(57)【要約】 【課題】微生物を捕集しその粘着性シート上で微生物を生育し、増殖した微生物を検出することを特徴とする微生物検査用キットを提供する。【解決手段】基材上に水溶性粘着層を積層してなる粘着性シートの該粘着層を被験体の表面に圧着、剥離して該粘着層の表面に微生物または細胞を捕集後、該粘着性シート上で微生物を培養、しかる後、前記捕集培養した微生物の検出を行うことを含む、被験体中に存在する微生物検査用粘着性シート及び微生物検査キット。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
支持体の少なくとも片面に設けた水溶性粘着剤からなる粘着剤層に微生物の栄養素を含有させてなることを特徴とする、微生物検査用粘着性シート。
【請求項２】
水溶性粘着剤がアクリル系共重合物である、請求項１記載の微生物検査用粘着性シート。
【請求項３】
アクリル系共重合物が、アルコキシアクリレート及びＮ-ビニルラクタムを主たる構成単位とするアクリル系共重合物である、請求項２記載の微生物検査用粘着性シート。
【請求項４】
粘着剤層に検査対象の微生物を選択し得る選択剤をさらに含有させた請求項１〜３のいずれか一項記載の微生物検査用粘着性シート。
【請求項５】
粘着剤層に微生物の着色剤をさらに含有させた、請求項１〜４のいずれか一項記載の微生物検査用粘着性シート。
【請求項６】
微生物の着色剤が蛍光染料である、請求項５記載の微生物検査用粘着性シート。
【請求項７】
支持体が多孔質であることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか一項記載の微生物検査用粘着性シート。
【請求項８】
水溶性粘着剤に少なくとも微生物の栄養素を添加・混合して調製した粘着剤組成物を支持体上に塗布、乾燥して粘着剤層を形成することを特徴とする、微生物検査用粘着性シートの製造方法。
【請求項９】
粘着剤組成物が水溶性粘着剤に微生物の栄養素とともに、検査対象の微生物を選択し得る選択剤を添加・混合して調製したものである、請求項８記載の微生物検査用粘着性シートの製造方法。
【請求項１０】
請求項１〜７のいずれか一項記載の微生物検査用粘着性シートの粘着剤層を被験体に圧着して微生物を捕集し、該粘着剤層上に捕集された微生物を培養して増殖させること、及び該増殖させた微生物の検出を行うことを含む、被験体中に存在する微生物の検査方法。
【請求項１１】
請求項１〜７のいずれか一項記載の微生物検査用粘着性シートの粘着剤層上に検査対象の微生物を含む溶液を滴下し、該粘着剤層上の微生物を培養して増殖させること、及び該増殖させた微生物の検出を行うことを含む、被験体中に存在する微生物の検査方法。
【請求項１２】
生育させた微生物の検出を、目視、増感装置又は自動検出装置によって行うことを特徴とする、請求項１０または１１記載の方法。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれか一項記載の微生物検査用粘着性シートと、検査対象の微生物を着色し得る着色剤及び／又は検査対象の微生物を選択し得る選択剤を含むことを特徴とする、微生物検査用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は粘着剤層上に捕集した微生物を培養して増殖させることができる微生物検査用粘着性シート及びその製造方法に関する。また、該粘着性シートを用いて微生物を検出することを特徴とする、微生物検査方法及び検査用キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、被験材料中の菌数を推定するには、例えば市販のフードスタンプ等を使用したアガースタンプ法のように、１個の菌が１個のコロニーを形成することを応用し、寒天等の固形培地を被験材料に押し当てて菌を培養し、寒天平板上に発現したコロニーを肉眼で見定めながら計測する方法がある。また、例えば市販の微生物／微粒子検査用メンブレンフィルター等を使用したメンブレンフィルター法のように、被験材料を生理食塩水等で洗いだし、メンブレンフィルターで捕集し、液体培地を吸収させることによりフィルター上でコロニーを形成させる方法もある。さらに下記非特許文献１には、フィルムに培地をコートし、これを被験面に接触培養するだけで検体採取が可能なフィルムコート培地を作成した例が報告されている。
【０００３】
しかしながら、アガースタンプ法では、寒天培地の大きさ（面積）が限られているとともに、通常一被験面に対して一度しか使用できないので、寒天培地の含水率によって捕集効率が変化し、再現性に劣る等、細菌の捕集効率において不都合をきたすことが多かった。さらに、寒天培地中の水分によって被験面が汚染されるといった問題もある。
【０００４】
また、メンブレンフィルター法では、洗い出し工程とフィルターでの濾過工程の２工程を要するために、操作が煩雑になるとともに、二次汚染が懸念される等の不都合がある。すなわちこの方法では、直接的に被験物質から菌を採取できず、使用前の滅菌作業、綿棒でのサンプリング、洗い出し液の調整、およびフィルター濾過などに多大な労力がかかり、コストアップが避けられない。
【０００５】
さらに、下記非特許文献１に発表されたフィルムコート培地は、アガースタンプ法と同様に、水分によって被験面が汚染されるといった問題がある。また、使用されている寒天培地の曲げ強度が小さい為に、シートとしての利用が制限され、培地とフィルムとの接着力不足等の諸欠点がある。
【０００６】
一方、本出願人は、粘着性シートの粘着剤層を圧着、剥離して、該粘着剤層上に微生物を捕集（集積）した後、微生物を染色し得る一種以上の発色性物資を含有する水溶液を粘着剤層表面に接触させ、染色された菌体を観察・計数（画像解析）することで、被験体中に存在する微生物を検出できる検査方法を提案した（下記特許文献１）。この検査方法は、粘着性シートの粘着剤層を微生物の捕集手段及び被験面として用いることによって、特に固形状の被験体の表面（固体表面）に存在する微生物を簡便に検出できるようにしたものである。しかしながら、例えば、被験体の表面が比較的清浄なものである場合、微生物捕集量が少ないために、十分に高い検出精度が得られないという問題があった。また、下記特許文献１の方法では、捕集された微生物と微小なごみとの識別がし難いという問題もあった。
【特許文献１】特開２００２−１４２７９７号公報
【非特許文献１】医学検査、１９９２年、第４１巻、第３号、p３５２
