(57)【要約】【課題】液状試料の質量分析の際のイオン化法において、移動相にプロトン性溶媒を添加することなく、試料を効率的にイオン化することができる液状試料の質量分析用プローブを提供すること。【解決手段】プローブは、一般式[I]Ｒ２−Ａ−Ｒ１      [I]（但し、式中、Ｒ１は溶媒中でイオンとなるイオン性官能基、Ｒ２は他の物質と結合し得る構造、Ａは任意のスペーサー部を示す）で表される化学構造を有する。【効果】本発明のプローブを用いれば、エレクトロスプレーイオン化法において、移動相にプロトン性溶媒を添加することなく、試料を効率的にイオン化することができ、種々の試料について、高感度、高精度にエレクトロスプレーイオン化質量分析を行うことができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式[I]
Ｒ２−Ａ−Ｒ１      [I]
（但し、式中、Ｒ１は溶媒中でイオンとなるイオン性官能基、Ｒ２は他の物質と結合し得る構造、Ａは任意のスペーサー部を示す）
で表される液状試料の質量分析用プローブ。
【請求項２】
Ｒ２は、他の官能基と反応して共有結合し得る官能基である請求項１記載のプローブ。
【請求項３】
Ｒ１は、アミン、カルボン酸若しくはその塩、スルホン酸若しくはその塩、又は
【化１】
2006317464.tif 000118
（但し、式中、R'、R''及びR'''は同一又は異なる任意の基）
である請求項２記載のプローブ。
【請求項４】
Ｒ１は、一般式[II]
【化２】
2006317464.tif 000119
（但し、式中、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５はそれぞれ独立に、水素又は任意の基を示す）
で表されるアミンである請求項３記載のプローブ。
【請求項５】
前記一般式[II]中、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５はそれぞれ独立に、水素、ハロゲン又は炭素数１〜２０の直鎖状若しくは分枝状アルキル基を示す）
で表される請求項４記載のプローブ。
【請求項６】
Ｒ２はＳＣＮ−、ＣlＯ２Ｓ−、
【化３】
2006317464.tif 000120
【化４】
2006317464.tif 000121
ＢｒＨ２Ｃ−、ＣｌＯＣ−、ＣＨ３ＣＨ（ＮＨ２）＝ＣＨ−、-CH2ONH2-HCl、
−ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＣＨ２Ｉ、
【化５】
2006317464.tif 000122
又は
【化６】
2006317464.tif 000123
である請求項２ないし５のいずれか１項に記載のプローブ。
【請求項７】
Ａは、疎水性部と親水性部を有する請求項２ないし６のいずれか１項に記載のプローブ。
【請求項８】
Ａは下記一般式[III] 
【化７】
2006317464.tif 000124
（式中、Ｒ６は炭素数１〜２０のアルキレン基であり、その構成単位である
−ＣＨ２−の１個以上かつ半数以下が−Ｏ−、−ＣＯ−及び−ＮＨ−から成る群より選ばれる１又は２以上の基であってもよく、１又は２以上の炭素数１〜２０のアルキル基で置換されていてもよく、Ａｒは、１ないし５個の炭素数１〜２０のアルキル基で置換されていてもよい芳香環である）
で表される請求項７記載のプローブ。
【請求項９】
Ａは、下記一般式[IV]
【化８】
2006317464.tif 000125
（但し、式中、Ｒ７は存在してもしなくてもよく、存在する場合には炭素数１〜６のアルキレン基を示し、Ｒ８は、式中に示されるベンゼン環によって任意の水素が置換された炭素数１〜６のアルキレン基を示す）
又は下記一般式[V]
【化９】
2006317464.tif 000126
（ただし、式中、Ｒ７及びＲ８は、式[IV]と同じ意味を示し、Ｒ９は、存在してもしなくてもよく、存在する場合には炭素数１〜６のアルキレン基を示す）
で表される請求項８記載のプローブ。
【請求項１０】
分子量が１０００以下である請求項２ないし９のいずれか１項に記載のプローブ。
【請求項１１】
エレクトロスプレーイオン化質量分析用プローブである請求項２ないし１０のいずれか１項に記載のプローブ。
【請求項１２】
Ｒ２は、一般式[VI]
【化１０】
2006317464.tif 000127
（ただし、Ｘはハロゲンを示す）、
【化１１】
2006317464.tif 000128
又は、一般式[VII]
【化１２】
2006317464.tif 000129
（ただし、ｎは１〜５の整数を示す）
で表される基である請求項２記載のプローブ。
【請求項１３】
Ｒ２は、光学活性を有する基である請求項２記載のプローブ。
【請求項１４】
Ｒ２は、一般式[VIII]
【化１３】
2006317464.tif 000130
（ただし、Ｘはハロゲン、Ｒ１０は炭素数１〜５のアルキル基を示す）
で表される基である請求項２記載のプローブ。
【請求項１５】
Ｒ２は、二本鎖核酸にインターカレートする構造を有する請求項１記載のプローブ。
【請求項１６】
Ｒ２は、一般式[IX]
【化１４】
2006317464.tif 000131
（ただし、Ｒ１１及びＲ１２は、それぞれ独立に、水素、ハロゲン、炭素数１〜５のアルキル基又は炭素数１〜５のN,N-ジアルキルアミノ基を示す）
で表される請求項１５記載のプローブ。
【請求項１７】
Ｒ２は、他の物質を包接し得る環状構造を有する請求項１記載のプローブ。
【請求項１８】
Ｒ２は、一般式[X]
【化１５】
2006317464.tif 000132
（ただし、Ｒ１３は水酸基、カルボキシル基又は炭素数１〜５のアルキル基、ｍは５〜９の整数を示す）
で表される請求項１７記載のプローブ。
【請求項１９】
Ｒ２は、一般式[XI]
【化１６】
2006317464.tif 000133
（ただし、Ｒ１４及びＲ１５はそれぞれ独立に水素、ハロゲン又は炭素数１〜５のアルキル基、Ｒ１６は炭素数１〜５のアルキル基、又は末端にカルボキシル基、エステル基若しくはアミド基を有する炭素数１〜５のアルキル基、ｐは３〜７の整数を示す）
で表される請求項１７記載のプローブ。
【請求項２０】
Ｒ１は、アミン、カルボン酸若しくはその塩、スルホン酸若しくはその塩、又は
【化１７】
2006317464.tif 000134
（但し、式中、R'、R''及びR'''は同一又は異なる任意の基）
である請求項１２ないし１９のいずれか１項に記載のプローブ。
【請求項２１】
Ｒ１は、一般式[II]
【化１８】
2006317464.tif 000135
（但し、式中、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５はそれぞれ独立に、水素又は任意の基を示す）
で表されるアミンである請求項２０記載のプローブ。
【請求項２２】
前記一般式[II]中、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５はそれぞれ独立に、水素、ハロゲン又は炭素数１〜２０の直鎖状若しくは分枝状アルキル基を示す）
で表される請求項２１記載のプローブ。
【請求項２３】
Ａは、疎水性部と親水性部を有する請求項１２ないし２２のいずれか１項に記載のプローブ。
【請求項２４】
Ａは下記一般式[III] 
【化１９】
2006317464.tif 000136
（式中、Ｒ６は炭素数１〜２０のアルキレン基であり、その構成単位である
−ＣＨ２−の１個以上かつ半数以下が−Ｏ−、−ＣＯ−及び−ＮＨ−から成る群より選ばれる１又は２以上の基であってもよく、１又は２以上の炭素数１〜２０のアルキル基で置換されていてもよく、Ａｒは、１ないし５個の炭素数１〜２０のアルキル基で置換されていてもよい芳香環である）
で表される請求項２３記載のプローブ。
【請求項２５】
Ａは、下記一般式[IV]
【化２０】
2006317464.tif 000137
（但し、式中、Ｒ７は存在してもしなくてもよく、存在する場合には炭素数１〜６のアルキレン基を示し、Ｒ８は、式中に示されるベンゼン環によって任意の水素が置換された炭素数１〜６のアルキレン基を示す）
又は下記一般式[V]
【化２１】
2006317464.tif 000138
（ただし、式中、Ｒ７及びＲ８は、式[IV]と同じ意味を示し、Ｒ９は、存在してもしなくてもよく、存在する場合には炭素数１〜６のアルキレン基又はフェニレン基を示す）
で表される請求項２４記載のプローブ。
【請求項２６】
Ａは、−Ｒ６−（ただし、Ｒ６は、炭素数１〜２０のアルキレン基であって、その構成単位である−ＣＨ２−の１個以上かつ半数以下が−Ｏ−、−ＣＯ−及び−ＮＨ−から成る群より選ばれる１又は２以上の基であってもよく、１又は２以上の炭素数１〜２０のアルキル基で置換されていてもよいアルキレン基）である請求項１ないし２２のいずれか１項に記載のプローブ。
【請求項２７】
Ａは、下記一般式[XII]
【化２２】
2006317464.tif 000139
（ただし、Ｒ１７及びＲ１８は、互いに独立に炭素数１〜６のアルキレン基を示し、Ｒ１９は存在していてもいなくてもよく、存在している場合には炭素数１〜６のアルキレン基を示す）
又は下記一般式[XIII]
【化２３】
2006317464.tif 000140
（ただし、Ｒ２０及びＲ２１は、互いに独立に炭素数１〜６のアルキレン基を示し、Ｒ２２は存在していてもいなくてもよく、存在している場合には炭素数１〜６のアルキレン基を示す）
で表される請求項２６記載のプローブ。
【請求項２８】
分子量が１０００以下である請求項１２ないし２７のいずれか１項に記載のプローブ。
【請求項２９】
エレクトロスプレーイオン化質量分析用プローブである請求項１２ないし２８のいずれか１項に記載のプローブ。
【請求項３０】
請求項１ないし２９に記載のプローブと、液状試料中の試料化合物とを結合させ、得られた結合物を質量分析にかけることを含む質量分析方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、液状試料の質量分析のためのプローブに関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、最も高感度、高精度に検体中の試料を定量することができる方法として質量分析測定法が挙げられる。質量分析法を用いて液状試料を測定するにあたり重要なことは、化合物の性質に合わせたイオン化法を選択することである。例えば化合物の不安定要因によって使い分ける場合、大きく分けてハードイオン化とソフトイオン化の２種類に分けられる。前者の方法としては、電子イオン化法、化学イオン化法及び大気圧イオン化法が挙げられ、後者の方法としてはエレクトロスプレーイオン化法、マトリックス支援レーザー脱離イオン化法及び高速原子衝撃イオン化法が挙げられる。
【０００３】
一方、最近では高速液体クロマトグラフィーで分離した試料をオンラインで質量分析を用いて同定を行う手法(LC/MS)が化学、生物学の分野で頻繁に利用されている。この場合、液体クロマトグラフィーと相性の良いイオン化法は、キャピラリー先端から流出する溶液試料を直接イオン化する方法であるため、先に記した方法のうち、後者の方法が該当する。中でもエレクトロスプレーイオン化質量分析装置と高速液体クロマトグラフィーをオンラインで接続した装置は現在最も汎用されており、タンパク質、糖質をはじめとした生体に不可欠な物質から、近年問題とされている環境ホルモン物質の同定にその威力を十分に発揮している。エレクトロスプレーイオン化の場合、試料の分子イオンピークが検出されることは極めて低く、通常ナトリウムなどが加算された擬分子イオンピークとして観察されるか、あるいはLC/MSでは移動相に酢酸アンモニウム、ギ酸、酢酸などのプロトン性溶媒を混入することにより、試料のイオン化を助ける方法が採られている。
【０００４】
液状試料の質量分析の際のイオン化を助ける手段として、液体クロマトグラフィーの移動相にプロトン性溶媒を添加する手法がLC/MSでは一般的となっている。しかし、i)酢酸アンモニウムは負イオンモードの場合、試料のイオンとアンモニウムイオンがペアとなって感度が低下する、ii)トリフルオロ酢酸は正イオンモードの場合、サンプルイオンとトリフルオロ酢酸イオンがペアとなって感度が低下し、負イオンモードの場合、一部例外を除きイオン化を妨害する、iii)アセトニトリルでは必ず酸を添加しなければならない、またこの際、酢酸アンモニウムでは溶解しないので用いることができない、等の欠点も指摘されている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従って、本発明の目的は、液状試料の質量分析の際のイオン化法において、移動相にプロトン性溶媒を添加することなく、試料を効率的にイオン化する手段を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本願発明者らは、鋭意研究の結果、溶媒中でイオン化する基と、試料化合物中の官能基と反応して共有結合する官能基を１つの分子中に有する化合物をプローブとして用い、該プローブを試料化合物と共有結合させることにより、試料化合物を効率的にイオン化することができることに想到し、かつ、このようなプローブによりイオン化した試料化合物がエレクトロスプレー質量分析により高感度に定量できることを実験的に確認し、本発明を完成した。
【０００７】
すなわち、本発明は、一般式[I]
Ｒ２−Ａ−Ｒ１      [I]
（但し、式中、Ｒ１は溶媒中でイオンとなるイオン性官能基、Ｒ２は他の物質と結合し得る構造、Ａは任意のスペーサー部を示す）
