(57)【要約】【課題】            本発明は、遺伝子の突然変異の根本的な原因となるＤＮＡ損傷を保護するＤＮＡ損傷保護作用に優れた成分を、安全性の高い天然成分の中から見出すことを目的とする。遺伝子の変異原性を抑制するＤＮＡ損傷保護作用により、癌や種々の老化症状に関与しているＤＮＡの損傷を防ぎ、これらの疾患を未然に防止することが可能となる。【解決手段】        優れたＤＮＡ損傷保護作用を有するハイゴケ属（Ｈｙｐｎｕｍ）、イトゴケ属（Ｂａｒｂｅｌｌａ）、及びシノブゴケ属（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ）の植物より選ばれる１種又は２種以上の植物抽出物をＤＮＡ損傷保護剤として提供する。【選択図】          なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ハイゴケ属（Ｈｙｐｎｕｍ）、イトゴケ属（Ｂａｒｂｅｌｌａ）、及びシノブゴケ属（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ）の植物の中から選ばれる１種または２種以上の植物の抽出物を有効成分とするＤＮＡ損傷保護剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、優れたＤＮＡ損傷保護作用を有するＤＮＡ損傷保護剤に関する。さらに詳しくは、ハイゴケ属、イトゴケ属、及びシノブゴケ属の植物の中から選ばれる１種または２種以上の植物の抽出物を有効成分とするＤＮＡ損傷保護剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
紫外線、放射線、化学物質などの変異原性物質により、細胞のＤＮＡが損傷し、遺伝子の機能変化、発現調節の異常といった生体内の遺伝情報に変化をもたらし、損傷したＤＮＡの修復が正確になされない場合には、細胞において遺伝子の突然変異が生じる。このようにして生じる遺伝子の突然変異は、癌や種々の老化症状に関与していると考えられており、遺伝子の突然変異を防ぐことは、癌や種々の老化症状の予防や回復に非常に有効な手段であると考えられている。これまでにも抗変異原性剤として、アマチャから得られる水溶性抽出物（特許文献１参照）、ラクトバチルス属微生物（特許文献２参照）などが知られている。また、変異原性の試験方法としては、突然変異の誘発性を検出するＡｍｅｓテストが最も広く利用されているが、最近では、ＤＮＡの損傷性を検出するｕｍｕテストについても報告されている（非特許文献１参照）。
【０００３】
【特許文献１】特開平３−２１５４３３号公報
【特許文献２】特開平５−２３６９４５号公報
【非特許文献１】小田、中村等、Evalution of the new system(umu-test)for the detection of environmental mutagens and carcinogens ,Mutation Research, 147 , 219-229 , 1985
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、遺伝子の突然変異の根本的な原因となるＤＮＡ損傷を保護するＤＮＡ損傷保護作用に優れた成分を、安全性の高い天然成分の中から見出すことを目的としてなされたものである。遺伝子の変異原性を抑制するＤＮＡ損傷保護作用により、癌や種々の老化症状に関与しているＤＮＡの損傷を防ぎ、これらの疾患を未然に防止することが可能となる。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、遺伝子の変異原性を抑制するＤＮＡ損傷保護作用を有する成分を見出すために、天然由来の種々の物質について検討を行った。その結果、ハイゴケ属、イトゴケ属、及びシノブゴケ属の植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物に優れたＤＮＡ損傷保護作用を見出し、さらに検討を重ね、本発明を完成するに至った。すなわち、本発明は、ハイゴケ属、イトゴケ属、及びシノブゴケ属の植物より選ばれる１種又は２種以上の植物の抽出物を有効成分とするＤＮＡ損傷保護剤を提供するものである。
【発明の効果】
【０００６】
