(57)【要約】【課題】  バルーンにより損傷したラット頚動脈中における、新生血管内膜の過形成、ならびに、免疫組織化学的および血管細胞分裂的周期の変化に対する、局所的に施用される抗増殖性物質または他の諸薬剤の有効性を評価するためのモデルを提供する。【解決手段】  ラット頚動脈の病状を評価するための方法であって、前記ラット頚動脈の内側の少なくとも１つの位置に血管内損傷を作り出す段階、及び前記損傷に関連する前記病状を評価する段階を含む、評価方法。【選択図】  図３
2006142025.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ラット頚動脈の病状を評価するための方法であって、
前記ラット頚動脈の内側の少なくとも１つの位置に血管内損傷を作り出す段階と
前記損傷に関連する前記病状を評価する段階と、
を含む、評価方法。
【請求項２】
ラット頚動脈の治療法を評価するための方法であって、
前記ラット頚動脈の内側の少なくとも１つの位置に血管内損傷を作り出す段階と、
前記損傷動脈を処置する段階と、
前記の処置された損傷動脈に関連する病状と前記処置の有効性とを評価する段階と、
を含む、評価方法。
【発明の詳細な説明】
【開示の内容】
【０００１】
〔１．発明の分野〕
本発明は、哺乳動物の動脈を評価するための方法及び装置に関し、更に詳しくは、ラット頚動脈の病状及び治療を評価するための方法及び装置に関する。
【０００２】
〔２．関連技術の解説〕
血管損傷の後の再発狭窄症を減少させる場合の治療薬の安全性と有効性とを評価するための数多くのモデル装置が開発されてきた。動脈損傷に関連する抗再発狭窄症治療及びそのプロセスに関する評価は、異なる形態を持つ様々な動脈に対して行われることがある。筋性動脈（例えば、冠状動脈）は、内部弾性膜及び外部弾性膜によって規定される、平滑筋細胞の諸層を有する。潜在的な抗再発狭窄症治療を評価するためには、種々の動物の導管動脈(conduit arteries)［例えば、頚動脈、腸骨動脈及び大動脈］が一般に利用されてきた。
【０００３】
治療薬の安全性及び有効性だけでなく運搬手段をも決定するために、典型的な動物モデルが利用される。それらモデルは、範囲が限定される所定組のパラメータを評価するように設計される。従って、より広い範囲を持つモデルが必要とされる。加えて、治療薬の血管周囲への運搬だけでなく、血管周囲への運搬を行うためのデバイスをも評価する原理体系(methodology；方法論)の必要性が存在している。
【０００４】
〔発明の概要〕
本発明によれば、上記に手短に記述されるように、現在利用されている諸動物モデルに関連する制限が克服される。
【０００５】
本発明には、弾性動脈モデル装置、ラット頚動脈の損傷モデルの使用方法であって、動脈損傷に関連する諸病態生理学的プロセスを研究するために、且つ、これら病態生理学的プロセスに影響を与える局所的又は全身的に用いられる治療法を評価するために最適化することのできる使用方法が包含される。
【０００６】
本発明は、１つの態様によると、ラット頚動脈の病状を評価するための方法に向けられている。該方法は、ラット頚動脈の内側の少なくとも１つの位置に血管内損傷を作り出す段階、及び前記損傷に関連する病状を評価する段階を含む。
【０００７】
本発明は、もう１つの態様によると、ラット頚動脈の治療法を評価するための方法に向けられている。該方法は、前記ラット頚動脈の内側の少なくとも１つの位置に血管内損傷を作り出す段階、前記損傷動脈を処置する段階、及び前記の処置された損傷動脈に関連する病状と前記処置の有効性とを評価する段階を含む。
【０００８】
