(57)【要約】【目的】  スフィンゴ糖脂質を配合した大腸癌抑制剤【構成】  スフィンゴ糖脂質または、スフィンゴ糖脂質含有物を飲食品、医薬品に配合し、安全性の高い新規な大腸癌予防剤を提供する。【効果】  大腸癌発生に関与があると考えられる異型陰窩巣（ＡＣＦ）および粘液枯渇巣（ＭＤＦ）を防ぐことで、安全性の高い新規な大腸癌予防に有用な飲食品または薬品を提供する事が可能となった。【特許請求の範囲】
【請求項１】
スフィンゴ糖脂質又はスフィンゴ糖脂質を含有することを特徴とする大腸癌予防剤。
【請求項２】
大腸癌予防剤であるスフィンゴ糖脂質又はスフィンゴ糖脂質を含有することを特徴とする医薬品。
【請求項４】
大腸癌予防剤であるスフィンゴ糖脂質又はスフィンゴ糖脂質を含有することを特徴とする飲食品。
【請求項５】
大腸癌予防剤であるスフィンゴ糖脂質又はスフィンゴ糖脂質を含有することを特徴とする健康食品。
【請求項６】
大腸癌予防剤であるスフィンゴ糖脂質又はスフィンゴ糖脂質を含有することを特徴とする機能性食品。
【請求項７】
大腸癌予防剤であるスフィンゴ糖脂質又はスフィンゴ糖脂質を含有することを特徴とする医療用食品。
【請求項８】
スフィンゴ糖脂質が米糠由来であること、スフィンゴ糖脂質を０．００１％〜１００％含有することを特徴とする大腸癌予防剤。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、例えば、医薬品、医薬部外品、飲食品等に適用されるスフィンゴ糖脂質又はスフィンゴ糖脂質を含有する大腸癌予防剤に関する。
【背景技術】
【０００２】  大腸癌による死亡率は我が国では消化器癌のうち、胃癌に次いで高く、特に最近の欧米型の食習慣化により急増している。
近年、ヒト大腸癌についての癌遺伝子や発癌抑制遺伝子の解析が積極的に行われているが、長年月を要する大腸癌の発生機構の解明は現在なお困難であり、大腸癌の発生に関わる環境要因の様式の解明は容易ではない。大腸癌の化学予防は、天然または合成系化学物質による発癌プロセスの抑制により行われる現在のような時代的背景において、天然物由来の安全な予防物質を発見することは特に重要である。
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】  このような背景の下、本発明者らは、各種成分について実験を行い、鋭意研究に努めた結果、米糠から抽出、精製したスフィンゴ糖脂質に大腸癌の発癌抑制作用があることを見出した。
本発明の目的は、スフィンゴ糖脂質という、米糠から得られ、しかも安全性の高い新規な大腸癌予防剤、並びにこれを含有する飲食品および薬品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】  前記課題を解決するための本発明の大腸癌予防剤は、米糠をそのまま用いる事は可能である。抽出する場合、水、エタノール、メタノール、イソプロパノール、アセトン、１，３−ブチレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、酢酸、酢酸エチル、エーテル、ヘキサン、二酸化炭素など、どの様な溶媒を、どの様に組み合わせても可能である。
【０００５】  本発明の飲食品は、前記大腸癌予防剤を含有してなることを特徴とする。
本発明の薬品は、前記大腸癌予防剤を含有してなることを特徴とする。
【発明実施の形態】
【０００６】  本発明に用いるスフィンゴ糖脂質としては、精製したものを用いるとよい。また、それに限らず、スフィンゴ糖脂質を含有する原料としては、米糠又は米糠から得られた抽出物でも用いることができる。
【０００７】  前記、抽出溶媒としては、水、エタノール、メタノール、イソプロパノール、アセトン、１，３−ブチレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、酢酸、酢酸エチル、エーテル、ヘキサン、二酸化炭素などをそのまま単一溶媒で用いるか、２種類以上を任意に混合して用い、エキスを作成する事も出来る。
【０００８】  本発明の大腸癌予防剤のエキスを用いる場合、抽出温度は、抽出溶媒が液体状態で有ればよく、そのつど温度は任意に決められる事になる。抽出時間は、好ましくは、１時間以上必要であるが温度条件によっては、もっと短い時間でも可能である。
【０００９】  本発明の大腸癌予防剤はスフィンゴ糖脂質もしくはスフィンゴ糖脂質精製物、または米糠抽出物をそのまま製剤の形態にしてもよいが、食品原料に所要量を加えて一般の製造法により加工製造してもよい。例えば大腸癌予防剤を飲料に添加物として直接添加するか、固形食品に添加して癌予防の食品、健康食品等として提供することができる。
【０００１０】  本発明の大腸癌予防剤の効果を損なわない範囲で、本発明の大腸癌予防剤を油分、高級アルコール、脂肪酸、界面活性剤、多価アルコール、糖、多糖、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、高分子化合物、生理活性成分、溶媒、酸化防止剤、香料、防腐剤等の医薬品、食品、食品添加物に配合することができる。
以下に配合される成分を列挙するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。
油分としてはトリ２−エチルヘキサン酸グリセリル、２−エチルヘキサン酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ブチル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸エチル、パルミチン酸オクチル、イソステアリン酸イソセチル、ステアリン酸ブチル、ミリスチン酸ブチル、リノール酸エチル、リノール酸イソプロピル、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソセチル、ミリスチン酸イソステアリル、パルミチン酸イソステアリル、ミリスチン酸オクチルドデシル、イソステアリン酸イソセチル、セバシン酸ジエチル、アジピン酸ジイソプロピル、ネオペンタン酸イソアラキル、トリ（カプリル・カプリン酸）グリセリル、トリ２−エチルヘキサン酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリトール、カプリル酸セチル、ラウリン酸デシル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸デシル、ミリスチン酸ミリスチル、ミリスチン酸セチル、ステアリン酸ステアリル、オレイン酸デシル、リシノレイン酸セチル、ラウリン酸イソステアリル、ミリスチン酸イソトリデシル、ミリスチン酸イソセチル、ミリスチン酸イソステアリル、パルミチン酸イソセチル、パルミチン酸イソステアリル、ステアリン酸オクチル、ステアリン酸イソセチル、オレイン酸イソデシル、オレイン酸オクチルドデシル、リノール酸オクチルドデシル、イソステアリン酸イソプロピル、２−エチルヘキサン酸セトステアリル、２−エチルヘキサン酸ステアリル、イソステアリン酸ヘキシル、ジオクタン酸エチレングリコール、ジオレイン酸エチレングリコール、ジカプリン酸プロピレングリコール、ジ（カプリル・カプリン酸）プロピレングリコール、ジカプリル酸プロピレングリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、ジオクタン酸ネオペンチルグリコール、トリカプリル酸グリセリル、トリウンデシル酸グリセリル、トリイソパルミチン酸グリセリル、トリイソステアリン酸グリセリル、ネオペンタン酸オクチルドデシル、オクタン酸イソステアリル、イソノナン酸オクチル、ネオデカン酸ヘキシルデシル、ネオデカン酸オクチルドデシル、イソステアリン酸イソセチル、イソステアリン酸イソステアリル、イソステアリン酸オクチルデシル、ポリグリセリンオレイン酸エステル、ポリグリセリンイソステアリン酸エステル、炭酸ジプロピル、炭酸ジアルキル（Ｃ１２〜Ｃ１８）、クエン酸トリイソセチル、クエン酸トリイソアラキル、クエン酸トリイソオクチル、乳酸ラウリル、乳酸ミリスチル、乳酸セチル、乳酸オクチルデシル、クエン酸トリエチル、クエン酸アセチルトリエチル、クエン酸アセチルトリブチル、クエン酸トリオクチル、リンゴ酸ジイソステアリル、ヒドロキシステアリン酸２−エチルヘキシル、コハク酸ジ２−エチルヘキシル、アジピン酸ジイソブチル、セバシン酸ジイソプロピル、セバシン酸ジオクチル、ステアリン酸コレステリル、イソステアリン酸コレステリル、ヒドロキシステアリン酸コレステリル、オレイン酸コレステリル、オレイン酸ジヒドロコレステリル、イソステアリン酸フィトステリル、オレイン酸フィトステリル、１２−ステアロイルヒドロキシステアリン酸イソセチル、１２−ステアロイルヒドロキシステアリン酸ステアリル、１２−ステアロイルヒドロキシステアリン酸イソステアリル、スクワラン、流動パラフィン、α−オレフィンオリゴマー、イソパラフィン、セレシン、パラフィン、流動イソパラフィン、ポリブテン、マイクロクリスタリンワックス、ワセリン、牛脂、硬化牛脂、豚脂、硬化豚脂、馬油、硬化馬油、ミンク油、オレンジラフィー油、魚油、硬化魚油、卵黄油等の動物油およびその硬化油、アボカド油、アルモンド油、オリブ油、カカオ脂、杏仁油、ククイナッツ油、ゴマ油、小麦胚芽油、コメ胚芽油、コメヌカ油、サフラワー油、シアバター、大豆油、月見草油、シソ油、茶実油、ツバキ油、トウモロコシ油、ナタネ油、硬化ナタネ油、パーム核油、硬化パーム核油、パーム油、硬化パーム油、ピーナッツ油、硬化ピーナッツ油、ヒマシ油、硬化ヒマシ油、ヒマワリ油、ブドウ種子油、ホホバ油、硬化ホホバ油、マカデミアナッツ油、メドホーム油、綿実油、硬化綿実油、ヤシ油、硬化ヤシ油等の植物油およびその硬化油、ミツロウ、高酸価ミツロウ、ラノリン、還元ラノリン、硬化ラノリン、液状ラノリン等が挙げられる。
高級アルコールとしてはラウリルアルコール、ミリスチルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、イソステアリルアルコール、オレイルアルコール、ベヘニルアルコール、２−エチルヘキサノール、ヘキサデシルアルコール、オクチルドデカノール等が挙げられる。
脂肪酸としてはカプリル酸、カプリン酸、ウンデシレン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキン酸、アラキドン酸、ベヘン酸、エルカ酸、２−エチルヘキサン酸等が挙げられる。
界面活性剤としてはプロピレングリコール脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンヒマシ油、水素添加大豆リン脂質、レシチン、サポニン、糖系界面活性剤等が挙げられる。
多価アルコール及び糖としてはエチレングリコール、ジエチレングリコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、グリセリン、ジグリセリン、ポリグリセリン、３−メチル−１，３−ブタンジオール、１，３−ブチレングリコール、ソルビトール、マンニトール、ラフィノース、エリスリトール、グルコース、ショ糖、果糖、キシリトール、ラクトース、マルトース、マルチトール、トレハロース、アルキル化トレハロース、混合異性化糖、水溶性多糖類、硫酸化トレハロース、プルラン等が挙げられる。またこれらの化学修飾体等も使用可能である。
高分子化合物としてはセルロース又はその誘導体、ケラチン及びコラーゲン又はその誘導体、アルギン酸カルシウム、プルラン、寒天、ゼラチン、タマリンド種子多糖類、キサンタンガム、カラギーナン、ハイメトキシルペクチン、ローメトキシルペクチン、グアーガム、アラビアゴム、結晶セルロース、アラビノガラクタン、カラヤガム、トラガカントガム、アルギン酸、アルブミン、カゼイン、カードラン、ジェランガム、デキストラン等の天然由来高分子化合物も好適に用いることができる。
生理活性成分としてはビタミン類、アミノ酸、各種植物抽出物等が挙げられる。これらの好適な配合成分の例としては、例えばアシタバエキス、アボカドエキス、アマチャエキス、アルテアエキス、アンズエキス、アンズ核エキス、ウイキョウエキス、ウコンエキス、ウーロン茶エキス、温州みかんエキス、エチナシ葉エキス、オウバクエキス、オウレンエキス、オオムギエキス、オトギリソウエキス、オドリコソウエキス、オランダカラシエキス、オレンジエキス、海水乾燥物、カカオエキス、カカオハスクエキス、加水分解エラスチン、加水分解コムギ末、加水分解シルク、カワラヨモギエキス、カルカデエキス、カキョクエキス、γ−アミノ酪酸富化米胚芽、キウイエキス、キナエキス、キューカンバーエキス、グアノシン、クチナシエキス、クマザサエキス、クララエキス、クルミエキス、グレープフルーツエキス、クレマティスエキス、黒米エキス、クロレラエキス、クワエキス、ゲンチアナエキス、紅茶エキス、ゴボウエキス、コメヌカ発酵エキス、米胚芽発酵エキス、コラーゲン、コケモモエキス、サイシンエキス、サイコエキス、サイタイ抽出液、サルビアエキス、サボンソウエキス、ササエキス、サンザシエキス、サンジョウエキス、シイタケエキス、ジオウエキス、シコンエキス、シソの実エキス、シナノキエキス、シモツケソウエキス、シャクヤクエキス、ショウブ根エキス、シラカバエキス、植物ステロール、セイヨウサンザシエキス、セイヨウニワトコエキス、セイヨウノコギリソウエキス、セイヨウハッカエキス、ゼニアオイエキス、センキュウエキス、センブリエキス、ソバの葉エキス、ダイズエキス、タイソウエキス、タイムエキス、チオクト酸、チガヤエキス、チンピエキス、月見草エキス、月見草種子エキス、トウキンセンカエキス、トウニンエキス、トウヒエキス、トコトリエノール、トマトエキス、トリテルペノイド、納豆エキス、生コーヒー豆エキス、ノバラエキス、ハイビスカスエキス、バクモンドウエキス、パセリエキス、蜂蜜、パリエタリアエキス、ヒキオコシエキス、ビサボロール、フキエキス、フキタンポポエキス、フキノトウエキス、ブクリョウエキス、ブッチャーブルームエキス、ブドウエキス、ブロッコリーエキス、ブロッコリースプラウトエキス、プロポリス、ヘチマエキス、ベニバナエキス、ペパーミントエキス、ボダイジュエキス、ボタンエキス、ホップエキス、マツエキス、マロニエエキス、ミズバショウエキス、ムクロジエキス、モモエキス、ヤグルマギクエキス、ユーカリエキス、ユキノシタエキス、ユズエキス、ユズ種子エキス、ヨクイニンエキス、ライチ種子エキス、ラベンダーエキス、ルテイン、レタスエキス、レモンエキス、レンゲソウエキス、ローズエキス、ローマカミツレエキス、ローヤルゼリーエキス等を挙げることができる。
また、デオキシリボ核酸、ムコ多糖類、ヒアルロン酸ナトリウム、コンドロイチン硫酸ナトリウム、コラーゲン、エラスチン、キチン、キトサン、加水分解卵殻膜などの生体高分子、アミノ酸、加水分解ペプチド、乳酸ナトリウム、ベタイン、ホエイ、コレステロール、コレステロール誘導体、リン脂質などの油性成分、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＤ、パントテン酸カルシウム、ビオチン、ニコチン酸アミド等のビタミン類、γ−オリザノール等の血行促進剤、製剤の酸化防止を目的とする酸化防止剤としては亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、エリソルビン酸、エリソルビン酸ナトリウム、チオジプロピオン酸ジラウリル、トリルビグアナイド、ノルジヒドログアヤレチン酸、パラヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシアニソール、ジブチルヒドロキシトルエン、没食子酸オクチル、没食子酸プロピル。
