(57)【要約】【課題】  大量生産に適したジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物の製造方法を提供する。【解決手段】  ジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物（第１の化合物）は、ジベンゾビシクロ［５．３．０］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物（第２の化合物）を非プロトン性極性溶媒に溶解し、硫酸よりも酸強度が強い酸よりなる酸触媒の存在下で、第２の化合物の骨格を変換する骨格変換工程を行うことにより製造される。第２の化合物として化５に示されるバチカノールＢを用いる場合には、第１の化合物として化２に示されるバチカノールＣ及び／又はその立体異性体が製造される。バチカノールＣ及びその立体異性体は、ゲル濾過カラムクロマトグラフィーと逆相カラムクロマトグラフィーとを組合せた精製工程により分画可能である。    【化２】2006151906.tif 000007    【化５】2006151906.tif 000008【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物を製造する方法であって、
ジベンゾビシクロ［５．３．０］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物を非プロトン性極性溶媒に溶解し、硫酸よりも酸強度が強い酸よりなる酸触媒の存在下で前記化合物の骨格を変換する骨格変換工程を行うことを特徴とするジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物の製造方法。
【請求項２】
前記ジベンゾビシクロ［５．３．０］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物はバチカノールＢであり、
前記ジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物はバチカノールＣ及びその立体異性体から選ばれる少なくとも一種であることを特徴とする請求項１に記載のジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物の製造方法。
【請求項３】
前記骨格変換工程は、前記ジベンゾビシクロ［５．３．０］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物が溶解された溶液を、不活性ガス雰囲気中で攪拌する工程であることを特徴とする請求項１又は請求項２に記載のジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物の製造方法。
【請求項４】
前記骨格変換工程後に精製工程が行われ、
該精製工程は、前記ジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物を、ゲル濾過カラムクロマトグラフィーにて分画する工程であることを特徴とする請求項１から請求項３のいずれか一項に記載のジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バチカノールＣ（Vaticanol C 又はvatdiospyroidol）やその立体異性体等のジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン（Dibenzobicyclo[3.2.1]octadiene）骨格を有するスチルベン４量体化合物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物としては、例えば特許文献１に開示されているバチカノールＣが知られている。バチカノールＣは、レスベラトロール（resveratrol）骨格（３，５，４’−トリヒドロキシスチルベン骨格）を基本単位とするスチルベン４量体化合物である。バチカノールＣは、ミトコンドリアを介してカスペース（caspase）を活性化させることにより、癌細胞特異的にアポトーシス（apoptosis）を誘導する。
【０００３】
