(57)【要約】  【課題】  流路に充填された緩衝剤中で生体サンプルを移動させた際の輸送反応の検出時に、複数の検査項目を短時間で正確に検出結果を得ることができ、取り扱いも容易で且つ小型で軽量、安価な生体サンプル判別用プレートを提供する。  【解決手段】  生体サンプルが流れるサンプル流路と緩衝剤が流れる緩衝剤流路との合流部分に一定量の生体サンプルを前記緩衝剤流路に取り込む定量分取部を設け前記定量分取部に取り込まれた生体サンプルを緩衝剤中で移動させた際に得られる輸送反応を検出して前記生体サンプルの判別を行う生体サンプル判別用プレートにおいて、前記緩衝剤流路を形成する閉じられた流路の内側に前記サンプル流路を設ける。【選択図】  図２ａ
2006220531.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
生体サンプルが流れるサンプル流路と緩衝剤が流れる緩衝剤流路との合流部分に一定量の生体サンプルを前記緩衝剤流路に取り込む定量分取部を設け前記定量分取部に取り込まれた生体サンプルを前記緩衝剤中で移動させた際に得られる輸送反応を検出して前記生体サンプルの判別を行う生体サンプル判別用プレートにおいて、前記緩衝剤流路を形成する閉じられた流路の内側に前記サンプル流路を設けた、ことを特徴とする生体サンプル判別用プレート。
【請求項２】
請求項１記載の生体サンプル判別用プレートにおいて、前記緩衝剤流路の前記生体サンプル判別用プレートの中心から外周方向に形成された部分の長さが回転方向に形成された部分の長さに比べて長い、ことを特徴とする生体サンプル判別用プレート。
【請求項３】
請求項２記載の生体サンプル判別用プレートにおいて、前記緩衝剤流路の形状が矩形である、ことを特徴とする生体サンプル判別用プレート。
【請求項４】
請求項２記載の生体サンプル判別用プレートにおいて、前記緩衝剤流路が前記生体サンプル判別用プレートの重心を回転中心とする同心円上に形成されてなる、ことを特徴とする生体サンプル判別用プレート。
【請求項５】
請求項４記載の生体サンプル判別用プレートにおいて、前記緩衝剤流路を設けた同心円の個数が２である、ことを特徴とする生体サンプル判別用プレート。
【請求項６】
請求項５記載の生体サンプル判別用プレートにおいて、内周側の流路の流路断面積が外周側の流路の流路断面積より大きい、ことを特徴とする生体サンプル判別用プレート。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＤＮＡやタンパクその他の生体サンプルを緩衝剤中で移動させ、その輸送反応を検出して生体サンプルを判別する生体サンプル判別用プレートに関する。
【背景技術】
【０００２】
一般的な生体サンプルを考えた場合、大きくはＤＮＡとタンパクが存在している。そして、近年、分子生物学の急速な進展によって、様々な疾患において遺伝子の関与がかなり正確に理解されるようになり、遺伝子をターゲットにした医療に注目が集まるようになってきている。
【０００３】
ＤＮＡに関しては、現在ＳＮＰｓ（ｓｉｎｇｌｅ  ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍの略で「１塩基多型」と一般に訳されており、遺伝子における１暗号（１塩基）の違いの総称である。）が注目されている。その理由としては、ＳＮＰｓの分類により、多くの疾患に対する罹患率や各個人の薬剤に対する効果や感受性を予測でき、さらには、地球上に親子兄弟といえども全く同じＳＮＰｓを持つ人間は絶対に存在しないことから個人の完全な特定ができると考えられているからである。
【０００４】
現在ＳＮＰｓを調べる方法としては、ＤＮＡの塩基配列を端から直接読んでいくシーケンシング（塩基配列の決定）が最も一般的に用いられている。そして、前記シーケンシングを行う方法としては、いくつかの報告があるが、もっとも一般的に行われているのは、ジデオキシシーケリング（Ｓａｎｇｅｒ法）である。なお、シーケンシングは、このＳａｎｇｅｒ法を含め何れの方法においても、分離能の高い変性ポリアクリルアミドゲル電気泳動か、キャピラリー電気泳動によって１塩基長の長さの違いを分離・識別する技術が基になって成り立っている。
【０００５】
また、他の方法として、アフィニティリガンドキャピラリー電気泳動法がある。
