(57)【要約】【課題】  培養工程が一段階ですみ、コッコミクサ藻体の濃度管理も一度ですむので、非常に簡単な製造方法となり、純粋なコッコミクサ藻体の培養が可能となり、高品質な規格が要求される医薬品の素材としても利用でき、しかも光をまったく照射する必要がないため、光の照射度の管理はまったく不要で、光熱費も低減でき、大量製造にも経済的に非常に有利な多糖体の製造方法を提供する。【解決手段】  コッコミクサ藻体を、暗嫌気条件下で液体培地に接種して培養するものとしている。また、コッコミクサ藻体を、暗嫌気条件下で液体培地に、乾燥藻体として０．００１重量％以上接種して、乾燥藻体として約０．０３重量％まで培養するものとしている。さらに、前記暗嫌気条件下が、密閉式タンク培養槽であるものとしている。【選択図面】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
コッコミクサ藻体を、暗嫌気条件下で液体培地に接種して培養することを特徴とする多糖体の製造方法。
【請求項２】
コッコミクサ藻体を、暗嫌気条件下で液体培地に、乾燥藻体として０．００１重量％以上接種して、乾燥藻体として約０．０３重量％まで培養することを特徴とする多糖体の製造方法。
【請求項３】
前記暗嫌気条件下が、密閉式タンク培養槽であることを特徴とする請求項１または２記載の多糖体の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、コッコミクサ藻体を原料とする多糖体の製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、コッコミクサ藻体を原料とする多糖体の製造方法として、透明体からなる縦型の偏平形状の水槽中の無機液体培地に、コッコミクサ藻体を接種して、この水槽に白色・昼色蛍光灯または白熱灯の光を照射することによりコッコミクサ藻体中に多糖体を生産させるものが存在した。すなわち、この多糖体の製造方法は、コッコミクサ藻体を、縦型偏平水槽の無機液体培地に接種して、光照射しつつ、かつ、炭酸ガス含有空気を通気しつつ培養するものであり、コッコミクサ藻体を、ＰＶＣ濃度０．９〜１．７ｍｌ／ｌの割合で接種して、水槽の前・後面の何れかの一面または水槽の前・後面と左・右側面との何れかの二面から、照度３０００〜９０００ｌｘの光を照射して、ＰＶＣ濃度１．８〜４．９ｍｌ／ｌまで培養する第一工程と、このＰＶＣ濃度１．８〜４．９ｍｌ／ｌの培養液に、水槽の前・後面の二面または水槽の前・後面と左・右側面との四面から、照度５５００〜１０５００ｌｘの光を照射して、ＰＶＣ濃度５．０〜７．０ｍｌ／ｌまで培養する第二工程と、このＰＶＣ濃度５．０〜７．０ｍｌ／ｌの培養液に、水槽の前・後面の二面または水槽の前・後面と左・右側面との四面から、照度６０００〜１７５００ｌｘの光を照射して、ＰＶＣ濃度１０．０〜１１．０ｍｌ／ｌまで培養する第三工程とからなるものとしている（特許文献１）。
【特許文献１】特開平１１−２９００９３号公報（第２頁）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら、上記従来の多糖体の製造方法は、コッコミクサ藻体の培養工程として三工程という複数の工程を有し、しかも各工程でのコッコミクサ藻体の濃度管理や、光の照射度の管理が必要であるため、各工程が煩雑になるという問題点を有していた。
【０００４】
また、上記従来の多糖体の製造方法は、前記一〜三工程の何れも長時間にわたり光を照射する必要があるため、光熱費が多大にかかり、多糖体の大量製造には経済的に不利であるという問題点を有していた。
【０００５】
さらに、上記従来の多糖体の製造方法は開放式であるために、各製造工程中に、外部から他の藻類や、藻類以外のバクテリア等の菌が混入してしまい、純粋なコッコミクサ藻体を培養することができないという問題点を有していた。
【０００６】
そこで、この発明は、上記従来の問題点を解消することを課題としており、培養工程が一段階ですみ、コッコミクサ藻体の濃度管理も一度ですみ、非常に簡単な製造方法となる多糖体の製造方法を提供することを目的としてなされたものである。また、この発明は、密閉式の製造方法とし、純粋なコッコミクサ藻体の培養を可能とし、高品質な規格が要求される医薬品の素材としても利用できる多糖体の製造方法を提供することを目的としてなされたものである。さらに、この発明は、光をまったく照射する必要がないため、光の照射度の管理はまったく不要で、光熱費も低減でき、大量製造にも経済的に非常に有利な多糖体の製造方法を提供することを目的としてなされたものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
そのため、この発明の多糖体の製造方法は、コッコミクサ藻体を、暗嫌気条件下で液体培地に接種して培養するものとしている。
【０００８】
また、この発明の多糖体の製造方法は、コッコミクサ藻体を、暗嫌気条件下で液体培地に、乾燥藻体として０．００１重量％以上接種して、乾燥藻体として約０．０３重量％まで培養するものとしている。
【０００９】
さらに、この発明の多糖体の製造方法は、前記暗嫌気条件下が、密閉式タンク培養槽であるものとしている。
【発明の効果】
