(57)【要約】【課題】  植物種子に作用して発芽率促進効果作用を示し、また、植物根に作用して生長促進作用を示し、環境や生態系に悪影響を及ぼさず、低コストで使用が簡便な微生物資材を提供する。【解決手段】  本発明は、微生物を植物種子に作用させることによって、植物種子の発芽率を向上させ、また発芽した根に作用して植物の生長を促進するものであって、トリコデルマ属またはバチルス属に属し、植物種子発芽率向上作用（及び更に生長促進作用）を有する微生物を有効成分とする植物種子発芽率向上剤を提供する。有効成分微生物としては、例えば、Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｏｖｉｒｉｄｅ  ＳＫＴ−１（ＦＥＲＭ  Ｐ−１６５１０）、同ＳＫＴ−２（ＦＥＲＭ  Ｐ−１６５１１）、同ＳＫＴ−３（ＦＥＲＭ  Ｐ−１７０２１）、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．  Ｄ７４７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−８２３４）等が例示される。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
トリコデルマ属又はバチルス属に属し植物種子発芽率向上作用を有する微生物を有効成分としてなること、を特徴とする植物種子発芽率向上剤。
【請求項２】
該微生物が更に植物の生長促進作用を有するものであること、を特徴とする請求項１に記載の植物種子発芽率向上剤。
【請求項３】
トリコデルマ属に属する微生物がトリコデルマ・アトロビリデであること、を特徴とする請求項１又は２に記載の植物種子発芽率向上剤。
【請求項４】
トリコデルマ・アトロビリデがトリコデルマ・アトロビリデ  ＳＫＴ−１菌株、トリコデルマ・アトロビリデ  ＳＫＴ−２菌株、トリコデルマ・アトロビリデ  ＳＫＴ−３菌株から選ばれる少なくともひとつであること、を特徴とする請求項３に記載の植物種子発芽率向上剤。
【請求項５】
バチルス属に属する微生物が、バチルス・エスピー  Ｄ７４７であること、を特徴とする請求項１又は２に記載の植物種子発芽率向上剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の植物種子発芽率向上剤で植物種子又は植物生育土壌を処理すること、を特徴とする植物種子発芽率向上方法。
【請求項７】
植物種子に作用して発芽率を向上させ、また、発芽した根に作用して生長を促進すること、を特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項８】
請求項１〜５のいずれか１項に記載の植物種子発芽率向上剤で処理してなる植物種子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物種子発芽率向上剤に関するものであり、更に詳細には、本発明は、植物種子発芽率向上作用と植物生長促進作用を併せ持つ微生物を利用するものであって、その微生物を植物種子または植物生育土壌に適用することによって植物種子の発芽率を向上させ、植物の生長を促進する方法に関する。さらに、これらの微生物を付着せしめた新規植物種子自体にも関するものである。
【背景技術】
【０００２】
農業の近代化に伴い、近年、栽培品種の多くは雑種第一代（Ｆ1）の種子が苗生産に用いられている。この種子は高価であるため、特にその発芽率の向上が求められている。しかしながら、発芽率の向上はＦ1の種子のみに限定されるものではなく、各種の植物種子について、その発芽率を向上させることは、農業及び園芸の技術分野において極めて重要な課題となっている。
【０００３】
従来より発芽率の向上については研究が行われており、いくつかの提案がなされている（特許文献１、２、３）。しかしながら、これらはいずれも化合物を利用するものであって、微生物を利用するものではない。
【０００４】
