(57)【要約】      （修正有）【課題】試料の粘性の多様性を許容し、かつ吸引中の種々の要因に由来する異常吸引を総合的に検知する方法を提供する。【解決手段】基準とする吸引状態において吸引経過時間ｔｉに対して前記吸引管内部の圧力データｙｉを取得することと、確認する対象の吸引状態において吸引経過時間ｔｉに対して前記吸引管内部の圧力データＹｉを取得することと、前記両圧力データｙｉ、Ｙｉのどちらか一方を吸引経過時間に依存する補正係数によって変換した圧力データｙｃｉまたはＹｃｉを得ることと、前記Ｙｉとｙｃｉとからまたは前記ｙｉとＹｃｉとから、残差２乗和Σ（Ｙｉ−ｙｃｉ）２またはΣ（ｙｉ−Ｙｃｉ）２の最小値を算出することと、算出された前記残差２乗和の最小値またはその平方根を閾値に対して比較した結果に応じて吸引状態の正否を確認することと、を含む吸引状態を確認する方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
負圧源に接続された吸引管の先端を介して所定量の液体を吸引するときの吸引状態を確認する方法であって、
・基準とする吸引状態において吸引経過時間ｔｉ（ｉ＝１，２，・・・，ｎ）に対して前記吸引管内部の圧力データｙｉ（ｉ＝１，２，・・・，ｎ）を取得することと、
・確認する対象の吸引状態において吸引経過時間ｔｉ（ｉ＝１，２，・・・，ｎ）に対して前記吸引管内部の圧力データＹｉ（ｉ＝１，２，・・・，ｎ）を取得することと、
・前記圧力データｙｉを吸引経過時間に依存する補正係数によって変換した圧力データｙｃｉ（ｉ＝１，２，・・・，ｎ）または前記圧力データＹｉを吸引経過時間に依存する補正係数によって変換した圧力データＹｃｉ（ｉ＝１，２，・・・，ｎ）を得ることと、
・ＹｉとｙｃｉとからまたはｙｉとＹｃｉとから、残差２乗和Σ（Ｙｉ−ｙｃｉ）２の最小値またはΣ（ｙｉ−Ｙｃｉ）２の最小値を算出することと、
・算出された残差２乗和の最小値または算出された残差２乗和の最小値の平方根を閾値に対して比較することと、
・この比較結果に応じて吸引状態の正否を確認することと、を含む前記方法。
【請求項２】
吸引経過時間に依存する補正係数が、吸引経過時間の一次関数ｂ＋ａ×ｔｉとして表され、パラメータｂおよびａは算出された残差２乗和Σ｛Ｙｉ−（ｂ＋ａ×ｔｉ）ｙｉ｝２またはΣ｛ｙｉ−（ｂ＋ａ×ｔｉ）Ｙｉ｝２が最小となる定数である請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ｎが５〜１５のいずれかであることを特徴とする請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
基準とする吸引状態において、水を吸引する請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
基準とする吸引状態において、吸引状態を確認すべき試料と同じ種類の溶媒を吸引する請求項１〜３のいずれかに記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、負圧源に接続された吸引管の先端を介して所定量の液体を吸引するときの吸引状態を確認する方法に係り、とくに血液等の生体液試料のための自動分析におけるサンプリングの吸引状態を確認する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
液体試料とりわけ血液等の生体液体試料のための自動分析において、試料の一部をサンプリングプローブによって吸引保持し、分析のための反応容器に分注することが一般におこなわれている。分注量が分析結果に影響を及ぼす免疫測定法等の分析方法を採用するとき、サンプリングの正確性・精度は重要である。血清、血漿等の血液試料をサンプリングプローブによって吸引する際、血液試料中に混在し得るフィブリン等の固形物がサンプリングプローブの先端や吸引管路内を閉塞して、サンプリングの正確性・精度に悪影響を及ぼすことがしばしば起こる。また、吸引動作の不具合やノズルチップの装着不良によって、気泡の混入や液漏れが生じることがある。
