(57)【要約】【課題】  食経験が豊富で安全性が高く、入手が容易で加工性にも優れ、現実的にヒトへの利用が可能な天然物素材に含まれる成分を有効成分とする、ＡＭＰＫ活性化剤の提供。【解決手段】  レスベラトロールを有効成分とするＡＭＰＫ活性化剤。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
レスベラトロールを有効成分とするＡＭＰＫ活性化剤。
【請求項２】
レスベラトロールを有効成分とする脂質代謝活性化剤。
【請求項３】
レスベラトロールを有効成分とする肥満抑制剤。
【請求項４】
レスベラトロールを有効成分とする糖尿病予防改善剤。
【請求項５】
レスベラトロールを有効成分とする肝臓肥大抑制剤。
【請求項６】
レスベラトロールを有効成分とする脂肪肝抑制剤。
【請求項７】
レスベラトロールを含有し、肥満及び/又は体脂肪蓄積及び/又は糖尿病及び/又は脂肪肝及び/又は生活習慣病の予防・改善作用を有することを特徴とし、そのために用いるものである旨の表示を付した飲食品。
【請求項８】
レスベラトロールを含有し、脂質代謝促進作用を有することを特徴とし、その旨の表示を付した飲食品。
【請求項９】
レスベラトロールを有効成分とする運動代替剤。
【請求項１０】
レスベラトロールを含有し、運動代替機能を有することを特徴とし、その旨の表示を付した飲食品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＡＭＰＫ（ＡＭＰ−ａｃｔｉｖａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｋｉｎａｓｅ）活性化剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
肥満は、摂取エネルギー量が消費エネルギー量を上回ることにより生じる。従って、肥満の予防・改善のためには摂取エネルギー量を減らす、すなわち食事量を減らすか、運動等を行うことにより消費エネルギー量を増やすことが基本となる。しかし、現代社会においては、食生活の欧米化により脂質摂取量が増えると同時に、自動車の普及等により運動量が減少しエネルギー消費量が低下している。その結果として肥満人口が増大し、それに伴って糖尿病等のいわゆる生活習慣病の増加が大きな社会問題となっている。運動はエネルギー代謝を促進することにより、肥満や糖尿病をはじめとする各種の生活習慣病の予防・改善に有効であることは広く認識されているが、実生活において日常的に運動を行うことは、なかなか容易なことではない。もし、運動以外の何らかの手段により、運動によりもたらされるのと同様な作用をもたらすことが出来れば、運動しなくとも運動したのと類似の効果を期待できる“運動代替手段”が可能になると考えられる。また、限られた運動であっても、その作用をより有効に引き出すことが可能になるとも考えられる。
これまで、肥満や糖尿病を予防・改善するために様々な取り組みがなされている。肥満に有効なものとして大豆エキス（特許文献１）、シアニジン  ３−グルコシド（特許文献２）、サトウキビポリフェノール（特許文献３）、Ｄ−システノール酸（特許文献４）、共役トリエン酸系油脂（特許文献５）等多くの化合物やエキス類が開示されている。しかしながら、これらは食経験に乏しく、作用機構、安全性の面からもその有用性は十分明確にはされていないのが実情である。また、運動の機能を代替できるような方法や食品素材、運動の作用をより高めるような方法・食品素材は、我々の知る限り殆ど知られていない。
【０００３】
一方、エネルギー代謝や肥満、糖尿病発症機構に関する研究が進み、ＡＭＰＫがきわめて重要な働きをしていることが明らかになってきた（非特許文献１）。ＡＭＰＫは細胞内ＡＴＰレベルが低下するような状況下において活性が上昇し、代謝を促進してＡＴＰ合成を促す“ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｓｅｎｓｏｒ”として機能している。運動時には筋肉が多くのエネルギーを必要とするが、運動時のエネルギー産生には、筋肉におけるＡＭＰＫの活性化が大きな役割を果たしていることが知られている。また、最近の研究によって、ＡＭＰＫはレプチン（非特許文献２）、アディポネクチンのような脂肪細胞由来ホルモン（
