(57)【要約】【課題】特に拡張期血圧（最低血圧）を低下させることのできる血圧降下剤を提供する。【解決手段】卵殻膜を有効成分として含有する。卵殻膜は、血管を構成するコラーゲン中の約６０％を占める３型コラーゲンを増加させて血管の柔軟性，弾性を増加させる。これにより血圧の低下が実現される。【選択図】      図５
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
卵殻膜を有効成分として含有することを特徴とする血圧降下剤。
【請求項２】
請求項１に記載の血圧降下剤において、血圧は拡張期血圧であることを特徴とする血圧降下剤。
【請求項３】
請求項１又は２に記載の血圧降下剤において、卵殻膜は微粉砕処理されていることを特徴とする血圧降下剤。
【請求項４】
卵殻膜を有効成分として含有することを特徴とする細胞保護剤。
【請求項５】
請求項４に記載の細胞保護剤において、卵殻膜は微粉砕処理されていることを特徴とする細胞保護剤。
【請求項６】
卵殻膜を有効成分として細胞を保護する機能を有することを特徴とする機能性食品。
【請求項７】
請求項６に記載の機能性食品において、卵殻膜は微粉砕処理されていることを特徴とする機能性食品。
【請求項８】
卵殻膜を有効成分として含有することを特徴とする細胞障害抑制剤。
【請求項９】
請求項８に記載の細胞障害抑制剤において、卵殻膜は微粉砕処理されていることを特徴とする細胞障害抑制剤。
【請求項１０】
卵殻膜を有効成分として細胞障害を抑制する機能を有することを特徴とする機能性食品。
【請求項１１】
請求項１０に記載の機能性食品において、卵殻膜は微粉砕処理されていることを特徴とする機能性食品。
【請求項１２】
卵殻膜を有効成分として含有することを特徴とするスポーツ障害抑制剤。
【請求項１３】
請求項１２に記載のスポーツ障害抑制剤において、卵殻膜は微粉砕処理されていることを特徴とするスポーツ障害抑制剤。
【請求項１４】
卵殻膜を有効成分としてスポーツ障害を抑制する機能を有することを特徴とする機能性食品。
【請求項１５】
請求項１４に記載の機能性食品において、卵殻膜は微粉砕処理されていることを特徴とする機能性食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、卵殻膜を有効成分とする薬剤であって、特に、最低血圧低下剤、細胞保護剤、細胞障害抑制剤及びスポーツ障害抑制剤に関するとともに、これらの薬効を得ることのできる機能性食品に関する。
【背景技術】
【０００２】
鶏卵などの鳥類の卵の卵殻の内側に存在する卵殻膜は、強靭な繊維性のタンパク質からなり、オポケラチン及びオポムシンを主成分としている。この卵殻膜は皮膚の老化や肌荒れ防止作用、皮膚の疾病の早期治癒作用、育毛・発毛促進作用、脱毛防止作用及び生体内に生成した活性酸素の低減ないし消去作用等の優れた薬効作用を有することが知られている。そして、このような自然（天然）の卵殻膜に由来する安全性に優れた薬剤を経口摂取しやすいようにした卵殻膜含有錠剤も提案されている（特許文献１参照）。
【０００３】
すなわち、この提案に係る卵殻膜含有錠剤は、直径が約７〜１０ｍｍ程度の円形ないし楕円形の錠剤で、錠剤１個の重さが約３５０〜４００ｍｇ程度であり、その錠剤１個中に卵殻膜が約３５〜４０ｍｇの量で含まれている。そして、成人が錠剤を１日当たり２〜３個摂取すると（１日当たり卵殻膜を合計で７０〜１２０ｍｇ摂取すると）、皮膚におけるコラーゲン、特に３型コラーゲン（コラーゲン３型とよばれることもあるが、ここでは３型コラーゲンとして説明する。なお、数字の３は、通常ギリシャ数字で表されるが、ここでは便宜上アラビア数字を用いている。）の生成が促進されて、皮膚の老化や肌荒れが防止され、皮膚を滑らかで、柔らかく、シットリとした状態にすることができ、湿疹、炎症、ヤケドなどの皮膚疾患の予防や治癒が促進され、育毛、発毛促進、脱毛の防止、白髪の減少等がなされ、生体内に生成した活性酸素が消去又は低減されて種々の疾病の予防や回復を促進することができるという特長を有している。
【０００４】
また、卵殻膜は上述のように皮膚損傷部の再生促進作用に優れているので、不織布、織布、編布、紙あるいはプラスチックフィルム等のフィルムからなる支持体に加水分解卵殻膜を含有する創傷被覆層を設けた絆創膏も提案されている（特許文献２参照）。この提案に係る絆創膏は、加水分解卵殻膜が損傷を受けた皮膚の再生を促進する作用に優れているので、皮膚の治癒の促進を図ることができる特長を有しているとともに、自然の卵殻膜に由来するので安全性に優れた絆創膏とすることができる。
【０００５】
さらに、卵殻膜は、上述のように育毛・発毛促進作用及び脱毛防止作用に優れているので、水又は水とエチルアルコールとの混合液等の水性媒体中に加水分解卵殻膜を０．００１〜５質量％の割合で含有させた育毛・発毛促進剤も提案されている（特許文献３参照）。この提案に係る育毛・発毛促進剤は、育毛促進、発毛促進、脱毛防止及び白髪の減少効果に優れており、毎日所定の量を継続して頭部に付与することによって、薄毛の解消、発毛、育毛、毛髪への張り・腰の付与、白髪の解消などの効果を発現させることができる。しかも、この育毛・発毛促進剤は、自然に由来する卵殻膜の成分を用いているために、安全性においても優れている。
【０００６】
さらにまた、卵殻膜の微細粉末と紙に加工して（抄紙して）調湿紙や吸油紙等の機能を有する機能紙も提案されている（特許文献４参照）。この提案に係る機能紙は環境中の湿気の吸収と放出により湿度調整を行うことができ、被処理物の油分の吸収除去を行うことができ、また、被処理物中の貴金属、重金属等の金属を吸収することができる優れた機能を有している。
