(57)【要約】【課題】延長された貯蔵期間に水溶液処方物において高い化学的安定性および高い物理的安定性ならびにα型インターフェロンの高い生物学的活性を維持しながら、HSAのようなヒト血液由来産物を含まない溶液処方物を得るための、α型インターフェロン溶液製品の再処方。【解決手段】高い生物学的α型インターフェロン活性を有しかつヒト血液由来産物を含まない安定な水性処方物であって、以下：ａ．0.1×106〜100×106IU/mLのα型インターフェロン；ｂ．pHを4.5〜7.1の範囲に維持するための緩衝系；ｃ．有効量のキレート剤；ｄ．α型インターフェロンをα型インターフェロンの損失に対して安定化するために十分な量のソルビタンモノ-9-オクタデセノエートポリ(オキシ-1,2-エタンジイル)誘導体；ｅ．有効量の張度剤；ｆ．有効量の抗微生物保存剤；およびｇ．上に列挙した成分の溶液を調製するために十分な量の注射用水、を含有する、処方物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
実施例に記載のプロセス。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
発明の背景
本発明は、ヒト血清由来産物を含まず、そして延長された期間α型インターフェロンの高い生物学的活性ならびに高い化学的安定性および高い物理的安定性を維持する安定な、水溶液処方物に関する。
【０００２】
米国特許第4,496,537号は、αインターフェロン、ヒト血清アルブミンおよびアラニンまたはグリシン、水、ならびにpHを6.5〜8.0に維持するための緩衝系を含有する、生物学的に安定なαインターフェロン水溶液処方物を開示する。ヒト血清アルブミン（「HSA」）は、αインターフェロンのための安定化剤として作用し、そして配合容器、処理装置および貯蔵容器のステンレススチール表面およびガラス表面へのαインターフェロンの被覆化および／または吸着による溶液からのαインターフェロンの損失を防止する。αインターフェロンおよびHSAを含有する溶液処方物は、このような溶液を延長された期間（すなわち、２年より長く）２〜８℃で貯蔵した場合、αインターフェロンの化学的安定性および生物学的安定性を維持している。
【０００３】
近年、世界的なAIDSの流行の結果、HSAのようなヒト血液由来産物を含む製品（例えば、αインターフェロン）に対して警戒することを製造者に要求する、衛生登録機関（healthregistration agency）が生じた。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
延長された貯蔵期間に水溶液処方物において高い化学的安定性および高い物理的安定性ならびにα型インターフェロンの高い生物学的活性を維持しながら、HSAのようなヒト血液由来産物を含まない溶液処方物を得るために、α型インターフェロン溶液製品を再処方する必要が存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明によって以下が提供される：
（１）高い生物学的α型インターフェロン活性を有し、かつヒト血液由来産物を含まない、安定な、水性処方物であって、以下：
ａ．0.1×106〜100×106IU/mLのα型インターフェロン；
ｂ．pHを4.5〜7.1の範囲に維持するための緩衝系；
ｃ．有効量のキレート剤；
ｄ．α型インターフェロンをα型インターフェロンの損失に対して安定化するために十分な量のソルビタンモノ-9-オクタデセノエートポリ(オキシ-1,2-エタンジイル)誘導体；
ｅ．有効量の張度剤；
ｆ．有効量の抗微生物保存剤；および
ｇ．上に列挙した成分の溶液を調製するために十分な量の注射用水、
を含有する、処方物。
（２）前記緩衝系が、リン酸２ナトリウムおよびリン酸１ナトリウムである、項目１に記載の処方物。
（３）前記キレート剤が、エデテート２ナトリウムまたはクエン酸である、項目１に記載の処方物。
（４）前記張度剤が塩化ナトリウムである、項目１に記載の処方物。
（５）前記保存剤が、m-クレゾール、フェノール、メチルパラベン、プロピルパラベン、またはそれらの混合物から選択される、項目１に記載の処方物。
（６）前記α型インターフェロンが、インターフェロンα2である、項目１に記載の処方物。
（７）高い生物学的インターフェロンα2活性を有し、かつヒト血清アルブミンを含まない、安定な、水溶液処方物であって、以下：
mg/mL
ａ．インターフェロンα2                           ５×106〜50×106IU