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、上記事情に艦みなされたもので、その目的は、被験体に圧着、剥離して粘着剤層上に捕集した微生物（検体）を培養して増殖させることができる微生物検査用粘着性シート及びその製造方法、並びに、そのような粘着性シートを用いて微生物を検出することを特徴とする、微生物の検査方法及び検査用キットを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意研究した結果、微生物の栄養素を水溶性粘着剤に配合した粘着剤組成物による粘着剤層は、微生物の生育が可能な培地様となり得ることを見出し、かかる知見に基づきさらに研究を重ねた結果、本発明を完成するに到った。
【０００９】
すなわち、本発明は、
（１）支持体の少なくとも片面に設けた水溶性粘着剤からなる粘着剤層に微生物の栄養素を含有させてなることを特徴とする、微生物検査用粘着性シート、
（２）水溶性粘着剤がアクリル系共重合物である、（１）記載の微生物検査用粘着性シート、
（３）アクリル系共重合物が、アルコキシアクリレート及びＮ-ビニルラクタムを主たる構成単位とするアクリル系共重合物である、（２）記載の微生物検査用粘着性シート、
（４）粘着剤層に検査対象の微生物を選択し得る選択剤をさらに含有させた（１）〜（３）のいずれかに記載の微生物検査用粘着性シート、
（５）粘着剤層に微生物の着色剤をさらに含有させた、（１）〜（４）のいずれかに記載の微生物検査用粘着性シート、
（６）微生物の着色剤が蛍光染料である、（５）記載の微生物検査用粘着性シート、
（７）支持体が多孔質であることを特徴とする、（１）〜（６）のいずれかに記載の微生物検査用粘着性シート、
（８）水溶性粘着剤に少なくとも微生物の栄養素を添加・混合して調製した粘着剤組成物を支持体上に塗布、乾燥して粘着剤層を形成することを特徴とする、微生物検査用粘着性シートの製造方法、
（９）粘着剤組成物が水溶性粘着剤に微生物の栄養素とともに、検査対象の微生物を選択し得る選択剤を添加・混合して調製したものである、（８）記載の微生物検査用粘着性シートの製造方法、
（１０）（１）〜（７）のいずれかに記載の微生物検査用粘着性シートの粘着剤層を被験体に圧着して微生物を捕集し、該粘着剤層上に捕集された微生物を培養して増殖させること、及び該増殖させた微生物の検出を行うことを含む、被験体中に存在する微生物の検査方法、
（１１）（１）〜（７）のいずれかに記載の微生物検査用粘着性シートの粘着剤層上に検査対象の微生物を含む溶液を滴下し、該粘着剤層上の微生物を培養して増殖させること、及び該増殖させた微生物の検出を行うことを含む、被験体中に存在する微生物の検査方法、
（１２）生育させた微生物の検出を、目視、増感装置又は自動検出装置によって行うことを特徴とする、（１０）または（１１）記載の方法、
（１３）（１）〜（７）のいずれかに記載の微生物検査用粘着性シートと、検査対象の微生物を着色し得る着色剤及び／又は検査対象の微生物を選択し得る選択剤を含むことを特徴とする、微生物検査用キット、
に関する。
【００１０】
なお、本明細書中、「微生物の検査」とは「微生物の検出検査」を意味する。
【発明の効果】
【００１１】
本発明の微生物検査用粘着性シートによれば、粘着剤層が微生物の栄養素を含むことから、粘着剤層上に捕集した微生物はそのまま培養して増殖させることができる。よって、粘着剤層上に捕集した微生物（検体）量が少ない場合でも、粘着剤層上に捕集した微生物を他の媒体に転写して培養する等の煩わしい作業を行うことなく、粘着性シート上で微生物（検体）の濃度を高めて、粘着剤層表面を被験面として精度の高い検出作業を行うことができる。また、比較的清浄度が高い被験体を検査対象とするときには同一粘着面で検査範囲を拡げることができるので、経済的かつ省力的に微生物の検出を行うことができる。また、微生物の捕集は粘着剤の粘着力によることから、比較的高い捕集効果が安定的に得られ、しかも、従来の検査用培地で問題となっていた、水分による被験面汚染の問題も解消することができる。
【００１２】
また、本発明の微生物検査用粘着性シートは、シートとしての操作性、取扱い性、安定性、保存性に優れるので、微生物の生育及び／又は検出のために必要な他の試薬、材料、器具等と組み合わせて、微生物検査のためのキットを構成することができ、該キットによって、検査作業者は、微生物検査をより簡単に実施することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
以下、本発明をより詳細に説明する。
図１は本発明の微生物検査用粘着性シート（以下、単に「粘着性シート」と略称する場合がある。）の一例を簡略化して示した断面図である。本発明の微生物検査用粘着性シートは、該一例の微生物検査用粘着性シート１０に示されるように、支持体２の少なくとも片面に粘着剤層１が形成され、該粘着剤層１に少なくとも微生物の生育に必要な栄養素を含有させたものである。
【００１４】
該一例の粘着性シート１０は、支持体２の一方の片面に粘着剤層１を設けたものであるが、本発明の粘着性シートにおいて、粘着剤層１は支持体２の両面（一方と他方の片面）に設けてもよい。
【００１５】
本発明の粘着性シートにおいて、粘着剤層１に用いる粘着剤は水溶性であれば特に限定されず、公知の水溶性粘着剤を制限なく使用できる。
【００１６】
粘着剤層を構成する水溶性粘着剤（以下、「水溶性高分子」ともいう。）としては、例えば、カンテン、カラゲニン、アラビアゴム、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、ゼラチン、カルボキシメチルセルロース、アルギン酸、メチルセルロース、ポリアクリル酸系及び／又はポリアクリル酸塩系高分子化合物、アクリル系共重合物、親水性ポリエーテル系ウレタンポリマー、スチルバゾリウム化ポリビニルアルコール、キサンタンガム等の多糖類、ポリエチレンオキサイド、ポリ（Ｎ−イソプロピルアクリルアミド）等のアクリルアミド類等が好ましい。
【００１７】
より好ましい水溶性高分子として、コロニーの成長の速さと分離性能の点から、アルコキシアクリレート及びＮ-ビニルラクタムを主たる構成単位とするアクリル系共重合物が挙げられる。ここで「アルコキシアクリレート及びＮ-ビニルラクタムを主たる構成単位とするアクリル系共重合物」とは、アルコキシアクリレートとＮ-ビニルラクタムの二元共重合物又は該二元共重合物にその他のモノマーをさらに共重合した共重合物を意味する。
【００１８】
