(57)【要約】【課題】生物学的に活性な薬剤を広範囲に移送可能であり、容易に調製される簡便で高価ではない移送システムを提供すること。【解決手段】本発明は、経口薬剤移送システムに関し、特に、生物学的活性ペプチド類等の感受性薬剤用移送システムとして使用される修飾アミノ酸類および修飾アミノ酸誘導体に関する。修飾アミノ酸類および修飾アミノ酸誘導体は、生物学的活性剤類との非共有混合物を形成可能であり、別の実施態様においては、活性剤を放出的に運搬可能なものである。修飾アミノ酸類はまた、微球体を含有する薬剤を形成可能である。該混合物は、動物に対して生物学的活性剤を経口投与するのに適している。該組成物の調製方法および投与方法も開示されている。【選択図】図１
2006273875.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（A）少なくとも１つの生物学的活性剤と；
（B）式： 
Ar−Ｙ−（Ｒ1）n−OH 
［式中、Arは、置換または無置換フェニルまたはナフチルであり；
Ｙは、−CO−または−SO2−であり；
Ｒ1は、−Ｎ（Ｒ4）−Ｒ3−CO−であり；
ここで、Ｒ3は、Ｃ1からＣ24アルキル、Ｃ1からＣ24アルケニル、フェニル、ナフチル、（Ｃ1からＣ10アルキル）フェニル、（Ｃ1からＣ10アルケニル）フェニル、（Ｃ1からＣ10アルキル）ナフチル、（Ｃ1からＣ10アルケニル）ナフチル、フェニル（Ｃ1からＣ10アルキル）、フェニル（Ｃ1からＣ10アルケニル）、ナフチル（Ｃ1からＣ10アルキル）、および、ナフチル（Ｃ1からＣ10アルケニル）であり；
Ｒ3は、任意に、Ｃ1からＣ4アルキル、Ｃ1からＣ4アルケニル、Ｃ1からＣ4アルコキシ、−OH、−SH、−CO2Ｒ5、シクロアルキル、シクロアルケニル、複素環、アリール、アルカリール、ヘテロアリール、または、ヘテロアルカリール、または、これらの組み合わせにより置換され；
Ｒ5は、水素、Ｃ1からＣ4アルキル、または、Ｃ1からＣ4アルケニルであり；
Ｒ3には、任意に、酸素、窒素、イオウ、またはこれらの組みあわせが介在していてもよく；
Ｒ4は、水素、Ｃ1からＣ4アルキル、または、Ｃ1からＣ4アルケニルであり；
nは、１から５である］を有する化合物
を含有する経口組成物。
【請求項２】
Arが置換または無置換フェニルであり、Ｙが−CO−であり、Ｒ3が、Ｃ1からＣ24アルキル、（Ｃ1からＣ10アルキル）フェニル、フェニル（Ｃ1からＣ10アルキル）であり、且つ、nが１である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記生物学的活性剤が、製薬的又は治療用薬剤である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記生物学的活性剤が、ペプチド、多糖、ムコ多糖、炭水化物、脂質、殺虫剤、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記生物学的活性剤が、ヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン、成長ホルモン−放出ホルモン、インターフェロン、インターロイキン−I、インターロイキン−II、インスリン、ヘパリン、低分子量ヘパリン、カルシトニン、エリスロポイエチン、心房性ナチュレティック（naturetic）因子、抗原、モノクローナル抗体、ソマトスタチン、アドレノコルチコトロピン、ゴナドトロピン放出ホルモン、オキシトシン、バソプレッシン、ナトリウムクロモリン、バンコマイシン、デスフェリオキサミン、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記生物学的活性剤が、インターフェロン、インスリン、成長ホルモン、ヘパリン、カルシトニン、ナトリウムクロモリンを含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項７】
前記生物学的活性剤が、カルシトニンである、請求項４に記載の組成物。
【請求項８】
前記生物学的活性剤が、成長ホルモンである、請求項４に記載の組成物。
【請求項９】
前記生物学的活性剤が、インターフェロンである、請求項４に記載の組成物。
【請求項１０】
前記生物学的活性剤が、ナトリウムクロモリンである、請求項４に記載の組成物。
【請求項１１】
（A）少なくとも１つの生物学的活性剤と；
（B）（i）アミノ酸の少なくとも１つのアシル化アルデヒド、 
（ii）アミノ酸の少なくとも１つのアシル化ケトン、 
（iii）ペプチドの少なくとも１つのアシル化アルデヒド、 
（iv）ペプチドの少なくとも１つのアシル化ケトン、又は、
（v）それらのあらゆる組み合わせ
を含む少なくとも１つのキャリア
を含有する経口組成物。
【請求項１２】
前記アミノ酸が、天然アミノ酸である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記アミノ酸が、合成アミノ酸である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１４】
前記アミノ酸が、α−アミノ酸である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１５】
前記アミノ酸が、非α−アミノ酸である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記生物学的活性剤が、製薬的又は治療用薬剤である、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１７】
前記生物学的活性剤が、ペプチド、多糖、ムコ多糖、炭水化物、脂質、殺虫剤、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１８】
前記生物学的活性剤が、ヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン、成長ホルモン−放出ホルモン、インターフェロン、インターロイキン−I、インターロイキン−II、インスリン、ヘパリン、低分子量ヘパリン、カルシトニン、エリスロポイエチン、心房性ナチュレティック（naturetic）因子、抗原、モノクローナル抗体、ソマトスタチン、アドレノコルチコトロピン、ゴナドトロピン放出ホルモン、オキシトシン、バソプレッシン、ナトリウムクロモリン、バンコマイシン、デスフェリオキサミン、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１９】
前記アシル化アルデヒドまたはアシル化ケトンが、式：Ｒ9−Ｃ−Ｘ［式中、Ｒ9は芳香族であり、Ｘは脱離基である］を有するアシル化剤によってアシル化される、請求項１１に記載の組成物。
【請求項２０】
（A）請求項１に記載の組成物；および 
（B）（a）賦形剤、 
（b）希釈剤、 
（c）崩壊剤、 
（d）潤滑剤、
（e）可塑剤、
（f）着色剤、 
（g）投与ビヒクル、または 
（h）これらのあらゆる組み合わせ 
を含有する、投与単位。
【請求項２１】
錠剤、カプセル、または液剤を含む、請求項２０に記載の投与単位。
【請求項２２】
（A）請求項１１に記載の組成物；および 
（B）（a）賦形剤、 
（b）希釈剤、 
（c）崩壊剤、 
（d）潤滑剤、
（e）可塑剤、
（f）着色剤、 
（g）投与ビヒクル、または 
（h）これらのあらゆる組み合わせ 
を含む、投与単位。
【請求項２３】
生物学的活性剤を含む経口組成物の製造における、式： 
Ar−Ｙ−（Ｒ1）n−OH 
［式中、Arは、置換または無置換フェニルまたはナフチルであり；
Ｙは、−CO−または−SO2−であり；
Ｒ1は、−Ｎ（Ｒ4）−Ｒ3−CO−であり；
ここで、Ｒ3は、Ｃ1からＣ24アルキル、Ｃ1からＣ24アルケニル、フェニル、ナフチル、（Ｃ1からＣ10アルキル）フェニル、（Ｃ1からＣ10アルケニル）フェニル、（Ｃ1からＣ10アルキル）ナフチル、（Ｃ1からＣ10アルケニル）ナフチル、フェニル（Ｃ1からＣ10アルキル）、フェニル（Ｃ1からＣ10アルケニル）、ナフチル（Ｃ1からＣ10アルキル）、および、ナフチル（Ｃ1からＣ10アルケニル）であり；
Ｒ3は、任意に、Ｃ1からＣ4アルキル、Ｃ1からＣ4アルケニル、Ｃ1からＣ4アルコキシ、−OH、−SH、−CO2Ｒ5、シクロアルキル、シクロアルケニル、複素環、アリール、アルカリール、ヘテロアリール、または、ヘテロアルカリール、または、これらの組み合わせにより置換され；
Ｒ5は、水素、Ｃ1からＣ4アルキル、または、Ｃ1からＣ4アルケニルであり；
Ｒ3には、任意に、酸素、窒素、イオウ、またはこれらの組みあわせが介在していてもよく；
Ｒ4は、水素、Ｃ1からＣ4アルキル、または、Ｃ1からＣ4アルケニルであり；
nは、１から５である］を有する化合物の使用。
【請求項２４】
生物学的活性剤を含む経口組成物の製造における、
（i）アミノ酸の少なくとも１つのアシル化アルデヒド、 
（ii）アミノ酸の少なくとも１つのアシル化ケトン、 
（iii）ペプチドの少なくとも１つのアシル化アルデヒド、 
（iv）ペプチドの少なくとも１つのアシル化ケトン、又は、
（v）それらのあらゆる組み合わせ
を含む少なくとも１つのキャリアの使用。
【請求項２５】
（A）少なくとも１つの生物学的活性剤と；
（B）式： 
Ar−Ｙ−（Ｒ1）n−OH 
［式中、Arは、置換または無置換フェニルまたはナフチルであり；
Ｙは、−CO−または−SO2−であり；
Ｒ1は、−Ｎ（Ｒ4）−Ｒ3−CO−であり；
ここで、Ｒ3は、Ｃ1からＣ24アルキル、Ｃ1からＣ24アルケニル、フェニル、ナフチル、（Ｃ1からＣ10アルキル）フェニル、（Ｃ1からＣ10アルケニル）フェニル、（Ｃ1からＣ10アルキル）ナフチル、（Ｃ1からＣ10アルケニル）ナフチル、フェニル（Ｃ1からＣ10アルキル）、フェニル（Ｃ1からＣ10アルケニル）、ナフチル（Ｃ1からＣ10アルキル）、および、ナフチル（Ｃ1からＣ10アルケニル）であり；
Ｒ3は、任意に、Ｃ1からＣ4アルキル、Ｃ1からＣ4アルケニル、Ｃ1からＣ4アルコキシ、−OH、−SH、−CO2Ｒ5、シクロアルキル、シクロアルケニル、複素環、アリール、アルカリール、ヘテロアリール、または、ヘテロアルカリール、または、これらの組み合わせにより置換され；
