(57)【要約】      （修正有）【課題】血管形成因子によって誘導される細胞増殖、細胞移動、または管形成を阻害するための薬剤組成物、および当該薬剤組成物を用いた、血管形成因子によって誘導される細胞増殖、細胞移動、または管形成を阻害するための方法の提供。【解決手段】具体例を示すと１−ベンジル−３−（５’−ヒドロキシメチル−２’−フリル）インダゾールで表わされる化合物を配合した薬剤組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の化学式の化合物を含む、血管形成因子によって誘導される細胞増殖を阻害するための薬剤組成物：
【化１】
2006070032.tif 000006
ここでＡはＨまたは
【化２】
2006070032.tif 000007
であり、ここでｎは０、１、２または３であり；
Ａｒ１、Ａｒ２、およびＡｒ３はそれぞれ独立に、フェニル、チエニル、フリル、ピロリル、ピリジニル、またはピリミジニルであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６はそれぞれ独立に、Ｒ、ニトロ、ハロゲン、Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｃ（Ｏ）ＳＲ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ’、（ＣＨ２）ｍＯＲ、（ＣＨ２）ｍＳＲ、（ＣＨ２）ｍＮＲＲ’、（ＣＨ２）ｍＣＮ、（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＯＲ、（ＣＨ２）ｍＣＨＯ、（ＣＨ２）ｍＣＨ＝ＮＯＲであるか、またはＲ１およびＲ２が一緒になって、Ｒ３およびＲ４が一緒になって、もしくはＲ５およびＲ６が一緒になってＯ（ＣＨ２）ｍＯであり、ここでＲおよびＲ’はそれぞれ独立にＨ、アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクリル、またはヘテロシクリルであり；並びにｍは０、１、２、３、４、５、または６である。
【請求項２】
前記血管形成因子が血管内皮細胞増殖因子である、請求項１に記載の薬剤組成物。
【請求項３】
前記血管形成因子が塩基性線維芽細胞増殖因子である、請求項１に記載の薬剤組成物。
【請求項４】
Ａｒ３がフェニルである、請求項１に記載の薬剤組成物。
【請求項５】
Ａｒ２が５’−フリルである、請求項４に記載の薬剤組成物。
【請求項６】
Ｒ３がＨであり、並びにＲ４がＣＨ２ＯＨであり、およびフリルの２位で置換される、請求項５に記載の薬剤組成物。
【請求項７】
Ａｒ１がフェニルである、請求項６に記載の薬剤組成物。
【請求項８】
Ｒ１がそれぞれアルキルまたはハロゲンであり、並びにＲ２、Ｒ５、およびＲ６がそれぞれＨである、請求項７に記載の薬剤組成物。
【請求項９】
Ａｒ１がチエニルである、請求項６に記載の薬剤組成物。
【請求項１０】
前記血管形成因子が血管内皮細胞増殖因子または塩基性線維芽細胞増殖因子である、請求項６に記載の薬剤組成物。
【請求項１１】
Ａｒ２が５’−フリルである、請求項１に記載の薬剤組成物。
【請求項１２】
Ｒ３がＨであり、並びにＲ４がＣＨ２ＯＨであり、およびフリルの２位で置換される、請求項１１に記載の薬剤組成物。
【請求項１３】
前記血管形成因子が血管内皮細胞増殖因子または塩基性線維芽細胞増殖因子である、請求項１２に記載の薬剤組成物。
【請求項１４】
以下の化学式の化合物を含む、血管形成因子によって誘導される細胞移動を阻害するための薬剤組成物：
【化３】
2006070032.tif 000008
ここでＡはＨまたは
【化４】
2006070032.tif 000009
であり、ここでｎは０、１、２または３であり；
Ａｒ１、Ａｒ２、およびＡｒ３はそれぞれ独立に、フェニル、チエニル、フリル、ピロリル、ピリジニル、またはピリミジニルであり；
