(57)【要約】【課題】  天然物質より得られる化合物であって、ＮＯ産生抑制作用にもとづく抗アレルギー作用を示す新規なＮＯ産生抑制活性物質、このＮＯ産生抑制活性物質をベースとし、安全かつ高性能の抗アレルギー剤、及び天然物質より、このＮＯ産生抑制活性物質を得る製造方法を提供する。【解決手段】  下記の構造式（１）、又は類似の構造式で表されることを特徴とするＮＯ産生抑制作用を有する化合物、このＮＯ産生抑制活性物質を含有する抗アレルギー剤、及び天然物質より、このＮＯ産生抑制活性物質を得る製造方法。2006290847.tif 000012【選択図】    なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の構造式（１）で表されることを特徴とするＮＯ産生抑制作用を有する化合物。
【化１】
2006290847.tif 000008
【請求項２】
下記の構造式（２）で表される化合物、又はその鏡像体であることを特徴とするＮＯ産生抑制作用を有する化合物。
【化２】
2006290847.tif 000009
【請求項３】
下記の構造式（３）で表される化合物、又はその鏡像体であることを特徴とするＮＯ産生抑制作用を有する化合物。
【化３】
2006290847.tif 000010
【請求項４】
下記の構造式（４）で表される化合物、又はその鏡像体であることを特徴とするＮＯ産生抑制作用を有する化合物。
【化４】
2006290847.tif 000011
【請求項５】
アルピニアガランガ(Alpinia galanga)の根茎を、アセトンまたは低級アルコールを１５重量％以上含む水溶液により抽出し、抽出物を、クロマトグラフィーにより分画処理して得られたことを特徴とする請求項１ないし請求項４のいずれかに記載のＮＯ産生抑制作用を有する化合物。
【請求項６】
請求項１ないし請求項５のいずれかに記載のＮＯ産生抑制作用を有する化合物を含有することを特徴とする抗アレルギー剤。
【請求項７】
アルピニアガランガ（Alpinia galanga）の根茎を、アセトンまたは低級アルコールを１５重量％以上含む水溶液により抽出し、抽出物を、クロマトグラフィーにより分画処理する工程を有することを特徴とする請求項１ないし請求項４のいずれかに記載のＮＯ産生抑制作用を有する化合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ショウガ科（Zingiberaceae）に属する天然植物から抽出することができるＮＯ産生抑制作用を有する化合物、この化合物をベースとして含有する抗アレルギー剤（天然医薬品）、及びこの化合物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
天然物質に由来する天然医薬品は、安全でありかつ手軽に飲食用として供することができる医薬品と考えられている。そこで、化学合成品に由来しない新しい天然医薬品を開発すべく、世界の種々の伝承医学において使用されている生薬が広く注目されている。例えば、ヒドロコーチゾン等のＮＯ産生を抑制する薬剤は、抗アレルギー薬に分類される医療用の医薬品において、アトピーをはじめとする種々のアレルギー疾患の治療薬として使われているが、このような抗アレルギー薬についても、生薬等より得られる天然医薬品の開発が常に求められている。
【０００３】
本発明者は、天然医薬品の開発という方向のもとで、特に抗Ｉ型アレルギー剤の開発を行ってきた。この中で、本発明者は、広く東南アジアから中国まで分布しており、その根茎が健胃や駆風、皮膚疾患の治療などに用いられているアルピニアガランガ（Alpinia galanga）に着目し、その抽出物が、ＮＯ産生抑制作用にもとづく抗アレルギー作用を示すことを突き止めている（特開２００４−１８９６６９号公報）。
【０００４】
さらに本発明者は、前記抽出物中の、抗アレルギー作用を発現する活性本体（活性物質）を見出し、下記の構造式（５）（1'S-1'-acetoxychavicol acetate）で表わされる公知化合物を得ている。
【０００５】
