(57)【要約】【課題】  副作用がなく、安全性の高いアレルギーの治療・予防剤、特にアレルギー性鼻炎の症状を緩和するために有用な薬剤または食品を提供すること。【解決手段】  本発明のアレルギー抑制剤は、イソマルトオリゴ糖を有効成分として含む。本発明のアレルギー抑制剤は、ＩｇＥ抗体の産生量を低減させる作用を有し、そしてＩＬ−４、ＩＬ−５、および／またはＩＬ−１３の産生量を低減させる作用を有する。さらに、本発明のアレルギー抑制剤は、特に、アレルギー性鼻炎の症状を緩和する作用を有する。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
イソマルトオリゴ糖を有効成分として含有する、アレルギー抑制剤。
【請求項２】
ＩｇＥ抗体の産生量を低減させる作用を有する、請求項１に記載のアレルギー抑制剤。
【請求項３】
ＩＬ−４の産生量を低減させる作用を有する、請求項１に記載のアレルギー抑制剤。
【請求項４】
ＩＬ−５の産生量を低減させる作用を有する、請求項１に記戦のアレルギー抑制剤。
【請求項５】
ＩＬ−１３の産生量を低減させる作用を有する、請求項１に記載のアレルギー抑制剤。
【請求項６】
アレルギー性鼻炎の症状を緩和する作用を有する、請求項１に記載のアレルギー抑制剤。
【請求項７】
イソマルトオリゴ糖を有効成分として含有する、アレルギー性鼻炎抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アレルギー抑制剤に関する。より詳細には、本発明は、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−５（ＩＬ−５）、インターロイキン−１３（ＩＬ−１３）、および免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）抗体産生抑制作用、特にアレルギー性鼻炎の症状を緩和する作用を有するアレルギー抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、食習慣の変化、住環境および自然環境などの環境の変化、ストレスの増加、大気汚染物質の増加などにより、アレルギー性疾患の患者数が増加している。特に花粉症およびアトピー性皮膚炎の患者は著しく増加しており、社会問題となっている。
【０００３】
アレルギーとは、本来、外来物質（アレルゲン）から身を守るための自己防衛機能として働く免疫系に、何らかの異常が生じて引き起こされる種々の疾患である。アレルギー反応は、そのメカニズムの違いによりＩ型からＩＶ型までの４つの型に分けられており、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、および気管支喘息は、通常Ｉ型アレルギー反応により起こる。Ｉ型アレルギーは即時型アレルギーとも呼ばれ、その発症機序は以下のように考えられている。すなわち、卵、牛乳、小麦などの食物抗原、ダニ、花粉などの吸入抗原など種々の外来抗原が体内に侵入し、これを抗原提示細胞が取り込み、ＣＤ４＋Ｔ細胞（ヘルパーＴ細胞）に対して抗原提示する。ヘルパーＴ細胞は、この提示された抗原を認識し、Ｂ細胞と相互作用して、Ｂ細胞を抗体産生細胞へ分化増殖させる。
【０００４】
ヘルパーＴ細胞は、その産生するサイトカインによって、細胞性免疫を誘導するＩ型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ１細胞）および液性免疫を誘導するＩＩ型ヘルパーＴ細胞（Ｔｈ２細胞）の２種類に分類される（非特許文献１）。Ｔｈ２細胞は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３などのサイトカインを産生する。このうち、ＩＬ−４およびＩＬ−１３はＢ細胞に作用して、ＩｇＥへのクラススイッチを誘導することにより、ＩｇＥ抗体の産生を誘導する。産生されたＩｇＥ抗体はマスト細胞の表面に結合し、特異抗原がこのＩｇＥ抗体に結合すると肥満細胞（マスト細胞）が活性化される。活性化された肥満細胞からは脱類粒によって細胞内に貯蔵されたヒスタミンなどの炎症性物質が放出され、アレルギー症状が誘発される。さらに、ＩＬ−４は、抗原未感作なナイーブＴ細胞からＴｈ２細胞への分化および増殖能ならびに肥満細胞に対する活性化能も有している。ＩＬ−５は好酸球の活性化と浸潤を促進することにより、皮膚や気道における炎症反応を促進させる。このように、ＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１３は、アレルギー発症に関して中心的な役割を果たしていると考えられている。
