(57)【要約】【課題】      安価で品質安定性に優れ、皮膚細胞において生理活性物質の産生を促進させる効果を有する油脂組成物及びこの油脂組成物を含有する皮膚外用剤組成物を提供すること。【解決手段】  γ−リノレン酸及び／又はその誘導体を有効成分として含む生理活性物質産生促進油脂組成物及びこの油脂組成物を含有する皮膚外用剤組成物である。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
γ−リノレン酸及び／又はその誘導体を有効成分として含む生理活性物質産生促進油脂組成物。
【請求項２】
γ−リノレン酸誘導体が、親水性基と疎水性基よりなる誘導体である請求項１に記載の生理活性物質産生促進油脂組成物。
【請求項３】
γ−リノレン酸誘導体が、少なくともエステル構造を有する請求項１に記載の生理活性物質産生促進油脂組成物。
【請求項４】
γ−リノレン酸誘導体が、少なくともエステル構造と水酸基を有する請求項１に記載の生理活性物質産生促進油脂組成物。
【請求項５】
γ−リノレン酸誘導体が、γ−リノレン酸を構成成分として含むグリセリドである請求項１に記載の生理活性物質産生促進油脂組成物。
【請求項６】
γ−リノレン酸を構成成分として含むグリセリドが、単一グリセリド及び／又は混合グリセリドである請求項５に記載の生理活性物質産生促進油脂組成物。
【請求項７】
γ−リノレン酸誘導体が、γ−リノレン酸を構成成分として含む、トリグリセリド、ジグリセリド又はモノグリセリドである請求項１に記載の生理活性物質産生促進油脂組成物。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載の生理活性物質産生促進油脂組成物を含有する皮膚外用剤組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生理活性物質産生促進能を有するγ−リノレン酸（以下、ＧＬＡと略記することがある。）及び／又はその誘導体を有効成分として含む生理活性物質産生促進油脂組成物、及びこの油脂組成物を含有する皮膚外用剤組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から、乳液、クリーム、化粧水、美容液、パック剤、洗顔料及びメイクアップ化粧品等の化粧料、並びに分散液、軟膏及び外用液剤等の外用医薬品などの皮膚外用剤に特定の効果を付与することを目的として、保湿剤等の生理活性物質が配合されており、生理活性物質を配合した化粧料として種々のものが提案されている（例えば、特許文献１〜４参照）。
コラーゲン、ヒアルロン酸及びセラミド等の生理活性物質は、皮膚のはりや保湿性に大きく関係しているが、これらの生理活性物質を化粧料に配合しても、その効果が十分に発揮されない場合が多かった。そこで、生理活性物質の配合量を増加するなどの手段が採用されていたが、コスト及び製剤中での安定性の面で問題があった。
【０００３】
【特許文献１】特公昭６１−１０４４７号公報
【特許文献２】特開平６−１２２６１８号公報
【特許文献３】特開平９−２９５２号公報
【特許文献４】特開昭６４−５００３５５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、上記事情に鑑みなされたもので、安価で品質安定性に優れ、皮膚細胞において生理活性物質の産生を促進する効果を有する油脂組成物及びこの油脂組成物を含有する皮膚外用剤組成物を提供することを目的とするものである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、先に、ＧＬＡを遊離酸及び／又はグリセリドとして含有する油脂組成物が、安価で品質安定性に優れ、動物細胞の増殖を促進することを見出し、特許出願を行った（ＰＣＴ／ＪＰ２００４／１８５７５）。その後も研究を継続し、ＧＬＡを遊離酸及び／又はグリセリドとして含有する油脂組成物が、皮膚関連細胞においても細胞増殖を促進し、かつその細胞が生産する生理活性物質（コラーゲン、ヒアルロン酸及びセラミド等）の産生を促進する効果を有することを見出した。本発明はかかる知見に基づいて完成したものである。
すなわち、本発明は、以下の生理活性物質産生促進油脂組成物及び皮膚外用剤組成物を提供するものである。
１．  γ−リノレン酸及び／又はその誘導体を有効成分として含む生理活性物質産生促進油脂組成物。
２．  γ−リノレン酸誘導体が、親水性基と疎水性基よりなる誘導体である上記１に記載の生理活性物質産生促進油脂組成物。