非特許文献３）、糖尿病治療薬であるメトフォルミン（非特許文献４）等によっても活性化され、それらによって惹起される脂肪酸酸化やグルコース利用促進作用の細胞内メディエーターであると考えられるようになってきた。例えば、ＡＭＰＫはアセチルＣｏＡカルボキシラーゼ（ＡＣＣ）への活性制御を通して、ミトコンドリアでの脂肪酸酸化に影響を及ぼすことが知られている。長鎖脂肪酸をミトコンドリア内に取り込むカルニチンパルミトイルトランスフェラーゼ（ＣＰＴ−１）は、ミトコンドリアにおける脂肪酸酸化の律速酵素であるとともに、ＡＣＣの産生物であるマロニルＣｏＡにより強い阻害を受ける。そのため、ＡＭＰＫはＡＣＣをリン酸化（Ｓｅｒ７９）することによってＡＣＣの活性を抑制し、マロニルＣｏＡ量を低下させる結果、ＣＰＴ−１の活性が亢進して脂肪酸酸化を促進すると考えられている。
【０００４】
このように、ＡＭＰＫは細胞内のエネルギー不足下において活性化するだけでなく、生体のエネルギー代謝又は栄養代謝に重要な作用を営んでいると考えられる。すなわち、ＡＭＰＫの活性化はエネルギー消費の促進、肥満や糖尿病、インスリン抵抗性、高脂血症の予防・改善に寄与すると考えられる。また、ＡＭＰＫの活性化剤は、運動と類似の有効性が期待できることから、“運動代替剤”として有効であると考えられる。
【０００５】
これまでにＡＭＰＫを活性化する化合物として、上記のレプチンやアディポネクチン、メトフォルミンの他、ＡＩＣＡＲ（５−アミノイミダゾール−４−カルボキサミド）が知られているが、食経験が豊富で安全性が高く、入手が容易で加工性にも優れ、現実的にヒトへの利用が可能な素材については現時点においては殆ど知られていない。
【特許文献１】特開２００３−２８６１８０号公報
【特許文献２】特開２００３−２５に７６６号公報
【特許文献３】特開２００３−１３７８０３号公報
【特許文献４】特開２００３−１０４８７９号公報
【特許文献５】特開２００２−１８６４２４号公報
【非特許文献１】Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．４，ｐｐ３９８−４０７、２００２
【非特許文献２】Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．４１５，ｐｐ３３９−３４３，２００２
【非特許文献３】Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．４２３，ＰＰ７６２−７６９，２００３
【非特許文献４】Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，Ｖｏｌ．１０８，ｐｐ１１６７−１１７４，２００１
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の目的は、食経験が豊富で安全性が高く、入手が容易で加工性にも優れ、現実的にヒトへの利用が可能な天然物素材に含まれる成分を有効成分とするＡＭＰＫ活性化剤を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、食経験が豊富な天然物素材の中から、ＡＭＰＫの活性化に有効な成分の探索を行い、葡萄やその加工品であるワイン等の摂取を通して長い食経験を有するレスベラトロールが、エネルギー代謝及び脂質代謝を促進して、肥満、糖尿病、高血糖、肝臓肥大、脂肪肝、高コレステロール血症、インスリン抵抗性、高脂血症の予防・改善に有効なＡＭＰＫ活性化作用を有することを見出した。
【０００８】
すなわち、本発明は、レスベラトロールを有効成分とするＡＭＰＫ活性化剤を提供するものである。
【発明の効果】
【０００９】
本発明のＡＭＰＫ活性化剤は、食経験が豊富であって安全性に優れ、肝細胞及び筋細胞におけるＡＭＰＫの活性化に優れ、脂質代謝や糖代謝等のエネルギー代謝の活性化を誘導し、肥満、糖尿病、高血糖、インスリン抵抗性、高コレステロール血症、肝臓肥大、脂肪肝の予防・改善に有効である。また、本発明のＡＭＰＫ活性化剤を用いれば、食品による運動代替効果が期待できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明でレスベラトロールとは、ｔｒａｎｓ−レスベラトロール、ｃｉｓ−レスベラトロール及びそれらの混合物の総称である。
