(57)【要約】      （修正有）【課題】日常的に安心して摂取できる脂肪蓄積抑制剤、抗肥満剤及びこの脂肪蓄積抑制剤を含む食品添加物並びにこれらを配合した食品及びペットフードを提供する。【解決手段】リグナン特にセコイソラリシレジノールジグリコシドが最適であり、その他にマタイレシノール，ピノレシノール，イソラシレシノール等のリグナンを有効成分として含有することを特徴とする脂肪蓄積抑制剤、抗肥満剤、食品添加物、食品及びペットフードである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記化学式（１）で示されるリグナンを有効成分として含有することを特徴とする脂肪蓄積抑制剤。
【化１】
2006347978.tif 000008
（式中、Ｒ１〜Ｒ４はそれぞれ独立して水素原子または炭素数１〜３のアルキル基、Ｒ５、Ｒ６はそれぞれ独立してヒドロキシル基、あるいはグルコース、ガラクトースおよびフルクトースからなる群から選ばれる１種また２種以上の糖が１〜３個グリコシド結合した糖鎖残基、あるいはＲ５、Ｒ６が一緒になって酸素原子を表す。）
【請求項２】
請求項１に記載のリグナンを有効成分として含有することを特徴とする抗肥満剤。
【請求項３】
請求項１に記載の脂肪蓄積抑制剤を含有することを特徴とする食品添加物。
【請求項４】
請求項１に記載の脂肪蓄積抑制剤又は請求項３に記載の食品添加物を配合したことを特徴とする食品。
【請求項５】
請求項１に記載の脂肪蓄積抑制剤を含有することを特徴とするペットフード。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
リグナンを有効成分とする脂肪蓄積抑制剤、抗肥満剤及びこの脂肪蓄積抑制剤を含む食品添加物並びにこれらを配合した食品及びペットフードに関する。
【背景技術】
【０００２】
リグナンは、抗ガン物質、抗酸化物質として知られている（例えば特許文献１参照）。
また、植物性エストロゲンとしても知られている。
アマニには前記リグナンが多量に含有されている。
特にセコイソラリシレジノールジグリコシド（以下、ＳＤＧともいう）が最も多量に含まれているほか、マタイレシノール、ピノレシノール、イソラレシレジノールなどのリグナンも少量含まれている。
アマニ以外では、繊維分の多い植物に含まれやすく、穀物では小麦、大麦、燕麦、豆類ではインゲン豆や大豆などに含まれている（例えば非特許文献１参照）。
【０００３】
【特許文献１】特開平９−２０８４６１号公報
【非特許文献１】ダイアン・Ｈ・モーリス著  「アマニ  その健康と栄養に関する小冊子」第１版、１９９４年、ｐ．１〜７８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
近年、肥満が糖尿病や高脂血症や高血圧症に結びつき、その結果、虚血性心疾患や脳卒中などの動脈硬化性疾患を引き起こすことが解明されてきている。
また、肥満は脂肪組織への脂肪細胞への過剰な脂肪の蓄積によって引き起こされるが、現在の高カロリーで高脂肪な食事が原因ではないかと考えられている。
本発明の目的は、日常的に安心して摂取できる脂肪蓄積抑制剤、抗肥満剤及びこの脂肪蓄積抑制剤を含む食品添加物並びにこれらを配合した食品及びペットフードを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者は前記の目的を達成するために鋭意研究を重ねた結果、アマニ種子に多量に含まれるリグナン類に脂肪蓄積抑制作用があることを見出し、本発明を完成するに至った。
従って、本発明は、
（１）下記化学式（１）で示されるリグナンを有効成分として含有することを特徴とする脂肪蓄積抑制である。
【化２】
2006347978.tif 000002
