(57)【要約】      （修正有）【課題】リュウケツジュ（Ｄｒａｃａｅｎａ  ｄｒａｃｏ  Ｌ）が生産する樹脂物質に含まれる活性成分から、これまで知られていなかった新規化合物を単離して、その化学構造を解明し、その医薬としての新らしい用途を開発する。【解決手段】一般式2006241078.tif 000006  ［Ｒ1〜Ｒ6は水素原子又は低級アルキル基、ＸはＯ又はＨ（ＯＨ）］で表わされる化合物少なくとも１種を有効成分とした肉芽形成促進剤及び癌細胞アポトーシス誘導剤とする。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式
【化１】
2006241078.tif 000004
［式中のＲ1〜Ｒ6は水素原子又は低級アルキル基、ＸはＯ又はＨ（ＯＨ）である］
で表わされる化合物。
【請求項２】
式
【化２】
2006241078.tif 000005
で表わされる請求項１記載の化合物。
【請求項３】
請求項１記載の化合物の少なくとも１種を有効成分とする肉芽形成促進剤。
【請求項４】
リュウケツジュ（Ｄｒａｃａｅｎａ  ｄｒａｃｏ  Ｌ）が生産する樹脂物質の抽出成分からなる請求項３記載の肉芽形成促進剤。
【請求項５】
請求項１記載の化合物の少なくとも１種を有効成分とする癌細胞アポトーシス誘導剤。
【請求項６】
リュウケツジュ（Ｄｒａｃａｅｎａ  ｄｒａｃｏ  Ｌ）が生産する樹脂物質の抽出成分からなる請求項５記載の癌細胞アポトーシス誘導剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リュウゼツラン科植物に属するリュウケツジュ（Ｄｒａｃａｅｎａ  ｄｒａｃｏ  Ｌ）が生産する樹脂物質の構成成分である新規化合物及びそれを有効成分とする生理活性剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
古代から、ドラゴンの血（Ｄｒａｇｏｎ´ｓ  ｂｌｏｏｄ）と称する創傷治療薬が世界各地において使用されていた。このドラゴンの血は、各種の植物が生産する樹脂物質から製造されたものの総称であり、生産する植物は多岐にわたっており、主なものとしては、リュウゼツラン科、リュウゼツラン属のドラセーナ（Ｄｒａｃａｅｎａ）類、ヤシ科、キリンケツ属のデモノロプス（Ｄａｅｍｏｎｏｒｏｐｓ）類、トウダイグサ科、ハズ属のクロトン（Ｃｒｏｔｏｎ）類などが知られている（非特許文献１参照）。
【０００３】
この中のドラセーナ類を原植物とするドラゴンの血は、主に中東、中国、日本において、デモノロプス類は主として南東アジア、特にインドネシアにおいて、クロトン類は主として新旧両大陸の熱帯地方において用いられており、特に、ドラセーナ類を原植物とするドラゴンの血は、中国、日本ではキリンケツ又はその乾燥物である血竭として知られ、刀傷の治療薬として尊重されていた。
このため、これらの創傷治療薬の活性成分の探索も行われており、これまでいくつかの報告もなされているが（非特許文献２、３参照）、まだ十分に解明されていない。
【０００４】
また、リュウケツジュの含有成分については、フラボン類、ドラコルホージン（ｄｒａｃｏｒｈｏｄｉｎ）やドラコルビン（ｄｒａｃｏｒｕｄｉｎ）のような赤色色素類、ホモイソフラボン類、ジヒドロシャルコンのようなステロイド配糖体が報告されている（非特許文献４、５参照）。
【０００５】
他方、このような創傷治療薬についての生理活性の検討も行われ、例えばヤシ科（Ｐｏｌｍａｅ）、キリンケツヤシ（Ｄａｅｍｏｎｏｒｏｐｓ  ｄｒａｃｏ  ＢＬＵＭＥ）のエッセンスからなる真皮コラーゲン線維束再構築剤が提案されている（特許文献１参照）。
