(57)【要約】【課題】            細胞移植療法に有用な細胞バンクを構築する。【解決手段】        哺乳動物のドナーより採取した羊膜を、抗生物質を含む緩衝液中、非凍結条件下にて所定の時間維持する工程と、前記所定時間経過後の羊膜を断片化してインビトロで培養し、羊膜細胞を増殖させる工程と、そして前記増殖した羊膜細胞を−３０℃以下の温度で凍結する工程とを含むことにより、分化多能性幹細胞を含む羊膜細胞を半永久的に凍結保存する。【選択図】            なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物のドナーより採取した羊膜を、抗生物質を含む緩衝液中、非凍結条件下にて所定の時間維持する工程と、
前記所定時間経過後の羊膜を断片化してインビトロで培養し、羊膜細胞を増殖させる工程と、そして
前記増殖した羊膜細胞を−３０℃以下の温度で凍結する工程と、
を含むことを特徴とする分化多能性幹細胞を含む羊膜細胞の保存方法。
【請求項２】
前記哺乳動物がヒトであり、かつ前記羊膜は、ヒトの出産時に採取される請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記非凍結条件が、０〜２５℃の範囲のいずれかの温度である請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
前記所定時間が、４８時間以内の任意の時間である請求項１〜３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
複数の哺乳動物ドナーより採取した羊膜を用いて請求項１〜４のいずれか一項に記載の方法により、それぞれのドナーの羊膜細胞を保存することを特徴とする羊膜細胞バンクの構築方法。
【請求項６】
前記それぞれの羊膜細胞は、各ドナーの遺伝情報と関連付けられている請求項５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳動物の羊膜細胞バンクを構築するための方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
臓器移植は、臓器機能を失ってしまった患者に対し、欠失機能を補助・補完する目的で行われるが、様々な問題を抱えている。臓器移植を困難にしている大きな問題は、第一に、臓器提供者が不足していること、第二に、臓器凍結保存法が確立されていないことである。臓器提供者不足の原因は、移植の際に起こる拒絶反応の克服が困難であるからであり、また、臓器凍結保存法の開発も成功の目途が全く立っていない。そこで、再生医療研究の最先端は、臓器移植の進化的代替法としての細胞移植療法の確立が中心課題となっている。
【０００３】
ヒト胚性幹細胞（ＥＳ細胞）の樹立や、近年の幹細胞研究の飛躍的な進展が細胞移植療法に大きく貢献すると期待されている。細胞移植療法の原理は、細胞の可塑性に基づいている。ある細胞が違う種類の細胞になることができる性質を細胞の可塑性と呼び、例えば、マウス及びラットの骨髄から、多能性を示す細胞が単離できることが報告されている（例えば、非特許文献１参照）。可塑性を持つ細胞は、骨髄に限らず、全ての組織に存在すると考えられるが、未分化な状態を維持している細胞、つまり胎児由来組織中の細胞に多能性幹細胞が含まれている可能性が高いと考えられる。
【０００４】
このような細胞移植療法のための移植源の１つとして、羊膜細胞が挙げられる。羊膜は、羊水に面している上皮細胞層と、その下層で絨毛膜との中間に位置する間葉細胞層からなる。上皮細胞層は胚盤葉上層から分離して形成される外胚葉起源であり、間葉細胞は原始線条が陥入して形成される中胚葉に由来する。羊膜上皮細胞及び間葉系細胞を浮遊培養条件下、ニコチンアミドを添加して２週間培養すると膵島状の細胞塊を形成し、インスリンやグルカゴンなどの膵分化マーカーが発現することが報告されている（例えば、非特許文献２参照）。また、羊膜上皮細胞を種々の分化誘導培地により培養することにより、神経細胞機能を示したり、骨細胞へ分化誘導されることも報告されている（例えば、特許文献１及び非特許文献３参照）。
【０００５】
【特許文献１】特開２００４−２５４６８２号公報
