(57)【要約】【課題】血栓形成マーカーおよび血栓形成が関与する疾患の診断方法の提供。【解決手段】血中蛋白糖化反応の後期生成物からなる血栓形成の検査マーカー；血中蛋白糖化反応の後期生成物を検出することを含む、血栓形成が関与する疾患のリスクの検査方法；血中蛋白糖化反応の後期生成物を検出することを含む、血栓形成が関与する疾患の診断方法；血中蛋白糖化反応の後期生成物を検出する物質を含む、血栓形成が関与する疾患の診断薬。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
蛋白糖化反応の後期生成物からなる血栓形成の検査マーカー。
【請求項２】
血液試料中の蛋白糖化反応の後期生成物を測定することを含む、血栓形成が関与する疾患のリスクを検査する方法。
【請求項３】
血液試料中の蛋白糖化反応の後期生成物を測定することを含む、血栓形成が関与する疾患の診断方法。
【請求項４】
該血栓形成が関与する疾患が、心筋梗塞、脳梗塞、がん、糖尿病および旅行者血栓症からなる群より選択される少なくとも一種である、請求項３記載の診断方法。
【請求項５】
蛋白糖化反応の後期生成物を認識する抗体を含む、血栓形成が関与する疾患の診断薬。
【請求項６】
血栓形成検査マーカーとしての、血中蛋白糖化反応の後期生成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血栓形成マーカー、血栓形成が関与する疾患のリスクの検査方法、血栓形成が関与する疾患の診断方法、および診断薬に関するものである。具体的には、血中蛋白糖化反応の後期生成物（ＡＧＥｓ）を血栓形成マーカーとして検出することを含む、血栓形成が関与する疾患のリスクの検査方法、血栓形成が関与する疾患の診断方法、およびそのための試薬に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病患者では、いくつかの血栓形成に係る異常が付随している。糖尿病患者動脈硬化症の促進が血栓形成と関連していることは知られており（非特許文献１）、実際、フィブリノーゲンおよびプラスミノーゲン活性化因子インヒビター−１（ＰＡＩ−１）のような血栓形成マーカーの値が上昇している（非特許文献２および３）。血栓症の媒介において、フィブリノーゲンおよびＰＡＩ−１に対する中心的役割の証拠を導き出すことは、これらマーカーが、特に糖尿病患者（非特許文献４〜６）のみならず非糖尿病患者（非特許文献７〜９）での急性心臓疾患の最も重要な危険因子の一つであるという理論を支持することとなる。
【０００３】
グルコース、フルクトースおよび三糖類を含む還元糖は、タンパク質のアミノ基と非酵素的に反応して可逆的シッフ塩基、次いでアマドリ転位生成物（蛋白糖化反応の前期生成物）となる。これら前期糖化生成物はさらに転位、脱水および縮合等の複雑な反応を行い、ＡＧＥｓと呼ばれる不可逆的に架橋された、不均質な蛍光物質になる（非特許文献１０）。ＡＧＥｓ（蛋白糖化反応の後期生成物；Ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇｌｙｃａｔｉｏｎ  ｅｎｄ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ）は、生体内にてグルコースから生成するばかりでなく、グリセルアルデヒドのような還元糖からも生成可能であり、ＡＧＥｓの生成と蓄積は、糖尿病ではかなり加速された速度にて進行することが知られている（非特許文献１１〜１２）。ＡＧＥｓが培養細胞および動物モデルにおいて血栓形成応答の引き金になり得ることは多くの証拠が示している（非特許文献１、１３〜１６）。したがって、高血糖が誘発する種々の代謝性および血液動態の混乱が血栓形成の傾向に寄与するけれども、ＡＧＥｓが糖尿病患者において無症状性血栓形成異常を誘引することはあり得る。しかしながら、糖尿病患者のＡＧＥｓのレベルは個体差が大きく、該疾患とＡＧＥｓとの関連性については十分解明されていない。