ｂ．無水リン酸２ナトリウム                        1.8
ｃ．リン酸１ナトリウム１水和物                    1.3
ｄ．エチレンジアミン４酢酸２ナトリウム２水素      0.1
ｅ．ソルビタンモノ-9-オクタデセノエートポリ(オキシ-1,2-エタンジイル)誘導体    0.1
ｆ．メチルパラベン                                1.2
ｇ．プロピルパラベン                              0.12
ｈ．塩化ナトリウム；および                        7.5
ｉ．注射用水、                                    １mLまで
を含有する、処方物。
（８．高い生物学的インターフェロンα2活性を有し、かつヒト血清アルブミンを含まない、安定な、水溶液処方物であって、以下：
mg/mL
ａ．インターフェロンα2                           ５×106〜50×106IU
ｂ．無水リン酸２ナトリウム                        1.8
ｃ．リン酸１ナトリウム１水和物                    1.3
ｄ．エチレンジアミン４酢酸２ナトリウム２水素      0.1
ｅ．ソルビタンモノ-9-オクタデセノエートポリ(オキシ-1,2-エタンジイル)誘導体                                                0.1
ｆ．m-クレゾール                                  1.5
ｇ．塩化ナトリウム；および                        7.5
ｈ．注射用水、                                    １mLまで
を含有する、処方物。
（９）包装物および項目１〜８のいずれかに記載の処方物を含む製品であって、ここで該包装物が多回用量ガラスバイアルである、製品。
（１０）有効量の項目１〜８のいずれかに記載の処方物を含有する事前充填シリンジを含む製品。
（１１）包装物および項目１〜８のいずれかに記載の処方物を含む製品であって、ここで該包装剤が単回用量バイアルである、製品。
（１２）高い生物学的α型インターフェロン活性を有し、かつヒト血液由来産物を含まない、安定な、水性処方物の調製プロセスであって、該プロセスが、有効量のα型インターフェロンを、pHを4.5〜7.1の範囲内に維持し得る緩衝系、キレート剤、ソルビタンモノ-9-オクタデセノエートポリ(オキシ-1,2-エタンジイル)誘導体、張度剤、抗微生物保存剤および水溶液を作製するために十分な水と混合する工程を包含する、プロセス。
（１３）前記水溶液が実質的に溶存酸素を含まないで調製および維持される、項目１２に記載のプロセス。
（発明の要旨）
本発明は、高い生物学的α型インターフェロン活性を維持し、かつヒト血液由来産物を含まない、安定な、水溶液処方物であって、以下：
ａ．0.1×106〜100×106IU/mLのα型インターフェロン；
ｂ．pHを4.5〜7.1の範囲に維持するための緩衝系；
ｃ．有効量のキレート剤；
ｄ．α型インターフェロンをα型インターフェロンの損失に対して安定化するために十分な量のソルビタンモノ-9-オクタデセノエートポリ(オキシ-1,2-エタンジイル)誘導体；
ｅ．有効量の張度剤；
ｆ．有効量の抗微生物保存剤；および
ｇ．上に列挙した成分の溶液を調製するために十分な量の注射用水、
を含有する、処方物を提供する。
【０００６】
本発明は、高いα型インターフェロン生物学的活性を有し、かつヒト血液由来産物を含まない、安定な、水溶液処方物であって、以下：
ａ．0.1×106〜100×106IU/mLのα型インターフェロン；
ｂ．溶液のpHを4.5〜7.1の範囲に維持するために十分な緩衝系；
ｃ．約0.01〜１mg/mLのエチレンジアミン４酢酸２ナトリウム２水素；
ｄ．約0.01〜１mg/mLのソルビタンモノ-9-オクタデセノエートポリ(オキシ-1,2-エタンジイル)誘導体；
ｅ．約１〜９mg/mLの塩化ナトリウム；
ｆ．有効量の、m-クレゾール、フェノール、メチルパラベン、プロピルパラベン、またはそれらの混合物から選択される抗微生物保存剤；および
ｇ．１mLにするための注射用水、
を含有する、処方物を提供する。
【０００７】
好ましい局面において、本発明は、高い生物学的α型インターフェロン活性を有し、かつヒト血液由来産物を含まない、安定な、水溶液処方物であって、以下：
mg/mL