【０００３】
吸引ポンプ等の負圧源に接続されたサンプリングプローブを用いる際、サンプリングプローブまたは流路の内部圧力を経時的にモニターすることによりサンプリングの適否を確認する手段またはその手段を備えた分注装置が多く開示されている。たとえば、液体吸引中の吸引管内部の圧力の時間に対する一次微分値を指標とするもの（特許文献１参照）や圧力の時間に対する積分値を指標とするもの（特許文献２参照）がある。また、正常な吸引がおこなわれたときの圧力変化曲線の上限と下限からなる正常吸引圧力枠なるものを指標とするものも開示されている（特許文献３参照）。これらの指標は試料の粘性に依存し、粘性が試料ごとに大きく異なる血清等の試料に対しては、正常な吸引に対して異常吸引と判定する誤りを犯すおそれがある。すなわち、粘度の高い試料をサンプリングプローブ内に吸引する場合、たとえばシリンジポンプの動きに対して試料の移動には時間的遅れが生じるため、吸引管内部の負圧が一時的に強まる傾向があるが、所定時間内に必要量が吸引できるならば、これを異常吸引と判定すべきではない。
【０００４】
試料の粘性に依存しない異常吸引の判定方法として、特許文献４は圧力変化曲線の時間による二次微分値を指標とすることを提案している。この方法によれば粘性に依存しない安定した閉塞しきい値および吸引不足しきい値が得られるとのことであるが、二次微分の曲線からは吸引異常の程度が直感的に把握しにくいきらいがある。特許文献５は、粘度の高い液体を吸引するとき、管路内の圧力は吸引中に大きく負圧側に振れるものの、正常に吸引されたときは吸引動作停止後に、粘度の低い液体を吸引したときと同じ圧力レベルに復帰することを利用して、吸引後の所定時期の圧力を詰まりの判別の指標とすることを提案している。しかし、最終的に高粘度試料の吸引量が確保されたとしても、不完全な閉塞物が吸引された場合、この吸引された閉塞物がその後の分注操作または分析反応中に悪影響を及ぼすことがありうる。
【０００５】
【特許文献１】特公平６−１９３６１号公報
【特許文献２】特公平６−１９３６２号公報
【特許文献３】特許第３０６５１００号
【特許文献４】特許第２７１１２１５号
【特許文献５】特開平１１−８３８６８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は試料の粘性の影響を適度に許容し、かつ吸引中の完全閉塞、不完全閉塞、吸引量不足等の種々の要因に由来する異常吸引を総合的に検知し、サンプリングプローブの吸引状態を高精度に確認する方法を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、正常な吸引がおこなわれた圧力変化曲線と、試料を吸引したときの圧力変化曲線との相似性により吸引状態を総合的に評価するに際して、吸引管内部の圧力に及ぼす試料粘度等の影響が吸引経過時間に依存すると仮定し、鋭意検討を重ねて本発明を完成した。
【０００８】
