(57)【要約】      （修正有）【課題】人での治験を行うまえに、或は人での治験結果では予測できない新薬の有効性、副作用を予測可能にし、新薬開発の効率化を達成することを課題とする。【解決手段】疾患自然発症の犬を当該疾患に対応する人の疾患の候補治療薬の治験対象動物とし、人における活性、副作用、長期投与による作用、及び多剤併用の影響等を予測する人用治療薬の評価方法及び  疾患自然発症動物を使った治験実施のための治験対象動物の広域情報伝達ツールを使った管理システムに使うための、治験対象動物管理データを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体であって、前記治験対象動物管理データは、前記記録媒体に候補治験対象動物固体毎に形成される候補治験対象動物ファイルと候補治験対象動物疾患データファイルと治験実施データファイルとに記録されたものを含む。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
疾患自然発症の犬を当該疾患に対応する人の疾患の候補治療薬の治験対象動物とし、人における活性、副作用、長期投与の影響、及び他剤併用の影響から選ばれる項目の少なくとも１による作用を予測する人用治療薬の評価方法。
【請求項２】
治験対象動物の免疫マーカーを測定し、人の疾患の候補治療薬の投与による影響を、免疫マーカーのレベルに応じて予測する請求項１の評価方法。
【請求項３】
免疫マーカーが、以下から選ばれる請求項２の方法；
１）白血球
２）抹消リンパ球
３）ＣＤ３＋Ｔ細胞
４）ＣＤ２１Ｂ細胞
５）ＣＤ４＋Ｔ細胞
６）ＣＤ８＋Ｔ細胞
７）ＩＬ−６
８）血清α１−ＡＧ
【請求項４】
疾患がガンである請求項１〜３の何れか一に記載の評価方法。
【請求項５】
疾患自然発症動物を使った前臨床試験実施のための治験対象動物の広域情報伝達ツールを使った管理システムに使うための、治験対象動物管理データを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体であって、
前記治験対象動物管理データは、前記記録媒体に候補治験対象動物個体毎に形成される候補治験対象動物ファイルと候補治験対象動物疾患データファイルと治験実施データファイルとに記録されたものを含み、
候補治験対象動物ファイルには、疾患自然発症動物個体の、動物の特定、動物の種類、動物の年齢、雄雌の別、治験管理者、治験管理施設、生年月日を含む項目から選ばれるデータを記録した候補治験対象動物データ領域を有し、
候補治験対象動物疾患データファイルには、候補治験対象動物ファイルの各候補治験対象動物と対応付けて、疾患自然発症動物の、疾病名、病状、症状画像、関連臓器の保管、臨床検査値、障害度データ、治療状況、治療薬剤の投与量・投与方法、治療薬剤の副作用状況、アレルギー状況を含む項目から選ばれるデータを記録した候補治験対象動物疾患データ領域を有し、
治験実施データファイルには、治験個体と対応付けて、治験実施がされたこと、治験実施開始日、治験実施依頼者、治験薬の特定、治験薬の投与量・投与方法・投与期間、治験データ、治験判定、治験副作用を含む項目から選ばれるデータを記録した治験実施データ領域を有し、
「治験開始の要求があると治験プロトコルファイルに基づき、治験対象となる疾患自然発症動物プロファイル判定手段がコンピュータ上で設定され、この判定手段と候補治験対象動物ファイルデータと候補治験対象動物疾患データファイルがコンピュータ上で連動し、評価・ソートされ治験対象動物個体が評価・選定され、コンピュータ上に保存され（個体登録：ＩＤ化）、この個体について治験の進展に伴い投薬記録及び治験個体データ及び治験データの入力が広域情報伝達ツールを使っておこなわれ、コンピュータ上で集積され、治験データについての異常値・除外値の警告・副作用を知らせる治験実施データ判定手段によって治験データをソートし、集積する」ことを特徴とする治験対象動物管理データを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体。
【請求項６】
治験プロトコルファイルを有し、治験プロトコルファイルには、治験薬の特定、治験薬の作用機作、治験薬の適応症、選定すべき治験対象動物、治験薬の投与量、投与方法、投与期間、除外症例、有効・無効判定基準を含む項目から選ばれるデータを記録した治験プロトコルデータ領域を有し、このデータをもとにして治験対象となる疾患自然発症動物プロファイル判定手段をコンピュータ上で調製し、この判定手段と、候補治験対象動物データと候補治験対象動物疾患データとをコンピュータ上で対比し、対応付けて、各候補治験対象動物をコンピュータ上で評価しソートし、治験対象としての適応可能な個体を決定される請求項５の治験対象動物管理データを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体。
【請求項７】
治験実施データが、広域情報伝達ツールを通じてデータの追加がおこなわれ、このデータは、治験プロトコルデータから調製された治験実施データ判定手段とコンピュータ上で対比し、対応付けて、治験実施データをコンピュータ上で評価しソートし、治験データの採用可能な個体データを決定される請求項５又は６の治験対象動物管理データを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体。
【請求項８】
疾患自然発症動物がイヌである請求項５〜７のいずれか一に記載の治験対象動物管理データを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体。
【請求項９】
疾患がガンである請求項７に記載の治験対象動物管理データを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体。
【請求項１０】
請求項５〜９の何れか一に記載の治験対象動物管理データを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体を使った治験対象動物管理に関するビジネス処理方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、人用治療薬の評価方法を提供するものである。
【背景技術】
【０００２】
新薬の開発には、治験の３つのステージ、つまり治験第I相試験（安全性の検討）、治験第II相試験（有効性の証明）、治験第III相試験（既存薬との比較）の完了が必要である。治験の実施は、GCPに準拠して、被験対象者への事前説明と同意を得て、治験実施医療機関に於いて、治験医師と専門スタッフによりおこなわれる。この治験の費用は1品目５０〜１００億円を必要とし、しかも治験での成功率は十分の１といわれている。
【０００３】
新薬の開発の最初の段階は、基礎研究期間である。この過程で有望な物質や方法が発見されると、細胞レベルでの検証をへて、動物実験に移行する。ここで有望な物質が絞り込まれ、動物投与による体内胴体、代謝分解過程の検討等がなされる。ここで選抜された物質は、GLPに準拠して前臨床試験が行われる。前臨床試験は、小動物（マウス、ラット）で各種試験がおこなわれ、さらにモデル動物での有効性試験も行われる。その後、大動物（ビーグル犬）を用いて安全性と毒性試験により、安全性を証明して前臨床試験を完了する。
【０００４】
動物薬は、実質的に独自に新薬開発されることはなく、人での有用性が確認された医薬をそのまま体重、年齢、過令度に応じた変更を加えて使用されている。例えば癌の化学療法剤としては、アルキル化剤、抗代謝物質薬、抗腫瘍性抗生物質、植物アルカロイド、副腎皮質ステロイド、L−アスパラギナーゼ、シスプラチン等人治療薬が転用されている（非特許文献１）
