(57)【要約】【課題】  各種疾患の治療に有用なＥＤＧファミリー受容体作動剤を提供すること。【解決手段】    次の一般式（１）【化１】2006273728.tif 000015〔式中、Ａはｎ−ドデシル基、ｎ−テトラデシル基、ｎ−ヘキサデシル基、ｎ−オクタデシル基、２−ヘプチルウンデシル基、イソステアリル基、２−オクチルドデシル基、［６−（３，５，５−トリメチルヘキシルオキシ）］ヘキシル基、又は［９−（２−エチルヘキシルオキシ）］ノニル基を示す。〕で表されるリン酸化グリセリルエーテル又はその塩を有効成分とするEDGファミリー受容体作動剤。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の一般式（１）
【化１】
2006273728.tif 000014
〔式中、Ａはｎ−ドデシル基、ｎ−テトラデシル基、ｎ−ヘキサデシル基、ｎ−オクタデシル基、２−ヘプチルウンデシル基、イソステアリル基、２−オクチルドデシル基、［６−（３，５，５−トリメチルヘキシルオキシ）］ヘキシル基、又は［９−（２−エチルヘキシルオキシ）］ノニル基を示す。〕
で表されるリン酸化グリセリルエーテル又はその塩を有効成分とするEDGファミリー受容体作動剤。
【請求項２】
１−［６−（３，５，５−トリメチルヘキシルオキシ）］ヘキシルグリセロール−３−リン酸若しくは１−［９−（２−エチルヘキシルオキシ）］ノニルグリセロール−３−リン酸又はこれらの塩。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＥＤＧファミリー受容体に結合し、これを活性化するＥＤＧファミリー受容体作動剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
リゾホスファチジン酸（ＬＰＡ）は、グリセロリン脂質の１種でありグリセロ骨格の一位にリン酸が、三位に長鎖脂肪酸がアシル、アルキル、アルケニル結合をしたものである。血清中には２〜２０μＭ程度あり、多くはアルブミンに結合している。生体では細胞膜のリン脂質からホスフォリパーゼの作用により産生され、血中では主に血小板にて合成されるが、他の組織・細胞でもＬＰＡを産生していると考えられている。スフィンゴシン１リン酸（Ｓ１Ｐ）は、スフィンゴシンキナーゼによりスフィンゴシンがリン酸化されて生じる。生体内では血小板での含有量が特に高く、トロンビン等の刺激に応じて放出される。血漿中には０．２μＭ、血清中には０．５μＭが存在すると言われる。全身の組織においてスフィンゴシンキナーゼの活性が検出されることから、血小板以外の組織・細胞においてもＳ１Ｐが産生されていると考えられている。ＬＰＡ及びＳ１Ｐは、共にリゾリン脂質メディエーターの１種であると考えられ、ＬＰＡは、創傷治癒促進作用（非特許文献１、２）、神経応答促進作用（非特許文献３）を有することが知られ、Ｓ１Ｐは、血管新生を促進することが知られている（非特許文献４）。
【０００３】
ＬＰＡやＳ１Ｐは、従来から、細胞膜表面に存在するＧタンパク質共役型の受容体（G‐protein‐coupled receptor;GPCR）に結合してその生理作用を発現すると考えられており、近年、ＬＰＡは、一群のＥＤＧ（endothelial cell differentiation gene）ファミリー受容体のＥＤＧ−２、−４及び−７を、Ｓ１Ｐは、ＥＤＧ−１、−３及び−５に結合して機能することが明らかにされている。
【０００４】
従って、ＬＰＡ又はＳ１Ｐと同様に、斯かるＥＤＧファミリー受容体に結合し、これを活性させうる物質は、上記の生理活性を発揮し、創傷治癒を始め、アレルギー・ガン等の疾患の予防又は治療に有用である。
【０００５】
リン酸化グリセリルエーテル類は、界面活性作用を有する物質として知られ（特許文献１〜３）、また、次の一般式：Ｒ1−ＯＧ
〔式中、Ｒ1は炭素数８〜３２のアルキル基又はアルケニル基を示し、ＯＧは、少なくとも一つの水酸基が硫酸化又はリン酸化された多価アルコールの水酸基から水素を除いた残基を示す〕で示されるリン酸化グリセリルエーテル誘導体には、ケラチノサイト収縮作用があり、ケラチノサイト収縮剤、毛穴収縮剤として使用できることが報告されている（特許文献４）。
【０００６】
しかし、斯かる化合物がＥＤＧファミリー受容体を活性化することは全く知られていない。
【特許文献１】特公昭５９−１５１５９号公報
【特許文献２】特開昭５８−１０４６２４号公報
