(57)【要約】【課題】  感度、保存性能等の基本性能を保ったまま、加工時のハンドリングによっても透明支持体と検知層との間の密着力が改善された、液体試料分析用多層分析素子を提供すること。【解決手段】  透明支持体の上に、少なくとも、ガス状物質により検知可能な変化を生じる物質を含む検知層、ガス状物質を選択的に透過させる液体遮断層、及び展開層がこの順に一体に接着積層された液体試料分析用多層分析素子において、前記検知層は接着性ポリマー及び水不溶性ビニルポリマーを含有することを特徴とする液体試料分析用多層分析素子。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
透明支持体の上に、少なくとも、ガス状物質により検知可能な変化を生じる物質を含む検知層、ガス状物質を選択的に透過させる液体遮断層、及び展開層がこの順に一体に接着積層された液体試料分析用多層分析素子において、前記検知層は接着性ポリマー及び水不溶性ビニルポリマーを含有することを特徴とする液体試料分析用多層分析素子。
【請求項２】
前記水不溶性ビニルポリマーはアセタール基を有することを特徴とする請求項１記載の液体試料分析用多層分析素子。
【請求項３】
前記水不溶性ビニルポリマーはポリビニルブチラールであることを特徴とする請求項１または２記載の液体試料分析用多層分析素子。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、液体試料分析用多層分析素子に関するものであり、詳しくは、例えば血液、尿等の液体試料中のアンモニア又はクレアチニン、尿素等のアンモニア生成物質を分析するための液体試料分析用多層分析素子に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、体液中の尿素窒素の測定法として、測定の簡易化、迅速化をはかり測定者の個人差をなくすために乾式法（ドライケミストリ）と呼ばれる方法が種々提案されている。その典型的なものは、ウレアーゼとアルカリ性緩衝剤を含有する試薬層と、ガス状アンモニアを検出する指示薬層とを備え、両者の間にガス状アンモニアのみを選択的に透過させるような選択透過層をはさんで一体化した一体型多層分析素子を使用するものである。たとえば特許文献１（特開昭５２−３４８８号公報）には、基本的に上記多層構造を有する一体型分析素子が開示されている。この分析素子ではアンモニアガスの選択透過層として疎水性ポリマー薄層が使用されている。
【０００３】
特許文献２（特開昭５８−７７６６１号）には、透明支持体上に、ガス状アンモニア用の指示薬層、液体遮断層、アルカリ性緩衝剤を含有し必要により基質と反応してアンモニアを生成することの出来る試薬を有する試薬層、および展開層がこの順に一体に接着積層された、液体試料中のアンモニア又はアンモニア生成基質分析用一体型多層分析材料において、液体遮断層が、多孔性物質より成り、使用条件下に液体試料を実質的に遮断しかつガス状アンモニアを透過させる空気孔を構成する事を特徴とする液体試料中のアンモニア又はアンモニア生成基質分析用一体型多層分析材料が開示されている。この多層分析材料においては、選択透過層としてメンブランフィルターを使用して、指示薬層との接着性を改善し、かつ高感度化をはかった一体型多層分析素子が開示されている。
【０００４】
そのほか、特許文献３（特開平４−１５７３６３号公報）には、支持体の下塗層にアンモニア及びアンモニウムイオンを実質的に含まないポリビニルアルキルエーテル等を用い、あるいは指示薬層のバインダーにポリビニルアルキルエーテルを用いて、発色光学濃度がより高く、バックグラウンドの発色光学濃度が低く、測定精度のより高いアンモニアまたはアンモニア生成物質分析用一体型多層分析素子が開示されている。また、特許文献４（特開平４−１５７３６４号公報）には、多孔性展開層にポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）を含有させ、アンモニア生成反応試薬層にアンモニアを実質的に含まずかつｐＨ約９．