(57)【要約】      （修正有）【課題】塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）を有効成分として含有し、歯周病などの各種歯周疾患治療剤に有効な医薬品製剤の提供。【解決手段】塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）を有効成分として含有し、さらにヒドロキシプロピルセルロースを代表例とする各種の増粘剤を含有する歯科用粘稠製剤。歯科用粘稠製剤を調整するためのキットとして利用可能であり、ｂＦＧＦ、増粘剤、不活性で無毒性の添加剤、溶解液を含ませて、歯科用粘稠製剤を調整することができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）を有効成分として含有し、更に増粘剤を含有する歯科用粘稠製剤。
【請求項２】
増粘剤が、ヒドロキシプロピルセルロース、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル、カルボキシビニルポリマー、カルメロースナトリウム、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリアクリル酸、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリアクリル酸部分中和物、ポリビニルアルコール、メチルセルロース、キサンタンガム、コンドロイチン硫酸、及びコンドロイチン硫酸ナトリウムからなる群より選択される少なくとも１種である、請求の範囲第１項記載の歯科用粘稠製剤。
【請求項３】
増粘剤が、ヒドロキシプロピルセルロースである、請求の範囲第１項記載の歯科用粘稠製剤。
【請求項４】
歯周病の処置用である、請求の範囲第１項〜第３項のいずれか１項に記載の歯科用粘稠製剤。
【請求項５】
ｂＦＧＦ含有量が、製剤の総重量に対して０．０００１〜２０重量％である、請求の範囲第１項〜第４項のいずれか１項に記載の歯科用粘稠製剤。
【請求項６】
請求の範囲第１項〜第５項のいずれか１項に記載の歯科用粘稠製剤を調製するためのキットであって、ｂＦＧＦ、増粘剤、必要であれば不活性で無毒性の添加剤、及び溶解液を含むキット。
【請求項７】
請求の範囲第１項〜第５項のいずれか１項に記載の歯科用粘稠製剤を調製する方法であって、ｂＦＧＦ、増粘剤、及び必要であれば不活性で無毒性の添加剤を溶解液に溶解することを特徴とする方法。
【請求項８】
溶解液が水である、請求の範囲第７項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、歯周病などの各種歯周疾患の処置に使用しうる塩基性線維芽細胞増殖因子含有歯科用粘稠製剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ｂＦＧＦ、つまり塩基性線維芽細胞増殖因子は、線維芽細胞の増殖を著しく促進する蛋白質として見出された。その後、in vitroにおいて線維芽細胞の増殖を促進するのみならず、血管内皮細胞、血管平滑筋細胞、上皮細胞などの種々の細胞に対してもその増殖や遊走、分化に対する促進作用を有することが明らかにされてきた。また、in vivoにおいても、強力な血管新生作用を有することが明らかになってきた。ｂＦＧＦはこのような薬理作用を持つことから、難治性皮膚潰瘍の治療剤として開発が進められ、臨床研究において優れた治療効果と安全性が確認され、現在、市販されている。