【０００６】
アフィニティリガンドキャピラリー電気泳動は、分子間親和力、とくに生態系における特異的親和力（酵素と基質、抗原と抗体の親和力等）を利用して分離に特異性を持たせるものであり、具体的には、キャピラリー管中の泳動溶液に、塩基配列を特異的に認識するアフィニティリガンドを添加しておき、試料を電気泳動させると、試料混合物中で相互作用する分子種だけが移動速度に変化を生じることに着目して分析を行うものである（例えば、特許文献１参照）。
【０００７】
一方、タンパク質は、細胞、組織、生体液中に存在し、生体活動の調節、細胞へのエネルギー供給、重要な物質の合成、生物構造体の維持、さらには細胞間でのコミュニケーションや細胞内情報伝達に関与している。現在では、タンパク質が様々な環境や、相互作用する他のタンパク質の存在、タンパク質が受けた修飾の程度や種類に応じて、複数の機能を有することが明らかになってきている。
【０００８】
タンパク質は、２０種類のアミノ酸が遺伝子の指示（配列情報）により順番につながることでつくられており、その種類は数千万種と言われるが、その遺伝子の配列がわかれば、どのアミノ酸がどういう順番でつながってできているかの情報を得ることができる。生物の遺伝子（ゲノム）から作られるタンパク質の一そろいのセットは、プロテオームと呼ばれるが、ヒトゲノムの塩基配列解読が終わった今、プロテオームの解析が盛んに進められている。
【０００９】
そして、このようなタンパク質の機能解析研究としては、同定やキャラクタリゼーションのみならず、生化学アッセイやタンパク質間相互作用研究、タンパク質ネットワーク、または細胞内外のシグナリング解明なども行っていく必要がある。このタンパク質機能の研究には、多方面の技術が使用され、酵素アッセイ、酵母  ｔｗｏ−ｈｙｂｒｉｄ  アッセイ、クロマトグラフィーによる精製、情報ツールとデータベース等があるが、特に、電気泳動によるたんぱく質の判別は重要な手法である。そして、電気泳動のように、キャピラリー管中のサンプル、分析物、緩衝剤、及び試薬等の液体を移動させた際に得られる輸送反応を検出して、該サンプルの分析、判別、判定等を行う場合の前記液体の輸送及び方向付けに関しては、さまざまな報告がある（例えば、特許文献２〜特許文献５）。
【特許文献１】特開平７−３１１１９８号公報
【特許文献２】特表２０００−５１３８１３号公報
【特許文献３】特表２００１−５２３３４１号公報
【特許文献４】特表２０００−５１４９２８号公報
【特許文献５】特開２００３−２８８８３号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
上述したように生体サンプルの分析においては、キャピラリー電気泳動装置を利用した方法が広く使われている。
【００１１】
実際に輸送反応を行なう部分であるキャピラリーは、外形３００ミクロン、内径１００ミクロン程度のガラス管が使用される例が多く、折れにくくするために表面はポリイミド等でコーティングされている。
【００１２】
しかしながら、内部試料を検出するために検出窓として焼いたり薬品で溶かすなどしてコーティングを一部剥ぎ取る。
【００１３】
この時、コーティングを剥いだ部分は折れやすくなり取り扱いに十分注意する必要がある。折れた場合はなお危険である。
【００１４】
また、サンプルの注入においても、加圧や吸引で行なうのが一般的な方法であるが、一定量注入する必要があり、時間で調整するもののキャピラリー内の緩衝剤の粘度や温度変化により注入量が実験のたびに異なるという問題がある。サンプルの量は測定結果に及ぼす影響は大きく、大変重要な項目である。
【００１５】
また、このようなキャピラリーを使用した装置の場合、構成上短い流路での電気泳動を行なうことは困難であり、必要以上の泳動距離と時間をかけて測定することになる。
【００１６】
さらに、プレート上の流路を利用した場合でも試料の分離を行うのに、例えば特許文献５，６に記載の方法では、複数のキャビラリーチャンネルを交差させ、且つ少なくとも３つ電極を設けて、該少なくとも３つ設けられた電極のうちの２つの電極に印加して、前記交差部を通して前記試料を移動させているが、この方法では、流路が交差していることから、試料を電気泳動させる際にうまく泳動しない可能性があり、正確な測定結果が得られないという問題がある。また、例えば特許文献３，４に記載の方法では、プラットホームに微細チャンネルを埋設し、該プラットホームの回転速度を変化させることで、該回転から生じる向心力を変化させて試料を移動させているが、この方法では、試料を向心方向にしか移動させることができないという問題に加え、該微小チャンネルの形状がかなり複雑であるという問題もある。