バチカノールＣは、フタバガキ科植物の幹及び樹皮からなるレサック材に含まれているため、そのようなレサック材を有機溶剤抽出することにより製造されている。具体的には、粉砕したレサック材をアセトン抽出した後、シリカゲルカラムクロマトグラフィーに吸着させ、クロロホルムとメタノールとの混合液で溶出することにより分離される。
【０００４】
前記レサック材からバチカノールＣを製造する際には、バチカノールＣに類似した構造を有するバチカノールＢ（Vaticanol B）も同時に得ることが可能である。バチカノールＢは、バチカノールＣと同様にレスベラトロール骨格を基本単位とするスチルベン４量体化合物であるが、ジベンゾビシクロ［５．３．０］オクタジエン骨格を有している。なお、バチカノールＢは、バチカノールＣと比べて抗腫瘍活性が若干弱い（例えば非特許文献１，２参照）。
【０００５】
一方、バチカノールＣに類似した構造を有するその他の化合物としては、ジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物であるイソバチカノールＣ（isovaticanol C）が知られている（例えば非特許文献３，４参照）。イソバチカノールＣは、バチカノールＣの立体異性体であり、抗腫瘍活性を有している。
【特許文献１】特開２００３−７３２７１号公報
【非特許文献１】伊藤哲朗（Tetsuro Ito）、外４名、「新規レスベラトロール４量体であるバチカノールＣは、大腸癌細胞株へのアポトーシス誘導を介して細胞増殖を抑える（Vaticanol C, a Novel Resveratrol Tetramer, Inhibits Cell Growth through Induction of Apoptosis in Colon Cancer Cell Lines）」、バイオロジカル＆ファルマシューティカル・ビュレチン（Biol.Pharm.Bull.）、社団法人日本薬学会（Pharmaceutical Society of Japan）、２００２年１月、２５（１）、１４７−１４８（２００２）
【非特許文献２】伊藤哲朗（Tetsuro Ito）、外７名、「ヒト癌細胞株に対するレスベラトロール・オリゴマーの抗腫瘍効果、及びバチカノールＣによって誘導されるアポトーシスの分子機構（Antitumor effect of resveratrol oligomers against human cancer cell lines and the molecular mechanism of apoptosis induced by vaticanol C）」、カルシノジェネシス（Carcinogenesis）、オックスフォード・ユニバーシティ・プレス（Oxford University Press.）、Ｖｏｌ．２４、Ｎｏ．９、ｐｐ．１４８９−１４９７、２００３
【非特許文献３】伊藤哲朗（Tetsuro Ito）、外１０名、「バチカ・パウシフロ−ラの樹皮に存在する新規なレスベラトロール・オリゴマー（New resveratrol oligomers in the stem bark of Vatica pauciflora）」、テトラへドロン（TETRAHEDRON）、エルゼビア・サイエンス・リミテッド（Elsevier Science Ltd.）、５９（２００３）５３４７−５３６３
【非特許文献４】伊藤哲朗（Tetsuro Ito）、外１０名、「ウプナ・ボルネエンシス由来の新規レスベラトロール４量体（A NEW RESVERATROL HEXAMER FROM UPUNA BORNEENSIS）」、ヘテロサイクルズ（HETEROCYCLES）、２００３年１１月１０日、Ｖｏｌ．６３，Ｎｏ．１，２００４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
バチカノールＣは、上述のようにバチカノールＢよりも抗腫瘍活性が高いという点で極めて有用である。しかしながら、現在、バチカノールＣの大量生産に適した方法が開発されていないため、十分な量の供給がなされていないのが現状である。例えば、前記レサック材からバチカノールＣを製造する際の収率は、レサック材をアセトン抽出することにより得られるエキス量に対して約１％程度に止まる。これに対し、同様な方法でバチカノールＢを製造すると、バチカノールＣの１０倍もの量が容易に得られる。
【０００７】