すなわち本発明は、負圧源に接続された吸引管の先端を介して所定量の液体を吸引するときの吸引状態を確認する方法であって、基準とする吸引状態において吸引経過時間ｔｉ（ｉ＝１，２，・・・，ｎ）に対して前記吸引管内部の圧力データｙｉ（ｉ＝１，２，・・・，ｎ）を取得することと、確認する対象の吸引状態において吸引経過時間ｔｉ（ｉ＝１，２，・・・，ｎ）に対して前記吸引管内部の圧力データＹｉ（ｉ＝１，２，・・・，ｎ）を取得することと、前記圧力データｙｉを吸引経過時間に依存する補正係数によって変換した圧力データｙｃｉ（ｉ＝１，２，・・・，ｎ）、または前記圧力データＹｉを吸引経過時間に依存する補正係数によって変換した圧力データＹｃｉ（ｉ＝１，２，・・・，ｎ）を得ることと、ＹｉとｙｃｉとからまたはｙｉとＹｃｉとから、残差２乗和Σ（Ｙｉ−ｙｃｉ）２の最小値またはΣ（ｙｉ−Ｙｃｉ）２の最小値を算出することと、算出された前記残差２乗和の最小値または算出された残差２乗和の最小値の平方根を閾値に対して比較することと、この比較結果に応じて吸引状態の正否を確認することと、を含む。
【０００９】
本発明の圧力データは、複数の吸引経過時間に対して取得されるために複数の値を含み、吸引経過時間に対する圧力変化曲線として表すことができる。したがって基準とする吸引状態の圧力データを基準の圧力変化曲線として、確認する対象の圧力変化曲線と比較することができ、これらの相似性により吸引状態を評価することができる。なお本明細書で、圧力変化曲線とは、時間の経過に連れて変化しうる圧力データの集合または部分集合をいう。圧力変化曲線といっても連続的曲線的に変化する滑らかな曲線に限定されるものではなく、とびとびの圧力−時間データからなり折れ線の形状をなすものも含まれる。
【００１０】
基準とする吸引状態の圧力データは、吸引プローブの詰まりや空吸いのない正常な吸引がおこなわれたときに取得された圧力データを用いることができる。基準とする吸引状態の圧力データは１回の実験から得られた圧力変化曲線でもよいし、複数回の実験から取得し、個々の吸引経過時間に対する圧力データの平均値をとったり、曲線当てはめの統計的手法を用いる等して得られた圧力変化曲線でもよい。
【００１１】
本発明の方法を実際に適用する実験条件において、吸引状態を大きく変える因子、たとえば吸引に要する時間、吸引速度、吸引量、サンプリングプローブの形状等を変える予定があるのならば、それらの因子ごとに基準の圧力変化曲線を求めておくのが望ましい。一方、吸引状態を変える可能性をもつ因子ではあるが、その因子ごとに基準の圧力変化曲線を求めるのが実際には困難である場合には、その因子をいろいろと変えて実験し、圧力変化曲線にどの程度影響を及ぼすかをあらかじめ把握しておくのが望ましい。たとえば、自動分析装置のサンプリングプローブを使用する場合には、同種の別個体である複数台の装置やサンプリングプローブを用いて複数の基準の圧力変化曲線を求める。このように、正常な吸引がおこなわれる種々の条件で多くの基準の圧力変化曲線を求めておくことは、吸引状態の正否を判定するための閾値の設定のためにも有用である。また、あらかじめ基準の圧力変化曲線および閾値を求めておけば、実際の測定を行なう際には、確認する対象の圧力変化曲線を取得し、すでに取得した基準の圧力変化曲線および閾値を使用して本発明の方法を実施することができる。
【００１２】
さて本発明では、基準の圧力変化曲線と吸引状態を確認する対象の圧力変化曲線とを比較するときに、吸引経過時間に依存する補正係数を使用する。この吸引経過時間に依存する補正係数は、吸引管内部の圧力に及ぼす試料粘度等の影響が吸引経過時間に依存すると仮定したことを反映している。たとえば、基準とする吸引状態が水等の粘度の低い液体を対象とし、吸引状態を確認する対象が血清等の粘度の高い液体であるとき、上記の補正係数はつぎのような形になる。基準とする吸引状態における圧力データｙｉをｙｃｉに変換するための補正係数は、観測する吸引経過時間の区間において単調増加であればよく、たとえば吸引経過時間に対する１次関数、２次関数およびそれ以上の高次関数であってよい。他方、確認する対象の吸引状態における圧力データＹｉをＹｃｉに変換するための補正係数は、観測する吸引経過時間の区間において単調減少であればよく、吸引経過時間に対する関数の形は、基準とする吸引状態における圧力データｙｉをｙｃｉに変換するための補正係数と同様で差し支えない。