【非特許文献１】Jiang Y, et al., "Pluripotency of mesenchymal stem cells derived from adult marrow." Nature 418, 41-49 (2002)
【非特許文献２】高島誠司、外３名、「羊膜細胞を用いた再生医療の可能性」、再生医療、日本再生医療学会雑誌、２００２年、第１巻、第２号、ｐ．７９−８５
【非特許文献３】桜川宣男、外４名、「羊膜細胞由来の幹細胞」、再生医療、日本再生医療学会雑誌、２００４年、第３巻、第１号、ｐ．５５−６０
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
細胞移植療法のための移植源を保存するためには、技術面と倫理面の両方において克服しなければならない課題がある。技術面では、採取した組織を、雑菌を含まない状態で、生きたまま細胞培養施設に運ぶ条件と、移植が必要となる時まで該組織又は該組織に由来する細胞を保存、例えば凍結保存しておく方法を確立する必要がある。特に、凍結時及び解凍時に受ける凍害は、物理的に細胞の組織を破壊し、解凍後に細胞を培養することを困難にする。一方、倫理面では、ヒトの組織の一部を摘出するという行為が大きな問題であるため、移植源は、例えば法医学領域で汎用される毛髪のような部位を対象とする必要がある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、かかる課題を解決するためになされたものであって、細胞移植療法のための移植源を確保するために、克服しなければならない上記技術的問題及び倫理的問題を同時に解決する方法を提供するものである。
【０００８】
すなわち、第一の視点において、本発明は、分化多能性幹細胞を含む羊膜細胞の保存方法であって、哺乳動物のドナーより採取した羊膜を、抗生物質を含む緩衝液中、非凍結条件下にて所定の時間維持する工程と、前記所定時間経過後の羊膜を断片化してインビトロ（試験管内）で培養し、羊膜細胞を増殖させる工程と、そして前記増殖した羊膜細胞を−３０℃以下の温度で凍結する工程と、を含むことを特徴とする。前記哺乳動物はヒトであり、かつ前記羊膜は、ヒトの出産時に採取されることが好ましい。また、前記非凍結条件は、０〜２５℃の範囲のいずれかの温度であることが好ましい。前記所定時間としては、４８時間以内の任意の時間とすることができる。
【０００９】
別の視点において、本発明は複数の哺乳動物ドナーより採取した羊膜を用いて上記方法により、それぞれのドナーの羊膜細胞を保存することを特徴とする羊膜細胞バンクの構築方法を提供する。前記それぞれの羊膜細胞は、各ドナーの遺伝情報と関連付けられていることが好ましい。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の方法によれば、細胞移植療法に利用可能な可塑性を有する細胞を半永久的に保存することができ、細胞移植が必要な状況になったときはいつでも、細胞を解凍することにより利用することができる。
【００１１】
また、羊膜は移植源となる分化多能性幹細胞を豊富に含んでいるが、出産時に廃棄されてしまうため、本人の意思により保存しても倫理的問題は発生しない。採取は無痛でドナーの負担はなく、自己移植の場合は、拒絶反応や感染症の危険が低下し、ドナー不足の問題も解決されると考えられる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明は、基本的に全てのヒト及び動物の細胞バンクを構築する方法に適用できるが、特に哺乳動物のドナーより採取した羊膜を所定の条件下に維持した後に細胞培養（組織培養）を行い、増殖した羊膜細胞を回収して凍結保存することにより、分化多能性幹細胞を含む羊膜細胞を保存することができる。一般的に生体から採取した組織を細胞培養が可能な施設に運搬するにはある程度の時間を必要とするが、所定の条件下であれば羊膜細胞の活度(viability)を維持した状態で運搬に必要な十分な期間これを維持することができる。その後、該羊膜を直接凍結するのではなく、一旦細胞培養を行って羊膜細胞を増殖させた後、この初代培養細胞を回収して凍結保存するという方法が採用される。この方法により得られた細胞は、半永久的に保存可能である（三井洋司、外４名編著、「機能細胞の分離と培養」、p.４５、東京、丸善、１９８７年）。同時に、ヒトの場合は採取する組織を羊膜とすることで、倫理的な問題も解決される。
