(57)【要約】【課題】  乳酸発酵卵白を含む免疫賦活・アレルギー改善材およびその製造方法、ならびに免疫賦活・アレルギー改善作用を有する食品組成物および医薬組成物を提供すること。【解決手段】  本発明の免疫賦活・アレルギー改善材は、乳酸発酵卵白を含む。本発明の免疫賦活・アレルギー改善作用を有する食品組成物は、乳酸発酵卵白を含む。本発明の免疫賦活・アレルギー改善作用を有する医薬組成物は、乳酸発酵卵白を有効成分として含む。本発明の免疫賦活・アレルギー改善材の製造方法は、卵白水溶液に乳酸菌を添加して発酵させる工程を含む。【選択図】        なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
乳酸発酵卵白を含む、免疫賦活・アレルギー改善材。
【請求項２】
請求項１において、
前記乳酸発酵卵白は、卵白および乳酸菌資化性糖類を含む水溶液に乳酸菌を添加して発酵させることにより得られる、免疫賦活・アレルギー改善材。
【請求項３】
請求項１または２に記載の免疫賦活・アレルギー改善材を含む、免疫賦活・アレルギー改善作用を有する食品組成物。
【請求項４】
請求項３において、
「免疫が賦活する、または／およびアレルギーが改善する」旨が表示に付された、免疫賦活・アレルギー改善作用を有する食品組成物。
【請求項５】
請求項１または２に記載の免疫賦活・アレルギー改善材を有効成分として含む、免疫賦活・アレルギー改善作用を有する医薬組成物。
【請求項６】
卵白および乳酸菌資化性糖類を含む水溶液に乳酸菌を添加して発酵させる工程を含む、免疫賦活・アレルギー改善材の製造方法。
【請求項７】
請求項６において、
前記発酵させる工程を行なう前に、前記水溶液を加熱する工程をさらに含む、免疫賦活・アレルギー改善材の製造方法。
【請求項８】
請求項６または７において、
前記発酵させる工程により得られた発酵物を均質化する工程をさらに含む、免疫賦活・アレルギー改善材の製造方法。
【請求項９】
請求項６ないし８のいずれかにおいて、
前記水溶液はさらに、卵黄を０．０５〜５質量％含む、免疫賦活・アレルギー改善材の製造方法。 
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、乳酸発酵卵白を含む免疫賦活・アレルギー改善材およびその製造方法、ならびに免疫賦活・アレルギー改善作用を有する食品組成物および医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
近年、環境の大きな変化が引き金となり、免疫力の低下やアレルギー体質に転換するという問題が発生している。特に、ジーゼルエンジンの発する微粒子による大気汚染はアレルギー性疾患を増悪し、また生後一定期間、微生物や寄生虫が過剰に管理された生活環境下で育つと細胞性免疫の獲得が不十分となり、アレルギー体質となりやすくなることが問題となっている。このためアトピー性皮膚炎や花粉症、食餌性アレルギー疾患に罹患する患者は年々増加傾向にある。また高齢化が進む現代社会において、医療費の高騰や高齢者のＱＯＬの低下が問題となっており、免疫力向上による疾病予防が重要な課題として取り上げられている。
【０００３】
そこで、食物を摂取することにより自己免疫力を向上させる方法がとられている。例えば特開２００３−３８１２２号公報にはきのこの一種、アガリクス・ブラゼイに優れた免疫賦活力が存在することを開示している。また、特許第３０４０７４４号公報にはエンテロコッカス属に属する菌体の酵素処理物に高い抗アレルギー作用があることを開示している。しかしこのような特殊な生物により得られる生理活性成分はこれまで食経験がなく、また特殊な方法以外では入手しづらく、高価なものであることが多い。
【０００４】