【００１７】
本発明は、流路に充填された緩衝剤中で生体サンプルを移動させた際の輸送反応の検出時に、複数の検査項目を短時間で正確に検出結果を得ることができ、取り扱いも容易で且つ小型で軽量、安価な生体サンプル判別用プレートを提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
前記課題を解決するために、本発明の生体サンプル判別用プレートは、生体サンプルが流れるサンプル流路と緩衝剤が流れる緩衝剤流路との合流部分に一定量の生体サンプルを前記緩衝剤流路に取り込む定量分取部を設け前記定量分取部に取り込まれた生体サンプルを緩衝剤中で移動させた際に得られる輸送反応を検出して前記生体サンプルの判別を行う生体サンプル判別用プレートにおいて、前記緩衝剤流路を形成する閉じられた流路の内側に前記サンプル流路を設けたことを特徴とする。
【００１９】
さらに、前記緩衝剤流路の前記生体サンプル判別用プレートの中心から外周方向に形成された部分の長さが回転方向に形成された部分の長さに比べて長いことを特徴とする。
【００２０】
さらに、前記緩衝剤流路の形状が矩形であることを特徴とする。
【００２１】
さらに、前記緩衝剤流路が前記生体サンプル判別用プレートの重心を回転中心とする同心円上に形成されてなることを特徴とする。
【００２２】
さらに、前記緩衝剤流路を設けた同心円の個数が２であることを特徴とする。
【００２３】
さらに、内周側の流路の流路断面積が外周側の流路の流路断面積より大きいことを特徴とする。
【発明の効果】
【００２４】
本発明の生体サンプル判別用プレートによれば、プレート上、流路の占める面積が小さいため、プレートサイズを更にコンパクトにすることが可能となる。更に、本発明の生体サンプル判別用プレートによれば、流路を多数形成できるため、同時に複数の項目を検査することが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
（実施の形態１）
以下、図１〜図１４を用いて、本実施の形態１における生体サンプル判別用プレートについて説明する。
【００２６】
本発明は、生体サンプルを緩衝剤中で移動させて、生物学的、酵素的、免疫学的、及び化学的反応を行い、生体サンプルを容易かつ安価に精度よく短時間で判別することを実現するものである。
【００２７】
なお、本実施の形態１では、説明を具体的にするために、前記生体サンプルがＤＮＡサンプルで、前記緩衝剤が分離用ＤＮＡコンジュゲート及びＤＮＡ結合制御剤を含むものであるとし、本生体サンプル判別用プレートが、流路中に充填させた分離用ＤＮＡコンジュゲート中に、定量された前記ＤＮＡサンプルを添加して電気泳動させ、該流路中の蛍光度あるいは吸光度を検出して、該ＤＮＡサンプルのＳＮＰｓ（一塩基多型）の有無を判別するものとする。
【００２８】
まず、図１〜図５を用いて、本実施の形態１における生体サンプル判別用プレートの構成について説明する。図１は、本実施の形態１における生体サンプル判別用プレートの流路形成面からみた図である。
図２ａは図１に示す生体サンプル判別用プレート１に形成された外周側パターン２の詳細形状を示す図である。
【００２９】
本実施の形態１における生体サンプル判別用プレート１には図２ａに示す外周側パターン２が１６個放射線状に形成されており、その内側には内周側パターン２'が8個放射線状に形成されており、これらの外周側パターン２と内周側パターン２'とによって、同時に２４検体のＤＮＡ判別が可能である。この外周側パターン２と内周側パターン２'とは、生体サンプル判別用プレート１の重心を中心とした同心円上に形成されている。
【００３０】
図１に示すように本実施の形態１における生体サンプル判別用プレート１の外形は８センチ四方の正方形で４角のうち３角はＲが設けられ、残りの１角は面取りされている。
【００３１】
