(57)【要約】      （修正有）【課題】アトルバスタチン、薬学的に許容し得るその塩及びその中間体のアルドラーゼを使用する新規な製造方法を提供する。【解決手段】以下のステップを含む、製造方法：（ａ）アルドラーゼにより触媒されるアルドール縮合条件下でアルデヒドをアミノアルデヒド基質、Ｎ−保護アミノアルデヒド基質又はピロールアルデヒド基質と反応させて対応するラクトールを生成し；（ｂ）前記ラクトールを対応するラクトンに酸化し；そして（ｃ）前記ラクトンをアトルバスタチン又は薬学的に許容し得るその塩の生成に充分な条件に供する。そのように製造された化合物はHMG−CoAレダクターゼの阻害剤として有用であり、そのため脂質低下剤及びコレステロール低下剤として使用され得る。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
アルドラーゼにより触媒されるアルドール縮合条件下でアルデヒドをアミノアルデヒド基質、Ｎ−保護アミノアルデヒド基質又はピロールアルデヒド基質と反応させて対応するラクトールを生成するステップを含む方法。
【請求項２】
以下のステップを含む、アトルバスタチン又は薬学的に許容し得るその塩の製造方法：
（ａ）アルドラーゼにより触媒されるアルドール縮合条件下でアルデヒドをアミノアルデヒド基質、Ｎ−保護アミノアルデヒド基質又はピロールアルデヒド基質と反応させて対応するラクトールを生成し；
（ｂ）前記ラクトールを対応するラクトンに酸化し；そして
（ｃ）前記ラクトンをアトルバスタチン又は薬学的に許容し得るその塩の生成に充分な条件に供する。
【請求項３】
前記アミノアルデヒド又は前記Ｎ−保護アミノアルデヒドが３−アミノプロピオンアルデヒド、アミノアセトアルデヒド、Ｎ−CBz−３−アミノプロピオンアルデヒド、Ｎ−アセチル−３−アミノプロピオンアルデヒド、Ｎ−Fmoc−３−アミノプロピオンアルデヒド、又はＮ−Fmoc−アミノアセトアルデヒドである、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記アミノアルデヒド又は前記Ｎ−保護アミノアルデヒドがＮ−CBz−３−アミノプロピオンアルデヒド又はＮ−Fmoc−３−アミノプロピオンアルデヒドである、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記アミノアルデヒド又は前記Ｎ−保護アミノアルデヒドがＮ−CBz−３−アミノプロピオンアルデヒドである、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記アルドラーゼが２−デオキシリボース−５−リン酸アルドラーゼ（DERA）である、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記アルドラーゼが配列番号：１のヌクレオチド配列若しくは配列番号：８のアミノ酸配列を含むDERA03；
配列番号：２のヌクレオチド配列若しくは配列番号：９のアミノ酸配列を含むDERA04；
配列番号：３のヌクレオチド配列若しくは配列番号：１０のアミノ酸配列を含むDERA06；
配列番号：４のヌクレオチド配列若しくは配列番号：１１のアミノ酸配列を含むDERA08；
配列番号：５のヌクレオチド配列若しくは配列番号：１２のアミノ酸配列を含むDERA11；
配列番号：６のヌクレオチド配列若しくは配列番号：１３のアミノ酸配列を含むDERA12；
配列番号：７のヌクレオチド配列若しくは配列番号：１４のアミノ酸配列を含むDERA15；又は
それらのいずれか一つに少なくとも約20％のアミノ酸配列同一性を有するアルドラーゼ、又はそれらのいずれか一つのアミノ酸配列において1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／若しくは付加したアミノ酸配列を有するアルドラーゼである、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記アルドラーゼが配列番号：２のヌクレオチド配列若しくは配列番号：９のアミノ酸配列を含むDERA04；又は配列番号：３のヌクレオチド配列若しくは配列番号：１０のアミノ酸配列を含むDERA06である、請求項２に記載の方法。
【請求項９】
前記アルドラーゼが配列番号：３のヌクレオチド配列若しくは配列番号：１０のアミノ酸配列を含むDERA06である、請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
前記薬学的に許容し得るアトルバスタチン塩がアトルバスタチンカルシウムである、請求項２に記載の方法。
【請求項１１】
以下のステップを含む、アトルバスタチン又は薬学的に許容し得るその塩の製造方法：
（ａ）アルドラーゼにより触媒されるアルドール縮合条件下でアルデヒドをアミノアルデヒド基質、Ｎ−保護アミノアルデヒド基質又はピロールアルデヒド基質と反応させて対応するラクトールを生成し；
（ｂ）前記ラクトールを触媒的脱水素条件とそれに続くラクトン化条件に供して対応するラクトンを生成し；そして
（ｃ）前記ラクトンをアトルバスタチン又は薬学的に許容し得るその塩の生成に充分な条件に供する。
【請求項１２】
前記アミノアルデヒド又は前記Ｎ−保護アミノアルデヒドが３−アミノプロピオンアルデヒド、アミノアセトアルデヒド、Ｎ−CBz−３−アミノプロピオンアルデヒド、Ｎ−アセチル−３−アミノプロピオンアルデヒド、Ｎ−Fmoc−３−アミノプロピオンアルデヒド、又はＮ−Fmoc−アミノアセトアルデヒドである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記アミノアルデヒド又は前記Ｎ−保護アミノアルデヒドがＮ−CBz−３−アミノプロピオンアルデヒド又はＮ−Fmoc−３−アミノプロピオンアルデヒドである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記アミノアルデヒド又は前記Ｎ−保護アミノアルデヒドがＮ−CBz−３−アミノプロピオンアルデヒドである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記アルドラーゼが２−デオキシリボース−５−リン酸アルドラーゼ（DERA）アルドラーゼである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１６】
前記アルドラーゼが配列番号：１のヌクレオチド配列若しくは配列番号：８のアミノ酸配列を含むDERA03；
配列番号：２のヌクレオチド配列若しくは配列番号：９のアミノ酸配列を含むDERA04；
配列番号：３のヌクレオチド配列若しくは配列番号：１０のアミノ酸配列を含むDERA06；
配列番号：４のヌクレオチド配列若しくは配列番号：１１のアミノ酸配列を含むDERA08；
配列番号：５のヌクレオチド配列若しくは配列番号：１２のアミノ酸配列を含むDERA11；
配列番号：６のヌクレオチド配列若しくは配列番号：１３のアミノ酸配列を含むDERA12；
配列番号：７のヌクレオチド配列若しくは配列番号：１４のアミノ酸配列を含むDERA15；又は