基準とする吸引状態の圧力データを変換して得たｙｃｉとＹｉとを比較することと、確認する対象の吸引状態の圧力データを変換して得たＹｃｉをｙｉとを比較することとは数学的に同値であり、一方を説明することが同時に他方を説明することになる。要するに、基準とする吸引状態と確認する対象の吸引状態とは、液体の粘度等の違いによる吸引管内の圧力への影響の度合いが異なるのだから、粘度等の影響を考慮して比較しようということである。
【００１３】
残差２乗和の最小値または残差２乗和の最小値の平方根によって異常吸引を総合的に検知するために、判断の基準となる閾値を利用する。閾値の設定のためには異常吸引が起こる状況を作り出してその圧力変化曲線を取得し、上述した残差２乗和の最小値またはその平方根を求めておく。たとえば、種々の濃度の血清アルブミンを水や血清に溶かして溶液の粘性を変えた試料を用意し、吸引に伴う圧力変化曲線を求めることにより、正常吸引がおこなわれる限界を求めておくのも好適である。また、吸引プローブの詰まりが起こりやすい種々の血液試料を用いて、異常吸引のいろいろな圧力変化パターンを採取し、閾値の設定に役立てることができる。正常吸引がおこなわれたかどうかは、同じ吸引試料の分析値の再現性を前提にして判断することもできるし、吸引サンプルの重量を直接測定することによっても確認できる。閾値の設定は、基準とする吸引状態の圧力データを取得したときと同様に吸引状態を大きく変える因子たとえば吸引量ごとにおこなうのが実際的である。
【００１４】
吸引経過時間に依存する補正係数について、とくに計算が簡単で効果的に好ましいのは、補正係数が吸引経過時間の１次関数ｂ＋ａ×ｔｉとして表される場合である。ここで、パラメータｂおよびａは観測するそれぞれの吸引経過時間ｔｉに対して残差２乗和Σ｛Ｙｉ−（ｂ＋ａ×ｔｉ）ｙｉ｝２またはΣ｛ｙｉ−（ｂ＋ａ×ｔｉ）Ｙｉ｝２が最小となる定数である。残差２乗和Σ｛Ｙｉ−（ｂ＋ａ×ｔｉ）ｙｉ｝２とΣ｛ｙｉ−（ｂ＋ａ×ｔｉ）Ｙｉ｝２とでパラメータａとｂの数値ないし符号は異なる。パラメータａは吸引経過時間すなわち粘度等の寄与を含み、パラメータｂは基準となる吸引状態と確認する対象の吸引状態の圧力値のレベルを調整する機能を含んでいる。
【００１５】
観測を開始する吸引経過時間ｔ１は吸引開始後の任意の所定時刻であってよく、吸引開始と同時でもよいし、吸引動作の後半であってもよい。観測する最後の吸引経過時間ｔｎはｔ１のあとの任意の所定時刻であってよく、負圧源の作動を停止する前でも後でもよい。ただし基準とする吸引状態の圧力データを取得する吸引経過時間ｔｉと確認する対象の吸引状態の圧力データを取得する吸引経過時間ｔｉは同一である必要がある。また、粘度の高い試料を吸引するときは、負圧源の動作を停止したあとでも吸引管内の圧力が変化するため、ｔｎを負圧源の動作を停止したあとの所定時刻とすることが確実に異常吸引を検出するために有用でありうる。
【００１６】
吸引管内の圧力データを取得する吸引経過時間ｔｉ（ｉ＝１，２，・・・，ｎ）のｎ数について制限はなく、実施条件により適宜設定すればよい。ｎ数として最低３点、多くて１００点程度が好適であり、５〜１５の間で設定するのがとくに好ましい。また、圧力データの取得間隔としては、とくに限定されるものではなく、等時間間隔としてもよいし、実施条件により異常吸引を検知するのに有効な時間帯を密に取得するのも好適である。ただし吸引状態の確認を正確に行なうためには、負圧が大きく変動する区間全体の圧力データを観測する吸引経過時間の区間として取得することが好ましい。たとえば吸引直後のみの圧力データを取得しても吸引後半に生じた異常吸引は検知できないし、負圧源の動作を停止した後のみの圧力データを取得しても吸引前半に生じた異常吸引は検知するのが困難となるためである。
