(57)【要約】【課題】  本発明は５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形、その製造のための方法、その結晶形を含有する医薬組成物、および、結晶形の使用に関する。【解決手段】  ５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドは、特に医薬用物質として適切であり、そしてgp120とCD4との相互作用を阻害し、そのためにHIV、HIVに遺伝的に関連するレトロウイルス感染、またはAIDSの治療で使用される。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
CuKα放射線（波長＝1.5406Å）を用いて測定した時に、以下の特徴的な粉末Ｘ線回析ピークを示す、５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形。
2θ±0.1（／°）
10.8
13.9 
15.1
16.2
17.9
【請求項２】
CuKα放射線（波長＝1.5406Å）を用いて測定した時に、以下の特徴的な粉末Ｘ線回析ピークによりさらに特徴付けられる、請求項１に記載の結晶形。
2θ±0.1（／°）
10.8
12.1
12.4
12.9 
13.9
15.1
16.2
17.9
20.2
21.0
21.7
【請求項３】
CuKα放射線（波長＝1.5406Å）を用いて測定した時に、以下の特徴的な粉末Ｘ線回析ピークによりさらに特徴付けられる、請求項１または２に記載の結晶形。
2θ±0.1（／°）
6.2
10.8
12.1
12.4
12.9
13.9
15.1
16.2
17.9
20.2
21.0
21.7
【請求項４】
CuKα放射線（波長＝1.5406Å）を用いて測定した時に、以下の特徴的な粉末Ｘ線回析ピークによりさらに特徴付けられる、請求項１〜３のいずれかに記載の結晶形。
2θ±0.1（／°）
6.2
10.8
12.1
12.4
12.9 
13.9
15.1
16.2
17.9
18.5
19.0
20.2
21.0
21.7
23.5
25.9
28.6
29.2
【請求項５】
127℃に鋭い吸熱を示すDSCトレースによってさらに特徴付けられる、請求項１〜４のいずれかに記載の結晶形。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに記載の結晶形と１またはそれ以上の製薬的に受容可能な添加剤、希釈剤または担体とを含有する、医薬組成物。
【請求項７】
医薬として使用するための、請求項１〜５のいずれかに記載の結晶形。
【請求項８】
HIV、HIVに遺伝子的に関連するレトロウイルス感染、またはAIDSの治療のために使用するための、請求項１〜５のいずれかに記載の結晶形。
【請求項９】
HIV、HIVに遺伝子的に関連するレトロウイルス感染、またはAIDSの治療用医薬を製造するための、請求項１〜５のいずれかに記載の結晶形の使用。
【請求項１０】
請求項１〜５のいずれかに記載の結晶形の有効量を哺乳類に投与することを含む、HIV、HIVに遺伝的に関連するレトロウイルス感染、またはAIDSに罹患した該哺乳類の治療のための方法。
【請求項１１】
請求項１〜５のいずれかに記載の結晶形、および１またはそれ以上の追加の治療剤を含有する医薬組成物。
【請求項１２】
少なくとも１つのエステルおよび水を含有する溶媒系から、式（Ｉ）
【化１】
2006225388.tif 000016
の化合物を結晶化することを含む、請求項１〜５のいずれかに記載の結晶形の製造方法。
【請求項１３】
エステルが酢酸ｎ−ブチルである、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
溶媒系が0.2〜５％w/wの水を含有する、請求項１３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形、その医薬組成物、および、そうした結晶形を製造するための方法に関する。本発明はさらにこの結晶形およびその組成物のHIV、HIVに遺伝的に関連するレトロウイルス感染すなわちAIDSの治療での使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
構造式（Ｉ）：
【化１】
2006225388.tif 000002
（式中、Meはメチル）
を有している化合物である、５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドは、HIV、例えばHIV−1、および、遺伝的に関連するレトロウイルス感染（および、その結果である後天性免疫不全症候群、AIDS）の治療において有用である。
【０００３】
化合物を医薬として開発する場合、大規模に、確実に製造および精製でき、ならびに貯蔵中に分解しないような化合物の形態（通常、原薬（drug substance）として知られている）を供給することが重要である。そうした特性は、通常、結晶でかつ高融点の原薬で見出される。こうした高融点結晶固形物は、再結晶による精製が容易で、かつ、貯蔵においても安定な傾向がある。
【０００４】
化合物は、完全な非晶質から完全な結晶までの範囲の固形状態の連続体として存在することができる。「非晶質」という表現は、分子レベルで長い範囲にわたる秩序を欠く物質の状態を表し、温度に依存して、固体または液体の物理的性質を示しうる。そうした物質は、典型的には、識別できるＸ線回析パターンは与えず、そして、固体としての性質を示す一方で、より形式的には液体として記載されている。加熱により、典型的には二次の状態変化（「ガラス転位」）により特徴付けられる、固体から液体の性質への変換が生じる。「結晶」という表現は、物質が、分子レベルで規則的な内部構造を有している固体相を表し、そして、それは明確なピークを有する識別できるＸ線回析パターンを与える。そうした物質は、また、充分に加熱されたときに、液体の性質も示すが、固体から液体への変換は、典型的には一次の相変換（「融点」）により特徴付けられる。
【０００５】
化合物は非溶媒和および溶媒和の形態で存在できる。「溶媒和」という表現は、ここでは該化合物および１またはそれ以上の製薬的に受容可能な溶媒分子、例えば、エタノール、を含む分子錯体を記述するために用いられる。「水和物」という表現は該溶媒が水の時に用いられる。
【０００６】
有機水和物に関して、現在受け入れられている分類システムは、分離された部位、チャネル、または、金属イオン共役水和物を定義するものであり、これについては、K. R. Morris による「医薬固体における多型」（H.G. Brittan編, Marcel Dekker, 1995年）を参照すること。分離された部位の水和物は、その水分子が、介在する有機分子により互いに直接の接触から分離されているものである。チャネル水和物では、その水分子が他の水分子に隣接している格子チャネル中に存在している。金属イオン共役水和物では、水分子は金属イオンに結合している。
【０００７】
溶媒または水が強く結合している場合、その錯体は湿度に依存しない明確に定められた化学量論を有している。しかし、溶媒または水が、チャネル水和物および吸湿性化合物のように、弱く結合している場合は、水／溶媒の含量は湿度および乾燥状態に依存するだろう。そうした場合は、非化学量論となるのが普通だろう。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
予期せぬことに、我々は今回、５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形を発見した。それは高融点を有する結晶性固体である。それは薄い木片（laths）のように結晶化し、脱水による結晶性の変化は見られない。さらに、それは受容可能な分解性および溶解性を有している。
【０００９】
結晶構造解析により、５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形はチャネル水和物であることが判明した。ここで水分子は結晶格子内を貫通しているチャネル内にゆるく結合している。その結果、水分子の正確な部位の占有レベルは、周囲の温度および湿度条件に敏感であり、無水物から完全な水和状態までの範囲となる。
【００１０】
種々の温度および湿度条件を組み合わせた、粉末Ｘ線回析（PXRD）、動的蒸気収着（DVS）、示差走査熱量計（DSC）および熱重量分析（TGA）研究により、全体の結晶構造が水含量に依存していないことが示されている。したがって、本発明の結晶形のPXRDパターンは、水含量に依存しない識別子（identifier）として用いることができる。５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形に関する固体形態のデータは、以下にさらに詳細に記載されている。
【００１１】
一つの態様で、本発明は、Cu Kα放射線（波長＝1.5406Å）を用いて測定したときに、以下の特徴的な粉末Ｘ線回析ピークを示す、５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形を提供する：
2θ±0.1（／°）
10.8
13.9
15.1
16.2
17.9
【００１２】
一つの実施態様で、該結晶形はさらにCu Kα放射線（波長＝1.5406Å）を用いて測定したときに、以下の特徴的な粉末Ｘ線回析ピークを示すことにより特徴付けられる：
2θ±0.1（／°）
10.8
12.1
12.4
12.9
13.9
15.1
16.2
17.9
20.2
21.0
21.7
【００１３】
他の実施態様で、該結晶形はさらにCu Kα放射線（波長＝1.5406Å）を用いて測定したときに、以下の特徴的な粉末Ｘ線回析ピークを示すことにより特徴付けられる：
2θ±0.1（／°）
6.2
10.8
12.1
12.4
12.9
13.9
15.1
16.2
17.9
20.2
21.0
21.7
【００１４】
他の実施態様で、該結晶形はさらにCu Kα放射線（波長＝1.5406Å）を用いて測定したときに、以下の特徴的な粉末Ｘ線回析ピークを示すことにより特徴付けられる：
2θ±0.1（／°）
6.2
10.8
12.1
12.4  
12.9
13.9
15.1
16.2
17.9
18.5
19.0
20.2
21.0
21.7
23.5
25.9
28.6
29.2
【００１５】
他の実施態様で、該結晶形はさらに127℃において鋭い吸熱反応を示すDSCトレースにより特徴付けられる。
【００１６】
本発明はまた、式（Ｉ）の化合物を、少なくとも１つのエステルおよび水を含有する溶媒系から結晶化させることを含む、本発明の結晶形を製造する方法を提供する。
【化２】
2006225388.tif 000003
【００１７】