本発明によれば、優れた効果を有するＤＮＡ損傷保護剤を提供することができる。また、これらを皮膚外用剤や食品など種々の組成物に配合することにより、優れた効果を有するＤＮＡ損傷保護作用を有し、遺伝子の変異原性を抑制することにより、抗癌や抗老化作用を発揮する組成物を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明の原料として用いられる植物は、ハイゴケ属（Ｈｙｐｎｕｍ）、イトゴケ属（Ｂａｒｂｅｌｌａ）、あるいはシノブゴケ属（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ）の植物であればよい。ハイゴケ属（Ｈｙｐｎｕｍ）の植物としては、イトハイゴケ（Ｈｙｐｎｕｍ ｔｒｉｓｔｏ−ｖｉｒｉｄｅ），エゾハイゴケ（Ｈｙｐｎｕｍ ｌｉｎｄｂｅｒｇｉｉ），オオベニハイゴケ（Ｈｙｐｎｕｍ ｓａｋｕｒａｉｉ），キノウエノコハイゴケ（Ｈｙｐｎｕｍ ｐａｌｌｅｓｃｅｎｓ），キノウエノハイゴケ（Ｈｙｐｎｕｍ ｒｅｐｔｉｌｅ），タチヒラゴケモドキ（Ｈｙｐｎｕｍ ｅｒｅｃｔｉｕｓｃｕｌｕｍ），チチブハイゴケ（Ｈｙｐｎｕｍ ｃａｌｃｉｃｏｌｕｍ），ハイゴケ（Ｈｙｐｎｕｍ ｐｌｕｍａｅｆｏｒｍｅ），ハイサワラゴケモドキ（Ｈｙｐｎｕｍ ｓｕｂｉｍｐｏｎｅｎｓ），ハイヒバゴケ（Ｈｙｐｎｕｍ ｃｕｐｒｅｓｓｉｆｏｒｍｅ），ヒメハイゴケ（Ｈｙｐｎｕｍ ｏｌｄｈａｍｉｉ），フジハイゴケ（Ｈｙｐｎｕｍ ｆｕｊｉｙａｍａｅ），ミヤマチリメンゴケ（Ｈｙｐｎｕｍ ｐｌｉｃａｔｕｌｕｍ）などが知られている。イトゴケ属の植物としては、キヌヒバゴケ（Ｂａｒｂｅｌｌａ ｃｕｂｅｎｓｉｓ），オオサガリゴケ（Ｂａｒｂｅｌｌａ ｅｌｅｇａｎｔｕｌａ），キヨスミイトゴケ（Ｂａｒｂｅｌｌａ ｆｌａｇｅｌｌｉｆｅｒａ），ゴウノサガリゴケ（Ｂａｒｂｅｌｌａ ｇｏｎｏｉ），イトゴケ（Ｂａｒｂｅｌｌａ ｐｅｎｄｕｌａ）などが知られている。シノブゴケ属の植物としては、アオシノブゴケ（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ ｇｌａｕｃｉｎｕｍ），エゾシノブゴケ（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ ｒｅｃｏｇｎｉｔｕｍ），オオシノブゴケ（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ ｔａｍａｒｉｓｃｉｎｕｍ），コバノエゾシノブゴケ（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ ｄｅｌｉｃａｔｕｌｕｍ），チャボシノブゴケ（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ ｂｉｐｉｎｎａｔｕｌｕｍ），アソシノブゴケ（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ ｋａｎｅｄａｅ），ヒメシノブゴケ（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ ｃｙｍｂｉｆｏｌｉｕｍ）などが知られている。
【０００８】
本発明に用いられる原料となる植物は、ハイゴケ属（Ｈｙｐｎｕｍ）、イトゴケ属（Ｂａｒｂｅｌｌａ）、あるいはシノブゴケ属（Ｔｈｕｉｄｉｕｍ）の植物であれば特に限定されないが、入手が比較的容易なことや有効性などの理由から、ハイゴケ，キヌゴケ，ダチョウゴケ，アカイチイゴケ，キヌヒバゴケ，オオサガリゴケ，キヨスミイトゴケ，チャボシノブゴケ，アソシノブゴケ等を用いることが好ましく、ハイゴケ（鬼ゴケ），キヨスミイトゴケ（下がりゴケ），チャボシノブゴケ（黄金鬼ゴケ）を用いることが有効性の点から特に好ましい。
【０００９】
これらハイゴケ属、イトゴケ属、あるいはシノブゴケ属の植物を使用する際は、植物をそのまま使用することも可能であるが、抽出物を用いるのが一般的である。抽出には、シノブゴケ科植物の胞子，胞子体，配偶体のいずれの部位を用いても構わないが、簡便に利用するには、胞子体と配偶体の全草を用いるとよい。抽出の際は、生のまま用いてもよいが、抽出効率を考えると、細切，乾燥，粉砕等の処理を行った後に抽出を行うことが好ましい。抽出は、抽出溶媒に浸漬するか、超臨界流体や亜臨界流体を用いた抽出方法でも行うことができる。抽出効率を上げるため、撹拌や抽出溶媒中でホモジナイズしてもよい。抽出温度としては、５℃程度から抽出溶媒の沸点以下の温度とするのが適切である。抽出時間は抽出溶媒の種類や抽出温度によっても異なるが、１時間〜１４日間程度とするのが適切である。
【００１０】
