(57)【要約】【課題】空腹時の採血を徹底することなく、正確な薬物治療効果の判定を行う。その際、実際の治療現場で実施可能なように、簡便かつ迅速な判定方法を提供する。【解決手段】同一の人から異なる時期に採取した血液中の、カイロマイクロンを含まないトータルのＶＬＤＬ中コレステロールを測定し、その変動を見ることにより、より詳細に薬物治療効果を把握し、判定することができる。特に高脂血症の薬物治療効果の判定を行うことで、動脈硬化性疾患の予防に役立てることができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
血液中の超低比重リポ蛋白に含まれるコレステロール値を測定することからなる、薬物治療効果の判定方法。
【請求項２】
同一人の異なる時期に採取した血液中の超低比重リポ蛋白に含まれるコレステロール値を測定し、その変動を見ることによる、薬物治療効果の判定方法。
【請求項３】
請求項１または２の血液が高脂血症患者から採取されたものである、薬物治療効果の判定方法。
【請求項４】
超低比重リポ蛋白に含まれるコレステロール値が低下することで高脂血症治療薬が有効であると判定することを特徴とする、請求項３の薬物治療効果の判定方法。
【請求項５】
請求項１乃至４のいずれかの薬物が、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、胆汁酸排泄促進剤から選択される１以上の薬物である、薬物治療効果の判定方法。
【請求項６】
イオン交換クロマトグラフィーを用いて超低比重リポ蛋白に含まれるコレステロール値を測定することを特徴とする、請求項１乃至５のいずれかの薬物治療効果の判定方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、超低比重リポ蛋白（ＶＬＤＬ）に含まれるコレステロール値により、施行した薬物治療の効果を判定する方法に関する。この方法によれば、簡便に、より詳細に種々の薬物治療の効果の有効性を判定することができる。
【背景技術】
【０００２】
高脂血症は動脈硬化の１つの危険因子であるので、早期に治療することは心筋梗塞などの動脈硬化性疾患を予防する上で重要である。高脂血症の治療において、その治療効果の判定は、通常、総コレステロール、中性脂肪、ＨＤＬコレステロール、ＬＤＬコレステロールを測定し行われる。これらの測定は、生化学自動測定装置と液状の試薬により簡便に行うことができる。治療効果が現れない場合には、投薬の種類などの治療方法を変更する。
【０００３】
ところで、血液中のリポ蛋白には、多くの種類が存在するが、主要な５つのクラスとしては、高比重リポ蛋白（ＨＤＬ）、低比重リポ蛋白（ＬＤＬ）、中間型リポ蛋白（ＩＤＬ）、超低比重リポ蛋白（ＶＬＤＬ）、カイロマイクロンに分けられる。
【０００４】
これらリポ蛋白は、通常、超遠心分離装置を用いて各リポ蛋白の比重の差を利用して分離し測定される。カイロマイクロンは食後に血液濃度が高くなるリポ蛋白で、空腹時においては、非常に低い濃度で存在するリポ蛋白である。このことから、空腹時に採血することを条件とする研究においては、カイロマイクロン画分は分離せず、ＶＬＤＬ画分と合わせた画分として分離し分析することが多い。これは、超遠心分離装置を用いるリポ蛋白を分離する方法は多大な手間がかかるため、分離する画分の数を必要最小限とし測定の手間を最小限に抑え、研究の効率を高めるようにプロトコールを作成するからである。実際に、Ｈｕｂｅｒｔら（非特許文献１）は、生活習慣と冠動脈疾患のリスクの関連性の研究の中で、カイロマイクロン＋ＶＬＤＬ、ＩＤＬ＋ＬＤＬ、ＨＤＬの３画分を分離測定し検討を行っている。Ｓａｃｋｓら（非特許文献２）も同様に前述した３画分の測定値と冠動脈疾患との関連性を研究しており、ＶＬＤＬコレステロール（カイロマイクロンを含む画分）、ＶＬＤＬ中の中性脂肪（カイロマイクロンを含む画分）、ＬＤＬコレステロール（ＩＤＬを含む画分）との関連性が高いことを報告している。Ｍａｒｋｏｖｉｃら（非特許文献３）は、糖尿病患者における食事療法の効果の検討に関して、これらリポ蛋白３画分を分離測定し、食事療法によって、中性脂肪および総コレステロール、そして、ＶＬＤＬコレステロール（カイロマイクロンを含む画分）が顕著に低下することを報告している。
