(57)【要約】      （修正有）【課題】選択的エストロゲン受容体修飾因子及びアロマターゼ阻害剤の組み合わせよりなる医薬組成物及び治療方法の提供。【解決手段】2-(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-l-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及びアロマターゼ阻害剤の組み合わせを、それを必要とする患者に投与することからなる治療方法。特にアロマターゼ阻害剤としては、アミノグルテチミド；フォルメスタン；アタメスタン；アナスタゾール；ファドロゾール；フィンロゾール；レトロゾール；ボロゾール；4-[N-(4-ブロモベンジル)-N-(4-シアノフェニル)アミノ]-4H-1,2,4-トリアゾール又はエキセメスタン又はその薬学的に許容し得る塩から選択される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール、その薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及びアロマターゼ阻害剤、その薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグを含有する医薬組成物。
【請求項２】
追加的に製剤用担体又は希釈剤を含有する請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
アロマターゼ阻害剤がアミノグルテチミド；フォルメスタン；アタメスタン；アナストラゾール；ファドロゾール；フィンロゾール；レトロゾール；ボロゾール；4-[N-(4-ブロモベンジル)-N-(4-シアノフェニル)アミノ]-4H-1,2,4-トリアゾール又はエキセメスタン又はその薬学的に許容し得る塩から選択される請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項４】
アロマターゼ阻害剤がエキセメスタンである請求項３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オールがそのＤ−酒石酸塩の形であり、そしてアロマターゼ阻害剤がエキセメスタンである請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
治療的に有効な量の(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及びアロマターゼ阻害剤又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグを治療を必要とする患者に投与することからなる、患者の老年性骨粗しょう症、閉経後骨粗しょう症、骨折、骨移植、乳癌、卵巣癌、肥満、骨減少症、男性骨粗しょう症、薄弱性、筋肉損傷又は筋肉減少症の治療方法。
【請求項７】
(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及びアロマターゼ阻害剤が経口的に投与される請求項６に記載の方法。
【請求項８】
乳癌を治療する請求項６に記載の方法。
【請求項９】
アロマターゼ阻害剤がアミノグルテチミド；フォルメスタン；アタメスタン；アナスタゾール；ファドロゾール；フィンロゾール；レトロゾール；ボロゾール; 4-[N-(4-ブロモベンジル)-N-(4-シアノフェニル)アミノ]-4H-1,2,4-トリアゾールもしくはエキセメスタン、又はその薬学的に許容し得る塩から選択される請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
アロマターゼ阻害剤がエキセメスタンである請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
乳癌を治療する請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
治療的に有効な量の(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール、Ｄ−酒石酸塩、及び治療的に有効な量のエキセメスタンを治療を必要とする患者に投与することからなる、乳癌の治療方法。
【請求項１３】
治療的に有効な量の(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール、Ｄ−酒石酸塩、及び治療的に有効な量のエキセメスタンを治療を必要とする患者に投与することからなる、患者の乳癌を治療しかつ患者の骨量を維持する方法。
【請求項１４】
治療的に有効な量の(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール、Ｄ−酒石酸塩、及び治療的に有効な量のエキセメスタンを治療を必要とする患者に投与することからなる、患者の骨量を維持しながら乳癌及び膣萎縮症を治療する方法。
【請求項１５】
治療的に有効な量の(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール、Ｄ−酒石酸塩、及び治療的に有効な量のエキセメスタンを治療を必要とする患者に投与することからなる、患者の乳癌を治療し関節痛を改善する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医薬組成物、及び選択的エストロゲン受容体修飾因子及びアロマターゼ阻害剤又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグの組み合わせをそれを必要とする患者に投与することからなる治療方法に関する。特に、本発明は医薬組成物、及び(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及びアロマターゼ阻害剤又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグをそれを必要とする患者に投与することからなる治療方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
引用によりここに組み込まれる米国特許第5,552,412号には、式：
【化１】
2006306872.tif 000002
（式中の可変部位はそこに定義されている）のＳＥＲＭ化合物が記載されている。シス-6-フェニル-5-(4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル)-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール、及びさらに特別には(−)-シス-6-フェニル-5-(4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル)-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オールは、経口的に活性な高度に有効なＳＥＲＭであり、これは骨減少を防止し、血清総コレステロ−ルを減少し、且つＯＶＸラットにおいてエストロゲン様子宮刺激作用を持たない。米国特許第6,204,286号（これも引用によりここに組み込まれる）には、実質的に純粋な(−)-シス-6-フェニル-5-(4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル)-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オールを開示している。米国特許第5,948,809号（これも引用によりここに組み込まれる）には、(−)-シス-6-フェニル-5-(4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル)-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール、酒石酸塩を開示している。２００１年４月１１日に出願された米国特許出願第09/833,169号は、前述の式のシス-6-フェニル-5-(4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル)-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オールのような化合物で女性の性的機能不全を治療する方法を開示している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明は選択的エストロゲン受容体修飾因子である(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及びアロマターゼ阻害剤又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグの組み合わせを用いる医薬組成物及び治療法を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は化合物(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及びアロマターゼ阻害剤又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグを含有する医薬組成物を提供する。本発明の特別の態様は、(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及びアロマターゼ阻害剤又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグを含有する医薬組成物であり、ここにおいてアロマターゼ阻害剤は、アミノグルテチミド；フォルメスタン；アタメスタン；アナストラゾール；ファドロゾール；フィンロゾール；レトロゾール；ボロゾール；4-[N-(4-ブロモベンジル)-N-(4-シアノフェニル)アミノ]-4H-1,2,4-トリアゾール又はエキセメスタンとしても知られている6-メチレンアンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグから選択される。さらに特定的には、本発明は(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及びエキセメスタン又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグを含有する医薬組成物を提供する。
