(57)【要約】【課題】  安全性の高い天然物の中から、活性酸素消去作用、ラジカル消去作用、腫瘍壊死因子産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用又はチロシナーゼ活性阻害作用を有するものを見出し、それを有効成分として含有した抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤及び皮膚化粧料を提供することを目的とする。【解決手段】  抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤及び皮膚化粧料にボチョウジ属に属する植物からの抽出物を含有せしめる。前記ボチョウジ属に属する植物は、シラタマカズラ（Psychotria serpens L.）であることが好ましい。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ボチョウジ属に属する植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗酸化剤。
【請求項２】
前記ボチョウジ属に属する植物が、シラタマカズラ（Psychotria serpens L.）であることを特徴とする請求項１に記載の抗酸化剤。
【請求項３】
前記抽出物が、活性酸素消去作用及び／又はラジカル消去作用を有することを特徴とする請求項１又は２に記載の抗酸化剤。
【請求項４】
ボチョウジ属に属する植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗炎症剤。
【請求項５】
前記ボチョウジ属に属する植物が、シラタマカズラ（Psychotria serpens L.）であることを特徴とする請求項４に記載の抗炎症剤。
【請求項６】
前記抽出物が、腫瘍壊死因子産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用及びシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用からなる群より選ばれた１種又は２種以上の作用を有することを特徴とする請求項４又は５に記載の抗炎症剤。
【請求項７】
ボチョウジ属に属する植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする美白剤。
【請求項８】
前記ボチョウジ属に属する植物が、シラタマカズラ（Psychotria serpens L.）であることを特徴とする請求項７に記載の美白剤。
【請求項９】
前記抽出物が、チロシナーゼ活性阻害作用を有することを特徴とする請求項７又は８に記載の美白剤。
【請求項１０】
ボチョウジ属に属する植物からの抽出物を配合したことを特徴とする皮膚化粧料。
【請求項１１】
前記ボチョウジ属に属する植物が、シラタマカズラ（Psychotria serpens L.）であることを特徴とする請求項１０に記載の皮膚化粧料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、安全性の高い植物抽出物を有効成分として含有する抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤及び皮膚化粧料に関する。
【背景技術】
【０００２】
活性酸素は、生体細胞内のエネルギー代謝過程で生じるものであり、例えば、スーパーオキサイド（すなわち、酸素分子の一電子還元で生じるスーパーオキシドアニオン（・Ｏ２−））、過酸化水素（Ｈ２Ｏ２）、一重項酸素（１Ｏ２）、ヒドロキシラジカル（・ＯＨ）等が挙げられる。
【０００３】
これら活性酸素は、食細胞の殺菌機構にとって必須であり、ウイルスや癌細胞の除去に重要な役割を果たしているが、活性酸素が過剰に生成されると、その活性酸素が生体内の膜や組織を構成する生体内分子を攻撃したり、コラーゲン等の生体組織を分解、変性又は架橋したり、油脂類を酸化して細胞に障害を与える過酸化脂質を生成したりすると考えられており、活性酸素によって引き起こされる障害が、皮膚のシワ形成や皮膚の弾力低下等の老化の原因になるものと考えられている。したがって、活性酸素や生体内ラジカルの生成を阻害・抑制することにより、シワ形成や弾力低下等の皮膚の老化を予防、治療又は改善できるものと考えられる。活性酸素消去作用又はラジカル消去作用を有する生薬としては、例えば、オスベッキア属に属する植物の抽出物（特許文献１参照）、プルメリア属に属する植物の抽出物（特許文献２参照）、カナリウム属に属する植物の抽出物（特許文献３参照）、ランタナ抽出物（特許文献４参照）等が報告されている。
【０００４】
炎症性疾患、例えば、接触性皮膚炎（かぶれ）、乾癬、尋常性天疱瘡、その他肌荒れに伴う各種皮膚疾患等の原因や発症機構は多種多様であるが、その原因として腫瘍壊死因子、ヒアルロニダーゼ、シクロオキシゲナーゼ−２等によるものが知られている。
【０００５】
腫瘍壊死因子は、腫瘍を壊死させる因子として見出されたが、最近では腫瘍に対してだけではなく、正常細胞の機能を調節するメディエーター的な役割を担うサイトカインであると考えられている。腫瘍壊死因子は炎症の初発から終息までの過程において重要な役割を担っているが、その持続的かつ過剰な産生は、皮膚を含めた組織の障害を引き起こし、全身的には発熱やカケクシアの原因となり、炎症の悪化を引き起こす。このような炎症としては、例えば、関節リューマチ、変形性関節症等の慢性炎症性疾患等が挙げられる。したがって、病的な炎症においては、腫瘍壊死因子の過剰な産生を抑制することが重要となる。過剰に産生された腫瘍壊死因子の産生抑制作用を有する生薬としては、例えば、シソ抽出液（非特許文献１参照）、ヒガンバナ科アルカロイドのリコリンとリコリシジノール（非特許文献２参照）等が報告されている。
