(57)【要約】      （修正有）【課題】大豆に含まれる糖尿病の治療・予防に効果のある成分を、探索し特定する事と、インスリン非依存性糖病に対する薬物療法でしばしば見られる低血糖による昏睡状態の危険のない薬物成分を提供する。【解決手段】糖尿病を治療・予防するためのグループＢソヤサポニン類を有効成分として含有する組成物、並びに、インスリン非依存性糖尿病に対する薬物療法でしばしば見られる低血糖を起こさないグループＢソヤサポニン類の経口摂取にによる血糖低下法および健康食品。さらに、グループＢソヤサポニン類は肝臓β酸化遺伝子発現促進作用、肝臓脂肪酸合成酵素遺伝子発現抑制作用、ＳＲＥＢＰ−１ｃ遺伝子発現抑制作用、脂肪細胞レプチン遺伝子発現促進作用、血中レプチン分泌促進作用および脂肪細胞アディポネクチン遺伝子発現促進作用を有する。【選択図】図１２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物において高血糖状態を予防または処置することに効果的な用量のグループＢソヤサポニン類を含む組成物。
【請求項２】
請求項１のグループＢソヤサポニン類を含む組成物を経口摂取することを特徴とする血糖値低下法。
【請求項３】
グループＢソヤサポニン類を配合した糖尿病の治療・予防用の健康食品。
【請求項４】
請求項１のグループＢソヤサポニン類を含む組成物からなる肝臓β酸化遺伝子発現促進剤。
【請求項５】
請求項１のグループＢソヤサポニン類を含む組成物からなる肝臓脂肪酸合成酵素遺伝子発現抑制剤。
【請求項６】
請求項１のグループＢソヤサポニン類を含む組成物からなる肝臓ｓｔｅｒｏｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｅｌｅｍｅｎｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ（ＳＲＥＢＰ−１ｃ）遺伝子発現抑制剤。
【請求項７】
請求項１のグループＢソヤサポニン類を含む組成物からなる脂肪細胞レプチン遺伝子発現促進剤。
【請求項８】
請求項１のグループＢソヤサポニン類を含む組成物からなる血中レプチン分泌促進剤。
【請求項９】
請求項１のグループＢソヤサポニン類を含む組成物からなる脂肪細胞アディポネクチン遺伝子発現促進剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、通常の生活を営みながら高血糖を予防または改善し得るグループＢソヤサポニン類を含む組成物およびそれの経口摂取による使用により糖尿病を治療・予防する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖尿病は、膵臓のインスリンを作り出す細胞（β細胞）が破壊されてしまい、インスリン分泌がほぼゼロになってしまうＩ型糖尿病（インスリン依存性）とインスリン分泌が低下はしているもののゼロではなく、インスリン抵抗性（細胞のインスリン感受性が低下した状態）により、作用が不足しているＩＩ型糖尿病（インスリン非依存型）がある。インスリン抵抗性物質にはＴＮＦ−α、脂質および遊離脂肪酸等がある。
【０００３】
肝臓ではインスリン受容体にインスリンが結合すると、受容体と共役しているｉｎｓｕｌｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｓｕｂｓｔｒａｔｅ  ２（ＩＲＳ−２）が刺激され、さらにＰＩ３キナーゼの活性化が起こりｇｌｕｃｏｓｅ  ｔｒａｎｓｐｏｒｔｅｒ  ４（ＧＵＬＵ  ４）が膜面に移動し、グルコースを細胞内へ運ぶ。筑波大学の山田信博教授らは肝臓において、ｓｔｅｒｏｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｅｌｅｍｅｎｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ（ＳＲＥＢＰ−１ｃ）がＩＲＳ−２の転写を阻害する事実を発見した。つまり、ＳＲＥＢＰ−１ｃが増加すると、ＩＲＳ−２の発現が抑制されることによりインスリンシグナルの伝達阻害が起こり、インスリン抵抗性となる。本来、ＳＲＥＢＰ−１ｃはコレステロールや中性脂肪を増加させ高脂血症を誘発する物質であるが、インスリン感受性にも関与することが明らかにされた。したがって、ＳＲＥＢＰ−１ｃは高脂血症に関わるだけでなく、インスリン抵抗性も誘発するのでＳＲＥＢＰ−１ｃの減少がインスリン抵抗性を改善すると考えられる（非特許文献１）。
