(57)【要約】【課題】  培養バッグ等の袋状容器内で細胞等を培養する場合、容器が柔軟性を有するために変形し易く、取り扱い時に、変形や若干の振動で容器内に複雑で大きな流動が生じ、せっかくできあがった細胞のクラスターが壊れ、細胞の成長、増殖、分化、および／または選択が阻害または抑制され、培養に支障をきたすことがあった。【解決手段】  細胞と培養液が充填された袋状容器２を、トレイ本体３の床面３１と押さえ板４との間に挟んで圧迫し、本来柔軟な容器壁２２にテンションを生じさせることによって、容易には変形しない容器化し、通常の取り扱いでは、容器内の培養液に不用な流れを生じさせないようにした、袋状容器２を収容して培養するための培養用トレイ１を提供する。【選択図】図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
細胞と培地とを含む液状物が収容された柔軟性を有する袋状容器を保持する培養用トレイであって、
袋状容器を床面に配置できるトレイ本体と、袋状容器をトレイ本体の床面との間に挟んで圧迫できる押さえ板とを備えたことを特徴とする培養用トレイ。
【請求項２】
押さえ板の袋状容器と接する位置に複数の通気孔を有することを特徴とする請求項１に記載の培養用トレイ。
【請求項３】
押さえ板の袋状容器と接する位置に複数の凸状構造部を有することを特徴とする請求項１または請求項２の何れかに記載の培養用トレイ。
【請求項４】
押さえ板の袋状容器と接する面の表面荒さが最大高さで２０ミクロン以上であることを特徴とする請求項１ないし請求項３の何れかに記載の培養用トレイ。
【請求項５】
袋状容器を挟んだときのトレイ本体の床面と押さえ板との間の隙間を維持する隙間維持機構を有することを特徴とする請求項１ないし請求項４の何れかに記載の培養用トレイ。
【請求項６】
隙間維持機構が、押さえ板をトレイ本体の床面方向に付勢するばね部材を有することを特徴とする請求項５に記載の培養用トレイ。
【請求項７】
隙間維持機構が、押さえ板の外側に配置される開閉自在な蓋体と、蓋体を閉じた状態で固定可能な固定具とを有し、ばね部材が蓋体と押さえ板との間に配置されていることを特徴とする請求項６に記載の培養用トレイ。
【請求項８】
トレイ本体及び／または蓋体に通気孔を有することを特徴とする請求項１ないし請求項７の何れかに記載の培養用トレイ。
【請求項９】
トレイ本体の床面が、透明な袋状容器を配置したときに倒立顕微鏡により袋状容器内を観察可能な透明性を有することを特徴とする請求項１ないし請求項８の何れかに記載の培養用トレイ。
【請求項１０】
保持される袋状容器が、実質的に液状物の全周囲を容器壁により覆う容器であることを特徴とする請求項１ないし９の何れかに記載の培養用トレイ。
【請求項１１】
袋状容器に収容される細胞の少なくとも一部が浮遊性を有する細胞であることを特徴とする請求項１ないし請求項１０の何れかに記載の培養用トレイ。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、袋状容器内で効率よく細胞を培養するための培養用トレイに関し、さらに詳しくは、袋状容器内の培地等の流動性を制限することによって細胞の成長、増殖、分化、および／または選択を促進させる培養用トレイに関する。
【背景技術】
【０００２】
細胞を生体の外で培養するために、培養用のフラスコまたは袋状容器である培養バッグが用いられる。培養バッグは、培養時には、容器壁から無菌的に酸素または二酸化炭素のガス交換を行うことができる。また、内容物の排出時または他の容器への移し替え時には、容器壁を変形させて内容物を排出することにより、容器内のスペースを外気で置換する必要がないので、無菌操作が容易であり、無菌システムを構築するに当たり不可欠な要素として期待されている。
