(57)【要約】      （修正有）【課題】  卵アレルギーの体質の改善が図れ、または、卵アレルギーの予防が図れる食材を提供する。【解決手段】  全卵白蛋白に対して５〜５００μｇ／ｇのオボムコイドと加熱凝固卵白を含有してなる加工卵白を有効成分として含むことを特徴とする卵アレルギー体質改善材または卵アレルギー予防材を提供する。また、上記卵アレルギー体質改善材または卵アレルギー予防材を配合してなる加工食品を提供する。さらに、全卵白蛋白に対して５〜５００μｇ／ｇのオボムコイドと加熱凝固蛋白を含有してなる加工卵白を配合してなる卵アレルギー体質改善用または卵アレルギー予防用加工食品の提供するものである。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
全卵白蛋白に対して５〜５００μｇ／ｇのオボムコイドと加熱凝固卵白を含有してなる加工卵白を有効成分として含むことを特徴とする卵アレルギー体質改善材または卵アレルギー予防材。
【請求項２】
加工卵白が、全卵白蛋白に対して１０〜１００μｇ／ｇのオボムコイドを含有している、請求項１に記載の卵アレルギー体質改善材または卵アレルギー予防材。
【請求項３】
加工卵白が、オボムコイドを含有した卵白蛋白の水溶液を加熱凝固した後、該加熱凝固卵白からオボムコイドの一部を除去してオボムコイドの含有量を調整したものである、請求項１または２に記載の卵アレルギー体質改善材または卵アレルギー予防材。
【請求項４】
オボムコイドを含有した卵白蛋白の水溶液が、殻付き卵を割卵して卵黄から分離して得られた生卵白である、請求項３に記載の卵アレルギー体質改善材または卵アレルギー予防材。
【請求項５】
更に賦形材を含んでなる、請求項１−４のいずれか一項に記載の卵アレルギー体質改善材または卵アレルギー予防材。
【請求項６】
請求項１−５のいずれか一項に記載の卵アレルギー体質改善材または卵アレルギー予防材を配合してなる加工食品。
【請求項７】
加工食品が、麺類、クッキー、ケーキ、マヨネーズ、かまぼこ、ハム、お粥、スープ、ミルクセーキまたはふりかけである、請求項６に記載の加工食品。
【請求項８】
全卵白蛋白に対して５〜５００μｇ／ｇのオボムコイドと加熱凝固卵白を含有してなる加工卵白を配合してなる卵アレルギー体質改善用または卵アレルギー予防用加工食品。
【請求項９】
加工食品が、麺類、クッキー、ケーキ、マヨネーズ、かまぼこ、ハム、お粥、スープ、ミルクセーキまたはふりかけである、請求項８に記載の卵アレルギー体質改善用または卵アレルギー予防用加工食品。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
発明の分野
本発明は、卵アレルギー体質改善材または卵アレルギー予防材、およびこれらを用いた卵アレルギー体質改善用または卵アレルギー予防用加工食品に関する。
【０００２】
背景技術
従来より、卵アレルギー患者の治療方法としては、一般的に、原因となる食品を食事から除くという、いわゆる除去食療法がとられている。しかし、除去食療法は対症療法であり、自然寛解にゆだねる方法であるためか、卵アレルギー体質が治るには通常半年から数年と長期間を要する。卵アレルギー患者の多くは、実際には成長期の乳幼児であるが、卵は、乳幼児にとって摂取すべき栄養価に優れた食品である。卵は、ケーキを含めた菓子類、麺類等を始めとして多くの加工食品に利用されているため、卵アレルギー患者はこれら加工食品を長期間摂取できないこととなり、その結果、特に、卵アレルギー体質の乳幼児にとって、栄養が偏り、発育不全に繋がる恐れがある。その上、卵アレルギー体質の乳幼児のみならずその親の精神的負担も大きいという問題がある。
【０００３】