【特許文献１】特開２００３−１４６８９５号公報
【特許文献２】特開２００３−２２５２９８号公報
【特許文献３】特開２００４−１８９６８８号公報
【特許文献４】特開平９−１７６９９８号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
上述のように、卵殻膜には各種の薬効が有り、また、各種の有用な機能を有し、しかも、自然に由来する安全な物質であることに着目し、本発明者らは、さらに研究を重ねた結果、卵殻膜には血管に柔軟性を与えて血圧を低下させる効果があるとの知見を得ることができた。そこで本発明の第１の目的は、卵殻膜を用いた血圧効果剤、特に拡張期血圧（最低血圧）を効果的に低下させることのできる降圧剤を提供することにある。
また、本発明者らは、卵殻膜には紫外線等の化学的刺激（ストレス）から細胞を保護する機能を有する知見を得ることができている。そこで本発明の第２の目的は、卵殻膜を用いた細胞保護剤を提供することにある。同時に、この細胞保護機能を有する機能性食品を提供することにある。
さらに、本発明者らは、卵殻膜には長距離選手等の持久性トレーニングを行う者のトレーニングによる細胞障害を抑制する知見を得ることができている。すなわち、スポーツ選手は、長期にわたって厳しいトレーニングが要求され、トレーニングに伴う障害発生の割合は極めて高いという現実がある。この障害発生を防止するためにトレーニング方法、栄養管理、心理的カウンセリング及びスポーツ医学などの面から研究が行われてきたものの、トレーニングそのものを回避する方法はない。このために今まで多くの有能な選手が障害発生のためにその能力を発揮できないまま、競技生活を停止する例が数多く存在していた。そこで本発明の第３の目的は、トレーニングを行う者が障害発生を未然に防止できる細胞障害抑制剤を提供することにある。同時に、この細胞障害抑制機能を有する機能性食品を提供することにある。
さらにまた、本発明者らは、卵殻膜には長距離選手等の持久性トレーニングを行う者の足関節痛等のスポーツ障害発生を抑制できる知見を得ることができている。すなわち、本発明者らは、卵殻膜は３型コラーゲンを増加させることの知見を得ており、しかもこの３型コラーゲンを増すことにより、細胞の防御システムが形成されることから、スポーツ選手の筋、腱及び靭帯等に発現するスポーツ障害を未然に防止できる知見を得ている。そこで本発明の第４の目的は、卵殻膜を用いたスポーツ障害抑制剤を提供することにある。同時に、このスポーツ障害抑制機能を有する機能性食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明に係る血圧降下剤は、上記第１の目的を達成するために、卵殻膜を有効成分として含有することを特徴とし（請求項１）、血圧は拡張期血圧であることを特徴とし（請求項２）、そして、卵殻膜が微粉砕処理されたものであることを特徴としている（請求項３）。
本発明に係る細胞保護剤は、上記第２の目的を達成するために、卵殻膜を有効成分として含有することを特徴とし（請求項４）、卵殻膜は微粉砕処理されていることを特徴としている（請求項５）。そして、卵殻膜を有効成分として細胞を保護する機能を有することを特徴とし（請求項６）、その卵殻膜が微粉砕処理されていることを特徴としている（請求項７）。
本発明に係る細胞障害抑制剤は、上記第３の目的を達成するために、卵殻膜を有効成分として含有することを特徴とし（請求項８）、卵殻膜が微粉砕処理されていることを特徴としている（請求項９）。また、卵殻膜を有効成分として細胞障害を抑制する機能を有することを特徴とし（請求項１０）、その卵殻膜が微粉砕処理されていることを特徴としている（請求項１１）。
本発明に係るスポーツ障害抑制剤は、上記第４の目的を達成するために、卵殻膜を有効成分として含有することを特徴とし（請求項１２）、その卵殻膜は微粉砕処理されていることを特徴としている（請求項１３）。また、卵殻膜を有効成分としてスポーツ障害を抑制する機能を有することを特徴とし（請求項１４）、その卵殻膜が微粉砕処理されていることを特徴としている（請求項１５）。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の請求項１〜請求項３に係る血圧降下剤は、卵殻膜、特に好ましくは微粉砕処理された卵殻膜からなるので、自然に由来した安全な原料で拡張期血圧に有効な血圧降下剤とすることができる。
本発明の請求項４及び請求項５に係る細胞保護剤は、卵殻膜、特に好ましくは微粉砕処理された卵殻膜からなるので、自然に由来した安全な原料で細胞を化学的刺激から保護するとともに、細胞内の発動性を高めることができる。
本発明の請求項６及び請求項７に係る機能性食品は、卵殻膜、特に好ましくは微粉砕処理された卵殻膜からなるので、自然に由来した安全な原料で細胞を化学的刺激から保護するとともに、細胞内の発動性を高めることができる。
本発明の請求項８及び請求項９に係る細胞障害抑制剤は、卵殻膜、特に好ましくは微粉砕処理された卵殻膜からなるので、自然に由来した安全な原料で細胞障害を有効に防止することができる。
本発明の請求項１０及び請求項１１に係る機能性食品は、卵殻膜、特に好ましくは微粉砕処理された卵殻膜からなるので、自然に由来した安全な原料で細胞障害を有効に防止することができる。
本発明の請求項１２及び請求項１３に係るスポーツ障害抑制剤は、卵殻膜、特に好ましくは微粉砕処理された卵殻膜からなるので、自然に由来した安全な原料でスポーツ選手の怪我を未然に防止することができる。
