(57)【要約】【課題】    ホンシメジの新菌株及びそれを用いたホンシメジの生産法を提供する。【解決手段】以下の(1)〜(4)の特長を有するホンシメジ（Lyophyllum shimeji）に属する菌株に関する。(1)菌床を用いた人工栽培で子実体の発生が可能である(2)子実体の菌柄が極太で、全長と菌柄の太さの比（全長／菌柄の太さ）が１．７〜２．４である(3)子実体の菌傘表面が平滑で、イボが発生しにくい、及び(4)子実体の発生が株状型である  また、菌床を用いた人工栽培法でホンシメジを生産する方法であって、種菌として上記菌株を用いるホンシメジの生産法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の(1)〜(4)の特長を有するホンシメジ（Lyophyllum shimeji）に属する菌株。
(1)菌床を用いた人工栽培で子実体の発生が可能である
(2)子実体の菌柄が極太で、全長と菌柄の太さの比（全長／菌柄の太さ）が１．７〜２．４である
(3)子実体の菌傘表面が平滑で、イボが発生しにくい、及び
(4)子実体の発生が株状型である
【請求項２】
菌床を用いた人工栽培が以下の(A)〜(D)工程からなるものである、請求項１記載の菌株。
(A)おが屑と栄養材を混合後、殺菌し、培養容器に充填する工程
(B)種菌接種後、１８〜２８℃の温度条件下、暗室にて培養する工程
(C)菌廻り完了後、覆土を行い、追加培養する工程、及び
(D)(B)工程より３℃以上低い１２〜１８℃の温度条件下、明室にて子実体を発生させる工程
【請求項３】
全長と菌柄の太さの比（全長／菌柄の太さ）が１．７〜２．０である、請求項１記載の菌株。
【請求項４】
イボの発生率が１０％以下である、請求項１記載の菌株。
【請求項５】
１株当たり２〜１０本の子実体を有する、請求項１記載の菌株。
【請求項６】
ホンシメジＹＧ６Ｌを一方の親株とし、野生株または公知の菌株を他方の親株として人工交配して得られたものである、請求項１記載の菌株。
【請求項７】
ホンシメジ（Lyophyllum shimeji）ＹＭＳ２０８株（ＦＥＲＭ  ＡＰ−２０３９３）である、請求項１記載の菌株。
【請求項８】
菌床を用いた人工栽培法でホンシメジを生産する方法であって、種菌として請求項１〜７いずれかに記載の菌株を用いる、ホンシメジの生産法。
【請求項９】
ホンシメジ（Lyophyllum shimeji）ＹＭＳ２０８株（ＦＥＲＭ  ＡＰ−２０３９３）又はその変異株。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ホンシメジ（Lyophyllum shimeji）の新菌株及び当該菌株を用いたホンシメジの生産方法に関するものである。
【背景技術】
【０００２】
従来、ホンシメジは菌根菌に属するため、人工栽培は極めて困難と考えられてきた。しかし、滋賀県森林センターの太田氏により、大麦とおが屑を用いたホンジメジの実用的な培養法が開発され、また、人工栽培に用いることのできる優良菌株としてホンシメジＹＧ６Ｌが報告された（特公平８−４４２７号公報、日菌報、３９巻、１３−２０頁（1998）、特開２００２−２４７９１７号公報など参照）。
【０００３】
【特許文献１】特公平８−４４２７号公報
【特許文献２】特開２００２−２４７９１７号公報
【非特許文献１】日菌報、３９巻、１３−２０頁（1998）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
従来公知の優良菌株であるＹＧ６Ｌは、人工栽培が可能であるものの、（１）消費者に好まれる形態、詳しくは菌柄が太くならず、ホンシメジ本来の極太感がない、（２）人工栽培した場合、菌傘表面にイボが発生し易く、商品価値を損なう、（３）子実体発生が株状型でなく、収穫に手間がかかる等の問題点を有しており、商品化を念頭に考慮すると必ずしも望ましい菌株とは言えなかった。