【０００５】
Ｉ型アレルギーの治療には、抗ヒスタミン剤および／または肥満細胞からの炎症性物質の遊離抑制作用を有する抗アレルギー剤の投与による薬物療法、あるいはアレルゲンの投与による減感作療法などが行われている。しかし、これらはいずれも副作用の問題や病院への長期の通院を要するなど、Ｑｕａｌｉｔｙ  ｏｆ  Ｌｉｆｅ（ＱＯＬ）の低下を伴うことが問題となっている。したがって、副作用がなく、高い安全性を有し、かつＱＯＬの低下を伴わないアレルギーの治療・予防法が求められている。
【０００６】
このような副作用のない天然物由来のアレルギー体質改善剤として、オリゴ糖の一種であるラフィノースが有効であることが報告されている（特許文献１）。ラフィノースは、インターロイキン−１２（ＩＬ−１２）の産生を増強する作用を有しており、このＩＬ−１２によってＴｈ１細胞が誘導される。誘導されたＴｈ１細胞は、インターフェロン−γ（ＩＦＮ−γ）を産生し、このＩＦＮ−γによりＩｇＥ抗体の産生が低減されて、アレルギー体質が改善される。すなわち、ラフィノースは、Ｔｈ１細胞に作用することによって、間接的にＴｈ２細胞による液性免疫を抑制している。しかし、アレルギー性鼻炎などを引き起こすアレルギー反応に関連するＴｈ２細胞に対して、より直接的に作用するオリゴ糖は知られていない。
【特許文献１】特開２００１−２８８０９３号公報
【非特許文献１】Ｍｏｓｍａｎｎ，Ｔ．Ｒ．ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９８６年，１３６巻，ｐｐ．２３４８−２３５７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、副作用がなく、安全性の高いアレルギーの治療・予防剤、特にアレルギー性鼻炎の症状を緩和するために有用な薬剤または食品を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明は、食品として安全性の高いことが知られているイソマルトオリゴ糖が、アレルギー症状を抑制する作用を有することを新たに見出したことに基づく。
【０００９】
本発明は、イソマルトオリゴ糖を有効成分として含むアレルギー抑制剤を提供する。
【００１０】
１つの実施態様では、上記アレルギー抑制剤は、ＩｇＥ抗体の産生量を低減させる作用を有する。
【００１１】
さらなる実施態様では、上記アレルギー抑制剤は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、および／またはＩＬ−１３の産生量を低減させる作用を有する
【００１２】
別の実施態様では、上記アレルギー抑制剤は、アレルギー性鼻炎の症状を緩和する作用を有する。
【００１３】
本発明はまた、イソマルトオリゴ糖を有効成分として含有する、アレルギー性鼻炎抑制剤を提供する。
【００１４】
本発明はさらに、イソマルトオリゴ糖を含有する、アレルギー抑制性食品組成物を提供する。
【００１５】
本発明はまた、イソマルトオリゴ糖を含有する、アレルギー性鼻炎改善用食品組成物を提供する。
【発明の効果】
【００１６】
本発明によれば、副作用がなく、安全性の高いアレルギー抑制剤が提供される。本発明のアレルギー抑制剤は、特に、アレルギー性鼻炎の症状を緩和するために有用である。本発明のアレルギー抑制剤は、食品としても提供され得るため、ＱＯＬを低下させることなくアレルギー症状を抑制することが可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明のアレルギー抑制剤は、イソマルトオリゴ糖を有効成分として含有する。
