(57)【要約】    【課題】  α−アミラーゼ阻害活性を有する新規蛋白質とその製造方法を提供する。    【解決手段】  以下の性質を示すことを特徴とする、α−アミラーゼ阻害活性を有する蛋白質である。1)ＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動で１２．０ｋＤａ、ゲル濾過クロマトグラフィーで２３．２ｋＤａの分子量を有する。2)サブユニットが以下のＮ末端アミノ酸配列を有する。ＳＧＰＷＭＣＹＰＧＱＡＦＱＶＰＡＬＰＮＭ (但し、式中、Ｓはセリン、Ｇはグリシン、Ｐはプロリン、Ｗはトリプトファン、Ｍはメチオニン、Ｃはシステイン、Ｙはチロシン、Ｑはグルタミン、Ａはアラニン、Ｆはフェニルアラニン、Ｖはバリン、Ｌはロイシン、Ｎはアスパラギン）。3)サブユニットの二量体１モルがα−アミラーゼの２モルに反応し、ブタ膵臓、ヒト唾液およびヒト膵臓由来α−アミラーゼの活性を拮抗的に阻害する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の性質を示すことを特徴とする、α−アミラーゼ阻害活性を有する蛋白質。
1)ＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動で１２．０ｋＤａ、ゲル濾過クロマトグラフィーで２３．２ｋＤａの分子量を示す。
2)サブユニットが以下のＮ末端アミノ酸配列を有する。
ＳＧＰＷＭＣＹＰＧＱＡＦＱＶＰＡＬＰＮＭ
(但し、式中、Ｓはセリン、Ｇはグリシン、Ｐはプロリン、Ｗはトリプトファン、Ｍはメチオニン、Ｃはシステイン、Ｙはチロシン、Ｑはグルタミン、Ａはアラニン、Ｆはフェニルアラニン、Ｖはバリン、Ｌはロイシン、Ｎはアスパラギン、である。）
3)サブユニットの二量体１モルがα−アミラーゼ２モルに反応し、ブタ膵臓、ヒト唾液およびヒト膵臓由来α−アミラーゼの活性を拮抗的に阻害する。
【請求項２】
ライ麦フスマ懸濁水の上清からライ麦フスマ水抽出液を得、このライ麦フスマ水抽出液を硫安画分し、回収した沈殿物の水溶液の上清から硫安沈殿画分溶液を得た後、イオン交換クロマトグラフィーによって硫安沈澱画分溶液からα−アミラーゼ阻害活性を有する蛋白質の活性画分溶液を分取し、次いで疎水性相互作用クロマトグラフィーによって活性画分溶液からα−アミラーゼ阻害活性を有する蛋白質の活性画分溶液を分取することにより、α−アミラーゼ阻害活性を有する蛋白質を精製するようにしたことを特徴とする、請求項１記載のα−アミラーゼ阻害活性を有する蛋白質の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はライ麦フスマに由来し、α−アミラーゼ阻害活性を有する新規な蛋白質に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、我が国では食生活の欧米化や飽食化により、糖尿病や肥満が増加の一途を辿っている。さらに、糖尿病患者あるいはその予備群で見られる食後の著しい血糖値の上昇は高脂血症、動脈硬化、心筋梗塞などの重篤な合併症に関与している。このような状況を鑑みて血糖値コントロールの重要性が認識されてきているが、現代の日常生活において厳しい食事制限や継続的な運動は必ずしも容易ではなく、食後の血糖値上昇を緩和し、かつ安全性の高い物質が望まれている。
【０００３】
α−アミラーゼは澱粉を糖に分解する酵素であり、ヒトでは唾液と膵液に含まれている。澱粉摂取後の血糖値の上昇はこのα−アミラーゼの活性を阻害することで遅延できることが知られている (特許文献１、特許文献２）。これまでに小麦、大麦、ライ麦、米、インゲン豆をはじめ、多くの植物からα−アミラーゼ阻害物質が単離されている（非特許文献１）。
