(57)【要約】      （修正有）【課題】抗生物質のバイオバーデンもしくは無菌テスト用又は抗生物質製造区域における環境試験用の培地及びこのような培地を用いる方法を提供する。【解決手段】抗生物質、抗菌剤、抗真菌剤等の存在下での微生物の存在を検出するために、上記薬剤等の効力を無力化することを主要な解決手段として検討を行った。本培地は、１種類又は複数種の２価又は３価の陽イオン成分、好ましくは、抗生物質が残留している状態でも微生物の増殖が可能となる、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム及び鉄を含有する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
１又は複数のタイプの微生物のための増殖用培地と、２価及び３価陽イオンからなる群から選択される１種類又は複数種の陽イオンを含有する１つ又は複数の成分を含む、抗生物質存在下における微生物増殖用の培地。
【請求項２】
前記１種類又は複数種の陽イオンが、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム及び鉄からなる群から選択される、請求項１に記載の培地。
【請求項３】
前記１種類又は複数種の陽イオンが、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム、クエン酸カルシウム、硫酸アルミニウム及び硫酸鉄からなる群から選択される、請求項１に記載の培地。
【請求項４】
前記１種類又は複数種の陽イオンが、マグネシウム及びカルシウムからなる群から選択される、請求項１に記載の培地。
【請求項５】
前記１種類又は複数種の陽イオンが、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム及びクエン酸カルシウムからなる群から選択される、請求項１に記載の培地。
【請求項６】
前記１種類又は複数種の陽イオンが、マグネシウム、カルシウム、アルミニウム及び鉄の２価及び３価の陽イオンからなる群から選択される、請求項１に記載の培地。
【請求項７】
前記培地が、ゲル又はブロスからなる群から選択される形態である、請求項１に記載の培地。
【請求項８】
前記培地が、ダイズカゼインダイジェストブロス（Ｓｏｙｂｅａｎ  Ｃａｓｅｉｎ  Ｄｉｇｅｓｔ  Ｂｒｏｔｈ）、ダイズカゼインダイジェスト寒天培地（Ｓｏｙｂｅａｎ  Ｃａｓｅｉｎ  Ｄｉｇｅｓｔ  Ａｇａｒ）、液状チオグリコレート培地（Ｆｌｕｉｄ  Ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｌｌａｔｅ  Ｍｅｄｉｕｍ）、サブローデキストロース寒天培地（Ｓａｂｏｕｒａｕｄ  Ｄｅｘｔｒｏｓｅ  Ａｇａｒ）、ミューラーヒントンブロス（Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎ  Ｂｒｏｔｈ）、ミューラーヒントン寒天培地（Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎ  Ａｇａｒ）、ニュートリエントブロス（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｂｒｏｔｈ）及びニュートリエント寒天培地（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ａｇａｒ）からなる群から選択される、請求項１に記載の培地。
【請求項９】
前記培地がゲルである、請求項１に記載の培地。
【請求項１０】
前記培地がブロスである、請求項１に記載の培地。
【請求項１１】
前記培地が、ダイズカゼインダイジェスト（Ｓｏｙｂｅａｎ  Ｃａｓｅｉｎ  Ｄｉｇｅｓｔ）、液状チオグリコレート培地（Ｆｌｕｉｄ  Ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｌｌａｔｅ  Ｍｅｄｉｕｍ）、ミューラーヒントンブロス（Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎ  Ｂｒｏｔｈ）及びニュートリエントブロス（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｂｒｏｔｈ）からなる群から選択されるブロスである、請求項１に記載の培地。
