(57)【要約】【課題】  抗生物質および合成抗菌剤を使用しない養成方法の確立を目的とし、薬用ハーブからなる魚類用飼餌料添加物及び該魚類用飼餌料添加物を含有する魚類用飼餌料を提供し、飼育魚の成長を促進させるとともに、飼育魚のストレス耐性及び免疫賦活効果、即ち飼育魚の自然治癒能力を高めることを課題とする。【解決手段】  神麹（Massa Medicata Fermentat）、バラ科サンザシ属（Crataegus L.）、キク科ヨモギ属（Artemisia L.）又はセリ科ハマゼリ属（Cnidium L.）植物から選択される１種以上からなることを特徴とする魚類用飼餌料添加物及び該魚類用飼餌料添加物を含有する魚類用飼餌料とする。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
神麹（Massa Medicata Fermentat）、バラ科サンザシ属植物（Crataegus L.）、キク科ヨモギ属植物（Artemisia L.）又はセリ科ハマゼリ属植物（Cnidium L.）から選択される１種以上からなることを特徴とする魚類用飼餌料添加物。
【請求項２】
神麹（Massa Medicata Fermentat）、キレバサンザシ（Crataegus. pinnatifida Bunge)、セイヨウサンザシ（Crataegus oxyacantha L.em.Jacq.)、サンザシ（Crataegus. cuneata Sieb. et Zucc.)、カワラヨモギ(Artemisia capillaris Thunb.)、ヨモギ(モチグサ，Artemisia vulgaris L. var. indica Maxim.，A. dubia Wall.)、ヤマヨモギ(オオヨモギ，Artemisia vulgaris L. var. vulgatissima Bess.，A. montana Pampanini)、ハマゼリ(Cnidium Japonicum Miq.)、蛇床(Cnidium.monnieri)、センキュウ(Cnidium officinale Makino)から選択される１種以上からなることを特徴とする請求項1記載の魚類用飼餌料添加物。
【請求項３】
神麹（Massa Medicata Fermentat）、バラ科サンザシ属キレバサンザシ（Crataegus pinnatifida Bunge)、キク科ヨモギ属カワラヨモギ（Artemisia capillaris Thunb.）又はセリ科ハマゼリ属センキュウ（Cnidium officinale Makino）から選択される１種以上からなることを特徴とする請求項1又は２記載の魚類用飼餌料添加物。
【請求項４】
前記神麹（Massa Medicata Fermentat）、バラ科サンザシ属植物（Crataegus L.）、キク科ヨモギ属植物（Artemisia L.）又はセリ科ハマゼリ属植物（Cnidium L.）がこれらの微粉末及び／又は抽出物であることを特徴とする請求項１乃至３いずれかに記載の魚類用飼餌料添加物。
【請求項５】
請求項１乃至４いずれかに記載の魚類用飼餌料添加物を含有する魚類用飼餌料。
【請求項６】
請求項１乃至４いずれかに記載の魚類用飼餌料添加物を０．０１〜１０重量％含有する魚類用飼餌料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、薬用ハーブからなる魚類用飼餌料添加物及び該魚類用飼餌料添加物を含有する魚類用飼餌料に関する。詳細には、神麹（Massa Medicata Fermentat）、バラ科サンザシ属植物（Crataegus L.)、キク科ヨモギ属植物（Artemisia L.)又はセリ科ハマゼリ属植物（Cnidium L.)から選択される１種以上からなる魚類用飼餌料添加物及び該魚類用飼餌料添加物を含有する魚類用飼餌料に関する。その目的は、飼育魚の成長促進、ストレス耐性および免疫賦活効果を高めるとともに、養殖魚の食品としてのイメージを向上させるだけでなく、成長や歩留まりを高く維持することである。