本発明の請求項１４及び請求項１５に係る機能性食品は、卵殻膜、特に好ましくは微粉砕処理された卵殻膜からなるので、自然に由来した安全な原料でスポーツ選手の怪我を未然に防止することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明に係る卵殻膜は、これを摂取することにより、血管を構成するコラーゲン中の約６０％を占める３型コラーゲンを増加させて血管の柔軟性ないし弾性を増加させる作用を有し血圧を低下させることができる。特に拡張期の血圧、いわゆる最低血圧を低下させることができる。血圧降下剤として用いられる卵殻膜は、上記特許文献１に詳述されているように、卵殻膜を微粉砕処理（パウダー処理）し、これを化工澱粉等の賦形剤を用いて錠剤とし、この錠剤を飲用することにより容易に摂取することができる。
【００１１】
従来、血圧を降下させるにはα遮断剤、β遮断剤、あるいはカルシウム拮抗剤等の薬剤によるもの又はＮａを制限した食事によるものが一般的である。これに対し、本発明は、３型コラーゲンを増加させて血管そのものの弾性要素を改善して血圧を低下させることを特徴とするもので、従来にない新規な発想である。
【００１２】
すなわち血圧は、加齢に伴って上昇するが、その原因は、血管内壁への沈着物の増加による血管弾性の低下、及び加齢に伴う３型コラーゲンの低下によるものと考えられている。このことは、表皮組織におけるコラーゲンの変化に着目した場合、加齢に伴って３型コラーゲンが低下することで表皮の硬化やしわが出現することからも理解できる。
【実施例１】
【００１３】
本発明に係る卵殻膜を有効成分とする血圧降下剤の効果を確認するために以下の実験を行った。
【００１４】
（１）実験で用いた動物
実験動物には、日本エスエルシー株式会社の３週齢の雄性の遺伝的に高血圧となる自然発生高血圧ラット（Spontaneous Hypertensive Rats ）（以下、ＳＨＲラットという。）を用いた。個体数ｎ（以下、ｎは個体数を示す。）は３２である。これらのラットを任意の５群、すなわち照査資料群（以下、コントロール群（Control 群）という。）、後述する卵殻膜を餌に０．３％を配合した０．３％群、以下同様に１．０％群及び３．０％群に分けた。水と餌は自由摂取とし、実験動物室（室温２５℃、湿度６０％）内で５週間飼育した。
【００１５】
（２）卵殻膜の配合
卵殻膜の配合は、日本クレア株式会社へ依頼し、ラットの通常給餌飼料のＣＥ−２固形食へ、それぞれ０．３％、１．０％、３．０％の微粉砕処理された卵殻膜を配合して固形食として用いた。０．３％群の摂取量を体重３００ｇのラット（ＣＥ−２固形食、５ｇ／日）で計算すると、体重３００ｇ当たり１日１５ｍｇ摂取となる（０．００３×５ｇ／日＝１５ｍｇ）。これを体重６０ｋｇのヒトに換算すると（６０ｋｇ／３００ｇ＝２００）、２００倍となる。この倍率の計算では、１５ｍｇ×２００＝３０００ｍｇ＝３ｇとなるが、通常ヒトの摂取は、ラットの１／１０〜１／３０とするため、これを考慮すると１００〜３００ｍｇ／日となり、この濃度はヒトで摂取した場合、何らかの効果が出現してくる濃度である。
【００１６】
（３）体重測定
各週ごとに小動物体重計を用い、体重測定を行い、ＳＨＲラットの週齢、血圧変動と合わせ、ＳＨＲラットの確認指標とした。図１は１週間毎のＳＨＲラットの体重の変化状態を示している。
【００１７】
（４）血圧の測定
血圧の測定には、無加温型非観血式血圧計（ＭＫ−２０００型、室町機械株式会社製）を用いた。測定時の室温は２２±１℃、照明は弱め、周囲の音声はできるだけ除去した。ラットの尾動脈にセンサーを取り付け、１５分間静置後測定を行った。各ラットにつき、５回の測定を行い、最大血圧値並びに最小血圧値を除き、これらの平均値をそのラットの血圧、心拍数とした。図２には心拍数を示し、図３には最高血圧（収縮期血圧）を示し、図４には最低血圧（拡張期血圧）を示している。
【００１８】
上記実験に基づく成果をまとめると以下のとおりである。
【００１９】
（１）卵殻膜摂取による体重変化
コントロール群（ｎ＝８）、０．３％群（ｎ＝６）、１．０％群（ｎ＝６）、３．０％群（ｎ＝６）の体重変化は図１に示すとおりであり、コントロール群の発育は、ＳＨＲラットのデータ（株式会社星野試験動物飼育所のデータ）とほぼ一致し、ＳＨＲラットとしての確認ができた。１〜２週では、これらの群に体重差は認められなかった。しかし、３〜５週にかけ、統計学的に有意な体重差が発現した。特にコントロール群に対し３．０％群では３週目、５週目で体重増加が認められた。したがって、３．０％群では卵殻膜摂取により栄養学的差異の発現が生じてくると言える。
【００２０】
（２）卵殻膜摂取による心拍数への影響
卵殻膜摂取による心拍数の影響については、図２に示されるように、３週齢（０週目）のＳＨＲラットでは、体重も小さく（６０〜８０ｇ）、心拍数は５００〜５２０拍／分の間にあった。しかし、週齢が進むと、心拍数は４２０〜４８０拍／分に低下し、発育に伴う変化が認められた。しかし、この図２からも明らかなように、卵殻膜摂取による心拍数変化はいずれの群間でも認められなかった。したがって、卵殻膜摂取は心拍数への影響はないと言える。
【００２１】
（３）最高血圧（収縮期血圧）に対する卵殻膜摂取の影響