それらのいずれか一つに少なくとも約20％のアミノ酸配列同一性を有するアルドラーゼ、又はそれらのいずれか一つのアミノ酸配列において1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／若しくは付加したアミノ酸配列を有するアルドラーゼである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１７】
前記アルドラーゼが配列番号：２のヌクレオチド配列若しくは配列番号：９のアミノ酸配列を含むDERA04；又は配列番号：３のヌクレオチド配列若しくは配列番号：１０のアミノ酸配列を含むDERA06である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１８】
前記アルドラーゼが配列番号：３のヌクレオチド配列若しくは配列番号：１０のアミノ酸配列を含むDERA06である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１９】
前記薬学的に許容し得るアトルバスタチン塩がアトルバスタチンカルシウムである、請求項１１に記載の方法。
【請求項２０】
以下のステップを含む、アトルバスタチン又は薬学的に許容し得るその塩の製造方法：
（ａ）アルドラーゼにより触媒されるアルドール縮合条件下でアルデヒドをアミノアルデヒド基質、Ｎ−保護アミノアルデヒド基質又はピロールアルデヒド基質と反応させて対応するラクトールを生成し；
（ｂ）前記ラクトールを対応するカルボン酸に開環し；そして
（ｃ）前記カルボン酸をアトルバスタチン又は薬学的に許容し得るその塩の生成に充分な条件に供する。
【請求項２１】
前記薬学的に許容し得るアトルバスタチン塩がアトルバスタチンカルシウムである、請求項２０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アトルバスタチン、薬学的に許容し得るその塩及びその中間体のアルドラーゼを使用する新規な製造方法に関する。そのように製造された化合物はHMG−CoAレダクターゼの阻害剤として有用であり、そのため脂質低下剤及びコレステロール低下剤として使用され得る。
【背景技術】
【０００２】
高濃度の血中コレステロール及び血中脂質はアテローム性動脈硬化症の発症に関与する状態である。HMG−CoAのメバロン酸への変換はコレステロール生合成経路における初期且つ律速段階である。この段階は酵素HMG−CoAレダクターゼによって触媒される。HMG−CoAレダクターゼの阻害剤は、ヒトの低密度リポ蛋白質コレステロール（LDL−C）の血漿中濃度を低下させるのに有効なことが知られている（M.S.BrownとJ.L.Goldstein、New England Journal of Medicine、305巻、第9号、515〜517頁、（1981）参照）。LDL−C濃度を低下させると虚血性心疾患が予防されることが確認されている（Journal of the American Medical Association、251巻、第3号、351〜374頁（1984）参照）。
【０００３】
様々な程度においてスタチン類はHMG−CoAレダクターゼと相互作用し、そして／又は、HMG−CoAのメバロン酸への変換を触媒することを阻害する。そのようなことから、スタチン類は集合的に強力な脂質低下剤である。そのため、スタチン類は多くの脂質疾患の処置において第一に選択される薬物である。一つの代表的なスタチンはアトルバスタチン（atorvastatin）である。他の代表的なスタチンにはロバスタチン（lovastatin）、プラバスタチン（pravastatin）、シンバスタチン（simvastatin）及びロスバスタチン（rosuvastatin）が含まれる。
【０００４】
アトルバスタチン及び薬学的に許容し得るその塩はHMG−CoAレダクターゼの選択的な拮抗阻害剤である。アトルバスタチンカルシウムは現在ではリピトール（Lipitor（登録商標））として市販されており、化学名［Ｒ−（Ｒ＊、Ｒ＊）］−２−(４−フルオロフェニル)−β、δ−ジヒドロキシ−５−(１−メチルエチル)−３−フェニル−４−[（フェニルアミノ）カルボニル]−１Ｈ−ピロール−１−ヘプタン酸カルシウム塩（2：1）３水和物及び式：
【０００５】
【化１】
2006345863.tif 000002
【０００６】
を有する。
そのようにしてアトルバスタチンカルシウムは強力な脂質低下化合物であり、そのため脂質低下剤及び／又はコレステロール低下剤として有用である。アトルバスタチンカルシウムは骨粗鬆症、前立腺肥大症（BPH）及びアルツハイマー病の治療においてもまた有用である。
【０００７】
アトルバスタチン、アトルバスタチン製剤、並びにアトルバスタチン製造のための方法及び主要な中間体を記載する特許及び公開された国際特許出願が多数発行されている。これらには、米国特許番号第4,681,893号、第5,003,080号、第5,097,045号、第5,103,024号、第5,124,482号、第5,149,837号、第5,155,251号、第5,216,174号、第5,245,047号、第5,248,793号、第5,273,995号、第5,280,126号、第5,298,627号、第5,342,952号、第5,397,792号、第5,446,054号、第5,470,981号、第5,489,690号、第5,489,691号、第5,510,488号、第5,686,104号、第5,969,156号、第5,998,633号、第6,087,511号、第6,121,461号、第6,126,971号、第6,433,213号、第6,476,235号、第6,528,660号、第6,600,051号、第6,605,759号、第6,613,916号、第6,646,133号、第6,730,797号、第6,867,306号、第6,891,047号、WO99/32434号、WO01/36384号、WO02/41834号、WO02/43667号、WO02/43732号、WO02/051804号、WO02/057228号、WO02/057229号、WO02/057274号、WO02/059087号、WO02/083637号、WO02/083638号、WO03/011826号、WO03/050085号、WO03/07072号、及びWO04/022053号が含まれる。
【０００８】
化学酵素的方法におけるアルドラーゼのDERA（デオキシリボースアルドラーゼ）ファミリーの使用が記載されている。米国特許番号第5,795,749号、WO03/006656、WO2004/027075、WO2005/012246；Gijsen, H. J. M.ら、JACS、1994年、116巻、8422〜8423頁；Gijsen, H. J. M.ら、JACS、1995年、117巻、7585〜7591頁；Greenberg, W. A.ら、PNAS、2004年、101巻、5788〜5793頁を見よ。
【特許文献１】米国特許番号第5,795,749号
【特許文献２】WO03/006656
【特許文献３】WO2004/027075
【特許文献４】WO2005/012246
【非特許文献１】Gijsen, H. J. M.ら、JACS、1994年、116巻、8422〜8423頁
