(57)【要約】      （修正有）【課題】ペプチド等の医薬を経口投与し、分解されることなく腸吸収させる方法を提供する。【解決手段】  一つの薬物の安定した界面活性エマルジョンあるいは分散体を、（ｉ）水相に分散される長鎖カルボン酸あるいはそのエステルもしくはアルコールの疎水性不連続相を持ち、もしくは（ｉｉ）長鎖カルボン酸あるいはそのアルコールの疎水相に分散される親水性不連続相を持つ一つのエマルジョンに一体化させることを含む薬物調製法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
炭素数１２−３６のカルボン酸、炭素数１２−３６のカルボン酸エステル（但し、該エステルにおけるカルボン酸部分は、炭素数１２−３６のカルボン酸のみから構成される）、炭素数１２−３６のカルボン酸アルコール及びこれらの混合物よりなる群から選択される少なくとも１種の疎水性物質から形成される非連続相と、親水性物質から構成される連続相を有する水中油型マイクロエマルジョンを含み、
薬物が非連続相に含まれている、
ことを特徴とする、薬物調製物。
【請求項２】
更に、界面活性剤を含む、請求項１に記載の薬物調製物。
【請求項３】
炭素数１２−３６のカルボン酸が、ｎ−ラウリン酸、ｎ−テトラデカン酸、ｎ−パルミチン酸、ラウリル酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキン酸、ベヘン酸、モンタン酸、メリシン酸、オレイン酸、ガドレイン酸、エルカ酸、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸、及びベヘノール酸よりなる群から選択される少なくとも１種である、請求項１に記載の薬物調製物。
【請求項４】
炭素数１２−３６のカルボン酸エステルが、モノステアリン酸グリセリド；モノパルミチン酸グリセリド；モノステアリン酸グリセリドとモノパルミチン酸グリセリドの混合物；モノリノール酸グリセリド；モノオレイン酸グリセリド；モノパルミチン酸グリセリド・モノステアリン酸グリセリド・モノオレイン酸グリセリドおよびモノリノール酸グリセリドの混合物；モノリノレン酸グリセリド；モノガドレイン酸グリセリド；モノパルミチン酸グリセリド・モノステアリン酸グリセリド・モノリノレン酸グリセリドおよびモノガドレイン酸グリセリド混合物；アセチル化グリセリド；プロピレングリコールモノエステル・蒸留モノグリセリド・ステアロイル乳酸ナトリウムおよびシリカの混合物；プロピレングリコールモノエステル・蒸留モノグリセリド・ステアロイル乳酸ナトリウムおよびシリカの混合物；モノおよびジクリセリドエステルの混合物；ステアロイル乳酸カルシウム；エトキシル化モノおよびジグリセリド；乳化モノおよびジグリセリド；グリセロールおよびプロピレングリコールのラクチル化カルボン酸エステル；炭素数１２−３６のカルボン酸のラクチル化エステル；炭素数１２−３６のカルボン酸のポリグリセロールエステル；炭素数１２−３６のカルボン酸のプロピレングリコールモノおよびジエステル；ステアロイル乳酸ナトリウム；モノステアリン酸ソルビタン；モノオレイン酸ソルビタン；炭素数１２−３６のカルボン酸の他のソルビタンエステル；クエン酸ステアリルモノグリセリド；ヘブタン酸ステアリル；ロウのセチルエステル；カプリル酸ステアリル；Ｃ１０−Ｃ３０コレステロール／ラボステロールエステル；およびスクロース炭素数１２−３６のカルボン酸エステルよりなる群から選択される少なくとも１種である、請求項１に記載の薬物調製物。
【請求項５】
炭素数１２−３６のカルボン酸エステルが、ステアリン塩酸、パルミチン酸塩、リシノール酸塩、オレイン酸塩、ベヘン酸塩、リシノレン酸塩、ミリスチン酸塩、およびラウリル酸塩よりなる群から選択される少なくとも１種である、請求項１に記載の薬物調製物。
【請求項６】
炭素数１２−３６のカルボン酸アルコールが、ｎ−ラウリルアルコール、ｎ−テトラデカニルアルコール、ｎ−パルミチルアルコール、ラウリルアルコール、ミリスチルアルコール、パルミチルアルコール、ステアリルアルコール、アラキルアルコール、ベヘニルアルコール、モンタニルアルコール、メリシルアルコール、オレイルアルコール、ガドレイルアルコール、エルシルアルコール、及びベヘノリルアルコールよりなる群から選択される少なくとも１種である、請求項１に記載の薬物調製物。
【請求項７】
疎水性物質の重量／重量当り０．０５〜３．０％の割合で界面活性剤を含む、請求項２に記載の薬物調製物。
【請求項８】
界面活性剤が、ラウリル硫酸ナトリウム；ポリオキシエチレンソルベート長鎖カルボン酸エステル界面活性剤；ソルビタン長鎖カルボン酸エステル界面活性剤；エチレンあるいはプロピレンオキサイドブロックコポリマー界面活性剤；ポリグリコール化グリセリド界面活性剤；オレイン酸、ステアリン酸、ラウリル酸又は他の長鎖カルボン酸のソルビタンエステル；ポロクサマー；他のソルビタンあるいはスクロース長鎖カルボン酸エステル；モノおよびジグリセリド、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリドのＰＥＧ誘導体；およびそれらの混合物よりなる群から選択される少なくとも１種である、請求項７に記載の薬物調製物。
【請求項９】
薬物が８０％以下の生物学的利用能を持つものである、請求項１に記載の薬物調製物。
【請求項１０】
薬物が１５個以下のアミノ酸よりなるポリペプチドである、請求項１に記載の薬物調製物。
【請求項１１】
薬物が１２個までのアミノ酸からなるポリペプチドである、請求項１０に記載の薬物調製物。
【請求項１２】
薬物が１，０００ダルトン以下の有機分子である、請求項１に記載の薬物調製物。
【請求項１３】
有機分子が６００ダルトン以下である、請求項１２に記載の薬物調製物。
【請求項１４】
薬物が、シクロスポリン、アンギオテンシンＩ、ＩＩ、およびＩＩＩ、エンセファリン、エンケファリン、ＡＣＴＨ、抗炎症ペプチドＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ブラジキニン、カルシトニン、コレシストキニン断片２６−３３および３０−３３、プレ／プロコレシストキニン（Ｖ−９−Ｍ）、β−エンドルフィン、ジノルフィン、ロイコキニン、ロイチナイジングホルモン放出ホルモン、ニューロキニン、ソマトスタチン、サブスタンスＰ、甲状腺放出ホルモン、バソプレシン、血小板凝集阻害体であるフィブリノーゲン受容体拮抗体（アルギニン−グリシン−アスパラギン酸含有ペプチド）成長ホルモン放出ペプチド（ＧＨＲＰ）、インシュリン、ＬＨ−ＰＲリリーサーおよび阻害体、エンドセリン、コレシストキニン、心房ナトリウム排泄因子、ガストリン、サイトプロテクティブ、ＭＳＨ修飾物質、エラスターゼあるいはレニン阻害体成長因子あるいはサイトカイン、ＨＩＶプロテアーゼ阻害体、カルバマゼピン、グリセオフルビン、アンギオテンシン転換酸素阻害体、フルタミド、ニフェジピン、アシクロビル、ガンシクロビル、インドメタシン、ナプロキセン、エストロゲン、テストステロン、ステロイド、フェニトイン、エルゴタミン、およびカンナビノイドよりなる群から選択される少なくとも１種である、請求項１に記載の薬物調製物。
【請求項１５】
マイクロエマルジョンが腸溶剤皮物質を含むカプセルに被包されている、請求項１に記載の薬物調製物。
【請求項１６】
マイクロエマルジョンが酸性水性環境に溶解するカプセルに被包されている、請求項１に記載の薬物調製物。
【請求項１７】
オレイン酸、ガドレイン酸、エルカ酸、リノール酸、リノレン酸、リシノール酸、アラキドン酸、これらの酸のグリセリルエステル、オレイルアルコール、及びｄ−アルファトコフェロールポリエチレングリコール１０００琥珀酸塩よりなる群から選択される少なくとも１種の疎水性物質から形成される非連続相と、親水性物質から構成される連続相を有する水中油型マイクロエマルジョンを含み、
該水中油型マイクロエマルジョンは、ポロクサマー１２４、ポリグリコール化グリセリド、ソルビタンラウレート及びポリソルベート８０よりなる群から選択される少なくとも１種の界面活性剤を含み、
薬物が非連続相に含まれている、
ことを特徴とする、薬物調製物。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
経口で投与される薬物の能力は、いくつかの要素に依存する。薬物はそれが生物の膜を通して運ばれ、あるいは活性移送機構に適しているためには消化液に溶解するものでなければならない。非常に小さな粒子（３００ナノメーター以下のもの）は、腸管にあるパイエル板システムを経由するリンパ系を通じて吸収することが出来る。しかしこの機構は大きな用量の薬物を体循環に吸収させることは出来ない。
問題は、薬物を溶解させることが困難であることから生じる。従来の薬物の場合において、いくつかのものは相対的に消化液には溶解しない。溶解度の範囲が低い場合には、これは不完全およびもしくは迷走性吸収を起こす。もしも溶解度が低い場合、その時吸収はほぼ間違いなく患者内および患者間ベースで迷走的になるであろう。ペプチド薬物は水溶性であり、これらは非溶解性薬物は問題をはらむことはない。従来の薬物のように、非溶解性ペプチドは典型的に不完全あるいは低い範囲の吸収および迷走性吸収あるいは生物学的利用能を示す。
ペプチドを経口で運ぶ能力においての主要な問題は、加水分解およびタンパク質分解酵素により薬物が分解することである。この障害を除去するためには、二つの基本的アプローチがある。第１のものは「腸溶」剤皮であり、これは腸管で見られるように薬物を中性からアルカリ性ｐＨ（通常はｐＨ６乃至８）の際にのみ放出するようにし、ペプチドが胃液には露出されないようにするものである。しかしこのアプローチのみではペプチドを保護するのに十分ではない。というのは、タンパク質分解酵素は上部腸管道に存在し、薬物の分解がやはり起こり得るからである。他のアプローチはペプチドを疎水性物質と一体化し、水液がシステムに浸透出来ないようにさせることである。腸管内で徐々に破壊されあるいはゆっくり溶解薬物が放出されることの可能な疎水性物質を選択することが重要である。このようにしてペプチドはタンパク質分解酵素から保護される。加えてこの２種のアプローチを組合わせることも可能である。例えば腸溶剤皮アプローチとの関連を参照されたい。
しかし前記に概略したアプローチには固有の障害がある。まず多くの薬物はあまりにもゆっくりと疎水性システムから放出される。更にある種のペプチドは疎水性相に入り込み、そのシステムから完全には放出されない。このようにして、薬物放出の速度と範囲はいずれの薬物送達システムにおいてもきわめて重要な要素であり、多くのペプチド薬物にとってはより重要なものとなる。
この発明に従って、一つの疎水性物質よりなる薬物担体エマルジョンと一体化される薬剤を含む一つの薬物組成物が提供され、この疎水性物質は、それで乳化された長鎖カルボン酸、長鎖カルボン酸エステル、長鎖カルボン酸アルコールおよびこれらの混合物よりなるグループから選択されたものである。