一方、植物の生長を促進することも農業および園芸の分野において極めて重要な課題であり、これまでにも植物生長促進作用のある化合物として植物生長ホルモンや植物生長調節物質などが報告されている。また、近年では、植物根にシュードモナス属（例えば、非特許文献１）などの細菌やフォーマ属糸状菌（例えば、非特許文献２）などの土壌微生物を作用させることによって植物の生長促進を図る試みが行われている。
【特許文献１】特許第３４７６１７２号公報
【特許文献２】特開平１０−８７４１３号公報
【特許文献３】特開平１０−１８２３１３号公報
【非特許文献１】「Ｐｈｙｔｏｐａｔｈｏｌｏｇｙ」、６８、１３７７〜１３８３
【非特許文献２】「拮抗微生物による作物病害の生物防除」、ｐ．２００、全国農村教育協会）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
既述したように、植物種子の発芽率の向上が重要な課題であることは多言をようしないが、発芽した植物根についてもこの生長を促進することも重要な課題である。このような技術の現状に鑑み、本発明は、これらの課題のひとつを解決するだけでなく、両方の課題を同時に解決するという非常に困難な技術課題をあえて設定した。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、上記課題を解決するためになされたものであり、しかも化合物系農業用資材の利用が安全性の面や環境汚染の面等から敬遠される現状に鑑み、微生物資材の利用によって解決することとした。すなわち、本発明は、未発芽の種子に作用させて発芽率を向上させ、かつ発芽した植物根に作用し、植物生長促進作用を併せ持つ微生物資材を開発することを課題とした。
【０００７】
発明者らは、これらの課題を解決するため莫大な数の微生物のスクリーニングを行い、鋭意検討を行った結果、トリコデルマ属糸状菌とバチルス属細菌に植物種子発芽率向上作用があることを見いだした。さらにこれらの微生物は発芽した植物体の生長促進作用も有することを見出し、この有用新知見に基づき更に研究を行い、遂に本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、トリコデルマ属又はバチルス属に属し、植物種子発芽率向上作用を有する微生物を有効成分としてなること、を特徴とする植物種子発芽率向上剤、また、該微生物が更に生長促進作用を有するものであること、を特徴とする請求項１に記載の植物種子発芽率向上剤に関するものである。
【０００９】
また、本発明は、トリコデルマ属又はバチルス属に属し植物種子発芽率向上作用及び／又は生長促進作用を有する微生物を有効成分とすることにより、植物種子発芽率向上作用及び／又は生長促進作用を有する植物種子発芽率向上剤としてなることを特徴とし、植物種子発芽率向上及び／又は生長促進のために用いられるものである旨の表示を付した植物種子発芽率向上剤を提供するほか、更に次のものも提供することができる。
【００１０】
例えば、本発明は上記植物種子発芽率上剤を植物種子もしくは植物生長土壌に適用することを特徴とする植物種子発芽率向上方法を提供する。また上記植物種子発芽率向上剤を植物種子もしくは植物生育土壌に適用することを特徴とする植物体の生長を促進する方法も提供する。さらに本発明は、これら方法を使用して生長させた植物およびその収穫物も提供する。本発明は、上記植物種子発芽率向上剤で処理した植物種子自体を提供するものである。
【００１１】
以下において本発明の植物種子発芽率向上剤および植物生長促進方法について詳細に説明する。本発明の植物種子発芽率向上剤には植物種子発芽率向上作用と植物生長促進作用を併せ持ち、あるいは少なくともいずれかの作用を有し、且つ、植物に対して病害作用を有しない微生物ならば、いずれの微生物を用いても特にその種類は制限されない。
【００１２】
