(57)【要約】【目的】 本発明は、メシマコブの液体培養を行うに際し、菌体の生産量を飛躍的に向上させる液体培地組成を提供することである。【構成】 本発明は、従来の液体培養組成物にオカラ粉末 または豆乳を配合してメシマコブの菌体を培養することにより、菌体の生産量を飛躍的に向上させることができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
オカラ粉末または豆乳を配合することを特徴とするメシマコブ の液体培養培地 。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、メシマコブ の液体培養培地組成 に関する。
【技術背景】
【０００２】
メシマコブは桑に特異的に寄生して、子実体の裏側が鮮黄色または黄褐色を呈する半円形をしたサルノコシカケのような木質のキノコである。メシマコブは漢方では桑黄と呼ばれ、日本では長崎県の男女群島や、韓国、北米、オーストラリア、フィリピンなど東南アジアの温帯地域に広く分布して自生している。しかし、近年、メシマコブから生理活性成分として抗腫瘍性の多糖体が抽出され、免疫賦活作用の優れていることが判明したために需要が増え、原産地での乱獲を招いて入手が困難になってきている。
【０００３】
そこで、近年、メシマコブの菌糸体を人工的に培養する方法が提案されている（例えば、特開２００１-１７８４４８）。この培養方法は、液体培地にメシマコブ菌糸体を接種して２２〜３５℃で培養すること、液体培地の炭素源にグルコース、マンノース、ガラクトース、スクロース、トレハロース、セロビオース、マルトース、ラクトース、ラフィノースから選択された１以上の糖類を使用すること、好気的条件下で培養すること、培養開始時の培地のｐＨを４．５〜６．５とすること、などを培養条件とするものである。
【０００４】
また、特開２００３−２５９８５７にはヤマグワ及び桑の木の幹、枝、葉、根から熱水抽出によって得られる抽出物を添加してメシマコブ菌糸体を液体培養する方法が記載されている。
【０００５】
さらに特開２００２−７０には、ハタケシメジの人工栽培に際して、人工栽培用培地にオカラを添加する方法が記載されている。しかしながら、この公報に記載された栽培用培地は、担子菌の子実体を発生させるための固体培養用の培地であり、本発明の液体培養培地ではない。一般に、担子菌の増殖に必要な栄養素と、子実体の形成に必要な栄養条件は大きく異なっている。また、子実体中の成分と、液体培養で得た菌糸体中の成分、さらに固体培養あるいは菌床培養で得た菌糸体中の成分は大きく異なっていることが多いため、栽培用培地、すなわち固体培養用培地に有効な栄養成分が、そのまま液体培養用培地にも有効であるとは限らない。
【特許文献１】特開２００１-１７８４４８号公報
【特許文献２】特開２００３−２５９８５７号公報
【特許文献３】特開２００２−７０号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
解決しようとする問題点は、メシマコブは菌糸の成長が遅く、従来のような液体培養方法では得られる菌糸体の収量が少なく、充分な菌糸体を得ることができないことである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明者らは、従来の液体培地にオカラ粉末または豆乳を添加することによって、メシマコブ菌糸体の収量が飛躍的に増加することを見出し、本発明を完成するに至った。即ち、本発明は、オカラ粉末または豆乳が添加された液体培地にメシマコブ菌糸体を接種し、これを液体培養することによりメシマコブ菌糸体の増殖を飛躍的に増加させるものである。
【発明の効果】
【０００８】
本発明は、本発明によるメシマコブ菌糸体の液体培養方法によれば、オカラ粉末および豆乳を含有する液体培地の中で培養させることで、メシマコブ菌糸体の収量を短期間で飛躍的に増加させることが可能である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明におけるオカラ粉末は豆腐の製造時、即ち、水に浸漬処理した大豆を磨砕して加熱・絞り処理することにより発生する副産物としてのオカラを気流乾燥法やドラム乾燥法など公知の乾燥手段により乾燥して用いる。また、豆乳は水に浸漬処理した大豆を磨砕して絞った絞り汁である。オカラ粉末、および豆乳はタンパク質、脂質、あるいは無機質などの成分を含有するため、担子菌の良い窒素源となる。
【００１０】
前記オカラ粉末は、基本培地に対して０．１〜1０重量％の範囲で添加するのが望ましい。液体培地の中にオカラ粉末を固体のまま添加し、分散させる。その後、滅菌を行い培養培地とする。オカラ粉末はメシマコブの培養につれ、菌糸が産生するプロテアーゼにより分解され、窒素源として菌糸に供給され、メシマコブ菌糸体の成長が促進される。特に、基本培地に対して０．５〜５．０重量％を添加したときにその効果が著しく発揮される。
【００１１】
また、豆乳は基本培地に対して１．０〜３０重量％の範囲で添加するのが望ましく、特に、基本培地に対して５．０〜２０．０重量％を添加したときにその効果が著しく発揮される。
【００１２】
本発明の液体培養で用いられる基本培地には、炭素源、窒素源などメシマコブ菌糸体を培養する際の生育に必要な栄養素が含まれており、さらにビタミン類やミネラルを含むこともある。
【００１３】
炭素源としては、グルコース、スクロース、マンニトール、ガラクトース、トレハロース、マルトース、ラクトース、デキストリン等が添加される。