アクリル系共重合物のモノマー成分であるアルコキシアルキルアクリレートとしては、炭素数１〜４のアルコキシ基と炭素数２〜４のアルキル基あるいはアルキレングリコール基をもつアクリレートが好ましい。具体的には、例えば２−メトキシエチルアクリレート、２−エトキシエチルアクリレート、２−ブトキシエチルアクリレート、３−メトキシプロピルアクリレート、３−メトキシブチルアクリレート、３−エトキシプロピルアクリレート、３−エトキシブチルアクリレート、さらに、ブトキシトリエチレングリコール、２−（２−エトキシエチル）エチルアクリレート、メトキシトリエチレンアクリレート、メトキシジプロピレングリコールアクリレート等のアルコキシアルキレングリコールアクリレートが挙げられ、低いガラス転移点を有する、親水性が高い、反応性が高い等の点から、２−メトキシエチルアクリレート、２−エトキシエチルアクリレートが好ましい。
【００１９】
また、Ｎ−ビニルラクタムとしては、５〜７員環のＮ−ビニルラクタムが使用される。例えばＮ−ビニル−２−ピロリドン、Ｎ−ビニル−２−ピペリドン、Ｎ−ビニル−２−カプロラクタム等が挙げられるが、安全性、汎用性の面からＮ−ビニル−２−ピロリドンが好ましい。
【００２０】
アルコキシアルキルアクリレートの配合割合は、好ましくはアクリル系共重合物全体の６０〜８０重量％であり、さらに好ましくは６５〜７５重量％である。アルコキシアルキルアクリレートの配合割合が、６０重量％未満になると、得られた粘着剤層は柔軟性が低くなる場合がある。一方、８０重量％を超えると、粘着剤層は粘着性が亢進し、強度が低くなる場合がある。
【００２１】
また、Ｎ−ビニルラクタムの配合割合は、好ましくはアクリル系共重合物全体の２０〜４０重量％であり、さらに好ましくは２５〜３５重量％である。Ｎ−ビニルラクタムの配合割合が、２０重量％未満になると、得られた粘着剤層の強度および吸水能力が低くなる場合がある。一方、４０重量％を超えると、得られた粘着剤層の柔軟性が低く、アクリル系共重合物が水分に溶解して流れが生じる場合がある。
【００２２】
アクリル系共重合物には、吸水能力を向上させるために、ビニルカルボン酸を共重合させてもよい。ビニルカルボン酸としては、例えばアクリル酸、メタクリル酸、クロトン酸、イタコン酸、マレイン酸、フマル酸、マレイン酸半エステル、フマル酸半エステルが挙げられる。中でも、反応性、汎用性の面からアクリル酸が好ましい。
【００２３】
ビニルカルボン酸の配合割合は、アクリル系共重合物全体の１０重量％以下が好ましく、さらに好ましくは５重量％以下である。ビニルカルボン酸の配合割合が１０重量％を超えると、粘着剤層は吸水能力が亢進し、柔軟性が低くなる傾向がある。
【００２４】
また、多官能アクリレートまたはメタクリレートを０．０１〜１重量％配合して共重合させて得られたアクリル系共重合物も有益である。
【００２５】
本発明に用いられる多官能アクリレートまたはメタクリレートとしては、例えば１，４−ブタンジオールジアクリレート、１，４−ブタンジオールジメタクリレート、ネオペンチルグリコールジアクリレート、１，６−ヘキサンジオールジアクリレート、１，６−ヘキサンジオールジメタクリレート等のアルキル型ジアクリレートまたはジメタクリレート、ジエチレングリコールジアクリレート、ジエチレングリコールジメタクリレート、トリエチレングリコールジアクリレート、トリエチレングリコールジメタクリレート、ポリエチレングリコール２００ジアクリレート、ポリエチレングリコール４００ジアクリレート、ポリエチレングリコール６００ジアクリレート、ポリエチレングリコール２００ジメタクリレート、ポリエチレングリコール４００ジメタクリレート、ポリエチレングリコール６００ジメタクリレート、ポリエチレングリコール１０００ジメタクリレート、ポリプロピレングリコール４００ジアクリレート、ポリプロピレングリコール４００ジメタクリレート等のアルキレングリコール型ジアクリレートまたはジメタクリレート、ヒドロキシピバリン酸ネオペンチルグリコールジアクリレート等のエステル型ジアクリレートまたはジメタクリレート、トリメチロールプロパントリアクリレート、トリメチロールプロパントリメタクリレート、エトキシ化トリメチロールプロパントリアクリレート、ジトリメチロールプロパンテトラアクリレート等のトリメチロールプロパン型トリおよびテトラアクリレートまたはトリメタクリレート、ペンタエリスリトールトリアクリレート、ペンタエリスリトールテトラメタクリレート等のペンタエリスリトール型トリおよびテトラアクリレートまたはトリおよびテトラメタクリレート、トリス（アクリロキシエチル）イソシアヌレート、トリス（メタクリロキシエチル）イソシアヌレート等のイソシアヌレート型トリアクリレートまたはトリメタクリレート、エトキシ化ビスフェノールＡジアクリレート、エトキシ化ビスフェノールＡジメタクリレート等のビスフェノールＡ型ジアクリレートまたはジメタクリレート等が挙げられるが、親水性、安全性の面からアルキレングリコール型ジアクリレートまたはジメタクリレートが好ましく、架橋が適度に行われる点からポリエチレングリコール６００ジメタクリレート、ポリエチレングリコール４００ジメタクリレートが一層好ましい。
【００２６】
多官能アクリレートまたはメタクリレートの配合割合は、好ましくはアクリル系共重合物全体の０．０１〜１重量％であり、さらに好ましくは０．０５〜０．５重量％である。この成分の量が、０．０１重量％未満になると、架橋が不十分となり、強度が低下し、水溶性となる傾向がある。一方、１重量％を超えると、柔軟性、粘着性が低下し、親水性が著しく低下し、吸水後白化する傾向がある。
【００２７】
本発明の水溶性粘着剤の製造はそれ自体既知の方法で行うことができる。
【００２８】
アクリル系共重合物は、溶液重合、乳化重合、懸濁重合、塊状重合、光重合等のいずれの共重合方法で製造してもよい。溶液重合は媒体および重合開始剤の存在下、モノマー混合物を過熱攪拌して行う。溶媒としては、例えば水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、アセトン、メチルエチルケトン、酢酸メチル、酢酸エチル、トルエン、キシレン、エチレングリコールモノアルキルエーテル等が挙げられるのであり、これらは単独或いは２種以上を混合して用いることができる。重合開始剤としては、例えばベンゾイルパーオキサイド、キュメンハイドロパーオキサイド、ジイソプロピルパーオキシジカーボネート、アゾビスイソブチロニトリル等が挙げられるのであり、これらは単独或いは２種類以上を混合して用いることができる。重合開始剤は、モノマー１００重量部に対して０．０１重量部以上５重量部以下で重合が好ましく進行し、０．１重量部以上０．５重量部以下がより好ましい。