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６はそれぞれ独立に、Ｒ、ニトロ、ハロゲン、Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｃ（Ｏ）ＳＲ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ’、（ＣＨ２）ｍＯＲ、（ＣＨ２）ｍＳＲ、（ＣＨ２）ｍＮＲＲ’、（ＣＨ２）ｍＣＮ、（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＯＲ、（ＣＨ２）ｍＣＨＯ、（ＣＨ２）ｍＣＨ＝ＮＯＲであるか、またはＲ１およびＲ２が一緒になって、Ｒ３およびＲ４が一緒になって、もしくはＲ５およびＲ６が一緒になってＯ（ＣＨ２）ｍＯであり、ここでＲおよびＲ’はそれぞれ独立にＨ、アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクリル、またはヘテロシクリルであり；並びにｍは０、１、２、３、４、５、または６である。
【請求項１５】
前記血管形成因子が血管内皮細胞増殖因子である、請求項１４に記載の薬剤組成物。
【請求項１６】
前記血管形成因子が塩基性線維芽細胞増殖因子である、請求項１４に記載の薬剤組成物。
【請求項１７】
Ａｒ３がフェニルである、請求項１４に記載の薬剤組成物。
【請求項１８】
Ａｒ２が５’−フリルである、請求項１７に記載の薬剤組成物。
【請求項１９】
Ｒ３がＨであり、並びにＲ４がＣＨ２ＯＨであり、およびフリルの２位で置換される、請求項１８に記載の薬剤組成物。
【請求項２０】
Ａｒ１がフェニルである、請求項１９に記載の薬剤組成物。
【請求項２１】
Ｒ１がそれぞれアルキルまたはハロゲンであり、並びにＲ２、Ｒ５、およびＲ６がそれぞれＨである、請求項２０に記載の薬剤組成物。
【請求項２２】
Ａｒ１がチエニルである、請求項１９に記載の薬剤組成物。
【請求項２３】
前記血管形成因子が血管内皮細胞増殖因子または塩基性線維芽細胞増殖因子である、請求項１９に記載の薬剤組成物。
【請求項２４】
Ａｒ２が５’−フリルである、請求項１４に記載の薬剤組成物。
【請求項２５】
Ｒ３がＨであり、並びにＲ４がＣＨ２ＯＨであり、およびフリルの２位で置換される、請求項２４に記載の薬剤組成物。
【請求項２６】
前記血管形成因子が血管内皮細胞増殖因子または塩基性線維芽細胞増殖因子である、請求項２５に記載の薬剤組成物。
【請求項２７】
以下の化学式の化合物を含む、血管形成因子によって誘導される管形成を阻害するための薬剤組成物：
【化５】
2006070032.tif 000010
ここでＡはＨまたは
【化６】
2006070032.tif 000011
であり、ここでｎは０、１、２または３であり；
Ａｒ１、Ａｒ２、およびＡｒ３はそれぞれ独立に、フェニル、チエニル、フリル、ピロリル、ピリジニル、またはピリミジニルであり；並びに
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６はそれぞれ独立に、Ｒ、ニトロ、ハロゲン、Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｃ（Ｏ）ＳＲ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ’、（ＣＨ２）ｍＯＲ、（ＣＨ２）ｍＳＲ、（ＣＨ２）ｍＮＲＲ’、（ＣＨ２）ｍＣＮ、（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＯＲ、（ＣＨ２）ｍＣＨＯ、（ＣＨ２）ｍＣＨ＝ＮＯＲであるか、またはＲ１およびＲ２が一緒になって、Ｒ３およびＲ４が一緒になって、もしくはＲ５およびＲ６が一緒になってＯ（ＣＨ２）ｍＯであり、ここでＲおよびＲ’はそれぞれ独立にＨ、アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクリル、またはヘテロシクリルであり；並びにｍは０、１、２、３、４、５、または６である。
【請求項２８】
前記血管形成因子が血管内皮細胞増殖因子である、請求項２７に記載の薬剤組成物。
【請求項２９】
前記血管形成因子が塩基性線維芽細胞増殖因子である、請求項２７に記載の薬剤組成物。
【請求項３０】
Ａｒ３がフェニルである、請求項２７に記載の薬剤組成物。
【請求項３１】
Ａｒ２が５’−フリルである、請求項３０に記載の薬剤組成物。
【請求項３２】
Ｒ３がＨであり、並びにＲ４がＣＨ２ＯＨであり、およびフリルの２位で置換される、請求項３１に記載の薬剤組成物。
【請求項３３】
Ａｒ１がフェニルである、請求項３２に記載の薬剤組成物。
【請求項３４】
Ｒ１がそれぞれアルキルまたはハロゲンであり、並びにＲ２、Ｒ５、およびＲ６がそれぞれＨである、請求項３３に記載の薬剤組成物。
【請求項３５】
