(57)【要約】【課題】長期飲用しても体内で過酸化水素を生成しないコーヒー飲料の提供。【解決手段】ヒドロキシヒドロキノン含有量が０〜０．００００５質量％であるコーヒー飲料組成物を充填した容器詰飲料。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒドロキシヒドロキノン含有量が０〜０．００００５質量％であるコーヒー飲料組成物を充填した容器詰飲料。
【請求項２】
コーヒー飲料組成物が、高速液体クロマトグラフィーによる分析における、ガリックアシッドを標準物質とした場合のガリックアシッドに対する相対保持時間が０．５４〜０．６１の時間領域に、実質的にピークを有しないものである請求項１記載の容器詰飲料。
【請求項３】
シングルストレングスである請求項１又は２記載の容器詰飲料。
【請求項４】
容器が酸素非透過性である請求項１〜３のいずれか１項記載の容器詰飲料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、長期飲用しても体内での過酸化水素の発生を抑制することのできるコーヒー飲料組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
活性酸素の一つである過酸化水素は、変異原性、癌原性等の他、動脈硬化症、虚血性心疾患等の循環器系疾患、消化器疾患、アレルギー疾患、眼疾患など多くの疾患に深く関与しているといわれている（非特許文献１）。一方、コーヒーには、焙煎によって自然発生する過酸化水素が含まれており（非特許文献２）、カタラーゼ、ペルオキシダーゼ、抗酸化剤（特許文献１〜４）等を添加することにより、コーヒー中の過酸化水素を除去する技術が報告されている。
【非特許文献１】栄養―評価と治療 19,3 (2002)
【非特許文献２】Mutat. Res. 16,308(2) (1994)
【特許文献１】特公平４−２９３２６号公報
【特許文献２】特開平３−１２７９５０号公報
【特許文献３】特開平１１−２６６８４２号公報
【特許文献４】特開２００３−８１８２４号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明者らが、過酸化水素を除去したコーヒーをラットに飲用させたところ、体内で過酸化水素が生成し、尿中過酸化水素濃度が上昇することが判明した。すなわち、従来の、コーヒー飲料中の過酸化水素除去技術によっては、コーヒー飲用後に体内での過酸化水素生成を抑制することはできなかった。
【０００４】
従って、本発明の目的は、飲用後に体内で過酸化水素を生成させないコーヒー飲料組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
そこで本発明者は、コーヒー中の何らかの成分が生体内において過酸化水素を生成させるのではないかとの仮説に基づき、種々検討した結果、コーヒー中に含まれるヒドロキシヒドロキノンに、生体内で過酸化水素を生成させる作用があること、及びヒドロキシヒドロキノンの含有量を通常含まれる量より十分に少ない０〜０．００００５質量％に制御すれば、生体内で過酸化水素生成を増加させないコーヒー飲料が得られることを見出した。
【０００６】
すなわち、本発明は、ヒドロキシヒドロキノン含有量が０〜０．００００５質量％であるコーヒー飲料組成物を充填した容器詰飲料を提供するものである。
【０００７】
また、本発明は、ヒドロキシヒドロキノン含有量が０〜０．００００５質量％であるコーヒー飲料組成物を提供するものである。
【発明の効果】
【０００８】
本発明のコーヒー飲料組成物を飲用しても生体内で過酸化水素が生成しない。従って、本発明のコーヒー飲料組成物は、安全性の高い飲料として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明のコーヒー飲料組成物は、ヒドロキシヒドロキノン含有量が０〜０．００００５質量％に調整されており、本発明のソリュブルコーヒー組成物は、ヒドロキシヒドロキノン含有量が０〜０．００１質量％に調整されていることを特徴とする。ヒドロキシヒドロキノン含有量が上記範囲内である場合には、これらの組成物を飲用したときに生体内での過酸化水素の発生が抑制される。コーヒー飲料組成物中の好ましいヒドロキシヒドロキノン含有量は、０〜０．００００３質量％であり、より好ましくは０〜０．００００１質量％である。ソリュブルコーヒー組成物中の好ましいヒドロキシヒドロキノン含有量は０〜０．０００３質量％であり、より好ましくは０〜０．０００１質量％である。
