(57)【要約】      （修正有）【課題】副作用のない抗不安、鎮静作用物質の提供。【解決手段】所定量のイソバレラマイドを含有した単位投与剤形を含む薬剤学的組成物。イソバレラマイドが、低用量から中等度のレベルまでは穏やかな不安緩解（不安軽減）活性を呈し、いくらか高い用量レベルでは穏やかな鎮静活性を呈する。不安緩解性あるいは穏やかな鎮静性を有すると考えられている特定のその他の化合物と比較すると、イソバレラマイドは非細胞毒性であるが、その他と異なり中枢神経系を刺激しない。穏和不安緩解薬および穏和鎮静薬として有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
所定の量のイソバレラマイドが、過剰の鎮静作用を誘発せずに不安を軽減するのに効果的であるような治療を必要とする被験者に、不安緩解効果をもたらす方法において使用する薬剤の調製における、該所定の量のイソバレラマイドの使用。
【請求項２】
効果的な量が1.5-20mg/kg体重の範囲である、請求の範囲１記載の使用。
【請求項３】
効果的な量が1.5-10mg/kg体重の範囲である、請求の範囲２記載の使用。
【請求項４】
被験者がヒトであり、不安緩解効果が精神的な不安、禁煙の症状、アルコール中毒とその他の物質の誤用、月経前症候群、月経中の不快感、小児の過興奮の治療に有効な、請求の範囲１記載の使用。
【請求項５】
被験者が家庭のあるいは家畜の動物で、興奮が望ましくない場合に不安緩解効果が有効である、請求の範囲１記載の使用。
【請求項６】
所定の量のイソバレラマイドが眠りを誘発するのに効果的であるような治療を必要とする被験者に、眠りを誘発する方法において使用する薬剤の調製における、所定量のイソバレラマイドの使用。
【請求項７】
効果的な量が10-20mg/kg体重の範囲である、請求の範囲６記載の使用。
【請求項８】
被験者がヒトである、請求の範囲６記載の使用。
【請求項９】
被験者が家庭のあるいは家畜の動物である、請求の範囲６記載の使用。
【請求項１０】
投薬単位にあらかじめ決められた量のイソバレラマイドを含む、薬剤学的組成物。
【請求項１１】
経口投与に適した、請求の範囲10記載の薬剤学的組成物。
【請求項１２】
注射に適した、請求の範囲10記載の薬剤学的組成物。
【請求項１３】
経皮あるいは経粘膜投与に適した、請求の範囲10記載の薬剤学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
本発明は、ヒトを含む動物において、望しくない過度の鎮静作用を生じずに、不安を軽減しようとする方法に関するものである。より特定すれば、本発明は、穏和不安緩解薬および穏和鎮静薬としてのイソバレラマイド(isovaleramide)の使用に関わるものである。
【０００２】
中枢神経系（CNS）に影響を与える、受容体、神経伝達物質、電気的刺激の複雑な相互関係は、完全に理解されるにはほど遠い。しかし、中枢神経系の、行動として示される側面への、様々な調合薬やその他の薬物の効果を明らかにすることは可能である。
【０００３】
特に、穏和不安緩解（不安を軽減する）効果を、鎮静効果、つまり典型的なCNS抑制、と見分けることができる。下記に説明する、探査行動試験、フォーゲル（Vogel）葛藤パラダイム試験などの標準的な行動試験は、様々な薬剤学的組成物の不安緩解効果を検出し、明らかにし、測定するために使用できる。バルビツール剤(barbiturate)誘導性の睡眠時間の延長や睡眠の誘発を含むその他の試験は、それぞれ鎮静および催眠効果を示す。
【０００４】
いくつかの薬剤が安定と鎮静の両方を誘導する効果をもつ一方、構造的に関連の近いその他の薬剤が、主として一方ないし他方のみの効果を呈することが示される。さらに、有効な抗不安薬の主として不安の緩解または鎮静のいずれかを呈する能力は、その用量に関係がある。「Wolff, M.E.(Ed.) BURGER'S MEDICINAL CHEMISTRY, Part III, 4th ed.(1981) Wiley-Interscience, pp.981-996; Foye, W.O.(Ed.) PRINCIPLES OF MEDICINAL CHEMISTRY, 3rd ed.(1989) Lea and Febiger, pp.143-237」を参照。さらに、痙攣を誘導または抑制する能力のように、中枢神経系に対する、さらなる明らかに可能な効果がある。言い換えると、様々な構造的に関連のある化合物には、これらの能力を呈するものと呈さないものとがある。現在入手可能な技術から明らかなことは、処方した方法で、ある特定の薬物が中枢神経系に作用する能力があるかないかを予想されることに関する、明らかな構造-機能相互依存関係が全くみられないことである。
【０００５】
ある薬草の抽出物は、太古から世界中の様々な異なる文化圏で、ストレスの軽減と不安の治療に使用されており、数多くの不安緩解および鎮静の素が高等植物から抽出され、近代にその特徴を記述された。さらに、最も優れた典型的な合成安定薬を代表する例として考えられてきた、ジアゼパム(diazepam)（「バリウム」（VALIUM））、オキサゼパム(oxazepam)（「セラックス」（SERAX））、ロラゼパム(lorazepam)（「アティバン」（ATIVAN））のようなベンゾジアゼピン(benzodiazepine)精神安定薬化合物が、芋、大豆、レンズ豆、とうもろこし、小麦、蕎麦、米、オート麦、大麦、キビから見つかった、自然に存在する植物抽出化合物であることが、現在明らかに示されている（Wildmannら、J.Neural Transm.(1987) 70:383-398; Wildmann, J.Biochem. Biophys. Res. Commun.(1988) 157:1436-1443; Wildmannら、Biochem. Pharmacol.(1988) 37:3549-3559; Unseldら、Biochem. Pharmacol.(1989) 38:2473-2478; Klotz, U., Life Sci.(1991) 48:209-215; Bringmann, G., J.Neural Transm.(1992) 88:77-82）。
