(57)【要約】【課題】肌の老化抑制および／または肌質改善用化粧料を提供する。【解決手段】本発明よれば、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩を有効成分とする肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤を含有する肌の老化抑制および／または肌質改善用化粧料を提供することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩を有効成分とするしわ形成抑制または改善剤。
【請求項２】
ヒドロキシプロリンまたはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体を全重量に対し０．０１〜５重量％含有することを特徴とする、請求項１記載のしわ形成抑制または改善剤。
【請求項３】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体が、Ｎ−アセチル化誘導体またはＮ−プロピオニル化誘導体である、請求項１または２記載のしわ形成抑制または改善剤。
【請求項４】
ヒドロキシプロリンが、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンからなる群より選ばれるヒドロキシプロリンである、請求項１〜３のいずれかに記載のしわ形成抑制または改善剤。
【請求項５】
ヒドロキシプロリンが、微生物により生産されたヒドロキシプロリンである、請求項１〜４のいずれかに記載のしわ形成抑制または改善剤。
【請求項６】
微生物が、アミコラトプシス属、ダクチロスポランジウム属およびストレプトマイセス属から選ばれる属に属する微生物由来のプロリン３位水酸化酵素またはプロリン４位水酸化酵素遺伝子を導入された微生物である、請求項５記載のしわ形成抑制または改善剤。
【請求項７】
肌がヒトの肌である請求項１〜６のいずれかに記載のしわ形成抑制または改善剤。
【請求項８】
請求項１〜７のいずれかに記載のしわ形成抑制または改善剤を含有するしわ形成抑制または改善用化粧料。
【請求項９】
ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩が、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンまたはその塩である請求項８記載の化粧料。
【請求項１０】
化粧料にレシチン、リゾレシチンおよびヒアルロン酸からなる群より選ばれる一種又は二種以上の成分を含有する請求項８または９記載の化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤、並びに該肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤からなる肌の老化抑制および／または肌質改善用化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、しわ・たるみ・ドライスキン等のトラブルの原因である肌の老化や肌質の悪化の防止などの美容効果を得る目的で、老化防止素材が広く化粧料に配合されてきた。
化粧料に配合されている老化防止素材は、過酸化脂質抑制剤と細胞賦活剤に大別される。
過酸化脂質抑制作用のある素材としては、α−ヒドロキシ酸、ビタミンＡ、β−カロチン、ビタミンＢ12、ビタミンＥ、また、プラルチン、プラトニンなどの色素類、オウゴン、ルチン、ゴマエキス、茶エキスなどがある。一方、細胞賦活剤としては、ムミネキス、グリコール酸、γ-アミノ酸、シアル酸、ローヤルゼリー、センブリエキス、トウヤク、高麗人参エキスなどが知られている。
【０００３】
細胞賦活剤としては、コラーゲン合成を促進する素材、肌質の改善作用のある素材等が知られている。
コラーゲン合成を促進するものとしては、トランスフォーミンググロースファクター  β１、プレートレットデライブドグロースファクター、ベーシックファイブロブラストグロースファクター、インシュリンライクグロースファクター１など各種グロースファクターおよびシルクプロテイン等が知られている。
【０００４】
肌質の改善作用のある素材としては、アラントイン、アロエ抽出物、人参抽出物、胎盤抽出物、牛血液除タンパク質、発酵代謝物等が知られている。
ヒドロキシプロリン誘導体がマウス肝臓破砕物の酸素消費量を増加させることより、肌の弾力性を保つことのできる化粧品として利用できるとの報告があるが（特許文献１参照）、マウス肝臓破砕物の酸素消費量の増加と肌に対する効果との関係、および化粧品としての有効性に関するデータは一切示されておらず、該報告からヒドロキシプロリンの誘導体が化粧品として有効であると結論づけることはできない。
【０００５】
これまでに、ヒドロキシプロリンまたはヒドロキシプロリンの誘導体が化粧品として有効であることを実証した報告はない。
保湿効果を増強させる目的で、ムチン（特許文献２参照）、あるいは、グリシンベタインとピロリドンカルボン酸またはその塩（特許文献３参照）等にアミノ酸を添加した化粧品の報告がある。該報告において、アミノ酸の例としてヒドロキシプロリンがあげられているが、ヒドロキシプロリンの化粧品としての効果に関するデータは一切示されていない。
【０００６】
このように、ヒドロキシプロリンまたはヒドロキシプロリンの誘導体の、化粧品分野における肌に対する機能および効果は不明である。
ヒドロキシプロリンおよびヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体が表皮細胞の増殖を促進する活性、繊維芽細胞におけるコラーゲンの合成を促進する活性を有することは知られておらず、該活性を利用した化粧料は知られていない。
【０００７】
更に、微生物を用いて製造したヒドロキシプロリンを用いた化粧品はこれまでに知られていない。
【特許文献１】特開平１−１３１１０７号公報
【特許文献２】特開平５−３３９１４０号公報
【特許文献３】特開平９−８７１２６２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明の目的は、肌の老化抑制作用および／または肌質改善作用を有する表皮細胞の増殖促進剤、繊維芽細胞のコラーゲン合成促進剤、表皮の水分保持機能向上剤等の肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤、並びに該肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤を含有する肌の老化抑制および／または肌質改善用化粧料を提供することにある。
本発明の目的は、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩を有効成分とする肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤を肌に塗布することからなる肌の老化抑制および／または肌質改善方法を提供することである。
【０００９】
本発明の目的は、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩を含有する肌の老化抑制および／または肌質改善用化粧料を肌に塗布することからなる肌の老化抑制および／または肌質改善方法を提供することである。
本発明の目的は、肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤を製造するためのヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩の使用を提供することである。
【００１０】