【０００５】
本発明は、また骨代謝病、老人性骨粗しょう症、閉経後骨粗しょう症、ステロイド誘発性骨粗しょう症、低骨ターンオーバー骨粗しょう症、骨軟化症、腎性骨ジストロフィー、変形性関節症、リューマチ様関節炎、骨折、骨移植、しわ、卵巣癌、グリオーマ、 腎細胞癌、肝臓癌、大腸癌、乳癌、前立腺癌、肥満、骨減少症、男性骨粗しょう症、性機能不全症、男性更年期、薄弱性、筋肉損傷、筋肉減少症、骨肉腫、食欲低下、過剰運動による低骨量、第二の腰部骨折の防止、膣萎縮症、子宮内膜増殖症及び女性の性的機能不全を治療する方法、それを必要とする患者に治療的に有効な量の (−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及び治療的に有効な量のアロマターゼ阻害剤又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグを投与することからなる方法を提供する。
【０００６】
本治療方法の特別な態様は、(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及びアロマターゼ阻害剤を経口的に投与する方法である。本発明の付加的な態様は、(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及びアロマターゼ阻害剤が非経口的に又は経皮的に投与される上記の治療方法である。本発明の更なる態様は、アロマターゼ阻害剤が本発明の医薬組成物のために上述したものから選択される治療法である。特定の治療方法は、それを必要とする患者に治療的に有効な量の(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及び治療的に有効な量のエキセメスタンを投与することからなる乳癌の治療方法である。
【０００７】
本発明は、(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及びアロマターゼ阻害剤又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグの組み合わせを用いる、骨代謝病、老年性骨粗しょう症、閉経後骨粗しょう症、ステロイド誘導骨粗しょう症、低骨ターンオーバー骨粗しょう症、骨軟化症、腎性骨ジストロフィー、変形性関節症、リューマチ様関節炎、骨折、骨移植、しわ、卵巣癌、グリオーマ、腎細胞癌、肝臓癌、大腸癌、乳癌、前立腺癌、肥満、骨減少症、男性骨粗しょう症、性機能不全症、男性更年期、薄弱性、筋肉損傷、筋肉減少症、骨肉腫、食欲低下、過剰運動による低骨量、第二の腰部骨折の防止、膣萎縮症、子宮内膜増殖症及び女性の性的機能不全を治療する医薬組成物及び方法に関する。
【０００８】
好ましい態様において、本発明は、(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール、Ｄ−酒石酸塩及びエキセメスタンを用いる、骨代謝病、老年性骨粗しょう症、閉経後骨粗しょう症、ステロイド誘導骨粗しょう症, 低骨ターンオーバー骨粗しょう症、骨軟化症、腎性骨ジストロフィー、変形性関節症、リューマチ様関節炎、骨折、骨移植、しわ、卵巣癌、グリオーマ、腎細胞癌、肝臓癌、大腸癌、乳癌、前立腺癌、肥満、骨減少症、男性骨粗しょう症、性機能不全症、男性更年期、薄弱性、筋肉損傷、筋肉減少症、骨肉腫、食欲低下、過剰運動による低骨量、第二の腰部骨折の防止、膣萎縮症、子宮内膜増殖症及び女性の性的機能不全の治療方法に関する。
【０００９】
好ましい態様においては、該組み合わせを用いる老年性骨粗しょう症、閉経後骨粗しょう症、骨折、骨移植、乳癌、前立腺癌、肥満、骨減少症、男性骨粗しょう症、薄弱性、筋肉損傷及び筋肉減少症の治療法である。
【００１０】
骨減少症は、骨の菲薄化であるが、骨粗しょう症に見られるよりも少なく、真の骨粗しょう症の前段階である。世界保健機構は骨質量密度（ＢＭＤ）に基づいてヒトが正常な骨を持っているか、骨減少症であるか、骨粗しょう症であるかを判断するための診断基準を開発した。正常な骨密度は、若い成人の平均骨密度の標準偏差１以内(+1又は-1)である。骨減少症（低骨密度）は、若い成人の平均以下の標準偏差１から２.５(−１から−２.５)の骨密度と定義され、また骨粗しょう症は、若い成人の平均以下の標準偏差２.５又はそれ以上(＞−２.５)の骨密度と定義される。
【００１１】
性機能不全症は、一般に不十分な生殖腺機能として定義され、配偶子形成及び／又は生殖腺ホルモン分泌における不全として表れ、性的成熟の遅れ及び／又は生殖不全を招くことがある。性機能不全症には３つの主なタイプ、すなわち：１）一次的性機能不全症；２）二次的性機能不全症及び３）抵抗性性機能不全症がある。一次的性機能不全症では、ライデイヒ(Leydig)細胞の損傷がアンドロゲン生産を減じる。二次的性機能不全症では、視床下部又は下垂体の障害がゴナドトロピン分泌を減じ、抵抗性性機能不全症では、身体のアンドロゲンに対する反応が不十分である。
【００１２】
食欲低下は、次の特徴を有する病気である：年齢及び身長に対する最低の正常体重かそれ以上に体重を維持することの拒否（例えば、予期値の８５％以下の体重の維持をもたらす体重減少；又は成長期における予期される体重増加の失敗であり、これは予期値の８５％以下の体重となる）；体重不足であっても体重を増加したり太ったりすることに対する激しい恐怖；及び自己の体重又は体形が経験上の障壁となる障害、自己評価に対する体重又は体形の過大の影響、又は現在の低体重の深刻性の否定。本発明の化合物及び組み合わせは食欲低下の治療に使うことができ、又 食欲低下を伴う骨減少の治療に使用することができる。
【００１３】
本発明の組み合わせを用いて治療することができる他の状態は、特に女性に見られる過剰な運動行動に伴う骨減少である。バレエ及び長距離走のような体操、運動又はスポーツにおける過剰な参加は骨減少を招くことがあり、通常女性ではアメノリア（ammenorhea）を伴う。過剰な運動行動を示す男性も又骨減少を示す。
【００１４】
男性更年期 (男性閉経又はビロポーズ(viropause)とも言われる）は、典型的には４０〜４５歳の間に起きる男性における自然の出来事である。男性更年期は、テストステロンホルモンの水準低下である。テストステロンレベルが低下し、男性が男性更年期に入ると、種々の変化や状態が観察され、それにはエネルギーや力の減少、体脂肪の増加、骨粗しょう症、意気消沈、知的明瞭度の減少、筋肉維持が出来なくなること、心臓血管病、アテローム性動脈硬化、性欲減退、オルガスムの強さの減少、勃起不全、怒りっぽさの増加、及び特に手及び足の間接の痛みとこわばりが含まれる。加えて、男性更年期中の又は男性更年期後の男性は、女性化乳房、高コレステロール血症のような血清脂肪障害、血管の反応性の減少、性機能不全症、及び良性の前立腺肥大となることがある。
【００１５】
薄弱性は、転落による怪我の高いリスクの元になる骨格筋の進行性の又は絶え間ない減少、病気からの回復の困難性、入院の長期化、及び日常生活に介助を必要とする長期の障害によって特徴付けられる。筋肉量、身体強度及び身体的能力の減少は、典型的には生活の質の低下、独立の喪失、及び死につながる。薄弱性は、通常加齢を伴うが、他の原因、例えば病気誘導性悪液質、運動不足又は薬剤誘導性筋肉減少症によって筋肉の減少や強度の減少が起きた時に起こることもある。薄弱性を意味するために使用される他の用語は、筋肉減少症であり、これは骨格筋量やその品質の喪失のための一般的な用語である。その全体的な品質に寄与する骨格筋の性質は、例えば収縮性、繊維の大きさとタイプ、疲労のし易さ、ホルモン応答性、グルコース取り込み／代謝、及び毛細血管密度を含む。筋肉の品質の低下は、筋肉量の減少が無い場合でも、身体的強度の低下及び身体的能力の障害につながることがある。
【００１６】
「筋肉損傷」という用語はここではあらゆる筋肉組織の損傷を意味する。筋肉損傷は、身体的なトラウマから発生し、事故、運動競技上の怪我、内分泌障害、病気、傷又は外科手術の結果としての筋肉組織に達する。本発明の方法は筋肉損傷回復を促進することによる筋肉損傷の治療に有用である。
【００１７】
老年女性の骨粗しょう症は、青春期から成人期において獲得したピーク骨量、そのピーク骨量の閉経前の維持、及び閉経後の骨量減少によって決められる。ピーク骨量の決定要因は、遺伝的、栄養的、重量負荷（運動）、及び環境因子を含む。それ故成人期におけるピーク骨量の増強は、骨格筋量を最大化させ、後年の骨粗しょう症の進展を防ぐために望ましい。同様に、男性の成人期におけるピーク骨量の増強もまた望ましい。
【００１８】
腰部骨折は医療資源及び患者の生存率及び致死率に大きなインパクトを持つ。腰部骨折をした幾人かの患者は更なる骨折のリスクを減らすための予防的措置が必要と考えられる。現状においては、１０〜１３％の患者が後に２回目の腰部骨折を起こすとされている。２回目の腰部骨折を起こした患者のうち、２回目の腰部骨折の後には、最初の骨折後と比べてより少ない数の患者が独立して歩く能力を維持していた（それぞれ５３及び９１％、Ｐ＜0.0005）。Pearse E.0.等、Injury, 2003, 34(7), 518-521。２回目の腰部骨折に引き続く患者の移動性のレベルは、彼らの社会的な独立性を決定した。より老齢の患者及び複数の転倒歴のあるヒトは、骨折間の間隔が短かった。２回目の腰部骨折は、患者の移動性及び社会的独立性に重要な更なるインパクトを持っている。したがって、第二の腰部骨折の防止のための新しい方法を持つことは望ましいことである。
【００１９】
骨肉腫は、比較的発症率が高い、高度に悪性の一次的骨腫瘍であり、肺に転移する傾向がある。骨肉腫は、１０から２０歳で最も発症率が高いが、何歳であっても起きる可能性がある。全ての骨肉腫の約半分は、膝の部位に位置するが、どんな骨にも見られる。痛みと塊が骨肉腫の通常の症状である。骨肉腫の典型的な治療は手術と組み合わせた化学療法である。メソトレキセート、ドキソルビシン、シスプラチン又はカルボプラチンのような薬剤による、手術前又は手術後の化学療法は骨肉腫の治療に有用である。
