(57)【要約】【課題】フィブリン溶解増強剤の局所投与により癒着を妨害する方法の提供。【解決手段】組織癒着を阻害するための組成物であって、癒着を阻害するための有効量のフィブリン溶解増強剤および組織への局所投与のための薬学的に受容可能なキャリアを含有し、ここで該フィブリン溶解増強剤が、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、ヒルジン、アンクロド、抗プラスミンインヒビター、およびフィブリン沈着ブロッカーからなる群より選択され、該薬学的に受容可能なキャリアが該フィブリン溶解増強剤の制御放出を提供するポリマー性物質を含む、組成物。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
組織癒着を阻害するための組成物であって、癒着を阻害するための有効量のフィブリン溶解増強剤および組織への局所投与のための薬学的に受容可能なキャリアを含有し、ここで該フィブリン溶解増強剤が、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、ヒルジン、アンクロド、抗プラスミンインヒビター、およびフィブリン沈着ブロッカーからなる群より選択され、該薬学的に受容可能なキャリアが該フィブリン溶解増強剤の制御放出を提供するポリマー性物質を含む、組成物。
【請求項２】
前記ポリマー性物質が１日〜３０日の間の期間にわたって薬剤を放出する、請求項１に記載の組成物
【請求項３】
組織癒着の形成を阻害するための方法に使用するための、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
実施例に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
本発明は、一般に外科的な癒着を妨害するための薬剤の送達の分野に属し、そしてとりわけ、癒着の妨害を改善するために、フィブリン溶解増強剤（特に、ウロキナーゼ(urokinase)）の制御された送達のための局在的に形成された局所ゲルシステムの使用を包含する。
【背景技術】
【０００２】
本明細書は、Jeffrey A.Hubbell,Chandrashekhar P.Pathak,Amarpreet S.Sawhney,Neil P. Desai,および Jennifer L.Hillにより1993年３月１日に出願された「組織接触物質および制御放出キャリアとしての光重合可能な生分解性ヒドロゲル」と題する米国特許第5,410,016号の一部継続出願であり、それは現在は放棄されたJeffrey A.Hubbell,Chandrashekhar P.PathakおよびAmarpreet S.Sawhneyにより1992年２月２８日に出願された「組織接触物質および制御放出キャリアとしての光重合可能な生分解性ヒドロゲル」と題する米国特許出願第07/843,485号の一部継続出願である。
【０００３】
手術での癒着
手術に続く癒着または瘢痕組織架橋の形成は、多くの外科処置の深刻な合併症のままである。これらは、骨盤の処置、腹部の処置、脊髄の処置、腱の処置、眼の処置、泌尿器の処置、胸部の処置、および他の処置を包含する。癒着形成は、一連の事象を介して生ずると考えられ、この内の１つは、手術後に起きる漿液滑液性の滲出物からのフィブリン架橋の形成である。器官は、最初に薄いフィブリン架橋により結合する。時間の経過に伴い、これらの架橋には細胞が生息し始め、この細胞は、コラーゲンを分泌し得、そしてさもなければ、架橋を安定化し得る。組織の損傷に続いてプラスミノーゲンアクチベータ（これは、通常、酵素プラスミノーゲンを活性化してフィブリンの破壊を引き起こす）の細胞分泌レベルが減少し得ることが観察されている。従って、このようなフィブリン架橋の安定化の妨害、および特にそれらが安定化して癒着する前にそのような架橋を除去し得る天然のプロセスの増強は、癒着の妨害に非常に望ましい。
【０００４】
プラスミノーゲンアクチベータの細胞分泌（例えば、腹膜を内張りする中皮細胞）は、Vipondら「腹膜フィブリン溶解性活性および腹内癒着」The Lancet, 335:1120-1122(1990)で、損傷に続いて減少し、瘢痕に成熟する前のフィブリン架橋の吸収の欠損を導くことが示された。腹腔内では、分泌物の中で減少する特定のフィブリン溶解因子(fibrinolytic)が、tPAであり、そしてuPAでないことが示された。
【０００５】
癒着妨害のバリア法：
いくつかの物理的バリア法が、手術後癒着の妨害に利用されている。これらは、酸化再生セルロースのシート（LinskyおよびCunninghamによる米国特許第5,007,916号；Safersteinらによる米国特許第5,134,229号）、伸長ポリテトラフルオロエチレン(polytetrafluoroethylene)のシート(Boyersら、「Gore-TexTM手術用膜を用いたウサギにおける手術後骨盤癒着の減少」Fertility and Sterility, 49:1066-1070(1988))、温度可逆性ヒドロゲル(thermoreversible hydrogel)（Henryによる米国特許第5,126,141号）、および光重合化吸収性ヒドロゲル(photopolymerized、resorbable hydrogel)(Hubbellらにより1993年３月１日に出願された「組織接触物質および制御放出キャリアとしての光重合可能な生分解性ヒドロゲル」と題された米国特許第5,410,016号、これに対して本出願の優先権を主張し、その教示は、本明細書中に参考として援用されている）を包含する。Hubbellらの方法を除いて、これらの方法は、有用性が多様であるが、しかし、いずれの場合でもこれらの方法は手術後の癒着形成を削除しない。
【０００６】
癒着妨害におけるフィブリン溶解酵素の使用
種々のフィブリン溶解増強剤は、癒着を妨害する試みに使用されている。それらの有用性および生体適合性ゆえに、ストレプトキナーゼ(streptokinase、SK)、ウロキナーゼ(UK；ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベータ、uPAとして公知でもある）、組織プラスミノーゲンアクチベータ(tPA)、および改変組換えtPA(Fb-Fb-CF)が最も広く試験されている。これらの薬剤は全て、酵素プラスミノーゲンを活性化することにより作用し、プラスミノーゲンにフィブリンの分解を生じさせる。フィブリン鎖の除去または妨害について調べた他の物質は、タンパク質分解酵素、薬物、およびへパリンのような凝固インヒビター（これは、さらなるフィブリンの沈着を妨害する傾向がある）を包含し、本明細書中に「フィブリン溶解増強剤」として言及されている。
【０００７】
