(57)【要約】【課題】  光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸およびその対掌体エステルの効率的な製造方法を提供する。また、新規な化合物である２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸およびそのエステルを提供する。【解決手段】  ２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルの光学異性体混合物に該化合物を不斉加水分解する酵素を作用させることにより、光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸およびその対掌体エステルを効率的に製造する。【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（１）：
【化１】
2006050990.tif 000012
（式中、Ｒ1は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数６〜２０のアリール基、炭素数７〜２０のアラルキル基、炭素数２〜１０のアシル基、アリル基、メタンスルホニル基、ｐ−トルエンスルホニル基、又は複素環基を示し、Ｒ2及びＲ3は炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数６〜２０のアリール基、炭素数７〜２０のアラルキル基を示す。）で表される２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルの光学異性体混合物に、該化合物の不斉加水分解能を有する酵素を作用させることを特徴とする、一般式（２）：
【化２】
2006050990.tif 000013
（式中、Ｒ1及びＲ2は前記と同じ基を示す。＊は不斉炭素原子を示す。）で表される光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸またはその塩、およびその対掌体をなす一般式（３）：
【化３】
2006050990.tif 000014
（式中、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は前記と同じ基を示し、＊は不斉炭素原子を示す。）で表される光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルの製造方法。
【請求項２】
Ｒ1が炭素数１〜１０のアルキル基である請求項１に記載の製造方法。
【請求項３】
Ｒ1がメチル基である請求項１に記載の製造方法。
【請求項４】
Ｒ2及びＲ3が炭素数１〜１０のアルキル基である請求項１〜３のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項５】
不斉加水分解能を有する酵素が２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルのＳ体を優先的に加水分解する酵素であり、生成する光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸またはその塩の立体配置がＳ体であり、且つ光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルの立体配置がＲ体である請求項１〜４のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項６】
酵素が、微生物、動物または植物起源のリパーゼ、エステラーゼもしくはプロテアーゼである請求項１〜５のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項７】
酵素が、アクロモバクター（Achromobacter）属、アルカリゲネス（Alcaligenes）属、アスペルギルス（Aspergillus）属、バークホルデリア（Burkholderia）属、キャンディダ（Candida）属、ゲオトリカム（Geotrichum）属、ムコール（Mucor）属、ペニシリウム（Penicillium）属、シュードモナス（Pseudomonas）属、リゾプス（Rhizopus）属、リゾムコール（Rhizomucor）属、リゾパス（Rhizopus）属及びサーモマイセス（Thermomyces）属の微生物、豚膵臓もしくは小麦麦芽を起源とするリパーゼ、アスペルギルス（Aspergillus）属、バシラス（Bacillus）属もしくはリゾプス（Rhizopus）属の微生物もしくは牛膵臓を起源とするプロテアーゼ、アスペルギルス（Aspergillus）属の微生物を起源とするアシラーゼである請求項１〜５のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項８】
酵素が、キャンディダ（Candida）属由来のリパーゼである請求項１〜５のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項９】
酵素が、キャンディダ・シリンドラッシ（Candida cylindracea）もしくはキャンディダ・ルゴーサ（Candida rugosa）由来のリパーゼである請求項１〜５のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１０】
酵素が、リパーゼＡＹＳ（天野エンザイム社製）、リパーゼＭＹ（名糖産業社製）もしくはリパーゼＯＦ（名糖産業社製）である請求項１〜５のいずれか１項に記載の製造方法。
【請求項１１】
一般式（４）：
【化４】
2006050990.tif 000015