３．  γ−リノレン酸誘導体が、少なくともエステル構造を有する上記１に記載の生理活性物質産生促進油脂組成物。
４．  γ−リノレン酸誘導体が、少なくともエステル構造と水酸基を有する上記１に記載の生理活性物質産生促進油脂組成物。
５．  γ−リノレン酸誘導体が、γ−リノレン酸を構成成分として含むグリセリドである上記１に記載の生理活性物質産生促進油脂組成物。
６．  γ−リノレン酸を構成成分として含むグリセリドが、単一グリセリド及び／又は混合グリセリドである上記５に記載の生理活性物質産生促進油脂組成物。
７．  γ−リノレン酸誘導体が、γ−リノレン酸を構成成分として含む、トリグリセリド、ジグリセリド又はモノグリセリドである上記１に記載の生理活性物質産生促進油脂組成物。
８．  上記１〜７のいずれかに記載の生理活性物質産生促進油脂組成物を含有する皮膚外用剤組成物。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、安価で品質安定性に優れた生理活性物質産生促進油脂組成物、及びこの油脂組成物を含有する皮膚外用剤組成物を得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明の生理活性物質産生促進油脂組成物（以下、単に「油脂組成物」と略記することがある。）の有効成分であるＧＬＡは遊離脂肪酸としてのみならず、エステルとして存在してもよい。「ＧＬＡ含有量」とは、本発明の油脂組成物中のＧＬＡ誘導体を全て遊離のＧＬＡとし、グリセリドを加水分解して得られる遊離脂肪酸と、油脂組成物に存在している遊離脂肪酸の合計から算出する。例えば、ＧＬＡがエステルとして存在する場合には、このエステルを加水分解して得られる遊離のＧＬＡ量を測定すればよい。
油脂組成物におけるＧＬＡの含有量は、産生促進の対象となる生理活性物質の種類に応じて適宜調整すればよい。一般的には、生理活性物質の相違による生理活性物質産生促進効果のばらつきを防ぐ点から、グリセリドを構成する脂肪酸と遊離脂肪酸の合計量に対し、５質量％以上が好ましい。より好ましくは１０質量％以上、さらに好ましくは２０質量％以上である。ＧＬＡの含有量には特に上限はないが、９８質量％を超えて含有しても、生理活性物質産生促進効果がより向上するものでもなく、経済的な観点から９８質量％以下が好ましい。ここで、生理活性物質としては、コラーゲン、ヒアルロン酸及びセラミド等が挙げられる。
ＧＬＡは化学的に合成して得ることもでき、ボラージ、月見草、ユキノシタ等の植物種子やスピルリナ（Spirulina)属等の藻類、カニンガメラ（Cunninghamella）属、モルティエレラ（Mortierella)属、ムコール（Mucor)属等の微生物から得ることもできる。得られたＧＬＡが誘導体である場合には、そのまま用いてもよく、加水分解処理やエステル交換処理を行ってもよい。
【０００８】
本発明に係るＧＬＡ誘導体の親水性基としては、水酸基、カルボキシル基、アミノ基及びそのイオン（−Ｏ-、−ＣＯＯ-、−ＮＨ3+）などが挙げられ、水酸基が好ましい。また、二種以上の親水性基を含んでいてもよい。疎水性基としては、アルキルエステル基、アルキルオキシ基及びアルキルオキシアルキル基などが挙げられる。この中で、アルキルエステル基が好ましく、炭素数６以上のアルキル基を有するアルキルエステル基が特に好ましい。
ＧＬＡ誘導体としては、ＧＬＡを構成成分として含むグリセリド、ビタミン類のエステル（例えば、Ｌ−カルニチンのエステル等）やアミノ酸類のエステルが好ましく、ＧＬＡを構成成分として含むグリセリドが特に好ましい。ＧＬＡを構成成分として含むグリセリドは、ＧＬＡのみを構成成分とする単一グリセリド（モノグリセリド、ジグリセリド又はトリグリセリド）でもよいし、ＧＬＡと他のカルボン酸（例えば、下記に好ましい脂肪酸として例示されているカプリル酸等）の一種又は二種を構成成分とする混合グリセリド（ジグリセリド又はトリグリセリド）でもよい。グリセリドとしては、単一グリセリドのみ又は混合グリセリドのみでもよく、単一グリセリドと混合グリセリドの混合物でもよい。入手が容易である点から、単一グリセリドと混合グリセリドの混合物が好ましい。
また、本発明の油脂組成物は、ＧＬＡ以外のカルボン酸を有効成分とする単一グリセリド及び／又は混合グリセリドを含んでいてもよい。
【０００９】