この組成物は薬物を便利に送達するために使用される。広範囲の活性剤がこの組成物に投与されるが、それには抗生物質、抗菌剤、抗腫瘍剤、抗ウイルス剤、心臓血管腎臓薬、免疫抑制剤および免疫刺激剤、および中枢神経系活性剤などが含まれるが、とりわけペプチドにとっては価値が大きい。通常の（マクロ）エマルジョンと比較すると、マイクロエマルジョンは高エネルギーを投入することなくたやすくかつ自発的に形成し、スケールアップも円滑である。それは貯蔵寿命が長くて安定しており、半透明でもあるため分光分析でたやすくモニターされる。それは粘度が低くて容易に移送し混合出来る。薬物の可溶化、酸素の加水分解、および従ってとりわけペプチドに対する経口生物学的利用能が高められる。
一つの実施例において、疎水性物質は非連続的相を形成し、また親水性物質は連続的相を形成し、後者においては疎水性物質は乳化される（水中油型）。疎水性非連続相および親水性連続相はそれぞれ独自に固体、半固体、あるいは液体であり得る。薬剤は疎水性物質、親水性物質あるいは疎水性物質および親水性物質双方に分散されるかもしくはそれと一体化される。望ましくは、担体エマルジョンはマイクロエマルジョンである。
も一つの実施例において、疎水性物質は連続相を形成し、親水性物質が非連続相を形成し、後者において疎水性物質は（水中にある油は）乳化される。疎水性非連続相および親水性連続相はそれぞれ独自に固体、半固体あるいは液体であり得る。薬剤は疎水性物質、親水性物質あるいは疎水性物質および親水性物質双方に分散されるかもしくはそれと一体化される。望ましくは担体エマルジョンはマイクロエマルジョンである。この実施例において、この発明は、一つの油相（長鎖カルボン酸あるいはそのエステルもしくはアルコール）を含む望ましくはマイクロエマルジョンである油中水型エマルジョン、界面活性剤（ポロクサマーなど）および薬物を含む水相よりなる薬物調製法を提供する。油中水型マイクロエマルジョンを使用する利点は、全体として油性環境の下で比較的大量の極性溶質を溶解する能力を持ち、ペプチドおよびタンパク質薬物分子の経口送達システムを創り出すことにある。
図１は実施例８に記載される実験結果を示す。
図２は実施例９に記載される実験結果を示す。
図３は実施例１０に記載される実験結果を示す。
図４は実施例１１に記載される実験結果を示す。
図５は実施例１２に記載される実験結果を示す。
エマルジョンは少なくとも２種の非混和性液相、つまり疎水性相および親水性相を含む分散系である。このエマルジョンは分散した相、分散相および乳化剤あるいは界面活性剤よりなる。ただし疎水性物質が「自己乳化性」エステルであり、これにより、別個の乳化剤がなくてもエマルジョンを生産することが可能な場合はこの限りではない。通常２種の非混和性液の一つは油であり、一方他のものは水である。どちらの相が分散相になるかは２種の液相の相対的な量、およびどの乳化剤が選択されるかに依存している。従って油が水相の全体にわたって液滴として分散されるエマルジョンは水中油型（Ｏ／Ｗ）エマルジョンであり、逆の場合は油中水型となる。「コロイド状」という用語は分散相が極微粒子のものであり、通常はサイズが約１ｍｍ以下のエマルジョンをいう。「マイクロコロイド状」は分散粒子のサイズが通常約１００μｍもしくはそれ以下であるエマルジョンである。副界面活性剤もマイクロコロイドの共通の成分であり、単に最初の界面活性剤に加えて含まれる界面活性剤であることを意味する。
「マイクロエマルジョン」は光学的には等方性であり、熱力学あるいは運動学的には安定した液エマルジョンである。マイクロエマルジョンは油相、水相、界面活性剤および場合によっては副界面活性剤よりなる。それは均質であり、熱力学的に安定し、約２００Åの均一な液滴サイズを有し光学的に透明であるため、経口薬物送達システムにとっては理想的である。油中水型マイクロエマルジョンは、とりわけ小さい水相液滴を有しており、均一に連続的油相に分散される。従って、広範囲のペプチド溶解性にわたって、ペプチドは消化液に溶けているタンパク質分解酵素から保護される。一般に、ペプチドの化学構造が指図するものとして、ペプチドがほとんどではないとしても少なくともいくらかは水溶性であり、従ってそれは油中水型マイクロエマルジョンシステムの水液滴の内部もしくは液滴表面のきわめて近くに位置することが理解される。かくしてマイクロエマルジョンの外部油相は送達システムを経由してタンパク質分解酵素の移染を妨げる。マイクロエマルジョンの外部油相は、更に腸細胞基質への一体化を可能にし、かくしてそれを通じてペプチド薬物が通過出来る（パラ細胞位あるいはトランス細胞位のいずれかでの）チャネルを創り出す。
従って薬物が放出されるように腸で浸食しあるいはゆっくと溶解する、もしくは腸細胞基質と一体化出来る疎水性物質を選択することが重要である。加えて、例えば腸溶剤皮と関連して２種のアプローチを組合せることも可能である。
この発明の水中油型エマルジョンは、一般に高温（７０−８０℃）の疎水性相（重量で小さい方）を高温（７０−８０℃）の親水性相に加えて界面活性剤の転移を押し進めて一体化していない分散相粒子の分散エマルジョンを形成することにより作られる。これは適切なシャーの下で処理された際にエマルジョンを生産する。薬物は、水性媒体に殆ど解けない有機分子である場合には疎水性物質を加えられる。エマルジョンが形成され、薬物がペプチドである場合にはエマルジョンが冷却された後に薬物が加えられる。エマルジョン製剤で薬物は次いでソフトあるいはハードゼラチンカプセル、錠剤、あるいは他の経口用量形態のものに充填される。
この発明に従って、ある種の疎水性物質は、疎水性物質の連続相で乳化された場合にペプチド薬物および水性媒体に殆ど溶解しない薬物の経口送達に関し吸収能力を高めたものとして提供される。この発明に従って、これらの物質は長鎖カルボン酸、長鎖カルボン酸エステル、長鎖カルボン酸アルコールおよびこれらの混合物よりなるグループから選択される。
更にある種の物質は、この発明に従って油中水型マイクロエマルジョンを形成するため組合せられた時には、吸収能力を高める。これらの物質は長鎖脂肪酸あるいはそのエステルもしくはアルコールよりなる油相、主として水よりなる水相、および主として非イオン系ブロックコポリマー型の界面活性剤であり、これらは混合されて油中水型マイクロエマルジョンを形成する。
長鎖カルボン酸は一般に４−３６個の炭素原子、望ましくは少なくとも１２個の炭素原子、もっとも望ましくは１２乃至２２個の炭素原子を含む。ある場合には、この炭素鎖は完全に飽和して直鎖であり、一方他のものは１個以上の二重結合を有している。これは飽和、不飽和、分岐あるいは直鎖の炭素鎖であるいくつかのものは３炭素環あるいはヒドロキシル基を有する。化合物は界面活性ではない。それらは水に殆ど溶解せず、酸鎖が長くなれば二重結合は少なくなり、水にはより溶けなくなる。カルボン酸基は極性であり中性ｐＨでイオン化される。これは水中で短鎖の酸の溶解度がきわめて小さいことを説明するものとなる。
このような酸の例は、Ｃ１６からＣ２２までで不飽和結合（更に分岐）が３個までのものである。飽和直鎖酸の例は、ｎ−ラウリン酸、ｎ−テトラデカン酸、ｎ−パルミチン酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリル酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキン酸、ベヘン酸、モンタン酸、およびメリシン酸である。更に不飽和モノオレフィン直鎖モノカルボン酸も有用である。この例としてはオレイン酸、ガドレイン酸およびエルカ酸がある。また不飽和（ポリオレフィン）直鎖モノカルボン酸も有用である。これらのものの例は、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸およびベヘノール酸である。有用な分岐酸は、例えば酒石酸ジアセチルを含む。
長鎖カルボン酸エステルの例は、必ずしもそれに限定されないが以下のグループからのものを含む：モノステアリン酸グリセリド、モノパルミチン酸グリセリド、モノステアリン酸グリセリドとモノパルミチン酸グリセリドの混合物（マイバプレックス６００，イーストマン・ファインケミカル・カンパニー）；モノリノール酸グリセリド、モノオレイン酸グリセリド；モノパルミチン酸グリセリド・モノステアリン酸グリセリド・モノオレイン酸グリセリドおよびモノリノール酸グリセリドの混合物（マイベロール１８−９２，イーストマン・ファインケミカル・カンパニー）；モノリノレン酸グリセリド、モノガドレイン酸グリセリド；モノパルミチン酸グリセリド・モノステアリン酸グリセリド・モノオレイン酸グリセリド・モノリノール酸グリセリド・モノリノレン酸グリセリドおよびモノガドレイン酸グリセリドの混合物（マイベロール１８−９９，イーストマン・ファインケミカル・カンパニー）；蒸留アセチル化モノグリセリド（マイバセット５−０７，７−０７，および９−４５，イーストマン・ファインケミカル・カンパニー）などのアセチル化グリセリド；プロピレングリコールモノエステル・蒸留モノグリセリド・ラクチル化ステアロイルナトリウムおよびシリカの混合物（マイバテクスＴＬ，イーストマン・ファインケミカル・カンパニー）；ｄ−アルファトコフェロールポリエチレングリコール１０００琥珀酸塩（ビタミンＥ  ＴＰＧＳ，イーストマン・ファインケミカル・カンパニー）；アトマル（ウイトコ・ケミカルのハムコ・ケミカル・ディビジョン）のようなモノおよびジグリセリドの混合物；ラクチル化ステアロイルカルシウム，エトキシル化モノおよびジグリセリド，乳酸化モノおよびジグリセリド、グリセロールおよびプロピレングリコールのラクチル化カルボン酸エステル、長鎖カルボン酸のラクチルエステル、長鎖カルボン酸のポリグリセロールエステル、長鎖カルボン酸のプロピレングリコールモノおよびジエステル、モノステアリン酸ソルビタン、モノオレイン酸ソルビタン、長鎖カルボン酸の他のソルビタンエステル、琥珀酸モノグリセリド、クエン酸モノグリセリルステアリル、ヘプタン酸ステアリル、ロウのセチルエステル、カプリル酸ステアリル、Ｃ１０−Ｃ３０コレステロール／ラボステロールエステル、およびスクロース長鎖カルボン酸エステル。
自己乳化長鎖カルボン酸エステルの例は、ステアリン酸塩、パルミチン酸塩、リシノール酸塩、オレイン酸塩、ベヘン酸塩、リシノレイン酸塩、ミリスチン酸塩、ラウリル酸塩、カプリル酸塩、およびカプロン酸塩のグループからのものを含む。
この発明で有用なアルコール類は前記に例示されたカルボン酸のヒドロキシル形態およびステアリルアルコールで例示される。
カルボン酸／アルコール相への添加剤は、室温で固形を創り出すのに使用出来る。この添加は、腸溶剤皮をよりよく利用する機会を産む。このような添加剤の例は、ベヘン酸グリセロール、セチルアルコール、ステアリン酸；ステアリン酸ソルビタン、イソステアリン酸ソルビタンなどのソルビタンエステル誘導体、ポリエチレングリコール１０００から６０００などである。