【０００４】
【特許文献１】特開平０７−４１４９９号公報
【特許文献２】特開平０９−１９４３９２号公報
【非特許文献１】Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２６９，３９７−４１２，（２００２）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
しかるに、従来のα−アミラーゼ阻害物質は細菌、昆虫、動物など種々のα−アミラーゼに対する特異性がそれぞれ異なっており、ヒト唾液およびヒト膵臓由来のα−アミラーゼに対して強い阻害活性を示すα−アミラーゼ阻害物質が求められている。
【０００６】
本発明はかかる状況において、ヒト唾液およびヒト膵臓由来のα−アミラーゼに対して阻害活性を有する物質を提供することを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本件発明者らは天然物由来の安全な素材として使用できるα−アミラーゼ阻害物質を鋭意探索した結果、ライ麦フスマからα−アミラーゼ阻害物質を探索し、従来のものと明らかに異なる蛋白質性の阻害物質を単離した。この蛋白質のＮ末端アミノ酸配列を決定し、データベースを用いた解析によりこの蛋白質が新規であることを確認し、ＲＢＡＩと命名して本発明を完成した。
【０００８】
即ち、本発明に係るα−アミラーゼ阻害活性を有する蛋白質は、以下の性質を示すことを特徴とする。
1)ＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動で１２．０ｋＤａ、ゲル濾過クロマトグラフィーで２３．２ｋＤａの分子量を示す。
2)サブユニットが以下のＮ末端アミノ酸配列を有する。
ＳＧＰＷＭＣＹＰＧＱＡＦＱＶＰＡＬＰＮＭ
（但し、式中、Ｓはセリン、Ｇはグリシン、Ｐはプロリン、Ｗはトリプトファン、Ｍはメチオニン、Ｃはシステイン、Ｙはチロシン、Ｑはグルタミン、Ａはアラニン、Ｆはフェニルアラニン、Ｖはバリン、Ｌはロイシン、Ｎはアスパラギン、である。）
3)サブユニットの二量体１モルがα−アミラーゼ２モルに対して反応し、ブタ膵臓、ヒト唾液およびヒト膵臓由来α−アミラーゼの活性を拮抗的に阻害する。
【０００９】
また、本発明に係るα−アミラーゼ阻害活性を有する蛋白質の製造方法は、ライ麦フスマ懸濁水の上清からライ麦フスマ水抽出液を得、このライ麦フスマ水抽出液を硫安画分し、回収した沈殿物の水溶液の上清から硫安沈殿画分溶液を得た後、イオン交換クロマトグラフィーによって硫安沈澱画分溶液からα−アミラーゼ阻害活性を有する蛋白質の活性画分溶液を分取し、次いで疎水性相互作用クロマトグラフィーによって活性画分溶液からα−アミラーゼ阻害活性を有する蛋白質の活性画分溶液を分取することにより、α−アミラーゼ阻害活性を有する蛋白質を精製するようにしたことを特徴とする。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
以下、実施例により本発明をより具体的に説明するが、これらによって本発明が限定されるものではない。
【実施例１】
【００１１】
ＲＢＡＩの精製
各精製段階での蛋白質量はウシ血清アルブミンを標準物質として用い、ロウリー（Ｌｏｗｒｙ）法により決定した。また、各クロマトグラフィー分画画分の阻害活性は小根田らの方法（Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３５，４２１−４２７（２００４））に従い、パンクレアチン (和光純薬社製) から精製したブタ膵臓α−アミラーゼアイソマーＩ （以下、ＰＰＡという）のｐ−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトシド（ｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ−α−Ｄ−ｍａｌｔｏｓｉｄｅ ;和光純薬社製  以下、ｐＮＰ−Ｇ２という) 分解活性の阻害量で評価した。