【００１８】
本発明において、イソマルトオリゴ糖とは、グルコース分子のα−１，６結合を有するオリゴ糖をいう。代表的には、イソマルトース、パノース、イソマルトトリオース、イソマルトテトラオースなどが挙げられる。イソマルトオリゴ糖は、天然物から精製または粗精製されたものであり得る、その起源は特に限定されない。本発明で使用するイソマルトオリゴ糖は、イソマルトース単独もしくはこれらの糖類の混合物のいずれでもよく、特にイソマルトースを主成分として含む糖類の混合物が好適である。本発明で使用するイソマルトオリゴ糖としては、例えば、固形分を基準としてイソマルトオリゴ糖を８５質量％以上（イソマルトース：約３５質量％；三糖類（パノース、イソマルトトリオースなど）：約２７質量％；および四糖類以上：約２４質量％）含むシロップ状の製品が、昭和産業株式会社から商品名「イソマルト９００」として市販されている。
【００１９】
イソマルトオリゴ糖は、上述のようにアレルギー抑制作用を有しており、これは、アレルギー発症に関して中心的な役割を果たしているＴｈ２細胞におけるＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１３産生の抑制、ならびにこれらのインターロイキンによって誘導されるＩｇＥ抗体産生の抑制による。イソマルトオリゴ糖は、種々のアレルギー症状のうち、特に、アレルギー性鼻炎の症状を緩和するために有用である。
【００２０】
本発明のアレルギー抑制剤は、イソマルトオリゴ糖を、通常用いられる食品あるいは食品成分、医薬担体、または賦形剤とともに、当業者が通常用いる方法で混合して、アレルギー抑制作用、特にアレルギー性鼻炎の抑制および／または改善作用を有する食品または食品組成物（あるいはそのような表示を付した食品または食品組成物）や医薬品として用いられ得る。
【００２１】
医薬品の場合、投与経路は経口および非経口のいずれであってもよい。通常、薬学的に受容可能な担体または賦形剤などを用いて、製剤化される。経口投与用の剤形としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロップ剤などが挙げられる。非経口投与用の剤形としては、経腸剤、軟膏剤などが挙げられる。
【００２２】
食品の場合、固体、半固体、または液体のいずれの形態でもよい。例えば、調味料、畜肉加工品、農産加工品、菓子（例えば、ビスケット）、飲料（例えば、ジュース）などの形態で提供してもよい。
【００２３】
本発明のアレルギー抑制剤の使用量は、症状、年齢、体重、投与方法などによって異なり、特に限定されない。通常は、イソマルトオリゴ糖として、成人１日あたり１０〜３０ｇ、好ましくは１２〜２４ｇが摂取される。イソマルトオリゴ糖は、食品として安全性が高いことが知られているため、上記の範囲より多量に摂取してもよい。
【実施例】
【００２４】
以下、本発明について具体例を挙げて具体的に説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるものではない。なお、以下の実施例において、イソマルトオリゴ糖をＩＭＯと記載する。
【００２５】
（実施例１：アレルギーモデルマウスにおけるＩＭＯ摂取によるＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３、およびＯＶＡ特異的ＩｇＥ産生抑制効果）
ＢＡＬＢ／ｃ雌性４週齢マウス（チャールズリバー株式会社より購入）を５匹ずつ２群に分け、２０％のＩＭＯ９００Ｐ（昭和産業株式会社製）含む飼料（ＩＭＯ群）またはＩＭＯを含まない飼料（対照群）を試験開始前に４週間にわたって自由摂取させた。以下で詳述する試験期間中も、試験開始前と同様に給餌した。
【００２６】
試験開始の０日目および７日目に、５０μｇの卵白オボアルブミン（ＯＶＡ）および１ｍｇのアルミニウムを腹腔内投与して、ＯＶＡに感作させた。試験開始２１日目にマウスを屠殺し、血清および脾臓を採取し、以下の実験を行った。
【００２７】
（１）血清中のＩｇＥおよびＩｇＧ１量