これらの問題点を解決する方法として、例えば、生卵白を加熱凝固させた加熱凝固卵白を極微量から段階的に量を増やして与えるという、いわゆる減感作療法が知られている。しかし、加熱凝固卵白は、単に生卵白を加熱凝固させたものであるので、加熱凝固卵白中の卵白蛋白には加熱変性してアレルゲン性を消失したオボアルブミン等ばかりでなく、加熱変性し難くアレルゲン性が維持されているオボムコイドが残存している。そのため、減感作療法中にアナフィラキシーショック等のアレルギー症状を引き起こす場合があり、当該治療法を行なうには充分な注意と熟練を要するという問題があった。
【０００４】
特開平７−２３６４５４号公報（特許文献１）には、卵アレルギー体質の人が摂取してもアレルギー反応を引き起こし難い加工卵白が開示されている。当該加工卵白は、天然の卵白に比べてオボムコイドの含有割合が減少している加熱凝固卵白からなる加工卵白であり、特許文献１の詳細な説明には、オボムコイドの具体的な含有量の例として、生卵白中のオボムコイドの含有量は卵白蛋白の約１１％であるのに対して、特許文献１に係る加工卵白は０．３〜５％であることが記載されている。しかし、特許文献１には、当該加工卵白は卵のアレルゲン性が軽減されているので軽度の卵アレルギー患者も摂取し得ることは記載されているものの、卵アレルギー患者のアレルギー体質そのものの改善について、あるいは卵アレルギー体質でない人であっても卵アレルギーになり難い体質への改善、即ち、卵アレルギーの予防については、何らの記載も示唆もされていない。その上、同文献の加工卵白にはオボムコイドが０．３〜５％と依然として高濃度で含有されており、このような高濃度では、後述の本発明者らによる試験例の結果から明らかなように、上記の範囲より低い０．１％の場合（全卵白蛋白に対して１ｍｇ／ｇのオボムコイド含有の場合に相当）ですら卵アレルギー体質改善効果あるいは卵アレルギー予防効果は期待し得なかった。
【０００５】
特開２００３−２６１４５２号公報（特許文献２）には、卵白由来のオボムコイドを有効成分として含有する免疫応答抑制剤、およびこれを含有したアレルギー抑制食品が開示されている。しかし、特許文献２には、卵白由来のオボムコイドの使用により、他のアレルゲン蛋白質であるβ−ラクトグロブリン（乳アレルゲン）に対する免疫応答を抑制することに関しては、マウスに１ｍｇ経口投与する場合の具体的な記載が見出し得ても、卵アレルギー体質そのものの改善について、あるいは卵アレルギーの予防については、何ら具体的な記載も見出し得ず、高々、卵アレルゲンに対してもオボムコイド１ｍｇ投与であろうことが示唆されているに過ぎない。オボムコイドは卵アレルゲンであることから、このような投与量で卵アレルギー患者に用いる場合は、特に、減感作療法で行なう必要があり、前述したとおり減感作療法は、減感作療法中にアナフィラキシーショック等のアレルギー症状を引き起こす場合があることから、当該治療法を行なうときも充分な注意と熟練を要するという問題があった。
【０００６】
なお上記記載中で挙げられた文献を列記すると下記の通りである。
【特許文献１】特開平７−２３６４５４号公報
【特許文献２】特開２００３−２６１４５２号公報
【発明の概要】
【０００７】
本発明者らは、上記特許文献２における示唆に従い、卵白由来のオボムコイドを用いて、卵アレルゲンに対する免疫応答抑制効果、即ち、卵アレルギー抑制効果について調べた結果、所望効果は期待し得ないことを確認した。このような状況下にあって、本発明者らは、卵アレルギーの体質改善並びに卵アレルギーの予防を課題とし、更に鋭意研究を重ねたところ、特定範囲の極微量のオボムコイドと、オボムコイド以外の卵白蛋白の加熱凝固卵白を含んでなる加工卵白は、卵アレルギー体質改善効果並びに卵アレルギー予防効果を奏し得るものであることを確認し、本発明を完成するに至った。
【０００８】
