(57)【要約】【課題】簡易な構成で高感度に被検物質を検出可能なバイオセンサーチップを提供すること。【解決手段】  本発明のバイオセンサーチップは、検体を流すための流路１を有する基板３と、流路１中に設けられ、生体機能性分子結合基を有する材料で形成された微小突起群５と、微小突起群５の下流に設けられ、電極活物質を検出するための作用電極７と参照電極９とを備える。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
検体を流すための流路を有する基板と、流路中に設けられ、生体機能性分子結合基を有する材料で形成された微小突起群と、微小突起群の下流に設けられ、電極活物質を検出するための作用電極と参照電極とを備えるバイオセンサーチップ。
【請求項２】
前記結合基は、カルボキシル基からなる請求項１に記載のチップ。
【請求項３】
微小突起群は、アスペクト比が１０〜２０である請求項１に記載のチップ。
【請求項４】
電極活物質は、過酸化水素又はキノンからなる請求項１に記載のチップ。
【請求項５】
作用電極は、微小突起群に隣接して配置される請求項１に記載のチップ。
【請求項６】
複数の流路を備え、それぞれの流路に作用電極が設けられた請求項１に記載のチップ。
【請求項７】
前記結合基には、生体機能性分子が結合されている請求項１に記載のチップ。
【請求項８】
生体機能性分子は、酵素、抗体又は一本鎖ＤＮＡからなる請求項７に記載のチップ。
【請求項９】
流路中に、少なくとも２つの微小突起群を備え、
上流側の微小突起群は、下流側の微小突起群よりも微小突起の横断面積が小さく、かつ、高密度に形成され、
下流側の微小突起群に、生体機能性分子が結合されている請求項１に記載のチップ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バイオセンサーチップに関し、より詳しくは、電極活物質の電気分解により高感度に被検物質を検出可能なバイオセンサーチップに関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、被検物質の濃度を電気化学的に測定するバイオセンサーチップとしては、特許文献１に記載されたものが知られている。このバイオセンサーチップは、図８に示すように、基板５１上に、一対の下地リード電極５３を備える。リード電極５３上には、それぞれ、作用極５５と対極５７が設けられている。作用極５５上には、電荷移動媒体層６１と酵素反応層６３が設けられている。酵素反応層６３は、被検物質に対応する酸化還元酵素を含有し、電荷移動媒体層６１は、酸化還元酵素の酵素反応と共役して酸化還元反応する電子受容体を含有する。作用極５５と対極５７とは、絶縁層５９によって絶縁されている。
【０００３】
このバイオセンサーチップでは、血液などの検体液が酵素反応層６３に滴下されると検体中の基質が酸化還元酵素と反応し、電子受容体が還元される。反応終了後、電極系に電圧を印加して電子受容体の還元体を酸化し、このとき得られる酸化電流値から検体液中の基質濃度を求める。
【特許文献１】特開２００４−２９４２３１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
上記従来のバイオセンサーチップでは、酵素反応層６３がリード電極上に形成されているので、その酵素反応層６３に含有された酸化還元酵素と基質との接触表面積を十分に大きくすることが困難であり、反応速度や感度を高くすることが難しい。
【０００５】
本発明は、係る事情に鑑みてなされたものであり、簡易な構成で高感度に被検物質を検出可能なバイオセンサーチップを提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明のバイオセンサーチップは、検体を流すための流路を有する基板と、流路中に設けられ、生体機能性分子結合基を有する材料で形成された微小突起群と、微小突起群の下流に設けられ、電極活物質を検出するための作用電極と参照電極とを備える。
【発明の効果】
【０００７】