【特許文献３】特開平１１−１３９９５７号公報
【特許文献４】特開２００２−１８７８１７号公報
【非特許文献１】Ｄｅｍｏｙｅｒら；Ｗｏｕｎｄ  Ｒｅｐ  Ｒｅｇ  ２０００、８、５３０−５３７
【非特許文献２】Ｂａｌａｚｓら；Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｉｎｔｅｇｒａｔｉｖｅ  Ｃｏｍｐ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２００１、２８０、Ｒ４６６−Ｒ４７２
【非特許文献３】Ｈａｓｈｉｍｏｔｏら；Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２００４、７２、５１−５６．
【非特許文献４】Ｌｅｅら；Ｃｅｌｌ  １９９９、９９、３０１−３１２．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
したがって、本発明の目的は、各種疾患の治療に有用なＥＤＧファミリー受容体作動剤を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
本発明者は、グリセリルエーテル類について検討した結果、特定のグリセリルエーテル誘導体又はその塩が、ＥＤＧファミリー受容体に結合し活性化することを見出した。
【０００９】
すなわち、本発明は、次の一般式（１）
【化１】
2006273728.tif 000002
〔式中、Ａはｎ−ドデシル基、ｎ−テトラデシル基、ｎ−ヘキサデシル基、ｎ−オクタデシル基、２−ヘプチルウンデシル基、イソステアリル基、２−オクチルドデシル基、［６−（３，５，５−トリメチルヘキシルオキシ）］ヘキシル基、又は［９−（２−エチルヘキシルオキシ）］ノニル基を示す。〕
で表されるリン酸化グリセリルエーテル又はその塩を有効成分とするEDGファミリー受容体作動剤を提供するものである。
【００１０】
また、本発明は、１−［６−（３，５，５−トリメチルヘキシルオキシ）］ヘキシルグリセロール−３−リン酸若しくは１−［９−（２−エチルヘキシルオキシ）］ノニルグリセロール−３−リン酸又はこれらの塩を提供するものである。
【発明の効果】
【００１１】
本発明のリン酸化グリセリルエーテル又はその塩は、優れたＥＤＧファミリー受容体作動作用を有するため、本発明のＥＤＧファミリー受容体作動剤は、創傷の治療や、アレルギー・ガンなどの疾患の予防又は治療に有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１２】
本発明の式（１）で示されるリン酸化グリセリルエーテル誘導体は、公知の合成法に基づいて製造することができる（特許文献４参照）。例えば、対応するグリセリルエーテルをリン酸化することにより得ることができる。リン酸化反応は、公知のリン酸化剤、例えば、オキシ塩化リン、ポリリン酸、水と無水リン酸、リン酸と無水リン酸等を用いて、-20℃〜200℃で、1時間〜24時間反応させることによって行うことができる（実験化学講座 有機化合物の合成ＩＰ２０６〜２１０）。なお、後の実施例に示す本発明の化合物のうち、化合物１〜７は公知であるものの、化合物８及び９は、本発明者らが新たに見出した新規の化合物である。
【００１３】
式（１）中、Ａがイソステアリル基である化合物は、牛脂や大豆油等からダイマー酸を製造する際、副生物であるイソステアリン酸を還元して得られるイソステアリルアルコールを原料に使用しているため、主に主鎖上の様々な位置にメチル分岐を有する混合物である。
【００１４】
Ａは、本発明の効果の点から、ｎ−テトラデシル基、ｎ−ヘキサデシル基、イソステアリル基、［６−（３，５，５−トリメチルヘキシルオキシ）］ヘキシル基、［９−（２−エチルヘキシルオキシ）］ノニル基が好ましい。
【００１５】
本発明のリン酸化グリセリルエーテル塩としては、ナトリウム、カリウム、リチウム等のアルカリ金属類、ベリリウム、マグネシウム、カルシウム等のアルカリ土類金属塩や１級、２級、３級アミン塩及び４級アンモニウム塩、アルギニン塩、リジン塩等の塩基性アミノ酸塩等の塩を挙げることができる。好ましい塩としては、ナトリウム塩、カリウム塩、アルギニン塩が挙げられる。
【００１６】