【００２０】
子宮内膜増殖症は、子宮内膜における細胞数の増加であり、それによって子宮内膜の嵩が増大する。子宮内膜は、子宮壁の内層からなる粘膜であり、単円柱上皮、及び単円柱子宮腺を含む固有層からなる。子宮内膜の構造、厚さ、及びその状態は月経サイクルとともに顕著な変化をする。
【００２１】
女性の性的機能不全（ＦＳＤ）は、性反応サイクルと関連する心理学的及び／又は生理学的変化によって特徴付けられる。性反応サイクルの現在の記述は、Bassonによって導入され、Masters及びJohnsonにより1966年に、又、Kaplanにより1979年に導入されたモデルの修正版である。Bassonのモデルは、愛情表現要求、性的刺激、性的覚醒、性的欲求及び強化された愛情表現を含む５つの非線形要素からなっている。このモデルは性的覚醒からの受容的な欲求を示唆している。 (Basson R., J Sex Marital Ther, 2001.27(5). 395-403)。アメリカ泌尿器病基金（AFUD）によって最近修正されたDiagnostic and Statistical Manual of Mental Disorders (DSM-IV; American Psychiatric Association、1994）分類に基づくＦＳＤの４つの主たるサブタイプは、以下に記載されている。全ての定義には個人的な心身苦悩要素を含んでいる。
【００２２】
機能低下性性的欲求障害（ＨＳＤＤ）：性的空想／考え及び／又は性的活動に対する欲求又は性的活動の受容性の、持続的又は再発性欠乏（又は欠如）であり、これは顕著な心身苦悩又は対人間関係の困難を生じる。このカテゴリーは、性的嫌悪障害のサブカテゴリーを含み、それは持続的又は再発性の性的パートナーとの性的な接触に対する恐怖的嫌悪及び回避であり、これは個人的な心身苦悩を生じる。
女性の性的覚醒障害（ＦＳＡＤ）：十分な興奮に達する又はそれを維持することの持続的又は再発性の不能であり、個人的な心身苦悩を生じ、これは主観的な興奮の欠如、又は性器（潤滑／膨張）又は他の肉体反応の欠如としても表現される。
女性のオルガスム障害（ＦＯＤ）：十分な性的刺激及び覚醒に引き続くオルガスム到達の、持続的又は再発性の困難、遅延、又は欠如であり、これは個人的な心身苦悩を生じる。
性的疼痛症（性交疼痛症、膣痙、及び他の性的疼痛症)：性交に伴う持続的又は再発性の性器の疼痛、又は膣の外側第３の筋系の持続的又は再発性の不随意性痙縮であり膣進入を妨げ、個人的な心身苦悩を生じる。
【００２３】
大部分の専門家は、これらのサブタイプは、必ずしも別々のものではなく頻繁に同一女性に共存し、したがって最初の３つの障害（欲求、覚醒及びオルガスム）はしばしば密接に関連していると信じている。最もありふれたFSDサブタイプはHSDD及びFSADである。FODだけが単独で起きることはあまり一般的ではない。これらの診断への共罹患は、一次診断を二次診断から区別することを困難にする。性反応サイクルは、交感神経系および副交感神経系間の微妙な、平衡性の相互作用によって司られる。例えば、血管収縮は主として副交感神経（コリン作動性）の流出によって司られ、オルガスムは主として交感神経（アドレナリン作動性）によって司られる。この応答サイクルは、皮質の影響、傷害されたホルモン性、神経性又は血管系機構により、医学的又は外科的介入により、心理的又は情緒的問題により、又はこれらのファクターの組み合わせにより容易に阻止される。性的な機能障害は、生涯に亘る（有効な成就が全く無い、一般的には精神内葛藤のため）か、又は後天的（正常な機能の期間の後に）であり、一般的（全体的）であったり又は時々（特定の場合又は特定の相手に限定される）であったり、そして総合的であったり部分的であったりする。
【００２４】
HSDDはしばしば通常にはエロチックな状況においてすら性的興味の欠如の訴えによって特徴付けられる。この異常はまれな性活動と関連することがあり、しばしば深刻な結婚又は異性関係の葛藤を生じる。しかしながら、ある患者は相手を喜ばせるためにかなりしばしば異性との出会いを持ち成就にも問題は無いが、性的無感動を持ち続ける。HSDDの後天的な形は、通常長期間の関係における倦怠又は不幸（しばしば性的欲求が正常であるか又は他よりも強い状況で）、抑うつ（これは男性を性的不能に導いたり、女性を興奮抑止に導くより、もっとしばしば興味の減少に導く）、不安、アルコール又は向精神薬への依存、病気、倦怠、処方薬（例えば血圧降下剤、抗うつ剤）の副作用、外科的介入、及び自然の閉経又は外科的閉経のいずれかによる低レベルテストステロンのようなホルモン不足によって生じる。この障害はFSAD、FOD又は疼痛障害に対して二次的である。
【００２５】
性的な興奮と愉悦は血管および神経筋性の出来事の組み合わせを伴っており、これはクリトリス、陰唇及び膣壁の充血、膣湿潤性の向上及び膣内腔の拡張に結びつく(Levin, R.J., Clin. Obstet. Gynecol., 1980:7; 213-252; Ottesen, B., Gerstenberg、T., Ulrichsen、H. et al., Eur. J. Clin. Invest., 1983:13; 321-324; Levin, R.J.. Exp. Clin. Endocrinol., 1991:98; 61-69; Levin, R.J, Ann. Rev. Sex Res., 1992:3; 1-48; Masters, W. H.、Johnson, V. E. Human Sexual Response. Little, Brown: Boston, 1996; Berman、J.R., Berman、L. & Goldstein, L, Urology. 1999:54; 385-391)。膣の充血は浸出が起きるのを可能とし、この過程は膣の湿潤性の原因となる。浸出は上皮組織を通して膣表面へのプラズマの流れを可能とするが、これを引き起こす力は刺激された状態における膣毛細管床における血流の増加である。加えて、充血は特に膣管の先端の２／３における膣の長さ及び内腔径の増加をもたらす。その内腔の拡張はその壁の平滑筋弛緩及び骨盤床の骨格筋の弛緩の組み合わせに由来する。いくつかの性交痛障害例えば膣痙は、少なくとも一部は、膣の拡張を阻害する不十分な弛緩によると考えられており、これが主として平滑筋又は骨格筋の問題かどうかは判然としていない。(Masters, W. H., Johnson, V. E. Human Sexual Response. Little, Brown: Boston, 1996; Berman、J.R., Berman, L. & Goldstein, L., Urology. 1999:54; 385-391)。
【００２６】
FSADは、主観的興奮の欠如又は膣湿潤、膣充血、クリトリス興奮又は平滑筋弛緩のような性的反応の欠如として経験される。オルガスムは妨げられ得る。身体的欠陥による性的な機能障害は、通常一般化され（特定のパートナーや状況に特異的にではなく）、種々の要因によって起き、その要因には、薬剤投与（例えば、利尿剤、抗ヒスタミン剤、抗うつ剤例えば選択的セロトニン取込阻害剤[SSRI]又は高血圧剤）、骨盤手術、以前の骨盤の外傷、膣又はクリトリスの血流減少、閉経時の又は分娩後の及び授乳中のエストロゲン減少が挙げられ、又は糖尿病及びアテローム性動脈硬化のような血管部分の病気によって起きる。心理的要因は、女性の反応を阻害したり、女性がリラックスして覚醒過程に入るのを阻害する可能性があるので、FSADの基礎となっていることがある(Walsh K. & Berman、J., 2004, Drugs Aging, 21(10)、655-675)。この障害はHSDD、FOD、又は疼痛障害に対して二次的である。
【００２７】
女性において、オルガスムは 膣の外側第３の筋肉の収縮を伴う（常に主観的にそう感じられるとは限らないが）。一般化された筋肉の緊張、会陰の収縮、及び不随意性の骨盤の突き出し（０.８秒毎）が通常起きる。オルガスムの後には一般的な愉悦感、幸福感及び筋肉の弛緩が起きる。女性はその生涯を通してオルガスムを感じることができるが、性活動は６０歳以後はしばしば減少する。それはパートナーの相対的な欠如及び未治療の身体的変化（例えば膣の粘膜の萎縮、それに伴う乾燥及び痛みを伴う性交）による。
【００２８】
生涯を通じてのFODはしばしば情緒的なトラウマ又は性的虐待と関係している。後天的なFODは、手術、トラウマ、ホルモン欠如、情緒的なストレス要因、対人関係葛藤、又は投薬（例えばＳＳＲＩ）の結果でありうる(Walsh K. & Berman、J., 2004, Drugs Aging,
21(10), 655-675)。 FODはHSDD、FSAD、疼痛障害に対して二次的でありうる。
【００２９】
性的疼痛障害には、性交疼痛症[性交に伴う痛み]、膣痙 [不随意性の膣の外部第３筋の痙縮、及び性交以外の性的な刺激によって生じる他の性器の疼痛]を含む。性交疼痛症は、通常最初に起きるが、性交前、中又は後に起きることもある。性交中又は後の痛みが主な症状である。疼痛障害は、膀胱瘤、レクトサイクル(rectocycle)及び子宮逸脱のような骨盤床障害、湿潤を減少する投薬、子宮内膜症、骨盤炎症病、炎症性腸管病、尿管障害、以前のOB/GYNトラウマ、放射線萎縮、直腸又は膣の炎症、又は粘膜の乾燥及びやせ細りを伴う閉経退縮によって起こりうる。心理的なことも又大事な役割を果たしうる。
【００３０】
膣萎縮症は、女性が経験する最も一般的でかつ不愉快な閉経の状態の一つである。閉経期の最初に、膣の上皮は徐々に無血管性で、薄くかつ非ケラチン化し、表面の成熟細胞の数ははっきりと減少しそして完全に消滅し、中間的及び副基性細胞（これはグリコーゲンをより酸くなる含む）が増加し支配的になる。これらの因子の組み合わせが、膣のｐＨの上昇（しばしば＞５.０）、膣の乾燥及び尿路及び膣の感染性の上昇をもたらす。
【００３１】
