(57)【要約】      （修正有）【課題】良性の前立腺肥大症の処置のための薬剤を提供する。【解決手段】下記式又はこれの鏡像異性体である２-[３-([１,４]-ベンゾジオキサン-２-イル-メチルアミノ)-１-プロピル]-３(２Ｈ)-ピリダジノン。2006316064.tif 000011α1-及びα2-アドレナリン受容体拮抗作用及び泌尿生殖器選択性を有する。【選択図】        なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（１）
【化１】
2006316064.tif 000009
の(Ｒ)-２-[３-([１,４]ベンゾジオキサン-２-イルメチルアミノ)-１-プロピル]-３(２Ｈ)-ピリダジノン又はその酸付加塩。
【請求項２】
式（２）
【化２】
2006316064.tif 000010
の(Ｓ)-２-[３-([１,４]ベンゾジオキサン-２-イルメチルアミノ)-１-プロピル]-３(２Ｈ)-ピリダジノン又はその酸付加塩。
【請求項３】
良性の前立腺肥大症の処置のための薬剤の製造における、請求項１に記載の(Ｒ)-２-[３-([１,４]ベンゾジオキサン-２-イルメチルアミノ)-１-プロピル]-３(２Ｈ)-ピリダジノン又はその酸付加塩の使用。
【請求項４】
良性の前立腺肥大症の処置のための薬剤の製造における、請求項２に記載の(Ｓ)-２-[３-([１,４]ベンゾジオキサン-２-イルメチルアミノ)-１-プロピル]-３(２Ｈ)-ピリダジノン又はその酸付加塩の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、式（１）
【化１】
2006316064.tif 000002
で表される(Ｒ)-２-[３-([１,４]-ベンゾジオキサン-２-イル-メチルアミノ)-１-プロピル]-３(２Ｈ)-ピリダジノン及び式（２）
【化２】
2006316064.tif 000003
で表される(Ｓ)-２-[３-([１,４]ベンゾジオキサン-２-イル-メチルアミノ)-１-プロピル]-３(２Ｈ)-ピリダジノン及びこれら化合物の酸付加塩に関する。本発明は、これらの化合物を含有する医薬組成物の製造における、これら化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
抗高血圧症剤である２-(アミノアルキル)-３(２Ｈ)-ピリダジノン誘導体は、ハンガリー国特許第195,645号に開示されている。これらの物質の代表的な例は、式（３）
【化３】
2006316064.tif 000004
で表される２-[３-([１,４]ベンゾジオキサン-２-イル-メチルアミノ)-１-プロピル]-３(２Ｈ)-ピリダジノン、すなわち、上記の式（１）で表される化合物と式（２）で表される化合物とのラセミ体であり、非常に少ない用量で投与される際、インビボ条件下での動物実験において、動脈血圧を著しく低下させる。その記載によれば、これらのピリダジノン誘導体は、選択的にα1-アドレナリン受容体を抑制し、カルシウム拮抗作用を発揮する。このように、これらは多成分系抗高血圧作用の要求を満足する。しかし、これら化合物の他の薬理作用については言及されていない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
最近、良性の前立腺肥大症（以下、BPHと表示する）の薬物治療の可能性が報告されている。これまでのところ、５０才以上の男性の約５０％が罹るとされるこの病気を克服するためには、外科的手段が、ほぼ絶対的なものとして採用されてきた。しかし、高齢であればあるほど、リスクは高くなり、外科的手段のコストは高くなるため、薬物治療が大いに注目されている。
【０００４】
