(57)【要約】【課題】創傷治癒効果のばらつきの小さい（再現性の高い）創傷被覆材を提供することである。【解決手段】ＪＩＳ  Ｂ０６０１：２００１「４．２．１輪郭曲線の算術平均高さ」に規定された算術平均粗さ（Ｒａ）が１μｍ〜１０００μｍ、且つＪＩＳ  Ｂ０６０１：２００１「４．３．１輪郭曲線要素の平均長さ」に規定された輪郭曲線要素の平均長さ（ＲＳｍ）が１０μｍ〜５ｍｍである表面性状パラメータをもつ単層フィルム（Ｓ）から構成されることを特徴とする創傷被覆材を用いる。この創傷被覆材は２級アミノ基（Ａ１）、３級アミノ基（Ａ２）、アンモニオ基（Ａ３）、ホスファチジル基（Ａ４）、及びリゾホスファチジル基（Ａ５）からなる群より選ばれる少なくとも１つの官能基（Ａ）を含む化合物（ＡＭ）及び／又は細胞接着性最小アミノ酸配列（Ｘ）を１分子中に少なくとも１個有するポリペプチド（ＸＭ）を有することが好ましい。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＪＩＳ  Ｂ０６０１：２００１「４．２．１輪郭曲線の算術平均高さ」に規定された算術平均粗さ（Ｒａ）が１μｍ〜１０００μｍ、且つＪＩＳ  Ｂ０６０１：２００１「４．３．１輪郭曲線要素の平均長さ」に規定された輪郭曲線要素の平均長さ（ＲＳｍ）が１０μｍ〜５ｍｍである表面性状パラメータをもつ単層フィルム（Ｓ）から構成されることを特徴とする創傷被覆材。
【請求項２】
２級アミノ基（Ａ１）、３級アミノ基（Ａ２）、アンモニオ基（Ａ３）、ホスファチジル基（Ａ４）、及びリゾホスファチジル基（Ａ５）からなる群より選ばれる少なくとも１つの官能基（Ａ）を含む化合物（ＡＭ）、並びに／又は細胞接着性最小アミノ酸配列（Ｘ）を１分子中に少なくとも１個有するポリペプチド（ＸＭ）を有してなる請求項１に記載の創傷被覆材。
【請求項３】
ポリペプチド（ＸＭ）を有してなり、細胞接着性最小アミノ酸配列（Ｘ）がArg Gly Asp配列、Leu Asp Val配列、Leu Arg Glu配列、His Ala Val配列及び配列番号（１）〜（８）のいずれかで表されるアミノ酸配列からなる群より選ばれる少なくとも１種である請求項２に記載の創傷被覆材。
【請求項４】
ポリペプチド（ＸＭ）を有してなり、（ＸＭ）が補助アミノ酸配列（Ｙ）をポリペプチド（ＸＭ）の１分子中に少なくとも１個有してなる請求項２又は３に記載の創傷被覆材。
【請求項５】
官能基（Ａ）を含む化合物（ＡＭ）を有してなり、（ＡＭ）の重量平均分子量（ＭＷ）が１，０００〜１００，０００である請求項２〜４のいずれかに記載の創傷被覆材。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、創傷被覆材に関する。さらに詳しくは、皮膚の表皮の再生を促進し、皮膚創傷の治癒に特に効果的な創傷被覆材に関する。
【背景技術】
【０００２】
創傷の治癒において、皮膚の再生を促進する創傷被覆材としては、細胞接着性ポリペプチドを有してなる創傷被覆材（特許文献１）等が知られている。
【特許文献１】特開２００４−０４９９２１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかし、上記の創傷被覆材は高い創傷治癒効果を示すこともあるが、その効果にばらつきがあるという問題がある。すなわち、本発明の目的は、創傷治癒効果のばらつきの小さい（再現性の高い）創傷被覆材を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明の創傷被覆材の特徴は、ＪＩＳ Ｂ０６０１：２００１「４．２．１輪郭曲線の算術平均高さ」に規定された算術平均粗さ（Ｒａ）が１μｍ〜１０００μｍ、且つＪＩＳ  Ｂ０６０１：２００１「４．３．１輪郭曲線要素の平均長さ」に規定された輪郭曲線要素の平均長さ（ＲＳｍ）が１０μｍ〜５ｍｍである表面性状パラメータをもつ単層フィルム（Ｓ）からなる点を要旨とする。
【発明の効果】
【０００５】
本発明の創傷被覆材は、優れた創傷治癒効果を再現性高く発揮することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
本発明において、表面性状パラメーターとは、算術平均粗さ（Ｒａ）及び輪郭曲線要素の平均長さ（ＲＳｍ）を意味する。
算術平均粗さ（Ｒａ）は、創傷治癒効果のはらつき（再現性）の観点等から、１〜１０００μｍが好ましく、さらに好ましくは１０〜５００μｍ、特に好ましくは２０〜３００μｍである。この範囲であると、創傷治癒効果の再現性がさらに良好となる。
また、輪郭曲線要素の平均長さ（ＲＳｍ）は、創傷治癒効果のばらつき（再現性）の観点等から、１０μｍ〜５ｍｍが好ましく、さらに好ましくは２０μｍ〜１ｍｍ、特に好ましくは５０μｍ〜６００μｍである。この範囲であると、創傷治癒効果の再現性がさらに良好となる。
【０００７】
本発明の創傷被覆材は、上記の表面性状パラメータの範囲内である限り、単層フィルム（Ｓ）の表面形状に制限はない。例えば、平らな面に、均一或いは不均一な大きさの盛り上がり｛半球状、扁平（楕円）状、不定形等｝及び／又は窪み｛半球状、扁平（楕円）状、不定形等｝が、均一或いは不均一に点在する形でもよく、平らな面に定型或いは不定形の畝及び／又は溝を有する形でもよく、平らな部分は有さず表面全体が凹凸｛半球状、扁平（楕円）状、不定形等｝で覆われている形でもよい。
【０００８】
なお、算術平均粗さ（Ｒａ）は、ＪＩＳ Ｂ０６０１：２００１の「４．２．１輪郭曲線の算術平均高さ」に規定されており、基準長さ｛Ｕ｝における、縦座標値｛Ｚ（ｘ）｝（任意の位置における輪郭曲線の高さ）の絶対値の平均をいう（次式で表される）。
【数１】
2006150072.tif 000002
基準長さ｛Ｕ｝及び輪郭曲線｛Ｚ（ｘ）｝については単層フィルム（Ｓ）の断面を模式的に表した図１を参照できる。
【０００９】
また、輪郭曲線要素の平均長さ（ＲＳｍ）は、ＪＩＳ Ｂ０６０１：２００１の「４．３．１輪郭曲線要素の平均長さ」に規定されており、基準長さ｛Ｕ｝における輪郭曲線要素の長さ｛ＸＳｉ｝の平均をいう（次式で表される）。
【数２】
2006150072.tif 000003
基準長さ（Ｕ）及び輪郭曲線要素｛ＸＳｉ｝については、単層フィルム（Ｓ）の断面を模式的に表した図２を参照できる。
【００１０】
算術平均粗さ（Ｒａ）、輪郭曲線要素の平均長さ（ＲＳｍ）はいずれも公知の方法で測定でき、例えば、表面形状顕微鏡｛キーエンス（株）製の表面形状測定顕微鏡ＶＦ−７５００等｝及び原子間力顕微鏡｛セイコー電子工業（株）製の原子間力顕微鏡ＳＦＡ−３００等｝が用いられる。
測定は、測定試料を２５℃、相対湿度６５％の雰囲気下に少なくとも１２時間放置し、同条件の恒温恒湿で行う。
【００１１】
本発明において、単層フィルム（Ｓ）とは、２枚以上のフィルムが複合化されたフィルムではなく、単一層からなるフィルムを意味する。
なお、単層フィルム（Ｓ）には微細な孔を全面又は一部に有していてもよい。微細な孔を有する場合、孔の大きさは、液体や細菌は透過しないが空気及び水蒸気が通過できる程度の大きさが好ましい。この穴の大きさとしては、開孔部の面積が１μｍ2以下が好ましい。またこの孔の形状は円形、楕円形、多角形、不定形及び線状（スリット）等が挙げられるが、その目的とする滲出液の創傷における貯留量を適度に保てれば、いずれの形状を用いてもよい。
【００１２】
単層フィルム（Ｓ）は、創傷を被覆できれば形状、大きさは特に制限がない。例えば、多角形、楕円形などでもよく、また、その一部を切り取って使用することもできる。また、本発明の創傷被覆材は、接着剤若しくは粘着剤付きのカバー、包帯、伸縮自在メッシュ、眼帯等を用いて固定されてもよく、縫合又は接着されてもよい。
単層フィルム（Ｓ）の厚さは、創傷被覆材が創傷面上でずれたり撚れたりすることなく創傷を被覆できれば特に制限はないが、１μｍ〜１ｃｍが好ましく、さらに好ましくは５〜３０００μｍ、特に好ましくは１５〜５００μｍである。
【００１３】
単層フィルム（Ｓ）の材質としては、細胞や生体に悪影響を及ぼさないものであれば制限がなく、創傷等への適用時に、体液等に分散、溶解又は吸収され易い材料｛以下、易生分解性材料（Ｓ１）｝、創傷等への適用時に、体液等に分散、溶解又は吸収され難い材料｛以下、難生分解性材料（Ｓ２）｝のいずれもが使用できる。これらのうち、創傷面から創傷被覆材の剥がしやすさの観点等から、難生分解生材料（Ｓ２）が好ましい。また易生分解性材料（Ｓ１）及び難生分解性材料（Ｓ２）を組み合わせてもよい。
易生分解性材料（Ｓ１）及び難生分解性材料（Ｓ２）を組み合わせる場合、組み合わせ形態及び組み合わせ方法等は特に制限がないが、難生分解性材料(Ｓ２）からなるフィルム表面に易生分解性材料（Ｓ１）からなる微粒子が点在して存在する形態等が例示できる。
【００１４】
易生分解性材料（Ｓ１）としては、天然高分子（Ｓ１Ａ）、合成高分子（Ｓ１Ｂ）及び無機物（Ｓ１Ｃ）等が使用できる。
天然高分子（Ｓ１Ａ）としては、コラーゲン、ゼラチン、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸、デルマタン硫酸、ヘパリン、エラスチン、キチン、キトサン、フィブリン、アルギン酸、デンプン、デキストラン、アルブミン、ポリヒドロキシ酪酸、ペクチン、ペクチン酸、ガラクタン、プルラン、アガロース、セルロース、グルテン及びフィブロイン等が挙げられる。
【００１５】
合成高分子（Ｓ１Ｂ）としては、乳酸、ロイシン、グリコール酸、ε−カプロラクトン、ジオキサノン、リンゴ酸、ラクチド及びグリコリドからなる群より選ばれた単量体を必須単量体としてなる（共）重合体（ポリグリコール酸）、並びに以下に説明するポリペプチド（ＸＭ）以外の合成ポリペプチド等が挙げられる。
【００１６】
無機物（Ｓ１Ｃ）としては、炭酸カルシウム（軽質炭酸カルシウム、重質炭酸カルシウム等）、リン酸カルシウム｛ヒドロキシアパタイト、トリカルシウムフォスフェート及びこれらと他のリン酸カルシウム（モノカルシウムハイドロジェンフォスフェート等）との混合物等｝等が含まれる。
【００１７】
これらのうち、天然高分子（Ｓ１Ａ）及び合成高分子（Ｓ１Ｂ）が好ましく、さらに好ましくは天然高分子（Ｓ１Ａ）、特に好ましくはコラーゲン、ゼラチン、ヒアルロン酸、キチン、キトサン、フィブリン、アルギン酸、デンプン、デキストラン、アガロース、セルロース及びフィブロインである。