で表される液状試料の質量分析用プローブを提供する。また、本発明は、上記本発明のプローブと、液状試料中の試料化合物とを結合させ、得られた結合物を質量分析にかけることを含む質量分析方法を提供する。
【発明の効果】
【０００８】
本発明のプローブを用いれば、エレクトロスプレーイオン化法において、移動相にプロトン性溶媒を添加することなく、試料を効率的にイオン化することができ、種々の試料について、高感度、高精度にエレクトロスプレーイオン化質量分析を行うことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明の液状試料のイオン化質量分析用プローブは、上記一般式[I]で表されるものである。一般式[I]において、Ｒ１は溶媒中でイオン化するイオン化基である。Ｒ１は、使用する溶媒中でイオン化される基であればいずれの基であってもよく、正に帯電するものでも負に帯電するものでもよい。Ｒ１の例として、アミン、カルボン酸若しくはその塩、スルホン酸若しくはその塩、
【００１０】
【化１】
2006317464.tif 000002
【００１１】
（但し、式中、R'、R''及びR'''は同一又は異なる本発明の効果に悪影響を与えない任意の基、好ましくは、水素、ハロゲン、又は炭素数１〜２０の直鎖状若しくは分枝状アルキル基）等を挙げることができるが、これらに限定されるものではない（なお、本明細書において、「ハロゲン」は、特に断りがない限りフッ素、塩素、臭素及びヨウ素のいずれであってもよい）。これらのうち、アミンが好ましく、とりわけ、下記一般式[II]で表されるアミンが好ましい。
【００１２】
【化２】
2006317464.tif 000003
【００１３】
（但し、式中、Ｒ３、Ｒ４及びＲ５はそれぞれ独立に、本発明の効果に悪影響を与えない任意の基、好ましくは、水素、ハロゲン、又は炭素数１〜２０の直鎖状若しくは分枝状アルキル基）
【００１４】
上記一般式[I]中において、Ｒ２は、他の物質と結合し得る構造を示す。Ｒ２の好ましい一群の例として試料化合物中の官能基と反応して共有結合し得る官能基を挙げることができる。この場合、Ｒ２としては、試料化合物中の官能基と反応して共有結合し得る官能基であれば、いかなる官能基であってもよい。液状で質量分析により分析される試料は、タンパク質や糖等の生体物質である場合が多いので、これらに含まれることが多い官能基、すなわち、−ＮＨ２基、−ＳＨ基、−ＣＯＯＨ基、−ＯＨ基、−ＣＨＯ基等と反応して共有結合する官能基が好ましい。このような官能基の例として、ＳＣＮ−、ＣlＯ２Ｓ−、
【００１５】
【化３】
2006317464.tif 000004
【００１６】
【化４】
2006317464.tif 000005
【００１７】
ＢｒＨ２Ｃ−、ＣｌＯＣ−、−ＮＨ２、−ＮＨＮＨ２、−ＣＨ２Ｉ、-CH2ONH2(-HCl)（塩酸塩であってもなくてもよい）、
【００１８】
【化５】
2006317464.tif 000006
【００１９】
【化６】
2006317464.tif 000007
【００２０】
を挙げることができる。これらの官能基と反応する試料化合物中の官能基(R') 及び該反応の結果形成される結合を下記表１に示す（なお、Ｒ２が−ＮＨ２の場合は、表１に示される、試料化合物中の官能基(R')が−ＮＨ２の場合のＲ２と表１に記載のように結合できる）。
【００２１】
【表１】
2006317464.tif 000008
【００２２】
また、Ｒ２としては、ＣＨ３ＣＨ（ＮＨ２）＝ＣＨ−も好ましく採用することができる。この場合、２分子のプローブがＲ−ＣＨＯで表される試料化合物と次のように反応する。
【００２３】
【化７】
2006317464.tif 000009
【００２４】
好ましいＲ２として、さらに、一般式[VI]
【００２５】
【化８】
2006317464.tif 000010
（ただし、Ｘはハロゲンを示す）、
【００２６】
【化９】
2006317464.tif 000011
【００２７】
及び一般式[VII]
【００２８】
【化１０】
2006317464.tif 000012
（ただし、ｎは１〜５の整数を示す）
で表される基を挙げることができる。一般式[VI]中、ハロゲンとしては、好ましくは臭素である。
【００２９】
上記一般式[VI]で示されるＲ２は、試料化合物中のシトシンと反応して次のように結合する。
【００３０】
【化１１】
2006317464.tif 000013
【００３１】
（ただし、式中、Ｒは、例えばヌクレオチドや核酸の糖部分のような任意の基を示す）
【００３２】
このＲ２は、試料化合物中のシトシン部分と結合することができるので、シチジン一リン酸、シチジン二リン酸、シチジン三リン酸、デオキシシチジン一リン酸、デオキシシチジン二リン酸及びデオキシシチジン三リン酸並びにシトシンを含むＤＮＡ及びＲＮＡのような核酸と結合できる。
【００３３】
Ｒ２が上記
【００３４】
【化１２】
2006317464.tif 000014
【００３５】
の場合は、試料化合物中のグアニンと反応して次のように結合する。
【００３６】
【化１３】
2006317464.tif 000015
【００３７】
（ただし、式中、Ｒは、例えばヌクレオチドや核酸の糖部分のような任意の基を示す）
【００３８】
このＲ２は、試料化合物中のグアニン部分と結合することができるので、グアノシン一リン酸、グアノシン二リン酸、グアノシン三リン酸、デオキシグアノシン一リン酸、デオキシグアノシン二リン酸及びデオキシグアノシン三リン酸並びにグアニンを含むＤＮＡ及びＲＮＡのような核酸と結合できる。
【００３９】
Ｒ２が上記一般式[VII]で示される基である場合は、試料化合物中のリン酸エステル部分と反応して次のように結合する（ただし、下記の例ではｎが２の場合について示す）。
【００４０】
【化１４】
2006317464.tif 000016
【００４１】
なお、この反応式では、試料化合物がデオキシアデノシン一リン酸（すなわち、ヌクレオチド中の塩基がアデニンで、糖がデオキシリボース）の場合を示しているが、Ｒ２は、リン酸エステル部分と結合するので、塩基は、シトシン、グアニン、チミン又はウラシルのようなアデニン以外の他の塩基であってもよいし、糖はデオキシリボースでもリボースでもよい。また、リン酸エステルの数は、上記反応式では１個であるが、Ｒ２は、末端のリン酸エステルと結合するので、縮合しているリン酸エステルの数は１個〜３個のいずれであってもよい。従って、一般式[VII]で示されるＲ２はあらゆる種類のヌクレオシド一リン酸、ヌクレオシド二リン酸及びヌクレオシド三リン酸と結合することが可能である。さらに、核酸の末端には遊離のリン酸エステルが存在するので、一般式[VII]で示されるＲ２はＤＮＡやＲＮＡのような核酸と結合することも可能である。
【００４２】
また、Ｒ２が光学活性を有する基である場合には、光学活性を有する試料化合物と結合させることにより、特定の光学活性を有する試料化合物の測定が可能になり、また、試料化合物中の光学中心の絶対配置を決定することが可能になる。
【００４３】
光学活性を有するＲ２の好ましい例として、一般式[VIII]で表される基を挙げることができる。
【００４４】
【化１５】
2006317464.tif 000017
（ただし、Ｘはハロゲン、Ｒ１０は炭素数１〜５のアルキル基を示す）
【００４５】
ハロゲンとしては、特に臭素が好ましい。
【００４６】
一般式[VIII]で表されるＲ２は、アミノ酸と反応して次のように結合する。
【００４７】
【化１６】
2006317464.tif 000018
【００４８】
（ただし、式中、Ｒはアミノ酸の任意の側鎖を示す）
【００４９】
この場合、アミノ酸が、Ｄ体とＬ体の混合物（ラセミ体）であると、形成された結合物は互いにジアステレオマーの関係になる。この状態でLC/MS分析を行うことにより、単にESI等の質量分析法で高感度検出を行うことができるばかりでなくアミノ酸の絶対配置を決定することが可能となる。
【００５０】
なお、Ｒ２は、試料化合物の官能基と反応して共有結合し得る官能基に限定されるものではなく、試料化合物とインターカレート又は配位結合により結合する基や試料化合物を包接する環状構造を有する基もＲ２として好ましく用いることができる。
【００５１】
すなわち、Ｒ２の好ましい例として、二本鎖核酸にインターカレートする構造を有するものを挙げることができる。このようなＲ２の具体例として下記一般式 [IX]で表される基を挙げることができる。
【００５２】
【化１７】
2006317464.tif 000019
【００５３】
（ただし、Ｒ１１及びＲ１２は、それぞれ独立に、水素、ハロゲン、炭素数１〜５のアルキル基又は炭素数１〜５のN,N-ジアルキルアミノ基を示す）
【００５４】
このようなＲ２は、二本鎖核酸にインターカレートして結合するので、このようなＲ２を有するプローブは二本鎖核酸の測定に好ましく用いることができる。
【００５５】
試料化合物を包接する環状構造を有する基としては、下記一般式[X]で示される基を挙げることができる。
【００５６】
【化１８】
2006317464.tif 000020
【００５７】
（ただし、Ｒ１３は水酸基、カルボキシル基又は炭素数１〜５のアルキル基、ｍは５〜９の整数を示す）
【００５８】
一般式[X]で示されるシクロデキストリン構造は、環状のオリゴ糖で、外側に水酸基を向け、内側に炭素鎖を向けた円錐台状の構造を有している。シクロデキストリンの空孔は疎水場であるため、疎水性相互作用を利用して、有機分子をその空孔内に包接することが出来る。この現象を利用して、微少量の様々な有機分子を含んでいる水を浄化し、その含まれている物質が何であるかを同定するために、上記Ｒ２を有するプローブを利用することができる。該プローブを水試料に投与し、撹拌することにより、水試料中の有機分子はシクロデキストリンの空孔内に包接される。
【００５９】
試料化合物を包接する環状構造を有する基としては、さらに下記一般式[XI]で示される基を挙げることができる。
【００６０】
【化１９】
2006317464.tif 000021
【００６１】
（ただし、Ｒ１４及びＲ１５はそれぞれ独立に水素、ハロゲン又は炭素数１〜５のアルキル基、Ｒ１６は炭素数１〜５のアルキル基、又は末端にカルボキシル基、エステル基若しくはアミド基を有する炭素数１〜５のアルキル基、ｐは３〜７の整数を示す）
【００６２】
一般式[XI]で示されるカリックスアレーンは、ベンゼン環からなる環状のオリゴマーである。カリックスアレーンのベンゼン環で囲まれた空孔は疎水場であるため、疎水性相互作用を利用して、有機分子をその空孔内に包接することが出来る。この現象を利用して、微少量の様々な有機分子を含んでいる水を浄化し、その含まれている物質が何であるかを同定するために、上記Ｒ２を有するプローブを利用することができる。該プローブを水試料に投与し、撹拌することにより、有機分子はカリックスアレーンの空孔内に包接される。
【００６３】
試料化合物を包接する環状構造を有する基は、上記のものに限定されるものではなく、例えば、クラウンエーテル等から水素原子が１個離脱した基等も用いることができる。
【００６４】
さらに、Ｒ２としては、試料化合物と配位結合する、例えばEDTAのような錯体形成性化合物から水素原子が１個離脱した基等も用いることができる。
【００６５】
一般式[I]中、Ａは任意のスペーサー部である。本発明のプローブは、Ｒ２により試料化合物と結合し、Ｒ１によって結合後の化合物をイオン化するものであるから、Ｒ１とＲ２の間に位置するＡは、任意の構造をとり得るものである。もっとも、Ａとして、疎水性部と親水性部を有するものを採用することにより、疎水性溶媒でも親水性溶媒でも用いることができ、汎用性が高まるので好ましい。疎水性部としては、ベンゼン環のような芳香環を挙げることができ、親水性部としては、エーテル、アミン、ケトンを含む構造を挙げることができる。このようなＡの好ましい例として、下記一般式[III]で表されるものを挙げることができる。
【００６６】
【化２０】
2006317464.tif 000022
【００６７】
（式中、Ｒ６は炭素数１〜２０のアルキレン基であり、その構成単位である
−ＣＨ２−の１個以上かつ半数以下が−Ｏ−、−ＣＯ−及び−ＮＨ−から成る群より選ばれる１又は２以上の基であってもよく、１又は２以上の炭素数１〜６のアルキル基で置換されていてもよく、Ａｒは、１ないし５個の炭素数１〜６のアルキル基で置換されていてもよい芳香環である）
【００６８】
さらに、一般式[III]で表されるＡの好ましい例として、下記一般式[IV]
【００６９】
【化２１】
2006317464.tif 000023
【００７０】
（但し、式中、Ｒ７は存在してもしなくてもよく、存在する場合には炭素数１〜６のアルキレン基を示し、Ｒ８は、式中に示されるベンゼン環によって任意の水素が置換された炭素数１〜６のアルキレン基を示す）
又は下記一般式[V]
【００７１】
【化２２】
2006317464.tif 000024
【００７２】
（ただし、式中、Ｒ７及びＲ８は、式[IV]と同じ意味を示し、Ｒ９は、存在してもしなくてもよく、存在する場合には炭素数１〜６のアルキレン基を示す）
で表されるものを挙げることができる。
【００７３】
また、Ａとしては、上記一般式[V]において、Ｒ９がフェニレン基であるものも好ましく用いることができる。このＡは、特にＲ２が上記一般式[VI]で表される構造を有する場合及び
【００７４】
【化２３】
2006317464.tif 000025