【背景技術】
【０００２】
これまでの魚類養殖業では、ウイルス性および細菌性の疾病に対して、ワクチンおよび抗生物質・合成抗菌物質が治療薬として用いられてきた。しかし、耐性菌などの出現でそれらによる治療効果は大きく期待できないことから、疾病による斃死数を見込んで過度な収容密度で養成されており、ストレスの増大とともに免疫機能が低下し、最終的には疾病が多発・蔓延して生産性を低下させるなど悪循環に陥っている。
【０００３】
魚類は多くの種類に分かれることから、ある魚種に認可された薬剤の使用は、その近縁種にも利用できるなど大きな枠で捉えられてきた。しかし、食の安全・安心がクローズアップされるのに伴って、HACCP（Hazard Analysis Critical Control Point）による対応に迫られトレーサビリティが重要視されるようになった。そのため、薬剤は認可された魚種のみに限定されるとともに、薬剤の使用をできるかぎり避ける方向での養殖管理が望まれている。
【０００４】
そこで、特許文献１には、ステビア植物の葉や茎枝の乾燥粉砕物からなる飼料添加物が飼育魚の罹患率を抑え成長を促進させること、さらに、特許文献２には、マイタケの子実体を含有する水産飼料が魚類の感染症による斃死を軽減するという発明が開示されており、その他多くの免疫賦活効果を有する飼料が既に創出されている。しかしながら、これら従来技術では、免疫賦活作用を有してもストレス耐性及び免疫賦活性を同時に高めることはできないため、飼育魚の自然治癒能力を効果的に高めるには、その効果は不十分なものであった。
一方、養殖魚への生餌の投与はPCB（ポリ塩化ビフェニル）および水銀の蓄積や養殖場における自家汚染の問題もあり、安全性が確認された配合飼料への転換も推奨されている。
【０００５】
【特許文献１】特開平１１‐０８９５３９号公報
【特許文献２】特開２００２‐１５３２１６号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明は、前記の現状を鑑み、これまでのワクチンや抗生物質による西洋医学的な治療から、薬用ハーブによって魚体のストレス耐性及び免疫機能、即ち自然治癒能力を高め、健康を維持する東洋医学的な治療への転換を行うとともに、養殖魚に対する低いイメージを払拭して、安全・安心の良質な魚類タンパクを安定的に供給するために成し得たものである。
【０００７】
即ち、薬用ハーブからなる魚類用飼餌料添加物及び該魚類用飼餌料添加物を含有する魚類用飼餌料を提供することにより、飼育魚の成長を促進させるとともに、飼育魚のストレス耐性及び免疫賦活効果、即ち飼育魚の自然治癒能力を高めることを課題とする。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
請求項１に係る発明は、神麹（Massa Medicata Fermentat）、バラ科サンザシ属植物（Crataegus L.）、キク科ヨモギ属植物（Artemisia L.）又はセリ科ハマゼリ属植物（Cnidium L.）から選択される１種以上からなることを特徴とする魚類用飼餌料添加物に関する。
請求項２に係る発明は、神麹（Massa Medicata Fermentat）、キレバサンザシ（Crataegus pinnatifida Bunge)、セイヨウサンザシ（Crataegus oxyacantha L.em.Jacq.)、サンザシ（Crataegus cuneata Sieb. et Zucc.)、カワラヨモギ(Artemisia capillaris Thunb.)、ヨモギ(モチグサ、Artemisia vulgaris L. var. indica Maxim.,A. dubia Wall.)、ヤマヨモギ(オオヨモギ，Artemisia vulgaris L. var. vulgatissima Bess.，A. montana Pampanini)、ハマゼリ(Cnidium Japonicum Miq.)、蛇床(Cnidium.monnieri)、センキュウ(Cnidium officinale Makino)から選択される１種以上からなることを特徴とする請求項1記載の魚類用飼餌料添加物に関する。