【０００４】
ところで、昨今の生活習慣病の蔓延状況に鑑み、糖尿病患者における血栓形成の診断のみならず、健常人等の非糖尿病患者での診断が予防疫学上重要になってきた。従来は、ＰＡＩ−１およびフィブリノーゲンを血栓形成マーカーとして測定してきたが、臨床現場からはさらに有効かつ簡便なマーカーの開発が望まれていた。
【非特許文献１】Yamagishi Sら、Diabetologia、vol.41、p.1435-1441 (1998)
【非特許文献２】Carr ME、J Diabetes Complications、vol.15、p.44-54 (2001)
【非特許文献３】Lyon CJら、Am J Med.、vol.115 Suppl 8A、p.62S-68S (2003)
【非特許文献４】Montalescot Gら、Eur Heart J.、vol.19 Suppl H、p.H11-7 (1998)
【非特許文献５】Saigo Mら、Prog Cardiovasc Dis.、vol.46、p.524-538 (2004)
【非特許文献６】Ottani Fら、Clin Chim Acta.、vol.311、p.33-39 (2001)
【非特許文献７】Sato Sら、Am J Epidemiol.、vol.152、p.420-423 (2000)
【非特許文献８】Smith FBら、Arterioscler Thromb Vasc Biol.、vol.17、p.3321-3325 (1997)
【非特許文献９】Sakata Tら、Atherosclerosis、vol.176、p.355-360 (2004)
【非特許文献１０】Brownlee Mら、N Engl J Med.、vol.318、p.1315-321 (1988)
【非特許文献１１】Dyer DGら、J Biol Chem.、vol.266、p.11654-11660 (1991)
【非特許文献１２】Grandhee SKら、J Biol Chem.、vol.266、p.11649-11653 (1991)
【非特許文献１３】Yamagishi Sら、FEBS Letters、vol.384、p.103-106 (1996)
【非特許文献１４】Kislinger Tら、Arterioscler Thromb Vasc Biol.、vol.21、p.905-910 (2001)
【非特許文献１５】Shen GX、Mol Cell Biochem.、vol.246、p.69-74 (2003)
【非特許文献１６】Yamagishi Sら、Int J Clin Pharm Res.、vol.23、p.129-134 (2003)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、血栓形成の指標となる血栓形成マーカー、血栓形成が関与する疾患のリスクの検査方法、血栓形成が関与する疾患の診断方法、および診断薬を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
血栓形成におけるＡＧＥｓの病理学的役割および非糖尿病患者における血中ＡＧＥｓ濃度と血栓形成マーカーとの間での疫学的関連性は、解明されていなかった。そこで、本発明者らは、冠動脈疾患の発症が低く（Toshima H、Jpn Circ J.、vol.58、p.166-172 (1994)）、かつ食生活が欧米とは極めて異なる（Hertog MGら、Arch Intern Med.、vol.155、p.381-386 (1995)）日本の一地方地域の糖尿病に罹患していない健常人において、血中ＡＧＥｓ濃度がＰＡＩ−１およびフィブリノーゲンなどの血栓形成マーカーと正の相関関係があるかどうかにつき検討した。その結果、健常人および糖尿病患者において、血栓形成に血中ＡＧＥｓが重要な役割を果たしていることを明らかにし、当該ＡＧＥｓの血中濃度が、血栓形成が関与する疾患の検査のために有用なバイオマーカーとして用いうることを見出し、本発明を完成するに至った。
