(57)【要約】      （修正有）【課題】アナンダミド輸送阻害剤である化合物及びその薬理学的使用。【解決手段】阻害剤はアナンダミドの類似体であり、構造式（Ｉ）で表されるテール、中央及びヘッドファーマコフォア部分を示す。構造式（Ｉ）；Ｘ−Ｙ−Ｚテール部分Ｘは、脂肪酸鎖残部、又は脂肪族炭化水素基、又はアルキル鎖を有するビフェニル基、中央部分Ｙは、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−、−ＮＨ−、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)−Ｏ−等を、ヘッド部分Ｚは水素、アリール、置換アリールアルキル、アルキルアリール等を表す。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記構造式で表される化合物及びその生理学的に許容される塩。
Ｘ−Ｙ−Ｚ
（式中、Ｘは、脂肪酸鎖残部、又は脂肪族炭化水素基、又はアルキル鎖を有するビフェニル基であり；Ｙは、-ＮＨ-Ｃ(Ｏ)-、-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ(Ｏ)-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ(Ｏ)-Ｏ-、-Ｏ-Ｃ(Ｏ)-ＮＨ、-Ｃ(Ｏ)-Ｃ(Ｏ)-ＮＨ、-ＮＨ-Ｃ(Ｏ)-Ｃ(Ｏ)-、-Ｏ-Ｃ(Ｏ)-Ｏ-、-Ｃ(Ｏ)-ＮＨ-、-Ｏ-Ｃ(Ｏ)-、-Ｏ-、-Ｓ-及び-Ｈでなる群から選ばれものであり（ここで、Ｘ及びＺ部分は、Ｙ部分結合原子のいずれかにおいてＹモイエティーに結合できる）；及びＺは、水素、アリール、置換アリール、アルキル、置換アルキル、アルキルアリール、ハロゲン置換アルキルアリール、環状グリセロール、置換環状グリセロール、ＣＯＣＦ3、Ｃ(Ｏ)-アルコール、-(ＣＨ2)ｍ-(Ｃ(ＣＨ3)2)ｐ-(ＣＨ2)ｎ-Ｔ2-Ｔ3、-(ＣＨ2)ｍ-(ＣＨ(ＣＨ3))ｑ-(ＣＨ2)ｎ-Ｔ2-Ｔ3（ここで、ｍ及びｎは、互いに独立して、０−６から選ばれる数であり、ｐ及びｑは、互いに独立して、０又は１から選ばれる数であり、Ｔ2は任意に存在し、存在する場合には、アリール、環式環、二環式環、三環式環、複素環式環、ヘテロ二環式環、ヘテロ三環式環、ヘテロ芳香環、１-又は２-グリセロール、１-又は２-環状グリセロール、アルキル、アルケニル、アルキニルであり、Ｔ3は、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ハロゲン、Ｃ(ハロゲン)3、ＣＨ(ハロゲン)2、Ｏ-アルキル、Ｎ3、ＣＮ、ＮＣＳ、ＮＨ2、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ又は置換基である）から選ばれるものであり、Ｚは、Ｘ及びＹが、ＡＡ-Ｃ(Ｏ)-Ｎ(Ｈ)-である場合、４-ヒドロキシフェニルではない。）
【請求項２】
Ｘが、炭素原子約４−約３０個を含有し、１以上の非共役シス二重結合及び水素、ハロゲン、アリール及び置換アリール、ビフェニル又は炭素原子約１−約１０個の末端直鎖又は分枝アルキル基を有するビフェニルから選ばれる末端ラジカルを有する疎水性脂肪族炭化水素基でなる群からえらばれるものであり；Ｙが、水素、-ＮＨ-Ｃ(Ｏ)-、-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ(Ｏ)-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ(Ｏ)Ｏ-、-Ｃ(Ｏ)-ＮＨ-、-Ｏ-Ｃ(Ｏ)-、-Ｏ-及び-Ｓ-でなる群から選ばれるものであり；及びＺが、水素、アリール、置換アリール、アルキルアリール、ハロゲン置換アルキルアリール、環状グリセロール及び置換環状グリセロールでなる群から選ばれるものである、請求項1記載の化合物。
【請求項３】
Ｘが、炭素原子約４−約３０個を含有し、１以上の非共役シス二重結合及びヒドロキシ、ハロゲン、-ＮＯ2、-ＮＨ2、-ＣＨ3、-ＯＣＨ3及び-ＳＣＨ3でなる群から選ばれるメンバーにて置換されたアリール末端ラジカルを含有する脂肪族炭化水素である、請求項１記載の化合物。
【請求項４】
置換環状グリセロール上のラジカルが、炭素原子約１−約５個を有するアルキル基、アリール及び置換アリールでなる群から選ばれるものである、請求項１記載の化合物。
【請求項５】
Ｙがカルボニルアミンラジカルである、請求項１記載の化合物。
【請求項６】
Ｘが、末端アルキル基を有するビフェニルである、請求項１記載の化合物。
【請求項７】
Ｘが、非共役二重結合２個以上を有する脂肪族炭化水素である、請求項１記載の化合物。
【請求項８】
Ｘが、非共役二重結合少なくとも４個を有する脂肪族炭化水素である、請求項１記載の化合物。
【請求項９】
Ｘが末端水素ラジカルを有するものであり、Ｙが-Ｃ(Ｏ)-ＮＨ-である場合、Ｚはヒドロキシ置換アリールではない、請求項1記載の化合物。
【請求項１０】
ＹがＯ-Ｃ(Ｏ)-ＮＨであり、Ｘがアラキドン酸のテール残部である場合、Ｚは、エチル、イソプロピル又はプロピルではなく；ＹがＮＨ-Ｃ(Ｏ)-ＮＨであり、Ｘがアラキドン酸のテール残部である場合、Ｚは、メチル、イソプロピル、プロピル、イソブチル、ＣＨ2ＣＨ2Ｆ、ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ又はＣＨ2ＣＨ2ＯＣＨ3ではなく；ＹがＮＨ-Ｃ(Ｏ)-Ｏであり、Ｘがアラキドン酸のテール残部である場合、Ｚは、エチル、イソプロピル又はＣＨ2ＣＨ2Ｆではなく；及びＹがＮＨ-Ｃ(Ｓ)-ＮＨであり、Ｘがアラキドン酸のテール残部である場合、Ｚは、４-メチル-２-メトキシ-フェノール又は４-メチル-２-クロロ-フェノールではない、請求項１記載の化合物。
【請求項１１】
Ｚが、複素環式環、置換複素環式環、ヘテロ芳香族環又は置換ヘテロ芳香族環から選ばれるものである、請求項１記載の化合物。
【請求項１２】
構造
ＡＡ-Ｃ(Ｏ)-Ｎ(Ｈ)-Ｚ
（ここで、Ｚは、複素環、置換複素環、ヘテロ芳香族環又は置換ヘテロ芳香族環から選ばれるものである）を有するものである、請求項１記載の化合物。
【請求項１３】
化合物１７−２５のいずれかの構造を有するものである、請求項１記載の化合物。
【請求項１４】
構造
【化１】
2006070021.tif 000009
を含有する、請求項１記載の化合物。
【請求項１５】
構造
【化２】
2006070021.tif 000010
を含有する、請求項１記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
政府支援
本発明は、米国国立薬物濫用研究所から授与された認可番号ＤＡ3801の下に政府の支援によりなされたものである。米国政府は、本発明において一定の権利を有する。
【０００２】
関連出願
本願は、1998年６月９日付け出願の米国仮出願第60/088,568号の利益を主張する国際特許出願PCT/US99/12900の国内段階である2001年１月２９日付出願の米国特許出願第08/701,989号の一部継続出願である。
【背景技術】
【０００３】
マリファナ由来のカンナビノイドであるΔ９-テトラヒドロカンナビノール（Δ９THC）は、脳のＣＢ１受容体及び脾臓のＣＢ２受容体に結合することが知られている。これらの受容体を刺激する化合物は、無痛覚及び鎮静を誘導し、多幸感及び夢幻状態を含む気分の高揚を生じ、嘔気や食欲を制御し、及び眼内圧を低下させることが示されている。また、カンナビノイドは、免疫系を抑制することが示されている。このように、受容体を直接又は間接的に刺激する化合物は、緑内障の治療、臓器移植患者における組織拒絶反応の予防、化学療法を受けている患者の嘔気の制御、痛みの制御、AIDI消耗症候群患者における食欲の増進及び痛みの制御において潜在的に有用である。