【０００６】
生体組織への親和性を保つヒアルロン酸塩は、含水系の中でヒアルロニダーゼによって加水分解されることで分子量が低下し、分子量の低下に伴って保水効果が減少する。また、ヒアルロン酸は細胞間組織として存在し、血管透過性とも関与している。さらに、肥満細胞中に存在するヒアルロニダーゼが活性化されることにより、肥満細胞からの脱顆粒が生じることが知られている。したがって、ヒアルロン酸の加水分解酵素であるヒアルロニダーゼの活性を阻害することにより、ヒアルロン酸の安定化をはかり、肥満細胞からの種々のケミカルメディエーターの放出を防ぐことができ、保湿効果又は抗炎症効果が期待できる。ヒアルロニダーゼ活性阻害作用を有する生薬としては、例えば、オスベッキア属に属する植物の抽出物（特許文献１参照）、藤茶抽出物（特許文献５参照）、シソ科植物抽出物（特許文献６参照）等が報告されている。
【０００７】
アラキドン酸は、細胞膜のリン脂質の脂肪酸構成組成物として存在し、細胞が刺激を受けるとホスホリパーゼの作用により遊離する。遊離したアラキドン酸は、シクロオキシゲナーゼ−２により代謝されプロスタグランジンを生成する。このようにして生合成されたプロスタグランジンは、炎症性疾患、発熱、疼痛等を引き起こすと考えられている。したがって、シクロオキシゲナーゼ−２の活性を阻害することにより、プロスタグランジンの生合成を抑制し、炎症性疾患の予防、治療又は改善に有効であると考えられる。シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を有する生薬としては、例えば、マンゴスチン果皮抽出物（特許文献７参照）等が報告されている。
【０００８】
また、皮膚においてメラニンは紫外線から生体を保護する役目も果たしているが、過剰な生成や不均一な蓄積は、皮膚の黒化やシミの原因となる。一般に、メラニンは色素細胞の中で生合成される酵素チロシナーゼの働きによって、チロシンからドーパ、ドーパからドーパキノンに変化し、ついで５，６−ジヒドロキシインドフェノール等の中間体を経て形成されるものとされている。したがって、皮膚の黒化（皮膚色素沈着症）やシミを予防、治療又は改善するためには、メラニン産生過程を阻害すること、又は既に産生したメラニンを淡色漂白することが考えられる。チロシナーゼ活性阻害作用を有する生薬としては、例えば、藤茶抽出物（特許文献８参照）、ヤナギタデ抽出物（特許文献９参照）等が報告されている。
【０００９】
このように、安全性及び生産性に優れ、日常的に摂取可能であり、かつ安価でありながら高い活性酸素消去作用、ラジカル消去作用、腫瘍壊死因子産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用及びチロシナーゼ活性阻害作用からなる群より選ばれる少なくともいずれかの作用を有する天然系の各種製剤に対する需要者の要望はきわめて強く、未だ充分満足し得るものが提供されていないのが現状である。
【特許文献１】特開２００３−５５２４２号公報
【特許文献２】特開２００２−９７１５１号公報
【特許文献３】特開２００２−５３４７８号公報
【特許文献４】特開２００２−１７９５８３号公報
【特許文献５】特開２００３−１２５３２号公報
【特許文献６】特開平８−３３３２６７号公報
【特許文献７】特開２００２−４７１８０号公報
【特許文献８】特開２００２−３７０９６２号公報
【特許文献９】特開２００４−８３４８８号公報
【非特許文献１】「炎症」1993年，Vol.13，No.4，p.337-340
【非特許文献２】「薬学雑誌」2001年，Vol.121，No.2，p.167-171
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、安全性の高い天然物の中から、活性酸素消去作用、ラジカル消去作用、腫瘍壊死因子産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用又はチロシナーゼ活性阻害作用を有するものを見出し、それを有効成分とする抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤及び皮膚化粧料を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
上記課題を解決するために、第１に、本発明は、ボチョウジ属に属する植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗酸化剤を提供する（請求項１）。
【００１２】
上記発明（請求項１）においては、前記ボチョウジ属に属する植物が、シラタマカズラ（Psychortria serpens L.）であることが好ましい（請求項２）。また、上記発明（請求項１，２）においては、前記抽出物が、活性酸素消去作用及び／又はラジカル消去作用を有することが好ましい（請求項３）。
【００１３】
第２に、本発明は、ボチョウジ属に属する植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする抗炎症剤を提供する（請求項４）。
【００１４】
上記発明（請求項４）においては、前記ボチョウジ属に属する植物が、シラタマカズラ（Psychotria serpens L.）であることが好ましい（請求項５）。また、上記発明（請求項４，５）においては、前記抽出物が、腫瘍壊死因子産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用及びシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用からなる群より選ばれた１種又は２種以上の作用を有することが好ましい（請求項６）。