【００２９】
また、アクリル系共重合物は、光開始剤の存在下、モノマー混合物にＵＶ光を照射して行う光重合でも重合できる。光重合は多官能アクリレートまたはメタクリレートを除くモノマーおよび光開始剤の混合物を十分窒素置換した後、一定の線量のＵＶ光を照射し、得られる部分重合シロップに、必要に応じて、多官能アクリレートまたはメタクリレートおよび後述する可塑剤を混合したものを塗布或いは枠内に流延した後、十分なＵＶ光を照射することにより、共重合物を得る。あるいは、モノマー、光開始剤、および必要に応じて、可塑剤の混合物を十分窒素置換した後、一定の線量のＵＶ光を照射し、得られる部分重合シロップを塗布或いは枠内に流延した後、十分なＵＶ光を照射することにより、共重合物を得る方法が好ましい。
【００３０】
この場合、部分重合時の総照射線量は２０ｍＪ／ｃｍ２以上３００ｍＪ／ｃｍ２以下が好ましく、完全重合時の総照射線量は１０００ｍＪ／ｃｍ２以上１００００ｍＪ／ｃｍ２以下が好ましく、２０００ｍＪ／ｃｍ２以上５０００ｍＪ／ｃｍ２以下がさらに好ましい。
【００３１】
光開始剤は、例えば、４−フェノキシジクロロアセトフェノン、４−ｔ−ブチル−ジクロロアセトフェノン、４−ｔ−ブチル−トリクロロアセトフェノン、ジエトキシアセトフェノン、２−ヒドロキシ−２−メチル−１−フェニルプロパン−１−オン、１−（４−イソプロピルフェニル）−２−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−１−オン、１−（４−ドデシルフェニル）−２−ヒドロキシ−２−メチルプロパン−１−オン、４−（２−ヒドロキシエトキシ）−フェニル−（２−ヒドロキシ−２−プロピル）ケトン、１−ヒドロキシシクロヘキシルフェニルケトン、２−メチル−１−〔４−（メチルチオ）フェニル〕−２−モルホリノプロパン−１等のアセトフェノン系光開始剤、ベンゾイン、ベンゾインメチルエーテル、ベンゾインエチルエーテル、ベンゾインイソプロピルエーテル、ベンゾインイソブチルエーテル、ベンジルジメチルケタール等のベンゾイン系光開始剤、ベンゾフェノン、ベンゾイル安息香酸、ベンゾイル安息香酸メチル、４−フェニルベンゾフェノン、ヒドロキシベンゾフェノン、４−ベンゾイル−４’−メチルジフェニルサルファイド、３，３’−ジメチル−４−メトキシベンゾフェノン等のベンゾフェノン系光開始剤、チオキサンソン、２−クロルチオキサンソン、２−メチルチオキサンソン、２，４−ジメチルチオキサンソン、イソプロピルチオキサンソン、２，４−ジクロロチオキサンソン、２，４−ジエチルチオキサンソン、２，４−ジイソプロピルチオキサンソン等のチオキサンソン系光開始剤である。光開始剤は吸光係数等によっても異なるが、モノマー１００重量部に対して０．００５重量部以上０．５重量部以下で重合が好ましく進行し、０．０１重量部以上０．２重量部以下がより好ましい。
【００３２】
また、この場合、必要に応じて光開始助剤を加えてもよい。光開始助剤は、例えば、トリエタノールアミン、メチルジエタノールアミン、トリイソプロパノールアミン、４，４’−ジメチルアミノベンゾフェノン、４，４’−ジエチルアミノベンゾフェノン、２−ジメチルアミノ安息香酸エチル、４−ジメチルアミノ安息香酸エチル、４−ジメチルアミノ安息香酸（ｎ−ブトキシ）エチル、４−ジメチルアミノ安息香酸イソアミル、４−ジメチルアミノ安息香酸２−エチルエキシル等が挙げられるのであり、これらは単独或いは２種以上を混合して用いることができる。光開始助剤は、モノマー１００重量部に対して０．０１重量部以上１重量部以下で重合が好ましく進行し、０．０２重量部以上０．５重量部以下がより好ましい。
【００３３】
水溶性高分子には、必要に応じて可塑剤を添加することができる。可塑剤を添加することにより、一層柔軟性および粘着性を向上させることができる。この可塑剤としては、使用する水溶性高分子との相溶性がよく、親水性である化合物を用いることが望ましい。
【００３４】
例えば、アクリル系共重合物に可塑剤を添加する場合、可塑剤はアクリル系共重合物１００重量部に対して５重量部以上４０重量部以下が好ましく、１０重量部以上３０重量部以下がさらに好ましい。また、他の水溶性高分子に可塑剤を添加する場合、可塑剤は水溶性高分子１００重量部に対して５重量部以上５００重量部以下が好ましく、１０重量部以上３００重量部以下がさらに好ましい。
【００３５】
可塑剤がアクリル系共重合物１００重量部に対して４０重量部を超えると、凝集力の低下等のアクリル系共重合物の特性が失われたり、後述する電子線などの放射線や化学的架橋剤による不溶化が困難となったり、多官能アクリレートまたはメタクリレート架橋による不溶化が困難となる場合がある。これらの観点より、可塑剤はアクリル系共重合物１００重量部に対して４０重量部以下とするのがより好ましい。また柔軟性および粘着性を一層向上させるためにも、可塑剤はアクリル系共重合物１００重量部に対して５重量部以上とするのが好ましい。
【００３６】
本発明で使用される可塑剤としては、例えばエチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、グリセリン、ジグリセリン、２，３−ブタンジオール、１，２−ブタンジオール、３−メチル−１，３−ブタンジオール、３−メチル−１，３，５−ペンタントリオール、２−エチル−１，３−ヘキサンジオール等の低分子量の多価アルコール、平均分子量が１０００以下であるポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリオキシエチレンブチルエーテル、ポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレン、ポリオキシプロピレングリセリルエーテル、ポリオキシプロピレングリコール、ポリオキシプロピレンソルビトール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンペンタエリスリトールエーテル等が挙げられるが、優れた柔軟性、粘着性および親水性が得られる点から、特に平均分子量が２００以上８００以下であるポリオキシプロピレングリセリルエーテル、平均分子量が２００以上８００以下であるポリオキシプロピレングリコール、平均分子量が２００以上８００以下であるポリオキシプロピレンソルビトールなどが好ましい。
【００３７】
