(57)【要約】【課題】  動物の個体で起こる創傷治癒反応を解明し、新規な創傷治療剤及び／又は創傷治癒促進剤を提供する。さらに加齢個体に有効な創傷治療剤及び／又は創傷治癒促進剤のスクリーニング方法を提供する。【解決手段】  繊維芽細胞増殖因子９、１１、１６、１８及び２３からなる群より選択される少なくとも１種の繊維芽細胞増殖因子の全長又は部分ペプチドを有効成分として含有する創傷治療及び／又は創傷治癒促進のための薬剤。加齢状態の異なる生体の創傷治癒過程における遺伝子の発現をモニターし、若齢個体と加齢個体との間で遺伝子の発現量を比較し、若齢個体と比べて加齢個体での発現量が低い遺伝子の産物を加齢個体の創傷治療及び／又は創傷治癒促進に効果があると判定することを含む、加齢個体の創傷治療及び／又は創傷治癒促進に効果がある物質をスクリーニングする方法。【選択図】  図１Ａ
2006347979.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
繊維芽細胞増殖因子９、１１、１６、１８及び２３からなる群より選択される少なくとも１種の繊維芽細胞増殖因子の全長又は部分ペプチドを有効成分として含有する創傷治療及び／又は創傷治癒促進のための薬剤。
【請求項２】
繊維芽細胞増殖因子が野生型である請求項１記載の薬剤。
【請求項３】
繊維芽細胞増殖因子が変異体である請求項１記載の薬剤。
【請求項４】
他のタンパク質増殖因子、創傷治癒剤及び/又は創傷治癒促進剤を更に含むことを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載の薬剤。
【請求項５】
繊維芽細胞増殖因子９、１１、１６、１８及び２３からなる群より選択される少なくとも１種の繊維芽細胞増殖因子の全長又は部分ペプチドをコードする核酸を有効成分として含有する創傷治療及び／又は創傷治癒促進のための薬剤。
【請求項６】
繊維芽細胞増殖因子の全長又は部分ペプチドをコードする核酸がcDNAであり、かつ発現ベクターに組み込まれている請求項５記載の薬剤。
【請求項７】
加齢状態の異なる生体の創傷治癒過程における遺伝子の発現をモニターし、若齢個体と加齢個体との間で遺伝子の発現量を比較し、若齢個体と比べて加齢個体での発現量が低い遺伝子の産物を加齢個体の創傷治療及び／又は創傷治癒促進に効果があると判定することを含む、加齢個体の創傷治療及び／又は創傷治癒促進に効果がある物質をスクリーニングする方法。
【請求項８】
繊維芽細胞増殖因子７、９、１０、１１、１６、１８、２２及び２３、トランスフォーミング増殖因子−β並びに肝細胞増殖因子からなる群より選択される少なくとも１種の増殖因子の全長又は部分ペプチドを有効成分として含有する加齢個体の創傷治療及び／又は創傷治癒促進のための薬剤。
【請求項９】
繊維芽細胞増殖因子７、９、１０、１１、１６、１８、２２及び２３、トランスフォーミング増殖因子−β並びに肝細胞増殖因子からなる群より選択される少なくとも１種の増殖因子の全長又は部分ペプチドをコードする核酸を有効成分として含有する加齢個体の創傷治療及び／又は創傷治癒促進のための薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、皮膚の再生を促進する成分を含有する創傷治療剤、創傷治癒促進剤並びに加齢個体の創傷治療及び／又は創傷治癒促進に効果がある物質のスクリーニング方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
繊維芽細胞増殖因子（以下FGFと称する）といった様々なポリペプチド増殖因子が皮膚組織において発現していることが知られている。マウス及びヒトにおいては、FGFは22種類の異なる遺伝子によってコードされる（非特許文献１）。特に、FGF1、FGF2、FGF5、FGF7、FGF10、FGF13、FGF18及びFGF22は、皮膚細胞及び毛包細胞において発現していることが報告されている（非特許文献２〜１８参照）。
【０００３】
また、特表2004-501203号公報（特許文献１）には、FGF1を含む創傷治癒剤が開示されている。また、FGF2を含む創傷治癒剤は現在市販されている。しかしながら、FGF1やFGF2の遺伝子産物は、創傷治癒の局面で生体の反応として増加するわけではなく、その創傷治癒効果は人為的にこれら増殖因子を使用した結果として起こるものである。また、FGF2は皮膚表皮細胞の増殖を直接促進することはできない。よって、FGF1やFGF2を用いて、創傷を治療することは、生理的治癒と同等の完璧な治癒反応を引き起こせない可能性がある。
【０００４】
上掲した非特許文献２〜１８を含む他の文献から、FGFが皮膚細胞の増殖及び分化に重要な役割を担っていることが示唆される。しかしながら、創傷治癒に対して、FGF群がどのように関与するのかといった知見は依然として不明のままである。また、若齢では速やかに治癒する創傷が、加齢時には遅延することが経験的に知られているが、その現象におけるFGF群の関与は不明のままである。
【０００５】
【非特許文献１】Ornitz DM, Itoh N: Fibroblast growth factors. Genome Biol2:REVIEWS3005, 2001
【非特許文献２】Bai XY, Miao D, Goltzman D & Karaplis AC 2003 Theautosomal dominant hypophosphatemic rickets R176Q mutation in fibroblast growthfactor 23 resists proteolytic cleavage and enhances in vivo biological potency.Journal of Biological Chemistry 278 9843-9849.
【非特許文献３】Beyer TA, Werner S, Dickson C & Grose R 2003 Fibroblast growth factor 22 and its potentialrole during skin development and repair. ExperimentalCell Research 287 228-236.
【非特許文献４】Bikfalvi A, Klein S, Pintucci G, Rifkin DB 1997 Biologicalroles of fibroblast growth factor-2. EndocrinologyReview 18 26-45.
【非特許文献５】Gao Z, Flaitz CM & Mackenzie IC 1996 Expression ofkeratinocyte growth factor in periapical lesions.Journal of Dentistry Research 75 1658-1663.
【非特許文献６】GuoL, Degenstein L & Fuchs E 1996 Keratinocyte growth factor is required forhair development but not for wound healing. Genesand Development 10 165-175.
【非特許文献７】Igarashi M, Finch PW & Aaronson SA 1998 Characterizationof recombinant human fibroblast growth factor (FGF) -10 reveals functionalsimilarities with keratinocyte growth factor (FGF-7). Journal of Biological Chemistry 27313230-13235.