すなわち、本発明は、全卵白蛋白に対して５〜５００μｇ／ｇのオボムコイドと加熱凝固卵白を含有してなる加工卵白を有効成分として含むことを特徴とする卵アレルギー体質改善材または卵アレルギー予防材を提供するものである。
【０００９】
また、本発明は、上記卵アレルギー体質改善材または卵アレルギー予防材を配合してなる加工食品を提供するものである。
【００１０】
更にまた、本発明は、全卵白蛋白に対して５〜５００μｇ／ｇのオボムコイドと加熱凝固卵白を含有してなる加工卵白を配合してなる卵アレルギー体質改善用または卵アレルギー予防用加工食品を提供するものである。
【００１１】
本発明の加工卵白は、卵アレルゲンであるオボムコイドの含有量が特定範囲の極微量であり、しかもオボムコイド以外の卵アレルゲンである卵白蛋白も加熱処理により卵アレルゲン性が消失した加熱凝固卵白であることから、卵アレルギー患者に摂取させた場合でもアレルギー症状を引き起し難く、更に、当該加工卵白を配合した加工食品を摂取させることにより、卵アレルギー患者の卵アレルギー体質の改善が図れ、また、卵アレルギー体質でない人であっても卵アレルギーになり難い体質への改善、即ち、卵アレルギーの予防が図れるという効果を奏し得る。
【発明の具体的な説明】
【００１２】
加工卵白
本発明の加工卵白は、卵白、主に卵白蛋白を加工したものであり、本発明においては、オボムコイドと加熱凝固卵白を含有し、全卵白蛋白に対して５〜５００μｇ／ｇという特定範囲の極微量のオボムコイドを含有していることを特徴とするものである。
オボムコイドは非常に熱安定性に優れ、１００℃、１時間の加熱処理でも変性しないという性質を有する。これに対し、オボムコイド以外の卵白蛋白は、約６０〜８０℃で加熱変性し、凝固すると言われている。なお、当該変性温度に関しては一般的に、砂糖を１０％添加すると約２℃、食塩を１０％添加すると約８℃加熱変性温度が上昇するとも言われている。後述の実施例および試験例で示しているとおり、粉砕した加熱凝固卵白の洗浄によりオボムコイドは加熱凝固卵白より容易に溶出し、加熱凝固卵白中のオボムコイドの含有量が減少する。このような事象は、上述した卵白蛋白の加熱変性温度と合致しており、オボムコイド以外の卵白蛋白は加熱処理により変性し凝固しているのに対して、オボムコイドは加熱による変性を受けておらず、未変性の水溶性を有した状態で維持されているものと推定される。
したがって、「全卵白蛋白に対して５〜５００μｇ／ｇのオボムコイドと加熱凝固卵白を含有してなる加工卵白」とは、「加熱凝固していないオボムコイドを全卵白蛋白に対して５〜５００μｇ／ｇ、および加熱凝固したオボムコイド以外の卵白蛋白を全卵白蛋白に対して９９９，９９５〜９９９，５００μｇ／ｇ含有してなる加工卵白」と同義である。
【００１３】
このような本発明の加工卵白は、特に限定されるものではないが、例えば、オボムコイドを含有した卵白蛋白の水溶液（例えば、生卵白等）を加熱凝固した後、当該加熱凝固卵白からオボムコイドの一部を水洗除去し、上記範囲のオボムコイドの含有量に調整することにより、または、予め上記範囲のオボムコイドを含有した卵白蛋白の水溶液を用意し、この卵白蛋白水溶液を加熱凝固することにより、または、オボムコイドの含有量が上記範囲より少ない加熱凝固卵白を調製した後、この加熱凝固卵白に別途用意したオボムコイドを添加し、上記範囲のオボムコイドの含有量に調整すること等により調製することができる。
【００１４】
本発明の加工卵白の形態は、塊状物、粉砕物、または乾燥物等のいずれの形態であってもよく、特に、乾燥物は、水分活性が低いので、細菌上の問題もほとんどないことから保存性に優れており、食品原料として取扱い易い、という点で好ましい。
【００１５】
