(57)【要約】【課題】癌治療は、従来の化学療法だけでは長期的な治癒が期待できないので、従来の抗癌剤とは作用機序の異なる新しい治療方法としての免疫療法の確立が望まれる。腎癌、膵癌、進行性の肺癌等の固形癌やリンパ腫等の治療や再発防止に確固たる術のない現状を打開するため、安全かつ有効な癌の免疫療法の確立が期待される。【解決手段】ＮｏｔｃｈリガンドのＤｅｌｔａ１及び／又はＤｅｌｔａ２遺伝子の発現増強と、Ｊａｇｇｅｄ１及び／又はＪａｇｇｅｄ２遺伝子の発現抑制下にある樹状細胞を有効成分として用いる免疫療法剤、更に、上記遺伝子の発現ベクター、ｓｈＲＮＡ発現ベクター、これ等のベクターＤＮＡをパッケージングにより得られるウイルス、Ｄｅｌｔａ１とＩｇＧのＦｃとの融合タンパク質等を用いる免疫療法剤。【選択図】図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＮｏｔｃｈリガンドであるＤｅｌｔａ１及び／又はＤｅｌｔａ４の遺伝子発現が増強された抗原提示細胞を有効成分として薬効を奏する量、含有する免疫療法剤。
【請求項２】
ＮｏｔｃｈリガンドであるＤｅｌｔａ１及び／又はＤｅｌｔａ４の遺伝子発現が増強され、かつ、上記リガンドであるＪａｇｇｅｄ１及び／又はＪａｇｇｅｄ２の遺伝子発現が抑制された抗原提示細胞を有効成分として薬効を奏する量、含有する免疫療法剤。
【請求項３】
請求項１又は２に記載のＤｅｌｔａ１遺伝子が配列番号１又は３に記載の完全長アミノ酸配列又はその活性ドメインを、Ｄｅｌｔａ４遺伝子が配列番号２又は４に記載の完全長アミノ酸配列又はその活性ドメインをそれぞれコードする遺伝子である免疫療法剤。
【請求項４】
請求項３に記載のＤｅｌｔａ１及びＤｅｌｔａ４の完全長アミノ酸配列及びその活性ドメインを保有のタンパク質群から選ばれる１種のタンパク質とヒト免疫グロブリンＧのＦｃ部分との融合タンパク質を有効成分として薬効を奏する量、含有する免疫療法剤。
【請求項５】
請求項３に記載のＤｅｌｔａ１遺伝子及び／又はＤｅｌｔａ４遺伝子を挿入連係することにより構築され、かつ、請求項１又は２に記載の抗原提示細胞の作出に用いられる発現ベクター。
【請求項６】
前記Ｊａｇｇｅｄ１及び／又はＪａｇｇｅｄ２のヘアピンＤＮＡを挿入連係することにより構築され、かつ、請求項２に記載の抗原提示細胞の作出に用いられるｓｈＲＮＡ発現ベクター。
【請求項７】
上記Ｊａｇｇｅｄ１のヘアピンＤＮＡが配列番号５〜１０及び配列番号２３〜３３に記載のポリヌクレオチド群から、Ｊａｇｇｅｄ２のヘアピンＤＮＡが配列番号１１〜２２及び配列番号３４〜４２に記載のポリヌクレオチド群からそれぞれ選ばれる少なくとも１種のポリヌクレオチドである請求項６に記載のｓｈＲＮＡ発現ベクター。
【請求項８】
請求項５、６又は７に記載の発現ベクターのパッケージングにより得られるウイルス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、癌の治療及び再発防止に有効な免疫療法剤に関するものである。更に詳しくは、ノッチリガンド（Ｎｏｔｃｈ  ｌｉｇａｎｄ）であるデルタ１（Ｄｅｌｔａ１）及び／又はデルタ４（Ｄｅｌｔａ４）の遺伝子発現の増強と、ジャグド１（Ｊａｇｇｅｄ１）及び／又はジャグド２（Ｊａｇｇｅｄ２）の遺伝子発現の抑制との組合せ、デルタｌとＩｇＧのＦｃとの融合タンパク質等を用いる癌の免疫療法剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
用語「ノッチ（Ｎｏｔｃｈ）」は、１９１７年にモルガン（Ｔ．Ｈ．Ｍｏｒｇａｎ）らによる、翅末端にＶ字の切り込み（ｎｏｔｃｈ）を有するショウジョウバエの記述において最初に用いられ、その遺伝子ＤＮＡの塩基配列は１９８５年に初めて報告された。ノッチ分子は、そのＮ末端を占めるシクナルペプチド、膜貫通（細胞外）ドメイン、細胞内ドメイン等からなる膜タンパク質ないしは膜貫通レセプターであり、発生や分化を制御するノッチの機能は細胞表面のリガンドにより活性化される。ノッチとそのリガンドは多数の細胞で発現され、哺乳類では４種のノッチ、Ｎｏｔｃｈ１〜Ｎｏｔｃｈ４、及び５種のノッチリガンド、Ｄｅｌｔａ１、Ｄｅｌｔａ３、Ｄｅｌｔａ４、Ｊａｇｇｅｄ１及びＪａｇｇｅｄ２が現在、知られている（非特許文献１）。
かかるノッチとそのリガンドの作用・機能に関しては、例えば、これ等のシグナル伝達によるリンパ球分化の制御、即ち、造血幹細胞のＴ細胞やＢ細胞等への分化、ノッチとそのリガンドによるＴ細胞やＢ細胞への機能化の制御等（非特許文献２）、ノッチによる成熟Ｔ細胞への分化とその活性の支配（非特許文献３）、転写後修飾である糖鎖付加（ｇｌｙｃｏｓｙｌａｔｉｏｎ）によるノッチのシグナル伝達の制御（非特許文献１）等が、上記の通り、非特許文献１〜３において総説されている。