また、ｂＦＧＦは骨組織に対しても有用な作用を示し、骨折治癒を促進する。更に、投与した局所において骨組織の形成を誘発する新しいタイプの骨形成促進剤として、骨折をはじめ骨形成が求められる種々の骨疾患への臨床応用が期待されている。ｂＦＧＦは、更に、歯周組織欠損部位へ投与されると、歯槽骨形成（骨密度、歯槽骨面積、骨梁面積）を促進し、露出歯根面におけるセメント質形成及び歯根膜再生を促進することにより、歯周組織をバランス良く再生することが明らかになってきた。このことから、歯周病治療の最終目的である再生治癒、新付着治癒を導くのに有効であることが認められている。また、抜歯後及び嚢胞又は口腔がん摘出後の歯周組織の修復、インプラント材の定着促進、う蝕により欠損した象牙質の再生など各種歯周疾患の処置に有用であると考えられている。なかでも慢性的な組織欠損である歯周病への適応が考えられている（ＷＯ９５／０５８４０）。
【０００３】
一方、ｂＦＧＦは、強力かつ多様な薬理作用を有することを考慮すると、ｂＦＧＦの作用を必要とする患部のみに直接投与されるのが望ましい。ｂＦＧＦを各疾患に効率よく適応するにはそれぞれに適した製剤設計が必要である。実際、難治性皮膚潰瘍には噴霧製剤、骨疾患に対してはゲル製剤のように疾患に適した製剤化が行われている。しかし、歯周病などの各種歯周疾患に直接的に効率よく適用することができる有用なｂＦＧＦ製剤は、これまで開発されていなかった。
【０００４】
一方、一般に歯科用製剤の剤型としてはパスタ剤、液剤、軟膏剤及びゲル剤などが知られている。しかし、ｂＦＧＦは物理化学的に不安定であること、また薬効用量が低含量であることから、その剤型や製造条件に制約を受け、特にパスタ剤や軟膏剤の開発は困難であると考えられていた。その一方、ｂＦＧＦを含有する液剤及びゲル剤は用時調製型の製剤とすることで、開発可能と考えられていた。各種歯周疾患、特に歯周病治療におけるｂＦＧＦの臨床応用においては、フラップ手術時（歯肉を開き歯石等を除去する術式）に歯槽骨再生を期待して歯肉内へ投与することが予想される。しかし、液剤では上顎部への投与の場合に液垂れにより患部に製剤が十分な時間保持されず、患部へ効率よく投与できないことが懸念される。そこで、その欠点を補う製剤としてゼリー状のゲル製剤が考えられる。ゲル製剤は、低含量の薬剤を定量的に多様な形状からなる患部に均一に塗布するのに好ましい剤型であるとは言えない。特にゲル製剤の場合、その基剤が患部に長期間残存すると組織の修復を阻害することが予想され、さらに、患者が異物としての不快感を訴えることも予想される。そのため、その基剤は投与後一定の時間患部に保持された後は速やかに分解もしくは消失するような高機能性のものである必要があるが、このような基剤は、高価であるという欠点を有している。
【０００５】
従って、ｂＦＧＦを歯周病などの各種歯周疾患の治療剤として開発するためには、ｂＦＧＦを安定に保持し、低含量のｂＦＧＦを小さな容積からなる患部に、液垂れを抑え、多様な形状に均一に塗布することができることが望ましい。また、塗布後は組織の修復を阻害しない程度に貯留した後は速やかに分解もしくは消失し、より効率的に塗布できる安価な材料からなる歯科用製剤の開発が望まれていた。
【０００６】
本願発明者らは、上記の課題を解決すべく鋭意研究した結果、ｂＦＧＦを、溶液にした場合に一定の粘度を維持することができる増粘剤と配合し、粘稠性の製剤とすることによって、ｂＦＧＦを安定に保持し、低含量のｂＦＧＦを定量的かつ多様な形状の患部に均一に塗布することができ、局所貯留性にすぐれた製剤が得られることを発見し、本発明を完成するに至った。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）を有効成分として含有し、更に増粘剤を含有する歯科用粘稠製剤に関する。
