(57)【要約】【課題】このような従来の課題を解決するものであり、容器の上部に加え下部にも開口部を設ける、および、少なくとも１つ以上の穴を設けることで、従来の一点吸引ではなく、面排出に近づけることで、目的層回収率を向上することができる方法を提供すること。【解決手段】本発明の分離回収方法は、両端が開放された筒型部材２と筒型部材２の一端に着脱可能な閉鎖手段３を備え、筒型部材２の他端に着脱可能な分離液押し出し手段４を備え、筒型部材２の上方に分離液押し出し手段４、筒型部材２の下方に閉鎖手段３を設置したものを鉛直方向になるようにし、筒型部材２から閉鎖手段３を外した時に内部分離液自重が筒型部材２に対する前記内部分離液の表面張力を上回り少なくとも目的回収層が自然落下しないようにすることを特徴とするものである。【選択図】図１
2006067869.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
両端が分離液の注入・排出のために開放された液状検体・分離液積層補助部材としての筒型部材と前記筒型部材の一端に前記筒型部材から前記筒型部材内部に積層された分離液と液状検体の漏れを防ぐための着脱可能な閉鎖手段を備え、前記筒型部材の他端に前記筒型部材から前記筒型部材内部に積層された分離液と液状検体を前記筒型部材内で密閉状態で押し出すための着脱可能な分離液押し出し手段を備え、前記筒型部材の両端の開放部が上方・下方になるように鉛直にし、上方に前記分離液押し出し手段を備え下方に前記閉鎖手段を備え前記押し出し手段と前記筒型部材と前記閉鎖手段を鉛直方向にし鉛直時、前記筒型部材から前記閉鎖手段を外した時に内部分離液自重が前記筒型部材に対する前記内部分離液表面張力を上回り前記内部分離液が前記筒型部材下端から自然落下しないようにすることを特徴とする分離回収方法。
【請求項２】
前記筒型部材の下端に前記閉鎖手段を備え、前記筒型部材の内部下方には比重の大きな溶液、上方には比重の小さな溶液となるように比重の異なる溶液を積層し、最上部に比重の異なる微生物及び異物混入のサンプルを入れ、遠心分離処理をすることにより微生物及び異物が各々の比重に近い溶液層に分離し、遠心処理後、前記閉鎖手段を下方として前記筒型部材を鉛直とし上方に前記分離液押し出し手段を備え前記筒型部材内を密閉状態とし、前記閉鎖手段を外し、前記分離液押し出し手段を下方へ移動することにより、前記筒型部材下端より目的回収層の下方に存在する不要液層を排出後、目的回収層を回収することを特徴とする請求項１の分離回収方法。
【請求項３】
請求項１記載の前記筒型部材の壁面に目的回収層より上方にある不要液層を排出するための上方排出口と目的回収層より下方にある不要液層を排出するための下方排出口をそれぞれ少なくとも１つ以上備えたことを特徴とする分離回収方法。
【請求項４】
前記筒型部材の下端に前記閉鎖手段を下方開放部と前記下方排出口と共に閉鎖する状態にて備えた前記筒型部材内部の下方には比重の大きな溶液、上方には比重の小さな溶液となるように比重の異なる液体を積層し、最上部に比重の異なる微生物及び異物混入のサンプルを入れ、遠心分離処理をすることにより微生物及び異物が各々の比重に近い溶液層に分離し、遠心処理後、前記閉鎖手段を下方にして筒型部材を鉛直にし上方には前記分離液押し出し手段を前記上方排出口を閉鎖しない状態にて備え、前記閉鎖手段を上方へ移動することにより、前記上方排出口より目的回収層よりも上方にある上方不要分離液層を排出し、前記上方不要分離液層を排出後、前記筒型部材上部の前記分離液押し出し手段と前記筒型部材下部の前記閉鎖手段を下方へ移動させることにより前記下方排出口より目的回収層よりも下方にある下方不要分離液層を排出した後、目的回収層を回収することを特徴とする請求項３の分離回収方法。
【請求項５】
所望する目的回収層が微生物層であることを特徴とする請求項１乃至４のいずれかに記載の分離回収方法。
【請求項６】
前記閉鎖手段と分離液押し出し手段をピストンで構成したことを特徴とする請求項１乃至４のいずれかに記載の分離回収方法。
【請求項７】
前記筒型部材に溶液回収量判断を容易にするために目盛りを付けることを特徴とする請求項１、２、３、４、６のいずれかに記載の分離回収方法。
【請求項８】
前記閉鎖手段をゴム製のキャップで構成したことを特徴とする請求項１、２記載の分離回収方法。
【請求項９】
前記閉鎖手段を樹脂製のキャップで構成したことを特徴とする請求項１または２記載の分離回収方法。
【請求項１０】
前記閉鎖手段を密度勾配遠心中に外れる事がない構成にしたことを特徴とする請求項１、２、３、４、６、７、８、９のいずれかに記載の分離回収方法。
【請求項１１】
部材を密度勾配遠心に耐えうる材料で構成したことを特徴とする請求項１、２、３、４、６、７、８、９、１０のいずれかに記載の分離回収方法。
【請求項１２】
前記筒型部材に有する前記上方排出口・前記下方排出口が各々２個以上の時、前記上方排出口・前記下方排出口の位置を高さ方向から見て同じ高さに有することを特徴とする請求項３または４記載の分離回収方法。
【請求項１３】
前記筒型部材に有する前記上方排出口・前記下方排出口が各々２個以上の時、前記上方排出口・前記下方排出口の位置を高さ方向から見て異なる高さに有することを特徴とする請求項３または４記載の分離回収方法。
