(57)【要約】【目的】  測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体を含む測定対象物質の測定試薬の保存中に、「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体」から「測定対象物質に対する特異的結合物質」が剥離（解離）してしまうことを防止し、これによりこの測定試薬の感度低下を防いで測定試薬の安定化を図り、長期間、正確な測定対象物質の測定結果を得ることができる測定試薬の提供を目的とする。【構成】  測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体を含む測定対象物質の測定試薬において、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体とともに、陽イオン及び陰イオンを各々１００ｍＭ以上存在させる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体を含む測定対象物質の測定試薬において、陽イオン及び陰イオンが各々１００ｍＭ以上存在することを特徴とする、測定対象物質の測定試薬。
【請求項２】
担体がラテックス粒子である、請求項１記載の測定対象物質の測定試薬。
【請求項３】
測定対象物質がトレポネーマ・パリダムに対する抗体であり、測定対象物質に対する特異的結合物質がトレポネーマ・パリダムの抗原である、請求項１又は請求項２記載の測定対象物質の測定試薬。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】  本発明は、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体から、測定対象物質に対する特異的結合物質が剥離（解離）するのを防ぐことができる測定対象物質の測定試薬に関するものである。【０００２】  本発明は、臨床検査、免疫学、及び医学などの生命科学分野、分析化学などの化学分野、食品衛生分野、並びに環境衛生分野等において有用なものである。
【背景技術】
【０００３】  抗原と抗体、糖とレクチン、ヌクレオチド鎖とそれに相補的なヌクレオチド鎖、リガンドとレセプター等の特異的な親和性を有する物質間の反応を利用した試料中に含まれる微量の測定対象物質の測定試薬及び測定方法は種々のものが知られている。【０００４】  これは、試料中に含まれる測定対象物質と、この測定対象物質に対して特異的に結合する特異的結合物質（測定対象物質に対する特異的結合物質）との結合の有無、又は結合の量を測ることにより、試料中に含まれる測定対象物質の有無の測定〔定性測定〕、又はその含有量（濃度）の測定〔定量測定〕を行うものである。【０００５】  特に、測定対象物質に対する特異的結合物質を担体に固定化したものを使用して測定を行う方法、又は測定試薬が繁用されている。【０００６】  例えば、抗原と抗体の間の抗原抗体反応（免疫反応、免疫学的反応）を利用した免疫学的測定試薬（免疫学的測定方法）においては、ラテックス粒子を担体として使用するラテックス比濁法；ラテックス粒子、有機高分子粒子、無機粒子、金属粒子、若しくは赤血球などを担体として使用する間接凝集反応測定法；マイクロタイタープレート、ビーズ、粒子、試験管、若しくは容器などを担体として使用する酵素免疫測定法、発光免疫測定法などの標識免疫測定法；又は、セルロース、若しくは不織布などを担体として使用するイムノクロマトグラフィー法等が繁用されている。【０００７】  血清等の試料中に含まれるトレポネーマ・パリダムに対する抗体の測定を例に取り、以下具体的に説明を行う。【０００８】  トレポネーマ・パリダム（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  Ｐａｌｌｉｄｕｍ）は、梅毒の病原体であり、血清等の試料中にこのトレポネーマ・パリダムに対する抗体（抗トレポネーマ・パリダム抗体）が存在することは、現在梅毒に罹患していること、又は過去に梅毒に罹患していたことの証拠となる。
よって、梅毒の診断のために、トレポネーマ・パリダムに対する抗体の測定が行われている。【０００９】  そして、ラテックス粒子を担体として使用するラテックス比濁法による、トレポネーマ・パリダムに対する抗体（測定対象物質）の測定においては、トレポネーマ・パリダム由来の成分、すなわちトレポネーマ・パリダムの抗原を担体であるラテックス粒子に物理的吸着により又は化学結合により固定化させたものを、トレポネーマ・パリダムに対する抗体の測定試薬として用いる。【００１０】  トレポネーマ・パリダムの抗原としては、トレポネーマ・パリダムの菌体の表面の抗原である１５Ｋダルトン抗原、１７Ｋダルトン抗原、又は４７Ｋダルトン抗原等が知られており、前記のトレポネーマ・パリダムに対する抗体の測定試薬に用いられる。【００１１】  また、前記の１５Ｋダルトン抗原、１７Ｋダルトン抗原、又は４７Ｋダルトン抗原等のトレポネーマ・パリダムの抗原を、遺伝子組み換え法により調製した組み換え抗原も前記のトレポネーマ・パリダムに対する抗体の測定試薬に用いられる。【００１２】  通常、ラテックス比濁法による、トレポネーマ・パリダムに対する抗体の測定においては、緩衝剤又は生理食塩水等よりなる試薬をトレポネーマ・パリダムに対する抗体の測定試薬の第１試薬とし、担体であるラテックス粒子にトレポネーマ・パリダムの抗原を固定化したものを含む測定試薬をトレポネーマ・パリダムに対する抗体の測定試薬の第２試薬として、２ステップ法（２試薬法）により測定を行う。【００１３】  又は、担体であるラテックス粒子にトレポネーマ・パリダムの抗原を固定化したものを含む測定試薬をトレポネーマ・パリダムに対する抗体の測定試薬として、１ステップ法（１試薬法）により測定を行うこともなされている。【００１４】  前記の２ステップ法（２試薬法）における測定の操作であるが、まず、試料と前記の第１試薬を混合し、一定時間後にこの試料と第１試薬の混合液に前記の第２試薬を混合し反応を行わせる。【００１５】  前記の１ステップ法（１試薬法）においては、試料と前記の測定試薬を混合し反応を行わせる。【００１６】  試料中にトレポネーマ・パリダムに対する抗体が含まれている場合には、この抗体がラテックス粒子に固定化したトレポネーマ・パリダムの抗原と反応し結合して、この抗体を介して「…〔トレポネーマ・パリダムの抗原＝ラテックス粒子＝トレポネーマ・パリダムの抗原〕−〔トレポネーマ・パリダムに対する抗体〕−〔トレポネーマ・パリダムの抗原＝ラテックス粒子＝トレポネーマ・パリダムの抗原〕…」の架橋が形成される。【００１７】  これにより、トレポネーマ・パリダムに対する抗体を介した、「トレポネーマ・パリダムの抗原を固定化したラテックス粒子」同士の凝集塊が生成する。【００１８】  このラテックス粒子同士の凝集塊の生成量は、一定の範囲において、試料中に含まれていたトレポネーマ・パリダムに対する抗体の量に応じて増加する。【００１９】  そして、試料と前記第１試薬と前記第２試薬が混合された反応混合液（又は試料と前記測定試薬が混合された反応混合液）に光を照射して、生成したラテックス粒子同士の凝集塊により生ずるシグナルである透過光の減少（吸光度の増加��、又は散乱光の増加を測定することにより、生成した前記凝集塊の量、すなわち、試料中に含まれるトレポネーマ・パリダムに対する抗体の量を求める。【００２０】  なお、定量値の算出であるが、前記測定を行った反応混合液の透過光の減少（吸光度の増加）、又は散乱光の増加と、濃度既知のトレポネーマ・パリダムに対する抗体を含む試料を測定したときの透過光の減少（吸光度の増加）、又は散乱光の増加の値とを比較することにより、試料中に含まれるトレポネーマ・パリダムに対する抗体の量（濃度）を算出する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】  測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体を含む測定対象物質の測定試薬、及びこの測定対象物質の測定試薬を用いる測定対象物質の測定方法は、前記したように繁用されているが、以下のような問題があることに本発明者らは気付いた。【００２２】  すなわち、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体を含む測定対象物質の測定試薬においては、その保存中に、「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体」から「測定対象物質に対する特異的結合物質」が剥離（解離）してしまうため、下記の▲１▼及び▲２▼により、生成するシグナルの量が減少してしまい、これにより測定の感度が低下し、測定対象物質を含む試料の測定においても、測定対象物質が含まれていないという誤った測定結果が得られてしまうことにもなる。（偽陰性）【００２３】▲１▼  「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体」から「測定対象物質に対する特異的結合物質」が剥離（解離）することにより、「担体に固定化された測定対象物質に対する特異的結合物質」の数（量）は、測定試薬の調製時に比べて減少してしまっている。【００２４】  そうすると、測定時、試料と測定試薬が混合された反応混合液中において、試料中に含まれていた「測定対象物質」が結合することが可能な「担体に固定化された測定対象物質に対する特異的結合物質」の数（量）が少なくなってしまっているので、「担体に固定化された測定対象物質に対する特異的結合物質」に結合することができる「測定対象物質」の数（量）も減少してしまう。【００２５】  従って、これにより、「…〔測定対象物質に対する特異的結合物質＝担体＝測定対象物質に対する特異的結合物質〕−〔測定対象物質〕−〔測定対象物質に対する特異的結合物質＝担体＝測定対象物質に対する特異的結合物質〕…」又は「…〔担体＝測定対象物質に対する特異的結合物質〕−〔測定対象物質〕」の架橋の形成の数（量）が減少してしまうため、生成するシグナルの量が減ってしまい、これにより測定の感度が低下したものとなる。すなわち、測定対象物質を含む試料の測定においても、測定対象物質が含まれていないという誤った測定結果が得られてしまうことにもなる。（偽陰性）【００２６】▲２▼  測定時、試料と測定試薬が混合された反応混合液中において、試料中に含まれていた「測定対象物質」の一部又は全部は、「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体」から剥離（解離）し遊離状態となった「測定対象物質に対する特異的結合物質」と結合してしまい、これにより担体に固定化された「測定対象物質に対する特異的結合物質」とは結合できなくなる。【００２７】  つまり、遊離状態となった「測定対象物質に対する特異的結合物質」と結合した「測定対象物質」は、「…〔測定対象物質に対する特異的結合物質＝担体＝測定対象物質に対する特異的結合物質〕−〔測定対象物質〕−〔測定対象物質に対する特異的結合物質＝担体＝測定対象物質に対する特異的結合物質〕…」又は「…〔担体＝測定対象物質に対する特異的結合物質〕−〔測定対象物質〕」の架橋の形成に参加できなくなるため、生成するシグナルの量が減ってしまい、これにより測定の感度が低下したものとな���。すなわち、測定対象物質を含む試料の測定においても、測定対象物質が含まれていないという誤った測定結果が得られてしまうことにもなる。（偽陰性）【００２８】  以上述べたように、従来、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体を含む測定対象物質の測定試薬においては、その保存中に、「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体」から「測定対象物質に対する特異的結合物質」が剥離（解離）することにより、測定反応において生成するシグナルの量が減少してしまい、これにより測定の感度が低下してしまう恐れがあり、測定対象物質を含む試料の測定においても、測定対象物質が含まれていないという誤った測定結果（偽陰性）が得られる可能性があり、特に臨床検査等においては患者などの疾病の診断を誤らせる危険性を含むものであった。【００２９】  本発明は、この測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体を含む測定対象物質の測定試薬において、前記測定試薬の保存中に、「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体」から「測定対象物質に対する特異的結合物質」が剥離（解離）してしまうことを防止し、これによりこの測定試薬の感度低下を防いで測定試薬の安定化を図り、長期間、正確な測定対象物質の測定結果を得ることができる測定試薬の提供を目的、課題とするものである。
【課題を解決するための手段】
【００３０】  本発明は、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体を含む測定対象物質の測定試薬において、陽イオン及び陰イオンが各々１００ｍＭ以上存在することを特徴とする、測定対象物質の測定試薬である。【００３１】  なお、前記の測定対象物質の測定試薬においては、担体がラテックス粒子であることが好適である。【００３２】  そして、前記の測定対象物質の測定試薬においては、測定対象物質がトレポネーマ・パリダムに対する抗体であり、測定対象物質に対する特異的結合物質がトレポネーマ・パリダムの抗原であることが好適である。
