(57)【要約】      （修正有）【課題】  高血圧症、高脂血症および動脈硬化症に関連する変異を有する変異型ＧＰＲ９１遺伝子の提供。【解決手段】  特定のヌクレオチド配列において、以下の変異：（i）第６１０番目のアデニン（Ａ）残基のチミン（Ｔ）残基への置換、（ii）第６７２番目のグアニン（Ｇ）残基のアデニン（Ａ）残基への置換、および（iii）第１８３１番目のシトシン（Ｃ）残基のチミン（Ｔ）残基への置換、からなる群から選択される少なくとも一つの変異を有するヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号１で表されるヌクレオチド配列において、以下の変異：
（i）第６１０番目のアデニン（Ａ）残基のチミン（Ｔ）残基への置換、
（ii）第６７２番目のグアニン（Ｇ）残基のアデニン（Ａ）残基への置換、および
（iii）第１８３１番目のシトシン（Ｃ）残基のチミン（Ｔ）残基への置換
からなる群から選択される少なくとも一つの変異を有するヌクレオチド配列を含んでなる、ポリヌクレオチド。
【請求項２】
配列番号２で表されるヌクレオチド配列において、以下の変異：
（i）第４４１番目のアデニン（Ａ）残基のシトシン（Ｃ）残基への置換、および
（ii）第１１５１番目のチミン（Ｔ）残基の欠失
からなる群から選択される少なくとも一つの変異を有するヌクレオチド配列を含んでなる、ポリヌクレオチド。
【請求項３】
被験者が高血圧症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
（i）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第６１０番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはチミン（Ｔ）である前記ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（ii）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第６７２番目のヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）またはアデニン（Ａ）である前記ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、ならびに
（iii）ＧＰＲ９９遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号２で表されるヌクレオチド配列中の第１１５１番目のチミン（Ｔ）残基が存在するか否かを同定しうる核酸分子であって、該チミン（Ｔ）残基が存在する、または欠失した前記ＧＰＲ９９遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
からなる群から選択される少なくとも一種の核酸分子を含んでなる、診断用キット。
【請求項４】
前記被験者が男性であり、前記（i）の核酸分子および前記（ii）の核酸分子からなる群から選択される少なくとも一種の核酸分子を含んでなる、請求項３に記載の診断用キット。
【請求項５】
前記被験者が女性であり、前記（i）の核酸分子および前記（iii）の核酸分子からなる群から選択される少なくとも一種の核酸分子を含んでなる、請求項３に記載の診断用キット。
【請求項６】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域にハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなるものである、請求項３に記載の診断用キット。
【請求項７】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域を核酸増幅法において増幅することができるものである、請求項３に記載の診断用キット。
【請求項８】
被験者が高血圧症になるリスクを予測する方法であって、
（i）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第６１０番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定する工程、
（ii）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第６７２番目のヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定する工程、および
（iii）ＧＰＲ９９遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号２で表されるヌクレオチド配列中の第１１５１番目のチミン（Ｔ）残基が存在するか否かを同定する工程、
からなる群から選択される少なくとも一つの工程を含んでなる、方法。
【請求項９】
前記被験者が男性であり、前記工程（i）および前記工程（ii）からなる群から選択される少なくとも一つの工程を含んでなる、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記被験者が女性であり、前記工程（i）および前記工程（iii）からなる群から選択される少なくとも一つの工程を含んでなる、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
被験者が高脂血症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
（i）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第１８３１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはチミン（Ｔ）である前記ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、ならびに
（ii）ＧＰＲ９９遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号２で表されるヌクレオチド配列中の第１１５１番目のチミン（Ｔ）残基が存在するか否かを同定しうる核酸分子であって、該チミン（Ｔ）残基が存在する、または欠失した前記ＧＰＲ９９遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
からなる群から選択される少なくとも一種の核酸分子を含んでなる、診断用キット。
【請求項１２】
前記被験者が男性であり、前記（i）の核酸分子を含んでなる、請求項１１に記載の診断用キット。
【請求項１３】
前記被験者が女性であり、前記（ii）の核酸分子を含んでなる、請求項１１に記載の診断用キット。
【請求項１４】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域にハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなるものである、請求項１１に記載の診断用キット。
