(57)【要約】【課題】  本発明は、５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２等を含むホスホリルコリン類（特に、１−パルミトイル−２−（５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン（１））のジアステレオマー混合物もしくは個々のジアステレオマーを効率的に製造しうる製造方法を提供するものである。【解決手段】  ５，６−エポキシ・カルボン酸ジアステレオマー（４２ａ）、（４２ｂ）、（４２ｃ）もしくは（４２ｄ）またはジアステレオマー混合物（４２ｅ）を、リゾホスファチジルコリン（３）と縮合剤を用いて縮合させて、それぞれホスホリルコリン類・ジアステレオマー（４ａ）、（４ｂ）、（４ｃ）もしくは（４ｄ）またはジアステレオマー混合物（４ｅ）を得ることを特徴とするホスホリルコリン類の製造方法。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
５，６−エポキシ・カルボン酸ジアステレオマー（４２ａ）、（４２ｂ）、（４２ｃ）もしくは（４２ｄ）またはジアステレオマー混合物（４２ｅ）
【化１】
2006248992.tif 000034
（式中、Ｒ１は
【化２】
2006248992.tif 000035
もしくは
【化３】
2006248992.tif 000036
を示す。ｌおよびｎは２から１０、ｍは５から１３を表す。）
を、リゾホスファチジルコリン（３）
【化４】
2006248992.tif 000037
（式中、Ｒ２は１１〜１９の奇数炭素数を有するアルキル基を示す。）
と縮合剤を用いて縮合させて、それぞれホスホリルコリン類・ジアステレオマー（４ａ）、（４ｂ）、（４ｃ）もしくは（４ｄ）またはジアステレオマー混合物（４ｅ）
【化５】
2006248992.tif 000038
（式中、Ｒ１、Ｒ２、ｌ、ｍおよびｎは前記と同義である。）
を得ることを特徴とするホスホリルコリン類の製造方法。
【請求項２】
縮合剤が２，４，６−トリクロロベンゾイルクロライド、２，６−ジクロロベンゾイルクロライドおよびジシクロヘキシルカルボジイミドから選ばれる請求項１記載のホスホリルコリン類の製造方法。
【請求項３】
５，６−エポキシ・カルボン酸ジアステレオマー（４２ａ）、（４２ｂ）、（４２ｃ）もしくは（４２ｄ）またはジアステレオマー混合物（４２ｅ）が、シクロペンテノン類（４８）
【化６】
2006248992.tif 000039
をエポキシアルデヒドジアステレオマー（４９ａ）もしくは（４９ｂ）またはジアステレオマー混合物（４９ｅ）
【化７】
2006248992.tif 000040
とアルドール縮合させてアルドール付加物を得、ついでこれらのアルドール付加物をメシレート化し、ついで脱メシルオキシ化してシクロペンテノンエポキシド・ジアステレオマー混合物（４１１ａ）、（４１１ｂ）、（４１１ｃ）もしくは（４１１ｄ）またはジアステレオマー混合物（４１１ｅ）
【化８】
2006248992.tif 000041
を得、ついでこれらのシクロペンテノンエポキシドを加水分解して得られる請求項１もしくは２記載のホスホリルコリン類の製造方法。
【請求項４】
５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２ジアステレオマー（２ａ）、（２ｂ）、（２ｃ）もしくは（２ｄ）またはジアステレオマー混合物（２ｅ）
【化９】
2006248992.tif 000042
を、リゾホスファチジルコリン（３）
【化１０】
2006248992.tif 000043
と縮合剤を用いて縮合させて、それぞれ１−パルミトイル−２−（５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン・ジアステレオマー（１ａ）、（１ｂ）、（１ｃ）もしくは（１ｄ）またはジアステレオマー混合物（１ｅ）
【化１１】
2006248992.tif 000044
を得ることを特徴とするホスホリルコリン類の製造方法。
【請求項５】
縮合剤が２，４，６−トリクロロベンゾイルクロライド、２，６−ジクロロベンゾイルクロライドおよびジシクロヘキシルカルボジイミドから選ばれる請求項４記載のホスホリルコリン類の製造方法。
【請求項６】
５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２ジアステレオマー（２ａ）、（２ｂ）、（２ｃ）もしくは（２ｄ）またはジアステレオマー混合物（２ｅ）が、（Ｒ）−４−[（２Ｚ）−オクテニル]−２−シクロペンテン−１−オン（８）
【化１２】
2006248992.tif 000045
をエポキシアルデヒドジアステレオマー（９ａ）もしくは（９ｂ）またはジアステレオマー混合物（９ｅ）
【化１３】
2006248992.tif 000046
とアルドール縮合させてアルドール付加物を得、ついでこれらのアルドール付加物を脱メシルオキシ化し、ついでエステル化してシクロペンテノンエポキシド・ジアステレオマー（１１ａ）、（１１ｂ）、（１１ｃ）もしくは（１１ｄ）またはジアステレオマー混合物（１１ｅ）
【化１４】
2006248992.tif 000047
を得、ついでこれらのシクロペンテノン・エポキシドを加水分解して得られる請求項４もしくは５記載のホスホリルコリン類の製造方法。
【請求項７】
次式（１ａ）で示される１−パルミトイル−２−（５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン・ジアステレオマー。
【化１５】
2006248992.tif 000048
【請求項８】
次式（１ｂ）で示される１−パルミトイル−２−（５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン・ジアステレオマー。
【化１６】
2006248992.tif 000049
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２等を含むホスホリルコリン類の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２を構成成分とする１−パルミトイル−２−（５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン（１）