また、バチカノールＣのようなジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物は、極めて複雑な構造を有しているため、有機合成化学的に製造することがほぼ不可能である。さらに、このようなスチルベン４量体化合物は、不斉炭素を数多く有しているため、イソバチカノールＣのような多種類の立体異性体が存在し得るという点で、全ての不斉炭素に所望とする選択的な結合を有機合成化学的にもたらすことは実質的に不可能である。
【０００８】
本発明は、このような従来技術に存在する問題点に着目してなされたものである。その目的とするところは、大量生産に適したジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物の製造方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００９】
上記の目的を達成するために、請求項１に記載の発明は、ジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物を製造する方法であって、ジベンゾビシクロ［５．３．０］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物を非プロトン性極性溶媒に溶解し、硫酸よりも酸強度が強い酸よりなる酸触媒の存在下で前記化合物の骨格を変換する骨格変換工程を行うことを要旨とする。
【００１０】
請求項２に記載の発明は、請求項１に記載の発明において、前記ジベンゾビシクロ［５．３．０］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物はバチカノールＢであり、前記ジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物はバチカノールＣ及びその立体異性体から選ばれる少なくとも一種であることを要旨とする。
【００１１】
請求項３に記載の発明は、請求項１又は請求項２に記載の発明において、前記骨格変換工程は、前記ジベンゾビシクロ［５．３．０］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物が溶解された溶液を、不活性ガス雰囲気中で攪拌する工程であることを要旨とする。
【００１２】
請求項４に記載の発明は、請求項１から請求項３のいずれか一項に記載の発明において、前記骨格変換工程後に精製工程が行われ、該精製工程は、前記ジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物を、ゲル濾過カラムクロマトグラフィーにて分画する工程であることを要旨とする。
【発明の効果】
【００１３】
本発明によれば、大量生産に適したジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物の製造方法を提供することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
以下、本発明の製造方法を具体化した一実施形態について説明する。
本実施形態の第１の化合物は、下記化１に示されるジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物である。
【００１５】
【化１】
2006151906.tif 000002
上記Ｒ1、Ｒ2およびＲ3はいずれも４−ヒドロキシフェニル基、Ｒ4およびＲ5はいずれも３，５−ジヒドロキシフェニル基を示す。但し、Ｒ2とＲ4、Ｒ3とＲ5はそれぞれ入れ替わっても良い。
【００１６】
上記化１に示される化合物は、レスベラトロール骨格を基本単位とするスチルベン４量体化合物である。なお、ジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格は、上記化１において太線で繋がれている領域が該当する。第１の化合物の例としては、下記化２に示されるバチカノールＣ及びその立体異性体が挙げられる。バチカノールＣの立体構造を下記化３に示し、バチカノールＣの立体異性体の一種であるイソバチカノールＣの立体構造を下記化４に示す。
【００１７】
【化２】
2006151906.tif 000003
【００１８】
【化３】
2006151906.tif 000004
【００１９】
【化４】
2006151906.tif 000005