（式中、Ｒ4は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｒ2及びＲ3は炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数６〜２０のアリール基、炭素数７〜２０のアラルキル基を示す。）で表される２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステル。
【請求項１２】
２位の絶対配置がＲの光学活性体である請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ1がメチル基、Ｒ2及びＲ3が炭素数１〜１０のアルキル基である請求項１１または１２に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ1、Ｒ2及びＲ3がメチル基である請求項１１または１２に記載の化合物。
【請求項１５】
一般式（５）：
【化５】
2006050990.tif 000016
（式中、Ｒ4は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｒ2は炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数６〜２０のアリール基、炭素数７〜２０のアラルキル基を示す。＊は不斉炭素原子を示す。）で表される２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸またはその塩。
【請求項１６】
２位の絶対配置がＳの光学活性体である請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ1がメチル基、Ｒ2が炭素数１〜１０のアルキル基である請求項１５または１６に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ1及びＲ2がメチル基である請求項１５または１６に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、各種医薬品・農薬などの合成原料或いは中間体として重要な光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸およびその対掌体エステルの効率的な製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸およびそのエステルは、種々の医薬品や農薬などの製造原料や合成中間体として重要な化合物である。そのため、高収率かつ工業的に実施可能な製造方法の開発が強く求められてきた。
【０００３】
光学活性２−置換−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸の合成法としては、該化合物のカルボン酸エステルを不斉加水分解する能力を有する酵素を用いて、該カルボン酸エステルを光学分割する方法が報告されている（特許文献１、特許文献２、非特許文献１、非特許文献２を参照）。しかし、これら文献中には、光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸の製造方法に関する記載はない。２−置換−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロピオン酸エステルと２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルを比較した場合、ベンゼン環上の置換基の違いにより、化合物の極性は大きく異なっていると考えられる。この物性差は酵素反応に少なからぬ影響を及ぼすと推測され、上記文献に記載の酵素及び反応条件を２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルに適用しても、光学純度の高い光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸及びその対掌体エステルを効率的に製造できるかどうかは容易には予測できない。
【０００４】
また、非特許文献３には、２−メトキシ−３−［４−［２−［Ｎ−（２−ベンゾキサゾリル）−Ｎ−メチルアミノ］エトキシ］フェニル］プロピオン酸メチルを、リゾプス・デレマー（Rhizopus delemar）由来のリパーゼを用いて光学分割して（Ｓ）−２−メトキシ−３−［４−［２−［Ｎ−（２−ベンゾキサゾリル）−Ｎ−メチルアミノ］エトキシ］フェニル］プロピオン酸及び（Ｒ）−２−メトキシ−３−［４−［２−［Ｎ−（２−ベンゾキサゾリル）−Ｎ−メチルアミノ］エトキシ］フェニル］プロピオン酸メチルを取得する方法が記載されている。しかし本反応では、高価な市販酵素を多量に必要とし、また得られる（Ｓ）体のカルボン酸及び（Ｒ）体のカルボン酸エステルの光学純度は低く、実用的な製造方法であるとは言えない。
【特許文献１】ＷＯ０１／１１０７２
【特許文献２】ＷＯ０１／１１０７３
【非特許文献１】Organic Process Research & Development, 7, 82(2003)
【非特許文献２】Journal of Medicinal Chemistry, 46, 1306(2003)