【０００３】
【化１】
2006248992.tif 000002
【０００４】
は、高脂血症や高コレステロール血症の成人にみられるアテローム性動脈硬化の原因分子のひとつであることが最近明らかになっている（非特許文献１）。この化合物はＬＤＬ（低密度リポタンパク質）に含まれるアラキドン酸含有ホスホリルコリンのアラキドン酸部位が酸化されて生成したものである。動脈硬化を予防するために、この分子に関する研究が今後も継続していくと考えられるが、この化合物の入手は困難であり、平面構造しか判明しておらない。したがって、この化合物の製造方法の開発および立体構造を明らかにすることが急務となっている。
【０００５】
一方、アラキドン酸含有ホスホリルコリンを酸化剤にさらすと、アラキドン酸部位が酸
化されて、他の酸化生成体とともに化合物（１）が生成する（非特許文献１）。しかしながら、化合物（１）の収率は１％以下であり、効率的ではない。そして、５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２（２）
【０００６】
【化２】
2006248992.tif 000003
【０００７】
に類似した化合物（ω鎖が２Ｚ−オクテニル基の代わりにアリル基CH２=CH-CH２-）に替わった化合物）を、プロスタグランジンを化学合成するための有力な方法のひとつであるプロスタグランジン三成分連結法を用いて合成することが提案されている（非特許文献２）。しかし、この方法も製造効率が極めて低いことが示されている。
【０００８】
さらに、化合物（１）を合成する最終段階では、化合物（２）部分、パルミチン酸部分およびホスホリルコリン部分をグリセロールにエステル化する必要がある。簡単な脂肪酸からなる１，２−ジアシルホスホリルコリン類の合成について数多くの報告があり、それらを応用すれば化合物（１）を簡単に合成できると考えられなくもないが、化合物（２）は酸性条件でもアルカリ条件でも不安定であり、効率の良い合成方法については報告されていない。
【０００９】
【非特許文献１】Ｊ.Biol.Chem.,1999,274,24787-24798
【非特許文献２】Chem.Commun.,2003,196-197
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２等を含むホスホリルコリン類（特に、１−パルミトイル−２−（５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン（１））のジアステレオマー混合物もしくは個々のジアステレオマーを効率的に製造しうる製造方法を提供するものである。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、上記の課題を解決するために以下の発明を提供する。
（１）  ５，６−エポキシ・カルボン酸ジアステレオマー（４２ａ）、（４２ｂ）、（４２ｃ）もしくはジアステレオマー混合物（４２ｄ）または（４２ｅ）
【００１２】
【化３】
2006248992.tif 000004
【００１３】
（式中、Ｒ１は
【００１４】
【化４】
2006248992.tif 000005
【００１５】
もしくは
【００１６】
【化５】
2006248992.tif 000006
【００１７】
を示す。ｌおよびｎは２から１０、ｍは５から１３を表す。）
を、リゾホスファチジルコリン（３）
【００１８】
【化６】
2006248992.tif 000007
【００１９】
（式中、Ｒ２は１１〜１９の奇数炭素数を有するアルキル基を示す。）
と縮合剤を用いて縮合させて、それぞれホスホリルコリン類・ジアステレオマー（４ａ）、（４ｂ）、（４ｃ）もしくは（４ｄ）またはジアステレオマー混合物（４ｅ）
【００２０】
【化７】
2006248992.tif 000008
【００２１】
（式中、Ｒ１、Ｒ２、ｌ、ｍおよびｎは前記と同義である。）
を得ることを特徴とするホスホリルコリン類の製造方法；
（２）縮合剤が２，４，６−トリクロロベンゾイルクロライド、２，６−ジクロロベンゾイルクロライドおよびジシクロヘキシルカルボジイミドから選ばれる（１）記載のホスホリルコリン類の製造方法；
（３）５，６−エポキシ・カルボン酸ジアステレオマー（４２ａ）、（４２ｂ）、（４２ｃ）もしくは（４２ｄ）またはジアステレオマー混合物（４２ｅ）が、シクロペンテノン類（４８）
【００２２】
【化８】
2006248992.tif 000009
【００２３】
をエポキシアルデヒドジアステレオマー（４９ａ）もしくは（４９ｂ）またはジアステレオマー混合物（４９ｅ）
【００２４】
【化９】
2006248992.tif 000010
【００２５】
とアルドール縮合させてアルドール付加物を得、ついでこれらのアルドール付加物をメシレート化し、ついで脱メシルオキシ化してシクロペンテノンエポキシド・ジアステレオマー（４１１ａ）、（４１１ｂ）、（４１１ｃ）もしくは（４１１ｄ）またはジアステレオマー混合物（４１１ｅ）
【００２６】
【化１０】
2006248992.tif 000011
【００２７】
を得、ついでこれらのシクロペンテノン・エポキシドを加水分解して得られる（１）もしくは（２）記載のホスホリルコリン類の製造方法；
（４）５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２ジアステレオマー（２ａ）、（２ｂ）、（２ｃ）もしくは（２ｄ）またはジアステレオマー混合物（２ｅ）
【００２８】
【化１１】
2006248992.tif 000012
【００２９】
を、リゾホスファチジルコリン（３）
【００３０】
【化１２】
2006248992.tif 000013
【００３１】
と縮合剤を用いて縮合させて、それぞれ１−パルミトイル−２−（５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン・ジアステレオマー（１ａ）、（１ｂ）、（１ｃ）もしくは（１ｄ）またはジアステレオマー混合物（１ｅ）
【００３２】
【化１３】
2006248992.tif 000014