【０００４】
現在、食事の過剰摂取、運動不足による余剰カロリーにより肥満者が増加する傾向にあり、肥満は体脂肪の過剰な蓄積状態と定義され、糖尿病、高血圧症、高脂血症を伴うことよりメタボリック症候群（メタボリックシンドローム）発症の基盤病態と考えられている。最近の研究により、単なるエネルギー貯蔵臓器としてとらえられてきた脂肪組織から、ホルモン、サイトカインなどの種々の生理活性物質（アディポサイトカイン）が分泌されていることが明らかとなり、最大の内分泌臓器として認識されるようになった。
【０００５】
レプチンは主に脂肪細胞より分泌されるホルモンであり、視床下部を介して強力な摂食抑制およびエネルギー消費亢進をもたらし、肥満を抑制する（非特許文献２）。
【０００６】
アディポネクチンは、脂肪細胞に高発現し、脂肪組織特異的な３０ｋＤａの分泌タンパク質である。血清中タンパク質濃度は肥満糖尿病マウスや肥満や２型糖尿病の患者において減少しており、これらの病態に関与していることが示唆されている（非特許文献３、４）。実際にマウスに対してアディポネクチンを皮下投与した場合、血糖降下作用、血清脂質低下作用が認められることが報告されている他、グロビュラーアディポネクチンを高発現させたｏｂ／ｏｂマウスでは、非トランスジェニックｏｂ／ｏｂマウスと比較して、空腹時血糖ならびに糖負荷後の血糖値が共に有意に低下しており、グロビュラーアディポネクチンが抗糖尿病作用、血清脂質低下作用を有することが示されている（非特許文献５、６）。
【０００７】
インスリン非依存性糖尿病に対して以下の薬物療法が用いられている。
【０００８】
１）糖質の吸収阻害：炭水化物の加水分解を阻害し、消化管でのグルコース、フルクトースへの分解を抑制することで糖質吸収を直接阻害する。例…α−グルコシダーゼ阻害薬（ボグリボース等）。
【０００９】
２）インスリンの分泌不良改善：すい臓ランゲルハウス島β−細胞からのインスリンの分泌を促す。例…ＳＵ剤（トルブタマイド）。
【００１０】
３）インスリン抵抗性の改善：細胞のグルコース取り込みを改善する。例…ビグアナイド剤（ジメチルビグアナイド）、インスリン抵抗性改善薬（トログリタゾン）。
【００１１】
糖尿病治療薬は、低血糖症状を招くことがあり、用量・用法を正しく守ることが重要である。
【００１２】
大豆の経口摂取による糖尿病治療・予防効果に関して、その有効成分としてトリプシンインヒビターが推定されており、さらに、大豆イソフラボン（特願２００３−２１１、特願２００３−１９６）およびピニトール（特開２００１−２６１５５４、特表平１１−５０２２２３）が報告されている。
【００１３】
ソヤサポニンの生理学的効果については、過酸化脂質上昇抑制作用、肝臓障害発生抑制作用、血清脂質改善作用が報告されている。しかしながら、ソヤサポニンが糖尿病に対し有効であることについては知られていない。本発明は、この新知見に基づき完成したものである。
【非特許文献１】Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ６：３５１−３５７，２００４
【非特許文献２】Ｎａｔｕｒｅ  ３９５：７６３-７７０，１９９６
【非特許文献３】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：１０６９７−１０７０３，１９９６
【非特許文献４】Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５７：７９−８３，１９９９
【非特許文献５】Ｎａｔ．Ｍｅｄ．７：９４１−９４６，２００１
【非特許文献６】Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：２４６１−２４６８，２００３