０以上でアンモニアを発生せずバインダー性能も変化しないバインダーを用いて、発色光学濃度がより高く、バックグラウンドの発色光学濃度が低く、測定精度のより高いアンモニアまたはアンモニア生成物質分析用一体型多層分析素子が開示されている。さらに、特許文献５（特開２００２−１２２５８５号公報）には、透明支持体の上に、ガス状アンモニアにより検知可能な変化を生じる指示薬を含む指示薬層、ガス状アンモニアを通過させる液体遮断層、アルカリ性緩衝剤を含有し必要により基質と反応してアンモニアを生成することのできる試薬を有する試薬層、及び展開層がこの順に一体に接着積層された分析素子において、該液体遮断層が少なくとも２層以上の多孔膜からなることを特徴とする液体試料中のアンモニアまたはアンモニア生成物質分析用一体型多層分析素子が開示されている。
【０００５】
【特許文献１】特開昭５２−３４８８号公報
【特許文献２】特開昭５８−７７６６１号
【特許文献３】特開平４−１５７３６３号公報
【特許文献４】特開平４−１５７３６４号公報
【特許文献５】特開２００２−１２２５８５号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
前記のように、例えば特許文献２〜５に開示されているアンモニアまたはアンモニア生成物質分析用一体型多層分析素子は、透明支持体の上に、ガス状アンモニアにより検知可能な変化を生じる指示薬を含む指示薬層（検知層）、ガス状アンモニアを通過させる液体遮断層、アンモニア生成反応試薬層、及び展開層がこの順に一体に接着積層され、必要に応じて展開層上にはビニルポリマーを含むオーバーコート層が積層されている。またとくにクレアチニン定量用一体型多層分析素子では、さらにアンモニア生成反応試薬層と展開層との間にアンモニア拡散防止層、内因性アンモニア補足層を積層する場合がある。
しかしながら、前記のように何層も積層するに従い、検知層に含まれる成分が多孔性膜である液体遮断層にしみ上がり、透明支持体と検知層との間の密着力が低下し、加工時のハンドリングにより剥離する場合があり、生産性が上がらないという問題点があった。
【０００７】
したがって本発明の目的は、感度、保存性能等の基本性能を保ったまま、加工時のハンドリングによっても透明支持体と検知層との間の密着力が改善された、液体試料分析用多層分析素子を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
上記課題は、以下の手段により解決することができる。
１）透明支持体の上に、少なくとも、ガス状物質により検知可能な変化を生じる物質を含む検知層、ガス状物質を選択的に透過させる液体遮断層、及び展開層がこの順に一体に接着積層された液体試料分析用多層分析素子において、前記検知層は接着性ポリマー及び水不溶性ビニルポリマーを含有することを特徴とする液体試料分析用多層分析素子。
２）前記水不溶性ビニルポリマーはアセタール基を有することを特徴とする上記１)記載の液体試料分析用多層分析素子。
３）前記水不溶性ビニルポリマーはポリビニルブチラールであることを特徴とする上記１)または２）記載の液体試料分析用多層分析素子。
【発明の効果】
【０００９】
本発明によれば、検知層に特定のポリマーを含有させたため、感度、保存性能等の基本性能を保ったまま、加工時のハンドリングによっても透明支持体と検知層との間の密着力が改善された、液体試料分析用多層分析素子を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明の液体試料分析用多層分析素子は、ガス状物質により検知可能な変化を生じる物質を含む検知層に接着性ポリマー及び水不溶性ビニルポリマーを含有させたことを特徴とする。
本明細書において、ガス状物質により検知可能な変化を生じる物質とは、ガス状物質と反応乃至相互作用の結果、構造が変化し、それに伴って吸収波長等の分光学的特性に変化を生じるような物質を意味する。ここで、構造の変化としては、化学構造、例えば、原子組成の変化、共有結合、水素結合等の結合関係の変化、立体構造の変化等が包含される。