【００３３】
を得ることを特徴とするホスホリルコリン類の製造方法；
（５）縮合剤が２，４，６−トリクロロベンゾイルクロライド、２，６−ジクロロベンゾイルクロライドおよびジシクロヘキシルカルボジイミドから選ばれる（４）記載のホスホリルコリン類の製造方法；
（６）５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２ジアステレオマー（２ａ）、（２ｂ）、（２ｃ）もしくは（２ｄ）またはジアステレオマー混合物（２ｅ）が、（Ｒ）−４−[（２Ｚ）−オクテニル]−２−シクロペンテン−１−オン（８）
【００３４】
【化１４】
2006248992.tif 000015
【００３５】
をエポキシアルデヒドジアステレオマー（９ａ）もしくは（９ｂ）またはジアステレオマー混合物（９ｅ）
【００３６】
【化１５】
2006248992.tif 000016
【００３７】
とアルドール縮合させてアルドール付加物を得、ついでこれらのアルドール付加物を脱メシルオキシ化し、ついでエステル化してシクロペンテノンエポキシド・ジアステレオマー（１１ａ）、（１１ｂ）、（１１ｃ）もしくは（１１ｄ）またはジアステレオマー混合物（１１ｅ）
【００３８】
【化１６】
2006248992.tif 000017
【００３９】
を得、ついでこれらのシクロペンテノン・エポキシドを加水分解して得られる（４）もしくは（５）記載のホスホリルコリン類の製造方法；
（７）次式（１ａ）で示される１−パルミトイル−２−（５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン・ジアステレオマー
【００４０】
【化１７】
2006248992.tif 000018
【００４１】
；ならびに
（８）次式（１ｂ）で示される１−パルミトイル−２−（５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン・ジアステレオマー
【００４２】
【化１８】
2006248992.tif 000019
【００４３】
、である。
【発明の効果】
【００４４】
本発明によれば、５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２等を含むホスホリルコリン類（特に、１−パルミトイル−２−（５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン（１））のジアステレオマー混合物もしくは個々のジアステレオマーを効率的に製造しうる製造方法を提供しうる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４５】
本発明のホスホリルコリン類の製造方法において、ホスホリルコリン類・ジアステレオマー（４ａ）、（４ｂ）、（４ｃ）もしくは（４ｄ）またはジアステレオマー混合物（４ｅ）は、それぞれ５，６−エポキシ・カルボン酸ジアステレオマー（４２ａ）、（４２ｂ）、（４２ｃ）もしくは（４２ｄ）またはジアステレオマー混合物（４２ｅ）は、リゾホスファチジルコリン（３）と縮合剤を用いて縮合することにより得られる。
【００４６】
【化１９】
2006248992.tif 000020
【００４７】
上記ホスホリルコリン類・ジアステレオマー（４ａ）、（４ｂ）、（４ｃ）もしくは（４ｄ）またはジアステレオマー混合物（４ｅ）、ならびに５，６−エポキシ・カルボン酸ジアステレオマー（４２ａ）、（４２ｂ）、（４２ｃ）もしくは（４２ｄ）またはジアステレオマー混合物（４２ｅ）において、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）、（ｄ）および（ｅ）体は次のとおりである。
【００４８】
【化２０】
2006248992.tif 000021
【００４９】
この縮合反応に際しては、縮合剤として２，４，６−トリクロロベンゾイルクロライド、２，６−ジクロロベンゾイルクロライドおよびジシクロヘキシルカルボジイミド等が効率的な反応を行うために好適であり、２，４，６−トリクロロベンゾイルクロライドが最も好適である。反応は有機溶媒中で、たとえば２０〜４０℃で１２〜４８時間程度、行われる。
【００５０】
上記の５，６−エポキシ・カルボン酸（４２ａ）、（４２ｂ）、（４２ｃ）もしくは（４２ｄ）または（４２ｅ）は、好適には次のような方法により得られる。
【００５１】
すなわち、シクロペンテノン類（４８）をエポキシアルデヒドジアステレオマー（４９ａ）もしくは（４９ｂ）またはジアステレオマー混合物（４９ｅ）とアルドール縮合させてアルドール付加物を得、ついでこれらのアルドール付加物をメシレート化し、ついで脱メシルオキシ化してシクロペンテノン・エポキシドジアステレオマー（４１１ａ）、（４１１ｂ）、（４１１ｃ）もしくは（４１１ｄ）またはジアステレオマー混合物（４１１ｅ）を得、ついでこれらのシクロペンテノン・エポキシドを加水分解して得られる。
【００５２】
上記のアルドール縮合は通常−５０〜−８０℃で、５〜３０分間程度、好適には−７８℃で、１０〜２０分間程度、メシレート化は通常−２０〜２０℃で、１０〜１２０分間程度、そして脱メシルオキシは通常−２０〜２０℃で、０．５〜２４時間程度、有機溶媒中で行われる。シクロペンテノン・エポキシドの加水分解は、通常０〜２５℃で、１０分〜１０時間程度、好適にはリパーゼを用いて行われる。
【００５３】
本発明のホスホリルコリン類の製造方法において、５，６−エポキシ・カルボン酸ジアステレオマー（４２ａ）、（４２ｂ）、（４２ｃ）もしくは（４２ｄ）またはジアステレオマー混合物（４２ｅ）として最も好適には５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２ジアステレオマー（２ａ）、（２ｂ）、（２ｃ）もしくは（２ｄ）またはジアステレオマー混合物（２ｅ）が挙げられる。この場合、これらの５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２（２ａ）、（２ｂ）、（２ｃ）もしくは（２ｄ）または（２ｅ）をリゾホスファチジルコリン（３）と縮合剤を用いて縮合することによりそれぞれ１−パルミトイル−２−（５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン・ジアステレオマー（１ａ）、（１ｂ）、（１ｃ）もしくは（１ｄ）またはジアステレオマー混合物（１ｅ）が得られる。