【００１０】
この発明の多糖体の製造方法は、以上に述べたように構成されているので、培養工程が一段階ですみ、コッコミクサ藻体の濃度管理も一度ですむので、非常に簡単な密閉式の製造方法となり、純粋なコッコミクサ藻体の培養が可能となり、高品質な規格が要求される医薬品の素材としても利用できる。しかも、光をまったく照射する必要がないため、光の照射度の管理はまったく不要で、光熱費も低減でき、多糖体の大量製造にも経済的に非常に有利なものとなった。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
以下、この発明の多糖体の製造方法を実施するための最良の形態について詳細に説明する。
【００１２】
この発明の多糖体の製造方法は、コッコミクサ藻体を、暗嫌気条件下である密閉式タンク培養槽中の液体培地（ｐＨ６〜８）に対して、乾燥藻体として０．００１重量％以上接種し、培養温度を２０〜３０°Ｃとし、攪拌翼を１分間に１０〜１２０回転させ、乾燥藻体として約０．０３重量％まで培養するものとしている。
【００１３】
この発明の多糖体の製造方法において、前記コッコミクサ藻体としては、緑色植物部門(Chlorohta) 、緑藻(Chlorococcaceae) 、クロロコックム目(Chlorococcales)、クロロコックム科(Chlorococcaceae) に属するコッコミクサ・ミノール(Coccomyxa minor) 、コッコミクサ・グロエオボトリディフォルミス(Coccomyxa gloeobotrydiformis)などのコッコミクサ株すべてを指す。
【００１４】
また、発明の多糖体の製造方法において、前記液体培地としては、培地１００リットルの対して、ＫＮＯ3 が１００〜３００ｇ、ＫＨ2 ＰＯ4 が１００〜１６０ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが２００〜３００ｇ、グルコースが５００〜１，５００ｇ、ＥＤＴＡが０．５〜１ｇ、クエン酸第二鉄が０．４９〜２．４５ｇ、Ｈ3 ＢＯ3 が０．１１〜０．５５ｇ、ＭｏＯ3 が３０〜１５０ｍｇ、ＣｏＣｌ2 が１０〜５０ｍｇ、ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏが１０〜５０ｍｇ、ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが１０〜５０ｍｇの割合で含有したものを用いた。
【００１５】
以下、この発明の多糖体の製造方法を、実施例に基づいて詳細に説明する。
（実施例１）
液体培地（培地１リットルに対して、ＫＮＯ3 が２．５ｇ、ＫＨ2 ＰＯ4 が１．３５ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが２．５ｇ、グルコースが５．０ｇ、ＥＤＴＡが０．００７ｇ、クエン酸第二鉄が０．００４９ｇ、Ｈ3 ＢＯ3 が０．００１１ｇ、ＭｏＯ3 が０．３ｍｇ、ＣｏＣｌ2 が０．１ｍｇ、ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏが０．１ｍｇ、ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが０．１ｍｇの割合で含有。ｐＨ７．５）１リットルを、密閉式のステンレスタンク培養槽（１．５リットル容）に入れ、培養温度を２５°Ｃとし、攪拌翼を１分間に１０回転させ、培地中にコッコミクサ乾燥藻体として０．００２重量％になるように接種して培養を開始した。１週間後、コッコミクサ乾燥藻体として０．０３重量％に達したので培養を止めて、得られた培養液をシャ−プレス遠心分離機（１５，０００回転／分）で分別した。分別して得られたコッコミクサペーストを蒸留水で洗浄し、凍結乾燥法により乾燥させ、３．２ｇの乾燥藻体を得た。そこで、乾燥藻体の一般化学組成を定量し、結果を表１に示した。また、乾燥藻体のアミノ酸分析をし、結果を表２に示した。
【００１６】
【表１】
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【００１７】
【表２】
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【００１８】
次に、得られた乾燥藻体中の多糖体含量を、以下のようにして定量し、結果を表３に示した。
【００１９】
先ず、乾燥藻体を１００倍容の又は窒素置換したＨ2 ＳＯ4 に溶かし、封管中で１０５°Ｃ、３時間加水分解した後、ＢａＣＯ3 末で中和し濾過して、濾液を濃縮した。生成した単糖をＮａＢＨ4 で室温で２時間還元後、ピリジン：無水酢酸（１：１ｖ／ｖ）を加え、室温で一夜、アセチル化した。得られた糖アルコールアセテートをクロロホルムに溶かし、ガスクロマトグラフィー分析法で定量した結果、３１．５ｇであった。多糖体は、ガラクトース、グルコース、マンノース、ラムノースなどを構成糖としており、多糖体含量は、乾燥藻体中１５．８％であった。
【００２０】
対照として、同条件でクロレラ藻体（クロレラピレノイドーサ）を培養し、同様に乾燥藻体中の多糖体含量を定量した結果を同じく表３に示した。多糖体含量は、乾燥藻体中１５．８％であった。よって、コッコミクサ乾燥藻体中に含まれる多糖体含量は、クロレラ乾燥藻体中に含まれる多糖体含量の５．４８倍であった。