（式中、Ｒ１〜Ｒ４はそれぞれ独立して水素原子または炭素数１〜３のアルキル基、Ｒ５、Ｒ６はそれぞれ独立してヒドロキシル基、あるいはグルコース、ガラクトースおよびフルクトースからなる群から選ばれる１種また２種以上の糖が１〜３個グリコシド結合した糖鎖残基、あるいはＲ５、Ｒ６が一緒になって酸素原子を表す。）
（２）前記化学式（１）で示されるリグナンを有効成分として含有することを特徴とする抗肥満剤である。
（３）前記脂肪蓄積抑制剤を含有することを特徴とする食品添加物である。
（４）前記脂肪蓄積抑制剤又は前記食品添加物を配合したことを特徴とする食品である。
（５）前記脂肪蓄積抑制剤を含有することを特徴とするペットフードである。
【発明の効果】
【０００６】
本発明の抗肥満剤により高カロリーで高脂肪な食事を取っても、体脂肪の蓄積を抑制することができ肥満を防ぐことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
以下、本発明を詳細に説明する。
本発明において使用するリグナンは前記化学式（１）で示される。
式中、Ｒ１〜Ｒ４はそれぞれ独立して水素原子または炭素数１〜３のアルキル基、Ｒ５、Ｒ６はそれぞれ独立してヒドロキシル基、あるいはグルコース、ガラクトースおよびフルクトースからなる群から選ばれる１種また２種以上の糖が１〜３個グリコシド結合した糖鎖残基、あるいはＲ５、Ｒ６が一緒になって酸素原子を表す。
【０００８】
アマニには、下記化学式（２）で示すセコイソラリシレジノールジグリコシド（ＳＤＧ）が最も多量に含まれている。
【化３】
2006347978.tif 000003
（式中、Glcはグルコース残基を表す）
【０００９】
本発明におけるＳＤＧ以外の配糖体は、ＳＤＧを原料として公知の糖転移酵素を利用する方法等により容易に製造することができる。
また、前記式中Ｒ５、Ｒ６で示される置換基は生体内で分離するため生理活性にほとんど影響しないと考えられる。
【００１０】
ＳＤＧは化学合成により得ることができる他、アマ種子から公知の方法で抽出、精製して得ることができる。
例えば、アマ種子をミキサー、ホモジナイザーなどの粉砕機で粉砕する。用いるアマ種子は、国内産、外国産などの産地や栽培用、搾油用の品種を問わず使用でき、焙煎、非焙煎の処理の有無に関係なく原料として使用できる。また、搾油工程で産生するアマニ粕を原料としてもよい。粉砕物をｎ-ヘキサン等の脂溶性有機溶媒で油分を削除し、脱脂物としてもよい。ＳＤＧが抽出可能な低級アルコール（エタノール、メタノール、ｎ-プロパノール、イソプロパノール、ｎ-ブタノールなど）、またはその含水アルコールで抽出し、必要であればケン化処理、中和を行い、吸着剤としてオクタデシルシリカ（ＯＤＳ）、シリカゲルなどを使用して、分画、精製することができる。
【００１１】
ＳＤＧ精製画分を濃縮乾固したものは、茶褐色の粉末状であり、水や含水アルコールなどに溶解する。  
保管は、抗酸化物であることから、冷暗所にて保管することが好ましい。
熱、ｐＨに対して安定であることから、脂肪蓄積抑制剤、抗肥満剤、食品添加物、食品およびペットフードへの配合も可能である。
【００１２】
脂肪蓄積抑制剤、抗肥満剤としては公知の方法により助剤とともに任意の形態に製剤化して、経口または非経口投与が可能な脂肪蓄積抑制剤及び抗肥満剤とすることができる。
【００１３】
経口投与する場合は、カプセル剤又は錠剤、顆粒剤、細粒剤、散剤等として投与できる。
また非経口投与する場合は、注射剤、点滴剤及び坐薬のような剤型で投与でき、局所組織内投与、皮内、皮下、筋肉内及び静脈内注射、局所への塗布、噴霧、坐剤、膀胱内注射等の外用的投与法等も用いることができる。
【００１４】
投与量は、投与方法と、患者の年齢、病状や一般状態等によって変化し得るが、大人では通常、１日当たり有効成分として１０〜６０,０００mgが適当であり、小人では１０〜３０,０００mgが適当である。