すなわち、本発明は、以下のものを提供する。
（１）蛋白糖化反応の後期生成物からなる血栓形成の検査マーカー、
（２）血液試料中の蛋白糖化反応の後期生成物を測定することを含む、血栓形成が関与する疾患のリスクを検査する方法、
（３）血液試料中の蛋白糖化反応の後期生成物を測定することを含む、血栓形成が関与する疾患の診断方法、
（４）該血栓形成が関与する疾患が、心筋梗塞、脳梗塞、がん、糖尿病および旅行者血栓症からなる群より選択される少なくとも一種である、上記（３）記載の診断方法、
（５）蛋白糖化反応の後期生成物を認識する抗体を含む、血栓形成が関与する疾患の診断薬、
（６）血栓形成検査マーカーとしての、血中蛋白糖化反応の後期生成物の使用。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、蛋白糖化反応の後期生成物（ＡＧＥｓ）とＰＡＩ−１およびフィブリノーゲンとの相関関係を明らかにしたことにより、ＡＧＥｓ単独を血栓形成の検査マーカーとして用いることができる。このようなマーカーを指標とする本発明の検査方法および診断方法は、簡便かつ高精度に血栓形成が関与する疾患のリスクを判定したり、血栓形成が関与する疾患を診断することができる。また、本発明の診断薬は、本発明の検査方法および診断方法に適するツールとなり得る。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明の血栓形成の検査マーカーは、蛋白糖化反応の後期生成物（ＡＧＥｓ）からなるものである。本発明において、ＡＧＥｓは、別の血栓形成マーカーであるＰＡＩ−１およびフィブリノーゲンと正の相関関係を有するものであり、ＡＧＥｓ単独をマーカーとして用いることにより、血栓形成の指標となり得るものである。
【０００９】
本発明は、ＡＧＥｓを検出することを特徴とする、血栓形成が関連する疾患のリスクの検査方法に関する。換言すれば、本発明は、生体試料中のＡＧＥｓ濃度を測定し、測定された該濃度に基づいて、血栓が形成されるリスクが高いか低いかを判断することを特徴とする、血栓形成が関連する疾患のリスクの検査方法に関する。
【００１０】
また、本発明は、ＡＧＥｓを検出することを特徴とする、血栓形成が関連する疾患の診断方法に関する。換言すれば、本発明は、生体試料中のＡＧＥｓ濃度を測定し、測定された該濃度に基づいて、血栓が形成されているか否かを判断することを特徴とする、血栓形成が関連する疾患の診断方法に関する。
【００１１】
本発明の検査方法および診断方法の対象としては、好ましくはヒトであるが、ヒト以外の哺乳動物であってもよい。このような哺乳動物としては、例えば、マウス、ラット、ウサギ、イヌ、ネコ、ウマ、ヒツジ、ウシ、ヤギ、ブタ、ミニブタ、無毛ブタ、サル等が挙げられる。
【００１２】
本発明の検査方法および診断方法の対象は、特に限定されるものでなく、ヒトにおいては一般の健康診断の対象者であり得る。
【００１３】
一実施形態では、本発明の検査方法および診断方法の対象は、正常な血糖値を有するヒトであり得る。ここで、「正常な血糖値」とは、糖尿病（Ｉ型およびＩＩ型糖尿病を含む）の診断基準により糖尿病型あるいは境界型に分類されるような高血糖値ではなく、正常型に分類される血糖値をいう。詳細には、例えば、日本の糖尿病の診断基準では、正常型は、随時血糖値（ｆａｓｔｉｎｇ  ｐｌａｓｍａ  ｇｌｕｃｏｓｅ、ＦＰＧ）が１１０ｍｇ／ｄＬ未満、且つ７５ｇ経口糖負荷試験（ｏｒａｌ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｔｅｓｔ）２時間値が１４０ｍｇ／ｄＬ未満と定義されているため、正常な血糖値は、このような血糖値であり得る。
【００１４】
