(57)【要約】【課題】従来法よりも簡便で、貼付材の皮膚刺激性の客観的評価が可能な貼付材の物理的皮膚刺激性の評価方法を提供すること。【解決手段】貼付材の引張試験によって得られる１０％モジュラス値（Ｎ／２０ｍｍ）をｘとし、貼付材の引張試験によって得られる１０％伸張時の３００秒経過後の応力緩和率（％）をｙとした場合のｘおよびｙが、一次関数式：ｙ≦−５ｘ＋８８を満たすか否かによって貼付材の刺激性を判定することを特徴とする、貼付材の皮膚への刺激性を評価する方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
貼付材の引張試験によって得られる１０％モジュラス値（Ｎ／２０ｍｍ）をｘとし、貼付材の引張試験によって得られる１０％伸張時の３００秒経過後の応力緩和率（％）をｙとした場合のｘおよびｙが、一次関数式：ｙ≦−５ｘ＋８８を満たすか否かによって貼付材の刺激性を判定することを特徴とする、貼付材の皮膚への刺激性を評価する方法。
【請求項２】
貼付材が付着している部分の皮膚を貼付材が付着したままで採取し、採取した皮膚の表皮の厚みを測定することをさらに組み合わせてなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
貼付材が付着している部分の皮膚を貼付材が付着したままで採取する工程と、
貼付材が皮膚に付着したままの該採取後の皮膚標本を固定する工程と、
該固定後の皮膚標本から貼付材を剥離する工程と、
固定後貼付材を剥離した皮膚標本の表皮の厚みを測定する工程と
をさらに組み合わせてなる、請求項１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は貼付材の皮膚への刺激性を評価する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚は外的な刺激に対して生体を覆い、その刺激から防御する機能を果たす器官であり、外的な刺激として化学的刺激や物理的刺激に曝される。ヒトの皮膚に直接適用する経皮吸収型製剤、創傷被覆材、医療用粘着テープなどの粘着剤応用製品では、化学的刺激については粘着剤の残存モノマーを低減させることや添加物を選定することによって化学的刺激を起こさない粘着性基材や製品を設計することが可能であるのに対し、物理的刺激については用途に応じて必要な粘着特性を得つつ刺激の低減化を図らなければならない。
貼付材における物理的刺激は、貼付中に生じる刺激と貼付後の剥離に伴う刺激に大別される。剥離に伴う刺激は、剥離による比較的強い力が皮膚に及ぼす作用と角質細胞の剥離によるバリア機能への影響を反映するものであるのに対し、貼付中に生じる刺激は、主に貼付中の皮膚の動きとそれを制約する貼付材との間に生じる物理的ストレスを反映するものと考えられ、さらには水分蒸散の抑制による角質層の浸軟化がこれを増強する因子として関与すると考えられている。またこの浸軟化は、細胞増殖を促し、生物学的刺激を生じる一因ともなり得る。
【０００３】
一般に、貼付材の皮膚刺激性は、上記の物理的刺激の総体に対する皮膚反応を、主にウサギを用いた皮膚一次刺激性試験および累積皮膚刺激性試験において目視判定することにより評価されている。しかしながら、これらによって一定のリスクは排除されるものの、目視判定は段階的スコアによる判定であり、多くの製品が、Ｄｒａｉｚｅら（非特許文献１）の基準で“わずかな紅斑（Ｓｃｏｒｅ  １）”ないし“明らかな紅斑（Ｓｃｏｒｅ  ２）”の範囲にあることから、皮膚のダメージの軽微な差異を評価する上では必ずしも好ましいものではなく、また動物を用いた試験方法であるためより簡便な評価方法が求められていた。
