(57)【要約】  【課題】  アディポネクチンを上昇させる効果があり、天然物質由来で安全性が高く、アディポネクチン調節作用を有するアディポネクチン調節剤を提供する。  【解決手段】  リンゴ抽出物を有効成分として含有してなることを特徴とするアディポネクチン調節剤。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
リンゴ抽出物を有効成分として含有してなることを特徴とするアディポネクチン調節剤。
【請求項２】
前記リンゴ抽出物がリンゴ由来ポリフェノールであることを特徴とする請求項１に記載のアディポネクチン調節剤。
【請求項３】
請求項１または２に記載のアディポネクチン調節剤を含有する飲食品。 
【請求項４】
請求項１または２に記載のアディポネクチン調節剤を含有する食品添加物。
【請求項５】
請求項１または２に記載のアディポネクチン調節剤を含有する医薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、リンゴより得られるアディポネクチン調節剤、それを含有する飲食品、食品添加物及び医薬に関する。
【背景技術】
【０００２】
日本人の糖尿病・肥満患者は、糖尿病患者だけで推定700万人でその数はなお増加の一途をたどっている。糖尿病の大部分を占める一般のII型糖尿病及び肥満は、複数の原因遺伝子が組合わさり、更に生活習慣などの環境因子が重なって発症する多因子病である。糖尿病・肥満増加の最大の原因は食生活の欧米化、特に高脂肪食と身体活動の減少など生活習慣に起因したインスリン抵抗性の増大と考えられる。
【０００３】
また、現在、動脈硬化性疾患は日本人の死因統計で癌と並んで大きな位置を占め、またその多くは働き盛りに突然発症して、社会的にも家庭的にも極めて大きな損失を与えることから、その効果的な予防及び治療対策の確立は必須の課題である（非特許文献１）。
【０００４】
アディポネクチン（adiponectin）は脂肪細胞に特異的に高発現する分泌蛋白質として発見されたが、その後の研究で単球の血管内皮細胞への接着や、平滑筋細胞の増殖を抑制するなど、抗動脈硬化的な作用を持つことが明らかとなった。
【０００５】
糖尿病との関係については、動物モデルにおいて、II型糖尿病サルにおいて、インスリン抵抗性の進行に伴いアディポネクチンが低値になること、グルコースクランプにおける糖取り込み指標（Ｍ値）に相関して、血中アディポネクチンが上昇することが示されている（非特許文献２）。さらに、II型糖尿病マウス（ｄｂ/ｄｂマウス、KKAｙマウス）への生理的濃度のアディポネクチン投与により、インスリン抵抗性が改善すること、脂肪欠損マウスでのインスリン抵抗性をアディポネクチン投与が改善することも示され、アディポネクチンの発現低下又は欠乏は、肥満インスリン抵抗性の原因であり、ひいては肥満及び２型糖尿病の原因であることが判明している（非特許文献３）。
【０００６】
また、冠動脈疾患患者や肥満患者では健常人に比べてアディポネクチンの血中濃度が低値を示すことが報告されている。
【０００７】
このように、脂肪組織特異的なタンパク質であるアディポネクチンは、血管平滑筋の増殖、遊走抑制作用、抗動脈硬化作用、単球やマクロファージの活性化抑制作用、抗炎症作用などが知られていたが、さらに、最近の研究により、肝線維化抑制、正常肝細胞増殖促進効果のあることも確かめられている。
【０００８】
したがって、このような生活習慣病の根本的予防法や治療法を確立することが急務となっている。
【非特許文献１】動脈硬化性疾患診療ガイドライン、日本動脈硬化学会編、2002
【非特許文献２】DIABETES  Vol.50：1126・1133(2001)
【非特許文献３】Nature  Medecine  Vol. 7:  941-946  (2001)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
薬物治療の普及は安易に薬剤に依存し、ライフスタイルの改善が十分おこなわれない恐れもある。しかしながら、現状では、天然物由来であって、生活習慣病に対する幅広い機能性を有し、かつ、副作用の可能性が極めて小さいという点において、十分満足できるものは見出されておらず、これらの性質を満足するアディポネクチン調節剤が切望されている。
【００１０】