【００１５】
本発明の脂肪蓄積抑制剤は、一般食品や健康食品に配合することができ、また、食品添加物の成分とすることもできる。
本発明の脂肪蓄積抑制剤あるいは食品添加物を配合する食品は特に限定されず、例えば食パン、菓子パン、パイ、デニッシュ、ドーナツ、ケーキ等のベーカリー食品、うどん、そば、中華麺、焼きそば、パスタ等の麺類、天ぷら、コロッケ等のフライ類、カレー、シチュー、ドレッシング等のソース類、ふりかけ類、かまぼこ等の練り製品、ジュース等の飲料、スナック菓子、米菓、飴、ガム等の菓子類を挙げることができる。
【００１６】
本発明の脂肪蓄積抑制剤はまた、ペットフードに配合することができる。
ペットフードとは、犬、猫、ハムスター、リス等の哺乳類の愛玩動物用の食餌をいう。
本発明のペットフードの形態は特に限定されるものではなく、例えばドライタイプ、ウェットタイプ、セミモイストタイプ、ビスケットタイプ、ソーセージタイプ、ジャーキータイプ、粉末、顆粒、カプセルなどが挙げられる。
【実施例】
【００１７】
以下本発明を実施例により具体的に説明する。
［抽出精製］
アマニ種子を粉砕し、ｎ−ヘキサンにより脱脂した後、含水メタノールにより還流抽出を行った。
前記抽出物をケン化処理し、中和後、吸着剤としてオクダデシルシリカ、シリカゲルを使用してＳＤＧ画分を精製した。
【００１８】
ＳＤＧ含有量は、高速液体クロマトグラフィーで、分子量は、飛行時間型質量分析計（以下ＴＯＦ／ＭＳともいう）で確認した。
高速液体クロマトグラフィーによる測定結果を図１に、ＴＯＦ／ＭＳによる分子量の測定結果を図２に示す。
図１及び図２において一番高いピークがＳＤＧである。
【００１９】
［安全性試験］
（１）急性毒性試験
ＳＤＧ含有量２０質量％品（ＳＤＧ６０％品：希釈剤αサイクロデキストリン、1：2で混合）の安全性研究の一環として、マウス（雌、雄）を用い、単回経口投与による急性毒性試験を行った。投与量は、５ｇ／ｋｇを最高として、２．５g／ｋｇ、1．２５g／ｋｇ、０．６２５g／ｋｇとした。
【００２０】
その結果、いずれの群においても死亡を示さず、観察期間中の一般症状としても全く異常は示さなかった。さらに病理解剖検査において、いずれの群も全く異常を示さなかった。
以上の結果から、ＳＤＧ２０質量％品のマウス（雄雌）に対する急性毒性値（LD50値）は、5g／ｋｇ以上であり、本物質は非常に安全性の高い物質であることが示された。
【００２１】
（2）変異原生試験について
サオモネラティフィムリウム（Saomonella  typhimurium）ＴＡ１００、ＴＡ１５３５、ＴＡ９８、ＴＡ１５３７及びエシェリシアコリ（Escherichia  coli）ＷＰ２uvrＡ菌株を用いてＳＤＧ２０質量％品の変異原性を試験した。その結果、ＳＤＧ２０質量％品において直接法及び代謝活性化法で用いたいずれの菌株でも、遺伝子突然変異を誘発しなかった。
【００２２】
［実施例１］
［前駆脂肪細胞分化抑制作用の確認試験］
脂肪細胞では、中性脂肪の合成、分解に関与する酵素、グリセロール−３−リン酸脱水素酵素（ＧＰＤＨ）などの活性が著しく上昇し、細胞内に中性脂肪の油滴を蓄積する。
この原理を利用して、マウス由来の前駆脂肪細胞を用い、アマニＳＤＧの脂肪蓄積に及ぼす影響を試験した。
前駆脂肪細胞（3T3-L1）を３７℃で培養し、コンフレンスに達した後、インスリン、デキサメタゾン、イソブチル−1−メチルキサンチンを含む培地で引き続き培養すると脂肪細胞へ分化する。この分化後の中性脂肪粒の大きさを経時的に観察した。脂肪蓄積の程度を観察する際に、アマニＳＤＧをインスリン、デキサメタゾン、イソブチル−1−メチルキサンチンと同時に添加した。
分化の程度の判定は、分化のマーカーであるグルセロール‐３‐リン酸脱水素酵素    （以下ＧＰＤＨともいう）活性を測定することで行った。ＧＰＤＨ活性測定は、４回行い、平均値±標準偏差で示した。