加工卵白の調製に用いうる原料卵白としては、例えば、殻付き卵を割卵して卵黄から分離して得られる生卵白；または、糖分、リゾチーム等の卵白成分の一部を生卵白から除去したもの；または、これらと、オボアルブミン、オボトランスフェリン、オボムコイド、オボムチン、オボグロブリン、リゾチーム等の卵白蛋白の一種または二種以上の混合物；および、これらに濾過、殺菌、凍結、乾燥等の処理を施したもの等、いずれの原料卵白であってもよい。なお、以下において説明する「加熱凝固卵白」の調製に用いる原料卵白としては、加熱凝固性を有した卵白蛋白を含有したものであることが必須であることから、上記卵白蛋白のうち少なくともオボムコイド以外の卵白蛋白を含有したものを用いる必要がある。
【００１６】
加熱凝固卵白
「加熱凝固卵白」とは、上記の液状の原料卵白、あるいは乾燥状態の原料卵白であっては水戻しして液状としたものを、オボムコイド以外の卵白蛋白が熱変性する温度（通常約６０〜８０℃）以上、具体的には約８０℃以上、好ましくは９０℃以上で加熱処理して３次元構造を形成させながら、その内部に水分子を取り込ませて外観上ゆで卵の卵白部のようにゲル化したものをいう。
【００１７】
上記液状の原料卵白、あるいは乾燥状態の原料卵白にあっては水戻しして液状としたものの卵白蛋白の濃度は、その後の加熱処理によりゲル化させうる濃度であるならば特に限定されるものではないが、生産性を考慮するならば、５〜３０％程度が好ましく、５〜２０％がより好ましい。また、加熱処理時間は、加熱処理温度、１回で処理する液状の原料卵白の容量若しくはｐＨ等にもよるが、通常、１０〜１２０分程度でよい。
【００１８】
オボムコイド
オボムコイドは、分子量が２万８，０００程度で、約２０〜２５％の糖を含んだ糖蛋白質であり、トリプシン阻害作用を有し、卵白蛋白中に約１１％含まれている物質である。また、オボムコイドは非常に熱安定性に優れた卵白蛋白であり、全卵白蛋白中に約５４％含まれているオボアルブミンは約６０〜６５℃で熱変性し凝固するのに対して、オボムコイドは１００℃、１時間の加熱処理でも凝固しないという性質を有する。
本発明の加工卵白は、このようなオボムコイドを、全卵白蛋白に対して５〜５００μｇ／ｇ、好ましくは１０〜１００μｇ／ｇ含有していることを特徴とする。後述の試験例で示しているとおり、上記範囲内では、卵アレルギー体質改善効果、および卵アレルギーになり難い体質への改善効果、即ち、卵アレルギー予防効果を有する。上記範囲外では、これらの効果はさほど、あるいは、ほとんど期待し得ない。なお、オボムコイドの含有量は、後述の実施例で説明しているサンドイッチＥＬＩＳＡ法で分析した値である。
【００１９】
卵アレルギー体質改善材または卵アレルギー予防材
本発明の「卵アレルギー体質改善材」とは、卵アレルギー患者のアレルギー体質そのものを改善する効果を奏する食材をいい、また、「卵アレルギー予防材」とは、卵アレルギー体質でない人であっても卵アレルギーになり難い体質に改善する、即ち、卵アレルギーを予防する効果を奏する食材をいう。本発明では、前述した加工卵白を有効成分として含むものである。したがって、本発明の加工卵白をそのまま卵アレルギー体質改善材または予防材として用いてもよく、また、上記効果を損なわない範囲内で各種賦形材等を添加して用いてもよい。
【００２０】
卵アレルギー体質改善材または卵アレルギー予防材を配合してなる加工食品：卵アレルギー体質改善用または卵アレルギー予防用加工食品
本発明の「卵アレルギー体質改善材または卵アレルギー予防材を配合してなる加工食品」、あるいは「卵アレルギー体質改善用または卵アレルギー予防用加工食品」とは、本発明の加工卵白、あるいは当該加工卵白を有効成分として含む卵アレルギー体質改善材または卵アレルギー予防材を配合してなる加工食品をいう。