更に、前述した哺乳類のノッチとそのリガンド並びにこれ等の遺伝子の利用に関しては以下が知られている：全能性幹細胞培養用フィーダー（特許文献１）、幹細胞培養媒体（特許文献２）、骨髄移植や臓器移植等における拒絶反応やアレルギー反応の抑制（特許文献３）、骨粗鬆症や破骨細胞分化等の治療剤（特許文献４）、血管細胞調節剤（特許文献５）、細胞分化の制御（特許文献６）、前立腺細胞の増殖抑制（特許文献７）、細胞分化の抑制による前駆細胞の増幅（特許文献８）、Ｄｅｌｔａ又はＪａｇｇｄ遺伝子、及びアレルゲン、ＭＨＣ抗原、癌抗原等の遺伝子を移入した免疫担当細胞を用いるワクチン（特許文献９）、Ｄｅｌｔａの細胞外ドメインとＩｇＧのＦｃドメインとの融合タンパク質を用いるＩＬ４発現とＴｈ１／Ｔｈ２バランスの調節剤（特許文献１０）、Ｄｅｌｔａを用いる臓器移植での拒絶反応の抑制剤や骨髄移植に伴う疾患の治療剤（特許文献１１）、ノッチリガンドと担体薬物との複合体を用いる癌、アレルギー、感染症等の免疫療法剤（特許文献１２）、サイトカインの発現調節剤（特許文献１３）、Ｄｅｌｔａ１とＪａｇｇｅｄ１による骨髄性白血病細胞株の増殖抑制（非特許文献４）等。
以上に見られる通り、ノッチとそのリガンドの作用機能の活用技術は既に、多様に開発されてはいるが、この発明に係るＤｅｌｔａの過剰発現及び／又はＪａｇｇｅｄの発現抑制を活用する免疫療法とその実用化は、未だ知られていない。
【特許文献１】特開２００５−３４
【特許文献２】ＷＯ０２／０１６５５６
【特許文献３】特開２００３−９３０４８
【特許文献４】特開２００１−１２２７９８
【特許文献５】特開平１０−３１６５８２
【特許文献６】特開２００４−６５２４３
【特許文献７】特表２００４−５２４２６９
【特許文献８】特表２０００−５１１０４３
【特許文献９】ＷＯ０４／０８３３７２
【特許文献１０】ＷＯ０４／０６２６８６
【特許文献１１】ＷＯ０４／０２２７３０
【特許文献１２】ＷＯ０３／０８７１５９
【特許文献１３】ＷＯ０３／０１１３１７
【非特許文献１】Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、第４巻、７８６−７９７、Ｏｃｔｏｂｅｒ  ２００３．
【非特許文献２】Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第５巻（３号）、２４７−２５３、Ｍａｒｃｈ  ２００４．
【非特許文献３】Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第１７３巻、７１０９−７１１３、２００４．
【非特許文献４】Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ、第１４巻（２号）、２２３−２２６、２００４．
【非特許文献５】Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、第７巻、１０６３−１０６６、２０００．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
難治性の腎癌、リンパ腫、膵癌、多発性骨髄腫や速進行性の肺癌等の治療や再発防止に確固たる術のない現状にあっては、安全かつ有効な癌の免疫療法の確立は、患者とその家族、そして担当臨床医のみならず、全人類にとって、解決されるべき待望の課題である。
他方、Tリンパ球で発現する分子の制御により自在にTリンパ球の活性化を制御できれば、Tリンパ球が関与する癌や自己免疫疾患等、免疫関連疾患の治療方法の開発に結びつくと考えられる。しかし、多種多様な分子群を如何に制御すれば、効率よくTリンパ球の活性化を制御できるかについては未解決の状態にあった。
本発明の目的は、上記の課題を解決するため、Ｎｏｔｃｈリガンドを用いて、Ｔリンパ球が発現のＮｏｔｃｈ分子を刺激することにより、Ｔリンパ球の活性化および分化を制御し、自己免疫疾患及び癌に対する治療方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（略語の説明）
先ず、この明細書で用いられる略語につき、略語（用語）の形で、以下に列記する：ＣＴＬ（細胞傷害性Ｔリンパ球；Ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ  Ｔ  Ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ）、ＤＣ（樹状細胞；Ｄｅｎｄｒｉｔｉｃ  Ｃｅｌｌ）、ＡＰＣ（抗原提示細胞；Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｐｒｅｓｅｎｔｉｎｇ  Ｃｅｌｌ）、ＩｇＧ（免疫グロブリンＧ；Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇ）、ｓｈＲＮＡ（ショートヘアピンＲＮＡ；ｓｈｏｒｔ  ｈａｉｒｐｉｎ  ＲＮＡ）、ＲＮＡｉ（ＲＮＡ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ）、ｓｉＲＮＡ（ｓｍａｌｌ  ｉｎｔｅｆｅｒｉｎｇ  ＲＮＡ）、及びＦｃＲ（Ｆｃレセプター）。
（配列表の説明）
配列番号１：マウスＤｅｌｔａ１完全長アミノ酸配列、マウスＤｅｌｔａ１完全長遺伝子（ＮＣＢＩアクセッション：ＮＭ＿００７８６５）ＤＮＡ塩基配列がコードする。