本発明の油脂組成物の成分であるトリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリドを構成する脂肪酸に制限はなく、例えば炭素数２〜２４の飽和脂肪酸及び不飽和脂肪酸が挙げられる。好ましい脂肪酸としては、カプリル酸、カプリン酸、ミリスチン酸、ミリストレイン酸、ペンタデセン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、リグレノリン酸、セロチン酸、オレイン酸、リノール酸、α−リノレン酸、γ−リノレン酸、オクタデカテトラエン酸、エイコセン酸、エイコサジエン酸、エイコサトリエン酸、エイコサテトラエン酸、アラキドン酸、エイコサペンタエン酸、ドコセン酸、ドコサジエン酸、ドコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸などが挙げられる。
グリセリドとしては特に制限はなく、化学合成品でも植物、動物由来のものでも、微生物由来のものでも用いることができるが、入手が容易である点から、植物又は微生物由来のものが好ましい。
本発明の油脂組成物中に含まれるトリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリドの含有割合は、生理活性物質の産生促進効果にばらつきが生じるのを防ぐ点から、グリセリド全量に対し、それぞれ１０〜７９質量％、２０〜７０質量％、１〜７０質量％が好ましい。トリグリセリド、ジグリセリド、モノグリセリドの含有割合は、より好ましくは、グリセリド全量に対し、それぞれ１０〜７０質量％、２５〜６０質量％、３〜６５質量％である。最も好ましくは、グリセリド全量に対し、それぞれ１０〜６５質量％、３０〜６０質量％、５〜６０質量％である。
このような組成のグリセリドは公知の方法で製造することができる。例えば、トリグリセリド型油脂を化学触媒又は酵素触媒を用いて、ジグリセリド、モノグリセリドに誘導する方法（例えば、特開２０００−２３６８８８、特開２０００−３３３６８８号公報参照）により製造することができる。
【００１０】
本発明の油脂組成物は、グリセリドとＧＬＡ油脂とを上記所定の割合で、公知の混合方法で混合することにより製造することができる。また、本発明の油脂組成物は、ＧＬＡを含有する微生物から、ＧＬＡを含有する微生物体内油脂又は微生物分泌油脂を抽出し、このＧＬＡ含有油脂を、加水分解処理又はエステル交換処理することにより得ることができる。
このような加水分解処理やエステル交換処理、あるいは上述のグリセリドの製造においては、遊離の脂肪酸やグリセリンが生成することもあるが、本発明の油脂組成物においては、これらが含まれていてもかまわない。
【００１１】
このＧＬＡ含有油脂は、ＧＬＡ含有油脂生産能を有する微生物を常法により培養することによって得ることができる。ＧＬＡ含有油脂生産能を有する微生物としては、上述したように、糸状菌や酵母、藻類など種々のものが挙げられる。例えば、γ−リノレン酸含有油脂生産能を有する微生物としては、特開昭６０−１６８３９１号公報等に記載されているモルティエレラ（Mortierella)属に属する微生物、特開昭６３−２８３５８９号公報等に記載されているムコール（Mucor)属に属する微生物、特開昭６３−１３３９９４号公報等に記載されているリゾプス（Rhizopus）属に属する微生物などが挙げられる。
より具体的には、モルティエレラ（Mortierella)属に属する微生物として、例えばモルティエレラ・イサベリナ（Mortierella isabellina）ＩＦＯ７８２４やモルティエレラ・ラマニアナ・アングリスポラ（Mortierella ramaniana var.angrispora）ＩＦＯ８１８７などが挙げられる。また、ムコール（Mucor)属に属する微生物としては、例えばムコール・シルシネロイデス（Mucor circinelloides）ＨＵＴ１１２１（ＦＥＲＭ Ｐ−９３５９）やムコール・ジャバニクス（Mucor javanicus)ＨＵＴ１１６２（ＦＥＲＭ Ｐ−９３６０）などが挙げられる。
【００１２】
上記微生物を培養するための培地は、上記微生物が良く生育して目的とする油脂を生産し得るものであればよく、炭素源、窒素源、無機塩類及び必要により微生物の生育に好適なアミノ酸等の成分を含むものが用いられる。炭素源としては、グルコース、デンプン、廃糖蜜等の糖類や有機酸や酢酸ナトリウムなどが使用でき、特にグルコース等の糖類が好適である。また、窒素源としては、アンモニウム塩、酵母エキス、コーンスティープリカー、ペプトンなどが挙げられる。無機塩類としては、マグネシウム塩、カルシウム塩、リン酸塩、鉄塩、銅塩などが挙げられる。