そこで、特許文献１には一般的な菌体と、卵白及びにんにくよりなる組成物が免疫賦活、感染防御に有効であることが開示されている。しかし一定の菌種の生菌あるいは死菌をそのまま摂取することは日常的に困難である。そこで、日々無理なく摂取できる一般的な食品素材であり、しかも臨床的に免疫賦活作用、アレルギー改善作用を有する食品の発明が期待される。
【特許文献１】特許第３２２４１３１号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明の目的は、マクロファージの活性指標を向上させ、アレルギーの指標であるTh１／Th2バランスを改善する効果を有し、しかも風味に優れ、また食品に添加した際食品の風味を損なうことなく調製することが可能な、乳酸発酵卵白を含む免疫賦活・アレルギー改善材を提供することである。
【０００６】
また、本発明の目的は、前記免疫賦活・アレルギー改善材を含む、免疫賦活・アレルギー改善作用を有する食品組成物および医薬組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者等は、上記目的を達成すべく、卵白の乳酸発酵物の生理機能について鋭意研究を重ねた結果、意外にもマクロファージの活性指標を向上させ、アレルギーの指標であるTh１／Th2バランスを改善する効果を有し、しかも風味に優れた組成物が調製可能であることを見出し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
（１）本発明の免疫賦活・アレルギー改善材は、乳酸発酵卵白を含む。
【０００９】
ここで、上記本発明の免疫賦活・アレルギー改善材において、前記乳酸発酵卵白は、卵白および乳酸菌資化性糖類を含む水溶液に乳酸菌を添加して発酵させることにより得ることができる。
【００１０】
（２）本発明の免疫賦活・アレルギー改善作用を有する食品組成物は、上記本発明の免疫賦活・アレルギー改善材を含む。
【００１１】
ここで、上記本発明の免疫賦活・アレルギー改善作用を有する食品組成物において、「免疫が賦活する、または／およびアレルギーが改善する」旨を表示に付すことができる。
【００１２】
（３）本発明の免疫賦活・アレルギー改善作用を有する医薬組成物は、上記本発明の免疫賦活・アレルギー改善材を有効成分として含む。
【００１３】
（４）本発明の免疫賦活・アレルギー改善材の製造方法は、卵白および乳酸菌資化性糖類を含む水溶液に乳酸菌を添加して発酵させる工程を含む。
【００１４】
ここで、上記本発明の免疫賦活・アレルギー改善材の製造方法において、前記発酵させる工程を行なう前に、前記水溶液を加熱する工程をさらに含むことができる。
【００１５】
また、ここで、上記本発明の免疫賦活・アレルギー改善材の製造方法において、前記発酵させる工程により得られた発酵物を均質化する工程をさらに含むことができる。
【００１６】
また、ここで、上記本発明の免疫賦活・アレルギー改善材の製造方法において、前記水溶液はさらに、卵黄を０．０５〜５質量％含むことができる。
【発明の効果】
【００１７】
本発明の免疫賦活・アレルギー改善材は、マクロファージの活性指標、具体的には腹腔内マクロファージによるTNF-α産生量を増加させ、アレルギーの指標であるTh1／Th2バランスの改善効果、具体的には脾臓細胞からのTh1タイプサイトカインであるIFN-γ産生を増加させ、Th2タイプサイトカインであるIL-4の産生を抑制する効果を有し、しかも風味に優れることより、有用な免疫賦活・アレルギー改善材を得ることができる。また、本発明の免疫賦活・アレルギー改善材を用いることにより、無理なく摂食または摂取可能な食品組成物または医薬組成物を得ることができる。
【００１８】
本発明の食品組成物および医薬組成物は安全性が高く、食感および風味に優れており、かつ、優れた免疫賦活・アレルギー改善作用を有する。本発明の食品組成物または医薬組成物を摂食または摂取することにより、アレルギー症を予防または改善することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