フィブリン溶解酵素は、手術後の癒着を妨害するために使用されてきた。これは、Dunnにより「組織プラスミノーゲンアクチベータと癒着妨害」Prog.Clin.Biol.Res.38:213-220(1993)および「癒着、癒着溶解およびプラスミノーゲンアクチベータ」Assisted Human Reproductive Technology, 13:130-137(1991)で概説されている。
【０００８】
組織プラスミノーゲンアクチベータ(tPA)
組織プラスミノーゲンアクチベータ(tPA)は、ミニポンプ注入、腹腔内注射、および局所的により送達される場合、手術後癒着の妨害に有用であることが示されてきた。Sheffieldは、tPAの局所投与は好ましくは注射によるが、しかしリン脂質キャリア、軟膏(asalve or ointment)、多糖組成物、熱可塑性重合ゲル、またはヒドロゲル（例えば、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンブロックコポリマー(polyoxyethylene-polyoxypropylene block copolymer)、これは、３時間から最大７日間の間放出する）内でも可能であることを記載した。Wisemanらは、tPA、tPAアナログ、Fb-Fb-CFおよびSKの、単独または吸収可能な酸化再生セルロースのシート、Interceed TC7吸収可能癒着バリア(Ethicon,Inc.,Somerville,NJによる)と組み合わせての添加を記載する。
【０００９】
ストレプトキナーゼ(SK)
ストレプトキナーゼ(SK)は、幅広く利用されるようになった最初のプラスミノーゲンアクチベータであり、ある研究者により癒着の妨害に有効であると示されているが、他の研究者によっては無効であると示されている。SKは、腹膜注射により送達された場合、手術後の癒着妨害に効果的であり(Meierら、「小児におけるストレプトキナーゼおよびストレプトドルナーゼの手術内適用の最初の臨床結果」Langenbecks Archiv.fuer Chirurgie, 366:191-193(1985)、Treutnerら、「手術後の腹腔内癒着−癒着予防のための物質の新規の標準的および客観的動物モデルおよび試験＊」Lagenbecks Archiv.fuer Chirurgie, 374:99-104(1989)、そして、他の研究においては、同様に送達した場合、効果がないことが示されている(Verreetら、「再発性手術後癒着妨害：ラットにおける実験的研究」Eur.Surg.Res.,21:267-273(1989)）。連続的注入として送達した場合、それは効果がなかった（Sheffield)。分解可能なポリマーマトリックスにより送達した場合は、幾分効果的であった（Wisemanら）。
【００１０】
tPAの副作用についての報告は、幅広く異なり、有効量で全くない(MenziesおよびEllis、またはSheffield)から、有効量で重篤なものまである(Wisemanら)。
【００１１】
Fb-Fb-CF
Fb-Fb-CFは、tPAアナログであり(Phillipsら、「新規な組織プラスミノーゲンアクチベータアナログ、Fb-Fb-CFのウサギEmbolic Strokeモデルでの脳内再潅流に及ぼす効果」Annals of Neurology, 23:281-285(1989)、そして分解可能なポリマーマトリックスより放出した場合は、手術後の癒着の妨害に効果的であった（Wisemanら）。
【００１２】
遺伝子工学は、プラスミノーゲンアクチベータ、プラスミン、プラスミノーゲン、および他のフィブリン溶解剤の別の形態を生成するために適用されている。例えば、米国特許第5,223,408号、同第5,185,259号、および同第5,094,953号に記載されている。
【００１３】
ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベータ(uPA)
ウロキナーゼプラスミノーゲンアクチベータ(uPA)についての研究の大部分は、手術後癒着の妨害に有用性を示さなかった。uPAは、Dunn(1991)により報告されたように癒着の妨害について調査されている。uPAを用いたいくつかの種についての最初の研究は、成功しなかった。しかし、Gervinらによる２番目の研究「手術後癒着の原因」Am.J.Surg.125:80-88(1973)は、効力を示した。イヌが、手術の時点で、多量のウロキナーゼを腹腔内注射により処置された。20,000 U/kgの用量では、伝えられるところでは、回腸癒着の形成において有意な減少が見られた。
【００１４】
しかし、後のどの研究でも効力を示さなかった。例えば、Rivkindらの報告「ウロキナーゼはラットにおける腹部癒着形成を妨害しない」Eur.Surg.Res.,17:254-258(1985)によると、彼らは、手術直後および手術後48〜72時間で、静脈投与、腹腔内投与、および胃腸内投与による5,000および100,000U/kgの間の用量のウロキナーゼの投与を研究した。さらに、uPAは、損傷部位にミニポンプで連続的に放出されたが、Sheffieldらにより報告されたように、癒着を減少させなかった。ウサギでの別の研究は、手術時または手術後24および48時間後の腹腔内または静脈内へのいずれの10,000U/kgのウロキナーゼの投与の後に、腹腔へ血液添加する場合および血液添加をしない場合の両方（どちらの場合も損傷している）に、子宮角への剥離創傷に効力を示すことを主張した（BirkenfeldおよびSchenker「ウロキナーゼの腹腔内癒着の妨害における効果；その形成における血液の役割」Annales Chirurgiae et Gynaecologiae, 72:246-249(1983))。効力の主張にもかかわらず、BirkenfeldおよびSchenkerの表２を参照すると、群「右の子宮角の奬膜剥離−処置せず」と群「右の子宮角の奬膜剥離−ウロキナーゼ処置」との比較は、ｐ値がほんの約0.2の違いを表すことを示す。対照してみると、群「奬膜剥離＋右の子宮角への血液の適用−処置せず」は、群「奬膜剥離＋右の子宮角への血液の適用−ウロキナーゼ処置」は、ｐ値<0.02で異なり、両方ともχ２検定による。従って、ウロキナーゼによる処置は、不自然な量の血液を添加した場合にのみ効果的であった。
【００１５】
まとめると、uPAは、１つの研究でのみ癒着の妨害に効果的であると示され、そして、統計的な違いのために通常の状態および通常の標準を使用してこの観察を再現することは可能ではなかった。他のフィブリン溶解剤の効力もまた、混同され、高用量の反復または連続注入の場合にのみtPAについて最も良い結果が得られ、そして本質的にストレプトキナーゼでは効力が観察されなかった。
【００１６】
この分野の文献は、手術後の癒着を妨害するための信頼性のある、臨床上有効な手段としての任意のこれらの薬剤の有用性に関して非常に疑わしい。