卵殻膜摂取による最高血圧の影響については、図３に示すとおりである。すなわち、ＳＨＲラットの血圧は、通常４週齢で１８０ｍｍＨｇあたりにあるので、本実験で用いたＳＨＲラットの血圧測定値を対照させると、ほぼこの範囲にあり、高血圧が発症していることが確認できる。しかし、卵殻膜摂取群では、１週目の摂取で全く変化はなかったが、２週目以上の摂取になると２，４，５週目にみられるように、卵殻膜摂取のいずれの群においても、通常のＳＨＲラット以上の血圧上昇を示し、統計学的にも有意な上昇であった（ｐ＜０．０５）。このように、卵殻膜摂取による血圧への影響では、摂取期間により予測と全く反対の結果となり、その理由は不明であるが、高血圧者に対する長期摂取は避けるべきと思われる。しかし、低血圧者への適用の可能性は後述する。
【００２２】
（４）最低血圧（拡張期血圧）に対する卵殻膜摂取の影響
卵殻膜摂取による最低血圧の影響については、図４に示すとおりである。なお、ＳＨＲラットについての最低血圧は、公表された測定値が存在しないため、ＳＨＲラットの最低血圧が週齢に伴いどのような変化を示すか明らかでない。しかしながら、今回の測定値でみる限り、４週齢で既に１００〜２００ｍｍＨｇとなっている。卵殻膜摂取による影響は最高血圧と同様なパターンとなった。しかし卵殻膜摂取では、１週間後に最低血圧の低下が認められ、特に、０．３％群並びに１．０％群では、統計学的にも有意な低下となった。ところが、２，４，５週目ではこの減少が逆転し、卵殻膜の摂取群ではいずれの濃度においても、最低血圧の有意な上昇が発現した。
【００２３】
（５）卵殻膜摂取後１週目の最低血圧
卵殻膜摂取１週後の最低血圧低下については、図５に示すとおりである。すなわち、ＳＨＲラットの最低血圧は、他のコントロール群を取り入れても９３．９±７．７ｍｍＨｇであった。しかし、０．３％群、１％群、並びに３％群ではそれぞれ６９．３±１３．０ｍｍＨｇ、７３．２±１０．９ｍｍＨｇ、８３．７±６．０ｍｍＨｇと低く、０．３％並びに１．０％群ではおよそ２０ｍｍＨｇ低く、統計学的にも有意な低下であった（ｐ＜０．０５）。卵殻膜群のみで比較した場合、卵殻膜摂取が増えるほど最低血圧が高まっていることにも注目する必要がある。
【００２４】
上記実験の成果に対する考察をまとめると以下のとおりである。
【００２５】
（１）ＳＨＲラットの確認
今回の実験で飼育したＳＨＲラットを株式会社星野試験動物飼育所のＳＨＲラットの週齢、体重、最高血圧を対照させると、４週齢で最高血圧１６０ｍｍＨｇ前後、体重２２０ｇ前であり、今回実験で飼育したＳＨＲラットもこれらの測定値にきわめて近似した数値となり、正にＳＨＲラットであることが確認できた。このラットの特徴は２０週齢で最高血圧２２０ｍｍＨｇ前後に達する特徴がある。今回の実験の測定値では、４週齢で既に１８０ｍｍＨｇ前後となり、５週齢では２２０ｍｍＨｇ前後に達し、自然発生的に血圧上昇が生じていた。
【００２６】
（２）卵殻膜摂取における栄養学的問題
卵殻膜摂取はいずれにしてもプロテイン（protein ）を摂取したことになる。この結果は特に３％群にみられ、３〜５週にかけ図１に示したように有意な体重増加として認められた。卵殻膜というきわめて特殊なプロテインであり、消化によるアミノ酸として吸収されるものの、これらのアミノ酸により生体内肝でどのようなプロテイン合成が促進されているかは明らかではない。しかし、いずれにせよ、卵殻膜は消化・吸収されて、体重増加を発現させていることには間違いはない。
【００２７】
（３）血圧に対する卵殻膜摂取の影響
卵殻膜摂取に伴う血圧への影響をみると、上記図３及び図４に示されるように、血圧への影響は確かに出現した。このことは卵殻膜を摂取すると、卵殻膜は全てアミノ酸まで分解され、肝臓での蛋白合成に利用されることになるが、血圧に影響を及ぼす何らかのプロテイン合成が行われていると考えられる。もし、このような現象が存在すると、一般に腱や靭帯、軟骨等を食用する意味も同時に存在しているように思われる。このことは、長寿といわれる沖縄ではこれらを常食としている点にも何らかの意味が存在していると推察される。
【００２８】
特に、上記図５に示されるように、卵殻膜摂取１週後では、０．３％群及び１％群に統計学的に有意な血圧低下が認められ、その低下はおよそ２０ｍｍＨｇであった。この変化は、特に拡張期血圧（最低血圧）のみに出現していることから、血管の弾性（柔軟性）を高めた結果といえる。なお、３％群ではその効果が少ないことから考えると、低濃度がより望ましいと言える。
【００２９】
上述の実験結果に基づいて卵殻膜をヒトに最低血圧降下剤として応用する場合について考察すると、通常ラットで得られた条件の薬剤の投与量をヒトに適用するときは、ラットの１／１０程度とされている。したがって、今回の実験結果では０．３％群及び１．０％群で血圧低下に有効と認められているから、ヒトに応用した場合は０．０３％〜０．１％の卵殻膜の投与量となる。また、血圧低下の目的達成のための持続時間は、上記実験では０．３％群及び０．１％群のラットの場合、１週間であるので、これをヒトに換算すると、その投与期間は１×３０週となり、およそ５〜６か月となる。このように、卵殻膜を有効成分として含有する薬剤は、拡張期血圧を効果的に低下させることができる。
【００３０】
次に、本発明の第２の目的を達成するための卵殻膜を有効成分とする細胞保護剤及びその細胞保護機能を有する機能性食品について説明する。
【００３１】
本発明の第２の目的を達成するための請求項４に記載の細胞保護剤は、卵殻膜を有効成分として含有することを特徴とし、請求項５に記載の細胞保護剤は、卵殻膜は微粉砕処理されていることを特徴としている。そして、請求項６に記載の機能性食品は、卵殻膜を有効成分として細胞を保護する機能を有することを特徴とし、請求項７に記載の機能性食品は、卵殻膜が微粉砕処理されていることを特徴としている。以下、卵殻膜が細胞を保護する作用を有していることを示すための実施例について説明する。