【０００４】
一方、剥離刺激による皮膚のダメージを評価する手法としては、従来、剥離角質細胞面積の測定、ならびに、水分蒸散量や電気伝導度測定によるバリア障害性の評価が知られており、貼付材の評価にも幅広く用いられている。しかしながら、貼付材の皮膚刺激の指標としては、ボランティア等の協力による官能試験から得られたデータが多いのも否めず、より客観的な評価方法が必要とされている。また、貼付材の剥離による刺激が比較的強い場合には、目視判定に加えて病理組織学的な皮膚反応を観察することによりその皮膚へのダメージを評価できるが、剥離刺激が比較的軽度である場合や、テープ貼付中の刺激などでは明らかな炎症性反応を起こさない場合が多く、従来の評価方法は必ずしも十分なものであるということができない。
【非特許文献１】Draize J.H.著，「The Journal of pharmacology and experimental therapeutics」，１９４４年，第８２巻，ｐ．３３７
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明者らは、従来の官能試験による主観的な評価に頼らず、客観的に貼付材の皮膚への刺激性を評価できる方法、さらには、従来の評価方法では十分に評価できなかった軽度の刺激性をも評価可能な貼付材の刺激性の評価方法を提供することを課題とした。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の要旨は以下のとおりである。
（１）貼付材の引張試験によって得られる１０％モジュラス値（Ｎ／２０ｍｍ）をｘとし、貼付材の引張試験によって得られる１０％伸張時の３００秒経過後の応力緩和率（％）をｙとした場合のｘおよびｙが、一次関数式：ｙ≦−５ｘ＋８８を満たすか否かによって貼付材の刺激性を判定することを特徴とする、貼付材の皮膚への刺激性を評価する方法。
（２）貼付材が付着している部分の皮膚を貼付材が付着したままで採取し、採取した皮膚の表皮の厚みを測定することをさらに組み合わせてなる、上記（１）に記載の方法。
（３）貼付材が付着している部分の皮膚を貼付材が付着したままで採取する工程と、
貼付材が皮膚に付着したままの該採取後の皮膚標本を固定する工程と、
該固定後の皮膚標本から貼付材を剥離する工程と、
固定後貼付材を剥離した皮膚標本の表皮の厚みを測定する工程と
をさらに組み合わせてなる、上記（１）に記載の方法。
【発明の効果】
【０００７】
本発明によれば、官能性試験によらずとも貼付材の皮膚への物理的刺激の客観的評価が可能である。さらには、従来法のような動物の使用が必ずしも必要ではないため、より簡便に貼付材の評価を行うことができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明は、貼付材の引張試験によって得られる１０％モジュラス値（Ｎ／２０ｍｍ）をｘとし、貼付材の引張試験によって得られる１０％伸張時の３００秒経過後の応力緩和率（％）をｙとした場合のｘおよびｙが、一次関数式：ｙ≦−５ｘ＋８８を満たす場合に、該貼付材を低皮膚刺激性であると判定するものである。
【０００９】
本発明における「１０％モジュラス値」および「応力緩和率（％）」は、以下のように定義される。
貼付材を幅２０ｍｍ、チャック間４０ｍｍのサイズに切断し、引張試験機（オートグラフＡＧＳ−１００Ｄ  島津製作所（株））を用いて、チャック間距離２０ｍｍ、２３±２℃、６５±１５％相対湿度の条件下で引張試験を行う。引張速度３００ｍｍ／分で伸張１０％となるまで延伸して、時間経過による引張応力値の変化を測定し、以下の式により応力緩和率（％）が求まる。