このバイオセンサーチップの微小突起群は、非常に大きな表面積を持つので、多量の生体機能性分子が結合される。このため、検体中の被検物質は、生体機能性分子と効率的に反応し、検出感度が向上する。また、このバイオセンサーチップの微小突起群は、インプリント法などで簡易に形成することができ、作用電極と参照電極もスクリーンプリント法などで簡易に形成することができる。従って、このバイオセンサーチップは、簡易に製造することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
以下、本発明の実施形態を図面を用いて説明する。図面は、説明の便宜のために用いられるものであり、本発明の範囲は、図面に示す実施形態に限定されない。
【０００９】
１．第１実施形態
図１は、本発明の第１実施形態のバイオセンサーチップの断面図である。（ａ）は平面図であり、（ｂ）は、（ａ）中のI-I断面図である。このバイオセンサーチップは、検体を流すための流路１を有する基板３と、流路１中に設けられた微小突起群５と、微小突起群５の下流に設けられ、電極活物質を電気分解して検出するための作用電極７と参照電極９とを備える。微小突起群５は、熱可塑性樹脂で形成され、この樹脂は、生体機能性分子結合基であるカルボキシル基を有する。微小突起群５は、図２（微小突起群５の拡大平面図）に示すように、複数の微小突起５ａが隣接して配置されて構成されている。各微小突起５ａは、直径が２μｍであり、高さが４０μｍである。隣接する微小突起間距離（隣接する微小突起の間の幅）は、2μｍである。
【００１０】
流路１及び微小突起群５は、基板上に熱可塑性樹脂を塗布し、この樹脂をガラス転位温度以上に加熱した状態で、流路及び微小突起群に対応した構造を有する金型を押し当て、その状態で冷却して、その後、離型することによって、形成する（インプリント法、詳細は特開２００２−１８４７１９などを参照のこと）。上記金型は、フォトリソグラフィー技術などを用いて作製しておく。なお、ここで用いた熱可塑性樹脂は、スチレンとメタクリル酸のコポリマーであり、メタクリル酸が５−１５％ポリマー鎖に含まれるものである。このポリマーの溶融温度は１５０−１９０℃である。
【００１１】
作用電極７は、白金又はパラジウム粒子を含むカーボンインクを基板３にスクリーンプリントして形成し、参照電極９は、銀粒子を含むカーボンインクを基板３にスクリーンプリントして形成する。
【００１２】
作用電極７は、微小突起群５に隣接して設けられる。作用電極７及び参照電極９は、それぞれ、ポテンショスタット１７に電気的に接続される。作用電極７と参照電極９の間には、常時０．６Ｖの電圧が印加されている。
【００１３】
上記流路は、蓋１１で覆う。蓋１１は、固定化用酵素入口１３ａ、固定化用酵素出口１３ｂ、検体入口１５ａ、検体出口１５ｂを有している。固定化用酵素入口１３ａから酵素を含む溶液を流路１に投入して、微小突起群５に接触させる。この溶液が微小突起群５を通過した後、この溶液を固定化用酵素出口１３ｂから吸引し、再度、固定化用酵素入口１３ａに投入する。この工程を繰り返すことにより、酵素を微小突起群５に固定させる。この固定は、微小突起群５のカルボキシル基と、酵素中のリジン残基に含まれるアミノ基との間のアミド結合によって行う。なお、カルボキシ基には、予め、架橋剤としてＥＤＣ｛1-ethyl-3-(dimethilaminopropyl)carbodiimide｝を反応させておく。
【００１４】
ここで、本実施形態のバイオセンサーチップを用いると高感度な測定が可能になる原理を以下、説明する。酵素としてグルコースオキシダーゼ、検体としてラットの血清を用い、血清中のグルコース量を検出する場合を例にとる。グルコースオキシダーゼは、上述した方法により、予め微小突起群５に結合させておく。
【００１５】
血清を検体入口１５ａから流路１に投入すると、血清は、流路１を通って流れ、微小突起群５に到達する。血清中のグルコースは、微小突起群５に固定されているグルコースオキシダーゼの作用によって、反応式１に従って、分解する。この場合、Ｈ2Ｏ2が電極活物質となる。
（反応式１）グルコース＋Ｏ2→グルコン酸＋Ｈ2Ｏ2
【００１６】