【０００６】
カノコソウの根の抽出物の医学的目的のための使用には何世紀もの歴史があるが、活性の鎮静成分は明らかにまたは肯定的に証明されておらず（Krieglsteinら、Deut. Apoth. Ztg.(1988) 128:2041-2046）、抽出物の効果の性質も、行動において区別しうる効果のレベルまで明らかに性質を解明し分離するには至っていない。カノコソウの根は３つの基本的な種類の化合物を含む。それらは、(a)主にイソ吉草酸(isovaleric acid)と、揮発性のモノテルペノイド(monoterpenoid )とセスキテルペノイド(sesquiterpenoid)の誘導体からなる揮発性油、(b)不揮発性のモノテルペノイドイリドイド(monoterpenoid iridoids)、またはバレポトリエイト(valepotriates)、(c)モノテルペノイドアルカロイド(monoterpenoid alkaloids)である。モノテルペノイドアルカロイドは、小成分に過ぎず、カノコソウの効果に対して重要に貢献するものとは考えられない。同様に、揮発性油の画分も弱い活性であるにすぎない。そのため、一般にモノテルペノイド（イリドイド）のエステルで構成される、バレポトリエイト画分が研究の焦点となった。これらのエステルは水に不溶性だが、カノコソウの根の水溶性抽出物（バレポトリエイトが欠如していると予想される）が鎮静作用を呈し続けるため、植物の鎮静作用が完全にこれらのエステルに由来するものであると結論することはできない。また、バレポトリエイトは毒性を呈しうる（下記を参照せよ）。
【０００７】
バレポトリエイトに関する最近の研究によると、これらの化合物がDNAとタンパク質を不可逆的にアルキル化すること、また少量のバレポトリエイトを経口投与すると、実際にマウスの脳やその他の臓器に損なわれずに到達することがわかっている（Wagner, H.とK. Jurcic, Planta Med.(1980) 38:366-376）。しかし、この潜在的に有害な毒性にもかかわらず、ヨーロッパでは、バレポトリエイト画分が鎮静薬として広く市場に出回ってきた。
【０００８】
カノコソウの根の水溶性および水性アルコールの抽出物は、ヨーロッパとアメリカ合衆国で、鎮静薬として伝統的に使用されてきた。しかし、アンモニア処理したカノコソウの根のチンキも、天然の混合物のみがアメリカ合衆国とイギリスで鎮静薬として使用されてきた。発明者らは、バレポトリエイトとアンモニアの反応生成物と思われる、カノコソウの根のアンモニア処理されたチンキからしか、イソ吉草酸を同定し、単離することができなかった。
【０００９】
イソ吉草酸、イソバレラマイドおよび関連する物質を、実験動物に非常に大量に投与すると、麻酔および催眠効果を導くことがわかっている。「Eeckhout, A.v.d., Arch. exptl. Pathol. Pharmakol.(1907) 57:338-57; Impens, E., Deut. med. Wochschr.(1912) 38:945-47; May, P., THE CHEMISTRY OF SYNTHETIC DRUGS, 3rd ed.(1921) Longmans, Green and Co., p.24; Meyer, K.H.とH. Hemmi, Biochem. Z.(1935) 277:39-71; Junkmann, K., Naunyn-Schmiedeberg's Arch. exptl. Pathol. Pharmakol.(1937) 186:552-64; Samsonら、J. Clin. Invest.(1956) 35:1291-98; Teychenneら、Clin. Sci. Molec. Med.(1976) 50(6):463-72」を参照。さらに、イソ吉草酸の塩類は、20世紀のはじめに鎮静薬として使用されていたが、その効果は心理学的で、揮発性の高い遊離酸の悪臭によると考えられた（Hareら、THE NATIONAL STANDARD DISPENSATORY(1905) Lea Brothers and Co., pp.94, 159-160, 1619-1620; Grier, J., Chem. Drug.(1929) 110:420-422; Allport, N.L., THE CHEMISTRY AND PHARMACY OF VEGETABLE DRUGS(1944) Chemical Publishing Co., pp.159-161; YEAR BOOK OF THE AMERICAN PHARMACEUTICAL ASSOCIATION, 1912(1914) 1:178-179; DE RE MEDICINA(1938) Eli Lilly and Co., p.159）。イソバレラマイド自体は、実験動物に非常に大量に投与したときのみ催眠作用を呈することが明らかにされ、催眠薬としては臨床的に無益なものであると考えられた。Impens, E., Deut. med. Wochschr.(1912) 38:945-47; Junkmann, K., Naunyn-Schmiedeberg's Arch. exptl. Pathol. Pharmakol.(1973) 186:552-64。