本発明の目的は、肌の老化抑制および／または肌質改善用化粧料を製造するためのヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩の使用を提供することである。
本発明の目的は、肌の老化抑制および／または肌質改善のためのヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩の使用を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明者らは、保湿効果、肌への老化抑制作用および肌質改善作用を有する、安全性の高い化粧料に関し、鋭意検討した結果、ヒドロキシプロリンあるいはそのＮ−アシル誘導体に効果を見出し本発明を完成するに至った。
即ち、本発明は以下（１）〜（６８）に関する。
（１）  ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩を有効成分とする肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤。
【００１２】
（２）  ヒドロキシプロリンまたはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体を全重量に対し０．０１〜５重量％含有することを特徴とする、上記（１）記載の肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤。
（３）  ヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体が、Ｎ−アセチル化誘導体またはＮ−プロピオニル化誘導体である、上記（１）または（２）記載の肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤。
【００１３】
（４）  ヒドロキシプロリンが、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンからなる群より選ばれるヒドロキシプロリンである、上記（１）〜（３）のいずれかに記載の肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤。
【００１４】
（５）  ヒドロキシプロリンが、微生物により生産されたヒドロキシプロリンである、上記（１）〜（４）のいずれかに記載の肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤。
（６）  微生物が、アミコラトプシス属、ダクチロスポランジウム属およびストレプトマイセス属から選ばれる属に属する微生物由来のプロリン３位水酸化酵素またはプロリン４位水酸化酵素遺伝子を導入された微生物である、上記（５）記載の肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤。
【００１５】
（７）  肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤が、表皮細胞の増殖促進剤である上記（１）〜（６）のいずれかに記載の肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤。
（８）  肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤が、繊維芽細胞のコラーゲン合成促進剤である上記（１）〜（６）のいずれかに記載の肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤。
【００１６】
（９）  肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤が、表皮の水分保持機能向上剤である上記（１）〜（６）のいずれかに記載の肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤。
（１０）  肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤が、しわ形成抑制または改善剤である上記（１）〜（６）のいずれかに記載の肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤。
（１１）  肌がヒトの肌である上記（１）〜（１０）のいずれかに記載の肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤。
【００１７】
（１２）  上記（１）〜（１１）のいずれかに記載の肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤を含有する肌の老化抑制および／または肌質改善用化粧料。
（１３）  ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩が、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンまたはその塩である上記（１２）記載の化粧料。
【００１８】
（１４）  化粧料にレシチン、リゾレシチンおよびヒアルロン酸からなる群より選ばれる一種又は二種以上の成分を含有する上記（１２）または（１３）記載の化粧料。
（１５）  ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩を有効成分とする肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤を肌に塗布することからなる肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
【００１９】
（１６）  肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤中にヒドロキシプロリンまたはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体を０．０１〜５重量％含有する上記（１５）記載の肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
（１７）  ヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体が、Ｎ−アセチル化誘導体またはＮ−プロピオニル化誘導体である、上記（１５）または（１６）記載の肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
【００２０】
（１８）  ヒドロキシプロリンが、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンからなる群より選ばれるヒドロキシプロリンである、上記（１５）〜（１７）のいずれかに記載の肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
【００２１】
（１９）  ヒドロキシプロリンが、微生物により生産されたヒドロキシプロリンである、上記（１５）〜（１８）のいずれかに記載の肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
（２０）  微生物が、アミコラトプシス属、ダクチロスポランジウム属およびストレプトマイセス属から選ばれる属に属する微生物由来のプロリン３位水酸化酵素またはプロリン４位水酸化酵素遺伝子を導入された微生物である、上記（１９）記載の肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
【００２２】