【化１】
2006290847.tif 000002
（式中、Acはアセチル基を表わす。）
【特許文献１】特開２００４−１８９６６９号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、天然物質より得られる化合物であって、前記構造式（５）の化合物と同様に、ＮＯ産生抑制作用にもとづく抗アレルギー作用を示す新規な化合物（ＮＯ産生抑制活性物質）を提供することを課題とする。本発明は、又、このＮＯ産生抑制活性物質をベースとし、安全かつ高性能の抗アレルギー剤を提供することを課題とする。本発明は、さらに、天然物質より、このＮＯ産生抑制活性物質を得る製造方法を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者は、ショウガ科の植物中に含有される活性本体についてさらに検討を加えた結果、アルピニアガランガの抽出物より、前記構造式（５）の化合物の他にも、ＮＯ産生抑制作用を有する化合物が得られること、さらにその化合物が従来は知られていない構造を有することを見出し、この知見をベースに本発明を完成した。
【０００８】
本発明の第一の態様は、下記の構造式（１）、（２）、（３）若しくは（４）で表されることを特徴とするＮＯ産生抑制作用を有する化合物、又は下記の構造式（２）、（３）若しくは（４）で表される化合物の鏡像体（鏡像異性体）であることを特徴とするＮＯ産生抑制作用を有する化合物を提供するものである。
【０００９】
【化２】
2006290847.tif 000003
（請求項１）
【００１０】
【化３】
2006290847.tif 000004
（請求項２）
【００１１】
【化４】
2006290847.tif 000005
（請求項３）
【００１２】
【化５】
2006290847.tif 000006
（請求項４）
【００１３】
なお、以下の説明に於いて、構造式（１）で示される化合物をガランガナール(galanganal)といい、構造式（２）で示される化合物、この化合物の鏡像体及びこれらの混合物をガランガノールＡ(galanganol A)、構造式（３）で示される化合物、この化合物の鏡像体及びこれらの混合物をガランガノールＢ(galanganol B)、及び、構造式（４）で示される化合物、この化合物の鏡像体及びこれらの混合物をガランガノールＣ(galanganol C)ということがある。
【００１４】
ガランガナール、ガランガノールＡ、ガランガノールＢ又はガランガノールＣは、アルピニアガランガをベースにして、抽出分画法を適用して得ることができる。より具体的には、アルピニアガランガの根茎を、アセトン、アセトンと水の混合溶媒、低級アルコール、低級アルコールと水との混合溶媒等の抽出剤により抽出し、抽出物をクロマトグラフィーにより分画処理して得られる。抽出剤としてはアセトン又は低級アルコールを、濃度１５重量％以上を含む水溶液が好ましい。
【００１５】
請求項５は、この好ましい態様に該当し、前記の請求項１ないし請求項４のいずれかに記載のＮＯ産生抑制作用を有する化合物（すなわちガランガナール、ガランガノールＡ、ガランガノールＢ又はガランガノールＣ）であって、アルピニアガランガの根茎を、アセトンまたは低級アルコールを濃度１５重量％以上含む水溶液により抽出し、抽出物を、クロマトグラフィーにより分画処理して得られたことを特徴とするＮＯ産生抑制作用を有する化合物を提供するものである。
【００１６】
ここで、低級アルコールとは、炭素数６以下のアルコールであって、メタノール、エタノール、プロパノール及びブタノールが例示される。抽出は室温又は抽出剤の沸点未満の温度で加熱して行うことができるが、室温で抽出する場合は、１〜３昼夜かけて抽出を行い、好ましくはこの抽出を数回繰り返す。加熱することにより、1回の抽出時間を１〜４時間程度まで短縮することができる。
【００１７】
ここで、アルピニアガランガとは、別名をナンキョーソウといい、タイではカーと呼ばれているショウガ科に属する植物であり、タイでは香辛料として使用されているが、前記のようにその根茎が健胃や駆風、皮膚疾患の治療などに用いられている。
