(57)【要約】  【課題】培養細胞の培養基質やナノマシンの支持体として利用可能な機能性材料を提供する。  【解決手段】 本発明は、微生物セルロースからなるハニカム状多孔質体、ならびにハニカム状多孔質体を鋳型として多孔質体の表面凹凸とは逆の凹凸パターンを有する固体栄養培地を調製する工程、該固体栄養培地に微生物セルロースを産生する微生物を接種する工程、及び相対湿度９０％以上、二酸化炭素濃度５０％以上の雰囲気下で該微生物に微生物セルロースを産生させる工程を含む、微生物セルロースからなるハニカム状多孔質体の製造方法を提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
微生物セルロースからなるハニカム状多孔質体。
【請求項２】
アセトバクター・キシリナム、アセトバクター・パスツリアヌス、アセトバクター・アセチ、アセトバクター・ランセンス、ザルチナ・キシロイデス、シュードモナス属細菌、アグロバクテリウム属細菌またはリゾビウム属細菌により産生される微生物セルロースからなる、請求項１記載のハニカム状多孔質体。
【請求項３】
孔径が１０ｎｍ〜１０００μｍ、厚みが０．１〜１０μｍである、請求項１に記載のハニカム状多孔質体。
【請求項４】
ハニカム状多孔質体を鋳型として多孔質体の表面凹凸とは逆の凹凸パターンを有する固体栄養培地を調製する工程、該固体栄養培地に微生物セルロースを産生する微生物を接種する工程、及び相対湿度９０％以上、二酸化炭素濃度５０％以上の雰囲気下で該微生物に微生物セルロースを産生させる工程を含む、微生物セルロースからなるハニカム状多孔質体の製造方法。
【請求項５】
微生物セルロースを産生する微生物がアセトバクター・キシリナム、アセトバクター・パスツリアヌス、アセトバクター・アセチ、アセトバクター・ランセンス、ザルチナ・キシロイデス、シュードモナス属細菌、アグロバクテリウム属細菌またはリゾビウム属細菌である、請求項４に記載の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、微生物が産生する微生物セルロースからなるハニカム状多孔質体ならびにその製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ある種の微生物は、植物由来のセルロースとは異なる、微生物セルロース（Bactrerial Cellulose、ＢＣ）と呼ばれる特徴的なセルロースを産生することが、広く知られている。特に酢酸菌（Acetobacter属細菌）が好気性培養条件下で良質なＢＣを産生することは、Hestrinら（非特許文献１）によって報告されている。
【０００３】
ＢＣは、一般に、結晶性および一軸配向性が非常に高いセルロースを主とする多糖類であり、非常に細いリボン状繊維が複雑に絡み合ったネットワーク状の構造を有するポリマーである（非特許文献２）。このＢＣの産業への利用例としては、食品、各種工業材料、医療材料、化成品等の種々の方面において、例えば可食性セルロース、音響機器材料、外科用包帯、医薬含浸パッドなどの具体的な製品が提案されている。
【０００４】
また、高機能性ポリマー材料の一つとして、ハニカム構造体あるいはハニカム状多孔質体と呼ばれる機能性高分子材料（以下、ハニカム状多孔質体と表す）が、近年注目を集めている。ハニカム状多孔質体とは、一般的には、星形ポリマーや線状ポリマーなどからなる、サブミクロン〜ミクロンスケールサイズの空孔あるいは窪みが最密充填された（ハニカム状の）構造を有する薄膜構造体として理解されている。
【０００５】
ハニカム状多孔質体の例としては、親水性アクリルアミドポリマーを主鎖骨格とし、疎水性側鎖としてドデシル基と親水性側鎖としてラクトース基或いはカルボキシル基を併せ持つ両親媒性ポリマーからなるハニカム状多孔質体（非特許文献３）、線状ポリスチレンからなるハニカム状多孔質体（特許文献１）、ポリイミドからなるハニカム状多孔質体（特許文献２）などがある。
【０００６】