しかし、α-臭素化および/またはα-アルキル化イソバレラマイド誘導体の列は、このことに関して成功していると考えられた。「Volwiler, E.H.とD.L.Tabern, J.Am. Chem. Soc.(1936) 58:1352-54; Burger, A., MEDICINAL CHEMISTRY, Vol.1, (1951) Interscience, pp.131-132; Burger, A.(Ed.) MEDICINAL CHEMISTRY, 2nd ed.(1960) Interscience, pp.357-375; Burger, A.(Ed.), MEDICINAL CHEMISTRY, Part II, 3rd ed.(1970) Wiley-Interscience, pp.1365-1385; Wolff, M.E.(Ed.) BURGER'S MEDICINAL CHEMISTRY, Part III, 4th ed.(1981) Wiley-Interscience, pp.787-828」を参照。
【００１０】
イソバレラマイドの高級同族体のバルノクタマイド(Valnoctamide)は、このような化合物である（図１参照）。バルノクタマイドは合成の、バルビツール剤誘導の、α-有枝の、非水溶性の化合物であり、攻撃的な実験動物や不安感におそわれたヒトを鎮めることができる、鎮静および不安を軽減する特性を呈するとされ（Stepansky, W., Curr. Therap. Res.(1960) 2:144-47; Goldberg, M., Dis. Nerv. Syst.(1961) 22:346-48; Roszkowski, A.P.とW.M. Govier, Int. J. Neuropharmacol.(1962) 1:423-30）、250mg/kgを腹膜内投与（IP）したラットにおいて催眠効果を呈する。またバルノクタマイドは、外面的にはイソバレラマイドと構造的に同じであるようにみえるが、その２つの化合物の間には、かなりの物理化学的および薬理学的な違いがある。例えば、バルノクタマイドは非常に水に不溶性であるが、イソバレラマイドは本質的に水溶性である。さらに、バルノクタマイドはラットにおいて比較的低用量（例えば、250mg/kg [1.75mM/kg], IP）で明白な催眠作用を呈するが、イソバレラマイドはマウスにおいて用量を1000mg/kg（9.90mM/kg）IPまで高めても催眠性はなく、毒性に近い用量（2000mg/kg IP以上）にしなければ催眠性を呈しない。したがって、バルノクタマイドの薬理学的特性は、イソバレラマイドよりも、合成バルビツール剤の前駆体により類似している。
【００１１】
バルノクタマイドは、２つの（キラル）立体中心（有枝のαおよびβ炭素）をもつ点でも、イソバレラマイドと異なる。イソバレラマイドは、全く（キラル）立体中心をもたない。したがって、「バルノクタマイド」は、実際は光学異性体の２組の偏左右異性体になった４つの立体異性体からなるラセミ化合物の混合製剤である。これらの４つの立体異性体の型が薬理学的に平衡であるかどうかはわかっていない。本発明者らは、炭素-13の核磁気共鳴[１３C-NMR]分光法でこれらの光学異性体の２組の偏左右異性体が「バルノクタマイド」のなかに等しくない量で存在していることを証明した。イソバレラマイドは光学的に活性の（キラル）立体中心を全くもたないことから、その他の光学異性体または偏左右異性体の型を全くとらない、単一の、明確に定義される分子として存在し、その実験的に測定される薬理学的な性質と特徴は、単一の、純粋な分子のものである。
【００１２】
マウスにおいて、30-100mg/kg IP程度の比較的低用量のイソバレラマイドは、定量的なCNS抑制効果を呈する。マウスにおいてイソバレラマイドのLD５０値は4000mg/kg IPを越えているため、化合物の治療的な指標は最低およそ40と思われる。バルノクタマイドの相当する値はおよそ11.4である。Roszkowski, A.P.とW.M. Govier, Int. J. Neuropharmacol.(1962) 1:423-30。したがってバルノクタマイドはイソバレラマイドの、この場合望ましくない真性の催眠誘導性のような特定のバルビツール剤のいくつかの性質を共有する、バルビツール剤誘導の高級同族体である。
【００１３】
さらに、構造的にバルノクタマイドに非常に関連の深い、あるα-有枝のイソバレラマイド誘導体、つまりより高級な同族体は、肝臓のポルフィリン症を起こす可能性を呈することが示されており、その性質はあるバルビツール剤と同様のものである。例えば「Schmid, R.とS. Schwartz, Proc. Soc. Exptl. Biol. Med.(1952) 81:685-89; Caseら、loc. cit.(1953) 83:566-68; Goldberg, A., Biochem. J.(1954) 57(1):ii; Goldbergら、Proc. Roy. Soc., Ser. B.(Biol. Sci.)(1955) 143:257-80; Talmanら、J. Biol. Chem.(1955) 212:663-75; Talmanら、Arch. Biochem. Biophys.(1957) 66:289-300; Goldberg, A.とC. Rimington, DISEASES OF PORPHYRIN METABOLISM(1962) Charles C. Thomas, pp.175-99; Granick, S., Ann. N. Y. Acad. Sci.(1965) 123:1 188-97; Marksら、Biochem. Pharmacol.(1965) 14(7):1077-84; de Barreiro, O.C., Biochem. Pharmacol.