【０００３】
ところが、従来、培養バッグは、前記の他、さらに、輸送性、廃棄性、培地容器との兼用性等培養用のフラスコに比べて多くのメリットを持っているものの、細胞の成長性、増殖性、分化性、および／または選択性に関しては、まだ、培養用のフラスコに比べて性能が劣っており、使用される範囲が限られてしまっている。
【０００４】
この原因一つとして、培養バッグは、容器が柔軟性を有しているために変形し易く、取り扱い時、例えば、検査または観察のために培養器から出し入れする時の変形または若干の振動で容器内部に複雑で大きな流動が生じ易い．そのために、例えば、浮遊性の細胞では、クラスター化した細胞が壊れてしまい、成長、増殖、分化、および／または選択が阻害または抑制されるという欠点があった。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明が解決しようとする課題は、培養用バッグ等の袋状容器内で細胞等を培養するに当たり、通常の取り扱い時に袋状容器に与えてしまうような若干の振動で、袋状容器内の培地等の液状物の複雑な流動を生じ難い培養用トレイを提供することにある。
【０００６】
更に、細胞の成長、増殖、分化、および／または選択に必要な袋状容器内の酸素バランス及び二酸化炭素バランスを維持し易い培養用トレイを提供することを他の課題とする。
また、倒立顕微鏡観察時に、袋状容器を出し入れすることなく、収容したままで倒立顕微鏡にセットして顕微鏡観察ができる培養用トレイを提供することを更に他の課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の培養用トレイは、細胞と培地とを含む液状物が収容された柔軟性を有する袋状容器を保持する培養用トレイであって、袋状容器を床面に配置できるトレイ本体と、袋状容器をトレイ本体の床面との間に挟んで圧迫できる押さえ板とを備えたことを特徴とする。
【０００８】
すなわち、液状物が充填された袋状容器は柔軟性を有するために変形し易い。特に、培養用の袋状容器は、容器壁でガス交換を行う関係で容器壁は薄く形成されており、より変形し易い。本発明の培養用トレイでは、このような袋状容器をトレイ本体の床面と押さえ板との間に挟んで圧迫することにより、内圧を上昇させて容器壁にテンションを生じさせ、このテンションにより袋状容器を変形し難くしている。そのため、液状物を変形し難い容器壁で覆うことで液状物の流動性を制限することができ、袋状容器の取り扱い時の振動により液状体が流動することを著しく抑えることができる。
特に、袋状容器を圧迫することにより容器壁を実用上変形不能にすれば、液状体の流動を抑制する効果を、一部が硬質の変形しない容器壁で覆われた液状物、すなわち、上面が空気と接する液面である培養用フラスコ内の液状物と同等或いはそれ以上に得ることができる。
【０００９】
また、請求項２に記載の発明は、請求項１に記載の構成に加え、押さえ板の袋状容器と接する位置に複数の通気孔を有することを特徴とする。
すなわち、袋状容器は、培養時に細胞が消費した酸素を容器壁を透過して取り込むとともに、細胞が生成した二酸化炭素を容器壁を透過して廃棄しているが、この容器壁を実質的に通気性のない板と密着させると、その密着部分におけるガス交換が行われず、袋状容器全体としてのガス交換に支障をきたし、結果として細胞の成長、増殖、分化、および／または選択を阻害することになる。そのため、本発明の培養用トレイでは、押さえ板に複数の通気孔を設けることで、容器壁の通気性を維持している。
【００１０】
ここで、通気孔を複数としたのは、一つの通気孔の開口面積を小さくして、複数の通気孔を設けることによって、袋状容器を均一に押さえることができ、かつ、袋状容器の容器壁の通気性を均一にし易いためである。