【００１１】
本発明の液体試料分析用多層分析素子は、透明支持体の上に、少なくとも、検知層、液体遮断層、及び展開層がこの順に一体に接着積層されてなる構成であれば、透明支持体−検知層間、検知層−液体遮断層間、液体遮断層−展開層間、展開層上の少なくとも何れか１箇所から選択される位置に１層以上設けることができる。
【００１２】
本発明の液体試料分析用多層分析素子は、検知層に接着性ポリマーを含む。この接着性ポリマーは、透明支持体−検知層間及び検知層−液体遮断層間の各々の界面の接着に寄与するポリマーである。
本発明で用いられる接着性ポリマーとしては、Ｔｇが０℃以下（更に好ましくは−１５０〜−５℃、特に好ましくは−１００〜−１０℃）であることが好ましい。また、接着性ポリマーは、質量平均分子量が１万〜１００万（更に好ましくは１万〜５０万、特に好ましくは２万〜２０万）であることが好ましい。
接着性ポリマーとしては、ポリビニルアルキルエーテル（例えば、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルエチルエーテル、ポリビニルイソブチルエーテル等）、天然ゴム、クロロプレン、スチレンブタジエンゴム、炭素数２〜１６の脂肪族アルコールのアクリルエステルを主体とし、これにアクリル酸、アクリルアミド等の極性基を有するモノマーを少量共重合させることにより得られるポリマー、シリコンゴムとシリコン樹脂の組み合わせによって構成されるシリコーン系粘着剤、スチレン・イソプレン・スチレンブロックポリマーを主体とした粘着剤、ロジン系樹脂、テルペン系樹脂、水添石油樹脂、ポリイソブチレン、インデン、ダンマー、コーパル、クマロン、ピコペール、アルキド樹脂、セルロースエステル、ネオプレンが挙げられる。中でもポリビニルアルキルエーテルが好ましい。
【００１３】
接着性ポリマーの添加量は、検知層の指示薬量に対し、１〜５００倍、好ましくは３〜３００倍、さらに好ましくは５〜１００倍である。
【００１４】
検知層に含まれる水不溶性ビニルポリマーは、水に不溶であることが必要であるが、検知層形成用塗布溶媒には可溶であることが好ましく、接着性ポリマー、更には併用し得る他のポリマーと相溶性であることが好ましい。ここで本明細書において、水に不溶であるとは、２０℃の水１００ｇへの溶解度１ｇ以下であることを意味する。検知層塗布溶媒は、有機溶媒または有機溶媒と水との混合溶媒が一般的である。水不溶性ビニルポリマーは、アルコールに可溶であることが好ましく、特にエタノール可溶性であることが好ましい。
また、水不溶性ビニルポリマーとしては、Ｔｇが１０℃以上（更に好ましくは２０〜１５０℃、特に好ましくは３０〜１２０℃）であることが好ましい。また、水不溶性ビニルポリマーは、平均重合度が３０〜５０００（更に好ましくは５０〜３０００、特に好ましくは１００〜２５００）であることが好ましい。
水不溶性ビニルポリマーはアセタール基を有することが好ましい。アセタール基としては、ブチラール基、アセタール基、ホルマール基等が挙げられる。
中でも、本発明に好適な水不溶性ポリマーは、一般式（１）で表される共重合体である。この共重合体は繰り返し単位ｘ、ｙ及びｚからなり、ｙはアセタール基を有する。
【００１５】
【化１】
2006084398.tif 000002
【００１６】
式（１）中、ｘ，ｙ，ｚは０以上の整数を表すモル比であり、好ましくは、ｘ：ｙ：ｚとしては、（２０〜７０）：（２０〜９０）：（１〜１０）であり、更に好ましくは（３０〜６０）：（３０〜８０）：（１〜５）である。Ｒはアルキル基を表す。Ｒとしては、直鎖でも分岐していてもよく、好ましくは、炭素数１〜５の直鎖アルキル基である。
【００１７】
また本発明は、水不溶性ビニルポリマーがポリビニルブチラールであることがとくに好ましい。ここで、ポリビニルブチラールとは、上記一般式（１）において、ｙ単位のＲがプロピル基であって、ｙ単位が２０モル％以上のものを意味する。
