(57)【要約】【課題】  ＧＡＢＡBレセプターに対して高い結合性と効力及び高い代謝安定性を持つ、医薬として有用な新規なアミノプロピルホスフィン酸誘導体を提供する。【解決手段】  （３−アミノ−２−フルオロプロピル）ホスフィン酸、（３−アミノ−２−オキソプロピル）ホスフィン酸、製薬上許容しうるその塩、その溶媒和物又はその立体異性体は新規化合物であって、ＧＡＢＡBレセプターに対して高い結合性と効力及び高い代謝安定性を持ち、医薬、特に一過性下部食道括約筋弛緩を抑制、胃食道逆流症の治療用医薬の有効成分として有用である。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記式Ｉ：
【化１】
2006306885.tif 000022
［式中、Ｒ1は水素であり；Ｒ2はフルオロまたはオキソ基であり；Ｒ3は水素であり；Ｒ4は水素である］
の化合物、製薬上許容しうるその塩、その溶媒和物又はその立体異性体。
【請求項２】
（３−アミノ−２−フルオロプロピル）ホスフィン酸である請求項１記載の化合物。
【請求項３】
（２Ｒ）−（３−アミノ−２−フルオロプロピル）ホスフィン酸である請求項２記載の化合物。
【請求項４】
（２Ｓ）−（３−アミノ−２−フルオロプロピル）ホスフィン酸である請求項２記載の化合物。
【請求項５】
（３−アミノ−２−オキソプロピル）ホスフィン酸である請求項１記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はＧＡＢＡB受容体１種以上に対する親和性を有する新規化合物並びに製薬上許容しうるその塩、溶媒和物および立体異性体に関する。本発明はまたその製造方法、上記治療上活性化合物を含有する医薬組成物および治療における上記活性化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
逆流
胃食道逆流症（ＧＯＲＤ）は最も多い上部胃腸管疾患である。現在の治療は胃酸分泌を低減するか、食道クリアランス、下部食道括約筋緊張および胃空虚化を促進することにより食道酸曝露を低減することを目的としている。逆流の主な機序は当初は低緊張性下部食道括約筋によるものと考えられていた。しかしながら、最近の研究（例えばHolloway & Dent(1990), Gastroenterol. Clin. N. Amer. 19, 517-535）によれば、大部分の逆流状態は一過性下部食道括約筋弛緩、即ちこれよりＴＬＯＳＲと記載する嚥下により惹起されない弛緩の間に発症する。胃酸の分泌はＧＯＲＤ患者では正常であることも知られている。
【０００３】
この結果、ＴＬＯＳＲの発生率を低下し、これにより逆流を減少する化合物が求められている。
下部食道括約筋の弛緩に適応された局所麻酔剤を含有する医薬組成物がＷＯ ８７／０４０７７および米国特許５,０３６,０５７号に記載されている。最近ＧＡＢＡB受容体アゴニストがＴＬＯＳＲを抑制することがわかり、ＷＯ ９８／１１８８５に記載されている。
【０００４】
ＧＡＢＡB受容体アゴニスト
ＧＡＢＡ（４−アミノブタン酸）は中枢および末梢神経系における内因性神経伝達物質である。ＧＡＢＡの受容体は伝統的にはＧＡＢＡA受容体およびＧＡＢＡB受容体のサブタイプに分類されている。ＧＡＢＡB受容体はｇ蛋白結合受容体のスーパーファミリーに属する。ＧＡＢＡB受容体アゴニストは、ＣＮＳ障害、例えば脊髄痙性における筋肉弛緩、心臓血管障害、喘息、腸運動性障害、例えば過敏性腸症候群（ＩＢＳ）の治療において有用であるものとして、そして、前運動性（prokinetic）および鎮咳剤として報告されている。ＧＡＢＡB受容体アゴニストはまた嘔吐の治療において（ＷＯ ９６／１１６８０）、そして最近では前述の通り、ＴＬＯＳＲの抑制において（ＷＯ ９８／１１８８５）有用であることが開示されている。
【０００５】
最も研究されているＧＡＢＡB受容体アゴニストはスイス国特許ＣＨ ４４９,０４６号に開示されているバクロフェン（４−アミノ−３−（クロロフェニル）ブタン酸）である。バクロフェンは数年間抗痙攣剤として使用されている。ＥＰ ０３５６１２８は治療における強力なＧＡＢＡB受容体アゴニストとしての特定の化合物（３−アミノプロピル）メチルホスフィン酸の使用を記載している。ＥＰ ０１８１８３３はＧＡＢＡB受容体部位に対して極めて高い親和性を有することがわかった置換３−アミノプロピルホスフィン酸を開示している。バクロフェンと同様、化合物は例えば筋弛緩のために使用できる。ＥＰ ０３９９９４９は強力なＧＡＢＡB受容体として記載されている（３−アミノプロピル）メチルホスフィン酸の誘導体を開示している。これらの化合物は筋弛緩剤として有用であるとされている。ＥＰ ０４６３９６９およびＦＲ ２７２２１９２ともにブチル鎖の３−炭素において種々の複素環置換基を有する４−アミノブタン酸誘導体に関する出願である。ＧＡＢＡB受容体経の親和性に関する数種のホスフィン酸類縁体の構造−活性関連性並びにその筋弛緩作用はJ. Med. Chem. (1995), 38, 3297-3312に記載されている。この文献の結論は、望ましくないＣＮＳ作用の発生を伴うことなくバクロフェンよりもかなり強力な筋弛緩作用が３−アミノ−２−ヒドロキシプロピルメチルホスフィン酸の(Ｓ)−エナンチオマーを用いて達成できたとしている。
【０００６】
文献では、リンに連結した水素原子を有するホスフィン酸は亜ホスホン酸（phosphonous acid）とも呼ばれている。これらは同じ化合物に対する二種の名称であり、両方の名称を使用できる。しかしながら、我々は本発明の化合物に付いてはホスフィン酸という名称を使用することとした。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、下記式Ｉ：
【化１】
2006306885.tif 000002
［式中、Ｒ1は水素、ヒドロキシ、低級アルキル、低級アルコキシまたはハロゲンであり；
Ｒ2はヒドロキシ、メルカプト、ハロゲンまたはオキソ基であり；
Ｒ3は水素または低級アルキル（場合によりヒドロキシ、メルカプト、低級アルコキシ、低級チオアルコキシまたはアリールで置換されたもの）であり；
Ｒ4は水素、低級アルキル（場合によりアリールで置換されたもの）またはアリールである］の化合物および製薬上許容しうるその塩、溶媒和物およびその立体異性体、ただし下記物質：
ｉ）（３−アミノ−２−ヒドロキシプロピル）ホスフィン酸のラセミ混合物、および、
ii）（２Ｒ／Ｓ,３Ｒ）−（３−アミノ−２−ヒドロキシブチル）ホスフィン酸
を除く上記物質を提供する。
【０００８】
好ましい実施態様においては、
Ｒ1が水素、低級アルキルまたはハロゲンであり；
Ｒ2がハロゲン、ヒドロキシまたはオキソ基であり；
Ｒ3が水素であり；そして
Ｒ4が水素であるが、
（３−アミノ−２−ヒドロキシプロピル）ホスフィン酸のラセミ混合物は除外される。
【０００９】
更に好ましい化合物は、（３−アミノ−２−フルオロプロピル）ホスフィン酸、（２Ｒ）−（３−アミノ−２−フルオロプロピル）ホスフィン酸、（２Ｓ）−（３−アミノ−２−フルオロプロピル）ホスフィン酸、（３−アミノ−２−フルオロ−１−メチルプロピル）ホスフィン酸、（３−アミノ−２−オキソプロピル）ホスフィン酸、（２Ｓ）−（３−アミノ−２−ヒドロキシプロピル）ホスフィン酸、（２Ｒ）−（３−アミノ−２−ヒドロキシプロピル）ホスフィン酸および（３−アミノ−１−フルオロ−２−ヒドロキシプロピル）ホスフィン酸である。
【００１０】
本発明の範囲内において、Ｒ2がオキソ基である場合はＲ2と炭素との間の結合は二重結合である。
本発明の範囲内において、「低級」の基および化合物とは、例えば炭素原子７個まで、特に４個までを有するものとする。また一般的用語は以下の意味を有する。
【００１１】
低級アルキルは例えば、Ｃ1−Ｃ4アルキル（例えばメチル、エチル、ｎ−プロピルまたはｎ−ブチル、イソプロピル、イソブチル、ｓ−ブチルまたはｔ−ブチル）、またはＣ5−Ｃ7アルキル基（例えばペンチル、ヘキシルまたはヘプチル基）である。
【００１２】
低級アルコキシは例えば、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、例えばメトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシまたはｎ−ブトキシ、イソプロポキシ、イソブトキシ、ｓ−ブトキシまたはｔ−ブトキシ、またはＣ5−Ｃ7アルコキシ基、例えばペントキシ、ヘキソキシまたはヘプトキシ基である。
【００１３】
低級チオアルコキシは、例えばＣ1−Ｃ4チオアルコキシ、例えばチオメトキシ、チオエトキシ、ｎ−チオプロポキシまたはｎ−チオブトキシ、チオイソプロポキシ、チオイソブトキシ、ｓ−チオブトキシまたはｔ−チオブトキシ、またはＣ5−Ｃ7チオアルコキシ基、例えばチオペントキシ、チオヘキソキシまたはチオヘプトキシ基である。
ハロゲンは原子番号３５までのハロゲンであり、例えばフッ素または塩素、そして好適度は低いが臭素が挙げられる。
【００１４】
