(57)【要約】【課題】  非重合体カテキンガレート体率を低減し、非重合体カテキンガロ体率の濃度を増加させ、さらにカフェイン量を低減し、没食子酸を低減することにより精製処理された非重合体カテキン類組成物の提供。【解決手段】  緑茶葉から、水を用いて抽出した水溶性組成物にタンナーゼ処理を行った後、合成吸着剤を充填したカラムに合成吸着剤に対する通液倍数として０．５〜２０[ｖ／ｖ]を吸着させ、合成吸着剤に対する通液倍数として１〜１０[ｖ／ｖ]の水で洗浄し、次いで１０〜９５ｖｏｌ％のエタノール水溶液を合成吸着剤の充填体積量当り０．５〜２０[ｖ／ｖ]量通液して溶出させる非重合体カテキン類組成物の製造方法。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
緑茶葉から、水を用いて抽出した水溶性組成物にタンナーゼ処理を行った後、合成吸着剤を充填したカラムに合成吸着剤に対する通液倍数として０．５〜２０[ｖ／ｖ]を吸着させ、合成吸着剤に対する通液倍数として１〜１０[ｖ／ｖ]の水で洗浄し、次いで１０〜９５ｖｏｌ％のエタノール水溶液を合成吸着剤の充填体積量当り０．５〜２０[ｖ／ｖ]量通液して溶出させる非重合体カテキン類組成物の製造方法。
【請求項２】
（Ａ）得られる組成物の非重合体カテキン類の回収率が７０重量％以上、（Ｂ）非重合体カテキン類中の非重合体カテキンガレート体率の濃度減少が１０重量％以上、（Ｃ）非重合体カテキン類中の非重合体カテキンガロ体率の濃度増加が１重量％以上である請求項１記載の非重合体カテキン類組成物の製造方法。
【請求項３】
得られる組成物中のカフェインと非重合体カテキン類との重量比が１／１０未満である請求項１又は２記載の非重合体カテキン類組成物の製造方法。
【請求項４】
得られる組成物中の没食子酸とタンナーゼ処理後の水溶性組成物中の没食子酸との重量比が１／１０未満である請求項１〜３のいずれか１項記載の非重合体カテキン類組成物の製造方法。
【請求項５】
酵素活性が５００〜５，０００Ｕ／ｇを有するタンナーゼを使用し、非重合体カテキン類に対して０．５〜１０重量％を添加する請求項１〜４のいずれか１項記載の非重合体カテキン類組成物の製造方法。
【請求項６】
緑茶葉が、蒸し製法により製造した緑茶葉である請求項１〜５のいずれか１項記載の非重合体カテキン類組成物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、非重合体カテキンガレート体率を低減し、非重合体カテキンガロ体率の濃度を増加させ、カフェイン量を低減し、没食子酸を低減することにより精製処理された非重合体カテキン類組成物の製造法に関する。
【背景技術】
【０００２】
カテキンの効果としてはαアミラーゼ活性阻害作用などが報告されている（例えば、特許文献１参照）。このような生理効果を発現させるためには、成人一日あたり４〜５杯のお茶を飲むことが必要であることから、より簡便に大量のカテキンを摂取するため、飲料にカテキンを高濃度配合する技術が望まれていた。
【０００３】
この方法の一つとして、緑茶抽出物の濃縮物などの水溶性組成物を利用して、カテキンを飲料に溶解状態で添加する方法が用いられている。しかしながら、カテキンを高濃度に配合する対象となる飲料の種によっては、例えば紅茶抽出液や炭酸飲料にカテキンを添加する場合など、カフェイン及び緑茶由来の風味の残存が飲料の商品価値を大きく損ねることがわかっている。
そこでこの課題を解決する為に高純度に精製された非重合体カテキン類組成物を添加する方法を用いるが、従来精製法のいずれもが水溶性組成物の精製前後における非重合体カテキン類の組成維持に対しての考慮がなされておらず、精製前の水溶性組成物で検証された生理効果が精製による組成変化後においては保証できないという重大なる問題があった。またカフェイン低減においてもクロロホルム処理などの更なる処理が必要となる問題があった。