【００１３】
本発明の羊膜細胞の保存方法は、以下に詳細に説明するように、羊膜の採取、羊膜の輸送のための維持又は保管、羊膜細胞の培養、及び羊膜細胞の凍結保存などの工程に特徴を有するが、本明細書で用いられる主な用語についてその概念を明確化するために定義しておく。
【００１４】
用語「分化多能性幹細胞」とは、外胚葉、中胚葉および内胚葉系幹細胞から選ばれる少なくとも１種の細胞に分化する能力を有する自己複製可能な幹細胞を意味し、これには、胚性幹細胞（embryonic stem cell：ＥＳ細胞）、胚性生殖細胞（embryonic germ cell：ＥＧ細胞）、胚性癌細胞（embryonal carcinomacell：ＥＣ細胞）、多能性成体前駆細胞（multipotent adult progenitor cells：ＭＡＰ細胞）、成体多能性幹細胞（adult pluripotent stem cell：ＡＰＳ細胞）、骨髄幹細胞などが含まれる。ヒト、サル、マウス、ラット、ハムスター、ウサギ、モルモット、ウシ、ブタ、イヌ、ウマ、ネコ、ヤギ、ヒツジを含む哺乳類、鳥類、爬虫類などの多様な動物から多能性幹細胞が得られるが、通常は哺乳類に由来するものを意味する。
【００１５】
用語「ドナー」とは、本発明の方法に用いる羊膜を採取する被検体をいう。被検体はヒトであるのが好ましいが、獣医学的措置を受けている他の脊椎動物、とりわけ哺乳動物は、ドナーとなり得る。
【００１６】
用語「遺伝情報」とは、生物の種々の形質を規定している遺伝子に関する情報であって、染色体（ゲノム）遺伝子と、染色体外性遺伝子の両方を含む。遺伝子とは、特定の機能性産物をコードする特定の染色体の特定の位置に位置するヌクレオチドの規則正しい配列であるが、当該コード領域に近接する非翻訳・非転写配列も含み得る。そのような非コード配列は、コード配列の転写・翻訳に必要な制御配列又はイントロン等を含み得る。
【００１７】
（羊膜の採取）
出産時に、ドナー（提供者）の羊膜を、抗生物質を含む緩衝液中に採取する。採取は、ドナーとなる哺乳動物の種類によって異なるが、ヒトの場合は、羊膜細胞バンク登録を希望する被験者に医師によりインフォームドコンセントを施行してから行う。抗生物質は細菌増殖とその後に組織感染を阻止又は防止する上で必要である。抗生物質 はペニシリン 、ストレプトマイシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、バシトラシン及びバンコマイシンからなる群より選択される１種又は２種以上を含むがこれらに限定されない。更に、アンホテリシンＢ、ニスタチン及びポリミキシンを含めた抗真菌剤も用いてよい。また、緩衝液としては、細胞の浸透圧を維持できるものであれば、特に制限はなく、純水以外の生理食塩水やＰＢＳ等を用いることができる。
【００１８】
（羊膜の輸送のための維持又は保管）
採取された羊膜は、上記抗生物質を含む緩衝液中にて、非凍結条件下で所定の時間維持する。非凍結条件とは、採取した羊膜が凍結しない条件であり、０℃〜常温までのいずれかの温度に設定することができる。常温とは、好ましくは２５℃付近の温度である。より好ましくは２〜１０℃の温度に維持することができ、最も好ましくは、約４℃である。これらの温度は、当業者に公知の方法で容易に維持することができ、例えば、冷蔵庫や保冷剤の入ったアイスボックスなどを用いることができる。採取した羊膜を輸送するためには、アイスボックスのような携帯可能な装置が好ましい。所定の時間とは、採取した羊膜を細胞培養可能な施設に移すのに必要な時間のことであり、通常４８時間以内の任意の時間に設定することができる。すなわち、４８時間以内であれば、上記非凍結条件下において羊膜細胞の活度(viability)を維持することができるのである。さらに、温度を厳密に調節することによって、この時間を延長することも可能である。
【００１９】
（羊膜細胞の培養）