【００１１】  また、本発明の大腸癌予防剤は、飲食品に含有させることができる。例えば、菓子類（ガム、キャンディー、キャラメル、チョコレート、クッキー、スナック菓子、ゼリー、グミ、錠菓等）、麺類（そば、うどん、ラーメン等）、乳製品（ミルク、アイスクリーム、ヨーグルト等）、調味料（味噌、醤油等）、スープ類、飲料（ジュース、コーヒー、紅茶、茶、炭酸飲料、スポーツ飲料等）をはじめとする一般食品や健康食品（錠剤、カプセル等）、栄養補助食品（栄養ドリンク等）などが上げられる。インスタント食品に本発明の大腸癌予防剤を添加しても良い。例えば、大腸癌予防剤を粉末セルロースとともにスプレードライまたは凍結乾燥したものを、粉末、顆粒、打錠または溶液にすることで容易に飲食品に含有させることができる。
【００１２】  本発明の大腸癌予防剤は、医薬品、医薬部外品、機能性食品等の内服剤に配合することができる。投与方法は経口投与することが望ましい。一般的には錠剤、丸剤、軟・硬カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、液剤等の製品形態にすることができる。
【００１３】  本発明の大腸癌予防剤は、医薬品、飲食品に添加する場合、有効成分の使用量に特に制限はない。健康食品として摂取する場合、病気予防や健康維持が目的であるので、含有する飲食品に対して有効成分が合計０．０１〜１０重量％であるのが好ましい。
【発明の効果】
【００１４】  以上説明したように、本発明によれば、次のような優れた効果を奏する。
（ａ）植物原料である米糠から安全性の高い新規な大腸癌予防剤を得ることができる。
（ｂ）副作用のない癌予防食品や癌予防・治療薬を容易に製造することができる。
（ｃ）飲食品または薬品から大腸癌予防の有効成分を日常的に摂取しやすくすることができる。
【実施例】
【００１５】  以下、本発明の実施例を説明する。なお、以下に示す大腸癌予防剤およびその製法は、大腸癌予防効果の確認のために説明するもので、これらに限定されるものではない。【００１６】（１）米糠１０ｋｇを５倍量（重量）クロロホルム／メタノール（混合比２：１）抽出溶媒に加えて抽出を行った。同じ操作を３回繰り返し行い、抽出液を回収し、溶媒を留去してスフィンゴ糖脂質含有抽出物を得た。次に、抽出物をクロロホルム／メタノール／水（３：４８：４７）で３回水洗して、水洗後のクロロホルム層を濃縮した。さらに、濃縮物を１０倍量クロロホルムに溶かして、シリカゲルカラムに注入し、クロロホルムで中性油を溶出した後、クロロホルム／メタノール（３：１）でスフィンゴ糖脂質を溶出した。この操作を２回繰り返し、すべてのクロロホルム／メタノール（３：１）溶出部を合わせて溶媒留去した後、固形分含量が５％になるようにヘキサン／プロパノール（９：１）に溶かして、シリカゲルカラム処理を行った。その後、ヘキサン／エタノール（４：１）でスフィンゴ糖脂質を回収した。スフィンゴ糖脂質フラクションを集め、濃縮、真空乾燥により、純度９５％以上の精製スフィンゴ糖脂質１００ｍｇを得た。【００１７】大腸癌抑制試験
次に、動物実験による大腸癌の発癌抑制作用を試験した。
試験用のサンプルとしては、スフィンゴ糖脂質を８．６％含有する米糠抽出物と９０％以上のスフィンゴ糖脂質の微粉砕品を用いた。【００１８】  実験（１）のプロトコール図．１に示す。
実験（１）：５週齢、雄Ｆ３４４ラット４匹を使い、６群に分け（実験プロトコール図．１参照）、第１〜４群に対してはアゾキシメタン（ａｚｏｘｙｍｅｔｈａｎｅ：ＡＯＭ）（２０ｍｇ／ｋｇ，ｂｏｄｙ  ｗｅｉｇｈｔ）を週１回の計２回皮下投与した。第２〜４群のラットにはＡＯＭ投与の１週間前から基礎食にスフィンゴ脂質を８．６％含有する米糠抽出物粉末（ｃＧＳＬ）を２５０，１，０００，３，０００ｐｐｍの濃度で混餌投与した。第５群はｃＧＳＬ摂取による副作用の有無を検討するするためにｃＧｓＬ３，０００ｐｐｍを含む基礎食を与えた。第６群は対照群として基礎食のみを与えた。全てのラットは実験開始５週目にＣＯ２ガス麻酔下で屠殺し，大腸，肝臓，腎臓を採取した。大腸は長軸方向に切り開いて１０％中性緩衝ホルマリンで固定した。肝および腎は重量を測定し，１０％中性緩衝ホルマリンで固定した。
大腸前癌病変の評価：
固定の終了した大腸をアルシアン青染色（ｐＨ２．５）した後，光学顕微鏡で大腸癌の前癌病変と考えられているａｂｅｒａｎｔ  ｃｒｙｐｔ  ｆｏｃｉ（ＡＣＦ），ｍｕｃｉｎ  ｄｅｐｌｅｔｅｄ  ｆｏｃｉ（ＭＤＦ）の数を測定した。通常の大腸粘膜陰窩から腫大した異型陰窩巣形成を見る、いわゆるａｂｅｒａｎｔ  ｃｒｙｐｔ  ｆｏｃｉ（ＡＣＦ）の数を調査した。また、一つのＡＣＦに含まれる陰窩数を観察し、大腸癌発生に関与があると考えられる大型ＡＣＦ（ＡＣＦ内に４つ以上の陰窩を認めるもの）の数を調査した。具体的には大腸を３％酢酸溶液で２分，０．５％アルシアン青（３％酢酸中）で５分，ホウ酸・塩化ナトリウム・ホウ砂緩衝液（Ｐａｌｉｔｉｓｃｈ  ｂｕｆｆｅｒ）で５分間処理した。染色の済んだ大腸はガラス板に載せ，乾燥しないように蒸留水で浸しながら１００倍で全ての粘膜面を顕鏡し病変の数を記録した。ラット１匹あたりのＡＣＦ数の有意差判定にはＤｕｃａｎの多重比較検定を用い、ＡＣＦ数の統計値を算出した。【００１９】実験（２）のプロトコール図．２に示す。
実験（２）：５週齢、雄Ｆ３４４ラット１１４匹を７群に分け（実験プロトコール図．２参照）、第１〜５群に対しては実験（１）と同様にＡＯＭ（２０ｍｇ／ｋｇ  ｂｏｄｙｗｅｉｇｈｔ）を週１回２週間皮下注射し、大腸癌の前癌病変であるＡＣＦとＭＤＦを誘発した。第１群はＡＯＭ投与１週間前より基礎食を実験終了８週目まで与えた。実験（１）の結果を考慮して、第２，３群は実験（１）で使用した粗精製物を約９０％の純度に精製したスフィンゴ脂質（Ｇ１ＣＭ）を、１００及び２５０ｐｐｍ含有する餌をそれぞれ実験開始より４週間投与しその後は基礎食を実験終了まで与えた。第４，５群は実験開始３週目より１００及び２５０ｐｐｍ  Ｇ１ＣＭ含有食をそれぞれ実験終了まで投与した。第６，７群はＡＯＭ非投与群で２５０ｐｐｍＧ１ＣＭ含有食と基礎食を通期で与えた。実験開始４週目には第１−３群（各１２匹）と第６，７群（各３匹）をそれぞれ屠殺した。また、８週目には全てのラットを屠殺し大腸を摘出しホルマリン固定後、実験（１）と同様にアルシアン青染色（ｐＨ２．５）を行い、ＡＣＦとＭＤＦを測定し、Ｇ１ＣＭのｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ期及びｐｏｓｔ−ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ期投与によるＡＣＦとＭＤＦの抑制効果を検討した。【００２０】結果を表１に示す。
【表１】
実験（１）：全てのラットは実験終了まで生存し，大腸に腫瘍を形成した個体は認めなかった。各群の体重，相対肝および腎重量（体重１００ｇあたりの臓器重量）の平均ではいずれの群間でも有意な差は認められず（Ｐ＞０．０５）、ＡＯＭ，ｃＧＳＬの投与による体重抑制，肝・腎重量抑制の副作用はなかった．
ｃＧＳＬが大腸前癌病変の数に与える影響：