【０００４】
受容体での作用のほかに、カンナビノイドは細胞膜にも影響し、それにより、嗜眠状態、モノアミンオキシダーゼ機能障害及び非受容体介在性脳機能障害など望ましくない副作用を生じる。また、カンナビノイドの常習性及び向精神性は、その治療価値を制限する。
【０００５】
アラキドニルエタノールアミド（アナンダミド）は、カンナビノイド受容体に結合し、これらを活性化する内因性脂質であり、Δ９THCの薬理学的活性によく似ている。一般に、アナンダミドの有効性は、Δ９THCよりもわずかに低いことがわかっている。作用の開始が迅速であるにもかかわらず、アナンダミドの作用の大きさと持続時間は比較的短く、これは細胞内へのキャリヤー介在性輸送後の膜結合アミドヒドロラーゼ、アナンダミドアミダーゼによる細胞内加水分解からなる急速な不活性化プロセスによるものと考えられる。従って、アナンダミドアミダーゼの阻害剤は、アナンダミドの生体内（in vivo）増大により受容体を直接刺激する効果を有する。この点について、Makriyannisらの米国特許第5,688,825号及び第5,874,459号が注目され、それらの開示は本明細中で参考として援用される。
【０００６】
脱分極ニューロンにより放出されるアナンダミドは、迅速に細胞摂取された後、酵素分解されると考えられている。実際に、一次培養中のラット脳のニューロン及び星状細胞は、キャリヤー介在性輸送の４つの重要な基準、すなわち、温度依存性、高い親和性、基質選択性、及び飽和に合致する機序により放射能標識アナンダミドを貪欲に摂取する。ポリ不飽和脂肪酸及びプロスタグランジンＥ２（PGE2）を含む他の脂質がキャリヤー介在性輸送により細胞に侵入するという点で、アナンダミドが同様の機序を用いていることが考えられる。この蓄積は膜通過キャリヤー又はトランスポーターの活動によるものであり、このため、アナンダミドの生物学的作用の終了に関与するとみられる。従って、脱分極時にニューロンから放出されるアナンダミドは迅速に細胞内へ輸送されて戻り、次いで、アミダーゼにより加水分解され、その生物学的作用を終了すると考えられる。従って、アナンダミドトランスポーターは、有用な薬物の開発のための潜在的な治療目標である。
【０００７】
アナンダミド輸送の機序を理解し、それを選択的に阻害する薬剤を開発することに大きな関心がある。アナンダミド輸送阻害剤は、この生物学的に活性な脂質の可能な生理学的機能を明らかにするために、実験ツールとして使用される。これらの機能の多くは、エンドカンナビノイド系が脳及び脊髄においてのみならず、末梢組織においても内在性であることを示す多数の証拠が増えているにもかかわらず、未だ明らかにされていない。さらに、アナンダミド輸送阻害剤は、疼痛、精神運動障害、及び多発性硬化症を含む種々の疾患状態に対する合理的な治療法を提供し、この場合、天然アナンダミド濃度の上昇が、作動薬によるＣＢ１受容体の直接的活性化よりも、さらに好ましい応答及びより少ない副作用を生ずる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
新たに、アナンダミドのいくつかの類似体が、細胞膜上のアナンダミド輸送の有力な阻害剤であるとの知見を得た。本発明の類似体は、カンナビノイド受容体を活性化すること又はアナンダミドの加水分解をそれ自体で阻害することはないが、その代わりとして、アナンダミドの再摂取を妨げ、これにより、未減成アナンダミドのレベルを持続させる。以前、カンナビノイド系薬剤は、カンナビノイド受容体及びアミダーゼ酵素を標的としていた。本発明のアナンダミド輸送阻害剤は、アナンダミドトランスポーターの活性を標的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
阻害剤はアナンダミドの類似体であり、構造式（Ｉ）で表わされるテール、中央及びヘッドファーマコフォア部分を示す。
【００１０】
構造式（Ｉ）
Ｘ−Ｙ−Ｚ
テール部分Ｘは、脂肪酸鎖残部、又は後述の脂肪族炭化水素基、又はアキル鎖を有するビフェニル基である。
【００１１】
中央部分Ｙは、-ＮＨ-Ｃ(Ｏ)-、-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ(Ｏ)-ＮＨ-、-ＮＨ-Ｃ(Ｏ)-Ｏ-、-Ｏ-Ｃ(Ｏ)-ＮＨ-、-Ｃ(Ｏ)-Ｃ(Ｏ)-ＮＨ、-ＮＨ-Ｃ(Ｏ)-Ｃ(Ｏ)-、-Ｏ-Ｃ(Ｏ)-Ｏ-、-Ｃ(Ｏ)-ＮＨ、-Ｏ-Ｃ(Ｏ)-、-Ｏ-、-Ｓ-及び-Ｈからなる群より選択されるメンバーである。Ｘ及びＺ部分は、Ｙ部分結合原子のいずれかにおいてＹに結合されることが注目されなければならない。このように、例えば、Ｙ部分-Ｃ(Ｏ)-ＮＨ-は、結果として、類似体Ｘ-Ｃ(Ｏ)-ＮＨ-Ｚ及びＺ-Ｃ(Ｏ)-ＮＨ-Ｘを生ずる。
【００１２】
ヘッド部分Ｚは、水素、アリール、置換アリール、アルキル、アルキルアリール、ハロゲン置換アルキルアリール、環状グリセロール及び置換環状グリセロール、ＣＯＣＦ3、Ｃ(Ｏ)-アルコール、-(ＣＨ2)m-(Ｃ(ＣＨ3)2)p-(ＣＨ2)n-Ｔ2-Ｔ3、-(ＣＨ2)m-(ＣＨ(ＣＨ3)q-(ＣＨ2)n-Ｔ2-Ｔ3（ここで、ｍ及びｎは、互いに独立して、０−６から選ばれる整数であり；ｐ及びｑは、互いに独立して、０又は１であり；Ｔ2は任意に存在し、アリール、環式環、二環式環、三環式環、複素環式環、ヘテロ二環式環、ヘテロ三環式環、ヘテロ芳香環、１-又は２-グリセロール、１-又は２-環状グリセロール、アルキル、アルケニル、アルキニルであり；Ｔ3は、Ｈ、ＯＨ、ＳＨ、ハロゲン、Ｃ(ハロゲン)3、ＣＨ(ハロゲン)2、Ｏ-アルキル、Ｎ3、ＣＮ、ＮＣＳ、ＮＨ2、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ又は後述の置換基である）からなる群より選択される。
【００１３】
発明の変形例では、次の但し書きが適用される。
【００１４】
Ｙが-Ｃ(Ｏ)-Ｎ(Ｈ)-であり、Ｘがアラキドン酸のテール残部である場合、Ｚは、４-ヒドロキシフェニルを含まない。
【００１５】
Ｙが-Ｏ-Ｃ(Ｏ)-ＮＨ-であり、Ｘがアラキドン酸のテール残部である場合、Ｚは、エチル、イソプロピル又はプロピルを含まない。
【００１６】
Ｙが-ＮＨ-Ｃ(Ｏ)-ＮＨ-であり、Ｘがアラキドン酸のテール残部である場合、Ｚは、メチル、イソプロピル、プロピル、イソブチル、ＣＨ2ＣＨ2Ｆ、ＣＨ2ＣＨ2ＯＨ又はＣＨ2ＣＨ2ＯＣＨ3を含まない。
【００１７】
Ｙが-ＮＨ-Ｃ(Ｏ)-Ｏ-であり、Ｘがアラキドン酸のテール残部である場合、Ｚは、エチル、イソプロピル又はＣＨ2ＣＨ2Ｆを含まない。
【００１８】
Ｙが-ＮＨ-Ｃ(Ｓ)-ＮＨ-であり、Ｘがアラキドン酸のテール残部である場合、Ｚは、４-メチル-２-メトキシ-フェノール及び４-メチル-２-クロロ-フェノールを含まない。
【００１９】
ここに記載の本発明の類似体及びその生理学的に許容される塩のいくつかは、痛み、抹消の痛み、緑内障、癲癇、ガン化学療法に伴うものの如き嘔気、AIDS消耗症候群、ガン、神経障害、神経変性疾患（多発性硬化症、パーキンソン病、ハンチントン病、アルツハイマー病を含む）を治療するため；食欲を増進するため；受胎能を低減するため；トゥレット症候群の如き運動機能に関連する疾患を予防又は低減するため；神経防護作用を提供するため；末梢血管拡張を生じさせるため；記憶を抑制するために有用な生理学作用を提供するように治療上有効な量で投与される際に高い能力を有する。このように、本発明の他の態様は、生理学的作用を提供するように、ヒト又は動物への、本発明の化合物又はその生理学的に許容される塩の治療上有効な量での投与にある。
【００２０】