(1965) 14:1694-96; Hirschら、loc. cit.(1966) 15(7):1006-08; Hirschら、loc. cit.(1967) 16(8):1455-62; Schneckら、loc. cit.(1968) 17(7):1385-99; Schneck, D.W.とG.S. Marks, loc. cit.(1972) 21(18):2509-518」を参照。対照的に、イソバレラマイドは肝臓のポルフィリン症を誘導する性質を全くもっておらず、それは、肝臓の酵素によってアミド加水分解されるα位置での立体障害の欠如のためと考えられる。「Hirschら、Biochem. Pharmacol.(1966) 15(7):1006-08; Hirschら、loc. cit.(1967) 16(8):1455-62; Schneckら、loc. cit.(1968) 17(7):1385-99; Schneck, D.W.とG.S. Marks, loc. cit.(1972) 21(18):2509-18」を参照。
【００１４】
臭素化されたイソバレラマイドの高級同族体であるネオドーム(Neodorm)（図１参照）も、鎮静催眠薬として市場に出回ってきた。「YEAR BOOK OF THE AMERICAN PHARMACEUTICAL ASSOCIATION, 1929(1931) 18:154; loc. cit, 1931 AND 1932(1934) 20, 21:154」を参照。いくつかの報告は、ネオドームをα-エチルイソバレラマイド(α-ethyl isovaleramide)として間違って認識している。しかし、実際は図１に示したα-臭素化構造が正しい構造であることがわかっている。
【００１５】
中枢神経系に作用する傾向があると化学的に定義された薬剤の活性は、興味深いパターンの欠如を示す。例えば、アミド基から窒素原子を誘導（N-アルキル化）すると、N,N-ジエチルイソバレラマイド（N,N-diethylisovaleramide)（A.Liebrecht, German Patent 129,967, issued 1902）のような、鎮静作用をもつと報告され、鎮静薬として市場に出回ってきた化合物ができる。Budavariら(Eds.), THE MERCK INDEX, 11th ed., page824, no.5122(Merck & Co., 1989)（図１の「バリル」を参照）。しかし、この化合物が実際にCNS刺激性、不安生成性（つまり、不安誘発性）、痙攣性の性質を呈することを下記に示している。確かに、N-メチル化アミド誘導体はCNS刺激性か抑制性かのどちらかの性質を示しうるが、N-エチル以上の誘導体は一般にCNS刺激性の性質をもつ。Volwiler, E.H.とD.L. Tabern, J. Am. Chem. Soc.(1936) 58:1352-54; Nelsonら、J. Am. Pharm. Assoc., Sci. Ed.(1941) 30:180-82。これは、カテコールアミン(catecholamine)様およびセロトニン(serotonin)様薬剤（F.W. Schueler(Ed.) MOLECULAR MODIFICATION IN DRUG DESIGN, ADVANCES IN CHEMISTRY SERIES No.45(1964) American Chemical Society, pp.114-139）、バルビツール剤（Burger, A.(Ed.) MEDICINAL CHEMISTRY, Part II, 3rd ed.(1970) Wiley-Interscience, pp.1365-85）、その他の種類の化合物（Slaterら、J. Pharmacol. Exptl. Therap.(1954) 111:182-196）などの、CNS抑制または刺激のいずれかの性質を呈しうる、その他のCNS薬剤において、メチル(methyl)基またはメチレン(methylene)基を添加ないし除去して得られる効果に類似している。
【００１６】
更なる関連した化合物、イソバレラマイドの高級同族体のバルプロリン酸(valproic acid)とバルプロマイド(valpromide)（図１参照）は、抗てんかん薬（抗痙攣薬）として使用されてきた。Gilmanら(Eds.), GOODMAN AND GILMAN7S THE PHARMACOLOGICAL BASIS OF THERAPEUTICS, 8th ed.(1990) Pergamon Press, pp.436-62。それと比較して、イソバレラマイド自体は抗痙攣性を全くもたない。
【００１７】
したがって、実験的な化合物の中枢神経系に対する作用の予測を可能にするような、明白に識別できる構造と機能の関係が全くないことが、さきの研究によって示されている。特に、どのアルキルアミド誘導体が治療的に有効な不安緩解薬および鎮静薬になりうるのかを予測することはできない。
【発明の開示】
【００１８】
発明の要約
本発明は、低用量で穏やかな不安緩解性をもち、やや高めの用量で穏やかな鎮静性を持つ、薬剤学的組成物の活性成分としてのイソバレラマイドの使用を指示するものである。イソバレラマイドは、低用量では望ましくない鎮静作用を示さず、催眠薬としても作用せず、本質的に毒性でない。
【００１９】