ＡＯＭを投与した第１から４群までの全ての個体の大腸にはＡＣＦの発生がみられた．各群のＡＣＦ数の平均は第１群；１３８．２±２４．８，第２群；１１６．１±１６．８，第３群；９７．９±１７．７，第４群；１０５．９±３７．６であり，陽性対照群（第１群）に比べｃＧＳＬを投与した群では有意な減少を認めた（Ｐ＜０．０５）。一方、ＭＤＦについては，第１群；１３．９±４．１，第２群；８．２±１．９，第３群；７．８±２．５，第４群；９．８±２．４であり，ＡＣＦ発生数と同様に陽性対照群（第１群）に比べｃＧＳＬ投与群で有意な差を認めた（Ｐ＜０．０１）。尚、第５と６群では前癌病変は認めなかった。
【００２１】結果を表２に示す。
【表２】
実験（２）：実験開始４週目におけるＡＣＦとＭＤＦ発生数は陽性対照群（第１群）でそれぞれ７５．７±１７．５、９．２±５．２であった。それに対し、ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ期にＧ１ＣＭを混餌投与した第２，３群におけるＡＣＦとＭＤＦはそれぞれ第２群で４５．９±８．８（Ｐ＜０．０１）、０．８±０．８（Ｐ＜０．０５）、第３群で４４．８±１４．５（Ｐ＜０．０１）、０．８±０．４（Ｐ＜０．０５）であり第１群に比較し有意な抑制が認められた。
実験開始８週目における各群のＡＣＦはそれぞれ第１群１１１．１±３２．９、第２群９０．１±２８．１、第３群７４．８±１９．９（Ｐ＜０．０５）、第４群８９．０±２８．６、第５群７８．７±１４．９（Ｐ＜０．０５）であり２５０ｐｐｍＧ１ＣＭのｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ期及びｐｏｓｔ−ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ期投与群において第１群に比較し有意な抑制が認められた。一方、ＭＤＦ数はそれぞれ第１群１７．２±６．６、第２群１０．８±５．９（Ｐ＜０．０５）、第３群６．８±２７（Ｐ＜０．０５）（Ｐ＜０．００５）、第４群１０．０±５．１（Ｐ＜０．０５）、第５群９．６±３．１（Ｐ＜０．０１）でありＧ１ＣＭのｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ期及びｐｏｓｔ−ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ期投与全群において第１群に比較し有意な抑制が認められた。
以上の結果から、大腸粘膜内の２種類前癌病変のＡＣＦおよびＭＤＦ発生数を大腸癌の前癌病変マーカーとした場合、粗抽出およびその精製物の混餌投与により、同等の濃度で、前癌病変の抑制効果を示し、がん病巣の芽を抑制する点で、がん予防の可能性を示唆した。特に発癌剤と投与と同時でなく、腫瘍形成のプロモーション期での投与により、前癌病変の発生低下を示し、細胞増殖抑制のみならず、アポトーシス誘導の可能性をした。
【００２２】製造例
本発明による大腸癌予防剤を適用した飲食品または薬品の製造例を示す。なお、下記の原料の種類および配合比は、適宜変更することが可能である。
製造例１：ソフトカプセル
玄米胚芽油                      ８７．０ｗｔ％
乳化剤                          １２．０
大腸癌予防剤                      １．０
１００．０ｗｔ％
【００２３】製造例２：錠剤
乳糖                            ５４．０ｗｔ％
結晶セルロース                  ３０．０
澱粉分解物                      １０．０
グリセリン脂肪酸エステル          ５．０
大腸癌予防剤                      １．０
１００．０ｗｔ％
【００２４】製造例３：錠菓
砂糖                            ７６．４ｗｔ％
グルコース                      １９．０
ショ糖脂肪酸エステル              ０．２
大腸癌予防剤                      ０．５
精製水                            ３．９
１００．０ｗｔ％
【００２５】製造例４：チューインガム
砂糖                            ５３．０ｗｔ％
ガムベース                      ２０．０
グルコース                      １０．０
水飴                            １６．０
香料                              ０．５
大腸癌予防剤                      ０．５
１００．０ｗｔ％
【００２６】製造例５：キャンディー
砂糖                            ５０．０ｗｔ％
水飴                            ３３．０
水                              １４．４
有機酸                            ２．０
香料                              ０．２
大腸癌予防剤                      ０．４
１００．０ｗｔ％
【００２７】製造例６：グミ
還元水飴                        ４０．０ｗｔ％
グラニュー糖                    ２０．０
ブドウ糖                        ２０．０
ゼラチン                          ４．７
水                                ９．６８
ウメ果汁                          ４．０
ウメフレーバー                    ０．６
色素                              ０．０２
大腸癌予防剤                      １．０
１００．０ｗｔ％
【００２８】製造例７：ヨーグルト（ハード・ソフト）
牛乳                            ４１．５ｗｔ％
脱脂粉乳                          ５．８
砂糖                              ８．０
寒天                              ０．１５
ゼラチン                          ０．１
乳酸菌                            ０．００５
大腸癌予防剤                      ０．４
香料                              微量
水                                残余
１００．０ｗｔ％
【００２９】製造例８：清涼飲料
果糖ブドウ等液糖                ３０．０ｗｔ％
乳化剤                            ０．５
大腸癌予防剤                      ０．０５
香料                              微量
精製水                            残余
１００．０ｗｔ％
【００３０】製造例９：コーヒー飲料（液状）
焙煎コーヒー豆                    ６．０ｗｔ％
砂糖                              ６．０
重曹                              ０．２