本発明の新規な阻害剤のいくつかは、インビボテストする際、ラット皮質ニューロン及び星状細胞におけるアナンダミドの蓄積を阻害し、インビボ及びインビトロの両方でアナンダミド投与の各種効果を強化する。血管抑制反応は、輸送阻害剤によって、大幅に増強され、延長される。従って、これらの阻害剤は、心血管疾患及び血圧障害の治療に有効な薬剤であると考えられる。
【００２１】
有益なことには、本発明の化合物は、典型的には、カンナビノイドに伴う望ましくない膜関連の副作用を有するとは考えられないであろう。加えて、ここに開示する化合物は、免疫抑制性であり、従って、臓器移植を受けたヒトにおける臓器の拒絶反応を防止するために使用される。化合物は、神経運動障害及び末梢性高血圧を治療するためにも使用される。上記のすべての状態において、アナンダミドトランスポーターの阻害及びその結果としてのアナンダミドの加水分解の減少は、作動薬によるＣＢ１及びＣＢ２受容体の直接の活性化よりも、より良好な応答及びより少ない副作用をもたらす。
【００２２】
ここに開示するアナンダミド輸送の新規な阻害剤は、また、研究に関する用途を有する。例えば、ヒト又は動物に関するアナンダミドの作用を研究するため、インビボでアナンダミドのレベルを維持するために使用される。ここに開示するアナンダミド輸送阻害剤は、ドラッグデザインにおける補助として、例えば、アナンダミド輸送を阻害し及びこのような阻害剤の構造及び活性に関する要求を決定する能力について他の化合物をテストするためのアッセイにおけるコントロールとしても使用される。これらの結果は、ラットの脳星状細胞による放射能標識[3Ｈ]アナンダミド摂取の選択性についての初期実験のデータと一緒になって、アナンダミドとその推定上のトランスポータータンパク質との相互作用が厳格な構造的要件により決定されることを示唆する。これらの結果は、このプロセスに関する広範囲な分子要件を明確に示し、これにより、薬剤への潜在的な適用をもつより強力かつ選択的な阻害剤のデザインに関する基礎を提供する。
【００２３】
ニューロン及び星状細胞におけるアナンダミド摂取は、本発明の阻害剤により選択的に阻害される、高親和性Ｎａ＋独立性トランスポーターによって仲介されることが判明した。アナンダミドトランスポーターによる基質の認識及び転位を決定する構造的決定因子が確認された。二級アミド基はトランスポーターと有利に相互作用するが、他の基にて置換されない。これは、二級アミド基が水素受容体として機能しうることを示唆する。推定上の内因性カンナビノイドエステルもトランスポーター用の基質として機能する。基質の認識及び転位は、脂肪酸炭化水素鎖又は脂肪族鎖を有するビフェニル基の中央部位に位置する少なくとも１つのシス二重結合の存在を必要とし、これは、疎水性テールが曲がったＵ字状又はヘアピン状の配置を採用できるリガンドが有利であることを示している。放射能標識基質を使用する摂取実験では、細胞膜を横切る最適な転位のためには、２つ以上、好ましくは４つのシス非共役二重結合が好ましい。これは、基質が、折り重なったヘアピン状の配置において輸送されることを示唆する。
【００２４】
本発明は、各種の及びすべての可能な異性体、立体異性体及び鏡像異性体を含む。一般に、本発明の組成物は、ここに開示する各種の好適な成分を包含する、成分でなる又は本質的になるように処方される。本発明の組成物は、さらに、又は選択的に、従来技術による組成物において使用されている各種成分、物質、アジュバント等を含まない、又は実質的に含まないように処方される。
【００２５】
本発明は、現在のところ好適であるが、説明を目的とする本発明の具体例に関する下記の詳細な記載から、より良好に理解されるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
本発明の１具体例は、生化学的及び薬学的に特徴づけられており、新規な薬物の発見のターゲットとして使用される推定上のアナンダミドトランスポーター系の発見を指向するものである。これらは、このトランスポーターの機能を阻害できるすべての化合物を含むであろう。他の具体例は、治療に有効な量の阻害剤及び／又はその生理学的に許容される塩を投与することによる、ヒト又は動物におけるアナンダミド輸送を阻害する方法を指向するものではあるが、本発明は、さらに、有効な量の阻害剤を含有する医薬組成物を包含する。この阻害は、ヒト又は動物におけるアナンダミドレベルを増大させる結果を生じ、これにより、ヒト又は動物におけるカンナビノイド受容体、例えば、脳におけるＣＢ１受容体及び脾臓におけるＣＢ２受容体の長期間の刺激を引き起こす。このように、本発明は、阻害剤自体だけではなく、ヒト又は動物におけるアナンダミドトランスポーター活性を減少させる方法をも含む。本発明は、未だ発見されていないトランスポーター（アナンダミド及び／又はカンナビノイドが作動薬として作用する）の活性を減少させるためにも使用されることが理解されるべきである。
【００２７】
いくつかの具体例では、本発明のアナンダミドトランスポーター阻害剤は、構造式(Ｉ)（ここで、テール部分Ｘは、脂肪族炭化水素鎖の中央部分に１以上の非共役シス二重結合を有する脂肪酸疎水性炭素鎖又は炭素原子約１−約１０個のアルキル又は分枝アルキル遠位部分を有するビフェニル基である）の３種類のファーマコフォアを有するアナンダミドのアミド、逆アミド又はカルボニルアミン、尿素、カルバメート又はエステル類似体を含む。ビフェニル基は、ＯＨ、ＣＨ3、ハロゲン、ＳＣＨ3、ＮＨ2、ＮＨＣＯＲ、ＳＯ2ＮＨＲ、ＮＯ2、-ＣＯＣＦ3又は後述の置換基含む１−６個の置換基によって置換される。脂肪酸鎖は、炭素原子４−３０個を含有できるが、鎖の長さは、好ましくは炭素原子約１０−２８個であり、さらに好ましくは、炭素原子約１７−約２２個を含有する。脂肪族炭化水素の鎖は、アリール又は置換アリール基で終了しうる。対照してみると、完全に飽和した鎖又はトランス若しくは末端二重結合を持つ類似体は、輸送に関して、[3Ｈ]アナンダミドとは効果的に競合せず、このように、阻害剤としては無効である。中央のファーマコフォアＹは、先に示した群から選択される。しかし、遊離カルボン酸基、カルボキシエチル基及びカルボキシメチル基、又は１級アルコールを含有する化合物は不活性である。ヘッド部分Ｚは、先に示した群から選択される。
【００２８】
Ｙ及びＺファーマコフォアの調査では、ヒドロキシメチルエステル又はグリセロールエステル部分と共に、１級、２級及び３級アミド基を含有する化合物は、[3Ｈ]アナンダミドと競合できるが、広い範囲の有効性を発揮することが示される。ヘッド部分Ｚの構造の変更により、アナンダミドトランスポーターに関する多様な選択性を持つ類似体が導かれる。このように、末端ヒドロキシル基の水素による置換は、有効性における実質的な低下を生じ、一方、全ヒドロキシルアルキル部分の水素による交換は、アナンダミドとして有力である化合物を生ずる。アミド窒素に対してα位のメチル基の導入も、活性な化合物を生ずる。いくつかのキラル分子は、[3Ｈ]アナンダミド輸送のかなりのエナンチオ選択的阻害を示す。(Ｓ)鏡像異性体は、(Ｒ)異性体よりも約４倍強力である。
【００２９】
ヘッド部分にヒドロキシフェニル基を有する類似体について、１つの特筆すべき構造−活性の相関関係が観察された。ヒドロキシフェニル基の使用は、比較的強力な摂取阻害剤を導き、４-ヒドロキシフェニル類似体は、特に最良である。
【００３０】
他に特に定義しない限り、「アシル」は、一般式-Ｃ(Ｏ)アルキルを表わす。
【００３１】
他に特に定義しない限り、「アシルオキシ」は、一般式-Ｏ-アシルを表わす。
【００３２】
他に特に定義しない限り、「アルコール」は、一般式アルキル-ＯＨを表わし、１級、２級及び３級を含む。
【００３３】