請求項３に係る発明は、神麹（Massa Medicata Fermentat）、バラ科サンザシ属キレバサンザシ（Crataegus pinnatifida Bunge)、キク科ヨモギ属カワラヨモギ（Artemisia capillaris Thunb.）又はセリ科ハマゼリ属センキュウ（Cnidium officinale Makino）から選択される１種以上からなることを特徴とする請求項1又は２記載の魚類用飼餌料添加物に関する。
請求項４に係る発明は、前記神麹（Massa Medicata Fermentat）、バラ科サンザシ属植物（Crataegus L.）、キク科ヨモギ属植物（Artemisia L.）又はセリ科ハマゼリ属植物（Cnidium L.）がこれらの微粉末及び／又は抽出物であることを特徴とする請求項１乃至３いずれかに記載の魚類用飼餌料添加物に関する。
請求項５に係る発明は、請求項１乃至４いずれかに記載の魚類用飼餌料添加物を含有する魚類用飼餌料に関する。
請求項６に係る発明は、請求項１乃至４いずれかに記載の魚類用飼餌料添加物を０．０１〜１０重量％含有する魚類用飼餌料に関する。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の薬用ハーブからなる魚類用飼餌料添加物及び該魚類用飼餌料添加物を含有する魚類用飼料は、ワクチンや抗生物質を使用することなく、飼育魚の成長促進、生存率、飼料効率、免疫賦活効果を高めることができる。
また、本発明の魚類用飼餌料添加物及び該魚類用飼餌料添加物を含有する魚類用飼料は、魚類の造血機能や栄養素の運搬を円滑にしつつ、養殖魚のストレス耐性を高めることができる。即ち、ストレスから生じると考えられる魚類の病気や免疫力の低下を防ぐ効果と免疫賦活効果による相乗的効果を有する魚類用飼餌料添加物及び該魚類用飼餌料添加物を含有する飼餌料と成り得るものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明の魚類用飼餌料添加物は薬用ハーブからなり、詳細には、神麹（Massa Medicata Fermentat）、バラ科サンザシ属植物（Crataegus L．)、キク科ヨモギ属植物（Artemisia L．)又はセリ科ハマゼリ属植物（Cnidium L.)から選択される１種以上からなる。
即ち、本発明に係る「ハーブ」とは、神麹（Massa Medicata Fermentat）、バラ科サンザシ属（Crataegus L．)、キク科ヨモギ属（Artemisia L.)及びセリ科ハマゼリ属（Cnidium L.)を表すものである。
【００１１】
本発明に用いられる神麹（Massa Medicata Fermentat）は、別名神曲、六神曲、六曲とも呼ばれる漢方薬の一種である。神麹は、小麦粉・フスマ・薬物（赤小豆・杏仁・青蒿・蒼耳子・辣蓼の細末など）を混和し、発酵させたものであり、麦芽とともに米や麺、パンなど、デンプン類の消化を助けるとされ、中国・韓国でも広く食されている。その主成分は、中国製では、精油、配糖体及び酵母、糖類、蛋白質、ビタミン類を含み、日本製では、酵母、糖類、蛋白質、ビタミン類を含む。
【００１２】
本発明に係るバラ科サンザシ属植物（Crataegus L.)としては、例えばキレバサンザシ（Crataegus pinnatifida Bunge)、セイヨウサンザシ（Crataegus oxyacantha L.em.Jacq.)、サンザシ（Crataegus. cuneata Sieb. et Zucc.)等が挙げられるが、本発明では特にキレバサンザシ（Crataegus pinnatifida Bunge)が好ましく用いられる。