ａ．α2インターフェロン                          ５×106〜50×106IU
ｂ．無水リン酸２ナトリウム                        1.8
ｃ．リン酸１ナトリウム１水和物                    1.3
ｄ．エチレンジアミン４酢酸２ナトリウム２水素      0.1
ｅ．ポリソルベート80                              0.1
ｆ．メチルパラベン                                1.2
ｇ．プロピルパラベン                              0.12
ｈ．塩化ナトリウム；および                        7.5
ｉ．注射用水、                                    １mLまで
を含有する、処方物を提供する。
【０００８】
別の好ましい局面において、本発明はさらに、高い生物学的α型インターフェロン活性を有し、かつヒト血液由来産物を含まない安定な、水溶液処方物であって、以下：
mg/mL
ａ．α2インターフェロン                          ５×106〜50×106IU
ｂ．無水リン酸２ナトリウム                        1.8
ｃ．リン酸１ナトリウム１水和物                    1.3
ｄ．エチレンジアミン４酢酸２ナトリウム２水素      0.1
ｅ．ポリソルベート80                              0.1
ｆ．m-クレゾール                                  1.5
ｇ．塩化ナトリウム；および                        7.5
ｈ．注射用水、                                    １mLまで
を含有する、処方物を提供する。
【０００９】
本発明はまた、高い生物学的α型インターフェロン活性を有し、かつヒト血液由来産物を含まない、安定な、水溶液処方物の調製プロセスであって、該プロセスが、有効量のα型インターフェロンを、pHを4.5〜7.1の範囲内に維持し得る緩衝系、キレート剤、ソルビタンモノ-9-オクタデセノエートポリ(オキシ-1,2-エタンジイル)誘導体、張度剤、抗微生物保存剤および溶液を形成するために十分な水と混合する工程を包含する、プロセスを提供する。本発明のプロセスの好ましい局面において、前記溶液は、実質的に溶存酸素を含まないで調製および維持され、そして前記溶液の上の不活性雰囲気のヘッドスペースは、約４％（容積）の酸素未満の値に維持される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
詳細な説明
本発明者らは、ヒト血清アルブミンを含有しないが、少なくとも24ヶ月の延長された期間２〜８℃での貯蔵に際して、α型インターフェロンについての高い化学的、生物学的および物理的安定性を維持する、水性α型インターフェロン溶液処方物を開発することを可能にした、特定の１組の成分の特定の量を選択した。
【００１１】
本発明の処方物に関して本明細書において用いられる用語「ヒト血液由来産物を含まない」は、HSAのようなヒト血液由来産物が、本発明の溶液処方物の調製において使用されないことを意味する。
【００１２】
本発明の処方物中のα型インターフェロンに関して本明細書において用いられる用語「高い化学的安定性」は、α型インターフェロンが、少なくとも85％、好ましくは85％〜100％のその化学的完全性を、２〜８℃で少なくとも24ヶ月の貯蔵に際して維持することを意味する。表１および２を参照のこと。化学的完全性は、例えば、T.L.Nagabhushanら、「遺伝子操作されたα２インターフェロンの特徴付け」79-88頁、InterferonResearch Clinical Application and Regulatory Consideration、Zoonら編、ElsevierScience Publishing Co., Inc. 1984により開示されるようなHPLCアッセイにおけるタンパク質含量の測定により決定される（表１〜４における結果を参照のこと）。
【００１３】
本発明の処方物中のα型インターフェロンに関して本明細書において用いられる用語「高い生物学的安定性」は、処方物中のα型インターフェロンが、W.P.Protzmanら、J. Clinical Microbiology, (1985), 22,596-599により開示される方法のようなウイルスの細胞変性効果（CPE）の阻害の標準的な方法において測定したところ、少なくとも75％、好ましくは少なくとも85％、より好ましくは90％〜100％その生物学的完全性を、２〜８℃で少なくとも24ヶ月の貯蔵に際して維持すること（表１〜４における結果を参照のこと）を意味する。
