(57)【要約】【課題】試料中の細胞やウイルスの効果的な回収、濃縮、精製方法の提供。【解決手段】本発明による試料中の標的物質の回収、濃縮、精製方法は、標的物質に特異的に結合する標識抗体を、試料中の標的物質と接触させ、標識抗体と標的物質を抗原抗体反応により結合させること、担体に固相化された、標識物質と特異的に結合する物質を、標的物質と結合した標識抗体と接触させ、特異的に結合させること、担体を回収すること、からなるものである。【選択図】  図２
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
標的物質に特異的に結合する標識物質で標識した抗体（標識抗体）を、試料中の標的物質と接触させ、標識抗体と標的物質を抗原抗体反応により結合させること、
担体に固相化された、標識物質と特異的に結合する物質を、標的物質と結合した標識抗体と接触させ、特異的に結合させること、
担体を回収すること、
からなる、標的物質の回収方法。
【請求項２】
請求項１において、標的物質が核酸を含むものであり、さらに、
回収した担体を洗浄することにより標的物質を精製すること、
精製した標的物質から核酸を抽出すること、
とを含む方法。
【請求項３】
標的物質が細菌である、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
標識物質がビオチンである、請求項１乃至３に記載の方法。
【請求項５】
標識物質と特異的に結合する物質がストレプトアビジンである、請求項１乃至４に記載の方法。
【請求項６】
担体が、磁性体あるいは磁性体を含む担体であり、磁力により担体の回収を行う、請求項１乃至５に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗体を用いて各種試料中から標的物質を回収する方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
細菌やウイルスによる感染症その他の病気の原因を確定診断するためには、その病気の原因となっている細菌やウイルスを検出し同定することが必要である。従来の細菌検査では、試料中の検査対象である病原菌の濃縮処理や精製処理を行わず検査に供しており、該試料を希釈し寒天培地に塗布して培養後、出現したコロニーを計数する培養検査が標準法として用いられていた。例えば、結核菌の場合は前記の様な処理を行っていない試料を用いた塗沫検査や培養検査が基本であった。また、食中毒菌の検査の場合も同様の培養法が標準的に用いられていた。
【０００３】
また、臨床診断等の分野では、試料から核酸を抽出し、標的細菌またはウイルスの核酸を増幅し検出することにより、病気の確定診断が行われている。さらに、各組織中の細胞から核酸を抽出し、癌やその他の病気の診断マーカーとして利用可能であり、病気の早期診断、治療のモニタリング、予後判定、治療方針決定の指標に有用である。この場合、試料からの核酸の抽出が重要な操作となっている。核酸抽出には、フェノール／クロロホルム法、グアニジン法等が知られているが、試料中に核酸の抽出を阻害する夾雑物あるいは、核酸増幅反応を阻害する物質が存在することが知られている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
これら従来法による細菌による病気の確定診断のための細菌検査においては、培養に時間がかかるという問題点があった。一般的な細菌検査では、増菌培養、選択培養といった培養を行い、一般生菌数の測定には２〜３日間、食中毒細菌等特定の細菌の検出には４〜５日間必要である。また例えば、結核菌の場合、菌の生育速度が遅く、検出、同定に４週間以上を必要としている。これらは試料中の細菌数が少なく、培養以外の現在の検出技術（例えば塗沫検査）では検出することが困難なことが原因である。
【０００５】
また従来法によるウイルスによる病気の確定診断のためのウイルス検査においては、通常ウイルスに対する抗体を測定することにより行われる。しかしこの場合、感染初期においては抗体が十分産生されておらず、検出できないという問題点があった。そこでウイルスの持つ核酸を測定することによりウイルスの検出を行う方法があるが、この場合試料中に存在するウイルスの数が少なく、検出できないという問題点があった。
【０００６】
また、臨床診断等の分野における遺伝子検査に用いられる試料としては、血液、尿、喀痰、膿、血液培養液、スワブ、コロニー等があげられる。これらの試料から従来の方法により核酸を抽出することは可能であるが、試料中に核酸の抽出を阻害する夾雑物あるいは、核酸増幅反応を阻害する物質が存在することが知られている。それらは試料中からの核酸の抽出を困難にし、その後の工程である核酸増幅を阻害し、正確な細菌やウイルス、診断マーカー等の検出、同定を困難なものにしている。
【０００７】