【非特許文献１】第１０回日本獣医がん研究会（平成11年7月11日）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
現在、世界的に実施されている新薬開発の方法論の最大の問題点は、人体による検証である治験前に候補薬剤の有効性の実証はモデル動物（一般的にマウス、ラット）を用いた検討のみで、人体での疾病状況に対する反応性を予想していることである。人体での疾患は多様であり、患者の個々人の遺伝的背景、生活環境、食生活等大幅に異なっている。こうした人体での候補薬剤の反応性をモデル動物、しかもマウス・ラットから予測しているのが現状である。モデル動物は、遺伝的にも近交系を用いて個体差を最小限に止めるべく調整され、さらに飼育環境も恒常性を極力保全する条件下でおこなわれる。このようなモデル動物での有効性の証明結果は人には十分反映しないものである。また、安全性の試験において、大型犬を用いているが、この場合に使用する犬は健常犬であり、その安全性の効果が疾患患者に十分反映しないものである。
本発明は、このような現状の新薬開発における問題点を解決し、人での治験を行うまえに、或は人での治験結果では予測できない新薬の有効性、副作用を予測可能にし、新薬開発の効率化を達成することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、疾患自然発症動物をデータ管理可能なシステムを構築し、この疾患自然発症動物を使って行った治験結果は有用な臨床試験を反映することを見出し本発明を完成した。
【０００７】
すなわち本発明は、
「１．疾患自然発症の犬を当該疾患に対応する人の疾患の候補治療薬の治験対象動物とし、人における活性、副作用、長期投与の影響、及び他剤併用の影響から選ばれる項目の少なくとも１による作用を予測する人用治療薬の評価方法。
２．治験対象動物の免疫マーカーを測定し、人の疾患の候補治療薬の投与による影響を、免疫マーカーのレベルに応じて予測する前項１の評価方法。
３．免疫マーカーが、以下から選ばれる前項２の方法；
１）白血球
２）抹消リンパ球
３）ＣＤ３＋Ｔ細胞
４）ＣＤ２１Ｂ細胞
５）ＣＤ４＋Ｔ細胞
６）ＣＤ８＋Ｔ細胞
７）ＩＬ−６
８）血清α１−ＡＧ
４．疾患がガンである前項１〜３の何れか一に記載の評価方法。
５．疾患自然発症動物を使った前臨床試験実施のための治験対象動物の広域情報伝達ツールを使った管理システムに使うための、治験対象動物管理データを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体であって、
前記治験対象動物管理データは、前記記録媒体に候補治験対象動物個体毎に形成される候補治験対象動物ファイルと候補治験対象動物疾患データファイルと治験実施データファイルとに記録されたものを含み、
候補治験対象動物ファイルには、疾患自然発症動物個体の、動物の特定、動物の種類、動物の年齢、雄雌の別、治験管理者、治験管理施設、生年月日を含む項目から選ばれるデータを記録した候補治験対象動物データ領域を有し、
候補治験対象動物疾患データファイルには、候補治験対象動物ファイルの各候補治験対象動物と対応付けて、疾患自然発症動物の、疾病名、病状、症状画像、関連臓器の保管、臨床検査値、障害度データ、治療状況、治療薬剤の投与量・投与方法、治療薬剤の副作用状況、アレルギー状況を含む項目から選ばれるデータを記録した候補治験対象動物疾患データ領域を有し、
治験実施データファイルには、治験個体と対応付けて、治験実施がされたこと、治験実施開始日、治験実施依頼者、治験薬の特定、治験薬の投与量・投与方法・投与期間、治験データ、治験判定、治験副作用を含む項目から選ばれるデータを記録した治験実施データ領域を有し、
「治験開始の要求があると治験プロトコルファイルに基づき、治験対象となる疾患自然発症動物プロファイル判定手段がコンピュータ上で設定され、この判定手段と候補治験対象動物ファイルデータと候補治験対象動物疾患データファイルがコンピュータ上で連動し、評価・ソートされ治験対象動物個体が評価・選定され、コンピュータ上に保存され（個体登録：ＩＤ化）、この個体について治験の進展に伴い投薬記録及び治験個体データ及び治験データの入力が広域情報伝達ツールを使っておこなわれ、コンピュータ上で集積され、治験データについての異常値・除外値の警告・副作用を知らせる治験実施データ判定手段によって治験データをソートし、集積する」ことを特徴とする治験対象動物管理データを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体。
６．治験プロトコルファイルを有し、治験プロトコルファイルには、治験薬の特定、治験薬の作用機作、治験薬の適応症、選定すべき治験対象動物、治験薬の投与量、投与方法、投与期間、除外症例、有効・無効判定基準を含む項目から選ばれるデータを記録した治験プロトコルデータ領域を有し、このデータをもとにして治験対象となる疾患自然発症動物プロファイル判定手段をコンピュータ上で調製し、この判定手段と、候補治験対象動物データと候補治験対象動物疾患データとをコンピュータ上で対比し、対応付けて、各候補治験対象動物をコンピュータ上で評価しソートし、治験対象としての適応可能な個体を決定される前項５の治験対象動物管理データを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体。
７．治験実施データが、広域情報伝達ツールを通じてデータの追加がおこなわれ、このデータは、治験プロトコルデータから調製された治験実施データ判定手段とコンピュータ上で対比し、対応付けて、治験実施データをコンピュータ上で評価しソートし、治験データの採用可能な個体データを決定される前項５又は６の治験対象動物管理データを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体。
８．疾患自然発症動物がイヌである前項５〜７のいずれか一に記載の治験対象動物管理データを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体。
９．疾患がガンである前項８に記載の治験対象動物管理データを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体。
１０．前項５〜９の何れか一に記載の治験対象動物管理データを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体を使った治験対象動物管理に関するビジネス処理方法。
」からなる。
【発明の効果】
【０００８】
本発明では、疾患自然発症動物が、人の治療薬の前臨床試験の対象として重要な意義を有すること及び疾患自然発症動物を管理するための手段を提供した。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明は、人用治療薬の評価方法を提供する。その手段として、疾患自然発症の動物を使う。この疾患自然発症とは、免疫的な機能が、疾患の影響を受けており、人の免疫的な変動と同様であることから、対象とする人用治療薬の副作用をより正確に把握できるからである。イヌは、人の約５倍の成長速度をもつことから、疾患の影響もより早いレベルで受けやすい。そのため、疾患自然発症のイヌは、より短期間に投与薬剤の影響・効果をとらえることが可能である。つまり、投与薬剤の人における活性、副作用、長期投与による作用、及び多剤併用の影響等を予測することが可能である。
【００１０】
疾患治療及び副作用には、免疫が重要なファクターとなることから、治験対象動物の免疫マーカーを測定し、その具体的な影響との相関を検討してみることは有用である。人の疾患の候補治療薬の投与による影響を、治験対象動物の免疫マーカーのレベルに応じて予測することができる。可能な免疫マーカーは、以下から選ばれる；