【００１１】
また、請求項３に記載の発明は、請求項１または請求項２項に記載の構成に加え、押さえ板の袋状容器と接する位置に複数の凸状構造部を有することを特徴とする。
すなわち、本発明の培養用トレイでは、押さえ板の袋状容器と接する位置に複数の凸状構造部を設けることで、押さえ板と袋状容器の密着面を減らすと同時に、押さえ板と袋状容器の間に隙間を設けることができ、請求項２に記載の発明と同様に、通気性を維持し易い。
【００１２】
また、請求項４に記載の発明は、請求項１ないし請求項３に記載の構成に加え、押さえ板の袋状容器と接する面の表面荒さが最大高さで２０ミクロン以上であることを特徴とする。
すなわち、本発明の培養用トレイでは、押さえ板の袋状容器と接する面に２０ミクロン以上の表面荒さの粗面を設けることで、請求項３に記載の発明と同様に、押さえ板と袋状容器の密着面を減らして、押さえ板と袋状容器の問に隙間を設けることができ、通気性を維持し易い。
【００１３】
また、請求項５に記載の発明は、請求項１ないし請求項４項に記載の構成に加え、袋状容器を挟んだときのトレイ本体の床面と押さえ板との間の隙間を維持するための隙間維持機構を有することを特徴とする。
すなわち、本発明の培養用トレイは、袋状容器をトレイ本体の床面と押さえ板との間に挟んでトレイ本体の床面と押さえ板との間の隙間を袋状容器を圧迫するところまで狭めることにより、袋状容器の容器壁にテンションを生じさせて変形しにくくするものであり、トレイ本体の床面と押さえ板との間の隙間を一定に保つための構造として、隙間維持機構を有することにより、圧迫状態を維持することができる。
【００１４】
また、請求項６に記載の発明は、請求項５に記載の構成に加え、隙間維持機構が押さえ板をトレイ本体の床面方向に付勢するばね部材を有することを特徴とする。
すなわち、本発明の培養用トレイでは、隙間維持機構のばね部により押さえ板をトレイ本体の床面方向に付勢するので、袋状容器の厚みにバラつきが存在しても安定した圧力で容器本体を圧迫し易く、トレイ本体の床面と押さえ板との間の隙間を一定に維持し易い。  
【００１５】
また、請求項７に記載の発明は、請求項６に記載の構成に加え、隙間維持機構が押さえ板の外側に配置される開閉自在な蓋体と、蓋体を閉じた状態で固定可能な固定具とを有し、ばね部材が蓋体と押さえ板との間に配置されていることを特徴とする。
すなわち、本発明の培養用トレイは、押さえ板の外側に配置された蓋体を閉じて固定具により固定すれば、蓋体と押さえ板との間でばね部材が圧縮されて、固定された蓋体側から押さえ板を十分な力で確実に付勢できると同時に、蓋体を閉じてトレイ本体に固定されたフック等の固定具に、押さえ板を押しつける反力が負荷されるため、固定具の固定状態を維持し易い。
【００１６】
また、請求項８に記載の発明は、請求項１ないし請求項７に記載の構成に加え、トレイ本体及び／または蓋体に通気孔を有することを特徴とする。
すなわち、本発明の培養用トレイは、トレイ本体と蓋体によって、袋状容器が収容される空間の外気とのガス交換が阻害されることを防ぐために、トレイ本体または蓋体に通気孔を設けている。
【００１７】
また、請求項９に記載の発明は、請求項１ないし請求項８記載の構成に加え、トレイ本体の床面が、透明な袋状容器を配置したときに倒立顕微鏡で袋状容器内を観察可能な透明性を有することを特徴とする。
すなわち、本発明の培養用トレイは、トレイ本体の床面を透明にすることにより、袋状容器を取り出さずにそのまま倒立顕微鏡での観察を可能にしたため、作業を容易にできると共に、振動をより与え難くできる。