【非特許文献２】Gijsen, H. J. M.ら、JACS、1995年、117巻、7585〜7591頁
【非特許文献３】Greenberg, W. A.ら、PNAS、2004年、101巻、5788〜5793頁
【発明の開示】
【０００９】
しかしながら、上述の方法には生成物の全体の収率及び純度が不充分なものがあった。さらに、これらの方法は特異的基質に限定されていた。従って、当業界においては有効且つ代替基質にも効果的な化学酵素的方法の必要性がある。
【００１０】
発明の概要
これら及びその他の必要性は、アトルバスタチン、薬学的に許容し得るその塩（例えばアトルバスタチンカルシウム）及びその中間体を製造するための効果的且つコスト効果の高い合成経路を指向する本発明によって満たされる。
【００１１】
本発明は、アルドラーゼにより触媒されるアルドール縮合条件下でアルデヒドをアミノアルデヒド基質、Ｎ−保護アミノアルデヒド基質又はピロールアルデヒド基質と反応させて対応するラクトールを生成するステップを含む方法を提供する。
【００１２】
本発明はまた以下のステップを含むアトルバスタチン又は薬学的に許容し得るその塩の製造方法を提供する：
（ａ）アルドラーゼにより触媒されるアルドール縮合条件下でアルデヒドをアミノアルデヒド基質、Ｎ−保護アミノアルデヒド基質又はピロールアルデヒド基質と反応させて対応するラクトールを生成し；
（ｂ）前記ラクトールを対応するラクトンへと酸化し；そして
（ｃ）前記ラクトンをアトルバスタチン又は薬学的に許容し得るその塩の生成に充分な条件に供する。
【００１３】
本発明はまた以下のステップを含むアトルバスタチン又は薬学的に許容し得るその塩の製造方法を提供する：
（ａ）アルドラーゼにより触媒されるアルドール縮合条件下でアルデヒドをアミノアルデヒド基質、Ｎ−保護アミノアルデヒド基質又はピロールアルデヒド基質と反応させて対応するラクトールを生成し；
（ｂ）前記ラクトールを触媒的脱水素条件と、それに続くラクトン化条件に供して対応するラクトンを生成し；そして
（ｃ）前記ラクトンをアトルバスタチン又は薬学的に許容し得るその塩の生成に充分な条件に供する。
【００１４】
本発明はまた以下のステップを含むアトルバスタチン又は薬学的に許容し得るその塩の製造方法を提供する：
（ａ）アルドラーゼにより触媒されるアルドール縮合条件下でアルデヒドをアミノアルデヒド基質、Ｎ−保護アミノアルデヒド基質又はピロールアルデヒド基質と反応させて対応するラクトールを生成し；
（ｂ）前記ラクトールを対応するカルボン酸へと開環し；そして
（ｃ）前記カルボン酸をアトルバスタチン又は薬学的に許容し得るその塩の生成に充分な条件に供する。
【００１５】
アトルバスタチン又は薬学的に許容し得るその塩の製造において有用な新規中間体もまた提供される。
発明の詳細な説明
定義
他に指示されない限り、以下の用語は以下のように定義される。
【００１６】
本明細書中に使用される冠詞「ａ」又は「ａｎ」はそれが指す対象の単数形及び複数形の両方を指す。
本明細書中に使用される用語「アルドラーゼにより触媒されるアルドール縮合条件」は、本明細書中に記載されるようにアルドラーゼによって触媒され得る当業界で既知のいかなるアルドール縮合条件をも指す。
【００１７】
本明細書中に使用される用語「アトルバスタチン又は薬学的に許容し得るその塩の生成に充分な条件」は、本明細書中に記載されるそれらの方法を含む当業界で記載されているそれらの方法を指す。
【００１８】
本明細書中に使用される用語「薬学的に許容し得る塩」はアトルバスタチンの比較的非毒性の塩類を指し、これらは正常な医学的判断の範囲において、過度の毒性、刺激、アレルギー性応答等を伴わず患者の組織との接触使用に適しており、妥当な利益／危険比率と釣り合っていて、且つ意図された使用に有効である。これらの塩は当業界で既知のいかなる方法で製造されてもよい。アトルバスタチンの薬学的に許容し得る塩の例は、アトルバスタチンカルシウム及びアトルバスタチンナトリウムを含むがこれらに限定されない当業界で既知のすべてのアトルバスタチン塩を含むがこれらに限定されない。
【００１９】
本発明で使用されるアルデヒドは本明細書中に記載されるようなアルドラーゼの存在下で本明細書中に記載されるような基質とアルドール縮合するであろういかなるアルデヒドでもよい。適するアルデヒドの一例はアセトアルデヒドであるが、これに限定されない。
【００２０】
本発明で使用される基質はいかなるアミノアルデヒド又はＮ−保護アミノアルデヒドでもよい。そのようなアミノアルデヒド又はＮ−保護アミノアルデヒドは、それぞれ本明細書中に記載されるようにアルドラーゼにより触媒されるアルドール縮合条件下でアルデヒドと反応するであろう。本発明の一つの実施態様において、本発明で使用される基質は、一般式（Ｉ）：
【００２１】
【化２】
2006345863.tif 000003
【００２２】
（式中、ｎ＝１〜４、好ましくはｎ＝１〜３、より好ましくはｎ＝１〜２であり、Ｒ’は水素であり、Ｒ’’は水素若しくはＮ−保護基であるか、又はＲ’及びＲ’’はそれらに結合した窒素と共に環状部分を形成している）を有する。
【００２３】
アミノアルデヒドに適するＮ−保護基は、ベンジルオキシカルボニル（CBz）、ブトキシカルボニル（Boc）、９−フルオレニルメトキシカルボニル（Fmoc）、ベンジル、及びジベンジルを含むがこれらに限定されない。
【００２４】
適するアミノアルデヒド基質の例は下記を含むがこれらに限定されない：
【００２５】
【化３】
2006345863.tif 000004
【００２６】
本発明の一つの実施態様において、アミノアルデヒド基質はＮ−CBz−３−アミノプロピオンアルデヒド又はＮ−Fmoc−３−アミノプロピオンアルデヒドである。本発明の一つの実施態様において、アミノアルデヒド基質は３−アミノ−プロピオンアルデヒドである。本発明の一つの実施態様において、アミノアルデヒド基質はアミノ−アセトアルデヒドである。本発明の一つの実施態様において、アミノアルデヒド基質はＮ−CBz−３−アミノプロピオンアルデヒド（Aldrichより市販されている）である。本発明の一つの実施態様において、アミノアルデヒド基質はＮ−アセチル−３−アミノプロピオンアルデヒドである。本発明の一つの実施態様において、アミノアルデヒド基質はＮ−Fmoc−３−アミノプロピオンアルデヒドである。
【００２７】
Ｎ−Fmoc−アミノアルデヒドは両方とも対応するＮ−Fmoc−アミノアルコールの標準的なデス・マーチン（Dess-Martin）酸化により得られた。
Ｎ−アセチル−３−アミノプロピオンアルデヒドは、３−アミノ−１−プロパノールから２段階手順により得られた：酢酸メチルにより３−アミノ−１−プロパノールをＮ−アセチル化し、続いてデス・マーチン酸化により目的生成物（正確なESI-MS[M+H]+116.25及び[M+Na]+138.20）を得た。
【００２８】
あるいは、本発明で使用される基質はピロールアルデヒドでもよい。一つの実施態様において、ピロールアルデヒドは以下の構造を有する：
【００２９】
【化４】
2006345863.tif 000005
【００３０】
このピロールアルデヒドはジケトン９から２段階手順によって製造された：３-アミノ−１−プロパノールをPaal-Knorr反応させ、続いてデス・マーチン酸化により目的生成物（正確なESI-MS[M+H]+455.4及び[M+Na]+477.3）を得た。