【請求項１５】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域を核酸増幅法において増幅することができるものである、請求項１１に記載の診断用キット。
【請求項１６】
被験者が高脂血症になるリスクを予測する方法であって、
（i）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第１８３１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定する工程、および
（ii）ＧＰＲ９９遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号２で表されるヌクレオチド配列中の第１１５１番目のチミン（Ｔ）残基が存在するか否かを同定する工程、
からなる群から選択される少なくとも一つの工程を含んでなる、方法。
【請求項１７】
前記被験者が男性であり、前記工程（i）を含んでなる、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記被験者が女性であり、前記工程（ii）を含んでなる、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
被験者が動脈硬化症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
（i）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第６１０番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはチミン（Ｔ）である前記ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（ii）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第６７２番目のヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）またはアデニン（Ａ）である前記ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（iii）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第１８３１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはチミン（Ｔ）である前記ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、ならびに
（iv）ＧＰＲ９９遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号２で表されるヌクレオチド配列中の第４４１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかシトシン（Ｃ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはシトシン（Ｃ）である前記ＧＰＲ９９遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
からなる群から選択される少なくとも一種の核酸分子を含んでなる、診断用キット。
【請求項２０】
前記被験者が男性である、請求項１９に記載の診断用キット。
【請求項２１】
前記被験者が男性であり、前記（ii）の核酸分子および前記（iv）の核酸分子からなる群から選択される少なくとも一種の核酸分子を含んでなる、請求項１９に記載の診断用キット。
【請求項２２】
前記被験者が女性であり、前記（i）の核酸分子および前記（iv）の核酸分子からなる群から選択される少なくとも一種の核酸分子を含んでなる、請求項１９に記載の診断用キット。
【請求項２３】
前記被験者が女性であり、前記（iv）の核酸分子を含んでなる、請求項１９に記載の診断用キット。
【請求項２４】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域にハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなるものである、請求項１９に記載の診断用キット。
【請求項２５】
診断用キットに含まれる少なくとも一種の核酸分子が、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域を核酸増幅法において増幅することができるものである、請求項１９に記載の診断用キット。
【請求項２６】
被験者が動脈硬化症になるリスクを予測する方法であって、
（i）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第６１０番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定する工程、
（ii）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第６７２番目のヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定する工程、
（iii）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第１８３１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定する工程、および
（iv）ＧＰＲ９９遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号２で表されるヌクレオチド配列中の第４４１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかシトシン（Ｃ）であるかを同定する工程、
からなる群から選択される少なくとも一つの工程を含んでなる、方法。
【請求項２７】
前記被験者が男性である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記被験者が男性であり、前記工程（ii）および前記工程（iv）からなる群から選択される少なくとも一つの工程を含んでなる、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記被験者が女性であり、前記工程（i）および前記工程（iv）からなる群から選択される少なくとも一つの工程を含んでなる、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
前記被験者が女性であり、前記工程（iv）を含んでなる、請求項２６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の背景】
【０００１】
発明の分野
本発明は、高血圧症、高脂血症、および動脈硬化症に関連する新規な遺伝子多型、並びにこれを利用した遺伝子診断法に関する。