レスベラトロールは葡萄の葉や果皮等に存在するポリフェノールの一種で、これまでにＬＤＬ酸化抑制作用、血小板凝集抑制作用、抗炎症作用、抗癌作用等が報告されている（「老化予防食品の開発」、シーエムシー、ｐ．１５６−１６８、１９９９）。また、レスベラトロールは、血栓予防剤（特開昭６１−１７１４２７号公報）、循環器系障害進展抑制用医薬品（特開２００３−３００９０４号公報）、高脂血症予防治療剤（特開２００１−７２５８３号公報）、骨疾患予防治療剤（特開２０００−２８１５６７号公報）等として有用であることが知られている。
【００１１】
レスベラトロールは、有機化学的又は微生物を用いて合成した高純度品の他、レスベラトロールを含有する天然物から抽出して用いることができ、その場合、抽出物を用いてもよく、又はその抽出物から単離したレスベラトロールを用いてもよい。天然物としては、レスベラトロールを含有するものであればよく、例えば、葡萄、落花生、ピーナッツ、及びイタドリやツルドクダミ等のタデ科植物が挙げられる。
【００１２】
天然物としては葡萄が特に好ましい。葡萄の種類は、特に限定されるものではないが、デラウエア、巨峰、甲州、ピオーネ、マスカット、シュナンブラン、グレナッシュ、マタロ、ミュラーテュルガウ、トレッビアーノ、ベリーＡ、カベルネソービニオン、メルロー、ピノノアール、カベルネフラン、シラー、シャルドネ、ソービニヨンブラン、セミヨン、シラー、ガメイ、リースリング、アリゴテ等が好ましい。葡萄抽出物とは、葡萄果実、葡萄葉又は葡萄に由来する物からの抽出物を指す。葡萄に由来する物としては、ブドウジュース、ワイン、ワイン製造時の残渣、ワイン濃縮物等をいう。抽出は、例えば、レスベラトロールは葡萄の果皮や葉に多く含まれているので、それらから水や熱水、アルコール水、有機溶剤等を用いた一般的な抽出方法で行う。また、ワイン、ワインの濃縮物又は濃縮乾固した固形物中にも含まれているので、それらを用いることもできる。また、ワイン製造時に発生する葡萄の残渣をそのまま用いるか、それから有機溶剤／水等により抽出することもできる。有機溶剤としてはエタノール等のアルコールが好ましく、特にエタノールが好ましい。
【００１３】
本発明のＡＭＰＫ活性化剤は、医薬品としてヒト及び動物に投与することができる他、各種飲食品、ペットフード等に配合して摂取させることができる。飲食品とする場合には、一般の飲食品の他、肥満、体脂肪蓄積、糖尿病、脂肪肝、生活習慣病、脂質代謝促進、高血糖、インスリン抵抗性、高コレステロール血症の予防・改善等の生理機能をコンセプトとし、その旨表示した機能性飲食品、疾病者用食品、特定保健用食品に応用できる。また、本発明のＡＭＰＫ活性化剤は、ＡＭＰＫを活性化し、かつ前記の運動不足が原因の一つとなっている種々の症状を改善することから、運動と類似の効果をもたらす運動代替剤として有用である。医薬品としては、例えば、錠剤、顆粒剤等の経口用固形製剤や、内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤とすることができる。また医薬品としては、脂質代謝活性化剤、肥満抑制剤、糖尿病予防改善剤、肝臓肥大抑制剤、脂肪肝抑制剤、生活習慣病予防改善剤等として有用である。
【００１４】
これらのものに対するレスベラトロールの配合量は、その使用形態により異なるが、飲食品やペットフード等とする場合は、通常０．０００１〜５質量％、更に０．００１〜５質量％、特に０．０１〜１質量％とするのが好ましい。上記以外の医薬品、例えば錠剤、顆粒剤、カプセル剤等の経口用固形製剤、内服液剤、シロップ剤等の経口用液体製剤等の場合は、通常０．０１〜９５質量％、更に５〜９５質量％、特に２０〜９０質量％とするのが好ましい。
【００１５】
本発明のＡＭＰＫ活性化剤の投与量（有効摂取量）は、一日当り５〜２０００ｍｇ／６０ｋｇ体重とするのが好ましく、特に１０〜１０００ｍｇ／６０ｋｇ体重、更に５０〜５００ｍｇ／６０ｋｇ体重とするのが好ましい。
【実施例】
【００１６】
実施例１
レスベラトロールのＡＭＰＫ活性化作用は、マウス肝細胞株（Ｈｅｐａ １−６）を用い、ＡＭＰＫα及びβのリン酸化を指標として、次法により評価した。
【００１７】