本発明において使用可能な微生物としては、例えば、トリコデルマ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ）属又はバチルス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ）属に属し、植物種子発芽率向上作用及び／又は生長促進作用を有する微生物であれば、すべての微生物が適宜使用可能である。
【００１３】
上記トリコデルマ属菌としては、例えば、糸状菌であるトリコデルマ・アトロビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｏｖｉｒｉｄｅ）が挙げられ、上記バチルス属菌としては、例えば、細菌であるバチルス・エスピー（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）Ｄ７４７が挙げられる。
【００１４】
本発明において、トリコデルマ・アトロビリデとしては、具体的には例えば、トリコデルマ・アトロビリデ  ＳＫＴ−１菌株、トリコデルマ・アトロビリデ  ＳＫＴ−２菌株、トリコデルマ・アトロビリデ  ＳＫＴ−３菌株から選ばれる少なくともひとつが使用可能である。
【００１５】
これらの菌株の内、ＳＫＴ−１は芝（ノシバ）根圏から分離した菌株であり、また、ＳＫＴ−２はサラダナ根圏から分離した菌株であって、植物種子発芽率向上作用及び生長促進作用を併有する点で従来既知の菌株とは明らかに区別することができ、きわめて特徴的であるので、前者の菌株（ＳＫＴ−１）をトリコデルマ・アトロビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｏｖｉｒｉｄｅ）ＳＫＴ−１と命名し、後者の菌株（ＳＫＴ−２）をトリコデルマ・アトロピリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｏｖｉｒｉｄｅ）ＳＫＴ−２と命名した。また、ＳＫＴ−１に変異を誘発させて得られた殺菌剤べノミル高度耐性変異菌（ＳＫＴ−３）についても、親株のＳＫＴ−１と同等の非常にすぐれた作用を有しており、これをトリコデルマ・アトロビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｏｖｉｒｉｄｅ）ＳＫＴ−３と命名した。
【００１６】
これら本発明に係る新規微生物、トリコデルマ・アトロビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｏｖｉｒｉｄｅ）ＳＫＴ−１菌株、トリコデルマ・アトロビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｏｖｉｒｉｄｅ）ＳＫＴ−２菌株及びトリコデルマ・アトロビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｏｖｉｒｉｄｅ）ＳＫＴ−３菌株は、工業技術院生命工学工業技術研究所（現、特許生物寄託センター）に寄託し、各々以下の寄託番号が付与されている。
トリコデルマ・アトロビリデＳＫＴ−１：ＦＥＲＭ  Ｐ−１６５１０
トリコデルマ・アトロビリデＳＫＴ−２：ＦＥＲＭ  Ｐ−１６５１１
トリコデルマ・アトロビリデＳＫＴ−３：ＦＥＲＭ  Ｐ−１７０２１
【００１７】
トリコデルマ・アトロビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｏｖｉｒｉｄｅ）ＳＫＴ−１菌株、トリコデルマ・アトロビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｏｖｉｒｉｄｅ）ＳＫＴ−２菌株及びトリコデルマ・アトロビリデ（Ｔｒｉｃｈｏｄｅｒｍａ  ａｔｒｏｖｉｒｉｄｅ）ＳＫＴ−３菌株は、以下の性質を有する。
【００１８】
（１）培地上での性質
ポテトデキストロース培地（ＰＤＡ：ジャガイモ２００．０ｇ、グルコース２０．０ｇ、寒天２０．０ｇ、蒸留水１０００ｍｌ）上及び２％麦芽エキス培地（麦芽エキス２０．０ｇ、寒天２０．０ｇ、蒸留水１０００ｍｌ）上での生育は良好で、菌糸伸長は早い。はじめ気生菌糸少なく白色、しだいに羊毛状の気生菌糸を生じ、分生子形成に従って緑色〜暗緑色となる。