【非特許文献３】Bioorganic & Medicinal Chemistry, 7, 821(1999)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸およびその対掌体エステルの効率的な製造方法を提供することである。また、新規な化合物である２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸およびそのエステルを提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは鋭意検討の結果、２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルの光学異性体混合物に該化合物を不斉加水分解する酵素を作用させることにより、光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸およびその対掌体エステル、特に（Ｓ）−２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸および（Ｒ）−２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステル、を効率的に製造できることを見いだし、本発明に至った。
【０００７】
すなわち、本発明は一般式（１）：
【０００８】
【化６】
2006050990.tif 000002
【０００９】
（式中、Ｒ1は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数６〜２０のアリール基、炭素数７〜２０のアラルキル基、炭素数２〜１０のアシル基、アリル基、メタンスルホニル基、ｐ−トルエンスルホニル基、又は複素環基を示し、Ｒ2及びＲ3は炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数６〜２０のアリール基、炭素数７〜２０のアラルキル基を示す。）で表される２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルの光学異性体混合物に、該化合物の不斉加水分解能を有する酵素を作用させることを特徴とする、一般式（２）：
【００１０】
【化７】
2006050990.tif 000003
【００１１】
（式中、Ｒ1及びＲ2は前記と同じ基を示す。＊は不斉炭素原子を示す。）で表される光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸またはその塩、およびその対掌体をなす一般式（３）：
【００１２】
【化８】
2006050990.tif 000004
【００１３】
（式中、Ｒ1、Ｒ2及びＲ3は前記と同じ基を示し、＊は不斉炭素原子を示す。）で表される光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルの製造方法である。
【００１４】
また、本発明は一般式（４）：
【００１５】
【化９】
2006050990.tif 000005
【００１６】
（式中、Ｒ4は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｒ2及びＲ3は前記と同じ基を示す。）で表される２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルおよび一般式（５）：
【００１７】
【化１０】
2006050990.tif 000006
【００１８】
（式中、Ｒ2及びＲ4は前記と同じ基を示す。）で表される２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸またはその塩に関する。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によれば、光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸またはその塩、とりわけ（Ｓ）−２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸またはその塩を効率的に合成することができる。更に、その対掌体をなす光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステル、とりわけ（Ｒ）−２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルをも同時に取得することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
まず、本発明の化合物について説明する。
一般式（１）ないし（３）において、Ｒ1はＲ1は、炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数６〜２０のアリール基、炭素数７〜２０のアラルキル基、炭素数２〜１０のアシル基、アリル基、メタンスルホニル基、ｐ−トルエンスルホニル基、又は複素環基を示す。
【００２１】
炭素数１〜１０のアルキル基としては、メチル基、エチル基、ｎ−プロピル基、イソプロピル基、ｎ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、シクロヘキシル基、シクロプロピルメチル基等が挙げられる。炭素数６〜２０のアリール基としては、フェニル基、ナフチル基等が挙げられる。炭素数７〜２０のアラルキル基としては、ベンジル基、ナフチルメチル基等が挙げられる。炭素数２〜１０のアシル基としては、アセチル基、ピバロイル基、ベンゾイル基等が挙げられる。複素環基としては、テトラヒドロピラニル基等が挙げられる。
【００２２】
上記の基は置換基を有していてもよく、置換基としては、ハロゲン原子、アルコキシ基、アラルキルオキシ基、アルキルチオ基、アリールチオ基、アルキルシリル基等が挙げられる。これら置換基を有するＲ1の例としては、２，２−ジクロロ−１，１−ジフルオロエチル基、メトキシメチル基、ｔｅｒｔ−ブトキシメチル基、ベンジルオキシメチル基、メトキシエトキシメチル基、メチルチオメチル基、フェニルチオメチル基等が挙げられる。
【００２３】
上記のなかでも、Ｒ1として好ましくは炭素数１〜１０のアルキル基であり、より好ましくは炭素数１〜７のアルキル基であり、更に好ましくは炭素数１〜４のアルキル基であり、最も好ましくはメチル基である。