【００１８】
水不溶性ビニルポリマーの添加量は、前記接着性ポリマーに対し、１〜５０質量％、好ましくは１〜３０質量％、さらに好ましくは１〜２０質量％である。
【００１９】
以下、本発明の液体試料分析用多層分析素子の好適な態様について、その構成要素毎に説明する。なお、以下の説明において、ガス状物質としてガス状アンモニアを採用した場合を例にとり説明する。
【００２０】
（透明支持体）
透明支持体としては、このような分析素子において一般的に用いられているような疎水性の透明支持体、たとえばポリエチレンテレフタレート、ポリカーボネート、ポリビニル化合物のようなポリマーから成る透明支持体が使用される。透明支持体の厚さは５０〜１０００μｍ程度、通常８０〜３００μｍ程度である。
【００２１】
（検知層）
検知層は、ガス状物質としてのアンモニアにより検知可能な変化を生じる物質、接着性ポリマー、及び水不溶性ビニルポリマーを少なくとも含む。
ガス状物質により検知可能な変化を生じる物質としては、例えばガス状アンモニアと反応して吸収波長に変化を生じるような化合物（以下、発色前駆体という）が好適である。本発明の分析素子に使用可能な発色前駆体としては、たとえば、ロイコシアニン染料、ニトロ置換ロイコ染料及びロイコフタレイン染料のようなロイコ染料（特開昭５２−３４８８号、米国特許  ＲＥ  ３０  ２６７号に記載）；ブロムフェノールブルー、ブロムクレゾールグリーン、ブロムチモールブルー、キノリンブルー及びロゾール酸のようなｐＨ指示薬（共立出版、化学大辞典、１０巻６３〜６５頁に記載）；トリアリールメタン系染料前駆体；ロイコベンジリデン色素（特開昭５６−１４５２７３号に記載）；ジアゾニウム塩とアゾ染料カプラー；塩基漂白可能染料等が挙げられる。
これらの発色前駆体の少なくとも１種を前記の接着性ポリマー及び水不溶性ビニルポリマーと混合し、透明支持体上に塗布すれば、検知層を形成することができる。また、上記で例示したもの以外のポリマーをバインダーポリマーとして併用することもできる。その他のバインダーポリマーとしては、酸処理ゼラチン、アルカリ処理ゼラチン、脱イオンゼラチン等のゼラチン；セルロースアセテート、セルロースアセテートブチレート、セルロースアセテートプロピオネート等のセルロースエステル類；メチルセルロース、エチルセルロース、プロピルセルロース等のアルキルセルロース類；等が用いられる。
【００２２】
接着性ポリマー、水不溶性ビニルポリマーおよびその他のバインダーポリマー（以下、単にバインダーポリマーということがある）の質量に対して、発色前駆体の使用量は０．１〜５０質量％程度、好ましくは０．５質量％〜２０質量％程度が適当である。また、感度を調整する目的で各種緩衝剤、有機酸、無機酸等を加えてｐＨを調整することができる。緩衝剤は後述するもののなかから選択することができ、有機酸、無機酸としては、エタンスルホン酸、アスパラギン酸、アゼライン酸、グルタル酸、コハク酸、グルタコン酸、酒石酸、ピメリン酸、マロン酸、リンゴ酸、３，３−ジメチルグルタル酸、クエン酸、Ｐ−トルエンスルホン酸、過塩素酸、塩酸等を使用できる。さらに、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、炭酸二ナトリウム、炭酸水素ナトリウム等のアルカリ等を検知層中に加えることもできる。塗布液を形成するのに用いる溶媒は、アセトン、２−メトキシエタノール、メチルエチルケトン、メタノール、エタノール等の有機溶剤あるいは水、またはこれらの混合溶媒が適当であり、これらの溶剤に発色前駆体、バインダーポリマー等を固形分濃度が１〜３０質量％程度、好ましくは３〜２０質量％程度となるように加えて塗布液とする。これを乾燥膜厚１〜３０μｍ程度、好ましくは２〜２０μｍとなるように透明支持体上に塗布、乾燥して検知層を形成する。
【００２３】