本発明は、バルーンにより損傷したラット頚動脈における、新生血管内膜(neointimal)の過形成(hyperplasia；増殖症)、ならびに、免疫組織化学的および血管細胞分裂的な周期の変化に対する、局所的に施用される抗増殖性物質および／もしくは他の治療薬の有効性を評価する原理体系又はモデルに向けられている。本明細書に記述されているように、血管損傷後の再発狭窄症を減少させるための治療薬の有効性を評価するために、数多くのモデルが開発されてきた。しかし、本発明は、ラット頚動脈がバルーンによって損傷した後、局所的に施用または運搬される諸薬剤を評価するためのモデル装置であって、新生血管内膜の過形成を減少させるそれら薬剤の能力、および、血管細胞分裂周期の相(phases)に影響を及ぼすそれら薬剤の能力を求めるためのモデル装置に向けられている。加えて、本発明は、存在している誘発的且つ自発的な複数の潜在的ラット疾患モデルであって、糖尿病（Ｉ型及びII型）、アテローム性動脈硬化症、免疫学的に改変されたトランスジェニックス(transgenics)及びノックアウト(knock-outs)を包含するラット疾患モデルに及ぶ。更に、損傷表現型(lesion phenotypes)［例えば、炎症の悪化、平滑筋の細胞増殖の増加(upregulation)、これらプロセスに影響を及ぼす遺伝子の使用］に局所的に影響を及ぼす薬剤を施用することによって、損傷及び炎症に対する血管壁の反応に関する研究がいっそう改善される。１つの具体例は、易損性プラーク表現型［薄い線維性キャップ(thin fibrous cap)、脂質に富む壊死性コア(necrotic core)、泡沫細胞及びマクロファージの存在、Ｔ細胞の存在、並びに潰瘍形成／びらん(erosion)の潜在性］が作り出されるような方法で、損傷と脂質代謝異常症(dyslipidemia)（例えば、高脂肪食／高コレステロール食）と炎症との組合せによる頚動脈損傷の特質(nature)に影響を及ぼすことである。
【０００９】
本発明の前述の特徴及び利点、並びに他の特徴及び利点は、諸添付図面に例示されるような、本発明の好ましい諸具体例のいっそう特定的な記述から明らかになるであろう。
【００１０】
〔好ましい具体例の詳細な記述〕
本発明は、血管内損傷を受けているか若しくは受けていないラット頚動脈の周辺の血管周囲施用(perivascularly-applied)医療用具の効果を評価するための原理体系(methodology；方法論)又はモデルに向けられている。この原理体系又はモデルは、再発狭窄症及び易損性プラーク(vulnerable plaque)を包含する血管疾患の処置を行うための治療薬を評価するための手段として役立つことができ、また、正常動脈又はアテローム性動脈との関連において、血管内に施用されるあらゆる数の治療薬に関する安全性及び有効性の試験をモデル化する(model；模擬実験する)のにも役立つことができる。本発明は本質的に、血管内損傷を生じさせるためにバルーンカテーテルを用いる。血管内損傷は、食事、炎症誘発物質(proinflammatory agents)の血管周囲注入／血管周囲投与、及び／又は、全身的薬剤運搬を包含する他の方法によって引き起こすことができる。加えて、血管造影法、血管内超音波画像診断、組織学的分子及び細胞のエンドポイント(endpoints)を包含する、標準的エンドポイント評価の生体顕微鏡検査(intravital microscopy)は、本明細書に記述される諸アプローチと併せて利用することができる。
【００１１】
本発明の原理体系は、数多くの手順又は段階を含んでいる。該原理体系は、本明細書及び特許請求の範囲に記述される特定の装置並びに治療薬及び／又は他の薬剤に限定されないように理解されるべきである。
【００１２】
本発明は、１つの典型的な具体例によると、新生血管内膜の過形成に対するだけでなく、バルーンにより損傷したラット頚動脈の中の免疫組織化学的な血管細胞分裂周期の変化にも対する、局所的に施用される抗増殖性物質及び／若しくは他の治療薬の有効性を評価するための原理体系又はモデルに向けられている。本明細書に記述されるように、血管が損傷した後の再発狭窄症を減少させる場合の治療薬の有効性を評価するための数多くのモデルが開発されてきた。しかし、本発明は、ラット頚動脈がバルーンによって損傷した後に、局所的に施用または運搬される諸薬剤を評価するためのモデル装置であって、新生血管内膜の過形成を減少させるそれら薬剤の能力、及び血管細胞分裂周期の相に影響を及ぼすそれら薬剤の能力を求めるためのモデル装置に向けられている。加えて、本発明は、存在している誘発的且つ自発的な複数の潜在的ラット疾患モデルであって、糖尿病（Ｉ型及びII型）、アテローム性動脈硬化症、免疫学的に改変されたトランスジェニックス及びノックアウトを包含するラット疾患モデルに及ぶ。
【００１３】