【００１８】
前記の抽出分画法により、ガランガナール、ガランガノールＡ、ガランガノールＢ又はガランガノールＣが、単なる抽出物に比べてはるかに高純度で得られる。後述する抗アレルギー剤等の医薬品として用いる場合の製剤の容易さ等の観点から、ガランガナール、ガランガノールＡ、ガランガノールＢ又はガランガノールＣであって純度、すなわちその含有率が１０重量％以上、より好ましくは９０重量％以上のものが好ましいが、前記の抽出及び分画処理により、９０重量％以上の高純度の化合物を容易に得ることができる。
【００１９】
本発明の第二の態様は、前記構造式（１）、（２）、（３）若しくは（４）で表される化合物、又は前記構造式（２）、（３）若しくは（４）で表される化合物の鏡像体（鏡像異性体）（ＮＯ産生抑制活性物質、すなわちガランガナール、ガランガノールＡ、ガランガノールＢ又はガランガノールＣ）を含有することを特徴とする抗アレルギー剤（請求項６）に関するものである。この抗アレルギー剤は、ガランガナール、ガランガノールＡ、ガランガノールＢ又はガランガノールＣのＮＯ産生抑制作用を利用したものである。この抗アレルギー剤中の、この化合物の含有割合は特に限定されないが、製剤の容易さや投与しやすさ等の観点から、抗アレルギー剤中に５重量％以上含有することが好ましい。この抗アレルギー剤は、前記構造式（１）、（２）、（３）若しくは（４）で表される化合物、又は前記構造式（２）、（３）若しくは（４）で表される化合物の鏡像体（鏡像異性体）をそれぞれ１種類で含有してもよいし、これらから選ばれる２種類以上の混合物を含有してもよい。通常、前記構造式（２）、（３）又は（４）で表される化合物については、その鏡像体との混合物として、本発明の抗アレルギー剤中に含有される。
【００２０】
前記ガランガナール、ガランガノールＡ、ガランガノールＢ又はガランガノールＣは、脂溶性が高い。そこで、抗アレルギー剤等として用いられるときは、適当な賦形剤あるいは乳糖やデンプン等を混合して錠剤の形態とし、又は顆粒の形態等にして使用に供することができる。又、これらの化合物は、ガムやチョコレート、あるいは脂質の多いバター、マーガリン、または菓子類などに対し、極微量を添加する添加剤として使用することができ、この場合でも抗アレルギー作用を発揮する。
【００２１】
本発明の第三の態様は、前記ガランガナール、ガランガノールＡ、ガランガノールＢ又はガランガノールＣの製造方法に関するものであり、アルピニアガランガの根茎を、アセトンまたは低級アルコールを１５重量％以上含む水溶液により抽出し、抽出物を、クロマトグラフィーにより分画処理する工程を有することを特徴とする前記構造式（１）、（２）、（３）若しくは（４）で表される化合物、又は前記構造式（２）、（３）若しくは（４）で表される化合物の鏡像体（ＮＯ産生抑制活性物質、すなわちガランガナール、ガランガノールＡ、ガランガノールＢ又はガランガノールＣ）の製造方法（請求項７）を提供するものである。
【００２２】
前記のようにガランガナール、ガランガノールＡ、ガランガノールＢ又はガランガノールＣは、アルピニアガランガをベースにして、抽出分画法を適用して得ることができる。本発明者は、検討の結果、これらの化合物の効率的かつ経済的な抽出法を確立することにも成功した。
【００２３】
クロマトグラフィーによる分画処理は、吸着クロマトグラフィー又は逆相クロマトグラフィーにより行うことができる。ここで、吸着クロマトグラフィーに用いられるゲルとしては、シリカゲル、アルミナ等が、逆相クロマトグラフィーに用いられるゲルとしては、オクタデシル基（ＯＤＳ）やオクチル基（Ｃ８）を結合したシリカゲル等、通常の吸着及び逆相クロマトグラフィーに用いられるものが使用できる。なお、ここで、吸着及び逆相クロマトグラフィーには、硬質ゲルをステンレス菅等の耐圧菅に詰め、高圧下で移動相を流して高速分離する場合も含まれる。
【００２４】