乳化剤                            ０．１５
大腸癌予防剤                      １．０
水                                残余
１００．０ｗｔ％
【図１】
2006290856.tif 000002
【図２】
2006290856.tif 000003
2006290856.tif 000004
2006290856.tif 000005
【手続補正書】
【提出日】平成17年6月24日(2005.6.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、例えば、医薬品、医薬部外品、飲食品等に適用されるスフィンゴ糖脂質又はスフィンゴ糖脂質を含有する大腸癌予防剤に関する。
【背景技術】
【０００２】  大腸癌による死亡率は我が国では消化器癌のうち、胃癌に次いで高く、特に最近の欧米型の食習慣化により急増している。
近年、ヒト大腸癌についての癌遺伝子や発癌抑制遺伝子の解析が積極的に行われているが、長年月を要する大腸癌の発生機構の解明は現在なお困難であり、大腸癌の発生に関わる環境要因の様式の解明は容易ではない。大腸癌の化学予防は、天然または合成系化学物質による発癌プロセスの抑制により行われる現在のような時代的背景において、天然物由来の安全な予防物質を発見することは特に重要である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】  このような背景の下、本発明者らは、各種成分について実験を行い、鋭意研究に努めた結果、米糠から抽出、精製したスフィンゴ糖脂質に大腸癌の発癌抑制作用があることを見出した。
本発明の目的は、スフィンゴ糖脂質という、米糠から得られ、しかも安全性の高い新規な大腸癌予防剤、並びにこれを含有する飲食品および薬品を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】  前記課題を解決するための本発明の大腸癌予防剤は、米糠をそのまま用いる事は可能である。抽出する場合、水、エタノール、メタノール、イソプロパノール、アセトン、１，３−ブチレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、酢酸、酢酸エチル、エーテル、ヘキサン、二酸化炭素など、どの様な溶媒を、どの様に組み合わせても可能である。【０００５】  本発明の飲食品は、前記大腸癌予防剤を含有してなることを特徴とする。
本発明の薬品は、前記大腸癌予防剤を含有してなることを特徴とする。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】  本発明に用いるスフィンゴ糖脂質としては、精製したものを用いるとよい。また、それに限らず、スフィンゴ糖脂質を含有する原料としては、米糠又は米糠から得られた抽出物でも用いることができる。【０００７】  前記、抽出溶媒としては、水、エタノール、メタノール、イソプロパノール、アセトン、１，３−ブチレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン、酢酸、酢酸エチル、エーテル、ヘキサン、二酸化炭素などをそのまま単一溶媒で用いるか、２種類以上を任意に混合して用い、エキスを作成する事も出来る。【０００８】  本発明の大腸癌予防剤のエキスを用いる場合、抽出温度は、抽出溶媒が液体状態で有ればよく、そのつど温度は任意に決められる事になる。抽出時間は、好ましくは、１時間以上必要であるが温度条件によっては、もっと短い時間でも可能である。【０００９】  本発明の大腸癌予防剤はスフィンゴ糖脂質もしくはスフィンゴ糖脂質精製物、または米糠抽出物をそのまま製剤の形態にしてもよいが、食品原料に所要量を加えて一般の製造法により加工製造してもよい。例えば大腸癌予防剤を飲料に添加物として直接添加するか、固形食品に添加して癌予防の食品、健康食品等として提供することができる。【００１０】  本発明の大腸癌予防剤の効果を損なわない範囲で、本発明の大腸癌予防剤を油分、高級アルコール、脂肪酸、界面活性剤、多価アルコール、糖、多糖、アミノ酸、ペプチド、タンパク質、高分子化合物、生理活性成分、溶媒、酸化防止剤、香料、防腐剤等の医薬品、食品、食品添加物に配合することができる。
以下に配合される成分を列挙するが、本発明はこれらの例に限定されるものではない。【００１１】  油分としてはトリ２−エチルヘキサン酸グリセリル、２−エチルヘキサン酸セチル、ミリスチン酸イソプロピル、ミリスチン酸ブチル、パルミチン酸イソプロピル、ステアリン酸エチル、パルミチン酸オクチル、イソステアリン酸イソセチル、ステアリン酸ブチル、ミリスチン酸ブチル、リノール酸エチル、リノール酸イソプロピル、オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソセチル、ミリスチン酸イソステアリル、パルミチン酸イソステアリル、ミリスチン酸オクチルドデシル、イソステアリン酸イソセチル、セバシン酸ジエチル、アジピン酸ジイソプロピル、ネオペンタン酸イソアラキル、トリ（カプリル・カプリン酸）グリセリル、トリ２−エチルヘキサン酸トリメチロールプロパン、トリイソステアリン酸トリメチロールプロパン、テトラ２−エチルヘキサン酸ペンタエリスリトール、カプリル酸セチル、ラウリン酸デシル、ラウリン酸ヘキシル、ミリスチン酸デシル、ミリスチン酸ミリスチル、ミリスチン酸セチル、ステアリン酸ステアリル、オレイン酸デシル、リシノレイン酸セチル、ラウリン酸イソステアリル、ミリスチン酸イソトリデシル、ミリスチン酸イソセチル、ミリスチン酸イソステアリル、パルミチン酸イソセチル、パルミチン酸イソステアリル、ステアリン酸オクチル、ステアリン酸イソセチル、オレイン酸イソデシル、オレイン酸オクチルドデシル、リノール酸オクチルドデシル、イソステアリン酸イソプロピル、２−エチルヘキサン酸セトステアリル、２−エチルヘキサン酸ステアリル、イソステアリン酸ヘキシル、ジオクタン酸エチレングリコール、ジオレイン酸エチレングリコール、ジカプリン酸プロピレングリコール、ジ（カプリル・カプリン酸）プロピレングリコール、ジカプリル酸プロピレングリコール、ジカプリン酸ネオペンチルグリコール、ジオクタン酸ネオペンチルグリコール、トリカプリル酸グリセリル、トリウンデシル酸グリセリル、トリイソパルミチン酸グリセリル、トリイソステアリン酸グリセリル、ネオペンタン酸オクチルドデシル、オクタン酸イソステアリル、イソノナン酸オクチル、ネオデカン酸ヘキシルデシル、ネオデカン酸オクチルドデシル、イソステアリン酸イソセチル、イソステアリン酸イソステアリル、イソステアリン酸オクチルデシル、ポリグリセリンオレイン酸エステル、ポリグリセリンイソステアリン酸エステル、炭酸ジプロピル、炭酸ジアルキル（Ｃ１２〜Ｃ１８）、クエン酸トリイソセチル、クエン酸トリイソアラキル、クエン酸トリイソオクチル、乳酸ラウリル、乳酸ミリスチル、乳酸セチル、乳酸オクチルデシル、クエン酸トリエチル、クエン酸アセチルトリエチル、クエン酸アセチルトリブチル、クエン酸トリオクチル、リンゴ酸ジイソステアリル、ヒドロキシステアリン酸２−エチルヘキシル、コハク酸ジ２−エチルヘキシル、アジピン酸ジイソブチル、セバシン酸ジイソプロピル、セバシン酸ジオクチル、ステアリン酸コレステリル、イソステアリン酸コレステリル、ヒドロキシステアリン酸コレステリル、オレイン酸コレステリル、オレイン酸ジヒドロコレステリル、イソステアリン酸フィトステリル、オレイン酸フィトステリル、１���−ステアロイルヒドロキシステアリン酸イソセチル、１２−ステアロイルヒドロキシステアリン酸ステアリル、１２−ステアロイルヒドロキシステアリン酸イソステアリル、スクワラン、流動パラフィン、α−オレフィンオリゴマー、イソパラフィン、セレシン、パラフィン、流動イソパラフィン、ポリブテン、マイクロクリスタリンワックス、ワセリン、牛脂、硬化牛脂、豚脂、硬化豚脂、馬油、硬化馬油、ミンク油、オレンジラフィー油、魚油、硬化魚油、卵黄油等の動物油およびその硬化油、アボカド油、アルモンド油、オリブ油、カカオ脂、杏仁油、ククイナッツ油、ゴマ油、小麦胚芽油、コメ胚芽油、コメヌカ油、サフラワー油、シアバター、大豆油、月見草油、シソ油、茶実油、ツバキ油、トウモロコシ油、ナタネ油、硬化ナタネ油、パーム核油、硬化パーム核油、パーム油、硬化パーム油、ピーナッツ油、硬化ピーナッツ油、ヒマシ油、硬化ヒマシ油、ヒマワリ油、ブドウ種子油、ホホバ油、硬化ホホバ油、マカデミアナッツ油、メドホーム油、綿実油、硬化綿実油、ヤシ油、硬化ヤシ油等の植物油およびその硬化油、ミツロウ、高酸価ミツロウ、ラノリン、還元ラノリン、硬化ラノリン、液状ラノリン等が挙げられる。