本発明の式Ｉの化合物は両性であり、内部塩の形態で存在する場合がある。これらはまた酸付加塩および塩基との塩を形成できる。このような塩は特に製薬上許容しうる酸付加塩、並びに塩基と形成された製薬上許容しうる塩である。このような塩の形成に適する酸は、塩酸、臭化水素酸、硫酸またはリン酸のような無機酸またはスルホン酸およびカルボン酸のような有機酸を包含する。塩基との塩は、例えばアルカリ金属の塩、例えば、ナトリウムまたはカリウム塩、またはアルカリ土類金属塩、例えばカルシウムまたはマグネシウム塩、並びにアンモニウム塩、例えばアンモニアまたは有機アミンとのものである。塩は従来の方法で製造してよい。
【００１５】
分子内に立体中心が１個以上存在する場合は、式Ｉの化合物は立体異性体の混合物、即ちジアステレオマーの混合物および／またはラセミ混合物の形態で、または単一の立体異性体、即ち単一のエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーの形態であることができる。化合物はまた溶媒和物、例えば水和物の形態であることができる。
【００１６】
式Ｉの化合物は全て、ＴＬＯＳＲの抑制のため、従って胃食道逆流症の治療のために使用することができる。ＴＬＯＳＲの上記抑制はまた式Ｉの上記化合物が乳幼児における逆流の治療のために使用できることを意味する。乳幼児における逆流の効果的な対処は摂取された栄養の過剰な損失による生育の不良に対処する重要な方法である。更にまた新規化合物はＧＯＲＤ関連または非ＧＯＲＤ関連の喘息、おくび、咳、疼痛、コカイン中毒、しゃっくり、ＩＢＳ、消化不良、嘔吐および侵害受容の治療のために使用できる。
【００１７】
従来の報告とは逆に（J. Med. Chem. (1995) 3297-3312およびThe GABA Receptors：第二版、S.J. Enna, Norman Bowery編、Humana Press (1997)、特にp281-282）、本発明の化合物は、Ｐ−Ｈ結合の存在にも関わらず意外にも高い代謝安定性を有する。その化合物はまた、意外にも高い治療指数を有する。
【００１８】
製造
本発明の式Ｉの化合物は以下の方法の１つにより製造してよい。
Ａ）下記式II：
【化２】
2006306885.tif 000003
［式中、Ｒ1およびＲ3は式Ｉにおいて上記定義した通りであり、Ｘは水素または−ＣＣＨ3(ＯＣＨ2ＣＨ3)2のような保護基であり、Ｚはｔ−ブチルオキシカルボニルのような保護基であり、そしてＹは水素または低級アルキルのような保護基である］の化合物、ただしここで、式IIの化合物は、下記スキーム１：
【化３】
2006306885.tif 000004
に従って、Ｒ3が前記定義したものであり、Ｗが低級アルキルのような保護基であり、そしてＺが式IIに定義したものである適切なＮ−保護アミノ酸エステル、およびＲ1が式Ｉにおいて前記定義したものであり、ＸおよびＹが式IIにおいて定義したものである適当に保護されたホスフィン酸およびリチウムジイソプロピルアミドのような塩基を用いた縮合反応により合成されたものを、
【００１９】
ａ）場合により、Ｒ4が水素と等しくないことが望まれる場合はＲ4を導入するためにＮ−アルキル化反応、そしてその後の加水分解反応により変換して下記式III：
【化４】
2006306885.tif 000005
［式中Ｒ1、Ｒ3およびＲ4は式Ｉにおいて前記定義したとおりである］の化合物を得て、そして場合により上記形成された化合物IIIを式IIIの別の化合物に変換し、および／または形成された異性体混合物を分離して個々の異性体とし、および／または形成された塩を式IIIの遊離の化合物および／または別の塩に変換し、および／または形成された式IIIの遊離の化合物を上記定義に相当する塩に変換するか、または
【００２０】
ｂ）還元反応、場合によりＲ4が水素と等しくないことが望まれる場合はＲ4を導入するためにＮ−アルキル化反応、そして最終的に加水分解反応により変換して下記式IV：
【化５】
2006306885.tif 000006
［式中Ｒ1、Ｒ3およびＲ4は式Ｉにおいて前記定義したとおりである］の化合物を得て、そして場合により上記形成された化合物IVを式IVの別の化合物に変換し、および／または形成された異性体混合物を分離して個々の異性体とし、および／または形成された塩を式IVの遊離の化合物および／または別の塩に変換し、および／または形成された式IVの遊離の化合物を上記定義に相当する塩に変換するか、または
【００２１】
ｃ）還元反応、次いでデオキソハロゲン化反応、場合によりＲ4が水素と等しくないことが望まれる場合はＲ４を導入するためにＮ−アルキル化反応、そして最終的に加水分解反応により変換して下記式Ｖ：
【化６】
2006306885.tif 000007
［式中Ｒ1、Ｒ3およびＲ4は式Ｉにおいて前記定義したとおりであり、Ｈａｌｏはハロゲン原子である］の化合物を得て、そして、場合により上記形成された化合物Ｖを式Ｖの別の化合物に変換し、および／または形成された異性体混合物を分離して個々の異性体とし、および／または形成された塩を式Ｖの遊離の化合物および／または別の塩に変換し、および／または形成された式Ｖの遊離の化合物を上記定義に相当する塩に変換するか；
または
【００２２】
Ｂ）下記式VI：
【化７】
2006306885.tif 000008
［式中、Ｒ1およびＲ3は式Ｉにおいて上記定義した通りであり、Ｘは水素または−ＣＣＨ3(ＯＣＨ2ＣＨ3)2のような保護基であり、Ｔは−ＮＨ2基に変換できる基であり、そして、Ｙは水素または低級アルキルのような保護基である］の化合物、ただしここで式VIの化合物は、下記スキーム２：
【化８】
2006306885.tif 000009
に従って、Ｒ1およびＲ3が式Ｉに置いて前記定義したものである適切なＮ−保護２,３−エポキシプロピルアミン誘導体またはエピクロロヒドリン誘導体のような２,３−エポキシプロピル誘導体、およびＸおよびＹが式VIにおいて定義したものであるＯ−シリル化により活性化された適当な保護ホスフィン酸誘導体、および無水ＺｎＣｌ2のようなルイス酸を用いた縮合反応により合成されたものを、
【００２３】
ａ）トリメチルシリル基が水素原子で置きかえられる反応、式VIにおいて定義したＴ基が−ＮＨＲ4（ただしＲ4が式Ｉにおいて前記定義したもの）に変換される反応、そして最終的に加水分解反応により変換して下記式IV：
【化９】
2006306885.tif 000010
［式中Ｒ1、Ｒ3およびＲ4は式Ｉにおいて前記定義したとおりである］の化合物を得て、そして、場合により上記形成された化合物IVを式IVの別の化合物に変換し、および／または形成された異性体混合物を分離して個々の異性体とし、および／または形成された塩を式IVの遊離の化合物および／または別の塩に変換し、および／または形成された式IVの遊離の化合物を上記定義に相当する塩に変換するか、または
【００２４】
ｂ）トリメチルシリル基が水素原子で置きかえられる反応、酸化反応、式VIにおいて定義したＴ基が−ＮＨＲ4（ただしＲ4が式Ｉにおいて前記定義したもの）に変換される反応、そして最終的に加水分解反応により変換して下記式III：
【化１０】
2006306885.tif 000011
［式中Ｒ1、Ｒ3およびＲ4は式Ｉにおいて前記定義したとおりである］の化合物を得て、そして場合により、上記形成された化合物IIIを式IIIの別の化合物に変換し、および／または形成された異性体混合物を分離して個々の異性体とし、および／または形成された塩を式IIIの遊離の化合物および／または別の塩に変換し、および／または形成された式IIIの遊離の化合物を上記定義に相当する塩に変換するか、または
【００２５】
ｃ）トリメチルシリル基が水素原子で置きかえられる反応、デオキソハロゲン化反応、式VIにおいて定義したＴ基が−ＮＨＲ4（ただしＲ4が式Ｉにおいて前記定義したもの）に変換される反応、そして最終的に加水分解反応により変換して下記式Ｖ：
【化１１】
2006306885.tif 000012
［式中Ｒ1、Ｒ3およびＲ4は式Ｉにおいて前記定義したとおりであり、Ｈａｌｏはハロゲン原子である］の化合物を得て、そして場合により、上記形成された化合物Ｖを式Ｖの別の化合物に変換し、および／または形成された異性体混合物を分離して個々の異性体とし、および／または形成された塩を式Ｖの遊離の化合物および／または別の塩に変換し、および／または形成された式Ｖの遊離の化合物を上記定義に相当する塩に変換するか；
または
【００２６】
Ｃ）下記式VII：
【化１２】
2006306885.tif 000013
［式中、Ｒ1は式Ｉにおいて上記定義した通りであり、Ｘは水素または−ＣＣＨ3(ＯＣＨ2ＣＨ3)2のような保護基であり、Ｕは例えば−ＣＨ2ＮＨ2基に変換できる−ＣＮまたは−ＣＯ2Ｅｔのような電子吸引性基であり、そしてＹは水素または低級アルキルのような保護基であり、Ｈａｌｏはハロゲン原子である］の化合物、ただしここで、式VIIの化合物は下記スキーム３：
【化１３】
2006306885.tif 000014