Ａｒ１がチエニルである、請求項３２に記載の薬剤組成物。
【請求項３６】
前記血管形成因子が血管内皮細胞増殖因子または塩基性線維芽細胞増殖因子である、請求項３２に記載の薬剤組成物。
【請求項３７】
Ａｒ２が５’−フリルである、請求項２７に記載の薬剤組成物。
【請求項３８】
Ｒ３がＨであり、並びにＲ４がＣＨ２ＯＨであり、およびフリルの２位で置換される、請求項３７に記載の薬剤組成物。
【請求項３９】
前記血管形成因子が血管内皮細胞増殖因子または塩基性線維芽細胞増殖因子である、請求項３８に記載の薬剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血管形成因子によって誘導される細胞増殖、細胞移動、または管形成を阻害するための薬剤組成物、および当該薬剤組成物を用いた、血管形成因子によって誘導される細胞増殖、細胞移動、または管形成を阻害するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
組織中の細胞が酸素を奪われると、例えば血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）および塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）などの血管形成因子を放出する。前記血管形成因子は、近くの内皮細胞を引きつけ、それらの増殖、移動、および新たな管の形成を促す。血管形成として知られるこの過程は、外傷の治癒のために、および負傷後組織への血流の回復のために、健康な体内で起こる。多くの疾患の状態では、人体は血管形成の制御ができなくなる。
【０００３】
過剰な血管増殖は、癌、加齢性黄斑変性症、関節リウマチ、および乾癬などのある種の病的状態によって引き起こされる。過剰な血管増殖の結果、新しい血管が病変組織に血液を供給し、正常な組織を破壊する。癌の場合、新しい血管は腫瘍細胞を血液循環に流れさせ、および他の器官にとどまらせる。
【０００４】
過剰な血管形成に関連する障害としては、癌（固形癌および血液腫瘍の両方）、心疾患（例えばアテローム性動脈硬化）、慢性炎症（例えば関節リウマチまたはクローン病）、糖尿病（例えば糖尿病性網膜症）、乾癬、子宮内膜症、および脂肪過多症が挙げられる。例えば非特許文献１を参照。
【非特許文献１】Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ５２：  ２３７−２６８，  ２００１
【発明の開示】
【０００５】
概要
本発明は、一連の融合ピラゾリル化合物が、血管形成因子によって促される細胞増殖、細胞移動、および管形成を効果的に阻害するという驚くべき発見に基づいている。
【０００６】
したがって本発明の一実施形態は、血管形成因子によって誘導される細胞増殖、細胞移動、または管形成を阻害するための薬剤組成物、および当該薬剤組成物を用いた、血管形成因子によって誘導される細胞増殖、細胞移動、または管形成を阻害するための方法に関する。前記薬剤組成物は、以下の化学式の化合物を含む：
【０００７】
【化１】
2006070032.tif 000002
【０００８】
ここでＡはＨまたは
【０００９】
【化２】
2006070032.tif 000003
【００１０】
であり、ここでｎは０、１、２または３であり；Ａｒ１、Ａｒ２、およびＡｒ３はそれぞれ独立に、フェニル、チエニル、フリル、ピロリル、ピリジニル、またはピリミジニルであり；Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、およびＲ６はそれぞれ独立に、Ｒ、ニトロ、ハロゲン、Ｃ（Ｏ）ＯＲ、Ｃ（Ｏ）ＳＲ、Ｃ（Ｏ）ＮＲＲ’、（ＣＨ２）ｍＯＲ、（ＣＨ２）ｍＳＲ、（ＣＨ２）ｍＮＲＲ’、（ＣＨ２）ｍＣＮ、（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＯＲ、（ＣＨ２）ｍＣＨＯ、（ＣＨ２）ｍＣＨ＝ＮＯＲであるか、またはＲ１およびＲ２が一緒になって、Ｒ３およびＲ４が一緒になって、もしくはＲ５およびＲ６が一緒になってＯ（ＣＨ２）ｍＯであり、ここでＲおよびＲ’はそれぞれ独立にＨ、アルキル、アリール、ヘテロアリール、シクリル、またはヘテロシクリルであり；並びにｍは０、１、２、３、４、５、または６である。融合ピラゾリル化合物に１以上のＲまたは（ＣＨ２）ｍ部分がある場合、前記Ｒまたは（ＣＨ２）ｍ部分は同一であっても異なっていてもよいことに注意すべきである。前記血管形成因子はＶＥＧＦまたはｂＦＧＦでありうる。