【００１２】  高級アルコールとしてはラウリルアルコール、ミリスチルアルコール、セチルアルコール、ステアリルアルコール、イソステアリルアルコール、オレイルアルコール、ベヘニルアルコール、２−エチルヘキサノール、ヘキサデシルアルコール、オクチルドデカノール等が挙げられる。
脂肪酸としてはカプリル酸、カプリン酸、ウンデシレン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、パルミトレイン酸、ステアリン酸、イソステアリン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸、アラキン酸、アラキドン酸、ベヘン酸、エルカ酸、２−エチルヘキサン酸等が挙げられる。
界面活性剤としてはプロピレングリコール脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、ポリグリセリン脂肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビット脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油、ポリオキシエチレンヒマシ油、水素添加大豆リン脂質、レシチン、サポニン、糖系界面活性剤等が挙げられる。【００１３】  多価アルコール及び糖としてはエチレングリコール、ジエチレングリコール、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、ジプロピレングリコール、ポリプロピレングリコール、グリセリン、ジグリセリン、ポリグリセリン、３−メチル−１，３−ブタンジオール、１，３−ブチレングリコール、ソルビトール、マンニトール、ラフィノース、エリスリトール、グルコース、ショ糖、果糖、キシリトール、ラクトース、マルトース、マルチトール、トレハロース、アルキル化トレハロース、混合異性化糖、水溶性多糖類、硫酸化トレハロース、プルラン等が挙げられる。またこれらの化学修飾体等も使用可能である。【００１４】  高分子化合物としてはセルロース又はその誘導体、ケラチン及びコラーゲン又はその誘導体、アルギン酸カルシウム、プルラン、寒天、ゼラチン、タマリンド種子多糖類、キサンタンガム、カラギーナン、ハイメトキシルペクチン、ローメトキシルペクチン、グアーガム、アラビアゴム、結晶セルロース、アラビノガラクタン、カラヤガム、トラガカントガム、アルギン酸、アルブミン、カゼイン、カードラン、ジェランガム、デキストラン等の天然由来高分子化合物も好適に用いることができる。【００１５】  生理活性成分としてはビタミン類、アミノ酸、各種植物抽出物等が挙げられる。これらの好適な配合成分の例としては、例えばアシタバエキス、アボカドエキス、アマチャエキス、アルテアエキス、アンズエキス、アンズ核エキス、ウイキョウエキス、ウコンエキス、ウーロン茶エキス、温州みかんエキス、エチナシ葉エキス、オウバクエキス、オウレンエキス、オオムギエキス、オトギリソウエキス、オドリコソウエキス、オランダカラシエキス、オレンジエキス、海水乾燥物、カカオエキス、カカオハスクエキス、加水分解エラスチン、加水分解コムギ末、加水分解シルク、カワラヨモギエキス、カルカデエキス、カキョクエキス、γ−アミノ酪酸富化米胚芽、キウイエキス、キナエキス、キューカンバーエキス、グアノシン、クチナシエキス、クマザサエキス、クララエキス、クルミエキス、グレープフルーツエキス、クレマティスエキス、黒米エキス、クロレラエキス、クワエキス、ゲンチアナエキス、紅茶エキス、ゴボウエキス、コメヌカ発酵エキス、米胚芽発酵エキス、コラーゲン、コケモモエキス、サイシンエキス、サイコエキス、サイタイ抽出液、サルビアエキス、サボンソウエキス、ササエキス、サンザシエキス、サンショウエキス、シイタケエキス、ジオウエキス、シコンエキス、シソの実エキス、シナノキエキス、シモツケソウエキス、シャクヤクエキス、ショウブ根エキス、シラカバエキス、植物ステロール、セイヨウサ���ザシエキス、セイヨウニワトコエキス、セイヨウノコギリソウエキス、セイヨウハッカエキス、ゼニアオイエキス、センキュウエキス、センブリエキス、ソバの葉エキス、ダイズエキス、タイソウエキス、タイムエキス、チオクト酸、チガヤエキス、チンピエキス、月見草エキス、月見草種子エキス、トウキンセンカエキス、トウニンエキス、トウヒエキス、トコトリエノール、トマトエキス、トリテルペノイド、納豆エキス、生コーヒー豆エキス、ノバラエキス、ハイビスカスエキス、バクモンドウエキス、パセリエキス、蜂蜜、パリエタリアエキス、ヒキオコシエキス、ビサボロール、フキエキス、フキタンポポエキス、フキノトウエキス、ブクリョウエキス、ブッチャーブルームエキス、ブドウエキス、ブロッコリーエキス、ブロッコリースプラウトエキス、プロポリス、ヘチマエキス、ベニバナエキス、ペパーミントエキス、ボダイジュエキス、ボタンエキス、ホップエキス、マツエキス、マロニエエキス、ミズバショウエキス、ムクロジエキス、モモエキス、ヤグルマギクエキス、ユーカリエキス、ユキノシタエキス、ユズエキス、ユズ種子エキス、ヨクイニンエキス、ライチ種子エキス、ラベンダーエキス、ルテイン、レタスエキス、レモンエキス、レンゲソウエキス、ローズエキス、ローマカミツレエキス、ローヤルゼリーエキス等を挙げることができる。【００１６】  また、デオキシリボ核酸、ムコ多糖類、ヒアルロン酸ナトリウム、コンドロイチン硫酸ナトリウム、コラーゲン、エラスチン、キチン、キトサン、加水分解卵殻膜などの生体高分子、アミノ酸、加水分解ペプチド、乳酸ナトリウム、ベタイン、ホエイ、コレステロール、コレステロール誘導体、リン脂質などの油性成分、ビタミンＢ２、ビタミンＢ６、ビタミンＤ、パントテン酸カルシウム、ビオチン、ニコチン酸アミド等のビタミン類、γ−オリザノール等の血行促進剤、製剤の酸化防止を目的とする酸化防止剤としては亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、エリソルビン酸、エリソルビン酸ナトリウム、チオジプロピオン酸ジラウリル、トリルビグアナイド、ノルジヒドログアヤレチン酸、パラヒドロキシアニソール、ブチルヒドロキシアニソール、ジブチルヒドロキシトルエン、没食子酸オクチル、没食子酸プロピル。【００１７】  また、本発明の大腸癌予防剤は、飲食品に含有させることができる。例えば、菓子類（ガム、キャンディー、キャラメル、チョコレート、クッキー、スナック菓子、ゼリー、グミ、錠菓等）、麺類（そば、うどん、ラーメン等）、乳製品（ミルク、アイスクリーム、ヨーグルト等）、調味料（味噌、醤油等）、スープ類、飲料（ジュース、コーヒー、紅茶、茶、炭酸飲料、スポーツ飲料等）をはじめとする一般食品や健康食品（錠剤、カプセル等）、栄養補助食品（栄養ドリンク等）などが上げられる。インスタント食品に本発明の大腸癌予防剤を添加しても良い。例えば、大腸癌予防剤を粉末セルロースとともにスプレードライまたは凍結乾燥したものを、粉末、顆粒、打錠または溶液にすることで容易に飲食品に含有させることができる。【００１８】  本発明の大腸癌予防剤は、医薬品、医薬部外品、機能性食品等の内服剤に配合することができる。投与方法は経口投与することが望ましい。一��的には錠剤、丸剤、軟・硬カプセル剤、顆粒剤、細粒剤、散剤、液剤等の製品形態にすることができる。【００１９】  本発明の大腸癌予防剤は、医薬品、飲食品に添加する場合、有効成分の使用量に特に制限はない。健康食品として摂取する場合、病気予防や健康維持が目的であるので、含有する飲食品に対して有効成分が合計０．０１〜１０重量％であるのが好ましい。