【００３１】
本発明で使用されるアルドラーゼは、それぞれ本明細書中に記載されるように、アミノアルデヒド基質、Ｎ−保護アミノアルデヒド基質又はピロールアルデヒド基質に対してアルドラーゼ活性を有するいかなる化合物でもよい。本発明の一つの実施態様において、アルドラーゼは２−デオキシリボース−５−リン酸アルドラーゼ（DERA）である。適するDERAアルドラーゼの例は以下を含むが、これらに限定されない：
DERA03（E. Coli）（Sigma Aldrich, St. Louis, MOより市販されている）；
DERA04（William A. Greenbergら、PNAS（2004）、101巻、16号、5788〜5793頁、又はその改変体）；
DERA06（GenBankアクセッション番号NP 294929又はその改変体）；
DERA08（GenBankアクセッション番号NP 465519又はその改変体）；
DERA11（GenBankアクセッション番号NP 439273）；
DERA12（GenBankアクセッション番号NP 229359）；又は
DERA15（Haruhiko Sakurabaら、Journal of Biological Chemistry(2003)、278巻、12号、10799〜10806頁）。
【００３２】
本発明の一つの実施態様において、アルドラーゼは、本明細書中に記載されるDERAアルドラーゼに対して少なくとも約20％（例えば、30％、40％、50％、60％）、好ましくは少なくとも70％（例えば、80％、85％、90％、95％、98％）のアミノ酸配列同一性を有するアルドラーゼである。同一性％の計算の際は、対象となる配列を最適に整列し、比較することができる。そのための適当なコンピュータープログラム及びソフトウェアは当業者に良く知られており、適用する際にはデフォルト値を使用することができる。あるいは、本発明の一つの実施態様において、アルドラーゼは、本明細書中に記載されるDERAアルドラーゼのいずれか一つのアミノ酸配列において1又は複数のアミノ酸が置換、欠失、挿入、及び／若しくは付加したアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。このようなアミノ酸置換等の方法は当業者には良く知られており、改変された配列が本発明に従ってアルドースとして作用する能力を保持するかぎり、例えば、1、2又は3〜10、20又は30のアミノ酸残基について行うことができる。本発明の一つの実施態様において、DERAアルドラーゼはDERA04又はDERA06である。本発明の一つの実施態様においてDERAアルドラーゼはDERA06である。
【００３３】
本発明によれば、DERA03、DERA04、DERA06、DERA08、DERA11、DERA12及びDERA15は実施例10〜23に示されるそれらのヌクレオチド配列及びアミノ酸配列によって同定される。
より明確には、DERA03は配列番号：１のヌクレオチド配列及び配列番号：８のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００３４】
DERA04は配列番号：２のヌクレオチド配列及び配列番号：９のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
DERA06は配列番号：３のヌクレオチド配列及び配列番号：１０のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００３５】
DERA08は配列番号：４のヌクレオチド配列及び配列番号：１１のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
DERA11は配列番号：５のヌクレオチド配列及び配列番号：１２のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００３６】
DERA12は配列番号：６のヌクレオチド配列及び配列番号：１３のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
DERA15は配列番号：７のヌクレオチド配列及び配列番号：１４のアミノ酸配列を有するアルドラーゼである。
【００３７】
本明細書中に記載されるDERAアルドラーゼは、当業界で既知のいかなる方法で製造されてもよく、組み換え型E. coliでの蛋白質発現のための標準的なプロトコル（SambrookとRussell、Molecular Cloning: A Laboratory Manual第３版、Cold Spring Harbor、NY2001）を含むがこれに限定されない。当業者には理解されるであろうように、既知のDERAアルドラーゼの改変体が必要とされるか、又はクローニング条件に依存して生じることもあり、これらも本発明に包含される。
【００３８】
以下のスキームは本発明を例証する。
【００３９】
【化５】
2006345863.tif 000006
【００４０】
スキーム１は本発明に包含される方法を概略的に記載している。スキーム１に示されるように、DERAアルドラーゼはアミノアルデヒド又はＮ−保護アミノアルデヒドと２モルのアセトアルデヒドとのアルドール縮合反応を触媒し、目的のアミノラクトール（Ａ）を与える。次にアミノ−ラクトール（Ａ）は対応するラクトン（Ｂ）へと選択的に酸化され得る。結果として得られるラクトン（Ｂ）は次に脱保護とそれに続くジケトン（９）：
【００４１】
【化６】
2006345863.tif 000007
【００４２】
とのPaal-Knorr縮合を経てアトルバスタチンラクトンへと変換することができ、対応するアトルバスタチンラクトンを与える。このアトルバスタチンラクトンをCa(OH)2で開環するとアトルバスタチンカルシウムが得られるであろう。
【００４３】
あるいは、アミノ-ラクトール（Ａ）を触媒（例えばPt/C、Pd/C）により脱水素してカルボン酸（Ｃ）を生成し、これをラクトン化して（Ｂ）を生成し、次にこれを上に記載されるようにアトルバスタチンカルシウムへと変換してもよい。
【００４４】
もう一つの実施態様においては、カルボン酸（Ｃ）がジケトン（９）と縮合してアトルバスタチンカルシウムを与える。
本発明によれば、当業者には理解されるであろうように、酵素的段階の立体選択性はラセミ体標準物の化学的製造及び関連するキラルクロマトグラフィー法の展開によって確認し得る。
【００４５】
ラクトール（Ａ）からラクトン（Ｂ）又はカルボン酸（Ｃ）への酸化は、目的の変換が達成されるであろう当業界では既知のいかなる酸化方法を使用して実施してもよい。本発明の一つの実施態様においては、選択的な酸化は実施例２及び３に記載される方法によって達成し得る。
【００４６】
（Ａ）を（Ｃ）へと変換する当業界では既知のいかなる触媒的脱水素方法も本発明に包含される。適する触媒の例は、Pt/C、Pd/C、Ｐｔ/Ｂｉ/C、Pd/Ｂｉ/C及び他のいかなる脱水素触媒をも含むがこれらに限定されない。本発明の一つの実施態様において、この触媒的脱水素はｐＨ約７〜１０において空気又は酸素を最終酸化剤として使用して実施される。