１）白血球
２）抹消リンパ球
３）ＣＤ３＋Ｔ細胞
４）ＣＤ２１Ｂ細胞
５）ＣＤ４＋Ｔ細胞
６）ＣＤ８＋Ｔ細胞
７）ＩＬ−６
８）血清α１−ＡＧ
これらマーカーの測定法は自体公知の方法が適用可能である。
これら免疫マーカーについて、犬における疾患時及び健康時における状態を人との対比において検討した結果、犬の約５倍の成長速度を考慮すれば、ヒトと犬は略同等の傾向があることが確認できた。
【００１１】
疾患自然発症動物での免疫状態が疾患ヒトと類似することから、疾患自然発症動物でのヒト治療薬の作用を活性、副作用、長期投与による作用、及び多剤併用の影響等について検討した。その結果、ヒトにおける副作用、長期投与による作用、及び多剤併用の影響等が極めて短期に疾患自然発症犬において確認された。このことは、ヒト用医薬品の開発において、疾患自然発症動物での前臨床段階での治験を行えば、短期にその人体への影響が予測可能であり、重篤な副作用で開発の早期停止、多剤併用の副作用の早期確認等が可能となり、医薬品開発の効率化が一層達成できる。
【００１２】
本発明の評価法は、免疫が関与する薬剤に広く適用可能である。たとえば、抗がん剤、免疫抑制剤、抗リウマチ薬、免疫賦活剤等の評価に特に好適に適用可能である。
【００１３】
本発明の別の発明は、疾患自然発症動物を使った前臨床試験実施のための治験対象動物の広域情報伝達ツールを使った管理システムに使う治験対象動物管理データを記録したコンピュータ読み取り可能な記録媒体及びこれを使った治験対象動物管理に関するビジネス処理方法である。
基本的な構成は、治験実施施設の端末、検査者の端末、治験請負者端末、及び全てのデータ類を蓄積するデータセンターのデータベースからなり、各端末とデータセンターはインターネットのような広域情報伝達ツールによって接続される。
本発明の治験対象動物管理データは、記録媒体に候補治験対象動物個体毎に形成される候補治験対象動物ファイルと候補治験対象動物疾患データファイルと治験実施データファイルとに記録されたものを含む。
【００１４】
（前臨床試験基本辞書データベース）
このデータベースには、疾患自然発症動物について、治験を行うにあたっての基礎的な知識の集約データが蓄積され以下の情報が集積されている。但し、このデータは所望により付加できるものである。
動物、動物疾病名、動物病状、動物病状画像、動物関連臓器、動物疾病診断基準、動物診断基準値（検査値の正常値幅、異常値幅）、障害度データ、動物用既知薬剤、動物用既知薬剤の投与量・投与方法、動物用既知薬剤の副作用、動物用既知薬剤の作用メカニズム、併用禁止薬・併用禁止作用機構、副作用グレードデータ、動物用既知薬剤についての前臨床試験データ等である。疾病名は、例えば国際疾病分類に準じて採用される。同時に各疾病の症状（病状）についての説明があり、症状と疾病名は、相互に関連づけられ、どちらからでも、特定が可能に関連付けられている。さらに、疾病・病状と関連付けられた内容で、関連する臓器の症状についての詳細もリンクされている。疾病診断基準は、外観、疾患部分、臨床検査等をもとに、疾病とリンクされている。
【００１５】
治験対象となる疾患自然発症動物の疾病決定の判断基準は、外観、疾患部位、臨床検査値、体調等の積極的な基準が設定されている。同時に疾患自然発症動物の除外基準をもうけ、不要なデータの混乱を避ける調整がなされる。これら基準はシステム化されシソーラス調整されている。疾患自然発症動物の臨床検査値に基づく診断基準値は動物検査値の正常値幅、異常値幅が、疾患自然発症動物の疾病とリンクしてデータ化されている。さらに疾患自然発症動物の疾病はその障害度を疾病診断基準・診断基準値によって分類し、そのグレードを明確化している。動物用既知薬剤は、各薬剤の動物における適応症・関連ある適応症・開発中の適応症の情報をもとに、動物用薬剤と動物疾病がリンク可能な状態にある。各薬剤については、投与量・投与方法・投与時期・併用禁忌などの情報が動物の種類別・年齢別・性別・障害度に応じてリンク可能である。その他、各薬剤については、動物における副作用・作用メカニズム・副作用メカニズム・併用禁止薬・併用禁止作用機作・副作用グレードなどのデータにリンク可能である。既知薬剤についての前臨床試験データも、適用治験薬への展開を予測するためにリンクづけられる。
【００１６】
（治験薬の選定）
医薬品候補化合物が選定され、疾患自然発症動物を使った前臨床試験の治験薬が特定される。
【００１７】
（治験プロトコル設定）
治験薬が特定されると、以下本発明のシステムが導入される。治験プロトコルとは、治験の実施方法を特定化するものであり、治験薬の分類、治験薬の作用メカニズム、薬効、副作用についてのこれまでの前臨床試験の結果を基礎にして、今後おこなう疾患自然発症動物を使った治験のプロトコル案の提示が前臨床試験基本辞書データベースとのリンクでおこなわれる。
【００１８】
治験プロトコルは、対象とする疾患自然発症動物個体の選択基準（適応症、選定すべき疾患自然発症動物）、被験個体除外基準（除外症例）、治験投薬スケジュール、検査項目、目標症例数、実施予定期間、試験依頼者・責任者、治験会社、試験方法、治験薬、用法・用量、投薬期間、併用禁止薬、併用許可薬、主評価項目、主評価基準（有効・無効の判断基準）、副評価項目、副評価基準（有効・無効の判断基準）等を決定するが、具体的な前臨床試験基本辞書データベースの内容の比較により、既定フォーム上にドラッグ＆ドロップで調整されていく。
【００１９】
かくして、治験プロトコルが決定すると、データは、治験対象となる疾患自然発症動物プロファイルの判定手段としての機能を果たす（治験対象となる疾患自然発症動物プロファイル判定手段）ために、データベース上に特定の治験に対する治験対象となる個体の判定手段として登録される。このデータは、データセンターにおいて、ユーザー個別データベースとして登録できる。治験プロトコルの変更は、オーソライズされた治験医、依頼者等によって、必要と認定されたら、特定ＩＤとキーワードを使って変更することが出来る。但し、変更前の記録も残るレイヤー（層）の概念によって扱われる。
【００２０】
（疾患自然発症動物個体の登録）
疾患自然発症動物個体の選定は治験医師が行う。治験契約医師は、治験プロトコルにもとづく個体判定手段（疾患自然発症動物個体の選定のための判定機能）を使い、候補治験対象動物ファイル及び候補治験対象動物疾患データファイルのデータからコンピュータ上で評価・ソート・登録を行う。
【００２１】
この選定のために、潜在的な疾患自然発症動物個体は予め所定のシソーラス化されたフォームで疾病、疾病症状、疾病期間、治療歴、禁忌状態、年齢、性別、副作用歴等が登録されている。このデータは、データセンターにおいて、候補治験対象動物ファイル及び候補治験対象動物疾患データファイルとして登録される。候補治験対象動物ファイルには、疾患自然発症動物個体の、動物の特定、動物の種類、動物の年齢、雄雌の別、治験管理者、治験管理施設、生年月日を含む項目から選ばれるデータを記録した候補治験対象動物データ領域を有し、候補治験対象動物疾患データファイルには、候補治験対象動物ファイルの各候補治験対象動物と対応付けて、疾患自然発症動物の、疾病名、病状、症状画像、関連臓器の保管、臨床検査値、障害度データ、治療状況、治療薬剤の投与量・投与方法、治療薬剤の副作用状況、アレルギー状況を含む項目から選ばれるデータを記録した候補治験対象動物疾患データ領域を有する。
【００２２】
疾患自然発症動物個体判定手段をパスした個体は、登録がされる。かくして登録された個体は、登録ＩＤが付与され、データ−ベースに保存・利用される。なお、個体登録後は、全て、個体登録ＩＤのみで管理される。
