(57)【要約】【課題】クロマトグラフィー用カラムにおける劣化の１つであるトップオフ現象が起こりにくいカラムを簡便に製造することを課題とする。【解決手段】カラムにスラリーを加圧充填した後、パッカーから外した際に、カラム先端から盛り上がったゲルをナイフやヘラですり切らず、そのままエンドフィッティングを締める、若しくは外周上をフッ素系樹脂など耐水性樹脂で囲み、カラム内壁と密着するようにしたカラム内径と同径のフリッツをカラム先端に乗せてエンドフィッティングを締め込むことにより、充填剤充填層に圧力をかけて充填状態を密にし、トップオフ現象を防止する。【選択図】    図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
スラリー加圧充填後のカラム先端にゲルを溢れさせ、盛り上がったゲルを成型加工せずにエンドキャップをすることを特徴とするクロマトグラフィー用カラムの製造方法。
【請求項２】
請求項１記載のクロマトグラフィー用カラムの製造方法において、盛り上がったゲルを成形加工した上で、カラム内径と同径のフリッツを用いて充填剤を押圧することを特徴とするクロマトグラフィー用カラムの製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はクロマトグラフィー用カラムに充填剤を充填する方法に関する分野に属するものである。
【背景技術】
【０００２】
イオン交換カラムの劣化は官能基の脱離、サンプルの非特異吸着、トップオフといった現象によって生じている。官能基の脱離やサンプルの非特異吸着は長期間にわたって徐々に生じる劣化であるが、トップオフ現象は比較的早期に見られる劣化である。このトップオフ現象はカラムの充填状態、特にカラム先端部分の充填状態と密接に関係している。
【０００３】
従来クロマトグラフィー用カラムは、充填した粗密度な充填剤を、液の流れによって高密度に充填させる通液加圧充填（スラリー充填法）によって作製される。この通液加圧充填法は、安定した高密度な充填剤充填層が得られ、かつカラムの性能を著しく高めることのできる優れた方法の１つとして、現在カラム充填法の主流となっている。
【０００４】
しかし通液による充填剤充填層の形成段階では、リザーバー取り外し時の充填剤充填層の盛り上がりを考慮した力を必要とするので、通液流速は分離操作時の２〜１０倍の加圧力が不可欠となる。
【０００５】
またリザーバー取り外し段階では圧縮された充填剤充填層の盛り上がりが生じるが、この盛り上がり状態は充填操作毎に異なり、人為的に制御することは困難である。また、リザーバー取り外し段階からエンドフィッティング装着段階までの間の操作を時間的に管理することも容易ではない。
【０００６】
これらのことは結果的に充填後においてカラムに充填されている充填剤の量に影響し、トップオフといった使用開始から短時間でおこる早期劣化の原因となっている。
【特許文献１】特開２０００−１４６９３６
【特許文献２】特開２０００−３４６８３３
【特許文献３】第２７０７７８０
【特許文献４】第２５９５０１５
【特許文献５】特公平７−２４７２６
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従来の通液加圧充填法の問題点を解決するため可動栓カラムといった充填方法が考案されている。しかしこれらの方式では可動部分を一定の速度で制御するため、さらに充填剤充填層を圧縮するための大きな荷重をもたらす特別な機構が要求される。また、可動により生じる空隙の分カラムの大きさを大きくしなければならず、またより複雑な構造のエンドフィッティングが要求される。
本発明は充填剤の充填状態が変化することによるトップオフ現象を防止する方法において、充填に必要な機構を増設することなく、さらにカラムの構造を変更することなく簡便にカラムの早期劣化を防ぐ充填方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
トップオフ現象を防止するためには、カラム先端の充填状態を密にする必要がある。しかし通液加圧充填法では充填時にいくら加圧しても、パッカーを外した時点でカラム先端部分の充填状態は疎となってしまう。そのため、カラム先端部分のゲルをナイフ等で成形しても充填状態は疎のままとなり、これがトップオフ現象を引き起こす。
【０００９】