所定時間経過後の羊膜は、無菌操作ができる装置内、例えば、クリーンベンチ、クリーンルーム、クリーンブース等の中で手術用のハサミ又はメスを用いて切り裂き断片化する。あるいは羊膜にメスの刃を当てて軽くこすり物理的に剥離してもよい。また、トリプシンやコラゲナーゼなどの酵素処理により羊膜細胞を分離することもできる。続いて、仔牛胎児血清を含む細胞培養用液体培地を含むフラスコやシャーレの中で、３７℃にて１５〜３０日間培養し、羊膜細胞を増殖させる。この増殖環境は、細胞が培養される培地、温度、酸素及び炭酸ガス濃度などによって特徴付けられる。培地条件としては、等張生理食塩水、緩衝液、アミノ酸、抗生物質、血清又は血清置換物、及び外来的に添加された因子などを適切な組み合わせにおいて含有することができる。細胞培養に関する一般的技術は、三井洋司ら編著、「機能細胞の分離と培養」丸善、東京、１９８７年、及びAnimal Cell Culture: A Practical Approach 第３版（Masters編、Oxford University Press、2000）等を参照することができる。また、本明細書において参照される細胞培養、細胞生物学実験のための試薬及びキット類はSigma社やAldrich社、Invitrogen/GIBCO社、Clontech社、Stratagene社、Qiagen社、Promega社、Roche Diagnostics社、Becton-Dickinson社、TaKaRa（タカラバイオ株式会社）等の市販業者から入手可能である。
【００２０】
（羊膜細胞の凍結保存）
上記方法により得られた初代培養細胞を回収し、−３０℃以下の温度で凍結保存する。−３０℃以上に温度が上がると水の結晶構造が変化し、細胞死を引き起こすからである（大熊勝治編集「細胞生物学実験法、Ｉ細胞培養法」廣川書店参照）。好ましくは、液体窒素の入ったタンクの中で凍結保存する。通常、１０％程度のジメチルシルホキシド（ＤＭＳＯ）やグリセリンの存在下で、約−１℃／分の速度で冷却し凍結すれば問題ない。
【００２１】
凍結保存された羊膜細胞は、−３０℃以下の温度、好ましくは液体窒素中で半永久的に保存可能である。必要に応じて凍結細胞を解凍し、再培養することによって分化多能性幹細胞を含む羊膜細胞を再生させることができる。凍結細胞の解凍は、例えば、保存されたアンプルを取り出し、直ちに３０〜３７℃の温水にアンプルを漬け、振りながらすばやく融解する。融解した細胞懸濁液を遠心管に移し、増殖培地で５倍以上に希釈し、軽く遠心する。上清を捨て、ＤＭＳＯ濃度を低下させてから再度適当量の培地を加え、細胞数を数えてからディッシュに植え込む。翌日、培地交換し、死細胞や残存ＤＭＳＯを除く。このようにして再生された羊膜細胞は、そのまま、あるいは適当な誘導培地にて分化誘導した後に細胞移植のために用いることができる。
【００２２】
（細胞バンクの構築）
上記方法により凍結保存された複数の哺乳動物ドナーの羊膜細胞は、細胞バンクとして保存、管理される。保存された各ドナーの細胞は、第一には細胞移植のための移植源、好ましくは自己移植のために用いられる。あるいは、組織適合性抗原等の一致した他の個体に適用することもできる。さらに、ＤＮＡによる個体識別、ＤＮＡによる病気や体質の診断、家畜の品種改良のための遺伝子資源などにも利用することができる。このための分子遺伝学、及び遺伝子操作の方法は、当該分野の標準的な参考書籍を参照し得る。これらには、例えば、Molecular Cloning：A Laboratory Manual 第３版（Sambrook & Russell、Cold Spring Harbor Laboratory Press、2001）；Current Protocols in Molecular biology（Ausubelら編、John Wiley & Sons、1987）；Methods in Enzymologyシリーズ（Academic Press）；PCR Protocols: Methods in Molecular Biology（Bartlett & Striling編、Humana Press、2003）などが含まれる。
【００２３】
本発明の１つの実施形態として、保存された各ドナーの細胞は、その必要のあるヒト患者において組織の再構築または再生のために使用され得る。その細胞は、意図された組織部位にその細胞を移植することを可能にし、そして機能的に欠損している領域を再構成または再生する様式で投与される。
【００２４】