【非特許文献８】Jameson J, Ugarte K, Chen N, Yachi P, Fuchs E, Boismenu R& Havran WL 2002 A role for skin gd T cells in wound repair. Science 296 747-749.
【非特許文献９】KawanoM, Suzuki S, Suzuki M, Oki J & Imamura T 2004 Bulge- and basallayer-specific expression of fibroblast growth factor 13 (FHF-2) in mouse skin.Journal of Investigative Dermatology 122 1084-1090.
【非特許文献１０】KawanoM, Kuramochi-Komi A, Asada M, Suzuki M, Oki J, Jiang J & Imamura T 2005Comprehensive analysis of FGF and FGFR expression in skin: FGF18 is highlyexpressed in hair follicles and capable of inducing anagen from telogen stagehair follicles. Journal of InvestigativeDermatology 124 877-885.
【非特許文献１１】Marchese C, Chedid M, Dirsch OR, Csaky KG, Santanelli F,Latini C, LaRochelle WJ, Torrisi MR & Aaronson SA 1995 Modulation of keratinocyte growth factor and its receptor inreepithelializing human skin. Journal ofExperimental Medicine 182 1369-1376.
【非特許文献１２】Martin P, Hopkinson-Woolley J & McCluskey J 1992 Growthfactors and cutaneous wound repair. Progressin Growth Factor Research 425-44.
【非特許文献１３】MartinP 1997 Wound healing--aiming for perfect skin regeneration. Science 27675-81.
【非特許文献１４】OrtegaS, Ittmann M, Tsang SH, Ehrlich M & Basilico C 1998 Neuronal defects anddelayed wound healing in mice lacking fibroblast growth factor-2. Proceedings of National Academy of SciencesUSA 95 5672-5677.
【非特許文献１５】Paddock HN, Schultz GS & Mast BA 2003 Methods in reepithelialization. A porcine model ofpartial-thickness wounds. Methods in MolecularMedicine 78 17-36.
【非特許文献１６】Singer AJ & Clark RA 1999 Mechanism of disease:cutaneous wound healing. New EnglandJournal of Medicine 341 738-746.
【非特許文献１７】Steiling H & Werner S 2003 Fibroblast growth factors:key players in epithelial morphogenesis, repair and cytoprotection. Current Opinion in Biotechnology 14 533-537.
【非特許文献１８】WernerS, Smola H, Liao X, Longaker MT, Krieg T, Hofschneider PH & Williams LT1994 The function of KGF in epithelial morphogenesis and woundre-epithelialisation. Science 266819-822.
【特許文献１】特表2004-501203号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
そこで、本発明は、生体反応として起こる創傷治癒作用を解明し、新規な創傷治療剤及び／又は創傷治癒促進剤を提供することを目的としている。さらに、創傷治癒が遅延する加齢個体において有効な創傷治療剤及び／又は創傷治癒促進剤を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上述した目的を達成するため本発明者らは、皮膚の創傷治癒に重要な働きをするFGF遺伝子を特定するために、若齢動物と加齢動物を用いて、FGFファミリーに属する22遺伝子全ての発現を、健康皮膚、及び創傷治癒の各ステージ（創傷作成後2、4、7、15、21日目までの21日間）で網羅的に検索したところ、これまで皮膚でその機能の知られていなかったFGF遺伝子の高発現と機能を見いだすに至った。例えば、若齢個体では、FGF7, 10及び22遺伝子のmRNA発現レベルが健康皮膚では高く、そのうちFGF7及び10のレベルは創傷後の時間経過中に2〜3.5倍増加した。FGF9, 16, 18及び23のmRNA発現レベルは健康皮膚では中程度あるいは低かったが、創傷後に2〜33倍増加した。特に、FGF23遺伝子のmRNA発現レベルは創傷治癒の初期に極めて高いレベルに到達した。また、トランスフォーミング増殖因子−β（以下TGF-betaと称する）及び肝細胞増殖因子（以下HGFと称する）も健康皮膚でmRNAの発現レベルが高く、創傷治癒中にアップレギュレートされた。さらに本発明者等は、若齢動物と加齢動物における創傷治癒反応を比較することにより、これらのFGF遺伝子のほとんどの発現レベルが、創傷治癒が遅延する加齢動物では若齢動物よりも低いことを発見した。
【０００８】
また、本発明者等は、FGF23のタンパク質が、創傷を受けて再生中の局所に選択的に存在していることも見出した。
【０００９】