【００１２】
酵素反応は７５０μＬの１．０ｍＭ  ＣａＣｌ2，３０ｍＭ  ＮａＣｌを含む５０ｍＭ  トリス−塩酸（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ）緩衝液（ｐＨ  ６．９）に５０μＬのＰＰＡ溶液および５０μＬのクロマトグラフィー分画溶液を添加し、３０°Ｃ、３分間でインキュベートした後、５０μＬのｐＮＰ−Ｇ２を添加して開始した。ＰＰＡによるｐＮＰ−Ｇ２加水分解反応により生成するｐ−ニトロフェノル（ｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｏｌ；以下、ｐＮＰと称する）量を４００ｎｍにおける吸光度の増大を指標に連続的に追跡し、ｐＮＰの４００ｎｍにおける分子吸光係数９，４７０Ｍ-1ｃｍ-1（Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１１０，６０５−６０７（１９９１））を用いて増加速度を算出し、これを酵素活性とした。測定条件はＰＰＡの初濃度１．１７μＭ（図１）及び０．５１３μＭ（図２）、ｐＮＰ−Ｇ２の初濃度１．６７ｍＭであり、酵素反応は恒温セルホルダーを用いて３０°Ｃで行った。
【００１３】
３５ｇのライ麦フスマを３００ｍＬの蒸留水に懸濁し、室温で１時間攪拌した。続いて３，５００ｇ×１０分間の遠心分離により沈殿物を除去し、得られた上清に蒸留水を添加して３５０ｍＬとし、これをライ麦フスマ水抽出液（８５４ｍｇ蛋白質）とした。上記ライ麦フスマ水抽出液の硫安飽和度２０−４０％沈殿画分を３，５００ｇ×１０分間の遠心分離により回収し、３５ｍＬの蒸留水に溶解した。この溶液を２Ｌの蒸留水に対して１２時間透析を行った後、さらに５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）に対して１２時間透析した。透析内液を１０，０００ｇ×５分間遠心分離を行い、得られた上清に同緩衝液を添加して４０ｍＬとし、これを２０−４０％硫安沈殿画分溶液（２４０ｍｇ蛋白質）とした。      
【００１４】
２０−４０％硫安沈殿画分溶液を陽イオン交換ＨＰＬＣカラム、ＴＳＫｇｅｌ  ＳＰ−５ＰＷ［７．５ｍｍ（Ｉ．Ｄ．）×７．５ｃｍ；東ソー社製］を用いて分画した。ＨＰＬＣの条件は、溶離液５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）、流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ、試料注入量３．０ｍＬ、検出波長２８０ｎｍ、分取量２．０ｍＬ／ｆｒａｃｔｉｏｎであり、図中に示すようにＮａＣｌ濃度が０から０．５Ｍにまで上昇する直線グラジエントで吸着した蛋白質を分離した。阻害活性は２２−２６分溶出画分に見られ、この画分を分取した（図１）。本操作を繰り返し、４０ｍＬの２０−４０％硫安沈殿画分溶液から５２ｍＬの活性画分溶液を得た。これをＳＰ分画溶液（３２．１ｍｇ蛋白質）とした。
【００１５】