ハニカム状多孔質体の製造法としては、自己凝集力の強い部分と柔軟性を発現する部分とを併せ持つ特殊なポリマーを利用し、これらのポリマーを疎水性有機溶媒に溶解し、これをキャストする手法（非特許文献４）が報告されている。また、ポリマー溶液を冷却して溶液表面に雰囲気中の蒸気を結露させることにより、その液滴の一部を上記ポリマー溶液の表面から内部に入り込ませ、次に上記溶媒を蒸発させ、その後、上記結露した液滴を除去することを特徴とする製造方法も報告されている（特許文献１）。
【０００７】
ハニカム状多孔質体は、微細空孔が規則的に配列した形状を有することから、半導体低誘電率材料、電子ディスプレイ用散乱層、磁気記録材料、細胞培養用基材など、多様な用途への応用が検討されている。
【特許文献１】特開平８−３１１２３１号
【特許文献２】特開２００３−８０５３８号
【非特許文献１】Hestrin,S.ら、Nature、1947年、第159巻、第4028号、第64-65頁
【非特許文献２】「先端材料シリーズ  微生物と材料」、2001年、日本材料科学会 編、東京  裳華房
【非特許文献３】Nishikawaら、Polymer Journal、2002年、第34巻、第3号、第166-174頁
【非特許文献４】Widanskiら、Nature、1994年、第369巻、第387-389頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
構造上の特性から種々の機能が期待されるハニカム状多孔質体を、ポリマー素材として有望なＢＣで製造することができれば、それぞれの長所を備えたＢＣからなるハニカム状多孔質体（以下、ＢＣハニカム状多孔質体と表す）という、新たな機能性材料の提供の途を開くことができる。しかしながら、この様なＢＣハニカム状多孔質体は、実際には製造、入手されるまでには至っていない。
【０００９】
本発明の目的は、ＢＣハニカム状多孔質体を提供すること、ならびにその効率的な製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは、既知の製法によって調製されるハニカム状多孔質体を鋳型にして、該ハニカム状多孔質体の表面凹凸パターンとは逆のパターンの凹凸を表面に有する固体栄養培地を用意し、この固体培地上でＢＣを産生する微生物（ＢＣ産生微生物）にＢＣを産生させることで、ＢＣハニカム状多孔質体を製造することが可能であることを見いだし、本発明を完成した。              
即ち本発明は、以下の１）〜５）に掲げる発明を提供するものである。
【００１１】
１）ＢＣハニカム状多孔質体。
【００１２】
２）アセトバクター・キシリナム、アセトバクター・パスツリアヌス、アセトバクター・アセチ、アセトバクター・ランセンス、ザルチナ・キシロイデス、シュードモナス属細菌、アグロバクテリウム属細菌またはリゾビウム属細菌により産生されるＢＣからなる、１）に記載のＢＣハニカム状多孔質体。
【００１３】
３）孔径が１０ｎｍ〜１０００μｍ、厚みが０．１〜１０μｍである、１）に記載のＢＣハニカム状多孔質体。
【００１４】
４）ハニカム状多孔質体を鋳型として多孔質体の表面凹凸とは逆の凹凸パターンを有する固体栄養培地を調製する工程、該固体栄養培地にＢＣを産生する微生物を接種する工程、及び相対湿度９０％以上、二酸化炭素濃度５０％以上の雰囲気下で該微生物にＢＣを産生させる工程を含む、ＢＣハニカム状多孔質体の製造方法。
【００１５】
５）ＢＣを産生する微生物がアセトバクター・キシリナム、アセトバクター・パスツリアヌス、アセトバクター・アセチ、アセトバクター・ランセンス、ザルチナ・キシロイデス、シュードモナス属細菌、アグロバクテリウム属細菌またはリゾビウム属細菌である、４）に記載の製造方法。
【発明の効果】
【００１６】
本発明のＢＣハニカム状多孔質体は、各種細胞の培養基質、通気性の創傷被覆材、ナノマシンの支持体などに利用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
＜ＢＣ産生微生物＞