【実施例２】
【００３２】
実験方法
（培養）
細胞株：新生児初代皮膚繊維芽細胞（Cambrex BioSciece Wakersvill Inc. New Jersey，コード番号：CC-2509 ）を用い、ＦＢＭ培地で培養を行った。
試薬添加：卵殻膜を微粉砕処理して得られた微粉末（パウダー）（本出願人（株式会社アルマード）製）をＦＢＭ培地に添加し、その添加量を０．２％とした。
培養：小型炭酸ガス培養器（BNS-110 ，エスペック株式会社製）を用い、３７℃、５％ＣＯ2 下で７２時間の培養を経て、測定を行った。
【００３３】
（測定）
（１）耐トリプシン（Anti-trypsinize ）：培養面積９．４ｃｍ2 に対し、１．５ｍｌの０．０５％のトリプシン（trypsin ）を含有するエチレンジアミン四酢酸溶液（ＥＤＴＡ溶液）（大日本製薬株式会社製）を添加した。細胞の解離状態を１０分，２５分の両時点において、経時的に比較を行い、卵殻膜の化学薬品ストレスに耐する耐性を検証した。  （２）アポトーシス率：７２時間の培養を経たアポトーシス率は、アポトーシスキット（株式会社医学生物学研究所製）を用い、フローサイトメトリー（Flow-cytometry）にて測定した。
（３）細胞の構造：細胞内にはＤＮＡを含む核、ミトコンドリア、小胞体、ゴルジ体等の細胞内小器官があり、各々が相互に関連した働きをし、細胞機能を営んでいる。これらの小器官の数の変化は細胞の生命力や機能の変化を示している。このため、本実験では、Flow-cytometryのサイドスキャター（side scatter）機能を用い、細胞内小器官数を比較し、細胞の活性を検証した。
【００３４】
実験結果
（１）細胞の形態と増殖速度
コラーゲンはヒト体の総蛋白質の３０％近くを占め、各種の細胞の接着、増殖、分化に特異的な作用を示すため、先ず、細胞の形態と増殖について実験した。図６（ａ），（ｂ）でみる限り、照査資料（Control （図６（ａ）参照））と卵殻膜（図６（ｂ）参照。なお、図中、ＥＭは卵殻膜を指している。後述の図７（ｂ）、図８（ｂ）、図９（ｂ）及び図１０（ｂ）も同じ。）添加との間に差は認められない。したがって、卵殻膜は細胞の形態と増殖速度には影響を与えないことが確認できた。なお、図６（ａ），（ｂ）〜図１０（ａ），（ｂ）は顕微鏡写真に基づいている。
【００３５】
（２）トリプシン（Trypsin ）処理での変化
１．５ｍｌの０．０５％のトリプシンを添加し、１０分，２５分における繊維芽細胞の変化を図７（ａ），（ｂ）及び図８（ａ），（ｂ）に示した。１０分後ではコントロールの細胞はトリプシンの分解により変形し、基底から遊離されていることが確認できた。これに対し、卵殻膜処理ではトリプシンの影響は少なく、細胞の形態が保たれている。
２５分後のコントロール処理では、ほとんどの細胞が基底から剥がされ、丸くなっていたり、死滅したりしていることが確認できた。これに対し、卵殻膜処理では多くの変化はあるが、まだ多くの細胞が基底に付着している状態にあることが確認できた。
トリプシンは蛋白溶解酵素であり、化学的過程により溶解となるため、洗浄しない限り、細胞それ自体を死滅させることになる。卵殻膜がこの作用を止めていることから見ると、卵殻膜がこのような化学的刺激に際し、細胞を保護している働きをもっていることが分かる。
【００３６】
（３）細胞死（アポトーシス）の比較
アポトーシス（細胞死）キットにより、細胞死の比較を行った結果を図９及び図１０に示した。トリプシン添加後１５分の写真では（図９（ａ），（ｂ））、コントロール処理で多くの死細胞（光っている部分）が出現していた。これに対し、卵殻膜処理では、その数が著しく少ない。３０分後では、これらの数はコントロール処理でさらに明確に著しく多くなるが、卵殻膜処理では死細胞が点在しているだけであることが確認できた。
これらの結果から、トリプシンという化学的な蛋白質溶解に際し、繊維芽細胞が卵殻膜により保護されていることが明確になった。
【００３７】
（４）フローサイトメトリー（Flow-cytometry）による確認と評価
アポトーシスキットを用い、生細胞、死細胞、初期アポトーシス細胞をフローサイトメトリーで分析した結果を図１１に示した。図中の囲み線Ａ内は生細胞であり、囲み線Ｂ内は初期アポトーシス、囲み線Ｃ内は死細胞である。これらの細胞数を１００％とすると、それぞれの細胞の状態を百分率（％）で表示できる。図１２はその百分率である。それぞれの％で比較すると、卵殻膜処理では生細胞の率が有意に高く（ｐ＜０．０５）、初期アポトーシス並びに死細胞の率も有意に低いことが分かる。
これらの結果から、卵殻膜処理は化学的刺激による保護作用をもっていることが分かる。
【００３８】
（５）胞内小器官への影響
フローサイトメトリーでは光の乱反射から細胞内の構造の変化を知ることができる。卵殻膜処理が細胞の外部保護だけの役割であれば、増殖・分化の特異的作用をもつことは説明できない。そこで、この背景を明らかにするために、細胞内の変化について、側方散乱光を用いて観察した。その結果を図１３に示した。コントロール処理と比較すると、その側方散乱光の値は卵殻膜処理では明らかに高まり、有意な変化であった。
この結果は、卵殻膜処理が単に細胞の接着に止まらず、増殖や分化のための細胞内小器官を増加させていることを示している。したがって、卵殻膜は細胞内の小器官を増加させる働きをもっていることが分かる。
【００３９】