また、適度な水分率を維持するために、親水性低分子物質を添加することもできる。親水性低分子物質としては、高沸点液状物質及び／又は潮解性無機塩類等が挙げられる。高沸点液状物質としては、沸点が１００〜４００℃、好ましくは２００〜３５０℃の化合物が好ましい。その具体例として、多価アルコール、糖アルコールなどが挙げられ、多価アルコールとしては、エチレングリコール、ジエチレングリコール、トリエチレングリコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、グリセリン等が、糖アルコールとしてはソルビトール等が挙げられる。また、潮解性無機塩類の具体例としては、硝酸リチウム、塩化リチウム等が挙げられる。
【００３８】
親水性低分子物質の使用量は、水溶性高分子１００重量部に対して２０〜３００重量部であることが好ましく、この割合はポリアクリル酸系高分子化合物において特に好ましいものである。該親水性低分子物質の使用量が２０重量部未満では顕著な吸湿効果や保湿効果が得られず、３００重量部を超えると水溶性組成物の粘度が高すぎて作業性が悪いために好ましくないものである。
【００３９】
本発明の水溶性粘着剤の滅菌処理方法としては、例えば電子線或いはγ線等の放射線照射による滅菌が挙げられる。この場合、放射線の照射線量は、例えばアクリル系共重合物であればその水溶性の度合いによって異なるが、２５ｋＧｙ以上５０ｋＧｙ以下とするのが望ましい。２５ｋＧｙ未満の場合には、滅菌は保障しがたく、照射線量が２５ｋＧｙ以上の場合には、医療関連法規の定める滅菌を兼ねることができる。５０ｋＧｙを超える場合、着色等の変性が著しく、使用は制限される。
【００４０】
上記した水溶性高分子と可塑剤及び／又は親水性低分子物質は、水と必要に応じて架橋剤を加え、混合攪拌してゲル化物を形成する。あるいはＰＶＡのように凍結、融解ゲルとして使用することもある。また、電子線或いはγ線の放射線照射架橋によるゲル化も挙げられる。特に、アクリル系共重合物の場合はＵＶ光重合が有効である。
【００４１】
好ましい架橋剤として、例えばポリエチレングリコールジグリシジルエーテル、エチレングリコールジグリシジルエーテル、グリセリントリグリシジルエーテル、トリグリシジルイソシアヌレート等の分子中に少なくとも２個のエポキシ基を有する化合物が挙げられる。これら架橋剤は、特にポリアクリル酸系高分子化合物において好ましいものである。
【００４２】
架橋処理法としては、例えば電子線或いはγ線などの放射線照射架橋による不溶化が挙げられる。この場合、放射線の照射線量は、例えばアクリル系共重合物であればその水溶性の度合いによって異なるが、１ｋＧｙ以上５０ｋＧｙ以下とするのが望ましい。
【００４３】
また、アクリル系共重合物に可塑剤を配合することによって水溶性が増加する場合にも、架橋処理による不溶化が必要となる場合が有る。
【００４４】
さらに、前述のアクリル系共重合物に可塑剤を添加する場合のアクリル系共重合物の配合割合が、アクリル系共重合物と可塑剤の合計量中６０重量％以上とあるのは、アクリル系共重合物のみからなる場合、つまりアクリル系共重合物１００重量％の場合も含み、架橋処理によってアクリル系共重合物の不溶化を実現し、保形性を実現する必要がある場合も有る。
【００４５】
こうして得られる粘着剤層用の水性組成物における水分率は、５〜９５重量％が好適であり、固化・硬化後のゲル層の水分率は通常５〜８０重量％の範囲に保つことが好ましい。この水分率は、特にポリアクリル酸系高分子化合物において好ましい水分率である。また、ゲル化物のｐＨは必要に応じ調整することができるが、通常６．５〜７．５の範囲が好ましい。
【００４６】
本発明の粘着性シートにおいて、粘着剤層１に含有させる微生物の栄養素は特に限定されず、検出目的の微生物に応じて、種々の栄養素を選択でき、例えば、標準寒天培地、ＬＢ培地、ＳＣＤＡ培地（一般細菌用）、Ｒ２Ａ培地（水質検査用）、マンニット食塩培地（ブトウ球菌用）等が挙げられる。該栄養素の配合量は特に限定されないが、微生物の増殖性の点から、粘着剤（固形分）に対し０．５〜２０重量％程度が好ましく、１〜１０重量％程度がより好ましい。
【００４７】
また、粘着剤層１には微生物の栄養素以外に、微生物の検出に好適に作用する機能物質（添加剤）を添加することができる。該機能物質（添加剤）としては、例えば、特定の微生物を検出するための選択剤、微生物を着色し得る着色剤等が挙げられる。
【００４８】
選択剤の具体例としては、選択培地、抗菌剤、抗生物質等が挙げられる。特定の微生物としては、食中毒菌として問題となっている、大腸菌や腸管出血性大腸菌、黄色ブドウ球菌、サルモネラ、腸炎ビブリオ、リステリア、院内感染問題で注目を浴びている薬剤耐性菌のＭＲＳＡ、ナチュラルウォーター中に存在する微生物、医薬用水中に存在する微生物、酵母、真菌などが挙げられる。耐性菌検出のために添加する抗菌剤の具体例としては、例えば、アルコール類、グルタルアルデヒド、ヨードホール、ポピドンヨード、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、アルキルポリアミノエチルグリシン、グルコン酸シクロヘキシジン、ベンズイソチアゾリン、有機窒素含有環式化合物、有機窒素硫黄系化合物、有機窒素硫黄ハロゲン化合物、ピリジンオキサイド系化合物等が挙げられ、抗生物質の具体例としては、例えば、セフェム系、第二世代セフェム系、第三世代セフェム系抗生物質（セファロシン、セファロリジン等）、ペニシリン系抗生物質（メチシリン、アンピシリン、ペニシリンＧ等）、テトラサイクリン系抗生物質（テトラサイクリン等）、ペプチド系抗生物質（バンコマイシン等）、アミノグリコシド系抗生物質（アルベカシン、スプレプトマイシン、カナマイシン等）が挙げられる。これら抗菌剤又は／及び抗生物質の配合量は特に限定されないが、粘着剤（固形分）に対し１×１０−６〜１×１０−１重量％程度が好ましく、２×１０−５〜４×１０−３重量％がより好ましい。
【００４９】