【請求項１４】
前記筒型部材に取っ手を備えることを特徴とする請求項１、２、３、４、６、７、８、９、１０、１１、１２のいずれかに記載の分離回収方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、密度勾配遠心分離により微生物と異物を分離する方法及び微生物の回収する方法に関するもので、特に微生物が混在する飲料水や食品、食材中から微生物のみを効率良く分離し回収する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、この種の密度勾配遠心分離方法は、特表２００２−５０５８６６号公報に明記されたものが知られている（例えば、特許文献１参照）。
【０００３】
以下、その特表２００２−５０５８６６号公報について図９を参照しながら説明する。
【０００４】
図９に示すように、遠心チューブ１０１は各密度勾配溶液層毎に開口部を変え、必要な密度勾配溶液を各層毎に注入し、微生物の入った溶液から、密度勾配溶液層上方に静置し遠心分離装置を用い遠心処理を行い、所定の密度勾配溶液層を回収し、微生物のみを検出する方法を取っている。
【０００５】
また、従来の密度勾配を用い分離方法は、各層の界面を検出するために、定められた比重の粒子を入れ、遠心分離後に粒子が集まった部分で、比重の層を見分け、微生物と同様な比重の層を設けてから、食材中等に含まれる溶液を、密度勾配溶液により遠心処理後、分離し、微生物が集まった部分を回収し、特定する方法が一般的に用いられている。密度勾配に使用する遠心容器は、密度勾配溶液の挿入部と吸引部が同じものを用いることが一般的なものとされている（例えば、特許文献１参照）。
【０００６】
以下、その遠心容器の構成について図９を参照しながら説明する。図に示すように、遠心チューブ１０１は上部をキャップ１０２により密閉され、キャップ上に配置された注入用チューブ１０３によって、上部より密度勾配溶液及び微生物を含んだ食材溶液の液体試料を遠心チューブ１０１内に充填される。遠心分離後は、キャップ中心点より遠心チューブ１０１の中心軸上に沿って、遠心チューブ１０１内部に毛細管プローブ１０４を挿入し、目的の密度勾配溶液を吸引、回収するものである。（特表２００２−５０５８６６号公報：特許文献１）
【特許文献１】特表２００２−５０５８６６号公報（図８Ａ）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
このような従来の密度勾配遠心を用いた分離回収方法では、容器上部の開口部が１つしかない為、目的層回収には針・ピペット等を用いて一点吸引にて回収を行う必要があり、一点吸引の為、分離液層回収時に液流が乱れ、液流の乱れのため回収中分離液層と隣接する分離液層の境界面に乱れが発生し目的回収層の回収率が低下するという課題があり、目的回収層の回収率を改善することが要求されている。
【０００８】
本発明は、このような従来の課題を解決するものであり、容器の上部に加え下部にも開口部を設ける、および、少なくとも１つ以上の穴を設けることで、従来の一点吸引ではなく、面排出に近づけることで、分離液層の境界面の乱れを軽減させ目的層回収率を向上することができる方法を提供することを目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
本発明の分離回収方法は上記の目的を達成するために、目的回収液層及び不要液層の回収方法を針・ピペット等のように一点吸引を用いるのでは無く、前記筒型部材下端に開放部もしくは目的回収層より上方にある不要液層を排出するための前記上方排出口と目的回収層より下方にある不要液層を排出するための前記下方排出口をそれぞれ少なくとも１つ以上前記筒型部材壁面に備えることで近似的に面排出としたものである。
【００１０】
この手段により一点吸引の場合よりも目的層回収率を向上することができ、また、菌検査の精度を向上できる分離回収方法が得られる。
【００１１】
この手段により前記筒型部材下端に開放部もしくは目的回収層より上方にある不要液層を排出するための前記上方排出口と目的回収層より下方にある不要液層を排出するための前記下方排出口をそれぞれ少なくとも１つ以上前記筒型部材壁面に備えることで、開放部の内径が筒型部材内径に比べ小さい場合と比較すると分離液層回収時に液流の乱れを軽減し、また、液流の乱れが軽減されるため回収中分離液層と隣接する分離液層の境界面の乱れを軽減できる分離回収方法が得られる。
【発明の効果】
【００１２】