本発明の検査方法および診断方法に用いられ得る生体試料としては、血液が好ましい。血液としては、全血、血清、血漿のいずれであってもよく、これらは、対象から採取した血液を常法に従って処理することで、適宜、得ることができる。
【００１５】
本発明において、ヒトから分離された血液試料中のＡＧＥｓの検出は、特に制限されず、たとえば、免疫化学的方法等の方法によって行うことができる。その中でも特に、抗ＡＧＥｓ抗体を利用する免疫化学的方法により検出を行うのが好ましい。なお、本明細書において「ＡＧＥｓの検出」は、ある一定濃度以上のＡＧＥｓの存否を定性的に検出することのみならず、定量的にＡＧＥｓ濃度を測定することをも意味する。  
【００１６】
血液試料中のＡＧＥｓ濃度の測定に使用される免疫化学的方法としては、特に制限はなく、従来公知の例えば、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ法）、ラテックス凝集法、免疫クロマト法、放射免疫測定法（ＲＩＡ法）、蛍光免疫測定法（ＦＩＡ法）、抗原抗体複合体形成に伴う濁度を測定する比濁法等が挙げられる。これらの中でも、ＥＬＩＳＡ法によってＡＧＥｓ濃度を測定するのが好ましい。
【００１７】
具体的には、例えば、Ｍ．Ｔａｋｅｕｃｈｉら、Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．２０００  Ｆｅｂ．；６（２）：１１４−１２５に記載の方法（以下、竹内らの方法という）の、抗ＡＧＥｓ抗体を用いたＥＬＩＳＡ法などにより測定することができる。
【００１８】
ＥＬＩＳＡ法には直接吸着法とサンドイッチ法の２種類がある。直接吸着法では目的とする抗原を含む溶液を直接固相（プラスチックチューブやマイクロプレートのウェル）に接触させ、固相表面に非特異的に吸着させる（実際には蛋白質の持つ電荷や疎水性相互作用で、物理化学的に吸着する）。次いで、後から加える抗体が直接固相に吸着してしまわないよう、固相表面を無関係な蛋白質で覆う（ブロッキング）。ここで目的の蛋白質に特異的な抗体を加え、抗原に結合しなかった抗体を洗い流して、残った抗体を酵素反応により定量する。この方法は簡便であるが、最初に固相に加えた溶液に目的の抗原以外の蛋白質が多量にあり、それらが強い吸着力を持っていると、溶液中の目的蛋白質は殆ど吸着できなくなってしまう。つまり条件によっては検出感度が著しく低くなるし、検出できる筈の抗原が検出できないこともある（固相への吸着の段階が感度を左右する）。これに対し、サンドイッチ法では、先ず固相に目的の蛋白質に特異的な抗体（最初に抗原を捉える抗体で、通常Ｃａｐｔｕｒｅ抗体という）を結合させておく。固相表面をブロックした後目的物質を含む溶液を加えると、溶液中の抗原が抗原抗体反応により固相に結合する。余計な蛋白質や固相に結合しなかった抗原を洗い流した後標識した抗体を加え、固相に結合していた目的物質を定量することができる。
【００１９】
竹内らの方法によれば、例えば、ＡＧＥｓの測定は、競合的ＥＬＩＳＡ法により行うことができる。つまり、競合物質として血液試料（５０μｌ）を、５０μｌの非カルボキシメチルリジン抗ＡＧＥｓ抗体（非ＣＭＬＡＧＥｓ抗体：ＡＧＥｓ特異的抗体）と各ウェルに添加し（１：２５０〜１：１０００）、水平ロータリー振盪器で穏やかに振盪しながら室温で２時間インキュベートする。得られた結果は、Ｂ／Ｂ０（（実験的ＯＤ−バックグランドＯＤ）／（全ＯＤ−バックグランドＯＤ）として計算）で表す。免疫活性は、４種類のＡＧＥｓ（Ｄ−グリセルアルデヒド、グリコルアルデヒド、メチルグリオキサールまたはグリオキサール結合）−ウシ血清アルブミンの検量線から読み取り、ＡＧＥｓ単位（Ｕ）／ｍｌとして表す。ここで一単位（Ｕ）は、１μｇ／ｍｌのタンパク濃度でのＡＧＥｓ−ウシ血清アルブミンに見出される、抗体反応量に相当する。
【００２０】