以下、本発明について説明する。なお、本発明において、「％」は「質量％」を意味する。
【００２０】
１．免疫賦活・アレルギー改善材およびその製造方法
１．１．免疫賦活・アレルギー改善材
本発明の免疫賦活・アレルギー改善材は、乳酸発酵卵白を含む。すなわち、乳酸発酵卵白は免疫賦活・アレルギー改善材として使用可能である。本発明において、乳酸発酵卵白は、卵白および乳酸菌資化性糖類を含む水溶液に乳酸菌を添加して発酵させることにより得られる。
【００２１】
乳酸発酵卵白は、マクロファージの活性指標、具体的にはTNF-α産生量を増加させ、アレルギーの指標であるTh1／Th2バランスの改善効果、具体的には脾臓細胞からのTh1タイプサイトカインであるIFN-γ産生を増加させ、Th2タイプサイトカインであるIL-4の産生を抑制する効果を有する。そのうえ、乳酸発酵卵白は卵特有の臭いが少なく、食感が良くかつ美味である。
【００２２】
本発明において、卵白とは、鶏等鳥類の卵を割卵し卵黄を分離したものであり、工業的に得られるもの、またこれを殺菌、凍結したもの、濃縮または希釈したもの、特定の成分、例えばリゾチームやアビジンを除去したもの、乾燥させたものを水戻ししたもの、等を含む。効果に影響を及ぼさない程度に卵黄やその他の卵由来の成分を含んでいても差し支えない。
【００２３】
本発明において、乳酸発酵とは、乳酸菌を１ｍＬあたり好ましくは１０３〜１０８、さらに好ましくは１０５〜１０７供し発酵することをいう。これに供される乳酸菌は特に限定されず、ヨーグルトやチーズ製造に利用されるラクトバチルス属（例えば、Lactobacillus bulgaricus等）、ストレプトコッカス属（例えば、Streptococcus thermophilus, Streptococcus diacetylactis等）、ラクトコッカス属（例えば、Lactococcus lactis等）、ロイコノストック属（例えば、Leuconostoc cremoris等）、エンテロコッカス属（例えば、Enterococcus faecalis等）等が例示できる。
【００２４】
本発明において、乳酸発酵卵白がTNF-α産生量を増加させ、脾臓細胞からのIFN-γ産生を増加させ、IL-4の産生を抑制する効果を有する作用機序は明らかではないが、乳酸発酵卵白の摂取により卵白の有する免疫向上効果と乳酸菌の有する抗アレルギー効果とが強い相乗効果を奏する他に、新たな効果を奏している可能性があると推察される。
【００２５】
一方、例えば特公平６−９９３１３号公報には、卵白の摂取によりマクロファージ及び好中球が活性化することが開示されている。この公報によれば、卵白の消化管分解物が何らかの免疫増強物質産生を惹起すると推察している。また、例えば特許第３１７４６１１号公報には、乳酸菌の細胞質画分に高いIgA抗体産生作用を有することが開示されている。この公報によれば、乳酸菌の抗アレルギー作用のメカニズムとして、免疫賦活作用の活性主体が、乳酸菌の細胞壁や菌体外産生物質にあるのではなく、細胞質そのものにあることを示唆しており、腸管免疫の指標であるIgA抗体産生が促進していることより局所液性免疫の向上に寄与していると考えられている。
【００２６】
すなわち、卵白においても、乳酸菌体においてもマクロファージ活性向上や体液性免疫改善効果を有することにより、免疫賦活・アレルギー改善効果を有すると考えられる。
【００２７】
これに対して、本発明にかかる乳酸発酵卵白の摂取による免疫賦活・アレルギー改善効果は、後述するようにTh2タイプのサイトカインを抑制するのみならず、Th1タイプのサイトカイン産生を促進することにより、Th1／Th2バランス改善に効果的に寄与している。また発酵卵白群（乳酸発酵卵白を摂取した群）では腹腔マクロファージによるTNF-α産生が対照群（乳酸発酵卵白を摂取しない群）よりも１０倍以上高まった結果より、単なる相乗効果だけではでは説明できない。