前記のモデル又は原理体系は本質的に、３つの態様（即ち、治療薬運搬用賦形製剤；損傷誘発及び賦形剤導入を包含する外科的介入；並びに評価）を含んでいる。本明細書に記述されている典型的な具体例における１種以上の治療薬を導入するための様々な手段が存在しているが、それら治療薬は、プルロニックゲル(pluronic gels)を利用して運搬される。多くのプルロニックゲルは、ある温度（例えば、低温）では液体であり、より高い温度（例えば、体温）では非常に粘性の高いポリマーを形成する熱感受性ポリマーである。これらのポリマーは、腫瘍の中に直接注入を行うための、抗増殖剤の局所的運搬用デポー製剤(depots；貯留物)として利用されてきた［アミジ(Amiji)等, Pharm Dev Technol.，７（２），第１９５頁〜２０２頁（２００２年５月）］。
【００１４】
本発明は、薬剤又は作用剤を、ケースに入れるか又はケースに入れないで、損傷血管の外面又は外膜表面まで局所的に運搬するためにそのようなゲルを使用して、新生血管内膜の形成と他の細胞／分子のエンドポイントとに及ぼすそれら薬剤の影響を評価することを具現化する。本発明は更に、局所的薬物運搬装置(local drug delivery system)の使用方法を諸原理体系と組合せて、血管形態［例えば、新生血管内膜の形成；血管壁の中の細胞型が変化する、血管壁の細胞分裂周期の変化；並びに、血管が損傷した後の遺伝子発現（ｍＲＮＡ及びタンパク質）］に及ぼす、局所的に施用される薬物の影響をも評価する。
【００１５】
幾種類のプルロニックゲルをも配合することができることに注目することが重要である。以下に開示される典型的な具体例において、血管周囲に局所的施用を行うための、シロリムス(sirolimus)及びパクリタクセル(paclitaxel)を包含する治療薬又は薬剤の懸濁液を得るための、プルロニック(Pluronic)Ｆ１２７を配合する手順を詳述する。その典型的な具体例において、プルロニックゲルは、滅菌水中、２５重量％で配合する。該プルロニックゲルの濃度及び溶媒の組成は、特定の薬剤又は作用剤の、血管壁までの運搬特性に影響を及ぼすように部分修正することができる。加えて、該ポリマーは、所望の運搬仕様に適合するように取り替えることができる。
【００１６】
プルロニックＦ−１２７は、シグマ(Sigma)（Ｐ−２４４３，２５０ｇ，ロット１２１Ｋ００７０，ＢＡＳＦ）からのものを包含する数多くの出所から得ることができる。一旦プルロニックＦ−１２７を入手したら、滅菌脱イオン水を調製し、例えば氷で冷却する。次いで、１０ｇのプルロニックＦ−１２７を該滅菌脱イオン水と混合して、最終濃度１０ｇ／４０ｍｌを得る。混合工程の初期において、ポロキサマー（poloxamer）及び水は本質的に混和性に乏しいことに注目すべきである。しかし、滅菌したプラスチックピペット（例えば、１ｍｌの組織培養用ピペット）を利用する連続的撹拌によって、良好な混合工程が可能となる。プルロニックＦ−１２７は、連続的撹拌によって該冷却水に徐々に溶解して、透明であるが泡立っている溶液を生じる。プルロニックＦ−１２７の溶液は、次いで、脱泡を行うため、約６〜１２時間に及ぶ期間の間冷却する。脱泡された溶液は、今や、いつでも血管周囲への植え込み(implantation)が行える状態である。
【００１７】
運搬手段は、如何なるデバイスを有していても良い。運搬手段は、典型的な具体例において、図１に例示されるようなシラスティック管状物(silastic tubing)を有する。該シラスティック管状物３００は、長さが約１０ｍｍであり外径が約１．５ｍｍである。全内腔容積は、実験的測定によると、約２０μｌである。シラスティック管状物３００は、適切な如何なる長さをも有することができることに注目することが重要である。該管状物の長さは、切除された動脈の量によって決定される。該シラスティック管状物は、頚動脈の上に該管状物を配置するのを容易にするため、一方の端部に切れ込み(notch)３０２を有することがある。該シラスティック管状物は、次いで、手術を行う前、オートクレーブで処理する。該シラスティック管状物に、検査薬の懸濁液、溶液、又は懸濁液と溶液との組み合せを含有するプルロニックゲル約２０μｌを充填する。該シラスティック管状物の内部に入れるべきプルロニックゲル製剤は、滅菌先端部を有する調節可能２０μｌピペットを利用して、該シラスティック管状物の中に分散させる。プルロニック手段又はプルロニック薬剤溶液は、該シラスティック管状物の中にピペットで移して分散させる直前まで、氷の上に放置する。
