(57)【要約】【課題】本発明は、人間および動物に対して、安全な抗疲労作用および持久力増強作用を有する組成物、医薬品、及び飲食品を提供することを課題とする。【解決手段】ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）成分が、顕著な抗疲労作用および持久力増強作用を示すことを見出し、該ウスヒラタケ成分を有する組成物、これを含有する医薬品および飲食品を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius ）の成分を含有することを特徴とする抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物。
【請求項２】
ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius ）が、Pleurotus pulmonarius S８２株（FERM  P−２０２２２）である請求項１に記載の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物。
【請求項３】
疲労が、運動による肉体疲労である請求項１又は２に記載の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物。
【請求項４】
疲労が、精神作業ストレスによる精神疲労である請求項１又は２に記載の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物。
【請求項５】
ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius ）の成分が、該ウスヒラタケの培養菌糸体である請求項１〜４のいずれかに記載の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物。
【請求項６】
ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius ）の成分を含有し、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するものであることを特徴とし、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するものである旨の表示を付した飲食品。
【請求項７】
請求項1〜５のいずれかに記載の組成物を含む抗疲労剤及び／又は持久力増強剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、人間および動物の抗疲労作用および持久力増強作用を目的とした組成物、これらを含む飲食品または医薬品に関する。
【背景技術】
【０００２】
健康志向が高まっている現在、スポーツと栄養またはスポーツと生理機能との関係についての認識が深まっている。このような中で、エネルギー補給、疲労回復、さらに瞬発力や持久力の増強、身体作りなど様々な場面でスポーツフーズが利用されている。スポーツフーズの中でも、抗疲労作用および持久力増強作用を目的とするものは、スポーツ選手の成績向上のためのみならず、一般の人が仕事をする上でも持久力維持や、活力あふれる生活を送るためのものとして多く利用されている。
これらの抗疲労剤および持久力増強剤の多くは、ビタミン類と生薬から成り、動物実験等の科学的根拠がないまま、古くからの伝承により効果を謳っているものが多い。また、これらの抗疲労剤等はカフェインやエチルアルコールを含有し、興奮、不眠などを伴うものが多く、真に健康を目的としたものとは言い難いのが実情である。
このような実情において、抗疲労剤および持久力増強剤には、明確な有効性の確認と、科学的根拠が求められている。
また、以上のことは動物においても同様であり、競走馬などのレース用の動物から家畜、動物園などの施設で飼育されている動物、ペットなどの動物においても抗疲労作用および持久力増強作用のある飲食品等が求められている。
近年、これら抗疲労作用および持久力増強作用を有するものとして、キノコに着目した研究が進められ、冬虫夏草（Cordyceps sinensis）の培養菌糸体熱水抽出物に強心作用及び抗疲労作用が見出されており（特許文献１）、また、霊芝の子実体等の抽出物に滋養強壮効果が見出されている（特許文献２）。
なお、本発明の有効成分の由来であるPleurotus pulmonarius は、日本ではウスヒラタケとよばれるキノコであり、その子実体は食用として市販されており、また、その菌糸体は、クワガタムシの幼虫飼育用のキノコ菌床としても用いられている（特許文献３）。しかし、ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）およびその培養菌糸体が抗疲労作用および持久力増強作用を有するという報告は全くない。
【特許文献１】国際公開第９６／００５８０号パンフレット
【特許文献２】特開２００３−６３９８１号公報
【特許文献３】特許第３３５５１５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は、人間および動物に対して、抗疲労作用および持久力増強作用を有する組成物を提供し、ひいては該組成物を含有する医薬品、栄養機能食品、健康食品又は飲食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討を重ねた結果、ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius ）が、顕著な抗疲労作用および持久力増強作用を有することを見出した。すなわち、本発明は、以下の構成を有する。