配列番号２：マウスＤｅｌｔａ４完全長アミノ酸配列、マウスＤｅｌｔａ４完全長遺伝子（ＮＣＢＩアクセッション：ＮＭ＿０１９４５４）ＤＮＡ塩基配列がコードする。
配列番号３：ヒトＤｅｌｔａ１完全長アミノ酸配列、ヒトＤｅｌｔａ１完全長遺伝子ＤＮＡ（ＮＣＢＩアクセッション：ＮＭ＿００５６１８）がコードする。
配列番号４：ヒトＤｅｌｔａ４完全長アミノ酸配列、ヒトＤｅｌｔａ４完全長遺伝子（ＮＣＢＩアクセッション：ＮＭ＿０１９０７４）ＤＮＡ塩基配列がコードする。
配列番号５〜１０：マウスＪａｇｇｅｄ１ヘアピンＤＮＡ、マウスＪａｇｇｅｄ１完全長遺伝子（ＮＣＢＩアクセッション：ＮＭ＿０１３８２２）ＤＮＡ塩基配列に基づき設計された。
配列番号１１〜２２：マウスＪａｇｇｅｄ２ヘアピンＤＮＡ、マウスＪａｇｇｅｄ２完全長遺伝子（ＮＣＢＩアクセッション：ＮＭ＿０１０５８８）ＤＮＡ塩基配列に基づき設計された。
配列番号２３〜３３：ヒトＪａｇｇｅｄ１ヘアピンＤＮＡ、ヒトＪａｇｇｅｄ１完全長遺伝子（ＮＣＢＩアクセッション：ＭＮ＿０００２１４）ＤＮＡ塩基配列に基づき設計された。
配列番号３４〜４２：ヒトＪａｇｇｅｄ２ヘアピンＤＮＡ、ヒトＪａｇｇｅｄ２完全長遺伝子（ＮＣＢＩアクセッション：ＡＦ０２９７７８）ＤＮＡ塩基配列に基づき設計された。
【０００５】
本発明者は、上述の課題と実情に鑑み、長年にわたる深い洞察と試行錯誤の結果、Ｔリンパ球で発現するＮｏｔｃｈ分子とそのリガンドによる細胞内への刺激伝達あるいはシグナル伝達の変調により、Ｔリンパ球が次の（１）〜（５）に示すエフェクター機能を獲得するという実に驚くべき現象を発見した：
（１）Ｄｅｌｔａ１（Ｄｅｌｔａ１を強制的に過剰発現させた抗原提示細胞）でＣＤ８陽性Ｔリンパ球を刺激すると、ＣＴＬへの分化が促進され、抗腫瘍作用が生じる。
（２）Ｄｅｌｔａ４（Ｄｅｌｔａ４を強制的に過剰発現させた抗原提示細胞）でＣＤ８陽性Ｔリンパ球を刺激すると、ＣＴＬへの分化が促進され、抗腫瘍作用が生じる。
（３）上記（１）の抗原提示細胞におけるＪａｇｇｅｄ１発現又はＪａｇｇｅｄ２発現の強制的抑制により、ＣＤ８陽性Ｔリンパ球のＣＴＬへの分化が相乗的に促進され、抗腫瘍作用も相乗的に増強される。
（４）上記（２）の抗原提示細胞におけるＪａｇｇｅｄ１発現又はＪａｇｇｅｄ２発現の強制的抑制により、ＣＤ８陽性Ｔリンパ球のＣＴＬへの分化が相乗的に促進され、抗腫瘍作用も相乗的に増強される。
（５）Ｄｅｌｔａ１又はＤｅｌｔａ４とヒトＩｇＧのＦｃ部分との融合タンパク質がＣＤ８陽性Ｔリンパ球のＣＴＬへの分化を促進し、抗腫瘍効果が生じる。
この発明は、安全かつ有効な癌の免疫療法の確立という前述課題の解決に寄与するため、上記（１）〜（５）の基礎的知見に基づき着想かつ創作され、絶え間ない創意工夫の投入と勤勉により完成された。
【０００６】
この発明によれば、前述の課題を解決するための手段として、次の（１）〜（８）がそれぞれ提供される：
（１）ＮｏｔｃｈリガンドであるＤｅｌｔａ１及び／又はＤｅｌｔａ４の遺伝子発現が増強された抗原提示細胞を有効成分として薬効を奏する量、含有する免疫療法剤。
（２）ＮｏｔｃｈリガンドであるＤｅｌｔａ１及び／又はＤｅｌｔａ４の遺伝子発現が増強され、かつ、上記リガンドであるＪａｇｇｅｄ１及び／又はＪａｇｇｅｄ２の遺伝子発現が抑制された抗原提示細胞を有効成分として薬効を奏する量、含有する免疫療法剤。
（３）上記（１）又は（２）のＤｅｌｔａ１遺伝子が配列番号１又は３に記載の完全長アミノ酸配列又はその活性ドメインを、Ｄｅｌｔａ４遺伝子が配列番号２又は４に記載の完全長アミノ酸配列又はその活性ドメインをそれぞれコードする遺伝子である免疫療法剤。
（４）上記（３）のＤｅｌｔａ１及びＤｅｌｔａ４の完全長アミノ酸配列及びその活性ドメインを保有のタンパク質群から選ばれる１種のタンパク質とヒト免疫グロブリンＧのＦｃ部分との融合タンパク質を有効成分として薬効を奏する量、含有する免疫療法剤。
（５）前記（３）のＤｅｌｔａ１遺伝子及び／又はＤｅｌｔａ４遺伝子を挿入連係することにより構築され、かつ、前記（１）又は（２）の抗原提示細胞の作出に用いられる発現ベクター。
（６）前記Ｊａｇｇｅｄ１及び／又はＪａｇｇｅｄ２のヘアピンＤＮＡを挿入連係することにより構築され、かつ、前記（２）の抗原提示細胞の作出に用いられるｓｈＲＮＡ発現ベクター。
（７）上記Ｊａｇｇｅｄ１のヘアピンＤＮＡが配列番号５〜１０及び配列番号２３〜３３に記載のポリヌクレオチド群から、Ｊａｇｇｅｄ２のヘアピンＤＮＡが配列番号１１〜２２及び配列番号３４〜４２に記載のポリヌクレオチド群からそれぞれ選ばれる少なくとも１種のポリヌクレオチドである上記（６）のｓｈＲＮＡ発現ベクター。
（８）上記（５）、（６）又は（７）の発現ベクターのパッケージングにより得られるウイルス。
【発明の効果】
【０００７】