【発明の効果】
【００３３】  本発明の測定対象物質の測定試薬は、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体を含む測定対象物質の測定試薬において、陽イオン及び陰イオンが各々１００ｍＭ以上存在することを特徴とするものであって、これにより前記測定試薬の保存中に、「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体」から「測定対象物質に対する特異的結合物質」が剥離（解離）してしまうことを防止し、これにより前記測定試薬の測定の感度の低下を防いで前記測定試薬の安定化が図られ、長期間、正確な測定対象物質の測定結果を得ることができるという効果を有するものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３４】（１）発明の基本要件
本発明の「測定対象物質の測定試薬」では、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体を含む測定対象物質の測定試薬において、陽イオン及び陰イオンが各々１００ｍＭ以上存在することが必須である。【００３５】  以上のことにより、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体を含む測定対象物質の測定試薬において、前記測定試薬の保存中に、「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体」から「測定対象物質に対する特異的結合物質」が剥離（解離）してしまうのを防ぐことができる。【００３６】（２）陽イオン及び陰イオンの濃度
本発明では、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体を含む測定対象物質の測定試薬において、陽イオン及び陰イオンは、各々１００ｍＭ以上存在させる。【００３７】  そして、前記の陽イオン及び陰イオンを、各々１５０ｍＭ以上存在させることが、前記剥離（解離）をより強く防ぐことができるため好ましい。同じ理由により、前記の陽イオン及び陰イオンを、各々３００ｍＭ以上存在させることが更に好ましく、各々５００ｍＭ以上存在させることが特に好ましい。【００３８】  なお、前記の陽イオン及び陰イオンを存在させる濃度が、各々１００ｍＭ未満であると、前記剥離（解離）を防ぐ効果が弱くなるので不適当である。【００３９】  また、前記の陽イオン及び陰イオンを存在させる濃度の上限は、特に限定されないものの、一般的には、各々２，０００ｍＭを超えると、担体に固定化した測定対象物質に対する特異的結合物質が変性、失活したり、担体同士が自然凝集する可能性が高くなるので、各々２，０００ｍＭ以下とすることが好ましい。【００４０】  なお、前記の陽イオン及び陰イオンを存在させる濃度であるが、陽イオン及び陰イオンの各々が規定の濃度以上であれば、それぞれが異なる濃度であってもよい。【００４１】（３）陽イオン及び陰イオン
本発明において測定対象物質の測定試薬に存在させる陽イオン及び陰イオンについて、以下説明を行う。【００４２】▲１▼  陽イオン
前記の陽イオン及び陰イオンにおける陽イオンは、正の電荷を有するイオンであれば、特に限定されず用いることができる。【００４３】  この陽イオンとしては、１価の陽イオンであってもよく、又は２価以上の多価の陽イオンであってもよい。【００４４】  そして、この陽イオンとしては、例えば、金属イオン、アンモニウムイオン、又はその他の陽イオン等を挙げることができる。【００４５】  この金属イオンとしては、例えば、アルカリ金属イオン、アルカリ土類金属イオン、又はその他の金属イオン等を挙げることができる。【００４６】  アルカリ金属イオンとしては、例えば、リチウムイオン、ナトリウムイオン、又はカリウムイオン等を挙げることができる。【００４７】  アルカリ土類金属イオンとしては、例えば、ベリリウムイオン、マグネシウムイオン、又はカルシウムイオン等を挙げることができる。【００４８】  その他の金属イオンとしては、例えば、マンガンイオン、鉄イオン、コバルトイオン、ニッケルイオン、銅イオン、亜鉛イオン、又はアルミニウムイオン等を挙げることができる。【００４９】  アンモニウムイオンとしては、例えば、一級のアンモニウムイオン、二級のアンモニウムイオン、三級のアンモニウムイオン、又は四級のアンモニウムイオン等を挙げることができる。【００５０】  その他の陽イオンとしては、例えば、炭素原子、ケイ素原子、ホウ素原子、窒素原子（アンモニウムイオン以外の場合において）、リン原子、若しくは硫黄原子などが正の電荷を帯びている原子、又は原子団等を挙げることができる。
この具体的な例としては、炭素原子が正の電荷を帯びているコリンイオン等を挙げることができる。【００５１】  なお、この陽イオンとしては、１種類のものだけを用いてもよいし、又は複数種類のものを同時に用いてもよい。【００５２】▲２▼  陰イオン
前記の陽イオン及び陰イオンにおける陰イオンは、負の電荷を有するイオンであれば、特に限定されず用いることができる。【００５３】  この陰イオンとしては、１価の陰イオンであってもよく、又は２価以上の多価の陰イオンであってもよい。【００５４】  そして、この陰イオンとしては、例えば、有機化合物よりなる酸基、ハロゲンイオン、又はその他の無機化合物よりなる酸基等を挙げることができる。【００５５】  この有機化合物よりなる酸基としては、例えば、酢酸イオン、クエン酸イオン、グルコン酸イオン、又はシュウ酸イオン等を挙げることができる。【００５６】  ハロゲンイオンとしては、例えば、フッ素イオン、塩素イオン、臭素イオン、又はヨウ素イオン等を挙げることができる。【００５７】  その他の無機化合物よりなる酸基としては、例えば、硫酸イオン、亜硫酸イオン、ピロ亜硫酸イオン、亜二チオン酸イオン、チオ亜硫酸イオン、硝酸イオン、亜硝酸イオン、次亜硝酸イオン、ペルオキソ亜硝酸イオン、リン酸イオン、亜リン酸イオン、ピロ亜リン酸イオン、次亜リン酸イオン、二リン酸イオン、ホウ酸イオン、炭酸イオン、シアン酸イオン、イソシアン酸イオン、又はケイ酸イオン等を挙げることができる。【００５８】  なお、この陰イオンとしては、１価の陰イオンが好ましい。
そして、この１価の陰イオンとしては、ハロゲンイオンが好ましい。特に、塩素イオン及び臭素イオンが好ましい。【００５９】  また、この陰イオンとしては、１種類のものだけを用いてもよいし、又は複数種類のものを同時に用いてもよい。【００６０】▲３▼  陽イオン及び陰イオン
前記の陽イオン及び陰イオンを測定対象物質の測定試薬に存在させる方法であるが、この陽イオン及び陰イオンを各々前記の測定対象物質の測定試薬に１００ｍＭ以上存在させることができればいかなる方法でもよい。【００６１】  例えば、前記陽イオンを含む化合物と、前記陰イオンを含む化合物を別々に添加して、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体とともに存在させて、測定対象物質の測定試薬を調製してもよい。【００６２】  また、前記陽イオンと前記陰イオンの両方を含む化合物を添加して、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体とともに存在させて、測定対象物質の測定試薬を調製してもよい。【００６３】  そしてその結果として、前記陽イオン及び前記陰イオンを各々前記の測定対象物質の測定試薬に１００ｍＭ以上存在させられればよい。【００６４】  なお、前記の陽イオンと陰イオンの両方を含む化合物としては、例えば、この陽イオン及び陰イオンよりなる塩等を挙げることができる。【００６５】（４）測定対象物質
▲１▼  測定対象物質
本発明において、測定対象物質とは、試料中におけるその存在の有無、又は含有量（濃度）を測定しようとする物質である。【００６６】  この測定対象物質としては、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体を含む測定対象物質の測定試薬を使用して測定を行うことができるものであれば如何なるものでもよい。【００６７】  この測定対象物質を例示すると、例えば、タンパク質、糖質、脂質、核酸などのような有機物質、又は金属などの無機物質等を挙げることができる。【００６８】  より具体的には、例えば、ＨＢｓ抗原、抗ＨＢｓ抗体、ＨＢｅ抗原、抗ＨＢｅ抗体、抗ＨＢｃ抗体、抗ＨＣＶ抗体、抗ＨＩＶ抗体、抗ＡＴＬＶ抗体等のウイルス関連の抗原又は抗体；大腸菌Ｏ１５７抗原、抗トレポネーマ・パリダム抗体、抗マイコプラズマ抗体、抗ストレプトリジンＯ抗体（ＡＳＯ）等の細菌関連の抗原又は抗体；免疫グロブリンＧ（ＩｇＧ）、免疫グロブリンＡ（ＩｇＡ）、免疫グロブリンＭ（ＩｇＭ）、若しくは免疫グロブリンＥ（ＩｇＥ）等の免疫グロブリン；Ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）、α１−酸性糖タンパク質、ハプトグロビン、補体Ｃ３、補体Ｃ４、リウマトイド因子等の炎症マーカー；α−フェトプロテイン、ＣＥＡ、ＣＡ１９−９等の腫瘍マーカー；ヒト胎盤絨毛性ゴナドトロピン等のホルモン；アレルゲン、アレルゲン特異ＩｇＥ抗体等のアレルギー関連の抗原又は抗体；抗トロンビンＩＩＩ（ＡＴＩＩＩ）等の血液凝固系関連物質；フィブリン体分解物（ＦＤＰ）、Ｄダイマー等の線溶系関連物質；ＡＢＯ式血液型抗体、不規則抗体等の血液型関連の抗原又は抗体；ウイルスのＤＮＡ又はＲＮＡ；細菌のＤＮＡ又はＲＮＡ；ヒト等の動物若しくは植物のＤＮＡ又はＲＮＡ；リポタンパク質（ａ）、フェリチン等の他の疾病に関連した物質；薬物；金属；毒物又は劇物等を例示することができる。【００６９】  この測定対象物質としては、前記のウイルス関連の抗原若しくは抗体、又は細菌関連の抗原若しくは抗体等が好適であるが、特にトレポネーマ・パリダムに対する抗体（抗トレポネーマ・パリダム抗体）である場合が好適である。【００７０】▲２▼  試料
本発明において、試料とは、前記の測定対象物質が存在する可能性があり、かつその測定対象物質の存在の有無、又は含有量（濃度）の測定を行おうとするものをいう。【００７１】  例えば、ヒト又は動物の血液、血清、血漿、尿、精液、髄液、唾液、汗、涙、腹水、羊水等の体液；ヒト若しくは動物の脳等の臓器、毛髪、皮膚、爪、筋肉、又は神経組織等の抽出液；ヒト又は動物の糞便の抽出液又は懸濁液；細胞或いは菌体の抽出液；植物の抽出液；穀物、野菜、果物、魚介類、肉類又は加工食品等の食品、水、茶、コーヒー、牛乳、又は果汁等の飲料；試薬又は医薬品；そして、飲料水、河川水、湖沼水、海水、又は土壌の懸濁液等の環境分析用試料等を挙げることができる。【００７２】（５）測定対象物質に対する特異的結合物質
本発明において、測定対象物質に対する特異的結合物質とは、前記の測定対象物質に特異的な親和性を有し結合することができる物質のことである。【００７３】  この測定対象物質に対する特異的結合物質としては、例えば、測定対象物質が抗原である場合にはこの抗原に対する抗体、測定対象物質が抗体である場合にはこの抗体に対する抗原若しくはこの抗体に対する抗体、測定対象物質がタンパク質などよりなる物質である場合にはそのリガンド、測定対象物質が糖である場合にはこの糖と結合するレクチン、測定対象物質がレクチンである場合にはこのレクチンと結合する糖、測定対象物質がヌクレオチド鎖である場合にはこのヌクレオチド鎖と相補的なヌクレオチド鎖、又は測定対象物質がレセプターである場合にはこのレセプターに対する物質等を挙げることができる。【００７４】  すなわち、測定対象物質に特異的な親和性を有し結合することができる物質であれば、特に制限なく、測定対象物質に対する特異的結合物質として、本発明において用いることができる。【００７５】  なお、本発明においては、測定対象物質が抗原であり、測定対象物質に対する特異的結合物質が前記抗原に対する抗体である場合が好適である。【００７６】  ここで、抗体としては、ポリクローナル抗体、又はモノクローナル抗体のいずれでもよく、そしてこれらの断片〔Ｆ（ａｂ）’２又はＦａｂ’など〕等でもよい。【００７７】  また、本発明においては、測定対象物質が抗体であり、測定対象物質に対する特異的結合物質が前記抗体に対する抗原、又は前記抗体に対する抗体である場合が好適である。【００７８】  この測定対象物質が抗体であり、測定対象物質に対する特異的結合物質が前記抗体に対する抗原である場合、この「前記抗体に対する抗原」は、細菌若しくはウイルスなど由来の天然のものであってもよく、又は遺伝子組み換え法などにより人為的に調製したものであってもよいが、特に遺伝子組み換え法などにより人為的に調製したものである場合が好適である。【００７９】  そして、この遺伝子組み換え法などにより人為的に調製したものである場合、「前記抗体に対する抗原」は、他のタンパク質と融合しているものであってもよく、この融合させる他のタンパク質としては、例えば、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトースバインディンクプロテイン（ＭＢＰ）、チオレドキシン、β−ガラクトシダーゼ、ラクターゼ、シグナルペプチド、ビオチン化タンパク、プロテインＡ、又はジーン１０等を挙げることができる。