他に特に定義しない限り、「アルキル」又は「低級アルキル」は、炭素原子１−約１６個、有利には炭素原子約１−６個を有する直鎖状、分枝状又は環状アルキル基を表わし、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ヘキシル、オクチル、イソプロピル、イソブチル、３級ブチル、シクロプロピル、シクロヘキシル、シクロオクチル、ビニル及びアリルを含む。アルキル基は、置換されていてもよく、未置換でもよい。他に特に限定しない限り、アルキル基は未置換であるか、いずれか可能な位置において、置換基によりモノ置換又は可能であれば多置換されていてもよい。
【００３４】
他に特に定義しない限り、脂肪族炭化水素は、他に述べない限り、１以上のシス−アルケニル結合によって結合された１以上のポリアルキレン基を含み、これにより、メチレン炭化水素の総数はここに示す範囲内である。テール部分Ｘを包含する好適な脂肪族炭化水素の構造は、式（II）
Ｃ(Ｒ3)3-(Ｃ(Ｒ2Ｒ1))a-(シス-ＣＨ=ＣＨＣ(Ｒ1)2)b-(Ｃ(Ｒ0Ｒ2))c-
（式中、Ｒ0−Ｒ3は、それぞれ独立して、水素及び低級アルキル基でなる群から選択されるが、鎖の末端Ｃ(Ｒ3)3は、未置換であるか、又はヒドロキシル、ハロゲン、-ＮＯ2、-ＮＨ2、-ＳＣＨ3、-ＣＨ3、-ＣＯＣＦ3及び-ＯＣＨ3又は後に定義する置換基でなる群から選択されるメンバーによって置換されたフェニル及びビフェニル基を含み、及びａ及びｃは、それぞれ独立して、０−１０の整数から選択され、ｂは、１−６の整数である）を有する。特殊な例としては、ＣＨ3-(ＣＨ2)4-(シス-ＣＨ=ＣＨＣＨ2-)4-(ＣＨ2)2-、ＣＨ3-(ＣＨ2)4-(シス-ＣＨ=ＣＨＣＨ2)3-(ＣＨ2)5-ＣＨ3-(ＣＨ2)6-(シス-ＣＨ=ＣＨＣＨ2)2-(ＣＨ2)6-、ＣＨ3-(ＣＨ2)6-(シス-ＣＨ=ＣＨＣＨ2)2-(ＣＨ2)5-ＣＨ3-(ＣＨ2)7-シスＣＨ=ＣＨ-(ＣＨ2)9-、ＣＨ3-(ＣＨ2)7-シス-ＣＨ=ＣＨ-(ＣＨ2)7-及びＣＨ3-(ＣＨ2)4-(ＣＨ=ＣＨＣＨ2)4-ＣＨ2-Ｃ(ＣＨ3)2-がある。
【００３５】
脂肪族炭化水素も、炭素原子８−２２個を含有し、二重結合０−６個を有し、低級アルキル、ジ-低級アルキル、シクロアルキル又はヘテロシクロアルキル基により、いずれか可能な位置において任意に置換されている長鎖炭化水素を含む（複数の二重結合は、共役又は非共役のいずれでもよい）。脂肪族炭化水素の主鎖は、メチレン、(ＣＨ3)2Ｃ、Ｏ、ＮＨ、Ｎ-アルキル、環状アルキル基、複素環基、又はアリール基によって中断されているか、又はこれらを含むものである。
【００３６】
他に特に定義しない限り、アルコキシは、一般式  -Ｏ-アルキルで表される。
【００３７】
他に特に定義しない限り、アルキルメルカプトは、一般式  -Ｓ-アルキルで表される。
【００３８】
他に特に定義しない限り、アルキルアミノは、一般式  -(ＮＨ)-アルキルで表される。
【００３９】
他に特に定義しない限り、ジアルキルアミノは、一般式  -Ｎ-(アルキル)２で表される。
【００４０】
他に特に限定しない限り、ジアルキルアミノは、ピペリジン及びモルホリンの如き環状アミン化合物を含む。
【００４１】
他に特に定義しない限り、芳香環は、約５−約７個の環メンバーを有し、環原子として炭素のみを含む不飽和環構造体である。芳香環構造体は、未置換であるか、わずかに置換されているか、又は可能であれば、いずれか可能な位置において、置換基により多置換されていてもよい。
【００４２】
他に特に定義しない限り、アリールは、環原子として炭素のみを含む芳香環系、例えば、フェニル、ビフェニル、１-ナフチル又は２-ナフチルを示す。アリール基は、未置換であるか、わずかに置換されているか、又は可能であれば、いずれか可能な位置において、置換基により多置換されていてもよい。
【００４３】
他に特に定義しない限り、アロイルは、一般式  -Ｃ(=Ｏ)-アリールで表される。
【００４４】
他に特に定義しない限り、二環式環構造体は、環原子として炭素のみを含む２つの融合又は橋架けした環でなる。二環式環構造体は、飽和又は不飽和である。また、二環式環構造体は、未置換であるか、わずかに置換されているか、又は可能であれば、いずれか可能な位置において、置換基により多置換されていてもよい。個々の環は、同一のタイプであるか、又は同一のタイプでなくてもよい。二環式環構造体の例としては、ジメチル-ビシクロ[３,１,１]ヘプタン、ビシクロ[２,２,１]ヘプタジエン、デカヒドロ-ナフタレン及びビシクロオクタンがある。
【００４５】
他に特に定義しない限り、炭素環式環は、環原子として炭素のみを含む約３−約８員を有する飽和又は不飽和の非芳香環構造体、例えば、シクロヘキサジエン又はシクロヘキサンである。炭素環式環は、未置換であるか、わずかに置換されているか、又は可能であれば、いずれか可能な位置において、置換基により多置換されていてもよい。
【００４６】
他に特に定義しない限り、環状グリセロールは、３個のヒドロキシ基の内の２個が結合されて５−８員環を形成し、第３のヒドロキシ基が、例えば、エステル又はエーテルの形で置換されているメンバーを含む。環状グリセロールの環は、代表的には（ただし、常にではない）飽和である。環状グリセロールは、いずれか可能な位置において、１以上の置換基により置換されていてもよい。環状グリセロールの例としては、
【化３】
2006070021.tif 000002
（ここで、ｎは１−３から選ばれる整数である）がある。
【００４７】
他に特に定義しない限り、ハロゲンは、フッ素、塩素、臭素及びヨウ素から選ばれる原子を示す。
【００４８】
他に特に定義しない限り、ヘテロ芳香環は、環原子として炭素原子及び１個以上のへテロ原子（酸素、窒素及び／又はイオウを含む）を有する不飽和の約５−約８員環構造体、例えば、ピリジン、フラン、キノリン及びそれらの誘導体である。ヘテロ芳香環は、未置換であるか、わずかに置換されているか、又は可能であれば、いずれか可能な位置において、置換基により多置換されていてもよい。
【００４９】
他に特に定義しない限り、ヘテロ二環式環構造体は、環原子として、炭素及び１個以上のへテロ原子（酸素、窒素及び／又はイオウを含む）を含む、融合又は橋架けした２個の環でなる。ヘテロ二環式環構造体は、飽和又は不飽和である。ヘテロ二環式環は、未置換であるか、わずかに置換されているか、又は可能であれば、いずれか可能な位置において、置換基により多置換されていてもよい。個々の環は、同一のタイプであるか、又は同一のタイプでなくてもよい。ヘテロ二環式環構造体の例としては、トロパン、キヌクリジン及びテトラヒドロベンゾフランがある。
【００５０】
他に特に定義しない限り、複素環は、環原子として、炭素原子及び１個以上のへテロ原子（酸素、窒素及び／又はイオウを含む）を有する飽和又は不飽和の約３−約８員環構造体であり、例えば、ピペリジン、モルホリン、ピペラジン、ピロリジン、チオモルホリン、テトラヒドロピリジン及びそれらの誘導体である。複素環は、未置換であるか、わずかに置換されているか、又は可能であれば、いずれか可能な位置において、置換基により多置換されていてもよい。
【００５１】
他に特に定義しない限り、ヘテロ三環式環構造体は、環原子として、炭素原子及び１個以上のへテロ原子（酸素、窒素及び／又はイオウを含む）を含む、融合又は橋架けした３個の環でなる。ヘテロ三環式環構造体は、飽和又は不飽和である。ヘテロ三環式環構造体は、未置換であるか、わずかに置換されているか、又は可能であれば、いずれか可能な位置において、置換基により多置換されていてもよい。個々の環は、同一のタイプであるか、又は同一のタイプでなくてもよい。ヘテロ三環式環構造体の例としては、２,４,１０-トリオキサアダマンタン、テトラデカヒドロフェナントロリンがある。
【００５２】