分解によって生じたグルコン酸とＨ2Ｏ2は、さらに流路に沿って流れ、作用電極７に到達する。作用電極７と参照電極９の間に０．６Ｖの電圧が印加されているので、Ｈ2Ｏ2は、反応式２に従って、分解され、この分解の際に、作用電極７と参照電極９の間にＨ2Ｏ2濃度に応じた電流が流れ、この電流値を測定することによって、血清中のグルコース濃度を測定することができる。
（反応式２）Ｈ2Ｏ2→Ｏ2＋２Ｈ+＋２ｅ-
【００１７】
ここまで、特定の実施形態を例にとって説明してきたが、種々の変形も可能である。
【００１８】
微小突起５ａの直径、高さは、特に限定されず、例えば、０．５〜１０μｍ、５〜２００μｍにすることができる。微小突起５ａのアスペクト比（高さ／直径）は、１０〜２０程度が好ましい。アスペクト比が小さいと、微小突起群５の表面積が十分に大きくならないからであり、また、アルペクト比が大きいと、流路も同様に高くなるので、生成されたＨ2Ｏ2と作用電極とが接触しにくくなり、感度が低下するからである。微小突起５ａ間距離は、特に限定されず、例えば、０．５〜１０μｍにすることができる。
【００１９】
微小突起５ａに固定する酵素は、グルコースオキシダーゼに限定されず、被検物質に応じて、適宜選択することができる。例えば、被検物質が、尿酸、総コレステロールの場合、微小突起５ａには、それぞれ、ウリカーゼ、コレステロールエステラーゼ＋コレステロールオキシダーゼを固定するとよい。酵素の固定方法は、特に限定されず、アミド結合以外にも、エステル結合などによってもよい。また、十分に固定されるのであれば、静電力などによってもよい。電極活物質は、電圧印加によって酸化又は還元されるものであればよく、Ｈ2Ｏ2以外にも、キノン類なども用いることができる。
【００２０】
流路１及び微小突起群５を形成する材料には、ポリ乳酸を用いてもよく、ポリアクリル酸、ＰＥＴ，ポリカーボネートの各種熱硬化性樹脂とポリメタクリル酸の混合ポリマーでもよい。また、流路１及び微小突起群５は、インプリント法以外にも、フォトリソグラフィー及びエッチング技術などを用いて形成してもよい。
【００２１】
作用電極７は、微小突起群５の下流であれば、微小突起群５から離れた位置に配置することもできる。この場合、生成されたＨ2Ｏ2が作用電極７に到達するまでに希釈されてしまうが、この場合でも、被検物質の測定は可能である。
【００２２】
作用電極７及び参照電極９の形成方法は、限定されず、例えば、スパッタリングなどにより、基板全面に金属膜を形成し、不要な部分をフォトリソグラフィー及びエッチング、又はリフトオフなどによって除去することにより、形成してもよい。作用電極７及び参照電極９の材料は、上述した作用により、電極活物質を検出可能な限り、特に限定されない。
【００２３】
検体としては、血清以外にも、全血や脳細胞での低分子量基質などを用いてもよい。また、必要に応じて、予め透析を行っておく。
【００２４】
２．第２実施形態。
【００２５】
図３は、本発明の第２実施形態のバイオセンサーチップの断面図である。（ａ）は平面図であり、（ｂ）は、（ａ）中のI-I断面図である。本実施形態では、流路は３つ設けられ、それぞれの流路に微小突起群５及び作用電極７が設けられている。作用電極７は、それぞれ、ポテンショスタット１７に電気的に接続される。各流路の微小突起群５には、異なる酵素が固定されている。例えば、グルコースオキシダーゼ、ウリカーゼ、コレステロールエステラーゼ＋コレステロールオキシダーゼがそれぞれ固定されている。流路に投入された検体は、３本の流路を同時に流れ、それぞれの作用電極７によって、同時に測定される。従って、本実施形態によれば、複数の被検物質を同時に測定することができる。なお、流路の数は、３本に限らず、２本又は４本以上であってもよい。
【００２６】
３．第３実施形態
第３実施形態のバイオセンサーチップは、第１実施形態に類似しているが、微小突起群５に固定するのが、一本鎖ＤＮＡである点が異なっている。この実施形態では、被検物質は、相補ＤＮＡである。
【００２７】