用いられる移動相としては、酢酸エチル、ｎ−ヘキサン等の脂肪族炭化水素、メタノール、水やこれらの混合物が例示される。試料の添加量や、移動相の流速等は特に限定されず、所望の純度で目的とする化合物が得られる条件を、簡易な予備実験により求め、この条件に従って分画処理が行われる。クロマトグラフィーによる溶出物は分画されるが、各分画について、ＮＯ産生阻害作用を調べ、ＮＯ産生阻害作用を有する分画について、必要によりさらに前記と同様なクロマトグラフィーによる分画処理を行うことにより、ガランガナール、ガランガノールＡ、ガランガノールＢ又はガランガノールＣを得ることができる。なお、この方法により得られるガランガノールＡ、ガランガノールＢ及びガランガノールＣは、それぞれ、前記構造式（２）で表される化合物及びその鏡像体の混合物、前記構造式（３）で表される化合物及びその鏡像体の混合物、及び前記構造式（４）で表される化合物及びその鏡像体の混合物である。これらの混合物から、通常の光学分割法により、鏡像体の一方のみを得ることができる。
【００２５】
なお、抽出物を、予め酢酸エチルやクロロホルムと水に分配し、水溶性の不活性分を除去した後、ゲル濾過クロマトグラフィーによる分画を行ってもよい。
【発明の効果】
【００２６】
構造式（１）、（２）、（３）若しくは（４）で表される化合物、又は前記構造式（２）、（３）若しくは（４）で表される化合物の鏡像体（すなわちガランガナール、ガランガノールＡ、ガランガノールＢ又はガランガノールＣ）である本発明の化合物は、ＮＯ産生抑制活性を有し、アトピーをはじめとする種々のアレルギー疾患の治療薬（抗アレルギー剤）として使用できるものである。特に、アルピニアガランガより、前記所定条件での抽出、分画により、高純度の化合物が得られ、高性能の抗アレルギー剤として好適に使用される。
【００２７】
又、ガランガナール、ガランガノールＡ、ガランガノールＢ又はガランガノールＣは、従来から生薬として利用されてきたアルピニアガランガより得られるものであるので、この化合物を活性成分として含有する本発明の抗アレルギー剤は、安全性に優れた抗アレルギー剤である。
【００２８】
本発明の製造方法によれば、アルピニアガランガから抽出分画法により、ガランガナール、ガランガノールＡ、ガランガノールＢ又はガランガノールＣを、効率的かつ経済的に得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
次に本発明を実施するためのより具体的な形態を、実施例により説明する。なお、実施例は、本発明の範囲を限定するものではなく、本発明の趣旨を損なわない限り、他の形態へ変更することができる。
【実施例】
【００３０】
１．ガランガナール、ガランガノールＡ、ガランガノールＢ又はガランガノールＣ（ＮＯ産生抑制活性物質）の製造
１）アルピニア ガランガの８０％含水アセトンエキスの製法（抽出工程）
アルピニアガランガとしては、タイ産の天然品を用いた。このアルピニアガランガの根茎の２.１ｋｇを粉砕したものを、約１０重量倍（２０Ｌ）の８０％含水アセトン（ナカライテスク社製の特級アセトンと蒸留水との８０：２０重量比の混合液）に加え、室温で一昼夜（２４時間）冷浸して、抽出した。抽出後、ろ紙（アドバンテック社製Ｎo.２ろ紙）にてろ過後、抽出残渣にさらに８０％含水アセトン（２０Ｌ）を加え、室温で一昼夜（２４時間）冷浸して、同様にろ過を行った。このような抽出を合計３回行い、その抽出液を合わせた後、ロータリーエバポレーターを用いて減圧下溶媒を留去し、アルピニア ガランガの８０％含水アセトン抽出エキス１３８ｇ（使用したアルピニアガランガに対して
６.６重量％、以下単に抽出エキスと言う。）を得た。
【００３１】
２）抽出エキスの分画（分画工程）
イ）抽出エキスのクロマト分離
１）で得た抽出エキス１３８ｇを、順相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（富士シリシア社製、ＢＷ−２００、１５０−３５０ｍｅｓｈ、３.０ｋｇ、移動相：ｎ−ヘキサン：酢酸エチル（１０：１→５：１）→メタノール）を使用し、下記の態様で溶離液を流入した後、画分毎に減圧下溶媒を留去し、分画１〜分画１３を得た。
【００３２】
