(57)【要約】【課題】  Ｔｈ１型アトピー性皮膚炎やＴｈ１型気管支喘息などのＴｈ１型アレルギー疾患に対して有効な薬学的組成物を提供する。【解決手段】  ＩＬ−１８阻害物質またはＩＦＮ−γ阻害物質、例えば抗ＩＬ−１８中和抗体や抗ＩＦＮ−γ中和抗体は、Ｔｈ１型アレルギー疾患を抑制することを見出した。したがって、ＩＬ−１８阻害物質および／またはＩＦＮ−γ阻害物質を含む組成物は、有効なＴｈ１型アレルギー疾患の予防・治療薬となる。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｔｈ１型アトピー性皮膚炎またはＴｈ１型気管支喘息を予防および／または治療するために用いられ、ＩＬ−１８阻害物質および／またはＩＦＮ−γ阻害物質を含むことを特徴とする薬学的組成物。
【請求項２】
上記ＩＬ−１８阻害物質が抗ＩＬ−１８中和抗体であり、上記ＩＦＮ−γ阻害物質が抗ＩＦＮ−γ中和抗体であることを特徴とする請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】
Ｔｈ１型アトピー性皮膚炎またはＴｈ１型気管支喘息を予防および／または治療するために用いられるキットであって、
少なくとも試料中のＩｇＥレベルを測定する試薬、試料中のＩＬ−１８レベルを測定する試薬およびＩＬ−１８阻害物質および／またはＩＦＮ−γ阻害物質を含む薬学的組成物を備えることを特徴とするキット。
【請求項４】
上記ＩＬ−１８阻害物質が抗ＩＬ−１８中和抗体であり、上記ＩＦＮ−γ阻害物質が抗ＩＦＮ−γ中和抗体であることを特徴とする請求項３に記載のキット。
【請求項５】
被検体由来の試料におけるＩｇＥレベルおよびＩＬ−１８レベルを測定する工程、
上記ＩｇＥレベルおよびＩＬ−１８レベルを正常レベルと比較する工程、および
ＩｇＥレベルが正常範囲内にあり、かつ、ＩＬ−１８レベルが正常範囲を超えている被検体に対して、ＩＬ−１８阻害物質および／またはＩＦＮ−γ阻害物質を投与する工程、
を包含することを特徴とするＴｈ１型アトピー性皮膚炎またはＴｈ１型気管支喘息の予防および／または治療方法。
【請求項６】
上記ＩＬ−１８阻害物質が抗ＩＬ−１８中和抗体であり、上記ＩＦＮ−γ阻害物質が抗ＩＦＮ−γ中和抗体であることを特徴とする請求項４に記載のＴｈ１型アトピー性皮膚炎またはＴｈ１型気管支喘息の予防および／または治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｔｈ１型アレルギー疾患の予防および／または治療に用いる薬学的組成物に関するものであり、特にＴｈ１型アトピー性皮膚炎またはＴｈ１型気管支喘息の予防および／または治療に用いる薬学的組成物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
アトピー性皮膚炎（Ａｔｏｐｉｃ  Ｄｅｒｍａｔｉｔｉｓ、以下、ＡＤと記す）は、代表的な慢性皮膚障害であり、その主な特徴は、掻痒性、慢性反復性および遺伝的背景を有することである（非特許文献１〜５）。
【０００３】
以前から、ＡＤは血清ＩｇＥレベルの上昇とＴｈ２応答に由来する免疫病理が原因であると考えられてきた。実際、多数の研究者が報告しているように、高い血清ＩｇＥレベルを有しているＡＤ患者（外因性ＡＤ）は、全体の約８０％に及び、末梢血Ｔ細胞および病変部位において優先的なＴｈ２細胞への偏りや、ＣＣＬ１７（ＴＡＲＣ）やＣＣＬ２２（ＭＤＣ）のようなＴｈ２ケモカインの発現を示す（非特許文献１〜３、５）。
【０００４】
しかしながら、内因性ＡＤと呼ばれているＩｇＥレベルが正常範囲のＡＤ患者は、多少異なった免疫学的特性、すなわち、Ｔｈ１サイトカインのＩＦＮ−γや、ＣＸＣＬ９（Ｍｉｇ）、ＣＸＣＬ１０（ＩＰ−１０）、ＣＸＣＬ１１（Ｉ−ＴＡＣ）のようなＩＦＮ関連ケモカインの発現増加という特性を有している（非特許文献２、５〜８）。さらに、最近の研究により、皮膚病変部における免疫学的特長は、ＡＤのステージにより全く異なることが明らかとなった（非特許文献２、５）。幼児期の急性ＡＤの皮膚病変部においてはＴｈ２サイトカインを発現しているリンパ球が優性であるが、慢性ＡＤ患者の皮膚病変部にはＩＦＮ−γ（Ｔｈ１サイトカイン）を発現しているリンパ球、さらに、ＩＬ−１２（Ｔｈ１細胞への分化を促進するサイトカイン）を発現する単球系細胞が認められる（非特許文献２、５）。
【０００５】
本発明者らは、最近、ＩｇＥに依存しないがケラチノサイトからのＩＬ−１８分泌の増加に完全に依存して、マウスにＡＤを誘発することが可能であることを明らかにした（非特許文献９、１０）。ケラチノサイトから大量のＩＬ−１８を分泌するカスパーゼ−１−トランスジェニックマウス（ＫＣＡＳＰ１Ｔｇ）はＳＰＦ（specific pathogen-free）環境下でＡＤ様皮膚炎を自然発症することが知られている（特許文献１）。本発明者らは、上記ＫＣＡＳＰ１ＴｇにおいてＩＬ−１８遺伝子を欠損させることで、ＩｇＥ誘導に必須のＩＬ−４シグナル伝達因子であるＳｔａｔ６遺伝子を有していてもＡＤを発症しないことを見出した。逆に、上記ＫＣＡＳＰ１ＴｇにおいてＳｔａｔ６遺伝子を欠損させると、ＩｇＥ非依存性のＴｈ１型ＡＤモデルマウスを作製できることを見出し（非特許文献９、１０）、これらのモデルマウスについて特許出願している（特許文献２）。
【０００６】
一方、気管支喘息もアレルゲン、ＩｇＥ、およびヘルパーＴ２細胞が産生するサイトカイン（Ｔｈ２サイトカイン）の協調作用によって誘導されるＴｈ２型疾患と考えられてきた。特に、Ｔｈ２サイトカイン（例えば、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−９、ＩＬ−１３など）、およびＧＭ−ＣＳＦ（顆粒球マクロファージ・コロニー刺激因子）によって気管支喘息が引き起こされることは、よく知られている。
【０００７】
しかしながら、気管支喘息患者の中には、Ｔｈ１細胞優位な免疫応答を示す症例、Ｔｈ１細胞とＴｈ２細胞の両免疫応答を示す症例も混在するという報告もあり、近年の研究の進歩によって、現在では３つのタイプ、すなわち、Ｔｈ１細胞誘導型気管支喘息（Ｔｈ１型気管支喘息）、Ｔｈ２細胞誘導型気管支喘息（Ｔｈ２型気管支喘息）およびＴｈ１細胞／Ｔｈ２細胞混合誘導型気管支喘息（混合型気管支喘息）に分類できる。Ｔｈ１型気管支喘息では、ＩｇＥ産生を認めないか、認めても正常範囲の場合がほとんどである。また、感染で増悪するのが、Ｔｈ１型気管支喘息の特徴である。
【０００８】
本発明者らは、抗原特異的なＴｈ１細胞を抗原とＩＬ−１８とで刺激すると、Ｔｈ１サイトカインのみならず、アレルギー性応答を担うエフェクター分子であるＩＬ−１３や種々のケモカインを大量に産生することを見出し、この知見に基づいて抗原特異的なＴｈ１細胞を内包したマウスに、抗原とＩＬ−１８を点鼻することにより抗原点鼻だけでは誘導できない気管支喘息（Ｔｈ１型気管支喘息）を誘発できることを報告している（非特許文献１１）。
【０００９】
また、ＩＬ−１８は間質性肺炎を誘導する可能性が報告されており（非特許文献１２）、ＣＯＰＤ（慢性呼吸不全）を誘発する可能性も示唆されている。したがって、間質性肺炎やＣＯＰＤは、おそらくＴｈ１型気管支喘息の進行形と考えられる。
【００１０】
ところで、現在、アトピー性皮膚炎の治療としては、ステロイドの外用、免疫抑制剤の外用、抗アレルギー剤の内服等が行われている。また、気管支喘息の治療としては、ステロイド吸入、気管支拡張作用のある交感神経薬剤の吸入、抗アレルギー剤の吸入、またはこれらの薬剤の内服等が行われている。さらに、ＩｇＥが原因で発症するＡＤや気管支喘息に対しては、抗ＩｇＥ抗体によるＩｇＥ中和療法も行われている。しかし、Ｔｈ１型ＡＤやＴｈ１型気管支喘息は上記治療法に抵抗性であり、未だ適切な治療法は確立されていない。なお、Ｔｈ１型気管支喘息は、難治性喘息に組み込まれている。
【特許文献１】国際公開ＷＯ０１／９５７１０Ａ１号パンフレット（国際公開日：２００１年１２月２０日）
【特許文献２】特開２００４−４１１２３号公報（公開日：平成１６年２月１２日）
【非特許文献１】Grewe, M., et al. A role for Th1 and Th2 cells in the immunopathogenesis of atopic dermatitis. Immunol. Today 19, 359-361 (1998).
【非特許文献２】Leung, D.Y.M.& Bieber, T. Atopic dermatitis. Lancet 361, 151-160 (2003).
【非特許文献３】Novak, N., Bieber, T.& Leung, D.Y.M. Immune mechanisms leading to atopic dermatitis. J. Allergy Clin. Immunol. 112, S128-S139 (2003).