【００１８】
該プロセスにおける次の段階は、外科的処置を含む。外科的介入を行う前、ラットに麻酔をかける。該ラットには、如何なる種類数の麻酔剤（吸入麻酔剤及び／又は注射可能麻酔剤）を利用して麻酔をかけてもよい。典型的な具体例において、ラットは、典型的には２５０〜４５０ｍｇの体重であるが、ケタミン(ketamine)／キシラジン(xylazine)／アセプロマジン(acepromazine)（５０／１０／１ｍｇ／ｋｇ）の混合物で麻酔をかける。ラットに麻酔をかけたら、頚部の中央部分の毛を剃る。その後、頚部を、先ず７０％のエタノール又はイソプロパノールで拭き取り、次いで、ポビドンヨード(povidone iodine)で拭き取り、次いで、７０％のエタノールで拭き取ることによって、消毒する。次いで、該ラットを胸部から滅菌ドレープ(drape)で巻き付け、次いで、約３７℃の温度に設定された加温パッドの上に置く。次いで、正中切開を行って、下に横たわっている腺及び筋肉組織を露出させる。外頚動脈の上に横たわっている唾液複合体(salivary complex)及び筋肉組織は、露骨に切り離して、左外頚動脈を露出させる。外頚動脈中の血流は、近位結紮糸（取り外し可能なループ）及び遠位結紮糸（永久的ループ）によって制御される。血流を制御するため、２Ｆフォガーティ静脈塞栓摘出用カテーテルを導入する動脈切開を行う。該カテーテルは、カテーテルシャフト上の第１の標識（約３ｃｍ）まで、近位へ外頚動脈を通って総頚動脈の中に進む。バルーンは、生理食塩水充填済みねじ込み気密のハミルトン(Hamilton)（登録商標）注射器を用いて膨張させ、次いで、僅かなねじり動作を用いながら、遠位へ総頚動脈を通って丁寧に引っ張る。一旦、総頚動脈がバルーンによって損傷すれば、該バルーンを収縮させ、次いで、バルーンによる損傷操作を、全部で３回繰り返す。バルーンによる損傷の後、該カテーテルは動脈切開によって回収し、近位の外頚動脈の結紮糸を永久的に結紮することによって出血を制御する。総頚動脈及び内頚動脈の脈動の確認を行う。
【００１９】
バルーンによる損傷の後、頚部領域内の左総頚動脈は、続いて、結合組織及び神経組織から丁寧に切り離す。次いで、シラスティック管状物は、上述のように、プルロニックＦ−１２７か、又はプルロニックＦ−１２７中の検査薬の懸濁液で充填する。次いで、該シラスティック管状物は、それの縦軸に沿ってスリット(slit；細長い穴)を有しているが、露出されている総頚動脈の外膜側の周囲に丁寧に導き、そうすることによって、血管周囲薬剤又はプルロニックＦ−１２７の運搬を開始する。次いで、上に横たわっている筋肉組織及び結合組織は、縫合糸を用いて修復し、また、皮膚の傷は、ステンレス鋼の縫合糸を用いて縫合される。縫合された傷はポビドンヨードで再び拭き取り、次いで、補液(fluid replacement)のため、皮下に滅菌生理食塩水５ｍｌを与える。ラットを、所望のエンドポイントに応じて、２１日間以下の間回復させる。
【００２０】
ラットは、新生血管内膜の過形成（所望の時点によって決まるが、１４〜２１日間）、又は免疫組織化学（所望のマーカー発現によって決まるが、１〜２１日間）を評価するため、ＡＶＭＡ２０００推奨に従い二酸化炭素に過剰暴露することによって、安楽死させる。呼吸が停止した時、該ラットの胸部を切開して、心臓を露出させる。右心房は切断し、左心房は通常生理食塩溶液で潅流して脱血させ、次いで、該左心房は中性緩衝ホルマリンで潅流して現場固定(in situ fixation)を行う。次いで、損傷した総頚動脈の処理済み領域は摘出し、また、血管周囲に配置したシラスティック管状物は除去する。次いで、該血管は、その後の組織標本及び組織形態計測分析のために、中性緩衝ホルマリンの中に保存する。
【００２１】