［画分画の収量］
分画１（０.７ｇ）、分画２（２.３ｇ）、分画３（０.５ｇ）、分画４（２.８ｇ）、分画５（２３.０ｇ）、分画６（１.７ｇ）、分画７（２.６ｇ）、分画８（３.６ｇ）、分画９（１.９ｇ）、分画１０（５.８ｇ）、分画１１（５.０ｇ）、分画１２（６.３ｇ）、分画１３（７３.８ｇ）。
【００３３】
ロ）分画９の再分画
分画１〜分画１３について、リポ多糖で刺激したマウス腹腔マクロファージからのＮＯ産生阻害作用（阻害活性：ＩＣ50値）を培養液中に蓄積したＮＯ２−を指標に調べたところ、分画９が特に強力な阻害作用を示した。又、分画１１も阻害作用を示した。そこで、この分画９（１.９ｇ）をさらに逆相カラムクロマトグラフィー（富士シリシア社製、Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ  ＯＤＳ  ＤＭ１０２０Ｔ、１００−２００ｍｅｓｈ、６０ｇ、移動相：メタノール：水（３０：７０→５０：５０→７０：３０、ｖ／ｖ、それぞれ３００ｍＬ）→メタノールのみ（８００ｍＬ））にて分離した後、減圧下溶媒を留去し、１００ｍｇ（０.００４８％）の分画ａ（純度９５％以上）を得た。後述するように、分画ａは構造式(１)で示される化合物であることが確認された。
【００３４】
ハ）分画１１の再分画
分画１１（５.０ｇ）を、逆相カラムクロマトグラフィー［富士シリシア社製、Ｃｈｒｏｍａｔｏｒｅｘ  ＯＤＳ  ＤＭ１０２０Ｔ、１００−２００ｍｅｓｈ、１５０ｇ、移動相：メタノール：水（４０：６０→５０：５０→６０：４０→７０：３０、ｖ／ｖ、それぞれ７００ｍＬ）→メタノールのみ（１６００ｍＬ）］にて分離した後、減圧下溶媒を留去し、７分画［分画１１−１（８２８ｍｇ）、分画１１−２（６９６ｍｇ）、分画１１−３（３７９ｍｇ）、分画１１−４（１１６９ｍｇ）、分画１１−５（９１１ｍｇ）、分画１１−６（３５１ｍｇ）、分画１１−７（６６６ｍｇ）］を得た。
【００３５】
分画１１−２および分画１１−４について、高速液体クロマトグラフィー（検出器：島津示唆屈折型検出器ＲＩＤ−６Ａ、ポンプ：島津ＬＣ−１０Ａ、カラム：ＹＭＣ社製ＹＭＣＰａｃｋ−ＯＤＳ−Ａ、２０ｍｍ（内径）×２５０ｍｍ、移動相：分画１１−２ではメタノール（関東化学社製ＨＰＬＣ大量分取用特級試薬）／水（５０／５０）、分画１１−４ではメタノール水（６０／４０）を用いて分離精製した後、減圧下溶媒を留去し、分画１１−２より分画ｂ及び分画ｃを、分画１１−４より分画ｄをそれぞれ２４ｍｇ（０.００１１％）、２１ｍｇ（０.００１０％）および３２ｍｇ（０.００１５％）得た。後述するように、分画ｂは、構造式(２)で示される化合物であり、分画ｃは、構造式(３)で示される化合物であり、分画ｄは、構造式(４)で示される化合物であることが確認された。
【００３６】
前記したアルピニアガランガの抽出分画法は、ガランガナール、ガランガンノールＡ、Ｂ及びＣの抽出効率、不活性部の除去効率などからみて最良の態様と考えるべきである。しかし、ガランガナール、ガランガンノールＡ、ＢおよびＣを抽出するためのアルピニアガランガの抽出分画法としては、前記の他にも種々の変形が可能である。例えば、含水アセトンに代えて、他の抽出剤（溶剤）、具体的には含水メタノールや含水エタノール等を用いてもよい。又、予め酢酸エチルやクロロホルムと水に分配し、水溶性の不活性分を除去した後、前記カラムクロマトグラフィーによる分画を行うことができる。
【００３７】
２．ガランガナール、ガランガンノールＡ、ＢおよびＣの構造決定
前記１．で得られた分画Ａ〜Ｄとして得られた成分ガランガナール、ガランガンノールＡ、ＢおよびＣについて、質量スペクトル（ＭＳ）、紫外線吸収スペクトル（ＵＶ）、赤外線吸収スペクトル（ＩＲ）、並びに１Ｈおよび１３Ｃ核磁気共鳴スペクトル（ＮＭＲ）の分析を実施した。これらの結果を以下に示すが、これらの結果より、分画ａは、構造式(１)で示される化合物であり、分画ｂは、構造式(２)で示される化合物とその鏡像体の混合物であり、分画ｃは、構造式(３)で示される化合物とその鏡像体の混合物であり、分画ｄは、構造式(４)で示される化合物とその鏡像体の混合物であることが確認された。