マウス肝細胞株（Ｈｅｐａ １−６）を２５ｃｍ2フラスコにまき、ＤＭＥＭ（＋１０％ＦＢＳ、＋抗菌剤）中３７℃で１〜２日培養した。サブコンフルエントになった時点で培養液を除去し、ＰＢＳ（−）で洗浄後、ＤＭＥＭ（−ＦＢＳ）に置き換え更に１日培養した。培養液を除去後、所定濃度のレスベラトロールを含むＤＭＥＭ（−ＦＢＳ）を加え、６０分間培養した。その後、培養液を除去、ＰＢＳ（−）で洗浄後、細胞溶解液（１０ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）、５０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム、３０ｍｍｏｌ／Ｌピロリン酸ナトリウム、０．５質量％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、ｐｒｏｔｅａｓｅｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｃｏｃｋｔａｉｌ（ＳＩＧＭＡ  Ｐ２７１４）、ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｃｏｃｋｔａｉｌ−２（ＳＩＧＭＡ  Ｐ５７２６））を２００μＬ添加し、セルスクレイパーで細胞溶解液を回収した。回収した細胞溶解液は、２３Ｇの針付シリンジを３回通すことにより良くホモジナイズし、その後３０分間氷上に放置した。１５０００ｒ／ｍｉｎで１５分間、４℃で遠心した後、その上清蛋白を以下の測定に用いた。
【００１８】
上清蛋白質の濃度を測定後、サンプル間の蛋白濃度を一定に調整した。その四分の一量のＳＤＳバッファー（２５０ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ、１２．５質量％ＳＤＳ、２０質量％グリセリン）を加えた後、更に２−メルカプトエタノール及びブロモフェノールブルーを加え、９５℃で熱変性、４℃で急冷し、電気泳動用のサンプルを調製した。
【００１９】
上記泳動用サンプルを、一定量（約２０〜４０μｇ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥ（１２％ゲル）に供し、膜へ転写後、ａｎｔｉ−ｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＭＰＫα（Ｔｈｒ７２）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製）又はａｎｔｉ−ｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＭＰＫβ（Ｓｅｒ１０８）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製）を一次抗体、ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ−ＨＲＰ抗体（アマシャム社製）を二次抗体、ｐｈｏｔｏｔｏｐｅ−ＨＲＰ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ （Ｃｅｌｌ Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製）を検出試薬として用いて、ｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＭＰＫを検出した。ＡＭＰＫ活性化の度合いは、検出されたバンドの強度を画像解析（ＥＤＡＳ  ２９０画像解析システム：ＫＯＤＡＫ）により数値（ピクセル）化し、コントロール（サンプル無添加群）を１００とし、それに対する相対値として示した。なお、レスベラトロール（３，４’，５−トリヒドロキシ−ｔｒａｎｓ−スチルベン）はＳＩＧＭＡ社製のものを用いた。
【００２０】
【表１】
2006273834.tif 000002
【００２１】
表１からレスベラトロールは、強いＡＭＰＫ活性化作用を有することがわかる。
【００２２】
実施例２
レスベラトロールのＡＭＰＫ活性化作用を、マウス筋細胞株(Ｃ２Ｃ１２)を用い、ＡＭＰＫα及びβのリン酸化を指標として、次法により評価した。
【００２３】