（１）ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius ）の成分を含有することを特徴とする抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物。
（２）ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius ）がPleurotus pulmonarius S８２株（FERM  P−２０２２２）である上記（１）に記載の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物。
（３）疲労が運動による肉体疲労である上記（１）又は（２）に記載の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物。
（４）疲労が精神作業ストレスによる精神疲労である上記（１）又は（２）に記載の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物。
（５）ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius ）の成分が、該ウスヒラタケの培養菌糸体である上記（１）〜（４）のいずれかに記載の抗疲労作用組成物及び／又は持久力増強作用組成物。
（６）ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius ）の成分を含有し、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するものであることを特徴とし、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するものである旨の表示を付した飲食品。
（７）上記（１）〜（５）のいずれかに記載の組成物を含む抗疲労剤及び／又は持久力増強剤。
【発明の効果】
【０００５】
本発明のウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）を有効成分とする組成物は、抗疲労作用および持久力増強作用が確認されたものであり、安全な栄養機能食品、又は健康食品等の飲食品並びに医薬品を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
本発明について、以下に具体的に説明する。
本発明に関わるキノコとしては、ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）種に属し、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するものであれば、いかなるものでもよい。ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）は、政令で品種登録制度の対象となっているキノコであり、また、ヒジリタケ、クロアワビタケという名称でも市場に流通している。
本発明のウスヒラタケの一例として、Pleurotus pulmonarius  S８２株が挙げられる。S８２株は自然界より単離された株であり、独立行政法人産業技術総合研究所特許生物寄託センターにFERM  P−２０２２２  として寄託(受理日平成１６年９月１４日)されている。
本発明のウスヒラタケには、さらに、これらの種の株に変異処理および遺伝子操作を加え、目的成分の含有量や副生物の生成量を変化させた、変異体または遺伝子組み換え体も含まれる。自然界より得られたウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）の子実体より分離したPleurotus pulmonarius S８２株の菌学的性質は以下のとおりである。
【０００７】
Pleurotus pulmonarius S８２株の菌学的性質
(a)培養的・形態的性質
観察方法
１．形態の巨視的観察（コロニー形状）
(1)ポテト・デキストロース(PDA)寒天培地（商品名「ダイゴ」(日水製薬製)）
(2)２％麦芽エキス寒天培地(Becton Dickinson,MD,USA)−１．５％寒天(MEA)
(3)オートミール寒天培地(Becton Dickinson,MD,USA) １．５％寒天(OA)
の３種類のプレートにPleurotus pulmonarius S８２株を接種し、２５℃で最長２週間の培養を実施した。培養1週間目からのコロニーの巨視的特徴について、肉眼および実体顕微鏡SZH10（オリンパス社製）を用いて観察した。コロニー色調に関する記載はKornerup and Wanscher（1978）に従った。
【０００８】
２．生育温度試験
検体をPDAプレートに接種し、２０℃、２５℃、２７℃、３０℃、３７℃の各温度条件下で1週間培養し、巨視的観察を行った。
【０００９】
３．形態の微視的観察
菌体の微視的特徴の観察は、上記ＰＤＡ平板培地を用い２５℃で培養した菌体を直接採取してプレパラートを作成し、微分干渉顕微鏡BX50F4（オリンパス社製）で観察した。