本発明によれば、前記筒型部材の両端に開口部もしくは目的回収層より上方にある不要液層を排出するための前記上方排出口と目的回収層より下方にある不要液層を排出するための前記下方排出口をそれぞれ少なくとも１つ以上前記筒型部材壁面に備えることで、従来の一点吸引ではなく面排出に近づけることで、液流の乱れが軽減され回収中分離液層と隣接する分離液層の境界面の乱れを軽減させ目的層回収率を向上する方法が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明の請求項１記載の発明は、両端が分離液の注入・排出のために開放された液状検体・分離液積層補助部材としての筒型部材と前記筒型部材の一端に前記筒型部材から前記筒型部材内部に積層された分離液と液状検体の漏れを防ぐための着脱可能な閉鎖手段を備え、前記筒型部材の他端に前記筒型部材から前記筒型部材内部に積層された分離液と液状検体を前記筒型部材内で密閉状態とした後に押し出すための着脱可能な分離液押し出し手段を備え、前記筒型部材の両端の開放部が上方・下方になるように鉛直にし、上方に前記分離液押し出し手段を備え下方に前記閉鎖手段を備え前記押し出し手段と前記筒型部材と前記閉鎖手段を鉛直方向にし鉛直時、前記筒型部材から前記閉鎖手段を外した時に内部分離液自重が前記筒型部材に対する前記内部分離液表面張力を上回り前記内部分離液が前記筒型部材下端から自然落下しないようにすることを特徴としたものであり、遠心処理後、前記筒型部材上部を前記分離液押し出し手段により閉じることによって前記筒型部材内部に負圧を発生させることによって、前記筒型部材下部の閉鎖手段を外した時、前記筒型部材下端開放部より分離液の自然落下を最小限にするという作用を有する。
【００１４】
また、前記筒型部材の下端に前記閉鎖手段を備え、前記筒型部材の内部下方には比重の大きな溶液、上方には比重の小さな溶液となるように比重の異なる溶液を積層し、最上部に比重の異なる微生物及び異物混入のサンプルを入れ、遠心分離処理をすることにより微生物及び異物が各々の比重に近い溶液層に分離し、遠心処理後、前記閉鎖手段を下方として前記筒型部材を鉛直とし上方に前記分離液押し出し手段を備え前記筒型部材内を密閉状態とし、前記閉鎖手段を外し、前記分離液押し出し手段を下方へ移動することにより、前記筒型部材下端より目的回収層の下方に存在する不要液層を排出後、目的回収層を回収することを特徴としたものであり、比重の異なる各分離液層を回収する際に、ピペットや針のような一点吸引ではなく面排出に近づけることにより、分離液層回収時に液流の乱れが小さくでき、また、液流の乱れが小さいため回収中分離層と隣接する分離層の境界面の乱れを軽減できるという作用を有する。
【００１５】
また、請求項１記載の前記筒型部材の壁面に目的回収層より上方にある不要液層を排出するための上方排出口と目的回収層より下方にある不要液層を排出するための下方排出口をそれぞれ少なくとも１つ以上備えたことを特徴としたものであり、比重の異なる各分離液層を回収する際に、ピペットや針のような一点吸引ではなく液流の乱れが少ない面排出に近づけることができるという作用を有する。
【００１６】
また、請求項３の分離回収方法において、前記筒型部材の下端に前記閉鎖手段を下方開放部と前記下方排出口と共に閉鎖する状態にて備えた前記筒型部材内部の下方には比重の大きな溶液、上方には比重の小さな溶液となるように比重の異なる液体を積層し、最上部に比重の異なる微生物及び異物混入のサンプルを入れ、遠心分離処理をすることにより微生物及び異物が各々の比重に近い溶液層に分離し、遠心処理後、前記閉鎖手段を下方にして筒型部材を鉛直にし上方には前記分離液押し出し手段を前記上方排出口を閉鎖しない状態にて備え、前記閉鎖手段を上方へ移動することにより、前記上方排出口より目的回収層よりも上方にある上方不要分離液層を排出し、前記上方不要分離液層を排出後、前記筒型部材上部の前記分離液押し出し手段と前記筒型部材下部の前記閉鎖手段を下方へ移動させることにより前記下方排出口より目的回収層よりも下方にある下方不要分離液層を排出した後、目的回収層を回収することを特徴としたものであり、比重の異なる各分離液層を回収する際に、ピペットや針のような一点吸引ではなく面排出に近づけることにより、分離液層回収時に液流の乱れが小さくでき、液流の乱れが小さいため回収中分離層と隣接する分離層の境界面の乱れを軽減できるという作用を有する。
【００１７】
また、所望する目的回収層が微生物層であることを特徴としたものであり、目的回収層が異物のみを含む層以外に微生物のみを含む層を回収できるという作用を有する。
【００１８】
また、請求項１乃至４のいずれかに記載の分離回収方法において、前記閉鎖手段と分離液押し出し手段をピストンで構成したことを特徴としたものであり、前記閉鎖手段および前記押し出し手段移動時に作業し易いという作用を有する。
【００１９】
また、請求項１、２、３、４、６のいずれかに記載の分離回収方法において、前記筒型部材に溶液回収量判断を容易にするために目盛りを付けることを特徴としたものであり、前記分離液押し出し手段もしくは前記閉鎖手段を前記筒型部材内を移動させて分離液を回収する際に目盛りを回収量の判断材料として分離液回収できるという作用を有する。
【００２０】
また、請求項１、２記載の分離回収方法において、前記閉鎖手段をゴム製のキャップで構成したことを特徴としたものであり、閉鎖手段にピストンを用いた場合に比べ、小型化が達成できるという作用を有する。
【００２１】
また、請求項１、２記載の分離回収方法において、前記閉鎖手段を樹脂製のキャップで構成したことを特徴としたものであり、閉鎖手段にピストンを用いた場合に比べ、小型化が達成できるという作用を有する。
【００２２】
また、請求項１、２、３、４、６、７、８、９のいずれかに記載の分離回収方法において、前記閉鎖手段を密度勾配遠心中に外れる事がない構成にしたことを特徴としたものであり、遠心処理中に分離液の漏れを防止できるという作用を有する。
【００２３】