【００１８】
難生分解性材料（Ｓ２）としては、天然高分子（Ｓ２Ａ）、合成高分子（Ｓ２Ｂ）及び無機物（Ｓ２Ｃ）等が使用できる。
天然高分子（Ｓ２Ａ）としては、天然繊維（綿、毛、麻、絹等）等が挙げられる。
【００１９】
合成高分子（Ｓ２Ｂ）としては、ポリオレフィン（ポリエチレン、ポリプロピレン、これらの変性物等）、オレフィン共重合体｛エチレン−ビニルアセテート共重合体、エチレン−エチル（メタ）アクリレート共重合体、エチレン−メチル（メタ）アクリレート共重合体、エチレン−（メタ）アクリル酸共重合体等｝、ポリウレタン、ポリエステル、ポリアクリル酸、ポリアミド（ナイロン等）、ポリ塩化ビニル、ポリ塩化ビニリデン、ポリスチレン、フッ素樹脂、シリコーン樹脂、セルロース、ビスコースレーヨン、キュプラレーヨン、ポリアセテート、ポリアクリルニトリル、ビニロン及びビニリデン等が用いられる。
【００２０】
無機物（Ｓ２Ｃ）としては、金属（金、銀、プラチナ、チタン及びニッケル等）、セラミックス（アルミナ、ジルコニア及び窒化アルミニウム等）等が用いられる。
【００２１】
これらのうち、合成高分子（Ｓ２Ｂ）及び無機物（Ｓ２Ｃ）が好ましく、さらに好ましくは合成高分子（Ｓ２Ｂ）、特に好ましくはポリオレフィン、ポリウレタン、ポリエステル、ポリアクリル酸、ポリアミド（ナイロン）、ポリスチレン及びシリコーン樹脂、最も好ましくはポリウレタンである。
【００２２】
単層フィルム（Ｓ）には、微粒子を含有させることもできる。
微粒子としては、細胞や生体に悪影響を及ぼさないものであれば制限がなく、無機物微粒子でも有機物微粒子でもよい。また、易生分解性材料（Ｓ１）からなる微粒子でも難生分解性材料（Ｓ２）からなる微粒子でもよい。
無機物微粒子としては、易分解性材料（Ｓ１）（炭酸カルシウム等）からなる微粒子、及び難分解性材料（Ｓ２）（珪酸カルシウム、珪酸マグネシウム、シリカ、硫酸バリウム、酸化亜鉛、酸化チタン、クレー及びアルミナ等）からなる微粒子が挙げられる。
有機微粒子としては、易分解性材料（Ｓ１）（ポリグリコール酸及び、グルコサミノグリカン等）からなる微粒子、及び難分解性材料（Ｓ２）（ポリウレタン樹脂、ポリエステル樹脂、ポリアクリル酸樹脂、ポリアミド（ナイロン）樹脂、ポリスチレン樹脂及びシリコーン樹脂等）からなる微粒子が挙げられる。
これらのうち、有機微粒子が好ましく、さらに好ましくはポリスチレン樹脂である。
【００２３】
微粒子の形状に制限はないが、例えば球状、針状、扁平（楕円）状、薄片状、不定形破砕状及び繊維状等が挙げられる。これらのうち、球状、扁平（楕円）状及び薄片状が好ましく、さらに好ましくは球状及び扁平（楕円）状、特に好ましくは球状である。
【００２４】
微粒子の大きさに制限はないが、微粒子の体積平均粒子径（μｍ）は、２〜２０００が好ましく、さらに好ましくは８０〜１２００、特に好ましくは４０〜６００である。なお、体積平均粒子径は、ＪＩＳ  Ｚ８８２５−１：２００１に準拠して、レーザー式粒度分布測定装置、たとえば、堀場製作所製ＬＡ−９２０（分散媒：メタノール、測定温度：２５℃）等により測定される。
【００２５】
微粒子を含有する場合、この含有量（重量％）は、単層フィルム（Ｓ）の重量（微粒子の重量を含む）に基づいて、３０〜２００が好ましく、さらに好ましくは４０〜１５０、特に好ましくは５０〜１１０である。
【００２６】
本発明の創傷被覆材は、さらに、２級アミノ基（Ａ１）、３級アミノ基（Ａ２）、アンモニオ基（Ａ３）、ホスファチジル基（Ａ４）、及びリゾホスファチジル基（Ａ５）からなる群より選ばれる少なくとも１つの官能基（Ａ）を含む化合物（ＡＭ）を有していてもよい。
【００２７】
２級アミノ基（Ａ１）としては、脂肪族アミノ基、芳香族アミノ基、−ＮＨＣＨ2−で表される基及び−Ｃ（＝ＮＨ）−で表される基等が使用できる。これらの炭素数は１〜１６が好ましく、さらに好ましくは１〜１２、特に好ましくは１〜６である。
【００２８】
脂肪族アミノ基としては、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、ブチルアミノ、シクロヘキシルアミノ、２−エチルヘキシルアミノ、ドデシルアミノ、ヘキサデシルアミノ、ベンジルアミノ及び２−フェニルエチルアミノ等が挙げられる。
【００２９】
芳香族アミノ基としては、フェニルアミノ（アニリノ）、４−メチルフェニルアミノ（４−メチルアニリノ）及びナフチルアミノ等が挙げられる。
これらのうち、脂肪族アミノ基、−ＮＨＣＨ2−で表される基及び−Ｃ（＝ＮＨ）−で表される基が好ましく、さらに好ましくはメチルアミノ基、エチルアミノ基、プロピルアミノ基、−ＮＨＣＨ2−で表される基及び−Ｃ（＝ＮＨ）−で表される基、特に好ましくは−ＮＨＣＨ2−で表される基及び−Ｃ（＝ＮＨ）−で表される基である。
【００３０】
３級アミノ基（Ａ２）としては、脂肪族アミノ基、芳香族アミノ基、−Ｎ（ＣＨ2−ＯＨ）ＣＨ2−又は、−Ｎ（ＣＨ3）ＣＨ2−で表される基等が挙げられる。これらの炭素数は２〜３２が好ましく、さらに好ましくは２〜２４、特に好ましくは２〜１２である。
【００３１】
脂肪族アミノ基としては、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルプロピルアミノ、ジイソプロピルアミノ、ジブチルアミノ、ジシクロヘキシルアミノ、ジドデシルアミノ、ジヘキサデシルアミノ及びジベンジルアミノ等が挙げられる。
【００３２】
芳香族アミノ基としては、ジフェニルアミノ及びジナフチルアミノ等が挙げられる。
これらのうち、脂肪族アミノ基、−Ｎ（ＣＨ2−ＯＨ）ＣＨ2−又は−Ｎ（ＣＨ3）ＣＨ2−で表される基が好ましく、さらに好ましくはジメチルアミノ、ジエチルアミノ、ジプロピルアミノ及び−Ｎ（ＮＨ2−ＯＨ）ＣＨ2−又は−Ｎ（ＣＨ3）ＣＨ2−で表される基、特に好ましくはジメチルアミノ、ジエチルアミノ及び−Ｎ（ＣＨ2−ＯＨ）ＣＨ2−又は−Ｎ（ＣＨ3）ＣＨ2−で表される基である。
【００３３】
アンモニオ基（Ａ３）としては、脂肪族アンモニオ基、芳香族アンモニオ基、＞Ｃ＝Ｎ+＝Ｃ＜で表される基及び−ＣＨ2Ｎ+（ＣＨ3）2ＣＨ2−で表される基等が挙げられる。これらの炭素数は１〜４８が好ましく、さらに好ましくは２〜３６、特に好ましくは２〜１８である。
【００３４】
脂肪族アンモニオ基としては、メチルアンモニオ、エチルアンモニオ、プロピルアンモニオ、ブチルアンモニオ、シクロヘキシルアンモニオ、２−エチルヘキシルアンモニオ、ドデシルアンモニオ、ヘキサデシルアンモニオ、ベンジルアンモニオ、２−フェニルエチルアンモニオ、ジメチルアンモニオ、ジエチルアンモニオ、メチルプロピルアンモニオ、ジイソプロピルアンモニオ、ジブチルアンモニオ、ジシクロヘキシルアンモニオ、ジドデシルアンモニオ、ジヘキサデシルアンモニオ、ジベンジルアンモニオ、トリメチルアンモニオ、トリエチルアンモニオ、メチルジエチルアンモニオ、メチルジイソプロピルアンモニオ、メチルジブチルアンモニオ、メチルジシクロヘキシルアンモニオ、メチルジドデシルアンモニオ及びトリヘキサデシルアンモニオ等が挙げられる。
【００３５】
芳香族アンモニオ基としては、メチルフェニルアンモニオ、メチルナフチルアンモニオ、メチルジフェニルアミノ、メチルジナフチルアミノ及びトリベンジルアンモニオ等が挙げられる。
【００３６】
これらのうち、脂肪族アンモニオ基、＞Ｃ＝Ｎ+＝Ｃ＜で表される基及び−ＣＨ2Ｎ+（ＣＨ3）2ＣＨ2−で表される基が好ましく、さらに好ましくはメチルアンモニオ、エチルアンモニオ、ブチルアンモニオ、トリメチルアンモニオ、トリエチルアンモニオ、メチルジエチルアンモニオ、メチルジイソプロピルアンモニオ、メチルジブチルアンモニオ、＞Ｃ＝Ｎ+＝Ｃ＜で表される基及び−ＣＨ2Ｎ+（ＣＨ3）2ＣＨ2−で表される基、特に好ましくはメチルアンモニオ、エチルアンモニオ、トリメチルアンモニオ、トリエチルアンモニオ、メチルジエチルアンモニオ、＞Ｃ＝Ｎ+＝Ｃ＜で表される基及び−ＣＨ2Ｎ+（ＣＨ3）2ＣＨ2−で表される基である。
【００３７】
ホスファチジル基（Ａ４）としては、ＨＯＣＨ2ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ2ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ-）−で表される基（無置換ホスファチジル基）又はＲ1ＯＣＨ2ＣＨ（ＯＲ2）ＣＨ2ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ-）−で表される基（置換ホスファチジル基、Ｒ1及びＲ2は、同じ又は異なる有機基（アシル基、アルキル基又はアルケニル基）である）等が使用できる。有機基（アシル基、アルキル基又はアルケニル基）の炭素数は１〜２２が好ましく、さらに好ましくは２〜１８、特に好ましくは１２〜１８である。
【００３８】
アシル基としては、飽和アシル基（アセチル、ブタノイル、ヘキサノイル、デカノイル、ラウロイル、ミリストイル、パルミトイル、ステアロイル及びアラキドノイル等）、及び不飽和アシル基（リノレオイル、オクタデシエノイル及びオレオイル等）等が挙げられる。
【００３９】
アルキル基としては、メチル、ヘキサデシル、ブチル、ヘキキル、デシル、ドデシル、テトラデシル、ヘキサデシル、オクタデシル及びイコサノイル等が挙げられる。
【００４０】
アルケニル基としては、リノレイル、オクタデカジエニル、オクタデカトリエニル及びオクタデセニル等が挙げられる。
これらのうち、無置換ホスファチジル基及び置換ホスファチジル基（Ｒ1及びＲ2はアシル基である）が好ましく、さらに好ましくは無置換ホスファチジル基及び置換ホスファチジル基（Ｒ1及びＲ2は不飽和アシル基である）、特に好ましくは置換ホスファチジル基（Ｒ1及びＲ2は同じ不飽和アシル基である）である。
【００４１】
リゾホスファチジル基（Ａ５）としては、Ｒ3ＯＣＨ2ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ2ＯＰ（＝Ｏ）（Ｏ-）−で表される基（Ｒ3は、飽和又は不飽和のアシル基）等が使用できる。アシル基の炭素数は１〜２２が好ましく、さらに好ましくは２〜１８、特に好ましくは１２〜１８である。
【００４２】
アシル基としては、ホスファチジル基（Ａ４）の場合と同じものが使用できる。
これらのうち、Ｒ3が不飽和アシル基である置換リゾホスファチジル基が好ましい。
【００４３】
化合物（ＡＭ）の重量平均分子量（ＭＷ）は、細胞に対する毒性が低く、細胞誘引性が高いという点で、１，０００〜１００，０００が好ましく、さらに好ましくは１，２００〜５０，０００、特に好ましくは１，８００〜３０，０００である。
なお、化合物（ＡＭ）の重量平均分子量（ＭＷ）は、ゲルパーミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ）で測定することができる（基準物質は、分子量４２０〜２０,６００,０００のポリスチレンスタンダード（例えば、東ソー製）である。）。
化合物（ＡＭ）としては、特許文献１に記載された少なくとも１個の１級アミノ基又は２級アミノ基を有するポリアミン（炭素数２〜５６）｛脂肪族ポリアミン、脂環式ポリアミン、複素環式ポリアミン、芳香族ポリアミン｝等がそのまま使用できる。
【００４４】
官能基（Ａ）のうち、創傷治癒促進の観点等から、２級アミノ基（Ａ１）及び３級アミノ基（Ａ２）が好ましく、さらに好ましくは２級のアミノ基である。すなわち、化合物（ＡＭ）のうち、創傷治癒効果の高さの観点等から、２級アミノ基（Ａ１）を含む化合物（ＡＭ１）及び３級アミノ基（Ａ２）を含む化合物（ＡＭ２）が好ましく、さらに好ましくは（ＡＭ１）、特に好ましくは脂肪族ポリアミン（ＰＡ）及び芳香族ポリアミン（ＰＡｒ）である｛これらの化合物については、特許文献１に詳細に記載されている。｝。
【００４５】
脂肪族ポリアミン（ＰＡ）としては、アルキレン基の複数個と、１〜３級のアミノ基及びアンモニオ基からなる群より選ばれる少なくとも１種の複数個とをもつ化合物等が含まれる。
芳香族アミン（ＰＡｒ）としては、アリーレン基の複数個と、１〜３級のアミノ基及びアンモニオ基からなる群より選ばれる少なくとも１種の複数個とをもつ化合物等が含まれる。
脂肪族ポリアミン（ＰＡ）は、アルキレン基の一部がアリーレン基に置き換わっていてもよい。また、芳香族ポリアミン（ＰＡｒ）は、アリーレン基の一部がアルキレン基に置き換わっていてもよい。
【００４６】
脂肪族ポリアミン（ＰＡ）及び芳香族ポリアミン（ＰＡｒ）は、直鎖状又は分岐状のいずれでもよい。
直鎖状ポリアミンとしては、次のような化学式（Ｒは同じでも異なっていてもよいアルキレン基またはアリーレン基を示し、Ｒ’は水素原子又は炭素数１〜４のアルキル基を示し、ｎはポリマーの重量平均分子量が１，０００〜１００，０００となる数を示す。）で表されるポリマーが含まれる。
【化１】
2006150072.tif 000004
【００４７】
脂肪族ポリアミン（ＰＡ）及び芳香族ポリアミン（ＰＡｒ）のアルキレン基としては、炭素数２〜６のアルキレン（エチレン、プロピレン、イソプロピレン、ブチレン、ヘキシレン等）基等が含まれる。アリーレン基としては、炭素数４〜８のアリーレン（フランジイル、フェニレン、トルエンジイル、キシレンジイル等）基等が含まれる。
【００４８】
脂肪族ポリアミン（ＰＡ）としては、アルキレンジアミン（エチレンジアミン、プロピレンジアミン、トリメチレンジアミン、テトラメチレンジアミン及びヘキサメチレンジアミン等）、アルキレン基の炭素数が２〜６であるポリアルキレンポリアミン（ジエチレントリアミン、イミノビスプロピルアミン、トリエチレンテトラミン、テトラエチレンペンタミン及びペンタエチレンヘキサミン等）、これらのアルキル（炭素数１〜１８）置換体（ジメチルアミノプロピルアミン、ジエチルアミノプロピルアミン、ジプロピルアミノプロピルアミン、メチルエチルアミノプロピルアミン、トリメチルヘキサメチレンジアミン、Ｎ，Ｎ−ジオクタデシルエチレンジアミン、トリオクタデシルエチレンジアミン及びメチルイミノビスプロピルアミン等）、ポリエチレンイミン、ポリ（エチレンイミン・Ｎ−メチルエチレンアミン）、ポリ（Ｎ−メチルエチレンアミン）、ポリ（エチレンイミン・Ｎ−エチルエチレンアミン）、ポリプロピレンイミン、ポリブチレンイミン、ポリ（エチレンイミン・プロピレンイミン）、ポリ（エチレンイミン・ヘキシレンイミン）等が含まれる。
【００４９】
芳香族アミン（ＰＡｒ）としては、フェニレンジアミン、Ｎ，Ｎ’−ジメチルフェニレンジアミン、Ｎ，Ｎ，Ｎ’−トリメチルフェニレンジアミン、ジフェニルメタンジアミン、２，６−ジアミノピリジン、トリレンジアミン、ジエチルトリレンジアミン、４，４’−ビス（メチルアミノ）ジフェニルメタン、１−メチル−２−メチルアミノ−４−アミノベンゼン、ポリフェニレンイミン、ポリ（フェニレンイミン・エチレンイミン）、ポリフランジイルイミン、ポリ（フランジイルイミン・エチレンイミン）等が含まれる。
化合物（ＡＭ）は、１種又は２種以上を用いることができる。
これらの脂肪族ポリアミン（ＰＡ）及び芳香族ポリアミン（ＰＡｒ）のうち、（ＰＡ）が好ましく、さらに好ましくはポリエチレンイミンである。
【００５０】
脂肪族ポリアミン（ＰＡ）及び芳香族ポリアミン（ＰＡｒ）は、次の（１）〜（４）に示すような公知の方法等で製造できる。
（１）アルキレンイミン（エチレンイミン、プロピレンイミン等）を触媒（二酸化炭素、塩酸、臭化水素酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、塩化アルミニウム、三フッ化ホウ素等）の存在下に開環重合する方法。
（２）ハロゲン化アルキレン及び／又はハロゲン化アリーレン（例えば、塩化エチレン、臭化プロピレン等）と、アルキレンジアミン及び／又はアリーレンジアミン（例えば、エチレンジアミン、プロピレンジアミン等）とを重縮合反応する方法。
（３）アキサゾリドン−２等を加熱する方法。
（４）生体から抽出する方法。
【００５１】
本発明の創傷被覆材は、細胞接着性最小アミノ酸配列（Ｘ）を１分子中に少なくとも１個有するポリペプチド（ＸＭ）をさらに有していてもよい。
ポリペプチド（ＸＭ）に細胞接着性最小アミノ酸配列（Ｘ）を含有すると、細胞接着活性が増大し、細胞（特に皮膚細胞）の接着を促進し、接着した細胞が増殖し、創傷治癒促進が可能となる。
【００５２】
この最小アミノ酸配列（Ｘ）の含有個数は、細胞接着・増殖性の観点等から、ポリペプチド（ＸＭ）１分子中に、１〜５０が好ましく、さらに好ましくは３〜３０、特に好ましくは４〜２０である。この範囲であると、細胞接着活性がさらに高く、細胞（特に皮膚細胞）の増殖をさらに容易に促進できる。
【００５３】
細胞接着性最小アミノ酸配列（X)としては、接着シグナルとして働くものであればいずれも使用でき、例えば、株式会社永井出版発行「病態生理」Ｖｏｌ．９、Ｎｏ．７、１９９０年、５２７頁に記載されているもの等が使用できる。
【００５４】
これらのうち、接着しやすい細胞の種類が多いという観点等から、Arg Gly Asp配列、Leu Asp Val配列、Leu Arg Glu配列、His Ala Val配列、Arg Glu Asp Val配列（１）、Tyr Ile Gly Ser Arg配列（２）、Pro Asp Ser Gly Arg配列（３）、Arg Tyr Val Val Leu Pro Arg配列（４）、Leu Gly Thr Ile Pro Gly配列（５）、Arg Asn Ile Ala Glu Ile Ile Lys Asp Ile配列（６）、Ile Lys Val Ala Val配列（７）及びAsp Gly Glu Ala配列（８）が好ましく、さらに好ましくはArg Gly Asp配列、His Ala Val配列及びIle Lys Val Ala Val配列（７）、特に好ましくはArg Gly Asp配列である。
【００５５】
ポリペプチド（ＸＭ）は、細胞接着性最小アミノ酸配列（X)以外に、ポリペプチド（ＸＭ）の熱安定性向上の観点等から、補助アミノ酸配列（Ｙ）を有することが好ましい。
【００５６】
補助アミノ酸配列（Ｙ）としては、最小アミノ酸配列（Ｘ）以外のアミノ酸配列が使用でき、ポリペプチド（ＸＭ）の耐熱性向上の観点等から、Gly 及び／又はAlaを有する配列が好ましい。
補助アミノ酸配列（Y）としては、（Gly Ala）a 配列、（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）b配列、（Gly Ala Gly Ala Gly Tyr）c配列、（Gly Ala Gly Val Gly Tyr）ｄ配列、（Gly Ala Gly Tyr Gly Val）e配列、｛Asp Gly Gly (Ala)f Gly Gly Ala｝g配列、（Gly Val Pro Gly Val）h配列、（Gly）i配列、（Ala）j配列、（Gly Gly Ala）k配列、（Gly Val Gly Val Pro）ｍ配列、（Gly Pro Pro）ｎ配列、（Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly）ｏ配列、（Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Ser Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln）ｐ配列及び／又は（Gly Ala Pro Gly Thr Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Ser Pro）ｑ配列を有する配列等が含まれる。これらのうち、（Gly Ala）a配列、（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）b配列、（Gly Ala Gly Ala Gly Tyr）c配列、（Gly Ala Gly Val Gly Tyr）d配列、（Gly Ala Gly Tyr Gly Val）e、｛Asp Gly Gly (Ala)f Gly Gly Ala｝g配列、（Gly Val Pro Gly Val）h配列、（Gly Val Gly Val Pro）ｍ配列及び／又は（Gly Pro Pro）ｎ配列を有するものが好ましく、さらに好ましくは（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）b配列、（Gly Val Pro Gly Val）h配列、（Gly Val Gly Val Pro）ｍ配列及び／又は（Gly Pro Pro）ｎ配列を有するもの、特に好ましくは（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）b配列を有するものである。