また、本発明者等は、FGF23に関する詳細な機能解析を行ったところ、FGF23には創傷治癒に重要と考えられる繊維芽細胞の増殖を促進する機能があることを見出した。さらに、本発明者等は、FGF23の発現部位において、細胞の増殖や遊走、分化の刺激時に発現誘導される初期遺伝子Fosが高いレベルで発現していることを見出した。本発明は、このような新規な知見に基づいて完成されたものである。
【００１０】
本発明の要旨は以下の通りである。
【００１１】
（１）繊維芽細胞増殖因子９、１１、１６、１８及び２３からなる群より選択される少なくとも１種の繊維芽細胞増殖因子の全長又は部分ペプチドを有効成分として含有する創傷治療及び／又は創傷治癒促進のための薬剤。
【００１２】
（２）繊維芽細胞増殖因子が野生型である（１）記載の薬剤。
【００１３】
（３）繊維芽細胞増殖因子が変異体である（１）記載の薬剤。
【００１４】
（４）他のタンパク質増殖因子、創傷治癒剤及び/又は創傷治癒促進剤を更に含むことを特徴とする（１）〜（３）のいずれかに記載の薬剤。
【００１５】
（５）繊維芽細胞増殖因子９、１１、１６、１８及び２３からなる群より選択される少なくとも１種の繊維芽細胞増殖因子の全長又は部分ペプチドをコードする核酸を有効成分として含有する創傷治療及び／又は創傷治癒促進のための薬剤。
【００１６】
（６）繊維芽細胞増殖因子の全長又は部分ペプチドをコードする核酸がcDNAであり、かつ発現ベクターに組み込まれている（５）記載の薬剤。
【００１７】
（７）加齢状態の異なる生体の創傷治癒過程における遺伝子の発現をモニターし、若齢個体と加齢個体との間で遺伝子の発現量を比較し、若齢個体と比べて加齢個体での発現量が低い遺伝子の産物を加齢個体の創傷治療及び／又は創傷治癒促進に効果があると判定することを含む、加齢個体の創傷治療及び／又は創傷治癒促進に効果がある物質をスクリーニングする方法。
【００１８】
（８）繊維芽細胞増殖因子７、９、１０、１１、１６、１８、２２及び２３、トランスフォーミング増殖因子−β並びに肝細胞増殖因子からなる群より選択される少なくとも１種の増殖因子の全長又は部分ペプチドを有効成分として含有する加齢個体の創傷治療及び／又は創傷治癒促進のための薬剤。
【００１９】
（９）繊維芽細胞増殖因子７、９、１０、１１、１６、１８、２２及び２３、トランスフォーミング増殖因子−β並びに肝細胞増殖因子からなる群より選択される少なくとも１種の増殖因子の全長又は部分ペプチドをコードする核酸を有効成分として含有する加齢個体の創傷治療及び／又は創傷治癒促進のための薬剤。
【発明の効果】
【００２０】
本発明により、創傷治療剤及び／又は創傷治癒促進剤を提供することができる。また、加齢個体で有効な創傷治療剤及び／又は創傷治癒促進剤を提供することができる。本発明の創傷治療剤及び／又は創傷治癒促進剤を用いれば、創傷治癒の促進及び／又は創傷の治療をより効果的に行うことができる。
【００２１】
また、本発明のスクリーニング方法により、加齢個体の創傷治療及び／又は創傷治癒促進に効果がある物質をスクリーニングすることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
以下、本発明を詳細に説明する。
【００２３】
１．創傷治療及び／又は創傷治癒促進のための薬剤
本発明は、繊維芽細胞増殖因子９、１１、１６、１８及び２３からなる群より選択される少なくとも１種の繊維芽細胞増殖因子の全長又は部分ペプチドを有効成分として含有する創傷治療及び／又は創傷治癒促進のための薬剤を提供する。
【００２４】
また、本発明は、繊維芽細胞増殖因子９、１１、１６、１８及び２３からなる群より選択される少なくとも１種の繊維芽細胞増殖因子の全長又は部分ペプチドをコードする核酸を有効成分として含有する創傷治療及び／又は創傷治癒促進のための薬剤を提供する。
【００２５】
本発明の薬剤に含まれてもよい有効成分の一つとして、FGF23がある。FGF23は、例えば配列番号２に示すアミノ酸配列からなるヒト由来のFGF23を使用することができる。また、使用可能なFGF23としては、ヒト由来に限定されず、例えば、他の哺乳動物由来のFGF23、魚類由来のFGF23などを使用することができる。他の哺乳動物としては、マウス、ラット、ニワトリ、七面鳥、ウシ、ブタ、ヒツジ及びウサギ等を挙げることができるが、これらに限定されない。例えば、配列番号１に示すヒト由来FGF23の塩基配列に基づいて作製したプローブを定法に従って用いれば、ヒトを除く他の哺乳動物からFGF23をコードする遺伝子を単離することができる。
【００２６】
ヒト由来FGF23の塩基配列及びアミノ酸配列をそれぞれ配列番号１及び２に示す。マウス由来FGF23のmRNAの塩基配列及びそれがコードするアミノ酸配列をそれぞれ配列番号３及び４に示す。ラット由来FGF23のmRNAの塩基配列及びそれがコードするアミノ酸配列をそれぞれ配列番号５及び６に示す。ゼブラフィッシュ由来FGF23のmRNAの塩基配列及びそれがコードするアミノ酸配列をそれぞれ配列番号７及び８に示す。これら配列番号２、４、６及び８に示すアミノ酸配列を比較すると判るように、哺乳動物においてFGF23は非常に高い相同性を有しており、哺乳動物におけるFGF23の機能はほぼ同様であると理解することができる。FGF23は体内リン酸濃度の維持を調節していることが報告されており、その異常はくる病の原因となると考えられているが、FGF23の創傷治癒における機能については、全く知られていない。
【００２７】
FGF23は野生型であっても、変異体であってもよい。変異体は天然に見出されるものであっても、人工的に作製されたものであってもよい。野生型FGF23としては、配列番号２、４、６及び８に示すアミノ酸配列を有するものを挙げることができる。変異体FGF23としては、配列番号２、４、６及び８に示すアミノ酸配列のうち、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換及び付加されたアミノ酸配列からなり、創傷治癒及び／又は創傷治癒促進作用があるタンパク質を挙げることができる。ここで、数個のアミノ酸とは、例えば２〜54個、より好ましくは2〜27個を例示することができる。生体内でFGF23は179番Rと180番Sの間で切断されることが公知であるが、176番Rまたは179番Rのミューテーションが起こると、体内リン酸塩の排泄調節活性が異常昂進することが知られている（Bai XY, Miao D, Goltzman D & Karaplis AC 2003 The autosomal dominant hypophosphatemic rickets R176Q mutation in fibroblast growth factor 23 resists proteolytic cleavage and enhances in vivo biological potency. Journal of Biological Chemistry 278 9843-9849.）。また、配列番号２に示すアミノ酸配列における42〜159番目の領域は、様々なFGFに共通性の高いコア部分であると考えられる。したがって、配列番号２に示すアミノ酸配列における42〜159番目の領域を除く領域であれば、１又は数個のアミノ酸が欠失、置換及び付加されたとしても、創傷治癒促進作用を欠損することなく、本発明の薬剤の有効成分として使用することができる。