【００２３】
（治験薬の管理）
治験が開始されるにあたり、治験薬の使用状況がシステム管理される。治験薬の管理は、データセンターのデータベース（治験薬管理システム）に広域情報伝達ツールによるアクセスによって行われる。このデータは、データセンターにおいて、ユーザー個別データベースとして登録できる。この管理は、治験施設毎の管理が必須であり、また治験施設内の管理システムとも連動される必要がある。治験実施企業（メーカー）は、各治験実施施設における治験薬の使用状況が、広域情報伝達ツールによって、いつでも確認できる状態となる。この管理に必要な入力事項としては、薬剤名／コード、個体登録ＩＤ、使用量、使用日、使用治験医／コード等である。
【００２４】
（投薬の開始と治験データの入力）
投薬の開始にあたっては、開始時データを取得する。その後に得られた、所見、検査、検査値、画像は、所定のフォームによって、随時、広域情報伝達ツールによってデータセンターの治験実施データファイルに登録されていく。この治験実施データは、データセンターにおいて、ユーザー個別データベースとして登録できる。入力項目は、治験プロトコルによって、決定された項目についておこなわれ、決定されたスケジュールで随時実行されていく。治験データの入力は、治験担当医師、治験担当施設の各端末を通じておこなわれ、各者は、それぞれ予めオーソライズされた範囲で、他者の入力内容を広域情報伝達ツールによって入手・閲覧・監視可能である。治験検査の測定値は、検査会社から広域情報伝達ツールにより入力される。治験実施データファイルには、治験個体と対応付けて、治験実施がされたこと、治験実施開始日、治験実施依頼者、治験薬の特定、治験薬の投与量・投与方法・投与期間、治験データ、治験判定、治験副作用を含む項目から選ばれるデータを記録した治験実施データ領域を有する。
【００２５】
（データフィルターの設定とその機能と具体的作業）
治験試験データは、入力後データベースに登録されるが、登録前に、データの異常値、副作用の発生、治験プロトコル違反、個体特殊事情等の除外基準を定めた治験プロトコルから調製される治験実施データ判定手段とコンピュータ上で連動させる。
【００２６】
データの異常値とは、初期値との差異、予測値との格別の差異等をもとに設定された数値であり、登録前にこのチェックを自動的に治験実施データ判定手段によってデータベース内でおこなう。異常値が検出されたら、その事実の通知、可能性ある原因の示唆、あるべき合理的数値、対策・対応についての通知が治験実施データ判定手段によってなされる。
【００２７】
副作用の発生は、治験医師の所見において又は検査値の異常値の発生によって検出される。この場合も、データの登録に際し、副作用の通知、そのグレード、予測される原因、対策・対応についての通知がなされる。
【００２８】
治験プロトコル違反も、データ登録に際し、個体、投薬スケジュール、禁忌事項等種々の治験プロトコルについての違反事項が登録前に治験実施データ判定手段によってチェックされる。この場合も、データの登録に際し治験プロトコル違反の通知、対策・対応についての通知がなされる。
【００２９】
個体特殊事情は、個体プロファイルにおける特殊事情とデータとの整合性が個体プロファイル選別手段と治験実施データ判定手段の連動によってチェックされる。この場合も、データの登録に際し個体特殊事情違反の通知、対策・対応についての通知がなされる。
【００３０】
（帳票の出力）
帳票は、従前のフォーム及び使用者の要請に応じて、所望のものが調製可能である。
【００３１】
（集計作業と数理解析・統計処理フィルター）
かくして登録されたデータが所定の目標数に達すると、対象の治験をクローズし、データの集計・統計解析・数理解析を実行する。得られたデータの数値について、集計作業と数理解析・統計処理フィルターを経由して、分析・戻し・分析・報告書というように最終処理化がなされる。
【実施例】
【００３２】
以下に、実施例を用いて本発明を具体的に説明するが、本発明は本実施例に限定されるものではない。
（実施例１）
癌治療あるいは癌免疫療法における疾患犬での結果を人治療薬における評価手段とするため、腫瘍と診断された担癌犬における免疫動態を分析した。
Ａ）材料および方法
１．材料
１）供試動物
供試犬には、血液検査により正常と判定した健康犬29頭（体重4.5〜30kg：雄16頭、雌13頭）および腫瘍と診断された担癌犬23頭（体重3.4〜45.25kg：雄8頭、雌15頭）の計52頭を用いた。
２）群区分
正常犬には1〜6才の臨床上健康と思われる29頭を用いた。担癌犬においてはWHOのTNM分類を行い、癌の病期が1〜2期ものをA群、3〜4期のものをB群とした（表１）。
【表１】
2006268223.tif 000002
３）供試材料
供試犬の橈側皮静脈および外側伏在静脈からヘパリン（1,000単位／ml）加生理食塩水を加えたシリンジを用いて5〜10ml採血を行い実験に供した。癌細胞障害性試験にはイヌのメラノーマ細胞（CMec）を使用した。
【００３３】
２．実験方法
１）試薬の作製
(1)フラスコ内培養培地の作製
リンパ球の培養液は、RPMI‐1640（Sigma）、非動化FBS（Sigma）、HEPES buffer solution（和光純薬工業）、PENICILIN‐STREPTOMYCIN SOLUTION STABILISED（Sigma）をそれぞれ427.5：50：12.5：10の割合で混合し、これをリンパ球およびCMecの培養液として用いた。
２）方法
(1)血液検査および一般生化学検査
ヘパリン加血液の一般血液検査項目（WBC、RBC、HGB、Ht、MCV、MCH、MCHC）を血球計算機（全自動血球計算機:MEK‐6358,セルタック ）を用いて測定した。また、血液塗沫標本を作製して白血球百分比からリンパ球数を算出した。全自動生化学分析装置（自動分析装置:AU400,OLYMPUS）を用いて血清中の各種生化学検査項目（TP、ALB、A/G、LDH、AST、ALT、ALP、γ‐GT、AMY、CPK、BUN、Cre、Ca、iP、TC、Glu、TB、Na、K、Cl）を測定した。
(2)血漿の採取・保存および末梢リンパ球の分離
血液は2,500rpmで5分間遠心した後、血漿を保存容器に分注して冷凍庫に保存した。その後、残りの血球層に同量の生理食塩水を加えて転倒混和した。次いで50mlの遠心管に採血量と同量のLymphoprepを加え、そこに生理食塩水加血球を静かに重層し、1,700rpmで30分間遠心した後、犬末梢血の単核球層（PBMC）を別の50ml遠心管に採取した。そこに、採取量とほぼ同量の生理食塩水を加えて撹拌し、1,700rpmで5分間遠心した後上清を吸引除去し、同様な方法を二度繰り返し、最後に10mlの培養液に再浮遊させた。
(3)Ｔ細胞表面マーカーの解析
4本のポリエチレン・ラウンドチューブに培養細胞を1×106個加え、3℃、2,500rpmで3分間遠心し、上清を除去した。コントロール用にはシース液（アイソフロー）400μlを加え、細胞を再浮遊させた後に氷中保存した。CD3+T細胞測定用にはFITC標識抗CD3抗体（Rat Anti Canine CD3：FITC, Serotec）を50μl用い、B細胞測定用にはRPE標識抗B抗体（Mouse Anti Canine B：RPE, Serotec）を50μl、CD4＋T細胞、CD8＋T細胞測定用にはFITC標識抗CD4抗体（Rat Anti Canine CD4：FITC, Serotec）、RPE標識抗CD8抗体（Rat Anti Canine CD8：RPE, Serotec）をそれぞれ50μlずつ添加し、混和後、氷中にて40分間反応させた。その後洗浄を行うために、0.1%Na2N3を含む冷却PBSをそれぞれに400μlずつ加え、4℃、2,500rpmで3分間遠心し上清を除去した。同様の操作をもう一度繰り返した後、シース液400μlを加えて細胞を再浮遊させた。検体はFACS解析用装置（FACScan：BECTON DICKINSON, USA）と解析用ソフトウェアによりT細胞表面マーカーの解析を行った。