【００１０】
観察結果
１．形態の巨視的観察結果
各種類の平板培養における1週間培養後の菌体について巨視的観察を行い、コロニーの直径、色調（コロニー表面および裏面）、表面性状に関して記録を行った。観察の結果、下記のような特徴が認められた。
（１）PDAプレート：コロニー直径は４０〜５０mm、色調はWhite（1A-1）、表面性状は羊毛状（floccose）。その他にコロニー表面上にYellowish orange（4A-7）の浸出液の産生が認められた。
（２）MEAプレート：コロニー直径は４０〜４５mm、色調はWhite（1A-1）、表面性状は羊毛状（floccose）。
（３）OAプレート：コロニー直径は６０〜７０mm、色調はWhite（1A-1）、表面性状は羊毛状（floccose）。
上記の（  ）内の数値は、Kornerup and Wanscher（1978）で用いられている色のコード番号を示す。
【００１１】
２．生育温度試験結果
Pleurotus pulmonarius S８２株をPDAプレートに接種し、各温度条件下で培養した結果は下記の通りであった。
培養温度２０℃：コロニー直径は１２〜１７mm。
培養温度２５℃：コロニー直径は４０〜４５mm。
培養温度２７℃：コロニー直径は３０〜３４mm。
培養温度３０℃：コロニー直径は３０〜３５mm。
培養温度３７℃：生育は認められなかった。
【００１２】
３．形態の微視的観察結果
栄養菌糸（vegetative hyphae）は、寒天表面上もしくは寒天内に形成され、無色で（hyaline）、隔壁を有し、かすがい連結（clamp connection）の形成が認められたが、厚壁胞子（chlamydospore）の形成は認められなかった。生殖器官（reproductive organ）については、1週間以上培養した平板において分生子（conidium）等の生殖器官構造の形成は認められなかった。
【００１３】
(ｂ)生理学的・化学分類学的性質
（１）最適生育条件    pH  ５〜６、温度    ２５℃
（２）生育の範囲    温度  ５〜３５℃
（３）フェノールオキシダーゼ反応        陽性
【００１４】
本発明で用いるウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）の成分は、その子実体、菌糸体、培養物等から得ることができる。培養法に関しては、液体培養、固体培養のいずれでもよく、培養条件の厳密なコントロールが可能な菌糸体の培養が望ましい。また、天然物およびポット培養等における子実体の栽培も同様に行うことができる。
【００１５】
本発明に関わるウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）は、子実体を生のまま、また、菌糸体、培養物をそのまま使用することができる。あるいは、子実体、菌糸体、培養物を乾燥した乾燥体、もしくは乾燥後粉砕した粉末としても使用することができる。また、これらを水抽出、熱水抽出、酸性下での抽出、アルカリ性下での抽出、エタノール、ヘキサン又は酢酸エチル等有機溶媒で抽出した抽出物としても使用できる。
さらに、培地中に有効成分が放出される際には培養物が液体の場合は、培養液を濃縮して用いることもでき、また、培養液を上記の方法で抽出することによっても用いることができる。さらに、子実体、菌糸体、培養液等の各種分画操作を経て作用の強い画分のみを抽出した抽出物を用いることもできる。
【００１６】
本発明における「疲労」とは、生体がある機能を発揮した結果、その機能が低下する現象をいう。これらに限定されるものではないが例えば、「水泳をした後の肉体疲労」「長時間にわたり、知的労働をした後の精神疲労」「毎日の通常生活においても蓄積する肉体的および精神的な複合疲労」等を挙げることができる。
「抗疲労作用」とは本発明の組成物等を飲食服用することにより、そのような「疲労」状態を軽減させる作用および「疲労」状態よりの回復を促進する作用、あるいは「疲労」を予防し、疲れにくくする作用などをいう。
「持久力」とは、ある一定の運動状態を継続して行うことができる能力をいい、「持久力増強作用」とは、その継続してできる能力が増強される作用、例えば、具体的には継続時間が延びることにより確認することができる。
本発明における抗疲労作用及び持久力増強作用は、例えば後述する実施例のように、マウスを用いた遊泳疲労試験などにより評価することができる。
【００１７】
上記の方法で得られたウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）の抗疲労作用および持久力増強作用を持つ組成物は、飲食品としてあるいは医薬品として用いることができる。医薬品としては、抗疲労剤又は持久力増強剤がこれに相当する。
医薬品としては、組成物それ自体で、あるいは常法に従って公知の医薬用無毒性担体と組み合わせることもでき、種々の製剤化が可能である。例えば、経口投与剤としては錠剤、顆粒剤、散剤、カプセル剤、ソフトカプセル剤等の固形剤、溶液剤、懸濁剤、乳剤等の液剤、凍結乾燥製剤等が挙げられ、非経口投与剤としては、注射剤のほか、坐剤、噴霧剤、経皮吸収剤等が挙げられ、これらの製剤は製剤上の常套手段により調整することができる。
【００１８】