に従って、Ｒ1が式Ｉにおいて前記定義したものであり、Ｕおよびｈａｌｏは式VIIにおいて定義したものである不飽和の化合物、およびＸおよびＹが式VIIにおいて定義したものであるＯ−シリル化により活性化された適当な保護ホスフィン酸誘導体を用いた付加反応によりにより合成されたものを、Ｕ基をＲ4が式Ｉにおいて上記定義したものである−ＮＨＲ4に変換される反応、および加水分解反応により変換して、下記式VIII：
【化１４】
2006306885.tif 000015
［式中Ｒ1およびＲ4は式Ｉにおいて前記定義したとおりであり、Ｈａｌｏはハロゲン原子である］の化合物を得て、そして場合により形成された化合物VIIIを式VIIIの別の化合物に変換し、および／または形成された異性体混合物を分離して個々の異性体とし、および／または形成された塩を式VIIIの遊離の化合物および／または別の塩に変換し、および／または形成された式VIIIの遊離の化合物を上記定義に相当する塩に変換するか；
または
【００２７】
Ｄ）場合により個々の立体異性体としての下記式IX：
【化１５】
2006306885.tif 000016
［式中Ｒ1、Ｒ3およびＲ4は式Ｉにおいて前記定義したとおりであり、Ｚはｔ−ブチルオキシカルボニルのような保護基であり、Haloはハロゲン原子である］の化合物、ただしここで、式IXの化合物は、下記スキーム４：
【化１６】
2006306885.tif 000017
に従って、Ｒ1、Ｒ3およびＲ4は前記定義したとおりであり、Ｌは脱離基（例えばヨード）であり、ＺおよびHaloは前記定義した通りである親電子化合物およびＯ−シリル化により活性化されたホスフィン酸を用いた置換反応により合成されたものを、加水分解反応により変換して下記式Ｖ：
【化１７】
2006306885.tif 000018
［式中Ｒ1、Ｒ3およびＲ4は式Ｉにおいて前記定義したとおりである］の化合物とし、そして場合により形成された化合物Ｖを式Ｖの別の化合物に変換し、および／または形成された異性体混合物を分離して個々の異性体とし、および／または形成された塩を式Ｖの遊離の化合物および／または別の塩に変換し、および／または形成された式Ｖの遊離の化合物を上記定義に相当する塩に変換するか；
または
【００２８】
Ｅ）下記式XI：
【化１８】
2006306885.tif 000019
［式中Ｒ1、Ｒ3およびＲ4は式Ｉにおいて前記定義したとおりであり、Ｘは水素または−ＣＣＨ3(ＯＣＨ2ＣＨ3)2のような保護基であり、そしてＹは水素または低級アルキルのような保護基である］の化合物、ただしここで、式XIの化合物はスキーム５：
【化１９】
2006306885.tif 000020
に従って、Ｒ1、Ｒ3およびＲ4が式Ｉにおいて前記定義したものである不飽和のホスフィン酸を、Ｈ2Ｓ、メルカプチドイオン（ＨＳ-）、または、後に保護基を除去する場合はベンジルチオールのような保護されたメルカプト化合物で処理する付加反応により合成しておいたものを、加水分解反応により下記式XII：
【化２０】
2006306885.tif 000021
［式中Ｒ1、Ｒ3およびＲ4は式Ｉにおいて前記定義したとおりである］の化合物とし、そして場合により形成された化合物XIIを式XIIの別の化合物に変換し、および／または形成された異性体混合物を分離して個々の異性体とし、および／または形成された塩を式XIIの遊離の化合物および／または別の塩に変換し、および／または形成された式XIIの遊離の化合物を上記定義に相当する塩に変換する。
【実施例】
【００２９】
本発明を以下の限定しない実施例により更に詳述する。
実施例１
（３−アミノ−２−フルオロプロピル）ホスフィン酸
ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）中のエチル（３−アミノ−２−フルオロ−３−オキソプロピル)(ジエトキシメチル）ホスフィネートのアイスバス冷却溶液に、１Ｍ ＢＨ3−ＴＨＦをアルゴン雰囲気下に添加した。１０分後、溶液を２.５時間還流下に加熱した。溶液を室温に冷却し、６Ｎ ＨＣｌ（２００mL）を添加した。ＴＨＦをロータリーエバポレーターで除去し、水層を２.５時間還流した。溶液を冷却し、蒸発させた。残存物をイオン交換カラムクロマトグラフィー（DOWEX(R) 500WX-8-200、H+型、３.５×４.０cm）で精製した。イオン交換樹脂を２：１ メタノール／水（４００mL）で予備洗浄した。１：１ メタノール／水に溶解した粗生成物をカラムに適用し、１：１ メタノール／水（４００mL）で洗浄した。溶離剤を３：１ メタノール／濃水酸化アンモニウムに変えた。２画分（総量１５０mL）を合わせ、蒸発させ、（３−アミノ−２−フルオロプロピル）ホスフィン酸６４５mg（３４％）を白色固体として得た。データ：融点２０３〜２０７℃；Ｒf＝０.３５（６０：４０：１ メタノール、塩化メチレン、濃水酸化アンモニウム）；1H NMR(300MHz, D2O) δ 7.11(d, J=528Hz, 1H), 5.18(dm, J=54Hz, 1H), 3.28-3.45(m, 2H), 1.65-2.23(m, 2H); 13C NMR(125MHz, D2O＋ジオキサン) δ 87.8(d, J=170Hz), 44.3(dd, J=12.6, 21.6Hz), 35.6(dd, J=20.2, 86.5Hz); APIMS: m/z=142(M＋H)+。
【００３０】
実施例２
（２Ｓ）−（３−アミノ−２−ヒドロキシプロピル）ホスフィン酸
エチル（２Ｓ）−（３−アミノ−２−ヒドロキシプロピル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート（１.０ｇ、３.５ミリモル）および濃塩酸（５０mL）の混合物を２時間還流下に加熱した。溶液を室温に冷却し、蒸発させた。残存物をメタノール（１００mL）に溶解し、室温でプロピレンオキシド（２mL）で処理した。混合物を５時間攪拌した後、溶媒を傾瀉することにより沈殿した固体を採取した。固体をアルゴン気流で乾燥し、白色固体として（２Ｓ）−（３−アミノ−２−ヒドロキシプロピル）ホスフィン酸２２０mg（４５％）を得た。
データ：1H NMR(300MHz, D2O) δ 7.1(d, J=540Hz, 1H), 4.2(m, 1H), 2.9-3.2(m, 2H), 1.7-2.0(m, 2H); 31P NMR(121MHz, D2O) δ 24.2(d,J=522Hz); FABMS: m/z=140(M+H)+; [α]D at 20℃＝＋8゜(0.1M HCl中0.5％)。
【００３１】
実施例３
（２Ｒ）−（３−アミノ−２−ヒドロキシプロピル）ホスフィン酸
エチル（２Ｒ）−（３−アミノ−２−ヒドロキシプロピル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート（０.９ｇ、３.２ミリモル）および濃塩酸（５０mL）の混合物を２時間還流下に加熱した。溶液を室温に冷却し、蒸発させた。残存物をメタノール（５０mL）に溶解し、室温でプロピレンオキシド（３mL）で処理した。混合物を５時間攪拌した後、溶媒を傾瀉することにより沈殿した固体を採取した。固体をアルゴン気流で乾燥し、白色固体として（２Ｒ）−（３−アミノ−２−ヒドロキシプロピル）ホスフィン酸２６０mg（５９％）を得た。
データ：1H NMR(300MHz, D2O) δ 7.1(d, J=540Hz, 1H), 4.2(m, 1H), 2.9-3.2(m, 2H), 1.7-2.0(m, 2H); 31P NMR(121MHz, D2O) δ 23.9(d, J=525Hz); FABMS: m/z=140(M+H)+; [α]D at 20℃＝−8゜(0.1M HCl中0.5％)。
【００３２】
実施例４
（３−アミノ−２−オキソプロピル）ホスフィン酸
エチル［３−［Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−オキソプロピル］(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート試料（８.１１ｇ、２１.０ミリモル）を予め溶液にＮ2を通してバブリングすることにより脱酸素化した３Ｎ ＨＣｌ（４００mL）に溶解した。混合物を室温で１４時間攪拌し、次に濃縮した。残存物をメタノールで共蒸発させた。次に残存物をメタノール（１０mL）に溶解し、プロピレンオキシド（１０mL）を添加した。混合物を６時間攪拌し、得られた沈殿物を濾過により単離した。固体を冷メタノールで洗浄し、５０℃で真空下に乾燥し、オフホワイト固体として（３−アミノ−２−オキソプロピル）ホスフィン酸２.１ｇ（７３％）を得た。データ：融点１２６〜１２７℃；Ｒf＝０.６４（８５：１５ メタノール、水）；1H NMR(300MHz, D2O) δ 7.13(d,J=551Hz, 1H), 4.14(s, 2H), 3.14(d, J=18Hz, 2H);13C NMR(75MHz, D2O＋ジオキサン) δ 199.5, 49.2, 47.3(d, J=69Hz); FABMS: m/z=138(M+H)+。
【００３３】
実施例５
（２Ｒ）−（３−アミノ−２−フルオロプロピル）ホスフィン酸