【００１０】
当該ヒドロキシヒドロキノン含量は、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により測定することができる。ＨＰＬＣにおける検出手段としては、ＵＶ検出が一般的であるが、ＣＬ（化学発光）検出、ＥＣ（電気化学）検出、ＬＣ−Ｍａｓｓ検出等により更に高感度で検出することもできる。なお、ＨＰＬＣによるヒドロキシヒドロキノン含量の測定にあたっては、コーヒー飲料を濃縮した後に測定することもできる。
【００１１】
更にヒドロキシヒドロキノン含量は、ＨＰＬＣで直接測定することもできるが、コーヒー飲料組成物又はソリュブルコーヒー飲料組成物から、各種クロマトグラフィーによりヒドロキシヒドロキノンを濃縮して、その濃縮画分の量を測定することによっても定量できる。なお、ヒドロキシヒドロキノン量の測定にあたっては、容器詰飲料の場合には開封後直ちに、例えば０.１Ｎ(規定)となるように塩酸を加えて、又は、０．１Ｎの塩酸／水酸
化ナトリウムバッファー系で測定するのが好ましい。
【００１２】
ヒトが通常の市販のインスタントコーヒー２杯（２８０ｇ）を飲用すると、尿中過酸化水素量は有意に増加する（図１）。一方、通常のコーヒー及び過酸化水素除去コーヒーを摂取したラットの尿中過酸化水素増加は同程度であった（図２）。このことから、コーヒー中に含まれる過酸化水素により、飲用後の尿中過酸化水素量が増加しているのではなく、コーヒー中に含まれる何らかの成分が生体内で過酸化水素を生成させていることは明らかである。
【００１３】
そこで本発明者は、コーヒー中に含まれる種々の成分の体内での過酸化水素生成能について検討した。その結果、ヒドロキシヒドロキノンは通常、市販のコーヒー中に０．２〜３ｍｇ／１９０ｇ含まれているが、極めて少量の摂取でも体内過酸化水素生成を増加させる作用を有し（図３、４）、ヒドロキシヒドロキノン含有量を０．００００５質量％以下に調整したコーヒーを摂取した場合には、体内での過酸化水素生成抑制することが判明した（図７）。
【００１４】
本発明のコーヒー飲料組成物及びソリュブルコーヒー組成物は、ヒドロキシヒドロキノン含有量を低減させる以外は、通常のコーヒー成分をそのまま含有しているのが好ましい。
【００１５】
本発明のコーヒー飲料組成物は、コーヒー飲料組成物１００ｇを基準とした場合に、カリウムを３０〜３００ｍｇ／１００ｇ、更に４０〜２５０ｍｇ／１００ｇ、特に５０〜２００ｍｇ／１００ｇ含むのが好ましい。また本発明のソリュブルコーヒー組成物には、ソリュブルコーヒー組成物１ｇを基準として、カリウムを２０〜２００ｍｇ／１ｇ、更に３０〜１８０ｍｇ／１ｇ、特に４０〜１５０ｍｇ／１ｇ含むのがコーヒー本来の風味の点で好ましい。カリウム濃度の測定は、例えば原子吸光光度法を用いて測定することができる。カリウム量を上記範囲にするためには、コーヒー飲料組成物の製造過程で、カリウムを積極的に除去する等の操作を行わないのが好ましい。
また、本発明のコーヒー飲料組成物は、コーヒー飲料組成物１００ｇを基準とした場合に、灰分の量が２８０ｍｇ以下、更には２５０ｍｇ以下、より更には２２０ｍｇ以下、特に２００ｍｇ以下であることがコーヒー本来の風味の点で好ましい。灰分の測定は、四訂日本食品標準成分表（昭和５７年発行、科学技術庁資源調査委員会編集、２８頁）記載の方法に準拠し、５５０℃で加熱し残存炭素がなくなり恒量となるまで灰化する方法を用いて測定することができる。灰分の量を上記範囲にするためには、コーヒー飲料組成物の製造過程で、強アルカリで処理した後に酸を用いて中性領域に戻すなどの、灰分の量が多くなる操作を行わないのが好ましい。
【００１６】