【０００２】
背景技術
生体内には数多くのＧタンパク質共役型受容体タンパク質が存在している。しかし、それらの機能についての十分な知見は、まだ得られていない。
【０００３】
最近、新しいオーファン受容体として、ＧＰＲ９９が同定されている（非特許文献１：Wittenberger T, Schaller HC, Hellebrand S., An expressed sequence tag (EST) data mining strategy succeeding in the discovery of new G-protein coupled receptors. J. Mol. Biol. 307(3), 799-813, March 30, 2001）。さらに、Ｇタンパク質共役型受容体タンパク質のうちの２つが、代謝と血圧を結びつける働きをしていることが報告されている（非特許文献２：He W, Miao FJ, Lin DC, Schwandner RT, Wang Z, Gao J, Chen JL, Tian H, Ling L., Citric acid cycle intermediates as ligands for orphan G-protein-coupled receptors. Nature 429(6988), 188-93, May 13, 2004）。この報告によれば、これまでＧタンパク質共役型のオーファン受容体（ＧＰＣＲ）とされてきたＧＰＲ９１がクエン酸回路の中間体であるコハク酸の受容体として働き、ＧＰＲ９９がクエン酸回路の中間体であるαケトグルタル酸に応答する。また、コハク酸はレニン−アンギオテンシン系に関与しており、血圧上昇の原因となることも明らかになっている。
【０００４】
これらのことから、ＧＰＲ９１およびＧＰＲ９９が腎血管性高血圧症に何らかの関係を有する可能性があるものと考えられる。しかし、ＧＰＲ９１遺伝子およびＧＰＲ９９遺伝子とヒトの疾患との関連についての報告はない。
【０００５】
【非特許文献１】Wittenberger T, Schaller HC, Hellebrand S., J. Mol. Biol. 307(3), 799-813, March 30, 2001.
【非特許文献２】He W, Miao FJ, Lin DC, Schwandner RT, Wang Z, Gao J, Chen JL, Tian H, Ling L., Nature 429(6988), 188-93, May 13, 2004.
【発明の概要】
【０００６】
本発明者らは、ＧＰＲ９１遺伝子およびＧＰＲ９９遺伝子において、幾つかの新規な遺伝子多型を見出した。さらに、本発明者らは、これらの遺伝子多型が、高血圧症、高脂血症および動脈硬化症のリスクファクターとして利用可能であることを見出した。本発明はこれらの知見に基づくものである。
【０００７】
従って、本発明は、上記遺伝子多型にかかる変異を有する新規な変異型ＧＰＲ９１遺伝子および変異型ＧＰＲ９９遺伝子、ならびに上記遺伝子多型を利用して高血圧症、高脂血症および動脈硬化症のリスクを予測する方法、ならびにこの方法に用いることができる診断用キットの提供を目的とする。
【０００８】
そして、本発明による変異型ＧＰＲ９１遺伝子は、配列番号１で表されるヌクレオチド配列において、以下の変異：（i）第６１０番目のアデニン（Ａ）残基のチミン（Ｔ）残基への置換、（ii）第６７２番目のグアニン（Ｇ）残基のアデニン（Ａ）残基への置換、および（iii）第１８３１番目のシトシン（Ｃ）残基のチミン（Ｔ）残基への置換、からなる群から選択される少なくとも一つの変異を有するヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチドである。
【０００９】
さらに、本発明による変異型ＧＰＲ９９遺伝子は、配列番号２で表されるヌクレオチド配列において、以下の変異：（i）第４４１番目のアデニン（Ａ）残基のシトシン（Ｃ）残基への置換、および（ii）第１１５１番目のチミン（Ｔ）残基の欠失、からなる群から選択される少なくとも一つの変異を有するヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチドである。
【００１０】
さらに、本発明の第一の態様による診断用キットは、被験者が高血圧症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
（i）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第６１０番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはチミン（Ｔ）である前記ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（ii）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第６７２番目のヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）またはアデニン（Ａ）である前記ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、ならびに
（iii）ＧＰＲ９９遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号２で表されるヌクレオチド配列中の第１１５１番目のチミン（Ｔ）残基が存在するか否かを同定しうる核酸分子であって、該チミン（Ｔ）残基が存在する、または欠失した前記ＧＰＲ９９遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
からなる群から選択される少なくとも一種の核酸分子を含んでなるものである。
【００１１】
さらに、本発明の第一の態様による方法は、被験者が高血圧症になるリスクを予測する方法であって、
（i）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第６１０番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定する工程、
（ii）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第６７２番目のヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定する工程、および
（iii）ＧＰＲ９９遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号２で表されるヌクレオチド配列中の第１１５１番目のチミン（Ｔ）残基が存在するか否かを同定する工程、
からなる群から選択される少なくとも一つの工程を含んでなるものである。
【００１２】
さらに、本発明の第二の態様による診断用キットは、被験者が高脂血症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