【００２４】
一般式（１）ないし（５）において、Ｒ2は炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数６〜２０のアリール基、炭素数７〜２０のアラルキル基を示す。具体的には、前記Ｒ1と同様の基が挙げられる。これらの基はさらに置換基を有していてもよく、置換基としては前記Ｒ1の場合と同様の基が挙げられる。なかでもＲ2として好ましくは、炭素数１〜１０のアルキル基であり、より好ましくは炭素数１〜７のアルキル基であり、更に好ましくは炭素数１〜４のアルキル基であり、最も好ましくはメチル基である。
【００２５】
一般式（１）、（３）及び（４）において、Ｒ3は炭素数１〜１０のアルキル基、炭素数６〜２０のアリール基、炭素数７〜２０のアラルキル基を示す。具体的には、前記Ｒ1と同様の基が挙げられる。これらの基はさらに置換基を有していてもよく、置換基としては前記Ｒ1の場合と同様の基が挙げられる。なかでもＲ2として好ましくは、炭素数１〜１０のアルキル基であり、より好ましくは炭素数１〜７のアルキル基であり、更に好ましくは炭素数１〜４のアルキル基であり、最も好ましくはメチル基である。
【００２６】
なお、一般式（１）においてＲ1が炭素数１〜１０である化合物、すなわち一般式（４）：
【００２７】
【化１１】
2006050990.tif 000007
【００２８】
（式中、Ｒ4は炭素数１〜１０のアルキル基を示し、Ｒ2及びＲ3は前記と同じ基を示す）
で表される２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルは、ラセミ体、光学活性体ともに、従来未報告の新規物質である。Ｒ4の具体例としては、前記Ｒ1の項で挙げたアルキル基の例と同様である。Ｒ4として、好ましくは炭素数１〜７のアルキル基であり、より好ましくは炭素数１〜４のアルキル基であり、更に好ましくはメチル基である。本発明で使用あるいは製造する化合物（４）としては、Ｒ4が炭素数１〜４のアルキルであり、Ｒ2及びＲ3が炭素数１〜１０のアルキル基である化合物である。より好ましくは、Ｒ4、Ｒ2及びＲ3が炭素数１〜４のアルキル基である化合物である。更に好ましくは、Ｒ4がメチル基であり、Ｒ2及びＲ3が炭素数１〜４のアルキル基である化合物であり、最も好ましくは、Ｒ4、Ｒ2及びＲ3がメチル基である化合物である。また、化合物（４）としては光学活性体がより好ましく、中でも、２位の絶対配置がＲである光学活性体が更に好ましい。
【００２９】
また、一般式（５）：
【００３０】
【化１２】
2006050990.tif 000008
【００３１】
（式中、Ｒ4及びＲ2は前記と同じ基を示す）で表される２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸は、ラセミ体、光学活性体ともに、従来未報告の新規物質である。Ｒ4の具体例ならびに好ましい基は前記と同様である。本発明で使用あるいは製造する化合物（５）としては、Ｒ4が炭素数１〜４のアルキルであり、Ｒ2が炭素数１〜１０のアルキル基である化合物である。より好ましくは、Ｒ4及びＲ2が炭素数１〜４のアルキル基である化合物である。更に好ましくは、Ｒ4がメチル基であり、Ｒ2が炭素数１〜４のアルキル基である化合物であり、最も好ましくは、Ｒ4及びＲ2がメチル基である化合物である。また、化合物（５）としては光学活性体がより好ましく、中でも、２位の絶対配置がＳである光学活性体が更に好ましい。
【００３２】
一般式（１）で示される２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルの光学異性体混合物、例えば２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸メチルの光学異性体混合物は、非特許文献１に記載の合成法と同様の方法で容易に合成可能である。本発明の加水分解においては、化合物（１）の光学異性体混合物として、ラセミ体を用いても良いし、一方の光学活性体が他方より過剰に含まれる混合物を用いて、さらに光学純度が高められた目的物を取得してもよい。
【００３３】
２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルの光学異性体混合物に、該化合物の不斉加水分解能を有する酵素を作用させるに当たっては、円滑な反応、操作の容易性などの観点から、２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルの光学異性体混合物及び不斉加水分解能を有する酵素を水性溶媒中に溶解または分散して反応を行なう方法が、好ましく採用される。
【００３４】
不斉加水分解反応を行なう水性溶媒は、不斉加水分解能を有する酵素の種類に応じて酵素が働き易いｐＨに調整しておくことが必要である。ｐＨの範囲としては、一般的にはｐＨ３〜１２程度、より好ましくはｐＨ５〜９程度である。ｐＨの調整は、水性溶媒として所定のｐＨを有する緩衝水溶液を用いて行なっても良い。その際の緩衝水溶液としては、例えば、リン酸ナトリウム水溶液、リン酸カリウム水溶液などのようなリン酸アルカリ金属塩水溶液等の無機塩の緩衝水溶液、酢酸ナトリウム水溶液、酢酸カリウム水溶液などの酢酸アルカリ金属塩等の有機酸塩の緩衝水溶液などを挙げることができる。また、反応系のｐＨを不斉加水分解反応に適したｐＨに保つために、不斉加水分解反応の初期および／または途中に水酸化ナトリウム水溶液、炭酸水素ナトリウム水溶液などの塩基や塩酸、硫酸などの酸などのｐＨ調整剤を添加してもよい。
【００３５】
