(57)【要約】【課題】            スーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）の効果を的確に発揮させ、熱傷治癒をおこなう熱傷治療剤を提供すること。【解決手段】        下記一般式（Ｉ）：      ＳＯＤ’（Ｑ−Ｂ）ｍ          （Ｉ）（式中、ＳＯＤ’はスーパーオキサイドジスムターゼの残基を表し、Ｑは化学的架橋を表し、Ｂはグリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシチンにおけるその水酸基の水素原子を除いた残基を表し、ｍはスーパーオキサイドジスムターゼ１分子に対するリゾレシチンの平均結合数であって、１以上の整数を表す）で表されるレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼを有効成分とする熱傷治療剤である。また、安定化剤としてシュークロースを含有する治療剤である。【選択図】          図５
2006169128.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）：
ＳＯＤ’（Ｑ−Ｂ）ｍ          （Ｉ）
（式中、ＳＯＤ’はスーパーオキサイドジスムターゼの残基を表し、Ｑは化学的架橋を表し、Ｂはグリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシチンにおけるその水酸基の水素原子を除いた残基を表し、ｍはスーパーオキサイドジスムターゼ１分子に対するリゾレシチンの平均結合数であって、１以上の整数を表す）
で表されるレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼを有効成分とすることを特徴とする熱傷治療剤。
【請求項２】
式（Ｉ）において、Ｑが−Ｃ(Ｏ)−(ＣＨ２)ｎ−Ｃ(Ｏ)−（式中、ｎは２以上の整数を表す）であることを特徴とする請求項１に記載の熱傷治療剤。
【請求項３】
ＳＯＤ’がヒトのスーパーオキサイドジスムターゼの残基であることを特徴とする請求項１または２に記載の熱傷治療剤。
【請求項４】
ＳＯＤ’がヒトのスーパーオキサイドジスムターゼのアミノ酸配列における１１１位のアミノ酸がＳ−（２−ヒドロキシエチルチオ）システインとなったスーパーオキサイドジスムターゼ修飾体の残基であることを特徴とする請求項１または２に記載の熱傷治療剤。
【請求項５】
スーパーオキサイドジスムターゼが、活性中心に銅と亜鉛を含むスーパーオキサイドジスムターゼであることを特徴とする請求項３または４に記載の熱傷治療剤。
【請求項６】
ｎが２〜１０の整数である請求項２ないし５のいずれか１項に記載の熱傷治療剤。
【請求項７】
ｍが１〜１２の整数である請求項１ないし６のいずれか１項に記載の熱傷治療剤。
【請求項８】
さらに安定化剤を含有することを特徴とする請求項１ないし７のいずれか１項に記載の熱傷治療剤。
【請求項９】
安定化剤が糖であることを特徴とする請求項８に記載の熱傷治療剤。
【請求項１０】
糖がシュークロースであることを特徴とする請求項９に記載の熱傷治療剤。
【請求項１１】
シュークロースが、活性炭処理されたシュークロースであることを特徴とする請求項１０に記載の熱傷治療剤。
【請求項１２】
熱傷に起因する皮膚症状の治療に使用することを特徴とする請求項１ないし１１のいずれか１項に記載の熱傷治療剤。
【請求項１３】
熱傷性ショックあるいはその他の熱傷合併症に起因する全身症状の緩解に使用することを特徴とする請求項１ないし１１のいずれかに記載の熱傷治療剤。
【請求項１４】
注射剤または外用剤の形態にあることを特徴とする請求項１３または１４に記載の熱傷治療剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は熱傷治療剤に係わり、詳細には、レシチン化スーパーオキサイドジスムターゼ（以下、単にＰＣ−ＳＯＤと記載する場合もある）を有効成分として含有する熱傷治療剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