【非特許文献４】Spergel, J.M.& Paller, A.S.P. Atopic dermatitis and the atopic march. J. Allergy Clin. Immunol. 2003, S118-S127 (2003).
【非特許文献５】Leung, D.Y.M., Boguniewicz, M., Howell, M.D., Nomura, I.& Hamid, Q.A. New insights into atopic dermatitis. J. Clin. Invest. 113, 651-657 (2004).
【非特許文献６】Simon, D., Borelli, S., Braathen, L.& Simon, H. Peripheral blood mononuclear cells from IgE- and non-IgE-associated allergic atopic eczema/dermatitis syndrome (AEDS) demonstate increased capacity of generating interleukin-13 but diffr in their potential of synthesizing interferon-γ. Allergy 57, 431-435 (2002).
【非特許文献７】Jeong, C.-W., et al. Differntial in vivo cytokine mRNA expression in lesional skin of intrinsic vs. extrinsic atopic dermatitis patients using semiuantitative RT-PCR. Clin. Epx. Allergy 33, 1717-1724 (2003).
【非特許文献８】Klunker, S., et al. A second step of chemotaxis after transendothelial migration: Keratinocytes undergoing apoptosis release IFN-γ-inducible protein 10, monokine induced by IFN-γ, and IFN-γ-inducible α-chemoattractant for T cell chemotaxic toward epidermis in atopic dermatitis. J. Immunol. 171, 1078-1084 (2003).
【非特許文献９】Konishi, H., et al. IL-18 contributes to the spontaneous development of atopic dermatitis-like inflammatory skin lesion independently of IgE/stat6 under specific pathogen-free conditions. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99, 11340-11345 (2002).
【非特許文献１０】Tsutsui, H., Yoshimoto, T., Hayashi, N., Mizutani, H.& Nakanishi, K. Induction of allergic inflammation by interleukin-18 in experimental animal models. Immunol. Rev. 202, 115-138 (2004).
【非特許文献１１】Sugimoto, T., et al. IL-18 acts on memory Th1 cells to induce airway inflammation and hyperresponsiveness in a naive host mouse. J. Exp. Med. 199, 535-545 (2004).
【非特許文献１２】Hoshino, T., et al. Interleukin-18 (IL-18) in synergy with IL-2 induces lethal lung injury in mice: a potential role for cytokines, chemokines, and natural killer cells in the pathogenesis of interstitial pneumonia. Blood 99, 1289-1298 (2002).
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
上述のように、本発明者らは、Ｔｈ１型ＡＤやＴｈ１型気管支喘息について鋭意研究を進展させており、その結果、Ｔｈ１型のＡＤや気管支喘息ではＩＬ−１８が皮膚炎や喘息を誘発する主な因子であることを既に公表している（例えば、特許文献２など）。また、ＩＬ−１８がＩＬ−４、ＩＬ−１３、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−８、ＩＦＮ−γ、ならびにＩＦＮ−γ関連ケモカインの産生を誘導することも知られている。
【００１２】
しかしながら、病気の誘発因子であることが実験的に強く示唆された場合でも、単純に当該誘発因子の機能を阻害することで、その病気の予防や治療が可能となるものではないことは当業者にはよく知られている事実である。例えば、ＩＬ−５およびＩＬ−１３は喘息において発現レベルの増加が認められるサイトカインであるが、抗ＩＬ−５抗体または抗ＩＬ−１３抗体を投与した場合、好酸球の増加が抑制されるが気道過敏性は抑制されないことが報告されている（Ichinose, M., et al. Cytokine-directed therapy in asthma. Curr. Drug Targets Inflamm.Allergy. Sep;3(3):263-269 (2004). Nagai, H., et al. The role of interleukin-5(IL-5) in allergic airway hyperresponsiveness in mice. Ann. N. Y. Acad. Sci. Oct31;796:91-96 (1996).）
したがって、Ｔｈ１型ＡＤやＴｈ１型気管支喘息において、ＩＬ−１８またはＩＦＮ−γを阻害した場合に、病態がどのように変化するかについては研究することは非常に意義のあるものと考えられるが、このような研究成果については未だ報告されていない。
【００１３】
また、上述のように、現在のＡＤや気管支喘息の治療は、アレルゲンによるＩｇＥの増加に起因するＴｈ２型の病態を対象としたものであり、Ｔｈ１型の患者に対する効果は低いため、Ｔｈ１型のＡＤ患者や気管支喘息患者に適した治療薬や治療方法の開発が待ち望まれている。
【００１４】
本発明は、上記の問題点に鑑みてなされたものであり、その目的は、効果的な治療方法や治療薬がないＴｈ１型アトピー性皮膚炎やＴｈ１型気管支喘息などのＴｈ１型アレルギー疾患に対して有効な薬学的組成物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明者らは、上記課題を解決するために鋭意検討し、本発明者らが独自に開発したＴｈ１型ＡＤモデルマウスまたはＴｈ１型気管支喘息モデルマウスに対して、抗ＩＬ−１８中和抗体または抗ＩＦＮ−γ中和抗体を投与することで、ＡＤまたは喘息の発症を抑えることができることを見出し、本発明を完成させるに至った。
【００１６】
すなわち、本発明に係る薬学的組成物は、Ｔｈ１型アトピー性皮膚炎またはＴｈ１型気管支喘息を予防および／または治療するために用いられ、ＩＬ−１８阻害物質および／またはＩＦＮ−γ阻害物質を含むことを特徴としている。上記ＩＬ−１８阻害物質は抗ＩＬ−１８中和抗体であり、上記ＩＦＮ−γ阻害物質は抗ＩＦＮ−γ中和抗体であることが好ましい。
【００１７】
本発明に係るキットは、Ｔｈ１型アトピー性皮膚炎またはＴｈ１型気管支喘息を予防および／または治療するために用いられるキットであって、少なくとも試料中のＩｇＥレベルを測定する試薬、試料中のＩＬ−１８レベルを測定する試薬およびＩＬ−１８阻害物質および／またはＩＦＮ−γ阻害物質を含む薬学的組成物を備えることを特徴としている。上記ＩＬ−１８阻害物質は抗ＩＬ−１８中和抗体であり、上記ＩＦＮ−γ阻害物質は抗ＩＦＮ−γ中和抗体であることが好ましい。
【００１８】
本発明に係るＴｈ１型アトピー性皮膚炎またはＴｈ１型気管支喘息の予防および／または治療方法は、被検体由来の試料におけるＩｇＥレベルおよびＩＬ−１８レベルを測定する工程、上記ＩｇＥレベルおよびＩＬ−１８レベルを正常レベルと比較する工程、およびＩｇＥレベルが正常範囲内にあり、かつ、ＩＬ−１８レベルが正常範囲を超えている被検体に対して、ＩＬ−１８阻害物質および／またはＩＦＮ−γ阻害物質を投与する工程、を包含することを特徴としている。上記ＩＬ−１８阻害物質は抗ＩＬ−１８中和抗体であり、上記ＩＦＮ−γ阻害物質は抗ＩＦＮ−γ中和抗体であることが好ましい。
【００１９】
上記構成の組成物、キットおよび方法により、Ｔｈ１型ＡＤまたはＴｈ１型気管支喘息を有効に予防および／または治療することが可能となる。
【発明の効果】
【００２０】
