(57)【要約】【課題】本発明の目的はこれまでササ抽出物の成分としては着目されていなかった化合物の抽出量を考慮し、それらを効率よく得られる製造方法を提供し、もって、広汎な薬理作用に優れたササ抽出物を提供することにある。【解決手段】乾燥させた笹の葉および／または稈と水を１００：５０〜１００：１５０の重量混合比の下、蒸煮温度１２０〜１７０℃で蒸煮したのち、水性溶媒で抽出してなり、抽出液の加熱残分を４０〜６０重量％に調整したときのフェニルプロパノイドが２．５ｍｇ／ｇ以上含有することを特徴とするササ抽出物。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
乾燥させた笹の葉および／または稈と水を１００：５０〜１００：１５０の重量混合比の下、蒸煮温度１２０〜１７０℃で蒸煮したのち、水性溶媒で抽出してなり、抽出液の加熱残分を４０〜６０重量％に調整したときのフェニルプロパノイドが２．５ｍｇ／ｇ以上含有することを特徴とするササ抽出物。
【請求項２】
フェニルプロパノイドが、クマル酸である請求項１記載のササ抽出物。
【請求項３】
水性溶媒抽出温度が、１００〜１５０℃であることを特徴とする請求項１または２記載のササ抽出物。
【請求項４】
水性溶媒が、水またはアルカリ水溶液である請求項１〜３いずれか記載のササ抽出物。
【請求項５】
乾燥させた笹の葉および／または稈と水を１００：５０〜１００：１５０の重量混合比の下、蒸煮温度１２０〜１７０℃で蒸煮したのち、水性溶媒で抽出することを特徴とするササ抽出物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は抗菌剤、抗ウィルス剤、抗腫瘍剤、抗変異原性剤、抗炎症剤として有用なササ抽出物、および該抽出物の製造方法に関する。本発明のササエキスは、笹の葉および／または稈と水を１００：５０〜１５０の重量混合比で蒸煮することによって特定の成分を効率よく抽出することができる。
【背景技術】
【０００２】
ササ類には古くから薬効が認められており、ササ抽出物にも抗炎症・抗潰瘍、血圧降下作用、抗腫瘍等の薬理作用が数多く報告されている（J.Hokkaido For.Prod.Res.Inst.Vol.9,No.6,1995、昭和医学会雑誌第48巻、第5号、595-600、1988等）。
ササ抽出物中の有効成分としては可溶性ヘミセルロースの抗腫瘍性が注目されており、中でもキシロオリゴ糖を中心とした多糖類が抗腫瘍効果発現に重要な役割を演じていると考えられている。特開平06−197800号公報、特開平11−199502号公報等にはササ類の葉および／または稈を高温、高圧の飽和水蒸気処理することで糖類を効率よく抽出する方法が開示されている。また、特開2002−322079号公報には高温、高圧の飽和水蒸気処理で得られたササ抽出物をピロリ菌に対する抗菌、除菌剤に用いている。
【０００３】
上記公知の文献では、いずれも、フェニルプロパノイド成分には全く言及されておらず、また、通常の製法ではフェニルプロパノイド特にクマル酸の含有量はあまり多くないために、本発明が目的とするエキスとは異なるものであった可能性が高い。
フェニルプロパノイド類の生理活性として、特開2003−176225号公報には口腔、皮膚科領域の酸化ストレスによる組織障害作用の抑制、酸化ストレスを惹起する病原菌の生体付着抑制効果、特開2001−245629号公報には活性酸素除去能、免疫賦活作用、抗アレルギー作用、特開2002−275058号公報には血糖値降下能、特開2002−371002号公報には免疫増強作用、血圧降下作用、血流改善作用に有効であることが開示されているが、ササ類の抽出物には全く言及していない。
【特許文献１】特開平06−197800号公報
【特許文献２】特開平11−199502号公報
【特許文献３】特開2002−322079号公報
【特許文献４】特開2003−176225号公報
【特許文献５】特開2001−245629号公報
【特許文献６】特開2002−275058号公報
【特許文献７】特開2002−371002号公報
【非特許文献１】J.Hokkaido For.Prod.Res.Inst.Vol.9,No.6,1995
【非特許文献２】昭和医学会雑誌第48巻、第5号、595-600、1988
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の目的はこれまでササ抽出物の成分としては着目されていなかった化合物の抽出量を考慮し、それらを効率よく得られる製造方法を提供し、もって、広汎な薬理作用に優れたササ抽出物を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は乾燥させた笹の葉および／または稈と水を１００：５０〜１００：１５０の重量混合比の下、蒸煮温度１２０〜１７０℃で蒸煮したのち、水性溶媒で抽出してなり、抽出液の加熱残分を４０〜６０重量％に調整したときのフェニルプロパノイドが２．５ｍｇ／ｇ以上含有することを特徴とするササ抽出物に関する。
