(57)【要約】【課題】  安全で有効な発癌予防剤を提供する。【解決手段】  ２０（２１）‐デヒドロルシデニン酸Ａ，２０（２１）‐デヒドロルシデニン酸Ａメチル，２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｄ2，２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｆ，２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｅ2，２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｎ，２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｐ，ルシデニン酸Ｃメチル，ガノデリン酸ＤＭ，ガノデルマノンジオール，ガノラクトンＡ，９α‐ハイドロキシ‐１，２，３，４，５，１０，１９‐ヘプタノルエルゴスタ‐７，２２‐ジエン‐６，９‐ラクトン，エルゴステロール，５，６‐ジヒドロエルゴステロール，（２４Ｓ）‐エルゴスト‐７‐エン‐３β‐オール，エルゴステロールパーオキサイド，９（１１）‐デヒドロエルゴステロールパーオキサイドのうちの少なくとも１つの化合物を有効成分として含有する。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
２０（２１）‐デヒドロルシデニン酸Ａ，２０（２１）‐デヒドロルシデニン酸Ａメチル，２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｄ2，２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｆ，２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｅ2，２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｎ，２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｐ，ルシデニン酸Ｃメチル，ガノデリン酸ＤＭ，ガノデルマノンジオール，ガノラクトンＡからなる群から選ばれた少なくとも１種のトリテルペン系化合物，及び，
９α‐ハイドロキシ‐１，２，３，４，５，１０，１９‐ヘプタノルエルゴスタ‐７，２２‐ジエン‐６，９‐ラクトン，エルゴステロール，５，６‐ジヒドロエルゴステロール，（２４Ｓ）‐エルゴスト‐７‐エン‐３β‐オール，エルゴステロールパーオキサイド，９（１１）‐デヒドロエルゴステロールパーオキサイドからなる群から選ばれた少なくとも１種のステロール系化合物のうちの一方又は両方の化合物を含有することを特徴とする請求項１に記載の発癌予防剤。
【請求項２】
前記化合物は，霊芝を処理して得られることを特徴とする請求項１に記載の発癌予防剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発癌予防剤に関し，特にトリテルペン系化合物あるいはステロール系化合物を含有する発癌予防剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来から，発癌予防剤として有効なトリテルペン系化合物は知られている（特許文献１参照）。
【特許文献１】特開平９−２５２３２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
しかしながら，特許文献１は，具体的に発癌予防に関して十分な効果を有する特定のトリテルペン系化合物を開示するものではない。一方，発癌予防の大きなニーズに鑑みて，安全で有効な発癌予防剤が得られないものかとの期待は大きい。
本発明は，安全で有効な発癌予防剤を提供することを課題としている。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
発癌予防剤の探索を行うためには，抗発癌プロモーターの探索を行う方法が最も有用である。この抗発癌プロモーター探索の一次スクリーニング法としては，ＥＢＶ活性化抑制検定法が知られている。ＥＢＶ活性化抑制検定法は，ＥＢＶのゲノムを内蔵するバーキット・リンパ腫由来の培養細胞であるラジ（Ｒａｊｉ）株において，ＥＢＶ・ゲノムの発現を阻害する化合物の多くがマウス皮膚発癌二段階実験において抗発癌プロモーターとして作用する点に注目したものであり，迅速，かつ定量性に優れ，加えて，微量活性成分の検出が可能な点で優れた方法である。
【０００５】
そして，本発明者らは，サルノコシカケ科に属するキノコである霊芝（和名：マンネンタケ）を処理して得られるトリテルペン系化合物に注目して鋭意研究を行った結果，ラノスタン型のルシデニン酸及びガノデリン酸類トリテルペン系化合物，及び，ステロール系化合物からなる群から選ばれた少なくとも１種の上記化合物が優れた発癌予防効果を持ち，安全性の高い発癌予防剤になり得ることを見出し，本発明を完成するに至った。特に霊芝子を処理して得られる上記化合物は，安全な天然物である霊芝を起源とすることで，安全性については注目に値するメリットがある。
よって本発明は，特に霊芝エキスの特定成分の抗発癌プロモーター活性を見出した点に有用な意味を有する。
【０００６】
上記課題を解決するために，本発明の請求項１による発癌予防剤は，２０（２１）‐デヒドロルシデニン酸Ａ）（以下，本明細書において「化合物１」と称すこともある），２０（２１）‐デヒドロルシデニン酸Ａメチル（以下，本明細書において「化合物２」と称すこともある），２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｄ2（以下，本明細書において「化合物３」と称すこともある），２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｆ（以下，本明細書において「化合物４」と称すこともある），２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｅ2（以下，本明細書において「化合物５」と称すこともある），２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｎ（以下，本明細書において「化合物６」と称すこともある），２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｐ（以下，本明細書において「化合物７」と称すこともある），ルシデニン酸Ｃメチル（以下，本明細書において「化合物８」と称すこともある），ガノデリン酸ＤＭ（以下，本明細書において「化合物９」と称すこともある），ガノデルマノンジオール（以下，本明細書において「化合物１０」と称すこともある），ガノラクトンＡ（以下，本明細書において「化合物１１」と称すこともある）からなる群から選ばれた少なくとも１種のトリテルペン系化合物，及び，９α‐ハイドロキシ‐１，２，３，４，５，１０，１９‐ヘプタノルエルゴスタ‐７，２２‐ジエン‐６，９‐ラクトン（以下，本明細書において「化合物１２」と称すこともある），エルゴステロール（以下，本明細書において「化合物１３」と称すこともある），５，６‐ジヒドロエルゴステロール（以下，本明細書において「化合物１４」と称すこともある），（２４Ｓ）‐エルゴスト‐７‐エン‐３β‐オール（以下，本明細書において「化合物１５」と称すこともある），エルゴステロールパーオキサイド（以下，本明細書において「化合物１６」と称すこともある），９（１１）‐デヒドロエルゴステロールパーオキサイド（以下，本明細書において「化合物１７」と称すこともある）からなる群から選ばれた少なくとも１種のステロール系化合物のうちの一方又は両方の化合物を含有することを特徴とする。