この発明は、腎癌、リンパ腫、膵癌、多発性骨髄腫や速進行性の肺癌等の治療や再発防止に優れて安全かつ有効な免疫療法剤を提供することにより、これ等の癌に対する免疫療法の確立を可能にする。換言すれば、この発明が人類の諸活動にもたらす精神的、物質的あるいは経済的効果は計り知れない。この発明は、世界の保健と医療行政に寄与するだけではなく、人類待望の癌の制圧に多大に貢献すると共に、長寿と延命という福音を全ての人類にもたらす。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
この発明の実施の形態に関し、次の通り詳述する：
（１）Ｄｅｌｔａ１遺伝子とそれがコードするアミノ酸配列
Ｄｅｌｔａ１タンパク質はＩｇＧのＦｃとの融合タンパク質の形で、また、Ｄｅｌｔａ１遺伝子ＤＮＡは、Ｄｅｌｔａ１発現を強制的に増強するため、発現ベクターに組み込まれた状態で使用される。上記の融合タンパク質には、配列番号１に記載のマウスＤｅｌｔａ１及び配列番号３に記載のヒトＤｅｌｔａ１の両完全長アミノ酸配列、及びこれ等の各アミノ酸配列の活性ドメインを含む部分領域を保有のタンパク質を用いることができる。また、発現ベクターの構築には、上記の完全長アミノ酸配列及びその活性ドメインを含む部分領域等をコードする遺伝子ＤＮＡを用いることができる。
ヒトへの免疫療法剤には、その安全性と有効性を確保するため、同種タンパク質であるヒトＤｅｌｔａ１とその遺伝子ＤＮＡの使用が望ましい。更に、ヒトとマウスのＤｅｌｔａ１遺伝子ＤＮＡの完全長塩基配列とそれがコードする完全長アミノ酸配列に関して、ＮＣＢＩアクセッション：ＮＭ＿００５６１８及びＮＭ＿００７８６５の記載をそれぞれ用いることができる。
（２）Ｄｅｌｔａ４遺伝子とそれがコードするアミノ酸配列
Ｄｅｌｔａ４タンパク質はＩｇＧのＦｃとの融合タンパク質の形で、また、Ｄｅｌｔａ１遺伝子ＤＮＡは、Ｄｅｌｔａ１発現を強制的に増強するため、発現ベクターに組み込まれた状態で使用される。上記の融合タンパク質には、配列番号２に記載のマウスＤｅｌｔａ４及び配列番号４に記載のヒトＤｅｌｔａ４の両完全長アミノ酸配列、及びこれ等の各アミノ酸配列の活性ドメインを含む部分領域を用いることができる。また、発現ベクターの構築には、上記の完全長アミノ酸配列及びその活性ドメインを含む部分領域等をコードする遺伝子ＤＮＡを用いることができる。
ヒトへの免疫療法剤には、上記（１）と同じ理由により、ヒトＤｅｌｔａ４とその遺伝子ＤＮＡの使用が望ましい。更に、ヒトとマウスのＤｅｌｔａ４遺伝子ＤＮＡの完全長塩基配列とそれがコードする完全長アミノ酸配列に関しては、ＮＣＢＩアクセッション：ＮＭ＿０１９０７４及びＮＭ＿０１９４５４の記載をそれぞれ用いることができる。
【０００９】
（３）Ｊａｇｇｅｄ１遺伝子ＤＮＡ塩基配列に基づくヘアピンＤＮＡ
ヒトとマウスのＪａｇｇｅｄ１遺伝子ＤＮＡの完全長塩基配列とそれがコードする完全長アミノ酸配列は、ＮＣＢＩアクセッション：ＮＭ＿０００２１４及びＮＭ＿０１３８２２に各々記載されている。上記ヘアピンＤＮＡは、ｓｈＲＮＡ発現ベクターに組み込まれた状態で用いられる。換言すれば、ヘアピンＤＮＡは、それが移入された細胞内でｓｈＲＮＡ→ｓｉＲＮＡ→ＲＮＡｉの順にこれ等を誘導し、最終的にはＲＮＡｉによるＪａｇｇｅｄ１発現の強制的抑制を図るために使用される。
上記Ｊａｇｇｅｄ１ヘアピンＤＮＡは、Ｊａｇｇｅｄ１遺伝子ＤＮＡ完全長塩基配列から、ＧＣ含量、反復配列の有無、センス鎖の特定位置のＤＮＡ塩基置換等に基づき多様に設計できる。例えば、マウスＪａｇｇｅｄ１遺伝子ＤＮＡ完全長塩基配列に基づき設計された配列番号５〜１０に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチド、ヒトＪａｇｇｅｄ１遺伝子ＤＮＡ完全長塩基配列に基づき設計された配列番号２３〜３３に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチド等をＪａｇｇｅｄ２のヘアピンＤＮＡとして用いることができる。尚、ヒトへの免疫療法剤には、上記（１）と同じ理由により、ヒトＪａｇｇｅｄ１に基づき設計されたヘアピンＤＮＡの使用が望ましい。  
（４）Ｊａｇｇｅｄ２遺伝子ＤＮＡ塩基配列に基づくヘアピンＤＮＡ
ヒトとマウスのＪａｇｇｅｄ２遺伝子ＤＮＡの完全長塩基配列とそれがコードする完全長アミノ酸配列は、ＮＣＢＩアクセッション：ＡＦ０２９７７８及びＮＭ＿０１０５８８に各々記載されている。尚、上記ヘアピンＤＮＡの用法、使用目的、作用及び設計に関しては、上記（３）の通りである。
Ｊａｇｇｅｄ２のヘアピンＤＮＡとしては、例えば、マウスＪａｇｇｅｄ２遺伝子ＤＮＡ塩基配列に基づき設計された配列番号１１〜２２に記載の塩基配列からなるポリヌクレオチド、ヒトＪａｇｇｅｄ２遺伝子ＤＮＡ塩基配列に基づき設計された配列番号３４〜４２に記載の各塩基配列からなるポリヌクレオチド等を用いることができる。尚、ヒトへの免疫療法剤には、上記（１）と同じ理由により、ヒトＪａｇｇｅｄ２遺伝子ＤＮＡの塩基配列に基づき設計されたヘアピンＤＮＡの使用が望ましい。
【００１０】
（５）抗原提示細胞とその形質転換体