【請求項１２】
前記１種類又は複数種の陽イオン成分が、約０．１Ｍから約０．５Ｍの範囲で存在する、請求項１に記載の培地。
【請求項１３】
前記１種類又は複数種の陽イオン成分が、約０．２Ｍから約０．４Ｍの範囲で存在する、請求項１に記載の培地。
【請求項１４】
前記２価陽イオン成分が、前記培地中に約０．３Ｍの量で存在する、請求項１に記載の培地。
【請求項１５】
試験すべき抗生物質を含有する試料と、ホルダーと、および前記ホルダー内部の増殖培地と、を提供するステップ（前記培地はマグネシウム、カルシウム、アルミニウム及び鉄の２価及び３価の陽イオンからなる群から選択される１種類又は複数種の陽イオン成分を含有する。）、
前記試料を前記増殖培地と接触するように配置し、予め選択した時間の間、予め選択した温度にて、前記培地のインキュベーションを行うステップ、および
何らかの微生物の存在を調べるために前記培地を観察するステップ、
を含む、抗生物質存在下で微生物の存在を調べるための方法。
【請求項１６】
フィルターを提供することと、該フィルターを介して前記試料を濾過することと、およびインキュベーション前に前記増殖培地の上に前記フィルターを配置することとをさらに含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
フィルターを提供することと、該フィルターを介して前記試料を濾過することと、およびインキュベーション前に前記増殖培地の上に前記フィルターを配置することと、をさらに含み、前記フィルターが約０．１ミクロンから約１．２ミクロンの孔径を有し、前記フィルターが再生セルロース、混合セルロースエステル、酢酸セルロース、硝酸セルロース、ニトロセルロース、ＰＶＤＦ、ナイロン、ポリカーボネート、ポリスルホン、ポリエーテルスルホン、ポリアリールスルホン及びポリフェニルスルホンからなる群から選択される材料で形成されている、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記試料が、液体及び液体中に溶解している粉末からなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
前記試料が、抗生物質製造の製造区域由来の空気である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
前記フィルター／培地が、約０から７日間の間、２０℃から５４℃の温度にてインキュベートされる、請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
前記フィルター／培地が、約７から約１４日間の間、２０℃から５４℃の温度にてインキュベートされる、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
前記１種類又は複数種の陽イオン成分が、約０．１Ｍから約０．５Ｍの範囲である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２３】
前記１種類又は複数種の陽イオン成分が、約０．２Ｍから約０．４Ｍの範囲である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２４】
前記１種類又は複数種の陽イオン成分が、約０．３Ｍの量である、請求項１５に記載の方法。
【請求項２５】
前記培地がゲルであり、該ゲルが寒天ベースである、請求項１に記載の培地。
【請求項２６】
前記観察が、コロニー形成単位の目視による計数又は微生物成分の存在に対する生物発光もしくは化学発光による検出からなる群から選択される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２７】
前記観察が、微生物成分の存在を指示するために使用される試薬の検出によるものである、請求項１５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗生物質存在下において微生物を回収するための培地及び方法に関する。さらに具体的には、本発明は、抗生物質のバイオバーデン及び無菌テスト用の培地に関する。本培地は、抗生物質製造施設における微生物の環境モニタリングに対しても使用し得る。
