(57)【要約】【課題】  医薬として有用なチモシンβ１０の発現増強剤を提供する。【解決手段】  ヨウキンカ、マンダラシ、クコ、ムカカ、ヒマ、カシキン、ボウコン、シャゼン、ジョチョウケイ、シテイ、テンキシ、サクリュウカ、センニンショウ、シクンシ、タイゲキ、キセンソウ、ケツメイシ、ソウキセイ、ソウシ、テンモンドウ、ライフクシ、カイキンシャ、ラッショウ、ケンゴシ、リョクズ、サンジコ及びビャクギュウから選ばれる植物又はそれらの抽出物を有効成分とするチモシンβ１０発現阻害剤。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヨウキンカ、マンダラシ、クコ、ムカカ、ヒマ、カシキン、ボウコン、シャゼン、ジョチョウケイ、シテイ、テンキシ、サクリュウカ、センニンショウ、シクンシ、タイゲキ、キセンソウ、ケツメイシ、ソウキセイ、ソウシ、テンモンドウ、ライフクシ、カイキンシャ、ラッショウ、ケンゴシ、リョクズ、サンジコ及びビャクギュウから選ばれる植物又はそれらの抽出物を有効成分とするチモシンβ１０発現阻害剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬として有用なチモシンβ１０発現増強剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
チモシン（ｔｈｙｍｏｓｉｎ）は、牛胸腺で見出された低分子量蛋白質ファミリーであり（例えば、非特許文献１）、このうち、β−チモシンは、４１−４５アミノ酸のポリペプチドホモログで、高度に保存された酸性蛋白質である。β−チモシンは、ヒト組織で広く発現しており（例えば、非特許文献２）、細胞質に存在すること、Ｇ−アクチンに結合し、それを保持することなどが知られている（例えば、非特許文献３）。その中で、チモシンβ１０は、ラットやヒトの脳の発達に関与していること（例えば、非特許文献４参照）、血管新生を促進すること、内皮細胞の遊走及び接着を促進することが報告されている（例えば、非特許文献５参照）。
【０００３】
従って、チモシンβ１０の発現を増強させる物質は、創傷治癒の促進や床ずれ等の血管新生に依存する症状の改善等に有用であると考えられる。
【非特許文献１】Low TKL. Et al.; The Year in Hematology. Edited by Silber R, Lobue J, Gordon AS. New York, Plenum Press, 281-319(1978)
【非特許文献２】Horecker B. L.et al.; Lymphokines 9, 15-35(1984)
【非特許文献３】Yu F.X. et al.; J. Biol. Chem. 268, 502-509(1993)
【非特許文献４】Lugo DI et.al.; J Neurochem. 56(2):457-61. (1991)
【非特許文献５】Deborah Philp et al., The FASEB Journal,17,2103-2105(2003)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的は、医薬として有用なチモシンβ１０の発現増強剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、安全性の高い天然物を探索したところ、特定の植物又はその抽出物にチモシンβ１０の発現を増強させる作用があり、医薬として有用であることを見出した。
【０００６】
すなわち本発明は、ヨウキンカ、マンダラシ、クコ、ムカカ、ヒマ、カシキン、ボウコン、シャゼン、ジョチョウケイ、シテイ、テンキシ、サクリュウカ、センニンショウ、シクンシ、タイゲキ、キセンソウ、ケツメイシ、ソウキセイ、ソウシ、テンモンドウ、ライフクシ、カイキンシャ、ラッショウ、ケンゴシ、リョクズ、サンジコ及びビャクギュウから選ばれる植物又はそれらの抽出物を有効成分とするチモシンβ１０発現阻害剤を提供するものである。
【発明の効果】
【０００７】
