(57)【要約】【課題】  これまで注目されなかったクズの花や蕾（以下葛花という）を原料とした、ヒトの病気の予防又は治療に有効な予防、治療剤を得ることを目的とする。【解決手段】  葛花乾燥物の抽出エキスからなるアルコール誘発性疾病予防、治療剤であって、（イ）葛花乾燥物を水と低級アルコールのいずれか一方又は両方からなる溶剤で抽出する工程、（ロ）この抽出液又はその濃縮液をカラムクロマトグラフィーにより分画する工程、（ハ）アルコール誘発性疾病予防又は治療効果を示す画分を回収する工程、及び（ニ）この回収した画分を濃縮乾燥する工程により製造する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
葛花乾燥物の抽出エキスからなるアルコール誘発性疾病予防、治療剤。
【請求項２】
葛花乾燥物がプエラリア・ロバータ（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｌｏｂａｔａ）又はプエラリア・トムソニイ（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｔｈｏｍｓｏｎｉｉ）に由来する葛花乾燥物である請求項１記載のアルコール誘発性疾病予防、治療剤。
【請求項３】
抽出エキスが水及び低級アルコールの中から選ばれた少なくとも１種の溶剤による抽出エキスである請求項１又は２記載のアルコール誘発性疾病予防、治療剤。
【請求項４】
低級アルコールがメタノール、エタノール、プロパノール又はブタノールの中から選ばれた少なくとも１種である請求項３記載のアルコール誘発性疾病予防、治療剤。
【請求項５】
イソフラボノイド、トリテルペノイドサポニン及びそれらの配糖体の中から選ばれた少なくとも１種を含有する請求項１ないし４のいずれかに記載のアルコール誘発性疾病予防、治療剤。
【請求項６】
イソフラボノイドがイリソリドン、バイオカニンＡ、ゲニステイン、グリシテイン又はテクトリゲニン及びそれらの配糖体である請求項５記載のアルコール誘発性疾病予防、治療剤。
【請求項７】
トリテルペノイドサポニンがカッカサポニンＩ、ソヤサポニンＩ、カイカサポニンＩＩＩ又はそれらのアグリコンである請求項５記載のアルコール誘発性疾病予防、治療剤。
【請求項８】
アルコール誘発性疾患がアルコール誘発性消化器系疾患である請求項１ないし７のいずれかに記載のアルコール誘発性疾病予防、治療剤。
【請求項９】
アルコール誘発性疾患が循環器系疾患である請求項１ないし７のいずれかに記載のアルコール誘発性疾病予防、治療剤。
【請求項１０】
（イ）葛花乾燥物を水と低級アルコールのいずれか一方又は両方からなる溶剤で抽出する工程、
（ロ）この抽出液又はその濃縮液をカラムクロマトグラフィーにより分画する工程、
（ハ）アルコール誘発性疾病予防又は治療効果を示す画分を回収する工程、及び
（ニ）この回収した画分を濃縮乾燥する工程
を含むことを特徴とするアルコール誘発性疾病予防、治療剤の製造方法。
【請求項１１】
（イ）工程における溶剤が水及び低級アルコールの中から選ばれた少なくとも１種である請求項１０記載のアルコール誘発性疾病予防、治療剤の製造方法。
【請求項１２】
（イ）工程を葛花乾燥物に対し１０〜５０倍体積量の溶剤を用い、抽出温度６０〜９５℃、抽出時間１〜２時間で行う請求項１０又は１１記載のアルコール誘発性疾病予防、治療剤の製造方法。
【請求項１３】
（ロ）工程をスチレン−ジビニルベンゼン共重合体系吸着剤、ポリスチレン系イオン交換体、トリフェニルメチルメタクリレート系吸着剤又はシリル化シリカゲル系逆相分離剤を充填したカラムを用いて行う請求項１０ないし１２のいずれかに記載のアルコール誘発性疾病予防、治療剤の製造方法。
【請求項１４】
（ロ）工程を溶出剤としてエタノール又は濃度７０％以上のエタノール水溶液を用いて行う請求項１０ないし１３のいずれかに記載のアルコール誘発性疾病予防、治療剤の製造方法。