【００１４】
本発明の処方物中のα型インターフェロンに関して本明細書において用いられる用語「高い物理的安定性」は、本発明の処方物が２〜８℃で少なくとも24ヶ月の貯蔵に際して明澄なままである、すなわち濁りまたは可視粒子物（すなわち、直径約60〜70ミクロンより大きな粒子）を示さないことを意味する。表１，２，および３を参照のこと。表１，２，および３に列挙した結果は、α型インターフェロンのようなタンパク質産物を含有する溶液処方物のほとんどが、２℃から８℃でさえも延長された貯蔵に際して可視的に観察可能な粒子物（すなわち、直径60〜70ミクロンより大きな粒子）を発達させるという点において驚異的である。本発明の溶液処方物中の粒子物を測定するために使用される試験方法は（表１〜４を参照のこと）、米国薬局方／国民医薬品集USP 23/NF 18、United States Pharmacopeial Convention,Inc.,(1995), Rockville,Maryland発行（1813〜1816頁のPhysical Test<788>を参照のこと）に記載されている。本発明の溶液処方物の可視種目（visualdescription）を測定するために使用される方法もまた、USP23に、「General Requirement Test andAssays<1>Injections」として1650〜1652頁に記載されている。
【００１５】
本発明者らは、キレート剤を本発明の処方物に添加することにより、可視粒子物を回避し得ることを見出した。代表的な適切なキレート剤は、エチレンジアミン４酢酸２ナトリウム２水素（EDTAまたはエデテート２ナトリウム）あるいはクエン酸を包含する。エデテート２ナトリウムの使用が好ましい。本発明者らは、いかなる理論によっても縛られないことを望むが、エデテート２ナトリウムは効果的に微量金属カチオン（例えば、Zn2+、Fe2+、Cu2+またはAl3+）（これらのイオンは賦形剤および包装成分（例えば、ゴムストッパーまたはガスケット）中に存在し得る）と複合体化すると考えられている。エデテート２ナトリウムはこれらの金属カチオンに対してα型インターフェロンよりも高い親和性を有するので、不溶性複合体の形成（例えば、可視粒子物の形態での）および活性損失を生じる金属カチオンとα型インターフェロンとの間の相互作用が回避される。キレート剤の有効量は、0.1×106〜100×106α型インターフェロン国際単位（「IU」）/mLに基づいて0.01〜１mg/mLの範囲である。好ましくは、0.1mgのエデテート２ナトリウムが５×106〜50×106IUのα２インターフェロンに対して使用される。
【００１６】
本発明の処方物に適切な緩衝系は、水溶液処方物のpHを、4.5〜7.1の範囲、好ましくは6.5〜7.1の範囲、そして最も好ましくは6.8に維持する緩衝系である。リン酸２ナトリウムおよびリン酸１ナトリウムの緩衝系の使用が好ましい。通常、好ましいリン酸１ナトリウム／リン酸２ナトリウム緩衝系の0.005〜0.1モル濃度緩衝液が、１mL当たり0.1×106〜100×106IUのα型インターフェロンを含有する処方物のために使用される。4.5〜7.1の所望のpH範囲を維持するためのその他の適切な緩衝系は、クエン酸ナトリウム／クエン酸および酢酸ナトリウム／酢酸を包含する。
【００１７】
本発明に有用な張度剤は、本発明の処方物にヒト血清と等しい浸透圧を与え得る任意の薬剤である。代表的な適切な張度剤は、塩化ナトリウム、マンニトール、グリシン、グルコース、およびソルビトールを包含する。塩化ナトリウムの張度剤としての使用が好ましい。
【００１８】
本発明の処方物が１mL当たり0.1×106〜100×106IUのα型インターフェロンを含有する場合、使用される張度剤の量は１〜10mg/mLの範囲である。本発明の処方物中の１mL当たり５×106〜50×106IUのα型インターフェロンに対しては、7.5mg/mLの塩化ナトリウムの使用が好ましい。
【００１９】