培養にあたり、炭素源や窒素源あるいはリン酸塩を、培地に最初から全量を加えた場合、微生物の生育に悪影響を及ぼすことがあるので、培養開始以降の適当な時期に一部追加することにより、γ−リノレン酸の生産性を向上させることができ、好ましい。
その他の培養条件、例えば温度、培養時間は、培地組成や目的とするγ−リノレン酸の含有率や油脂の生産性を考えて好ましい条件を設定すればよい。温度は通常２０〜３５℃程度、好ましくは２５〜３０℃、ｐＨは通常３〜７程度、好ましくは３．５〜６．５にて、通常７２〜２４０時間程度、好ましくは９６〜１６８時間行えばよい。
【００１３】
ＧＬＡを含有する油脂は、通常、微生物菌体中に蓄積されるので、常法により培養液を固液分離し、ＧＬＡを含有する油脂を含む菌体を得る。ＧＬＡの用途によってはこの菌体をそのまま用いることもできるが、さらに油脂を抽出し精製するためには、Ｂｌｉｇｈ＆Ｄｙｅｒ法、Ｆｏｌｉｃｈ法や特開昭５７−１４４９８６号公報などに記載の方法で菌体破砕、溶剤抽出を行い、目的とするＧＬＡ含有油脂を得ることができる。
以上のようにして得られたＧＬＡ含有油脂を、公知の方法により加水分解処理又はエステル交換処理することにより、本発明の油脂組成物を得ることができる。このような方法で本発明の油脂組成物を得る場合、油脂組成物におけるＧＬＡの含有割合は、油脂組成物の一部を採り、メチルエステル化の後、ガスクロマトグラフィーにより決定される（特開昭５７−１４４９８６号公報参照）。
【００１４】
本発明の皮膚外用剤組成物は、上記油脂組成物を含有する。本発明の皮膚外用剤組成物における油脂組成物の含有量は、皮膚外用剤組成物の剤型や種類に応じて、ＧＬＡ含有量が適宜のものとなるように調整すればよい。
本発明の皮膚外用剤組成物には、本発明の効果を阻害しないものであれば、一般に皮膚外用剤成分として使用されている他の成分を含有させてもよい。他の成分としては、例えば、精製水、アルコール類、油性物質、防腐剤、増粘剤、収れん剤、粉体、香料、乳化安定剤、ｐＨ調整剤、薬効剤などが挙げられる。
アルコール類としては、エタノール、直鎖又は分岐鎖のアルキル基又はアルケニル基を有する高級アルコール類などが挙げられ、油性物質としては、流動パラフィン、ワセリン、固形パラフィン等の炭化水素類；液状ラノリン、ラノリン脂肪酸等のラノリン誘導体；ジメチルポリシロキサン、ポリエーテル変性ポリシロキサン、アミノ変性ポリシロキサン等のシリコーン誘導体、高級アルコール高級脂肪酸エステル類、高級脂肪酸、アルキル基又はアルケニル基を有する長鎖アミドアミン等の油脂類；ミンクオイル、オリーブ油等の動植物性油脂類などが挙げられる。防腐剤としてはパラベン類などが挙げられ、増粘剤としては水溶性高分子化合物などが挙げられる。
【００１５】
薬効剤としては、例えば、美白剤、抗酸化剤、抗炎症剤、細胞賦活剤、血行促進剤、保湿剤、抗菌剤及び紫外線防止剤などが挙げられる。これらは一種を単独で又は二種以上を組み合わせて使用することができる。これらの薬効剤の併用によって、抗老化性効果を一層高めることができる。これらの薬効剤の具体例を以下に示す。ここで「誘導体」には形成可能な塩が含まれる。また、かっこ内は、植物の別名、生薬名等を示す。
【００１６】
美白剤としては、カンゾウ抽出物、ヨクイニン（ハトムギ）抽出物、コガネバナ（オウゴン）抽出物、ビャクレン抽出物、センプクカ抽出物、コムギ抽出物、トマト抽出物、アガロース、オリゴサッカライド、ネオアガロビオース、ハイドロキノン及びその誘導体、システイン及びその誘導体、アスパラガス抽出物、イブキトラノオ抽出物、ノイバラ（エイジツ）抽出物、エゾウコギ抽出物、エンドウ豆抽出物、カミツレ抽出物、ケイケットウ抽出物、オレンジ抽出物、キイチゴ抽出物、キウイ抽出物、クララ（クジン）抽出物、ゴマ油、エゴマ油、ゴカヒ（エゾウコギ）抽出物、コメ抽出物、サイシン抽出物、サンザシ抽出物、サンペンズ（カワラケツメイ）抽出物、シャクヤク抽出物、シラユリ抽出物、クワ（ソウハクヒ）抽出液、トウキ抽出液、ブナ抽出物、ブラックカラント抽出物、ホップ抽出物、マイカイカ（マイカイ、ハマナス）抽出物、モッカ（ボケ）抽出物、ユキノシタ抽出物、茶抽出物（烏龍茶、紅茶、緑茶等）、微生物醗酵代謝産物、大豆抽出物、糖蜜抽出物、羅漢果抽出物等が挙げられる。これらの美白剤のうち、カンゾウ抽出物、ハトムギ（ヨクイニン）抽出物、コムギ抽出物、ビャクレン抽出物、茶抽出物が特に好ましい。
美白剤の配合量は、皮膚外用剤組成物基準で、通常０．００００１〜１０質量％程度、０．００１〜５質量％である。
【００１７】