【００３８】
１）分画ａの分析
分画ａとして得られた白色粉末についての分析結果を以下に示す。
【００３９】
・高分解ＥＩ−ＭＳ (m/z)
測定値：  280.1094    ［C18H16O3 (M+)の計算値：  280.1099］
・ＵＶ(MeOH)  : λmax (logε) = 263 (4.14), 314 (3.98) 
・ＩＲ(KBr)  : νmax = 3325, 1661, 1653, 1601, 1514, 1447, 1173 cm-1 
・１Ｈ−ＮＭＲ(500 MHz, CD3OD)  :
3.31 (1H, m), 3.39 (1H, dd-like), 9'-H2], 6.10 (1H, ddd, J=5.8, 5.8, 5.8 Hz, 8'-H), 6.28 (1H, d, J=15.8 Hz, 7'-H), 6.68, 7.14 (2H each, both d, J=8.6 Hz, 3',5'-H and 2', 6'-H), 6.86, 7.53 (2H each, both d, J=8.8 Hz, 3,5-H and 2,6-H), 7.44 (1H, s, 4-H), 9.52 (1H, s, 9-H).
・１３Ｃ−ＮＭＲ  (125 MHz, CD3OD),δｃ:  28.6、116.3、116.8、123.9、127.5、128.3、130.5、131.8、133.7、138.4、153.7、157.9、161.1、197.2、
・ＥＩ−ＭＳ： m/z (rel. Int.) = 280 (M+, 100), 251 (M+-CHO, 40), 186 (M+-C6H6O, 17), 173 (M+-C7H7O, 97), 120 (C8H8O+, 28), 107 (C7H7O+, 42)
【００４０】
以上の結果、さらに１Ｈ−１Ｈ  ＣＯＳＹスペクトル、ＨＭＢＣスペクトル、差ＮＯＥスペクトルの結果から、分画ａより得られた白色粉末は、構造式（１）で表わされる化合物、ガランガナールであることが明らかになった。
【００４１】
２）分画ｂの分析
分画ｂとして得られた白色粉末についての分析結果を以下に示す。
【００４２】
・[α]D20 ±0° (ｃ0.34, MeOH) 
・高分解ＥＩ−ＭＳ (m/z)
測定値：  300.1366    ［C18H20O3 (M+)の計算値：  300.1361］
・ＵＶ(MeOH)  : λmax (logε) = 262 (4.33)
・ＩＲ(KBr)  : νmax = 3649, 1653, 1559, 1509, 1458 cm-1
・１Ｈ−ＮＭＲ(500 MHz, CD3OD):
1.92 (1H, m, 8-H), 2.23, 2.33 (1H each, both m, 9'-H2), [3.40 (1H, dd, J= 5.3, 10.9 Hz), 3.56 (1H, dd, J= 6.0, 10.9 Hz), 9-H2], 4.74 (1H, d, J= 5.9 Hz, 7-H), 6.00 (1H, ddd, J= 6.9, 7.7, 16.0 Hz, 8'-H), 6.28 (1H, d, J= 16.0 Hz, 7'-H), 6.68, 7.14 (2H each, both d, J= 8.6 Hz, 3', 5'-H and 2', 6'-H), 6.76, 7.18 (2H each, both d, J= 8.6 Hz, 3, 5-H and 2, 6-H)
・１３Ｃ−ＮＭＲ  (125 MHz, CD3OD),δｃ:  30.5、49.5、62.6、74.5、115.7、116.0、126.6、127.9、128.4、130.8、132.2、135.6、157.3
・ＥＩ−ＭＳ： m/z (rel. Int.) = 300 (M+, 4), 282 (M+-H2O, 14), 252 (44), 158 (27), 145 (62), 131 (50), 120 (C8H8O+, 49), 107 (C7H7O+, 100)