【００１７】
基準とする吸引状態の圧力データを取得するためには、正常吸引がおこなわれるように、基準試料として水を使用するのが便利かつ好適である。一方、精密な異常吸引の検知のためには、基準試料として、吸引状態を確認する対象の試料と同じ種類の溶媒で、閉塞の原因となるものが取り除かれたものを使用するのが望ましい。同じ種類の溶媒とは、粘度や密度、表面張力等の圧力変化曲線に影響を与えると思われる物性が、吸引状態を確認する対象の試料と同様の値を示すように、確認する対象がたとえば血清であれば基準試料にも血清を使用することがあげられる。また、溶媒の物性の中でも主に粘度が圧力変化曲線に与える影響が大きいため、粘度が近い溶媒、たとえば吸引状態を確認する対象の試料が血清ならば、基準試料として、十分に管理された標準血清、コントロール血清あるいは血清アルブミン水溶液を使用するのが好ましい。また同様の物性の溶媒として、吸引状態を確認する対象の試料自体を使用してもよいが、この場合は基準とする吸引状態の圧力データを取得する際には確実に正常吸引を行なわせる必要があるため、閉塞の原因となるものを取り除いたり、複数回の実験から取得した圧力データの平均値を基準とする吸引状態の圧力データとすることが望ましい。
【００１８】
負圧源としては各種吸引ポンプが使用できる。本発明の方法を分注装置のサンプリングプローブに適用することを想定すると、吸引・吐出動作の制御が容易なシリンジポンプを使用するのがとくに好適である。
【００１９】
負圧源に接続された吸引管としては各種サンプリングプローブが使用できるが、サンプリングプローブの先端から直接液体を吸引してもよいし、ディスポーザブルチップを使用してもよい。また、吸引管と負圧源の接続は直接接続されていてもよいし、間にトラップ等を介して接続されていてもよい。
【発明の効果】
【００２０】
本発明によれば、正常な吸引がおこなわれた圧力変化曲線と、試料を吸引したときの圧力変化曲線との相似性により吸引状態を総合的に評価するに際して、吸引経過時間に依存する補正係数によって、吸引管内部の圧力に及ぼす試料粘度等の影響を効果的に抑制して、正確な評価を実施することができる。たとえば、粘度が高い液体を異常吸引と判定する誤りを防止することができる。また、正常吸引と異常吸引との区別の精度を高め、閾値の設定における信頼性を高めることができる。本発明では、正常な吸引がおこなわれた圧力変化曲線と、試料を吸引したときの圧力変化曲線とを統計的に当てはめ、その残差２乗和の最小値またはその残差２乗和の最小値の平方根を吸引状態の指標とするので、直感的には両曲線の形を比較することになる。したがって、基準とする吸引状態および個々の確認する対象の吸引状態における圧力値のレベルそのものに対する高い再現性は要求されない。すなわち、基準の圧力変化曲線の取得時と確認する対象の圧力変化曲線の取得時とにおける圧力センサの精密なゲイン調節が不要である。したがって本発明は、吸引中または吸引停止後のある時点における圧力を閾値と比較する従来法に比べて、より安定性の高い方法であると言える。
【００２１】
さらに本発明の方法は、生化学自動分析装置などに搭載される試料の自動吸引手段における吸引状態を確認する方法として実施することも可能である。この場合には、たとえば生化学自動分析装置の記憶手段などに予め取得した基準の圧力変化曲線および閾値を記憶しておき、センサーで測定した確認する対象の圧力変化曲線を演算装置に出力し、自動的に吸引状態の正否をディスプレイやプリンタ等の表示手段に表示することが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