なお、このトレイ本体の床面の透明性は、袋状容器の透明性と合わせて倒立顕微鏡での観察が可能な程度であればよい。また、トレイ本体の床面の厚さは、厚いと深度の浅い高倍率での観察ができなくなるので、薄い方が好ましい。
【００１８】
また、請求項１０に記載の発明は、請求項１ないし９の何れかに記載の構成に加え、保持される袋状容器が、実質的に液状物の全周囲を容器壁により覆う容器であることを特徴とする。
すなわち、本発明の培養用トレイは、保持される袋状容器が実質的に液状物の全周囲を容器壁により覆う容器であるため、袋状容器内が液状物で満たされて、容器の振動に影響される液面をより少なくでき、その結果、容器壁を変形し難くすることで、液状物の流動性を制限する効果を顕著に得やすい。
【００１９】
また、請求項１１に記載の発明は、請求項１ないし請求項１０の何れかに記載の培養用トレイにおいて、袋状容器に収容される細胞の少なくとも一部が浮遊性を有する細胞であることを特徴とする。
すなわち、リンパ球のように浮遊性を有する細胞は、細胞間の情報伝達のために、クラスターを形成することがあり、この細胞間の伝達が、細胞の成長、増殖、分化、および／または選択に欠かせない要因と考えられるからである。
【００２０】
なお、上記各発明において、トレイ本体の素材としては、ポリスチレン樹脂、アクリル樹脂、ポリカーボネート樹脂他、ポリプロピレン樹脂等、剛性と透明性を有するエンジニアリング樹脂の中から選定できる。
また、押さえ板の素材としては、ポリスチレン樹脂、アクリル樹脂、ポリカーボネート樹脂、ポリプロピレン樹脂、高密度ポリエチレン樹脂等、剛性を有するエンジニアリング樹脂の中から選定できる。
更に、ばね部材の素材としては、金属はもちろんのこと、エラストマー、一般のプラスチック樹脂、柔軟性を有するプラスチックの発泡体、例えば、ウレタン発泡体等の中から選定できる。
【発明の効果】
【００２１】
以上のとおり本発明によれば、培養用バッグ等袋状容器内で細胞等を培養するに当たり、袋状容器が変形しにくく、取り扱い時に袋状容器に与えてしまうような若千の振動では、袋状容器内の培地等液状物の内部に複雑な流れを生じない培養用トレイを提供することができる。
また、細胞の成長、増殖、分化、および／または選択に必要な、袋状容器内の酸素バランス及び二酸化炭素バランスを維持できる培養用トレイを提供することができる培養用トレイを提供することができる。
また、上記の結果として、袋状容器内で細胞等を培養するに当たり、細胞の成長性、増殖性、分化性、および／または選択性の良い培養用トレイを提供することができる。
【００２２】
また、倒立顕微鏡観察時に、トレイ本体から出し入れすることなく、トレイ本体に収容したまま倒立顕微鏡にセットして容易に顕微鏡観察ができる培養用トレイを提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
本発明の実施の形態を図面を参照しながら説明する。
【００２４】
［実施の形態１］
図１ないし図３に示すが如く、本実施の形態の培養用トレイ１は、細胞と培地を含む液状物２１が収容された柔軟性を有する袋状容器２を箱状のトレイ本体３に収容して保持するものであり、トレイ本体３の床面３１に配置された袋状容器２を、床面３１との間に挟んで圧迫することにより、液状物２１の流動性を制限するための押さえ板４を有している。
さらに、押さえ板４とトレイ本体３の床面３１との間の隙間を維持するための隙間維持機構として、押さえ板４の外側に配置されて蝶番６１によってトレイ本体３に開閉自在に取り付けられた蓋体６と、蓋体６に取り付けられ、押さえ板４を蓋体６側からトレイ本体３の床面３１方向に付勢して袋状容器２を圧迫するための圧迫力を発生するばね部材５と、蓋体６を閉じてフック受け３３に係止することにより、ばね部材５の反力によって開かないように蓋体６を所定位置で固定する固定具としてのフック６２を有している。