【０００８】
本発明の歯科用粘稠製剤においては、一定の粘度を有する増粘剤を配合することにより、粘稠製剤の適度な粘性と局所貯留性が確保され、それにより患部へのｂＦＧＦ投与をより確実なものとすることができる。
【０００９】
本発明はまた、本発明の歯科用粘稠製剤を調製するためのキットであって、ｂＦＧＦ、増粘剤、必要であれば不活性で無毒性の添加剤、及び溶解液を含むキット、並びに本発明の歯科用粘稠製剤を調製する方法であって、ｂＦＧＦ、増粘剤、及び必要であれば不活性で無毒性の添加剤を溶解液に溶解することを特徴とする方法にも関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明の歯科用粘稠製剤は、ｂＦＧＦを有効成分として含有し、更に増粘剤を含有する歯科用粘稠製剤である。ここでいう粘稠製剤とは、２５℃で、Ｅ型粘度計を使用して測定した場合に約２０〜２５，０００mPa・sの粘度を示す製剤を意味する。本発明の歯科用粘稠製剤は、好ましくは、約１，０００〜２０，０００mPa・s、特に好ましくは約３，０００〜１５，０００mPa・sの粘度を有する。
【００１１】
本発明の歯科用粘稠製剤に含有されるｂＦＧＦとしては、哺乳動物由来のものがあげられる。哺乳動物としては、ヒト、サル、ブタ、ウシ、ヒツジ、ウマなどがあげられる。これらの哺乳動物からは、公知の方法によりｂＦＧＦを得ることができ、また動物由来のｂＦＧＦ、例えばウシｂＦＧＦは、複数の会社から試薬として市販されている。
【００１２】
また、該ｂＦＧＦとしては、組換えＤＮＡ技術によって製造されたものを用いることもできる。組換えＤＮＡ技術によりｂＦＧＦを製造するには、例えば特公表６３−５００８４３号に記載の技術を用いることができる。また組換えＤＮＡ技術により製造されたヒトｂＦＧＦは、試薬として販売されており、一般名：トラフェルミン（遺伝子組換え）を、好ましく使用することができる。
【００１３】
本願の歯科用粘稠製剤のｂＦＧＦ濃度は、その歯周疾患に対する効果を考慮すると、製剤の総重量に対して、好ましくは約０．０００１〜２０重量％、より好ましくは約０．００１〜１０重量％、最も好ましくは約０．０１〜１重量％である。
【００１４】
本発明の歯科用粘稠製剤に含有される増粘剤としては、溶液とした場合に、上記の粘度（約２０〜２５，０００mPa・s）を示すことができ、ｂＦＧＦの安定性に悪影響を及ぼさず、かつ薬学的に許容しうる増粘剤であれば任意のものを任意の濃度で使用することができる。具体的には、ヒドロキシプロピルセルロース、アルギン酸ナトリウム、アルギン酸プロピレングリコールエステル、カルボキシビニルポリマー、カルメロースナトリウム、ヒアルロン酸、ヒアルロン酸ナトリウム、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシエチルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリアクリル酸、ポリアクリル酸ナトリウム、ポリアクリル酸部分中和物、ポリビニルアルコール、メチルセルロース、キサンタンガム、コンドロイチン酸、及びコンドロイチン硫酸ナトリウムなどを用いることができる。なかでも、ｂＦＧＦの安定性に対する影響を考慮すると、ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ）、ヒアルロン酸ナトリウム、キサンタンガム、及びコンドロイチン硫酸ナトリウムを好ましく使用することができるが、特にヒドロキシプロピルセルロースを好ましく使用することができる。