特に組成維持に関する課題は厚生労働省許可食品の一つである保健機能食品においては切実であり、精製による有効成分の組成変化は新たなる生理効果上の検証を必要とするため、有効成分を単に分離精製するという従来技術では、スピードが重視される保健機能食品の商品開発には適用できない。
【０００４】
このような背景の中、従来の精製法の中でも、緑茶葉から水を用いて抽出した水溶性組成物を、吸着剤に一旦吸着させ、その後溶剤等で溶出回収するという手段は多数試みられている（例えば、特許文献２〜６参照）。しかしながら、特許文献２は、ハイドロキシルプロピル化デキストランゲル又は親水性ビニルポリマーゲルを用いて精製する方法であるが、溶出に使用される有機溶媒濃度が常に２０％以上と高い為に、精製後のカフェイン量が多くなるという問題があった。また特許文献３は、スチレン−ジビニルベンゼン或いはメタアクリル酸エステルを用いて精製する方法であるが溶出に使用される有機溶媒濃度が最終的に６０％程度である為に、カラム処理後に別途クロロホルム処理による脱カフェイン処理を行う必要があった。同様に特許文献４、５及び６においても３０％、４０％以上あるいは５０％以上の濃度の有機溶媒を使用する為に同様の精製状態となっていた。
【０００５】
一方、紅茶等の発酵茶抽出液に対してタンナーゼ処理を行い、低温冷却時の懸濁、即ちテイークリーム形成を抑制できることは古くから知られていた。又、特許文献７に見られる、ガレート体カテキンにタンナーゼ処理を行い、一部又は全部を没食子酸とすることにより、カテキン類と没食子酸との混合物を得る方法は、苦味の原因となるガレート体カテキン類を低減することができる。しかし、副生する没食子酸により酸味・エグ味が発生する為、必ずしも有効な手段ではなかった。
【特許文献１】特開平３−１３３９２８号公報
【特許文献２】特開平１−１７５９７８号公報
【特許文献３】特開平２−３１１４７４号公報
【特許文献４】特開平１０−６７７７１号公報
【特許文献５】特開平４−１８２４７９号公報
【特許文献６】特開平６−９６０７号公報
【特許文献７】特開２００３−３３１５７号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、非重合体カテキンガレート体率を低減し、非重合体カテキン類中の非重合体カテキンガロ体率の濃度を増加させ、カフェイン量を低減させ、さらに副生する没食子酸を低減させることにより、高度に精製処理された非重合体カテキン類組成物の製造法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、緑茶葉から、水を用いて抽出した水溶性組成物中の非重合体カテキン類の精製処理を検討した結果、タンナーゼ処理を施して非重合体カテキンガレート体を遊離型非重合体カテキン類と没食子酸に分解し、非重合体カテキンガレート体率を低減させる第一の工程、さらに、タンナーゼ処理を行った後の水溶性組成物を特定の合成吸着剤に通液し、吸着した非重合体カテキン類をエタノール水溶液により溶出させる第二の工程を行うことにより、非重合体カテキンガレート体率が低減し、非重合体カテキンガロ体率の濃度が増加し、カフェイン含量が低減し、さらに副生する没食子酸を低減させた非重合体カテキン類組成物を高収率で得られることを見出した。
【０００８】