更に穴４を設けているが、これは外形を非対称にしてパターンの場所を特定できるようにされている。材料はアクリル系の樹脂を使用し厚みは２ｍｍである。流路形成面には溝が形成されさらに厚さ５０μｍのアクリル製フィルムを接着することで密閉流路が形成されている。
【００３２】
また、重心５は本生体サンプル判別用プレートの重心であり、重心５を中心に本生体サンプル判別用プレートを回転部に固定するための孔を設けている。
【００３３】
図２ａに示す緩衝剤注入口６は緩衝剤であるＤＮＡコンジュゲートを注入する緩衝剤注入口、緩衝剤注入部７は注入された緩衝剤を一旦保持するための緩衝剤注入部、サンプル注入口８はＤＮＡサンプルを注入するためのサンプル注入口、サンプル注入部９は注入されたＤＮＡサンプルを一旦保持するためのサンプル注入部である。緩衝剤注入部とサンプル注入部は同様の形状をしており、周辺断面を図３に示す。
【００３４】
図３は緩衝剤注入部やサンプル注入部近傍の断面を表した図であり、斜線でハッチングした部分が生体サンプル判別用プレート１である。３５が緩衝剤注入口６およびサンプル注入口８にあたり、３６が緩衝剤注入部７およびサンプル注入部９である。３７が前述したフィルムであり溝２４にフタをするように貼り付けることで密閉流路が形成される。ちなみに流路形成面は下部である。
【００３５】
正電極の挿入部１２、負電極の挿入部１３は、流路１４を介して接続されており、さらには流路１０，１１により緩衝剤注入部ともそれぞれ接続されている。
【００３６】
チャンバー部１６は、流路１５によりサンプル注入部９と接続されている。
【００３７】
また、２０はサンプル保持部であり流路１７と流路１８によりチャンバー部１６と接続されているが、流路１７は細く、流路１８は流路１７に比べ太い。本実施の形態では、流路１７の幅が２５μｍに対し、流路１８は５０μｍである。また、流路の深さは共に３０μｍである。尚、生体サンプル判別用プレート１に形成された内周側パターン２’の場合、流路１７’の幅は４０μｍ、流路１８’は８０μｍで形成され、流路深さは全て５０μｍとなっている。
【００３８】
２１はバッファ部であり、流路１７、流路１８、流路１９によりチャンバー部１６、サンプル保持部２０とそれぞれ接続されており、さらにサンプル注入部９とバッファ部２１とをつなぐ流路２２によってバッファ部２１の空気抜きが可能となる。
緩衝剤注入部７、流路１０、流路１１、正電極部１２、負電極部１３、流路１４は閉じられた流路となっており、この閉じられた流路を緩衝材が流れ、緩衝剤流路を構成している。
【００３９】
図１において内周側パターン２’に示すように、緩衝剤流路のパターン形状はプレートの中心に対し、外周方向に配置した、矩形の形状をしており、外周に向かってのびる流路長さの方が、円周上、回転方向にのびる流路長さに比べ長くなるようになっている。これは、プレートの同心円上に数多くの流路パターンを形成するためである。
【００４０】
続いて、サンプル注入部９、流路１５、チャンバー部１６、流路１７、流路１８、流路１９、サンプル保持部２０、バッファ部２１、流路２２も閉じられた流路となっており、この閉じられた流路を生体サンプルが流れ、サンプル流路を構成している。緩衝剤流路とサンプル流路とはサンプル定量分取部２３で合流し、このサンプル定量分取部２３において定量されたＤＮＡサンプルを実際に判別する。
【００４１】
ここで、本実施の形態では、緩衝剤流路の内部にサンプル流路を配置した。これは、検査項目を可能な限り増やすことを目的に、流路パターンの同心円方向のスペースが狭くなるよう設計した。仮に、サンプル流路を緩衝剤流路と同心円方向に並べた場合、図２ｂに示すように、流路パターンの同心円方向のスペースが広くなるため、結果として、流路パターン数が本実施の形態の２４流路に比べ、１８流路と少なくなる。
【００４２】
チャンバー部１６、サンプル保持部２０、バッファ部２１は同様の形状をしており、その周辺の断面図を図４に示す。図４は下方が流路形成面である。
【００４３】
溝２４がチャンバー部１６、サンプル保持部２０、バッファ部２１にあたる部分であり、流路形成面からみて１．５ｍｍの深さの器状になっている。２５、２６が各部からのびる流路となる。
【００４４】
次に、正電極部１２と負電極部１３について図５を用いて説明する。
【００４５】