また本発明のコーヒー飲料組成物は、Ｈ2Ｏ2（過酸化水素）の含有量が１ｐｐｍ以下、更に０．１ｐｐｍ以下、特に０．０１ｐｐｍ以下であるのがコーヒー本来の風味の点で好ましい。過酸化水素の測定は通常用いられる過酸化水素計を用いて行うことができ、例えば、セントラル科学社製の高感度過酸化水素計スーパーオリテクターモデル５（ＳＵＰＥＲ  ＯＲＩＴＥＣＴＯＲ  ＭＯＤＥＬ５）等を用いることができる。
【００１７】
本発明のコーヒー飲料組成物に用いるコーヒー豆の種類は、特に限定されないが、例えばブラジル、コロンビア、タンザニア、モカ等が挙げられる。コーヒー種としては、アラビカ種、ロブスタ種などがある。コーヒー豆は１種でもよいし、複数種をブレンドして用いてもよい。焙煎コーヒー豆の焙煎方法については特に制限はなく、焙煎温度、焙煎環境についても何ら制限はなく、通常の方法を採用できる。更にその豆からの抽出方法についても何ら制限はなく、例えば焙煎コーヒー豆又はその粉砕物から水〜熱水（０〜１００℃）を用いて１０秒〜３０分抽出する方法が挙げられる。抽出方法は、ボイリング式、エスプレッソ式、サイホン式、ドリップ式（ペーパー、ネル等）等が挙げられる。
【００１８】
本発明のコーヒー飲料組成物は、１００ｇあたりコーヒー豆を生豆換算で１ｇ以上使用したものをいう。好ましくはコーヒー豆を２．５ｇ以上使用しているものである。更に好ましくはコーヒー豆を５ｇ以上使用しているものである。本発明のコーヒー飲料組成物を容器詰飲料とする場合には、シングルストレングスであることが好ましい。ここでシングルストレングスとは、容器詰飲料を開封した後、常態として薄めずにそのまま飲めるものをいう。
【００１９】
本発明のコーヒー飲料組成物又はソリュブルコーヒー組成物は、焙煎コーヒー豆抽出物を吸着剤処理してヒドロキシヒドロキノン含量を低減させることにより得られる。吸着剤としては、活性炭、逆相担体などが挙げられる。より具体的には、焙煎コーヒー豆抽出液又は焙煎コーヒー豆抽出液の乾燥品の水溶液に、吸着剤を加え０〜１００℃で１０分〜５時間撹拌した後、吸着剤を除去すればよい。ここで、吸着剤は、焙煎コーヒー豆重量に対して活性炭の場合は０．０２〜１．０倍、逆相担体の場合は２〜１００倍用いるのが好ましい。活性炭としては、ヤシ殻活性炭が好ましく、更に水蒸気賦活化ヤシ殻活性炭が好ましい。活性炭の市販品としては、白鷺ＷＨ2ｃ（日本エンバイロケミカルズ）、太閣ＣＷ
（二村化学）、クラレコールＧＷ（クラレケミカル）等を用いることができる。逆相担体としては、ＹＭＣ・ＯＤＳ−Ａ（ＹＭＣ）、Ｃ１８（ＧＬサイエンス）等が挙げられる。
これらの吸着剤処理法のうち、活性炭を用いた吸着剤処理法はクロロゲン酸類量を低下させることなく選択的にヒドロキシヒドロキノン含量を低減させることができるだけでなく、工業的にも有利であり、更にカリウム含量を低下させない（質量比で１／５以上、特に１／２以上保持）点からも好ましい。
【００２０】
また、本発明のコーヒー飲料組成物又はソリュブルコーヒー組成物中のヒドロキシヒドロキノン量は、高速液体クロマトグラフィーによりガリックアシッドを標準物質とした場合のガリックアシッドに対する相対保持時間が０．５４〜０．６１の時間領域のピークとして検出することができる。従って、本発明のコーヒー飲料組成物は、高速液体クロマトグラフィーによる分析において、ガリックアシッドを標準物質とした場合のガリックアシッドに対する相対保持時間が０．５４〜０．６１の時間領域に、実質的にピークを有しないことを特徴とするコーヒー飲料組成物と規定できる。また、本発明のソリュブルコーヒー組成物は、高速液体クロマトグラフィーによる分析において、ガリックアシッドを標準物質とした場合のガリックアシッドに対する相対保持時間が０．５４〜０．６１の時間領域に、実質的にピークを有しないことを特徴とするソリュブルコーヒー組成物と規定できる。尚、この規定における高速液体クロマトグラフィーの分析条件は、後述の分析条件Ｂによるものである。
【００２１】