マウス筋細胞株（Ｃ２Ｃ１２）を２５ｃｍ2フラスコにまき、ＤＭＥＭ（＋１０％ＦＢＳ、＋抗菌剤）中３７℃で１〜２日培養した。コンフルエントになった時点で培養液を除去し、ＰＢＳ（−）で洗浄後、ＤＭＥＭ（２質量％Ｈｏｒｓｅ  ｓｅｒｕｍ）に置き換え、２〜３日毎に培養液を交換しながら更に７〜８日培養した。その後培養液を除去し、ＰＢＳ（−）で洗浄後、ＤＭＥＭ（−ＦＢＳ）に置き換え、更に１日培養した。培養液を除去後、所定濃度のレスベラトロールを含むＤＭＥＭ（−ＦＢＳ）を加え、６０分間培養した。次いで培養液を除去、ＰＢＳ（−）で洗浄後、細胞溶解液（１０ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．４）、５０ｍｍｏｌ／Ｌ塩化ナトリウム、３０ｍｍｏｌ／Ｌピロリン酸ナトリウム、０．５質量％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００、ｐｒｏｔｅａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｃｏｃｋｔａｉｌ（ＳＩＧＭＡ  Ｐ２７１４）、ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｃｏｃｋｔａｉｌ−１（ＳＩＧＭＡ Ｐ２８５０）、ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｃｏｃｋｔａｉｌ−２（ＳＩＧＭＡ  Ｐ５７２６））を２００μＬ添加し、セルスクレイパーで細胞溶解液を回収した。回収した細胞溶解液は、２３Ｇの針付シリンジを３回通すことにより良くホモジナイズし、その後３０分間氷上に放置した。１５０００ｒ／ｍｉｎで１５分間、４℃で遠心した後、その上清蛋白を以下の測定に用いた。
【００２４】
上清蛋白質の濃度を測定後、サンプル間の蛋白濃度を一定に調整した。その四分の一量のＳＤＳバッファー（２５０ｍｍｏｌ／Ｌ  Ｔｒｉｓ、１２．５質量％ＳＤＳ、２０質量％グリセリン）を加えた後、更に２−メルカプトエタノール及びブロモフェノールブルーを加え、９５℃で熱変性、４℃で急冷し、電気泳動用のサンプルを調製した。
【００２５】
上記泳動用サンプルを、一定量（約２０〜４０μｇ）をＳＤＳ−ＰＡＧＥ（１２％ゲル）に供し、膜へ転写後、ａｎｔｉ−ｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＭＰＫα（Ｔｈｒ７２）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製）又はａｎｔｉ−ｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＭＰＫβ（Ｓｅｒ１０８）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製）を一次抗体、ａｎｔｉ−ｒａｂｂｉｔ−ＨＲＰ抗体（アマシャム社製）を二次抗体、ｐｈｏｔｏｔｏｐｅ−ＨＲＰ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製）を検出試薬として用いて、ｐｈｏｓｐｈｏ−ＡＭＰＫを検出した。ＡＭＰＫ活性化の度合いは、検出されたバンドの強度を画像解析（ＥＤＡＳ２９０画像解析システム：ＫＯＤＡＫ）により数値（ピクセル）化し、コントロール（サンプル無添加群）を１００とし、それに対する相対値として示した。尚、レスベラトロールはＳＩＧＭＡ社製の物を用いた。
【００２６】
【表２】
2006273834.tif 000003
【００２７】
表２からレスベラトロールは、筋細胞において強いＡＭＰＫ活性化作用を有することがわかる。
【００２８】
実施例３
レスベラトロールの有効性は以下のように評価した。
７週齢のＣ５７ＢＬ／６系雄性マウス（日本クレア）を各群１０〜１５匹ずつ３群に分け、表３記載の組成の各食餌で飼育した。試験開始２４週後に体重を測定するとともに麻酔下、非絶食条件下で採血を行い、血漿グルコース、コレステロール、インスリン、レプチン値を測定した。また、内臓脂肪重量（副睾丸脂肪、後腹膜脂肪及び腎周囲脂肪）、肝臓重量を測定した。尚、レスベラトロールはCayman社製のものを用いた。
【００２９】
【表３】
2006273834.tif 000004