本発明は、アロマターゼ阻害剤単独投与と関連する副作用を改善し、かつ明らかな相乗効果を奏する治療方法を提供する。(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ、及びアロマターゼ阻害剤又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグによる組み合わせ治療からなる本治療法は、アロマターゼ単独療法に比較したとき、骨減少、骨折、変形性関節症、関節痛、性交疼痛症、膣萎縮症及び心血管系事象の発生率及び／又はその重大性を減少させる効果をもたらす。乳癌の治療において、(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ、及びアロマターゼ阻害剤又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグによる組み合わせ治療は、特に有利であり、どちらかの薬剤を単独で投与する場合と比較したとき、乳癌治療において相乗効果が奏される。
【００３２】
本発明は、(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ、及びアロマターゼ阻害剤又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ、及び担体、溶媒、希釈剤などを含有する、骨代謝病、老年性骨粗しょう症、閉経後骨粗しょう症、ステロイド誘導骨粗しょう症、低骨ターンオーバー骨粗しょう症、骨軟化症、腎性骨ジストロフィー、変形性関節症、リューマチ様関節炎、骨折、骨移植、しわ、卵巣癌、グリオーマ、腎細胞癌、肝臓癌、大腸癌、乳癌、前立腺癌、肥満、骨減少症、男性骨粗しょう症、性機能不全症、男性更年期、薄弱性、筋肉損傷、筋肉減少症、骨肉腫、食欲低下、過剰運動による低骨量、第二の腰部骨折の防止、膣萎縮症、子宮内膜増殖症及び女性の性的機能不全を治療するための医薬組成物にも関係する。
【００３３】
好ましい組み合わせは、(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及びエキセメスタンの組み合わせである。特に好ましい組み合わせは、(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール、Ｄ−酒石酸塩及びエキセメスタンの組み合わせである。
【００３４】
ここで用いられる用語「ヒドロキシ保護基」は、ヒドロキシ基の一時的な保護のために一般的に用いられるあらゆる基を意味し、例えば、アルコキシカルボニル、アシル、アルキルシリル又はアルキルアリールシリル基（以後単に「シリル」基と称する）、及びアルコキシアルキル基である。 アルコキシカルボニル保護基は、アルキル-Ｏ-ＣＯ-基であり、例えばメトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニル、tert-ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル又はアリルオキシカルボニルである。用語「アシル」は、その全ての異性体における、１−６個の炭素を有するアルカノイル基、又は１−６個の炭素を有するカルボキシアルカノイル基を意味し、例えばオキザリル、マロニル、スクシニル、又はグルタリル基、又は芳香族アシル基、例えばベンゾイル、又はハロ、ニトロ又はアルキル置換されたベンゾイル基である。明細書及び特許請求の範囲で用いられる用語「アルキル」は、その全ての異性体における、１−１０個の炭素を有する直鎖又は分枝アルキル基を意味する。アルコキシアルキル保護基は、例えばメトキシメチル、エトキシメチル、メトキシエトキシメチル、又はテトラヒドロフラニル及びテトラヒドロピラニルのような基である。好ましいシリル保護基は、トリメチルシリル、トリエチルシリル、t-ブチルジメチルシリル、ジブチルメチルシリル、ジフェニルメチルシリル、フェニルジメチルシリル、ジフェニル-t-ブチルシリル及び類似のアルキル化されたシリル基である。用語「アリール」は、フェニル-、又は如何なるアルキル-、ニトロ-又はハロ-置換されたフェニル基を意味する。
【００３５】
「保護されたヒドロキシ」基は、ヒドロキシ基の一時的な又は永久的な保護のために一般的に用いられる上記のいずれかの基、例えば前に定義したようなシリル、アルコキシアルキル、アシル又はアルコキシカルボニル基によって誘導された又は保護されたヒドロキシ基である。用語「ヒドロキシアルキル」、「重水素アルキル」及び「フルオロアルキル」は、１つ又はそれ以上のヒドロキシ、重水素又はフルオロ基でそれぞれ置換されたあらゆるアルキル基を意味する。
【００３６】
本発明の組み合わせ及び方法において用いられる第２の化合物は、アロマターゼ阻害剤である。アロマターゼ阻害剤は、チトクロームＰ−４５０スーパーファミリーの酵素でありＣＹＰ１９遺伝子の産物である、アロマターゼの阻害又は不活化によって作用する。アロマターゼは、アンドロゲン様物質からのエストロゲンの合成、例えば好ましい基質アンドロステンジオンからエストロン、及びテストステロンからエストラジオールの合成を司っている。
【００３７】
アロマターゼ阻害剤は、年代順又はその治療展開にしたがって、第１-、第２-及び第３-世代阻害剤として、又その作用機作にしたがって、タイプ１又はタイプ２阻害剤として分類されている。Smith, M.D., I.E.及びDowsett, Ph.D., M, N Engl J Med 2003, 348, 2431-2442。タイプ１アロマターゼ阻害剤は、一般にアンドロステンジオンのステロイド性類似体であり、アロマターゼに不可逆的に結合し、それにより該酵素を不活化する。タイプ２アロマターゼ阻害剤は、一般に非ステロイドであり、塩基性窒素により該酵素のヘム基に可逆的に結合する。
【００３８】
本発明の組み合わせ及び方法に用いるのに好ましいアロマターゼ阻害剤は、米国特許第4,808,616及び4,904,650号に記載された化合物を含む。
【００３９】
これらの化合物は以下に記載の式（Ａ）のものである。
【化２】
2006306872.tif 000003
式中、Ｒ及びＲ2は、独立して、水素又はＣ1−Ｃ6アルキルであり、Ｒ1は、水素、ハロゲン又はＣ1−Ｃ6アルキルである。上記式（Ａ）の中の好ましい化合物は、Ｒが水素又はＣ1−Ｃ4アルキルであり、Ｒ1が水素、フッ素、塩素又はＣ1−Ｃ4アルキルであり、Ｒ2が水素又はＣ1−Ｃ4アルキルであるものである。このグループ内のさらに好ましい化合物は、式（Ａ）においてＲが水素、メチル又はエチルであり、Ｒ1が水素、フッ素又は塩素であり、Ｒ2が水素のものである。
【００４０】
アロマターゼ阻害剤の具体例には次のものが含まれる：6-メチレンアンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン；1-メチル-6-メチレンアンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン；1-エチル-6-メチレンアンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン；4-メチル-6-メチレンアンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン；4-エチル-6-メチレンアンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン；4-フルオロ-6-メチレンアンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン；4-クロロ-6-メチレンアンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン；6-エチリデンアンドロスタ-l ,4-ジエン-3,17-ジオン；6-プロピリデンアンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン；4-フルオロ-1-メチル-6-メチレンアンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン; 4-クロロ-1-メチル-6-メチレンアンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン；1-メチル-6-エチリデンアンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン；及び4-フルオロ-6-エチリデンアンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン。
【００４１】
アロマターゼ阻害剤の上記のグループ内の最も好ましい化合物は、6-メチレンアンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオンであり、これはエキセメスタンとしても知られており、又Aromasin(登録商標)として販売されている。6-メチレンアンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオンは、米国特許第4,808,616号及び4,904,650号の実施例１の方法により製造することができ、この方法は以下のとおり再現される。
【００４２】
0.50ｇの6-メチレンアンドロスタ-4-エン-3,17-ジオン及び0.57ｇの ジクロロジシアノベンゾキノン(DDQ)を、20mlの無水ジオキサン中で約15時間還流した。懸濁液をアルミナに通してろ過してDDQを除去した。溶媒を蒸発させた後の残留物をエチルアセテートに溶解し、有機相を水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させ、溶媒を真空下で除去した。粗生成物をシリカゲル上、ヘキサン／酢酸エチル40％を用いてクロマトグラフにかけ、0.25ｇの純粋な6-メチレンアンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオンを得た。m.p. 188-191℃。
λmax247 mμ(ε 13.750)。実験値：C 81.01、H 8.05；C20H24O2の理論値：C 81.04、H 8.16.