なお、aは５〜１００の整数、b、ｃ、ｄ及びｅは２〜３３の整数、fは１〜１９４の整数、ｇは｛１｝〜｛２００／（６＋ｆ）｝の小数点以下を切り捨てした整数、hは２〜４０の整数、i及びjは１０〜２００の整数、kは３〜６６の整数、ｍは２〜４０の整数、ｎは３〜６６の整数、ｏは１〜２２の整数、ｐ及びｑは１〜１３の整数である。
【００５７】
補助アミノ酸配列（Ｙ）は、グリシン(Gly)及び／又はアラニン(Ala)を含むことが好ましい。グリシン（Gly）及びアラニン（Ala）を含む場合、これらの合計含有割合（％）は、補助アミノ酸配列（Ｙ）の全アミノ酸個数に基づいて、１０〜１００が好ましく、さらに好ましくは２０〜９５、特に好ましくは３０〜９０、最も好ましくは４０〜８５である。この範囲であると、耐熱性がさらに良好となる。
グリシン（Gly）及びアラニン（Ala）の両方を含む場合、これらの含有個数割合（Gly／Ala）は、０．０３〜４０が好ましく、さらに好ましくは０．０８〜１３、特に好ましくは０．２〜５である。この範囲であると、耐熱性がさらに良好となる。
【００５８】
補助アミノ酸配列（Ｙ）を含む場合、（Ｙ）の含有個数は、耐熱性向上の観点等から、ポリペプチド（ＸＭ）1分子中に、２〜５１が好ましく、さらに好ましくは３〜３５、特に好ましくは４〜２０である。また、ポリペプチド（ＸＭ）は、２種以上の補助アミノ酸配列（Ｙ）を含んでもよい。
【００５９】
（Gly Ala）a配列を有する補助与アミノ酸配列としては、配列番号（９）〜（１１）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）b配列を有する補助アミノ酸配列としては、配列番号（１２）〜（１４）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Ala Gly Ala Gly Tyr）c配列を有する補助アミノ酸配列としては、配列番号（１５）〜（１７）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Ala Gly Val Gly Tyr）d配列を有する補助アミノ酸配列としては、配列番号（１８）〜（２０）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Ala Gly Tyr Gly Val）e配列を有する補助アミノ酸配列としては、配列番号（２１）〜（２３）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
｛Asp Gly Gly (Ala)f Gly Gly Ala｝g配列を有する補助アミノ酸配列としては、配列番号（２４）〜（２６）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Val Pro Gly Val）h配列を有する補助アミノ酸配列としては、配列番号（２７）〜（２９）及び（５４）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly）i配列を有する補助アミノ酸配列としては、配列番号（３０）〜（３２）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Ala）j配列を有する補助アミノ酸配列としては、配列番号（３３）〜（３５）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Gly Ala）k配列を有する補助アミノ酸配列としては、配列番号（３６）〜（３８）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Val Gly Val Pro）ｍ配列を有する補助アミノ酸配列としては、配列番号（３９）〜（４１）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Pro Pro）ｎ配列を有する補助アミノ酸配列としては、配列番号（４２）〜（４４）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Ala Gln Gly Pro Ala Gly Pro Gly）ｏ配列を有する補助アミノ酸配列としては、配列番号（４５）〜（４７）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Ala Pro Gly Ala Pro Gly Ser Gln Gly Ala Pro Gly Leu Gln）ｐ配列を有する補助アミノ酸配列としては、配列番号（４８）〜（５０）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
（Gly Ala Pro Gly Thr Pro Gly Pro Gln Gly Leu Pro Gly Ser Pro）ｑ配列を有する補助アミノ酸配列としては、配列番号（５１）〜（５３）で表されるアミノ酸配列等が挙げられる。
【００６０】
これらの配列番号のうち、（９）、（１０）、（１２）、（１３）、（１４）、（１５）、（１６）、（１８）、（１９）、（２１）、（２２）、（２４）、（２５）、（２６）、（２７）、（２８）、（３０）、（３１）、（３３）、（３４）、（３６）、（３７）、（３９）、（４０）、（４２）、（４３）、（４５）、（４６）、（４８）、（４９）、（５１）、（５２）及び（５４）が好ましく、さらに好ましくは（１０）、（１２）、（１３）、（１４）、（１６）、（１９）、（２２）、（２６）、（２７）、（２８）、（２９）、（３１）、（３４）、（３７）、（４０）、（４３）、（４６）、（４９）、（５２）及び（５４）、特に好ましくは（１２）、（１３）及び（５４）である。
【００６１】
ポリペプチド（ＸＭ）は、分岐鎖を含んでいてもよく、一部が架橋されていてもよく、環状構造を含んでいてもよい。しかし、ポリペプチド（ＸＭ）は、架橋されていないことが好ましく、さらに好ましくは架橋されていない直鎖構造（環状構造を含んでいてもよい）、特に好ましくは環状構造を持たず架橋されていない直鎖構造である。なお、直鎖構造には、β構造（直鎖状ペプチドが折れ曲がってこの部分同士が平行に並び、その間に水素結合が作られる二次構造）も含まれる。
【００６２】
ポリペプチド（ＸＭ）は、細胞接着性及び耐熱性の観点等から、最小アミノ酸配列（Ｘ）と補助アミノ酸配列（Ｙ）とが交互に化学結合してなる構造であることが好ましい。この場合、最小アミノ酸配列（Ｘ）と補助アミノ酸配列（Ｙ）との繰り返し単位（Ｘ−Ｙ）の数（個）は、細胞接着性の観点等から、２〜５０が好ましく、さらに好ましくは３〜４０、特に好ましくは４〜３０、最も好ましくは５〜２０である。
また、最小アミノ酸配列（Ｘ）と補助アミノ酸配列（Ｙ）との含有個数は同じでも異なっていてもよい。異なっている場合は、いずれかの含有個数が他方の含有個数より１個少ないことが好ましい｛この場合、補助アミノ酸配列（Ｙ）が少ないことが好ましい｝。ポリペプチド（ＸＭ）中の最小アミノ酸配列（Ｘ）と補助アミノ酸配列（Ｙ）との含有個数割合（Ｘ／Ｙ）は、０．５〜２が好ましく、さらに好ましくは０．９〜１．４、特に好ましくは１〜１．３である。
また、ポリペプチド（ＸＭ）の末端部分（最小アミノ酸配列（Ｘ）又は補助アミノ酸配列（Ｙ）からペプチド末端まで）に他のアミノ酸を含んでもよい。他のアミノ酸を含む場合、その含有個数は、ポリペプチド（ＸＭ）１個当たり、１〜１０００個が好ましく、さらに好ましくは３〜３００、特に好ましくは１０〜１００である。
【００６３】
ポリペプチド（ＸＭ）の数平均分子量（Ｍｎ）は、１，０００〜１，０００，０００が好ましく、さらに好ましくは２，０００〜７００，０００、特に好ましくは３，０００〜４００，０００、最も好ましくは４，０００〜２００，０００である。
なお、ポリペプチド（ＸＭ）の数平均分子量（Ｍｎ）は、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ（ＳＤＳポリアクリルアミドゲル電気泳動）法により、測定サンプル｛ポリペプチド等｝を分離し、泳動距離を標準物質と比較する方法等の公知の方法によって求められる（以下、同じ）。
【００６４】
好ましいポリペプチド（ＸＭ）の一部を以下に例示する。
（１）最小アミノ酸配列（Ｘ）がArg Gly Asp配列（ｘ１）の場合
（ｘ１）の１３個と（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）9配列（１３）（ｙ１）の１３個とを有し、これらが交互に化学結合してなる構造を有するＭｎ約１１万のポリペプチド（「プロネクチンＦ」、プロネクチン：三洋化成工業（株）の登録商標（日本及び米国）、三洋化成工業（株）製＜以下同じ＞）；
（ｘ１）の５個と（Gly Ala Gly Ala Gly Ser）3配列（１２）（ｙ２）の５個とを有しこれらが交互に化学結合してなる構造を有するＭｎ約２万のポリペプチド（「プロネクチンＦ２」）；
（ｘ１）の３個と（Gly Val Pro Gly Val）2 Gly Gly （Gly Ala Gly Ala Gly Ser）3配列（５４）（ｙ３）の３個とを有しこれらが交互に化学結合してなる構造を有するＭｎ約１万のポリペプチド（「プロネクチンＦ３」）等。
【００６５】
（２）最小アミノ酸配列（Ｘ）がIle Lys Val Ala Val配列（ｘ２）の場合
プロネクチンＦ、プロネクチンＦ２又はプロネクチンＦ３のArg Gly Asp配列（ｘ１）をIle Lys Val Ala Val配列（７）（ｘ２）に変更した「プロネクチンＬ」、「プロネクチンＬ２」、又は「プロネクチンＬ３」等。
【００６６】
（３）最小アミノ酸配列（Ｘ）がTyr Ile Gly Ser Arg配列（ｘ３）の場合
プロネクチンＦ、プロネクチンＦ２又はプロネクチンＦ３のArg Gly Asp配列（ｘ１）をTyr Ile Gly Ser Arg配列（ｘ３）に変更した「プロネクチンＹ」、「プロネクチンＹ２」、又は「プロネクチンＹ３」等。
【００６７】