次ホスフィン酸アンモニウム（７３.８ｇ、０.８９モル）を機械攪拌器、温度計、添加漏斗およびアルゴンバブラーを装備した３つ首２−Ｌフラスコに添加した。フラスコを室温でウォーターバス内に置き、Ｎ,Ｏ−ビス−（トリメチルシリル）アセトアミド（２１５mL、０.８７モル −ＢＳＡ）を内部温度が３８℃以下に維持するような速度（約３０分）で添加した。ＢＳＡの添加完了後、反応混合物を４５〜４８℃に加熱し、１時間この温度を維持した。反応混合物を室温に冷却し、塩化メチレン（３００mL）中のｔ−ブチル（２Ｒ）−２−フルオロ−３−ヨードプロピルカーバメート（２７.３ｇ、０.０９モル）の溶液を反応混合物に添加した。次に、反応混合物を１８時間室温で攪拌した。反応混合物を０℃に冷却し、メタノール（２７５mL）、次に水（３２mL）で慎重にクエンチングした。反応混合物を３０分間攪拌し、その後反応混合物を濾過し、固体をメタノールで洗浄した。濾液を濃縮し、残存物を一夜高真空（０.１mmHg）下に置いた。粗製の残存物を塩化メチレン、メタノール、濃水酸化アンモニウム溶液（８０：２０：１）で磨砕し、濾過した。濾液を減圧下に濃縮し、繰り返し磨砕した。粗製の濃縮物を２−Ｌフラスコに移し、メタノール（３７５mL）に溶解し、室温でウォーターバス内に置いた。酢酸エチル（５００mL）中の塩化水素ガスの飽和溶液を添加し、混合物を３時間攪拌した。反応混合物を濾過し、固体をメタノールと酢酸エチルの混合物（９０：１０）で洗浄した。濾液を減圧下に濃縮し、粗生成物をＴＬＣ分析で物質が検出されなくなるまで、１：１ メタノール／水を溶離剤として、Dowex(R) 50WX8-200メッシュ Ｈ+型（５００ｇ、８×１５cm）カラムを通した。次に必要な粗生成物を１：３ 濃水酸化アンモニウム溶液／メタノールで溶離した。生成物をクロロホルム、メタノール、濃水酸化アンモニウム溶液（６：３：１）を溶離剤とするカラムクロマトグラフィーでさらに精製し、白色固体として（２Ｒ）−（３−アミノ−２−フルオロプロピル）ホスフィン酸（３.１２ｇ、２４％）を得た。
1H NMR(300MHz, D2O) δ 7.90(s, 0.5H), 6.15(s, 0.5H), 5.12-5.29(m, 0.5H), 4.92-5.10(m, 0.5H), 3.12-3.42(m, 2H), 1.74-2.26(m, 2H)。 
【００３４】
実施例６
（２Ｓ）−（３−アミノ−２−フルオロプロピル）ホスフィン酸
次ホスフィン酸アンモニウム（５８.１ｇ、０.７０モル）を機械攪拌器、温度計、添加漏斗およびアルゴンバブラーを装備した３つ首２−Ｌフラスコに添加した。Ｎ,Ｏ−ビス−（トリメチルシリル）アセトアミド（１７５.９mL、０.７１モル −ＢＳＡ）を内部温度が３５〜４０℃の間を維持するような速度で添加した。ＢＳＡの添加完了後、反応混合物を４５分間３５〜４０℃で維持した。塩化メチレン（１５０mL）を添加し、混合物をさらに４５分間３５〜４０℃で攪拌した。反応混合物を室温に冷却し、塩化メチレン（３００mL）中のｔ−ブチル（２Ｓ）−２−フルオロ−３−ヨードプロピルカーバメート（４２.５ｇ、０.１４モル）の溶液を反応混合物に添加した。次に反応混合物を一夜室温で攪拌した。反応混合物を０℃に冷却し、メタノール（１５０mL）、次に水（６０mL）で慎重にクエンチングした。反応混合物を濃縮し、残存物を高真空（０.１mmHg）下に置いた。残存物を濃水酸化アンモニウム（５０mL）を添加することにより約ｐＨ８に調整し、次に塩化メチレン（４００mL）およびメタノール（２５０mL）を添加した。得られた固体を濾過し、濾液を濃縮した。残存物を塩化メチレン、メタノール、濃水酸化アンモニウム（８０：２０：１；４００mL）で磨砕し、濾過した。濾液を減圧下に濃縮し、粗製の濃縮物をメタノール（４００mL）に溶解した。酢酸エチル中塩化水素ガス飽和溶液（６００mL）を添加し、混合物を３時間攪拌した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧下に濃縮した。粗生成物をＴＬＣ分析で物質が検出されなくなるまで、１：１ メタノール／水を溶離剤としてDowex(R) 50WX8-200メッシュ Ｈ+型（４５０ｇ）カラムを通した。次に必要な粗生成物を１：３ 濃水酸化アンモニウム／メタノールで溶離した。生成物を塩化メチレン、メタノール、濃水酸化アンモニウム溶液（６：３：１）を溶離剤とするカラムクロマトグラフィーでさらに精製し、白色固体として（２Ｓ）−（３−アミノ−２−フルオロプロピル）ホスフィン酸（３.４６ｇ、１７％）を得た。
1H NMR(300MHz, D2O) δ 7.90(s, 0.5H), 6.15(s, 0.5H), 5.12-5.29(m. 0.5H), 4.92-5.10(m, 0.5H), 3.12-3.42(m, 2H), 1.74-2。
【００３５】
実施例７
（３−アミノ−１−フルオロ−２−ヒドロキシプロピル）ホスフィン酸
エチル（３−（Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−フルオロ−２−ヒドロキシプロピル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート（１８０mg、４.５ミリモル）をメタノール（２mL）に溶解し、３Ｎ塩酸（２０mL、６０ミリモル、使用直前にアルゴンでパージ）で処理した。混合物をアルゴン雰囲気下に６時間室温で攪拌した。反応混合物を減圧下に濃縮し、粗生成物をメタノール（５mL）に再溶解し、残存した水分をメタノールで減圧下に共蒸発させて除去した。粗生成物（７０mg）を塩化メチレン、メタノール、濃水酸化アンモニウム溶液（６：３：１）を溶離剤とするカラムクロマトグラフィー（１×１０cmカラム）でさらに精製した。生成物を含有する画分を減圧下に濃縮し、アセトニトリル（２×１０mL）、次にメタノール（１×１０mL）で共蒸発させ、高真空（０.１mmHg）下に一夜乾燥した。この工程で白色固体として（３−アミノ−１−フルオロ−２−ヒドロキシプロピル）ホスフィン酸（４０mg、５６％）を得た。
1H NMR(300MHz, D2O) δ 7.93(s, 0.5H), 6.11(s, 0.5H), 4.60-4.20(m, 2H), 3.42-3.08(m, 2H)。
【００３６】
実施例８
（３−アミノ−２−フルオロ−１−メチルプロピル）ホスフィン酸
ＴＨＦ（１５mL）中のエチル３−アミノ−２−フルオロ−１−メチル−３−オキソプロピル（ジエトキシメチル）ホスフィネート（１.６ｇ、５.３ミリモル）のアイスバス冷却溶液に１Ｍ ＢＨ3−ＴＨＦ（１２.３mL、１２.３ミリモル）をアルゴン雰囲気下に添加した。１０分後、溶液を３時間還流下に加熱した。溶液を室温に冷却し、６Ｎ ＨＣｌ（１００mL）を滴加した。ＴＨＦをロータリーエバポレーターによって除去し、さらに６Ｎ塩酸（１００mL）を添加した。混合物を３時間還流した。溶液を冷却し、蒸発させ、水、次にエタノールで共蒸発させた。残存物をイオン交換クロマトグラフィー（DOWEX(R) 50WX-8-200、Ｈ+型、３.５×４.０cm）で精製した。イオン交換樹脂を２：１ メタノール／水で予備洗浄した。１：１ メタノール／水に溶解した粗生成物をカラムに適用し、１：１ メタノール／水で洗浄した。溶離剤を３：１ メタノール／濃水酸化アンモニウムに変えた。適切な画分を合わせ、蒸発させて油状物として（３−アミノ−２−フルオロ−１−メチルプロピル）ホスフィン酸のジアステレオマー混合物１５０mg（１５％）を得た。
1H NMR(400MHz, D2O) δ 6.2-7.8(m, 1H), 4.8-5.2(m, 1H), 3.2-3.5(m, 2H), 1.8-2.2(m, 1H), 1.0-1.2(m, 3H); MS: m/z=156(M+H)+。
【００３７】
以下の中間体は本発明の化合物の製造に使用された。
中間体
実施例Ｉ １
エチル３−［(ジエトキシメチル)(エトキシ)ホスホリル］−２−フルオロプロパノエート（実施例１の化合物の中間体）
エチル（ジエトキシメチル）ホスフィネート（２６.０ｇ、１３３ミリモル）と１,１,１,３,３,３−ヘキサメチルジシラザン（２８mL、１３３ミリモル）の混合物をアルゴン雰囲気下に２時間還流下に加熱した。混合物を室温に冷却し、フルオロアクリレート（１０.５ｇ、８９.０ミリモル）を添加した。試薬をアルゴン雰囲気下に３日間６０℃に加熱した。混合物を室温に冷却し、酢酸エチル（３００mL）で希釈し、１Ｎ塩酸（２×１５０mL）と飽和塩化ナトリウム溶液（１００mL）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4上に乾燥し、濾過し、蒸発させて黄色の油状物３２.０ｇを得た。残存物を９７：３ 塩化メチレン／メタノールを溶離剤とするウェットパックされたシリカゲルカラム（６×３０cm）上のクロマトグラフィーで精製した。適切な画分を合わせ、蒸発させて透明な油状物としてエチル３−［(ジエトキシメチル)(エトキシ)ホスホリル］−２−フルオロプロパノエート１６.０ｇ（５７％）を得た。
データ：1H NMR(300MHz, CDCl3) δ 5.32(dm, 1H), 4.67-4.77(m, 1H), 4.18-4.32(m, 2H), 3.58-3.91(m, 4H), 2.30-2.62(m, 2H), 1.20-1.41(m, 9H)。