これまでの研究によって、アセトバクター属細菌をはじめ、シュードモナス属細菌、アグロバクテリウム属細菌、リゾビウム属細菌等、種々の微生物について、ＢＣを産生することのできる微生物として報告されている。本発明においては、この様なＢＣを産生することのできる微生物、すなわちＢＣ産生微生物であれば、いずれも利用可能な微生物として理解されるべきである。また、これまでに単離報告されていない新種の微生物、あるいは既知のＢＣ生産菌の亜種や変異株であっても、本発明における培養条件でＢＣを産生し得る微生物であれば、それらも利用可能であると解するべきである。
【００１８】
本発明で用いられる好適なＢＣ産生微生物の例としては、アセトバクター・キシリナム（Acetobactor xylinum）、アセトバクター・パスツリアヌス(A.pasturianus)、A.アセチ(A.aceti)、A.ランセンス(A.ransens)、ザルチナ・ベントリクリ(Sarcinaventriculi)、バクテリウム・キシロイデス(Bacterium xyloides)、あるいはこれらのＢＣ生産性の亜種もしくは変異株が挙げられる。特にアセトバクター属細菌、中でもA.xylinum、あるいはA.aceti  Sp. xylinum、A. pasturianus、A.ransensの使用が好ましい。
【００１９】
＜ＢＣ＞
一般に、ＢＣの化学的構造はそれを産生する微生物によって異なり、セルロースを主鎖とし、その他の構成成分としてマンノース、フラクトース、ガラクトース、キシロース、アラビノース、ラムノース、ウロン酸等の六炭糖、五炭糖および有機酸等を含むヘテロ多糖や、β、α等のグルカン等を含むものもある。本発明では、微生物によって産生されるセルロースを主とする多糖類であれば、上記のような構造的な差異に関わらず、いずれも本発明のハニカム状多孔質体を構成するＢＣとして利用可能である。
【００２０】
本発明で好適なＢＣは、アセトバクター属細菌が産生するＢＣである。このＢＣは、構造的にはセルロースＩαと呼ばれる構造を有しており、生分解性であることや強度特性などの理由から、環境調和型の天然高分子材料への応用という点で有利である。
【００２１】
＜ＢＣハニカム状多孔質体＞
本発明のＢＣハニカム状多孔質体は、多数のサブミクロン〜ミクロンスケールサイズの空孔あるいは窪みが最密充填された（ハニカム状の）構造パターンを有する、すなわち空孔あるいは窪み部分が最密充填的に構成されるように繊維状のＢＣが伸展してなる構造を有する、ＢＣセルロースの薄膜構造体である（図１、図２）。
【００２２】
本発明のＢＣハニカム状多孔質体の孔部分の径は、概ね１０ｎｍ〜１０００μｍの範囲の値、好ましくは０．１μｍ〜１００μｍ、より好ましくは２０〜３０μｍの範囲の値をとることができる。また、ハニカム状の壁の部分の高さもしくは厚みは、使用するＢＣ産生微生物の量あるいはＢＣを産生させる時間にもよるが、０．１〜１０μｍの範囲の値を採ることができる。これらのサイズは、後に述べるように、ＢＣ産生微生物にＢＣを産生させる際に使用する固体栄養培地の表面の凹凸形状の寸法を、そしてこの固体栄養培地の凹凸形状の寸法を決定することとなるハニカム状多孔質体の凹凸の寸法を調節することによって、間接的に制御することができる。
【００２３】
ハニカム状多孔質体は、非特許文献１〜４や特許文献１または２などの、公知の方法によって適当なポリマー溶液から調製することができる。例えば、アクリルアミド、ポリスチレン、ポリカプロラクトン、ポリイミンあるいはそれらの混合物や共重合体などを用いて、上記文献等に開示されている方法に従うことで、所望の孔径や厚みを有するハニカム状多孔質体を調製することができる。一般に、公知の方法によって調節可能なハニカム状多孔質体の孔径は、１μｍ〜１０００μｍとされている。また、ポリマー溶液を冷却して溶液表面に雰囲気中の蒸気を結露させることにより、その液滴の一部を上記ポリマー溶液の表面から内部に入り込ませ、次に上記溶媒を蒸発させ、その後、上記結露した液滴を除去することを特徴とする製造方法（特許文献１）を利用する際に、相対湿度３０％以上の湿度を有する流速１０〜１００Ｌ／分の気流下で溶媒を蒸発させることで、１０ｎｍ〜１００ｎｍといったサブミクロンレベルの微小な孔径を有するハニカム状多孔質体を調製することも可能である。
【００２４】