【００４７】
カルボン酸（Ｃ）をラクトン（Ｂ）へと変換する当業界では既知のいかなるラクトン化方法も本発明に包含され、例えばHCl、H２SO４、メタンスルホン酸（MSA）、ｐ−トルエンスルホン酸（TSA）及び当業界で既知の他のいかなるラクトン化酸等（これらに限定されない）の酸触媒の使用を含むがこれに限定されない。
【００４８】
【化７】
2006345863.tif 000008
【００４９】
スキーム２はラクトール（１）からアトルバスタチンカルシウムを製造するための３つの可能な経路を説明している。ラクトール（１）は本明細書中に記載される化学酵素的方法により製造し得る。
【００５０】
経路１：酸触媒により（３）をラクトン化し、続いてPd/C触媒による水素化によって（２）のベンジルオキシカルボニル（CBz）を脱保護することで、アミノ−ラクトン（２）を製造し得る。
【００５１】
経路２：Pd/C触媒による水素化によって（３）のCBzを脱保護することによりω−アミノ酸−ジオール（５）を製造し得る。続いて（５）をジケトン（９）：
【００５２】
【化８】
2006345863.tif 000009
【００５３】
と縮合させてアトルバスタチンカルシウムを得た。
経路３：化合物（８）（TBIA）は、（３）の酸触媒によるジオール保護により（６）を生成し、（６）とt-BuOHとのカップリングにより（７）を生成し、そして（７）のCBzをPd/C触媒による水素化によって脱保護して（８）を生成することにより製造し得る。次に化合物（８）をジケトン（９）と縮合させ、脱保護、ラクトン化及びCa(OH)２によるラクトン開環によってアトルバスタチンカルシウムを生成する。
【００５４】
もう一つの実施態様において、カルボン酸（３）をｔ−ブチル−イソプロピリジンアミン（８）へと変換し、続いてジケトン（９）と縮合させ、脱保護、ラクトン化及びラクトン開環によってアトルバスタチンカルシウムを生成し得る。
【００５５】
【化９】
2006345863.tif 000010
【００５６】
スキーム３は、本明細書中に記載される方法により製造されるラクトール（１）からアトルバスタチンカルシウムを生成するもう一つの経路を記載している。保護されたアミノ−ラクトール（１２）は、ラクトール（１）をエチル−保護ラクトール（１１）へと変換し、続いてPd/C触媒による水素化によって（１１）のCBzを脱保護することにより製造される。続いて（１２）をジケトン（９）と縮合させて（１３）を得、次に（１３）を脱保護して（１４）が得られ、（１４）は酸化されてアトルバスタチンラクトン（１０）を与え、次に（１０）がアトルバスタチンカルシウムへと変換される。
【００５７】
【化１０】
2006345863.tif 000011
【００５８】
スキーム４において、アトルバスタチンカルシウムはジケトン９から出発して製造される。ジケトン９は当業界で既知の手順、例えばBaumann, Kelvin L.、Tetrahedron Letters (1992),33(17),2283〜2284頁を含む手順に従って製造し得る。ジケトン９をピバル酸と処理して対応するピロールアルコールを生成し、次にこれをデス・マーチン条件下で酸化して対応するピロールアルデヒドを生成する。次にピロールアルデヒドをアルドラーゼ触媒によりアルドール縮合させて対応するピロールラクトールを生成する。結果として得られるピロールラクトールを次に標準的な酸化によりピロールラクトンへと変換し得る。ピロールラクトンは次に当業界で既知の方法によってアトルバスタチンカルシウムへと変換され得る。
【００５９】
以下の非限定的実施例は本発明を例証する。
【実施例１】
【００６０】
６Ｒ−［（ベンジルオキシカルボニル）アミノ］エチル−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２，４−ジオール（１）の製造
【００６１】
【化１１】
2006345863.tif 000012
【００６２】
DERA04（デオキシリボースアルドラーゼ、42,000単位、14.0mL）の溶液にリン酸緩衝液（60mL、pH7.3、0.05M）を加えた。ジメチルスルホキシド（DMSO）（2.5mL）に溶解した［（ベンジルオキシカルボニル）アミノ］プロピオンアルデヒド（10.0g、48.3mmol、Aldrich）及びアセトアルデヒド（5.5mL、96.6mmol、Aldrich）／リン酸緩衝液（5.5mL、pH7.3、0.05M）を、プログラムしたポンプを用いて上記DERA溶液へ２時間以内で継続的に加えた。反応の変換は高速液体クロマトグラフィー（HPLC）で検出した。20〜24時間に変換が95％に到達した後、反応混合物を酢酸エチル（100mL）で抽出した。２層を遠心分離した後、有機層を乾燥蒸発させて粗ラクトール１（14.5g）をオイルとして得、これを直接次のステップに供した。ヘプタン／酢酸エチル／メタノール（1:8:1）を使用したシリカゲルクロマトグラフィーにより、純粋な１（10.8g、76％）が得られた。LC-MS m/z[M+Na]+ 318.2。主要なアノマーの113C NMR (CDCl3, 75 MHz): δ 136.96, 157.00, 128.90, 128.61, 93.07, 69.01, 67.89, 67.10, 40.21, 38.00, 35.50。
【実施例２】
【００６３】
【化１２】
2006345863.tif 000013
【００６４】
６Ｒ−［１−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ］エチル−４Ｒ−ヒドロキシテトラヒドロ−２−Ｈ−ピラン−２−オン（２）の製造
ラクトール１（50mg、0.169mmol、実施例１に従って製造）のアセトニトリル（ACN）（1mL）溶液にBaCO3（1.5当量、0.253mmol、Aldrich）を加えた。上記混合物に臭素（1.5当量、0.253mmol、Aldrich）を１滴ずつ加え激しく攪拌した。５時間後、残余固体を濾過して溶液を得、これを蒸発させて粗ラクトン２を得た。LC-ESIMS:m/z[M+Na]+ m/z 316.1。このラクトンのジアステレオマー過剰率（de）及びエナンチオマー過剰率（ee）はキラルHPLCにより決定した。
【実施例３】
【００６５】
３Ｒ，５Ｒ−ジヒドロキシ−１−［ベンジルオキシカルボニル］アミノ−７−ヘプタン酸（３）の製造
【００６６】
【化１３】
2006345863.tif 000014
【００６７】
粗ラクトール１（7.5g、実施例１に従って製造）のｔ−ブタノール／H2O（38mL／38mL）溶液にPt／C(3.0g、3%mol、Arldrich）を加えた。この反応混合物に泡立たせた空気を40℃で注入することにより脱水素を実施した。反応混合物のpHは飽和NaHCO３溶液の継続的添加により8.0に保った。24時間後、触媒を濾過し、酢酸エチル（70mL）で洗浄して、３の粗水溶液をナトリウム塩として得た。この水溶液を10%HClでpH4.0まで酸性化し、酢酸エチル（2×70mL）で抽出した。有機層を乾燥濃縮させて粗３を薄黄色のオイル（4.0g）として得た。LC-ESIMS m/z [M+Na]+ 334.1。