【００２８】
また、本発明の薬剤は、上述したFGF23の部分断片を有効成分として含有してもよい。FGF23の部分断片としては、例えば配列番号２における25〜251番目のアミノ酸配列からなるポリペプチド、または、配列番号２における25〜179番目のアミノ酸配列からなるポリペプチドを挙げることができる。すなわち、25〜251番目のアミノ酸配列からなるポリペプチドであっても、受容体とヘパリンに結合し、創傷の治癒を促進する作用を有している蓋然性が高い。また、FGF23の部分断片としては、最も好ましくは42〜159番目のアミノ酸配列からなるポリペプチドを使用することができる。なお、配列番号４、６及び８に示すアミノ酸配列においても、上記の範囲に相当するアミノ酸配列からなるポリペプチドであっても、本発明の薬剤の有効成分として使用することができる。さらに、FGF23の部分断片としては、創傷治癒及び／又は創傷治癒促進作用があるなら、25〜251番目のアミノ酸配列のうちいずれの部分からなる長さ3-50アミノ酸程度のペプチドであっても良い。ただし、この数値範囲を超えるアミノ酸からなるペプチドであっても、本発明におけるFGF23の部分断片に含まれる。
【００２９】
上述したように定義されたFGF23の全長及び部分ペプチドは、創傷治癒を促進する作用を有する。この作用は、詳細を実施例にて後述するが、FGF23の全長及び部分ペプチドを含む培地にて細胞を培養し、FGF23の全長及び部分ペプチドによる皮膚繊維芽細胞におけるDNA合成や細胞数増加の誘導能を調べることで確認することができる。
【００３０】
本発明の薬剤に含まれてもよい他の有効成分として、FGF9, 11, 16及び18の全長又は部分ペプチドがある。FGF9, 11, 16及び18のmRNAの塩基配列をそれぞれ配列番号１１(ヒト由来FGF9)、１５(ヒト由来FGF11)、１７(ヒト由来FGF16)、１９(ヒト由来FGF18)及び２１(ヒト由来FGF18)に示す。FGF9, 11, 16及び18のmRNAがコードするアミノ酸配列をそれぞれ配列番号１２(ヒト由来FGF9)、１６(ヒト由来FGF11)、１８(ヒト由来FGF16)、２０(ヒト由来FGF18)及び２２(ヒト由来FGF18)に示す。
【００３１】
FGF9, 11, 16, 18及び23からなる群より選択される少なくとも１種の繊維芽細胞増殖因子の全長又は部分ペプチドは、例えば、皮膚適用向けに適合化された溶液、クリーム、軟膏、ゲル、ローシヨン、シャンプー又はエアゾールといった形態で製剤化され、創傷治療及び／又は創傷治癒促進のための薬剤として提供される。この薬剤は、加齢個体への適用が特に効果的である。
【００３２】
本発明の創傷治療及び／又は創傷治癒促進のための薬剤は、局所投与用に適合化された薬学的に許容される担体と共に有効成分（例えば、FGF9, 11, 16, 18, 23など）を含んだ医薬組成物の形で投与される。有効成分の担体に対する割合は１〜９０重量％の間で変動され得る。
【００３３】
本発明の薬剤は、さらにヘパリンを含有することが好ましい場合もある。
【００３４】
また、本発明の薬剤は、当業界で周知の他の精製又は組換え由来タンパク質増殖因子を含有していても良い、本発明の薬剤に含まれる有効成分による創傷治癒促進効果を増加又は増強させる増殖因子としては特に限定されず、表皮増殖因子（EGF）、血小板由来増殖因子（PDGF）、トランスフォーミング増殖因子-α（TGF-α）、トランスフォーミング増殖因子-β（TGF-β）、トランスフォーミング増殖因子-βスーパーファミリーに属する因子、骨形成因子（BMP）、インシュリン様増殖因子（IGF）（例えば、IGF-I, IIなど）及び血管内皮細胞増殖因子の群を挙げることができる（フアン・ブラント及びクラウスナー，バイオテクノロジー，第6巻，第25-30頁，1988年）。本発明の薬剤は、これらの他の精製又は組換え由来タンパク質増殖因子のうち１種類を含むものであってもよいが、複数種を含むものであってもよい。
【００３５】
EGF、hEGF及びこれらの製造方法については、米国特許第3,914,824号、米国特許第 3,948,875号、米国特許第 4,528,186号、国際公開第WO/85/00369号パンフレット、プロシーデイング・オブ・ナショナル・アカデミー・オブ・サイエンスUSAの第80巻、第7461-7465頁（1983年）に記載されており、参照することができる。
【００３６】
PDGF、hPDGF及びこれらの製造方法については、米国特許第4,350,687号、ネーチャーの第320巻，第695-699頁（1986年）、EMBOジャーナルの第3巻，第921-928頁（1984年）、EMBOジャーナルの第3巻，第2963-2967頁（1984年）に記載されており、参照することができる。
【００３７】
TGF-α、hTGF-α及びこれらの製造方法については、欧州特許出願公開第154,434号、セルの第38巻，第287-297頁（1984年）に記載されており、参照することができる。TGF-β、hTGF-β及びこれらの製造方法については、米国特許第4,774,228号、米国特許第4,774,322号、ＤＮＡの第7巻，第1-8頁（1988年）、ジャーナル・オブ・バイオロジカル・ケミストリーの第262巻，第12127-12131頁（1987年）に記載されており、参照することができる。
【００３８】
IGF-I、hIGF-I及びこれらの製造方法については、国際公開第WO/88/03409号パンフレット、欧州特許出願公開第264,074号、欧州特許出願公開第219,814号に記載されており、参照することができる。IGF-II、hIGF-II及び及びこれらの製造方法については、欧州特許出願公開第280,460号に記載されており、参照することができる。
【００３９】
さらに、本発明の薬剤は、当業界で周知の他の創傷治療剤、創傷治癒促進剤などを含んでもよい。他の創傷治療剤及び創傷治癒促進剤としては、特に限定されず、ポピドンヨード、ポピドンヨード白糖、フィブラストスプレーなどを挙げることができる。本発明の薬剤は、これらの他の創傷治療剤及び創傷治癒促進剤のうち１種類を含むものであってもよいが、複数種を含むものであってもよい。
【００４０】