スーパーオキサイドジスムターゼ（以下、単にＳＯＤと記載する場合もある）は、１９６５年Huberらによって牛の血液から抗炎症蛋白質として抽出され、活性酸素の一つであるスーパーオキサイドアニオン（Ｏ２−）を特異的に消去することが明らかにされた生理活性蛋白質である。生体内においては、活性酸素は主に好中球、マクロファージ等の食細胞から殺菌のために放出されるが、通常余剰の活性酸素に対してはＳＯＤをはじめとする種々の抗酸化物質が存在し、活性酸素による正常細胞への傷害を防御している。
【０００３】
しかしながら、ＳＯＤ等の抗酸化物質による抗酸化能力を超えて活性酸素が過剰に存在すると、その近くに存在する物質、特に細胞膜が活性酸素により攻撃され、種々の病態が発現してくる。事実、活性酸素はその強力な組織障害性が証明されて以来、炎症、アレルギー、虚血再灌流による組織障害、抗癌剤による肺線維症など多くの病態の発生・増悪因子になることが明らかにされてきた。
【０００４】
このような状況の中、活性酸素を特異的に消去するＳＯＤが見出され、その臨床的応用の可能性について広く検討されている。本発明者らもＳＯＤの臨床的活用性について鋭意検討してきたなかで、ＳＯＤの臨床的効果を高めるためには、腎臓からの排泄を抑えて血中濃度を維持すること、さらに細胞膜への親和性を高めて細胞膜上に存在する過剰の活性酸素を消去することが重要であると考え、種々の修飾型ＳＯＤを検討し、レシチン化スーパーオキサイドジスムターゼ（ＰＣ−ＳＯＤ）を提案してきている（特許文献１）。
【０００５】
このＰＣ−ＳＯＤは、遺伝子組み換え技術によりＣｕ／Ｚｎ−ヒトスーパーオキサイドジスムターゼ（ＳＯＤ）を調製した後、化学的にレシチン誘導体（フォスファチジルコリン誘導体：ＰＣ）をＳＯＤ１分子（２量体）あたり平均４分子結合させたレシチン化ＳＯＤである。ＰＣ−ＳＯＤは、細胞膜に対して高い親和性を有し、病変部位において発症因子である虚血・再灌流障害やアントラサイクリン系抗癌剤誘発心筋症等の活性酸素が関与する疾患に対する高い治療効果が認められており、既にこのＰＣ−ＳＯＤを有効成分とする急性心不全治療剤（特許文献２）、抗ウイルス剤（特許文献３）、ループス腎炎治療剤（特許文献４）、脳血管障害に伴う機能障害改善剤（特許文献５）、抗線維化剤（特許文献６）あるいは抗アレルギー疾患処置剤（特許文献７）等を種々提案してきている。
【０００６】
ところで、熱傷による損傷を受けた場合には、熱傷部位における脂質過酸化は２時間でピークとなり、その後全身性に波及することが動物モデルにおいて研究され、証明されている。この脂質過酸化（過酸化脂質）の生成は、種々の疾患を引き起こす原因の一つとも考えられており、脂質過酸化の誘導にはスーパーオキシドアニオンなどの活性酸素や鉄錯体の関与が示唆されている。
【０００７】
また、熱傷による損傷を受けると肥満細胞からのヒスタミン等の化学物質の放出が増大し、このヒスタミンが熱傷部位における炎症を増悪させることが知られている。
したがって、脂質過酸化を抑えること、ならびにヒスタミンの放出を抑制させることは熱傷を受けた損傷部位の治癒、あるいはそれに基づく全身性症状の治癒に有効なものであると考えられる。
【０００８】
この脂質過酸化の誘導にはスーパーオキシドアニオンなどの活性酸素や鉄錯体が関与していることから、ＳＯＤ等によりかかる活性酸素を消去させることで脂質過酸化の誘導を抑制させることができるものと考えられる。さらに、ＳＯＤにより熱傷損傷部位におけるヒスタミンの放出を抑制させれば、熱傷部位の炎症症状を抑制し、その治療に効果的なものである。
【０００９】
かかる考え方に立脚し本発明者らは、ラットを用い、ラット皮膚に実験的に熱傷を作成し、ネイティブなＳＯＤを投与することでその治療効果を検討したが、ＳＯＤでは上記の効果を全く示さなかった。これはＳＯＤ自体が体内で不安定であり、半減期が短く、また組織親和性が低いことから、外部から投与されたＳＯＤの効果は弱いものであり、有効な治療効果を示すほど生体内に存在しないためであると考えられた。
【００１０】
そこでＳＯＤに替え、先に提案している細胞親和性の高いレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼ（ＰＣ−ＳＯＤ）を用いて検討した結果、このＰＣ−ＳＯＤが極めて効果的な熱傷治療効果を発揮するものであることを確認し、さらにＰＣ−ＳＯＤと安定化剤、特にシュークロースの両者を含有させたものがＳＯＤの安定性に優れるものであることを確認し、本発明を完成させるに至った。
【００１１】