一つの実施態様で、５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形は、次の構造式（II）を有する：
【化３】
2006225388.tif 000004
（式中、Meはメチルであり、および０≦ｎ≦１である。）
【００１８】
一つの実施態様で、５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形、特に式（II）の結晶形は、少なくとも１つの有機溶媒を含有する溶媒系から、式（Ｉ）の遊離の塩基化合物を結晶化することにより製造できる。一つの実施態様で、溶媒系は少なくとも１つの有機溶媒および水を含有する。有機溶媒は中程度に極性を持つ有機溶媒であっていい。典型的には、有機溶媒は無水物ではない。中程度に極性を持つ有機溶媒はエステルであっていい。例えば、有機溶媒は酢酸ｎ−ブチルまたは酢酸イソプロピルでありうる。一つの実施態様で、有機溶媒は酢酸ｎ−ブチルである。一つの実施態様で、溶媒系は0.2〜５％w/wの水を含有している。一つの実施態様で、溶媒系はエステル、例えば酢酸ｎ−ブチル、および、0.2〜５％w/wの水を含有している。他の実施態様で、溶媒系はエステル、例えば酢酸ｎ−ブチル、および、約0.2％w/w、約0.5％w/w、約１％w/w、約２％w/w、約３％w/w、約４％w/w、および約５％w/wの水から選ばれる水の量を含有している。一つの実施態様で、溶媒系は酢酸ｎ−ブチルおよび約1.5％w/wの水を含有している。
【００１９】
式（Ｉ）の化合物は結晶化の前には非晶性固体の形態であってもいい。式（Ｉ）の化合物の非晶形は、水、例えば２〜３％w/wの水を含有してもいい（例えば、図４を参照されたい）。一つの実施態様で、場合により２〜３％w/wの水を含有する非晶性固体の形態の式（Ｉ）の化合物の結晶化は、エステル、例えば酢酸ｎ−ブチル、および、少なくとも約0.2％w/wの水（例えば、酢酸ブチルを４mL／ｇの濃度で用いた場合）を含有している溶媒系を用いて行うことができる。
【００２０】
他の実施態様で、式（Ｉ）の化合物の非晶形の結晶化はpH調節によって行うことができる。式（Ｉ）の化合物を水に懸濁し、次に、酸、例えば塩酸を溶液が酸性、例えばpH２未満、例えば約pH1となるまで加えることができる。適切な塩基、例えば飽和重炭酸ナトリウム溶液を、次に、溶液が約pH９になるまで加えることができる。こうして得られた混合物には、場合によって、式（Ｉ）の化合物の結晶を産生するためにシードを加えることができる。
【００２１】
当業者は、式（Ｉ）の化合物の結晶化が、水および不混和性有機溶媒によるエマルジョン結晶化方法により行うことができることを理解するであろう。したがって、他の実施態様で、式（Ｉ）の化合物は、水および水−不混和性有機溶媒を含有する溶媒系からエマルジョン結晶化により結晶化することができる。有機溶媒はエステル、例えば、酢酸ｎ−ブチルまたは酢酸イソプロピルであっていい。一つの実施態様で、溶媒は酢酸ｎ−ブチルである。
【００２２】
他の実施態様で、式（Ｉ）の化合物の結晶化は、式（Ｉ）の化合物の溶液が水に加えられ（または、代わりに、それに加える）、ここで水が逆溶媒（anti-solvent）として働く、逆溶媒添加結晶化方法を用いて行うことができる。
【００２３】
式（Ｉ）の化合物は、それ自体、国際特許公開WO2005/016344、ならびに、下記の実施例および製造例に記載されたように製造することができる。
【００２４】
本発明は、全ての製薬的に受容可能な同位元素で標識された本発明の結晶形、例えば式（II）の結晶形を含む。同位元素で標識された形態では、１つまたはそれ以上の原子を、同じ原子番号を有するが天然で優勢な原子番号または質量数とは異なった原子番号または質量数を有する１つの原子または複数の原子で、置換している。
【００２５】
適切な同位元素には、水素の同位元素、例えば2Hおよび3H；炭素、例えば11C、13Cおよび14C；窒素、例えば13Nおよび15N；酸素、例えば15O、17Oおよび18O；ならびに、硫黄、例えば35Sが含まれる。
【００２６】
ある種の同位元素標識化合物、例えば放射性同位元素を組み込んだ化合物は、医薬および／または基質の組織分布研究で有用である。放射性同位元素のトリチウム、すなわち3H、および炭素−14、すなわち14Cは、それらの組み込みの容易さおよび容易な検出手段を考慮すれば、この目的に特に有用である。
【００２７】
重水素、すなわち2Hのようなより重い同位元素との置換は、より大きな代謝安定性、例えばインビボでの半減期を増大させ、または必要とされる投与量を軽減させることから、ある種の治療上の利点を提供でき、そのために或る種の状境下では好まれることがある。
【００２８】
陽電子を放出する同位元素、例えば11C、18F、15Oおよび13Nによる置換は、基質受容体の占有度を調べるための陽電子放出断層撮影（PET）研究で使用することができる。
【００２９】
同位元素で標識した化合物は、一般的に、当業者に周知の定法により、または以下の、以前に使用されていた非標識試薬に代えて適切な同位元素標識試薬を用いた実施例および製法例により、製造することができる。
【００３０】
５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドは、gp120とCD4との相互作用を阻害することから、HIV、HIVに遺伝子的に関連したレトロウイルス感染、およびAIDSの治療において使用できる。
【００３１】
したがって、他の実施態様で、本発明は、医薬として使用するための本発明の結晶形を提供する。
【００３２】
他の実施態様で、本発明は、HIV、HIVに遺伝子的に関連したレトロウイルス感染、およびAIDSの治療において使用するための本発明の結晶形を提供する。
【００３３】
他の実施態様で、本発明は、HIV、HIVに遺伝子的に関連したレトロウイルス感染、およびAIDSの治療のための医薬を製造するための、本発明の結晶形の使用を提供する。
【００３４】
他の実施態様で、本発明は、有効量の本発明の結晶形により哺乳類を治療することを含む、HIV、HIVに遺伝子的に関連したレトロウイルス感染、およびAIDSに罹患した該哺乳類の治療方法を提供する。
【００３５】
本発明の結晶形（ここでは本発明の化合物ともよぶ）は、単独で、または他の１つまたはそれ以上の医薬と組み合わせて、投与できる。一般に、本発明の結晶形は１つまたはそれ以上の製薬的に受容可能な添加剤、希釈剤または担体と組み合わせた製剤として、投与されるであろう。ここで用いた添加剤の用語は、本発明の化合物または他の活性成分以外のありうる成分について述べるためのものである。添加剤の選択は、特定の投与方法、添加剤の溶解性および安定性への効果、ならびに投与形態の性質に大きく依存するであろう。
【００３６】
本発明の化合物の送達に適した医薬組成物およびそれらの製造方法は、当業者には容易に理解できるであろう。そうした組成物およびそれらの製造方法は、例えば、「Remington's Pharmaceutical Sciences」、第19版（Mack出版社、1995年）に記載されている。
【００３７】
本発明の化合物は経口的に投与しうる。経口投与では、化合物を胃腸管へ送りこむ飲み込み投与法、または、化合物が口から直接血流に入る頬内もしくは舌下投与方法を用いることができる。
【００３８】
経口投与に適した製剤には、錠剤、粒子を含有するカプセル剤、液剤、または粉剤、トローチ剤（液体充填型を含む）、噛剤、マルチ−もしくはナノ−粒子、ゲル剤、固溶体剤、リポソーム剤、フィルム剤（粘膜粘着剤を含む）、オブーレ（ovules）、スプレー剤、および液体製剤が含まれる。
【００３９】
液体製剤には、懸濁液、溶液、シロップ、およびエリキシールが含まれる。そうした製剤は、軟質または硬質カプセルの充填剤として用いられ、そして、典型的には、担体、例えば、水、エタノール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、メチルセルロース、または適切な油、および１つまたはそれ以上の乳化剤および／または懸濁剤を含有している。液体製剤はまた、例えば、サシエ（sachet）からの固体物を再構成して製造することができる。
【００４０】
本発明の化合物はまた、LiangおよびChenによりExpert Opinion in Therapeutic Patents,11(6), 981-986 (2001年)に記載されたような、急速溶解性、急速崩壊性の投与形態で用いることができる。
【００４１】
錠剤の投与形態については、投与量に依存して、医薬は、該投与形態の0.1wt％〜80wt％、より典型的には１wt％〜60wt％、例えば、５wt％〜50wt％を占めることができる。医薬に加えて、錠剤は通常、崩壊剤を含む。崩壊剤の例には、デンプングリコール酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、クロスカルメロースナトリウム、クロスポビドン、ポリビニルピロリドン、メチルセルロース、微結晶性セルロース、低級アルキル置換ヒドロキシプロピルセルロース、デンプン、アルファ化デンプン（pregelatinised starch）、およびアルギン酸ナトリウムが挙げられる。一般に、崩壊剤は、該投与形態の、0.1wt％〜25wt％、より典型的には0.5wt％〜20wt％、例えば、１wt％〜15wt％を含むであろう。
【００４２】
結合剤は一般に、錠剤型製剤に粘着性を与えるために用いられる。適切な結合剤には、微結晶性セルロース、ゼラチン、糖類、ポリエチレングリコール、天然ゴムおよび合成ゴム、ポリビニルピロリドン、アルファ化デンプン、ヒドロキシプロピルセルロース、およびヒドロキシプロピルメチルセルロースが挙げられる。錠剤はまた、希釈剤、例えば、乳糖（一水和物、スプレー乾燥型一水和物、無水物等）、マンニトール、キシリトール、デキストロース、スクロース、ソルビトール、微結晶性セルロース、デンプン、炭酸カルシウム、および二塩基性リン酸カルシウム二水和物を含有することもできる。
【００４３】
錠剤はまた、場合により、界面活性剤、例えば、ラウリル硫酸ナトリウム、およびポリソルベート80、ならびにグライダント、例えば、二酸化シリコンおよびタルクを含有してもいい。
【００４４】
界面活性剤は、それが含まれる場合は、錠剤の0.2wt％〜５wt％で含むことができ、そして滑沢剤は錠剤の0.2wt％〜１wt％で含むことができる。錠剤はまた、滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸亜鉛、ステアリルフマル酸ナトリウム、およびステアリン酸マグネシウムとラウリル硫酸ナトリウムとの混合物を含むことができる。滑沢剤は、一般に、該錠剤の0.25wt％〜10wt％、例えば、0.5wt％〜３wt％で含む。
【００４５】
他の可能な成分には、抗酸化剤、着色剤、矯味矯臭剤、保存剤、および味覚遮断剤が含まれる。
【００４６】