【００１５】
第３に、本発明は、ボチョウジ属に属する植物からの抽出物を有効成分として含有することを特徴とする美白剤を提供する（請求項７）。
【００１６】
上記発明（請求項７）においては、前記ボチョウジ属に属する植物が、シラタマカズラ（Psychotria serpens L.）であることが好ましい（請求項８）。また、上記発明（請求項７，８）においては、前記抽出物が、チロシナーゼ活性阻害作用を有することが好ましい（請求項９）。
【００１７】
第４に、本発明は、ボチョウジ属に属する植物からの抽出物を配合したことを特徴とする皮膚化粧料を提供する（請求項１０）。
【００１８】
上記発明（請求項１０）においては、前記ボチョウジ属に属する植物が、シラタマカズラ（Psychotria serpens L.）であることが好ましい（請求項１１）。
【発明の効果】
【００１９】
本発明によれば、天然物であるボチョウジ属に属する植物からの抽出物を有効成分として含有し、安全性に優れた抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤及び皮膚化粧料を得ることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
以下、本発明について説明する。
〔抗酸化剤，抗炎症剤，美白剤〕
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤及び美白剤は、ボチョウジ属に属する植物からの抽出物を有効成分として含有するものである。
【００２１】
ここで、「ボチョウジ属に属する植物からの抽出物」には、ボチョウジ属に属する植物を抽出原料として得られる抽出液、当該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、当該抽出液を乾燥して得られる乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物のいずれもが含まれる。
【００２２】
本発明において使用する抽出原料は、アカネ科ボチョウジ属に属する植物である。ボチョウジ属に属する植物としては、例えば、シラタマカズラ（Psychotria serpens L.）、オオシラタマカズラ（Psychotria boninensis）、ボチョウジ（Psychotria rubra）、オガサワラボチョウジ（Psychotria homalosperma）、プシコトリア・カペンシス（Psychotria capensis）等が挙げられ、これらのうち、シラタマカズラ（Psychotria serpens L.）を用いるのが好ましい。
【００２３】
上記シラタマカズラ（Psychotria serpens L.）は、常緑樹林の林床等に生える、つる性の低木であって、和歌山県、四国南部、九州南部、南西諸島、中国南部、台湾及びインドシナ半島等の地域に広く分布しており、これらの地域から容易に入手が可能である。シラタマカズラの葉や全株は、関節やのどの痛みに対して用いられているが、抗酸化作用、抗炎症作用及び美白作用を有することはこれまで知られていなかった。
【００２４】
上記抽出原料として使用し得るボチョウジ属に属する植物の部位としては、特に限定されるものではなく、例えば、地上部、根部又はこれらの混合物を使用することができるが、これらのうち地上部を用いるのが好ましい。上記地上部としては、葉部、枝部、樹皮部、茎部、果実部等を用いるのが好ましく、特に茎部を用いるのが好ましい。
【００２５】
ボチョウジ属に属する植物の抽出物に含有される活性酸素消去物質、ラジカル消去物質、腫瘍壊死因子産生抑制物質、ヒアルロニダーゼ活性阻害物質、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害物質又はチロシナーゼ活性阻害物質の詳細は不明であるが、植物の抽出に一般に用いられる抽出方法によって、ボチョウジ属に属する植物から活性酸素消去作用、ラジカル消去作用、腫瘍壊死因子産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用又はチロシナーゼ活性阻害作用を有する抽出物を得ることができる。
【００２６】
例えば、ボチョウジ属に属する植物を乾燥した後、そのまま、又は粗砕機を用いて粉砕し、抽出溶媒による抽出に供することにより、上記作用を有する抽出物を得ることができる。乾燥は天日で行ってもよいし、通常使用される乾燥機を用いて行ってもよい。また、ヘキサン等の非極性溶媒によって脱脂等の前処理を施してから抽出原料として使用してもよい。脱脂等の前処理を行うことにより、極性溶媒による抽出処理を効率よく行うことができる。
【００２７】
抽出溶媒としては、極性溶媒を用いるのが好ましく、例えば、水、親水性有機溶媒等が挙げられ、これらを単独で又は２種以上を組み合わせて、室温又は溶媒の沸点以下の温度で使用することが好ましい。
【００２８】
抽出溶媒として使用し得る水としては、純水、水道水、井戸水、鉱泉水、鉱水、温泉水、湧水、淡水等のほか、これらに各種処理を施したものが含まれる。水に施す処理としては、例えば、精製、加熱、殺菌、濾過、イオン交換、浸透圧調整、緩衝化等が含まれる。したがって、本発明において抽出溶媒として使用し得る水には、精製水、熱水、イオン交換水、生理食塩水、リン酸緩衝液、リン酸緩衝生理食塩水等も含まれる。
【００２９】
抽出溶媒として使用することのできる親水性有機溶媒としては、メタノール、エタノール、プロピルアルコール、イソプロピルアルコール等の炭素数１〜５の低級脂肪族アルコール；アセトン、メチルエチルケトン等の低級脂肪族ケトン；１，３−ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセリン等の炭素数２〜５の多価アルコール等が挙げられる。