使用される保護あるいは持続放出剤皮の種類は、必ずしもそれに限定されないが、以下のモノを含む：エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースおよびメタクリル酸ならびにエタクリル酸のエステル（ユードラジットＲＬ，ＲＳ，およびＮＥポリマー製品、ドイツ、ダルムシュタット、ローム・プファルマ社）。腸溶保護物質あるいは剤皮は、例えばフタル酸セルロースアセテート、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、フタル酸エチルビニルアセテート、フタル酸ポリビニルアセテートおよびメタクリル酸ならびにエタクリル酸のエステル類（ユードラジットＳ，ユードラジットＬおよびユードラジットＥ３０Ｄ、ドイツ、ダルムシュタット、ローム・プファルマ社）。
この発明の組成物あるいは調製物は、更に界面活性剤あるいはその２種以上の混合物を含むことが出来る。界面活性剤は疎水性尾部および親水性頭部よりなる両親媒性分子である。これらの分子は親水性および疎水性の双方の異なった形質を持っている。疎水性尾部は８乃至１８個の炭素原子を持つ炭化水素あるいは過フッ化炭化水素であり得る。それは例えば、石鹸あるいは洗剤のような長鎖分子である。界面活性剤は親水性／疎水性（油中水）界面で累積し、界面張力を下げる。界面活性剤あるいは表面活性剤は石鹸および洗剤などの長鎖分子であり、それは親水性／疎水性（油中水）界面で累積し、界面での界面張力を下げる。減少界面張力の一つの効果はエマルジョンの安定性である。これは極性および非極性基を持つ分子が配向され、炭化水素尾部でそれ自身を疎水性相に包埋し、また親水性頭部が親水性相に突出するためである。疎水性組成物あるいは調製物の他の成分が表面活性剤のような界面活性剤を含む場合には、疎水性組成物を重量／重量あたり約０．０５％乃至５０．０％、望ましくは１．０％乃至３．０％（重量／重量）の量で通常は存在する。望ましい表面活性剤は、例えば以下のものを含む：トゥイーン（ソルビン酸ポリオキシエチレン）表面活性剤族（ＩＣＩ，デラウェア、ウイルミントン）、スパン（ソルビタン長鎖カルボン酸エステル）表面活性剤族（ＩＣＩ）、プルロニック（エチレンもしくはプロピレンオキサイドブロックコポリマー）表面活性剤族（ＢＡＳＦ，ニュージャージー、パーシッパニー）、ラブラソル、ラブラフィルおよびラブラファク（それぞれポリグリコール化グリセリド）表面活性剤族（ガッペ．フォッセ、フランス、サンプリースト）、オレイン酸、ステアリン酸、ラウリル酸あるいは他の長鎖カルボン酸のソルビタンエステル、ポロクサマー（ポリエチレン−ポリプロピレングリコールブロックコポリマー）、他のソルビタンあるいはスクロース長鎖カルボン酸エステル、モノおよびジグリセリド、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリドのＰＥＧ誘導体およびそれらの混合物。
この発明の薬剤調製物に個別にあるいは組合せられて一体化される薬物は、約８０％以下の生物学的利用能を有するものである。ここで使用される「生物学的利用能」という用語は経口投与の薬物の体系的な吸収速度および範囲を意味する。
一つの見地において、薬物は約１５個以下のアミノ酸を持つポリペプチドである。その例としては以下のものを含む：シクロスポリン、アンギオテンシンＩ、ＩＩ、およびＩＩＩ、エンセファリン、エンケファリンおよびその類似物、ＡＣＴＨ（副腎皮質刺激ホルモン）、抗炎症ペプチドＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ブラジキニン、カルシトニン、コレシスチキニン（ＣＣＫ）断片２６−３３および３０−３３、プレ／プロＣＣＫ（Ｖ−９−Ｍ）、βエンドルフィン、ジノルフィン、タイコキニン、ロイチナイジングホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、ニューロキニン（例えばニューロキニンＡ）、ソマトスタチン、サブスタンスＰ、甲状腺放出ホルモン（ＴＲＡ）、バソプレミン、フィブリノーゲン受容体拮抗阻害体（アルギニン−グリシン−アスパラギン酸含有ペプチド）（血小板凝集阻害体）、成長ホルモン放出ペプチド（ＧＨＲＰ）、インシュリンＬＨ−ＲＨ解発体および阻害体、エンドセリン、心房ナトリウム排泄因子、ガストリン、サイトプロテクティブ（ｃｙｔｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅｓ）、ＭＳＨ修飾物質、あるいはエラスターゼもしくは成長因子およびサイトカイン、レニン阻害体、およびＨＩＶプロテアーゼ阻害体。
も一つの見地において、薬物は水性媒体に殆ど溶けない有機分子である。これらの有機分子は通常約１，０００ダルトン以下、また通常約６００ダルトン以下の分子量（ｍ．Ｗ．）を持つ。その例としては以下のものがある：カルマバゼピン、グリセオフルビン、アンギオテンシン転換酸素阻害体、フルタミド、ニフェジピン、アシクロビル、ガンシクロビル、インドメタシン、ナプロキセン、エストロゲン、テストステロン、ステロイド、エルゴタミンおよびカンナビノイド。
これらの分類基準に合致する望ましい薬物は、必ずしもそれに限定されないが、アンギオテンシンＩ、ＩＩおよびＩＩＩ、ＡＣＴＨ、抗炎症ペプチド１、２および３、ブラジキニン、シクロスポリン、カルシトニン、ＣＣＫ断片２６−３３および３０−３３、プレ−プロ−ＣＣＫ（Ｖ−９−Ｍ）、ベータエンドルフィン、ジノルフィン、ロイコキニン、ＬＨＲＨ、ニューロキニンＡ、ソマトスタチン、サブスタンスＰ、ＴＲＨ、バソプレシン、エンケファリン類似物エビラチド（ｅｂｉｒａｔｉｄｅ）、ガラニン、および成長ホルモン放出ホルモンを含む。
この発明に従って、薬物は、半固形軟膏およびローションに使用される従来の混合装置およびホモジェナイザを使用し、クリームおよびエマルジョンのような乳化製品は共通の速度で攪拌してマイクロエマルジョンに組み込まれる。使用される一般の設備の例として、プロペラあるいはタービン、ミキサ、ホモジェナイザ、コロイドミル、超音波ミキサおよびマイクロフリュイダイザがある。混合装置のブランド名の例は、リーケトル、ゴーランミキサおよびシュテファンである。攪拌のシヤーは安定した分散を形成するのに十分でなければならないが、薬物の分解を生じるほど大きいものであってはならない。シヤーの強さは１００−５００オングストロームにわたる直径を持つ凝集物を形成する。適切なホモジナイザはシルバーソン、マイクロメディクス，インコーポレイテッドおよびアルデ・バリンコ、ＡＰＶクレパコで利用出来る。スチーブンおよびフリマ・ミキサーも同じく泡形成を妨げるために適切な真空を創り出すのに使用出来る。ｐＨ、粘度、比重および凝集物のサイズをモニターし評価することが必要である。
これらに装置を利用して、疎水性物質内（水中油型実施例）での薬物の混合は、スプレー凝固あるいは「噴射造粒」により例えばビードあるいは球体のような粒子を形成する。このプロセスはスプレーノズルを使用し、それが物質をクーリングタワーあるいはチャンバに噴霧する。物質がスプレーされると、界面張力により均一な球体ビードが形成される。ビードがクーリングチャンバを落下すると、それは固化し安定した無傷球体となる。
粒子は一般に０．５ミクロンから１００ミクロンの粒径を持つ。球体のサイズを出来る限り小さくし、もっとも望ましくは１０ミクロン以下にすることである。場合によっては、粒子は粒子からの薬物放出の速度を修飾するために持続放出被覆およびもしくは腸溶剤皮で被覆される。
粒子は追加の賦形剤と一緒にもしくは単独でハードゼラチンカプセルに組み込まれ得る。カプセル形成に加えられる典型的な賦形剤は、必ずしもそれに限定されないが以下のものを含む：フィラー、例えば微結晶セルロース、ダイズ多糖類、二水和リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、ラクトース、スクロース、ソルビトール、あるいは他のいずれかの不活性フィラー。加えてフロー助成のため、燻蒸シリカ、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムあるいは他のいずれかの粉にフローを付与する物質がある。これらは疎水性があるため、粒子は滑剤を必要としないが、もし必要とあればポリエチレングリコール、ロイシン、ベヘン酸グリセリド、ステアリン酸マグネシウムあるいはステアリン酸カルシウムを加えることも出来る。
粒子はまた錠剤に組み込まれ、とりわけ錠剤基質に組み込まれることにより経口摂取後急速に粒子を分散させる。これら粒子をそのような錠剤に組み込むために、粒子を受け入れるが錠剤形成時に破壊されないようにフィラー／結合剤が加えられねばならない。この目的に最適な物質は、必ずしもそれに限定されないが、微結晶セルロース（アビセル）、ダイズ多糖類（エムコソイ）、前ゼラチン化でんぷん（スターチ１５００，ナショナル１５５１）、およびポリエチレングリコール（カーボワックス）を含む。物質は５−７５％（Ｗ／Ｗ）の範囲で、望ましくは２５−５０％（Ｗ／Ｗ）の範囲で存在するものとする。
加えて、一度錠剤を摂取すると粒子を分散するために錠剤分解物質が加えられる。適切な錠剤分解物質は必ずしもそれに限定されないが、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（Ａｃ−Ｄｉ−Ｓｏｌ）、グリコール酸でんぷんナトリウム（エクスプロタブ、プリモジェル）、および架橋ポリビニルピロリドン（プラスドンＸＬ）である。これらの物質は３−１５％（Ｗ／Ｗ）、望ましくは５−１０％（Ｗ／Ｗ）の範囲で存在するものとする。
適当なタブレット形成を確実なものとするために錠剤が加えられるが、これには必ずしもそれに限定されないが、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、ポリエチレングリコール、ロイシン、ベヘン酸グリセリド、および水素添加植物油が含まれる。これらの滑剤は０．１−１０％（Ｗ／Ｗ）、望ましくは０．３−３．０％（Ｗ／Ｗ）の範囲で存在するものとする。
錠剤は例えば以下のように形成される。粒子はアビセル、錠剤分解物質、および滑剤と共にブレンダーに導入され、物質混合物を供するように一定時間混合され、次いで錠剤が圧縮される錠剤プレスのホッパに入れられる。使用される圧縮力は錠剤形成に適したものであるがビードあるいは剤皮を破砕するものであってはならない。
カプセルあるいは錠剤はまた腸溶被覆される。粒子が腸溶被覆（ｐＨ感受性）され胃で放出されるか、もしくはカプセルあるいは錠剤が腸溶被覆（これにより粒子は腸で放出）されるが、後者の場合には粒子はそのように被覆される必要はない。粒子上で持続性放出被覆のみを利用するためには、同じく腸溶剤皮カプセルあるいは錠剤を必要とする。ここでは三つのアプローチがある。まず、腸溶剤皮カプセルでは未被覆疎水性粒子の場合である。第２は腸溶剤皮カプセルあるいは錠剤内での持続性放出被覆粒子の場合である。第３としては通常のソフトゼラチンカプセルあるいは未被覆錠剤内に封入された腸溶剤皮粒子がある。
カプセルは更にカプセルを腸溶被覆して胃の保護をするように加工される。カプセル内容物が胃腸環境で放出される際、それは消化液で自発的にマイクロコロイドエマルジョンを形成する。消化液は水相の役割を果たすものとなる。