【実施例】
【００２０】  以下、本発明の実施例を説明する。なお、以下に示す大腸癌予防剤およびその製法は、大腸癌予防効果の確認のために説明するもので、これらに限定されるものではない。【００２１】（１）米糠１０ｋｇを５倍量（重量）クロロホルム／メタノール（混合比２：１）抽出溶媒に加えて抽出を行った。同じ操作を３回繰り返し行い、抽出液を回収し、溶媒を留去してスフィンゴ糖脂質含有抽出物を得た。次に、抽出物をクロロホルム／メタノール／水（３：４８：４７）で３回水洗して、水洗後のクロロホルム層を濃縮した。さらに、濃縮物を１０倍量クロロホルムに溶かして、シリカゲルカラムに注入し、クロロホルムで中性油を溶出した後、クロロホルム／メタノール（３：１）でスフィンゴ糖脂質を溶出した。この操作を２回繰り返し、すべてのクロロホルム／メタノール（３：１）溶出部を合わせて溶媒留去した後、固形分含量が５％になるようにヘキサン／プロパノール（９：１）に溶かして、シリカゲルカラム処理を行った。その後、ヘキサン／エタノール（４：１）でスフィンゴ糖脂質を回収した。スフィンゴ糖脂質フラクションを集め、濃縮、真空乾燥により、純度９５％以上の精製スフィンゴ糖脂質１００ｍｇを得た。【００２２】大腸癌抑制試験
次に、動物実験による大腸癌の発癌抑制作用を試験した。
試験用のサンプルとしては、スフィンゴ糖脂質を８．６％含有する米糠抽出物と９０％以上のスフィンゴ糖脂質の微粉砕品を用いた。【００２３】  実験（１）のプロトコール図１に示す。
実験（１）：５週齢、雄Ｆ３４４ラット４匹を使い、６群に分け（実験プロトコール図１参照）、第１〜４群に対してはアゾキシメタン（ａｚｏｘｙｍｅｔｈａｎｅ：ＡＯＭ）（２０ｍｇ／ｋｇ，ｂｏｄｙ  ｗｅｉｇｈｔ）を週１回の計２回皮下投与した。第２〜４群のラットにはＡＯＭ投与の１週間前から基礎食にスフィンゴ脂質を８．６％含有する米糠抽出物粉末（ｃＧＳＬ）を２５０，１，０００，３，０００ｐｐｍの濃度で混餌投与した。第５群はｃＧＳＬ摂取による副作用の有無を検討するするためにｃＧＳＬ３，０００ｐｐｍを含む基礎食を与えた。第６群は対照群として基礎食のみを与えた。全てのラットは実験開始５週目にＣＯ２ガス麻酔下で屠殺し，大腸，肝臓，腎臓を採取した。大腸は長軸方向に切り開いて１０％中性緩衝ホルマリンで固定した。肝および腎は重量を測定し，１０％中性緩衝ホルマリンで固定した。
大腸前癌病変の評価：
固定の終了した大腸をアルシアン青染色（ｐＨ２．５）した後，光学顕微鏡で大腸癌の前癌病変と考えられているａｂｅｒａｎｔ  ｃｒｙｐｔ  ｆｏｃｉ（ＡＣＦ），ｍｕｃｉｎ  ｄｅｐｌｅｔｅｄ  ｆｏｃｉ（ＭＤＦ）の数を測定した。通常の大腸粘膜陰窩から腫大した異型陰窩巣形成を見る、いわゆるａｂｅｒａｎｔ  ｃｒｙｐｔ  ｆｏｃｉ（ＡＣＦ）の数を調査した。また、一つのＡＣＦに含まれる陰窩数を観察し、大腸癌発生に関与があると考えられる大型ＡＣＦ（ＡＣＦ内に４つ以上の陰窩を認めるもの）の数を調査した。具体的には大腸を３％酢酸溶液で２分，０．５％アルシアン青（３％酢酸中）で５分，ホウ酸・塩化ナトリウム・ホウ砂緩衝液（Ｐａｌｉｔｉｓｃｈ  ｂｕｆｆｅｒ）で５分間処理した。染色の済んだ大腸はガラス板に載せ，乾燥しないように蒸留水で浸しながら１００倍で全ての粘膜面を顕鏡し病変の数を記録した。ラット１匹あたりのＡＣＦ数の有意差判定にはＤｕｃａｎの多重比較検定を用い、ＡＣＦ数の統計値を算出した。【００２４】実験（２）のプロトコール図２に示す。
実験（２）：５週齢、雄Ｆ３４４ラット１１４匹を７群に分け（実験プロトコール図．２参照）、第１〜５群に対しては実験（１）と同様にＡＯＭ（２０ｍｇ／ｋｇ  ｂｏｄｙ  ｗｅｉｇｈｔ）を週１回２週間皮下注射し、大腸癌の前癌病変であるＡＣＦとＭＤＦを誘発した。第１群はＡＯＭ投与１週間前より基礎食を実験終了８週目まで与えた。実験（１）の結果を考慮して、第２，３群は実験（１）で使用した粗精製物を約９０％の純度に精製したスフィンゴ脂質（Ｇ１ＣＭ）を、１００及び２５０ｐｐｍ含有する餌をそれぞれ実験開始より４週間投与しその後は基礎食を実験終了まで与えた。第４，５群は実験開始３週目より１００及び２５０ｐｐｍ  Ｇ１ＣＭ含有食をそれぞれ実験終了まで投与した。第６，７群はＡＯＭ非投与群で２５０ｐｐｍＧ１ＣＭ含有食と基礎食を通期で与えた。実験開始４週目には第１−３群（各１２匹）と第６，７群（各３匹）をそれぞれ屠殺した。また、８週目には全てのラットを屠殺し大腸を摘出しホルマリン固定後、実験（１）と同様にアルシアン青染色（ｐＨ２．５）を行い、ＡＣＦとＭＤＦを測定し、Ｇ１ＣＭのｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ期及びｐｏｓｔ−ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ期投与によるＡＣＦとＭＤＦの抑制効果を検討した。【００２５】実験１の結果を表１に示す。【００２６】
【表１】
2006290856.tif 000006
【００２７】  実験（１）：全てのラットは実験終了まで生存し，大腸に腫瘍を形成した個体は認めなかった。各群の体重，相対肝および腎重量（体重１００ｇあたりの臓器重量）の平均ではいずれの群間でも有意な差は認められず（Ｐ＞０．０５）、ＡＯＭ，ｃＧＳＬの投与による体重抑制，肝・腎重量抑制の副作用はなかった．
ｃＧＳＬが大腸前癌病変の数に与える影響：
ＡＯＭを投与した第１から４群までの全ての個体の大腸にはＡＣＦの発生がみられた．各群のＡＣＦ数の平均は第１群；１３８．２±２４．８，第２群；１１６．１±１６．８，第３群；９７．９±１７．７，第４群；１０５．９±３７．６であり，陽性対照群（第１群）に比べｃＧＳＬを投与した群では有意な減少を認めた（Ｐ＜０．０５）。一方、ＭＤＦについては，第１群；１３．９±４．１，第２群；８．２±１．９，第３群；７．８±２．５，第４群；９．８±２．４であり，ＡＣＦ発生数と同様に陽性対照群（第１群）に比べｃＧＳＬ投与群で有意な差を認めた（Ｐ＜０．０１）。尚、第５と６群では前癌病変は認めなかった。【００２８】実験２の結果を表２に示す。【００２９】
【表２】
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【００３０】  実験（２）：実験開始４週目におけるＡＣＦとＭＤＦ発生数は陽性対照群（第１群）でそれぞれ７５．７±１７．５、９．２±５．２であった。それに対し、ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ期にＧ１ＣＭを混餌投与した第２，３群におけるＡＣＦとＭＤＦはそれぞれ第２群で４５．９±８．８（Ｐ＜０．０１）、０．８±０．８（Ｐ＜０．０５）、第３群で４４．８±１４．５（Ｐ＜０．０１）、０．８±０．４（Ｐ＜０．０５）であり第１群に比較し有意な抑制が認められた。