【００８０】  これをより具体的に例示すると、例えば、測定対象物質がトレポネーマ・パリダムに対する抗体である場合、測定対象物質に対する特異的結合物質として、トレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原にマルトースバインディングプロテイン（ＭＢＰ）が融合しているもの、又はトレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原にグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）が融合しているもの等を挙げることができる。【００８１】  また、この遺伝子組み換え法などにより人為的に調製したものである場合、「前記抗体に対する抗原」は、複数種類の抗原が融合しているものであってもよい。【００８２】  これをより具体的に例示す��と、例えば、測定対象物質がトレポネーマ・パリダムに対する抗体である場合、測定対象物質に対する特異的結合物質として、トレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原とトレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原が融合しているもの、又はトレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原とトレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原とグルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）が融合しているもの等を挙げることができる。【００８３】  なお、本発明においては、測定対象物質がトレポネーマ・パリダムに対する抗体であり、測定対象物質に対する特異的結合物質がトレポネーマ・パリダムの抗原である場合が好適である。【００８４】  なお、前記のトレポネーマ・パリダムの抗原としては、例えば、１５Ｋダルトン抗原、１７Ｋダルトン抗原、又は４７Ｋダルトン抗原等を挙げることができる。【００８５】  これらのトレポネーマ・パリダムの各抗原は、トレポネーマ・パリダム菌体由来の天然のものであっても良く、又は遺伝子組み換え法などにより人為的に調製したものであってもよいが、特に遺伝子組み換え法などにより人為的に調製したものである場合が好適である。【００８６】  そして、このトレポネーマ・パリダムの抗原が遺伝子組み換え法などにより人為的に調製したものである場合には、例えば、グルタチオン−Ｓ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）、マルトースバインディングプロテイン（ＭＢＰ）、チオレドキシン、β−ガラクトシダーゼ、ラクターゼ、シグナルペプチド、ビオチン化タンパク、プロテインＡ、又はジーン１０等の他のタンパク質と融合しているものであってもよい。【００８７】（６）担体
▲１▼  本発明において、担体は、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化することができるものであれば、特に制限なく用いることができる。【００８８】  すなわち、「測定対象物質に対する特異的結合物質」と「特異的結合物質」との特異的な結合反応を利用して試料中の測定対象物質の測定を行う方法及び測定試薬に使用されている担体、又は使用することが可能な担体であればよい。【００８９】▲２▼  本発明における担体としては、例えば、ラテックス比濁法に使用されているラテックス粒子、又はラテックス比濁法に使用することが可能なラテックス粒子を挙げることができる。【００９０】  このようなラテックス粒子としては、例えば、ポリスチレン・ラテックス粒子、スチレン−スチレンスルホン酸塩共重合体・ラテックス粒子、アクリロニトリル−ブタジエン−スチレン共重合体・ラテックス粒子、塩化ビニル−アクリル酸エステル共重合体・ラテックス粒子、酢酸ビニル−アクリル酸共重合体・ラテックス粒子、ポリアクロレイン・ラテックス粒子、スチレン−メタクリル酸共重合体・ラテックス粒子、スチレン−グリシジル（メタ）アクリル酸共重合体・ラテックス粒子、メタクリル酸重合体・ラテックス粒子、又はアクリル酸重合体・ラテックス粒子などの合成高分子粒子を均一に懸濁させたラテックス粒子等を挙げることができる。【００９１】  このラテックス粒子としては、ポリスチレン・ラテックス粒子又はスチレン−メタクリル酸共重合体・ラテックス粒子が好適であり、ポリスチレン・ラテックス粒子が特に好適である。【００９２】  このラテックス粒子の粒径については、特に制限はない。
なお、ラテックス比濁法を測定原理として測定対象物質の測定を行う場合、ラテックス粒子が測定対象物質を介して結合し、凝集塊を生成する程度、及びこの生成した凝集塊の測定の容易さ等の理由より、ラテックス粒子の粒径は、その平均粒径が０．０４〜１μｍであることが好ましい。【００９３】  また、測定対象物質の測定試薬において、「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化したラテックス粒子」を含ませる濃度であるが、これは、測定対象物質の種類と試料中の濃度、測定対象物質に対する特異的結合物質の種類とラテックス粒子表面上での分布密度、ラテックス粒子の粒径、試料と前記測定試薬の混合比率等の各種条件により最適な濃度は異なるので一概に言うことはできない。【００９４】  しかし、通常は、試料と測定対象物質の測定試薬が混合され、ラテックス粒子に固定化された「測定対象物質に対する特異的結合物質」と試料中に含まれていた「測定対象物質」との特異的な結合反応が行われる測定反応時に、「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化したラテックス粒子」の濃度が、反応混合液中において０．００５〜１％（ｗ／ｖ）となるようにするのが一般的であり、この場合、反応混合液中においてこのような濃度になるような濃度の「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化したラテックス粒子」を前記測定対象物質の測定試薬に含ませる。【００９５】▲３▼  また、本発明における担体としては、例えば、ゼラチン粒子などを用いる粒子凝集反応測定法又はラテックス凝集反応測定法などの間接凝集反応測定法に使用されている粒子、又はこの間接凝集反応測定法に使用することが可能な粒子等を挙げることができる。【００９６】  このような粒子としては、例えば、リポソーム、ラテックス、ゼラチン、ポリアクリルアミド、マイクロカプセル若しくはエマルジョン等の有機高分子物質よりなる粒子、ガラス、シリカゲル、カーボン若しくはベントナイト等の無機高分子物質よりなる粒子又はその他の人工担体等を挙げることができる。【００９７】  なお、前記の高分子粒子を強磁性体で被覆又は粒子成型時に強磁性体を分散させて調製した磁性粒子等を担体として用いることもできる。【００９８】  こららの粒子の粒径については、特に制限はない。
しかし、これらの粒子の粒径としては、その平均粒子径が０．０１〜１００μｍの範囲内にあることが好ましく、０．５〜１０μｍの範囲内にあることがより好ましい。【００９９】  また、これらの粒子の比重は、１〜１０の範囲内にあることが好ましく、１〜２の範囲内にあることがより好ましい。【０１００】▲４▼  また、本発明における担体としては、例えば、前記の間接凝集反応測定法に使用されている容器、又はこの間接凝集反応測定法に使用することが可能な容器等を挙げることができる。【０１０１】  このような容器としては、例えば、ガラス、ポリスチレン、塩化ビニル重合体又はメタクリル酸重合体などからなる試験管、マイクロプレート（マイクロタイタープレート）又はトレイ等を挙げることができる。【０１０２】  なお、前記容器の溶液収容部分（マイクロプレートのウェル等）の底面は、Ｕ型、Ｖ型又はＵＶ型等の底面中央から周辺にかけて傾斜をもつ形状であることが好ましい。【０１０３】▲５▼  また、本発明における担体としては、例えば、酵素免疫測定法、蛍光免疫測定法、放射免疫測定法、若しくは発光免疫測定法などの標識物質を用いる免疫測定法、すなわち標識免疫測定法に使用されている担体、又はこの標識免疫測定法に使用することが可能な担体等を挙げることができる。【０１０４】  このような担体としては、例えば、ポリスチレン、ポリカーボネイト、ポリビニルトルエン、ポリプロピレン、ポリエチレン、塩化ビニル重合体、ナイロン、メタクリル酸重合体、ポリアクリルアミド、ラテックス、リポソーム、ゼラチン、アガロース、セルロース、セファロース、ガラス、金属、セラミックス又は磁性体等の材質よりなる粒子、マイクロカプセル、ビーズ、マイクロプレート（マイクロタイタープレート）、試験管、スティック又は試験片等を挙げることができる。【０１０５】▲６▼  また、本発明における担体としては、例えば、特開平９−２２９９３６号公報及び特開平１０−１３２８１９号公報などに記載された測定対象物質（被検物質）に対する特異的結合物質が固定され被覆された面を有する担体並びに測定対象物質（被検物質）に対する特異的結合物質が固定された粒子を用いる測定法に使用される担体、又はこの測定法に使用することが可能な担体等を挙げることができる。【０１０６】▲７▼  また、以上記載した担体を強磁性体で被覆又は担体成型時に強磁性体を含有させて調製した磁性担体等を用いることもできる。【０１０７】▲８▼  本発明において、担体に測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化させる方法は、物理的吸着法等の公知の方法を用いることができる。【０１０８】  物理的吸着法による場合は、公知の方法に従い、緩衝液等に溶解した測定対象物質に対する特異的結合物質を容器の溶液収容部分に添加し内壁面に接触させたり、又は測定対象物質に対する特異的結合物質と粒子を緩衝液等の溶液中で混合し接触させること等により、担体への固定化を行うことができる。【０１０９】  例えば、緩衝液等に溶解した測定対象物質に対する特異的結合物質を、容器の溶液収容部分に添加し内壁面に接触させ、又は測定対象物質に対する特異的結合物質と粒子を緩衝液等の溶液中で混合し接触させ、これを約２℃〜約４０℃で約���０分〜約１日間行う。【０１１０】  また、更に非特異的反応や担体の自然凝集等を抑制するために処理を行う必要があれば、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化させた容器の溶液収容部分の内壁面又は粒子に、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、カゼイン、ゼラチン、卵白アルブミン若しくはその塩などのタンパク質、界面活性剤又は脱脂粉乳等を接触させ被覆させること等の公知の方法により処理して、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化させた担体のブロッキング処理（マスキング処理）を行ってもよい。【０１１１】（７）測定試薬
▲１▼  測定試薬の測定原理（測定方法）
本発明において、測定対象物質の測定試薬は、担体に固定化された「測定対象物質に対する特異的結合物質」と試料中に含まれていた「測定対象物質」との特異的な結合反応を利用して、試料中の測定対象物質の測定を行う方法を測定原理とする測定試薬である。【０１１２】  なお、この「測定対象物質に対する特異的結合物質」と「測定対象物質」との特異的な結合反応としては、例えば、抗原と抗体の抗原抗体反応（免疫反応）、タンパク質などよりなる物質とそのリガンドとの反応、糖とレクチンの反応、ヌクレオチド鎖とそれに相補的なヌクレオチド鎖の反応、又はレセプターとそれに対する物質の反応等を挙げることができる。【０１１３】  そして、このような結合反応を利用して、試料中の測定対象物質の測定を行う方法の例としては、例えば、免疫学的測定方法、又は遺伝子測定方法等を挙げることができる。【０１１４】  なお、この免疫学的測定方法としては、例えば、ラテックス比濁法；ラテックス凝集反応測定法などの間接凝集反応測定法；酵素免疫測定法、蛍光免疫測定法、放射免疫測定法、若しくは発光免疫測定法などの標識物質を用いる免疫測定法、すなわち標識免疫測定法；ウエスタンブロット法；Ｄａｈｌｂｅａｃｋらが示したＥＬＳＡ法（ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ  ｌｉｇａｎｄｓｏｒｂｅｎｔ  ａｓｓａｙ）〔Ｔｈｒｏｍｂ．Ｈａｅｍｏｓｔ．，７９巻，７６７〜７７２頁，１９９８年、及びＷＯ９８／２３９６３号公報〕；又は特開平９−２２９９３６号公報及び特開平１０−１３２８１９号公報などに記載された測定対象物質（被検物質）に対する特異的結合物質が固定され被覆された面を有する担体並びに測定対象物質（被検物質）に対する特異的結合物質が固定された粒子を用いる測定法等を挙げることができる。【０１１５】  そして、前記の標識免疫測定法であるが、これは、サンドイッチ法、競合法、又は均一系法（ホモジニアス系法）等のいずれの手法においても本発明を適用することができる。【０１１６】  また、この遺伝子測定方法としては、例えば、サンドイッチ法、分岐プローブ法、又はポリヌクレオチドプローブ（測定対象物質に対する特異的結合物質）を固定化したラテックス粒子などの担体の凝集により測定を行う方法等を挙げることができる。【０１１７】▲２▼  測定試薬
