(57)【要約】【課題】安全性の確立した天然物由来の抽出物であって、女性ホルモン様作用剤を示す抽出物を機能性食品へ適用することによって、骨粗鬆症、更年期障害といった女性ホルモン作用に関連する各種の障害を改善する新規な食用組成物を提供することである。【解決手段】グァバより抽出されたポリフェノールからなることを特徴とする、女性ホルモン様作用剤、およびこの女性ホルモン様作用剤を有効成分として含有することを特徴とする、食用組成物を提供する。また、グァバより抽出されたポリフェノールからなることを特徴とする、抗骨粗鬆症剤や、更年期障害の改善・治療剤を提供する。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
グァバより抽出されたポリフェノールを含有することを特徴とする、女性ホルモン様作用剤。
【請求項２】
抗骨粗鬆症剤であることを特徴とする、請求項１記載の女性ホルモン様作用剤。
【請求項３】
更年期障害の改善・治療剤であることを特徴とする、請求項１記載の女性ホルモン様作用剤。
【請求項４】
前立腺ガンおよび乳ガンの予防・治療剤であることを特徴とする、請求項１記載の女性ホルモン様作用剤。
【請求項５】
前記ポリフェノールが、グァバ葉を原料とし、濃度３０〜８０重量％の含水有機溶剤を溶出溶媒とし、クロマトグラフィーによって溶出されたポリフェノール含有画分であることを特徴とする、請求項１〜４のいずれか一つの請求項に記載の女性ホルモン様作用剤。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれか一つの請求項に記載の女性ホルモン様作用剤を有効成分として含有することを特徴とする、食用組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、女性ホルモン様作用を有する抗骨粗鬆症剤、更年期障害の改善・治療および前立腺ガン、乳ガンの予防・治療剤として利用可能な生理活性を有する機能性食品や食品添加物に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
近年、更年期障害などの生活習慣病患者が増加してきており、予防の観点から食事が見直されてきている。エストロゲンは、女性ホルモンの総称であり、女性の無月経、無排卵周期症、機能性子宮出血、子宮発育不全等の治療に用いられている。
【０００３】
植物中にも女性ホルモン様作用を有する物質が含まれていることが知られている。例えば、豆類中では、ゲニステイン、ダイゼイン、ミロエストロール等のイソフラボンが強いエストロゲン作用活性を有することが報告されている（特許文献１）。さらに、これらのイソフラボンは骨粗鬆症や婦人科疾患の予防に効果があることが報告されている。また、最近ではケール等の植物よりエストロゲン作用が見出されている（特許文献２）。
【特許文献１】特許第3014145
【特許文献２】特開2003―277274
【０００４】
現在使用されているエストロゲン作用剤は、副作用を有することが知られており、長期間使用すると乳ガンや子宮ガンなどを発現する危険性がある。
【０００５】
骨粗鬆症は骨量の減少することにより骨が脆くなる病気である。治療方法の基本的な考え方は、骨吸収の抑制もしくは骨形成の促進が考えられる。エストロゲンはこの両作用を併せ持ち、骨粗鬆症の進行を抑制する。しかしながら、腹部膨満感・悪心などの消化器症状、乳ガン、子宮ガンの発生などの副作用が認められている。従って、これらの副作用を軽減させたエストロゲン作用剤が望まれている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
最近は、生活習慣病など種々の疾病に対する予防、改善効果をもつものとして機能性食品が注目されている。機能性食品は、クロレラ、ローヤルゼリー、あるいはアガリクスなどといった天然成分を含み、この天然成分の生理活性により人の免疫力や自然治癒力などを高め、病気の予防・改善を図るものである。
【０００７】