本発明におけるコーヒー組成物が、高速液体クロマトグラフィーによる分析における、ガリックアシッドを標準物質とした場合のガリックアシッドに対する相対保持時間が０．５４〜０．６１の時間領域に実質的にピークを有しないことを確認するには、一般的なＨＰＬＣを使用することができ、例えば溶離液として０．０５Ｍ酢酸水溶液と０．０５Ｍ酢酸１００％アセトニトリル溶液のグラジエントを用い、ＯＤＳカラムを用いて、紫外線吸光光度計等により検出することで確認することができる。
【００２２】
本発明においてガリックアシッドに対する相対保持時間が０．５４〜０．６１の時間領域に実質的にピークを有しないとは、ガリックアシッドの１ｐｐｍ溶液を分析時の面積値をＳ１とし、同条件でコーヒー飲料組成物を分析した時の前記特定の領域に溶出する成分に由来するピーク面積の総和をＳ２としたとき、Ｓ２／Ｓ１＜０．０１であることを意味する。
【００２３】
本発明のコーヒー飲料組成物には、所望により、ショ糖、グルコース、フルクトース、キシロース、果糖ブドウ糖液、糖アルコール等の糖分、乳成分、抗酸化剤、ｐＨ調整剤、乳化剤、香料等を添加することができる。乳成分としては、生乳、牛乳、全粉乳、脱脂粉乳、生クリーム、濃縮乳、脱脂乳、部分脱脂乳、れん乳等が挙げられる。本発明のコーヒー飲料組成物のｐＨとしては、３〜７．５、更に４〜７、特に５〜７が飲料の安定性の面で好ましい。
【００２４】
ソリュブルコーヒー組成物とは粉体状のインスタントコーヒー粉体等の粉体食品のことである。インスタントコーヒー粉体は、常法にしたがって製造することができる。例えばコーヒー抽出液をノズルからスプレーし、約２１０〜３１０℃の熱風中を落下させることにより、多孔質、水可溶性のコーヒー粉末にする噴霧乾燥（スプレードライ）、あるいはコーヒー抽出物を液体窒素や冷凍庫等で凍結し、粉砕し、篩別したのち真空で水分を昇華させて、水分を３％以下にする凍結乾燥（フリーズドライ）等により乾燥粉体を得ることができる。
【００２５】
本発明のコーヒー飲料組成物又はソリュブルコーヒーはＰＥＴボトル、缶（アルミニウム、スチール）、紙、レトルトパウチ、瓶（ガラス）等の容器に詰めることができる。この場合、本発明のコーヒー飲料組成物はそのままで５０〜２５００ｍＬの容器詰飲料とすることができる。容器詰飲料のｐＨとしては５〜７．５が好ましく、特に５．４〜７が好ましい。容器としては、コーヒー中の成分の変化を防止する観点から、酸素非透過性の容器が好ましく、例えば、アルミニウムや、スチールなどの缶、ガラス製のビン等を用いるのが良い。缶やビンの場合、リキャップ可能な、リシール型のものも含まれる。ここで酸素非透過性とは、２０℃、相対湿度５０％の環境下で測定した酸素透過度（ｃｃ・ｍｍ／ｍ2・ｄａｙ・ａｔｍ）が５以下であることをいうが、更に３以下、特に１以下であれば
より好ましい。
また本発明のソリュブルコーヒーは１ｇあたり２５〜５００ｍＬの水又はお湯に溶解して飲むことができる。
【００２６】
容器詰飲料にする場合、通常殺菌処理が行われるが、当該殺菌処理は、金属缶のように容器に充填後、加熱殺菌できる場合にあっては食品衛生法に定められた殺菌条件で行われる。ＰＥＴボトル、紙容器のようにレトルト殺菌できないものについては、あらかじめ食品衛生法に定められた条件と同等の殺菌条件、例えばプレート式熱交換器で高温短時間殺菌後、一定の温度迄冷却して容器に充填する等の方法が採用される。また無菌下で加熱殺菌後、無菌下でｐＨを中性に戻すことや、中性下で加熱殺菌後、無菌下でｐＨを酸性に戻す等の操作も可能である。
【実施例】
【００２７】
実施例１
（焙煎コーヒーが体内過酸化水素量に与える影響）
（ａ）焙煎コーヒーの調製
インスタントコーヒー（ネスカフェカフェインレス）４ｇをミネラルウォーター２８０ｍＬに溶解した。この時コーヒー２８０ｍＬ中のクロロゲン酸量は２１０ｍｇ、ＨＨＱ量は２．６ｍｇとなる。
【００２８】
（ｂ）得られたコーヒー２８０ｍＬを健常男性６名に飲用させ、その後１〜５時間後に尿中過酸化水素量を測定した。なお、尿中過酸化水素量は、ＦＯＸ（ferrous ion oxidation-xylenol orange）アッセイにより測定した。
【００２９】
その結果、図１に示すように、焙煎コーヒーの飲用により、ヒトの尿中過酸化水素量は増加することがわかる。