本発明における測定対象物質の測定試薬は、前記した測定方法を測定原理とすることができるものであって、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体を含む測定対象物質の測定試薬において、陽イオン及び陰イオンが各々１００ｍＭ以上存在することを特徴とするものである。【０１１８】  すなわち、本発明における測定対象物質の測定試薬は、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体を含み、かつ陽イオン及び陰イオンが各々１００ｍＭ以上存在するものである。【０１１９】  これにより、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体を含む測定対象物質の測定試薬において、測定対象物質の測定試薬の保存中に、「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体」から「測定対象物質に対する特異的結合物質」が剥離（解離）してしまうのを防ぐことができ、測定対象物質の測定試薬を長期間安定に保つことができ、そして、長期間安定な測定対象物質の測定試薬を得ることができるのである。【０１２０】  なお、本発明における測定対象物質の測定試薬は、そのもの単独にて、販売し、又は試料中の測定対象物質の測定に使用することができる。
また、本発明における測定対象物質の測定試薬は、他の試薬と組み合わせて、販売し、又は試料中の測定対象物質の測定に使用することもできる。【０１２１】  前記の他の試薬としては、例えば、緩衝液、試料希釈液、試薬希釈液、標識物質を含有する試薬、発色などのシグナルを生成する物質を含有する試薬、又は校正（キャリブレーション）を行うための物質を含有する物質の試薬等を挙げることができる。【０１２２】  そして、前記の他の試薬を第１試薬とし、本発明における測定対象物質の測定試薬を第２試薬としたり、又は本発明における測定対象物質の測定試薬を第１試薬とし、前記の他の試薬を第２試薬としたりして、適宜様々な組合せにて販売、及び使用を行うことができる。【０１２３】  なお、本発明における測定対象物質の測定試薬の溶媒としては、各種の水系溶媒を用いることができる。【０１２４】  この水系溶媒としては、例えば、精製水、生理食塩水、又は、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン緩衝液、リン酸緩衝液、若しくはリン酸緩衝生理食塩水などの各種緩衝液等を挙げることができる。【０１２５】  この緩衝液のｐＨについては、適宜適当なｐＨを選択して用いればよく、特に制限はないものの、通常は、ｐＨ３〜１２の範囲内のｐＨを選択して用いることが一般的である。【０１２６】  なお、本発明における測定対象物質の測定試薬のｐＨは、アルカリ性領域や酸性領域のｐＨよりも、中性領域のｐＨを用いる方が、測定試薬の安定化効果を高めることができるので好ましい。例えば、ｐＨがｐＨ７．０〜ｐＨ７．３であるとより好ましい。【０１２７】  また、本発明における測定対象物質の測定試薬には、前記の測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体、及び前記の陽イオン及び陰イオンの他に、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、ヒト血清アルブミン（ＨＳＡ）、カゼイン若しくはその塩などのタンパク質；前記の陽イオン及び陰イオン以外の各種塩類；各種糖類；脱脂粉乳；正常ウサギ血清などの各種動物血清；アジ化ナトリウム若しくは抗生物質などの各種防腐剤；活性化物質；反応促進物質；ポリエチレングリコールなどの感度増加物質；非特異的反応抑制物質；又は、非イオン性界面活性剤、両イオン性界面活性剤若しくは陰イオン性界面活性剤などの各種界面活性剤等の１種又は２種以上を適宜含有させてもよい。【０１２８】  そして、これらを測定対象物質の測定試薬に含有させる際の濃度は特に限定されるものではないが、０．００１〜１０％（Ｗ／Ｖ）が好ましく、特に０．０１〜５％（Ｗ／Ｖ）が好ましい。【０１２９】  なお、前記の界面活性剤としては、例えば、ソルビタン脂肪酸エステル、グリセリン脂肪酸エステル、デカグリセリン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシエチレングリセリン脂肪酸エステル、ポリエチレングリコール脂肪酸エステル、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンフィトステロール、フィトスタノール、ポリオキシエチレンポリオキシプロピレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルフェニルエーテル、ポリオキシエチレンヒマシ油、硬化ヒマシ油若しくはポリオキシエチレンラノリンなどの非イオン性界面活性剤；酢酸ベタインなどの両性界面活性剤；又は、ポリオキシエチレンアルキルエーテル硫酸塩若しくはポリオキシエチレンアルキルエーテル酢酸塩などの陰イオン性界面活性剤等を挙げることができる。【０１３０】  本発明における、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体から、測定対象物質に対する特異的結合物質が剥離（解離）するのを防ぐ安定化の効果は、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体が液体と接触している時の安定化において特に顕著である。（なお、この測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体が液体と接触しているということは、液体と接触していない前記担体を、使用時に水又は他の液体と接触、復元させたものをも含むものである。）【０１３１】（８）試料中の測定対象物質の測定
本発明における測定対象物質の測定試薬を用いて、試料中の測定対象物質の測定を行うには、その測定対象物質の測定試薬の測定原理である測定方法の操作法に従って測定操作を行えばよい。【０１３２】  この測定は、用手法により行ってもよいし、又は分析装置等の装置を用いて行ってもよい。【０１３３】  また、この測定は、１ステップ法（１試薬法）により行ってもよいし、又は２ステップ法（２試薬法）等の複数の操作ステップにより行う方法によって実施してもよい。【０１３４】  以下、ラテックス比濁法を測定原理とする測定対象物質の測定試薬を用いて、試料中のトレポネーマ・パリダムに対する抗体（抗トレポネーマ・パリダム抗体）の測定を行う場合を例にとって、具体的に説明を行う。【０１３５】▲１▼  まず、測定対象物質の測定試薬として、以下のものを準備する。
第１試薬：  緩衝剤を含有させｐＨを一定の値に調整した緩衝液
第２試薬：  トレポネーマ・パリダムの抗原を固定化したラテックス粒子を含み、かつ陽イオン及び陰イオンが各々１００ｍＭ以上存在する緩衝液【０１３６】▲２▼  血清等の試料の一定量と前記の第１試薬の一定量を混合し、静置する。【０１３７】▲３▼  一定時間後、前記の試料と第１試薬の混合液に、前記の第２試薬の一定量を添加、混合し、反応混合液として、一定温度下で一定時間静置する。【０１３８】  ここで、試料中にトレポネーマ・パリダムに対する抗体が存在していた場合には、このトレポネーマ・パリダムに対する抗体が、ラテックス粒子に固定化されているトレポネーマ・パリダムの抗原と抗原抗体反応により結合する。【０１３９】  そして、更には、「…〔トレポネーマ・パリダムの抗原＝ラテックス粒子＝トレポネーマ・パリダムの抗原〕−〔トレポネーマ・パリダムに対する抗体〕−〔トレポネーマ・パリダムの抗原＝ラテックス粒子＝トレポネーマ・パリダムの抗原〕…」の架橋が形成され、トレポネーマ・パリダムに対する抗体を介した、トレポネーマ・パリダムの抗原を固定化したラテックス粒子同士の凝集塊が生成する。【０１４０】▲４▼  次に、一定時間後、分析装置又は分光光度計等において、反応混合液に光を照射して、生成したラテックス粒子同士の凝集塊により生ずるシグナルである適当な波長の透過光強度の減少（吸光度の増加）又は散乱光強度の増加を測定することにより、生成した前記凝集塊の量、すなわち、試料中に含まれていたトレポネーマ・パリダムに対する抗体の量を求める。【０１４１】▲５▼  そして、「前記測定を行った反応混合液の透過光強度の減少（吸光度の増加）又は散乱光強度の増加の値」と、「濃度既知のトレポネーマ・パリダムに対する抗体を含む試料（標準液、標準血清等）を測定したときの透過光強度の減少（吸光度の増加）又は散乱光強度の増加の値」とを比較することにより、測定を行った試料中に含まれるトレポネーマ・パリダムに対する抗体の量（濃度）の算出を行う。
【実施例】
【０１４２】  以下、本発明を実施例により更に説明する。
なお、本発明は、これらにより限定されるものではない。【０１４３】〔実施例１〕（トレポネーマ・パリダムに対する抗体の測定試薬の調製）
測定対象物質がトレポネーマ・パリダムである時の、本発明の測定対象物質の測定試薬の調製を行った。【０１４４】１．トレポネーマ・パリダムの抗原を固定化したラテックス粒子を含む測定試薬の調製（第２試薬の調製）【０１４５】（１）  遺伝子組み換え法により調製されたトレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原を使用した測定試薬（第２試薬）。【０１４６】▲１▼  トレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原として、遺伝子組み換え法によって大腸菌より発現された１７Ｋダルトン抗原（Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）を用いた。【０１４７】▲２▼  前記▲１▼のトレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原を、最終濃度が５０μｇ／ｍＬとなるように、５０ｍＭグリシン緩衝液〔ｐＨ９．０〕に添加し、溶解させた。【０１４８】▲３▼  ラテックス粒子〔積水化学社製、平均粒径０．４μｍ、ポリスチレン〕を、０．５％（ｗ／ｖ）となるように、５０ｍＭグリシン緩衝液〔ｐＨ９．０〕に添加し、懸濁させた。【０１４９】▲４▼  前記▲２▼のトレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原の溶液の０．２ｍＬと、前記▲３▼のラテックス粒子の懸濁液の０．２ｍＬを混合した。
そして、その後、３７℃で３時間静置して、前記トレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原の前記ラテックス粒子への固定化を行った。【０１５０】▲５▼  前記▲４▼のトレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子の懸濁液に、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．６〕の１ｍＬを添加し、３７℃で２時間静置して、担体であるラテックス粒子の表面のブロッキング処理（マスキング処理）を行った。【０１５１】▲６▼  前記▲５▼のブロッキング処理（マスキング処理）の後、回転数１４，０００ｒｐｍでの遠心分離を、１０℃にて２０分間行った。
遠心分離後、デカンテーションにより上清を除き、沈殿物であるラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）を得た。【０１５２】▲７▼  塩化ナトリウムの濃度だけが異なる３種類のラテックス粒子分散媒を調製した。
