(57)【要約】【課題】セルロースアセテート膜電気泳動において正確な測定結果を得るためには、一定量の試料を一定面積に偏り・歪みなく塗布する必要がある。従来使われてきた針付ピペットは、熟練を要し、取扱いが煩雑な上、衛生上および感染防御上問題があった。塗布装置は、塗布チップが破損しやすく、扱いが煩雑で高価であった。【解決手段】本発明は、紙の毛細管現象を利用して試料を吸引することにより、取扱いが簡便で安価な、使用後は焼却可能な塗布器を提供する。【選択図】図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
支持体電気泳動分析法において、緩衝液で湿潤させた支持体上に１または複数の検体を同時に一定量塗布する手段であって、検体を毛細現象にて吸引するのに必要な厚さの１枚または２枚の紙を櫛型に形成した使い捨て塗布器。
【請求項２】
必要な検体数だけ切り離して使用できる請求項１の塗布器。
【請求項３】
複数の検体を同時にかつ個々の検体の塗布量を個別に変更しながら塗布するとき、櫛の先端を折り曲げるか切り取ることにより、個々の検体の塗布回数を調節することができるようにした請求項１の塗布器。
【請求項４】
保持具で挟むことにより、櫛の先端を一直線に配置できるようにした請求項１の塗布器。
【請求項５】
重さを調節した保持具で挟むことにより、支持体上に置くだけで均一に検体を塗布できるようにした請求項１の塗布器。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は支持体電気泳動分析法において、試料を支持体に添加するための塗布器に関する技術分野に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来より、血清中蛋白質の電気泳動による分画分析法は、たった一滴の血液から様々な疾患情報を得る手段として頻用されている。
【０００３】
なかでもセルロースアセテート膜は、常温乾燥状態で保存できるなど取り扱いが便利なため、電気泳動用支持体として広く用いられてきた。セルロースアセテート膜電気泳動は、セルロ−スアセテート膜の支持体上に、試料を塗布した上で通電し、電気泳動による血清の分画パターンを形成せしめ、その後、染色液にて染色し、血清以外の部分を脱色させたものを濃度計にて測定・定量する（非特許文献１、ｐ９〜１５参照）。支持体に塗布する試料の量が偏っていたり歪んでいたりすると分画パターンが歪み、濃度計による測定・定量に影響を与える。正確な測定結果を得るためには、一定量の試料を一定面積に偏り・歪みなく塗布する必要があることがわかっている（非特許文献２、ｐ１０４〜１０５参照）。
【０００４】
これまで、用手法では針付ピペットの針先を試料に浸し、針とは反対側に装着した吸い口により人が口で試料を吸引し、その後針先をセルロースアセテート膜上に接触させ、ペンで直線を描くように塗布していた（非特許文献１、ｐ１１、図２−１０および図２−１１参照）。針付ピペットで複数の検体を連続して塗布する場合、塗布済の検体を濾紙上に吹き出し、ピペットの先端をよくふいたのち、次の検体を適当量採取し、それをすべて吹き出したのち、あらためて採取したものを塗布する（非特許文献１、ｐ１１参照）。使用後は、つまりが生じ使用不能とならぬよう、精製水、エタノール、アセトンの順に吸引洗浄する。
【０００５】
先端に溝を形成したり二枚の金属製片を組合せたりした塗布チップに試料を吸引し、その後塗布チップをセルロースアセテート膜上に接触させ塗布する塗布装置も使用されている。このような塗布装置も塗布チップは測定ごとに洗浄操作、たとえば専用洗剤に９０秒間浸漬し、その後精製水に浸してワイパーで拭うことを５回繰りかえし、定期的に分解掃除を実施する。非特許文献１、ｐ２０〜２１、図２−３５および図２−３７、図２−５４にそのような塗布装置の一例が掲載されている。
【０００６】
いっぽう、セルロースアセテート膜電気泳動は、血清蛋白分画だけでなく、尿やその他の蛋白分画、血清酵素アイソザイム分画にも用いられているが、これらに供する検体の被検成分濃度は非常に低濃度であったり検体により大きな差があったりするため、塗布量を適切に変更する必要がある。針付ピペットでは直線を何重にも書く要領で、塗布装置では支持体に塗布する回数を変化させることで行われている。
【０００７】
なお、１９９６年にアメリカＣＤＣが提唱したガイドライン「スタンダードプレコーション（標準予防策）」により、すべての患者検体は感染性物質として扱うという考えかたが広まっており、検体の付着した針付ピペットや塗布チップの滅菌処理も重要視されるようになってきている。
【０００８】
上記に述べたような一定量の試料を一定面積に偏り・歪みなく塗布することや塗布量を適切に変更すること、すべての患者検体を感染性物質として扱うことは、セルロースアセテート膜電気泳動のみならず、寒天、アガロースなど支持体の材質や形状を問わず電気泳動による分画分析法全般に共通する問題点である。
【非特許文献１】芝紀代子「目でみる電気泳動法１  セルロースアセテート膜」、医歯薬出版社、１９８８年
【非特許文献２】橋本寿美子「セルロースアセテート膜電気泳動法」、臨床検査第２６巻１号ｐ９９〜１０７、医学書院、１９８２年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