本発明の薬学的組成物、キットおよび方法により、従来効果的な治療ができなかったＴｈ１型ＡＤまたはＴｈ１型気管支喘息を有効に予防および／または治療できる手段を提供できるという効果を奏する。さらに、Ｔｈ１型気管支喘息の進行形と考えられる間質性肺炎や慢性呼吸不全の発症を予防できるという効果を奏する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
本発明の実施の一形態について説明すれば、以下のとおりである。なお、本発明はこれに限定されるものではない。
【００２２】
〔薬学的組成物〕
本発明に係る薬学的組成物は、ＩＬ−１８阻害物質および／またはＩＦＮ−γ阻害物質を含むものであればよく、Ｔｈ１型のアレルギー疾患を予防および／または治療するために用いられる。
【００２３】
本明細書において、Ｔｈ１型アレルギー疾患とは、抗原と感染が原因で発症し、ＩｇＥ産生を伴わないか、ＩｇＥレベルが正常範囲内であるような疾患を意味するものとする。
【００２４】
Ｔｈ１型アレルギー疾患としては、例えば、Ｔｈ１型アトピー性皮膚炎（ＡＤ）、Ｔｈ１型気管支喘息などを挙げることができる。
【００２５】
本発明者らは、実施例において詳細に記載しているように、Ｔｈ１型ＡＤモデルマウスに抗ＩＬ−１８中和抗体または抗ＩＦＮ−γ中和抗体を投与するとＡＤを発症しないことを実験的に確認した。また、Ｔｈ１型気管支喘息モデルマウスに抗ＩＬ−１８中和抗体または抗ＩＦＮ−γ中和抗体を投与すると喘息症状が抑制されること、および、ＩＬ−１８遺伝子ノックアウト（ＫＯ）マウスまたはＩＦＮ−γ遺伝子ＫＯマウスを用いて作製したＴｈ１型気管支喘息モデルマウスでは、中和抗体を投与したマウスと同様に喘息症状が抑制されることを、実験的に確認した。
【００２６】
このような本発明者らによる実験データに基づけば、ＩＬ−１８阻害物質およびＩＦＮ−γ阻害物質がＴｈ１型のアレルギー疾患、なかでもＴｈ１型ＡＤおよびＴｈ１型気管支喘息を有効に抑制できることは明らかである。
【００２７】
ここで、「阻害物質」はＩＬ−１８またはＩＦＮ−γの正常な機能を損なわせるように作用する物質であれば特に限定されない。したって、「阻害物質」にはＩＬ−１８遺伝子またはＩＦＮ−γ遺伝子からの転写を阻害する物質、ＩＬ−１８ｍＲＮＡまたはＩＦＮ−γｍＲＮＡからの翻訳を阻害する物質、ＩＬ−１８タンパク質またはＩＦＮ−γタンパク質の成熟を阻害する物質、成熟したＩＬ−１８タンパク質またはＩＦＮ−γタンパク質の機能発現を阻害する物質などが含まれる。
【００２８】
ＩＬ−１８（成熟タンパク質としてのＩＬ−１８）阻害物質は、以下のような方法で取得することができる。例えば、皮膚ケラチノサイトを黄色ブドウ球菌由来のプロテインＡで刺激する、または気道上皮細胞を大腸菌由来ＬＰＳで刺激することで、ＩＬ−１８の産生が誘導されるが、この系に阻害候補物質を添加してＩＬ−１８産生が抑制されるか否かを測定することにより、ＩＬ−１８阻害物質を取得することができる。ただし、ＩＬ−１８阻害物質のスクリーニング方法はこれに限定されるものではない。
【００２９】
また、ＩＦＮ−γ（成熟タンパク質としてのＩＦＮ−γ）阻害物質は、以下のような方法で取得することができる。例えば、Ｔｈ１細胞を抗原刺激する、またはＮＫ細胞をＩＬ−１２とＩＬ−１８とで刺激するとＩＦＮ−γが産生されるが、この系に阻害候補物質を添加してＩＦＮ−γ産生が抑制されるか否かを測定することにより、ＩＦＮ−γ阻害物質を取得することができる。ただし、ＩＦＮ−γ阻害物質のスクリーニング方法はこれに限定されるものではない。
【００３０】
より具体的なＩＬ−１８阻害物質としては抗ＩＬ−１８中和抗体を挙げることができ、より具体的なＩＦＮ−γ阻害物質としては抗ＩＦＮ−γ中和抗体を挙げることができる。ここで「抗体」は、免疫グロブリン（ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、ＩｇＭおよびこれらのフラグメント）を意味し、例としては、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単鎖抗体などが挙げられるがこれらに限定されない。
【００３１】
抗体は、種々の公知の方法（例えば、HarLowら、「Antibodies:a laboratory manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New York（1988）」、岩崎ら、「単クローン抗体  ハイブリドーマとＥＬＩＳＡ、講談社（1991）」）に従えば作製することができる。また、作製した抗体が中和活性を有するか否かは、例えば上記ＩＬ−１８阻害物質のスクリーニング方法または上記ＩＦＮ−γ阻害物質のスクリーニング方法に従えば確認することができる。また、公知の抗ＩＬ−１８中和抗体または抗ＩＦＮ−γ中和抗体を用いてもよい。
【００３２】
また、抗体は投与対象動物由来の抗体であることが好ましい。異種動物由来の抗体を投与すると異種タンパク質として認識され、免疫系により不活化・排除されるからである。
【００３３】
本発明の薬学的組成物の適用対象はヒトに限定されるものではないが、例えば、ヒトに対して抗ＩＬ−１８中和抗体または抗ＩＦＮ−γ中和抗体を含有する本発明の薬学的組成物を適用する場合には、抗体はヒト抗体またはヒト化抗体であることが好ましい。ヒト抗体やヒト化抗体は公知の方法（例えば、Riechman, Nature 332, 323-327 (1988)、Queen, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 86, 10029-10033(1989)、国際特許出願公開番号WO92-03918、WO93-2227、WO94-02602、WO94-25585、WO96-33735、WO96-34101など）により取得することができる。
【００３４】
本発明の薬学的組成物には、ＩＬ−１８阻害物質またはＩＦＮ−γ阻害物質の何れか一方のみが含まれていてもよいし、両方が含まれていてもよい。
【００３５】
本発明の薬学的組成物は、経口、非経口、または局所のいずれかの経路で哺乳動物に投与することができる。有効成分としてのＩＬ−１８阻害物質またはＩＦＮ−γ阻害物質の含有量は、治療対象の体重および状態、治療される疾病の状態、および選択される特定の投与経路に応じて、適宜選択すればよい。
【００３６】
ＩＬ−１８阻害物質またはＩＦＮ−γ阻害物質は、上記投与経路のいずれかにより、単独で、あるいは、薬剤学的に許容することのできる担体または希釈剤との組み合わせで、投与することができ、投与は、単回または複数回投与で実施することができる。より具体的には、本発明の薬学的組成物は、幅広い種々の剤形で投与することができる。すなわち、錠剤、カプセル剤、ロゼンジ剤、トローチ剤、ハードキャンディー剤、散剤、スプレー剤、クリーム剤、塗剤、坐剤、ゼリー剤、ゲル剤、ペースト剤、ローション剤、軟膏剤、水性懸濁液、注射溶液、エリキシル剤、シロップ剤などの形で、種々の薬剤学的に許容されることのできる不活性担体と組み合わせることができる。担体には、固体希釈剤もしくは充填剤、滅菌水性媒体、種々の非毒性有機溶媒などが含まれる。更に、経口医薬組成物には、適当な甘味および／または香気を付与することができる。通常、有効成分は、上記剤形中に、５重量％〜７０重量％（好ましくは１０重量％〜５０重量％）の範囲の濃度レベルで存在する。
【００３７】
経口投与用では、種々の賦形剤（例えば、微結晶セルロース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸二カリウム、およびグリシン）を含有する錠剤を、種々の崩壊剤（例えば、デンプン（好ましくはコーン、ポテト、またはタピオカスターチ）、アルギン酸、およびケイ酸複合体）と一緒に、あるいは顆粒化結合剤（例えば、ポリビニルピロリドン、スクロース、ゼラチン、およびアラビアゴム）と一緒に用いることができる。加えて、滑沢剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム、およびタルク）が、多くの場合、錠剤形成用に非常に有用である。また、同型の固体組成物をゼラチンカプセルにおける充填剤として用いることができる。これに関連する好適材料には、ラクトース（乳糖）および高分子量ポリエチレングリコールが含まれる。経口投与用に水性懸濁液および／またはエリキシル剤が望まれる場合には、活性成分を、種々の甘味量もしくは香料、着色剤、または色素と組み合わせることができ、所望により、さらに乳化剤および／または懸濁剤と、上記希釈剤（例えば、水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン、およびそれらの種々の組み合わせ）と一緒に組み合わせることができる。
【００３８】
非経口投与用では、ゴマもしくはピーナッツオイルまたは水性プロピレングリコールのいずれかを溶媒として用いることができる。所望に応じて、上記水溶液を適当に緩衝化（好ましくはｐＨ＞８）すべきであり、液体希釈剤を最初に等張性にするべきである。これらの水溶液は、静脈注射用に適している。油性溶液は、関節内、筋内、および皮下注射用に適している。滅菌条件下におけるこれらの全ての溶液の調製は、当業者に周知の標準的薬剤学的技術により、容易に達成される。加えて、また、皮膚の炎症症状を治療する場合に、本発明の化合物を局所投与することができる。この場合、好ましくは、標準的薬剤学的手法に従って、クリーム剤、ゼリー剤、ゲル剤、ペースト剤、および軟膏剤により行うことができる。