すなわち、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．６〕；１００ｍＭ塩化ナトリウム、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．６〕；並びに、５００ｍＭ塩化ナトリウム、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．６〕の調製を行った。【０１５３】▲８▼  前記▲７▼で調製した３種類のラテックス粒子分散媒の各々の０．４ｍＬに、前記▲６▼で得たラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）をそれぞれ０．２５％（ｗ／ｖ）となるように懸濁させて、下記の３種類の測定試薬（第２試薬）を調製した。【０１５４】  〔測定試薬Ａ〕：  ０．２５％（ｗ／ｖ）のラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）を含む、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．６〕。【０１５５】  〔測定試薬Ｂ〕：  ０．２５％（ｗ／ｖ）のラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）を含む、１００ｍＭ塩化ナトリウム、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．６〕。【０１５６】  〔測定試薬Ｃ〕：  ０．２５％（ｗ／ｖ）のラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）を含む、５００ｍＭ塩化ナトリウム、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．６〕。【０１５７】（２）  遺伝子組み換え法により調製されたトレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を使用した測定試薬（第２試薬）。【０１５８】▲１▼  トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を、Ｌ．Ｗｅｉｇｅｌ，Ｍ．Ｎｏｒｇａｒｄらの方法〔“ＩＮＦＥＣＴＩＯＮ  ＡＮＤ  ＩＭＭＵＮＩＴＹ”，６０巻，４号，１５６８〜１５７６頁，１９９２年〕に従い、遺伝子組み換え法により調製した。【０１５９】▲２▼  前記▲１▼にて調製したトレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を、最終濃度が５０μｇ／ｍＬとなるように、５０ｍＭグリシン緩衝液〔ｐＨ９．０〕に添加し、溶解させた。【０１６０】▲３▼  ラテックス粒子〔積水化学社製、平均粒径０．４μｍ、ポリスチレン〕を、０．５％（ｗ／ｖ）となるように、５０ｍＭグリシン緩衝液〔ｐＨ９．０〕に添加し、懸濁させた。【０１６１】▲４▼  前記▲２▼のトレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原の溶液の０．２ｍＬと、前記▲３▼のラテックス粒子の懸濁液の０．２ｍＬを混合した。
そして、その後、３７℃で３時間静置して、前記トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原の前記ラテックス粒子への固定化を行った。【０１６２】▲５▼  前記▲４▼のトレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子の懸濁液に、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕の１ｍＬを添加し、３７℃で２時間静置して、担体であるラテックス粒子の表面のブロッキング処理（マスキング処理）を行った。【０１６３】▲６▼  前記▲５▼のブロッキング処理（マスキング処理）の後、回転数１４，０００ｒｐｍでの遠心分離を、１０℃にて２０分間行った。
遠心分離後、デカンテーションにより上清を除き、沈殿物であるラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）を得た。【０１６４】▲７▼  塩化ナトリウムの濃度だけが異なる４種類のラテックス粒子分散媒を調製した。
すなわち、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕；１００ｍＭ塩化ナトリウム、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕；３００ｍＭ塩化ナトリウム、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕；並びに、５００ｍＭ塩化ナトリウム、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕の調製を行った。【０１６５】▲８▼  前記▲７▼で調製した４種類のラテックス粒子分散媒の各々の０．４ｍＬに、前記▲６▼で得たラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）をそれぞれ０．２５％（ｗ／ｖ）となるように懸濁させて、下記の４種類の測定試薬（第２試薬）を調製した。【０１６６】  〔測定試薬Ｄ〕：  ０．２５％（ｗ／ｖ）のラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）を含む、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕。【０１６７】  〔測定試薬Ｅ〕：  ０．２５％（ｗ／ｖ）のラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）を含む、１００ｍＭ塩化ナトリウム、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕。【０１６８】  〔測定試薬Ｆ〕：  ０．２５％（ｗ／ｖ）のラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）を含む、３００ｍＭ塩化ナトリウム、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕。【０１６９】  〔測定試薬Ｇ〕：  ０．２５％（ｗ／ｖ）のラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）を含む、５００ｍＭ塩化ナトリウム、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕。【０１７０】２．試料の希釈液である試薬の調製（第１試薬の調製）【０１７１】  試料の希釈液として、下記の第１試薬を調製した。【０１７２】  〔第１試薬〕：  ４％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ、０．２％（ｗ／ｖ）ポリエチレングリコール及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ８．５〕。【０１７３】〔実施例２〕（トレポネーマ・パリダムに対する抗体の測定試薬の保存安定性の確認）【０１７４】  前記実施例１で調製した、トレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子を含む測定試薬を、３０℃で保存し，保存時の安定性の確認を行った。【０１７５】１．測定試薬���保存【０１７６】  前記実施例１の１の（１）で調製した、〔測定試薬Ａ〕、〔測定試薬Ｂ〕、及び〔測定試薬Ｃ〕の３種類の測定試薬を、各々３０℃で５０日間保存した。【０１７７】２．測定試薬の安定性の確認【０１７８】  保存前及び保存後の前記測定試薬の各々を用いて試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定を行い、前記測定試薬の保存時の安定性の確認を行った。【０１７９】（１）  試薬【０１８０】▲１▼  第１試薬
前記実施例１の２で調製した試料の希釈液である〔第１試薬〕を、第１試薬として用いた。【０１８１】▲２▼  第２試薬
下記の測定試薬をそれぞれ第２試薬として用いた。【０１８２】  ・  前記１における３０℃での保存５０日後の〔測定試薬Ａ〕、〔測定試薬Ｂ〕、若しくは〔測定試薬Ｃ〕。  又は、【０１８３】  ・  測定試薬調製時すなわち保存開始前の〔測定試薬Ａ〕、〔測定試薬Ｂ〕、若しくは〔測定試薬Ｃ〕。【０１８４】（２）  試料
トレポネーマ・パリダムに対する抗体を含むヒト血清を試料として用いた。【０１８５】（３）  試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定【０１８６】▲１▼  ９６穴マイクロタイタープレート（ヌンク社製）のウェルに前記の第１試薬の８７．５μＬを添加し、次にこれに前記の試料の１０μＬを加え混合した。【０１８７】▲２▼  このウェルに更に、前記の第２試薬の１２．５μＬを添加し、混合した後、直ちに、このウェル内の混合液の吸光度（主波長：４９０ｎｍ、副波長：６５５ｎｍ）をマイクロプレートリーダー（３３５０型、バイオラッド社製）で測定した。【０１８８】▲３▼  前記の吸光度の測定の後、直ぐに前記マイクロタイタープレートを３７℃で静置した。
これにより、前記のラテックス粒子に固定化されたトレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原と、前記の試料に含まれていたトレポネーマ・パリダムに対する抗体との抗原抗体反応を行わせ、ラテックス粒子の凝集塊を生成させた。【０１８９】▲４▼  前記▲２▼における吸光度の測定から１０分後に、前記のウェル内の反応混合液の吸光度を前記▲２▼の場合と同様にして測定した。【０１９０】▲５▼  前記▲４▼において測定した吸光度から前記▲２▼において測定した吸光度を差し引き、吸光度差を得た。
なお、この吸光度差は試料に含まれる測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の量（濃度）に比例したものである。【０１９１】（４）  測定結果
前記（３）において、試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定を行って得られた吸光度差を、表１に示した。【０１９２】
【表１】
2006227027.tif 000002
【０１９３】３．考察
表１より、陽イオン及び陰イオンが各々１００ｍＭ未満である〔測定試薬Ａ〕において、３０℃での保存５０日後に得た吸光度差の値は、保存開始前の吸光度差の値の５０％まで減少してしまっていることが分かる。すなわち、シグナルの生成が大きく減少し、測定の感度が低下してしまっている。【０１９４】  これに対して、１００ｍＭの塩化ナトリウムを含有して、陽イオン及び陰イオンが各々１００ｍＭ以上存在することになる〔測定試薬Ｂ〕において、３０℃での保存５０日後に得た吸光度差の値は、保存開始前の吸光度差の値の８３％であり、生成するシグナルの減少、すなわち測定の感度の低下が抑制されていることが分かる。【０１９５】  更に、５００ｍＭの塩化ナトリウムを含有して、陽イオン及び陰イオンが各々５００ｍＭ以上存在することになる〔測定試薬Ｃ〕において、３０℃での保存５０日後に得た吸光度差の値は、保存開始前の吸光度差の値の９６％であり、生成するシグナルの減少、すなわち測定の感度の低下をほとんど抑制できていることが分かる。【０１９６】  従って、陽イオン及び陰イオンが各々１００ｍＭ以上存在することにより、測定対象物質の測定試薬を長期間安定に保つことができ、例え、３０℃で５０日間という測定試薬にとって過酷な保存条件においても、生成するシグナルの減少を防ぎ、測定の感度の低下を抑制することができることが確かめられた。【０１９７】〔実施例３〕（トレポネーマ・パリダムに対する抗体の測定試薬の保存安定性の確認）【０１９８】  前記実施例１で調製した、トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子を含む測定試薬を、３０℃で保存し、保存時の安定性の確認を行った。【０１９９】１．測定試薬の保存
前記実施例１の１の（２）で調製した、〔測定試薬Ｄ〕、〔測定試薬Ｅ〕、〔測定試薬Ｆ〕、及び〔測定試薬Ｇ〕の４種類の測定試薬を、各々３０℃で６０日間保存した。【０２００】２．測定試薬の安定性の確認
保存前、保存中及び保存後の前記測定試薬の各々を用いて試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定を行い、前記測定試薬の保存時の安定性の確認を行った。【０２０１】（１）  試薬【０２０２】▲１▼  第１試薬
前記実施例１の２で調製した試料の希釈液である〔第１試薬〕を、第１試薬として用いた。【０２０３】▲２▼  第２試薬
下記の測定試薬をそれぞれ第２試薬として用いた。【０２０４】  ・  前記１における３０℃での保存６０日後の〔測定試薬Ｄ〕、〔測定試薬Ｅ〕、〔測定試薬Ｆ〕、若しくは〔測定試薬Ｇ〕。【０２０５】  ・  前記１における３０℃での保存３０日後の〔測定試薬Ｄ〕、〔測定試薬Ｅ〕、〔測定試薬Ｆ〕、若しくは〔測定試薬Ｇ〕。  又は、【０２０６】  ・  測定試薬調製時すなわち保存開始前の〔測定試薬Ｄ〕、〔測定試薬Ｅ〕、〔測定試薬Ｆ〕、若しくは〔測定試薬Ｇ〕。【０２０７】（２）  試料
トレポネーマ・パリダムに対する抗体を含むヒト血清を試料として用いた。【０２０８】（３）  試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定【０２０９】▲１▼  測定は、日立−７１７０形自動分析装置（日立製作所社製）を使用して行った。【０２１０】  まず、測定用セル（キュベット）に、前記の試料の２０μＬを添加した。
次に、この測定用セル（キュベット）に、前記の第１試薬の１７５μＬを添加し、混合した。【０２１１】  そして、この測定用セル（キュベット）を、３７℃で静置した。【０２１２】▲２▼  前記の第１試薬の添加後４分１４秒目（１５ポイント目）に、この測定用セル（キュベット）内の混合液の吸光度（波長：７００ｎｍ）を試料盲検として測定した。【０２１３】▲３▼  前記の第１試薬の添加後４分３０秒目（１６ポイント目）に、この測定用セル（キュベット）内の混合液に、更に、前記の第２試薬の２５μＬを添加し、混合した。【０２１４】  そして、この測定用セル（キュベット）を、３７℃で静置して、反応を行わせた。