この発明で用いることができるＡＰＣとして、樹状細胞、Ｂ細胞、マクロファージ等を上げることができる。かかるＡＰＣは、上述したＤｅｌｔａ遺伝子及び／又はＪａｇｇｅｄヘアピンＤＮＡを導入ないしはトランスダクションすることにより作出されるＡＰＣ形質転換体の形で、免疫療法剤の有効性成分として用いられる。
（６）発現ベクターによるトランスダクション
ＡＰＣ形質転換体は、宿主としてのＡＰＣへのＤｅｌｔａ遺伝子発現ベクター及び／又はｓｈＲＮＡ発現ベクターの移入ないしはトランスフェクションにより作出することができる。尚、Ｄｅｌｔａ遺伝子発現ベクターはＤｅｌｔａ遺伝子ＤＮＡを、また、ｓｈＲＮＡ発現ベクターはヘアピンＤＮＡを、それぞれ外来遺伝発現用ベクターに挿入連係することにより構築される。
外来遺伝子発現用ベクターには、公知又は市販の動物細胞を宿主とするベクター、例えは、レトロウイルス系、アデノウイルス系、ＥＢウイルス系、ＳＶ４０系、ポリオーマ系等々を使用できる。更に、多様に市販されている発現システム、例えば、ｓｉＲＮＡ発現システムから入手可能なプラスミドベクターｐＳｕｐｐｒｅｓｓｏｒＲｅｔｒｏやｐＳｕｐｐｒｅｓｓｏｒＡｄｅｎｏ［Ｆｕｎａｋｏｓｈｉ（日本）製］、ｐｉＧＥＮＥ［ｉＧＥＮＥ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ社（米国）製］等を利用できる。
ＡＰＣへの発現ベクターＤＮＡの導入方法としては、リン酸カルシウム法、リポフェクション法、ＦｕＧＥＮＥ法［Ｒｏｃｈｅ社（米国）製］、エレクトロポァレーション等によるトランスフェクション、アデノウイルスベクターやレトロウイルスベクター等を用いるウイルス感染による導入方法、マイクロインジェクション等を上げることができる。
上記のうち、ウイルス感染による導入は、簡便であり、例えば、その手順（レトロウイルス系の発現ベクターでの例示）は次の通りである：
先ず外来遺伝子発現レトロウイルスベクターＤＮＡをパッケージング細胞に移入し培養することによりレトロウイルスパッケージング（該ベクターＤＮＡをウイルス粒子内に包み込ませる）を行い、上記ベクターＤＮＡを保有の感染性レトロウイルスを作出する；次いで、この作出ウイルスを標的細胞（形質転換を行う細胞）に感染させ培養することにより、該細胞のゲノムに上記の外来遺伝子をインテグレーションさせ、形質転換体を得る。これには、パッケージング細胞株Ｐｌａｔ−Ｅ（Ｐｌａｔｉｎｕｍ−Ｅ）を用いるシステム（非特許文献５）、市販のレトロウイルスパッケージング細胞株ＨＥＫ２９３やＮＩＨ  ３Ｔ３を用いるシステム［Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社（米国）製］等を活用することができる。
【００１１】
（７）Ｄｅｌｔａ−Ｆｃ融合タンパク質の生産と精製
ＤｅｌｔａとＦｃ両遺伝子ＤＮＡの連結鎖を挿入連係することにより構築した発現ベクターを移入の形質転換体を培養することにより生産することができる。精製には、公知のタンパク質精製方法、例えば、塩析、有機溶媒による沈殿、市販のゲルや樹脂への吸着脱着を用いるバツチ法やカラム精製等を用いることができる。
【００１２】
（８）ＣＴＬの誘導
ＡＰＣ形質転換体、例えば、Ｄｅｌｔａ発現の増強及び／又はＪａｇｇｅｄ発現の抑制下にあるＤＣ形質転換体とＴ細胞との混合培養や、かかる形質転換体を皮下や腹腔内等に接種することにより、ＣＴＬを誘導する。
（９）ＣＴＬ活性の測定
キラー細胞ないしは被誘導ＣＴＬ（エフェクター細胞）と、５１Ｃｒで標識した腫瘍細胞（標的細胞）、例えば、５１Ｃｒで標識の３Ｔ１やＥＬ４等とを混合し、一定時間（例えば４時間）培養の後、培養上清に遊離される５１Ｃｒの放射活性を計測する。この測定に用いられるＥ／Ｔ（エフェクター細胞数／標的細胞数）は通常、２．５〜４０：１である。
（１０）抗腫瘍作用の測定
例えば、腫瘍細胞を皮下に注入ないしは移植し、その増殖により拡大する円状の腫瘍細胞領域の直径を計測する。
【００１３】
この発明に係る免疫療法剤、ＡＰＣ形質転換体、発現ベクター、発現ベクターをパッケージングしたウイルス、Ｄｅｌｔａ−Ｆｃ融合タンパク質等は、アンプルやバイアル瓶等に分注され、液状又は乾燥のかたちで密封された状態で提供かつ使用に供される。
【００１４】
以下、実験例及び実施例を上げ、本発明の構成と効果を具体的に説明する。但し、この発明は、これ等の実験例及び実施例だけに限定されるわけではない。
【実施例１】
【００１５】
Ｄｅｌｔａ１及びＤｅｌｔａ４の各発現ベクターの構築
マウスのＤｅｌｔａ１（配列番号１）及びＤｅｌｔａ４（配列番号２）各完全長アミノ酸配列をコードする遺伝子ＤＮＡをそれぞれ、レトロウイルスベクターｐＫＥ００４［図１（ａ）］の制限酵素ＨｐａＩ−ＸｈｏＩサイトに挿入連係することにより、Ｄｅｌｔａ１及びＤｅｌｔａ４の各遺伝子発現ベクターを構築した。尚、ＰＫＥ００４には、レポーター遺伝子としてＧＦＰ（Ｇｒｅｅｎ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｎｃｅ  Ｐｒｏｔｅｉｎ）が組み込まれている。
【実施例２】
【００１６】
Ｊａｇｇｅｄ１及びＪａｇｇｅｄ２の各ｓｈＲＮＡ発現ベクターの構築