（i）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第１８３１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはチミン（Ｔ）である前記ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、ならびに
（ii）ＧＰＲ９９遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号２で表されるヌクレオチド配列中の第１１５１番目のチミン（Ｔ）残基が存在するか否かを同定しうる核酸分子であって、該チミン（Ｔ）残基が存在する、または欠失した前記ＧＰＲ９９遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
からなる群から選択される少なくとも一種の核酸分子を含んでなるものである。
【００１３】
さらに、本発明の第二の態様による方法は、被験者が高脂血症になるリスクを予測する方法であって、
（i）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第１８３１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定する工程、および
（ii）ＧＰＲ９９遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号２で表されるヌクレオチド配列中の第１１５１番目のチミン（Ｔ）残基が存在するか否かを同定する工程、
からなる群から選択される少なくとも一つの工程を含んでなるものである。
【００１４】
さらに、本発明の第三の態様による診断用キットは、被験者が動脈硬化症になるリスクを予測するための診断用キットであって、
（i）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第６１０番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはチミン（Ｔ）である前記ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（ii）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第６７２番目のヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）またはアデニン（Ａ）である前記ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
（iii）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第１８３１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）またはチミン（Ｔ）である前記ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、ならびに
（iv）ＧＰＲ９９遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号２で表されるヌクレオチド配列中の第４４１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかシトシン（Ｃ）であるかを同定しうる核酸分子であって、該ヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）またはシトシン（Ｃ）である前記ＧＰＲ９９遺伝子ゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなる、核酸分子、
からなる群から選択される少なくとも一種の核酸分子を含んでなるものである。
【００１５】
さらに、本発明の第三の態様による方法は、被験者が動脈硬化症になるリスクを予測する方法であって、
（i）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第６１０番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定する工程、
（ii）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第６７２番目のヌクレオチド残基がグアニン（Ｇ）であるかアデニン（Ａ）であるかを同定する工程、
（iii）ＧＰＲ９１遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号１で表されるヌクレオチド配列中の第１８３１番目のヌクレオチド残基がシトシン（Ｃ）であるかチミン（Ｔ）であるかを同定する工程、および
（iv）ＧＰＲ９９遺伝子ゲノム配列に含まれる配列番号２で表されるヌクレオチド配列中の第４４１番目のヌクレオチド残基がアデニン（Ａ）であるかシトシン（Ｃ）であるかを同定する工程、
からなる群から選択される少なくとも一つの工程を含んでなるものである。
【００１６】
本発明によれば、ＧＰＲ９１遺伝子またはＧＰＲ９９遺伝子上の特定の多型部位におけるヌクレオチド残基を同定することにより、被験者の高血圧症、高脂血症または動脈硬化症のリスクを予測することが可能となる。これにより、被験者の体質に応じて生活習慣を改善することによって、高血圧症、高脂血症および動脈硬化症の発症を予防し、あるいはこれら疾患を効率的に治療することが可能となる。本発明によれば、出生前および出生直後の診断も可能である。
【発明の具体的説明】
【００１７】
本明細書において「ＧＰＲ９１遺伝子」とは、Ｇタンパク質共役型受容体の一種であるヒトＧＰＲ９１を発現する遺伝子であり、そのゲノム配列は配列番号１で表されるヌクレオチド配列を含んでいる。この遺伝子は、配列番号１中の第６１０残基において、アデニン（Ａ）残基とチミン（Ｔ）残基との一塩基多型（以下「−４４５Ａ＞Ｔ多型」という。）を有する。また、この遺伝子は、配列番号１中の第６７２残基において、グアニン（Ｇ）残基とアデニン（Ａ）残基との一塩基多型（以下「−３８３Ｇ＞Ａ多型」という。）を有する。さらに、この遺伝子は、配列番号１中の第１８３１残基において、シトシン（Ｃ）残基とチミン（Ｔ）残基との一塩基多型（以下「７７７Ｃ＞Ｔ多型」という。）を有する。
【００１８】
本明細書において「ＧＰＲ９９遺伝子」とは、Ｇタンパク質共役型受容体の一種であるヒトＧＰＲ９９を発現する遺伝子であり、そのゲノム配列は配列番号２で表されるヌクレオチド配列を含んでいる。この遺伝子は、配列番号２中の第４４１残基において、アデニン（Ａ）残基とシトシン（Ｃ）残基との一塩基多型（以下「−５７７Ａ＞Ｃ多型」という。）を有する。また、この遺伝子は、配列番号２中の第１１５１残基において、チミン（Ｔ）残基の有無による一塩基多型（以下「１３４ｄｅｌＴ多型」という。）を有する。
【００１９】
ＧＰＲ９１遺伝子およびＧＰＲ９９遺伝子における上記の多型は、いずれも新たに見出されたものである。よって、これらの遺伝子多型におけるマイナーアレルは、新規な変異型遺伝子である。