【００１１】
上記の化学式に関して、前記化合物の一部は、Ａｒ１がフェニルもしくはチエニルである、Ａｒ２が５’−フリルである、またはＡｒ３がフェニルであることを特徴とする。さらに、Ａｒ２が５’−フリルである場合、Ｒ３およびＲ４のうち一方がＨであり、他方がＣＨ２ＯＨでありうる。いくつかの実施形態においては、前記ＣＨ２ＯＨ基がフリルの２位で置換される。
【００１２】
上記の方法を実施するために用いられる典型的な化合物を以下に示す。
【００１３】
【化３】
2006070032.tif 000004
【００１４】
「アルキル」の用語は、１〜１０の炭素原子を有する直鎖または分岐した炭化水素を意味する。アルキル基の例として、特に制限されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、およびｔ−ブチルが挙げられる。
【００１５】
「アリール」の用語は、炭素数６の単環、炭素数１０の二環、および炭素数１４の三環の芳香族環系を意味する。アリール基の例として、特に制限されないが、フェニル、ナフチル、およびアントラセニルが挙げられる。
【００１６】
「ヘテロアリール」の用語は、単環であれば１〜３のヘテロ原子を、二環であれば１〜６のヘテロ原子を、または三環であれば１〜９のヘテロ原子を有し、前記へテロ原子がＯ、Ｎ、もしくはＳから選択される（例えば単環、二環、または三環の場合、それぞれ、炭素原子および１〜３、１〜６、または１〜９の、Ｏ、Ｎ、もしくはＳのヘテロ原子）、芳香族の５〜８員の単環、８〜１２員の二環、および１１〜１４員の三環の環系を意味する。ヘテロアリール基の例として、特に制限されないが、ピリジル、フリルまたはフラニル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、ピリミジニル、チオフェニルまたはチエニル、キノリニル、インドリル、チアゾリルなどが挙げられる。
【００１７】
「シクリル」の用語は、炭素数３〜１２の、好ましくは炭素数３〜８の、より好ましくは炭素数３〜６の飽和および部分的に不飽和の環状の炭化水素基を意味する。シクリル基の例として、特に制限されないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロペンテニル、シクロヘキシル、シクロヘキセニル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルが挙げられる。
【００１８】
「ヘテロシクリル」の用語は、単環であれば１〜３のヘテロ原子を、二環であれば１〜６のヘテロ原子を、または三環であれば１〜９のヘテロ原子を有し、前記へテロ原子がＯ、Ｎ、もしくはＳから選択される（例えば単環、二環、または三環の場合、それぞれ、炭素原子および１〜３、１〜６、または１〜９の、Ｏ、Ｎ、もしくはＳのヘテロ原子）、非芳香族の５〜８員の単環、８〜１２員の二環、および１１〜１４員の三環の環系を意味する。ヘテロシクリル基の例として、特に制限されないが、ピペラジニル、ピロリジニル、ジオキサニル、モルフォリニル、テトラヒドロフラニルなどが挙げられる。
【００１９】
本明細書中で言及されるアルキル、アリール、ヘテロアリール、シクリル、およびヘテロシクリルは、置換および非置換の部分の両方を含む。置換基の例として、特に制限されないが、ハロゲン、ヒドロキシル、アミノ、シアノ、ニトロ、メルカプト、アルコキシカルボニル、アミド、カルボキシ、アルカンスルホニル、アルキルカルボニル、カルバミド、カルバミル、カルボキシル、チオウレイド、チオシアナート、スルホンアミド、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シクリルおよびヘテロシクリルが挙げられ、前記アルキル、アルケニル、アルキニル、アルキルオキシ、アリール、ヘテロアリール、シクリルおよびヘテロシクリルはさらに置換されてもよい。
【００２０】