【０００６】
また、本発明は、フェニルプロパノイドが、クマル酸である上記ササ抽出物に関する。
【０００７】
また、本発明は、水性溶媒抽出温度が、１００〜１５０℃であることを特徴とする上記ササ抽出物に関する。
【０００８】
また、本発明は、水性溶媒が、熱水またはアルカリ水溶液である上記ササ抽出物に関する。
【０００９】
また、本発明は、乾燥させた笹の葉および／または稈と水を１００：１５０の重量混合比の下、蒸煮温度１２０〜１７０℃で蒸煮したのち、水性溶媒で抽出することを特徴とするササ抽出物の製造方法に関する。
【発明の効果】
【００１０】
本発明により、広汎な薬理作用に優れた、フェニルプロパノイド類を多量に含有するササ抽出物が得られる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明で用いる笹は、クマザサ属に属するものが好ましく、例えばゴテンバザサ、カツラギザサ、スズダケ、ミヤマクマザサ、ネマガリダケ、ミヤコザサ、ホソバザサ、クマイザサ、クマザサ、チュウゴクザサ等があり中でもクマイザサが最も好ましい。また笹の葉および稈中に蓄積される成分が季節により変動することは良く知られており、本発明に用いる場合は７〜９月に収穫される笹が最適である。
【００１２】
本発明の蒸煮に用いる笹の葉および／または稈は十分に乾燥したものが好ましく、好ましい水分は笹の葉および／または稈全体に対して１０％以下であり、それより多い場合であると腐敗、発酵により成分が変質する恐れがある。本発明の蒸煮に用いる笹の葉および／または稈の形態については細片化したものが好ましく、好ましい大きさは０．５〜２０ｍｍであり、０．５ｍｍよりも小さいと抽出後の固液分離が困難となり２０ｍｍよりも大きいと抽出効率が悪くなる。
【００１３】
本発明の蒸煮は高温、高圧に耐えうる装置であれば如何なるものでも実施でき、蒸煮時の乾燥させた笹の葉および／または稈と水の比は１００：５０〜１５０の混合比が最も好ましい。１００：５０よりも少ない水の比率下ではヘミセルロース等の加水分解に必要とされる水分量が不足し、１００：１５０よりも多い水の比率下では蒸気が笹葉に到達せず細胞壁の破壊がほとんど起こらないため所望の成分を十分に抽出することができない。また、蒸煮時の温度は１２０〜１７０℃が最も好ましい。１２０℃未満では笹中のヘミセルロースの分解による細胞壁の破壊がほとんど起こらないため所望の成分を十分に抽出することができず、１７０℃より高温ではクマル酸などの有効成分の分解が激しくなり薬効が損なわれるおそれがある。蒸煮を行なう時間は３０秒から１時間の間が好ましく、さらに好ましくは５分から２０分の間が良く、３０秒より短いとヘミセルロースの加水分解が不十分となり成分量が少なくなり、1時間より長いと得られた成分の分解が起こりやはり得られる成分量が少なくなる場合がある。蒸煮終了後、加圧を解除する際は一気に装置を開放形にして大気圧とする方がササの葉または稈の組織破壊がより進み、抽出効率が向上するので好ましい。
【００１４】
水性溶媒で抽出方法は、蒸煮後に、冷却もしくは温度を保持したまま、水性溶媒を添加し、室温から１７０℃の条件で、前記水性溶媒に、蒸煮されたササの葉または稈を漬浸する。抽出時の温度は１００〜１５０℃が最も好ましい。１００℃未満では抽出効率が低下し、１５０℃より高温では有効成分の分解が激しくなりやはり得られる成分量が少なくなる。抽出を行なう時間は１０分から１時間の間が好ましく、さらに好ましくは１５分から３０分の間が良く、１０分より短いと溶出量が少なくなり抽出効率が低下し、1時間より長いと得られた成分の分解が起こりやはり得られる成分量が少なくなる。
【００１５】
本発明に用いられる水性溶媒は水が好ましく、ササ抽出物の用途によって許される場合はアルカリ水溶液を用いることで抽出効率を上げることができる。本発明に用いられるアルカリ水溶液は水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウム、炭酸水素アンモニウム等が好ましい。また、用途によって可能な範囲でメタノール、エタノール、アセトン等の水溶性溶媒またはそれらの水溶液を用いることもできる。
【００１６】
本発明において、蒸煮工程、抽出工程は、それぞれを本発明の主旨を逸脱しない範囲で、繰り返し行われていてもよい。また、各工程前後に、さらに、保持工程などの他の工程が設けられていてもよい。
