(57)【要約】      （修正有）【課題】ヒト・インターロイキン−１１受容体（ＩＬ−１１Ｒ）の製造方法の提供。さらに、治療薬の製造、ＩＬ−１１の受容体への結合および受容体シグナリングに対する阻害剤のスクリーニング方法の提供。【解決手段】ヒト・ＩＬ−１１受容体およびそのフラグメントをコードしているポリヌクレオチドを開示する。ヒト・ＩＬ−１１受容体蛋白、それらの製造方法、ヒト・ＩＬ−１１とその受容体との結合に対する阻害剤、およびそれらの同定方法の提供。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号：１のヌクレオチド８０３からヌクレオチド１９９９までのヌクレオチド配列；
（ｂ）遺伝学的コードの縮重の結果として（ａ）に記載したヌクレオチド配列から変化しているヌクレオチド配列；および
（ｃ）（ａ）に記載したヌクレオチド配列の対立遺伝子変種
からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含んでなる単離ポリヌクレオチド。
【請求項２】
ヌクレオチド配列がヒト・ＩＬ−１１受容体の生物学的活性を有する蛋白をコードしている請求項１のポリヌクレオチド。
【請求項３】
ヌクレオチド配列が発現抑制配列に作動可能に連結されている請求項１のポリヌクレオチド。
【請求項４】
配列番号：１のヌクレオチド８０３からヌクレオチド１９９９までのヌクレオチド配列を含んでなる請求項２のポリヌクレオチド。
【請求項５】
配列番号：１のヌクレオチド８０３からヌクレオチド１８２８までのヌクレオチド配列またはそのフラグメントを含んでなる請求項２のポリヌクレオチド。
【請求項６】
配列番号：１のヌクレオチド１９０７からヌクレオチド１９９９までのヌクレオチド配列またはそのフラグメントを含んでなる請求項２のポリヌクレオチド。
【請求項７】
配列番号：１のヌクレオチド７３４からヌクレオチド１９９９までのヌクレオチド配列を含んでなる請求項１のポリヌクレオチド。
【請求項８】
配列番号：１のヌクレオチド１０６７からヌクレオチド１８２８までのヌクレオチド配列を含んでなる請求項１のポリヌクレオチド。
【請求項９】
配列番号：１のヌクレオチド１０６７からヌクレオチド１９９９までのヌクレオチド配列を含んでなる請求項１のポリヌクレオチド。
【請求項１０】
請求項３のポリヌクレオチドで形質転換された宿主細胞。
【請求項１１】
哺乳動物細胞である請求項１０の宿主細胞。
【請求項１２】
（ａ）適当な培地中で請求項１０の宿主細胞を増殖させ；次いで
（ｂ）培養からヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を精製する
ことを特徴とするヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白の製造方法。
【請求項１３】
請求項１２の方法に従って製造される蛋白。
【請求項１４】
（ａ）配列番号：２のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号：２のアミノ酸２４から４２２までのアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号：２のアミノ酸２４から３６５までのアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号：２のアミノ酸３９１から４２２までのアミノ酸配列；
（ｅ）配列番号：２のアミノ酸１０２から４２２までのアミノ酸配列；
（ｆ）配列番号：２のアミノ酸１０２から３６５までのアミノ酸配列；および
（ｇ）ヒト・ＩＬ−１１受容体の生物学的活性を有する（ａ）〜（ｆ）のフラグメント
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなる単離ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白。
【請求項１５】
配列番号：２のアミノ酸配列を含んでなる請求項１４の蛋白。
【請求項１６】
配列番号：２のアミノ酸２４から３６５までの配列を含んでなる請求項１４の蛋白。
【請求項１７】
哺乳動物対象におけるヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合を阻害するための、治療上有効量の請求項１４の蛋白および医薬上許容される担体を含んでなる医薬組成物。
【請求項１８】
哺乳動物対象における骨量の損失を治療または予防するための、治療上有効量の請求項１４の蛋白および医薬上許容される担体を含んでなる医薬組成物。
【請求項１９】
哺乳動物対象におけるヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合を阻害するための、請求項１４の蛋白と特異的に反応する治療上有効量の抗体を含んでなる医薬組成物。
【請求項２０】
哺乳動物対象における骨量の損失を治療または予防するための、請求項１４の蛋白と特異的に反応する治療上有効量の抗体を含んでなる医薬組成物。
【請求項２１】
ヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合に対する阻害剤の同定方法であって、
（ａ）請求項１４の蛋白をＩＬ−１１またはそのフラグメントと混合し、該混合により第１の結合混合物を得て；
（ｂ）第１の結合混合物中の蛋白とＩＬ−１１またはそのフラグメントとの間の結合量を測定し；
（ｃ）化合物を蛋白およびＩＬ−１１またはそのフラグメントと混合して第２の結合混合物を得て；
（ｄ）第２の結合混合物中の結合量を測定し；次いで
（ｅ）第１の結合混合物中の結合量と第２の結合混合物中の結合量とを比較する
ことを特徴とし、第２の結合混合物中の結合量の減少が起こった場合には、該化合物はヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合を阻害しうるものである方法。
【請求項２２】
第１および第２の混合物が、請求項１４の蛋白またはＩＬ−１１または請求項２１で使用されるフラグメントに結合しうるｇｐ１３０またはそのフラグメントを含んでなる請求項２１の方法。
【請求項２３】
請求項２１の方法により同定される阻害剤。
【請求項２４】
哺乳動物対象におけるヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合を阻害するための、治療上有効量の請求項２３の阻害剤および医薬上許容される担体を含んでなる医薬組成物。
【請求項２５】
哺乳動物対象における骨量の損失を治療または予防するための、治療上有効量の請求項２３の阻害剤および医薬上許容される担体を含んでなる医薬組成物。
【請求項２６】
厳密な条件下で請求項４のポリヌクレオチドにハイブリダイゼーションしうるヌクレオチド配列を含んでなる単離ポリヌクレオチド。
【請求項２７】
（ａ）配列番号：２のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号：２のアミノ酸２４から４２２までのアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号：２のアミノ酸２４から３６５までのアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号：２のアミノ酸３９１から４２２までのアミノ酸配列；
（ｅ）配列番号：２のアミノ酸１０２から４２２までのアミノ酸配列；
（ｆ）配列番号：２のアミノ酸１０２から３６５までのアミノ酸配列；および
（ｇ）ヒト・ＩＬ−１１受容体の生物学的活性を有する（ａ）〜（ｆ）のフラグメント
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなるペプチドまたは蛋白をコードしているヌクレオチド配列を含んでなる単離ポリヌクレオチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒト・インターロイキン−１１受容体、そのフラグメントおよび組み換えポリヌクレオチドおよびかかる蛋白の発現に有用な細胞に関する。
【背景技術】
【０００２】
インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）を包含するサイトカインとして知られる種々の調節分子が同定されている。ＩＬ−１１の種々の蛋白形態および種々の形態のＩＬ−１１活性をコードしているＤＮＡがＢｅｎｎｅｔｔらの特許文献１；ＭｃＣｏｙらの特許文献２；およびＭｃＣｏｙらの特許文献３に記載されており、参照によりすべてを本明細書に記載されているものと見なす。よって、用語「ＩＬ−１１」は、遺伝子組み換え法により生産されたかどうか、本来的それを生産する細胞にまたは他の因子による誘導によりそれを産生する細胞から精製されたかどうか、あるいは化学合成されたかどうか；あるいは上記方法の組み合わせにより合成されたかどうかにかかわらず、これらの特許に記載された生物学的活性を有する蛋白を包含する。
【０００３】
ＩＬ−１１は、多能性造血前駆細胞分化の誘導（非特許文献１）；巨核細胞および血小板形成の促進（非特許文献２）；急性フェーズ蛋白合成の刺激（非特許文献３）；脂肪細胞リポ蛋白リパーゼ活性の阻害（非特許文献４）；および神経伝達物質表現型に対する影響（非特許文献５）を包含するいくつかの生物学的活性に関与している多面発現性サイトカインである。
【０００４】