（２１）  肌の老化抑制および／または肌質改善方法が、表皮細胞の増殖促進方法である上記（１５）〜（２０）のいずれかに記載の肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
（２２）  肌の老化抑制および／または肌質改善方法が、繊維芽細胞のコラーゲン合成促進方法である上記（１５）〜（２０）のいずれかに記載の肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
【００２３】
（２３）  肌の老化抑制および／または肌質改善方法が、表皮の水分保持機能向上方法である上記（１５）〜（２０）のいずれかに記載の肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
（２４）  肌の老化抑制および／または肌質改善方法が、しわ形成抑制または改善方法である上記（１５）〜（２０）のいずれかに記載の肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
【００２４】
（２５）  肌がヒトの肌である上記（１５）〜（２４）のいずれかに記載の肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
（２６）  ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩を含有する肌の老化抑制および／または肌質改善用化粧料を肌に塗布することからなる肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
【００２５】
（２７）  肌の老化抑制および／または肌質改善用化粧料中にヒドロキシプロリンまたはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体を０．０１〜５重量％含有する上記（２６）記載の肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
（２８）  ヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体が、Ｎ−アセチル化誘導体またはＮ−プロピオニル化誘導体である、上記（２６）または（２７）記載の肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
【００２６】
（２９）  ヒドロキシプロリンが、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンからなる群より選ばれるヒドロキシプロリンである、上記（２６）〜（２８）のいずれかに記載の肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
【００２７】
（３０）  ヒドロキシプロリンが、微生物により生産されたヒドロキシプロリンである、上記（２６）〜（２９）のいずれかに記載の肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
（３１）  微生物が、アミコラトプシス属、ダクチロスポランジウム属およびストレプトマイセス属から選ばれる属に属する微生物由来のプロリン３位水酸化酵素またはプロリン４位水酸化酵素遺伝子を導入された微生物である、上記（３０）記載の肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
【００２８】
（３２）  肌の老化抑制および／または肌質改善方法が、表皮細胞の増殖促進方法である上記（２６）〜（３１）のいずれかに記載の肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
（３３）  肌の老化抑制および／または肌質改善方法が、繊維芽細胞のコラーゲン合成促進方法である上記（２６）〜（３１）のいずれかに記載の肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
【００２９】
（３４）  肌の老化抑制および／または肌質改善方法が、表皮の水分保持機能向上方法である上記（２６）〜（３１）のいずれかに記載の肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
（３５）  肌の老化抑制および／または肌質改善方法が、しわ形成抑制または改善方法である上記（２６）〜（３１）のいずれかに記載の肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
【００３０】
（３６）  肌がヒトの肌である上記（２６）〜（３５）のいずれかに記載の肌の老化抑制および／または肌質改善方法。
（３７）  肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤を製造するためのヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩の使用。
（３８）  肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤中にヒドロキシプロリンまたはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体を０．０１〜５重量％含有する上記（３７）記載の使用。
【００３１】
（３９）  ヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体が、Ｎ−アセチル化誘導体またはＮ−プロピオニル化誘導体である、上記（３７）または（３８）記載の使用。
（４０）  ヒドロキシプロリンが、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンからなる群より選ばれるヒドロキシプロリンである、上記（３７）〜（３９）のいずれかに記載の使用。
【００３２】
（４１）  ヒドロキシプロリンが、微生物により生産されたヒドロキシプロリンである、上記（３７）〜（４０）のいずれかに記載の使用。
（４２）  微生物が、アミコラトプシス属、ダクチロスポランジウム属およびストレプトマイセス属から選ばれる属に属する微生物由来のプロリン３位水酸化酵素またはプロリン４位水酸化酵素遺伝子を導入された微生物である、上記（４１）記載の使用。
【００３３】
（４３）  肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤が、表皮細胞の増殖促進剤である上記（３７）〜（４２）のいずれかに記載の使用。
（４４）  肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤が、繊維芽細胞のコラーゲン合成促進剤である上記（３７）〜（４２）のいずれかに記載の使用。
（４５）  肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤が、表皮の水分保持機能向上剤である上記（３７）〜（４２）のいずれかに記載の使用。
【００３４】
（４６）  肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤が、しわ形成抑制剤または改善剤である上記（３７）〜（４２）のいずれかに記載の使用。
（４７）  肌がヒトの肌である上記（３７）〜（４６）のいずれかに記載の使用。
（４８）  肌の老化抑制および／または肌質改善用化粧料を製造するためのヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩の使用。
【００３５】
（４９）  肌の老化抑制および／または肌質改善用化粧料中にドロキシプロリンまたはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体を０．０１〜５重量％含有する上記（４８）記載の使用。