図５は正電極部１２と負電極部１３の周辺の断面図であり、下方が流路形成面である。
【００４６】
穴３０が正電極部１２と負電極部１３にあたる部分であり、プレートを貫通した穴である。両面にはフィルム３７とフィルム２７が貼り付けてあるが、フィルム３７が非導電性の材料を必要とするのに対してフィルム２７は導電性のものでもよい。導電性の場合外部からフィルム２７に電圧を印加することで電極部３０内の試料に電圧を印加することができる。非導電性の場合は針状の電極を突き刺し内部へ挿入することで電圧印加が可能となる。
【００４７】
また、フィルム３７がプレート前面に貼られているのに対してフィルム２７は電極部近傍のみにそれぞれ貼られている。
【００４８】
それでは、以下、前述した該ＤＮＡサンプルのＳＮＰｓ（一塩基多型）の有無を判別するまでの具体的操作および動作の一例を、外周側パターン２の詳細形状を示す図２ａを利用して説明する。
【００４９】
まず、検体となるＤＮＡサンプルを準備する。
【００５０】
本来、ＤＮＡは２本鎖の螺旋構造をしたものであるが、本実施の形態１においては、判別したいＳＮＰｓ部位を含む約６０塩基長の１本鎖ＤＮＡを準備する。
【００５１】
抽出方法や１本鎖化については本発明とは直接関係がないので詳細説明は省略する。
【００５２】
次に、緩衝剤としてＤＮＡコンジュゲートを準備する。
【００５３】
ＤＮＡコンジュゲートとは、６〜１２塩基長１本鎖ＤＮＡの５’末端に高分子のリニアポリマーが共有結合したものである。さらにＤＮＡは、正常型に対しては相補であるが変異型に対しては相補ではない配列であり、正常型ＤＮＡに対しての結合力が強く、変異型ＤＮＡに対しての結合力が弱い特性がある。また、電気泳動した場合、５’末端に結合したリニアポリマーがおもりとなり泳動速度がかなり遅いという特性もある。
【００５４】
以後記述する「ＤＮＡコンジュゲート」とは、電解質の役目もするｐＨ緩衝剤およびＭｇＣｌ2などのＤＮＡ結合力制御剤を含んだ物性とする。
【００５５】
試料の準備が終わったところで、ＤＮＡコンジュゲートおよびＤＮＡサンプルをプレート内へ注入する。ＤＮＡコンジュゲートはピペッター等により定量を緩衝剤注入口６から緩衝剤注入部７へ分注する。ＤＮＡサンプルも同様に定量をサンプル注入口８よりサンプル注入部９へ分注する。
【００５６】
分注量としては、パターンのスケールにより異なるが本実施の形態１においては、ＤＮＡコンジュゲートは３マイクロリットル、ＤＮＡサンプルは１マイクロリットルとする。
【００５７】
次にモータ等に生体サンプル判別用プレート１を固定し、重心５を軸に回転させる。この時、分注されたＤＮＡコンジュゲートとＤＮＡサンプルは、遠心力により外周方向へと移動する。
【００５８】
緩衝剤注入部７内のＤＮＡコンジュゲートは流路１０と流路１１を通り正電極部１２と負電極部１３へ等分され正電極部１２へ移動したＤＮＡコンジュゲートはさらに流路１４を通り定量分取部２３まで移動する。負電極部１３へ移動したＤＮＡコンジュゲートも同様に流路１４を通り定量分取部２３まで移動する。回転開始から２分後、ＤＮＡコンジュゲートの移動が停止した状態が図６（ａ）である。また、定量分取部２３周辺を拡大した図が図６（ｂ）である。
【００５９】
ＤＮＡコンジュゲート３１は、正電極部１２および負電極部１３の７割程度まで充填されており、流路１４を満たし、図６（ｂ）に示すように定量分取部２３まで達している。
【００６０】
正電極部１２と負電極部１３内に存在するＤＮＡコンジュゲートの液面高さとサンプル定量分取部の液面高さは、重心５を中心とする同一円周上となる。
【００６１】
次に、注入されたＤＮＡサンプルの移動について図２ａおよび図７を用いて説明する。サンプル注入部９内のＤＮＡサンプルは流路１５を通りチャンバー部１６さらには流路１７、流路１８を通り外周側に位置するサンプル保持部２０まで達する。しかしながら図７に示すように流路１８はサンプル保持部２０の外周側で接続されかつサンプル保持部２０には空気抜き用の穴が存在しない。そのためサンプル保持部２０内に残った空気は抜けることはなく加圧された状態となる。
【００６２】
図７が回転開始から２分後のＤＮＡサンプルの状態であり、３２と３３がＤＮＡサンプルである。３４が圧縮された空気であり、回転中のみこのような遠心力と加圧力とが平衡となった状態を維持する。本実施の形態では回転数４０００ｒｐｍである。
