(57)【要約】【課題】  過剰飲酒、喫煙、高血圧、塩分過剰摂取、または運動との組み合わせにより動脈硬化症のリスクを予測する方法の提供。【解決手段】  本発明によれば、過剰飲酒の習慣を有する被験者では計５種の遺伝子多型のいずれか、喫煙の習慣を有する被験者では１種の遺伝子多型、定期的運動の習慣を有さない被験者では計２種の遺伝子多型のいずれか、塩分過剰摂取の習慣を有する被験者では１種の遺伝子多型、ならびに高血圧の被験者では計４種の遺伝子多型のいずれかをリスクファクターとして、動脈硬化症のリスクを予測する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
過剰飲酒の習慣を有する被験者が動脈硬化症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
（i）ＤＤＡＨ２遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはアデニン（Ａ）である前記ＤＤＡＨ２遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（ii）ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号２で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）である前記ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（iii）ＡＣＡＤＳＢ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号３で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）である前記ＡＣＡＤＳＢ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（iv）ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号４で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）である前記ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、ならびに
（v）ＦＬＪ１４０７５遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号４で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）である前記ＦＬＪ１４０７５遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子
からなる群から選択される少なくとも一種の核酸分子を含んでなる、診断用キット。
【請求項２】
前記被験者が男性である、請求項１に記載の診断用キット。
【請求項３】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域にハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなるものである、請求項１に記載の診断用キット。
【請求項４】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域を核酸増幅法において増幅することができるものである、請求項１に記載の診断用キット。
【請求項５】
過剰飲酒の習慣を有する被験者が動脈硬化症になるリスクを予測する方法であって、
（i）ＤＤＡＨ２遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定する工程、
（ii）ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号２で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定する工程、
（iii）ＡＣＡＤＳＢ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号３で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定する工程、
（iv）ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号４で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定する工程、および
（v）ＦＬＪ１４０７５遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号４で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定する工程
からなる群から選択される少なくとも一つの工程を含んでなる、方法。
【請求項６】
前記被験者が男性である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
喫煙の習慣を有する被験者が動脈硬化症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
ＬＰＩＮ１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号６で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がチミン（Ｔ）であるかシトシン（Ｃ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がチミン（Ｔ）またはシトシン（Ｃ）である前記ＬＰＩＮ１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子を含んでなる、診断用キット。
【請求項８】
前記被験者が男性である、請求項７に記載の診断用キット。
【請求項９】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域にハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなるものである、請求項７に記載の診断用キット。
【請求項１０】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域を核酸増幅法において増幅することができるものである、請求項７に記載の診断用キット。
【請求項１１】
喫煙の習慣を有する被験者が動脈硬化症になるリスクを予測する方法であって、
ＬＰＩＮ１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号６で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がチミン（Ｔ）であるかシトシン（Ｃ）であるかを同定する工程を含んでなる、方法。
【請求項１２】
前記被験者が男性である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
定期的運動の習慣を有さない被験者が動脈硬化症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
（i）ＩＧＦ１Ｒ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号７で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはチミン（Ｔ）である前記ＩＧＦ１Ｒ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、ならびに
（ii）ＴＨ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号８で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはチミン（Ｔ）である前記ＴＨ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子
からなる群から選択される少なくとも一種の核酸分子を含んでなる、診断用キット。
【請求項１４】
前記被験者が男性である、請求項１３に記載の診断用キット。
【請求項１５】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域にハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなるものである、請求項１３に記載の診断用キット。
【請求項１６】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域を核酸増幅法において増幅することができるものである、請求項１３に記載の診断用キット。
【請求項１７】
定期的運動の習慣を有さない被験者が動脈硬化症になるリスクを予測する方法であって、
（i）ＩＧＦ１Ｒ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号７で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定する工程、および
（ii）ＴＨ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号８で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定する工程
からなる群から選択される少なくとも一つの工程を含んでなる、方法。
【請求項１８】
前記被験者が男性である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
塩分過剰摂取の習慣を有する被験者が動脈硬化症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
ＰＲＫＷＮＫ１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号９で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）またはアデニン（Ａ）である前記ＰＲＫＷＮＫ１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子を含んでなる、診断用キット。
【請求項２０】
前記被験者が女性である、請求項１９に記載の診断用キット。
【請求項２１】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域にハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなるものである、請求項１９に記載の診断用キット。
【請求項２２】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域を核酸増幅法において増幅することができるものである、請求項１９に記載の診断用キット。
【請求項２３】
塩分過剰摂取の習慣を有する被験者が動脈硬化症になるリスクを予測する方法であって、
ＰＲＫＷＮＫ１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号９で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定する工程を含んでなる、方法。
【請求項２４】
前記被験者が女性である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
高血圧の被験者が動脈硬化症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
（i）ＧＣ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１０で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはアデニン（Ａ）である前記ＧＣ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（ii）ＲＯＣＫ２遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１１で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはアデニン（Ａ）である前記ＲＯＣＫ２遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（iii）ＲＯＣＫ２遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１２で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）であるかシトシン（Ｃ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）またはシトシン（Ｃ）である前記ＲＯＣＫ２遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、ならびに
（iv）ＧＲＥＢ１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１３で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはチミン（Ｔ）である前記ＧＲＥＢ１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子
からなる群から選択される少なくとも一種の核酸分子を含んでなる、診断用キット。
【請求項２６】
前記被験者が男性である、請求項２５に記載の診断用キット。
【請求項２７】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域にハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなるものである、請求項２５に記載の診断用キット。
【請求項２８】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域を核酸増幅法において増幅することができるものである、請求項２５に記載の診断用キット。
【請求項２９】
高血圧の被験者が動脈硬化症になるリスクを予測する方法であって、
（i）ＧＣ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１０で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定する工程、
（ii）ＲＯＣＫ２遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１１で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定する工程、
（iii）ＲＯＣＫ２遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１２で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）であるかシトシン（Ｃ）であるかを同定する工程、および
（iv）ＧＲＥＢ１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１３で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定する工程
からなる群から選択される少なくとも一つの工程を含んでなる、方法。
【請求項３０】
前記被験者が男性である、請求項２９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
発明の分野
本発明は、遺伝子多型と生活習慣との組み合わせを利用した動脈硬化症のリスクの予測法に関する。
【０００２】
背景技術
動脈硬化症は、遺伝的要因だけでなく、生活習慣とも深く関連することが知られている。動脈硬化症について、生活習慣と遺伝的要因との交互作用に関する報告がなされている（非特許文献１：Inamoto N, Katsuya T, Kokubo Y, Mannami T, Asai T, Baba S, Ogata J, Tomoike H, Ogihara T: Association of methylenetetrahydrofolate reductase gene polymorphism with carotid atherosclerosis depending on smoking status in a Japanese general population. Stroke 34: 1628-1633, 2003）。この報告は、ＭＴＨＦＲ（methylenetetrahydrofolate reductase）遺伝子中の多型と頚部エコーとの関係に関するものであるが、そのなかで、ある遺伝子型を有する女性の喫煙群におけるプラークが、同遺伝子型を有する非喫煙群と比較して大きく肥厚することが示されている（交互作用Ｐ値＝０．０４）。このことから、ＭＴＨＦＲ遺伝子の前記遺伝子型を有する女性では、非喫煙群と比べて、喫煙群で頚動脈硬化のリスクが高いことが示唆される。
【０００３】
【非特許文献１】Inamoto N, Katsuya T, Kokubo Y, Mannami T, Asai T, Baba S, Ogata J, Tomoike H, Ogihara T, Stroke 34: 1628-1633, 2003.