【００１７】
本発明のササ抽出物に含まれるフェニルプロパノイドが抗菌性、抗変異原性、抗酸化作用を発現するメカニズムは明確になってはいないがフェニルプロパノイド以外も含むササ抽出成分による相乗効果により各単独成分よりも大きな効果を発揮すると推定される。
【００１８】
本発明のササ抽出物に含まれるフェニルプロパノイドとしてはクマル酸、フェルラ酸、カフェ酸、バニリン等があり含有量としてはクマル酸が最も多く次いで多いのはフェルラ酸である。例えば抗菌剤または抗変異原性剤として有効に作用するのに必要なフェニルプロパノイドの含有量としては全てのフェニルプロパノイドの総量としてササ抽出物中に２．５ｍｇ／ｇ以上、好ましくはクマル酸単独で１ｍｇ／ｇ以上であれば高い抗菌性と抗変異原性を得ることができる。
【００１９】
本発明のササ抽出物の形態は、溶液であっても固形であってもよく、また、その他の化合物との混合物であってもよい。混合物である場合は、スプレードライ、凍結乾燥、デキストリンなど造形剤添加等の処理したものであってもよい。さらに、濾過、カラム精製、溶剤洗浄などの選別工程を経たものであってもよい。
【００２０】
本発明のササ抽出物は様々な菌類に対して抗菌作用が発揮され、例えば、大腸菌、黄色ブドウ球菌、緑膿菌、破傷風菌、クロストリジウム属ガス壊疸菌、カンジタ菌、白癬菌、ケカビ、クモノスカビ、アスペルギルス属菌、クリプトコッカス属菌、コクシジオイデス属菌、ヒストプラズマ属菌、Peptostreptococcus anaerobius,Peptostreptococcus asaccharolyticus,Peptostreptococcus indolicus, Peptosteptococcus prevotii, Micromonas micros, Finegoldia magna, Staphylococcus saccharolyticus, Streptococcus intermedius,Steiptococus constellatus,Atopobium parvulum,Gemella morbillorumなどの嫌気性グラム陽性球菌、
【００２１】
Propionibacterium acnes, Propionibacterium granulosum,Eggerthella lenta,Actinomyces odontolyticus, Bifidobacterium adolescentis, Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium pseudolongum,Mobiluncus spp. などの嫌気性グラム陽桿菌、
Bacteroides fragilisペニシリン耐性, Bacteroides fragilisカルバペネム耐性, Bacteroides vulgatus, Bacteroides distasonis, Bacteroides ovatus, Bacteroides thetaiotaomicron, Bacteroides uniformis, Bacteroides eggerthii,Bacteroides ureolyticus, Campylobacter gracilis, Sutterella wadsworthensis, Prevotella bivia, Prevotella buccae, Prevotella corporis, Prevotella heparinolytica, Prevotella intermedia, Prevoterlla melaninogenica, Prevotella oralis, Prevotella oris ,Porphyromonas asaccharolytica, Porphyromonas gingivalis, Fusobacterium nucleatum, Fusobacterium varium, Fusobacterium necrophrum, Bilophila wadsworthia, Desulfovibrio piger, Capnocytophage ochraceaなどの嫌気性グラム陰性桿菌、
【００２２】
Clostridium diffioile, Clostriduim sordellii,Clostridium septicum, Clostridium perfringens, Clostridium ramosum, Clostridium clostridiiforme, Clsotridium bifermentans, Clostridium sordellii,Clostridium novyi Type A, Clostridium sporogenes, Clostridium botulinum, clostridium tetaniiなどの嫌気性有芽胞菌