【０００６】
【非特許文献１】「アナリスト（Ａｎａｌｙｓｔ）」、第１２８巻、２００４年、ｐ．１３５−１３８
【非特許文献２】「薬学雑誌」、第１１２巻、１９９１年、ｐ．２５９−２７１
【非特許文献３】「プランタ・メジカ（Ｐｌａｎｔａ  Ｍｅｄｉｃａ）」、第５５巻、１９８９年、ｐ．１４０−１４３
【非特許文献４】「ジャーナル・オブ・ナチュラル・プロダクツ（Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．）」、第６３巻、２０００年、ｐ．１２９７−１２９９
【非特許文献５】「フィトケミストリー（Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）」、第５０巻、１９９９年、ｐ．８０５−８１３
【特許文献１】特開２００２−２９９８５号公報（特許請求の範囲その他）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、リュウケツジュ（Ｄｒａｃａｅｎａ  ｄｒａｃｏ  Ｌ）が生産する樹脂物質すなわちキリンケツ中に含まれる活性成分から、これまで知られていなかった新規化合物を単離して、その化学構造を解明し、かつその医薬としての新らしい用途を開発することを目的としてなされたものである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、キリンケツの抽出画分に含まれる化合物の単離及びその構造解析を行った結果、その活性成分がこれまで文献未載の新規化合物であり、これが特定の薬理作用を示すことを見出し、この知見に基づいて本発明をなすに至った。
【０００９】
すなわち、本発明は、一般式（Ｉ）
【化１】
2006241078.tif 000002
［式中のＲ1〜Ｒ6は水素原子又は低級アルキル基、ＸはＯ又はＨ（ＯＨ）である］
で表わされる化合物、この化合物の少なくとも１種を有効成分とする肉芽形成促進剤及び癌細胞アポトーシス誘導剤を提供するものである。
【００１０】
本発明化合物の製造原料として用いられるキリンケツから活性画分を分離するには、例えばキリンケツをエーテルで抽出し、次にエーテル可溶部に、ほぼ同量のヘキサンを加え、沈殿する不溶部をさらにエーテルとヘキサンの等容混合物で洗い、残存する不溶部（以下ＫＦという）を回収する。
【００１１】
次いで、このＫＦをシリカゲルに吸着させ、溶媒Ａ（酢酸エチルとヘキサンの等容混合物）及び溶媒Ｂ（酢酸エチルとヘキサンとの体積比２５：２０の混合物）を用いて、順次溶離させたところ、溶媒Ｂによる溶離画分に肉芽形成促進作用が認められたので、この画分をさらに薄層クロマトグラフィーにより、ＫＦ−Ａ、ＫＦ−Ｂ及びＫＦ−Ｃに分画した。これらの画分は、1Ｈ−核磁気共鳴スペクトルの類似した化合物で構成されていることから、これらはヒドロキシ基の数及びその結合位置の相違による異性体であると考えられる。
これらの画分について確認された肉芽形成促進作用の増加率はＫＦ−Ａ  １９．７％、ＫＦ−Ｂ  ３５．８％、ＫＦ−Ｃ  ４２．２％であった。
【００１２】
次に、これらの画分で最も強い活性を示したＫＦ−Ｂを中圧液体クロマトグラフィー（ＭＰＬＣ）により精製することにより、構造式（ＩＩ）
【化２】
2006241078.tif 000003