【００６３】
それでは次の動作を説明する。
【００６４】
生体サンプル判別用プレート１を一定時間回転させＤＮＡコンジュゲートとＤＮＡサンプルの移動が停止した状態で回転を急停止させる。（例えば２秒で４０００ｒｐｍより停止まで。）
するとサンプル保持部２０内に存在していたＤＮＡサンプル３２は遠心力が無くなったため空気３４の圧力によりサンプル保持部２０から流路１８へ逆流しようとする。さらに
ＤＮＡサンプル３２はサンプル保持部２０内の空気３３が大気圧となるまで流路１７、流路１９へと移動しようとするが、この時流路１７は流路１９にくらべ細く形成されているためＤＮＡサンプル３２は流路１７よりも流路１９へ多く流れようとする。
【００６５】
そこで急停止した直後の状態を図８に示す。
【００６６】
サンプル保持部２０内のＤＮＡサンプル３２は空気３４の膨張により流路１８、１９を通り定量分取部２３およびバッファ部２１まで達する。
【００６７】
特に定量分取部２３では、充填されたＤＮＡコンジュゲート３１と接することになる。
【００６８】
このとき流路１７を通りチャンバー部１６へ移動するＤＮＡサンプルも多少存在する。
【００６９】
次に、生体サンプル判別用プレート１を中速にて数秒間もう一度回転させる。この時減速を緩やかにすることが重要である。
【００７０】
停止後の状態が図９である。
【００７１】
流路１９に充填されていたＤＮＡサンプルはチャンバー部３３へと流れるが、定量分取部２３にはＤＮＡサンプルが微量残存する。残存したＤＮＡサンプルは他ＤＮＡサンプルに対して電気的にも絶縁された状態である。
【００７２】
またこのように１回目の回転時と異なる動作をする理由は、回転速度が遅く減速度が緩やかであるためサンプル保持部２０内の空気３４が強く圧縮されることがないからである。よって逆流して流路１９が再度充填されることもない。
【００７３】
以上の動作で定量分取部２３に残存したサンプルＤＮＡがＳＮＰｓの判別を行なう最終試料となる。尚、内周側パターン２’は、外周側パターン２に比べ、遠心力による輸送能力が低いため、流路断面積を外周側パターン２の流路断面積より多くとることで、遠心力の違いによる、輸送能力の差をなくす事が可能となり、その結果、１回の操作でプレート内全てのパターンにおいて、ＳＮＰｓの判別を行なう最終試料を定量分取部に残存できる。
【００７４】
次に、電気泳動を行なう。電気泳動は、正電極部１２に正電極、負電極部１３に負電極を挿入し、数百Ｖの電圧を印加する。すると、流路１４さらにはサンプルの定量分取部２３において電界が発生し、定量分取部２３に一定量残存したＤＮＡサンプルは、流路１４中を正電極側（図９中Ａ方向）へ泳動する。
【００７５】
流路１４中にはＤＮＡコンジュゲートが充填されており、ＤＮＡサンプルはＤＮＡコンジュゲートとの結合を繰り返しながら電気泳動する。この時、上述したようにＤＮＡサンプル中の正常型ＤＮＡはＤＮＡコンジュゲートとの結合力が強いため泳動速度が遅くなり、変異型ＤＮＡは結合力が弱いため正常型に比べ泳動速度は速くなる。つまりＤＮＡサンプル中に正常型、変異型両方が存在した場合は、正常型のＤＮＡと変異型のＤＮＡが分離していくこととなり、ＳＮＰｓの判別が行なえるのである。
【００７６】
図１１は図１０に示す流路１４の一部４０を電気泳動中にＤＮＡをスキャンしたグラフである。
【００７７】
ＤＮＡの検出は、蛍光標識（ＦＩＴＣ）を修飾したＤＮＡを４７０ｎｍの光で励起し、５２０ｎｍ付近の光検出により行なった。ＤＮＡの検出は、２６０ｎｍの吸光度により行なってもよい。
【００７８】
横軸が４０の部分の位置を表しＤＮＡは左から右へ泳動する。つまり左側が定量分取部２３で右側が正電極部１２側である。縦軸は蛍光強度で、上から１分毎に計時変化した波形を表す。徐々に２つの山が分離していく様子がわかる。この場合ＤＮＡサンプル中には同量の正常型ＤＮＡと変異型ＤＮＡが存在していることが判定された。
【００７９】
グラフ右側の山は泳動速度が速いので変異型、左側が遅く泳動しているので正常型となる。
【００８０】