但し、Ｘは４−ヒドロキシフェニル基を示す。
【００２０】
バチカノールＣ及びイソバチカノールＣはいずれも、分子式Ｃ56Ｈ42Ｏ12、分子量９０６、淡黄色不定晶（粉末状）の天然物由来の有機化合物である。その他のバチカノールＣの立体異性体の分子式及び分子量も全く同様である。バチカノールＣとイソバチカノールＣとは、７ａ位の不斉炭素に関して互いにエピマーの関係にある。ちなみに、バチカノールＣの場合、上記化２に示される７ａ、７ｂ、７ｃ、７ｄ、８ａ、８ｂ、８ｃ及び８ｄ位に不斉炭素が存在する。バチカノールＣ及びイソバチカノールＣは、いずれも抗腫瘍活性を有している。
【００２１】
第１の化合物は、ジベンゾビシクロ［５．３．０］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物（以下、第２の化合物と記載する）を、非プロトン性極性溶媒に溶解し、酸触媒の存在下で、該第２の化合物の骨格を変換する骨格変換工程を行うことにより製造される。
【００２２】
第２の化合物としては、例えば下記化５に示されるバチカノールＢが挙げられる。
【００２３】
【化５】
2006151906.tif 000006
第２の化合物としてバチカノールＢを用いる場合には、第１の化合物としてのバチカノールＣが得られる。またこのとき、イソバチカノールＣのようなバチカノールＣの立体異性体も同時に得られる。第２の化合物から第１の化合物への骨格変換について、バチカノールＢから、バチカノールＣ及びその立体異性体への骨格変換を例に説明する。前記骨格変換では、上記化５に示されるＣ−７ｂとＣ−１０ａとの間のＣ−Ｃ結合（化５に太線で示されている）が開裂され、その開裂に伴って分子内で種々の共有結合の開裂及び再形成が引き起こされ、結果的に上記化２に示されるＣ−７ａとＣ−１０ｂとの間のＣ−Ｃ結合（化２に太線で示されている）を形成する。
【００２４】
第１の化合物の製造に用いる原料としては、第２の化合物を含むものであれば特に限定されないが、骨格変換工程を効率よく実施するために、精製された第２の化合物であるのが好ましい。バチカノールＣ及びその立体異性体の製造に用いる原料としては、レサック材を有機溶剤抽出することにより得られたバチカノールＢを含む抽出物が使用可能であり、その抽出物をクロマトグラフィー等の精製手段にて精製したバチカノールＢの精製物が好適に使用される。レサック材は、Vatica rassak、Vatica arbiramis、Hopea utilis、Vateria indica、Upuna borneensis等のフタバガキ科植物の樹皮および材（心材部分）を主成分としている。また、葉部についても同様にその抽出物を用いることが可能である。
【００２５】
第２の化合物を溶解するための溶媒としては、骨格変換を効率よく進行させるために、非プロトン性極性溶媒が使用される。非プロトン性極性溶媒としては、ニトロメタン（ＣＨ3ＮＯ2）、ニトロエタン、ニトロプロパン等のニトロアルカンやアセトニトリル等が使用可能であり、特に好ましくはニトロメタンが使用される。酸触媒としては、硫酸よりも酸強度が強い酸を用いる必要がある。このような酸触媒としては、トリフルオロメタンスルホン酸（ＣＦ3ＳＯ3Ｈ）のようなパーフルオロアルキルスルホン酸やクロロスルホン酸等が使用可能であり、好ましくはトリフルオロメタンスルホン酸が使用される。
【００２６】
骨格変換工程は、Ｃ−Ｃ結合の開裂と、新たなＣ−Ｃ結合の形成とを行うことにより、第２の化合物の骨格を第１の化合物の骨格に変換する工程である。この骨格変換工程は、非プロトン性極性溶媒中に第２の化合物及び酸触媒が溶解された溶液を攪拌することにより実施される。この骨格変換工程は、乾燥不活性ガス雰囲気中で行われるのが好ましい。不活性ガスとしては、アルゴンガス又は窒素ガスが挙げられる。また、水分の混入を防止し、かつ酸触媒の触媒作用を安定化させるために、骨格変換工程は密閉容器内のような閉鎖系で行われるのが好ましい。即ち、骨格変換工程は、非プロトン性極性溶媒中に第２の化合物及び酸触媒が溶解された溶液を、不活性ガスが充填されてなる密閉容器内で攪拌することにより実施するのが好ましい。また、骨格変換工程は室温で行うことが望ましい。
【００２７】