上述の実験結果から、卵殻膜は皮膚繊維芽細胞（CC-2509 ）における化学的刺激に対する保護作用を示すとともに、繊維芽細胞内そのものの活動性を高めていることが明らかである。したがって、この卵殻膜を有効成分とする薬剤を投与することにより細胞を紫外線等の化学的刺激から保護できるとともに、その細胞内の活動性を高めることができる。また、この卵殻膜を食品として、例えば、所定の食品に添加物として添加して摂取したとき、あるいは食品補助剤として摂取したときは、細胞を化学的刺激から保護できるとともに、その細胞内の活動性を高めることができる。
【００４０】
次に、本発明の第３の目的を達成するための卵殻膜を有効成分とする細胞障害抑制剤及びその細胞障害抑制機能を有する機能性食品について説明する。
【００４１】
本発明の第３の目的を達成するための請求項８に記載の細胞障害抑制剤は、卵殻膜を有効成分として含有することを特徴とし、請求項９に記載の細胞障害抑制剤は、卵殻膜が微粉砕処理されていることを特徴としている。また、請求項１０に記載の機能性食品は、卵殻膜を有効成分として細胞障害を抑制する機能を有することを特徴とし、請求項１１に記載の機能性食品は、卵殻膜が微粉砕処理されていることを特徴としている。
【００４２】
一般にスポーツ選手は、長期にわたって厳しいトレーニングが要求され、トレーニングに伴う障害発生は極めて高い。この障害発生を防止するためにトレーニング方法、栄養管理、心理的カウンセリング及びスポーツ医学などの面から研究が行われてきたものの、トレーニングそのものを回避する方法はない。そのため多くの有能な選手が障害発生のためにその能力を発揮できないまま、競技生活を停止する例が数多く存在している。
【００４３】
本発明者らは、上述したように卵殻膜は３型コラーゲンを増加させ、培養細胞での抗トリプシン作用を増強させ、このような状況が全身に発現しているとの確認の下、スポーツ選手の逸脱酵素への影響も出現することを見出だしている。すなわち、本発明者らは、卵殻膜が逸脱酵素を抑制できる作用を有している知見を得て、この卵殻膜がスポーツ選手の細胞障害を抑制できることを見出だすことができた。以下、卵殻膜が細胞障害抑制作用を有することを実施例に基づいて説明する。
【実施例３】
【００４４】
実験方法
（１）本実験の対象者は東海大学陸上競技部長距離ブロックの学生３９名である。これらの学生は全員合宿所に居住しているため、食事並びにトレーニング内容はほぼ類似している。そして、これら３９名の学生のうち、無作為に抽出した１９名を卵殻膜の摂取を行わない対照群（図示ではControl ）とし、残りの２０名が卵殻膜を摂取した卵殻膜摂取群（図示では卵殻膜）としている。
これら３９名の学生の身体的特徴とパフォーマンス（５０００ｍ走）をそれぞれ表１に示す。
【表１】
2006169205.tif 000003
【００４５】
（２）卵殻膜
使用した卵殻膜は、本出願人（株式会社アルマード）製のアルマードＴＯ．２（実際の数字はギリシャ数字）の卵殻加工食品を用いた。この卵殻加工食品は、上記特許文献１に記載されているように、卵殻膜を微粉砕処理（パウダー処理）し、これを化工澱粉等の賦形剤を用いて錠剤としたもので、１粒に卵殻膜が２．７ｍｇ含まれる。１日４粒の摂取で１０．８ｍｇとなる。摂取期間は４ケ月である。
【００４６】
（３）採血並びに血液成分の分析・定量
採血は全て早朝空腹時（７：３０〜９：００）とし、血液は直ちに氷冷化し、株式会社ＳＲＬへ分析依頼した。分析項目は、白血球（ＷＢＣ）、赤血球（ＲＢＣ）、平均赤血球容積（ＭＣＶ）、平均赤血球色素量（ＭＣＨ）、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）、乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）、トランスアミラーゼ（ＧＯＴ、ＧＰＴ）、トリグリセリド（ＴＧ）、総コレステロール（Ｔ−Ｃｈｏ）、高比重リポ蛋白（ＨＤＬ）である。
【００４７】
実験結果
１．血清逸脱酵素の特徴
図１４には、典型的な逸脱酵素であるクレアチンキナーゼ（ＣＫ（ｏｒ  ＣＰＫ））の変化を示した例が示されている。この対象者は４年間特別な疾病や障害のなかった長距離選手であったが、本人の自覚症状もなく、著しいＣＰＫの増加を示した。
図１５には、４０ｋｍ走トレーニング後のＣＰＫの変化が示されている。４０ｋｍ走トレーニングを行った者では、明らかにＣＰＫの増加が起きている。したがって、持久性トレーニングが確かに心臓や骨格筋の細胞に障害を起こし、細胞内からＣＫ（ＣＰＫ）が逸脱していることが分かる。
【００４８】
２．卵殻膜摂取による血液性状の変化
（１）図１６（ａ）は赤血球（ＲＢＣ）、同図（ｂ）はヘモグロビン（Ｈｇｂ）及び同図（ｃ）はヘマトクリット値（Ｈｃｔ）の変化が示されている。これら図から明らかなように、ＲＢＣ、Ｈｇｂ及びＨｃｔは、卵殻膜の影響は全く認められなかった。
【００４９】
（２）トランスアミラーゼ（ＧＯＴ，ＧＰＴ）と乳酸脱水素酵素（ＬＤＨ）について
図１７（ａ），（ｂ），（ｃ）には、卵殻膜の摂取におけるＧＯＴ，ＧＰＴ及びＬＤＨについてコントロール群と卵殻膜摂取群との比較がそれぞれ示されている。ＧＯＴ，ＧＰＴ及びＬＤＨは、いずれも逸脱酵素であるが、ＬＤＨには変化はなかったが、ＧＯＴ及びＧＰＴについては統計学的に差異はないが、減少の傾向が認められた。
【００５０】
（３）総コレステロール（Ｔ−ｃｈｏ）、トリグリセリド（ＴＧ）及び高比重リポ蛋白（ＨＤＬ）