当該加工食品としては、通常、卵白、または卵白を含有した全卵を食材として用いた加工食品はもちろんのこと、卵白等を食材として用いていない加工食品であってもよい。例えば、麺類、クッキー、ケーキ、マヨネーズ、かまぼこ、ハム、お粥、スープ、ミルクセーキ、ふりかけ等が挙げられる。また、本発明の加工卵白、または卵アレルギー体質改善材若しくは卵アレルギー予防材の配合量は、目的とする加工食品の食味や食感を損なわない範囲で配合すればよく、好ましくは、卵白蛋白換算で０．１〜４０％、より好ましくは１〜２５％程度でよい。
【実施例】
【００２１】
以下、本発明を実施例および試験例でもって更に詳しく説明する。なお、本発明において「％」は「質量％」である。
【００２２】
実施例１
生卵白１ｋｇをポリエチレン製の袋に収容、密閉し、９０℃で６０分間加熱処理して加熱凝固させた。得られた加熱凝固卵白をフードミキサーにより粉砕した後、オボムコイドの溶出を容易にするために０．９％食塩水３ｋｇを加えてさらに高速万能ホモジナイザーにより微細化した。この懸濁液を３，０００×ｇで１０分間遠心分離し、上澄みを廃棄した。この操作を３回繰り返した後、０．９％食塩水を清水に代えてさらに３回繰り返し、得られた沈殿物を凍結乾燥し、残留オボムコイド含量を測定した。
得られた乾燥品は、オボムコイドの含有量が全卵白蛋白に対して１μｇ／ｇ以下であった。この乾燥品を用いて、これにオボムコイドを適量加えて均一化することにより、全卵白蛋白に対してオボムコイドを１μｇ／ｇ、１０μｇ／ｇ、１００μｇ／ｇおよび１ｍｇ／ｇ含有する加工卵白をそれぞれ調製した。
なお、得られた乾燥品中の全卵白蛋白の含有量は、乾燥品から水分（減圧１００℃乾燥法で分析）および無機質（原子吸光法で分析）を減じた値であり、全卵白蛋白に対してオボムコイドを１μｇ／ｇ、１０μｇ／ｇ、１００μｇ／ｇおよび１ｍｇ／ｇ含有する加工卵白の全卵白蛋白の含有量はそれぞれ９１．７％、９１．６％、９１．６％および９１．８％であった。また、オボムコイドの含有量は、下記の方法により分析した。
【００２３】
オボムコイドの含有量の分析：サンドイッチＥＬＩＳＡ法（ｅｎｚｙｍｅ  ｌｉｎｋｅｄ  ｉｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ法）
ＥＬＩＳＡ用９６穴マイクロプレートに、リン酸緩衝液（ｐＨ７．３：「ＰＢＳ」と省略）に溶解したオボムコイドに対する抗体を１００μＬずつ分注し、２時間静置する。０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ（「Ｔ−ＰＢＳ」と省略）で５回洗浄した後、５％Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ  Ａｌｂｕｍｉｎ（「ＢＳＡ」と省略）を含むＰＢＳを１００μＬずつ分注し、４℃で一晩静置する。洗浄後、１％ＢＳＡを含むＴ−ＰＢＳ（「ＢＴ−ＰＢＳ」と省略）で段階希釈した測定試料溶液を１００μＬずつ分注し２時間反応させる。洗浄後、ＢＴ−ＰＢＳに溶解したペルオキシターゼ標識抗オボムコイド抗体を１００μLずつ分注し、２時間反応させる。洗浄後、３，３′，５，５′− ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｉｄｉｎｅを基質として１０分間反応させた後、１Ｎの硫酸で反応を停止させ、マイクロプレートリーダーで４５０ｎｍの吸光度を測定する。オボムコイドの標準も同様に測定を行ない、その吸光度から試料中のオボムコイド含量を算出した。
【００２４】
実施例２
生卵白３ｋｇをポリエチレン製の袋に収容、密閉し、９０℃で３０分間加熱処理して凝固させた。得られた凝固卵白をフードミキサーにより粉砕した後、０．９％食塩水１５ｋｇを加えてさらに高速万能ホモジナイザーにより微細化した。この懸濁液を３，０００×ｇで１０分間遠心分離し、上澄みを廃棄した。この操作を２回繰り返した後、０．９％食塩水を清水に代えてさらに１回繰り返し、得られた沈殿物を凍結乾燥し、加工卵白を調製した。