また、（１）〜（３）のポリペプチドの他、宝酒造（株）製ＲｅｔｒｏＮｅｃｔｉｎ（リコンビナントヒトフィブロネクチンＣＨ−２９６）｛最小アミノ酸配列（Ｘ）としてArg Gly Asp配列（ｘ１）及びLeu Asp Val配列を含有するＭｎ約6万のポリペプチド｝、同ＲＧＤＳ−Ｐｒｏｔｅｉｎ Ａ｛最小アミノ酸配列（Ｘ）としてArg Gly Asp配列（ｘ１）を含有するＭｎ約３万のポリペプチド｝も好ましく使用できる｛ただし、これらのポリペプチドは天然に由来し、補助アミノ酸配列（Ｙ）が含まれていない。よって、耐熱性等が上記の（１）〜（３）よりも劣る。また、これらのポリペプチドのアミノ酸配列は特開平２−３１１４９８号に開示されている。｝。
【００６８】
ポリペプチド（ＸＭ）の製造方法は特に制限されず、ペプチドを合成する従来既知の方法と同様にして製造することができ、例えば、有機合成法（固相合成法、液相合成法等）及び生化学的合成法［遺伝子組換微生物（酵母、細菌、大腸菌等）］等によって合成することができる。有機合成法に関しては、例えば、日本生化学学会編「続生化学実験講座２、タンパク質の化学（下）」第６４１〜６９４頁（昭和６２年５月２０日；株式会社東京化学同人発行）に記載されている方法等が用いられる。生化学的合成法に関しては、例えば、特表平３−５０２９３５号公報に記載されている方法等が用いられる。高分子量のポリペプチド（ＸＭ）を容易に合成できる点で、遺伝子組換微生物による生化学的合成法が好ましく、特に好ましくは遺伝子組換大腸菌を用いて合成する方法である。
【００６９】
化合物（ＡＭ）及び／又はポリペプチド（ＸＭ）は、細胞との接触を容易にするため、その全て又は一部が単層フィルム（Ｓ）の表面に存在していることが好ましく、さらに好ましくは（ＡＭ）及び／又は（ＸＭ）の全てが単層フィルム（Ｓ）表面に存在していることである。
【００７０】
本発明の創傷被覆材が、官能基（Ａ）を含む化合物（ＡＭ）及び／又はポリペプチド（ＸＭ）を有する場合、単層フィルム（Ｓ）を製造してから、官能基（Ａ）を含む化合物（ＡＭ）及び／又はポリペプチド（ＸＭ）を（Ｓ）の表面に結合させる方法（１）、又は官能基（Ａ）を含む化合物（ＡＭ）及び／又はポリペプチド（ＸＭ）と、単層フィルム（Ｓ）の原材料とを混合してから、単層フィルム化する方法（２）等により製造できる。
方法（１）において、単層フィルム（Ｓ）は公知の方法を用いて作製することができ、例えば、（ａ）単層フィルム（Ｓ）の原料を溶融又は溶液にし、これを剥離紙上に塗工し乾燥させて得たフィルム、又は射出成形により得たフィルムを、エンボス加工装置｛例えば、エンボスター（サイトウエンヂニアーズ株式会社製）等｝等を用いて、フィルム表面に凹凸を形成することにより単層フィルム（Ｓ）を得る方法、（ｂ）単層フィルム（Ｓ）の原料を溶融又は溶液にし、これと微粒子とを混合し、この混合物を塗工機を用いて剥離紙上に塗工し、又はこの混合物を射出成形し、表面に凹凸を有する単層フィルム（Ｓ）を得る方法、（ｃ）単層フィルム（Ｓ）の原料を分散液又は溶液にし、これを漉き（すき）、乾燥することにより、表面に凹凸を有する単層フィルム（Ｓ）を得る方法等が適用できる。
【００７１】
原料を溶液にする場合、溶媒は原料を均一な溶液又は乳化状態にできれば特に制限されないが、例えばウレタン樹脂の場合、イソプロピルアルコール、メチルエチルケトン及びトルエン等の有機溶剤等が使用でき、乳化性のあるウレタン樹脂の場合は水等を溶媒として乳化液にすることができる。溶媒を水とする場合、必要に応じて乳化剤その他の添加剤を使用してもよい。有機溶剤を用いる場合、２種以上の有機溶剤を用いてもよい。
原料を分散液にする場合、分散媒は原料を均一な分散状態にできれば特に制限されないが、上記の有機溶剤及び水等が使用できる。
塗工するための装置としては、ロールコーター（サイズプレス、ゲートロールコーター等）、バーコーター（Ｋペイントアプリケーター；松尾産業株式会社製等）、グラビアコーター、エアナイフコーター、ブレードコーター等の塗工機等が使用できる。
剥離紙としては、作製したフィルムと容易に剥離できるものなら特に制限はなく、例えば、ポリプロピレン、ポリエチレン又は紙に剥離剤を表面コーティングを施したもの（ＥＶ１３０ＴＰＤ；リンテック株式会社製等）等が挙げられる。
塗工量は、乾燥後の重量として５０〜４５０ｇ／ｍ2が好ましく、さらに好ましくは１００〜３００ｇ／ｍ2である。
乾燥は、室温乾燥或いは熱風乾燥等によって行われる。乾燥温度は２０〜２００℃が好ましく、さらに好ましくは７０〜１５０℃である。
【００７２】
フィルム表面に凹凸を形成するための装置として、エンボス加工装置によるほかに、サンドブラスト処理（硬質の微粒子をフィルム表面に衝突させて凹凸を形成する方法）、酸又はアルカリで表面をエッチングする化学的方法等も適用できる。
漉く（すく）方法は、和紙や洋紙等の抄紙方法と同様の方法等が適用できる。
【００７３】
本発明の創傷被覆材がポリペプチド（ＸＭ）を有してなる場合、ポリペプチド（ＸＭ）と単層フィルム（Ｓ）とは、化学結合（イオン結合、水素結合及び／又は共有結合等）及び／又は物理吸着（ファンデルワールス力による吸着等）によって結合することができる。
【００７４】
ポリペプチド（ＸＭ）と単層フィルム（Ｓ）とを共有結合させる方法としては、以下の（１）〜（３）等が適用できる。
（１）ポリペプチド（ＸＭ）のうち１級アミノ基又は２級アミノ基を有するもの｛アルギニン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、フェニルアラニン、スレオニン、トリプトファン、チロシン、バリン、アラニン、アスパラギン、アスパラギン酸、グルタミン、グルタミン酸、プロリン、システイン、リシン、セリン、グリシン、オルニチン、ヒスチジン、３−アミノプロピオン酸、８−アミノオクタン酸及び／又は２０−アミノエイコサン酸を構成単位として含むポリペプチド等｝と、単層フィルム（Ｓ）のうちカルボキシル基を有するもの（ポリグリコール酸、細胞接着性最小アミノ酸配列（Ｘ）を含まない合成ポリペプチド、ポリエチレン又はポリプロピレンのマレイン酸変性物、エチレン−（メタ）アクリル酸共重合体、ポリアクリル酸、コラーゲン、ゼラチン、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸、ヘパリン、エラスチン、フィブリン、アルギン酸、アルブミン、ペクチン、ペクチン酸、グルテン及び／又はフィブロインからなるフィルム等）とを反応させる方法（アミド結合させる方法）。
【００７５】
（２）ポリペプチド（ＸＭ）のうち１級アミノ基又は２級アミノ基を有するものと、単層フィルム（Ｓ）のうちヒドロキシル基を有するもの（ヒドロキシル基を含むフィルムには特に制限はないが、例えば、ポリグリコール酸、エチレン−ビニルアセテート共重合体、ポリウレタン、ポリエステル、セルロース、ビスコースレーヨン、キュプラレーヨン、ポリアセテート、ビニロン、コラーゲン、ゼラチン、グリコサミノグリカン、ヒアルロン酸、コンドロイチン硫酸、ケラタン硫酸、デルマタン硫酸、ヘパリン、エラスチン、キチン、キトサン、フィブリン、アルギン酸、デンプン、デキストラン、アルブミン、ポリヒドロキシ酪酸、ペクチン、ペクチン酸、ガラクタン、プルラン、アガロース、グルテン及び／又はフィブロインからなるフィルム等）とを反応させる方法（Ｎ−Ｃ結合させる方法）。
【００７６】
（３）ポリペプチド（ＸＭ）のうちヒドロキシル基を有するもの（アスパラギン酸、グルタミン酸、セリン、トレオニン、チロシン、チロニン及び／又はヒドロキシプリンを構成単位として含むポリペプチド等）と、単層フィルム（Ｓ）のうちカルボキシル基を有するものとを反応させる方法（エステル結合させる方法）。
【００７７】
これらの反応は公知の方法（「ペプチド合成の基礎と実験、平成９年１０月５日、丸善株式会社発行」に記載の方法等）で行うことができる。具体的には、以下の（１）〜（３）の通りである。
（１）ポリペプチド（ＸＭ）のうち１級アミノ基又は２級アミノ基を有するものと単層フィルム（Ｓ）のうちカルボキシル基を有するものとを反応させる場合、単層フィルム（Ｓ）のカルボキシル基を予めカルボジイミド化合物と反応させ、アシルイソ尿素｛Ｒ’−Ｎ＝Ｃ（ＯＣＯＲ）−ＮＨ−Ｒ’（−ＯＣＯＲが単層フィルム（Ｓ）に由来する部分）｝を得た後、ポリペプチド（ＸＭ）のうち１級アミノ基又は２級アミノ基を有するものをこのアシルイソ尿素に加えることによって、単層フィルム（Ｓ）とポリペプチド（ＸＭ）とをアミド結合できる。
カルボジイミド化合物としては、Ｎ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩等が挙げられる。
【００７８】
（２）ポリペプチド（ＸＭ）のうち１級アミノ基又は２級アミノ基を有するものと単層フィルム（Ｓ）のうちヒドロキシル基を有するものとを反応させる場合、単層フィルム（Ｓ）のヒドロキシル基を予めカルボニルジイミダゾール化合物と反応させ、イミダゾール誘導体｛Ｒ−Ｉｍ、Ｉｍはイミダゾリン環、Ｒが単層フィルム（Ｓ）に由来｝を得た後、ポリペプチド（ＸＭ）のうち１級アミノ基又は２級アミノ基を有するものをこのイミダゾール誘導体に加えることによって、単層フィルム（Ｓ）とポリペプチド（ＸＭ）とをＮ−Ｃ結合できる。
カルボニルジイミダゾール化合物としては、Ｎ，Ｎ’−カルボニルジイミダゾール等が挙げられる。
【００７９】
（３）ポリペプチド（ＸＭ）のうちヒドロキシル基を有するものと単層フィルム（Ｓ）のうちカルボキシル基を有するものとを反応させる場合、単層フィルム（Ｓ）のカルボキシル基を予めカルボジイミド化合物と反応させ、アシルイソ尿素を得た後、ポリペプチド（ＸＭ）のうちヒドロキシル基を有するものをこのアシルイソ尿素に加えることによって、単層フィルム（Ｓ）とポリペプチド（ＸＭ）とをエステル結合できる。
【００８０】
ポリペプチド（ＸＭ）を単層フィルム（Ｓ）に、物理吸着、イオン結合及び／又は水素結合させる方法としては、溶媒等にポリペプチド（ＸＭ）と（Ｓ）とを投入し、混合して作製する方法等が挙げられる。溶媒としては特に制限はないが、無機塩、有機酸塩、酸及び／又は塩基を０．００１〜５０重量％（好ましくは０．０１〜１０重量％）含有する水溶液等が使用できる。
【００８１】