【請求項１５】
（ニ）工程を減圧濃縮後、噴霧又は凍結乾燥することによって行う請求項１０ないし１４のいずれかに記載のアルコール誘発性疾病予防、治療剤の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、葛花を原料としたアルコール誘発性疾病、特にアルコール誘発性消化器疾病及び循環器系疾病の予防、治療剤及びその製造方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
マメ科の大形蔓性の多年草で、東アジアや東南アジアを中心として広く分布しているクズの根、いわゆる葛根は昔から漢方薬として利用されている。
【０００３】
しかしながら、このクズの花や蕾すなわち葛花は、清酒を目的として用いられていたが、その有効成分を効率よく分離するための適切な手段が見出されなかったため、各種疾病の治療剤としての系統的研究は行われておらず、葛花抽出物についてマウス血中のアルコール、アセトアルデヒド、ケトンの濃度を低下させること（非特許文献１参照）、ヒト血中のアセトアルデヒドの消失を促進すること（非特許文献２参照）が報告されているにすぎない。
【０００４】
一方、葛根については、その中に含まれている成分が血流コレステロールを減少させたり、冠動脈性心疾患の危険性を軽減したり、血液脂質プロフィルを調節する作用を有すること（特許文献１参照）や、葛根粉末を主成分とした骨粗鬆症治療剤や、これに果糖を配合して、二日酔症状の予防及び治療用に用いること（特許文献２参照）が提案されている。
【０００５】
【特許文献１】特開平１１−２２１０４８号公報（特許請求の範囲その他）
【特許文献２】特開平７−１９６５２４号公報（特許請求の範囲その他）
【非特許文献１】「薬学雑誌」、日本薬学会、１９８９年、第１０９巻、ｐ．４２４
【非特許文献２】「日本薬学会第１２１年会講演要旨集」、２００１年、ｐ．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、これまで注目されなかったクズの花や蕾（以下葛花という）を原料とした、ヒトの病気の予防又は治療に有効な予防、治療剤を得ることを目的としてなされたものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、葛花に含まれる成分の、ヒトの中枢器官に対する作用について種々研究を重ねた結果、葛花の乾燥物を水又は低級アルコール類あるいはこれらの混合物で抽出したエキスが、アルコールにより誘因された各種疾病、特に消化器系又は循環器系疾病に対し優れた予防、治療効果を示すことを見出し、この知見に基づいて本発明をなすに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、葛花乾燥物の抽出エキスからなるアルコール誘発性疾病予防、治療剤、及び
（イ）葛花乾燥物を水と低級アルコールのいずれか一方又は両方からなる溶剤で抽出する工程、
（ロ）この抽出液又はその濃縮液をカラムクロマトグラフィーにより分画する工程、
（ハ）アルコール誘発性疾病予防又は治療効果を示す画分を回収する工程、及び
（ニ）この回収した画分を濃縮乾燥する工程
を含むことを特徴とするアルコール誘発性疾病予防、治療剤の製造方法を提供するものである。
【０００９】
次に、本発明をさらに詳細に説明する。
本発明のアルコール誘発性疾病予防、治療剤（以下単に本発明治療剤という）は、葛花すなわちクズの花や蕾を乾燥したものを原料として用いて得られるが、このクズは、マメ科の大形蔓性の多年草であって、東アジアや東南アジアを中心にして広く分布している。
【００１０】