本発明の請求項２による発癌予防剤は，請求項１における前記化合物は，霊芝を処理して得られることを特徴とする。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば，安全かつ発癌予防効果に優れた発癌予防剤が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
次に，実施例により本発明を具体的に説明する。すなわち，霊芝からの化合物１〜１７の単離，化合物１〜１７の同定及び構造解析，並びに，本発明に係る発癌予防剤の効果確認試験について説明する。
［霊芝からの化合物１〜１７の単離について］
まず，乾燥粉砕した霊芝の子実体（３７３ｇ）をメタノール（３Ｌ）により室温下で抽出し，この抽出を２週間ごとにメタノールを交換して計３回行うことで，３０ｇの抽出物を得た。この抽出物について，シリカゲル（１ｋｇ）カラムクロマトグラフィーにより分画を行った。カラムに次の各種の展開液を０．５Ｌずつ分取し，順次展開した。
【０００９】
展開液（投入順，括弧内には得られた溶出物の画分を示す）
ｎ‐ヘキサン（Ｆｒ．１〜２），ｎ‐ヘキサン：酢酸エチル＝１９：１（Ｆｒ．３〜１０），同９：１（Ｆｒ．１１〜１５），同４：１（Ｆｒ．１６〜３５），同７：３（Ｆｒ．３６〜４８），同１：１（Ｆｒ．４９〜６３），同３：７（Ｆｒ．６４〜７３），酢酸エチル（Ｆｒ．７４〜８７），酢酸エチル：メタノール＝１：１（Ｆｒ．８８〜９９），メタノール（Ｆｒ．１００〜１１０）
【００１０】
次に，これらＦｒ．１〜１１０の溶出物は，薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）で確認し，次の７つの画分にまとめた：Ｆｒ．Ａ（Ｆｒ．１〜１１；０．５１ｇ），Ｆｒ．Ｂ（Ｆｒ．１２；０．０２ｇ），Ｆｒ．Ｃ（Ｆｒ．１３〜２２；０．１５ｇ），Ｆｒ．Ｄ（Ｆｒ．２３〜２７；０．９４ｇ），Ｆｒ．Ｅ（Ｆｒ．２８〜２９；０．６４ｇ），Ｆｒ．Ｆ（Ｆｒ．３０〜９８；６．８２ｇ），Ｆｒ．Ｇ（Ｆｒ．９９〜１１０；１２．０ｇ）。
【００１１】
Ｆｒ．Ｄはさらにシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開液にはｎ‐ヘキサン：酢酸エチル＝４：１〜０：１を用いた）を行い１０画分（Ｆｒ．Ｄａ〜Ｄｊ）に分画した。４番目（Ｆｒ．Ｄｄ；６０ｍｇ）の画分についてオクタデシルシリカ（ＯＤＳ）カラム分取ＨＰＬＣ［ＨｙｐｅｒｓｉｌＯＤＳ  ５μ，２５ｃｍ×内径１０ｍｍ；展開液：メタノール／水／酢酸（８５：１５：１），２．０ｍＬ／分］を行い，９α‐ハイドロキシ‐１，２，３，４，５，１０，１９‐ヘプタノルエルゴスタ‐７，２２‐ジエン‐６，９‐ラクトン（化合物１２，２．１ｍｇ；保持時間１２．４分）を単離した。
【００１２】
Ｆｒ．Ｅはシリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開液にはｎ‐ヘキサン：酢酸エチル＝４：１〜０：１を用いた）を行い、さらに７画分（Ｆｒ．Ｅａ〜Ｅｇ）に分画した。２番目の画分（Ｆｒ．Ｅｂ；９７．８ｍｇ）についてＯＤＳカラムによる分取ＨＰＬＣ［Ｐｅｇａｓｉｌ  ＯＤＳ  ５μ，２５ｃｍ×内径１０ｍｍ；展開液：メタノール／酢酸（１００：１），２．０ｍＬ／分］を行い，３種の化合物：エルゴステロール（化合物１３，５４．８ｍｇ；保持時間２８．０分），５，６‐ジヒドロエルゴステロール（化合物１４，２２．１ｍｇ；保持時間３６．６分），（２４Ｓ）‐エルゴスト‐７‐エン‐３β‐オール（化合物１５，２．４ｍｇ；保持時間４５．１分）を単離した。また，４番目の画分（Ｆｒ．Ｅｄ；１２０．５ｍｇ）の分取ＨＰＬＣ［Ｐｅｇａｓｉｌ  ＯＤＳ  ５μ，２５ｃｍ×内径１０ｍｍ；展開液：メタノール／水／酢酸（９２．５：７．５：１），２．０ｍＬ／分］を行い，３種の化合物：ガノデルマノンジオール（化合物１０，５．４ｍｇ；保持時間６．６分），エルゴステロールパーオキサイド（化合物１６，１９．２ｍｇ；保持時間１８．０分），９（１１）‐デヒドロエルゴステロールパーオキサイド（化合物１７，１．７ｍｇ；保持時間１５．２分）を単離した。
【００１３】
Ｆｒ．Ｆの一部（５．０ｇ）は再度シリカゲルカラムクロマトグラフィー（展開液にはｎ‐ヘキサン：酢酸エチル＝４：１〜０：１を用いた）を行い，９画分（Ｆｒ．Ｆａ〜Ｆｉ）に分画した。５番目の画分（Ｆｒ．Ｆｅ；１７３．０ｍｇ）のＨＰＬＣ［Ｐｅｇａｓｉｌ  ＯＤＳ  ５μ，２５ｃｍ×内径１０ｍｍ；展開液：メタノール／水／酢酸（６０：４０：１），２．０ｍＬ／分］を行い，２０（２１）‐デヒドロルシデニン酸Ａメチル（化合物２，２．８ｍｇ；保持時間２７．６分）を単離した。６番目の画分（Ｆｒ．Ｆｆ；５３４．０ｍｇ）の一部（３９０．０ｍｇ）のＨＰＬＣ［Ｐｅｇａｓｉｌ  ＯＤＳ  ５μ，２５ｃｍ×内径１０ｍｍ；展開液：メタノール／水／酢酸（８０：２０：１），２．０ｍＬ／分］を行い，ガノデリン酸ＤＭ（化合物９，１８．４ｍｇ；保持時間１８．０分）を単離した。７番目の画分（Ｆｒ．Ｆｇ；９１６．２ｍｇ）の一部（２００．０ｍｇ）からはＨＰＬＣ［Ｐｅｇａｓｉｌ  ＯＤＳ  ５μ，２５ｃｍ×内径１０ｍｍ；展開液：メタノール／水／酢酸（６０：４０：１），２．０ｍＬ／分］により，ルシデニン酸Ｃメチル（化合物８，４．５ｍｇ；保持時間１７．６分）を単離した。
【００１４】
８番目の画分（Ｆｒ．Ｆｈ；１８２６．３ｍｇ）の一部（８００ｍｇ）についてＨＰＬＣ［Ｆｒ．Ｆｇと同条件］を行い，７種の化合物：２０（２１）‐デヒドロルシデニン酸Ａ（化合物１，２．０ｍｇ；保持時間１９．０分），２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｄ2（化合物３，１．０ｍｇ；保持時間１３．０分），２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｆ（化合物４，４．０ｍｇ；保持時間８．４分），２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｅ2（化合物５，１．６ｍｇ；保持時間１５．０分），２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｎ（化合物６，１４．２ｍｇ；保持時間６．６分），２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｐ（化合物７，１．６ｍｇ；保持時間７．６分），ガノラクトンＡ（化合物１１，３．３ｍｇ；保持時間９．４分）を単離した。