驚くべきことに、本発明者らはイソバレラマイドの同族体の活性の一般的なパターンを見いだした。例えば、イソバレラマイドの低級同族体のn-ブチルアミドn-butyramide)は、イソバレラマイドが不安の緩解を誘導する用量で明らかな不安緩解活性をもたず、一方、イソバレラマイドの高級同族体のバルノクタマイドは、鎮静催眠薬としてイソバレラマイドの約10倍の強さをもつ（後述の実施例２を参照）。従って、イソバレラマイドの低級同族体は、臨床的な有効性としては弱すぎる鎮静活性をもち、高級同族体は、売薬としての用途に適さない化合物になり、鎮静催眠作用をもたらす。対照的に、イソバレラマイドは望ましい薬理学的な性質の最適なバランスをもっており、売薬としての応用のための穏やかな精神治療薬としての使用に特に適した化合物になる。
【００２０】
したがって、その１つの側面によると、本発明は、このような治療の必要な被験者に不安緩解効果をもたらす方法において用いる薬剤の調製における、イソバレラマイドの量の使用を指示するものである。その点でイソバレラマイドの量が過剰な鎮静作用を誘発することなく不安感を軽減するのに効果的なものである。その他の側面によれば、本発明はこのような治療の必要な被験者の眠りを誘発する方法で用いるための薬剤を調製する場合のイソバレラマイドの量の使用を示すものである。本発明はまた、前述の方法において有用な薬剤学的組成物、特に経口組成物を示すものである。
【００２１】
好ましい態様の詳細な記載
本発明に従って、イソバレラマイドは穏和不安緩解薬として用いられ、より高い用量では、穏やかな鎮静薬として用いられる。したがって、イソバレラマイドのこれらの２つの作用は、本発明によれば、用量のレベルに基づいて分離し、明確にすることができる。
【００２２】
望ましくない副作用なしにこれらの作用を発揮するイソバレラマイドの能力は、その有効性の主な特徴である。したがって、中枢神経系に作用する薬剤の投与結果として実験的に測定できる様々な行動的な結果を区別することが重要である。それらを評価するいくつかの行動および試験は下記の通りである。
【００２３】
不安緩解活性
不安緩解効果は、探査行動試験とフォーゲル葛藤パラダイム試験のいずれを用いても測定できる。「Christmas, A.J.とD.R. Maxwell, Neuropharmacology(1970) 9:17-29、およびSepinwall, J.とL. Cook, HANDBOOK OF PSYCHOPHARMACOLOGY(1978) 13:345-93」に説明されている探査行動試験は、動物が新しい、または慣れた環境に置かれたときの運動活性の増減を測定して行う。不安緩解薬は新しい環境での探査行動を増加させる（恐怖と不安を軽減するため）が、慣れた環境での行動には影響しない。
【００２４】
試験の１つの様式では、ワイヤーメッシュの床と、床から３cmのところに光電管を付けた、木製のチャンバー（65cmx100cmx20cm）を使用する。光電管はグリッドに取り付けられ、動物が光路の境目を横切るのを記録する（運動活性の測定）。光電管の出力は、データの保存と解析のためにコンピュータ（アイ・ビー・エム社、IBM）に送る。横切った回数の合計と単位時間当たりの横切った回数を数えて、活動を定量化する。
【００２５】
オスのスプレイグドーリー(Sprague-Dawley)ラットに、試験あるいは対照の物質のいずれかを腹膜内に注射し（IP）、活動チャンバーに入れる。そして、動物を１時間観察する。これは、動物にとって初めての環境になる。不安緩解薬による「脱抑制」のため、最初の５分間の運動活性は増加する。
【００２６】
初回のおわりに、動物を取り出して動物コロニーのなかで７日間回復させ、８日目と９日目に同じ活動チャンバーに１時間入れる。このときまでに、この環境は実験動物にとって慣れたものであると考えられる。10日目に試験物質または対照物質を注射し、実験を繰り返すと、慣れた環境での結果が得られる。
【００２７】
フォーゲル葛藤パラダイム試験では、のどが渇いたラットに、水を飲もうとするときに金属製の給水器に穏やかな電気ショックを与える。ショックは不快ではあるが、とりたてて痛いほどひどくはない。不安緩解薬を投与すると、ラットは対照物質投与よりも給水器をよく舐める（これも、不安の軽減による「脱抑制」のため）。したがって、不安緩解効果の評価は、吸水器を舐める回数の増加として測定する。
【００２８】
例えば、Petersen, E.N.とJ.B. Lassen, psychopharmacology(1981) 75:236-39による標準的なフォーゲル解析の変法を下記に説明する。動物（オスのスプレイグドーリーラット、250-300g）を24時間水を与えずに置いておき、ステンレスの棒でできた格子の上に載せた透明なプレキシガラス（Plexiglass)の箱（45cmx25cmx20cm）に入れる。格子の棒とのみ口の間の回路は、チャンバー内の給水器の中に銀電極を入れてできている。動物に、５分間ショックなしで給水器の水を舐めさせる。舐めなかった動物は、さらなる実験から除外する。
【００２９】
動物をもとのコロニーへ戻し、再び24時間水を与えずに置き、チャンバーに移して１分間ショックなしで舐めさせる。それから１ミリアンペアの電流を４分間のみ口に流す。初回に比べて舐める行動が50%抑制された動物のみ、さらなる実験に含めた。
【００３０】
この回の後、試験物質を腹膜内（IP）に注射し、30分後に再び動物をチャンバーに入れた。再び動物に１分間ショックなしで舐めさせ、残りの４分間はショックを与えた。この間ショックを受けながら舐めた回数は,不安緩解活性を評価するのに使用する。
【００３１】
前述の分析は両方とも、不安緩解活性を検出し、明らかにし、定量化を可能にするものである。第一の分析では鎮静薬は全く活性を示さなかったが、フォーゲル葛藤試験では肯定的な結果が得られた。
【００３２】
鎮静活性