【００７５】
である場合に好ましく用いることができる。
【００７６】
また、Ａとしては、−Ｒ６−（ただし、Ｒ６は、一般式[III]におけるＲ３と同じ意味を示す）であるものも好ましく用いることができる。このＡは、特にＲ２が二本鎖核酸にインターカレートする構造を有する基（例えば、上記一般式[IX]で表される基）であり試料化合物が二本鎖核酸である場合、及びＲ２が他の化合物を包接する環状構造を有する基（例えば、上記一般式[X]又は[XI]で表される基）である場合に好ましく用いることができる。
【００７７】
さらに、Ａとしては、−Ｒ６−Ａｒ−Ｒ６’−（ただし、Ｒ６及びＡｒは一般式[III]におけるＲ６及びＡｒとそれぞれ同じ意味を示し、Ｒ６'は存在していてもいなくてもよく、存在している場合には一般式[III]におけるＲ６と同じ意味を示す（ただし、式中のＲ６とＲ６'とは同一であっても異なっていてもよい））であるものも好ましく用いることができる。このようなＡの好ましい例として、下記一般式[XII]
【００７８】
【化２４】
2006317464.tif 000026
【００７９】
（ただし、Ｒ１７及びＲ１８は、互いに独立に炭素数１〜６のアルキレン基を示し、Ｒ１９は存在していてもいなくてもよく、存在している場合には炭素数１〜６のアルキレン基を示す）
又は下記一般式[XIII]
【００８０】
【化２５】
2006317464.tif 000027
【００８１】
（ただし、Ｒ２０及びＲ２１は、互いに独立に炭素数１〜６のアルキレン基を示し、Ｒ２２は存在していてもいなくてもよく、存在している場合には炭素数１〜６のアルキレン基を示す）
で表されるものを挙げることができる。
【００８２】
Ａの構造は任意のものでよいが、プローブ全体の分子量が余りに大きくなると、試料化合物−プローブ結合物における、プローブの占める割合が大きくなって分析の感度が低下するので、プローブの分子量は１０００以下であることが好ましい。
【００８３】
本発明のプローブは、当業者が、公知の方法に基づいて容易に合成することができる。下記実施例にも、複数の好ましいプローブの製造方法が具体的に記載されている。
【００８４】
試料化合物と、プローブとの反応は、プローブのＲ２と、試料化合物中の、Ｒ２と結合させるべき官能基の種類に応じて、公知の技術に基づき適宜の条件で行うことができる。下記実施例にも、好ましいプローブと試料化合物との結合反応の条件が具体的に記載されている。
【００８５】
Ｒ２及び該Ｒ２と結合する試料化合物中の官能基（Ｒ’）の上記した具体的な組合せのそれぞれについて、具体的な結合反応条件の例を以下に記載する。もっとも、これらは単なる例示であり、他の反応条件でもこれらの官能基同士を結合させることは可能であるので、結合反応条件が下記のものに限定されるものではないことは当業者にとって明らかである。また、ここに記載されていないＲ２についても、当業者が化学常識に従って容易に結合反応を行うことができる。
【００８６】
(1)  Ｒ２がＳＣＮ−、Ｒ’が−ＮＨ２の場合
2〜3 mgの試料に0.2 ml (エタノール : 水 :トリエチルアミン = 2 : 2 : 1 v/v)を加え減圧乾固した後、0.5 ml (エタノール : 水 :トリエチルアミン : プローブ = 7 : 7 : 1 : 1 v/v)を加え室温で20分間反応させる。溶媒を減圧留去した後、溶離液に溶解し試料溶液とする（B. A. Bidlingmeyer, et al, J. Chromatogr., 336, 93 (1984)参照）。
【００８７】
(2)  Ｒ２がＣｌＯ２Ｓ−で、Ｒ’が−ＮＨ２の場合
2〜3 mgの試料に500μLの1M NaHCO3水溶液と200μLの1 mg / mLプローブ/アセトン溶液を加え、60℃で30分間加熱する。アセトンを留去後、溶離液に溶解し試料溶液とする（Meffin, P. J., et al, J. Pharm. Sci., 66, 583 (1977)参照）。
【００８８】
(3)  Ｒ２が
【００８９】
【化２６】
2006317464.tif 000028
【００９０】
で、Ｒ’が−ＮＨ２の場合
【００９１】
1.5 mgの試料をTHF5.0 mLに溶解し、50 mgのプローブを加え、60 ℃で30分間加熱する。THFを留去後、溶離液に溶解し試料溶液とする（Jupill, T. H., Am. Lab., 8 (5), 85-92 (1976)参照）。
【００９２】
(4)  Ｒ２が
【００９３】
【化２７】
2006317464.tif 000029
【００９４】
で、Ｒ’が−ＳＨの場合
【００９５】
2〜3 mgの試料を500μLの水に溶解後、200μLの1 mg / mLプローブ/アセトニトリル溶液を加え、60 ℃で30分間加熱する。溶媒を留去後、溶離液に溶解し試料溶液とする（Nakashima K., et al, Talanta., 32, 167 (1985)参照）。
【００９６】
(5)  Ｒ２がＢｒＨ２Ｃ−又はＩＨ２Ｃ−で、Ｒ’が−ＣＯＯＨの場合
2〜3 mgの試料をアセトン500μLに溶解し、200μLの1 mg / mLプローブ/アセトン溶液およびK2CO3 1 mgを加え、60℃ で30分間加熱する。溶媒を留去後、溶離液に溶解し試料溶液とする（Dunges, W., Anal. Chem., 49, 442 (1977)参照）。
【００９７】
(6)  Ｒ２がＣｌＯＣ−で、Ｒ’が−ＯＨの場合
2〜3 mgの試料を0.5 mlのピリジンに溶解後、0.2 mLの1 mg / mLプローブ/ピリジン溶液を加え、40 ℃で1時間加熱する。溶媒を留去後、溶離液に溶解し試料溶液とする（Suzuki, A., et al., J. Biochem., 82, 1185 (1977)参照）。
【００９８】
(7)  Ｒ２が
【００９９】
【化２８】
2006317464.tif 000030
【０１００】
で、Ｒ’が−ＣＨＯの場合
【０１０１】
2〜3 mgの試料をメタノール1.0 ml、酢酸0.1 ml、0.2 mLの1 mg / mLプローブ/メタノール溶液を加え、40 ℃で30分間加熱する。溶媒を留去後、溶離液に溶解し試料溶液とする。
【０１０２】
(8)  Ｒ２が
【０１０３】
【化２９】
2006317464.tif 000031
【０１０４】
で、Ｒ’が−ＮＨ２の場合
【０１０５】
試料のエタノール溶液(10-4 〜 10-3 M) 0.1 mLに、10 mg / mLのプローブ/エタノール溶液1.5 mLを加え、室温で5分間〜10分間撹拌する。溶媒を減圧留去後、溶離液に溶解し試料溶液とする（Roth, M., Anal. Chem., 43, 880 (1971)参照）。
【０１０６】
(9)  Ｒ２が−ＣＨ２ＯＮＨ２・ＨＣｌでＲ’が
【０１０７】
【化３０】
2006317464.tif 000032
【０１０８】
の場合
【０１０９】
1〜5 mgの試料、トリエチルアミン2滴、プローブ50 mgを50 ℃で30分間加熱する。溶媒を減圧留去後、溶離液に溶解し試料溶液とする（Jupille, T. H., Am. Lab., 8 (5), 85-92 (1976)参照）。
【０１１０】
(10)  Ｒ２が−ＮＨＮＨ２、Ｒ’が−ＣＨＯの場合
1〜5 mgの試料を水0.5 mlに溶解後、30%HClO4水溶液に20mg/mLの割合でプローブを溶かした溶液を加え、室温で10分間撹拌した。溶媒を減圧留去後、溶離液に溶解し試料溶液とする（Newberg, C., et al., Anal. Chim. Acta, 7, 238 (1952)参照）。
【０１１１】
(11)  Ｒ２が
【０１１２】
【化３１】
2006317464.tif 000033
【０１１３】
で、Ｒ’が
【０１１４】
【化３２】
2006317464.tif 000034
【０１１５】
の場合
【０１１６】
0.1〜5.0μgの試料を、50μLのリン酸緩衝溶液(pH7.0)に溶解後、200μLの1mg / mLのプローブ/リン酸緩衝溶液(pH7.0)を加え、室温で5分間撹拌する。溶媒を減圧留去後、溶離液に溶解し試料溶液とする。
【０１１７】
(12)  Ｒ２が
【０１１８】
【化３３】
2006317464.tif 000035
【０１１９】
で、Ｒ’が
【０１２０】
【化３４】
2006317464.tif 000036
【０１２１】
の場合
【０１２２】
0.1〜5.0μgの試料を、50μLのリン酸緩衝溶液(pH7.0)に溶解後、200μLの1mg / mLのプローブ/リン酸緩衝溶液(pH7.0)を加え、室温で5分間撹拌する。溶媒を減圧留去後、溶離液に溶解し試料溶液とする。
【０１２３】
(13)  Ｒ２が−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２で、Ｒ’が
【０１２４】
【化３５】
2006317464.tif 000037
【０１２５】
の場合
【０１２６】
0.1〜5.0μgの試料を、50μLのリン酸緩衝溶液(pH7.0)に溶解後、200μLの1mg / mLのプローブ/リン酸緩衝溶液(pH7.0)および1-エチル-3-(3-ジメチルアミノプロピル)カルボジイミドを加え、室温で30分間撹拌する。溶媒を減圧留去後、溶離液に溶解し試料溶液とする。
【０１２７】
本発明のプローブを用いた液状試料の質量分析は、試料化合物と本発明のプローブを反応、結合させた後、通常の液状試料の質量分析と全く同様にして行うことができる。本発明のプローブは、試料のイオン化を伴う、あらゆる液状試料の質量分析方法に適用可能である。好ましい液状試料の質量分析方法の例として、エレクトロスプレーイオン化質量分析、大気圧化学イオン化質量分析、サーモスプレーイオン化質量分析、パーティクルビーム質量分析、フリット高速原子衝撃質量分析等を挙げることができるが、これらに限定されるものではない。また、通常の質量分析のみならず、反応槽と一体化された分析装置中で行われる質量分析に適用することも可能である。例えば、ポストカラム反応方式の高速液体クロマトグラフィ装置や、フローインジェクション分析装置のように、分析装置に反応槽又は反応コイルが組み込まれた分析装置において、反応槽又は反応コイルの下流で行われる質量分析に本発明のプローブを適用することができる。この場合、プローブは、反応槽又は反応コイルの上流で試料と混合し、結合反応を反応槽又は反応コイル中で行うことができる。なお、質量分析自体は、市販の装置を用い、装置に添付された指示書に従って容易に行うことができる。
【０１２８】
なお、「液状試料」とは、分析対象である試料化合物が液状である場合の試料化合物、及び試料化合物が固体である場合の該試料化合物の溶液の両者を包含する。
【０１２９】
本発明のプローブを用いた場合には、試料化合物がプローブと結合することによって確実にイオン化されており、結合後のプローブ由来部分の質量も既知であるから、通常の質量分析により高感度、高精度に定量することができる。なお、観察されたピーク値(m/z値）からプローブの分子量を差し引くことにより試料化合物の分子量を算出することができる。
【０１３０】
以下、本発明を実施例に基づきより具体的に説明する。もっとも、本発明は下記実施例に限定されるものではない。
【０１３１】
実施例１  プローブの合成（その１）
【０１３２】
【化３６】
2006317464.tif 000038
【０１３３】
下記のスキームに従い、Ｒ１として第四級アミン、Ｒ２としてＳＣＮ−を有する上記化合物を合成した。
【０１３４】
【化３７】
2006317464.tif 000039
【０１３５】
（１）2-(2-トリメチルシロキシエトキシ)-2-フェニルエタンニトリルの合成
【０１３６】
【化３８】
2006317464.tif 000040
【０１３７】
50 ml二口フラスコに2-フェニル-1,3-ジオキソラン(化合物1) 3.0 g (19.9 mmol)、トリメチルシリルシアノイド(TMSCN)2.1 ml (21.4 mmol)、ZnI2 0.3 g (0.94 mmol)を加え、窒素気流下、室温で2時間撹拌した。TLC (SiO2; CH2Cl2 : n-ヘキサン = 1 : 4 v/v)で原料消失を確認後、ジエチルエーテル100 mlを加え水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留去し無色オイル状化合物を得た。同定は1H-NMR、ESI-TOF質量分析を用いて行った。
【０１３８】
収率 93 %
1H-NMR (300 MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm) 0.12 (s, 9H, Si (CH3)3),  3.65 〜 3.84 (m, 4H, -OCH2CH2O-), 5.42 (s, 1H, Ar-CH), 7.40〜7.58 (m, 5H, ArH)
ESI-TOF [M + Na]+ = 272
【０１３９】
（２）2-(2-アミノ-1-フェニルエトキシ)エタン-1-オールの合成
【０１４０】
【化３９】
2006317464.tif 000041
【０１４１】
100 ml二口フラスコに化合物2 2.0 g (8.0 mmmol) を加え脱気窒素置換後、氷浴下1 M BH3・THF溶液50 mlを30分間かけて滴下した。室温で4時間撹拌後、TLC (SiO2; n-ヘキサン : 酢酸エチル = 4 : 1 v/v)で原料消失を確認した。氷浴下、6 N HClを加え酸性にした後、溶媒の大部分を減圧留去した。NaOH水溶液を加えpH 10にした後、酢酸エチル100 mlで3回抽出し無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去後、無色オイル状化合物を得た。同定は1H-NMR、ESI-TOF質量分析を用いて行った。