以上のように、本実施の形態１によれば、サンプル保持部２０をもうけることで回転動作のみによって生体サンプル判別用プレート１上の定量分取部２３にＤＮＡサンプルを一定量保持し、正電極部１２と負電極部１３と流路１４によって電気泳動できるような構成とした。そして、サンプル流路を緩衝剤流路の内部に形成することで、流路パターンをコンパクトにすることができ、１枚のプレートで複数の項目を検査することが可能となる。さらには、流路断面積を変えることで２重の流路パターンを同時に検査することができるため、より複数の項目検査が可能となる。
【産業上の利用可能性】
【００８１】
本発明の生体サンプル判別プレートは、ＤＮＡサンプル等の生体サンプルの判別を、安価で、且つ簡便に行えるようにするものとして有用である。
【図面の簡単な説明】
【００８２】
【図１】本発明の実施の形態１にかかる生体サンプル判別用プレートの溝形成面を示す図
【図２ａ】本発明の実施の形態１にかかる生体サンプル判別用プレートに形成されるパターンを示す図
【図２ｂ】サンプル流路と緩衝剤流路が同心円方向に並べた流路パターンで溝が形成された面を示す図
【図３】本発明の実施の形態１にかかる生体サンプル判別用プレートのサンプル注入部、および緩衝剤注入部の断面図
【図４】本発明の実施の形態１にかかる生体サンプル判別用プレートのチャンバー部、サンプル保持部およびバッファ部の断面図
【図５】本発明の実施の形態１にかかる生体サンプル判別用プレートの正電極部および負電極部の断面図
【図６（ａ）】本発明の実施の形態１にかかる生体サンプル判別用プレートパターンに、試料充填処理を施した時のＤＮＡコンジュゲートの状態を示す図
【図６（ｂ）】本発明の実施の形態１にかかる生体サンプル判別用プレートパターンに、試料充填処理を施した時のＤＮＡコンジュゲートの状態を示す定量分取部拡大図
【図７】本発明の実施の形態１にかかる生体サンプル判別用プレートにＤＮＡコンジュゲートとＤＮＡサンプルを充填し、４０００ｒｐｍにて回転中の各試料の状態を示した図
【図８】本発明の実施の形態１にかかる生体サンプル判別用プレートにＤＮＡコンジュゲートとＤＮＡサンプルを充填し、４０００ｒｐｍにて回転後、急停止したときの各試料の状態を示した図
【図９】本発明の実施の形態１にかかる生体サンプル判別用プレートにＤＮＡコンジュゲートとＤＮＡサンプルを充填し、４０００ｒｐｍにて回転停止後、再回転した直後の各試料の状態を示した図
【図１０】本発明の実施の形態１にかかる生体サンプル判別用プレートパターンのＤＮＡスキャンを行なう部分を示した図
【図１１】本発明の実施の形態１にかかる生体サンプル判別用プレートに形成された定量分取部にＤＮＡサンプルが充填されて、該ＤＮＡサンプルが第１の流路に充填された分離用ＤＮＡコンジュゲート中を移動していく様子を示す図
【符号の説明】
【００８３】
１  生体サンプル判別用プレート
２、２’  流路パターン
３    回転部固定用穴
４    位置決め穴
５    プレート重心
６    緩衝剤注入口
７    緩衝剤注入部
８    サンプル注入口
９    サンプル注入部
１０  第１の流路
１１  第２の流路
１２  正電極部
１３  負電極部
１４  第３の流路
１５  流路
１６  チャンバー部
１７  流路
１８  流路
１９  流路
２０  サンプル保持部
２１  バッファ部
２２  流路
２３  定量分取部
２４  溝
２５  流路
２６  流路
２７  フィルム
２８  流路
２９  流路
３０  穴
３１  ＤＮＡコンジュゲート
３２  ＤＮＡコンジュゲート
３３  ＤＮＡコンジュゲート
３４  空気
４０  スキャン流路
Ａ    泳動方向
【図１】
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【図２ａ】
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【図２ｂ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６（ａ）】
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【図６（ｂ）】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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