【００１９】
（２）形態的性質
分生子柄は気生菌糸より生じ、多くは綿毛状にかたまる。輪生状或るいは不規則に分枝、各分枝は下方のものほど伸びて分枝をくりかえし、全体としては円すい形を呈する。各分枝はほぼ直角に分かれ先端はフィアライドとなる。フィアライドは分生子柄先端に２〜４個（平均３個）が規則正しく対生または輪生し、フィアライド先端は細くなる。分生子はフィアライド頂端に塊状に形成される。球形〜亜球形で表面は小さいトゲ状であり、ＳＫＴ−１菌株、ＳＫＴ−３菌株は２．５〜４．０×２．５〜３．５μｍ、ＳＫＴ−２菌株は３．０〜４．０×２．７〜３．５μｍである。
【００２０】
（３）生理学的性質
生育温度は１０〜３５℃であり、最適温度は３０℃付近である。ｐＨ４．０〜８．０の間で生育可能であり、最適ｐＨは５．０〜７．０である。
【００２１】
また、本発明における有効成分としては、バチルスｓｐ．Ｄ７４７菌株が例示される。このＤ７４７菌株は、静岡県小笠郡菊川町の空気中から単離された菌株であって、現在、独立行政法人  産業技術総合研究所  特許生物寄託センターにおいて、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．Ｄ７４７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−８２３４）として国際寄託されている。
【００２２】
このバシルス  エスピーＤ７４７株の細菌的性質は以下に示す通りである。なお、菌学的性質の試験はＢｅｒｇｅｙ’ｓ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ、ｖｏｌｕｍｅ  １（１９８４）に基づいて行った。
【００２３】
（Ａ）形態学的性質
形態：  桿菌
大きさ：  幅１．０〜１．２μｍ、長さ３〜５μｍ
運動性：  ＋
鞭毛の着生状態：  周鞭毛
内生胞子：  ＋
胞子の位置：  中央
胞子の膨張：  −
【００２４】
（Ｂ）培養的性質
コロニーの色：  白色〜薄い茶色
肉汁寒天平板培養：白色〜クリーム色のコロニーを形成し、表面はしわ状
【００２５】
（ｃ）生理学的性質
グラム染色性：  ＋
硝酸塩の還元：  ＋
ＭＲ試験：  −
ＶＰ試験：  ＋
インドールの生成：  −
澱粉の加水分解：  ＋
クエン酸の資化性：  ＋
無機窒素源：  ＋
オキシダーゼ：  −
カタラーゼ：  ＋
生育ｐＨ
６．８、肉エキス培地：  ＋
５．７、肉エキス培地：  ＋
生育温度
３０℃：  ＋
５０℃：  −
生育ＮａＣｌ濃度
２％：  ＋
５％：  ＋
７％：  ＋
好気的生育：  ＋
嫌気的生育：  −
Ｏ−Ｆテスト：  Ｆ
卵黄反応：  −
グルコースからの酸生成：  ＋
マンニトールからの酸生成：  −
Ｌ−アラビノースからの酸生成：  −
Ｄ−キシロースからの酸生成：  −
グルコースからのガス生成：  −
β−ガラクトシダーゼ：  −
ＮａＣｌ及びＫＣｌ要求性：  −
【００２６】
本発明では上記菌株をそのまま用いることが好ましいが、その変異株を用いることも可能である。変異株は胞子などの休眠体や栄養細胞などの栄養体に紫外線を照射したり、エチルメタンスルホネートやＮ−メチル−Ｎ’−ニトロ−Ｎ−ニトロソグアニジン等の変異誘発剤で処理したりすることによって取得することもできる。また、自然界からスクリーニングして選択した菌株のほか、細胞融合で得られた菌株、遺伝子組換えなどの遺伝子操作によって得られた菌株も適宜利用可能である。
【００２７】
上記例示に係るトリコデルマ属及びバシルス属菌株は、植物種子発芽率向上作用と植物生長促進作用の両方の作用を併有するものであるが、本発明においては、上記作用の内一方の作用を有する微生物も使用可能である。したがって、本発明では植物種子発芽率向上作用と植物生長促進作用を併せ持つ微生物や上記のような方法で得られた変異株のいずれか１種を単独で用いてもよいし、２種類以上を混合しても良く、その数や組み合わせは何ら制限されない。