無機塩としては、ハロゲン化金属塩、硫酸金属塩、リン酸金属塩、リン酸水素金属塩、硝酸金属塩、炭酸金属塩、過ハロゲン酸金属等が含まれ、具体的には、例えば、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム、リン酸ナトリウム、塩化カルシウム、硝酸鉄、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、炭酸ナトリウム、リン酸水素ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸水素カリウム、硫酸銅、硫酸鉄、塩化リチウム、臭化ナトリウム、臭化リチウム、過塩素酸ナトリウム、過塩素酸リチウム等が挙げられる。
有機酸塩としては、蟻酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、酢酸リチウム、酒石酸ナトリウム等が挙げられる。
酸としては、無機酸、炭素数１〜６の有機酸等が含まれ、具体的には、例えば、塩酸、燐酸、酢酸、蟻酸、フェノール、硫酸が挙げられる。
塩基としては、無機塩基、炭素数２〜６の有機塩基等が含まれ、具体的には、例えば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、アンモニア、トリエチルアミンが挙げられる。
水としては、蒸留水、イオン交換水、水道水、イオン交換蒸留水等が挙げられる。
これらの溶媒の中で、無機塩、酸及び／又は塩基を含有する水溶液、水が好ましく、さらに好ましくは無機塩、酸及び／又は塩基を含有する水溶液である。
【００８２】
ポリペプチド（ＸＭ）と単層フィルム（Ｓ）とが強固に結合される点で、化学結合が好ましく、さらに好ましくは共有結合である。
【００８３】
創傷被覆材にポリペプチド（ＸＭ）を有する場合、この含有量は、創傷治癒促進の観点等から、１ｃｍ×１ｃｍの正方形状単層フィルム（Ｓ）あたり、０．１ｎｇ／ｃｍ2〜１００ｍｇ／ｃｍ2が好ましく、さらに好ましくは１ｎｇ／ｃｍ2〜１０ｍｇ／ｃｍ2、特に好ましくは１０ｎｇ／ｃｍ2〜１ｍｇ／ｃｍ2、最も好ましくは１００ｎｇ／ｃｍ2〜１００μｇ／ｃｍ2である。
【００８４】
１ｃｍ×１ｃｍの正方形状単層フィルム（Ｓ）あたりのポリペプチド（ＸＭ）の含有量の測定方法は特に限定されないが、例えば、免疫学的測定法が利用できる。本発明において、１ｃｍ×１ｃｍの正方形状単層フィルム（Ｓ）あたりのポリペプチド（ＸＭ）の含有量は、創傷被覆材の表面の一部（例えば、１ｃｍ×１ｃｍの正方形状）を切り取りとった試験片と、ポリペプチド（ＸＭ）と結合する抗体に酵素を標識したものとを反応させ、反応した酵素標識抗体の酵素量を測定することにより得られる値によって示される。
【００８５】
酵素標識抗体は通常、酵素と特異抗体とを化学結合させたもの（公知の方法で化学結合できる）である。酵素（ペルオキシダーゼ、β−Ｄ−ガラクトシダーゼ、アルカリホスファターゼ、グルコース−６−リン酸脱水素酵素等）と特異抗体とをグルタルアルデヒド法、過ヨウ素酸法、マレイミド法、ピリジルジスルフィド法等によって化学結合させる方法等（超高感度酵素免疫測定法、石川榮治著、株式会社学会出版センター、１９９３年；エンザイムイムノアッセイ、石川榮治訳、株式会社東京化学同人、１９８９年；及び酵素抗体法、渡辺慶一ら編、学際企画株式会社、１９９２年）が適用できる。
【００８６】
また、特異抗体はポリペプチド（ＸＭ）に特異的に結合する抗体｛公知の方法；ポリクローナル抗体作製法及びモノクローナル抗体作製法（エンザイムイムノアッセイ、石川榮治訳、株式会社東京化学同人、１９８９年；及び酵素抗体法、渡辺慶一ら編、学際企画株式会社、１９９２年）等が適用できる｝である。尚、特異抗体の交差反応性抗原に対する親和定数は小さいほど好ましい。例えば、特異抗体のポリペプチド（ＸＭ）への親和定数を１とした場合、交差反応性抗原に対する親和定数は、１以下が好ましく、さらに好ましくは０．１以下、特に好ましくは０．０１以下である。この親和定数はエンザイムイムノアッセイ（石川榮治訳、株式会社東京化学同人、１９８９年）に記載の方法で得ることが出来る。
【００８７】
化合物（ＡＭ）を用いる場合、化合物（ＡＭ）は、単層フィルム（Ｓ）及び／又はポリペプチド（ＸＭ）に結合されていることが好ましい。
【００８８】
化合物（ＡＭ）を単層フィルム（Ｓ）及び／又はポリペプチド（ＸＭ）に結合する方法としては、化学反応させる方法、物理吸着させる方法｛前述のポリペプチド（ＸＭ）と単層フィルム（Ｓ）との結合方法と同様の方法｝等が適用できる。
【００８９】
創傷被覆材に化合物（ＡＭ）を有する場合、この含有量（個／ｃｍ2）は、創傷治癒促進の観点から、１ｃｍ×１ｃｍの正方形状単層フィルム（Ｓ）あたりのアミノ基の平均個数として、１０8〜１０22が好ましく、さらに好ましくは１０10〜１０20である。
【００９０】
アミノ基の平均個数は、公知の方法、たとえば、トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）法｛タンパク質の化学ＩＶ（東京化学同人発行、１９８１年）等｝や塩酸・指示薬（ブロムフェノールブルー等）滴定法による全アミン価測定法（ＪＩＳ  Ｋ７２３７−１９８６や、ＡＳＴＭ  Ｄ２０７４−６６等）等によって測定できる。
【００９１】
本発明において、具体的には、１ｃｍ×１ｃｍの正方形状単層フィルム（Ｓ）あたりのアミノ基の平均個数（個／ｃｍ2）は、以下のようにして測定される。アミノ基の個数が既知の化合物（ＡＭ）又は（ＡＭ）の溶液についての検量線（アミノ基の個数と吸光度のグラフ）をＴＮＢＳ法により作製する。
【００９２】
創傷被覆材の表面の一部（例えば、１ｃｍ×１ｃｍの正方形状）を切り取りとった試験片の吸光度は、ＴＮＢＳ法により測定され、検量線を用いてアミノ基の個数に換算される。
【００９３】
本発明の創傷被覆材は、必要に応じて滅菌処理を施してもよい。滅菌方法としては、放射線、エチレンオキサイドガス、プラズマ、γ線、アルコール、オートクレーブ、乾熱等を用いた滅菌方法が適用できる。これらは、１種の方法のみで行ってもよいし、２種以上を組み合わせてもよい。
【００９４】
本発明の創傷被覆材の創傷面への適用としては、創傷面に被覆できれば制限なく適用でき、例えば、接着剤若しくは粘着剤付きのカバー、包帯、伸縮自在メッシュ又は眼帯等を用いて固定してもよく、縫合又は接着してもよい。また、創傷が潰瘍等の慢性創傷の場合、黄色期から赤色期の創傷への適用が好ましく、また創傷が熱傷や外傷性皮膚欠損症等の急性創傷の場合、炎症期から肉芽形成期の創傷への適用が好ましい。
本発明の創傷被覆材は、ヒトの外傷部位、熱傷部位、褥瘡部位、潰瘍部位及び採皮部位等の皮膚欠損部位のほか、縫合部位及びカテーテル等の穿刺部位等のヒト体表部位に適用できる。
【００９５】
本発明の創傷被覆材に適用できる細胞としては、ヒト由来の細胞が適しており、例えば、皮膚に関与する細胞（上皮細胞、線維芽細胞、血管内皮細胞及び平滑筋細胞等）、血管に関与する細胞（血管内皮細胞、平滑筋細胞及び線維芽細胞等）、筋肉に関与する細胞（筋肉細胞等）、脂肪に関与する細胞（脂肪細胞等）、神経に関与する細胞（神経細胞等）、肝臓に関与する細胞（肝実質細胞等）、膵臓に関与する細胞（膵ラ島細胞等）、腎臓に関与する細胞（腎上皮細胞、近位尿細管上皮細胞及びメサンギウム細胞等）、肺・気管支に関与する細胞（上皮細胞、線維芽細胞、血管内皮細胞及び平滑筋細胞等）、目に関与する細胞（視細胞、角膜上皮細胞及び角膜内皮細胞等）、前立腺に関与する細胞（上皮細胞、間質細胞及び平滑筋細胞等）、骨に関与する細胞（骨芽細胞、骨細胞及び破骨細胞等）、軟骨に関与する細胞（軟骨芽細胞及び軟骨細胞等）、歯に関与する細胞（歯根膜細胞及び骨芽細胞等）、血液に関与する細胞（白血球及び赤血球等）、及び幹細胞｛例えば、骨髄未分化間葉系幹細胞、骨格筋幹細胞、造血系幹細胞、神経幹細胞、肝幹細胞（oval cell、small hepatocyte等）、脂肪組織幹細胞、胚性幹（ＥＳ）細胞、表皮幹細胞、腸管幹細胞、精子幹細胞、胚生殖幹（ＥＧ）細胞、膵臓幹細胞（膵管上皮幹細胞等）、白血球系幹細胞、リンパ球系幹細胞、角膜系幹細胞、前駆細胞（脂肪前駆細胞、血管内皮前駆細胞、軟骨前駆細胞、リンパ球系前駆細胞、ＮＫ前駆細胞等）等｝等が挙げられる。これらの細胞は、本発明の創傷被覆材をインビトロで細胞培養するための基材として使用する際にも好適に適用できる。
【実施例】
【００９６】
以下に実施例を掲げて本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれら実施例のみに限定されるものではない。なお、特記しない限り％は重量％を意味する。
＜実施例１＞
＜単層フィルム(Ｓ１)の準備＞
ウレタンエマルション（商品名：パーマリンＵＡ２００、三洋化成工業株式会社製）の６．６７ｇとイオン交換水の３．３３ｇを混合し、ウレタンエマルションを調製した。このウレタンエマルションと、１２ナイロンビーズ（商品名：マイクロコンポジットスフェア、ＴＲＩアドバンストラボラトリー社製、直径１５０μｍ〜２５０μｍ）の６．６７ｇを、混合し、縦２０ｃｍ×横２０ｃｍ×厚さ１ｍｍのポリプロピレンシート（株式会社メディカルエイジェント製）上に均一に広げ、膜厚が３００μｍになるように、両端に３００μｍの高さにビニールテープを巻いたガラス棒を用いてキャストし、室温（約２５℃）に放置した。室温放置後２４時間後に、循風乾燥機中で１２０℃、１時間乾燥した。乾燥後、ポリプロピレンシート上に形成されたウレタンフィルムを、ポリプロピレンシートから剥離し、単層フィルム（Ｓ１）を得た。
乾燥後膜厚をデジタル膜厚計で測定したところ、フィルムの平均膜厚は５８μｍであった。また、算術平均粗さ（Ｒａ）は４０μｍ、輪郭曲線要素の平均長さ（ＲＳｍ）は３００μｍであった。
【００９７】
＜細胞接着性ポリペプチド（Ｐ２−１）の準備＞
特表平３−５０２９３５号公報中の実施例記載の方法に準じて、Arg Gly Asp配列（１）と(Gly Ala Gly Ala Gly Ser)９配列（４７）とを各々約１３個有し、数平均分子量約１０万のペプチド”ＳＬＰＦ”を遺伝子組み換え大腸菌により製造し、カラムクロマトグラフィーにて精製して細胞接着性ポリペプチド（Ｐ２−０）を得た。さらに、この（Ｐ２−０）をオートクレーブ滅菌（１２０℃、２０分）することにより、細胞接着性ポリペプチド（Ｐ２−１）を得た。
【００９８】
＜創傷被覆材（Ｈ１）の調製＞