かくして得られたリン酸化グリセリルエーテル誘導体又はその塩は、試験例１及び２で示すように、ＥＤＧファミリー受容体に結合し、ＬＰＡ及びＳ１Ｐと同様にアゴニストとして機能する。ＥＤＧファミリー受容体の活性化により、創傷治癒促進、神経応答促進、血管新生の促進などがなされることが報告されている（特許文献１〜４）。したがって、これを含有したＥＤＧファミリー受容体作動剤は、創傷治癒の促進剤、床ずれ等の血管新生に依存する症状の改善、アレルギー・ガン等の疾患の予防又は治療に有用である。
【００１７】
本発明のＥＤＧファミリー受容体活性化剤は、例えば、錠剤、カプセル剤等の内服剤、軟膏、水剤、エキス剤、ローション剤、乳剤等の外用剤、注射剤等の医薬製剤とすることができ、当該製剤には、式（１）で示されるリン酸化グリセリルエーテル誘導体又はその塩の他に、助剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、促収促進剤、界面活性化剤等の薬学的に許容される担体を任意に組み合わせて配合することができる。
【００１８】
本発明のＥＤＧファミリー受容体活性化剤における式（１）で示されるリン酸化グリセリルエーテル誘導体又はその塩の配合量は、０．００１〜２０質量％、特に０．０１〜５質量％が好ましい。
【００１９】
また、本発明ＥＤＧファミリー受容体活性化剤の投与量は、用量、患者の年齢、性別、体重、疾患の度合い等により適宜選択することができるが、経口投与の場合、一日当たり約０．１〜１００ｍｇ、好ましくは約１．０〜５０ｍｇ、より好ましくは約１．０〜２０ｍｇである。非経口的に投与する場合は、例えば注射剤の形では、一日につき約０．０１〜３０ｍｇ程度、好ましくは約０．１〜２０ｍｇ程度、より好ましくは０．１〜１０ｍｇ程度を静脈注射により投与するのが適当である。外用塗布する場合は、一日当たり約０．０００１〜５ｍｇ、好ましくは約０．００１〜２ｍｇ、より好ましくは０．０１〜１ｍｇである。
【実施例】
【００２０】
〔製造例１〕  特許文献４記載の方法およびこれに準ずる方法により、以下の化合物を製造した。
（１）１−イソステアリルグリセロール−３−リン酸ジナトリウム塩（化合物１）
【００２１】
【化２】
2006273728.tif 000003
【００２２】
（２）１−テトラデシルグリセロール−３−リン酸ジナトリウム塩（化合物２）
【００２３】
【化３】
2006273728.tif 000004
【００２４】
（３）１−ドデシルグリセロール−３−リン酸ジカリウム塩（化合物３）
【００２５】
【化４】
2006273728.tif 000005
【００２６】
（４）１−ヘキサデシルグリセロール−３−リン酸モノアルギニン塩（化合物４）
【００２７】
【化５】
2006273728.tif 000006
【００２８】
（５）１−オクタデシルグリセロール−３−リン酸モノアルギニン塩（化合物５）
【００２９】
【化６】
2006273728.tif 000007
【００３０】
（６）１−（２−ヘプチルウンデシル）グリセロール−３−リン酸モノアルギニン塩（化合物６）
【化７】
2006273728.tif 000008
【００３１】
（７）１−（２−オクチルドデシル）グリセロール−３−リン酸モノアルギニン塩（化合物７）
【化８】
2006273728.tif 000009
【００３２】
〔製造例２〕１−［６−（３，５，５−トリメチルヘキシルオキシ）］ヘキシルグリセロール−３−リン酸ジカリウム塩（化合物８）の製造
【化９】
2006273728.tif 000010
【００３３】
トルエン25mlに95%リン酸4.52g（43.8mmol）を混合し、窒素雰囲気下、室温下で１−[6-(3,5,5-トリメチルヘキシルオキシ)]ヘキシルグリシジルエーテル5g（14.6mmol）を30分間かけて滴下した。その後、更に3時間攪拌し、蒸留水、イソプロピルアルコールを加え、水層を分離した。有機層を2.5%硫酸ナトリウム水溶液で洗浄し、有機層を濃縮し、粗１−[6-(3,5,5-トリメチルヘキシルオキシ)]ヘキシルグリセロール−３−リン酸を得た。得られた粗１−[6-(3,5,5-トリメチルヘキシルオキシ)]ヘキシルグリセロール−３−リン酸をエタノールに溶解し、50℃で水酸化カリウム1.31g（23.0ｍmol）を溶解したエタノールを加え、50℃で30分間攪拌した。その後、この溶液を10℃以下に冷却したアセトンに徐々に加え、析出した白色粉末をアセトンで洗浄し、乾燥して１−[6-(3,5,5-トリメチルヘキシルオキシ)]ヘキシルグリセロール−３−リン酸ジカリウム塩3.88gを得た。
【００３４】