ここで、相補ＤＮＡ量の検出原理を図１を用いて説明する。一本鎖ＤＮＡは、５’末端をアミノ基で修飾した後、第１実施形態と同様の方法により、微小突起群５に固定しておく。検体として、相補ＤＮＡを含む溶液を準備する。
【００２８】
検体を検体入口１５ａから流路１に投入すると、検体は、流路１を通って流れ、微小突起群５に到達する。相補ＤＮＡは、微小突起群５に固定されている一本鎖ＤＮＡと効率よく結合して、二本鎖ＤＮＡを形成する。次に、電極活物質であるインターカレーター分子（例えば、ヘキスト３３２５８（同人社））を含む溶液を同様に流路１に投入する。この溶液が微小突起群５に到達すると、二本鎖ＤＮＡにトラップされ、溶液中のインターカレーター分子の濃度が減少する。このインターカレーター分子のトラップ量は、二本鎖ＤＮＡの量に依存しているので、インターカレーター分子の濃度の減少もまた、二本鎖ＤＮＡの量に依存している。このため、作用電極７及び参照電極９により、インターカレーター分子の濃度（濃度の減少量）を測定することにより、検体に含まれる相補ＤＮＡ量を測定することができる。
【００２９】
なお、インターカレーター分子の種類は、電極活物質である限り、限定されない。流路は、二本以上であってもよく、それぞれの流路に別の一本鎖ＤＮＡを固定しておくことによって、複数の相補ＤＮＡを同時に測定することができる。
【００３０】
４．第４実施形態
第４実施形態のバイオセンサーチップは、第１実施形態に類似しているが、微小突起群５に固定するのが、抗体である点が異なっている。この実施形態では、被検物質は、前記抗体と抗原抗体反応する抗原である。
【００３１】
ここで、前記抗原の検出原理を図１及び図４を用いて説明する。抗体は、第１実施形態と同様の方法により、微小突起群５に固定しておく（図４（ａ）に、抗体１９が微小突起５ａに固定されている状態を模式的に示す。）。検体として、抗原を含む溶液を準備する。
【００３２】
検体を検体入口１５ａから流路１に投入すると、検体は、流路１を通って流れ、微小突起群５に到達する。検体に含まれる抗原２１は、微小突起群５に固定されている抗体１９と効率よく結合して、複合体を形成する（図４（ｂ））。複合体の形成量は、抗原２１の量に依存する。次に、酵素２５で修飾された抗体２３を含む溶液を同様に流路１に投入する。この溶液が微小突起群５に到達すると、抗体２３が複合体に結合する（図４（ｃ））。図４（ｃ）を見ると、抗原２１等を介して、酵素２５が微小突起５ａに固定されていることが分かる。酵素２５の固定量は、抗原２１の量に依存することが分かる。この後は、例えば、濃度が既知のグルコース溶液を流路１に投入し、第１実施形態と同様の方法により、生成されるＨ2Ｏ2の酸化電流を測定する。酸化電流量は、酵素２５の量に依存する。従って、酸化電流量を測定することにより、抗原２１の量を求めることができる。
【００３３】
なお、流路は、二本以上であってもよく、それぞれの流路に別の抗体を固定しておくことによって、複数の抗原を同時に測定することができる。微小突起群５に固定するのが、抗原で、検体中の抗体量を測定するようにしてもよい。
【００３４】
５．第５実施形態
第５実施形態のバイオセンサーチップは、第４実施形態に類似しているが、図５及び図６に示すように、流路中に２つの微小突起群５，２７を備える点が異なっている。上流側の微小突起群（複数の微小突起２７ａからなる。）２７は、下流側の微小突起群（複数の微小突起５ａからなる。）５よりも微小突起の横断面積が小さく、かつ、高密度に形成されている。各微小突起２７ａは、直径が１００ｎｍであり、高さが４０μｍである。隣接する微小突起間距離（隣接する微小突起の間の幅）は、２００ｎｍである。抗体は、下流側の微小突起群５のみに固定される。
【００３５】
ここで、上流側の微小突起群２７の機能を図５を用いて説明する。検体として、複数種類の抗原を含む検体を準備する。本実施形態は、複数種類の抗原のうち、比較的サイズの小さいものが被検物質である場合に好適に利用される。
【００３６】