本発明のチモシンβ１０発現増強剤は、チモシンβ１０の発現を特異的に増強することから、創傷治癒や床ずれ等の血管新生に依存する症状を改善等するための医薬として使用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明のチモシンβ１０発現増強剤は、チモシンβ１０の発現を増強する作用を有し、医薬として使用できる。ここで、チモシンβ１０の発現増強とは、ある細胞内及び／又は生体内のある部分において、特に線維芽細胞内、上皮細胞内において、チモシンβ１０量の増加が観察される状態を含み、チモシンβ１０を産生する細胞におけるチモシンβ１０の存在量及び／又は産生量の増加、及びチモシンβ１０を産生する細胞からのチモシンβ１０の放出量の増加を含む。
【０００９】
本発明において、ヨウキンカ（洋金花）とは、ナス科のチョウセンアサガオ（Datura metel L.）の花を、マンダラシ（曼陀羅子）とは、ナス科のチョウセンアサガオ（Datura metel L.）の種子または果実を、クコ（枸杞子）とはナス科のクコ（Lycium chinense Mill.）を、ムカカ（無花果）とは、クワ科のイチジク（Ficus carica L.）を、ヒマとは、トウダイグサ科のヒマ（別名：トウゴマ、Ricunus communis L.）を、カシキン（瓜子金）とは、ヒメハギ科のヒメハギ（Polygala japonica Houtt.）を、ボウコン（茅根）とは、イネ科のチガヤ（Imperata cylindrical (L.) P. Beauv. var. major (Nees) C. E. Hubb.）を、シャゼン（車前）とは、オオバコ科のオオバコ（Plantago asiatica L.）を、ジョチョウケイ（徐長卿）とは、ガガイモ科のスズサイコ（Cynanchum paniculatum(Bge.) Kitag.）を、シテイ（柿蒂）とは、カキノキ科のカキ（Disopyros kaki L. f）を、テンキシ（天葵子）とは、キンポウゲ科のヒメウズ（Semiaquilegia adoxoides (DC.) Mak.）を、サクリュウカ（醋柳果）とは、グミ科のサキョク（Hippophae rhamnoides L.）、センニンショウ（仙人掌）とは、サボテン科のセンニンショウ（Echinopsis multiplex Zucc.）を、シクンシ（使君子）とは、シクンシ科のシクンシ（Quisqualis indica L.）、タイゲキ（大戟）とは、トウダイグサ科のタカトウダイ（Euphrbia pekinensis Rupr.）を、キセンウ(鬼箭羽)とは、ニシキギ科のニシキギ（Euonymus alatus (Thunb.) Sieb.）を、ケツメイシ（決明子）とは、マメ科のコエビスグサ（Cassia tora L.）を、ソウキセイ（桑寄生）とは、ヤドリギ科のヤドリギ（Viscum coloratum (Kom.) Nakai）を、ソウシ（葱子）とは、ユリ科のネギ（Alium fistulosum L.）を、テンモンドウ（天門冬）とは、ユリ科のクサスギカズラ（Asparagus cochinchinesis (Lour.) Merr.）を、ライフクシ（莱箙子）とは、アブラナ科のダイコン（Raphanus sativa L. var. coloratum(Komar.) Ohwi）を、カイキンシャ（海金沙）とは、カニクサ科のカニクサ（Lygodium japonicum (thumb.) Sw.）、ラッショウ（辣椒）とは、ナス科のシマトウガラシ（Capsicum frutescens L.）を、ケンゴシ（牽牛子）とは、ヒルガオ科のアメリカアサガオ（Ipomoea hederacea Jacq.）を、リョクズ（緑豆）とは、マメ科のブンドウ（Phaselous radialus L.）を、サンジコ（山慈姑）とは、ラン科のドクサンラン（Pleione bulbocodiodes (Franch.) Rolfe）又はサイハンランCremastra appendiculata (D.Don) Makino）を、ビャクギュウ（白及）とは、ラン科のシラン（Bletilla striata(Thumb.)）をそれぞれ意味する。