本発明の原料としては、クズの中のどのような種のものを用いてもよく、制限はないが、特にプエラリア・ロバータ（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｌｏｂａｔａ）又はプエラリア・トムソニイ（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｔｈｏｍｓｏｎｉｉ）が好適である。
【００１１】
本発明の治療剤は、このクズの花又は蕾を乾燥したのち、これを抽出した抽出エキスからなっている。この抽出の際に用いる溶剤としては水のみでもよいが、薬理作用の大きい抽出エキスを得るには低級アルコール例えばメタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールの単独又はこれと水との混合物、特に濃度７０％以上のエタノール水溶液を用いるのがよい。
【００１２】
この抽出エキスは、所望ならばその溶液状のものをそのまま用いることができるが、抽出エキスを濃縮、乾燥して白色粉末状にしたものが、製剤しやすい点で好ましい。
【００１３】
このようにして得られる葛花には、イリソリドン、バイオカニンＡ、ゲニステイン、グリシテイン、テクトリゲニンのようなイソフラボノイド又はその配糖体や、カッカサポニンＩ、ソヤサポニンＩ、カイカサポニンＩＩＩのようなトリテルペノイドサポニン又はそのアグリコンなどの活性物質が含まれている。
【００１４】
本発明の治療剤は、原料の葛花乾燥物から、以下に示す（イ）〜（ニ）の工程を経て調製することができる。
（イ）葛花乾燥物を水と低級アルコールのいずれか一方又は両方からなる溶剤で抽出する工程、
（ロ）この抽出液又はその濃縮液をカラムクロマトグラフィーにより分画する工程、
（ハ）アルコール誘発性疾病予防又は治療効果を示す画分を回収する工程、及び
（ニ）この回収した画分を濃縮乾燥する工程。
【００１５】
上記の（イ）工程における溶剤としては、水又は低級アルコール例えばメタノール、エタノール、プロパノール又はブタノールが用いられる。これらの溶剤は単独で用いてもよいし、２種以上混合して用いてもよい。
【００１６】
好ましい溶剤は、水単独又はエタノール濃度３０％以下の水とエタノールとの混合物である。この（イ）工程は、葛花乾燥物の質量に対して１０〜５０倍量の溶剤を加え、温度６０〜９５℃に加熱しながら１〜２時間抽出処理することによって行われる。
このようにして、淡黄色の抽出液が得られるが、これは所望に応じ３００メッシュ又はそれよりも細かい篩目の金網でろ過して固形物を除去したのち、次工程に付する。
【００１７】
次に（ロ）工程は、クロマトグラフィーにより分画して活性成分を含む画分を得る工程である。この場合、前工程で得た抽出液をそのまま処理してもよいが、多量の抽出溶剤を用いた場合は、所望により１／２〜１／１０の量になるまで濃縮したのち処理することもできる。
【００１８】
このクロマトグラフィーによる画分は通常の分画クロマトグラフィーの場合と同様に、充てん剤を詰めたカラムに抽出液を通したのち、溶離液を通して展開し、溶出することによって行うことができる。
【００１９】
この際、充てん剤としては、通常の全多孔性アルミナ、全多孔性シリカゲル保持体、表面多孔性シリカゲル保持体などの吸着用又は逆相分離用充てん剤、イオン交換体も用いることができるが、特に分取クロマトグラフィー用充てん剤として調製された吸着用、逆相用又は分配用充てん剤が好適である。
【００２０】
このようなものとしては、例えば関東化学社試薬事業本部から商品名「Ｌｉ  Ｃｈｒｏｐｒｅｐ  Ｓｉ４０」として市販されている全多孔性シリカゲル、商品名「Ｌｉ  Ｃｈｒｏｐｒｅｐ  ＲＰ−８」として市販されている逆相用全多孔性化学結合型シリカゲル、商品名「Ｌｉ  Ｃｈｒｏｐｒｅｐ  Ｄ１０Ｌ」として市販されている分配用全多孔性化学結合型シリカゲル、日本ウォーターズリミテッド社から商品名「ＰＲＥＰ−ＰＡＫＳｉｌｉｃａ」として市販されている吸着用全多孔性シリカゲル、ローム・アンド・ハース社から商品名「アンバーライトＸＡＤ１６ＨＰ」として市販されている吸着分離体、三菱化学社より商品名「ダイヤイオンＨＰ２０」として市販されている吸着分離体、和光純薬社から商品名「Ｗａｋｏｇｅｌ  １００Ｃ１８」として市販されているオクタデシルシリル化シリカゲルのようなシリル化シリカゲル系逆相分離剤やスチレン−ジビニルベンゼン共重合体系吸着剤、ポリスチレン系イオン交換体、トリフェニルメチルメタクリレート系吸着剤などが好適である。