【００１５】
なお，本実施例では，霊芝の子実体から本発明の化合物１〜１７を抽出しているが子実体に限られず，霊芝の胞子や菌糸体から抽出してもよい。また，用いる霊芝の種類も限定されず，紫霊芝，赤霊芝，青霊芝，黄霊芝，黒霊芝及び白霊芝，あるいは，一種の奇形である鹿角（ろっかく）霊芝のいずれを用いてもよい。
また，抽出用の有機溶媒は，前述のものに限定されず，特にエタノール，メタノール，プロパノール，イソプロパノール，ｎ‐ブタノール，アセトン，ｎ‐ヘキサン，酢酸エチル，イソプロピルエーテル等を好ましく，これらの溶媒を単独又は混合し，または水で希釈して用いることができる。
【００１６】
また，得られた化合物１〜１７は，単独であるいは混合して用いることができる。
本発明の化合物１〜１７は，適当な医薬用の担体又は希釈剤と組み合わせて医薬とすることができ，通常の如何なる方法によっても製剤化でき，経口又は非経口投与するための固体，半固体又は液体の剤形に処方することができる。処方にあたっては，他の医薬活性成分との配合剤としてもよい。
【００１７】
例えば，日本薬局方に記載されている各種製剤，即ち，錠剤，丸剤，カプセル剤，顆粒剤，散剤，乾燥エキス剤，トローチ剤等の内用固形製剤，流エキス剤，エリキシル剤，酒精剤，シロップ剤，リモナーデ剤等の内容液剤，チンキ剤，リニメント剤，ローション剤等の外用液剤，硬膏剤，軟膏剤，パップ剤等の外用剤などに製剤化できる。また，投与可能であるならば，吸入剤，エアゾール剤，注射剤，点眼剤，座剤等にも用途に応じて製剤化してもよい。
経口投与においては，成人に対し体重１ｋｇ当り０．５〜５００ｍｇ／日の範囲で投与するのが好ましい。
【００１８】
また，本発明に係る化合物１〜１７は発癌予防の薬剤として使用するだけでなく，種々の飲食品に添加し，発癌予防に有効な機能性飲食品を製造するのにも有用なものである。このような機能性飲食品の形態の例としては，顆粒，錠菓，ゼリー，飴，飲料などが挙げられる。また，本発明に係る化合物１〜１７は，人間の食べる食品としてだけでなく，ペット，家畜，競技用動物などの人間以外の動物の飼料に添加して利用され得る。
【００１９】
［化合物１〜１７の同定及び構造解析について］
化合物１〜１７の構造解析はＭＳ，ＩＲ，ＵＶ，1Ｈ‐ＮＭＲ，13Ｃ‐ＮＭＲ，ＮＭＲの一種である相関分光法（1Ｈ−1Ｈ  ＣＯＳＹ），異種核多量子コヒーレンス法（ＨＭＱＣ），異種核遠隔多量子相関法（ＨＭＢＣ），及び，核オーバーハウザー交換分光法（ＮＯＥＳＹ）を用いて行った。解析された１７種の化合物１〜１７の化学構造式を図１に示す。
これらのうち，化合物１〜７の７種はこれまで文献記載のない新規化合物であった。新規化合物１〜７の1Ｈ‐ＮＭＲ及び13Ｃ‐ＮＭＲデータをＨＭＢＣデータとともに表１〜表４に示した。
【００２０】
７種の新規化合物及び既知の化合物８〜１７の化学名を以下に示す。
化合物１：１５β‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐３，７，１１‐ｔｒｉｏｘｏ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｓｎｏｒｌａｎｏｓｔａ‐８，２０‐ｄｉｅｎ‐２４‐ｏｉｃ  ａｃｉｄ［２０（２１）‐ｄｅｈｙｄｒｏｌｕｃｉｄｅｎｉｃ  ａｃｉｄ  Ａ］
化合物２：ｍｅｔｈｙｌ  １５β‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐３，７，１１‐ｔｒｉｏｘｏ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｓｎｏｒ‐ｌａｎｏｓｔａ‐８，２０‐ｄｉｅｎ‐２４‐ｏａｔｅ  ［ｍｅｔｈｙｌ  ２０（２１）‐ｄｅｈｙｄｒｏｌｕｃｉｄｅｎａｔｅ  Ａ］
【００２１】
化合物３：（２０ξ）‐１２β‐ａｃｅｔｏｘｙ‐２０‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐３，７，１１，１５‐ｔｅｔｒａｏｘｏ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｓｎｏｒｌａｎｏｓｔ‐８‐ｅｎ‐２４‐ｏｉｃ  ａｃｉｄ（２０‐ｈｙｄｒｏｘｙｌｕｃｉｄｅｅｎｉｃ  ａｃｉｄ  Ｄ2）
化合物４：（２０ξ）‐２０‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐３，７，１１，１５‐ｔｅｔｒａｏｘｏ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｓｎｏｒｌａｎｏｓｔ‐８‐ｅｎ‐２４‐ｏｉｃ  ａｃｉｄ  （２０‐ｈｙｄｒｏｘｙｌｕｃｉｄｅｎｉｃ  ａｃｉｄ  Ｆ）
【００２２】
化合物５：（２０ξ）‐１２β‐ａｃｅｔｏｘｙ‐３β，２０‐ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ‐７，１１，１５‐ｔｒｉｏｘｏ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｓｎｏｒｌａｎｏｓｔ‐８‐ｅｎ‐２４‐ｏｉｃ  ａｃｉｄ  （２０‐ｈｙｄｒｏｘｙｌｕｃｉｄｅｎｉｃ  ａｃｉｄ  Ｅ2）
化合物６：（２０ξ）‐３β，７β，２０‐ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ‐１１，１５‐ｄｉｏｘｏ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｓｎｏｒｌａｎｏｓｔ‐８‐ｅｎ‐２４‐ｏｉｃ  ａｃｉｄ  （２０‐ｈｙｄｒｏｘｙｌｕｃｉｄｅｎｉｃ  ａｃｉｄ  Ｎ）
【００２３】
化合物７：（２０ξ）‐１２β‐ａｃｅｔｏｘｙ‐３β，７β，２０‐ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ‐１１，１５‐ｄｉｏｘｏ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｓｎｏｒｌａｎｏｓｔ‐８‐ｅｎ‐２４‐ｏｉｃ  ａｃｉｄ  （２０‐ｈｙｄｒｏｘｙｌｕｃｉｄｅｎｉｃ  ａｃｉｄ  Ｐ）
化合物８（ルシデニン酸Ｃメチル）：ｍｅｔｈｙｌ  ３ｂ，７ｂ，１２ｂ‐Ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｎｏｒ‐１１，１５‐ｄｉｏｘｏｌａｎｏｓｔ‐８‐ｅｎ‐２４‐ｏａｔｅ
【００２４】
化合物９（ガノデリン酸ＤＭ）：３，７‐ｄｉｏｘｏｌａｎｏｓｔａ‐８，２４‐ｄｉｅｎ‐２６‐ｏｉｃ  ａｃｉｄ