また、請求項１、２、３、４、６、７、８、９、１０のいずれかに記載の分離回収方法において部材を密度勾配遠心に耐えうる材料で構成したことを特徴としたものであり、遠心処理中に部材の破損を防止できるという作用を有する。
【００２４】
また、請求項３、４記載の分離回収方法において、前記筒型部材に有する前記上方排出口・前記下方排出口が各々２個以上の時、前記上方排出口・前記下方排出口の位置を高さ方向から見て同じ高さに有することを特徴としたものであり、前記穴が同じ高さに存在するため、ピペットや針のような一点吸引ではなく面排出に近づけることにより、分離液層回収時に液流の乱れが小さくでき、また、液流の乱れが小さいため回収中分離層と隣接する分離層の境界面の乱れを軽減できるという作用を有する。
【００２５】
また、請求項３、４記載の分離回収方法において、前記筒型部材に有する前記上方排出口・前記下方排出口が各々２個以上の時、前記上方排出口・前記下方排出口の位置を高さ方向から見て異なる高さに有することを特徴としたものであり、前記穴が異なる高さに存在するため、目的層の上方・下方に不要液層が複数層あった場合、同じ高さに穴がある場合に比べて素早く不要液層が除去できるという作用を有する。
【００２６】
また、請求項１、２、３、４、６、７、８、９、１０、１１、１２のいずれかに記載の分離回収方法において、前記筒型部材に取っ手を備えることを特徴としたものであり、前記閉鎖手段および前記押し出し手段移動時に作業し易いという作用を有する。
【００２７】
以下、本発明の実施の形態について図面を参照しながら説明するが、本発明の分離回収方法は以下の記載に限定して解釈されるものではない。
【００２８】
（実施の形態１）
図１は本発明の分離回収方法の請求項１、２の場合の一態様の構成部材毎の概略図である。図２は、図１で示した構成部材からなる分離回収方法の一態様の概略図である。分離回収手段１は微生物を含み得る液状検体と比重の異なる溶液を注入するための上方開口部５を有するとともに液状検体と比重の異なる溶液を排出するための下方開口部６を有する液状検体・分離液積層補助部材としての筒型部材２と、上方開口部５から注入された液状検体・溶液が下方開口部６からの漏れを防止するための、筒型部材２の下端の下方開口部６に勘合して用いられる閉鎖手段としての蓋である閉鎖手段３と、筒型部材２の下方開口部６から液状検体・溶液を排出する際に筒型部材２下端の下方開口部６に勘合された閉鎖手段３を外す際に筒型部材２内部の分離液層の自然落下を防止する為の筒型部材２上端の上方開口部５に勘合された分離液排出補助手段としての押子（ピストン）である分離液押し出し手段４からなり、筒型部材２と閉鎖手段３と分離液押し出し手段４は着脱自在で組み立てと分解が可能である。筒型部材２としては、筒等がある。
【００２９】
上記構成において図３に示すように筒型部材２の上方開口部５を上方とし比重の異なる溶液を筒型部材２の下端の下方開口部６に閉鎖手段３を備えた筒型部材２の上方開口部５よりピペットもしくは針を備えたシリンジにて注入量を確定した上で最初に最も比重の大きな溶液を注入し、次いで同様に上方開口部５より次に比重の大きな溶液を下に積層している層と混ざらないように注入し、この作業を繰り返し比重の異なる溶液を積層していく。比重の異なる溶液を積層完了後、最上部に比重の異なる微生物及び異物混入のサンプルをピペットもしくは針を備えたシリンジにて注入量を確定した上で注入し遠心分離処理を行う。遠心分離処理をすることにより微生物及び異物が各々の比重に近い溶液層に分離でき、遠心分離処理後、図４に示すように筒型部材２上方の上方開口部５に分離液押し出し手段４を備え、少なくとも最下層の溶液と最下層から１段上の溶液層との境界面以上は落下させないように閉鎖手段３を外し、分離液押し出し手段４を下方へ移動することにより、筒型部材２下方の下方開口部６より目視にて分離液層の境界面を確認し目的回収層の下方に存在する不要液層を排出し、目視にて目的回収層と目的回収層の１段上に存在する不要液層の境界面を確認し目的回収層のみを回収することができる分離回収方法。
【００３０】
なお、分離液押し出し手段４を備える順序は遠心分離処理を行う前でもよい。
【００３１】
また、閉鎖手段３の形状としては、キャップ、栓、ピストンを含むが、これに限定されるものではない。
【００３２】
また、筒型部材２の色として、透明、半透明を含むが、これに限定されるものではない。
【００３３】
また、材料として密度勾配を形成する溶液として、シリカゲル系溶液、ショ糖溶液、グリセリン、塩化セシウム溶液、その他高分子材料を含むが、これに限定されるものではない。
【００３４】
また、材料として、筒型部材２・ピストンには、ガラス、ポリエチレン、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリスチレン、ＰＥＴ、フッ素化樹脂、ポリアセタール、ポリ塩化ビニル、アクリロニトリル、アクリルなどの樹脂を含むがこれに限定されるものではない。
【００３５】
また、材料として、キャップ型閉鎖手段（ピストン先の押し出し部分も含む）には、天然ゴム、スチレンゴム、ブチルゴム、二トリルゴム、クロロプレンゴム、ネオプレンゴム、エチレン・プロピレンゴム、シリコーンゴム、熱可塑性エラストマー、その他高分子材料を含むが、これに限定されるものではない。