で示される化合物、すなわち１‐（４‐ヒドロキシフェニル）‐３‐｛４‐ヒドロキシ‐５‐［１‐（４‐ヒドロキシ‐２‐メトキシフェニル）プロピル］‐２‐メトキシフェニル｝‐１‐プロパノンが融点７６〜７８℃、屈折率［α］D25＋９．６１°（ｃ＝０．１１３、メタノール）をもつ無色結晶として得られる。この化合物のアセチル化誘導体は、融点５７〜５９℃、屈折率［α］D25＋１０．９８°（ｃ＝０．０８０、メタノール）をもつ無色結晶である。
【００１３】
前記式（ＩＩ）で示される化合物の赤外線吸収スペクトルを図１に、1Ｈ−核磁気共鳴スペクトルを図２に、13Ｃ−核磁気共鳴スペクトルを図３に、またマススペクトルを図４にそれぞれ示す。
また、核磁気共鳴スペクトルの1Ｈ−1ＨＣＯＳＹ及びＳｅｌｅｃｔｅｄ  ＮＯＥＳＹを測定により、式（ＩＩ）に示される官能基の位置を同定した。
【００１４】
本発明の化合物は、肉芽形成促進作用及び癌細胞に対する選択的アポトーシス誘導作用を有するので、創傷治療薬、癌治療薬として有用である。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、キリンケツの生産する樹脂物質から、有用な薬理活性を示す新規化合物が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
次に、実施例により本発明を実施するための最良の形態を説明するが、本発明はこれらによりなんら限定されるものではない。
【実施例１】
【００１７】
キリンケツ（中国河北省安国産）から抽出した不溶部（ＫＦ）５．５ｇをシリカゲル（メルク社製）１００ｇに吸着させ、これを酢酸エチルとヘキサンとの体積比１：１の混合溶媒及び酢酸エチルとヘキサンとの体積比２５：２０の混合溶媒を用いて順次溶離させ、後者の溶離画分をさらに薄層クロマトグラフィーによりＫＦ−Ａ  ５００ｍｇ、ＫＦ−Ｂ  ３５０ｍｇ、及びＫＦ−Ｃ  ３００ｍｇに分画した。
次に、画分ＫＦ−Ｂ  ３０ｍｇを中圧液体クロマトグラフィー（溶出溶媒ＣＨＣｌ3：ＣＨ3ＯＨ＝６：１）により精製し、精製物７ｍｇを得た。この精製物をカラムクロマトグラフィー（径２５ｍｍ、長さ１７０ｍｍ；溶出溶媒ＣＨＣｌ3：ＣＨ3ＯＨ＝２：１）で、さらに精製することにより、１‐（４‐ヒドロキシフェニル）‐３‐｛４‐ヒドロキシ‐５‐［１‐（４‐ヒドロキシ‐２‐メトキシフェニル）プロピル］‐２‐メトキシフェニル｝‐１‐プロパノン５ｍｇを得た。
この化合物の構造は赤外線吸収スペクトル、1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル、13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル、マススペクトルにより同定された。
【実施例２】
【００１８】
以下に示す方法により、実施例１で得た本発明化合物の肉芽形成作用について試験した。
（１）コットンペレット法による肉芽形成に及ぼす影響の検討：
８週齢雄性Ｗｉｓｔａｒ系ラットでコットンぺレット法を用いて肉芽組織形成を調べた。すなわち、ラット背部に左右対称となるように切り込みを入れ、実験群として試料（不溶部ＫＦ）を浸み込ませた脱脂綿を、コントロール群には何も浸み込ませない脱脂綿をそれぞれ皮下に埋め込んだ。１０日後、脱脂綿の周りに形成された肉芽組織を取り出し、６０℃で２４時間乾燥した後の質量を測定した。
また、コラーゲン合成の指標としてその肉芽のヒドロキシプロリン含量を測定し、肉芽形成能の評価とした。さらに、形成された肉芽組織の抗Ｉ、ＩＩＩ型コラーゲン抗体による免疫染色、Ｈ−Ｅ染色を行い、その組織観察を行った。
【００１９】
（２）ヒドロキシプロリンの定量：
