(57)【要約】【課題】  本発明は、多発性硬化症の治療の有効性を早期に判定する方法、および診断キットを提供することを課題とする。【解決手段】  多発性硬化症治療薬の投与前および投与後に被検者から採取された試料を用意する工程と、前記試料のＩＬ−６を測定する工程と、前記試料のＩＬ−６測定値を比較し、治療後の試料のＩＬ−６測定値が治療前の試料のＩＬ−６測定値より高い時に当該治療薬が有効であると判定する工程とを備える多発性硬化症治療薬の有効性を判定する方法、および診断キット。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程（ａ）〜（ｃ）を含む、被検者について多発性硬化症治療薬の有効性を検査する方法。
（ａ）多発性硬化症治療薬の投与前および投与後に被検者から採取された試料を用意する工程。
（ｂ）前記試料のＩＬ−６を測定する工程。
（ｃ）前記試料のＩＬ−６測定値を比較し、治療後の試料のＩＬ−６測定値が治療前の試料のＩＬ−６測定値より高い時に当該治療薬が有効であると判定する工程。
【請求項２】
以下の工程（ａ）〜（ｃ）を含む、被検者について多発性硬化症治療薬の有効性を検査するための診断キット。
（ａ）多発性硬化症治療薬の投与前および投与後に被検者から採取された試料を用意する工程。
（ｂ）前記試料のＩＬ−６を測定する工程。
（ｃ）前記試料のＩＬ−６測定値を比較し、治療後の試料のＩＬ−６測定値が治療前の試料のＩＬ−６測定値より高い時に当該治療薬が有効であると判定する工程。
【請求項３】
前記被検試料が治療薬投与後２４時間以内の被検者より得られたものである事を特徴とする、請求項２に記載の診断キット。
【請求項４】
前記治療薬がインターフェロンである請求項２または３のいずれかに記載の診断キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、多発性硬化症の治療の有効性を判定する方法、および診断キットに関する。
【背景技術】
【０００２】  多発性硬化症（ＭＳ）は、脳や脊髄などの中枢神経（視神経を含む）の髄鞘が何らかの原因で炎症を起こし、障害され脱髄する事によって発症する。病巣が複数の部位に及ぶこと、寛解と憎悪を繰り返すことが臨床的な特徴である。脱髄が起きる原因として、自己免疫によるとする説が有力であるが、未だ明らかにはなっていない。患者の７０％前後に視力減衰、運動麻痺および知覚障害が、また４０％前後に運動失調、膀胱障害等が認められる（非特許文献１）。【０００３】    多発性硬化症の治療には、急性期にはステロイド薬による炎症抑制、血漿交換療法が行なわれ、多様な症状に関しては対症療法が行なわれる。しかし、前述の薬剤では、病気の進行や再発を食い止める事はできない。一方、病気の進行や再発を抑制する薬剤としてインターフェロン、免疫抑制剤の使用が挙げられる。これらの治療のうち、インターフェロン療法はＭＳの長期的な予後を改善する治療薬の中心的な薬剤として、インターフェロンβ１ａ（ＩＦＮβ−１ａ）とβ１ｂ（ＩＦＮβ−１ｂ）が国際的に利用されているが、２００４年５月現在で日本で承認されているのは、ＩＦＮ−β１ｂのみである。ＩＦＮβ−１ａ、ＩＦＮβ−１ｂの効果および有害事象には共通点が多く、同様の機序で作用していると予測できる。【０００４】  インターフェロン療法の効果には個人差が認められ、神経細胞の障害を抑制する効果は少なくとも１年程度の長期間にわたる投与の後でないと判定する事ができない。インターフェロン療法は、現在用いられている薬剤は自己注射を必要とする事、注射部位の発赤、頭痛、関節痛等の副作用が認められる事などから、効果が判然としない治療を長期間にわたり受ける患者の負担は少なくない。経済的側面においても患者個人および社会の負担は多大である。このような背景より、長期間にわたる投与を待たず、早期にＭＳの治療効果を判定できる方法の開発が望まれていた。【０００５】  一方、本発明で指標として用いられるインターロイキンー６（ＩＬ−６）は、炎症に関連するサイトカインとして、ＭＳとの関連についての研究がなされてきた。また、インターフェロン療法の効果を予測するための研究において、末梢単核球をインターフェロン処理した時のＩＬ−６の変動が調べられたがＩＬ−６について有意な結果は得られていない（非特許文献２）。インターフェロン投与後、数時間という短いオーダーでＩＬ−６が上昇する事は報告されている（非特許文献３）が、インターフェロン療法の効果との関連については報告されていない。また、ＩＬ−６は炎症性疾患のバイオマーカーとして臨床検査に利用されており、関節リウマチ治療薬の効果判定において、治療後のＩＬ−６が治療前と比較して低下することを指標として利用できることが開示されている（特許文献１）。しかし、多発性硬化症についての記載はなく、ＩＬ−６の低下を指標としている点で本発明と異なる。