本発明では、ハニカム状多孔質体は後に述べる固体栄養培地の調製のための鋳型として使用可能なものであればよい。すなわち、サブミクロン〜ミクロンスケールサイズの空孔あるいは窪みが最密充填された構造を有する薄膜構造体であればよく、その材質や調製方法には何ら制限はされない。従って、従来公知の方法に改良あるいは改変を加えた方法で調製されたハニカム状多孔質体であっても、その特有の構造を有する物であれば、いずれも利用可能である。以下、本発明で固体栄養培地の調製のために使用されるハニカム状多孔質体を、第１鋳型と表す。
【００２５】
ハニカム状多孔質体を鋳型として多孔質体の表面凹凸とは逆の凹凸パターンを有する固体栄養培地を調製する工程とは、第１鋳型のハニカム状の凹凸パターンを、ＢＣ産生微生物が資化可能な適当な栄養源を含む固体培地に転写し、第１鋳型の凹凸パターンとは逆のパターンの凹凸を有する、すなわち第１鋳型の孔部分が盛り上がり、第１鋳型のポリマー部分に相当する凹部を有する固体栄養培地を調製する工程である。
【００２６】
典型的な例としては、ヘストリンとシュラムによって開発された培地（ＨＳ培地、Biochem.J.,第５８巻、第３４５頁（1954年））を溶解した寒天溶液を調製し、これを第１鋳型の凹凸面の上側からに注いだ後、あるいは該寒天溶液の表面に第一鋳型の凹凸面側を接触させながら、寒天溶液を冷却して固化させ、第１鋳型を固化した寒天から引きはがすことによって、所望の凹凸パターンを有する固体栄養培地を調製することができる（図３）。ここで得られる固体栄養培地の凹凸の寸法は、使用した第１鋳型の凹凸、すなわち細孔の孔径や孔の深さ等によって定まることになるので、第１鋳型の孔径や孔の深さもしくは該多孔質体の厚みを調節することで、固体栄養培地の凹凸のサイズを調整することができる。なお、上記の操作において使用する寒天に代えて、適当な条件で液体状態と固体状態が相互に変換可能なもの、例えばアルギン酸やゼラチンなどを用いても、所望の固体栄養培地を調製することが可能である。
【００２７】
なお、第１鋳型を構成するポリマーと固体栄養培地との相性等の問題から、固体栄養培地と第１鋳型のスムーズな剥離が困難な場合には、かかる問題の生じない別のポリマーを介して第１鋳型の凹凸パターンを固体栄養培地に転写してもよい。例えば、第１鋳型に適当なポリマー、例えばポリジメチルシロキサンを注ぎ、これを固化させた後、第１鋳型から剥離することによって、第１鋳型の凹凸パターンとは逆のパターンの凹凸を有する、すなわち第１鋳型の孔部分が盛り上がり、第１鋳型のポリマー部分に相当する凹部を有するシート（第２鋳型）を調製し、さらにこの第２鋳型に対してさらにポリマー、例えば第２鋳型と同じポリジメチルシロキサンを加えて固化させ、剥離することで、第１鋳型と同じ凹凸パターンを有するシート（第３鋳型）を調製する。この第３鋳型を利用して、前記の第１鋳型から固体栄養培地に直接凹凸パターンを転写した方法と同様の操作を行うことによって、最終的に第１鋳型の凹凸パターンとは逆のパターンの凹凸を有する、すなわち第１鋳型の孔部分が盛り上がり、第１鋳型のポリマー部分に相当する凹部を有する固体栄養培地を調製することができる。
【００２８】
固体栄養培地に微生物セルロースを産生する微生物を接種する工程は、予め適当な培地、例えばＨＳ液体培地で増殖させたＢＣ産生微生物を固体栄養培地に接種する工程である。接種は、予め増殖させたＢＣ産生微生物の細胞懸濁液を固体栄養培地上に添加して行うことが好ましい。
【００２９】
添加する細胞懸濁液の量は、固体栄養培地表面の凹凸が添加した細胞懸濁液に没する程度を加えてもよく、また凹部分にのみ細胞懸濁液を溜めて、凸部の一部は細胞懸濁液に没することなく露出する程度を加えてもよい。前者の添加からは、凸部に相当する窪みが規則的に並んだＢＣハニカム状多孔質体が得られ、後者からは、懸濁液に浸せきしていた凸部分の寸法を有する、一方の面から他方の面に貫通した孔が規則的に並んだＢＣハニカム状多孔質体を得ることができる。
【００３０】
