(57)【要約】【目的】メタロチオネインを安定化し、メラノサイトのチロシナーゼ活性を抑制することを特徴とする美白化粧料及びメラニン生成抑制剤を提供する。【構成】（Ａ）メラノサイトのメタロチオネイン産生を誘導する物質と、（Ｂ）メタロチオネインの分解を抑制する物質とを含有することを特徴とする美白化粧料。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（Ａ）メラノサイトのメタロチオネイン産生を誘導する物質と、（Ｂ）メタロチオネインの分解を抑制する物質とを含有することを特徴とする美白化粧料。
【請求項２】
（Ａ）メラノサイトのメタロチオネイン産生を誘導する物質と、（Ｂ）メタロチオネインの分解を抑制する物質とを含有することを特徴とするメラニン生成抑制剤。
【請求項３】
（Ｂ）メタロチオネインの分解を抑制する物質が、白芥子から得られる抽出物であることを特徴とする請求項１記載の美白化粧料。
【請求項４】
（Ｂ）メタロチオネインの分解を抑制する物質が、白芥子から得られる抽出物であることを特徴とする請求項２記載のメラニン生成抑制剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、生体内のメラノサイト自身のメタロチオネイン産生を誘導する物質と、メタロチオネインの分解を抑制する物質とを含有することにより、メラノサイトのチロシナーゼ活性を抑制することを特徴とする美白化粧料及びメラニン生成抑制剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚が紫外線を浴びたり、炎症を起こしたりした場合、細胞内ではサイトカイン、ケモカインなどの様々な情報伝達物質が放出される。これらの物質の中で、メラノサイト刺激ホルモン（α−ＭＳＨ）、エンドセリン、ヒスタミン、一酸化窒素などの因子がメラノサイトのチロシナーゼ活性を上昇させることが報告されている。
【０００３】
チロシナーゼ活性が上昇した場合、当然のことながらメラニン合成が高まり、その結果、皮膚の色素沈着、しみ、くすみといった症状が現れる。そのため、チロシナーゼ活性上昇を防ぐためには、チロシナーゼ活性阻害剤やメラノサイトを活性化させる物質の抑制剤の使用が考えられる。
【０００４】
一方、細胞内で産生される抗酸化物質であるメタロチオネインは炎症時に生じるフリーラジカルのスカベンジャーの働きがあると報告されている（非特許文献１参照）。またメラノサイトにおいては、メタロチオネイン産生誘導することにより、チロシナーゼ活性が抑制されることが報告されている（非特許文献２参照）。しかしながら、メタロチオネインの生体内での役割について、いまだ未解明な部分が多い。
【非特許文献１】Hanada K. et al., Dermatologica, Vol.179(suppl.1), p.143, 1989
【非特許文献２】Sasaki M. et al., Experimental Dermatology, Vol.13, p.465, 2004
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明者らは、メラノサイトにおいて、メタロチオネイン産生誘導させることによる、チロシナーゼ活性が抑制される効果について検討を重ねたところ、メタロチオネイン産生誘導をやめるとメタロチオネインは時間の経過とともに、比較的短い時間で分解され、細胞内から消失してしまい、チロシナーゼ活性の抑制効果がなくなってしまうことを明らかにした。しかし、現在のところ、メタロチオネインの分解のメカニズムに関しては未解明な部分が多く、またメタロチオネインの分解を抑制する試みは行われていない。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明はメラノサイト内にメタロチオネインを産生誘導する物質に加え、その分解を抑制する物質を配合することにより、産生されたメタロチオネインを安定化し、メラノサイトのチロシナーゼ活性を抑制することを特徴とする美白化粧料及びメラニン生成抑制剤にある。
【０００７】
すなわち本発明の請求項１は、（Ａ）メラノサイトのメタロチオネイン産生を誘導する物質と、（Ｂ）メタロチオネインの分解を抑制する物質とを含有することを特徴とする美白化粧料である。
【０００８】
また本発明の請求項２は、（Ａ）メラノサイトのメタロチオネイン産生を誘導する物質と、（Ｂ）メタロチオネインの分解を抑制する物質とを含有することを特徴とするメラニ
ン生成抑制剤である。
【０００９】