【０１４２】
収率 90 %
1H-NMR (300 MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm) 2.55 (br s, 3H), 2.83 (dd, 1H), 3.15 (dd, 1H), 3.39〜3.62 (m, 2H), 3.68〜3.78 (m, 2H), 5.00 (dd, 1H), 7.40  7.58 (m, 5H)
ESI-TOF [M]+ = 181
【０１４３】
（３）(tert-ブトキシ)-N-(2-(2-ヒドロキシエトキシ)-2-フェニルエチル)フォルムアミドの合成
【０１４４】
【化４０】
2006317464.tif 000042
【０１４５】
30 ml二口フラスコに化合物3 0.50 g (2.76 mmol)を加え脱気窒素置換後、THF 15 ml、トリエチルアミン 0.28 ml (2.76 mmol)、ジ-tert-ブチル-ジカーボネート0.60 g (2.76 mmol)を加え、室温で撹拌した。2時間後、TLC (SiO2; n-ヘキサン : 酢酸エチル = 1 : 1)で原料消失を確認後、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィー (SiO2; n-ヘキサン : 酢酸エチル = 1 : 1)で精製し、無色オイル状化合物を得た。同定は1H-NMR、ESI-TOF質量分析を用いて行った。
【０１４６】
収率 90 %
1H-NMR (300 MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm) 1.37 (s, 9H), 3.10 (s, 3H), 3.51 〜3.64 (m, 4H), 4.33〜4.37 (m, 2H), 4.98 (br s, 1H), 5.01 (dd, 1H), 7.41〜7.58 (m, 5H)
ESI-TOF [M + Na]+ = 304
【０１４７】
（４）(tert-ブトキシ)-N-(2-(2-(メチルスルフォニロキシ)エトキシ)-2-フェニ
ルエチルフォルムアミドの合成
【０１４８】
【化４１】
2006317464.tif 000043
【０１４９】
30 ml二口フラスコに化合物4 0.50 g (1.78 mmol)を加え脱気窒素置換後、ジエチルエーテル10.0 ml、トリエチルアミン0.23 g (2.31 mmol)を加えた。氷浴下、メタンスルホニルクロリド0.22 g (1.96 mmol)を加えた後、室温で撹拌した。一時間後、TLC (SiO2; n-ヘキサン : 酢酸エチル = 2 : 1) で原料消失を確認した。溶媒を減圧留去後、カラムクロマトグラフィー (SiO2; n-ヘキサン : 酢酸エチル = 2 : 1) で精製し、白色固体を得た。同定は1H-NMR、ESI-TOF質量分析を用いて行った。
【０１５０】
収率88 %
1H-NMR (300 MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm) 1.37 (s, 9H), 3.10 (s, 3H), 3.51 〜3.64 (m, 4H), 4.33 ~ 4.37 (m, 2H), 4.98 (br s, 1H), 5.01 (dd, 1H), 7.40 〜7.58 (m, 5H) 
ESI-TOF [M + Na]+ = 382
【０１５１】
（５）(tert-ブトキシ)-N-(2-(2-ヨードエトキシ)-2-フェニルエチル)フォルム
アミドの合成
【０１５２】
【化４２】
2006317464.tif 000044
【０１５３】
30 ml二口フラスコに化合物5 0.50 g (1.39 mmol)を加え脱気窒素置換後、アセトン10.0 ml、ヨウ化ナトリウム1.10 g (7.25 mmol)を加え還流した。2時間後、TLC (SiO2; n-ヘキサン : 酢酸エチル = 1 : 1) で原料消失を確認後、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィー (SiO2; n-ヘキサン : 酢酸エチル = 10 : 1)で精製後、赤色固体を得た。同定は1H-NMR、ESI-TOF質量分析を用いて行った。
【０１５４】
収率85 %
1H-NMR (300 MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm) 1.35 (s, 9H), 3.22 (t, 2H), 3.38 〜3.66 (m, 4H), 5.02 (br s, 1H), 5.06 (dd, 1H), 7.41〜 7.58 (m, 5H)
ESI-TOF [M + Na]+ = 414
【０１５５】
（６）2-(2-ヨードエトキシ)-2-フェニルエタンイソチオシアネートの合成
【０１５６】
【化４３】
2006317464.tif 000045
【０１５７】
10 ml二口フラスコに化合物6 0.20 g (0.51 mmol)を加え脱気窒素置換後、塩化メチレン2.0 ml、トリフルオロ酢酸0.5 mlを加え室温で撹拌した。30分後、TLC (SiO2; n-ヘキサン : 酢酸エチル = 4 : 1) で原料消失を確認し、溶媒を減圧留去した。得られた化合物に塩化メチレン : 水 = 1 : 1 v/vの混合溶媒5.0 mlを加えた後、炭酸水素ナトリウム0.30 g、チオホスゲン80.0μＬを加え、室温で撹拌した。1時間後、TLC (SiO2; n-ヘキサン : 酢酸エチル = 4 : 1) で原料消失を確認し、塩化メチレン50 mlで3回抽出後、有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去後、黄橙色オイル状化合物を得た。同定は1H-NMR、ESI-TOF質量分析を用いて行った。
【０１５８】
収率80 %
1H-NMR (300 MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm) 3.26〜3.33 (m, 2H), 3.36〜3.79 (m, 2H), 3.80 (dd, 1H), 3.95 (dd, 1H), 5.24 (dd, 1H), 7.40〜7.58 (m, 5H)
ESI-TOF [M + Na]+ = 355
【０１５９】
（７）2-(2-(トリエチルアミノ)エトキシ)-2-フェニルエタンイソチオシアネート
ヨーダイドの合成
【０１６０】
【化４４】
2006317464.tif 000046
【０１６１】
30 mlなす型フラスコに化合物7 0.20 g (0.60 mmol)、トルエン5.0 ml、トリエチルアミン1.0 mlを加え、室温で撹拌した。24時間後、TLC (SiO2; n-ヘキサン : 酢酸エチル = 4 : 1) で原料消失を確認し、析出した沈殿を分取後、トルエンで洗浄し、黄白色固体を得た。同定は1H-NMR、ESI-TOF質量分析を用いて行った。
【０１６２】
収率92 %
1H-NMR (300 MHz, DMSO-d6, TMS, r.t., δ/ppm) 1.30 (t, 9H), 3.04 (q, 6H), 3.75〜3.95 (m, 3H), 4.11 (dd, 1H), 4.10 ~ 4.16 (m, 1H), 4.33 (dd, 1H), 5.54 (dd, 1H), 7.40〜7.58 (m, 5H)
ESI-TOF [M]+ = 307
【０１６３】
実施例２  プローブの合成（その２）
【０１６４】
【化４５】
2006317464.tif 000047
【０１６５】
下記のスキームに従い、Ｒ１として第四級アミン、Ｒ２としてＢｒＨ２Ｃ−を有する上記化合物を合成した。
【０１６６】
【化４６】
2006317464.tif 000048
【０１６７】
（１）2-(3,3,4,4-テトラメチル-1-フェニル-3-シラペンチルオキシ)エタン-1-オールの合成
【０１６８】
【化４７】
2006317464.tif 000049
【０１６９】
50 ml二口フラスコに2-(2-ヒドロキシエトキシ)-2-フェニルエタン-1-オール(化合物1) 3.0 g (16.5 mmol)、t-ブチルジメチルシリルクロリド (TBDMSCl) 2.48 g (16.5 mmol)、1,8-ジアザビシクロ[5,4,0]-7-ウンデセン (DBU) 2.51 ml 16.5 mmol)を加え、窒素気流下、室温で24時間撹拌した。TLCで原料消失を確認後、溶媒を減圧留去し、得られた化合物を塩化メチレンに溶解した。水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、目的化合物を得た。
【０１７０】
（２）(メチルスルホニル)オキシ(2-(3,3,4,4-テトラメチル-1-フェニル-3-シラペンチルオキシ)エタンの合成
【０１７１】
【化４８】
2006317464.tif 000050
【０１７２】
100 ml二口フラスコに化合物2 2.0 g (6.75 mmmol) を加え脱気窒素置換後、ジエチルエーテル20.0 ml、トリエチルアミン0.68 g (6.75 mmol)、メタンスルホニルクロリド0.77 g (6.75 mmol)を加え、室温で2時間撹拌した。水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、目的化合物を得た。
【０１７３】
（３）2-ヨード-1-(3,3,4,4-テトラメチル-1-フェニル-3-シラペンチルオキシ)
エタンの合成
【０１７４】
【化４９】
2006317464.tif 000051
【０１７５】
30 ml二口フラスコに化合物3 0.50 g (1.25 mmol)を加え脱気窒素置換後、アセトン 15 ml、ヨウ化ナトリウム 1.49 g (10.0 mmol)を加え、2時間還流した。溶媒を減圧留去後、水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、目的化合物を得た。
【０１７６】
（４）トリエチル(2-(3,3,4,4-テトラメチル-1-フェニル-3-シラペンチルオキシ)エチル)アミンの合成
【０１７７】
【化５０】
2006317464.tif 000052
【０１７８】
30 mlなす型フラスコに化合物4 0.50 g (1.25 mmol)、トルエン10.0 ml、トリエチルアミン1.0 mlを加え、室温で24時間撹拌した。析出した沈殿を分取後、トルエンで洗浄した。減圧乾燥後、目的化合物を得た。
【０１７９】
（５）1-(メチルスルホニル)-2-フェニル-2-(2-(トリエチルアミノ)エトキシ)エタンの合成
【０１８０】
【化５１】
2006317464.tif 000053
【０１８１】
30 ml二口フラスコに化合物5 0.50 g (1.37 mmol)、酢酸 : 水 : THF = 3 : 1 : 1 v/vの混合溶媒10. 0 mlを加え室温で2時間撹拌した。溶媒を減圧留去後、ポンプで減圧乾燥した。得られた化合物に、ジエチルエーテル10 0 ml、トリエチルアミン、メタンスルホニルクロリドを加え、室温で2時間撹拌した。水で洗浄後、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、目的化合物を得た。
【０１８２】
（６）(2-(2-ヨード-1-フェニルエトキシ)エチル)トリエチルアミンの合成
【０１８３】
【化５２】
2006317464.tif 000054
【０１８４】
50 mlなす型フラスコに化合物6 0.20 g (0.58 mmol)、アセトン20.0 ml、臭化リチウム0.43 g (5.0 mmol)を加え2時間還流した。溶媒を減圧留去後、エタノールを加えた。不溶物を濾別後、濾液を減圧濃縮し、目的化合物を得た。
【０１８５】
実施例３  プローブの合成（その３）
【０１８６】
【化５３】
2006317464.tif 000055
【０１８７】
下記のスキームに従い、Ｒ１として第四級アミン、Ｒ２としてＮＨ２−を有する上記化合物を合成した。
【０１８８】
【化５４】
2006317464.tif 000056
【０１８９】
（１）2-(2-トリメチルシロキシエトキシ)-2-フェニルエタンニトリルの合成
【０１９０】
【化５５】
2006317464.tif 000057
【０１９１】
50 ml二口フラスコに2-フェニル-1,3-ジオキソラン(化合物1) 3.0 g (19.9 mmol)、TMSCN2.1 ml (21.4 mmol)、ZnI2 0.3 g (0.94 mmol)を加え、窒素気流下、室温で2時間撹拌した。TLC (SiO2; CH2Cl2 : n-ヘキサン = 1 : 4 v/v)で原料消失を確認後、ジエチルエーテル100 mlを加え水で洗浄した。無水硫酸マグネシウムで乾燥後、溶媒を減圧留去し無色オイル状化合物を得た。同定は1H-NMR、ESI-TOF質量分析を用いて行った。
【０１９２】
収率 93 %
1H-NMR (300 MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm) 0.12 (s, 9H, Si (CH3)3),  3.65〜3.84 (m, 4H, -OCH2CH2O-), 5.42 (s, 1H, Ar-CH), 7.40〜7.58 (m, 5H, ArH)