BPHに伴う症状の多くは、尿道及び膀胱頸部の前立腺領域の平滑筋の緊張力の増加（尿道内圧の増大を導く）に関するものである。さらに、これらの組織内において、α1-及びα2-アドレナリン受容体の両方を含むα-アドレナリン作動性神経支配を有する平滑筋は、α-アドレナリン抑制薬によって弛緩されることが証明されている。このように、BPHの症状はα-アドレナリン抑制薬によって有利に影響される（例えば、E. Shapiroら, J. Urol., 137, 565(1987); H. Lepor, J. Androl., 12, 356(1991)；さらに、S. Hedaら, Eur. J. Pharm., 103, 249(1994)参照）。しかし、BPHの治療については、このようなα-アドレナリン受容体抑制化合物として、好ましくは、例えば、血圧低下、起立性低血圧症又は失神の如き各種の心臓血管系の副作用を示さないもののみが考慮に入れられる。
【０００５】
非選択的なα1-及びα2-アドレナリン受容体抑制薬を使用する場合、シナプス前部α2-受容体の抑制のため、他の副作用が現れる（例えば、心拍数が増加する）。従って、現時点では、もっぱらα1-アドレナリン受容体抑制薬が治療に使用されている。
【０００６】
終局的には、活性剤の泌尿生殖器選択性、すなわち、前立腺−尿道−膀胱系に関する選択性が非常に重要な要件である。それにもかかわらず、利用できる薬剤(例えば、プラゾシン、テラゾシン、アルフゾシン)の選択性は低いか又は中程度であり、結果として、それらは逆の作用を示す。このように、BPHの症状に良好な影響を及ぼすことができ、有害な副作用を持たない、新規な泌尿生殖器選択性のα-アドレナリン受容体抑制薬が真に必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明者らの研究において、驚くべきことには、本発明の式（１）又は（２）で表されるα-アドレナリン受容体抑制化合物が、顕著な泌尿生殖器選択性を有すること；これらの化合物は、非常に少ない用量において、尿道内圧力を低下させると共に、同時に、他の心臓血管パラメータについては極めて弱い影響を及ぼすのみであるとの知見を得た。このように、これら化合物は上記の要件を満足する。
【０００８】
化合物の効能及び選択性を、単離された器官に関するインビトロ実験及び受容体結合アッセイによると共に、インビボ条件下において証明した。
【０００９】
インビボ動物モデルである麻酔した猫において、尿道内の高圧は、α1-アドレナリン受容体作動薬（例えば、フェニレフリン（化学的には、(−)-１-(３-ヒドロキシフェニル)-２-(メチルアミノ)エタノール））によって惹起される。この高圧惹起作用は、α1-アドレナリン受容体拮抗薬によって拮抗される。抗高血圧作用は、拡張期血圧の低下によって表される。この実験の結果を表１に示す（実験については、薬理に関する部分において詳細に説明する）。
【００１０】
表１
フェニレフリン惹起尿道内高圧及び拡張期血圧に関する式(１)又は(２)で表される化合物の効果
化合物                 ED50(μg/kg, iv.)                        Ｄ/Ｕc
尿道a              拡張期血圧b   
（１）          13.9                   ＞888                  ＞63.9
（２）           3.4                      90                    26.5
（３）          28.4                     130                     4.6
プラゾシン        18.7                      25                     1.3
注：
a：フェニレフリン１５μg/kg/分の静脈内投与によって惹起された高圧を５０％低下させる用量
b：フェニレフリンによって上昇された拡張期全血圧を５０％低下させる用量
c：ED50(拡張期圧)／ED50(尿道)
【００１１】