【００２１】
（ロ）工程は、これらの充てん剤を詰めたカラムに、（イ）工程で得た抽出液又はその濃縮液を通して、活性物質を充てん剤に吸着させたのち、展開させ、溶出させる。この際の移動相すなわち展開及び溶出させるための溶剤としては、エタノール単独又は濃度７０％以上のエタノール水溶液が好ましい。この際の移動相流速としては、５０〜５００ｍｌ／分の範囲内が選ばれる。
このようにして、カラムから溶出してくる液を、例えばフラクションコレクターを用いて分取し、所要の画分を得る。
【００２２】
次いで、（ハ）工程において、このようにして得た画分について、アルコール誘発性疾病に対する予防、治療効果の試験を行い、効果を示す画分を回収する。
【００２３】
（ニ）工程においては、このようにして回収した活性を示す画分から、必要に応じろ過又は遠心分離して不溶分を除去したのち、減圧下で濃縮し、その濃縮液を噴霧乾燥する。この際の濃縮は、噴霧乾燥を容易にするために行うのであるから、場合によっては省略することもできる。また、噴霧乾燥の代りに凍結乾燥することもできる。
このようにして、所望のアルコール誘発性疾病予防、治療剤が褐色粉末として得られる。
【００２４】
本発明の治療剤は、これに経口用賦形剤を配合し、常法に従って調製することにより、経口用製剤とすることができる。この製剤の剤形としては、液剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、錠剤、トローチ剤、カプセル剤、丸剤などがある。
【００２５】
この際に用いる賦形剤としては、例えばヨウ化ナトリウム、酸化マグネシウム、ケイ酸アルミニウム、炭酸水素ナトリウム、タルク、ホウ酸などの無機系賦形剤、ブドウ糖、乳糖、デンプン、ゼラチン、アラビアゴム、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウム、ポリエチレングリコール、塩化ベンザルコニウム、シロップ、レモン油、ユーカリ油、エタノールなどの有機系賦形剤を挙げることができる。
【００２６】
本発明の治療剤は、体重１ｋｇ当り１０〜５００ｍｇを１日２〜３回に分けて投与するが、この投与量は症状の軽重に応じて適宜増減することが必要である。
このようにして、本発明の治療剤を投与することにより、アルコールにより誘発された各種疾病、特に消化器系疾病及び循環器系疾病を効果的に予防又は治療することができる。
【発明の効果】
【００２７】
本発明によれば、これまで適切な経口投与手段がなく、また中枢作用に対する影響が知られていなかったため利用されていなかった葛花を原料として、アルコール誘発性疾病に対し、優れた予防薬あるいは治療効果を有するアルコール誘発性疾病患者のための治療薬が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２８】
次に、実施例により、本発明を実施するための最良の形態を説明するが、本発明はこれらの例によってなんら限定されるものではない。
【実施例１】
【００２９】
乾燥した葛花（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｌｏｂａｔａ  Ｏｈｗｉ）３ｋｇに水６０リットルを加え、９０℃で１時間かき混ぜながら抽出した後、金網を通してろ過し、さらに高速遠心分離して抽出液を調製した。予めエタノール、次いで水を用いてステンレス鋼管に充てんした吸着樹脂（ローム・アンド・ハース社製、商品名「アンバーライトＸＡＤ１６ＨＰ」）に負荷させて目的物質を吸着させ、水洗後、エタノールで目的物質を溶離した。