【実施例４】
【００６８】
６Ｒ−[１−（ベンジルオキシカルボニル）アミノ]エチル−４Ｒ−ヒドロキシテトラヒドロ−２−Ｈ−ピラン−２−オン（２）の製造
【００６９】
【化１４】
2006345863.tif 000015
【００７０】
粗３（2.0g、実施例３に従って製造）／テトラヒドロフラン（THF）（50mL）に塩酸（HCl）／ジオキサン（100μL、4M、Aldrich）を加え、この反応混合物を23℃で2〜3時間攪拌した。THFを蒸発させた後、粗オイルを酢酸エチル（50mL）に溶解して水（pH7.0、50mL）で洗浄した。有機層をNa2SO4上で乾燥させ溶媒を蒸発させた後、残余物はヘプタン／アセトン（4:1、50mL）から長針を形成し、２が白色固体として得られた（1.5g、３段階の総収率〜45%、de＞97%、ee＞99%）。LC-ESIMS [M+Na]+ m/z 316.1。1H NMR (CDCl3, 300MHz)：d 7.23-7.50 (m, 5H), 5.19 (brs, 1H), 5.08 (s, 2H), 4.78 (m, 1H), 4.32 (s, 1H), 3.38 (m, 2H), 2.65 (m, 2H), 1.59-2.02 (m, 4H)。13C NMR (CDCl3, 75 MHz) d 170.28, 156.71, 136.49, 128.56, 128.17, 128.09, 73.82, 66.82, 62.59, 38.51, 37.34, 35.81, 35.64。
【実施例５】
【００７１】
６Ｒ−アミノエチル−４Ｒ−ヒドロキシテトラヒドロ−２−Ｈ−ピラン−２−オン（４）の製造
【００７２】
【化１５】
2006345863.tif 000016
【００７３】
ラクトン２（100mg、0.341mmol、実施例４に従って製造）／THF（2mL）をPd／C（5%、100mg、Aldrich）で、23℃で１時間水素化した。触媒を濾過した後、遊離のアミノエチル−ラクトン４が生成され、これを次のPaal-Knorr縮合に直接使用した（実施例８を見よ）。LC-ESIMS: m/z [M+THF]+ 232.3。
【実施例６】
【００７４】
[６−（２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−エチル）−２，２−ジメチル−[１，３]ジオキサン−４−イル]−酢酸ｔ−ブチルエステル（７）の製造
【００７５】
【化１６】
2006345863.tif 000017
【００７６】
粗酸３（1.0g、実施例３に従って製造）／アセトン（2.0mL）及びジメトキシプロパン（4.0mL、Aldrich）混合物にメチルスルホン酸（MSA）（15μL、触媒量、Aldrich）を加えた。この混合物を室温(rt）で2〜3時間攪拌した。溶媒を蒸発させた後、粗残余物／アセトニトリル（ACN）(10mL）にDCC（1.0当量、720mg、Aldrich）及びｔ−ブタノール（2.0当量、660μL、Aldrich）を加えた。この混合物を室温で２時間混合した。生成された固体を濾過して溶媒を蒸発させた後に粗生成物７が得られ、次の脱保護段階に直接供された。LC-ESIMS m/z [M+Na]+431.5。
【実施例７】
【００７７】
ｔ−ブチル−イソプロピリジンアミン（TBIA）（８）の製造
【００７８】
【化１７】
2006345863.tif 000018
【００７９】
粗７（2.3g、実施例６に従って製造）／メタノール（20mL）をPd／C（5%、500mg、Aldrich）で、23℃で水素化した。触媒を濾過しメタノールを蒸発させた後、粗生成物を酸性緩衝液（pH4.0）に溶解し、これを酢酸エチル（1×50mL）で洗浄した。水相のpHを1NNaOHで10へと調整し、酢酸エチル（2×50mL）で抽出した。有機相を乾燥蒸発させて８をオイルとして得た。
【実施例８】
【００８０】
アトルバスタチンラクトン（１０）の製造
【００８１】
【化１８】
2006345863.tif 000019
【００８２】
アミノ−ラクトン４（77mg、0.486mmol、実施例５に従って製造）、ジケトン９（0.7等量、142mg）及びピバリン酸（1.0当量、34.7mg、Fluka）の混合物をトルエン／ヘプタン(1:1、3mL）中で、110℃で24時間還流した。LC-MSスペクトルにより、＜5%のアトルバスタチンラクトン１０が生成したことが示された。LC-ESIMS: m/z [M+Na]+ 563.2。
【実施例９】
【００８３】
Ｎ−ＣＢｚ−３−アミノ−エチル−ラクトール（１１）の製造
【００８４】
【化１９】
2006345863.tif 000020
【００８５】
粗ラクトール１（100mg、実施例１に従って製造）／エタノール(1mL）にH2SO4を２mL加えた。この混合物を室温で１時間混合した。溶媒を除去した後、粗保護ラクトール１１が変換率＞95%で得られた。LC-ESIMS: m/z [M+Na]+ 346.3。
【実施例１０】
【００８６】
配列番号：１  DERA03のヌクレオチド配列
atgactgatctgaaagcaagcagcctgcgtgcactgaaattgatggacctgaccaccctgaatgacgacgacaccgacgagaaagtgatcgccctgtgtcatcaggccaaaactccggtcggcaataccgccgctatctgtatctatcctcgctttatcccgattgctcgcaaaactctgaaagagcagggcaccccggaaatccgtatcgctacggtaaccaacttcccacacggtaacgacgacatcgacatcgcgctggcagaaacccgtgcggcaatcgcctacggtgctgatgaagttgacgttgtgttcccgtaccgcgcgctgatggcgggtaacgagcaggttggttttgacctggtgaaagcctgtaaagaggcttgcgcggcagcgaatgtactgctgaaagtgatcatcgaaaccggcgaactgaaagacgaagcgctgatccgtaaagcgtctgaaatctccatcaaagcgggtgcggacttcatcaaaacctctaccggtaaagtggctgtgaacgcgacgccggaaagcgcgcgcatcatgatggaagtgatccgtgatatgggcgtagaaaaaaccgttggtttcaaaccggcgggcggcgtgcgtactgcggaagatgcgcagaaatatctcgccattgcagatgaactgttcggtgctgactgggcagatgcgcgtcactaccgctttggcgcttccagcctgctggcaagcctgctgaaagcgctgggtcacggcgacggtaagagcgccagcagctactaa
【実施例１１】
【００８７】
配列番号：２  DERA04のヌクレオチド配列