Escherichia coli, Enterobacter cloacae, Flavobacterium meningosepticum, Pseudeomonas aeruginosaなどの通性嫌気性グラム陰性桿菌、
Staphylococcus aureus MSSA,Staphylococcus aureus MRSA, Staphylococcus epidermidis, Staphylococcus hemolyticus, Gardnerella vaginalisなどの通性嫌気性グラム陽性球菌、
Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus brevis ss. brevis, Lactobacillus casei ss. casei, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus salivarius ss. salivariusなどの通性嫌気性グラム陽性桿菌、などの菌に対する抗菌性を示す。
【００２３】
本発明の使用形態は特に限定はなく、固状、液状、半固体状のいずれの形態でもよく、経口、非経口の何れも可能であるが、例えば、経口的に摂取する場合には、食品添加剤として食品に添加して摂取することができる。食品添加剤として用いる場合には、その添加量については、特に限定的ではなく、食品の種類に応じ適宜決めればよい。例えば、清涼飲料、炭酸飲料などの液体食品や菓子類やその他の各種食品等の固形食品に添加して用いることができる。また、その他に、本発明の抽出物を人体に投与する場合の投与方法の一例を示すと次の通りである。投与は、種々の方法で行うことができ、例えば、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、シロップ剤等による経口投与とすることができる。経口投与剤は、通常の製造方法に従って製造することができる。例えば、デンプン、乳糖、マンニット等の賦形剤、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ヒドロキシプロピルセルロース等の結合剤、結晶セルロース、カルボキシメチルセルロースカルシウム等の崩壊剤、タルク、ステアリン酸マグネシウム等の滑沢剤、軽質無水ケイ酸等の流動性向上剤等を適宜組み合わせて処方することにより、錠剤、カプセル剤、顆粒剤等として製造することができる。
また、化粧品等に添加して皮膚等に塗布することによっても有効に使用できる。化粧品に添加する場合には、化粧品の本来の機能を阻害しない範囲において、添加量を適宜決めればよい。
【００２４】
本発明の抽出物のその他の用途としては、噴霧剤、座剤、防腐剤、はみがき剤、石鹸、シャンプー、化粧水、軟膏、皮膚貼り付けフィルム、消毒液、浴用剤、化粧品などの、医療品もしくは医療補助品、耳栓、手袋、帽子、白衣、眼帯などの医療用品、空気清浄機、クーラー、掃除機、換気扇、マスクなどのフィルタ、カーペット、床板、壁板、壁紙などの室内建装材、機器、家具や雑貨などの保護シート、保護カバー、保護板、マスターバッチ、塗料、インキ、衣服、肌あて、寝具、包帯、ガーゼ、ハンカチ、ペナント、クロスなどの日用布製品、包装紙、ノート、メモ書き、ウエットティッシュなどの日用紙製品などが挙げられる。
【実施例】
【００２５】
以下、実施例により、本発明をさらに詳細に説明する。なお、％は重量％を示す。
＜実施例１＞
０．５〜５ｍｍに粉砕された水分７％の乾燥したクマイザサの葉および稈４００ｇと純水４００ｇ（含水率５０重量％）を高圧蒸煮缶に仕込み、１０分間かけて１６０℃まで昇温させそのままの温度で１０分間保持後一気に加圧解除した。高圧加水蒸煮した葉および稈に水４ｋｇを加えて室温から１１０℃まで５分間かけて昇温し、そのままの温度で３０分間保持後加圧状態を解除した。抽出液をろ過、減圧濃縮して加熱残分５０％のササ抽出液を得た。
【００２６】
＜実施例２＞
０．５〜５ｍｍに粉砕された水分７％の乾燥したクマイザサの葉および稈４００ｇと純水４００ｇ（含水率５０重量％）を高圧蒸煮缶に仕込み、１０分間かけて１７０℃まで昇温させそのままの温度で１０分間保持後一気に加圧解除した。高圧加水蒸煮した葉および稈に水酸化ナトリウム１．８ｇを溶解した水４ｋｇを加えて室温から１１０℃まで５分間かけて昇温し、そのままの温度で３０分間保持後加圧状態を解除した。抽出液をろ過、減圧濃縮して加熱残分５０％のササ抽出液を得た。
【００２７】
（比較例１）