Ｒ5は、水素、Ｃ1からＣ4アルキル、または、Ｃ1からＣ4アルケニルであり；
Ｒ3には、任意に、酸素、窒素、イオウ、またはこれらの組みあわせが介在していてもよく；
Ｒ4は、水素、Ｃ1からＣ4アルキル、または、Ｃ1からＣ4アルケニルであり；
nは、１から５である］を有する化合物
を混合することを含む、経口組成物の調製方法。
【請求項２６】
（A）少なくとも１つの生物学的活性剤と；
（B）（i）アミノ酸の少なくとも１つのアシル化アルデヒド、 
（ii）アミノ酸の少なくとも１つのアシル化ケトン、 
（iii）ペプチドの少なくとも１つのアシル化アルデヒド、 
（iv）ペプチドの少なくとも１つのアシル化ケトン、又は、
（v）それらのあらゆる組み合わせ
を含む少なくとも１つのキャリア
を混合することを含む、経口組成物の調製方法。
【請求項２７】
活性剤と、アミノ酸アミドを含む１つ以上の修飾アミノ酸とを含む、組成物。
【請求項２８】
前記アミノ酸アミドがベンゼンアミドを含む、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記生物学的活性剤が、ヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン、成長ホルモン−放出ホルモン、インターフェロン、インターロイキン−I、インターロイキン−II、インスリン、ヘパリン、低分子量ヘパリン、カルシトニン、エリスロポイエチン、心房性ナチュレティック（naturetic）因子、抗原、モノクローナル抗体、ソマトスタチン、アドレノコルチコトロピン、ゴナドトロピン放出ホルモン、オキシトシン、バソプレッシン、ナトリウムクロモリン、バンコマイシン、デスフェリオキサミン、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項２７に記載の組成物。
【請求項３０】
（A）少なくとも１つの生物学的活性剤；及び、
（B）請求項２７の組成物
を混合することを含む、組成物の調製方法。
【請求項３１】
Ｎ−シクロヘキサノイルフェニルアラニンアルデヒド化合物。
【請求項３２】
（A）少なくとも１つの生物学的活性剤；及び、
（B）請求項３１の化合物
を含む組成物。
【請求項３３】
前記生物学的活性剤が、ペプチド、多糖、ムコ多糖、炭水化物、脂質、殺虫剤、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３４】
前記生物学的活性剤が、ヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン、成長ホルモン−放出ホルモン、インターフェロン、インターロイキン−I、インターロイキン−II、インスリン、ヘパリン、低分子量ヘパリン、カルシトニン、エリスロポイエチン、心房性ナチュレティック（naturetic）因子、抗原、モノクローナル抗体、ソマトスタチン、アドレノコルチコトロピン、ゴナドトロピン放出ホルモン、オキシトシン、バソプレッシン、ナトリウムクロモリン、バンコマイシン、デスフェリオキサミン、またはこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項３２に記載の組成物。
【請求項３５】
（A）請求項３２に記載の組成物；および 
（B）（a）賦形剤、 
（b）希釈剤、 
（c）崩壊剤、 
（d）潤滑剤、
（e）可塑剤、
（f）着色剤、 
（g）投与ビヒクル、または 
（h）これらのあらゆる組み合わせ 
を含有する、投与単位。
【請求項３６】
生物学的活性剤を含有する組成物の製造における、Ｎ−シクロヘキサノイルフェニルアラニンアルデヒド化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
経口薬剤移送組成物およびその方法 発明の分野 本発明は、経口薬剤移送に適した組成物に関し、特に、修飾アミノ酸類および修飾アミノ酸誘導体を生物学的活性ペプチド類等の感受性薬剤用キャリアとして使用する組成物に関する。修飾アミノ酸類またはその誘導体は、動物に対しての経口投与に適した生物学的活性剤類との非共有混合物を形成可能である。該組成物の調製方法および投与方法も開示されている。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景 生物学的薬剤、たとえばこれらに限定されるわけではないが、薬理学的薬剤および治療薬剤を動物に移送する従来の手段は、体による化学的バリアおよび物理的バリアのために、きびしく制限されることがある。胃腸管（GI）における過度なpH変化、強力な消化酵素、および、活性剤が胃腸管に浸透しないことなどの化学的及び物理的バリアがなければ、多くの生物学的活性剤の経口移送は、種々のルートで行われる。経口投与に典型的に適するわけではない薬剤としては、カルシトニンおよびインスリンなどの生物学的に活性なペプチドがあげられる。該物理化学バリアにより影響される他の化合物の例としては、多糖類、特にムコ多糖類があげられ、たとえばこれらに限定されるわけではないが、ヘパリン；ヘパリノイド類；抗生物質類；および他の有機物質類が挙げられる。該薬剤は、酸加水分解、酵素などにより胃腸管において直ちに破壊される。
【０００３】
破壊されやすい薬剤を経口投与する従来の方法は、人工的に腸壁の浸透性を向上させるために、添加物（たとえば、レゾルシノール類および非イオン界面活性剤、たとえばポリオキシエチレンオレイルエーテルおよびn−ヘキサデシルポリエチレンエーテルなど）と共に投与すること、および、酵素分解を抑制するために、酵素抑制剤（たとえば、膵臓トリプシン抑制剤、ジイソプロピルフルオロホスファート（DFF）およびトラシロール）を共に投与することに依存していた。リポソームはまた、インスリン及びヘパリン用の薬剤移送システムとしても開示されている。たとえば、文献（米国特許４，２３９，７５４；Patel et al．（１９７６）FEBS Letters Vol．６２，p．６０；およびHashimoto et al．Endocrinol．Japan，Vol．２６，P．３３７）参照。しかしながら、前記薬剤移送システムを広範囲に使用することは、以下の理由から妨げられる：（１）添加物または抑制剤を毒性量使用する必要がある；（２）適当な低ＭＷ被移送体（cargo）の欠如；（３）システムの寿命および安定性が乏しく、保存性が適当でない；（４）システム調製の困難性；（５）活性成分を保護するためのシステムがない；および（６）活性剤の吸収促進用システムがない。
【０００４】
近年、混合アミノ酸類のプロテイノイド類または人工ポリマー類の微球体が、薬剤移送用として開示されている。たとえば、米国特許４，９２５，６７３は、微球体構造を有する薬剤およびその調製及び使用方法を開示する。該プロテイノイド微球体は、多くの活性剤を移送するのに有用である。
【特許文献１】米国特許４，２３９，７５４
【特許文献２】米国特許４，９２５，６７３
【非特許文献１】Patel et al．（1976）FEBS Letters Vol．62，p．60
【非特許文献２】Hashimoto et al．Endocrinol．Japan，Vol．26，P．337
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
生物学的に活性な薬剤を広範囲に移送可能であり、容易に調製される簡便で高価ではない移送システムが所望されている。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
修飾アミノ酸、アミノ酸誘導体、ペプチド、およびペプチド誘導体をキャリアとして組み入れている生物学的活性剤の経口薬剤移送用組成物が提供される。
【０００７】
該組成物は、 （A）少なくとも１つの生物学的活性剤と；
（B）少なくとも１つのキャリアとを含有する組成物であって、該キャリアが、 （a）（i）アミノ酸の少なくとも１つのアシル化アルデヒド、 （ii）アミノ酸の少なくとも１つのアシル化ケトン、 （iii）ペプチドの少なくとも１つのアシル化アルデヒド、 （iv）ペプチドの少なくとも１つのアシル化ケトン、または、 （v）（a）（i）、（a）（ii）、（a）（iii）、および（a）（iv）の種々の組み合わせ；
（b）（i）カルボキシメチル−フェニルアラニン−ロイシン、 （ii）２−カルボキシ−３−フェニルプロピオニル−ロイシン、 （iii）２−ベンジルコハク酸、または、 （iv）アクチノニン、または、 （v）式： Ar−Ｙ−（Ｒ1）n−OH （式中、Arは、置換または無置換フェニルまたはナフチルであり；
Ｙは、−CO−または−SO2−であり；
Ｒ1は、−Ｎ（Ｒ4）−Ｒ3−CO−であり；
ここで、Ｒ3は、C1からＣ24アルキル、Ｃ1からＣ24アルケニル、フェニル、ナフチル、（Ｃ1からＣ10アルキル）フェニル、（Ｃ1からＣ10アルケニル）フェニル、（Ｃ1からＣ10アルキル）ナフチル、（Ｃ1からＣ10アルケニル）ナフチル、フェニル（Ｃ1からＣ10アルキル）、フェニル（Ｃ1からＣ10アルケニル）、ナフチル（Ｃ1からＣ10アルキル）、および、ナフチル（Ｃ1からＣ10アルケニル）であり；
Ｒ3は、Ｃ1からＣ4アルキル、Ｃ1からＣ4アルケニル、Ｃ1からＣ4アルコキシ、−OH、−SH、−CO2Ｒ5、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロサイクリック、アリール、アルカリール、ヘテロアリール、または、ヘテロアルカリール、または、これらの組み合わせにより、任意に置換され；
Ｒ5は、水素原子、Ｃ1からＣ4アルキル、または、Ｃ1からＣ4アルケニルであり；
Ｒ3には、任意に、酸素原子、窒素原子、イオウ原子、またはこれらの組みあわせが入っていてもよく；
Ｒ4は、水素原子、Ｃ1からＣ4アルキル、または、Ｃ1からＣ4アルケニルであり；
nは、１から５である）で表わされる化合物；
（vi）（b）（i）、（b）（ii）、（b）（iii）、（b）（iv）、および（b）（v）の種々の組み合わせ；または、 （c）（a）と（b）の組み合わせを含有する、組成物である。
【０００８】
また、少なくとも１つの生物学的活性剤を、上記少なくとも１つのキャリアと、任意にビヒクルとを混合することを含有する、該組成物の調製方法も提供される。
【０００９】