上記のベクターＰＫＥ００４にＵ６プロモーターを組み込み、更に、レポーター遺伝子として前記ＧＦＰの代わりに細胞内部分を欠失したＮＧＦＲ（Ｎｅｒｖｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ）をＣＭＶプロモーター下流に組み込んだレトロベクターｐＫＥ−ＮＧＦＲ［図１（ｂ）］を作製した。このｐＫＥ−ＮＧＦＲに、マウスＪａｇｇｅｄ１の１９ｂｐ領域を基本としたヘアピンＤＮＡ（配列番号６）及びＪａｇｇｅｄ２のヘアピンＤＮＡ（配列番号１４）をそれぞれ、限酵素ＨｐａＩ−ＸｈｏＩサイトに挿入連係することにより、Ｊａｇｇｅｄ１及び２の各ｓｈＲＮＡ発現ベクターを構築した。
尚、ｓｈＲＮＡ発現ベクターの構築手順は、次の実施例３において示す。
【実施例３】
【００１７】
ｓｈＲＮＡ発現ベクターの構築手順の例示
ＧＧＡＧＡＴＧＡＣＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣを標的配列とした場合には、ループ配列にはｔｔｃａａｇａｇａを使用し、次の（１）〜（４）の順序でｓｈＲＮＡ発現ベクターを構築した：
（１）以下に示すオリゴヌクレオチド（ａ）〜（ｄ）を合成した：
（ａ）ｔＧＧＡＧＡＴＧＡＣＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣ
（ｂ）ｔｃｔｃｔｔｇａａＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＧＴＣＡＴＣＴＣＣａ
（ｃ）ｔｔｃａａｇａｇａＧＡＡＧＡＴＧＡＡＣＧＴＣＡＴＣＴＣＣｔｔｔｔｔｔｃ
（ｄ）ｔｃｇｇａｇａａａａａａＧＧＡＧＡＴＧＡＣＧＴＴＣＡＴＣＴＴＣ
大文字は、標的配列及びそれと相補的な配列。
小文字は、ベクター組み込み用配列、ヘアピンループ、転写終結シグナル等を示す。
（２）オリゴ（ｂ）及び（ｃ）をＴ４ポリヌクレオチドキナーゼにより５’リン酸化した。
（３）オリゴ（ａ）とリン酸化オリゴ（ｂ）、及びリン酸化オリゴ（ｃ）とオリゴ（ｄ）をそれぞれ混合し、９５℃まで加熱した後、２５℃まで、毎分１℃ずつ冷却することにより各オリゴヌクレオチドを２本鎖にし、２種の２本鎖オリゴヌクレオチドを得た。
（４）上記（３）で得た２種の２本鎖オリゴヌクレオチドを混合し、これ等を実施例２で得たレトロベクターｐＫＥ−ＮＧＦＲ［図１（ｂ）］の制限酵素ＨｐａＩ−ＸｈｏＩサイトに挿入連係することによりｓｈＲＮＡ発現ベクターを構築した。
【実施例４】
【００１８】
レトロウイルスパッケージングによる前記発現ベクターＤＮＡを保有の感染性レトロウイルスの作出
遺伝子導入試薬ＦｕＧＥＮＥ［Ｒｏｃｈｅ社（米国）製］を用い、実施例１で得た各発現ベクター及び実施例２で得た各ｓｈＲＮＡ発現ベクターをそれぞれ、レトロウイルスパッケージング細胞株Ｐｌａｔ−Ｅ（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ、７、１０６３−１０６６、２０００）に導入した。Ｐｌａｔ−Ｅ細胞は、ＤＭＥＤ／１０％ＦＣＳで培養した。遺伝子導入後1日目に新しい培地と交換した。その２４時間後に、培養上清を回収した。培養上清は、上記の各発現ベクターをウイルス粒子内に包み込んだ感染性レトロウイルス（発現ベクターがパッケージングされたウイルス）の浮遊液であり、このウイルス液は、使用に供するまで−８０℃で保存された。
尚、作出したウイルスは次の４種である：Ｄｅｌｔａ１遺伝子ＤＮＡを保有のウイルス（以下「Ｄ１ウイルス」と表記する）、Ｄｅｌｔａ４遺伝子ＤＮＡを保有のウイルス（Ｄ４ウイルス）、Ｊａｇｇｅｄ１ヘアピンＤＮＡを保有のウイルス（Ｇ１ウイルス）、及びＪａｇｇｅｄ２ヘアピンＤＮＡを保有のウイルス（Ｇ２ウイルス）。
【実施例５】
【００１９】
樹状細胞の分離とその形質転換体の作出
ＢＡＬＢ／ｃマウスの頸骨、大腿骨を採取の後、その両骨から分離調製した骨髄細胞を、抗ＣＤ３抗体、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ８抗体、抗ＣＤ１１ｂ抗体、及び抗Ｂ２２０抗体と４℃で３０分間、それぞれ反応させた。次いで、抗ラットＩｇＧを結合した磁気ビーズと反応する細胞を除去した。残った細胞を、実施例４で得た各レトロウイルス液に浮遊させた後、２４穴のプレートに入れ、これを室温で２，５００ｒｐｍにて６０分間、遠心した。遠心後に、ＧＭ−ＣＳＦ（２０ｎｇ／ｍｌ）とＩＬ−４（１００ｎｇ／ｍｌ）とを含む培地の中で培養を開始した。培養開始２４時間後及び４８時間後、実施例４で得た各ウイルス液を培地に添加混合することによりウイルス再感染を行った。
尚、ウイルス感染の組合せは次の通りである：Ｄ１とＤ４各ウイルスの単独感染、Ｄ１とＧ１、Ｄ１とＧ２、Ｄ４とＧ１、及びＤ４とＧ２両ウイルスの各混合感染。