さらにまた、局所投与用に適合化された薬学的に許容される担体としては、特に限定されないが、親水ワセリン又はポリエチレングリコール軟膏のような軟膏、キサンゴムのようなゴム等のペースト、アルコール、水性又は緩衝液のような溶液、水酸化アルミニウム又はアルギン酸ナトリウムゲルのようなゲル、ヒト又は動物アルブミンのようなアルブミン、ヒト又は動物コラーゲンのようなコラーゲン、アルキルセルロース、ヒドロキシアルキルセルロース及びアルキルヒドロキシアルキルセルロースのようなセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース及びヒドロキシプロピルセルロース、プルロニックＦ−１２７で例示されるプルロニック（Pluronic（商標））ポリオ−ルのようなポリマ−；テトロニック１５０８のようなテトロニック（tetronic）、アルギン酸ナトリウムのようなアルギン酸塩を挙げることができる。
【００４１】
投与量は、患者の年齢、性別、体重および症状、治療効果、投与方法、処理時間、あるいは医薬組成物に含まれる有効成分の種類などにより異なるが、例えば、成人患者（体重60kg）一人あたり、有効成分の量に換算して、約0.01〜約100μg/日/cm2、好ましくは、約0.01〜約100μg/日/cm2の範囲で投与するとよい。投与回数は特に制限されないが、好ましくは1〜2回／日である。
【００４２】
また、本発明の薬剤は、FGF9, 11, 16, 18及び23からなる群より選択される少なくとも１種の繊維芽細胞増殖因子の全長又は部分ペプチドをコードする核酸を有効成分として含有する創傷治療及び／又は創傷治癒促進のための薬剤であってもよい。FGF9, 11, 16, 18及び23からなる群より選択される少なくとも１種の繊維芽細胞増殖因子の全長又は部分ペプチドをコードする核酸がcDNAであり、かつ発現ベクターに組み込まれていることが好ましい。すなわち、本発明の薬剤は、上記発現ベクターを用いた遺伝子治療に使用することができる。発現ベクターとしては、動物細胞において発現を実現するためのプロモーターなどの配列を備えるが、特に限定されるものではない。発現ベクターとしては、例えば、プラスミドベクター、ウイルスベクターなどが利用可能であるが、これらに限定されない。
【００４３】
より具体的には、遺伝子治療においては、FGF9, 11, 16, 18及び23からなる群より選択される少なくとも１種の繊維芽細胞増殖因子の全長又は部分ペプチドをコードするcDNAを、例えばウイルスベクターに組み込んで、該組換えウイルスベクターを有するウイルス（無毒化されたもの）を患者に感染させる。患者体内では繊維芽細胞増殖因子９、１１、１６、１８及び２３からなる群より選択される少なくとも１種の繊維芽細胞増殖因子の全長ポリペプチド及び/又は部分ポリペプチドが産生され、創傷治癒を促進することができる。
【００４４】
遺伝子治療用の薬剤を細胞内に導入する方法としては、ウイルスベクターを利用した遺伝子導入方法、非ウイルス性の遺伝子導入方法（日経サイエンス，1994年4月号，20-45頁、実験医学増刊，12(15)(1994)、実験医学別冊「遺伝子治療 の基礎技術」，羊土社(1996)）のいずれの方法も適用することができる。
【００４５】
ウイルスベクターによる遺伝子導入方法としては、例えばレトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ヘルペスウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス、ポリオウイルス、シンビスウイルス等のDNAウイルス又はRNAウイルスに、TR4あるいは変異TR4をコードするDNAを組み込んで導入する方法が挙げられる。このうち、レトロウイルス、アデノウイルス、アデノ関連ウイルス、ワクシニアウイルスを用いた方法が、特に好ましい。非ウイルス性の遺伝子導入方法としては、発現プラスミドを直接筋肉内に投与する方法（DNAワクチン法）、リポソーム法、リポフェクチン法、マイクロインジェクション法、リン酸カルシウム法、エレクトロポレーション法等が挙げられ、特にDNAワクチン法、リポソーム法が好ましい。
【００４６】
また遺伝子治療用の薬剤を実際に医薬として作用させるには、DNAを直接体内に導入するインビボ法及びヒトからある種の細胞を取り出し体外でDNAを該細胞に導入し、その細胞を体内に戻すエクスビボがある（日経サイエンス，1994年4月号，20-45頁、月刊薬事，36(1)，23-48(1994)、実験医学増刊，12(15)(1994)）。
【００４７】
例えば、遺伝子治療用の薬剤がインビボ法により投与される場合は、疾患、症状等に応じ、静脈、動脈、皮下、皮内、筋肉内等、適当な投与経路により投与される。またインビボ法により投与する場合は、遺伝子治療用の薬剤は一般的には注射剤等とされるが、必要に応じて慣用の担体を加えてもよい。また、リポソーム又は膜融合リポソーム（センダイウイルス−リポソーム等）の形態にした場合は、懸濁剤、凍結剤、遠心分離濃縮凍結剤等のリポソーム製剤とすることができる。
【００４８】
FGF9, 11, 16, 18及び23からなる群より選択される少なくとも１種の繊維芽細胞増殖因子の全長又は部分ペプチドをコードするcDNAを組み込んだ発現ベクターをヒトに投与する場合、成人患者（体重60kg）一人あたり、0.01〜100 mg、好ましくは0.1〜10 mgの１回量で投与するとよい。投与されるベクターに含まれる所望の繊維芽細胞増殖因子の全長又は部分ペプチドをコードするcDNAの量としては、成人患者（体重60kg）一人あたり、0.001〜10 mg、好ましくは0.005〜0.1 mgの１回量で投与するとよい。投与は、治療効果が認められるまで、適当な頻度で繰り返すとよい。
【００４９】
２．スクリーニング方法
本発明は、加齢状態の異なる生体の創傷治癒過程における遺伝子の発現をモニターし、若齢個体と加齢個体との間で遺伝子の発現量を比較し、若齢個体と比べて加齢個体での発現量が低い遺伝子の産物を加齢個体の創傷治療及び／又は創傷治癒促進に効果があると判定することを含む、加齢個体の創傷治療及び／又は創傷治癒促進に効果がある物質をスクリーニングする方法を提供する。
【００５０】
本発明のスクリーニング方法では、若齢及び加齢の実験動物個体を用い、その創傷治癒反応を比較する。実験動物としては、ヒトを除く、例えば、マウス、ラット、ニワトリ、七面鳥、ウシ、ブタ、ヒツジ及びウサギ等を挙げることができる。若齢及び加齢の程度としては、何ら限定されないが、例えば、マウスでは若齢個体として８週齢程度、加齢個体として３５週齢程度が挙げられる。これらの年齢差はさらに大きくてもよいし、小さくてもよい。
【００５１】