ヒドロキシプロリンを酸化、脱炭酸し、生じたピロールをｐ‐ジメチルベンズアルデヒドで発色させる定量法を用いて、乾燥肉芽組織中の含量を測定した。
【００２０】
（３）ヒト皮膚繊維芽細胞の培養：
ヒト皮膚繊維芽細胞はペニシリン・ストレプトマイシン（最終濃度それぞれ、５０Ｕ／ｍｌ、５０μｇ／ｍｌ）、１０％ＦＣＳ含有Ｄｕｌｂｅｃｃｏ´ｓ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  ｍｅｄｉｕｍ（ＤＭＥＭ）で、３７℃、５％ＣＯ2の条件下で培養した。
【００２１】
（４）試料のヒト皮膚繊維芽細胞に及ぼす細胞増殖能の検討：
試料の及ぼす影響はＷＳＴ−１試験により評価した。すなわち、細胞を一定量播種し、各濃度の試料をエタノールに溶かして添加後、５日間培養した。培養後ＷＳＴ−１試薬を１０μｌ添加し、３７℃で２時間インキュベート後、４５０ｎｍの吸光度を測定した。同量のエタノールを添加して培養したときの吸光度をコントロールとし、相対値で比較した。
【００２２】
（５）試料のヒト皮膚繊維芽細胞のコラーゲン合成能に及ぼす影響の検討：
ヒト皮膚繊維芽細胞を０．４×１０5ｃｅｌｌｓ／ｍｌの濃度で６ウェルプレートに３ｍｌずつ播種し、コンフルエントに達するまで培養後、０．１ｍＭアスコルビン酸、５０ｍＭβ‐アミノプロピオニトリルを加えた、ＤＭＥＭ（ＦＣＳ−）に交換し、３日間培養した。培養後、氷冷下にて細胞をセルスクレイパーで剥がし、培養上清ごとに集めた。氷冷下にて１０秒間×３回超音波処理を行った後、凍結乾燥したものを試料として用いて試験し、以下の結果を得た。
【００２３】
図５は、試料として不溶部ＫＦを０．０１ｍｇ、０．１ｍｇ及び１ｍｇ用いたときの肉芽組織の質量とコントロールの肉芽組織の質量を対比して棒グラフで示したものである。このグラフから０．１ｍｇ及び０．０１ｍｇの試料については、コントロールとの間に大きな差は認められないが、１ｍｇの試料については、コントロールに比べ有為差（ｐ＜０．０５）の増加があったことが分る。
また、図６は、この場合の免疫染色（右側）及びＨ−Ｅ染色（左側）したものについての４０倍拡大写真である。
【００２４】
次に図７は、試料及びコントロールにより得られた肉芽のヒドロキシプロリンの含量を示す棒グラフであり、この図から上記と同じく１ｍｇの試料において有為差が認められることが分る。
図８は、このようにして形成された肉芽組織を抗Ｉ型、抗ＩＩＩ型コラーゲン抗体により免疫染色した場合についての４０倍拡大写真である。
また、図９は、試料として不溶部ＫＦを０．０１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ及び２０μｇ／ｍｌの濃度で用いた場合のヒト皮膚繊維芽細胞への影響を、コントロールに対する百分比で示した棒グラフである。この図から分るように、試料濃度１μｇ／ｍｌまではほとんど変化は認められないが、それ以上の濃度では細胞数が明らかに減少している。
図１０は、試料濃度１μｇ／ｍｌで用いた場合の培養した細胞のヒドロキシプロリン含量をコントロールと対比して示した棒グラフであり、これによるとコラーゲン合成に有為な促進効果（ｐ＜０．０１）が奏されることが分る。
【実施例３】
【００２５】
以下の方法によりアポトーシス誘導作用を試験した。
（１）試料の調製：
試料ＫＦは２ｍｇ／ｍｌの濃度でＤＭＳＯに溶かし、０．２μｍの酢酸セルロースフィルターでフィルター滅菌したものを用いた。
【００２６】
（２）ＨＬ−６０細胞に対する効果の検討：
