(57)【要約】      （修正有）【課題】コラーゲン合成促進剤および皮膚外用剤の提供。【解決手段】α−トコフェリルリン酸、又はそのリン酸基をエーテル化、エステル化、ポリオキシエチレン化した誘導体／又はその塩とコラーゲンペプチドとを含有するコラーゲン合成促進剤及び皮膚外用剤。これら誘導体又はその塩とコラーゲンペプチドとの混合物は、コラーゲン合成促進効果に優れ、シワやタルミの改善に有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
化学式（１）で表される化合物および/またはこれらの塩とコラーゲンペプチドを配合することを特徴とするコラーゲン合成促進剤。
2006143660.tif 000005
【請求項２】
Ｒ１、Ｒ２が水素原子であることを特徴とする請求項１記載のコラーゲン合成促進剤。
【請求項３】
化学式（１）で表される化合物および/またはこれらの塩とコラーゲンペプチドを配合することを特徴とする皮膚外用剤。
【請求項４】
コラーゲンペプチドが魚由来のコラーゲンペプチドである請求項３記載の皮膚外用剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、コラーゲン合成促進剤及び皮膚外用剤に関する。より具体的には、皮膚に対するなじみがよく、皮膚のカサツキ等の肌荒れを防止し、シワを改善するコラーゲン合成促進剤及び皮膚外用剤である。
【背景技術】
【０００２】
真皮線維芽細胞により合成されるコラーゲンは、肌の弾力を保つのに重要な成分として知られている。シワやタルミの原因として、炎症や老化によりコラーゲン量が低下することが挙げられることから、シワやタルミを改善するためには、コラーゲンの合成を促進することが重要であると考えられている。
【０００３】
近年、コラーゲンペプチドには線維芽細胞におけるコラーゲン合成の促進作用が明らかとなり、保湿性や皮膚に対する使用感の良さから、コラーゲンペプチドを配合した老化防止剤およびコラーゲン産生促進剤が提供されている（特許文献１〜３参照）。一方、化学式（１）で表される水溶性ビタミンＥ誘導体は皮膚外用剤として公知となっているが（特許文献４〜８参照）、コラーゲンペプチドと併用することによるコラーゲン合成およびシワ、タルミ改善の相乗効果については報告されていない。
【特許文献１】特開平１１−３１５４６１
【特許文献２】特開２０００−３０９５２１
【特許文献３】特開２００３−１３７８０７
【特許文献４】特公平１１−１９９４２４
【特許文献５】特公平１１−１９９４６５
【特許文献６】特公２００３−１７１２８１
【特許文献７】特公２００３−３２７５０７
【特許文献８】特公２００４−２６８１７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
コラーゲンペプチドにシワ改善効果が認められるが、それだけでは効果は充分ではなく、より効果の高いものが望まれている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
このような事情により、本発明者らは鋭意研究検討した結果、化学式（１）で表される化合物および/またはそれらの塩とコラーゲンペプチドを組み合わせることによりコラーゲン合成促進効果、シワ、タルミの改善効果が増大することを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００６】
本発明の化学式（１）は、天然由来のものを利用することができるほか、トコフェロールから常法により合成でき、下記の文献も参考にできる。
【０００７】
【特許文献９】特公昭６１−２０５８３
【特許文献１０】特公平３−３２５５８
【０００８】
また、本発明においては化学式（１）の塩も使用可能であり、塩の種類は限定されないが、一般的にはナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属塩が用いられる。
【０００９】
本発明に用いられる化合物の量は、剤型や期待する効果の程度により異なるが、通常０．００１重量％以上、好ましくは０．１〜５０重量％程度配合するのがよい。０．００１重量％未満では十分な効果は望みにくい場合があり、５０重量％を超えて配合した場合、効果の増強は認められにくく不経済である。
【００１０】
本発明に用いられるコラーゲンペプチドの出発原料であるコラーゲン成分またはゼラチン成分は、牛、豚、鳥などの骨、皮、腱または魚類から抽出したものであれば、いずれをも用いることができる。好ましくは、ヒラメ、鯛、カレイ、キンメダイ、舌平目、鮭、カラフトマス等の魚類の骨、腱、鱗、皮、浮袋等から抽出されたものが用いられる。これらの原料からのコラーゲン成分またはゼラチン成分の抽出・精製は、通常公知の方法を用いて行うことができる。
【００１１】
本発明に用いられるコラーゲンペプチドは、コラーゲン成分またはゼラチン成分を加水分解して得ることができる。加水分解に用いる酵素としては、トリプシン、キモトリプシン、ズブチリシン、エラスターゼ、プロリン特異性プロテアーゼ、ストレプトコッカス属の微生物が産生するプロテアーゼ、アスペルギルス属の微生物が産生するプロテアーゼ、ストレプトミセス属の微生物が産生するプロテアーゼ、リゾープス属の微生物が産生するプロテアーゼ、バチラス属の微生物が産生するプロテアーゼ、乳酸菌が産生するプロテアーゼ等が利用できる。また、ペプシン処理によるアテロ化等の処理をして用いても良い。さらには、濃縮乾固、噴霧乾燥、凍結乾燥等の処理を行い、乾燥物として用いても良い。また、一般に市販されているものを用いることもできる。
【００１２】