続いて、ＳＰ分画溶液を疎水性相互作用ＨＰＬＣカラム、ＴＫＳｇｅｌ  Ｐｈｅｎｙｌ−５ＰＷ［７．５ｍｍ（Ｉ．Ｄ．）×７．５ｃｍ；東ソー社製］を用いて分画した。ＳＰ分画溶液５２ｍＬを等量の１Ｍ硫安と混合して試料溶液とした。ＨＰＬＣの条件は、溶離液０．５Ｍ硫安を含む５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）、流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ、試料注入量３．０ｍＬ、検出波長２８０ｎｍ、分取量２．０ｍＬ／ｆｒａｃｔｉｏｎであり、図中に示すように硫安濃度が０．５から０Ｍにまで低下する直線グラジエントで吸着した蛋白質を分離した。活性阻害は３８−４１分溶出画分に見られ、３９−４０分溶出画分を分取した（図２）。本操作を繰り返し、５２ｍＬのＳＰ分画溶液から３５ｍｌの活性画分溶液を得た。これを最終精製標品（６．６５ｍｇ蛋白質）とした。
【００１６】
ＲＢＡＩの性状
本精製標品５００μＬを予め５０ｍＭ酢酸緩衝液（ｐＨ５．０）で平衡化したゲル濾過ＨＰＬＣカラム、ＴＳＫｇｅｌ  Ｇ２０００ＳＷXL［７．８ｍｍ（Ｉ．Ｄ．）×３０ｃｍ；東ソー社製］に注入し、流速１．０ｍＬで分析したところ、本標品は分子量２３．２ｋＤａの位置に溶出し（図３）、分子量はゲル濾過クロマトグラフィで２３．２ｋＤａであることが認められた。
【００１７】
また、各精製段階のサンプルとともにＲＢＡＩ精製標品を非還元条件下でのＳＤＳポリアクリルアミド電気泳動（ＳＤＳ−ＰＡＧＥ）（ＰＡＧミニ「第一」１５／２５；第一化学薬品社製) により分析した。４０ｍＡの一定電流で電気泳動を行い、精製標品は分子量１２．０ｋＤａの位置に単一バンドを示した（図４）。これらの結果より、ＲＢＡＩは分子量約１２．０ｋＤａのサブユニットからなる二量体として存在することが判明した。
【００１８】
ＲＢＡＩを還元Ｓ−アルキル化し、Ｎ末端アミノ酸配列をプロテインシーケンサー（Ｇ１０００Ａ；Ｈｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄ社製）を用いて解析したところ、ＳＧＰＷＭＣＹＰＧＱＡＦＱＶＰＡＬＰＮＭ (式中、Ｓはセリン、Ｇはグリシン、Ｐはプロリン、Ｗはトリプトファン、Ｍはメチオニン、Ｃはシステイン、Ｙはチロシン、Ｑはグルタミン、Ａはアラニン、Ｆはフェニルアラニン、Ｖはバリン、Ｌはロイシン、Ｎはアスパラギンを意味する。）で示される配列であることが分かった。この配列を蛋白質アミノ酸配列データベースであるＳＷＩＳＳ−ＰＬＯＴを利用して既知蛋白質とのホモロジー検索を行ったところ、ＲＢＡＩは新規物質であることが判明した。
【実施例２】
【００１９】
ＲＢＡＩのα−アミラーゼ活性の阻害特性（１）
ＲＢＡＩ精製標品のＰＰＡおよびヒト唾液α−アミラーゼ (以下、ＨＳＡと称する) 活性に対する阻害効果を検討した。ＨＳＡは少量のアイソザイムを含むため、ＳＩＧＭＡ社製ＨＳＡ（Ｔｙｐｅ  ＸIII−Ａ  ｃｒｕｄｅ）を疎水性相互作用ＨＰＬＣカラム、ＴＳＫｇｅｌ  Ｅｔｈｅｒ−５ＰＷ［７．５ｍｍ（Ｉ．Ｄ．）×７．５ｃｍ；東ソー社製］を用いて精製した標品を実験に用いた。
【００２０】
ＨＰＬＣの条件は、溶離液０．５Ｍ硫安を含む５０ｍＭ  ２−［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジニル］エタンスルホン酸｛２−［４−（２−ｈｙｄｒｏｘｙｅｔｈｙｌ）−１−ｐｉｐｅｒａｚｉｎｙｌ］ｅｔｈａｎｅｓｕｌｆｏｎｉｃ  ａｃｉｄ；（ＨＥＰＥＳ）｝緩衝液（ｐＨ６．９）、流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ、試料０．５Ｍ硫安を含む１．０ｍｇ／ｍＬクルード（ｃｒｕｄｅ）ＨＳＡ（ＳＩＧＭＡ製）、試料注入量５００μＬ、検出波長２８０ｎｍ、試料注入後１０分から３５分の間に硫安濃度が０．５Ｍから０Ｍに低下する直線グラジエントで吸着した蛋白質を分離した。本分離条件においてＨＳＡの主成分は１７．３分から１８．０分に溶出し、この画分を分取して、ＨＳＡ精製標品とした。