ＩＬ−１１を医薬調合物または処方に用いて免疫欠乏、詳細には造血前駆細胞の欠乏、またはそれに関連した疾病を治療することができる。他の疾病の治療またはその細胞の免疫系の刺激においてもＩＬ−１１を用いることができる。ＩＬ−１１をガンおよび他の疾病の治療に使用することもできる。かかる病理学的状態は、疾病、放射線への曝露または薬剤により生じる可能性があり、例えば、白血球減少、細菌またはウイルス感染、貧血、骨髄移植後の免疫細胞または造血細胞欠乏のごときＢ細胞またはＴ細胞欠乏を包含する。ＩＬ−１１を用いて、長期かつ効果的な免疫性を作り出す種々のワクチンに対する免疫応答を有効ならしめることもできる。ＩＬ−１１を用いるガンおよび他の疾病の治療的処置は、現在用いられている薬剤を用いる処置により引き起こされる望ましくない副作用を回避することができる。
【０００５】
大部分のサイトカインと問様、ＩＬ−１１は、標的細胞上のＩＬ−１１受容体（ＩＬ−１１Ｒ）と相互作用することによってある種の生物学的活性を示す。ヒト・受容体を同定し、配列決定して、ＩＬ−１１Ｒを種々の手段（治療薬の製造、ＩＬ−１１の受容体への結合および受容体シグナリングに対する阻害剤のスクリーニングを包含）により製造できるようにすることが望まれるであろう。
【特許文献１】米国特許第５，２１５，８９５号
【特許文献２】米国特許第５，２７０，１８１号
【特許文献３】米国特許第２，２９２，６４６号
【非特許文献１】Musashi et al. (1991) Blood,78,1448-1451
【非特許文献２】Burstein et al. (1992) J.Cell. Physiol.,153, 305-312
【非特許文献３】Baumann et al. (1991) J.Biol. Chem., 266, 20424-20427
【非特許文献４】Kawashima et al. (1991) FEBS Lett.,283,199-202
【非特許文献５】Fann et al.(1994) Proc. Natl. Acad.Sci.USA, 91, 43-47
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の解決しようとする課題は、ヒト・受容体を同定し、配列決定して、ＩＬ−１１受容体を種々の手段（治療薬の製造、ＩＬ−１１の受容体への結合および受容体シグナリングに対する阻害剤のスクリーニングを包含）により製造できるようにすることであった。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明によれば、ヒト・ＩＬ−１１受容体をコードしているポリヌクレオチドが開示される。ある具体例において、本発明は、
（ａ）配列番号：１のヌクレオチド８０３からヌクレオチド１９９９までのヌクレオチド配列；
（ｂ）遺伝学的コードの縮重の結果として（ａ）に記載したヌクレオチド配列から変化しているヌクレオチド配列；および
（ｃ）（ａ）に記載したヌクレオチド配列の対立遺伝子変種
からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含んでなる単離ポリヌクレオチドを提供する。好ましくは、ヌクレオチド配列はヒト・ＩＬ−１１受容体の生物学的活性を有する蛋白をコードしている。ヌクレオチド配列が発現制御配列に作動可能に連結されていてもよい。好ましい具体例において、ポリヌクレオチドは配列番号：１のヌクレオチド８０３からヌクレオチド１９９９までのヌクレオチド配列またはそのフラグメント；配列番号：１のヌクレオチド８０３からヌクレオチド１８２８までのヌクレオチド配列またはそのフラグメント；配列番号：１のヌクレオチド１９０４からヌクレオチド１９９９までのヌクレオチド配列またはそのフラグメント；配列番号：１のヌクレオチド７３４からヌクレオチド１９９９までのヌクレオチド配列またはそのフラグメント；配列番号：１のヌクレオチド１０６７からヌクレオチド１８２８までのヌクレオチド配列またはそのフラグメントあるいは配列番号：１のヌクレオチド１０６７からヌクレオチド１９９９までのヌクレオチド配列またはそのフラグメントを含んでなる。他の具体例において、ポリヌクレオチドは、非常に厳密な条件下で配列番号：１のヌクレオチド配列にハイブリダイゼーションしうるヌクレオチド配列を含んでなる。
【０００８】
また本発明は、
（ａ）配列番号：２のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号：２のアミノ酸２４から４２２までのアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号：２のアミノ酸２４から３６５までのアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号：２のアミノ酸３９１から４２２までのアミノ酸配列；
（ｅ）配列番号：２のアミノ酸１１２から４２２までのアミノ酸配列；
（ｆ）配列番号：２のアミノ酸１１２から３６５までのアミノ酸配列；および
（ｇ）ヒト・ＩＬ−１１受容体の生物学的活性を有する（ａ）〜（ｆ）のフラグメント
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなるペプチドまたは蛋白をコードしているヌクレオチド配列を含んでなる単離ポリヌクレオチドを提供する。
【０００９】
該ポリヌクレオチドで形質転換された宿主細胞、好ましくは哺乳動物細胞も提供される。
【００１０】
他の具体例において、本発明は、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白の製造方法を提供する。該方法は、
（ａ）適当な培地中で本発明宿主細胞の培養を増殖させ；次いで
（ｂ）培養からヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を精製する
ことを特徴とする。これらの方法により製造された蛋白も提供される。
【００１１】
また本発明は、
（ａ）配列番号：２のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号：２のアミノ酸２４から４２２までのアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号：２のアミノ酸２４から３６５までのアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号：２のアミノ酸３９１から４２２までのアミノ酸配列；
（ｅ）配列番号：２のアミノ酸１１２から４２２までのアミノ酸配列；
（ｆ）配列番号：２のアミノ酸１１２から３６５までのアミノ酸配列；および
（ｇ）ヒト・ＩＬ−１１受容体の生物学的活性を有する（ａ）〜（ｆ）のフラグメント
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなる単離ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を提供する。好ましくは、該蛋白は配列番号：２のアミノ酸；配列番号：２のアミノ酸２４から４２２までの配列；配列番号：２のアミノ酸２４から３６５までの配列；または配列番号：２のアミノ酸３９１から４２２までの配列を含んでなる。本発明蛋白および医薬上許容される担体を含んでなる医薬組成物も提供される。
【００１２】
さらに本発明は、本発明蛋白と特異的に反応する抗体を含んでなる組成物を提供する。
【００１３】
ヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合に対する阻害剤の同定方法も提供される。これらの方法は、
（ａ）ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはそのフラグメントをＩＬ−１１またはそのフラグメントと混合し、該混合により第１の結合混合物を得て；
（ｂ）第１の結合混合物中の蛋白とＩＬ−１１またはそのフラグメントとの間の結合量を測定し；
（ｃ）化合物を蛋白およびＩＬ−１１またはそのフラグメントと混合して第２の結合混合物を得て；
（ｄ）第２の結合混合物中の結合量を測定し；次いで
（ｅ）第１の結合混合物中の結合量と第２の結合混合物中の結合量とを比較することを特徴とし、第２の結合混合物の結合量の減少が起こった場合には、該化合物はヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合を阻害しうるものである。さらに第１および／または第２の結合混合物は、使用される請求項１３の蛋白またはＩＬ−１１または該方法で使用されるフラグメントに結合しうるｇｐ１３０またはそのフラグメントを含んでいてもよい。これらの方法により同定されるＩＬ−１１Ｒの阻害剤およびそれらを含有する医薬組成物も提供される。
【００１４】
哺乳動物対象におけるヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合の阻害方法も開示され、該方法は、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白、ＩＬ−１１Ｒ阻害剤またはヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白に対する抗体を含有する治療上有効量の組成物を投与することを特徴とする。これらの組成物を用いて哺乳動物対象における骨量の損失を治療または予防する方法も提供される。
【発明の効果】
【００１５】
本発明によれば、ＩＬ−１１Ｒを種々の手段により製造することができるようになり、治療薬の製造、ＩＬ−１１の受容体への結合および受容体シグナリングに対する阻害剤のスクリーニングも可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明者らは、ヒト・ＩＬ−１１受容体（ヒト・ＩＬ−１１Ｒ）をコードしているポリヌクレオチドを初めて同定し、これを提供する。
【００１７】