本発明で使用されるコラーゲンペプチドの配合量は特に限定されないが、本発明の皮膚外用剤全量に対し、固形分に換算して０．００００１％以上、特に０．００１〜３０％とすると、十分なシワ改善効果が得られ、保存安定性や使用感等に優れるので好ましい。０．００００１％未満では十分な効果は望みにくい場合があり、３０％を超えて配合した場合、効果の増強は認められにくく不経済である。また、添加の方法については、あらかじめ加えておいても、製造途中で添加しても良く、作業性を考えて適宜選択すればよい。
【００１３】
本発明のコラーゲン合成促進剤は、化粧品、医薬部外品、医薬品及び食品のいずれにも用いることができ、その剤型としては、例えば、散剤、丸剤、錠剤、注射剤、座剤、乳剤、カプセル剤、顆粒剤、液剤（チンキ剤、流エキス剤、酒精剤、懸濁剤、リモナーデ剤等を含む）、化粧水、クリーム、乳液、ゲル剤、エアゾール剤、パック、洗浄剤、浴用剤、ファンデーション、打粉、口紅、軟膏、パップ剤、ペースト剤、プラスター剤、エッセンス、錠菓、飲料等が挙げられる。また、本発明の効果を損なわない範囲内で、通常の化粧品、医薬部外品、医薬品等に用いられる各種成分、例えば油性成分、乳化剤、保湿剤、増粘剤、薬効成分、防腐剤、顔料、粉体、ｐＨ調整剤、紫外線吸収剤、抗酸化剤、香料等を適宜配合することができる。
【００１４】
油性成分としては、例えば流動パラフィン、ワセリン、マイクロクリスタリンワックス、スクワラン、ホホバ油、ミツロウ、カルナウバロウ、ラノリン、オリーブ油、ヤシ油、高級アルコール、脂肪酸、高級アルコールと脂肪酸のエステル、シリコーン油等が挙げられる。乳化剤としては、例えばポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等の非イオン界面活性剤、ステアロイル乳酸ナトリウム等のアニオン界面活性剤、大豆リン脂質等の両性界面活性剤、塩化アルキルトリメチルアンモニウム等のカチオン界面活性剤が挙げられる。保湿剤としては、例えばグリセリン、ソルビトール、キシリトール、マルチトール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、１，３−ブチレングリコールなどが挙げられる。増粘剤としては、例えばカルボキシビニルポリマー、キサンタンガム、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、ゼラチン、ベントナイト等の粘土鉱物等が挙げられる。薬効成分としては、例えば各種ビタミンおよびその誘導体、アラントイン、グリチルリチン酸およびその誘導体、各種動植物抽出物等が挙げられる。
【発明の効果】
【００１５】
本発明の化学式（１）で表される化合物および/またはこれらの塩とコラーゲンペプチドを併用することによりコラーゲンペプチド単独の場合と比較してコラーゲン合成促進効果に優れていた。また、これらの成分を含む皮膚外用剤は、安全でシワ、タルミの改善効果に優れていた。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
次に本発明による効果を具体的な実施例を挙げ説明する。これらの実施例は効果を具体的に説明するもので、発明の範囲を限定するものではない。実施例中の配合量は重量％である。
【実施例１】
【００１７】
製造例１  ペプシン加水分解によるコラーゲンペプチド１
コラーゲンタンパクとして、ヒラメ皮より調製したゼラチン３０ｇを蒸留水３００ｍＬに加温溶解した。ペプシン（日本バイオコン社製）３００ｍｇを加えて、酸にてｐＨ３．５に調整した後５０℃で１時間放置した。反応終了後、反応液を中和し、１００℃で１５分間加熱して酵素を失活させた。次いで活性炭素処理後、凍結乾燥して平均分子量５０００のコラーゲンペプチドを得た。
【００１８】
製造例２  ペプシン加水分解によるコラーゲンペプチド２
製造例１における活性炭素処理液を蒸留水で平衡化したＢｉｏ−Ｇｅｌ  Ｐ−２（ＢＩＯ−ＲＡＤ社製）によるゲル濾過クロマトグラフィーを行い、平均分子量が２８０、５００、１０００の画分を凍結乾燥した。
【００１９】
製造例３  パパイン加水分解によるコラーゲンペプチド３
コラーゲンタンパクとして、鮭皮より調製したゼラチン３０ｇを蒸留水３００ｍＬに加温溶解した。パパイン（天野エンザイム社製）３００ｍｇを加え、アンモニア水にてｐＨ７．０に調製した後５０℃で１時間放置した。反応終了後、反応液を１００℃で１５分間加熱し、酵素を失活させた。次いで活性炭素処理後、凍結乾燥し平均分子量１００００のコラーゲンペプチドを得た。
【００２０】
製造例４  パパイン加水分解によるコラーゲンペプチド４
製造例３の活性炭素処理液を蒸留水で平衡化したＢｉｏ−Ｇｅｌ  Ｐ−２（ＢＩＯ−ＲＡＤ社製）によるゲル濾過クロマトグラフィーを行い、平均分子量が５００、２０００の画分を凍結乾燥した。
【００２１】
製造例５  コラゲナーゼ加水分解によるコラーゲンペプチド５
コラーゲンタンパクとして、鯛鱗より調製したゼラチン３０ｇを蒸留水３００ｍＬに加温溶解した。コラゲナーゼタイプＩ（Ｗｏｒｔｈｉｎｇｔｏｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｒｐ製）３００ｍｇを加え、アンモニア水にてｐＨ７．５に調製した後３７℃で１時間放置した。反応終了後、反応液を１００℃で１５分間加熱し、酵素を失活させた。次いで活性炭素処理後、凍結乾燥し平均分子量１０００のコラーゲンペプチドを得た。
【００２２】
製造例６  コラゲナーゼ加水分解によるコラーゲンペプチド６
製造例５の活性炭素処理液を蒸留水で平衡化したＢｉｏ−Ｇｅｌ  Ｐ−２（ＢＩＯ−ＲＡＤ社製）によるゲル濾過クロマトグラフィーを行い、平均分子量４００の画分を凍結乾燥した。
【００２３】
製造例７  パパインおよびバチラス属の微生物が産生するプロテアーゼ加水分解によるコラーゲンペプチド７
コラーゲンタンパクとして、カレイ皮より調製したゼラチン３０ｇを蒸留水３００ｍＬに加温溶解した。パパイン（天野エンザイム社製）、バチラス属の微生物が産生するプロテアーゼ（天野エンザイム社製）を各３００ｍｇ加え、アンモニア水にてｐＨ７．５に調製した後５０℃で３時間放置した。反応終了後、反応液を１００℃で１５分間加熱し、酵素を失活させた。次いで活性炭素処理後、凍結乾燥し平均分子量３０００のコラーゲンペプチドを得た。