(4)リンパ球幼若化試験
リンパ球幼若化試験はグルコース消費試験法で行った。培養細胞を培養液中で2×106個/mlに調整し、96穴マイクロプレートに200μlずつ6穴に分注後、マイトジェン非添加群には培養液を20μlずつ、添加群にはフィトへマグルチニン（PHA,200μl/ml）を20μlずつ分注した。5%CO2、37℃、72時間のインキュベーションを行い、上清を100 lずつオートアナライザー用チップに採取した。採取した上清はオートアナライザーによりメジウム中のグルコース量を三重測定した。リンパ球の幼若化率（%）は以下の式によって算出した。
SR値＝（B−A／B）ｘ  100  
A：マイトジェン添加リンパ球培養液（ml/dl）
B：マイトジェン非添加リンパ球培養液（ml/dl）
(5)Rose Bengalを用いた比色定量法による細胞傷害性試験
96穴マイクロプレートにRPMI-1640で1×105cells/ mlに調節した継代3日目のTarget細胞（犬メラノーマ細胞株；CMec）を100μl播き、8時間培養、付着させた。その後、1×107cells/mlのdPBLをTaeget細胞を播いたwellに100μlずつ播き14時間混合培養した。コントロールとして、Target細胞100μlのみ培養したwell(Targetコントロール),およびEffector細胞（ｄPBL）100μlのみ培養したwell（Effectorコントロール）を用意した。培養後、各wellを5回ピペッティングし、上清を除去後、0.25％Rose Bengal液/PBS100μlで３分間染色した。PBS 200μlで3回洗浄後、50％エタノール/PBS 200μlを加え、ピペッティングにより色素を離散させ、ELISAプレートリーダー（OpsysMR Microplate Reader, DINEX, 福岡）で各wellの吸光度を測定した。尚、測定は三重測定で行った。
癌細胞における細胞傷害は以下の式により求めた。
Natural cytotoxicity(%)
=100-{(test(E+T)O.D.-EffectorO.D.)/TargeO.D.}×100 
test(E+T)O.D.；EffectorとTargetを混合培養したwellの吸光度
EffectorO.D.；Effectorのみ培養したwellの吸光度（Effector Control）
TargetO.D.；Targetのみ培養したwellの吸光度（Target control）
Natural cytotoxicity；細胞傷害
(6)IL‐6活性値の測定
IL‐6活性値は、IL‐6依存性増殖を示すマウス由来のハイブリドーマ細胞であるMH60BFS2細胞に対する細胞増殖活性で測定した。マイクロタイタープレートに、種々の濃度のIL‐6を含む培地を100 lずつ入れ、MH60BFS2細胞を4×103個/wellの濃度で添加した。その後37℃、5% CO2で48時間細胞を培養し、Premix WST‐1（タカラバイオ株式会社, 三重）を10μl/well加えてさらに37℃、5% CO2で4時間インキュベーションした。また１つのwellに培地100μlとPremix WST‐1を10ml加え、ELISAリーダーのブランクポジションでバックグラウンドコントロールとして用い、これに対するサンプルの吸光度を測定した。
(7)TNF‐α活性値の測定
TNF‐α活性値は、WEHI‐164細胞（マウス線維芽細胞腫細胞：ATCC株番号CRL‐1751）に対する細胞増殖活性で測定した。マイクロタイタプレートに、アクチノマイシンD（1μg/ml）と種々の濃度のTNF‐αを含む培地を100μlずつ入れ、WEHI‐164細胞を5×103cells/wellの濃度で添加した。その後37℃、5%CO2で48時間細胞を培養し、Premix WST‐1を10μl/well加えてさらに37℃、5% CO2で4時間インキュベーションした。また１つのwellに培地100μlとPremix WST‐1を10ml加え、ELISAリーダーのブランクポジションでバックグラウンドコントロールとして用い、これに対するサンプルの吸光度を測定した。
(8)血清α1‐AG値の測定
1‐AGの測定にはイヌ 1‐AGプレート測定用キット（メタボリックエコシステム研究所, 仙台）を用いた。一元放射免疫拡散法（SRID法）に基づき作製した抗イヌα1‐AG血清を含む寒天培地に、検体の血清成分を一つの検体注入穴に5 lずつ入れ、湿潤箱に入れ、水平状態に保ち室温にて24時間反応させた。反応終了後に沈降リングの直径を、専用のスケールを用いて測定した。さらに標準イヌα1‐AG基準液（イヌα1‐AG 2,000μg/ml、500μg/ml）より作成した検量線より、血清中に含まれるα1‐AG濃度を算出した。
(9)TGF‐β1の活性値の測定
活性型TGF‐β1の測定はELISA TGF‐β1 kit（Serotec,Product,U.S.A）を用いて測定した。標準液またはサンプルをあらかじめ活性型TGF‐β1結合レセプターでコーティングされたマイクロプレートのwellに200μlずつ加え、室温で３時間放置した。上清を吸引した後三回洗浄し、各wellに結合液を200μlずつ加え、さらに1.5時間室温に放置した。再び液を吸引後、３回洗浄し、各wellに基質溶液を200μlずつ加え、直ちに450nmの波長で測定した。
【００３４】
３）統計処理
今回測定した検査項目（末梢白血球数、末梢リンパ球数、CD3+T細胞数、CD4+T細胞数、CD8+T細胞数, CD21+B細胞数、IL‐6活性値、TNF‐α活性値、血清α1‐AG値、）についてKruskal-Wallisの検定を行った。有意差が認められたものについてはMann-Whitney Uの検定を行い有意差が認められたものについてはP<0.05をもって有意な差とした。
【００３５】
３．結果
一般血液検査
1）末梢白血球数
正常犬の末梢白血球数の範囲は5×103個/μl〜17.8×103個/μlの範囲内に含まれおり、平均値および標準偏差は10.9±2.7×103個/μlを示した。また軽度な担癌犬のA群における末梢白血球数の範囲は6.9×103個/μl〜45.6×103個/μlを示し、その平均値および標準偏差は14.1×103±11.6個/μlを示した。両者を比較すると正常犬に比べA群において有意に末梢白血球数の増加が認められた。（P<0.05）また重篤な担癌犬であるB群の範囲は6.5×103個/μl〜41.6×103個/μlと幅広く、平均値および標準偏差は22.4±9.8×103個/μlを示した。B群のうち13例中9例（69.2%）が20.0×103個/μl以上を示した。9例中2例（22.2%）が40.0×103個/μl以上と著しい高値を示した。2例の担癌犬は肝臓腫瘍（肺転移）1例と乳腺腫瘍1例（肺転移）が含まれた。担癌犬A群とB群を比較するとB群において有意に白血球数の増加が認められた（P＜0.05）。腫瘍犬全体としての平均値は18.8×103±11.2個/μlを示し、正常犬よりも高値を示した（図１）。
【００３６】
２）末梢血中リンパ球数および百分比