配列番号：１は、ヒトＩＬ−１１ＲをコードしているｃＤＮＡのヌクレオチド配列を示す。配列番号：２は該受容体のアミノ酸配列を示し、アミノ酸１〜２３からなる推定シグナル配列を含む。成熟ヒト・ＩＬ−１１Ｒは配列番号：２のアミノ酸２４〜４２２であると考えられる。
【００１８】
成熟受容体は少なくとも３つの明確なドメインを有している：それらは細胞外ドメイン（おおまかには配列番号：２のアミノ酸２４〜３６５を含んでなる）、膜内外ドメイン（おおまかには配列番号：２のアミノ酸３６６〜３９０を含んでなる）および細胞内ドメイン（おおまかには配列番号：２のアミノ酸３９１〜４２２を含んでなる）である。細胞外ドメインはさらに免疫グロブリン様ドメイン（おおまかには配列番号：２のアミノ酸２４〜１１１を含んでなる）およびタイプ−Ｉ−サイトカインドメイン（おおまかには配列番号：２のアミノ酸１１２〜３６５を含んでなる）に分けられる。
【００１９】
可溶性形態のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白も製造することができる。かかる可溶性形態は、配列番号：２のアミノ酸１〜３６５および２４〜３６５を含んでなる蛋白を包含するが、これらに限らない。可溶性形態のヒト・ＩＬ−１１Ｒは、好ましくは室温において水溶液に溶解しうることによってさらに特徴づけられる。細胞内ドメインまたはそのフラグメントのみを含んでなるヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白も製造することができる。全長未満のヒト・ＩＬ−１１Ｒのいずれの形態も本発明に含まれ、それらは本明細書において一括して「ヒト・ＩＬ−１１Ｒ」または「ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白」という。全長のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白（配列番号：１）をコードしているポリヌクレオチドの対応フラグメントを発現させることによって全長未満のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を製造することができる。これらの対応ポリヌクレオチドフラグメントも本発明の一部である。上記の修飾されたポリヌクレオチドを、標準的な分子生物学的方法（適当な所望欠失変異体の構築、部位特異的突然変異法が含まれる）により、あるいは適当なオリゴヌクレオチドプライマーを用いるポリメラーゼ連鎖反応により作成することができる。
【００２０】
ＩＬ−６受容体の構造に対する類似性に基づくと、全長の受容体の細胞外領域のタイプ−Ｉサイトカインドメインのみを含むＩＬ−１１Ｒ蛋白はＩＬ−１１に結合し、受容体シグナリングを誘導しうるであろうと予想される。結果として、配列番号：２のアミノ酸１１２から３６５までを含んでなるＩＬ−１１Ｒ蛋白、配列番号：２のアミノ酸１１２から３９０までを含んでなるＩＬ−１１Ｒ蛋白、および配列番号：２のアミノ酸１１２から４２２までを含んでなるＩＬ−１１Ｒ蛋白が本発明により提供される。かかる蛋白をコードしているポリヌクレオチド（例えば、配列番号：１のヌクレオチド１０６７からヌクレオチド１８２８までのヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド、配列番号：１のヌクレオチド１０６７からヌクレオチド１９０６までのヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド、配列番号：１のヌクレオチド１０６７からヌクレオチド１９９９までのヌクレオチド配列を含んでなるポリヌクレオチド）も本発明により提供される。
【００２１】
本発明の目的からすると、蛋白が１またはそれ以上の下記特徴を有する場合には、蛋白は「ヒト・ＩＬ−１１受容体の生物学的活性」を有する：（１）ＩＬ−１１またはそのフラグメント（好ましくは、その生物学的活性のあるフラグメント）への結合能；（２）ヒト・ＩＬ−１１ＲへのＩＬ−１１の結合により発動されるシグナリング経路に合まれる細胞質ゾル蛋白または分子に結合する能力；（３）ヒトＩＬ−１１ＲへのＩＬ−１１の結合の特徴的なシグナルを生じる能力（ここに、問題となっている蛋白はＩＬ−１１に結合しうる部分を含むか、あるいはＩＬ−１１に結合しうる別の蛋白の結合した場合にかかるシグナルを生じる）；（４）ｇｐ１３０またはそのフラグメントヘの結合能（ＩＬ−１１の存在下または不存在下いずれかにおいて）；（５）ｇｐ１３０のチロシンのホスホリレーションを誘導する能力；（６）ＪＡＫキナーゼのチロシンのホスホリレーションを誘導する能力；または（７）ＤＮＡ結合蛋白のＳＴＡＴファミリーのチロシンのホスホリレーションを誘導する能力（Ｚｈｏｎｇｅｔ  ａｌ．  （１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４，  ９５−９８）。好ましくは、該蛋白が有する生物学的活性は、ＩＬ−１１またはそのフラグメントヘの結合能であり、より好ましくは約０．１ないし約１００ｎＭのＫＤ、最も好ましくは約１ないし約１０ｎＭのＫＤを有する。
【００２２】
ヒト・ＩＬ−１１Ｒまたはその活性フラグメント（ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白）を免疫グロブリンのごとき担体分子に融合させてもよい。例えば、可溶性形態のヒト・ＩＬ−１１Ｒを、「リンカー」配列を介して免疫グロプリンのＦｃ部分に融合させてもよい。ＧＳＴ、Ｌｅｘ−ＡまたはＭＢＰとの融合蛋白のごとき他の融合蛋白を用いてもよい。
【００２３】
また本発明は、配列番号：１に示すヌクレオチド配列の対立遺伝子変種、すなわち、配列番号：１の単離ポリヌクレオチドの自然に発生する別形態を含み、対立遺伝子変種もまた、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白、好ましくはヒト・ＩＬ−１１Ｒの生物学的活性を有する蛋白をコードしている。非常に厳密な条件下（例えば、Ｏ．１ＸＳＳＣ、６５℃）において配列番号：１に示すヌクレオチド記列にハイブリダイゼーションする単離ポリヌクレオチドも本発明に含まれる。ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白をコードしているが、遺伝学的コードの縮重のため配列番号：１に示すヌクレオチド配列とは異なる単離ポリヌクレオチドも本発明に含まれる。点突然変異または誘導された修飾により生じる、配列番号：１に示すヌクレオチド配列の変種も本発明に含まれる。
【００２４】
本発明の単離ポリヌクレオチドを、Ｋａｕｆｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ１９，４４８５−４４９０（１９９１）に開示されたｐＭＴ２またはｐＥＤ発現ベクターのごとき発現制御配列に作動可能に連結してヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を組み換え法により製造してもよい。多くの適当な発現調節配列が当該分野において知られている。組み換え蛋白の発現方法も知られており、Ｒ．Ｋａｕｆｍａｎ，  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １８５，５３７−５６６（１９９０）において説明されている。本明細書の「作動可能に連結」は、本発明単離ポリヌクレオチドと発現制御配列との間の共有結合を形成するために酵素的または化学的に連結されて、そのようにして、連結されたポリヌクレオチド／発現制御配列で形質転換（トランスフェクション）された宿主細胞によりヒト・ＩＬ一１１Ｒ蛋白が発現されることを意味する。
【００２５】
多くのタイプの細胞は、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白の発現に適する宿主細胞として活動しうる。機能的なヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を発現しうるいずれの細胞タイプを用いてもよい。適当な哺乳動物宿主細胞は、例えば、サル・ＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター・卵巣（ＣＨＯ）細胞、ヒト・腎臓２９３細胞、ヒト・上皮Ａ４３１細胞、ヒト・Ｃｏｌｏ２０５細胞、３Ｔ３細胞、ＣＶ一１細胞、他の形質転換された霊長類細胞系、正常２倍体細胞、霊長類組織、霊長類外植物のｉｎ  ｖｉｔｒｏ培養により得られた細胞株、ＨｅＬａ細胞、マウス・Ｌ細胞、ＢＨＫ、ＨＬ−６０、Ｕ９３７、ＨａＫ、Ｒａｔ２、ＢａＦ３、３２Ｄ、ＦＤＣＰ一１、ＰＣ１２、Ｍ１ｘまたはＣ２Ｃ１２細胞を包含する。
【００２６】
本発明の単離ポリヌクレオチドを１またはそれ以上の昆虫発現ベクター中の適当な制御配列に作動可能に連結させ、次いで、昆虫発現系を用いることにより、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を製造することができる。バキュロウイルス／昆虫細胞発現系のための材料および方法はキットの形で市販されており、例えば、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，  Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｕ．Ｓ．Ａ．のＭａｘＢａｃＲキットがあり、かかる方法は当該分野においてよく知られており、例えばＳｕｍｍｅｒｓ  ａｎｄ  Ｓｍｉｔｈ，  Ｔｅｘａｓ  Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔ  Ｓｔａｔｉｏｎ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  Ｎｏ．１５５５（１９８７）  （参照により本明細書に記載されているものとみなす）に記載されている。可溶性形態のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を、適当な上記単離ポリヌクレオチドを用いて昆虫細胞において製造してもよい。