【００４３】
本発明の組み合わせ及び方法において有用なアロマターゼ阻害剤の他の例は次のものを含む：一般的にアミノグルテチミドと呼ばれCytadren(登録商標)として市販されている3-(4-アミノフェニル)-3-エチル-2,6-ピペリジンジオン；フォルメスタンとして知られている4-ヒドロキシアンドロステンジオン；アタメスタンとして知られている1-メチルアンドロスタ-1,4-ジエン-3,17-ジオン；アナスタゾールとして知られており、U.S. RE36617に記載されArimidex(登録商標)として販売されているα,α,α,α'-テトラメチル-5-(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イルメチル)-1,3-ベンゼンジアセトニトリル；ファドロゾールとして知られている4-(5,6,7,8-テトラヒドロイミダゾ[1,5-a]ピリジン-5-イル)-ベンゾニトリル一塩酸塩；フィンロゾールとして知られている 4-(3-(4-フルオロフェニル)-2-ヒドロキシ-1-(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イル)-プロピル)-ベンゾニトリル；レトロゾールとして知られており、米国特許第4,978,672号に記載されており、Femara(登録商標)として市販されている、4,4'-(1H-1,2,4-トリアゾール-1-イルメチレン)ビス-ベンゾニトリル；ボロゾールとして知られている6-[(4-クロロフェニル)-1H-1,2,4-トリアゾール-1-イルメチル]-1-メチル-1H-ベンゾトリアゾール；及び山之内製薬が開発中のYM-511として知られている4-[N-(4-ブロモベンジル)-N-(4-シアノフェニル)アミノ]-4H-1,2,4-トリアゾール。
【００４４】
化合物が以下において記述される場合、化合物は患者に、薬学的に許容し得る塩、プロドラッグ、又はプロドラッグの塩として投与されうることが意図されていることに留意すべきである。そのような全ての変形は本発明に包含される。
【００４５】
用語「それを必要とする患者」は、骨代謝病、老年性骨粗しょう症、閉経後骨粗しょう症、ステロイド誘導骨粗しょう症、低骨ターンオーバー骨粗しょう症、骨軟化症、腎性骨ジストロフィー、変形性関節症、リューマチ様関節炎、骨折、骨移植、しわ、卵巣癌、グリオーマ、腎細胞癌、肝臓癌、大腸癌、乳癌、前立腺癌、肥満、骨減少症、男性骨粗しょう症、性機能不全症、男性更年期、薄弱性、筋肉損傷、筋肉減少症、骨肉腫、食欲低下、過剰運動による低骨量、第二の腰部骨折の防止、膣萎縮症、関節痛、子宮内膜増殖症及び女性の性的機能不全のある又はそのリスクのある人間及び他の動物を意味する。治療される特定の状況においては女性のみに作用するので、その様な場合には患者は女性であると理解される。好ましい患者は閉経後の女性のヒトである。
【００４６】
ここにおいて用いられている用語「治療すること」、「治療する」又は「治療」は、予防的、緩和的、補助的及び治療的処置を含む。例えば、ここで用いられる乳癌の治療は、乳癌のある患者又は乳癌となるリスクのある患者がここに記載された方法にしたがって処置されうることを意味する。予防的な処置を行った患者にとって、予防的に処置されている病気の状態の発生における結果的な減少は、予防的処置の計測可能な帰結である。
【００４７】
「薬学的に許容しうる」により、担体、希釈剤、賦形剤及び／又は塩又はプロドラッグが製剤の他の成分と許容可能であり、又患者に有毒でなければならないことを意味する。
【００４８】
用語「プロドラッグ」は、インビボで本発明の化合物を生じるように変換される化合物を意味する。その変換は種々のメカニズム、例えば血中における加水分解によって起こりうる。プロドラッグの使用に関する検討は、T. Higuchi及びW. Stellaの“Pro-drugs as Novel Delivery Systems,”Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series.及びEdward B. Roche編のBioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press、1987により与えられる。
【００４９】
例えば、本発明の組成物及び方法に用いられる化合物がカルボン酸官能基を持つ場合には、プロドラッグはその酸基の水素原子を、（C1−C8）アルキル、（C2−C12）アルカノイルオキシメチル、炭素原子４〜９個を有する1-(アルカノイルオキシ)エチル、炭素原子５−１０個を有する1-メチル-l-(アルカノイルオキシ)-エチル、炭素原子３−６個を有するアルコキシカルボニルオキシメチル、炭素原子４−７個を有する1-(アルコキシカルボニルオキシ)エチル、炭素原子５−８個を有する1-メチル-1-(アルコキシカルボニルオキシ)エチル、炭素原子３−９個を有するN-(アルコキシカルボニル)アミノメチル、炭素原子４−１０個を有する1-(N-(アルコキシカルボニル)アミノ)エチル、3-フタリジル、4-クロトノラクトニル、γ-ブチルラクトン-4-イル、ジ-N,N-(C1-C2)アルキルアミノ(C2-C3)アルキル（例えばβ-ジメチルアミノエチル）、カルバモイル-(C1-C2)アルキル、N,N-ジ(C1-C2)アルキルカルバモイル-(C1-C2) アルキル及びピペリジノ-、ピロリジノ-又はモルホリノ(C2-C3) アルキルのような基で置換して形成されるエステルを含むことができる。
【００５０】
同様に、本発明の組成物及び方法に用いられる化合物がアルコール官能基を持つ場合には、プロドラッグはそのアルコール基の水素原子を、（C1−C6）アルカノイルオキシメチル、1-(（C1−C6）アルカノイルオキシ)エチル、1-メチル-1-(（C1−C6）アルカノイルオキシ)エチル、（C1−C6）アルコキシカルボニルオキシメチル、N-（C1−C6）アルコキシカルボニルアミノメチル、サクシノイル、（C1−C6）アルカノイル、α-アミノ（C1−C4）アルカノイル、アリールアシル及びα-アミノアシル又はα-アミノアシル-α-アミノアシル（ここで各α-アミノアシル基は独立に天然に存在するＬ−アミノ酸から選択される）、P(O)(OH)2、-P(O)(O(C1−C6)アルキル)2又はグリコシル（炭水化物のヘミアセタール形のヒドロキシル基を除去して生成する基）のような基で置換して形成され得る。
【００５１】
本発明の組成物及び方法に用いられる化合物がアミノ官能基を持つ場合には、プロドラッグはそのアミノ基の水素原子を、RX-カルボニル、RXO-カルボニル、NRXRX1-カルボニル、ここでRX及びRX1は、それぞれ独立して（C1−C10）アルキル、（C3−C7）シクロアルキル、ベンジルであり、又はRX-カルボニルは天然のα-アミノアシル又は天然のα-アミノアシル-天然のα-アミノアシルであり、-C(OH)C(O)OYX、ここでYXはH、（C1−C6）アルキル又はベンジルであり、-C(YX0)YX1、ここでYX0は（C1−C4）アルキル及びYX1は（C1−C6）アルキル、カルボキシ（C1−C6）アルキル、アミノ（C1−C4）アルキル又はモノ-N-又はジ-N,N-（C1−C6）アルキルアミノアルキルであり、-C(YX2)YX3、ここでYX2はＨ又はメチル及びYX3はモノ-N-又はジ-N,N-(C1−C6）アルキルアミノ、モルホリノ、ピペリジン-1-イル又はピロリジン-1-イルである、のような基で置換して形成され得る。
【００５２】
「薬学的に許容し得る塩」という表現は、これに限定されるものではないが、クロリド、ブロミド、ヨージド、サルフェート、ビスルフェート、ホスフェート、アセテート、マレエート、フマレート、オキザレート、ラクテート、タートレート、シトレート、グルコネート、メタンスルホネート及び4-トルエン-スルホネートのようなアニオンを含む非毒性のアニオン性塩を例示する。この表現は、これに限定されるものではないが、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、アンモニウム塩又はプロトン化されたベンザチン(N,N'-ジベンジルエチレンジアミン)、コリン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、エチレンジアミン、メグラミン(N-メチル-グルカミン)、ベネタミン(N-ベンジルフェネチルアミン)、ピペラジン又はトロメタミン(2-アミノ-2-ヒドロキシメチル-1,3-プロパンジオール) のような非毒性のカチオン性塩をも例示する。
【００５３】
本発明の組成物及び方法に用いられる化合物は放射性同位元素で標識した形でも存在しうる。つまり該化合物は、通常天然に見られる原子量又は質量数とは異なる原子量又は質量数の１つ又はそれ以上の原子を含んでもよいと認識される。水素、炭素、リン、フッ素及び塩素の放射性同位元素は、それぞれ3Ｈ、14Ｃ、32Ｐ、35Ｓ、18Ｆ及び36Ｃｌを含む。これらの放射性同位元素及び／又は他の放射性同位元素を含む本発明の組成物及び方法に用いられる化合物は、本発明の範囲内である。トリチウム、つまり3Ｈ及び炭素-14、つまり14Ｃ放射性同位元素は、その製造のし易さと検出性の点で特に好ましい。放射性同位元素で標識した本発明の化合物は、当業者に良く知られた方法によって一般的に製造されうる。そのような放射性同位元素で標識した化合物は、好都合には、放射性同位元素で標識しない試薬に代えて容易に入手しうる放射性同位元素で標識した試薬で置き換える以外は以下に記載の方法を実施することによって製造されうる。
【００５４】
本発明の組成物及び方法に用いられる化合物のいくつかは少なくとも一つの不斉炭素原子を有しており、したがってエナンチオマー又はジアステレオマーであることが当業者に認識される。ジアステレオマー混合物は、それ自体公知の方法、例えばクロマトグラフィ及び／又は分別結晶法によって、その物理化学的な相違に基づき各ジアステレオマーに分けることができる。エナンチオマーは、適当な光学的に活性な化合物（例えばアルコール）と反応させてエナンチオマー混合物をジアステレオマー混合物に転換し、ジアステレオマーを分離しそして各ジアステレオマーを対応する純粋なエナンチオマーに変換（例えば、化学的加水分解及び微生物学的リパーゼ加水分解、例えば酵素触媒加水分解の両方を含む加水分解）することによって分離されうる。その全ての異性体（ジアステレオマー、エナンチオマー及びその混合物を含む）は、本発明の一部とされる。また、本発明の組成物及び方法において用いられるいくつかの化合物は、アトロプ異性体（例えば、置換されたビアリール）であり、本発明の一部とされる。
【００５５】