【００３６】
また、筒型部材２の内径条件は５ｍｍ以下、分離液ショ糖溶液のものを含むがこれに限定されるものではない。
【００３７】
（実施の形態２）
実施の形態１と同一部分については同一番号を付し詳細な説明は省略する。図１は本発明の分離回収方法の請求項１、２の場合の一態様の構成部材毎の概略図である。図２は、図１で示した構成部材からなる分離回収方法の一態様の概略図である。分離回収手段１は微生物を含み得る液状検体と比重の異なる溶液を注入するための上方開口部５を有するとともに液状検体と比重の異なる溶液を排出するための下方開口部６を有する液状検体・分離液積層補助部材としての筒型部材２と、上方開口部５から注入された液状検体・溶液が下方開口部６からの漏れを防止するための、筒型部材２の下端の下方開口部６に勘合して用いられる閉鎖手段としての蓋である閉鎖手段３と、筒型部材２の下方開口部６から液状検体・溶液を排出する際に筒型部材２下端の下方開口部６に勘合された閉鎖手段３を外す際に筒型部材２内部の分離液層の自然落下を防止する為の筒型部材２上端の上方開口部５に勘合された分離液排出補助手段としての押子（ピストン）である分離液押し出し手段４からなり、筒型部材２と閉鎖手段３と分離液押し出し手段４は着脱自在で組み立てと分解が可能である。筒型部材２としては、筒等がある。
【００３８】
上記構成において図３に示すように筒型部材２の上方開口部５を上方とし比重の異なる溶液を筒型部材２の下端の下方開口部６に閉鎖手段３を備えた筒型部材２の上方開口部５より自動で装置により注入量を確定した上で最初に最も比重の大きな溶液を注入し、次いで同様に上方開口部５より次に比重の大きな溶液を下に積層している層と混ざらないように注入し、この作業を繰り返し比重の異なる溶液を積層していく。比重の異なる溶液を積層完了後、最上部に比重の異なる微生物及び異物混入のサンプルを自動で装置により注入量を確定した上で注入し遠心分離処理を行う。遠心分離処理をすることにより微生物及び異物が各々の比重に近い溶液層に分離でき、遠心分離処理後、図４に示すように筒型部材２上方の上方開口部５に分離液押し出し手段４を備え、閉鎖手段３に少なくとも１つ以上の孔を開け、分離液押し出し手段４を下方へ移動することにより、閉鎖手段３に設けた孔より目的回収層の下方に存在する不要液層を自動で装置により排出量を確定した上で排出し、自動で装置にて排出量を確定した上で目的回収層のみを回収することができる分離回収方法。
【００３９】
また、注入量・排出量を確定する自動装置として、シリンジポンプを含むが、これに限定されるものではない。
【００４０】
（実施の形態３）
実施の形態１または２と同一部分については同一番号を付し詳細な説明は省略する。図１は本発明の分離回収方法の請求項１、２の場合の一態様の構成部材毎の概略図である。図２は、図１で示した構成部材からなる分離回収方法の一態様の概略図である。分離回収手段１は微生物を含み得る液状検体と比重の異なる溶液を注入するための上方開口部５を有するとともに液状検体と比重の異なる溶液を排出するための下方開口部６を有する液状検体・分離液積層補助部材としての筒型部材２と、上方開口部５から注入された液状検体・溶液が下方開口部６からの漏れを防止するための、筒型部材２の下端の下方開口部６に勘合して用いられる閉鎖手段としての蓋である閉鎖手段３と、筒型部材２の下方開口部６から液状検体・溶液を排出する際に筒型部材２下端の下方開口部６に勘合された閉鎖手段３を外す際に筒型部材２内部の分離液層の自然落下を防止する為の筒型部材２上端の上方開口部５に勘合された分離液排出補助手段としての押子（ピストン）である分離液押し出し手段４からなり、筒型部材２と閉鎖手段３と分離液押し出し手段４は着脱自在で組み立てと分解が可能である。
【００４１】
上記構成において図３に示すように筒型部材２の上方開口部５を上方とし比重の異なる溶液を筒型部材２の下端の下方開口部６に閉鎖手段３を備えた筒型部材２の上方開口部５よりピペットもしくは針を備えたシリンジにて注入量を確定した上で最初に最も比重の大きな溶液を注入し、次いで同様に上方開口部５より次に比重の大きな溶液を下に積層している層と混ざらないように注入し、この作業を繰り返し比重の異なる溶液を積層していく。比重の異なる溶液を積層完了後、最上部に比重の異なる微生物及び異物混入のサンプルをピペットもしくは針を備えたシリンジにて注入量を確定した上で注入し遠心分離処理を行う。遠心分離処理をすることにより微生物及び異物が各々の比重に近い溶液層に分離でき、遠心分離処理後、図４に示すように筒型部材２上方の上方開口部５に分離液押し出し手段４を備え、少なくとも最下層の溶液と最下層から１段上の溶液層との境界面以上は落下させないように閉鎖手段３を外し、分離液押し出し手段４を下方へ移動することにより、筒型部材２下方の下方開口部６より目視にて分離液層の境界面を確認し目的回収層の下方に存在する不要液層を排出後回収し、目視にて目的回収層と目的回収層の１段上に存在する不要液層の境界面を確認し目的回収層を回収し、目的回収層の上方に存在する不要液層も回収することができる分離回収方法。
【００４２】
（実施の形態４）