【００１５】
これらの増粘剤のほかにも、アラビアゴム、アラビアゴム末、グアガム、グルコノ−δ−ラクトン、ゼラチン、デキストラン７０、デキストリン、トラガント、トラガント末、ポビドン、水アメ、ロジン、ポリオキシエチレン（１６０）ポリオキシプロピレン（３０）グリコール、ポリオキシエチレン（２００）ポリオキシプロピレングリコール（７０）、及びメチルビニルエーテルと無水マレイン酸との共重合体などの増粘剤も使用することができる。
【００１６】
本発明の歯科用粘稠製剤において増粘剤として特に好ましく使用することができるヒドロキシプロピルセルロースは、セルロースのヒドロキシプロピルエーテル誘導体であり、乾燥したものを定量するとき、ヒドロキシプロピル基５３．４〜７７．５％を含む（日本薬局方第１４改正Ｄ）ものが好ましい。ＨＰＣは水に溶解すると粘稠性の液となるが、水溶液にした場合に２５℃においてＥ型粘度計を使用して測定した場合に約２０〜２５，０００mPa・sの粘度を示すＨＰＣであれば、任意の分子量のＨＰＣを上記の粘度を示す濃度で使用することができる。しかし、低濃度で高い増粘性を示す、分子量約１００，０００〜５００，０００のものを好ましく使用することができ、更に好ましくは１１０，０００〜４００，０００のものである。例えば分子量約１１０，０００〜１５０，０００のＨＰＣを使用する場合であれば、日本曹達（株）製のＨＰＣ−Ｍを、製剤全体に対して、好ましくは約２〜１８重量％の割合で、より好ましくは約３〜１０重量％の割合で使用することができる。また、分子量約２５０，０００〜４００，０００のＨＰＣを使用する場合であれば、日本曹達（株）製のＨＰＣ−Ｈを、製剤全体に対して、好ましくは約１〜９重量％の割合で、より好ましくは約２〜６重量％の割合で使用することができる。上記の粘度を達成することができる範囲で、異なる分子量のＨＰＣを適宜混合して使用することもできる。
【００１７】
また、ヒアルロン酸ナトリウム、キサンタンガム、及びコンドロイチン硫酸ナトリウムを増粘剤として使用する場合も、上記の粘度を達成することができる範囲の濃度で使用することができる。例えばヒアルロン酸ナトリウムを使用する場合、分子量約６０万〜９０万のものであれば、約１重量％の濃度で使用することができる。キサンタンガムを使用する場合、分子量約２００万のものであれば、約１重量％の濃度で使用することができる。その他の増粘剤についても、上記の粘度を達成することができる範囲の濃度で使用することができる。
【００１８】
本発明の歯科用粘稠製剤には、必要に応じて更に糖類、ｐＨ調節剤、保存剤、キレート剤、乳化剤、懸濁化剤、安定剤、着色料などの薬学的に許容しうる添加剤を各種含有させることができる。糖類としては、ショ糖、トレハロース等が挙げられ、特にショ糖を好ましく使用することができる。また、本発明の歯科用粘稠製剤のｐＨは、約４．５〜８、特に４．５〜６．５に保持するのが望ましく、このｐＨを保持するためのｐＨ調製剤としては、クエン酸とクエン酸ナトリウム又は酢酸と酢酸ナトリウムからなる緩衝液が挙げられる。防腐剤及びキレート剤としては、それぞれ塩化ベンザルコニウム及びエデト酸ナトリウムが挙げられる。
【００１９】