上記の医薬用無毒性担体としては、例えば、グルコース、乳糖、ショ糖、澱粉、マンニトール、デキストリン、脂肪酸グリセリド、ポリエチレングリコール、ヒドロキシエチルデンプン、エチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、アミノ酸、アルブミン、水、生理食塩水等が挙げられる。また、必要に応じて、安定化剤、滑沢剤、湿潤剤、乳化剤、結合剤等の慣用の添加剤を適宜添加することができる。
【００１９】
本発明に関わる抗疲労組成物および持久力増強組成物において、かかる医薬品の形態におけるウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）の粉末もしくは抽出物の投与量は、患者の年齢、体重、症状、疾患の程度、投与スケジュール、製剤形態などにより、適宜選択・決定されるが、例えば、一日あたり乾燥粉末等価量として０．０１〜１０ｇ/ｋｇ体重程度とされ、一日数回に分けて投与してもよい。
【００２０】
動物においても人間用と同様に製剤化すればよい。動物の年齢、体重、症状、疾患の程度、投与スケジュール、製剤形態などにより、適宜選択・決定されるが、例えば、一日あたり０．０１〜１０g/kg体重程度とされ、一日数回に分けて投与してもよい。
【００２１】
本発明に関わる天然のウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）子実体は、長年、食されてきたことから安全性が高いと考えられ、各種飲食品として用いることができる。飲食品としては、それ自体単独で、あるいは他の飲食品に含有させ最終形態にすることができる。
飲食品としては、抗疲労作用および持久力増強を目的とする機能性食品として摂取することもできる。機能性食品は、特定保険用食品、栄養機能性食品、又は健康食品として位置付けることができる。
なお、本発明の機能性食品には、ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius ）の培養菌糸体、子実体、培養物の少なくともいずれかの成分を含有し、運動における抗疲労作用を有するものであることを特徴とし、抗疲労作用及び／又は持久力増強作用を有するものである旨の表示を付したものが含まれる。
【００２２】
本発明の食品としては、例えば、ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）の成分に適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル剤、ペースト状等に形成したものを用いることができる。この機能性食品は、そのまま食用に供してもよく、また種々の食品（例えばハム、ソーセージ、かまぼこ、ちくわ、パン、バター、粉乳、菓子など）に添加して使用したり、水、酒類、果汁、牛乳、清涼飲料水等の飲物に添加して使用してもよい。
【００２３】
かかる食品の形態における本発明のウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius  ）の粉末もしくは抽出物の摂取量は、対象の年齢、体重、症状、摂取スケジュール、製剤形態などにより、適宜選択、決定されるが、例えば、一日あたり乾燥粉末等価量として０．０１〜１０ｇ/ｋｇ体重程度とされる。
【００２４】
動物においても同様にウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）に適当な助剤を添加した後、慣用の手段を用いて、食用に適した形態、例えば、顆粒状、粒状、錠剤、カプセル剤、ペースト状等に形成したものを用いることができる。また、飼料およびペットフードに添加して使用したり、水などの飲料水に添加してもよい。
【００２５】
かかる食品の形態における本発明のウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）の粉末もしくは抽出物の摂取量は、動物の年齢、体重、症状、摂取スケジュール、製剤形態などにより、適宜選択、決定されるが、例えば、一日あたり乾燥粉末等価量として０．０１〜１０ｇ/ｋｇ体重程度とされる。
【実施例】
【００２６】
以下に本発明をより詳細に説明するために実施例を挙げるが、本発明はこれらによって何ら限定されるものではない。
ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）菌糸体の培養
（培地の調整）
ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）の単離に用いた培地は、菌類の培養に一般的に用いられるMY培地であり、培地１Lあたりに麦芽エキス２０ｇおよび酵母エキス２ｇを蒸留水に溶解させたものを、1Nの塩酸水溶液または1Nの水酸化ナトリウム溶液を用いてpHを５．５に調整したものである。調製した培地は三角フラスコなどの適当な培養容器に分注して、１２１℃で１５分間、オートクレーブで加熱滅菌した。菌糸体の単離や保存に用いるプレートおよびスラントを作成するためには、上記のMY液体培地に寒天を１Lあたり１５ｇ加えて加熱滅菌し、滅菌済みの容器に分注して放冷し固化させた。
【００２７】
（単離、保存）
ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）菌糸の単離と菌体の保存は以下のように行った。自然界に発生したウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）の新鮮な子実体を採取し、柄の部分を縦に裂いて他のかび類や雑菌に汚染されていない中心部分を切り出した。切り出された柄の中心部分を、５０μg/mLとなるように抗生物質（クロラムフェニコール）を添加したMY寒天プレート上に置き、インキュベーター内で７日〜１０日間培養し、菌糸を成長させた。プレートから菌糸を分離し、MY培地のスラントに接種して４℃で冷蔵保存した。
【００２８】
（液体培養）
ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）菌糸体の液体培養（ジャーファーメンターを用いた撹拌培養）は以下のように行った。保存された菌糸の一部をMY寒天プレートに植菌し、25℃のインキュベーター内で７日〜１０日間成長させた。次に、寒天プレート上に広がった菌糸体を集め、ジャーファーメンターの培養槽に調製したMY液体培地に移して7日間の撹拌培養を行った。培養槽は１０L容のものを用い、MY液体培地は５L調製した。ジャーファーメンターを用いた撹拌培養においては、温度は２５℃で一定とした。また培養液のpHは、ジャーファーメンターに設けたpHセンサーと連動した送液ポンプで１N塩酸水溶液および1N水酸化ナトリウム水溶液を滴下することによって、pH５．５に維持された。また通気攪拌は、５L/minの空気を通気しながら毎分２５０回転で撹拌羽根を回転させることによって行われた。
【００２９】
（菌糸体の回収、乾燥）
生育した菌糸体は以下のように回収した。９０mmφのブフナー漏斗に定性濾紙を置き、菌糸体を含む液体培地を漏斗上に移し吸引濾過を行った。得られた菌糸体は蒸留水で3回洗浄して培地由来の成分を除き、最終的に圧搾と吸引により水分を可能な限り除いた。得られた含水菌糸体は−８０℃のディープフリーザー内に置いて十分に凍結させた後、凍結乾燥機で乾燥させてウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）菌糸体の乾燥標品を得た。
【００３０】
（試料の調整）
マウスでの評価を行うための試料の調製は以下のように行った。前述の方法で得られたウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）菌糸体の乾燥標品を、小型のラボ用ミルおよび乳鉢を用いて粉砕し、マウスに投与できるように、目開き３００μmのステンレス製ふるいを用いて分級し、このふるいを通った微粉末を試料とした。
[実施例１]
【００３１】
ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）の抗疲労作用および持久力増強作用の効果
５週齢の雄性ｄｄYマウスを用い、６日間の予備飼育後、１群１０匹で２群に分けた。群構成は、試料の代わりに水を投与する対照群（水投与）と、試料としてウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）の培養菌糸体を前述の方法で調整した乾燥微粉末試料４００mg/kgを試験投与群とし、週５日間経口投与を行った。投与後２週目からマウスに体重の９．５％の重りを付加して強制水泳させ、疲労困憊し頭部が完全に７秒間水中に沈むまでの時間を測定した。その結果を表1に示す。
表の数値は、平均値（sec.）±標準誤差を示した。表中、＊、＊＊はそれぞれ危険率５％、０．１％で試験投与群が対照群に対して有意差があることを示す（Student Test）。
【００３２】
【表１】
2006160653.tif 000002
【比較例１】
【００３３】
冬虫夏草(Cordyceps sinensis)の抗疲労作用および持久力増強作用の比較
上記の効果が既に報告されているキノコと比較するため、試料として冬虫夏草（Cordyceps sinensis ,有限会社康源製）を小型のラボ用ミルおよび乳鉢を用いて粉砕し、マウス投与に共するため、目開き３００μmのステンレス製ふるいを用いて分級し、このふるいを通った微粉末を試料とした。ウスヒラタケと同量の冬虫夏草微粉末試料４００mg/kgを試験投与群とし、抗疲労作用および持久力増強作用の確認はマウスを用い、上記ウスヒラタケと同様の方法により試験を行った。その結果を表２に示す。
【００３４】
【表２】
2006160653.tif 000003
【００３５】
これらの結果より、ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）の試験投与群において遊泳時間の顕著な延長効果が認められ、これは同効果が知られている冬虫夏草を凌ぐものであった。この遊泳時間の延長は、動物個体における総合的な反応の変化による抗疲労作用および持久力増強作用を評価するために常用される試験であり、上記結果は本発明におけるウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）の組成物に該作用があることを科学的に立証できた。
【産業上の利用可能性】
【００３６】
本発明により、ウスヒラタケ（Pleurotus pulmonarius）を有効成分とする抗疲労作用および持久力増強作用を目的とした組成物の提供が可能となった。これに伴い、安全性が高くかつ効果の期待できる医薬品及び栄養機能食品、健康食品、等の飲食品を人間および動物に提供することができる。