また、従来の方法で試料中の標的物質の濃縮を行おうとした場合、遠心分離による標的細菌の沈降やフィルターろ過が考えられるが、これらの技術では培養や核酸増幅の工程を阻害する試料中の夾雑物も同時に回収してしまうという問題点があった。
【０００８】
また、標的物質に結合する抗体を固相化した担体を用いて標的物質を捕捉し、精製、濃縮する方法が考えられるが、抗体が固相に結合しているため自由度が低く、標的物質の回収率が低下するという問題点があった。
【０００９】
そこで本発明の目的は、抗体を効率よく標的物質と結合させることにより、標的物質の回収率を向上させ、かつ標的物質を試料の中から特異的に回収し、検出可能な量まで濃縮する方法を提供することにある。また、その過程で、核酸の抽出および後の核酸増幅工程を阻害する物質を洗浄除去し、標的物質を精製する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明者らは研究を重ねた結果、試料中の標的物質を効率よく回収し、濃縮、精製する方法を見出した。本発明は、標的物質に特異的に結合する標識物質で標識した抗体（標識抗体）を、試料中の標的物質と接触させ、標識抗体と標的物質を抗原抗体反応により結合させること、担体に固相化された、標識物質と特異的に結合する物質を、標的物質と結合した標識抗体と接触させ、特異的に結合させること、担体を回収すること、からなる、標的物質の回収方法である。以下、本発明を詳細に説明する。
【００１１】
本発明における標的物質とは、細菌、ウイルスおよび各種細胞があげられ、例えば細菌では、大腸菌、サルモネラ、肺炎桿菌、セラチア菌、腸炎ビブリオ、インフルエンザ桿菌等のグラム陰性菌、黄色ぶどう球菌、レンサ球菌、破傷風菌、ボツリヌス菌、炭疽菌等のグラム陽性菌、および結核菌があげられる。例えばウイルスでは、ノロウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、エイズウイルス、ＳＡＲＳウイルス、鳥インフルエンザウイルス等があげられる。
【００１２】
本発明における試料には、血液、尿、血液培養液等の試料溶液、喀痰、膿、コロニー、スワブ等の生体試料の試料懸濁液、あるいは食物試料のホモジェナイズ等の試料懸濁液があげられる。試料が喀痰の場合は、ＮＡＬＣ処理等の試料の粘性を落す前処理を行うとより好ましい結果が得られる。また、環境分析等における環境水や排水、土壌の懸濁液等があげられる。
【００１３】
本発明において標識抗体とは、標的物質に特異的に結合する抗体を標識物質により標識したものをいう。
【００１４】
本発明において標的物質に特異的に結合する抗体とは、標的細胞の細胞表層膜やウイルス粒子に存在する表面抗原を特異的に認識し結合する抗体を意味し、モノクローナル抗体であってもポリクローナル抗体であってもよい。また、標的物質に存在する共通抗原を認識するものであっても、標的物質に特異的に存在する抗原を認識するものであってもよい。標的細胞の細胞表層膜に存在する表面抗原は、標的物質がグラム陰性菌の場合、細胞外膜に存在するリポ蛋白質、蛋白質、リポ多糖、あるいは鞭毛等が挙げられ、グラム陽性菌の場合、細胞壁に存在する多糖、ペプチドグリカン、蛋白質、あるいは鞭毛等が挙げられ、標的物質が細胞である場合、細胞表層膜に存在する蛋白質、脂質、糖鎖等、ウイルスの場合、外皮蛋白質等があげられる。
【００１５】
本発明における標識物質は、ビオチン、デキストラン等の多糖、アビジン等の蛋白質、ポリリジン等のポリペプチド、金属が挙げられる。
【００１６】
抗体と標識物質の結合方法は、抗体のアミノ基を介した方法、チオール基を介した方法、カルボキシル基を介した方法等が挙げられるが、特にこれらに限定されるものではない。例えば、標識物質のカルボキシル基をＮ−ヒドロキシスクシミドで活性エステル体とし抗体のアミノ基とアミド結合を形成させて結合させる。また、抗体と標識物質は直接結合されていても良いが、リンカーを介して結合していることが望ましい。
【００１７】
試料に添加する標識抗体の量は、試料中の標的物質の数に対して過剰に添加することが望ましい。特に標的物質の数に対して１００倍以上の分子数の抗体を添加することが望ましい。
【００１８】
本発明における標識物質と特異的に結合する物質は、ビオチン、アビジン、抗体、レクチン、キレート剤等が挙げられ、標識物質の種類によって適宜決められる。
担体に結合する、標識物質と特異的に結合する物質の量は、標的物質の検査における検出下限界よりも多くの標的物質数を結合できる量であればよいが、過剰に添加した標識抗体を、全て結合できる量を担体に結合させることが望ましい。
【００１９】