ESI-TOF [M + Na]+ = 272
【０１９３】
（２）2-(2-アミノ-1-フェニルエトキシ)エタン-1-オールの合成
【０１９４】
【化５６】
2006317464.tif 000058
【０１９５】
100 ml二口フラスコに化合物2 2.0 g (8.0 mmmol) を加え脱気窒素置換後、氷浴下1 M BH3・THF溶液50 mlを30分間かけて滴下した。室温で4時間撹拌後、TLC (SiO2; n-ヘキサン : 酢酸エチル = 4 : 1 v/v)で原料消失を確認した。氷浴下、6 N HClを加え酸性にした後、溶媒の大部分を減圧留去した。NaOH水溶液を加えpH 10にした後、酢酸エチル100 mlで3回抽出し無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去後、無色オイル状化合物を得た。同定は1H-NMR、ESI-TOF質量分析を用いて行った。
【０１９６】
収率 90 %
1H-NMR (300 MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm) 2.55 (br s, 3H), 2.83 (dd, 1H), 3.15 (dd, 1H), 3.39 ~ 3.62 (m, 2H), 3.68 ~ 3.78 (m, 2H), 5.00 (dd, 1H), 7.40〜7.58 (m, 5H)
ESI-TOF [M]+ = 181
【０１９７】
（３）(tert-ブトキシ)-N-(2-(2-ヒドロキシエトキシ)-2-フェニルエチル)フォ
ルムアミドの合成
【０１９８】
【化５７】
2006317464.tif 000059
【０１９９】
30 ml二口フラスコに化合物3 0.50 g (2.76 mmol)を加え脱気窒素置換後、THF 15 ml、トリエチルアミン 0.28 ml (2.76 mmol)、ジ-tert-ブチル-ジカーボネート0.60 g (2.76 mmol)を加え、室温で撹拌した。2時間後、TLC (SiO2; n-ヘキサン : 酢酸エチル = 1 : 1)で原料消失を確認後、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィー (SiO2; n-ヘキサン : 酢酸エチル = 1 : 1)で精製し、無色オイル状化合物を得た。同定は1H-NMR、ESI-TOF質量分析を用いて行った。
【０２００】
収率 90 %
1H-NMR (300 MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm) 1.37 (s, 9H), 3.10 (s, 3H), 3.51〜3.64 (m, 4H), 4.33 ~ 4.37 (m, 2H), 4.98 (br s, 1H), 5.01 (dd, 1H), 7.41〜7.58 (m, 5H)
ESI-TOF [M + Na]+ = 304
【０２０１】
（４）(tert-ブトキシ)-N-(2-(2-(メチルスルフォニロキシ)エトキシ)-2-フェニルエチルフォルムアミドの合成
【０２０２】
【化５８】
2006317464.tif 000060
【０２０３】
30 ml二口フラスコに化合物4 0.50 g (1.78 mmol)を加え脱気窒素置換後、ジエチルエーテル10.0 ml、トリエチルアミン0.23 g (2.31 mmol)を加えた。氷浴下、メタンスルホニルクロリド(MsCl)0.22 g (1.96 mmol)を加えた後、室温で撹拌した。一時間後、TLC (SiO2; n-ヘキサン : 酢酸エチル = 2 : 1) で原料消失を確認した。溶媒を減圧留去後、カラムクロマトグラフィー (SiO2; n-ヘキサン : 酢酸エチル = 2 : 1) で精製し、白色固体を得た。同定は1H-NMR、ESI-TOF質量分析を用いて行った。
【０２０４】
収率88 %
1H-NMR (300 MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm) 1.37 (s, 9H), 3.10 (s, 3H), 3.51〜3.64 (m, 4H), 4.33 ~ 4.37 (m, 2H), 4.98 (br s, 1H), 5.01 (dd, 1H), 7.40〜7.58 (m, 5H) 
ESI-TOF [M + Na]+ = 382
【０２０５】
（５）(tert-ブトキシ)-N-(2-(2-ヨードエトキシ)-2-フェニルエチル)フォルム
アミドの合成
【０２０６】
【化５９】
2006317464.tif 000061
【０２０７】
30 ml二口フラスコに化合物5 0.50 g (1.39 mmol)を加え脱気窒素置換後、アセトン10.0 ml、ヨウ化ナトリウム1.10 g (7.25 mmol)を加え還流した。2時間後、TLC (SiO2; n-ヘキサン : 酢酸エチル = 1 : 1) で原料消失を確認後、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィー (SiO2; n-ヘキサン : 酢酸エチル = 10 : 1)で精製後、赤色固体を得た。同定は1H-NMR、ESI-TOF質量分析を用いて行った。
【０２０８】
収率85 %
1H-NMR (300 MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm) 1.35 (s, 9H), 3.22 (t, 2H), 3.38〜3.66 (m, 4H), 5.02 (br s, 1H), 5.06 (dd, 1H), 7.41 ~ 7.58 (m, 5H)
ESI-TOF [M + Na]+ = 414
【０２０９】
（６）N-(2-(2-ヨードエトキシ)-2-フェニルエチル)-3-オキソブタンアミドの合成
【０２１０】
【化６０】
2006317464.tif 000062
【０２１１】
10 ml二口フラスコに化合物6 0.20 g (0.51 mmol)を加え脱気窒素置換後、塩化メチレン2.0 ml、トリフルオロ酢酸0.5 mlを加え室温で撹拌した。30分後、TLC (SiO2; n-ヘキサン : 酢酸エチル = 4 : 1) で原料消失を確認し、溶媒を減圧留去した。得られた化合物に塩化メチレン5.0 ml、トリエチルアミン0.05 g (0.51 mmol)、アセト酢酸0.05 g (0.51 mmol)を加え、氷浴下30分間撹拌した。BOP(Benzotriazol-1-yloxytris(dimethylamino)phosphonium hexafluorophosphate)試薬0.22 g (0.51 mmol)を添加後、氷浴下で30分間、室温に戻した後24時間撹拌した。TLC (SiO2; n-ヘキサン : 酢酸エチル = 4 : 1) で原料消失を確認し、塩化メチレン50 mlで3回抽出後、有機相を無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去後、化合物を得た。
【０２１２】
（７）3-アミノ-N-(2-(2-ヨードエトキシ)-2-フェニルエチル)-2-ブテンアミド
の合成
【０２１３】
【化６１】
2006317464.tif 000063
【０２１４】
10 mlなす型フラスコに化合物7 0.20 g (0.60 mmol)、アンモニア水 5.0 ml、モントモリロナイトK-10 0.1 gを加え、24時間室温で撹拌した。塩化メチレンで抽出後、水で洗浄し、無水硫酸マグネシウムで乾燥した。溶媒を減圧留去後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。
【０２１５】
（８）3-アミノ-N-(2-フェニル-2-(2-(トリエチルアミノ)エトキシ)エチル)-2-ブテンアミドの合成
【０２１６】
【化６２】
2006317464.tif 000064
【０２１７】
10 mlなす型フラスコに化合物8 0.20 g (0.58 mmol)、トルエン5.0 ml、トリエチルアミン1.0 mlを加え、室温で24時間撹拌した。析出した沈殿を分取後、トルエンで洗浄し減圧乾燥した。
【０２１８】
実施例４  プローブの合成（その４）
【０２１９】
【化６３】
2006317464.tif 000065
【０２２０】
下記のスキームに従い、Ｒ１として第四級アミン、Ｒ２として-COCH2Brを有する上記化合物を合成した。
スキーム
【０２２１】
【化６４】
2006317464.tif 000066
【０２２２】
(1)  フェニル-(2-トリメチルシラニルオキシ-エトキシ)-アセトニトリル（化合物2）の合成
【０２２３】
【化６５】
2006317464.tif 000067
【０２２４】
30 mlナス型フラスコに2-フェニル-1,3-ペンタジオン(化合物 1 ) 3.0 g (19.9 mmol) を加え氷浴につけた後、TMSCN 2.1ml (21.43 mmol)、ZnI2 0.3 g (0.94mmol)を加え、室温で2 時間攪拌した。反応溶液にジエチルエーテルを加え、水で洗浄後、MgSO4を用いて乾燥した。溶媒を減圧留去後、黄色油状物質(4.17g, 収率83.2 %)を得た。
【０２２５】
1H-NMR (270MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  0.15(s, 9H, SiCH3), 3.80(t, 2H, -OCH2CH2OSi-), 4.11(t, 2H, -OCH2CH2OSi-), 5.39(s, 1H, ArCH) , 7.45(m, 5H, ArH) 
ESI-TOF(+): [M + Na]+ = 272.0
【０２２６】
(2)  2-(2-アミノ-1-フェニル-エトキシ)-エタノール(化合物3)の合成
【０２２７】
【化６６】
2006317464.tif 000068
【０２２８】
100 ml三口フラスコに、化合物2 1.0 g (4.01 mmol)を反応容器に加え、脱気窒素置換後、氷浴につけて１M BH3・THF溶液 30mlをゆっくりと加えた。氷浴中で30分間、室温で4時間攪拌させた。反応終了後、反応容器を氷浴につけ、1N HCl水溶液を加え酸性にした。溶媒を減圧留去後、水20mlを加え、NaOH水溶液を加えpH 10とした。酢酸エチルを加えて抽出した後、水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥後、無色オイル状の化合物(650mg, 収率89.5 %)を得た。
【０２２９】
1H-NMR (300MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  2.95(d, 2H, NH2-CH2) , 3.65(t, 2H, -OCH2CH2OH) , 3.75(t, 2H, -OCH2CH2OH) , 4.46(t, 1H, ArCH) , 7.32(m, 5H, ArH) 
ESI-TOF (+) : [M + H]+ = 182.0
【０２３０】
(3)  [2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-2-フェニル-エチル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル(化合物4)の合成
【０２３１】
【化６７】
2006317464.tif 000069
【０２３２】
100 ml二口フラスコに、化合物3 1.40 g (7.70 mmol)を入れ窒素置換後、氷浴中で乾燥THF 55 ml 、TEA 0.78 g (7.69 mmol)、Di-tert-butyl-dicarbonate 1.68 g (7.70 mmol)を加え、室温で2時間攪拌した。溶媒を減圧留去後、カラムクロマトグラフィー（SiO2、クロロホルム）で精製し、黄色油状化合物(1.30g, 収率59.9 %)を得た。
【０２３３】
1H-NMR (300MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  1.48(s, 9H, t-Bu) , 3.24(d, 2H, NH-CH3) , 3.49(t, 2H, -OCH2CH2OH) , 3.73(t, 2H, -OCH2CH2OH) , 4.42(t, 1H, ArCH) , 7.33(m, 5H, ArH)
ESI-TOF (+) : [ M + Na ]+ = 304.0
【０２３４】
(4)  メタンスルホン酸2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-1-フェニル-エトキシ)-エチルエステル(化合物5)の合成
【０２３５】
【化６８】
2006317464.tif 000070
【０２３６】
50 mlナス型フラスコに、化合物4 500 mg (1.78 mmol) を加え窒素置換後、乾燥THF 16 ml 、TEA 0.5 ml (4.55 mmol) を加えて氷浴につけた。MsCl 440 mg (3.84 mmol) を加え、室温で一時間攪拌した。溶媒を減圧留去後、クロロホルムを加えて析出した沈殿をろ別後，ろ液を減圧濃縮した。カラムクロマトグラフィー(SiO2, 酢酸エチル : n-ヘキサン = 2 : 1 v/v) で精製し、黄色油状物質(491mg, 収率77.0 %)を得た。