マイクロエマルジョンは、一般に水相、油相、および表面活性剤を加えることによって最適な器および混合で形成される。成分のいずれかが固体であれば、それは液相に加えられて可溶となり加熱で溶解する。例えば表面活性剤が固体であり、それが油相に可溶であるなら、それは完全に溶解することになり、次いで水相が続く、などである。一方表面活性剤が水相に可溶であれば、それはまず水相に加えられ、完全に溶解し、油相がそれに続くことになる。前記の適切な混合装置はこの目的のために使用出来る。
水中油型エマルジョンベースシステムは、薬物が前記の通り疎水性物質内に分散し、水相が表面活性剤あるいは自己乳化疎水性長鎖カルボン酸エステルの存在下で加えられねばならないことを必要とする。最適なシヤーの下でこの方法はマイクロエマルジョンを形成する。このエマルジョンはソフトあるいはハードゼラチンカプセルに注入される。カプセルは更にカプセルを腸溶被覆することで胃の保護をするように加工される。
実施例１−７は、この発明の水中油型実施例を説明する組成を記述する。
実施例１
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各層は成分は別個に７０−８０℃まで加熱される。Ｂ相はＡ相に加えられ、混合は適切な混合装置で行われる。混合物は次いで室温にまで冷却される。生成エマルジョンはいずれかの経口送達用量形態にいつでも組み込まれる用意が出来ている。
実施例２
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手順は実施例１に記述されたものと同じである。
実施例３
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手順は実施例１に記述されたものと同じである。
実施例４
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手順は実施例１に記述されたものと同じである。
実施例５
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Ａ相およびＢ相が一緒に混和され、次いでＣからＥまでが順に係りなく加えられ攪拌される。
実施例６
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成分ＢおよびＣは４０℃以下で加熱され混和される。成分Ａが次いで加えられる。次いで成分Ｄが前記のものに加えられ、生成する混合物は成分Ｅに７０−８０℃で加えられる。これが次いで冷却しながら混合される。
実施例７
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Ａ相がＤ相に溶解され、次いで他の成分がゆっくり攪拌しながら加えられる。
実施例８−１２はこの発明の油中水型実施例を説明し、モデルペプチドＤＡＧＯエンケファリンを使用してＣａｃｏ−２細胞を横断する生体外送達強化を示す組成を記述する。
Ｃａｃｏ−２細胞の調製
腸管上皮の生体外モデル、Ｃａｃｏ−２ヒト結腸癌細胞系が予備検定システムとして使用される。これらの細胞は培養で分化し、通常の腸管上皮のバリア性を持つ密集単層を形成する。細胞は別個の接近可能なごく小さい基部コンパートメントを持つ輸送系の透過膜上で成長する。
分化、バリア形成、およびグリコースの活性輸送の時間経過が測定された。細胞は電子顕微鏡検査、酸素検定、およびキレート化によるカルシウム従属接合部の可逆開口で示されるように、細胞間の刷子縁および堅い接合部を形成することが判明した。標識ペプチドの輸送は時間でルミナルコンパートメントから基部コンパートメントまで測定される。マイクロエマルジョンは生理緩衝液対水相を使って調合され、細胞単層のルミナル面に使用された。ペプチドの外観が計量され、平方センチ当り時間当りの輸送パーセントが計数され、緩衝液のみの場合と比較される。
実施例８
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適当なコンテナ内で前記の適切な混合装置の一つを使い光学的に透明な溶液を形成するために成分を十分に混合する。ＤＡＧＯエンケファリン１０ｍＭを加え、溶液をＣａｃｏ−２細胞に加える。この結果は図１に示される。
実施例９
2006022112.tif 000010
適当なコンテナ内で前記の適切な混合装置の一つを使い光学的に透明な溶液を形成するために成分を十分に混合する。ＤＡＧＯエンケファリン１０ｍＭを加え、溶液をＣａｃｏ−２細胞に加える。この結果は図２に示される。
実施例１０
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適当なコンテナ内で前記の適切な混合装置の一つを使い光学的に透明な溶液を形成するために成分を十分に混合する。ＤＡＧＯエンケファリン１０ｍＭを加え、溶液をＣａｃｏ−２細胞に加える。この結果は図３に示される。
実施例１１
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一般手順
適当なコンテナ内で５０−８０℃でリノール酸の中でベヘン酸を融解する。４０℃に冷却し、残りの成分を十分に混合する。ＤＡＧＯエンケファリン１０ｍＭを加え、溶液をＣａｃｏ−２細胞に加える。このマイクロエマルジョンは室温で固体である。この結果は図４に示される。
実施例１２
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一般手順
適当なコンテナ内で前記の適切な混合装置の一つを使い光学的に透明な溶液を形成するために成分を十分に混合する。ＤＡＧＯエンケファリン１０ｍＭを加え、溶液をＣａｃｏ−２細胞に加える。この結果は図５に示される。
実施例１３
Ｃａｃｏ−２細胞を横断するペプチド輸送のためのプルロニックＬ４４／脂肪酸あるいはアルコール／ハンクマイクロエマルジョンシステム
表面活性剤としてのプルロニックＬ４４、水相としてのハンク緩衝液およびいくつかの可能な油相：すなわちオレイルアルコール、オレイン酸およびリノール酸を含むマイクロエマルジョンシステムの組成が準備された。
下記の物質で組成を準備するのに受け入れられるものとして使用された：ポリソルベート２０、６０および８０（トウィーン２０、６０および８０、デラウェア、ウイルミントン、ＩＣＩサーファクタンツ社）；モノオレイン酸グリセリド／プロピレングリコール混合物（アーラセル１８６、デラウェア、ウイルミントン、ＩＣＩサーファクタンツ社）；モノオレイン酸グリセリド（アルドＭＯ、ニュージャージー、フェア  ローン、ロンザ・スペシアリティ・ケミカルズ）；モノオレイン酸ソルビタン（クリル４、ニュージャージ、パーシッパニ、クローダ社）；オレイルアルコール（ベルギー、ギール、ジャンセン・ケミカル社）；およびリノール酸（エマーソル３１５、ヘンケル社）。
ペプチド送達に関してマイクロエマルジョン賦形剤にポリソルベート表面活性剤クラスを利用しようと努力して、多種多様な組成が検討された。３種のＩＣＩ表面活性剤トウィーン２０、６０および８０が補助界面活性剤のある場合およびない場合で溶液およびマイクロエマルジョンシステムに使用された。以下に用意された組成が提示される。
トウィーン８０，アーラセル１８６、オレイルアルコールおよび蒸留水とハンクス緩衝液の対応する乳化剤（４部のトウィヘン８０／１部のアーラセル１８６）溶液が準備される。表１を参照されたい。
【表１】
2006022112.tif 000014
ハンクス緩衝液で乳化剤の割合の大きいもの（４部のトウィーン８０／１部のアーラセル１８６）も用意された。表２参照。
【表２】
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トウィーン８０，アーラセル１８６およびオレイルアルコールで構成される無水マイクロエマルジョンシステムのための組成も用意された。表３参照。
【表３】
2006022112.tif 000016
ハンクス緩衝液でそれぞれｐＨ３．５および６．５，７．０であるトウィーン２０，６０および８０の１０％溶液の組成が用意された。この場合これに組み込まれたペプチドは１０μＭのパソプレシンである。表４参照。
【表４】
2006022112.tif 000017
トウィーン２０，アーラセル１８６およびオレイルアルコールで構成される無水マイクロエマルジョンシステムの組成。表５参照。
【表５】
2006022112.tif 000018
リノール酸を油相として含むトウィーン２０／スパン２０のマイクロエマルジョン組成も用意された。表６参照。
【表６】
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リノール酸、オレイン酸あるいはオレインアルコールを含むトウィーン２０／スパン２０マイクロエマルジョン組成も用意された。表７参照。
【表７】
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３種の追加マイクロエマルジョン組成も用意された。表８参照。
【表８】
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トウィーン２０を用いる追加の組成への努力で、スパン２０が補助的界面活性剤である一つのマイクロエマルジョンに導かれた。スパン２０、つまりモノラウリン酸ソルビタンは理想的な補助界面活性剤として行動する。この新しいマイクロエマルジョンシステムの油相もリノール酸あるいはオレイン酸に転換され、これらは他の賦形剤でペプチド油相を促進するものとして知られている。ハンクス緩衝液は水相であり、リノール酸、オレイン酸あるいはオレイルアルコールは油相である。
実施例１４
経口ペプチド送達におけるポリソルベート界面活性剤システムおよびマイクロエマルジョン
主な研究イニシアチブはＣａｃｏ−２単相を横切るペプチド油相を増加させるシステムを選別し確認することであった。探究されこのような一つのシステムは、界面活性剤プルロニックＬ４４を含む。この界面活性剤を用いていくつかのマイクロエマルジョンシステムの組成が開発された。この実施例は、これらのシステムを要約する。
下記の物質が組成を用意するために受け入れられるものとして使用された：プルロニックＬ４４（ニュージャージー、パーシッパニー、ＢＡＳＦ）：オレイルアルコール（ベルギー、ギール、ジャンセン・ケミカ）；オレイン酸（エマーソル２２１、オハイオ、シンシナティ、エメリー・グループ、ヘンケル）；リノール酸（エマーソル３１５、オハイオ、シンシナティ、エメリーグループ、ヘンケル）；およびハンクス緩衝液（メディアテク、セルグロ）。
下記の表は、油相実験の使用のために用意された組成を列挙する。これらの表は、それが適切であるならば成分、量およびｐＨについて詳細な情報を提供する。
【表９】
2006022112.tif 000022
【表１０】
2006022112.tif 000023
【表１１】
2006022112.tif 000024
【表１２】
2006022112.tif 000025
【表１３】
2006022112.tif 000026
【表１４】
2006022112.tif 000027
【表１５】
2006022112.tif 000028
【表１６】
2006022112.tif 000029
実施例  １５
プルロニックＬ１４４／リノール酸／ハンクス緩衝液マイクロエマルジョンシステム