微生物の着色剤としては、微生物の検出検査（試験）において微生物を着色するために使用されている公知の材料を用いることができる。例えば、微生物の着色に汎用されている蛍光染料や、生育する微生物に特異的な酵素基質、ｐＨ指示薬のような着色料等が挙げられる。蛍光染料は、検査対象である微生物または細胞に作用して蛍光を発する物質（蛍光性物質）であれば特に限定されないが、それ自身は発光しないが、微生物の作用により変換され、発光するようになる物質を用いるのが好ましく、具体例としては、SYBR Green Ｉ、SYBR Green II、SYBR Gold、SYTOX Green、DAPI、6-Carboxyfluorescein Diacetate(CFDA)、TOTO-1 Iodide、 YOYO-1 Iodide、SYTO 62、SYTO 63、SYTO 64（いずれもMolecular Probes社製）などが挙げられ、なかでも、SYBR Goldが微生物の染色性が良好で、しかも、微生物の増殖を阻害しにくい点でより好ましい。添加する蛍光染料の濃度は、粘着剤層中、好ましくは０．０１〜１００ｐｐｍ、より好ましくは０．１〜１０ｐｐｍである。すなわち、濃度が０．０１ｐｐｍより小さい場合、微生物の着色が弱くて、検出が困難となり、濃度が１００ｐｐｍを超える場合、バックグラウンド発色が生じて、検出が困難となってしまい、好ましくない。また、着色剤として酵素基質を使用する場合、添加する酵素基質の濃度は、粘着剤層中、好ましくは１０μｇ／ｍｌ〜１０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは５０μｇ／ｍｌ〜２ｍｇ／ｍｌである。すなわち、濃度が１０μｇ／ｍｌより小さい場合、微生物の着色が弱くて、検出が困難となり、濃度が１０ｍｇ／ｍｌを超える場合、バックグラウンド発色が生じて、検出が困難となってしまい、好ましくない。さらに、着色剤としてｐＨ指示薬を使用する場合、添加するｐＨ指示薬の濃度は、粘着剤層中、好ましくは１μｇ／ｇ〜１ｍｇ／ｇ、より好ましくは５μｇ／ｇ〜２００μｇ／ｇである。すなわち、濃度が１μｇ／ｇより小さい場合、微生物の着色が弱くて、検出が困難となり、濃度が１ｍｇ／ｇを超える場合、バックグラウンド発色が生じて、検出が困難となってしまい、好ましくない。
【００５０】
本発明の粘着性シートは、自体既知の方法で製造される。
【００５１】
例えば、可塑剤、親水性低分子物質及び／又は架橋剤を含有する、水溶性高分子物質の水溶液（水性組成物）を支持体に塗布し、１０℃〜２００℃で乾燥させ、支持体が非透水性の場合は、支持体に穴をあけることによって製造される。乾燥によって薄膜状に形成させた粘着剤層は、必要に応じて１０℃〜１００℃の温度で後処理してもよい。形成された粘着剤層は、適度な粘着性と水分率が付与されている。
【００５２】
特にアクリル系共重合物は、優れた熱可塑性を有するために、押し出し成形によりシート状に加工することができる。この押し出し成形はインフレーション成形、Ｔダイ成形、ラミネーション成形等の一般に知られるあらゆる方法を用いることができるが、高温押し出し、急冷が可能なので光学的性質に優れたフィルム或いはシートが得られ、且つ冷却能率が良いので生産速度を上げられる上、シート厚みの調節が容易である等の観点より、Ｔダイ成形が好ましい。尚、押し出し機は単軸押し出し機及び２軸押し出し機のいずれを用いてもよい。成形温度、ダイリップ幅、押し出し速度、引き取り速度等の成形条件を適宜に制御することにより、フィルム或いはシートの厚みを調節することができる。この場合、成形温度は１４０℃以上１８０℃以下が好ましく、さらに好ましくは１５０℃以上１７０℃以下である。成形温度が、１４０℃未満の場合、しばしば非溶融物が混入して品質にバラツキが生じるおそれがあり、一方１８０℃を超えると、膜切れや気泡の噛み込み現象が生じるので好ましくない。
【００５３】
また、このフィルムおよびシートの成形法として、カレンダー法、キャスティング法等の方法を用いることもできる。但し重合方法が光重合の場合、光開始剤を含むモノマー混合物、或いはその部分重合シロップ、または光開始剤および可塑剤を含むモノマー混合物、或いはその部分重合シロップをポリエステルフィルム等からなる剥離性フィルム上に一定の厚みで流延塗布し、その上から透明な剥離性フィルムにて覆った後、不活性雰囲気下、ＵＶ光を十分に照射することにより、重合と成膜が同時に行われる。かくして得られたフィルムおよびシートは任意の形状に裁断して粘着性シートとして使用することができ、任意の支持体と張り合わせて使用できる。
【００５４】
さらに、本発明におけるアクリル系共重合物を構成するモノマー、溶剤、重合開始剤の混合物を通常の操作でラジカル重合することにより、アクリル系共重合物を得ることができるのであり、このアクリル系共重合物の溶液をキャスティングしてフィルムを形成することもできる。このフィルムはその厚みが１０〜７５μｍ、好ましくは２０〜５０μｍとなるように調節されるのであり、この厚みが７５μｍを超えると、不純物や残存モノマーが十分に除去できなかったり、後述する乾燥時に著しく発泡したりするため好ましくなく、一方、１０μｍ未満になると吸水量が少なく、しかも所要の強度が得られないことがあるから望ましくない。この得られたフィルムは、一定の条件下で乾燥することにより、溶剤等（溶剤及び／又はプレポリマー、以下単に不純物という）および残存モノマーが除去されたフィルム状の粘着剤を得ることができる。
【００５５】
この場合、乾燥条件としては、フィルムの厚さ、更に減圧乾燥或いは常圧乾燥などの乾燥条件によって異なるのであり、常圧乾燥では、フィルムの厚さが１０〜７５μｍで、１１０〜１５０℃で３０秒〜２０分、特に１２０〜１４０℃で１〜１５分とするのが望ましい。
【００５６】
このように、本ポリマーで形成されたフィルムを乾燥することによって不純物や残存モノマーが除去される結果、品質が安定する上、この不純物や残存モノマーに基づく、微生物への悪影響を除くことができる。
【００５７】
上記アクリル系共重合物を溶剤でキャスティングする方法を除いて、本発明の微生物検査用粘着性シートにおける粘着剤層１はその厚みが、１０μｍ以上、好ましくは２０μｍ以上２０００μｍ以下、さらに好ましくは３０μｍ以上１０００μｍ以下に設定されることが好適である。この厚みが、１０μｍ未満の場合、しばしば膜切れ現象を生じて好ましくなく、２０００μｍを超えるものは透水性が悪く、しかも厚くする意味がないのである。
【００５８】
本発明において、水溶性高分子をこのフィルム状またはシート状に成形してから、電子線或いはγ線等の放射線を照射することにより、架橋を施すこともできる。特にアクリル系共重合物において、この放射線架橋が有効である。架橋処理は前述と同様の条件で行うことができる。
【００５９】
また本発明の粘着性シートは滅菌した状態で細菌遮断性包材に封入する等により、無菌状態を保持した形態をとることができる。なお滅菌法はＥＯＧ（エチレンオキサイドガス）法、電子線法、γ線法を用いるのが好ましい。即ち、上記の粘着性シートを細菌遮断性包材に封入する等により、無菌状態を保持し得る形態とした後、電子線或いはγ線を照射して架橋および滅菌処理を施すことにより、本発明のポリマー並びにこれを用いてなる粘着性シートを流通に供することができる。