本発明が解決しようとする課題は、アディポネクチンを上昇させる効果があり、天然物質由来で安全性が高く、アディポネクチン調節作用を有するアディポネクチン調節剤、飲食品、食品添加物または医薬を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上記課題を解決するため鋭意研究を重ねた結果、本発明者らはリンゴ抽出物が、アディポネクチン調節作用を有することを見出し、本発明を完成するに至った。 
【００１２】
すなわち、本発明は以下の内容を要旨とするものである。
（１）リンゴ抽出物を有効成分として含有してなることを特徴とするアディポネクチン調節剤。
（２）前記リンゴ抽出物がリンゴ由来ポリフェノールであることを特徴とする（１）に記載のアディポネクチン調節剤。
（３）（１）または（２）に記載のアディポネクチン調節剤を含有する飲食品。
（４）（１）または（２）に記載のアディポネクチン調節剤を含有する食品添加物。
（５）（１）または（２）に記載のアディポネクチン調節剤を含有する医薬。
【発明の効果】
【００１３】
本発明のリンゴ抽出物を有効成分とするアディポネクチン調節剤は、副作用が極めて少なくアディポネクチンを上昇させることができる。
【００１４】
また、上記のアディポネクチン調節剤を有効成分として含有する飲食品、食品添加物及び医薬は、副作用が極めて少なくアディポネクチンを上昇させることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
アディポネクチンの発現低下又は欠乏は、肥満インスリン抵抗性の原因であり、ひいては肥満及びII型糖尿病の原因であることが判明している。さらに、冠動脈疾患患者や肥満患者では健常人に比べてアディポネクチンの血中濃度が低値を示すことが報告されている。よって、本発明におけるアディポネクチン調節剤とは、アディポネクチンの血中濃度を正常に調節するものを指す。
【００１６】
本発明におけるリンゴ由来ポリフェノールは、リンゴ抽出物中に由来ポリフェノールを有効成分として含まれているものである。本発明におけるアディポネクチン調節剤は、リンゴ抽出物あるいはリンゴ由来ポリフェノールのいずれでもよいが、好ましくはリンゴ由来ポリフェノールである。精製度の高いリンゴ由来ポリフェノールは、飲食品等に添加する場合、おりや濁りを発生しにくく、また、飲食品等自身に与える風味の影響も抑えることができるといった加工上の応用性が高い。
【００１７】
本発明で使用するリンゴ由来ポリフェノールを含有するリンゴ抽出物は、バラ科リンゴ属植物の果実、例えば、フジ、陸奥、津軽、スターキング・デリシャス等の栽培品種及び原種リンゴ等より公知抽出手段により抽出して得られる。
【００１８】
果実としては成熟果実、未熟果実ともに用いることができるが、より多くのポリフェノール化合物を含有すること、及び広範な生理作用を有する各種活性成分を多量に含むことから、未熟果実が特に好ましい。
【００１９】
本発明のリンゴ抽出物中に含有されるリンゴ由来ポリフェノールは、リンゴ果実、若しくは未熟果実の搾汁果汁、抽出液より精製されたポリフェノール画分からなるものであるが、当該ポリフェノール画分の精製は、搾汁果汁、抽出液を吸着剤で処理することにより行なわれ、吸着剤に吸着する画分（以下、吸着画分という）にポリフェノールは含有されている。吸着剤としては、ポリフェノールを吸着するものであれば特に限定されないが、例えば親水性ビニルポリマー樹脂（東ソー社製「トヨパールHW４０」）、スチレン−ジビニルベンゼン樹脂（三菱化学社製「セパビーズＳＰ−８５０」）、ゲル型合成樹脂（三菱化学社製「ダイヤイオンHP-20」）を挙げることができる。
【００２０】
前記吸着剤に吸着した吸着画分を、例えば含水エタノール等のアルコール溶媒で溶出させることにより、ポリフェノール画分が精製される。当該ポリフェノール画分は、次いで濃縮処理することにより液体製剤を得ることができ、さらに、当該液体製剤を噴霧乾燥もしくは凍結乾燥処理することにより粉末製剤を得ることもできる。
【００２１】
リンゴ由来ポリフェノールの原料となるリンゴ抽出物の抽出方法としては、例えば洗浄した原料をpH３．２〜４．６、好ましくはpH３．５〜４．３で破砕し、得られた果汁にペクチナーゼを５〜７５℃、好ましくは３０〜６０℃で１０〜１００ｐｐｍ、好ましくは２０〜３０ｐｐｍで清澄化を行い、遠心分離後、５〜７５℃、好ましくは１５〜２５℃で珪藻土（商品名「シリカ３００S」、中央シリカ社製）濾過によりさらに清澄化を行い、清澄果汁を得る。或いはヘキサン、クロロホルム等の有機溶媒による分配及び濾過を行い、清澄抽出液としてリンゴ抽出物が得られる。