図１は本発明を示したものである。従来のようにゲル先端をナイフ等で成形するのではなく、カラム入り口（１）に盛り上がったゲル（２）をそのままエンドフィッティング（３）を締めて押し込むことによって充填剤充填層に圧力をかけて充填状態を密にする方法である。また、この際に用いるカラム形状はねじ込み式カラムよりフェラル式カラムの方が好適である。
【００１０】
また、図２のようにカラム先端のゲルを成形した後（１）、カラム内径と同径のフリッツ（４）をカラム入り口に入れ、ゲルを押し込むことによって充填剤充填層に圧力をかける方法によっても同様の問題を解決できる。その際、フリッツの外周（５）はフッ素系樹脂など耐水性のある樹脂で囲んでおき、カラム内壁と密着できるようにしておく。フリッツが厚いとカラム圧が高くなるため、フリッツは薄い方が望ましい。若しくは、エンドフィッティングのフリッツがカラム管内部に入り込むような構造にエンドフィッティングを加工しても差し支えない。
【発明の効果】
【００１１】
本発明によれば、充填剤の充填状態が変化することによるトップオフ現象が防止でき、早期の劣化が生じにくいカラムを作製することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
図３に示したように、適当な塩を含む移動相（６）を送液ポンプ（７）とサンプル注入バルブ（８）を用いてカラム（９）に通し、検出器（１０）でピーク形状を検出する様式の液体クロマトグラフィー。
【実施例１】
【００１３】
ゲルは平均粒子径５μmの多孔性（１０００Å）シリカゲルにポリアミノ酸をコーティングし、陽イオン交換ゲルとしたものを用いた。
【００１４】
内径４．６ｍｍ長さ３５ｍｍのカラムをつないだパッカーにスラリーゲル溶液を注入し、２００Kg／cm２で５分間定圧充填を行った。流速は１１〜１４mL／minであった。送液ポンプ停止後、パッカーからカラムを外し、カラム先端に約２ｍｍゲルが盛り上がっていることを確認した。その状態のまま、エンドフィッティングをかぶせ、スパナで締め込んだ。
【００１５】
完成したカラムを用いて、一例としてヘモグロビンの分析測定を４８時間連続して繰り返した。この時のグリコヘモグロビンの分離状態の変化を図４に示す。
【実施例２】
【００１６】
実施例１と同様に充填作業を行い、カラム先端に盛り上がったゲルをヘラですり切り除去した。カラム内径と同径のフリッツをカラム先端に乗せてその上からエンドフィッティングをかぶせ、スパナで締め込んだ。その後、実施例１と同じ条件でヘモグロビンの分析測定を繰り返した。この時の波形変化を図５に示す。
【００１７】
対照方法として、フリッツをカラム先端に乗せることなくエンドフィッティングをかぶせてスパナで締める方法を実行した。その後、実施例１と同じ条件でグリコヘモグロビンの分析測定を繰り返した。その際の波形の変化を図６に示す。
この例により、先端部分の充填状態が密でない場合は早期の劣化が生じることがわかる。
【００１８】
実施例２と同様に充填作業を行い、カラム先端部分のゲルをすり切った後、さらに先端部分のゲルをヘラで乱した。その後、フリッツをカラム先端に乗せ、エンドフィッティングをかぶせてスパナで締め込んだ。その後、実施例１と同じ条件でヘモグロビンの分析測定を繰り返した。この時の波形変化を図７に示す。
【００１９】
このように、カラムの充填状態が乱れていても、先端部分の充填状態を密にすれば、劣化が生じにくくなることがわかる。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】本発明のうち、ゲル先端を成形しない方法を説明する説明図である。
【図２】本発明のうち、ゲル先端を成形し、フリッツを入れる方法を説明する説明図である。
【図３】測定システム
【図４】本発明のうち、ゲル先端を成形しない方法によるカラムの劣化の評価結果である。
【図５】本発明のうち、ゲル先端を成形し、フリッツを入れる方法によるカラムの劣化の評価結果である。
【図６】本発明の比較として、ゲル先端を成形してエンドフィッティングを締めたカラムの劣化の評価結果である。
【図７】本発明のうち、ゲル先端を乱してフリッツを入れたカラムの劣化の評価結果である。
【符号の説明】
【００２１】
１・・・カラム入口
２・・・ゲル
３・・・エンドフィッティング
４・・・フリッツ
５・・・耐水性樹脂
６・・・移動相
７・・・送液ポンプ
８・・・サンプル注入バルブ
９・・・カラム
１０・・・検出器
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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