【００６０】
この場合、電子線或いはγ線などの放射線の照射線量はポリマーの親水度によって異なるが、架橋処理は前述と同様の条件で行うことができる。
【００６１】
このようにして得られた粘着性シートの粘着剤層は、均質な水吸収性を有するのが好ましい。すなわち、粘着剤層は、ＳＵＳＢＡ４３０板での３００ｍｍ／分の速度で１８０°方向への引剥し接着力（ＪＩＳＫ６８５４に準じる）が、５〜５００ｇ／２０ｍｍ、好ましくは１００〜４００ｇ／２０ｍｍである。
【００６２】
また、本発明のポリマーにおいて、２４時間吸水率が２０重量％以上５０００重量％以下であるものが特に望ましい。
【００６３】
ここで吸水率とは、ポリマーをフィルム状或いはシート状に成形し、これを１．５ｃｍ×１．５ｃｍに裁断し、吸水前の重量を測定したのち、各裁断片をリン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ７．４、３２℃）１３５ｍｌ中に２４時間浸漬した。そののち、各裁断片を取り出して表面の水分を拭い取り、吸水後の重量を測定し、増加した重量から算出した値である。
【００６４】
この吸水率の増加に伴い、柔軟性、応力緩和性が増大するが、吸水率が５０００重量％を超えると、ゲル強度が低下して脆くなるか、或いは溶解傾向となり、実質的に使用不可能となるが、吸水率が５０００重量％以下では実質的に使用可能な強度を有するゲル状態を得ることができ、特に３０００重量％以下で有効に使用可能な強度を有するゲル状態を得ることができる。一方、吸水率が２０重量％未満になると、透水性が悪くなり、支持体からの水分、栄養分の吸収が悪くなる。
【００６５】
本発明の微生物検査用粘着性シートにおける支持体２には、粘着テープ用の支持体として使用されている公知のシート(フィルム）類を適用できるが、粘着剤層表面に大きな凹凸を形成させず、また、曲面や狭所表面にも自在に圧着させ得る柔軟な材質からなるものが好適であり、例えば、ポリエステル、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリウレタン、ポリ塩化ビニル、エチレン−酢酸ビニル共重合体、ウレタン−アクリルハイブリッド樹脂等からなる中実または多孔質のプラスチックシート、布、不織布、紙、ポリエチレンラミネート紙等が挙げられる。これらの中でも、柔軟性や機械的強度の点からポリエステルフィルムやポリカーボネートフィルムが好ましく、これらの多孔質フィルムが特に好ましい。
【００６６】
また、支持体２の厚みは粘着性シートの支持体としての十分な強度が得られる厚みであれば特に制限されるものではないが、一般的には５〜５０００μｍ程度であり、好ましくは５〜２００μｍ程度である。
【００６７】
本発明の微生物検査用粘着性シートには、支持体２の粘着剤層と接する面とは反対面に、基材の強度を上げたり、光学的な散乱防止や発色性物質を用いて発色した微生物の視認性を向上させるバックグランド色を形成するために、さらにバッキング層を設けてもよい。
【００６８】
本発明の微生物検査用粘着性シートは、水溶性粘着剤に微生物の栄養素、さらに必要に応じて目的に応じた種々の機能物質（添加剤）を添加、混合して粘着剤組成物を調製し、かかる粘着剤組成物をアプリケータ等の公知の塗工手段を用いて支持体上に塗布し、次いで、９０〜１３０℃程度で乾燥することによって製造することができる。かくして得られた粘着性シートは任意の形状に裁断して、使用することができる。
【００６９】
こうして作製された粘着性シートは滅菌した状態で細菌遮断性包材に封入する等により、無菌状態を保持した形態をとることができる。なお滅菌法はγ線滅菌などを用いるのが好ましい。即ち、粘着性シートを細菌遮断性包材に封入する等により、無菌状態を保持し得る形態とした後、γ線滅菌処理を施すことにより、本発明の粘着性シートを流通に供することができる。なお、粘着剤層に、微生物の着色剤として、蛍光性色素を含有させる場合、蛍光性色素の減退を防ぐために、作製した粘着性シートは遮光保存するのが好ましい。
【００７０】
以下、本発明の微生物検査用粘着性シートを用いて、微生物を検出する方法について説明する。まず、粘着性シートの粘着剤層を被験体に押し当て、被験体に付着している微生物を粘着剤層上に捕集する。または、水溶液状の被験物質（即ち、検査対象の微生物を含む水性溶液、例えば、飲料水や食品懸濁液、拭き取り法などにより捕集した微生物含有液等）を粘着性シートの粘着剤層上に直接接種する。次に、粘着剤層上の微生物を培養して増殖させる。粘着剤層は微生物の生育に必要な栄養素を含んでいるため、粘着剤層上の微生物は培地に転写（培地に接触）させる必要なく、粘着剤層上で増殖させることができる。
【００７１】
なお、人体や設備機器の二次汚染を防ぐ目的で本発明の粘着性シートはこれらの汚染源となる物品、環境から遮断された状態を保つのが好ましく、例えば、微生物を捕集した粘着性シートを直ちにシャーレに入れる、粘着性シートの粘着剤層を微生物が透過することのできないフィルムで覆う等の手段を講じるのが好ましい。図２は微生物を捕集した粘着性シートをシャーレに入れて微生物の培養を行う実施態様の一例を示している。また、図３は、シャーレに入れる代わりに、微生物が透過することのできないフィルムで覆う実施態様の一例を示している。なお、ここでいう「微生物が透過することのできないフィルム」とは、微生物が移動可能な大きさの孔を有しないフィルムのことであり、例えば、ポリエステル、ポリウレタン、ポリエチレンなどのプラスチックフィルムや、孔径０．２μｍ以下のメンブレンフィルタ等が挙げられる。
【００７２】
本発明において、微生物の培養は、微生物がその粘着剤層上に捕集された（付着した）粘着性シートをそのまま微生物が培養され得る環境下、すなわち、微生物が生育し得る温・湿度環境下に置くことによって行うことができる。粘着性シートを微生物が生育し得る温・湿度環境下とは、例えば、恒温インキュベーターや湿潤箱によって得られる環境である。また、孵卵器等のインキュベーターを使用してもよい。粘着剤層に含有させた栄養素、さらに種々の機能物質（添加剤）が、微生物に取り込まれ、微生物の増殖が進む。なお、適当な水分存在下で微生物を培養することが好ましく、例えば、インキュベートに用いる機器（孵卵器等）内を湿潤にする方法、微生物が付着した粘着剤層表面に滅菌水や滅菌生理食塩水等を滴下する方法等が挙げられる。なお、滅菌水や滅菌生理食塩水等を滴下する場合、該滅菌水等に特定の微生物を検出するための選択剤を含んでも良く、その場合選択剤の量は１×１０−６〜１×１０−１重量％程度が好ましく、２×１０−５〜４×１０−３重量％がより好ましい。