【００３９】
〔キット〕
本発明に係るキットは、少なくとも試料中のＩｇＥレベルを測定する試薬、試料中のＩＬ−１８レベルを測定する試薬およびＩＬ−１８阻害物質および／またはＩＦＮ−γ阻害物質を含む薬学的組成物を備えるものであればよい。本発明のキットは、Ｔｈ１型アレルギー疾患、具体的には、例えばＴｈ１型アトピー性皮膚炎またはＴｈ１型気管支喘息を予防および／または治療するために用いられる。
【００４０】
本キットに備えられるＩＬ−１８阻害物質および／またはＩＦＮ−γ阻害物質を含む薬学的組成物については、上記〔薬学的組成物〕の項で既に説明したので、ここでの説明は省略する。
【００４１】
本発明のキットを用いることにより、試料中のＩｇＥレベルを測定する試薬および試料中のＩＬ−１８レベルを測定する試薬を用いてＩｇＥレベルおよびＩＬ−１８レベルをあらかじめ測定し、Ｔｈ１型アレルギー疾患であるか否かを確認すれば、ＩＬ−１８阻害物質および／またはＩＦＮ−γ阻害物質を含む薬学的組成物（すなわち、上記本発明に係る薬学的組成物）を用いて、より効率良くＴｈ１型アレルギー疾患の予防および／または治療を行うことが可能となる。
【００４２】
試料は、本キットに含まれる本発明の薬学的組成物を適用しようとする対象動物由来の生体試料であればよく、例えば、血液、体液、喀痰、洗浄液、排泄液、生検組織などを挙げることができる。
【００４３】
試料中のＩｇＥレベルは、例えば試料中のＩｇＥ濃度を測定することにより決定することができる。したがって、試料中のＩｇＥレベルを測定する試薬は、公知のＩｇＥ濃度測定方法に用いられる試薬であれば特に限定されるものではない。一般に、ＩｇＥの濃度測定方法としては、ＥＬＩＳＡ法などの抗ＩｇＥ抗体を用いた免疫学的測定法が広く用いられている。それゆえ、本キットに備えるＩｇＥレベルを測定する試薬の一例としては、目的の動物種のＩｇＥと結合可能な抗ＩｇＥ抗体、標識二次抗体、発色用試薬、洗浄用緩衝液、ＥＬＩＳＡ用プレートなどを挙げることができる。ただし、これらに限定されるものではない。
【００４４】
試料中のＩＬ−１８レベルは、例えば試料中のＩＬ−１８濃度を測定することや試料中のＩＬ−１８ｍＲＮＡレベルを測定することにより決定することができる。
【００４５】
ＩＬ−１８濃度を測定する場合には、上記ＩｇＥ濃度の測定と同様に、ＥＬＩＳＡ法などの抗ＩＬ−１８抗体を用いた免疫学的測定法を用いることができる。したがって、本キットに備えるＩＬ−１８レベルを測定する試薬の一例としては、目的の動物種のＩＬ−１８と結合可能な抗ＩＬ−１８抗体、標識二次抗体、発色用試薬、洗浄用緩衝液、ＥＬＩＳＡ用プレートなどを挙げることができる。ただし、これらに限定されるものではない。
【００４６】
また、ＩＬ−１８ｍＲＮＡレベルを測定する場合には、公知のｍＲＮＡを測定する方法を用いることができ、本キットに備える試料中のＩＬ−１８レベルを測定する試薬は、これら公知の方法に用いられる試薬であれば、特に限定されるものではない。具体的には、例えばＲＴ−ＰＣＲ法、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法、ノーザンハイブリダイゼーション法、ＤＮＡアレイ法などを挙げることができる。
【００４７】
例えば、ＲＴ−ＰＣＲ法またはリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ法で試料中のＩＬ−１８レベルを測定する場合、本キットに備えるＩＬ−１８レベルを測定する試薬の一例としては、目的の動物種のＩＬ−１８ｍＲＮＡ（ｃＤＮＡ）を増幅可能なプライマーセット、組織または細胞からＲＮＡを調製するための試薬、逆転写酵素、逆転写反応に用いる緩衝液、耐熱性ＤＮＡポリメラーゼ、ＰＣＲ用試薬、リアルタイムＰＣＲ用試薬、ＰＣＲ用チューブ、ＰＣＲ用プレートなどを挙げることができる。ただし、これらに限定されるものではない。
【００４８】
なお、本発明のキットに備えられる、上記試料中のＩｇＥレベルを測定する試薬、試料中のＩＬ−１８レベルを測定する試薬および本発明に係る薬学的組成物以外の試薬や器具等は特に限定されない。
【００４９】
〔予防・治療方法〕
本発明に係るＴｈ１型アレルギー疾患の予防および／または治療方法は、被検体由来の試料におけるＩｇＥレベルおよびＩＬ−１８レベルを測定する工程、上記ＩｇＥレベルおよびＩＬ−１８レベルを正常レベルと比較する工程、およびＩｇＥレベルが正常範囲内にあり、かつ、ＩＬ−１８レベルが正常範囲を超えている被検体に対して、ＩＬ−１８阻害物質および／またはＩＦＮ−γ阻害物質を投与する工程、を包含するものであればよい。
【００５０】
以下、上記各工程について順番に説明する。
【００５１】
被検体由来の試料におけるＩｇＥレベルおよびＩＬ−１８レベルを測定する工程（以下、便宜上「測定工程」と記す。）において、被検体は特に限定されるものではなく広く動物一般を含むが、ヒトであることが好ましい。ヒト以外の動物としては、例えばイヌ、ネコ等のペット動物が好ましい。試料については上記〔キット〕の項で説明したとおりである。
【００５２】
本発明者らの研究により、Ｔｈ１型のアレルギー疾患においては、ＩｇＥレベルは正常範囲内であるが、ＩＬ−１８レベルが上昇していることが明らかにされている。したがって、被検体のＩｇＥレベルおよびＩＬ−１８レベルをあらかじめ測定し、Ｔｈ１型アレルギー疾患であることを診断した後に治療を行うことは、治療効率を上げるとともに医療経済の観点からも有意義である。
【００５３】
ＩｇＥレベルの測定方法およびＩＬ−１８レベルの測定方法は特に限定されるものではなく、上記〔キット〕の項で説明したように、公知の方法から適宜選択して使用することができる。
【００５４】
なお、Ｔｈ１型アレルギー疾患の病態の指標としては、上記ＩｇＥおよびＩＬ−１８以外に先行する感染、環境要因（粉塵、ガス等）の影響などを挙げることができる。したがって、上記指標を総合的に判断し、Ｔｈ１型アレルギー疾患であるか否かを決定することが好ましい。
【００５５】
次の工程では、上記測定工程で測定したＩｇＥレベルおよびＩＬ−１８レベルを正常レベルと比較する（以下、便宜上「比較工程」と記す。）。ここで、正常レベルとは正常健康個体におけるＩｇＥおよびＩＬ−１８のレベルを意味する。正常レベルは、比較する非検体由来の試料と同一の動物種における同一の細胞、組織、体液を試料として用いて測定されたものであることが好ましい。また、正常レベルは正常健康個体集団の平均レベルを用いることがより好ましい。
【００５６】
ＩｇＥレベルおよびＩＬ−１８レベルは測定方法や施設により異なることが知られており、具体的数値で正常レベルの範囲を規定することは困難である。したがって、施設ごとに同一方法で測定した正常健康個体の測定値を蓄積し、それを背景データとして用いて被検体の測定レベルと比較することにより、正常範囲内か否かを判断することが好ましい。
【００５７】
次の工程では、上記比較工程において、ＩｇＥレベルが正常範囲内にあり、かつ、ＩＬ−１８レベルが正常範囲を超えている被検体に対して、ＩＬ−１８阻害物質および／またはＩＦＮ−γ阻害物質を投与する（以下、便宜上「投与工程」と記す。）。
【００５８】
ＩＬ−１８阻害物質およびＩＦＮ−γ阻害物質については上記〔薬学的組成物〕の項で説明したとおりであり、例えば、抗ＩＬ−１８中和抗体、抗ＩＦＮ−γ中和抗体を挙げることができる。ＩＬ−１８阻害物質および／またはＩＦＮ−γ阻害物質はそれぞれ単独で投与してもよいが、薬剤学的に許容することのできる担体または希釈剤との組み合わせで投与することが好ましい。担体または希釈剤についても上記〔薬学的組成物〕の項で説明したとおりである。
【００５９】
投与経路、投与回数等については特に限定されない。被検体に適した投与経路、投与回数等を適宜選択すればよい。
【００６０】
なお、本発明の予防および／または治療方法においては、上記測定工程、比較工程および投与工程以外の工程を包含してもよいことはいうまでもなく、包含できる工程の内容についても限定されない。
【００６１】
なお本発明は上述した各実施形態に限定されるものではなく、請求項に示した範囲で種々の変更が可能であり、異なる実施形態にそれぞれ開示された技術的手段を適宜組み合わせて得られる実施形態についても本発明の技術的範囲に含まれる。
【実施例】
【００６２】
〔実施例１：Ｔｈ１型アトピー性皮膚炎モデルマウスにおけるＩＬ−１８阻害およびＩＦＮ−γ阻害による抑制作用〕
（１）使用動物
ＮＣ／Ｎｇａマウス（雌、６〜８週齢、日本チャースルリバー）を購入し、ＳＰＦ（specific pathogen-free）環境下で飼育した。１群の匹数は、４〜６匹とした。
【００６３】
（２）試薬等