検知層の上には液体遮断層を設ける。この液体遮断層は、多層分析素子の製造時及び／又は分析操作時において、塗布液、試料液等の液体及びこれらの液体に溶解含有されている妨害成分（例えば、アルカリ性成分等）が実質的に透過せずかつガス状アンモニアのようなガス状物質を選択的に透過できるような貫通空気孔を有する微多孔性物質で構成されているのが好ましい。
【００２４】
本発明における液体遮断層は、１層または２層以上の多孔膜からなる。２層以上の多孔膜の場合は、後述の試薬層と接する最上層の多孔膜の孔径がその直下の多孔膜の孔径と同じかそれより小さいことが好ましい。具体的には、最上層の多孔膜の孔径は０．０１〜１μｍ、好ましくは０．０４〜０．２μｍであり、その直下の多孔膜の孔径は０．２〜２０μｍ、好ましくは０．５〜１０μｍであって、最上層の多孔膜の平均孔径／その直下の多孔膜の孔径の比が０．００１〜１．０、好ましくは０．０１〜０．５である。尚、本明細書における孔径は特に記載がなければ平均孔径である。多孔膜の材質は特に限定されないが、ポリエチレン、ポリプロピレン、ポリテトラフルオロエチレン等の弗素含有ポリマー、セルロースアセテート、ポリスルホン、ポリアミド（ナイロン類）、またはこれらの混合物等が挙げられる。好ましいものはポリエチレン多孔膜とポリプロピレン多孔膜の組み合わせである。各多孔膜は厚さが３〜４０μｍ、好ましくは５〜２０μｍであり、これらを２層以上、通常は２〜３層を組み合わせて液体遮断層が形成される。この液体遮断層全体の空隙率は２５〜９０％、好ましくは３５％〜９０、全層厚は１０〜５０μｍ、好ましくは１０〜３０μｍが適当である。
【００２５】
上記の液体遮断層は前述した検知層に実用的な強度をもって接着する。接着は、検知層表面をウェット状態にして貼り付け乾燥すればよい。ここにウェット状態とは、バインダーを溶解している溶媒が残っているか、あるいは乾燥した膜が可溶性溶媒で濡らされてバインダーが膨潤状態、分散状態又は溶液状態にあることを意味する。
【００２６】
多孔膜間の接着は、熱圧着またはホットメルト等の接着剤を用いて点接触状に接着する等の物理的および／または化学的手段により行う。これらは、順次積層しても先に多孔膜同士を積層化後、検知層に接着してもよい。
【００２７】
液体遮断層の上には、試薬層を設けることができる。試薬層は、例えばアンモニア生成物質と反応してアンモニアを生成させる試薬（一般には酵素又は酵素を含有する試薬）、反応により生成したアンモニアをガス状アンモニアとして効率よく遊離させるためのアルカリ性緩衝剤及びフィルム形成能を有する親水性ポリマーバインダーを通常含有する層である。このアンモニア生成基質と試薬との組合わせとしては、たとえば、尿素／ウレアーゼ、クレアチニン／クレアチニンデイミナーゼ、アミノ酸／アミノ酸−デヒドロゲナーゼ、アミノ酸／アミノ酸オキシダーゼ、アミノ酸／アミノ酸−デヒドラターゼ、アミノ酸／アンモニア−リアーゼ、アミン／アミン−オキシダーゼ、ジアミン／アミン−オキシダーゼ、グルコース及び燐アミダート／燐アミダートヘキソース燐トランスフェラーゼ、ＡＤＰ／カルバミン酸塩キナーゼ及び燐酸カルバモル、酸アミド／アミドヒドロラーゼ、ヌクレオ塩基／デアミナーゼ、ヌクレオシド／デアミナーゼ、ヌクレオチド／デアミナーゼ、グアニン／グアナーゼ等が挙げられる。
【００２８】
試薬層に用いることができるアルカリ性緩衝剤としては、ｐＨ７．０から１０．５、好ましくは７．５から１０．０の範囲の緩衝剤を用いることができる。緩衝剤の具体例としては、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（Ｔｒｉｓ）、燐酸塩緩衝剤、Ｎ，Ｎ−ビス（２−ヒドロキシエチル）グリシン（Ｂｉｃｉｎｅ）、Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−ヒドロキシプロパン−３−スルホン酸（ＨＥＰＰＳＯ）、Ｎ−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）等のＧｏｏｄの緩衝剤、硼酸塩緩衝剤等を挙げることができる。