下記の物質は、組成を用意するために受け取るべきものとして使用された：プルロニック（ニュージャージー、パーシッパニー、ＢＡＳＦ；リノール酸（エマーソル３１５，オハイオ，シンシナティ、エメリー・グループ、ヘンケル）；オレイン酸（エマーソル２２１，オハイオ、シンシナティ、エメリー・グループ、ヘンケル）；リノレン酸（ウイスコンシン、ミルウォーキー、オルトリッチ）；ハンクス緩衝液（メディアテク、セルグロ）；エタノール（アルコール、脱水ＵＳＰ、アイオワ、マスカリン、グレイン・プロセシング・コーポレイション、ミッドウエスト・グレイン・プロダクツ・オブ・イリノイ）；およびトウィーン２０（ＩＣＩ，デラウェア、ウイルミントン）
リシノール酸（Ｐ−１０  アシッズ、ニュージャージー、ベイヨンヌ、カス・ケム）は固型物除去のため１５，０００ｒｐｍで３０分遠心分離された。
下記の表は用意された組成を列挙する。表は成分、および量、また必要とあればｐＨについての詳細な情報を提示する。
マイクロエマルジョンを用意する一般手順は下記の通りである：成分を再密封できるコンテナで検量し、振動させ、必要とすれば泡を除去するため超音波で破壊する。
【表１７】
2006022112.tif 000030
【表１８】
2006022112.tif 000031
【表１９】
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【表２０】
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【表２１】
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【表２２】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【手続補正書】
【提出日】平成17年10月28日(2005.10.28)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
経口で投与される薬物の能力は、いくつかの要素に依存する。薬物はそれが生物の膜を通して運ばれ、あるいは活性移送機構に適しているためには消化液に溶解するものでなければならない。非常に小さな粒子（３００ナノメーター以下のもの）は、腸管にあるパイエル板システムを経由するリンパ系を通じて吸収することが出来る。しかしこの機構は大きな用量の薬物を体循環に吸収させることは出来ない。
【０００２】
問題は、薬物を溶解させることが困難であることから生じる。従来の薬物の場合において、いくつかのものは相対的に消化液には溶解しない。溶解度の範囲が低い場合には、これは不完全およびもしくは迷走性吸収を起こす。もしも溶解度が低い場合、その時吸収はほぼ間違いなく患者内および患者間ベースで迷走的になるであろう。ペプチド薬物は水溶性であり、これらは非溶解性薬物は問題をはらむことはない。従来の薬物のように、非溶解性ペプチドは典型的に不完全あるいは低い範囲の吸収および迷走性吸収あるいは生物学的利用能を示す。
【０００３】
ペプチドを経口で運ぶ能力においての主要な問題は、加水分解およびタンパク質分解酵素により薬物が分解することである。この障害を除去するためには、二つの基本的アプローチがある。第１のものは「腸溶」剤皮であり、これは腸管で見られるように薬物を中性からアルカリ性ｐＨ（通常はｐＨ６乃至８）の際にのみ放出するようにし、ペプチドが胃液には露出されないようにするものである。しかしこのアプローチのみではペプチドを保護するのに十分ではない。というのは、タンパク質分解酵素は上部腸管道に存在し、薬物の分解がやはり起こり得るからである。他のアプローチはペプチドを疎水性物質と一体化し、水液がシステムに浸透出来ないようにさせることである。腸管内で徐々に破壊されあるいはゆっくり溶解薬物が放出されることの可能な疎水性物質を選択することが重要である。このようにしてペプチドはタンパク質分解酵素から保護される。加えてこの２種のアプローチを組合わせることも可能である。例えば腸溶剤皮アプローチとの関連を参照されたい。
【０００４】
しかし前記に概略したアプローチには固有の障害がある。まず多くの薬物はあまりにもゆっくりと疎水性システムから放出される。更にある種のペプチドは疎水性相に入り込み、そのシステムから完全には放出されない。このようにして、薬物放出の速度と範囲はいずれの薬物送達システムにおいてもきわめて重要な要素であり、多くのペプチド薬物にとってはより重要なものとなる。
【０００５】
この発明に従って、一つの疎水性物質よりなる薬物担体エマルジョンと一体化される薬剤を含む一つの薬物組成物が提供され、この疎水性物質は、それで乳化された長鎖カルボン酸、長鎖カルボン酸エステル、長鎖カルボン酸アルコールおよびこれらの混合物よりなるグループから選択されたものである。
【０００６】
この組成物は薬物を便利に送達するために使用される。広範囲の活性剤がこの組成物に投与されるが、それには抗生物質、抗菌剤、抗腫瘍剤、抗ウイルス剤、心臓血管腎臓薬、免疫抑制剤および免疫刺激剤、および中枢神経系活性剤などが含まれるが、とりわけペプチドにとっては価値が大きい。通常の（マクロ）エマルジョンと比較すると、マイクロエマルジョンは高エネルギーを投入することなくたやすくかつ自発的に形成し、スケールアップも円滑である。それは貯蔵寿命が長くて安定しており、半透明でもあるため分光分析でたやすくモニターされる。それは粘度が低くて容易に移送し混合出来る。薬物の可溶化、酸素の加水分解、および従ってとりわけペプチドに対する経口生物学的利用能が高められる。
【０００７】
一つの実施例において、疎水性物質は非連続的相を形成し、また親水性物質は連続的相を形成し、後者においては疎水性物質は乳化される（水中油型）。疎水性非連続相および親水性連続相はそれぞれ独自に固体、半固体、あるいは液体であり得る。薬剤は疎水性物質、親水性物質あるいは疎水性物質および親水性物質双方に分散されるかもしくはそれと一体化される。望ましくは、担体エマルジョンはマイクロエマルジョンである。
【０００８】
も一つの実施例において、疎水性物質は連続相を形成し、親水性物質が非連続相を形成し、後者において疎水性物質は（水中にある油は）乳化される。疎水性非連続相および親水性連続相はそれぞれ独自に固体、半固体あるいは液体であり得る。薬剤は疎水性物質、親水性物質あるいは疎水性物質および親水性物質双方に分散されるかもしくはそれと一体化される。望ましくは担体エマルジョンはマイクロエマルジョンである。この実施例において、この発明は、一つの油相（長鎖カルボン酸あるいはそのエステルもしくはアルコール）を含む望ましくはマイクロエマルジョンである油中水型エマルジョン、界面活性剤（ポロクサマーなど）および薬物を含む水相よりなる薬物調製法を提供する。油中水型マイクロエマルジョンを使用する利点は、全体として油性環境の下で比較的大量の極性溶質を溶解する能力を持ち、ペプチドおよびタンパク質薬物分子の経口送達システムを創り出すことにある。
【０００９】
エマルジョンは少なくとも２種の非混和性液相、つまり疎水性相および親水性相を含む分散系である。このエマルジョンは分散した相、分散相および乳化剤あるいは界面活性剤よりなる。ただし疎水性物質が「自己乳化性」エステルであり、これにより、別個の乳化剤がなくてもエマルジョンを生産することが可能な場合はこの限りではない。通常２種の非混和性液の一つは油であり、一方他のものは水である。どちらの相が分散相になるかは２種の液相の相対的な量、およびどの乳化剤が選択されるかに依存している。従って油が水相の全体にわたって液滴として分散されるエマルジョンは水中油型（Ｏ／Ｗ）エマルジョンであり、逆の場合は油中水型となる。「コロイド状」という用語は分散相が極微粒子のものであり、通常はサイズが約１ｍｍ以下のエマルジョンをいう。「マイクロコロイド状」は分散粒子のサイズが通常約１００μｍもしくはそれ以下であるエマルジョンである。副界面活性剤もマイクロコロイドの共通の成分であり、単に最初の界面活性剤に加えて含まれる界面活性剤であることを意味する。
【００１０】
「マイクロエマルジョン」は光学的には等方性であり、熱力学あるいは運動学的には安定した液エマルジョンである。マイクロエマルジョンは油相、水相、界面活性剤および場合によっては副界面活性剤よりなる。それは均質であり、熱力学的に安定し、約２００Åの均一な液滴サイズを有し光学的に透明であるため、経口薬物送達システムにとっては理想的である。油中水型マイクロエマルジョンは、とりわけ小さい水相液滴を有しており、均一に連続的油相に分散される。従って、広範囲のペプチド溶解性にわたって、ペプチドは消化液に溶けているタンパク質分解酵素から保護される。一般に、ペプチドの化学構造が指図するものとして、ペプチドがほとんどではないとしても少なくともいくらかは水溶性であり、従ってそれは油中水型マイクロエマルジョンシステムの水液滴の内部もしくは液滴表面のきわめて近くに位置することが理解される。かくしてマイクロエマルジョンの外部油相は送達システムを経由してタンパク質分解酵素の移染を妨げる。マイクロエマルジョンの外部油相は、更に腸細胞基質への一体化を可能にし、かくしてそれを通じてペプチド薬物が通過出来る（パラ細胞位あるいはトランス細胞位のいずれかでの）チャネルを創り出す。
【００１１】
従って薬物が放出されるように腸で浸食しあるいはゆっくと溶解する、もしくは腸細胞基質と一体化出来る疎水性物質を選択することが重要である。加えて、例えば腸溶剤皮と関連して２種のアプローチを組合せることも可能である。
【００１２】
この発明の水中油型エマルジョンは、一般に高温（７０−８０℃）の疎水性相（重量で小さい方）を高温（７０−８０℃）の親水性相に加えて界面活性剤の転移を押し進めて一体化していない分散相粒子の分散エマルジョンを形成することにより作られる。これは適切なシャーの下で処理された際にエマルジョンを生産する。薬物は、水性媒体に殆ど解けない有機分子である場合には疎水性物質を加えられる。エマルジョンが形成され、薬物がペプチドである場合にはエマルジョンが冷却された後に薬物が加えられる。エマルジョン製剤で薬物は次いでソフトあるいはハードゼラチンカプセル、錠剤、あるいは他の経口用量形態のものに充填される。
【００１３】
この発明に従って、ある種の疎水性物質は、疎水性物質の連続相で乳化された場合にペプチド薬物および水性媒体に殆ど溶解しない薬物の経口送達に関し吸収能力を高めたものとして提供される。この発明に従って、これらの物質は長鎖カルボン酸、長鎖カルボン酸エステル、長鎖カルボン酸アルコールおよびこれらの混合物よりなるグループから選択される。
【００１４】
更にある種の物質は、この発明に従って油中水型マイクロエマルジョンを形成するため組合せられた時には、吸収能力を高める。これらの物質は長鎖脂肪酸あるいはそのエステルもしくはアルコールよりなる油相、主として水よりなる水相、および主として非イオン系ブロックコポリマー型の界面活性剤であり、これらは混合されて油中水型マイクロエマルジョンを形成する。
【００１５】