鎮静効果は、バルビツール剤誘導性の睡眠時間の延長によって測定できる。この分析では、動物に、50mg/kgのペントバルビタールナトリウムをIPで注射した15又は30分後に、試験化合物または対照物質をIPで注射する。それから動物を行動試験室内の小さなプレキシガラスチャンバーに入れ、眠りまでの潜伏期と眠りの継続時間を手動で記録する。睡眠の開始は、動物を横にしたときに自力でまっすぐになれない時と定義する（Irwin, S., Psychopharmacologia(1968) 13:222-257）。睡眠の継続時間は、立ち直り反射の消失と回復の間と定義する。
【００３３】
催眠活性
催眠活性は、立ち直り反射（上記）を消失させ、意識と反応性が明らかに失われるような試験物質の用量（IP注射による投与）を単純に測定することによって評価できる。これは「眠りの誘発」を代表するものと考えられ、実験動物が単に行動が遅いないし停滞するが、いくつかの反応性と同様に立ち直り反射がある程度残る鎮静効果とは明らかに区別される。
【００３４】
イソバレラマイドの特徴
様々なCNS効果の分析において、イソバレラマイドの効果は、毒性の欠如とともに、理想的な不安緩解剤であり、高用量では穏和鎮静薬になることである。例えば、イソバレラマイドは、緊張、不穏、神経質、集中力の散漫、被刺激性、過攻撃性、不眠を含むストレスと精神的な不安の症状に悩む患者の治療に有効である。イソバレラマイドの不安緩解効果が有益なその他の状態と治療法には、禁煙の症状の治療、アルコール中毒およびその他の物質の誤用の治療、月経前症候群、月経による不快感、小児の過興奮が含まれる。
【００３５】
図１は、イソバレラマイドに構造的に関連のある様々な既知の化合物の構造を示したものである。本発明者らは、最初にイソバレラマイドをValeriana officinalis L.（一般名、カノコソウ）の地下部分の抽出物（つまり、アンモニア処理したチンキ）から調製した。この植物および近縁種の抽出物は、歴史的に、鎮静薬および抗痙攣薬として使用されてきた。しかし、上述したように、カノコソウの抽出物と、図１に示した化合物についてこれまでにわかったことは、イソバレラマイド自体が活性物質であったこと、あるいはその化合物が、そのような治療が必要な患者に過剰の鎮静性を誘導せずに不安緩解効果を示し、高用量の活性物質が睡眠を促進する、薬剤学的組成物の調製において使用に適する性質を持つことを提言するものではなかった。
【００３６】
売薬型の処方には、経口投与が好ましく、腸溶性コーティングのタブレット、カップレット、ジェルカップ(gelcaps)、カプセルなどの固体の経口投薬様式、あるいはシロップやエリキシル(elixirs)などの液体投薬様式を経由できる。イソバレラマイドの指示された用量は、不安緩解薬としては成人１人あたりおよそ100-1000mgで、好ましくは60-70kgの成人１人あたり100-500mgである。この量は、約1.5-20mg/kgで、好ましくは約1.5-10mg/kgである。単位固形経口投与様式は、一般に、１日あたり最高４回、典型的には１回につき１-２個服用され、タブレットまたはカプセル１個あたり約100-250mgを含む。液体処方も１回あたり小匙１-２杯になるように活性成分を含む。さらに、小児の噛める、または液状の経口投与の、量を減らした形も開発できる。この化合物は、経口投与のためにドロップの形（「濃縮」調剤からのドロップとして）で食品や飲み物に添加することができる。加えて、イソバレラマイドはチューインガムに処方することもできる。
【００３７】
イソバレラマイドの活性成分は、注射、あるいは、他の、例えば鼻、口腔、座薬を経由して直腸のような、経皮または経粘膜投与などの組織的な経路で投与できる。しかし、経口投与の方がずっと便利であり、よって、好ましい。
【００３８】
さらに、イソバレラマイドを他の薬理学的に活性のある成分と組み合わせて使用できることがわかっている。
【００３９】
眠りを誘発する穏和鎮静薬として使用するには、用量は、典型的な成人１人あたりおよそ500-1000mg、すなわち約10-20mg/kgで、一般的に眠りの誘発が望まれる15-30分前に服用する。経口の用量は、濃度をより高く、または服用するカプセルないしタブレットの数をより多くすることにより処方できる。この場合も、イソバレラマイドは単に寝る前に口にする食品や飲み物に加えられる。不眠に悩む患者は、これらの穏和鎮静作用が有益であるだろう。
【００４０】
ヒトに対するイソバレラマイドの穏和不安緩解薬または穏和鎮静薬としての用途に加えて、イソバレラマイドは、猫、犬、鳥、馬、牛、ミンク、家禽、魚などの、しかしこれに限らない、興奮することが望ましくない家庭の、あるいは家畜の動物にも穏和不安緩解薬または穏和鎮静薬として使用できる。このような場合、イソバレラマイドは注射、あるいは経皮、または経粘膜投与などの他の組織的な経路（例えば座薬を経由して直腸に投与）、または食品や飲み物に添加して経口で投与できる。イソバレラマイドの指示された用量は、動物の種と投与する経路により、このような動物の体重１kgあたり約0.15-20mg/kgであり、好ましくは約0.25-10mg/kgである。
【００４１】
したがって本発明は、活性成分としてイソバレラマイドを含む、経口、非経口、経皮、鼻腔内、口腔、直腸投与に適した多様な薬剤学的組成物を企図するものである。イソバレラマイドは、本発明の領域外のある薬剤学的組成物の偶発的な副産物として存在しうるが、請求している組成物の主な特徴は、イソバレラマイドが規格化された量で存在することである。それは、請求する組成物が、本明細書において説明されているイソバレラマイドの用量レベルに達するために必要な特定の組成物量の決定を可能にする、予測された量のイソバレラマイドを含む。
【００４２】
以下の実施例は、本発明を説明しようとするものであるが、これに限られない。
【００４３】
実施例１：  イソバレラマイドとバレポトリエイト化合物の、インビトロ（in vitro）での細胞毒性の比較