他の実施態様においては、該無毒性キャリアが、投与前に生物学的活性剤とキャリアを混合または配合することによって、移送システムの一部として動物に経口投与される。該キャリアはまた、活性剤の存在下、微球体を形成可能である。活性剤を含有する微球体は、次いで経口投与される。また、本発明は、該組成物を含有する投与単位製剤を提供するものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
修飾形態におけるアミノ酸およびアミノ酸誘導体が、種々の理由から経口投与不可能であると考えられていた、ヘパリンなどの多糖類、インスリン、カルシトニンなどのホルモン（これらに限られるわけではないが）を含有する、経口感受性生物学的活性剤を移送するのに使用可能である。たとえばインスリンは、胃腸管の変性状態に敏感である。ヘパリンもまた、その電荷および親水性特性のために、胃腸管からは容易に吸収されない。本発明による修飾アミノ酸および修飾アミノ酸誘導体とは対照的に、修飾していないフリーのアミノ酸は、不安定な生物学的活性剤の胃腸管における破壊に対して保護しない。
【００１１】
本発明の組成物は、種々の動物、たとえば、鳥類、哺乳類、たとえば霊長類、特にヒト、および虫類に生物学的活性剤を投与するのに有用である。
【００１２】
本発明により提供される他の優位性は、修飾アミノ酸誘導体を調製して単離する方法において、容易に入手可能で高価でない出発原料を使用することである。
該方法は、簡便に実施され、商業的製品用にスケールアップことができる。
【００１３】
ここに開示するキャリアとともに使用するのに適する生物学的活性剤としては、胃腸粘膜を通過しないか、ゆっくりとわずかにしか通過せず、および／または胃腸管における酸および酵素によって化学的破壊を受けやすいペプチド類、特にスモールペプチドホルモン；多糖類、特にムコ多糖の混合物；炭水化物；脂質；またはこれらの混合物があげられるが、これらに限定されるわけではない。前記生物学的活性剤の例としては、ヒト成長ホルモン、ウシ成長ホルモン、成長ホルモン−放出ホルモン、インターフェロン、インターロイキン−II、インスリン、ヘパリン、特に低分子量ヘパリン、カルシトニン、エリスロポイエチン、心房性ナチュレティック（naturetic）因子、抗原、モノクローナル抗体、ソマトスタチン、アドレノコルチコトロピン、ゴナドトロピン放出ホルモン、オキシトシン、バソプレッシン、ナトリウムクロモリン（ナトリウム＝またはジナトリウム＝クロモグリカート）、バンコマイシン、デスフェリオキサミン（DFO）、またはこれらの組み合わせが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【００１４】
さらに、本発明のキャリアは、殺虫剤等の他の活性剤を移送するのに使用可能である。
ここで使用するアミノ酸とは、天然または合成アミノ酸を含有する、少なくとも１つのフリーのアミン基を有する種々のカルボン酸である。好ましいアミノ酸としては、α−アミノ酸、より好ましくは天然α−アミノ酸であり、非α−アミノ酸も同様に有用である。
【００１５】
ここで使用するポリアミノ酸は、結合可能な他の基、たとえば、エステル、無水物または無水結合により形成された結合によって結合した２以上のアミノ酸またはペプチドのことをいう。
ペプチドとは、ペプチド結合により結合した２以上のアミノ酸を含有することを意味する。ペプチドは、２つのアミノ酸を含有するジペプチドから数百のアミノ酸を含有するするポリペプチドで、種々の長さのものであってもよい。文献（Chambers Biological Dictionary，editor Peter Ｍ．Ｂ．Walker，Cambridge，England：Chambers Cambridge，１９８９，page２１５）参照のこと。本発明において最も有用なペプチド類は、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、およびペンタペプチドがあげられる。好ましいペプチドは、ジペプチド、トリペプチドである。ペプチドは、ホモ−またはヘテロ−ペプチドであってもよく、天然アミノ酸、合成アミノ酸、またはこれらの組み合わせであってもよい。
【００１６】
ここで使用するアミノ酸誘導体およびペプチド誘導体とは、アミノ酸アルデヒドまたはケトンおよび／またはペプチドアルデヒドまたはケトンを意味し、ここで、−COOH基は、ケトンまたはアルデヒドに変換されているものである。
【００１７】
修飾アミノ酸、ペプチド、およびそれらの誘導体とは、以下に記載するように少なくとも１つのフリーのアミン基を、これと反応するアシル化剤またはスルホン化剤と反応させることによってアシル化またはスルホン化することにより修飾されたアミノ酸、アミノ酸誘導体、ペプチド、およびペプチド誘導体を意味する。
【００１８】
本発明においてアミノ酸またはペプチドの成分として使用される好ましい天然アミノ酸は、アラニン、アルギニン、アスパラギン、アスパラギン酸、シトルリン、システイン、シスチン、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、イソロイシン、ロイシン、リジン、メチオニン、オルニチン、フェニルアラニン、プロリン、セリン、スレオニン、トリプトファン、バリン、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタマート、またはＯ−ホスホセリンである。最も好ましいアミノ酸は、アルギニン、ロイシン、リジン、フェニルアラニン、チロシン、およびバリンである。
【００１９】
本発明においてアミノ酸またはペプチドの成分として使用される好ましい非天然アミノ酸は、β−アラニン、フェニルグリシン、α−アミノ酪酸、γ−アミノ酪酸、４−（４−アミノフエニル）酪酸、α−アミノイソ酪酸、ε−アミノカプロン酸、７−アミノヘプタン酸、β−アスパラギン酸、アミノ安息香酸、（アミノメチル）安息香酸、（アミノフェニル）酢酸、アミノ馬尿酸、γ−グルタミン酸、システイン（ACM）、ε−リジン、ε−リジン（Ａ−Fmoc）、メチオニン＝スルホン、ノルロイシン、ノルバリン、オルニチン、d−オルニチン、p−ニトロ−フェニルアラニン、ヒドロキシ＝プロリン、およびチオプロリンである。
【００２０】
本発明に有用なアミノ酸は、以下の式：HN（Ｒ4）−（Ｒ2）n−OHで表わされる。
（式中、Ｒ2は、式：−Ｒ3−CO−で表わされ、ここで、Ｒ3は、Ｃ1からＣ24アルキル、Ｃ1からＣ24アルケニル、フェニル、ナフチル、（Ｃ1からＣ10アルキル）フェニル、（Ｃ1からＣ10アルケニル）フェニル、（Ｃ1からＣ10アルキル）ナフチル、（Ｃ1からＣ10アルケニル）ナフチル、フェニル（Ｃ1からＣ10アルキル）、フェニル（Ｃ1からＣ10アルケニル）、ナフチル（Ｃ1からＣ10アルキル）
、および、ナフチル（Ｃ1からＣ10アルケニル）であり；
任意に、Ｒ3は、Ｃ1からＣ4アルキル、Ｃ1からＣ4アルケニル、Ｃ1からＣ4アルコキシ、−OH、−SH、−CO2Ｒ5、またはこれらの組み合わせにより、置換され；
Ｒ5は、水素原子、Ｃ1からＣ4アルキル、または、Ｃ1からＣ4アルケニルであり；
Ｒ3には、任意に、酸素原子、窒素原子、イオウ原子、またはこれらの組みあわせが入っていてもよく；
Ｒ4は、水素原子、Ｃ1からＣ4アルキル、または、Ｃ1からＣ4アルケニルである）。
フェニルまたはナフチル基は、任意に置換されてもよい。適当な置換基は、Ｃ1からＣ6アルキル、Ｃ1からＣ6アルケニル、Ｃ1からＣ6アルコキシ、ヒドロキシ、チオ、またはCO2Ｒ6であり、式中、Ｒ6は、水素原子、Ｃ1からＣ6アルキル、Ｃ1からＣ6アルケニルであるが、これらに限定されるわけではない。
【００２１】
本発明のアミノ酸誘導体またはペプチド誘導体は、アミノ酸エステルまたはペプチドエステルの適当な還元剤をもちいた還元反応によって容易に調製可能である。たとえば、アミノ酸アルデヒドまたはペプチドアルデヒドは、文献（R．Chen et al．，Biochemistry，１９７９，１８，９２１−９２６）にしたがって調製可能である。アミノ酸またはペプチドケトンは、文献（Organic Syntheses，Col．Vol．IV，Wiley，（１９６３），pages５−６）にしたがって調製可能である。アミノ酸、ペプチド、アミノ酸エステル、ペプチドエステル、および、該誘導体を調製するのに必要な他の薬剤は、商業的に入手可能であり、たとえば、アルドリッチ社（ミルオーキー、WI、米国）；シグマ社（セントルイス、MO、米国）；およびフルカ社（ロンコンコマ、NY、米国）から入手可能である。
アミノ酸およびペプチドは、少なくとも１つのフリーのアミン基を、該少なくとも１つのフリーのアミン基と反応するアシル化剤またはスルホン化剤で、アシル化またはスルホン化することにより、修飾される。アミノ酸およびペプチドを修飾するのに適当な薬剤としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【００２２】
式：Ｒ7−CO−ＸまたはＲ7−SO2−Ｘで表わされるアシル化剤またはスルホン化剤。
（式中、Ｒ7は、好ましくはＣ1からＣ20の、アルキルまたはアルケニル、または、Ｃ6からＣ20の芳香族である）。
Ｒ7基は、置換されていても、置換されていなくてもよい。好ましい置換基は、Ｃ1からＣ4アルキル、Ｃ1からＣ4アルケニル、Ｃ1からＣ4アルコキシ、CO2Ｒ8であり、ここでＲ8は、水素原子、Ｃ1からＣ4アルキル、Ｃ1からＣ4アルケニルである。
好ましくは、Ｒ7は、メチル、エチル、フェニル、ベンジル、またはナフチルである。より好ましくは、Ｒ7は、フェニル、またはアセチルである。Ｘは、脱離基である。基体分子が開裂する反応においては、その一部（炭素を含有しない部分）は、通常、脱離基と呼ばれる。文献（Advanced Organic Chemistry，2d edition，Jerry March，New York：McGraw−Hill Book（１９７７），page１８７）参照。典型的な脱離基としては、塩素原子、臭素原子、ヨウ素原子等のハロゲン原子が挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【００２３】