【０００５】
一方でカイロマイクロンを含まない、ＶＬＤＬ画分中のコレステロールを測定する方法も知られており、Ｍｉｌｏｓａｖｌｊｅｖｉｃら（非特許文献４）、Ｇｕｅｒｉｎら（非特許文献５）、Ｗｉｎｏｃｏｕｒら（非特許文献６）は、異なる複数の比重の溶液を重層し超遠心分離装置により、沈降係数（Ｓｆ）が６０−４００と２０−６０に分離し、それぞれをＶＬＤＬ１またはＬａｒｇｅＶＬＤＬとＶＬＤＬ２またはＳｍａｌｌＶＬＤＬと呼び、薬物投与におけるリポ蛋白への影響を研究している。
【０００６】
Ｍｉｌｏｓａｖｌｊｅｖｉｃら（非特許文献４）は、タイプ２Ｂ型の高脂血症患者にフィブラート系薬剤であるフェノフィブラートを投与し、ＶＬＤＬ１、ＶＬＤＬ２、ＩＤＬについて詳細に解析している。そして、ＶＬＤＬ１およびＶＬＤＬ２の血液中の蛋白質としての総量、ＶＬＤＬ２中のコレステロールエステル含量が顕著に低下すること、ＶＬＤＬ１とＩＤＬ中の遊離コレステロール含量が顕著に高くなることを報告している。Ｇｕｅｒｉｎら（非特許文献５）は、高脂血症患者において、スタチン系薬剤であるアストバスタチンを投与し、ＶＬＤＬ１およびＶＬＤＬ２の血液中の蛋白質としての総量を検討し、ＶＬＤＬ１が特に顕著に低下することを報告している。Ｗｉｎｏｃｏｕｒら（非特許文献６）は、高脂血症を呈したタイプ１の糖尿病患者にフィブラート系薬剤であるベンザフィブラートを投与し、ＬａｒｇｅＶＬＤＬおよびＳｍａｌｌＶＬＤＬおよびＩＤＬおよびＬＤＬの変化を検討し、ＬａｒｇｅＶＬＤＬ中のコレステロール、遊離コレステロール中性脂肪、ＶＬＤＬ２中の遊離コレステロールが顕著に低下することを示している。
【０００７】
このように、通常、簡便に測定できるＨＤＬコレステロール、ＬＤＬコレステロール以外のリポ蛋白も同時に測定することができれば、より詳細な薬剤治療効果の判定を行うことができ、早期かつ適切な治療を行うことができる。
【０００８】
しかしながら、これまで、ＨＤＬコレステロール、ＬＤＬコレステロール以外のリポ蛋白の分離定量には、超遠心分離装置を使う方法が一般的であることから、実際の治療現場で適用するという視点に立った研究や検討は、ほとんどなされていない。
【０００９】
【非特許文献１】Ｈｕｂｅｒｔ  ＨＢら、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊ  ｏｆ  Ｅｐｉｄｍｉｏｌｏｇｙ、１２５（５）、ｐ８１２（１９８７）
【非特許文献２】Ｓａｃｋｓ  ＦＭら、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ、１０２、ｐ１８８６（２０００）
【非特許文献３】Ｍａｒｋｏｖｉｃ  ＴＰら、Ｄｉａｂａｔｅｓ  Ｃａｒｅ、２１（５）、ｐ６９５（１９９８）
【非特許文献４】Ｍｉｌｏｓａｖｌｊｅｖｉｃ  Ｄら、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ、１５５、ｐ２５１（２００１）
【非特許文献５】Ｇｕｅｒｉｎ  Ｍら、Ａｒｔｅｒｏｓｃｌｅｒ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｖａｓｃ  Ｂｉｏｌ、２０、ｐ１８９（２０００）
【非特許文献６】Ｗｉｎｏｃｏｕｒ  ＰＨら、Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ、９３、ｐ８３（１９９２）
【非特許文献７】Ｈｉｒｏｗａｔａｒｉ  Ｙら、Ｊ  ｏｆ  Ｌｉｐｉｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、４４、ｐ１４０４（２００３）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