長鎖カルボン酸は一般に４−３６個の炭素原子、望ましくは少なくとも１２個の炭素原子、もっとも望ましくは１２乃至２２個の炭素原子を含む。ある場合には、この炭素鎖は完全に飽和して直鎖であり、一方他のものは１個以上の二重結合を有している。これは飽和、不飽和、分岐あるいは直鎖の炭素鎖であるいくつかのものは３炭素環あるいはヒドロキシル基を有する。化合物は界面活性ではない。それらは水に殆ど溶解せず、酸鎖が長くなれば二重結合は少なくなり、水にはより溶けなくなる。カルボン酸基は極性であり中性ｐＨでイオン化される。これは水中で短鎖の酸の溶解度がきわめて小さいことを説明するものとなる。
【００１６】
このような酸の例は、Ｃ16からＣ22までで不飽和結合（更に分岐）が３個までのものである。飽和直鎖酸の例は、ｎ−ラウリン酸、ｎ−テトラデカン酸、ｎ−パルミチン酸、カプロン酸、カプリル酸、カプリン酸、ラウリル酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アラキン酸、ベヘン酸、モンタン酸、およびメリシン酸である。更に不飽和モノオレフィン直鎖モノカルボン酸も有用である。この例としてはオレイン酸、ガドレイン酸およびエルカ酸がある。また不飽和（ポリオレフィン）直鎖モノカルボン酸も有用である。これらのものの例は、リノール酸、リノレン酸、アラキドン酸およびベヘノール酸である。有用な分岐酸は、例えば酒石酸ジアセチルを含む。
【００１７】
長鎖カルボン酸エステルの例は、必ずしもそれに限定されないが以下のグループからのものを含む：モノステアリン酸グリセリド、モノパルミチン酸グリセリド、モノステアリン酸グリセリドとモノパルミチン酸グリセリドの混合物（マイバプレックス６００，イーストマン・ファインケミカル・カンパニー）；モノリノール酸グリセリド、モノオレイン酸グリセリド；モノパルミチン酸グリセリド・モノステアリン酸グリセリド・モノオレイン酸グリセリドおよびモノリノール酸グリセリドの混合物（マイベロール１８−９２，イーストマン・ファインケミカル・カンパニー）；モノリノレン酸グリセリド、モノガドレイン酸グリセリド；モノパルミチン酸グリセリド・モノステアリン酸グリセリド・モノオレイン酸グリセリド・モノリノール酸グリセリド・モノリノレン酸グリセリドおよびモノガドレイン酸グリセリドの混合物（マイベロール１８−９９，イーストマン・ファインケミカル・カンパニー）；蒸留アセチル化モノグリセリド（マイバセット５−０７，７−０７，および９−４５，イーストマン・ファインケミカル・カンパニー）などのアセチル化グリセリド；プロピレングリコールモノエステル・蒸留モノグリセリド・ラクチル化ステアロイルナトリウムおよびシリカの混合物（マイバテクスＴＬ，イーストマン・ファインケミカル・カンパニー）；ｄ−アルファトコフェロールポリエチレングリコール１０００琥珀酸塩（ビタミンＥ ＴＰＧＳ，イーストマン・ファインケミカル・カンパニー）；アトマル（ウイトコ・ケミカルのハムコ・ケミカル・ディビジョン）のようなモノおよびジグリセリドの混合物；ラクチル化ステアロイルカルシウム，エトキシル化モノおよびジグリセリド，乳酸化モノおよびジグリセリド、グリセロールおよびプロピレングリコールのラクチル化カルボン酸エステル、長鎖カルボン酸のラクチルエステル、長鎖カルボン酸のポリグリセロールエステル、長鎖カルボン酸のプロピレングリコールモノおよびジエステル、モノステアリン酸ソルビタン、モノオレイン酸ソルビタン、長鎖カルボン酸の他のソルビタンエステル、琥珀酸モノグリセリド、クエン酸モノグリセリルステアリル、ヘプタン酸ステアリル、ロウのセチルエステル、カプリル酸ステアリル、Ｃ10−Ｃ30コレステロール／ラボステロールエステル、およびスクロース長鎖カルボン酸エステル。
【００１８】
自己乳化長鎖カルボン酸エステルの例は、ステアリン酸塩、パルミチン酸塩、リシノール酸塩、オレイン酸塩、ベヘン酸塩、リシノレイン酸塩、ミリスチン酸塩、ラウリル酸塩、カプリル酸塩、およびカプロン酸塩のグループからのものを含む。
【００１９】
この発明で有用なアルコール類は前記に例示されたカルボン酸のヒドロキシル形態およびステアリルアルコールで例示される。
【００２０】
カルボン酸／アルコール相への添加剤は、室温で固形を創り出すのに使用出来る。この添加は、腸溶剤皮をよりよく利用する機会を産む。このような添加剤の例は、ベヘン酸グリセロール、セチルアルコール、ステアリン酸；ステアリン酸ソルビタン、イソステアリン酸ソルビタンなどのソルビタンエステル誘導体、ポリエチレングリコール１０００から６０００などである。
【００２１】
使用される保護あるいは持続放出剤皮の種類は、必ずしもそれに限定されないが、以下のモノを含む：エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシエチルセルロースおよびメタクリル酸ならびにエタクリル酸のエステル（ユードラジットＲＬ，ＲＳ，およびＮＥポリマー製品、ドイツ、ダルムシュタット、ローム・プファルマ社）。腸溶保護物質あるいは剤皮は、例えばフタル酸セルロースアセテート、フタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロース、フタル酸エチルビニルアセテート、フタル酸ポリビニルアセテートおよびメタクリル酸ならびにエタクリル酸のエステル類（ユードラジットＳ，ユードラジットＬおよびユードラジットＥ３０Ｄ、ドイツ、ダルムシュタット、ローム・プファルマ社）。
【００２２】
この発明の組成物あるいは調製物は、更に界面活性剤あるいはその２種以上の混合物を含むことが出来る。界面活性剤は疎水性尾部および親水性頭部よりなる両親媒性分子である。これらの分子は親水性および疎水性の双方の異なった形質を持っている。疎水性尾部は８乃至１８個の炭素原子を持つ炭化水素あるいは過フッ化炭化水素であり得る。それは例えば、石鹸あるいは洗剤のような長鎖分子である。界面活性剤は親水性／疎水性（油中水）界面で累積し、界面張力を下げる。界面活性剤あるいは表面活性剤は石鹸および洗剤などの長鎖分子であり、それは親水性／疎水性（油中水）界面で累積し、界面での界面張力を下げる。減少界面張力の一つの効果はエマルジョンの安定性である。これは極性および非極性基を持つ分子が配向され、炭化水素尾部でそれ自身を疎水性相に包埋し、また親水性頭部が親水性相に突出するためである。疎水性組成物あるいは調製物の他の成分が表面活性剤のような界面活性剤を含む場合には、疎水性組成物を重量／重量あたり約０．０５％乃至５０．０％、望ましくは１．０％乃至３．０％（重量／重量）の量で通常は存在する。望ましい表面活性剤は、例えば以下のものを含む：トゥイーン（ソルビン酸ポリオキシエチレン）表面活性剤族（ＩＣＩ，デラウェア、ウイルミントン）、スパン（ソルビタン長鎖カルボン酸エステル）表面活性剤族（ＩＣＩ）、プルロニック（エチレンもしくはプロピレンオキサイドブロックコポリマー）表面活性剤族（ＢＡＳＦ，ニュージャージー、パーシッパニー）、ラブラソル、ラブラフィルおよびラブラファク（それぞれポリグリコール化グリセリド）表面活性剤族（ガッペ．フォッセ、フランス、サンプリースト）、オレイン酸、ステアリン酸、ラウリル酸あるいは他の長鎖カルボン酸のソルビタンエステル、ポロクサマー（ポリエチレン−ポリプロピレングリコールブロックコポリマー）、他のソルビタンあるいはスクロース長鎖カルボン酸エステル、モノおよびジグリセリド、カプリル酸／カプリン酸トリグリセリドのＰＥＧ誘導体およびそれらの混合物。
【００２３】
この発明の薬剤調製物に個別にあるいは組合せられて一体化される薬物は、約８０％以下の生物学的利用能を有するものである。ここで使用される「生物学的利用能」という用語は経口投与の薬物の体系的な吸収速度および範囲を意味する。
【００２４】
一つの見地において、薬物は約１５個以下のアミノ酸を持つポリペプチドである。その例としては以下のものを含む：シクロスポリン、アンギオテンシンＩ、II、およびIII、エンセファリン、エンケファリンおよびその類似物、ＡＣＴＨ（副腎皮質刺激ホルモン）、抗炎症ペプチドＩ、II、III、ブラジキニン、カルシトニン、コレシスチキニン（ＣＣＫ）断片２６−３３および３０−３３、プレ／プロＣＣＫ（Ｖ−９−Ｍ）、βエンドルフィン、ジノルフィン、タイコキニン、ロイチナイジングホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、ニューロキニン（例えばニューロキニンＡ）、ソマトスタチン、サブスタンスＰ、甲状腺放出ホルモン（ＴＲＡ）、バソプレミン、フィブリノーゲン受容体拮抗阻害体（アルギニン−グリシン−アスパラギン酸含有ペプチド）（血小板凝集阻害体）、成長ホルモン放出ペプチド（ＧＨＲＰ）、インシュリンＬＨ−ＲＨ解発体および阻害体、エンドセリン、心房ナトリウム排泄因子、ガストリン、サイトプロテクティブ（cytoprotectives）、ＭＳＨ修飾物質、あるいはエラスターゼもしくは成長因子およびサイトカイン、レニン阻害体、およびＨＩＶプロテアーゼ阻害体。
【００２５】
も一つの見地において、薬物は水性媒体に殆ど溶けない有機分子である。これらの有機分子は通常約１，０００ダルトン以下、また通常約６００ダルトン以下の分子量（ｍ．Ｗ．）を持つ。その例としては以下のものがある：カルマバゼピン、グリセオフルビン、アンギオテンシン転換酸素阻害体、フルタミド、ニフェジピン、アシクロビル、ガンシクロビル、インドメタシン、ナプロキセン、エストロゲン、テストステロン、ステロイド、エルゴタミンおよびカンナビノイド。
【００２６】
これらの分類基準に合致する望ましい薬物は、必ずしもそれに限定されないが、アンギオテンシンＩ、IIおよびIII、ＡＣＴＨ、抗炎症ペプチド１、２および３、ブラジキニン、シクロスポリン、カルシトニン、ＣＣＫ断片２６−３３および３０−３３、プレ−プロ−ＣＣＫ（Ｖ−９−Ｍ）、ベータエンドルフィン、ジノルフィン、ロイコキニン、ＬＨＲＨ、ニューロキニンＡ、ソマトスタチン、サブスタンスＰ、ＴＲＨ、バソプレシン、エンケファリン類似物エビラチド（ebiratide）、ガラニン、および成長ホルモン放出ホルモンを含む。
【００２７】
この発明に従って、薬物は、半固形軟膏およびローションに使用される従来の混合装置およびホモジェナイザを使用し、クリームおよびエマルジョンのような乳化製品は共通の速度で攪拌してマイクロエマルジョンに組み込まれる。使用される一般の設備の例として、プロペラあるいはタービン、ミキサ、ホモジェナイザ、コロイドミル、超音波ミキサおよびマイクロフリュイダイザがある。混合装置のブランド名の例は、リーケトル、ゴーランミキサおよびシュテファンである。攪拌のシヤーは安定した分散を形成するのに十分でなければならないが、薬物の分解を生じるほど大きいものであってはならない。シヤーの強さは１００−５００オングストロームにわたる直径を持つ凝集物を形成する。適切なホモジナイザはシルバーソン、マイクロメディクス，インコーポレイテッドおよびアルデ・バリンコ、ＡＰＶクレパコで利用出来る。スチーブンおよびフリマ・ミキサーも同じく泡形成を妨げるために適切な真空を創り出すのに使用出来る。ｐＨ、粘度、比重および凝集物のサイズをモニターし評価することが必要である。
【００２８】