本発明は、緑茶葉から、水を用いて抽出した水溶性組成物にタンナーゼ処理を行った後、合成吸着剤を充填したカラムに合成吸着剤に対する通液倍数として０．５〜２０[ｖ／ｖ]を吸着させ、合成吸着剤に対する通液倍数として１〜１０[ｖ／ｖ]の水で洗浄し、次いで１０〜９５ｖｏｌ％のエタノール水溶液を合成吸着剤の充填体積量当り０．５〜２０[ｖ／ｖ]量通液して溶出させる非重合体カテキン類組成物の製造方法を提供するものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明により、従来より処理前後で非重合体カテキンガレート体率が低減され、非重合体カテキン類中の非重合体ガロ体率の濃度が増加し、カフェイン含量が低く、さらにタンナーゼ処理の際に副生する没食子酸が大幅に低減された非重合体カテキン組成物を高純度でかつ高収率で得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明で非重合体カテキン類とは、カテキン、ガロカテキン、カテキンガレート、ガロカテキンガレートなどの非エピ体カテキン及びエピカテキン、エピガロカテキン、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレートなどのエピ体カテキンをあわせての総称である。
【００１１】
本発明で非重合体カテキンガレート体とは、カテキンガレート、ガロカテキンガレート、エピカテキンガレート、エピガロカテキンガレートなどをあわせての総称である。また非重合体カテキンガロ体とは、ガロカテキン、ガロカテキンガレート、エピガロカテキン、エピガロカテキンガレートなどをあわせての総称である。
【００１２】
本発明に使用する緑茶葉としては、Camellia属、例えばC. sinensis、C. assamica及びやぶきた種、又はそれらの雑種から得られる茶葉から製茶された茶葉が挙げられる。当該製茶された茶葉は不発酵茶であれば全て利用できる。例えば、原料の調達の容易な蒸し製茶葉が好ましく、普通煎茶、深蒸し煎茶、玉露、かぶせ茶、玉緑茶、番茶などが挙げられる。
【００１３】
本発明で使用する水溶性組成物は、通常の緑茶の抽出条件で製造される。緑茶葉からの抽出時の温度は、非重合体カテキン類の抽出効率を高くする観点から７０℃〜沸騰水、さらに好ましくは８０℃〜沸騰水を使ってもよい。緑茶葉から抽出する際の水の量は、緑茶葉に対して５〜６０重量倍、特に５〜４０重量倍が好ましい。緑茶葉からの抽出時間は１〜６０分が好ましく、より好ましくは１〜４０分、さらに好ましくは１〜３０分である。抽出時間は短すぎると非重合体カテキン類の溶出が不十分であり、長すぎると非重合体カテキン類の熱変性異性化反応が進行してしまう。
【００１４】
本発明で用いる水溶性組成物のＢrixは２〜２５、好ましくは２〜１０、さらに好ましくは２〜５の範囲にすることで、非重合体カテキン類の回収率が高まり、脱カフェイン効率も改善される。
【００１５】
本発明に用いる水溶性組成物の代わりに、特開昭５９−２１９３８４号公報、特開平４−２０５８９号公報、特開平５−２６０９０７号公報、特開平５−３０６２７９号公報、特願２００２−１１４３５５、特願２００２−０２０４１５などに詳細に例示されている方法で調製した緑茶抽出物の濃縮品を使用しても良い。市販品としては、三井農林（株）「ポリフェノン」、伊藤園（株）「テアフラン」、太陽化学（株）「サンフェノン」などが挙げられる。そのほか、カラム精製品及び化学合成品でも使用できる。ここでいう茶抽出物の濃縮物の形態としては、固体、水溶液、スラリー状など種々のものが挙げられるが、本発明の処理においては事前に水溶液の状態に調整する。
【００１６】
本発明で行うタンナーゼ処理、即ち酵素反応は、特開２００３−３３１５７記載のタンニンアシルヒドラーゼＥＣ３．１．１．２０などで行うことが好適である。市販品としては、商品名 「タンナーゼ」キッコーマン（株）製及びタンナーゼ「三共」三共（株）製などが挙げられる。
【００１７】
本発明で使用するタンナーゼは、一般に市販されている５００〜５，０００Ｕ／ｇの酵素活性を有することが好ましく、５００Ｕ／ｇ以下であると充分な活性を得ることができず、５，０００Ｕ／ｇ以上であると酵素反応速度が速すぎる為、反応系を制御することが困難となる。