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
本発明が解決しようとする課題は、大豆に含まれる糖尿病の治療・予防に効果のある成分を、探索し特定することと、インスリン非依存性糖尿病に対する薬物療法でしばしば見られる低血糖による昏睡状態の危険のない薬物成分を、大豆成分の中から探索して特定することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明においては、上述の課題を解決するための手段として、特許請求の範囲の請求項１〜請求項９に記載したように、
哺乳動物において高血糖状態を予防または処置することに効果的な用量のグループＢソヤサポニン類を含む組成物。
請求項１のグループＢソヤサポニン類を含む組成物を経口摂取することを特徴とする血糖値低下法。
グループＢソヤサポニン類を配合した糖尿病の治療・予防用の健康食品。
請求項１のグループＢソヤサポニン類を含む組成物からなる肝臓β酸化遺伝子発現促進剤。
請求項１のグループＢソヤサポニン類を含む組成物からなる肝臓脂肪酸合成酵素遺伝子発現抑制剤。
請求項１のグループＢソヤサポニン類を含む組成物からなる肝臓ｓｔｅｒｏｌ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｅｌｅｍｅｎｔ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ（ＳＲＥＢＰ−１ｃ）遺伝子発現抑制剤。
請求項１のグループＢソヤサポニン類を含む組成物からなる脂肪細胞レプチン遺伝子発現促進剤。
請求項１のグループＢソヤサポニン類を含む組成物からなる血中レプチン分泌促進剤。
請求項１のグループＢソヤサポニン類を含む組成物からなる脂肪細胞アディポネクチン遺伝子発現促進剤。
の手段を提起するものである。
【発明の効果】
【００１６】
以上のことから、グループＢソヤサポニンを継続摂取することにより、ヒトにおける空腹時血糖値を低下でき、さらに、耐糖能を改善して食後（糖負荷後）血糖値の上昇を抑制できることがわかった。この効果は、従来大豆の血糖値低下成分として報告されているピニトールまたは大豆イソフラボンとは無関係に発揮されるものであり、さらに、ピニトールまたは大豆イソフラボンよりも優れた効果を発揮する。また、グループＢソヤサポニンの継続摂取により、血糖値が極端に下がりすぎることもなく、低血糖状態を招く恐れがないことから、極めて安全に使用できるとういう特徴がある。従って、グループＢソヤサポニン画分を含有する組成ものは、糖尿病の治療・予防に有効である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明は、大豆の胚軸部を溶媒抽出および各種クロマトグラフィーを組合せて分画し、その画分について実験動物を用いて血糖値低下作用を確認しながら、血糖値低下成分を特定し、更に、作用機序として、肝臓β酸化遺伝子発現促進、肝臓脂肪酸合成酵素遺伝子発現抑制、肝臓ＳＲＥＢＰ−１ｃ遺伝子発現抑制、脂肪細胞レプチン遺伝子発現促進、脂肪細胞アディポネクチン遺伝子発現促進、血中レプチン分泌促進を解明し、完成に至ったものである。
【００１８】
ソヤサポニンは、大豆から初めて単離され、その構造が決定された。それらの構造は、化１に示すようにソヤサポゲノールＡ、ソヤサポゲノールＢ、ソヤサポゲノールＥ、ＤＤＭＰ（２，３−ジヒドロ−２，５−ジヒイドロオキシ−６−メチル−４Ｈ−ピラン−４−オン）−ソヤサポゲノールＢをアグリコンとする多種のソヤサポニンが存在し、アグリコンの種類に基づいて、それぞれグループＡソヤサポニン、グループＢソヤサポニン、グループＥソヤサポニン、ＤＤＭＰソヤサポニンに分類できる。
【００１９】
【化１】
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【００２０】
本発明の血糖値低下作用を有するソヤサポニン類は、化２に示すようなソヤサポゲノールＢ、ソヤサポゲノールＥまたはＤＤＭＰ−ソヤサポゲノールＢをアグリコンとし、それらのＣ−３位に化２に示す糖鎖（Ｒ１）が結合した配糖体である。