【００３０】
２種以上の極性溶媒の混合液を抽出溶媒として使用する場合、その混合比は適宜調整することができる。例えば、水と低級脂肪族アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して低級脂肪族アルコール１〜９０質量部を混合することが好ましく、水と低級脂肪族ケトンとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して低級脂肪族ケトン１〜４０質量部を混合することが好ましく、水と多価アルコールとの混合液を使用する場合には、水１０質量部に対して多価アルコール１〜９０質量部を混合することが好ましい。
【００３１】
抽出処理は、抽出原料に含まれる可溶性成分を抽出溶媒に溶出させ得る限り特に限定はされず、常法に従って行うことができる。例えば、抽出原料の５〜１５倍量（質量比）の抽出溶媒に、抽出原料を浸漬し、常温又は還流加熱下で可溶性成分を抽出させた後、濾過して抽出残渣を除去することにより抽出液を得ることができる。得られた抽出液は、該抽出液の希釈液若しくは濃縮液、該抽出液の乾燥物、又はこれらの粗精製物若しくは精製物を得るために、常法に従って希釈、濃縮、乾燥、精製等の処理を施してもよい。
【００３２】
精製は、例えば、活性炭処理、吸着樹脂処理、イオン交換樹脂処理等により行うことができる。得られた抽出液はそのままでも抗酸化剤の有効成分として使用することができるが、濃縮液又は乾燥物としたものの方が使用しやすい。
【００３３】
以上のようにして得られるボチョウジ属に属する植物からの抽出物は、抗酸化作用、抗炎症作用又は美白作用を有しており、それらの作用を利用して抗酸化剤、抗炎症剤又は美白剤として使用することができる。
【００３４】
ボチョウジ属に属する植物からの抽出物が有する抗酸化作用は、例えば、活性酸素消去作用及び／又はラジカル消去作用に基づいて発揮される。ただし、ボチョウジ属に属する植物からの抽出物が有する抗酸化作用は、上記作用に基づいて発揮される抗酸化作用に限定されるものではない。ここで、「活性酸素」には、スーパーオキサイド、過酸化水素、ヒドロキシラジカル、一重項酸素等が含まれる。また、「ラジカル」とは、不対電子を１つ又はそれ以上有する分子又は原子を意味し、スーパーオキサイド、ヒドロキシラジカル、ＤＰＰＨ等が含まれる。
【００３５】
また、ボチョウジ属に属する植物が有する抗炎症作用は、例えば、腫瘍壊死因子産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用及びシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用からなる群から選ばれる１種又は２種以上の作用に基づいて発揮される。ただし、ボチョウジ属に属する植物が有する抗炎症作用は、上記作用に基づいて発揮される抗炎症作用に限定されるものではない。
【００３６】
さらに、ボチョウジ属に属する植物が有する美白作用は、例えば、チロシナーゼ活性阻害作用に基づいて発揮される。ただし、ボチョウジ属に属する植物が有する美白作用は、上記作用に基づいて発揮される美白作用に限定されるものではない。
【００３７】
なお、上記ボチョウジ属に属する植物からの抽出物は、抽出物が有する活性酸素消去作用、ラジカル消去作用、腫瘍壊死因子産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用又はチロシナーゼ活性阻害作用を利用して、活性酸素消去剤、ラジカル消去剤、腫瘍壊死因子産生抑制剤、ヒアルロニダーゼ活性阻害剤、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害剤又はチロシナーゼ活性阻害剤として使用してもよい。
【００３８】
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤又は美白剤は、上記ボチョウジ属に属する植物からの抽出物のみからなるものであってもよいし、上記抽出物から製剤化したものであってもよい。
【００３９】
上記ボチョウジ属に属する植物からの抽出物は、デキストリン、シクロデキストリン等の薬学的に許容し得るキャリアーその他任意の助剤を用いて、常法に従い、粉末状、顆粒状、液状等の任意の剤形に製剤化して提供することができ、他の組成物（例えば、後述する皮膚化粧料等）に配合して使用することができるほか、軟膏剤、外用液剤、貼付剤等として使用することができる。この際、助剤としては、例えば、賦形剤、結合剤、崩壊剤、滑沢剤、安定剤、矯臭剤等を用いることができる。
【００４０】
本発明の抗酸化剤は、ボチョウジ属に属する植物からの抽出物が有する活性酸素消去作用又はラジカル消去作用を通じて、過剰に産生された活性酸素や生体内ラジカルを消去することができる。その結果、シワ形成や皮膚の弾力低下等の皮膚の老化を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の抗酸化剤はこれらの用途以外にも、活性酸素消去作用又はラジカル消去作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４１】
また、本発明の抗炎症剤は、ボチョウジ属に属する植物からの抽出物が有する腫瘍壊死因子産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用又はシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を通じて、接触性皮膚炎、乾癬等の各種炎症性皮膚疾患を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の抗炎症剤はこれらの用途以外にも、腫瘍壊死因子産生抑制作用、ヒアルロニダーゼ活性阻害作用又はシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４２】
