(57)【要約】【課題】簡単で使い捨て可能な破砕用キットを提供すること。【解決手段】開口を有し試料を収容するための袋と、袋を試料に押しつけて試料を破砕するために袋に設けられた複数の硬質の粒状部材と、前記開口を開閉するための開閉部材を備えた破砕用キット。【選択図】図４
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
開口を有し試料を収容するための袋と、袋を試料に押しつけて試料を破砕するために袋に設けられた複数の硬質の粒状部材と、前記開口を開閉するための開閉部材を備えた破砕用キット。
【請求項２】
前記袋が内袋と外袋とからなる二重構造を備え、前記粒状部材が内袋と外袋との間に収容されてなる請求項１記載の破砕用キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
この発明は、破砕用キットに関し、主に生体の組織片や食品からタンパク質や核酸を抽出するために組織片を破砕するための破砕用キットに関する。
【背景技術】
【０００２】
一般的に、生体から取り出した組織片からタンパク質や核酸（ＤＮＡ，ＲＮＡ）を抽出するには、組織片を破砕して細胞内からタンパク質や核酸成分を抽出する方法が採られている。そして、その破砕装置としては、組織片とビーズを収容する容器を揺動装置に装填し、容器を揺動させて組織片を破砕するようにした、いわゆるビーズ法の装置が知られている（例えば、特許文献１参照）。
【特許文献１】特公平６−３６７３２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら、このような従来の破砕装置は、高価な専用の装置が必要であり、前もって試料の種類に応じた回転数や揺動時間などを設定する必要がある。この発明はこのような事情を考慮してなされたもので、構造や操作が簡単で、迅速に効率よく組織片を破砕でき、安価な破砕用キットを提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
この発明は、開口を有し試料を収容するための袋と、袋を試料に押しつけて試料を破砕するために袋に設けられた複数の硬質の粒状部材と、前記開口を開閉するための開閉部材を備えた破砕用キットを提供するものである。
前記袋が内袋と外袋とからなる二重構造を備え、前記粒状部材が内袋と外袋との間に収容されてもよい。
【発明の効果】
【０００５】
袋の中に試料を挿入し、開閉部材で開口を閉じ、袋を試料に押しつけると、粒状部材により試料が効率よく破砕される。従って、きわめて構成が単純で、操作が容易な使い捨て可能な破砕用キットが安価に提供される。なお、袋が二重構造であれば、内袋のみを使い捨てにすることも可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
以下、図面に示す実施形態に基づいてこの発明を詳述する。これによってこの発明が限定されるものではない。
破砕用キットの概要
この発明の破砕用キットは、図１に示す袋１を備え、袋１は開口２を有する。袋１は図４に示すように試料３（図４）を収容可能で可撓性を有し、開口２を開閉するための開閉具、ここではクリップ４を備える。袋１には、袋１を試料３（図４）に押しつけることにより試料３を破砕するための複数の硬質の粒状部材が設けられる。
【０００７】
図２は図１に示す袋１の上面図、図３は図２のＡ−Ａ矢視断面図である。
図２，図３に示すように、袋１は内袋５と外袋６とからなる二重構造を備え、内袋５と外袋６との間に複数の硬質粒状部材、ここではビーズ７が収容されている。使用時には、図４に示すように、外袋６にビーズ７を収容し、さらに内袋５を収容して袋１を形成する。そして、袋１の中（つまり内袋５の中）に試料３と適量のバッファを収容し、開口２をクリップ４で閉じる。そして、袋１の外側から内側に向けて押圧するように、袋１を使用者が手で揉む。それによってビーズ７が試料３を破砕する。使用者は手の感触により破砕の程度を確認しつつ、試料３を適当な大きさまで破砕する。そのようにしてバッファ中にホモジナイズされた試料３を含む内容物は、クリップ４をはずして内袋５から外へ取り出され、その上清中に含まれる成分（タンパク質や核酸）が測定される。
なお、使用時において、外袋６にビーズを収容し、試料３と適量のバッファを収容した内袋５を外袋６にセットするようにしても良い。また、袋１を使用者が手で揉む代わりに、ローラを備えた装置を用いて試料を破砕するようにしても良い。なお、バッファを収容した容器をキット化するようにしても良い。
【０００８】
袋１の構成
袋１は、図３に示すように内袋５と、内袋５を収容する外袋６とからなるが、内袋５および外袋６の材料としては、強度，柔軟性，耐薬品性などを考慮すると、ラテックス（ＮＲラテックス，天然ゴムラテックス，ニトリルゴム）や塩化ビニル樹脂などが好ましい。内袋５，外袋６の厚さは使用するビーズ７のサイズにもよるが、通常、０.０１〜１.０ｍｍの範囲にあればよく、好ましくは０.１〜０.５ｍｍ、最も好ましくは０.１〜０.２ｍｍ程度である。
内袋５と外袋６のサイズは、試料３の大きさやバッファの量にもよるが、通常、内袋５は外周６０ｍｍ，長さ８０ｍｍの円筒形、外袋６は外周７０ｍｍ，長さ８０ｍｍの円筒形で、図３に示すように、基端にいずれも開口を有し、先端はいずれもドーム状で角部分のないことが望ましい。
【０００９】
内袋５や外袋６は、例えば次のようにして製造される。
材料に天然ゴムラテックスを用いる場合、ガラス製の円柱状の袋用型をこのラテックスに浸漬する。型を引き上げ、乾燥させて型の表面にゴム膜を形成する。次に、ゲルリーチングによる洗浄を行った後、このゴム膜を加硫する。さらに、ポストリーチングによる洗浄を行うことにより所望の袋が得られる。成膜処理は袋の所望厚さに応じて１回以上行われる。ゲルリーチングおよびポストリーチング洗浄は、いずれも、室温から８０℃程度の水にゴム膜付の袋の型を３０秒〜５分程度浸漬すればよい。