ヒト前骨髄性白血病細胞株ＨＬ−６０は１０％非流動化ＦＢＳを添加したＲＰＭＩ１６４０培地を用い、３７℃、５％炭酸ガス雰囲気下で培養した。ＨＬ−６０を１×１０4個／ｍｌの細胞密度で２４ウェルプレートに５００μｌ播種後、ＫＦを添加し、３７℃、５％炭酸ガス雰囲気下で培養した。コントロールには希釈に用いた滅菌ＤＭＳＯを用いた。４日間培養後、トリパンブルー細胞染色法で細胞を染め分け、血球計算板でカウントし、染色されない細胞を生細胞、染色された細胞を死細胞とし生存率（ｖｉａｂｌｉｔｙ：％）と細胞数を求めた。また、ＨＬ−６０を１×１０5個／ｍｌの細胞密度で播種したものも同様に測定した。
【００２７】
（３）ヒト正常リンパ球における効果の検討：
ヒト正常リンパ球は同意を得た被験者から末梢血の採血を行い、ヒトリンパ球、単球、好中球分離溶液、モノ・ポリ分離溶液（大日本製薬社製）を用いて分離した。その後の操作は実施例２（８）と同様に行った。
【００２８】
（４）ＨＬ−６０におけるカスパーゼ−３活性の検討：
ＨＬ−６０を５×１０5個／ｍｌの細胞密度で６ウェルプレートに３ｍｌ播種し、ＫＦを３０μｌ各ｗｅｌｌに添加し、３７℃、５％炭酸ガス雰囲気下で培養した。コントロールは同量のＤＭＳＯを用いた。０、５、１０、２４、４８時間後に細胞懸濁液を回収し、４℃、２５００ｒｐｍ、５ｍｉｎ遠心し、培地を除去後、ＰＢＳを洗い、再び遠心し、ＰＢＳを除いた細胞塊を試料とした。カスパーゼ−３活性はＣａｓｐａｓｅ−３／ＣＰＰ３２  Ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  Ａｓｓａｙ  Ｋｉｔ（Ｂｉｏ  Ｖｉｓｉｏｎ）により測定した。
【００２９】
（５）ＨＬ−６０におけるアガロースゲルによるＤＮＡ  ｌａｄｄｅｒの検出：
ＨＬ−６０を５×１０5個／ｍｌの細胞密度で６ウェルプレートに３ｍｌ播種し、３７℃、５％炭酸ガス雰囲気下で培養した。コントロールには同量のＤＭＳＯを用いた。細胞懸濁液を回収し、４℃、２５００ｒｐｍ、５ｍｉｎ遠心し、培地を除去後、ＰＢＳを洗い、再び遠心し、ＰＢＳを除いた細胞塊を試料とした。細胞塊に１００μｌのｃｅｌｌ  ｌｙｓｉｓ  ｂｕｆｆｅｒを加え、４℃、１０ｍｉｎ放置後、１５０００ｒｐｍ、２０ｍｉｎ遠心し、上清を回収した。
【００３０】
上清にＲｎａｓｅＡ５μｌを加え、５０℃で１ｈインキュベートした。イソプロパノール１２０μｌと５ＭＮａＣｌを２０μｌを加え、ボルテックスし、−２０℃で一晩放置した。４℃、１５０００ｒｐｍ、２０ｍｉｎ遠心し、上清を除去しエタノールでＤＮＡをリンスし、風乾させた。これをＴＥｂｕｆｆｅｒ２０μｌに溶かし、ＤＮＡ試料とし、１．８％のアガロースゲルでＴＢＥｂｕｆｆｅｒを用いて泳動した。泳動終了後、エチルジブロマイドでＤＮＡを染色し、ＵＶをあて視覚化したものをポラロイドカメラで撮影した。
【００３１】
（６）ＨＬ−６０における形態学的変化の観察：
ＨＬ−６０を５×１０5個／ｍｌの細胞密度で６ウェルプレートに３ｍｌ播種し、ＫＦを３０μｌ各ｗｅｌｌに添加し、３７℃、５％炭酸ガス雰囲気下で培養した。コントロールには同量のＤＭＳＯを用いた。細胞懸濁液を回収し、４℃、３０００ｒｐｍ、５ｍｉｎ遠心し、培地を除去後、ＰＢＳを洗い、再び遠心し、ＰＢＳを除いた細胞塊を１％グルタルアルデヒドで４℃で一晩固定した。ＰＢＳで洗浄後、ヘキスト３３２５６で細胞内ＤＮＡを蛍光顕微鏡で核の状態を観察した。
【００３２】