【００２１】
【化２】
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【００２２】
ソヤサポゲノールＡをアグリコンとするグループＡソヤサポニンが、大豆だけに存在するのに対して、ソヤサポゲノールＢ、ソヤサポゲノールＥまたはＤＤＭＰ−ソヤサポゲノールＢをアグリコンとするソヤサポニン類は、アズキ等のマメ科植物にも存在する。従って、この発明のソヤサポニン類は、大豆由来に限定されるものではない。
【００２３】
以下、本発明の実施の態様を、実施例を挙げてグループＢソヤサポニン類の血糖値低下作用について詳細に説明するが、本発明は以下の実施例だけに限定されるものではない。
【実施例１】
【００２４】
大豆種子は、子葉部、胚軸部および種皮部から構成されており、特に胚軸部の配糖体成分含量率が子葉部の１０〜２０倍高いことが知られている。大豆胚軸部のソヤサポニン含量は０．５〜１．９％、大豆イソフラボン含量は、０．１〜１．５％であり、品種および栽培年度により大きく変動する。胚軸中に存在する血糖値低下作用のある成分を特定するために以下のように胚軸成分を分画して、各画分の効果を調べた。
【００２５】
大豆胚軸に３倍量の５０％水溶性メタノールを加え、一晩室温で抽出後、減圧ろ過によりろ液を得た。ろ液をスプレードライヤーで乾燥して粉末化した（５０％メタノール抽出画分）。この画分は、全イソフラボン成分としては約３％、全ソヤサポニン成分として５〜１０％含まれており、残りのほとんどがピニトールおよび大豆オリゴ糖である。
【実施例２】
【００２６】
オクタデシルシリル（ＯＤＳ）樹脂を充填した分取用カラム（φ５０×４５０ｍｍ）を装着したＧＬ  Ｓｃｉｅｎｃｅ社製の分取用ＨＰＬＣシステムを使用した。分取用ＨＰＬＣシステムのカラムを水で平衡化してから、実施例１の５０％メタノール抽出画分５０ｇを水に溶解して３００ｇとした水溶液をカラムに供給した。水で非吸着成分を洗い流してから、９０％水溶性メタノール画分（粗イソフラボン画分および粗ソヤサポニン画分）を溶出し含まれる成分は、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）および高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により確認した。
【実施例３】
【００２７】
糖尿病モデルマウス（ＫＫ−Ａｙ／Ｔａ）を使用して、９０％水溶性メタノール画分（粗イソフラボン画分および粗ソヤサポニン画分）の血糖値上昇抑制効果を調べた。飼料は以下の組成を混合し自由に摂取させ定期的に血糖値を測定した。血糖値はＭｅｄｉＳｅｎｓｅエキストライージーセンスＧ３血糖測定電極を用いて測定した。飼料組成：試料１．３重量％ カゼイン２０ セルロース２．７Ｍｉｎｅｒａｌ  Ｍｉｘｔｕｒｅ  ＡＩＮ７６（オリエンタル酵母工業株式会社製）３．５ Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｍｉｘｔｕｒｅ  ＡＩＮ７６（オリエンタル酵母工業株式会社製）１  ＤＬ−メチオニン０．３  重酒石酸コリン０．２  コーンオイル７  シュクロース１０  α−ポテト澱粉  ５４を均一に混合して与えた。対照はセルロース４とした。更に、投与１５日後グルコース（１．５ｇ／ｋｇ）負荷試験を行い血糖値とインスリンを測定した。インスリン濃度はレビス（登録商標）インスリン−マウスＥＩＡキット（Ｕタイプ）（シバヤギ（株）製）を用い測定した。
【００２８】
実験の結果、９０％水溶性メタノール画分（粗イソフラボン画分および粗ソヤサポニン画分）を１．３％餌に混合した飼料で飼育したマウスで、２日目以降に有意（Ｐ＜０．０５）な血糖値上昇抑制効果が認められた（図１）。この結果は、大豆胚軸の血糖値低下成分として報告されているピニトールよりも９０％水溶性メタノール画分（粗イソフラボン画分および粗ソヤサポニン画分）がより血糖値低下活性が高いことを示している。
【００２９】