例示的な錠剤は、医薬を約80％まで、結合剤を約10wt％〜約90wt％、希釈剤を約０wt％〜約85wt％、崩壊剤を約１wt％〜約10wt％、および滑沢剤を約0.25wt％〜約10wt％含有している。
【００４７】
錠剤用混合物は直接に、またはローラーにより圧縮されて、錠剤に成形される。錠剤化の前に、錠剤用混合物または混合物の一部分は、交互に、湿式、乾式もしくは融解型顆粒化、融解凝固化、または押出し成形される。最終的な製剤は、１またはそれ以上の層を含むことができ、被覆されても被覆されなくてもよく、そしてカプセル化されてもいい。
【００４８】
錠剤の製剤化は、H. LiebermanおよびL. Lachmanによる「Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Vol.1」（Marcel Dekker, N.Y., N.Y., 1980年（ISBN 0-8247-6918-X））において論じられている。
【００４９】
経口投与用の固形製剤は、即時および／または修飾型放出のために製剤化できる。修飾型放出製剤は、遅延型、持続型、パルス型、制御型、標的型、およびプログラム型放出を含んでいる。
【００５０】
本発明の目的のための適切な修飾型放出製剤は、米国特許6,106,864に記載されている。他の適切な放出技術、例えば、高エネルギー分散ならびに浸透性および被覆型粒子は、Verma等の、Pharmaceutical Technology On-line, 25(2), 1-14 (2001年)、に記載されている。制御型放出のためのチューインガムの使用は、国際特許公開WO00/35298に記載されている。
【００５１】
本発明の化合物はまた、直接に、血流中、筋肉中、または体内器官へ投与できる。適切な非経口投与の方法には、静脈内、動脈内、腹腔内、クモ膜下、脳室内、尿道内、胸骨内、頭蓋内、筋肉内、および皮下が挙げられる。非経口投与用の適切な器具には、針（ミクロ針を含む）注射器、無針注射器、および輸液技術が含まれる。非経口製剤は典型的には、水溶液であり、賦形剤、例えば、塩類、炭水化物類、および緩衝剤（好ましくは、pH３〜９に）を含むことができるが、いくつかの適用では、無菌非水性溶液として、または適切なビヒクル、例えば、無菌でパイロジェンを含まない水と一緒に用いられる乾燥形態として、より適切に製剤化できる。
【００５２】
無菌条件下での非経口製剤の製造、例えば、凍結乾燥化合物の再構成によるものは、当業者が周知の標準的な製薬技術を用いて、容易に達成できる。
【００５３】
非経口溶液の製造で用いられる本発明の化合物の溶解性は、適切な製剤技術、例えば、溶解促進剤を組み入れることによって促進できる。
【００５４】
非経口投与用製剤は、即時および／または修飾型放出のために製剤化できる。修飾型放出製剤は、遅延型、持続型、パルス型、制御型、標的型、およびプログラム型放出を含んでいる。したがって、本発明の化合物は、固体、半固体、または化合物を修飾型放出とするインプラント型デポ剤である揺変性の投与用液体として、製剤化できる。そうした製剤の例には、医薬被覆ステントおよびPGLAマイクロスフェアが挙げられる。
【００５５】
本発明の化合物はまた、皮膚または粘膜に局所的に、すなわち、皮膚へまたは経皮的に投与することができる。この目的のための典型的な製剤には、ゲル剤、ヒドロゲル剤、ローション、溶液、クリーム、軟膏、散布剤、ドレッシング、泡剤、フィルム剤、皮膚用パッチ、ウエハー剤（wafers）、インプラント、スポンジ剤、繊維剤（fibres）、包帯、および微乳化剤が挙げられる。リポソームもまた使用できる。典型的な担体には、アルコール、水、鉱油、液体石油、白色ワセリン、グリセリン、ポリエチレングリコール、およびプロピレングリコールが挙げられる。浸透促進剤を組み込むこともでき、これについては、例えば、FinninおよびMorganによるJ Pharm Sci, 88(10), 955-958 (1999年10月)を参照する。
【００５６】
局所投与の他の方法には、エレクトロポレーション、イオントフォレーゼ（iontophoresis）、フォノフォレシス（phonophoresis）、ソノフォレシス（sonophoresis）、および微小針または無針（例えば、PowderjectTM、 BiojectTM、等）注射による投与が含まれる。
【００５７】
局所投与用製剤は、即時および／または修飾型放出のために製剤化できる。修飾型放出製剤は、遅延型、持続型、パルス型、制御型、標的型、およびプログラム型放出を含んでいる。
【００５８】
本発明の化合物はまた、経鼻または吸入により投与でき、典型的には乾燥粉末の形態（単独でか、混合物として、例えば、乳糖との乾燥混合物、または混合成分粒子、例えば、フォスファチジルコリンのようなリン脂質と混合、のいずれかで）で、乾燥粉末吸入器からか、または加圧式容器、ポンプ、スプレー、霧化器（好ましくは、電気流体力学を用いて、微細なミストを産生できる霧化器）、または、適切な推進薬、例えば、1,1,1,2−テトラフルオロエタンもしくは1,1,1,2,3,3,3−ヘプタフルオロプロパンを使用するかもしくは使用しないネブライザーからのエアロゾルスプレーとして投与できる。経鼻使用のためには、粉剤には、生体粘着剤、例えば、キトサンまたはシクロデキストリンを含有することができる。
【００５９】
加圧式容器、ポンプ、スプレー、霧化器、またはネブライザーは、例えば、エタノール（場合により、水性エタノール）または、化合物の分散化、溶解化もしくは放出延長化のための適切な代替剤、溶媒としての推進剤、および、例えば、ソルビタントリオレート、オレイン酸、またはオリゴ乳酸のような場合によって用いられる界面活性剤を含有する、本発明の化合物の溶液または懸濁液を含有している。
【００６０】
乾燥粉末または懸濁製剤で使用する前に、医薬製造物は吸入による投与に適した大きさ（典型的には、５ミクロン未満）にまで微細化される。これは、適切な粉砕方法、例えば、渦巻状噴出粉砕法、液体床噴出粉砕法、ナノ粒子を作成するための超臨界液体処理、高圧均質化、または噴霧乾燥により達成できる。
【００６１】
吸入器または吹込器で使用するための、カプセル（例えば、ゼラチンまたはHPMCから作成された）、ブリスターおよびカートリッジは、本発明の化合物と、適切な粉末基剤、例えば、乳糖またはデンプン、および性能調整剤、例えば、１−ロイシン、マンニトール、またはステアリン酸マグネシウムとのパウダーミックスを含有するように製剤化されうる。乳糖は、無水または単水和物で、好ましくは後者であっていい。他の適切な添加剤には、デキストラン、グルコース、マルトース、ソルビトール、キシリトール、果糖、スクロース、およびトレハロースが挙げられる。
【００６２】
電気流体力学を用いて微細なミストを産生するための霧化器で使用するための適切な溶液製剤は、一作動当りで本発明の化合物を１μg〜20mg含むことができ、作動容量は１μL〜100μLの間で変えられる。典型的な製剤には、本発明の化合物、プロピレングリコール、無菌水、エタノールおよび塩化ナトリウムを含むことができる。プロピレングリコールの代わりに用いることができる代替用溶媒には、グリセロールおよびポリエチレングリコールが含まれる。
【００６３】
適切な矯味矯臭剤、例えば、メントールおよびレボメントール、または甘味剤、例えば、サッカリンまたはサッカリンナトリウムを、吸入／経鼻投与のための本発明の製剤に添加することができる。
【００６４】
吸入／経鼻投与のための製剤は、例えば、ポリ（DL−乳酸−コグリコール酸）（PGLA）を用いた、即時および／または修飾型放出として製剤化できる。修飾型放出製剤は、遅延型、持続型、パルス型、制御型、標的型、およびプログラム型放出を含んでいる。
【００６５】
乾燥粉末吸入およびエアロゾールの場合は、投与単位は、計量された用量を放出できるバルブによって決定される。本発明に関わる単位は、典型的に、本発明の化合物を１μg〜10mgを含有する、計量された用量、または「一吹き（puff）」を投与できるように設定される。一日の全投与量は、典型的には、１μg〜200mgの範囲であり、単回投与量、または、より普通には、一日の間に分割した用量である。
【００６６】
本発明の化合物は、直腸内または膣内に、例えば、坐薬、ペッサリー、膣リング、または浣腸の形態で、投与することができる。カカオバターは伝統的な坐薬基剤であるが、種々の代替物も適宜使用できる。上記のように、本発明の化合物はまた、粘膜、例えば、膣および直腸粘膜に局所投与できる。この目的での典型的な製剤には、ゲル、クリーム、軟膏、泡剤、ウエハー、インプラントおよびスポンジが含まれる。
【００６７】
直腸内／膣内投与のための製剤は、即時および／または修飾型放出のために製剤化できる。修飾型放出製剤は、遅延型、持続型、パルス型、制御型、標的型、およびプログラム型放出を含んでいる。
【００６８】
本発明の化合物はまた、直接、目や耳に、典型的には、等張の、pH調整した無菌食塩水中で微細化された懸濁液または溶液の水滴の形態で、投与できる。他の目および耳に適した製剤には、軟膏、生体分解性（例えば、吸収可能なゲルスポンジ、コラーゲン）および非生体分解性（例えば、シリコン）インプラント、ウエハー、レンズ、ならびに粒子状または小胞状システム、例えば、ニオソーム（niosomes）またはリポソームが含まれる。重合体、例えば、交差結合したポリアクリル酸、ポリビニルアルコール、ヒアルロン酸、セルロース系重合体、例えば、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、もしくはメチルセルロース、または、ヘテロポリサッカライド重合体、例えば、ゲランガムは、保存剤、例えば、塩化ベンゾアルコニウムと一緒に組み込むことができる。そうした製剤はまた、イオントフォレーシスにより送達されうる。
【００６９】
目／耳投与用製剤は、即時および／または修飾型放出のために製剤化できる。修飾型放出製剤は、遅延型、持続型、パルス型、制御型、標的型、およびプログラム型放出を含んでいる。
【００７０】
本発明の化合物は、例えば、特定の疾患または症状を治療するための他の治療剤と組み合わせて投与することが望ましいかぎりにおいて、２個またはそれ以上の医薬組成物（これは少なくとも１個の本発明の化合物を含んでいる）が、組成物の同時投与に適切なキットの形態で便利なように組み合わせられることも、本発明の範囲内である。
【００７１】
したがって、本発明のキットは、２個またはそれ以上の別々の医薬組成物（これは少なくとも１個の本発明の化合物を含んでいる）、およびそうした組成物を別々に保持するための道具、例えば、コンテナー、分割したビン、または分割したホイルポケット、を含むことができる。そうしたキットの例には、錠剤、カプセル剤等を封入した、汎用のブリスターパックが挙げられる。
【００７２】