骨格変換工程を経て製造された第１の化合物を含む溶液には、骨格変換されずに残存する第２の化合物やその他の夾雑物が含まれている場合があるため、それら第２の化合物や夾雑物を除去するために、第１の化合物を精製する精製工程を行うことが可能である。さらに、この精製工程では、第２の化合物から骨格変換された複数の第１の化合物の立体異性体をそれぞれ分画可能にするような条件で実施されるのが好ましい。第２の化合物や夾雑物を除去して第１の化合物を精製する場合には、例えば特許文献１に記載のクロロホルム等の有機溶剤を用いる方法が使用可能である。
【００２８】
一方、立体異性体の分画を同時に達成可能な精製工程としては、ゲル濾過カラムクロマトグラフィーが特に好適に適用される。また、ゲル濾過カラムクロマトグラフィーと逆相カラムクロマトグラフィーとを組み合わせると、より一層効果的な分画が可能となる。ゲル濾過カラムクロマトグラフィーを行う際には、固定相としてのクロマトグラフィー担体よりも比重が低い任意の溶媒が移動相として使用可能である。これらのクロマトグラフィーを行う際には、環境に対する負荷が少ないことから、移動相としてアルコール及び水のいずれか一種からなる溶媒を用いるのが好ましい。なお、精製工程を行う前には、骨格変換工程後の第１の化合物を含む溶液の溶媒を、精製工程で用いる移動相と同じ溶媒に置換しておくのが好ましい。
【００２９】
前記実施形態によって発揮される効果について、以下に記載する。
・  本実施形態の第１の化合物は、第２の化合物を非プロトン性極性溶媒に溶解し、硫酸よりも酸強度が強い酸よりなる酸触媒の存在下で、第２の化合物の骨格を変換する骨格変換工程を行うことにより製造される。第１の化合物は、極めて複雑な構造を有しているうえ、不斉炭素を数多く有していることから、有機合成化学的に製造することが実質的に不可能である。これに対し、本実施形態では、第１の化合物に対して部分構造が一致する第２の化合物を骨格変換するという簡単な製造方法により、半合成的に第１の化合物を製造することができる。従って、本実施形態の製造方法は、第１の化合物の大量生産に適している。しかも、本実施形態の製造方法にてバチカノールＣを製造する際には、従来の製造方法にてバチカノールＣを製造する際に副産物として大量に得られるバチカノールＢを原料とすることが可能な点で、極めて効率がよい。
【００３０】
・  骨格変換工程を不活性ガス雰囲気中で実施することにより、第１の化合物の製造効率を容易に高めることが可能である。さらに、骨格変換工程を閉鎖系で実施することにより、水分の混入を防止し、かつ酸触媒の触媒作用を安定化させることが可能となる。さらにこのとき、トリフルオロメタンスルホン酸のような強い酸触媒を用いる場合にも有利である。
【００３１】
・  ゲル濾過カラムクロマトグラフィー及び逆相カラムクロマトグラフィーから選ばれる少なくとも一種を用いた精製工程を行うことにより、第１の化合物以外の夾雑物を効率的に取り除くことが可能である。さらにこのとき、第１の化合物の立体異性体を分画することも可能となる。また、精製工程で水及びアルコールの何れか一種を移動相として用いることにより、クロロホルムやアセトンのような有機溶剤を用いる場合と比べて、取り扱い性が高まるとともに、環境に対する負荷を容易に低減させることが可能となる。特に、本実施形態の方法でバチカノールＣを製造する場合、従来の製造方法と比べて、環境負荷の高い有機溶剤（クロロホルムやアセトン等）の使用量を４分の１程度に低減させることができるうえ、同量のレサック材から得られるバチカノールＣの収量を４倍程度に増加させることが可能となる。
【実施例１】
【００３２】
＜バチカノールＢの抽出＞
レサック材（Vatica arbiramis）の乾燥粉砕物１．５ｋｇをアセトン抽出することにより約１００ｇのアセトン抽出エキスを得た。このエキス１００ｇ中には、バチカノールＢが約１０ｇ、バチカノールＣが約１ｇ含まれていた。前記エキスから、Tanaka T., Ito T., Nakaya K., Iinuma M., Riswan S., Phytochemistry, 54, 63-69 (2000) に記載の方法により、バチカノールＢを精製した。
【００３３】
＜第１の化合物の製造（骨格変換工程）＞
（比較例１）  １５０ｍｇのバチカノールＢを４ｍＬのメタノールに溶解した後、２滴（約０．０３ｍＬ）のトリフルオロメタンスルホン酸を加え、乾燥窒素ガス雰囲気中の室温環流下で約６８時間攪拌した。