図１８（ａ），（ｂ），（ｃ）には、卵殻膜の摂取におけるＴ−ｃｈｏ、ＴＧ及びＨＤＬについてコントロール群と卵殻膜摂取群との比較がそれぞれ示されている。卵殻膜摂取群では、Ｔ−ｃｈｏ及びＴＧの有意な増加が認められた。また、ＨＤＬにもその傾向は出現していた。
【００５１】
（４）白血球（ＷＢＣ）及びクレアチンキナーゼ（ＣＫ）
図１９（ａ），（ｂ）には卵殻膜の摂取におけるＷＢＣ及びＣＫについてコントロール群と卵殻膜摂取群との比較がそれぞれ示されている。卵殻膜摂取群ではＷＢＣに有意な減少が出現した（図１９（ａ）参照）。一般的に運動後では白血球数の上昇があり、これはトレーニング（運動）そのものが身体にとって障害となっている（炎症）ことを予測させるので、この減少はこれらの障害を抑えていることを示している。卵殻膜によるＣＫの有意な減少はこのことをさらに裏付けている（図１９（ｂ）参照）。
【００５２】
上述のように、卵殻膜の摂取は、白血球数（ＷＢＣ）に有意な減少現象があり、抗炎症的働きのあることが分かる。さらに、クレアチンキナーゼ（ＣＫ）では明らかな低下となり、トレーニングにより細胞障害が抑えられていることを裏付けている。これらの結果から、卵殻膜摂取は激しいトレーニングに際して生じる臓器・組織の障害を抑える働きをもっていることが分かる。したがって、この卵殻膜を有効成分とする薬剤を投与することにより細胞障害を抑制することができるとともに、この卵殻膜を食品として、例えば所定の食品に添加物として添加して摂取したとき、あるいは食品補助剤として摂取したときは、細胞障害を抑制することができる。
【００５３】
次に、本発明の第４の目的を達成するための卵殻膜を有効成分とするスポーツ障害抑制剤及びそのスポーツ障害抑制機能を有する機能性食品について説明する。
【００５４】
本発明の第４の目的を達成するために請求項１２に記載のスポーツ障害抑制剤は、卵殻膜を有効成分として含有することを特徴とし、請求項１３に記載のスポーツ障害抑制剤は、卵殻膜は微粉砕処理されていることを特徴としている。また、請求項１４に記載の機能性食品は、卵殻膜を有効成分としてスポーツ障害を抑制する機能を有することを特徴とし、請求項１５に記載の機能性食品は、卵殻膜が微粉砕処理されていることを特徴としている。
【００５５】
本発明者らは、卵殻膜は３型コラーゲンを増加させるとの知見を得ている。しかも、この３型コラーゲンを増すことにより、細胞の防御システムが形成されることを考慮して、スポーツ選手の筋、腱及び靭帯等に発現するスポーツ障害について鋭意研究して本発明するに至った。以下、本発明の実施例について説明する。
【実施例４】
【００５６】
（１）対象者
本実験の対象者は東海大学陸上競技部長距離ブロックの学生５０名である。これら対象者の身体的特徴及び治療期間は表２に示すとおりである。また、これらの学生は全員合宿所に居住しているため、毎日のトレーニングメニュー並びに朝夕の食事メニューは同条件下にある。
【表２】
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【００５７】
（２）調査方法
調査方法は記入式で、図２０に示した質問項目について、各自で記入し、これらを集計することとした。項目は部位、病名、詳細部位について、腰部、膝、下腿、足関節に分類し、発生時、治療期間について調査した。
【００５８】
（３）卵殻膜の摂取
使用した卵殻膜は、本出願人（株式会社アルマード）製の上述したアルマードＴＯ．２の卵殻加工食品を朝夕食後それぞれ２粒とし、１〜４ケ月摂取した。１ケ月摂取と４ケ月摂取に分け、その効果について検討した。
【００５９】
実験結果
（１）長距離選手の障害発生
５０名の東海大学長距離選手について在学中のトレーニングに伴う障害発生の状況を調査すると、５０名中３７名がトレーニング中の障害発生を経験し、７４％の対象者に障害が発生していることになり、この率がいかに高いかが明らかである。
【００６０】
（２）長距離選手の障害発生部位の特徴
図２１は、５０名の長距離選手の障害部位についてまとめられている。この図から明らかなように、障害部位は全て下肢に集中し、足首（１６名）、前脛骨筋（１１名）、足底（２名）、足甲（３名）、踵（４名）、アキレス腱（９名）、母指球（１名）で８４名の障害者数に対し、４６名の下腿中心の訴えとなり、５４．７％は下腿に発生していた。
【００６１】
（３）障害の治療期間
長距離選手の障害では軽いもので１週間ぐらいであるが、一般に治療期間が著しく長く、長いものでは発生後、６ケ月に及ぶ場合もあり、このような連続で、最終的には完治しないまま３年を越す例もある。そして、その平均治療期間は、上記表２に示されるように、７．８３±８．２０（週）であり、個人差や障害部位、あるいはその程度により治療期間にバラツキが多いことが分かる。このようなスポーツ障害、特に長距離選手の障害は発生すると著しく長い治療期間を要している特徴があり、脱トレーニング期間が長びき、これまでのトレーニング効果が失われる例がほとんどである。
【００６２】
（４）卵殻膜摂取の影響
（ａ）各部位の障害者数
図２２は、腰部、下肢についての各部分の障害者数の変化について示されている。この図から明らかなように、膝部の障害については大きな変化はなかったが、腰部、大腿部、足部については卵殻膜摂取により明らかな低下が認められた。したがって、卵殻膜摂取によって確かに長距離選手のトレーニングに伴う障害発生を抑える効果があることが分かる。
（ｂ）詳細部位による変化