（５０）  ヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体が、Ｎ−アセチル化誘導体またはＮ−プロピオニル化誘導体である、上記（４８）または（４９）記載の使用。
【００３６】
（５１）  ヒドロキシプロリンが、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンからなる群より選ばれるヒドロキシプロリンである、上記（４８）〜（５０）のいずれかに記載の使用。
【００３７】
（５２）  ヒドロキシプロリンが、微生物により生産されたヒドロキシプロリンである、上記（４８）〜（５１）のいずれかに記載の使用。
（５３）  微生物が、アミコラトプシス属、ダクチロスポランジウム属およびストレプトマイセス属から選ばれる属に属する微生物由来のプロリン３位水酸化酵素またはプロリン４位水酸化酵素遺伝子を導入された微生物である、上記（５２）記載の使用。
【００３８】
（５４）  肌の老化抑制および／または肌質改善が、表皮細胞の増殖促進である上記（４８）〜（５３）のいずれかに記載の使用。
（５５）  肌の老化抑制および／または肌質改善が、繊維芽細胞のコラーゲン合成促進である上記（４８）〜（５３）のいずれかに記載の使用。
（５６）  肌の老化抑制および／または肌質改善が、表皮の水分保持機能向上である上記（４８）〜（５３）のいずれかに記載の使用。
【００３９】
（５７）  肌の老化抑制および／または肌質改善が、しわ形成抑制剤または改善剤である上記（４８）〜（５３）のいずれかに記載の使用。
（５８）  肌がヒトの肌である上記（４８）〜（５７）のいずれかに記載の使用。
（５９）  肌の老化抑制および／または肌質改善のためのヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩の使用。
【００４０】
（６０）  ヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体が、Ｎ−アセチル化誘導体またはＮ−プロピオニル化誘導体である、上記（５９）記載の使用。
（６１）  ヒドロキシプロリンが、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンからなる群より選ばれるヒドロキシプロリンである、上記（５９）または（６０）に記載の使用。
【００４１】
（６２）  ヒドロキシプロリンが、微生物により生産されたヒドロキシプロリンである、上記（５９）〜（６１）のいずれかに記載の使用。
（６３）  微生物が、アミコラトプシス属、ダクチロスポランジウム属およびストレプトマイセス属から選ばれる属に属する微生物由来のプロリン３位水酸化酵素またはプロリン４位水酸化酵素遺伝子を導入された微生物である、上記（６２）記載の使用。
【００４２】
（６４）  肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤が、表皮細胞の増殖促進剤である上記（５９）〜（６３）のいずれかに記載の使用。
（６５）  肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤が、繊維芽細胞のコラーゲン合成促進剤である上記（５９）〜（６３）のいずれかに記載の使用。
（６６）  肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤が、表皮の水分保持機能向上剤である上記（５９）〜（６３）のいずれかに記載の使用。
【００４３】
（６７）  肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤が、しわ形成抑制剤または改善剤である上記（５９）〜（６３）のいずれかに記載の使用。
（６８）  肌がヒトの肌である上記（５９）〜（６７）のいずれかに記載の使用。
【発明の効果】
【００４４】
本発明によれば、肌の老化抑制作用および／または肌質改善剤作用等に有効である肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤を提供することができる。
本発明によれば、肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤からなる肌の老化抑制および／または肌質改善用化粧料を提供することができる。
本発明よれば、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩を有効成分とする肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤を肌に塗布することからなる肌の老化抑制および／または肌質改善方法を提供することができる。
【００４５】
本発明によれば、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩を含有する肌の老化抑制および／または肌質改善用化粧料を肌に塗布することからなる肌の老化抑制および／または肌質改善方法を提供することができる。
本発明によれば、肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤を製造するためのヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩の使用を提供することができる。
【００４６】
本発明によれば、肌の老化抑制および／または肌質改善用化粧料を製造するためのヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩の使用を提供することができる。
本発明によれば、肌の老化抑制および／または肌質改善のためのヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩の使用を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４７】
本発明の肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤とは、肌の老化抑制作用または肌質改善作用を有するもの、あるいは、肌の老化抑制作用と肌質改善作用の両方の作用を有するものを意味する。
本発明に使用するヒドロキシプロリンは、プロリンがＤ体かＬ体か、また水酸基の位置が３位か４位か、およびその立体異性体がシスかトランスかによって、８種類の立体異性体があるが、いずれでも用いうる。具体的ヒドロキシプロリンとしては、シス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、シス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン、トランス−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン、トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびトランス−３−ヒドロキシ−Ｄ−プロリンがあげられる。
【００４８】
ヒドロキシプロリンは、コラーゲン中の主要構成アミノ酸成分として、また、エラスチンの構成アミノ酸として自然界に広く存在するアミノ酸の一種であり、例えばブタやウシ等の動物由来のコラーゲンを酸加水分解し、常法により精製することにより製造することができる。
トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンは、アミコラトプシス（Amycolatopsis）属またはダクチロスポランジウム（Dactylosporangium）属より単離したプロリン４位水酸化酵素（特開平７−３１３１７９号公報）を用い製造することができる。またシス−３−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンは、ストレプトマイセス（Streptomyces）属より単離したプロリン３位水酸化酵素（特開平７−３２２８８５号公報）を用い製造することができる〔バイオインダストリー, 14, 31 (1997)〕。
【００４９】
本発明においては、微生物を用いて製造したヒドロキシプロリンがより品質の優れたものが容易に得られる点で好ましい。
本発明で用いるヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体としては、上述の各種ヒドロキシプロリンの立体異性体のＮ−アシル誘導体があげられる。該Ｎ−アシル誘導体のアシル基としては、特に制限がないが、好ましくは炭素数１〜２４、より好ましくは炭素数１〜１２、特に好ましくは炭素数１〜６のアシル基があげられ、具体的にはホルミル、アセチル、プロピオニル、ブチリル、イソブチリル、バレリル、ピバロイル、ヘキサノイル、ヘプタノイル、オクタノイル、ノナノイル、デカノイル、ウンデカノイル、ドデカノイル等をあげることができる。
【００５０】
ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体の塩としては、ナトリウム、カリウム、リチウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類金属塩、アンモニウム塩、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トリイソプロパノールアミンなどのアミンの付加塩およびアルギニン、リジン等の塩基性アミノ酸の付加塩などがあげられる。
【００５１】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体は、公知の方法により調製することができる。例えば、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体は、直鎖または分岐状の炭素数１〜２４の飽和または不飽和の脂肪酸を塩化チオニル、ホスゲン等のハロゲン化剤を用いてクロライド、ブロマイド等のハロゲン化物に変換した後、前述のヒドロキシプロリンと縮合させるか、または脂肪酸を酸無水物に変換した後、ヒドロキシプロリンと反応させることにより製造することができる。
【００５２】
脂肪酸としては、例えばギ酸、酢酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、吉草酸、イソ吉草酸、ピバル酸、ヘキサン酸、ヘプタン酸、オクタン酸、ノナン酸、デカン酸、ウンデカン酸、ドデカン酸等の脂肪酸を単独もしくは組合せたものがあげられる。
酸ハロゲン化物を経由するヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体の製造方法を、以下に例示する。
【００５３】
脂肪酸を塩化メチレン、クロロホルム、四塩化炭素、ベンゼン、トルエン、キシレン、ｎ−ヘキサン等の溶媒中に分散し、これに１〜５倍当量のハロゲン化剤を添加して反応させ、脂肪酸ハライドを得る。次に、ヒドロキシプロリンを溶媒に溶解または分散させ、得られた溶液を５〜７０℃に保ちながら、上記の脂肪酸ハライドをヒドロキシプロリン対して０．３〜３．０倍当量加え、アシル化反応を行うことによりヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体を製造することができる。
【００５４】
アシル化反応に用いられる溶媒としては、水、メタノール、エタノール、イソプロパノール、イソブタノール、アセトン、トルエン、テトラヒドロフラン、酢酸エチル、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド等があげられ、これらは単独あるいは混合して用いてもよい。ヒドロキシプロリンを溶媒に溶解または分散する際、ヒドロキシプロリンに対して０．８〜２．０倍当量の水酸化ナトリウム、水酸化カリウム等のアルカリ物質を必要に応じて溶媒に溶解または分散させてもよい。
【００５５】
ヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体の塩を取得したいとき、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体が塩の形で得られる場合には、そのまま精製すればよく、遊離の形で得られる場合には、適当な溶媒に溶解または懸濁し、塩基を加えて塩を形成させればよい。
精製は、例えば結晶化、クロマトグラフィー等の通常の方法が用いられる。
本発明の肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤およびそれを含有する肌の老化抑制および／または肌質改善用化粧料において、シス／トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ／Ｄ−プロリン、シス／トランス−３−ヒドロキシ−Ｌ／Ｄ−プロリン、もしくはこれらのＮ−アシル誘導体またはその塩を、単独または混合して用いることができる。
【００５６】
これらヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩の肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤並びに化粧料中の含有量は目的とする効果に応じて広い範囲で増減することができる。これら化合物の肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤並びに化粧料中の含有量としては、例えば、０．０１〜５重量％をあげることができ、好ましくは０．１〜５重量％、特に好ましくは０．５〜３重量％である。
【００５７】
本発明において、肌の老化抑制作用および／または肌質改善作用とは、例えば表皮細胞の増殖促進作用、繊維芽細胞のコラーゲン合成促進作用、表皮の水分保持機能向上作用、しわ形成抑制もしくは改善作用等が例示されるがこれに限定されるものではない。また、肌としては、マウス、イヌ、ネコ、ウマ等の愛玩動物等及びヒトの肌が例示でき、ヒト肌が好ましい。
【００５８】
また、繊維芽細胞のコラーゲン合成促進剤、表皮の水分保持機能向上剤としては、ヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体が好ましく、Ｎ−アセチルヒドロキシプロリンがより好ましい。
本発明の肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤並びに肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤からなる肌の老化抑制および／または肌質改善用化粧料には、上記必須成分に加え、必要に応じて通常化粧料に配合される成分を含有してもよい。
【００５９】
配合成分としては、例えば、固形油、半固形油、他の保湿剤、エモリエント剤、水溶性高分子、油溶性高分子、各種界面活性剤、無機および有機顔料、シリコーンまたはフッ素化合物で処理された無機および有機顔料、有機染料等の色剤、エタノール、紫外線吸収剤、防腐剤、酸化防止剤、色素、増粘剤、ｐＨ調整剤、香料、血行促進剤、冷感剤、制汗剤、殺菌剤、肌柔軟剤、水等をあげることができ、本発明の目的、効果を損なわない質的、量的範囲内で含有可能である。
【００６０】