【００５４】
上記の５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２（２ａ）、（２ｂ）、（２ｃ）もしくは（２ｄ）または（２ｅ）は、好適には（Ｒ）−４−[（２Ｚ）−オクテニル]−２−シクロペンテン−１−オン（８）をエポキシアルデヒド（９ａ）もしくは（９ｂ）または（９ｅ）とアルドール縮合させてアルドール付加物を得、ついでこれらのアルドール付加物を脱メシルオキシ化し、ついでエステル化してシクロペンテノン・エポキシド（１１ａ）、（１１ｂ）、（１１ｃ）もしくは（１１ｄ）または（１１ｅ）を得、ついでこれらのシクロペンテノン・エポキシドを加水分解して得られる。
【００５５】
これらの反応ルートは次のように示される。
【００５６】
【化２１】
2006248992.tif 000022
【実施例】
【００５７】
以下、本発明を実施例によりさらに詳細に説明するが、本発明はその要旨を超えない限りこれらの実施例に限定されるものではない。
実施例１
【００５８】
【化２２】
2006248992.tif 000023
【００５９】
（(1R,4S)-4-[(tert-ブチルジメチルシリル)オキシ]-2-シクロペンテン-1-イル アセテート(5).
５員環モノアセテート (1.52 g, 10.7 mmol) の DMF (22 mL) 溶液に t-BuMe2SiCl (2.42 g, 16.04 mmol) を加え，室温下，２時間反応させた。飽和重曹水とヘキサンを加え反応を停止した後，激しくかきまぜた。ヘキサン層を分離し，水層をヘキサンで抽出した。抽出液を１つに集め，乾燥後，減圧濃縮し，得られた粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー精製するとシリルエーテル 5 が 2.58 g 得られた (収率 94%)：1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.08 (s, 3 H), 0.09 (s, 3 H), 0.89 (s, 9 H), 1.60 (dt, J = 14, 5 Hz, 2 H), 2.04 (s, 3 H), 2.80 (dt, J = 14, 7.5 Hz, 1 H), 4.66-4.75 (m, 1 H), 5.42-5.50 (m, 1 H), 5.88 (dt, J = 6, 1.5 Hz, 1 H), 5.97 (dt, J = 6, 1.5 Hz, 1 H).  
【００６０】
【化２３】
2006248992.tif 000024
【００６１】
ジメチル(1R,4S)-4-[(tert-ブチルジメチルシリル)オキシ]-2-シクロペンテン-1-イル マロネート.
t-BuOK (2.19 g, 19.5 mmol) の THF サスペンジョン (18 mL) の中にジメチルマロネート (2.46 mL, 21.4 mmol) を加え，30 分かきまぜた。その後，Pd(PPh3)4 (564 mg, 0.49 mmol) と THF (2 mL) に溶解したシリルエーテル 5 (2.50 g, 9.76 mmol) を加え，反応は 55 °C に加温して３時間反応させた。反応終了後，飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた。有機層を分かち，水層を hexane で抽出した。抽出液を１つに集め，乾燥し，減圧下溶媒を留去した。得られた粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー精製するとマロネート付加体が 2.98 g 得られた (収率 93%)： 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.06 (s, 6 H), 0.88 (s, 9 H), 1.40 (ddd, J = 14, 11, 5 Hz, 1 H), 2.44 (dt, J = 14, 7 Hz, 1 H), 3.15-3.26 (m, 1 H), 3.37 (d, J = 10 Hz, 1 H), 3.74 (s, 6 H), 4.77-4.84 (m, 1 H), 5.80 (s, 2 H).
【００６２】
【化２４】
2006248992.tif 000025
【００６３】
メチル(1R,4S)-4-[(tert-ブチルジメチルシリル)オキシ]-2-シクロペンテン-1-イル アセネート(6).
マロネート付加体 (2.8 g, 8.52 mmol), KI (11.32 g, 68.2 mmol), DMI (30 mL), および 水 (3 mL) から成る混合物を 130 oC に熱しながら 10 時間反応させた。室温に戻し，水と hexane を加え，激しくかき混ぜた後，２層を分離し，水層を hexane で４回抽出した。抽出液を１つに集め，減圧下溶媒を留去し，得られた粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィー精製するとアセテート誘導体 6 が 2.05 g 得られた (収率 89%)： [α]31D -19 (c 0.56, CHCl3); IR (neat) 1742, 1252, 1085, 836, 776 cm-1; 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.07 (s, 6 H), 0.89 (s, 9 H), 1.30 (ddd, J = 13, 6, 5 Hz, 1 H), 2.38 (dd, J = 16, 8 Hz, 1 H), 2.46 (dt, J = 13, 7.5 Hz, 1 H), 2.48 (dd, J = 16, 7 Hz, 1 H) 2.86-3.00 (m, 1 H), 3.68 (s, 3 H), 4.78-4.86 (m, 1 H), 5.74 (dt, J = 6, 2 Hz, 1 H), 5.80 (dt, J = 6, 2 Hz, 1 H).