試験飼料を１５日間投与後、グルコース（１．５ｇ／ｋｇ）糖負荷試験を行った。その結果（図２）、９０％水溶性メタノール画分（粗イソフラボン画分および粗ソヤサポニン画分）を与えたマウスでは、投与後３０分および１時間後で対照と比較して血糖値の上昇が有意に（Ｐ＜０．０５）抑制された。投与前のインスリンレベルは同値を示していたが投与１時間後、９０％水溶性メタノール画分を与えたマウスで有意（Ｐ＜０．０５）に低値を示した（図３）。従って、対照群よりも低い血糖値およびインスリンレベルであることから、ＩＩ型糖尿病ラットの耐糖能を是正していると考えられた。
【実施例４】
【００３０】
実施例２の９０％水溶性メタノール画分（粗イソフラボン画分および粗ソヤサポニン画分）をメタノールに溶解してＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０カラム（５×６４ｃｍ）に供し、１００％メタノールで溶出した。溶出液をフラクションコレクターで１５ｇずつ分画した。各分画画分をＴＬＣで調べて、グループＡソヤサポニン画分、グループＢソヤサポニン画分（グループＥソヤサポニンおよびＤＤＭＰソヤサポニンを含む）および粗イソフラボン画分をそれぞれ集め、濃縮乾固後、凍結乾燥して粉末とした。その結果、９０％水溶性メタノール画分（粗イソフラボン画分および粗ソヤサポニン画分）の約５０％がグループＡソヤサポニン画分、１４％がグループＢソヤサポニン画分で粗イソフラボン画分は５％であった。
【実施例５】
【００３１】
糖尿病モデルマウス（ＫＫ−Ａｙ／Ｔａ）を使用して、グループＡソヤサポニン画分およびグループＢソヤサポニン画分の血糖値上昇抑制効果を調べた。飼料は以下の組成を混合し自由に摂取させ定期的に血糖値を測定した。飼料組成：試料０．５重量％  カゼイン  ２０  セルロース  ３．５  Ｍｉｎｅｒａｌ  Ｍｉｘｔｕｒｅ  ＡＩＮ７６（オリエンタル酵母工業株式会社製）３．５Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｍｉｘｔｕｒｅ  ＡＩＮ７６（オリエンタル酵母工業株式会社製）１  ＤＬ−メチオニン０．３  重酒石酸コリン０．２  コーンオイル７  シュクロース１０  α−ポテト澱粉  ５４を均一に混合して与えた。対照はセルロース４とした。更に、投与２０日目に空腹時血糖、インスリンおよびレプチンを測定した。血糖値はＭｅｄｉＳｅｎｓｅエキストライージーセンスＧ３血糖測定電極を用いインスリン濃度はレビス（登録商標）インスリン−マウスＥＩＡキット（Ｕタイプ）（シバヤギ（株）製）を用い血中レプチンはマウスレプチンＥＩＡキット（森永乳業（株）製）を用いて測定した。
【００３２】
その結果、投与５日目以降に有意（Ｐ＜０．０５）に、グループＢソヤサポニン画分を投与したマウスで血糖値上昇抑制が確認され、１９日目まで血糖値上昇抑制を確認できた（図４）。
【００３３】
投与２０目に血糖（空腹時）は同じレベルであったが、インスリンはグループＢソヤサポニン画分が対照と比べ有意（Ｐ＜０．０１）に低値を示し（図５）、レプチンは有意（Ｐ＜０．０５）に高値を示した（図６）。
【００３４】
以上の結果から、大豆胚軸中の血糖値上昇抑制作用は、グループＢソヤサポニン画分（グループＥソヤサポニンおよびＤＤＭＰソヤサポニンを含む）に活性がありインスリン抵抗性を改善していることが明らかとなった。
【実施例６】
【００３５】
実施例５のグループＢソヤサポニン画分を投与したマウスの肝臓β酸化遺伝子（ａｃｙｌ−Ｃｏｅｎｚｙｍｅ  Ａ  ｏｘｉｄａｓｅ  １）発現、肝臓脂肪酸合成酵素遺伝子（ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｓｙｎｔｈａｓｅ）発現、肝臓インスリン感受性改善遺伝子（ＳＲＥＢＰ−１ｃ）発現、脂肪細胞レプチン遺伝子発現および脂肪細胞アディポネクチン遺伝子発現について測定した。