上記のデータから、本発明の式（１）又は（２）で表される化合物による尿道内圧の低下作用が少ない用量で出現すること；さらに、その泌尿生殖器選択性（Ｄ/Ｕとして表示される）は、式（３）で表されるラセミ化合物の選択性及びプラゾシンの選択性を、かなり越えていることが明らである。
【００１２】
さらに、血管及びヒト肥大化前立腺組織試料について調査を行った。これらの実験では、血圧に影響を及ぼす抵抗血管のモデルとして腸間膜動脈を使用した。α1-作動薬（フェニレフリン）の収縮惹起作用に関する本発明の化合物の抑制程度及び対照薬剤の抑制程度を、それぞれ測定した。ついで、α1-アドレナリン受容体拮抗作用をｐＡ2値によって特定した。その結果を表２に示す。
【００１３】
表２
単離器官実験におけるα1-アドレナリン受容体拮抗作用の評価
化合物                    ｐＡ2                       選択性a
(前立腺／動脈)
ラット腸間膜動脈 ヒト肥大前立腺組織  
（１）            6.56              7.20                4.37
（２）            7.68              8.23                3.55
（３）            7.16              7.51                2.24
アルフゾシン        8.60              8.01                0.26
テラゾシン          8.45              8.39                0.87
注：
a：ｐＡ2値の真数比率である。
【００１４】
表２のデータは、式（１）及び（２）で表される化合物が、強力なα1-アドレナリン受容体拮抗作用を有し、その作用は、抵抗動脈試料に関するよりも、前立腺組織に関して、より顕著であることを示している。本発明による化合物の前立腺選択性は、式（３）で表されるラセミ化合物を含むいずれの対照薬剤の選択性よりも好適であることも明らかである。
【００１５】
上記のように、シナプス後部α2-アドレナリン受容体の抑制が、シナプス前部α2-受容体の抑制よりも顕著である場合には、α2-アドレナリン受容体抑制成分も、BPHの治療において重要であろう。
【００１６】
さらに最近になって示されたように、α2-拮抗薬は、前立腺における交感神経コントロールの亢進を低減する能力以外に、ホルモンによって惹起される前立腺の硬直を効果的に低減できるものである（R. R. Ruffoloら, Eur. J. Med. Chem., 30S, 269(1995)参照）。
【００１７】
本発明による化合物のシナプス前部及びシナプス後部α2-アドレナリン受容体拮抗作用を、キシラジン（化学的には、５,６-ジヒドロ-２-(２,６-ジメチルフェニルアミノ)-１,３-チアジン）又は英国特許第14,304号に記載されたもの（化学的には、５-ブロモ-６-(２-イミダゾリン-２-イル-アミノ)-キノキサリン）を作動薬として使用して、ラットの輸精管及び犬の伏在静脈試料について測定した。拮抗作用をｐＡ2値によって表示した。結果を表３に示す。
【００１８】
表３
輸精管及び伏在静脈試料に関するシナプス前部及びシナプス後部α2-アドレナリン受容体拮抗作用
化合物                ｐＡ2              選択性a(シナプス後部/シナプス前部)
シナプス前部    シナプス後部  
（１）      5.81             7.87                     115.0
（２）      6.81             8.14                      21.4
ヨヒンビン    6.93             8.05                      13.2
注：
a：ｐＡ2値の真数比率
【００１９】