抽出溶媒としては、水の他、メタノール，エタノール，プロパノール，イソプロパノール等の低級アルコール、１，３−ブチレングリコール，プロピレングリコール，ジプロピレングリコール，グリセリン等の多価アルコール、エチルエーテル，プロピルエーテル等のエーテル類、酢酸ブチル，酢酸エチル等のエステル類、アセトン，エチルメチルケトン等のケトン類などの溶媒を用いることができ、これらより１種又は２種以上を選択して用いる。また、生理食塩水，リン酸緩衝液，リン酸緩衝生理食塩水等を用いてもよい。さらに、水や二酸化炭素，エチレン，プロピレン，エタノール，メタノール，アンモニアなどの１種又は２種以上の超臨界流体や亜臨界流体を用いてもよい。
【００１１】
ハイゴケ属、イトゴケ属、あるいはシノブゴケ属の植物の上記溶媒による抽出物は、そのままでも使用することができるが、濃縮，乾固した物を水や極性溶媒に再度溶解したり、或いはこれらの生理作用を損なわない範囲で脱色，脱臭，脱塩等の精製処理を行ったり、カラムクロマトグラフィー等による分画処理を行った後に用いてもよい。このような処理物や分画物は、各処理や分画後に凍結乾燥し、用時に溶媒に溶解して用いることもできる。
【００１２】
ハイゴケ属、イトゴケ属、あるいはシノブゴケ属の植物の抽出物は、抗変異原性作用を有し、特に紫外線によるＤＮＡ損傷の保護作用に優れている。このため、ハイゴケ属、イトゴケ属、あるいはシノブゴケ属の植物の抽出物は、ＤＮＡ損傷保護剤、あるいは抗変異原性剤として利用することができる。得られるＤＮＡ損傷保護剤、あるいは抗変異原性剤は、細胞における遺伝子の突然変異を防止することにより、癌や老化症状の防止・改善に効果を発揮する。
【００１３】
また、ハイゴケ属、イトゴケ属、あるいはシノブゴケ属の植物の抽出物を有効成分とするＤＮＡ損傷保護剤、あるいは抗変異原性剤は、経口投与や皮膚に外用するなど非経口での投与が可能であり、医薬品，医薬部外品，化粧品，食品など種々の組成物に配合することができる。これらに配合することにより、ＤＮＡ損傷保護作用や抗変異原性作用を有する医薬品，医薬部外品，化粧品，食品など種々の組成物を得ることが出来る。得られる組成物は、細胞における遺伝子の突然変異を防止することにより、癌や老化症状の防止・改善に効果を発揮する。
【００１４】
ハイゴケ属、イトゴケ属、あるいはシノブゴケ属の植物の抽出物を配合する組成物は、医薬品，医薬部外品，化粧品，食品などの剤型に応じて、これら抽出物の他に通常医薬品，医薬部外品，皮膚外用剤，浴用剤，洗浄剤，食品などに配合される油性成分，保湿剤，粉体，色素，乳化剤，可溶化剤，洗浄剤，紫外線吸収剤，増粘剤，薬剤，香料，樹脂，アルコール類，栄養強化物質，調味料などを適宜配合することができる。また、本発明の効果を損なわない範囲において、他のＤＮＡ損傷保護剤、あるいは抗変異原性剤との併用も可能である。
【００１５】
以下に、ハイゴケ属、イトゴケ属、あるいはシノブゴケ属の植物の抽出物についての製造例、各作用を評価するための試験、処方例についてさらに詳細に説明するが、本発明の技術的範囲はこれによって何ら限定されるものではない。
【００１６】
［製造例１］
ハイゴケ属、イトゴケ属、あるいはシノブゴケ属の植物の全草を乾燥・粉砕し、１ｋｇに対して、５０重量％エタノール水溶液を１０Ｌ加え、室温で７日間浸漬した。抽出液をろ過して回収し、溶媒を除去した後、抽出物を得た。
【００１７】
［製造例２］
ハイゴケ属、イトゴケ属、あるいはシノブゴケ属の植物の全草を乾燥・粉砕し、１ｋｇに対して、水を９Ｌ加え、９０℃にて６時間還流して抽出した。抽出液をろ過して回収し、溶媒を除去した後、抽出物を得た。
【００１８】
［製造例３］
ハイゴケ属、イトゴケ属、あるいはシノブゴケ属の植物の全草を乾燥・粉砕し、１ｋｇに対して、メタノールを９Ｌ加え、室温で７日間浸漬した。抽出液をろ過して回収し、溶媒を除去した後、抽出物を得た。
【００１９】
［製造例４］
超臨界抽出装置にハイゴケ属、イトゴケ属、あるいはシノブゴケ属の植物の全草を乾燥・粉砕後に投入し、４０℃において１５ＭＰａの気圧下で二酸化炭素の超臨界流体を用いて抽出し、抽出物を得た。
【００２０】
次に、ハイゴケ属、イトゴケ属、あるいはシノブゴケ属の植物の抽出物についてのＤＮＡ損傷保護作用について示す。試料には、ハイゴケ、キヨスミイトゴケ、チャボシノブゴケを製造例１に従って抽出し、試料１〜３として評価を行った。
【００２１】
ＤＮＡ損傷保護作用の評価は、ｕｍｕテストで行った。これは、ＤＮＡ損傷により誘発される一連の遺伝子群（ＳＯＳ遺伝子）のうち、突然変異に直接関与しているｕｍｕ遺伝子の発現についてβガラクトシダーゼ活性を指標として測定するものである。
【００２２】