これにより、前記のラテックス粒子に固定化されたトレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原と、前記の試料に含まれていたトレポネーマ・パリダムに対する抗体との抗原抗体反応を行わせ、ラテックス粒子の凝集塊を生成させた。【０２１５】▲４▼  前記の第１試薬の添加後９分４７秒目（３４ポイント目）に、この測定用セル（キュベット）内の反応混合液の吸光度（波長：７００ｎｍ）を、前記試料の測定値として測定した。【０２１６】▲５▼  前記▲４▼において測定した吸光度（測定値）から前記▲２▼において測定した吸光度（試料盲検）を差し引き、吸光度差を得た。
なお、この吸光度差は試料に含まれる測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の量（濃度）に比例したものである。【０２１７】（４）  測定結果
前記（３）において、試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定を行って得られた吸光度差を、表２に示した。【０２１８】
【表２】
2006227027.tif 000003
【０２１９】３．考察
表２より、陽イオン及び陰イオンが各々１００ｍＭ未満である〔測定試薬Ｄ〕において、３０℃での保存３０日後に得た吸光度差の値は、保存開始前の吸光度差の値の７３％まで減少してしまっており、更に、３０℃での保存６０日後に得た吸光度差の値は、保存開始前の吸光度差の値の５６％にまで減少してしまっていることが分かる。すなわち、シグナルの生成が大きく減少し、測定の感度が低下してしまっている。【０２２０】  これに対して、１００ｍＭの塩化ナトリウムを含有して、陽イオン及び陰イオンが各々１００ｍＭ以上存在することになる〔測定試薬Ｅ〕において、３０℃での保存３０日後に得た吸光度差の値は減少しておらず、更に、３０℃での保存６０日後に得た吸光度差の値は、保存開始前の吸光度差の値の９２％であり、生成するシグナルの減少、すなわち測定の感度の低下が抑制されていることが分かる。【０２２１】  また、３００ｍＭの塩化ナトリウムを含有して、陽イオン及び陰イオンが各々３００ｍＭ以上存在することになる〔測定試薬Ｆ〕において、３０℃での保存３０日後に得た吸光度差の値は減少しておらず、更に、３０℃での保存６０日後に得た吸光度差の値は、保存開始前の吸光度差の値の９６％であり、生成するシグナルの減少、すなわち測定の感度の低下をほとんど抑制できていることが分かる。【０２２２】  そして、５００ｍＭの塩化ナトリウムを含有して、陽イオン及び陰イオンが各々５００ｍＭ以上存在することになる〔測定試薬Ｇ〕においても、３０℃での保存３０日後に得た吸光度差の値は減少しておらず、更に、３０℃での保存６０日後に得た吸光度差の値は、保存開始前の吸光度差の値の９５％であり、生成するシグナルの減少、すなわち測定の感度の低下をほとんど抑制できていることが分かる。【０２２３】  従って、陽イオン及び陰イオンが各々１００ｍＭ以上存在することにより、測定対象物質の測定試薬を長期間安定に保つことができ、例え、３０℃で６０日間という測定試薬にとって過酷な保存条件においても、生成するシグナルの減少を防ぎ、測定の感度の低下を抑制することができることを、再度確かめることができた。【０２２４】〔実施例４〕（測定対象物質の測定試薬における測定の感度低下の作用機序に関する確認）【０２２５】  測定対象物質の測定試薬において、保存することにより測定の感度が低下するようになる作用機序について、前記実施例１で調製した、トレポネーマ・パリダムの抗原を固定化したラテックス粒子を含む測定試薬を使用して確認を行った。【０２２６】Ｉ．トレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原を使用した測定試薬での確認【０２２７】１．測定試薬の保存
前記実施例１の１の（１）で調製した〔測定試薬Ａ〕を、３０℃で６０日間保存した。【０２２８】２．保存後の測定試薬による測定
保存１日後及び保存６０日後の前記測定試薬を用いて試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定を行い、吸光度差の値を得た。【０２２９】（１）  試薬【０２３０】▲１▼  第１試薬
前記実施例１の２で調製した試料の希釈液である〔第１試薬〕を、第１試薬として用いた。【０２３１】▲２▼  第２試薬
下記の測定試薬をそれぞれ第２試薬として用いた。【０２３２】  ・  前記１における３０℃での保存６０日後の〔測定試薬Ａ〕。  又は、【０２３３】  ・  前記１における３０℃での保存１日後の〔測定試薬Ａ〕。【０２３４】（２）  試料
トレポネーマ・パリダムに対する抗体を含むヒト血清を試料として用いた。【０２３５】（３）  試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定
前記試薬及び前記試料を使用し、前記実施例３の２の（３）の記載の通りに各々操作を行い、試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定を行った。【０２３６】（４）測定結果
これらの測定により得られた吸光度差を、表３に示した。【０２３７】３．分散媒を交換した測定試薬による測定
前記保存を行った測定試薬の分散媒の交換（置換）を行い、この測定試薬を用いて試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定を行って、吸光度差の値を得た。【０２３８】（１）  試薬【０２３９】▲１▼  第１試薬
前記実施例１の２で調製した試料の希釈液である〔第１試薬〕を、第１試薬として用いた。【０２４０】▲２▼  第２試薬
前記１における３０℃での保存６０日後の〔測定試薬Ａ〕の０．４ｍＬについて、回転数１４，０００ｒｐｍでの遠心分離を、１０℃にて３０分間行った。【０２４１】  遠心分離後、デカンテーションにより上清（分散媒）を除き、沈殿物であるラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）のみを分取した。【０２４２】  このラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）を、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．６〕よりなる分散媒の０．４ｍＬに、０．２５％（ｗ／ｖ）となるように懸濁させて、再度、〔測定試薬Ａ〕を調製した。【０２４３】  すなわち、以上の操作により、３０℃で６０日間保存した〔測定試薬Ａ〕について、ラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）はそのままで、分散媒のみを調製直後のものに交換して、〔測定試薬Ａ〕の再構成を行ったことになる。【０２４４】（２）  試料
トレポネーマ・パリダムに対する抗体を含むヒト血清を試料として用いた。【０２４５】（３）  試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定
前記の分散媒の交換を行った〔測定試薬Ａ〕及び前記試料を使用し、前記実施例３の２の（３）の記載の通りに各々操作を行い、試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定を行った。【０２４６】（４）  測定結果
これらの測定により得られた吸光度差をも、表３に示した。【０２４７】
【表３】
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【０２４８】ＩＩ．トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を使用した測定試薬での確認【０２４９】１．測定試薬の保存
前記実施例１の１の（２）で調製した〔測定試薬Ｄ〕を、３０℃で６０日間保存した。【０２５０】２．保存後の測定試薬による測定
保存１日後及び保存６０日後の前記測定試薬を用いて試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定を行い、吸光度差の値を得た。【０２５１】（１）  試薬【０２５２】▲１▼  第１試薬
前記実施例１の２で調製した試料の希釈液である〔第１試薬〕を、第１試薬として用いた。【０２５３】▲２▼  第２試薬
下記の測定試薬をそれぞれ第２試薬として用いた。【０２５４】  ・  前記１における３０℃での保存６０日後の〔測定試薬Ｄ〕。  又は、【０２５５】  ・  前記１における３０℃での保存１日後の〔測定試薬Ｄ〕。【０２５６】（２）  試料
トレポネーマ・パリダムに対する抗体を含むヒト血清を試料として用いた。【０２５７】（３）  試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定
前記試薬及び前記試料を使用し、前記実施例３の２の（３）の記載の通りに各々操作を行い、試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定を行った。【０２５８】  これらの測定により得られた吸光度差を、表４に示した。【０２５９】３．分散媒を交換した測定試薬による測定
前記保存を行った測定試薬の分散媒の交換（置換）を行い、この測定試薬を用いて試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定を行って、吸光度差の値を得た。【０２６０】（１）  試薬【０２６１】▲１▼  第１試薬
前記実施例１の２で調製した試料の希釈液である〔第１試薬〕を、第１試薬として用いた。【０２６２】▲２▼  第２試薬
前記１における３０℃での保存６０日後の〔測定試薬Ｄ〕の０．４ｍＬについて、回転数１４，０００ｒｐｍでの遠心分離を、１０℃にて３０分間行った。【０２６３】  遠心分離後、デカンテーションにより上清（分散媒）を除き、沈殿物であるラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）のみを分取した。【０２６４】  このラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）を、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕よりなる分散媒の０．４ｍＬに、０．２５％（ｗ／ｖ）となるように懸濁させて、再度、〔測定試薬Ｄ〕を調製した。【０２６５】  すなわち、以上の操作により、３０℃で６０日間保存した〔測定試薬Ｄ〕について、ラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）はそのままで、分散媒のみを調製直後のものに交換して、〔測定試薬Ｄ〕の再構成を行ったことになる。【０２６６】（２）  試料
トレポネーマ・パリダムに対する抗体を含むヒト血清を試料として用いた。【０２６７】（３）  試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定
前記の分散媒の交換を行った〔測定試薬Ｄ〕及び前記試料を使用し、前記実施例３の２の（３）の記載の通りに各々操作を行い、試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定を行った。【０２６８】  これらの測定により得られた吸光度差をも、表４に示した。【０２６９】
【表４】
2006227027.tif 000005