タンナーゼ処理の具体的な手法としては、水溶性組成物中の非重合体カテキン類に対してタンナーゼを０．５〜１０重量％の範囲になるように添加することが好ましい。酵素失活の工程を含め、タンナーゼ処理を最適な酵素反応時間である２時間以内で終了させるためには、タンナーゼ濃度が０．５〜５重量％、さらに２〜４重量％であることが好ましい。０．５重量％未満の濃度であると酵素活性が弱いため非重合体カテキンガレート体率の低減効果が弱く、１０重量％を超える濃度であると酵素活性が強すぎる為、最適の非重合体カテキンガレート体率で酵素反応を停止することが困難となる。
タンナーゼ処理の温度は、最適な酵素活性が得られる１５〜４０℃が好ましく、さらに好ましくは２０〜３０℃である。
【００１８】
タンナーゼ反応を終了させる際には、酵素活性を失活させる必要がある。失活の条件は、水溶性組成物中の非重合体カテキン類の非エピメリ化が起こらない温度である８０〜９０℃程度で数十秒以上行う。酵素失活の温度は、７０〜９０℃が好ましく、７０℃以下では酵素を充分に失活することが困難である為反応が進行し、所定の非重合体カテキンガレート体率の範囲内で酵素反応を停止することができない。又、所定の失活温度に到達してから１０秒程度以下の保持時間であると酵素活性を充分に失活することが困難である為、酵素反応が進行し、２０分以上行うと非重合体カテキン類の非エピメリ化が起こる場合があり好ましくない。
酵素反応の失活方法は、バッチ式もしくはプレート型熱交換機のような連続式で加熱を行うことで停止することができる。又、タンナーゼ処理の失活終了後、遠心分離などの操作により水溶性組成物を清浄化することができる。
【００１９】
本発明に用いる合成吸着剤としては、スチレン−ジビニルベンゼン、修飾スチレン−ジビニルベンゼン又はメタクリル酸メチルを母体とするものが挙げられる。スチレン−ジビニルベンゼン系の合成吸着剤の例としては、三菱化学社製の商品名ダイヤイオンＨＰ−２０、ＨＰ−２１、セパビーズＳＰ７０、ＳＰ７００、ＳＰ８２５、ＳＰ−８２５やオルガノ社（供給元：米国ローム＆ハース社）のアンバーライトＸＡＤ４、ＸＡＤ１６ＨＰ、ＸＡＤ１１８０、ＸＡＤ２０００、住友化学（供給元：米国ローム＆ハース社）のデュオライトＳ８７４、Ｓ８７６等が挙げられる。臭素原子を核置換して吸着力を強めた修飾スチレン−ジビニルベンゼン系の合成吸着剤の例としては、三菱化学社製の商品名セパビーズＳＰ２０５、ＳＰ２０６、ＳＰ２０７等が挙げられる。メタクリル酸メチル系の合成吸着剤の例としては、三菱化学社製のセパビーズＨＰ１ＭＧ、ＨＰ２ＭＧやオルガノ社のＸＡＤ７ＨＰ、住友化学のデュオライトＳ８７７等が挙げられる。
合成吸着剤の中でも特に、特に修飾ポリスチレン系合成吸着剤及びメタクリル酸メチル系合成吸着剤が好ましい。前者はポリスチレン系合成吸着剤に比べ吸着容量が高く、また高比重である為に精製プロセスの中でアップフロー通液が可能となって好ましい。また後者は吸着量が少ないものの高極性有機物の吸着に有利な点が挙げられる。
本発明に用いる合成吸着剤は具体的には、ＳＰ２０７などの修飾ポリスチレン系合成吸着剤（三菱化学社製）、ＨＰ２ＭＧなどのメタクリル系合成吸着剤（三菱化学社製）が挙げられるが、前述の理由からＳＰ２０７が好ましい。
【００２０】
本発明においては、タンナーゼ処理後の水溶性組成物を合成吸着剤が充填されたカラムに通液するが、予めＳＶ(空間速度)＝１〜１０[ｈ-1]、合成吸着剤に対する通液倍数として２〜１０[ｖ／ｖ] の通液条件で９５ｖｏｌ％エタノール水溶液による洗浄を行い、合成吸着剤の原料モノマーや原料モノマー中の不純物等を除去するのが好ましい。そして、その後ＳＶ＝１〜１０[ｈ-1]、合成吸着剤に対する通液倍数として１〜１０[ｖ／ｖ] の通液条件により水洗を行い、エタノールを除去して合成吸着剤の含液を水系に置換する方法により非重合体カテキン類の吸着能が向上する。
【００２１】