他に特に定義しない限り、ヘテロ多環式環構造体は、環原子として、炭素原子及び１個以上のへテロ原子（酸素、窒素及び／又はイオウを含む）を含む、融合及び／又は橋架けした３個以上の環でなる。ヘテロ多環式環構造体は、飽和又は不飽和である。ヘテロ多環式環構造体は、未置換であるか、わずかに置換されているか、又は可能であれば、いずれか可能な位置において、置換基により多置換されていてもよい。個々の環は、同一のタイプであるか、又は同一のタイプでなくてもよい。ヘテロ多環式環構造体の例としては、アザアダマンチン、５-ノルボルネン-２,３-ジカルボキシイミドがある。
【００５３】
他に特に定義しない限り、用語「フェナシル」は、一般式  フェニル-アシルを示す。
【００５４】
他に特に定義しない限り、多環式環構造体は、融合及び／又は橋架けした３個以上の環でなり、環原子として炭素を含む。多環式環構造体は、飽和又は不飽和である。多環式環構造体は、未置換であるか、わずかに置換されているか、又は可能であれば、いずれか可能な位置において、置換基により多置換されていてもよい。個々の環は、同一のタイプであるか、又は同一のタイプでなくてもよい。多環式環構造体の例としては、アダマンチン、ビシクロオクタン、ノルボルナン及びビシクロノナンである。
【００５５】
他に特に定義しない限り、スピロ環は、ただ１個の原子が２個の環の唯一の共通メンバーである環システムを示す。スピロ環は、約３−約８個の環メンバーでなる飽和炭素環式環、環原子の約３個以下がＮ、Ｓ又はＯ又はこれらの組合せである約３−約８個の環原子からなる複素環である。
【００５６】
他に特に定義しない限り、三環式環構造体は、融合及び／又は橋架けした３個の環でなり、環原子として炭素を含む。三環式環構造体は、飽和又は不飽和である。三環式環構造体は、未置換であるか、わずかに置換されているか、又は可能であれば、いずれか可能な位置において、置換基により多置換されていてもよい。個々の環は、同一のタイプであるか、又は同一のタイプでなくてもよい。三環式環構造体の例としては、フルオレン及びアントラセンがある。
【００５７】
他に特に限定しない限り、用語「置換された」は、いずれか可能な位置において下記の置換基により置換されることを意味する。本発明において有用な上記の部分用の置換基は、本発明の化合物の生物活性を明確には低減させない置換基である。他に特に限定しない限り、置換基又は本発明の化合物の生物活性を明確には低減させない置換基としては、例えば、Ｈ、ハロゲン、Ｎ3、ＮＣＳ、ＣＮ、ＮＯ2、ＮＸ1Ｘ2、ＯＸ3、Ｃ(Ｘ3)3、ＯＡｃ、Ｏ-アシル、Ｏ-アロイル、ＮＨ-アシル、ＮＨ-アロイル、ＮＨＣＯアルキル、ＣＨＯ、Ｃ(ハロゲン)3、ＣＯＯＸ3、ＣＯＣＦ3、ＳＯ3Ｈ、ＰＯ3Ｈ2、ＳＯ2ＮＸ1Ｘ2、ＣＯＮＸ1Ｘ2、アルキル、アルコール、アルコキシ、アルキルメルカプト、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、スルホンアミド又はチオアルコキシ（ここで、Ｘ1及びＸ2は、それぞれ独立して、Ｈ又はアルキルであるか、又はＸ1及びＸ2は、一緒になって、約４−約７個の環メンバー及び任意にＯ、Ｎ又はＳから選ばれるヘテロ原子を有する複素環の一部を形成するか、又はＸ1及びＸ2は、一緒になって、約５−約６員のイミド環の一部を形成し、及びＸ3は、Ｈ、アルキル、低級アルキルヒドロキシ、又はアルキル-ＮＸ1Ｘ2である）がある。他に特に限定しない限り、置換基はいずれか可能な位置にある。
【００５８】
これらの物質を合成する方法は以下のとおりである。
【実施例】
【００５９】
アラキドニルアルコール：
磁気的に攪拌したLiAlH4のEt2O溶液０.５ml（０.５ミリモル）に、０℃において、Et2O ２ml中に存在するアラキドン酸メチルエステル100mg（0.314ミリモル）を滴下した。反応混合物を１時間攪拌し、ついで、EtOAc １mlを添加することによって反応を停止させた。飽和NH4Cl溶液２mlを添加し、有機相を分離し、MgSO4にて乾燥し、濾過し、蒸発させた。シリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（溶離剤：CH2Cl2／石油エーテルから７０％CH2Cl2まで）、蒸発、その後、生成物のCH2Cl2溶液のMillipore濾過を行い、アラキドニルアルコール99.3mg（0.292ミリモル、収率９３％）を無色の油状物として得た。
【００６０】
TLC（CHCl3）：Ｒｆ0.28
1HNMR（200MHz，CDCl3）：ｄ 5.37(m, 8H), 3.61(t, 2H, J=6Hz), 2.79(m, 6H), 2.08(m, 4H), 1.66-1.17(m, 8H), 0.92(t, 3H, J=7Hz)
アラキドニルアジド：
磁気的に攪拌した、ピリジン１ml中にアラキドニルアルコール５０mg（0.17ミリモル）を含有する溶液に、０℃において、塩化メシル29.2mg（0.255ミリモル）を添加した。５時間攪拌した後、反応混合物を氷水２mlに注ぎ、Et2Oで抽出した（２×４ml）。エーテル相を合わせ、１Ｎ H2SO4、NaHCO3で洗浄し、真空中で蒸発乾固させた。メシレートを精製することなく、対応するアジドに直接変換した。まず、DMF ２mlに溶解し、ついで、室温において、NaN3 ６.５mg（0.85ミリモル）のDMF溶液４mlを添加した。反応混合物を９０℃で２４時間加熱した。反応混合物を室温まで冷却させた後、無機物質を濾去し、濾液を氷冷H2O １mlに注ぎ、Et2Oにて抽出した（２×６ml）。エーテル相を合わせ、乾燥し、濾過し、真空中で蒸発乾固させた。シリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（溶離剤：石油エーテル）、蒸発、その後、生成物のCH2Cl2溶液のMillipore濾過を行い、アラキドニルアジド３９mg（0.12ミリモル、収率７３％）を無色の油状物として得た。
【００６１】
1HNMR（200MHz，CDCl3）：ｄ 5.38(m, 8H), 3.27(t, 2H, J=6Hz), 2.81(m, 6H), 2.11-2.01(m, 4H), 1.62(m, 8H), 1.48-1.25(m, 6H), 0.89(t, 3H, J=7Hz)
アラキドニルアミン：
磁気的に攪拌した、Et2O ３ml中にアラキドニルアジド132mg（0.43ミリモル）を含有する溶液に、室温において、１.０Ｍ LAHのTHF溶液４ml（４.０ミリモル）を滴下した。反応混合物を３時間還流し、ついで、周囲温度に冷却させた。NaF 210mg（５ミリモル）を添加し、反応を含水Et2Oにて停止させた。白色の混合物を濾過し、溶媒を蒸発させて乾固させた。シリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（溶離剤：CH2Cl2／MeOHから５０％MeOHまで）、溶媒の蒸発、その後、生成物のCH2Cl2溶液のMillipore濾過を行い、アラキドニルアミン78.9mg（0.28ミリモル、収率６４％）を無色の油状物として得た。
【００６２】
TLC（EtOAc/CH2Cl2(２０：８０)）：Ｒｆ0.33
1HNMR（200MHz，CDCl3）：ｄ 5.38(m, 8H), 2.82(m, 6H), 2.70(t, 2H, J=6.6Hz), 2.08(m, 4H), 1.40(m, 4H), 1.26(m, 6H), 0.89(t, 3H, J=6.4Hz)
AM 1177、AM 1172及びAM 1191の合成の代表的な方法は以下のとおりである：