正常犬の末梢リンパ球数の範囲は884個/μl〜4,978個/μlを示し、平均値および標準偏差は2,685±883個/μlを示した。これに対し、軽度な担癌犬のA群における末梢リンパ球数の範囲は804個/μl〜3,420個/μlを示し、平均値および標準偏差は2,006±905個/μlを示した。正常犬とA群を比較すると、A群において末梢リンパ球数の低下が有意に認められた（P<0.05）。更に重篤な担癌犬のB群の末梢リンパ球数の範囲は205個/μl〜3,192個/μlを占め、平均値および標準偏差は1,470±875個/μlを示した。B群において13例中5例（38.4%）において末梢リンパ球数が1,000μl/ml以下を示した。5例中4例（80.0%）が他臓器への転移（肺転移）を示していた。A群とB群には有意な差は認められなかったが、B群と正常犬を比較するとB群における末梢リンパ球数の減少が有意に認められた（P<0.05）。
また腫瘍犬全体における末梢リンパ球数の平均値および標準偏差は1,703±909μl/mlを示し、腫瘍犬全体として正常犬と比較した場合末梢リンパ球数の減少が有意に認められた（P<0.05）。正常犬における末梢リンパ球の割合は25.0%に対し、軽度な担癌犬A群の末梢リンパ球の割合の平均値は17.6%と減少が認められた。さらに重篤な担癌犬B群の末梢リンパ球の割合の平均は7.1%と正常犬に比べ著しい減少が認められた。B群において13例中5例（38%）が末梢リンパ球の割合が5%以下を示した。5例には臨床ステ−ジの高い肝臓腫瘍（肺転移1例、椎骨転移1例）2例、乳腺腫瘍（肺転移）1例、繊維肉腫（肺転移）1例、血管肉腫（肺転移）1例が含まれていた。腫瘍犬全体の末梢リンパ球の割合は11.6%と正常犬に比べ低値を示した（図２,３）。
【００３７】
２．末梢血中リンパ球のサブタイプ数とその割合
１）CD3＋T細胞数および割合
正常犬におけるCD3＋T細胞の範囲は692個/μl〜3,334個/μlを占め、平均値および標準偏差は2,303±730個/μlを示した。軽度な担癌犬のA群のCD3＋T細胞の範囲は848個/μl〜3,420個/μlを占め、平均値および標準偏差は1,332±783個/μlを示し正常犬よりも減少を示した。また重篤な担癌犬のB群のCD3＋T細胞の範囲は11個/μl 〜2,190個/μlと個体間でのばらつきが大きく見られた。B群における平均値および標準偏差は741±616個/μlを示したが、13例中9例（69%）が1,000個/μl以下を示し、更に9例中5例（55%）が300個/μlと著しい減少を示した。B群においてCD3＋T細胞が11個/μlと極めて著しい減少を示した肝臓腫瘍は、肺やリンパ節への腫瘍細胞の転移が認められ来院後数日で死亡した。またCD3＋T細胞が154個/μlを示した血管肉腫も一週間以内の死亡が確認された。また腫瘍犬全体のCD3＋T細胞数の平均値および標準偏差は998±740個/μlと1,000個/μl以下を示し、正常犬の平均値と比べ減少していたが、各群の有意差は認められなかった（図４）。
正常犬におけるCD3＋T細胞割合の平均値は86.0%を示し、全ての正常犬においてCD3＋T細胞割合が70%を超えていた。軽度な担癌犬のA群における平均値は68.3%を示し正常犬に比べ減少が認められた。A群の12例中6例（50%）では、CD3＋T細胞割合が70%を上回っていた。6例は全て乳腺腫瘍であり、5例が1期を、1例が2期を示した。担癌状態の軽度なものほどCD3＋T細胞割合が高い傾向が示された。また重篤な担癌犬のB群におけるCD3＋T細胞の平均値は45.1%と正常犬やA群よりも減少を示した。B群では13例中1例のみが70%を上回っていた。他の12例中8例（66%）は、50%〜70%の範囲内であったが、4例（33%）は50%以下を示した。50%以下を示した4例には肝臓腫瘍（肺転移１例、椎骨転移1例）2例、血管肉腫（肺転移）1例、セルトリー細胞腫1例が含まれた。また腫瘍犬全体におけるCD3＋T細胞割合は55.2%を示し、正常犬に比べて減少が認められた（図５）。
【００３８】
２）CD4＋T細胞数および割合
正常犬におけるCD4＋T細胞数の範囲は226個/μl〜2,178個/μlを示し、平均値および標準偏差は1,162±480個/μlを示した。正常犬29例中16例（55.1%）で1,000個/μl以上を示した。軽度な担癌犬のA群のCD4＋T細胞数の範囲は218個/μl〜1,317個/μlを示し平均値および標準偏差は612±361個/μlを示した。A群において10例中2例（20%）が1,000個/μl以上を示した。重篤な担癌犬のB群の平均値および標準偏差は379±365個/μlと低値を示した。B群において100個/μl以下と著しい減少を示したのは13例中4例（30%）であり、4例中3例がCD3＋T細胞数及び割合でも著しい減少を示した担癌犬だった。3例は肝臓腫瘍（肺転移）2例、血管肉腫（肺転移）の1例であった。腫瘍犬全体におけるCD4＋T細胞数の平均値および標準偏差は502±363個/μlと正常犬の半数以下を示し減少が認められた（図６）。正常犬におけるCD4＋T細胞割合の平均値は42.8%を示したのに対し、A群の平均値は31.2%と減少が認められた。さらに重篤な担癌犬B群の平均値において21.8%と正常犬のほぼ半数の割合を示し、13例中５例（38%）においてCD4＋T細胞割合が20%以下を示した。腫瘍犬全体におけるCD4＋T細胞割合は25.9%と正常犬に比べ低値を示した（図７）。
【００３９】
３）CD8＋T細胞数および割合
正常犬におけるCD8＋T細胞数の範囲は213個/μl〜1,062個/μlを示し、平均値および標準偏差は621±233個/μlであった。軽度な腫瘍犬のA群のCD8＋T細胞数の範囲は213個/μl〜1,163個/μlを示し、平均値および標準偏差は472±330個/μlと正常犬に比べて減少が認められた。また重篤な担癌犬のB群のCD8＋T細胞数の範囲は2個/μl〜869個/μlを示し、平均値および標準偏差は224±237個/と低下が認められた。B群において特に原発の肝臓癌から肺転移を起こして短期間で死亡した症例では、CD8＋T細胞数が僅か２個/μｌであった。また、CD8＋T細胞数が100個/μｌ以下を示していた症例は、１３例中６例（46％）で悪液質や短日内で死亡が確認されている症例であった。腫瘍全体のCD8＋T細胞数の平均値および標準偏差は332±302個/μｌと正常犬の約半数を示し、正常犬に対し減少が認められた（図8）。正常犬におけるCD8＋T細胞の割合は23.3%を示したのに対し、軽度な担癌犬のCD8＋T細胞の割合は23.9%とほとんど変化は認められなかった。しかし、重篤な担癌犬のB群のCD8＋T細胞の割合は14.3%と正常犬やA群に比べて低値を示した。腫瘍犬全体のCD8＋T細胞の割合は18.5%と正常犬に比べ低値を示した（図９）。
【００４０】
４）CD21＋B細胞数および割合
正常犬におけるCD21B細胞数の範囲は146個/μｌ〜595個/μｌを占め平均値および標準偏差は385±158個/μｌを示した。軽度な担癌犬A群のCD21B細胞数の範囲は36個/μｌ〜510個/μｌ を示し平均値および標準偏差は208±160個/μｌを示し正常犬よりも低値を示した。重篤な担癌犬B群の範囲は7個/μｌ〜592個/μｌ を示し平均値および標準偏差は179±166個/μｌと低値を示した。担癌犬B群のCD21B細胞数が100個/μｌ以下と低値を示した供試犬は、46％(13頭中6頭)と高率であった。また腫瘍犬全体としてのCD21B細胞数の平均および標準偏差は192±160個/μｌを示し、正常犬に比べて低値を示した(図１０)。正常犬におけるCD21B細胞の割合は14.1%を示したのに対しA群は10.6%、B群は11.5%を示し共に低値を示した。また腫瘍犬全体としてのCD21B細胞の割合は10.9%を示し正常犬に比べ低値を示した（図１１）。
【００４１】
３．血清サイトカインの活性値
１）IL‐6の活性値