【０２７０】ＩＩＩ．考察【０２７１】  表３により、陽イオン及び陰イオンが各々１００ｍＭ未満である〔測定試薬Ａ〕において、３０℃での保存６０日後に得た吸光度差の値は、３０℃での保存１日後に得た吸光度差の値の５４％まで減少してしまっていることが分かる。すなわち、シグナルの生成が大きく減少し、測定の感度が低下してしまっている。【０２７２】  また、表４により、陽イオン及び陰イオンが各々１００ｍＭ未満である〔測定試薬Ｄ〕においても、３０℃での保存６０日後に得た吸光度差の値は、３０℃での保存１日後に得た吸光度差の値の７３％まで減少してしまっていることが分かる。すなわち、これもシグナルの生成が大きく減少し、測定の感度が低下してしまっている。【０２７３】  これに対して、前記の３０℃で６０日間保存した〔測定試薬Ａ〕の分散媒を交換（置換）して、再構成した〔測定試薬Ａ〕により得た吸光度差の値は、先の３０℃での保存１日後に得た吸光度差の値の８６％であり、分散媒交換前に比べて３２％も増加、回復していることが分かる。【０２７４】  また、前記の３０℃で６０日間保存した〔測定試薬Ｄ〕の分散媒を交換（置換）して、再構成した〔測定試薬Ｄ〕により得た吸光度差の値は、先の３０℃での保存１日後に得た吸光度差の値の９２％であり、分散媒交換前に比べて１９％も増加、回復していることが分かる。【０２７５】  以上の測定結果より、「トレポネーマ・パリダムの１７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子を含む測定試薬」、及び「トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子を含む測定試薬」において、つまり、「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体を含む測定対象物質の測定試薬」において、その保存中に測定試薬が劣化してしまい、試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定の感度が低下してしまうようになる原因が、「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体」から「測定対象物質に対する特異的結合物質」が剥離（解離）してしまうため、すなわち、「トレポネーマ・パリダムの抗原を固定化したラテックス粒子」から「トレポネーマ・パリダムの抗原」が剥離（解離）してしまうためであることが分かる。【０２７６】  これを以下、より詳細に説明する。【０２７７】  測定対象物質の測定試薬（〔測定試薬Ａ〕、〔測定試薬Ｄ〕）の保存により、測定によって得られる吸光度差すなわちシグナルは大きく減少し、測定の感度が低下してしまう。【０２７８】  しかし、保存を行った前記測定試薬の「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体以外の成分」（分散媒）を分離・除去して、残った「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体」（トレポネーマ・パリダムの抗原を固定化したラテックス粒子）と、新たに調製した「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体以外の成分」（分散媒）とより再構成を行った測定試薬（〔測定試薬Ａ〕、〔測定試薬Ｄ〕）においては、測定によって得られる吸光度差すなわちシグナルは回復する。【０２７９】  すなわち、「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体」を含む測定対象物質の測定試薬においては、保存により前記測定試薬が劣化し、測定反応において生成するシグナルは減少し、測定の感度は低下するようになる。
そして、「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体以外の成分」（分散媒）を分離・除去して、新たに調製した前記成分と交換（置換）することにより、前記の阻害物質が、測定試薬ひいては測定反応系（反応混合液）から取り除かれるので、吸光度差（シグナル）が回復する。【０２８０】  これにより、保存を行った前記測定試薬の「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体以外の成分」（分散媒）の中に、「測定対象物質」（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）と「測定対象物質に対する特異的結合物質」（トレポネーマ・パリダムの抗原）との特異的結合反応（抗原抗体反応）を阻害する物質が含まれていることが分かる。【０２８１】  更に、保存を行った前記測定試薬より、「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体以外の成分」（分散媒）を分離・除去して、新たに調製した前記成分と交換（置換）した場合でも、吸光度差（シグナル）が完全には回復しないことより、前記の阻害物質が「測定対象物質に対する特異的結合物質」であること、そして、その「測定対象物質に対する特異的結合物質」が、前記測定試薬の保存中に、「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体」から剥離（解離）し、「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体以外の成分」（分散媒）の中に遊離状態で存在するようになったものであることが分かる。【０２８２】  すなわち、本実施例における検討により、「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体」を含む測定対象物質の測定試薬においては、保存により以上のようなことが起こり、そのため下記のようなことが起こって、測定によって得られるシグナルが減少し、測定の感度が低下するようになることが確かめられた。【０２８３】▲１▼  測定対象物質の測定試薬の保存中に、「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体」から「測定対象物質に対する特異的結合物質」が剥離（解離）することにより、「担体に固定化された測定対象物質に対する特異的結合物質」の数（量）は、前記測定試薬の調製時に比べて減少してしまい、これにより、
この「担体に固定化された測定対象物質に対する特異的結合物質」に結合することができる「測定対象物質」の数（量）も減ってしまう。【０２８４】  そうすると、「…〔測定対象物質に対する特異的結合物質＝担体＝測定対象物質に対する特異的結合物質〕−〔測定対象物質〕−〔測定対象物質に対する特異的結合物質＝担体＝測定対象物質に対する特異的結合物質〕…」等の架橋の形成も減少してしまうので、生成するシグナルの量も減少してしまい、これにより測定の感度が低下してしまう。【０２８５】▲２▼  「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体」から剥離（解離）し遊離状態となった「測定対象物質に対する特異的結合物質」は、測定時、試料と前記測定試薬が混合された反応混合液中において、試料中に含まれていた「測定対象物質」の一部又は全部と結合してしまう。
この結合した「測定対象物質」は、もう担体に固定化された「測定対象物質に対する特異的結合物質」とは結合できなくなる。【０２８６】  すなわち、遊離状態となった「測定対象物質に対する特異的結合物質」と結合した「測定対象物質」は、「…〔測定対象物質に対する特異的結合物質＝担体＝測定対象物質に対する特異的結合物質〕−〔測定対象物質〕−〔測定対象物質に対する特異的結合物質＝担体＝測定対象物質に対する特異的結合物質〕…」等の架橋の形成に参加できなくなる。
これにより、生成するシグナルの量が減少してしまい、測定の感度が低下してしまう。【０２８７】  そして、前記▲２▼のため、保存を行った前記測定試薬より「測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体以外の成分」（分散媒）を取り去って、剥離（解離）した「測定対象物質に対する特異的結合物質」を分離・除去することにより、測定によって得られる吸光度差すなわちシグナルは回復するものの、前記▲１▼のため、完全には回復しないのである。【０２８８】〔実施例５〕（トレポネーマ・パリダムに対する抗体の測定試薬の保存安定性の確認）
トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子を含む測定試薬を調製し、これを３０℃で保存して、保存時の安定性の確認を行った。【０２８９】Ｉ．トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子を含む測定試薬の調製【０２９０】１．トレポネーマ・パリダムの抗原を固定化したラテックス粒子を含む測定試薬の調製（第２試薬の調製）【０２９１】  遺伝子組み換え法により調製されたトレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子を含む測定試薬（第２試薬）を以下の通り調製した。【０２９２】▲１▼  トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原の調製から、ラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）の取得までの過程は、前記実施例１の１の（２）における▲１▼〜▲６▼の記載の通りに行った。【０２９３】▲２▼  次の５種類のラテックス粒子分散媒の調製を行った。
・  １％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕
・  ３００ｍＭ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕
・  ３００ｍＭ塩化カリウム（ＫＣｌ）、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕
・  ３００ｍＭ臭化ナトリウム（ＮａＢｒ）、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕
・  １５０ｍＭ塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ２）、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕【０２９４】▲３▼  前記▲２▼で調製した５種類のラテックス粒子分散媒の各々の０．８ｍＬに、前記の取得したラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）をそれぞれ０．１２５％（ｗ／ｖ）となるように懸濁させて、下記の５種類の測定試薬（第２試薬）を調製した。【０２９５】  〔測定試薬Ｈ〕：  ０．１２５％（ｗ／ｖ）のラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）を含む、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕。【０２９６】  〔測定試薬Ｉ〕：  ０．１２５％（ｗ／ｖ）のラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）を含む、３００ｍＭ塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕。【０２９７】  〔測定試薬Ｊ〕：  ０．１２５％（ｗ／ｖ）のラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）を含む、３００ｍＭ塩化カリウム（ＫＣｌ）、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕。【０２９８】  〔測定試薬Ｋ〕：  ０．１２５％（ｗ／ｖ）のラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）を含む、３００ｍＭ臭化ナトリウム（ＮａＢｒ）、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕。【０２９９】  〔測定試薬Ｌ〕：  ０．１２５％（ｗ／ｖ）のラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）を含む、１５０ｍＭ塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ２）、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕。【０３００】２．試料の希釈液である試薬の調製（第１試薬の調製）【０３０１】  前記実施例１の２の記載の通りに、試料の希釈液（第１試薬）を調製した。【０３０２】ＩＩ．  トレポネーマ・パリダムに対する抗体の測定試薬の保存安定性の確認
前記Ｉで調製した、トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子を含む測定試薬を、３０℃で保存し，保存時の安定性の確認を行った。【０３０３】１．測定試薬の保存【０３０４】  前記Ｉの１で調製した、〔測定試薬Ｈ〕、〔測定試薬Ｉ〕、〔測定試薬Ｊ〕、〔測定試薬Ｋ〕、及び〔測定試薬Ｌ〕の５種類の測定試薬を、各々３０℃で５６日間保存した。【０３０５】２．測定試薬の安定性の確認【０３０６】  保存前、保存中及び保存後の前記測定試薬の各々を用いて試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定を行い、前記測定試薬の保存時の安定性の確認を行った。【０３０７】（１）  試薬【０３０８】▲１▼  第１試薬
前記Ｉの２で調製した試料の希釈液である〔第１試薬〕を、第１試薬として用いた。【０３０９】▲２▼  第２試薬
下記の測定試薬をそれぞれ第２試薬として用いた。【０３１０】  ・  前記１における３０℃での保存５６日後の〔測定試薬Ｈ〕、〔測定試薬Ｉ〕、〔測定試薬Ｊ〕、〔測定試薬Ｋ〕、若しくは〔測定試薬Ｌ〕。【０３１１】  ・  前記１における３０℃での保存２８日後の〔測定試薬Ｈ〕、〔測定試薬Ｉ〕、〔測定試薬Ｊ〕、〔測定試薬Ｋ〕、若しくは〔測定試薬Ｌ〕。【０３１２】  ・  前記１における３０℃での保存１４日後の〔測定試薬Ｈ〕、〔測定試薬Ｉ〕、〔測定試薬Ｊ〕、〔測定試薬Ｋ〕、若しくは〔測定試薬Ｌ〕。【０３１３】  ・  前記１における３０℃での保存７日後の〔測定試薬Ｈ〕、〔測定試薬Ｉ〕、〔測定試薬Ｊ〕、〔測定試薬Ｋ〕、若しくは〔測定試薬Ｌ〕。  又は、【０３１４】  ・  測定試薬調製時すなわち保存開始前の〔測定試薬Ｈ〕、〔測定試薬Ｉ〕、〔測定試薬Ｊ〕、〔測定試薬Ｋ〕、若しくは〔測定試薬Ｌ〕。【０３１５】（２）  試料