次いで、固定された血管は、パラフィン中に固定し、３つのレベルで薄片を作る。血管の諸薄片は、被覆されたガラススライドの上に載せて、ヘマトキシリン(hematoxylin)／エオシン(eosin)又はベルホッフ・ファン・ガイソン・弾性ステイン(Verhoff van Geisson elastic stain)で染色する。次いで、内腔領域、新生血管内膜領域及び内側(medial)領域は、対物ミクロメータを用いて較正されたコンピュータ化形態計測分析プログラムを使用して評価する。細胞増殖、アポトーシス、又は他の細胞標識の発現は、この方法を用いて得ることができる。この典型的な具体例において、細胞増殖及びアポトーシスは、抗増殖細胞核抗原(anti-Proliferating cell Nuclear Antigen)(PCNA)及びチューネル（ＴＵＮＥＬ）法(Terminal deoxynucleotide transferase-mediated dUTP nick-End labeling (TUNEL) immunohistochemistry)を用いて評価される。
【００２２】
血管細胞分裂周期を評価するためには、血管は、安楽死した非潅流ラットから１〜１０日間（更に好ましくは、３〜７日間）で摘出するのが好ましい（上述を参照されたい）。次いで、血管を、十字形外科用メス(crossed scalpels)を用いて徹底的に細断し、次いで、ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）／クエン酸塩／スクロースの凍結防止溶液の中に入れる。次いで、該ミンケート(mincate)は、スナップ・フリーズを行い(snap-frozen)、その後の分析を行うために−８０℃で保存した。分析を行う場合、ミンケートを、該ミンケートから細胞核を効果的に押し出すトリプシン／洗浄剤の溶液で処理する。消化(digestion)を終了させ、懸濁液を遠心分離機にかけ、次いで、結果として得られる核懸濁液は、ヨウ化プロピジウム(propidium iodide)で処理して、核ＤＮＡを有する蛍光複合体(fluorescent complex)を形成する。次いで、ヨウ化プロピジウムで染色された核懸濁液は、蛍光強度を定量するために壊死組織片(debris)及びダブレット核(doublet nuclei)を排除するようにゲートで制御されているフローサイトメータ(flow cytometer)の中に引き寄せる。結果として得られる蛍光は、各々の核のＤＮＡの量に比例する。細胞分裂周期のヒストグラムに関する後続の分析に対して、約１２,０００〜２０,０００の事象が得られる。ＭＯＤＦＩＴ細胞分裂周期分析アルゴリズムを用いて、ＤＮＡのヒストグラムを取得した後、細胞分裂周期の分析を行う。もう１つの方法として、他の細胞標識は、細断された血管の全細胞標本からフローサイトメータを用いて分析することができる。これは、平滑筋αアクチン、ＰＣＮＡ（増殖性細胞核抗原）、ＢｒｄＵ（ブロモデオキシウリジン）、Ｍａｃ−１、インテリン(interins)、細胞表面受容体、等を包含するが、それらに限定されない。
【００２３】
処理された損傷血管壁又は非損傷血管壁からのミンケートは、ＲＮＡ抽出と、その後の、定量的ＲＴ−ＰＣＲ（逆転写酵素−ポリメラーゼ連鎖反応法）及び／又は遺伝子チップ分析を用いた遺伝子発現とを行うことができる。
【００２４】
遺伝子の発現はまた、インサイチュー・ハイブリッド形成法(in situ hybridization)を使用し、次いで、フィルム・オートラジオグラフィー(film autoradiography)、エマルション・オートラジオグラフィーの蛍光［FISH］を使用して、スナップ・フリーズ処理済み／損傷血管又は非損傷血管の低温セクション(cryo-sections)で評価することができる。
【００２５】
タンパク質の発現は、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着検定法）又は他の分析法を使用して、細断された処理済み／損傷頚動脈又は非損傷頚動脈の組織学（免疫組織化学）によるか、又はタンパク質抽出によって評価することができる。
【００２６】