固形・半固形油としては、ワセリン、ラノリン、セレシン、マイクロクリスタリンワックス、力ルナバロウ、キャンデリラロウ；椰子油脂肪酸、ラウリン酸、硬化牛脂脂肪酸等の高級脂肪酸；ラウリルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、べへニルアルコール等の高級アルコール等をあげることができる。
液体油としては、例えばアボガド油、オリーブ油、ホホバ油等の植物油；オレイン酸、イソステアリン酸等の脂肪酸；へキサデシルアルコール、オレイルアルコール等のアルコール類；２−エチルヘキサン酸セチル、ミリスチン酸−２−オクチルドデシル、ジ−２−エチルヘキサン酸ネオペンチルグリコール、トリ−２−エチルヘキサン酸グリセロール、オレイン酸−２−オクチルドデシル、ミリスチン酸イソプロピル、トリイソステアリン酸グリセロール、２−エチルヘキサン酸ジグリセリド、長鎖アシルグルタミン酸オクチルドデシルエステル等のエステル油；ジメチルポリシロキサン、メチルハイドロジェンポリシロキサン、メチルフェニルポリシロキサン、オクタメチルシクロテトラシロキサン等のシリコン油等；流動パラフィン、スクワレン、スクワラン等の液状炭化水素油等をあげることができる。
【００６１】
保湿剤としては、脂溶性保湿剤、低分子保湿剤および高分子保湿剤をあげることができる。
脂溶性保湿剤としては、例えば、リゾレシチン、レシチン、コレステロール、コレステロールエステル、スフィンゴ脂質、セラミド等をあげることができる。
低分子保湿剤としては、セリン、グルタミン、ソルビトール、マンニトール、グリセリン、ピロリドン−カルボン酸ナトリウム、1、3−ブチレングリコール、プロビレングリコール、乳酸、乳酸塩等をあげることができる。
【００６２】
高分子保湿剤としては、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸ナトリウム、エラスチン、アルギン酸、ムコ多糖類、ポリエチレングリコール、ポリアスパラギン酸塩、水溶性キチン等をあげることができる。
エモリエント剤としては、例えば長鎖アシルグルタミン酸コレステリルエステル、ヒドロキシステアリン酸コレステリル、１２−ヒドロキシステアリン酸、ステアリン酸、ロジン酸、ラノリン脂肪酸コレステリルエステル等をあげることができる。
【００６３】
界面活性剤としては、例えばポリオキシエチレン（ＰＯＥと略記する）セチルエーテル、ＰＯＥステアリン酸エステル、ＰＯＥソルビタンモノラウレート、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油等の非イオン界面活性剤；塩化ペンザルコニウム、塩化ステアリルトリメチルアンモニウム、塩化ジセチルジメチルアンモニウム、塩化べへニルトリメチルアンモニウム等のカチオン界面活性剤；２−ココイル−Ｎ−カルボキシメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルイミダゾリニウムベタイン、アミド酢酸べタイン等の両性界面活性剤；高級アルコール硫酸塩、高級アルコールエーテル硫酸塩、長鎖脂肪酸アルカリ金属塩、長鎖脂肪酸アルカリ土類金属塩、長鎖脂肪酸塩基性アミノ酸塩、Ｎ−長鎖アシルアミノ酸、Ｎ−長鎖アシルアミノ酸塩等のアニオン界面活性剤をあげることができる。
【００６４】
水溶性高分子としては、例えばカルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシメチルセルロース、ボリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、トランガントガム、カラギーナン、デキストリン、デキストリン脂肪酸エステル、カルボキシビニルポリマー、キサンタンガム、ゼラチン、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム等の化粧料に汎用される水溶性高分子をあげることができる。
【００６５】
油溶性高分子としてはポリビニルピロリドン・エイコセン共重合体、ポリビニルピロリドン・ヘキサデセン共重合体、ニトロセルロース、高分子シリコーン等の化粧料に汎用される油溶性高分子をあげることができる。
有機および無機顔料としては、例えばケイ酸、無水ケイ酸、ケイ酸マグネシウム、タルク、セリサイト、マイカ、カオリン、ベンカラ、クレー、ベントナイト、チタン被膜雲母、オキシ塩化ビスマス、酸化ジルコニウム、酸化マグネシウム、酸化亜鉛、酸化チタン、酸化アルミニウム、硫酸カルシウム、硫酸バリウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシウム、炭酸マグネシウム、酸化鉄、群青、酸化クロム、水酸化クロム、カラミンおよびカーボンブラックおよびこれらの複合体等の無機粉体；ポリアミド、ポリエステル、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリウレタン、ビニル樹脂、尿素樹脂、フェノール樹脂、フッ素樹脂、ケイ素樹脂、アクリル樹脂、メラミン樹脂、エポキシ樹脂、ポリカーボネート樹脂、ジビニルベンゼン・スチレン共重合体、シルクパウダー、セルロース、ＣＩピグメントイエロー、ＣＩビグメントオレンジ等の有機粉体；およびこれらの無機粉体と有機粉体の複合粉体等をあげることができる。
【００６６】
有機粉体としては、ステアリン酸カルシウム等の金属石鹸；セチルリン酸亜鉛ナトリウム、ラウリルリン酸亜鉛、ラウリルリン酸カルシウム等のアルキルリン酸多価金属塩；Ｎ−ラウロイル−β−アラニンカルシウム、Ｎ−ラウロイル−β−アラニン亜鉛、Ｎ−ラウロイルグリシンカルシウム等のアシルアミノ酸多価金属塩；Ｎ−ラウロイル−タウリンカルシウム、Ｎ−パルミトイル−タウリンカルシウム等のアミドスルホン酸多価金属塩；Ｎε−ラウロイル−Ｌ−リジン、Ｎε−パルミトイルリジン、Ｎα−パルミトイルオルニチン、Ｎα−ラウロイルアルギニン、Ｎα−硬化牛脂脂肪酸アシルアルギニン等のＮ−アシル塩基性アミノ酸；Ｎ−ラウロイルグリシルグリシン等のＮーアシルポリベプチド；α−アミノカプリル酸、α−アミノラウリン酸等のα−アミノ脂肪酸；ポリエチレン、ポリプロピレン、ナイロン、ポリメチルメタクリレート、ポリスチレン、ジビニルベンゼン・スチレン共重合体、四フッ化エチレン等の樹脂粉体等を用いることができる。
【００６７】
紫外線吸収剤としては、例えばパラアミノ安息香酸、パラジメチルアミノ安息香酸オクチル等のパラアミノ安息香酸誘導体；２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン、ジヒドロキシジメトキシベンゾフェノン等のベンゾフェノン誘導体；パラメトキシ桂皮酸エチル、パラメトキシ桂皮酸オクチル等のメトキシ桂皮酸誘導体；サリチル酸オクチル、サリチル酸ホモメンチル等のサリチル酸誘導体；Ｎ−ベンソイル−０−メチル−α−デヒドロチロシン２−エチルヘキシルエステル等のα−デヒドロアミノ酸誘導体；４−（３，４−ジメトキシフェニル）メチレン−２，５−ジオキソ−１−イミダゾリジンプロピオン酸２−エチルヘキシルエステル等のベンザールヒダントイン誘導体；ウロカニン酸、ウロカニン酸エチル、４−ｔｅｒｔ−ブチル−４’−メトキシジベンゾイルメタン、２−（２’−ヒドロキシ−５’−メチルフェニル）ベンゾトリアゾール等をあげることができる。
【００６８】
防腐剤としては、メチルパラベン等をあげることができる。
肌柔軟剤としては、流動パラフィン、ワセリン、オリーブ油、スクワラン、ラノリン、合成エステル油等をあげることができる。
上記いずれの成分も、本発明の目的、効果を損なわない範囲内で配合可能であるが、好ましくは０．０１〜５重量％であり、特に好ましくは０．０１〜３重量％である。
【００６９】