本発明の歯科用粘稠製剤は、ｂＦＧＦに上記増粘剤を配合し、溶解液に溶解して所定の粘度を有する溶液とすることにより調製することができる。製剤全体に対するｂＦＧＦの比率は、上述したように、好ましくは約０．０００１〜２０重量％、より好ましくは約０．００１〜１０重量％、最も好ましくは約０．０１〜１重量％であり、このような割合になるようにｂＦＧＦを配合する。また、溶解液としては、水を好ましく使用することができる。製剤全体に対する増粘剤の使用比率は、用いる増粘剤の種類により異なるが、溶液の状態で約２０〜２５，０００mPa・sの粘度を示す範囲で決定することができる。例えば増粘剤として分子量約１１０，０００〜１５０，０００のＨＰＣを用いる場合、約２〜１８重量％の割合、好ましくは約３〜１０重量％の割合になるように増粘剤を溶解液に溶解する。また、分子量約２５０，０００〜４００，０００のＨＰＣを使用する場合であれば、約１〜９重量％の割合、好ましくは約２〜６重量％の割合になるように増粘剤を溶解液に溶解する。
【００２０】
本発明の歯科用粘稠製剤を調製するには、例えば、粉末状のＨＰＣにｂＦＧＦの水溶液を添加し、混合することにより、又はＨＰＣを水に溶解することによりＨＰＣ粘稠水溶液を得、これにｂＦＧＦの水溶液を混合するなどの方法を用い、適宜必要に応じて調製することができる。調製のための具体的方法については、以下の実施例に各種具体的に記載するが、これらに限定されず、当業界の技術常識の範囲内で適宜調製することができる。更に、上記のようにして調製した本発明の歯科用粘稠製剤は、ｂＦＧＦの長期安定性を確保するためにその製剤を凍結乾燥し、用時、水を加えて再調製することも可能である。また、ｂＦＧＦは、凍結乾燥状態で保存しておき、用時、ＨＰＣの粘稠水溶液を加え調製してもよい。
【００２１】
したがって、本発明はまた、本発明の歯科用粘稠製剤を調製するためのキットであって、ｂＦＧＦ、増粘剤、必要であれば不活性で無毒性の添加剤、及び溶解液を含むキット、並びに本発明の歯科用粘稠製剤を調製する方法であって、ｂＦＧＦ、増粘剤、及び必要であれば不活性で無毒性の添加剤を溶解液に溶解することを特徴とする方法にも関する。
【００２２】
また、本発明の歯科用粘稠製剤は、適用法によっては、無菌状態であることが必要であるため、調製するにあたっても、予め、ｂＦＧＦ溶液をろ過滅菌したり、ＨＰＣ粉末を放射線滅菌や乾熱滅菌したり、また、ＨＰＣ粘稠液をオートクレーブ滅菌するなどの方法により、無菌状態を確保することができる。
【００２３】
上記の方法により調製した本発明の歯科用粘稠製剤は、軟膏剤、ゲル剤、パスタ剤及び液剤などと同様な方法により、各種歯周疾患の患部へ直接投与することができる。例えば、１８Ｇ程度の太さの注射針を取り付けた２mlの注射筒で粘稠製剤を適量取り、患部に広くおよび大量に投与する場合は、注射針は１８Ｇのままで投与する．また、歯周ポケットのように小さな隙間に投与する場合は、２６Ｇ程度の注射針に付け直して投与することもできる。簡易型注射器具のようなキット製品のリザーバー部分にあらかじめ充填しておき、投与することも可能である。
【００２４】
また、患部に直接又はヘラなどに別に取って塗ることも可能である。それ以外にも、加圧式定量ポンプなどから必要量を取り、患部に直接又はヘラなどで別に取って塗ることが可能である。
【００２５】
本発明の歯科用粘稠製剤を投与する量は、適用する歯周疾患の種類、重症度、罹患範囲、患者の性別、体重などによって適宜変更することができるが、一般的には、ヒトの場合、一回の投与により約０．１〜３０００μg、好ましくは１〜１５００μgのｂＦＧＦが患部に適用される量の製剤を適用するのが好ましい。