【００２５】
ここで、袋状容器２は、培養液の収容部の寸法が縦１１３ｍｍ、横７５ｍｍの袋体であって、容器壁２２は酸素及び二酸化炭素の透過性を有する薄肉樹脂である厚さ０．１ｍｍのＥＶＡ（エチレン酢酸ビニル共重合体）により形成されている。内部には、満注容量の１／２以下となる４０ｍｌの培養液が封入されている。
培養液は、培地中に浮遊性を有する細胞が含有された液状物２１である。この液状物２１は容器壁２２により一部が覆われている状態、即ち、培養液の収容部内に液状物２１と共に気相又は気泡として気体が存在している状態で封入されていてもよいが、より好ましくは、容器壁２２により液状物２１の実質的に全周囲が覆われている状態、即ち、培養液の収容部内が液状物２１で満たされ、容器の振動に影響される液面がより少ない状態で封入されているのが好適である。
【００２６】
また、トレイ本体３は、袋状容器２が収容される収容部の寸法が縦１９０ｍｍ、横１２０ｍｍ、深さ２０ｍｍの箱体であって、厚さ２ｍｍの透明なアクリル樹脂により形成され、側面には、直径４ｍｍの４０ヶの通気孔３２が設けられている。このトレイ本体３の床面３１は、袋状容器２の容器壁２２より硬く、変形し難いものとなっている。
また、押さえ板４には、袋状容器２と接する位置に格子状に通気孔４１が設けられて、寸法が縦１３０ｍｍ、横８５ｍｍの板体であって、厚さ２ｍｍの透明なスチレン樹脂により形成され、縦５ｍｍ、横５ｍｍの通気孔４１が、縦方向、横方向とも８ｍｍ間隔で設けられている。
【００２７】
また、蓋体６は、通気孔６３が設けられた寸法が縦１９０ｍｍ、横１２０ｍｍの板体であって、厚さ２ｍｍの透明なアクリル樹脂により形成され、直径１０ｍｍの１５ヶの通気孔６３が設けられている。
また、ばね部材５は、発泡ウレタンにより形成された寸法が幅１５ｍｍ、高さ２０ｍｍ、長さ８５ｍの角棒様の部材であって、押さえ板４を均一に押すために、蓋体６に２本平行に接着されている。このばね部材５としては、他の発泡樹脂など、蓋体６を閉じて袋状容器２を圧迫する際に、圧縮されて弾性変形可能な程度の弾性を有するものを用いることが可能である。
【００２８】
次に、本実施例の培養用トレイ１の使用方法について説明する。
予め、培養液が封入された袋状容器２を形成しておき、培養用トレイ１の蓋体６を開いて、培養液が充填された袋状容器２をトレイ本体３の床面３１に寝かせて配置し、押さえ板４を袋状容器２の培養液の収容部の容器壁２２に載せ、さらに、蓋体６を閉じて、フック６２をフック受け３３に掛ける。
このとき、袋状容器２の容器壁２２の一方側の面が床面３１に接触すると共に、他方側の面が押さえ板４に接触して、両者間に挟まれてばね部材５の弾性に応じた圧力で圧迫され、容器壁２２の略全体にテンションが負荷される。
【００２９】
この操作により、培養液内部に生じる不用で複雑な流動を抑えることができる。
すなわち、培養用の袋状容器２は、一般に、その容器壁２２でガス交換を行う必要があるので容器壁２２が薄く形成されており、極めて変形しやすく、一般のトレイなどに収容するだけでは、少し斜めにするだけで、袋状容器２内の液状物２１は低い方に流れて片側に寄ってしまう。これを戻そうとしてもなかなか均一にならず、却って、戻そうとする行為が波を生じさせて助長させ、袋状容器２内をいたずらに攪拌してしまい、培養に支障をきたしていた。
ところが、本実施の形態の培養用トレイ１によれば、袋状容器２が圧迫されて容器壁２２にテンションが生じることにより、剛性が増して変形し難くなる。この剛性とは、物質自体の硬さに由来する剛性だけでなく、柔軟性を有する物質でも常時力が加わることによって変形が抑えられる状態も含まれ、柔軟性を有する容器壁に常時テンションが負荷されることにより剛性が増加する。