０．５〜５ｍｍに粉砕された水分７％の乾燥したクマイザサの葉および稈４００ｇを高圧蒸煮缶に仕込み、１０分間かけて１６０℃まで昇温させそのままの温度で１０分間保持後一気に加圧解除した。高圧加水蒸煮した葉および稈に水４ｋｇを加えて室温から１１０℃まで５分間かけて昇温し、そのままの温度で３０分間保持後加圧状態を解除した。抽出液をろ過、減圧濃縮して加熱残分５０％のササ抽出液を得た。
【００２８】
（比較例２）
０．５〜５ｍｍに粉砕された水分７％の乾燥したクマイザサの葉および稈４００ｇと純水３２７ｇ（含水率４５重量％）を高圧蒸煮缶に仕込み、１０分間かけて１８５℃まで昇温させそのままの温度で１０分間保持後一気に加圧解除した。高圧加水蒸煮した葉および稈に水４ｋｇを加えて室温から１１０℃まで５分間かけて昇温し、そのままの温度で３０分間保持後加圧状態を解除した。抽出液をろ過、減圧濃縮して加熱残分５０％のササ抽出液を得た。
【００２９】
（比較例３）
０．５〜５ｍｍに粉砕された水分７％の乾燥したクマイザサの葉および稈４００ｇと純水４００ｇ（含水率５０重量％）を高圧蒸煮缶に仕込み、１０分間かけて１８０℃まで昇温させそのままの温度で１０分間保持後一気に加圧解除した。高圧加水蒸煮した葉および稈に水４ｋｇを加えて室温から８０℃まで５分間かけて昇温し、そのままの温度で３０分間保持後加圧状態を解除した。抽出液をろ過、減圧濃縮して加熱残分５０％のササ抽出液を得た。
【００３０】
＜ササ抽出液の評価＞
（組成分析方法）
Shim-pack PREP-ODS(H)カラム（島津）を装着したHPLCによりクマル酸の定性、定量分析を行なった。
（抗菌性試験方法）
試験菌には、黄色ブドウ球菌：Staphylococcus aureus NBRC12732を用い以下の条件で試験を行った。
菌数をほぼ一定にしたミュラーヒントンブロスに種々の倍率で希釈したササ抽出液を接触させ一定時間培養後菌の増殖を阻止した最小の薬剤濃度（ＭＩＣ）を求め抗菌効果の指標とした。
ＭＩＣが小さいほど抗菌効果が高い。
【００３１】
（評価結果）
以上の評価方法により実施例１および２、比較例１〜３により得られたササ抽出液の評価結果を表１に示す。
【００３２】
【表１】
2006056847.tif 000002
【００３３】
表１により、明らかなように、蒸煮時に混合する水の量がゼロの場合（比較例１）、あるいは、含水量が４５〜５０重量％でも蒸煮温度が１８５℃（比較例２）、１８０℃（比較例３）では、エキスに含まれるクマル酸の収量に明らかな差異が見られた。また、これに対応して黄色ブドウ球菌に対する抗菌性も向上した。
【手続補正書】
【提出日】平成17年12月22日(2005.12.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
乾燥させた笹の葉および／または稈と水を１００：５０〜１００：１５０の重量混合比の下、蒸煮温度１２０〜１７０℃で蒸煮し、加圧を解除した後、加圧下１００〜１５０℃の水性溶媒で抽出してなり、抽出液の加熱残分を４０〜６０重量％に調整したときのフェニルプロパノイドが２．５ｍｇ／ｇ以上含有することを特徴とするササ抽出物の製造方法。
【請求項２】
フェニルプロパノイドが、クマル酸である請求項１記載のササ抽出物の製造方法。
【請求項３】
水性溶媒が、水またはアルカリ水溶液である請求項１または２に記載のササ抽出物の製造方法。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
本発明は、乾燥させた笹の葉および／または稈と水を１００：１５０の重量混合比の下、蒸煮温度１２０〜１７０℃で蒸煮し、加圧を解除した後、加圧下１００〜１５０℃の水性溶媒で抽出してなり、抽出液の加熱残分を４０〜６０重量％に調整したときのフェニルプロパノイドが２．５ｍｇ／ｇ以上含有することを特徴とするササ抽出物の製造方法に関する。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００９
【補正方法】削除
【補正の内容】
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
水性溶媒での抽出方法は、蒸煮後に、冷却もしくは温度を保持したまま、水性溶媒を添加し、蒸煮されたササの葉または稈を漬浸する。抽出時の温度は１００〜１５０℃である。１００℃未満では抽出効率が低下し、１５０℃より高温では有効成分の分解が激しくなりやはり得られる成分量が少なくなる。
抽出を行なう時間は１０分から１時間の間が好ましく、さらに好ましくは１５分から３０分の間が良く、１０分より短いと溶出量が少なくなり抽出効率が低下し、1時間より長いと得られた成分の分解が起こりやはり得られる成分量が少なくなる。