【発明の概要】
【０００４】
本発明者らは、過剰飲酒、喫煙、高血圧、塩分過剰摂取、または運動と、特定の遺伝子多型との組み合わせにより、動脈硬化症のリスクが予測可能となるとの知見を得た。本発明はこの知見に基づくものである。
【０００５】
従って、本発明は、過剰飲酒、喫煙、高血圧、塩分過剰摂取、または運動との組み合わせにより動脈硬化症のリスクを予測する方法、ならびにこの方法に用いることができる診断用キットの提供を目的とする。
【０００６】
そして、本発明の第一の態様による診断用キットは、過剰飲酒の習慣を有する被験者が動脈硬化症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
（i）ＤＤＡＨ２遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはアデニン（Ａ）である前記ＤＤＡＨ２遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（ii）ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号２で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）である前記ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（iii）ＡＣＡＤＳＢ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号３で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）である前記ＡＣＡＤＳＢ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（iv）ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号４で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）である前記ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、ならびに
（v）ＦＬＪ１４０７５遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号４で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）である前記ＦＬＪ１４０７５遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子
からなる群から選択される少なくとも一種の核酸分子を含んでなるものである。
【０００７】
さらに、本発明の第一の態様による方法は、過剰飲酒の習慣を有する被験者が動脈硬化症になるリスクを予測する方法であって、
（i）ＤＤＡＨ２遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定する工程、
（ii）ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号２で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定する工程、
（iii）ＡＣＡＤＳＢ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号３で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定する工程、
（iv）ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号４で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定する工程、および
（v）ＦＬＪ１４０７５遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号４で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定する工程
からなる群から選択される少なくとも一つの工程を含んでなるものである。
【０００８】
さらに、本発明の第二の態様による診断用キットは、喫煙の習慣を有する被験者が動脈硬化症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
ＬＰＩＮ１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号６で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がチミン（Ｔ）であるかシトシン（Ｃ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がチミン（Ｔ）またはシトシン（Ｃ）である前記ＬＰＩＮ１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子を含んでなるものである。
【０００９】
さらに、本発明の第二の態様による方法は、喫煙の習慣を有する被験者が動脈硬化症になるリスクを予測する方法であって、
ＬＰＩＮ１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号６で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がチミン（Ｔ）であるかシトシン（Ｃ）であるかを同定する工程を含んでなるものである。
【００１０】
さらに、本発明の第三の態様による診断用キットは、定期的運動の習慣を有さない被験者が動脈硬化症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
（i）ＩＧＦ１Ｒ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号７で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはチミン（Ｔ）である前記ＩＧＦ１Ｒ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、ならびに
（ii）ＴＨ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号８で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはチミン（Ｔ）である前記ＴＨ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子
からなる群から選択される少なくとも一種の核酸分子を含んでなるものである。
【００１１】
さらに、本発明の第三の態様による方法は、定期的運動の習慣を有さない被験者が動脈硬化症になるリスクを予測する方法であって、
（i）ＩＧＦ１Ｒ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号７で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定する工程、および
（ii）ＴＨ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号８で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定する工程
からなる群から選択される少なくとも一つの工程を含んでなるものである。
【００１２】
さらに、本発明の第四の態様による診断用キットは、塩分過剰摂取の習慣を有する被験者が動脈硬化症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
ＰＲＫＷＮＫ１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号９で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）またはアデニン（Ａ）である前記ＰＲＫＷＮＫ１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子を含んでなるものである。
【００１３】
さらに、本発明の第四の態様による方法は、塩分過剰摂取の習慣を有する被験者が動脈硬化症になるリスクを予測する方法であって、
ＰＲＫＷＮＫ１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号９で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定する工程を含んでなるものである。
【００１４】
さらに、本発明の第五の態様による診断用キットは、高血圧の被験者が動脈硬化症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