【００３０】
実施例２
（過酸化水素除去コーヒーが体内過酸化水素量に与える影響）
（ａ）焙煎コーヒー
インスタントコーヒー（ネスカフェカフェインレス）１０ｇを２６ｍＬの蒸留水に溶解した。
【００３１】
（ｂ）過酸化水素除去コーヒー
インスタントコーヒー（ネスカフェカフェインレス）１０ｇを２３ｍＬの蒸留水に溶解し、３ｍＬのカタラーゼ溶液（セントラル科学）を添加した。
【００３２】
（ｃ）上記（ａ）及び（ｂ）で得られたコーヒーを、６週齢のＳＤ系雄性ラット（ｎ＝４）に強制経口投与（１０ｍＬ/ｋｇ）した。投与後３時間目に採尿し、尿中過酸化水素量
を測定した。なお、尿中過酸化水素量はＦＯＸ（ferrous ion oxidation-xylenol orange）アッセイにより測定した。
【００３３】
その結果、図２に示すように、焙煎コーヒーの摂取により尿中過酸化水素量は増加し、その増加率は焙煎コーヒーから過酸化水素を除去してもほとんど変化しなかった。このことから、焙煎コーヒーを摂取することにより体内で新たに過酸化水素が生成することがわかる。
【００３４】
実施例３
（体内で過酸化水素を生成させる成分）
（ａ）焙煎コーヒー
インスタントコーヒー（ネスカフェカフェインレス）を下記の溶離液Ａに溶解し、２０ｍｇ/ｍＬのコーヒー溶液を作製した。
【００３５】
この焙煎コーヒー中のヒドロキシヒドロキノン量を定量したところ、０．００１３質量％であった。ここで焙煎コーヒー中のヒドロキシヒドロキノンの分析法は次の通りである。以下の分析条件を分析条件Ａとする。分析機器はＨＰＬＣ（島津製作所（株））を使用した。装置の構成ユニットの型番は次の通り。ディテクター：ＳＰＤ−Ｍ１０Ａ、オーブン：ＣＴＯ−１０ＡＣ、ポンプ：ＬＣ−１０ＡＤ、オートサンプラー：ＳＩＬ−１０ＡＤ、カラム：Inertsil ＯＤＳ−２  内径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ。
【００３６】
分析条件は次の通り。サンプル注入量：１０μＬ、流量：１．０ｍＬ/ｍｉｎ、紫外線
吸光光度計検出波長：２９０ｎｍ、溶離液Ａ：０．０５Ｍ酢酸３％アセトニトリル溶液、溶離液Ｂ：０．０５Ｍ酢酸１００％アセトニトリル溶液
【００３７】
濃度勾配条件
時間      溶離液Ａ        溶離液Ｂ
０分      １００％            ０％
２０分        ８０％          ２０％
３５分        ８０％          ２０％
４５分          ０％        １００％
６０分          ０％        １００％
７０分      １００％            ０％
１２０分      １００％            ０％
【００３８】
ヒドロキシヒドロキノンのリテンションタイム：５．５分。ここで求めたエリアからヒドロキシヒドロキノンを標準物質とし、質量％を求めた。
【００３９】
また、コーヒー組成物中のヒドロキシヒドロキノンは以下の分析法によっても測定できる。以下の分析条件を分析条件Ｂとする。分析機器はＨＰＬＣ（日立製作所（株））を使用した。装置の構成ユニットの型番は次の通り。ディテクター：Ｌ−７４５５、オーブン：Ｌ−７３００、ポンプ：Ｌ−７１００、オートサンプラー：Ｌ−７２００、カラム：Inertsil ＯＤＳ−２  内径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ。
【００４０】
分析条件は次の通り。サンプル注入量：１０μＬ、流量：１．０ｍＬ/ｍｉｎ、紫外線
吸光光度計検出波長：２５８又は２８８ｎｍ、溶離液Ａ：０．０５Ｍ酢酸水溶液、溶離液Ｂ：０．０５Ｍ酢酸１００％アセトニトリル溶液
【００４１】
濃度勾配条件
時間      溶離液Ａ        溶離液Ｂ
０分      １００％            ０％
１５分      １００％            ０％
１５．１分          ０％        １００％
２５分          ０％        １００％
２５．１分      １００％            ０％