そこで、安全性の確立した天然物由来の抽出物であって、女性ホルモン様作用を示す抽出物があれば、この抽出物を機能性食品へ適用することによって、骨粗鬆症、更年期障害といった女性ホルモン作用に関連する各種の障害を改善する新規な食用組成物を提供できるはずであり、このような食用組成物は市場において望まれている。
【０００８】
本発明の課題は、安全性の確立した天然物由来の抽出物であって、女性ホルモン様作用剤を示す抽出物を機能性食品へ適用することによって、骨粗鬆症、更年期障害といった女性ホルモン作用に関連する各種の障害を改善する新規な食用組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明者らは、上記の課題に鑑み研究を進めた結果、フトモモ科バンジロウ属のグァバ（学名：Psidium  guajava）より抽出、精製されたポリフェノール含有物は、女性ホルモン様作用活性を有しており、抗骨粗鬆症剤、更年期障害の改善・治療剤、前立腺ガンおよび乳ガンの予防・治療剤として有用なことを見出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】
則ち、本発明は、産業上有用な下記の発明を含むものである。
Ａ）グァバより抽出、精製された、ポリフェノールを含有する女性ホルモン様作用剤である。
Ｂ）グァバの好ましくは葉より抽出、生成されたポリフェノールを含有する女性ホルモン様作用剤。
Ｃ）グァバより抽出、精製されたポリフェノールを含有する抗骨粗鬆症剤。
Ｄ）グァバより抽出、精製されたポリフェノールを含有する更年期障害の改善・治療剤。
Ｅ）グァバより抽出、精製されたポリフェノールを含有する前立腺ガンおよび乳ガンの予防・治療剤。
Ｆ）上記Ａ）〜Ｅ）記載の組成物を有効成分とする食用組成物。
【発明の効果】
【００１１】
グァバより抽出、精製されたポリフェノールは、α−アミラーゼ阻害剤や美白剤等の食品素材として利用されていることから、安全性の面で何ら問題ない。このように安全な抽出物を女性ホルモン様作用剤として適用することで、安全性が高く、継続服用可能な食用組成物を提供できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の女性ホルモン様作用剤は、グァバから精製されるものである。グァバの由来や産地は特に限定されない。また、グァバ葉が特に好ましい。
この抽出、精製方法は特に限定されないが、以下の方法が特に好ましい。
【００１３】
即ち、グァバ葉の乾燥物を裁断し、この乾燥物からクロマトグラフィーによって含水有機溶剤を用いてポリフェノール含有画分を溶出させる。
特に好適な実施形態においては、グァバ葉を原料とし、濃度３０〜８０重量％の含水有機溶剤を溶出溶媒とし、クロマトグラフィーによってポリフェノール含有画分を溶出させる。
好ましくは、グァバ葉からいったん予備抽出物を得、この予備抽出物を溶媒に溶解し、この溶液を、含水有機溶剤を溶出溶媒とするクロマトグラフィーに供する。
【００１４】
ここで、グァバ葉から抽出物を得る予備抽出工程においては、抽出方法は特に限定されない。例えば抽出溶剤として、水、含水有機溶剤、水溶性有機溶剤を利用できる。このうち含水有機溶剤が、高濃度のポリフェノール含有画分を得るという観点から特に好ましい。
【００１５】
予備抽出工程において、含水有機溶剤あるいは水溶性有機溶剤として利用できる有機溶剤は、特に限定されないが、エタノール、メタノール等のアルコール類、アセトン等のケトン類が好ましく、エタノール、メタノール、アセトンが好ましく、エタノールが最も好ましい。また二種類以上の有機溶剤の混合物であってもよい。
【００１６】
予備抽出工程においては、含水有機溶剤における有機溶剤の重量比率（複数の有機溶剤を使用する場合にはその合計比率）は限定されないが、高濃度のポリフェノール含有画分を得るという観点からは３０重量％以上、８０重量％以下が好ましく、４０重量％以上、６０重量％以下とすることが更に好ましい。
【００１７】