本発明のキットは、特に、異なった投与形態、例えば、経口および非経口投与のために、異なった投与間隔での別々の組成物の投与のために、または互いに対して別々の組成物を徐々に増量していく（titrating）ために、適している。コンプライアンスを支援するために、キットは典型的には、投与の指示書を含み、そして、いわゆる記憶支援用具（memory aid）と一緒に提供できる。
【００７３】
ヒト患者（体重が約65〜70kg）への投与のためには、本発明の化合物の一日投与量は、典型的には、１mg〜10,000mgの範囲、例えば、10mg〜1,000mg、例えば、25mg〜500mg、特に50mg〜400mgの範囲であり、当然のこととして、投与方法、患者の年齢、症状および体重に依存しており、そしていかなる場合でも最終的には医師により決定されるだろう。一日の全投与量は、単回でまたは分割用量で投与できる。
【００７４】
したがって、本発明の他の態様は、本発明の結晶形と１またはそれ以上の製薬的に受容可能な添加剤、希釈剤または担体とを含有する、医薬組成物を提供する。
【００７５】
本発明の化合物は、単独で、または組み合わせ治療の一部として、投与できる。したがって、本発明の範囲に含まれるものは、本発明の化合物の他に、１またはそれ以上の追加の治療剤の、同時投与、および、それらを含有する組成物を含む態様である。そうした複数投薬計画は、しばしば組合せ治療と呼ばれるが、ヒト免疫不全ウイルス、HIVによる感染の治療および予防のために用いることができる。そうした組合せ治療の使用は、特に、治療を必要としている患者またはそうした患者になる危険性を有する人において、ヒト免疫不全ウイルス、HIV、および関連する病原性レトロウイルスの感染および増殖を治療および予防するために適切である。そうしたレトロウイルス病原体が、比較的短期間に該患者に投与されてきたいずれかの単剤治療に対して抵抗性を有する系統へと進化してゆく能力は、文献で良く知られている。HIVに対する推奨される治療は、高活性型抗レトロウイルス治療（または、HAART）と呼ばれる組合せ薬物治療である。HAARTは３個またはそれ以上のHIV薬を組み合わせる。したがって、本発明の治療方法および医薬組成物は、本発明の化合物を単剤治療の形態で使用できるが、そうした方法および組成物はまた、本発明の化合物が、例えば、詳細がここでさらに記載されているような、１またはそれ以上のさらなる治療剤、と組み合わせて同時投与される、組合せ治療の形態でも使用できる。
【００７６】
本発明のさらなる実施態様で、本発明の組合せは、本発明の化合物と、１またはそれ以上の以下から選択される追加の治療剤での治療を含んでいる：
HIVタンパク分解酵素阻害剤（PIs）、以下のものを含むがそれらには限定されない：アンプレナビル（141W94）、CGP-73547、CGP-61755、DMP-450（モゼナビル）、ネルフィナビル、リトナビル、サキナビル（インビラーゼ）、ロピナビル、TMC-126、アタザナビル、パリナビル、GS-3333、KNI-413、KNI-272、LG-71350、CGP-61755、PD 173606、PD 177298、PD 178390、PD 178392、U-140690、ABT-378、DMP-450、AG-1776、MK-944、VX-478、インジナビル、チプラナビル、TMC-114、DPC-681、DPC-684、フォサムプレナビルカルシウム（レキシバ）、国際特許公開03/053435に記載されたベンゼンスルフォンアミド誘導体、R-944、Ro-03-34649、VX-385、GS-224338、OPT-TL3、PL-100、PPL-100、SM-309515、AG-148、DG-35-VIII、DMP-850、GW-5950X、KNI-1039、L-756423、LB-71262、LP-130、RS-344、SE-063、UIC-94-003、Vb-19038、A-77003、BMS-182193、BMS-186318、SM-309515、JE-2147、GS-9005；
非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（NNRTIs）、以下のものを含むがそれらには限定されない：エファビレンズ、HBY-097、ネビラピン、TMC-120（ダピビリン）、TMC-125、エトラビリン、デラビルジン、DPC-083、DPC-961、カプラビリン、リルピビリン、５−｛［３,５−ジエチル−１−（２−ヒドロキシエチル）−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］オキシ｝イソフタロニトリルまたはその製薬的に受容可能な塩、溶媒和物、もしくは誘導体；５−｛［３−シクロプロピル−１−（２−ヒドロキシエチル）−５−メチル−１Ｈ−ピラゾール−４−イル］オキシ｝イソフタロニトリルまたはその製薬的に受容可能な塩、溶媒和物、もしくは誘導体；GW-678248、GW-695634、MIV-150、カラノリド、および国際特許公開03/062238に記載された三環式ピリミジノン誘導体；
【００７７】
ヌクレオシド／ヌクレオチド逆転写酵素阻害剤（NRTIs）、以下のものを含むがそれらには限定されない：アバカビル、GS-840、ラミブジン、アデフォビルジピボキシル、β−フルオロ−ddA、ザルシタビン、ジダノシン、スタブジン、ジドブジン、テノフォビルフマル酸、ジソプロキシル、アムドキソビル（DAPD）、SDP-754、SPD-756、ラシビル、レベルセット（DPC-817）、MIV-210（FLG）、ベータ−L−Fd4C（ACH-126443）、MIV-310（アロブジン、FLT）、dOTC、DAPD、エンテカビル、CG-7340、エムトリシタビン（FTC）；
CCR5拮抗剤、以下のものを含むがそれらには限定されない：TAK-779、SC-351125、SCH-C（アンクリビロク）、SCH-D（ビクリビロク）、マラビロク、PRO-140、アプラビロク、AMD-887、CMPD-167、
【００７８】
１−エンド−｛８−［（３Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−３−（３−フルオロフェニル）プロピル］−８−アザビシクロ−［３,２,１］オクタ−３−イル｝−２−メチル−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４,５−Ｃ］ピリジン−５−カルボン酸メチルまたはその製薬的に受容可能な塩、溶媒和物、もしくは誘導体；
３−エンド−｛８−［（３Ｓ）−３−（アセトアミド）−３−（３−フルオロフェニル）プロピル］−８−アザビシクロ−［３,２,１］オクタ−３−イル｝−２−メチル−４,５,６,７−テトラヒドロ−３Ｈ−イミダゾ［４,５−Ｃ］ピリジン−５−カルボン酸メチルまたはその製薬的に受容可能な塩、溶媒和物、もしくは誘導体；
１−エンド−｛８−［（３Ｓ）−３−（アセチルアミノ）−３−（３−フルオロフェニル）プロピル］−８−アザビシクロ−［３,２,１］オクタ−３−イル｝−２−メチル−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４,５−Ｃ］ピリジン−５−カルボン酸エチルまたはその製薬的に受容可能な塩、溶媒和物、もしくは誘導体；および、Ｎ−｛（１Ｓ）−３−［３−エンド−（５−イソブチリル−２−メチル−４,５,６,７−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４,５−Ｃ］ピリジン−１−イル）−８−アザビシクロ−［３,２,１］オクタ−８−イル］−１−（３−フルオロフェニル）プロピル｝−アセトアミド）またはその製薬的に受容可能な塩、溶媒和物、もしくは誘導体；
【００７９】
エントリーおよび融合阻害剤、以下のものを含むがそれらには限定されない：BMS-806、BMS-488043、および４−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−３−メトキシ−Ｎ−メチル−ベンズアミド、エンフビルチド（T-20）、SP-01A、T1249、PRO 542、PRO 140、AMD-3100、可溶性CD4、日本公開2003-171381に記載された化合物、および日本公開2003-119137に記載された化合物；
【００８０】
HIVインテグラーゼ阻害剤、以下のものを含むがそれらには限定されない：L-000870810、GW-810781、国際特許公開03/062204に記載された1,5−ナフチリジン−3−カルボキサミド誘導体、国際特許公開03/047564に記載された化合物、国際特許公開03/049690に記載の化合物、および、国際特許公開03/035076に記載された5−ヒドロキシピリミジン−4−カルボキサミド誘導体、MK-0518（国際特許公開03/016315に記載された５−（１,１−ジオキソ−１,２−チアジナン−２−イル）−Ｎ−（４−フルオロベンジル）−８−ヒドロキシ−１,６−ナフチリジン−７−カルボキサミド）；
【００８１】
プレニル化阻害剤、以下のものを含むがそれには限定されない：HMG CoA還元酵素阻害剤、例えば、スタチン類（例えば、アトルバスタチン）；
【００８２】
RNアーゼＨ阻害剤；
HIVカプシドタンパク質の産生に干渉することにより効果を表す成熟阻害剤；および抗感染剤として有用な化合物。
【００８３】
本発明の化合物と、１またはそれ以上の、以下の群から独立して選ばれる、追加の治療剤と一緒にした配合剤もまた、本発明の範囲に含まれる；すなわち、この追加の治療剤には、増殖阻害剤、例えばヒドロキシ尿素；免疫調整剤、例えば、AD-436、AD-519、α−インターフェロン、AS-101、ブロピリミン、アセマンナン、CL246,738、EL10、FP-21399、γ−インターフェロン、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（例えば、サルグラモスチム）、IL-2、免疫グロブリン静脈内用、IMREG-1、IMREG-2、ジエチルジチオカルバミン酸イムチオール、α-2インターフェロン、メチオニン−エンケファリン、MTP-PE、レムーン、rCD4、組換え可溶性ヒトCD4、インターフェロンα-2、SK&F106528、可溶性T4チモペンチン、腫瘍壊死因子（TNF）、ツカレソール、組換えヒトインターフェロンβ、インターフェロンαn-3；タキキニン受容体調節剤（例えば、NK1拮抗剤）およびインターフェロンまたはインターフェロン誘導体の種々の形態；他のケモカイン受容体作動剤／拮抗剤、例えば、CXCR4拮抗剤（例えば、AMD070およびAMD3100）またはCD4拮抗剤（例えば、TNX-355）；ウイルスの転写またはRNA複製を実質的に阻害し、破壊し、または減少させる薬剤、例えば、tat（転写トランス活性化剤）またはnef（ネガテイブ調節因子）の阻害剤；逆転写酵素以外で、ウイルスにより発現する１またはそれ以上のタンパク質の翻訳を実質的に阻害し、破壊し、または減少させる薬剤（それには限定されないが、タンパク質発現の下方調節、または、１もしくはそれ以上のタンパク質の拮抗作用を含む）で、例えば、TatまたはNef；CCR5受容体発現に影響し、特に下方調節する薬剤；CCR5受容体取込みを誘導するケモカイン、例えば、MIP-1α、MIP-1β、ランテス（RANTES）およびそれらの誘導体；および、ウイルス感染を阻害し、または、様々の機構によりHIVに感染した個人の症状または転帰を改善する他の薬剤；