９６ウェルマイクロプレートに１ウェルあたり１００μｇ／ｍｌのＯＶＡ溶液を１００μｌずつ分注し、３７℃で一晩放置してウェルの表面をＯＶＡでコーティングした。各ウェルを０．０５％Ｔｗｅｅｎ(登録商標)２０溶液（以下、洗浄液１という）で２回洗浄した後、１ウェルあたり１００μｌの１％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）溶液を加えて室温で３０分間ブロッキングし、各ウェルを洗浄液１で２回洗浄した。上記の各マウス血清を適宜希釈し、１ウェル当り５０μｌ加えて７０分間放置した。各ウェルを洗浄液１で２回洗浄した後、ペルオキシダーゼ結合抗マウスＩｇＥ抗体（Ｎｏｒｄｉｃ社製）またはペルオキシダーゼ結合抗マウスＩｇＧ１抗体（Ｚｙｍｅｄ社製）を加え、室温で９０分間放置した。各ウェルを洗浄液１で３回洗浄した後、オルトフェニルジアミン溶液を１ウェルあたり１００μｌ加え、室温で２０分間発色させ、２Ｎ硫酸を１００μｌ加えて反応を停止させた。各ウェルについて４９２ｎｍでの吸光度を測定した。結果を図１に示す。
【００２８】
図１に示すように、ＩＭＯ摂取により、ＩｇＥ産生が抑制されていた。ＩｇＧ１は、Ｔｈ２細胞によって作用を受けて増殖する抗体産生細胞がＩｇＥとともに産生する抗体であり、このＩｇＧ１の産生もＩｇＥと同様に抑制されていた。
【００２９】
（２）脾臓中のＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１３濃度
採取した脾臓を、スライドガラスを用いてすりつぶし、塩化アンモニウムで赤血球を除去することにより脾臓細胞浮遊液を調製した。調製した浮遊液をナイロンウールカラムに添加し、３７℃にて５％ＣＯ２条件下で１時間静置した。２０ｍｌのＲＰＭＩ１６４０培地（ＳＩＧＭＡ社製）によりナイロンウールカラムから溶出させることにより、Ｔ細胞を豊富に含む細胞懸濁液を得た。得られた懸濁液５×１０５細胞を、２００μｇのＯＶＡおよび抗原提示細胞としてマイトマイシンＣ処理した脾臓細胞浮遊液５×１０５細胞とともにＣＯ２条件下で３７℃にて４８時間培養した。培養後、回収した上清中のＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１３の濃度を以下のように測定した。
【００３０】
９６ウェルマイクロプレートに、１ウェルあたり１００μｌの各サイトカインに対する抗ラット抗体溶液（ＰＢＳに懸濁）を加え、室温で一晩放置した。０．０５％Ｔｗｅｅｎ(登録商標)２０を含むＰＢＳ溶液（以下、洗浄液２）で３回洗浄し、１％ＢＳＡを含むＰＢＳ溶液を１ウェルあたり３００μｌ加えて、室温で１時間固定化した。洗浄液２で３回洗浄した後、１ウェルあたり１００μｌの試料を加えて室温で２時間放置した。同時に、試料中の各サイトカイン濃度を算出するために、濃度既知のマウス各サイトカイン標準液の希釈系列を作成し、同様な操作を行った。洗浄液で３回洗浄し、各サイトカインに対するビオチン結合抗マウス抗体を１ウェルあたり１００μｌ加え、室温で２時間放置した。洗浄液２で３回洗浄し、ペルオキシダーゼ結合ストレプトアビジン溶液を１ウェルあたり１００μｌ加え、室温で２０分間放置した。洗浄液２で３回洗浄し、発色液（ＴＭＢ＋溶液（ＤＡＫＯ社製））を１ウェルあたり１００μｌ加えて２０分間反応させた。２Ｎ硫酸を１００μｌ加えることにより反応を停止させ、４５０ｎｍの吸光度を測定した。試料中の各サイトカイン量を、濃度既知の各サイトカイン標準液の吸光度から作成した標準曲線より算出した。結果を図２に示す。
【００３１】
図２に示すように、ＩＭＯ摂取により、ＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１３の濃度が低減していた。上記（１）の結果と合わせると、ＩＬ−４などのサイトカインの産生が抑制されると同時に、ＩｇＥ量も低下しており、したがって、ＩＭＯ摂取によりアレルギー発症を抑制することができると思われる。
【００３２】