【００２２】
リンゴ抽出物よりリンゴ由来ポリフェノールを得るには、次いで清澄抽出液を０〜４０℃、好ましくは１５〜２５℃、pH１．５〜４．２、好ましくはpH３．０〜４．０で前記吸着剤を充填した吸着カラム（商品名「セパビーズＳＰ−８５０」、三菱化学社製）に通液し、ポリフェノール類を吸着させる。続いて純水を通液し、カラム中の非吸着物質（糖類、有機酸類等）を除去した後、１０〜９０％、好ましくは３０〜８０％のエタノールで吸着画分を溶出する。得られた吸着画分からエタノールを２５〜１００℃、好ましくは３５〜９０℃で減圧留去濃縮し、濃縮液をそのままで液体のリンゴ由来ポリフェノールとしてもよい。或いはデキストリン等の粉末助剤を添加し、噴霧乾燥又は凍結乾燥を行い、リンゴ由来ポリフェノールの抽出粉末品としてもよい。
【００２３】
本発明のアディポネクチン調節剤により、アディポネクチンを調節する効果を得るための成人１日あたりの投与量は、リンゴ抽出物あるいはリンゴポリフェノールとして、100〜2500 mgであるが、好ましくは150〜1500 mg、更に好ましくは150〜1000 mg、特に150〜750 mgであるのが好ましい。
【００２４】
本発明のアディポネクチン調節剤を利用する場合、ポリフェノール類の吸収の点から、１日あたりのリンゴ抽出物量またはリンゴ由来ポリフェノール量を少ない回数で摂取する方がポリフェノール類の血中濃度が高くなり、ポリフェノール類の作用を発現しやすい。
【００２５】
本発明のアディポネクチン調節剤は、飲料を含む、広く食品一般に食品添加物として添加して用いることができ、例えばスープ類、飲料（ジュース、酒、ミネラルウォーター、コーヒー、茶、ノンアルコールビール等）、菓子類（ガム、キャンディー、チョコレート、スナック、ゼリー等）、麺類（そば、うどん、ラーメン等）、アルコール飲料（ビール、発泡酒、カクテル、チューハイ、焼酎、日本酒、ウィスキー、ブランデー、ワイン等）に好適に用いられる。
【００２６】
本発明のアディポネクチン調節剤を含む医薬品の剤形は特に限定されないが、例えば錠剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、カプセル剤、丸剤等の固形製剤、水剤、懸濁剤、シロップ剤、乳剤等の液剤等の経口投与剤が挙げられる。この経口投与剤は、形態に応じて当分野において通常用いられる賦形剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、界面活性剤、アルコール類、水、水溶性高分子、甘味料、矯味剤、酸味料、薬剤用担体等を添加して通常使用されている方法によって製造することができる。
【００２７】
実施例
次に実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明は何らこれに限定されるものではない。 
【００２８】
（製造例１）
青森県産リンゴ幼果３００ｋｇを破砕、圧搾し果汁２１０ｋｇを得た。得られた果汁にペクチナーゼ３０ｐｐｍで清澄化を行い、遠心分離後、珪藻土（シリカ３００Ｓ、中央シリカ社製）濾過により清澄化を行い清澄果汁を得た。清澄果汁を吸着カラム（セパヒーズＳＰ−８５０、三菱化学社製）に通液し、ポリフェノール類を吸着させた。続いて純水を通液し、カラム中の非吸着物室（糖類、有機酸類など）を除去したのち、８０％アルコールで溶出した。得られた画分からアルコールを減圧濃縮し、抽出粉末品約２ｋｇを調製した。抽出粉末品を逆相計高速液体クロマトグラフィーを用いて検定したところ、クロロゲン酸類（約２０％）、フロレチレン配糖体類（約５％）、フラボノール類（約１５％）、プロアントシアニジン（約５０％）及びその他褐変物質（約１０％）からなることが確認できた。更に、このプロシアジニン類は、マトリックス支援レーザーイオン化―飛行時間型質量分析計(ＭＡＬＤＩ−ＴＯＦ／ＭＳ、アプライドバイオシステム社製)による解析の結果、フラボノール類であるカテキンやエビカテキンから構成される２量体から１５量体までのオリゴマーやポリマーであることが確認された。（Ｍ.Ohnishi−kameyama  et  al.Mass  Spectrometry，11，31，-36，1997）
【００２９】
（比較例１）錠剤