【００３８】
実施例Ｉ ２
エチル（３−アミノ−２−フルオロ−３−オキソプロピル)(ジエトキシメチル）ホスフィネート（実施例１の化合物の中間体）
エタノール（２２mL）中のエチル３−［（ジエトキシメチル)(エトキシ）ホスホリル］−２−フルオロプロパノエート（１６.０ｇ、５１.１ミリモル）に、濃水酸化アンモニウム（１４.８Ｎ、３.５mL、５１.１ミリモル）を添加した。溶液を１６時間攪拌し、蒸発させた。残存物を９６.５：３.５ 塩化メチレン／メタノールで溶離剤とするウェットパックされたシリカゲルカラム（７×３７cm）上のクロマトグラフィーで精製した。適切な画分を合わせ、蒸発させて、透明な油状物としてエチル（３−アミノ−２−フルオロ−３−オキソプロピル)(ジメトキシメチル）ホスフィネート３.４３ｇ（２７％）を得た。
データ：1H NMR(300MHz, CDCl3) δ 6.43(s, 1H), 5.70(s, 1H), 5.21-5.49(dm, 1H), 4.7(dd, 1H), 4.18-4.31(m, 2H), 3.65-3.91(m, 4H), 2.21-2.81(m, 2H), 1.30-1.40(m, 3H), 1.20-1.28(m, 6H)。
【００３９】
実施例Ｉ ３
エチル（２Ｒ）−（３−クロロ−２−ヒドロキシプロピル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート（実施例２の化合物の中間体）
エチル（ジエトキシエチル）ホスフィネート（１５.０ｇ、７１ミリモル）およびトルエンの混合物を蒸発させて乾燥した後、残存物と１,１,１,３,３,３−ヘキサメチルジシラザン（１３.２ｇ、８２ミリモル）をアルゴン雰囲気下に３時間還流下に加熱した。混合物を室温に冷却し、蒸発させた。(Ｒ)−エピクロロヒドリン（６.６ｇ、７１ミリモル
）と無水塩化亜鉛（２.５ｇ、１８ミリモル）を添加し、試薬をアルゴン雰囲気下に一夜６０℃に加熱した。混合物を室温に冷却し、塩化メチレンと水で希釈した。有機層を水で洗浄し、ＭｇＳＯ4上に乾燥し、濾過し、蒸発させて、黄色の油状物として２０.７ｇを得た。残存物を酢酸１％を含有するメタノール（１５０mL）中に溶解し、溶液を一夜攪拌した。溶媒を除去し、透明な油状物としてエチル（２Ｒ）−（３−クロロ−２−ヒドロキシプロピル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート１７.７ｇ（８２％）を得た。
データ：1H NMR(500MHz, CDCl3) δ 4.3-4.4(m, 1H), 4.1-4.3(m, 2H), 3.5-3.8(m, 4H), 1.9-2.4(m, 2H), 1.5(dd, J=2.3, 11.4Hz, 3H), 1.32-1.37(m, 3H), 1.18-1.24(m, 6H)。
【００４０】
実施例Ｉ ４
エチル（２Ｓ）−（３−クロロ−２−ヒドロキシプロピル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート（実施例２の化合物の中間体）
アンモニア９％を含有するエタノール中のエチル（２Ｒ）−（３−クロロ−２−ヒドロキシプロピル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート（５.０ｇ、１７ミリモル）の溶液を４日間室温でさらに１日間６０℃でオートクレーブ内に攪拌した。溶液を蒸発させ、残存物を塩化メチレン／トリエチルアミン５％を含有するメタノール（５〜８％ＭｅＯＨ）を溶離剤とするウェットパックされたシリカゲルカラム上のクロマトグラフィーで精製した。適切な画分を合わせ、蒸発させ、塩化メチレンと水で希釈した。水層をＮａ2ＣＯ3の１０％水溶液を数mL添加することによりｐＨを調整し、塩化メチレンで繰り返し抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4上に乾燥し、蒸発させて透明な油状物としてエチル（２Ｓ）−（３−アミノ−２−ヒドロキシプロピル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート１.２ｇ（２６％）を得た。
データ：1H NMR(300MHz, CDCl3) δ 4.40-4.55(b, 1H), 4.10-4.30(m, 2H), 3.55-3.80(m, 4H), 3.20-3.30(m, 1H), 3.00-3.10(m, 1H), 2.00-2.40(m, 2H), 1.45-1.53(dd, J=3.4, 11.7Hz, 3H), 1.30-1.40(m, 3H), 1.15-1.25(m, 6H)。
【００４１】
実施例Ｉ ５
エチル（２Ｓ）−（３−クロロ−２−ヒドロキシプロピル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート（実施例３の化合物の中間体）
エチル（ジエトキシエチル）ホスフィネート（１５.０ｇ、７１ミリモル）とトルエンとの混合物を蒸発させて乾燥した後、残存物と１,１,１,３,３,３−ヘキサメチルジシラザン（１３.２ｇ、８２ミリモル）をアルゴン雰囲気下に３時間還流下に加熱した。混合物を室温に冷却し、蒸発させた。（Ｓ）−エピクロロヒドリン（６.６ｇ、７１ミリモル）と無水塩化亜鉛（２.５ｇ、１８ミリモル）を添加し、試薬をアルゴン雰囲気下に一夜６０℃に加熱した。混合物を室温に冷却し、塩化メチレンと水で希釈した。有機層を水で洗浄し、ＭｇＳＯ4上に乾燥し、濾過し、蒸発して黄色の油状物として２０.７ｇを得た。残存物を酢酸１％を含有するメタノール（１５０mL）に溶解し、溶液を一夜攪拌した。溶媒を除去し、透明な油状物としてエチル（２Ｓ）−（３−クロロ−２−ヒドロキシプロピル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネートを得た。
データ：1H NMR(500MHz, CDCl3) δ 4.4(m, 1H), 4.2-4.3(m, 2H), 3.6-3.8(m, 4H), 1.9-2.4(m, 2H), 1.5(dd, J=2.3, 11.4Hz, 3H), 1.32-1.37(m, 3H), 1.18-1.24(m, 6H)。
【００４２】
実施例Ｉ ６
エチル（２Ｒ）−（３−クロロ−２−ヒドロキシプロピル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート（実施例３の化合物の中間体）
アンモニア９％を含有するエタノール中のエチル（２Ｓ）−（３−クロロ−２−ヒドロキシプロピル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート（５.０ｇ、１７ミリモル）の溶液を６日間室温で、さらに１日間５５℃でオートクレーブ内に攪拌した。溶液を蒸発させ、残存物を塩化メチレン／トリエチルアミン５％を含有するメタノール（５〜８％ＭｅＯＨ）を溶離剤とするウェットパックされたシリカゲルカラム上のクロマトグラフィーで精製した。適切な画分を合わせ、蒸発させ、塩化メチレンと水で希釈した。水層をＮａ2ＣＯ3の１０％水溶液を数mL添加することによりｐＨを調整し、塩化メチレンで繰り返し抽出した。合わせた有機層をＮａ2ＳＯ4上に乾燥し、蒸発させて透明な油状物としてエチル（２Ｒ）−（３−アミノ−２−ヒドロキシプロピル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート０.９ｇ（１９％）を得た。
データ：1H NMR(500MHz, CDCl3) δ 4.1-4.3(m, 2H), 4.05(b, 1H), 3.60-3.80(m, 4H), 2.4-2.9(m, 2H), 1.7-2.1(m, 2H), 1.4-1.5(dd, 3H), 1.3-1.4(m, 3H), 1.2(m, 6H)。
【００４３】
実施例Ｉ ７
エチル［３−［Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−オキソプロピル］(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート（実施例４の化合物の中間体）
−１０℃でＴＨＦ（５mL）中のジイソプロピルアミン（３.０mL、２１ミリモル）の溶液にｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中２.５Ｍ、８.６mL、２１ミリモル）を滴加した。１０分後、反応混合物を−７８℃に冷却し、ＴＨＦ（５mL）中のエチル（１,１−ジエトキシエチル)(メチル)ホスフィネート（４.８０ｇ、２１.０ミリモル）の溶液を滴加した。添加後、溶液を１時間−７８℃で攪拌した。ＴＨＦ（１５mL）中のＮ−Ｂｏｃ−グリシンメチルエステル（８１０mg、４.３ミリモル）の溶液を滴加した。添加が完了した後、反応混合物を４５分間攪拌した。酢酸（１.２mL、２１ミリモル）を添加し、反応混合物を室温に加温した。反応混合物を塩化メチレンと水の間に分配し、層を分離した。水層を塩化メチレンで１回抽出した。合わせた有機抽出物をＭｇＳＯ4上に乾燥し、濾過し、蒸発させて油状物４.８９ｇを得た。残存物を酢酸エチルを溶離剤とするシリカゲル１００ｇ上のクロマトグラフィーで精製した。適切な画分を収集し、油状物としてエチル［３−［Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−２−オキソプロピル］(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート１.２ｇ（７４％）を得た。