【００２４】
製造例８  パパインおよびバチラス属の微生物が産生するプロテアーゼ加水分解によるコラーゲンペプチド８
製造例７の活性炭素処理液を蒸留水で平衡化したＢｉｏ−Ｇｅｌ  Ｐ−２（ＢＩＯ−ＲＡＤ社製）によるゲル濾過クロマトグラフィーを行い、平均分子量８００の画分を凍結乾燥した。
【実施例２】
【００２５】
本発明の薬効成分は、処方例として下記の製剤化を行うことができる。
【００２６】
処方例１  クリーム
処方                                                    配合量
１．コラーゲンペプチド（平均分子量５００、製造例４）  １０．０重量％
２．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム              １．０
３．スクワラン                                          ５．５
４．オリーブ油                                          ３．０
５．ステアリン酸                                        ２．０
６．ミツロウ                                            ２．０
７．ミリスチン酸オクチルドデシル                        ３．５
８．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）    ３．０
９．ベヘニルアルコール                                  １．５
１０．モノステアリン酸グリセリン                        ２．５
１１．香料                                              ０．１
１２．１，３−ブチレングリコール                        ８．５
１３．パラオキシ安息香酸エチル                          ０．０５
１４．パラオキシ安息香酸メチル                          ０．２
１５．精製水にて全量を１００とする
[製造方法]成分３〜１０を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１、２および１２〜１５を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１１を加え、さらに３０℃まで冷却して製品とする。
【００２７】
比較例１  従来のクリーム
処方例１において、ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウムを精製水に置き換えたものを従来のクリームとした。
【００２８】
処方例２  化粧水
処方                                  配合量
１．コラーゲンペプチド（平均分子量８００、製造例８）    ２．０重量％
２．ｄ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム                ０．５
３．１，３−ブチレングリコール                          ８．０
４．グリセリン                                          ２．０
５．キサンタンガム                                      ０．０２
６．クエン酸                                            ０．０１  
７．クエン酸ナトリウム                                  ０．１
８．エタノール                                          ５．０
９．パラオキシ安息香酸メチル                            ０．１
１０．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油（４０Ｅ．Ｏ．）    ０．１
１１．香料                                              適量
１２．精製水にて全量を１００とする
[製造方法]成分１〜７および１２と、成分８〜１１をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合し濾過して製品とする。
【００２９】
処方例３  乳液  
処方                                                    配合量
１．コラーゲンペプチド（平均分子量５００、製造例４）    ５．０重量％
２．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ジナトリウム            ２．０
３．スクワラン                                          ５．０
４．オリーブ油                                          ５．０
５．ホホバ油                                            ５．０
６．セタノール                                          １．５
７．モノステアリン酸グリセリン                          ２．０