【００１３】
本発明に係るキク科ヨモギ属植物(Artemisia L.)としては、例えば、カワラヨモギ(Artemisia capillaris Thunb.)、ヨモギ(モチグサ，Artemisia vulgaris L. var. indica Maxim.，A. dubia Wall.)、ヤマヨモギ(オオヨモギ，Artemisia vulgaris L. var. vulgatissima Bess.，A. montana Pampanini)、これに近縁のArtemisia vulgaris L.，オトコヨモギ(Artemisia japonica Thunb.)、シロヨモギ(Artemisia stelleriana Bess.)、イヌヨモギArtemisia keiskeana Miq.)、ヒメヨモギ (Artemisia lavandulaefolia DC.)、タカネヨモギ(Artemisia sinanensis Yabe)、サマニヨモギ(Artemisia norvegica Fries.，A. arctica Less.)、アサギリソウ(Artemisia schmidtiana Maxim.)、カワラニンジン(Artemisia apiacea Hance)、クソニンジン(Artemisia annua L.)、ハマヨモギ(フクド，Artemisia fukudo Makino)、モウコヨモギ(Artemisia mongolia Fischer)が挙げられる。この中で、カワラヨモギ(Artemisia capillaris Thunb.)が好ましく用いられる。
【００１４】
本発明に係るセリ科ハマゼリ属植物(Cnidium L.)としては、例えば、ハマゼリ(Cnidium Japonicum Miq.)、蛇床(Cnidium monnieri)、センキュウ(Cnidium officinale Makino)が挙げられ、本発明では、センキュウ(Cnidium officinale Makino)が好ましく用いられる。
【００１５】
さらに、神麹（Massa Medicata Fermentat）、バラ科サンザシ属植物(Crataegus L.)、キク科ヨモギ属植物(Artemisia L.)又はセリ科ハマゼリ属植物(Cnidium L.)のうち２種以上を混合して用いる場合、その配合比率は特に限定されない。例えば前記４種を混合して用いる場合、重量比１〜４：１〜４：０．５〜２：０．５〜２で混合される飼餌料添加物が挙げられる。上記比率で配合された本発明の添加物及び飼餌料は、成長促進、ストレス耐性・免疫賦活作用の亢進、健康維持に優れる。
【００１６】
前記のハーブはそれぞれ、生のままでも乾燥したものでも使用することができるが、使用性、製剤化等の点から乾燥微粉末あるいは溶媒抽出物として用いることが好ましい。また、前記ハーブの使用部位としては、全草、または葉、花、根、果実等、任意に用いることができる。
【００１７】
前記乾燥微粉末を得る方法としては特に限定されないが、例えば、天日、或は凍結乾燥が挙げられる。
【００１８】
前記ハーブの抽出物は常法により得ることができ、例えば、各ハーブをそれぞれ抽出溶媒とともに浸漬または加熱還流した後、濾過し濃縮して得ることができる。抽出溶媒としては、通常抽出に用いられる溶媒であれば任意に用いることができ、例えば、水、メタノール、エタノール、プロピレングリコール、1，３−ブチレングリコール、グリセリン等のアルコール類、含水アルコール類、クロロホルム、ジクロルエタン、四塩化炭素、アセトン、酢酸エチル、ヘキサン等の有機溶媒を、それぞれ単独あるいは組み合わせて用いることができる。上記溶媒で抽出して得た抽出液は、そのままで、濃縮しエキスとする、或は溶媒を減圧蒸留し乾燥させたものとして用いてもよい。
【００１９】