【００２７】
別法として、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を、酵母のごとき下等真核細胞または細菌のごとき原核細胞において製造してもよい。適当な酵母株は、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ、Ｋｌｕｙｖｅｒｏｍｙｃｅｓ株、Ｃａｎｄｉｄａ、または異種蛋白を発現できる酵母株を包含する。適当な細菌株は、Ｅｓｃｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、または異種蛋白を発現できる細菌株を包含する。
【００２８】
細菌における発現は、組み換え蛋白を含む封入体を生じる可能性がある。よって、活性のある、あるいはより活性のある物質を得るためには組み換え蛋白の再生が必要であるかもしれない。細菌封入体からの正しく折り畳まれた異種蛋白の取得方法は当該分野において知られている。一般的には、これらの方法は、封入体からの蛋白の可溶化、次いで、カオトロピック剤を用いる蛋白の完全な変性を包含する。システイン残基が蛋白の１次アミノ酵配列に存在する場合、ジスルフィド結合の正しい形成を可能にする環境（酸化還元系）において再生を行うことがしばしば必要である。再生の一般的方法は、Ｋｏｈｎｏ，  Ｍｅｔｈ．  Ｅｎｚｙｍ．，１８５，１８７−１９５（１９９０）に開示されている。  ＥＰ  ０４３３２２５および同時係属出願ＵＳＳＮ０８／１６３，８７７には他の適当な方法が記載されている。
【００２９】
本発明ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白をコードしているポリヌクレオチド配列を含む体細胞または生殖細胞により時徴づけられるトランスジエニック勤物の生産物として、例えば、トランスジエニックなウシ、ヤギ、ブタまたはヒツジの乳の成分として発現させてもよい。
【００３０】
所望蛋白の発現に必要な培養条件下で形質転換宿主細胞の培養を増殖させることにより、本発明ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を調製することができる。次いで、得られた発現蛋白を培地または細胞抽出物から精製することができる。可溶性形態の本発明ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白をならし培地から精製することができる。発現細胞から全膜フラクションを調製し、Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００のごとき非イオン性界面活性剤で膜を抽出することにより、膜結合形態の本発明ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を精製することができる。
【００３１】
当業者に知られた方法を用いてヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を精製することができる。例えば、市販蛋白濃縮フィルター、例えば、ＡｍｉｃｏｎまたはＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｐｅｌｌｉｃｏｎ限界濾過ユニットを用いて本発明ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を濃縮することができる。濃縮工程後、濃縮物をゲル濾過媒体のごとき精製マトリックスに適用することができる。別法として、例えば、懸垂ジエチルアミノエチル（ＤＥＡＥ）またはポリエチレンイミン（ＰＥＩ）基を有するマトリックまたは基材のごときアニオン交換樹脂を用いることができる。マトリックスはアクリルアミド、アガロース、デキストラン、セルロースまたは蛋白精製において通常に使用される他のタイプのものであってよい。別法として、カチオン交換工程を用いてもよい。適当なカチオン交換体は、スルホプロピルまたはカルボキシメチル基を含んでなる種々の不溶性マトリックスを包含する。スルホプロピル基が好ましい（例えば、Ｓ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）カラム）。培養上清から得たヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白の精製はさらに１またはそれ以上のカラムエ程を要するかもしれず、それらはコンカナバリンＡ−アガロース、ヘパリンートヨパール（登録商標）またはＣｉｂａｃｒｏｍ  ｂｌｕｅ  ３ＧＡ  Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）のようなアフィニティー樹脂によるカラム；あるいはフエニルエーテル、ブチルエーテルまたはプロピルエーテルのような樹脂を用いる疎水性相互作用クロマトグラフィー；あるいは免疫アフィニティークロマトグラフィーである。最後に、疎水性ＲＰ−ＨＰＬＣ媒体、例えば、懸垂メチルまたは他の脂肪族基を有するシリカゲルを用いる１またはそれ以上の逆相高品質液体クロマトグラフィー（ＰＲ−ＨＰＬＣ）工程を用いてさらにヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を精製することができる。ＩＬ−１１またはそのフラグメントを含むアフィニティー力ラム、あるいはＩＬ−１１Ｒ蛋白に対する抗体を含むアフィニティーカラムを既知方法による精製に使用することもできる。上記精製工程のいくつかまたはすべてを種々組み合わせて、あるいは他の既知方法と組み合わせて用いて実質的に精製された単離組み換え蛋白を得ることができる。好ましくは、単離ＩＬ−１１Ｒ蛋白を、実質的に他の哺乳動物蛋白を含まないように精製する。
【００３２】
本発明ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を用いて、ヒト・ＩＬ−１１Ｒに結合しうるかあるいはヒト・ＩＬ−１１Ｒ（細胞外または細胞内ドメインのいずれか）へのＩＬ−１１の結合を妨害して正常な結合およびサイトカイン作用の阻害剤として作用しうる剤（ＩＬ−１１Ｒ阻害剤）のスクリーニングを行ってもよい。固定化された、あるいは固定化されていない所望結合蛋白を用いる結合アッセイは当該分野でよく知られており、該アッセイを本発明ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を用いるこの目的のために使用することができる。精製細胞に基づく、あるいは蛋白に基づく（無細胞）スクリーニングアッセイを用いてかかる剤を同定することができる。例えば、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を精製形態で担体上に固定化し、阻害剤でありうる剤の存在下または不存在下で精製ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白への結合を測定することができる。別法として、適当な結合アッセイは可溶性形態の本発明ヒト・ＩＬ−１１Ｒを用いるものであってもよい。
【００３３】
かかるスクリーニングアッセイにおいて、ＩＬ−１１またはそのフラグメントとヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白とを混合することにより第１の結合混合物を得て、第１の結合混合物中の結合量（Ｂ０）を測定する。ＩＬ−１１またはそのフラグメント、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白、およびスクリーニングすべき化合物または剤を混合することにより第２の結合混合物を得て、第２の結合混合物中の結合量（Ｂ）を測定する。例えば、Ｂ／Ｂ０比の計算を行うことにより、第１および第２の結合混合物の結合量を比較する。第１の結合混合物と比較して第２の結合混合物中の結合の減少が観察される場合に、化合物または剤は結合を阻害しうると考えられる。ｇｐ１３０を結合混合物の一方または両方に添加してもよい。結合混合物の処方および最適化は当業者のレベルの範囲内であり、かかる結合混合物は、結合を促進または最適化するのに必要なバッファーおよび塩を含んでいてもよく、さらに対照アッセイを本発明スクリーニングアッセイに含ませてもよい。
【００３４】
ＩＬ−１１またはそのフラグメントヘのヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白の結合活性をある程度、好ましくは少なくとも約１０％、より好ましくは約５０％以上減少させることが見いだされる化合物をこのようにして同定し、次いで、他の結合アッセイおよびｉｎ  ｖｉｖｏアッセイにおいて２次スクリーニングすることができる。これらの手段により、ＩＬ−１１Ｒ結合に対する阻害活性を有する化合物であって治療剤として適当でありうる化合物を同定することができる。
【００３５】
ＩＬ−１１Ｒ、ＩＬ−１１の発現または存在を検出、あるいはＩＬ−１１またはＩＬ−１１を発現する細胞を検出するための診断薬としてヒト・ＩＬ一１１Ｒ蛋白、およびそれらをコードしているポリヌクレオチドを用いてもよい。これらのタイプの材料を用いる診断アッセイのための標準的手順において、蛋白またはポリヌクレオチドをかかる目的に用いてもよい。適当な方法は当業者によく知られている。