ＢＣ産生微生物の細胞懸濁液は、ＢＣ産生微生物を適当な液体培地に接種し、当該微生物にとって好適な培養条件下で培養し、６６０ｎｍにおける吸光度（ＯＤ）で０．０５〜０．２程度まで増殖させたブロスをそのまま用いてもよく、また細胞を遠心分離操作等で回収した後、新鮮な液体培地、生理食塩水あるいは適当な緩衝液に再懸濁して用いてもよい。新鮮な液体培地に回収した細胞を再懸濁した場合には、これを固体栄養培地に接種後、さらに該固体栄養培地上でＢＣ産生微生物を生育させてもよい。
【００３１】
相対湿度９０％以上、二酸化炭素濃度５０％以上の雰囲気下で該微生物にＢＣを産生させる工程は、固体栄養培地上に接種された微生物に多量のＢＣを産生させ、固体栄養培地上でＢＣハニカム状多孔質体を調製する工程である。固体栄養培地上に接種されたＢＣ産生微生物は、二酸化炭素濃度５０％以上の雰囲気下でインキュベーションされることによって、自身の増殖を殆ど行わず、より多量のＢＣを産生するようになる。この現象は、０〜１００％の酸素気流下や０〜１００％の窒素気流下では、観察されない。ＢＣ産生微生物の多く、特にアセトバクター属細菌は好気性微生物であり、従って従来ＢＣの産生は専ら大気組成中で行われてきた。今回見いだされた高濃度の二酸化炭素気流下でＢＣがより多量に産生されるという知見は、予期せぬものであった。なお、ＢＣの産生時には微生物の増殖は特に必要ではないため、殆ど酸素が存在せず実質的に二酸化炭素濃度が１００％である雰囲気下でインキュベーションしても、特に問題はない。また、相対湿度を９０％以上に保つのは、固体栄養培地上に接種したＢＣ産生微生物の細胞懸濁液を乾固させないための措置であり、従って相対湿度が１００％としても、本発明の方法に対しては何ら支障とはならない。
【００３２】
この様にして微生物にＢＣを産生させると、固体栄養培地上で細胞懸濁液が存在するパターン通りに、非常に細いリボン状繊維が複雑に絡み合ったネットワーク状の構造が形成される。その結果、孔がハニカム状に規則的に並んだ構造、すなわち空隙部分あるいは窪みを規則的に（ハニカム状に）構成するように繊維状のＢＣが伸展してなる構造を有する、ＢＣハニカム状多孔質体が形成される。
【００３３】
インキュベーション時間は、４８〜１４４時間の範囲で設定することができる。特に、本発明では、インキュベーション時間を調節することによって、得られるハニカム状多孔質体のＢＣ部分の緻密さ、多孔質体の膜厚などを調節することができる。一般に、長時間インキュベートすることによって、より緻密で膜厚の厚いハニカム状多孔質体を得ることができる。また、固体栄養培地上でのＢＣ産生微生物のインキュベーション温度は、使用するＢＣ産生微生物の種類にもよるが、概ね２７〜２９℃の範囲で設定すればよい。
【００３４】
インキュベーション温度、相対湿度ならびに二酸化炭素濃度は、それぞれを任意に調節することができる適当な培養装置を用意し、調節すればよい。また、後述する実施例に示したような装置を使用してもよい。
【００３５】
以上の工程を経て固体栄養培地上に生成されたＢＣハニカム状多孔質体は、固体栄養培地から剥離したり、あるいは加熱によって固体栄養培地を再び溶解させたりすることで、容易に回収することができる。また、用途に応じて、希アルカリ、希酸、有機溶剤、熱水等を単独あるいは組み合わせて、回収後のＢＣハニカム状多孔質体を洗浄し、そのままあるいはこれを乾燥させて使用してもよい。
【００３６】
上記の製造法において、固体栄養培地に含めることのできる栄養源としては、炭素源、窒素源、無機塩類、アミノ酸、ビタミン等の有機微量栄養素など、ＢＣ産生微生物が必要とする栄養源あるいは資化可能な栄養源であれば、いずれも利用可能である。特にこれらの栄養源を組み合わせてなる調製培地の利用が便利である。調製培地の例としては、普通寒天培地、ＨＳ培地などを挙げることができる。固体栄養培地に接種するために予めＢＣ産生微生物を増殖させるときの培地も、前記の培地を利用することができる。本発明で好ましい調製培地はＨＳ培地である。
【００３７】
また、インキュベーションによるＢＣの産生量を増加させるため、使用するＢＣ産生微生物の増殖あるいはＢＣ産生にとって好ましい任意成分を適宜追加して、培地組成を改良することも可能である。例えば、ＢＣ生産性を向上させる目的でイノシトールやフィチン酸あるいはピロロキノリンキノンを添加してもよい。また、ＢＣの収率を高めるために、セルラーゼ製剤をセルラーゼ活性を保持させた形で微量添加することもできる。
