(57)【要約】【課題】医薬化合物をより効率的に標的部位に移行させることのできる薬物送達用担体及びこれを用いた薬物複合体を提供することを課題とする。【解決手段】本発明は、下記式（I）、（II）および（III）で表される構造単位を含みポリエチレングリコール（ＰＥＧ）換算重量平均分子量が１，０００〜２００，０００であることを特徴とするポリエーテルを用いた薬物送達用担体及びこれを用いた薬物複合体を提供する。【化１】2006193627.tif 000012【化２】2006193627.tif 000013【化３】2006193627.tif 000014（式中、Ｒ1は水素、ナトリウムまたは薬理作用を有する基を示し、同一の共重合体内でＲ１は同一であっても異なっていても良い。各構造単位のモル比は、（I）／（（I）＋（II）＋（III））＝０．００１〜０．５の範囲であり、単位（I）（II）（III）のモル％はそれぞれ（I）＝０．０１〜９９．９８、（II）＝０．０１〜９９．９８、（III）＝０．０１〜９９．９８モル％である。）【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（I）、（II）および（III）で表される構造単位を含みポリエチレングリコール（ＰＥＧ）換算重量平均分子量が１，０００〜２００，０００であることを特徴とするポリエーテル。
【化１】
2006193627.tif 000009
【化２】
2006193627.tif 000010
【化３】
2006193627.tif 000011
（式中、Ｒ1は水素、ナトリウムまたは薬理作用を有する基を示し、同一の共重合体内でＲ１は同一であっても異なっていても良い。各構造単位のモル比は、（I）／（（I）＋（II）＋（III））＝０．００１〜０．５であり、構造単位（I）、（II）、（III）のモル％はそれぞれ（I）＝０．０１〜９９．９８、（II）＝０．０１〜９９．９８、（III）＝０．０１〜９９．９８モル％である。）
【請求項２】
さらに、ＰＥＧ換算重量平均分子量／ＰＥＧ換算数平均分子量（Ｍｗ／Ｍｎ）が１．２〜２．５である請求項１に記載のポリエーテル。
【請求項３】
薬理作用を有する基がリンカーと結合した基である請求項1又は２に記載のポリエーテル。
【請求項４】
リンカーがアミノ酸もしくはペプチドである請求項１〜３のいずれかに記載のポリエーテル。
【請求項５】
リンカーがＧｌｙ，Ａｌａ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ｇｌｙ−Ｇｌｙ，Ａｌａ−ＧＬｙ，Ｇｌｙ−Ａｌａ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｌｅｕ，Ｉｌｅ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｉｌｅ，Ｐｈｅ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ，Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ，Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ，Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙから選択される請求項４に記載のポリエーテル。
【請求項６】
薬理作用を有する基が分子中にアミノ基、カルボキシル基、または水酸基を有する請求項１〜５のいずれかに記載のポリエーテル。
【請求項７】
薬理作用を有する基が抗腫瘍剤、抗炎症剤、酵素阻害剤、免疫抑制剤、免疫賦活剤、核酸または抗リウマチ剤である請求項１〜６のいずれかに記載のポリエーテル。
【請求項８】
抗腫瘍剤がタキサン系抗腫瘍剤、アンスラサイクリン系抗腫瘍剤、白金系抗腫瘍剤、カンプトテシン、フッ化ピリミジン系代謝拮抗剤、ビンカアルカロイド系抗腫瘍剤、葉酸拮抗剤およびその誘導体から選択される請求項１〜７のいずれかに記載のポリエーテル。
【請求項９】
請求項１〜８のいずれかに記載のポリエーテルを含む薬物送達製剤。
【請求項１０】
請求項１におけるＲ1が水素又はナトリウムである生体内組織への薬物送達用担体。
【請求項１１】
請求項１におけるＲ1が水素あるいはナトリウムである薬剤、ペプチド、核酸および／又は蛋白を固定化するための担体。
【請求項１２】
請求項１〜８のいずれかに記載のポリエーテルを静脈内より生体内に投与することによる治療方法。
【請求項１３】
請求項１〜８のいずれかに記載のポリエーテルを疾患部位に投与することによる治療方法。
【請求項１４】
請求項１〜８のいずれかに記載のポリエーテルを架橋してなる構造体を疾患部位に投与することによる治療方法。
【請求項１５】
薬物送達製剤の製造における請求項１〜８のいずれかに記載のポリエーテルの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医薬化合物を標的部位に効率よく到達させることのできる薬物複合体および薬物送達用担体に関する。
【背景技術】
【０００２】
例えば抗腫瘍剤等の薬物（医薬化合物）は、静脈内投与や経口投与などの投与経路により全身的に投与された後、特定の腫瘍部位に移行して癌細胞の増殖を阻害ないし抑制することにより治療効果を発揮する。しかしながら、全身投与された抗腫瘍剤は、血中から肝臓、脾臓、骨髄といった網内系臓器に速やかに取り込まれたり、あるいは腎臓から速やかに尿中に排泄されるために、血中濃度が低下し、腫瘍部位への移行が十分に行われない場合がある。
また、通常の抗腫瘍剤単独では、腫瘍部位への移行選択性（腫瘍選択性）が低いために、抗腫瘍剤が全身の様々な細胞や組織に満遍なく分布してしまい、正常な細胞や組織に対しても細胞毒として作用し、嘔吐、発熱、あるいは脱毛などの副作用を極めて高率に発生させるという問題が指摘されている。そこで、これまで抗腫瘍剤を効率的かつ選択的に腫瘍部位に移行させる技術の開発が求められてきた。
このような技術の一つとして、例えば、多糖の様な水溶性高分子に抗腫瘍剤を結合させて、抗腫瘍剤の血中からの消失を遅延させ、かつ、癌組織への指向性を高める方法が提案されている。例えば、種々の多糖に対してアドリアマイシンを結合させた複合体が開示されている例がある（特許文献１）。また、カルボキシメチルデキストランを含む種々の多糖誘導体にアンスラサイクリン系抗腫瘍剤を結合させた錯体が開示されている例もある（非特許文献１）。さらに、カルボキシアルキルデキストランポリアルコールに対してペプチドを介して薬物を結合させた複合体が開示されている例がある（特許文献２）。これらの天然由来の多糖は水酸基等の官能基を有し薬物担持能力に優れるものの、天然物であることから均一な品質のものを容易に得られないといった問題点がある。
一方、合成高分子を薬物送達用担体として用いた例としては、ヒドロキシプロピルメタクリレート（ＨＰＭＡ）にリンカーを介し血管新生阻害剤（ＴＮＰ−４７０）を結合させた例が報告されている（非特許文献２）。また、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にパクリタキセルを結合させた複合体が開示されている例がある（非特許文献３）。しかし、このような合成高分子は生体内において分解されることなく蓄積されるという問題点がある。
【特許文献１】米国5,688,931号公報
【特許文献２】特開第2002-30002号公報
【非特許文献１】Biol. Pharm. Bull.,24, 535-543(2001)
【非特許文献２】Nature Medicine, 10, 255-261(2004)
【非特許文献３】J．Med．Chem．，39, 424-431(1996)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
上記従来の水溶性高分子と薬物との複合体は、一定品質の安定供給、高分子部分の生体内安全性および薬物の担持能力などの面で十分満足できるものではなかった。従って、薬物をより効率的に標的部位に移行させることのできる薬物送達用担体及びこれを用いた薬物複合体の開発が望まれている。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は上記課題に鑑み鋭意研究した結果、特定の構造単位からなるポリエーテルを薬物送達用の担体として用いることで本課題を解決することに成功した。すなわち、本発明は以下の構成からなる。
（１）式（I）、（II）および（III）で表される構造単位を含みポリエチレングリコール（ＰＥＧ）換算重量平均分子量が１，０００〜２００，０００であることを特徴とするポリエーテル。
【化４】
2006193627.tif 000002
【化５】
2006193627.tif 000003
【化６】
2006193627.tif 000004
（式中、Ｒ1は水素、ナトリウムまたは薬理作用を有する基を示し、同一の共重合体内でＲ１は同一であっても異なっていても良い。各構造単位のモル比は、（I）／（（I）＋（II）＋（III））＝０．００１〜０．５であり、構造単位（I）、（II）、（III）のモル％はそれぞれ（I）＝０．０１〜９９．９８、（II）＝０．０１〜９９．９８、（III）＝０．０１〜９９．９８モル％である。）
（２）さらに、ＰＥＧ換算重量平均分子量／ＰＥＧ換算数平均分子量（Ｍｗ／Ｍｎ）が１．２〜２．５である上記（１）に記載のポリエーテル。
（３）薬理作用を有する基がリンカーと結合した基である上記（1）又は（２）に記載のポリエーテル。
（４）リンカーがアミノ酸もしくはペプチドである上記（１）〜（３）のいずれかに記載のポリエーテル。
（５）リンカーがＧｌｙ，Ａｌａ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ｇｌｙ−Ｇｌｙ，Ａｌａ−ＧＬｙ，Ｇｌｙ−Ａｌａ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｌｅｕ，Ｉｌｅ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｉｌｅ，Ｐｈｅ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ，Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ，Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ，Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙから選択される上記（４）に記載のポリエーテル。
（６）薬理作用を有する基が分子中にアミノ基、カルボキシル基、または水酸基を有する上記（１）〜（５）のいずれかに記載のポリエーテル。
（７）薬理作用を有する基が抗腫瘍剤、抗炎症剤、酵素阻害剤、免疫抑制剤、免疫賦活剤、核酸または抗リウマチ剤である上記（１）〜（６）のいずれかに記載のポリエーテル。
（８）抗腫瘍剤がタキサン系抗腫瘍剤、アンスラサイクリン系抗腫瘍剤、白金系抗腫瘍剤、カンプトテシン、フッ化ピリミジン系代謝拮抗剤、ビンカアルカロイド系抗腫瘍剤、葉酸拮抗剤およびその誘導体から選択される上記（１）〜（７）のいずれかに記載のポリエーテル。
（９）上記（１）〜（８）のいずれかに記載のポリエーテルを含む薬物送達製剤。
（１０）上記（１）におけるＲ1が水素又はナトリウムである生体内組織への薬物送達用担体。
（１１）上記（１）におけるＲ1が水素あるいはナトリウムである薬剤、ペプチド、核酸および／又は蛋白を固定化するための担体。
（１２）上記（１）〜（８）のいずれかに記載のポリエーテルを静脈内より生体内に投与することによる治療方法。
（１３）上記（１）〜（８）のいずれかに記載のポリエーテルを疾患部位に投与することによる治療方法。
（１４）上記（１）〜（８）のいずれかに記載のポリエーテルを架橋してなる構造体を疾患部位に投与することによる治療方法。
（１５）薬物送達製剤の製造における上記（１）〜（８）のいずれかに記載のポリエーテルの使用。
【発明の効果】
【０００５】
（１）一級水酸基を有するポリエーテルの水酸基に対し炭素数２〜５よりなるカルボキシアルキル基を導入して得られる該カルボキシアルキルポリエーテルを担体として用い、これに薬理作用を有する基を直接又は特定のリンカーを介して結合させることにより得られる。従って、本発明の薬物送達用担体は、ポリエチレングリコール（以下、ＰＥＧということがある）の場合のように両端にのみ薬物が担持されるのでなく、側鎖にも薬物の担持が可能となり、ＰＥＧに比べて薬物担持能力が高く、これを用いることにより製剤として少ない投与量で薬物を標的部位に到達させることができる。
（２）また、薬物担持能力が高く、標的部位への薬物到達性に優れるだけでなく、水に対する溶解性が高く、特に注射剤として有用である。
（３）さらに、本発明の薬物送達用担体は、特に医療行為のために用いられる生体に対する安全性の高い、ポリエーテルを用いている。従って、生体との相互作用が極めて少なく、生体組織に認識されにくいために肝臓、脾臓、骨髄といった代謝臓器、副作用発現臓器に分布することが少なく、臓器障害や細胞毒性を引き起こす可能性が低減され、標的とする臓器に集積することが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
本発明の薬物送達用担体は、一級水酸基を有する該ランダム共重合ポリエーテルからなり、下記式（I）、（II）および（III）で表される構造単位を含む。また、ＰＥＧ換算重量平均分子量は１，０００〜２００，０００である。前記の重量平均分子量が１，０００未満になるとポリエーテルは極めて水に溶けやすく、２００，０００を越えるとポリエーテルは水に溶けるものの粘度が上昇するからである。水に対する溶解性についてはポリエーテル分子量に大きく依存しない。薬物送達用担体としての安全性を考慮するとポリエーテルの重量平均分子量は２０，０００〜１２０，０００が好ましく、２０，０００〜１００，０００がより好ましい。特に、腎排泄の容易さから判断すれば血漿アルブミンの分子量と同程度の分子量であれば体外への排泄が抑制されることから７０，０００程度の分子量であることがより好ましい。これは、生体内にポリエーテルが投与された場合、生体中の血漿アルブミンの分子量（約６７，０００）よりも低い分子量である場合、体外への排泄が迅速に進行するためである。
【化７】
2006193627.tif 000005
【化８】
2006193627.tif 000006
【化９】
2006193627.tif 000007