【０２３７】
1H-NMR (300MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  1.44(s, 9H, t-Bu) , 3.24(d, 2H, NH-CH2) , 3.44(t, 2H, -OCH2CH2OS-) , 3.62(t, 2H, -OCH2CH2OS-) , 4.34(t, 1H, ArCH) , 7.33(m, 5H, ArH)
ESI-TOF (+) : [ M + Na ]+ = 382.2
【０２３８】
(5)  [2-(2-ヨード-エトキシ)-2-フェニル-エチル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル(化合物6)の合成
【０２３９】
【化６９】
2006317464.tif 000071
【０２４０】
50 mlナス型フラスコに、化合物5 100 mg (0.28 mmol)を加え、窒素置換後、アセトン10 ml、NaI 1.0 g (6.67 mmol)を加えて2時間還流した。NaIをろ別後、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィー(SiO2, n-ヘキサン：酢酸エチル = 1：1 v/v) で精製し、黄色油状化合物(104mg, 収率93.99 %)を得た。
【０２４１】
1H-NMR (270MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  1.45(s, 9H, t-Bu) , 3.22(t, 2H, I-CH2) , 3.49(d, 2H, NH-CH2), 3.67(t, 2H, -OCH2), 4.43(t, 1H, ArCH), 7.34(m, 5H, ArH)
ESI-TOF (+) : [M + Na]+ = 413.9
【０２４２】
(6)  [2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-1-フェニル-エトキシ)-エチル]-トリエチル-アンモニウム  ヨウ化物(化合物7)の合成
【０２４３】
【化７０】
2006317464.tif 000072
【０２４４】
50 mlナス型フラスコに、化合物6 350 mg (0.90 mmol)、トルエン8.75 ml、TEA 1.75 ml (17.33 mmol)を加えて、80 ℃で24時間反応を行なった。溶媒を減圧留去後、大型薄層クロマトグラフィー(SiO2, クロロホルム：メタノール=7：1  v/v)で精製し、赤黄色固体物質(383mg, 収率66.70%)を得た。
【０２４５】
1H-NMR (300MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  1.42(t, 9H, CH2-CH3), 1.48(s, 9H, t-Bu), 3.53(q, 6H, NR3-CH2), 3.70(t, 2H, -OCH2CH2N-), 3.72(d, 2H, NH-CH2), 3.95(t, 2H, -OCH2CH2N-), 4.63(t, 1H, ArCH), 7.35(m, 5H, ArH)
ESI-TOF (+) : [ M ]+ = 365.2
【０２４６】
(7)  化合物8の合成
【０２４７】
【化７１】
2006317464.tif 000073
【０２４８】
30 mlナス型フラスコに化合物7 0.50 g (1.02 mmol)、TFA （トリフルオロ酢酸）0.50 ml、塩化メチレン10.0 mlを加え、室温で30分間撹拌した。溶媒を減圧留去後、ポンプで減圧乾燥した。窒素置換後、THF 20.0 ml、TEA 0.10 g (1.02 mmol)、BOP 0.10 g (1.02 mmol)、4-ブロモメチルアセチル安息香酸0.25 g (1.02 mmol)を加え室温で24時間撹拌した。溶媒を減圧留去後、カラムクロマトグラフィーで精製し、目的化合物を得た。
【０２４９】
実施例５  プローブの合成（その５）
【０２５０】
【化７２】
2006317464.tif 000074
【０２５１】
下記のスキームに従い、Ｒ１として第四級アミン、Ｒ２として-COCHOを有する上記化合物を合成した。
スキーム
【０２５２】
【化７３】
2006317464.tif 000075
【０２５３】
(1)  フェニル-(2-トリメチルシラニルオキシ-エトキシ)-アセトニトリル(化合物2) の合成 
【０２５４】
【化７４】
2006317464.tif 000076
【０２５５】
30 mlナス型フラスコに2-フェニル-1,3-ペンタジオン(化合物1) 3.0 g (19.9 mmol) を加え氷浴につけた後、TMSCN 2.1ml (21.43 mmol)、ZnI2 0.3 g (0.94mmol)を加え、室温で2 時間攪拌した。反応溶液にジエチルエーテルを加え、水で洗浄後、MgSO4を用いて乾燥した。溶媒を減圧留去後、黄色油状物質(4.17g, 収率83.2 %)を得た。
【０２５６】
1H-NMR (270MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  0.15(s, 9H, SiCH3) , 3.80(t, 2H, -OCH2CH2OSi-) , 4.11(t, 2H, -OCH2CH2OSi-) , 5.39(s, 1H, ArCH) , 7.45(m, 5H, ArH) 
ESI-TOF (+) : [ M + Na ]+ = 272.0
【０２５７】
(2)  2-(2-アミノ-1-フェニル-エトキシ)-エタノール(化合物3)の合成
【０２５８】
【化７５】
2006317464.tif 000077
【０２５９】
100 ml三口フラスコに、化合物2 1.0 g (4.01 mmol)を反応容器に加え、脱気窒素置換後、氷浴につけて１M BH3・THF溶液 30ml をゆっくりと加えた。氷浴中で30分間、室温で4時間攪拌させた。反応終了後、反応容器を氷浴につけ、1N HCl水溶液を加え酸性にした。溶媒を減圧留去後、水20mlを加え、NaOH水溶液を加えpH 10とした。酢酸エチルを加えて抽出した後、水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥後、無色オイル状の化合物(650mg, 収率89.5 %)を得た。
【０２６０】
1H-NMR (300MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  2.95(d, 2H, NH2-CH2) , 3.65(t, 2H, -OCH2CH2OH) , 3.75(t, 2H, -OCH2CH2OH) , 4.46(t, 1H, ArCH) , 7.32(m, 5H, ArH) 
ESI-TOF (+) : [ M + H ]+ = 182.0
【０２６１】
(3)  [2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-2-フェニル-エチル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル(化合物4)の合成
【０２６２】
【化７６】
2006317464.tif 000078
【０２６３】
100 ml二口フラスコに、化合物3 1.40 g (7.70 mmol)を入れ窒素置換後、氷浴中で乾燥THF 55 ml 、TEA 0.78 g (7.69 mmol)、ジ-tert-ブチル-ジカーボネート1.68 g (7.70 mmol)を加え、室温で2時間攪拌した。溶媒を減圧留去後、カラムクロマトグラフィー（SiO2、クロロホルム）で精製し、黄色油状化合物(1.30g, 収率59.9 %)を得た。
【０２６４】
1H-NMR (300MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  1.48(s, 9H, t-Bu) , 3.24(d, 2H, NH-CH3) , 3.49(t, 2H, -OCH2CH2OH) , 3.73(t, 2H, -OCH2CH2OH) , 4.42(t, 1H, ArCH) , 7.33(m, 5H, ArH)
ESI-TOF (+) : [ M + Na ]+ = 304.0
【０２６５】
(4)  メタンスルホン酸2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-1-フェニル-エトキシ)-エチルエステル(化合物5)の合成
【０２６６】
【化７７】
2006317464.tif 000079
【０２６７】
50 mlナス型フラスコに、化合物4 500 mg (1.78 mmol) を加え窒素置換後、乾燥THF 16 ml 、TEA 0.5 ml (4.55 mmol) を加えて氷浴につけた。MsCl 440 mg (3.84 mmol) を加え、室温で一時間攪拌した。溶媒を減圧留去後、クロロホルムを加えて析出した沈殿をろ別後，ろ液を減圧濃縮した。カラムクロマトグラフィー(SiO2, 酢酸エチル : n-ヘキサン = 2 : 1 v/v) で精製し、黄色油状物質(491mg, 収率77.0 %)を得た。
【０２６８】
1H-NMR (300MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  1.44(s, 9H, t-Bu) , 3.24(d, 2H, NH-CH2) , 3.44(t, 2H, -OCH2CH2OS-) , 3.62(t, 2H, -OCH2CH2OS-) , 4.34(t, 1H, ArCH) , 7.33(m, 5H, ArH)
ESI-TOF (+) : [ M + Na ]+ = 382.2
【０２６９】
(5)  [2-(2-ヨード-エトキシ)-2-フェニル-エチル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル(化合物6)の合成
【０２７０】
【化７８】
2006317464.tif 000080
【０２７１】
50 mlナス型フラスコに、化合物5 100 mg (0.28 mmol)を加え、窒素置換後、アセトン10 ml、NaI 1.0 g (6.67 mmol)を加えて2時間還流した。NaIをろ別後、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィー(SiO2, n-ヘキサン：酢酸エチル = 1：1 v/v) で精製し、黄色油状化合物(104mg, 収率93.99 %)を得た。
【０２７２】
1H-NMR (270MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  1.45(s, 9H, t-Bu) , 3.22(t, 2H, I-CH2) , 3.49(d, 2H, NH-CH2) , 3.67(t, 2H, -OCH2) , 4.43(t, 1H, ArCH) , 7.34(m, 5H, ArH)
ESI-TOF (+) : [ M + Na ]+ = 413.9
【０２７３】
(6)  [2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-1-フェニル-エトキシ)-エチル]-トリエチルアンモニウム  ヨウ化物(化合物7)の合成
【０２７４】
【化７９】
2006317464.tif 000081
【０２７５】
50 mlナス型フラスコに、化合物6 350 mg (0.90 mmol)、トルエン8.75 ml、TEA 1.75 ml (17.33 mmol)を加えて、80 ℃で24時間反応を行なった。溶媒を減圧留去後、大型薄層クロマトグラフィー(SiO2, クロロホルム：メタノール=7：1  v/v)で精製し、赤黄色固体物質(383mg, 収率66.70%)を得た。
【０２７６】
1H-NMR (300MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  1.42(t, 9H, CH2-CH3) , 1.48(s, 9H, t-Bu), 3.53(q, 6H, NR3-CH2), 3.70(t, 2H, -OCH2CH2N-), 3.72(d, 2H, NH-CH2), 3.95(t, 2H, -OCH2CH2N-), 4.63(t, 1H, ArCH), 7.35(m, 5H, ArH)
ESI-TOF (+) : [ M ]+ = 365.2
【０２７７】
(7)  化合物8の合成
【０２７８】
【化８０】
2006317464.tif 000082
【０２７９】
30 mlナス型フラスコに化合物7 0.50 g (1.02 mmol)、TFA 0.50 ml、塩化メチレン10.0 mlを加え、室温で30分間撹拌した。溶媒を減圧留去後、ポンプで減圧乾燥した。窒素置換後、THF 20.0 ml、TEA 0.10 g (1.02 mmol)、BOP 0.10 g (1.02 mmol)、4-ブロモメチルアセチル安息香酸0.25 g (1.02 mmol)を加え室温で24時間撹拌した。溶媒を減圧留去後、カラムクロマトグラフィーで精製し、目的化合物を得た。
【０２８０】
(8)  化合物9の合成
【０２８１】
【化８１】
2006317464.tif 000083
【０２８２】