目的画分を約７０μｍの間隔で精ろ過した後、減圧下で約１／３量まで濃縮、当該濃縮液を噴霧乾燥することにより、アルコール誘発性疾病予防、治療剤９６ｇを褐色粉末として回収した。
この物質５０ｍｇに水２５ｍｌを加え溶解し、さらにメタノールを加え５０ｍｌとした溶液をろ過しその１０μｌを高速液体クロマトグラフィー（以下ＨＰＬＣと略す）で定量したところ、カッカライド４３．３％含有することが確認された。
また、このメタノール抽出液を薄層クロマトグラフィー（以下ＴＬＣと略す）で分析したところ、トリテルペノイドサポニンのスポットが確認された。
【実施例２】
【００３０】
乾燥した葛花（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｌｏｂａｔａ  Ｏｈｗｉ）３ｋｇに２０％エタノール６０リットルを加え、８５℃で１時間かき混ぜながら抽出した後、金網を通してろ過し、さらに高速遠心分離して抽出液を調製した。予めアルコール、次いで水でステンレス鋼管に充てんした吸着樹脂（三菱化学社製、商品名「ダイヤイオンＨＰ２０」）に負荷させて目的物質を吸着させ、水洗後、エタノールで目的物質を溶離した。
目的画分を約７０μｍの間隔で精ろ過した後、減圧下で約１／３量まで濃縮、当該濃縮液を噴霧乾燥することにより、アルコール誘発性疾病予防、治療剤約１７０ｇを褐色粉末として回収した。
この物質５０ｍｇにメタノール５ｍｌを加え溶解し、さらにメタノールを加え５０ｍｌとした溶液をろ過しその１０μｌをＨＰＬＣで定量するとカッカライド４３．１％含有することが確認された。
また、このメタノール抽出液をＴＬＣで分析したところ、トリテルペノイドサポニンのスポットが確認された。
【実施例３】
【００３１】
乾燥した葛花（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｌｏｂａｔａ  Ｏｈｗｉ）２ｋｇに１０％エタノール４０リットルを加え、９０℃で１時間かき混ぜながら抽出した後、金網を通してろ過し、さらに高速遠心分離して抽出液を調製した。次に、この抽出液を予めエタノール、次いで１０％エタノールでステンレス鋼管に充てんしたオクタデシルシリル化シリカゲルに負荷させて目的物質を吸着させ、８０％エタノールで目的物質を溶離した。
目的画分を約７０μｍの間隔で精ろ過した後、減圧下で約１／３量まで濃縮したのち、当該濃縮液を噴霧乾燥することにより、アルコール誘発性疾病予防、治療剤約６１ｇを褐色粉末として回収した。
この物質５０ｍｇに水２５ｍｌを加え溶解し、さらにメタノールを加え５０ｍｌとした溶液をろ過し、その１０μｌをＨＰＬＣで定量したところ、カッカライド４６．２％含有することが確認された。
また、このメタノール抽出液をＴＬＣで分析したところ、トリテルペノイドサポニンのスポットが確認された。
【実施例４】
【００３２】
乾燥した葛花（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｔｈｕｎｂｅｒｇｉａｎａ  Ｂｅｎｔｈ）２ｋｇに１０％エタノール４０リットルを加え、９０℃で２時間かき混ぜながら抽出した後、金網を通してろ過し、さらに高速遠心分離して抽出液を調製した。この抽出液を予めエタノール、次いで水でステンレス鋼管に充てんした実施例１で用いたのと同じ吸着樹脂に負荷させて目的物質を吸着させ、エタノールで目的物質を溶離した。
目的画分を約７０μｍの間隔で精ろ過した後、減圧下で約１／３量まで濃縮し、この濃縮液を噴霧乾燥することにより、アルコール誘発性疾病予防、治療剤約１０１ｇを褐色粉末として回収した。
この物質５０ｍｇに水２５ｍｌを加え溶解し、さらにメタノールを加え５０ｍｌとした溶液をろ過し、その１０μｌをＨＰＬＣで定量したところ、テクトリジン１３．１％、テクトリゲニン７‐Ｏ‐キシロシルグルコサイド１４．８％を含有することが確認された。