【００４３】
以上の結果、又、各種２次元ＮＭＲ（１Ｈ−１ＨＣＯＳＹ、  １３Ｃ−１ＨＣＯＳＹ、  ＨＭＢＣスペクトル）の結果、さらに2,2-dimethoxypropaneを用いて調製した7,8-アセトナイド化誘導体の7,8位の1H-1Hカップリング定数の測定結果から、分画ｂとして得られた白色粉末は、構造式（２）で表わされる化合物とその鏡像体の混合物、ガランガノールＡであることが明らかになった。
【００４４】
３）分画ｃの分析
分画ｃとして得られた白色粉末についての分析結果を以下に示す。
【００４５】
・[α]D22 ±0° (ｃ0.96, MeOH)  
・高分解ＥＩ−ＭＳ (m/z)
測定値：  300.1358    ［C18H20O3 (M+)の計算値：  300.1361］
・ＵＶ(MeOH)  : λmax (logε) = 262 (4.35)
・ＩＲ(KBr)  : νmax = 3649, 1653, 1559, 1507, 1458 cm-1
・１Ｈ−ＮＭＲ(500 MHz, CD3OD):
1.92 (1H, m, 8-H), 2.01, 2.10 (1H each, both m, 9'-H2), [3.65 (1H, dd, J= 5.3, 11.1 Hz), 3.78 (1H, dd, J= 4.8, 11.1 Hz), 9-H2], 4.62 (1H, d, J= 7.1 Hz, 7-H), 5.90 (1H, ddd, J= 6.8, 7.2, 15.8 Hz, 8'-H), 6.19 (1H, d, J= 15.8 Hz, 7'-H), 6.68, 7.12 (2H each, both d, J= 8.4 Hz, 3',5'-H and 2', 6'-H), 6.77, 7.18 (2H each, both d, J= 8.4 Hz, 3,5-H and 2,6-H)
・１３Ｃ−ＮＭＲ  (125 MHz, CD3OD),δｃ: 32.3、 48.8、 63.1、 76.3、 115.8、 116.0、 126.1、 127.9、 128.9、130.6、132.3、 135.5、 157.3、 157.6
・ＥＩ−ＭＳ： m/z (rel. Int.) = 300 (M+, 1), 282 (M+-H2O, 6), 252 (84), 158 (46), 145 (95), 131 (49), 120 (C8H8O+, 24), 107 (C7H7O+, 100)
【００４６】
以上の結果、又、１Ｈ−１ＨＣＯＳＹ、ＨＭＢＣスペクトル、NOESYスペクトル等の結果、さらに2,2-dimethoxypropaneを用いて調製した7,8-アセトナイド化誘導体の7,8位の1H-1Hカップリング定数の測定結果から、分画ｃより得られた白色粉末は、構造式（３）で表わされる化合物とその鏡像体の混合物、ガランガノールＢであることが明らかになった。
【００４７】
４）分画ｄの分析
分画ｄとして得られた白色粉末についての分析結果を以下に示す。
【００４８】
・[α]D28 ±0° (ｃ0.18, MeOH)
・高分解ＥＩ−ＭＳ (m/z)
測定値：  432.1934    ［C18H20O3 (M+)の計算値：  432.1937］
・ＵＶ(MeOH)  : λmax (logε) = 263 (4.31)
・ＩＲ(KBr)  : νmax = 3650, 3260, 1654, 1609, 1516, 1456, 1229, 1171, 1043 cm-1
・１Ｈ−ＮＭＲ(500 MHz, pyridine-d5):