本発明の魚類用飼餌料は、本発明の魚類用飼餌料添加物が含有されてなる。前記魚類用飼餌料に含まれる前記魚類用飼餌料添加物以外の成分は特に限定されず、例えば魚粉、大豆粕、ミートミール、ミートボーンミール、チキンミール、カノラミール、アルハロファミールなど動・植物起源の飼料原料からなる配合飼料、或は粉末配合と魚肉とからなるモイスト飼料が挙げられる。
本発明の魚類用飼餌料中の魚類用飼餌料添加物の含有量も特に限定されないが、好ましくは０．０１〜１０重量％、より好ましくは０．１〜３．０重量％である。含有量が０．０１重量％未満の場合、添加された魚類用飼餌料添加物の有する効果を十分に発揮する事ができず、１０重量％を超える場合は、飼餌料の消化性が劣るためいずれの場合も好ましくない。また、前記含有量は、魚種や成長段階、環境条件或は共に用いられる飼料の種類によって適宜調製することが好ましい。
【００２０】
本発明の魚類用飼餌料添加物及びこれを含有する魚類用飼餌料の対象魚類は特に限定されず、例えば、マダイ、ヒラメ、クロソイ、ギンザケ、ニジマス、ブリ、フグ、アジ、アユ、コイ、ウナギ、ティラピア、コノシロ、マサバ、カワハギ、ニベ、スズキ、クロダイ、カサゴ、メバル等の魚類が挙げられ、このうちマダイ、ヒラメ、クロソイ、クロダイ、ウナギ、ブリには好適に使用される。前記魚類は養殖魚であることが好ましい。
【実施例１】
【００２１】
以下の実施例に基づいてさらに詳細に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００２２】
（試験例１）マダイに対する本発明魚類用飼餌料添加物の効果
（１−１）試験試料の調製
魚粉、大豆粕、小麦粉、スケトウダラ肝油、α-デンプン等からなる配合飼料（表１参照）に、神麹（Massa Medicata Fermentat）、サンザシ属キレバサンザシ（Crataegus pinnatifida Bunge)、ヨモギ属カワラヨモギ(Artemisia capillaris)及びハマゼリ属センキュウ(Cnidium officinale)をそれぞれ単独に、また、重量比で２：２：１：１に混合したものの微粉末を０．５％添加した実施例１〜５と無添加の対照飼料（比較例１）を調製した（表２参照）。なお、試験飼料への本発明魚類用飼餌料添加物の添加はセルロースを３．５％に減量して行った。また、実施例１〜５は外割で３０％の水道水を加えてよく練り合わせ、造粒機で直径３ｍｍのモイストペレットに調製し、給餌するまで−２０℃のフリーザーに保存した。給餌に際しては必要量を解凍してから与えた。
【００２３】
【表１】
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【００２４】
【表２】
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【００２５】
（１−２）供試魚および飼育方法
近畿大学水産養殖種苗センター浦神事業場で人工種苗生産した平均体重２４．１ｇのマダイ稚魚を、４００Ｌ容塩ビ角型水槽に２５尾ずつ収容して各試験区を設けた。各水槽に所定の飼料（実施例１〜５及び比較例１）を1日２回（９：００および１５：００）飽食給与して９０日間飼育し、終了時には尾動脈からシリンジを用いて採血し、血液性状、血漿化学成分、リゾチーム活性、補体価、ＧＯＴ・ＧＰＴ活性を測定し、さらに、必要尾数を取り上げて、空気中での乾出、麻酔回復およびVibrio anguillarumによる攻撃試験などを行った。水槽は飼料ごとに３重複区を設け、濾過海水を３Ｌ/ｍｉｎで注水した。期間中の水温は１７.３〜２６．６℃、溶存酸素量は６．１〜８．７ｍｇ/Ｌであった。また、照明は蛍光灯を用いて明暗サイクルを１２ｈ-Ｌ：１２ｈ-Ｄとした。
【００２６】
（１−３）飼育成績