更には、化合物(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ 又はアロマターゼ阻害剤は、水和物又は溶媒和物を形成し、これらも又本発明の範囲内である。
【００５６】
本発明の組成物及び方法において用いられる化合物の投与は、本発明の化合物を全身的に及び／又は部分的に配送するいかなる方法によってもよい。これらの方法は、経口、非経口、及び十二指腸内ルート等を含む。一般に、本発明の化合物は経口的に投与されるが、例えば経口投与が標的に対して適当でない場合又は患者が薬を摂取できない場合には、非経口的投与（例えば、静脈内、筋肉内、経皮的、皮下、直腸内又は脊髄内）も用いることが出来る。本発明の組成物及び方法において用いられる化合物は、患者上又は患者内の部位に局所的に適当な担体又は希釈剤にいれて施用される。
【００５７】
一般的に本発明の医薬組成物及び方法で用いられるシス-6-フェニル-5-(4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル)-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその塩の有効量は、0.001−100 mg/kg/日の範囲であり、好ましくは0.01−10 mg/kg/日である。
【００５８】
本発明の組み合わせ及び方法に用いられるアロマターゼ阻害剤は、ヒトの患者に対して用量範囲約0.01mg/kgから約50 mg/kgで投与されうる。例えば、アミノグルテチミドは最初は投与量250 mgで８時間間隔で投与され、投与量は一日当たり用量2グラムまで増量されうる。Cytadren（登録商標）として市販されている、アミノグルテチミドは、250mg経口錠として市場で入手可能である。他のアロマターゼ阻害剤の市場で入手可能な用量形としては、Femara（登録商標）として市販され2.5mg経口錠として入手可能なレトロゾール、Arimidex（登録商標）として市販されて1mg経口錠として入手可能なアナスタゾールが挙げられる。Aromasin（登録商標）として市販されているエキセメスタンは、25mg経口錠として入手可能である。本発明の医薬組成物の好ましい治療的有効量は、約0.01mg/kg/日から約20mg/kg/日である。
【００５９】
投与量とタイミングは、勿論治療される対象、苦痛の強さ、投与の仕方及びそれを処方する医師の判断に依存する。このように、患者毎に違いがあるので、以下に記載の用量はガイドラインであり、医師は医師がその患者に適当であると考える治療を行うための用量を増減することができる。希望される治療の程度を考慮して、医師は患者の年齢、前からある病気、及び他の病気の存在のような各種の要因をバランスさせなければならない。用量は一日一回又は一日二回以上で与えられ、持続性放出剤型又は制御形剤型として与えられる。即時放出と制御形剤型及び／又は持続性放出剤型の組み合わせを用いて化合物を投与することも可能である。
【００６０】
(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及びアロマターゼ阻害剤又はその組み合わせの投与は、いかなる連続的又は間欠的投与スケジュールによることができる。一日一回、一日多数回、一週間一回、一週間多数回、二週毎に一回、二週毎に複数回、一月一回、一月多数回、二月毎に一回、三月毎に一回、六月毎に一回及び一年に一回投与は、(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及びアロマターゼ阻害剤又はその組み合わせの投与スケジュールの非制限的な例示である。
【００６１】
本発明の組成物及び方法で用いられる化合物は、一般的に、少なくとも一つの化合物が薬学的に許容される担体又は希釈剤と共に含む医薬組成物の形で投与される。このように、本発明の組成物及び方法で用いられる化合物は、いかなる通常の経口的、非経口的、直腸内又は経皮投与形で投与される。
【００６２】
経口投与のための医薬組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、ピル、カプセル、粉剤等の形をとることができる。クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム及び燐酸カルシウムのような種々の補助剤を含む錠剤は、澱粉及び好ましく馬鈴薯又はタピオカ澱粉のような種々の崩壊剤及び特定の複合シリケートと共に、又ポリビニルピロリドン、蔗糖、ゼラチン及びアカシアのような結合剤と共に用いられる。更に、ステアリン酸マグネシウム、ラウリルスルホン酸ナトリウム及びタルクのような潤滑剤が錠剤化のためにしばしば極めて有用である。同様なタイプの固形組成物が、ソフト及びハード充填ゼラチンカプセルの充填剤としても用いられ、これに関連して好ましい物質は、ラクトース又は乳糖、ならびに高分子量ポリエチレングリコールをも含む。水性懸濁液及び／又はエリキシル剤が経口投与に好ましい時には、本発明の化合物は種々の甘味剤、芳香剤、着色剤、乳化剤及び／又は懸濁剤、ならびに希釈剤例えば水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン及びその種々の組み合わせと組み合わされる。(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及びアロマターゼ阻害剤の受容できる投与形は、錠剤、カプセル、溶液及び懸濁液を含む。他の適当な製剤は当業者にとって自明である。
【００６３】
非経口的投与のためには、ゴマ又はピーナッツ油中の又は水性プロピレングリコール中の溶液、ならびに対応する水溶性塩の無菌水溶液が用いられる。そのような水溶液は必要に応じ適宜緩衝化されることができ、液体希釈剤が最初に十分の生理食塩水又はグルコースで等張化される。これらの水溶液は、特に静脈内、筋肉内、皮下及び腹腔内注射目的に適している。 これに関連し、使用される無菌の水性媒体は、当業者に良く知られている標準的な技術によって容易に得ることができる。
【００６４】
経皮（例えば局所）投与の目的には、希薄な無菌の水性又は部分水性溶液（通常約０.１％〜５％濃度で）が、それ以外は上記の非経口的溶液と同様にして、調製される。
一定量の有効成分を含む種々の医薬組成物の製法は公知であり、又は当業者にはこの記述に照らして明らかである。医薬組成物の製造方法の例として、Remington's Pharmaceutical Sciences. Mack Publishing Company, Easton, Pa., 19th Edition (1995)が参照される。本発明の医薬の組み合わせは、一般的に適宜な製剤として投与される。以下の製剤例は単に例示的なものであり、本発明の範囲を限定することを意図するものではない。
【００６５】
以下の製剤において、「活性成分」は、第１の化合物、(−)-シス-6-フェニル-5-(4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル)-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール、又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及び第２の化合物、アロマターゼ阻害剤の組み合わせを意味する。好ましい態様において、製剤に用いられる「活性成分」の第１の化合物は、(−)-シス-6-フェニル-5-(4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル)-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール、Ｄ−酒石酸塩であり、また第２の化合物はエキセメスタンである。
【００６６】
製剤１：ゼラチンカプセル
ハードゼラチンカプセルを以下のようにして製造した。
成  分 量(mg/カプセル)
活性成分                                    0.25-100
澱粉、NF                                    0-650
澱粉流動性粉末                              0-50
シリコン流体350センチストローク             0-15
錠剤製剤を以下の成分を用いて製造した。
【００６７】
製剤２：錠剤
成  分 量 (mg/錠剤)
活性成分                                    0.25-100
セルロース、微結晶                          200-650
シリコンジオキシド、燻蒸                    10-650
ステアリン酸                                5-15
上記成分を混合し圧縮して錠剤とした。
代替として、活性成分0.25-100mgをそれぞれ含有する錠剤を次のようにして製造した。
【００６８】
製剤３：錠剤
成  分 量 (mg/錠剤)
活性成分                                         0.25-100
澱粉                                             45
セルロース、微結晶                               35
ポリビニルピロリドン（水中の10%溶液として）      4
カルボキシメチルセルロースナトリウム             4.5
ステアリン酸マグネシウム                         0.5
タルク                                           1
活性成分、澱粉、及びセルロースを第４５メッシュＵ.Ｓ.篩に通し、完全に混合した。得られた粉末にポロビニルピロリドンの溶液を混合し、次いで第１４メッシュＵ.Ｓ.篩に通した。このようにして得られた顆粒を５０−６０℃で乾燥し第１８メッシュＵ.Ｓ.篩に通した。予め第６０ Ｕ.Ｓ.篩に通しておいた、カルボキシメチル澱粉ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム及びタルクをその顆粒に加え、混合後打錠機で錠剤となるよう圧縮した。
5ml用量あたりそれぞれ0.25-100mgの活性成分を含有する懸濁液を以下のようにして製造した。
【００６９】
製剤４：懸濁液
成  分 量 (mg/5 ml)
活性成分                                        0.25-100 mg
カルボキシメチルセルロースナトリウム            50 mg
シロップ                                        1.25 mg
