(57)【要約】【課題】  歯牙又は骨（骨片）を摘出し、体外において長時間処置し、再度体内に戻した際に、細胞増殖が順調に行われ、速やかに修復され、生体への生着性が優れた再生医療が行える、歯牙又は骨細胞が長時間にわたって保存できる歯牙又は骨細胞の保存液の提供。【解決手段】  次の成分（Ａ）及び（Ｂ）：（Ａ）アスコルビン酸エステル又はその塩（Ｂ）単糖類を含有するｐＨ７．０〜７．６の緩衝液からなる歯牙又は骨細胞保存液。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
次の成分（Ａ）及び（Ｂ）：
（Ａ）アスコルビン酸エステル又はその塩
（Ｂ）単糖類
を含有するｐＨ７．０〜７．６の緩衝液からなる歯牙又は骨細胞保存液。
【請求項２】
成分（Ａ）が、アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩又はアスコルビン酸硫酸エステルナトリウム塩である請求項１記載の歯牙又は骨細胞保存液。
【請求項３】
成分（Ａ）を０．０００１〜０．１重量％含有する請求項１又は２記載の歯牙又は骨細胞保存液。
【請求項４】
成分（Ｂ）が、グルコースである請求項１〜３のいずれか１項記載の歯牙又は骨細胞保存液。
【請求項５】
成分（Ｂ）を０．０００１〜２重量％含有する請求項１〜４のいずれか１項記載の歯牙又は骨細胞保存液。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、歯又は骨の再生治療を行うにあたって抜歯した歯牙又は採取した骨の細胞を安定に保存する保存液に関する。
【背景技術】
【０００２】
従来、う蝕の進んだ歯は、抜歯し、入れ歯によって機能を回復させる方法が、一般に行われている。しかし、う蝕の進んだ歯を抜歯処置した後に元の場所に戻すことにより機能が回復することがわかってきた。自己の歯を保存修復することにより患者のＱＯＬ（クオリティー・オブ・ライフ）を向上させることができる。この歯牙の保存液として生理食塩水、リン酸系等張緩衝液等が使用されてきたが、このような保存液中では骨細胞は機能を停止しており、長時間にわたって保存しておくと、再度生体に戻したときの細胞機能の回復が行われず生着の可能性が低下するという問題があった。組織培地を用いると、長時間の保存が可能であることが知られているが、組織培地の組成は複雑で、かつ液体の安定性に問題がある。これを解決するために、単糖類等を種々の電解質を含み浸透圧及び水素イオン濃度を調整した歯牙保存液（特許文献１）が提案され、当該保存液で保存した歯牙を用いて炭酸ガスレーザーによる歯牙再植が試みられている（非特許文献１）。
【特許文献１】特開平１０−２５２０１号公報
【非特許文献１】顎咬合誌  第２２巻  第１号  ８０−８３頁  ２００１年
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
本発明の目的は、歯牙又は骨細胞（骨片）を摘出して体外で処置し、再度体内に戻した際に、細胞増殖が順調に行われて速やかに修復され、生体への生着性が優れた再生医療が行え、歯牙又は骨片を長時間にわたって保存できる歯牙又は骨細胞の単純な組成の保存液を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
そこで、本発明者は、抜歯した歯牙等が長期間にわたって保存しても安定で、それを使用して再生治療を行った際の生着性が優れた歯牙又は骨細胞の保存液を開発すべく鋭意検討としたところ、アスコルビン酸エステル塩及び単糖類を含有し、特定のｐＨ範囲に維持すると、歯牙又は骨細胞を長期間にわたって安定に保存でき、生着性に優れた再生治療が行えることを見出し、本発明を完成した。
【０００５】
すなわち、本発明は、次の成分（Ａ）及び（Ｂ）：
（Ａ）アスコルビン酸エステル又はその塩
（Ｂ）単糖類
を含有するｐＨ７．０〜７．６の緩衝液からなる歯牙又は骨細胞保存液を提供するものである。
【発明の効果】
【０００６】
本発明の保存液は、抜歯した歯牙及び骨細胞が長期間にわたって安定で、それを使用して再生治療を行った際の生着性が優れ、簡便に使用でき、また保存液も安定である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
本発明で使用する（Ａ）アスコルビン酸エステルとしては、アスコルビン酸硫酸エステル、アスコルビン酸リン酸エステル等のアスコルビン酸鉱酸エステル、アスコルビン酸パルミチン酸エステル、アスコルビン酸イソパルミチン酸エステル、アスコルビン酸ステアリン酸エステル等のアスコルビン酸の炭素数１２〜２０脂肪酸エステル、アスコルビン酸−２−リン酸−６−パルミチン酸エステル等のアスコルビン酸鉱酸脂肪酸エステル等が挙げられる。また、塩としては、ナトリウム、カリウム等のアルカリ金属塩、カルシウム、マグネシウム等のアルカリ土類属塩、アルミニウム塩等が挙げられる。