【００２８】
本発明の植物種子発芽率向上剤には微生物菌体をそのまま使用しても良いし、固体培地や液体培地で培養した培養物を使用しても良い。本発明の作用を効果的に発現させるためには植物種子や植物生育土壌に、当該微生物を処理した後も植物根圏で死滅せずに、生存、増殖する方が好ましい。従って適当な培地で  増殖性に富む生長段階まで培養した菌体や、保存安定性や定着性に優れた製剤化を施された菌体を本発明の植物種子発芽率向上剤に使用するのが望ましい。
【００２９】
微生物を培養する培地として、例えば麦芽エキス培地（麦芽エキス２０ｇ、ペプトン１ｇ、ブドウ糖２０ｇ、蒸留水１０００ｍｌ）やブドウ糖ブイヨン培地（肉エキス１０ｇ、ＮａＣｌ５ｇ、ペプトン１０ｇ、ブドウ糖１０ｇ、蒸留水１０００ｍｌ）を例示できる。
【００３０】
微生物を培養する方法としては固体培地や液体培地で培養した培養物を使用しても良く、固体培地での培養では植物由来の固形成分と多孔質担体を含有する培地を用いて培養することもできる。植物由来の固形成分としては穀類や豆類などやこれらの粕を用いることができる。具体的にはふすま、米ぬか、大麦、脱脂大豆、おから、でんぷんなど植物由来の固形成分を単独もしくは二種以上を混合して用いることができる。これらの培地に配合する多孔質担体としてはゼオライト、モンモリロナイト、アタパルジャイト、パーライト、軽石、炭などの鉱物性多孔質担体やパーク、ケナフなどの植物性多孔質担体を挙げることができる。多孔質担体も単独もしくは二種以上を混合して用いることができる。
【００３１】
液体培地での培養では上記に記載した麦芽エキス培地やブドウ糖ブイヨン培地などを使用することができる。
【００３２】
培養によって得られた菌体を含む培養物は、そのまま本発明の植物種子発芽率向上剤として使用しても良いし、乾燥して用いても良い。また培養物を粉砕し、造粒、粉末化、錠剤化したものも用いることができる。また増量剤として多孔質担体を用いて造粒化、粉末化、錠剤化することも可能である。さらにでんぷんなどの有機物を増量剤として造粒化、粉末化、錠剤化することも可能である。
【００３３】
上記したように、本発明に係る植物種子発芽率向上剤は、上記した微生物菌株について、菌体または培養物を単独で用いるほか、不活性な液体または固体の担体で希釈し、必要に応じて界面活性剤、その他の補助剤を加えた薬剤として用いてもよい。具体的な製剤例としては、粒剤、粉剤、水和剤、懸濁製剤、乳剤等の剤型等があげられる。
【００３４】
好ましい担体の例としては、タルク、ベントナイト、クレー、カオリン、珪藻土、ホワイトカーボン、バーミキュライト、消石灰、珪砂、硫安、尿素、多孔質な固体担体、水、イソプロピルアルコール、キシレン、シクロヘキサノン、メチルナフタレン、アルキレングリコールなどの液体担体等があげられる。界面活性剤および分散剤としては、例えばジナフチルメタンスルホン酸塩、アルコール硫酸エステル塩、アルキルアリールスルホン酸塩、リグニンスルホン酸塩、ポリオキシエチレングリコールエーテル、ポリオキシエチレンアルキルアリールエーテル、ポリオキシエチレンソルビタンモノアルキレート等があげられる。補助剤としては、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、アラビアゴム、オキシタンガム等、保護剤としてはスキムミルク、ｐＨ緩衝剤等があげられる。
【００３５】
さらには、培養して得られた微生物菌体をカプセル封入して本発明の植物種子発芽率向上剤として使用することも可能である。例えばアルギン酸ナトリウム水溶液とカルシウムなどの陽イオンと反応することによって形成したゲル中に、微生物菌体を含有させて粒形化することも可能である。また増量剤として多孔質担体を用いて造粒化、粉末化、錠剤化することも可能である。さらにでんぷんなどの有機物を増量剤として造粒化、粉末化、錠剤化することも可能である。