１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（シグマ社製）の０．４７９ｇを５０ｍＬのイオン交換水に溶解し、カルボジイミド水溶液を作製した。このカルボジイミド水溶液の５０ｍＬと単層フィルム（Ｓ１）の１０ｃｍ×１０ｃｍとをガラスシャーレに投入し、２５℃で１時間静置した。その後、１００ｍＬの脱イオン水で５回洗浄した。次に、細胞接着性ポリペプチド（Ｐ２−１）の水溶液｛（Ｐ２−１）の濃度：１００ｎｇ／ｍＬ｝の５０ｍＬを投入し、２５℃で１時間静置させ、（Ｓ１）に（Ｐ２−１）を結合させた。さらに、ポリエチレンイミン含有水溶液｛ポリエチレンイミン（ＭＷ＝１００００）の濃度：５０ｎｇ／ｍＬ｝の５０ｍＬを投入し、２５℃で１時間静置させ、（Ｓ１）にポリエチレンイミン（ＭＷ＝１００００）を結合させた。その後、１００ｍＬのイオン交換水で５回洗浄し、３７℃の循風乾燥機の中で１２時間乾燥させ、創傷被覆材（Ｈ１）を調製した。（Ｈ１）１ｃｍ×１ｃｍ当たりの（Ｐ２−１）の付着量（含有量）は、１μｇであった。
【００９９】
創傷被覆材（Ｈ１）の細胞接着性ポリペプチド（Ｐ２−１）の付着量（含有量）は、以下の手順で測定した。
（１）細胞接着性ポリペプチド（Ｐ２−１）の付着量（含有量）が既知の標準創傷被覆材（Ｎ１）及び付着量が未知の創傷被覆材（Ｈ１）を各々１ｃｍ×１ｃｍの正方形状に切り取り、牛血清アルブミンを１重量％で含有するＰＢＳの３ｍＬ中に１枚を投入し、室温（２５℃）で２時間浸漬した。
なお、標準創傷被覆材の調整は、上記の創傷被覆材（Ｈ１）の調製と同様に行うが、付着量は、細胞接着性ポリペプチドが付着後のＰ２−１水溶液を濃縮、凍結乾燥して、未付着の細胞接着性ポリペプチド重量を求め、付着前の細胞接着性ポリペプチド重量から未付着の細胞接着性ポリペプチド重量を差し引くことにより求めた。
【０１００】
（２）各創傷被覆材を取り出し、ペルオキシダーゼ標識抗Ｐ２−１抗体を１０μｇ／ｍＬ、牛血清アルブミンを１重量％及びＴｗｅｅｎ２０を０．２重量％で含有するＰＢＳの２ｍＬ中に各創傷被覆材１枚を投入し、３７℃で２時間反応した。反応後、Ｔｗｅｅｎ２０を０．２重量％で含有するＰＢＳの５ｍＬで各創傷被覆材を３回洗浄した。
尚、ペルオキシダーゼ標識抗Ｐ２−１抗体の調製は、ポリクローナル抗体作製法（エンザイムイムノアッセイ、石川榮治訳、株式会社東京化学同人、１９８９年）にしたがってウサギに細胞接着性ポリペプチド（Ｐ２−１）を免疫して抗Ｐ２−１抗体を得て、その抗Ｐ２−１抗体とペルオキシダーゼ（東洋紡績株式会社製）とをマレイミド法（エンザイムイムノアッセイ、石川榮治訳、株式会社東京化学同人、１９８９年）によって結合させることにより、ペルオキシダーゼ標識抗Ｐ２−１抗体を得た。
【０１０１】
（３）各創傷被覆材を取り出し、ＯＬＹＤＡＳ専用試薬の発色液セット（三洋化成工業株式会社製）の０．２ｍＬとイオン交換水の１．８ｍＬとの混合液中に各創傷被覆材１枚を投入し、３７℃で１時間反応した。反応後、３８０ｎｍの波長で吸光度測定した。
（４）標準創傷被覆材（Ｎ１）の吸光度を用いて検量線を作成し、その検量線から、創傷被覆材（Ｈ１）の付着量を得た。以下、同様にしてポリペプチドの付着量を測定した。
【０１０２】
＜実施例２＞
＜創傷被覆材（Ｈ２）の調製＞
１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（シグマ社製）の０．４７９ｇを５０ｍＬのイオン交換水に溶解し、カルボジイミド水溶液を作製した。このカルボジイミド水溶液の５０ｍＬと単層フィルム（Ｓ１）の１０ｃｍ×１０ｃｍとをガラスシャーレに投入し、２５℃で１時間静置した。その後、１００ｍＬの脱イオン水で５回洗浄した。次に、細胞接着性ポリペプチド（Ｐ２−１）の水溶液｛（Ｐ２−１）の濃度：１００ｎｇ／ｍＬ｝の５０ｍＬを投入し、２５℃で１時間静置させ、単層フィルム（Ｓ１）に（Ｐ２−１）を結合させた。その後、１００ｍＬのイオン交換水で５回洗浄し、３７℃の循風乾燥機の中で１２時間乾燥させ、創傷被覆材（Ｈ２）を調製した。（Ｈ２）１ｃｍ×１ｃｍ当たりの（Ｐ２−１）の付着量（含有量）は、1μｇであった。
【０１０３】
＜実施例３＞
＜創傷被覆材（Ｈ３）の調製＞
１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（シグマ社製）の０．４７９ｇを５０ｍＬのイオン交換水に溶解し、カルボジイミド水溶液を作製した。このカルボジイミド水溶液の５０ｍＬと単層フィルム（Ｓ１）の１０ｃｍ×１０ｃｍとをガラスシャーレに投入し、２５℃で１時間静置した。その後、１００ｍＬの脱イオン水で５回洗浄した。次に、ポリエチレンイミン含有水溶液｛ポリエチレンイミン（ＭＷ＝１００００）の濃度：５０ｎｇ／ｍＬ｝の５０ｍＬを投入し、２５℃で１時間静置させ、（Ｓ１）にポリエチレンイミン（ＭＷ＝１００００）を結合させた。その後、１００ｍＬのイオン交換水で５回洗浄し、３７℃の循風乾燥機の中で１２時間乾燥させ、創傷被覆材（Ｈ３）を調製した。
【０１０４】
＜実施例４＞
＜単層フィルム（Ｓ２）の準備＞
１２ナイロンビーズ（直径１５０〜２５０μｍ）を、１２ナイロンビーズ（直径４００〜５００μｍ）に変更した以外は実施例１と同様にして単層フィルム（Ｓ２）を得た。乾燥後膜厚をデジタル膜厚計で測定したところ、平均膜圧は１３８μｍであった。また、算術平均粗さ（Ｒａ）は２８０μｍ、輪郭曲線要素の平均長さ（ＲＳｍ）は１９０μｍであった。
＜創傷被覆材（Ｈ４）の調製＞
単層フィルム（Ｓ１）を単層フィルム（Ｓ２）に変更した以外、実施例１と同様にして創傷被覆材（Ｈ４）を作製した。（Ｈ４）１ｃｍ×１ｃｍ当たりの（Ｐ２−１）の付着量（含有量）は、０．９μｇであった。
【０１０５】
＜実施例５＞
＜単層フィルム（Ｓ３）の準備＞
１２ナイロンビーズ６．６７ｇを２．７５ｇとした以外は実施例１と同様にして単層フィルム（Ｓ３）を得た。乾燥後膜厚をデジタル膜厚計で測定したところ、平均膜圧は４７μｍであった。また、算術平均粗さ（Ｒａ）は３２μｍ、輪郭曲線要素の平均長さ（ＲＳｍ）は５８８μｍであった。
＜創傷被覆材（Ｈ５）の調製＞
単層フィルム（Ｓ１）を単層フィルム（Ｓ３）に変更した以外、実施例１と同様にして創傷被覆材（Ｈ５）を作製した。（Ｈ５）１ｃｍ×１ｃｍ当たりの（Ｐ２−１）の付着量（含有量）は、０．９μｇであった。
【０１０６】
＜実施例６＞
＜細胞接着性ポリペプチド（Ｐ３−１）の準備＞
ペプチドの配列をArg Gly Asp配列（１）と(Gly Ala Gly Ala Gly Ser)９配列（４７）とを各々約５個有し、数平均分子量約２万のペプチドに変更した以外は実施例１と同様にして細胞接着性ポリペプチド（Ｐ３−１）を得た。
＜創傷被覆材（Ｈ６）の調製＞
細胞接着性ポリペプチド（Ｐ２−１）を細胞接着性ポリペプチド（Ｐ３−１）に変更した以外、実施例１と同様にして創傷被覆材（Ｈ６）を作製した。（Ｈ６）１ｃｍ×１ｃｍの（Ｐ３−１）の付着量は０．８μｇであった。
【０１０７】
＜実施例７＞
＜細胞接着性ポリペプチド（Ｐ４−１）の準備＞
ペプチドの配列をArg Gly Asp配列（１）と(Gly Ala Gly Ala Gly Ser)９配列（４７）とを各々約３個有し、数平均分子量約１万のペプチドに変更した以外は実施例１と同様にして細胞接着性ポリペプチド（Ｐ４−１）を得た。
＜創傷被覆材（Ｈ７）の調製＞
細胞接着性ポリペプチド（Ｐ２−１）を細胞接着性ポリペプチド（Ｐ４−１）に変更した以外、実施例１と同様にして創傷被覆材（Ｈ７）を作製した。（Ｈ７）１ｃｍ×１ｃｍの（Ｐ４−１）の付着量は１．０μｇであった。
【０１０８】
＜実施例８＞
＜単層フィルム（Ｓ４）の準備＞
１２ナイロンビーズ６．６７ｇを８．２５ｇとした以外は実施例１と同様にして単層フィルム（Ｓ４）を得た。乾燥後膜厚をデジタル膜厚計で測定したところ、平均膜圧は６１μｍであった。また、算術平均粗さ（Ｒａ）は２０μｍ、輪郭曲線要素の平均長さ（ＲＳｍ）は５２μｍであった。
＜創傷被覆材（Ｈ８）の調製＞
単層フィルム（Ｓ１）を単層フィルム（Ｓ４）に変更した以外、実施例１と同様にして創傷被覆材（Ｈ８）を作製した。（Ｈ８）１ｃｍ×１ｃｍ当たりの（Ｐ２−１）の付着量（含有量）は、０．７μｇであった。
【０１０９】
＜実施例９＞
＜単層フィルム（Ｓ５）の準備＞
１２ナイロンビーズ（直径１５０〜２５０μｍ）を１２ナイロンビーズ（直径５０〜２００μｍ）に変更した以外は実施例１と同様にして単層フィルム（Ｓ５）を得た。乾燥後膜厚をデジタル膜厚計で測定したところ、平均膜圧は５０μｍであった。また、算術平均粗さ（Ｒａ）は１１μｍ、輪郭曲線要素の平均長さ（ＲＳｍ）は９２０μｍであった。
＜創傷被覆材（Ｈ９）の調製＞
単層フィルム（Ｓ１）を単層フィルム（Ｓ５）に変更した以外、実施例１と同様にして創傷被覆材（Ｈ９）を作製した。（Ｈ９）１ｃｍ×１ｃｍ当たりの（Ｐ２−１）の付着量（含有量）は、０．７μｇであった。
【０１１０】
＜実施例１０＞
＜単層フィルム（Ｓ６）の準備＞
１２ナイロンビーズ（直径１５０〜２５０μｍ）を１２ナイロンビーズ（直径７５０〜１５００μｍ）に変更した以外は実施例１と同様にして単層フィルム（Ｓ６）を得た。乾燥後膜厚をデジタル膜厚計で測定したところ、平均膜圧は８０μｍであった。また、算術平均粗さ（Ｒａ）は５１０μｍ、輪郭曲線要素の平均長さ（ＲＳｍ）は８０μｍであった。
＜創傷被覆材（Ｈ１０）の調製＞
単層フィルム（Ｓ１）を単層フィルム（Ｓ６）に変更した以外、実施例１と同様にして創傷被覆材（Ｈ１０）を作製した。（Ｈ１０）１ｃｍ×１ｃｍ当たりの（Ｐ２−１）の付着量（含有量）は、０．８μｇであった。
【０１１１】
＜実施例１１＞
＜単層フィルム（Ｓ７）の準備＞
１２ナイロンビーズ（直径１５０〜２５０μｍ）６．６７ｇを、１２ナイロンビーズ（直径５０〜１００μｍ）１２．０ｇに変更した以外は実施例１と同様にして単層フィルム（Ｓ７）を得た。乾燥後膜厚をデジタル膜厚計で測定したところ、平均膜圧は９４μｍであった。また、算術平均粗さ（Ｒａ）は１４μｍ、輪郭曲線要素の平均長さ（ＲＳｍ）は２１μｍであった。
＜創傷被覆材（Ｈ１１）の調製＞
単層フィルム（Ｓ１）を単層フィルム（Ｓ７）に変更した以外、実施例１と同様にして創傷被覆材（Ｈ１１）を作製した。（Ｈ１１）１ｃｍ×１ｃｍ当たりの（Ｐ２−１）の付着量（含有量）は、０．９μｇであった。
【０１１２】
＜実施例１２＞
＜創傷被覆材（Ｈ１２）の調製＞