上記データに基づいて、式（１）又は（２）で表される２つの化合物はいずれも、強力なα2-アドレナリン受容体拮抗性を有すること、及びこれら化合物は、驚くべきことには、シナプス後部α2-受容体に対する優れた選択性を発揮することが指摘される。後者の特性は、本発明による化合物の作用メカニズムにおける有利な付加的要素を提供する。
【００２０】
上記のインビボ及び単離器官実験は、式（３）で表されるラセミ化合物及び他の対照薬剤との比較において、本発明による式（１）及び（２）で表される物質が、BPHの治療の観点から、かなりの利点を提供することを支持している。式（１）又は（２）で表される両化合物の低い毒性は、高い治療効果及び安全性に寄与する。
【００２１】
このように、本発明は、式（１）又は（２）で表される化合物を、それぞれ、有効成分として含有する、良性の前立腺肥大症の治療に関して有用な医薬組成物にも関する。
【００２２】
さらに、本発明は、式（１）又は（２）で表される化合物の製法にも関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
式（１）又は（２）で表される化合物又はその酸付加塩は、式（４）
【化４】
2006316064.tif 000005
で表されるＲ配置の、又は式（５）
【化５】
2006316064.tif 000006
で表されるＳ配置の、対応する光学活性Ｎ-([１,４]ベンゾジオキサン-２-イル-メチル)-Ｎ-(３-クロロ-１-プロピル)-アミンを、式（６）
【化６】
2006316064.tif 000007
で表される３(２Ｈ)-ピリダジノンと反応させ、所望により、得られた遊離塩基を酸付加塩に変換させることによって調製される。
【００２４】
本発明の製法の好適な具体的例によれば、式（６）で表される化合物の塩（任意に、その場で塩基によって調製される）を使用し、反応を、非プロトン性又はプロトン性溶媒中、温度２０〜150℃で行う。
【００２５】
好適には、式（６）で表される化合物のアルカリ金属塩、例えば、カリウム又はナトリウム塩を、極性又は非極性の非プロトン性溶媒中、温度２０℃〜使用した溶媒の沸点において、式（４）又は（５）で表される化合物と反応させる。この反応にとって好適な溶媒は、ジメチルスルホキシド、ジメチルホルムアミド又はトルエンである。反応において、任意に、触媒、例えば、ヨウ化カリウム又はヨウ化ナトリウム及び／又は４級アンモニウム塩、例えば、臭化テトラブチルアンモニウムを使用できる。
【００２６】
本発明の製法の特に好適な具体例によれば、式（１）で表される化合物を得るため、式（６）で表される化合物の無水カリウム塩を、式（４）で表されるクロロプロピルアルキル化剤と反応させる。一方、式（２）で表される化合物の調製では、式（５）で表されるクロロプロピルアルキル化剤を使用する。反応は、攪拌下、ジメチルスルホキシド中、室温において約２０時間で行われる。
【００２７】
製法の他の有利な具体例によれば、上記の反応体を、トルエン中、臭化テトラブチルアンモニウムの存在下、反応混合物の沸点において相互作用させる。
【００２８】
反応混合物を、それ自体公知の方法によって処理できる；例えば、水処理の後、任意に、混合物をアルカリ化した後、水と非混和性の溶媒にて生成物を抽出する。粗製生成物は、例えば、クロマトグラフ法を使用することによって塩基形で精製される。又は、その酸付加塩の１つに変換され、再結晶され、又は、所望により、得られた酸付加塩から他の酸付加塩が調製される。
【００２９】
上記反応において原料物質として使用される式（６）で表される３(２Ｈ)-ピリダジノンは既知の化合物である（例えば、Staehelinら, Helv. Chim. Acta, 39, 1741(1959)参照）。
【００３０】
式（４）又は（５）で表される光学活性化合物は新規であり、本発明の範囲内に含まれる。これらの化合物は、例えば、式（７）
【化７】
2006316064.tif 000008
で表されるラセミ化合物の分割によって調製される。
【００３１】