（i）ＧＣ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１０で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはアデニン（Ａ）である前記ＧＣ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（ii）ＲＯＣＫ２遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１１で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはアデニン（Ａ）である前記ＲＯＣＫ２遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（iii）ＲＯＣＫ２遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１２で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）であるかシトシン（Ｃ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）またはシトシン（Ｃ）である前記ＲＯＣＫ２遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、ならびに
（iv）ＧＲＥＢ１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１３で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはチミン（Ｔ）である前記ＧＲＥＢ１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子
からなる群から選択される少なくとも一種の核酸分子を含んでなるものである。
【００１５】
さらに、本発明の第五の態様による方法は、高血圧の被験者が動脈硬化症になるリスクを予測する方法であって、
（i）ＧＣ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１０で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定する工程、
（ii）ＲＯＣＫ２遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１１で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定する工程、
（iii）ＲＯＣＫ２遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１２で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）であるかシトシン（Ｃ）であるかを同定する工程、および
（iv）ＧＲＥＢ１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１３で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定する工程
からなる群から選択される少なくとも一つの工程を含んでなるものである。
【００１６】
本発明によれば、被験者の特定の遺伝子多型部位におけるヌクレオチド残基を同定することにより、該被験者の生活習慣（過剰飲酒、喫煙、高血圧、塩分過剰摂取、運動）に応じて、動脈硬化症のリスクを予測することが可能となる。さらに、リスクの原因となる遺伝子多型に対応する生活習慣を改善することにより、その被験者において動脈硬化症を効率的に予防または治療することが可能となる。本発明によれば、出生前および出生直後の診断も可能である。
【発明の具体的説明】
【００１７】
本明細書において「過剰飲酒の習慣」とは、一日当りの飲酒量が日本酒（アルコール濃度が約１５％）に換算して２７０ｍｌ以上であることを意味する。また、「過剰飲酒の習慣を有する被験者」という用語は、その被験者が検査の時に既に過剰飲酒の習慣を有している場合のみならず、将来においてその習慣を有する場合をも含む。
【００１８】
本明細書において「喫煙の習慣」とは、日常的に煙草、葉巻などを吸うことを意味し、例えば、一日当り１回でも喫煙することを意味する。また、「喫煙の習慣を有する被験者」という用語は、その被験者が検査の時に既に喫煙の習慣を有している場合のみならず、将来においてその習慣を有する場合をも含む。
【００１９】
本明細書において「定期的運動の習慣」とは、運動の種類にかかわらず、日常生活において定期的に（例えば、１日１回、２〜３日に１回、週に１回など）運動することを意味する。また、「定期的運動の習慣を有さない被験者」という用語は、その被験者が検査の時に定期的運動の習慣を有していない場合のみならず、将来その習慣を有さなくなる場合をも含む。
【００２０】
本明細書において「塩分過剰摂取の習慣」とは、身長、体重、および年齢から１日クレアチニン排泄量を求め、尿中クレアチニン量から塩分排泄量を推計し（Kawasaki T, Uezono K, Itoh K, Ueno M. Prediction of 24-hour urinary creatinine excretion from age, body weight and height of an individual and its application. Japanese Journal of Public Health. 1991 Aug;38(8):567-74）、その値が１２ｇ/日以上であることを意味する。また、「塩分過剰摂取の習慣を有する被験者」という用語は、その被験者が検査の時に既に塩分過剰摂取の習慣を有している場合のみならず、将来においてその習慣を有する場合をも含む。
【００２１】
本明細書において「高血圧」とは、収縮期血圧が１４０ｍｍＨｇ以上であるか、もしくは拡張期血圧が９０ｍｍＨｇ以上であるか、またはその被験者が降圧剤を服用していることを意味する。また、「高血圧の被験者」という用語は、その被験者が検査の時に既に高血圧である場合のみならず、将来において高血圧となる場合をも含む。
【００２２】
本明細書において「ＤＤＡＨ２遺伝子」とは、ジメチルアルギニンジメチルアミノヒドロラーゼ２を発現する遺伝子であり、そのゲノム配列はアクセス番号：NT_007592.13としてGenBankに登録されている。この遺伝子は、そのプロモーター領域に含まれる配列番号１中の第５０１残基において、シトシン残基（Ｃ）とアデニン残基（Ａ）との一塩基多型（以下「DDAH2-C1155A多型」という。）を有する。
【００２３】
本明細書において「ＣＬＯＣＫ遺伝子」とは、体内時計タンパク質の一種であるＣＬＯＣＫ（circadian locomotor output cycles kaput）を発現する遺伝子であり、そのゲノム配列はアクセス番号：NT_022853.14としてGenBankに登録されている。この遺伝子は、そのゲノム配列に含まれる配列番号２中の第５０１残基において、グアニン残基（Ｇ）とアデニン残基（Ａ）との一塩基多型（以下「CL-A215G多型」という。）を有する。さらに、この遺伝子は、そのゲノム配列に含まれる配列番号４中の第５０１残基において、グアニン残基（Ｇ）とアデニン残基（Ａ）との一塩基多型（以下「clock-A395G多型」という。）を有する。
【００２４】
本明細書において「ＡＣＡＤＳＢ遺伝子」とは、短鎖／分岐鎖アシルＣｏＡデヒドロゲナーゼを発現する遺伝子であり、そのゲノム配列はアクセス番号：NT_037753.3としてGenBankに登録されている。この遺伝子は、そのゲノム配列に含まれる配列番号３中の第５０１残基において、グアニン残基（Ｇ）とアデニン残基（Ａ）との一塩基多型（以下「SBCAD-A2334G多型」という。）を有する。
【００２５】
本明細書において「ＦＬＪ１４０７５遺伝子」とは、機能未知タンパク質ＦＬＪ１４０７５を発現する遺伝子であり、そのゲノム配列はアクセス番号：NT_005334.14としてGenBankに登録されている。この遺伝子は、そのゲノム配列に含まれる配列番号５中の第５０１残基において、グアニン残基（Ｇ）とアデニン残基（Ａ）との一塩基多型（以下「FLJ14075-JST085615多型」という。）を有する。
【００２６】
本明細書において「ＬＰＩＮ１遺伝子」とは、リピン１（lipin 1）を発現する遺伝子であり、そのゲノム配列はアクセス番号：NT_005334.14としてGenBankに登録されている。この遺伝子は、そのゲノム配列に含まれる配列番号６中の第５０１残基において、シトシン残基（Ｃ）とチミン残基（Ｔ）との一塩基多型（以下「LPIN1-JST153824多型」という。）を有する。
【００２７】
本明細書において「ＩＧＦ１Ｒ遺伝子」とは、インスリン様増殖因子１受容体を発現する遺伝子であり、そのゲノム配列はアクセス番号：NT_035325.4としてGenBankに登録されている。この遺伝子は、そのゲノム配列に含まれる配列番号７中の第５０１残基において、シトシン残基（Ｃ）とチミン残基（Ｔ）との一塩基多型（以下「IGF1R-C956T多型」という。）を有する。
【００２８】
本明細書において「ＴＨ遺伝子」とは、チロシンヒドロキシラーゼを発現する遺伝子であり、そのゲノム配列はアクセス番号：NT_009237.16としてGenBankに登録されている。この遺伝子は、そのゲノム配列に含まれる配列番号８中の第５０１残基において、シトシン残基（Ｃ）とチミン残基（Ｔ）との一塩基多型（以下「TH-JST005746多型」という。）を有する。
【００２９】