抗酸化剤としては、ハイドロキノン及びその誘導体、カンゾウ抽出物、キュウリ抽出物、ケイケットウ抽出物、ゲンチアナ（リンドウ）抽出物、ゲンノショウコ抽出物、コレステロール及びその誘導体、サンザシ抽出物、シャクヤク抽出物、イチョウ抽出物、コガネバナ（オウゴン）抽出物、ニンジン抽出物、マイカイカ（マイカイ、ハマナス）抽出物、サンペンズ（カワラケツメイ）抽出物、トルメンチラ抽出物、パセリ抽出物、ボタン（ボタンピ）抽出物、モッカ（ボケ）抽出物、メリッサ抽出物、ヤシャジツ（ヤシャ）抽出物、ユキノシタ抽出物、ローズマリー（マンネンロウ）抽出物、レタス抽出物、茶抽出物（烏龍茶、紅茶、緑茶等）、微生物醗酵代謝産物、羅漢果抽出物等が挙げられる。これらの抗酸化剤のうち、ヤシャジツ抽出物、ユキノシタ抽出物、マイカイカ抽出物、イチョウ抽出物が特に好ましい。
抗酸化剤の配合量は、皮膚外用剤組成物基準で、通常０．００００１〜５質量％程度、好ましくは０．００１〜３質量％である。
【００１８】
抗炎症剤としては、グリチルリチン酸及びその誘導体、グリチルレチン酸及びその誘導体、アロエ抽出物、アシタバ抽出物、アルテア抽出物、アルニカ抽出物、イオウ及びその誘導体、イラクサ抽出物、インチンコウ（カワラヨモギ）抽出物、ウコン抽出物、キハダ（オウバク）抽出物、オトギリソウ抽出物、カミツレ抽出物、コンフリー（ヒレハリソウ）抽出物、スイカズラ（キンギンカ）抽出物、クレソン抽出物、サルビア（セージ）抽出物、ワレモコウ（ジユ）抽出物、シコン（ムラサキ）抽出物、シソ抽出物、シラカバ抽出物、ニワトコ抽出物、ガマ（ホオウ）抽出物、ムクロジ抽出物、ユーカリ抽出物、ヨモギ抽出物、レンゲソウ抽出物、コンドロイチン硫酸及びその誘導体、酸化亜鉛等が挙げられる。これらの抗炎症剤のうち、グリチルリチン酸及びその誘導体、グリチルレチン酸及びその誘導体が特に好ましい。
抗炎症剤の配合量は、皮膚外用剤組成物基準で、通常０．００００１〜５質量％程度、好ましくは０．００１〜３質量％である。
【００１９】
細胞賦活剤としては、リボ核酸及びその塩、デオキシリボ核酸及びその塩、α−リノレン酸、キサンチン及びその誘導体（カフェイン等）、アーモンド抽出物、アスパラガス抽出物、アミノ酸及びその誘導体（セリン、グルタミン酸、テアニン、ヒドロキシプロリン、ピロリドンカルボン酸等）、アンズ（キョウニン）抽出物、イチョウ抽出物、ドコサヘキサエン酸及びその誘導体、エイコサペンタエン酸及びその誘導体、キハダ（オウバク）抽出物、オオムギ（バクガ）抽出物、キウイ抽出物、キュウリ抽出物、クエン酸、コハク酸、シイタケ抽出物、スギナ抽出物、センブリ抽出物、ダイズ抽出物、ナツメ（タイソウ）抽出物、ツボクサ抽出物、トウガラシ抽出物、トウキンセンカ抽出物、トマト抽出物、ニンニク抽出物、ニンジン抽出物、ヒノキチオール、ブクリョウ抽出物、ブドウ種子油、ブナ抽出物、モモ抽出物、ユーカリ抽出物、ユリ抽出物、レタス抽出物、レモン抽出物、ローズマリー（マンネンロウ）抽出物、イカスミ等軟体動物抽出物、貝殻抽出物、貝肉抽出物、魚肉抽出物、鶏冠抽出物、シルクプロテイン及びその分解物、血清除蛋白抽出物、ローヤルゼリー、ラクトフェリン又はその分解物等）、微生物醗酵代謝産物（乳酸菌、ビフィズス菌等由来）等が挙げられる。これらの細胞賦活剤のうち、ピロリドンカルボン酸、鶏冠抽出物、血清除蛋白抽出物、乳酸菌抽出物、ビフィズス菌抽出物などの微生物由来の抽出物あるいは発酵代謝産物から選ばれる微生物由来の抽出物が特に好ましい。
細胞賦活剤の配合量は、皮膚外用剤組成物基準で、通常０．００００１〜５質量％程度、好ましくは０．００１〜３質量％である。
【００２０】
血行促進剤としては、アルニカ抽出液、トウガラシチンキ、イチョウ抽出物、γ−オリザノール等が挙げられる。これらの血行促進剤のうち、アルニカ抽出液、イチョウ抽出物が特に好ましい。
血行促進剤の配合量は、皮膚外用剤組成物基準で、通常０．００００１〜５質量％程度、好ましくは０．００１〜３質量％である。
【００２１】
保湿剤としては、グリセリン、１，３−ブチレングリコール、ソルビトール、エリスリトール、ペンタエリスリトール、トレハロース、イノシトール、グルコース、キシリトール、マルトース、マルチトール、キシロース、果糖及び蔗糖並びにそれらの誘導体；コラーゲン、エラスチン、ケラチン及びフィブロネクチン等のタンパク質、それらの誘導体及びそれらの加水分解物並びにそれらの塩；ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ヘパラン硫酸、ヘパリン及びケラタン硫酸等のムコ多糖類、それらの誘導体並びにそれらの塩；セリン、グリシン、テアニン、アスパラギン酸、アスパラギン、アルギニン、アラニン、バリン、イソロイシン、スレオニン、リジン、ヒドロキシリジン、システイン、フェニルアラニン、プロリン、ヒドロキシプロリン、オルチニン、シトルリン及びピロリドンカルボン酸等のアミノ酸、それらの誘導体並びにそれらの塩；デキストリン及びその誘導体；ハチミツ等の糖類；糖脂質、セラミド、ムチン、尿素等が挙げられる。