1H NMR(300MHz, CDCl3) δ 5.48(s, 1H), 4.10-4.30(m, 2H), 4.17(d, 2H), 3.60-3.80(m, 4H), 3.01-3.30(m, 2H), 1.52(d, 3H), 1.43(s, 9H), 1.32(t, 3H), 1.19(t, 6H)。
【００４４】
実施例Ｉ ８
（２Ｒ）−３−（ジベンジルアミノ）−２−フルオロ−１−プロパノール（実施例５の化合物の中間体）
ホウ化水素リチウム（５.３ｇ、０.２４ミリモル）を窒素雰囲気下にＴＨＦ（２００mL）中に懸濁させ、攪拌しながら−１５℃に冷却した。メチル（２Ｒ）−３−（ジベンジルアミノ）−２−フルオロプロパノエート（５６.６ｇ、０.１９ミリモル）をＴＨＦ（２５０mL）中に懸濁し、１時間かけて、添加中の内部温度を−１０℃以下に維持しながら、混合物に滴加した。添加完了後、反応混合物を室温に戻し、１７時間この温度で攪拌した。反応混合物を０℃に冷却し、塩化アンモニウム飽和水溶液（３００mL）で慎重にクエンチングした。反応混合物を酢酸エチル（２×２００mL）で抽出し、有機層を減圧下に濃縮した。粗製の残存物を２Ｎ塩酸（２００mL、ｐＨ＝約２）に溶解し、水層をエーテル（２×２００mL）で洗浄した。水層を塩水中の８０％水酸化アンモニウムで塩基性化（ｐＨ＝約１０）し、酢酸エチル（３×２００mL）で抽出し、無水硫酸ナトリウム（１０ｇ）上に乾燥し、濾過し、減圧下に濃縮して、黄色の油状物として（２Ｒ）−３−（ジベンジルアミノ）−２−フルオロ−１−プロパノール（４８ｇ、９３％）を得た。
1H NMR(300MHz, CDCl3) δ 7.15-7.38(m, 10H), 4.65-4.78(m, 0.5H), 4.48-4.58(m, 0.5H), 3.50-3.82(m, 6H), 2.70-2.88(m, 2H)。
【００４５】
実施例Ｉ ９
（２Ｒ）−３−アミノ−２−フルオロ−１−プロパノール（実施例５の化合物の中間体）  （２Ｒ）−３−（ジベンジルアミノ）−２−フルオロ−１−プロパノール（２９.２ｇ、０.１１モル）をエタノール（３００mL）に溶解した。炭素上１０重量％の水酸化パラジウム(II)(５.０ｇ)を添加し、混合物をParr(R)振とう器上に置き、６時間水素雰囲気（５.５psi）下に振とうした。水素の取り込みが観察されなくなった時点で、混合物をCelite(R)(２０ｇ)のパッドを通して濾過した。水酸化パラジウム(II)(５ｇ)の新たなバッチをエタノール混合物に添加し、１７時間上記水素化条件に再び付した。粗製の反応化合物をCelite(R)を通して濾過し、減圧下に濃縮し、淡黄色の油状物として（２Ｒ）−３−アミノ−２−フルオロ−１−プロパノール（９.６ｇ、９６％）を得た。
1H NMR(300MHz, CD3OD) δ 4.78-5.00(br s, 3H), 4.49-4.62(m, 0.5H), 4.32-4.46(m,
0.5H), 3.54-3.70(m, 2H), 2.70-2.96(m, 2H)。
【００４６】
実施例Ｉ １０
ｔ−ブチル（２Ｒ）−２−フルオロ−３−ヒドロキシプロピルカーバメート（実施例５の化合物の中間体）
（２Ｒ）−３−アミノ−２−フルオロ−１−プロパノール（４.６ｇ、４９ミリモル）を２５％ジオキサン水溶液（１６０mL）に溶解し、炭酸カリウム（７.１ｇ、５１ミリモル）を添加し、混合物を０℃に冷却した。二炭酸ジ−ｔ−ブチル（１１.６ｇ、５３ミリモル）を２回に分けて添加した。次に混合物を一夜室温に戻した。粗製の反応生成物を濃縮して乾燥し、水（１５０mL）、次いで硫酸水素カリウム飽和水溶液を添加した（ｐＨ＝約３まで）。有機物質を塩化メチレン（２×１５０mL）で抽出し、硫酸ナトリウム上に乾燥し、濾過し、減圧下に濃縮して、無色の油状物としてｔ−ブチル（２Ｒ）−２−フルオロ−３−ヒドロキシプロピルカーバメート（９.５ｇ、１００％）を得た。
1H NMR(300MHz, CDCl3) δ 4.82-5.04(br s, 1H), 4.62-4.72(m, 0.5H), 4.48-4.58(m,
0.5H), 3.62-3.72(m, 2H), 3.32-3.62(m, 2H), 3.20-3.44(br s, 1H), 1.48(s, 9H)。
【００４７】
実施例Ｉ １１
ｔ−ブチル（２Ｒ）−２−フルオロ−３−ヨードプロピルカーバメート（実施例５の化合物の中間体）
イミダゾール（２６.６ｇ、０.３９モル）を室温で塩化メチレン（４００mL）中に溶解した。ヨウ素（１０２.５ｇ、０.３９モル）を添加し、反応混合物を室温で１０分間攪拌し、次に０℃に冷却した。トリフェニルホスフィン（１０２.５ｇ、０.３９モル）を内部温度が１０℃以下に留まるように１０分かけて少しずつ添加した。塩化メチレン（１００mL）中のｔ−ブチル（２Ｒ）−２−フルオロ−３−ヒドロキシプロピルカーバメート（６０.４ｇ、０.３１モル）の溶液を滴加した。ｔ−ブチル（２Ｒ）−２−フルオロ−３−ヒドロキシプロピルカーバメートの添加完了後、追加の塩化メチレン（２００mL）を添加した。反応混合物を室温に戻し、１７時間攪拌を続けた。反応混合物をCelite(R)(５０ｇ)のパッドを通して濾過し、追加の塩化メチレンで洗浄した。濾液を減圧下に濃縮し、塩化メチレンを溶離剤とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。この工程で白色固体としてｔ−ブチル（２Ｒ）−２−フルオロ−３−ヨードプロピルカーバメート（６４.７ｇ、６８％）が得られた。
1H NMR(300MHz, CDCl3) δ 4.80-5.10(br s, 1H), 4.58-4.72(m, 0.5H), 4.42-4.56(m,
0.5H), 3.48-3.70(m, 1H), 3.20-3.46(m, 3H), 1.48(s, 9H)。
【００４８】
実施例Ｉ １２
メチル（２Ｓ）−３−（ジベンジルアミノ）−２−フルオロプロパノエート（実施例６の化合物の中間体）
メチル（２Ｒ）−２−（ジベンジルアミノ）−３−ヒドロキシプロパノエート（２３１.７ｇ、０.７７モル）をＴＨＦ（８５０mL）に溶解し、ＴＨＦ（４００mL）中のＤＡＳＴ（１９６ｇ、１.２モル）の溶液をゆっくり滴加した。添加完了後、反応混合物をさらに１.５時間攪拌した。ＴＬＣ分析が出発物質の消費を示した。次に反応混合物を０℃に冷却し、水（１.５Ｌ）をゆっくり添加してクエンチングし、次いで固体重炭酸ナトリウムを添加して中和した。中和した後、濃水酸化アンモニウム／塩化ナトリウム飽和水溶液の
１：１混合物を添加し、反応混合物を酢酸エチルで抽出し、減圧下に濃縮した。粗製の混合物を酢酸エチル、ヘキサン（１：４）を溶離剤とするシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、油状物として所望の化合物（１８８.３ｇ、６２％）を得た。
1H NMR(300MHz, CDCl3) δ 7.18-7.38(m, 10H), 5.12-5.17(m, 0.5H), 4.95-5.00(m, 0.5H), 3.81-3.87(m, 2H), 3.69(s, 3H), 3.49-3.55(m, 2H), 2.90-3.12(m, 2H)。
【００４９】
実施例Ｉ １３
（２Ｓ）−３−（ジベンジルアミノ）−２−フルオロ−１−プロパノール（実施例６の化合物の中間体）
ホウ化水素リチウム（１７.７ｇ、０.８１モル）を窒素雰囲気下にＴＨＦ（４００mL）中に懸濁し、攪拌しながら−１５℃に冷却した。メチル（２Ｓ）−３−（ジベンジルアミノ）−２−フルオロプロパノエート（１８８.３ｇ、０.６２モル）をＴＨＦ（４００mL）中に懸濁し、混合物に添加した。添加完了後、反応混合物を室温に戻し、３時間この温度で攪拌した。ＴＬＣ分析が出発物質の完全な消費を示した。反応混合物を０℃に冷却し、塩化アンモニウム飽和水溶液（３００mL）で慎重にクエンチングした。追加の水（４００mL）を添加し、次に反応混合物を酢酸エチルで抽出し、有機層を減圧下に濃縮した。粗製の残存物を２Ｎ塩酸に溶解し、水層をエーテルで２回洗浄した。水層を塩水中の８０％水酸化アンモニウムで塩基性化（ｐＨ＝約１０）し、酢酸エチルで抽出し、無水硫酸ナトリウム上に乾燥し、濾過し、減圧下に濃縮して、黄色油状物として（２Ｓ）−３−（ジベンジルアミノ）−２−フルオロ−１−プロパノール（１５６.６ｇ、９２％）を得た。
1H NMR(300MHz, CDCl3) δ 7.15-7.38(m, 10H), 4.65-4.78(m, 0.5H), 4.48-4.58(m, 0.5H), 3.50-3.82(m, 6H), 2.70-2.88(m, 2H)。