化合物１０（ガノデルマノンジオール）：（２４Ｓ）‐２４，２５‐ｄｉｈｙｄｒｏｘｙｌａｎｏｓｔ‐７，９（１１）‐ｄｉｅｎ‐３‐ｏｎｅ
化合物１１（ガノラクトンＡ）：７‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｎｏｒ‐３，１１，１５‐ｔｒｉｏｘｏ‐８‐ｌａｎｏｓｔｅｎ‐２４，２０‐ｏｌｉｄｅ
化合物１２：９ａ‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐１，２，３，４，５，１０，１９‐ｈｅｐｔａｎｏｒ‐ｅｒｇｏｓｔａ‐７，２２‐ｄｉｅｎｅ‐６，９‐ｌａｃｔｏｎｅ
【００２５】
化合物１３（エルゴステロール）：（２２Ｅ，２４Ｒ）‐ｅｒｇｏｓｔａ‐５，７，２２‐ｔｒｉｅｎ‐３ｂ‐ｏｌ
化合物１４（５，６‐ジヒドロエルゴステロール）：（２２Ｅ，２４Ｒ）‐ｅｒｇｏｓｔａ‐７，２２‐ｄｉｅｎ‐３ｂ‐ｏｌ
化合物１５：（２４Ｓ）‐ｅｒｇｏｓｔ‐７‐ｅｎ‐３ｂ‐ｏｌ
化合物１６（エルゴステロールパーオキサイド）：（２２Ｅ，２４Ｒ）‐５，８‐ｅｐｉｄｉｏｘｙｅｒｇｏｓｔａ‐６，２２‐ｄｉｅｎ‐３ｂ‐ｏｌ
化合物１７（９（１１）‐デヒドロエルゴステロールパーオキサイド）：（２２Ｅ，２４Ｒ）‐５，８‐ｅｐｉｄｉｏｘｙｅｒｇｏｓｔａ‐６，９（１１），２２‐ｔｒｉｅｎ‐３ｂ‐ｏｌ
【００２６】
新規化合物１〜７の諸性質及びスペクトルデータを次に示す。
（１）２０（２１）‐デヒドロルシデニン酸Ａ（化合物１）：
無色結晶
ｍｐ：１３５〜１３７℃
比旋光度［α］25D：＋６９．９°（濃度ｃ＝０．２０（ｇ／１００ｍｌ），溶媒：クロロホルム）
ＵＶ（溶媒：メタノール）λmax：２５３ｎｍ（ｌｏｇε３．７８）
ＩＲ  νmax：３４４５，１７３５，１７０２，１６６０，８９７ｃｍ-1
ＭＳ  （検出されたそれぞれのピークについて，ｍ／ｚ値，（相対イオン強度），検出された分子の状態を示す）：４５６（９０）［Ｍ］+，４３８（７５）［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+，４２８（１００）［Ｍ−ＣＯ］+，３９７（７）（Ｃ22‐Ｃ23開裂によるＣ23‐Ｃ24の脱離），３９５（７）（ｍ／ｚ３９７−２Ｈ），３６９（２５），３５５（１３）［Ｍ−側鎖（Ｃ5Ｈ7Ｏ2）−２Ｈ］+，３３１（１３），３１８（８５）（Ｃ5‐Ｃ6とＣ9‐Ｃ10の開裂によるＡ環（図１において，Ｃ1，Ｃ2，Ｃ3，Ｃ4，Ｃ5及びＣ10からなる環を言う，以下同様）の脱離），３１２（９８），３００（２０）（Ｃ13‐Ｃ17とＣ14‐Ｃ15の開裂によるＤ環（図１において，Ｃ13，Ｃ14，Ｃ15，Ｃ16及びＣ17からなる環を言う，以下同様）の２Ｈを伴った脱離），２７５（５５），２６１（２５）
高分解能ＥＩ‐ＭＳ  （ｍ／ｚ値）：４５６．２５１２（理論値Ｃ27Ｈ36Ｏ6［Ｍ］+，４５６．２５１１）
【００２７】
（２）２０（２１）‐デヒドロルシデニン酸Ａメチル（化合物２）：
無色結晶
ｍｐ：１２３‐１２５℃
比旋光度［α］25D：＋１５１．２°（濃度ｃ＝０．２６（ｇ／１００ｍｌ），溶媒：クロロホルム）
ＵＶ（溶媒：メタノール）λmax：２５４ｎｍ（ｌｏｇε３．８８）
ＩＲ  νmax：３４５８，２９２８，１７３３，１７０６，１６６０，８９９ｃｍ-1
ＭＳ  （検出されたそれぞれのピークについて，ｍ／ｚ値，（相対イオン強度），検出された分子の状態を示す）：４７０（９１）［Ｍ］+，４５５（１９）［Ｍ−ＣＨ3］+，４５２（１１）［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+，４４２（１００）［Ｍ−ＣＯ］+，３９７（５）（Ｃ22‐Ｃ23の開裂によるＣ23‐Ｃ24の脱離），３６９（２９），３５５（１９）［Ｍ−側鎖（Ｃ5Ｈ7Ｏ2）−２Ｈ］+，３４５（１３），３３２（８７）（Ｃ5‐Ｃ6とＣ9‐Ｃ10の開裂によるＡ環の脱離），３０４（２９），３００（８７）（Ｃ13‐Ｃ17とＣ14‐Ｃ15の開裂によるＤ環の２Ｈを伴った脱離），２８５（２０），２７５（３５），２６１（１９）
高分解能ＥＩ‐ＭＳ  （ｍ／ｚ値）：４７０．２６６８（理論値Ｃ28Ｈ38Ｏ6［Ｍ］+，４７０．２６７１）
化合物１及び化合物２の1Ｈ‐ＮＭＲ及び13Ｃ‐ＮＭＲデータをＨＭＢＣデータとともに表１に示す：
【００２８】
【表１】
2006022017.tif 000003
【００２９】
（３）２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｄ2（化合物３）：
無色結晶
ｍｐ：１２３‐１２５℃
比旋光度［α］25D：＋５４．７°（濃度ｃ＝０．１０（ｇ／１００ｍｌ），溶媒：クロロホルム）
ＵＶ（溶媒：メタノール）  λmax：２５４ｎｍ（ｌｏｇε３．９７）
ＩＲ  νmax：３４５２，１７５２，１６９８ｃｍ-1
ＭＳ  （検出されたそれぞれのピークについて，ｍ／ｚ値，（相対イオン強度），検出された分子の状態を示す）：５１２（３０）［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+，４７０（１００）［Ｍ−ＨＯＡｃ］+，４５２（１０）［Ｍ−Ｈ2Ｏ−ＨＯＡｃ］+，４３７（３）［Ｍ−ＣＨ3−Ｈ2Ｏ−ＨＯＡｃ］+，４２７（６），４１３（５）［Ｍ−側鎖（Ｃ5Ｈ9Ｏ3）］+，３９７（４），３７１（ｍ／ｚ４１３−ＣＨ3−ＣＯ＋Ｈ）（１５），３５４（ｍ／ｚ４１３−ＨＯＡｃ＋Ｈ）（１８），３０２（６０）［Ｍ−Ｃ11Ｈ17Ｏ5（Ｃ11‐Ｃ12，Ｃ13‐Ｃ14とＣ16‐Ｃ17の開裂による）＋Ｈ］+，１６９［Ｃ11Ｈ17Ｏ5−ＨＯＡｃ］+（６０）
高分解能ＥＩ‐ＭＳ  （ｍ／ｚ値）：５１２．２４１０（理論値Ｃ29Ｈ36Ｏ8［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+，５１２．２４１１）
ＦＡＢ‐ＭＳ  （ｍ／ｚ値）：５５３［Ｍ＋Ｎａ］+
【００３０】
（４）２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｆ（化合物４）：
無色結晶
ｍｐ：１６２‐１６４℃
比旋光度［α］25D：＋１２８．６°（濃度ｃ＝０．１０（ｇ／１００ｍｌ），溶媒：Ｍｅ2ＣＯ）
ＵＶ（溶媒：メタノール）λmax：２５５ｎｍ（ｌｏｇε３．９９）
ＩＲ  νmax：３４４９，１７７２，１７５０，１６９８，１６８０ｃｍ-1
ＭＳ  （検出されたそれぞれのピークについて，ｍ／ｚ値，（相対イオン強度），検出された分子の状態を示す）：４５４（１００）［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+，４３９（７）［Ｍ−Ｈ2Ｏ−ＣＨ3］+，４２６（７）［Ｍ−ＣＯＯＨ−Ｈ］+，４１１（８），３９９（５），３８３（５），３５５（７）［Ｍ−側鎖（Ｃ5Ｈ9Ｏ3）］+，３２７（３０）（ｍ／ｚ３５５−ＣＯ），３０６（２５）［Ｃ5‐Ｃ6とＣ9‐Ｃ10の開裂によるＡ環（Ｃ9Ｈ14Ｏ）のＣＯを伴った脱離］，３００（２４）（Ｃ13‐Ｃ17とＣ14‐Ｃ15の開裂によるＤ環の脱離），２８５（７）（ｍ／ｚ３００−ＣＨ3）