S.aureus Cowan1株由来のSpAはCalbio Chem社（La Jolla, CA）から購入した。PE-conjugated anti-I-Ad、FITC-conjugated anti-CD3、PE-conjugated anti-CD8、FITC-conjugated anti-CD4およびPE-conjugated anti-Gr-1はPharMingen（San Diego, CA）から購入した。anti-IL-4 mAb（11B11）を産生するハイブリドーマおよびanti-IFN-γ mAb（6A2）を産生するハイブリドーマはATCC（American Type Culture Collection）から入手した。anti-IL-18ウサギポリクローナル抗体は文献（Sugimoto, T., et al. IL-18 acts on memory Th1 cells to induce airway inflammation and hyperresponsiveness in a naive host mouse. J. Exp. Med. 199, 535-545 (2004).）に記載のものを使用した。Recombinant mouse IL-12はR & D（Minneapolis, MN）から購入した。Recombinant mouse IL-18はMBL（Nagoya, Japan）から購入した。Recombinant human IL-2は塩野義製薬から供与された。細胞培養液には、10 % FCS, 100 U/ml penicillin, 100 mg/ml streptomycin, 50 mM of 2-ME および 2 mM L-glutamineを含むRPMI 1640を用いた。
【００６４】
（３）Ｔｈ１型アトピー性皮膚炎（ＡＤ）モデルマウスの作製
ＳＤＳ（Sodium dodecyl salfate）を滅菌蒸留水に溶解し、４％溶液を調製した。また、ＳｐＡを滅菌蒸留水に溶解し、１匹あたりの塗布量が１０μｇ、１００μｇおよび２００μｇとなるように適当な濃度に調製した。
【００６５】
背部を剃毛したマウスに４％ＳＤＳ溶液を塗布し、その２分後にＳｐＡを塗布した。塗布は４週間連日行った。皮膚症状のスコアリングにはclinical severity score（Matsuda, H., et al. Development of atopic dermatitis-like skin lesion with IgE hyperproduction in NC/Nga mice. Int. Immunol. 9, 461-466 (1997)）を用い、各症状を表１に記載のスコアで採点し、その合計点で皮膚症状の重症度を評価した。
【００６６】
【表１】
2006199614.tif 000002
【００６７】
結果を図１（Ａ）および（Ｂ）に示した。図１（Ａ）から明らかなように、４％ＳＤＳとＳｐＡの塗布により、ＳＰＦ環境下であるにも関わらず、皮膚の乾燥と苔癬化、および掻爬行動を主症状とする皮膚炎が惹起された。また、図１（Ｂ）から明らかなように、皮膚炎の重傷度はＳｐＡの用量に依存的であり、２００μｇのＳｐＡを４％ＳＤＳと組み合わせて塗布することにより、７点を超える中等度以上の皮膚炎が全例で惹起された。なお、ＳＤＳ単独またはＳｐＡ単独の塗布では、有意な皮膚炎の発症は認められなかった。
【００６８】
（４）Ｔｈ１型ＡＤモデルマウスを用いた解析
４−１．血清ＩＬ−１８および血清ＩｇＥ
尾静脈から経時的に採血し、血清中のＩＬ−１８濃度およびＩｇＥ濃度を測定した。測定は非特許文献９に記載の方法に従った。
【００６９】
結果を図２に示した。図２左側のグラフから明らかなように、２００μｇのＳｐＡを４％ＳＤＳと組み合わせて塗布することにより、血清中のＩＬ−１８濃度は塗布開始前と比較して有意（p<0.01）に増加した。ＳｐＡ単独の塗布では増加傾向が認められたが、塗布開始前と比較して有意ではなかった。ＳＤＳ単独の塗布では、血清中のＩＬ−１８濃度は増加しなかった。一方、図２右側のグラフから明らかなように、血清中のＩｇＥ濃度は何れの群においても増加しなかった。したがって、このＴｈ１型ＡＤモデルマウスにおける皮膚炎の発症にはＩＬ−１８が関与し、ＩｇＥ非依存的な機序があることが示された。
【００７０】
４−２．組織学的観察
皮膚病変部をサンプリングし、定法に従いホルマリン固定後パラフィン包埋切片作製した。ヘマトキシリン・エオジン（ＨＥ）染色またはトルイジンブルー染色を施し、光学顕微鏡で観察した。また、低倍率（４０倍）において無作為に選んだ５視野の肥満細胞数を数え、血漿ヒスタミン濃度との関係を解析した。
【００７１】
図３に皮膚病変部の顕微鏡観察像を示した。図３から明らかなように、時間に依存した表皮および真皮の肥厚が認められた。真皮では、好中球、好酸球、肥満細胞、リンパ球などの様々な白血球が高密度に浸潤した炎症性変化が観察され、特に塗布開始４週後の病変部において顕著であった。４週目の病変部のＨＥ染色強拡大像では、皮下において好中球および好酸球からなる重篤な炎症部位が観察された。なお、図３に示していないが、ＳＤＳ単独の塗布では４週間にわたりほぼ正常な組織像が観察された。
【００７２】
図４に顕微鏡で観察した肥満細胞数の変化（左側グラフ）と血漿中ヒスタミン濃度（右側グラフ）を示した。図４から明らかなように、ＳＤＳとＳｐＡと塗布により、肥満細胞数および血漿中ヒスタミン濃度は、皮膚炎の重症度とパラレルな増加を示した。一方、ＳＤＳの単独塗布では何れも変化しなかった。
【００７３】
次に、病変部の浸潤細胞のタイプを同定するために、共焦点レーザー顕微鏡を用いて観察した。すなわち、採取した皮膚を直ちにＯＴＣコンパウンドに包埋し、−８０℃で保存した。厚さ４μｍの凍結切片を作製し、３％パラホルムアルデヒドを含むＰＢＳで３０分間固定し、１％ウシ血清アルブミンでブロッキング処理した。ＰＢＳで洗浄した後、上記（２）に記載のＦＩＴＣ標識またはＰＥ標識した各モノクローナル抗体と１時間反応させた。なお、各標識抗体は５０倍希釈で使用した。ＰＢＳで洗浄した後、各切片の免疫染色像を共焦点レーザー顕微鏡（オリンパスＩＸ８１）を用いて評価した。
【００７４】
図５に共焦点レーザー顕微鏡観察像を示した。４％ＳＤＳと２００μｇのＳｐＡとを４週間塗布したマウスの病変部の表皮および真皮ではＣＤ３陽性Ｔ細胞の増加が観察された。ＣＤ４陽性Ｔ細胞とＣＤ８陽性Ｔ細胞はほぼ同程度であった。また、真皮においてＧｒ−１陽性の好中球の局所的な集積が多数観察された。さらに興味深いことに、ＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞が極端に増加していた。一方、ＳＤＳのみの塗布では、好中球（Ｇｒ−１陽性）の軽度の集積が認められたが、その他の所見は観察されなかった。
【００７５】
以上の観察結果から、本ＡＤモデルマウスにおいては、肥満細胞および好酸球と同程度にＴ細胞および好中球が高密度に浸潤していることが明らかとなった。
【００７６】
４−３．皮膚病変部のサイトカインおよびケモカイン発現
採取した皮膚病変部からＲＮｅａｓｙキット（Quiagen, Basel, Switzerland）を用いて使用説明書に従い、トータルＲＮＡを抽出した。このトータルＲＮＡを用いてＲＴ−ＰＣＲを文献（Ogushi, I., et al. Nuclear factor kB decoy oligodeoxynucleotides prevent endotoxin-induced fatal liver failure in a murine model. Hepatology 38, 335-344 (2003)）に記載の方法で行った。
【００７７】
結果を図６に示した。図６から明らかなように、ＩＬ−１２（ｐ４０）は１日目から１４目まで発現していた。一方、ＩＬ−１２（ｐ３５）は恒常的に弱く発現していた。ＩＦＮ−γの発現は、ＩＬ−１２（ｐ４０）と同様であった。ＴＦＮ−αは１日目または２日目で発現し始め、その後２８日目までその発現は徐々に連続的に増加した。ＩＬ−１３は１４日目以後弱く発現するようになり、相対的にＩＦＮ−γの発現より遅れていることが興味深い。一方、ＩＬ−４は発現していなかった。
【００７８】
以上のサイトカインの発現動態は、ＩＦＮ−γおよびその上流サイトカインであるＩＬ−１２は、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１３の発現が誘導された後直ちに誘導されることを示しており、このことは、当該皮膚病変部においてＴｈ１様の反応が優位に活性化されていることを示唆するものである。
【００７９】
また、図６から明らかなように、Ｔ細胞および好中球の集積に関与するケモカインの発現が検出された。すなわち、１日目には、マクロファージおよびＴ細胞の集積に関与するＩＦＮ誘導ケモカインであるＭｉｇ、ＩＰ−１０およびＩ−ＴＡＣが発現しており、明らかにＩＬ−１２およびＩＦＮ−γの発現誘導と同調していた。同時に、ＭＩＰ−１αおよびＭＩＰ−１βが発現し始めた。これらはマクロファージ、Ｔｈ１細胞、肥満細胞、好酸球などの様々な炎症性細胞の集積に関与するケモカインである。その後マウスにおいて好中球を集積させるケモカインであるＭＩＰ−２が発現した。一方、ｅｏｔａｘｉｎおよびＲＡＮＴＥＳの発現レベルは、ＳｐＡ／ＳＤＳを適用した後も変化がなかった（データを示さず）。
【００８０】
以上の結果から、Ｔｈ１型炎症反応に優先的に関与するサイトカインおよびケモカインが、ＳｐＡ／ＳＤＳチャレンジ後の皮膚病変部に順次誘導されていることが明らかとなった。
【００８１】
４−４．抗ＩＬ−１８中和抗体および抗ＩＦＮ−γ中和抗体の効果
本ＡＤモデルマウスの皮膚病変部においてＴｈ１に関わるサイトカインおよびケモカインが選択的に誘導されていたことから、内因性のＩＬ−１８および／またはＩＦＮ−γが皮膚症状の進行の原因であるか否かを確認するため、以下の解析を行った。
【００８２】