血液の摂取及び遺伝子回折用組織の摂取：飼育開始時から２０日後に１２時間絶食させたマウスをエーテル麻酔下で直ちに開腹し、腹部大静脈より採血し、肝臓および内臓脂肪（副睾丸脂肪）を採取した。更に遺伝子解析用の肝臓および脂肪組織はＲＮｅａｓｙ  Ｍｉｎｉ  Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を用い総ＲＮＡを精製した。得られた総ＲＮＡからＲＴ−ＰＣＲをおこない、遺伝子発現量（ｍＲＮＡ量）を調べた。肝臓ａｃｙｌ−Ｃｏｅｎｚｙｍｅ  Ａ  ｏｘｉｄａｓｅ  １（Ｇｅｎｅ  Ｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ０１５７２９）のＲＴ−ＰＣＲのプライマーには、センスプライマー：５‘−ＣＣＧＣＣＡＣＣＴＴＣＡＡＴＣＣＡＧＡＧ−３’、及びアンチセンスプライマー：５‘−ＴＣＴＧＧＡＧＴＴＣＴＴＧＧＧＡＣＧＧＧ−３’を、肝臓ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｓｙｎｔｈａｓｅ（Ｇｅｎｅ  Ｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ００７９８８）のプライマーには、センスプライマー：５‘−ＧＡＧＡＡＣＣＡＧＡＣＣＣＣＡＧＡＧＣ−３’、及びアンチセンスプライマー：５‘−ＣＡＧＣＡＴＴＡＣＣＡＣＧＣＣＣＧＣＡ−３’を、肝臓ＳＲＥＢＰ−１ｃ（Ｇｅｎｅ  Ｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ０１１４８０）のプライマーには、センスプライマー：５‘−ＣＧＡＣＴＡＣＡＴＣＣＧＣＴＴＣＴＴＧＣ−３’、及びアンチセンスプライマー：５‘−ＣＣＡＴＣＴＣＴＧＣＴＣＴＣＴＧＣＣＴＣ−３’を、脂肪細胞レプチン（Ｇｅｎｅ  Ｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ００８４９３）のプライマーには、センスプライマー：５‘−ＴＴＧＧＡＴＧＴＴＡＧＣＣＣＴＧＡＡＴＧ−３’、及びアンチセンスプライマー：５‘−ＧＧＴＣＴＣＣＡＧＣＡＣＡＴＴＴＴＣＣＴ−３’を、脂肪細胞アディポネクチン（Ｇｅｎｅ  Ｂａｎｋ  Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ  Ｎｏ：ＮＭ００９６０５）のプライマーには、センスプライマー：５‘−ＡＡＡＧＧＧＣＴＣＡＧＧＡＴＧＣＴＡＣＴ−３’、及びアンチセンスプライマー：５‘−ＣＡＧＡＴＧＧＡＧＧＡＧＣＡＣＡＧＡＧＣ−３’を用いＰＣＲを行った。ＲＴ−ＰＣＲ産物は２％アガロースゲル電気泳動をおこない、エチジゥムブロマイド染色した後、紫外線照射し目的のバンドのシグナル強度を測定した。同時にＧＡＰＤＨも測定しグループＢソヤサポニン画分／対照とし発現比を求めた。
【００３６】
その結果、肝臓ａｃｙｌ−Ｃｏｅｎｚｙｍｅ  Ａ  ｏｘｉｄａｓｅ  １の発現比は対照と比較し１．５倍であった（図７）。肝臓ｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｓｙｎｔｈａｓｅは対照と比較し０．４倍であった（図８）。肝臓ＳＲＥＢＰ−１ｃは対照と比較し０．３倍であった（図９）脂肪細胞レプチンは対照と比較し２．２倍であった（図１０）。脂肪細胞アディポネクチンは対照と比較し１．６倍であった（図１１）。
【００３７】
以上の結果から、グループＢソヤサポニン画分（グループＥソヤサポニンおよびＤＤＭＰソヤサポニンを含む）がインスリン抵抗性改善をしていることが明らかとなった。
【実施例７】
【００３８】
９０％水溶性メタノール画分（粗イソフラボン画分および粗ソヤサポニン画分）の１００ｍｇをカプセルに詰め、６名の被験者（空腹時血糖値１１１ｍｇ／ｄｌ以上）に一日３カプセルを１２週間摂取させた。４週間ごとに、空腹時血糖値を測定した。更に投与前、投与１２週間後および投与終了４週目に糖負荷による耐糖能試験を行った。
【００３９】
糖負荷試験は空腹時血糖値を測定後、トレーランＧ７５（清水製薬株式会社製、１瓶当りブドウ糖換算で７５ｇ含有）を一瓶飲用する。その後、３０分、６０分、９０分および１２０分後に血糖値を測定することにより、耐糖能を評価した。