さらに、本発明の美白剤は、ボチョウジ属に属する植物からの抽出物が有するチロシナーゼ活性阻害作用を通じて、皮膚の黒化やシミ等を予防、治療又は改善することができる。ただし、本発明の美白剤はこれらの用途以外にも、チロシナーゼ活性阻害作用を発揮することに意義のあるすべての用途に用いることができる。
【００４３】
〔皮膚化粧料〕
上記ボチョウジ属に属する植物からの抽出物は、皮膚に適用した場合の使用感と安全性に優れているため、皮膚化粧料に配合するのに好適である。この場合、ボチョウジ属に属する植物からの抽出物をそのまま配合してもよいし、当該抽出物から製剤化した抗酸化剤、抗炎症剤又は美白剤を配合してもよい。
【００４４】
上記ボチョウジ属に属する植物からの抽出物を配合し得る皮膚化粧料としては、特に限定されるものではなく、例えば、軟膏、クリーム、乳液、ローション、パック、ファンデーション、リップクリーム、入浴剤、ヘアートニック、ヘアーローション、石鹸、ボディーシャンプー等が挙げられる。
【００４５】
上記ボチョウジ属に属する植物からの抽出物を皮膚化粧料に配合する場合、その配合量は、皮膚化粧料の種類等によって適宜調整することができるが、好適な配合率は、標準的な抽出物に換算して約０．０００１〜１０質量％であり、特に好適な配合率は、標準的な抽出物に換算して約０．００１〜１質量％である。
【００４６】
なお、本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤及び皮膚化粧料は、ヒトに対して好適に適用されるものであるが、それぞれの作用効果が奏される限り、ヒト以外の動物に対して適用することもできる。
【実施例】
【００４７】
以下、製造例、試験例及び配合例を示し、本発明を具体的に説明するが、本発明は下記の各例に何ら制限されるものではない。
【００４８】
〔製造例１〕
細切りにしたシラタマカズラの地上部の乾燥物２００ｇに抽出溶媒２０００ｍＬを加え、還流抽出器で８０℃の温度条件下にて２時間加熱抽出し、熱時濾過した。残渣についてさらに同様の抽出処理を行った。得られた各抽出液を合わせて減圧下に濃縮し、さらに乾燥してシラタマカズラ抽出物を得た。抽出溶媒として、水、５０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：１）及び８０質量％エタノール（水とエタノールとの質量比１：４）を用いたときの各抽出物の収率を表１に示す。
【００４９】
［表１］
試  料           抽出溶媒           抽出物収率（％）
１                 水                   ８．０
２        ５０質量％エタノール          ８．５
３        ８０質量％エタノール          ８．０
【００５０】
〔試験例１〕スーパーオキサイド消去試験（ＮＢＴ法）
製造例１で得られたシラタマカズラ抽出物（試料１〜３）について、以下のようにしてスーパーオキサイド消去作用を試験した。
【００５１】
試験管に０．０５ｍｏｌ／Ｌの炭酸水素ナトリウム緩衝液（ｐＨ１０．２）２．４ｍＬ、３ｍｍｏｌ／Ｌのキサンチン０．１ｍＬ、３ｍｍｏｌ／ＬのＥＤＴＡ０．１ｍＬ、５０μｇ／ｍＬのウシ血清アルブミン０．１ｍＬ及び０．７５ｍｍｏｌ／Ｌのニトロブルーテトラゾリウム０．１ｍＬを加え、これに試料溶液０．１ｍＬを添加し２５℃で１０分間放置した。
【００５２】
放置後、キサンチンオキシダーゼ溶液０．１ｍＬを加え素早く攪拌し、２５℃で２０分間反応させた。その後、６ｍｍｏｌ／Ｌの塩化銅０．１ｍＬを加えて反応を停止させ、波長５６０ｎｍにおける吸光度を測定した。酵素溶液を添加しない場合についても、同様の操作と吸光度の測定を行い、さらに、試料溶液を添加せずに蒸留水を添加した場合についても同様の測定を行った。得られた結果から、下記の式によりスーパーオキサイド消去率（％）を算出した。
【００５３】
スーパーオキサイド消去率(％)＝{１−(Ｓｔ−Ｓｂ)／(Ｃｔ−Ｃｂ)}×１００
上記式において、Ｓｔは「酵素溶液添加・試料溶液添加時の吸光度」を、Ｓｂは「酵素溶液無添加・試料溶液添加時の吸光度」を、Ｃｔは「酵素溶液添加・試料溶液無添加時の吸光度」を、Ｃｂは「酵素溶液無添加・試料溶液無添加時の吸光度」を示す。
【００５４】
試料溶液の濃度を段階的に減少させて上記スーパーオキサイド消去率の測定を行い、スーパーオキサイド消去率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ；ｐｐｍ）を内挿法により求めた。
上記試験の結果を表２に示す。
【００５５】
［表２］
試  料     ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）
１            ５５．０
２            ２４．０
３            ２５．４
【００５６】
表２に示すように、シラタマカズラ抽出物は、優れたスーパーオキサイド消去作用を有することが確認された。また、スーパーオキサイド消去作用の程度は、シラタマカズラ抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００５７】
〔試験例２〕ラジカル消去作用試験
製造例１で得られたシラタマカズラ抽出物（試料１〜３）について、以下のようにしてラジカル消去作用を試験した。
【００５８】