【００２８】
すなわち、乳酸発酵卵白の摂取による免疫賦活・アレルギー改善効果は、卵白や乳酸菌体のみの摂取による同効果の作用機序とは異なる作用機序によるものと推察される。
【００２９】
本発明において、本発明の免疫賦活・アレルギー改善効果は種々の形態（例えば、マイクロコロイド状、粉末状、クリーム状、ペースト状、ゼリー状）を有することができる。すなわち、乳酸発酵卵白を用途に応じて適切な形態に加工することにより、免疫賦活・アレルギー改善材を種々の形態にて得ることができる。
【００３０】
例えば、卵白および乳酸菌資化性糖類を含む水溶液に乳酸菌を添加して発酵させた後、均質化することにより、マイクロコロイド状の乳酸発酵卵白を得ることができる（詳しくは後述する）。このマイクロコロイド状の乳酸発酵卵白を用いて後述する食品組成物または医薬組成物を製造することにより、食品組成物または医薬組成物中に乳酸発酵卵白を均一に分散させることができる。  
【００３１】
あるいは、例えば、このマイクロコロイド状の乳酸発酵卵白を乾燥（例えば、凍結乾燥，噴霧乾燥，真空乾燥）することにより、本発明の乳酸発酵卵白を粉末として得ることもできる。粉末状の乳酸発酵卵白は重量が軽いため、取り扱いが容易である。また、食品組成物または医薬組成物中に粉末状の乳酸発酵卵白を添加することにより、乳酸発酵卵白を均一に分散させることができる。
【００３２】
本発明の免疫賦活・アレルギー改善効果は、食品、医薬品、飼料等の配合成分の一つとして使用してもよく、あるいはそのまま食品、医薬品、飼料等として使用してもよい。
【００３３】
すなわち、本発明の免疫賦活・アレルギー改善材は、後述する食品組成物や医薬組成物の成分として使用することができる。また、上述したように、乳酸発酵卵白は卵特有の臭いが少なく、食感が良くかつ美味であるため、後述する食品組成物や医薬組成物の成分として使用することにより、摂食時に食感や臭いに違和感を生じさせたり、他の成分の風味を害したりすることがない。
【００３４】
本発明の免疫賦活・アレルギー改善材が使用可能な食品組成物および医薬組成物のｐＨは特に限定されない。また、本発明の免疫賦活・アレルギー改善材を用いた食品組成物および医薬組成物は、ヒトおよびヒト以外の動物に摂取させることにより使用可能である。
【００３５】
１．２．本発明の免疫賦活・アレルギー改善材の製造方法
本発明の免疫賦活・アレルギー改善材の製造方法は、卵白および乳酸菌資化性糖類を含む水溶液に乳酸菌を添加して発酵させる工程を含む。この工程により乳酸発酵卵白を得ることができる。
【００３６】
上記発酵工程において、乳酸発酵の温度は２５〜５０℃が好ましく、使用する乳酸菌の培養至適温度がさらに好ましい。また、乳酸発酵の程度は、発酵終了時の乳酸酸度が０.３〜２％である程度が好ましい。
【００３７】
卵白を乳酸発酵させる際、乳酸菌資化性糖類を添加することにより、発酵効率を改善させることができる。乳酸菌資化性糖類としては、例えば、単糖類（グルコース、ガラクトース、フルクトース、マンノース、Ｎ−アセチルグルコサミンなど）、二糖類（ラクトース、マルトース、スクロース、セルビオース、トレハロースなど）、オリゴ糖類（特に３〜５個の単糖類が結合しているもの）、ブドウ糖果糖液糖を単独でまたは２種以上を組み合わせて添加することができる。乳酸菌資化性糖類の添加量は水溶液の１〜１５％が好ましく、２〜１０％がさらに好ましい。１％未満では乳酸菌資化性糖類不足により発酵が十分には進行しない場合があり、一方、１５％を超えると浸透圧上昇により発酵が進行しにくくなる場合がある。
【００３８】
また、卵白および乳酸菌資化性糖類を含む水溶液はさらに、卵黄を０．０５〜５質量％含むことができ、０．５〜２質量％含むことがより好ましい。前記水溶液において卵黄の含有量が０．０５〜５質量％であることにより、乳酸発酵をさらに促進させることができる。卵黄の質量が５質量％を超えると風味が損なわれる場合があり、一方、卵黄の質量が０．０５質量％未満であると、乳酸発酵を促進させるのに十分ではない場合がある。