実施の形態１乃至３のいずれかと同一部分については同一番号を付し詳細な説明は省略する。図１は本発明の分離回収方法の請求項１、２の場合の一態様の構成部材毎の概略図である。図２は、図１で示した構成部材からなる分離回収方法の一態様の概略図である。分離回収手段１は微生物を含み得る液状検体と比重の異なる溶液を注入するための上方開口部５を有するとともに液状検体と比重の異なる溶液を排出するための下方開口部６を有する液状検体・分離液積層補助部材としての筒型部材２と、上方開口部５から注入された液状検体・溶液が下方開口部６からの漏れを防止するための、筒型部材２の下端の下方開口部６に勘合して用いられる閉鎖手段としての蓋である閉鎖手段３と、筒型部材２の下方開口部６から液状検体・溶液を排出する際に筒型部材２下端の下方開口部６に勘合された閉鎖手段３を外す際に筒型部材２内部の分離液層の自然落下を防止する為の筒型部材２上端の上方開口部５に勘合された分離液排出補助手段としての押子（ピストン）である分離液押し出し手段４からなり、筒型部材２と閉鎖手段３と分離液押し出し手段４は着脱自在で組み立てと分解が可能である。
【００４３】
上記構成において図３に示すように筒型部材２の上方開口部５を上方とし比重の異なる溶液を筒型部材２の下端の下方開口部６に閉鎖手段３を備えた筒型部材２の上方開口部５より自動で装置により注入量を確定した上で最初に最も比重の大きな溶液を注入し、次いで同様に上方開口部５より次に比重の大きな溶液を下に積層している層と混ざらないように注入し、この作業を繰り返し比重の異なる溶液を積層していく。比重の異なる溶液を積層完了後、最上部に比重の異なる微生物及び異物混入のサンプルを自動で装置により注入量を確定した上で注入し遠心分離処理を行う。遠心分離処理をすることにより微生物及び異物が各々の比重に近い溶液層に分離でき、遠心分離処理後、図４に示すように筒型部材２上方の上方開口部５に分離液押し出し手段４を備え、閉鎖手段３に少なくとも１つ以上の孔を開け、分離液押し出し手段４を下方へ移動することにより、閉鎖手段３に設けた孔より目的回収層の下方に存在する不要液層を自動で装置により排出量を確定した上で排出後回収し、自動で装置にて排出量を確定した上で目的回収層を回収し、自動で装置にて排出量を確定した上で目的回収層の上方に存在する不要液層も回収することができる分離回収方法。
【００４４】
（実施の形態５）
実施の形態１乃至４のいずれかと同一部分については同一番号を付し詳細な説明は省略する。図５は本発明の分離回収方法の請求項３、４の場合の一態様の構成部材毎の概略図である。図６は、図５で示した構成部材からなる分離回収方法の一態様の概略図である。分離回収手段７は微生物を含み得る液状検体と比重の異なる溶液を注入するための上方開口部９を有するとともに閉鎖手段としての蓋と分離液排出補助手段としての押子（ピストン）を兼ねた閉鎖手段３を勘合するための下方開口部１０を有し、遠心処理後、目的回収層より上方にある不要分離液層を排出するための上方排出口１１を有し、遠心処理後、目的回収層より下方にある不要分離液層を排出するための下方排出口１２を有する液状検体・溶液積層補助部材としての筒型部材８と、上方開口部９から注入された液状検体・溶液が下方開口部１０と下方排出口１２からの漏れを防止するための、筒型部材８の下端の下方開口部１０に勘合して用いられる閉鎖手段３と、筒型部材８と勘合した閉鎖手段３を筒型部材８の上方排出口１１または下方排出口１２から液状検体・溶液を排出する際に閉鎖手段３とともに筒型部材８内壁に沿って移動する為の筒型部材８上端の上方開口部９に勘合された分離液排出補助手段としての押子（ピストン）である分離液押し出し手段４からなり、筒型部材８と閉鎖手段３と分離液押し出し手段４は着脱自在で組み立てと分解が可能である。
【００４５】
上記構成において、図７に示すように筒型部材８の上方開口部９を上方とし比重の異なる溶液を筒型部材８下端の下方開口部１０に閉鎖手段３を下方開口部１０を下方排出口１２と共に閉鎖する状態にて備えた筒型部材８の上方開口部９よりピペットもしくは針を備えたシリンジにて注入量を確定した上で最初に最も比重の大きな溶液を注入し、次いで同様に上方開口部９より次に比重の大きな溶液を下に積層している層と混ざらないように注入し、この作業を繰り返し比重の異なる溶液を積層していく。比重の異なる溶液を積層完了後、最上部に比重の異なる微生物及び異物混入のサンプルをピペットもしくは針を備えたシリンジにて注入量を確定した上で注入し遠心分離処理を行う。遠心分離処理をすることにより微生物及び異物が各々の比重に近い溶液層に分離でき、遠心処理後、図８に示すように上方に分離液押し出し手段４を目的回収層より上方にある不要分離液層を排出するための上方排出口１１を閉鎖しない状態にて備え、閉鎖手段３を上方へ移動することにより、上方排出口１１より目視にて分離液層の境界面を確認し目的回収層の上方に存在する不要液層を排出し、上方不要分離液層を排出後、筒型部材８上部の分離液押し出し手段４と筒型部材８下部の閉鎖手段３を下方へ移動させることにより下方排出口１２より目視にて分離液層の境界面を確認し目的回収層の下方に存在する不要液層を排出した後、目的回収層を回収することができる分離回収方法。
【００４６】
また、排出口の孔位置の条件は筒型部材８の長さ１０ｃｍに対して開口部から１ｃｍのものを含むが、これに限定されるものではない。
【００４７】
（実施の形態６）