高分解能ＥＩ‐ＭＳ（ｍ／ｚ値）：４５４．２３５５（理論値Ｃ27Ｈ36Ｏ7［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+，４５４．２３５５）
ＦＡＢ‐ＭＳ  （ｍ／ｚ値）：４９５［Ｍ＋Ｎａ］+
化合物３及び化合物４の1Ｈ‐ＮＭＲ及び13Ｃ‐ＮＭＲデータをＨＭＢＣデータとともに表２に示す：
【００３１】
【表２】
2006022017.tif 000004
【００３２】
（５）２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｅ2（化合物５）：
無色結晶
ｍｐ：１４７‐１４９℃
比旋光度［α］25D：＋７８．０°（濃度ｃ＝０．１６（ｇ／１００ｍｌ），溶媒：アセトン）
ＵＶ（溶媒：メタノール）  λmax：２５５ｎｍ（ｌｏｇε３．８５）
ＩＲ  νmax：３４６６，１７５３，１６９７ｃｍ-1
ＭＳｍ（検出されたそれぞれのピークについて，ｍ／ｚ値，（相対イオン強度），検出された分子の状態を示す）：５１４（１０）［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+，４７２（２２）［Ｍ−ＨＯＡｃ］+，４５４（１０）［Ｍ−ＨＯＡｃ−Ｈ2Ｏ］+，４３９（３）（ｍ／ｚ４５４−ＣＨ3），４１５（４）［Ｍ−側鎖（Ｃ5Ｈ9Ｏ3）］+，３７３（２２）（ｍ／ｚ４１５−ＣＨ3−ＣＯ＋Ｈ），３５６（１３）（ｍ／ｚ４１５−ＨＯＡｃ＋Ｈ），３０４（１００）［Ｍ−Ｃ11Ｈ17Ｏ5（Ｃ11−Ｃ12，Ｃ13‐Ｃ14とＣ16‐Ｃ17の開裂による）＋Ｈ］+，１６９（３８）［Ｃ11Ｈ17Ｏ5−ＨＯＡｃ］+
高分解能ＥＩ‐ＭＳ  （ｍ／ｚ値）：５１４．２５６６（理論値Ｃ29Ｈ38Ｏ8［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+，５１４．２５７１）
ＦＡＢ‐ＭＳ  （ｍ／ｚ値）：５５５［Ｍ＋Ｎａ］+
化合物５の1Ｈ‐ＮＭＲ及び13Ｃ‐ＮＭＲデータをＨＭＢＣデータとともに表３に示す：
【００３３】
【表３】
2006022017.tif 000005
【００３４】
（６）２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｎ（化合物６）：
無色結晶
ｍｐ：２６８‐２７０℃
比旋光度［α］25D：＋１５０．４°（濃度ｃ＝０．２３（ｇ／１００ｍｌ），溶媒：アセトン）
ＵＶ（溶媒：メタノール）  λmax：２５５ｎｍ（ｌｏｇε３．８５）
ＩＲ  νmax：３４３４，１７７１，１７２１，１６６１ｃｍ-1
ＭＳ（検出されたそれぞれのピークについて，ｍ／ｚ値，（相対イオン強度），検出された分子の状態を示す）：４５８（４８）［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+，４４０（１０）［Ｍ−２Ｈ2Ｏ］+，４３０（１００）［Ｍ−ＣＯＯＨ−Ｈ］+，４０７（４），３７１（９），３５７（４）［Ｍ−側鎖（Ｃ5Ｈ9Ｏ3）−２Ｈ］+，３３１（１３）（ｍ／ｚ３５７−ＣＯ），３１８（４５）［Ｃ5‐Ｃ6とＣ9‐Ｃ10の開裂によるＡ環（Ｃ9Ｈ14Ｏ）の脱離］，３０４（１０）（Ｃ13‐Ｃ17とＣ14‐Ｃ15の開裂によるＤ環の脱離）
高分解能ＥＩ‐ＭＳ  （ｍ／ｚ値）：４５８．２６６８（理論値Ｃ27Ｈ38Ｏ6［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+，４５８．２６６７）
ＦＡＢ‐ＭＳ  （ｍ／ｚ値）：４９９［Ｍ＋Ｎａ］+
【００３５】
（７）２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｐ（化合物７）：
無色結晶
ｍｐ：１２５‐１２７℃
比旋光度［α］25D：＋７７．７°（濃度ｃ＝０．１０（ｇ／１００ｍｌ），溶媒：クロロホルム）
ＵＶ（溶媒：メタノール）  λmax：２５４ｎｍ（ｌｏｇε３．８７）
ＩＲ  νmax：３４５１，１７５８，１６９５ｃｍ-1
ＭＳ  検出されたそれぞれのピークについて，ｍ／ｚ値，（相対イオン強度），検出された分子の状態を示す）：５１６（７）［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+，５０１（２）［Ｍ−Ｈ2Ｏ−ＣＨ3］+，４８８（１０）［Ｍ−ＣＯＯＨ−Ｈ］+，４７４（４）［Ｍ−ＨＯＡｃ］+，４５６（４）［Ｍ−ＨＯＡｃ−Ｈ2Ｏ］+，４４１（２）（ｍ／ｚ４５４−ＣＨ3），４１７（１）［Ｍ−側鎖（Ｃ5Ｈ9Ｏ3）］+，３７５（１０）（ｍ／ｚ４１７−ＣＨ3−ＣＯ＋Ｈ），３５６（１３）（ｍ／ｚ４１５−ＨＯＡｃ＋Ｈ），３０６（１００）［Ｍ−Ｃ11Ｈ17Ｏ5（Ｃ11‐Ｃ12，Ｃ13‐Ｃ14とＣ16‐Ｃ17の開裂による）＋Ｈ］+，１６９（１０）［Ｃ11Ｈ17Ｏ5−ＨＯＡｃ］+
高分解能ＥＩ‐ＭＳ  （ｍ／ｚ値）：５１６．２７２３（理論値Ｃ29Ｈ40Ｏ8［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+，５１６．２７２２）
ＦＡＢ‐ＭＳ  （ｍ／ｚ値）：５５７［Ｍ＋Ｎａ］+
化合物６及び化合物７の1Ｈ‐ＮＭＲ及び13Ｃ‐ＮＭＲデータをＨＭＢＣデータとともに表４に示す：
【００３６】
【表４】
2006022017.tif 000006
【００３７】
以下には新規化合物１〜７の構造決定について述べた。
化合物１は，高分解能ＥＩ‐ＭＳ（［Ｍ］+ｍ／ｚ４５６．２５１１）及び13Ｃ‐ＮＭＲより分子式Ｃ27Ｈ36Ｏ6を持つ事が示された。また，本化合物には１個の第２級水酸基［νmax  ３４５０ｃｍ-1；δH  ４．８７（ｄｄ，Ｊ＝７．６，９．６Ｈｚ）；δC  ６６．３（ｄ）］，１個のα，β‐不飽和ケトン基［λmax  ２５３ｎｍ；νmax  １７３０ｃｍ-1；δC  １４１．３（ｓ），１５７．８（ｓ），１９７．５（ｓ）］，その他の２個のケトン基［δC  ２１６．５（ｓ），２１７．７（ｓ）］，１個のカルボキシル基［νmax  １６９８ｃｍ-1；δC  １７５．１（ｓ）］，１個の末端メチレン基［νmax  ８９０ｃｍ-1；δH  ４．９１（１Ｈ，ｓ）及び５．０８（１Ｈ，ｓ）；δC  １１２．３（ｔ）］，５個の第３級メチル基［δH  ０．９０，１．１１，１．１３，１．２６，１．３９（各ｓ）］の存在が示され，本化合物がルシデニン酸骨格を持つ酸性トリテルペノイドであることが示唆された。ＥＩ‐ＭＳではｍ／ｚ３９７にＣ22‐Ｃ23開裂によるＣ23‐Ｃ24の脱離による開裂イオン，ｍ／ｚ３５５に２Ｈの移動を伴った側鎖（Ｃ5Ｈ7Ｏ2）の脱離によるイオン，ｍ／ｚ３１８にＣ5‐Ｃ6とＣ9‐Ｃ10結合の開裂によるＡ環の脱離イオン，更にｍ／ｚ３００にＣ13‐Ｃ17とＣ14‐Ｃ15結合開裂による，２Ｈを伴ったＤ環の開裂イオンが観測された。これらのイオンは，本化合物のＣ３位にはケトン基の存在，側鎖にはカルボキシル基と末端メチレン基の存在を示唆している。