【背景技術】
【０００２】
医薬品、眼科関連品等は、その使用者に対して有害となったり、傷害を与えたりしないようにするため、無菌状態である必要がある。それらに対して、いかなる微生物も、存在量が許容範囲内の低レベルであるか、又は全く存在しないかのいずれかであることを確認するために、製品を販売する前に試験を行う必要がある。
【０００３】
粉末又は液体といった、多くの製品に対する試験プロセスは以下のようなものである。
【０００４】
液体（又は、液体中に溶解している粉末）の試料を、表面であらゆる微生物を捕らえられるよう十分に小さい孔径の微小孔フィルターを介して濾過する。
【０００５】
次に、寒天プレート等の増殖培地上、又はブロス等の培地中のいずれかにそのフィルターを置くか、又は、増殖培地をフィルターもしくはフィルターの下の吸収性パッドに当て、室温又は高温（９８°Ｆ程度）のいずれかにて、あらゆる微生物が、計数するのに十分なサイズ、必要であれば同定するのに十分なサイズに増殖できる期間、インキュベーションを行う。
【０００６】
計数及び同定試験は、目視によるもの（形成されたコロニー数を単純に計数する。）、あるいは、微生物の存在を検出し、目視又は機器を使用して見ることができるシグナル（生物又は化学発光、放射線、比色等）を与えるための様々な試薬を使用して行うものであり得る。
【０００７】
フルオロキノロン、アミノグリコシド、テトラサイクリン、β−ラクタム（ペニシリン、セファロスポリン等）、グリコペプチド、リポペプチド、マクロライド、ストレプトグラミン、リンコサミド、オキサゾリジノン、スルホンアミド、ポリペプチド類等の抗生物質、又はアゾール、ポリエン、ピリミジン合成阻害剤、グルカン合成阻害剤及びキチン合成阻害剤等の抗真菌剤は、試験を行うのが困難なタイプの製品に挙げられる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
抗生物質は、細菌及び他の微生物を死滅させ、又は抑制するように設計されている。最新の試験においては、微生物増殖を抑制しないように、フィルターからその抗生物質の痕跡を全て除去するために一連の洗浄液が用いられている。この方法は、時間と費用がかかり、必ずしも有効であるとは限らない。抗生物質のバイオバーデン、無菌テスト及び環境試験を行うためのより優れた方法が必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明は、抗生物質のバイオバーデン若しくは無菌テスト、又は抗生物質製造環境を試験するため等に用いる培地及び方法を提供する。本培地には、抗生物質が残留している状態でも微生物が増殖できるようになる、１種類又は複数種の２価もしくは３価陽イオン成分が含有される。
【００１０】
本培地を用いるための方法は、被検微生物を捕らえるのに十分小さい孔径を有するフィルターを介して抗生物質試料を濾過し、次に、１種類又は複数種の２価もしくは３価陽イオン成分を含有する増殖培地上又は中でそのフィルターのインキュベーションを行うというものである。その後、インキュベーションを行ったフィルター又は培地を、微生物の有無を調べるために観察もしくは試験し、存在する場合は、存在する微生物数、及び、望ましくは微生物の種類を調べる。
【００１１】
バイオバーデン又は無菌テストの第二の方法は、１種類又は複数種の２価もしくは３価陽イオン成分を含有する本培地中又は本培地上に、抗生物質試料を直接植菌又はプレーティングするというものである。本培地を用いる第三の方法は、フィルターに空気を引き込むか、又は１種類若しくは複数種の２価もしくは３価陽イオンを含有する培地上又は培地中に直接空気を引き込むというものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明は、１種類又は複数種の２価又は３価陽イオン成分をその中に含有する増殖培地に関する。１種類又は複数種の２価もしくは３価陽イオン成分が存在すると、残留抗生物質がある場合でも、微生物が増殖できるようになる。これは、抗生物質が残留していることにより微生物増殖が阻害され、偽陰性という結果が出てしまうといった、抗生物質のバイオバーデン又は無菌テストに対して有用である。これはまた、抗生物質製造環境における空気中の環境モニタリングにも有用である。