培養開始後、7日後に、生存している細胞を、ＰＥ標識抗ＣＤ１１Ｃ抗体及びビオチン標識抗ＮＧＦＲ抗体と４℃にて３０分間、反応させた。次に、細胞を３回ＰＢＳで洗浄の後に、ＡＰＣ標識アビジンと4℃にて３０分間、反応させた。反応終了後、細胞を２回ＰＢＳで洗浄の後、セルソーターでＧＦＰ陽性、ＮＧＦＲ陽性及びＣＤ１１ｃ陽性細胞を分離した。分離した細胞はＧＦＰ陽性（Ｄｅｌｔａ遺伝子を保有）及び／又はＮＧＦＲ陽性（ＪａｇｇｅｄヘアピンＤＮＡを保有）のＤＣ形質転換体であり、これ等の細胞は、以下、次の通り表記され、その性状は次の通りである。
（ａ）ＤＣ−Ｄｅｌｔａ１：Ｄｅｌｔａ１遺伝子の発現が増強されたＤＣ形質転換体
（ｂ）ＤＣ−Ｄｅｌｔａ４：Ｄｅｌｔａ４遺伝子の発現が増強されたＤＣ形質転換体
（ｃ）ＤＣ−Ｄｅｌｔａ１／Ｊａｇｇｅｄ１ｌｏｗ：
Ｊａｇｇｅｄ１遺伝子の発現が抑制された上記（ａ）の形質転換体。
（ｄ）ＤＣ−Ｄｅｌｔａ１／Ｊａｇｇｅｄ２ｌｏｗ：
Ｊａｇｇｅｄ２遺伝子の発現が抑制された上記（ａ）の形質転換体。
（ｅ）ＤＣ−Ｄｅｌｔａ４／Ｊａｇｇｅｄ１ｌｏｗ：
Ｊａｇｇｅｄ１遺伝子の発現が抑制された上記（ｂ）の形質転換体。
（ｆ）ＤＣ−Ｄｅｌｔａ４／Ｊａｇｇｅｄ２ｌｏｗ：
Ｊａｇｇｅｄ２遺伝子の発現が抑制された上記（ｂ）の形質転換体。
【実施例６】
【００２０】
ＤＣ形質転換体の抗腫瘍移植作用
３，０００ｒａｄの放射線照射した腎癌細胞３Ｔ１を１ｘ１０７細胞／ドーズ、腹腔内接種することによりＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫した。免疫10日後に、各マウスの背中の皮下に３Ｔ１を移植した。移植と同時に、実施例５で作出した前記（ａ）〜（ｆ）の各ＤＣ形質転換体(細胞分離後にＬＰＳで1日刺激を加えた)を、移植した腫瘍の周りに投与した。尚、比較対照群としては、形質転換なしのＤＣ（ＤＣ−ｃｏｎｔｒｏｌ）、及び腫瘍移植後のＤＣ処理なし（ｕｎｔｒｅａｔｅｄ）をそれぞれ用いた。腫瘍の移植後、各マウスの腫瘍のサイズを測定した。その結果得られた、実施例５で作出の前記（ａ）〜（ｆ）の各ＤＣ形質転換体につき認められた抗腫瘍移植作用を以下に列記する。
（１）ＤＣ−Ｄｅｌｔａ１の抗腫瘍移植作用を図２に示す。比較対照群に比べ顕著な抗腫瘍移植作用が認められた。
（２）ＤＣ−Ｄｅｌｔａ１の抗腫瘍移植作用に及ぼす抗ＤＣ抗体の影響を図３に示す。ＤＣ−Ｄｅｌｔａ１の抗腫瘍移植作用は、抗ＣＤ４及び抗ＣＤ８の各抗体でそれぞれ抑制された。
（３）ＤＣ−Ｄｅｌｔａ１、ＤＣ−Ｄｅｌｔａ１／Ｊａｇｇｅｄ１ｌｏｗ及びＤＣ−Ｄｅｌｔａ１／Ｊａｇｇｅｄ２ｌｏｗの各抗腫瘍移植作用を図４に示す。Ｊａｇｇｅｄ１及び２の各遺伝子の抑制が、Ｄｅｌｔａ１遺伝子発現の増強がもたらす抗腫瘍移植作用を相乗的に高進させた。
（４）ＤＣ−Ｄｅｌｔａ４、ＤＣ−Ｄｅｌｔａ４／Ｊａｇｇｅｄ１ｌｏｗ及びＤＣ−Ｄｅｌｔａ４／Ｊａｇｇｅｄ２ｌｏｗの各抗腫瘍移植作用を図５に示す。Ｊａｇｇｅｄ１及び２の各遺伝子の抑制が、Ｄｅｌｔａ４遺伝子発現の増強がもたらす抗腫瘍移植作用を相乗的に高進させた。
【実施例７】
【００２１】
ＤＣ形質転換体によるＣＴＬの誘導とその活性の測定
ＢＡＬＢ／ｃマウスから分離調製した脾臓細胞と、抗ＦｃＲ抗体および抗ＣＤ４抗体と４℃で３０分間、反応させた。次いで、細胞を洗浄の後、抗ラットＩｇＧを結合した磁気ビーズと反応させることにより、ＦｃＲとＣＤ４を発現する細胞を除去した。残った細胞の９０％は、ＣＤ８陽性のＴリンパ球であった。
次いで、実施例５で作出した各ＤＣ形質転換体と、分離した上記Ｔリンパ球とを混合培養した。培養5日後に、生存しているＴリンパ球を分離した。この分離したＴリンパ球（ＣＴＬないしはエフェクター細胞）と、５１Ｃｒでラベルした腫瘍細胞ＥＬ４（標的細胞）とを５時間、混合培養し、５１Ｃｒの遊離をベーターカウンターで測定した。尚、Ｔリンパ球（エフェクター細胞）とＥＬ４（標的細胞）の細胞数の比（Ｅ／Ｔ）は、５０：１、２０：１、１０：１、及び５：１とした。尚、比較対照として、ＤＣ形質転換体で処理しないＴ細胞を用いた。その結果は次の通りであった。
（１）ＤＣ−Ｄｅｌｔａ１、ＤＣ−Ｄｅｌｔａ１／Ｊａｇｇｅｄ１ｌｏｗ及びＤＣ−Ｄｅｌｔａ１／Ｊａｇｇｅｄ２ｌｏｗによるＣＴＬ誘導とその活性を図６に示す。Ｊａｇｇｅｄ１及び２の各遺伝子の抑制が、Ｄｅｌｔａ１遺伝子発現の増強がもたらすＣＴＬ誘導とその活性の促進をいずれも相乗的に高進させた。
（２）ＤＣ−Ｄｅｌｔａ４、ＤＣ−Ｄｅｌｔａ４／Ｊａｇｇｅｄ１ｌｏｗ及びＤＣ−Ｄｅｌｔａ４／Ｊａｇｇｅｄ２ｌｏｗによるＣＴＬ誘導とその活性を図７に示す。Ｊａｇｇｅｄ１及び２の各遺伝子の抑制が、Ｄｅｌｔａ１遺伝子発現の増強がもたらすＣＴＬ誘導とその活性の促進をいずれも相乗的に高進させた。
【実施例８】
【００２２】
Ｄｅｌｔａ１−Ｆｃ融合タンパク質の作製と精製