バレポトリエイトの化合物であるバルトレイト(valtrate)、ジドロバルトレイトdidrovaltrate)、アセバルトレイト(scevaltrate)を、様々なヒトとマウスの腫瘍細胞系に対する効果について、イソバレラマイドと比較した。対数増殖期の細胞を、様々な濃度の試験物質で４８時間処理した。その後、増殖速度は直接細胞数を数える、あるいはタンパク質測定することにより決定した。直接EC５０は、試験物質が細胞の増殖を50%阻害する有効濃度である。
【００４４】
バレポトリエイトの化合物と比較したイソバレラマイドの結果を表１に示す。明らかに示されるように、バレポトリエイトの化合物が高い毒性をもつ濃度よりはるかに高い濃度レベルでもイソバレラマイドは全く細胞毒性を示さない。したがって、バレポトリエイトが細胞毒性の化合物（バルトレイト＞ジドロバルトレイト＞アセバルトレイトの順に）である一方、イソバレラマイドは非細胞毒性であることが明らかに証明される。
【００４５】
【表１】
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【００４６】
実施例２：  イソバレラマイドのCNSに対する効果の比較
不安緩解活性
イソバレラマイドと他の５つの化合物を不安緩解活性についてフォーゲル葛藤解析で試験した。図２は、オスのラットを使ってフォーゲル葛藤（不安緩解）分析で得られたデータから引き出した、これらの試験化合物の様々な用量での不安緩解指数を示している。「不安緩解指数」は、４分周期での対照動物に対する試験動物の、痛みを伴って舐めた回数の比として定義する。１よりも大きい不安緩解指数は、不安緩解（「落ちつかせる」）活性を示す。実際に、顕著な「落ちつかせる」活性は、不安緩解指数が1.5よりも大きいときに観察されると考えられている。1.0より小さい不安緩解指数は、不安生成（CNS刺激）活性を示す。不安生成化合物は、実験動物に対して、緊張、恐怖、飛び上がり反射などの増加に特徴づけられる不眠症の増大として効果を呈する。
【００４７】
オスのスプレイグドーリーラット（250-300g）を、試験前の24時間、水を与えないでおいた。指示された用量の試験物質を与える前に、実験チャンバーの中で、動物に５分間周期で１回、水を飲ませた。30分後、動物をチャンバーに戻し、ショックなしで１分間水を飲ませた。残りの４分間は、のみ口にショックを与え、ショックを受けて舐めた回数を記録した。各々のグループにつき4-5匹を試験した。
【００４８】
イソバレラマイドを500-1000mg/kg IPでラットに注射すると、ショックを受けて舐めた回数がコントロールに対しておよそ３倍の増加が示され、これらの用量レベルで明らかに不安緩解（「落ちつかせる」）であることが証明された（図２）。（「バリウム」（ジアゼパム）を治療上効果的な量で注射すると、舐める回数は10倍に増加する。）イソバレラマイドの低級同族体のn-ブチルアミド（図１参照）とショ糖は、コントロールとして解析すると、比較した用量では、はっきりした不安緩解活性を全く示さなかったが、イソバレラマイドの構造異性体のn-バレラマイド(n-valeramide)と、イソバレラマイドの高級同族体のバルノクタマイド（両方とも図１）は、低用量（それぞれ250mg/kgと50mg/kg)で明らかな「落ちつかせる」活性を呈した。これらの結果から、イソバレラマイドと比較して、n-バレラマイドとバルノクタマイドの強い催眠性と傾向が強調された。イソバレラマイドの簡単なN,N-ジエチル誘導体のN,N-ジエチルイソバレラマイド（図１）も、鎮静作用を持つと考えられ、事実、50mg/kgでCNS刺激（興奮）活性を呈し（図２）、ラットにおいて250mg/kgで効果的な痙攣薬であった（データは図２に示されていない）。したがって、イソバレラマイドは、この実験物質のグループで、穏やかな「落ちつかせる」（不安緩解）薬として最も薬理学的に望ましい性質のバランスをもつ化合物である。
【００４９】
鎮静活性
試験物質によって誘発される鎮静活性は、例えば開放観察実験で、実験動物の自発的運動活性の減少として直に観察できる。このような実験では、実験動物に試験物質を投与（通常、IP注射）し、適当な待ち時間（通常、5-30分）の後、底（または床）にはっきりと見える格子をかいた透明なプラスチック箱でできた、開放実験チャンバーに入れた。床の格子を横切った数を一定の時間（通常、１-３時間）数え、続いて、同様に処理した生理食塩水の対照の数値と比較する。計測された格子を横切った数は、問題の各々の試験動物の（自発的運動活性として測定された）全体的な活動レベルの直接の測定になる。鎮静活性は、単位時間当たりの格子の横切りで測定された自発的運動活性の、対照レベルの百分率として表される。
【００５０】
直接観察実験は、経験のない観察者でも、イソバレラマイド処理のマウス（用量250mg/kg IP）と生理食塩水処理の対照を、全体的な活動レベルのみに基づいて、格子の横切りを数えなくても、直ちに認め、見分けることができたことを示した。（非常に目の利いた観察者は、100mg/kg IPの用量で試験動物と対照動物を見分けることもできた。）より高い用量レベル、例えば500mg/kgと1000mg/kg IPで、観察された鎮静作用はより明らかであり、実験動物（オスのマウス）は、明らかに投与される用量が高くなるほど、次第により重い鎮静になった。1000mg/kg IPでは、イソバレラマイド処理の動物は、明らかに座り込み、その毛並みは非常に滑らかでつやがあった。
【００５１】