本明細書において「ＰＲＫＷＮＫ１遺伝子」とは、セリン・スレオニンキナーゼであるＷＮＫ１を発現する遺伝子であり、そのゲノム配列はアクセス番号：NT_009759.15としてGenBankに登録されている。この遺伝子は、そのゲノム配列に含まれる配列番号９中の第５０１残基において、グアニン残基（Ｇ）とアデニン残基（Ａ）との一塩基多型（以下「WNK1-G3785A多型」という。）を有する。
【００３０】
本明細書において「ＧＣ遺伝子」とは、グループ特異的成分（ビタミンＤ結合タンパク質）を発現する遺伝子であり、そのゲノム配列はアクセス番号：NT_006216.14としてGenBankに登録されている。この遺伝子は、そのゲノム配列に含まれる配列番号１０中の第５０１残基において、シトシン残基（Ｃ）とアデニン残基（Ａ）との一塩基多型（以下「GC-rs4588多型」という。）を有する。
【００３１】
本明細書において「ＲＯＣＫ２遺伝子」とは、ｒｈｏ結合コイルドコイル含有プロテインキナーゼ２を発現する遺伝子であり、そのゲノム配列はアクセス番号：NT_005334.14としてGenBankに登録されている。この遺伝子は、そのゲノム配列に含まれる配列番号１１中の第５０１残基において、シトシン残基（Ｃ）とアデニン残基（Ａ）との一塩基多型（以下「ROCK2-JST066563多型」という。）を有する。さらに、この遺伝子は、そのゲノム配列に含まれる配列番号１２中の第５０１残基において、シトシン残基（Ｃ）とグアニン残基（Ｇ）との一塩基多型（以下「ROCK2-JST042011多型」という。）を有する。
【００３２】
本明細書において「ＧＲＥＢ１遺伝子」とは、乳癌タンパク質中のエストロゲンにより調節される遺伝子であり、そのゲノム配列はアクセス番号：NT_005334.14としてGenBankに登録されている。この遺伝子は、そのゲノム配列に含まれる配列番号１３中の第５０１残基において、シトシン残基（Ｃ）とチミン残基（Ｔ）との一塩基多型（以下「GREB1-JST149403多型」という。）を有する。
【００３３】
過剰飲酒の習慣を有する被験者、特に男性の被験者において、DDAH2-C1155A多型におけるＣアレル、特にＣＣ型、CL-A215G多型におけるＡアレル、特にＡＡ型、SBCAD-A2334G多型におけるＡアレル、clock-A395G多型におけるＡアレル、特にＡＡ型、もしくはFLJ14075-JST085615多型におけるＡアレル、またはこれらの任意の組み合わせが検出された場合には、その被験者が動脈硬化症になるリスクが高いものと判定することができる。すなわち、被験者、特に男性の被験者において、これらのアレルまたは遺伝子型が検出された場合には、その被験者が過剰飲酒の習慣を有すると、動脈硬化症になるリスクが高くなるものと判定することができる。
【００３４】
喫煙の習慣を有する被験者、特に男性の被験者において、LPIN1-JST153824多型におけるＣアレルが検出された場合には、その被験者が動脈硬化症になるリスクが高いものと判定することができる。すなわち、被験者、特に男性の被験者において、このアレルが検出された場合には、その被験者が喫煙の習慣を有すると、動脈硬化症になるリスクが高くなるものと判定することができる。
【００３５】
定期的運動の習慣を有さない被験者、特に男性の被験者において、IGF1R-C956T多型におけるＴアレル、もしくはTH-JST005746多型におけるＴアレル、またはこれらの組み合わせが検出された場合には、その被験者が動脈硬化症になるリスクが高いものと判定することができる。すなわち、被験者、特に男性の被験者において、これらのアレルまたは遺伝子型が検出された場合には、その被験者が定期的に運動しないと、動脈硬化症になるリスクが高くなるものと判定することができる。
【００３６】
塩分過剰摂取の習慣を有する被験者、特に女性の被験者において、WNK1-G3785A多型におけるＧアレルが検出された場合には、その被験者が動脈硬化症になるリスクが高いものと判定することができる。すなわち、被験者、特に女性の被験者において、このアレルが検出された場合には、その被験者が塩分過剰摂取の習慣を有すると、動脈硬化症になるリスクが高くなるものと判定することができる。
【００３７】
高血圧の被験者、特に男性の被験者において、GC-rs4588多型におけるＣアレル、特にＣＣ型、ROCK2-JST066563多型におけるＡアレル、特にＡＡ型、ROCK2-JST042011多型におけるＣアレル、特にＣＣ型、もしくはGREB1-JST149403多型におけるＣアレル、またはこれらの任意の組み合わせが検出された場合には、その被験者が動脈硬化症になるリスクが高いものと判定することができる。すなわち、被験者、特に男性の被験者において、これらのアレルまたは遺伝子型が検出された場合には、その被験者が高血圧になると、動脈硬化症になるリスクが高くなるものと判定することができる。
【００３８】
本発明による診断用キットは、上述の各生活習慣との関連において、被験者が動脈硬化症になるリスクの予測に用いられるものである。このキットには、それぞれの生活習慣に対応する多型部位におけるヌクレオチド残基を同定することのできる核酸分子であって、該多型部位にかかるいずれかのアレルのゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含む核酸分子が含まれる。
【００３９】
本発明において「ハイブリダイズする」とは、ある核酸分子がストリンジェントな条件下で標的ヌクレオチド分子にハイブリダイズし、標的ヌクレオチド分子以外のヌクレオチド分子にはハイブリダイズしないことを意味する。ストリンジェントな条件は、具体的な核酸分子とその相補鎖との二重鎖の融解温度Ｔｍ（℃）およびハイブリダイゼーション溶液の塩濃度などに依存して決定することができ、例えば、J. Sambrook, E. F. Frisch, T. Maniatis; Molecular Cloning 2nd edition, Cold Spring Harbor Laboratory (1989)等を参照することができる。例えば、使用する核酸分子の融解温度よりわずかに低い温度下でハイブリダイゼーションを行なうと、核酸分子を標的ヌクレオチド分子に特異的にハイブリダイズさせることができる。本発明の好ましい実施態様によれば、あるポリヌクレオチドにハイブリダイズする核酸分子は、そのポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドの全部または一部の配列を含んでなるものとされる。
【００４０】
本発明において「核酸分子」は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、およびＰＮＡ（peptide nucleic acid）を含む意味で用いられる。本発明の好ましい実施態様によれば、核酸分子はＤＮＡである。
【００４１】
本発明に用いられる核酸分子のヌクレオチド配列は、当業者により適宜設計されうる。例えば、本発明に用いられる核酸分子は、プロモーター領域、ターミネーター領域、エクソン、およびイントロンのいずれにハイブリダイズする部分をも含むことができる。
【００４２】
本発明に用いられる核酸分子は、各標的遺伝子における多型部位のヌクレオチドの同定において、核酸プローブとして用いることができる。この目的のためには、本発明に用いられる核酸分子は、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域にハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなることが好ましい。
【００４３】
本発明に用いられる核酸分子を核酸プローブとして用いる場合、核酸分子の鎖長は１０〜１００ヌクレオチドとすることが好ましく、より好ましくは少なくとも１２ヌクレオチド、さらに好ましくは少なくとも１３ヌクレオチド、さらに好ましくは１３〜５０ヌクレオチドとする。
【００４４】
また、本発明に用いられる核酸分子は、各標的遺伝子における多型部位のヌクレオチドの同定において、核酸増幅用プライマーとして用いることができる。この目的のためには、本発明に用いられる核酸分子は、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域を核酸増幅法において増幅することができるものであることが好ましい。
【００４５】
本発明に用いられる核酸分子を核酸増幅用プライマーとして用いる場合、核酸分子の鎖長は１０〜５０ヌクレオチドとすることが好ましく、より好ましくは少なくとも１２ヌクレオチド、さらに好ましくは少なくとも１５ヌクレオチド、さらに好ましくは１５〜３０ヌクレオチドとする。
【００４６】
本発明の他の好ましい実施態様によれば、本発明に用いられる核酸分子の鎖長は、１５〜１００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも１７ヌクレオチド、さらに好ましくは１７〜５０ヌクレオチドとする。このような鎖長を有する核酸分子は、特に夾雑物を含む核酸試料において、各標的遺伝子上の多型部位のヌクレオチドを同定する上で好ましいものである。
【００４７】
核酸増幅法は、通常、プライマーのペアを用いて実施される。よって、本発明による診断用キットは、各標的遺伝子上の上記多型部位におけるヌクレオチドの同定に用いることのできるプライマーペアを含むことができる。
【００４８】