安息香酸溶液                                    0.10 mL
香料                                            適量
着色剤                                          適量
精製水                                          全量が5 mLとなるまで
活性成分を第４５メッシュＵ.Ｓ.篩いに通しカルボキシメチルセルロースナトリウム及びシロップと混合し滑らかなペーストとした。安息香酸溶液、香料及び着色料を水の一部で希釈してから撹拌しながら加えた。次いで所定の容量とするに十分な水を加えた。
次の成分を含有するエアゾール溶液を製造した。
【００７０】
製剤５：エアゾール
成  分 量 (質量%)
活性成分                                        0.25
エタノール                                      25.75
噴射剤２２（クロロジフルオロメタン）            70.00
活性成分をエタノールと混合し、混合物を噴射剤２２の一部に加え、３０℃に冷却し、充填機に移した。必要量をステンレススチール容器に入れ残りの噴射剤で希釈した。バルブユニットを容器に取り付けた。
坐剤を次のようにして製造した。
【００７１】
製剤６：坐剤
成  分 量 (mg/座剤)
活性成分                                        250
飽和脂肪酸グリセリド                            2,000
活性成分を第６０メッシュＵ.Ｓ.篩に通し、最小限の熱で予め溶融しておいた飽和脂肪酸グリセリド中に懸濁した。混合物を、公証２ｇ容量の座剤型に注ぎついで冷却した。静脈内注射剤を次のようにして製造した。
【００７２】
製剤７：静脈内注射液
成  分  量 
１％エタノールに溶解した活性成分                20 mg
Intralipid（TM） 乳液                           1,000 mL
上記成分の溶液を患者に１分あたり１ｍＬの速度で静脈内投与した。
ソフトゼラチンカプセルを次の成分を用いて製造した。
【００７３】
製剤８：油製剤のソフトゼラチンカプセル
成  分 量 (mg/カプセル)
活性成分                                      10-500
オリーブオイル又はMiglyol（登録商標）油       500-1000
【００７４】
本発明の他の側面は次のものを含有するキットである。
a. (−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ、及び薬学的に許容される担体又は希釈剤の第１の単位容量形における量；
b. アロマターゼ阻害剤、及び薬学的に許容される担体又は希釈剤の第２の単位容量形における量；及び
c. 容器。
【００７５】
キットは二つの別個の医薬組成物からなる：(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及び上述した第２の化合物。キットは、別々の組成物を例えば仕切りのあるボトル又は仕切られたホイルパッケトに収容するための容器手段を有しているが、別々の組成物は単一の分割されていない容器に入れることも可能である。典型的には、キットは別々の成分の投与方法指示を含んでいる。キット形は、別々の成分を異なる用量形（例えば、経口及び非経口）で好ましく投与される場合、異なった用量間隔で投与される場合、又組み合わせの各成分の増減が処方する医師によって望まれる時には特に有利である。
【００７６】
そのようなキットの例は、いわゆるブリスターパックである。ブリスターパックは包装業界においては良く知られており、医薬品の単位投与形（錠剤、カプセル等）の包装に広く使用されている。ブリスターパックは、好ましくは透明なプラスチック材料のホイルで覆われた比較的硬い材料のシートから構成される。包装過程において収納部がプラスチックホイルに形成される。収納部は包装される錠剤又はカプセルの大きさと形状を持つ。次いで、錠剤又はカプセルがその収納部に入れられ、その比較的硬い材料のシートは、収納部が形成された方向とは反対のホイル表面でプラスチックホイルにより密封される。その結果、錠剤又はカプセルはプラスチックホイル及びシートの間の収納部中に密封される。好ましくはシートの強度は、収納部を手で押圧することにより収納部の部分のシートに孔が形成され、錠剤又はカプセルがブリスターパックから取り出せるようなものが好ましい。錠剤又はカプセルはその開口から取り出される。
【００７７】
キット上に記憶補助具、例えば、錠剤又はカプセルの隣の番号を付し、それが特定された用量単位が摂取される投薬計画の日に対応するようにしたものを備えることが望ましい。記憶補助具の他の例は、カードに印刷したカレンダーであり、「第１週、月曜日、火曜日、...等.... 第２週、月曜日、火曜日、...」等である。記憶補助具の他のバリエーションは自明である。一日当たり用量は、一日に摂取される、一つの錠剤又はカプセル、又はいくつかの錠剤又はカプセルである。又、(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグの一日用量が一個の錠剤又はカプセルであり、アロマターゼ阻害剤の一日用量が数個の錠剤又はカプセルであったり、その逆であったりすることもできる。記憶補助具はこれを反映しなければならない。
【００７８】
本発明の他の特別な態様では、複数の一日用量の一つを一回にそれらの意図された順で分配する分配機が提供される。好ましくは、この分配機は記憶補助具を備えており、それにより処方に対する服薬遵守を促進する。そのような記憶補助具の例は、分配された一日当たり投与量の数を示す機械的なカウンターである。そのような記憶補助具の他の例は、電池式のマイクロチップメモリーであり、液晶読み取り又は音響リマインダー信号と組み合わされ、それは例えば一日用量が最後に取られた日付を読み出したり及び／又は次の用量を取る時をリマインドする。
【００７９】
(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及びアロマターゼ阻害剤は、同じ投与形で又は異なった投与形で同時に又は異なる時に投与されうる。投与方法のあらゆる変法が考えられる。好ましい投与方法は同じ投与形中の組み合わせを同時に投与することである。他の好ましい投与方法は、(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグを一つの投与形とし、そしてアロマターゼ阻害剤を他の投与形として投与し、この両者が同時に服用されることである。
【００８０】
本発明の組成物及び方法に用いられる、(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグは、全て哺乳類特にヒトのエストロゲン受容体を媒介する剤として治療用に適用される。本発明の組成物及び方法に用いられる、アロマターゼ阻害剤又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグは、全てアロマターゼを阻害又は不活化し、それによってアンドロゲン性基質からエストロゲンの合成（特に、好ましい基質のアンドロステンジオンからエストロンの合成及びテストステロンからエストラジオールの合成）に影響する剤として治療用に適用される。これらの活性によって、本発明の組み合わせは乳癌の治療及び低骨量を示す状態の治療及び薄弱性及び前述した他の病気／状態の改善のために有用である。本発明の組み合わせは、乳癌の治療に特に効果的であり、相乗活性を示す。
【００８１】
本発明の組成物及びその塩の哺乳類(例えば、ヒト、男性又は女性)上記の病気／状態の治療における医薬としての有用性は、以下に記載の定法によるアッセー及びインビトロ及びインビボアッセーにおける本発明の組み合わせの活性により示される。インビトロ及びインビボアッセーは（当該技術スキル内での適当な変更を加えて）類似の剤の活性のみならず本発明の組み合わせの活性の決定に用いることができる。そのようなアッセーは、本発明の組成物の活性を他の公知の化合物と比較できるような方法をも提供する。これらの比較の結果は、ヒトを含む哺乳類のそのような病気の治療のための用量レベルを決定するのに有用である。
【００８２】
以下のプロトコールは、適当な場合には当業者により変更されうる。
本発明の組み合わせの乳癌の予防的処置における使用は、Cohen et al., LAS. A Novel Selective Estrogen Receptor Modulator with Chemopreventive and Therapeutic Activity in the N-Nitroso-N-methylurea-induced Rat Mammary Tumor Model. Cancer Research, 61、8683-8688, December 15, 2001に記載のもののように当業者に公知の方法によって評価されうる。(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ及びアロマターゼ阻害剤の組み合わせは、Cohenに記載されたようなプロトコールに従って投与される。用いられたＡＩ化合物がエキセメスタンである時は、代表的な治療有効用量は約0.3mg/kg/日である。組み合わせの有効性は、ラットにおけるＮＭＵ誘導腫瘍の発生の減少又は発生の遅延を測定することにより決められる。
【００８３】
選択的エストロゲン受容体修飾因子(SERM)及び／又はアロマターゼ阻害剤(ＡＩ)の老齢化した自然の及び卵巣切除した雌ラットの体重、体組成及び骨密度に対する影響
この研究の目的は、試験組成物の、老齢化した自然の又は卵巣切除した(ＯＶＸ)雌ラットモデルでの影響を試験するためのものである。以下のプロトコールにおいて用いたＳＥＲＭ化合物は、(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグである。用いたＡＩ化合物がエキセメスタンであるときは、代表的な治療的有効用量は約0.3mg/kg/日である。
【００８４】
研究プロトコール
１８月令のSprague-Dawley雌ラットを偽手術するかＯＶＸし、ラットの１グループを日０において剖検しベースライン対照として用いた。手術後１日目から、ラットを担体又はアロマターゼ阻害剤 (ＡＩ)試験化合物、ＳＥＲＭ試験化合物又はＡＩとＳＥＲＭ試験化合物の組み合わせのいずれかで５９日間処理した。担体又はＡＩ試験化合物は、経口的に又は皮下注射(s.c.)のいずれかによって投与され、ＡＩ化合物は治療的に有効な用量で投与された。ＳＥＲＭ試験化合物は、体重１キログラム当たり１日０.１ミリグラムの用量で経口的に強制投与（Ｐ．Ｏ.）された。