ラクトース１４０ｇとコーンスターチ１７ｇとを混合し、この混合物をあらかじめコーンスターチ７０ｇから調整したペーストとともに顆粒化した。得られた顆粒にステアリン酸マグネシウム１ｇを加えてよく混合し、この混合物を打錠機にて打錠して錠剤１０００個を製造した。
【００３０】
（実施例１）錠剤  
製造例１で得られたリンゴポリフェノール１５０ｇとラクトース９０ｇとコーンスターチ１７ｇを混合し、この混合物をあらかじめコーンスターチ７０ｇから調整したペーストとともに顆粒化した。得られた顆粒にステアリン酸マグネシウム１ｇを加えてよく混合し、この混合物を打錠機にて打錠して錠剤１０００個を製造した。
【００３１】
（試験例１）リンゴポリフェノールの脂肪蓄積抑制作用（ヒト）
次に、臨床試験により、リンゴポリフェノールの脂肪蓄積抑制作用を検討した。
【００３２】
［方法］
1) 対象
有償ボランティアで、本試験への参加を自発的に志願した20歳以上の男女の中から、試験開始4週間前に実施した予備試験において、肥満指数が22＜BMI≦30を示す50名を選択した。ただし、脂質代謝に影響を及ぼす可能性のある医薬品や健康食品を服用している者、食品アレルギーの既往歴のある者、本試験開始1ヶ月以内に200 ml、または、3ヶ月以内に400 mlを越えるような採血（献血など）をした者、試験責任医師が試験参加に不適であると判断した者は対象から除外した。この50名を、試験に直接参加しない医師が、予備試験の検査結果(血液、理学的検査)および摂取前に行ったCT検査結果をもとに、年齢、体重、身長、肥満指数、血圧、中性脂肪、全脂肪面積(TFA)、内臓脂肪面積(VFA)、および皮下脂肪面積（SFA）ウェスト/ヒップ等の背景がそろうように2群に分けた。なお、本試験は、ヘルシンキ宣言の主旨に従い、被験者に対しては研究内容、方法などについて十分な説明を行ない、文書による同意を得て実施した。
【００３３】
2) 試験食
本試験食は、実施例１で製造されたリンゴポリフェノールを含有した錠剤（150mg/1錠）および比較例１で製造されたポリフェノールが配合されていない対照食(プラセボ錠剤)とした。また、試験実施前に、試験責任医師が、風味、香りなどの官能面やパッケージなどにより、被験飲料とプラセボ錠剤間で区別がつかないことを確認した。
【００３４】
3) 摂取方法とスケジュール
試験は、無作為割付による2重盲検法を採用した並行2群間比較試験とした。試験期間は、前観察期間4週間、摂取期間12週間、摂取終了後の観察期間4週間の計20週間を設定した。被験者は、2つのグループに分け、次の方法で試験錠剤を摂取させた。
【００３５】
A群：リンゴポリフェノール含有被験錠剤(150 mｇ/１錠)を夕食前に各4錠摂取（計4錠/日）、以下  リンゴポリフェノール被験錠剤摂取群
B群：プラセボ錠剤(150 mg/１錠)を夕食前に各4錠摂取 （計4錠/日）、以下  プラセボ錠剤摂取群  なお、被験者には、試験錠剤を毎日摂取することを除いて、それまでの食生活、喫煙および運動などの日常生活を変えないように指導した。
【００３６】
４) 血液検査
全ての被験者に、摂取開始日、摂取12週間後（摂取終了）において、アディポネクチン、Na、Ca、Cl、K、GPT（ALT）、LDH、総ビリルビン、UIBC、Fe、γ-GTP、総蛋白質、尿素窒素、血球成分（白血球、赤血球、ヘモグロビン量、ヘマトクリット値、MCV、MCH、MCHC、血小板数）の測定項目を実施した。すべての検査に際しては、食事や運動などの外因的影響を避けるため、12時間以上の絶食を行い、来院後10分以上の安静状態を維持した後、座位にて採血を実施した。
【００３７】
（結果）
結果を表１に示した。アディポネクチンについては、プラセボカプセル摂取群において、摂取12週間後に有意な低下が認められた (ｐ＜0.001)。群間比較において、プラセボカプセル摂取群とリンゴポリフェノール被験カプセル摂取群間 (p＜0.01)で有意な差が認められた。また、各種血液検査から異常は認められなかった。摂取期間中、問題となるような訴えは全く見られなかった。
【００３８】
【表１】
2006193502.tif 000002
【産業上の利用可能性】
【００３９】
リンゴ抽出物を有効成分とするアディポネクチン調節剤は、副作用が極めて少なくアディポネクチンを調節することができるので、本発明は有用である。
【００４０】
また、上記のアディポネクチン調節剤を有効成分として含有する飲食品、食品添加物及び医薬は、副作用が極めて少なく血中のアディポネクチン量を調節することができるので、本発明は有用である。