式（７）で表される化合物は、例えば、ドイツ国特許第1,118,218号に従って得られる。
【００３２】
分割は、例えば、光学活性酸によってラセミ塩基からジアステレイマー塩を調製し、ジアステレオマー塩ペアーを、例えば、分別結晶によって分離し、ついで、分離したジアステレオマー塩から塩基を遊離した後、式（４）又は（５）で表されるエナンチオマーを得ることによって行われる。ジアステレオマー塩は、好ましくは、Ｌ(−)-ジベンゾイル酒石酸を使用することによって調製される。分割の具体例については、製造例に関連して説明する。
【００３３】
上記のように、式（１）又は（２）で表される化合物は有用な薬理作用を有し、BPHの症状に好適な影響を及ぼす。
【００３４】
治療目的については、本発明の活性化合物の用量は、一般的には、0.05〜２.０mg/kg（体重）、好ましくは、０.１〜０.５mg/kg（体重）であり、該用量は、吸収の条件をも考慮して、任意に分けられる。また、上記用量以外の用量も、治療される臨床症状の重篤性に応じて、治療すべき患者の一般的状態を考慮して使用される。
【００３５】
治療目的について、投与は、使用前に溶解、乳化又は懸濁化される固状の注射用組成物の形態と共に、例えば、錠剤、ピル、カプセル、顆粒剤、粉末剤、坐薬、軟膏、水性又は非水性注射剤、又は注射用エマルジョン又は懸濁液等の形態で行われる。本発明の医薬組成物の使用は、経口及び非経口ルートの両方において（例えば、静脈、筋肉内又は皮下ルートにおける注射用溶液の投与による）；又は直腸ルート等によって有効である。通常は、経口投与が好適である。
【００３６】
本発明による医薬組成物は、滅菌水、植物油等の如き通常使用されるキャリヤー及び賦形剤を含有でき、生物学的に許容される溶媒、例えば、エタノール、グリセリン、プロピレングリコール等；充填剤、接着剤、滑沢剤、着色料、香料、乳化剤及び懸濁化剤(例えば、ツイーン８０、アカシアゴム等)；並びに他の添加剤を含有できる。
【００３７】
次に、下記の実施例（本発明を限定するものではない）により、本発明を詳細に説明する。
【００３８】
化合物の化学的及び光学的純度を、高圧液体クロマトグラフィー（HPLC）を使用することによって測定した。
化学的純度の測定：ヌクレオシル（Nucleosil）Ｃ18カラム；移動相：KH2P4リン酸塩緩衝液／ラウリル硫酸Ｎａ／アセトニトリル
光学的純度の測定：キラール（Chiral）AGPカラム；リン酸塩緩衝液／アセトニトリル
【００３９】
融点を、ボエチウス（Boetius）タイプの融点装置で測定した。
【実施例１】
【００４０】
(Ｒ)-２-[３-([１,４]ベンゾジオキサン-２-イル-メチルアミノ)-１-プロピル]-３(２Ｈ)-ピリダジノン塩酸塩
攪拌しながら、窒素雰囲気下、無水のジメチルスルホキシド５７mlに、５０％水素化ナトリウム1.40ｇ（29.2ミリモル）を添加した後に、懸濁物を、室温において１０分間攪拌した。ついで、３(２Ｈ)-ピリダジノン2.80ｇ（９.２モリモル）を添加した後、(Ｒ)-Ｎ-([１,４]ベンゾジオキサン-２-イル-メチル)-Ｎ-(３−クロロ-１-プロピル)アミン7.00ｇ（29.0ミリモル）のジメチルスルホキシド（１１ml）溶液を１０分間で滴下した。反応混合物を室温において約４時間攪拌し、１昼夜放置した。ついで、氷水（５０ml）に注加し、各回１０mlずつのトルエンで４回抽出した。有機相を活性炭にて浄化した後、さらに、各回５０mlずつの１Ｎ塩酸で２回抽出し、合わせた水性酸性相をトルエンで洗浄した。氷で冷却しながら、３５％水酸化ナトリウム溶液を添加することによって、水相をｐＨ９のアルカリ性とした後、各回２０mlずつの塩化メチレンにて５回抽出し、ついで、合わせた有機相を無水の炭酸カリウムにて乾燥した。濾過し、溶媒を蒸発させた後に得られた残渣を、シリカゲルカラムでのクロマトグラフィーによって精製した。アセトン及びトルエンの混合物にて溶離を行った。
【００４１】