【００３６】
ヒト・ＩＬ−１１Ｒは、ＩＬ−１１の知られた生物学的活性のメディエイタとして作用する。結果として、単離ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白およびＩＬ−１１Ｒ阻害剤は、ＩＬ−１１が関与している種々の医学的症状、あるいはＩＬ−１１の活性（またはその欠乏）により生じる種々の医学的症状（一括して「ＩＬ−１１関連症状」という）の治療または転調において有用でありうる。ＩＬ−１１関連症状は、免疫欠乏、詳細には造血前駆細胞の欠乏、またはそれに関連した疾病、ガンおよび他の疾病を包含するが、これらに限らない。かかる病理学的状態は、疾病、放射線への曝露または薬剤により生じる可能性があり、例えば、白血球減少、細菌もしくはウイルス感染、貧血、骨髄移植後の免疫細胞もしくは造血細胞欠乏のごときＢ細胞もしくはＴ細胞欠乏を包含する。
【００３７】
ＩＬ−１１およびＩＬ−１１Ｒは、骨の成熟および修復において役割を果たしている可能性があると考えられている（Ｇｉｒａｓｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ，９３，１５１６−１５２４  ；  Ｐａｓｓｅｒｌ  ｅｔ  ａ１．（１９９２）Ｊ．Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ．  Ｒｅｓ．，  ７（Ｓ１），Ｓ１１０  Ａｂｓｔ
．；Ｐａｓｓｅｒｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊ．  Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．，８（Ｓ１），Ｓ１６２  Ａｂｓｔ．）。結果として、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白およびＩＬ−１１Ｒ阻害剤は、骨の損失（骨粗鬆症、閉経後の骨粗鬆症、老人性骨粗鬆症、突発性骨粗鬆症、パジェット病、多発性ミエロ−マおよび性機能低下症状を包含）の治療において有用でありうる。
【００３８】
細胞から精製された、または組み換え法により製造されたヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白およびＩＬ−１１Ｒ阻害剤を、医薬上許容される担体と混合して医薬組成物として用いてもよい。かかる組成物は、ヒト・ＩＬ−１１Ｒまたはリガンドおよび担体のほかに、希釈剤、充填剤、塩類、バッファー、安定化剤、可溶化剤および当該分野で知られた他の物質を含有していてもよい。用語「医薬上許容される」は、有効成分の生物学的活性の有効性を妨害しない無毒の物質を意味する。担体の特性は投与経路に依存する。
【００３９】
本発明医薬組成物は、Ｍ−ＣＳＦ、ＧＭ−ＣＳＦ、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ一１５、Ｇ−ＣＳＦ、幹細胞因子およびエリトロポエチンのごときサイトカイン、リンホカイン、または他の造血因子を含有していてもよい。医薬組成物は、プラスミノゲンアクチベーターおよびファクターＶＩＩＩのごとき血栓溶解または抗血栓因子を含有していてもよい。医薬組成物はさらに他の抗炎症剤を含有していてもよい。かかるさらなる因子および／または剤を医薬組成物に含ませて、単離ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤との相互作用を生じるようにしてもよく、あるいは単離ヒト・ＩＬ−１１ＲまたはＩＬ−１１Ｒ阻害剤により引き起こされる副作用を最小にするようにしてもよい。逆に、単離ヒト・ＩＬ−１１ＲまたはＩＬ−１１Ｒ阻害剤を、特定のサイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解または抗血栓因子、または抗炎症剤の処方に含ませて、サイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解または抗血栓因子、または抗炎症剤の副作用を最小化してもよい。
【００４０】
本発明医薬組成物は、単離ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤が他の医薬上許容される担体とともに脂質のごとき両親媒性剤と混合されているリポソームの形態であってもよく、脂質は水溶液中のミセル、不溶性単層、液状結晶またはラメラ層のような凝集形態で存在している。かかるリポソーム処方の調製は当業者のレベルの範囲内であり、例えば米国特許第４，２３５，８７１号；米国特許第４，５０１，７２８号；米国特許第４，８３７，０２８号；および米国特許第４，７３７，３２３号（参照によりこれらすべてを本明細書に記載されているものと見なす）に開示されている。
【００４１】
本明細書の用語「治療上有効量」は、医薬組成物の各有効成分の合計量、あるいは患者に対する有意な有益性（例えば、かかる症状の徴候の改善、治癒、または治癒速度の上昇）を示すに十分な方法を意味する。単独で投与される個々の有効成分についてこの語を用いる場合には、この語は当該成分のみについていう。組み合わせについてこの語を用いる場合には、この語は、組み合わせ投与、逐次投与あるいは同時投与にかかわらず、治療効果を生じる有効成分の合計量についていう。
【００４２】
本発明治療方法または使用を実施する場合、単離ヒト・ＩＬ−１１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤の治療上有効量を哺乳動物に投与する。単離ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤を、それのみ、あるいはサイトカイン、リンホカインまたは他の造血因子を用いる治療のごとき他の治療と組み合わせて、本発明方法に従って投与することができる。１またはそれ以上のサイトカイン、リンホカインまたは他の造血因子と共投与する場合、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤を、サイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解または抗血栓因子と同時投与、あるいは逐次投与することができる。逐次投与する場合、担当医は、サイトカイン、リンホカイン、他の造血因子、血栓溶解または抗血栓因子と組み合わせるヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤の順序を決定するであろう。
【００４３】
本発明医薬組成物または本発明方法の実施に用いるヒト・ＩＬ−１１ＲまたはＩＬ−１１Ｒ阻害剤の投与を、経口摂取、吸入、あるいは皮内、皮膚、または静脈注射のごとき種々の慣用的経路で行うことができる。患者への静脈投与が好ましい。
【００４４】
治療上有効量のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤を経口投与する場合、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤は錠剤、カプセル、粉末、溶液またはエリキシルの形態であろう。錠剤形態で投与する場合、本発明医薬組成物はさらにゼラチンのごとき固体担体またはアジュバントを含有していてもよい。錠剤、カプセル、および粉末は、約５ないし９５％のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害刑、好ましくは約２５ないし９０％のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻宮刑を含有する。液体形態で投与する場合、水、石油、ピーナッツ油、鉱油、大豆油またはゴマ油のごとき動物または植物起源の油、あるいは合成油のごとき液体担体を添加してもよい。医薬組成物の液体形態はさらに生理学的セイライン溶液、デキストロースまたは他の糖類の溶液、あるいはエチレングリコール、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールのごときグリコール類を含有していてもよい。液体形態で投与する場合、医薬組成物は約０．５ないし９０重量％のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤、好ましくは約１ないし５０％のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤を含有する。
【００４５】
治療上有効量のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ一１１Ｒ阻害剤を静脈、皮膚または皮下注射により投与する場合、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤はパイロジェン不含かつ非経口的に許容される水溶液の形態であろう。ｐＨ、等張性、安定性等を考慮したかかる非経口的に許容される蛋白溶液の調製は当該分野の技術の範囲内である。静脈、皮膚または皮下注射に好ましい医薬組成物は、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤のほかに、注射用塩化ナトリウム、注射用リンゲル溶液、注射用デキストロース、注射用デキストロースおよび塩化ナトリウム、注射用ラクテートリンゲル溶液、または当業者に知られた他の担体を含有すべきである。本発明医薬組成物は、安定化剤、保存料、バッファー、抗酸化剤、または当業者に知られた他の添加物を含有していてもよい。
【００４６】