不斉加水分解能を有する酵素の使用量は、使用する酵素の種類などに応じて、反応時間の遅延や２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルの光学異性体混合物を加水分解する際の選択性の低下が起こらないような量を適宜選択するとよい。例えば、従来から市販されている不斉加水分解能を有する酵素を用いる場合、一般に、２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルの光学異性体混合物質量の０．０００１〜３．０質量倍が好ましく、０．００１〜１．０質量倍がより好ましく、０．００１〜０．１質量倍が特に好ましい。
【００３６】
不斉加水分解反応の反応温度としては、温度が高すぎると酵素の安定性が低下したり酵素が失活する場合があり、一方温度が低すぎると反応速度が低下する場合があるので、通常５〜６５℃の範囲であることが好ましく、２０〜５０℃の範囲であることがより好ましい。
【００３７】
不斉加水分解反応の反応時間は、使用する酵素の種類や量、反応温度などに応じて変わり得るが、通常０．１〜１２０時間程度、特に０．１〜４８時間程度とするのが好ましい。
【００３８】
上記の不斉加水分解反応によって、光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸（不斉加水分解能を有する酵素によって加水分解された一方の光学異性体）とそれと対掌配置を有する光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステル（不斉加水分解能を有する酵素によって加水分解されずにそのまま残ったもう一方の光学異性体）を含有する反応生成物が得られる。
【００３９】
反応生成物からの光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸およびそれと対掌配置を有する光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルの分離回収に当たっては、両者をそれぞれ円滑に分離回収できる方法であればいずれの方法を採用してもよい。例えば、ｐＨを中性〜アルカリ性、例えばｐＨ７〜１０程度に調整した光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸およびそれと対掌配置を有する光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルを含有する反応生成物（水性反応液等）に、非水溶性の有機溶剤を添加して十分に攪拌した後、水層と有機層に分液する。有機層中には加水分解されずに残った光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルが多く含まれ、水層中には生成した光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸が多く含まれる。有機層の溶剤を留去するか、または蒸留、カラムクロマトグラフィーなどにより処理して、純度の高い光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルが得られる。この際に使用する非水溶性の有機溶剤としては、例えば、ｔ−ブチルメチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル類；トルエンなどの炭化水素類；ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、クロロベンゼンなどのハロゲン化炭化水素類；酢酸エチル、酢酸メチル、酢酸ブチルなどのエステル類などを挙げることができ、これらの１種または２種以上を用いることができる。
【００４０】
一方、水層中に残留する光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸は、水層のｐＨを酸性、例えば１〜３程度に調整後、適当な有機溶剤を用いて抽出処理することにより、水層から分離回収することができる。その際の有機溶剤としては、例えば、ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、イソプロピルエーテルなどのエーテル類；トルエンなどの炭化水素類；ジクロロメタン、ジクロロエタン、クロロホルム、クロロベンゼンなどのハロゲン化炭化水素類；酢酸エチル、酢酸メチル、酢酸ブチルなどのエステル類などを挙げることができ、これらの１種または２種以上を用いることができる。そして、抽出処理に用いた有機溶剤を留去することによって、高純度の光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸を得ることができる。必要に応じてカラムクロマトグラフィー、晶析などを行なうことにより、更に高純度化することもできる。また、既知の方法により、光学活性２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸を塩、例えばアルカリ金属との塩、として単離、精製して取得することもできる。
【００４１】
本反応に使用する酵素は微生物起源の酵素であってもよいし、動物起源の酵素であってもよいし、植物起源の酵素であっても良い。これらの酵素の純度あるいは形態については、目的とする反応の活性を有していれば特に制限されるものではない。精製酵素、粗酵素、酵素含有物、微生物培養液、培養物、菌体、培養液、酵素遺伝子が導入されることによって目的とする反応の活性を獲得した組み換え微生物およびそれらの処理物など、種々の形態で用いることができる。ここで処理物とは、例えば、凍結乾燥品、アセトン乾燥品、摩擦物、自己消化物、超音波破砕物またはアルカリ処理物などを言う。更に上記のような種々の純度あるいは形態の酵素を、例えばシリカゲルやセラミックスなどの無機担体、セルロース、イオン交換樹脂などへの吸着法、ポリアクリルアミド法、含硫多糖ゲル法（例えばカラギーナンゲル法）、アルギン酸ゲル法、寒天ゲル法などの公知の方法により固定化して用いてもよい。