これらに装置を利用して、疎水性物質内（水中油型実施例）での薬物の混合は、スプレー凝固あるいは「噴射造粒」により例えばビードあるいは球体のような粒子を形成する。このプロセスはスプレーノズルを使用し、それが物質をクーリングタワーあるいはチャンバに噴霧する。物質がスプレーされると、界面張力により均一な球体ビードが形成される。ビードがクーリングチャンバを落下すると、それは固化し安定した無傷球体となる。
【００２９】
粒子は一般に０．５ミクロンから１００ミクロンの粒径を持つ。球体のサイズを出来る限り小さくし、もっとも望ましくは１０ミクロン以下にすることである。場合によっては、粒子は粒子からの薬物放出の速度を修飾するために持続放出被覆およびもしくは腸溶剤皮で被覆される。
【００３０】
粒子は追加の賦形剤と一緒にもしくは単独でハードゼラチンカプセルに組み込まれ得る。カプセル形成に加えられる典型的な賦形剤は、必ずしもそれに限定されないが以下のものを含む：フィラー、例えば微結晶セルロース、ダイズ多糖類、二水和リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、ラクトース、スクロース、ソルビトール、あるいは他のいずれかの不活性フィラー。加えてフロー助成のため、燻蒸シリカ、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムあるいは他のいずれかの粉にフローを付与する物質がある。これらは疎水性があるため、粒子は滑剤を必要としないが、もし必要とあればポリエチレングリコール、ロイシン、ベヘン酸グリセリド、ステアリン酸マグネシウムあるいはステアリン酸カルシウムを加えることも出来る。
【００３１】
粒子はまた錠剤に組み込まれ、とりわけ錠剤基質に組み込まれることにより経口摂取後急速に粒子を分散させる。これら粒子をそのような錠剤に組み込むために、粒子を受け入れるが錠剤形成時に破壊されないようにフィラー／結合剤が加えられねばならない。この目的に最適な物質は、必ずしもそれに限定されないが、微結晶セルロース（アビセル）、ダイズ多糖類（エムコソイ）、前ゼラチン化でんぷん（スターチ１５００，ナショナル１５５１）、およびポリエチレングリコール（カーボワックス）を含む。物質は５−７５％（Ｗ／Ｗ）の範囲で、望ましくは２５−５０％（Ｗ／Ｗ）の範囲で存在するものとする。
【００３２】
加えて、一度錠剤を摂取すると粒子を分散するために錠剤分解物質が加えられる。適切な錠剤分解物質は必ずしもそれに限定されないが、架橋カルボキシメチルセルロースナトリウム（Ａｃ−Ｄｉ−Ｓｏｌ）、グリコール酸でんぷんナトリウム（エクスプロタブ、プリモジェル）、および架橋ポリビニルピロリドン（プラスドンＸＬ）である。これらの物質は３−１５％（Ｗ／Ｗ）、望ましくは５−１０％（Ｗ／Ｗ）の範囲で存在するものとする。
【００３３】
適当なタブレット形成を確実なものとするために錠剤が加えられるが、これには必ずしもそれに限定されないが、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸、ポリエチレングリコール、ロイシン、ベヘン酸グリセリド、および水素添加植物油が含まれる。これらの滑剤は０．１−１０％（Ｗ／Ｗ）、望ましくは０．３−３．０％（Ｗ／Ｗ）の範囲で存在するものとする。
【００３４】
錠剤は例えば以下のように形成される。粒子はアビセル、錠剤分解物質、および滑剤と共にブレンダーに導入され、物質混合物を供するように一定時間混合され、次いで錠剤が圧縮される錠剤プレスのホッパに入れられる。使用される圧縮力は錠剤形成に適したものであるがビードあるいは剤皮を破砕するものであってはならない。
【００３５】
カプセルあるいは錠剤はまた腸溶被覆される。粒子が腸溶被覆（ｐＨ感受性）
され胃で放出されるか、もしくはカプセルあるいは錠剤が腸溶被覆（これにより粒子は腸で放出）されるが、後者の場合には粒子はそのように被覆される必要はない。粒子上で持続性放出被覆のみを利用するためには、同じく腸溶剤皮カプセルあるいは錠剤を必要とする。ここでは三つのアプローチがある。まず、腸溶剤皮カプセルでは未被覆疎水性粒子の場合である。第２は腸溶剤皮カプセルあるいは錠剤内での持続性放出被覆粒子の場合である。第３としては通常のソフトゼラチンカプセルあるいは未被覆錠剤内に封入された腸溶剤皮粒子がある。
【００３６】
カプセルは更にカプセルを腸溶被覆して胃の保護をするように加工される。カプセル内容物が胃腸環境で放出される際、それは消化液で自発的にマイクロコロイドエマルジョンを形成する。消化液は水相の役割を果たすものとなる。
【００３７】
マイクロエマルジョンは、一般に水相、油相、および表面活性剤を加えることによって最適な器および混合で形成される。成分のいずれかが固体であれば、それは液相に加えられて可溶となり加熱で溶解する。例えば表面活性剤が固体であり、それが油相に可溶であるなら、それは完全に溶解することになり、次いで水相が続く、などである。一方表面活性剤が水相に可溶であれば、それはまず水相に加えられ、完全に溶解し、油相がそれに続くことになる。前記の適切な混合装置はこの目的のために使用出来る。
【００３８】
水中油型エマルジョンベースシステムは、薬物が前記の通り疎水性物質内に分散し、水相が表面活性剤あるいは自己乳化疎水性長鎖カルボン酸エステルの存在下で加えられねばならないことを必要とする。最適なシヤーの下でこの方法はマイクロエマルジョンを形成する。このエマルジョンはソフトあるいはハードゼラチンカプセルに注入される。カプセルは更にカプセルを腸溶被覆することで胃の保護をするように加工される。
【実施例】
【００３９】
実施例１−７は、この発明の水中油型実施例を説明する組成を記述する。
実施例１
相      成分                            ｗ／ｗ％
Ｂ      カルマバゼピン                    ５
Ｂ      モノステアリン酸グリセリド      ５−６０
Ａ      ポリソルベート８０                ５
Ａ      オレイン酸                      ２−１０
Ａ      水                              100までの十分な量
各層は成分は別個に７０−８０℃まで加熱される。Ｂ相はＡ相に加えられ、混合は適切な混合装置で行われる。混合物は次いで室温にまで冷却される。生成エマルジョンはいずれかの経口送達用量形態にいつでも組み込まれる用意が出来ている。
実施例２
相      成分                            ｗ／ｗ％
Ｂ      シクロスポリン                    ５
Ｂ      中位鎖モノおよびジグリセリド      １７
Ａ      ポリソルベート８０                ５
Ｂ      オレイルアルコール                ２−１０
Ａ      水                                100までの十分な量
手順は実施例１に記述されたものと同じである。
実施例３
相      成分                            ｗ／ｗ％
Ｂ      ＡＣＥ阻害剤                      ５
Ａ      PeG-25トリオレイン酸グリセリド  ３０−６０
Ｂ      オレイルアルコール                ２−２０
Ａ      水                                100までの十分な量
手順は実施例１に記述されたものと同じである。
実施例４
相      成分                            ｗ／ｗ％
Ｂ      ソマトスタチン                    ５
Ｂ      中位鎖モノおよびジグリセリド    １７
Ａ      ポリソルベート８０                ５
Ｂ      オレイン酸                      ２−１０
Ａ      水                              100までの十分な量
手順は実施例１に記述されたものと同じである。
実施例５
相      成分                            ｗ／ｗ％
Ａ      エンケファリン                    ５
Ｂ      オレイルアルコール              １４
Ｃ      モノオレイン酸ソルビタン        １４
Ｄ      ポリソルベート８０              １４
Ｅ      水                              100までの十分な量
Ａ相およびＢ相が一緒に混和され、次いでＣからＥまでが順に係りなく加えられ攪拌される。
実施例６
相      成分                                              ｗ／ｗ％
Ａ      ＴＲＨ                                              ５
Ｂ      α−アルファトコフェリルポリエチレングリコール
1000琥珀酸塩                                      １０
Ｃ      α−アルファトコフェノールアセテート                ３
Ｄ      オレイルアルコール                                ２−１０
Ｅ      水                                      100までの十分な量
成分ＢおよびＣは４０℃以下で加熱され混和される。成分Ａが次いで加えられる。次いで成分Ｄが前記のものに加えられ、生成する混合物は成分Ｅに７０−８０℃で加えられる。これが次いで冷却しながら混合される。
実施例７
相      成分                            ｗ／ｗ％
Ａ      エゼラタイド(Ebiratide)            ５
Ｂ      アセチル化モノグリセリド          １０
Ｃ      スルホ琥珀酸ナトリウムジオクチル  １０
Ｄ      アプリコット仁油                  １０
Ｅ      水                            100までの十分な量
Ａ相がＤ相に溶解され、次いで他の成分がゆっくり攪拌しながら加えられる。
実施例８−１２はこの発明の油中水型実施例を説明し、モデルペプチドＤＡＧＯエンケファリンを使用してＣａｃｏ−２細胞を横断する生体外送達強化を示す組成を記述する。
Ｃａｃｏ−２細胞の調製 
腸管上皮の生休外モデル、Ｃａｃｏ−２ヒト結腸癌細胞系が予備検定システムとして使用される。これらの細胞は培養で分化し、通常の腸管上皮のバリア性を持つ密集単層を形成する。細胞は別個の接近可能なごく小さい基部コンパートメントを持つ輸送系の透過膜上で成長する。
【００４０】
分化、バリア形成、およびグリコースの活性輸送の時間経過が測定された。細胞は電子顕微鏡検査、酸素検定、およびキレート化によるカルシウム従属接合部の可逆開口で示されるように、細胞間の刷子縁および堅い接合部を形成することが判明した。標識ペプチドの輸送は時間でルミナルコンパートメントから基部コンパートメントまで測定される。マイクロエマルジョンは生理緩衝液対水相を使って調合され、細胞単層のルミナル面に使用された。ペプチドの外観が計量され、平方センチ当り時間当りの輸送パーセントが計数され、緩衝液のみの場合と比較される。