正常犬群のIL‐6の活性値の範囲は26.9U/ml〜256.8U/mlを示し、平均値および標準偏差は188.7±174U/mlであった。軽度な担癌犬A群のIL‐6の活性値の範囲は22.4U/ml〜755.9U/mlを示し平均値および標準偏差は181.8±217U/mlと平均値の差はほとんど認められなかった。しかしA群内において755.9U/mlと著しい高値を示すものが１例認められた。重篤な担癌犬B群におけるIL‐6の活性値の範囲は14.7U/ml〜970.3U/mlを示し平均値および標準偏差は219.58±287U/mlを示し,正常犬やA群に比べ増加が認められた。また13例中4例30.7%が300U/ml以上を示し、うち1例が900U/ml以上の高値を示した。腫瘍犬全体におけるIL‐6の活性値の平均値および標準偏差は203.16±254U/mlと正常犬に比べ増加が認められた(図１２)。
【００４２】
２）TNF‐αの活性値
正常犬群におけるTNF‐αの活性値の範囲は 0.2U/ml〜4.8 U/mlを示し、平均値および標準偏差は0.61±1.2U/mlを示した。軽度な担癌犬のA群におけるTNF‐αの活性値の範囲は0.2U/ml〜7.5U/mlを示し、平均値および標準偏差としては1.29±2.1U/mlを示し、さらに重篤な担癌犬のB群におけるTNF‐αの活性値の範囲は0.2U/ml〜11.5U/mlを示し、平均値は2.45±4.1U/mlと正常犬やA群に比べ明らかな違いは示されなかった。また腫瘍犬全体におけるTNF‐αの活性値も1.95±3.3U/mlと正常犬と比べほとんど変化は見られなかった(図１３)。
【００４３】
３）血清α1‐AG濃度
担癌犬A群において異常値を示したのは10例中1例（10%）のみでそれ以外は450μg/mlと正常範囲内を示した。またB群において13例中6例（46%）が異常値を示し、6例中5例(83%)が800μg/ml以上を示した。さらに1,000μg/ml以上を示した2例は、リンパ腫の肺転移と悪液質の状態を呈していた。
しかし、血清α1‐AG濃度と死亡との相関性は認められなかった。乳腺腫瘍において異常値を示したのは、12例中3例（25%）でそれ以外は450μg/mlと正常範囲内を示した（図１４）。
【００４４】
４）TGF-β１濃度
イヌのTGF-β１における健常犬での正常値（3.5±1.2 ng/ml）に比べ、軽度な担癌犬のA群におけるTGF-β１の平均値および標準偏差は21.7±14.7ng/mlを示した。また重篤な担癌犬のB群におけるTGF-β１の平均値は17.1±9.7ng/mlを示し両群で著しい高値を示した。腫瘍犬全体のTGF-β１濃度の平均値は17.93±11.5ng/mlを示し著しい高値を示した(図１５)。
【００４５】
４．リンパ球幼若化試験
腫瘍犬におけるグルコース消費試験を行ったところすべての供試犬は、40%以下と低値を示した。A群(n=5)におけるSR値の平均値は20.0±8.6%で、B群（n=3）の平均値は10.9±5.8%と両群ともリンパ球の幼若化反応は低値を示した(図１６)。
【００４６】
５．癌細胞傷害性試験
正常犬における癌細胞傷害性試験の平均値および標準偏差は39.4±14%を示したのに対し、軽度な担癌犬（2例）の細胞傷害活性は22.0%と26.4%と正常犬に比べ低値を示した。重篤な担癌犬の内、血管肉腫と診断された1例では、9.9%と極端に低値を示した (図１７)。
【００４７】
結果のまとめ
正常犬と担癌犬のCD3＋T細胞数, CD4＋T細胞数、CD8＋T細胞数を比較した場合、担癌犬が低値を示し、特に重篤な担癌犬が著しい低値を示した。重篤な担癌犬は、殆んどが肺や肝臓などの主要な臓器に転移が認められているもので悪液質の状態であるため骨髄の細胞産生機能も低下しているものと推察される。
CD4＋T細胞の細胞数の低下により細胞傷害を有するCD8＋T細胞の活性に必要なIL-2の産生が減少するためCD8＋T細胞数および割合に大きく影響しているものと推察された。
腫瘍が産生するTGF-βは、CD4＋T細胞の応答を低下させると言われているが、イヌの担癌犬における報告は見当たらない。今回、担癌犬におけるTGF-βを測定した結果、健康犬の正常値に比較して高値を示した。このことからイヌもヒトと同様にCD4＋T細胞の応答を低下させていることが示唆された。
担癌犬におけるPHAを用いたリンパ球幼若試験では、著しいSR値の低下が認められた。おそらく、重篤な担癌犬では、腫瘍塊が増大しているため大量のTGF-β産生によりリンパ球の活性低下を引き起こしているものと推察された。
TNF‐αの活性値を正常犬と担癌犬で比較すると、TNF‐αは変化が見られなかった。TNF‐αは主にマクロファージから産生されるものであり、マクロファージがTNF‐αを産生するためにはIFN-γの刺激が必須でありIFN-γはCD4＋T細胞から分泌されることが報告されている。今回CD4＋T細胞の細胞数および割合が低下している担癌犬、特に重篤な担癌犬のステージにおいてはTNF‐αの差は認められなかった。
今回のIL-6活性値は、正常犬に比較して担癌犬の方がやや高値を示した。ヒトのIL-6は悪疫質のマ−カ−にされており悪疫質と関連がある。またIL-6はTh1やTh2機能が抑制された担癌状態において免疫応答とは無関係にマクロファージからの大量分泌が報告されている。このマクロファージからの大量のIL-6が免疫をTh2の方に傾かせることが知られている。今回の実験におけるTNF-αの産生の高値からTh1に免疫応答としては傾いているがおそらくマクロファージから放出されているIL-6により担癌犬において免疫がTh2に傾いていることが示唆された。
癌細胞障害性試験における重篤な担癌犬の末梢リンパ球の細胞傷害活性は極めて低値を示し、ほとんど癌細胞に対してkillingを起こしていないことが明らかにされた。TGF-βのCD4＋T細胞の抑制により細胞傷害を有するCD8＋T細胞の活性に必要なIL-2の産生が減少するためCD8＋T細胞の傷害活性が低下していることに大きく影響しているものと推察された。
今回の結果、イヌの担癌状態では、癌のステージが上がるにつれて抗腫瘍免疫を司る免疫担当細胞数の減少が起こっていることが明らかにされた。また、腫瘍細胞が産生するといわれているTGF-βなどによる免疫抑制がCTL細胞、NK細胞、NKT細胞および抗原提示細胞などの免疫担当細胞に大きく影響していることが判明した。
以上の結果、イヌの担癌つまり疾患状態のイヌは、疾患状態の人間の免疫状態に非常に類似しており、しかもイヌの生命は人間の約5分の一で、担癌犬の癌の成長度も約5倍と推定され、疾患状態のイヌは、疾患状態の人と類似の免疫状態にあり、投与する薬剤に対する免疫的な応答性はより短期間にイヌにおいて顕著になり、疾患状態のヒトへの薬剤の影響をより早期に予測できることが判明した。
【００４８】
（実施例２）