【００３９】
さらに、前記水溶液に他の発酵促進物質を添加して乳酸発酵させてもよい。発酵促進物質としては、発酵を促進するための成分、例えば、ビタミン（ニコチン酸、パントテン酸、ビオチンなど）、アミノ酸、または核酸を含んでいるものであれば特に限定されない。発酵促進物質の例としては、酵母エキス、肉エキス、カゼイン加水分解物、ビタミン類、補酵素類、ミネラル類を挙げることができる。
【００４０】
さらに、上記発酵させる工程を行なう前に、卵白および乳酸菌資化性糖類を含む水溶液を加熱する工程をさらに含むことができる。前記加熱工程により、微生物増殖抑制因子（乳酸菌の増殖および／または発酵を抑制する因子）を失活させることができる。
【００４１】
加熱工程における温度は、６０〜１１０℃が好ましく、７０〜９５℃がさらに好ましい。６０℃未満では卵白中に存在する微生物増殖抑制因子の失活が不十分で発酵不十分となる場合があり、１１０℃を越えると熱変性が進みすぎ、褐変や焦げ付きにより工業的利用が困難になる場合がある。
【００４２】
前記加熱工程において、例えば６０〜１１０℃で１０〜６０分間加熱することにより、卵白を加熱変性させることができる。ここで、卵白の加熱変性とは、卵白の物性に変化を与えることをいい、例えば卵白の凝集または凝固などのことをいい、高温であればあるほど加熱時間は短くてよい。卵白を加熱変性させることにより、リゾチーム等の乳酸菌増殖抑制因子を失活させ、乳酸発酵を円滑に促進する効果がある。
【００４３】
さらに、上記発酵させる工程により得られた発酵物を均質化する工程を含むことができる。本発明において「均質化」とは、卵白および乳酸菌資化性糖類を含む水溶液を乳酸発酵させて発酵物を得、この発酵物に物理的な外力を付加することにより、該発酵物中の成分を均質に分散することをいう。
【００４４】
物理的な外力を付加する方法としては、特に限定されないが、例えば、ストレーナーによる裏漉しやポンプ等による攪拌、高圧ホモジナイザー等による加圧等が例示できる。中でも、高圧ホモジナイザーによる加圧破砕が工業的に好ましく、その圧力は１０〜８０ＭＰａが好ましく、３０〜６０ＭＰａがさらに好ましい。
【００４５】
均質化処理により得られる乳酸発酵卵白の平均粒径は３０μｍ以下であることが好ましく、１５μｍ以下であることがより好ましい。平均粒径が３０μｍ以下であることにより、食品組成物または医薬組成物中に乳酸発酵卵白を均一に分散させることができ、かつ、滑らかな食感に調製することが可能となる。
【００４６】
本発明の免疫賦活・アレルギー改善材の代表的な製造方法を以下に示す。卵白タンパク質２〜８％、乳酸菌資化性糖類１〜１５％、および発酵促進物質０.５〜１０％を水に加え、乳酸を用いてｐＨ５〜７.５にｐＨ調整する。得られた仕込み液を６０〜１１０℃で１０分間加熱した後、Lactobacillus bulgaricus およびStreptococcus thermophilusを含む乳酸菌スターターを１ｍＬあたり１０５〜１０７になるよう添加し、２５〜５０℃で８〜４８時間発酵する。発酵終了後、高圧下で発酵物を均質化処理する。具体的には、発酵物を１０〜８０ＭＰａの圧力にてホモゲナイズ処理することにより均質化処理を行ない、クリーム状の乳酸発酵卵白を得る。
【００４７】
２．食品組成物
本発明の免疫賦活・アレルギー改善作用を有する食品組成物（以下、単に「食品組成物」ともいう）は、本発明の免疫賦活・アレルギー改善材を含む。すなわち、本発明の食品組成物は乳酸発酵卵白を含む。本発明の食品組成物に添加する乳酸発酵卵白の形態は、用途に応じて選択することができる。
【００４８】
また、本発明の食品組成物には、「免疫が賦活する、または／およびアレルギーが改善する」旨を表示に付すことができる。すなわち、本発明の食品組成物は、厚生労働省から許可される特定保健用食品としての利用可能性を有する。
