(57)【要約】【課題】新規の輸血製剤中の溶存酸素濃度消費曲線の傾きを指標とした輸血製剤の微生物汚染の検出方法を提供する。【解決手段】輸血製剤中の溶存酸素濃度消費曲線の傾きを測定し、長期期間保存された輸血製剤を輸血するより前に、その微生物汚染を検出することができる。溶存酸素濃度測定法を用いた自己血輸血を含めた、血液製剤の微生物汚染検出は有用である。微生物汚染を検出できる方法として、迅速、自動化、低コストな実用システムを構築する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
輸血製剤の溶存酸素量を測定し、その量を指標として輸血製剤の微生物汚染を測定する方法
【請求項２】
輸血製剤の微生物汚染を示す指標としての輸血製剤中の溶存酸素濃度消費曲線の傾きを検出する方法
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は輸血製剤の微生物汚染を示す指標としての輸血製剤中の溶存酸素濃度消費曲線の傾きと輸血製剤の微生物汚染を示す指標としての輸血製剤中の溶存酸素濃度消費曲線の傾きを検出する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
輸血製剤での細菌汚染は輸血を受ける患者にとって致命的な危険をもたらす。日本では、ＭＡＰ製剤の冷蔵保存で５日間、血小板製剤では２０〜２４℃の常温保存で期限は３日間である。この保存期間中に細菌に汚染されていた場合には、例えば、４℃で発育するYersinia enterocoliticaが汚染していた場合は輸血された後に、受血者に菌血症を惹起し、死に至らしめる事故がある。また、血小板製剤では常温保存であるので、多くの細菌が同様に汚染し、重篤な感染症を引き起こす事故がある。そのため、輸血製剤内の細菌汚染に関して早期の検出が必要である。
【０００３】
日本ポール株式会社（アメリカのＰＡＬＬ社）は血液製剤バックから４ｍＬを分取して常温で２４時間静置したのち、培地タブレット（tripticase  soy）と補体阻害剤を混合し、３５℃で２４時間培養して、バックの気相部分に酸素ガス検知管を差し込んで、BDS  Oxygen  Analyserで酸素濃度減を測定するシステムを完成させ、商品化（eBDS）している。ただし、輸血製剤内の溶存酸素を測定していない。一人の献血者に小型バックを用意し血液を分取し、密閉状態でガス状の酸素を測定する。アメリカＦＤＡの承認時に機材開発が間に合わなかった。日本ビオメリュー（フランス、アメリカのbioMerieux）は商品名Bactalartで輸血製剤を５ｍＬ採取して増菌用液体培地に接種し、高感度ＣＯ2検出器で細菌呼吸による生産を検知するシステムを開発し、アメリカＦＤＡの承認をとっている。もともと、菌欠症の患者血液の細菌検出装置として商品になっているものを使用した。
【０００４】
ダイキン工業株式会社は食品における汚染細菌検出装置ＤＯＸTMを開発し、商品化した。今回この酸素電極装置を使用して輸血製剤の溶液中の酸素濃度消費を測定し、細菌汚染を検出する。非特許文献１では培地中で細菌の増殖を酸素消費を指標として観察しているが、輸血製剤中での細菌の増殖を溶存酸素消費曲線の傾きで観察したものはない。
【特許文献１】特願２０００−８１７６５号
【特許文献２】特願２０００−８１７６６号
【特許文献３】特願２０００−７６３９３号
【非特許文献１】町田勝彦、シンポジウム１：薬剤耐性菌をめぐる諸問題  感受性検査の迅速化の試み、日本臨床微生物学雑誌、９（２）１７８−１８３、１９９９
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
解決しようとする問題点は、新規の輸血製剤微生物汚染の測定方法、新規の輸血製剤微生物汚染指標の提供とその検出方法である。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、輸血製剤に人為的に細菌を接種し、連続培養を行い、溶存酸素消費曲線の傾きを見いだすことができたことを最も主要な特徴とする。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、溶存酸素濃度測定法を用いて輸血製剤製造時または製剤使用施設への搬入時である製造２４時間後に一部を採取し溶存酸素濃度を連続測定することで約２０時間後には検出可能である。輸血される一般的な標準時間とされる製造４８時間後には、輸血製剤の微生物汚染状況を前もって知ることができる。これによって、輸血時の事故を未然に回避できる可能性が大きい。微生物汚染を検出できる方法として、迅速、自動化、低コストな実用システムである。溶存酸素濃度測定法を用いた自己血輸血を含めた、血液製剤の微生物汚染検出は有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