図１１及び図１２は、試料として不溶部ＫＦを、またコントロールとしてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）をそれぞれ用い、これらをヒト前骨髄性白血病細胞株ＨＬ−６０に添加した場合の細胞生存率（％）及び増殖抑制率すなわち１ｍｌ中の細胞数を示す棒グラフである。このグラフから細胞生存率、細胞数の濃度依存的な阻害が認められることから、不溶部ＫＦが癌細胞に対し、選択的なアポトーシス誘導作用を示すことが分る。このものの増殖抑制率のＩＣ50は約８μ／ｍｌ、４μ／ｗｅｌｌであった。
【００３３】
また、比較実験として、ヒト末梢血から分離したヒト正常リンパ球での細胞毒性を調べたところ、その生存率はコントロールのＤＭＳＯとほぼ同じあり、細胞数はコントロールよりもやや増加の傾向がみられた。このように、試料が正常細胞に対し、毒性を示さないことから癌細胞に選択的に作用することが分る。
【００３４】
アポトーシスによる細胞死の生化学的特徴の１つに、モノ及びオリゴヌクレオゾームの長さでのＤＮＡの断片化が挙げられる。これらのＤＮＡ断片はアガロースゲル電気泳動において約１８０ｂｐサブユニットの倍数により構成される独特のラダーパターンとして観測される。これに対し、ネクローシスではＤＮＡはランダムに分解されるためラダー（ｌａｄｄｅｒ）は観測されない。
図１３は、ＨＬ−６０を試料として不溶部ＫＦを用いて処理したものについてアガロースゲル電気泳動した場合のパターンを示したもので、レーン１はＤＮＡラダーマーカー、レーン２はコントロール（ＤＭＳＯ）、レーン３は試料についてのものである。この図からラダーの存在が確認できる。
【００３５】
このＤＮＡラダーは、電気泳動法で染色体ＤＮＡを解析するときに、約１８０ｂｐの塩基対の整数倍の大きさのＤＮＡバンドが階段状に認められることをいい、ＤＮＡ断片化ともいう。正常の細胞では認められないが、アポトーシスを誘導した細胞のＤＮＡで認められる。これはアポトーシスが誘導される際に、ＤＮＡがヌクレオソーム単位に規則的に切断された結果である。アポトーシスの指標とされている。
【００３６】
カスパーゼ−３は様々なアポトーシスシグナルにより最終的に活性化されるカスパーゼ群の酵素であり、カスパーゼ−３の活性化がＤＮＡを分解するＤＮａｓｅへと伝達されるため、アポトーシスの実行因子として中心的な働きを有している。
図１４は、試料として不溶部ＫＦを用い、これを投与した後のカスパーゼ−３の活性の経時的変化を示す折れ線グラフである。この図から、投与５時間後に最大活性を示すことが分る。このことから細胞死がアポトーシスに基づくことが明らかになった。
【００３７】
このカスパーゼは、ＩＣＥファミリープロテアーゼともいい、細胞死の実行と炎症反応に重要なサイトカインのプロセッシングに機能する一群のシステインプロテアーゼである。哺乳類から多くの同族体が得られており、少なくとも１２種が知られている。
カスパーゼ（ｃａｓｐａｓｅ）のｃはシステインプロテアーゼを示し、ａｓｐａｓｅは基質側の切断部位のアミノ酸残基にアスパラギン酸を要求するというこのファミリーのユニークな基質特異性に由来する。
カスパーゼは、その基質特異性から３群に分類され、Ｉ群はカスパーゼ−１に代表されるサイトカインのプロセッシングと細胞死に、ＩＩ群はカスパーゼ−３やＣＥＤ−３に代表される細胞死の実行に、ＩＩＩ群はカスパーゼ−８に代表され、カスパーゼのタンパク質分解カスケードの上流に位置し、細胞死のシグナルを伝える働きに関与する。
【００３８】
図１５及び図１６は、アポトーシスを起こしたことを証明するための細胞の形態学的変化を示す顕微鏡写真で、図１５はコントロールのへキスト３３２５８で染色されたＨＬ−６０細胞であり、図１６は試料として不溶部ＫＦを添加したものである。前者では核の変化が認められないのに対し、後者では核全体に断片化し、球状になったものが凝集している。