【００４９】
本発明の食品組成物の態様は特に限定されないが、例えば、加工食品であることができる。加工食品としては、例えば、菓子類、豆類の調製品、マヨネーズ、ドレッシング類、酪農製品（乳飲料、発酵乳、乳酸菌飲料、乳製品乳酸菌飲料など）、加工卵製品、調理食品、飲料（清涼飲料など）等が挙げられる。
【００５０】
また、本発明の食品組成物を有効成分として、食品製剤（サプリメント）を調製することができる。この場合、種々の食品素材または飲料品素材を添加することによって、例えば、粉末状、錠剤状、カプセル状、液状（ドリンク剤など）などの形態の食品製剤とすることができる。また、この食品製剤には、基材、賦形剤、添加剤、副素材、増量剤などを適宜添加してもよい。
【００５１】
本発明の食品組成物は、他の免疫賦活・アレルギー改善材を含有する食品の摂食中に摂取してもよいし、あるいは他の免疫賦活・アレルギー改善材を含有する食品の摂食前または摂食後に摂取してもよい。または、他の免疫賦活・アレルギー改善材を含有する食品の摂取前に、該食品と混合してからともに摂食してもよい。
【００５２】
３．医薬組成物
本発明の免疫賦活・アレルギー改善作用を有する医薬組成物（以下、単に「医薬組成物」ともいう）は、免疫賦活・アレルギー改善材を有効成分として含む。すなわち、本発明の免疫賦活・アレルギー改善作用を有する医薬組成物は、乳酸発酵卵白を有効成分として含む。
【００５３】
本発明の医薬品組成物の投与形態は特に限定されないが、例えば、経口投与、経管投与などが挙げられる。投与時期は例えば、食前、食後、食間のいずれかであってもよい。また、投与回数は例えば１日１〜数回である。
【００５４】
本発明の組成物の剤型は特に限定されないが、経口剤であることができる。例えば、上述した本発明の免疫賦活・アレルギー改善材を含む材料を下記剤型に加工することができる。
【００５５】
経口剤としては、例えば、錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、液剤、シロップ剤、ドリンク剤などの内服剤が挙げられる。この場合、本発明の医薬組成物は、本発明の免疫賦活・アレルギー改善材とともに、結合剤、賦形剤、膨化剤、滑沢剤、甘味剤、香味剤などを含むことができる。ここで、錠剤は、シェラックまたは砂糖で被覆することもできる。また、カプセル剤は、上記の材料にさらに油脂などの液体担体を含有させることができる。シロップ剤およびドリンク剤には、甘味剤、防腐剤、色素香味剤などを含有させてもよい。
【００５６】
４．実施例
次に、本発明を実施例及び試験例に基づき、さらに詳細に説明する。なお、本発明はこれらに限定されるものではない。なお、マイクロコロイド状の乳酸発酵卵白中の粒子の粒径は以下の方法にて測定した。
測定方法：粒子にレーザ光を照射した時の回折／散乱光の光強度分布パターンから粒子の大きさおよび粒度分布を解析した。
測定装置：島津レーザ回折式粒度分布測定装置ＳＡＬＤ−２００Ｖ（（株）島津製作所）
【００５７】
４．１．実施例１
液卵白３４％、ショ糖６％、卵黄０.５％、酵母エキス０.０５％、５０％乳酸０.１５％、および水５９.３％からなる水相３ｋｇを攪拌してクリームミックスを調製した。得られたクリームミックスを７５℃で１０分間加熱した後、乳酸菌スターター０.０１％（Lactobacillus bulgaricus 、Streptococcus thermophilus）を添加し、４２℃で２４時間発酵を行なった後、７０〜９０℃で加熱殺菌することにより、ｐＨ４.２のヨーグルト様の芳香成分を含む発酵物を得た。この乳酸酸度は０．７％であった。この発酵物を、高圧ホモジナイザーを用いて３０ＭＰａの圧力で加圧破砕し、平均粒経０．１〜２．０μｍのマイクロコロイド状の乳酸発酵卵白を得た。
【００５８】
４．２．実施例２
