(57)【要約】【課題】アルドースレダクターゼ阻害薬並びに糖尿病及び糖尿病性合併症の予防又は治療薬を提供すること。【解決手段】呉茱萸又はその抽出物を配合することを特徴とするアルドースレダクターゼ阻害薬、並びに糖尿病及び糖尿病性合併症の予防又は治療薬。また、式【化５】
2006022102.tif 000008
で表される化合物を有効成分とするアルドースレダクターゼ阻害薬、並びに糖尿病及び糖尿病性合併症の予防又は治療薬。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
呉茱萸又はその抽出物を配合することを特徴とするアルドースレダクターゼ阻害薬。
【請求項２】
呉茱萸又はその抽出物を配合することを特徴とする糖尿病及び糖尿病性合併症の予防又は治療薬。
【請求項３】
式
【化１】
2006022102.tif 000007
で表される化合物を有効成分とするアルドースレダクターゼ阻害薬。
【請求項４】
請求項３記載の化合物を有効成分とする糖尿病及び糖尿病性合併症の予防又は治療薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、アルドースレダクターゼ阻害剤及び糖尿病及び糖尿病性合併症の予防又は治療薬に関する。
【背景技術】
【０００２】  糖尿病性合併症としては神経症、網膜症、腎症などがあり、糖尿病患者の１０％が十数年後に各種合併症に悩まされ、羅病期間が３０年になると、これらの合併症が３０〜５０％の患者に発生すると言われている（非特許文献１）。糖尿病合併症の促進要因としてポリオール経路の代謝亢進がある。ポリオール経路はアルドースレダクターゼとソルビトールデヒドロゲナーゼが触媒している（非特許文献２）。正常の血中グルコース濃度ではグルコースからソルビトールへ変換される量はわずかにすぎないが、高血糖になるとアルドースレダクターゼが活性化され、ポリオール経路に流入するグルコース量が増加し、ソルビトール、フルクトースの生産量が増加する。グルコースの細胞内流入はインスリン非依存性の組織で起こりやすく、細胞内に産生されたソルビトールやフルクトースは細胞膜透過性が低く排泄されにくい為に細胞内に蓄積されやすい。神経症、網膜症及び腎症は、それぞれ神経組織細胞、毛細血管壁細胞及びメサンギウム細胞が主に関与するが、ソルビトールの蓄積とミオイノシトール代謝異常により発症すると考えられる。ミオイノシトールはホスホイノシチドの構成成分であり、これらの細胞内に高濃度に存在する。ミオイノシトールとグルコースは細胞内への取り込みの際に競合する結果、高血糖はミオイノシトール減少の一因であると考えられる。ミオイノシトールの低下はＮａ／Ｋ  ＡＴＰａｓｅ活性の低下をもたらし糖尿病性合併症をもたらす（非特許文献３）。【０００３】  呉茱萸は、習慣性偏頭痛の主薬として用いられる生薬であり、末梢血液循環の改善、更年期障害の改善や嘔吐、不眠の改善を期待し処方に配合される。しかしながら、アルドースレダクターゼ阻害作用を有すること並びに糖尿病及び糖尿病性合併症の予防又は治療薬として有効であることについては知られていない。
【非特許文献１】  今月の治療１１  ｖｏｌ  １０  ｎｏ１１  ２００２  総合医学社
【非特許文献２】  Ｗａｒｄ，Ｊ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  Ｂｌｏｏｄ  Ｓｕｇａｒ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  ｏｎ  ｔｈｅ  Ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｏｒｂｉｔｏｌ  ａｎｄ  Ｆｒｕｃｔｏｓｅ  ｉｎ  Ｎｅｒｖｏｕｓ  Ｔｉｓｓｕｅｓ．Ｄｉａｂｅｔｅｓ．２１：１１７３−１１７８，１９７２
【非特許文献３】  後藤由夫ら，９０年代の糖尿病の治療  ４５−４７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】  本発明は、各種生薬からアルドースレダクターゼ阻害薬並びに糖尿病及び糖尿病性合併症の予防又は治療薬を見出すことを主目的としている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】  本発明者らは前記課題を解決するために多くの生薬のアルドースレダクターゼ阻害活性を探索した結果、呉茱萸がアルドースレダクターゼ阻害活性を有することを見出した。
かかる知見に基づき完成した本発明の一つの態様は、呉茱萸又はその抽出物を配合することを特徴とするアルドースレダクターゼ阻害剤である。
また、本発明の他の態様は、呉茱萸又はその抽出物を配合することを特徴とする糖尿病及び糖尿病性合併症の予防又は治療薬である。【０００６】  また、本発明の他の態様は、式
【化２】
2006022102.tif 000002
で表される化合物を有効成分とするアルドースレダクターゼ阻害薬である。
また、本発明の他の態様は、上記の化合物を有効成分とする糖尿病及び糖尿病性合併症の予防又は治療薬である。【０００７】  本発明において「呉茱萸」は、原末のみならず、エキス等の抽出物あってもよく、その形態には特に限定はない。木通の有効投与量（原生薬換算量）は、おおよそ成人１人に対して１日当たり２．０〜６．０ｇであり、好ましくは３．０〜５．０ｇである。【０００８】  生薬は以下の方法により分画することができる。