得られた加工卵白は、そのまま卵アレルギー体質改善材または卵アレルギー予防材としても用いることができる。当該加工卵白中の全卵白蛋白の含有量は９０．５％であり、オボムコイドの含有量は、全卵白蛋白に対して約５０μｇ／ｇであった。
なお、得られた加工卵白中の全卵白蛋白の含有量およびオボムコイドの含有量は、実施例１における方法に準じて求めた。
【００２５】
実施例３
実施例２で調製した加工卵白を用いて加工食品（クッキー）を下記の方法で調製した。ショートニング４４ｇとグラニュー糖４４ｇを混合し、水２２ｇを加えて攪拌した後、さらに薄力粉７２ｇと実施例２で得られた加工卵白１８ｇを加えて練らないように混ぜ合わせた。こうして得られた生地を４℃の冷蔵庫に３０分間入れた後、円筒状に成形し、−２０℃の冷凍庫で凍らせた。凍った生地を、クッキー１枚当たり固形物換算で１ｇの上記加工卵白を含有するように切り分けて、オーブンで、１７０℃で１５分間焼成してクッキーを調製した。
【００２６】
試験例１
試験方法
卵アレルギー予防効果に関して、下記の試験を行なった。
実施例１で得られた加工卵白（オボムコイドを全卵白蛋白に対してそれぞれ１μｇ／ｇ、１０μｇ／ｇ、１００μｇ／ｇおよび１ｍｇ／ｇ含有した４種類の加工卵白）を１００ｍｇ／ｍＬとなるように清水に懸濁し、投与試料とした。３週齢のＨａｒｔｌｅｙ系モルモットに２０日間連続で、それぞれの投与試料を固形物換算で体重１ｋｇ当たり４００ｍｇとなるようにゾンデを用いて胃内投与した。各群５匹ずつのモルモットを使用し、対照群には清水だけを投与した。２０日間の投与後、耳静脈から部分採血を行ない、卵白およびオボムコイドに対する抗体価をＥＬＩＳＡ法で測定した。その後、５日間連続で清水に溶解した卵白溶液（１００ｍｇ／ｍＬ）を固形物換算で体重１ｋｇ当たり４００ｍｇとなるようにゾンデを用いて胃内投与し、１週間後さらに同様の操作を行なった。最終投与の１週間後に耳静脈から部分採血を行ない、卵白、オボアルブミン、オボムコイドおよびリゾチームに対する抗体価をＥＬＩＳＡ法で測定した。また、同じ動物に清水に溶解した卵白溶液（固形物換算で１０ｍｇ／ｍＬ）を０．２ｍＬずつ静脈内投与し、３０分間アレルギー症状を観察した。観察されたアレルギー症状はスコアー化して評価した。
【００２７】
また、上記の試験に準じてオボムコイドのみを投与する場合についても試験を行なった。但し、上記の試験では、実施例１で得られた加工卵白を１００ｍｇ／ｍＬとなるように清水に懸濁して投与試料とし、この投与試料を固形物換算で体重１ｋｇ当たり４００ｍｇとなるようにゾンデを用いて胃内投与しているが、オボムコイドのみを投与する場合の試験では、投与試料のオボムコイドの濃度および体重１ｋｇ当たりのオボムコイド胃内投与量を、実施例１で得られた全卵白蛋白に対してオボムコイド１００μｇ／ｇ含有の加工卵白を用いたときのオボムコイドの濃度および胃内投与量となるように調整して試験を行ない、その他は上記の試験に準じて行なった。
【００２８】
なお、図および表中の「ＯＡ」とは「オボアルブミン」、「ＯＭ」とは「オボムコイド」、「ＬＹ」とは「リゾチーム」をそれぞれ意味し、「対照群」とは「清水だけを投与した群」、「ＯＭ群」とは「オボムコイドのみを投与した群」、並びに「１μｇ群」、「１０μｇ群」、「１００μｇ群」および「１ｍｇ群」とは、「オボムコイドを全卵白蛋白に対してそれぞれ１μｇ／ｇ、１０μｇ／ｇ、１００μｇ／ｇおよび１ｍｇ／ｇ含有する加工卵白を投与した群」を意味する。また抗体価は、下記の方法により分析した。
【００２９】
抗体価：ＥＬＩＳＡ法