【００８４】
CCR5受容体発現に影響し、特に下方調節する薬剤；CCR5受容体取込みを誘導するケモカイン、例えば、MIP-1α、MIP-1β、ランテス（RANTES）およびそれらの誘導体、それには限定されないが、免疫抑制剤、例えば、カルシネウリン阻害剤（例えば、タクロリムスおよびシクロスポリンＡ）；ステロイド；サイトカイン産生またはシグナル伝達に干渉する薬剤、例えば、ヤヌスキナーゼ（JAK）阻害剤（例えば、３−｛（3Ｒ,４Ｒ）−４−メチル−３−［メチル−（７Ｈ−ピロール［２,３−ｄ］ピリミジン−4−イル）−アミノ］−ピペリジン−１−イル｝−３−オキソ−プロピオニトリルを含むJAK-3阻害剤）またはその製薬的に受容可能な塩、溶媒和物、もしくは誘導体；サイトカイン抗体（例えば、インターロイキン-2（IL-2）受容体を阻害する抗体、バシリキシマブおよびダクリズマブを含む）；ならびに、細胞活性化または細胞周期に干渉する薬剤、例えば、ラパミシン、がある。
【００８５】
本発明の化合物と、１またはそれ以上の、本発明の化合物の代謝速度を遅らせ、それにより患者への露出量を増加させる、追加の治療剤と一緒にした配合剤もまた、本発明の範囲に含まれる。そうした様式による露出の増加はブーステング（boosting）として知られている。このことは、本発明の化合物の効率を増加させ、またはブーストしていない用量と同一の効率を達成するために必要な用量を減少させる利点を有する。本発明の化合物の代謝には、P450（CYP450）酵素、特にCYP3A4により行われる酸化プロセス、ならびにUDPグルクロノシルトランスフェラーゼおよび硫酸化酵素によるコンジュゲーションが含まれる。それにより、患者の本発明の化合物に対する露出を増加させるために使用できる薬剤の間には、少なくとも１つのP450（CYP450）酵素のアイソフォームの阻害剤として作用できる薬剤がある。有利に阻害されることができるCYP450のアイソフォームには、それらには限定されるものではないが、CYP1A2、CYP2D6、CYP2C9、CYP2C19およびCYP3A4が挙げられる。CYP3A4を阻害するために使用することができる適切な薬剤には、それらには限定されるものではないが、リトナビル、サキナビルまたはケトコナゾールが挙げられる。
【００８６】
当業者には、上記の組合わせ医薬治療が、同一または異なった作用機構を有する２またはそれ以上の化合物を含むことができることが理解されるだろう。したがって、例示のためのみではあるが、組合せは、本発明の化合物と；１またはそれ以上のNRTIｓ；１またはそれ以上のNRTIsおよびPI；１またはそれ以上のNRTIsおよびCCR5拮抗剤；１またはそれ以上のCCR5拮抗剤；PI；PIおよびNNRTI；NNRTI；等が挙げられる。
【００８７】
本発明の化合物に加えて治療剤の使用を必要とする、治療効率の必要性の他に、例えば、基礎的なまたは基になっている変調した疾患または症状に、起因するまたは間接的に随伴している、疾患または症状の治療において、本発明の化合物と他の治療剤との組合せの使用を強いるまたは強く推奨される、追加の理由付けがあるだろう。例えば、治療を受けている患者の免疫不全状態の結果として発症する可能性のある、Ｃ型肝炎ウイルス（HCV）、Ｂ型肝炎ウイルス（HBV）、ヒトパピローマウイルス（HPV）、日和見感染（細菌および真菌感染を含む）、新生物、および他の症状を治療することが必要であるか、または少なくとも望ましいだろう。他の治療剤は、例えば、免疫刺激のために、またはHIV感染に伴うことがある痛みおよび炎症を治療するために、本発明の化合物と共に使用しうる。
【００８８】
したがって、本発明の化合物と組み合わせて使用するための治療剤にはまた、：肝炎の治療のための、インターフェロン類、ペジル化インターフェロン類（例えば、ペジインターフェロンα−2a、およびペジインターフェロンα−2b）、ラミブジン、リバビリン、およびエミトリシタビン；抗真菌剤、例えば、フルコナゾール、フォスフルコナゾール、イトラコナゾール、およびボリコナゾール；抗菌剤、例えば、アジスロマイシンおよびクラリスロマイシン；AIDS関連カポジ肉腫の治療のための、インターフェロン類、ダウノルビシン、ドキソルビシン、およびパクリタキセル；ならびに、サイトメガロウイルス（CMV）網膜炎の治療のための、フォミビルセン、フォスカルネット、ガンシクロビルおよびバルサイト、が含まれる。
【００８９】
上記の組合せにおいて、本発明の化合物は、投与形態については、別々にまたは１もしくはそれ以上の他の治療剤と共に、そして、投与の時間については、同時にまたはいかなる順序であれ順次に投与できる。したがって、一つの成分薬剤の投与は、他の成分薬剤に、先んじて、同時に、または後続して行うことができる。
【００９０】
したがって、本発明のさらなる様態において、本発明の結晶形と１またはそれ以上の追加の治療薬を含有する医薬組成物が提供される。
【００９１】
ここでの全ての治療への言及には、治癒的、緩和的および予防的治療が含まれることが理解されるべきである。
【００９２】
以下の実施例および製造は、５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形の製造を説明し、ここでは以下のさらなる略語を用いることができる：
ｈ＝時間
min＝分
RTは室温を意味する
LRMS＝低解像度質量スペクトル
HRMS＝高解像度質量スペクトル
APCI＝大気圧化学イオン化
ESI＝エレクトロスプレーイオン化
NMR＝核磁気共鳴
HPLC＝高速液体クロマトグラフィー
[α]D＝旋光角度
tlc＝薄層クロマトグラフィー
Me＝メチル
【００９３】
別に述べないかぎり、標準的な実験室用溶媒を、以下の実施例および製造で用い、使用前には乾燥させていない。
【００９４】
実施例１
５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶
（Ｓ)−２−（４−メトキシ−６−メチルカルバモイル−ピリジン−３−イルオキシ)−プロピオン酸塩酸（33ｇ、0.11モル）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（20.0ｇ、0.15モル）、Ｎ−エチルジイソプロピルアミン（93mL、0.53モル）および１−(３−ジメチルアミノプロピル)−３−エチルカルボジイミド塩酸（58.8ｇ、0.3モル）をＮ,Ｎ−ジメチルアセトアミド（600mL）に溶解し、そして混合物を室温で２時間攪拌した。（３Ｒ）−（３−メチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル−メタノン（J. Med. Chem. 43(23), 4499; 2000）（23.2ｇ、0.11モル）をＮ,Ｎ−ジメチルアセトアミド（30mL）に溶解した溶液を次に加えて、そして混合物を室温で48時間攪拌した。混合物を蒸発乾固し、そして残留物を酢酸エチル（400mL）と飽和重炭酸ナトリウム水溶液（200mL）との間で分配した。有機層を分離し、そして水層を追加の酢酸エチル（４×100mL）で抽出した。合体した有機層を乾燥（MgSO4）させそして減圧下で蒸発させて、オフホワイトの固形物を得た。これをシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製し、酢酸エチル：メタノール、90：10で溶離させ、粗製の５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドを白色泡状物として得たが、まだ残留するＮ,Ｎ−ジメチルアセトアミドを含んでいた。この粗製物を酢酸エチル（400mL）に溶解し、そして水で洗浄した（３×100mL）。有機層を乾燥（MgSO4）しそして減圧下で蒸発させて、５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドを非晶性の白色固形物として得た。これを最小量の熱酢酸ｎ−ブチル（100mL）に溶解し、熱いうちに溶液を濾過し、そして室温まで冷却させた。室温に120時間放置後、析出した結晶性物質を濾別し、少量の冷酢酸n−ブチルで洗浄し、そして減圧下65℃で乾燥し、結晶性白色固形物として表題の化合物を、15.22ｇ得た。
LRMS (APCI+): m/z [M+H]+ 441
1H NMR (400MHz, CD3OD): δ: 8.05 (1H, s), 7.75 (1H, s), 7.50-7.40 (5H, m), 5.40 (1H, m), 4.60-3.00 (8H, m), 3.95 (3H, br s), 2.90 (3H, s), 1.60-1.00 (6H, m) ppm。
実測値C, 60.91; H, 6.56; N, 12.31。C23H28N4O5。0.75 H2Oでの計算値C, 60.85; H, 6.55; N, 12.34％。
【００９５】
実施例１の化合物のPXRD、DSC、TGAおよびDVSデータは以下に記載されている。
【００９６】
実施例２
５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶
５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルエステル（0.2ｇ、0.45ミリモル）の、33％ w/wのメチルアミンのエタノール溶液（３mL）を、リアクチ−バイアルTM（Reacti-vialTM）中で、50℃で18時間加熱した。室温に冷却した後、溶媒を減圧下で蒸発させた。残留物をシリカゲルのカラムクロマトグラフィーで精製し、ジクロロメタン：メタノール：NH3、98：２：0.5〜95：５：0.5で溶離させ、５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドを非晶質の白色固形物として、0.18ｇ得た。
実測値C, 61.65; H, 6.47; N, 12.41。C23H28N4O5。0.1モルCH2Cl2での計算値C, 61.80; H, 6.33; N, 12.48％。
[α]D -15.5°（MeOH中１mg／mL、25℃、波長589nm）
【００９７】
非晶質の５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドのサンプルを最小量の熱酢酸ｎ−ブチルに溶解し、熱いうちに溶液を濾過し、そして室温まで冷却させた。室温に120時間放置後、析出した結晶性物質を濾別し、少量の冷酢酸ｎ−ブチルで洗浄し、そして減圧下65℃で乾燥し、結晶性白色固形物として表題の化合物を得た。