【００４２】
本発明において好ましく用いられる酵素は、２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルを不斉的に加水分解する活性を有するものであれば特に制限されないが、微生物または動物起源のリパーゼ、エステラーゼ、プロテアーゼもしくはアシラーゼである。
【００４３】
より好ましい酵素としては、アクロモバクター（Achromobacter）属、アルカリゲネス（Alcaligenes）属、アスペルギルス（Aspergillus）属、バークホルデリア（Burkholderia）属、キャンディダ（Candida）属、ゲオトリカム（Geotrichum）属、ムコール（Mucor）属、ペニシリウム（Penicillium）属、シュードモナス（Pseudomonas）属、リゾプス（Rhizopus）属、リゾムコール（Rhizomucor）属、リゾパス（Rhizopus）属もしくはサーモマイセス（Thermomyces）属の微生物、豚膵臓、又は、小麦麦芽を起源とするリパーゼ；アスペルギルス（Aspergillus）属、バシラス（Bacillus）属もしくはリゾプス（Rhizopus）属の微生物又は牛膵臓を起源とするプロテアーゼ；アスペルギルス（Aspergillus）属の微生物を起源とするアシラーゼなどを挙げることができる。
【００４４】
そのうちでもキャンディダ（Candida）属由来のリパーゼが好ましく、キャンディダ・シリンドラッシ（Candida cylindracea）もしくはキャンディダ・ルゴーサ（Candida rugosa）由来のリパーゼが更に好ましく用いられる。これらの酵素は市販品の中から選択して使用することもできる。
【００４５】
本発明で使用しうる市販の酵素の具体例としては、リパーゼＡＬ（Achromobacter sp.由来、名糖産業製）、リパーゼＰＬ（Alcaligenes sp.由来、名糖産業製）、リパーゼＡＰ−４（Aspergillus niger由来、天野エンザイム製）、リパーゼＡＰ−６（Aspergillus niger由来、天野エンザイム製）、リパーゼＰＳ（Burkholderia cepacia由来、天野エンザイム製）、リパーゼＡＨ（Burkholderia cepacia由来、天野エンザイム製）、リパーゼＱＬＭ（Burkholderia gradiloi由来、名糖産業製）、リパーゼＱＬ（Burkholderia gradiloi由来、名糖産業製）、ノボザイム４３５（Candida antarctica由来、ノボザイム製）、ノボザイムＣＡＬＢ Ｌ（Candida antarctica由来、ノボザイム製）、リパーゼＯＦ（Candida cylindracea由来、名糖産業製）、リパーゼＭＹ（Candida cylindracea由来、名糖産業製）、リパーゼＡＹＳ（Candida rugosa由来、天野エンザイム製）、リパーゼＡＳ（Candida rugosa由来、天野エンザイム製）、リパーゼＧＣ−４（Geotrichum candidum由来、天野エンザイム製）、リパーゼＭ「アマノ」１０（Mucor javanicus由来、天野エンザイム製）、ノボザイム３８８（Mucor miehei由来、ノボザイム製）、ノボザイムＩＭ（Mucor miehei由来、ノボザイム製）、ノボザイム１００００Ｍ（Mucor miehei由来、ノボザイム製）、リパーゼＧ（Penicillium camembertii由来、天野エンザイム製）、リパーゼＲ（Penicillium roqueforti由来、天野エンザイム製）、リパーゼ（豚膵臓由来、東洋醸造製）、リパーゼ（タイプ２）（豚膵臓由来、シグマ製）、リパーゼＳＬ（Pseudomonas cepacia由来、名糖産業製）、リパーゼＡＫ（Pseudomonas fluorescens由来、天野エンザイム製）、リパーゼＣＨＥ（Pseudomonas sp.由来、天野エンザイム製）、トヨチームＬＩＰ（Pseudomonas sp.由来、東洋紡製）、リパーゼＷＯ（Pseudomonas sp.由来、ベーリンガー製）、リパーゼＴＬ（Pseudomonas stutzeri由来、名糖産業製）、リパーゼ（Rhizopus delemar由来、生化学工業製）、タリパーゼ（Rhizopus delemar由来、天野エンザイム製）、リパーゼサイケン１００（Rhizopus javanicus由来、ナガセケムテック製）、リパーゼＦ−ＡＰ１５（Rhizopus javanicus由来、天野エンザイム製）、リパーゼＵＬ（Rhizopus sp.由来、名糖産業製）、ノボザイム３８８（Rhizomucor miehei由来、ノボザイム製）、ノボザイムＲＭ ＩＭ（Rhizomucor miehei由来、ノボザイム製）、リポザイムＴＬ１００Ｌ（Thermomyces lanuginosus由来、ノボザイム製）、リパーゼ（タイプ１）（小麦麦芽由来、シグマ製）リパーゼＰＧＥ（天野エンザイム製）、プロテアーゼＹＰ−ＳＳ（Aspergillus niger由来、ヤクルト製薬製）、デナプシン２Ｐ（Aspergillus niger由来、ナガセケムテック製）、プロテアーゼＡ「アマノ」Ｇ（Aspergillus oryzae由来、天野エンザイム製）、プロテアーゼＭ「アマノ」Ｇ（Aspergillus oryzae由来、天野エンザイム製）、パンチダーゼＮＰ−２（Aspergillus oryzae由来、天野エンザイム製）、デナチームＡＰ（Aspergillus oryzae由来、ナガセケムテック製）、サチライシンＡ（Bacillus lichenformis由来、ノボザイム製）、プロテアーゼＮ「アマノ」Ｇ（Bacillus subtilis由来、天野エンザイム製）、ビオプラ−ゼＳＰ−４ＦＧ（Bacillus subtilis由来、ナガセケムテック製）、ニューラーゼ（Rhizopus niveus由来、天野エンザイム製）、アシラーゼＡ（Aspergillus sp.由来、シグマ製）、アシラーゼ「アマノ」（Aspergillus sp.由来、天野エンザイム製）、アシラーゼ（Aspergillus sp.由��、東京化成製）、などを挙げることができる。