【００２０】
従って、本発明によれば、配列番号１で表されるヌクレオチド配列において、−４４５Ａ＞Ｔ多型部位におけるチミン（Ｔ）残基への置換、−３８３Ｇ＞Ａ多型部位におけるアデニン（Ａ）残基への置換、および７７７Ｃ＞Ｔ多型部位におけるチミン（Ｔ）残基への置換のいずれか一つまたはこれらの任意の組み合わせを有するヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチドが提供される。さらに、本発明によれば、配列番号２で表されるヌクレオチド配列において、−５７７Ａ＞Ｃ多型部位におけるシトシン（Ｃ）残基への置換、および１３４ｄｅｌＴ多型部位におけるチミン（Ｔ）残基の欠失のいずれか一つまたはこれらの組み合わせを有するヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチドが提供される。
【００２１】
本発明による上記変異型ポリヌクレオチドは、一本鎖であっても、相補鎖がハイブリダイズした二本鎖であってもよい。
【００２２】
本発明による変異型ポリヌクレオチドは、上記の遺伝子多型部位における変異を検出する際の標的として有用であるが、さらには、ＧＰＲ９１およびＧＰＲ９９の活性または発現量に影響を与え、これにより高血圧症、高脂血症、および動脈硬化症の発症を抑制することのできる化合物をスクリーニングするためにも有用である。
【００２３】
被験者、特に男性の被験者において、−４４５Ａ＞Ｔ多型におけるＡアレル、−３８３Ｇ＞Ａ多型におけるＧアレル、特にＧＧ型、またはこれらの任意の組み合わせが検出された場合には、その被験者が高血圧症になるリスクが高いものと判定することができる。
【００２４】
被験者、特に女性の被験者において、−４４５Ａ＞Ｔ多型におけるＡアレル、１３４ｄｅｌＴ多型におけるＤアレル（Ｔ残基の欠失を有するアレル）、またはこれらの任意の組み合わせが検出された場合には、その被験者が高血圧症になるリスクが高いものと判定することができる。
【００２５】
被験者、特に男性の被験者において、７７７Ｃ＞Ｔ多型におけるＴアレル、特にＴＴ型が検出された場合には、その被験者が高脂血症になるリスクが高いものと判定することができる。
【００２６】
被験者、特に女性の被験者において、１３４ｄｅｌＴ多型におけるＴアレル、特にＴＴ型が検出された場合には、その被験者が高脂血症になるリスクが高いものと判定することができる。
【００２７】
被験者、特に男性の被験者において、−３８３Ｇ＞Ａ多型におけるＧアレル、特にＧＧ型、−５７７Ａ＞Ｃ多型におけるＣアレル、特にＣＣ型、またはこれらの任意の組み合わせが検出された場合には、その被験者が動脈硬化症になるリスクが高いものと判定することができる。
【００２８】
被験者、特に女性の被験者において、−５７７Ａ＞Ｃ多型におけるＣアレル、特にＣＣ型が検出された場合には、その被験者が動脈硬化症になるリスクが高いものと判定することができる。
【００２９】
さらに、高血圧症および高脂血症はともに、動脈硬化症を引き起す重要な原因であることが知られている。これは、高血圧の状態が続くと常に動脈に強い圧力がかかることにより動脈壁に傷が発生しやすくなり、また、血中の総コレステロールが高濃度であると動脈壁の傷に脂肪分が浸透しやすくなるためであると考えられている。よって、被験者が高血圧症または高脂血症になるリスクが高いものと判定される場合には、その被験者は、動脈硬化症になるリスクも高いものと判定することができる。
【００３０】
従って、被験者、特に男性の被験者において、−４４５Ａ＞Ｔ多型におけるＡアレル、７７７Ｃ＞Ｔ多型におけるＴアレル、特にＴＴ型、またはこれらの任意の組み合わせが検出された場合にも、その被験者が動脈硬化症になるリスクが高いものと判定することができる。また、被験者、特に女性の被験者において、−４４５Ａ＞Ｔ多型におけるＡアレルが検出された場合にも、その被験者が動脈硬化症になるリスクが高いものと判定することができる。
【００３１】
本発明による診断用キットは、被験者が高血圧症、高脂血症、または動脈硬化症になるリスクの予測に用いられるものである。このキットには、それぞれの疾患に対応する多型部位におけるヌクレオチド残基を同定することのできる核酸分子であって、該多型部位にかかるいずれかのアレルのゲノム配列を含むポリヌクレオチドまたはこれに相補的なポリヌクレオチドにハイブリダイズするヌクレオチド断片を含む核酸分子が含まれる。
【００３２】
本発明において「ハイブリダイズする」とは、ある核酸分子がストリンジェントな条件下で標的ヌクレオチド分子にハイブリダイズし、標的ヌクレオチド分子以外のヌクレオチド分子にはハイブリダイズしないことを意味する。ストリンジェントな条件は、具体的な核酸分子とその相補鎖との二重鎖の融解温度Ｔｍ（℃）およびハイブリダイゼーション溶液の塩濃度などに依存して決定することができ、例えば、J. Sambrook, E. F. Frisch, T. Maniatis; Molecular Cloning 2nd edition, Cold Spring Harbor Laboratory (1989)等を参照することができる。例えば、使用する核酸分子の融解温度よりわずかに低い温度下でハイブリダイゼーションを行なうと、核酸分子を標的ヌクレオチド分子に特異的にハイブリダイズさせることができる。本発明の好ましい実施態様によれば、あるポリヌクレオチドにハイブリダイズする核酸分子は、そのポリヌクレオチドに相補的なポリヌクレオチドの全部または一部の配列を含んでなるものとされる。
【００３３】
本発明において「核酸分子」は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、およびＰＮＡ（peptide nucleic acid）を含む意味で用いられる。本発明の好ましい実施態様によれば、核酸分子はＤＮＡである。
【００３４】
本発明に用いられる核酸分子のヌクレオチド配列は、当業者により適宜設計されうる。例えば、本発明に用いられる核酸分子は、プロモーター領域、ターミネーター領域、エクソン、およびイントロンのいずれにハイブリダイズする部分をも含むことができる。
【００３５】
本発明に用いられる核酸分子は、各標的遺伝子における多型部位のヌクレオチドの同定において、核酸プローブとして用いることができる。この目的のためには、本発明に用いられる核酸分子は、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域にハイブリダイズするヌクレオチド断片を含んでなることが好ましい。
【００３６】
本発明に用いられる核酸分子を核酸プローブとして用いる場合、核酸分子の鎖長は１０〜１００ヌクレオチドとすることが好ましく、より好ましくは少なくとも１２ヌクレオチド、さらに好ましくは少なくとも１３ヌクレオチド、さらに好ましくは１３〜５０ヌクレオチドとする。
【００３７】