アミノ酸およびペプチド用アシル化剤またはスルホン化剤の例としては、ハロゲン化アシル、たとえばアセチル＝クロライド、プロピル＝クロライド、ベンゾイル＝クロライド、ヒップリル＝クロライドなど、ハロゲン化スルホニル、たとえば、ベンゼン＝スルホニル＝クロライド、および、無水物、たとえば、無水酢酸、プロピル酸無水物、安息香酸無水物、馬尿酸無水物などが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。好ましいアシル化剤またはスルホン化剤は、ベンゾイル＝クロライド、ベンゼン＝スルホニル＝クロライド、およびヒップリル＝クロライドである。
修飾酸化合物は、式： Ar−Ｙ−（Ｒ1）n−OH （式中、Arは、置換または無置換フェニルまたはナフチルであり；
Ｙは、−CO−または−SO2−であり；
Ｒ1は、−Ｎ（Ｒ4）−Ｒ3−CO−であり；
ここで、Ｒ3は、Ｃ1からＣ24アルキル、Ｃ1からＣ24アルケニル、フェニル、ナフチル、（Ｃ1からＣ10アルキル）フェニル、（Ｃ1からＣ10アルケニル）フェニル、（Ｃ1からＣ10アルキル）ナフチル、（Ｃ1からＣ10アルケニル）ナフチル、フェニル（Ｃ1からＣ10アルキル）、フェニル（Ｃ1からＣ10アルケニル）、ナフチル（Ｃ1からＣ10アルキル）、および、ナフチル（Ｃ1からＣ10アルケニル）であり；
Ｒ3は、Ｃ1からＣ4アルキル、Ｃ1からＣ4アルケニル、Ｃ1からＣ4アルコキシ、−OH、−SH、−CO2Ｒ5、または、これらの組み合わせにより、任意に置換され；
Ｒ5は、水素原子、Ｃ1からＣ4アルキル、または、Ｃ1からＣ4アルケニルであり；
Ｒ3には、任意に、酸素原子、窒素原子、イオウ原子、またはこれらの組みあわせが入っていてもよく；
Ｒ4は、水素原子、Ｃ1からＣ4アルキル、または、Ｃ1からＣ4アルケニルである）で表わされる化合物である。
【００２４】
アミノ酸誘導体およびペプチド誘導体は、少なくとも１つのフリーのアミン基を、該少なくとも１つのフリーのアミン基と反応するアシル化剤で、アシル化することにより修飾される。アミノ酸誘導体およびペプチド誘導体を修飾するのに有用な適当なアシル化剤の例は、以下の式で表わされる酸塩化物であるが、これらに限定されるわけではない。
【００２５】
式：Ｒ9−CO−Ｘ 式中、Ｒ9は、好ましくは炭素数１〜２０の、アルキルまたはアルケニル、好ましくは炭素数１〜２０の、シクロアルキルまたはシクロアルケニル、または、好ましくは炭素数６〜２０の芳香族である。Ｒ9基は、置換されてもされていなくてもよい。好ましい置換基は、Ｃ1からＣ4アルキル、Ｃ1からＣ4アルケニル、Ｃ1からＣ4アルコキシ、CO2Ｒ10であり、ここでＲ10は、水素原子、Ｃ1からＣ4アルキル、またはＣ1からＣ4アルケニルである。好ましくは、Ｒ9基は、メチル、エチル、シクロヘキシル、シクロペンチル、シクロヘプチル、フェニル、ベンジル、またはナフチルである。より好ましくは、Ｒ9基は、フェニル、シクロヘキシル、シクロペンチル、シクロヘプチル、またはアセチルである。Ｘは脱離基である。典型的な脱離基は、塩素原子、臭素原子、およびヨウ素原子などのハロゲンであるが、これらに限定されるわけではない。
【００２６】
アミノ酸誘導体およびペプチド誘導体用アシル化剤の例としては、ハロゲン化アシル、たとえばアセチル＝クロライド、プロピル＝クロライド、シクロヘキサノイル＝クロライド、シクロペンタノイル＝クロライド、シクロヘプタノイル＝クロライド、ベンゾイル＝クロライド、ヒップリル＝クロライドなど、および、無水物、たとえば、無水酢酸、プロピル酸無水物、シクロヘキサン酸無水物、安息香酸無水物、馬尿酸無水物などが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。好ましいアシル化剤は、ベンゾイル＝クロライド、ベンゼン＝スルホニル＝クロライド、およびヒップリル＝クロライド、アセチル＝クロライド、シクロヘキサノイル＝クロライド、シクロペンタノイル＝クロライド、シクロヘプタノイル＝クロライドである。
【００２７】
アミン基はまた、カルボン酸とジシクロヘキシルカルボジイミド等のカップリング剤との反応により変換可能である。ペプチドにおいては、１以上のアミノ酸が誘導体化（アルデヒドまたはケトン）および／または修飾（アシル化）されてもよい。
【００２８】
キャリア単独でまたは修飾アミノ酸またはペプチド誘導体とともに使用するキャリアとしては、カルボメトキシ修飾アミノ酸、カルボキシメチル−フェニルアラニン−ロイシン、２−カルボキシ−３−フェニルプロピオニル−ロイシン、２−ベンジルコハク酸およびアクチノニンが挙げられる。アクチノニン化合物としては、アクチノニンまたはエピアクチノニンおよびこれらの誘導体が挙げられる。該化合物は、以下の式で表わされる：
【００２９】
【化１】
2006273875.tif 000003
該化合物の誘導体は、米国特許５，２０６，３８４に開示されている。
【００３０】
アクチノニン誘導体は、以下の式：
【化２】
2006273875.tif 000004
【００３１】
（式中、Ｒ11は、スルホキシメチルまたはカルボキシまたは置換カルボキシ基であり、カルボキサミド、ヒドロキシアミノカルボニルおよびアルコキシカルボニル基から選択され、Ｒ12は、ヒドロキシル、アルコキシ、ヒドロキシアミノ、またはスルホキシアミノ基である）で表わされる。
【００３２】
修飾アミノ酸誘導体またはペプチド誘導体は、当業者に公知の方法にしたがって、容易に調製し、修飾可能なものである。たとえば、本発明の修飾アミノ酸誘導体は、一つのアミノ酸誘導体またはペプチド誘導体または２以上のアミノ酸またはペプチド誘導体の混合物を、アミドを形成する誘導体に存在するフリーのアミノ部位と反応するアセチル化剤またはアミン修飾剤と、反応させることによって調製可能である。アミノ酸またはペプチドは、修飾して次いで誘導体化するか、誘導体化して次いで修飾するか、または、同時に、修飾して誘導体化することが可能である。保護基は、当業者に公知であるように、所望しない副反応を避けるために使用可能である。
【００３３】
本発明の修飾アミノ酸および修飾アミノ酸誘導体はまた、一つのアミノ酸、２種以上のアミノ酸、またはアミノ酸エステルの混合物を、アミドまたはスルホンアミドを形成するためのアミノ酸に存在するフリーのアミノ部位と反応するアミン修飾剤と、反応させてもよい。アミノ酸およびアミノ酸エステルは、商業的に入手可能であり、たとえば、アルドリッチ社（ミルオーキー、WI、米国）；シグマ社（セントルイス、MO、米国）；およびフルカ社（ロンコンコマ、NY、米国）から入手可能である。
【００３４】
たとえば、アミノ酸を、金属水酸化物、たとえば水酸化ナトリウムまたはカリウムのアルカリ水溶液に溶解し、次いで約５℃から約７０℃までのあいだの温度、好ましくは約１０℃から約４０℃までの間の温度で、約１時間から約４時間までの間、好ましくは約２．５時間、加熱可能である。アミノ酸におけるNH2基の当量あたり使用されるアルカリの量は、NH2基の当量あたり、約１．２５から約３モルまでの間、好ましくは、約１．５から約２．２５モルまでの間である。
【００３５】
溶液のpHは、約８から約１３までの間の範囲で、好ましくは、約１０から約１２までの間である。
アミノ修飾剤は、撹拌しながらアミノ酸溶液に添加される。該混合物の温度は、約５℃から約７０℃までのあいだの温度、好ましくは約１０℃から約４０℃までの間の温度で、約１時間から約４時間までの間、保持される。アミノ酸の量に対して使用されるアミノ修飾剤の量は、アミノ酸における全フリーのNH2のモルに基づくものである。一般的には、アミノ修飾剤は、アミノ酸における全NH2基のモル当量あたり、約０．５から約２．５モル当量までのあいだの量、好ましくは約０．７５から約１．２５モル当量までの間の量で使用される。
【００３６】
反応は、pHが約２から約３までの間になるまで、適当な酸、たとえば濃塩酸で該混合物のpHを調節することによって終了させる。該混合物を室温で放置すると、透明な上層と白またはオフホワイトの沈殿物とが形成される。上層を捨て、修飾アミノ酸を下層からろ過して収集する。該粗修飾アミノ酸を次いで、pHが約９から約１３までの間、好ましくはpHが約１１から約１３までの間で水に溶解する。不溶物をろ過により除去し、ろ液を真空で濃縮する。修飾アミノ酸の収率は一般的には、約３０から約６０％までの間、通常は約４５％である。
【００３７】
所望ならば、アミノ酸エステル、たとえばアミノ酸のメチルまたはエチルエステルが、本発明の修飾アミノ酸を調製するのに使用可能である。ジメチルホルムアミドまたはピリジンなどの適当な有機溶媒に溶解されたアミノ酸エステルは、約５℃から約７０℃までのあいだの温度、好ましくは約２５℃の温度で、約７時間から約２４時間までの間、アミノ酸修飾剤と反応させる。アミノ酸エステルに対して使用されたアミノ修飾剤の量は、アミノ酸の場合と同じである。
【００３８】
反応溶媒を、負圧下で除去し、エステル官能基部を、適当なアルカリ溶液、たとえば１Ｎ水酸化ナトリウムで、修飾アミノ酸エステルを、約５０℃から約８０℃までのあいだの温度、好ましくは約７０℃の温度で、エステル基を加水分解し、フリーのカルボキシル基を有する修飾アミノ酸を形成するのに十分な時間、加水分解することによって、除去する。加水分解混合物を次いで、室温まで冷却し、たとえば２５％塩酸水溶液で、pH約２から約２．５までの間に酸性化する。
【００３９】
該修飾アミノ酸は、溶液から沈殿し、ろ過またはデカンデーションなどの常法にしたがって回収される。
【００４０】
該修飾アミノ酸は、再結晶またはカラムによる分離によって、精製可能である。適当な再結晶溶媒システムは、アセトニトリル、メタノールおよびテトラヒドロフランである。分離は、適当なカラムサポートを、たとえば、アルミナで、メタノール／n−プロパノール混合物を移動相として使用して；逆相カラムサポートをトリフルオロ酢酸／アセトニトリル混合物の混合物を移動相として用いて；および移動相として水を用いたイオン交換クロマトグラフィーで行ってもよい。陰イオン交換クロマトグラフィーが行われる場合には、後処理としての０−５００mM塩化ナトリウム成分が使用される。修飾アミノ酸はまた、低分子量の非球体材料を除去するために、低級アルコール、たとえばメタノール、ブタノール、またはイソプロパノールを用いて、抽出することによって精製可能である。
【００４１】