血液試料中にＡＧＥｓが一定レベル以上検出された場合、当該血液試料の由来する対象は、血栓形成が関与する疾患を発症するリスク／している可能性が高いと判断することができる。この場合、血液試料中のＡＧＥｓ濃度が高いほど血栓形成が関与する疾患を発症するリスク／している可能性が高いとすることもできる。逆に、血液試料中にＡＧＥｓが一定レベル未満で検出された場合、当該血液試料の由来する対象は、血栓形成が関与する疾患を発症するリスク／している可能性が低いと判断することができる。
【００２１】
上記発症リスクおよび発症可能性を判断する場合、例えば、後述の実施例に示されているように３分位値からカットオフ値を設定し、カットオフ値以上であれば対象は血栓形成が関与する疾患を発症するリスク／している可能性が高いと判断し、逆にカットオフ値未満であれば対象は血栓形成が関与する疾患を発症するリスク／している可能性が低いと判断することができる。
【００２２】
カットオフ値としては、ＰＡＩ−１およびフィブリノーゲンとの相関から、ＥＬＩＳＡによる測定では、４．３±０．２Ｕ／ｍｌが挙げられる。ここで、ＡＧＥｓの一単位（Ｕ）は、後述の実施例に示すように、１μｇのグリセルアルデヒド誘導ＡＧＥ−ウシ血清アルブミン標準に相当する。
【００２３】
血栓形成が関与する疾患とは、心筋梗塞、脳梗塞、がん、糖尿病、旅行者血栓症（エコノミー症候群）などが挙げられる。
【００２４】
本発明の方法は、対象が血栓形成が関与する疾患を発症するリスク／している可能性があるか否かを、簡便かつ高い精度で判断し得る。例えば、本発明の方法において、血栓形成が関与する疾患を発症する可能性が高いと判断された対象に対し、当該疾患を予防するための対策（例えば、生活習慣の改善）を講じることができるので、本発明は血栓形成が関与する疾患を予防するための検査方法としても有用となり得る。
【００２５】
また、本発明では、生体試料中のＡＧＥｓを検出する物質を含む、血栓形成が関与する疾患の診断薬が提供される。
【００２６】
該物質としては、上述の方法においてＡＧＥｓの検出を達成しうるものであれば特に限定されないが、好ましくはＡＧＥｓの抗体である。
【００２７】
前記診断薬中に含まれる抗ＡＧＥｓ抗体は、哺乳動物、好ましくはヒトから分離された血液中に存在するＡＧＥｓを認識し、ＡＧＥｓとの特異的な免疫反応性を有するものであれば、ポリクローナル抗体又はモノクローナル抗体の何れでも良い。
【００２８】
例えば、具体的に、抗ＡＧＥｓ抗体としては、以下に示す竹内らの方法に準じ、製造することができる。
Ｍ．Ｔａｋｅｕｃｈｉら、Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．１９９９；５：３９３−４０５に記載の方法により、ＡＧＥｓにウサギ血清アルブミン（ＲＳＡ）を修飾させる（ＡＧＥｓ−ＲＳＡ）。つまり、タンパク質を、０．１ＭのＤ−グリセルアルデヒド、グリコルアルデヒド、メチルグリオキサールまたはグリオキサール、および５ｍＭのＤＴＰＡを溶解した０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．４）と共に３７℃で７日間、無菌下でインキュベートし、その後、低分子反応物およびアルデヒドを、ＰＤ−１０カラム（ファルマシアバイオテクＡＰ）およびＰＢＳ（ｐＨ７．４）に対する透析を用いて除去する。
このようにして調製したさまざまなＡＧＥ−ＲＳＡ（各４ｍｇ）を、５０％のフロイント完全アジュバント（Ｆｒｅｕｎｄ’ｓ  ｃｏｍｐｌｅｔｅ  ａｄｊｕｖａｎｔ）で乳剤化し、ウサギに皮内注射する。この手順を１週間間隔で６週間繰り返す。２週間の中断の後、各抗原の追加抗原刺激を行う。追加抗原刺激後１０日目に採血し、血清を精製し、抗ＡＧＥｓ抗体を得る。非ＣＭＬＡＧＥｓ抗体は、例えば、ＣＭＬ−ＢＳＡを結合させたＳｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）４Ｂを用いたアフィニティークロマトグラフィーにより、抗ＡＧＥｓ抗体から精製することができる。