実験開始８週目における各群のＡＣＦはそれぞれ第１群１１１．１±３２．９，第２群９０．１±２８．１、第３群７４．８±１９．９（Ｐ＜０．０５）、第４群８９．０±２８．６、第５群７８．７±１４．９（Ｐ＜０．０５）であり２５０ｐｐｍＧ１ＣＭのｉｎｔｉａｔｉｏｎ期及びｐｏｓｔ−ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ期投与群において第１群に比較し有意な抑制が認められた。一方、ＭＤＦ数はそれぞれ第１群１７．２±６．６、第２群１０．８±５．９（Ｐ＜０．０５）、第３群６．８±２．７（Ｐ＜０．０５）（Ｐ＜０．００５）、第４群１０．０±５．１（Ｐ＜０．０５）、第５群９．６±３．１（Ｐ＜０．０１）でありＧ１ＣＭのｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ期及びｐｏｓｔ−ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ期投与全群において第１群に比較し有意な抑制が認められた。
以上の結果から、大腸粘膜内の２種類前癌病変のＡＣＦおよびＭＤＦ発生数を大腸癌の前癌病変マーカーとした場合、粗抽出およびその精製物の混餌投与により、同等の濃度で、前癌病変の抑制効果を示し、がん病巣の芽を抑制する点で、がん予防の可能性を示唆した。特に発癌剤と投与と同時でなく、腫瘍形成のプロモーション期での投与により、前癌病変の発生低下を示し、細胞増殖抑制のみならず、アポトーシス誘導の可能性をした。【００３１】製造例
本発明による大腸癌予防剤を適用した飲食品または薬品の製造例を示す。なお、下記の原料の種類および配合比は、適宜変更することが可能である。
製造例１：ソフトカプセル
玄米胚芽油                      ８７．０ｗｔ％
乳化剤                          １２．０
大腸癌予防剤                      １．０
１００．０ｗｔ％【００３２】製造例２：錠剤
乳糖                            ５４．０ｗｔ％
結晶セルロース                  ３０．０
澱粉分解物                      １０．０
グリセリン脂肪酸エステル          ５．０
大腸癌予防剤                      １．０
１００．０ｗｔ％【００３３】製造例３：錠菓
砂糖                            ７６．４ｗｔ％
グルコース                      １９．０
ショ糖脂肪酸エステル              ０．２
大腸癌予防剤                      ０．５
精製水                            ３．９
１００．０ｗｔ％【００３４】製造例４：チューインガム
砂糖                            ５３．０ｗｔ％
ガムベース                      ２０．０
グルコース                      １０．０
水飴                            １６．０
香料                              ０．５
大腸癌予防剤                      ０．５
１００．０ｗｔ％【００３５】製造例５：キャンディー
砂糖                            ５０．０ｗｔ％
水飴                            ３３．０
水                              １４．４
有機酸                            ２．０
香料                              ０．２
大腸癌予防剤                      ０．４
１００．０ｗｔ％【００３６】製造例６：グミ
還元水飴                        ４０．０ｗｔ％
グラニュー糖                    ２０．０
ブドウ糖                        ２０．０
ゼラチン                          ４．７
水                                ９．６８
ウメ果汁                          ４．０
ウメフレーバー                    ０．６
色素                              ０．０２
大腸癌予防剤                      １．０
１００．０ｗｔ％【００３７】製造例７：ヨーグルト（ハード・ソフト）
牛乳                            ４１．５ｗｔ％
脱脂粉乳                          ５．８
砂糖                              ８．０
寒天                              ０．１５
ゼラチン                          ０．１
乳酸菌                            ０．００５
大腸癌予防剤                      ０．４
香料                              微量
水                                残余
１００．０ｗｔ％【００３８】製造例８：清涼飲料
果糖ブドウ等液糖                ３０．０ｗｔ％
乳化剤                            ０．５
大腸癌予防剤                      ０．０５
香料                              微量
精製水                            残余
１００．０ｗｔ％【００３９】製造例９：コーヒー飲料（液状）
焙煎コーヒー豆                    ６．０ｗｔ％
砂糖                              ６．０
重曹                              ０．２
乳化剤                            ０．１５
大腸癌予防剤                      １．０
水                                残余
１００．０ｗｔ％
【産業上の利用可能性】
【００４０】  以上説明したように、本発明によれば、次のような優れた効果を奏する。
（ａ）植物原料である米糠から安全性の高い新規な大腸癌予防剤を得ることができる。
（ｂ）副作用のない癌予防食品や癌予防・治療薬を容易に製造することができる。
（ｃ）飲食品または薬品から大腸癌予防の有効成分を日常的に摂取しやすくすることができる。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】実験（１）のプロトコールを示す説明図である。
【図２】実験（２）のプロトコールを示す説明図である。
【手続補正２】
【補正対象書類名】図面
【補正対象項目名】全図
【補正方法】変更
【補正の内容】
【図１】
2006290856.tif 000008
【図２】
2006290856.tif 000009