【００４０】
その結果（図１２）、グループＢソヤサポニンの摂取を継続すると、投与１２週間後に空腹時血糖値が有意（Ｐ＜０．０１）に低下し、グループＢソヤサポニンの摂取を停止後４週目には、摂取以前のレベルに戻った。グループＢソヤサポニンの摂取を停止したことで、空腹時血糖値が摂取開始時のレベルに戻ったことは、空腹時血糖値の低下にグループＢソヤサポニンが強く関与していることを示している。糖負荷試験の結果は、グループＢソヤサポニン投与前と１２週間後を比較すると耐糖能が是正され、糖負荷による血糖値の上昇が抑制されることを示した。またグループＢソヤサポニンの摂取を停止後４週目には、摂取以前のレベルに戻った（図１３）。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】本発明の実施例２で示した９０％水溶性メタノール画分（粗イソフラボン画分および粗ソヤサポニン画分）を糖尿病モデルマウス（ＫＫ−Ａｙ／Ｔａ）投与による血糖値上昇抑制効果を示した図である。血糖値；平均±ＳＤ（ｍｇ／ｄｌ）
【図２】本発明の実施例２で示した９０％水溶性メタノール画分（粗イソフラボン画分および粗ソヤサポニン画分）投与１５日後グルコース（１．５ｇ／ｋｇ）負荷試験の血糖値を示した図である。血糖値；平均±ＳＤ（ｍｇ／ｄｌ）
【図３】本発明の実施例２で示した９０％水溶性メタノール画分（粗イソフラボン画分および粗ソヤサポニン画分）投与１５日後グルコース（１．５ｇ／ｋｇ）負荷試験のインスリンを示した図である。インスリン；平均±ＳＤ（ｐｇ／ｍｌ）
【図４】本発明の実施例４で示したグループＡソヤサポニン画分およびグループＢソヤサポニン画分を糖尿病モデルマウス（ＫＫ−Ａｙ／Ｔａ）に投与したときの血糖値上昇抑制効果を示した図である。血糖値；平均±ＳＤ（ｍｇ／ｄｌ）
【図５】本発明の実施例４で示したグループＢソヤサポニン画分を糖尿病モデルマウス（ＫＫ−Ａｙ／Ｔａ）に投与２０日後の空腹時インスリンを示した図である。インスリン；平均±ＳＤ（ｐｇ／ｍｌ）
【図６】本発明の実施例４で示したグループＢソヤサポニン画分を糖尿病モデルマウス（ＫＫ−Ａｙ／Ｔａ）に投与２０日後の空腹時レプチンを示した図である。レプチン；平均±ＳＤ（ｎｇ／ｍｌ）
【図７】本発明の実施例４で示したグループＢソヤサポニン画分を糖尿病モデルマウス（ＫＫ−Ａｙ／Ｔａ）に投与２０日後の肝臓中のａｃｙｌ−Ｃｏｅｎｚｙｍｅ  Ａ  ｏｘｉｄａｓｅ  １の発現比を示した図である。
【図８】本発明の実施例４で示したグループＢソヤサポニン画分を糖尿病モデルマウス（ＫＫ−Ａｙ／Ｔａ）に投与２０日後の肝臓中のｆａｔｔｙ  ａｃｉｄ  ｓｙｎｔｈａｓｅの発現比を示した図である。発現比；平均＋ＳＤ
【図９】本発明の実施例４で示したグループＢソヤサポニン画分を糖尿病モデルマウス（ＫＫ−Ａｙ／Ｔａ）に投与２０日後の肝臓中のＳＲＥＢＰ−１ｃの発現比を示した図である。発現比；平均＋ＳＤ
【図１０】本発明の実施例４で示したグループＢソヤサポニン画分を糖尿病モデルマウス（ＫＫ−Ａｙ／Ｔａ）に投与２０日後の脂肪細胞中のレプチンの発現比を示した図である。発現比；平均＋ＳＤ
【図１１】本発明の実施例４で示したグループＢソヤサポニン画分を糖尿病モデルマウス（ＫＫ−Ａｙ／Ｔａ）に投与２０日後の脂肪細胞中のアディポネクチンの発現比を示した図である。発現比；平均＋ＳＤ
【図１２】本発明の実施例７で示した９０％水溶性メタノール画分（粗イソフラボン画分および粗ソヤサポニン画分）をヒトへ投与する前、投与４、８、１２週間後および終了後４週間の血糖値を示した図である。血糖値；平均±ＳＤ（ｍｇ／ｄｌ）
【図１３】本発明の実施例７で示した９０％水溶性メタノール画分（粗イソフラボン画分および粗ソヤサポニン画分）を投与前、投与１２週間後および終了４週間後の糖負荷試験を示した図である。血糖値；平均±ＳＤ（ｍｇ／ｄｌ）
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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