このようなプライマーペアを構成する２本のプライマーとしては、上述の核酸分子を用いることができる。このようなプライマーは、増幅の対象となる領域のヌクレオチド配列に基づいて当業者が適宜設計することができる。例えば、プライマーペアの一方のプライマーを、増幅対象領域のヌクレオチド配列中における５’末端部分の配列を有するものとし、他方のプライマーを、増幅対象領域の相補鎖のヌクレオチド配列中における５’末端部分の配列を有するものとすることができる。
【００４９】
本発明による方法は、上述の各生活習慣との関連において、被験者が動脈硬化症になるリスクの予測に用いられるものである。この方法には、それぞれの生活習慣に対応する上述の多型部位におけるヌクレオチド残基を同定する工程が含まれる。この方法は、本発明による診断用キットを用いることにより、好適に実行することができる。
【００５０】
一つの実施態様によれば、本発明による診断用キットに含まれる核酸分子を用いて、被験者由来の核酸試料を鋳型とする核酸増幅法を行ない、得られた増幅産物中において上記各多型部位のヌクレオチドを同定することができる。
【００５１】
この方法による診断に当たっては、例えば、被験者から血液等の試料を採取し、得られた試料からゲノムＤＮＡ等の核酸試料を抽出し、得られた核酸試料を鋳型として、前記核酸分子を用いて核酸増幅法を実施し、得られた増幅産物のヌクレオチド配列を解析することにより、各標的遺伝子における上記各多型部位のヌクレオチドを同定することができる。核酸増幅法およびこれによる前記ヌクレオチドの同定法としては、当技術分野において公知のいずれの方法を用いてもよい。例えば、核酸増幅法としてはＰＣＲ法等を用いることができる。
【００５２】
核酸増幅法により得られた増幅産物のヌクレオチド配列の解析は、例えば、シークエンス用プライマーを用いるダイレクトシークエンス法等により容易に行なうことができる。このような方法は当技術分野において周知であり、例えば、市販のキットを用いて実施することができる。
【００５３】
本発明による方法においては、アレル特異的ＰＣＲ法を実施できるようにプライマーを設計することもできる。具体的には、一方のプライマーを多型部位に対合できるように設計し、他方のプライマーを多型部位を含まない領域に対合できるように設計することができる。このように設計されたプライマーペアを用いて核酸増幅法を実施すると、核酸試料中に前記多型にかかるいずれかのアレルが存在する場合には増幅産物が得られ、これが存在しない場合には増幅産物が得られない。従って、この場合には、増幅産物の有無を検出することにより特定のアレルの有無を判定することができる。
【００５４】
他の実施態様によれば、本発明による診断用キットに含まれる核酸分子と被験者由来の核酸試料とのハイブリダイゼーションを行ない、次いでハイブリダイゼーション複合体の存在を検出することができる。ハイブリダイゼーション複合体の存在は、上記各多型にかかるいずれかのアレルの存在を示す。このハイブリダイゼーション法を用いる方法は、上述の核酸増幅法を用いる方法により得られる増幅産物に対して適用することもできる。
【００５５】
この方法による診断に当たっては、例えば、被験者から血液等の試料を採取し、得られた試料からゲノムＤＮＡ等の核酸試料を抽出し、ストリンジェントな条件下、前記核酸分子とのハイブリダイゼーションの有無を検出することにより、各標的遺伝子における上記各多型部位のヌクレオチドを同定することができる。核酸試料は、必要であれば、制限酵素処理等を施し、ハイブリダイゼーションに適切な長さとすることもできる。ハイブリダイゼーション法とこれによる前記ヌクレオチドの同定法としては、当技術分野において公知のいずれの方法を用いてもよい。例えば、サザンハイブリダイゼーション、コロニーハイブリダイゼーション等の技術を用いることができ、これらの方法については、例えば、J. Sambrook, E. F. Frisch, T. Maniatis; Molecular Cloning 2nd edition, Cold Spring Harbor Laboratory (1989)を参照することができる。
【００５６】
各標的遺伝子における上記各多型が一塩基多型である場合において、該一塩基多型部位のヌクレオチドを同定するためには、本発明による診断用キットに含まれる核酸分子をプライマーとして使用するプライマーエクステンション法を用いることもできる。プライマーエクステンション法は当業者に公知であり、その操作手順および使用するプライマーの具体的ヌクレオチド配列は、当業者であれば容易に決定することができる。本発明の好ましい実施態様によれば、上記のプライマーエクステンション法としては、ＳＮａＰｓｈｏｔＴＭ法またはＰｙｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ法として知られる方法が用いられる。
【００５７】
ＳＮａＰｓｈｏｔＴＭ法においては、一塩基多型の部位に隣接するプライマーであって、伸長反応によりその３’末端に付加するヌクレオチドが前記一塩基多型の部位に相補的なものとなるプライマーが用いられる。このようなプライマーを使用し、被験者からの核酸試料を鋳型としてプライマーの伸長反応が行なわれるが、その際にｄｄＮＴＰ（ジデオキシＮＴＰ）を用いることにより、伸長反応は、上記の多型部位に対応する一個のヌクレオチドを取り込んだ時点で終了する。取り込まれたヌクレオチドは、蛍光標識等で予め標識しておくことにより容易に同定され、従って、多型部位のヌクレオチドが同定される。このような方法は当業者に公知であり、その操作手順および使用するプライマーの具体的ヌクレオチド配列は、当業者であれば容易に決定することができる。
【００５８】
Ｐｙｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ法においては、被験者からの核酸試料を鋳型とするプライマーの伸長反応の際に、４種のｄＮＴＰを１種ずつ反応させる。ｄＮＴＰのいずれかが取り込まれると、等量のピロリン酸塩（ＰＰｉ）が遊離し、遊離したＰＰｉはスルフリラーゼと反応してＡＴＰを生成させ、このＡＴＰによりルシフェラーゼの反応が起こり、発光が起こる。従って、ある特定のｄＮＴＰを加えたときに発光が起こった場合には、そのｄＮＴＰに対応するヌクレオチドが取り込まれたことが明らかとなり、これにより核酸試料中の対象部位のヌクレオチドが同定される。この方法においては、ｄＮＴＰが用いられるため、ＳＮａＰｓｈｏｔＴＭ法で用いられるような多型部位に隣接するプライマーを用いる必要はなく、数塩基はなれたプライマーを用いてもよい。このような方法は当業者に公知であり、その操作手順および使用するプライマーの具体的ヌクレオチド配列は、当業者であれば容易に決定することができる。
【００５９】
各標的遺伝子における上記各多型部位のヌクレオチドを同定する場合には、さらに、本発明による診断用キットに含まれる核酸分子をプローブおよび／またはプライマーとして使用する遺伝子型決定法（タイピング法）を用いることもできる。遺伝子型決定法は当業者に公知であり、その操作手順および使用するプローブおよび／またはプライマーの具体的ヌクレオチド配列は、当業者であれば容易に決定することができる。本発明の好ましい実施態様によれば、上記の遺伝子型決定法としては、ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法として知られる方法が用いられる。
【００６０】
ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法においては、上記各多型部位のヌクレオチドを含む領域に対して、両アレルのそれぞれに特異的にハイブリダイズする２種のプローブであって、それぞれ別の蛍光標識物質が５’末端に付され、その蛍光標識に対するクエンチャー（消光物質）が３’末端に付されてなるプローブ（ＴａｑＭａｎプローブ）が用いられ、これらをＰＣＲ反応液中に添加して、被験者由来の核酸試料を鋳型とするＰＣＲ反応を行なう。ＴａｑＭａｎプローブおよびＰＣＲ用のプライマーとしては、本発明による診断用キットに含まれる核酸分子を用いることができ、それらの具体的なヌクレオチド配列は、当業者であれば適宜決定することができる。また、２種の蛍光標識物質は、互いに識別可能な組合せであればよく、そのような蛍光標識物質の組合せはそれぞれのクエンチャーとともに当業者に公知のものを用いることができるが、好ましくはＦＡＭ、ＶＩＣ、およびＴＥＴのいずれかの組合せを用いる。
【００６１】
ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法においては、まず、各アレルにＴａｑＭａｎプローブがハイブリダイズし、プライマーからの伸長反応がそのハイブリダイゼーション領域に到達した際にＴａｑＤＮＡポリメラーゼの作用によって蛍光標識物質が遊離する。遊離した蛍光標識物質はクエンチャーの作用を受けないため、蛍光を発する。従って、この方法によれば、各アレルの存在量に対応する強度の各蛍光を観察することができ、これにより、被験者の遺伝子型が容易に決定される。
【００６２】
本発明による診断用キットは、上述の核酸分子に加えて、上記各種標的遺伝子における上記各多型部位のヌクレオチドを同定するための具体的方法に応じて、その方法に用いられる試薬類、反応容器、説明書等を含んでいてもよい。
【実施例】
【００６３】
以下、実施例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるれものではない。