確認する対象の吸引状態における圧力データＹｉと、基準とする吸引状態における圧力データｙｉを補正係数ｂ＋ａ×ｔｉによって変換して得たｙｃｉとから、残差２乗和Σ（Ｙｉ−ｙｃｉ）２すなわちΣ｛Ｙｉ−（ｂ＋ａ×ｔｉ）ｙｉ｝２の最小値を求め、その平方根を吸引状態の正否を確認する指標とする場合を例にとり、本発明を実施するための最良の形態を説明する。
【００２３】
残差２乗和Σ｛Ｙｉ−（ｂ＋ａ×ｔｉ）ｙｉ｝２が最小となるパラメータａとｂを求めるため、ｂとａに関する偏導関数をそれぞれ０とおいてつぎの方程式（１）、（２）を得る：
∂Σ｛Ｙｉ−（ｂ＋ａ×ｔｉ）ｙｉ｝２／∂ａ  ＝  −ΣＹｉｙｉｔｉ＋ｂΣｙｉ２ｔｉ＋ａΣｙｉ２ｔｉ２＝０・・・・・（１）
∂Σ｛Ｙｉ−（ｂ＋ａ×ｔｉ）ｙｉ｝２／∂ｂ  ＝  −ΣＹｉｙｉ＋ｂΣｙｉ２＋ａΣｙｉ２ｔｉ＝０・・・・・（２）
式（１）、（２）よりパラメータａおよびｂを求める次式を得る：
ａ＝(ΣＹｉｙｉ×Σｙｉ２ｔｉ−Σｙｉ２×ΣＹｉｙｉｔｉ)／｛(Σｙｉ２ｔｉ）２−Σｙｉ２×Σｙｉ２ｔｉ２｝・・・・・（３）
ｂ＝(ΣＹｉｙｉ−ａΣｙｉ２ｔｉ）／Σｙｉ２・・・・・（４）
確認する対象の吸引状態における圧力データＹｉと、基準とする吸引状態における圧力データｙｉを式（３）、（４）に代入してａおよびｂの数値を求める。こうして求めたａおよびｂの数値を用いて、個々の実測した圧力データＹｉと、基準とする吸引状態における圧力データｙｉとから、残差２乗和Σ｛Ｙｉ−（ｂ＋ａ×ｔｉ）ｙｉ｝２を算出する。この残差２乗和の最小値の正の平方根を閾値に対して比較する。
【実施例】
【００２４】
実施例１
本発明の方法を実施するための最良の形態の適用例として、正常吸引、詰まりの傾向および空吸いの現象について順次述べる。圧力データの値は吸引前の圧力を０としたときの負圧（任意単位）で示した。
【００２５】
図１は、基準とする正常な吸引状態を表す圧力データと、検体の吸引状態を表す圧力データとが、吸引経過時間に対してほぼ同様に推移する正常吸引の例である。シリンジポンプに接続された吸引管の先端に使い捨てピペットチップを装着した。吸引管内部の空気の圧力を測定する圧力センサの出力をモニターした。開口容器中の水吸引を５回繰り返して得た圧力データの平均値を、基準とする吸引状態における圧力データとした。確認する対象として血清検体を吸引した。吸引量は１回あたり１００μＬ、シリンジポンプの動作時間は約５５０ｍｓである。吸引開始後約１００ｍｓの時点での圧力データをとり、吸引動作中に８点、吸引動作停止後２００ｍｓの圧力データまであわせて９点の圧力データをプロットした。図１において基準とする吸引状態の圧力データ（黒丸のプロットマーカー）および、実測した血清の吸引に伴う圧力データ（白四角のプロットマーカー）をそれぞれ折れ線で結んだ。これらの圧力−時間データを上の式（３）、（４）に代入して、パラメータａ，ｂを求め、基準となる圧力データに補正係数ｂ＋ａ×ｔｉ（この例ではｂ＝１．０、ａ＝０．２）を掛けて補正した圧力データｙｃｉの変化を破線で示した。図１が示しているように、補正した圧力データは実測した血清の吸引状態を表すプロットとほとんど重なっている。この正常吸引の例の場合、残差２乗和の最小値の正の平方根は３．３（負圧を表す任意単位）であった。
【００２６】
図２は、血清の吸引に伴う負圧の上昇（減圧の進行）が顕著な、詰まりの傾向を示す異常吸引の例である。基準となる圧力データ、吸引量、圧力データの取得時間等の実験条件は図１と同じである。今度は図１と異なり、４００ｍｓ手前から吸引動作が停止する直前である約５５０ｍｓまで負圧が高く維持されている。しかし、吸引動作停止後２００ｍｓの時点で血清吸引の負圧レベルは基準の圧力データとほぼ同じレベルまで下がっている。これは、たとえばゆるく架橋したフィブリン凝固体のようなものがピペット先端の狭窄部で停滞したのち、吸引圧に負けて吸い込まれた結果とも考えられる。このような状態で吸引採取した試料は分析に悪影響を与える要因を有していると見なければならない。吸引動作停止後の所定時期の圧力を指標として異常吸引を検知する従来の方法では、この例のような不完全な詰まり現象を検知することはできなかった。図２のデータにおいて補正のパラメータは、ｂ＝０．５、ａ＝２．１であり、残差２乗和の最小値の正の平方根は４２．７であった。この値４２．７は異常吸引を強く示唆している。