【００１４】
窒素源としては、イーストエキス、モルトエキス、ペプトン、ポリペプトン、カザミノ酸、硝酸カルシウム、硫酸アンモニウム等が添加される。
【００１５】
また、ビタミン類やミネラルとしては、チアミン、ビオチン、葉酸、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム等が添加される。
【００１６】
本発明における基本培地としては、例えば、グルコース２．０％、イーストエキス０．５％を添加した培地組成からなるものである。また、前記以外の培地組成であっても、メシマコブ菌糸培養に適している培地であれば、本発明に適用されるのは勿論である。
【００１７】
本発明におけるメシマコブの液体培養法は、前述のオカラ粉末を添加した液体培地にメシマコブの種菌を接種し、室温約２０〜３0℃の好気条件下で約２１〜２８日間培養するのが望ましい。培養は、振とう培養を行なっても良いし、通気培養を行なっても良い。
【実施例】
【００１８】
以下に実施例を挙げて本発明をさらに詳細に説明するが、本発明はこれに限定されるものではない。なお、培養および操作方法は無菌的に行なうものとする。
【００１９】
〔実施例 1〕培地に添加するオカラ粉末の効果試験
継代培養しているメシマコブ保存菌株（株式会社ナリス化粧品の保存菌株）の一部をポテトデキストロース（DIFCO社）の寒天培地に接種し、約４週間平面培養を行なったのち、これを種菌として用いる。
【００２０】
グルコース２．０％、酵母エキス０．５％を1００ｍｌの水に添加して基本の液体培地を作った。また、添加物としてオカラ乾燥粉末、クワ抽出物（蒸発算分４．０％濃度の水溶液）、フスマ、米ヌカを表-１の量を添加して液体培地を調製する。これらの液体培地を２００mｌの三角フラスコに１００ｍｌずつ分注後、オートクレーブを用いて高圧殺菌する。なお、クワ抽出物は、桑の木の幹や枝を剪定バサミで５ｍｍ程度に細かく切り、水に加えて約６０分間熱水抽出を行い、冷却後に固形分を除去して、上記の蒸発残分になるように濃縮したものを用いた。
【００２１】
上述の液体培地を室温まで放冷した後、寒天培地で培養したメシマコブ培養物を取り、グルコースと酵母エキスからなる基本培地で良くホモジネートしたものを1ｍｌづつフラスコに接種する。接種後は２４℃、１５０ｒｐｍの暗条件下で振とう培養を行った。
【００２２】
培養を開始して約２１日後には液体培地に菌糸体が生育する。そこで、生育した菌糸体を収集し、これを水でよく洗浄したのち６０℃で５時間、送風乾燥した。
【００２３】
前記収集した菌糸体の成長比を表-１に示す。成長比は実施例-1の基本培地で培養した時の収量を１００とし、それに対する比計算によって算出した。
【００２４】
【表−１】
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【００２５】
表−１によれば、比較例−１の基本培地で培養したものと比較して、オカラ粉末を１％添加した実施例−1は、３２８％の増殖率を示した。これに対し、桑エキスを添加した比較例−２の増殖率は１０９％であり、オカラ粉末添加の効果が著しいことが明らかとなった。また、固体培地に汎用されるフスマを添加した比較例−３、米ヌカを添加した比較例−４の増殖率はそれぞれ１６５％、１４９％であり、いずれもオカラ粉末を添加したものの増殖率には及ばなかった。以上の結果からも、液体培養と固体培養での培養は、必要とされる物質が同じものではないことが明らかである。また、実施例−1，比較例−３、比較例−４に桑エキスをそれぞれ添加した実施例−２，比較例−５、比較例−６の増殖率は、桑エキスを添加しないものと比較して大差はなく、メシマコブ菌糸の増殖にはオカラ粉末が大きな影響を与えていることが明らかとなった。
【００２６】
〔実施例２〕培地に添加するオカラ粉末の添加量
培地に添加するオカラ粉末の添加量を検討するため、表-２に示したような培地を作成し、実施例1と同じ方法で、メシマコブ菌体量を測定した。
【００２７】
【表−２】
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【００２８】
表-２に結果を示した。オカラ粉末の添加量が０．０５％の場合は、増殖率が１５６％となった。増殖率が上がるが顕著な増殖効果は示さなかった。これに対し、０．１％〜５．０％添加したものは、メシマコブ菌糸体の顕著な増殖効果が認められた。
【００２９】
〔実施例３〕培地に添加する豆乳の添加量
培地に添加する豆乳の添加量を検討するため、表-３に示したような培地を作成し、実施例1と同じ方法で、メシマコブ菌体量を測定した。
【００３０】
【表−３】
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【００３１】
表-３に結果を示した。豆乳の添加量が１．０％の場合は、増殖率が１８１％となった。これに対し、５．０％〜２０．０％添加したものは、増殖率が２８１％から４３７％とメシマコブ菌糸体の顕著な増殖効果が認められた。また、添加量を３０％と増加させても、添加量に比例するような増殖は認められなかった。
【産業上の利用可能性】
【００３２】
本発明によるメシマコブ菌糸体の液体培養方法によれば、オカラ粉末および豆乳を含有する液体培地の中で培養させることで、メシマコブ菌糸体の収量を短期間で飛躍的に増加させることが可能であり、化粧料や医薬品、及び食品の各分野に広く応用が期待できる。