タンナーゼ処理後の水溶性組成物を、合成吸着剤を充填したカラムに通液する条件としては、ＳＶ(空間速度)＝０．５〜１０[ｈ-1]の通液速度で、合成吸着剤に対する通液倍数として０．５〜２０[ｖ／ｖ]で通液するのが好ましい。１０[ｈ-1]以上の通液速度や２０[ｖ／ｖ]以上の通液量であると非重合体カテキン類の吸着が不充分となる場合がある。
さらに、タンナーゼ処理後の水溶性組成物を合成吸着剤に吸着させた後に水洗浄を行うが、ＳＶ＝０．５〜１０ [ｈ-1]の通液速度で、合成吸着剤に対する通液倍数として１〜１０[ｖ／ｖ]で、合成吸着剤に付着した没食子酸や不純物を除去する。１０[ｈ-1]以上の通液速度や１０[ｖ／ｖ]以上の水洗量で水洗浄すると非重合体カテキン類が溶出する場合があり、１[ｖ／ｖ]以下の水洗量であると没食子酸の除去が不充分である。
【００２２】
タンナーゼ処理後の水溶性組成物をカラムに吸着・水洗後、エタノール水溶液によって溶出する条件としては、１０〜９５ｖｏｌ％のエタノール水溶液を合成吸着剤の充填体積当り０．５〜２０倍量通液するのが、非重合体カテキン類の効率的な溶出及び精製ができる点で好ましい。さらに、溶出するエタノール水溶液の濃度を１０〜５０ｖｏｌ％で行った場合、カフェインと非重合体カテキン類比率を低減できる点で好ましく、特に好ましくは１０〜３０ｖｏｌ％である。
ここで、１０ｖｏｌ％未満のエタノール水溶液で溶出する場合、カフェインと非重合体カテキン類比率は下がるものの、合成吸着剤に対する通液倍数が２０倍量を超えてしまい、多量の溶出液を要し、かつ非重合体カテキン類の回収率が低くなってしまう。一方、９５ｖｏｌ％以上のエタノール水溶液で溶出する場合、カフェインと非重合体カテキン類の分離が悪くなり、エタノールを回収する際の蒸留操作が煩雑になる。
【００２３】
本発明で使用される合成吸着剤は精製処理後に所定の方法を用いることにより再使用できる。具体的には、水酸化ナトリウムのようなアルカリ水溶液を通液・洗浄し、合成吸着剤上に残存する水溶性成分をすべて脱着させる。
【００２４】
本発明により得られる非重合体カテキン類組成物は、水溶性組成物からの非重合体カテキン類の回収率が７０重量％以上、非重合体カテキン類中のガレート体率の濃度減少が１０重量％以上、非重合体カテキン類中のガロ体率の濃度増加が１重量％以上であり、カフェインと非重合体カテキン類との重量比が１／１０未満である。又、本発明により得られる合成吸着剤から溶出する非重合体カテキン類組成物中の没食子酸とタンナーゼ処理により生成する没食子酸との比は、１／１０未満であり、酸味やエグ味など風味上好ましくない没食子酸を大幅に減少することが可能である。
【００２５】
本発明で得られた非重合体カテキン類組成物はそのままで使用できる。また、減圧濃縮、薄膜濃縮などの方法によりエタノールを除去してもよい。通常飲料への配合に使用する場合、エタノールを完全に除去した方が好ましい。また非重合体カテキン類組成物の製品形態として粉体が望ましい場合は、噴霧乾燥や凍結乾燥等の方法により粉体化できる。
【００２６】
本発明で得られた非重合体カテキン類組成物は容器詰飲料に配合できる。使用される容器は一般の飲料と同様にポリエチレンテレフタレートを主成分とする成形容器（いわゆるＰＥＴボトル）、金属缶、金属箔やプラスチックフィルムと複合された紙容器、瓶などの通常の形態で提供することができる。ここでいう容器詰飲料とは希釈せずに飲用できるものをいう。
【００２７】
また上記の容器詰飲料は、例えば、金属缶のように容器に充填後、加熱殺菌できる場合にあっては食品衛生法に定められた殺菌条件で製造される。ＰＥＴボトル、紙容器のようにレトルト殺菌できないものについては、あらかじめ上記と同等の殺菌条件、例えばプレート式熱交換器などで高温短時間殺菌後、一定の温度迄冷却して容器に充填する等の方法が採用される。また無菌下で、充填された容器に別の成分を配合して充填してもよい。
【実施例】
【００２８】