THF ５ml中にアラキドニルアミン又はアラキドン酸（１ミリモル）及び１-[３-(ジメチルアミノ)プロピル]-３-エチルカルボジイミド塩酸塩(EDCI)（１.２ミリモル）を含有する懸濁液に、室温において、THF１ml中に対応する酸又はアルコール（Stekar, J.ら, Angew. Chem.; GE; 1995, 107: 195-197）１.１ミリモルを含有する溶液を添加し、続いて、THF１ml中にジメチルアミノピリジン(DMAP)（１.１ミリモル）を含有する溶液を添加した。攪拌をさらに６時間続けた。THFを真空下で除去し、残渣をEt2Oに再度溶解した。得られた溶液を、水、１Ｎ HCl及び食塩水で順次洗浄し、Mg2SO4にて乾燥し、溶媒を真空下で除去し、残渣をシリカゲルでのクロマトグラフィーによって精製し、AM 1177、AM1172及びAM1191を油状物として得た（０.６−０.８ミリモル、収率６０−８０％）。
【００６３】
アラキドニルアミン-３'-(ヒドロキシ)-プロピオネート：
磁気的に攪拌したCH2Cl2 ２ml中にアラキドニルアミン４８mg（0.17ミリモル）を含有する溶液に、室温において、(CH3)3Alの２.０Ｍヘキサン溶液５８μl（0.17ミリモル）を添加した。混合物を２０分間攪拌し、ついで、β-プロピオラクトン12.24mg（0.17ミリモル）を滴下した。反応混合物を６時間還流し、１Ｎ HClにて反応を停止し、塩化メチルにて抽出した。生成物をシリカゲルでのカラムクロマトグラフィー（溶離剤：CH2Cl2／EtOAcから８０％EtOAcまで）にて精製した。溶媒の蒸発、その後、生成物のCH2Cl2溶液のMillipore濾過を行い、アラキドニルアミン-３'-(ヒドロキシ)-プロピオネート５１mg（0.14ミリモル、収率８３％）を無色の油状物として得た。
【００６４】
TLC（EtOAc）：Ｒｆ0.26
1HNMR（200MHz，CDCl3）：ｄ 5.35(m, 8H), 3.85(q, 2H, J=5.4Hz), 3.25(q, 2H, J=5.4Hz), 2.84(m, 6H), 2.66(t, 2H, J=6.8Hz), 2.05(m, 4H), 1.57(m, 2H), 1.35(m, 6H), 0.89(t, 3H, J=6.5Hz)
元素分析：Ｃ，Ｈ，Ｎ
アラキドニルアミン-トリフルオロアセテート：
磁気的に攪拌した、乾燥塩化メチレン２ml中にトルフルオロ酢酸６９mg（０.６ミリモル）を含有する溶液に、０℃において、乾燥DMF 0.046ml（０.６ミリモル）を添加し、ついで、塩化オキサリルの２.０Ｍ塩化メチレン溶液０.３ml（０.６ミリモル）を滴下した。反応混合物を２０分間攪拌して、ついで、塩化メチレン２ml中にアラキドニルアミン172mg（０.６ミリモル）を含有する溶液を添加し、反応混合物を周囲温度において２時間攪拌した。生成物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶離剤：石油エーテル／酢酸エチルから５０％酢酸エチルまで）にて精製した。溶媒の蒸発、その後、生成物のCH2Cl2溶液のMillipore濾過を行い、アラキドニルアミン-トリフルオロアセテート153mg（０.４ミリモル、収率６７％）を無色の油状物として得た。
【００６５】
化合物１−１２の調製：
【化４】
2006070021.tif 000003
【００６６】
化合物１−８及び１２
方法Ａ：
無水THF３ml中にＣＯ(イミダゾール)2（１.５ミリモル）を含有する懸濁液に、０℃において、THF１ml中にアラキドニルアルコール又はアラキドニルアミン（１ミリモル）を含有する溶液を添加した。周囲温度において、攪拌をさらに２時間続けた。ついで、反応混合物を再度０℃に冷却し、各アミン（２ミリモル）を添加し、一夜攪拌した。THFを真空下で除去し、残渣をEt2Oにて希釈した。異成分混合物をCeliteパッドにて濾過し、２Ｎ HCl、飽和NaHCO3及び食塩水にて洗浄し、Na2SO4にて乾燥した。溶媒を真空下で除去し、残渣をシリカゲルにてクロマトグラフィー処理して、純粋な化合物１−８及び１２を油状物として得た（０.７−０.９ミリモル，収率７０−９０％）。
【００６７】
化合物９−１１
方法Ｂ：
無水THF３ml中にアラキドニルアルコール（１ミリモル）及び活性炭（０.１ミリモル）を含有する懸濁液に、０℃において、ジホスゲン（0.75ミリモル）を添加した。０℃において、攪拌をさらに２時間続けた。ついで、THF１ml中に各アミン（２ミリモル）及びEt3N（６ミリモル）を含有する溶液を、前記反応混合物に添加し、攪拌を一夜続けた。Et2Oにて希釈し、異成分混合物をCeliteパッドにて濾過した。濾液を、水及び食塩水にて洗浄し、Na2SO4にて乾燥し、真空下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィー処理して、純粋な化合物９−１１を油状物として得た（0.82−0.90ミリモル，収率８２−９０％）。
【００６８】
化合物１３−１５の調製
【化５】
2006070021.tif 000004
【００６９】
化合物１３−１５：
化合物１３−１５の調製を、化合物１−８の調製法に従って、対応する市販のアルコールを使用して行うことができる。
【００７０】
化合物１６の調製：
【化６】
2006070021.tif 000005
【００７１】
化合物Ｍ１：
無水CH2Cl2 ５ml中に(Ｓ)-１,２-プロパンジオール（５ミリモル）を含有する懸濁液に、室温において、２-メチル-１-ブテン（５.５ミリモル）及びBF3・エーテル（０.５ミリモル）を添加した。攪拌をさらに２４時間続けた。真空下で溶媒を除去し、残渣をシリカゲルでのクロマトグラフィーによって精製し、中間体（４ミリモル，収率８０％）を油状物として得た。ついで、無水THF６ml中に前記中間体及びイミダゾール（６ミリモル）を含有する懸濁液に、０℃において、TBDMSCI ４.８ml（１Ｍ THF溶液）を添加した。溶媒を真空下で除去し、残渣をEt2O中に再度溶解した。異成分混合物をCeliteパッドにて濾過し、１Ｎ HCl、水及び食塩水にて洗浄し、Na2SO4にて乾燥した。真空下で濃縮した。残渣をクロマトグラフィー処理して、純粋な化合物Ｍ１を油状物として得た（0.34ミリモル，収率８５％）。
【００７２】
化合物Ｍ２：
無水CH2Cl2 ３ml中に化合物Ｍ１（３ミリモル）を含有する溶液に、室温において、TBDMSOTf（０.３ミリモル）を添加し、得られた溶液を２４時間攪拌した。ついで、飽和NaHCO3溶液を添加し、溶液をAcOEtにて抽出した。合わせた有機相をNa2SO4にて乾燥し、真空下で濃縮した。粗製生成物をシリカゲルでのクロマトグラフィーによって精製して、純粋な化合物Ｍ２を油状物として得た（１.８ミリモル，収率６０％）。
【００７３】
化合物１６：
化合物１６は、２工程で調製される。第１工程はカップリングであり、カップリングは、化合物１−８の調製法と同様にして、収率８３％で行われる。第２工程は、TBAFによる脱保護化である。THF ２ml中にカップリング生成物（１ミリモル）を含有する溶液に、室温において、TBAF（THF １ml中）１.２mlを添加した。攪拌を、さらに１.５時間続けた。ついで、THFを真空下で除去し、得られた混合物をEt2Oに溶解した。得られた溶液を水及び食塩水にて洗浄し、Na2SO4にて乾燥し、真空下で濃縮した。粗製生成物をシリカゲルでのクロマトグラフィーによって精製して、化合物１６を油状物として得た（０.８ミリモル，収率８０％）。
【００７４】
化合物１７−２５の調製：
化合物１７−２５の代表的な合成法は以下のとおりである。
【００７５】
３頚フラスコ（２５ml）において、磁気的に攪拌した塩化メチレン５ml中にアラキドン酸（１ミリモル）及びDMF（０.１ミリモル）を含有する溶液に、０℃において、塩化オキサリル（２ミリモル）を１滴ずつ添加した。反応混合物を、０℃において、さらに１時間攪拌した。ついで、THF ５ml中に対応するアミン（１０ミリモル）を含有する溶液を添加した。攪拌をさらに１５分間続けた。反応混合物をCH2Cl2 ３０mlにて希釈し、１０％HCl水溶液３０ml、１０％NaOH水溶液３０ml、及び水にて順次洗浄した。有機相を分離し、乾燥し（MgSO4）、真空下にて蒸発させて、黄色がかった油状残渣を得た。シリカゲルでのクロマトグラフィーを行い、最終化合物１７−２５を無色の油状物として得た（０.６−０.９ミリモル，収率６０−９０％）。