これまで、ＰＣ−ＳＯＤ自体を用いた熱傷治療の考え方は具体的には存在しなかった。特許文献８には、ＰＣ−ＳＯＤとシュークロースの両者を含有する医薬組成物について熱傷治療への可能性が単に示唆されているが、具体的な効果について検討されているものではない。したがって、当該文献は、本発明の新規性を阻却するものではなく、その点で本発明は極めて特異的なものであるといえる。
【００１２】
【特許文献１】特開平９−１１７２７９号公報
【特許文献２】特開平９−５２８４３号公報
【特許文献３】特開平９−５９１７８号公報
【特許文献４】特開平９−１１０７１７号公報
【特許文献５】特開平１０−３３８６４５号公報
【特許文献６】特開２００１−２５８５号公報
【特許文献７】特開２００１−１５１６９５号公報
【特許文献８】特開２００１−６４１９９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
したがって本発明は、上記の現状に鑑み、ＰＣ−ＳＯＤを有効成分とする熱傷治療剤を提供し、また、有効成分であるＰＣ−ＳＯＤに対する安定化剤、特にシュークロースを含有させた熱傷治療剤を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
かかる課題を解決するための本発明は、その基本的態様として、
下記一般式（Ｉ）：
ＳＯＤ’（Ｑ−Ｂ）ｍ          （Ｉ）
（式中、ＳＯＤ’はスーパーオキサイドジスムターゼの残基を表し、Ｑは化学的架橋を表し、Ｂはグリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシチンにおけるその水酸基の水素原子を除いた残基を表し、ｍはスーパーオキサイドジスムターゼ１分子に対するリゾレシチンの平均結合数であって、１以上の整数を表す）
で表されるレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼを有効成分とすることを特徴とする熱傷治療剤である。
【００１５】
より好ましくは、本発明で使用する式（Ｉ）で示されるレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼにおいて、Ｑが−Ｃ(Ｏ)−(ＣＨ２)ｎ−Ｃ(Ｏ)−（式中、ｎは２以上の整数を表す）であることを特徴とする熱傷治療剤である。
【００１６】
さらに本発明は、より具体的には、ＳＯＤ’がヒトのスーパーオキサイドジスムターゼの残基であり、具体的には、ＳＯＤ’がヒトのスーパーオキサイドジスムターゼのアミノ酸配列における１１１位のアミノ酸がＳ−（２−ヒドロキシエチルチオ）システインとなったスーパーオキサイドジスムターゼ修飾体の残基であることを特徴とする熱傷治療剤である。
【００１７】
最も具体的には、本発明はスーパーオキサイドジスムターゼが、活性中心に銅と亜鉛を含むスーパーオキサイドジスムターゼであることを特徴とする熱傷治療剤である。
【００１８】
さらに本発明は、レシチン化スーパーオキサイドジスムターゼと共にその安定化剤を含有する熱傷治療剤であり、安定化剤として糖成分、特にシュークロースを含有させた熱傷治療剤である。
【００１９】
また本発明は、別の態様として、熱傷治療剤の具体的な適用の形態として、熱傷に起因する皮膚症状の治療に使用することを特徴とすること、ならびに熱傷性ショックあるいはその他の熱傷合併症に起因する全身症状の緩解に使用することを特徴とする熱傷治療剤であり、具体的には注射剤または外用剤の形態にある熱傷治療剤である。
【発明の効果】
【００２０】
本発明は、これまで効果的な熱傷治療剤が存在しなかった状況下において、特異的なＰＣ−ＳＯＤを投与することにより、熱傷による損傷を受けた組織中に産生される過酸化脂質物質の生成を抑制すると共に、肥満細胞からヒスタミン等の化学物質の放出を抑制し、熱傷治療を行うものであり、その医療上の効果は極めて特異的なものである。
また、本発明に使用するＰＣ−ＳＯＤは、従来のＳＯＤに比較して細胞膜への親和性に優れたものであり、病変部位におけるスーパーオキサイドアニオンを消去する能力が高いものである。その上安定化剤として糖成分、特にシュークロースを一緒に含有させることにより、ＳＯＤ自体の安定性に優れたものとなり、半減期の短いＳＯＤの効果を持続的に発揮し、熱傷治療を行い得る点で、特に優れたものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
