(57)【要約】    【課題】  副作用の少ない天然物由来のキサンチンオキシダーゼ阻害剤を提供する。    【解決手段】  リンゴおよび／またはホップ由来のポリフェノール画分を含有することを特徴とするキサンチンオキシダーゼ阻害剤。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
リンゴおよび／またはホップ由来のポリフェノール画分を含有することを特徴とするキサンチンオキシダーゼ阻害剤。
【請求項２】
リンゴおよび／またはホップ由来のポリフェノール画分を有効成分として含有することを特徴とする通風または高尿酸血症の治療・予防薬。
【請求項３】
リンゴおよび／またはホップ由来のポリフェノール画分を有効成分として含有することを特徴とする通風または高尿酸血症の治療・予防用飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、天然物由来のキサンチンオキシダーゼ阻害剤に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、食生活の乱れ、運動不足、ストレスなどに起因する様々な疾患が問題となっている。その中でも高カロリー、高たんぱく、高脂肪食の摂取等が原因で近年増加傾向にあるのが、プリン体の代謝異常によって引き起こされる高尿酸血症や痛風である。
【０００３】
痛風は関節内や関節周囲に尿酸塩の結晶が沈積して痛風結節、関節機能障害、関節の変形、激痛を伴う発作が生じる疾病であり、さらには腎障害や尿路結石、動脈硬化等の合併症も引き起こす危険性もあるため、痛風の予防や治療対策は極めて重要である。
【０００４】
生体内では、核酸であるプリンヌクレオチドの代謝物としてヒポキサンチンが生成され、次いでキサンチンオキシダーゼによってキサンチンを経て尿酸へと代謝されて尿中に排泄される。尿酸は水への溶解度が低く、尿細管での再吸収も起こるため、生体内で尿酸合成が亢進したり、尿酸の排泄速度が低下したりすることによって、高尿酸血症が引き起こされる。
【０００５】
従来、高尿酸血症の治療には、尿酸排泄剤のベンズプロマロン、プロベネシド、スルフィンピラゾン、尿酸合成阻害剤アロプリノール等が用いられているが、これらは効果が一過性であることや、劇症肝炎、再生不良貧血、皮膚炎などの副作用があるなどの問題があった。
【０００６】
これらの問題を解決するために、天然物由来の尿酸合成阻害剤が検討されてきた。天然物由来のキサチンオキシダーゼ阻害剤としては、ドコウジュ（特許文献１）、ハマメリス（特許文献２）、オオバナサルスベリ（特許文献３）、ユーカリ由来のフラボノイド配糖体（特許文献４、５）等が報告されている。しかしながら、いずれもキサンチンオキシダーゼ阻害活性が低く、食経験が少ない等の問題があり、痛風や高尿酸血症の予防や治療に利用することは困難であった。
【特許文献１】特開2003-252776号公報
【特許文献２】特開2001-258504号公報
【特許文献３】特開2000-290188号公報
【特許文献４】特開平6-172184号公報
【特許文献５】特開平6-172185号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明が解決しようとする課題は、連用しても副作用の恐れがなく、効果的で安全性の高い痛風及び高尿酸血症の予防と治療に有効な医薬品や飲食品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題を解決すべく鋭意研究を重ねた結果、本発明者らは天然物由来のリンゴやホップから抽出されたポリフェノール画分に、強いキサンチンオキシダーゼ阻害活性を見出し、本発明を完成するに至った。
【０００９】
すなわち本発明は、以下の内容を発明の要旨とするものである。
（１）  リンゴおよび／またはホップ由来のポリフェノール画分を含有することを特徴とするキサンチンオキシダーゼ阻害剤。