【００３８】
また、培地のｐＨ範囲は、使用するＢＣ産生微生物毎に好適な範囲を設定すればよいが、概ねｐＨ４〜６、好ましくは４．５〜５．５であればよい。ｐＨの設定は、クエン酸塩のごとき緩衝剤を培地に加えることにより、あるいは所望の範囲にｐＨを維持するのに十分な量の塩基又は酸を培地に加えることにより、調節することができる。
【００３９】
以下、実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、これらの説明は本発明を限定的に解釈するためのものでないことは言うまでもない。また、実施例中の％は特に断らない限り重量％を意味する。
【実施例１】
【００４０】
ドデシルアクリルアミドとω−カルボキシヘキシルアクリルアミドの共重合体とポリカクロラクトンとの混合比１：９の混合物１０ｍｇを溶解したクロロホルム溶液５ｍｌを、ガラスシャーレ上に滴下し、飽和水蒸気を２リットル／分の流量にて吹き付けて、ハニカム状多孔質体である第１鋳型を調製した。光学顕微鏡による観察から、直径２５μｍ程度の微細孔が最密充填された構造のハニカム膜が生成していることを確認した。
【００４１】
ポリジメチルシロキサン（ＰＤＭＳ）からなるシリコンエラストマーを作成する東レダウコーニング社製のキット（シルガード１８４）を用い、第１鋳型と液状ＰＤＭＳとを接触させ、７０℃で４５分維持してＰＤＭＳを固化させた。固化したＰＤＭＳを第１鋳型から剥離して、第２鋳型を得た。第２鋳型をさらに液状ＰＤＭＳとを接触させ、７０℃で４５分維持してＰＤＭＳを固化させた。固化しＰＤＭＳを第２鋳型から剥離して、第３鋳型を得た。
【００４２】
ＨＳ培地（０．５％イースト抽出物、０．５％ペプトン、２．０％グルコース、０．１１５％クエン酸、０．２７％リン酸水素二ナトリウム）を含む１．５％寒天溶液をオートクレーブで滅菌した後、シャーレに移し、この上に第３鋳型を置き、寒天を凝固させた。第３鋳型を寒天から剥離し、固化した寒天の１ｃｍ×１ｃｍ大の切片を取り出して別のシャーレに移し、本発明の固体栄養培地とした。
【００４３】
１リットル容量の三口セパラブルフラスコを用意し、第一口には温度並びに湿度を測定するセンサーを設け、第二口はガス流入口として二酸化炭素ガスボンベに接続し、第三口はガス排出口として利用した。このフラスコに５００ｍｌの水を加え、木片を浮かべ、マントルヒーター上に設置した。
【００４４】
三角フラスコに３０ｍｌのＨＳ液体培地を加え、アセトバクター・キシリナム（ＡＴＣＣ５３５８２）を接種して、好気条件下、２８℃で４８時間静置培養を行い、６６０ｎｍＯＤで０．０９４に達するまで培養を行った。この培養ブロス２０μｌを先に用意したシャーレ上の１ｃｍ×１ｃｍの固体栄養培地に接種した後、シャーレごとセパラブルフラスコの中の木片上に置き、マントルヒーターでフラスコを加熱した。フラスコ中の水温を２８〜２９℃に、相対湿度を９０％に維持し、ボンベから二酸化炭素を０．０５〜０．１リットル／分でフラスコに流入させた（二酸化炭素濃度８５％）。
【００４５】
インキュベーション開始から２日後に固体栄養培地上に白濁が認められた。インキュベーションを６日間行った後、固体栄養培地を回収し、沸騰水に加えて固体栄養培地を溶解させ、残留フィルムを回収して温水で洗浄し、乾燥して、ＢＣハニカム状多孔質体を得た。
【００４６】
このＢＣハニカム状多孔質体を電子顕微鏡で観察したところ、孔径２５μｍの貫通した孔が最密充填された構造を有することが確認された（図１、２）。
【図面の簡単な説明】
【００４７】
【図１】図１は、本発明のＢＣからなるハニカム状多孔質体の電子顕微鏡写真である。
【図２】図２は、本発明のＢＣからなるハニカム状多孔質体の電子顕微鏡写真（部分拡大図）である。
【図３】図３は、本発明で使用する固体栄養培地表面の電子顕微鏡写真である。
【図１】
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【図２】
2006325534.tif 000003
【図３】
2006325534.tif 000004