本発明が提供する熱傷治療剤において使用されるレシチン化スーパーオキサイドジスムターゼ（ＰＣ−ＳＯＤ）において、「レシチン」とはフォスファチジルコリンを意味する通常のレシチンをいい、「リゾレシチン」とはレシチンのグリセロールの２位に結合している脂肪酸１分子がとれて、２位の炭素原子に水酸基が結合した化合物をいう。
【００２２】
本発明で使用するＰＣ−ＳＯＤは、通常リゾレシチンの２位の水酸基に化学的架橋剤を結合させたレシチン誘導体を、ＳＯＤに１個以上結合させて得ることができる。このＰＣ−ＳＯＤは、次式（Ｉ）：
ＳＯＤ’（Ｑ−Ｂ）ｍ          （Ｉ）
（式中、ＳＯＤ’はスーパーオキサイドジスムターゼの残基を表し、Ｑは化学的架橋を表し、Ｂはグリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシチンにおけるその水酸基の水素原子を除いた残基を表し、ｍはスーパーオキサイドジスムターゼ１分子に対するリゾレシチンの平均結合数であって、１以上の整数を表す）
で表すことができる。
【００２３】
ここで使用するＳＯＤ’は、生体内の活性酸素（Ｏ２−）の分解というその本来の機能を発揮し得る限りにおいて、その起源は特に限定されるものではなく、各種の動植物または微生物に由来するＳＯＤ残基を広く用いることができる。しかしながら、医薬品としての用途を考慮した場合には生体内での抗原性を可能な限り減らすことが好ましい。したがって、使用するＳＯＤ’としては、本発明の熱傷治療剤を投与する対象に応じて適宜適切なＳＯＤ残基を選択することが好ましい。
【００２４】
例えば、ヒトの熱傷を対象に投与しようとする場合には、ヒト体内における抗原性をできるだけ減らすために、ヒト由来のＳＯＤ残基を用いることが好ましい。本発明の熱傷治療剤は、主としてヒトに対して適用される点から、抗原性を考慮し、ヒト由来のＳＯＤを使用するのがよい。
【００２５】
ヒト由来のＳＯＤとしては、ヒト由来のＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤ（活性中心に銅と亜鉛を含むヒト由来のＳＯＤ；以下、ヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤと略記する場合もある）が、細胞内における発現量が多く、また遺伝子工学的手法による生産技術が既に確立しており、大量に調製することが可能であるために、特に好ましく使用される。
【００２６】
このヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤには、ヒト組織または培養細胞から製造される天然のヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤ；遺伝子工学的手法により製造されるヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤ；天然のヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤと実質上同一のアミノ酸配列を有する組み換えヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤ；これらのヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤにおけるアミノ酸配列式中の一部のアミノ酸を欠失、付加、置換、あるいは化学的に修飾若しくは改変したＳＯＤ等があり、いずれのヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤであってもよい。
【００２７】
そのなかでも、天然のヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤのアミノ酸配列式における１１１位のアミノ酸（システイン：Ｃｙｓ）がＳ−（２−ヒドロキシエチルチオ）システインとなったヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤが好ましい。かかるヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤは、例えば特開平９−１１７２７９号公報にその詳細が記載されており、その方法に従って得ることができる。