期間中の生残率は、比較例１（Ｃ）区、実施例１（Ｍｍ）区、実施例２（Ｃｐ）区、実施例３（Ａｃ）区、実施例４（Ｃｏ）区および実施例５（Ｈｍ）区で、それぞれ８４、９６、９６、１００、９３および９７％であり、比較例１（Ｃ）区が有意に低かった。日間摂餌率（乾物重量）には有意な区間差は認められなかったが、成長率は実施例５（Ｈｍ）区がもっとも高く、次いで、実施例４（Ｃｏ）、実施例３（Ａｃ）および実施例２（Ｃｐ）区、そして実施例１（Ｍｍ）および比較例１（Ｃ）区の順に低下し、飼料効率は実施例５（Ｈｍ）、実施例４（Ｃｏ）および実施例３（Ａｃ）区が７０％以上であったが、実施例１（Ｍｍ）、実施例２（Ｃｐ）および比較例１（Ｃ）区は６５％以下で低かった。結果を表３に示す。
【００２７】
【表３】
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【００２８】
（１−４）血液性状および血漿化学成分の測定
ヘモグロビン含量はいずれの実施例区も比較例区より高かったが、ヘマトクリット値に有意な区間差はなかった。血漿化学成分では総タンパク含量、血糖値、総コレステロール含量、リン脂質含量に差異は認められなかったが、実施例４（Ｃｏ）および実施例５（Ｈｍ）区では他の区に比べてＨＤＬ-コレステロール含量が高く、逆に、トリグリセリドおよび遊離脂肪酸含量が低下する傾向にあった。これら結果により、本発明の魚類用飼餌料添加物を与えられた魚類において、造血機能や栄養素の運搬が円滑に行われていることが分かった。結果を表４に示す。
【００２９】
【表４】
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【００３０】
（１−５）ストレス耐性試験
（空中露出後の回復率と麻酔後の回復時間の測定）
５および１０分間の空中露出後と、２００、４００および８００ｐｐｍ２-フェノキシエタノールで１分間の麻酔後の回復試験から、魚類のストレス耐性に及ぼす各種ハーブの効果について検討した。
尚、本試験における「回復」とは、試験魚が正常に遊泳し始めることをいう。
５分間の空中露出では、水槽に戻してから１０分後の回復率は、比較例１および実施例２（Ｃｐ）区が７０％で他の区の８０％以上に比べて低かった。一方、１０分間の空中露出では顕著な区間差が認められ、比較例１区が１０％と最も低く、次いで実施例１（Ｍｍ）区の３０％、実施例４（Ｃｏ）区の４０％、実施例３（Ａｃ）区の４５％、実施例５（Ｈｍ）区の５５％そして実施例２（Ｃｐ）区の６０％の順に高くなった。５分および１０分間空中露出の回復率に実施例２（Ｃｐ）区で逆の傾向が認められたが、４種ハーブを混合添加した実施例５（Ｈｍ）区はいずれにおいても高い回復率を示した。５分間（１）および１０分間（２）の空中露出試験における回復率を図１に示す。
【００３１】
２-フェノキシエタノールによる麻酔回復時間は、２００および４００ｐｐｍで有意な区間差は認められなかったが、８００ｐｐｍでは実施例１（Ｍｍ）、比較例１、実施例３（Ａｃ）、実施例４（Ｃｏ）、実施例２（Ｃｐ）区の順に減少し、実施例５（Ｈｍ）区における回復時間がもっとも短かった。本試験における２−フェノキシエタノールによる麻酔後の回復時間を図２に示す。
【００３２】
（１−６）血漿のＧＯＴ・ＧＰＴとリゾチーム活性および溶血補体価
ＧＯＴ・ＧＰＴ活性はヒトと同じキット（ＧＯＴ・ＧＰＴテストワコー：和光純薬社製）を用いる酵素法で、リゾチーム・溶血補体価は定法で測定した。
表５に示すように、終了時における血漿ＧＯＴ活性は、比較例１区に比べ、全実施例区で低かった。また、ＧＰＴ活性は実施例３（Ａｃ）、実施例４（Ｃｏ）および実施例５（Ｈｍ）区が他の区より有意に低かった。リゾチーム活性は比較例区より実施例区に高い傾向が認められたが、有意に高かったのは実施例５（Ｈｍ）区のみであった。また、溶血補体価もリゾチームに類似した傾向にあったが、実施例３（Ａｃ）および実施例５（Ｈｍ）区が有意に高かった。
【００３３】
【表５】
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【００３４】
（１−７）病原細菌による攻撃試験