本発明における担体は、通常アフィニティークロマトグラフィーを作製するために用いられるゲル担体や蛋白質結合能を有する担体であればよく、例えばＴＯＹＯＰＥＡＲＬ  ＡＦ−Ｔｒｅｓｙｌ−６５０Ｍ（東ソー社製）やセファロース４Ｂ（アマシャムファルマシアバイオテク社製）およびポリスチレンビーズがあげられる。標識物質と特異的に結合する物質と、担体との結合は、本発明の標的物質の回収方法における各工程によって解離しないものであれば特に限定はされず、化学的な共有結合による結合でも、疎水性相互作用やアフィニティによる物理的吸着によるものでもよい。
【００２０】
本発明で使用する担体の形状は限定されるものではなく、粒子状、多孔質フィルター状、ファイバー状、シート状であってもよい。担体が球状粒子である場合、粒子径は均一でなくてもよい。直径は実用上問題なければ小さい方が望ましい。粒子径が小さい場合は試料と分離する場合に分離方法によっては分離が困難になる場合や時間がかかり過ぎるという問題点が生じる。担体が磁性ビーズ等の、磁性体あるいは磁性体を含む担体である場合は、磁力により分離ができるので粒子径は小さくても良い。また、粒子径が大きすぎる場合は単位体積あたりの担体表面積が小さくなり、標的細菌を結合する能力が低下する。そのため、磁性ビーズや比重の大きなビーズやあるいは低速遠心分離で沈殿可能なビーズの様に、試料との分離が容易に行うことのできるビーズであれば、担体の粒子径は小さい方が望ましい。
【００２１】
担体に固相化された、標識物質と特異的に結合する物質と、試料中の標的物質と結合した標識抗体との接触は、バッチ法あるいはカラム法のどちらでもよいが、試料中に不溶性の懸濁物が存在する場合はバッチ法が好ましい。接触させる時間は抗原抗体反応が完了する時間であれば制限はないが、臨床検査、診断時の操作性を考慮すると短時間であるほうが好ましい。
【００２２】
標的物質が結合した担体の洗浄は、通常使用される緩衝液で行えばよく、例えば、ＰＢＳ、リン酸緩衝液、トリス緩衝液等があげられる。そのｐＨは５〜９付近であればよく、好ましくは６〜８であればよい。また、洗浄後の核酸の抽出の過程での核酸の分解を抑えるために１ｍＭのＥＤＴＡを添加することが好ましい。
【００２３】
試料中の標的物質を結合した担体の、試料または洗浄液からの分離方法は、バッチ法の場合は自然沈降、遠心分離、磁気分離等によって行えばよい。カラム法の場合は試料をカラムに通過させ、必要であれば洗浄液をカラムに通過させた後、カラムから担体を回収してもよいし、溶出液により標的物質をカラムから溶出させてもよい。この場合に使用される溶出液には、過剰の標識物質を含むことで標識物質と標識物質と特異的に結合する物質とを解離させるものや、ｐＨを下げることで抗原と抗体を解離させるもの、プロテアーゼを含み抗体等を分解することで標的物質を溶出させるもの等があげられる。
【００２４】
本発明により回収、濃縮、精製された標的細菌は、核酸増幅検査、免疫診断等に供される。核酸増幅検査は、ＰＣＲ（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ）、ＲＴ−ＰＣＲ（Ｒｅｖｅｒｓｅ−Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔａｓｅ  ＰＣＲ）、ＬＣＲ（Ｌｉｇａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ）、ＬＡＭＰ（Ｌｏｏｐ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｉｓｏｔｈｅｒｍａｌ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＤＮＡ）等のＤＮＡ増幅法、ＮＡＳＢＡ（Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｂａｓｅｄ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）、ＴＭＡ（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ−Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ）あるいはＴＲＣ（Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｒｅｖｅｒｓｅ  Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  Ｃｏｎｃｅｒｔｅｄ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ、医学のあゆみ、Ｖｏｌ．２０６．Ｎｏ８、２００３）等のＲＮＡ増幅法があげられる。これら核酸増幅検査のための核酸の抽出を行う場合、試料によっては核酸の抽出を阻害する夾雑物あるいは核酸増幅反応を阻害する物質が存在しているが、本発明により精製された標的物質は、これらの夾雑物が洗浄除去されているため核酸の抽出を容易に行うことが可能である。また、標的物質を担体に結合したまま行うことが可能である。