また、このメタノール抽出液をＴＬＣで分析したところ、トリテルペノイドサポニンのスポットが確認された。
【実施例５】
【００３３】
乾燥した葛花（Ｐｕｅｒａｒｉａ  ｔｈｕｎｂｅｒｇｉａｎａ  Ｂｅｎｔｈ）１５０ｋｇに２０倍量の熱湯を加え、９５℃で２時間かき混ぜながら抽出した後、金網を通してろ過し、抽出液を濃縮し、その濃縮物を噴霧乾燥することにより、約４０ｋｇの乾燥エキスを得た。次いで、このエキス末４０ｋｇを７倍量の温湯で再溶解し、不溶部を高速遠心分離で除き、先ずエタノール、次いで水でステンレス鋼管に充てんした実施例２で用いたのと同じ吸着樹脂に負荷させて目的物質を吸着させ、水洗後、薄めたエタノール約６００リットルで目的物質を溶離した。
目的画分を約７０μｍで精ろ過した後、減圧下で約１／３量まで濃縮し、この濃縮液を噴霧乾燥することにより、アルコール誘発性疾病予防、治療剤約６．１ｋｇを褐色粉末として回収した。
この物質５０ｍｇに水２５ｍｌを加えて溶解し、さらにメタノールを加えて、全量５０ｍｌとしたのち、ろ過して不溶分を除去した。このろ液の１０μｌをＨＰＬＣで定量したところ、テクトリジン１１．６％、テクトリゲニン‐Ｏ‐キシロシルグリコシド１２．５％を含有することが確認された。
また、このメタノール抽出液をＴＬＣで分析したところ、トリテルペノイドサポニンのスポットが確認された。
【実施例６】
【００３４】
実施例１で回収したアルコール誘発性疾病予防、治療剤を用いて、アルコール誘発性代謝異常症に対する治療効果を以下のとおり試験した。
ｄｄＹ系７週令雄性マウスにアルコール誘発性疾病予防、治療剤１ｇ／ｋｇを経口的に投与し、その６０分後に５０％エタノール５ｇ／ｋｇを経口投与した。エタノール投与４時間後に頚椎脱臼により屠殺し採血を行った。採血した血液は遠心分離（３０００ｒ．ｐ．ｍ．×１０分）後血清を分離し、血清中のトリグリセリド、尿素窒素を定量し対照群と比較した。トリグリセリドの定量は酵素法で、尿素窒素の定量はウレアーゼインドフェノール法で行った。
なお、アルコール誘発性疾病予防、治療剤は１％アラビアゴムを溶媒として懸濁し、対照群はこの治療剤の代わりに１％アラビアゴム液を、正常群はこの治療剤及びエタノールの代わりに１％アラビアゴム液及び精製水を体重１０ｇ当り０．１ｍｌの割合で投与した。その結果を表１に示す。
【００３５】
【表１】
2006206557.tif 000002
【００３６】
アルコールの投与により血清中のトリグリセリド及び尿素窒素は正常値に比べて有意な上昇が認められた。治療剤で前処置すると、このような上昇したトリグリセリド及び尿素窒素を有意に抑制した。
【００３７】
これらの結果から、本発明治療剤はアルコールによる代謝異常の中でもトリグリセリドや尿素窒素の上昇を改善することが分った。すなわち、本発明治療剤はアルコールによる高トリグリセライド血症、及び高尿素窒素血症の改善作用を有することが確認された。
【実施例７】
【００３８】
実施例２で回収したアルコール誘発性疾病予防、治療剤を用いて、アルコール誘発性肝障害による高血糖症に対する治療効果を以下のとおり試験した。
１夜絶食したｄｄＹ系７週令雄性マウスに上記治療剤を腹腔内に投与し、その３０分後に２５％エタノール５ｇ／ｋｇを腹腔内投与した。エタノール投与１８時間後に頚椎脱臼により屠殺し採血を行った。採血した血液は遠心分離（３０００ｒ．ｐ．ｍ．×１０分）後血清を分離し、血清中のグルコースを定量し対照群と比較した。
グルコースの定量は酵素法にて行った。また、治療剤及びエタノールは生理食塩液に溶解し、対照群は治療剤の代わりに生理食塩液を、正常群は治療剤及びエタノールの代わりに生理食塩液を投与した。なお、治療剤は体重１０ｇ当り０．１ｍｌの割合で投与した。その結果を表２に示す。
【００３９】
【表２】