【００１７】
欧州特許公開第A 0 472 011号は、プロテアーゼおよび創傷処置のための薬学的に受容可能なキャリアを含有する組成物を開示する。豪州特許公開第A-38229/93号は、炎症および創傷処置のためのプラスミノーゲンアクチベータのインヒビターの使用を開示する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１８】
それゆえ、本発明の目的は、フィブリン溶解剤を使用して局所的に手術後癒着を妨害するための信頼性のある手段を提供することである。さらに、本発明の目的は、治癒の発生と同じ期間にわたって最小の侵襲性および生分解性を有する手術後癒着を妨害する手段を提供すること、および単純に使用することである。本発明のさらに別の目的は、低用量のフィブリン溶解剤を使用して、手術後の癒着を妨害するための手段を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１９】
発明の要旨
本明細書中に記載されるのは、フィブリン溶解増強剤の局所投与により癒着を妨害する方法である。特に、本明細書中に記載されるのは、フィブリン溶解剤、好ましくはウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、ヒルジン(hirudin)、またはアンクロド(ancrod)を送達するための局所的に適用されるポリマーマトリックスを使用して手術後の癒着を妨害するための局所的な分解性ポリマー放出システムを使用する方法である。最も好ましい実施態様では、マトリックスは極めて薄く、そしてインサイチュで重合して生分解性のポリマーマトリックスを形成する。マトリックスは、手術後の癒着の妨害に有効な期間にわたる薬剤の制御された放出を提供し、そして通常は同じ時間枠内で生分解可能である。ウロキナーゼを全身投与した以前の研究と対照的に、マトリックスとウロキナーゼの組み合わせは、比較例に示したように手術後の癒着の妨害に有効である。この実施例はまた、低用量を使用する制御放出性、生分解性システムを通して投与される組織プラスミノーゲンアクチベータ（tPA）に効力を示す。
【００２０】
さらに、本発明は以下を提供する。
（項目１）組織癒着を妨害するための組成物であって、局所適用される生体適合性の生分解性ポリマーマトリックスにおけるフィブリン溶解増強剤の有効量を含有し、ここで該マトリックスが組織上の生体適合性の生分解性ポリマーまたはマクロマーをゲル化または凝固させることによって形成され、および、ここで該マトリックスが該組織に適合し得、そして癒着を妨害するに効果的な期間に亘って制御された方法で該薬剤を放出し得る、組成物。
（項目２）項目１に記載の組成物であって、前記ポリマーマトリックスが、前記フィブリン溶解増強剤および重合可能な生体適合性の生分解性マクロマーを組織部位に適用し、次いで該マクロマーを架橋または重合することにより形成され、これにより該組織上にバリアコーティングの形態で該フィブリン溶解剤を含有するポリマーマトリックスを形成する、組成物。
（項目３）項目１または２に記載の組成物であって、前記フィブリン溶解増強剤が、ウロキナーゼ、血栓溶解剤、フィブリンを特異的に分解するプロテアーゼ、抗プラスミンインヒビター、およびフィブリン沈着ブロッカーからなる群より選択される、組成物。
（項目４）前記薬剤が、ウロキナーゼ、ヒルジン、およびアンクロドからなる群より選択される、項目１または２に記載の組成物。
（項目５）前記ポリマーマトリックスが、１日から30日の間の期間に亘って薬剤を放出する、項目１から４に記載の組成物。
（項目６）前記ポリマーマトリックスが、１日から30日の間の期間に亘って分解する、項目１から４に記載の組成物。
（項目７）前記マトリックスが、重合または架橋の間に前記組織に結合する、項目２から６に記載の組成物。
（項目８）前記マトリックスが、前記マクロマーのフリーラジカル重合によって形成される、項目１から７に記載の組成物。
（項目９）前記マクロマーの重合が、紫外線または可視光線への曝露によって開始される、項目８に記載の組成物。
（項目１０）前記マトリックスが、温度またはイオン環境の変化によって凝固する、項目１から７に記載の組成物。
（項目１１）前記組成物がポリマー微粒子の懸濁液である、項目１から１０に記載の組成物。
（項目１２）前記マトリックスがヒドロゲルである、項目１から１１に記載の組成物。
（項目１３）組織癒着を阻害するための方法における、項目１から１２に記載の組成物の使用。
（項目１４）組織癒着を阻害するための方法における項目１に記載の組成物の使用であって、該組成物が組織への局所投与のための薬学的に受容可能なキャリアをさらに含有する、使用。
（項目１５）組織癒着を阻害するための組成物であって、組織への局所投与のための薬学的に受容可能なキャリアおよび癒着を阻害するための有効量のフィブリン溶解増強剤を含有し、ここで該フィブリン溶解増強剤が、ウロキナーゼ、血栓溶解剤、フィブリンを特異的に分解するプロテアーゼ、抗プラスミンインヒビター、およびフィブリン沈着ブロッカーからなる群より選択される、組成物。
（項目１６）組織癒着形成を阻害するための方法における、項目１５に記載の組成物の使用。
【００２１】
発明の詳細な説明
本明細書中に開示するのは、手術後の癒着妨害に有効でかつ信頼性のあるフィブリン溶解増強剤(FEA)の送達のための送達システムである。
【００２２】
フィブリン溶解増強剤
FEAは、例えば、ウロキナーゼ、ストレプトキナーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベータ、ヒルジン、ヘビ毒成分（例えば、アンクロド）、およびそれらの遺伝子工学的改変体を包含し、これらは全てプラスミノーゲンへの結合により機能し、そしてプラスミノーゲンがフィブリンに対してタンパク質分解的に活性となることを生じさせる。FEAはまた、血栓溶解剤；プラスミンまたはプラスミノーゲンを包含するプロテアーゼのような直接フィブリンを攻撃するタンパク質；それ自身プラスミノーゲンを阻害するタンパク質のクラスを不活化する分子（抗プラスミンインヒビター）；へパリンおよび他のフィブリン沈着ブロッカー；およびフィブリンの溶解を局所的に増強する効果、またはその沈着を妨害する効果を有する他の薬剤を包含する。
【００２３】
これらの１以上の物質の有効量を、癒着を妨害するべき領域に局所的に投与する。本明細書で使用される、「癒着」は、手術のまたは手術後の癒着、感染後の癒着、狭窄、瘢痕形成、および関連のプロセスを包含する。癒着は、骨盤の処置、腹部の処置、脊髄の処置、腱の処置、眼の処置、泌尿器の処置、胸部の処置、および他の処置において生じ得る。
【００２４】
好ましい実施態様では、薬剤はウロキナーゼまたはtPAであり、最も好ましくはウロキナーゼである。
【００２５】