【００６４】
例１：遺伝子多型および生活習慣と動脈硬化症との関連
本研究においては、吹田市在住の市民から性および年齢により階層的に選ばれた、国立循環器病センター（National Cardiovascular Center of Japan）における１８８０人の受診者を対象とした。遺伝子解析に先立ち、被験者全員から遺伝子解析についてのインフォームドコンセントを取得した。被験者全員から採血し、得られた血液を遺伝子解析用のサンプルとした。被験者の血圧測定は２回行い、その平均値をとり、収縮期血圧（ＳＢＰ）１４０ｍｍＨｇ以上もしくは拡張期血圧（ＤＢＰ）９０ｍｍＨｇ以上の被験者または降圧剤服用中の被験者を高血圧症と判定した。また、被験者は、喫煙者、飲酒者、高コレステロール症（総コレステロール２２０ｍｇ／ｄＬ以上またはコレステロール低下薬服用中）、糖尿病（空腹時血糖値１２６ｍｇ／ｄＬ以上、もしくは非空腹時血糖値２００ｍｇ／ｄＬ以上でＨｂＡ１Ｃ６．５％以上、または糖尿病薬服用中）に分類した。被験者全体の各種データを表１に示す。
【００６５】
【表１】
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【００６６】
被験者全員のサンプルにおいて、高血圧感受性の候補遺伝子と考えた遺伝子中の計６３８種の多型についてＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法によるタイピングを行った。ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法は、ＴａｑＭａｎシステム（Applied Biosystems, Foster City, CA, USA）を用いて行なった。ＰＣＲ産物の蛍光は、ABI PRISM（登録商標）7900HT Sequence Detection System（ABI）を用いて測定した。
【００６７】
生活習慣については、一日当りの飲酒量が日本酒（アルコール濃度が約１５％）に換算して２７０ｍｌ以上である場合を過剰飲酒と定義し、ＢＭＩ（体格指数：Body Mass Index）が２５ｋｇ／ｍ２以上である場合を肥満と定義し、身長、体重、および年齢から１日クレアチニン排泄量を求め、尿中クレアチニン量から塩分排泄量を推計し（Kawasaki T, Uezono K, Itoh K, Ueno M. Prediction of 24-hour urinary creatinine excretion from age, body weight and height of an individual and its application. Japanese Journal of Public Health. 1991 Aug;38(8):567-74）、その値が１２ｇ/日以上である場合を塩分過剰摂取と定義した。
【００６８】
動脈硬化の指標として、脈派伝播速度と頚動脈超音波検査を用いた。脈派伝播速度（ＰＷＶ）の測定には、日本コーリンのFormを使用した。測定は２回行い、２回目の測定値をデータとして用いた。ＡＢＩが０．９以下側のＰＷＶ値はデータとして用いないで解析した。ＰＷＶの値は左右の平均値を用いた。ＰＷＶの平均値が１４００ｃｍ／ｓ以上である場合に、ＰＷＶ高値と定義した。頚動脈は、総計動脈から分岐部、内頚動脈までを計測した。総計動脈の内膜中幕複合体（ＩＭＴ）の左右平均値を平均ＩＭＴ値とし、左右の測定領域のうちで最大のＩＭＴをＩＭＴ値とした。さらに、２５％以上の狭窄がみられた場合に、狭窄ありと定義した。また、ＩＭＴが１．１ｍｍ以上である場合に、プラークありと定義した。
【００６９】
遺伝子と生活習慣との高血圧における交互作用を求めるために、以下のロジスティック回帰モデルを用いた（Witte JS. Gene-environment interaction. In: Elston R. Olson J, Palmer L, eds. Biostatistical Genetics and Genetic Epidemiology. Cleveland, Ohio: John Wiley &Sons; 2002:297-299）。
Logit p ＝ β0 ＋ βgxg ＋ βexe ＋ βgexge
【００７０】
上記の式において、xgとxeはそれぞれ遺伝子と生活習慣のデータ項であり、β0は切片項、βgは遺伝子多型の主要効果の係数、βeは生活習慣の主要効果の係数を表す。Logitスケールでβgeは遺伝子多型と生活習慣との交互作用の係数を表す。本研究では、交互作用のｐ値が０．０５未満のもので、生活習慣の有無別に分け、それぞれの群でロジスティック回帰分析を行い、生活習慣要因（＋）のｐ値が０．０５未満であったものを生活習慣と遺伝子との交互作用のある遺伝子多型とした。ここでの調整変数として、年齢、ＢＭＩ、過剰飲酒、喫煙、既往歴（高血圧、高脂血症、および糖尿病）をモデルに組み込んだ。その分析結果を、以下の表２〜７に示す。
【００７１】
【表２】
2006067903.tif 000003
【００７２】
【表３】
2006067903.tif 000004
【００７３】
【表４】
2006067903.tif 000005
【００７４】
【表５】
2006067903.tif 000006
【００７５】
【表６】
2006067903.tif 000007
【００７６】
【表７】
2006067903.tif 000008
【００７７】
表２から明らかなように、過剰飲酒との交互作用において動脈硬化症との関連性が見られる６種類の遺伝子多型のうち、交互作用ｐ値が０．０１未満のものは、DDAH2-C1155A、CL-A215G、SBCAD-A2334G、clock-A395G、およびFLJ14075-JST085615の５種類であった。このことから、これら５種類の遺伝子多型において、表２の「モデル」欄の下段に示される遺伝子型を保有している被験者が過剰飲酒の習慣を有すると、その被験者が動脈硬化症になるリスクが高くなることが明らかとなった。
【００７８】
表３から明らかなように、喫煙との交互作用において動脈硬化症との関連性が見られる３種類の遺伝子多型のうち、交互作用ｐ値が０．０１未満のものは、LPIN1-JST153824の１種類であった。このことから、この遺伝子多型において、表３の「モデル」欄の下段に示される遺伝子型を保有している被験者が喫煙の習慣を有すると、その被験者が動脈硬化症になるリスクが高くなることが明らかとなった。
【００７９】
表４から明らかなように、定期的な運動との交互作用において動脈硬化症との関連性が見られる２種類の遺伝子多型のうち、IGF1R-C956TおよびTH-JST005746の双方において交互作用ｐ値が０．０１未満であった。このことから、これら２種類の遺伝子多型において、表４の「モデル」欄の下段に示される遺伝子型を保有している被験者が定期的な運動の習慣を有さないと、その被験者が動脈硬化症になるリスクが高くなることが明らかとなった。
【００８０】
表５から明らかなように、肥満との交互作用において動脈硬化症との関連性が見られる２種類の遺伝子多型のうち、交互作用ｐ値が０．０１未満のものはみられなかった。
【００８１】
表６から明らかなように、塩分過剰摂取との交互作用において動脈硬化症との関連性が見られる７種類の遺伝子多型のうち、交互作用ｐ値が０．０１未満のものは、WNK1-G3785Aの１種類であった。このことから、この遺伝子多型において、表６の「モデル」欄の下段に示される遺伝子型を保有している被験者が塩分過剰摂取の習慣を有すると、その被験者が動脈硬化症になるリスクが高くなることが明らかとなった。
【００８２】
表７から明らかなように、高血圧との交互作用において動脈硬化症との関連性が見られる７種類の遺伝子多型のうち、交互作用ｐ値が０．０１未満のものは、GC-rs4588、ROCK2-JST066563、ROCK2-JST042011、およびGREB1-JST149403の４種類であった。このことから、これら４種類の遺伝子多型において、表７の「モデル」欄の下段に示される遺伝子型を保有している被験者が高血圧であると、その被験者が動脈硬化症になるリスクが高くなることが明らかとなった。
【００８３】
以上の通り、各生活習慣要因との交互作用において、上述の遺伝子多型における遺伝子型を同定することにより、被験者が動脈硬化症になるリスクを予測することができる。さらに、動脈硬化症のリスクが高いと判定された被験者に対して、判定に用いられた遺伝子多型に対応する生活習慣の改善を指導することにより、該被験者における動脈硬化症の予防または治療が可能となる。
【配列表】
2006067903000001.app
【手続補正書】
【提出日】平成16年11月19日(2004.11.19)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
過剰飲酒の習慣を有する被験者が動脈硬化症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