得られた粗製塩基をエタノール６ml及びエチルエーテル１４mlの混合物に溶解させた後、−５℃において２０％エタノール性塩化水素溶液を添加することによって、溶液をｐＨ５に酸性化した。反応混合物を−５℃において1時間攪拌し、ついで、沈殿物を濾過し、エーテルにて洗浄し、乾燥して、題記塩酸塩を収量３.０ｇ（３１％）で得た。
融点：151〜152℃
光学活性：［α］D18＝＋50.3゜（ｃ＝１，エタノール）
化学的及び光学的純度（HPLC法によって測定）：≧99.5％
【実施例２】
【００４２】
(Ｓ)-２-[３-([１,４]ベンゾジオキサン-２-イル-メチルアミノ)-１-プロピル]-３(２Ｈ)-ピリダジノン塩酸塩
実施例１に記載の方法に従い、ただし、(Ｒ)-Ｎ-([１,４]ベンゾジオキサン-２-イル-メチル)-Ｎ-(３-クロロ-１-プロピル)-アミンの代わりに、(Ｓ)-Ｎ-([１,４]ベンゾジオキサン-２-イル-メチル)-Ｎ-(３-クロロ-１-プロピル)アミンを使用して操作を行い、題記塩酸塩を収量３.２ｇ（３３％）で得た。
融点：152〜153℃
光学活性：［α］D18＝−50.8゜（ｃ＝１，エタノール）
化学的及び光学的純度（HPLC法によって測定）：≧99.5％
【００４３】
実施例１及び２において原料物質として使用した(Ｒ)-又は(Ｓ)-Ｎ-([１,４]ベンゾジオキサン-２-イル-メチル)-Ｎ-(３-クロロ-１-プロピル)アミンは、それぞれ、例えば、次のようにして調製される。
【００４４】
アセトン９７mlにラセミＮ-([１,４]ベンゾジオキサン-２-イル-メチル)-Ｎ-(３-クロロ-１-プロピル)-アミン塩基（３５％水酸化ナトリウム溶液の添加によって、その塩酸塩から遊離されたもの）12.0ｇ（50.0ミリモル）を含有する溶液に、Ｌ(−)-ジベンゾイル酒石酸１水和物18.85ｇ（50.0ミリモル）を、攪拌しながら添加する。溶液を、室温において４時間攪拌し、ついで、１昼夜放置する。沈殿物を瀘過によって集め、アセトンから数回再結晶する。
【００４５】
このようにして、化学量論的組成１：１にて、(Ｒ)-Ｎ-([１,４]ベンゾジオキサン-２-イル-メチル)-Ｎ-(３-クロロ-１-プロピル)アミンのＬ(−)-ジベンゾイル酒石酸塩が収量４.５ｇ（３０％）で得られる（融点：149〜150℃）。
【００４６】
上記の濾液を減圧下で蒸発させた後に、３５％水酸化ナトリウム溶液を添加することによって、蒸発残渣（(Ｓ)-Ｎ-([１,４]ベンゾジオキサン-２-イル-メチル)-Ｎ-(３-クロロ-１-プロピル)アミン塩を富有する混合物である）から、塩基（主成分として、(Ｓ)-Ｎ-([１,４]ベンゾジオキサン-２-イル-メチル)-Ｎ-(３-クロロ-１-プロピル)アミンを含有する）を分離する。Ｓ配置の純粋なアミン塩は、調製された塩基から、次のようにして得られる：
【００４７】
粗製塩基７.１ｇ（30.0ミリモル）のエタノール（１５ml）溶液に、Ｌ(−)-ジベンゾイル酒石酸１水和物5.65ｇ（15.0ミリモル）を添加する。反応混合物を室温において２時間攪拌した後に、沈殿物を濾過し、エタノールから数回再結晶し、乾燥する。このようにして、化学量論的組成２：１にて、(Ｓ)-Ｎ-([１,４]ベンゾジオキサン-２-イル-メチル)-Ｎ-(３-クロロ-１-プロピル)アミンのＬ(−)-ジベンゾイル酒石酸塩が、収量４.２ｇ（３３％）で得られる（融点：100〜101℃）。
【００４８】
両ジアステレオマー塩の化学的及び光学的純度は、≧９９％（HPLC分析に基づく）である。
【００４９】
Ｒ又はＳ配置のアミン塩基は、３５％水酸化ナトリウム溶液を、水中のジアステレオマー塩に添加することによって遊離され、それぞれ、実施例１及び２の化合物の製造に直接使用される。
【００５０】
薬理学的検討
麻酔した猫の尿道内圧及び拡張期血圧に関する効果
この調査を、Lefevreらの方法（Br. J. Pharmacol., 109, 1282(1993)）に従って行った。この方法の要点は以下のように要約される。