【００２９】
試薬層に用いることができるフィルム形成能を有する親水性ポリマーバインダーとしては、ゼラチン、アガロース、ポリビニルアルコール、ポリアクリルアミド、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリビニルピロリドン等を挙げることができる。
【００３０】
試薬層には、アンモニア生成物質と反応してアンモニアを生成させる試薬、反応により生成したアンモニアをガス状アンモニアとして効率よく遊離させるためのアルカリ性緩衝剤及びフィルム形成能を有する親水性ポリマーバインダー以外にも必要に応じて、湿潤剤、バインダー架橋剤（硬化剤）、安定剤、重金属イオントラップ剤（錯化剤）等を含有させることができる。
【００３１】
試薬層は、アンモニア生成基質と反応してアンモニアを生成させる試薬、アルカリ性緩衝剤及び必要に応じて加えられる上記試薬類を、フィルム形成能を有するゼラチン等の親水性ポリマーバインダーと混合して塗布液とし、液体遮断層の上に塗布、乾燥することにより形成することができる。
【００３２】
試薬層に含まれるアンモニア生成基質と反応してアンモニアを生成させる試薬の量は、バインダーの質量に対して通常約０．１〜約５０質量％、好ましくは約０．２〜約２０％の範囲内である。アルカリ性緩衝剤の量はバインダーの質量に対して約０．１〜約６０質量％の範囲内であるのが適当である。この試薬層の乾燥膜厚は通常約１〜約４０μｍ、好ましくは約２〜約２０μｍの範囲内である。
【００３３】
試薬層の上には展開層を設ける。展開層としては、特開昭５５−１６４３５６号公報（対応米国特許  ４  ２９２  ２７２）、特開昭５７−６６３５９号公報（対応米国特許  ４  ７８３  ３１５）等に記載の織物布地展開層（例、ブロード、ポプリン等の平編物布地）、特開昭６０−２２２７６９号公報（対応ＥＰ特許  ０  １６２  ３０２Ａ）等に記載の編物布地展開層（例、トリコット編物布地、ダブルトリコット編物布地、ミラニーズ編物布地）、特開昭５７−１４８２５０号公報に記載の有機ポリマー繊維パルプ含有抄造紙展開層、特開昭５７−１２５８４７号公報等に記載の繊維と親水性ポリマーの分散液を塗布して形成した展開層等の繊維質微多孔性展開層；特公昭５３−２１６７７号公報（対応米国特許  ３  ９９２  １５８）等に記載のメンブランフィルター層（ブラッシュポリマー層）、ポリマーミクロビーズ等の微粒子が親水性ポリマーバインダーで点接触状に接着されてなる連続微空隙含有等方的微多孔性展開層、特開昭５５−９０８５９号公報（対応米国特許  ４  ２５８  ００１）等に記載のポリマーミクロビーズが水で膨潤しないポリマー接着剤で点接触状に接着されてなる連続微空隙含有等方的微多孔性層（三次元格子状粒状構造物層）展開層等の非繊維等方的微多孔性展開層；特開昭６１−４９５９（対応米国特許５  ０１９  ３４７）、特開昭６２−１３８７５６、特開昭６２−１３８７５７、特開昭６２−１３８７５８号（対応ＥＰ特許  ０  ２２６  ４６５Ａ）の各公報等に記載の複数の微多孔性層（例、織物布地又は編物布地とメンブランフィルターの２層、織物布地又は編物布地とメンブランフィルターと織物布地又は編物布地の３層）をそれらの表面で微細な不連続点状又は島状（印刷分野における網点状）の接着剤で積層接着した血球分離能力の優れた展開層がある。
【００３４】
展開層に用いられる織物生地又は編物生地は特開昭５７−６６３５９号公報に記載のグロー放電処理又はコロナ放電処理に代表される物理的活性化処理を布生地の少なくとも片面に施すか、又は特開昭５５−１６４３５６号公報、特開昭５７−６６３５９号公報等に記載の水洗脱脂処理、親水性ポリマー含浸等親水化処理、又はこれらの処理工程を適宜に組み合せて逐次実施することにより布生地を親水化し、下側（支持体に近い側）の層との接着力を増大させることができる。また、特開昭５９−１７１８６４、特開昭６０−２２２７６９、特開昭６０−２２２７７０号の各公報等に記載のように、展開層の上からポリマー含有水溶液又はポリマー含有水−有機溶媒混合溶液を塗布して液体試料の展開面積又は広がりを制御することができる。