【００１３】
本発明において、あらゆる２価又は３価陽イオン成分を使用し得る。好ましい例には、これらに限定されないが、マグネシウム（硫酸マグネシウム及び塩化マグネシウムの形態が好ましい。）、カルシウム（塩化カルシウム又はクエン酸カルシウムの形態が好ましい。）、硫酸アルミニウム及び硫酸鉄（第一鉄）が含まれる。
【００１４】
本培地中に存在する２価又は３価陽イオンの量は、存在するあらゆる微生物が増殖できるようにするため、抗生物質による阻害を克服するのに十分な量とすべきである。通常、２価又は３価陽イオンの量は、約０．１Ｍから約０．５Ｍの量であるが、約０．２Ｍから約０．４Ｍの量であるのが好ましく、約０．３Ｍの量であればさらに好ましい。
【００１５】
培地は、一般的には、寒天ベースの培地等のゲルの形態であるか、又はブロス等の液体の形態である。これらのテストで通常用いられる培地は、ダイズカゼインダイジェストブロス（Ｓｏｙｂｅａｎ  Ｃａｓｅｉｎ  Ｄｉｇｅｓｔ  Ｂｒｏｔｈ）又は寒天（ＳＣＤＢ又はＳＣＤＡ）、液状チオグリコレート培地（Ｆｌｕｉｄ  Ｔｈｉｏｇｌｙｃｏｌｌａｔｅ  Ｍｅｄｉｕｍ（ＦＴＭ））及びサブローデキストロース寒天培地（Ｓａｂｏｕｒａｕｄ  Ｄｅｘｔｒｏｓｅ  Ａｇａｒ（ＳＤＡ））である。他の有用な培地には、これらに限定されないが、ミューラーヒントンブロス（Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎ  Ｂｒｏｔｈ）もしくは寒天培地（Ｍｕｅｌｌｅｒ  Ｈｉｎｔｏｎ  Ａｇａｒ）、ニュートリエントブロス（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ｂｒｏｔｈ）もしくは寒天培地（Ｎｕｔｒｉｅｎｔ  Ａｇａｒ）が含まれる（寒天培地は、特別なカセット中又は標準的な寒天培地ペトリ皿にあり得る）。
【００１６】
抗生物質のバイオバーデンレベル又は無菌性を試験する一般的な方法は、あらゆる微生物を捕らえるのに十分小さい孔径を有するフィルターを介して抗生物質試料を濾過し、次に、増殖培地の存在下でそのフィルターのインキュベーションを行い、検出に適したサイズになるまで微生物を増殖させるというものである。
【００１７】
このようなフィルターの孔径は通常、０．４５ミクロン以下であり、場合によっては、約０．１μｍから最大１．２μｍの孔径であることが好ましい。このようなフィルターは、これらに限定されないが、再生セルロース、混合セルロースエステル、酢酸セルロース、硝酸セルロース、ニトロセルロース等のセルロースベースのフィルター、ＰＶＤＦ、ナイロン、ポリカーボネート並びにポリスルホン、ポリエーテルスルホン、ポリアリールスルホン及びポリフェニルスルホン等のポリスルホン類を含む、このような用途に一般に使用されるあらゆる適切な材質で形成され得る。
【００１８】
このようなフィルターは、多くの供給業者から市販されている。適切なフィルターには、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）より市販されている、Ｓ−ＰａｋＴＭ混合セルロースエステルフィルター及びＤｕｒａｐｏｒｅ（Ｒ）ＰＶＤＦフィルターが含まれる。
【００１９】
このフィルター用のホルダーは、単に漏斗等のステンレスの装置であり得、又はＳｔｅｒｉｔｅｓｔＴＭ装置、ＭｉｃｒｏｐｒｅＳｕｒｅＴＭ装置、Ｓｔｅｒｉｓｕｒｅ（Ｒ）装置、Ｍｉｌｌｉｆｌｅｘ（Ｒ）フィルターユニット若しくはＭｉｃｒｏｆｉｌ（Ｒ）Ｓ装置（全て、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）より市販されている。）等の装置を含む、使い捨ての滅菌済みフィルターであり得る。
【００２０】
特に無菌テストに対して、閉鎖的試験、例えばＳｔｅｒｉｔｅｓｔＴＭ装置等、を用いると、閉鎖系中で試験全体（サンプリング、濾過、培地添加及びインキュベーション）を行うことが可能となる。このような設計により、偶発的な細菌混入が起こり、それによって偽陽性となるリスクが激減する。
【００２１】