応力緩和率（％）＝（５分後引張応力値／初期引張応力値）×１００
なお、初期引張応力は、引張開始直後から１０％延伸するまでの最大引張応力値を示す。また、この場合の初期引張応力が、本発明における１０％モジュラス値である。
【００１０】
貼付材の引張試験によって得られる１０％モジュラス値（Ｎ／２０ｍｍ）をｘとし、貼付材の引張試験によって得られる１０％伸張時の３００秒経過後の応力緩和率（％）をｙとした場合のｘおよびｙが、一次関数式：ｙ≦−５ｘ＋８８を満たす場合、該貼付材は低皮膚刺激性であるということができる。この方法によって、種々の支持体、粘着剤の組み合わせにおいて、応力緩和率と１０％モジュラス値を測定するだけで、動物試験をしなくても、貼付材の物理的な皮膚刺激性の有無を予測することができる。
【００１１】
上述の貼付材の皮膚刺激性の評価方法に、貼付材が付着している部分の皮膚を貼付材が付着したままで採取する工程と、採取した皮膚の表皮の厚みを測定する工程とを含む、貼付材の貼付中に生じる皮膚への刺激性を評価する方法をさらに組み合わせてもよい。より詳細には、貼付材が付着している部分の皮膚を貼付材が付着したままで採取する工程と、貼付材が皮膚に付着したままの該採取後の皮膚標本を固定する工程と、該固定後の皮膚標本から貼付材を剥離する工程と、固定後貼付材を剥離した皮膚標本の表皮の厚みを測定する工程とを含む、貼付材の貼付中に生じる皮膚への刺激性を評価する方法をさらに組み合わせてもよい。このような方法を併用すれば、貼付中の皮膚への刺激性をより多角的に評価することが可能となる。
【００１２】
従って、これらの方法を組み合わせることにより、貼付中の皮膚への刺激性が小さくかつ貼付中および剥離時により生じる皮膚への物理的刺激性も小さいという好ましい特性を兼ね備えた貼付材の選出が可能となる。
【００１３】
本発明の評価方法に用いられる皮膚としては、本発明の目的を達成しうるものであればいかなるものでもよく特に限定されないが、好ましくは、ウサギ、マウス、ラット、イヌ、ネコなどの哺乳動物の皮膚、特にこれら哺乳動物の毛刈・剃毛した皮膚が好適なものとして挙げられる。
【００１４】
貼付材が付着している部分の皮膚を貼付材が付着したままで採取する際の採取方法は、貼付材と貼付材が付着した皮膚とが剥離せずに皮膚の標本を採取可能なものであれば特に限定されないが、例として、医学・獣医学分野で慣用されているメスやハサミなどの手術器具などが挙げられる。
【００１５】
採取した皮膚の表皮の厚みの測定の方法は、特に限定されず、皮膚と貼付材とが接着している皮膚標本を分離しその後表皮の厚みの測定を行ってもよいし、これらを分離せずに表皮の厚みを測定してもよい。
【００１６】
採取した皮膚の表皮の厚みの測定の方法の好ましい実施態様としては、以下の手順が挙げられる。
採取後の貼付材の付着した皮膚標本を固定後、貼付材を剥離し、貼付材が付着していた部分の皮膚を切り出して皮膚組織の標本を作製する。該標本を固定して、定法によってパラフィン包埋し、標本断面が表皮面に対して直角になるように薄切して組織切片を作製し、切片を脱パラフィンし、蒸留水などで洗浄する。その後、染色を行い、必要に応じ透徹、封入する。こうして得られた標本の表皮の厚さを、光学顕微鏡などを用いて測定する。なお、測定を簡便にするため、光学顕微鏡で得られる画像を市販の画像解析ソフトを用いて解析してもよい。ここで、固定とは組織標本作製のために、人為的操作を加え、もとの形態や構造内容物を出来るだけ保持し変化させないようにする処理であり、当分野では慣用的に行われている処理である。使用する固定方法は併用する染色方法によって適宜選択すればよい。固定方法としては、例えば、中性ホルマリン液、グルタルアルデヒド液、ブアン氏液、酢酸アルコール、メタノールによる方法が用いられる。