前述したように、ＶＬＤＬ＋カイロマイクロン画分中に存在するコレステロール値は、冠動脈疾患のリスクとの関連性が高く、糖尿病患者の食事療法において低下することから、高脂血症患者の治療効果を判定する一つの指標になると言え、これらの研究は、空腹時に採血するという条件においてカイロマイクロンとＶＬＤＬの両方を含んだ画分で検討されている。しかしこの方法では、実際の治療現場においては空腹時の採血を徹底することが困難であるために、正確な治療効果の判定を行うことができない。また、カイロマイクロンは日内の変動が激しいリポ蛋白であり、空腹時においてもわずかながらカイロマイクロンが血液中に含まれるので、治療効果を判定する指標としては、やはり正確性に欠けるという課題があげられる。
【００１１】
一方で、ＶＬＤＬを複数の画分に分けその画分中のコレステロールを測定するためには、異なる複数の比重の溶液を重層し、超遠心分離装置を使用しなければならず、実際に治療現場で使用することが困難である。しかしトータルのＶＬＤＬ画分であれば、分離分析が比較的容易であり、実際の治療現場での使用が可能である。そこでトータルのＶＬＤＬを薬剤治療効果の判定に利用できることがわかれば、ＶＬＤＬ１とＶＬＤＬ２を分離する工数を省略でき、分析効率が上がることで薬剤治療効果をより早期に判定することができることになる。
【００１２】
また、特に高脂血症の治療については、スタチン系、フィブラート系などの種々の薬剤による方法や、食事療法などがあげられるが、早期に適切かつ効果的な治療を行うことは、動脈硬化性疾患を予防する上でも重要なことである。そのために、実際の治療現場において、より簡便で、詳細かつ正確に薬剤治療効果を判定する方法が望まれている。
【００１３】
我々は、ＶＬＤＬ中コレステロールが、高脂血症の薬剤治療においてその治療効果を良好に判定する指標となる可能性が高いと考え検討を進め、本発明に到達した。また、本検討を開始するにあたり、治療に関して、カイロマイクロンを含まず、ＶＬＤＬ１とＶＬＤＬ２とを分けないトータルとしてのＶＬＤＬ画分の変化について検討した報告を調査したが、過去報告はなく、自ら検討することにしたわけである。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、血液中のＶＬＤＬ中コレステロールを測定し、より詳細に薬物治療効果を把握し、判定することができるものである。また好ましくは、同一の人から異なる時期に採取した血液中のＶＬＤＬ中コレステロールを測定し、その変動を見ることにより薬物治療効果を判定する。したがって、選択した薬物が良好な治療をもたらしているか判定できる。また、血液を採取される対象となる人が高脂血症を有している患者の場合には、特に詳細に治療効果を把握することが動脈硬化性疾患を予防する上で重要であり、本発明の効果をより発揮することができる。
【００１５】
測定する試料としては、通常採取した血液から、血漿または血清を取得して用いる。またＶＬＤＬ中のコレステロール値の変動を測定して判定に使用する場合には、同一人の異なる時期に採取した複数の試料について実施することが好ましい。特に最初の測定は薬物治療を開始する前または開始直後に行い、薬物治療後にさらに測定を行うことが望ましいが、薬物治療後にのみ測定しても判定は可能である。測定の回数や測定間の期間に制限はないが、薬物治療効果を判定するために最適な測定を行なう必要がある。したがって例えば、薬物治療の開始から治療効果が表れるまで長期間かかるような薬物を使用する場合には、最初の測定以降に複数回測定し、十分に測定間の期間をとることが好ましく、治療効果が迅速に表れる薬物を使用する場合には、１回薬物治療後に測定するだけで判定を行ってもよい。
【００１６】
ＶＬＤＬの分離および分析方法としては、特に制限はないが、イオン交換クロマトグラフィーを用いた分析法（非特許文献７）が、迅速に測定を行うことができるため、実際の臨床現場で用いるという点において望ましい。この方法ではＶＬＤＬの他にもＨＤＬ、ＬＤＬ、ＩＤＬおよびカイロマイクロン中のコレステロールを測定できるため、必要であればＶＬＤＬ中のコレステロール値と組み合わせて、ＶＬＤＬ以外のリポ蛋白中のコレステロール値を薬物治療効果の判定に使用してもよい。
【００１７】
投与される薬物は１種類でも複数種類でもよい。また、投与される薬物の種類や量に特に制限はなく、投与される薬物がＶＬＤＬ中のコレステロール値の変動を引き起こし、薬物治療効果の判定の指標とすることができればよい。以上のことから投与される薬剤として高脂血症治療薬が例示できる。