液卵白５０％、ぶどう糖果糖液糖９％、酵母エキス０.０５％、脱脂粉乳０.５％、５０％乳酸０.１５％、および水４０.３％からなる水相３ｋｇを攪拌してクリームミックスを調製した。得られたクリームミックスを７５℃で１０分間加熱した後、乳酸菌スターター０.０１％（Lactococcus lactis subsp. lactis、Leuconostoc mesenteroides subsp. cremoris、Streptococcus diacetylactis、Lactococcus lactis subsp. cremoris）を添加し、３０℃で２４時間発酵を行なった後、７０〜９０℃で加熱殺菌することにより、ｐＨ４．２〜４．５のサワークリーム様の芳香成分を含む発酵物を得た。この乳酸酸度は０．６％であった。この発酵物を、高圧ホモジナイザーを用いて５０ＭＰａの圧力で加圧破砕し、平均粒経０．１〜２．０μｍのマイクロコロイド状の乳酸発酵卵白を得た。
【００５９】
４．３．試験例１
次に、実施例１で得られた乳酸発酵卵白を凍結乾燥し、動物実験の試料に供し、免疫賦活・アレルギー改善作用を確認した。以下、試験方法、評価項目および測定方法、ならびに試験結果を示す。
【００６０】
４．３．１．試験方法
４．３．１−１．試験動物
マウス：種および系統：SPFマウス、BALB/cAnNCrj、7週齢（試験開始時）、日本チャールズ・リバー（株）より購入
【００６１】
４．３．１−２．試験試料
乳酸発酵卵白：実施例１にて得られた乳酸発酵卵白を凍結乾燥したものを用いた（乾燥減量２．４％）。
陽性対照：「インターバランスL92   のむヨーグルト（以下L92とする）」（カルピス（株）社製）、凍結乾燥後、陽性対照用試料とした。（乾燥減量２．４％）。
上記陽性対照は乳酸菌「Lactobacillus acidophilus L92」を有効成分とし、Th1／Th2バランス改善が期待される健康飲料である。  
【００６２】
４．３．１−３．試験群
（Ａ）対照群  ：カゼイン２０％を含む飼料を与えた群…５匹
（Ｂ）陽性対照群：Ｌ９２を１０％およびカゼイン１８％を含む飼料を与えた群…５匹
（Ｃ）発酵卵白群：乳酸発酵卵白１０％およびカゼイン１６．１％を含む飼料を与えた群…５匹
（Ａ）対照群、（Ｂ）陽性対照群および（Ｃ）発酵卵白群にて使用する飼料は、タンパク質含量が等しくなるようにカゼインとβ−コーンスターチで調整した。
【００６３】
４．３．１−４．飼料組成
表１に飼料組成を示した。飼料はＡＩＮ−９３Ｇ組成に準拠し、脂質として大豆油７％を配合した。
【００６４】
対照食は飼料タンパク質として２０％のカゼインを含み、発酵卵白食および陽性対照食は乳酸発酵卵白、Ｌ９２を各１０％配合して対照食とタンパク質含量が等しくなるようカゼインで調整した。全体の配合はβ−コーンスターチで調整した。
【００６５】
【表１】
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【００６６】
４．３．１−５．試験内容
マウスを搬入後、プラスチックケージで5匹ずつ群飼いし、3日間環境に馴化させた。この間動物には市販の固形飼料（PMI Nutrition International Lab. Diet5002）を与えた。3日後、粉末飼料に馴化させるため、飼料を対照食に切り替えて7日間与えた後、平均体重が等しくなるように群分けを行い、飼料を試験食に切り替えた。水および各試験食を4週間自由摂食させた後、腹腔内マクロファージおよび脾臓を採取し、細胞培養によりサイトカイン産生を調べた。サイトカインの測定はELISA法で行った。腹腔内マクロファージが産生するTNF-αの測定については、採取された細胞数が少なかったため、各群まとめて培養を行った。
【００６７】
４．３．２．評価項目および測定方法
４．３．２−１．評価項目
体重、摂食量、飼料効率、
サイトカイン：TNF-α、IFN-γ、IL-4 