【非特許文献１】日本多発性硬化症研究班  １９７３
【非特許文献２】Ｈｏｎｇ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １５２（２００４）１２６−１３９
【非特許文献３】Ｎｉｃｏｌｅｔｔｉ  Ｆ．ｅｔ  ａｌ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ．２０００  Ｊｕｎ；１２（６）：６８２−７．
【特許文献１】特開２００５−９８８９
【０００６】  本発明は、治療薬投与前および後のＩＬ−６を比較し、投与後のＩＬ−６が投与前のＩＬ−６より上昇する事を指標とする多発性硬化症治療薬の有効性の検査方法および診断キットを提供する。
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】本発明の目的は、多発性硬化症治療の効果を早期に判定するための検査方法および診断キットを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】  本発明者らは、上記課題を解決するために、多発性硬化症治療薬投与前と投与後のサイトカイン測定値の比較を行い、ＩＬ−６測定値の変動が治療効果と密接な関連がある事を見出した。
【０００９】  即ち、本発明は、以下の〔１〕〜〔４〕を提供するものである。
【００１０】〔１〕以下の工程（ａ）〜（ｃ）を含む、被検者について多発性硬化症治療薬の有効性を検査する方法。
（ａ）  多発性硬化症治療薬の投与前および投与後に被検者から採取された試料を用意する工程。
（ｂ）  前記試料のＩＬ−６を測定する工程。
（ｃ）  前記試料のＩＬ−６測定値を比較し、治療後の試料のＩＬ−６測定値が治療前の試料のＩＬ−６測定値より高い時に当該治療薬が有効であると判定する工程。
【００１１】〔２〕以下の工程（ａ）〜（ｃ）を含む、被検者について多発性硬化症治療薬の有効性を検査するための診断キット。
（ａ）  多発性硬化症治療薬の投与前および投与後に被検者から採取された試料を用意する工程。
（ｂ）  前記試料のＩＬ−６を測定する工程。
（ｃ）  前記試料のＩＬ−６測定値を比較し、治療後の試料のＩＬ−６測定値が治療前の試料のＩＬ−６測定値より高い時に当該治療薬が有効であると判定する工程。
【００１２】〔３〕前記被検試料が治療薬投与後２４時間以内の被検者より得られたものである事を特徴とする、請求項２に記載の診断キット。
【００１３】〔４〕前記治療薬がインターフェロンである請求項２または３のいずれかに記載の診断キット。
【００１４】  ＭＳ治療に用いる治療薬は特に限定されないが、例えばインターフェロンベータ−１ａ、インターフェロンベータ−１ｂなどを挙げることができ、投与方法は皮下注射、筋肉注射、静脈注射などが考えられるがこれに限定されない。被験者から採取する試料としては血液が望ましく、通常用いられる方法で血清分離した血清部分を測定試料に用いる事が好ましいが、これに限定されるものではない。
【００１５】  ＩＬ−６測定には、ＥＬＩＺＡ法をはじめとする様々な既存の方法を用いることが可能である。例えば、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ社のＩＬ−６Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ｋｉｔなどを使用することができる。本発明の診断キットには、ＩＬ−６測定試薬の他に使用目的・用途や測定方法を記載したマニュアルを含んでいてもよく、例えば被検試料が治療薬の投与後２４時間以内の被検者より採取すべきことを記載してもよい。
【発明の効果】
【００１６】  多発性硬化症の進行を防ぐ治療においては、その効果を判定するために長期間を要するが、驚くべきことに、投与開始後３日目、５日目という治療初期の注射後２４時間までのＩＬ−６測定値の変動により、少なくとも１年を待たなければ判定が困難である治療効果の有無を判定することができる。本発明により、適切な治療の選択が可能になるほか、無駄な治療の回避による精神的・肉体的・経済的な負担を減らす事ができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】  以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが本発明はこれら実施例に制限されるものではない。