【産業上の利用可能性】
【００３９】
本発明の新規化合物は、創傷治療剤、癌治療剤などとして有用である。
【図面の簡単な説明】
【００４０】
【図１】式（ＩＩ）で示される化合物の赤外線吸収スペクトル図。
【図２】式（ＩＩ）で示される化合物の1Ｈ−核磁気共鳴スペクトル図。
【図３】式（ＩＩ）で示される化合物の13Ｃ−核磁気共鳴スペクトル図。
【図４】式（ＩＩ）で示される化合物のマススペクトル図。
【図５】実施例２において、試料として不溶部ＫＦを０．０１ｍｇ、０．１ｍｇ及び１ｍｇ用いたときの肉芽組織の質量とコントロールの肉芽組織の質量を対比した棒グラフ。
【図６】免疫染色（右側）及びＨ−Ｅ染色（左側）したものについての４０倍拡大写真図。
【図７】実施例２において、試料及びコントロールにより得られた肉芽のヒドロキシプロリンの含量を示す棒グラフ。
【図８】肉芽組織を抗Ｉ型、抗ＩＩＩ型コラーゲン抗体により免疫染色した場合についての４０倍拡大写真図。
【図９】試料として不溶部ＫＦを０．０１μｇ／ｍｌ、０．１μｇ／ｍｌ、１μｇ／ｍｌ、１０μｇ／ｍｌ及び２０μｇ／ｍｌの濃度で用いた場合のヒト皮膚繊維芽細胞への影響をコントロールに対する百分比で示した棒グラフ。
【図１０】試料濃度１μｇ／ｍｌで用いた場合の培養した細胞のヒドロキシプロリン含量をコントロールと対比して示した棒グラフ。
【図１１】試料として不溶部ＫＦを、またコントロールとしてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）をそれぞれ用い、これらをヒト前骨髄性白血病細胞株ＨＬ−６０に添加した場合の細胞生存率（％）を示す棒グラフ。
【図１２】試料として不溶部ＫＦを、またコントロールとしてジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）をそれぞれ用い、これらをヒト前骨髄性白血病細胞株ＨＬ−６０に添加した場合の増殖抑制率（１ｍｌ中の細胞数）を示す棒グラフ。
【図１３】ＨＬ−６０を試料として不溶部ＫＦを用いて処理したものについてアガロースゲル電気泳動した場合のパターンを示す図。
【図１４】試料として不溶部ＫＦを用い、これを投与した後のカスパーゼ−３の活性の経時的変化を示す折れ線グラフ。
【図１５】コントロールのへキスト３３２５８で染色されたＨＬ−６０細胞を示す顕微鏡写真図。
【図１６】試料として不溶部ＫＦをＨＬ−６０細胞に添加した顕微鏡写真図。
【図１】
2006241078.tif 000007
【図２】
2006241078.tif 000008
【図３】
2006241078.tif 000009
【図４】
2006241078.tif 000010
【図１１】
2006241078.tif 000011
【図１２】
2006241078.tif 000012
【図１４】
2006241078.tif 000013
【図５】
2006241078.tif 000014
【図６】
2006241078.tif 000015
【図７】
2006241078.tif 000016
【図８】
2006241078.tif 000017
【図９】
2006241078.tif 000018
【図１０】
2006241078.tif 000019
【図１３】
2006241078.tif 000020
【図１５】
2006241078.tif 000021
【図１６】
2006241078.tif 000022