実施の形態１乃至５のいずれかと同一部分については同一番号を付し詳細な説明は省略する。図５は本発明の分離回収方法の請求項３、４の場合の一態様の構成部材毎の概略図である。図６は、図５で示した構成部材からなる分離回収方法の一態様の概略図である。分離回収手段７は微生物を含み得る液状検体と比重の異なる溶液を注入するための上方開口部９を有するとともに閉鎖手段としての蓋と分離液排出補助手段としての押子（ピストン）を兼ねた閉鎖手段３を勘合するための下方開口部１０を有し、遠心処理後、目的回収層より上方にある不要分離液層を排出するための上方排出口１１を有し、遠心処理後、目的回収層より下方にある不要分離液層を排出するための下方排出口１２を有する液状検体・溶液積層補助部材としての筒型部材８と、上方開口部９から注入された液状検体・溶液が下方開口部１０と下方排出口１２からの漏れを防止するための、筒型部材８の下端の下方開口部１０に勘合して用いられる閉鎖手段３と、筒型部材８と勘合した閉鎖手段３を筒型部材８の上方排出口１１または下方排出口１２から液状検体・溶液を排出する際に閉鎖手段３とともに筒型部材８内壁に沿って移動する為の筒型部材８上端の上方開口部９に勘合された分離液排出補助手段としての押子（ピストン）である分離液押し出し手段４からなり、筒型部材８と閉鎖手段３と分離液押し出し手段４は着脱自在で組み立てと分解が可能である。筒型部材８としては、筒等がある。
【００４８】
上記構成において、図７に示すように筒型部材８の上方開口部９を上方とし比重の異なる溶液を筒型部材８下端の下方開口部１０に閉鎖手段３を下方開放部１０を下方排出口１２と共に閉鎖する状態にて備えた筒型部材８の上方開口部９より自動で装置により注入量を確定した上で最初に最も比重の大きな溶液を注入し、次いで同様に上方開口部９より次に比重の大きな溶液を下に積層している層と混ざらないように注入し、この作業を繰り返し比重の異なる溶液を積層していく。比重の異なる溶液を積層完了後、最上部に比重の異なる微生物及び異物混入のサンプルを自動で装置により注入量を確定した上で注入し遠心分離処理を行う。遠心分離処理をすることにより微生物及び異物が各々の比重に近い溶液層に分離でき、遠心処理後、図８に示すように上方に分離液押し出し手段４を目的回収層より上方にある不要分離液層を排出するための上方排出口１１を閉鎖しない状態にて備え、閉鎖手段３を自動で装置により上方へ移動することにより、上方排出口１１より自動で装置により排出量を確定した上で目的回収層よりも上方に存在する不要液層を排出し、上方不要分離液層を排出後、筒型部材８上部の分離液押し出し手段４と筒型部材８下部の閉鎖手段３を自動で装置により下方へ移動させることにより下方排出口１２より自動で装置により排出量を確定した上で目的回収層よりも下方に存在する不要液層を排出した後、目的回収層を回収することができる分離回収方法。
【００４９】
（実施の形態７）
実施の形態１乃至６のいずれかと同一部分については同一番号を付し詳細な説明は省略する。図５は本発明の分離回収方法の請求項３、４の場合の一態様の構成部材毎の概略図である。図６は、図５で示した構成部材からなる分離回収方法の一態様の概略図である。分離回収手段７は微生物を含み得る液状検体と比重の異なる溶液を注入するための上方開口部９を有するとともに閉鎖手段としての蓋と分離液排出補助手段としての押子（ピストン）を兼ねた閉鎖手段３を勘合するための下方開口部１０を有し、遠心処理後、目的回収層より上方にある不要分離液層を排出するための上方排出口１１を有し、遠心処理後、目的回収層より下方にある不要分離液層を排出するための下方排出口１２を有する液状検体・溶液積層補助部材としての筒型部材８と、上方開口部９から注入された液状検体・溶液が下方開口部１０と下方排出口１２からの漏れを防止するための、筒型部材８の下端の下方開口部１０に勘合して用いられる閉鎖手段３と、筒型部材８と勘合した閉鎖手段３を筒型部材８の上方排出口１１または下方排出口１２から液状検体・溶液を排出する際に閉鎖手段３とともに筒型部材８内壁に沿って移動する為の筒型部材８上端の上方開口部９に勘合された分離液排出補助手段としての押子（ピストン）である分離液押し出し手段４からなり、筒型部材８と閉鎖手段３と分離液押し出し手段４は着脱自在で組み立てと分解が可能である。
【００５０】
上記構成において、図７に示すように筒型部材８の上方開口部９を上方とし比重の異なる溶液を筒型部材８下端の下方開口部１０に閉鎖手段３を下方開口部１０を下方排出口１２と共に閉鎖する状態にて備えた筒型部材８の上方開口部９よりピペットもしくは針を備えたシリンジにて注入量を確定した上で最初に最も比重の大きな溶液を注入し、次いで同様に上方開口部９より次に比重の大きな溶液を下に積層している層と混ざらないように注入し、この作業を繰り返し比重の異なる溶液を積層していく。比重の異なる溶液を積層完了後、最上部に比重の異なる微生物及び異物混入のサンプルをピペットもしくは針を備えたシリンジにて注入量を確定した上で注入し遠心分離処理を行う。遠心分離処理をすることにより微生物及び異物が各々の比重に近い溶液層に分離でき、遠心処理後、図８に示すように上方に分離液押し出し手段４を目的回収層より上方にある不要分離液層を排出するための上方排出口１１を閉鎖しない状態にて備え、閉鎖手段３を上方へ移動することにより、上方排出口１１より目視にて分離液層の境界面を確認し目的回収層の上方に存在する不要液層を排出後回収し、上方不要分離液層を排出後、筒型部材８上部の分離液押し出し手段４と筒型部材８下部の閉鎖手段３を下方へ移動させることにより下方排出口１２より目視にて分離液層の境界面を確認し目的回収層の下方に存在する不要液層を排出後回収した後、目的回収層を回収することができる分離回収方法。