適当な修飾アミノ酸誘導体としては、Ｎ−シクロヘキサノイル−Phe−アルデヒド、Ｎ−アセチル−Phe−アルデヒド、Ｎ−アセチル−Tyr−ケトン、Ｎ−アセチル−Lys−ケトン、および、Ｎ−アセチル−Leu−ケトンがあげられるが、これらに限定されるわけではない。特に、修飾アミノ酸誘導体としては、Ｎ−シクロヘキサノイル＝フェニルラニン＝アルデヒドが挙げられる。
特に、生物学的活性剤としては、カルシトニンが挙げられ、キャリアとしては、アセチル＝フェニルアラニン＝アルデヒド、カルボメトキシ＝フェニルアラニルロイシンおよびアセチル−Phe−Leu−Leu−アルデヒドが挙げられる。
【００４２】
また、特に、前記生物学的活性剤が、１．５μg／mLのカルシトニン、１３２mg／mlのアセチル＝フェニルアラニン、３３mg／mLのカルボメトキシ＝フェニルアラニルロイシン、および、２５mg／mLのアセチル−Phe−Leu−Leu−Argアルデヒドを含有するものである。
【００４３】
ある実施態様においては、修飾および／または修飾誘導体化アミノ酸は、直接的に、投与前に、活性成分とキャリアとを単純に混合することによって、移送キャリアとして使用可能である。別の実施態様においては、修飾アミノ酸は、活性剤を含有する微球体を形成するために使用可能である。本発明の修飾および／または修飾誘導体化アミノ酸は特に、ある薬理剤、たとえば、それ自体で胃腸粘膜を通過しないか、または、ゆっくりとしか通過しない、および／または、胃腸管における酸および酵素によって化学的分解を受けやすい、スモールペプチドホルモンの経口投与用に有用である。
【００４４】
修飾アミノ酸が微球体に変換される場合には、該混合物は、任意に、約２０℃から約５０℃までのあいだの温度、好ましくは約４０℃の温度で、修飾アミノ酸が溶解するまで加熱される。最終溶液は、溶液のmLあたり、修飾アミノ酸を、約１mgから約２０００mgまでの間、好ましくは、約１mgから約５００mgまでの間で含有する。最終溶液中における活性剤の濃度は、治療の必要投与量に応じて、種々に変換される。必要な場合には、正確な濃度は、たとえば逆相HPLC分析によって定められる。
【００４５】
修飾アミノ酸が微球体を調製するのに使用される場合には、以下に示す他の方法が用いられる。修飾アミノ酸を、脱イオン水に、約７５から２００mg／mlまでの間の濃度で、好ましくは約１００mg／mlの濃度で、約２５℃から約６０℃まで、好ましくは約４０℃の温度で溶解する。溶液中に粒状物が残るので、ろ過などの常法にしたがって取り除くことが可能である。
約４０℃の温度に保持された修飾アミノ酸溶液は、約０．０５から約２Ｎまでの、好ましくは約１．７Ｎの酸濃度の酸水溶液（約４０℃）と、１：１（Ｖ／Ｖ）で混合する。得られた混合物はさらに、４０℃で、微球体形成に有効な期間、インキュベートされ、微球体の形成は、光顕微鏡で観察される。本発明を実施するにあたり、好ましい添加の順序は、修飾アミノ酸溶液を酸水溶液に添加することである。
【００４６】
微球体形成用の適当な酸としては、（a）修飾アミノ酸に悪影響、たとえば化学分解などを与えないもの、（b）微球体形成を妨害しないもの、（c）被移送体（cargo）の微球体カプセル化を妨害しないもの、（d）被移送体（cargo）と逆相互作用しないものが挙げられる。
【００４７】
本発明で使用される好ましい酸は、酢酸、クエン酸、塩酸、りん酸、リンゴ酸、およびマレイン酸である。
【００４８】
本発明を実施するにあたり、微球体安定化添加剤が、微球体形成工程の前に、酸水溶液に、またはアミノ酸溶液に組み入れられてもよい。ある薬剤においては、このような添加剤の存在によって、溶液中における微球体の安定性および／または分散性が促進されるものである。
【００４９】
安定化添加剤は、約０．１から５％（Ｗ／Ｖ）までの間、好ましくは約０．５％（Ｗ／Ｖ）の濃度で使用可能である。適当な微球体安定化添加剤としては、アカシアゴム、ゼラチン、メチルセルロース、ポリエチレングリコール、およびポリリジンが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。好ましい安定化添加剤は、アカシアゴム、ゼラチン、およびメチルセルロースである。
【００５０】
上記条件下、修飾アミノ酸分子は、中空または固形マトリックスタイプの微球体を形成し、ここで、被移送体は、キャリアマトリックスまたはカプセルタイプの微球体カプセル液体または固体被移送体に分布される。修飾アミノ酸微球体が、溶解可能な材料、たとえば前記酸水溶液中における薬剤の存在下に形成される場合には、該材料は、微球体内にカプセル化されるものである。このように、薬剤学的に活性な材料、たとえば、ペプチド、タンパク質、および多糖と同様、経口ルートでは通常生物学的活性が低くなる有機分子、たとえば抗微生物剤をカプセル化することが可能である。微球体によってカプセル化可能な薬剤の量は、キャリアへの被移送体の親和性と同様、カプセル化溶液中における薬剤の濃度を含むファクターの数に依存する。
【００５１】
本発明の修飾アミノ酸微球体は、薬剤学的に無害であり、活性剤の物理的および生物的特性を変えないものである。さらに、カプセル化工程は、活性剤の薬剤学的特性を変えないものである。種々の薬剤が、アミノ酸微球体内にカプセル化可能である。該システムは特に、微球体がターゲットゾーン（すなわち微球体の中身が遊離されるべき場所）に到達する前に、投与された動物の生体内の条件によって破壊されたり、効果がほとんどなくなる化学的または生物学的薬剤を、および、胃腸管においてほとんど吸収されない薬剤を移送するのに優位である。
ターゲットゾーンは、使用される薬剤に依存して種々変えることが可能である。
【００５２】
微球体の粒子径は、胃腸管のターゲットエリアにおいて、活性剤を放出することを決定するのに重要な役割を有している。好ましい微球体は、約＜０．１ミクロンから約１０ミクロンまでの間、好ましくは約０．５ミクロンから約５ミクロンまでの間の粒子径を有する。微球体は、胃腸管内のターゲットエリアにおいて活性剤を効果的に放出するのに十分小さい。小さい微球体はまた、適当なキャリア流体（たとえば等張食塩水）に懸濁させ、直接循環システムに筋肉内または皮下注射することによって、非経口的に投与可能である。選択された投与モードは、無論、投与される薬剤の必要性に応じて変えられる。大きいアミノ酸微球体（＞５０ミクロン）は、経口移送システムとしてあまり効果的ではない傾向である。
【００５３】
修飾アミノ酸を水または活性剤を含有する水溶液と接触させることによって形成された微球体のサイズは、物理的または化学的パラメーター、たとえば、カプセル溶液のイオン強度、浸透圧、またはpH、溶液中のイオンサイズなどを操作することによって、および、カプセル化工程において使用された酸の選択によって制御可能である。
【００５４】
典型的には、本発明の薬理学的組成物は、投与の直前に、活性成分の水溶液とキャリアの水溶液を混合することにより調製する。または、キャリアおよび生物学的活性成分は、製造工程中に混合可能である。該溶液は任意に、りん酸緩衝液塩、クエン酸、酢酸、ゼラチン、およびアラビアゴムなどの添加剤を含有してもよい。
【００５５】
本発明の実施に際して、安定化添加剤をキャリア溶液に組み入れてもよい。
該添加剤の存在によって、溶液中の薬剤の安定性および分散性が促進される場合がある。
安定化添加剤は、約０．１から５％（Ｗ／Ｖ）までの間、好ましくは約０．５％（Ｗ／Ｖ）の濃度で使用可能である。適当な安定化添加剤としては、アカシアゴム、ゼラチン、メチルセルロース、ポリエチレングリコール、およびポリリジンが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。好ましい安定化添加剤は、アカシアゴム、ゼラチン、およびメチルセルロースである。
【００５６】
組成物における活性剤の量は、薬理学的または生物学的有効量である。しかしながら、該量は、組成物が投与単位製剤で使用される場合、たとえばカプセル、錠剤、または液剤で使用される場合、薬理学的または生物学的有効量よりもすくなく含有してもよい。なぜならば、投与単位製剤は、キャリア／生物学的活性剤組成物を種々含有してもよく、また、薬理学的または生物学的有効量の分配量を含有してもよいからである。全有効量は、生物学的活性剤の全薬理学的または生物学的有効量において含有される累積単位によって投与される。
【００５７】
使用される生物学的活性剤の全量は、当業者には定めることが可能である。
しかしながら、驚くべきことに、ある生物学的活性剤、たとえばカルシトニンでは、現在開示されたキャリアを使用すると、極度に効率的な移送が行われる。したがって、同じ血液レベルで治療効果を達成しながら、従来の投与単位製剤または移送システムにおいて使用されるものよりも少ない量の生物学的活性剤を投与することが可能である。
【００５８】
本発明の組成物におけるキャリアの量は、移送有効量であり、当業者に良く知られた方法によって生物学的活性剤または特別なキャリアに合わせて定めることが可能である。
【００５９】
投与単位製剤はまた、付形剤；希釈剤；分解剤；潤滑剤；かそ剤；着色剤、及びビヒクルなどを含有可能であり、たとえば、水、１，２−プロパンジオール、エタノール、オリーブ油、またはこれらの組み合わせなどが挙げられるが、これらに限定されるわけではない。
【００６０】
本発明の組成物または投与単位製剤の投与は、経口でも十二指腸注射でもよい。
【００６１】
実施例 
本発明を以下の実施例においてさらに説明するが、本発明はこれらの実施例に限定されるわけではない。
【００６２】
実施例１
Ｎ−シクロヘキサノイルフェニルアラニン＝アルデヒドの調製
フェニルアラニン＝メチル＝エステル（１ｇ、０．００４６モル）を、５mLのピリジンに溶解した。塩化シクロヘキサノイル（０．６２mL）を添加し、該混合物を２時間撹拌した。反応混合物を粉砕した氷入の塩酸（１Ｎ）に注いだ。該混合物を２回トルエンで抽出した。得られたトルエン抽出物を真空濃縮したところ、１．１ｇのＮ−シクロヘキサノイルフェニルアラニン＝メチル＝エステルが得られた。