2006206557.tif 000003
【００４０】
アルコールの投与により肝機能のマーカーである血清ＡＳＴ／ＡＬＴの上昇が認められ、肝障害が示唆された際に、血清グルコースについても正常値に比べ有意な上昇が認められた。アルコール誘発性疾病予防、治療剤で前処置すると、このようなグルコースの上昇を抑制する傾向がみられた。特に治療剤２００ｍｇ／ｋｇの前処置では対照群に比べて有意差が認められた。
以上の結果より、本発明のアルコール誘発性疾病予防、治療剤はアルコール誘発性肝障害による高血糖を改善することが分る。
【実施例８】
【００４１】
実施例３で回収したアルコール誘発性疾病予防、治療剤を用いて、塩酸とエタノールにより誘発された胃粘膜損傷に対する治療効果を以下のとおり試験した。
２４時間絶食させたＳＤ（Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ）系６週令雄性ラットへ葛花抽出物を投与し、１時間後に１５０ｍＭ／６０％エタノールを１ｍｌ／ラットの割合で経口投与した。塩酸／エタノール投与１時間後にエーテルで致死させ胃を摘出した。摘出した胃は２％ホルマリン１０ｍｌで固定した後、大湾に沿って切開し１０倍の実体顕微鏡下で個々の胃における胃粘膜損傷の長さの総和を計測し、対照群と比較した。
なお、治療剤はツイーン８０（Ｔｗｅｅｎ８０）と１％カルボキシメチルセルロースナトリウム（以下ＣＭＣ−Ｎａと略す）（１：１９）の混合液に懸濁し、体重１００ｇ当り０．５ｍｌの割合で投与し、また対照群は１％ＣＭＣ−Ｎａのみを投与した。
得られた結果を表３に示す。
【００４２】
【表３】
2006206557.tif 000004
【００４３】
この表から、治療剤の投与により用量依存的に塩酸／エタノール胃粘膜損傷を抑制する傾向が認められた。以上の結果、本発明のアルコール誘発性疾病予防、治療剤は塩酸／エタノール胃粘膜損傷に対する抑制作用を示していることから、胃粘膜保護作用を示すことが分る。
【実施例９】
【００４４】
実施例４で回収したアルコール誘発性疾病予防、治療剤を用いて、マウス急性アルコール性中毒に対する予防効果を以下のとおり試験した。
１６時間絶食させたｄｄＹ系６週令雄性マウスへ治療剤を腹腔内投与し、３０分後に２５％エタノール７．５ｇ／ｋｇを腹腔内投与した。エタノール投与後２４時間後のマウスの生死の有無を確認し、生存率を算出し、対照群と比較した。なお、治療剤は生理食塩液に溶解し体重１０ｇ当り０．１ｍｌの割合で投与した。また対照群は治療剤の代わりに生理食塩液を投与した。
得られた結果を表４に示す。
【００４５】
【表４】
2006206557.tif 000005
【００４６】
この表に示すように、エタノール７．５ｇ／ｋｇの投与２４時間後の生存率は７．５％で９２．５％の死亡が確認された。一方、本発明治療剤１２．５ｍｇ／ｋｇ〜２００ｍｇ／ｋｇで前処理すると、用量依存的に生存率の上昇がみられた。
特に１００ｍｇ／ｋｇ及び２００ｍｇ／ｋｇ投与群では有意差が認められた。
以上の結果、本発明治療剤はアルコールによる致死を低下させ、急性アルコール中毒を軽減することが分る。
【００４７】
以上のほか、本発明治療剤は、次のような薬理効果を有する。
【００４８】
参考例１
実施例１で回収した本発明治療剤を用いて高脂血症上昇抑制試験を行った。
ＩＣＲ系６週令雄性マウスを実験に使用した。マウス３０匹を３群に分け、第１群には普通食を、第２群及び第３群へは高脂肪食並びにこの高脂肪食へ本発明治療剤を０．４％添加した飼料を１か月間摂取させ、最終日に２時間絶食させた後、頚椎脱臼にて屠殺し、血液採取後血清を分離した後、インドメタシン５×１０−９ｍｏｌを含むＰＢＳで希釈後、分離した血清をＡｍｐｒｅｐ  Ｃ２カラムに付し、妨害物質を除去し蟻酸メチルでトロンボキサンＢ2（ＴＸＢ2）を抽出後、血清ＴＸＢ2濃度をＥＬＳＩＡ法（Ｃａｙｍａｎ製）により定量した。