まず、ｕｍｕテスト菌の調整を行った後、試料添加後にＵＶＢを０．１Ｊ／ｃｍ2照射した。３７℃で２時間培養した後、発色基質（Ｘ-ｇａｌ）を添加し、反応が十分進んだところで基質反応を停止させ、６２０ｎｍにおける吸光度を測定し、ＤＮＡ損傷率を次式により計算した。
ＤＮＡ損傷率＝[（試料添加時の吸光度）／（試料未添加時の吸光度）]×１００
また一方で、それぞれの試料のＵＶＢ吸収について試験を行い、各試料にＵＶＢ吸収能がないことを確認した。
【００２３】
各試料におけるＤＮＡ損傷率を表１に示す。なお、表中の*及び**は、ｔ検定における有意確率Ｐ値に対し、有意確率５％未満（Ｐ＜０．０５）を*で、有意確率１％未満（Ｐ＜０．０１）を**で表したものである。
【００２４】
【表１】
2006193472.tif 000002
【００２５】
表１より明らかなように、各試料を添加した場合には、有意なＤＮＡ損傷率の低下が認められた。このことから、ハイゴケ属、イトゴケ属、及びシノブゴケ属の植物の抽出物は、優れたＤＮＡ損傷保護作用を有することが明らかとなった。
【００２６】
続いて、本発明に係るハイゴケ属、イトゴケ属、及びシノブゴケ属の植物の抽出物を配合した組成物の処方例を示すが、これらの処方例以外にも医薬品，医薬部外品，化粧品，食品などの各種剤型に用いることが可能である。
【００２７】
［処方例１］錠剤
（１）ハイゴケ抽出物［製造例１］                        ０．２（重量部）
（２）乳糖                                              ０．１５
（３）ステアリン酸マグネシウム                          ０．００５
製法：（１）〜（３）を打錠機にて打錠し、直径１０ｍｍ、重量３５０ｍｇの錠剤とする。
【００２８】
［処方例２］散剤
（１）キヨスミイトゴケ［製造例１］    ８．０（重量部）
（２）精製水                                            ９．０
（３）大豆オリゴ糖                                      ２．０
（４）デキストリン                                    ８１．０
製法：（１）〜（６）を均一に混合攪拌し、スプレードライを行い散剤とする。
【００２９】
［処方例３］飲料
（１）チャボシノブゴケ抽出物［製造例１］                ８．０(重量％)
（２）エリスリトール                                    １．０
（３）クエン酸                                          ０．１
（４）ステビア                                          ０．０１
（５）精製水                                          ９０．８９
製法：（１）〜（５）を均一に混合する。
【００３０】
［処方例４］皮膚外用クリーム
（１）スクワラン                                      １０．０（重量％）
（２）ステアリン酸                                      ２．０
（３）水素添加パーム核油                                ０．５
（４）水素添加大豆リン脂質                              ０．１
（５）セタノール                                        ３．６
（６）親油型モノステアリン酸グリセリン                  ２．０
（７）グリセリン                                      １０．０
（８）パラオキシ安息香酸メチル                          ０．１
（９）アルギニン（２０重量％水溶液）                  １５．０
（10）精製水                                          ４０．７
（11）カルボキシビニルポリマー（１重量％水溶液）      １５．０
（12）ハイゴケ抽出物［製造例１］                      １．０
製法：（１）〜（６）の油相成分を８０℃にて加熱溶解する。一方（７）〜（10）の水相成分を８０℃にて加熱溶解する。これに前記油相成分を攪拌しながら加え、ホモジナイザーにより均一に乳化する。乳化終了後、（11）を加え、冷却を開始し、４０℃にて（12）を加え、均一に混合する。