【００５１】
（実施の形態８）
実施の形態１乃至７のいずれかと同一部分については同一番号を付し詳細な説明は省略する。図５は本発明の分離回収方法の請求項３、４の場合の一態様の構成部材毎の概略図である。図６は、図５で示した構成部材からなる分離回収方法の一態様の概略図である。分離回収手段７は微生物を含み得る液状検体と比重の異なる溶液を注入するための上方開口部９を有するとともに閉鎖手段としての蓋と分離液排出補助手段としての押子（ピストン）を兼ねた閉鎖手段３を勘合するための下方開口部１０を有し、遠心処理後、目的回収層より上方にある不要分離液層を排出するための上方排出口１１を有し、遠心処理後、目的回収層より下方にある不要分離液層を排出するための下方排出口１２を有する液状検体・溶液積層補助部材としての筒型部材８と、上方開口部９から注入された液状検体・溶液が下方開口部１０と下方排出口１２からの漏れを防止するための、筒型部材８の下端の下方開口部１０に勘合して用いられる閉鎖手段３と、筒型部材８と勘合した閉鎖手段３を筒型部材８の上方排出口１１または下方排出口１２から液状検体・溶液を排出する際に閉鎖手段３とともに筒型部材８内壁に沿って移動する為の筒型部材８上端の上方開口部９に勘合された分離液排出補助手段としての押子（ピストン）である分離液押し出し手段４からなり、筒型部材８と閉鎖手段３と分離液押し出し手段４は着脱自在で組み立てと分解が可能である。
【００５２】
上記構成において、図７に示すように筒型部材８の上方開口部９を上方とし比重の異なる溶液を筒型部材８下端の下方開口部１０に閉鎖手段３を下方開口部１０を下方排出口１２と共に閉鎖する状態にて備えた筒型部材８の上方開口部９より自動で装置により注入量を確定した上で最初に最も比重の大きな溶液を注入し、次いで同様に上方開口部９より次に比重の大きな溶液を下に積層している層と混ざらないように注入し、この作業を繰り返し比重の異なる溶液を積層していく。比重の異なる溶液を積層完了後、最上部に比重の異なる微生物及び異物混入のサンプルを自動で装置により注入量を確定した上で注入し遠心分離処理を行う。遠心分離処理をすることにより微生物及び異物が各々の比重に近い溶液層に分離でき、遠心処理後、図８に示すように上方に分離液押し出し手段４を目的回収層より上方にある不要分離液層を排出するための上方排出口１１を閉鎖しない状態にて備え、閉鎖手段３を自動で装置により上方へ移動することにより、上方排出口１１より自動で装置により排出量を確定した上で目的回収層よりも上方に存在する不要液層を排出し、上方不要分離液層を排出後回収し、筒型部材８上部の分離液押し出し手段４と筒型部材８下部の閉鎖手段３を自動で装置により下方へ移動させることにより下方排出口１２より自動で装置により排出量を確定した上で目的回収層よりも下方に存在する不要液層を排出後回収した後、目的回収層を回収することができる分離回収方法。
【産業上の利用可能性】
【００５３】
食品、化粧品や飲料水中の微生物のみを分離回収することにより、微生物以外の異物を除くことで、蛍光発光試薬や発光試薬染色や抗体試薬での検出が、従来に比べ精度良く検出することができ、食品分野、医薬品分野、化成品分野における微生物の検査において適用することができる。
【図面の簡単な説明】
【００５４】
【図１】本発明の実施の形態１〜４の分離回収方法の一態様の構成部品毎の概略図
【図２】図１で示した構成部品からなる本発明の実施の形態１〜４の分離回収方法の一態様の概略図
【図３】本発明の実施の形態１〜４の分離液とサンプルの積層の概略図
【図４】本発明の実施の形態１〜４の分離液排出とサンプル排出の概略図
【図５】本発明の実施の形態５〜８の分離回収方法の一態様の構成部品毎の概略図
【図６】図５で示した構成部品からなる本発明の実施の形態５〜８の分離回収方法の一態様の概略図
【図７】本発明の実施の形態５〜８の分離液とサンプルの積層の概略図
【図８】本発明の実施の形態５〜８の分離液排出とサンプル排出の概略図
【図９】従来の密度勾配溶液を注入する容器を示す断面図
【符号の説明】
【００５５】
１  分離回収手段
２  筒型部材
３  閉鎖手段
４  分離液押し出し手段
５  上方開口部
６  下方開口部
７  分離回収手段
８  筒型部材
９  上方開口部
１０  下方開口部
１１  上方排出口
１２  下方排出口
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2006067869.tif 000008
【図７】
2006067869.tif 000009
【図８】
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【図９】
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