３０分      １００％            ０％
【００４２】
ヒドロキシヒドロキノンの保持時間：６．８分。ここで求めたエリアからヒドロキシヒドロキノンを標準物質とし、質量％を求めた。同様に測定したガリックアシッドの保持時間は１１．５分であった。
【００４３】
（ｂ）インスタントコーヒー（ネスカフェカフェインレス）２．４ｇ／ｋｇ（ヒドロキシヒドロキノンとして１．６ｍｇ／ｋｇ）、ヒドロキシヒドロキノン１．６ｍｇ／ｋｇを、７週齢のＳＤ系雄性ラット（ｎ＝４）に強制経口投与した。投与前及び投与後３時間、６時間目に採尿し、実施例２と同様にして尿中過酸化水素量を測定した。
【００４４】
その結果、図３に示すように、ヒドロキシヒドロキノン及び焙煎コーヒー摂取群では摂取後３時間目の尿中過酸化水素量が有意に増加し、増加した尿中過酸化水素量はヒドロキシヒドロキノン及び焙煎コーヒー摂取群で同程度であった。これにより、コーヒー中の体内過酸化水素生成物質がヒドロキシヒドロキノンであることが判明した。
【００４５】
実施例４
７週齢のＳＤ系雄性ラット（ｎ＝３）に、ヒドロキシヒドロキノン（０．１、０．３、１及び３ｍｇ／ｋｇ）を強制経口投与した。投与前及び投与後３時間、６時間目に採尿し、実施例２と同様にして尿中過酸化水素量を測定した。
【００４６】
その結果、図４に示すように、０．３ｍｇ／ｋｇ以上のヒドロキシヒドロキノンの摂取によって、用量依存的に体内の過酸化水素が増加することが判明した。
【００４７】
実施例５
本発明のコーヒー飲料組成物は次のように製造した。インスタントコーヒー（ネスカフェカフェインレス）２．５ｇをＯＤＳ充填剤（ＹＭＣ  ＧＥＬ  ＯＤＳ−Ａ  細孔径６ｎｍ  粒子径１５０μｍ）５００ｇを充填したカラムにアプライし、０．５％酢酸水６Ｌでヒドロキシヒドロキノンを含む画分を溶出し、ヒドロキシヒドロキノンを含まない画分はメタノール６Ｌで溶出した。ヒドロキシヒドロキノンを含まない画分Ａは凍結乾燥法によりメタノールを完全に除去した。インスタントコーヒー２．５ｇから画分Ａは０．９３３ｇ得られた。画分Ａを実施例３に示した方法で分析したところ、画分Ａ中のヒドロキシヒドロキノンは検出できなかった。画分Ａ  ０．７５ｇを１４０ｍＬの水に溶解することにより、本発明のコーヒー飲料組成物を作製した。
尚、本発明の発明のコーヒー飲料組成物中の過酸化水素量を高感度過酸化水素計を用いて測定したところ、過酸化水素量は検出限界以下であり検出されなかった。過酸化水素の分析法は次の通りである。測定は、高感度過酸化水素計ＳＵＰＥＲ  ＯＲＩＴＥＣＴＯＲ
ＭＯＤＥＬ  ５（セントラル科学（株））にて行った。試料２ｍＬをホールピペットにて精秤し、装置本体の反応セルに注入した。反応セルを密栓した後、測定レンジを選択し、測定用スイッチを押して測定を開始した。測定準備が整ったことを知らせる発信音を確認後、速やかにオリテクター用カタラーゼ２０μＬをマイクロシリンジにて注入し、出力値を読み取った。
【００４８】
装置の校正は、０．１、１、及び５ｍｇ／Ｌの過酸化水素標準液にて行った。
過酸化水素標準液の調製は、過酸化水素（３０％水溶液、特級、和光純薬工業（株））を、イオン交換水にて１，０００ｍｇ／Ｌに希釈したものを原液として使用した。原液を抽出用溶液にて希釈し、過酸化水素標準液  ５ｍｇ／Ｌを調製した。更に、過酸化水素標準液  ５ｍｇ／Ｌ溶液を抽出用溶液にて希釈し、１ｍｇ／Ｌ及び０．１ｍｇ／Ｌを調製した。
【００４９】
抽出用溶液（０．５％臭素酸カリウム含有０．２Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７．０）は、リン酸ニ水素カリウム（特級）１１．０ｇ、リン酸水素ニナトリウム１２水和物（特級）４４．８ｇ、及び臭素酸カリウム（特級）５．０ｇをイオン交換水に溶解した後、１Ｌに定容して調製した。使用時は、あらかじめ氷冷下で１時間以上窒素ガスを通気した。
【００５０】
実施例６
本発明のソリュブルコーヒーは実施例５で得られた画分Ａを粉砕することにより作製した。
【００５１】
実施例７