IR（cm-1,KBr錠剤法）：3400,2936,2860,1664,1468,1104,978
1H-NMR（δ,ppm,D2O-CD3OD）：3.92-3.64,3.51-3.31,1.54,1.29,0.88
【００３５】
〔製造例３〕  下記の化合物９を製造例２と同様にして製造した。
１−［９−（２−エチルヘキシルオキシ）］ノニルグリセロール−３−リン酸ジカリウム塩（化合物９）
【化１０】
2006273728.tif 000011
【００３６】
IR（cm-1,KBr錠剤法）：3388,2940,2864,1670,1464,1110,978
1H-NMR（δ,ppm,D2O-CD3OD）：3.94-3.65,3.50-3.37,1.55,1.27,0.87
【００３７】
試験例１  受容体への結合量の測定
EDGファミリー受容体への結合解析はリガンドであるLPAの放射性ラベル体（[3H]-LPA;パーキンエルマー、2μM  1.85 TBq/mmol）を使用し、培養表皮細胞への結合量を測定する。リン酸化グリセリルエーテル添加による[3H]-LPA結合の阻害率を見ることで各種リン酸化グリセリルエーテル誘導体のEDGファミリー受容体への結合を調べた。
表皮角化細胞をサブコンフルエントまで培養後、PBS-BSA（1mg/ml）で3回洗浄した。100nM [3H]-LPA（18.5 kBq）、10μMリン酸化グリセリルエーテル誘導体を含むPBS-BSAを100μl加え、4℃で6時間インキュベートした。PBS-BSAで3回洗浄後、１M  NaOHを250μl加えて室温で30分反応させて細胞を溶解し、放射能量を測定した。結果を表１に示す。
測定の結果、以下の表１に示すとおり、本発明の化合物を添加した場合における［3H］-LPA結合量は、無添加の場合（表１におけるtotal。なお、表１における数値は、かかる値を１００％としたときの相対値を示している）に比べて有意に少ないものであった。このことから、本発明の化合物は、EDGファミリー受容体に結合する物質であることが示された。
【００３８】
【表１】
2006273728.tif 000012
【００３９】
試験例２  ケラチノサイト膜画分を用いた35S-γ-GTPバインディングアッセイ
EDG受容体ファミリーはGPCRであることからLPA等の結合によりGDP-GTP交換反応が活性化してGTP結合型に変換され、細胞内に刺激が伝達される。放射性ラベル体GTP-γ-［35S］（Amersham Biosciences）を用い、各種リン酸化グリセリルエーテル誘導体によりGDP-GTP交換反応の活性化の有無を解析した。
サブコンフレント状態まで培養した細胞を回収し、氷冷BufferA（20 mM HEPES(pH7.5)、50 mM NaCl、2 mM EDTA）に懸濁した。ホモジナイズ後、破砕液を4℃で2000×g、5分遠心、得られた上清を100000×gで30分超遠心して得られた沈殿を500μlのBufferB （50 mM HEPES(pH7.5) 、100 mM NaCl、2 mM EDTA、1 mM MgCl2）に再懸濁して膜画分とした。Buffer C（50 mM HEPES (pH 7.5),100 mM NaCl,1 mM MgCl2,10μM GDP,2 mM DTT）0.2 mlに膜画分を20μg/mlになるように加えよく懸濁した。0.2μCi GTP-γ-［35S］、LPAあるいは各種リン酸化グリセリルエーテル誘導体を2μMになるように加え、30℃で30分インキュベートした。反応後、膜画分をガラスろ紙 GF/B（Whatman）を用いて回収し、結合している放射能量を測定した。結果を表２に示す。なお、化合物１０〜１４は、順に、１−［６−（２−エチルヘキシルオキシ）］ヘキシルグリセロール−３−リン酸ジカリウム塩、１−（２−エチルヘキシル）グリセロール−３−リン酸ジカリウム塩、１−［９−（３，５，５−トリメチルヘキシルオキシ）］ノニルグリセロール−３−リン酸ジカリウム塩、１−デシルグリセロール−３−リン酸ジナトリウム塩、１−（２−ヘキシルデシル）グリセロール−３−リン酸モノアルギニン塩を示す。
【表２】
2006273728.tif 000013
【００４０】
表２に示すとおり、本発明の化合物を用いた場合には、GTP結合量の増加が観察された。このことから、本発明の化合物は、受容体に結合するだけでなく、下流へその刺激を伝達する物質、すなわちアゴニストであり、EDGファミリー受容体作動作用を有することが示された。