そのため、液状物２１を変形し難い容器壁２２で覆うことで液状物２１の流動性を制限することができ、通常の取り扱い時に袋状容器２に与えてしまうような若干の振動で袋状容器２内の液状物２１に生じ易い複雑な流れを抑制でき、培養に支障をきたしていた不具合を解消できた。
【００３０】
また、押さえ板４、トレイ本体３、蓋体６に設けられた通気孔４１、３２、６３等により、通気性を確保しているため、袋状容器２内の酸素バランスまたは二酸化炭素バランスを維持できる。
そのため、結果として、この培養用トレイ１は、袋状容器２内で細胞等を培養するに当たり、細胞の成長性、増殖性、分化性、および／または選択性の良いものとなっている。
しかも、細胞の生育状態を観察する場合には、袋状容器２が透明であって、トレイ本体３の床面３１も透明であるため、本実施の形態の培養用トレイ１ごと倒立顕微鏡の試料台の上にのせれば、トレイ本体３から袋状容器２を観察する度に出し入れすることなく、そのまま透明なトレイ本体３の床面３１を透過して袋状容器２の細胞の生育状態を容易に観察できる。また、観察中の操作で容易には培養液中に大きな流れが生じることがないので、観察中の細胞を見失うことも少なくなる。
なお、上記実施の形態１では、押さえ板４として、複数の通気孔４１を有するものについて説明したが、通気孔を設けなくても、押さえ板４として、図４に示すように、袋状容器２との間に空気が流通する隙間ができるように、押さえ板４の袋状容器２と接する面に複数の凸状構造部４２を設けても良い。
また、この実施の形態１では、袋状容器２の液状物２１が収容される収容部の容積は、例えば数ｃｃのように小さくても、或いは、数Ｌのように大きくてもよく、目的に応じて任意に選択可能である。その場合、容積に応じて袋状容器２の構造や容器壁２２の厚さ等も適宜調整することも可能である。
【００３１】
［実施の形態２］
本実施の形態の培養用トレイ１は、図５に示すように、細胞と培地を含む液状物２１が収容された柔軟性を有する袋状容器２を保持するものであり、袋状容器２をトレイ本体３’の床面３１との間に挟んで圧迫することにより、液状物２１の流動性を制限するための押さえ板４を有し、さらに、押さえ板４とトレイ本体３’の床面３１との間の隙間を維持するため隙間維持機構として、蓋体としての押し板６’と、押し板６’に取り付けられ、押さえ板４をトレイ本体３’の床面３１方向に押しつけるばね部材５’と、押し板６’とトレイ本体３’とに位置関係を固定または調整可能に連結されたクリップ、自在結束帯等の固定具６４とにより形成されている。
【００３２】
ここで、袋状容器２、押さえ板４は、実施の形態１と同じである。
また、トレイ本体３’は、袋状容器２が収容される収容部の寸法が縦１９０ｍｍ、横１２０ｍｍ、深さ２０ｍｍの板体であって、厚さ２ｍｍの透明なアクリル樹脂により形成されている。すなわち、ここで言うトレイ本体３’は、必ずしも、高さのある縁のついた容器、または、深さのある容器を意味するのでなく、袋状容器２を収容または載せることができる床面３１を有するものであればよい。
【００３３】
また、ばね部材５’は、発泡ウレタンにより形成された寸法が幅１５ｍｍ、高さ２０ｍｍ、長さ８５ｍｍの角棒様の部材であって、押さえ板４を均一に押すために、押し板６’に２本平行に接着されている。
また、押し板６’は、寸法が縦１９０ｍｍ、横１２０ｍｍの板体であって、厚さ２ｍｍの透明なアクリル樹脂により形成されている。
【００３４】
次に、本実施の形態の培養用トレイ１の使用方法について説明する。