【００３５】
また、本発明の分析素子をクレアチニン定量用として用いる場合には、試薬層と展開層との間には、アンモニア拡散防止層、内因性アンモニア補足層をこの順で設けることもできる。アンモニア拡散防止層及び内因性アンモニア補足層は、例えば特開平４−１５７３６４号公報等に記載され、公知であるが、例えばアンモニア拡散防止層は、アンモニアの補足およびアンモニア生成反応が実質的に行われない層であり、ヒドロキシプロピルセルロースのような親水性ポリマーを用いて形成することができる。アンモニア拡散防止層の厚さは、例えば２〜５０μｍである。内因性アンモニア補足層は、液体試料中にすでに存在する内因性アンモニアに作用してこれを実質的に試薬層に到達しえない状態に変化させる試薬を含む層である。試薬としては、アンモニアを基質として他の物質に変化させる触媒能を有する酵素を含む組成物が挙げられる。該組成物の具体例としては、ヒドロキシエチルセルロースのような親水性ポリマーをバインダーポリマーとし、α−ケトグルタル酸、ＮＡＤＰＨ、グルタミン酸デヒドロゲナーゼを含む組成物である。内因性アンモニア補足層の厚さは、例えば１〜３０μｍである。
【００３６】
さらに試薬層と展開層との間には、色遮蔽層又は光反射層を設けることができる。色遮蔽層又は光反射層は光遮蔽性又は光遮蔽性と光反射性を兼ね備えた二酸化チタン微粒子、硫酸バリウム微粒子等の白色微粒子がゼラチン等の親水性ポリマーバインダー中にほぼ一様に分散されている乾燥時の厚さ約２μｍから約２０μｍの範囲の層である。
【００３７】
さらに試薬層、アンモニア拡散防止層、内因性アンモニア補足層、色遮蔽層又は光反射層の上には展開層を強固に接着一体化する目的で親水性ポリマーからなる公知の接着層を設けることができる。接着層の乾燥時の厚さは約０．５μｍから約５μｍの範囲である。
【００３８】
試薬層、アンモニア拡散防止層、内因性アンモニア補足層、色遮蔽層又は光反射層、接着層、展開層等には界面活性剤を含有させることができる。その例としてノニオン性界面活性剤がある。ノニオン性界面活性剤の具体例として、ｐ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール、ｐ−ノニルフェノキシポリエトキシエタノール、ポリオキシエチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタンモノラウレート、ｐ−ノニルフェノキシポリグリシドール、オクチルグルコシド等がある。ノニオン性界面活性剤を展開層に含有させることにより水性液体試料の展開作用（メータリング作用）がより良好になる。ノニオン性界面活性剤を試薬層、アンモニア拡散防止層、内因性アンモニア補足層、色遮蔽層又は光反射層、接着層などに含有させることにより分析操作時に水性液体試料中の水が試薬層に実質的に一様に吸収されやすくなり、また展開層との液体接触が迅速にかつ実質的に一様になる。
【００３９】
本発明の分析素子を用いて液体試料中の、例えばアンモニア又はアンモニア生成基質を測定するには、展開層の上に３〜３０μＬ、好ましくは６〜１５μＬの範囲の全血、血漿、血清、尿等の水性液体試料滴を点着し、１〜１０分の範囲で、約２０〜４０℃の範囲の実質的に一定の温度でインキュベーションを行った後、透明支持体側から検知層の色変化（発色又は退色）の程度を反射測光するか、標準色と視覚的に比較すればよい。
【実施例】
【００４０】
以下、本発明を実施例および比較例によりさらに説明するが、本発明は下記例に限定されるものではない。
［実施例１］
厚さ１８０μｍの透明ポリエチレンテレフタレート（ＰＥＴ）フィルムの上に下記の被覆量となるように検知層をエタノール溶液により塗布・乾燥した。
検知層
ブロムフェノールブルー    １１０ｍｇ／ｍ2
ポリビニルメチルエーテル    １．８ｇ／ｍ2  質量平均分子量：約４万