実施例２の表記化合物のLRMSおよび1H NHRデータは実施例１のものと一致した。
【００９８】
実施例３
５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶
（３Ｒ）−（３−メチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル−メタノン塩酸（570ｇ、2.37モル）を水（1.71Ｌ，３Ｌ／kg）に溶解し、そして炭酸カリウム（655ｇ）を攪拌しながら加えた。得られた二相性の混合物を次にジクロロメタン（1.71Ｌ）で抽出し、そして有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥させた。次に溶媒を減圧除去して（３Ｒ）−(３−メチル−ピペラジン−１−イル)−フェニル−メタノンを油状物として得た。これを秤量し、そして、アミドカップリング反応のための試薬の投入量を適切に調整した。（３Ｒ）−（３−メチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル−メタノンにジクロロメタン（7.125Ｌ）を加え、次に（Ｓ）−２−（４−メトキシ−６−メチルカルバモイル−ピリジン−３−イルオキシ）−プロピオン酸（691ｇ、2.21モル）、およびさらに１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（388ｇ、2.87モル）を加えた。次に、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−3−エチルカルボジイミド塩酸塩（1271ｇ、6.63モル）を、室温、窒素下で反応液に加えた。反応が完了したと思われる３時間後に、反応液を水（3.56Ｌ）、次いで10％w/w水性クエン酸（２×3.56Ｌ）で洗浄した。次に、有機相を0.5Ｍ水性重炭酸ナトリウム溶液（3.56Ｌ）、および次に飽和ブライン（3.56 L）で洗浄した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥し、次に減圧下で濃縮し、５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドを油状／泡状生成物として得た（766ｇ、1.74モル、収率79％）。生成物を次に以下のように結晶化した。５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド（903ｇ、2.05モル）をジクロロメタンに溶解した濃縮溶液に、酢酸ｎ−ブチル（2.0Ｌ）を加え、次に溶媒を減圧下で除去した。得られた非晶質の固形物に、酢酸ｎ−ブチル（4.0Ｌ）、続いて水（32.0mL、0.78％w/w）、そしてさらに５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド（1.0ｇ）の種結晶を加えた。得られた溶液を次に、18℃で64時間攪拌した。少量の固形物しか結晶化しなかったのでさらに水（29.0mL、0.71％w/w）を加え、スラリーを22℃でさらに18時間攪拌した。得られたスラリーを３時間５℃まで冷却し、そして減圧下濾過した。フィルターケーキを、水（30mL）を含んでいる酢酸ｎ−ブチル（1.0Ｌ）で洗浄し、そして減圧下60℃で乾燥させ、表題の化合物を白色結晶固形物として得た（705ｇ、1.6モル、収率78％）。
実施例３の表題の化合物に関する1H NMR、LRMSおよび光学回析データは実施例１のものと一致した。
【００９９】
実施例４
５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶
非晶質の５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド（5.0ｇ、11.4ミリモル）を水に懸濁させ、次に濃塩酸を、試験紙で判定してpHが１になるまで加えた。得られた黄色の溶液に次に、飽和重炭酸ナトリウム溶液を、試験紙で判定してpHが９になるまで加えた。得られた乳濁液に種を加え、そして終夜攪拌した。得られたスラリーを次に減圧下濾過し、そして生成物を減圧下で、終夜50℃で乾燥させ、表題の化合物を得た（3.7ｇ、8.4ミリモル、収率74％）。
実施例４の表記の化合物に関するLRMSおよび1H NMRは実施例１のものと一致した。
【０１００】
製造例１Ａ
５−ベンジルオキシ−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド
【化４】
2006225388.tif 000005
５−ベンジルオキシ−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルエステル（24.7ｇ、90.4ミリモル）（Tetrahedron Letter, 38, 1297 (1997)）をエタノールに溶解したメチルアミン溶液（３Ｍ、82mL）に溶解し、次いで混合物をボンベ中で、50℃で18時間加熱した。冷却した反応混合物を減圧下で蒸発乾固させ、次に残留物をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーで精製し、ジクロロメタン：メタノール、97：３で溶出して、表題の化合物を白色固形物21.9ｇとして得た。
LRMS (APCI+): m/z [M+H]+ 273
【０１０１】
製造例１Ｂ
５−ベンジルオキシ−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド
５−ベンジルオキシ−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルエステル（1.62
kg、5.94モル）のメタノール懸濁液（8.12Ｌ）に32℃でメチルアミンの水溶液（40％w/w、1.62 L）を加えた。得られた溶液を次に室温で２時間攪拌し、少量の５−ベンジルオキシ−４−メトキシ−ピリジン−２−メチルアミドを種として加え、そして18時間攪拌させた。得られたスラリーを５℃に冷却し、そしてこの温度で1.4時間保持し、次に減圧下で濾過した。生成物を減圧下で、55℃で終夜乾燥し、表題の化合物をオフホワイトの固形物として得た（1.33kg、4.88モル、収率82％）。
1H NMR (CD3OD、300MHz): δ: 2.94 (3H, s), 3.97 (3H, d), 5.22 (2H,s), 7.32-7.46 (5H, m), 7.11 (1H, s), 8.16 (1H, s)
【０１０２】
製造例２
５−ヒドロキシ−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド
【化５】
2006225388.tif 000006
５−ベンジルオキシ−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド（10.8ｇ、39.7ミリモル）および炭素上の10％w/w Pd（0.1ｇ）のメタノール（100mL）溶液を、室温で５時間、水素化した（138 kPa H2）。反応混合物をアルボセル(R)（Arbocel）を通して濾過し、メタノール（10mL）を通して洗浄した。濾液を減圧下で濃縮し、表題の化合物を白色固形物7.2ｇとして得た。
LRMS (APCI+): m/z [M+H]+ 183；1H NMR (CD3OD、300MHz): δ: 2.94 (3H, s), 3.98 (3H, s), 4.81 (2H,s), 7.68 (1H, s), 8.02 (1H, s)。
【０１０３】
製造例３Ａ
（Ｓ）−２−（４−メトキシ−６−メチルカルバモイル−ピリジン−３−イルオキシ）−プロピオン酸メチルエステル
【化６】
2006225388.tif 000007
５−ヒドロキシ−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド（13.1ｇ、72ミリモル）、（Ｒ）−乳酸メチル（8.23ｇ、79ミリモル）およびトリフェニルフォスフィン（30.1ｇ、15ミリモル）をTHF（150mL）に溶解し、そして混合物を窒素環境下で０℃まで冷却した。アゾジカルボン酸ジイソプロピル（21.2mL、108ミリモル）をTHF（50mL）に溶解した溶液を、次に１時間かけて滴下により加え、反応混合物を室温まで暖め、そしてさらに18時間攪拌した。反応混合物を蒸留して乾燥し、（Ｓ）−２−（４−メトキシ−６−メチルカルバモイル−ピリジン−３−イルオキシ）−プロピオン酸メチルエステルの粗製物を得、これを直接に製造例４で使用した。
【０１０４】
製造例３Ｂ
（Ｓ）−２−（４−メトキシ−６−メチルカルバモイル−ピリジン−３−イルオキシ）−プロピオン酸メチルエステル
（Ｒ）−乳酸メチル（486.0ｇ、4.67モル）のTHF（2.0 L）溶液に、５−ヒドロキシ−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミド（810.0ｇ、4.45モル）、次いでTHF（2.0Ｌ）を加えた。この溶液に、トリフェニルフォスフィン（1.28kg、4.86モル）、次いでTHF（2.5Ｌ）を加え、そして反応混合物を５℃まで冷却した。次に、ジイソプロピルアゾジカルボキシレート（989ｇ、4.89モル）のTHF（0.8Ｌ）溶液を、反応液に、温度を10℃以下に保ちながら加えた。追加ラインをTHF（0.8Ｌ）で洗浄し、これを反応液にくわえ、次にこれを18時間かけて室温まで暖めた。得られたスラリーを次に５℃まで冷却し、2.5時間攪拌し、減圧濾過により固形物を回収した。得られた固形物を減圧下、室温で２日間乾燥させ、表題の化合物を白色結晶固形物として得（754.2ｇ、2.81モル、収率63％）、さらに以下のように精製した。（Ｓ）−２−（４−メトキシ−６−メチルカルバモイル−ピリジン−３−イルオキシ）−プロピオン酸メチルエステル（743.8ｇ、2.77モル）のイソプロパノール（5.58Ｌ）溶液を80℃まで加熱し、にごった溶液を得、次に室温まで冷却し、18時間攪拌した。得られたスラリーを５℃に冷却し、そしてこの温度に５時間保ち、次いで減圧濾過した。生成物を減圧下、60℃で終夜乾燥させ、表題の化合物を得た（676.4ｇ、2.52モル、収率91％）。
融点143℃；1H NMR (d6-DMSO、300MHz): δ: 1.53 (3H, d), 2.80 (3H, d), 3.69 (3H, s), 3.93 (3H, s), 5.15 (1H, q), 7.64 (1H, s), 8.05 (1H, s), 8.54 (1H, d、br)；HPLC（カラム：ダイアセル  キラルパックAS-H、５mm、 250mm×4.6mm；移動相：80：20：0.1 ヘキサン：IPA：DEA；流速： 1.0mL／分；温度：25℃；注入量：20μL；検出：225nmでの紫外部吸収；サンプル濃度：1.0mg／mL 移動相で作成；操作時間：30分）。