以上のデータに加え，1Ｈ及び13Ｃ‐ＮＭＲデータのルシデニン酸Ａ（１５β‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐３,７,１１‐ｔｒｉｏｘｏ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｓｎｏｒｌａｎｏｓｔ‐８‐ｅｎ‐２４‐ｏｉｃ  ａｃｉｄ）［Ｎｉｓｈｉｔｏｂａら，Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，４９巻，１７９３頁（１９８５）］との比較により，化合物１は１５β‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐３，７，１１‐ｔｒｉｏｘｏ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｓｎｏｒｌａｎｏｓｔａ‐８，２０‐ｄｉｅｎ‐２４‐ｏｉｃ  ａｃｉｄ［２０（２１）‐デヒドロルシデニン酸Ａ］構造を持つことが明らかとなった。この構造の正しい事は1Ｈ−1Ｈ  ＣＯＳＹ，ＨＭＱＣ，ＨＭＢＣ，及びＮＯＥＳＹスペクトルの解析により確認した。
【００３８】
化合物２は高分解能ＥＩ‐ＭＳ（［Ｍ］+ｍ／ｚ４７０．２６７１）及び13Ｃ‐ＮＭＲより分子式Ｃ28Ｈ38Ｏ6を持つ事が示された。本化合物には１個の第２級水酸基［νmax３４５８ｃｍ-1；δH  ５．１９（ｄｄ，Ｊ＝７．６，９．３Ｈｚ）；δC  ６５．７（ｄ）］，１個のα，β‐不飽和ケトン基［λmax  ２５４ｎｍ；νmax１７３３ｃｍ-1；δC  １４０．９（ｓ），１５９．８（ｓ），１９８．０（ｓ）］，その他の２個のケトン基［δC  ２１５．５（ｓ），２１５．９（ｓ）］，１個のメチルエステル化［δH３．６４（３Ｈ，ｓ）；δC  ５１．５（ｑ）］を受けたカルボキシル基［νmax１７０５ｃｍ-1；δC  １７３．２（ｓ）］，１個の末端メチレン基［νmax８９９ｃｍ-1；  δH４．９３（１Ｈ，ｓ）及び５．０５（１Ｈ，ｓ）；δC  １１１．６（ｔ）］，５個の第３級メチル基［δH１．１０，１．１２，１．１５，１．３５，１．４３(各ｓ)］が存在する。ＥＩ‐ＭＳではｍ／ｚ３９７にＣ22‐Ｃ23開裂によるＣ23‐Ｃ24の脱離による開裂イオン，ｍ／ｚ３５５に２Ｈの移動を伴った側鎖(Ｃ5Ｈ7Ｏ2)の脱離によるイオン，ｍ／ｚ３３２にＣ5‐Ｃ6とＣ9‐Ｃ10結合の開裂によるＡ環の脱離イオン，更にｍ／ｚ３００にＣ13‐Ｃ17とＣ14‐Ｃ15結合開裂による，２Ｈを伴ったＤ環の開裂イオンが観測された。これらのデータに加え，1Ｈ及び13Ｃ‐ＮＭＲデータの化合物１との比較により，化合物２はｍｅｔｈｙｌ  １５β‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐３，７，１１‐ｔｒｉｏｘｏ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｓｎｏｒ‐ｌａｎｏｓｔａ‐８，２０‐ｄｉｅｎ‐２４‐ｏａｔｅ［２０（２１）‐デヒドロルシデニン酸Ａメチル］構造を持つことが明らかとなった。本構造が正しい事は，1Ｈ−1Ｈ  ＣＯＳＹ，ＨＭＱＣ，ＨＭＢＣ，及びＮＯＥＳＹスペクトルの解析により確認した。
【００３９】
化合物３はＦＡＢ‐ＭＳ（［Ｍ＋Ｎａ］+．ｍ／ｚ５５３），高分解能ＥＩ‐ＭＳ（［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+ｍ／ｚ５１２．２４１０）及び13Ｃ‐ＮＭＲより分子式Ｃ29Ｈ38Ｏ9を持つ事が示された。また，本化合物には１個の第３級水酸基［νmax３４５２ｃｍ-1；δC  ８６．４（ｓ）］，１個の第２級アセトキシル基［νmax１７５２ｃｍ-1；δC２１．０（ｑ），７８．６（ｄ），１７０．１（ｓ）；δH２．２６（３Ｈ，ｓ），５．７０（１Ｈ，ｓ）］，１個のカルボキシル基［νmax１６９８ｃｍ-1；δC  １７５．６（ｓ）］，１組のα，β‐不飽和ジケトン基［λmax  ２５４ｎｍ；δC  １４５．６（ｓ），１４９．６（ｓ），１９３．３（ｓ），１９８．４（ｓ）］，その他の２個のケトン基［δC  ２０３．８（ｓ），２１４．９（ｓ）］，及び６個の第３級メチル基［δH０．９６，１．１２，１．１４，１．３３，１．４９，１．８５(各ｓ)］の存在が示された。ＥＩ‐ＭＳではｍ／ｚ４１３に側鎖(Ｃ5Ｈ9Ｏ3)の脱離によるイオン及びｍ／ｚ３０２にＣ11‐Ｃ12，Ｃ13‐Ｃ14，及びＣ16‐Ｃ17結合の開裂と１Ｈの移動により生成したイオンが観測された。以上のデータ，及び1Ｈ及び13Ｃ‐ＮＭＲデータのルシデニン酸Ｄ2（１２β‐ａｃｅｔｏｘｙ‐３，７，１１，１５‐ｔｅｔｒａｏｘｏ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｓｎｏｒｌａｎｏｓｔ‐８‐ｅｎ‐２４‐ｏｉｃ  ａｃｉｄ）［Ｋｏｍｏｄｏら，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，３３巻，４８２９頁（１９８５）；Ｋｉｋｕｃｈｉら，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，３４巻，４０１８頁（１９８６）］との比較により，化合物３は（２０ξ）‐１２β‐ａｃｅｔｏｘｙ‐２０‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐３，７，１１，１５‐ｔｅｔｒａｏｘｏ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｓｎｏｒｌａｎｏｓｔ‐８‐ｅｎ‐２４‐ｏｉｃ  ａｃｉｄ［２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｄ2］構造を持つことが明らかとなった。この構造は1Ｈ−1Ｈ  ＣＯＳＹ，ＨＭＱＣ，ＨＭＢＣ，及びＮＯＥＳＹスペクトルの解析により確認した。
【００４０】
化合物４はＦＡＢ‐ＭＳ（［Ｍ＋Ｎａ］+．ｍ／ｚ４９５），高分解能ＥＩ‐ＭＳ（［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+ｍ／ｚ４５４．２３５５）及び13Ｃ‐ＮＭＲより分子式Ｃ27Ｈ38Ｏ8を持つ事が示された。また，本化合物には１個の第３級水酸基［νmax３４４９ｃｍ-1；δC  ８６．０（ｓ）］，１個のカルボキシル基［νmax１６９８ｃｍ-1；δC  １７５．８（ｓ）］，１組のα，β‐不飽和ジケトン基［λmax  ２５５ｎｍ；δC  １４６．２（ｓ），１４９．６（ｓ），１９８．０（ｓ），１９９，１（ｓ）］，その他の２個のケトン基［δC  ２０４．９（ｓ），２１５．１（ｓ）］，及び６個の第３級メチル基［δH１．０２，１．１２，１．１４，１．２８，１．５０，１．６８(各ｓ)］の存在が示された。ＥＩ‐ＭＳではｍ／ｚ３５５に側鎖(Ｃ5Ｈ9Ｏ3)の脱離によるイオン，ｍ／ｚ３０６にＣ5‐Ｃ6及びＣ9‐Ｃ10結合の開裂によるＡ環のＣＯを伴った脱離によるイオン，及びｍ／ｚ３００にＣ13‐Ｃ17とＣ14‐Ｃ15結合の開裂によるＤ環の脱離イオンが観測された。