【実施例】〔実施例１〕【００１８】  文書にて同意を得たＭＳ患者２５名（女性：２０名、男性５名）につき、インターフェロンβ−１ｂ（ベタフェロン、日本シェーリング）を、隔日に皮下注射した。図１にプロトコルを示す。１日目にはベタフェロン０．８ＭＵ、その後はベタフェロン８ＭＵを隔日に皮下注射によって投与した。３日目、５日目において、皮下注射前（０ｈｒ）および皮下注射後１０ｈｒ、２４ｈｒ後に採血した。治療開始後４ヶ月、１年においては、皮下注射前（０ｈｒ）および皮下注射後２４ｈｒ後に採血した。なお、４ヶ月後、１年後に来院し投与を受ける間も隔日の皮下注射（ベタフェロン８ＭＵ）が行われた。  各回とも１０ｍｌずつ採血し、速やかに血清分離した後に５分割し−８０℃で凍結保存し、５種類のサイトカイン（インターフェロンγ、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、トランスフォーミング増殖因子−β（ＴＧＦ−β））をＥＬＩＺＡ法により測定した。ＩＬ−６の測定には、Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ社のＩＬ−６  Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ｋｉｔを使用した。【００１９】  患者情報に関しては、ベタフェロン治療開始の２年前から開始１年後までの再発回数、総合障害度評価尺度（ＥＤＳＳ：Ｅｘｐａｎｄｅｄ  Ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ  Ｓｔａｔｕｓ  Ｓｃａｌｅ）（Ｋｕｒｔｚｋｅ  ＪＦ．Ｒａｔｉｎｇ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ  ｉｎ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：Ａｎ  ｅｘｐａｎｄｅｄ  ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ  ｓｔａｔｕｓ  ｓｃａｌｅ（ＥＤＳＳ）．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  １９８３；３３（１１）：１４４４−１４５２．）の推移、核磁気共鳴画像診断（ＭＲＩ）検査結果を記録した。表１に結果の一覧を示す。【００２０】  ベタフェロン投与開始１年後のＥＤＳＳの１段階以上の進行の有無により２群に分け、インターフェロン投与初回（１日目）、第２回（３日目）、第３回（５日目）注射後（１０ｈｒ、２４ｈｒ）のサイトカイン濃度の対数と注射前（０ｈｒ）のサイトカイン濃度の対数との差を使用し、反復測定分散分析（ｒｅｐｅａｔｅｄ  ｍｅａｓｕｒｅｍｅｎｔ  ＡＮＯＶＡ）をＳＡＳ（ＳＡＳインスティテュート）を用いて行なった。図２に示した通り、１年後のＥＤＳＳの変化のを指標とした進行が１段階以上あった患者群では、進行しなかった患者群と比較してインターフェロン投与１０時間後に採血した血清のＩＬ−６測定値の上昇が有意に低かった。すなわち、インターフェロン療法が有効であった患者群ではＩＬ−６測定値の上昇が有意に高かった。【００２１】
【表１】
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【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】多発性硬化症におけるベタフェロンの薬効メカニズムに関する研究プロトコルを示す。
【図２】１年後のＥＤＳＳの進行が１段階以上あった患者群と進行がなかった患者群のＩＬ−６濃度が、進行があった患者群ではインターフェロン投与１０時間後の採血試料におけるＩＬ−６測定値の上昇が有意に高かったことを示す。
【図１】
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【図２】
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