【００５０】
実施例Ｉ １４
（２Ｓ）−３−アミノ−２−フルオロ−１−プロパノール（実施例６の化合物の中間体）  （２Ｓ）−３−（ジベンジルアミノ）−２−フルオロ−１−プロパノール（３９.１ｇ、０.１４モル）をエタノール（３００mL）に溶解した。炭素上１０重量％の水酸化パラジウム(II)(５.０ｇ)を添加し、混合物をParr(R)振とう器上に置き、一夜水素雰囲気（５５psi）下に振とうした。水素の取り込みが観察されなくなった時点で混合物をCelite(R)のパッドを通して濾過した。新たなバッチの水酸化パラジウム(II)(５ｇ)をエタノール混合物に添加し、１２時間上記水素化条件に再び付した。再び水素の取り込みが観察されなくなった時点で混合物をCelite(R)のパッドを通して濾過した。新たなバッチの水酸化パラジウム(II)(５ｇ)をエタノール混合物に添加し、１２時間上記水素化条件に再び付した。粗製の反応混合物をCelite(R)を通して濾過し、減圧下に濃縮し、淡黄色油状物として（２Ｓ）−３−アミノ−２−フルオロ−１−プロパノール（１３.３ｇ、１００％）を得た。
1H NMR(300MHz, CD3OD) δ 4.78-5.00(br s, 3H), 4.49-4.62(m, 0.5H), 4.32-4.46(m,
0.5H), 3.54-3.70(m, 2H), 2.70-2.96(m, 2H)。
【００５１】
実施例Ｉ １５
ｔ−ブチル（２Ｓ）−２−フルオロ−３−ヒドロキシプロピルカーバメート（実施例６の化合物の中間体）
（２Ｓ）−３−アミノ−２−フルオロ−１−プロパノール（３８.６ｇ、０.４１モル）をジオキサン２５％水溶液（１.４Ｌ）に溶解し、炭酸カリウム（６０.１ｇ、０.４３モル）、次いで二炭酸ジ−ｔ−ブチル（９９.５ｇ、０.４６モル）を添加した。混合物を一夜攪拌した。ＴＬＣ分析は出発物質の完全な消費を示した。粗製の反応混合物を濃縮し、乾燥した。水（３００mL）、次いで硫酸水素カリウム飽和水溶液を添加した（pH＝約３まで）。有機物質を２回塩化メチレンで抽出し、硫酸ナトリウム上に乾燥し、濾過し、減圧下に濃縮し、淡黄色の油状物としてｔ−ブチル（２Ｓ）−２−フルオロ−３−ヒドロキシプロピルカーバメート（７９.５ｇ、９９％）を得た。
1H NMR(300MHz, CDCl3) δ 4.82-5.04(br s, 1H), 4.62-4.72(m, 0.5H), 4.48-4.58(m,
0.5H), 3.62-3.72(m, 2H), 3.32-3.62(m, 2H), 3.20-3.44(br s, 1H), 1.48(s, 9H)。
【００５２】
実施例Ｉ １６
ｔ−ブチル（２Ｓ）−２−フルオロ−３−ヨードプロピルカーバメート（実施例６の化合物の中間体）
イミダゾール（１９.８ｇ、０.２９モル）を室温で塩化メチレン（９００mL）に溶解した。ヨウ素（７３.９ｇ、０.２９モル）を添加し、反応混合物を室温で１０分間攪拌し、次に０℃に冷却した。トリフェニルホスフィン（７６.３ｇ、０.２９モル）を内部温度が１０℃以下に留まるように１０分間かけて少しずつ添加した。塩化メチレン（３００mL）中のｔ−ブチル（２Ｓ）−２−フルオロ−３−ヒドロキシプロピルカーバメート（４５.０ｇ、０.２３モル）の溶液を滴加した。反応混合物を室温に戻し、１２時間攪拌を続けた。反応混合物をCelite(R)のパッドを通して濾過し、追加の塩化メチレンで洗浄した。濾液を減圧下に濃縮し、塩化メチレンを溶離剤としてシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製した。この工程で無色の油状物としてｔ−ブチル（２Ｓ）−２−フルオロ−３−ヨードプロピルカーバメート（４２.５ｇ、６２％）を得た。
1H NMR(300MHz, CDCl3) δ 4.80-5.10(br s, 1H), 4.58-4.72(m, 0.5H), 4.42-4.56(m,
0.5H), 3.48-3.70(m, 1H), 3.20-3.46(m, 3H), 1.48(s, 9H)。
【００５３】
実施例Ｉ １７
エチル（フルオロメチル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート（実施例７の化合物の中間体）
水素化ナトリウム（１.４ｇ、５７.１ミリモル）を窒素雰囲気下に圧力フラスコ内でＴＨＦ（５０mL）中に懸濁し、攪拌しながら−１０℃に冷却した。ＴＨＦ（２０mL）中のエチル（１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート（１０.０ｇ、４７.６ミリモル）を添加中内部温度が０℃以下に維持されるように１０分間かけて混合物に添加した。添加完了後、反応混合物を９０分間この温度で攪拌した。フラスコを−７８℃に冷却し、クロロフルオロメタンガス（９.７ｇ、１４２.８ミリモル）を反応混合物内に凝縮させた。隔壁を除去し、フラスコをスクリュースレッドストッパーでシールした。次にフラスコを室温まで戻し、次に２４時間５０℃に加熱した。反応混合物を０℃に冷却し、水（２５mL）で慎重にクエンチングした。塩化メチレン（５０mL）を反応混合物に添加し、乳濁液をCelite(R)のパッドを通し濾過した。水層を塩化メチレン（２×１００mL）で抽出し、無水硫酸マグネシウム上に乾燥し、有機層を減圧下に濃縮し、淡黄色の油状物として粗製の生成物（６.９３ｇ）を得た。粗製の残存物をヘキサン中の２０％アセトンを溶離剤とするシリカゲルカラムクロマトグラフィー（６×２５cmカラム）で精製した。この工程で透明な無色の油状物としてエチル（フルオロメチル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート（４.４ｇ、４２％）を得た。
1H NMR(300MHz, CDCl3) δ 4.94-4.54(m, 2H), 4.32-4.20(m, 2H), 3.82-3.54(m, 4H),
1.60-1.44(m, 3H), 1.40-1.28(m, 3H), 1.26-1.08(m, 6H)。
【００５４】
実施例Ｉ １８
エチル（３−（Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−フルオロ−２−オキソプロピル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート（実施例７の化合物の中間体）
−１０℃でＴＨＦ（３０mL）中のジイソプロピルアミン（２.５mL、１４.５ミリモル、３.５eq）の溶液にｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中の１.４Ｍ、９.０mL、１４.５ミリモル）を滴加（約１０分）した。１０分後、反応混合物を−７８℃に冷却し、ＴＨＦ（１０mL）中のエチル(フルオロメチル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート（２.０ｇ、８.２６ミリモル、２eq）の溶液を１０分間かけて滴加した。添加後、反応混合物を１時間−７８℃で攪拌した。ＴＨＦ（１０mL）中のＮ−Ｂｏｃ−グリシンメチルエステル（０.８ｇ、４.１ミリモル）の溶液を内部温度が−７０℃以下を維持するように１０分間かけて滴加した。添加完了後、反応混合物を１時間−７８℃で攪拌した。反応混合物を酢酸（１mL、１４.５ミリモル）でクエンチングし、次に室温に戻した。塩化ナトリウム飽和水溶液（７５mL）を反応混合物に添加し、有機層を分離した。次に水層を酢酸エチル（２×７５mL）で抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウム上に乾燥し、減圧下に濃縮して、淡黄色油状物として粗生成物（２.６９ｇ）を得た。粗生成物をヘキサン中の４０％酢酸エチルを溶離剤とするカラムクロマトグラフィー（２×３５cmカラム）で精製した。この方法により透明無色の油状物としてエチル（３−（Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−フルオロ−２−オキソプロピル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート（０.７３ｇ、４４％）を得た。
1H NMR(300MHz, CDCl3) δ 5.78-5.24(m, 2H), 4.52-4.08(m, 4H), 3.94-3.50(m, 4H),
1.62-1.51(m, 3H), 1.50-1.32(m, 3H), 1.42(s, 9H), 1.30-1.12(m, 6H)。
【００５５】
実施例Ｉ １９