ポリビニルブチラール      ０．１８ｇ／ｍ2  平均重合度：約３００
水酸化ナトリウム          ６．８ｍｇ／ｍ2
【００４１】
次いで、検知層の上に平均孔径０．２μｍ、空隙率７５％、厚さ１００μｍのポリエチレン製メンブレンフィルターを均一に圧着して液体遮断層を設けた。この液体遮断層の上に試薬層を下記の被覆量となるように試薬層を水溶液から塗布・乾燥した。
【００４２】
試薬層（ｐＨ９．０）
ヒドロキシエチルセルロース        ３．０ｇ／ｍ2
平均分子量：約４万
ヒドロキシエチル基平均置換度：ＤＳ＝１．０〜１．３
平均値モル数：ＭＳ＝１．８〜２．５
四ホウ酸ナトリウム                    １ｇ／ｍ2
クレアチニンイミノヒドラーゼ    １８００Ｕ／ｍ2
（ＥＣ ３．５．４．２１）
【００４３】
さらに、試薬層の上に、下記の被覆量となるように、アンモニア拡散防止層を塗布し、乾燥した。
アンモニア拡散防止層
ヒドロキシプロピルセルロース    ２０．０ｇ／ｍ2
メトキシ基２８〜３０％
ヒドロキシプロポキシ基７〜１２％
２％水溶液の２０℃での粘度０．０５Ｐａ．ｓ（５０ｃｐｓ）
【００４４】
さらに、アンモニア拡散防止層の上に、下記の被覆量となるように、内因性アンモニア補足層を塗布し、乾燥した。
内因性アンモニア補足層（ｐＨ８．２）
ヒドロキシエチルセルロース            ５ｇ／ｍ2
アンフォライト                    １．２ｇ／ｍ2
α−ケトグルタル酸                １．２ｇ／ｍ2
ＮＡＤＰＨ                        ０．４ｇ／ｍ2
グルタミン酸デヒドロゲナーゼ  １００００Ｕ／ｍ2
（ＥＣ １．４．１．４）
【００４５】
上記内因性アンモニア補足層を０．２％Ｐ−ノニルフェノキシポリグリシドール水溶液でほぼ均一に湿潤させ、直ちにポリエステル編布（ゲージ数４０）を均一に圧着した。さらにこの積層物に、展開性を改良する目的で下記の被覆量となるようにポリビニルピロリドンのエタノール溶液を含浸塗布・乾燥し、１２ｍｍ幅にスリットしてクレアチニン定量分析用一体型多層分析素子を調製した。
ポリビニルピロリドン  ７．５ｇ／ｍ2  平均分子量：約１２０万
【００４６】
［比較例１］
ポリビニルブチラールを使用せずに検知層を作成した以外は実施例１と同様にクレアチニン定量分析用一体型多層分析素子を調製した。
【００４７】
上記で得られたクレアチニン定量分析用一体型多層分析素子における、支持体透明ＰＥＴフィルムと検知層との間の剥離力を測定した。剥離力は、以下の方法により測定された値である。
剥離力測定方法：剥離力測定装置として、オリエンテック社製、ＴＥＮＳＩＬＯＮ  ＵＴＭ−ＩＩ−２０を用いる。サンプルを、幅１２ｍｍ、長さ１５０ｍｍの短冊状に切り取り、両面テープでＰＥＴフィルム面を架台に貼り付ける。ＰＥＴフィルムと検知層との間を手動で引き剥がし、はがした検知層をクリップで止め、測定装置に連結し、測定を開始する。剥離力がレコーダーとしてグラフに記録され、グラフから剥離力を読み取ることができる。
また同時にサンプルの感度、保存性能も測定した。
感度は、クレアチニンを１２．７ｍｇ／ｄｌの割合で含む溶液を、展開層上に１０μｌ点着させ、５分後の発色光学濃度（ＯＤ）を６５０ｎｍの測定波長で測定し、相対値で示した。
保存性能は、４５℃、４日間の加速試験を実施することにより調べた。評価は、○：±５％以内、×：±５％より大きいとした。
【００４８】
結果を下記に示す。
剥離力        感度        保存性能
実施例１        ２１８ｇ    １０４％         ○
比較例１          １５ｇ    １００％         ○
【００４９】
実施例１の分析素子では、水不溶性ビニルポリマーを使用していない従来の分析素子（比較例１）に比べて、約１５倍の剥離力を有し、しかも感度の低下が生じず、保存性能も良好であることが分かる。