【００６４】
【化２５】
2006248992.tif 000026
【００６５】
(1S,4R)-4-[(2Z)-オクテニル]-1-[(t-ブチルジメチルシリル)オキシ]-2-シクロペンテン(7).
エステル 6 (1.80 g, 6.66 mmol) の入っている CH2Cl2 溶液 (25 mL) を -70 oC に冷却し，この中に i-Bu2Al-H のヘキサン溶液 (7.98 mL, 0.95 M, 7.58 mmol) をゆっくり滴下した。45 分後，H2O (2.5 mL, 140 mmol) とエーテル (15 mL) の入っているフラスコにあけた。続いて NaF (2.8 g, 67 mmol) を加え，30 分かき混ぜ，セライトろ過した。ろ液を減圧下濃縮し，シリカゲルカラム精製すると (1R,4S)-4-[(tert-ブチルジメチルシリル)オキシ]-2-シクロペンテン-1-イル エタナールが 1.42 g 得られた (収率 89%)。
【００６６】
Rf value 0.56, hexane/EtOAc (5 : 1); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.05 (s, 6 H), 0.87 (s, 9 H), 1.29 (ddd, J = 13, 6, 5 Hz, 1 H), 2.41-2.68 (m, 3 H), 2.92-3.04 (m, 1 H), 4.78-4.85 (m, 1 H), 5.71-5.80 (m, 2 H), 9.79 (s, 1 H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ -4.44, -4.42 18.3, 26.1, 38.1, 40.9, 50.6, 77.2, 135.0, 135.4, 201.6; [α]30D -23 (c 0.38, CHCl3). 
i-Bu2Al-H のヘキサン溶液 :  関東化学
NaF :  小宗化学薬品
(Ph3PC6H13)+Br- (1.80 g, 4.21 mmol) と THF (20 mL) の入ったフラスコを氷浴に浸し，この混合物の中に NaN(TMS)2 の THF 溶液 (4.56 mL, 1.0 M, 4.56 mmol) を滴下した。氷浴をはずして 30 分かき混ぜた後，-50 °C 以下に冷却した。次に，上で合成したアルデヒド (500 mg, 2.08 mmol) を加えた。反応は，-70 ~ -50 °C にて１時間，その後冷却浴をはずしてから，室温下で 12 時間行なった。飽和塩化アンモニウム水溶液に反応溶液を注ぎ，生成物をヘキサンで３回抽出した。抽出液を１つに集め，無水硫酸マグネシウムを加えて乾燥させた。減圧下濃縮し，粗生成物をシリカゲルカラム精製するとオレフィン 7 が 610 mg 得られた (収率 95%)。
【００６７】
Rf value 0.76, hexane/EtOAc (8 : 1); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.07 (s, 3 H), 0.08 (s, 3 H), 0.84-0.94 (m, 12 H), 1.22-1.42 (m, 7 H), 1.96-2.28 (m, 4 H), 2.37 (dt, J = 13, 7 Hz, 1 H), 2.46-2.58 (m, 1 H), 4.78-4.86 (m, 1 H), 5.29-5.50 (m, 2 H), 5.71 (dt, J = 5.5, 2 Hz, 1 H), 5.89 (dt, J = 5.5, 2 Hz, 1 H).   
(Ph3PC6H13)+Br- :  当該研究室で n-C6H13Br と PPh3 から合成した
NaN(TMS)2 の THF 溶液 :  Aldrich
【００６８】
【化２６】
2006248992.tif 000027
【００６９】
(R)-4-[(2Z)-オクテニル]-2-シクロペンテン-1-オン(8).
オレフィン 7 (610 mg, 1.98 mmol) を THF (4 mL) に溶解し，この中に Bu4NF の THF 溶液を加えた (3 mL, 1.0 M, 3.0 mmol)。室温にて，３時間かき混ぜた後，飽和塩化アンモニウム水溶液を加えた。粗生成物を３回酢酸エチル抽出した。抽出液を１つに集め，無水硫酸マグネシウムを加えて乾燥させた。減圧下濃縮し，粗生成物をシリカゲルカラム精製すると (1S,4R)-4-[(2Z)-オクテニル]-2-シクロペンテン-1-オールが 341 mg 得られた (収率 89%)。
【００７０】
Rf value 0.42, hexane/EtOAc (4 : 1); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.89 (t, J = 7 Hz, 3 H), 1.20-1.42 (m, 7 H), 1.49 (br s, 1 H), 2.03 (q, J = 7 Hz, 2 H), 2.06-2.28 (m, 2 H), 2.47 (dt, J = 14, 8 Hz, 1 H), 2.60-2.72 (m, 1 H), 4.78 (br s, 1 H), 5.30-5.53 (m, 2 H), 5.80 (dt, J = 5.5, 2 Hz, 1 H), 5.87 (dt, J = 5.5, 2 Hz); 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 14.1, 22.6, 27.4, 29.4, 31.6, 33.7, 39.9, 44.6, 77.4, 127.3, 131.8, 133.5, 138.4. 