４％ＳＤＳおよびＳｐＡ（２００μｇ）の塗布開始前日（０日目）に上記（２）に記載の抗ＩＬ−１８中和抗体（anti-IL18ウサギポリクローナル抗体）５００μｇ／マウスまたは抗ＩＦＮ−γ中和抗体（anti-IFN-γ mAb（6A2））１０００μｇ／マウスを腹腔内に投与した。なお、抗ＩＬ−１８中和抗体はＰＢＳを用いて２．５ｍｇ／ｍＬに調製したものを、抗ＩＦＮ−γ中和抗体はＰＢＳを用いて５ｍｇ／ｍＬに調製したものを、いずれも注射ポンプを用いて２００μＬ投与した。初回抗体投与の翌日からＳｐＡ／ＳＤＳの塗布を開始し、抗ＩＬ−１８中和抗体は７日ごとに、抗ＩＦＮ−γ中和抗体は５日ごとに初回投与と同一用量を腹腔内投与した。塗布開始後１週間目および２週間目に表１に記載のスコアを用いて皮膚症状の重症度を評価した。また、２週間目に皮膚を採取し、組織学的観察に供した。
【００８３】
図７に抗体を投与したマウスおよび投与していないマウスの皮膚の重症度を示した。図中のＣｔｒｌはＳｐＡ／ＳＤＳを連日塗布し何れの抗体も投与していない群（対照群）を示し、α−ＩＬ−１８はＳｐＡ／ＳＤＳを連日塗布し、かつ、抗ＩＬ−１８中和抗体を投与した群（抗ＩＬ−１８群）を示し、α−ＩＦＮ−γはＳｐＡ／ＳＤＳを連日塗布し、かつ、抗ＩＦＮ−γ中和抗体を投与した群（抗ＩＦＮ群）を示す。図７から明らかなように、抗体投与群は何れの抗体もＡＤスコアが低く抑えられ、有意な皮膚炎の発症は認められなかった。一方対照群は、スコアが約５点に上昇し、有意な皮膚炎が発症した。なお、コントロール抗体を投与したマウスは対照群と同程度のスコアを示した（データを示さず）。なお、抗ＩＬ−１８抗体のコントロール抗体としては、免疫前の正常ウサギ血清のγ−グロブリン分画を用い、抗ＩＦＮ−γ抗体のコントロール抗体としては、当該抗ＩＦＮ−γ抗体のクラスにマッチし、かつマウスと反応性を示さない抗体を用いた。
【００８４】
図８に組織学的観察像を示した。１段目はＨＥ染色したパラフィン切片の光学顕微鏡観察像、２段目はトルイジンブルー染色したパラフィン切片の光学顕微鏡観察像、３段目および４段目は凍結切片に免疫染色を施し共焦点レーザー顕微鏡で観察した像である。
【００８５】
抗ＩＬ−１８群では、真皮に炎症性の変化が観察されたが、表皮にはほとんど変化がなかった。Ｔ細胞および肥満細胞の数に変化はなく、好中球の浸潤も観察されなかった。ＭＨＣクラスＩＩ陽性細胞は対照群と比較して低いレベルであったが、増加した状態を維持していた。
【００８６】
抗ＩＦＮ−γ群では、表皮および真皮に明らかな炎症性の変化は認められなかった。共焦点レーザー顕微鏡による観察においてもＴ細胞、肥満細胞、好中球の明らかな浸潤はなかった。さらに、ＭＨＣクラスＩＩの発現は正常マウスのレベルに低下していた。
【００８７】
一方、対照群では図５および図６に示した像と同様に、Ｔ細胞、好中球、肥満細胞などの白血球が高密度に浸潤した炎症像が観察された。また、上記コントロール抗体を投与した場合も対照群と同様の炎症像が観察された（データ示さず）。
【００８８】
以上の結果より、内因性のＩＬ−１８および内因性のＩＦＮ−γは、本ＡＤモデルマウスのＡＤ発症に必須であり、これらの機能を阻害することによりＡＤの発症を抑えることが可能であることが明らかとなった。
【００８９】
４−５．所属リンパ節におけるＴｈ１／Ｔｈ２分化
最初に、ＳｐＡ／ＳＤＳを皮膚に塗布した後にＴ細胞がＳｐＡに応答できるか否かを確認した。すなわち、４％ＳＤＳおよびＳｐＡ（２００μｇ）を連日塗布したマウスから塗布開始後４週目に頸部リンパ節を採取した。採取したリンパ節の細胞を、各濃度のＳｐＡを含む培地で３日間培養し、ＳｐＡに応答して細胞が増殖するかどうかを確認した。細胞の増殖は、培養終了１６時間前に３Ｈ−ＴｄＲを添加し、培養終了後、３Ｈ−ＴｄＲの細胞への取り込み量を測定した。
【００９０】
結果を図９に示した。図９から明らかなように、ＳｐＡ／ＳＤＳを塗布した後の細胞はＳｐＡ濃度に依存して増殖した。一方、ＳｐＡ／ＳＤＳを塗布する前の細胞は増殖しなかった。したがって、ＳｐＡ／ＳＤＳの塗布により所属リンパ節にＳｐＡ特異的Ｔ細胞が蓄積していることが明らかとなった。
【００９１】
次に、リンパ節の細胞がＴｈ１またはＴｈ２のどちらに分化するかを調べた。すなわち、４％ＳＤＳおよびＳｐＡ（２００μｇ）塗布群と、４％ＳＤＳの単独塗布群との２群を設け、経時的に頸部リンパ節を採取した。ＭＡＣＳを用いてＣＤ４陽性リンパ節細胞を選抜した。各群３〜５匹分のＣＤ４陽性をプールし、抗ＣＤ３抗体を固相化したプレートで４８時間培養した後、上清のＩＦＮ−γ、ＩＬ−１３およびＩＬ−４濃度を測定した。これらの測定にはＥＬＩＳＡキット（Genzyme Techne, Boston, MA）を用いた。
【００９２】
結果を図１０に示した。図１０から明らかなように、ＳｐＡ／ＳＤＳを１回または数回塗布されたマウス由来の細胞で、ＳＤＳの単独塗布の場合と比較して大量のＩＦＮ−γが産生された（左上グラフ）。しかし、何れの群でもＩＬ−４は検出されなかった（右下グラフ）。また、ＩＬ−１３については、ＳｐＡ／ＳＤＳを７日以上塗布したマウス由来の細胞で大量に産生された（左下グラフ）。
【００９３】
以上の結果より、ＳｐＡ／ＳＤＳの塗布開始後直ちに局所のＣＤ４陽性Ｔ細胞はＴｈ１細胞に分化することが示され、さらにＴｈ１細胞は、ＴＣＲ刺激とＩＬ−１８刺激とを受けＩＦＮ−γとＩＬ−１３とを産生した。
【００９４】
さらに、ＩＬ−１８がＩＬ−１２と共同してナイーブＣＤ４陽性Ｔ細胞をＩＦＮ−γとＩＬ−１３との両方を産生するＴｈ細胞（以下「炎症誘発Ｔｈ細胞」と記す）に分化誘導するか否かを確かめるため、以下の実験を行った。すなわち、ＮＣ／Ｎｇａ由来のリンパ節のナイーブＣＤ４陽性細胞を、ＩＬ−１８を添加したＴｈ１環境で培養し、固相化した抗ＣＤ３抗体および／またはＩＬ−１８の刺激により産生されるＩＦＮ−γおよびＩＬ−１３を測定した。
【００９５】
結果を図１１に示した。図１１から明らかなように、Ｔｈ１環境下でＩＬ−１８による刺激を受けたＣＤ４陽性Ｔ細胞はＩＦＮ−γおよびＩＬ−１３を産生した。一方、Ｔｈ１細胞は同じレベルのＩＦＮ−γを産生したがＩＬ−１３を産生しなかった。この結果は、ＴＣＲを介した刺激とＩＬ−１８との両方に対する応答によりＴｈ１細胞がＩＬ−１３を産生するという、本発明者らの従来の知見と一致した。炎症誘発Ｔｈ細胞は同じ刺激に対する応答により、Ｔｈ１細胞よりはるかに大量のＩＬ−１３を産生した。反対に、炎症誘発Ｔｈ細胞およびＴｈ１細胞の何れも抗ＣＤ３抗体とＩＬ−１８との刺激に対する応答により産生されるＩＦＮ−γの量は、抗ＣＤ３抗体のみに対する応答より産生されるＩＦＮ−γと同じレベルであった。したがって、これらのユニークな分化をした炎症誘発Ｔｈ細胞によるＩＬ−１３産生に関して、抗原刺激とＩＬ−１８とは相乗作用を有していた。
【００９６】
４−６．炎症誘発Ｔｈ細胞発生とＩＬ−１８の関係
ＳｐＡ／ＳＤＳ塗布による炎症誘発Ｔｈ細胞の発生にＩＬ−１８が必須であるか否かを確認するため、以下の実験を行った。すなわち、ＳｐＡ／ＳＤＳを塗布していないマウス（正常マウス）、ＳｐＡ／ＳＤＳを塗布したマウスおよび抗ＩＬ−１８中和抗体を投与し、かつ、ＳｐＡ／ＳＤＳを塗布したマウスから、塗布開始２週間目に頸部リンパ節を採取し、ＣＤ４陽性細胞を分離して抗ＣＤ３抗体を固定化したプレートで培養した。培養上清のＩＦＮ−γおよびＩＬ−１３を測定し、正常マウス由来細胞の培養上清における濃度に対する比率を算出した。なお、抗ＩＬ−１８中和抗体の投与条件は、上記４−４に記載の投与条件と同一とした。
【００９７】
結果を図１２に示した。ＳｐＡ／ＳＤＳ塗布マウス由来のＣＤ４陽性細胞は正常マウスと比較して顕著に大量のＩＦＮ−γおよびＩＬ−１３を産生した（図中Ｃｔｒｌ）。反対に、抗ＩＬ−１８中和抗体を投与したＳｐＡ／ＳＤＳ塗布マウス由来のＣＤ４陽性細胞は、正常マウスレベルのＩＦＮ−γおよびＩＬ−１３を産生した（図中α−ＩＬ−１８）。
【００９８】
この結果から、炎症誘発Ｔｈ細胞の発生にはＩＬ−１８が必須であることが明らかとなった。
【００９９】
〔実施例２：Ｔｈ１型気管支喘息モデルマウスにおけるＩＦＮ−γ阻害およびＩＬ−１８阻害による抑制作用〕
（１）使用動物
Jackson Laboratoryから特定病原体未感染（ＳＰＦ）雌ＢＡＬＢ／ｃマウスを購入した。Dr.D.Loh（Washington University,St.Louis,MO）から、ＯＶＡ３２３−３３９（ＯＶＡの３２３〜３３９番目のアミノ酸からなるポリペプチド）を認識するαβＴＣＲのトランスジェニック（Ｔｇ）マウス（ＤＯ１１．１０；遺伝的背景ＢＡＬＢ／ｃ）を入手した。当該トランスジェニックマウスについては、全ての実験に、導入遺伝子に対してヘテロ接合性のものを用いた。ＩＬ−４受容体α鎖遺伝子ＫＯマウス（ＩＬ−４ＲαＫＯ）はJackson Laboratory（USA）より購入した。ＩＦＮ−γ遺伝子ＫＯマウス（ＩＦＮ−γＫＯ）は、東京大学・岩倉教授より恵与された。ＩＬ−１８遺伝子ＫＯマウス（ＩＬ−１８ＫＯ）は、兵庫医科大学で審良静男らが作製したものを分与された。上記いずれのＫＯマウスも外見は正常でノックアウトされたサイトカインを使う免疫応答のみに異常を持つ。なお、全てのマウスは兵庫医科大学（西宮、日本）の動物施設においてＳＰＦ条件下で飼育し、６〜１０週齢のものを使用した。
【０１００】
（２）試薬等