ＥＬＩＳＡ用９６穴マイクロプレートに、リン酸緩衝液（ｐＨ７．３：「ＰＢＳ」と省略）に１００μｇ／ｍＬとなるように溶解した抗原（卵白、オボムコイド等）を１００μＬずつ分注し、２時間静置する。０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含むＰＢＳ（「Ｔ−ＰＢＳ」と省略）で５回洗浄した後、５％Ｂｏｖｉｎｅ  Ｓｅｒｕｍ  Ａｌｂｕｍｉｎ（「ＢＳＡ」と省略）を含むＰＢＳを１００μＬずつ分注し、４℃で一晩静置する。洗浄後、１％ＢＳＡを含むＴ−ＰＢＳ（「ＢＴ−ＰＢＳ」と省略）で１，０００倍希釈した動物血清を１００μＬずつ分注し２時間反応させる。洗浄後、ＢＴ−ＰＢＳに溶解したペルオキシターゼ標識抗ＩｇＧ抗体を１００μＬずつ分注し、２時間反応させる。洗浄後、３，３′，５，５′− ｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｂｅｎｚｉｄｉｎｅを基質として１０分間反応させた後、０．５ｍｏｌ／Ｌの硫酸で反応を停止させ、マイクロプレートリーダーで４５０ｎｍの吸光度を測定した。
【００３０】
試験結果
図１に、各試料投与後の卵白およびオボムコイドに対する抗体価の平均を吸光度で示す。全卵白蛋白に対してオボムコイド含有量が１ｍｇ／ｇの加工卵白を与えた群で、オボムコイドに対する抗体価の上昇がわずかにみられたものの、他の群では卵白およびオボムコイドに対する抗体価の上昇はほとんど認められず、抗原性の低いことが確認された。
【００３１】
図２に、卵白で感作した後の卵白、オボアルブミン、オボムコイドおよびリゾチームに対する抗体価の平均を吸光度で示す。清水のみを与えた対照群およびオボムコイドのみを与えたＯＭ群と比較して実施例１で調製した加工卵白を与えた群では、すべての卵白アレルゲンに対して低い値を示し、特に、全卵白蛋白に対してオボムコイド含有量が１０μｇ／ｇおよび１００μｇ／ｇの加工卵白を与えた群では、オボムコイドに対する抗体価が低い傾向を示した。
【００３２】
下記の表１のアレルギー症状の観察結果によれば、対照群では５匹のモルモットが５匹ともアナフィラキシーショックにより死亡し、またＯＭ群では５匹中４匹が死亡し、全卵白蛋白に対してオボムコイド含有量が１μｇ／ｇの加工卵白を与えた群では１匹が死亡し、１ｍｇ／ｇの加工卵白を与えた群では２匹が死亡し１匹が痙攣等の症状を示したのに対して、オボムコイド含有量が全卵白蛋白に対して５〜５００μｇ／ｇの範囲にある１０μｇ／ｇまたは１００μｇ／ｇの加工卵白を与えた群では、一部のモルモットが鼻をこする程度の症状を示したが、ほとんどが症状無しであった。
【００３３】
【表１】
2006036669.tif 000002
【００３４】
これらの結果から、本発明品である、オボムコイドの含有量が全卵白蛋白に対して１０μｇ／ｇまたは１００μｇ／ｇの加工卵白を摂取することにより、卵アレルギーになり難い体質に改善されることが、即ち、卵アレルギーを予防しうることが確認された。
【００３５】
試験例２
試験方法
卵アレルギー体質改善効果に関して、下記の試験を行なった。
３週齢のＨａｒｔｌｅｙ系モルモットに１０日間連続で、清水に溶解した卵白溶液（１００ｍｇ／ｍＬ）を固形物換算で体重１ｋｇ当たり４００ｍｇとなるようにゾンデを用いて胃内投与した。１週間後、耳静脈から部分採血を行ない、卵白に対する抗体価をＥＬＩＳＡ法で測定し、抗体価が同様になるように５匹ずつ２群に分け、１群には２０日間連続で、実施例２で得られた加工卵白（オボムコイドを全卵白蛋白に対して５０μｇ／ｇ含有）を固形物換算で体重１ｋｇ当たり４００ｍｇとなるようにゾンデを用いて胃内投与した。もう一方の群には清水を同様に胃内投与した。最終投与の１週間後に、清水に溶解した卵白溶液（固形物換算で１０ｍｇ／ｍＬ）を０．２ｍＬずつ静脈内投与し、３０分間アレルギー症状を観察した。観察されたアレルギー症状はスコアー化して評価した。なお、スコアーは、試験例１に準ずる。