Ｎ−シクロヘキサノイルフェニルアラニン＝メチル＝エステル（０．５ｇ）を、エチレングリコールジメルエーテル（２０mL）に溶解した。該溶液を−７０℃に冷却し、ジイソブチルアルミニウムヒドリド（トルエン中１．５Ｍ溶液を２．０４mL）を添加した。得られた反応混合物を−７０℃で２時間撹拌した。反応は、２Ｎ塩酸を滴下することにより終了させた。該混合物を冷却した酢酸エチルで抽出した。酢酸エチル溶液を食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥後、真空濃縮し、シリカゲルクロマトグラフィーで精製したところ、白色固体が得られた。
【００６３】
1Ｈ NMR（３００MHz，DMSO−d６）：９．５（s，１Ｈ）、８．２（d，１Ｈ）、７．２（m，５Ｈ）、４．２（m，１Ｈ）、３．２（d，１Ｈ）、２．７（d，１Ｈ、２．１（m，１Ｈ）、１．６（br.m，４Ｈ）、１．２（br.m，６Ｈ）。
IR（KBr）：３３００，３０５０，２９００，２８５０，２８００，１７００，１６００，１５００cm-1。質量分析：Ｍ＋１ ｍ／ｅ ２６１。
【００６４】
実施例２
Ｎ−アセチルフェニルアラニン＝アルデヒドの調製
Ｎ−アセチルフェニルアラニン＝メチル＝エステル（４．２ｇ、１９モル）を、エチレングリコールジメチルエーテルに溶解した。該溶液を−７０℃に冷却し、水素化ジイソブチルアルミニウム（２５．３mLの１．５Ｍトルエン溶液、３９モル）を添加した。得られた反応混合物を−７０℃で２時間撹拌した。反応は、２Ｎの塩酸を添加することによって終了させた。該混合物を、冷却した酢酸エチルで４回、およびトルエンで４回抽出した。抽出物を混合し、食塩水で洗浄後、硫酸マグネシウムで乾燥して、真空濃縮後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製したところ、白い固体が２．７ｇ得られた。NMRから、文献（Biochemistry，１９７９，１８，９２１−９２６）に記載の化合物と良い一致を示した。
【００６５】
実施例３
３−アセトアミド−４−（p−ヒドロキシ）フェニル−２−ブタノン（Ｎ−アセチルチロシノン）の調製 
チロシン（２８．９ｇ、１６モル）、無水酢酸（９７．９ｇ、９６モル）、およびピリジン（３５ｇ、１６モル）の混合物を、１００℃で１時間加熱した。
反応混合物を真空濃縮したところ、黄色のオイルが得られた。得られたオイルを減圧濃縮したところ、２９．９ｇのオイルが得られた。
【００６６】
1Ｈ NMR（DMSO-d６）：NMR（d６-DMSO）；８．２（d，１Ｈ）、７．３（d，２Ｈ）、７．０（d，２Ｈ）、４．４（m，１Ｈ）、３．１（dd，１Ｈ）、２．７（dd，１Ｈ）、２．３（s，３Ｈ）、１．８（s，３Ｈ）。
【００６７】
実施例４ 
３−アセトアミド−７−アミノ−２−ブタノン（Ｎ−アセチルリジノン）の調製
実施例３の方法にしたがって、リジンをＮ−アセチルリジノンに変換した。
【００６８】
1Ｈ NMR（DMSO-d６）：８．１（d，１Ｈ）、７．８（br.m，１Ｈ）、４．１（m，１Ｈ）、３．０（m，２Ｈ）、２．０（s，３Ｈ）、１．９（s，３Ｈ）、１．３（br.m，６Ｈ）。
【００６９】
実施例５
３−アセトアミド−５−メチル−２−ブタノン（Ｎ−アセチルロイシノン）の調製 
実施例３の方法にしたがって、ロイシンをＮ−アセチルロイシノンに変換した。
【００７０】
1Ｈ NMR（DMSO-d６）：８．１（d，１Ｈ）、４．２（m，１Ｈ）、２．０（s，３Ｈ）、１．８（s，３Ｈ）、０．８（d，６Ｈ）。
【００７１】
実施例６
４−（４−アミノフェニル）酪酸の塩化ベンゼンスルホニルを用いた修飾
４−（４−アミノフェニル）酪酸（２０ｇ、１１モル）を、２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液、１１０mLに溶解した。室温で約５分撹拌後、塩化ベンゼンスルホニル（１４．２mL、０．１１モル）を１５分間かけてアミノ酸溶液に滴下した。
室温で約３時間撹拌後、該混合物を塩酸を添加することによってpH２まで酸性化した。これを、ろ過すると明茶色の沈殿物が得られた。該沈殿物を温水で洗浄して、乾燥した。４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸の収率は、２４．３ｇ（６９％）であった。融点は１２３−２５℃であった。
必要ならば、修飾アミノ酸は再結晶および／またはクロマトグラフィーで精製してもよい。
【００７２】
実施例７
４−アミノ安息香酸の塩化ベンゼンスルホニルを用いた修飾 
実施例６の方法にしたがって、４−アミノ安息香酸を４−（フェニルスルホンアミド）安息香酸に変換した。
【００７３】
実施例８
４−アミノフェニル酢酸、４−アミノ馬尿酸、および４−アミノメチル安息香酸の塩化ベンゼンスルホニルを用いた修飾
実施例６の方法にしたがって、４−アミノフェニル酢酸、４−アミノ馬尿酸、および４−アミノメチル安息香酸を、それぞれ４−（フェニルスルホンアミド）フェニル酢酸、４−（フェニルスルホンアミド）馬尿酸、および４−（フェニルスルホンアミドメチル）安息香酸に変換した。
【００７４】
実施例９
アミノ酸の塩化ベンゼンスルホニルを用いた修飾
化学修飾する前に、１６のアミノ酸の混合物を調製した。該混合物の成分を表１に示す。６５ｇのアミノ酸混合物（［−NH2］基の全濃度＝０．６１モル）を、室温で１Ｎ水酸化ナトリウム溶液、７６０mL（０．７６２５当量）に溶解した。２０分間撹拌後、塩化ベンゼンスルホニル（７８ml、１当量）を２０分間かけて添加した。反応混合物をついで２．５時間、加熱することなしに撹拌した。
沈殿がおきるので、pH９．３になるまでNaOH（２Ｎ）溶液をさらに添加した。該反応混合物を室温で一昼夜撹拌した。該混合物を希塩酸（３８％、１：４）を用いて酸性化すると、クリーム色の沈殿が生じた。得られた沈殿をデカンテーションによって単離し、水酸化ナトリウム（２Ｎ）溶液に溶解した。該溶液を次いで真空濃縮したところ、黄色の固体が得られ、これは、凍結乾燥された。
【００７５】
【表１】
2006273875.tif 000005
【００７６】
実施例１０
５つのアミノ酸混合物の塩化ベンゼンスルホニルを用いた修飾
アミノ酸混合物（表２参照）、８６．１ｇ（NH2、０．８５モル）を、２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液、６４３mL（１．５当量）に溶解した。室温で３０分間撹拌後、塩化ベンゼンスルホニル（１０８mL、０．８６当量）を１５分間かけて該アミノ酸溶液に滴下した。反応混合物をついで室温で２．５時間撹拌した後、反応混合物のpH（pH５）を、NaOH（２Ｎ）溶液によってpH９に調節した。該反応混合物を室温で一昼夜撹拌した。該混合物びpHを希塩酸（４：１、Ｈ2Ｏ：HCl）を用いてpH２．５にすると、形成された修飾アミノ酸の沈殿が生じた。上澄みをすてて、得られた黄色の沈殿をデカンテーションによって単離し、水で洗浄後、水酸化ナトリウム（２Ｎ）に溶解した。該溶液を次いで真空濃縮したところ、黄色の固体が得られ、これは、凍結乾燥された。粗修飾アミノ酸の収率は、１３７．９ｇであった。
【００７７】
【表２】
2006273875.tif 000006
【００７８】
実施例１１
５つのアミノ酸混合物の塩化ベンゾイルを用いた修飾
アミノ酸混合物（実施例１０における表２参照）、８６ｇ（NH2、０．８５モル）を、２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液、６３７mL（１．５当量）に溶解した。室温で１０分間撹拌後、塩化ベンゾイル（９９mL、０．８５モル）を１０分間かけて該アミノ酸溶液に滴下した。反応混合物を室温で２．５時間撹拌した後、反応混合物のpH（pH１２）を、希塩酸（４：１、Ｈ2Ｏ：HCl）を用いてpH２．５にすると、形成された修飾アミノ酸の沈殿が生じた。１時間放置した後、得られた沈殿をデカンテーションによって単離し、水で洗浄後、水酸化ナトリウム（２Ｎ）に溶解した。該溶液を次いで真空濃縮したところ、白色の固体として修飾が得られた。（２２０．５ｇ）。
【００７９】
実施例１２
Ｌ−バリンの塩化ベンゼンスルホニルを用いた修飾
Ｌ−バリン（５０ｇ、０．４３モル）を、２Ｎ水酸化ナトリウム溶液、３７６mL（０．７５当量）に、室温で１０分間撹拌することにより溶解した。塩化ベンゼンスルホニル（６８．７mL、０．３８モル、１．２５当量）を２０分間かけて該アミノ酸溶液に室温で滴下した。反応混合物を室温で２時間撹拌した後、沈殿が生じた。沈殿を、さらなる２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液、２００mLを添加することによって溶解した。さらに３０分間撹拌後、希塩酸（４：１、Ｈ2Ｏ：HCl）を用いてpH２．６になるまで添加した。形成された修飾アミノ酸の沈殿が生じ、デカンテーションによって回収した。該沈殿物を、水酸化ナトリウム（２Ｎ）に溶解し、次いで真空濃縮したところ、白色の固体が得られた。粗修飾アミノ酸の収率＝８４．６ｇ、７７％。
【００８０】
実施例１３
フェニルアラニン＝メチル＝エステルの塩化ヒップリルを用いた修飾 
Ｌ−フェニルアラニン＝メチル＝エステル、塩酸塩（１５ｇ、０．０８４モル）を、ジメチルホルムアミド（DMF）（１００mL）に溶解し、これにピリジン（３０mL）を添加した。塩化ヒップリル（１６．６ｇ、０．０８４モル、１００mLのDMF中）を直ちに２回にわけてアミノ酸エステル溶液に添加した。反応混合物を室温で一昼夜撹拌した。該反応混合物を次いで真空減圧して、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に溶解した。該溶液を、メチルエステルをフリーのカルボキシル基に加水分解するために、７０℃で３時間加熱した。該溶液を、希塩酸（３：１、Ｈ2Ｏ：HCl）を用いてpH２．２５になるまで酸性化した。ゴム状の沈殿物が形成され、回収した後、１Ｎ水酸化ナトリウムに溶解した。該溶液を真空濃縮したところ、粗修飾アミノ酸生成物が１８．６ｇ得られた（収率：１８．６ｇ）。
アセトニトリルから再結晶したところ、精製修飾フェニルアラニン（１２ｇ）が白色粉末として得られた。融点：２２３−２２５℃。
【００８１】
実施例１４ 
投与溶液の調製 
試験管において、５６８mgのアセチル＝フェニルアラニン＝アルデヒド、１３２mgのカルボメトキシ＝フェニルアラニルロイシン、および１００mgのアセチル−Phe−Leu−Leu−Arg＝アルデヒドを、２．９mlの１５％エタノール中に添加した。該溶液を撹拌し、水酸化ナトリウム（１．０Ｎ）を添加してpHを７．２まで上げた。水を添加することによって、全容量を４．０mLとした。該サンプルは、２００mg／mLのキャリア濃度を有する。カルシトニン（６μg）を該溶液に添加した。全カルシトニン濃度は、１．５μg／mLであった。