Bu4NF の THF 溶液 :  アルドリッチ
上記のように合成したアルコール (501 mg, 2.58 mmol) を CH2Cl2 (30 mL) に溶解し，この中に PCC (833 mg, 3.86 mmol) を加えた。室温にて，２時間激しくかき混ぜ，その後エーテルを加えて希釈した。生じた混合物をセライトろ過し，ろ過を減圧下濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラム精製するとシクロペンテノン 8 が 462 mg 得られた (収率 93%)。
【００７１】
Rf value 0.55, hexane/EtOAc (4 : 1); 1H NMR (300 MHz, CDCl3) δ 0.88 (t, J = 7 Hz, 3 H), 1.16-1.46 (m, 6 H), 1.88-2.10 (m, 3 H), 2.14-2.36 (m, 2 H), 2.51 (dd, J = 19, 6 Hz, 1 H), 2.92-3.08 (m, 1 H), 5.25-5.42 (m, 1 H), 5.43-5.59 (m, 1 H), 6.17 (dd, J = 6, 2 Hz, 1 H), 7.63 (dd, J = 6, 2 Hz, 1 H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 14.1, 22.6, 27.4, 29.3, 31.6, 32.0, 40.6, 41.5, 125.4, 133.0, 134.2, 168.2, 210.1.
PCC :  東京化成
【００７２】
【化２７】
2006248992.tif 000028
【００７３】
5,6-エポキシ-イソプロスタン A2 メチルエステル(11a).
LDA (1.31 mmol) の THF 溶液は THF 中 (8 mL)，i-Pr2NH (0.22 mL, 1.57 mmol) に n-BuLi のヘキサン溶液 (0.71 mL, 1.84 M, 1.31 mmol) を作用させて合成した (0 °C, 30 min)。
【００７４】
この LDA 溶液を -78 °C に冷却し，この中にシクロペンテノン 8 (100 mg, 0.52 mmol) の THF 溶液 (2 mL) を加えた。20 分後，エポキシアルデヒド 9a (134 mg, 0.78 mmol) を加えた。同じ温度で 20 分かき混ぜ，その後，飽和塩化アンモニウム水溶液とエーテルの混合液の中に注いだ。有機層を分かち，水層を酢酸エチルで２回抽出した。抽出液を１つに集め，無水硫酸マグネシウムを加えて乾燥させた。減圧下濃縮し，粗生成物をヘキサンと酢酸エチルとの混合溶媒を用いて短いシリカゲルカラムを通すとアルドール付加物 10a が得られた。こうして合成した生成物はこのまま次の反応に用いた。
【００７５】
i-Pr2NH :  東京化成
n-BuLi のヘキサン溶液:  当該研究室で合成した
エポキシアルデヒド 9a :  下記の文献にしたがって合成した。
【００７６】
文献：A. M. Kornilov, A. E. Sorochinskii, I. A. Butovich, V. P. Kukhar, 
Zh. Org. Khim. 1987, 23, 2470-2471; J. Org. Chem. USSR. 1987, 23, 
2183-2184.
このアルドール付加物 10a を CH2Cl2 (5 mL) に溶解し，0 °C に冷却後，Et3N (0.73 mL, 5.24 mmol) と MsCl (0.21 mL, 2.71 mmol) を加えた。そのままの温度で１時間かき混ぜ，飽和重曹水と酢酸エチルを加えた。有機層を分かち，水層を酢酸エチルで２回抽出した。抽出液を１つに集め，無水硫酸マグネシウムを加えて乾燥させた。減圧下濃縮し，粗生成物をヘキサンと酢酸エチルとの混合溶媒を用いて短いシリカゲルカラムを通すと相当するメシレートが得られた。こうして合成した生成物はこのまま次の反応に用いた。
【００７７】
Et3N :  東京化成
MsCl :  東京化成
このメシレートを CH2Cl2 (7 mL) に溶解し，この中にアルミナ (530 mg, 5.20 mmol) を加えた。混合物を室温にて６時間激しくかき混ぜ，その後，セライトろ過し，ろ過を減圧下濃縮した。粗生成物をシリカゲルカラム精製するとシクロペンテノン・エポキシド 11a が 92 mg 得られた (エノン 8 からの収率 51%)。
【００７８】
アルミナ :  Alumina N - Super I, ICN
以下に 11a のデータを示すが，このうち 1H NMR スペクトルは CDCl3 中の残存 CHCl3 をδ7.26 ppm と 7.24 ppm にセットした場合の２つのデータを示した。
【００７９】
Rf value 0.55, hexane/EtOAc (2 : 1); 1H NMR (500 MHz, CHCl3 in CDCl3 at 7.26 ppm) δ 0.87 (t, J = 7 Hz, 3 H), 1.20-1.38 (m, 6 H), 1.54-1.64 (m, 2 H), 1.76-1.88 (m, 2 H), 1.97 (q, J = 7 Hz, 2 H), 2.28-2.42 (m, 3 H), 2.50-2.58 (m, 1 H), 2.96-3.04 (m, 1 H), 3.38 (dd, J = 9, 2 Hz, 1 H), 3.62-3.74 (m, 1 H), 3.67 (s, 3 H), 5.28-5.40 (m, 1 H), 5.46-5.56 (m, 1 H), 6.18 (d, J = 9 Hz, 1 H), 6.35 (dd, J = 6, 1 Hz, 1 H), 7.54 (dd, J = 6, 3 Hz, 1 H). 1H NMR (500 MHz, CHCl3 in CDCl3 at 7.24 ppm) δ 0.85 (t, J = 7 Hz, 3 H), 1.18-1.36 (m, 6 H), 1.52-1.62 (m, 2 H), 1.74-1.86 (m, 2 H), 1.95 (q, J = 7 Hz, 2 H), 2.26-2.40 (m, 3 H), 2.48-2.56 (m, 1 H), 2.94-3.02 (m, 1 H), 3.36 (dd, J = 9, 2 Hz, 1 H), 3.60-3.72 (m, 1 H), 3.65 (s, 3 H), 5.26-5.38 (m, 1 H), 5.44-5.54 (m, 1 H), 6.16 (d, J = 9 Hz, 1 H), 6.33 (dd, J = 6, 1 Hz, 1 H), 7.52 (dd, J = 6, 3 Hz, 1 H); 13C NMR (300 MHz, CDCl3) δ 14.1, 21.4, 22.6, 27.4, 29.2, 30.9, 31.3, 31.6, 33.5, 43.1, 51.7, 54.3, 60.4, 124.3, 131.0, 133.6, 134.6, 141.8, 162.2, 173.6, 195.8. 