【００３０】
結果を表４に示す。第２群では第１群に比較し、有意な体重の増加（P<0.001）が認められたのに対して、第３群においては第１群に対して体重の増加は少なく、また第２群に対して体重は有意に低値（P<0.001）を示した。内臓脂肪量も、第２群では第１群に比較し有意に多く（P<0.001）、また第２群に対して第３群においては内臓脂肪重量は有意に低値（P<0.01）を示した。これらの結果より、本発明のレスベラトロールは優れた抗肥満効果、体脂肪蓄積抑制効果を有することが明らかとなった。
肝臓重量に関しては、第２群では第１群に比較し有意（P<0.01）な増加が認められたのに対して、第３群においては第１群に対して重量の増加は少なく、また第２群に対して重量は有意に低値（P<0.05）を示した。本結果より、本発明のレスベラトロールは優れた肝臓肥大抑制効果を有することが明らかとなった。また、レスベラトロールは高脂肪食摂取による肝臓肥大を抑制したことから、肥満に伴う脂肪肝の抑制に有効であると考えられた。
【００３１】
【表４】
2006273834.tif 000005
【００３２】
表５に血液分析の結果を示す。第２群では第１群に比較し、有意（P<0.001）な血糖値（グルコース）の上昇が認められた。また、第３群においては第２群に対して血糖値は低値を示した（P<0.1）。本発明のレスベラトロールは、血糖値上昇抑制効果に優れ、更に糖尿病に有効であると考えられた。
総コレステロールは、第１群に比較し第２群では有意（P<0.05）に高値を示した。一方、第３群ではコレステロール値の上昇は認められず、第２群と比較し、有意（P<0.05）に低値を示した。従って、レスベラトロールは優れたコレステロール抑制作用を有することが明らかとなった。
第２群では第１群に比較し、血中インスリンは高値を示したのに対して、第３群においては第１群に対してのインスリン値の上昇は少なく、また第２群に対してインスリン値は低値を示した。本発明のレスベラトロールは、血中インスリン値上昇抑制に優れ、更にインスリン抵抗性の抑制に有効であると考えられた。
第２群では第１群に比較し、血中レプチンは有意に高値を示した（P<0.01）のに対して、第３群においては第１群に対してのレプチン値の上昇は少なく、また第２群に対してレプチン値は有意に低値を示した（P<0.01）。本発明のレスベラトロールは、血中レプチン値上昇抑制に優れ、更にレプチン抵抗性の抑制に有効であると考えられた。
【００３３】
【表５】
2006273834.tif 000006
【００３４】
実施例４：脂質代謝活性化効果
７週齢のBalb/c系雄性マウスを２群に分け、生理食塩水（コントロール）又は２００ｍｇ/ｋｇ体重となるようレスベラトロールを１０日間、連続して経口投与した。その後、肝臓及び骨格筋（腓腹筋+ひらめ筋）を採取した。肝臓及び骨格筋はそれぞれ緩衝液（250 mM sucrose, 1 mM EDTA in10 mM HEPES (pH 7.2)）中でホモジナイズし、不溶性の組織残渣を遠心分離し上清を得た。得られた上清について蛋白量の測定を行い、各サンプル間の蛋白量を一定に合わせ、脂質代謝活性（β酸化活性）の測定に用いた。１００μgの上清タンパク質を、終容量２００μｌの緩衝液（50 mM Tris-HCl (pH 8.0), 40 mM NaCl, 2 mM KCl, 2 mM MgCl2, 1 mM DTT, 5 mM ATP, 0.2 mM L-carnitine, 0.2 mM NAD, 0.06 mM FAD, 0.12 mM CoA, 3 mM α−cyclodextrin）中、0.1 μCi [14C]−パルミチン酸と３７℃で２０分間反応させた。２００μｌの0.6 N perchloric acidで反応を停止後、１ｍＬのヘキサンで３回、未反応の[14C]−パルミチン酸を除去し、水層の放射活性を測定することにより、脂質分解活性を評価した。
測定結果を表６に示す。コントロールの脂質分解活性を１００とし、その相対値で表示した。レスベラトロールを摂取することにより、肝臓及び骨格筋の脂質分解活性（β酸化活性）が顕著に増加した（肝臓：ｐ＜0.001、筋肉：ｐ＜0.001）。従って、レスベラトロールは脂質代謝の活性化に有効であることが明らかとなった。