８．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）    ３．０
９．ポリオキシエチレンソルビタン
モノオレエート（２０Ｅ．Ｏ．）  ２．０
１０．香料                                              ０．１
１１．プロピレングリコール                              １．０
１２．グリセリン                                        ２．０
１３．パラオキシ安息香酸メチル                          ０．２
１４．精製水にて全量を１００とする
[製造方法]成分３〜９を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１、２および１１〜１４を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化して、かき混ぜながら冷却し、４５℃で成分１０を加え、さらに３０℃まで冷却して製品とする。
【００３０】
処方例４  ゲル剤  
処方                                                    配合量
１．コラーゲンペプチド（平均分子量１０００、製造例５）  ０．５重量％
２．ｄ−α−トコフェリルリン酸カリウム                  ０．３
３．エタノール                                          ５．０
４．パラオキシ安息香酸メチル                            ０．１
５．ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油                      ０．１
６．香料                                                適量
７．１，３−ブチレングリコール                          ５．０
８．グリセリン                                          ５．０
９．キサンタンガム                                      ０．１
１０．カルボキシビニルポリマー                          ０．２
１１．水酸化カリウム                                    ０．２
１２．精製水にて全量を１００とする
成分３〜６と、成分１、２および７〜１２をそれぞれ均一に溶解し、両者を混合して製品とする。
【００３１】
処方例５  軟膏
処方                                                    配合量
１．コラーゲンペプチド（平均分子量１０００、製造例２）  ５．０重量％
２．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム              ０．１
３．ポリオキシエチレンセチルエーテル（３０Ｅ．Ｏ．）    ２．０
４．モノステアリン酸グリセリン                        １０．０
５．流動パラフィン                                      ５．０
６．セタノール                                          ６．０
７．パラオキシ安息香酸メチル                            ０．１
８．プロピレングリコール                              １０．０
９．精製水にて全量を１００とする
[製造方法]成分３〜６を加熱溶解して混合し、７０℃に保ち油相とする。成分１、２および７〜９を加熱溶解して混合し、７５℃に保ち水相とする。油相に水相を加えて乳化し、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３２】
処方例６  パック
処方                                                    配合量
１．コラーゲンペプチド（平均分子量５００、製造例４）    ３．０重量％
２．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸カリウム                ０．２
３．ポリビニルアルコール                              １２．０
４．エタノール                                          ５．０
５．１，３−ブチレングリコール                          ８．０
６．パラオキシ安息香酸メチル                            ０．２
７．パラオキシエチレン硬化ヒマシ油（２０Ｅ．Ｏ．）      ０．５
８．クエン酸                                            ０．１
９．クエン酸ナトリウム                                  ０．３
１０．香料                                              適量
１１．精製水にて全量を１００とする
[製造方法]成分１〜１１を均一に溶解し製品とする。
【００３３】
処方例７  ファンデーション    
処方                                                    配合量
１．コラーゲンペプチド（平均分子量１０００、製造例２）  １．０重量％
２．ｄ−α−トコフェリルリン酸ジナトリウム              ０．０５