また、式中、Ｒ1は水素、ナトリウムを示し、同一の共重合体内でＲ1は同一であっても異なっていても良い。各構造単位のモル比は、（I）／（（I）＋（II）＋（III））＝０．００１〜０．５であり、構造単位（I）、（II）、（III）のモル％はそれぞれ（I）＝０．０１〜９９．９８、（II）＝０．０１〜９９．９８、（III）＝０．０１〜９９．９８モル％である。なお、後述する実施例では、（I）／（（I）＋（II）＋（III））はカルボキシル基の導入量（モル比）として求めている。
【０００７】
ＰＥＧ換算重量平均分子量とは、ＧＰＣにより分子量の測定を実施した場合において、ＰＥＧを標準試料（ＴＳＫｓｔａｎｄａｒｄ  ＰＯＬＹ（ＥＴＨＹＬＥＮＥ  ＯＸＩＤＥ）、ＴＯＳＯＨ（株）製）とし、その重量平均分子量に換算して得られた分子量をいう。ＰＥＧは水溶性溶媒および有機溶媒にも可溶なため、親水性重合体および疎水性重合体の分子量測定の際に分子量標準物質として用いる。
【０００８】
本発明の薬物複合体ならびに薬物送達用担体における重量平均分子量／数平均分子量（Ｍｗ／Ｍｎ）で表示する分子量分布としては、目的とする薬理効果を十分に発揮するために薬物複合体ならびに薬物送達用担体の品質の均一性が重要であることから、上記の分子量分布が１．２〜２．５であることが望ましい。該薬物複合体ならびに該薬物送達用担体に関し品質確保のためには１．２〜２．２であることが好ましく、１．２〜１．８であることがより好ましく、さらに１．０〜１．５であることがなお一層好ましい。
【０００９】
本発明の構造単位を表す一般式（Ｉ）で表されるＲ1が水素であるポリエーテルを製造するためのモノマー原料の例としては、エチレンオキサイドに加えてグリシドールの水酸基を有機置換基で保護した化合物である保護グリシジルエーテル等が挙げられる。例えば、保護グリシジルエーテルとしては、ｔ−ブチルグリシジルエーテル、グリシジルテトラヒドロピラニルエーテル、（１−エトキシ）エチルグリシジルエーテル、グリシジルトリメチルシリルエーテル、グリシジルメトキシメチルエーテル、アリルグリシジルエーテル、ベンジルグリシジルエーテル、グリシジルメタクリレート、アセチルグリシジルエーテル等を挙げることができる。これらの保護基に関してはエポキシの開環重合が終了した後、酸処理、塩基処理、水素添加などの通常の有機合成で用いる脱保護の条件により除去することが可能である。
更に、エピクロルヒドリン、エピブロモヒドリン等もモノマー原料として用いることができる。例えば、モノマー原料としてエピクロルヒドリンを用いた場合、重合が終了した後、クロロメチル基を、例えば、ジエチレングリコールメチルエーテル溶媒中で酢酸カリウムと１００〜１５０℃で加熱下に反応させ，アセトキシメチル基に変換し、その後、室温下で水酸化ナトリウム水溶液等によりアセチルオキシ基を加水分解することで水酸基を有する本発明のポリエーテルを製造することができる。
【００１０】
本発明のポリエーテルは、ＰＥＧに比べて、側鎖に高い反応性を有する一級水酸基が導入されていることから構造および物性がＰＥＧとは異なる。特に側鎖一級水酸基への官能基導入が可能であること、また官能基導入量が制御可能であること、更に本発明のポリエーテルは、水溶解性、水和能力、保水能力および官能基導入能力がＰＥＧに比べて向上している。更に、本発明のポリエーテルにおいては，多数存在する側鎖一級水酸基を有効に使い、アルゴン雰囲気下、ＴＨＦ、トルエン等の溶媒中、カリウムｔ−ブトキシドなどのアルカリ条件下でブロモ酢酸エチル等により容易にエーテル結合を生成する事が出来，その後エステルの加水分解等によりカルボキシル基を容易に導入できる。このようにして得られるカルボキシアルキルポリエーテルは薬物送達のための薬物送達用担体など医療行為のために用いられる医療用材料として優れている。
【００１１】
従来技術として、例えば、ＰＥＧは、医薬用途として広く用いられているが、両末端だけにしか官能基導入に使える水酸基が存在しないために薬物担持能力が極めて低く、薬物送達のための担体としては適切でない。また、薬物の血中滞留性を向上させて標的臓器への薬物送達を試みた場合、ＰＥＧの分子量を増加させて腎排泄を妨げなければならない問題が生じる。例えば、ＰＥＧ分子量が６万であるとき薬剤が５００とすればＰＥＧの一分子にたった２分子の薬物しか導入されないため薬剤の導入量は重量％では１．６％となる。この場合、患者にＰＥＧを担体として用い製剤化した薬物を投与しようとすると、必要薬剤量の６０倍以上のＰＥＧ薬物複合体を投与する必要があり、患者にとって負荷が極めて大きい。
【００１２】
これに対し、本発明のポリエーテルは、側鎖にも一級水酸基が多数導入されているために薬物の導入量を自由に増加させることができ、例えば薬剤導入量は１０％以上とすることも可能である。従って、本発明の薬物複合体の投与量は従来のＰＥＧ複合体投与量に比べて遙かに減らすことができ患者に対する負荷も軽減することになる。
【００１３】
本発明のポリエーテルの組成については、反応に用いる原料の種類、原料の量、重合開始剤の種類、重合開始剤の添加量、反応溶媒の有無、反応溶媒の選択、反応温度、反応時間、原料濃度、重合開始剤濃度、反応雰囲気、反応圧力、撹拌状態、撹拌速度等の調整により、種々の組成比を有する樹脂が製造される。例えばトルエン、ヘキサン、ヘプタン、２−メトキシエチルエーテル、エチレングリコールジメチルエーテル、エチレングリコールジエチルエーテル等の反応溶媒中または無溶媒で、エチレンオキサイドと共に種々の水酸基保護グリシジルエーテル類を、例えば三フッ化ホウ素エーテル錯体、トリアルキルアルミニウム、トリエチルアルミニウム、トリフェニルアルミニウムやトリブチルアルミニウムなどのルイス酸等の金属重合開始剤あるいは水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、水酸化セシウムやナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、ナトリムプロポキシド、ナトリウムｔ−ブトキシド、カリウムプロポキシド、カリウムｔ−ブトキシド、カリウムｔ−２−メチル−２−ブトシキド等などの重合開始剤を単独あるいは混合して使用し、氷冷、室温下または必要に応じて加熱下にて、常圧もしくは加圧下で開環重合させることにより得られる。
【００１４】
次の工程として、保護グリシジルエーテルが例えばｔ−ブチルグリシジルエーテルの場合、得られた共重合体を例えばペプチド合成用の脱保護試薬として市販されている４Ｎ塩化水素−ジオキサン溶液などを用いることにより室温下１〜４０時間処理してｔ−ブチル基を容易に除去することが出来、除去の結果は１Ｈ−ＮＭＲにより確認することができる。また、加熱下に塩酸水溶液で処理することでもｔ−ブチル基を容易に除去することが出来る。この脱保護の結果として側鎖に一級水酸基の導入されたポリエーテルが得られる。
【００１５】
本発明におけるポリエーテルの重量平均分子量は、安全性の面から生体内からの体外への排泄が容易な分子量の大きさであることが重要であるが、例えば、ＧＰＣ分析におけるＰＥＧ換算重量平均分子量が１，０００〜２００，０００を達成するには、必要に応じて例えば、出発原料の精製、反応後に高分子量分画または低分子量分画の分別除去を行ってもよい。例えば、分子量分画の具体的方法は、サイズエクスクルージョンクロマトグラフィー（ＳＥＣ）、ＧＰＣ等のクロマトグラフィー、ＵＦモジュール等を含む限外ろ過、超遠心分離法、エーテルなどの有機溶媒等を用いた沈殿分画等の種々の手法により行うことができる。
以上の事実を元に、本発明のポリエーテルを、例えば医薬化合物送達複合体および医薬化合物送達用担体として用いる場合には、最適な分子量を選択し、かつ側鎖水酸基を使用目的に応じて最適な量だけ導入することが可能である。
【００１６】
本発明の薬物複合体は、薬物送達用担体に直接又はリンカーを介して薬物（医薬化合物）が結合している。すなわち、本発明のポリエーテルの構造単位を表す一般式（Ｉ）においてＲ1が薬理作用を有する基（リンカーに結合した薬理作用を有する基も含む）である場合がこれに相当する。医薬化合物としては、カルボキシル基又は当該リンカーに反応し得る官能基を有する医薬化合物であれば特に制限されないが、例えば金属原子、アミノ基、カルボキシル基、ヒドロキシ基、メルカプト基、カルボキサミド基、ウレタン基等を有する医薬化合物が好ましい。このうちでもアミノ基を有する医薬化合物は、リンカーを介さずに薬物送達用担体に結合させることができる。また、このようなアミノ基を有さない医薬化合物については、リンカーによって官能基を導入することにより担体と結合可能にする必要がある。例えば、パクリタキセル、デキサメタゾン、カンプトテシンは水酸基をリンカーによってアミノ基に変換することにより、担体に結合することが可能となる。
【００１７】
該医薬化合物としては、抗腫瘍剤、抗炎症剤、酵素阻害剤、免疫抑制剤、免疫賦活剤、核酸または抗リウマチ剤等が挙げられる。
抗腫瘍剤としては、タキサン系抗腫瘍剤、アンスラサイクリン系抗腫瘍剤、白金系抗腫瘍剤、カンプトテシン、フッ化ピリミジン系代謝拮抗剤、ビンカアルカロイド系抗腫瘍剤、葉酸拮抗剤等の抗腫瘍剤およびその誘導体が挙げられる。
ここで、白金系抗腫瘍剤としては、シスプラチン、カルボプラチン、オキサリプラチンが好ましい。カンプトテシン誘導体としては、イリノテカンなどが挙げられる。タキサン誘導体としてはタキソール、タキソテールなどが挙げられる。フッ化ピリミジン系代謝拮抗剤としては、５−フルオロウラシルなどが挙げられる。ビンカアルカロイド系抗腫瘍剤としては、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ナベルビン等が挙げられる。葉酸拮抗剤としては、メトトレキセート等が挙げられる。これらのうち、白金系抗腫瘍剤、特にシスプラチン、カルボプラチン又はオキサリプラチンが好ましい。また抗炎症剤としては、コハク酸ヒドロコルチゾン、コハク酸プレドニゾロンなどのステロイド系抗炎症剤；メフェナム酸、フルフェナム酸、ジクロフェナク、イブプロフェン、チノリジンなどの非ステロイド系抗炎症剤が挙げられる。
【００１８】
該薬物送達用担体と薬物とを結合させて本発明の薬物複合体を製造するには、例えばこれらを錯体形成配位結合、エステル結合、チオエステル結合、酸アミド結合、酸無水物形成などの手段で結合させることにより製造される。例えば、錯体形成反応の場合には、通常、水溶液中で反応させればよい。エステル結合形成反応の場合には、種々のカルボジイミド類などの脱水縮合剤存在下に行い、その際必要に応じてジメチルアミノピリジンなどの活性剤を加えるとよい。また、酸アミド結合形成反応の場合には、種々カルボジイミド類等、脱水縮合剤の存在下に行えばよい。
【００１９】
本発明では、該薬物送達用担体と薬物とを結合させるためにリンカーを介して結合させる場合がある。本発明のリンカーとしては、担体との距離を調整する、いわゆるスペーサも含まれる。リンカーとしては、例えば、１個のアミノ酸、ペプチド結合した２〜４個のアミノ酸等が挙げられる。より具体的には、１個のアミノ酸の残基（アミノ酸のアミノ基及びカルボキシル基からそれぞれ１個の水素原子及び１個の水酸基を除いた残基を意味する）、又はペプチド結合した２ないし４個のアミノ酸からなるオリゴペプチドの残基（Ｎ末端のアミノ基及びＣ末端のカルボキシル基からそれぞれ１個の水素原子及び１個の水酸基を除いた残基を意味する）の形態を有している。好ましいリンカーは１アミノ酸残基または、２〜４個のアミノ酸からなるオリゴペプチドの残基である。このようなアミノ酸の立体障害の違いにより担体に結合した薬物の遊離速度を調整することが可能となる。
【００２０】
リンカーを構成するアミノ酸の種類は特に限定されないが、例えば、Ｌ−又はＤ−アミノ酸、好ましくはＬ−アミノ酸を用いることができ、α−アミノ酸のほか、β−アラニン、ε−アミノカプロン酸、γ−アミノ酪酸などを用いてもよい。このようなα−アミノ酸以外のアミノ酸は、薬物送達用担体に近接した位置に配置されることが好ましい。介在基の結合方向は特に限定されないが、一般的には、カルボキシアルキルポリエーテルのカルボキシル基に介在基のＮ末端を酸アミド結合によって結合し、医薬化合物のアミノ基もしくは水酸基に介在基のＣ末端を結合することができる。また、例えば、ペプチドリンカーの構成単位としてリジン残基を含めておき、リジン残基のα−アミノ基及びε−アミノ基をそれぞれ他のアミノ酸のカルボキシル基と酸アミド結合させると、ペプチドリンカーの両末端がＮ末端になるので、医薬化合物のカルボキシル基を結合することが可能になる。さらに、リンカー中に１個又は２個以上のジアミン化合物又はジカルボン酸化合物の残基（例えばエチレンジアミンなどのジアミンの残基やコハク酸などのジカルボン酸の残基）を構成単位として含めておき、それぞれ両末端がＮ末端の介在基及び両末端がＣ末端のリンカーを利用してもよい。
【００２１】
リンカーのアミノ酸配列は特に限定されないが、ジペプチド構造を含むリンカーを用いると、ペプチダーゼが豊富であると考えられる腫瘍部位や炎症部位で加水分解が促進され、当該部位において医薬化合物が高濃度に遊離する。上記ジペプチドを含むリンカーと医薬化合物とが結合して形成される部分構造は本発明の薬物複合体の部分構造である。医薬化合物の残基として、例えば、濃度依存型の抗腫瘍剤（例えば、ドキソルビシン）などを用いる場合には、ジペプチド残基を部分ペプチド配列として含むリンカーを用いることが特に好ましい。また、医薬化合物の残基として、一定の濃度以上で作用時間の持続を必要とする時間依存型の抗腫瘍剤（例えば、パクリタキセル）を用いる場合にも、上記のリンカーを用いることによって高い抗腫瘍効果を達成できる場合がある。一般的には、上記のリンカーに限定されることなく、抗腫瘍剤の作用機作、体内動態や毒性発現の特徴、体内での抗腫瘍剤の遊離性などの観点から好ましいリンカーを選択する必要がある。
【００２２】
リンカーのアミノ酸配列としては、具体的には、Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｌｅｕ，Ｉｌｅ，Ｐｈｅ，Ｇｌｙ−Ｇｌｙ，Ａｌａ−ＧＬｙ，Ｇｌｙ−Ａｌａ，Ｌｅｕ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｌｅｕ，Ｉｌｅ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｉｌｅ，Ｐｈｅ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ，Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ，Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ，Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ，Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙから選択される配列が望ましい。