【００１８】
投与される薬物としては、例えば、肝臓のコレステロール合成系の律速酵素であるＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素を特異的かつ拮抗的に阻害し血液中のコレステロールを低下させるスタチン系と呼ばれる薬物、また、リポ蛋白リパーゼ活性および肝性トリグリセライドリパーゼ活性を亢進することによりリポ蛋白の代謝を促進するフィブラート系と呼ばれる薬物、また、消化管で胆汁酸を吸着し、その排泄促進作用により胆汁酸の腸管循環を阻害し、肝臓におけるコレステロールから胆汁酸への異化を亢進することにより肝臓中のコレステロールプールを減少させ、結果として血液中のコレステロールが減少する陰イオン交換樹脂製剤と呼ばれる薬物などがある。
【発明の効果】
【００１９】
本発明は、特に高脂血症を有した患者において、薬物治療の効果を判定する新たな有用な指標を提供するものである。すなわち、対象となる人の異なる時期に採取した血液中のＶＬＤＬ中コレステロールの増減を確認することにより、より詳細に薬物治療効果を判定できる。また本発明は、日内の変動が激しいカイロマイクロンを判定の指標として使用しないため、より正確な薬物治療効果の判定を行うことができる。さらにＶＬＤＬ画分中のコレステロール値をＶＬＤＬ１およびＶＬＤＬ２を分離することなく測定するため、工数を省略でき、分析効率が上がることで薬物治療効果を早期に判定するという、実際の治療現場に適した方法を提供する。特にイオン交換クロマトグラフィーを使用することで簡便なＶＬＤＬ中のコレステロール値の測定を行うことができ、簡便かつ迅速な薬物治療効果の判定を可能とする。
【実施例】
【００２０】
実施例１
高脂血症患者６名について、その薬物治療経過の前後において、空腹時採血を行い、血清を得て、総コレステロール、中性脂肪、イオン交換クロマトグラフィーを用い、ＨＤＬ、ＬＤＬ、ＩＤＬ、ＶＬＤＬ、カイロマイクロン中のコレステロールを測定した。これら患者は、本検討の実施期間以前から、種々の治療を受けている患者である。なお、総コレステロールと中性脂肪の測定は、和光純薬製のコレステロールＥテストワコー、トリグリセライドＥテストワコーにより行った。その他は、非特許文献７の方法を用いた。各患者の治療に用いた薬物の名称および薬効などを表１に、投与薬物の種類と量、治療期間、治療の前後における測定値を表２および表３に示した。表３の投薬名および経過期間は表２に準じたものである。さらに表２および表３の結果を統計処理したデータを表４に示した。
【００２１】
【表１】
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【００２２】
【表２】
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【００２３】
【表３】
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【００２４】
【表４】
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表４においてＰ値が０．０５以下と有意差が確認できるデータが中性脂肪とＨＤＬ中コレステロール、ＶＬＤＬ中コレステロールである。そして、ＶＬＤＬ中コレステロールは特に高い有意差を示した。また、カイロマイクロン中コレステロールを見ると有意差はなく、ＶＬＤＬ＋カイロマイクロン中コレステロールの有意差はＶＬＤＬ中コレステロールに比べ、有意差が低くなっていることがわかる。本検討において、空腹時に採血を行ったが、推測したより多く血液中にカイロマイクロンが存在し、そしてカイロマイクロンは治療効果の良好な指標とは言えず、カイロマイクロンの含まれるＶＬＤＬ画分中のコレステロールに比べ、カイロマイクロンを分離し、それが含まれないＶＬＤＬ画分中のコレステロールの方が、より良い治療効果を判定する良い一つの指標となることが明らかとなった。すなわち、血中のＶＬＤＬの減少が高脂血症の改善の指標となることがわかる。また、図１から図７に、総コレステロール、中性脂肪、ＨＤＬ、ＬＤＬ、ＩＤＬ、ＶＬＤＬ、カイロマイクロン中のコレステロールについて、治療経過の前後での測定値の変動をまとめた。