上述の融合ピラゾリル化合物は、化合物そのものであっても、適切であればその塩およびプロドラッグであってもよい。このような塩は、例えば、融合ピラゾリル化合物上の負に荷電した置換基（カルボキシレートなど）とカチオンとの間の相互作用によって形成されうる。適当なカチオンとしては、特に制限されないが、ナトリウムイオン、カリウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、およびテトラメチルアンモニウムイオンなどのアンモニウムカチオンが挙げられる。同様に、正に荷電した置換基（アミノなど）は負に荷電した対イオンと塩を形成しうる。適当な対イオンとしては、特に制限されないが、塩化物イオン、臭化物イオン、ヨウ化物イオン、硫酸イオン、硝酸イオン、リン酸イオン、または酢酸イオンが挙げられる。プロドラッグの例としては、患者への投与によって上述の融合ピラゾリル化合物を提供することができる、エステルおよび他の製薬上許容される誘導体が含まれる。
【００２１】
本発明の他の特徴、目的、および利点は当該記述および特許請求の範囲により明らかにされるであろう。
【００２２】
詳細な説明
本発明は、血管形成因子によって誘導される細胞増殖、血管形成因子によって誘導される細胞移動、および血管形成因子によって誘導される管形成を阻害するための薬剤組成物を特徴とする。本発明はまた、当該薬剤組成物を用いて、血管形成因子によって誘導される細胞増殖、血管形成因子によって誘導される細胞移動、および血管形成因子によって誘導される管形成を阻害する方法を特徴とする。前記方法は、融合ピラゾリル化合物の有効量を投与を必要とする患者に投与することを含む。「有効量」は、必要とする患者への投与によって、患者に上述の効果を与えるのに必要なピラゾリル化合物の量として定義される。前記有効量は、当業者に理解されるように、効果の型、投与経路、賦形剤使用、および他の治療との併用の可能性に依存して変化する。
【００２３】
本発明の方法を実施するために、融合ピラゾリル化合物は経口で、非経口で、吸入スプレーで、または埋め込まれた容器を用いて、投与されうる。本明細書で用いられる場合、「非経口」の用語は、皮下、皮内、静脈内、筋肉内、関節内、動脈内、滑液嚢内、胸骨内、くも膜下、病巣内、および頭蓋内への注射または注入の技術を含む。
【００２４】
経口投与のための組成物は、特に制限されないが、錠剤、カプセル、乳化液ならびに水性の懸濁液、分散液、および溶液を含む任意の経口投与可能な剤形であってもよい。錠剤に通常用いられる担体には、ラクトースおよびコーンスターチが含まれる。ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤もまた典型的に錠剤に加えられる。カプセルの形態での経口投与のための有用な希釈剤としてはラクトースおよび乾燥コーンスターチが挙げられる。水性の懸濁液または乳化液が経口で投与される場合、活性成分は乳化剤もしくは懸濁化剤とともに油相に懸濁または溶解されうる。必要に応じて、甘味料、香料または着色剤が加えられてもよい。
【００２５】
無菌注射組成物（例えば水性または油性の懸濁液）は適切な分散剤または湿潤剤（例えばＴｗｅｅｎ  ８０など）および懸濁化剤を用いて、既知の技術に従って製剤されうる。無菌注射製剤は、また、１，３−ブタンジオールの溶液のような、無毒な非経口投与で許容される希釈剤もしくは溶媒中の、無菌注射溶液または懸濁液であってもよい。許容される媒体または溶媒の中で、用いられうるのはマンニトール、水、リンガー溶液および生理食塩液である。加えて、無菌の固定油は通常、溶媒または懸濁媒体（例えば合成モノ−またはジグリセリド）として用いられる。オレイン酸などの脂肪酸およびそのグリセリド誘導体は、注射剤の調製に、オリーブオイルまたはひまし油などの天然の製薬上許容される油として、特にそのポリオキシエチル化物において有用である。これらの油溶液または懸濁液はまた、長鎖アルコールの希釈剤もしくは分散剤、またはカルボキシメチルセルロースなどの分散剤を含んでもよい。
【００２６】
吸入組成物は製剤分野で既知の技術に従って調製することができ、ベンジルアルコールもしくは他の適当な防腐剤、バイオアベイラビリティを高めるための吸収促進剤、フルオロカーボン、および／または当該分野で既知の他の可溶化剤もしくは分散剤を用いた生理食塩水の溶液として調製することができる。
【００２７】
薬剤組成物の担体は、製剤の活性成分と適合する（および好ましくは活性成分を安定化する）という意味で、「許容される」必要があり、治療される患者にとって有害であってはならない。例えば、シクロデキストリン（融合ピラゾリル化合物と特異的に、より溶解性の複合体を形成する）などの可溶化剤は、融合ピラゾリル化合物のデリバリーのための製薬上の賦形剤として用いられうる。他の担体の例としては、コロイド状二酸化ケイ素、ステアリン酸マグネシウム、セルロース、ラウリル硫酸ナトリウム、およびＤ＆Ｃ  Ｙｅｌｌｏｗ  ＃  １０が挙げられる。