【００１７】
表皮厚みを測定するために採取皮膚標本を染色する方法としては、例えば、リンタングステン酸ヘマトキシリン染色やヘマトキシリン−エオジン染色などが挙げられる。
【００１８】
本発明の評価方法をウサギの背部や側腹部の毛刈・剃毛した皮膚を用いて行う場合、貼付材貼付部の表皮の厚みが該貼付材による刺激の影響がないと考えられる未貼付部の表皮の厚みと比較して、表皮の厚みの増加に有意差（通常５μｍ以内、好ましくは３μｍ以内）がなければ、その評価対象の貼付材は低刺激性であると評価される。
【００１９】
本明細書において「貼付材」とは、ヒトおよび動物の皮膚に直接適用しうる粘着剤層を有する物品を意味し、本発明の方法が適用可能である限りその形態は特に制限されない。本発明の方法が適用可能な貼付材の例としては、経皮吸収型製剤、創傷被覆材、医療用粘着テープなどが挙げられる。
【００２０】
貼付材に用いられる粘着剤は特に限定されないが、医療用粘着シートに通常用いられるものが好ましい。粘着剤は、アクリル系粘着剤、ゴム系粘着剤、シリコーン粘着剤などの適当な粘着剤を１種のみを用いてもよいし、２種以上を併用してもよい。
【００２１】
アクリル系粘着剤としては、好ましくは炭素数が１〜１８、さらに好ましくは炭素数４〜１２のアルキル基を有する（メタ）アクリル酸アルキルエステルの単独重合体や当該（メタ）アクリル酸アルキルエステルを主成分単量体として、当該単量体と共重合可能な他の単量体を３〜５０重量％、好ましくは５〜４０重量％の範囲で共重合してなる各種共重合体などが用いられる。
【００２２】
上記（メタ）アクリル酸アルキルエステルとしては、ブチルエステル、へキシルエステル、オクチルエステル、ノニルエステル、デシルエステル、ラウリルエステル、ステアリルエステルなどが挙げられ、これらのエステル鎖は直鎖状若しくは分岐状のいずれであってもよい。
【００２３】
上記主成分単量体と共重合可能な他の単量体としては、（メタ）アクリル酸、マレイン酸、フマル酸、クロトン酸などのカルボキシル基含有不飽和単量体；（メタ）アクリル酸２−ヒドロキシエチルエステル、（メタ）アクリル酸３−ヒドロキシプロピルエステルなどの（メタ）アクリル酸ヒドロキシアルキルエステル；（メタ）アクリルアミドやジメチル（メタ）アクリルアミドなどの（メタ）アクリルアミドおよびその誘導体；Ｎ−ブトキシメチル（メタ）アクリルアミド、Ｎ−エトキシメチル（メタ）アクリルアミドなどのＮ−アルコキシアルキル（メタ）アクリルアミド；（メタ）アクリル酸Ｎ，Ｎ−アルキルアミノアルキルエステル、Ｎ−ビニルピロリドンなどの酸アミド基含有不飽和単量体などの官能性単量体が挙げられる。なおこれらの官能性単量体以外に、酢酸ビニルやスチレン、アクリロニトリルなどの無官能性の単量体も共重合させることができる。
【００２４】
ゴム系粘着剤としては、天然ゴム、ポリイソブチレン、ポリイソプレン、ポリブテン、スチレン−イソプレン系ブロック共重合体、スチレン−ブタジエン系ブロック共重合体などの主ポリマーに粘着付与樹脂としてロジン系樹脂、テルペン系樹脂、クマロン−インデン系樹脂、テルペン−フェノール系樹脂、石油系樹脂などを配合したものを用いることができる。さらに必要に応じて液状ポリブテン、鉱油、ラノリン、液状イソプレン、脂肪族エステルなどの軟化剤；酸化チタン、酸化亜鉛などの充填剤；ブチルヒドロキシトルエンなどの酸化防止剤などを適宜配合したものを用いることもできる。なおこのような添加剤は、前記アクリル系粘着剤に配合しても差し支えないものである。またアクリル系粘着剤に軟化剤を配合する場合には、必要に応じて多官能性ポリイソシアネートや多官能性エポキシ化合物、アルミニウムキレート化合物により架橋処理するのが好ましい。