また本発明の請求項３は、（Ｂ）メタロチオネインの分解を抑制する物質が、白芥子から得られる抽出物であることを特徴とする請求項１記載の美白化粧料である。
【００１０】
また本発明の請求項４は、（Ｂ）メタロチオネインの分解を抑制する物質が、白芥子から得られる抽出物であることを特徴とする請求項２記載のメラニン生成抑制剤である。
【発明の効果】
【００１１】
本発明により、メラノサイトのチロシナーゼ活性を抑制することができ、皮膚の色素沈着、しみ、くすみの改善ができる美白化粧料及びメラニン生成抑制剤を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
以下、本発明の実施の形態について記述する。
【００１３】
本発明に用いられるメタロチオネイン産生誘導物質としては、メラノサイトのメタロチオネイン産生を誘導する物質であれば特に限定されるものではなく、具体的には、塩化亜鉛や、亜鉛を含有する酵母エキス、トウヒ（Citrus aurantium）エキスなどを挙げることができる。亜鉛を含有する酵母エキスとしては、イーストリキッドＺＢ（一丸ファルコス社製）などが好ましいものとして挙げられ、またトウヒエキスとしては、トウヒリキッドＢ（一丸ファルコス社製）などが好ましいものとして挙げられる。
【００１４】
本発明に用いられる（Ａ）メラノサイトのメタロチオネイン産生を誘導する物質の配合量は、美白化粧料又はメラニン生成抑制剤の総量を基準とし、（抽出物の場合は固形分換算で）０．００００１〜３．０質量％（以下単に「％」で表す）が好ましく、特に好ましくは０．０００１〜１．０％である。
【００１５】
本発明に用いられるメタロチオネイン分解抑制物質としては、メラノサイトのメタロチオネイン分解を抑制する物質であれば特に限定されるものではなく、具体的には、アブラナ科ブラシカ属の白芥子（ハクガイシ）の種子、葉、茎、根、又は全草より得られる抽出物などを挙げることができる。その抽出溶媒としては、精製水や、グリセリン、プロピレングリコール、ブチレングリコールなどのポリオール類、エタノールなどの低級アルコール類、アセトンなどのケトン類、酢酸エチルなどのエステル類、ヘキサン、クロロホルム、ベンゼンなどの炭化水素系溶剤、又はこれらの混液を挙げることができる。
【００１６】
本発明に用いられる（Ｂ）メタロチオネインの分解を抑制する物質の配合量は、美白化粧料又はメラニン生成抑制剤の総量を基準とし、（抽出物の場合は固形分換算で）０．００００１〜３．０％が好ましく、特に好ましくは０．０００１〜１．０％である。
【００１７】
本発明の美白化粧料及びメラニン生成抑制剤の使用形態としては、皮膚外用剤があり、例えば、軟膏、ローション、乳液、クリームなどに適用できる。
【００１８】
また本発明の美白化粧料及びメラニン生成抑制剤は、抗酸化剤、抗炎症剤、ビタミン及びその誘導体、美白剤、細胞賦活剤など他の有効成分を配合することもできる。
【実施例】
【００１９】
以下、本発明の試験例及び実施例を示す。尚、試験例及び実施例にて用いた白芥子抽出物の製造方法は以下の通りであるが、本発明はこれに限定されるものではない。
【００２０】
白芥子抽出物の製造
白芥子の種子の粉砕物１００ｇと精製水１０００ｇとを混合してｐＨを約５に調整し、室温下で２４時間抽出したのち、これをろ過して抽出液（固形分含量：約１質量％）を得た。
【００２１】
［試験例１］メラノサイト内のメタロチオネイン量
（１）方法
メラノサイトをＭＣＤＢ１５３培地にて１５０×１０４個／ｍＬに調整し、６０ｍｍシャーレに４ｍＬずつ播種し、９５％空気（ｖ／ｖ）−５％（ｖ／ｖ）炭酸ガスの雰囲気下、３７℃、１日間静置培養した。
【００２２】
培養上清を吸引除去し、塩化亜鉛５０μｍｏｌ／Ｌ添加した培地を４ｍＬずつ各シャーレに加えた。このシャーレを９５％空気（ｖ／ｖ）−５％（ｖ／ｖ）炭酸ガスの雰囲気下、３７℃、２日間静置培養し、メタロチオネインをメラノサイト内に産生誘導させた。
【００２３】
塩化亜鉛の入った培養上清を吸引除去し、白芥子抽出物を１％添加した培地、及び無添加の培地を４ｍＬずつ各シャーレに加えた。このシャーレを９５％空気（ｖ／ｖ）−５％（ｖ／ｖ）炭酸ガスの雰囲気下、３７℃静置培養した。
【００２４】
２日間培養後、培養メラノサイトから蛋白質を抽出し、ウエスタンブロット解析を行った。バンドの濃さをデンシトメーターで解析した。
【００２５】
（２）結果
塩化亜鉛の入った培地を除いた直後のメタロチオネイン量を１００として、メタロチオネイン量を示した。結果を図１に示す。
【００２６】