【００３６】
これらの微生物菌体、培養物、カプセル封入剤、造粒体、粉末体、錠剤体は、植物種子に塗布、浸漬、噴霧、糖衣あるいはまぶしても良いし、植物培土に混合したり、種子周りに入れても良い。いずれにせよ植物種子発芽率向上作用を有する微生物菌体と未発芽種子が接触することが必須条件となる。
【００３７】
本発明の植物種子発芽向上剤の適用量は、植物種子１粒あたり微生物菌体が１０〜１０11ｃｆｕ（コロニーフォーミングユニット：コロニー形成単位）となることが好ましい。培土への適用量としては培土１００ｇあたり１０〜１０11ｃｆｕとなる量が好ましい。いずれの施用方法の場合も更に好ましくは１０2〜１０10ｃｆｕとなる量が好ましい。これら適用量より少ない場合には植物種子発芽向上効果の発現が不安定になりやすく、また適用量より多い場合には、施用量あたりの効果を得ることができず、経済的に不利になる。
【００３８】
本発明に係る植物種子発芽率向上剤は、任意の植物に適用することができ、その種類は限定されない。したがって、農業、園芸、医薬、林業等の分野において有用な植物のいずれかに対しても適用することができる。また、本発明の好適な実施態様のひとつは、培養して得られた上記微生物菌体を植物種子に作用させるか、植物生育土壌と混合して適用する。
【発明の効果】
【００３９】
本発明の植物種子発芽率向上剤は植物種子発芽率向上作用と植物生長促進効果を併せ持つことから、一度適用するだけで２つの効果を期待することができる。このような効果は農作物生産において、コスト削減と作業簡易化に役立つ。また、本発明の植物生長促進効果は環境や生態系に悪影響を及ぼさないことから安全性も高いという利点がある。
【００４０】
具体的には、本発明によれば、次のような著効が奏される。すなわち、本発明の植物種子発芽率向上剤を適用することによって、植物種子の発芽率を大いに向上させることができる。後述する実施例から明らかなように、本発明の効果は植物種子もしくは植物生長培土に微生物を適用するだけの簡単な作業によって、植物種子の発芽率を向上させることができる。従って、本発明の有用性は極めて高い。
【００４１】
また、本発明の植物種子発芽率向上剤は、単に植物種子の発芽率を向上させる効果のみならず、植物生長促進効果も示す。従って本発明の植物生長促進効果を持つ植物種子発芽率向上剤を適用すれば、従来施用していた発芽促進のための資材と生長促進のために使用していた肥料成分を使用せずに、１剤の処理によって発芽率向上作用と生長促進作用を期待することができる。安全性の面でも問題点はない。
【００４２】
更に、本発明によれば、上記微生物を種子に付着せしめる微生物処理した植物種子自体も提供することができ、このような種子を使用すれば更に格別の処理をすることなく、高い発芽率で発芽しそして生長が促進され、ますます農業の省力化が図れるという著効が奏される。
【００４３】
そして更に、本発明には、本発明の植物種子発芽向上剤を適用して生長させた植物とその収穫物も含まれる。例えば、本発明の植物種子発芽率向上剤を適用して生長させた園芸用植物や、本発明の植物種子発芽率向上剤を適用して生長させた植物から収穫した野菜、果実、穀物、樹木および本発明の植物種子発芽率向上剤を適用させて生長させた薬草から取得した薬効成分はすべて本発明に含まれる。
【実施例】
【００４４】
以下に実施例を記載して本発明を具体的に説明する。以下の実施例に記載される成分、施用量、施用割合、手法などは本発明の技術的概念を逸脱しない限り適宜変更することができ、本発明の範囲を以下に示す具体例に限定されるものではない。
【００４５】
（実施例１：糸状菌の培養１）
静岡県内の土壌より分離されたトリコデルマ  アトロビリデ  ＳＫＴ−１（ＦＥＲＭ  Ｐ−１６５１０）をポテト−デキストロース液体培地（ＤＩＦＣＯ社製）で２７℃、６日間培養し、遠心分離機により培養菌体のみを得た。これを蒸留水にて１０6ｃｆｕ／ｍｌに調整した。
【００４６】
（実施例２：糸状菌の培養２）