また、本発明に用いられる核酸分子は、各標的遺伝子における多型部位のヌクレオチドの同定において、核酸増幅用プライマーとして用いることができる。この目的のためには、本発明に用いられる核酸分子は、同定の対象となるヌクレオチド残基を含むポリヌクレオチド上の領域を核酸増幅法において増幅することができるものであることが好ましい。
【００３８】
本発明に用いられる核酸分子を核酸増幅用プライマーとして用いる場合、核酸分子の鎖長は１０〜５０ヌクレオチドとすることが好ましく、より好ましくは少なくとも１２ヌクレオチド、さらに好ましくは少なくとも１５ヌクレオチド、さらに好ましくは１５〜３０ヌクレオチドとする。
【００３９】
本発明の他の好ましい実施態様によれば、本発明に用いられる核酸分子の鎖長は、１５〜１００ヌクレオチド、より好ましくは少なくとも１７ヌクレオチド、さらに好ましくは１７〜５０ヌクレオチドとする。このような鎖長を有する核酸分子は、特に夾雑物を含む核酸試料において、各標的遺伝子上の多型部位のヌクレオチドを同定する上で好ましいものである。
【００４０】
核酸増幅法は、通常、プライマーのペアを用いて実施される。よって、本発明による診断用キットは、各標的遺伝子上の上記多型部位におけるヌクレオチドの同定に用いることのできるプライマーペアを含むことができる。
【００４１】
このようなプライマーペアを構成する２本のプライマーとしては、上述の核酸分子を用いることができる。このようなプライマーは、増幅の対象となる領域のヌクレオチド配列に基づいて当業者が適宜設計することができる。例えば、プライマーペアの一方のプライマーを、増幅対象領域のヌクレオチド配列中における５’末端部分の配列を有するものとし、他方のプライマーを、増幅対象領域の相補鎖のヌクレオチド配列中における５’末端部分の配列を有するものとすることができる。
【００４２】
本発明による方法は、被験者が高血圧症、高脂血症、または動脈硬化症になるリスクの予測に用いられるものである。この方法には、それぞれの疾患に対応する上述の多型部位におけるヌクレオチド残基を同定する工程が含まれる。この方法は、本発明による診断用キットを用いることにより、好適に実行することができる。
【００４３】
一つの実施態様によれば、本発明による診断用キットに含まれる核酸分子を用いて、被験者由来の核酸試料を鋳型とする核酸増幅法を行ない、得られた増幅産物中において上記各多型部位のヌクレオチドを同定することができる。
【００４４】
この方法による診断に当たっては、例えば、被験者から血液等の試料を採取し、得られた試料からゲノムＤＮＡ等の核酸試料を抽出し、得られた核酸試料を鋳型として、前記核酸分子を用いて核酸増幅法を実施し、得られた増幅産物のヌクレオチド配列を解析することにより、各標的遺伝子における上記各多型部位のヌクレオチドを同定することができる。核酸増幅法およびこれによる前記ヌクレオチドの同定法としては、当技術分野において公知のいずれの方法を用いてもよい。例えば、核酸増幅法としてはＰＣＲ法等を用いることができる。
【００４５】
核酸増幅法により得られた増幅産物のヌクレオチド配列の解析は、例えば、シークエンス用プライマーを用いるダイレクトシークエンス法等により容易に行なうことができる。このような方法は当技術分野において周知であり、例えば、市販のキットを用いて実施することができる。
【００４６】
本発明による方法においては、アレル特異的ＰＣＲ法を実施できるようにプライマーを設計することもできる。具体的には、一方のプライマーを多型部位に対合できるように設計し、他方のプライマーを多型部位を含まない領域に対合できるように設計することができる。このように設計されたプライマーペアを用いて核酸増幅法を実施すると、核酸試料中に前記多型にかかるいずれかのアレルが存在する場合には増幅産物が得られ、これが存在しない場合には増幅産物が得られない。従って、この場合には、増幅産物の有無を検出することにより特定のアレルの有無を判定することができる。
【００４７】
他の実施態様によれば、本発明による診断用キットに含まれる核酸分子と被験者由来の核酸試料とのハイブリダイゼーションを行ない、次いでハイブリダイゼーション複合体の存在を検出することができる。ハイブリダイゼーション複合体の存在は、上記各多型にかかるいずれかのアレルの存在を示す。このハイブリダイゼーション法を用いる方法は、上述の核酸増幅法を用いる方法により得られる増幅産物に対して適用することもできる。
【００４８】
この方法による診断に当たっては、例えば、被験者から血液等の試料を採取し、得られた試料からゲノムＤＮＡ等の核酸試料を抽出し、ストリンジェントな条件下、前記核酸分子とのハイブリダイゼーションの有無を検出することにより、各標的遺伝子における上記各多型部位のヌクレオチドを同定することができる。核酸試料は、必要であれば、制限酵素処理等を施し、ハイブリダイゼーションに適切な長さとすることもできる。ハイブリダイゼーション法とこれによる前記ヌクレオチドの同定法としては、当技術分野において公知のいずれの方法を用いてもよい。例えば、サザンハイブリダイゼーション、コロニーハイブリダイゼーション等の技術を用いることができ、これらの方法については、例えば、J. Sambrook, E. F. Frisch, T. Maniatis; Molecular Cloning 2nd edition, Cold Spring Harbor Laboratory (1989)を参照することができる。
【００４９】
各標的遺伝子における上記各多型が一塩基多型である場合において、該一塩基多型部位のヌクレオチドを同定するためには、本発明による診断用キットに含まれる核酸分子をプライマーとして使用するプライマーエクステンション法を用いることもできる。プライマーエクステンション法は当業者に公知であり、その操作手順および使用するプライマーの具体的ヌクレオチド配列は、当業者であれば容易に決定することができる。本発明の好ましい実施態様によれば、上記のプライマーエクステンション法としては、ＳＮａＰｓｈｏｔＴＭ法またはＰｙｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ法として知られる方法が用いられる。
【００５０】
ＳＮａＰｓｈｏｔＴＭ法においては、一塩基多型の部位に隣接するプライマーであって、伸長反応によりその３’末端に付加するヌクレオチドが前記一塩基多型の部位に相補的なものとなるプライマーが用いられる。このようなプライマーを使用し、被験者からの核酸試料を鋳型としてプライマーの伸長反応が行なわれるが、その際にｄｄＮＴＰ（ジデオキシＮＴＰ）を用いることにより、伸長反応は、上記の多型部位に対応する一個のヌクレオチドを取り込んだ時点で終了する。取り込まれたヌクレオチドは、蛍光標識等で予め標識しておくことにより容易に同定され、従って、多型部位のヌクレオチドが同定される。このような方法は当業者に公知であり、その操作手順および使用するプライマーの具体的ヌクレオチド配列は、当業者であれば容易に決定することができる。
【００５１】
Ｐｙｒｏｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ法においては、被験者からの核酸試料を鋳型とするプライマーの伸長反応の際に、４種のｄＮＴＰを１種ずつ反応させる。ｄＮＴＰのいずれかが取り込まれると、等量のピロリン酸塩（ＰＰｉ）が遊離し、遊離したＰＰｉはスルフリラーゼと反応してＡＴＰを生成させ、このＡＴＰによりルシフェラーゼの反応が起こり、発光が起こる。従って、ある特定のｄＮＴＰを加えたときに発光が起こった場合には、そのｄＮＴＰに対応するヌクレオチドが取り込まれたことが明らかとなり、これにより核酸試料中の対象部位のヌクレオチドが同定される。この方法においては、ｄＮＴＰが用いられるため、ＳＮａＰｓｈｏｔＴＭ法で用いられるような多型部位に隣接するプライマーを用いる必要はなく、数塩基はなれたプライマーを用いてもよい。このような方法は当業者に公知であり、その操作手順および使用するプライマーの具体的ヌクレオチド配列は、当業者であれば容易に決定することができる。
【００５２】
各標的遺伝子における上記各多型部位のヌクレオチドを同定する場合には、さらに、本発明による診断用キットに含まれる核酸分子をプローブおよび／またはプライマーとして使用する遺伝子型決定法（タイピング法）を用いることもできる。遺伝子型決定法は当業者に公知であり、その操作手順および使用するプローブおよび／またはプライマーの具体的ヌクレオチド配列は、当業者であれば容易に決定することができる。本発明の好ましい実施態様によれば、上記の遺伝子型決定法としては、ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法として知られる方法が用いられる。
【００５３】
ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法においては、上記各多型部位のヌクレオチドを含む領域に対して、両アレルのそれぞれに特異的にハイブリダイズする２種のプローブであって、それぞれ別の蛍光標識物質が５’末端に付され、その蛍光標識に対するクエンチャー（消光物質）が３’末端に付されてなるプローブ（ＴａｑＭａｎプローブ）が用いられ、これらをＰＣＲ反応液中に添加して、被験者由来の核酸試料を鋳型とするＰＣＲ反応を行なう。ＴａｑＭａｎプローブおよびＰＣＲ用のプライマーとしては、本発明による診断用キットに含まれる核酸分子を用いることができ、それらの具体的なヌクレオチド配列は、当業者であれば適宜決定することができる。また、２種の蛍光標識物質は、互いに識別可能な組合せであればよく、そのような蛍光標識物質の組合せはそれぞれのクエンチャーとともに当業者に公知のものを用いることができるが、好ましくはＦＡＭ、ＶＩＣ、およびＴＥＴのいずれかの組合せを用いる。
【００５４】
ＴａｑＭａｎ ＰＣＲ法においては、まず、各アレルにＴａｑＭａｎプローブがハイブリダイズし、プライマーからの伸長反応がそのハイブリダイゼーション領域に到達した際にＴａｑＤＮＡポリメラーゼの作用によって蛍光標識物質が遊離する。遊離した蛍光標識物質はクエンチャーの作用を受けないため、蛍光を発する。従って、この方法によれば、各アレルの存在量に対応する強度の各蛍光を観察することができ、これにより、被験者の遺伝子型が容易に決定される。
【００５５】
本発明による診断用キットは、上述の核酸分子に加えて、上記各種標的遺伝子における上記各多型部位のヌクレオチドを同定するための具体的方法に応じて、その方法に用いられる試薬類、反応容器、説明書等を含んでいてもよい。
【００５６】
上述の遺伝子多型は、高血圧症、高脂血症および動脈硬化症のリスクを予測する上で有用なものである。さらに、これらの遺伝子多型は、ＧＰＲ９１遺伝子およびＧＰＲ９９遺伝子によって引き起こされる高血圧症、高脂血症および動脈硬化症の発症メカニズムを研究する上でも重要な情報となる。また、特定の遺伝子と疾患との関連を調べるためには、その遺伝子をノックアウトしたマウスがしばしば用いられ、その実験結果を参照してヒトについての研究が行なわれる。一方で、上述のＧＰＲ９９／１３４ｄｅｌＴ多型におけるＤアレル（Ｔ残基の欠失を有するアレル）はフレームシフトを伴う変異型遺伝子であるため、この多型においてＤＤ型を有するヒトは、ＧＰＲ９９タンパク質を生産することができない。そして、後述の実施例において、計３６５１名の被験者のうち、１１名の男性被験者および１４名の女性被験者がこのＤＤ型を有することが見出されている。このような被験者から得られる医学的データは、ヒトにおけるＧＰＲ９９タンパク質の欠損と疾患との関連を研究する上で重要な情報となる。
【実施例】
【００５７】
例１：ＧＰＲ９１遺伝子およびＧＰＲ９９遺伝子中の多型と動脈硬化症との関連
本研究においては、吹田市在住の市民から性および年齢により階層的に選ばれた、国立循環器病センター（National Cardiovascular Center of Japan）における３６５１人の受診者を対象とした。遺伝子解析に先立ち、被験者全員から遺伝子解析についてのインフォームドコンセントを取得した。被験者全員から採血し、得られた血液を遺伝子解析用のサンプルとした。被験者の血圧測定は２回行い、その平均値をとり、収縮期血圧（ＳＢＰ）１４０ｍｍＨｇ以上もしくは拡張期血圧（ＤＢＰ）９０ｍｍＨｇ以上の被験者または降圧剤服用中の被験者を高血圧と判定した。また、被験者は、喫煙者、飲酒者、高コレステロール症（総コレステロール２２０ｍｇ／ｄＬ以上またはコレステロール低下薬服用中）、糖尿病（空腹時血糖値１２６ｍｇ／ｄＬ以上、もしくは非空腹時血糖値２００ｍｇ／ｄＬ以上でＨｂＡ１Ｃ６．５％以上、または糖尿病薬服用中）に分類した。被験者全体の各種データを表１に示す。
【００５８】
【表１】
2006217886.tif 000002
【００５９】
上記被験者のうち、４８人の高血圧患者からのサンプルを対象に、ＧＰＲ９１遺伝子およびＧＰＲ９９遺伝子のゲノム配列を決定した。これにより見出された遺伝子多型を、そのアレル頻度とともに表２および表３に示す。
【００６０】
【表２】
2006217886.tif 000003
【００６１】
【表３】
2006217886.tif 000004
【００６２】
表２に示すとおり、ＧＰＲ９１では、プロモーター領域に、−９０８Ａ＞Ｔ、−５２０Ｃ＞Ｔ、−４４５Ａ＞Ｔ、−３８３Ｇ＞Ａ、および−２８６−−２８５ｉｎｓＴの合計５つの遺伝子多型を見出した。エクソン２の領域では、７７７Ｃ＞Ｔおよび８３４Ｃ＞Ｔの２つの遺伝子多型を見出したが、これらはともにアミノ酸置換を伴うものではなかった。３’−ＵＴＲ領域では、１７０１Ｃ＞Ｔおよび１７９０Ｃ＞Ｔの２つの遺伝子多型を見出した。ＧＰＲ９１遺伝子領域上におけるこれら遺伝子多型の位置を図１に示す。
【００６３】
また、表３に示すとおり、ＧＰＲ９９では、プロモーター領域に、−５７７Ａ＞Ｃおよび−２１０Ｔ＞Ｃの２つの遺伝子多型を見出した。エクソン１の領域では、１３４ｄｅｌＴおよび６００Ｇ＞Ａの２つの遺伝子多型を見出した。１３４ｄｅｌＴは４８人中５人にヘテロでみられるフレームシフト変異であり、この変異を有するアレルからは、機能をもつＧＰＲ９９は生成されないことが分かった。ＧＰＲ９９遺伝子領域上におけるこれら遺伝子多型の位置を図２に示す。
【００６４】