したがって、特開平９−１１７２７９号公報に記載されるヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤの調製は、本明細書の一部を構成し、本発明で使用するＰＣ−ＳＯＤは、これらのヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤを素材として得ることができる。
【００２８】
本発明で使用する式（Ｉ）で表されるＰＣ−ＳＯＤにおいて、Ｂで示される「グリセロールの２位に水酸基を有するリゾレシチンにおけるその水酸基の水素原子を除いた残基」は、具体的には次式（ＩＩ）：
−Ｏ−ＣＨ(ＣＨ２ＯＲ)[ＣＨ２ＯＰ(Ｏ)(Ｏ−)(ＯＣＨ２ＣＨ２Ｎ＋(ＣＨ３)３)]      （ＩＩ）
（式中、Ｒは脂肪酸残基（アシル基）である）
で表される。
【００２９】
Ｒで示される脂肪酸残基（アシル基）としては、炭素数１０〜２８の飽和または不飽和脂肪酸残基が好ましく、より好ましくは、ミリストイル基、パルミトイル基、ステアロイル基、イコサノイル基、ドコサノイル基、その他の炭素数１４〜２２の飽和脂肪酸残基であり、特に好ましくは炭素数１６を有する飽和脂肪酸残基であるパルミトイル基である。
【００３０】
また、一般式（Ｉ）においてＱで示される化学的架橋は、ＳＯＤとレシチンとを架橋して化学的に結合（共有結合）させ得るものであれば特に限定されない。そのような化学的架橋としては、残基：−Ｃ(Ｏ)−(ＣＨ２)ｎ−Ｃ(Ｏ)−（式中、ｎは２以上の整数を表す）が特に好ましい。この残基は、式：ＨＯ−Ｃ(Ｏ)−(ＣＨ２)ｎ−Ｃ(Ｏ)−ＯＨで表される直鎖状のジカルボン酸、その無水物、エステル、ハロゲン化物等の両端に存在する水酸基（但し、無水物、エステル、ハロゲン化物の場合には、両端に存在する水酸基に該当する部分）を除いた残基である。
【００３１】
一般式（Ｉ）においてＱが上記の直鎖状のジカルボン酸残基である場合には、Ｑはその一端において前記した式（ＩＩ）のリゾレシチン残基の水酸基由来の酸素とエステル結合により結合している。また、エステル結合をしたＱの他端は、ＳＯＤのアミノ基とアミド結合などにより直接結合している。
なお、上記化学的架橋の残基においてｎとしては２以上の整数であり、好ましくは２〜１０の整数である。
【００３２】
また、式（Ｉ）においてｍとしてはＳＯＤ１分子に対するリゾレシチンの平均結合数を表している。したがって、ｍは１以上の整数であり、１〜１２、特に４であることが好ましい。
【００３３】
本発明で使用するＰＣ−ＳＯＤの製造方法、すなわちレシチン誘導体とＳＯＤ、好ましくはヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤの結合方法は、例えば、特開平９−１１７２７９号公報に記載の方法により行うことができる。
【００３４】
その好ましいＰＣ−ＳＯＤの化学構造を模式的に示すと、以下のＰＣ−ＳＯＤが特に好ましい。
【００３５】
【化１】
2006169128.tif 000003
（ｍは、結合したレシチン誘導体数）
【００３６】
すなわち、E. coliを宿主として遺伝子組み換えにより製造したヒトＣｕ／Ｚｎ ＳＯＤの遊離アミノ基に、レシチン誘導体を平均４分子共有結合させたものである。
【００３７】
本発明の熱傷治療剤において用いるＰＣ−ＳＯＤは、医薬として使用できる程度に精製され、かつ、医薬として混入が許されない物質を実質的に含まないものであることが好ましい。例えば、ＰＣ−ＳＯＤは、２，５００Ｕ／ｍｇ以上の比ＳＯＤ活性を有する精製されたものを用いるのが好ましく、３，０００Ｕ／ｍｇ以上の比ＳＯＤ活性を有する精製されたものがより好ましい。
なお、本発明において１Ｕ（ユニット）とは、ｐＨ７．８／３０℃の条件下でＮＢＴ（ニトロブルーテトラゾリウム）を用いてJ. Biol. Chem., vol.244, No.22 6049-6055 (1969) に記載の方法に準じて測定し、ＮＢＴの還元速度を５０％阻害するＰＣ−ＳＯＤの酵素量を表す。
【００３８】