【００２８】
本発明の融合ピラゾリル化合物は、当業者に知られた方法で調製されうる（米国特許第５，５７４，１６８号明細書を参照）。調製は以下の合成経路を含む：はじめにアリールアリールケトンが、塩化アリールカルボニルを別のアリール化合物とのカップリングによって調製される。それぞれのアリール化合物は一置換または多置換であってもよい。その後ケトンはアリールアルキルヒドラジンと反応し、ここでもアリール基は一置換または多置換であってもよく、３つのアリール基を有するヒドラゾンを形成する。ヒドラゾン基はアルキレンリンカーによって融合ピラゾリルコアに変換され、別のアリール基はピラゾリルコアの４−Ｃおよび５−Ｃで融合し、第３のアリール基はピラゾリルコアの３−Ｃに直接結合する。前記融合ピラゾリル化合物の誘導体は、任意のアリール基上の置換基の修飾によって得ることができる。
【００２９】
上述した合成経路は、本明細書に明確に記載された段階の前または後のいずれかに、最終的に融合ピラゾリル化合物の合成を許容するための適当な保護基の付加または除去のためのさらなる段階を含みうる。加えて、さまざまな段階が他の方法で所望の化合物を得るために行われうる。融合ピラゾリル化合物の合成に適用できる合成化学的変換および保護基方法（保護および脱保護）が知られており、例えば、Ｒ．  Ｌａｒｏｃｋ，  Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，  ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ  （１９８９）；  Ｔ．Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．  Ｗｕｔｓ，  Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  ２ｄ．  Ｅｄ．，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ  （１９９１）；  Ｌ．  Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．  Ｆｉｅｓｅｒ，  Ｆｉｅｓｅｒ  ａｎｄ  Ｆｉｅｓｅｒ’ｓ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ  （１９９４）；Ｌ．  Ｐａｑｕｅｔｔｅ，  ｅｄ．，  Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｒｅａｇｅｎｔｓ  ｆｏｒ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ  （１９９５）およびその後の版に記載されるものを含む。
【００３０】
このように合成された融合ピラゾリル化合物は、カラムクロマトグラフィー、高速液体クロマトグラフィー、または再結晶のような方法で、さらに精製されうる。
【００３１】
適切なインビトロのアッセイが、ｂＦＧＦまたはＶＥＧＦなどの血管形成因子によって誘導される細胞増殖、細胞移動、および管形成の阻害における融合ピラゾリル化合物の効果を予備的に評価するために用いられうる。インビボのアッセイもまた、本技術分野において既知の方法で行われうる。以下の実施例５を参照。
【００３２】
さらなる実験を行うことなく、上述の記載は本発明の実施に十分であると考えられる。したがって以下の具体的な実施例は、単に例示として説明するためであって、開示の残部をいかようにも限定するものではない。
【実施例】
【００３３】
実施例１：１−ベンジル−３−（５’−ヒドロキシメチル−２’−フリル）インダゾール（化合物１）の合成