本発明における表皮細胞の増殖促進剤、繊維芽細胞のコラーゲン合成促進剤、表皮の水分保持機能向上剤、しわ形成抑制もしくは改善剤等の肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤並びに化粧料は、溶液、乳化物、練り状混合物等の形態をとることが可能である。
また、本発明における該肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤からなる肌の老化抑制および／または肌質改善用化粧料には、洗顔クリーム、洗顔フォーム、クレンジングクリーム、クレンジングミルク、クレンジングローション、マッサージクリーム、コールドクリーム、モイスチャークリーム、乳液、化粧水、パック、アフターシェービングクリーム、日焼け止めクリーム、日焼け用オイル、ボディシャンプー、ヘアシヤンプー、ヘアリンス、ヘアートリートメント、養毛料、育毛料、チック、ヘアクリーム、ヘアリキツド、セットローション、ヘアスプレー、ヘアダイ、ヘアブリーチ、カラーリンス、カラースプレー、パーマネントウェーブ液、プレスパウダー、ルースパウダー、アイシヤドー、ハンドクリーム等が含まれる。
【００７０】
また、肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤並びに該肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤からなる肌の老化抑制および／または肌質改善用化粧料の形態としては、特に、限定されず、例えば、乳液、クリーム、化粧水、パック、ファンデーション、毛髪化粧料等とすることができる。
本発明の肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤並びに該肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤からなる肌の老化抑制および／または肌質改善用化粧料の使用方法は年齢、個人、使用する部位により異なるが、ヒドロキシプロリンもしくはヒドロキシプロリンのＮ−アシル誘導体またはその塩を有する化粧料の濃度が０．０１〜５重量％、好ましくは０．１〜５重量％、特に好ましくは０．５〜３重量％であるものを０．１〜５μｌ、好ましくは１〜５μｌ、特に好ましくは２μｌを１日１回〜数回、肌に塗布することが望ましいがこれに限定されるものではない。
【００７１】
次に、実施例を挙げ本発明を更に詳しく説明するが、本発明はこれらになんら制約されるものではない。
【実施例１】
【００７２】
トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン含有化粧料の調製
精製水にトランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン（以下、Ｈｙｐと略すこともある、協和発酵工業社製）  ０．５重量％、メチルパラベン  ０．１重量％およびグリセロール  ０．１７重量％添加し、混合融解することによりＨｙｐ含有化粧料（化粧料１）を調製した。
【実施例２】
【００７３】
トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン含有化粧料の調製
精製水にＨｙｐ  ３重量％、メチルパラベン  ０．１重量％およびグリセロール  ０．１７重量％添加し、混合融解することによりＨｙｐ含有化粧料（化粧料２）を調製した。
【実施例３】
【００７４】
Ｎ−アセチル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン含有化粧料の調製
精製水にＮ−アセチル−トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン（以下、N-Acetyl-Hypと略すこともある、協和発酵工業社製）  ３重量％、メチルパラベン  ０．１重量％およびグリセロール  ０．１７重量％添加し、混合融解することによりN-Acetyl-Hyp含有化粧料（化粧料３）を調製した。
【実施例４】
【００７５】
コラーゲン含有化粧料の調製
精製水にコラーゲン（コラーゲンＣＬＲ、寿ケミカル）  １重量％、メチルパラベン  ０．１重量％およびグリセロール  ０．１７重量％添加し、混合融解することによりコラーゲン含有化粧料（化粧料４）を調製した。
【実施例５】
【００７６】
トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびレシチン含有化粧料の調製
精製水にＨｙｐ  ０．５重量％、レシチン〔ＳＬＰ−ホワイトＨ、ツルーレシチン工業社製〕  ０．０５重量％、ヒアルロン酸（ヒアルロン酸ＬＰ、協和発酵工業社製）  ０．０１重量％、メチルパラベン  ０．１重量％およびグリセロール  ０．１７重量％添加し、混合融解することによりＨｙｐおよびレシチン含有化粧料（化粧料５）を調製した。
【実施例６】
【００７７】
トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびリゾレシチン含有化粧料の調製
精製水にＨｙｐ  ３重量％、リゾレシチン〔リゾレシチン協和、協和発酵工業社製〕  ０．０５重量％、ヒアルロン酸（ヒアルロン酸ＬＰ、協和発酵工業社製）  ０．０１重量％、メチルパラベン  ０．１重量％およびグリセロール  ０．１７重量％添加し、混合融解することによりＨｙｐおよびレシチン含有化粧料（化粧料６）を調製した。
【実施例７】
【００７８】
トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびレシチン含有化粧料の調製
精製水にＨｙｐ  ３重量％、レシチン〔ＰＣ９２Ｈ、ツルーレシチン工業社製〕  ０．０５重量％、ヒアルロン酸（ヒアルロン酸ＬＰ、協和発酵工業社製）  ０．０１重量％、メチルパラベン  ０．１重量％およびグリセロール  ０． １７重量％添加し、混合融解することによりＨｙｐおよびレシチン含有化粧料（化粧料７）を調製した。
【実施例８】
【００７９】
トランス−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリンおよびレシチン含有化粧料の調製
精製水にＨｙｐ  ３重量％、レシチン（ＳＬＰ−ホワイトＨ、ツルーレシチン工業社製）  ０．０５重量％、ヒアルロン酸（ヒアルロン酸ＬＰ、協和発酵工業社製）  ０．０１重量％、メチルパラベン  ０．１重量％およびグリセロール  ０．１７重量％添加し、混合融解することによりＨｙｐおよびレシチン含有化粧料（化粧料８）を調製した。
以上、実施例１〜８で調製した化粧料の組成を第１表にまとめて示す。
【００８０】
【表１】
2006199714.tif 000002
【実施例９】
【００８１】
ヒト繊維芽細胞におけるコラーゲン合成促進活性
合成コラーゲンの測定は、「コラーゲン実験法」（永井ら著、講談社サイエンティフィク）に準じ、以下の方法で行った。
ヒト新生児由来繊維芽細胞（三光純薬社製）を、１０％牛胎児血清を添加したＤＭＥＭ培地〔Virology, 8, 396 (1959)〕を用い、３７℃、５％ＣＯ2の条件で定常期まで培養した後、3Ｈ標識グリシンと被験物質を添加し、さらに７２時間培養した。なお、ＤＭＥＭ培地としては、日水製薬社製の『ダルベッコ変法イーグル培地「ニッスイ」２』にグルタミン  ４ｍｍｏｌ／Ｌ、炭酸水素ナトリウム  適量、ＨＥＰＥＳ  １０ｍｍｏｌ／Ｌ、ペニシリンＧカリウム  ５０Ｕ／ｍｌ、ストレプトマイシン  ５０μｇ／ｍｌ、牛胎児血清  １０％となるように添加したものを用いた。
【００８２】
得られた培養液に、５００μｍｏｌ／Ｌ  フェニルメタンスルホニルフルオリド（ＰＭＳＦ）を添加した後、細胞および培地を回収し、ソニケーターで破砕してタンパク質を抽出した。