予備抽出工程における抽出温度は特に限定されないが、ポリフェノール含有画分における有効成分の濃度を向上させるためには、４０℃以上が好ましい。また、温度の上限も特にないが、有効成分の濃度を向上させるという観点からは、例えば１３０℃以下とすることができ、更に好ましくは１００℃以下とする。また、含水有機溶剤によって還流抽出することが最も好ましい。
【００１８】
予備抽出段階における抽出時間は特に限定されないが、ポリフェノールの濃度を向上させるという観点からは、例えば３０分以上とすることが好ましい。また、長時間抽出しても有効成分の収量は必ずしも増加しないので、この観点からは、抽出時間を１８０分以下とすることが好ましい。
【００１９】
好適な実施形態においては、予備抽出工程において得られた予備抽出物を溶媒に溶解し、溶液を得る。この溶液をクロマトグラフィーを用いた本抽出工程に供する。
ここで、予備抽出物の溶解に使用する溶剤は、予備抽出物の溶解が可能であれば特に限定されないが、水、あるいは含水有機溶剤が好ましい。含水有機溶剤に使用可能な有機溶剤は、前述した予備抽出用の有機溶剤を例示できる。
【００２０】
本抽出工程において使用するクロマトグラフィーの種類は特に限定されない。例えば、予備抽出物をクロマトグラフィーの媒質に吸着させた後に、含水有機溶剤を用いてポリフェノール含有画分を溶出させることができる。しかし、好適な実施形態においては、予備抽出物をいったんクロマトグラフィーの媒質に吸着させた後、水を流して未吸着物を洗浄し、次いで含水有機溶剤を媒質に流してポリフェノール含有画分を溶出させる。
【００２１】
クロマトグラフィーの種類としては、いわゆるイオン交換クロマトグラフィー、ゲルろ過、疎水クロマトグラフィー、逆相クロマトグラフィーを例示できるが、疎水クロマトグラフィーが、高濃度のポリフェノール含有画分を得るという点で特に優れている。
【００２２】
こうした疎水クロマトグラフィーを構成する充填剤は特に限定されないが、合成樹脂として、ポリスチレン系合成吸着剤、修飾ポリスチレン系合成吸着剤、メタクリル系合成吸着剤を例示できる。また合成樹脂を修飾する場合には修飾官能基としては臭素基を例示できる。商品名を例示すると、三菱化学株式会社製の「ダイヤイオンHP-20」が特に好ましい。
【００２３】
本方法では、クロマトグラフィーを用いた抽出時に溶出溶媒として含水有機溶剤を使用する。この含水有機溶剤を構成する有機溶剤の種類は特に限定されないが、エタノール、メタノール等のアルコール類、アセトン等のケトン類が好ましく、エタノール、メタノール、アセトンが好ましく、エタノールが最も好ましい。また二種類以上の有機溶剤の混合物であってもよい。
【００２４】
クロマトグラフィーを用いた抽出時には、含水有機溶剤における有機溶剤の重量比率（複数の有機溶剤を使用する場合にはその合計比率）は、３０重量％以上、８０重量％以下とすることが好ましい。これによって、抗酸化性あるいはα−アミラーゼ阻害活性の高いポリフェノール含有画分が得られる。この観点からは、含水有機溶剤における有機溶剤の重量比率は、４０重量％以上とすることが更に好ましく、また、６０重量％以下とすることが更に好ましい。
【００２５】
このようにして、本発明の女性ホルモン様作用剤が得られる。この女性ホルモン様作用剤のポリフェノール含有量は、好ましくは重量比３０重量％以上、さらに好ましくは５０重量％以上、最も好ましくは７０重量％以上である。なお、本発明の女性ホルモン様作用剤には、ポリフェノールの他、残部は，食物繊維、タンパク質、糖質、ミネラル類（カルシウム、鉄、カリウム、マグネシウム、ナトリウム等）が含まれていて良い。
【００２６】
クロマトグラフィーを用いた抽出方法は、上記方法に限定されるものではなく、種々の変更が可能である。例えば、最初に、アセトン、メタノール、エタノール等の有機溶剤を用いて抽出処理し、ついで、逆相吸着剤、イオン交換樹脂、合成吸着剤を用いたカラムクロマトグラフィーで、含水有機溶剤を用いて分画処理し、濃縮画分を採取し、目的物である本発明のポリフェノール含有生成物を調整することができる。
【００２７】