本発明品のコーヒー飲料組成物は次の方法でも製造した。
活性炭処理コーヒーの製造
市販インスタントコーヒー（ネスカフェゴールドブレンド赤ラベル）２０ｇを、蒸留水１４００ｍＬに溶解したのち（このコーヒーをコーヒーＰという）、活性炭白鷺ＷＨ2ｃ
２８／４２（日本エンバイロケミカルズ）を３０ｇ加え、１時間攪拌したのち、メンブレンフィルター（０．４５μｍ）を用いてろ過し、ろ液を得た（このコーヒーをコーヒーＱという）。得られたろ液を、凍結乾燥し、褐色粉末１５．８ｇを得た。この褐色粉末を蒸留水に溶解し、実施例１と同様にしてＨＰＬＣ分析により、クロロゲン酸及びＨＨＱの定量を行なったところ、クロロゲン酸は４．１２質量％含まれ、ＨＨＱは検出限界以下（分析条件Ｂによる）であった。また、ＩＣＰ発光分光分析法でカリウム含量を測定したところ、原料インスタントコーヒー及び活性炭処理コーヒーのいずれも約４．２質量％であった。コーヒーＰ、コーヒーＱ、及びガリックアシッドをＨＰＬＣを用いて分析すると図５及び６に示すチャートが得られた。コーヒーＱにおいては保持時間６．８分付近のピークが消失し実質的にピークを有していない。図５におけるａはコーヒーＰのチャートを、ｂはコーヒーＱのチャートを、ｃはガリックアシッドのチャートを示す。図６におけるｂはコーヒーＰのチャートを、ｃはコーヒーＱのチャートを、ａはガリックアシッドのチャートを示す。
また、本発明のコーヒー飲料組成物中のヒドロキシヒドロキノン（ＨＨＱ）量の測定は以下の方法でも行った。
【００５２】
ヒドロキシヒドロキノンの測定
コーヒー飲料組成物のヒドロキシヒドロキノンの分析法は次の通りである。分析機器はＨＰＬＣ−電気化学検出器（クーロメトリック型）であるクーロアレイシステム（モデル５６００Ａ、開発・製造：米国ＥＳＡ社、輸入・販売：エム・シー・メディカル（株））を使用した。装置の構成ユニットの名称・型番は次の通りである。
アナリティカルセル：モデル５０１０、クーロアレイオーガナイザー、クーロアレイエレクトロニクスモジュール・ソフトウエア：モデル５６００Ａ、溶媒送液モジュール：モデル５８２、グラジエントミキサー、オートサンプラー：モデル５４２、パルスダンパー、デガッサー：Ｄｅｇａｓｙｓ  Ｕｌｔｉｍａｔｅ  ＤＵ３００３、カラムオーブン：５０５。カラム：ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ１８  ＡＱ  内径４．６ｍｍ×長さ２５０ｍｍ  粒子径５μｍ（（株）資生堂）。
分析条件は次の通りである。
サンプル注入量：１０μＬ、流量：１．０ｍＬ／ｍｉｎ、電気化学検出器の印加電圧：０ｍＶ、カラムオーブン設定温度：４０℃、溶離液Ａ：０．１（Ｗ／Ｖ）％リン酸、０．１ｍＭ  １−ヒドロキシエタン−１，１−ジホスホン酸、５（Ｖ／Ｖ）％メタノール溶液、溶離液Ｂ：０．１（Ｗ／Ｖ）％リン酸、０．１ｍＭ  １−ヒドロキシエタン−１，１−ジホスホン酸、５０（Ｖ／Ｖ）％メタノール溶液。
【００５３】
溶離液Ａ及びＢの調製には、高速液体クロマトグラフィー用蒸留水（関東化学（株））、高速液体クロマトグラフィー用メタノール（関東化学（株））、リン酸（特級、和光純薬工業（株））、１−ヒドロキシエタン−１，１−ジホスホン酸（６０％水溶液、東京化成工業（株））を用いた。
【００５４】
濃度勾配条件
時間      溶離液Ａ        溶離液Ｂ
０．０分      １００％          ０％
１０．０分      １００％          ０％
１０．１分          ０％      １００％
２０．０分          ０％      １００％
２０．１分      １００％          ０％
５０．０分      １００％          ０％
【００５５】
分析試料の調製は、試料２ｇを精秤後、溶離液Ａにて１０ｍＬにメスアップし、メンブレンフィルター（ＨＬＣ−ＤＩＳＫ２５溶媒系、孔径０．４５μｍ、高速液体クロマトグラフィー用、関東化学（株））にて濾過した。得られた濾液約２．５ｍＬについて、ボンドエルートＳＣＸ（固相充填量：５００ｍｇ、リザーバ容量：３ｍＬ、ジーエルサイエンス（株））に通液し、初通過液約０．５ｍＬを除いた通過液を、速やかに分析に供した。