免疫抑制作用を持つ、人の新しい抗リウマチ薬であるレフルノミドの投与中にその副作用と思われる、重篤な間質性肺炎を呈し、死亡した犬の症例に遭遇した。レフルノミドは関節リウマチを適応として海外での臨床試験成績を基に、2003年9月に発売された。本剤の代謝産物が、TおよびBリンパ球の増殖を抑制し、ピリミジン合成やチロシンキナーゼ活性を阻害することによりシグナル伝達を抑制すると考えられている。またヒトの移植手術の際にシクロスポリンAと併用することにより有効な免疫抑制の誘導が報告されている。犬においてはIMHA、IMTP、多発性筋炎、天ぽうそうなどコルチコステロイドに抵抗性を示す自己免疫性疾患に有効であったと報告されいる。本剤は国内での販売前は、副作用が少なく使いやすい薬剤と考えられていたが、ヒトで特に重篤な間質性肺炎について国内での死亡例が報告されている。発売開始から2005年2月2日現在まで5,188例の使用患者のうち副作用として間質性肺炎の発現あるいは悪化が63例に認められ、うち死亡が25例と報告されている。一方でこれまでのところ犬での重篤な副作用の報告はなく、元気食欲の低下や軽度に貧血が認められた症例がいくつか確認されているだけであった。症例はミニチュアダックスフンド、2歳7ヵ月齢の雌、初診時体重7.0kgである。症例は最初前肢の跛行を示しましたが、カルプロフェンの投与により改善した。その後原因不明の激しい疼痛、顔面の皮下浮腫、斜頚、旋回などの症状を示しプレドニゾロンの投与により良化するものの投薬を中止すると再発を繰り返した。初診時はプレドニゾロンの投薬により症状を認めなかったため、投薬を中止し1週間後に検査をった。一般身体検査所見では、元気消失は認めるものの、主訴とされていた症状は認められず、神経学的検査、外耳道検査、関節の触診でも異常は確認されなかった。一方で体温は39.8度と高く、血液生化学検査ではC応性蛋白(以下CRP）が12mg/dlと上昇していた。レントゲン検査は、頭部、頸部および胸部について行ったが、異常はなかった。四肢についてもレントゲン検査を実施したが、異常所見は得られなかった。ここまでの検査結果より炎症性疾患が疑われるものの炎症部位は特定できず、不明熱と仮診断した。また感染性の原因も認められなかったため、炎症の原因として免疫介在性の疾患を疑い抗核抗体とリウマチ因子の検査を実施し、プレドニゾロン2mg/kg投与を再開した。後日、抗核抗体が陽性であった為、プレドニゾロンを中心とした免疫抑制治療を続けた。プレドニゾロンを2mg/kg SIDから漸減しながら単独投与を行ったところ、 0.5mg/kg以上の用量では症状が消失し、CRPも低下した。しかし体温は39度を超えていた。さらに 0.25mg/kgまで減量するとCRPも上昇したため、アザチオプリンを併用することにした。アザチオプリンは2mg/kg siｄでプレドニゾロンと併用したが、4週間後の検診ではCRPが7.1mg/dlと上昇し、症状の再発を認めた。さらに白血球数も5000/μｌと低下し、骨髄抑制傾向を認めたため、アザチオプリンの投与を中止し、シクロスポリンに変更した。シクロスポリンは6mg/kg SIDで投与し、プレドニゾロン2mg/kgと併用した。CRPを含めて比較的、安定した状態を約一年間、維持し続けた。しかし、間歇的な再発を認めるため、更なる症状の良化と安定を図るため、レフルノミドに変更した。レ��ルノミドを投与してからは、耳介のカヒ形成や色素沈着などの軽度の副作用と考えられる皮膚病変が確認されたが、これまでと比較して最も安定した状態が得られ体温も平熱を保っていた。ところがレフルノミドの投与開始から25週目にCRPの上昇を認め、さらにその4日後には突然、重篤な呼吸困難を発症し、このためレフルノミドの投与を中止し、酸素吸入、ステロイド剤の投与等の治療を行なったが、回復せず死亡した。呼吸困難発症時の胸部レントゲン写真によると、肺野全域にわたりＸ線不透過性が亢進しており、気管支拡張および非構造性の間質パターンが見られた。オーナーの了解を得て剖検を行ったところ、肺の肉眼所見で肺は退縮不良を起こしており、割面は赤褐色で充実性に富んでいた。組織学的検査では漿膜から増生した線維成分が実質にかけて広がり、同部にて肺胞上皮細胞の立方上皮化生も確認され間質性肺炎と診断された。一方で化膿性変化は確認されず、グロコット染色も陰性で真菌感染は否定された。またその他の臓器には重大な異常は確認されなかった。  本症例では、プレドニゾロンとレフルノミドの併用により最も安定した経過が得られたことから、他の免疫抑制剤に抵抗性の免疫介在性疾患では、レフルノミドは有効な薬剤であると考えられた。一方でレフルノミド使用中にCRPの上昇に伴う急性の重篤な呼吸困難を発症し死亡した。その原因としては、日和見感染、原疾患による肺疾患、薬剤性肺障害が考えられが、日和見感染は否定でき、原疾患も死亡する直前まで良好にコントロールされていたことから可能性は低い。一方、本症例の呼吸困難の発症パターンはヒトの場合と酷似しており、レフルノミドの副作用により間質性肺炎を発症した可能性が高い。ヒトでは本剤使用により間質性肺炎を発症した患者は、肺線維症など肺疾患の既往歴があったり、他の抗リウマチ薬の投与により呼吸器症状を示した経験のある場合が多いとされている。犬における発症率は不明であるが、ヒトと同様に重篤な間質性肺炎を発症する可能性が強く示唆された。
この結果、自然発症イヌにおける副作用を事前に治験によって予測が可能であったことを示しており、疾患自然発症の動物を当該疾患に対応する人の疾患の候補治療薬の治験対象動物とし、人における活性、副作用、長期投与による作用、及び多剤併用の影響等を予測する人用治療薬の評価方法が可能であることが証明された。
【００４９】
（実施例３）
メーカーＡは、候補薬がきまるとインターネットを経由して、データセンターにアクセスして、前臨床試験基本辞書を元にして治験プロトコル原案を作成する。決定された治験プロトコルは、データセンターの治験プロトコルファイルに登録される。同時に、そのデータをもとに治験対象となる疾患自然発症動物プロファイル判定手段が設定される。次いで、治験実施施設は、判定手段に従いコンピュータ上で、候補治験対象動物ファイルと候補治験対象動物疾患データファイルから個体の選定・登録をおこなう。登録はインターネットを経由して治験プロトコルに従い作成された治験対象となる疾患自然発症動物プロファイル判定手段によってなされていく。この段階で不適当な個体への警告・排除がなされる。登録はデータベースに適当な分散を達成した無作為割付登録がなされる。投薬が開始され、データが出てくると、治験医、検査会社、治験会社が予めオーソライズされた権限にもとづきデータ入力をなし、インターネットを通じて、データセンターの治験実施データファイルに登録していく。登録に際して、全てのデータは、治験プロトコルに基づき設定された治験実施データ判定手段と連動し、異常値の検出・除外データの検出がなされ、重要な有害事象の警告・通知が、即座に通知される。通知された警告・通知は予めオーソライズされた者に、インターネットを通じて即座に情報伝達がなされ、治験の継続可否・治験プロトコルの変更の必要性等の検討を可能にする。治験データが十分に集積されると、データセンターの数理解析・統計処理手段によって、メーカーはインターネットを経由して所望の各種報告書を調製可能である。各種出力は、使用者の要求に応じて編集され出力可能である。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１】各群における末梢白血球数を示す。
【図２】各群における末梢リンパ球数を示す。
【図３】各群における末梢リンパ球の割合を示す。
【図４】各群におけるCD3+細胞数を示す。
【図５】各群における CD3+細胞の割合を示す。
【図６】各群におけるCD4+細胞数を示す。
【図７】各群におけるCD4+細胞の割合を示す。
【図８】各群におけるCD8+細胞数を示す。
【図９】各群におけるCD8+細胞割合を示す。
【図１０】各群におけるCD21+B細胞数を示す。
【図１１】各群におけるCD21+B細胞の割合を示す。
【図１２】各群におけるIL-6活性値を示す。
【図１３】各群におけるTNF-α活性値を示す。
【図１４】各群における血清α1-AG濃度を示す。
【図１５】各群におけるTGF-β1濃度を示す。
【図１６】各群におけるリンパ球幼若化試験を示す。
【図１７】各群における細胞傷害性試験を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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