針付ピペットで一定量の試料を一定面積に塗布するためには、熟練を要した。また、試料を吸引するために人が口をつける必要があり、検体を口腔内まで吸い込んでしまうなど衛生上および感染防御上問題があった。試料ごとに洗浄しなければならないため、たくさんの種類の試料を測定するには、煩雑な洗浄方法を繰り返したり試料の数だけ針付ピペットを用意しなければならなかった。
【００１０】
塗布装置の塗布チップは精密な構造のため高価であり、洗浄により破損しやすいため扱いが煩雑だった。したがって洗浄や滅菌処理がおろそかになりがちで、汚れだけでなく感染性物質が残るおそれがあった。
【００１１】
塗布チップを用いる塗布器で塗布量を変更するには塗布回数を変更するが、塗布回数の少ない検体に用いたチップは、使用しないときに上部に引き上げネジ止めするなど、扱いが煩雑であった。また、操作中に塗布チップに触れるおそれがあるなど、分析上および感染防御上問題があった。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、紙の毛細管現象を利用して試料を吸引することにより、取扱いが簡便で安価な、使用後は焼却可能な塗布器を提供する。
【００１３】
形状は一定の長さと間隔、例えば８ミリメートルの直線を２ミリメートルの間隔をあけて直列に塗布できるものであればよく、望ましくは図１に示したような櫛型である。
【００１４】
紙は検体を毛細現象にて吸引するのに必要な厚さであればよく、望ましくは０．３ミリメートル乃至０．７ミリメートルである。
【００１５】
当該塗布器は、必要な検体数だけ簡単に切り離すことができるようミシン目を入れてあるが、ミシン目はなくてもよく、日常使用するハサミ等でも簡単に切り離すことができる。
【００１６】
当該塗布器は、塗布操作中に簡単に櫛の先端を折り曲げるか切り取るかして塗布回数を調節できるよう折り線またはミシン目を入れてある。
【００１７】
さらに、保管等により曲がりやすい紙を着脱が簡易な保持具、たとえばばね式クリップのような紙を平面に保つことのできる保持具で挟むことにより、櫛の先端を一直線に配置し、複数試料の同時測定時であっても分画パターンの再現性が確保できるようにしている。
【００１８】
保持具の重さは、置くだけで均一に検体を塗布できる程度に重く、支持体を傷つけない程度に軽ければよい。
【発明の効果】
【００１９】
操作に熟練の必要がなくなり、簡単確実に個々の検体ごとに塗布回数を変えながら１または複数の検体を同時に塗布することができるようになった。
【００２０】
また、安価なため患者検体が付着した使用済塗布器を使い捨てにできるようになり、煩雑で危険な洗浄操作が省略できた。使用済紙製使い捨て塗布器は軽くかさばらず、簡単に焼却処分することが可能となり、衛生上および感染防御上の問題も解決した。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
紙製使い捨て簡易塗布器の形状を図１、図２に示した。このままでも使用可能だが、置くだけで均一に塗布するためには保持具を装着して用いるのがよく、図３に保持具として着脱簡易なばね式保持具を装着した場合を示した。
【００２２】
複数回の塗布を確実に行うためには、位置決めが簡便なよう膜の置き位置および保持具の置き位置を記した塗布用下敷きを用いるのがよく、下敷きには保持具をはめ込むためのガイド穴もしくはガイド柱を設けてもよい。また、塗布チップを支持体上に接触させ塗布する塗布装置に見られるような上下動機構に装着して使用してもよい。上下動機構に装着する場合は、着脱簡易な保持具を上下動機構に固定すれば、塗布チップを用いる塗布器と同様に使用でき、使用後は塗布チップを洗浄することなく、紙製使い捨て塗布器を外して廃棄し、新しい紙製使い捨て塗布器を装着することで連続塗布が可能となる。
【実施例】
【００２３】
以下の方法で血清蛋白分画を行った。電気浸透のないセルロースアセテート膜（セパラックスＳＰ、富士写真フイルム製）をバットに入れた泳動用緩衝液（ベロナール・ベロナールナトリウム緩衝液、ｐＨ８．６、イオン強度０．０５、常光製）でバッファライズした後、全自動電気泳動装置ＡＬＣ−７６０用血清皿（常光製）に分注したコントロール血清（分画トロールアブノーマル、常光製）に当該塗布器の先端を充分に浸した後膜に接触させて塗布し、泳動槽にセット後１００ボルトの定電圧を２２分間印可した。泳動後の膜をポンソー３Ｒ染色液（常光製）に２分間浸し、その後脱色液（１％酢酸）で検体の付着していない部分が白くなるまで脱色した。結果を図４に示した。
【産業上の利用可能性】
【００２４】
全自動電気泳動装置を導入するのが困難な中小病院の臨床検査室において、安価手軽に電気泳動検査が実施できるようになる。
【００２５】
臨床検査技師の生涯学習や、大学等の授業における電気泳動実習での利用のほか、広く教育および研究活動に活用しうる。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】紙製使い捨て簡易塗布器の平面図である。
【図２】紙製使い捨て簡易塗布器に入れるミシン目を点線で表した平面図である。
【図３】使用時の簡易塗布器の全体図である。
【図４】実施例の結果得られた蛋白分画像の写真である。
【符号の説明】
【００２７】
１  紙製使い捨て簡易塗布器
２  保持具
３  ばね
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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