新生血管内膜の形成、細胞増殖、アポトーシス、及び細胞分裂周期変化との関連における、薬剤運搬装置を利用した関連データを、図２〜図７に例示する。図２は、損傷したラット頚動脈における新生血管内膜の過形成に及ぼす、シロリムス(sirolimus) 及びパクリタクセル(paclitaxel)の血管周囲施用の影響を例示する。図２に示されるように、血管周囲に施用されたシロリムス及びパクリタクセルは、損傷したラット頚動脈における新生血管内膜の形成を著しく減少させた。図２のデータは、平均±ＳＥＭ（標準誤差）として与えられている。図３は、ラット頚動脈のスライド画像を取り囲んでいる。第１のスライドには、損傷していない未処置頚動脈が示されている。次のスライドには、プルロニックゲルのみにさらされた損傷頚動脈が示される。このスライドから分かるように、該損傷は、かなりの量の新生血管内膜の形成を引き起こした。次のスライドには、プルロニックゲルと組合せたシロリムスで処置された損傷頚動脈が示される。該典型的な具体例では、シロリムス２００μｇが該プルロニックゲルに添加された。シロリムスを血管周囲に投与した結果、新生血管内膜の形成がかなり減少した。最後のスライドには、プルロニックゲルと組合せたパクリタクセルで処置された損傷頚動脈が示される。該典型的な具体例では、パクリタクセル２００μｇが該プルロニックゲルに添加された。シロリムスの場合そうであったように、クリタクセルが血管周囲に投与された場合、結果的に新生血管内膜の形成はかなり減少した。図４及び図５は、血管処置プロトコールに対する、細胞数及びＴＵＮＥＬ法によるＰＯＳ細胞数のグラフ表示である。これら２つの図は本質的に、損傷後７日目の損傷ラット頚動脈の内側のあらゆる増殖［図４、ＰＣＮＡ（増殖性細胞核抗原）、免疫組織化学］とアポトーシス［図５、ＴＵＮＥＬ法、免疫組織化学］とに及ぼす、シロリムス及びパクリタクセルの局所運搬の影響を例示している。損傷後７日目の新生血管内膜の増殖（ＰＣＮＡラベリング）は増大することに注目されたい。プルロニックゲル懸濁液に入っている２００μｇの濃度のシロリムス及びパクリタクセルは、新生血管内膜の増殖を著しく減少させる。血管周囲に投与量２００μｇで運搬されたトポテカン(Topotecan)は、新生血管内膜の増殖に及ぼす影響を実質的に有していない。データは、平均±ＳＥＭ（標準誤差）として与えられている。図６及び図７は、損傷後７日目においてフローサイトメータによって評価された、損傷したラット頚動脈の内部におけるアポトーシス核の数（図７）と血管壁細胞分裂周期（図６）とに及ぼす、シロリムス及びパクリタクセル（プルロニックゲル懸濁液に入っている２００μｇ）の血管周囲施用の影響のグラフ表示である。損傷によって、該細胞分裂周期のＳ相及びＧ２／Ｍ相の中の核の割合が増大するが、Ｇ０／Ｇ１相の中の核の割合は減少することに注目することが重要である。シロリムスの調和した作用機構と一致して、シロリムスは、Ｇ０／Ｇ１相中の核百分率を回復させるが、Ｓ相及びＧ２／Ｍ相の中の核の百分率を減少させる。核分裂停止剤のパクリタクセルによって、Ｇ０／Ｇ１中の細胞の百分率は増大する。図７において、パクリタクセルは、損傷血管壁中のアポトーシス細胞の��計百分率を増大させることが分かる。データは、平均±ＳＥＭ（標準誤差）として与えられている。
【００２７】
単独で又は植え込み可能な医療用具と組合せて利用することのできる治療薬及び薬剤の部分的な表には、ビンカアルカロイド(vinca alkaloids)［即ち、ビンブラスチン(vinblastine)、ビンクリスチン(vincristine)及びビノレルビン(vinorelbine)］、パクリタクセル、エピジポドフィロトクシン(epidipodophyllotoxins)［即ち、エトポサイド(etoposide)、テニポサイド(teniposide)］、抗生物質［ダクチノマイシン(dactinomycin)（アクチノマイシン(actinomycin D)）、ダウノルビシン(daunorubicin)、ドキソルビシン(doxorubicin)及びイダルビシン(idarubicin)］、アントラサイクリン(anthracyclines)、ミトキサントロン(mitoxantrone)、ブレオマイシン(bleomycins)、プリカマイシン(plicamycin)（ミトラマイシン（mithramycin））、マイトマイシン(mitomycin)、酵素(enzymes)（全身的にＬ−アスパラギンを代謝し、細胞自身のアスパラギンを合成する能力のない細胞を取り除くＬ−アスパラギナーゼ（L-asparaginase））、のような天然物を包含する抗増殖剤／細胞分裂抑制剤；Ｇ（ＧＰ）IIb／IIIa抑制剤及びビトロネクチン受容体拮抗薬(vitronectin