はじめに、無水塩化カルシウム（８８．８ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）を水素化ホウ素ナトリウム（６０ｍｇ、１．６ｍｍｏｌ）と無水ＴＨＦ中で４時間撹拌して、水素化ホウ素カルシウムを調製した。その後水素化ホウ素カルシウム溶液に、１−ベンジル−３−（５’−メトキシカルボニル−２’−フリル）インダゾール（８８．０ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を含む３０ｍＬのＴＨＦ溶液を３０±２℃で滴下して加えた。混合物を還流させながら６時間加熱して冷却し砕いた氷で急冷し、減圧下でＴＨＦを除去し、ろ過して固体状生成物を得た。固体状生成物をジクロロメタンで抽出した。抽出物を５０ｍｌに濃縮し、石油エーテルを加えて固体を沈殿させた。沈殿を集めてカラムクロマトグラフィー（シリカゲル−ベンゼン）で精製し、７０．０ｍｇの１−ベンジル−３−（５’−ヒドロキシメチル−２’−フリル）インダゾールを得た（収率：８７％）。
【００３４】
【表１】
2006070032.tif 000005
【００３５】
実施例２：細胞増殖の阻害
ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を、化合物１が存在しない（ベースおよびコントロール）または化合物１が存在する（０．０１、０．０３、０．１、０．３、および１μＭのさまざまな濃度で）条件でインキュベートした。ＶＥＧＦまたはｂＦＧＦを加えて（ベースは除く）ＤＮＡ合成を誘導し、ＤＮＡ合成を［３Ｈ］チミジン取り込みに基づいて検出した。
【００３６】
その結果、化合物１は、濃度に依存して、ＨＵＶＥＣのＶＥＧＦおよびｂＦＧＦによって誘導される細胞増殖を阻害することが示された。化合物１は予想外に、ＶＥＧＦおよびｂＦＧＦそれぞれに対して９．０×１０−８Ｍおよび１．４×１０−７Ｍの非常に低いＩＣ５０値を示した。
【００３７】
他の融合ピラゾリル化合物についても試験した。すべての試験化合物はＨＵＶＥＣのＶＥＧＦによって誘導される細胞増殖を阻害した。そのいくつかは化合物１と同じ、またはそれ以上に強力であった。
【００３８】
実施例３：細胞移動の阻害
ＨＵＶＥＣの化学走性移動はトランスウェル移動装置を用いて、Ｐａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  （２００３）  Ｊ．  Ｕｒｏｌ．  ６９：７２４−７２．に記載される方法に従って測定した。簡潔には、ＶＥＧＦまたはｂＦＧＦをＭ１９９および０．１％ウシ血清アルブミンで１０ｎｇ／ｍＬに希釈し、装置のトランスウェルチャンバーの下のウェルに加えた。ＨＵＶＥＣ（０．２ｍｌ中に２×１０５細胞）をトランスウェルチャンバーの上のウェルに加え、化合物１（３〜３０μＭ）で１時間処理した。フィルターを下のウェルの上に設置した。チャンバーを２４時間、３７℃で、空気９５％およびＣＯ２５％でインキュベートした。インキュベーションの最後にフィルターを装置から取り出し、細胞を固定してヘマトキシリンで染色した。フィルターの上の移動していない細胞をふきとった。フィルターを設置し、フィルターの下部に付着した移動した細胞を６ランダム高倍率視野で４００×の倍率で計数した。
【００３９】
細胞移動は化合物１で処理した群とコントロール群との間の移動した細胞の数の差として計算した。その結果化合物１（３〜３０μＭ）は、投与量に依存して、ＶＥＧＦおよびｂＦＧＦによって誘導される細胞移動を有意に阻害することが示された。
【００４０】
実施例４：管形成の阻害
ＨＵＶＥＣはあらかじめマトリゲル（１０ｍｇ／ｍＬ）でコートしたチャンバースライド上で培養した。細胞を化合物１（１０μＭ）で、または化合物１を入れずに（コントロール）、処理した。ＶＥＧＦ（１０ｎｇ／ｍＬ）またはｂＦＧＦ（１０ｎｇ／ｍＬ）を加えて管形成を誘導した。１００×の倍率で写真を撮影した。その結果化合物１は、ＶＥＧＦおよびｂＦＧＦによって誘導される、伸長した内皮細胞のネットワークの形成を効果的に阻害することが示された。
【００４１】
他の実施形態
本明細書に開示された全ての特徴は、任意の組み合わせで組み合わせることができる。本明細書に開示された個々の特徴は、同様の、等価な、あるいは類似の目的を果たす代替の特徴に置き換えることができる。よって、特記しない限り、開示された個々の特徴は等価または同様な一連の一般的な特徴の単なる例示である。
【００４２】
上述の説明によって、当業者は本発明の本質的な特徴を簡単に確認することができ、その思想および範囲から逸脱することなく、本発明にさまざまな変化や修正を加えさまざまな用途や条件に適用することができる。例えば、融合ピラゾリル化合物に構造的に類似する化合物のまた、本発明を実施するのに用いられうる。したがって、他の実施形態もまた特許請求の範囲に含まれる。