全身の鎮静効果は、図３に示すように、処理済みの実験動物における薬物誘導性の自発的運動活性の減少を記録することにより、電子的に測定することもできる。図３のデータは、イソバレラマイドの高級同族体のバルノクタマイドが、強力な鎮静睡眠薬であるイソバレラマイドの約10倍強いことを明らかに示している。用量250mg/kg IPのバルノクタマイドがオスのラットに対して催眠性である一方、同じ用量レベルのイソバレラマイドは、25mg/kg IPのバルノクタマイドにより誘発されるものに相当するレベルに、運動活性を減少させた。同様に、500mg/kg IPのイソバレラマイドにより誘導される運動活性の減少は、50mg/kg IPのバルノクタマイドによるものに相当する。したがって、イソバレラマイドは、バルノクタマイドが比較的低用量で呈する約10分の１の強さの（この場合、望ましくない）鎮静催眠性しか呈せず、よって、穏やかな「落ちつかせる」薬として、バルノクタマイドよりも優れている。
【００５２】
薬剤のCNS鎮静活性は、ペントバルビタール誘導性の睡眠時間の延長によって示すこともできる。これらの解析では、鎮静作用を持つ薬剤を一緒に投与していれば、催眠性の用量のバルビタール剤（この場合、ペントバルビタールナトリウム、50mg/kg IP）を投与した実験動物は、対照（生理食塩水処理した動物）よりも長い時間眠るであろう。発明者らの実験では、オスのスイスウェブスター（Swiss-Webster）マウス（30-45g）に、50mg/kg IPのペントバルビタールを投与する30分前に、用量30-500mg/kg IPのイソバレラマイドを投与すると、鎮静効果の検出および定量化ができた(図４参照）。したがって、ペントバルビタール誘発性の睡眠時間の有意な延長として示された、実験動物のCNSに対する明らかな鎮静効果は、用量が100-500mg/kg IPの範囲のイソバレラマイド処理マウスで示すことができた（図４参照）。
【００５３】
弱い催眠活性と効力
イソバレラマイドの催眠活性を、立ち直り反射の消失および意識と反応性（「眠りの誘発」）の明らかな消失を誘導する用量（IP注射により、ネズミに投与）を測定することにより、前述のイソバレラマイドの高級同族体のバルノクタマイドと比較した。バルノクタマイドは、オスのラットにおいて250mg/kg IPの用量で催眠性（眠りを誘発する）であったが、イソバレラマイドは、オスのマウスにおいて1000mg/kg IPでも催眠性でなかった。しかし、オスのマウスにおいて毒性の用量レベルに近い2000mg/kg IPで、イソバレラマイドは催眠活性を示した。したがって、バルノクタマイドは、毒性の用量レベルに近い非常に高い用量（例えば1g/kgより高い）でなければ催眠性を示さない、活性の弱いイソバレラマイドよりもずっと強い催眠性能を持つ。
【００５４】
CNS刺激性および痙攣活性と、その他の急性の毒性効果の欠如
CNS刺激性および痙攣性の可能性は、適当な用量の試験物質をネズミ（オスのマウスとラット）にIP投与し、N,N-ジエチルイソバレラマイド（文献には鎮静薬と意味づけられている）とイソバレラマイドで評価した。N,N-ジエチルイソバレラマイドは鎮静作用をもつと言われているが、実際はオスのマウスとラットにおいて250mg/kg IPの用量で、強いCNS刺激性および痙攣性を示した。オスのマウスにおいて500mg/kg IPでは、N,N-ジエチルイソバレラマイドは痙攣発作の後、死に至った。一方、イソバレラマイド自体は、オスのマウスにおいて10-4000mg/kg IPの範囲で試験されたどの用量でも、CNS刺激性あるいは痙攣性を全く示さなかった。イソバレラマイドを試験した最も高い用量（4000mg/kg IP）では、試験動物（オスのマウス）の中に、何日間か眠った後で、明らかに呼吸機能の低下により死んだものがあった。しかし、実験動物の半数以上が数日間眠った後も生き残ったので、この用量レベルはイソバレラマイドのLD５０値よりも低かった。溶解の限界と、結果として過剰の注入量が要求されるため、さらに高い用量でのイソバレラマイドの更なる試験はできなかった。
【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】イソバレラマイドとおよび構造的に関連のある既知の化合物の化学構造、一般名および商品名、用途を示す。
【図２】オスのラットのフォーゲル（Vogel）解析のデータから導いた、イソバレラマイドとその構造的関連化合物および実験対照の化合物の、不安緩解活性を不安緩解指数で示したものである。
【図３】オスのラットにおける自発的運動活性の薬物誘導性の減少を電子的測定によって示した、バルノクタマイドに対するイソバレラマイドの一般的な鎮静作用を示したものである。
【図４】対照マウスに対するイソバレラマイド投与のマウスの、ペントバルビタール(pentobarbital)誘導性の睡眠時間の平均相対百分率の増加を示す。
【図１】
2006169259.tif 000003
【図２】
2006169259.tif 000004
【図３】
2006169259.tif 000005
【図４】
2006169259.tif 000006
【手続補正書】
【提出日】平成18年2月14日(2006.2.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
催眠状態を誘導することなく眠りを誘発するのに効果的な量のイソバレラマイドを含有した単位投与剤形を含み、
前記催眠状態とは、被験者を横にしたときに自力でまっすぐになれず、意識と反応性が明らかに失われる状態であり、
前記眠りを誘発するとは、被験者を横にしたときに自力でまっすぐになれる能力が保持され、反応性が保持されることである、
眠りの誘発を必要とする被験者において眠りを誘発するための薬剤学的組成物。
【請求項２】
効果的な量が10-20mg/kg体重の範囲である、請求の範囲１記載の薬剤学的組成物。
【請求項３】
被験者がヒトである、請求の範囲１記載の薬剤学的組成物。
【請求項４】
被験者が家庭のあるいは家畜の動物である、請求の範囲１記載の薬剤学的組成物。