（i）ＤＤＡＨ２遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはアデニン（Ａ）である前記ＤＤＡＨ２遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（ii）ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号２で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）である前記ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（iii）ＡＣＡＤＳＢ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号３で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）である前記ＡＣＡＤＳＢ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（iv）ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号４で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）である前記ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、ならびに
（v）ＦＬＪ１４０７５遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号５で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）である前記ＦＬＪ１４０７５遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子
からなる群から選択される少なくとも一種の核酸分子を含んでなる、診断用キット。
【請求項２】
前記被験者が男性である、請求項１に記載の診断用キット。
【請求項３】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域にハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなるものである、請求項１に記載の診断用キット。
【請求項４】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域を核酸増幅法において増幅することができるものである、請求項１に記載の診断用キット。
【請求項５】
過剰飲酒の習慣を有する被験者が動脈硬化症になるリスクを予測する方法であって、
（i）ＤＤＡＨ２遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定する工程、
（ii）ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号２で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定する工程、
（iii）ＡＣＡＤＳＢ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号３で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定する工程、
（iv）ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号４で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定する工程、および
（v）ＦＬＪ１４０７５遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号５で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定する工程
からなる群から選択される少なくとも一つの工程を含んでなる、方法。
【請求項６】
前記被験者が男性である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
喫煙の習慣を有する被験者が動脈硬化症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
ＬＰＩＮ１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号６で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がチミン（Ｔ）であるかシトシン（Ｃ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がチミン（Ｔ）またはシトシン（Ｃ）である前記ＬＰＩＮ１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子を含んでなる、診断用キット。
【請求項８】
前記被験者が男性である、請求項７に記載の診断用キット。
【請求項９】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域にハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなるものである、請求項７に記載の診断用キット。
【請求項１０】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域を核酸増幅法において増幅することができるものである、請求項７に記載の診断用キット。
【請求項１１】
喫煙の習慣を有する被験者が動脈硬化症になるリスクを予測する方法であって、
ＬＰＩＮ１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号６で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がチミン（Ｔ）であるかシトシン（Ｃ）であるかを同定する工程を含んでなる、方法。
【請求項１２】
前記被験者が男性である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
定期的運動の習慣を有さない被験者が動脈硬化症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
（i）ＩＧＦ１Ｒ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号７で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはチミン（Ｔ）である前記ＩＧＦ１Ｒ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、ならびに
（ii）ＴＨ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号８で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはチミン（Ｔ）である前記ＴＨ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子
からなる群から選択される少なくとも一種の核酸分子を含んでなる、診断用キット。
【請求項１４】
前記被験者が男性である、請求項１３に記載の診断用キット。
【請求項１５】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域にハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなるものである、請求項１３に記載の診断用キット。
【請求項１６】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域を核酸増幅法において増幅することができるものである、請求項１３に記載の診断用キット。
【請求項１７】
定期的運動の習慣を有さない被験者が動脈硬化症になるリスクを予測する方法であって、
（i）ＩＧＦ１Ｒ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号７で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定する工程、および
（ii）ＴＨ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号８で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定する工程
からなる群から選択される少なくとも一つの工程を含んでなる、方法。
【請求項１８】
前記被験者が男性である、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
塩分過剰摂取の習慣を有する被験者が動脈硬化症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
ＰＲＫＷＮＫ１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号９で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）またはアデニン（Ａ）である前記ＰＲＫＷＮＫ１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子を含んでなる、診断用キット。
【請求項２０】
前記被験者が女性である、請求項１９に記載の診断用キット。