１５０μｍｏｌ／ＬのＤＰＰＨエタノール溶液３ｍＬに試料溶液３ｍＬを加え密栓した後、振り混ぜて３０分間放置した。放置後、波長５２０ｎｍにおける吸光度を測定した。コントロールとして、試料溶液の代わりに試料を溶解した溶媒のみを用いて同様の操作をして、波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。また、ブランクとして、エタノールに試料溶液３ｍＬを加えた後、直ちに波長５２０ｎｍの吸光度を測定した。得られた結果から、下記の式によりラジカル消去率（％）を算出した。
【００５９】
ラジカル消去率(％)＝{Ｃ−(Ｓｔ−Ｓｂ)}／Ｃ×１００
上記式において、Ｓｔは「試料溶液を添加した場合の吸光度」を、Ｓｂは「ブランクの吸光度」を、Ｃは「コントロールの吸光度」を示す。
【００６０】
試料溶液の濃度を段階的に減少させて上記ラジカル消去率の測定を行い、ラジカル消去率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ；ｐｐｍ）を内挿法により求めた。
上記試験の結果を表３に示す。
【００６１】
［表３］
試  料     ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）
１            １５６．３
２            １２５．２
３            １３３．３
【００６２】
表３に示すように、シラタマカズラ抽出物は、優れたラジカル消去作用を有することが確認された。また、ラジカル消去作用の程度は、シラタマカズラ抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００６３】
〔試験例３〕腫瘍壊死因子産生抑制作用試験
製造例１で得られたシラタマカズラ抽出物（試料１〜３）について、以下のように腫瘍壊死因子産生抑制作用を試験した。
【００６４】
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７細胞）を、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地を用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を１．０×１０６ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭで希釈した後、９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌあたり１００μＬずつ播種し、４時間培養した。
【００６５】
培養終了後、培地を抜き、終濃度２％のＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭで溶解した試料を、各ｗｅｌｌに１００μＬ添加し、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ，E.coli0111;B4，DIFCO社製）１００μＬを加え、２４時間培養した。
【００６６】
培養終了後、各ｗｅｌｌの培養上清中の腫瘍壊死因子量を、サンドイッチＥＬＩＳＡ法を用いて測定した。同様の方法により、試料を添加しない場合についても測定した。得られた結果から、下記の式により腫瘍壊死因子産生抑制率を算出した。
【００６７】
腫瘍壊死因子産生抑制率（％）＝{(Ｂ−Ａ)／Ｂ}×１００
上記式において、Ａは「試料添加時の腫瘍壊死因子量」を、Ｂは「試料無添加時の腫瘍壊死因子量」を示す。
【００６８】
試料溶液の濃度を段階的に減少させて上記腫瘍壊死因子産生抑制率の測定を行い、腫瘍壊死因子産生抑制率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ；ｐｐｍ）を内挿法により求めた。
上記試験の結果を表４に示す。
【００６９】
［表４］
試  料     ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）
１            １５４．０
２              ７０．９
３            １８９．４
【００７０】
表４に示すように、シラタマカズラ抽出物は、優れた腫瘍壊死因子産生抑制作用を有することが確認された。また、腫瘍壊死因子産生抑制作用の程度は、抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００７１】
〔試験例４〕ヒアルロニダーゼ活性阻害作用試験
製造例１で得られたシラタマカズラ抽出物（試料１〜３）について、以下のようにしてヒアルロニダーゼ活性阻害作用を試験した。
【００７２】
試料を溶解した０．１ｍｏｌ／Ｌの酢酸緩衝液（ｐＨ３．５）０．２ｍＬにヒアルロニダーゼ溶液（Type IV-S(from bovine testis，SIGMA社製，４００Ｕ／ｍＬ)）０．１ｍＬを加え、３７℃の温度条件下で２０分間反応させた。さらに、活性化剤として２．５ｍｍｏｌ／Ｌの塩化カルシウム０．２ｍＬを加え、３７℃の温度条件下で２０分間反応させた。これに０．４ｍｇ／ｍＬのヒアルロン酸カリウム溶液（from rooster comb）０．５ｍＬを加え、３７℃で４０分間反応した。
【００７３】
その後、０．４ｍｏｌ／Ｌの水酸化ナトリウム０．２ｍＬを加えて反応を止め冷却した後、各反応溶液にホウ酸溶液０．２ｍＬを加え、３分間煮沸した。氷冷後、ｐ−ＤＡＢＡ試薬（ｐ−ジメチルアミノベンズアルデヒド１０ｇを１０Ｎ塩酸１２．５ｍＬと酢酸８７．５ｍＬの混合液に溶解し、酢酸で１０倍に希釈したもの）６．０ｍＬを加え、３７℃の温度条件下で２０分間反応した。その後、波長５８５ｎｍにおける吸光度を測定した。酵素溶液を添加しない場合についても同様の操作と吸光度の測定を行い、さらに、試料溶液を添加しない場合についても同様の操作と吸光度の測定を行った。得られた結果から、下記の式によりヒアルロニダーゼ活性阻害率（％）を算出した。