【００２５】
シリコーン粘着剤としては、ジメチルポリシロキサンを主成分とする粘着剤が例示される。
【００２６】
これら粘着剤は、公知の方法により上記支持体に塗布され、粘着剤層が形成される。このときの粘着剤層の厚さも特に限定されるものではないが、概ね１０〜２００μｍ、好ましくは２０〜７０μｍに形成するのがよい。
【００２７】
本発明の評価方法を適用する貼付材に用いる基材は、粘着剤層を保持可能なものであれば特に制限されない。例えば、ポリエーテルウレタン等のウレタン系ポリマー；ポリエーテルアミド等のアミド系ポリマー；ポリアクリレート等のアクリル系ポリマー；ポリエチレン、ポリプロピレン、エチレン−酢酸ビニル共重合体等のオレフィン系ポリマー；ポリエーテルポリエステル等のエステル系ポリマー；ポリ塩化ビニル、ポリテトラフルオロエチレン等からなるものが挙げられる。基材は、単層であっても複数の層からなる積層体でもよく、積層体の場合には、各層が同一材料からなるものであっても、異なる種類の材料からなるものであってもよい。また積層フィルムとする方法は、従来から用いられている種々の公知の方法を用いることができ、例えば、いわゆるラミネート法、共押し出し法などが採用できる。また、基材の材料については適宜穿孔を設けても、多孔質にしても良い。さらに貼付材用基材フィルムに用いられているような耐熱安定剤、酸化防止剤、光安定剤、帯電防止剤、滑剤、核剤、難燃剤、顔料などを添加していてもよい。
【００２８】
基材の厚みは特に制限されるものではなく、目的や用途に応じて、適宜選択することができ、例えば、１０μｍ〜１０００μｍといった幅広い範囲のものを用いることができる。なお本明細書において文脈から明らかに矛盾しない限り「シート」と言った場合にはフィルムも含み、「フィルム」と言った場合にはシートも含む概念とする。
【００２９】
以下、本発明を実施例に基づき詳細を説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。
なお、以下において部及び％は重量部および重量％を示す。
【実施例】
【００３０】
貼付材の作製
（粘着剤Ａ溶液の作製）
アクリル酸イソオクチルエステル９５部、アクリル酸５部を混合溶媒としての酢酸エチル中で共重合させ、固形分濃度が３５％の粘着剤Ａ溶液を得た。
（粘着剤Ｂ溶液の作製）
アクリル酸イソノニルエステル６５部、アクリル酸メトキシエチル３０部、アクリル酸５部を混合溶媒としてのトルエン中で共重合させ、固形分濃度が４０％の粘着剤Ｂ溶液を得た。
【００３１】
（実施例１〜１２の貼付材の作製）
片面をシリコーン樹脂で剥離処理したセパレーター上に、上記で作製した粘着剤Ａ溶液または粘着剤Ｂ溶液を乾燥後の厚みが約３５μｍ（±５μｍ）となるように塗布、乾燥して粘着剤層を作製した。次に得られた粘着剤層を表１に記載の実施例１〜１２の貼付材用基材フィルムに転写積層して、各貼付材を作製した。
【００３２】
【表１】
2006153593.tif 000002
【００３３】
評価試験
（応力緩和率の測定）
（１０％モジュラス値の測定）
上記のようにして作製した貼付材を用い、以下に示す項目について評価試験を行った。なお試験用のサンプルとして、上記各フィルムを幅２０ｍｍ、チャック間４０ｍｍのサイズに切断したものを用いた。また、測定には引張試験機（オートグラフＡＧＳ−１００Ｄ  島津製作所（株））を用いて、チャック間距離２０ｍｍ、２３±２℃、６５±１５％相対湿度の条件下でおこなった。