次に、本発明のスクリーニング方法では、実験動物の創傷治癒過程における様々な遺伝子の発現をモニターする。遺伝子の種類としては、何ら限定されないが、例えば、22種のFGF遺伝子及び4種のFGF受容体遺伝子の発現をモニターする。実験動物におけるFGF遺伝子の発現は、例えば、FGF23抗体を用いた組織染色やELISA等の常法を用いて解析するか、あるいは実験動物内におけるFGF23遺伝子のmRNA量を定量的逆転写PCR法やノーザンブロット法等により解析するといった方法によりモニターすることができる。
【００５２】
これらいずれかの解析により、例えば、若齢動物個体での創傷治癒におけるFGF23遺伝子の発現量と比べて、加齢動物個体での創傷治癒におけるFGF23遺伝子の発現量が低減していれば、当該遺伝子の産物を補給することによって加齢動物個体での創傷の治療、創傷治癒促進といった機能を有する可能性がある候補物質であると判断できる。この方法により、FGF7, 9,  10, 11, 16, 18, 22, 23, TGF-beta, HGFなどが候補物質であると判断できた（後述の実施例を参照のこと）。
【００５３】
このようにスクリーニングされた物質は、臨床へ応用するに際し、上記有効成分を単独で用いることも可能であるが、薬学的に許容され得る担体と配合して医薬組成物として用いることもできる。この時の有効成分の担体に対する割合は、１〜９０重量％の間で変動され得る。また、かかる薬剤は種々の形態で投与することができ、それらの投与形態としては、溶液、クリーム、軟膏、ゲル、ローシヨン、シャンプー又はエアゾールといった非経口投与を挙げることができる。また、その投与量は、症状、年齢、体重等によって適宜選択することができる。
【００５４】
あるいはまた、スクリーニングされた物質の全長又は部分ペプチドをコードする核酸を加齢個体の創傷治療及び／又は創傷治癒促進のための遺伝子治療に用いてもよく、発現ベクター、遺伝子導入法、投与量、投与方法などは上述したものと同様である。
【００５５】
従って、本発明は、FGF7, 9,  10, 11, 16, 18, 22及び 23, TGF-beta並びにHGFからなる群より選択される少なくとも１種の増殖因子の全長又は部分ペプチドを有効成分として含有する加齢個体の創傷治療及び／又は創傷治癒促進のための薬剤を提供する。
【００５６】
さらにまた、本発明は、FGF7, 9,  10, 11, 16, 18, 22及び23, TGF-beta並びにHGFからなる群より選択される少なくとも１種の増殖因子の全長又は部分ペプチドをコードする核酸を有効成分として含有する加齢個体の創傷治療及び／又は創傷治癒促進のための薬剤を提供する。
【００５７】
本発明の薬剤に含まれてもよい有効成分として、FGF7, 9, 10, 11, 16, 18, 22及び23、TGF-beta並びにHGFの全長又は部分ペプチドがある。FGF7, 9, 10, 11, 16, 18, 22及び23、TGF-beta並びにHGFのmRNAの塩基配列をそれぞれ配列番号９(ヒト由来FGF7)、１１(ヒト由来FGF9)、１３(ヒト由来FGF10)、１５(ヒト由来FGF11)、１７(ヒト由来FGF16)、１９(ヒト由来FGF18)、２１(ヒト由来FGF18)、２３(ヒト由来FGF22)、１(ヒト由来FGF23)、３(マウス由来FGF23)、５(ラット由来FGF23)、７(ゼブラフィッシュ由来FGF23)、２５(ヒト由来TGF-beta)、２７(ヒト由来HGF)及び２９(ヒト由来HGF)に示す。FGF7, 9, 10, 11, 16, 18, 22及び23、TGF-beta並びにHGFのmRNAがコードするアミノ酸配列をそれぞれ配列番号１０(ヒト由来FGF7)、１２(ヒト由来FGF9)、１４(ヒト由来FGF10)、１６(ヒト由来FGF11)、１８(ヒト由来FGF16)、２０(ヒト由来FGF18)、２２(ヒト由来FGF18)、２４(ヒト由来FGF22)、２（ヒト由来FGF23）、４（マウス由来FGF23）、６（ラット由来FGF23）、８（ゼブラフィッシュ由来FGF23）、２６(ヒト由来TGF-beta)、２８(ヒト由来HGF)及び３０(ヒト由来HGF)に示す。
【実施例】
【００５８】
以下、実施例を用いて本発明をより詳細に説明するが、本発明の技術的範囲は以下の実施例に限定されるものではない。
【００５９】
〔実施例１〕
本実施例では、マウスの皮膚の全層欠損創傷治癒モデルにおけるFGFファミリーに属する遺伝子の発現プロファイルを検討した。
【００６０】
＜材料と方法＞
マウスおよび皮膚サンプルの調製
皮膚の全層欠損創傷治癒の実験用としてヘアレス雄マウス（hr）25匹（７週齢及び３３週齢）を日本エスエルシー株式会社から入手し、標準的な実験動物用飼料および水を任意に摂取させて飼育した。７週齢マウスについては1週間、33週齢マウスについては2週間馴化させた後、マウス5匹を安楽死させ、背部の皮膚サンプルを分離し、「0日（休止期）」サンプルとした。残りのマウス20匹については、ネンブタール麻酔下で背部皮膚を４カ所について、直径8mmの円形に切り取り、全層欠損創傷を作成した。そして快復後、異なる時期、すなわち創傷作成後２日、４日、７日、１５日、２１日を選択し、マウスを安楽死させ、創傷部を含む8mmx8mmの正方形の全層皮膚サンプル（表皮、毛幹、毛包、皮脂腺、皮下脂肪、皮膚筋及び血管を含む）を採取した。全層皮膚サンプルは、後述するmRNA分離、in situハイブリダイゼーション及び免疫組織染色に使用した。なお、これらの実験は基本的に同一試験計画によって3回実施して結果の再現性を確証した。
免疫組織染色用の皮膚サンプルは、最初に10％ホルムアルデヒドで室温24時間固定し、標準的な方法によってパラフィンで包理した。
【００６１】
mRNA調製および逆転写
トータルRNAは、上述したように準備した皮膚サンプルからIsogen（株式会社ニッポンジーン）を製造業者の取扱説明書に従って使用して調製した。次に、Oligotex-dT30 Super mRNA精製キット（タカラバイオ株式会社）を用いて、トータルRNAからmRNAを精製した。精製したmRNAサンプル（100ng）を鋳型とし、プライマとしてOligo(dT)12-18を用いたSuperScript II（Gibco BRL）によって全量20mlで逆転写反応を行った。
【００６２】
PCRプライマの設計およびFGF cDNAのクローニング
各FGFのmRNA量をリアルタイムPCRによって分析できるように、特異的なプライマセットを設計した（表１）。各FGFのmRNAを定量する際、コピー数対照としてcDNAフラグメントが必要となる。このcDNAフラグメントをクローニングする際、同じプライマセットを使用した。
【００６３】
【表１】