（カテキン、カフェイン及び没食子酸の測定法）
試料溶液をフィルター（０．４５μｍ）で濾過し、島津製作所製、高速液体クロマトグラフ（型式ＳＣＬ-１０ＡＶＰ）を用い、オクタデシル基導入液体クロマトグラフ用パックドカラム  Ｌ−カラムＴＭ  ＯＤＳ（４．６ｍｍφ×２５０ｍｍ：財団法人  化学物質評価研究機構製）を装着し、カラム温度３５℃でグラジエント法により行った。移動相Ａ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有の蒸留水溶液、Ｂ液は酢酸を０．１ｍｏｌ／Ｌ含有のアセトニトリル溶液とし、試料注入量は２０μＬ、ＵＶ検出器波長は２８０ｎｍの条件で行った。
【００２９】
（タンナーゼ活性の測定法）
試薬Ａ：ｐＨ５．５クエン酸緩衝溶液５０ｍｍｏｌ：蒸留水８００ｍＬにクエン酸１０．５ｇを溶解し、１ＮのＮａＯＨ溶液でｐＨ５．５に調整し、１０００ｍＬに希釈する。
試薬Ｂ：０．３５重量％基質水溶液（タンニン酸）：５０ｍＬクエン酸緩衝溶液（試薬Ａ）にタンニン酸１７５ｍｇを溶解する。
試薬Ｃ：９０ｖｏｌ％エタノール溶液。
測定方法
１．試験管に基質溶液（試薬Ｂ）を１．０ｍＬ採取し、３０℃で５分間保つ。
２．試料溶液０．２５ｍＬ添加し、１５分間３０℃で培養する。ブランク溶液は、試料溶液の代わりにクエン酸緩衝溶液（試薬Ａ）を加える。
３．酵素反応を停止するため試料溶液とブランク溶液に５．０ｍＬのエタノール溶液（試薬Ｃ）を加える。
４．３１０ｎｍの吸光度を測定する［試料：Ａs、ブランク：Ａ0］。
次の計算式により活性を計算する。
体積当たりの活性（Ｕ／ｍＬ）＝（Ａs−Ａ0）×２０．３×１．０（ｍＬ）×１．０４×ｄｆ／（０．７１×０．２５（ｍＬ）×１５（ｍｉｎ））＝ΔＡ×７．９３×ｄｆ
重量当たりの活性（Ｕ／ｇ）＝（Ｕ／ｍＬ）×１／Ｃ
２０．３：基質溶液（試薬Ｂ）の１．０ｍＬ中に含まれるタンニン酸のｍｍｏｌ。
０．７１：分析条件下での２０．３μｍｏｌのタンニン酸が完全に加水分解した後の吸光度の変化量、１．０４：換算係数、ｄｆ：希釈係数、Ｃ：サンプル（ｇ／ｍＬ）中にのタンナーゼ濃度。
【００３０】
殺菌後の風味評価
各実施例で得られた非重合体カテキン類組成物をカテキン含有率が０．１７５％[ｗ／ｖ]となるように脱イオン水で希釈し、その４０ｍＬを５０ｍＬの耐圧製ガラス容器に入れた。そこにアスコルビン酸Ｎａを０．１重量％添加し、５％重炭酸Ｎａ水溶液でｐＨを６．４に調整し、窒素置換を行い、オートクレーブで１２１℃、１０分間加熱滅菌した。その後、評価パネラー５名によって緑茶由来の異味・異臭が感じられないか確認を行った。
【００３１】
沈殿の評価方法
耐圧製ガラス容器に入っている評価サンプルを、５５℃の恒温槽に入れて、濁りの発生状況を確認した。イルミネーター上で内容物の状態を観察し、澱の観察された時点を澱生成日とした。
【００３２】
実施例１
蒸し製法により製造された緑茶１、２００ｇを９５℃の脱イオン水２４、０００gで１０分間抽出、冷却、搾汁後、金網によりろ過し、ｐＨ５．５７の抽出液１８、８１０ｇを得た。抽出液中の非重合体カテキン類の濃度は７１１．９ｍｇ／１００ｍＬであり、１３３．９ｇの非重合体カテキン類が含まれ、ガレート体率７０．２％、ガロ体率７０．０％であった。又、カフェイン濃度は８８．３ｍｇ／１００ｍＬであり、１６．６ｇのカフェインが含まれ、カフェイン／非重合体カテキン類比は、０．１２４（−）であった。没食子酸濃度は、０．４７ｍｇ／１００ｍＬであり、０．８９ｇの没食子酸が含まれていた。
得られた水溶性組成物全量をステンレス容器に投入し、２１℃、１５０ｒｐｍの攪拌条件下で、イオン交換水１６ｇ中にキッコーマンタンナーゼＫＴFH（Industrial Grade、５００Ｕ／ｇ以上）４．０ｇ（非重合体カテキン類に対して３．０％）を溶解した液を添加し、４０分後にｐＨが４．９８に低下した時点で酵素反応を終了した。次いで９５℃の温浴に浸漬したＳＵＳ製ホールディングチューブに１．２Ｌ／ｍｉｎで通液し、回収液を９０℃、１０分間保持して酵素活性を完全に失活した後、２５℃まで冷却、遠心分離後水押しを行い、タンナーゼ処理液２２、１６０ｇを得た。