【００２１】
ＰＰＡおよびＨＳＡのｐＮＰ−Ｇ２分解活性に対するＲＢＡＩの効果を酵素初濃度 （［Ｅ］O）≫阻害物質定数（Ｋi）の条件下、速度論的に検討した。
【００２２】
酵素反応は７００μＬの１．０ｍＭ  ＣａＣｌ2  、３０ｍＭ  ＮａＣｌを含む５０ｍＭ  トリス−塩酸（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ）緩衝液（ｐＨ６．９）に１０μＬのＲＢＡＩ溶液および５０μＬのＰＰＡまたはＨＳＡ溶液を添加して、３０°Ｃで３分間インキュベートしたのち、４０μＬのｐＮＰ−Ｇ２溶液を添加して開始した。測定条件はＰＰＡおよびＨＳＡの初濃度１７９ｎＭ、ｐＮＰ−Ｇ２の初濃度４．０ｍＭであり、酵素反応は恒温セルホルダーを用いて３０°Ｃで行った。
【００２３】
反応により生成するｐＮＰの増加に伴うＡ400の増大を連続的に追跡してｐＮＰの増加初速度を算出してこれを酵素活性とし、酵素活性に対するＲＢＡＩの添加効果を検討した。
【００２４】
ＰＰＡおよびＨＳＡ活性のＲＢＡＩ濃度依存性のデータを数１に示される式に近似してＲＢＡＩの各α−アミラーゼに対するＫiを算出し、Ｋi値をもって阻害活性を評価した （図５）。
【００２５】
【数１】
2006328017.tif 000002
【００２６】
ｖ：ＲＢＡＩ存在下の酵素活性、ｖO:ＲＢＡＩ非存在下の酵素活性、［Ｅ］O: 酵素初濃度、［Ｓ］O：基質初濃度、［Ｉ2］O：ＲＢＡＩ（二量体) 初濃度、Ｋm：ミカエリス定数、である。
【００２７】
この結果、α−アミラーゼとＲＢＡＩの等量点はα−アミラーゼ：ＲＢＡＩ（二量体）＝２：１（モル）であり、ＲＢＡＩ二量体１分子に対してアミラーゼが２分子結合することが示された。ｐＨ６．９、３０°ＣにおけるＲＢＡＩのＰＰＡに対するＫiは１７．７±１．１ｎＭ、ＨＳＡに対するＫiは８９３±２２８ｐＭとそれぞれ求められ、ＲＢＡＩはこれらのα−アミラーゼに対して非常に強い阻害活性を有することが示された。
【実施例３】
【００２８】
ＲＢＡＩのα−アミラーゼ活性の阻害特性（２）
ＰＰＡ、ＨＳＡおよびヒト膵臓α−アミラーゼ (ＣＡＬＺＹＭＥ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社製、以下、ＨＰＡと称する) のｐ−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトペンタオシド（ｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ−α−Ｄ−ｍａｌｔｐｅｎｔａｏｓｉｄｅ；和光純薬社製  以下、ｐＮＰ−Ｇ５と称する。) 分解活性に対するＲＢＡＩの効果を［Ｅ］O≪Ｋiの条件下、速度論的に検討した。以下にα−アミラーゼのｐＮＰ−Ｇ５分解活性測定の一例を示す。２０００μＬの１．０ｍＭ  ＣａＣｌ2、３０ｍＭ  ＮａＣｌを含む５０ｍＭ  トリス−塩酸（Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ）緩衝液（ｐＨ６．９）に１０μＬのα−アミラーゼ溶液および１０μＬのＲＢＡＩ溶液を混合し、３０°Ｃに設定した恒温水槽中で３０分間処理後、１００μＬのｐＮＰ−Ｇ５溶液を添加して反応を開始した。
【００２９】