FEAの用量は、全身的にまたは注射により送達される現在使用される用量から、または文献で報告された用量から、慣例の最適化に基づいて決定される。ラットでは、tPAは、動物あたり0.03mg〜動物あたり12mgの用量で、一連の処置に使用され得；現存する証拠により好ましい範囲は、重合物質中で投与した場合は、用量あたり１〜２mgの範囲にあることが示唆される。ヒトに適切な用量は、外挿により得られ得；上記のラットの用量は、心臓発作後の全身的なフィブリン溶解に通常投与される治療量に対応し、従って、範囲の上限付近であり得る。ウロキナーゼは同じく、全身適用に適切な用量（ラットでは約45,000国際単位）で有効であることが証明され、そしてより低濃度も有効であり得る。ストレプトキナーゼの必要範囲は、ラットあたり15,000IUの等価量より高いようである。
【００２６】
局所投与の手段
局所送達には数多くの方法が公知であるが、有効であることが発見された方法は、癒着形成の妨害に必要な期間にわたって、取り込まれたFEAの制御された放出をもたらした。最も有効であり、そして最小の患者の許容コンプライアンスを要求する方法は、手術時に癒着が妨害されるべき部位に適用し得る、生体適合性の生分解性ポリマーマトリックスからなる方法である。
【００２７】
ポリマーマトリックスは、以下の基準を満たすべきである：
物質は、生体適合性であり、そして例えば、１日〜30日の間の期間にわたって、加水分解または酵素的開裂のいずれかにより生分解性であるべきであるが、妨害する癒着の性質およびそれらの位置によって決定されたように、いくつかの場合ではより長い分解時間が所望され得る。腹部では、好ましい期間は、１日〜１ヶ月の間であり、好ましくは２日間〜２週間の間であり、そして最も好ましくは、４日間〜１週間である。
【００２８】
物質は以下のいずれかの形態であるべきである。(1)液体またはゲルとして適用され、次いでこれは、インサイチュで重合または架橋してさらに物理的完全性または影響されるべき組織への結合を提供する形態、または、(2)癒着が妨害されるべき部位に適合して確保される形態である。これらの物質は、部位に送達する前に形成される物質（例えば、Teflon(登録商標)酸化セルロース布、またはゼラチンのスポンジ）とは区別される。ゲル化していないポリマーは、任意の適切な手段で送達され得；好ましい手段は、癒着が妨害されるべき、またはフィブリン溶解が増強されるべき特定の状況にともなって変化し得る。腹腔鏡または套管針を用いて手術を行う場合には、好ましい方法は、（好ましくは、フィブリン溶解増強剤を含有している）ゲル化していないバリア物質を損傷部位上にスプレーすることであり；そして次いで、バリアを光または特定のバリアシステムに適切な他の手段によりゲル化させる。手術が開口損傷を含有する場合には、バリアを注射器またはまたは同様の手段で適用することが有利であり得る。バリアを中空血管(hollowvessel)または管腔の内側に据え付ける場合には、送達のためにカテーテルを使用することが最も適切であり得る。
【００２９】
重合物質の厚さは、いくつかの要因によって決定され得、これは、送達されるFEAの量、FEAが送達される間の時間、機械的抵抗に必要とされるバリアの厚さ、および同様の要因を包含する。これらの制限内では、より薄いバリアが好ましい。なぜなら、それらはより早く浸食され、そしてしばしばより早く設置され、そして他の器官または生物学的プロセス（例えば、血流）をさほど妨げないことが予想されるからである。一般に、意図する厚さは、１〜500ミクロンの範囲内である。10〜100ミクロンの範囲がより好ましく、そして20〜50ミクロンの範囲が最も好ましい。しかし、適切な量のFEAを含有または送達する必要のある場合には、より厚いバリアが意図される。
【００３０】
物質の浸食性は、組成物の選択およびその分解性架橋の安定性によって制御を受ける。物質の安定性に対する要求は、所望の効果を得るのに充分に長く存続することであり、そして可能な限り短い時間で完全に浸食されることである。腹部内の癒着妨害について、現在のデータは、バリアおよびFEAの送達が、少なくとも１日、好ましくは２日以上、そして最も好ましくは少なくとも４日間持続すべきであることを示唆する。脊髄盤手術では、断片的な証拠が、手術後の癒着妨害のために１〜２週間の期間が好ましいことを示唆する。バリアは、その分解が１ヶ月より早く、より好ましくは、２週間くらいのより短い期間で完了することが好ましい。但し、この期間が少なくともFEAの治療的な存在に必要とされる期間の長さである。
【００３１】
物質はまた、取り込まれたFEAの効力を阻害するように、それらと反応性であってはならないが、しかし好ましくは拡散の制限により、FEAの放出速度をその大きさで制限するように供しなければならない。治癒の時間は、一般に２週間の範囲であるので、好ましい放出時間は、１日〜30日までの範囲内である。拡散の制御は、穴の大きさの設計、FEAに対するバリアマトリックスの相対的アフィニティー、FEAの部分的不溶性、および沈着バリアの物理的大きさおよび形状により達成される。数日間単位の短い処理期間のためには、多孔性の親水性マトリックスの単純な抗対流効果が充分な制御を与え得る。
【００３２】
物質はまた、ポリマーそれ自体の性質によって癒着を妨害するために機能し得、このポリマーはFEAの作用に対して累積的である。このような物質は、Jeffrey A.Hubbell,Chandrashekhar P.Pathak,Amarpreet S.Sawhney,Neil P.Desai,およびJennifer L.Hillにより1993年３月１日に出願された「組織接触物質および制御放出キャリアとしての光重合可能な生分解性ヒドロゲル」と題された米国特許出願第08/022,687号に記載されている（この教示は本明細書中に援用されている）。簡略に述べると、ポリマーは、生体適合性の、生分解性の、重合可能な、そして少なくとも実質的に水溶性のマクロマーから形成され、少なくとも１つの水溶性領域、少なくとも１つの生分解性領域（通常は加水分解による）、および少なくとも２つのフリーラジカル重合可能領域を有する。この領域は、いくつかの実施態様では水溶性でありかつ生分解性であり得る。マクロマーは、生成されたフリーラジカルに重合可能領域を曝すことにより（例えば、光感受性化学薬品および染料により）重合され得る。
【００３３】