実施例８
成分 ％
ポリクサマー１２４                          ２７．０
リノール酸                                  ６３．１
水相                                          ９．９
一般手順
適当なコンテナ内で前記の適切な混合装置の一つを使い光学的に透明な溶液を形成するために成分を十分に混合する。ＤＡＧＯエンケファリン１０ｍＭを加え、溶液をＣａｃｏ−２細胞に加える。この結果は図１に示される。
実施例９
成分 ％
ポリクサマー１２４                          １９
オレイルアルコール                          ７５．９
水相                                          ５．１
一般手順
適当なコンテナ内で前記の適切な混合装置の一つを使い光学的に透明な溶液を形成するために成分を十分に混合する。ＤＡＧＯエンケファリン１０ｍＭを加え、溶液をＣａｃｏ−２細胞に加える。この結果は図２に示される。
実施例１０
成分 ％
ポリクサマー１２４                          ２７．０
オレイン酸                                  ６３．１
水相                                          ９．９
一般手順 
適当なコンテナ内で前記の適切な混合装置の一つを使い光学的に透明な溶液を形成するために成分を十分に混合する。ＤＡＧＯエンケファリン１０ｍＭを加え、溶液をＣａｃｏ−２細胞に加える。この結果は図３に示される。
実施例１１
成分 ％
ポリクサマー１２４                          ２７．０
リノール酸                                  ６１．７
水相                                          ９．９
ベヘン酸                                      １．３５
一般手順
適当なコンテナ内で５０−８０℃でリノール酸の中でベヘン酸を融解する。４０℃に冷却し、残りの成分を十分に混合する。ＤＡＧＯエンケファリン１０ｍＭを加え、溶液をＣａｃｏ−２細胞に加える。このマイクロエマルジョンは室温で固体である。この結果は図４に示される。
実施例１２
成分 ％
ポリクサマー１０５                          ２７．０
リノール酸                                  ６３．１
水相                                          ９．９
一般手順
適当なコンテナ内で前記の適切な混合装置の一つを使い光学的に透明な溶液を形成するために成分を十分に混合する。ＤＡＧＯエンケファリン１０ｍＭを加え、溶液をＣａｃｏ−２細胞に加える。この結果は図５に示される。
実施例１３ 
Ｃａｃｏ−２細胞を横断するペプチド輸送のためのプルロニックＬ４４／脂肪酸あるいはアルコール／ハンクマイクロエマルジョンシステム 
表面活性剤としてのプルロニックＬ４４、水相としてのハンク緩衝液およびいくつかの可能な油相：すなわちオレイルアルコール、オレイン酸およびリノール酸を含むマイクロエマルジョンシステムの組成が準備された。
【００４１】
下記の物質で組成を準備するのに受け入れられるものとして使用された：ポリソルベート２０、６０および８０（トウィーン２０、６０および８０、デラウェア、ウイルミントン、ＩＣＩサーファクタンツ社）；モノオレイン酸グリセリド／プロピレングリコール混合物（アーラセル１８６、デラウェア、ウイルミントン、ＩＣＩサーファクタンツ社）；モノオレイン酸グリセリド（アルドＭＯ、ニュージャージー、フェア ローン、ロンザ・スペシアリティ・ケミカルズ）；モノオレイン酸ソルビタン（クリル４、ニュージャージ、パーシッパニ、クローダ社）；オレイルアルコール（ベルギー、ギール、ジャンセン・ケミカル社）；およびリノール酸（エマーソル３１５、ヘンケル社）。
【００４２】
ペプチド送達に関してマイクロエマルジョン賦形剤にポリソルベート表面活性剤クラスを利用しようと努力して、多種多様な組成が検討された。３種のＩＣＩ表面活性剤トウィーン２０、６０および８０が補助界面活性剤のある場合およびない場合で溶液およびマイクロエマルジョンシステムに使用された。以下に用意された組成が提示される。
【００４３】
トウィーン８０，アーラセル１８６、オレイルアルコールおよび蒸留水とハンクス緩衝液の対応する乳化剤（４部のトウィヘン８０／１部のアーラセル１８６）溶液が準備される。表１を参照されたい。
【００４４】
【表１】
2006022112.tif 000041
【００４５】
ハンクス緩衝液で乳化剤の割合の大きいもの（４部のトウィーン８０／１部のアーラセル１８６）も用意された。表２参照。
【００４６】
【表２】
2006022112.tif 000042
【００４７】
トウィーン８０，アーラセル１８６およびオレイルアルコールで構成される無水マイクロエマルジョンシステムのための組成も用意された。表３参照。
【００４８】
【表３】
2006022112.tif 000043
【００４９】
ハンクス緩衝液でそれぞれｐＨ３．５および６．５，７．０であるトウィーン２０，６０および８０の１０％溶液の組成が用意された。この場合これに組み込まれたペプチドは１０μＭのパソプレシンである。表４参照。
【００５０】
【表４】
2006022112.tif 000044
【００５１】
トウィーン２０，アーラセル１８６およびオレイルアルコールで構成される無水マイクロエマルジョンシステムの組成。表５参照。
【００５２】
【表５】
2006022112.tif 000045
【００５３】
リノール酸を油相として含むトウィーン２０／スパン２０のマイクロエマルジョン組成も用意された。表６参照。
【００５４】
【表６】
2006022112.tif 000046
【００５５】
リノール酸、オレイン酸あるいはオレインアルコールを含むトウィーン２０／スパン２０マイクロエマルジョン組成も用意された。表７参照。
【００５６】
【表７】
2006022112.tif 000047
【００５７】
３種の追加マイクロエマルジョン組成も用意された。表８参照。
【００５８】
【表８】
2006022112.tif 000048
【００５９】
トウィーン２０を用いる追加の組成への努力で、スパン２０が補助的界面活性剤である一つのマイクロエマルジョンに導かれた。スパン２０、つまりモノラウリン酸ソルビタンは理想的な補助界面活性剤として行動する。この新しいマイクロエマルジョンシステムの油相もリノール酸あるいはオレイン酸に転換され、これらは他の賦形剤でペプチド油相を促進するものとして知られている。ハンクス緩衝液は水相であり、リノール酸、オレイン酸あるいはオレイルアルコールは油相である。
実施例１４   経口ペプチド送達におけるポリソルベート界面活性剤システムおよびマイクロエマルジョン 
主な研究イニシアチブはＣａｃｏ−２単相を横切るペプチド油相を増加させるシステムを選別し確認することであった。探究されこのような一つのシステムは、界面活性剤プルロニックＬ４４を含む。この界面活性剤を用いていくつかのマイクロエマルジョンシステムの組成が開発された。この実施例は、これらのシステムを要約する。
【００６０】
下記の物質が組成を用意するために受け入れられるものとして使用された：プルロニックＬ４４（ニュージャージー、パーシッパニー、ＢＡＳＦ）：オレイルアルコール（ベルギー、ギール、ジャンセン・ケミカ）；オレイン酸（エマーソル２２１、オハイオ、シンシナティ、エメリー・グループ、ヘンケル）；リノール酸（エマーソル３１５、オハイオ、シンシナティ、エメリーグループ、ヘンケル）；およびハンクス緩衝液（メディアテク、セルグロ）。
【００６１】
下記の表は、油相実験の使用のために用意された組成を列挙する。これらの表は、それが適切であるならば成分、量およびｐＨについて詳細な情報を提供する。
【００６２】
【表９】
2006022112.tif 000049
【００６３】
【表１０】
2006022112.tif 000050
【００６４】
【表１１】
2006022112.tif 000051
【００６５】
【表１２】
2006022112.tif 000052
【００６６】
【表１３】
2006022112.tif 000053
【００６７】
【表１４】
2006022112.tif 000054
【００６８】
【表１５】
2006022112.tif 000055
【００６９】
【表１６】
2006022112.tif 000056
【００７０】
実施例 １５   プルロニックＬ１４４／リノール酸／ハンクス緩衝液 マイクロエマルジョンシステム 
下記の物質は、組成を用意するために受け取るべきものとして使用された：プルロニック（ニュージャージー、パーシッパニー、ＢＡＳＦ；リノール酸（エマーソル３１５，オハイオ，シンシナティ、エメリー・グループ、ヘンケル）；オレイン酸（エマーソル２２１，オハイオ、シンシナティ、エメリー・グループ、ヘンケル）；リノレン酸（ウイスコンシン、ミルウォーキー、オルトリッチ）；ハンクス緩衝液（メディアテク、セルグロ）；エタノール（アルコール、脱水ＵＳＰ、アイオワ、マスカリン、グレイン・プロセシング・コーポレイション、ミッドウエスト・グレイン・プロダクツ・オブ・イリノイ）；およびトウィーン２０（ＩＣＩ，デラウェア、ウイルミントン）
リシノール酸（Ｐ−１０ アシッズ、ニュージャージー、ベイヨンヌ、カス・ケム）は固型物除去のため１５，０００ｒｐｍで３０分遠心分離された。
【００７１】
下記の表は用意された組成を列挙する。表は成分、および量、また必要とあればｐＨについての詳細な情報を提示する。
【００７２】
マイクロエマルジョンを用意する一般手順は下記の通りである：成分を再密封できるコンテナで検量し、振動させ、必要とすれば泡を除去するため超音波で破壊する。
【００７３】
【表１７】
2006022112.tif 000057
【００７４】
【表１８】
2006022112.tif 000058
【００７５】
【表１９】
2006022112.tif 000059
【００７６】
【表２０】
2006022112.tif 000060
【００７７】
【表２１】
2006022112.tif 000061
【００７８】
【表２２】
2006022112.tif 000062
【図面の簡単な説明】
【００７９】
【図１】図１は、実施例８に記載される実験結果を示す。
【図２】図２は実施例９に記載される実験結果を示す。
【図３】図３は実施例１０に記載される実験結果を示す。
【図４】図４は実施例１１に記載される実験結果を示す。
【図５】図５は実施例１２に記載される実験結果を示す。