このように、本発明の女性ホルモン様作用剤は、上記抽出および精製方法によりグァバ葉から抽出・精製することができるが、上記抽出および精製方法に限定されるものではなく、種々の変更が可能である。例えば、アセトン、メタノール、エタノール等の有機溶剤を用いて抽出処理し、ついで、逆相吸着剤、イオン交換樹脂、合成吸着剤を用いたカラムクロマトグラフィーで分画処理し濃縮画分を採取し、目的物である女性ホルモン様作用剤を調整することができる。
【００２８】
上述した本発明の女性ホルモン様作用剤は、エストロゲン様作用活性、子宮重量増加作用といった有用な生理活性を有することから、女性ホルモン様作用剤、抗骨粗鬆症剤、更年期障害の改善・治療剤、前立腺ガンおよび乳ガンの予防・治療剤として利用可能であり、特に機能性食品などに好適に用いることができる。
【００２９】
本発明品の食品および食品添加物の形態としては、固形食品、ゲル状食品、飲料などが挙げられ、具体的には打錠、カプセル錠、顆粒品などの健康食品タイプの形態や、パン、クッキー、飴、ゼリー、ヨーグルト、そば、ドリンク、お茶などの食品形態にする事ができる。
【００３０】
本発明の女性ホルモン様作用剤を配合してなる食品組成物について説明する。本発明の女性ホルモン様作用剤は、必要に応じて精製した後、賦形剤などの添加剤と混合して例えば粉末、顆粒、錠剤、カプセル剤などの形態で製品化することができる。さらに本女性ホルモン様作用剤は、味、臭いに特異な厭味がないことから、経口により摂取することが可能である。投与量は、通常、成人で女性ホルモン様作用剤の重量として１日あたり２０ｍｇ以上〜６００ｍｇ以下を数回に分けて服用するのが適当である。そのため、本発明で得られる女性ホルモン様作用剤それ自体、あるいは該女性ホルモン様作用剤食品に配合、添加し提供することができる。
【００３１】
本発明において錠剤、カプセル剤、顆粒剤、細粒剤としての経口剤は、例えば、デンプン、乳糖、白糖、マンニット、カルボキシメチルセルロース、コーンスターチ、無機塩類等を用いて常法に従って製造される。これら製剤中のポリフェノール含有組成物の配合量は特に限定されるものではなく適宜設計できる。この種の製剤には本発明の組成物の他に、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、流動性促進剤、矯味剤、着色剤、香料等を適宜に使用することができる。
【００３２】
ここで、結合剤としてデンプン、デキストリン、アラビアゴム末、ゼラチン、ヒドロキシプロピルスターチ、メチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース、結晶セルロース、エチルセルロース、ポリビニルピロリドン、マクロゴール等を例示できる。崩壊剤としてはデンプン、ヒドロキシプロピルスターチ、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロースカルシウム、カルボキシメチルセルロース、低置換ヒドロキシプロピルセルロース等を例としてあげることができる。流動性促進剤では、軽質無水ケイ酸、乾燥水酸化アルミニウムゲル、合成ケイ酸アルミニウム、ケイ酸マグネシウム等を例としてあげることができる。また、ポリフェノール含有組成物は懸濁液、エマルション剤、シロップ剤、エリキシル剤としても投与することができ、これらの各種剤形には、矯味矯臭剤、着色剤を含有させてもよい。
【００３３】
本発明の女性ホルモン様作用剤の好適な態様は食用組成物である。すなわち、前述のようにして得られる女性ホルモン様作用剤は、これをそのまま液状、ゲル状あるいは固形状の食品、例えばジュース、清涼飲料、茶、スープ、豆乳、サラダ油、ドレッシング、ヨーグルト、ゼリー、プリン、ふりかけ、育児用粉乳、ケーキミックス、粉末状または液状の乳製品、パン、クッキー等に添加したり、必要に応じてデキストリン、乳糖、澱粉等の賦形剤や香料、色素等とともにペレット、錠剤、顆粒等に加工したり、またゼラチン等で被覆してカプセルに成形加工して健康食品や栄養補助食品等として利用できる。
【００３４】