アスコルビン酸エステル又はその塩としては、アスコルビン酸鉱酸エステル塩が好ましく、より好ましくはアスコルビン酸硫酸エステル塩、アスコルビン酸リン酸エステル塩である。更に、アスコルビン酸硫酸エステルナトリウム塩、アスコルビン酸硫酸エステルカリウム塩、アスコルビン酸硫酸エステルマグネシウム塩、アスコルビン酸硫酸エステルカルシウム塩、アスコルビン酸硫酸エステルアルミニウム塩、アスコルビン酸リン酸エステルナトリウム塩、アスコルビン酸リン酸エステルカリウム塩、アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩、アスコルビン酸リン酸エステルカルシウム塩、アスコルビン酸リン酸エステルアルミニウム塩等が好ましく、特にアスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩、アスコルビン酸硫酸エステルナトリウム塩が好ましい。
【０００８】
アスコルビン酸エステル又はその塩は、本発明の歯牙又は骨細胞保存液中に、細胞安定化、抗酸化の点で０．０００１〜０．１重量％、更に０．０００５〜０．０５、更に０．００１〜０．０３重量％、特に０．００１〜０．０１含有するのが好ましい。
【０００９】
本発明で使用する（Ｂ）単糖類としては、キシロース、リボース、アラビノース等のペント−ス；マンノース、グルコース、ガラクト−ス、フルクトース等のヘキソース等が挙げられる。単糖類としては、ヘキソースが好ましく、特にグルコースが好ましい。
【００１０】
単糖類は、本発明の歯牙又は骨細胞保存液中に、細胞安定化の点で０．０００１〜２重量％、更に０．０００５〜１重量％、更に０．００１〜０．５重量％、特に０．００１〜０．１重量％含有するのが好ましい。
【００１１】
本発明の歯牙又は骨細胞保存液は、アスコルビン酸エステル又はその塩と単糖類を水と混合して、更にｐＨ（２５℃）を７．０〜７．６とすることが重要である。これらの成分を７．０〜７．６のｐＨ範囲に維持できる緩衝液とすることにより、歯牙又は骨細胞を長期間にわたって安定に保存することができ、更に生着性が改善される。ｐＨは、更に７．２〜７．６、特に７．３〜７．５に維持できるようにするのが好ましい。
【００１２】
保存液のｐＨを７．０〜７．６に維持するために、リン酸、塩酸、硫酸、炭酸、酒石酸、クエン酸、グリシン等を使用したｐＨ緩衝液とする。特にリン酸を使用したリン酸系緩衝液とするのが好ましい。
リン酸系緩衝液とするには、リン酸、リン酸ナトリウム、リン酸カリウム、リン酸一水素ニナトリウム、リン酸一水素ニカリウム、リン酸ニ水素一ナトリウム、リン酸ニ水素一カリウム等が使用され、上記ｐＨ範囲を維持するように調整する。
【００１３】
本発明の歯牙又は骨細胞保存液は、アスコルビン酸エステル又はその塩と単糖類を水と混合し、更にｐＨを調整して製造するが、これらの成分の他、塩化ナトリウム、塩カリウム、塩化マグネシウム、塩化カルシウム等の無機塩化物、抗生物質、殺菌剤、細胞賦活化剤、抗ヒスタミン剤、抗アレルギー剤等を適宜その目的に応じて配合してもよい。
【００１４】
このようにして製造された本発明の歯牙又は骨細胞保存液は、必要により精密ろ過膜、限外ろ過膜等を使用してろ過滅菌してもよい。
【実施例】
【００１５】
以下に実施例を示して本発明を具体的に説明するが、本発明はこれらに限定されるものではない。
【００１６】
実施例１
塩化ナトリウム８．０ｇ、塩化ナトリウム０．２ｇ、リン酸ニ水素一カリウム０．２ｇ、リン酸一水素二ナトリウム１．５ｇ、アスコルビン酸リン酸エステルマグネシウム塩０．０５ｇ及びグルコース１．５ｇを蒸留水１０００ｍＬに溶解し、次いで精密ろ過膜（孔径：０．１μｍ）を使用してろ過滅菌をして歯牙又は骨細胞保存液（本発明保存液）を製造した。ｐＨは、７．４５（２５℃）であった。
【００１７】
１０重量％牛胎児血清添加ＭＥＭ培地（イーグルＭＥＭ培地「ニッスイ」１）：日水製薬社製）でコンフルエントになるまで培養したヒト歯根膜細胞又はヒト骨芽細胞を、ＰＢＳ（−）で洗浄した後、上記の本発明保存液、ＭＥＭ培地、ＰＢＳ（−）又は生理食塩水に所定の細胞数に調整し、２５℃で経時的に細胞を観察した。観察は、所定時間経過した各細胞を、至適培養条件（培地：１０重量％牛胎児血清添加ＭＥＭ培地、培養温度：３７℃、培養時間：１６８時間）に戻し、増殖の状況（コントロールに対する細胞数の変化）を、下記基準に従って評価した。なお、コントロールは、１０重量％牛胎児血清添加ＭＥＭ培地により培養しておいた細胞を、同一細胞数で培養に供した。
観察評価基準
＋＋＋：極めて良好（２倍以上の細胞数：２００％以上）
＋＋：良好（５０％以上１００％未満の細胞数増加：１５０％以上２００％未満）
＋：やや良好（１０％以上５０％未満の細胞数増加：１１０％以上１５０％未満）
±：変化なし（細胞数が殆ど変化しない：１００％以上１１０％未満）
−：減少（細胞数が減少：１００％未満）
観察結果を表１に示す。
【００１８】
【表１】
2006151884.tif 000002
【００１９】
本発明の歯牙又は骨細胞保存液中で保存したヒト歯根膜細胞及びヒト骨芽細胞は、いずれも至適ｐＨ培養条件に戻すと順調に増殖を示し、細胞は安定に保存されていた。