【００７３】
本発明の粘着性シートで検出する微生物は特に限定されない。前記したように、選択培地や抗生物質を添加することで、特定の菌のみについて検出することも可能である。
【００７４】
本発明における検出対象となる微生物には、細菌や放線菌などの原核生物、酵母やカビなどの真核生物、下等藻類などが含まれる。また、微生物にはコロニー、マイクロコロニーも含まれる。
【００７５】
本発明の粘着性シートで増殖した微生物の集合体（コロニー）を検知する手段は特に限定されない。目視で観察しても良いし、光学顕微鏡や位相差顕微鏡、蛍光顕微鏡、電子顕微鏡、レーザー顕微鏡等で観察しても良い。また、市販のコロニーカウンターや、各種画像の自動検出装置（例えば、簡易顕微鏡にオートスキャン装置を組み合わせたもので、該粘着性シートをステージに乗せるだけで、自動で画像を取り込み、微生物を検出するもの）を用いても良い。
【００７６】
本発明の粘着性シートで増殖した微生物のコロニーの大きさは、特に限定されない。目視で観察できる大きさまで増殖させても良い。また、少なくとも４個以上の集合体であれば、増殖したコロニーとして判定できる。
【００７７】
本発明の粘着性シートで増殖した微生物を検知する場合、直接観察しても良いし、観察前に微生物を着色してもよい。また、前記したように、本発明の粘着性シートにおいては、粘着剤層に予め微生物の着色剤を含有させることができるが、粘着剤層に微生物の着色剤を含有させて微生物を増殖させた後、さらに微生物の観察前に粘着剤層を着色剤に付して微生物を着色してもよい。このような微生物の観察前に行う微生物の着色に使用する着色剤には、粘着剤層に含有させる着色剤と同様のものを使用することができ、その具体例も前記と同様のものが挙げられる。なお、あらかじめ粘着剤中に着色剤を添加することで、増殖した微生物を十分に着色できる場合、観察前の微生物の着色作業の手間を省くことができる。
【００７８】
本発明の粘着性シートを適用して微生物検査を行う被験体は特に限定されない。例えば、床や壁、食品や医薬品の製造装置、肉や魚や野菜の表面、ホモジナイズした食品、調理器具、医療器具、水などが挙げられる。
【００７９】
本発明の粘着性シートの応用の一例として、該粘着性シートをローラーとして使用すれば、細菌を粘着捕獲したシートの粘着面にコロニーを発現させることができ、被験物質の清浄度を簡便に測定する院内環境調査用などに利用できる。また、粘着剤の培地にメチシリン等の特定の抗菌剤や抗生物質を含有させることによりＭＲＳＡ等の耐性菌の検出用途にも使用できる。
【００８０】
本発明の粘着性シートを用いた微生物検査用キットの内容は、微生物を着色し得る着色剤、微生物を選択し得る添加剤、微生物を捕集後培養するためのシャーレ、微生物を捕集後培養する際に粘着性シートを覆う微生物が透過することのできないフィルム、小型インキュベーター等が考えられ、誰でも何処でもできる環境調査器具一式を提供することができる。  
【実施例】
【００８１】
以下に実施例を挙げて、本発明をさらに具体的に説明するが、これは単なる例示であって本発明の範囲を何ら限定するものではない。
【００８２】
〔実施例１〕
（１）粘着シートの作製
攪拌機付き密閉型反応器に２−メトキシエチルアクリレート７０重量部、Ｎ−ビニル−２ピロリドン３０重量部、重合開始剤としてアゾビスイソブチロニトリル０．１７５重量部および蒸留水−メタノール−イソプロパノール混合溶剤（重量比＝１６：２３：１）２５０重量部を仕込み、１０ｍｌ／分の流量で２時間窒素置換した後、反応器内を６０〜６２℃に維持しながら１．５時間攪拌した。続いて、７５℃で２時間攪拌することにより、反応を完結させた後、室温まで冷却して、アクリル系共重合物の溶液を得た。
これに、可塑剤としてポリオキシプロピレングリセリルエーテル（平均分子量４００）２０重量部を添加・混合し、粘着組成物とした。
【００８３】
上記のようにして得られた粘着組成物８１．３ｇ（固形分４１％）にSCD  Broth（日水製）１ｇを添加・混合した。この混合物を、アプリケーターを用いて剥離紙上に２０μｍの厚みになるように塗布した後、１１０℃で３分間乾燥することによって溶剤および未反応モノマーを除去し、水溶性高分子を主成分とする粘着剤を得た。さらに、支持体としてポリカーボネートタイプメンブレンフィルター（ワットマン社製、製品名Nucleopore、孔径０．２μｍ）を貼り付けた。
【００８４】
これを耐細菌性包材に封入した後、コバルト６０を線源とするγ線（照射線量２５ｋＧｙ）を照射して滅菌した。最後に、粘着集菌に適当な大きさ（約３×４ｃｍ）に切り分け、本発明の粘着シートとした。
【００８５】
（２）微生物の捕集および染色
本発明のキットを用いて、水溶液状検体からの微生物の検出を行った。
滅菌生理食塩水で約６×１０７cells／ｍｌに希釈したブドウ球菌（Staphylococcus  ATCC  strain  No.155）１０μｌを、（１）で作製した培地添加粘着性シートの粘着剤面に滴下した。前記の方法により集菌した粘着性シートをシャーレに入れて蓋をし、３２℃で１６時間静置培養した。培養後、リン酸緩衝液で１ｐｐｍに調製した６−ＣＦＤＡ溶液（Molecular Probes社製）３００μｌを染み込ませた濾紙を、支持体側に接触させ（支持体が透水性なので、粘着剤面まで染色液を吸い上げることができる）、３分間室温で放置して粘着剤面に生育したマイクロコロニーを染色した後、支持体面をリン酸緩衝液で洗浄した。
【００８６】
（３）検出（計測）
粘着剤層表面（微生物捕集培養面）を落射型蛍光顕微鏡（オリンパス社製、ＢＸ５１）（１０００倍、青色励起：４６０ｎｍ〜４９０ｎｍの励起波長）で観察したところ、培地を添加した粘着剤上で該ブドウ球菌（Staphylococcus）が増殖し、形成されたマイクロコロニーを観察することができた。
【図面の簡単な説明】
【００８７】
【図１】本発明の粘着性シートの一実施態様を示す横断面図である。
【図２】本発明の粘着性シートを培養する際の、一実施態様例を示す横断面図である。
【図３】本発明の粘着性シートを培養する際の、他の一実施態様例を示す横断面図である。
【符号の説明】
【００８８】
１  粘着剤
２  支持体
３  シャーレ
４  フィルム
【図１】
2006136274.tif 000002
【図２】
2006136274.tif 000003
【図３】
2006136274.tif 000004