設備内の微生物の環境レベルの一般的な試験方法は、微生物を付着させ保持することができる培地カセットを備える装置を介して空気試料を濾過し、次に、その培地上でインキュベーションを行い、検出に適したサイズになるまで微生物を増殖させるというものである。そのような系の１例は、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）から市販されている、Ｍ  Ａｉｒ  Ｔ（Ｒ）システムとして知られている。米国特許第６，０９４，９９７号及び第６，２４０，７６８号も参照のこと。他の方法には、試験すべき環境中で、選択した培地を満たしたペトリ皿を開けた状態でただ放置して、培地表面上で落下微生物を回収するという方法が含まれる。次に、そのペトリ皿のインキュベーションを行い、観察する。その他の方法も、当業者により使用されることが可能であり、使用されている。
【００２２】
一般に、捕らえた微生物を容易に検出できるよう、培地に適用した後の試料を、捕らえた微生物がある程度増殖できる時間、インキュベーションを行う。従来の方法において、この時間は、空気中のモニタリング又はバイオバーデン試料の場合の最低３日間から、無菌テストの場合の１４日間の範囲であり得る。一般に、それは、約３から１４日間であるが、より一般的には、約７から１４日間である。室温（２０℃前後）から５４℃前後という高温において、その試料をインキュベーションし得る。一般的な温度範囲は、２０から３５℃である。
【００２３】
計数及び同定テストは、肉眼で、又は顕微鏡もしくは他の拡大装置を介してのいずれかによる、目視によるものであり得る（単純に、形成されたコロニー数を数える）。あるいは、そのテストはより複雑なものであり得、ＤＮＡもしくはＲＮＡに対するプローブ、ＡＴＰ用の試薬等の様々な微生物成分の存在を検出するための様々な試薬；生物発光及びこれらの成分の存在を指示するための他の周知の化学／生化学試薬等、及び／又は生物の存在及び存在する生物のタイプを指示するこれらの試薬を検出するための機器が使用され得る。例えば、ある周知の系では、微生物のインキュベーションを行い、細胞溶解させ、次に微生物内のＡＴＰを検出する試薬を使用する。ルシフェリン及びルシフェラーゼの生物発光反応により、ＡＴＰの存在が可視化される。このような系の１つは、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ）からＭｉｃｒｏｓｔａｒ（Ｒ）システムとして販売されている。クロマトグラフィーによる指標、蛍光指標等を利用した他の系も本分野で公知である。
【実施例１】
【００２４】
直接植菌
マグネシウム陽イオン又はシプロフロキサシン抗生物質含有又は非含有のＳＣＤＢ培地が入った試験管に、２００コロニー形成ユニット（ｃｆｕ）のＳ．ａｕｒｅｕｓ（黄色ブドウ球菌、ＡＴＣＣ  ６５３８）を植菌した。試料Ａには、シプロフロキサシン試料（１００μｇ／ｍｌ）が使用され、２価陽イオン成分は含まれていなかった。Ｂには、シプロフロキサシン試料（１００μｇ／ｍｌ）が使用され、０．５Ｍ  マグネシウム陽イオンが含まれていた。Ｃには、対照試料が使用され、Ｂと同じ２価陽イオン、０．５Ｍが含まれていた。Ｄには、対照試料が使用され、２価陽イオンは含まれていなかった。
【００２５】
表１にその結果を示す。
【００２６】
【表１】
2006051028.tif 000002
【実施例２】
【００２７】
濾過した場合
Ｄｕｒａｐｏｒｅ（Ｒ）膜を含有する４個のＭｉｌｌｉｆｌｅｘ（Ｒ）漏斗のうち２個を介して、オフロキサシン抗生物質試料（４ｍｇ／ｍｌを、１０ｍｌ）を濾過した。各膜フィルターを、ＵＳＰ  Ｆｌｕｉｄ  Ａ  リンス液１００ｍｌで６回リンスしたが、最後のリンスには、約２０から６０ｃｆｕのＥ．コリ、ＡＴＣＣ  ８７３９）が含まれていた。ＵＳＰ  Ｆｌｕｉｄ  Ａ中のＥ．コリの対照も、Ｍｉｌｌｉｆｌｅｘ（Ｒ）漏斗を介して濾過した。次に、全ての膜を増殖培地（ダイズカゼインダイジェスト寒天培地、Ｓｏｙｂｅａｎ  Ｃａｓｅｉｎ  Ｄｉｇｅｓｔ  Ａｇａｒ）に置き、試料Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤとした。Ａには、オフロキサシン試料が使用され、２価陽イオン成分は含まれていなかった。Ｂには、オフロキサシン試料が使用され、０．５Ｍ  ２価陽イオン（マグネシウム）が含まれていた。Ｃには、対照試料が使用され、Ｂの２価陽イオン、０．５％が含まれていた。Ｄには、対照試料が使用され、２価陽イオンは含まれていなかった。