精製したアマニＳＤＧ含量８８％粉末を用い、培地に０．５mg／ml、１．０mg／mlとなるよう添加した。
統計的検定はANOVA解析後、Fischer’s 最小有意差法を行い解析した。
また、これ以外の試験も同様に統計処理した。
【００２３】
結果を表１に示す。
【表１】
2006347978.tif 000004
濃度依存的なＧＰＤＨ活性の低下が確認され、脂肪蓄積の抑制傾向があることからアマニＳＤＧの肥満予防効果が確認できた。
【００２４】
［体重抑制作用の試験］
７週齢の雄性C57BL/6マウス（日本エスエルシー株式会社より入手した）を実験動物として用いた。
前記マウスを１週間普通飼料を与えて飼育後、３群にわけて（５匹/群）、表２に示す飼料を８週間自由摂食させ体重変化を測定した。
水は、水道水を自由に与えた。
飼料は遮光袋に２日分毎に小分けし、４℃で保存した。
【表２】
2006347978.tif 000005
【００２５】
マウスの体重変化の測定結果を表３に示す。
【表３】
2006347978.tif 000006
アマニＳＤＧを加えることで体重増加抑制効果が確認された。
【００２６】
［脂肪重量抑制作用の試験］
８週間後、前記マウスを、１８時間絶食させエーテル麻酔し、ただちに開腹して内臓脂肪（腎周囲脂肪、副睾丸周囲脂肪）を採取し、重量測定を行った。
【００２７】
重量測定結果を表４に示す。
【表４】
2006347978.tif 000007
高脂肪食群と有意に差がある群；*P<0.05
高脂肪食摂取群と比較して、高脂肪食に1.0％ＳＤＧ添加群で腎周囲脂肪は有意に減少し、副睾丸周囲脂肪は減少傾向が認められた。
【００２８】
［実施例２］
（錠菓及び錠剤の製造）
卵殻カルシウム１０８g、ピロリン酸第二鉄２g、アスコルビン酸４０g、微結晶セルロース４０g、還元麦芽糖２８０g、ＳＤＧ２５gをミキサーによって常法により混合した後、打錠し、錠菓及び錠剤を製造した。
【００２９】
［実施例３］
（ビスケットの製造）
小麦粉１２０g、ＳＤＧ２g、砂糖３５g、ショートニング１５g、全卵粉２g、食塩１g、炭酸水素ナトリウム０．６g、炭酸アンモニア０．７５g、水２０gを用いて、常法によりドウを作成し、成形、焙焼してビスケットを製造した。
【００３０】
［実施例４］
（パンの製造）
小麦粉３kg、ＳＤＧ３ｇ、イースト６０ｇ、イーストフード３ｇ、砂糖１５０ｇ、食塩６０ｇ、ショートニング１５０ｇ、脱脂粉乳６０ｇ、水２.１kgを用いて、常法によりドウを作成し、成形、焙焼してパンを製造した。
【００３１】
［実施例５］
（うどんの製造）
中力小麦粉１００質量部に対して、１質量部のＳＤＧ、４０質量部の水、３質量部の食塩を加えたものを、常法により混捏し、複合１回、圧延３回した後、切刃１０番で切り出し、うどんの麺線を得た。
前記うどんを１３分間ゆで茹でうどんを得た。
【００３２】
［実施例６］
（ペットフードの製造）
冷凍牛肉７５質量部、油脂２質量部、小麦蛋白１０質量部、プロピレングリコール５ 質量部、小麦粉８質量部、ＳＤＧ１質量部を常法により混捏、乾燥して棒状ドックフードを得た。
【００３３】
［実施例７］
（サプリメントの製造）
マルチトール３５質量部、デキストリン２０質量部、卵殻カルシウム１０質量部、食物ファイバー１０質量部、ビタミンミックス５質量部、ショ糖脂肪酸エステル５質量部、ＳＤＧ１５質量部を使って打錠し、錠剤であるサプリメントを得た。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】高速液体クロマトグラフィーによるＳＤＧ含有量の測定結果である。
【図２】飛行時間型質量分析計（TOF/MS）によるＳＤＧ分子量の測定結果である。
【図１】
2006347978.tif 000009
【図２】
2006347978.tif 000010