以上の結果から、本発明のレスベラトロールはＡＭＰＫ活性化作用を有し、脂質代謝等のエネルギー代謝の活性化を誘導し、肥満、糖尿病、高血糖、インスリン抵抗性、高コレステロール血症、肝臓肥大、脂肪肝の予防・改善に有効である。また、ＡＭＰＫ活性化作用を介して前記運動不足が原因の一つとなっている種々の症状を改善することから、運動と類似の効果をもたらす運動代替剤として有用であることが明らかとなった。
【００３５】
【表６】
2006273834.tif 000007
【００３６】
下記に本発明の代表的実施例を示すが、本発明はこれらに限られるものではない。
【００３７】
実施例５
生活習慣病予防・改善用カプセル剤
カプセル化剤中に下記組成物（３００ｍｇ）を封入した。
レスベラトロール          ６８質量％
コーンスターチ            １０
セルロース                １０
トコフェロール              ２
乳糖                      １０
【００３８】
実施例６
生活習慣病予防・改善用錠剤
下記組成物（１錠＝２５０ｍｇ）を打錠し、錠剤を製造した。
葡萄抽出物                ５０質量％
コーンスターチ            １０
セルロース                １０
ビタミンＣ                ２０
乳糖                      １０
【００３９】
実施例７
生活習慣病予防・改善用錠剤
下記組成物（１錠＝２５０ｍｇ）を打錠し、錠剤を製造した。
レスベラトロール          ５０質量％
コーンスターチ            １０
セルロース                １０
ビタミンＣ                ２０
乳糖                      １０
【００４０】
実施例８
生活習慣病予防・改善用顆粒剤
下記組成物（１袋＝５００ｍｇ）を混合し顆粒剤を製造した。
レスベラトロール          ２５質量％
葡萄乾燥粉末              ２０
果糖                      ２０
ブドウ糖                  ２０
脱脂粉乳                  １０
カフェイン                  ５
【００４１】
実施例９
肥満・生活習慣病予防・改善用飲料
下記組成物を混合し、果汁飲料を製造した。
レスベラトロール          １００ｍｇ
葡萄果汁                  ５００ｍＬ
【００４２】
実施例１０
生活習慣病予防・改善用飲料
下記組成物を混合し、果汁飲料を製造した。
レスベラトロール            ５０ｍｇ
ビタミンＣ                ３００ｍｇ
オレンジ果汁              ３００ｍＬ
水                        ２００ｍＬ
香料                      若干量
異性化糖                      ５ｇ
【００４３】
実施例１１
肥満・生活習慣病予防・改善用飲料
下記組成物を混合し、果汁飲料を製造した。
葡萄葉乾燥粉末            ３００ｍｇ
レスベラトロール            １５ｍｇ
ビタミンＣ                ３００ｍｇ
葡萄果汁                  ３００ｍＬ
水                        ２００ｍＬ
香料                      若干量
ブドウ糖                      ２ｇ
【００４４】
実施例１２
肥満・生活習慣病予防・改善用飲料
下記組成物を混合し、茶飲料を製造した。
レスベラトロール            ２０ｍｇ
茶カテキン                ２００ｍｇ
ビタミンＣ                ２００ｍｇ
緑茶                      ５００ｍＬ
【００４５】
実施例１３
肥満・生活習慣病予防・改善用飲料
下記組成物を混合し、果汁飲料を製造した。
赤ワイン濃縮乾燥粉末    ２０００ｍｇ
葡萄果汁                  ２５０ｍＬ
水                        ２５０ｍＬ