トレポネーマ・パリダムに対する抗体を含むヒト血清を試料として用いた。【０３１６】（３）  試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定【０３１７】▲１▼  測定は、日立−７１７０Ｓ形自動分析装置（日立製作所社製）を使用して行った。【０３１８】  まず、測定用セル（キュベット）に、前記の試料の１５μＬを添加した。
次に、この測定用セル（キュベット）に、前記の第１試薬の１５０μＬを添加し、混合した。【０３１９】  そして、この測定用セル（キュベット）を、３７℃で静置した。【０３２０】▲２▼  前記の第１試薬の添加後４分１４秒目（１５ポイント目）に、この測定用セル（キュベット）内の混合液の吸光度（波長：７００ｎｍ）を試料盲検として測定した。【０３２１】▲３▼  前記の第１試薬の添加後４分３０秒目（１６ポイント目）に、この測定用セル（キュベット）内の混合液に、更に、前記の第２試薬の５０μＬを添加し、混合した。【０３２２】  そして、この測定用セル（キュベット）を、３７℃で静置して、反応を行わせた。
これにより、前記のラテックス粒子に固定化されたトレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原と、前記の試料に含まれていたトレポネーマ・パリダムに対する抗体との抗原抗体反応を行わせ、ラテックス粒子の凝集塊を生成させた。【０３２３】▲４▼  前記の第１試薬の添加後９分４７秒目（３４ポイント目）に、この測定用セル（キュベット）内の反応混合液の吸光度（波長：７００ｎｍ）を、前記試料の測定値として測定した。【０３２４】▲５▼  前記▲４▼において測定した吸光度（測定値）から前記▲２▼において測定した吸光度（試料盲検）を差し引き、吸光度差を得た。
なお、この吸光度差は試料に含まれる測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の量（濃度）に比例したものである。【０３２５】（４）  測定結果
前記（３）において、試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定を行って得られた吸光度差を、表５に示した。【０３２６】
【表５】
2006227027.tif 000006
【０３２７】ＩＩＩ．考察
表５より、陽イオン及び陰イオンが各々１００ｍＭ未満である〔測定試薬Ｈ〕において、３０℃での保存１４日後に得た吸光度差の値は、保存開始前の吸光度差の値の７７％まで減少してしまっており、そして、３０℃での保存２８日後に得た吸光度差の値は、保存開始前の吸光度差の値の６６％まで滅少してしまっており、更に、３０℃での保存５６日後に得た吸光度差の値は、保存開始前の吸光度差の値の４９％にまで減少してしまっていることが分かる。すなわち、シグナルの生成が大きく減少し、測定の感度が低下してしまっている。【０３２８】  これに対して、３００ｍＭの塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）を含有して、陽イオン及び陰イオンが各々３００ｍＭ以上存在することになる〔測定試薬１〕において、３０℃での保存１４日後、３０℃での保存２８日後、及び３０℃での保存５６日後に得た吸光度差の値はいずれも減少しておらず、生成するシグナルの減少、すなわち測定の感度の低下を抑制できていることが分かる。【０３２９】  また、３００ｍＭの塩化カリウム（ＫＣｌ）を含有して、陽イオン及び陰イオンが各々３００ｍＭ以上存在することになる〔測定試薬Ｊ〕において、３０℃での保存１４日後、３０℃での保存２８日後、及び３０℃での保存５６日後に得た吸光度差の値はいずれも減少しておらず、生成するシグナルの減少、すなわち測定の感度の低下を抑制できていることが分かる。【０３３０】  そして、３００ｍＭの臭化ナトリウム（ＮａＢｒ）を含有して、陽イオン及び陰イオンが各々３００ｍＭ以上存在することになる〔測定試薬Ｋ〕において、３０℃での保存１４日後、及び３０℃での保存２８日後に得た吸光度差の値は減少しておらず、更に、３０℃での保存５６日後に得た吸光度差の値は、保存開始前の吸光度差の値の９８％であり、生成するシグナルの減少、すなわち測定の感度の低下をほとんど抑制できていることが分かる。【０３３１】  更に、１５０ｍＭの塩化マグネシウム（ＭｇＣｌ２）を含有して、陽イオン及び陰イオンが各々１５０ｍＭ以上存在することになる〔測定試薬Ｌ〕において、３０℃での保存１４日後に得た吸光度差の値は、保存開始前の吸光度差の値の９６％であり、また、３０℃での保存２８日後に得た吸光度差の値は、保存開始前の吸光度差の値の９４％であり、そして、３０℃での保存５６日後に得た吸光度差の値も、保存開始前の吸光度差の値の９４％であり、生成するシグナルの減少、すなわち測定の感度の低下をほとんど抑制できていることが分かる。【０３３２】  以上のことより、種々の陽イオン及び陰イオンにおいても、各々１００ｍＭ以上存在することにより、測定対象物質の測定試薬を長期間安定に保つことができ、例え、３０℃で５６日間という測定試薬にとって過酷な保存条件においても、生成するシグナルの減少を防ぎ、測定の感度の低下を抑制することができることを、確かめることができた。【０３３３】〔実施例６〕（トレポネーマ・パリダムに対する抗体の測定試薬の保存安定性の確認）
トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子を含む測定試薬を調製し、これを３０℃で保存して、保存時の安定性の確認を行った。【０３３４】Ｉ．トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子を含む測定試薬の調製【０３３５】１．トレポネーマ・パリダムの抗原を固定化したラテックス粒子を含む測定試薬の調製（第２試薬の調製）【０３３６】  遺伝子組み換え法により調製されたトレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子を含む測定試薬（第２試薬）を以下の通り調製した。【０３３７】▲１▼  トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原の調製から、ラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）の取得までの過程は、前記実施例１の１の（２）における▲１▼〜▲６▼の記載の通りに行った。【０３３８】▲２▼  次の３種類のラテックス粒子分散媒の調製を行った。
・  １％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕
・  １５０ｍＭ硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕
・  １５０ｍＭ硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕【０３３９】▲３▼  前記▲２▼で調製した３種類のラテックス粒子分散媒の各々の０．８ｍＬに、前記の取得したラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）をそれぞれ０．１２５％（ｗ／ｖ）となるように懸濁させて、下記の３種類の測定試薬（第２試薬）を調製した。【０３４０】  〔測定試薬Ｍ〕：  ０．１２５％（ｗ／ｖ）のラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）を含む、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕。【０３４１】  〔測定試薬Ｎ〕：  ０．１２５％（ｗ／ｖ）のラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）を含む、１５０ｍＭ硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕。【０３４２】  〔測定試薬Ｐ〕：  ０．１２５％（ｗ／ｖ）のラテックス粒子（トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子）を含む、１５０ｍＭ硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）、１％（ｗ／ｖ）ＢＳＡ及び１５ｍＭアジ化ナトリウムを含有する５０ｍＭトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン−塩酸緩衝液〔ｐＨ７．２〕。【０３４３】２．試料の希釈液である試薬の調製（第１試薬の調製）【０３４４】  前記実施例１の２の記載の通りに、試料の希釈液（第１試薬）を調製した。【０３４５】ＩＩ．トレポネーマ・パリダムに対する抗体の測定試薬の保存安定性の確認
前記Ｉで調製した、トレポネーマ・パリダムの４７Ｋダルトン抗原を固定化したラテックス粒子を含む測定試薬を、３０℃で保存し，保存時の安定性の確認を行った。【０３４６】１．測定試薬の保存【０３４７】  前記Ｉの１で調製した、〔測定試薬Ｍ〕、〔測定試薬Ｎ〕、及び〔測定試薬Ｐ〕の３種類の測定試薬を、各々３０℃で２８日間保存した。【０３４８】２．測定試薬の安定性の確認【０３４９】  保存前、保存中及び保存後の前記測定試薬の各々を用いて試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定を行い、前記測定試薬の保存時の安定性の確認を行った。【０３５０】（１）  試薬【０３５１】▲１▼  第１試薬
前記Ｉの２で調製した試料の希釈液である〔第１試薬〕を、第１試薬として用いた。【０３５２】▲２▼  第２試薬
下記の測定試薬をそれぞれ第２試薬として用いた。【０３５３】  ・  前記１における３０℃での保存２８日後の〔測定試薬Ｍ〕、〔測定試薬Ｎ〕、若しくは〔測定試薬Ｐ〕。【０３５４】  ・  前記１における３０℃での保存１４日後の〔測定試薬Ｍ〕、〔測定試薬Ｎ〕、若しくは〔測定試薬Ｐ〕。【０３５５】  ・  前記１における３０℃での保存７日後の〔測定試薬Ｍ〕、〔測定試薬Ｎ〕、若しくは〔測定試薬Ｐ〕。  又は、【０３５６】  ・  測定試薬調製時すなわち保存開始前の〔測定試薬Ｍ〕、〔測定試薬Ｎ〕、若しくは〔測定試薬Ｐ〕。【０３５７】（２）  試料
トレポネーマ・パリダムに対する抗体を含むヒト血清を試料として用いた。【０３５８】（３）  試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定【０３５９】  測定は、日立−７１７０Ｓ形自動分析装置（日立製作所社製）を使用し、前記実施例５のＩＩの２の（３）における▲１▼〜▲５▼の記載の通りに行った。【０３６０】（４）  測定結果
前記（３）において、試料中の測定対象物質（トレポネーマ・パリダムに対する抗体）の測定を行って得られた吸光度差を、表６に示した。【０３６１】
【表６】
2006227027.tif 000007
【０３６２】ＩＩＩ．考察
表６より、陽イオン及び陰イオンが各々１００ｍＭ未満である〔測定試薬Ｍ〕において、３０℃での保存１４日後に得た吸光度差の値は、保存開始前の吸光度差の値の７７％まで減少してしまっており、更に、３０℃での保存２８日後に得た吸光度差の値は、保存開始前の吸光度差の値の６６％にまで減少してしまっていることが分かる。すなわち、シグナルの生成が大きく減少し、測定の感度が低下してしまっている。【０３６３】  これに対して、１５０ｍＭの硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）を含有して、陽イオン及び陰イオンが各々１５０ｍＭ以上存在することになる〔測定試薬Ｎ〕において、３０℃での保存１４日後に得た吸光度差の値は減少しておらず、更に、３０℃での保存２８日後に得た吸光度差の値は、保存開始前の吸光度差の値の９１％であり、生成するシグナルの減少、すなわち測定の感度の低下が抑制されていることが分かる。【０３６４】  また、１５０ｍＭの硫酸マグネシウム（ＭｇＳＯ４）を含有して、陽イオン及び陰イオンが各々１５０ｍＭ以上存在することになる〔測定試薬Ｐ〕において、３０℃での保存１４日後に得た吸光度差の値は減少しておらず、更に、３０℃での保存２８日後に得た吸光度差の値は、保存開始前の吸光度差の値の７３％であり、生成するシグナルの減少、すなわち測定の感度の低下が抑制されていることが分かる。【０３６５】  以上のことより、更に異なる陽イオン及び陰イオンの組合せにおいても、各々１００ｍＭ以上存在することにより、測定対象物質の測定試薬を長期間安定に保つことができ、例え、３０℃で２８日間という測定試薬にとって過酷な保存条件においても、生成するシグナルの減少を防ぎ、測定の感度の低下を抑制することができることを、確かめることができた。【０３６６】〔実施例の結果のまとめ〕
以上の実施例の結果をまとめると、陽イオン及び陰イオンが、塩化ナトリウム、塩化カリウム、臭化ナトリウム、塩化マグネシウム、硫酸ナトリウム、又は硫酸マグネシウムのいずれの場合においても、１００ｍＭ以上存在することにより、「測定対象物質に対する特異的結合物質」が担体から剥離（解離）することが抑制され、これにより測定の感度の低下を抑制することができた。【０３６７】  すなわち、種々の陽イオン及び陰イオンにおいて、１００ｍＭ以上存在することにより、測定対象物質に対する特異的結合物質を固定化した担体を含む測定対象物質の測定試薬を長期間安定に保ち、正確な測定対象物質の測定結果を得ることができることが確かめられた。