トレイ本体３’に、培養液が充填された袋状容器２を寝かせ、押さえ板４を袋状容器２の培養液の収容部に載せ、さらに、押し板６’を載せてから、トレイ本体３’と押し板６’を、図５のように固定具６４で挟んで固定する。
【００３５】
この操作により、実施の形態１と同様の効果が得られ、通常の取り扱い時に袋状容器２に与えてしまうような振動で袋状容器２内の液状物２１の複雑な流動が生じることを抑制でき、また、通気性も確保できるため、袋状容器２の酸素バランスや二酸化炭素バランスを維持できる。その結果、細胞の成長性、増殖性、分化性、および／または選択性が良い。しかも、観察する際に袋状容器２を取り出す必要もなく、袋状容器２の細胞の生育状態を観察し易い。
なお、本実施の形態２の培養用トレイ１では、ばね部材５’により、袋状容器２を圧迫する圧迫力を得ていたが、ばね部材５’の代わりに弾性がなくて剛性を有するものを使用し、固定具６４をばね性を有する材料で形成し、固定具６４により、袋状容器２を圧迫する圧迫力を得るようにすることもできる。但し、この時、トレイ本体３’と押し板６’にピン等を設け、固定具６４を固定する機構を設けることも好ましい。
【００３６】
［実施の形態３］
上記実施の形態１及び実施の形態２では、いずれも押さえ板４を蓋体６或いは押し板６’に対してトレイ本体３、３’の床面３１側に付勢したが、この実施の形態３では、図６に示すように、蓋体６或いは押し板６’を用いることなく、押さえ板４’をばね性を有する帯体からなる固定具６４’をばね部材として用い、トレイ本体３’と押さえ板４’とを連結している。この場合、押さえ板４’は固定具６４’により、トレイ本体３’の床面３１側に引張られることにより、袋状容器２の培養液の収容部を床面３１と押さえ板４’との間で圧迫している。
【００３７】
ここでは、押さえ板４’の袋状容器２と接する面が粗面となっており、その表面荒さが最大高さで２０ミクロン以上となっている。このような押さえ板４’であっても、十分に通気性を確保しているため、袋状容器２内の酸素バランスまたは二酸化炭素バランスは維持されている。
なお、袋状容器２及びトレイ本体３は実施の形態２と同様である。
【００３８】
そして、このような実施の形態３であっても、実施の形態１及び２と同様に、通常の取り扱い時に袋状容器２に与えてしまうような振動で袋状容器２内の液状物２１に複雑な流動が生じることを抑制でき、また、通気性も確保できるため、袋状容器２の酸素バランスや二酸化炭素バランスを維持できる。その結果、細胞の成長性、増殖性、分化性、および／または選択性が良い。しかも、観察する際に袋状容器２を取り出す必要もなく、袋状容器２の細胞の生育状態を観察し易い。
【実施例】
【００３９】
実施例
以下の手順にてヒトのリンパ球を培養した。本培養テストでは、サイトメガロウィルスに対して反応するＣＤ４＋Ｔ細胞を増殖させた。培養用トレイ１は上記実施の形態１に示すものを用いた。また、袋状容器２は、容器壁２２が酢酸ビニル含量１０％のＥＶＡ（エチレン酢酸ビニル共重合体）のウルトラセンＵＥ５４０グレード（東ソー株式会社）からなる袋体であり、培養液の収容部の対向する容器壁２２の寸法が縦１１３ｍｍ、横７５ｍｍで、肉厚が０．１１ｍｍ、酸素透過率が２７００ｍｌ／ｃｍ２であった。
ヒトから１００ｍｌの血液を採取し、Ｆｉｃｏｌ（アマシャム  バイオサイエンス株式会社製）を用いた密度勾配遠心分離法で分離して、６２．５×１０５のＰＢＭＣを採取した。
次に、その半数の３１．２５×１０５のＰＢＭＣをＣＭＶ Ｌｙｓａｔｅを添加した培地ＡＩＭ  Ｖ（インビトロジェン社製）と共に袋状容器２に無菌的に封入した。
この時、培養液の総量は１５ｍｌであり、ＡＩＭ  Ｖ培地１３.５ｍｌ、ａｕｔｏ−Ｐｌａｓｍａ（自家血漿）１.５ｍｌに、ＣＭＶ Ｌｙｓａｔｅを培養液１ｍｌあたり１０μｇの濃度になるように添加したものである。