引張速度３００ｍｍ／分で伸張１０％となるまで延伸して、時間経過による引張応力値の変化を測定し、次式により応力緩和率（％）を求めた。
応力緩和率（％）＝（５分後引張応力／初期引張応力）×１００
なお、初期引張応力は、引張開始直後から１０％延伸するまでの最大引張応力値を示す。
また、この場合の初期引張応力を、本発明の１０％モジュラス値とする。測定の結果を、次の皮膚肥厚の測定結果とともに表２に示す。
【００３４】
皮膚肥厚の測定
（評価標本の作製）
試験開始前にウサギの背部から側腹部にかけて電気バリカンおよびシェーバーで毛刈・剃毛し、首かせを装着した。皮膚が露出した部分に、２．０ｃｍ×５．０ｃｍにカットした貼付材を長辺が背骨と平行になるように貼付した。貼付４８時間後に引っ張り試験機（Ｍｏｄｅｌ−２２５２  アイコーエンジニアリング（株））とプッシュプルゲージ（Ｍｏｄｅｌ−７５０２Ｂ  アイコーエンジニアリング（株））を用いて、頭部より貼付材のおおよそ半分を剥離したあと、残りの貼付材が付着したままの部分の皮膚を貼付材が貼り付いたままで採取し、１０倍中性緩衝ホルマリン溶液で固定した。固定後に標本から貼付材を剥離し、定法に従ってパラフィン包埋し、標本断面が表皮面に対して直角になるように薄切して組織切片を作製し、切片を脱パラフィンし、蒸留水で水洗した。切片を０．５％過マンガン酸カリウム水溶液に３０分間浸漬し、１％シュウ酸水溶液に３０分間浸漬して、蒸留水で水洗した。次に切片をリンタングステン酸へマトキシリン（ＰＴＡＨ）染色液（へマトキシリン０．１ｇ、蒸留水８０．０ｍＬ、１０％リンタングステン酸２０．０ｍＬ、過酸化水素水０．２ｍＬ）に２４時間浸漬して、その後アルコールに数回浸漬した。最後に切片をキシレンで透徹して封入し、表皮厚み測定のための評価標本とした。ＰＴＡＨ染色によれば、表皮下層の基底層は青色に、真皮層上部や結合組織は赤褐色に染色される。
【００３５】
（表皮厚みの測定）
ＣＣＤカラーカメラモジュール（ＸＣ−００３  ソニー（株））を取り付けた光学顕微鏡（ＢＨ−２型  オリンパス（株））に上記で得られた評価標本をセットし、対物レンズ１０倍の低倍率にて標本組織全体を観察して、表皮の肥厚状態を把握する。その後、標本全体を適当数に分割し、各分割エリア内で平均的と思われる部位を決定する。その後、対物レンズ４０倍の高倍率にて皮膚断面の画像を取り込む。画像解析ソフト（Ｍａｃ  ＡＳＰＥＣＴ  三谷商事（株））を用い、該ソフトに添付の使用説明書に記載の使用法に従い、始点と終点（表皮層の最上部〜最下部；ＰＴＡＨ染色により青色に染まった部分と赤褐色に染まった部分との境界を最下部とした）を設定して目的の厚みを測定する。取り込んだ画像毎に数ポイント測定し、その平均をその部位の厚みとする。同様に各分割エリアの平均値を計算し、さらに切片全体の平均値を求めて表皮の厚みとした。この測定評価の際、貼付材を貼付しなかった無貼付部の表皮の厚みを対照とし、貼付材貼付部位との有意差を判定した。検定にはＤｕｎｎｅｔ法を用いた。
表皮厚みが７〜１１μｍの範囲（無貼付部と有意差なし）の貼付材を低刺激性であると判定し、１８〜２４μｍの範囲の貼付材を高刺激性であると判定した。結果を表２に示す。なお、貼付材未貼付の場合の表皮の厚みは８．５μｍであった。
【００３６】
【表２】
2006153593.tif 000003
【図面の簡単な説明】
【００３７】
【図１】実施例１〜８（●）および実施例９〜１２（○）の１０％モジュラス値（Ｎ／２０ｍｍ）を横軸に、応力緩和率（％）を横軸にとった散布図である。点線は、横軸をｘ、縦軸をｙとした場合に得られる一次関数式：ｙ＝−５ｘ＋８８を表す直線である。
【図１】
2006153593.tif 000004