【００７４】
ヒアルロニダーゼ活性阻害率(％)＝{１−(Ｓｔ−Ｓｂ)／(Ｃｔ−Ｃｂ)}×１００
上記式において、Ｓｔは「酵素溶液添加・試料溶液添加時の吸光度」を、Ｓｂは「酵素溶液無添加・試料溶液添加時の吸光度」を、Ｃｔは「酵素溶液添加・試料溶液無添加時の吸光度」を、Ｃｂは「酵素溶液無添加・試料溶液無添加時の吸光度」を示す。
【００７５】
試料溶液の濃度を段階的に減少させて上記ヒアルロニダーゼ活性阻害率の測定を行い、ヒアルロニダーゼ活性阻害率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ；ｐｐｍ）を内挿法により求めた。
上記試験の結果を表５に示す。
【００７６】
［表５］
試  料     ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）
１            ３９０
２            ３８５
３            ２７５．３
【００７７】
表５に示すように、シラタマカズラ抽出物は、ヒアルロニダーゼ阻害作用を有することが確認された。
【００７８】
〔試験例５〕シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用試験
製造例１で得られたシラタマカズラ抽出物（試料１〜３）について、下記の試験法によりシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を試験した。
【００７９】
マウスマクロファージ細胞（ＲＡＷ２６４．７細胞）を、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地を用いて培養した後、セルスクレーパーにより細胞を回収した。回収した細胞を２．０×１０５ｃｅｌｌｓ／ｍＬの細胞密度になるように１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭで希釈した後、９６ｗｅｌｌプレートに１ｗｅｌｌあたり１００μＬずつ播種し、１８時間培養した。
【００８０】
培養終了後、既に存在するシクロオキシゲナーゼ−１及び少量発現しているシクロオキシゲナーゼ−２をアセチル化して失活させるため、培地を５００μｍｏｌ／Ｌのアスピリン含有培地に交換し４時間培養した。細胞をＰＢＳ（−）で３回洗浄し、終濃度０．５％のＤＭＳＯを含む１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭで溶解した試料を、各ｗｅｌｌに１５０μＬ添加した後、終濃度１μｇ／ｍＬで１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭに溶解したリポポリサッカライド（ＬＰＳ，E.coli0111;B4，DIFCO社製）５０μＬを添加し、２４時間培養した。
【００８１】
培養終了後、各ｗｅｌｌの培養上清中のプロスタグランジンＥ２量を、ＰＧＥ２ ＥＩＡ ｋｉｔ（Cayman Chemical社製）を用いて定量した。得られた結果から、下記の式によりシクロオキシゲナーゼ−２活性阻害率を算出した。
【００８２】
シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害率(％)＝{１−(Ａ−Ｃ)/(Ｂ−Ｃ)}×１００
上記式において、Ａは「試料溶液添加・ＬＰＳ刺激時のプロスタグランジンＥ２量」を、Ｂは「試料溶液無添加・ＬＰＳ刺激時のプロスタグランジンＥ２量」を、Ｃは「試料溶液無添加・ＬＰＳ無刺激時のプロスタグランジンＥ２量」を示す。
【００８３】
試料溶液の濃度を段階的に減少させて上記シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害率の測定を行い、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害率が５０％になる試料濃度ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ；ｐｐｍ）を内挿法により求めた。
上記試験の結果を表６に示す。
【００８４】
［表６］
試  料     ＩＣ５０（μｇ／ｍＬ）
１            １２４．４
２              ９９．７
３            １０８．２
【００８５】
表６に示すように、シラタマカズラ抽出物は、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用を有することが確認された。また、シクロオキシゲナーゼ−２活性阻害作用の程度は、抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００８６】
〔試験例６〕チロシナーゼ活性阻害作用試験
製造例１で得られたシラタマカズラ抽出物（試料１〜３）について、以下のようにしてチロシナーゼ活性阻害作用を試験した。
【００８７】
試験管に、１／１５Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）０．４５ｍＬ、０．１ｍｇ／ｍＬのチロシン溶液１．０ｍＬ、シラタマカズラ抽出物（試料１〜３）４０ｍｇを５０質量％エタノール溶液１ｍＬに溶解して得た試料溶液０．０５ｍＬを加え、さらにチロシナーゼ溶液（マッシュルーム由来，１２８．４Ｕ／ｍＬ，Sigma社製）０．５ｍＬを加えて、３７℃で１時間インキュベーションした。反応終了後、波長４７５ｎｍにおける吸光度を測定した。同様の操作と吸光度測定を、酵素溶液を添加せずに１／１５Ｍのリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）を用いて行った。さらに、試料溶液を添加せず、試料を溶解する溶媒のみについても同様の測定を行った。得られた結果から、下記の式によりチロシナーゼ活性阻害率を算出した。