これらの遺伝子多型のうち、ＧＰＲ９１／−２８６−−２８５ｉｎｓＴ多型およびＧＰＲ９９／−２１０Ｔ＞Ｃ多型については、これらのマイナーアレル（アレル２）の頻度が５％以下であったので、詳細な解析は行わなかった。残りの１１の遺伝子多型について連鎖不平衡解析を行い、ｒ２が０．５以上のグループの中から６つの遺伝子多型（ＧＰＲ９１／−４４５Ａ＞Ｔ、−３８３Ｇ＞Ａ、７７７Ｃ＞Ｔ、８３４Ｃ＞Ｔ；ＧＰＲ９９／−５７７Ａ＞Ｃ、１３４ｄｅｌＴ）を選択し、これらの多型について以下の解析を行った。
【００６５】
まず、動脈硬化の指標として、安静臥位での脈派伝播速度と頚動脈超音波検査を用いた。脈派伝播速度（ＰＷＶ）の測定には、日本コーリンのFormを使用した。測定は２回行い、２回目の測定値をデータとして用いた。ＡＢＩが０．９以下側のＰＷＶ値はデータとして用いないで解析した。ＰＷＶの値は左右の平均値を用いた。ＰＷＶの平均値が１４００ｃｍ／ｓ以上である場合に、ＰＷＶ高値と定義した。頚動脈は、総計動脈から分岐部、内頚動脈までを計測した。総計動脈の内膜中幕複合体（ＩＭＴ）の左右平均値を平均ＩＭＴ値とし、左右の測定領域のうちで最大のＩＭＴを最大ＩＭＴ値とした。さらに、２５％以上の狭窄がみられた場合に、狭窄ありと定義した。また、ＩＭＴが１．１ｍｍ以上である場合に、プラークありと定義した。
【００６６】
次いで、遺伝子多型別に、ＰＷＶ、平均ＩＭＴ、最大ＩＭＴの共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）を行った。調整変数には、年齢、ＢＭＩ、喫煙、過剰飲酒、現病歴（高脂血症、糖尿病）、収縮期血圧、降圧剤服用の有無を用いた。また、ＰＷＶ高値、プラーク有り、２５％以上狭窄のオッズ比は、ロジスティック回帰モデルを用いて解析した。調整変数には、年齢、ＢＭＩ、喫煙、過剰飲酒、現病歴（高血圧、高脂血症、糖尿病）を用いた。
【００６７】
ＧＰＲ９１遺伝子の各多型における遺伝子型と、血圧、総コレステロール、および動脈硬化（ＰＷＶ、ＩＭＴ）との関係をＡＮＣＯＶＡを用いて解析した。その結果を表４に示す。
【００６８】
【表４】
2006217886.tif 000005
【００６９】
表４に示すとおり、７７７Ｃ＞Ｔでは、男性の総コレステロールが、ＣＣ型、ＣＴ型、およびＴＴ型の順に２１５．２±０．８ｍｇ／ｄＬ、２１８．８±１．６ｍｇ／ｄＬ、および２２１．７±５．９ｍｇ／ｄＬであり、有意差が認められた（ｐ＝０．０２５）。−４４５Ａ＞Ｔでは、女性の収縮期血圧が、ＡＡ型＋ＡＴ型およびＴＴ型の順に１２８．７±０．４ｍｍＨｇおよび１２６．１±０．９ｍｍＨｇであり、有意差が認められた（ｐ＝０．０１）。また、−４４５Ａ＞Ｔでは、女性の拡張期血圧が、ＡＡ型＋ＡＴ型およびＴＴ型の順に７６．８±０．２ｍｍＨｇおよび７５．４±０．５ｍｍＨｇであり、有意差が認められた（ｐ＝０．０１７）。
【００７０】
従って、７７７Ｃ＞ＴにおけるＴアレル、特にＴＴ型は、男性における高脂血症のリスクファクターであることが明らかとなった。また、−４４５Ａ＞ＴにおけるＡアレルは、女性における高血圧のリスクファクターであることが明らかとなった。
【００７１】
ＧＰＲ９９遺伝子の各多型における遺伝子型と、血圧、総コレステロール、および動脈硬化（ＰＷＶ、ＩＭＴ）との関係をＡＮＣＯＶＡを用いて解析した。その結果を表５に示す。
【００７２】
【表５】
2006217886.tif 000006
【００７３】
表５に示すとおり、１３４ｄｅｌＴでは、女性の拡張期血圧が、ＴＴ型およびＴＤ型＋ＤＤ型の順に７６．３±０．２ｍｍＨｇおよび７７．５±０．６ｍｍＨｇであり、有意差が認められた（ｐ＝０．０４４）。また、１３４ｄｅｌＴでは、女性の総コレステロールが、ＴＴ型およびＴＤ型＋ＤＤ型の順に２１７．０±０．８ｍｇ／ｄＬおよび２１１．０±１．８ｍｇ／ｄＬであり、有意差が認められた（ｐ＝０．００２）。さらに、１３４ｄｅｌＴでは、女性の総コレステロールが、ＴＴ型、ＴＤ型、およびＤＤ型の順に２１７．０±０．８ｍｇ／ｄＬ、２１１．６±１．９ｍｇ／ｄＬ、および２００．１±８．３ｍｇ／ｄＬであり、有意差が認められた（ｐ＝０．００１）。−５７７Ａ＞Ｃでは、男性のＰＷＶが、ＡＡ型、ＡＣ型、およびＣＣ型の順に１７０９±１２ｃｍ／ｓ、１６６６±１１ｃｍ／ｓ、および１６５８±２２ｃｍ／ｓであり、有意差が認められた（ｐ＝０．００８）。また、−５７７Ａ＞Ｃでは、女性のＰＷＶが、ＡＡ型、ＡＣ型、およびＣＣ型の順に１５８１±１０ｃｍ／ｓ、１５６４±９ｃｍ／ｓ、および１５３７±１８ｃｍ／ｓであり、有意差が認められた（ｐ＝０．０２８）。
【００７４】
従って、１３４ｄｅｌＴにおけるＤアレル（Ｔ残基の欠失を有するアレル）は、女性における高血圧のリスクファクターであることが明らかとなった。また、１３４ｄｅｌＴにおけるＴアレル、特にＴＴ型は、女性における高脂血症のリスクファクターであることが明らかとなった。さらに、−５７７Ａ＞ＣにおけるＡアレル、特にＡＡ型は、男性における高脂血症のリスクファクターであることが明らかとなった。さらに、−５７７Ａ＞ＣにおけるＣアレル、特にＣＣ型は、性別にかかわらず動脈硬化のリスクファクターであることが明らかとなった。
【００７５】
ＧＰＲ９１遺伝子およびＧＰＲ９９遺伝子の各多型における遺伝子型と、血圧、総コレステロール、および動脈硬化（ＰＷＶ、ＩＭＴ）との関係を、ロジスティックモデルを用いて解析した。その結果を表６に示す。
【００７６】
【表６】
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【００７７】
表６に示すとおり、ＧＰＲ９１／−４４５Ａ＞Ｔでは、ＡＡ型＋ＡＴ型を基準にして、ＴＴ型の男性で高血圧の危険度が０．７２倍であった（ｐ＝０．０１５）。ＧＰＲ９１／−３８３Ｇ＞Ａでは、ＧＧ型を基準にして、ＧＡ型＋ＡＡ型の男性で高血圧の危険度が０．７７倍であり（ｐ＝０．０１５）、ＧＧ型＋ＧＡ型を基準にして、ＡＡ型の男性で高血圧の危険度が０．６０倍であった（ｐ＝０．０１９）。また、ＧＰＲ９１／−３８３Ｇ＞Ａでは、ＧＧ型を基準にして、ＧＡ型＋ＡＡ型の男性で頸動脈プラーク形成の危険度が０．７３倍であった（ｐ＝０．０２５）。ＧＰＲ９９／１３４ｄｅｌＴでは、ＴＴ型を基準にして、ＴＤ型＋ＤＤ型の女性で高脂血症の危険度が０．７３倍であった（ｐ＝０．０２０）。
【００７８】
従って、−４４５Ａ＞ＴにおけるＡアレルは、男性における高血圧のリスクファクターであることが明らかとなった。また、−３８３Ｇ＞ＡにおけるＧアレル、特にＧＧ型は、男性における高血圧および動脈硬化のリスクファクターであることが明らかとなった。さらに、１３４ｄｅｌＴにおけるＴアレル、特にＴＴ型は、女性における高脂血症のリスクファクターであることが明らかとなった。
【図面の簡単な説明】
【００７９】
【図１】図１は、ＧＰＲ９１遺伝子領域上において見出された遺伝子多型の位置を示す図である。
【図２】図２は、ＧＰＲ９９遺伝子領域上において見出された遺伝子多型の位置を示す図である。
【図１】
2006217886.tif 000008
【図２】
2006217886.tif 000009
【配列表】
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