【００７６】
トランスポーター
アナンダミド輸送の阻害剤の有効性を適切に評価するため、キャリヤー介在トランスポーターの同定及び特徴を確立することが必要であった。ニューロン及び星状細胞による放射能標識外因性[3Ｈ]アナンダミドの蓄積は、キャリヤー介在輸送のいくつかの基準を満足する。それは、約４分以内で最大値の５０％に達する迅速なプロセスである。さらに、[3Ｈ]アナンダミドの蓄積は温度依存性であり、可飽和性である。動態分析は、ニューロン中の蓄積が、異なる親和性の２つの成分により表されることを示す（低親和性：ミカエリス定数Ｋｍ＝１.２μＭ、最大蓄積速度Ｖmax＝タンパク質１mg当たり90.9 ピコモル／分；高親和性：Ｋｍ＝0.032μＭ、Ｖmax＝タンパク質１mg当たり５.９ピコモル／分）。しかしながら、カンナビノイド受容体拮抗物質SR-141716-A（100nM）によって示されるように、高親和性成分は結合部位を示す。星状細胞では、[3Ｈ]アナンダミドの蓄積は、単一の高親和性成分(Ｋｍ＝0.32μＭ、Ｖmax＝タンパク質１mg当たり171ピコモル／分）によって表される。このような見掛けのＫｍ値は、既知の神経伝達物質摂取系のものと同様であり、従って、高親和性キャリヤー介在輸送を示唆するものである。
【００７７】
さらに、この推定上のアナンダミドトランスポーターを特徴づけるために、培養物中の皮質星状細胞を使用した。選択的プロセスから予想されるように、[3Ｈ]アナンダミド蓄積の温度感受性成分は、非放射性アナンダミドにより阻止されたが、パルミトイルエタノールアミド、アラキドネート、プロスタノイド、又はロイコトリエンによっては阻止されなかった。細胞外ナトリウムイオンのＮ-ジメチルグロコサミン又はコリンによる交換は、蓄積が、他の脂質について観察されているＮａ＋非依存性メカニズムによって仲介されることを示唆する作用を有していなかった。さらに、脂肪酸アミドヒドラーゼ（FAAH）の阻害は、アナンダミドの加水分解が、実験の時間枠内で星状細胞へのアナンダミド輸送のための駆動力を提供するものではないことを示す。最後に、カンナビノイド受容体作動薬 WIN-55212-2（１μM）及び拮抗物質 SR-141716-A（１０μM）は作用を有しておらず、受容体内在化は関与しなかったことを示す。
【００７８】
キャリヤー介在輸送を規定する主な基準は薬学的阻害である。アナンダミド輸送の阻害剤を同定するために、脂肪酸、リン脂質又はブロムクレゾールグリーンの如き他の脂質の細胞摂取を阻止するさまざまな成分にて検査を行った。試験した成分の中で、ブロムクレゾールグリーンのみが無生物の輸送を妨害し、限られた効能及び部分的な有効性ではあるが、ブロムクレゾールグリーンは、ニューロンにおいて４μM及び星状細胞において１２μMのＩＣ50（最大阻害の１／２を生ずるに必要な濃度）で[3Ｈ]アナンダミド蓄積を阻害し、非競合的に作用した。さらに、ブロムクレゾールグリーンは、ラット脳膜への[3Ｈ]WIN-55212-2の結合について、脳ミクロソームにおけるFAAH活性について、及び星状細胞における[3Ｈ]アラキドネート又は[3Ｈ]エタノールアミンの摂取についての有意な作用を有していなかった。
【００７９】
PGE2輸送をブロックするブロムクレゾールグリーンは、アナンダミドの蓄積がPGE2キャリヤーによって生ずるかどうかという問題を提起した。これは特別のケースではないことが、ニューロン又は星状細胞における[3Ｈ]PGE2の蓄積の欠落によって及びPGE2は[3Ｈ]アナンダミドの蓄積を妨害する能力がないことによって示された。脳組織におけるPGE2トランスポーターmRNAの発現が検出されないことを示す以前の結果は、さらに、この結論を支持している。
【００８０】
ハイスループット法を用いた[3Ｈ]アナンダミド競合アッセイ
ヒトCCF-STTG1星状細胞（American Type Culture Collection）を、１０％FBS及び１mMグルタミンを含有するPRMI 1640培地中で培養した。細胞を２×１０５／ウェル＝６×１０５／cm2の密度で播種し、融合時（播種後５日）に使用した。標準競合アッセイのために、９６ウェルビュアプレート中で培養した融合細胞をリンスし、138mM NaCl、５mM KCl、1.26mM MgSO4、２.５mM CaCl2-2H2O、１mM ホスフェート、４mM NaHCO3、１０mMグルコース、１０mM Hepesを含有するように補足したHanks平衡化塩溶液（HBSS）において、０.１％DMSO又は０.１％DMSO＋テスト化合物（最終濃度：０.１-100μg）と共に、３７℃で１０分間プレインキュベートした。手短に言えば、細胞のプレートを、プレートウォッシャー Multiwash Plus（Molecular Device)を使用して、０.１％DMSOを含有するHBSS 100μlにて３回洗浄した。洗浄したプレートを、空気−二酸化炭素（９５：５）混合物のプレート保温器内に置いた。
【００８１】
シラン化した９６ウェルプレートを、細胞を処理するためのマザープレートとして調製した。各テスト化合物について、予測されるＩＣ50 500nM前後の濃度範囲を網羅するように希釈シートを調製した。
【００８２】
マザープレートについて、２倍希釈したテスト化合物150μlを、２列のカラム１〜１２又は９６ウェルマザーに加えた。０.１％DMSOを含有するHBSS 150μlを、列Ａ（この列を「前処置」と表示）の１つの各ウェルに添加した。列Ｂには、ウェル当たり[3Ｈ]アナンダミド100又は1000nM 150μlを添加し、この列を「処置」と表示した。これにより、１×濃度のテスト化合物及びアナンダミド最終濃度５０又は500nMが得られる。
【００８３】
マザープレートを取り出し、電子ピペットを、適宜のウェルに225μlを充填し、「前処置」５０μlを配分するようにセットした。次に、９６ウェルプレートをデカントして、洗浄緩衝液 100μlを除去する。テスト化合物番号１のための列ａ−ｄについて、ｎ＝４カラムワイズダウンに関して、１ウェル当たり５０μlを添加する。ついで、４カラムワイズに関する１ウェル当たり化合物２ ５０μlの添加を列ｅ−ｈに移動する。プレートを、プレート保温器／インキュベーターに戻す。
【００８４】
１０分間の予備インキュベート後、プレートをデカントする。マザープレートと共に、電子ピペットを、適宜のウェルに225μlを充填し、「処置」５０μlを分配するようにセットする。プレートを、プレート保温器に戻して４分間置く。ついで、プレートをホットシンクにデカントし、Filtermate 196 Cell Harvester（Packard Instruments社：コネティカット州メリデン）を用いて、直ちにインキュベーション培地を吸引し、続いて、０.１％脂肪酸フリーウシ血清アルブミン（Sigma）を含有する氷冷したHBSSにて、細胞を６回洗浄する。
【００８５】
インキュベーション培地を除去し、０.１％脂肪酸フリーウシ血清アルブミン（Sigma）を含有する氷冷したHBSS ０.１mlにて細胞を３回洗浄することによって、反応を停止させた。HBSS中でのプレートの最後の洗浄を行い、その後のタンパク質の分析のために、極微量のアルブミンまで除去した。
【００８６】