以上のデータ，及び1Ｈ及び13Ｃ‐ＮＭＲデータの化合物３，並びにルシデニン酸Ｆ（３，７，１１，１５‐ｔｅｔｒａｏｘｏ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｓｎｏｒｌａｎｏｓｔ‐８‐ｅｎ‐２４‐ｏｉｃ  ａｃｉｄ）［Ｋｉｋｕｃｈｉら，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，３３巻，２６２４頁（１９８５）］との比較により，化合物４は化合物３のＣ12脱アセチル化物，即ち（２０ξ）‐２０‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐３，７，１１，１５‐ｔｅｔｒａｏｘｏ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｓｎｏｒｌａｎｏｓｔ‐８‐ｅｎ‐２４‐ｏｉｃ  ａｃｉｄ［２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｆ］構造を持つことが明らかとなった。この構造は1Ｈ−1Ｈ  ＣＯＳＹ，ＨＭＱＣ，ＨＭＢＣ，及びＮＯＥＳＹスペクトルの解析により確認した。
【００４１】
化合物５はＦＡＢ‐ＭＳ（［Ｍ＋Ｎａ］+．ｍ／ｚ５５５），高分解能ＥＩ‐ＭＳ（［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+ｍ／ｚ５１４．２５６６）及び13Ｃ‐ＮＭＲより分子式Ｃ29Ｈ40Ｏ9を持つ事が示された。本化合物には１個の第２級水酸基［νmax３４６６ｃｍ-1；δH  ３．２６（ｄｄ，Ｊ＝４．９，１１．２Ｈｚ）；δC  ７７．４（ｄ）］，１個の第３級水酸基［δC  ８６．６（ｓ）］，１個の第２級アセトキシル基［νmax１７５３ｃｍ-1；δC２１．０（ｑ），７８．９（ｄ），１７０．１（ｓ）；δH２．２６（３Ｈ，ｓ），５．６５（１Ｈ，ｓ）］，１個のカルボキシル基［νmax１６９７ｃｍ-1；δC  １７５．６（ｓ）］，１組のα，β‐不飽和ジケトン基［λmax  ２５５ｎｍ；δC  １４５．４（ｓ），１５１．４（ｓ），１９３．０（ｓ），１９８．０（ｓ）］，その他の１個のケトン基［δC  ２０３．９（ｓ）］，及び６個の第３級メチル基［δH０．８９，０．９３，１．０３，１．３３，１．４８，１．７８(各ｓ)］の存在が種々のスペクトル法で示された。ＥＩ‐ＭＳではｍ／ｚ４１５に側鎖(Ｃ5Ｈ9Ｏ3)の脱離によるイオン及びｍ／ｚ３０４にＣ11‐Ｃ12，Ｃ13‐Ｃ14及びＣ16‐Ｃ17結合の開裂と１Ｈの移動により生成したイオンが観測された。以上のデータ，及び1Ｈ及び13Ｃ‐ＮＭＲデータのルシデニン酸Ｅ2（１２β‐ａｃｅｔｏｘｙ‐３β‐ｈｙｄｒｏｘｙ‐７，１１，１５‐ｔｒｉｏｘｏ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｓｎｏｒｌａｎｏｓｔ‐８‐ｅｎ‐２４‐ｏｉｃ  ａｃｉｄ）［Ｋｉｋｕｃｈｉら，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，３３巻，２６２４頁（１９８５）］との比較により，化合物５は（２０ξ）‐１２β‐ａｃｅｔｏｘｙ‐３β，２０‐ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ‐７，１１，１５‐ｔｒｉｏｘｏ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｓｎｏｒｌａｎｏｓｔ‐８‐ｅｎ‐２４‐ｏｉｃ  ａｃｉｄ［２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｅ2］構造を持つことが明らかとなった。この構造は1Ｈ−1Ｈ  ＣＯＳＹ，ＨＭＱＣ，ＨＭＢＣ，及びＮＯＥＳＹスペクトルの解析により確認した。
【００４２】
化合物６はＦＡＢ‐ＭＳ（［Ｍ＋Ｎａ］+．ｍ／ｚ４９９），高分解能ＥＩ‐ＭＳ（［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+ｍ／ｚ４５８．２６６８）及び13Ｃ‐ＮＭＲより分子式Ｃ27Ｈ40Ｏ7を持つ事が示された。本化合物には１個の第３級水酸基［νmax３４３４ｃｍ-1；δC  ８５．９（ｓ）］，２個の第２級水酸基［δH  ３．２１（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．６，１０．７Ｈｚ），４．８０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．５，８．８Ｈｚ）；δC  ６６．０（ｄ），７８．２（ｄ）］，１個のα，β‐不飽和ケトン基［λmax  ２５５ｎｍ；νmax１７２１ｃｍ-1；δC  １４２．６（ｓ），１５６．５（ｓ），１９７．０（ｓ）］，その他の１個のケトン基［δC  ２１５．７（ｓ）］，１個のカルボキシル基［νmax１６６１ｃｍ-1；δC  １７５．９（ｓ）］，及び６個の第３級メチル基［δH０．８５，１．０４，１．１３，１．２２，１．３８，１．５１(各ｓ)］の存在が示された。ＥＩ‐ＭＳではｍ／ｚ３５７に２Ｈの移動を伴った側鎖(Ｃ5Ｈ9Ｏ3)の脱離によるイオン，ｍ／ｚ３１８にＣ5‐Ｃ6及びＣ9‐Ｃ10結合の開裂によるＡ環（Ｃ9Ｈ14Ｏ）の脱離イオン，及びｍ／ｚ３０４にＣ13‐Ｃ17とＣ14‐Ｃ15結合の開裂によるＤ環の脱離イオンが観測された。以上のデータ，及び1Ｈ及び13Ｃ‐ＮＭＲデータのルシデニン酸Ｎ（３β，７β‐ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ‐１１，１５‐ｄｉｏｘｏ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｓｎｏｒｌａｎｏｓｔ‐８‐ｅｎ‐２４‐ｏｉｃ  ａｃｉｄ）［Ｗｕら，Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．，６４巻，１１２１頁（２００１）］との比較により，化合物６は（２０ξ）‐３β，７β，２０‐ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ‐１１，１５‐ｄｉｏｘｏ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｓｎｏｒｌａｎｏｓｔ‐８‐ｅｎ‐２４‐ｏｉｃ  ａｃｉｄ［２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｎ］構造を持つことが明らかとなった。この構造は1Ｈ−1Ｈ  ＣＯＳＹ，ＨＭＱＣ，ＨＭＢＣ，及びＮＯＥＳＹスペクトルの解析により確認した。
【００４３】