20 mlナス型フラスコに化合物8 0.25 g (0.41 mmol)、DMSO 5.0 mlを加え、室温で2時間撹拌した。溶媒を減圧留去後、カラムクロマトグラフィーで精製し目的化合物を得た。
【０２８３】
実施例６  プローブの合成（その６）
【０２８４】
【化８２】
2006317464.tif 000084
【０２８５】
下記のスキームに従い、Ｒ１として第四級アミン、Ｒ２として-CH2CH2NH2 を有する上記化合物を合成した。
【０２８６】
【化８３】
2006317464.tif 000085
【０２８７】
(1)  フェニル-(2-トリメチルシラニルオキシ-エトキシ)-アセトニトリル(化合物2) の合成 
【０２８８】
【化８４】
2006317464.tif 000086
【０２８９】
30 mlナス型フラスコに2-フェニル-1,3-ペンタジオン(化合物1) 3.0 g (19.9 mmol) を加え氷浴につけた後、TMSCN 2.1ml (21.43 mmol)、ZnI2 0.3 g (0.94mmol)を加え、室温で2 時間攪拌した。反応溶液にジエチルエーテルを加え、水で洗浄後、MgSO4を用いて乾燥した。溶媒を減圧留去後、黄色油状物質(4.17g, 収率83.2 %)を得た。
【０２９０】
1H-NMR (270MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  0.15(s, 9H, SiCH3) , 3.80(t, 2H, -OCH2CH2OSi-) , 4.11(t, 2H, -OCH2CH2OSi-) , 5.39(s, 1H, ArCH) , 7.45(m, 5H, ArH) 
ESI-TOF (+) : [ M + Na ]+ = 272.0
【０２９１】
(2)  2-(2-アミノ-1-フェニル-エトキシ)-エタノール(化合物3)の合成
【０２９２】
【化８５】
2006317464.tif 000087
【０２９３】
100 ml三口フラスコに、化合物2 1.0 g (4.01 mmol)を反応容器に加え、脱気窒素置換後、氷浴につけて１M BH3・THF溶液 30ml をゆっくりと加えた。氷浴中で30分間、室温で4時間攪拌させた。反応終了後、反応容器を氷浴につけ、1N HCl水溶液を加え酸性にした。溶媒を減圧留去後、水20mlを加え、NaOH水溶液を加えpH 10とした。酢酸エチルを加えて抽出した後、水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥後、無色オイル状の化合物(650mg, 収率89.5 %)を得た。
【０２９４】
1H-NMR (300MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  2.95(d, 2H, NH2-CH2) , 3.65(t, 2H, -OCH2CH2OH) , 3.75(t, 2H, -OCH2CH2OH) , 4.46(t, 1H, ArCH) , 7.32(m, 5H, ArH) 
ESI-TOF (+) : [ M + H ]+ = 182.0
【０２９５】
(3)  [2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-2-フェニル-エチル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル(化合物4)の合成
【０２９６】
【化８６】
2006317464.tif 000088
【０２９７】
100 ml二口フラスコに、化合物3 1.40 g (7.70 mmol)を入れ窒素置換後、氷浴中で乾燥THF 55 ml 、TEA 0.78 g (7.69 mmol)、ジ-tert-ブチル-ジカーボネート1.68 g (7.70 mmol)を加え、室温で2時間攪拌した。溶媒を減圧留去後、カラムクロマトグラフィー（SiO2、クロロホルム）で精製し、黄色油状化合物(1.30g, 収率59.9 %)を得た。
【０２９８】
1H-NMR (300MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  1.48(s, 9H, t-Bu) , 3.24(d, 2H, NH-CH3) , 3.49(t, 2H, -OCH2CH2OH) , 3.73(t, 2H, -OCH2CH2OH) , 4.42(t, 1H, ArCH) , 7.33(m, 5H, ArH)
ESI-TOF (+) : [ M + Na ]+ = 304.0
【０２９９】
(4)  メタンスルホン酸2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-1-フェニル-エトキシ)-エチルエステル(化合物5)の合成
【０３００】
【化８７】
2006317464.tif 000089
【０３０１】
50 mlナス型フラスコに、化合物5 100 mg (0.28 mmol)を加え、窒素置換後、アセトン10 ml、NaI 1.0 g (6.67 mmol)を加えて2時間還流した。NaIをろ別後、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィー(SiO2, n-ヘキサン：酢酸エチル = 1：1 v/v) で精製し、黄色油状化合物(104mg, 収率93.99 %)を得た。
【０３０２】
1H-NMR (270MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  1.45(s, 9H, t-Bu) , 3.22(t, 2H, I-CH2) , 3.49(d, 2H, NH-CH2) , 3.67(t, 2H, -OCH2) , 4.43(t, 1H, ArCH) , 7.34(m, 5H, ArH)
ESI-TOF (+) : [ M + Na ]+ = 413.9
【０３０３】
(5)  [2-(2-ヨード-エトキシ)-2-フェニル-エチル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル(化合物6)の合成
【０３０４】
【化８８】
2006317464.tif 000090
【０３０５】
50 mlナス型フラスコに、化合物5 100 mg (0.28 mmol)を加え、窒素置換後、アセトン10 ml、NaI 1.0 g (6.67 mmol)を加えて2時間還流した。NaIをろ別後、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィー(SiO2, n-ヘキサン：酢酸エチル = 1：1 v/v) で精製し、黄色油状化合物(104mg, 収率93.99 %)を得た。
【０３０６】
1H-NMR (270MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  1.45(s, 9H, t-Bu) , 3.22(t, 2H, I-CH2) , 3.49(d, 2H, NH-CH2) , 3.67(t, 2H, -OCH2) , 4.43(t, 1H, ArCH) , 7.34(m, 5H, ArH)
ESI-TOF (+) : [ M + Na ]+ = 413.9
【０３０７】
(6)  [2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-1-フェニル-エトキシ)-エチル]-トリエチルアンモニウム  ヨウ化物(化合物7)の合成
【０３０８】
【化８９】
2006317464.tif 000091
【０３０９】
50 mlナス型フラスコに、化合物6 350 mg (0.90 mmol)、トルエン8.75 ml、TEA 1.75 ml (17.33 mmol)を加えて、80 ℃で24時間反応を行なった。溶媒を減圧留去後、大型薄層クロマトグラフィー(SiO2, クロロホルム：メタノール=7：1  v/v)で精製し、赤黄色固体物質(383mg, 収率66.70%)を得た。
【０３１０】
1H-NMR (300MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  1.42(t, 9H, CH2-CH3), 1.48(s, 9H, t-Bu), 3.53(q, 6H, NR3-CH2), 3.70(t, 2H, -OCH2CH2N-), 3.72(d, 2H, NH-CH2), 3.95(t, 2H, -OCH2CH2N-), 4.63(t, 1H, ArCH), 7.35(m, 5H, ArH)
ESI-TOF (+) : [ M ]+ = 365.2
【０３１１】
(7)  化合物8の合成
【０３１２】
【化９０】
2006317464.tif 000092
【０３１３】
30 mlナス型フラスコに化合物7 0.50 g (1.02 mmol)、TFA 0.50 ml、塩化メチレン10.0 mlを加え、室温で30分間撹拌した。溶媒を減圧留去後、ポンプで減圧乾燥した。窒素置換後、THF 20.0 ml、TEA 0.10 g (1.02 mmol)、BOP 0.10 g (1.02 mmol)、β-アラニン0.10 g (1.02 mmol)を加え室温で24時間撹拌した。溶媒を減圧留去後、カラムクロマトグラフィーで精製し、目的化合物を得た。
【０３１４】
実施例７  プローブの合成（その７）
【０３１５】
【化９１】
2006317464.tif 000093
【０３１６】
下記のスキームに従い、Ｒ１として第四級アミン、Ｒ２として
【０３１７】
【化９２】
2006317464.tif 000094
【０３１８】
を有する上記化合物を合成した。
【０３１９】
【化９３】
2006317464.tif 000095
【０３２０】
(1)  フェニル-(2-トリメチルシラニルオキシ-エトキシ)-アセトニトリル(化合物2) の合成 
【０３２１】
【化９４】
2006317464.tif 000096
【０３２２】
30 mlナス型フラスコに2-フェニル-1,3-ペンタジオン(化合物1) 3.0 g (19.9 mmol) を加え氷浴につけた後、TMSCN 2.1ml (21.43 mmol)、ZnI2 0.3 g (0.94mmol)を加え、室温で2 時間攪拌した。反応溶液にジエチルエーテルを加え、水で洗浄後、MgSO4を用いて乾燥した。溶媒を減圧留去後、黄色油状物質(4.17g, 収率83.2 %)を得た。
【０３２３】
1H-NMR (270MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  0.15(s, 9H, SiCH3) , 3.80(t, 2H, -OCH2CH2OSi-) , 4.11(t, 2H, -OCH2CH2OSi-) , 5.39(s, 1H, ArCH) , 7.45(m, 5H, ArH) 
ESI-TOF (+) : [ M + Na ]+ = 272.0
【０３２４】
(2)  2-(2-アミノ-1-フェニル-エトキシ)-エタノール(化合物3)の合成
【０３２５】
【化９５】
2006317464.tif 000097
【０３２６】
100 ml三口フラスコに、化合物2 1.0 g (4.01 mmol)を反応容器に加え、脱気窒素置換後、氷浴につけて１M BH3・THF溶液 30ml をゆっくりと加えた。氷浴中で30分間、室温で4時間攪拌させた。反応終了後、反応容器を氷浴につけ、1N HCl水溶液を加え酸性にした。溶媒を減圧留去後、水20mlを加え、NaOH水溶液を加えpH 10とした。酢酸エチルを加えて抽出した後、水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥後、無色オイル状の化合物(650mg, 収率89.5 %)を得た。
【０３２７】
1H-NMR (300MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  2.95(d, 2H, NH2-CH2) , 3.65(t, 2H, -OCH2CH2OH) , 3.75(t, 2H, -OCH2CH2OH) , 4.46(t, 1H, ArCH) , 7.32(m, 5H, ArH) 
ESI-TOF (+) : [ M + H ]+ = 182.0
【０３２８】
(3)  [2-(2-ヒドロキシ-エトキシ)-2-フェニル-エチル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル(化合物4)の合成
【０３２９】
【化９６】
2006317464.tif 000098
【０３３０】
100 ml二口フラスコに、化合物3 1.40 g (7.70 mmol)を入れ窒素置換後、氷浴中で乾燥THF 55 ml 、TEA 0.78 g (7.69 mmol)、ジ-tert-ブチルジカーボネート1.68 g (7.70 mmol)を加え、室温で2時間攪拌した。溶媒を減圧留去後、カラムクロマトグラフィー（SiO2、クロロホルム）で精製し、黄色油状化合物(1.30g, 収率59.9 %)を得た。
【０３３１】
1H-NMR (300MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  1.48(s, 9H, t-Bu) , 3.24(d, 2H, NH-CH3) , 3.49(t, 2H, -OCH2CH2OH) , 3.73(t, 2H, -OCH2CH2OH) , 4.42(t, 1H, ArCH) , 7.33(m, 5H, ArH)