本発明が提供する熱傷治療剤は、かくして調製されたＰＣ−ＳＯＤを有効成分とする熱傷治療剤であるが、好ましくはＰＣ−ＳＯＤと共に安定化剤を含有するものがよい。そのような安定化剤としては、例えば糖成分をあげることができる。糖成分としては医薬的に使用される糖成分であれば特に限定されないが、なかでもシュークロースが好ましい。したがって、本発明が提供する最も好ましい熱傷治療剤は、ＰＣ−ＳＯＤと共にシュークロースを含有する組成物である。シュークロースとしては医薬品として使用できる程度に精製されたものが好ましく、特に活性炭で処理されたシュークロースを用いるのがよい。かかるシュークロースをＰＣ−ＳＯＤと共に使用することにより、長期間保存によるＰＣ−ＳＯＤの活性低下を防ぐことができ、安定性が高く、凍結乾燥した場合であっても、その性状が特に良好な組成物として調製することができる。
【００３９】
本発明の熱傷治療剤におけるＰＣ−ＳＯＤとシュークロースの配合比率は、投与量、製剤の形態等に応じて適宜決定することができ、特に限定されるものではない。しかしながら、ＰＣ−ＳＯＤとシュークロースの重量比として、０．１／１００〜８０／１００程度の範囲内にあることが好ましく、０．４／１００〜６０／１００程度がより好ましい。
【００４０】
本発明の熱傷治療剤には、ＰＣ−ＳＯＤの活性に影響を与えず、且つ製剤の効果に影響を与えない限り、他の医薬活性成分や、慣用されている製剤成分、例えば、賦形剤、結合剤、滑沢剤、着色剤、崩壊剤、緩衝剤、等張化剤、保存剤、無痛化剤等を添加することができる。
【００４１】
本発明が提供する熱傷治療剤の調製は、ＰＣ−ＳＯＤおよびシュークロースを用いて、製剤学的に公知の慣用されている方法により行うことができる。なお、本発明の製剤組成物に使用するＰＣ−ＳＯＤは、溶液状、凍結状、または凍結乾燥状の形態が好ましい。
【００４２】
本発明が提供する熱傷治療剤は、好ましくは注射剤または外用剤の形態で投与することができる。注射剤としては、溶液、懸濁液、乳濁液、用時溶解型固形製剤等の形態であることが好ましく、また外用剤としては、外用散剤、スプレー剤等の形態であることが好ましい。これらの製剤は、日本薬局方の製剤総則に記載の方法に準じ調製することができる。
【００４３】
本発明の熱傷治療剤中における有効成分であるＰＣ−ＳＯＤの量および製剤の投与量は、製剤調製の方法、剤形、対象疾患の程度、患者の年齢、体重によって異なり、一概に限定できないが、例えば臨床量として成人１人１日当たり０．５〜１００ｍｇ（１５００〜３０万Ｕ）を例示することができる。また投与回数についても一概に限定できないが、１日１回ないし１日数回の投与を行うことも可能である。
【実施例】
【００４４】
以下に本発明を実施例に代わる試験例によりさらに詳細に説明する。
【００４５】
試験例：局所熱傷モデルによる脂質過酸化の抑制検討
動物（ラット）を使用し、その背部に局所的に熱傷を作成し、熱傷作成後直ちに本発明の熱傷治療剤を含有する輸液を開始して循環動態を安定化させ、一定時間経過後に熱傷損傷部位における過酸化脂質物質の産生および総ＳＯＤ活性を検討し、また血漿中の過酸化脂質物質の産生、ヒスタミンの産生抑制および総ＳＯＤ活性、ならびに肺組織における過酸化脂質物質の産生および総ＳＯＤ活性を検討した。
【００４６】
［方法］
ウィスター系ラット（体重１５０〜２００ｇ）２０匹を用いた。ラットをペントバルビタールの麻酔下に背部に約２０％の熱傷を、Ｗａｒｋｅｒ法を用いて作成した。
ラットを３群に分け、グループＩ（６匹）として無投与群（コントロール群）、グループＩＩ（７匹）として本発明のＰＣ−ＳＯＤを１ｍｇ／ｋｇ投与群（低濃度群）およびグループＩＩＩ（７匹）として本発明のＰＣ−ＳＯＤを３ｍｇ／ｋｇ投与群（高濃度群）とした。
熱傷作成後、直ちに初期輸液（ＰＣ−ＳＯＤ無含有ならびに含有輸液）を開始し、循環動態を安定させた。熱傷作成後の１２０分後に背部の熱傷創を除去し、皮膚組織中における過酸化脂質物質の産生および総ＳＯＤ活性を測定した。また、同時にラットから採血を行い、血漿中の過酸化脂質物質の産生、ヒスタミンの産生抑制および総ＳＯＤ活性、さらに肺組織における過酸化脂質物質の産生および総ＳＯＤ活性を測定した。
【００４７】
［結果］
それらの結果を図１〜図７に示した。
図１および２は、ラット熱傷損傷部位の皮膚における過酸化脂質物質量と総ＳＯＤ活性を示したものである。本発明の熱傷治療剤を投与したラットにおいては、低濃度群および高濃度群とも共にコントロール群（無投与群）に比較して過酸化脂質量は減少しており（図１）、それに伴い総ＳＯＤ活性は増大している（図２）。このことは、投与された本発明のＰＣ−ＳＯＤによりＳＯＤ活性が高まり、そのＳＯＤが活性酸素を消去し、熱傷により生じる脂質過酸化を抑制しているものであり、効果的に熱傷治癒を行っていることを示しているものである。