【００２３】
リンカーを介して結合する薬物複合体に関しては、カルボキシアルキルポリエーテルのカルボキシル基に対して、医薬化合物の残基と結合させたリンカーを結合することにより本発明の薬物複合体を製造することができる。介在基とカルボキシアルキルポリエーテルのカルボキシル基との結合は、一般的には、リンカーのＮ末端アミノ基とカルボキシアルキルポリエーテルのカルボキシル基とを酸アミド結合により結合させることにより形成できる。もっとも、リンカーとカルボキシアルキルポリエーテルのカルボキシル基との結合は上記のものに限定されることはなく、他の化学結合や１又は２以上のリンカーを利用した結合であってもよい。例えば、リンカーのＣ末端カルボキシル基とカルボキシアルキルポリエーテルのカルボキシル基とにより酸無水物を形成させてもよく、また、エチレンジアミン等のジアミン化合物をリンカーとして用いてそれぞれのカルボキシル基をジアミンの各アミノ基に酸アミド結合させてもよい。介在基のＮ末端アミノ基とカルボキシアルキルポリエーテルのカルボキシル基とを酸アミド結合により結合させる場合には、ペプチド類の合成に用いる通常の脱水縮合剤、例えば、Ｎ，Ｎ′−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）のようなＮ，Ｎ′−ジシクロアルキルカルボジイミド類、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＡＰＣ）等のカルボジイミド誘導体のほか、１−エトキシカルボニル−２−エトキシ−１，２−ジヒドロキシキノリン（ＥＥＤＱ）などを用いることができる。また、活性エステル法や酸ハライド法などにより反応を行ってもよい。
【００２４】
カルボキシアルキルポリエーテルに導入する医薬化合物残基の量は、特に限定されないが、医薬化合物残基の物理化学的性質、並びに本発明の薬物複合体の体内動態、薬効、及び毒性などの観点から適宜選択すべきである。一般的には、０．１〜３０重量％、好ましくは１〜１５重量％、さらに好ましくは２〜１０重量％、特に好ましくは５〜１０重量％程度の範囲を選択することができる。カルボキシアルキルポリエーテルに導入された医薬化合物残基の割合は、例えば、紫外吸光分析、蛍光光度分析、吸光度分析などにより容易に決定することが可能である。
【００２５】
本発明の薬物複合体は、医薬化合物の残基の種類（例えば、抗腫瘍剤又は抗炎症剤などの医薬化合物の残基）に応じて、所望の医薬活性を腫瘍部位や炎症部位などの局所において特異的に発現させることができ、かつ、医薬化合物自体の有する毒性を低減できるという特徴を有する。本発明の薬物複合体のポリエーテル部分は極めて優れた血中滞留性及び腫瘍・炎症部位への集積性を有するので薬物送達用の薬物担体として有用である。また、薬物担体がＰＥＧとは構造的に異なり側鎖にも多数のカルボキシアルキル基を有するため、医薬化合物の担持能力が向上している。さらに、本発明の薬物複合体は、水に対する溶解性が特に向上していることから、難水溶性薬物等における注射剤として用いる場合に特に有用である。特に本発明の薬物複合体は、ＰＥＧをキャリヤーとして用いた場合に比べて、モル当たりの医薬化合物の担持能力が特に優れている。
【００２６】
本発明の薬物複合体を含む医薬は、通常、凍結乾燥品などの形態でバイアル等に充填することができ、用時溶解型の注射用又は点滴用製剤等の非経口投与用製剤として臨床に提供されるが、本発明の医薬の製剤形態は上記態様に限定されることはない。上記製剤の製造には、例えば、溶解補助剤、ｐＨ調整剤、安定化剤など当業界で利用可能な製剤用添加物を用いることができる。本発明の医薬の投与量は特に限定されないが、通常は、医薬化合物残基を構成する医薬化合物の投与量、本発明の薬物複合体中に導入された医薬化合物の残基の量、患者の状態や疾患の種類などを勘案して決定すべきである。例えば、カンプトテシンが約５重量％程度の割合で導入された本発明の薬物複合体を非経口投与する場合には、一般に一日あたり体表面積１ｍ２につき約０．１〜１００ｍｇ程度、好ましくは約１〜３０ｍｇの範囲で一回投与し、３〜４週毎に繰り返すことが好ましい。
【００２７】
本発明は、前記薬物複合体を静脈内より生体内に、また疾患部位に投与することにより治療する方法に関する。さらに、該薬物複合体であるポリエーテルを架橋してなる構造体を疾患部位に投与することにより治療する方法にも関する。
【実施例】
【００２８】
以下、本発明を実施例によりさらに具体的に説明するが、本発明の範囲は下記の実施例に限定されることはない。
また本実施例におけるＧＰＣの条件は、以下のとおりである。
カラム：Ｇ４０００ＰＷＸＬ（東ソー社製）
移動相：２０％アセトニトリルｉｎ ５０ｍＭ塩化リチウム
流速：０．８ｍｌ／ｍｉｎ
カラム温度：４０℃
ポンプ：Ｌ−６２００（日立製作所製）
検出器：Ｌ−３３００（ＲＩ：示差屈折計、日立製作所製）
化合物の分子量および分子量分布を算出するための検量線は、スタンダードポリエチレンオキサイド（ＴＯＳＯＨ製、重量平均分子量が２．４×１０４，５．００×１０４，１０．７×１０４，１４．０×１０４）を用いて作成した。
【００２９】
[実施例1]
アルゴン雰囲気下、耐圧反応容器にｔ−ブチルグリシジルエーテル３３ｍｌ、エチレンオキサイド８５ｍｌ、カリウムｔ−ブトキシド１Ｍテトラヒドロフラン溶液１ｍｌおよびトリイソブチルアルミニウム１Ｍヘキサン溶液１０ｍｌ、および溶媒としてヘキサン３００ｍｌを加え、２５℃で２４時間反応を行った。反応終了後、反応生成物を回収し、減圧下で溶媒を除去することによって目的とする共重合体（１）６２ｇを白色固体として得た。
得られた共重合体のＰＥＧ換算分子量をＧＰＣにより測定した結果は、５３，０００であった。ＧＰＣの結果を図１に示す。更に 1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシランを標準とする重水素化メタノール溶媒中での測定により、δ１．２０にｔ−ブチル基に由来する単線ピークが観測され、さらにδ３．４０〜３．８２に主にポリエチレングリコールに由来するピークが見られた。 1Ｈ−ＮＭＲ分析によるｔ−ブチル基の導入率は、モル比で３．９％（ｙ＝０．０３９）であった。
室温下、上記共重合体２０ｇに、４Ｎ−塩化水素１，４−ジオキサン溶液２００ｍｌを加えて室温下で２４時間反応させた。反応終了後、反応溶媒を減圧下で留去し、米国スペクトラポア社製透析膜（Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ２、分子量分画１２，０００−１４，０００）を用い、精製水を外液とした２日間の透析を行った。次いで、ミリポア社製メンブランフィルター（ＤＵＲＡＰＯＲＥ、０．２２μｍ）を用いたろ過後、凍結乾燥の工程を経て、白色非晶質の目的とする共重合体（２）１６．６ｇを得た。
1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシランを標準とする重水素化メタノール溶媒中での測定により、δ１．２０に存在したｔ−ブチル基に由来する単線ピークが消失し、ｔ−ブチル基が除去されたことが確認された。得られた共重合体のＰＥＧ換算分子量をＧＰＣにより測定した結果は、６１，０００であり、Ｍｗ／Ｍｎ＝１．５４であった。ＧＰＣの結果を図２に示す。
【００３０】
[実施例２]
アルゴン雰囲気下、耐圧反応容器にｔ−ブチルグリシジルエーテル４２ｍｌ、エチレンオキサイド８５ｍｌ、カリウム２−メチル−２−ブトキシド１Ｍテトラヒドロフラン溶液１．１ｍｌおよびトリイソブチルアルミニウム１Ｍヘキサン溶液１１．１ｍｌ、および溶媒としてヘキサン３００ｍｌを加え、２５℃で２４時間反応を行った。反応終了後、反応生成物を回収し、減圧下で溶媒を除去することにより、目的とする共重合体（３）５５ｇを白色固体として得た。
得られた共重合体のＰＥＧ換算分子量をＧＰＣにより測定した結果は、４０，０００であった。ＧＰＣの結果を図３に示す。更に 1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシランを標準とする重水素化メタノール溶媒中での測定により、δ１．２２にｔ−ブチル基に由来する単線ピークが観測され、さらにδ３．４２〜３．８２に主にポリエチレングリコールに由来するピークが見られた。 1Ｈ−ＮＭＲ分析によるｔ−ブチル基の導入率は、モル比で５．７％（ｙ＝０．０５７）であった。
室温下、上記共重合体２０．８ｇに、４Ｎ−塩化水素１，４−ジオキサン溶液２００ｍｌを加えて室温下で２４時間反応させた。反応終了後、反応溶媒を減圧下で留去し、米国スペクトラポア社製透析膜（Ｓｐｅｃｔｒａ／Ｐｏｒ２、分子量分画１２，０００−１４，０００）を用い精製水を外液とした２日間の透析を行い、次いで、ミリポア社製メンブランフィルター（ＤＵＲＡＰＯＲＥ, ０．２２μｍ）を用いたろ過後、凍結乾燥の工程を経て、白色非晶質の目的とする共重合体（４）１５．１ｇを得た。
1Ｈ−ＮＭＲ分析によると、テトラメチルシランを標準とする重水素化メタノール溶媒中での測定により、δ１．２２に存在したｔ−ブチル基に由来する単線ピークが消失し、ｔ−ブチル基が除去されたことが確認された。得られた共重合体のＰＥＧ換算分子量をＧＰＣにより測定した結果は、４４，０００であり、Ｍｗ／Ｍｎ＝１．７０であった。ＧＰＣの結果を図４に示す。
【００３１】
[実施例３]
毒性評価
上記実施例１中の化合物(２)に関し生理食塩水を投与溶媒として、更に生理食塩水を比較対照として、化合物(２)投与量１０００ｍｇ／ｋｇ、３００ｍｇ／ｋｇについて、投与液量２５ｍｌ／ｋｇの条件で６週齢BALB/c雌性マウス（各群n=５、日本エスエルシー（株）から購入）の尾静脈より実験開始日から０日目、３日目、６日目の３回にわたり間歇投与を行った。
体重減少を指標として評価を実施した。実験開始日におけるマウスの体重を100％とした場合の体重変化を評価し、１０％の体重減少が起きた場合に毒性有りと判断した。
評価結果を図５に示す。生理食塩水にて溶解した化合物(２)の各濃度投与群および比較対照の生理食塩水を２５ｍｌ／ｋｇの投与液量で、３日に１回、計３回に渡り静脈内間歇投与した。投与後の１０％以上の体重減少は見られず、体重に関しいずれの投与群においても同一日測定日における優位差は見られず、毒性無しと判断された。図中の各ポイントは平均体重±標準偏差（ＳＤ）を示す。図中の上向き矢印は投与日であることを示す。
以下の実施例では次の略号を使用する。
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｔｒｔ：トリフェニルメチル基（トリチル基）、Ｚ：ベンジルオキシカルボニル基、Ｆｍｏｃ：９−フルオレニルメチルオキシカルボニル基、ＤＭＡＰ：Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノピリジン、ＷＳＣＤ・ＨＣｌ：水溶性カルボジイミド塩酸塩、ＤＩＰＣ：Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド、ｔＢｕＯＫ： Potassium t-butoxide，ＤＭＳＯ−ｄ６：重水素化ジメチルスルホキシド
【００３２】
〔実施例４〕
カルボキシメチル化ポリエーテル（５）の製造
トルエン（５０ｍｌ）に実施例１で得られた共重合体（化合物番号（２）；３ｇ）を溶解し、ｔ−ブチルアルコール（１０ｍｌ）に溶解したカリウムｔ−ブトキシド（１．８ｇ）、次いで１８−クラウン−６エーテル（５０ｍｇ）および臭素化酢酸エチル（１．８ｍｌ）を加え７０℃で７時間反応させた。反応溶媒を減圧下で留去し、反応液に１N水酸化ナトリウム水溶液を２０ｍｌ加え室温下５時間反応させた。この反応液を透析膜（分子量カットオフ１２，０００−１４，０００、米国、スペクトラム社製）を用い、精製水に対して４℃で２日間透析した。この内液をメンブランフィルター（０．２２μｍ）にて濾過した後、凍結乾燥し、表記化合物（５）（３．０ｇ）を得た。TSP （3-(Trimethylsilyl)propanoic-2,2,3,3-d4 acid, sodium salt）を標準とする重水溶媒における1Ｈ−ＮＭＲ分析によるカルボキシル基の導入率は、モル比で３．５％であった。得られた共重合体の重量平均分子量をＧＰＣにより測定した結果は、６５，０００であった。
【００３３】
〔実施例５〕
（工程１）
米国、ハウザー社製のパクリタキセルを原料として、パクリタキセルの２’位水酸基にアミノ酸リンカーを導入し２’−Ｇｌｙ−ｐａｃｌｉｔａｘｅｌ塩酸塩（６）を調製した。
１Ｈ−ＮＭＲおよびＨＲＭＳ（high-resolution mass spectrometry）により構造確認した。すなわち、Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ（１７８ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（７３ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）およびパクリタキセル（米国、HＡＵＳＥＲ社製、４２７ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、Ｎ，Ｎ’−ジイソプロピルカルボジイミド（７６ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を加え、室温で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9385，Silica gel 60，200-400 mesh，カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝７０／３０）で精製し、２’−Ｆｍｏｃ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（４８９ｍｇ）を得た。