ESI-TOF (+) : [ M + Na ]+ = 304.0
【０３３２】
(4)  メタンスルホン酸2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-1-フェニル-エトキシ)-エチルエステル(化合物5)の合成
【０３３３】
【化９７】
2006317464.tif 000099
【０３３４】
50 mlナス型フラスコに、化合物4 500 mg (1.78 mmol) を加え窒素置換後、乾燥THF 16 ml 、TEA 0.5 ml (4.55 mmol) を加えて氷浴につけた。MsCl 440 mg (3.84 mmol) を加え、室温で一時間攪拌した。溶媒を減圧留去後、クロロホルムを加えて析出した沈殿をろ別後，ろ液を減圧濃縮した。カラムクロマトグラフィー(SiO2, 酢酸エチル : n-ヘキサン = 2 : 1 v/v) で精製し、黄色油状物質(491mg, 収率77.0 %)を得た。
【０３３５】
1H-NMR (300MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  1.44(s, 9H, t-Bu) , 3.24(d, 2H, NH-CH2) , 3.44(t, 2H, -OCH2CH2OS-) , 3.62(t, 2H, -OCH2CH2OS-) , 4.34(t, 1H, ArCH) , 7.33(m, 5H, ArH)
ESI-TOF (+) : [ M + Na ]+ = 382.2
【０３３６】
(5)  [2-(2-ヨード-エトキシ)-2-フェニル-エチル]-カルバミン酸tert-ブチルエステル(化合物6)の合成
【０３３７】
【化９８】
2006317464.tif 000100
【０３３８】
50 mlナス型フラスコに、化合物5 100 mg (0.28 mmol)を加え、窒素置換後、アセトン10 ml、NaI 1.0 g (6.67 mmol)を加えて2時間還流した。NaIをろ別後、溶媒を減圧留去した。カラムクロマトグラフィー(SiO2, n-ヘキサン：酢酸エチル = 1：1 v/v) で精製し、黄色油状化合物(104mg, 収率93.99 %)を得た。
【０３３９】
1H-NMR (270MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  1.45(s, 9H, t-Bu) , 3.22(t, 2H, I-CH2) , 3.49(d, 2H, NH-CH2) , 3.67(t, 2H, -OCH2) , 4.43(t, 1H, ArCH), 7.34(m, 5H, ArH)
ESI-TOF (+) : [ M + Na ]+ = 413.9
【０３４０】
(6)  [2-(2-tert-ブトキシカルボニルアミノ-1-フェニル-エトキシ)-エチル]-トリエチルアンモニウム  ヨウ化物(化合物7)の合成
【０３４１】
【化９９】
2006317464.tif 000101
【０３４２】
50 mlナス型フラスコに、化合物6 350 mg (0.90 mmol)、トルエン8.75 ml、TEA 1.75 ml (17.33 mmol)を加えて、80 ℃で24時間反応を行なった。溶媒を減圧留去後、大型薄層クロマトグラフィー(SiO2, クロロホルム：メタノール=7：1  v/v)で精製し、赤黄色固体物質(383mg, 収率66.70%)を得た。
【０３４３】
1H-NMR (300MHz, CDCl3, TMS, r.t., δ/ppm)  1.42(t, 9H, CH2-CH3) , 1.48(s, 9H, t-Bu) , 3.53(q, 6H, NR3-CH2) , 3.70(t, 2H, -OCH2CH2N-) , 3.72(d, 2H, NH-CH2) , 3.95(t, 2H, -OCH2CH2N-), 4.63(t, 1H, ArCH), 7.35(m, 5H, ArH)
ESI-TOF (+) : [ M ]+ = 365.2
【０３４４】
(7)  化合物8の合成
【０３４５】
【化１００】
2006317464.tif 000102
【０３４６】
30 mlナス型フラスコに化合物7 0.50 g (1.02 mmol)、TFA 0.50 ml、塩化メチレン10.0 mlを加え、室温で30分間撹拌した。溶媒を減圧留去後、ポンプで減圧乾燥した。窒素置換後、THF 20.0 ml、TEA 0.10 g (1.02 mmol)、BOP 0.10 g (1.02 mmol)、2-ブロモ-4-メチルペンタン酸0.20 g (1.02 mmol)を加え室温で24時間撹拌した。溶媒を減圧留去後、カラムクロマトグラフィーで精製し、目的化合物を得た。
【０３４７】
実施例８  プローブの合成（その８）
【０３４８】
【化１０１】
2006317464.tif 000103
【０３４９】
下記のスキームに従い、Ｒ１として第四級アミン、Ｒ２としてシクロデキストリン（グルコピラノース単位の数７）を有する上記化合物を合成した。
【０３５０】
【化１０２】
2006317464.tif 000104
【０３５１】
(1)  化合物2の合成
【０３５２】
【化１０３】
2006317464.tif 000105
【０３５３】
100 mlナス型フラスコにモノ-6-デオキシ-6-アミノ-β-シクロデキストリン(1) 2.0 g (1.59 mmol)、無水酢酸20.0 ml、ピリジン10.0 mlを加え、室温で24時間撹拌した。反応溶液を冷水にあけ、エーテルで抽出した。飽和食塩水で洗浄後、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去後、目的化合物を得た。
【０３５４】
(2)  化合物3の合成
【０３５５】
【化１０４】
2006317464.tif 000106
【０３５６】
100 ml三口フラスコに化合物2 1.0 g (0.37 mmol)、ヨウ化メチル 0.26 g (1.85 mmol)、トリエチルアミン 0.05 g (0.40 mmol)、乾燥DMF 20.0 mlを加え、窒素気流下、室温で24時間撹拌した。溶媒を減圧留去後、再沈殿操作を行い目的化合物を得た。
【０３５７】
(3)  化合物4の合成
【０３５８】
【化１０５】
2006317464.tif 000107
【０３５９】
50 mlナス型フラスコに化合物3 1.0 g (0.35 mmol) 、1.0 M NaOH水溶液5.0 ml、エタノール20.0 mlを加え、5時間還流した。溶媒の大部分を減圧留去後、水20 mlを加え、1N HClで酸性にした。溶媒を減圧留去後、再沈殿操作により精製し、目的化合物を得た。
【０３６０】
実施例９  プローブの合成（その９）
【０３６１】
【化１０６】
2006317464.tif 000108
【０３６２】
下記のスキームに従い、Ｒ１として第四級アミン、Ｒ２として−ＯＮＨ２を有する上記化合物を合成した。
【０３６３】
【化１０７】
2006317464.tif 000109
【０３６４】
(1)  化合物2の合成
【０３６５】
【化１０８】
2006317464.tif 000110
【０３６６】
100 mlナス型フラスコに、化合物1 3.0 g (27.5 mmol)、水30.0 ml、トリエチルアミン3.46 g (34.3 mmol)を加え、氷浴につけた。Zクロリド4.8 g (27.5 mmol)をジエチルエーテル10.0 mlに溶解し、滴下ロートを用いて加えた。氷浴下で30分間、室温に戻して7時間撹拌した。酢酸エチルで抽出後、有機層を飽和食塩水で洗浄した。無水硫酸ナトリウムで乾燥後、カラムクロマトグラフィー(SiO2, CHCl3 : 酢酸エチル= 2 : 3 v/v)で精製し、目的化合物を得た。
【０３６７】
(2)  化合物3の合成
【０３６８】
【化１０９】
2006317464.tif 000111
【０３６９】
100 ml三口フラスコに、化合物2 2.0 g (10.3 mmol)、乾燥塩化メチレン50.0 ml、トリエチルアミン1.1 g(11.0 mmol)を加え、氷浴につけた。p-キシリレンジアミン1.4 g (11.0 mmol)及びBOP試薬4.8 g(11.0 mmol)を加え、氷浴下で30分間、室温に戻して12時間撹拌した。水を加えて反応を停止後、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧留去後、カラムクロマトグラフィー(SiO2, CHCl3 : 酢酸エチル = 1 : 1 v/v)で精製し、目的化合物を得た。
【０３７０】
(3)  化合物4の合成
【０３７１】
【化１１０】
2006317464.tif 000112
【０３７２】
100 mlナス型フラスコに化合物3 2.0 g (6.0 mmol)、トルエン50.0 mlおよびヨウ化メチル8.5 g (60.0 mmol)を加え80 ℃で加熱撹拌した。析出した沈殿を分取後、トルエンで洗浄し、目的化合物を得た。
【０３７３】
(4)  化合物5の合成
【０３７４】
【化１１１】
2006317464.tif 000113
【０３７５】
100 mlナス型フラスコに化合物4 2.0 g (5.0 mmol)、エタノールを加え窒素置換、および水素置換した。パラジウムカーボン0.1 gを加え、室温で5時間撹拌した。パラジウムカーボンを濾別後、溶媒を減圧留去し、目的化合物を得た。
【０３７６】
実施例１０  プローブの合成（その１０）
【０３７７】
【化１１２】
2006317464.tif 000114
【０３７８】
下記のスキームに従い、Ｒ１として第四級アミン、Ｒ２として−ＮＨＮＨ２を有する上記化合物を合成した。
【０３７９】
(1)  化合物2の合成
【０３８０】
【化１１３】
2006317464.tif 000115
【０３８１】
100 mlナス型フラスコに化合物1 3.0 g (19.8 mmol)、アセトン50.0 ml、ヨウ化メチル14.1 g (100.0 mmol)、炭酸カリウム6.9 g (50.0 mmol)を加え、窒素気流下、24時間還流した。炭酸カリウムを濾別後、溶媒を減圧留去した。反応混合物にクロロホルムを加え、析出した沈殿を分取した。クロロホルムで洗浄し、目的化合物を得た。
【０３８２】
(2)  化合物3の合成
【０３８３】
【化１１４】
2006317464.tif 000116
【０３８４】
100 mlナス型フラスコに化合物2 2.0 g (6.25 mmol)、エタノール30.0 ml、ヒドラジン0.22 g (7.0 mmol)を加え、室温で5時間撹拌した。溶媒を減圧留去し、目的化合物を得た。
【０３８５】
実施例１１  エレクトロスプレーイオン化質量分析
(1)  試料化合物とプローブの結合
下記反応式に示すように、実施例１で合成したプローブ（化合物１）と、試料化合物（化合物２）とを結合した。この反応は、試験管に10.0 mMの化合物1および化合物2のアセトニトリル(またはTHF)溶液をとり、両者を混合後、室温で30分間撹拌することにより行った。
【０３８６】
【化１１５】
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【０３８７】
(2)  エレクトロスプレーイオン化質量分析
(1)で得られた反応産物を1.0μＭに希釈後、Applied Biosystems社製のESI-TOF質量分析計(Mariner）を用いて測定した。用いた質量分析計の構成を図３に示す。シリンジポンプより10.0 μL/minの流速で、常時移動溶媒(MeOH、水等)を流した。試料溶液はマイクロシリンジを用いて、インジェクターから導入した。試料溶液は移動溶媒の流れに沿って、質量分析計に向かう。
【０３８８】
質量分析計の設定条件は以下の通りであった。
スプレーチップ電位(Spray tip potential) : 3450 V
ノズル電位(Nozzle Potential) : 184 V
Quad RF電圧(Quad RF voltage) : 1000 V
噴霧器ガス流速(Flow rate of Nebulizer gas) (N2) : 0.25 L/分
補助ガス流速(Flow rate of Auxiliary gas) (N2) : 1.0 L/分
カウンター流温度(Temperature of the counter stream) : 160℃
【０３８９】
測定結果を図１に示す。なお、比較のため、プローブのみを1.0μＭに希釈後、同様にして質量分析を行った。結果を図２に示す。
【０３９０】
図１及び図２から明らかなように、試料化合物とプローブとの結合物は、プローブ単独の場合とは異なる位置に鋭いピークを示した。これにより、上記方法により、エレクトロスプレーイオン化質量分析が高感度、高精度に行うことができることが明らかになった。
【図面の簡単な説明】
【０３９１】
【図１】本発明の実施例１１において実施した、エレクトロスプレーイオン化質量分析により得られた質量スペクトルを示す。
【図２】本発明の実施例１１において実施した、プローブのみの場合のエレクトロスプレーイオン化質量分析により得られた質量スペクトルを示す。
【図３】図３は、実施例１１において実施した質量分析に用いた質量分析計の構成を模式的に示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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