該抽出液に１００μｍｏｌ／Ｌ  ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）および１０％  トリクロル酢酸（ＴＣＡ）を添加した後、３０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、沈殿物を回収した。
【００８３】
該沈殿物に、上記で行った培養で用いた培養容器の底面積１ｃｍ2あたり８μｌとなるように、０．２ｍｏｌ／Ｌ  ＮａＯＨを加え溶解後、等容量の１ｍｏｌ／Ｌ  リン酸バッファーで中和した。
得られたタンパク質溶液１００μｌに、２５ｍｍｏｌ／Ｌ  塩化カルシウム１０μｍｏｌ／Ｌ、６２．５ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｎ−エチルマレイミド２０μｍｏｌ／Ｌ、コラゲナーゼ（和光純薬工業社製；コラーゲン分析用）  ２０ｕｎｉｔを加え、３７℃で９０分間反応を行った。
【００８４】
該反応液を分子量１０，０００の限外ろ過で分離し、ろ過液のタンパク質画分の放射活性（ＣＤＰ）を測定し、新たに合成されたコラーゲンとした。ろ過されなかったタンパク質画分の放射活性（ＮＣＤＰ）を測定し、下記、式１に従ってコラーゲン合成比を算出した。
相対コラーゲン合成促進活性（コラーゲン合成の変化）は、コントロールに対する被験物質のコラーゲン合成比の相対値として、下記、式２に従って算出した。
【００８５】
【数１】
2006199714.tif 000003
【００８６】
【数２】
2006199714.tif 000004
【００８７】
結果を第２表に示した。
Ｈｙｐ、N-Acetyl-Hypのいずれにもコラーゲンの合成促進活性が認められた。
【００８８】
【表２】
2006199714.tif 000005
【実施例１０】
【００８９】
ヒト表皮細胞における増殖活性
ヒト表皮細胞の増殖活性の測定は、〔3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyl tetrazolium bromide〕（ＭＴＴ）を細胞に取り込ませて、生成されるＭＴＴフォルマザン(MTT formazan)量を５７０ｎｍ（リファレンス＝６５０ｎｍ）の波長で比色定量するＭＴＴ法（細胞培養III、4477-4482, (1984) ）に準じて行った。
【００９０】
即ち、ヒト新生児由来正常表皮角化細胞（三光純薬社製）を、ＫＧＭ培地（三光純薬）で３７℃、５％ＣＯ2下で定常期まで培養し、ＨｙｐおよびN-Acetyl-Hypを添加し、４日間培養した。ついでＭＴＴ試薬を５ｍｇ／ｍｌ濃度でリン酸緩衝液（ｐＨ７．４、カルシウム−マグネシウムフリー）に溶解したものを培養液に１／１０量添加し、さらに５％ＣＯ２下、３７℃で４時間培養した。培地を除去後、細胞中のＭＴＴフォルマザンを０．４ｍｏｌ／Ｌの塩酸を含むイソプロパノールで抽出し、６３０ｎｍを対照とする５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００９１】
結果を第３表に示した。
Ｈｙｐ、N-Acetyl-Hypのいずれにも表皮細胞増殖活性が認められた。Ｈｙｐにおいては濃度依存的な増殖活性が認められた。
【００９２】
【表３】
2006199714.tif 000006
【実施例１１】
【００９３】
マウス表皮細胞における増殖活性
３日令C3Hマウスより、谷垣らの方法〔日皮会誌、1145-1152（1989）〕に準じて表皮細胞を剥離した。
該表皮細胞を０．２５％トリプシンで処理した後、１５００ｒｐｍで５分間遠心分離し、細胞を取得した。該細胞を１０％牛胎児血清を添加したＤＭＥＭ培地に播種し、３７℃で１日培養しマウス表皮細胞を調製した。
【００９４】
該マウス表皮細胞を、被験物質（ＨｙｐまたはN-Acetyl-Hyp）入りの無血清ＭＣＤＢ１５３培地で６日間培養した後、ＭＴＴ試薬を５ｍｇ／ｍｌ濃度でリン酸緩衝液（ｐＨ７．４、カルシウム−マグネシウムフリー）に溶解したものを培養液に１／１０量添加し、さらに５％ＣＯ２下、３７℃で４時間培養した。培地を除去後、細胞中のＭＴＴフォルマザンを０．４ｍｏｌ／Ｌの塩酸を含むイソプロパノールで抽出し、６３０ｎｍを対照とする５７０ｎｍにおける吸光度を測定した。
【００９５】
結果を第４表に示した。
Ｈｙｐ、N-Acetyl-Hypのいずれにも表皮増殖活性が認められた。
【００９６】
【表４】
2006199714.tif 000007
【実施例１２】
【００９７】
水分保持機能の評価（１）
実施例１〜８で調製した化粧料（１）〜（８）の肌質改善効果を見るため、連用による水分維持機能の変化を調べた。
（試験方法）
23〜28才の健常な女性４名をパネラーとし、毎日、朝・夕２回、３週間または２ヶ月にわたって、前腕屈曲部の被検部位に被検化粧料を２μｌ／ｃｍ2ずつ塗布した。
（評価方法）
経時的に、朝の塗布前の被検部位の水分含量を測定した。測定機器は、SKICON-200〔アイ・ビー・エス社製〕を用い、プローブを被検部位に垂直にあてて肌伝導度（＝水分含量）を測定した。
【００９８】
測定値が高いほど水分含量が高いことを示す。被検部位の肌の伝導度変化（相対伝導度）は、無処理部位の伝導度変化に対する相対値として、下記、式３に従って算出した。
【００９９】
【数３】
2006199714.tif 000008
【０１００】
結果を、第５−１表および第５−２表に示した。
Hyp、N-Acetyl-Hypいずれも、連用することにより肌の水分含量が増加し水分維持機能の改善が認められた。またN-Acetyl-Hypはコラーゲンを上回る改善効果を有していた。
【０１０１】
【表５】
2006199714.tif 000009
【０１０２】
2006199714.tif 000010
【実施例１３】
【０１０３】
水分維持機能の評価（２）
N-Acetyl-Hypの水分維持効果について単回処理による濃度依存性を評価した。
（試験方法）
２３〜３２才の健常な女性１２名をパネルとし、前腕屈曲部の被検部位の水分含量を測定した後、被験物質を２μｌ／ｃｍ2ずつ塗布し放置した。
【０１０４】
３時間後に測定し、塗布前の水分含量を１００％とした相対値で評価した。
結果を第６表に示した。N-Acetyl-Hypは単回処理でも濃度依存的な水分維持効果を示した。
【０１０５】
【表６】
2006199714.tif 000011
【実施例１４】
【０１０６】
肌質改善効果
実施例１２の実施時に、パネラーの被験部位のシリコンレプリカ〔商品名「スキンキャスト」使用、山田粧業社製〕を作製し、下記基準により肌状態のスコアを求め肌質改善効果を評価した。
肌状態スコア：
スコア１：肌の皮溝が不鮮明であり、はがれた角質が認められる。
【０１０７】
スコア２：肌の皮溝がやや不鮮明であるかまたは一方向性が強い。
スコア３：肌の皮溝は認められるが、浅いかまたは一方向性が強い。
スコア４：肌の皮溝が認められるかまたはやや網目状である。
スコア５：肌の皮溝がはっきり認められるかまたはきれいな網目状である。
結果を第７表に示した。精製水塗布部位に比べ、化粧料（１）〜（５）のスコアは０．４〜２．１上昇しており、明らかに肌質の改善が見られた。即ち、きめ細かな肌となり、しわ形成の抑制もしくは改善効果が認められた。また、レシチンを配合した化粧料（５）は、配合していない化粧料（１）に比べスコアが高く、使用感も高まる結果が得られた。
【０１０８】
【表７】
2006199714.tif 000012
【０１０９】
以上、本発明の肌の老化抑制剤および／または肌質改善剤並びに化粧料は、表皮細胞の増殖促進作用、繊維芽細胞のコラーゲン合成促進作用、表皮の水分保持機能向上作用、しわ形成抑制もしくは改善作用等を有することから、肌の老化抑制および／または肌質改善等に有効であることが確認された。