この化合物（４２０ｍｇ）をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド(１０ｍｌ)に溶解し、室温下ピペリジン（２ｍｌ）を加え、５分間撹拌し、溶媒を留去して、脱Ｆｍｏｃ化し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9385，Silica gel 60，200-400 mesh，カラム：４．０×５０ｃｍ、溶離液：アセトニトリル／塩化メチレン＝８０／２０）で精製し、標記化合物（６）（１４５ｍｇ）を得た。テトラメチルシランを標準とするDMSO-d6溶媒におけるNMRデータを下記に示す。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１．０１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１７）１．０５（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１６）１．５２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．６，９．２Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）１．５１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１９）１．６５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１１．６Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）１．８１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．５，９．６Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）１．８６（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１８）２．１１（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−１０）２．２３（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−４）２．３２（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６ａ）３．５８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−３）３．９６〜４．０７（ｍ，３Ｈ，ＧｌｙＣＨ２，Ｈ−２０）４．１０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．７，１０．７，Ｈ−７）４．６３（ｓ，１Ｈ，ＯＨ−１）４．９０（ｂｒｓ，１Ｈ，ＯＨ−７）４．９１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４．９Ｈｚ，Ｈ−５）５．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０，Ｈ−２）５．４６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，Ｈ−２’）５．５８（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｈ−３’）５．８７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｈ−１３）６．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１０）７．１９〜８．００（ａｒｏｍａｔｉｃ，１５Ｈ）８．４０（ｂｒｓ，２Ｈ，ＧｌｙＮＨ２）９．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，ＣＯＮＨ−３’）
ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ  ９１１．３６０４(Ｍ＋Ｈ)+：Ｃ49Ｈ55Ｏ15Ｎ2としての計算値  ９１１．３６０２
（工程２）
カルボキシメチル化ポリエーテル−２’−Ｇｌｙ−パクリタキセル（７）の製造
実施例４で得た、カルボキシメチル化ポリエーテル（５）（１００ｍｇ）を水２ｍｌに溶解し、氷冷下、この溶液にＤＭＦ２ｍｌを加えた。この溶液に本実施例（工程１）で得た、２’−Ｇｌｙ−パクリタキセル（６）（３０ｍｇ）を溶解した水：ＤＭＦ（１：１）混合液（０．５ｍｌ）およびＷＳＣ・ＨＣｌ（１００ｍｇ）を溶解したＤＭＦ（０．５ｍｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。この反応液を透析膜（分子量カットオフ１２，０００−１４，０００、米国、スペクトラム社製）を用い、精製水に対して４℃で２日間透析した。この内液をメンブランフィルター（０．２２μｍ）にて濾過した後、凍結乾燥し、表記化合物（７）（８７ｍｇ）を得た。本複合体の薬物の導入量は、２５４ｎｍにおける紫外吸光度および複合体の総重量から算出したところ、４．１％（重量％）であった。
【００３４】
〔実施例６〕
（工程１）
２’−Ａｌａ−パクリタキセル（８）の製造
Ｚ−Ａｌａ（１４５ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）および、ＤＭＡＰ（７９ｍｇ，０．６５ｍｍｏｌ）およびパクリタキセル（４２７ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、ＤＩＰＣ（８２ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を加え室温で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9385，Silica gel 60，200-400 mesh，カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝７０／３０）で精製し、２’−Ｚ−Ａｌａ−パクリタキセル（４３５ｍｇ）を得た。この化合物（４００ｍｇ）をジオキサン（２０ｍｌ）に溶解しパラジウム−炭素触媒（２００ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、４時間撹拌し、触媒を濾去した後、減圧下で溶媒を留去し、残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9385，Silica gel 60，200-400mesh，カラム：２．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／メタノール／アセトニトリル＝９５／５／５）で精製し、標記化合物（８）（２２１ｍｇ）を得た。テトラメチルシランを標準とするDMSO-d6溶媒におけるNMRデータを下記に示す。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１．０１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１７）１．０３（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１６）１．１４（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−Ａｌａ）１．５１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１９）１．６１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．６，９．２Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）１．６４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．８Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）１．８１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１８）１．８８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．３，  ９．５Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）２．１１（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−１０）２．２７（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−４）２．３３（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６ａ）３．５２（ｑ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−Ａｌａ）３．６０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ−３）４．０２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−２０）４．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．０Ｈｚ，Ｈ−２０）４．１２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．６，６．６，１７．４Ｈｚ，Ｈ−７）４．６６（ｓ，１Ｈ，ＯＨ−１）４．９１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．６，ＯＨ−７）４．９２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，Ｈ−５）５．３５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６，Ｈ−２’）５．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−２）５．６４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｈ−３’）５．８７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｈ−１３）６．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１０）７．２０〜８．００（ａｒｏｍａｔｉｃ，１５Ｈ）９．１７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＣＯＮＨ−３’）
ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ  ９２５．３７９７(Ｍ＋Ｈ)+：Ｃ50Ｈ57Ｏ15Ｎ2としての計算値  ９２５．３７５９
（工程２）
カルボキシメチル化ポリエーテル−２’−Ａｌａ−パクリタキセル（９）の製造
実施例４で得た、カルボキシメチル化ポリエーテル（５）（１００ｍｇ）に対し、本実施例６（工程１）で得た、２’−Ａｌａ−パクリタキセル（８）（３０ｍｇ）を用いた以外は実施例５（工程２）と同様に行い、標記化合物（９）（９３ｍｇ）を得た。本複合体の薬物の導入量は、２５４ｎｍにおける紫外吸光度および複合体の総重量から算出したところ、２．２％（重量％）であった。
【００３５】
〔実施例７〕
（工程１）２’−Ｌｅｕ−パクリタキセル（１０）の製造
Ｚ−Ｌｅｕ（１７２ｍｇ、０．６５ｍｍｏｌ）を用いた以外は実施例６（工程１）と同様に行い２’−Ｚ−Ｌｅｕ−パクリタキセル（４５０ｍｇ）を得た。この化合物（４００ｍｇ）をジオキサン(２０ｍｌ)に溶解しパラジウム−炭素触媒（２００ｍｇ）を加え、水素雰囲気下、４時間撹拌し、触媒を濾去した後、減圧下溶媒を留去し、残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9385，Silica gel 60，200-400 mesh，カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／メタノール／アセトニトリル＝９５／５／５）で精製し、標記化合物（１０）（２８２ｍｇ）を得た。テトラメチルシランを標準とするDMSO-d6溶媒におけるNMRデータを下記に示す。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．６６（ｄ，３Ｈ，Ｍｅ−Ｌｅｕ）０．７０（ｄ，３Ｈ，Ｍｅ−Ｌｅｕ）１．０１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１７）１．０３（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１６）１．２６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４，８．５，１３．４Ｈｚ，Ｈ−Ｌｅｕ）１．３６（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．８，７．６，１３．４Ｈｚ，Ｈ−Ｌｅｕ）１．５１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１９）１．５６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．３，９．０Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）１．６４（ｍ，１Ｈ，Ｈ−６ｂ）１．６７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−Ｌｅｕ）１．７９（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１８）１．８４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．３，９．５Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）２．１０（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−１０）２．２５（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−４）２．３３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．７，９．５，６．４Ｈｚ，Ｈ−６ａ）３．３８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．６，５．８Ｈｚ，Ｈ−Ｌｅｕ）３．５９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−３）４．０１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，Ｈ−２０）４．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．８Ｈｚ，Ｈ−２０）４．１２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．９，６．９，１１．０Ｈｚ，Ｈ−７）４．６４（ｓ，１Ｈ，ＯＨ−１）４．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０，ＯＨ−７）４．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．１Ｈｚ，Ｈ−５）５．３４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２，Ｈ−２’）５．４２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−２）５．６２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．０Ｈｚ，Ｈ−３’）５．８６（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｈ−１３）６．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１０）７．２０〜８．００（ａｒｏｍａｔｉｃ，１５Ｈ）９．１６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＣＯＮＨ−３’）
ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ  ９６７．４３２１(Ｍ＋Ｈ)+：Ｃ53Ｈ63Ｏ15Ｎ2としての計算値  ９６７．４２２８
（工程２）
カルボキシメチル化ポリエーテル−２’−Ｌｅｕ−パクリタキセル（１１）の製造
実施例４で得た、カルボキシメチル化ポリエーテル（５）（１００ｍｇ）に対し、本実施例７（工程１）で得た、２’−Ｌｅｕ−パクリタキセル（１０）（３０ｍｇ）を用いた以外は実施例６（工程１）と同様に行い、標記化合物（１１）（９２ｍｇ）を得た。本複合体の薬物の導入量は、２５４ｎｍにおける紫外吸光度および複合体の総重量から算出したところ、４．１％（重量％）であった。
【００３６】
〔実施例８〕
（工程１）
２’−Ｉｌｅ−パクリタキセル（１２）の製造
Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ（２１２ｍｇ，０．６ｍｍｏｌ）および、ＤＭＡＰ（７３ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）およびパクリタキセル（４２７ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、ＤＩＰＣ（７６ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）を加え室温で終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマト・グラフィー（シリカゲル：Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9385，Silica gel 60，200-400 mesh，カラム：２．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝７０／３０）で精製し、２’−Ｆｍｏｃ−Ｉｌｅ−パクリタキセル（５５３ｍｇ）を得た。この化合物（４７０ｍｇ）をＤＭＦ(１０ｍｌ)に溶解し、室温下ピペリジン（２ｍｌ）を加え、５分間撹拌した後、減圧下溶媒を留去し、残査をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No．9385，Silica gel 60，200-400 mesh，カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／メタノール／アセトニトリル＝９５／５／５）で精製し、標記化合物（１２）（３５５ｍｇ）を得た。テトラメチルシランを標準とするDMSO-d6溶媒におけるNMRデータを下記に示す。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．６２（ｔ，３Ｈ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，Ｍｅ−Ｉｌｅ）０．８１  （ｄ，３Ｈ，Ｊ＝６．７Ｈｚ，Ｍｅ−Ｉｌｅ）１．０１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１７）１．０３  （ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１６）１．０７（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．４，７．３，４．９Ｈｚ，Ｈ−Ｉｌｅ）１．３２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．４，７．６，４．６Ｈｚ，Ｈ−Ｉｌｅ）１．５１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１９）１．５６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．３，９．２Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）１．５６−１．６１（ｍ，１Ｈ，Ｈ−Ｉｌｅ）１．６４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．７，３．１Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）１．７９（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１８）１．８７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．３，９．８Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）２．１０（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−１０）２．２９（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−４）２．３３（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．４，９．６，６．４Ｈｚ，Ｈ−６ａ）３．６０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ−３）３．６０−３．６７（ｍ，１Ｈ，Ｈ−Ｉｌｅ）４．０２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．６Ｈｚ，Ｈ−２０）４．０３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１６．６Ｈｚ，Ｈ−２０）４．１２（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．８，６．７，６．７Ｈｚ，Ｈ−７）４．６４（ｓ，１Ｈ，ＯＨ−１）４．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０，ＯＨ−７）４．９２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，Ｈ−５）５．３７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，Ｈ−２’）５．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，Ｈ−２）５．６４（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，Ｈ−３’）５．８５（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝０．９，９．２Ｈｚ，Ｈ−１３）６．３０（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１０）７．２０〜８．００（ａｒｏｍａｔｉｃ，１５Ｈ）９．１５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，ＣＯＮＨ−３’）
ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ  ９６７．４２３４(Ｍ＋Ｈ)+：Ｃ53Ｈ63Ｏ15Ｎ2としての計算値  ９６７．４２２８
（工程２）
カルボキシメチル化ポリエーテル−２’−Ｉｌｅ−パクリタキセル（１３）の製造
実施例４で得た、カルボキシメチル化ポリエーテル（５）（１００ｍｇ）に対し、本実施例８（工程１）で得た、２’−Ｉｌｅ−パクリタキセル（１２）（３０ｍｇ）を用いた以外は実施例５（工程２）と同様に行い、標記化合物（１３）（９２ｍｇ）を得た。本複合体の薬物の導入量は、２５４ｎｍにおける紫外吸光度および複合体の総重量から算出したところ、１．８％（重量％）であった。
【００３７】
〔実施例９〕
（工程１）
２’−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル塩酸塩（１４）の製造
Ｐｈｅ−Ｇｌｙ（日本国、ペプチド研究所製、１．１ｇ、５ｍｍｏｌ）を水（２ｍｌ）、２−プロパノール（２ｍｌ）およびジエチルアミン（１．５ｍｌ）の混合溶液に溶かし、この反応液にトリチルクロライド（１．８ｇ、６．５ｍｍｏｌ）を徐々に加え、１時間撹拌した。反応液に水を加え、生じた沈殿を水で洗浄した。次に、沈殿に酢酸５ｍｌを加えて酸性にした後、溶媒を減圧下留去することによりＴｒｔ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ１．４ｇを得た。得られたＴｒｔ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ（６０４ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）および、ＤＭＡＰ（１５８ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）およびパクリタキセル（８５３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、ＤＩＰＣ（１６４ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を加え室温下終夜撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9385，Silica gel 60，200-400 mesh，カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝８０／２０）で精製し、２’−Ｔｒｔ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（９９０ｍｇ）を得た。この化合物（８００ｍｇ）を９０％酢酸（１０ｍｌ）で処理して脱Ｎ−トリチル化し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製Art No．9385，Silica gel 60，200-400 mesh，カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／メタノール／アセトニトリル＝９５／５／５）で精製し、次に酢酸塩をイオン交換樹脂により塩酸塩へ変換して標記化合物（１４）（４５５ｍｇ）を得た。テトラメチルシランを標準とするDMSO-d6溶媒におけるNMRデータを下記に示す。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）；δ１．０１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１７）１．０３（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１６）１．４２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．５，９．１Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）１．５０（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１９）１．６３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．２Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）１．７５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．３，９．５Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）１．８１（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１８）２．１２（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−１０）２．２３（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−４）２．２９（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．４，９．２，７．０Ｈｚ，Ｈ−６ａ）２．９０（ｄｄ，１Ｈ，１４．２，７．８Ｈｚ，ＰｈｅＣＨ２）３．０８（ｄｄ，１Ｈ，１４．４，５．２Ｈｚ，ＰｈｅＣＨ２）３．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−３）４．０５−４．１０（ｍ，２Ｈ，Ｈ−７，ＰｈｅＣＨ）４．１５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１８．０，５．８Ｈｚ，Ｇｌｙ）４．６１（ｂｒｓ，１Ｈ，ＯＨ−１）４．９０（ｂｒｓ，１Ｈ，ＯＨ−７）４．９０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５．３Ｈｚ，Ｈ−５）５．３８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，Ｈ−２’）  ５．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ，Ｈ−２）５．５３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．６Ｈｚ，Ｈ−３’）５．８３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．８Ｈｚ，Ｈ−１３）６．２９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１０）７．１６〜８．００（ｍ，２０Ｈ，ａｒｏｍａｔｉｃ）８．１５（ｂｒｓ，２Ｈ，ＮＨ２）９．０２（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．８Ｈｚ，Ｇｌｙ−ＮＨ）９．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ，ＣＯＮＨ−３’）
ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ  １０５８．４２４１(Ｍ＋Ｈ)+：Ｃ58Ｈ64Ｏ16Ｎ3としての計算値  １０５８．４２８７
（工程２）
カルボキシメチル化ポリエーテル−２’−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（１５）の製造  
実施例４で得た、カルボキシメチル化ポリエーテル（５）（１００ｍｇ）を水２ｍｌに溶解し、氷冷下、この溶液にＤＭＦ２ｍｌを加えた。この溶液に本実施例１３７（工程１）で得た、２’−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（１４）（２２ｍｇ）を溶解した水：ＤＭＦ（１：１）混合液（０．５ｍｌ）およびＷＳＣ・ＨＣｌ（１００ｍｇ）を溶解したＤＭＦ（０．５ｍｌ）を加え、室温で２時間撹拌した。この反応液を透析膜（分子量カットオフ１２，０００−１４，０００、米国、スペクトラム社製）を用い、精製水に対して４℃で２日間透析した。この内液をメンブランフィルター（０．２２μｍ）にて濾過した後、凍結乾燥し、表記化合物（１５）（８２ｍｇ）を得た。本複合体の薬物の導入量は、２５４ｎｍにおける紫外吸光度および複合体の総重量から算出したところ、３．１％（重量％）であった。
【００３８】
〔実施例１０〕
Ｔｒｔ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ（１６）の製造
（１）Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＢｎ（１７）の合成
Ｐｈｅ−Ｇｌｙ・Ｈ2Ｏ（日本国、国産化学社製、２５ｇ、１０４ｍｍｏｌ）をパラトルニンスルホン酸１水和物（１９．８ｇ、１０４ｍｍｏｌ）、ベンジルアルコール（２５ｍｌ）およびトルエン（２００ｍｌ）混合液に溶かし、Dean-Stark装置により５時間加熱環流する。反応後、溶媒を留去し、ジエチルエーテルを加えると標記化合物であるＰｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＢｎ（１７）のパラトルエンスルホン酸塩（３４ｇ）が得られた。
（２）Ｔｒｔ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（１８）の合成
Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（日本国、ペプチド研究所製、６．６ｇ、５０ｍｍｏｌ）をＨ2Ｏ（２０ｍｌ）、２−プロパノール（４０ｍｌ）およびジエチルアミン（１５ｍｌ）の混合溶液に溶かし、この反応液にトリチルクロライド（１８．１ｇ、６５ｍｍｏｌ）を徐々に加え、１時間撹拌する。反応液にＨ2Ｏを加え、生じた沈殿を水で洗浄した。次に、沈澱に酢酸5mlを加えて酸性にした後、溶媒を減圧下で留去することにより標記化合物（１８）１３．３ｇを得た。
（３）Ｔｒｔ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＢｎ（１９）の合成
乾燥ＤＭＦ（１０ｍｌ）に、Ｔｒｔ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ（１８）（１．５４ｇ）、Ｎ−ヒドロキシコハク酸イミド（０．５２ｇ）およびＤＣＣ（０．９３ｇ）を加え、４℃で３時間反応する。反応溶液にＰｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＢｎ（１７）のパラトルエンスルホン酸塩（２．０ｇ）およびＮ−メチルモルホリン（０．４１ｇ）を溶かしたＤＭＦ溶液（ＤＭＦ１０ｍｌ）を加え、４℃で１５時間反応する。沈殿物を除き、溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9365，Silica gel 60，200-400mesh，溶離液：クロロホルム／メタノール＝２０／１）で精製することにより、標記生成物（１９）（１．６ｇ）を得た。
（４）Ｔｒｔ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ（１６）の合成
化合物（１９）Ｔｒｔ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−ＯＢｎ（１．３ｇ）をＤＭＦ（２０ｍｌ）に溶かし、１０％パラジウム−炭素（０．５ｇ）および１，４−シクロヘキサジエン（０．４ｇ）を加え、室温下３０分反応する。反応液をろ過し、触媒を除き、溶媒を留去し、残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9365，Silica gel60，200-400 mesh，溶離液：クロロホルム／メタノール＝７／１）で精製することにより、標記化合物（１６）（１．１ｇ）を得た。
Anal．Calcd for: Ｃ34Ｈ34Ｎ4Ｏ5：Ｃ，７０．５７；Ｈ，５．９２；Ｎ，９．６８  Found: Ｃ，７０．０３；Ｈ，６．０７；Ｎ，９．６７
アミノ酸分析：Ｐｈｅ（１）１．００，Ｇｌｙ（３）２．９１
加水分解条件：６ＮＨＣｌ、１１０℃、２２ｈｒｓ
【００３９】
〔実施例１１〕
２’−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル塩酸塩（２０）の製造
実施例１０で得た（１６）Ｔｒｔ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ（７３９ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）および、ＤＭＡＰ（１５８ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）およびパクリタキセル（８５３ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、ＤＩＰＣ（１６４ｍｇ、１．３ｍｍｏｌ）を加え室温下４時間撹拌した。反応溶媒を留去し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9385，Silica gel 60，200-400 mesh，カラム：４．０×５０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／メタノール／アセトニトリル＝９５／５／３０）で精製し、２’−Ｎα−Ｔｒｔ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（２１）（１２５０ｍｇ）を得た。
ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ  １４１４．５７６３(Ｍ＋Ｈ)+：Ｃ81Ｈ84Ｏ18Ｎ5としての計算値  １４１４．５８１１
この化合物（２１）（１１００ｍｇ）を７５％酢酸（１０ｍｌ）で処理して脱Ｎ−トリチル化し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9385，Silica gel 60，200-400 mesh，カラム：４．０×５０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／メタノール／アセトニトリル＝８５／１５／５）で精製し、次に陰イオン交換樹脂により塩酸塩へ変換して表記化合物（２０）（５３３ｍｇ）を得た。テトラメチルシランを標準とするDMSO-d6溶媒におけるNMRデータを下記に示す。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ１．００（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１７）１．０３（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１６）１．４２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．４，９．２Ｈｚ，Ｈ−１４ｂ）１．４９（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１９）１．６３（ｂｒｔ，１Ｈ，Ｊ＝１２．１Ｈｚ，Ｈ−６ｂ）１．７４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１５．４，  ９．２Ｈｚ，Ｈ−１４ａ）１．８０（ｓ，３Ｈ，Ｍｅ−１８）２．１１（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−１０）２．２３（ｓ，３Ｈ，Ａｃ−４）２．３０（ｍ，１Ｈ，Ｈ６ａ）２．７２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．９，１０．２Ｈｚ，ＰｈｅＣＨ２Ｈｂ）３．０２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１３．９，３．８Ｈｚ，ＰｈｅＣＨ２ＣＨａ）３．５２（ｂｒｓ，２Ｈ，ＧｌｙＣＨ２）３．５６（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｈ−３）３．６６（ｄｄ，１Ｈ，１６．９，５．４Ｈｚ，ＧｌｙＣＨ２ｂ）３．８４（ｄｄ，１Ｈ，１６．９，５．４Ｈｚ，ＧｌｙＣＨ２ａ）４．０１（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝１４．５，８．４Ｈｚ，Ｈ−２０ａ，Ｈ−２０ｂ）４．０１（２Ｈ，ＧｌｙＣＨ２）４．０９（ｍ，１Ｈ，Ｈ−７）４．５５（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１０．２，８．５，３．８Ｈｚ，ＰｈｅＣＨ２ＣＨ）４．６１（ｓ，１Ｈ，ＯＨ−１）４．８９（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９，１．３Ｈｚ，Ｈ−５）４．９２（ｂｒｓ，１Ｈ，ＯＨ−７）５．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．２，Ｈ−２）５．４３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，Ｈ−２’）５．５１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，Ｈ−３’）５．８３（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，Ｈ−１３）６．２９（ｓ，１Ｈ，Ｈ−１０）７．１０〜８．００（ａｒｏｍａｔｉｃ，２０Ｈ）８．３３（ｄ，１Ｈ，ＰｈｅＣＯＮＨ）８．５１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．５Ｈｚ，ＧｌｙＣＯＮＨ）８．６９（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，ＧｌｙＣＯＮＨ）９．３４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，ＣＯＮＨ−３’）
ＨＲＭＳ：ｍ／ｚ  １１７２．４７１１(Ｍ＋Ｈ)+：Ｃ62Ｈ70Ｏ18Ｎ5としての計算値  １１７２．４７１６
Anal．Calcd for: Ｃ62Ｈ69Ｏ18Ｎ5・ＨＣｌ・２．５Ｈ2Ｏ：Ｃ，５９．４０；Ｈ，６．０３；Ｎ，５．５９．
Found: Ｃ，５９．５５；Ｈ，６．０４；Ｎ，５．６０
【００４０】
〔実施例１２〕
カルボキシメチル化ポリエーテル−２’−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（２２）の製造
実施例４で得た、カルボキシメチル化ポリエーテル（５）（１．０ｇ）を水２０ｍｌに溶解し、氷冷下、この溶液にＤＭＦ２０ｍｌを加えた。この溶液に実施例１１で得た、２’−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−パクリタキセル（２０）（２００ｍｇ）を溶解した水：ＤＭＦ（１：１）混合液（８ｍｌ）およびＷＳＣ・ＨＣｌ（１．０ｇ）を溶解したＤＭＦ５ｍｌを加え、室温で６時間撹拌した。この反応液を透析膜（分子量カットオフ１２，０００−１４，０００、米国、スペクトラム社製）を用い、精製水に対して４℃で２日間透析した。この内液をメンブランフィルター（０．２２μｍ）にて濾過した後、凍結乾燥し、表記化合物（２２）（９５３ｍｇ）を得た。本複合体の薬物の導入量は、２５４ｎｍにおける紫外吸光度および複合体の総重量から算出したところ、４．４％（重量％）であった。
【００４１】
〔実施例１３〕
２０−Ｇｌｙ−カンプトテシン塩酸塩（２３）の製造
（工程１）
BOC−Ｇｌｙ（２６３ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（１２２ｍｇ、１．０ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−（＋）−Ｃａｍｐｔoｔｈｅｓｉｎ（日本国、東京化成、１７４ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（２０ｍｌ）に溶解した。次いで、ＤＩＰＣ（１８９ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を加え室温で３．５時間撹拌した。反応溶液を０．１Ｎ塩酸および飽和食塩水で洗浄しその後、溶媒を減圧下で留去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9385，Silica gel 60，200-400 mesh，カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝７０／３０）で精製し、２０−ＢＯＣＧｌｙ−カンプトテシン（２４）（３１５ｍｇ）を得た。