マクロマーの重要な性状は、重合可能領域がインビボでの一様な分解を促進するために少なくとも１つの分解性領域により分離されることである。これらのポリマーの変形がいくつかある。例えば、重合可能領域は、分解性伸長部分に直接に、または分解可能領域が分解可能部分により分離されている限りは、水溶性分解不能部分を介して間接的に結合され得る。例えば、マクロマーが分解可能領域と結合した単純な水溶性領域を含有する場合、１つの重合可能領域は、水溶性領域に結合され得、そしてもう１つの重合可能領域は分解可能な伸長部分または領域に結合し得る。別の実施態様では、水溶性部分はマクロマーの中心核を形成し、そして核に結合した少なくとも２つの分解可能領域を有する。少なくとも２つの重合可能領域が分解可能領域に結合され、そのため分解するにつれ重合可能部分（特に重合ゲルの形態の）が分離される。逆に、マクロマーの中心核が分解可能領域により形成される場合、少なくとも２つの水溶性領域は核に結合され得、そして、重合可能領域はそれぞれの水溶性領域に結合され得る。正味の結果は、ゲル形成およびインビボでの分解条件に曝した後に同じとなる。さらに別の実施態様では、マクロマーは、水溶性骨格領域およびマクロマーの骨格に固定された分解可能な領域を有する。少なくとも２つの重合可能領域は、分解可能域に結合され得、そのため、それらは分解するにつれ分離され、ゲル生成物の溶解を生じる。さらなる実施態様では、マクロマー骨格は、分解可能な骨格に結合した分枝またはグラフトとして水溶性領域を有する分解不能な骨格で形成される。２つ以上の重合可能領域は、水溶性分枝またはグラフトに結合される。別の変形では、骨格は星形であり得、これは、水溶性領域、生分解性領域、または生分解性でもある水溶性領域を含む。この一般的な実施態様では、星形領域は、それに結合した重合可能領域を有する水溶性または生分解性の分枝またはグラフトを含む。さらに、光重合性領域は、分解性領域のなんらかの点で分離されなければならない。
【００３４】
これらのマクロマーの例は、PEG-オリゴラクチルマルチアクリレート(PEG-oligolactyl-multiacrylate）である。適切な末端キャップの選択は、迅速な光重合およびゲル化を可能にし；それらがいくつかの開始システム（例えば、エオシン色素(eosindye)を使用して、紫外光または可視光に短時間曝すことにより重合し得るので、アクリレート(acrylate）が選択される。ポリ（エチレングリコール）(poly(ethylene glycol))またはPEG中心構造単位（核）は、優れた生体適合性とともにその高い親水性および水溶性に基づき選択される。短いポリ（α−ヒドロキシ酸）(polya-hydroxy acid)（例えば、ポリグリコール酸(polyglycolic acid)）は、好ましい鎖伸長物として選択される。なぜなら、それはエステル結合の加水分解により迅速に分解され、無毒な代謝物であるグリコール酸になるからである。高度に結晶化したポリグリコール酸は水に不溶性であり、そして最も一般的な有機溶媒であるが、全体のマクロマーは水溶性であり、そして水性の組織液と接触する間に、迅速にゲル化して生分解性のネットワークになり得る。このようなネットワークを、水溶性の薬剤および酵素（例えば、FEA）を捕獲し、そして均一に分散させるため、およびそれらを制御された速度で送達するために使用し得る。他の好ましい鎖伸長物は、ポリ乳酸(polylactic acid)、ポリカプロラクトン(polycaprolactone)、ポリオルトエステル(polyorthoester)、およびポリアンヒドリド(polyanhydride)である。ポリペプチドおよび多糖もまた使用され得る。
【００３５】
これらの物質は、制御された薬剤送達、特に親水性物質（例えば大部分のFEA）に特に有用である。なぜなら、ポリマーの水溶性領域が、水とポリマー内に捕獲された物質との接触を可能にするからである。さらに、捕獲される物質を含有するマクロマーを、物質を有機溶媒に曝さずに重合することが可能である。放出は、分解前のポリマーからの物質の拡散および／または分解するときのポリマーからの物質の拡散により生じ得、これはポリマー内の特徴的な孔の大きさ（これは、架橋間の分子量および架橋密度により制御される）に依存する。捕獲された物質の不活化は、ゲルの固定化効果および防護効果により減少し、そして他の制御放出システムに関する破局突然効果(catastrophic burst effect)が避けられる。捕獲された物質が酵素の場合、ゲル部分が、基質がゲルに浸透を可能にするように選択される場合、酵素は捕獲される間に基質に曝され得る。ポリマーの分解は、末端エステル結合を徐々に加水分解することにより、インビボでの最終的な遊離マクロ分子の制御された放出を促進する。
【００３６】
これらのマクロマーの利点は、これらは水性環境で迅速に重合し得ることである。従って、正確に形成された、半透性の、生分解性フィルムまたは膜をインサイチュで、組織上に形成し得る。特に好ましい実施態様では、マクロマーはそこに結合した光イニシエーター(photoinitiator)を有する組織に適用され、そして重合して極薄の被膜を形成する。これは特に、手術の間に組織バリアを形成するのに有用であり、そして形成による癒着を妨害する。
【００３７】
本明細書の実施例は、ラットの盲腸およびウサギの子宮角での手術後の手術癒着の妨害のためのこれらのマクロマーおよびポリマーの使用を示す。ポリマーは、移植サンプル上の最小の繊維質の過剰増殖を示したことから、優れた生体適合性を示す。このモデルのためのヒドロゲルは、長波長の紫外(LWUV)光に短時間曝すことにより、水溶性前駆体からインサイチュでゲル化し、その結果、組織を被覆する粘液質で、漿液性の、または漿液血液性の層を有するヒドロゲルの浸透性のネットワークを形成する。分解性のヒドロゲルは、それ自身およびtPAとの組み合わせの両方で癒着妨害に大変効果的であった。
【００３８】
これらの物質は、酸化再生セルロース布またはペルフルオロアルキレン(perfluoroalkylene)膜のような物質とは、より浸食性の少ない技術によって組織創傷部位へのこれらの送達を可能にする注射器、カテーテル、スプレーまたは溶液により送達される能力により区別される。さらに、これらは生分解性または生体侵食性であるので、除去する必要がない。これらは、リポソーム(liposome)、ポリマーアジュバント（例えば、デキストラン(dextran)）、および堅固にゲル化されていないポリマー（例えば、ヒアルロン酸(hyaluronic acid)）とは、癒着妨害の必要な部位（単数および複数）に正確に局在化するその能力により区別される。このことにより、所望の効果を生み出すために必要なFEAの用量が最小化される。
【００３９】
別の重合物質は、他の機構により設置可能な物質を包含する。これらは、以下のポリマーを包含する。すなわち、加温して設置されるポリマー、例えば、ポロキサマー(poloxamer)(Pluronic(登録商標)またはButyronic(登録商標)界面活性剤；ポリエチレンオキシド(polyethylene oxide)およびポリプロピレンオキシド(polypropylene oxide)またはポリブチレンオキシド(polybutylene oxide)のブロックコポリマー）、またはヒドロキシプロピルメチルセルロース(hydroxy propylmethyl cellulose)；冷やすとゲル化するポリマー（例えば、ゼラチン）；生理学的イオン（カルシウム）に曝すとゲル化し得るポリマー（例えば、アルギネート(alginate)またはキトサン(chitosan)）；他の機構（例えば、酸化還元変化）でゲル化するポリマーを包含する；ただし全ての場合に設置可能なポリマーはまた、実質的に不活性で浸食性である。