組み換えマウスＩＬ−１２はＲ＆Ｄ（Minneapolis, MN）から購入した。組み換えマウスＩＬ−１８はＭＢＬ（Nagoya, Japan）から購入した。抗マウスＩＬ−１８抗体（anti-IL18ウサギポリクローナル抗体）は文献（Sugimoto, T., et al. IL-18 acts on memory Th1 cells to induce airway inflammation and hyperresponsiveness in a naive host mouse. J. Exp. Med. 199, 535-545 (2004).）に記載のものを精製して使用した。抗マウスＩＬ−４（１１Ｂ１１）および抗マウスＩＦＮ−γ（ＸＭＧ１．２）を精製して使用した。組換えマウスＩＬ−１３Ｒα２／Ｆｃ  ＣｈｉｍｅｒａはＲ＆Ｄ（Minneapolis, MN）から購入した。ＰＥ（Phycoerythrin;フィコエリスリン）標識抗Ｇｒ−１抗体は、PharMingen（San Diego,CA）から購入した。
【０１０１】
（３）Ｔｈ１型気管支喘息モデルマウスの作製
３−１．ＯＶＡ特異的Ｔｈ１細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ誘導
１０％ＦＢＳ（ウシ胎仔血清）、５０μＭ ２−ＭＥ（ＭＥ：メルカプトエタノール）、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌ ペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌ ストレプトマイシンを充填したＲＰＭＩ１６４０を、全量３ｍｌの６ウェルプレート中に加え、７日間、ＤＯ１１．１０Ｔｇマウス由来のナイーブ脾臓ＣＤ４＋ＣＤ６２Ｌ＋Ｔ細胞（ＣＤ４およびＣＤ６２発現Ｔ細胞；１×１０５／ｍｌ）を、抗原提示細胞（ＡＰＣ；放射線照射によるＴ細胞を除去したＢＡＬＢ／ｃの脾細胞）存在下（１×１０６／ｍｌ）、ＩＬ−２（１００ｐＭ）およびＯＶＡ３２３−３３９（１μＭ）によって刺激した。このＴ細胞を、Ｔｈ１細胞に誘導するため、ＩＬ−１２（１０ｎｇ／ｍｌ）および抗ＩＬ−４抗体（１１Ｂ１１；１０μｇ／ｍｌ）を培地に添加した。このような抗原刺激を２回行った。
【０１０２】
３−２．モデルマウスの作製
上記ｉｎ  ｖｉｔｒｏで誘導したＯＶＡ特異的Ｔｈ１細胞（５〜１０×１０６ｃｅｌｌ／マウス）をＢＡＬＢ／ｃマウスに静脈内投与し、受動Ｔｈ１型気管支喘息モデルマウスを作製した。また、ＢＡＬＢ／ｃマウス、各種ノックアウトマウスにＯＶＡとＣＦＡ（Complete Freund Adjuvant）を皮下投与することで能動Ｔｈ１型気管支喘息モデルマウスを作製した。具体的には、ＯＶＡ（SIGMA, USA）を２００μｇ／ｍＬとなるようにＰＢＳで溶解し、同量のＣＦＡと混和したものをマウス１匹あたり５００μＬ皮下投与した（最終濃度として、ＯＶＡ：５０μｇ／マウス、ＣＦＡ：２５０μＬ／マウス）。これらのマウスは、投与後２〜４週間で以下の実験に使用した。
【０１０３】
（４）実験方法
上記により作製したＴｈ１型気管支喘息モデルマウスに、ＰＢＳ（コントロール）、ＯＶＡまたはＯＶＡ＋ＩＬ−１８を３日間連続で鼻腔内投与した。
【０１０４】
ＡＨＲ（気道抵抗）は、Ｐｕｌｍｏｓ−Ｉ（ＭＩＰＳ、大阪、日本）のハードウェアおよびソフトウェアを用いて、マウスのβ−メタコリン（Ｍｃｈ）吸入に対するＡＨＲを測定した。チャンバーにマウスを置き、最初に、生理食塩水のエアロゾル（ベースライン）を暴露し、次いで、濃度を増加したメタコリン（５、１０、１５および２０ｍｇ／ｍｌ）を暴露した。それぞれ、２分間の暴露後、増強された圧力波形状および呼吸時間の振幅の変化を反映する指数を３分間測定した。
【０１０５】
ＢＡＬＦ（肺胞洗浄液）は、１匹のマウス当たり、０．５ｍＬのＰＢＳを３回に分けて肺胞洗浄を行い、回収したＢＡＬＦ中の全細胞数を計測した。また、ＢＡＬＦを遠心後、Ｄｉｆ−Ｑｕｉｋ（Baxter Healthcare Corp,Miami,FL）で染色し、形態学および染色特性に基づいて区別した。
【０１０６】
肺の免疫組織学的は以下の手順で行った。すなわち採取した肺組織を直ちにＯＴＣコンパウンドに包埋し、−８０℃で保存した。厚さ７μｍの凍結切片を作製し、３％パラホルムアルデヒドを含むＰＢＳで３０分間固定し、１％ウシ血清アルブミンでブロッキング処理した。ＰＢＳで洗浄した後、ＰＥ標識抗Ｇｒ−１抗体（５０倍希釈）と１時間反応させた。ＰＢＳで洗浄した後、共焦点レーザー顕微鏡（オリンパスＩＸ８１）を用いて評価した。
【０１０７】
（５）実験結果
５−１．Ｉｎ  ｖｉｖｏ誘導Ｔｈ１型気管支喘息モデルマウス
正常マウスにＯＶＡ＋ＣＦＡを皮下に免疫することで正常Ｂａｌｂ／ｃマウスにＴｈ１環境が誘導される。このマウスにＯＶＡ（100μg/day）およびＩＬ−１８（500ng/day）を３日間連続鼻腔内投与するとＴｈ１細胞移入マウスと同様のＡＨＲの上昇、気道の炎症所見、ＢＡＬＦ中の好中球、好酸球浸潤が認められ、Ｔｈ１型気管支喘息の病態を呈した。
【０１０８】
ＡＨＲの結果を図１３に示した。左側のグラフ（ＤＯ１１．１０Ｔｈ１）はＴｈ１細胞移入マウスの結果を示し、右側のグラフ（ＯＶＡ＋ＣＦＡ）はＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したマウスの結果を示す。図中のＣｏｎｔｒｏｌはＰＢＳを鼻腔内投与したことを表し、ＯＶＡ＋ＩＬ−１８はＯＶＡおよびＩＬ−１８を鼻腔内投与したことを表す。図１３から明らかなように、ＯＶＡおよびＩＬ−１８を鼻腔内投与した場合、いずれのマウスもＡＨＲが上昇した。
【０１０９】
５−２．ＩＬ−１３、ＩＬ−４ＲαのＴｈ１型気管支喘息に及ぼす影響
図１４に、ＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫した野生型マウスに対してＰＢＳ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、ＯＶＡ＋ＩＬ−１８またはＯＶＡ＋ＩＬ−１８＋ＩＬ−１３Ｒα２／Ｆｃ  Ｃｈｉｍｅｒａを鼻腔内投与した場合、並びにＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したＩＬ−４ＲαＫＯマウスに対してＰＢＳ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）またはＯＶＡ＋ＩＬ−１８を鼻腔内投与した場合のＡＨＲの測定結果を示した。図１４から明らかなように、ＩＬ−１３Ｒα２／Ｆｃ  Ｃｈｉｍｅｒａを同時に投与してＩＬ−１３を中和した場合もＡＨＲの上昇は抑制されなかった（図１４左）。また、ＯＶＡ＋ＣＦＡ免疫を施したＩＬ−４ＲαＫＯマウスは、野生型マウスと同様にＯＶＡおよびＩＬ−１８の鼻腔内投与によりＡＨＲの上昇が認められた（図１４右）。
【０１１０】
図１５に、ＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫した野生型マウスに対して鼻腔内投与を行わなかった場合（unchallenge）、ＯＶＡ＋ＩＬ−１８を鼻腔内投与した場合、並びにＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したＩＬ−４ＲαＫＯマウスに対してＯＶＡ＋ＩＬ−１８を鼻腔内投与した場合のＢＡＬＦ中細胞の種類および数を示した。図中Ｍｏ．は単球、Ｅｏ．は好酸球、Ｌｙｍはリンパ球、Ｎｅｕ．は好中球を表す。図１５から明らかなように、ＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫した野生型マウスに対してＯＶＡ＋ＩＬ−１８を鼻腔内投与した場合、ＢＡＬＦ中の好酸球が顕著に増加した。一方、ＩＬ−４ＲαＫＯマウスのＢＡＬＦ中の好酸球は、野生型マウスと比較して有意に少数であった。
５−３．ＩＦＮ−γのＴｈ１型気管支喘息に及ぼす影響
図１６に、Ｔｈ１細胞移入マウス（ＤＯ１１．１０Ｔｈ１）またはＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したマウスに対して、ＰＢＳ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、ＯＶＡ＋ＩＬ−１８またはＯＶＡ＋ＩＬ−１８＋抗ＩＦＮ−γ抗体（ａｎｔｉ  ＩＦＮ−γ）を鼻腔内投与した場合のＡＨＲの結果を示した。図１６から明らかなように、いずれのマウスも抗ＩＦＮ−γ抗体の投与により、ＡＨＲの上昇が抑制された。
【０１１１】
図１７に、ＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したマウスに対して、ＰＢＳ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）、ＯＶＡ＋ＩＬ−１８またはＯＶＡ＋ＩＬ−１８＋抗ＩＦＮ−γ抗体（ａｎｔｉ  ＩＦＮ−γ）を鼻腔内投与した場合のＢＡＬＦ中細胞の種類および数を示した。図中Ｍｏ．は単球、Ｅｏ．は好酸球、Ｌｙｍはリンパ球、Ｎｅｕ．は好中球を表す。図１７から明らかなように、抗ＩＦＮ−γ抗体の投与によりＢＡＬＦ中の好中球浸潤が抑制されたが好酸球は影響を受けなかった。
【０１１２】