【００２９】
このような抗ＡＧＥｓ抗体は、遊離の状態、標識された状態または固相化された状態で前記診断薬に含まれる。
【００３０】
本発明の診断薬を用いれば、上述の方法により、容易に血栓形成が関与する疾患を診断することができる。
【００３１】
本発明の診断薬はまた、上述の検出方法で使用される試薬等をさらに含む、血栓形成が関与する疾患の診断用キットとすることもできる。該試薬等としては、具体的に、試薬や生体試料を希釈するための緩衝液、蛍光色素、反応容器、陽性対照、陰性対照、検査プロトコールを記載した指示書等が挙げられる。これらの要素は、必要に応じて予め混合しておくこともできる。該キットを使用することにより、本発明の血栓形成が関与する疾患の診断が簡便となる。
【００３２】
本明細書中で挙げられた特許および特許出願明細書を含む全ての刊行物に記載された内容は、本明細書での引用により、その全てが明示されたと同程度に本明細書に組み込まれるものである。
【００３３】
以下に実施例を用いて本発明を詳述するが、本発明は以下の実施例に限定されるものではない。  
【実施例】
【００３４】
試験検査例
２００４年、長崎県福江市沖の離島にある宇久町（人口３７００名）の漁業を主たる生計として従事している地区の２０４名に健康診断を行った。内８名が血液検査を拒絶し、また、１０名が真性糖尿病に罹患しておよび／または治療中であり、糖化ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）値が６．５％以上であった。最終的に１８６名の非糖尿病対象者（男性：６４名、女性１２２名）を一夜絶食後、血中ＡＧＥｓ濃度と糖尿病および血栓形成との関係を調べた。試験にあたり、行政当局の事前承認を得、また、久留米大学医学部倫理委員会の承認、および対象者すべてのインフォームド・コンセントを得た。
【００３５】
対象者１８６名へは次の試験を行った。すなわち、病歴ならびに喫煙および飲酒の習慣を問診にて確認した。喫煙および飲酒については、現時点での習慣か否かにより分類した。身長と体重を測定し、肥満係数としてＢＭＩ（Ｂｏｄｙ  ｍａｓｓ  ｉｎｄｅｘ、体重（ｋｇ）／身長（ｍ）２）を求めた。血圧は座位および仰向位にて２回測定し、仰向位での血圧を分析に用いた。１２時間絶食した後の朝に血液を前肘静脈から採取して、脂質（総コレステロール、ＨＤＬ−コレステロール、ＬＤＬ−コレステロールおよびトリグリセリド）、空腹時グルコース値（ＦＰＧ）、ＨｂＡ１ｃ、インスリン、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン、尿酸、高感度Ｃ反応性タンパク質（Ｈｓ−ＣＲＰ）、フィブリノーゲン、ＰＡＩ−１およびＡＧＥｓの各濃度を測定した。フィブリノーゲンはトロンビン時間法により測定した。ＰＡＩ−１は、Declerckら、Blood、vol.71、p.220-225 (1988)に記載されたように、クエン酸加血漿を用いて酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）により測定した。この方法は、遊離ＰＡＩ−１には感受性があるが、組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔ−ＰＡ）と結合したＰＡＩ−１には感受性がない。血小板ＰＡＩ−１が混入しないようにするため、クエン酸加サンプルを少なくとも１０分間遠心分離した。ＡＧＥｓ濃度は、上記した竹内らの方法により、測定した。ＡＧＥｓの一単位（Ｕ）は、１μｇのグリセルアルデヒド誘導ＡＧＥ−ウシ血清アルブミン標準に相当する。血清総コレステロール、ＨＤＬ−コレステロール（酵素アッセイ法）およびクレアチニン（酵素アッセイ法）等の他の因子は、外部の試験機関（（株）協同医学研究所）にて常法により測定した。