１つの例において、神経機能を有する細胞は、処置される疾患により中枢神経系の実質部位またはクモ膜下腔内の部位に直接的に移植される。移植は、１μｌあたり２５，０００〜５００，０００細胞の密度の単一の細胞懸濁物または小さな凝集物を使用して行われる（米国特許第５，９６８，８２９号）。神経細胞移植物の効力は、ＭｃＤｏｎａｌｄら（Ｎａｔ．Ｍｅｄ．５：１４１０，１９９９）によって記載されるように、急性的に損傷した脊髄についてのラットモデルにおいて評価され得る。首尾よい移植は、損傷において２〜５週間後に存在する移植片由来の細胞（星状細胞、稀突起神経膠細胞、および／またはニューロンに分化した）および損傷した末端から脊髄に沿っての移動、ならびに歩行（ｇａｔｅ）、協調（ｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｏｎ）、および重量負荷における改善を示す。
【００２５】
ヒト羊膜上皮を初代培養して、そこから少なくとも神経系幹細胞を含む幹細胞の集団が単離されている（上掲特許文献１及び非特許文献３参照）。これによると、ヒト羊膜上皮を初代培養し、得られた初代培養細胞をヘキスト３３３４２という蛍光色素を用いて染色したところ、この色素によりあまり染色されない細胞集団（ＳＰ細胞）が得られる。このＳＰ細胞は、幹細胞に特徴的なＯｃｔ−４マーカー遺伝子の発現が認められ幹細胞であることが確認されている。このＳＰ細胞は、ラットの脳に移植することができ、また、β−ガラクトシダーゼ、β−グルコシダーゼのようなライソゾーム内酵素を多く発現する。ライソゾーム病は、脳に好発し、代表的な脳代謝病の一種であるから、これらの酵素が欠損する疾患の治療用細胞として利用できる可能性がある。
【００２６】
その他の例において、重症心筋梗塞などにより心筋細胞が機能不全に陥り、さらに線維芽細胞の増殖、間質の線維化が進行し、心不全を呈するようになった患者に対し、心筋細胞を移植する治療が試みられている。首尾よい処置は、瘢痕の領域を減少し、瘢痕の拡大を制限し、そして、収縮期の血圧、拡張期の血圧、そして生じた血圧によって決定されるように、心機能を改善する。さらに、肝細胞および肝細胞前駆体は、肝障害を修復する能力についての動物モデルにおいて評価され得る。１つのそのような例は、Ｄ−ガラクトサミンの腹腔内注入によって引き起こされる傷害である（Ｄａｂｅｖａら、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１４３：１６０６，１９９３）。処置の効力は、肝細胞マーカーについての免疫組織化学的染色、増殖している組織において小管構造が形成されるか否かの顕微鏡的決定、および肝細胞特異的タンパク質の合成を回復させる処置の能力によって決定され得る。肝細胞は、直接的投与によって、または劇症肝不全の後に被験体の肝組織がそれ自体を再生する間に一時的に肝機能を提供する生物補助（ｂｉｏａｓｓｉｓｔ）デバイスの一部として、治療において使用され得る。
【００２７】
ヒトまたは獣医学的治療のために有用である本発明に従って再生される細胞は、最適には、薬学的組成物中に供給され得、ヒト投与のために十分に滅菌した条件下で調製される等張性の賦形剤を含む。その組成物は、組織再生、または治療的に重要な代謝機能を回復させることにおける細胞の使用について書かれた説明書とともにパッケージされ得る。
【００２８】
本発明の他の実施形態において、保存された各ドナーの細胞は、ＤＮＡによる個体識別、ＤＮＡによる病気や体質の診断に用いることができる。細胞からのＤＮＡ及びＲＮＡを分離、精製するための方法は多数知られている。典型的には細胞からＤＮＡが単離される。この場合、ます、細胞を界面活性剤溶液で溶解し、溶解液中のタンパク質成分をタンパク質分解酵素で消化する。次に溶解液をフェノールで抽出して細胞成分の大部分を除去し、残余の水相をさらに処理してＤＮＡを単離する。
【００２９】
このようにして得られたＤＮＡを用いて、各ドナーの遺伝情報を決定する。遺伝情報の最も典型的なものは、種々の遺伝子の多型性に関する情報であり、一塩基多型（ＳＮＰｓ）、ハプロタイプ、遺伝子型、及びアレル（対立遺伝子）型を含むがこれらに限定されない。これらの遺伝情報は、制限酵素断片長（ＲＦＬＰ）分析、シークエンシング、ハイブリダオゼーション、オリゴヌクレオチドライゲーションアッセイ、ライゲーションローリングサークル増幅、ポリメラーゼプルーフリーディング法、アレル特異的ＰＣＲ及びインベーダー法を含む。