類似の方法にしたがって、６６８mgのアセチル＝フェニルアラニン＝アルデヒドおよび１３２mgのカルボメトキシ＝フェニルアラニルロイシンをキャリア組成物として有する第２溶液と、キャリアであるアセチル＝フェニルアラニン＝アルデヒドを有する第３溶液を調製した。各溶液は、１．５μg／mLのカルシトニン濃度を有した。
【００８２】
実施例１５
修飾アミノ酸／鮭カルシトニン組成物の調製
（a）カプセル化された鮭カルシトニンを含有する修飾アミノ酸微球体の調製 実施例９にしたがって調製された修飾アミノ酸混合物を、蒸留水（pH７．２）に、４０℃で、１００mg／mlの濃度で溶解した。該溶液を次いで、０．２ミクロンフィルターでろ過し、温度を４０℃に保持した。鮭カルシトニン（サンドズ コーポレーション、バジル、スイス）を、クエン酸（１．７Ｎ）水溶液およびゼラチン（５％）に、濃度１５０mg／mlで溶解した。該溶液を次いで４０℃に加熱した。上記２つの加熱溶液を次いで１：１（v／v）で混合した。得られた微球体懸濁液をガラスウールでろ過し、１０００ｇで５０分間遠心分離した。得られたペレットを、０．８５Ｎクエン酸を用いて再懸濁し、オリジナル容量の１／５から１／７の容量にした。再懸濁ペレットの鮭カルシトニン濃度は、HPLCによって定められた。さらなる微球体を、上記方法にしたがって、鮭カルシトニンなしで調製した。該”空の微球体”は、カプセル化した鮭カルシトニン微球体調製物を動物テスト用の最終投与懸濁液に希釈するのに使用された。
（b）溶解性修飾アミノ酸キャリア／鮭カルシトニンシステムの調製 鮭カルシトニンを含有する溶解性アミノ酸投与製剤を、修飾アミノ酸材料を蒸留水（pH８）中に適当な濃度に溶解することによって調製した。該溶液を４０℃まで加熱し、次いで０．２ミクロンフィルターでろ過した。鮭カルシトニンもまた、蒸留水に溶解し、次いで、修飾アミノ酸溶液に、経口投与する前に添加した。
【００８３】
実施例１６
ラットにおけるインビボ実験
断食した６匹のラットを麻酔し、経口胃管投与によって、実施例１５にしたがって調製されたカルシトニン／キャリア製剤の１つを投与した。各サンプルのカルシトニン濃度は、１．５μg／mlであった。各ラットは、２mL／kgずつ投与された。血液サンプルを尾の動脈から連続的に収集した。血清カルシウムは、ディマンドTM・カルシウム・キット（シグマ・ケミカル・カンパニー、セントルイス、ミッソーリ、米国から入手可能）を用いたテストによって定めた。テストの結果を図１に示す。
【００８４】
実施例１７
４００mg／kgのアセチル−Leu＝アルデヒドと１０μg／kgのカルシトニン、４００ｍg／kgのアセチル−Phe＝アルデヒドと１０μg／kgのカルシトニン、２００mg／kgのアセチル−Leu＝アルデヒド、２００mg／kgのアセチル−Phe＝アルデヒドと１０μg／kgのカルシトニンを有する３つのサンプルを、それぞれ調製した。該サンプルを実施例１６に記載したように断食したラットに与えた。テストの結果を図２に示す。
【００８５】
実施例１８ 
３５０mg／kgのアセチル−Phe＝アルデヒド、５０mg／kgのカルボメトキシ−Phe−Leu−OHおよび３μg／kgのカルシトニン、４００mg／kgのアセチル−Phe＝アルデヒド、５０mg／kgのカルボメトキシ−Phe−Leu−OHおよび１０μg／kgのカルシトニンを有する２つのサンプルを、それぞれ調製した。該サンプルを実施例１６に記載したように断食したラットに与えた。テストの結果を図３に示す。
【００８６】
実施例１９
プロピレングリコールにおける５０mg／kgのカルボメトキシ−Phe−Leu−OHと３μg／kgのカルシトニン、２８４mg／kgのアセチル−Phe＝アルデヒドと６６mg／kgのアセチル−Leu−Leu−Arg＝アルデヒド；水性エタノールにおける５０mg／kgのカルボメトキシ−Phe−Leu−OHと３μg／kgのカルシトニン、２８４mg／kgのアセチル−Phe＝アルデヒドと６６mg／kgのアセチル−Leu−Leu−Arg＝アルデヒド；と３μg／kgのカルシトニンを有する３つのサンプルを、それぞれ調製した。該サンプルを実施例１６に記載したように断食したラットに与えた。テストの結果を図４に示す。
【００８７】
実施例２０
プロピレングリコールにおける１．５μg／kgのカルシトニンと４００mg／kgの４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸；水性エタノールにおける１．５、μg／kgのカルシトニン、２００mg／kgのアセチル−Phe＝アルデヒドと２００mg／kgの４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸；１．５μg／kgのカルシトニンを有する３つのサンプルを、それぞれ調製した。該サンプルを断食したラットに十二指腸内注射することにより投与した。テストの結果を図５に示す。
【００８８】
実施例２１
水性エタノールにおける１０μg／kgのカルシトニンと６００mg／kgのアセチル−Phe＝アルデヒド；１０μg／kgのカルシトニン、２００mg／kgのアセチル−Phe＝アルデヒド、２００g／kgのＮ−アセチルリジノン、２００mg／kgのアセチル−Leu＝アルデヒドを有するサンプルを、それぞれ調製した。該サンプルを実施例１６に記載したように断食したラットに与えた。テストの結果を図６に示す。
【００８９】
実施例２２
水性エタノール、ジメチルスルホキシド（DMSO）、およびオリーブ油における、３μg／kgのカルシトニンと２００mg／kgのアセチル−Phe＝アルデヒドを有する３つのサンプルを、それぞれ調製した。さらに、DMSOにおける、３μg／kgのカルシトニンのみのサンプルも調製した。該サンプルを断食したラットに十二指腸内注射することにより投与した。テストの結果を図７に示す。
【００９０】
実施例２３
水性エタノールにおける３μg／kgのカルシトニンと４００mg／kgのシクロヘキサノイル−Phe＝アルデヒドを有するサンプルを調製した。該サンプルを実施例１６に記載したように断食したラットに与えた。テストの結果を図８に示す。
【００９１】
実施例２４
実施例１６に記載したように、カプセル化したカルシトニンおよび溶解性修飾アミノ酸キャリア／カルシトニンシステムを含有する修飾アミノ酸微球体のインビボ評価が、ラットにおいて行われた。ラットは、経口投与製剤を胃管投与され、血液サンプルが、血清カルシウム濃度決定のために、種々の時間に採取された。
９匹のラットが以下の３グループに分けられた。
１．カルシトニン微球体：１０ugカルシトニン／kg体重、経口胃管投与（３匹）；
２．カルシトニン微球体：３０ugカルシトニン／kg体重、経口胃管投与（３匹）；および 
３．溶解性修飾アミノ酸／カルシトニンシステム：３０ugカルシトニン／kg体重、経口胃管投与（３匹）。該ラットは溶解性システム投与の前に、炭酸水素ナトリウム水溶液、０．７meqが予め投与された。
ラットの経口胃管投与が行われる。カルシトニン微球体は、投与直前に調製され、グループ１およびグループ２のラットが各々、微球体懸濁液を適量摂取する。グループ３のラットは、カプセル化していないカルシトニン／修飾アミノ酸システムを摂取する。血液を約０．５ml、各ラットから、投与直前（０時間）、投与後１時間、２時間、および３時間、採取する。血液サンプルからの血清が−２０℃で保存される。
グループ１〜３のラットから採取された血清のカルシウムレベルを、常法にしたがって分析する。ラットにおける実験結果から、カルシトニンを、基準レベルと比較して、修飾アミノ酸微球体のカプセル、または修飾アミノ酸の混合物のいずれかで経口投与した場合、薬学活性が非常に上昇すること（すなわち、血清カルシウムレベルが減少すること）が例証された。図９に示すように、鮭カルシトニンを含有する溶解性修飾アミノ酸溶液によって、経口投与後の基準レベルと比較すると、薬学活性を上昇すること（すなわち、血清カルシウムレベルが減少すること）が例証される。
【００９２】
実施例２５ 
１０μg／kgのカルシトニン、３３ng／kgのアクチノニンと３６６mg／kgのアセチル−Phe＝アルデヒド；１０μg／kgのカルシトニン、３３mg／kgのカルボキシ−Phe−Leu−OH、３６６mg／kgのアセチル−Phe＝アルデヒドを有する２つのサンプルを、それぞれ調製した。該サンプルを実施例１４に記載したように断食したラットに与えた。テストの結果を図１０に示す。
【００９３】
実施例２６
３μg／kgのカルシトニンと４００mg／kgの４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸；および１０μg／kgのカルシトニンと４００mg／kgの４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸を有する２つのサンプルを、それぞれ調製した。該サンプルを実施例１４に記載したように断食したラットに与えた。テストの結果を図１１に示す。
【００９４】
実施例２７
１０μg／kgのカルシトニンと４００mg／kgの３−（フェニルスルホンアミド）安息香酸；および１０μg／kgのカルシトニンと４００mg／kgの４−（フェニルスルホンアミド）馬尿酸を有する２つのサンプルを、それぞれ調製した。該サンプルを実施例１４に記載したように断食したラットに与えた。テストの結果を図１２に示す。
【００９５】
実施例２８
１０μg／kgのカルシトニンと４００mg／kgの４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸；および１０μg／kgのカルシトニンと４００mg／kgの４−（フェニルスルホンアミド）安息香酸を有する２つのサンプルを、それぞれ調製した。該サンプルを実施例１４に記載したように断食したラットに与えた。
テストの結果を図１３に示す。
【００９６】
実施例２９