腹腔内にビブリオ病原因細菌Vibrio anguillalumを接種する攻撃試験を行い、攻撃後の生残率について調べた。比較例１区では経日的に徐々に低下して１０日後には生残率は６０％に達したが、実施例２（Ｃｐ）、実施例４（Ｃｏ）および実施例１（Ｍｍ）区では８５％、実施例３（Ａｃ）区では９０％、そして実施例５（Ｈｍ）区では９５％を維持していた。本攻撃試験結果を図３に示す。
【００３５】
（試験例２）ヒラメに対する本発明魚類用飼餌料添加物の効果
（２−１）試験飼料の調製
市販の魚粉を主体にする粉末配合飼料に、等量のマアジ肉を混合し、さらに、神麹（Massa medicata）、サンザシ属キレバサンザシ（Crataegus pinnatifida Bunge)、ヨモギ属カワラヨモギ（Artemisia capillaris）および ハマゼリ属センキュウ（Cnidium officinale）をそれぞれ重量比で２：２：１：１に混合した実施例（Ｈｍ）を、外割で０．１％（実施例６）、０．３％（実施例７）、０．５％（実施例８）および１．０％（実施例９）添加した４つの実施例と無添加の対照飼料（比較例２）を調製した。なお、各飼料は試験用造粒機を用いて適当な直径のモイストペレットに成型し、給餌するまで−４５℃のフリーザーに保存した。配合組成と一般成分を表６に示す。
【００３６】
【表６】
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【００３７】
（２−２）供試魚および飼育方法
一般種苗生産業者から購入し、対照飼料を用い飼育条件下で４週間予備飼育した平均体重１５．２ｇのヒラメ稚魚を、４０ｍ3容コンクリート製角型水槽内に設置した１×１×１ｍの網生簀へ、５０尾ずつ収容して５試験区を設け、毎日２回（８:００と１６:００）に所定の飼料を飽食給与して４週間飼育した。飼育期間中にはコンクリート水槽に３００Ｌ/ｍｉｎで新鮮な海水を注水し、絶えずエアレーションを行った。期間中の水温および平均溶存酸素量は１６．０〜２１．４℃および７．５ｍｇ/Ｌであった。終了時には尾動脈からシリンジを用いて採血し、血液性状、血漿化学成分、ＧＯＴ・ＧＰＴ活性を測定し、さらに、必要尾数を取り上げて、空中露出および麻酔回復試験を行った。なお、試験区は各飼料に付き２反復区を設けた。
【００３８】
（２−３）飼育成績
期間中の生残率は、実施例７（０．３Ｈｍ）区で９８％であったが他の区はいずれも１００％で優れていた。期間中の日間成長率についてみると対照および実施例６（０．１Ｈｍ）区は２．９５および３．２１％と若干低かったが、実施例７（０．３Ｈｍ）、実施例８（０．５Ｈｍ）および実施例９（１．０Ｈｍ）区ではそれぞれ３．６９、３．７０および３．４９％で有意に改善されていた。しかし、日間摂餌率は比較例２区と実施例６（０．１Ｈｍ）区が、実施例７（０．３Ｈｍ）、実施例８（０．５Ｈｍ）および実施例９（１．０Ｈｍ）区より高い傾向にあったことから、飼料効率は実施例７（０．３Ｈｍ）、実施例８（０．５Ｈｍ）および実施例９（１．０Ｈｍ）区が７５％前後であり、比較例２および実施例６（０．１Ｈｍ）区の６０および６５％より顕著に優れていた。飼育成績結果を表７に示す。
【００３９】
【表７】
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【００４０】
（２−４）血液性状および血漿化学成分の測定
ヘモグロビン含量、ヘマトクリット値、血糖値、トリグリセリド、総コレステロール含量などに区間差はなかったが、ＨＤＬ-コレステロール含量は実施例７〜９区が他の区より有意に高かった。結果を表８に示す。
【００４１】
【表８】
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【００４２】
（２−５）血漿のＧＯＴおよびＧＰＴ活性の測定
ＧＯＴ活性には有意な区間差が認められ、比較例１区より各実施例区が低かった。しかし、ＧＰＴ活性には差異は認められなかった。血漿ＧＯＴおよびＧＰＴ活性を図４に示す。
【００４３】
（２−６）ストレス耐性試験
（空中露出後の回復率と麻酔後の回復時間の測定）