図１より塩化亜鉛を加えて産生されたメタロチオネインは、塩化亜鉛を除いた培地に交換することにより、２日後には培地交換直後に比べて約２割程度にタンパク量が減少した。
しかしながら、白芥子抽出物を添加した培地に交換したものでは、メタロチオネインは培地交換直後に比べて約４割程度タンパク質が残っており、分解を抑制していることがわかった。
【００２７】
次に、本発明の美白化粧料及びメラニン生成抑制剤の実施例を示す。尚、実施例に示す％とは質量％である。実施例に記載の皮膚色明度回復試験法、官能テスト（美肌効果）は下記の通りである。
【００２８】
（１）皮膚色明度回復試験法
被験者２０名の背部皮膚にＵＶ−Ｂ領域の紫外線を最小紅斑量の２倍照射し、試料塗布部位と非塗布部位を設定して各々の皮膚の基準明度（Ｖ０値，Ｖ０’値）を測定した。引き続いて塗布部位には試料を１日２回ずつ１５週間連続塗布した後、３，６，９，１２，１５週間後の塗布部位及び非塗布部位の皮膚の明度（Ｖｎ値，Ｖｎ’値）を測定し、下記の判定基準にしたがって皮膚色の回復を評価した。尚、皮膚の明度（マンセル表色系Ｖ値）は高速分光色彩計で測定して得られたＸ，Ｙ，Ｚ値より算出した。また評価は被験者２０名ついて、３週間後の評価点の平均値で示した。
評価点                            判断基準
各週間の皮膚明度の回復値の差が下式を満足する試料
５                              ΔＶ−ΔＶ’≧０．１２
４                    ０．１２＞ΔＶ−ΔＶ’≧０．０８
３                    ０．０８＞ΔＶ−ΔＶ’≧０．０４
２                    ０．０４＞ΔＶ−ΔＶ’≧０
１                          ０＞ΔＶ−ΔＶ’
ΔＶ  …塗布部位の回復値 （Ｖｎ−Ｖ０）
ΔＶ’…非塗布部位の回復値（Ｖｎ’−Ｖ０’）
【００２９】
（２）官能試験
被験者２０名が試料を１０日間連用した後の試料の特性を評価した。評価は、平滑性、美白効果、弾力性のアンケート項目に対し、「美白効果が感じられた」と回答した人数で示した。
【００３０】
実施例１〜４、比較例１〜２［スキンクリーム］
表１の組成により本発明のスキンクリームを下記の製法により調製した。各々について前記の試験を実施し、その結果を表２、表３に示した。
（組成）
【００３１】
【表１】
2006199649.tif 000002
【００３２】
【表２】
2006199649.tif 000003
【００３３】
【表３】
2006199649.tif 000004
【００３４】
（調製方法）
（Ａ）、（Ｂ）を７０℃にて均一に溶解し、（Ａ）を攪拌しながら（Ｂ）を（Ａ）に注入して乳化分散した後、攪拌しながら温度５０℃まで冷却して（Ｃ）、（Ｄ）を加え、さらに攪拌しながら温度３０℃まで冷却して調製する。
【００３５】
（特性）
本発明の実施例１〜４のスキンクリームは、前記諸試験において良好な結果を示した。一方、比較例１〜２のスキンクリームは、十分な効果が認められず、本発明の実施例に比べて劣っていた。
【００３６】
実施例５［乳液］
表４の組成により本発明の乳液を下記の製法により調製した。
（組成）
【００３７】
【表４】
2006199649.tif 000005
【００３８】
（調製方法）
（Ａ）、（Ｂ）を７０℃にて均一に溶解し、（Ａ）を攪拌しながら（Ｂ）を（Ａ）に注入して乳化分散した後、攪拌しながら温度５０℃まで冷却して（Ｃ）、（Ｄ）を加え、さらに攪拌しながら温度３０℃まで冷却して調製する。
【００３９】
（特性）
この実施例５の乳液は、前記諸試験において良好な結果を示した。
【００４０】
実施例６［スキンローション］
表５の組成により本発明のスキンローションを下記の製法によって調製した。
（組成）
【００４１】
【表５】
2006199649.tif 000006
【００４２】
（調製方法）
（Ａ）、（Ｂ）の各成分をそれぞれ混合溶解し、（Ｂ）を（Ａ）に加えて混合攪拌した後、（Ｃ）を加えて混合攪拌して調製した。
【００４３】
（特性）
この実施例６のスキンローションは、前記諸試験において良好な結果を示した。
【００４４】
尚、上記実施例における香料は、下記香料処方のものを用いた。
【表６】
2006199649.tif 000007
【図面の簡単な説明】
【００４５】
【図１】塩化亜鉛によってメラノサイトに産生させたメタロチオネインの蛋白質量の、白芥子抽出物による分解抑制を示した図である。
【図１】
2006199649.tif 000008