【００２７】
図３は、吸引中に負圧が異常低下を示した、空吸いの傾向を示す異常吸引の例である。基準となる圧力データ、吸引量、圧力データの取得時間等の実験条件は図１、２と同じである。血清検体の実測データにおいて、３００ｍｓを過ぎたあたりから負圧の急激な低下が起こっている。これは液面検知の過誤あるいは気泡の存在により、吸引中に検体が不足して空吸いが起きたことが考えられる。このデータにおいて、補正のパラメータは、ｂ＝１．５、ａ＝−２．０であり、残差２乗和の最小値の正の平方根は３０．７であった。この例もまた、吸引動作停止後の所定時期の圧力を指標とする従来の方法では検知できなかった異常吸引を本発明の方法が検知できることを示している。
【００２８】
以上の結果から、この測定系においては閾値を１０程度に設定することで、詰まりや空吸いの異常吸引を検知し、吸引状態の正否を確認することができた。
【００２９】
実施例２
本発明の特徴の一つは、吸引管内部の圧力に及ぼす試料粘度の影響を考慮するために、吸引経過時間に依存する補正係数を用いて、基準の圧力変化曲線と検査対象の圧力変化曲線とを比較することである。すなわち、補正係数としてｂ＋ａ×ｔｉを使うのであればパラメータａが重要な役割を果たしている。このことを実例により説明する。
【００３０】
仮に補正係数の時間依存性を考慮しない場合、すなわち補正係数ｂ＋ａ×ｔｉのパラメータａが０のとき、式（４）によりｂ＝ΣＹｉｙｉ／Σｙｉ２となる。取得した圧力データをこの式に代入してｂの数値を求める。こうして求めたｂの数値を用いて、個々の実測した圧力データＹｉと、基準とする吸引状態における圧力データｙｉとから、残差２乗和Σ（Ｙｉ−ｂ×ｙｉ）２を算出する。この残差２乗和の正の平方根を本発明による残差２乗和Σ｛Ｙｉ−（ｂ＋ａ×ｔｉ）ｙｉ｝２の正の平方根と比較した。
【００３１】
説明のために図４にヒト血清検体に対する圧力変化曲線の一例を示す。基準となる圧力変化曲線、吸引量、圧力データの取得時間等の実験条件は図１〜３と同じである。図４において基準とする吸引状態の圧力データ（黒丸のプロットマーカー）および、実測した血清の吸引に伴う圧力データ（白四角のプロットマーカー）をそれぞれ折れ線で結んだ。これらの圧力−時間データを上の式（３）、（４）に代入して、パラメータａ，ｂを求め、基準となる圧力データに補正係数ｂ＋ａ×ｔｉ（この例ではｂ＝１．１４、ａ＝１．９４）を掛けて補正した圧力データｙｃｉの変化を破線で示した（補正（ａ，ｂ））。他方、同じ圧力−時間データをｂ＝ΣＹｉｙｉ／Σｙｉ２に代入して、パラメータｂを求め、基準となる圧力データに補正係数ｂ（この例ではｂ＝１．７５）を掛けて補正した圧力データｙｃｉの変化を一点鎖線で示した（補正（ａ＝０））。
【００３２】