一定時間後に反応溶液２００μＬを５０μＬの５％トリフルオロ酢酸 (以下、ＴＦＡと称する) と混合して反応を停止し、逆相ＨＰＬＣカラム、ＣＡＰＣＥＬＬ  ＰＡＫ  Ｃ８ＵＧ  １２０［４．６ｍｍ（Ｉ．Ｄ．）×２５ｃｍ；資生堂社製］を用いて反応生成物を分離定量した。ＨＰＬＣの条件は、溶離液０．１％ＴＦＡ、流速１．０ｍＬ／ｍｉｎ、試料注入量２００μＬ、検出波長３１３ｎｍ、試料注入後５分から２０分でアセトニトリル濃度が５％から５０％に上昇する直線グラジエントで吸着した試料を分離した。検討したα−アミラーゼによるｐＮＰ−Ｇ５の分解生成物は主としてｐ−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトシド（ｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ−α−Ｄ−ｍａｌｔｏｓｉｄｅ）及びｐ−ニトロフェニル−α−Ｄ−マルトトリオシド（ｐ−ｎｉｔｒｏｐｈｅｎｙｌ−α−Ｄ−ｍａｌｔｏｔｒｉｏｓｉｄｅ）であり、これらの増加初速度を酵素活性とした。
【００３０】
ＰＰＡのｐＮＰ−Ｇ５分解活性の基質濃度依存性をＲＢＡＩ存在下で検討し、Ｈａｎｅｓ−Ｗｏｏｌｆプロットを用いて解析したところ、ＲＢＡＩによるα−アミラーゼ活性の阻害はミカエリス定数の増大に起因する拮抗型と判別された（図６）。また、ＰＰＡおよび基質濃度を一定にして、ＲＢＡＩ濃度依存性を検討した。測定データを数２で示される式に近似してＲＢＡＩのＰＰＡに対するＫiを算出した（図７）。
【００３１】
【数２】
2006328017.tif 000003
【００３２】
ｖ：ＲＢＡＩ存在下の酵素活性、ｖO：ＲＢＡＩ非存在下の酵素活性、〔Ｓ〕O：基質初濃度、〔Ｉ2〕O：ＲＢＡＩ（二量体) 初濃度、Ｋm：ミカエリス定数、である。
【００３３】
この結果、ｐＨ６．９、３０°ＣにおけるＲＢＡＩのＰＰＡに対するＫiは１７．４±０．５ｎＭと求められた。同様に、ＨＳＡに対するＫiは１．０１±０．０６ｎＭ（図８）、ＨＰＡに対するＫiは１８．２±０．８ｎＭ（図９）とそれぞれ求められた。
【産業上の利用可能性】
【００３４】
本発明の新規蛋白質ＲＢＡＩはブタ膵臓、ヒト唾液、ヒト膵臓由来のα−アミラーゼの活性に対して強い阻害活性を有する。ＲＢＡＩをアミラーゼ阻害剤、血糖値上昇抑制剤、食品に有効成分として含有することにより、糖尿病、肥満、高血糖症、動脈硬化をはじめとする過剰の栄養摂取が原因と考えられる疾患の予防および治療に有効である。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】実施例１において、陽イオン交換カラムによるＲＢＡＩの分画を示す図である。
【図２】実施例１において、疎水性相互作用カラムによるＲＢＡＩの分画を示す図である。
【図３】実施例１において、ゲル濾過カラムによるＲＢＡＩ精製標品の溶出パターンを示す図である。
【図４】実施例１において、各精製段階標品およびＲＢＡＩ精製標品のＳＤＳ−ＰＡＧＥでの泳動パターンを示す図である。
【図５】実施例２において、ＰＰＡおよびＨＳＡのｐＮＰ−Ｇ２分解活性に対するＲＢＡＩの添加効果を示す図である。
【図６】実施例３において、ＰＰＡのｐＮＰ−Ｇ５分解活性の基質濃度依存性に対するＲＢＡＩの添加効果を示す図である。
【図７】実施例３において、ＰＰＡのｐＮＰ−Ｇ５分解活性に対するＲＢＡＩの添加効果を示す図である。
【図８】実施例３において、ＨＳＡのｐＮＰ−Ｇ５分解活性に対するＲＢＡＩの添加効果を示す図である。
【図９】実施例３において、ＨＰＡのｐＮＰ−Ｇ５分解活性に対するＲＢＡＩの添加効果を示す図である。
【図１】
2006328017.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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