【００６８】
４．３．２−２．サイトカインの測定方法
サイトカインの測定方法を以下のキットを用いて測定を行った。
腹腔内マクロファージ：TNF-α量の測定，Tumor Necrosis Factor-Alpha Mouse Biotrak ELISA System(アムシャムバイオサイエンス（株）) 
脾臓細胞：IFN-γ量の測定， Interferon Gamma Mouse Biotrak ELISA System(アムシャムバイオサイエンス（株）) 
IL-4量の測定，  Interleukin-4 Mouse Biotrak ELISA System(アムシャムバイオサイエンス（株）)
【００６９】
４．３．２−３．評価方法
測定値はそれぞれ平均値±標準偏差(SD)で示した。
【００７０】
群間の比較については一元配置分散分析を行い、有意差が認められた場合にはTukeyの多重比較検定を行った。P＜0.05をもって有意差ありとした。
これらの統計処理は統計用ソフトウエア(Dr.SPSSII for Windows：エス・ピー・エスエス株式会社)を用いて行った。
【００７１】
４．３．３．試験結果
４．３．３−１．体重および摂食量
表２に体重、体重増加量、摂食量および飼料効率を示した。
【００７２】
表２によれば、体重増加量および摂食量は３群間で有意差は認められなかった。
【００７３】
【表２】
2006273745.tif 000003
【００７４】
４．３．３−２．サイトカイン産生量
表３に免疫に関する各種サイトカイン産生量を示す。表３によれば、有意差は認められないものの（Ｃ）発酵卵白群は（Ａ）対照群および（Ｂ）陽性対照群に対してINF-γで高い値を示し、IL-４では（Ａ）群より低値、（Ｂ）群と同等、TNF-αでは（Ａ）（Ｂ）両群に対しはるかに高い値を示した。
【００７５】
【表３】
2006273745.tif 000004
【００７６】
以上の結果より、発酵卵白群は、対照群さらには陽性対照群に比べ、脾臓細胞からのTh1タイプサイトカインであるIFN-γ産生を増加させ、Th2タイプサイトカインであるIL-4の産生を抑制した結果、アレルギーの指標であるTh1／Th2バランスを改善し、またマクロファージの活性指標であるTNF-α産生量を増加させる機能を有することが理解できる。
【００７７】
４．４．応用例１
実施例１で得られたマイクロコロイド状の乳酸発酵卵白を凍結乾燥し、適量の乳糖と混合したものを打錠機にてタブレット状に製し、医薬組成物を調製した。
【００７８】
４．５．応用例２
応用例１で得られたタブレットにコーティングパンを用い、常法で糖衣し、糖衣錠タイプのアレルギー対応食品を得た。この包装表面に「免疫力を賦活し、アレルギーを改善する食品」である旨、および「継続的に摂取することにより免疫力が向上し、アレルギー体質を改善する作用がある」旨を付記した。
【００７９】
４．６．応用例３
以下の配合により、実施例１で得られた乳酸発酵卵白を配合したゼリー飲料を調製した。
【００８０】
（組成）
乳酸発酵卵白                          ５％
ホワイトグレープ果汁（濃縮還元）    １０％
ぶどう糖・果糖液糖                    ８％
甘味料                            ０．１％
酸味料                            ０．３％
ゲル化剤                          ０．７％
ホワイトグレープ香料              ０．１％
上記成分に清水を添加することにより、上記成分の合計質量を１００％とした。これを１８０ｍＬ容の吸い口付スパウトパウチにホットパック（充填温度９５℃）し、キャッピング後冷却することにより、本応用例の乳酸発酵卵白配合ゼリー飲料を得た。本応用例の乳酸発酵卵白配合ゼリー飲料を試飲したところ、風味・食感が良好であった。