【００１０】
上記植物は、その植物の全草、葉、樹皮、枝、果実又は根等をそのまま又は粉砕して用
いることができるが、ヨウキンカについては花、マンダラシについては果実又は種子を、クコについては果実を、ムカカについては果実を、ヒマについては葉を、カシキンについては全草を、ボウコンについては根茎を、シャゼンについては全草を、ジョチョウケイについては全草を、シテイについては宿存花萼を、テンキシについては塊根を、サクリュウカについては果実を、センニンショウについては茎を、シクンシについては種子を、タイゲキについては根を、キセンソウについては枝を、ケツメイシについては種子を、ソウキセイについては葉茎を、ソウシについては種子を、テンモンドウについては塊根を、ライフクシについては種子を、カイキンシャについては胞子を、ラッショウについては果実を、ケンゴシについては種子を、リョクズについては種子を、サンジコについては仮球茎を、ビャクギュウについては塊根をそれぞれ使用するのが好ましい。
【００１１】
また、本発明における抽出物とは、上記植物を常温又は加温下にて抽出するか又はソックスレー抽出器等の抽出器具を用いて抽出することにより得られる各種溶媒抽出液、その希釈液、その濃縮液又はその乾燥末を意味するものである。
【００１２】
本発明の抽出物を得るために用いられる抽出溶剤としては、極性溶剤、非極性溶剤のいずれをも使用することができ、これらを混合して用いることもできる。例えば、水；メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノール等のアルコール類；プロピレングリコール、ブチレングリコール等の多価アルコール類；アセトン、メチルエチルケトン等のケトン類；酢酸メチル、酢酸エチル等のエステル類；テトラヒドロフラン、ジエチルエーテル等の鎖状及び環状エーテル類；ポリエチレングリコール等のポリエーテル類；ジクロロメタン、クロロホルム、四塩化炭素等のハロゲン化炭化水素類；ヘキサン、シクロヘキサン、石油エーテル等の炭化水素類；ベンゼン、トルエン等の芳香族炭化水素類；ピリジン類；超臨界二酸化炭素；油脂、ワックス、その他オイル等が挙げられ、このうち、水、アルコール類、水−アルコール混液が好ましい。
【００１３】
抽出条件は、使用する溶媒によっても異なるが、例えば水、アルコール類又は水−アルコール混液により抽出する場合、植物１重量部に対して１〜５０重量部の溶剤を用い、４〜１００℃、好ましくは室温〜６０℃の温度で、１時間〜１５０日間、より好ましくは１日〜３０日間抽出するのが好ましい。
【００１４】
上記の抽出物は、そのまま用いることもできるが、当該抽出物を希釈、濃縮若しくは凍結乾燥した後、必要に応じて粉末又はペースト状に調製して用いることもできる。また、液々分配等の技術により、上記抽出物から不活性な夾雑物を除去して用いることもでき、本発明においてはこのようなものを用いることが好ましい。これらは、必要により公知の方法で脱臭、脱色等の処理を施してから用いてもよい。
【００１５】
尚、本発明の植物又はそれらの抽出物は、２種以上を混合して用いてもよい。
【００１６】
これらの植物又はその抽出物は、後記実施例に示すように優れたチモシンβ１０の発現増強活性を有する。チモシンβ１０はチモシンβ４と同様、血管新生の促進、内皮細胞の遊走及び接着を促進する作用を有することが報告されている（Deborah Philp et al., The FASEB Journal,17,2103-2105(2003)）。従って、これらを有効量含有するチモシンβ１０発現増強剤は、創傷治癒の促進や床ずれ等の血管新生に依存する症状を改善（Katherin M.Malinda et al.,J Invest Dermatol,113,364-368(1999)）等するための医薬として有用である。
【００１７】