本発明医薬組破物中のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤の量は、治療すべき症状の性質および重さならびに患者がすでに受けている治療によるであろう。最終的には、担当医が、個々の患者を治療するためのヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤の量を決定するであろう。まず、担当医は低用量のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤を投与し、患者の応答を観察するであろう。患者に対する最適治療効果が得られるまで、より高用量のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤を投与してもよく、一般的には、最適治療効果が得られた時点で用量をさらに増加させない。本発明方法の実施に用いる種々の医薬組成物は体重１ｋｇにつき約０．１μｇないし約１００ｍｇのヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤を含有すべきであると考えられる。
【００４７】
本発明医薬組成物を用いる静脈投与による治療期間は、治療すべき疾病の重さおよび症状および個々の患者の潜在的特徴的応答により変化させられるであろう。ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白またはＩＬ−１１Ｒ阻害剤の各投与期間は、連続的静脈投与の場合１２ないし２４時間の範囲であろうと考えられる。最終的には、担当医が、本発明を用いる静脈投与による適当な治療期間を決定するであろう。
【００４８】
本発明ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を用いて動物を免疫して、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白と特異的に反応し、ＩＬ−１１またはそのフラグメントの受容体への結合を阻害しうるポリクローナルおよびモノクローナル抗体を得てもよい。ヒト・ＩＬ−１１Ｒ全体を免疫原として用いて、あるいは可溶性成熟ヒト・ＩＬ−１１Ｒのごときヒト・ＩＬ−１１Ｒのフラグメントを用いることにより、かかる抗体を得てもよい。ヒト・ＩＬ−１１Ｒのより小型のフラグメントを用いて動物を免疫してもよい。さらにペプチド免疫原はカルボキシル末端においてシステイン残基を含んでいてもよく、キーホール・リムペット・ヘモシアニン（ｋｅｙｈｏｌｅ  ｌｉｍｐｅｔ  ｈｅｍｏｃｙａｍｉｎ）（ＫＬＨ）と抱合したものである。チロシン残基を硫酸化チロシン残基に置き換えることにより、さらなるペプチド免疫原を得てもよい。かかるペプチドの合成方法は当該分野において知られており、例えば、Ｒ．Ｐ．Ｍｅｒｒｉｆｉｅｌｄ，  Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．８５，２１４９−２１５４（１９６３）；Ｊ．Ｌ．  Ｋｒｓｔｅｎａｎｓｋｙ，  ｅｔ  ａｌ．，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ２１１，１０（１９８７）に記載されている。
【００４９】
ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白に結合する中和または非中和抗体（好ましくはモノクローナル抗体）は、ある種の腫瘍および上記症状の治療のための有用な治療薬でありうる。これらの中和モノクローナル抗体は、ヒト・ＩＬ−１１ＲへのＩＬ−１１の結合をブロックする能力を有しうる。
【実施例１】
【００５０】
実施例１
ヒトＩＬ−１１ＲｃＤＮＡの単離
ＤＮＡプローブの調製
マウス・Ｅｔｌ−２配列由来のＤＮＡプローブ（配列番号：３）をマウス・胎盤ｃＤＮＡからＰＣＲにより得た。アミノ末端プローブはＥｔｌ−２配列の塩基対４１８〜５７０に対応し、カルボキシ末端プローブはＥｔｌ−２配列の塩基対８４７〜１０３８に対応する。ＤＮＡプローブをゲル精製し、α３２Ｐ−ｄＡＴＰおよびα３２Ｐ−ｄＣＴＰを用いて放射性標識した。
【００５１】
ｃＤＮＡライブラリーのスクリーニング：
Ｓｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ  Ｃｈｏｉｃｅ  Ｓｙｓｔｅｍを用いて活性化ヒト・ＰＢＭＣからｃＤＮＡを得て、ＺＡＰ  ＩＩ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）のＥｃｏＲＩ部忙中にクローンした。得られたファージを用いてＥ．ｃｏｌｉ  ＢＢ４株に感染させた。百万個のファージを１５０ｍｍのＮＺＣＹＭプレートに１５０００ｐｆｕ／プレートの密度で撒いた。プラークを複製用Ｄｕｒａｌｏｓｅニトロセルロースフィルタ―（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）に移した。アルカリ変性および熱固定後、５ＸＳＳＣ、５Ｘデンハーツ、０．１％  ＳＤＳ、および５０μｇ／ｍｌ  酵母・ｔＲＮＡ中、６５℃で２時間フィルターをプレハイブリダイゼーションさせた。プレハイブリダイゼーションバッファー中、５５℃で４８時間、１セットのフィルターをアミノ末端プローブとハイブリダイゼーションさせ、他のセットをカルボキシ末端プローブ（５×１０５ｃｐｍ／ｍｌ）とハイブリダイゼーションさせた。フィルターを４ＸＳＳＣ、０．１％  ＳＤＳにて、２５℃で１回、５５℃で２回洗浄した。両プローブにハイブリダイゼーションしたプラークをオートラジオグラフィーにより固定した。
【００５２】
スクリーニングした百万個のプラークのうち、２個のプラークが両プローブにハイブリダイゼーションした。これらのプラークを拾い、クロロホルム含有ＳＭ培地中にファージを溶出させた。得られたファージを用いてＥ．ｃｏｌｉ  ＢＢ４株に再感染させ、２次スクリーニング用にＮＺＣＹＭプレートに１００〜３００ｐｆｕ／プレートの密度で撒いた。
【００５３】
２次スクリーニング後、ヘルパーファージ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を用いる切断によりプラスミドＤＮＡをＺＡＰ  ＩＩプラークから単離した。Ａｐｐｌｉｅｄ  ＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓのＤＮＡシークエンサーによりインサートのＤＮＡ配列を決定した。
【００５４】
配列番号：１の配列を有するポリヌクレオチドを含むクローンｐｈＩＬ１１Ｒ１４−２は、１９９４年１２月２２日に受託番号            としてＡＴＣＣに寄託された。
【実施例２】
【００５５】
実施例２
可溶性ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白の発現および活性のアッセイ
可溶性形態のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を哺乳動物細胞において発現させた。発現された組み換え蛋白はＢＡＦ１３０−９細胞においてシグナル変換する能力があった。
【００５６】
可溶性形態に対応する、全長のヒト・ＩＬ−１１Ｒ配列の一部（配列番号：２のアミノ酸１〜３６５をコードしている配列番号：１のヌクレオチド７３４〜１８２８）を哺乳動物発現ベクターｐＥＤ中にクローンし、ＣＯＳＭ６細胞をトランスフェクションするために用いた。トランスフェクションから４０時間後、ならし培地を取り、５倍に濃縮し、マウス・細胞系ＢＡＦ１３０−９（ヒト・ｇｐ１３０シグナルトランスデューサーを発現するＢＡＦＢ０３細胞系の誘導体であり、Ｈｉｂｉ，Ｍ．  ｅｔ  ａ１．  （１９９０）Ｃｅｌｌ  ６３，１１４９−１１５７に記載されている）を用いる増殖アッセイに使用した。ＢＡＦ１３０−９細胞はＩＬ−１１のみまたはＩＬ−６のみに応答して増殖しないが、ＩＬ−６および可溶性ＩＬ−６Ｒの組み合わせに応答して増殖する（Ｈｉｂｉらの上記文献）。疑似トランスフェクションされた細胞または可溶性ヒト・ＩＬ−１１Ｒ配列でトランスフェクションされた細胞により得られたならし培地１０μｌの不存在下または存在下にて組み換えヒト・ＩＬ−１１濃度を増加させつつ、ＢＡＦ１３０−９細胞（０．１ｍｌ中１ｘ１０４個）をＲＰＭＩ１６４０培地／１０％ＦＣＳ中で培養した。４０時間後、細胞を３Ｈ−蛋白チミジン（０．５μＣｉ／ウェル）で８時間パルス標識し、取り込まれたヌクレオチドを調べた。図２に示すように、ＢＡＦ１３０−９細胞はＩＬ−１１のみまたは可溶性ＩＬ−１１Ｒのみに応答して増殖しなかったが、ＩＬ−１１および可溶性ＩＬ−１１Ｒの両方の存在下では増殖した。
【００５７】
他のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白をこのモデルにおいて試験して、それらが本明細書定義のヒト・ＩＬ−１１Ｒの「生物学的活性」を示すかどうかを調べた。
【実施例３】
【００５８】
実施例３
ヒト・ＩＬ−１１Ｒの生物学的活性を調べるための他の系
蛋白
他の系を用いて個々のヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白が本明細書定義のヒト・ＩＬ−１１Ｒの「生物学的活性」を示すかどうかを調べることができる。かかる系の例を以下に示す。
【００５９】
ＩＬ−１１結合についてのアッセイ
結合を検出できる適当なアッセイにより、ＩＬ−１１またはそのフラグメントヘのヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白の結合能を調べることができる。いくつかの適当な例を以下に示す。
【００６０】
ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白の細胞外領域へのＩＬ−１１の結合は、受容体蛋白上のホスホチロシンの迅速な誘導を特異的に引き起こすであろう。ホスホリレーションの誘導により測定されるリガンド結合活性に関するアッセイを以下に説明する。
【００６１】
別法として、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白（例えば、可溶性形態の細胞外ドメインのような）を得て、これを用いてＩＬ−１１の結合を検出する。例えば、細胞外ドメイン（予想膜内外ドメインの前、好ましくは直前で切断されている）がヒト・免疫グロブリン（Ｉｇ）γ１のヒンジＣＨ２およびＣＨ３ドメインをコードしているｃＤＮＡにイン・フレームで連結されているＤＮＡ構築物を調製する。この構築物を、ｐＥＤΔＣまたはｐＭＴ２のごときＣＯＳ細胞用の適当な発現ベクター中に挿入された形で得る。プラスミドをＣＯＳ細胞中に一時的にトランスフェクションする。分泌されたＩＬ一１１Ｒ−Ｉｇ融合蛋白をならし培地中に集め、プロテインＡクロマトグラフィーにより精製する。
【００６２】
多くの用例においてＩＬ−１１の結合を示すために精製ＩＬ−１１Ｒ−Ｉｇ融合蛋白が用いられる。ＩＬ−１１を酵素結合免疫アッセイ（ＥＬＩＳＡ）プレート表面上にコーティングすることができ、次いで、標準的なＥＬＩＳＡバッファーを用いてウシ・血清アルブミンまたはカゼインでさらなる結合部位をブロックする。次いで、ＩＬ一１１Ｒ−Ｉｇ融合蛋白を固相ＩＬ−１１に結合させ、セイヨウワサビ・ペルオキシダーゼに抱合した２次ヤギ・抗−ヒトＩｇを用いて結合を検出する。テトラメチルベンジジンのごとき比色法で測定される基質および吸光度の読みを用いて、特異的に結合した酵素の活性を測定することができる。
【００６３】
例えば、膜内外ドメインまたはグルコシルホスファチジルイノシトール（ＧＰＩ）結合を提供することにより、ＩＬ−１１を細胞表面に発現させてもよい。ＩＬ−１１Ｒ−Ｉｇ融合蛋白を用いて膜結合ＩＬ−１１を発現する細胞を同定することができる。可溶性ＩＬ−１１Ｒ−Ｉｇ融合蛋白をこれらの細胞の表面に結合させ、フルオレセインイソチオシアネートのごとき蛍光色素に抱合したヤギ・抗−ヒト・Ｉｇおよびフローサイトメトリーを用いて検出する。
【００６４】
相互作用罠
酵母の遺伝学的選択法「相互作用罠」［Ｇｙｕｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ，Ｃｅｌｌ  ７５，７９１−８０３，１９９３］を用いて、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白は本明細書定義のヒト・ＩＬ−１１Ｒの生物学的活性を有しているかどうかを調べることができる。この系において、ＬｅｘＡｏｐ−Ｌｅｕ２およびＬｅｘＡｏｐ−ＬａｃＺ双方からのレポーター遺伝子の発現は、エサ蛋白（例えば、この場合にはヒト・ＩＬ−１１Ｒと相互作用する種）と、えじき（例えば、この場合にはヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白）との間の相互作用に依存する。よって、Ｌｅｕ２またはＬａｃＺ発現レベルにより相互作用の強さを測定することができる。最も単純な方法は、ＬａｃＺによりコードされる蛋白β−ガラクトシダーゼの活性を測定することである。Ｘ−Ｇａｌ含有培地またはフィルターの青さの程度によりこの活性を判定することができる。β−ガラクトシダーゼ活性の定量的測定のためには、標準的アッセイは“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｙｅａｓｔ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ”Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９０（Ｒｏｓｅ，Ｍ．Ｄ．，Ｗｉｎｓｔｏｎ，  Ｆ．およびＨｉｅｔｅｒ，  Ｐ．による）中に見いだされる。
【００６５】
かかる方法において、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白が特定の種（例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏでヒト・ＩＬ−１１Ｒの細胞内ドメインに結合する細胞質ゾル蛋白）と相互作用するかどうかを調べたい場合には、そのような種を相互作用罠における「エサ」として用い、試験すべきヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を「えじき」として用いることができ、その逆も可能である。
【００６６】
ＣＡＴ誘導系  ラット・β−フィブリノーゲンのごとき急性フェーズの血漿蛋白遺伝子の転写は、種々の細胞系において、ＩＬ−１１により活性化される。１の典型的な系において、ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白（全長のヒト・ＩＬ−１１Ｒまたはその可溶性形態のごとき）、ヒト・ｇｐ１３０シグナルトランスデューサーおよびレポータ一遺伝子ＣＡＴ（Ｂａｕｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９１）Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．２６６，２０４２４−２０４２７）に融合したラット・ｂ−フィブリノーゲン遺伝子の３５０塩基対のプロモーター領域を含むレポーター遺伝子をコードしているプラスミドでＣＯＳＭ６細胞をトランスフェクションする。組み換えヒト・ＩＬ−１１濃度を上昇させていって細胞を剌激し、ＣＡＴ活性の存在についてアッセイすることによりレポーター遺伝子の転写をモニターする。
【００６７】
ｇｐ１３０のホスホリレーション
ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白（全長のヒト・ＩＬ−１１Ｒまたはその可溶性形態のごとき）をコードしている配列でトランスフェクションされた細胞におけるｇｐ１３０のチロシンのホスホリレーションを誘導するＩＬ−１１の能力（Ｌｕｔｔｃｋｅｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６３，８９−９２）を試験することにより活性を調べてもよい。
【００６８】
ＳＴＡＴｓのホスホリレーション
ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白（全長のヒト・ＩＬ−１１Ｒまたはその可溶性形態のごとき）をコードしている配列でトランスフェクションされた細胞におけるＳＴＡＴｓ（転写のシグナルトランスデューサーおよびアクチベーター、ＤＮＡ結合蛋白のファミリー）のチロシンのホスホリレーションを誘導するＩＬ−１１の能力（Ｚｈｏｎｇ  ｅｔ  ａ１（１９９４）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６４，  ９５−９８）を試験することにより活性を調べてもよい。
【００６９】
ＪＡＫキナーゼのホスホリレーション
ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白（全長のヒト・ＩＬ−１１Ｒまたはその可溶性形態のごとき）をコードしている配列でトランスフェクションされた細胞におけるＪＡＫキナーゼのチロシンのホスホリレーションを誘導するＩＬ−１１の能力（Ｙｉｎ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９３）Ｊ．Ｉ１ｍｍｕｎｌ．１５１：２５５５−２５６１）を試験することにより活性を調べてもよい。
【００７０】
本明細書に引用された特許および文献は、参照により全体が本明細書に記載されているものと見なされる。
【産業上の利用可能性】
【００７１】
本発明は、医薬品の分野、研究用試薬の分野等に利用可能である。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】図１は、ヒト・ＩＬ−１１受容体およびｇｐ１３０の構造をスキームで示したものである。
【図２】図２は、可溶性形態の組み換えヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白の生物学的活性を示すデータである。
【図３】図３は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドの配列を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３−１】
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【図３−２】
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【図３−３】
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【図３−４】
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【図３−５】
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【図３−６】
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【図３−７】
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【図３−８】