ポリソルベート80またはポリソリベート20のようなソルビタンモノ-9-オクタデセノエートポリ(オキシ-1,2-エタンジイル)誘導体が、α2bインターフェロンのようなα型インターフェロンタンパク質の、α型インターフェロンを含有する注射用処方物（indictableformulation）を作製するために使用される装置のステンレススチール表面およびガラス表面への吸着を防止するための安定化剤として有用である。本発明の処方物において有効なポリソルベート20またはポリソリベート80の量は、１mL当たり0.1×106〜100×106IUのα型インターフェロンを含有する処方物について0.01〜1.0mg/mLの範囲である。ポリソルベート80の使用が好ましい。0.1mg/mLのポリソルベート80の使用が、本発明のすべての溶液処方物においてより好ましい。α２インターフェロンのようなα型インターフェロンの濃度が、約15×106IU/mL未満（例えば、６×106IU/mL）である場合、ポリソルベート80の非存在下でのαインターフェロンの吸着に起因する活性の損失は、処方物の生物学的活性を顕著に低下させる。驚くべきことに、本発明者らはポリソルベート80がα2bインターフェロンの損失を防止し、そしてα2bインターフェロンの全身送達を生物学的活性の損失なしに可能にすることを見出した。本発明の処方物の開発の過程において、本発明者らは驚くべきことに、ポリソルベート80がその他の非イオン性界面活性剤（例えば、PluronicF127およびPluronic F-68）に比較して優れた化学的および生物学的安定性をα2bインターフェロンに提供することを見出した。
【００２０】
本発明の処方物において有用なα型インターフェロンの量は、0.1×106〜100×106IU/mLの範囲、好ましくは５×106〜50×106IU/mLの範囲である。
【００２１】
本明細書において用いられる用語「α型インターフェロン」は、ウイルス複製および細胞増殖を阻害し、そして免疫応答を調整する、高度に相同性の種特異的タンパク質のファミリーを意味する。代表的な適切なα型インターフェロンは、Hoffmann-La Roche, Nutley, N.J.から入手可能なROFERON Aインターフェロンα2aのようなインターフェロンα2a、ScheringCorporation, Kenilworth, N.J.から入手可能なINTRON Aインターフェロンα2bのようなインターフェロンα2b、BoehringerIngelheim Pharmaceutical, Inc., Ridgefield, CT.から入手可能なBEROFORインターフェロンα2cのようなインターフェロンα2c、Sumitomo,JapanからSUMIFERONとして入手可能な、またはThe Wellcome Foundation Ltd., London, Great BritainからWELLFERONとして入手可能なインターフェロンαn1（天然αインターフェロン類の精製混合物）、あるいはAmgen,Inc., Newbury Park, Californiaから入手可能なコンセンサスαインターフェロン、あるいはInterferon Sciencesにより製造され、そしてPurdueFrederick Co., Norwalk, CT.からALFERONの商品名で入手可能なインターフェロンαn3（天然αインターフェロン類の混合物）を包含する。インターフェロンα2aまたはα2bの使用が好ましい。インターフェロンα2bの使用がより好ましい。
【００２２】
本発明において有用であると見出された抗微生物保存剤は、m-クレゾール、フェノール、ならびにメチル-パラベンおよびプロピルパラベン、ならびに上に列挙した保存剤の混合物（例えば、フェノール−メチルパラベン混合物）を包含する。本発明において有用であると見出されたm-クレゾールの有効量は、0.1×106〜100×106IU/mLのα型インターフェロンを含有する処方物について0.5〜２mg/mLの範囲である。５×106〜50×106IU/mLのインターフェロンα2bを含有する処方物について1.5mg/mLのm-クレゾールの使用が好ましい。
【００２３】
有用であると見出されたフェノールの有効量は、0.1×106〜100×106IU/mLのα型インターフェロンを含有する溶液処方物について0.5〜５mg/mLの範囲である。
【００２４】
本発明の処方物が0.1×106〜100×106IU/mLのα型インターフェロンを含有する場合、メチルパラベンの有効量は、0.6〜1.8mg/mLの範囲であり、プロピルパラベンの有効量は0.06〜0.18mg/mLの範囲である。
【００２５】
本発明の処方物が0.1×106〜100×106IU/mLのα2bインターフェロンを含有する場合、1.2mg/mLのメチルパラベンを0.12mg/mLのプロピルパラベンと併用することが好ましい。
【００２６】