本発明のチモシンβ１０発現増強剤は、例えば、錠剤、カプセル剤等の内服剤、軟膏、水剤、エキス剤、ローション剤、乳剤等の外用剤、注射剤等の医薬製剤とすることができ、当該製剤には、本発明の植物又はその抽出物の他に、助剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、促収促進剤、界面活性化剤等の薬学的に許容される担体を任意に組み合わせて配合することができる。
【００１８】
本発明のチモシンβ１０発現増強剤における植物又はそれら抽出物の配合量は、乾燥物として通常全組成の０．００００１〜１０重量％、特に０．０００１〜１重量％が好ましい。
【００１９】
また、本発明チモシンβ１０発現増強剤の投与量は、用量、患者の年齢、性別、体重、疾患の度合い等により適宜選択することができるが、好ましくは、一日当たり０．１〜１００００ｍｇ、より好ましくは１〜１０００ｍｇ、更に好ましくは１０〜１００ｍｇであり、これを一日一回ないし数回に分けて投与するのが適当である。
【実施例】
【００２０】
以下、実施例により本発明を具体的に説明する。
製造例１  ヨウキンカ抽出物の製造
チョウセンアサガオ（中国江蘇省産）の花４０ｇをとり、４００ｍＬの５０％（ｖ／ｖ）ＥｔＯＨ水を加え、室温で１３３日間静置抽出後、ろ過して抽出液を得た。
【００２１】
製造例２
製造例１に準じて下記表１に示す各植物抽出物を調製した。
【００２２】
【表１】
2006199609.tif 000002
【００２３】
実施例１  チモシンβ１０発現増強活性
線維芽細胞（１０継代以上のもの）を２×１０4ｃｅｌｌｓ／ｃｍ2で５％の血清を含む培地で１２穴に撒き、次の日０．２％の血清を含む培地に培地交換し、固形残分０．００５％になるように製造例１及び２で調製した植物抽出物を加え、さらに一日培養した。２００μＬのＲＩＰＡ  Ｂｕｆｆｅｒ（10mM Tris-Hcl, pH7.4, 1% NP-40, 0.1% Sodium Deoxycholate, 0.1% SDS, 150mM NaCl, 0.5M EDTA）で細胞を回収し、１５０００ｒｐｍ×１５ｍｉｎ遠心することにより上清を回収した。ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｓｓａｙを行うことによりタンパク定量を行い、サンプル間のタンパク量を調製し、等量のサンプルバッファーを添加して５分間煮沸することによりウエスタンブロッティング用のサンプルを作製した。これらのサンプル１０μＬずつを５−２５％ＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し、ゲルを１０％グルタルアルデヒド／ＰＢＳで室温で１時間固定した後ＰＢＳで洗浄した。ＰＶＤＦメンブランにブロッティング後、メンブランをＰＢＳ中で５０℃、１時間振とうし、さらに２０ｍＭグリシン／ＰＢＳ中で１時間振とうした。３％ＢＳＡ／ＴＢＳ  Ｔｗｅｅｎ（0.01M Tris-Hcl, pH7.5, 0.15M NaCl, 1% Tween 20 ）でブロッティング後、１次抗体としてチモシンβ１０抗体（１μｇ／ｍＬ）で室温２時間インキュベートした。その後、５％ｓｋｉｍ  ｍｉｌｋで１時間ブロッティングした後、２次抗体としてＨＲＰ−ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ  ｒａｂｂｉｔ  ＩｇＧ抗体（５０００倍希釈，Ａｍｅｒｓｈａｍ）で室温１時間インキュベートし、ＥＣＬ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）により特異的チモシンβ１０蛋白質を検出した。Ｘ線フィルム上の画像をスキャナで取り込んだ後、ｌａｎｅ＆ｓｐｏｔ  ａｎａｌｙｚｅｒを用いてチモンシンβ１０発現量を数値化し、コントロールの発現量と比較して発現増強効果を測定した。結果を表２に示す。
【００２４】
【表２】
2006199609.tif 000003
【００２５】
表２に示したとおり、本発明の植物抽出物は、チモシンβ１０の発現を増強することが認められた。