【００１０】
硬質粒状部材
この発明に適用される硬質粒状部材（ビーズ）としては、球状で硬度の高いものが望ましい。その材料としてはセラミック，シリカ，ガラス，炭化珪素，ジルコニアなどが挙げられる。粒径としては、０.１〜４.０ｍｍの範囲にあればよいが、試料が動物組織の場合には１.０〜１.５ｍｍが好適である。
なお、このような種々のビーズは、フナコシ株式会社からQ・BIOgene社製のBio Pulverizer Systemとして市販されている。
【００１１】
開閉部材
袋１の開口を開閉する開閉部材としては、市販の結束バンドやクリップを好適に利用することができる。
【００１２】
キットの性能評価
ここで、この発明による破砕用キットを用いて、実際の生体組織片をバッファ中で破砕し、ホモジナイズされた測定試料を作成した。そして、その測定試料を従来のように遠心分離し、その上清からたんぱく質を測定し、従来のビーズ法の装置を用いた場合と比較した。その測定条件と測定結果を以下に示す。
【００１３】
本発明の条件
・袋          材料：天然ゴムラテックス
厚さ：０.２ｍｍ
サイズ：内袋  外周６０ｍｍ，長さ８０ｍｍ
外袋  外周７０ｍｍ，長さ８０ｍｍ
・ビーズ          ：Q・BIOgene社製Lysing MatrixD（6913-010型）
・ビーズ使用個数  ：約５０個
・バッファ使用量  ：１ｍＬ
・ホモジナイズ時間：１分間
比較例の条件
・使用ビーズ法装置：Q・BIOgene社製Fast Prep FP100A
・ビーズ          ：Q・BIOgene社製 Lysing MatrixF（6915-010型）
・ビーズ使用個数  ：約５０個
・バッファ使用量  ：０.５ｍＬ
・ホモジナイズ時間：４０秒（最大設定可能時間）
【００１４】
共通条件
・使用バッファ    ：プロテアーゼインヒビター含有Lysis Buffer
・対象生体組織    ：牛胃由来組織，豚由来筋組織（各５００ｍｇ）
・遠心分離条件    ：１５Ｋｒｐｍ，１０分
・タンパク量測定  ：BIORAD Protein assay（タンパク質測定キット）
Molecular Devices tunable microplate reader VERSA max
（吸光度測定装置）
【００１５】
測定結果
（ホモジナイズ後の上清中に含まれる総タンパク質）／（試料重量）×１００＝回収率（％）として、算出した結果は、下表の通りである。
【００１６】
【表１】
2006230279.tif 000003
【００１７】
【表２】
2006230279.tif 000004
【００１８】
表１，２から、本発明を用いると、従来のビーズ法を用いた場合に比べて、タンパク質回収率が優れていることが分かる。
【００１９】
他の実施形態
図５は、この発明の他の実施形態を示す図３対応図である。
この破砕用キットは、図５に示す袋１ａを備え、袋１ａは開口２ａを有する。袋１ａは、周壁内に埋設され一体に成型された複数のビーズ７を備える。その他の構成および使用方法は図１〜図４に示す実施形態と同等である。なお、袋１ａは、例えば、次のようにして製造される。
【００２０】
材料に天然ゴムラテックスを用いる場合、ガラス製の円柱状の袋用型をラテックスに浸漬する。型を引き上げ、乾燥させて、型の表面に１層目のゴム膜を形成する。次に、ゲルリーチングによる洗浄を行った後、このゴム膜を加硫する。次にポストリーチングによる洗浄を行う。次に、ゴム膜の表面に複数のビーズを一様な密度で接着剤により接着し、再びラテックスに浸漬する。型を引き上げ、乾燥させて２層目のゴム膜を形成する。
次にゲルリーチングによる洗浄を行った後、２層目のゴム膜を加硫し、さらにポストリーチングによる洗浄を行う。これによって、図５のようにビーズ７が埋設された袋１ａが得られる。
【００２１】
さらに他の実施形態
図６はこの発明のさらに他の実施形態を示す図３対応図である。この破砕用キットは、図６に示す袋１ｂを備え、袋１ｂは開口２ｂを有する。袋１ａは、内壁に一様に取り付けられた複数のビーズ７を備える。その他の構成および使用方法は、図１〜図４に示す実施形態と同等である。なお、袋１ｂは例えば、次のようにして製造される。
材料に天然ゴムラテックスを用いる場合、ガラス製の円柱状の袋用型をラテックスに浸漬する。型を引き上げ、乾燥させて型の表面にゴム膜を形成する。次に、ゲルリーチングによる洗浄を行った後、このゴム膜を加硫する。さらにポストリーチングによる洗浄を行うことにより、ゴム袋が得られる。得られたゴム袋の表面に接着剤を用いて複数のビーズ７を適当な密度で接着する。そして、ゴム袋を袋用型からはずし、表裏を反転させると、図６に示す袋１ｂが得られる。
【図面の簡単な説明】
【００２２】
【図１】この発明による実施形態の袋の側面図である。
【図２】図１に示す袋の上面図である。
【図３】図２のＡ−Ａ矢視断面図である。
【図４】図１に示す袋の使用状況を示す説明図である。
【図５】この発明による他の実施形態の図３対応図である。
【図６】この発明によるさらに他の実施形態の図３対応図である。
【符号の説明】
【００２３】
１  袋
２  開口
３  試料
４  クリップ
５  内袋
６  外袋
７  ビーズ
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
2006230279.tif 000009
【図６】
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