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上述した逆転写反応の反応産物（RT混合物）を蒸留水で10倍希釈したものをPCR増幅の鋳型とした。PCR増幅には、Pfuポリメラーゼ（Stratagene社製）を製造業者の取扱説明書に従って使用した。そして、PCR増幅反応混合液の一部を2.0％アガロースゲルを用いた電気泳動に使用し、増殖産物の大きさを確証した。また、各FGFに相当するそれぞれのcDNAをクローニングするため、PCR産物をpCR-BluntII-TOPOベクター（Invitrogen社製）に連結してE.coliの形質転換に使用した。リコンビナントプラスミドのヌクレオチド配列はBigDyeターミネータサイクルシークエンシングキット及びABI PRISM 310 Genetic Analyzer（Applied Biosystems社製）を用いて確認した。
【００６４】
リアルタイムPCRによるmRNAコピー数の定量
リアルタイムPCR増幅は、1:10に希釈したRT混合物2mlを鋳型として用い、Light Cycler（Roche Diagnostics社製）によって実施した。各FGFの絶対コピー数を得るため、各FGFに対応するプラスミッドDNAをコピー数対照としてそれぞれ使用した。Light Cyclerによって増幅したDNAの定量には、Cyber Greenを使用した。特異性の高いプライマとともに、最適なアニーリング温度、伸長時間、および取得温度でLight Cycler反応を実施した。プライマの特異性はバックグラウンド用の配列としてマウスの全cDNAを用いて最初に確証した。プライマの特異性および反応条件はプラスミドDNAに増幅フラグメントをクローニングすることによって、さらに実験的に実証してこれらの配列を検証した。
さらに個別実験の最後に増幅産物の融点温度を測定してこれらが融点温度で均一であることが実証された。定量実験後、産物を2.0％アガロースゲル電気泳動で分析し、反応によって既知サイズのDNAフラグメントが正確に増幅されていることが確証された。この実験系によって個別遺伝子の特異的な定量が保証される。mRNAの評価では、Light Cyclerによる同一実験に標的cDNA配列を有するDNAの連続希釈サンプルを含め、これらの測定から個別サンプルと関連するmRNAの絶対コピー数を算出した。またハウスキーピング遺伝子のコピー数を同じ方法で評価してこれらの量が予測範囲内であることを確認した。
【００６５】
＜結果＞
FGF及びFGFRファミリメンバー、TGF-beta、HGFの発現プロファイル
創傷治癒の各時点における各FGFおよびFGFRのmRNA発現量をそれぞれ図1A、図1B及び図2に示した。
図1Aから、創傷治癒の過程で発現量が高まる遺伝子はFgf-5、-7、-9、-10、-11、-16、-18及び-23であることが判明した。本実施例では、健康な皮膚で発現することが既に知られているこれら遺伝子、すなわちFGF1、-2、-5、-7、-10、-13及び-22に加えて、健康な皮膚ではほとんど発現がみられないFGF23 mRNAも創傷治癒の過程では高い量で発現しており、FGF23 mRNA量が創傷作成後２日目ないし４日目にピークを示す（図1A）ことが明らかになった。また、図1Aからは、加齢個体において、上記の創傷治癒の過程で発現量が高まる遺伝子の多くが、若齢個体よりも発現レベルが低下することが明らかとなった。
FGFRに関しては、FGFR1及びFGFR3のmRNAともに多量に発現されたが（図2）、前者では最も強い発現が2日目及び15日目に現れ、後者では創傷作成後の発現昂進はみられなかった。FGFR2のmRNA発現量は、上皮細胞に特異的であるIIIbサブクラスも含めてFGFR1又は3のmRNAよりも少なく（図2）、FGFR4のmRNA発現量は4種類の受容体の中で最も低かった（図2）。
TGF-beta mRNA、HGF mRNAに関しては、健康な皮膚での発現レベルも高いが、創傷治癒の過程で、さらに発現量が高まることが明らかになった。
【００６６】
〔実施例２〕
実施例１において、皮膚におけるFGF23 mRNAの発現が新規に明らかになったため、本実施例では、特異的抗体を用いて免疫組織染色によりFGF23タンパク質の分布を測定した。
【００６７】
＜材料と方法＞
免疫組織染色
抗FGF23抗体は以下のように作成した。FGF23の一次構造から、二次構造、親水性、他のタンパク質との相異性などを勘案して、抗原性と特異性が高いと考えられる部分ペプチドを予測し、これを化学合成して精製した。このペプチドを、キーホールリンペットヘモシアニンタンパク質（KLH）と共有結合させ、ウサギにアジュバントと共に複数回注射し、抗体を含む血清を得た。抗体のタイターをELISA法で評価した後（データは示さない）、イムノブロッティングにより特異性を確認した。
免疫組織染色はパラフィン包埋組織切片を抗FGF23抗体で染色することにより行った。若齢マウスの創傷治癒過程（創傷作成後４日目）の皮膚をホルマリン固定後、パラフィンに包埋し、４マイクロメートルの厚さの切片を作成した。これをスライドグラス上に貼り付け、脱パラフィン処理を行った。その後、0.01Mクエン酸(pH6.0)中で２分間煮沸して抗原活性化を行い、抗FGF23抗体とインキュベートした。洗浄後、ビオチン化ヤギ抗ウサギIgGとインキュベートし、洗浄した。これをアビジン化パーオキシデースとインキュベートし、パーオキシデースの基質であるアミノエチルカルバゾール試薬で発色した。
＜結果＞
免疫組織染色の結果を図３に示す。図３に示すように、創傷治癒過程4日目における皮膚では、FGF23 タンパク質は高いレベルで存在し、細胞の遊走や増殖が盛んに起こっている創の周囲及び底部の皮膚、特に肉芽組織にのみ発現されることを認めた（図3；紫色のシグナル）。一方、FGF23 mRNAがほとんど発現していない健常皮膚ではシグナルを生じなかった（図は示さない）。
【００６８】
〔実施例３〕
本実施例では、FGF23の皮膚における機能を評価するため、線維芽細胞（NIH3T3細胞）について、FGF23による細胞増殖促進効果を調べた。
【００６９】
＜材料と方法＞
細胞増殖アッセイ
マウス線維芽細胞（NIH3T3）（ATCCから入手）は、生育培地（10%仔ウシ血清を加えたDMEM基礎培地）で継代培養して［3H］-チミジン取り込みアッセイに使用した。
細胞はトリプシン処理して24wellプレート（Sumilon社製）に、密度が5×103細胞/ウェルで24ウェル（HFDP細胞）に分注して生育培地で37℃に維持した。次の日に生育培地を、0.5%チャコール吸着子ウシ血清を含むDMEM基礎培地で置き換え、細胞を48時間培養してから、5 μg/mlのヘパリンの共存下で、所定の濃度のFGFで刺激した。FGFを加えてから24時間後に再びFGFを加え、さらに24時間後に細胞を採取して、細胞数を計測した。
＜結果＞
結果を図４に示す。図４から判るように、適切な濃度（1及び3 ng/ml）のFGF23によって、細胞数の増加が誘導されていた。