【００２２】
保湿剤として、さらに、アマチャ抽出物、アーモンド抽出物、アシタバ抽出物、アボカド抽出物、アルテア抽出物、アルニカ抽出物、温泉水、アロエ抽出物、ウスベニアオイ抽出物、コガネバナ（オウゴン）抽出物、オウレン抽出物、オトギリソウ抽出物、オドリコソウ抽出物、オノニス抽出物、カミツレ抽出物、カラスムギ抽出物、グラブリジン、グラブレン、リクイリチン、イソリクイリチン及びこれらを含有するカンゾウ抽出物、キイチゴ抽出物、スイカズラ（キンギンカ）抽出物、クインスシード抽出物、クララ（クジン）抽出物、クチナシ抽出物、クマザサ抽出物、グレープフルーツ抽出物、クレソン抽出物、ゲンチアナ抽出物、ゲンノショウコ抽出物、ゴボウ抽出物、ゴマ抽出物、コムギ抽出物、コンフリー（ヒレハリソウ）抽出物、サイシン抽出物、サボテン抽出物、サボンソウ抽出物、サルビア（セージ）抽出物、サンザシ抽出物、ジオウ抽出物、シソ抽出物、シモツケ抽出物、シャクヤク抽出物、ショウガ抽出物、ショウブ抽出物、シラカバ抽出物、セイヨウハッカ（ペパーミント）抽出物、ゼニアオイ（ウスベニタチアオイ）抽出物、センキュウ抽出物、クワ（ソウハクヒ）抽出物、タチジャコウソウ（タイム）抽出物、ツバキ抽出物、トウキ抽出液、トウチュウカソウ抽出物、ドクダミ抽出物、トルメンチラ抽出物、パセリ抽出物、ハッカ抽出物、ハトムギ抽出物、ハマメリス抽出物、バラ抽出物、ヒノキ抽出物、ヒマワリ抽出物、ピロリドンカルボン酸及びその塩、フキタンポポ抽出物、ブッチャーズブルーム抽出物、プルーン抽出物、ヘチマ抽出物、ボダイジュ抽出物、ボタン（ボタンピ）抽出物、ホップ抽出物、ホホバ油、マカデミアナッツ油、オリーブ油、杏仁油、パーシック油、サフラワー油、ヒマワリ油、アボガド油、メドゥホーム油、ツバキ油、アーモンド油、エゴマ油、ゴマ油、ボラージ（ルリジサ）油、カカオ脂、シア脂、マツ抽出物、マルメロ抽出物、マロニエ抽出物、ムクロジ抽出物、ムラサキ（シコン）抽出物、メドウホーム油、メリッサ抽出物、ヤグルマソウ抽出物、ユキノシタ抽出物、ユリ抽出物、ライム抽出物、ラベンダー抽出物、リンゴ抽出物、リンドウ（リュウタン）抽出物、レンゲソウ抽出物、ワレモコウ抽出物、茶抽出物（烏龍茶、緑茶、紅茶等）、羅漢果抽出物等が挙げられる。
これらの保湿剤のうち、アミノ酸及びその誘導体並びにそれらの塩、グリセリン及びその誘導体、１，３−ブチレングリコールが特に好ましい。
保湿剤の配合量は、皮膚外用剤組成物基準で、通常０．００００１〜２０質量％程度、好ましくは０．０１〜５質量％である。
【００２３】
抗菌剤としては、安息香酸、安息香酸ナトリウム、パラオキシ安息香酸エステル、パラクロルメタクレゾール、塩化ベンザルコニウム、フェノキシエタノール、イソプロピルメチルフェノール、石炭酸、ソルビン酸、ソルビン酸カリウム、ヘキサクロロフェン、塩化クロルヘキシジン、トリクロロカルバニリド、感光素、ビス（２−ピリジルチオ−１−オキシド）亜鉛、チアントール等が挙げられる。
抗菌剤の配合量は、皮膚外用剤組成物基準で、通常０．００００１〜５質量％程度、好ましくは０．００１〜３質量％である。
【００２４】
紫外線防止剤としては、パラメトキシケイ皮酸−２−エチルヘキシル、４−ｔｅｒｔ−ブチル−４'−メトキシジベンゾイルメタン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−スルホン酸ナトリウム、２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン−５−硫酸ナトリウム、酸化チタン、酸化亜鉛等が挙げられる。また、粉体は微粒子のものを用いるとより高い効果が発揮される。これらの紫外線防止剤のうち、パラメトキシケイ皮酸−２−エチルヘキシル、酸化チタン、微粒子酸化チタン、酸化亜鉛が特に好ましい。
紫外線防止剤の配合量は、皮膚外用剤組成物基準で、通常０．０１〜２０質量％程度、好ましくは０．１〜１０質量％である。
【００２５】