【００３４】
（比較例２）  １５０ｍｇのバチカノールＢを４ｍＬのメタノールに溶解した後、２滴（約０．０３ｍＬ）の硫酸を加え、乾燥窒素ガス雰囲気中の室温環流下で約６８時間攪拌した。
【００３５】
（実施例１）  １５０ｍｇのバチカノールＢを２ｍＬのニトロメタンに溶解した後、２滴（約０．０３ｍＬ）のトリフルオロメタンスルホン酸を加え、乾燥窒素ガス雰囲気中の室温環流下で約６８時間攪拌することにより、骨格変換工程を行った。
【００３６】
＜第１の化合物の生成確認１＞
比較例１，２及び実施例１において約６８時間攪拌した後のそれぞれの溶液をＨＰＬＣ分析した。ＨＰＬＣ分析の条件は、アセトニトリルと０．４％リン酸とを１６：８４の体積比で混合することにより作製した混合液を移動相として用い、流速を１ｍＬ／分、検出波長を２８０ｎｍとした。また、ＯＤＳカラム（関東化学社製のMightysil RP-18 GP (φ4.6mm×150mm)）を用いた。実施例１のクロマトグラムを図１に示す。
【００３７】
その結果、比較例１，２では、いずれもバチカノールＣ及びその立体異性体は検出されず、多量のバチカノールＢが検出された。一方、図１より、実施例１では、バチカノールＢは検出されず、バチカノールＣ及びイソバチカノールＣが検出された。ちなみに、実施例１で得られたバチカノールＣの量（生成率）は、原料として用いたバチカノールＢの量に対して３０％以上であった。また、データは示さないが、ＨＰＬＣを実施する前の実施例１の溶液を薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）にて分析したところ、バチカノールＣが存在していたことも確認した。
【実施例２】
【００３８】
（実施例２）  実施例１の製造条件をスケールアップした。即ち、１．５ｇのバチカノールＢを４０ｍＬのニトロメタンに溶解した後、１０滴（約０．１５ｍＬ）のトリフルオロメタンスルホン酸を加え、乾燥窒素ガス雰囲気中の室温環流下で２４時間攪拌することにより、骨格変換工程を行った。
【００３９】
＜第１の化合物の生成確認２＞
実施例２において２４時間攪拌した後の溶液の少量を、上記＜第１の化合物の生成確認１＞と同じ条件でＨＰＬＣ分析した。結果を図２に示す。その結果、実施例２の条件で製造した場合でも、バチカノールＣ及びイソバチカノールＣがともに生成していたことが確認された。但し、実施例２の条件では、骨格変換されずに残留するバチカノールＢも同時に検出された。この原因は、バチカノールＢがニトロメタンに十分に溶解していなかったため、或いは攪拌時間が短かったためと推測される。
【００４０】
＜第１の化合物の精製＞
実施例２において２４時間攪拌した後の固形分約１．５ｇを含む溶液約４０ｍＬ（茶褐色液体）に１０％メタノールを２０ｍＬ加えた。次に、この溶液を、前処理したセプパック（ Waters Sep-Pak Vac 35cc C18-10g ）の担体に通した後、該担体を１０％メタノール５０ｍＬで洗浄することにより、吸着されない物質を洗い流した。なお、前記セプパックの前処理は、担体をメタノール３０ｍＬで洗浄した後、蒸留水３０ｍＬで洗浄することにより行った。続いて、セプパックに６０％メタノール１００ｍＬを流すことにより溶出液を得た。この溶出液を減圧濃縮して溶媒を除去したところ、固形分約１．５ｇが得られた。
【００４１】
次に、得られた固形分について、精製工程を行った。即ち、前記固形分をメタノールに溶解した後、ゲル濾過カラムクロマトグラフィー（固定相として Sephadex LH-20 、移動相としてメタノールを使用）にて分画し、１８のフラクション（Ｆｒ１〜Ｆｒ１８）を得た。各フラクションの少量をそれぞれＴＬＣにて分析した結果、Ｆｒ５〜Ｆｒ７にバチカノールＣが含まれていることが判明した。さらに、Ｆｒ６についてＮＭＲ測定を行ったところ、バチカノールＣが主成分であることが確認された。
【００４２】
次に、Ｆｒ５〜Ｆｒ７を混合した後、逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィー（固定相として Fuji Silysia Chemical Chromatorex 、移動相として３５〜５０％メタノールのグラジエント溶出を使用）にて分画し、１１のフラクション（ｆｒ１〜ｆｒ１１）を得た。各フラクションの少量をそれぞれＴＬＣ（ Merck Kieselgel F254 (0.25 mm) 、展開溶媒としては酢酸エチル、クロロホルム、メタノール及び水をそれぞれ１５：８：４：１で含むものを用いた）にて分析した。その結果、４０％メタノール溶出画分であるｆｒ４〜ｆｒ７にバチカノールＣが含まれていることが判明した。