保持時間：主要なエナンチオマー、14.3分。
【０１０５】
製造例４
（Ｓ）−２−（４−メトキシ−６−メチルカルバモイル−ピリジン−３−イルオキシ）−プロピオン酸塩酸塩
【化７】
2006225388.tif 000008
（Ｓ）−２−（４−メトキシ−６−メチルカルバモイル−ピリジン−３−イルオキシ）−プロピオン酸メチルエステル（製造例３Ａからの粗製物）（推定で72ミリモル）を、メタノール（150mL）に溶解した溶液し、水酸化リチウム（3.93ｇ、94ミリモル）を分割して加え、そして混合物を室温で18時間攪拌した。反応混合物を蒸発乾固させ、そして残留物を、水（300mL）および酢酸エチルとジエチルエーテルの１：１v/v混合物（300mL）との間で分配した。水相を分離し、連続的に、酢酸エチル（２×200mL）、ジエチルエーテル（２×200mL）、および最終的に酢酸エチルとジエチルエーテルの１：１v/v混合物で洗浄した。水相を濃塩酸（〜30mL）の添加によりpH１まで酸性化し、そして蒸発乾固させた。残留物を、アセトニトリル（200mL）および水（200mL）に再溶解し、減圧下で溶媒量が〜100mLになるまで蒸発させた。室温に放置することにより、白色固形物が沈殿し始めた。アセトニトリル（100mL）を加え、そして混合物を攪拌し、沈殿が完了するように超音波処理した。得られた白色固形物を濾別し、アセトニトリルで洗浄し。そして減圧下で乾燥させ、表題の化合物を白色固形物、25.87ｇとして得た。
LRMS (APCI+): m/z [M+H]+ 255
【０１０６】
製造例５
（Ｓ）−２−（４−メトキシ−６−メチルカルバモイル−ピリジン−３−イルオキシ）−プロピオン酸
【化８】
2006225388.tif 000009
（Ｓ）−２−（４−メトキシ−６−メチルカルバモイル−ピリジン−３−イルオキシ）−プロピオン酸メチルエステル（50ｇ、186.4ミリモル）の水（150mL）中のスラリーに、温度を22〜30℃に保ちながら、水酸化ナトリウム水溶液（25％ w/w、31.3ｇ、195.7ミリモル）を加えた。反応液を次に室温で２時間攪拌し、次に塩酸水溶液（６Ｍ、18mL）を加えて、試験紙でpHを２〜３とした。次に水を減圧で除去し、次にジクロロメタン（２×100mL）を加え、そして減圧下に除去し、固形の泡状物を得、これを減圧下40℃で乾燥させ、表題の化合物を得た（56.2ｇ、粗製物、定量的収率）。
1H NMR (d6-DMSO、300MHz): δ: 1.46 (3H, d), 2.78 (3H, d), 3.90 (3H, s), 4.80 (1H, q),  7.56 (1H, s), 7.98 (1H, s), 8.52 (1H, q)；LRMS (ES): m/z 255 [M+H]+。
【０１０７】
製造例６
（２Ｒ）−１−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−２−ベンジルオキシ−プロパン−１−オン
【化９】
2006225388.tif 000010
１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（825mg、5.3ミリモル）、Ｎ−メチルモルフォリン（808μL、7.3ミリモル）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（1.13ｇ、5.8ミリモル）および（３Ｒ）−（３−メチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル−メタノン［(1.0ｇ、4.9ミリモル)、J. Med. Chem. 43 (23), 4499; 2000］ を（Ｒ）−（＋）−２−ベンジルオキシプロピオン酸（97mg、5.3ミリモル）をジクロロメタン（10mL）に溶解した溶液に加え、そして混合物を18時間撹拌した。追加の（Ｒ）−（＋）−２−ベンジルオキシプロピオン酸（486mg、2.65ミリモル）、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（5.65mg、2.9ミリモル）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（413mg、2.65ミリモル）、およびＮ−メチルモルフォリン（808μL、7.3ミリモル）を加えて、そして混合物を還流下で３時間加熱した。水を次に反応混合物に加え、そして水溶液をジクロロメタン（２×10mL）で抽出した。有機抽出物を合わせて、２Ｍの塩酸、１Ｍの水酸化ナトリウム、およびブラインで洗浄した。有機相を硫酸マグネシウム上で乾燥し、そして減圧下で濃縮した。シリカゲル上のカラムクロマトグラフィーによる精製、ペンタン：酢酸エチル、50：50、次いで酢酸エチル：メタノール、90：10、による溶出により、表題の化合物を白色泡状物として収率81％で、1.45ｇ得た。
LRMS (APCI-): m/z [M+H]- 367
【０１０８】
製造例７
（２Ｒ）−１−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−２−ヒドロキシ−プロパン−１−オン
【化１０】
2006225388.tif 000011
Pd(OH)2（300mg、2.2ミリモル）および蟻酸アンモニウム（1.36ｇ、22ミリモル）を（２Ｒ）−１−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−２−ベンジルオキシ−プロパン−１−オン（1.45ｇ、3.9ミリモル）をエタノール（30mL）に溶解した溶液に加え、そして混合物を60℃で２時間加熱した。次にTlc分析で反応がまだ完了していないことがわかったので、さらに追加のPd(OH)2（300mg、2.2ミリモル）を加え、次いで蟻酸アンモニウム（1.37ｇ、22ミリモル）を45分間隔で、全ての出発物質が消費されるまで加えた。次いで、反応混合物をアルボセル(R)を通して濾過し、メタノール（10mL）を通して洗浄した。濾液を、減圧下で濃縮し、そしてシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーにより精製し、ジクロロメタン：メタノール、95：５、による溶出により、表題の化合物を白色ゴム状物として収率91％で、１ｇ得た。
LRMS (APCI+): m/z [M+H]+ 277
【０１０９】
製造例８
５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルエステル
【化１１】
2006225388.tif 000012
アゾジカルボン酸ジ−tert−ブチル（0.14ｇ、0.6ミリモル）およびポリマーに固定したトリフェニルフォスフィン（0.25ｇ、0.75ミリモル）を、（2R）−1−［（2R）−4−ベンゾイル−2−メチル−ピペラジン−1−イル］−2−ヒドロキシ−プロパン−１−オン（0.083ｇ、0.3ミリモル）および５−ヒドロキシ−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルエステル（0.083ｇ、0.45ミリモル）（Tetrahedron Letters, 38, 1297 (1997)）をジクロロメタン（３mL）に溶解した撹拌溶液に０℃で加えた。１時間後、反応混合物を室温まで暖め、そして追加のアゾジカルボン酸ジ−tert−ブチル（0.14ｇ、0.6ミリモル）およびポリマーに固定したトリフェニルフォスフィン（0.25ｇ、0.75ミリモル）を加えた。室温で18時間後、反応混合物をアルボセル(R)を通して濾過し、ジクロロメタン（10mL）を通して洗浄した。濾液を、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（20mL）で洗浄し、そして有機相を分離し、乾燥し（MgSO4）、減圧下で蒸発させた。残留物をシリカゲル上のカラムクロマトグラフィーにより精製し、酢酸エチル：ペンタン、80：20、次に酢酸エチルそして最後に酢酸エチル：メタノール、95：５、により溶出し、表題の化合物を白色固形物として、0.1ｇ得た。
LRMS (APCI+): m/z [M+H]+ 422
【０１１０】
製剤例９
（３Ｒ）−（３−メチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル−メタノン塩酸塩
【化１２】
2006225388.tif 000013
（Ｒ）−２−メチルピペラジン二塩酸塩（300ｇ、1.73モル）のアセトニトリル（2.6Ｌ）中のスラリーへ、炭酸カリウム（479ｇ、3.46モル）を、窒素下で撹拌しながら加えた。次に反応物を70℃で18時間加熱した。反応物を室温まで冷却し、そして無機スラリーを濾過し、アセトニトリル（0.9Ｌ）で洗浄した。次に濾液を、窒素下で撹拌しながら３℃まで冷却した。この溶液に、温度を10℃未満に維持しながら、2.5時間かけて塩化ベンゾイル（221mL、1.90モル）を加えた。反応物を室温まで暖め、そして18時間撹拌した。次に得られたスラリーを３℃まで冷却し、そして減圧下で濾過した。フィルターケーキをアセトニトリル（300mL）で洗浄し、次いで減圧下で、終夜60℃で乾燥させ、表題の化合物を白色結晶固形物として得た（336ｇ、1.40モル、収率81％）。
1H NMR (d4-メタノール、300MHz): δ: 1.36 (3H, s、br), 3.19-3.32 (2H, m), 3.40-3.50 (4H, m), 4.79 (2H, s), 7.51 (5H, s)。
【０１１１】
製造例１０
（３Ｒ）−（３−メチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル−メタノン
【化１３】
2006225388.tif 000014
（３Ｒ）−（３−メチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル−メタノン塩酸塩の酢酸エチル懸濁液に水を加え、次に炭酸カリウム水溶液を水相のpHが９〜10となるまで加えた。層を分離し、有機相を蒸留して乾燥させ、表題の化合物を、油状物質として得た。
LRMS (EI): m/z 203 [M+H]+、160、105；1H NMR (d4-メタノール、300MHz): δ: 1.05 (3H, s、br), 2.47-3.17 (m、5H), 3.58 (m、br、1H), 4.49 (d、br、1H), 7.37-7.49 (m、5H)。
【０１１２】
固形形態データ