【００２６】
本発明の歯科用粘稠製剤は、上述したように歯周病をはじめとして抜歯後及び嚢胞又は口腔がん摘出後の歯周組織の修復、インプラント材の定着促進、う蝕により欠損した象牙質の再生など歯周疾患の治療又は予防を目的として適用することができる。例えば歯周病の場合は、直接患部へ投与することができるが、フラップ手術において歯根面を露出させる場合には、その露出面に、本発明の歯科用粘稠製剤を塗布、注入などする。投与回数は、歯周疾患の種類、重症度などによって異なるが、例えば歯周病におけるフラップ手術において使用する際は、歯根面などの患部に投与した後患部を縫合するため、本製剤は一回投与するのみである。
【実施例１】
【００２７】
以下に、本発明の歯科用粘稠製剤について更に詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。なお、以下の実施例及び試験例において使用するヒトｂＦＧＦとしては、トラフェルミン（遺伝子組換え）を用いた。
【００２８】
実施例１
水４８５mlにＨＰＣ（ＨＰＣ−Ｈ（日本曹達製）、１５．０ｇ）を徐々に添加し、粒子が完全に分散溶解するまで攪拌を続けて、ＨＰＣ粘稠液を得た。アンプルに２mlずつ分注した後融封し、オートクレーブ滅菌した。得られたＨＰＣ粘稠液は、１００８２．０mPa・sの粘度を有していた（２５℃でＥ型粘度計を使用して測定した。また以降の実施例及び試験例においては、特に断らない限り、粘度は実施例１と同じ条件で測定した）。別に、それぞれ０．８９又は２．６７mg/mlのヒトｂＦＧＦを含有するクエン酸塩／ショ糖緩衝液（ｐＨ５．１、１．０ml）をろ過滅菌し、バイアル中で凍結乾燥した。これら凍結乾燥品に、上記の滅菌したＨＰＣ粘稠液（１．０ml）を加えて、攪拌し、静置脱泡を行い、本発明の歯科用粘稠製剤を得た（それぞれ製剤例１ａ（０．８９mg/ml）、製剤例１ｂ（２．６７mg/ml）とする）。
【００２９】
実施例２
水８７mlにＨＰＣ（ＨＰＣ−Ｈ（日本曹達製）、３．０ｇ）およびショ糖９．０ｇを徐々に添加し、粒子が完全に分散溶解するまで攪拌を続けて、ＨＰＣ粘稠液を得た。このＨＰＣ粘稠液を冷却、攪拌しながら、１０．１mg／mlのヒトｂＦＧＦを含有するクエン酸塩緩衝液（ｐＨ５．１、１．０ml）を徐々に添加し、均一になるまで攪拌し、本発明の歯科用粘稠製剤を得た。
【００３０】
実施例３
０．８９、２．６７、又は８．００mg／mlのヒトｂＦＧＦを含有するクエン酸塩／ショ糖緩衝液（ｐＨ５．１、１．０ml）をろ過滅菌し、バイアル中で凍結乾燥した。この凍結乾燥品に注射用水１mlを加えて溶解後、ＨＰＣ（ＨＰＣ−Ｈ（日本曹達製）、３０mg）を徐々に加えて溶解し、本発明の歯科用粘稠製剤を得た。
【００３１】
実施例４
０．８９、２．６７、又は８．００mg／mlのヒトｂＦＧＦを含有するクエン酸塩／ショ糖緩衝液（ｐＨ５．１、１．０ml）をろ過滅菌し、ＨＰＣ（ＨＰＣ−Ｈ（日本曹達製）、３０mg）を徐々に加えて溶解後、バイアル中で凍結乾燥した。この凍結乾燥品に、水（１ml）を加えて、本発明の歯科用粘稠製剤を得た。
【００３２】
実施例５
０．８９、２．６７、又は８．００mg／mlのヒトｂＦＧＦを含有するクエン酸塩／ショ糖緩衝液（ｐＨ５．１、１．０ml）をろ過滅菌し、バイアル中で凍結乾燥した。別に、ＨＰＣ（ＨＰＣ−Ｈ（日本曹達製）、３０mg）を徐々に水（１ml）で溶解後、バイアル中で凍結乾燥した。これら凍結乾燥品に水（０．５mlずつ）を加えて溶解し、両者を混和し、本発明の歯科用粘稠製剤を得た。