【実施例】
【００４０】
本発明は、以下の非限定実施例を参照することにより、さらに理解される。
【００４１】
実施例１：  ヒドロゲルポリマーマトリックスからのフィブリン溶解因子の放出による癒着の妨害。
【００４２】
有効性試験を、米国特許第5,410,016号に記載のように電気焼灼器具により子宮角を損傷させて、脈管遮断および漿膜損傷を生じさせたラットにおいて実施した。動物を、損傷および処置７日後に屠殺し、そして癒着をスコアづけた。切開部を再び開き、そして癒着を、程度および粘着力についてスコアづけた。癒着形成の程度を、それ自身と、あるいは腹膜壁または他の器官と癒着を形成した子宮角の長さを測定することにより評価した。癒着の粘着力を、フィルム状または繊維状のいずれかとして分類した。フィルム状癒着は、通常、透き通っており、弱く、そして手で剥離され得た。繊維状癒着は、高密度であり、白っぽく、そして通常、剥離されるためには鋭利な器具での解剖を必要とした。単一のフィルム状癒着帯のみがはっきりと分かる場合、５％のスコアを割り当てた。
【００４３】
この角の代表的なサンプルを、組織学のために摘出し、そして10％の中性のホルマリン緩衝溶液中で固定した。このサンプルのパラフィン切片を、ヘマトキシリン(hematoxylin)およびエオシン(eosin)を用いて染色した。
【００４４】
癒着スコアは、フィルム状または繊維状であるとそれぞれ等級分けた、癒着により占められる罹患面積の％である。
【００４５】
性的に成熟した雌ラットを手術のために用意した。正中線切開を下腹部に、ロンパン(Rompun)、ケタミン(Ketamine)、およびアセプロマジン(Acepromazine)麻酔下で実施した。子宮角を探知し、そして両方の角への脈管構造を体系的に焼灼し、虚血性損傷を誘導した。焼灼後、マクロマー溶液（0.5ml）を角に沿って塗布し、焼灼損傷が誘導された表面を被覆させた。マクロマー溶液の均一な適用が完了した後、この角をLWUVランプに１分間曝し、ゲル化を誘導した。この手順を角の反対側で繰り返した。次いで筋腹膜層について連続2-0 Vicryl（Ethicon）縫合、および皮膚層について０Vicryl（Ethicon）縫合を用いて、切開部を閉じた。予防的な抗生物質は、全く投与しなかった。虚血性損傷を記載のように生成させ、そして切開部を前駆物質を塗布せずに閉じた；全ての方法は、処置群とコントロール群の間で同一であった。
【００４６】
同一の動物モデルをマクロマーを塗布せずに手術する場合にコントロールを用いた；全ての手術方法は、処置群と組織学的コントロールとの間で同一であった。
【００４７】
動物を、フィブリン溶解剤をバリアに含有させるか、または含有させずに、光重合ヒドロゲルバリアで処置した。ポリエチレングリコール(polyethylene glycol)（M.W. 18,500）（これは、両末端に短いポリグリコリド(polyglycolide)繰り返し単位（各末端におけるグリコリジル残基の平均数：10）で鎖伸長しており、そして続いてアクリル酸基で終結している）のリン酸緩衝生理食塩水（8.0g/l NaCl, 0.201 g/l KCl, 0.611 g/l Na2HPO4, 0.191 g/lKHPO4, pH 7〜4）中の粘稠性無菌15％溶液を調製した。架橋反応に必要とされる開始剤である2,2-ジメトキシ-2-フェニルアセトフェノン（2,2-dimethoxy-2-phenyl acetophenone）をマクロマー溶液に添加し、900ppmの開始剤濃度を得た。長波長UVランプ（Blak Ray）への30秒の曝露は、重合を引き起こすに十分である。フィブリン溶解タンパク質をマクロマー溶液中で、表１の脚注で示される濃度で混合した。
【００４８】
SKを、Astra Pharmaceutical Products,Westborough、PAから得た;tPAをGenentech, South San Francisco, CAから得、そしてウロキナーゼをAbbott Laboratories, North Chicago, ILから得た。３tPA mg/ml（正味1,740,000単位）の基本用量を選択した。SK（45,000単位）およびuPA（15,000単位）についての等価用量を、心筋梗塞を処置するために用いた相対的用量、薬物の一次使用に基づいて計算した：薬剤の用量＝（３mg/ml）×（心筋梗塞を処置するために用いた薬剤の用量）／（心筋梗塞を処置するために用いたtPAの用量）。それぞれの実験群は、７匹のラットからなる。
【００４９】
結果および統計学的分析を表１に示す。
【００５０】
【表１】
2006193535.tif 000002
溶液中のuPAは、腹腔内注射の４日経過後でさえ、無効であった。tPAの溶液は、幾分効果があり、これはコントロールの約１／３で癒着を減少させた。バリアゲル単独は、FEAを添加せずに、癒着をコントロールの約75％減少させた。しかし、バリアゲルならびにuPAおよびtPAは、癒着を４〜６％まで、またはゲルのみのコントロールよりおよそ５の因子(factor)だけ、有意に減少した。バリアゲル単独は、単独で試験したFEAのいずれよりも効果的であったが、併用は、いずれよりも著しく効果的であった。
【００５１】
実施例２：フィブリン溶解剤の日周注射による癒着の処置の比較。
【００５２】
uPAの有効性における分解性ポリマー除放システムの重要性を理解するために、同一の全用量の様々なフィブリン溶解薬物を、４日間にわたって同一のモデルにおいて、毎日全用量の１／４量の腹腔内注射で送達した。無菌薬物の溶液を、無菌HEPES緩衝生理食塩水（pH7.4, 10ミル）中で以下の濃度で作製した；tPA、３mg/ml；uPA、1.8mg/ml；SK、1.2mg/ml。癒着モデルを実施例１に記載のように正確に実施した。0.375mlの用量を、損傷後、腹腔の閉鎖前にただちに腹腔内に与えた。等しい用量を、次の３日間のそれぞれに、腹腔内注射により投与した。従って、それぞれの薬物の全投与量は、分解性ポリマー放出システムを用いる研究における全投与量と同一であった。コントロール動物に等容量のHEPES緩衝生理食塩水を与えた。それぞれの群は、７匹の動物からなる（１匹の動物が、SK処理群において、術後期間に死亡した。これは、麻酔合併症に起因する）。癒着を、術後７日目に、実施例１に記載のようにスコアづけた。
【００５３】
結果および統計学的解析を表２に報告する。
【００５４】
【表２】
2006193535.tif 000003