そして、この袋状容器２を本実施例の培養用トレイ１にセットし、押さえ板４で袋状容器２を圧迫することにより培養液の流れを抑制しながら培養した。
また、培養条件は、温度３７℃、湿度９５％、二酸化炭素５％とした。
【００４０】
９日目に、細胞の成長状態を観察した。その後、培養液１ｍｌあたりＩＬ−２を５０ＩＵとＣＭＶ  Ｌｙｓａｔｅを１０μｇを含む培養液１０ｍｌを追加した。
さらに、前記条件で４日間培養を続け、総日数で１３日目に、細胞の成長状態を観察するとともに、ＦＡＣＳ解析を行い、細胞の活性等を評価した。
なお、培養９日目の観察時に撮影した本実施例の顕微鏡写真を図７に、培養１３日目の観察時に撮影した本実施例の顕微鏡写真を図９に示した。また、ＦＡＣＳ解析の結果を表１に示した。
【００４１】
比較例
押さえ板４を用いず、内容液の流れを抑制しなかった以外は、実施例と同じ方法で培養及び評価を行った。なお、ＰＢＭＣは実施例で採取したＰＢＭＣの残りの半数を使用した。
なお、培養９日目の観察時に撮影した比較例の顕微鏡写真を図８に、また、培養１３日目の観察時に撮影した比較例の顕微鏡写真を図１０に示した。また、ＦＡＣＳ解析の結果を表１に示した。
【００４２】
【表１】
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【００４３】
本実施例の培養結果である写真１及び写真３を、比較例の写真２及び４と比較すると、本実施例の培養トレイ１で培養することにより、すなわち、押さえ板４で内容液の流れを抑制しながら培養することによって、比較例に比べて、すなわち、押さえ板４を使用しない場合に比べて、細胞の生存率または増殖率が、明らかに高いことが分かる。
さらに、ＦＡＣＳ解析によれば、すなわち、表１によれば、本実施例のトレイで培養することにより、増殖率が良く、目的細胞の収率が良く、すなわち、ＣＤ４＋Ｔ細胞の収率が良く、ナイーブ細胞からメモリー細胞への移行も良好な、活性の高い細胞が得られていることが確認できた。
ここで、ＣＭＶ  Ｌｙｓａｔｅはサイトメガロウィルスの溶解液、ＰＢＭＣは採取した末梢血単核球、ＦＡＣＳは表面マーカー解析を表している。
【図面の簡単な説明】
【００４４】
【図１】本発明の実施の形態１の培養用トレイの一例を示す斜視である。
【図２】本発明の実施の形態１の培養用トレイの一例を分解して斜視図で示したものである。
【図３】本発明の実施の形態１の培養用トレイの断面を斜視図で示したものである。
【図４】本発明の実施の形態１の培養用トレイに使用される押さえ板のもう一つの例を斜視図で示したものである。
【図５】本発明の実施の形態２の培養用トレイの断面を斜視図で示したものである。
【図６】本発明の実施の形態３の培養用トレイの断面を斜視図で示したものである。
【図７】培養９日目の観察時に撮影した本実施例の顕微鏡写真である。
【図８】培養９日目の観察時に撮影した比較例の顕微鏡写真である。
【図９】培養１３日目の観察時に撮影した本実施例の顕微鏡写真である。
【図１０】培養１３日目の観察時に撮影した比較例の顕微鏡写真である。
【符号の説明】
【００４５】
１  培養用トレイ
２  袋状容器
３、３’  トレイ本体
４  押さえ板
５  ばね部材
５’押し具
６  蓋体
６’押し板
２１  液状物
２２  容器壁
３１  トレイ本体の床面
３２  通気孔
３３  フック受け
４１  通気孔
４２  凸状構造物
６１  蝶番
６２  フック
６３  通気孔
６４  固定具
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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