本発明の皮膚外用剤組成物の剤型としては特に限定されず、皮膚外用剤組成物をそのまま用いてもよく、通常の皮膚外用剤の剤型を適用することもできる。すなわち、乳液、クリーム、化粧水、美容液、パック剤、洗顔料及びメイクアップ化粧品等の化粧料、並びに分散液、軟膏及び外用液剤等の外用医薬品等とすることができる。
本発明の皮膚外用剤組成物の使用量は、用途によって適宜調整すればよい。例えば、化粧水に配合する場合、化粧水中の濃度は通常０．００１〜１００ｍｇ／ｍｌ程度とすることができ、好ましくは０．０１〜１０ｍｇ／ｍｌ、より好ましくは０．０１〜１ｍｇ／ｍｌとなるように配合する。
【実施例】
【００２６】
次に、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はこれらの例によってなんら限定されるものではない。
下記実施例及び比較例で用いた原料油脂及び油脂組成物の脂肪酸組成は、特開昭５７−１４４８９６号公報に記載されている方法によりメチルエステル化し、ガスクロマトグラフィーにより測定した。また、実施例及び比較例の油脂組成物の構成グリセリド組成は、イアトロスキャン法（Ｊ．Ｊｐｎ．Ｏｉｌ Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．，Ｖｏｌ３５，Ｎｏ．８，６２５−６３１（１９８６））に基づき、薄層クロマトグラフ（ＴＬＣ）と水素炎イオン化検出器（ＦＩＤ）を組み合わせたＩａｔｒｏｓｃａｎ ＴＨ−１０型（ヤトロン社製）により求めた。すなわち、試料溶液１マイクロリットルをシリカゲル薄層棒（クロマロッド Ｓ−１１１、ヤトロン社製）の片側に滴下した後、溶媒展開を行い、溶媒展開後、シリカゲル薄層棒を上記分析機ＴＨ−１０型に取り付け、下記条件で分析した。
【００２７】
試料溶液濃度：２０ｍｇ／ｍｌアセトン
ＴＬＣ展開溶媒及び展開条件
展開溶媒：ヘキサン／ジエチルエーテル／酢酸＝７０／３０／１（容量比）
展開距離：１０．０ｃｍ
イアトロスキャン分析条件
水素流量    ：１６０ｍｌ／ｍｉｎ
空気流量    ：２．０ｍｌ／ｍｉｎ
スキャン速度：３０ｓｅｃ／ＳＣＡＮ
検出器      ：水素炎イオン化検出器（ＦＩＤ）
【００２８】
実施例１（油脂組成物の製造）
表１に示す脂肪酸組成を有するＧＬＡ含有油脂（出光興産株式会社製、商品名：グラノイルＨＧＣ、ＧＬＡ：２５．９質量％）１００ｇ及び蒸留水１００ｇを含む反応系に、Rhizopus niveus 産生リパーゼ（天野エンザイム株式会社製、ニューラーゼＦ３Ｇ、３０，０００Ｕ／ｇ）を３０，０００ユニット加え、攪拌しながら３０℃で４８時間反応させた。
【００２９】
【表１】
2006347984.tif 000002
【００３０】
得られた分解反応物に１０質量％水酸化ナトリウム水溶液を添加して分解反応物のｐＨを８〜９に調整した後、ジエチルエーテル２００ｍｌを用いて分解反応物中の油分を抽出し、水洗し、脱水後エーテルを除去して油分（油脂組成物）５６．４ｇを得た。
この油脂組成物の一部を用いて上記方法により構成グリセリド組成分析を行い、また、油脂組成物の一部をメチルエステル化した後、ガスクロマトグラフィーで脂肪酸組成を分析した。その結果を表３に示す。なお、表３において、例えばＣ１６：０は、炭素数１６で、二重結合を有しない脂肪酸を意味し、Ｃ１８：３は、炭素数１８で、二重結合を３個有する脂肪酸を意味する。
【００３１】
実施例２（油脂組成物の製造）
実施例１において、ＧＬＡ含有油脂として、表２に示す脂肪酸組成を有するＧＬＡ含有油脂（出光興産株式会社製、商品名：グラノイルＣＳ、ＧＬＡ：７．９質量％）を用いた以外は、実施例１と同様の酵素処理及び抽出により油脂組成物を得た。得られた油脂組成物の分析結果を表３に示す。
【００３２】
【表２】
2006347984.tif 000003
【００３３】
【表３】
2006347984.tif 000004
【００３４】
実施例３（生理活性物質産生試験）
実施例１及び２で得られた油脂組成物の、コラーゲン及びヒアルロン酸産生促進試験を行った。
（１）コラーゲン産生促進試験
繊維芽細胞のコラーゲン産生の評価を、培養上清中に分泌されたＩ型コラーゲンを、ＥＬＩＳＡ（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）によって定量することにより行った。