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【図３−９】
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【図３−１０】
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【手続補正書】
【提出日】平成18年4月21日(2006.4.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）配列番号：１のヌクレオチド８０３からヌクレオチド１９９９までのヌクレオチド配列；および
（ｂ）０．１ｘＳＳＣ、６５℃において（ａ）の配列にハイブリダイゼーションするヌクレオチド配列
からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含んでなる単離ポリヌクレオチド。
【請求項２】
ヌクレオチド配列がヒト・ＩＬ−１１受容体の生物学的活性を有する蛋白をコードしている請求項１のポリヌクレオチド。
【請求項３】
ヌクレオチド配列が発現抑制配列に作動可能に連結されている請求項１のポリヌクレオチド。
【請求項４】
配列番号：１のヌクレオチド８０３からヌクレオチド１９９９までのヌクレオチド配列を含んでなる請求項２のポリヌクレオチド。
【請求項５】
配列番号：１のヌクレオチド８０３からヌクレオチド１８２８までのヌクレオチド配列またはそのフラグメントを含んでなる請求項２のポリヌクレオチド。
【請求項６】
配列番号：１のヌクレオチド１９０７からヌクレオチド１９９９までのヌクレオチド配列またはそのフラグメントを含んでなる請求項２のポリヌクレオチド。
【請求項７】
配列番号：１のヌクレオチド７３４からヌクレオチド１９９９までのヌクレオチド配列を含んでなる請求項１のポリヌクレオチド。
【請求項８】
配列番号：１のヌクレオチド１０６７からヌクレオチド１８２８までのヌクレオチド配列を含んでなる請求項１のポリヌクレオチド。
【請求項９】
配列番号：１のヌクレオチド１０６７からヌクレオチド１９９９までのヌクレオチド配列を含んでなる請求項１のポリヌクレオチド。
【請求項１０】
請求項３のポリヌクレオチドで形質転換された宿主細胞。
【請求項１１】
哺乳動物細胞である請求項１０の宿主細胞。
【請求項１２】
（ａ）適当な培地中で請求項１０の宿主細胞を増殖させ；次いで
（ｂ）培養からヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白を精製する
ことを特徴とするヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白の製造方法。
【請求項１３】
請求項１２の方法に従って製造される蛋白。
【請求項１４】
（ａ）配列番号：２のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号：２のアミノ酸２４から４２２までのアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号：２のアミノ酸２４から３６５までのアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号：２のアミノ酸３９１から４２２までのアミノ酸配列；
（ｅ）配列番号：２のアミノ酸１０２から４２２までのアミノ酸配列；
（ｆ）配列番号：２のアミノ酸１０２から３６５までのアミノ酸配列；および
（ｇ）ヒト・ＩＬ−１１受容体の生物学的活性を有する（ａ）〜（ｆ）のフラグメント
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなる単離ヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白。
【請求項１５】
配列番号：２のアミノ酸配列を含んでなる請求項１４の蛋白。
【請求項１６】
配列番号：２のアミノ酸２４から３６５までの配列を含んでなる請求項１４の蛋白。
【請求項１７】
哺乳動物対象におけるヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合を阻害するための、治療上有効量の請求項１４の蛋白および医薬上許容される担体を含んでなる医薬組成物。
【請求項１８】
哺乳動物対象における骨量の損失を治療または予防するための、治療上有効量の請求項１４の蛋白および医薬上許容される担体を含んでなる医薬組成物。
【請求項１９】
哺乳動物対象におけるヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合を阻害するための、請求項１４の蛋白と特異的に反応する治療上有効量の抗体を含んでなる医薬組成物。
【請求項２０】
哺乳動物対象における骨量の損失を治療または予防するための、請求項１４の蛋白と特異的に反応する治療上有効量の抗体を含んでなる医薬組成物。
【請求項２１】
ヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合に対する阻害剤の同定方法であって、
（ａ）請求項１４の蛋白をＩＬ−１１またはそのフラグメントと混合し、該混合により第１の結合混合物を得て；
（ｂ）第１の結合混合物中の蛋白とＩＬ−１１またはそのフラグメントとの間の結合量を測定し；
（ｃ）化合物を蛋白およびＩＬ−１１またはそのフラグメントと混合して第２の結合混合物を得て；
（ｄ）第２の結合混合物中の結合量を測定し；次いで
（ｅ）第１の結合混合物中の結合量と第２の結合混合物中の結合量とを比較する
ことを特徴とし、第２の結合混合物中の結合量の減少が起こった場合には、該化合物はヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合を阻害しうるものである方法。
【請求項２２】
第１および第２の混合物が、請求項１４の蛋白またはＩＬ−１１または請求項２１で使用されるフラグメントに結合しうるｇｐ１３０またはそのフラグメントを含んでなる請求項２１の方法。
【請求項２３】
請求項２１の方法により同定される阻害剤。
【請求項２４】
哺乳動物対象におけるヒト・ＩＬ−１１受容体へのＩＬ−１１の結合を阻害するための、治療上有効量の請求項２３の阻害剤および医薬上許容される担体を含んでなる医薬組成物。
【請求項２５】
哺乳動物対象における骨量の損失を治療または予防するための、治療上有効量の請求項２３の阻害剤および医薬上許容される担体を含んでなる医薬組成物。
【請求項２６】
厳密な条件下で請求項４のポリヌクレオチドにハイブリダイゼーションしうるヌクレオチド配列を含んでなる単離ポリヌクレオチド。
【請求項２７】
（ａ）配列番号：２のアミノ酸配列；
（ｂ）配列番号：２のアミノ酸２４から４２２までのアミノ酸配列；
（ｃ）配列番号：２のアミノ酸２４から３６５までのアミノ酸配列；
（ｄ）配列番号：２のアミノ酸３９１から４２２までのアミノ酸配列；
（ｅ）配列番号：２のアミノ酸１０２から４２２までのアミノ酸配列；
（ｆ）配列番号：２のアミノ酸１０２から３６５までのアミノ酸配列；および
（ｇ）ヒト・ＩＬ−１１受容体の生物学的活性を有する（ａ）〜（ｆ）のフラグメント
からなる群より選択されるアミノ酸配列を含んでなるペプチドまたは蛋白をコードしているヌクレオチド配列を含んでなる単離ポリヌクレオチド。
【手続補正書】
【提出日】平成18年5月22日(2006.5.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７２】
【図１】図１は、ヒト・ＩＬ−１１受容体およびｇｐ１３０の構造をスキームで示したものである。
【図２】図２は、可溶性形態の組み換えヒト・ＩＬ−１１Ｒ蛋白の生物学的活性を示すデータである。
【図３−１】図３−１は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドに関する配列表の一部である（図３−２へ続く）。
【図３−２】図３−２は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドに関する配列表の一部である（図３−３へ続く）。
【図３−３】図３−３は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドに関する配列表の一部である（図３−４へ続く）。
【図３−４】図３−４は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドに関する配列表の一部である（図３−５へ続く）。
【図３−５】図３−５は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドに関する配列表の一部である（図３−６へ続く）。
【図３−６】図３−６は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドに関する配列表の一部である（図３−７へ続く）。
【図３−７】図３−７は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドに関する配列表の一部である（図３−８へ続く）。
【図３−８】図３−８は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドに関する配列表の一部である（図３−９へ続く）。
【図３−９】図３−９は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドに関する配列表の一部である（図３−１０へ続く）。
【図３−１０】図３−１０は、本発明のポリヌクレオチドおよびポリペプチドに関する配列表の一部である（図３−９から続く）。