静岡県内の土壌より分離されたトリコデルマ  アトロビリデ  ＳＫＴ−１（ＦＥＲＭ  Ｐ−１６５１０）を大麦培地で２７℃、７日間培養後、ワーリングブレンダーで粉砕化を行い、菌体と培地成分混合物を得た。この時の菌体の濃度は１０8ｃｆｕ／ｇであった。
【００４７】
（実施例３：細菌の培養３）
静岡県内の空気中より分離されたバチルス  エスピー  Ｄ７４７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−８２３４）をブドウ糖ブイヨン液体培地で２７℃、２日間培養し、遠心分離機により培養菌体のみを得た。これを蒸留水にて１０8ｃｆｕ／ｍｌに調整した。
【００４８】
（実施例４：細菌の培養２）
静岡県内の空気中より分離されたバチルス  エスピー  Ｄ７４７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−８２３４）をブドウ糖ブイヨン液体培地で２７℃、２日間培養し、遠心分離機により培養菌体のみを得た。得られた菌体を凍結乾燥法にて粉末化した。このときの菌体の濃度は１０11ｃｆｕ／ｇであった。
【００４９】
（実施例５）
市販されているシュンギク、パセリ、ニガウリの種子を実施例１および３で調整した菌液に５分間浸漬し、浸漬種子を得た。この種子を育苗培土に播種し、温室内で育苗した。播種２週間後に発芽率および植物生長促進効果を調査した。
【００５０】
（実施例６）
市販されているシュンギク、パセリ、ニガウリの種子を実施例２および４で調整した菌体１ｇを水１００ｍｌに懸濁した菌液に５分間浸漬し、浸漬種子を得た。この種子を育苗培土に播種し、温室内で育苗した。播種２週間後に発芽率および植物生長促進効果を調査した。
【００５１】
＜比較例１＞
実施例５と同様に市販されているシュンギク、パセリ、ニガウリの種子を水道水に５分間浸漬し、浸漬種子を得た。この種子を育苗培土に播種し、温室内で育苗した。播種２週間後に発芽率および植物生長促進効果を調査した。
【００５２】
（実施例７）
市販されているシュンギク、パセリ、ニガウリの種子を育苗培土に播種し、覆土する前に培土および種子表面に実施例１および３で調整した菌液を５００ｍｌ／ｍ2の割合で散布した。散布後、覆土を行い、温室内で育苗し、播種２週間後に発芽率および植物生長促進効果を調査した。
【００５３】
（実施例８）
市販されているシュンギク、パセリ、ニガウリの種子を育苗培土に播種し、覆土する前に培土および種子表面に実施例２および４で調整した菌体１ｇを水１００ｍｌに懸濁した菌液を５００ｍｌ／ｍ2の割合で散布した。散布後、覆土を行い、温室内で育苗し、播種２週間後に発芽率および植物生長促進効果を調査した。
【００５４】
＜比較例２＞
実施例７と同様に市販されているシュンギク、パセリ、ニガウリの種子を育苗培土に播種し、覆土する前に培土および種子表面に水道水を５００ｍｌ／ｍ2の割合で散布した。散布後、覆土を行い、温室内で育苗し、播種２週間後に発芽率および植物生長促進効果を調査した。
【００５５】
発芽率は、子葉が地上部において完全に展開しているものを発芽とみなして、以下の式（１）により算出した。
（式１）
発芽率（％）＝（発芽数／播種数）×１００
【００５６】
また、植物生長促進効果は、地上部の植物体の長さを測定することにより評価した。実施例５〜８および比較例１〜２の発芽率の結果を表１、表２に、生長促進効果の結果を表３、表４にそれぞれ示した。
【００５７】
（表１）
ＦＥＲＭ  Ｐ−１６５１０菌株による発芽率（％）
―――――――――――――――――――――――
シュンギク  パセリ  ニガウリ
―――――――――――――――――――――――
実施例５     ７１      ８１     ８７
実施例６     ６６      ７５     ８７
比較例１     ５０      ４３     ５０
―――――――――――――――――――――――
実施例７     ７２      ５２     ８２