【００８０】
【化２８】
2006248992.tif 000029
【００８１】
5,6-エポキシ-イソプロスタンA2 (2a).
エステル 11a (25 mg, 0.072 mmol) をアセトン (0.7 mL) とリン酸緩衝液  (pH 7, 3.5 mL) に溶かし，その中に PPL (150 mg) を加えた。室温にて２時間かき混ぜ，酢酸エチルで希釈後，セライトろ過した。得られたろ液を減圧下濃縮し，粗生成物をシリカゲルカラム精製するとカルボン酸 2a が 21 mg 得られた (収率 89%)。
【００８２】
Rf value 0.24, hexane/EtOAc (1 : 2); 1H NMR (500 MHz, CHCl3 in CDCl3 at 7.24 ppm) δ 0.86 (t, J = 7 Hz, 3 H), 1.17-1.38 (m, 6 H), 1.54-1.66 (m, 1 H), 1.74-1.88 (m, 3 H), 1.95 (q, J = 7 Hz, 2 H), 2.25-2.35 (m, 1 H), 2.38-2.46 (m, 3 H), 2.49-2.55 (m, 1 H), 2.94-3.00 (m, 1 H), 3.38 (dd, J = 8, 2 Hz, 1 H), 3.60-3.67 (m, 1 H), 5.24-5.36 (m, 1 H), 5.44-5.53 (m, 1 H), 6.17 (d, J = 9 Hz, 1 H), 6.33 (dd, J = 6, 2 Hz, 1 H), 7.52 (dd, J = 6, 2.5 Hz, 1 H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 14.1, 21.2, 22.6, 27.4, 29.3, 31.2, 31.6, 31.9, 33.3, 43.4, 55.0, 59.9, 124.5, 131.0, 133.5, 134.5, 141.2, 162.1, 177.6, 195.9. 
PPL (150 mg) :  lipase from porcine pancreas, Type II, シグマ
【００８３】
【化２９】
2006248992.tif 000030
【００８４】
5,6-エポキシ-イソプロスタンA2 メチルエステル (11b).
11a の合成法に従い，エノン 8 からジアステレオマー 11b を合成した。使用した試薬類と収量・収率は以下の通り。
【００８５】
(1) アルドール反応による 10b の合成：  エノン 8 (150 mg, 0.78 mmol)，i-Pr2NH (0.27 mL, 1.93 mmol)，n-BuLi (0.89 mL, 1.75 M in hexane, 1.56 mmol)，THF (16 mL)。
【００８６】
(2) 10b のメシレート化：  上で合成した 10b，MsCl (0.36 mL, 4.65 mmol)，Et3N (1.10 mL, 7.90 mmol)，CH2Cl2 (8 mL)。
【００８７】
(3) エポキシ・エステル 11b の合成：  上で合成したメシレート，Al2O3 (800 mg, 7.85 mmol)，CH2Cl2 (16 mL)。11b の収量： 141 mg, エノン 8 からの収量 53%。
【００８８】
以下に 11b のデータを示すが，このうち 1H NMR スペクトルは CDCl3 中の残存 CHCl3 をδ7.26 ppm と 7.24 ppm にセットした場合の２つのデータを示した。
【００８９】
Rf value 0.54, hexane/EtOAc (2 : 1); 1H NMR (500 MHz, CHCl3 in CDCl3 at 7.26 ppm) δ 0.87 (t, J = 7 Hz, 3 H), 1.20-1.38 (m, 6 H), 1.61-1.88 (m, 4 H), 1.98 (q, J = 7 Hz, 2 H), 2.32-2.42 (m, 3 H), 2.62-2.70 (m, 1 H), 2.98-3.02 (m, 1 H), 3.38 (dd, J= 9, 2 Hz, 1 H), 3.62-3.72 (m, 1 H), 3.67 (s, 3 H), 5.30-5.38 (m, 1 H), 5.48-5.56 (m, 1 H), 6.12 (d, J = 9 Hz, 1 H), 6.36 (dd, J = 6, 2 Hz, 1 H), 7.56 (dd, J = 6, 2 Hz, 1 H). 1H NMR (500 MHz, CHCl3 in CDCl3 at 7.24 ppm) δ 0.85 (t, J = 7 Hz, 3 H), 1.18-1.36 (m, 6 H), 1.59-1.86 (m, 4 H), 1.96 (q, J = 7 Hz, 2 H), 2.30-2.40 (m, 3 H), 2.60-2.68 (m, 1 H), 2.96-3.00 (m, 1 H), 3.36 (dd, J= 9, 2 Hz, 1 H), 3.60-3.70 (m, 1 H), 3.65 (s, 3 H), 5.28-5.36 (m, 1 H), 5.46-5.54 (m, 1 H), 6.10 (d, J = 9 Hz, 1 H), 6.34 (dd, J = 6, 2 Hz, 1 H), 7.54 (dd, J = 6, 2.5 Hz, 1 H).