検体を検体入口１５ａから流路１に投入すると、検体は、流路１を通って流れ、微小突起群２７に到達する。比較的サイズの小さい抗原（小抗原）は、素早く微小突起群２７を通過するが、比較的サイズの大きい抗原（大抗原）は、ゆっくりと微小突起群２７を通過する。このため、微小突起群２７は、サイズごとに抗原を分離するフィルターとして機能する。微小突起群２７を設けていない場合、大抗原と小抗原が同時に微小突起群５に到達し、小抗原が微小突起群５に固定された抗体と結合するのが阻害されることがあったが、本実施形態では、小抗原が効率的に上記抗体と結合する。この後は、第４実施形態と同様の方法により、抗原量を求めることができる。
【００３７】
なお、微小突起２７ａの直径、高さは、特に限定されず、例えば、５０〜２００ｎｍ、５〜２００μｍにすることができる。微小突起２７ａ間距離は、特に限定されず、例えば、５０〜２００ｎｍにすることができる。３つ以上の微小突起群を設け、段階的な分離を行ってもよい。
【実施例１】
【００３８】
（酵素センサーチップ）
図３に示すような、３チャンネルの酵素センサーチップを作製し、血清中のグルコース、尿酸、総コレステロールの測定に用いた。
【００３９】
（１）酵素の固定化法
微小突起群５の前後の穴１３ａ、１３ｂから、架橋剤ＥＤＣ（１０ｍＭ，酢酸緩衝液（０．０５Ｍ，ｐＨ５．７）溶液を１０μｌ／分の流速で流し、チャンネル１、２および３にＥＤＣを反応させた。次いで、チャンネル１の前後の穴を利用して、０．５ｍｇ／ｍｌのグルコースオキシダーゼ（０．１Ｍリン酸緩衝液、ｐＨ７．０）溶液を１０μｌ／分の速度で４０分間循環して、グルコースオキシダーゼ酵素を固定化した。同様にチャンネル２には、０．５ｍｇ／ｍｌのウリカーゼ溶液を流してウリカーゼを固定化した。チャンネル３には、０．５ｍｇのコレステロールオキシダーゼと０．５ｍｇのコレステロールエステラーゼを含む溶液を流して、両酵素を固定化した。最後に、０．１Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）を流して、洗浄してセンサーチップを得た。
【００４０】
（２）測定方法
移動相（キャリヤー溶液）には、界面活性剤Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００を０．５％含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．５）を用いた。検体注入は、オートインジェクターを用いて行い、検体となる血清をインジェクターのサンプルループに１μｌをため、バルブ自動スイッチングにより、チップの入口１５ａから注入した。電極部に０．６Ｖ（Ａｇ／ＡｇＣｌ参照電極に対して）の加電圧をかけ、それぞれのチャンネルの微小突起群５で起こる酵素反応によって生成した過酸化水素の酸化電流を検出した。
【００４１】
（３）結果
各チャンネルでは、グルコース、尿酸、総コレステロールに対してそれぞれ５−５００ｍｇ／ｄｌの濃度範囲で、基質濃度と応答電流との間に直線的関係があった。４種の各基質濃度が標示された管理血清を用いて、本法による測定の正確さと再現性（７回の繰返し精度）を求めた結果を表１に示す。
【００４２】
【表１】
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【００４３】
表１から分かるように、メーカー標示値と分析値は、よく−致した。また、測定の再現性は変動係数で１−２％であった。また、センサーチップの安定性は１ケ月間連続使用（毎日３０サンプル）しても、酵素活性は初期活性の８８％以上を保持した。
【実施例２】
【００４４】
（ラット脳内神経伝達物質測定のための酵素センサーチップ）
図７に示すマイクロ透析プローブを手術によりラット脳線状帯部に固定し、実施例１と同様のシステムを用いて、神経伝達物質（Ｌ−グルタミン酸、ドーパミン、アセチルコリン）を同時検出した。なお、図７において、符号Ａ，Ｂは、溶融シリカチューブであり、Ｃは、透析チューブ（内径２００μｍ、外径２２０μｍ）である。
【００４５】
（１）酵素の固定化法
チャンネル１の微小突起群５にグルタミン酸オキシダーゼを、チャンネル２にチロシナーゼを、チャンネル３にはアセチルコリンエステラーゼとコリンオキシダーゼを実施例１と同様の方法により固定化して、酵素センサーチップを得た。