【００８５】
全てのラットは、蛍光骨標識のため、剖検の２日及び１２日前に１０ｍｇ／ｋｇのカルセイン(Sigma、St.Louis, MO)の皮下注射を受けた。剖検の日に、ケタミン／キシラジン麻酔した全てのラットを体重測定し、痩せた及び太った体質量測定のため、Rat Whole Body Scanソフトウエアを備えた二重エネルギーＸ−線吸収分析(DXA、QDR-4500/W、Hologic Inc., Waltham、MA)を行った。ラットを剖検し、次いで検死しそして血液を心臓破裂によって得た。それぞれのラットからの末端大腿骨幹端及び大腿骨幹を末梢定量的コンピューター化断層撮影（ｐＱＣＴ）によって分析し、総容積、小柱及び皮質骨ミネラル含量及び密度を測定した。
【００８６】
末梢定量的コンピューター化断層撮影（ｐＱＣＴ）分析：摘出した大腿骨を、ソフトウエア５.４０版を備えたｐＱＣＴ Ｘ-線機械(Stratec XCT Research M, Norland Medical Systems, Fort Atkinson, Wl.)でスキャンした。厚さ１ミリメートル(mm)の大腿骨幹端の切断面を、５.０ｍｍ（近位大腿骨幹端、一次的海綿状骨部位）及び１３ｍｍ(大腿骨幹、皮質骨部位)で０.１０ｍｍのボクセルサイズの末端から近くで採取した。皮質骨を特定しコンターモード２及び皮質モード４を用いて分析した。皮質殻を軟組織から区別するための外部閾値設定を３４０mg／cm3とし、内皮質表面に沿った皮質骨を区別するための内部閾値を529mg/cm3とした。柱骨は、ピールモード４を用い、(サブ)皮質を海綿状骨から区別するため、閾値を６５５mg／cm3として決定した。特定化された海綿状骨の１％の追加的同心剥離により、（サブ）皮質骨が分析から除外されることを確実にした。容積的体積、密度、及び面積を柱骨及び皮質骨の両方について測定した(Jamsa T. et al., Bone 23:155-161,1998; Ke, H.Z. et al., Journal of Bone and Mineral Research, 16:765-773、2001)。
【００８７】
膣の組織学：膣の組織を固定しパラフィンに埋め込んだ。５ミクロンの切片に切り、アルシアンブルー染色で染色した。膣内腔上皮厚さとムコポリサッカライド（分泌された細胞）の組織学的な試験が行われた。
プロトコールのための実験グループは次のとおりである。
グループ Ｉ:     ベースライン対照
グループ II:     偽 + 担体
グループ III:    OVX + 担体
グループ IV:     OVX + ＡＩ試験化合物（担体中）
グループ Ｖ:     OVX + SERM試験化合物
グループ VI:     OVX + Al試験化合物及びSERM試験化合物
【００８８】
骨折治癒アッセー
以下のプロトコールにおいて用いられた医薬組成物は、(−)-シス-6-フェニル-5-[4-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-5,6,7,8-テトラヒドロナフタレン-2-オール又はその薬学的に許容し得る塩又はプロドラッグ、及びアロマターゼ阻害剤を含有する。
【００８９】
全身的投与後の骨折治癒効果のアッセー
骨折技術：３ヶ月令のSprague-Dawleyラットをケタミンで麻酔した。右側脛部又は大腿部の近接部分の前中央部面上に１ｃｍの切込を作った。以下に脛部手術技術を記載する。切込は骨に達しており、１ｍｍの穴を脛部結節の末端表面近辺４ｍｍ、前方隆線に対し２ｍｍ内側に開けた。脊髄内釘固定法を、０.８ｍｍステンレス管を用いて行った(最高加重３６.３Ｎ、最高硬さ61.8N/mm、骨と同じ条件化で試験した)。脊髄管のリーミングは行わなかった。尖っていない顎を持った特別にデザインされた調節可能なピンセットを用いて３点押し曲げにより、脛腓骨接合の上２ｍｍに、標準化された閉鎖骨折を作った。軟組織の損傷を最小にするため、骨折がずれないように注意を払った。皮膚をモノフィラメントのナイロン縫合糸で封鎖した。手術は無菌状態で行われた。全ての骨折のＸ線写真を釘固定の直後に撮り、骨折が特定のジアフィシール部位にあるラット及び変位した釘のあるラットを除外した。残りの動物を無作為に骨折治癒試験の時点で各サブグループ当たり１０−１２動物の次のグループに分けた。最初のグループは担体（水：１００％エタノール＝９５：５）を１ｍｌ／ラットで毎日強制投与され、他のグループは0.01から１００ｍｇ／ｋｇ／日の試験される医薬組成物（１ｍｌ／ラット）を１０、２０、４０及び８０日毎日強制投与された。
【００９０】
１０、２０、４０及び８０日において、各グループから10-12のラットがケタミンで麻酔され失血によりと殺された。両脛腓骨を開切により取り出し全ての軟組織を剥ぎ取った。各グループ５−６ラットの骨が組織学的分析のために７０％エタノール中に貯蔵され、各グループ５−６ラットの骨が実施される放射線写真及び生化学的試験のために緩衝されたリンゲル液（＋４℃、ｐＨ７.４）中に貯蔵された。
【００９１】
組織学的分析：骨折した骨の組織学的分析方法は、Mosekilde及びBakにより以前に発表されている(The Effects of Growth Hormone on Fracture Healing in Rats: A Histological Description. Bone, 14:19-27,1993)。概略は、骨折部位を骨折線の各サイドまで８ｍｍで鋸で切り、メチルメタクリレートに脱カルシウムしないで埋め込み、前部切片をReichert-Jung Polycutミクロトーム上で８μｍの厚さに切る。Masson-Trichrome染色された中-前部切片（脛骨及び腓骨を含む）を、治療の有無による骨折治癒に対する細胞及び組織反応の可視化のために用いる。シリウスレッド染色切片は仮骨構造の特徴を示すため及び骨折部位における編まれた骨と層状骨を区分するために使われる。次の測定が行われた：(1)骨折ギャップ-骨折の皮質骨の両端間の最も短い距離として測定される、(2)仮骨の長さ及び仮骨の直径、(3)仮骨の総骨容量範囲、(4)仮骨領域内部の組織領域当たりの骨性組織、(5)仮骨内の繊維性組織、及び(6)仮骨内の軟骨領域。
【００９２】
生化学的分析：生化学的分析の方法はBak及びAndreassenにより発表されている(The Effects of Aging on Fracture Healing in Rats. Calcif Tissue Int 45:292-297,1989)。概略は、生化学テストに先立ち全ての骨折のＸ線写真を撮る。治癒中の骨折の機械的な性質は、破壊的３−又は４−点曲げ法により分析される。最大荷重、堅さ、最大荷重におけるエネルギー、最大荷重における変角、及び最大ストレスが測定される。
【００９３】
局所投与後の骨折治癒効果のアッセー
骨折技術：約２歳令の雌又は雄のビーグル犬を麻酔して研究に用いた。横行橈骨骨折をLenehan et al. (Lenehan, T. M.; Balligand, M.; Nunamaker, D.M.; Wood, F.E.: Effects of EHDP on Fracture Healing in Dogs. J Orthop Res 3:499-507; 1985)に記載された３点曲げにおける緩やかな連続荷重により起こした。骨の完全な解剖学的な破壊を確実にするためにワイヤーを骨折部位を通して引っ張った。その後、試験医薬組成物の骨折部位への局所伝達を、除放ペレットによる化合物の除放により又はペーストゲル溶液又は懸濁液のような適当な製剤中の化合物の投与によって１０.１５又は２０週行った。
【００９４】
組織学的分析：骨折の組織学的分析の方法は、Peter et al. (Peter, C.P.; Cook、W.O.; Nunamaker, DM; Provost, M. T.; Seedor, J.G.; Rodan, G.A. Effects of alendronate on fracture healing and bone remodeling in dogs. J. Orthop. Res. 14:74-70,1996)及びMosekilde 及びBak (The Effects of Growth Hormone on Fracture Healing in Rats: A Histological Description. Bone, 14:19-27,1993)により以前に発行されている。概略は、と殺後、骨折部位を骨折線の各サイドに対し３ｃｍに鋸で切断し、脱カルシウムしないでメチルメタクリレート中に埋め込み、Reichert-Jung Polycutミクロトーム上で前面切片の厚さ8μｍに切る。 Masson-Trichrome染色した中間-前面切片（脛骨及び腓骨を含む）を治療したものとしなかったものの骨折治癒に対する細胞及び組織反応の可視化のために用いた。シリウスレッド染色切片を仮骨構造の性質を示すため及び骨折部位における編まれた骨と層状骨の区分するために使われる。次の測定が行われた：(1)骨折ギャップ-骨折の皮質骨の両端間の最も短い距離として測定される、(2)仮骨の長さ及び仮骨の直径、(3)仮骨の総骨容量範囲、(4)仮骨領域内部の組織領域当たりの骨性組織、(5)仮骨内の繊維性組織、及び(6)仮骨内の軟骨領域。
【００９５】
生化学的分析： 生化学的分析の方法はBak及びAndreassenにより(The Effects of Aging on Fracture Healing in Rats. Calcif Tissue Int 45:292-297,1989)及びPeter et al. (Peter, C.P.; Cook, W.O.; Nunamaker, D.M.; Provost、M. T.; Seedor, J.G.; Rodan, G.A. Effects of Alendronate On Fracture Healing And Bone Remodeling In Dogs. J. Orthop. Res. 14:74-70,1996)により既に発表されている。概略は、生化学テストに先立ち全ての骨折のＸ線写真を撮る。治癒中の骨折の機械的な性質は、破壊的３−又は４−点曲げ法により分析される。最大荷重、堅さ、最大荷重におけるエネルギー、最大荷重における変角、及び最大ストレスが測定される。
【００９６】
本出願に引用された、特許及び特許出願を含む全ての文献は、引用により組み込まれる。