m-クレゾールの抗微生物保存剤としての使用がより好ましい。
【００２７】
本発明の処方物の調製のために使用される水は、好ましくは注射用水である。
【００２８】
HSAを安定化剤として用いることなく、延長された貯蔵期間にわたってα型インターフェロンの高い生物学的活性ならびに高い化学的安定性および高い物理的安定性を維持する、本発明の水溶液処方物の開発の過程において、本発明者らは、α型インターフェロンのための安定化剤として作用するように必要とされるポリソルベート80のようなソルビタンモノ-9-オクタデセノエートポリ(オキシ-1,2-エタンジイル)誘導体の量が、所望されない溶液中の濁りの形成を引き起こすことなく、種々の世界的な衛生登録要求（healthregistration requirement）に従って前記処方物に適切な抗微生物防御を提供するために水溶液処方物に添加され得る抗微生物保存剤の有効量に対して、直接的な影響を有したことを同定した。
【００２９】
従って、好ましい安定化剤であるポリソルベート80が本発明の処方物中に存在した場合（好ましい有効量の0.1mg/mLで）、前記処方物の濁りを生じさせることなく添加され得る、好ましい抗微生物保存剤（例えば、m-クレゾール）の有効量は、厳密であることが見出された。例えば、0.1mg/mLのポリソルベート80を含有する処方物（実施例３に示されるような）に添加されるm-クレゾールの量が1.75mg/mLより多くまで増加する場合に、濁りが観察された。同様な濁りの問題が、得られる処方物中のポリソルベート80の量が0.01mg/mLから１mg/mLに変動すると観察された。1.75mg/mL以下、好ましくは約1.5mg/mLのm-クレゾールを実施例３の手順に従って調製した処方物（これは0.1mg/mLのポリソルベート80を含有する）に添加した場合には、濁りは観察されなかった。この厳密性はまた、パラベンおよびフェノールについても、これらを抗微生物保存剤として使用した場合に観察された。0.01〜１mg/mLのポリソルベート80を含有する本発明の処方物について、0.12mg/mLのプロピルパラベンとともに使用する場合に濁りを回避するためのメチルパラベンの有効量は、約1.2mg/mL以下であるべきであり、そして濁りを回避するためのフェノールの有効量は（フェノールをパラベンの代わりに使用する場合）、0.5〜約４mg/mL未満の範囲であるべきである。
【００３０】
α型インターフェロン処方物は、腎細胞ガン、AIDS関連カポジ肉腫、慢性および急性Ｂ型肝炎、慢性および急性非Ａ、非B/C肝炎などの種々の病状の処置のために有用である。本発明の処方物は、好ましくは注射用水溶液として、これらの病状を処置することにおいて有用である。
【実施例】
【００３１】
実施例
以下の非限定的な実施例は、α型インターフェロンの水溶液の調製を例示する。
【００３２】
実施例５より後に挙げる手順を、実施例１〜５の本発明の処方物を調製するために使用する。
実施例１
活性物質：        インターフェロンα2b          0.1×106〜100×106IU/mL*
緩衝液：          リン酸ナトリウム              0.005〜0.1M
（１ナトリウム／２ナトリウム）
キレート剤：      エデテート２ナトリウム        0.01〜１mg/mL
安定化剤：        ポリソルベート80              0.01〜１mg/mL
張度調整剤：      塩化ナトリウム                １〜９mg/mL
抗微生物保存剤：  m-クレゾール                  0.5〜1.75mg/mL
またはフェノール              0.5〜＜４mg/mL
またはメチルパラベン          0.6〜1.2mg/mL
プロピルパラベン            0.06〜0.12mg/mL
溶媒：            注射用水                      １mLまで
*IU−国際単位
実施例２
インターフェロンα2b                              10×106IU/mL
無水リン酸２ナトリウム                            1.8mg/mL
リン酸１ナトリウム１水和物                        1.3mg/mL
エデテート２ナトリウム                            0.1mg/mL
ポリソルベート80                                  0.1mg/mL