核酸の抽出は、酵素や界面活性剤で細胞膜や細胞壁、または外皮蛋白質を破壊し、複合体の蛋白質を分解して核酸を遊離させた後、フェノール／クロロホルムを添加して遊離した核酸を抽出する、いわゆるフェノール／クロロホルム法（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ  Ａｐｐｅｎｄｉｘ  Ｅ３−Ｅ４（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８９年））、塩酸グアニジンまたはチオシアン酸グアニジンで処理して細胞膜や細胞壁、または外皮蛋白質を破壊し、核酸との複合体を形成している蛋白質を変性して核酸を遊離させた後、エタノール等を添加して遊離した核酸を抽出する、いわゆるグアニジン法（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ  Ａｐｐｅｎｄｉｘ  ７．２３〜７．２５（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，１９８９年））、あるいは市販されている核酸抽出試薬を用いて行えばよい。
【発明の効果】
【００２５】
本発明においては抗体を効率よく標的物質と結合させることにより、標的物質の回収率を向上させ、かつ標的物質を試料の中から特異的に回収し、濃縮している。そのため試料中の標的物質が極微量であって通常の検出方法では検出不可能な場合においても検出することが可能である。
【００２６】
特に本発明において、標的物質に標識抗体を結合する工程では標識抗体が担体に結合していないため、標識抗体の自由度が高く、標的物質の回収率を向上させている。
【実施例】
【００２７】
以下に、発明を更に詳細に説明するために実施例を示すが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００２８】
実施例１  ビオチン標識した大腸菌認識抗体とストレプトアビジン固相化担体による、大腸菌懸濁液からの大腸菌の回収
ＭＲＳＡ（メシチリン耐性黄色ブドウ球菌）のＰＢＰ−２’をコードするｍｅｃＡ遺伝子（ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ２２１（１）、１６７−１７１，１９８７）を組み込んだｐＵＣ１９により形質転換を行ったＪＭ１０９を、１００μｇ／ｍｌのアンピシリンを添加したＬＢ培地により３７℃で一晩培養した。該培養液を、波長６００ｎｍにおける吸光度が０．５となるようにＰＢＳで希釈し、試料とした。
【００２９】
該試料１ｍｌにビオチン標識大腸菌認識抗体（バイロスタット社製）５ｍｇ／ｍｌを１００μｌ添加し、４℃で１６時間ゆるやかに回転攪拌した。対照として、ビオチン標識大腸菌認識抗体を添加しない試料を同様に回転攪拌し、以下同様の操作を行った。
【００３０】
１３０００回転で５分間遠心し沈殿を回収し、その後１ｍｌのＰＢＳで１回洗浄した後、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ  Ｍ−２８０  Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ（ＤＹＮＡＬ社）７ｘ１０８ビーズ／ｍｌを２５０μｌ添加し、室温で１５分間ゆるやかに回転攪拌した。
【００３１】
磁石によりビーズを回収し、ＱＩＡ  ｐｒｅｐ  Ｓｐｉｎ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）でビーズから直接プラスミドを抽出した。
【００３２】
該プラスミドを鋳型としプライマー（Ｆ−ＰＢＰ−１：配列表１に記載）とプライマー（Ｆ−ＰＢＰ−２：配列表２に記載）を用いたライトサイクラー（ロッシュ・ダイアグノスティックス社製）による定量ＰＣＲを行うことによりｍｅｃＡ遺伝子を定量した。ＰＣＲ反応は、９４℃で２０秒、４３℃で３０秒、７２℃で２分を１サイクルとして４０サイクル行った。
【００３３】
結果を図１に示した。その結果、試料１ｍｌを１３０００回転で５分間遠心した沈殿からプラスミドを抽出し、定量ＰＣＲを行なった結果を１００％とすると、ビオチン標識大腸菌認識抗体を添加して試料から回収した標的大腸菌の回収率は７１．４％であった。一方、ビオチン標識大腸菌認識抗体を添加しなかった試料からの標的大腸菌の回収率は１１．０％であった。このことは、本法により試料である大腸菌溶液から大腸菌を効率よく回収することが可能であることを示す。
【００３４】
実施例２  ビオチン標識した大腸菌認識抗体とストレプトアビジン固相化担体による、牛乳中の大腸菌の濃縮精製
市販の牛乳１ｍｌに９ｍｌのＴＥバッファーを添加し攪拌した。該溶液を１０％牛乳溶液とした。
【００３５】