【請求項２１】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域にハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなるものである、請求項１９に記載の診断用キット。
【請求項２２】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域を核酸増幅法において増幅することができるものである、請求項１９に記載の診断用キット。
【請求項２３】
塩分過剰摂取の習慣を有する被験者が動脈硬化症になるリスクを予測する方法であって、
ＰＲＫＷＮＫ１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号９で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定する工程を含んでなる、方法。
【請求項２４】
前記被験者が女性である、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
高血圧の被験者が動脈硬化症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
（i）ＧＣ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１０で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはアデニン（Ａ）である前記ＧＣ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（ii）ＲＯＣＫ２遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１１で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはアデニン（Ａ）である前記ＲＯＣＫ２遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（iii）ＲＯＣＫ２遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１２で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）であるかシトシン（Ｃ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）またはシトシン（Ｃ）である前記ＲＯＣＫ２遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、ならびに
（iv）ＧＲＥＢ１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１３で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはチミン（Ｔ）である前記ＧＲＥＢ１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子
からなる群から選択される少なくとも一種の核酸分子を含んでなる、診断用キット。
【請求項２６】
前記被験者が男性である、請求項２５に記載の診断用キット。
【請求項２７】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域にハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなるものである、請求項２５に記載の診断用キット。
【請求項２８】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域を核酸増幅法において増幅することができるものである、請求項２５に記載の診断用キット。
【請求項２９】
高血圧の被験者が動脈硬化症になるリスクを予測する方法であって、
（i）ＧＣ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１０で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定する工程、
（ii）ＲＯＣＫ２遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１１で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定する工程、
（iii）ＲＯＣＫ２遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１２で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）であるかシトシン（Ｃ）であるかを同定する工程、および
（iv）ＧＲＥＢ１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１３で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定する工程
からなる群から選択される少なくとも一つの工程を含んでなる、方法。
【請求項３０】
前記被験者が男性である、請求項２９に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００６】
そして、本発明の第一の態様による診断用キットは、過剰飲酒の習慣を有する被験者が動脈硬化症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
（i）ＤＤＡＨ２遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはアデニン（Ａ）である前記ＤＤＡＨ２遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（ii）ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号２で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）である前記ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（iii）ＡＣＡＤＳＢ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号３で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）である前記ＡＣＡＤＳＢ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（iv）ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号４で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）である前記ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、ならびに
（v）ＦＬＪ１４０７５遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号５で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ）である前記ＦＬＪ１４０７５遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子
からなる群から選択される少なくとも一種の核酸分子を含んでなるものである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００７】
さらに、本発明の第一の態様による方法は、過剰飲酒の習慣を有する被験者が動脈硬化症になるリスクを予測する方法であって、
（i）ＤＤＡＨ２遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定する工程、
（ii）ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号２で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定する工程、
（iii）ＡＣＡＤＳＢ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号３で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定する工程、
（iv）ＣＬＯＣＫ遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号４で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定する工程、および
（v）ＦＬＪ１４０７５遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号５で表されるヌクレオチド配列中の第５０１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかグアニン（Ｇ）であるかを同定する工程
からなる群から選択される少なくとも一つの工程を含んでなるものである。