３．ステアリン酸                                        ２．４
４．ポリオキシエチレンソルビタン
モノステアレート（２０Ｅ．Ｏ．）  １．０
５．ポリオキシエチレンセチルエーテル（２０Ｅ．Ｏ．）    ２．０
６．セタノール                                          １．０
７．液状ラノリン                                        ２．０
８．流動パラフィン                                      ３．０
９．ミリスチン酸イソプロピル                            ６．５
１０．パラオキシ安息香酸ブチル                          ０．１
１１．カルボキシメチルセルロースナトリウム              ０．１
１２．ベントナイト                                      ０．５
１３．プロピレングリコール                              ４．０
１４．トリエタノールアミン                              １．１
１５．パラオキシ安息香酸メチル                          ０．２
１６．二酸化チタン                                      ８．０
１７．タルク                                            ４．０
１８．ベンガラ                                          １．０
１９．黄酸化鉄                                          ２．０
２０．香料                                              適量
２１．精製水にて全量を１００とする
[製造方法]成分３〜１０を加熱溶解し、８０℃に保ち油相とする。成分２１に成分１１をよく膨潤させ、続いて、成分１、２および１２〜１５を加えて均一に混合する。これに粉砕機で粉砕混合した成分１６〜１９を加え、冷却し、４５℃で成分２０を加え、かき混ぜながら３０℃まで冷却して製品とする。
【００３４】
処方例８  浴用剤  
処方                                                    配合量
１．コラーゲンペプチド（平均分子量１０００、製造例５）２０．０重量％
２．ｄｌ−α−トコフェリルリン酸ナトリウム              ０．１
３．炭酸水素ナトリウム                                ５０．０
４．黄色２０２号                                        適量
５．香料                                                適量
６．無水硫酸ナトリウムにて全量を１００とする
[製造方法]成分１〜６を均一に混合し製品とする。
【００３５】
次に、本発明の効果を詳細に説明するため、実験例を挙げる。
【００３６】
実験例１  コラーゲン合成促進試験
コンフルエントな状態の正常ヒト皮膚線維芽細胞に３０ｍＪ／ｃｍ２の紫外線Ｂ波を処置し、試料を添加したＥａｇｌｅ'ｓ  ＭＥＭ培地にてさらに２４時間培養した後、総ＲＮＡの抽出を行った。正常ヒト皮膚線維芽細胞から抽出した総ＲＮＡを基にＲＴ−ＰＣＲ法によりコラーゲンｍＲＮＡ発現量の測定を行った。ＲＴ−ＰＣＲ法にはＴａＫａＲａ  ＲＮＡ  ＰＣＲ  Ｋｉｔ（ＡＭＶ）Ｖｅｒ．２．１を用いた。また、内部標準としてはＧＡＰＤＨを用いた。その他の操作は定められた方法に従い、ＰＣＲ反応液をアガロースゲル電気泳動に供し、コラーゲン及びＧＡＰＤＨのｍＲＮＡ発現をバンドとして確認した。これらのバンドをポラロイドカメラにて撮影してデンシトメーターを用いて定量化し、コラーゲンｍＲＮＡの発現量を内部標準であるＧＡＰＤＨ  ｍＲＮＡ発現量に対する割合として求めた。合成促進率の計算は、この例では、用いたデンシトメーターの数値を利用して、次式により計算した。その結果、表１および２に示すように、化学式（１）で表される化合物および/またはそれらの塩とコラーゲンペプチドの混合物は、コラーゲンペプチドのみと比較して優れたコラーゲン合成促進効果を示した。なお、化学式（１）で表される化合物および/またはそれらの塩自体には、１００μＭでコラーゲン合成促進効果はない。
【００３７】
合成促進率（％）＝Ａ／Ｂ×１００    
Ａ：試料を添加した場合のデンシトメーターの数値
Ｂ：試料を添加しない場合のデンシトメーターの数値
【００３８】
【表１】
2006143660.tif 000002
【００３９】
【表２】
2006143660.tif 000003
【００４０】
実験例２  使用試験
処方例１のクリーム及び比較例１のクリームを用いて、各々女性３０人（３１〜５０才）を対象に２ヶ月間の使用試験を行った。使用後、シワ、たるみ、肌の弾力についてのアンケート調査を行って、老化防止効果を判定した。
【００４１】
これらの結果を表２に示した。本発明のコラーゲン合成促進剤は優れた老化防止効果を示した。なお、試験期間中皮膚トラブルは一人もなく、安全性においても問題なかった。
【００４２】
【表３】
2006143660.tif 000004
【００４３】
その他のコラーゲン合成促進剤について同様な使用試験を行ったところ、いずれも安全で優れた老化防止・改善効果を示した。
【産業上の利用可能性】
【００４４】
本発明の化学式（１）で表される化合物および／またはその塩とコラーゲンペプチドを併用することにより、安全でシワ、タルミの改善効果に優れたコラーゲン合成促進剤および皮膚外用剤を提供できる。