【００２８】
表２にその結果を示す。
【００２９】
【表２】
2006051028.tif 000003
【００３０】
抗生物質存在下での例から分かるように、培地に２価陽イオンが含まれていない場合は、微生物増殖が抑制された。これにより、偽陰性となる可能性を制限又は排除して、抗生物質のバイオバーデン又は無菌テストを行うことができるようになる。
【実施例３】
【００３１】
無菌テスト
オフロキサシン抗生物質試料（４０ｍｇ／ｍｌを、２０ｍｌ）を、それぞれがＤｕｒａｐｏｒｅ（Ｒ）膜を含有する、４対のうち２つのＳｔｅｒｉｔｅｓｔＴＭキャニスターセットを介して濾過した。各膜フィルターを３回、ＵＳＰ  Ｆｌｕｉｄ  Ａ  リンス液１００ｍｌでリンスしたが、最後のリンスには約３０ｃｆｕのＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ（枯草菌、ＡＴＣＣ  ６６３３）が含有されていた。ＵＳＰ  Ｆｌｕｉｄ  Ａ中のＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓの対照も、Ｓｔｅｒｉｔｅｓｔ装置を介して濾過した。次に、増殖培地（ダイズカゼインダイジェスト寒天培地、Ｓｏｙｂｅａｎ  Ｃａｓｅｉｎ  Ｄｉｇｅｓｔ  Ａｇａｒ）Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤに、各キャニスターを添加した。
【００３２】
表３にその結果を示す。
【００３３】
【表３】
2006051028.tif 000004
【００３４】
０．１、０．２、０．３及び０．４Ｍのマグネシウム陽イオン濃度で、２価陽イオンを含むＳＣＤＢを用いた、オフロキサシンによる実験で、同様の結果が得られた。また、さらに２種類のフルオロキノロン類、モキシフロキサシン及びシプロフロキサシンを用いて行った、０．３Ｍ  濃度の２価陽イオン（マグネシウム）を含有するＳＣＤＢを用いた実験で、同様の結果が得られた。
【実施例４】
【００３５】
空気モニタリング試験
抗生物質製造工場における空気のモニタリング方法の１つは、寒天の表面に空気を叩きつけ、その寒天表面の微生物及び抗生物質の両方を回収するというものである。様々な量のマグネシウム陽イオンを含有する寒天表面全体に微生物を広げ、次に抗生物質を含有するディスクをその寒天表面上に置くことで、この試験をシミュレートした。各ディスク周囲の阻害ゾーンを測定して、その抗生物質の影響に対する培地の中和能に関する指標を与えた（次の方法は、臨床微生物学において用いられる、感受性ディスク試験と同様である。）。
【００３６】
Ｓ．ａｕｒｅｕｓ（黄色ブドウ球菌、ＡＴＣＣ６５３８）、Ｐ．ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ（緑膿菌、ＡＴＣＣ  ９０２７）又はＥ．ｃｏｌｉ（Ｅ．コリ、ＡＴＣＣ  ２５９２２）を、０．１Ｍ、０．２Ｍ、０．３Ｍ、０．４Ｍ又は０．５Ｍマグネシウム陽イオンを含有するＳＣＤＡの寒天培地表面に広げた。次に、既知の量の抗生物質を浸透させたディスクを、寒天プレート上の細菌の上に置いた。このプレートのインキュベーションを行い、細菌増殖が抑制されたゾーンを測定した。この細菌増殖が抑制されたゾーンが減少していれば、陽イオン含有培地が保護効果を有することが示される。３種類の抗生物質、オフロキサシン（フルオロキノロン）、ストレプトマイシン（アミノグリコシド）及びドキシサイクリン（テトラサイクリン）に対する結果を、表４に示す。
【００３７】
【表４】
2006051028.tif 000005
【００３８】
他の８種類のフルオロキノロン剤、シプロフロキサシン、モキシフロキサシン、エノキソシン（ｅｎｏｘｏｘｉｎ）、エンロフロキサシン、レボフロキサシン、レモフロキサシン（ｌｅｍｏｆｌｏｘａｃｉｎ）、ノルフロキサシン及びスパルフロキサシンを用いた場合も、同様の結果が見られた。
【外国語明細書】
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