【００４３】
最後に、ｆｒ４〜ｆｒ７を混合した後、ＮＭＲ測定するとともに、上記＜第１の化合物の生成確認１＞と同じ条件でＨＰＬＣ分析した。ＮＭＲ測定の結果より、ｆｒ４〜ｆｒ７に含まれる物質は標品のバチカノールＣと一致し、かつ夾雑物を含んでいないことが確認された。即ち、この精製工程により、バチカノールＣとバチカノールＢとが完全に分離されるとともに、立体異性体であるバチカノールＣとイソバチカノールＣとが完全に分離されたことが確認された。ちなみに、上記精製工程を行うことにより純品として得られたバチカノールＣ、イソバチカノールＣおよびバチカノールＢ（未反応部分）は、それぞれ５２７ｍｇ（収率３５．１％）、７８ｍｇ（収率５．２％）および２７４ｍｇ（１８．３％）であった。一方、精製工程を実施する前の固形分約１．５ｇを含む溶液中のバチカノールＣの濃度は、前記ＨＰＬＣ分析によって得られたクロマトグラムのピーク面積より算出すると４３μｇ／ｍＬであった。よって、骨格変換工程にて生成したバチカノールＣの生成量は６５０ｍｇ（４３．３％の生成率）であった。
【実施例３】
【００４４】
第１の化合物の製造に使用される非プロトン性極性溶媒及び酸触媒について検討した。
（実施例３）  ５０ｍｇのバチカノールＢを４ｍＬのアセトニトリルに溶解した後、２滴（約０．０３ｍＬ）のトリフルオロメタンスルホン酸を加え、乾燥窒素ガス雰囲気中の室温環流下で約３日間攪拌することにより、骨格変換工程を行った。
【００４５】
（実施例４）  ５０ｍｇのバチカノールＢを４ｍＬのニトロエタンに溶解した後、２滴（約０．０３ｍＬ）のトリフルオロメタンスルホン酸を加え、乾燥窒素ガス雰囲気中の室温環流下で約３日間攪拌することにより、骨格変換工程を行った。
【００４６】
（実施例５）  ５０ｍｇのバチカノールＢを４ｍＬのニトロメタンに溶解した後、１滴（約０．０１５ｍＬ）のクロロスルホン酸を加え、乾燥窒素ガス雰囲気中の室温環流下で約３日間攪拌することにより、骨格変換工程を行った。
【００４７】
実施例３〜５において約３日間攪拌した後のそれぞれの溶液をＴＬＣにて分析したところ、いずれの溶液にもバチカノールＣが存在していたことを確認した。
さらに、前記実施形態より把握できる技術的思想について以下に記載する。
【００４８】
・  前記骨格変換工程後に精製工程が行われ、該精製工程は、前記ジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物を、ゲル濾過カラムクロマトグラフィー及び逆相カラムクロマトグラフィーにて分画する工程であることを特徴とする請求項１から請求項３のいずれか一項に記載のジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物の製造方法。
【００４９】
・  前記精製工程では、移動相として水及びアルコールの何れか一種を用いることを特徴とする請求項４に記載のジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物の製造方法。
【００５０】
・  前記非プロトン性極性溶媒はニトロメタンであることを特徴とする請求項１から請求項４のいずれか一項に記載のジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物の製造方法。前記酸触媒はパーフルオロアルキルスルホン酸であることを特徴とする請求項１から請求項４のいずれか一項に記載のジベンゾビシクロ［３．２．１］オクタジエン骨格を有するスチルベン４量体化合物の製造方法。
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】実施例１のクロマトグラムを示す図。
【図２】実施例２のクロマトグラムを示す図。
【図１】
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【図２】
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