atgggtaatatcgcgaaaatgattgatcacaccctcttaaaacccgaagcaaccgaacaacaaattgtacaattatgcacggaagcgaaacaatatggctttgcagcagtatgcgtaaatccgacatgggttaaaaccgccgcacgtgaattaagcgggacagacgttcgtgtgtgtactgtaattggatttcccttgggcgctacgactccagaaactaaagcattcgaaactactaacgcgattgaaaatggagcacgggaagtagatatggtaattaatattggtgcattgaaatctggacaagatgaactggtggaacgtgatattcgtgccgttgttgaagctgcagcaggccgcgcgcttgtgaaagtaattgtagaaacagcccttcttactgatgaagaaaaagttcgcgcttgtcaattagcagtaaaagcgggtgccgattatgtgaagacgtcgacaggatttagcggtggtggtgcaacggtggaagatgtggctttaatgcggaaaacggttggtgatcgtgcaggggtcaaagcaagcggcggagtacgtgactggaaaacagcagaagcaatgattaacgcaggagcaacgcgcattggcacaagttctggagtagcaatcgtaacaggtggaaccggccgggcagactattaa
【実施例１２】
【００８８】
配列番号：３  DERA06のヌクレオチド配列
atgggactcgcctcctacatcgaccacacgctgcttaaggccaccgccacgctcgccgacatccgcacgctgtgtgaggaagcccgcgagcactcgttctacgcggtgtgcatcaacccggtctttattccccacgcccgcgcctggctcgaaggcagcgacgtgaaggtcgccaccgtctgcggctttcccctcggcgccatcagctccgagcagaaagctctggaagcccgcctgagcgccgaaacgggcgccgacgaaatcgatatggtcatccacatcggctcggcgcttgccggcgactgggacgcggtggaagccgacgtgcgggcagtgcgccgcgcggtgcccgagcaggtgctcaaggtgattatcgaaacctgctacctgaccgacgagcaaaagcgcttggcgactgaggtcgccgtacagggcggcgccgacttcgtgaagacgagcacaggcttcggcaccggcggcgccaccgtggacgacgtgcgcctgatggcggaagtgatcgggggccgcgccggactcaaggcggcgggcggcgtccgcactcctgccgacgcgcaagccatgatcgaggcgggcgcgacccggctgggcacctcgggcggcgtgggtctggtgtcgggcggcgaaaacggagccggctactga
【実施例１３】
【００８９】
配列番号：４  DERA08のヌクレオチド配列
atgggaattgctaaaatgatcgatcacactgctttaaaaccagacacaacgaaagaacaaattttaacactaacaaaagaagcaagagaatacggttttgcttccgtatgcgtaaatccaacttgggtaaaactatccgctgaacaacttgctggagcagaatctgtagtatgtactgttatcggtttcccactaggagcgaatacccctgaagtaaaagcatttgaagtaaaagatgctatccaaaacggtgcaaaagaagtggatatggttattaatatcggcgcactaaaagacaaagacgacgaactagtagaacgtgatattcgcgctgtagtcgatgctgccaaaggaaaagcattagtaaaagtaattatcgaaacttgcctattaacagacgaagaaaaagttcgcgcatgtgaaatcgctgtaaaagcgggaacagacttcgttaaaacatccactggattctccacaggtggcgcaactgccgaagatatcgccttaatgcgtaaaactgtaggaccaaacatcggcgtaaaagcatctggtggggttcgtacgaaagaagacgtagaaaaaatgatcgaagcaggcgcaactcgtattggcgcaagtgcaggtgtcgcaattgtttccggcgaaaaaccagccaaaccagataattactaa
【実施例１４】
【００９０】
配列番号：５  DERA11のヌクレオチド配列
atgacatcaaatcaacttgctcaatatatcgatcacaccgcacttaccgcagaaaaaaatgaacaagatatttcgacactctgtaatgaagcgattgaacacggattttattctgtatgtatcaattctgcttatattccactcgctaaagaaaaacttgctggctcaaatgtaaaaatttgcaccgtagttggattccctttgggggcgaatttaacctcagtcaaagcatttgaaacgcaagaatctattaaagcgggtgcaaatgaaattgatatggtgattaatgtaggttggataaaatcgcaaaaatgggatgaagtaaaacaagatattcaagcggtatttaatgcttgtaatggcacgccattaaaagtgattttagaaacttgtttgctcactaaagatgaaatagtgaaagcctgcgaaatttgtaaagaaatcggtgtagcttttgttaaaacatcaacaggctttaataaaggtggtgcgaccgtagaagatgttgcattgatgaaaaacacggtcggcaatattggtgttaaagcatcaggtggtgtgcgtgatactgaaactgcacttgcaatgattaaggcgggtgcgactcgcattggtgcaagcgctggcattgcgattattagcggtactcaagacactcaaagcacttactaa
【実施例１５】
【００９１】
配列番号：６  DERA12のヌクレオチド配列
atgatagagtacaggattgaggaggcagtagcgaagtacagagagttctacgaattcaagcccgtcagagaaagcgcaggtattgaagatgtgaaaagtgctatagagcacacgaatctgaaaccgtttgccacaccagacgatataaaaaaactctgtcttgaagcaagggaaaatcgtttccatggagtctgtgtgaatccgtgttatgtgaaactggctcgtgaagaactcgaaggaaccgatgtgaaagtcgtcaccgttgttggttttccactgggagcgaacgaaactcggacgaaagcccatgaggcgattttcgctgttgagagtggagccgatgagatcgatatggtcatcaacgttggcatgctcaaggcaaaggagtgggagtacgtttacgaggatataagaagtgttgtcgaatcggtgaaaggaaaagttgtgaaggtgatcatcgaaacgtgctatctggatacggaagagaagatagcggcgtgtgtcatttccaaacttgctggagctcatttcgtgaagacttccacgggatttggaacaggaggggcgaccgcagaagacgttcatctcatgaaatggatcgtgggagatgagatgggtgtaaaagcttccggagggatcagaaccttcgaggacgctgttaaaatgatcatgtacggtgctgatagaataggaacgagttcgggagttaagatcgttcaggggggagaagagagatatggaggttga