【００３０】
得られた遺伝情報に基づき、各ドナーの個体識別、各種病気や体質の診断、例えば、糖尿病やアルツハイマー病などの特定の病気のなりやすさ、薬剤耐性や感受性の違いなどの診断を行うことができる。好ましい実施形態において、それぞれの羊膜細胞は、これらの遺伝情報と関連付けられており、これにより将来の病気の可能性を予測し、将来において細胞移植が必要となる場合には、適切に対処することができる。例えば、特定の遺伝子が欠損したり、機能が低下しているドナーに対しては、それらの遺伝子を相同的組換えなどによって人為的に導入したり、又は活性化することによって適切な細胞移植源を提供することができる。
【実施例１】
【００３１】
［羊膜細胞の保存］
細胞培養液ＭＥＭ（シグマ社製）、ＰＢＳ（シグマ社製）及び生理食塩水のそれぞれに、ペニシリン３００Ｕ／ｍｌ、ストレプトマイシン３００μｇ／ｍｌを加え、プラスチック製の５０ｍｌ遠心管（ファルコン社製）に入れて分娩室へあずけておいた。帝王切開で得られた羊膜を採取後、２ｃｍ×３ｃｍの断片に切断した後、上皮と絨毛に分け、すぐに上記３種類の基礎液に入れ、氷冷した状態で分娩室の外へ搬出した。
【００３２】
上記羊膜断片を氷冷した状態のまま培養室へ運び、それぞれの羊膜断片の一部をクリーンベンチ内の細胞培養用プラスチックシャーレ（ファルコン社製）に移し、滅菌済みのピンセットとメス及びハサミで細切した。細切しなかった羊膜は、それぞれの基礎液に戻し、細胞培養を開始するまで２４時間及び４８時間、４℃の冷蔵庫で保管した。
【００３３】
細切した羊膜を、予め仔牛血清１０％、ペニシリン３００Ｕ／ｍｌ、ストレプトマイシン３００μｇ／ｍｌを含むＭＥＭ１０ｍｌの入った細胞培養用２５ｍｌフラスコ（ファルコン社製）に移し、３７℃に保たれたインキュベータ中で培養した。
【００３４】
培養開始後３日目までは、仔牛血清１０％、ペニシリン３００Ｕ／ｍｌ、ストレプトマイシン３００μｇ／ｍｌを含むＭＥＭ１０ｍｌで培養を続け、４日目以降は、抗生物質の濃度を１／３に低下させた培養液（１０％仔牛血清入りのＭＥＭ１０ｍｌ）で培養を続けた。
【００３５】
羊膜採取直後、並びに採取後２４時間及び４８時間経過後に細胞培養を開始したときのいずれの条件でも羊膜細胞は順調に増殖し、約１５日間でシャーレ一面が細胞で覆われた。図１は採取した羊膜を２４時間ＭＥＭ中で保存し、その後に細胞培養を開始した場合の９６時間経過後の写真である。採取した羊膜断片の周囲に羊膜上皮細胞が増殖していることが分かる。図２は羊膜採取後４８時間ＰＢＳ中で保存し、その後に細胞培養を開始して１５日間経過後の羊膜上皮細胞の写真である。シャーレ一面が細胞で覆われていることが分かる。
【００３６】
このようにして得られた初代培養細胞を回収し、液体窒素の入ったタンクの中で凍結保存した。凍結保存した細胞を解凍し、再び培養を行ったところ、羊膜細胞が再び増殖することを確認した。また、この増殖した羊膜細胞は、適切な培地で培養することにより所望の組織へ分化可能な、多能性幹細胞を含んでいることは明らかである。
【産業上の利用可能性】
【００３７】
既存の細胞バンクには骨髄バンクとさい帯血バンクがある。骨髄バンクの登録者は年間３万人（累積２０万人）を超え、骨髄バンクより後発のさい帯血バンク登録者も２万人を突破している。しかし、これらの細胞バンクが役立つのは、白血病になってしまった場合のみで、その発症率は１０万人に１人と低い。本発明の方法により構築される羊膜細胞バンクには、可塑性を有する細胞が保存されるため、多くの病気や臓器移植への利用が期待され、既存の細胞バンク以上に利用価値が高い。
【図面の簡単な説明】
【００３８】
【図１】羊膜採取後２４時間、４℃にてＭＥＭ中で保管した羊膜を用いて細胞培養を開始し、９６時間経過したときの羊膜上皮細胞の写真である。
【図２】羊膜採取後４８時間、４℃にてＰＢＳ中で保管した羊膜を用いて細胞培養を開始し、１５日間経過したときの羊膜上皮細胞の写真である。
【図１】
2006197867.tif 000002
【図２】
2006197867.tif 000003