１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（シグマ社製）の０．４７９ｇを５０ｍＬのイオン交換水に溶解し、カルボジイミド水溶液を作製した。このカルボジイミド水溶液の５０ｍＬと単層フィルム（Ｓ１）の１０ｃｍ×１０ｃｍとをガラスシャーレに投入し、２５℃で１時間静置した。その後、１００ｍＬの脱イオン水で５回洗浄した。次に、細胞接着性ポリペプチド（Ｐ２−１）の水溶液｛（Ｐ２−１）の濃度：１００ｎｇ／ｍＬ｝の５０ｍＬを投入し、２５℃で１時間静置させ、（Ｓ１）に（Ｐ２−１）を結合させた。さらに、ポリエチレンイミン含有水溶液｛ポリエチレンイミン（ＭＷ＝１８００）の濃度：５０ｎｇ／ｍＬ｝の５０ｍＬを投入し、２５℃で１時間静置させ、（Ｓ１）にポリエチレンイミン（ＭＷ＝１８００）を結合させた。その後、１００ｍＬのイオン交換水で５回洗浄し、３７℃の循風乾燥機の中で１２時間乾燥させ、創傷被覆材（Ｈ１２）を調製した。（Ｈ１２）１ｃｍ×１ｃｍ当たりの（Ｐ２−１）の付着量（含有量）は、１μｇであった。
【０１１３】
＜実施例１３＞
＜創傷被覆材（Ｈ１３）の調製＞
１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（シグマ社製）の０．４７９ｇを５０ｍＬのイオン交換水に溶解し、カルボジイミド水溶液を作製した。このカルボジイミド水溶液の５０ｍＬと単層フィルム（Ｓ１）の１０ｃｍ×１０ｃｍとをガラスシャーレに投入し、２５℃で１時間静置した。その後、１００ｍＬの脱イオン水で５回洗浄した。次に、ポリエチレンイミン含有水溶液｛ポリエチレンイミン（ＭＷ＝１８００）の濃度：５０ｎｇ／ｍＬ｝の５０ｍＬを投入し、２５℃で１時間静置させ、（Ｓ１）にポリエチレンイミン（ＭＷ＝１８００）を結合させた。その後、１００ｍＬのイオン交換水で５回洗浄し、３７℃の循風乾燥機の中で１２時間乾燥させ、創傷被覆材（Ｈ１３）を調製した。
【０１１４】
＜実施例１４＞
＜創傷被覆材（Ｈ１４）の調製＞
１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド塩酸塩（シグマ社製）の０．４７９ｇを５０ｍＬのイオン交換水に溶解し、カルボジイミド水溶液を作製した。このカルボジイミド水溶液の５０ｍＬと単層フィルム（Ｓ１）の１０ｃｍ×１０ｃｍとをガラスシャーレに投入し、２５℃で１時間静置した。その後、１００ｍＬの脱イオン水で５回洗浄した。次に、細胞接着性ポリペプチド（Ｐ２−１）の水溶液｛（Ｐ２−１）の濃度：１００ｎｇ／ｍＬ｝の５０ｍＬを投入し、２５℃で１時間静置させ、（Ｓ１）に（Ｐ２−１）を結合させた。さらに、ポリ−Ｌ−オルニチン含有水溶液｛ポリ−Ｌ−オルニチン（ＭＷ＝１１９００）の濃度：５０ｎｇ／ｍＬ｝の５０ｍＬを投入し、２５℃で１時間静置させ、（Ｓ１）にポリ−Ｌ−オルニチン（ＭＷ＝１１９００）を結合させた。その後、１００ｍＬのイオン交換水で５回洗浄し、３７℃の循風乾燥機の中で１２時間乾燥させ、創傷被覆材（Ｈ１４）を調製した。（Ｈ１４）１ｃｍ×１ｃｍ当たりの（Ｐ２−１）の付着量（含有量）は、１．１μｇであった。
【０１１５】
＜比較例１＞
＜単層フィルム(Ｓ８)の準備＞
１２ナイロンビーズを混合しないこと以外は実施例１と同様にして単層フィルム（Ｓ８）を得た。 乾燥後膜厚をデジタル膜厚計で測定したところ、フィルムの平均膜厚は６０μｍであった。
＜創傷被覆材（Ｈ１５）の調製＞
単層フィルム（Ｓ１）を単層フィルム（Ｓ８）に変更した以外、実施例１と同様にして創傷被覆材（Ｈ１５）を作製した。（Ｈ１５）１ｃｍ×１ｃｍ当たりの（Ｐ２−１）の付着量（含有量）は、０．７μｇであった。
【０１１６】
＜比較例２＞
＜単層フィルム(Ｓ９)の準備＞
１２ナイロンビーズ（直径１５０μｍ〜２５０μｍ）を、直径１５００〜２５００μｍのガラスビーズ（商品名：ガラスビーズ＃２、東京硝子器械社製）に変更した以外は実施例１と同様にして単層フィルム（Ｓ９）を得た。
乾燥後膜厚をデジタル膜厚計で測定したところ、フィルムの平均膜厚は８０μｍであった。また、算術平均粗さ（Ｒａ）は１０２０μｍ、輪郭曲線要素の平均長さ（ＲＳｍ）は５１０μｍであった。
＜創傷被覆材（Ｈ１６）の調製＞
単層フィルム（Ｓ１）を単層フィルム（Ｓ９）に変更した以外、実施例１と同様にして創傷被覆材（Ｈ１６）を作製した。（Ｈ１６）１ｃｍ×１ｃｍ当たりの（Ｐ２−１）の付着量（含有量）は、０．７μｇであった。
【０１１７】
＜評価１（細胞培養：インビトロ）＞
実施例１〜１４、比較例１〜２の創傷被覆材（Ｈ１）〜（Ｈ１６）を各々直径１．２ｃｍの大きさに切り取ったものを、クリーンベンチ中で表裏各１時間づつＵＶ照射を行い、滅菌した。なお、１種類の創傷被覆材につき、６枚用意し、６回ずつ評価した。
また、正常ヒト皮膚繊維芽細胞増殖用低血清培地（倉敷紡績株式会社製）１０ｍＬ中で５日間プレ培養しておいた正常ヒト皮膚線維芽細胞（倉敷紡績株式会社製）の１．５万個を、２４穴ポリスチレンプレート（ベクトンディッキンソン社製）の各穴に置いたコラーゲンタイプＩゲル（商品名：セルマトリックス、新田ゼラチン社製）に播種して、３７℃、二酸化炭素ガス濃度５容量％のインキュベーター中にて７日間の細胞培養を行い、培養真皮モデルを作成した。
【０１１８】
７日後に、培養真皮モデルを、無血清表皮角化細胞増殖用培地（倉敷紡績株式会社製）を各穴１５０μＬ入れた別の２４穴ポリスチレンプレートに移し、培養真皮モデルの上面中央部に、正常ヒト表皮角化細胞（倉敷紡績株式会社製）３μＬを播種し、さらに播種した正常ヒト表皮角化細胞上に予め滅菌しておいた創傷被覆材（Ｈ１）〜（Ｈ１６）を貼りつけた。貼りつけは、接着剤等は用いず、正常ヒト表皮角化細胞を播種した培養真皮モデルと創傷被覆材（Ｈ１）〜（Ｈ１６）が接するように、正常ヒト表皮角化細胞を播種した培養真皮上にピンセットを用いて創傷被覆材（Ｈ１）〜（Ｈ１６）を置いた。
創傷被覆材（Ｈ１）〜（Ｈ１６）を貼りつけた培養真皮モデルは再び３７℃、二酸化炭素ガス濃度５容量％のインキュベーターに戻し、さらに７日間培養を行った。
【０１１９】
培養７日後に、創傷被覆材（Ｈ１）〜（Ｈ１６）を培養真皮の上面から各々剥がし、新しい２４穴ポリスチレンプレートに創傷被覆材（Ｈ１）〜（Ｈ１６）を１枚／穴で投入し、そこへ塩化ナトリウムを０．８５重量％で含有するリン酸緩衝液（０．０２Ｍ、ｐＨ７．２）の１２５μＬ及びテトラカラーワン（生化学工業社製）の２５μＬを、１穴づつ投入し、３７℃、二酸化炭素ガス濃度５容量％のインキュベーター中にて４時間放置した。
【０１２０】
４時間後に、インキュベートしておいた２４穴プレートの各穴から６０μＬの液を抜き出し、液中のホルマザン生成量を４９２ｎｍ（対照波長６３０ｎｍ）の吸光度で分光光度計を用いて測定し、この値を創傷被覆材表面に付着している細胞の細胞活性とした。この測定は１穴について２回測定し、結果として（Ｈ１）〜（Ｈ１６）について各１２個の測定データを得、これらの測定データと算術平均、標準偏差及び変動係数（％）を表１及び２に示した。なお、細胞活性は、吸光度の高さに比例するので、吸光度の算術平均が大きい程細胞活性が高いことを意味する。また、テトラカラーワンのテトラゾリウム塩が、細胞内ミトコンドリアのデヒドロゲナーゼにより還元されて、ホルマリンを生成することにより発色する。
【０１２１】
【表１】
2006150072.tif 000005
【０１２２】
【表２】
2006150072.tif 000006
【０１２３】
以上の結果から、比較例の創傷被覆材の変動係数は３１又は４１％と高い値であるのに対し、本発明の創傷被覆材｛実施例１〜１４｝の変動係数は７〜２０％と極めて低い。このことは、本発明の創傷被覆材の表面には、再現性よく細胞が増殖し付着していることを示し、すなわち、本発明の創傷被覆材は創傷治癒効果のばらつきの小さい（再現性の高い）ことことを示していることが判明した。
【０１２４】
＜評価２（動物実験）＞
ＤＭマウス（Ｃ５７ＢＬＫ  Ｊｃｌ  ｄｂ／ｄｂ、日本クレア株式会社製）１２匹に対し、ジエチルエーテルによる吸気麻酔を実施し、フェザー剃刀を用いて背部全面を剃毛し、その中央部に正方形（各辺１．０ｃｍ）の全層皮膚欠損創を作製した。なお、ＤＭマウスは、糖尿確認用ストリップ（ウロピース、藤沢薬品工業株式会社製）を用いて、糖尿病発症が確認されているものを使用した。
実施例１の創傷被覆材（Ｈ１）、比較例１の創傷被覆材（Ｈ１５）を各々１．５ｃｍ×１．５ｃｍの大きさに切り取ったものを、粘着フィルム（商品名：テガダーム、３Ｍヘルスケア株式会社製）に貼り合わせ、創傷被覆材側が該創面に当たるように貼り付けし、さらに、粘着性バンデージ（商品名：シルキーテックス、アルケア株式会社製）で体幹部全周を巻き付け、固定した。観察個体数は、（Ｈ１）適用群、（Ｈ１５）適用群それぞれ６匹づつとした。
生育環境は室温２４℃、飼料、給水ともに自由摂取状態とした。観察点は７日目として肉眼所見にて創傷治癒状態を確認した。評価は次の判定基準に従い、○、×のニ段階評価とした。これらの結果を表３に示す。
＜判定基準＞
○：創縁部から創傷の中心に向かって表皮が順調に再生され、未再生部分が６４ｍｍ2未満である。
×：創傷の未再生部分が６４ｍｍ2以上存在し、表皮の再生が不十分である。
【０１２５】
【表３】
2006150072.tif 000007
【０１２６】
以上の結果より、本発明創傷被覆材（実施例１）では６匹とも○になったのに対して、比較用の創傷被覆材（比較例１）では３匹が○、３匹が×であった。このことは、実施例１は創傷治癒効果の再現性が高いことを示している。
【産業上の利用可能性】
【０１２７】
本発明の創傷被覆材は、ヒト用の創傷被覆材としてだけではなく、ヒト以外の動物用の創傷被覆材として使用できる。さらにインビトロで細胞培養するための基材としても使用できる。
【図面の簡単な説明】
【０１２８】
【図１】基準長さ｛Ｕ｝と輪郭曲線｛Ｚ（ｘ）｝との関係を模式的に表した単層フィルム（Ｓ）の断面図である。
【図２】基準長さ（Ｕ）と輪郭曲線要素｛ＸＳｉ｝との関係を模式的に表した単層フィルム（Ｓ）の断面図である。
【図３】実施例１で得た本発明の創傷被覆材[Ｈ１]の表面を、デジタルマイクロスコープ（キーエンス社製ＨＤマイクロスコープ「ＶＨ―８０００」）、５０倍で観察した写真である。
【図１】
2006150072.tif 000008
【図２】
2006150072.tif 000009
【図３】
2006150072.tif 000010
【配列表】
2006150072000001.app