ヒラメは比較的空中露出に対して高い耐性を持つことから、１０分間の空中露出と１０分間の飼育水中での回復を１サイクルとし、５サイクルを連続して繰り返した後の生残率を測定した。また、２００ｐｐｍ２-フェノキシエタノールで１分間の麻酔後の回復率を調べる麻酔試験を実施した。空中露出試験では対照区の生残率が６０％であったが、実施例６（０．１Ｈｍ）で８０％、実施例８（０．５Ｈｍ）で９０％、そして、実施例７（０．３Ｈｍ）および実施例９（１．０Ｈｍ）では１００％が生残し、Ｈｍ区で空中露出に対する耐性が優れていることが示された（図５参照）。また、麻酔試験では図６に示すように、対照区では１００％の回復に５分程度必要であったが、各実施例区では４〜４．５分と若干短かった。また、半数が麻酔からさめる時間は対照区で４分間、各実施例区では３分間前後であった。
【００４４】
（試験例３）クロソイに対する本発明魚類用飼餌料添加物の効果
（３−１）試験飼料の調製
市販の魚粉を主体にする粉末配合飼料２５％に、マアジ肉７５％を混合した対照飼料（比較例３）と、対照飼料に外割で神麹（Massa Medicata Fermentat）、サンザシ属キレバサンザシ（Crataegus pinnatifida Bunge)、ヨモギ属カワラヨモギ(Artemisia capillaris)および ハマゼリ属センキュウ(Cnidium officinale)を、それぞれ２：２：１：１の割合で混合したものを０．５％添加した実施例１０（０．５Ｈｍ）試験飼料を調製した。なお、各飼料は試験用造粒機を用いて均質になるまで混合し、ぺースト状にしたものを給餌した。また、各飼料は給餌するまで−２０℃のフリーザーに保存した。対照および試験飼料の配合組成と一般成分を表９に示す。
【００４５】
【表９】
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【００４６】
（３−２）供試魚および飼育方法
一般種苗生産業者から購入し、対照飼料を用い飼育条件下で２週間予備飼育した平均体重９３ｇのクロソイ稚魚を、海面に設置した２．５×２．５×２．５ｍ３の網生簀へ、３００尾ずつ収容して２区を設け、２日に１回（１５：００）所定の飼料を飽食給与して８週間飼育した。期間中の水温は１３．０〜１７．０℃および塩分濃度は３２〜３４ｐｐｔであった。
【００４７】
（３−３）飼育成績
期間中の生残率は、比較例３および実施例１０（０．５Ｈｍ）区でそれぞれ８２および８５％で大きな違いはなかった。また、両区の総摂餌量も３９ｋｇで区間差はなかったが、増重率は比較例３区で２４．８％であったのに対して、実施例１０（０．５Ｈｍ）区では４２．７％と顕著に改善されていた。飼料効率も増重率と同様に実施例１０（０．５Ｈｍ）区が優れていた。飼育成績結果を表１０に示す。
【００４８】
【表１０】
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【図面の簡単な説明】
【００４９】
【図１】（試験例１：１−５）本発明に係るストレス耐性試験における５分間（１）および１０分間（２）の空中露出後の回復率を示す図である。
【図２】（試験例１：１−５）本発明に係るストレス耐性試験における２-フェノキシエタノールによる麻酔後の回復時間を示す図である。
【図３】（試験例１：１−７）本発明に係る病原細菌による攻撃試験におけるVibrio anguillalumによる攻撃後の生残率を示す図である。
【図４】（試験例２：２−５）本発明に係る血漿のＧＯＴおよびＧＰＴ活性の測定結果を示す図である。
【図５】（試験例２：２−６）本発明に係るストレス耐性試験における空中露出後の生残率を示す図である。
【図６】（試験例２：２−６）本発明に係るストレス耐性試験における麻酔後の回復率を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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