１０μg／kgのカルシトニンと４００mg／kgの４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸；および１０μg／kgのカルシトニンと４００mg／kgの４−（フェニルスルホンアミド）フェニル酢酸を有する２つのサンプルを、それぞれ調製した。該サンプルを実施例１４に記載したように断食したラットに与えた。テストの結果を図１４に示す。
【００９７】
ラットにおけるインターフェロン製剤のインビボ評価 pH約７〜８のトリズマ（Trizma）塩酸塩緩衝液（Tris−HCl）における本発明のキャリアとインターフェロンα２bを含有するサンプルが調製された。動物に経口胃管投与によって薬剤が投与された。移送は、ヒトインターフェロンαのエリーザ分析を用いて評価された。
【００９８】
実施例３０
緩衝液中の８００mg／kgの４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸および１０００μg／kgのインターフェロンα２bを有するサンプルを調製した。該サンプルを実施例１４に記載したように断食したラットに与えた。テストの結果を図１５に示す。
【００９９】
実施例３１
緩衝液中の４００mg／kgの４−（フェニルスルホンアミドメチル）安息香酸および１０００μg／kgのインターフェロンα２bを有するサンプルを調製した。
該サンプルを実施例１４に記載したように断食したラットに与えた。テストの結果を図１６に示す。
【０１００】
実施例３２ 
緩衝液中の８００mg／kgの４−（フェニルスルホンアミド）フェニル酢酸および１０００μg／kgのインターフェロンα２bを有するサンプルを調製した。該サンプルを実施例１４に記載したように断食したラットに与えた。テストの結果を図１７に示す。
【０１０１】
実施例３３ 
緩衝液中の６００mg／kgの４−（フェニルスルホンアミド）馬尿酸および１０００μg／kgのインターフェロンα２bを有するサンプルを調製した。該サンプルを実施例１４に記載したように断食したラットに与えた。テストの結果を図１８に示す。
ラットにおける成長ホルモン製剤のインビボ評価 本発明のキャリアと成長ホルモンを含有するサンプルが調製された。動物に経口胃管投与によって薬剤が投与された。移送は、成長ホルモンのエリーザ分析を用いて評価された。
【０１０２】
実施例３４
１０００mg／kgの４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸および１mg／kgの成長ホルモンを有するサンプルを調製した。該サンプルを実施例１４に記載したように下垂体を切除された（hypophysectomized）ラットに与えた。テストの結果を図１９に示す。
【０１０３】
実施例３５
５００mg／kgの４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸および１mg／kgの成長ホルモンを有するサンプルを調製した。比較として、キャリアなしの成長ホルモンのサンプルをラットに投与した。該サンプルを実施例１４に記載したように下垂体を切除された（hypophysectomized）ラットに与えた。テストの結果を図２０に示す。
【０１０４】
実施例３６
５００mg／kgの４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸および６mg／kgの成長ホルモンを有する２つのサンプルを調製した。該サンプルを実施例１４に記載したように通常のラットに与えた。テストの結果を図２１に示す。
【０１０５】
ラットにおけるクロモグリコラート製剤のインビボ評価 
実施例３７
本発明のキャリアとジナトリウム＝クロモグリコラートを含有するサンプルが調製された。サンプルは、０．８５Ｎクエン酸および０．５％アカシア中における、２００mg／kgの４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸および５０mg／kgのジナトリウム＝クロモグリカートを含有した。動物に経口胃管投与によって薬剤が投与された。移送は、文献（A．Yoshimi，in Pharmcobio−Dyn．，１５，pages６８１−６８６，（１９９２））記載の方法を用いて評価された。テストの結果を図２２に示した。
【０１０６】
実施例および図面のデータから明らかなように、本発明の組成物を使用すると、生物学的活性剤の移送において非常に優位である。
【０１０７】
ここで述べた全ての特許、出願、および公表文献は、本願に参照して組み入れられるものである。
本発明の種々の変換は、上記記載から当業者には明らかであろう。たとえば、アミド結合以外の結合、たとえばエステルまたは無水結合によって形成されたポリ（アミノ酸）は、本発明によるキャリアとして使用するのに、誘導体化および修飾可能である。これら全ての変換は、添付の請求の範囲内のものである。
【図面の簡単な説明】
【０１０８】
【図１】アセチル＝フェニルアラニン＝アルデヒド、カルボメトキシPhe−Leu−OH、およびアセチル−Phe−Leu−Leu−Argアルデヒドキャリアとともに、サケのカルシトニンを用いて、ラットに経口胃管投与した結果を示すグラフである。
【図２】アセチルロイシン＝アルデヒド、およびアセチルフェニルアラニン＝アルデヒドキャリアとともに、サケのカルシトニンを用いて、ラットに経口胃管投与した結果を示すグラフである。
【図３】アセチルフェニルアラニン＝アルデヒド、およびカルボメトキシPhe−Leu−OHキャリアとともに、サケのカルシトニンを用いて、ラットに経口胃管投与した結果を示すグラフである。
【図４】アセチルフェニルアラニン＝アルデヒド、アセチル−Leu−Leu−Argアルデヒド、およびカルボメトキシPhe−Leu−OHキャリアとともに、サケのカルシトニンを用いて、ラットに経口胃管投与した結果を示すグラフである。
【図５】アセチルフェニルアラニン＝アルデヒド、および４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸キャリアとともに、サケのカルシトニンを用いて、ラットに十二指腸注射投与した結果を示すグラフである。
【図６】アセチルフェニルアラニン＝アルデヒド、Ｎ−アセチルリジノン、およびアセチル−Leu＝アルデヒドキャリアとともに、サケのカルシトニンを用いて、ラットに経口胃管投与した結果を示すグラフである。
【図７】アセチルフェニルアラニン＝アルデヒドキャリアのエタノール水溶液、ジメチルスルホキシド（DMSO）、およびオリーブ油ビヒクル、およびDMSOビヒクル単独で、サケのカルシトニンを用いて、ラットに十二指腸注射投与した結果を示すグラフである。
【図８】シクロヘキサノイル−フェニルアラニン＝アルデヒドキャリアとともに、サケのカルシトニンを用いて、ラットに経口胃管投与した結果を示すグラフである。
【図９】炭酸水素ナトリウム溶液を予備投与後に、サケのカルシトニンを含有する修飾アミノ酸微球体製剤と、サケのカルシトニンを含有する溶解性修飾アミノ酸製剤の２投与量レベルで経口投与した後の、ラット血清カルシウムレベルを示すグラフである。
【図１０】アセチル−Phe＝アルデヒド、アクチノニン、およびカルボメトキシ−Phe−Leu−OHキャリアとともに、サケのカルシトニンを用いて、ラットに経口胃管投与した結果を示すグラフである。
【図１１】４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸キャリアとともに、サケのカルシトニンを用いて、ラットに経口胃管投与した結果を示すグラフである。
【図１２】３−（フェニルスルホンアミド）安息香酸および４−（フェニルスルホンアミド）馬尿酸キャリアとともに、サケのカルシトニンを用いて、ラットに経口胃管投与した結果を示すグラフである。
【図１３】４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸および４−（フェニルスルホンアミド）安息香酸キャリアとともに、サケのカルシトニンを用いて、ラットに経口胃管投与した結果を示すグラフである。
【図１４】４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸および４−（フェニルスルホンアミド）フェニル酢酸キャリアとともに、サケのカルシトニンを用いて、ラットに経口胃管投与した結果を示すグラフである。
【図１５】４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸キャリアとともに、インターフェロンα２b（rhIFN）を用いて、ラットに経口胃管投与した結果を示すグラフである。
【図１６】４−（フェニルスルホンアミドメチル）安息香酸キャリアとともに、インターフェロンα２bを用いて、ラットに経口胃管投与した結果を示すグラフである。
【図１７】４−（フェニルスルホンアミド）フェニル酢酸キャリアとともに、インターフェロンα２bを用いて、ラットに経口胃管投与した結果を示すグラフである。
【図１８】４−（フェニルスルホンアミド）馬尿酸キャリアとともに、インターフェロンα２bを用いて、ラットに経口胃管投与した結果を示すグラフである。
【図１９】４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸キャリアを用いた２投与量レベルで成長ホルモン単独で、下垂体を切除された（hypophysectomized）ラットに経口胃管投与した結果を示すグラフである。
【図２０】４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸キャリアを用いた２投与量レベルで成長ホルモン単独で、下垂体を切除された（hypophysectomized）ラットに経口胃管投与した結果を示すグラフである。
【図２１】４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸キャリアとともに成長ホルモンを用いた、ノーマルなラットに経口胃管投与した結果を示すグラフである。
【図２２】キャリアとして４−（フェニルスルホンアミド）−４−フェニル酪酸とともにジナトリウム＝クロモグリカートを用いた、ラットに経口胃管投与した結果を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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