（２）  リンゴおよび／またはホップ由来のポリフェノール画分を有効成分として含有することを特徴とする通風または高尿酸血症の治療・予防薬。
（３）  リンゴおよび／またはホップ由来のポリフェノール画分を有効成分として含有することを特徴とする通風または高尿酸血症の治療・予防用飲食品。
【発明の効果】
【００１０】
本発明の医薬品や飲食品は、天然物由来であるため連用しても副作用の恐れがなく、効果的で安全性の高い痛風及び高尿酸血症の予防と治療に有効な医薬品や飲食品である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
キサンチンオキシダーゼとは、核酸であるプリン化合物を分解する酵素で、ヒポキサンチンからキサンチンを経て尿酸を生成する反応を触媒する。
【００１２】
本発明で使用するリンゴポリフェノール画分を含有するリンゴ抽出物は、バラ科リンゴ属植物の果実、例えば、フジ、陸奥、津軽、スターキング・デリシャス等の栽培品種及び原種リンゴ等より抽出して得られる。
【００１３】
果実としては成熟果実、未熟果実ともに用いることができるが、より多くのポリフェノール化合物を含有すること、及び広範な生理作用を有する各種活性成分を多量に含むことから、未熟果実が特に好ましい。リンゴ抽出物の抽出方法としては、洗浄した原料をpH３．２〜４．６、好ましくはpH３．５〜４．３で破砕し、得られた果汁にペクチナーゼを５〜７５℃、好ましくは３０〜６０℃で１０〜１００ｐｐｍ、好ましくは２０〜３０ｐｐｍで清澄化を行い、遠心分離後、５〜７５℃、好ましくは１５〜２５℃で珪藻土（商品名「シリカ３００S」、中央シリカ社製）濾過によりさらに清澄化を行い、清澄果汁を得る。或いはヘキサン、クロロホルム等の有機溶媒による分配及び濾過を行い、清澄抽出液を得る。清澄果汁を０〜４０℃、好ましくは１５〜２５℃、pH１．５〜４．２、好ましくはpH３．０〜４．０で吸着カラム（商品名「セパビーズＳＰ−８５０」、三菱化学社製）に通液し、ポリフェノール類を吸着させる。続いて純水を通液し、カラム中の非吸着物質（糖類、有機酸類等）を除去した後、１０〜９０％、好ましくは３０〜８０％のエタノールで溶出する。得られた画分からエタノールを２５〜１００℃、好ましくは３５〜９０℃で減圧濃縮し、濃縮液をそのまま或いはデキストリン等の粉末助剤を添加し、噴霧乾燥又は凍結乾燥を行い、抽出粉末品を得る。
【００１４】
本発明で使用するホップ苞ポリフェノール画分を含有するホップ苞抽出物は、ホップ毬果よりルプリン部分を除いて得られるものであり、一般に、ホップ毬果を粉砕後、篩い分けによってルプリン部分を除くことによってホップ苞を得る。しかし、最近のビール醸造において、ホップ苞を篩い分けして除去する手間を省くために、ビール醸造に有用でないホップ苞を取り除かずにホップ毬果をそのままペレット状に成形し、ホップペレットとして、ビール醸造に利用する傾向にある。したがって、本発明の原料としては、ホップ苞を含むものであれば特に限定せず、ホップ苞を含むホップ毬果やホップペレットを原料としてもなんら問題ない。
【００１５】
ホップ苞抽出物の抽出方法としては、原料であるホップ苞またはホップ苞を含むホップ毬果やホップペレットなどを、４〜９５℃、好ましくは３０〜６０℃で０〜５０％、好ましくは１０〜４０％のエタノールと混和し、抽出する。原料と抽出溶媒の割合は、１：２０〜１００（重量比）、好ましくは１：３０〜９０（重量比）であり、攪拌下、２０〜６０分、好ましくは３０〜５０分で行う。５〜７５℃、好ましくは１５〜２５℃で珪藻土（商品名「シリカ３００S」、中央シリカ社製）濾過によりさらに清澄化を行う。抽出液を０〜４０℃、好ましくは１５〜２５℃で吸着カラム（商品名「セパビーズＳＰ−８５０」、三菱化学社製）に通液し、ポリフェノール類を吸着させる。続いて純水を通液し、カラム中の非吸着物質（糖類、有機酸類等）を除去した後、１０〜９０％、好ましくは３０〜８０％のエタノールで溶出する。次に、限外ろ過膜を用いる方法について述べる。上記の抽出工程で得られたホップ苞の抽出液を、分画分子量が１，０００以上、好ましくは１０，０００〜５０，０００の限外ろ過膜で処理する。