DSC測定は、TA機器Q1000示差走査熱量計を用いて行った。実施例１（2.822mg）の結晶形のサンプルを、非圧着アルミニウム皿中で、20℃／分の割合で、室温から250℃まで加熱した。フローガスは窒素を20cm3／分で流した。５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形は、127℃付近で鋭い吸熱性融解ピークを示した（図１）。
【０１１３】
TGA測定を、TA機器TGA2950高分解性（Hi-Res）熱重量分析器で、窒素パージガスを50cm3／分の速度で、20℃／分の加熱速度で、室温から250℃まで加熱した。サンプル量は6.077mgであった。５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形のTGAプロットを図１に示した。
【０１１４】
５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形のPXRDパターンを５mgの固形物をシリコンウエーハーに埋め込んで測定した。使用した照射は、ブルーカーD8粉末Ｘ線回折計測器および位置敏感型検出器上で、0.014°２θのステップサイズで３°〜35°２θの角度範囲でスキャンされたCuKα1（λ＝1.5406Å）である。変化する温度および湿度は、ANSYCO Sycos H−Hot 加湿器システムを用いて与えた。
【０１１５】
変化する温度および相対湿度での、５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形のPXRDパターンは、それぞれ、図２および図３で与えられる。
【０１１６】
図１のDSC／TGAの結果は、20〜100℃の温度範囲にわたって脱水現象が起こっていることを証明している。同様の温度範囲にわたってPXRDパターンの変化はわずかであり（図２）、結晶構造が水含量に依存していないことを証明している。
【０１１７】
吸湿プロフィルを、Surface Measurement Systems Ltd.DVS1を使用した固形物の19.267mgを制御された相対湿度（％RH）環境に曝すことによる動的蒸気吸収（DVS）、およびその時間にわたって記録した質量変化から測定した。湿度は45-0-90-0と15％間隔で、変化させた。使用したフローガスは窒素であった。図４に示した、５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形のDVS等温線は、％相対湿度（RH）と水の取込みとの間に直接の相関性があることを示している（０％ RH 無水；90％ RH 一水和物）。同様のRH範囲にわたるPXRDパターンには明瞭な変化はみられず（図３）、これもまた結晶構造が水含量に依存していないことを証明している。
【０１１８】
２θ角度、d−間隔および相対インテンシティ（表１）は、５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの単結晶構造から、Accelrys MS ModellingTM [3.0版]の「反射粉末回析」モジュールを用いて計算した。
適切なシミュレーション用パラメータは以下のようであった：
波長＝1.5406Å（CuKα）
偏光ファクター＝0.5
疑似ボイトプロフィル（U = 0.01, V = -0.001, W = 0.002）
【０１１９】
５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶の、主要な特徴的PXRDピークを以下の表２に示した。
【０１２０】
【表１】
2006225388.tif 000015
【０１２１】
〔表２〕
５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形の主要特性PXRDピーク
2θ±0.1（／°）
10.8
13.9
15.1
16.2
17.9
【０１２２】
計算されたパターンは、それが単結晶構造に由来しているために、５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形の純粋相のパターンを表している。測定されたパターンと計算されたパターンの比較が図５に示され、そして大部分（bulk）が単結晶構造によって表わされていることを証明している。ピーク密度のわずかな相違は、測定されたパターンの中の好ましい配向効果によるものであろう。
【０１２３】
生物学的データ
５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドがgp120活性を調節する能力、特にgp120とCD4との相互作用を阻害する能力を、HIV-1融合に対する化合物のIC50値を測定するためのgp160誘導型の細胞−細胞融合アッセイを用いて証明する。gp160誘導型の細胞−細胞融合アッセイは、HeLa P4細胞株およびCHO−Tat10細胞株を使用する。
【０１２４】
HeLa P4細胞株は、CCR5およびCD4を発現し、HIV-1 LTR−β−ガラクトシダーゼを用いて形質転換されてきた。この細胞株のための培地は、ダルペッコの修正イーグル培地（D-MEM）（Ｌ−グルタミン不含）で10％のウシ胎児血清（FCS）、２mM Ｌ−グルタミンペニシリン／ストレプトマイシン（Pen／Strep；100Ｕ／mLペニシリン＋10mg／mL ストレプトマイシン）、および１μg／mLのピューロマイシンを含む。
【０１２５】
CHO細胞株は、CHO JRR17.1 細胞株由来で、pTatピューロ（puro）プラスミドで形質転換した、Tat（転写トランス活性化因子）を発現しているクローンである。この細胞株のための培地は、元々、ロズウエルパーク記念研究所で開発された、哺乳類細胞培養用のリッチ培地、RPMI1640（Ｌ−グルタミン不含）であり、10％のFCS、２mM Ｌ−グルタミン、0.5mg／mLのハイグロマイシンＢおよび12μg／mLのピューロマイシンを含む。CHO JRR17.1株はgp160（JRFL）を発現しており、そしてCCR5／CD4を発現している細胞と融合するその能力により選択されてきたクローンである。
【０１２６】
細胞融合において、CHO細胞で表示されているTatは、HeLa細胞に存在しているHIV-1長い末端反復配列（LTR）をトランス活性化することができ、β−ガラクトシダーゼ酵素の発現を導くことができる。次にこの発現は、Fluor AceTMβ−ガラクトシダーゼレポーターアッセイキット（バイオラド社、カタログ番号170-3150）を用いて測定される。このキットは、定量的蛍光アッセイであり、４−メチルウンベリフェルル−ガラクトピラノシド（MUG）を基質として用いて、β−ガラクトシダーゼの発現レベルを測定する。β−ガラクトシダーゼは、蛍光性基質を加水分解し、その結果、蛍光性分子の４−メチルウンベリフェロン（４MU）が遊離する。次に、４−メチルウンベリフェロンの蛍光が、励起波長360nmおよび放出波長460nmを用いて、蛍光測定器により測定される。
【０１２７】
融合を阻害する化合物は減少したシグナルをもたらすようになるだろう、そして、適切な溶媒に溶解し培養液で希釈して、それぞれの化合物の用量−反応曲線をIC50値の計算に用いることができる。
【０１２８】
５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドのIC50値は14nMである。
【０１２９】
５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドが、精製した組換えHIV−1ｇp120とCD4（sCD4）との相互作用を阻害する能力は、AlphascreenTM技術（パーキン・エルマー・ライフ・サイエンス社）を使用して証明できる。
【０１３０】
５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドは、可溶化され（100％ DMSO（ジメチルスルフォキシド））、そしてアルファスクリーン緩衝液（25mM HEPES（N−2−ヒドロキシエチルピペラジン−N−2−エタンスルフォン酸）、pH7.4、100mM NaCl、0.03％ TWEEN(R)（ポリエチレングリコールソルビタンモノラウレート）、0.3％ BSA（ウシ血清アルブミン）により所望の濃度まで希釈される。溶液の４μLを不透明なプロキシプレート（パーキン・エルマー・ライフ・サイエンス社）に添加する。４μLの精製した、組換えのヒスチジン標識付gp120（BaL株、CHO細胞で発現している）、および次いで、４μLのビオチン化可溶性CD4（Autogen Bioclear社）を添加する。アルファスクリーンビーズ（８μL）を、それぞれのウエルに添加し、そして反応を室温で２時間行った。用いた試薬の濃度はバッチに依存する。アルファスクリーンビーズは、ビオチン化可溶性CD4と結合するストレプトアビジン被覆ドナービーズと、ヒスチジン標識化gp120と結合するニッケルキレートアクセプタービーズとから成っている。もし、gp120がsCD4に結合した場合は、ドナービーズの680nmでのレーザー励起が、アクセプタービーズの励起を引き起こし、次いで520〜620nmで放出する。これは、Fusion α FT HP プレートリーダー（パーキン・エルマー・ライフ・サイエンス社）を使用して測定される。Gp120のsCD4への結合の阻害は、アクセプタービーズからの放出の減少により測定できる。
【０１３１】
５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドは、この相互作用を1.5μMのIC50で阻害することが見出された。
【図面の簡単な説明】
【０１３２】
【図１】５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形のDSC／TGAプロットを示す。
【図２】５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形の種々の温度でのPXRDパターンを示す。
【図３】５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形の種々の湿度でのPXRDパターンを示す。
【図４】５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形のDVS等温線（30℃）を示す。
【図５】５−｛（１Ｓ）−２−［（２Ｒ）−４−ベンゾイル−２−メチル−ピペラジン−１−イル］−１−メチル−２−オキソ−エトキシ｝−４−メトキシ−ピリジン−２−カルボン酸メチルアミドの結晶形のPXRDパターンを示す。
【図１】
2006225388.tif 000017
【図２】
2006225388.tif 000018
【図３】
2006225388.tif 000019
【図４】
2006225388.tif 000020
【図５】
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