【００５１】
化合物の投与及び血圧測定のため、ペントバルビタールにて麻酔し、人工呼吸器を装着した雄及び雌の猫（体重２.５〜３.５kg）の大腿動脈及び静脈内にカニューレを挿入した。下方正中開腹術によって膀胱を露出し、トリゴナムを介してカテーテルを尿道に導入した。動脈血圧及び尿道内圧を、圧力トランスデューサーを使用することによってHelligeポリグラフに記録した。
【００５２】
α-アドレナリン受容体を介さない自律神経作用を排除するために、メカミルアミン、アトロピン及びプロプラノロールを、それぞれ、０.５、0.75及び０.５mg/kgの用量で静脈内に投与した。
【００５３】
尿道内圧及び血圧の上昇を、フェニレフリン１５μg/kg/分の注射によって惹起した。ベースライン圧力を超える変化を100％とみなした。テスト物質を、１〜1000μg/kgの累積ボーラス用量で静脈内注射した。各投与後に、少なくとも５分間の間隔を置いた。フェニレフリン惹起拡張期全圧上昇を５０％低減する用量（ED50拡張期値）と共に、フェニレフリン惹起尿道内圧の上昇を５０％抑えるα-拮抗薬の用量（ED50尿道）を測定した。
【００５４】
単離器官実験におけるα1-アドレナリン受容体拮抗作用
Ａ）ラット腸間膜動脈に関するシナプス後部α1-アドレナリン受容体の検討
このテストを、Angusらの方法（J. Physiol., 403, 495(1988)）に従って行った。上部腸間膜動脈試料を、３７℃において、carbogenを発泡させたKrebs溶液中に懸濁させた。プレテンション１ｇ及び平衡期間１.５時間を使用した。フェニレフリンについて、累積用量／作用曲線を確立した。ついで、２回洗浄し、拮抗剤と共に３０分間インキュベートした後、用量／作用曲線を繰り返し測定した。拮抗作用を特定するため、ｐＡ2値を算定した。
【００５５】
Ｂ）ヒト前立腺試料に関するシナプス後部α1-アドレナリン受容体の検討
このテストを、Scheu-Eei Yuらの方法（Eur. J. Pharmacol., 252, 29(1994)）に従って行った。
【００５６】
ヒト肥大前立腺組織から調製されたストリップを、３７℃において、carbogenを発泡させたKrebs溶液中に懸濁させた。プレテンション１ｇ及び平衡期間１時間を使用した。フェニレフリンについて、用量／作用曲線を確立した。ついで、洗浄し、拮抗剤と共に３０分間インキュベートした後、用量／作用曲線を再び測定した。拮抗作用を特定するため、ｐＡ2値を算定した。
【００５７】
シナプス前部及び後部α2-アドレナリン受容体拮抗作用
Ａ）ラット輸精管試料に関するシナプス前部α2-アドレナリン受容体拮抗作用
要約すると、実験を下記のように実施した。
【００５８】
Viziらの方法（N. S. Arch. Pharmacol., 280, 79(1973)）に従って、SPRDラットから輸精管を単離した。試料を、３５℃のKrebs溶液に懸濁化し、電気的に刺激した。
キシラジンについて、用量／作用曲線を測定した。ついで、洗浄した後、器官を拮抗剤と共にインキュベートした。拮抗剤の存在下、キシラジンについての用量／作用曲線を測定した。拮抗作用を、Arunlakshana及びSchieldの方法（Br. J. Pharmacol., 14, 48(1959)）の方法に従って測定したｐＡ2値によって特定した。
【００５９】
Ｂ）犬の伏在静脈試料におけるシナプス後部α2-アドレナリン受容体拮抗作用
この調査を、Fowlerらの方法（J. Pharmacol. Exp. Ther., 229, 712(1984)）に従い、わずかな変更を加えて実施した。
【００６０】
β-アドレナリン受容体をプロプラノロールにて不活性化した。選択性のα2-アドレナリン受容体作動性化合物（英国特許第14304号）について、累積用量／作用曲線を確立した。３０分後に、器官を作動薬と共に３０分間インキュベートした。この場合も、拮抗作用をｐＡ2値によって特定した。