その際必要があれば、抽出液を減圧濃縮し、エタノール濃度を下げておくこともできる。また処理は、抽出溶媒の有機溶媒濃度や抽出溶媒とホップまたはホップ苞の割合にもよるが、およそ上残り液の量が処理開始時の１／１０〜１／１００、好ましくは１／２０〜１／１００になるまで行う。その際の圧力は０．１〜１０ｋｇ／ｃｍ２、好ましくは１〜７ｋｇ／ｃｍ２である。このまま液体状態で利用することも可能であるが、下記記述のとおり、乾燥させることもできる。得られた画分からエタノールを２５〜１００℃、好ましくは３５〜９０℃で減圧濃縮し、濃縮液をそのまま或いはデキストリン等の粉末助剤を添加し、噴霧乾燥又は凍結乾燥を行い、抽出粉末品を得る。
【００１６】
本発明のキサンチンオキシダーゼ阻害剤は、リンゴ由来ポリフェノール画分またはホップ由来ポリフェノール画分単独でもよく、両者を併用してもよい。
【００１７】
本発明のキサンチンオキシダーゼ阻害剤を適用する濃度は、０.１ｍｇ／Ｋｇ体重から２０００ｍｇ／ｋｇ体重、好ましくは１ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重を１日に１ないし数回に分けて投与することができる。
【００１８】
本発明のリンゴおよび／またはホップ由来のポリフェノール画分を有効成分として含有することを特徴とする通風または高尿酸血症の治療・予防薬の剤形は、特に限定されないが、例えば公知の方法により、錠剤、散剤、顆粒剤、カプセル剤、シロップ剤などの経口剤、座剤、軟膏、噴霧剤、注射剤などの非経口剤として用いることができる。
【００１９】
本発明のリンゴおよび／またはホップ由来のポリフェノール画分を有効成分として含有することを特徴とする通風または高尿酸血症の治療・予防薬の服用濃度は、例えば経口剤として用いる場合は、投与対象の性別、年齢、体重、健康状況等により異なるが、乾燥ポリフェノール画分の重量として、１ｍｇ／ｋｇ体重から１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲で適宜調節して投与することができる。
【００２０】
通風または高尿酸血症の治療・予防を期待して、飲食品にリンゴおよび／またはホップ由来のポリフェノール画分を有効成分として配合することができる。
【００２１】
このような飲食品としては、炭酸飲料、果汁飲料、乳酸菌飲料、アルコール飲料、コーヒーや紅茶などの清涼飲料、アイスクリーム、飴、ガム、菓子、パン、麺類などに用いることができる。
【実施例１】
【００２２】
（１）キサンチンオキシダーゼ阻害活性の評価方法
キサンチンオキシダーゼ（ＸＯＤ）の作用によって、酸素とヒポキサンチン（ＨＰＸ）から尿酸とスーパーオキシドを発生させるＨＰＸ／ＸＯＤ系において、酸素残存量・スーパーオキシド生成量・尿酸生成量をそれぞれ測定した。
【００２３】
（２）ＨＰＸ／ＸＯＤ系における酸素残存量の測定
０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）に溶解した２ｍＭ  ＨＰＸ溶液（ＳＩＧＭＡ）６．４ｍＬ、１０ｍｇ／ｍＬに調製した検体溶液３４μＬ、１Ｕ／ｍＬ  ＸＯＤ溶液（ラボテック）１００μＬを混合し、攪拌しながら生物用酸素モニターＭＯＤＥＬ５３００（ＹＳＩ）にて反応液中の溶存酸素濃度を３０分間経時的に測定した。
【００２４】
（３）ＨＰＸ／ＸＯＤ系における酸素残存量の測定結果
リンゴポリフェノール（ＡＰ）・ホップポリフェノール（ＨＰ）を反応系に添加したところ、図１に示すように酸素残存量が対照よりも多くなった。酸素消費割合が低下したことより、リンゴ及びホップポリフェノールの添加によってＨＰＸ／ＸＯＤ系の反応が阻害されていると考えられた。
【実施例２】
【００２５】
（１）ＨＰＸ／ＸＯＤ系におけるスーパーオキシド生成量の測定