【００３３】
実施例６
０．８９、２．６７、又は８．００mg／mlのヒトｂＦＧＦを含有するクエン酸塩／ショ糖緩衝液（ｐＨ５．１、１．０ml）をろ過滅菌し、ＨＰＣ（ＨＰＣ−Ｈ（日本曹達製）、３０mg）を徐々に加えて溶解し、本発明の歯科用粘稠製剤を得た。
【００３４】
実施例７
ＨＰＣ（ＨＰＣ−Ｈ（日本曹達製）、６０mg）に水（１ml）を加えて溶解し、これを、ろ過滅菌した５．３４mg／mlのヒトｂＦＧＦを含有するクエン酸塩／ショ糖緩衝液（ｐＨ５．１、１．０ml）に加えて混和し、本発明の歯科用粘稠製剤を得た。
【００３５】
実施例８
ＨＰＣ（ＨＰＣ−Ｈ（日本曹達製）、３０mg）を徐々に水（１ml）に溶解した後、バイアル中で凍結乾燥した。この凍結乾燥品にろ過滅菌した０．８９、２．６７、又は８．００mg／mlのヒトｂＦＧＦを含有するクエン酸塩／ショ糖緩衝液（ｐＨ５．１、１．０ml）を加えて溶解し、本発明の歯科用粘稠製剤を得た。
【００３６】
実施例９
ＨＰＣ（ＨＰＣ−Ｈ（日本曹達製）、６０mg）を徐々に水（１ml）に溶解した後、バイアル中で凍結乾燥した。この凍結乾燥品に水（１ml）を加えて溶解し、ろ過滅菌した０．８９、２．６７、又は８．００mg／mlのヒトｂＦＧＦを含有するクエン酸塩／ショ糖緩衝液（ｐＨ５．１、１．０ml）を加えて混和し、本発明の歯科用粘稠製剤を得た。
【００３７】
試験例１
本発明の歯科用粘稠製剤中のｂＦＧＦの安定性を検討した。
実施例１で得た製剤（１ａ、１ｂ）を２５℃の恒温室に保存し、経時的にＨＰＬＣ法によりｂＦＧＦの残存率を測定した。その結果を表１に示す。
【００３８】
【表１】
2006225398.tif 000002
【００３９】
表１に示す結果より、本発明の歯科用粘稠製剤は、調製の４２時間後でも、ｂＦＧＦを安定に保持していることが確認された。
【００４０】
試験例２
フランツ型拡散セルを用いて、実施例１で得た製剤（１ｂ）の薬物放出性を、対照としてｂＦＧＦの水溶液（ｂＦＧＦ濃度：０．２６７重量％）を用い、その拡散セルのレセプター相へのｂＦＧＦ放出率を検討した。セルロース製の膜を通過してくるレセプター相のｂＦＧＦの量を経時的にＨＰＬＣ法で定量し、ｂＦＧＦ放出率を求めた。レセプター液にはクエン酸塩／ショ糖緩衝液を使用した。その結果を図１に示した。
図１に示す結果によると、本発明の歯科用粘稠製剤は、ｂＦＧＦ水溶液よりも長時間にわたってｂＦＧＦを局所に貯留させる傾向を示し、長時間にわたって一定速度でｂＦＧＦを放出するパターンを示した。
【００４１】
試験例３
ＳＤ系雄性ラット（７週齢）の左後肢の腓骨近傍に、125Ｉラベル化ｂＦＧＦを含有する本発明の歯科用粘稠製剤（ｂＦＧＦ濃度：０．９７mg/ml；ＨＰＣ濃度：３％；粘度：１０４２３mPa・s）又は125Ｉラベル化ｂＦＧＦ水溶液を筋肉内投与（５０μl）した。ｂＦＧＦ投与量は、ラット１匹当たり４８．５２μg、放射ラベル化ｂＦＧＦとしては、１匹当たり２６４．２９kBqであった。投与１５分後、３０分後及び６時間後に投与部位での125Ｉラベル化ｂＦＧＦを測定した。投与した組織中の放射能残存率を図２に示した。各値は、３例の平均±標準偏差を表す。
図２に示す結果によると、本発明の歯科用粘稠製剤を筋肉内投与すると、ｂＦＧＦ水溶液を投与した場合と比べて、ｂＦＧＦの血中への移行が遅く、本発明の粘稠製剤を投与されたラットでは、投与１５分後でも、放射ラベル化ｂＦＧＦの９０．６％が投与部位に残存しており、ｂＦＧＦ水溶液を投与した場合と比較すると、本発明の製剤を投与した方が、投与部位におけるｂＦＧＦ残存率が有意に高かった(０．０１＜ｐ≦０．０５、Studentのt検定)。また、投与６時間後まで水溶液よりも本発明製剤の方が、投与部位でのｂＦＧＦの残存率が高かった。