分解性ポリマーシステムからのtPAの送達よりもはるかに低かったが、tPAの日周注射は、幾分効果があった。uPAの日周注射は、効果がなかった。従って、薬物のみが表１に観測された効果の原因とならなかったという結論を下し得る。むしろ、制御放出処方における薬物処方が効果的であった。
【００５５】
実施例１および実施例２の研究を、盲検および無作為化様式で実施した。損傷を実施する外科医は、動物の群分けについて知らされていなかった。ゲルを投与する外科医は、ゲルの内容物について知らされておらず、そして注射を投与する外科医は、注射の内容物について知らされていなかった。癒着のスコア付けを実施する外科医は、動物の群について知らされていなかった。
【００５６】
実施例３：癒着妨害のためのアンクロドの使用。
【００５７】
アンクロドは、マレーシアアナクサリヘビの毒液、Agkistrodon Rhodostoma由来の酵素である（Merck Index、10版 #655を参照のこと）。抗凝固剤として知られており、これはフィブリンの加水分解による凝固を阻害するように作用し、それゆえフィブリン鎖の形成を妨害する。アンクロドを、Sigma Chemicalsから得た。
【００５８】
実施例１に記載の手順を用いて、アンクロドを、様々な経路で投与し、そして癒着のパーセントをスコアづけた。10匹の動物を、それぞれの研究に用いた。群を、生理食塩水コントロール；手術の当日に10単位/kg体重のアンクロドの１回のIP注射；および３回の注射に分類した。
材料および方法：
癒着モデル
240〜260gの体重の雌SD系ラットを研究のために用いた。損傷の誘導時に、動物を40mg/kgのペントバルビタール（pentobarbital）の腹腔内注射で麻酔した。腹部を、剪毛し、Betadine溶液で清潔にし、そして下部正中線縦方向切開により開腹した。子宮角を曝露し、そして子宮角を提供する脈管構造を、双極性電気焼灼器具を用いて体系的に焼灼した。さらに、２個の焼灼損傷（それぞれ約１mmの直径）を、それぞれの子宮角の対腸間膜漿膜上に2.5cm離して生成させた。子宮角を腹腔に戻し、腹壁を２層で閉鎖した（連続4-0Vicryl縫合（Ethicon）で筋−腹膜を閉鎖、そして９mm傷クリップで皮膚を閉鎖）。
【００５９】
術後７日目に、ラットを、二酸化炭素窒息により屠殺した。腹部を開き、そして子宮角を曝露した。癒着に含まれるそれぞれの子宮角の全長、およびそれぞれの角の長さを、定規で測定した。癒着に含まれる全子宮角長の割合を、両方の子宮角についての値の相和の後に、それぞれの動物について計算した。癒着の質（その程度に関係なく）もまた、等級１または等級２としてスコアづけた。等級１は、フィルム状癒着の場合に割り当てられ、このフィルム状癒着は、手で容易に分離され得る；そして等級２は、高密度の癒着の場合に割り当てられ、この高密度の癒着は、鋭利な器具による解剖なしには分離され得ない。
【００６０】
癒着の程度における結果を、Kruskall-Wallis検定により分析し、処置群における傾向を決定し、そして群間の比較を、Marin-Whitney U-検定により行った。癒着の等級における結果を、χ2検定により群間で比較した。
【００６１】
術前から術後の静脈内注射によるアンクロドの投与。
【００６２】
用量−応答の関連性を確立するために、アンクロドを術前５日から術後３日まで、IV注射により送達した。動物を無作為に４つの実験群に分けた。術前５日から術後３日まで、第１群には生理食塩水を与え、そして他の３つの群には、１日当たり２回の等分割量の注射で投与される５、10、または20単位/kg/日のアンクロドを与えた。アンクロドを10単位バイアルまたは50単位バイアル中の凍結乾燥粉末として得た（Sigma Chemicals, St. Louis, Mo.）。アンクロドの粉末形態を無菌条件下で、水の添加により注射用に所望の強度に再構成した。それぞれの注射は、0.25ml/ラットの等容量であった。
【００６３】
10回目の注射の半日後、子宮角損傷を上記のように実施した。手術後ただちに、動物に11回目の注射を受けさせ、そして注射を８日目（手術後３日である）まで継続した。手術後７日目に、動物を屠殺し、そして癒着部を測定し、上記のように等級分けた。損傷および測定の両方、ならびにスコアづけを、外科医（S.M.C）に動物の群分けを知らせないで実施した。
【００６４】
手術前または手術後の腹腔内注射によるアンクロドの投与。
【００６５】
２つの研究を実施し、IP送達が、投与の効果的な経路であるか否かを決定し、そしてさらに、電気焼灼損傷の前または後のどちらの脱フィブリン化がより効果的かを決定した。
【００６６】
アンクロドを術前注射するモデルにおいて、動物を無作為に４つの実験群に分けた。第１の群には、手術前５日に日に２回生理食塩水をIPで与えた。他の３つの群には、５、10、または20単位/kg/日のアンクロドを、２回に均等に分けた用量でIP注射により与えた。最後の注射を手術の朝に与えた。最後の注射後、動物を上記のように手術した。手術後７日目に、動物を屠殺し、そして上記のように癒着を測定し、等級分けた。損傷ならびに測定および等級分けの両方を、動物の群分けに対して盲検的に実施した。
【００６７】
アンクロドを術前注射するモデルにおいて、動物を無作為に４つの実験群に分けた。術後３日間、第１の群には生理食塩水を与え、他の３つの群には、５、10、または20単位/kg/日のアンクロドを、２回に均等に分けた用量でIP注射により与えた。動物を上記のように手術し、そして最初の用量を、手術の２時間以内に投与した。手術後７日後に、動物を屠殺し、そして上記のように癒着を測定し、等級分けた。損傷ならびに測定および等級分けの両方を、動物の群分けに対して盲検的に実施した。
【００６８】
10％ヒドロゲルからの局所放出によるアンクロドの投与
実験を、分解性ヒドロゲルからの遅延放出により、損傷した子宮角へ局所的にアンクロドを効果的に送達できるかどうかを決定するために行った。このヒドロゲルを、水性前駆物質溶液からインサイチュで光重合した。10% w/vのプレポリマー溶液を、滅菌条件下で、１gのプレポリマー(Focal Inc., Lexington, MAから乾燥粉末として供給された)を、10mlの注射用の水に溶解することにより使用する直前に調製した。長波長紫外線光開始剤である2,2-ジメトキシ,2-フェニルアセトフェノン(Aldrich Chemical Co., Milwaukee, WI)を、N-ビニルピロリジノン(Aldrich)中に600mg/mlの濃度で溶解し、そしてこの開始剤溶液1.5μlを１mlのプレポリマー溶液に添加して、この前臨床研究処方において100万開始剤当たり900部の最終濃度を達成した。プレポリマー溶液を、0.8μmのプレフィルターを有する0.2μフィルター(Millipore、Bedford,MA)を通すことにより滅菌した。約70mW／cm2の強度で手持ち型長波長(365nm)紫外線ランプ(BlackRay, UVP, Inc., San Gabriel, CA)を使用して、１滴の溶液を照射することにより、プレポリマー溶液をゲル化について試験した。ゲルへの転化は、約７〜８秒以内に起こった。50単位のアンクロドを0.5mlの注射用の水に溶解し、そして0.1mlを４mlのプレポリマー溶液に添加して約３日の期間に亘って10単位のアンクロド／kgを送達し、１mlのプレポリマーを各動物に投与した。この混合物を再びゲル化について試験した。