化合物７はＦＡＢ‐ＭＳ（［Ｍ＋Ｎａ］+．ｍ／ｚ５５７），高分解能ＥＩ‐ＭＳ（［Ｍ−Ｈ2Ｏ］+ｍ／ｚ５１６．２７２３）及び13Ｃ‐ＮＭＲより分子式Ｃ29Ｈ42Ｏ9を持つ事が示された。本化合物には１個の第３級水酸基［νmax３４５１ｃｍ-1；δC  ８６．７（ｓ）］，２個の第２級水酸基［δH  ３．２０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝５．１，１１．２Ｈｚ），４．８３（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４，８．６Ｈｚ）；δC  ６６．１（ｄ），７８．１（ｄ）］，１個のα，β‐不飽和ケトン基［λmax  ２５４ｎｍ；νmax１７５８ｃｍ-1；δC  １４２．９（ｓ），１５５．９（ｓ），１９１．０（ｓ）］，その他の１個のケトン基［δC  ２１４．５（ｓ）］，１個のカルボキシル基［νmax１６９５ｃｍ-1；δC  １７５．５（ｓ）］，１個の第２級アセトキシル基［δC２１．２（ｑ），７９．１（ｄ），１７０．３（ｓ）；δH２．２６（３Ｈ，ｓ），５．６４（１Ｈ，ｓ）］，及び６個の第３級メチル基［δH０．８６，１．０４，１．０８，１．２６，１．４９，１．５４(各ｓ)］の存在が示された。ＥＩ‐ＭＳではｍ／ｚ４１７に側鎖(Ｃ5Ｈ9Ｏ3)の脱離によるイオン，及びｍ／ｚ３０６のＣ11‐Ｃ12，Ｃ13‐Ｃ14とＣ16‐Ｃ17結合開裂と１Ｈ移動によるイオンが観測された。以上のデータ，及び1Ｈ及び13Ｃ‐ＮＭＲデータのルシデニン酸Ｐ（１２β‐ａｃｅｔｏｘｙ‐３β，７β‐ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ‐１１，１５‐ｄｉｏｘｏ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｓｎｏｒｌａｎｏｓｔ‐８‐ｅｎ‐２４‐ｏｉｃ  ａｃｉｄ）［Ｉｗａｔｓｕｋｉら，Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．，６６巻，１５８２頁（２，００３）］との比較により，化合物７は（２０ξ）‐１２β‐ａｃｅｔｏｘｙ‐３β，７β，２０‐ｔｒｉｈｙｄｒｏｘｙ‐１１，１５‐ｄｉｏｘｏ‐２５，２６，２７‐ｔｒｉｓｎｏｒｌａｎｏｓｔ‐８‐ｅｎ‐２４‐ｏｉｃ  ａｃｉｄ［２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｐ］構造を持つことが明らかとなった。この構造は1Ｈ‐1Ｈ  ＣＯＳＹ，ＨＭＱＣ，ＨＭＢＣ，及びＮＯＥＳＹスペクトルの解析により確認した。
【００４４】
［効果確認試験について］
次に，本発明の効果を確認するために行った試験について説明する。
まず，ＥＢＶ活性化抑制効果検定法の操作手順を，図２のスキームを参照しながら詳細に説明する。なお，本手順は，徳田らの方法［Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，４０巻，３０９頁（１９８８）］に準拠している。
（１）１×１０6／ｍＬのラジ細胞に，発癌プロモーターとして，２０ｎｇ／ｍＬの濃度の１２‐Ｏ‐テトラデカノイルホルボール‐１３‐アセテート（ＴＰＡ）を３２ｐｍｏｌ加え，さらにＴＰＡの活性発現のために相乗作用として働くｎ‐酪酸を加えた。
（２）そこに，水，エタノール，又はジメチルスルホキシドに溶解した所定量の被検物質を添加して，３７℃で４８時間培養した。
（３）培養終了後，上咽頭癌患者の血清（ＴＰＡにより活性化された細胞由来の抗体を含む）を用いた間接蛍光抗体法によりＥＢＶ早期抗原の発現を検出した。
【００４５】
上記の手順に従って検定を行った後，ＴＰＡのみを加えた群（コントロール）のＥＢＶ早期抗原の発現率を１００％として，被検物質添加群のＥＢＶ早期抗原の発現率を求め，次式（１）により被検物質のＥＢＶ早期抗原の発現阻害率（％）を算出した。
ＥＢＶ早期抗原の発現阻害率（％）＝
１００  −  被検物質添加群のＥＢＶ早期抗原の発現率（％）・・・式（１）
【００４６】
前述のようにして霊芝子実体抽出物から得た１７種のラノスタン型トリテルペン系化合物及びステロール系化合物，即ち，２０（２１）‐デヒドロルシデニン酸Ａ（化合物１），２０（２１）‐デヒドロルシデニン酸Ａメチル（化合物２），２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｄ2（化合物３），２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｆ（化合物４），２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｅ2（化合物５），２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｎ（化合物６），２０‐ハイドロキシルシデニン酸Ｐ（化合物７），ルシデニン酸Ｃメチル（化合物８），ガノデリン酸ＤＭ（化合物９），ガノデルマノンジオール（化合物１０），ガノラクトンＡ（化合物１１），９α‐ハイドロキシ‐１，２，３，４，５，１０，１９‐ヘプタノルエルゴスタ‐７，２２‐ジエン‐６，９‐ラクトン（化合物１２），エルゴステロール（化合物１３），５，６‐ジヒドロエルゴステロール（化合物１４），（２４Ｓ）‐エルゴスト‐７‐エン‐３β‐オール（化合物１５），エルゴステロールパーオキサイド（化合物１６），９（１１）‐デヒドロエルゴステロールパーオキサイド（化合物１７）を被検物質として行った検定の結果を表５に示す。
【００４７】
【表５】
2006022017.tif 000007
【００４８】
なお，被検物質の濃度が１０００倍モル濃度の欄の括弧内の数値は，ラジ細胞の生存率（％）を示す。この数値が高い方が正常細胞に対する悪影響が小さい，すなわち安全性が高いと言える。
表５に示されるように，これらの化合物の阻害率は，ＴＰＡに対し１００倍モル濃度の時１６〜３８％，同様に１０００倍モル濃度の時８５〜１００％であり，高い活性を有している。特に，９（１１）‐デヒドロエルゴステロールパーオキサイド（化合物１７）は，いずれの濃度においても最も阻害率が高く，抗発癌プロモーター活性に優れることが確認された。また，この阻害率は，ビタミンＡ誘導体であり，その発がん予防効果が種々の動物モデル実験でも確認されているβ‐カロテン［村上ら，Ｂｉｏｓｃｉ．  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，６０巻，１頁（１９９６）］と同程度か，それよりも高い値を示した。さらに，これらは本検定において高いラジ細胞生存率を示したことから，高い安全性を持つ発癌予防剤として期待できる。
【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】本発明に係る化合物１〜１７の化学構造式を示す図である。
【図２】ＥＢＶ活性化抑制検定の手順を説明する図である。
【図１】
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【図２】
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