receptor antagonists)、のような抗血小板剤；窒素マスタード［メクロレタミン(mechlorethamine)、シクロホスファミド(cyclophosphamide)及び類似体、メルファラン(melphalan)、クロランブシル(chlorambucil)、エチレンイミン及びメチルメラミン（ヘキサメチルメラミン(hexamethylmelamine)及びチオテパ(thiotepa)）、アルキルスルホン酸塩−ブスルファン(alkyl sulfonates-busulfan)、ニトロソウレア(nitrosoureas)（カルムスチン(carmustine)（ＢＣＮＵ）及び類似体、ストレプトゾシン(streptozocin)）、トリアゼン(triazenes)−ダカルバジニン(dacarbazinine)（ＤＴＩＣ）］、のような抗増殖アルキル化剤／細胞分裂抑制アルキル化剤；葉酸類似体［メトトレキセート(methotrexate)］、ピリミジン類似体［フルオロウラシル(fluorouracil)、フロクスウリジン(floxuridine)、及びシタラビン(cytarabine)］、プリン類似体及び関連抑制剤［メルカプトプリン(mercaptopurine)、チオグアニン(thioguanine)、ペントスタチン(pentostatin)、及び２−クロロデオキシアデノシン(2-chlorodeoxyadenosine)｛クラドリビン(cladribine)｝］、のような抗増殖代謝拮抗剤／細胞分裂抑制代謝拮抗剤；白金配位錯体［シスプラチン（cisplatin）、カルボプラチン（carboplatin）］、プロカルバジン（procarbazine）、ヒドロキシウレア（hydroxyurea）、ミトタン(mitotane)、アミノグルテチミド(aminoglutethimide)；ホルモン（例えば、エストロゲン）；抗凝血剤［ヘパリン、合成ヘパリン塩、及び他のトロンビン抑制物質］；線維素溶解薬（例えば、組織プラスノミノゲン（plasminogen）活性化因子、ストレプトキナーゼ（streptokinase）及びウロキナーゼurokinase））、アスピリン、ジピリダモール(dipyridamole)、チクロピジン(ticlopidine)、クロピドグレル(clopidogrel)、アブシキマブ(abciximab)；移動抑制薬(antimigratory)；分泌抑制薬(antisecretory)［ブレベルディン(breveldin)］；抗炎症薬：例えば、副腎皮質ステロイド［コルチゾール（cortisol）、コルチゾン（cortisone）、フルドロコルチゾン（fludrocortisone）、プレドニゾン（prednisone）、プレドニゾロン（prednisolone）、６α−メチルプレドニゾロン（6α-methylprednisolone）、トリアムシノロン(triamcinolone)、ベータメタゾン(betamethasone)、及びデキサメタゾン(dexamethasone)］、非ステロイド剤｛サリチル酸誘導体、即ち、アスピリン；パラアミノフェノール誘導体、即ち、アセト���ミノフェン；インドール酢酸及びインデン酢酸［インドメタシン(indomethacin)、スリンダク(sulindac)、及びエトダラク(etodalac)］、ヘテロアリール酢酸（heteroaryl acetic acids）（トルメチン（tolmetin）、ジクロフェナク（diclofenac）、及びケトロラク（ketorolac））、アリールプロピオン酸（arylpropionic acids）（イブプロフェン及び誘導体）、アントラニル酸（anthranilic acids）（メフェナム酸（mefenamic acid）、及びメクロフェナム酸（meclofenamic acid））、エノール酸（enolic