【００３６】
試験結果
下記の表２にアレルギー症状の観察結果を示す。対照群では、５匹のモルモットが５匹ともアナフィラキシーショックにより死亡したのに対して、本発明品であるオボムコイドの含有量が全卵白蛋白に対して５０μｇ／ｇの加工卵白を与えた群ではアナフィラキシーショックで死亡したのは２匹に減少しており、本発明品である加工卵白を摂取することにより、卵アレルギー体質が改善されることが確認された。なお、同様な試験を実施例３で得られた加工食品（クッキー）で行なったところ、同様な結果が得られ、卵アレルギー体質が改善されることが確認された。
【００３７】
【表２】
2006036669.tif 000003
【００３８】
試験例３
試験方法
卵アレルギー予防効果に関して、下記の試験を行なった。
実施例３で得られた加工食品（クッキー）を１００ｍｇ／ｍＬとなるように清水に懸濁し、投与試料とした。３週齢のＨａｒｔｌｅｙ系モルモットに２０日間連続で、投与試料を固形物換算で体重１ｋｇ当たり４００ｍｇ（クッキーとして４０ｍｇ）となるようにゾンデを用いて胃内投与した。各群５匹ずつのモルモットを使用し、対照群には清水だけを投与した。その後、５日間連続で清水に溶解した卵白溶液（１００ｍｇ／ｍＬ）を固形物換算で体重１ｋｇ当たり４００ｍｇとなるようにゾンデを用いて胃内投与し、１週間後さらに同様の操作を行なった。最終投与の１週間後に耳静脈から部分採血を行ない、卵白、オボアルブミン、オボムコイドおよびリゾチームに対する抗体価をＥＬＩＳＡ法で測定した。また、同じ動物に清水に溶解した卵白溶液（固形物換算で１０ｍｇ／ｍＬ）を０．２ｍＬずつ静脈内投与し、３０分間アレルギー症状を観察した。観察されたアレルギー症状はスコアー化して評価した。なお、スコアーは、試験例１に準ずる。
【００３９】
試験結果
図３に、卵白で感作した後の卵白、オボアルブミン、オボムコイドおよびリゾチームに対する抗体価の平均を吸光度で示す。対照群と比較して本発明品（クッキー：実施例２で得られた、オボムコイドを全卵白蛋白に対して５０μｇ／ｇ含有した加工卵白を配合）を与えた群では、すべての卵白アレルゲンに対して低い値を示した。
【００４０】
下記の表３にアレルギー症状の観察結果を示す。対照群では、５匹のモルモットが５匹ともアナフィラキシーショックにより死亡したのに対して、本発明品を与えた群ではアナフィラキシーショックで死亡したのは１匹であり、ほとんどのモルモットが症状無しか、あるいは軽度の症状であった。
【００４１】
【表３】
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【００４２】
これらの結果から、試験例１の結果と同様に、本発明品である、オボムコイドの含有量が全卵白蛋白に対して５０μｇ／ｇの加工卵白を配合したクッキーを摂取することにより、卵アレルギーになり難い体質に改善されることが、即ち、卵アレルギーを予防しうることが確認された。
【図面の簡単な説明】
【００４３】
【図１】卵アレルギー予防効果に関する試験例１において、各試料投与後の卵白およびオボムコイドに対する抗体価の平均を吸光度で示した図である。
【図２】卵アレルギー予防効果に関する試験例１において、卵白で感作した後の卵白、オボアルブミン、オボムコイドおよびリゾチームに対する抗体価の平均を吸光度で示した図である。
【図３】卵アレルギー予防効果に関する試験例３において、卵白で感作した後の卵白、オボアルブミン、オボムコイドおよびリゾチームに対する抗体価の平均を吸光度で示した図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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