【００２５】
また、今回対象となった患者の治療経過前の脂質データを見ると、患者番号２，３については、総コレステロール２２０ｍｇ／ｄｌ以下、中性脂肪１４０ｍｇ／ｄｌ以下とほぼ正常値である。これら患者においても、治療経過において、ＶＬＤＬ中コレステロール値の低下（改善）が確認できた。特に患者番号３番については、治療経過前において、ＶＬＤＬ中コレステロールが１３．４ｍｇ／ｄｌと低値であるにもかかわらず、治療経過後には更に５．２ｍｇ／ｄｌと低値となっている。このことは、現在の日常検査（総コレステロール、中性脂肪、ＨＤＬコレステロール、ＬＤＬコレステロール）で正常な値を示している人の中にも、ＶＬＤＬ中コレステロールがやや高値を示し、薬剤によりそれが改善する人がいるが、これらの人についても、薬物治療効果を判定することが可能であることを示している。ＶＬＤＬ中コレステロールによる判定方法で、健常者や高脂血症を有しない糖尿病患者などにおいても、より良好な脂質代謝の状態に持っていくことおよびその維持が可能であり、このことは、動脈硬化性疾患のリスクを下げる効果がある。
【００２６】
実施例２
２名の患者について、複数時期において経過観察を行った。１名は高脂血症治療薬としてメバロチンを１日投与量１０ｍｇとして５月から継続投与した患者であり、５月の継続投与前と、継続投与中の７月、９月の３点において、採血を行い脂質データの変動を確認した（患者７）。１名は同じメバロチンを１日投与量２０ｍｇとして、５月から継続投与した患者であり、５月の継続投与前と、６月、７月、８月の４点において、採血を行い脂質データの変動を確認した（患者８）。脂質データの測定は、実施例１と同じとした。
【００２７】
患者７のデータを図８から図１０に示した。総コレステロール、中性脂肪、ＨＤＬ中コレステロール、ＬＤＬ中コレステロール、カイロマイクロン中コレステロールについては、変動は軽微であったが（図８から図１０）、ＩＤＬ中コレステロール、ＶＬＤＬ中コレステロールは経過とともに大きく低下した。このことは、ＩＤＬ中コレステロールとＶＬＤＬ中コレステロールが薬物治療効果を反映したことを示している。患者８のデータを図１１から図１３に示した。総コレステロール、中性脂肪、ＨＤＬ中コレステロール、ＬＤＬ中コレステロール、ＩＤＬ中コレステロール、カイロマイクロン中コレステロールについては、変動は軽微であったが（図１１から図１３）、ＶＬＤＬ中コレステロールは５月、８月は低値を示し、６月、７月はそれに比べ高値を示した。このＶＬＤＬ中コレステロールの変動は、メバロチンがこの患者（患者８）の病態において良好な治療効果を示さず、脂質代謝が不安定であることを示している。
【００２８】
これら２人の患者の経過観察の結果から、両者において、薬物治療効果を判定するための良好な指標として共通するものはＶＬＤＬ中コレステロールであることがわかった。
【図面の簡単な説明】
【００２９】
【図１】経過観察における総コレステロールの変動
【図２】経過観察における中性脂肪の変動
【図３】経過観察におけるＨＤＬ中コレステロールの変動
【図４】経過観察におけるＬＤＬ中コレステロールの変動
【図５】経過観察におけるＩＤＬ中コレステロールの変動
【図６】経過観察におけるＶＬＤＬ中コレステロールの変動
【図７】経過観察におけるカイロマイクロン中コレステロールの変動
【図８】患者７における総コレステロールと中性脂肪の経過観察
【図９】患者７におけるＨＤＬ中およびＬＤＬ中コレステロールの経過観察
【図１０】患者７におけるＩＤＬ中およびＶＬＤＬ中およびカイロマイクロン中コレステロールの経過観察
【図１１】患者８における総コレステロールと中性脂肪の経過観察
【図１２】患者８におけるＨＤＬ中およびＬＤＬ中コレステロールの経過観察
【図１３】患者８におけるＩＤＬ中およびＶＬＤＬ中およびカイロマイクロン中コレステロールの経過観察
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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