タンナーゼ処理後に得られた水溶性組成物の非重合体カテキン類は１２７．１ｇ、ガレート体率は６０．６％、非重合体カテキン類中の非重合体ガロ体率は７１．２％であり、酵素反応による非重合体カテキン類の減少はごくわずかであるが、ガレート体率は大幅に低減した。さらに、５時間後に再測定した際もこれらの数値は殆ど変わらず、酵素活性が完全に失活していることが確認できた。又、カフェイン量は１６．０ｇであり殆ど変化がなく、没食子酸は８．１ｇに増加した。
次いで、ステンレスカラム（内径７２．３ｍｍ×高さ１、６００ｍｍ、容積５、７４５ｍＬ）に充填した合成吸着剤セパビーズＳＰ−２０７（三菱化学（株）製）５、１９２ｍＬを、予めＳＶ＝６．９（ｈ-1）で９５％（ｖ／ｖ）エタノール２５、９６０ｍＬによる洗浄を行い、次いでＳＶ＝６．９（ｈ-1)で２５、９６０ｍＬの水で洗浄した。その後、得られたタンナーゼ処理液全量（４．３倍容積対合成吸着剤）をＳＶ＝４．６（ｈ-1）で通液し通過液は廃棄した。通過液には、非重合体カテキン類０．７ｇ、没食子酸４．８ｇが含まれており、殆どの非重合体カテキン類は合成吸着剤に吸着されいた。
次いでＳＶ＝６．９（ｈ-1)で２０、７６０ｍＬ（４倍容積対合成吸着剤）の水で洗浄した。洗浄液には、非重合体カテキン類０．７ｇ、没食子酸３．１ｇが含まれており、非重合体カテキン類の溶出は殆どなかった。
水洗後、２０％（ｖ／ｖ）エタノール水をＳＶ＝４．６（ｈ-1）で２５、９６０ｍＬ通液した（５倍容積対合成吸着剤）。カラム内の残留水３、０００ｍＬを端切り後、溶出液２２、１５８ｇを回収し、減圧濃縮してエタノールを除去した後、噴霧乾燥を行い、非重合体カテキン類組成物粉体１４０．９ｇを得た。この紛体中には非重合体カテキン類９８．６ｇが含まれており、抽出液からの非重合体カテキン類の回収率は７３．６％、非重合体カテキン類組成物のガレート体率は５１．２％、非重合体カテキン類中のガロ体率は７６．９％であった。又、カフェイン量は３．７９ｇ、カフェイン／非重合体カテキン類比は０．０３８（−）、没食子酸量は０．１４ｇであった。
【００３３】
実施例２
タンナーゼ処理を３０分で終了し、４０％（ｖ／ｖ）エタノール水６、４９０ｍＬ（１．２５倍容積対合成吸着剤）で溶出した以外は実施例１と全く同様の操作を行った。
【００３４】
実施例３
９５％（ｖ／ｖ）エタノール水１５，５７６ｍＬ（３倍容積対合成吸着剤）で溶出した以外は実施例１と全く同様の操作を行った。
【００３５】
実施例４
合成吸着剤にセパビーズＳＰ−７０（三菱化学（株）製）を使用した以外は実施例１と全く同様の操作を行った。
【００３６】
比較例１
実施例１と同様にタンナーゼ処理を行ない、合成吸着剤への通液及び溶出は行わなかった。
【００３７】
比較例２
タンナーゼ処理を行わなかった以外は、実施例１と全く同様に行った。
【００３８】
比較例３
実施例１の２０％（ｖ／ｖ）エタノール水を通液する代わりに、５％（ｖ／ｖ）エタノール水を１０３，８４０ｍＬ（２０倍容積対合成吸着剤）通液した以外は全く同様に行った。
【００３９】
表１に分析並びに評価結果を示す。
【００４０】
【表１】
2006160656.tif 000002
【００４１】
実施例１〜４のいずれにおいても処理前後における非重合体カテキン類の回収率が高く、非重合体カテキンガレート率が減少し、非重合体カテキンガロ体率が増加し、没食子酸を殆ど含まず、カフェイン濃度が低減した非重合体カテキン類組成物を得ることができた。また容器詰飲料をモデル系とした殺菌後の風味評価において緑茶由来の異味・異臭が感じられず、５５℃保存後の澱生成もみられなかった。