【００４８】
図３から図５は、ラット血漿中のヒスタミン量、過酸化脂質物質であるマロンジアルデヒド化されたＬＤＬ（低比重リポ蛋白）の量および総ＳＯＤ活性を示したものである。
図３に示した結果からも判明するように、コントロール群に比較して本発明のＰＣ−ＳＯＤの投与により、用量依存的にヒスタミンの放出抑制されていることが理解される。このことは、熱傷による損傷で肥満細胞からのヒスタミンの放出が増大し、このヒスタミンが熱傷部位における炎症を増悪させるが、かかるヒスタミンの放出抑制により、効果的に熱傷による損傷を治癒するものであることが示されている。
【００４９】
また、図４および図５は、血漿中の過酸化脂質物であるマロンジアルデヒド化されたＬＤＬ量と総ＳＯＤ活性を示したものであるが、本発明の熱傷治療剤を投与したラットにおいては、低濃度群および高濃度群とも共にコントロール群（無投与群）に比較して、用量依存的に過酸化脂質量は減少しており（図４）、それに伴い総ＳＯＤ活性は増大している（図５）。この事実も、投与された本発明のＰＣ−ＳＯＤによりＳＯＤ活性が高まり、そのＳＯＤが活性酸素を消去し、熱傷により生じる脂質過酸化を抑制しているものであり、効果的に熱傷治癒を行っていることを示しているものである。
【００５０】
さらに図６および図７は、ラット肺内で産生される過酸化脂質物質量と総ＳＯＤ活性を示したものである。本発明の熱傷治療剤を投与したラットにおいては、低濃度群および高濃度群とも共にコントロール群（無投与群）に比較して、用量依存的に肺内においても過酸化脂質量は減少しており（図６）、それに伴い総ＳＯＤ活性は増大している（図７）。かかる事実も、投与された本発明のＰＣ−ＳＯＤによりＳＯＤ活性が高まり、そのＳＯＤが活性酸素を消去し、熱傷により生じる脂質過酸化を抑制しているものであり、効果的に熱傷治癒を行っていることを示しているものである。
【００５１】
なお、本発明の熱傷治療剤であるＰＣ−ＳＯＤを投与した場合におけるＳＯＤ作用は、ＳＯＤ作用を有する臨床的に使用されているエダラボン（商品名：ラジカット：登録商標）の５倍程度の作用を示しており、極めて効果的なものであることが判明した。
【００５２】
熱傷による障害は、皮膚症状（例えば、ケロイドの発生）のみならず、熱傷性のショックあるいはその他の熱傷合併症に起因する全身症状が現れるが、本発明の熱傷治療剤は、ヒスタミンの放出を効果的に抑制するものであることから、かかる全身症状の抑制に対しても有効なものであり、その有用性は多大なものである。
【産業上の利用可能性】
【００５３】
以上記載したように、本発明が提供する熱傷治療剤は、特異的なＰＣ−ＳＯＤを有効成分とするものであり、従来のＳＯＤに比較して細胞膜への親和性に優れたものであり、病変部位におけるスーパーオキサイドアニオンを消去する能力が高いものである。その上シュークロースと共に含有させることによりその安定性に優れたものであり、半減期の短いＳＯＤの効果を持続的に発揮する。このＳＯＤの効果により脂質過酸化を抑えること、ならびにヒスタミンの放出を抑制させ、効果的に熱傷を受けた損傷部位の治癒を行うものであり、医療上の価値は多大なものである。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】本発明の試験例における結果を示す図であり、ラット熱傷損傷部位の皮膚における過酸化脂質物質量を示した図である。
【図２】本発明の試験例における結果を示す図であり、ラット熱傷損傷部位の皮膚における総ＳＯＤ活性を示した図である。
【図３】本発明の試験例における結果を示す図であり、ラットの血漿中のヒスタミン量を示した図である。
【図４】本発明の試験例における結果を示す図であり、ラットの血漿中の過酸化脂質物質量を示した図である。
【図５】本発明の試験例における結果を示す図であり、ラットの血漿中の総ＳＯＤ活性を示した図である。
【図６】本発明の試験例における結果を示す図であり、ラット肺内の過酸化脂質物質量を示した図である。
【図７】本発明の試験例における結果を示す図であり、ラット肺内の総ＳＯＤ活性を示した図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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