【００３６】
トリグリセリド、インスリン、ｈｓ−ＣＲＰおよびＰＡＩ−１の統計解析については、分布が非対称であるので、自然対数変換法にて行った。９５％の信頼区間（ＣＩ）の上限下限をもつ平均値を指数化し、幾何平均値±標準偏差（ＳＤ）で示した。ここで、ＳＤ値は、３．９２（データが正規分布している９５％ＣＩでのＳＤの数値である）で除した指数化されたＣＩ値の差として近似した。高血圧および高脂血症の医薬はダミーの変数として暗号化した。血清ＡＧＥｓ濃度の決定要因特定のために一変量分析を行った。ＡＧＥｓ濃度の最終パラメーターを決定するために、重直線回帰分析を行った。増加していくＡＧＥｓ濃度の三分位値による血漿ＰＡＩ−１およびフィブリノーゲンの各平均濃度を共変数分析を用いて比較し、その際に、共変数として年齢および性別で調整した。統計的有意性は、ｐ＜０．０５と定めた。すべての統計解析は、ＳＡＳシステム（SAS Institute. SAS/STAT Software: Changes and enhancements through release 6.12. Cary, NC: SAS Institute Inc; 1997）を用いて行った。
【００３７】
対象者の特性を表１にまとめた。
【００３８】
【表１】
2006337322.tif 000002
【００３９】
表中の数値は、別途示さない限り、平均値±％にて示す。ＡＧＥ、ＢＭＩ、ＦＰＧ、Ｈｓ−ＣＲＰおよびＰＡＩ−1は上記に定義したとおりであり、ＴＣＨは総コレステロール値を、ＨＤＬ−ｃはＨＤＬ−コレステロールを、ＬＤＬ−ｃはＬＤＬ−コレステロールをそれぞれ意味する。＋では、対数に変換した値が使用されている。
【００４０】
対象者のほとんどが、正常血圧者で、肥満ではなく、また正常の脂質値を示したが、飲酒率は男性の方が高かった。ＡＧＥｓ濃度は、男女間に差はなかった。血清ＡＧＥｓ濃度の決定要因を表２にまとめた。
【００４１】
【表２】
2006337322.tif 000003
【００４２】
表中、βは正規化回帰係数を、ＳＥは標準誤差を意味する。特性の項での各略号の意味は、上記に定義したとおりである。＋では、対数に変換した値が使用されている。
【００４３】
ＡＧＥｓ濃度に統計的有意に関連するパラメーターはフィブリノーゲン（ｐ＜０．０５）およびＰＡＩ−１（ｐ＜０．０５）であった。これらの有意なパラメーターは、互いに密接に関連しているので、重直線回帰分析を行った。その結果、表３に示すように、フィブリノーゲン（ｐ＜０．０５）およびＰＡＩ−１（ｐ＜０．０５）の有意性はそのままであった。
【００４４】
【表３】
2006337322.tif 000004
【００４５】
Ｒ２＝０．０５２。表中の略号は、上記に定義した意味を有する。＋では、対数に変換した値が使用されている。
【００４６】
図１および２に示したように、統計上の有意性および用量応答相関がＰＡＩ−１およびフィブリノーゲン濃度に対して示された。
【産業上の利用可能性】
【００４７】
ＡＧＥｓを血栓形成の検査マーカーとして用いることにより、有効かつ簡便な血栓形成が関与する疾患のリスクの検査方法、血栓形成が関与する疾患の診断方法、および診断薬が提供される。また、血中ＡＧＥｓ濃度をモニタリングまたは適時測定することにより、血栓形成が関与する疾患の予防または治療のための診断を有効に行うことが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】血清ＰＡＩ−１三分位値によって層別化された年齢および性別にて調整した血漿ＡＧＥｓ濃度を示す図である。傾向に対し、ｐ＝０．０１１。
【図２】血清フィブリノーゲン三分位値によって層別化された年齢および性別にて調整した血漿ＡＧＥｓ濃度を示す図である。傾向に対し、ｐ＝０．０１８。
【図１】
2006337322.tif 000005
【図２】
2006337322.tif 000006