（工程２）
化合物（２４）（３００ｍｇ）を塩化メチレン（５ｍｌ）に溶解し、室温下トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ；２ｍｌ）を加え、５分間撹拌し、ついで溶媒を留去した。脱ＢＯＣ化した化合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9385，Silica gel 60，200-400 mesh，カラム：４．０×５０ｃｍ、溶離液：アセトニトリル／メタノール／塩化メチレン＝１０／１０／９０）で精製し、その後陰イオン交換樹脂で処理することで、標記化合物（２３）（２１４ｍｇ）を得た。テトラメチルシランを標準とするDMSO-d6溶媒におけるNMRデータを下記に示す。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．９７（ｓ，３Ｈ）２．２０（ｍ，２Ｈ）４．０８，４．３４（ｄｄ，２Ｈ）５．３２（ｓ，２Ｈ）５．５６（ｓ，２Ｈ）７．３２（ｓ，１Ｈ）７．７３（ｔ，１Ｈ）７．８８（ｔ，１Ｈ）８．１５（ｄ，１Ｈ）８．１７（ｄ，１Ｈ）８．５６（ｂｒｓ，２Ｈ）８．７２（ｓ，１Ｈ）
１３C−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．５３，３０．１８，３８．６−４０．２，５０．１０，６６．２９，７７．４２，９５．５１，１１８．７８，１２７．６３，１２７．８２，１２８．４５，１２８．６６，１２９．４９，１３０．４３，１３１．５８，１４４．７２，１４５．９７，１４７．７７，１５２．１３，１５６．３９，１６６．７７
【００４２】
〔実施例１４〕
カルボキシメチル化ポリエーテル−２０−Ｇｌｙ−カンプトテシン（２５）の製造
実施例４で得た、カルボキシメチル化ポリエーテル（５）（１．０ｇ）を水２０ｍｌに溶解し、氷冷下、この溶液にＤＭＦ２０ｍｌを加えた。この溶液に実施例１３で得た、２０−Ｇｌｙ−カンプトテシン塩酸塩（２３）（２００ｍｇ）を溶解した水：ＤＭＦ（１：１）混合液（８ｍｌ）およびＷＳＣ・ＨＣｌ（１．０ｇ）を溶解したＤＭＦ５ｍｌを加え、室温で６時間撹拌した。この反応液を透析膜（分子量カットオフ１２，０００−１４，０００、米国、スペクトラム社製）を用い、精製水に対して４℃で２日間透析した。この内液をメンブランフィルター（０．２２μｍ）にて濾過した後、凍結乾燥し、表記化合物（２５）（９５３ｍｇ）を得た。本複合体の薬物の導入量は、２５４ｎｍにおける紫外吸光度および複合体の総重量から算出したところ、３．６％（重量％）であった。
【００４３】
〔実施例１５〕
２０−ＧｌｙＧｌｙＰｈｅＧｌｙ−カンプトテシン塩酸塩（２６）の製造
（工程１）
実施例１０で得られた（１６）Ｔｒｔ−ＧｌｙＧｌｙＰｈｅＧｌｙ（１７３６ｍｇ、３ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（２４４ｍｇ、２ｍｍｏｌ）および（Ｓ）−（＋）−Ｃａｍｐｔoｔｈｅｓｉｎ（３４８ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（１００ｍｌ）に溶解した。次いで、ＤＩＰＣ（３７８ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を加え室温で終夜撹拌した。反応溶液を０．１Ｎ塩酸および飽和食塩水で洗浄しその後、溶媒を減圧下で留去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9385，Silica gel 60，200-400 mesh，カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝７０／３０）で精製し、２０−２０−ＴｒｔＧｌｙＧｌｙＰｈｅＧｌｙ−カンプトテシン（２７）（７５４ｍｇ）を得た。
（工程２）
化合物（２７）（７００ｍｇ）を７５％酢酸（８ｍｌ）に溶解し、２０分間撹拌し、ついで溶媒を留去した。脱Ｔｒｔ化した化合物を陰イオン交換樹脂（バイオラッド社ＡＧ１−Ｘ８）により酢酸塩を塩酸塩に変換し、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9385，Silica gel 60，200-400 mesh，カラム：４．０×５０ｃｍ、溶離液：メタノール／塩化メチレン＝１５／８５）で精製し、標記化合物（２６）（５３５ｍｇ）を得た。テトラメチルシランを標準とするDMSO-d6溶媒におけるNMRデータを下記に示す。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．９３（ｔ，３Ｈ）２．３２（ｍ，２Ｈ）２．７７，３．０６（ｄｄ，ｄｄ，２Ｈ）３．２７（ｓ，２Ｈ）３．６１，３．７６（ｄ，ｄ，２Ｈ）４．１１，４．２１（ｄｄ，ｄｄ，２Ｈ）４．５５（ｍ，１Ｈ）５．２７（ｓ，２Ｈ）５．５１（ｓ，２Ｈ）７．１５（ｍ，１Ｈ）７．１９（ｓ，１Ｈ）７．２２（ｍ，４Ｈ）７．７１（ｔ，１Ｈ）７．８７（ｔ，１Ｈ）８．１２（ｄ，１Ｈ）８．１７（ｄ，１Ｈ）８．２３（ｂｒｓ，１Ｈ）８．３１（ｄ，１Ｈ）８．６８（ｓ，１Ｈ）８．６８（ｂｒｓ，２Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：７．５２，３０．４２，３７．４３，４０．４１，４１．６４，４２．２１，５０．０８，５３．９６，６６．２８，７６．２７，９５．２０，１１８．８７，１２６．２０，１２７．５９，１２７．８０，１２８．０１，１２８．３９，１２８．７９，１２９．０６，１２９．５０，１３０．３７，１３１．４９，１３７．８２，１４５．１１，１４５．８７，１４７．７２，１５２．１２，１５６．４１，１６７．００，１６８．３５，１６８．８４，１７１．６８
【００４４】
〔実施例１６〕
カルボキシメチル化ポリエーテル−２０−ＧｌｙＧｌｙＰｈｅＧｌｙ−カンプトテシン（２８）の製造
実施例４で得た、カルボキシメチル化ポリエーテル（５）（１．０ｇ）を水２０ｍｌに溶解し、氷冷下、この溶液にＤＭＦ２０ｍｌを加えた。この溶液に実施例１５で得た、２０−ＧｌｙＧｌｙＰｈｅＧｌｙ−カンプトテシン塩酸塩（２６）（２００ｍｇ）を溶解した水：ＤＭＦ（１：１）混合液（８ｍｌ）およびＷＳＣ・ＨＣｌ（１．０ｇ）を溶解したＤＭＦ５ｍｌを加え、室温で６時間撹拌した。この反応液を透析膜（分子量カットオフ１２，０００−１４，０００、米国、スペクトラム社製）を用い、精製水に対して４℃で２日間透析した。この内液をメンブランフィルター（０．２２μｍ）にて濾過した後、凍結乾燥し、表記化合物（２８）（１．１ｇ）を得た。本複合体の薬物の導入量は、２５４ｎｍにおける紫外吸光度および複合体の総重量から算出したところ、４．６％（重量％）であった。
【００４５】
〔実施例１７〕
２１−Ａｌａ−デキサメタゾン塩酸塩（２９）の製造
（工程１）
BOC−Ａｌａ（５６８ｍｇ、３ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（２４４ｍｇ、２ｍｍｏｌ）およびデキサメタゾン（３９２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（３０ｍｌ）に溶解した。次いで、ＤＩＰＣ（２５２ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を加え室温で０．５時間撹拌した。反応溶液を０．１Ｎ塩酸および飽和食塩水で洗浄しその後、溶媒を減圧下留去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9385，Silica gel 60，200-400 mesh，カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝８０／２０）で精製し、２１−ＢＯＣ−Ａｌａ−デキサメタゾン（３０）（５５３ｍｇ）を得た。
（工程２）
化合物（３０）（５００ｍｇ）を塩化メチレン（１０ｍｌ）に溶解し、室温下トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ；１ｍｌ）を加え、２時間撹拌し、ついで溶媒を留去した。脱ＢＯＣ化した化合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9385，Silica gel 60，200-400 mesh，カラム：４．０×５０ｃｍ、溶離液：アセトニトリル／メタノール／塩化メチレン＝５／１５／８５）で精製し、その後陰イオン交換樹脂で処理することで、標記化合物（２９）（４１２ｍｇ）を得た。テトラメチルシランを標準とするDMSO-d6溶媒におけるNMRデータを下記に示す。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．８０（ｄ，３Ｈ）０．９０（ｓ，３Ｈ）１．０９（ｓ，１Ｈ）１．３３−１．７９（ｍ，４Ｈ）１．４９（ｓ，３Ｈ）１．５０（ｄ，３Ｈ）２．０８−２．９１（ｍ，６Ｈ）３．３５（ｂｒｓ，１Ｈ）４．１７（ｍ，１Ｈ）４．２４（ｑ，１Ｈ）４．９５（ｄ，１Ｈ）５．２０（ｄ，１Ｈ）５．２７（ｓ，１Ｈ）５．５３（ｄ，１Ｈ）６．０１（ｓ，１Ｈ）６．２３（ｄｄ，１Ｈ）７．３３（ｄ，１Ｈ）８．４６（ｂｒｓ，１Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：１５．２０，１６．０９，１６．２９，２３．０８，２７．４１，３０．４１，３２．０５，３３．７０，３５．６１，３５．８３，４３．４２，４７．８０，４８．０５，４８．２５，６９．３８，７０．４１，９０．６１，１０１．４２，１２４．１９，１２９．０３，１５２．９４，１６７．１７，１６９．９８，１８５．４１，２０４．３０
【００４６】
〔実施例１８〕
カルボキシメチル化ポリエーテル−２１−Ａｌａ−デキサメタゾン（３１）の製造
実施例４で得た、カルボキシメチル化ポリエーテル（５）（１ｇ）を水２０ｍｌに溶解し、氷冷下、この溶液にＤＭＦ２０ｍｌを加えた。この溶液に実施例１６で得た、２１−Ａｌａ−デキサメタゾン塩酸塩（２９）（２００ｍｇ）を溶解した水：ＤＭＦ（１：１）混合液（８ｍｌ）およびＷＳＣ・ＨＣｌ（１．０ｇ）を溶解したＤＭＦ５ｍｌを加え、室温で６時間撹拌した。この反応液を透析膜（分子量カットオフ１２，０００−１４，０００、米国、スペクトラム社製）を用い、精製水に対して４℃で２日間透析した。この内液をメンブランフィルター（０．２２μｍ）にて濾過した後、凍結乾燥し、表記化合物（３１）（０．９７ｇ）を得た。本複合体の薬物の導入量は、２４０ｎｍにおける紫外吸光度および複合体の総重量から算出したところ、３．６％（重量％）であった。
【００４７】
〔実施例１９〕
２１−Ｌｅｕ−デキサメタゾン塩酸塩（３２）の製造
（工程１）
BOC−Ｌｅｕ・Ｈ２Ｏ（７４７ｍｇ、３ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（２４４ｍｇ、２ｍｍｏｌ）およびデキサメタゾン（３９２ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（３０ｍｌ）に溶解した。次いで、ＤＩＰＣ（２５２ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を加え室温で１３時間撹拌した。反応溶液を０．１Ｎ塩酸および飽和食塩水で洗浄しその後、溶媒を減圧下留去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9385，Silica gel 60，200-400 mesh，カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝８０／２０）で精製し、２０−ＢＯＣ−Ｌｅｕ−デキサメタゾン（３３）（６０６ｍｇ）を得た。
（工程２）
化合物（３３）（５００ｍｇ）を塩化メチレン（５ｍｌ）に溶解し、室温下トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ；１ｍｌ）を加え、２時間撹拌し、ついで溶媒を留去した。脱ＢＯＣ化した化合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9385，Silica gel 60，200-400 mesh，カラム：４．０×５０ｃｍ、溶離液：アセトニトリル／メタノール／塩化メチレン＝５／１５／８５）で精製し、その後陰イオン交換樹脂で処理することで、標記化合物（３２）（５１５ｍｇ）を得た。テトラメチルシランを標準とするDMSO-d6溶媒におけるNMRデータを下記に示す。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．７９（ｄ，３Ｈ）０．８８（ｄ，３Ｈ）０．８９（ｓ、３Ｈ）０．９２（ｄ，３Ｈ）１．０８（ｍ，１Ｈ）１．３４−１．８１（ｍ，６Ｈ）１．４９（ｓ，３Ｈ）１．８６（ｍ，１Ｈ）２．１２−２．８８（ｍ，６Ｈ）３．３５（ｓ，２Ｈ）３．４４（ｑ，１Ｈ）４．１６（ｍ，１Ｈ）４．８５（ｄ，１Ｈ）５．０２（ｄ，１Ｈ）５．１７（ｓ，１Ｈ）５．４７（ｄ，１Ｈ）６．０１（ｓ，１Ｈ）６．２３（ｄｄ，１Ｈ）７．３１（ｄ，１Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：１５．２７，１６．３０，２１．８７，２３．１１，２３．１５，２４．１５，２７．４６，３０．５０，３２．１３，３３．７９，３５．５２，３５．７９，４３．４６，４３．５６，４８．１５，４８．１６，５２．１６，６８．２１，７０．６２，９０．６７，１０１．４７，１２４．２４，１２９．０６，１５３．０４，１６７．２７，１７５．４７，１８５．４８，２０４．９０
【００４８】
〔実施例２０〕
カルボキシメチル化ポリエーテル−２１−Ｌｅｕ−デキサメタゾン（３４）の製造
実施例４で得た、カルボキシメチル化ポリエーテル（５）（１ｇ）を水２０ｍｌに溶解し、氷冷下、この溶液にＤＭＦ２０ｍｌを加えた。この溶液に実施例１８で得た、２１−Ｌｅｕ−デキサメタゾン塩酸塩（３２）（２００ｍｇ）を溶解した水：ＤＭＦ（１：１）混合液（８ｍｌ）およびＷＳＣ・ＨＣｌ（１．０ｇ）を溶解したＤＭＦ５ｍｌを加え、室温で６時間撹拌した。この反応液を透析膜（分子量カットオフ１２，０００−１４，０００、米国、スペクトラム社製）を用い、精製水に対して４℃で２日間透析した。この内液をメンブランフィルター（０．２２μｍ）にて濾過した後、凍結乾燥し、表記化合物（３４）（１．１ｇ）を得た。本複合体の薬物の導入量は、２４０ｎｍにおける紫外吸光度および複合体の総重量から算出したところ、４．１％（重量％）であった。