【００９０】
【化３０】
2006248992.tif 000031
【００９１】
5,6-エポキシ-イソプロスタンA2 (2b).
2a の合成法に従い，メチルエステル 11b から 2b を合成した。使用した試薬類と収量・収率は以下の通り。
【００９２】
メチルエステル 11b (45 mg, 0.13 mmol)，PPL (270 mg)，acetone (1 mL)，リン酸緩衝液 (pH 7, 5 mL)。カルボン酸 2b の収量： 38 mg, 87%。
【００９３】
Rf value 0.23, hexane/EtOAc (1 : 2); 1H NMR (500 MHz, CHCl3 in CDCl3 at 7.24 ppm) δ 0.86 (t, J = 7 Hz, 3 H), 1.18-1.36 (m, 6 H), 1.60-1.88 (m, 4 H), 1.97 (q, J = 7 Hz, 2 H), 2.28-2.48 (m, 3 H), 2.60-2.68 (m, 1 H), 2.96-3.02 (m, 1 H), 3.37 (dd, J = 9, 2 Hz, 1 H), 3.60-3.68 (m, 1 H), 5.29-5.36 (m, 1 H), 5.48-5.54 (m, 1 H), 6.10 (d, J = 9.5 Hz, 1 H), 6.35 (dd, J = 6, 2 Hz, 1 H), 7.55 (dd, J = 6, 2 Hz, 1 H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3) δ 14.1, 21.1, 22.6, 27.4, 29.2, 30.9, 31.2, 31.5, 33.4, 43.1, 54.3, 60.4, 124.3, 131.1, 133.6, 134.6, 141.8, 162.4, 178.8, 195.9.
【００９４】
【化３１】
2006248992.tif 000032
【００９５】
1-パルミトイル-2-(5,6-エポキシ-イソプロスタンA2)-sn-グリセロ-3-ホスホリルコリン (1a).
lyso-PC 3 (12 mg, 0.024 mmol)，Et3N (0.10 mL, 0.73 mmol)，および DMAP (18 mg, 0.144 mmol) の入っている CH2Cl2 (1.5 mL) の中にカルボン酸 2a (24 mg, 0.073 mmol) の CH2Cl2 (1 mL) 溶液を滴下した。10分後，2,4,6-Cl3C6H2COCl (0.023 mL, 0.16 mmol) を加えて反応を開始させた。室温にて 36 時間かき混ぜた後，H2O を数滴滴下した。反応液を濃縮し，得られた粗生成物をシリカゲルカラム精製したところ，目的のエステル 1a と DMAP の混合物が得られた。次に，この混合物を逆層シリカゲルカラム精製すると，DMAP が分離され，エステル 1a が 10 mg 得られた (収率 53%)。
【００９６】
Rf value 0.19, MeOH; 1H NMR (500 MHz, CHCl3 in CDCl3 at 7.24 ppm) δ 0.86 (t, J = 7 Hz, 6 H), 1.1-2.6 (m, 44 H), 2.94-2.99 (m, 1 H), 3.24-3.42 (m, 10 H), 3.58-4.42 (m, 9 H), 5.16-5.24 (m, 1 H), 5.26-5.36 (m, 1 H), 5.44-5.54 (m, 1 H), 6.13 (d, J = 9 Hz, 1 H), 6.32 (dd, J = 6.5, 2 Hz, 1 H), 7.52 (dd, J = 6, 2 Hz, 1 H).
Et3N :  東京化成
DMAP :   アルドリッチ
2,4,6-Cl3C6H2COCl :  アルドリッチ
【００９７】
【化３２】
2006248992.tif 000033
【００９８】
1-パルミトイル-2-(5,6-エポキシ-イソプロスタンA2)-sn-グリセロ-3-ホスホリルコリン(1b).
上記の 1a の合成に従い，2b (16 mg, 0.048 mmol)，lyso-PC 3 (8 mg, 0.016 mmol)，Et3N (0.067 mL, 0.481 mmol)，DMAP (12 mg, 0.098 mmol)，2,4,6-Cl3C6H2COCl (0.015 mL, 0.096 mmol) および CH2Cl2 (2 mL) を用いて 1b を合成した。収量 8 mg (収量 56%)。
【００９９】
Rf value 0.19, MeOH; 1H NMR (500 MHz, CHCl3 in CDCl3 at 7.24 ppm) δ 0.86 (t, J = 7 Hz, 6 H), 1.1-2.7 (m, 44 H), 2.93-3.05 (m, 1 H), 3.18-3.43 (m, 10 H), 3.58-4.43 (m, 9 H), 5.14-5.24 (m, 1 H), 5.26-5.38 (m, 1 H), 5.45-5.54 (m, 1 H), 6.07 (d, J = 9 Hz, 1 H), 6.33 (d, J = 6 Hz, 1 H), 7.54 (dd, J = 6, 2 Hz, 1 H). 
【産業上の利用可能性】
【０１００】
本発明は、５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２等を含むホスホリルコリン類（特に、１−パルミトイル−２−（５，６−エポキシ・イソプロスタンＡ２）−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホリルコリン（１））のジアステレオマー混合物もしくは個々のジアステレオマーを効率的に製造しうる製造方法を提供するものである。