1.45 (1H, ddd, J= 4.9, 13.4, 13.7 Hz, 9ax-H), 1.82 (1H, ddd, J= 7.5, 7.6, 14.0 Hz), 1.89 (1H, br dd, J= ca. 3, 14 Hz, 9eq-H), 2.14 (1H, m), 9'-H2], 2.14 (1H, m, 8''-H), 2.30 (1H, m, 8-H), 3.86 (1H, dd, J= 2.5, 11.3 Hz, 9''ax-H), 4.19 (1H, d, J= 9.7 Hz, 7-H), 5.04 (1H, br d, J= ca. 11 Hz, 9''eq-H), 5.51 (1H, d, J= 10.4 Hz, 7''-H), 5.89 (1H, ddd, J= 7.3, 7.6, 15.9 Hz, 8'-H), 6.26 (1H, d, J= 15.9 Hz, 7'-H), 7.15, 7.32 (2H each, both d, J= 8.6 Hz, 3',5'-H and 2',6'-H), 7.20, 7.61 (2H each, both d, J= 8.6 Hz, 3'',5''-H and 2'',6''-H), 7.24, 7.56 (2H each, both d, J= 8.6 Hz, 3,5-H and 2,6-H)
・１３Ｃ−ＮＭＲ  (125 MHz, pyridine-d5),δｃ: 31.8、 35.9、 38.8、 43.4、 69.1、 72.4、 85.7、 116.0、 116.4、 123.8、 125.4、127.9、 128.7、 129.5、 129.8、 131.5、 133.3、 136.6、 158.2、 158.6
・ＥＩ−ＭＳ： m/z (rel. Int.) = 432 (M+, 1), 414 (M+-H2O, 2), 107 (C7H7O+, 23), 94 (C6H6O+, 100)
【００４９】
以上の結果、さらに、１Ｈ−１ＨＣＯＳＹ、ＨＭＢＣスペクトル、NOESYスペクトル等の測定結果から、分画ｄより得られた白色粉末は、構造式（４）で表わされる化合物とその鏡像体の混合物、ガランガノールＤであることが明らかになった。
【００５０】
３．抗アレルギー性の検討
前記で得られたガランガナール、ガランガンノールＡ、Ｂ及びＣ、並びにL-NMMA (NG-monomethyl-L-arginine、NO合成阻害作用物質であり、比較対照薬として用いた。)について、下記の方法により、マウス腹腔マクロファージからのＮＯ産生抑制作用を検討した。その結果を表１に示す。
【００５１】
［ＮＯ産生抑制作用の測定方法］
ddY 系雄性マウス（体重約３０ｇ）に４％チオグリコール培地（日水製薬）２ｍｌを腹腔内に投与し、３日後に腹部の体皮を剥離し、氷冷したＣａ２＋、Ｍｇ２＋不含リン酸緩衝化生理食塩水［ＰＢＳ（−）］の７ｍＬで腹腔内を洗浄し、洗浄液を回収した。回収した洗浄液を遠心分離(1,000 rpm, 10 min, 4 ℃)し、ＰＢＳ（−）で2回洗浄した後に、５％ウシ胎仔血清（ＦＣＳ）、100 units/mLペニシリン、100μg/mL ストレプトマイシン含有RPMI-1640 培地 (Sigma 社) に懸濁した。
【００５２】
次に96 ウェル平底マイクロプレートに 5.0×10５ cells (100μL medium/well)づつ播種し、1 時間前培養 (5% CO2, 37℃) し、ＰＢＳ（−）で非接着性細胞を洗浄除去した後に、表１に示す量の被験物質および 10μg/mL LPS (Salmonella enteritidis 由来、Sigma 社) を含む培地 (200μL/well)で 20 時間培養した。培養上清中に蓄積した NO2- をGriess 法により定量しNO産生量とした。すなわち、培養上清に同量の Griess 試薬 (1% スルファニルアミド / 0.1% N-1-ナフチルエチレンジアミン二塩酸塩 / 2.5% リン酸) を加えて混和し、１０分間室温で放置した後に、マイクロプレートリーダー (model 550、BIO-RAD 社) にて吸光度 (測定波長 ; 570 nm、参照波長 ; 655 nm)を測定し、培地で希釈したＮａＮＯ２をスタンダードとして培養上清に蓄積したＮＯ２−を定量した。
【００５３】
【表１】
2006290847.tif 000007
【００５４】
表１に示す結果より明らかなように、ガランガナール、ガランガノールＡ、ガランガノールＢ及びガランガノールＣには、ＮＯ産生抑制活性が見出され、抗アレルギー性があることが示された。