ＨＰＸ／ＸＯＤ系において発生するスーパーオキシドをＥＳＲ（ＪＥＳ−ＦＲ８０  日本電子株式会社）にて測定した。試薬・検体は全て０．１Ｍリン酸緩衝液を用いて調製した。２ｍＭ  ＨＰＸ溶液（ＳＩＧＭＡ）５０μＬ、ＤＭＳＯ（関東化学）３０μＬ、検体溶液５０μＬ、４．４５Ｍ  ＤＭＰＯ（ラボテック）２０μＬ、０．４Ｕ／ｍＬ  ＸＯＤ溶液（ラボテック）５０μＬをテストチューブに加えて１０秒間攪拌した後、水溶液用セルに吸入し、６０秒後にＥＳＲの測定を開始した。
【００２６】
（２）ＨＰＸ／ＸＯＤ系におけるスーパーオキシド生成量の測定結果
０．１Ｍリン酸緩衝液添加時（対照）のスペクトルの相対強度をＩ0、検体添加時のスペクトルの相対強度をＩとして得られたスーパーオキシド生成量の測定結果から、（Ｉ0／Ｉ）−１としてスーパーオキシド消去活性を算出した。結果を図２に示す。ＨＰＸ／ＸＯＤ系における検体の添加濃度を０．００１２５ｍｇ／ｍＬ〜０．３２ｍｇ／ｍＬまで変化させたところ、リンゴ及びホップポリフェノールは濃度依存的なスーパーオキシド消去活性を示した。活性の程度はカテキンと同程度であったが、リンゴ及びホップポリフェノールでは、低濃度域に比較すると特に高濃度域で消去活性の上昇度合が高くなる傾向が見られた。これらよりリンゴ及びホップポリフェノールはＨＰＸ／ＸＯＤ系におけるスーパーオキシドの生成を阻害した。
【実施例３】
【００２７】
（１）ＨＰＸ／ＸＯＤ系における尿酸生成量の測定
ＨＰＸ／ＸＯＤ系において生成する尿酸量をＨＰＬＣ（ＣＬＡＳＳ−ＬＣ１０システム  島津製作所）で測定した。試薬・検体は全て０．１Ｍリン酸緩衝液を用いて調製した。０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）５０μＬ、２ｍＭ  ＨＰＸ溶液（ＳＩＧＭＡ）５０μＬ、０．４Ｕ／ｍＬ  ＸＯＤ溶液（ラボテック）５０μL、検体溶液５０μＬを混合し、３７℃で６０分間インキュベーションした。１．２Ｎ  ＨＣｌ  ５０μＬを添加して反応を停止させた後、０．４５μＭフィルターでろ過してＨＰＬＣ測定に供試した。ＨＰＬＣは、カラム：Ｓｏｄｅｘ  Ａｓａｈｉｐａｋ  ＧＳ３２０ＨＱ（７．６×３００ｍｍ）、ガードカラム：ＧＳ―２Ｇ７Ｂ（７．６×５０ｍｍ）、移動相：５０ｍＭ  リン酸緩衝液（ｐＨ２．５）、流速：１．０ｍＬ／分、温度：３０℃、検出：ＵＶ２６０ｎｍ、サンプル注入量：１０μＬの測定条件にて実施した。
【００２８】
（２）ＨＰＸ／ＸＯＤ系における尿酸生成量の測定結果
検体溶液としてリンゴ及びホップポリフェノールを０．２５μｇ／ｍＬ〜２５０μｇ／ｍＬ、スーパーオキシドを不均化する酵素スーパーオキシドディスムターゼ（ＳＯＤ）を１Ｕ〜１０００Ｕ添加した際のヒポキサンチンと尿酸の消長を図３から図５に示した。ＳＯＤは尿酸の生成を阻害しなかったのに対し、リンゴ及びホップポリフェノールは添加量が高くなるほど、尿酸の生成を阻害した。
【産業上の利用可能性】
【００２９】
本発明により、連用しても副作用の恐れがなく、効果的で安全性の高い痛風及び高尿酸血症の予防と治療に有効な医薬品や飲食品を得ることができるので、本発明の有用性は高いものである。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】図１は、リンゴおよび／またはホップ由来のポリフェノール画分がＨＰＸ／ＸＯＤ系において酸素消費を抑制する効果を示す図である。
【図２】図２は、リンゴおよび／またはホップ由来のポリフェノール画分がＨＰＸ／ＸＯＤ系においてスーパーオキサイドを消去する効果を示す図である。
【図３】図３は、リンゴ由来ポリフェノールがＨＰＸ／ＸＯＤ系において尿酸生成を抑制する効果を示す図である。
【図４】図４は、ホップ由来ポリフェノールがＨＰＸ／ＸＯＤ系において尿酸生成を抑制する効果を示す図である。
【図５】図５は、ＳＯＤがＨＰＸ／ＸＯＤ系において尿酸生成に影響を与えないことを示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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