図１８に、ＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したＩＦＮ−γＫＯマウス対してＰＢＳ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）またはＯＶＡ＋ＩＬ−１８を鼻腔内投与した場合のＡＨＲの結果、並びにＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したＩＦＮ−γＫＯマウス対してＯＶＡ＋ＩＬ−１８を鼻腔内投与した場合のＢＡＬＦ中細胞の種類および数を、同じ処理を施した野生型マウスのＢＡＬＦ中細胞の種類および数と比較した結果を示した。図１８から明らかなように、ＩＦＮ−γＫＯマウスで作製したモデルではＡＨＲの上昇は認められなかった（図１８左）。また、ＩＦＮ−γＫＯマウスで作製したモデルではＢＡＬＦ中の好中球浸潤が抑制されたが好酸球浸潤は野生型と比較して亢進した。
５−４．ＬＰＳ（Lipopolysaccharide）による内因性ＩＬ−１８の誘導およびＯＶＡ＋ＬＰＳによるＴｈ１型気管支喘息の誘導
図１９に、ＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したマウスに対して、ＰＢＳ（Ｃｏｎｔ）、ＬＰＳ、ＯＶＡ＋ＬＰＳ、ＯＶＡ＋ＬＰＳ＋抗ＩＦＮ−γ抗体またはＯＶＡ＋ＬＰＳ＋抗ＩＬ−１８抗体を鼻腔内投与した場合のＡＨＲの結果を示した。図１９から明らかなように、ＬＰＳの投与のみではＡＨＲは上昇せず、ＯＶＡ＋ＬＰＳの投与ではＡＨＲが上昇した。一方、抗ＩＦＮ−γ抗体または抗ＩＬ−１８抗体を同時に投与した場合には、いずれもＡＨＲの上昇を抑制した。
【０１１３】
図２０に、上記各処置を施したマウスのＢＡＬＦ中細胞の種類および数を示した。図中Ｍｏ．は単球、Ｅｏ．は好酸球、Ｌｙｍはリンパ球、Ｎｅｕ．は好中球を表す。図１７から明らかなように、抗ＩＦＮ−γ抗体または抗ＩＬ−１８抗体を同時に投与した場合には、いずれもＢＡＬＦ中の好中球浸潤が抑制された。
【０１１４】
図２１に、ＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したマウスに対して鼻腔内投与を行わなかった場合（unchallenge）、ＯＶＡ＋ＬＰＳを鼻腔内投与した場合、およびＯＶＡ＋ＬＰＳ＋抗ＩＬ−１８抗体を鼻腔内投与した場合において、各マウスから採取した肺についてＰＥ標識抗Ｇｒ−１抗体を用いた免疫組織学的観察結果を示した。図２１から明らかなように、ＯＶＡ＋ＬＰＳを鼻腔内投与した場合には好中球の浸潤が亢進していたが、抗ＩＬ−１８抗体を同時投与することで好中球の浸潤は抑制された。
【０１１５】
図２２に、ＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したＩＦＮ−γＫＯマウス、またはＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したＩＬ−１８ＫＯマウスに対して、ＰＢＳ（Ｃｏｎｔｒｏｌ）またはＯＶＡ＋ＬＰＳを鼻腔内投与した場合のＡＨＲを、ＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫した野生型マウスに対してＯＶＡ＋ＬＰＳを鼻腔内投与した場合のＡＨＲと比較した結果を示した。図２２から明らかなように、ＩＦＮ−γＫＯマウスおよびＩＬ−１８ＫＯマウスのいずれも野生型マウスで見られるＡＨＲの上昇が認められなかった。
【産業上の利用可能性】
【０１１６】
本発明は、Ｔｈ１型アトピー性皮膚炎またはＴｈ１型気管支喘息の予防および／または治療に用いる薬学的組成物を提供するものであり、医薬品産業に利用可能である。
【図面の簡単な説明】
【０１１７】
【図１】（Ａ）はＴｈ１型ＡＤモデルマウスの皮膚の病態を示す写真であり、（Ｂ）はＡＤの重症度のスコアを示すグラフである。
【図２】Ｔｈ１型ＡＤモデルマウスの血清中のＩＬ−１８濃度およびＩｇＥ濃度を測定した結果を示すグラフである。
【図３】Ｔｈ１型ＡＤモデルマウスの皮膚病変部の光学顕微鏡観察画像である。
【図４】Ｔｈ１型ＡＤモデルマウスの皮膚病変部における肥満細胞数の変化および血漿中ヒスタミン濃度を示すグラフである。
【図５】Ｔｈ１型ＡＤモデルマウスの皮膚病変部の共焦点レーザー顕微鏡観察画像である。
【図６】Ｔｈ１型ＡＤモデルマウスの皮膚病変部における各種サイトカインおよびケモカインのＲＴ―ＰＣＲ結果を示す画像である。
【図７】抗ＩＬ−１８中和抗体または抗ＩＦＮ−γ中和抗体を投与したＴｈ１型ＡＤモデルマウスにおけるＡＤの重症度のスコアを示すグラフである。
【図８】抗ＩＬ−１８中和抗体または抗ＩＦＮ−γ中和抗体を投与したＴｈ１型ＡＤモデルマウスの皮膚病変部の光学顕微鏡観察画像および共焦点レーザー顕微鏡観察画像である。
【図９】Ｔｈ１型ＡＤモデルマウスの頸部リンパ節細胞のＳｐＡに応答性試験の結果を示すグラフである。
【図１０】Ｔｈ１型ＡＤモデルマウスの頸部リンパ節細胞のＴｈ１／Ｔｈ２分化を確認する試験において、培養上清のＩＦＮ−γ、ＩＬ−１３およびＩＬ−４濃度を測定した結果を示すデータである。
【図１１】ナイーブＣＤ４陽性Ｔ細胞の分化誘導実験において、培養上清のＩＦＮ−γ、ＩＬ−１３、ＩＬ−４濃度およびＩＬ−１０を測定した結果を示すグラフである。
【図１２】炎症誘発Ｔｈ細胞発生とＩＬ−１８の関係を確認する試験において、ＳｐＡ／ＳＤＳ塗布マウス由来細胞および抗ＩＬ−１８中和抗体を投与したＳｐＡ／ＳＤＳ塗布マウス由来細胞の培養上清のＩＦＮ−γおよびＩＬ−１３を測定し、正常マウス由来細胞の培養上清における濃度に対する比率を測定した結果を示すグラフである。
【図１３】ＯＶＡ特異的Ｔｈ１細胞移入マウスとＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したマウスに対してＯＶＡ＋ＩＬ−１８を鼻腔内投与した場合のＡＨＲの結果を示すグラフである。
【図１４】ＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫した野生型マウスに対してＯＶＡ＋ＩＬ−１８またはＯＶＡ＋ＩＬ−１８＋ＩＬ−１３Ｒα２／Ｆｃ  Ｃｈｉｍｅｒａを鼻腔内投与した場合、並びにＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したＩＬ−４ＲαＫＯマウスに対してＯＶＡ＋ＩＬ−１８を鼻腔内投与した場合のＡＨＲの結果を示すグラフである。
【図１５】ＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫した野生型マウスに対してＯＶＡ＋ＩＬ−１８を鼻腔内投与した場合、並びにＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したＩＬ−４ＲαＫＯマウスに対してＯＶＡ＋ＩＬ−１８を鼻腔内投与した場合のＢＡＬＦ中細胞の種類および数を示したグラフである。
【図１６】ＯＶＡ特異的Ｔｈ１細胞移入マウスまたはＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したマウスに対して、ＯＶＡ＋ＩＬ−１８またはＯＶＡ＋ＩＬ−１８＋抗ＩＦＮ−γ抗体を鼻腔内投与した場合のＡＨＲの結果を示したグラフである。
【図１７】ＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したマウスに対して、ＯＶＡ＋ＩＬ−１８またはＯＶＡ＋ＩＬ−１８＋抗ＩＦＮ−γ抗体を鼻腔内投与した場合のＢＡＬＦ中細胞の種類および数を示したグラフである。
【図１８】ＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したＩＦＮ−γＫＯマウス対してＯＶＡ＋ＩＬ−１８を鼻腔内投与した場合のＡＨＲの結果、並びにＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したＩＦＮ−γＫＯマウス対してＯＶＡ＋ＩＬ−１８を鼻腔内投与した場合のＢＡＬＦ中細胞の種類および数を示したグラフである。
【図１９】ＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したマウスに対して、ＬＰＳ、ＯＶＡ＋ＬＰＳ、ＯＶＡ＋ＬＰＳ＋抗ＩＦＮ−γ抗体またはＯＶＡ＋ＬＰＳ＋抗ＩＬ−１８抗体を鼻腔内投与した場合のＡＨＲの結果を示したグラフである。
【図２０】ＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したマウスに対して、ＬＰＳ、ＯＶＡ＋ＬＰＳ、ＯＶＡ＋ＬＰＳ＋抗ＩＦＮ−γ抗体またはＯＶＡ＋ＬＰＳ＋抗ＩＬ−１８抗体を鼻腔内投与した場合のＢＡＬＦ中細胞の種類および数を示したグラフである。
【図２１】ＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したマウス、ＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫しさらにＯＶＡ＋ＬＰＳを鼻腔内投与したマウス、およびＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫しＯＶＡ＋ＬＰＳ＋抗ＩＬ−１８抗体を鼻腔内投与した各マウスから採取した肺の共焦点レーザー顕微鏡観察画像である。
【図２２】ＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したＩＦＮ−γＫＯマウス、またはＯＶＡおよびＣＦＡを皮下に免疫したＩＬ−１８ＫＯマウスに対して、ＯＶＡ＋ＬＰＳを鼻腔内投与した場合のＡＨＲの結果を示したグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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