上記の高脂肪食は、コレステロール２％、コール酸１％、カゼイン２０％、ショ糖４９％、硬化油（コーン油）１２％、セルロース４％、ビタミン及びミネラル４％、乾燥魚粉８％の組成からなる。
得られた結果を表５に示す。
【００４９】
【表５】
2006206557.tif 000006
【００５０】
この表から分るように、高脂肪食の長期摂取でＴＸＢ2は有意に上昇し、本発明治療剤の投与によりこの上昇は有意に抑制される。
【００５１】
トロンボキサンＢ2はトロンボキサンＡ2は半減期が極めて短く不安定であるため、生体内のこの物質の量を知る為には、その代謝産物であるトロンボキサンＢ2を定量することによって推量できる。トロンボキサンＡ2は血液凝固を促進し血栓形成を誘発する物質であり、血清中のトロンボキサンＡ2含量を低下させることが血栓形成の予防につながる。
したがって、代謝産物トロンボキサンＢ2含量の低下はトロンボキサンＡ2含量の低下を意味し、血栓形成の低下とみなすことができる。
以上の点を考慮すると上述のデータは高脂肪食の長期摂取により高トロンボキサン血症を生じ、血栓形成促進が誘発されるのに対し、本発明治療剤の併用によりトロンボキサンＢ2濃度が低下し血栓形成が抑制されたものと考えられる。
以上の結果から、本発明治療剤は高トロンボキサン血症を予防し血栓の形成を予防改善することができることが分る。
【００５２】
参考例２
実施例１で回収した本発明治療剤を用いて、消化管輸送能に対する作用を以下のとおり試験した。
１６時間絶食したｄｄＹ系６週令雄性マウスへ本発明治療剤を投与し、５分後に５％炭素末を経口投与した。５％炭素末投与２０分後に屠殺し、小腸を摘出し全小腸に対する炭素末の移動長である消化管輸送率を算出した。なお、本発明治療剤はツイーン８０（Ｔｗｅｅｎ８０）と５％アラビアゴム（１：１９）の混液に、炭素末は５％アラビアゴム溶液にそれぞれ懸濁し、体重１０ｇ当り０．１ｍｌの割合で経口投与した。また、対照群は溶媒のみを投与した。
得られた結果を表６に示す。
【００５３】
【表６】
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【００５４】
この表から、本発明治療剤は２５ｍｇ／ｋｇ及び１００ｍｇ／ｋｇの用量で、非投与群に比べて消化管輸送能を有意に促進することが分る。
【００５５】
参考例３
実施例１で回収した本発明治療剤を用いてＬ−ｄｏｐａにより消化管輸送能低下の賦活作用についての試験を次のようにして行った。
８−１６時間絶食したｄｄＹ系６週令雄性マウスを実験に使用した。Ｌ−ｄｏｐａ３００ｍｇ／ｋｇを皮下投与し、３０分後に５％アラビアゴムに懸濁した５％炭素末を体重１０ｇ当り０．１ｍｌの割合で経口投与した。炭素末投与２０分後に頚椎脱臼にて屠殺し、全小腸に対する炭素末の移動長である消化管輸送率を算出した。被検薬物はツイーン８０（Ｔｗｅｅｎ  ８０）と５％アラビアゴム（１：１９）の混液に懸濁し、５％炭素末投与５分前に経口投与した。なお、対照群は溶媒のみを投与した。
得られた結果を表７に示す。
【００５６】
【表７】
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【００５７】
Ｌ−ｄｏｐａによる消化管輸送能の低下したマウスにおいても本発明治療剤は５０ｍｇ／ｋｇの用量で低下した輸送能を９８．５４％まで回復し、１００ｍｇ／ｋｇにおいては正常よりもさらに４６．２％まで促進させ、正常マウスの輸送能促進作用が確認された。
以上の結果から、本発明治療剤に消化管輸送能の促進作用が認められるとともに、消化管運動機能低下も改善することから、消化管運動賦活作用が認められた。
【産業上の利用可能性】
【００５８】
本発明治療剤は、アルコール誘発性の消化器系及び循環器系の疾病患者の治療剤として有用であり、またその他の疾病治療患者に対しても有効であるので、種々の医薬として利用することができる。