微生物の検出を迅速かつ自動化、低コストで実現した。
【実施例１】
【０００９】
アフェレーシス（血液成分分画採取）血小板製剤において予め用意された３菌種を接種してＤＯＸTMの有用性を確認した。Serratia marcescens（セラチア菌）, Staphylococcus aureus（黄色ブドウ球菌）,Staphylococcus epidermidis（表皮ブドウ球菌）を日赤から供給されたシングルドナー（単一供血者）由来の血小板製剤に接種し(１００, １０１, １０２ ＣＦＵ/ｍＬ)（ＣＦＵはｃｏｌｏｎｙ ｆｏｒｍｉｎｇ ｕｎｉｔの略で菌数を表す）、常温（２０〜２４℃）で４８時間培養した。血小板製剤は、その血小板の機能を保持するため常温で保存する必要性がある。菌接種直後にバック内から検体を１ｍＬ分取し、溶存酸素測定装置（ＤＯＸ-３０Ｆ）のセルに分注し、３５℃、２４時間連続で製剤内の溶存酸素濃度測定を行った。菌接種を行わない同一ロットの血小板製剤内容を１ｍＬ同様に装置にセットし陰性コントロールとした。溶存酸素消費の判定は傾きに変化がみられた時点で判断した。図１に輸血製剤への菌接種直後から２４時間の溶存酸素濃度連続測定成績を表したグラフを、表１に輸血製剤への菌接種直後と４８時間２０〜２４℃培養後の菌数計測成績を示す。
【００１０】
【表１】
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【００１１】
S. marcescens (１０２ ＣＦＵ/ｍＬ) を汚染させた試験血小板製剤は溶存酸素濃度測定法を用いると、グラフに溶存酸素消費を示す傾きが現れ、７６０分で検出可能であった。同時に、その試験バックを４８時間、常温培養後に試験血小板製剤を１ｍＬ採取し、従来法で菌数を計測すると１０７ ＣＦＵ/ｍＬを確認した。１０１ ＣＦＵ/ｍＬでは２４時間以内に検出不可能であった。４８時間後の従来法でも菌数は検出されなかった。おそらく、血小板製剤が有する殺菌能によって、接種菌が死滅したものと思われる。S. aureus (１０１、１０２  ＣＦＵ/ｍＬ) を汚染させた試験血小板製剤は溶存酸素濃度測定法を用いると、それぞれ１２００分、５００分で検出可能であった（グラフ１）。４８時間後の従来法では、いずれも菌数は１０７ ＣＦＵ/ｍＬであった。S. epidermidis では１０１、１０２ ＣＦＵ/ｍＬの、いずれの接種濃度でも酸素電極法および菌数計測法ともに検出不可能であった。
【００１２】
血小板製剤の製造時にS. marcrscens , S. aureus が１０２ ＣＦＵ/ｍＬ汚染として存在した場合、約２０時間以内で細菌汚染の存在を検出できると考えられる。その汚染製剤は常温で保存され、輸血される一般的な標準時間とされる４８時間後には、菌数が１０７ ＣＦＵ/ｍＬに達していた。受血者はこの汚染製剤を輸血されると、重篤な菌血症に陥る。 S. epidermidis では溶存酸素濃度測定法および菌数計測法の両者で検出されず、新鮮血の持つ殺菌能により接種菌は消滅したものと考えられた。以上より、溶存酸素濃度測定法を用いて血小板製造時または製剤使用施設への搬入時である製造２４時間後に一部を採取し溶存酸素濃度を連続測定することでその後約２０時間後には検出可能と考えられた。これによって、輸血時の事故を未然に回避できる可能性が大きい。この装置は既に食品の細菌汚染に対して迅速に検出できる装置として市販化されており、迅速、自動化、低コストな実用システムとして自己血輸血を含め、血液製剤の細菌汚染検出装置として有用であると考えられた。
【産業上の利用可能性】
【００１３】
微生物汚染を検出できる指標として、輸血時の事故を未然に回避できる可能性が大きい。迅速、自動化、低コストな実用システムである、溶存酸素濃度測定法を用いた自己血輸血を含め、血液製剤の微生物汚染検出は有用である。
【図面の簡単な説明】
【００１４】
【図１】輸血製剤への菌接種直後から２４時間の溶存酸素濃度連続測定成績を表したグラフ
【図１】
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