マウスＤｅｌｔａ１のＮ末端から数えて第１番アミノ酸メチオニン（ＡＴＧ）から第５３５番アミノ酸ヒスチジン（ＣＡＴ）をコードする遺伝子ＤＮＡと、ヒト免疫グロブリンＧのＦｃ領域の全長をコードする遺伝子ＤＮＡとを結合させた後、これをプラスミドベクターｐＴｒａｓｅｒＣＭＷ［Ｃｌｏｎｔｅｃｈ社（米国）製］に挿入連係した。このベクターをＣＨＯ細胞に移入の後、Ｚｅｏｃｉｎで薬剤選択を行い、恒常的に遺伝子が組み込まれたＣＨＯ細胞の形質転換体をスクリーニングした。次に、得られた形質転換体の培養によりＤｅｌｔａ１−Ｆｃ融合タンパク質を生産した。これには先ず、ＣＨＯ細胞の形質転換体をＭＥＭ（１０％ＦＣＳ）で培養し、細胞数が増えた時点で、ＣＨＯ細胞用の無血清培地［Ｓｉｇｍａ社（米国）製］と培地交換して更に培養し、その上清を回収した。次いで、回収した上清をプロテインＡカラムに４℃で一晩、吸着させた。翌日、カラムを洗浄の後、プロテインＡに結合したＤｅｌｔａ１−Ｆｃ融合タンパク質を離脱さて精製した。通常、１リットルの培養上清から３−５ｍｇの精製Ｄｅｌｔａ１−Ｆｃ融合タンパク質が得られた。
【実施例９】
【００２３】
Ｄｅｌｔａ１−Ｆｃ融合タンパク質による抗腫瘍移植作用
実施例６の記載と同様にして、８週齢の雌ＢＡＬＢ／ｃマウスを免疫の後、各マウスに腎害細胞株３Ｔ１を移植した。次いで、最初の免疫の日から３日の間隔で５０μｇ／ドーズのＤｅｌｔａ１−Ｆｃ融合タンパク質を各マウス  腹腔内に投与した。その後、マウスの腫瘍径を経時的に測定した。この結果、ＩｇＧ投与のない比較対照群に比べ、Ｄｅｌｔａ１−Ｆｃ融合タンパク質の投与群では明らかに腫瘍径が小さかった。
【産業上の利用可能性】
【００２４】
この発明は、腎癌、リンパ腫、膵癌、多発性骨髄腫や速進行性の肺癌等の治療や再発防止のための免疫療法及び臨床検査において有用であり、医薬品、診断剤等の製造・販売の分野で利用できる。
【図面の簡単な説明】
【００２５】
【図１】（ａ）Ｄｅｌｔａ１及び２の各発現ベクターの構造を示す；及び（ｂ）Ｊａｇｇｅｄ１及び２の各ｓｈＲＮＡ発現ベクターの構造を示す。
【図２】樹状細胞におけるＤｅｌｔａ１の強制的な過剰発現がもらす腫瘍免疫の促進を示す。ＤＣ−ｃｏｎｔｒｏｌはＤｅｌｔａ１の強制的な過剰発現のない正常ＤＣ、ＤＣ−Ｄｅｌｔａ１はＤｅｌｔａ１を強制的に過剰発現するＤＣ、及びｕｎｔｒｅａｔｅｄはＤＣ投与なしをそれぞれ意味する。
【図３】Ｄｅｌｔａ１を強制的に過剰発現するＤＣによる抗腫瘍効果にはＣＤ４陽性及びＣＤ８陽性の両Ｔ細胞細が必要であることを示す。ＤＣ−ｃｏｎｔｒｏｌはＤｅｌｔａ１の強制的な過剰発現のない正常ＤＣ、ＤＣ−Ｄｅｌｔａ１はＤｅｌｔａ１を強制的に過剰発現するＤＣ、ＤＣ−Ｄｅｌｔａ１（αＣＤ４）は抗ＣＤ４抗体でＣＤ４陽性リンパ球を除去した状態下のＤＣ−Ｄｅｌｔａ１、ＤＣ−Ｄｅｌｔａ１（αＣＤ８）は抗ＣＤ８抗体でＣＤ８陽性リンパ球を除去した状態下のＤＣ−Ｄｅｌｔａ１をそれぞれ意味する。
【図４】Ｄｅｌｔａ１の強制的過剰発現と、Ｊａｇｇｅｄ１又はＪａｇｇｅｄ２の発現抑制下にあるＤＣによる抗腫瘍免疫の増強効果を示す。ＤＣ−ｃｏｎｔｒｏｌはＤｅｌｔａ１の強制的な過剰発現のない正常ＤＣ、ＤＣ−Ｄｅｌｔａ１はＤｅｌｔａ１を強制的に過剰発現するＤＣ、ＤＣ−Ｄｅｌｔａ１／Ｊａｇｇｅｄ１ｌｏｗはＤｅｌｔａ１を強制的に過剰発現しＪａｇｇｅｄ１の発現抑制下にあるＤＣ、及びＤＣ−Ｄｅｌｔａ１／Ｊａｇｇｅｄ２ｌｏｗはＤｅｌｔａ１を強制的発現しＪａｇｇｅｄ２の発現抑制下にあるＤＣをそれぞれ意味する。
【図５】Ｄｅｌｔａ４の強制的過剰発現と、Ｊａｇｇｅｄ１又はＪａｇｇｅｄ２の発現抑制下にあるＤＣによる抗腫瘍免疫の増強効果を示す。ＤＣ−ｃｏｎｔｒｏｌはＤｅｌｔａ４の強制的な過剰発現のない正常ＤＣ、ＤＣ−Ｄｅｌｔａ１はＤｅｌｔａ４を強制的に過剰発現するＤＣ、ＤＣ−Ｄｅｌｔａ４／Ｊａｇｇｅｄ１ｌｏｗはＤｅｌｔａ４を強制的発現しＪａｇｇｅｄ１の発現抑制下にあるＤＣ、及びＤＣ−Ｄｅｌｔａ４／Ｊａｇｇｅｄ２ｌｏｗはＤｅｌｔａ４を強制的発現しＪａｇｇｅｄ２の発現抑制下にあるＤＣ（ＣＴＬ誘導細胞）をそれぞれ意味する。
【図６】Ｄｅｌｔａ１の強制的過剰発現と、Ｊａｇｇｅｄ１又はＪａｇｇｅｄ２の発現抑制下にあるＤＣによる細胞傷害性かリンパ球の分化高進を示す。ＥＬ４は腫瘍細胞（標的細胞）；ＤＣ−Ｄｅｌｔａ１／Ｊａｇｇｅｄ１ｌｏｗ及びＤＣ−Ｄｅｌｔａ１／Ｊａｇｇｅｄ２ｌｏｗは図５と同義のＤＣ（ＣＴＬ誘導細胞）をそれぞれ意味する。
【図７】Ｄｅｌｔａ４の強制的過剰発現と、Ｊａｇｇｅｄ１又はＪａｇｇｅｄ２の発現抑制下にあるＤＣによる細胞傷害性かリンパ球の分化高進を示す。ＥＬ４は腫瘍細胞（標的細胞）；ＤＣ−Ｄｅｌｔａ４／Ｊａｇｇｅｄ１ｌｏｗ及びＤＣ−Ｄｅｌｔａ４／Ｊａｇｇｅｄ２ｌｏｗは図５と同義のＤＣ（ＣＴＬ誘導細胞）をそれぞれ意味する。                                                      （以下余白）
【図１】
2006241087.tif 000003
【図２】
2006241087.tif 000004
【図３】
2006241087.tif 000005
【図４】
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【図５】
2006241087.tif 000007
【図６】
2006241087.tif 000008
【図７】
2006241087.tif 000009
【配列表】
2006241087000001.app