【実施例１６】
【００９２】
配列番号：７  DERA15のヌクレオチド配列
atgccgtcggccagggatatactgcagcagggtctagacaggctagggagccctgaggacctcgcctcgaggatagactctacgctactaagccctagggctacggaggaggacgttaggaatcttgtgagagaggcgtcggactacgggtttagatgcgcggttctgactccagtgtacacagtaaagatttctgggctggctgagaagcttggtgtgaagctatgtagcgttataggctttcccctgggccaggccccgctcgaggtaaagctagttgaggcacaaactgttttagaggctggggctactgagcttgatgttgtcccccatctctcactaggccccgaagctgtttacagggaggtctcagggatagtgaagttggcgaaaagctatggagccgttgtgaaagtaatattagaagcgccactctgggatgacaaaacgctctccctcctggtggactcgtcgaggagggcgggggcggatatagtgaagacaagcaccggggtctatacaaagggtggtgatccagtaacggtcttcaggctggccagtcttgccaagccccttggtatgggtgtaaaggcaagcggcggtataaggagtggcatcgacgccgtcctcgccgtaggagctggcgcggatatcatagggacaagcagtgctgtaaaggttttggagagcttcaaatccctagtctaa
【実施例１７】
【００９３】
配列番号：８  DERA03のアミノ酸配列
mtdlkasslralklmdlttlndddtdekvialchqaktpvgntaaiciyprfipiarktlkeqgtpeiriatvtnfphgnddidialaetraaiaygadevdvvfpyralmagneqvgfdlvkackeacaaanvllkviietgelkdealirkaseisikagadfiktstgkvavnatpesarimmevirdmgvektvgfkpaggvrtaedaqkylaiadelfgadwadarhyrfgassllasllkalghgdgksassy
【実施例１８】
【００９４】
配列番号：９  DERA04のアミノ酸配列
mgniakmidhtllkpeateqqivqlcteakqygfaavcvnptwvktaarelsgtdvrvctvigfplgattpetkafettnaiengarevdmvinigalksgqdelverdiravveaaagralvkvivetalltdeekvracqlavkagadyvktstgfsgggatvedvalmrktvgdragvkasggvrdwktaeaminagatrigtssgvaivtggtgrady
【実施例１９】
【００９５】
配列番号：１０  DERA06のアミノ酸配列
mglasyidhtllkatatladirtlceearehsfyavcinpvfipharawlegsdvkvatvcgfplgaisseqkalearlsaetgadeidmvihigsalagdwdaveadvravrravpeqvlkviietcyltdeqkrlatevavqggadfvktstgfgtggatvddvrlmaeviggraglkaaggvrtpadaqamieagatrlgtsggvglvsggengagy
【実施例２０】
【００９６】
配列番号：１１  DERA08のアミノ酸配列
mgiakmidhtalkpdttkeqiltltkeareygfasvcvnptwvklsaeqlagaesvvctvigfplgantpevkafevkdaiqngakevdmvinigalkdkddelverdiravvdaakgkalvkviietclltdeekvraceiavkagtdfvktstgfstggataedialmrktvgpnigvkasggvrtkedvekmieagatrigasagvaivsgekpakpdny
【実施例２１】
【００９７】
配列番号：１２  DERA11のアミノ酸配列
mtsnqlaqyidhtaltaekneqdistlcneaiehgfysvcinsayiplakeklagsnvkictvvgfplganltsvkafetqesikaganeidmvinvgwiksqkwdevkqdiqavfnacngtplkviletclltkdeivkaceickeigvafvktstgfnkggatvedvalmkntvgnigvkasggvrdtetalamikagatrigasagiaiisgtqdtqsty
【実施例２２】
【００９８】
配列番号：１３  DERA12のアミノ酸配列
mieyrieeavakyrefyefkpvresagiedvksaiehtnlkpfatpddikklclearenrfhgvcvnpcyvklareelegtdvkvvtvvgfplganetrtkaheaifavesgadeidmvinvgmlkakeweyvyedirsvvesvkgkvvkviietcyldteekiaacvisklagahfvktstgfgtggataedvhlmkwivgdemgvkasggirtfedavkmimygadrigtssgvkivqggeerygg
【実施例２３】
【００９９】
配列番号：１４  DERA15のアミノ酸配列
mpsardilqqgldrlgspedlasridstllsprateedvrnlvreasdygfrcavltpvytvkisglaeklgvklcsvigfplgqaplevklveaqtvleagateldvvphlslgpeavyrevsgivklaksygavvkvileaplwddktlsllvdssrragadivktstgvytkggdpvtvfrlaslakplgmgvkasggirsgidavlavgagadiigtssavkvlesfkslv。
【０１００】
発行された特許、特許出願及び雑誌記事を含むがこれらに限定されない、本出願中に引用されたすべての刊行物は参照することによりそれぞれそのまま本明細書中に組み込まれる。
【０１０１】
本発明は開示された実施態様に関して以上に記載されたが、当業者は特定の詳細な実験は本発明の例証に過ぎないことを容易に認識するであろう。従って、本発明は請求項のみによって限定される。
【配列表】
2006345863000001.app