ついで、１.２Ｎ NaOH／０.１％Triton X-100を５０μl/ウェルで添加すること及びプレート振盪機にて１０分間振盪することによって、細胞を可溶化した。Biorad DCタンパク質キットを使用するタンパク質分析のため、一定部分１５μlを取り出した。ビュアプレート内の残った細胞抽出物に、Microscint-20 215μlを添加し、液体シンチレーション計数によって放射性物質を測定した。TLCによって行った予備分析は、この放射性物質の＞９５％が非代謝[3Ｈ]アナンダミドであることを表し、これは、発明者らの星状細胞標本がアナンダミドアミドヒロラーゼ活性を全く含有しないことを示すものである。
【００８７】
阻害剤のいくつかは、トランスポーターによって基質として認識され、膜転位を受けるため、競合性として確認されている。
【００８８】
表１及び表２のＩＣ50のデータは、アナンダミドトランスポーターによるリガンド認識の親和性データを提供するが、リガンドがトランスポーター用の基質としても作用しうるかどうかについての情報を提供するものではない。基質転位を調査するために、発明者らは、代表的な放射性標識化合物セットを使用した。発明者らは、摂取に関するアナンダミドと競合する４つの重要な類似体：[3Ｈ]Ｎ-(４-ヒドロキシフェニル)アラキドンアミド（AM404として表示）、AM1172、AM1177及びAM1191アラキドニルグリセロールとして表示される物質をテストした。図１及び図２に示すように、すべての類似体は、レベル５０mM及び500mMで、[3Ｈ]アナンダミドと同じく迅速かつ有効に輸送された。これらの所見は、アナンダミドトランスポーターも、主に酵素加水分解によって仲介されると考えられている２-アナキドニルグリセロールの不活性化に関与しうることを示唆する。
【００８９】
【表１】
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【００９０】
【表２−１】
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【００９１】
【表２−２】
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【００９２】
疎水性脂肪酸テールの変更は、アナンダミドトランスポーターによる基質の認識及び転位の明確な要件を意外にも示している。基質認識は、脂肪酸鎖の中央に位置する少なくとも１のシス二重結合の存在を要求し、疎水性テールが中央で折り重なり、曲がったＵ字状の配置を取り入れることができるリガンドにとって有利であることを示している。実際に、完全に飽和した鎖を有する類似体又はトランス二重結合を取り込んだ類似体は、トランスポーターとは有意に相互作用することがない。対照的に、１、２又は３のオレフィンを含有するリガンドは、非常にゆっくりと輸送されるか、又はまったく輸送されないため、基質転位は、最小限４のシス非共役二重結合を要求する。この所見は、膜通過輸送を起こさせるためには、基質が、しっかりと折り重なった配置を採用できるものでなければならず、これは不十分な数のシス二重結合を含有するリガントにはエネルギー的に有利ではないことを示している。
【００９３】
疎水性炭素鎖の不飽和度が異なる脂肪酸エタノールアミドの分子モデリングに関する研究は、これらの明確な構造的要件の洞察を提供する。これらの分子の考えうる低エネルギーの配座異性体は著しく異なる。鎖の中央における１以上の非共役シス二重結合の存在又はビフェニル基の使用は、きわめて近傍で、分子のヘッド及びテールを橋掛けする回転の形成をもたらす。この回転の形状は、シス二重結合の数及び位置によって決定される。逆に、中央のトランス二重結合の導入は、さらに拡大した鎖の配置を生じ、折り重なりを受ける分子の能力を妨げる。このように、アナンダミドの低エネルギー配座異性体の１つは、分子の１／２部分２つが相互に対面しているような折り重なったヘアピン形状を示す。シス−トリエン類似体は、類似の配置を取り入れうるが、これはアナンダミドのものよりも幅広である。回転の幅は、分子のヘッド基及びテールの間の距離が明らかに増大するため、シス−ジエン及び２つのモノアルケンでは、かなり増大する。対応するトランスアルケン類似体では、ヘッド及びテールの間の距離はずっと大きい。アラキドン酸のようなアナンダミドは、周囲環境の特性に応じて、閉鎖したヘアピン又はＵ字状のいずれかの配置を採用できるが、ヘアピン状配置は、１又は２の二重結合のみを含有する脂肪酸エタノールアミドにとって熱力学的に不利であろう。
【００９４】
発明者らの結果における推定上の解釈は、アナンダミドトランスポーターによる基質の認識及び転位は、明確な配置選択によって決定されるということである。初期認識ステップは、基質が可変の幅の曲がったＵ字状配置をとることを要求するが、続く細胞上の転位のステップは、さらにしっかりと折り重なったヘアピン状配置を強いるとみられる。
【００９５】
本明細書中で使用するように、化合物の「治療に有効な量」は、ヒト又は動物に投与される際、ヒト又は動物において十分に高いアナンダミドレベルを生じ、カンナビノイド受容体によって影響又は制御される細胞活性における認識されうる増加又は減少を引き起こす化合物の量である。例えば、アナンダミドは、ホルスコリン刺激アデニレートサイクラーゼの阻害につながる受容体介在シグナル伝達を刺激することができる（Vogelら，J．Neurochem．60:352(1993)）。また、アナンダミドは、cAMPＰ代謝とは無関係に、百日咳毒素感受性Ｇタンパク質経路を介するＮタイプのカルシウムカレントの部分的な阻害を生ずる（Mackieら，Mol．Pharmacol．47:711(1993)）。
【００９６】
アナンダミド阻害剤の「治療に有効な量」は、ヒト又は動物において十分に高いアナンダミドレベルを生じ、カンナビノイド受容体の刺激から生ずる生理学的作用を生ずる量である。カンナビノイド受容体の刺激から生ずる生理学的作用には、無痛覚、化学療法から生ずる嘔気の減少、鎮静及び食欲増大が含まれる。他の生理学的機能には、緑内障患者における眼内圧の軽減及び免疫系の抑制が含まれる。代表的には、化合物の「治療に有効な量」は、約１０mg／日−約1000mg／日の範囲である。
【００９７】
本明細書中で使用するように、「ヒト」は人間を指す。「動物」は、犬、猫、馬など脊椎動物及び牛、豚、モルモットなどの飼育動物を指す。
【００９８】
本発明の化合物は、経口、直腸又は非経口ルート（例えば、筋肉内、静脈内、皮下、鼻腔又は局所）を含む周知の種々の方法により投与される。化合物が投与される剤形は、投与ルートにより決定される。かかる形としては、カプセル及び錠剤処方（経口及び直腸投与用）、液体処方（経口、静脈内、筋肉内又は皮下投与用）及び徐放性マイクロキャリア（直腸、筋肉内又は静脈内投与用）が挙げられるが、これらに限定されるものではない。また、当該処方は、生理学的に許容される賦形剤及び任意にアジュバント、香料、着色料及び保存料を含むことができる。好適な生理学的に許容される賦形剤としては、塩水、滅菌水、リンゲル溶液、等張塩化ナトリウム溶液が挙げられる。活性成分の特殊な用量レベルは、例えば、個々の製剤の生物学的活性、治療を受けるヒトの年齢、体重、性別及び一般的健康状態を含む多くの因子に依存する。
【００９９】
当業者であれば、単なる日常的実験手法により、本明細書に記載された発明の具体的態様に対する多くの均等物を認識でき、又は確認することができるだろう。かかる均等物は本発明の範囲に包含されるものである。
【図面の簡単な説明】
【０１００】
【図１】各種の濃度レベルにおける、本発明の基質阻害剤の転位を示すグラフである。
【図２】２つの異なる基質阻害剤に関する図１と同様のグラフである。
【図１】
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【図２】
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【外国語明細書】
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