【００４９】
〔実施例２１〕
２１−Ｉｌｅ−デキサメタゾン塩酸塩（３５）の製造
（工程１）
BOC−Ｉｌｅ（１０４０ｍｇ、４．５ｍｍｏｌ）および、ジメチルアミノピリジン（３６６ｍｇ、３ｍｍｏｌ）およびデキサメタゾン（５８８ｍｇ、１．５ｍｍｏｌ）を塩化メチレン（３０ｍｌ）に溶解した。次いで、ＤＩＰＣ（３７８ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を加え室温で１４時間撹拌した。反応溶液を０．１Ｎ塩酸および飽和食塩水で洗浄しその後、溶媒を減圧下留去した。シリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9385，Silica gel 60，200-400 mesh，カラム：４．０×３０ｃｍ、溶離液：塩化メチレン／アセトニトリル＝８０／２０）で精製し、２０−ＢＯＣ−Ｉｌｅ−デキサメタゾン（３６）（６２２ｍｇ）を得た。
（工程２）
化合物（３６）（６００ｍｇ）を塩化メチレン（５ｍｌ）に溶解し、室温下トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ；１ｍｌ）を加え、２時間撹拌し、ついで溶媒を留去した。脱ＢＯＣ化した化合物をシリカゲルカラムクロマトグラフィー（シリカゲル：独国Ｍｅｒｃｋ社製 Art No．9385，Silica gel 60，200-400 mesh，カラム：４．０×５０ｃｍ、溶離液：アセトニトリル／メタノール／塩化メチレン＝５／１５／８５）で精製し、その後陰イオン交換樹脂で処理することで、標記化合物（３５）（５８４ｍｇ）を得た。テトラメチルシランを標準とするDMSO-d6溶媒におけるNMRデータを下記に示す。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．８０（ｄ，３Ｈ）０．９０（ｓ，３Ｈ）０．９３（ｔ，３Ｈ）１．０３（ｄ，３Ｈ）１．０８（ｍ，１Ｈ）１．３３−１．８６（ｍ，６Ｈ）１．４９（ｓ，３Ｈ）１．５０（ｄ，１Ｈ）２．１３−２．９１（ｍ，６Ｈ）４．１１（ｄ，１Ｈ）４．１６（ｍ，１Ｈ）４．９９（ｄ，１Ｈ）５．１７（ｄ，１Ｈ）５．２６（ｓ，１Ｈ）５．５５（ｄ，１Ｈ）６．０１（ｓ，１Ｈ）６．２３（ｄｄ，１Ｈ）７．３４（ｄ，１Ｈ）８．４４（ｓ，１Ｈ）
１３Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：１１．６９，１３．６９，１５．２１，１６．２１，２３．０９，２５．０２，２７．４４，３０．４５，３２．０８，３３．７２，３５．８１，３５．６１，３６．３４，４３．４４，４８．０８，４８．２２，５６．１５，６９．５４，７０．４１，９０．７２，１０１．４６，１２４．１９，１２９．００，１５２．９６，１６７．１８，１６８．６６，１８５．４１，２０４．４０
【００５０】
〔実施例２２〕
カルボキシメチル化ポリエーテル−２１−Ｉｌｅ−デキサメタゾン（３７）の製造
実施例４で得た、カルボキシメチル化ポリエーテル（５）（１ｇ）を水２０ｍｌに溶解し、氷冷下、この溶液にＤＭＦ２０ｍｌを加えた。この溶液に実施例２０で得た、２１−Ｉｌｅ−デキサメタゾン塩酸塩（３５）（２００ｍｇ）を溶解した水：ＤＭＦ（１：１）混合液（８ｍｌ）およびＷＳＣ・ＨＣｌ（１．０ｇ）を溶解したＤＭＦ５ｍｌを加え、室温で６時間撹拌した。この反応液を透析膜（分子量カットオフ１２，０００−１４，０００、米国、スペクトラム社製）を用い、精製水に対して４℃で２日間透析した。この内液をメンブランフィルター（０．２２μｍ）にて濾過した後、凍結乾燥し、表記化合物（３７）（０．９７ｇ）を得た。本複合体の薬物の導入量は、２４０ｎｍにおける紫外吸光度および複合体の総重量から算出したところ、３．１％（重量％）であった。
【００５１】
〔実施例２３〕
化合物（７）、（９）、（１１）、（１３）、（１５）および（２２）の生理食塩水に対する溶解度
化合物（７）、（９）、（１１）、（１３）、（１５）および（２２）をそれぞれ１０ｍｇ量り取り、０．１ｍｌの生理食塩水に加えたところ、加えた化合物はそれぞれ完全に溶解した。パクリタキセル換算では、化合物（７）は４．１ｍｇ／ｍｌ（生理食塩水）の溶解度であった。同様に（９）は２．２ｍｇ／ｍｌ（生理食塩水）の溶解度、（１１）は４．１ｍｇ／ｍｌ（生理食塩水）の溶解度、（１３）は１．８ｍｇ／ｍｌ（生理食塩水）の溶解度、（１５）は３．１ｍｇ／ｍｌ（生理食塩水）の溶解度、（２２）は４．４ｍｇ／ｍｌ（生理食塩水）の溶解度であった。
更に、パクリタキセル（米国、ＨＡＵＳＥＲ社製）１ｍｇは、１０ｍｌの生理食塩水に溶解しなかった。
【００５２】
〔実施例２４〕
マウスおよびヒト血漿中における、化合物（７）、（９）、（１１）および（１３）からのパクリタキセル遊離評価実験
実施例５で得た化合物（７）、実施例６で得た化合物（９）、実施例７で得た化合物（１１）および実施例８で得た化合物（１３）をそれぞれ生理食塩水に溶解し、パクリタキセルに換算した濃度が１２５μｇ／ｍｌとなるよう調製した。これらの溶液２０μｌをマウスおよびヒト血漿２００μｌにそれぞれ添加し、３７℃における薬物複合体からのパクリタキセル遊離量を測定した。薬学雑誌，１１４，３５１−３５５（１９９４）記載の方法に従い、血漿中からのパクリタキセル回収を行い、ＨＰＬＣにより、化合物（７）、（９）、（１１）および（１３）から血漿中に遊離したパクリタキセル量を評価した。図６および図７には、パクリタキセル遊離の経時変化を示した。その結果、薬物複合体からのパクリタキセルの遊離速度はマウスおよびヒト血漿で同じ傾向が見られた。その順序は、遊離速度の大きい順に化合物（７）＞（９）＞（１１）＞（１３）であり、これはリンカーであるアミノ酸の立体障害の大きさと相関が見られた。
【００５３】
〔実施例２５〕
抗腫瘍効果の評価実験（１）
Ｂ１６マウス黒色腫細胞５×１０６個を、Ｃ５７ＢＬ／６系の雌性マウス（６週齢）の鼠径部皮下に移植し、８日後に、被検化合物として実施例１２で得た化合物（２２）を生理食塩水に溶解した被検液、およびパクリタキセルをエタノール−クレモホールＥＬ（米国、シグマ社製）−生理食塩水に溶解した被検液を、一群７匹として尾静脈内に投与した。投与量はパクリタキセル換算で２０および５０ｍｇ／ｋｇとした。無処置群は、生理食塩水を一群１３匹として投与した。被検液投与後６日目に、マウスの腫瘍体積を測定することにより、抗腫瘍効果を判定した。
無処置群の腫瘍体積を１００としたときの、被検化合物投与群の平均腫瘍体積を表わした。腫瘍体積Ｖは、腫瘍を外部から計測し、長径ａ（ｍｍ）および短径ｂ（ｍｍ）とするとき、下式（１）により求めた。
【数１】
2006193627.tif 000008
被検液投与後６日目の、投与量と腫瘍体積との関係は、図８に示される通りであった。本発明による薬物複合体（２２）の５０ｍｇ／ｋｇ投与群の抗腫瘍効果は、パクリタキセルの５０ｍｇ／ｋｇ投与群の抗腫瘍効果と比較して、有意に優れていた。
【００５４】
〔実施例２６〕
抗腫瘍効果の評価実験（２）
Ｃｏｌｏｎ２６腫瘍細胞４％懸濁液を、Ｂａｌｂ／Ｃ系の雌性マウス（６週齢）の側腹部皮下に移植し、被検化合物として実施例１２で得た化合物（２２）を生理食塩水に溶解した被検液、およびパクリタキセルをエタノール−クレモホールＥＬ（米国、シグマ社製）−生理食塩水に溶解した被検液を、一群３匹として尾静脈内に投与した。投与量はパクリタキセル換算で５０ｍｇ／ｋｇとした。無処置群は、一群５匹とした。細胞移植後２日目に、第１回被検液を投与し、その後４日毎に計７回、被検液を尾静脈内に投与した。マウスの腫瘍体積を測定することにより、抗腫瘍効果を判定した。無処置群および被検液投与群の平均腫瘍体積の経時変化を示した。腫瘍体積Ｖは、腫瘍を外部から計測し、長径ａ（ｍｍ）および短径ｂ（ｍｍ）とするとき、前記式（１）により求めた。
被検液投与後の、腫瘍体積の経時変化は、図９に示される通りであった。本発明による薬物複合体（２２）の５０ｍｇ／ｋｇ投与群の抗腫瘍効果は、パクリタキセルの５０ｍｇ／ｋｇ投与群の抗腫瘍効果と比較して、有意に優れていた。
【００５５】
〔実施例２７〕
抗腫瘍効果の評価実験（３）
Ｃｏｌｏｎ２６腫瘍細胞４％懸濁液を、Ｂａｌｂ／Ｃ系の雌性マウス（６週齢）の側腹部皮下に移植し、被検化合物として実施例５で得た化合物（７）、実施例６で得た化合物（９）、実施例７で得た化合物（１１）、実施例８で得た化合物（１３）を生理食塩水に溶解した被検液、およびパクリタキセルをエタノール−クレモホールＥＬ（米国、シグマ社製）−生理食塩水に溶解した被検液を、一群５匹として尾静脈内に投与した。投与量はパクリタキセル換算で５０ｍｇ／ｋｇとした。無処置群は、一群９匹とした。細胞移植後２日目に、第１回被検液を投与し、その後７日毎に、被検液を尾静脈内に合計４回投与した。マウスの腫瘍体積を測定することにより、抗腫瘍効果を判定した。無処置群および被検液投与群の平均腫瘍体積の経時変化を示した。腫瘍体積Ｖは、腫瘍を外部から計測し、長径ａ（ｍｍ）および短径ｂ（ｍｍ）とするとき、前記式（１）により求めた。
被検液投与後の、腫瘍体積の経時変化は、図１０に示される通りであった。本発明による薬物複合体（７）および（９）の５０ｍｇ／ｋｇ投与群の抗腫瘍効果は、パクリタキセルの５０ｍｇ／ｋｇ投与群の抗腫瘍効果と比較して、有意に優れていた。抗腫瘍効果の強さは[化合物（７）および（９）＞（１１）＞（１３）およびパクリタキセル]の順序であった。
【００５６】
〔実施例２８〕
化合物（２５）、（２８）、（３１）、（３４）および（３７）の生理食塩水に対する溶解度
化合物（２５）、（２８）、（３１）、（３４）および（３７）をそれぞれ１０ｍｇ量り取り、０．１ｍｌの生理食塩水に加えた、加えた化合物はそれぞれ完全に溶解した。カンプトテシン換算で化合物（２５）は３．６ｍｇ／ｍｌ（生理食塩水）の溶解度であった。同様に（２８）はカンプトテシン換算で４．６ｍｇ／ｍｌ（生理食塩水）の溶解度、（３１）はデキサメタゾン換算で３．６ｍｇ／ｍｌ（生理食塩水）の溶解度、（３４）は同様にデキサメタゾン換算で４．１ｍｇ／ｍｌ（生理食塩水）の溶解度、（３７）は同様にデキサメタゾン換算で３．１ｍｇ／ｍｌ（生理食塩水）の溶解度であった。
【００５７】
〔実施例２９〕
マウス血漿中における、化合物（３１）、（３４）および（３７）からのデキサメタゾン遊離評価実験
実施例１８で得た化合物（３１）、実施例２０で得た化合物（３４）および実施例２２で得た化合物（３７）をそれぞれ生理食塩水に溶解し、デキサメタゾン換算で８０μｇ／ｍｌとなるよう調製した。これらの溶液５０μｌをマウス血漿２５０μｌにそれぞれ添加し、３７℃におけるそれぞれの薬物複合体からのデキサメタゾン遊離量を測定した。血漿中のデキサメタゾン回収並びに定量は次のようにして行った。すなわち、血漿サンプル２５０μｌに対し、２５０μlリン酸緩衝液(pH7.4)を加え、さらに内部標準として酢酸ヒドロコルチゾンを含むアセトニトリル−メタノール溶液（ＣＨ3ＣＮ／ＭｅＯＨ＝４／１、酢酸ヒドロコルチゾン濃度＝１０ｎｇ／ｍl）を３ｍｌ加えた後遠心し、（３０００ｒｐｍ、１０分、４℃）得られた上清７００μlに、蒸留水７００μlを加え、メンブランフィルター（０．４μｍ）にてろ過した後、ＨＰＬＣにて定量した。
ＨＰＬＣの条件
カラム：Asahipak HIKARISIL C18(4.6×150mm)  流速：1.0ml/min
カラム温度：２５℃
検出波長：２４０nm
移動相：Linear gradient
0min：20%アセトニトリル水溶液（20%CH3CN/H2O）
20min：50%アセトニトリル水溶液（50%CH3CN/H2O）
図１１にマウス血漿中からのデキサメタゾン遊離の経時変化を示した。薬物複合体からのデキサメタゾンの遊離速度の順序は、遊離速度の大きい順に化合物（３１）＞（３４）＞（３７）であり、これはリンカーであるアミノ酸の立体障害の大きさと相関が見られた。
【産業上の利用可能性】
【００５８】
本発明のポリエーテルは、生体組織適合性および体液適合性に優れ、更に、それらを用いた医療用材料を構成する材料全体の高い安全性が期待される。特に、本発明のポリエーテルは、生体との相互作用が極めて少なく、生体組織に認識されにくいために肝臓、脾臓、骨髄といった代謝臓器、副作用発現臓器に分布することが少なく、臓器障害や細胞毒性を引き起こす可能性が低減され、標的とする臓器に集積することが可能となる。
また、該ポリエーテルにアミノ酸やペプチドなどのリンカーを介して薬理活性を有する化合物を結合させて薬物複合体として用いた場合、これを生体内に投与した際に、生体組織に認識されずに薬物を標的組織に送達することが可能になる。薬物複合体は、優れた薬物遊離速度の制御が可能であり、しかも結合前の薬物に比べ生理食塩水に対する溶解性が極めて向上し、溶解補助剤無しでの静脈内投与を可能とする効果を発揮する。
【図面の簡単な説明】
【００５９】
【図１】実施例１の本発明の化合物（１）のＧＰＣによる溶出曲線。
【図２】実施例１の本発明の化合物（２）のＧＰＣによる溶出曲線。
【図３】実施例２の本発明の化合物（３）のＧＰＣによる溶出曲線。
【図４】実施例２の本発明の化合物（４）のＧＰＣによる溶出曲線。
【図５】実施例１の本発明の化合物（２）における毒性評価のグラフ。
【図６】実施例１２の本発明の化合物（２２）のマウス血漿中薬物遊離のグラフ。
【図７】実施例１２の本発明の化合物（２２）のヒト血漿中薬物遊離のグラフ。
【図８】実施例１２の本発明の化合物（２２）のB16に対する抗腫瘍効果を表すグラフ。
【図９】実施例１２の本発明の化合物（２２）のColon26に対する抗腫瘍効果を表すグラフ。
【図１０】実施例５の本発明の化合物（７）、実施例６の本発明の化合物（９）、実施例７の本発明の化合物（１１）、実施例８の本発明の化合物（１３）のColon26に対する抗腫瘍効果を表すグラフ。
【図１１】実施例１８の本発明の化合物（３１）、実施例２０の本発明の化合物（３４）、実施例２２の本発明の化合物（３７）のマウス血漿中薬物遊離のグラフ。
【図１】
2006193627.tif 000015
【図２】
2006193627.tif 000016
【図３】
2006193627.tif 000017
【図４】
2006193627.tif 000018
【図５】
2006193627.tif 000019
【図６】
2006193627.tif 000020
【図７】
2006193627.tif 000021
【図８】
2006193627.tif 000022
【図９】
2006193627.tif 000023
【図１０】
2006193627.tif 000024
【図１１】
2006193627.tif 000025