【００４２】
試験例４
比放射能約２５kBq/μgの125Ｉラベル化ｂＦＧＦを用い、ウサギの右側下顎骨の欠損部位に、以下の表２に示す組成の本発明の歯科用粘稠製剤又は125Ｉラベル化ｂＦＧＦ水溶液５０μlを投与し、投与６時間後の125Ｉラベル化ｂＦＧＦの残存率を測定した。
【００４３】
【表２】
2006225398.tif 000003
【００４４】
具体的には、ウサギをネンブタール麻酔下（５０mg/ml溶液を約３ml投与）に、腹ばいに保持し、キシロカインにより局所麻酔し（約２０mg/ml溶液を約１ml投与）、切歯から臼歯に向けて右側の下顎骨に沿って歯肉を切開し、骨膜を剥離して右側下顎骨の下顎体切歯部に２壁性欠損を作成した（頬舌幅：約４mm；近遠心幅：約８mm；深さ：約４mm）。止血後、本発明の歯科用粘稠製剤又は125Ｉラベル化ｂＦＧＦ水溶液５０μlを右側下顎骨の欠損部位に投与し、３０秒間静止してから、切開した歯肉を欠損部位にかぶせて縫合した。投与６時間後に全採血後、右側下顎骨（欠損部位を含む右切歯から前臼歯の手前まで）および切開・縫合した歯肉を摘出し、γカウンターで放射活性を測定した。投与直後に対する投与６時間後の125Ｉラベル化ｂＦＧＦの残存率（％）を表３に示すとともに、図３に示す。
【００４５】
【表３】
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【００４６】
上記の結果より、ｂＦＧＦ水溶液を投与した場合に比べて、本発明の粘稠製剤を投与した場合、投与６時間後でも、投与部位、特に右歯肉にｂＦＧＦが高濃度で残存していることが認められ、この残存率は、本発明の粘稠製剤に含まれるＨＰＣ濃度が高いほど高かった。これらの結果から、本発明の粘稠製剤は、ｂＦＧＦ水溶液に比べて、投与後も長時間にわたって投与部位に高濃度にｂＦＧＦを残存させることが示された。
【産業上の利用可能性】
【００４７】
本発明の歯科用粘稠製剤は、塩基性線維芽細胞増殖因子（ｂＦＧＦ）を有効成分として含有し、更に増粘剤を含有することにより一定の粘度を有する。その結果、有効成分のｂＦＧＦが物理化学的に安定に保持され、歯周病などの各種歯周疾患の処置剤として患部に適用する際には、疾患部位に均一に塗布することができ、患部への刺激や異物感が少なく、適用された製剤が適用部位から流れ落ちることなく比較的長時間貯留することにより、製剤に含まれるｂＦＧＦが安定して患部に放出され、その結果として優れた治療効果が得られる。くわえて、本発明の製剤は、流動性があることから疾患部の凹凸や隙間などにも対応し、正確に投与することが可能である。
【図面の簡単な説明】
【００４８】
【図１】図１は、本発明の歯科用粘稠製剤及びｂＦＧＦ水溶液からのｂＦＧＦの放出曲線を示す図である。
【図２】図２は、本発明の歯科用粘稠製剤及びｂＦＧＦ水溶液をラットに筋肉内投与後の組織中125Ｉラベル化ｂＦＧＦの残存率を示す図である。
【図３】図３は、本発明の歯科用粘稠製剤及びｂＦＧＦ水溶液をウサギ下顎骨欠損部位に投与した場合の投与直後に対する投与６時間後の125Ｉラベル化ｂＦＧＦの残存率（％）を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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