この結果から、FGF23の全長及び/又は部分ペプチドは、皮膚の創傷治癒の一過程である繊維芽細胞の増殖を促進する作用があることが実証された。
【００７０】
〔実施例４〕
本実施例では、FGF23のin vivoでの影響を調べるため、細胞の増殖や分化のシグナル伝達の結果として起こる初期遺伝子c-fosの発現が誘導されているかどうかを創傷治癒の過程にあるマウスで試験した。
【００７１】
＜材料と方法＞
免疫組織染色
免疫組織染色は、実施例２と同様の操作によりパラフィン包埋組織切片を抗c-fos抗体（Calbiochem-Novabiochem社）で染色することにより行った。皮膚組織切片は、若齢マウスの創傷治癒過程（創傷作成後４日目）の皮膚から作成した。
＜結果＞
結果を図5に示す。図5は創傷治癒過程（創傷作成後４日目）の皮膚切片を抗c-fos抗体で染色した結果である。抗c-fos抗体によって強く染まる領域は、実施例２で観察されたFGF23タンパク質の発現部位と類似性が高いことが分かった。
この結果から、FGF23タンパク質の発現によって、細胞の増殖や分化、遊走につながるc-fosの発現が誘導されていると考えられることがin vivoにおいて示された。
【産業上の利用可能性】
【００７２】
本発明の薬剤は、創傷治癒及び／又は創傷治療促進のために利用できる。特に、本発明の薬剤は、加齢個体の創傷治癒及び／又は創傷治療促進に有効である。
【００７３】
また、本発明のスクリーニング方法により、加齢個体における創傷治癒及び／又は創傷治療促進に効果のある物質を探索することができる。
【図面の簡単な説明】
【００７４】
【図１Ａ】創傷治癒の各段階におけるFGF各メンバー遺伝子の発現プロファイルを示す図である。
【図１Ｂ】創傷治癒の各段階におけるFGF各メンバー遺伝子の発現プロファイルを示す図である。
【図２】傷治癒の各段階におけるFGFRファミリーに属する遺伝子の発現プロファイルを示す特性図である。
【図３】組織免疫染色実験（抗FGF23抗体で染色）の結果を示す写真である。免疫染色で調べた創傷治癒過程でのFGF23タンパク質の局在が示されている。図左側：健常皮膚（上が表皮、その下に真皮、皮下脂肪が見える）図右側：治癒過程の皮膚（「かさぶた」が上に載っている）赤いシグナルで示されるFGF23タンパク質が、治癒過程の創傷とごく近傍という局所にのみ特異的に発現していることがわかる。
【図４】DNA合成アッセイの結果を示す特性図である。X軸に示す濃度のFGF23タンパク質共存下でNIH3T3細胞を培養し、一定時間後にTetraColor ONE試薬（生化学工業株式会社）を用いて測定した細胞数をY軸に表す。
【図５】組織免疫染色実験（抗Fos抗体で染色）の結果を示す写真である。
【配列表フリーテキスト】
【００７５】
＜配列番号１＞
配列番号１は、ヒト由来FGF23のmRNAのヌクレオチド配列を示す。
＜配列番号２＞
配列番号２は、ヒト由来FGF23のmRNAがコードするアミノ酸配列を示す。
＜配列番号３＞
配列番号３は、マウス由来FGF23のmRNAのヌクレオチド配列を示す。
＜配列番号４＞
配列番号４は、マウス由来FGF23のmRNAがコードするアミノ酸配列を示す。
＜配列番号５＞
配列番号５は、ラット由来FGF23のmRNAのヌクレオチド配列を示す。
＜配列番号６＞
配列番号６は、ラット由来FGF23のmRNAがコードするアミノ酸配列を示す。
＜配列番号７＞
配列番号７は、ゼブラフィッシュ由来FGF23のmRNAのヌクレオチド配列を示す。
＜配列番号８＞
配列番号８は、ゼブラフィッシュ由来FGF23のmRNAがコードするアミノ酸配列を示す。
＜配列番号９＞
配列番号９は、ヒト由来FGF7のmRNAのヌクレオチド配列を示す。
＜配列番号１０＞
配列番号１０は、ヒト由来FGF7のmRNAがコードするアミノ酸配列を示す。
＜配列番号１１＞
配列番号１１は、ヒト由来FGF9のmRNAのヌクレオチド配列を示す。
＜配列番号１２＞
配列番号１２は、ヒト由来FGF9のmRNAがコードするアミノ酸配列を示す。
＜配列番号１３＞
配列番号１３は、ヒト由来FGF10のmRNAのヌクレオチド配列を示す。
＜配列番号１４＞
配列番号１４は、ヒト由来FGF10のmRNAがコードするアミノ酸配列を示す。
＜配列番号１５＞
配列番号１５は、ヒト由来FGF11のmRNAのヌクレオチド配列を示す。
＜配列番号１６＞
配列番号１６は、ヒト由来FGF11のmRNAがコードするアミノ酸配列を示す。
＜配列番号１７＞
配列番号１７は、ヒト由来FGF16のmRNAのヌクレオチド配列を示す。
＜配列番号１８＞
配列番号１８は、ヒト由来FGF16のmRNAがコードするアミノ酸配列を示す。
＜配列番号１９＞
配列番号１９は、ヒト由来FGF18(variant 1)のmRNAのヌクレオチド配列を示す。
＜配列番号２０＞
配列番号２０は、ヒト由来FGF18(variant 1)のmRNAがコードするアミノ酸配列を示す。
＜配列番号２１＞
配列番号２１は、ヒト由来FGF18(variant 2)のmRNAのヌクレオチド配列を示す。
＜配列番号２２＞
配列番号２２は、ヒト由来FGF18(variant 2)のmRNAがコードするアミノ酸配列を示す。
＜配列番号２３＞
配列番号２３は、ヒト由来FGF22のmRNAのヌクレオチド配列を示す。
＜配列番号２４＞
配列番号２４は、ヒト由来FGF22のmRNAがコードするアミノ酸配列を示す。
＜配列番号２５＞
配列番号２５は、ヒト由来TGF-betaのmRNAのヌクレオチド配列を示す。
＜配列番号２６＞
配列番号２６は、ヒト由来TGF-betaのmRNAがコードするアミノ酸配列を示す。
＜配列番号２７＞
配列番号２７は、ヒト由来HGF(variant 1)のmRNAのヌクレオチド配列を示す。
＜配列番号２８＞
配列番号２８は、ヒト由来HGF(variant 1)のmRNAがコードするアミノ酸配列を示す。
＜配列番号２９＞
配列番号２９は、ヒト由来HGF(variant 3)のmRNAのヌクレオチド配列を示す。
＜配列番号３０＞
配列番号３０は、ヒト由来HGF(variant 3)のmRNAがコードするアミノ酸配列を示す。
＜配列番号３１〜７４＞
配列番号３１〜７４は、プライマーのヌクレオチド配列を示す。
【図１Ａ】
2006347979.tif 000004
【図１Ｂ】
2006347979.tif 000005
【図２】
2006347979.tif 000006
【図３】
2006347979.tif 000007
【図４】
2006347979.tif 000008
【図５】
2006347979.tif 000009
【配列表】
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