（実施例２：鼻アレルギーモデルマウスにおけるＩＭＯ摂取によるアレルギー症状緩和ならびにＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ‐１３、およびＯＶＡ特異的ＩｇＥの産生抑制効果）
上記実施例１と同様にＯＶＡ感作したマウスに対して、試験開始２１日目から２７日目まで２％ＯＶＡ溶液を１０μｌずつ経鼻的に投与した。
【００３３】
２７日目に、経鼻投与直後に１０分間にわたってくしゃみ・鼻かき数を計測した。その結果を図３に示す。ＩＭＯ摂取群において、くしゃみ・鼻かき数とも減少していた。
【００３４】
次いで、経鼻投与１２時間後に血清および頚部リンパ節を採取した。血清については、上記実施例１と同様の操作により、ＯＶＡ特異的ＩｇＥおよびＩｇＧ１産生量を測定した。結果を図４に示す。血清中のＩｇＥおよびＩｇＧ１産生量は、ＩＭＯ摂取群におい低減していた。
【００３５】
頚部リンパ節については、スライドガラスを用いてすりつぶし、細胞浮遊液を調製した。調製した浮遊液をナイロンウールカラムに添加し、３７℃にて５％ＣＯ２条件下で１時間静置した。１０ｍｌのＲＰＭＩ１６４０培地（ＳＩＧＭＡ社製）によってナイロンウールカラムから溶出させることにより、Ｔ細胞を豊富に含む細胞懸濁液を得た。得られた懸濁液５×１０５細胞を、２００μｇのＯＶＡおよび抗原提示細胞としてマイトマイシンＣ処理した脾臓細胞浮遊液５×１０５細胞とともにＣＯ２条件下で３７℃にて４８時間培養した。培養後、回収した上清中のＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１３濃度を、上記実施例１と同様の操作により測定した。その結果を図５に示す。ＩＭＯ摂取により、ＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１３の濃度が低減していた。
【００３６】
以上の結果から、ＩＭＯ摂取により、ＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１３産生が抑制されると同時に、ＩｇＥ量も低下し、さらにアレルギー症状であるくしゃみ・鼻かきを緩和することができる。
【産業上の利用可能性】
【００３７】
本発明のアレルギー抑制剤は、生体内における抗原特異的ＩｇＥ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１３の産生を低下させることが可能であり、アレルギー反応の抑制に有用である。そのため、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、気管支喘息などの各種アレルギー疾患の予防・治療に用いることができる。特に、アレルギー性鼻炎の症状の緩和に有用である。また、本発明のアレルギー抑制剤は、従来から食品として用いられている糖を主成分とし、安全であることが知られているため、医薬品としてだけでなく、健康食品としても利用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】ＩＭＯ摂取マウス群およびコントロールマウス群の血清中のＩｇＥおよびＩｇＧ１量を示すグラフである。（実施例１）
【図２】ＩＭＯ摂取マウス群およびコントロールマウス群の脾臓中のＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１３濃度を示すグラフである。（実施例１）
【図３】ＩＭＯ摂取マウス群およびコントロールマウス群におけるくしゃみ数および鼻かき数を示すグラフである。（実施例２）
【図４】ＩＭＯ摂取マウス群およびコントロールマウス群の血清中のＩｇＥおよびＩｇＧ１量を示すグラフである。（実施例２）
【図５】ＩＭＯ摂取マウス群およびコントロールマウス群の頚部リンパ節中のＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＬ−１３濃度を示すグラフである。（実施例２）
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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