【００４６】
上記の市販の酵素は、いずれもＳ体の２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルを優先的に加水分解して（Ｓ）−２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸に変換する性質を有する。このうち、収率、酵素使用量、酵素の価格及び得られる化合物の光学純度の観点から、キャンディダ（Candida）属由来のリパーゼＯＦ（Candida cylindracea由来、名糖産業製）、リパーゼＭＹ（Candida cylindracea由来、名糖産業製）もしくはリパーゼＡＹＳ（Candida rugosa由来、天野エンザイム製）が特に好ましい。
【００４７】
また、Ｒ体を優先的に加水分解するする酵素の具体例としては、ノボザイム５３９（Bacillus sp.由来、ノボザイム製）、キモトリプシン（牛膵臓由来、和光純薬製）などを挙げることができる。これらの酵素はいずれも、Ｒ体の２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸エステルを優先的に加水分解して（Ｒ）−２−置換−３−（４−置換オキシフェニル）プロピオン酸に変換する性質を有する。
【００４８】
製造したい化合物の光学的立体構造に応じて、上記で例示した酵素の１種または２種以上を用いることができる。
【実施例】
【００４９】
以下、実施例などにより本発明について具体的に説明するが、本発明は以下の例により何ら限定されるものではない。
【００５０】
（実施例１）ラセミ体２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸メチルの合成
窒素雰囲気下、ジメトキシ酢酸メチル５．４ｇとアセチルクロリド４．０ｇの混合物にヨウ素１５ｍｇを添加し、氷冷下で１５分、室温で４０分更に５０℃で１．３時間攪拌した。反応液にトルエンを添加後、減圧下で溶媒を留去することにより、反応液に含まれる低沸点化合物を除去した。これにより２−クロロ−２−メトキシ酢酸メチル８．６ｇが得られた。
【００５１】
窒素雰囲気下、上記で得られた２−クロロ−２−メトキシ酢酸メチル８．６ｇと亜リン酸トリエチル７．２ｇを混合し、１５０℃で７時間攪拌した。反応液にトルエンを添加後、減圧下で溶媒を留去することにより、反応液に含まれる低沸点化合物を除去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製を行ない、２−ジエトキシホスフィニル−２−メトキシ酢酸メチル５．４ｇを得た。
【００５２】
上記で得られた２−ジエトキシホスフィニル−２−メトキシ酢酸メチル５．４ｇとアニスアルデヒド３．０ｇをトルエン５０ｍｌに溶解し、窒素雰囲気下でｔｅｒｔ−ブトキシカリウムを２−ジエトキシホスフィニル−２−メトキシ酢酸メチルの１．５モル等量を添加し、室温で１８時間攪拌した。反応液を塩化アンモニウム水溶液で洗浄後、溶媒を減圧留去した。残渣に１０％パラジウム炭素２．５ｇを含むトルエン溶液５０ｍｌを添加後、水素加圧（０．２４ＭＰａ）下で２４℃で２時間攪拌した。セライトで減圧濾過後、濾液を無水硫酸ナトリウムで脱水した。減圧下で溶媒を留去し、４．５ｇのラセミ体２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸メチルを黄色オイルとして得た。
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3／ｐｐｍ）：δ２．９１−３．０１（ｍ，２Ｈ），３．３５（ｓ，３Ｈ），３．７２（ｓ，３Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），３．９０−３．９６（ｍ，１Ｈ），６．８１−６．８４（ｍ，２Ｈ），７．１２−７．１４（ｍ，２Ｈ）。
【００５３】
（実施例２）
実施例１で得られたラセミ体２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸メチル１０ｍｇに、０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）０．５ｍｌ及び下記の表１に記載したそれぞれの市販酵素５ｍｇもしくは０．５ｍｇを加えて、３０℃で１６時間反応させた。反応後、酢酸エチル１ｍｌを加えてよく混合し、有機層の一部を採取して下記に記載の高速液体クロマトグラフィー分析条件で分析した。
［高速液体クロマトグラフィー分析条件］
カラム：Ｃｈｉｒａｌｃｅｌ  ＯＪ（ダイセル化学製）、カラム温度：２０℃、溶離液：ヘキサン／イソプロパノール／トリフルオロ酢酸＝７０／３０／０．１、流速＝０．５ｍｌ／ｍｉｎ、検出：２５４ｎｍ、溶出時間：（Ｒ）−２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸１２．７分、（Ｓ）−２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸１６．８分、（Ｒ）−２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸メチル２５．１分、（Ｓ）−２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸メチル２２．８分
上記分析結果から、２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸への変換率、生成した２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸及び未反応の２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸メチルの絶対立体配置及び光学純度を求めた。結果を以下の表１に示す。使用酵素量は、基質であるラセミ体２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸メチルの重量に対する割合で示した。
【００５４】
【表１】
2006050990.tif 000009
【００５５】
（実施例３）
下記の表２に記載したそれぞれの市販酵素を用いて、実施例２１と同様に操作後、分析により２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸への変換率、生成した２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸及び未反応の２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸メチルの絶対立体配置及び光学純度を求めた。結果を以下の表２に示す。
【００５６】
【表２】
2006050990.tif 000010
【００５７】
（実施例４）
リパーゼＯＦ（名糖産業製）、リパーゼＭＹ（名糖産業製）もしくはリパーゼＡＹＳ（天野エンザイム製）を用いて、実施例２と同様に反応を行ない、分析により２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸への変換率、生成した２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸及び未反応の２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸メチルの絶対立体配置及び光学純度を求めた。結果を以下の表３に示す。
【００５８】
【表３】
2006050990.tif 000011
【００５９】
上記の表３の結果から、酵素としてリパーゼＯＦ（名糖産業製）、リパーゼＭＹ（名糖産業製）もしくはリパーゼＡＹＳ（天野エンザイム製）を用いた場合、他の市販酵素を用いた場合に比べて、非常に少ない酵素使用量で、高光学純度の（Ｒ）−２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸及び（Ｓ）−２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸メチルが高収率で得られた。
【００６０】
（実施例５）
実施例１で得られたラセミ体２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸メチル６３．２ｇ及びリパーゼＡＹＳ（天野エンザイム製）４２２ｍｇを０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０）６３２ｍｌに添加し、５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ７．０に保ちながら３０℃で２４時間攪拌しながら反応させた。反応開始後の２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸への変換率は４８．０％であり、生成した２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸の光学純度は９５．６％ｅ．ｅ．（Ｒ）、未反応の２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸メチルの光学純度は８８．４％ｅ．ｅ．（Ｓ）であった。
【００６１】
（実施例６）
実施例５で得られた反応液約７２０ｍｌより、（Ｒ）−２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸及び（Ｓ）−２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸メチルを取得した。反応液を５Ｎ水酸化ナトリウム水溶液でｐＨ８に調整後、トルエン７２０ｍｌで２度、５４０ｍｌで１度抽出操作を行なった。得られた有機層を集めて飽和食塩水６０ｍｌで洗浄後、溶媒を留去することにより、２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸を含まない光学純度８８．４％ｅ．ｅ．の（Ｓ）−２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸メチル２７．３ｇをオイルとして得た。
【００６２】
上記の抽出操作後の水層について、６Ｎ塩酸でｐＨ３に調整後、トルエン７２０ｍｌで２度、５４０ｍｌで２度抽出操作を行なった。得られた有機層を集めて飽和食塩水６０ｍｌで洗浄後、溶媒を留去することにより、２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸メチルを含まない光学純度９５．５％ｅ．ｅ．の（Ｒ）−２−メトキシ−３−（４−メトキシフェニル）プロピオン酸２３．８ｇをオイルとして得た。
1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3／ｐｐｍ）：δ２．９４−２．９９（ｍ，１Ｈ），３．０６−３．１１（ｍ，１Ｈ），３．４０（ｓ，３Ｈ），３．７９（ｓ，３Ｈ），３．９７−４．００（ｍ，１Ｈ），６．８２−６．８５（ｍ，２Ｈ），７．１３−７．１７（ｍ，２Ｈ）。