メチルパラベン                                    1.2mg/mL
プロピルパラベン                                  0.12mg/mL
塩化ナトリウム                                    7.5mg/mL
注射用水                                         １mLまで
実施例３
インターフェロンα2b                              10×106IU/mL
無水リン酸２ナトリウム                            1.8mg/mL
リン酸１ナトリウム１水和物                        1.3mg/mL
エデテート２ナトリウム                            0.1mg/mL
ポリソルベート80                                  0.1mg/mL
m-クレゾール                                      1.5mg/mL
塩化ナトリウム                                    7.5mg/mL
注射用水                                         １mLまで
実施例２および３についての安定性データをそれぞれ表１および２にまとめる。
【００３３】
実施例４
実施例３の処方物を、６×106IU/mLのα2bインターフェロンを用いて、本明細書中以下に詳述する製造方法に従い、溶液の窒素散布を用い、そしてヘッドスペースにおける酸素を約４％（容積）以下に維持して調製した。
【００３４】
３mLの溶液の表示容量を含有するバイアルを、30℃、25℃および４℃で貯蔵した。結果を表３にまとめる。
【００３５】
実施例５
実施例４の処方物を、窒素を溶液に散布も重層もせず、そしてヘッドスペースの酸素容積が雰囲気空気において見出されるように約20％（容積）であった以外は、すべての点において本明細書中以下で詳述する製造方法に従って調製した。
【００３６】
３mLの溶液の表示容量を含有するバイアルを、30℃、25℃および４℃で貯蔵した。結果を表４にまとめる。
【００３７】
実施例１〜５におけるインターフェロンα2bを、等価量のRoferon A、WellferonまたはSumiferonインターフェロンαで置き換えても、同様な結果が予想される。
【００３８】
【表１】
2006193536.tif 000002
【００３９】
【表２】
2006193536.tif 000003
【００４０】
【表３−１】
2006193536.tif 000004
【００４１】
【表３−２】
2006193536.tif 000005
【００４２】
【表４−１】
2006193536.tif 000006
【００４３】
【表４−２】
2006193536.tif 000007
【００４４】
実施例１〜５についての製造方法
Ａ．実施例２に示すようなパラベン含有水溶液処方物の配合
１．約80％の注射用水を70℃より高い温度で攪拌機を備えたジャケット配合容器に入れる。
【００４５】
２．別に、約30％の注射用水を別の適切な容器に入れる。冷却して水温を20℃と25℃との間に維持する。バッチを最終容量にするために使用される水に濾過窒素での散布および重層を開始して、溶存酸素レベルを0.25ppm以下に維持する。
【００４６】
３．工程１の配合容器にメチプパラベンおよびプロピルパラベンを入れ、そして混合しながら溶解させ、この間溶液の温度を70℃と80℃との間に維持する。
【００４７】
４．工程３の溶液を20℃と25℃との間の温度に冷却する。溶液に濾過窒素を散布および重層する。溶存酸素レベルを0.25ppm以下に維持する。
【００４８】
５．工程４の溶液に以下の成分を入れ、そして混合しながら溶解させ、この間窒素散布および重層を維持する：
無水リン酸２ナトリウム
リン酸１ナトリウム１水和物
エデテート２ナトリウム
塩化ナトリウム
６．工程５の溶液の窒素散布を停止する。配合容器における窒素重層を維持する。
【００４９】
７．ポリソルベート80を約50mLの注射用水（１リットルサイズのバッチについて）に別の容器において入れ、そして溶解する。ポリソルベート80溶液を工程６の溶液に移す。
【００５０】
８．溶液のpHをチェックする。pHは6.6と7.0との間にあるはずである。pH調整は必要ではない。
【００５１】
９．インターフェロンα2bバルク薬物溶液を混合しながら工程８の溶液に入れる。