正常ヒト繊維芽細胞（倉敷紡績株式会社製、Ｆｉｂｒｏｃｅｌｌ ＮＨＤＦ（新生児由来））を、細胞密度２．０×１０4ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌで９６ウエルマイクロプレートに播種し、０．５％ウシ血清（ＦＢＳ）含有ＤＭＥＭ(Dulbecco's Modified Eagle's Medium)にて２４時間培養を行った。次に、このＤＭＥＭを、実施例１及び２で得られた油脂組成物各々を０．１ｍｇ／ｍｌの濃度で添加した０．５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭと交換し、１６８時間培養を行った。このＤＭＥＭを、培養上清を添加した０．５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭと交換し、２４時間培養した。その後、培養上清を回収してＥＬＩＳＡに供し、培養上清中に分泌されたＩ型コラーゲンを以下のようにして定量した。
回収した培養上清を９６ウエルマイクロプレートに入れ、コーティングした後、１％牛血清アルブミン（ＢＳＡ、シグマ社製）を用いてブロッキングした。これをＨｕｍａｎ Ｔｙｐｅ Ｉ コラーゲン測定キット（Ｃｈｏｎｄｒｅｘ社製）を用いてコラーゲン量を定量した。油脂組成物無添加の場合のコラーゲン量を１００％とし、これを基準として油脂組成物を添加した場合のコラーゲン量を求めた。結果を表４に示す。
また、培養した９６ウエルマイクロプレートのウエル中に付着した細胞の蛋白質を、ＢＣＡ蛋白質分析試薬（ＰＩＥＲＣＥ社製）を用いて定量し、細胞数とした。油脂組成物無添加の場合の細胞数を１００％とし、これを基準として油脂組成物を添加した場合の細胞数を求めた。結果を表４に示す。
【００３５】
（２）ヒアルロン酸産生促進試験
繊維芽細胞のヒアルロン酸産生の評価を、培養上清中に分泌されたヒアルロン酸を、ＥＬＩＳＡによって定量することにより行った。
上記（１）と同様に、正常ヒト繊維芽細胞（倉敷紡績株式会社製、Ｆｉｂｒｏｃｅｌｌ ＮＨＤＦ（新生児由来））を、細胞密度２．０×１０4ｃｅｌｌ／ｗｅｌｌで９６ウエルマイクロプレートに播種し、同様の培養を行うことにより、ヒアルロン酸が分泌された培養上清を得た。この培養上清を回収してＥＬＩＳＡに供し、培養上清中に分泌されたヒアルロン酸を以下のようにして定量した。
回収した培養上清を９６ウエルマイクロプレートに入れ、コーティングした後、１％牛血清アルブミン（ＢＳＡ、シグマ社製）を用いてブロッキングし、ヒアルロン酸測定キット（生化学工業株式会社製）を用いてヒアルロン酸量を定量した。油脂組成物無添加の場合のヒアルロン酸量を１００％とし、これを基準として油脂組成物を添加した場合のヒアルロン酸量を求めた。結果を表４に示す。
【００３６】
【表４】
2006347984.tif 000005
【産業上の利用可能性】
【００３７】
本発明の生理活性物質産生促進油脂組成物は、コラーゲン、ヒアルロン酸及びセラミド等の生理活性物質の産生を促進する効果を有するため、この油脂組成物を配合した皮膚外用剤組成物は、特に皮膚の老化防止用化粧品として有用である。
【手続補正書】
【提出日】平成17年11月25日(2005.11.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００８】
本発明に係るＧＬＡ誘導体の親水性基としては、水酸基、カルボキシル基、アミノ基及びそのイオン（−Ｏ-、−ＣＯＯ-、−ＮＨ3+）などが挙げられ、水酸基が好ましい。また、二種以上の親水性基を含んでいてもよい。疎水性基としては、アルキルエステル基、アルキルオキシ基及びアルキルオキシアルキル基などが挙げられる。この中で、アルキルエステル基が好ましく、炭素数６以上のアルキル基を有するアルキルエステル基が特に好ましい。
ＧＬＡ誘導体としては、ＧＬＡを構成成分として含むグリセリド、ビタミン類のエステルやアミノ酸類のエステル（例えば、Ｌ−カルニチンのエステル等）が好ましく、ＧＬＡを構成成分として含むグリセリドが特に好ましい。ＧＬＡを構成成分として含むグリセリドは、ＧＬＡのみを構成成分とする単一グリセリド（モノグリセリド、ジグリセリド又はトリグリセリド）でもよいし、ＧＬＡと他のカルボン酸（例えば、下記に好ましい脂肪酸として例示されているカプリル酸等）の一種又は二種を構成成分とする混合グリセリド（ジグリセリド又はトリグリセリド）でもよい。グリセリドとしては、単一グリセリドのみ又は混合グリセリドのみでもよく、単一グリセリドと混合グリセリドの混合物でもよい。入手が容易である点から、単一グリセリドと混合グリセリドの混合物が好ましい。
また、本発明の油脂組成物は、ＧＬＡ以外のカルボン酸を有効成分とする単一グリセリド及び／又は混合グリセリドを含んでいてもよい。