実測した血清の圧力変化曲線（白四角のプロットマーカー）の形状を見ると、図２に見られるような吸引後半５５０ｍｓ付近の負圧のふくらみや、図３に見られるような吸引途中における負圧の急激な落ち込みも見られない。また、吸引動作停止後の圧力も基準の圧力変化曲線とほぼ同じレベルにまで下がっている。さらに、この吸引操作後の血清の分析値に異常の報告がなされていないことからも、図４に示した血清の吸引に異常性は認められない。図４を詳細に観察すると、基準の圧力変化曲線のピーク位置（時間軸）に比べて、実測した圧力変化曲線のピーク位置はやや右側にシフトしていることがわかる。パラメータａを０とした補正による圧力変化曲線（一点鎖線）は基準の圧力変化曲線を上方に比例的に移動させた形となっているのに対して、補正係数ｂ＋ａ×ｔｉを使用する本願の方法による圧力変化曲線（破線）は、実測した圧力変化曲線の時間方向にシフトしたピークによく追随していることがわかる。じっさい、補正係数ｂ＋ａ×ｔｉを用いる本発明による残差２乗和の正の平方根は８．２であるのに対して、ａ＝０とした補正、すなわち吸引経過時間に依存しない補正係数により補正した残差２乗和の正の平方根は４４．１であった。
【００３３】
したがって、補正係数に時間依存性を考慮しない場合には正常吸引であっても残差２乗和Σ｛Ｙｉ−（ｂ＋ａ×ｔｉ）ｙｉ｝２の正の平方根が高い値を示してしまうため、実施例１のように閾値を１０程度に設定すると、異常吸引と正常吸引の区別をすることができないことがわかった。  図４に示したデータを含み、異常吸引が報告されていない２４４個の吸引測定データを図５にまとめた。吸引検体はヒト血清である。図５には、本発明による補正係数ｂ＋ａ×ｔｉを用いたときの残差２乗和の正の平方根（補正（ａ，ｂ））と、パラメータａ＝０としたときの残差２乗和の正の平方根（補正（ａ＝０））とに関する度数分布を折れ線で示した。階級の幅は、残差２乗和の正の平方根について０．５（負圧：任意単位）とした。本発明による方法（補正（ａ，ｂ））で算出した残差２乗和の正の平方根の分布は、あきらかに正常な吸引状態を反映するデータにおける平均値が３．５、標準偏差が０．８の正規分布に近い形状を示している。これに対してパラメータａ＝０としたときの分布（補正（ａ＝０））は、残差２乗和の正の平方根が１４以上のデータを除く平均値が５．４、標準偏差が１．７で、右側に広がるブロードな分布を示している。とくに、残差２乗和の正の平方根が１５を超えるデータ３点の内訳は、本願による補正（ａ，ｂ）と補正（ａ＝０）の組として、それぞれ｛８．２，  ４４．１｝、｛１１．４，  ５７．８｝および｛１１．１，  ２７．４｝となっており、本願方法は正常吸引を異常吸引と判定する誤りを回避することに役立つことがわかる。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】検体の吸引状態を表す圧力変化および基準とする吸引状態を表す圧力変化、ならびに本発明の補正係数によって変換した圧力データを表す実施例であって、正常吸引を表す図である。
【図２】検体の吸引状態を表す圧力変化および基準とする吸引状態を表す圧力変化、ならびに本発明の補正係数によって変換した圧力データを表す実施例であって、詰まりを示唆する吸引状態を表す図である。
【図３】検体の吸引状態を表す圧力変化および基準とする吸引状態を表す圧力変化、ならびに本発明の補正係数によって変換した圧力データを表す実施例であって、空吸いを示唆する吸引状態を表す図である。
【図４】検体の吸引状態を表す圧力変化および基準とする吸引状態を表す圧力変化、ならびに本発明の補正係数によって変換した圧力データ（補正（ａ，ｂ））および吸引経過時間に依存しない補正係数によって変換した圧力データ（補正（ａ＝０））を表す実施例である。
【図５】血清検体２４４個の吸引測定データに対する、本発明による補正係数ｂ＋ａ×ｔｉを用いたときの残差２乗和の正の平方根（補正（ａ，ｂ））と、パラメータａ＝０としたときの残差２乗和の正の平方根（補正（ａ＝０））とに関する度数分布である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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