香料                      若干量
【００４６】
実施例１４
生活習慣病予防・改善用飲料
下記組成物を混合し、果汁飲料を製造した。
レスベラトロール            １０ｍｇ
ビタミンＣ                ５００ｍｇ
グレープフルーツ果汁        ２５ｍＬ
水                        ４７０ｍＬ
香料                      若干量
異性化糖                      ５ｇ
【００４７】
実施例１５
運動代替機能性飲料
下記組成の炭酸飲料を製造した。
レスベラトロール            １５ｍｇ
ビタミンＣ                ５００ｍｇ
炭酸水                    ４９５ｍＬ
レモン果汁                    ５ｍＬ
香料                          若干量
アスパルテーム                  ５ｇ
【００４８】
実施例１６
運動代替機能性飲料
下記組成の炭酸飲料を製造した。
レスベラトロール            １００ｍｇ
ビタミンＣ                  ５００ｍｇ
炭酸水                      ５００ｍＬ
レモン果汁                      ５ｍＬ
香料                          若干量
アスパルテーム                  ５ｇ
【００４９】
実施例１７
運動代替機能性食品
下記組成物（１錠＝１０００ｍｇ）を打錠し、チュアブルタイプのタブレット食品を製造した。
レスベラトロール            ２.５質量％
麦芽糖                    １１
乳糖                      ３０
ブドウ糖                  １５
ビタミンＣ                ２０
ビタミンＥ                  １
セルロース                １０
キシリトール              １０
香料                        ０．５
【手続補正書】
【提出日】平成17年6月20日(2005.6.20)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００３５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００３５】
【表６】
2006273834.tif 000008
【手続補正書】
【提出日】平成17年6月21日(2005.6.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】０００５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【０００５】
これまでにＡＭＰＫを活性化する化合物として、上記のレプチンやアディポネクチン、メトフォルミンの他、ＡＩＣＡＲ（５−アミノイミダゾール−４−カルボキサミド）が知られているが、食経験が豊富で安全性が高く、入手が容易で加工性にも優れ、現実的にヒトへの利用が可能な素材については現時点においては殆ど知られていない。
【特許文献１】特開２００３−２８６１８０号公報
【特許文献２】特開２００３−２５２７６６号公報
【特許文献３】特開２００３−１３７８０３号公報
【特許文献４】特開２００３−１０４８７９号公報
【特許文献５】特開２００２−１８６４２４号公報
【非特許文献１】Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｖｏｌ．３９，Ｎｏ．４，ｐｐ３９８−４０７、２００２
【非特許文献２】Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．４１５，ｐｐ３３９−３４３，２００２
【非特許文献３】Ｎａｔｕｒｅ，Ｖｏｌ．４２３，ｐｐ７６２−７６９，２００３
【非特許文献４】Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，Ｖｏｌ．１０８，ｐｐ１１６７−１１７４，２００１