【００６９】
ヒドロゲルを介して局所的に送達されるアンクロドの効果を、腹腔内注射による送達と比較した。動物をランダムに５つの群に分けた。第一の群はコントロールであり、処置を受けなかった。第二の群は、10%のゲルをのみを投与された。第三の群は10%ゲル中10単位/kgのアンクロドを投与された。第四の群は、手術後の１回の腹腔内注射として10単位/kgのアンクロドを投与され、そして第五の群は手術後３日間に亘って３回の等量に分割した腹腔内注射として10単位/kgのアンクロドを投与された。子宮角損傷を上記のように行った。アンクロドを含むゲル、またはアンクロド含まないゲルを投与した群において、0.5mlのプレポリマー溶液をそれぞれの角に適用し、そして腹側および背側に、それぞれ約70mW/cm2の強度で20秒間長波長紫外光を照射することによってゲル化した。動物を、手術後７日目に屠殺し、そして癒着を上記のように測定しそして等級分けした。損傷と測定および等級分けとの両方を動物の群分けについてブラインドで行った。
【００７０】
10%ヒドロゲルからのアンクロドの用量応答局所送達
研究を、高用量のアンクロドを10%ヒドロゲルを介して局所的に送達して行った。動物をランダムに５つの実験群に分けた。第一の群はコントロールであり、処置を受けなかった。第二の群は、上記のように10%ヒドロゲルのみを投与された。他の３つの群は、10%ヒドロゲルを介して局所的に送達される25、50または100単位／kgのアンクロドを投与された。50単位のアンクロドを滅菌条件下、0.5mlの注射用の水に溶解し、そして約３日の期間に亘って25、50または100単位/kgのアンクロドを送達するために、0.25、0.5または１mlのこの溶液を４mlのプレポリマー溶液に添加した。開始剤を添加し、この溶液を滅菌し、そしてヒドロゲルを上記のように適用した。手術後７日目に動物を屠殺し、そして上記のように癒着を測定しそして等級分けした。損傷と測定および等級分けとの両方を動物の群分けについてブラインドで行った。
【００７１】
15%ヒドロゲルからの局所放出による投与
研究を、いくらか遅延した薬物の放出が期待される15%ヒドロゲルからのアンクロドの持続放出を提供するために行った。50単位のアンクロドを0.5mlの注射用の水に溶解し、この溶液の0.5mlを、各動物に50単位/kg用量のアンクロドを送達するために、４mlのプレポリマー溶液に添加した。動物をランダムに３つの群に分けた。第一の群はコントロールであり、処置を受けなかった。第二の群は15%ヒドロゲルのみを投与され、そして第三の群は、15%ヒドロゲルを介して送達される50単位／kgのアンクロドを投与された。開始剤を添加し、溶液を滅菌し、そしてヒドロゲルを損傷後に上記のように適用した。手術後７日目に動物を屠殺し、そして上記のように癒着を測定し、等級分けした。損傷と測定および等級分けとの両方を動物の群分けについてブラインドで行った。
【００７２】
【表３】
2006193535.tif 000004
【００７３】
【表４】
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【００７４】
【表５】
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【００７５】
【表６】
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【００７６】
【表７】
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【００７７】
【表８】
2006193535.tif 000009
アンクロドを含まない光重合性ゲルの使用により、癒着が25.5±7.2%に減少した。１kg当たり10単位のアンクロドを含むゲルの使用により、さらに癒着が13.7±8.9%に減少した。
【００７８】
生理食塩水コントロールにおいて、癒着は子宮角の80.5±11.4%の程度であった。手術日に10単位/kg体重のアンクロドを腹腔内に１回注射することによって、癒着が63.8±13.4%に減少した。３回の注射(０日目、１日目および２日目)により、癒着が55.9±11.9%に減少した。効果は両者とも統計学的に有意であった。
【００７９】
アンクロドを含まない光重合性ゲルの使用により、癒着が25.5±7.2%に減少した。１kg当たり10単位のアンクロドを含むゲルの使用により、さらに癒着が13.7±8.9%に減少した。これらの減少はそれぞれ統計学的に有意であり、かつ臨床上重要であった。
【００８０】
実施例４.  癒着を妨害するためのヒルジンの使用。
【００８１】
ヒルジンは、医薬ヒル由来の小タンパク質(7000ダルトン)である(Merck Index 第10版 #4613)。凝固を妨害する際のその作用メカニズムは、トロンビンに堅く結合し、そして凝固カスケードにおいて、トロンビンが酵素活性を発揮することを妨害することであり、従って最終的にフィブリン沈着を妨害する。精製された天然物質をSigmaから得た。標準的なフィブリンにより、改変物が大量に生成された。精製された天然物質をSigmaから得た。標準的な遺伝学的操作技術によって大量に生成された改変物(Hirulog)は、本質的に同一の特性を有する。
【００８２】
４つの群を準備した：コントロール；ゲルのみ；1000単位のヒルジン/kg体重を含むゲル；および、さらなるコントロールとして、300単位/kgヘパリンを含むゲル。
【００８３】
本質的に実施例３のように行った実験において、コントロールは86%の癒着を有し；ゲルのみでは50%の癒着を有し；1000単位のヒルジン／kg体重を含むゲルは、19%の癒着を有し；そして、さらなるコントロールとして、300単位/kgヘパリンを含むゲルは、41%の癒着を有した。従って、ヒルジンは、ゲルのみに比べると顕著な効果を有する。へパリンもまた、臨床的に有用であるためには非常に十分な効果ではないが、ゲルのみに比べると顕著な効果を有する。
【００８４】
本発明、すなわち、外科的癒着を妨害するためのフィブリン溶解剤の局所的ゲル送達システムの改変および変形は、上述の詳細な記載から当業者には明らかである。このような改変および変形は以下の請求の範囲の範囲内であることが意図される。