実施例１に示すｍｅｃＡ遺伝子を組み込んだｐＵＣ１９により形質転換を行ったＪＭ１０９を、１００μｇ／ｍｌのアンピシリンを添加したＬＢ培地により３７℃で一晩培養した。該培養液を上記牛乳溶液に、波長６００ｎｍにおける吸光度が０．５、０．５ｘ１０−１、０．５ｘ１０−２、０．５ｘ１０−３、０．５ｘ１０−４、０．５ｘ１０−５、０．５ｘ１０−６、となるように添加し試料希釈液とした。該試料希釈液０．５ｍｌにビオチン標識大腸菌認識抗体（バイロスタット社製）５ｍｇ／ｍｌを５０μｌ添加し、３７℃で１５分ゆるやかに回転攪拌した。１３０００回転で５分間遠心し沈殿を回収し、その後１ｍｌのＰＢＳで１回洗浄した後、Ｄｙｎａｂｅａｄｓ  Ｍ−２８０  Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ（ＤＹＮＡＬ社製）７ｘ１０８ビーズ／ｍｌを５０μｌ添加し、室温で１５分間ゆるやかに回転攪拌した。
【００３６】
磁石によりビーズを回収し、ＱＩＡ  ｐｒｅｐ  Ｓｐｉｎ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）でビーズから直接プラスミドを抽出した。
【００３７】
該牛乳試料中の夾雑物は遠心操作では標的細菌と共に沈降してしまい遠心操作では除去できず、かつ抽出に用いる試料容量を増やすと夾雑物により核酸の抽出が阻害される可能性がある。そのため対照として該試料希釈液５０μｌから、それぞれＱＩＡ  ｐｒｅｐ  Ｓｐｉｎ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いてプラスミドを抽出した。
【００３８】
該プラスミドを鋳型とし実施例１と同様の条件で定量ＰＣＲを行うことによりｍｅｃＡ遺伝子を定量した。
【００３９】
波長６００ｎｍにおける吸光度が０．５である場合の大腸菌濃度を１．２５ｘ１０８Ｃｅｌｌｓ／ｍｌとし、ＴＥバッファーで１０倍づつ希釈した希釈列を作製した。各大腸菌濃度の溶液５０μｌから、それぞれＱＩＡ  ｐｒｅｐ  Ｓｐｉｎ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐ  Ｋｉｔ（ＱＩＡＧＥＮ社製）を用いてプラスミドを抽出し、該プラスミドを鋳型とし同様の条件で定量ＰＣＲを行うことにより検量線を作成した。該検量線により、定量したプラスミドの量から大腸菌数を算出した。
【００４０】
結果を図２に示した。その結果、ビオチン標識大腸菌認識抗体とＤｙｎａｂｅａｄｓ  Ｍ−２８０  Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎを用いて回収した大腸菌数は、対照として行ったビオチン標識大腸菌認識抗体を添加しなかった５０μｌの試料から回収した大腸菌数の４．８倍から１．７倍の回収量を示した。このことは、本法により試料から大腸菌を効率よく濃縮、精製回収することが可能であることを示す。
【図面の簡単な説明】
【００４１】
【図１】図１に示すグラフは、ビオチン標識した大腸菌認識抗体とストレプトアビジン固相化担体を用いて大腸菌懸濁液から大腸菌を回収した場合と、ビオチン標識した大腸菌認識抗体を用いず、ストレプトアビジン固相化担体のみを用いて大腸菌懸濁液から大腸菌を回収した場合の、大腸菌の回収率を見たものである。検出は回収した大腸菌から抽出したプラスミドを定量ＰＣＲにより定量することにより行った。波長６００ｎｍにおける吸光度が０．５の大腸菌溶液１ｍｌから抽出したプラスミドの量を１００％とし、それに対する各試料から抽出されたプラスミドの割合を細菌回収率とした。
【００４２】
Ａｂ−ｂｉｏｔｉｎ（＋）はビオチン標識した大腸菌認識抗体とストレプトアビジン固相化担体を用いて大腸菌懸濁液から大腸菌を回収した場合、Ａｂ−ｂｉｏｔｉｎ（−）はビオチン標識した大腸菌認識抗体を用いず、ストレプトアビジン固相化担体のみを用いて大腸菌懸濁液から大腸菌を回収した場合を示す。
【図２】図２に示すグラフは、ビオチン標識した大腸菌認識抗体とストレプトアビジン固相化担体を用いて０．５ｍｌの大腸菌懸濁牛乳溶液から大腸菌を回収した場合と、ビオチン標識した大腸菌認識抗体とストレプトアビジン固相化担体を用いないで５０μｌの大腸菌懸濁牛乳溶液から大腸菌を回収した場合の、各濃度の試料における回収した大腸菌数を示しており、大腸菌の検出下限界を見たものである。
【００４３】
●はビオチン標識した大腸菌認識抗体とストレプトアビジン固相化担体を用いて大腸菌を回収した場合を、△はビオチン標識した大腸菌認識抗体とストレプトアビジン固相化担体を用いないで大腸菌を回収した場合をそれぞれ示す。
【図１】
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【図２】
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【配列表】
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