実施例８     ６４      ６７     ７２
比較例２     ５５      ３３     ４１
―――――――――――――――――――――――
【００５８】
（表２）
ＦＥＲＭ  ＢＰ−８２３４菌株による発芽率（％）
―――――――――――――――――――――――
シュンギク  パセリ  ニガウリ
―――――――――――――――――――――――
実施例５     ５７      ５９     ７２
実施例６     ５５      ６７     ７５
比較例１     ５０      ４３     ５０
―――――――――――――――――――――――
実施例７     ６１      ４８     ６５
実施例８     ６０      ５５     ６８
比較例２     ５５      ３３     ４１
―――――――――――――――――――――――
【００５９】
（表３）
ＦＥＲＭ  Ｐ−１６５１０菌株による生長促進効果
―――――――――――――――――――――――
シュンギク  パセリ    ニガウリ
―――――――――――――――――――――――
実施例５    ６．７    ３．７    １８．１
実施例６    ７．０    ３．５    １７．７
比較例１    ５．９    ３．３    １４．５
―――――――――――――――――――――――
実施例７    ６．９    ３．６    １７．２
実施例８    ７．５    ３．５    １６．９
比較例２    ５．７    ３．１    １５．０
―――――――――――――――――――――――
表中の数字は地上部長（ｍｍ）
【００６０】
（表４）
ＦＥＲＭ  ＢＰ−８２３４菌株による生長促進効果
―――――――――――――――――――――――
シュンギク  パセリ    ニガウリ
―――――――――――――――――――――――
実施例５    ６．５    ３．５    １６．１
実施例６    ６．４    ３．５    １５．９
比較例１    ５．９    ３．３    １４．５
―――――――――――――――――――――――
実施例７    ６．１    ３．６    １６．３
実施例８    ６．２    ３．５    １６．３
比較例２    ５．７    ３．１    １５．０
―――――――――――――――――――――――
表中の数字は地上部長（ｍｍ）
【００６１】
これらの結果から明らかなように、トリコデルマ・アトロビリデＳＫＴ−１（ＦＥＲＭ  Ｐ−１６５１０）およびバチルス  エスピーＤ７４７（ＦＥＲＭ  ＢＰ−８２３４）を培養して得られた菌体を未発芽の種子に作用させることは、植物種子の発芽率を向上させ、かつ発芽した植物根に作用し、植物生長促進効果を示すことが明らかである。また、トリコデルマ・アトロビリデＳＫＴ−２（ＦＥＲＭ  Ｐ−１６５１１）及び同ＳＫＴ−３（ＦＥＲＭ  Ｐ−１７０２１）も同様にすぐれた効果を示した。
【手続補正書】
【提出日】平成17年6月22日(2005.6.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
（ｃ）生理学的性質
グラム染色性：  ＋
硝酸塩の還元：  ＋
ＭＲ試験：  −
ＶＰ試験：  ＋
インドールの生成：  −
澱粉の加水分解：  ＋
クエン酸の資化性：  ＋
無機窒素源：  ＋
オキシダーゼ：  −
カタラーゼ：  ＋
生育ｐＨ  
６．８、肉エキス培地：  ＋
５．７、肉エキス培地：  ＋
生育温度
３０℃：  ＋
５０℃：  −
生育ＮａＣｌ濃度
２％：  ＋
５％：  ＋
７％：  ＋
好気的生育：  ＋
嫌気的生育：  −
Ｏ−Ｆテスト：  Ｏ
卵黄反応：  −
グルコースからの酸生成：  ＋
マンニトールからの酸生成：  −
Ｌ−アラビノースからの酸生成：  −
Ｄ−キシロースからの酸生成：  −
グルコースからのガス生成：  −
β−ガラクトシダーゼ：  −
ＮａＣｌ及びＫＣｌ要求性：  −