これらの食品類あるいは食用組成物における本発明の女性ホルモン様作用剤の配合量は、当該食品や組成物の種類や状態等により一律に規定しがたいが、約０．０１〜５０重量％、より好ましくは０．１〜３０重量％である。配合量が０．０１重量％未満では経口摂取による所望の効果が小さく、５０重量％を超えると食品の種類によっては風味を損なったり当該食品を調製できなくなる場合がある。なお、本発明の女性ホルモン様作用剤は、これをそのまま食用に供してもさしつかえない。
【実施例】
【００３５】
以下に本発明の女性ホルモン様作用剤について具体的に説明する。
（実施例１：グァバ葉由来抽出物と精製物の製造）
原料のグァバ葉からポリフェノール含有組成物を精製した。まず、グァバ葉の乾燥物100gを細断後、1000mlの５０％含水エタノールを加え、還流下、６０℃で２回抽出行った。抽出液はろ過後、減圧下で濃縮を行い、グァバ葉抽出物21gを得た。
【００３６】
次に得られた上記抽出物を水に溶解し、疎水クロマトグラフィー用樹脂150ml（ダイヤイオンＨＰ−２０、三菱化学社製）に注入した。その後、水で未吸着物質を洗浄・除去し、５０％含水エタノールで溶出されるポリフェノール精製物に分画した。
上記ポリフェノール精製物は、フォーリン・デニス法によりポリフェノール含量を解析した。その結果、グァバ葉抽出物が42％（ポリフェノール含量）、精製物が80％（ポリフェノール含量）であった。
【００３７】
（実施例２：上記抽出物、精製物のエストロゲン様作用活性）
上記方法により得られた女性ホルモン様作用剤のエストロゲン様作用活性を調べた。エストロゲン受容体（αおよびβ）はヒト受容体の発現細胞（リコンビナント）を使用した。
【００３８】
上記エストロゲン受容体に対する阻害作用の測定は、常法により行った。すなわち、エストロゲン受容体はヒトの発現細胞を用い、蛋白質濃度が6mg／mlになるように調製したサイトゾル画分をリン酸緩衝液（ｐH7.4）に溶解し、2.5pM［３H］で標識した17-β-エストラジオールと実施例１で得られたグァバ葉抽出物および精製物を20μg／mlとなるように添加し、０℃、１６時間反応させた。非特異的結合試験は、3,000倍過剰量のジスチルベステロールの存在下で行った。
【００３９】
遊離したステロイドや試料サンプルは、デキストリン処理した活性炭懸濁液を用いて、４℃で５分間処理することにより除去した。その後、5,０００gで遠心分離し、上清にシンチレーションカクテル溶液を３００μｌ加えてシンチレーションカウンターにより測定した。下式により阻害率を測定した。
【００４０】
阻害率（％）＝１００―［（Ａ１−Ｂ）／（Ａ０−Ｂ）］Ｘ１００
Ａ１：既知量の供試物質と［３H］標識17-β-エストラジオールが共存している状態での［３H］標識17-β-エストラジオールのヒトのエストロゲン受容体に対する結合量を表している。
Ａ０：供試物質を除いた時の［３H］標識17-β-エストラジオールのヒトのエストロゲン受容体に対する結合量を表している。
Ｂ：過剰のジスチルベステロール存在下での［３H］標識17-β-エストラジオールのヒトのエストロゲン受容体に対する結合量を表している。
【００４１】
【表１】
2006104128.tif 000002
【００４２】
【表２】
2006104128.tif 000003
【００４３】
（実施例３：上記抽出物、精製物の子宮重量試験）
次に、抽出物および精製物の子宮重量試験の検討を行った。
メスのＩＣＲマウスを用い（１群５匹）、実施例１記載のグァバ葉精製物を500mg／kgと1.500mg/kgの２用量、およびβ−エストロジオール３ベンゾエートを陽性対照として30μg/mlとなるように経口投与（３日間）した。最終投与２４時間後、各マウスの子宮の湿重量を測定した。
【００４４】
【表３】
2006104128.tif 000004
【００４５】
以上のように、本発明の女性ホルモン様作用剤は、エストロゲン様作用活性といった有用な生理活性を有することから抗骨粗鬆症剤、更年期障害の改善・治療剤、前立腺ガンおよび乳ガンの予防・治療剤等として利用可能であり、特に機能性食品や機能性食品添加物に好適に用いることができる。