【００２１】
【表３】
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【００２２】
（実施例２）
液体培地（培地１００リットルに対して、ＫＮＯ3 が１２５ｇ、ＫＨ2 ＰＯ4 が１３５ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが２５０ｇ、グルコースが１，５００ｇ、ＥＤＴＡが０．７ｇ、クエン酸第二鉄が０．４９ｇ、Ｈ3 ＢＯ3 が０．１１ｇ、ＭｏＯ3 が３０ｍｇ、ＣｏＣｌ2 が１０ｍｇ、ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏが１０ｍｇ、ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが１０ｍｇの割合で含有。ｐＨ７．５）１００リットルを、密閉式のステンレスタンク培養槽（１００リットル容）に入れ、培養温度を２８°Ｃとし、攪拌翼を１分間に６０回転させ、培地中にコッコミクサ乾燥藻体として０．００１重量％になるように接種して培養を開始した。１０日後、コッコミクサ乾燥藻体として０．０３重量％に達したので培養を止めて、得られた培養液をシャ−プレス遠心分離機（１５，０００回転／分）で分別した。分別して得られたコッコミクサペーストを蒸留水で洗浄し、凍結乾燥法により乾燥させ、２７５ｇの乾燥藻体を得た。そこで、乾燥藻体の一般化学組成を定量し、結果を表４に示した。また、乾燥藻体中に含まれる多糖体構成を表５に示した。
【００２３】
【表４】
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【００２４】
【表５】
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【００２５】
（実施例３）
液体培地（培地４００リットルに対して、ＫＮＯ3 が８００ｇ、ＫＨ2 ＰＯ4 が２７０ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが５００ｇ、グルコースが４，０００ｇ、ＥＤＴＡが１．４ｇ、クエン酸第二鉄が０．９８ｇ、Ｈ3 ＢＯ3 が０．２２ｇ、ＭｏＯ3 が６０ｍｇ、ＣｏＣｌ2 が２０ｍｇ、ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏが２０ｍｇ、ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが２０ｍｇの割合で含有。ｐＨ７．５）４００リットルを、密閉式のステンレスタンク培養槽（５００リットル容）に入れ、培養温度を２６°Ｃとし、攪拌翼を１分間に１２０回転させ、培地中にコッコミクサ乾燥藻体として０．００５重量％になるように接種して培養を開始した。８日後、コッコミクサ乾燥藻体として０．０２７重量％に達したので培養を止めて、得られた培養液をシャ−プレス遠心分離機（１５，０００回転／分）で分別した。分別して得られたコッコミクサペーストを蒸留水で洗浄し、凍結乾燥法により乾燥させ、７５８ｇの乾燥藻体を得た。そこで、乾燥藻体の一般化学組成を定量し、結果を表６に示した。また、乾燥藻体中に含まれる多糖体構成を表７に示した。
【００２６】
【表６】
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【００２７】
【表７】
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【００２８】
（実施例４）
液体培地（培地４００リットルに対して、ＫＮＯ3 が１，０００ｇ、ＫＨ2 ＰＯ4 が５４０ｇ、ＭｇＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが１，０００ｇ、グルコースが６，０００ｇ、ＥＤＴＡが２．８ｇ、クエン酸第二鉄が１．９６ｇ、Ｈ3 ＢＯ3 が０．４４ｇ、ＭｏＯ3 が１２０ｍｇ、ＣｏＣｌ2 が４０ｍｇ、ＣｕＳＯ4 ・５Ｈ2 Ｏが４０ｍｇ、ＺｎＳＯ4 ・７Ｈ2 Ｏが４０ｍｇの割合で含有。ｐＨ７．５）４００リットルを、密閉式のステンレスタンク培養槽（５００リットル容）に入れ、培養温度を２６°Ｃとし、攪拌翼を１分間に６０回転させ、培地中にコッコミクサ乾燥藻体として０．００８重量％になるように接種して培養を開始した。６日後、コッコミクサ乾燥藻体として０．０３重量％に達したので培養を止めて、得られた培養液をシャ−プレス遠心分離機（１５，０００回転／分）で分別した。分別して得られたコッコミクサペーストを蒸留水で洗浄し、凍結乾燥法により乾燥させ、８９５ｇの乾燥藻体を得た。そこで、乾燥藻体の一般化学組成を定量し、結果を表８に示した。また、乾燥藻体中に含まれる多糖体構成を表９に示した。
【００２９】
【表８】
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【００３０】
【表９】
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