エチル（３−（Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−フルオロ−２−ヒドロキシプロピル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート（実施例７の化合物の中間体）  窒素雰囲気下に−５℃でメタノール（３０mL）中のエチル（３−（Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−フルオロ−２−オキソプロピル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネート（０.７ｇ、１.８ミリモル）の溶液にホウ化水素ナトリウム（７６mg、２.０ミリモル）を１回で添加した。僅かに発熱が起こったが、内部温度は−２℃以下を維持した。反応混合物を１時間０℃で攪拌した。反応混合物を炭酸水素ナトリウム飽和水溶液（５mL）でクエンチングした。粗製の混合物を減圧下に濃縮した。粗製の残存物を酢酸エチル（３０mL）で抽出し、塩化ナトリウム飽和水溶液（５mL）で洗浄し、無水硫酸マグネシウム上に乾燥した。減圧下に溶媒を除去し、淡黄色の油状物として粗生成物（５８０mg）を得た。カラムクロマトグラフィーによる精製で２つの画分が得られたが、これはエチル（３−（Ｎ−（ｔ−ブトキシカルボニル）アミノ）−１−フルオロ−２−ヒドロキシプロピル)(１,１−ジエトキシエチル）ホスフィネートの異なるジアステレオマーの存在と合致した。極性のより低い画分は２つのジアステレオマーの１：１混合物であると考えられた。一方、極性のより高い画分は１Ｈ ＮＭＲ分析によれば主に１つのジアステレオマーであった（１９０mg、２６％）。
極性のより高い化合物の1H NMR(300MHz, CDCl3) δ 5.32-5.04(br s, 1H), 4.88-4.82(m, 0.5H), 4.72-4.68(m, 0.5H), 4.40-4.08(m, 4H), 3.90-3.26(m, 6H), 1.66-1.52(m, 3H), 1.50-1.32(m, 3H), 1.44(s, 9H), 1.30-1.12(m, 6H)。
【００５６】
実施例Ｉ ２０
エチル３−［（ジエトキシメチル)(エトキシ）ホスホリル］−２−フルオロブタノエート（実施例８の化合物の中間体）
エチル（ジエトキシメチル）ホスフィネート（２１.７０ｇ、１１０ミリモル）と１,１,１,３,３,３−ヘキサメチルジシラザン（２３.３mL、１１０ミリモル）をアルゴン雰囲気下に２時間還流下に加熱した。混合物を室温に冷却し、エチル２−フルオロブタ−２−エノエートのジアステレオマー混合物（１４.６ｇ、１１０ミリモル）を添加した。試薬をアルゴン雰囲気下に８０℃に１日、そして１２０℃に２時間加熱した。混合物を室温に冷却し、別のトリエチルシリルで活性化したエチル（ジエトキシメチル）ホスフィネートを添加した（これは、エチル（ジエトキシメチル）ホスフィネート（２１.７０ｇ、１１０ミリモル）と１,１,１,３,３,３−ヘキサメチルジシラザン（２３.３mL、１１０ミリモル）から上記と同様の方法で製造された）。混合物を３日間１００℃に加熱し、さらに別のトリエチルシリルで活性化したエチル（ジエトキシメチル）ホスフィネートを添加した。混合物をアルゴン雰囲気下に３日間１００℃に加熱し、室温に冷却し、次に酢酸エチル（３００mL）で希釈した。溶液を１Ｎ ＨＣｌ（２×２００mL）と塩化ナトリウム飽和溶液で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ4上に乾燥し、濾過し、蒸発させて黄色の油状物として４２.０ｇを得た。この残存物を塩化メチレン、次に塩化メチレン／メタノール９８：２を溶離剤とするウェットパックされたシリカゲルカラム上のクロマトグラフィーで精製した。適切な画分を合わせ、蒸発させて透明な油状物としてエチル３−［(ジエトキシメチル)(エトキシ)ホスホリル］−２−フルオロブタノエート３.６ｇ（１０％）を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 4.9-5.6(m, 1H), 4.7-4.8(m, 1H), 4.2-4.4(m, 4H), 3.6-4.0(m, 4H), 2.6-2.9(m, 1H), 1.2-1.4(m, 12H)。
【００５７】
実施例Ｉ ２１
エチル３−アミノ−２−フルオロ−１−メチル−３−オキソプロピル（ジエトキシメチル）ホスフィネート（実施例８の化合物の中間体）
エタノール（３mL）中のエチル−３−［(ジエトキシメチル)(エトキシ)ホスホリル］−２−フルオロブタノエート（１.８ｇ、５.５ミリモル）に濃水酸化アンモニウム（１４.８Ｍ、０.５mL、７.４ミリモル）を添加した。溶液を４０℃で２４時間攪拌し、次に蒸発させて透明な油状物としてエチル３−アミノ−２−フルオロ−１−メチル−３−オキソプロピル（ジエトキシメチル）ホスフィネートのジアステレオマー混合物１.６ｇ（９７％）を得た。
1H NMR(400MHz, CDCl3) δ 5.7-6.7(m, 2H), 4.9-5.56(m, 1H), 4.7-4.8(m, 1H), 4.1-4.4(m, 2H), 3.8-4.0(m, 4H), 2.8-3.0(m, 1H), 1.2-1.4(m, 12H)。
【００５８】
医薬製造物
本発明の式Ｉの化合物は経口、直腸、硬膜下、静脈内、筋肉内、皮下、経鼻投与、および輸液による投与、またはその他の適当な投与
経路のための医薬製造物における活性成分として使用できる。好ましくは投与経路は経口または注射／輸液である。
【００５９】
医薬製造物は１種以上の製薬上許容しうる成分と組み合わせて本発明の化合物を含有する。最終剤型は知られた製薬工程により製造される。通常は活性化合物の量は製造物重量の０.１〜９５％、好ましくは非経口用途の製造物では０.２〜２０重量％、そして経口投与用途の製造物では１〜５０重量％である。
【００６０】
経口投与のための固体投与単位の形態の本発明の化合物を含有する医薬製造物の製造においては、選択された化合物を固体の製薬上許容しうる成分（例えば錠剤分解剤および潤滑剤）と混合してよい。次に混合物を処理して顆粒、錠剤、カプセルまたはカシェ剤とする。
【００６１】
直腸投与のための投与単位は坐薬形態；ゼラチン直腸カプセル形態；製造済みマイクロ浣腸剤の形態；または投与直前に適当な溶媒で希釈製造するための乾燥マイクロ浣腸製剤の形態に製造してよい。
【００６２】
経口投与に適する液体製造物は、シロップまたは懸濁液の形態、または、使用前に適当な溶媒で希釈製造するための乾燥混合物の形態に製造してよい。
非経腸投与のための溶液は、製薬上許容しうる溶媒中の本発明の化合物の溶液として製造してよく、そしてアンプルまたはバイアルに分注する。これらはまた使用直前に適当な溶媒で希釈製造するための乾燥製造物として製造してよい。
活性化合物の典型的一日当たり用量は、例えば各患者の個々の要求性、投与経路および疾患などの種々の要因に応じたものである。一般的に、用量は１μｇ〜１００mg／日kg体重、好ましくは１０μｇ〜２０mg／日kg体重の範囲である。
【００６３】
生物学的試験
[3Ｈ]ＧＡＢＡ放射性リガンド結合アッセイ
本質的に既に報告されているとおり（Zukin等、(1974)，Proc. Natl. Acad. USA 71, 4
802-4807）、ラットシナプス膜はSprague Dawley系ラット（オス）全脳から採取した。Olpe等の方法（1990, Eur. J. Pharmacol. 187, 27-38）の変法による[3Ｈ]ＧＡＢＡの競合アッセイは、２０nMの[3Ｈ]ＧＡＢＡ（比放射能：３テラベクレル（TBq／mmol))、被験化合物あるいは溶媒そして８０μｇのシナプス膜タンパク質を含む２００μｌのＴＣＩ（Tris Calcium Isoguvacine）緩衝液（５０mMトリス（トリ（ヒドロキシメチル）アミノメタン）、ｐＨ７.４、２.５mM ＣａＣｌ2および４０μＭイソグバシン）中で９６穴プレートを用いて行った。室温において１２〜２０分間インキュベーションした後、９６穴プレートセルハーベスター（SkatronあるいはTomtec）を用いて、０.３％ポリエチレンイミンにより前処理したガラス繊維フィルター（Printed filtermat B filters, Wallac）を通す高速濾過によりインキュベーションを終了した。フィルターは５０mMのトリス（トリ（ヒドロキシメチル）アミノメタン）および２.５mM ＣａＣｌ2を含有するｐＨ７.４、４℃の緩衝液で洗浄し、５５℃において乾燥した。MeltiLex B／HSシンチレータシート（Wallac）をフィルター上で溶融し、放射能をマイクロベータシンチレーションカウンター（Wallac）で測定した。
【００６４】
結果および考察
本発明の化合物は、結合アッセイと回腸アッセイ各々における低ＩＣ50およびＥＣ50のにより明らかになったとおり、ＧＡＢＡBレセプターに対して高い結合性と効力を持つことがわかった。また本化合物は静注並びに経口で動物モデルに投与した場合もＴＬＯＳＲを低減することがわかった。３−アミノプロピルホスフィン酸誘導体がＰ−Ｈ結合を持っていると文献に述べられていたことに反して、本発明の化合物が動物モデルにおいて高い代謝安定性を持つことがわかった。さらに、（マウスの体温低下によって測定されるような）中枢神経系の副作用は観察されなかったか、あるいは非常に高用量において観察されたのみであった。従って、治療用量（イヌモデルにおけるＴＬＯＳＲの抑制）と副作用を引き起こす用量（マウスモデルにおいて）の相違は意外にも大きかった。