【００５６】
上記の条件における分析において、ヒドロキシヒドロキノンの保持時間は、６．３８分であった。得られたピークの面積値から、ヒドロキシヒドロキノン（和光純薬工業（株））を標準物質とし、質量％を求めた。
尚、本発明の発明のコーヒー飲料組成物中の過酸化水素量を高感度過酸化水素計を用いて測定したところ、過酸化水素量は検出限界以下であり検出されなかった。また、コーヒーＰの灰分量は、前述の測定法により測定したところ、コーヒー飲料１００ｇあたりの量で表すと、１８６ｍｇ／１００ｇであり、コーヒーＱの灰分量は１７６ｍｇ／１００ｇであった。
【００５７】
実施例８
ラットにおける焙煎コーヒーと実施例７で製造した活性炭処理コーヒー（本発明コーヒー飲料組成物）の体内過酸化水素量に対する影響
（ａ）焙煎コーヒーの調製
インスタントコーヒー（ネスカフェカフェインレス）８ｇを１２ｍＬの蒸留水に溶解した。
（ｂ）活性炭処理コーヒーの調製
実施例７で製造した活性炭処理コーヒー８ｇを１２ｍＬの蒸留水に溶解した。（ｃ）上記（ａ）及び（ｂ）で得られたコーヒーを、７週齢のＳＤ系雄性ラット（ｎ＝８）に強制経口投与（１０ｍＬ／ｋｇ）した。投与前及び投与後３時間、６時間目に採尿し、実施例２と同様にして尿中過酸化水素量を測定した。
その結果、図７に示すように、焙煎コーヒー摂取群では摂取後３時間目の尿中過酸化水素量が蒸留水摂取群に比べて有意に増加するが、活性炭処理コーヒー摂取群では蒸留水摂取群と同等であることがわかる。
【００５８】
実施例９
ヒトにおける焙煎コーヒーと活性炭処理コーヒー（本発明コーヒー飲料組成物）の体内過酸化水素量に対する影響
（ａ）焙煎コーヒーの調製
インスタントコーヒー（ネスカフェカフェインレス）４．５ｇをミネラルウォーター２８０ｍＬに溶解した。
（ｂ）活性炭処理コーヒーの調製
実施例７で製造した活性炭処理コーヒー４．５ｇをミネラルウォーター２８０ｍＬに溶解した。
（ｃ）上記（ａ）及び（ｂ）で得られたコーヒー２８０ｍＬを健常男性７名に飲用させ、その後１〜５時間後に尿中過酸化水素量を測定した。また試験はクロスオーバーを行った。実施例２と同様にして尿中過酸化水素量を測定した。
その結果、図８に示すように、焙煎コーヒーの飲用により、ヒトの尿中過酸化水素量は増加するが、本発明コーヒー組成物の活性炭処理コーヒーでは増加しないことがわかる。
【００５９】
実施例１１
一般的抽出機に中煎り（Ｌ＝２２）・粉砕（中挽き）デカフェコロンビア豆を４００ｇ投入後、９５℃の湯を加え３２００ｇの抽出液を得る。その抽出液の固形量に対し、５０％（ｗ／ｗ）の活性炭ＷＨ2ｃ（日本エンバイロケミカル社製）を添加し、３０分間攪拌
後、遠心ろ過を行い活性炭除去し、脱ＨＨＱコーヒー抽出液を得る。その脱ＨＨＱコーヒー抽出液にイオン交換水及び重曹をｐＨ６．３になる様に加え調合液を得る。その調合液を１９０ｇ容金属缶に充填・密封後、１１８．１℃にて１０分のレトルト殺菌を行い、缶コーヒーを得た。殺菌後のｐＨは５．８であった。
【００６０】
実施例１２
実施例７で得られた凍結乾燥品をそのまま粉末コーヒーとした。
【図面の簡単な説明】
【００６１】
【図１】焙煎コーヒーが体内過酸化水素に与える影響（ヒト）を示す図である。
【図２】過酸化水素除去コーヒーが体内過酸化水素量に与える影響を示す図である。
【図３】体内で過酸化水素を生成させるコーヒー中の成分を示す図である。
【図４】ヒドロキシヒドロキノンが体内過酸化水素生成に及ぼす作用を示す図である。
【図５】コーヒーＱのＨＰＬＣチャート（検出波長２５８ｎｍ）を示す図である。
【図６】コーヒーＱのＨＰＬＣチャート（検出波長２８８ｎｍ）を示す図である。
【図７】活性炭処理コーヒーがラットの体内過酸化水素量に与える影響を示す図である。
【図８】活性炭処理コーヒーがヒトの体内過酸化水素量に与える影響を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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