まず、呉茱萸を水中で加熱抽出する。等量のメタノールを加え、冷却後遠心し、上清をデカンテーションにより採取し、濾過する。その後、濾液を濃縮後、有機溶媒にて抽出し、脂溶性アルカロイド画分を得る。この画分を用いアルドースレダクターゼの阻害活性の測定を行う。【０００９】  アルドースレダクターゼの阻害活性の測定は、リン酸緩衝液、ＮＡＤＰＨ、ＢＳＡ、検体及び基質としてＤＬ−ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅを含む反応溶液を調製した後、アルドースレダクターゼを加え反応を開始し、反応によって減少するＮＡＤＰＨ量を、分光光度計を用いて、吸収波長にて測定する。
【発明の効果】
【００１０】  本発明により、生薬由来の副作用の少ないアルドースレダクターゼ阻害薬並びに糖尿病及び糖尿病性合併症の予防又は治療薬を提供することが可能となった。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】  以下、実施例及び試験例を挙げて本発明を詳細に説明する。
実施例１（アルドースレダクターゼの阻害活性の測定）
リン酸緩衝液（２００ｍＭ  ｐＨ６．２）、ＮＡＤＰＨ（１．５ｍＭ）、ＢＳＡ（１ｍｇ／ｍＬ）、サンプル（２００μｇ／ｍＬ）及び基質としてＤＬ−ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ（１００ｍＭ）を含む反応溶液を調製した後（０ｔｉｍｅ）、アルドースレダクターゼ（５．１×１０−１ｕｎｉｔ／ｍＬ）を加え反応を開始し、反応によって減少するＮＡＤＰＨ量を、分光光度計を用いて、吸収波長３４０ｎｍにて測定した。
反応液の組成：リン酸緩衝液                        ５００μＬ；
ＮＡＤＰＨ（１．５ｍＭ）            １００μＬ；
ＢＳＡ（１ｍｇ／ｍＬ）              １００μＬ；
サンプル                              ４０μＬ；
ＤＬ−ｇｌｙｃｅｒａｌｄｅｈｙｄｅ  １００μＬ；
アルドースレダクターゼ                １０μＬ；
蒸留水                              １５０μＬ；
（全体量，１．０ｍＬ）【００１２】実施例２（アルドースレダクターゼ阻害物質の単離精製ならびに阻害活性の測定）
呉茱萸６００ｇを蒸留水８００ｍＬ中で１００℃、４０分間加熱抽出した。等量のメタノールを加え、冷却後、７，０００ｒｐｍで２０分間遠心した。上清をデカンテーションにより採取し、ハイフロスーパーセルにて濾過した。濾液を減圧濃縮した後、希塩酸に溶解させ酢酸エチルにて分配を行った。水層を更にクロロホルムを用いて分配し、得られたクロロホルム層を濃縮することにより、脂溶性アルカロイド画分（３５０．５ｍｇ）を得た。これを、ゲル濾過カラムＬＨ−２０にアプライし、１画分５ｍＬとなるようメタノールで溶出した。溶出されてきた成分を薄層クロマトグラフィーにて確認したところ、ドラーゲンドルフ、ヨウ素及びクロラックスに陽性なシングルスポットが活性成分本体であることがわかった。この活性成分のアルドースレダクターゼに対するＩＣ５０値は２５．１μｇ／ｍＬであり、収量は２１１．４ｍｇであった。また、この化合物の構造はＥｈｒｌｉｃｈ反応及びバニリン−塩酸反応に陽性であったことからインドール骨格を基本骨格としたアルカロイドであることが示唆された。更に１３Ｃ−ＮＭＲにより構造の詳細を解析した結果、本化合物はＮ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−５−ｍｅｔｈｏｘｙｔｒｙｐｔａｍｉｎｅであることが明らかになった（化１）。【００１３】実施例３（呉茱萸に含まれるアルカロイド成分のアルドースレダクターゼ阻害活性）
活性成分Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−５−ｍｅｔｈｏｘｙｔｒｙｐｔａｍｉｎｅがアルカロイドであったことから、呉茱萸に含まれる代表的なアルカロイドｅｖｏｄｉａｍｉｎｅ、ｒｕｔａｅｃａｒｐｉｎｅ、ｒｈｅｔｉｎｉｎｅ（下記式参照）についても同様にアルドースレダクターゼ阻害活性の測定をおこなった。しかし、いずれの化合物も終濃度５ｍｇ／ｍＬ添加した場合でも阻害活性は認められなかった（表１参照）。【００１４】
【化３】
2006022102.tif 000003
【００１５】
【表１】
2006022102.tif 000004
【００１６】実施例４（各種トリプタン系アルカロイドのアルドースレダクターゼ阻害活性の測定）
活性成分Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−５−ｍｅｔｈｏｘｙｔｒｙｐｔａｍｉｎｅは、トリプタン系アルカロイドであるため、トリプタン骨格を有する構造類似化合物；ｓｕｍａｔｒｉｐｔａｎ、ｚｏｌｍｉｔｒｉｐｔａｎ、ｍｅｌａｔｏｎｉｎ、ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ（下記式参照）についても同様にアルドースレダクターゼ阻害活性の測定し、Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−５−ｍｅｔｈｏｘｙｔｒｙｐｔａｍｉｎｅとの比較を行った（表２参照）。その結果、終濃度１００μｇ／ｍＬ添加により、いずれの化合物にも弱い阻害活性が認められたが、Ｎ，Ｎ−ｄｉｍｅｔｈｙｌ−５−ｍｅｔｈｏｘｙｔｒｙｐｔａｍｉｎｅの阻害率が最も高かった（７２．６％）。【００１７】
【化４】
2006022102.tif 000005
【００１８】
【表２】
2006022102.tif 000006