【００８８】
チロシナーゼ活性阻害率(％)＝{１−(Ａ−Ｂ)／(Ｃ−Ｄ)}×１００
上記式において、Ａは「酵素溶液添加・試料溶液添加時の吸光度」を、Ｂは「酵素溶液無添加・試料溶液添加時の吸光度」を、Ｃは「酵素溶液添加・試料溶液無添加時の吸光度」を、Ｄは「酵素溶液無添加・試料溶液無添加時の吸光度」を示す。
上記試験の結果を表７に示す。
【００８９】
［表７］
試  料     チロシナーゼ活性阻害率（％）
１                ９４．５
２                ８３．６
３                ５６．７
【００９０】
表７に示すように、シラタマカズラ抽出物は、優れたチロシナーゼ活性阻害作用を有することが確認された。また、チロシナーゼ活性阻害作用の程度は、抽出物の濃度によって調節できることが確認された。
【００９１】
〔配合例１〕
下記組成の乳液を常法により製造した。
シラタマカズラ５０質量％エタノール抽出物（製造例１）    ０．０１ｇ
ホホバオイル                                            ４．０ｇ
プラセンタエキス                                        ０．１ｇ
オリーブオイル                                          ２．０ｇ
スクワラン                                              ２．０ｇ
セタノール                                              ２．０ｇ
モノステアリン酸グリセリル                              ２．０ｇ
ポリオキシエチレンセチルエーテル（20E.O）               ２．５ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O）         ２．０ｇ
１，３−ブチレングリコール                              ３．０ｇ
ヒノキチオール                                          ０．１５ｇ
香料                                                    ０．０５ｇ
精製水                                  残部（全量を１００ｇとする）
【００９２】
〔配合例２〕
下記組成のクリームを常法により製造した。
シラタマカズラ８０質量％エタノール抽出物（製造例１）    ０．１ｇ
流動パラフィン                                          ５．０ｇ
サラシミツロウ                                          ４．０ｇ
セタノール                                              ３．０ｇ
スクワラン                                            １０．０ｇ
ラノリン                                                ２．０ｇ
ステアリン酸                                            １．０ｇ
オレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン（20E.O）         １．５ｇ
モノステアリン酸グリセリル                              ３．０ｇ
１，３−ブチレングリコール                              ６．０ｇ
パラオキシ安息香酸メチル                                １．５ｇ
香料                                                    ０．１ｇ
精製水                                残部（全量を１００ｇとする）
【００９３】
〔配合例３〕
下記組成のパックを常法により製造した。
シラタマカズラ水抽出物（製造例１）                      ０．０５ｇ
ポリビニルアルコール                                  １５ｇ
ポリエチレングリコール                                  ３ｇ
プロピレングリコール                                    ７ｇ
エタノール                                            １０ｇ
パラオキシ安息香酸エチル                                ０．０５ｇ
香料                                                    ０．０５ｇ
精製水                                  残部（全量を１００ｇとする）
【産業上の利用可能性】
【００９４】
本発明の抗酸化剤、抗炎症剤、美白剤及び皮膚化粧料は、活性酸素や生体内ラジカルによる皮膚の老化、炎症性疾患に伴う皮膚炎や肌荒れ、皮膚色素沈着症等の予防、改善又は治療に有用である。