【００４６】
（２）測定方法
チャンネル１とチャンネル３の電極部には０．６Ｖ（Ａｇ／ＡｇＣｌ参照電極に対して）の加電圧を与え、酵素反応により生成した過酸化水素の酸化電流を検出した。一方、チャンネル２の電極部には−０．１５Ｖの加電圧をかけ、酵素反応によって生成したドパキノンの還元電流を測定した。移動相（キャリヤー溶液）として０．１Ｍリン酸緩衝液を用い、５μｌ／分の一定流速でキャリヤー溶液を流した。また、透析液としてリンゲル液を用いシリンジポンプで２μｌ／分の流速で流した。
【００４７】
（３）結果
それぞれのチャンネルで、Ｌ−グルタミン酸、ドーパミン、アセチルコリンは１μＭ−１００μＭの濃度範囲で、応答電流はそれぞれの濃度に比例した。検出下限は０．４μＭであった。また、センサーチップの安定性は１ケ月間連続使用した場合，Ｌ−グルタミン酸センサー部とアセチルコリンセンサー部の感度は初期感度の９０％以上を保持したが、ドーパミンセンサー部の感度は７２％に減少した。
【実施例３】
【００４８】
（ＤＮＡセンサーチップ）
図１に示すような１チャンネルのＤＮＡセンサーチップを作製し、ＤＮＡセンサーチップとしての機能評価の実験を行った。
【００４９】
実施例１と同様の方法で、５’−アミノ基修飾１本範ＤＮＡ（ｄ（Ｔ）22：チミンが２２個つながったＤＮＡ）を微小突起群５に結合した。検体としてｄ（Ａ）22と一塩基ミスマッチＤＮＡ、二塩基ミスマッチＤＮＡを注入し、微小突起群上のｄ（Ｔ）22とハイブリダイゼーションを行わせる。次に、インターカレーター分子としてドーノマイシン（１μＭ溶液）を注入し，０．７Ｖの加電圧で電流測定した。
【００５０】
ｄ（Ｔ）22では電流値は７０％減少し、一塩基ミスマッチＤＮＡでは３．５％減少し、二塩基ミスマッチＤＮＡでは０％であった。つまり：、微小突起群５上のｄ（Ｔ）22はｄ（Ａ）22と選択的にハイブリダイゼーションし、相補的ＤＮＡ分子に対する選択性を示した。
【実施例４】
【００５１】
（タンパク質センサーチップ）
図１に示すような１チャンネルのタンパク質センサーチップを作製し、ヒト免疫グロブリンＧ（ＨＩｇＧ）の測定を行った。
【００５２】
実施例１と同様の方法でＨＩｇＧ抗体（Ａｎｔｉ  ＨＩｇＧ）を微小突起群５に固定化した。スライドバルブを用い、ＨＩｇＧを注入（１μｌ，３０秒）、次いで、グルコースオキシダーゼ標識抗体（ＧＯＤ−Ａｎｔｉ  ＨＩｇＧ）を注入（６０秒）、グルコース溶液（０．１ｍＭ）を注入（３０秒）して、標識されたグルコースオキシダーゼにより、グルコースから生成した過酸化水素の酸化電流を下流の電極で検出した。２μｍｇ／ｍｌから８０μｇ／ｍｌの濃度範囲で、応答電流とＨＩｇＧ濃度との間に良好な直線関係があった。
【図面の簡単な説明】
【００５３】
【図１】本発明の第１実施形態のバイオセンサーチップの（ａ）平面図、（ｂ）Ｉ−Ｉ断面図である。
【図２】図１の微小突起群の拡大平面図である。
【図３】本発明の第２実施形態のバイオセンサーチップの（ａ）平面図、（ｂ）Ｉ−Ｉ断面図である。
【図４】第４実施形態の原理を示す概念図である。
【図５】本発明の第５実施形態のバイオセンサーチップの（ａ）平面図、（ｂ）Ｉ−Ｉ断面図である。
【図６】図５の微小突起群の拡大平面図である。
【図７】マイクロ透析プローブの構成を示す。
【図８】従来のバイオセンサーチップの断面図である。
【符号の説明】
【００５４】
１：流路  ３：基板  ５，２７：微小突起群  ５ａ，２７ａ：微小突起  ７：作用電極  ９：参照電極  １１：蓋  １３ａ：固定化用酵素入口  １３ｂ：固定化用酵素出口  １５ａ：検体入口  １５ｂ：検体出口  １７：ポテンショスタット  １９，２３：抗体  ２１：抗原  ２５：酵素  ５１：基板  ５３：下地リード電極  ５５：作用極  ５７：対極  ６１：電荷移動媒体層  ６３：酵素反応層
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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