acids）［ピロキシカム（piroxicam）、テノキシカム（tenoxicam）、フェニルブタゾン（phenylbutazone）、及びオキシフェンタトラゾン(oxyphenthatrazone)］、ナブメトン(nabumetone)、金化合物（オーラノフィン（auranofin）、アウロチオグルコース（aurothioglucose）、金チオリンゴ酸ナトリウム（gold sodium thiomalate））；免疫抑制薬：サイクロスポリン（cyclosporine）、タクロリムス(tacrolimus)（ＦＫ−５０６）、シロリムス(sirolimus)（ラパマイシン(rapamycin)）、アザチオプリン（azathioprine）、ミコフェノール酸モフェチル(mycophenolate mofetil)｝；血管新生促進剤(angiogenic agents)：血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）；アンギオテンシン（angiotensin）受容体ブロッカー；一酸化窒素供与体；オリギオヌクレオチド類(oligionucleotides)及びそれらの組合せ；細胞周期抑制剤、ｍＴＯＲ抑制剤、及び成長因子受容体情報伝達キナーゼ抑制剤(growth factor receptor signal transduction kinase inhibitors)；レチノイド(retenoids)；サイクリン(cyclin)／ＣＤＫ抑制剤；ＨＭＧ補酵素還元酵素阻害剤（スタチン(statins)）；並びに、タンパク質分解酵素抑制剤(protease inhibitors)；が包含される。
【００２８】
〔実施態様〕
（１）ラット頚動脈の病状を評価するための方法であって、
前記ラット頚動脈の内側の少なくとも１つの位置に血管内損傷を作り出す段階と、
前記損傷に関連する前記病状を評価する段階と、
を含む、評価方法。
（２）ラット頚動脈の治療法を評価するための方法であって、
前記ラット頚動脈の内側の少なくとも１つの位置に血管内損傷を作り出す段階と、
前記損傷動脈を処置する段階と、
前記の処置された損傷動脈に関連する病状と前記処置の有効性とを評価する段階と、
を含む、評価方法。
【００２９】
最も実用的であり且つ好ましい具体例であると思われるものが表示され記述されているものの、記述され表示されている特定の構想から逸脱したもの自体が、当業者の心に浮かび、しかも、本発明の思想及び範囲から逸脱することなく使用されることがあることは明らかである。本発明は、記述され例示されている特定の諸構成に限定されるのではなく、特許請求の範囲の中に含まれるあらゆる一部修正と一致するように構成されるべきである。
【図面の簡単な説明】
【００３０】
【図１】本発明による、血管周囲へ治療薬を運搬する手段の図示である。
【図２】本発明に従って、損傷したラット頚動脈の中の新生血管内膜の過形成に及ぼすシロリムス(sirolimus)及びパクリタクセル(paclitaxel)の血管周囲施用の影響のグラフ表示である。
【図３】本発明による処置を受けているラット頚動脈の中の新生血管内膜の形成を例示する一連のスライドである。
【図４】本発明による、損傷したラット頚動脈の内側の細胞増殖とアポトーシスとに及ぼす、シロリムス及びパクリタクセルの局所的施用の影響のグラフ表示である。
【図５】本発明による、損傷したラット頚動脈の内側の細胞増殖とアポトーシスとに及ぼす、シロリムス及びパクリタクセルの局所的施用の影響のグラフ表示である。
【図６】本発明による、損傷したラット頚動脈の内側の血管壁細胞分裂周期とアポトーシス核の数とに及ぼす、シロリムス及びパクリタクセルの血管周囲施用の影響のグラフ表示である。
【図７】本発明による、損傷したラット頚動脈の内側の血管壁細胞分裂周期とアポトーシス核の数とに及ぼす、シロリムス及びパクリタクセルの血管周囲施用の影響のグラフ表示である。
【符号の説明】
【００３１】
３００    シラスティック管状物
３０２    切れ込み
【図１】
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【図２】
2006142025.tif 000004
【図３】
2006142025.tif 000005
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【外国語明細書】
2006142025000001.pdf