図２３には障害部位による障害者数の変化が示されている。この図から明らかなように、足底、母指球、ヒラメ筋、腓骨筋では卵殻膜摂取によるスポーツ障害抑制効果が認められなかったが、その他の部位では全て障害者数が減少していて、スポーツ障害抑制効果が認められた。したがって、常時負荷の加わる腓骨筋、母指球、ヒラメ筋、足底については障害抑制効果は弱いが、これらの結果は立位、歩行という利用の頻度が高く、その意味で障害を回復しにくい部位と考えられる。しかし、その他の部位では明らかに障害者数が減少し、卵殻膜摂取の効果が認められた。
【００６３】
上述のように、卵殻膜を摂取することにより、確実に長距離選手の障害発生を予防する効果があることが分かる。したがって、この卵殻膜を有効成分とする薬剤を投与することによりスポーツ障害を未然に防止できるとともに、この卵殻膜を食品として、例えば所定の食品に添加物として添加して摂取したとき、あるいは食品補助剤として摂取したときは、スポーツ障害を未然に防止することができる。
【００６４】
上記請求項８〜請求項１５に係る発明の説明においては、スポーツ選手を対象に説明したが、一般人であっても同様の効果を得ることが可能である。したがって、本発明でスポーツ選手というときは一般人も含み、また、スポーツ障害というときは運動障害を含んでいる。
【図面の簡単な説明】
【００６５】
【図１】ＳＨＲラットの体重変化を示すグラフである。
【図２】ＳＨＲラットの心拍数へ与える影響を示すグラフである。
【図３】ＳＨＲラットの最高血圧へ与える影響を示すグラフである。
【図４】ＳＨＲラットの最低血圧へ与える影響を示すグラフである。
【図５】ＳＨＲラットの１週間後の最低血圧の変化を示すグラフである。
【図６】細胞の形態及び増殖の状態を示す図である。
【図７】細胞のトリプシン処理１０分後の細胞の変化を示す図である。
【図８】細胞のトリプシン処理２５分後の細胞の変化を示す図である。
【図９】細胞のトリプシン処理１５分後の細胞死の状態を示す図である。
【図１０】細胞のトリプシン処理３０分後の細胞死の状態を示す図である。
【図１１】生細胞、死細胞及び初期アポトーシス細胞の分析結果を示す図である。
【図１２】生細胞、死細胞及び初期アポトーシス細胞の百分率を示すグラフである。
【図１３】細胞内の小器官含有量の比較を示すグラフである。
【図１４】典型的な逸脱酵素（クレアチンキナーゼ（ＣＰＫ））の変化を示したグラフである。
【図１５】４０ｋｍ走後のＣＰＫの変化を示すグラフである。
【図１６】赤血球（ＲＢＣ）、ヘモグロビン（Ｈｇｂ）及びヘマトクリット値（Ｈｃｋ）の変化を示すグラフである。
【図１７】トランスアミラーゼ（ＧＯＴ，ＧＰＴ）及び乳酸脱水素（ＬＤＨ）の変化を示すグラフである。
【図１８】総コレステロール（Ｔ−ｃｈｏ）、トリグリセリド（ＴＧ）及び高比重リピ蛋白（ＨＤＬ）の変化を示すグラフである。
【図１９】白血球数（ＷＢＣ）及びクレアチンキナーゼ（ＣＫ）の変化を示すグラフである。
【図２０】調査方法で使用した調査票である。
【図２１】長距離選手の障害部位を示すグラフである。
【図２２】卵殻膜摂取前及び摂取後の障害発生部位を示すグラフである。
【図２３】卵殻膜摂取前及び摂取後の障害発生部位を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【手続補正書】
【提出日】平成17年2月21日(2005.2.21)
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
上述のように、卵殻膜には各種の薬効が有り、また、各種の有用な機能を有し、しかも、自然に由来する安全な物質であることに着目し、本発明者らは、さらに研究を重ねた結果、卵殻膜には血管に柔軟性を与えて血圧を低下させる効果があるとの知見を得ることができた。そこで本発明の第１の目的は、卵殻膜を用いた血圧降下剤、特に拡張期血圧（最低血圧）を効果的に低下させることのできる降圧剤を提供することにある。
また、本発明者らは、卵殻膜には紫外線等の化学的刺激（ストレス）から細胞を保護する機能を有する知見を得ることができている。そこで本発明の第２の目的は、卵殻膜を用いた細胞保護剤を提供することにある。同時に、この細胞保護機能を有する機能性食品を提供することにある。
さらに、本発明者らは、卵殻膜には長距離選手等の持久性トレーニングを行う者のトレーニングによる細胞障害を抑制する知見を得ることができている。すなわち、スポーツ選手は、長期にわたって厳しいトレーニングが要求され、トレーニングに伴う障害発生の割合は極めて高いという現実がある。この障害発生を防止するためにトレーニング方法、栄養管理、心理的カウンセリング及びスポーツ医学などの面から研究が行われてきたものの、トレーニングそのものを回避する方法はない。このために今まで多くの有能な選手が障害発生のためにその能力を発揮できないまま、競技生活を停止する例が数多く存在していた。そこで本発明の第３の目的は、トレーニングを行う者が障害発生を未然に防止できる細胞障害抑制剤を提供することにある。同時に、この細胞障害抑制機能を有する機能性食品を提供することにある。
さらにまた、本発明者らは、卵殻膜には長距離選手等の持久性トレーニングを行う者の足関節痛等のスポーツ障害発生を抑制できる知見を得ることができている。すなわち、本発明者らは、卵殻膜は３型コラーゲンを増加させることの知見を得ており、しかもこの３型コラーゲンを増すことにより、細胞の防御システムが形成されることから、スポーツ選手の筋、腱及び靭帯等に発現するスポーツ障害を未然に防止できる知見を得ている。そこで本発明の第４の目的は、卵殻膜を用いたスポーツ障害抑制剤を提供することにある。同時に、このスポーツ障害抑制機能を有する機能性食品を提供することにある。