【００５２】
10．窒素で散布しておいた注射用水（工程２の）を添加して、バッチを最終容量にする。溶液を均一になるまで穏やかに攪拌する。
【００５３】
11．無菌的に溶液を、洗浄し、そして完全性を試験しておいた滅菌フィルターを通して濾過する。滅菌された溶液を滅菌濾過した窒素で重層しておいた滅菌充填容器に採集する。濾過後フィルターを完全性試験する。
【００５４】
12．工程11の充填容器を滅菌濾過窒素で重層し、そして密封する。
【００５５】
Ｂ．実施例３に示すようなm-クレゾール含有水溶液処方物の配合
保存剤としてm-クレゾールを含有する水溶液（実施例３に示すような）を調整するために使用される製造手順は、工程３の温度を20℃と25℃との間に維持し、そしてm-クレゾールを工程６の後に入れる以外は、本明細書中上記と正確に同じである。
【００５６】
Ｃ．雰囲気空気下でのHSA非含有水性αインターフェロン溶液処方物の配合
すべての工程を雰囲気空気下で実施し、窒素を溶液に散布または重層せず、そして雰囲気空気（通常約20％（容積）の酸素を含有する）がヘッドスペース容積を占めた以外は、実施例１〜４のHSA非含有水性αインターフェロン処方物を調製するために使用される製造手順を用いて、実施例５の処方物のような処方物を調製した。
【００５７】
高い化学的、物理的および生物学的安定性を維持するためには、水性αインターフェロン溶液を調製するために用いられる水およびそうして形成された水性αインターフェロン溶液は、実質的に溶存酸素を含まず、そして水溶液は、約４％（容積）以下の酸素を含有する不活性雰囲気（例えば、窒素）のヘッドスペースを有して作製および貯蔵されることが好ましい。本明細書において用いられる用語「実質的に溶存酸素を含まない」は、水温約20℃〜25℃での約0.25ppm以下の酸素レベルを意味する。通常、この0.25ppmの好ましい溶存酸素レベルは、不活性雰囲気（例えば、窒素ガス）を、水溶液を調製するために使用される水（温度を約20℃〜25℃に維持した）に、十分な時間（例えば、約30分間）散布して、溶存酸素を約0.25ppm以下の値まで低下させることにより好都合に達成される。散布を製造手順の間中継続して、溶存酸素レベルを0.25ppmに維持する。本発明者らは、１ppmの溶存酸素レベルおよび７％（容積）のヘッドスペースにおける酸素含量を有する本発明の水性処方物が、25℃で３ヶ月の貯蔵の後に、同じ条件下で貯蔵された0.25ppmの好ましい溶存酸素レベルおよび４％（容積）のヘッドスペースにおける酸素含量を有する同様な水性処方物に比較して、有意により大きなαインターフェロンの化学的安定性の損失を示したことを見出した。
【００５８】
表３および４に示すα2bインターフェロン溶液安定性データの並べた比較（side-by-side comparison）により、実施例４において用いられた窒素／低酸素条件下で調製された本発明の水溶液処方物と、実施例５に従って雰囲気空気下で調製された処方物との間に、４℃で12ヶ月間での有意な安定性の差がないことが示される。対照的に、より高い温度（例えば、25℃および30℃）で貯蔵された実施例４および５の溶液におけるα2bインターフェロン安定性の比較により、同時にヘッドスペースにおける酸素含量を約４％（容積）以下の値に維持しながら低い水溶液中の溶存酸素レベルをもたらす、窒素散布の好ましい（より安全な）使用により達成される保護効果が示される。
【００５９】
本発明の水溶液処方物を、任意の適切な洗浄および滅菌された充填容器またはコンテナ（例えば、灰色のブチルゴム栓で栓をした2-mLまたは5-mL Type Iフリントガラスバイアル）中に貯蔵し得る。本発明の水溶液処方物をまた、事前充填多回用量シリンジ（prefilledmulti-dose syringe）（例えば、インスリンのような薬物の注射用（indictable）溶液の送達のために有用なシリンジ）中に貯蔵し得る。代表的な適切なシリンジは、ペン型シリンジ（例えば、NovoNordiskから入手可能なNovolet Novo Pen）に取り付けられた事前充填バイアルを含むシステムを包含する。代表的な適切なシステムは、使用者による容易な自己注射および正確な再現性のある用量設定を可能にする事前充填、ペン型シリンジを包含する。
【００６０】
本発明の水溶液処方物（例えば、実施例に示した）をまた、凍結乾燥して再構成用の粉末を形成させ得る。凍結乾燥したα型インターフェロン粉末は、２℃〜８℃で貯蔵する場合、少なくとも２年間、その化学的および生物学的安定性を維持することが予想される。