【０００５】
このため、本発明は、ＹＧ６Ｌの欠点を克服した新規なホンシメジ菌株を提供することを主目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者らは、上記目的を達成するため、鋭意検討を重ねた結果、ＹＧ６Ｌを親株とし、これと野生株あるいは公知のホンシメジ菌株とを交配させることで、ＹＧ６Ｌの欠点を克服した新規なホンシメジ菌株を提供できることを見出し、本発明を完成した。したがって、本発明は以下の通りである。
【０００７】
［１］以下の(1)〜(4)の特長を有するホンシメジ（Lyophyllum shimeji）に属する菌株。
(1)菌床を用いた人工栽培で子実体の発生が可能である
(2)子実体の菌柄が極太で、全長と菌柄の太さの比（全長／菌柄の太さ）が１．７〜２．４である
(3)子実体の菌傘表面が平滑で、イボが発生しにくい、及び
(4)子実体の発生が株状型である
【０００８】
［２］菌床を用いた人工栽培が以下の(A)〜(D)工程からなるものである、上記［１］記載の菌株。
(A)おが屑と栄養材を混合後、殺菌し、培養容器に充填する工程
(B)種菌接種後、１８〜２８℃の温度条件下、暗室にて培養する工程
(C)菌廻り完了後、覆土を行い、追加培養する工程、及び
(D)(B)工程より３℃以上低い１２〜１８℃の温度条件下、明室にて子実体を発生させる工程
【０００９】
［３］全長と菌柄の太さの比（全長／菌柄の太さ）が１．７〜２．０である、上記［１］記載の菌株。
［４］イボの発生率が１０％以下である、上記［１］記載の菌株。
【００１０】
［５］１株当たり２〜１０本の子実体を有する、上記［１］記載の菌株。
［６］ホンシメジＹＧ６Ｌを一方の親株とし、野生株または公知の菌株を他方の親株として人工交配して得られたものである、上記［１］記載の菌株。
【００１１】
［７］ホンシメジ（Lyophyllum shimeji）ＹＭＳ２０８株（ＦＥＲＭ  ＡＰ−２０３９３）である、上記［１］記載の菌株。
［８］菌床を用いた人工栽培法でホンシメジを生産する方法であって、種菌として上記［１］〜［７］いずれかに記載の菌株を用いる、ホンシメジの生産法。
［９］ホンシメジ（Lyophyllum shimeji）ＹＭＳ２０８株（ＦＥＲＭ  ＡＰ−２０３９３）又はその変異株。
【発明の効果】
【００１２】
本発明の新菌株は、菌床を用いた人工栽培が可能で、菌柄が極太で、菌傘表面が平滑で、イボが発生しにくい、及び子実体発生が株状型であることから、従来の優良菌株とされたＹＧ６Ｌの欠点をすべて克服し、消費者に好まれる形態を有し、収穫も簡単で、かつ人工栽培が可能な実用的な菌株である。
【００１３】
また、人工栽培した場合、多くの菌種で共通して観察されるイボの発生を抑制し、ホンシメジの別称であるダイコクシメジに似つかわしい菌柄の太いホンシメジを安定して生産できる本発明のホンシメジの生産法は、商品価値の高いホンシメジを人工的に大量に製造する方法として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
（１）本発明菌株
本発明の菌株は、以下の(1)〜(4)の特長を有するホンシメジ（Lyophyllum shimeji）に属する菌株であって、そのような菌株を具体的に例示すれば、ホンシメジＹＭＳ２０８株（ＦＥＲＭ  ＡＰ−２０３９３）を挙げることができる。
【００１５】
(1)菌床を用いた人工栽培で子実体の発生が可能である
(2)得られる子実体の菌柄が極太で、全長と菌柄の太さの比（全長／菌柄の太さ）が１．７〜２．４である
(3)得られる子実体の菌傘表面が平滑で、イボが発生しにくい、及び
(4)得られる子実体の発生が株状型である
【００１６】
なお、「菌床を用いた人工栽培」とは、以下の(A)〜(D)工程からなる栽培を意味し、詳細な栽培条件等は、以下に説明したとおりである。
(A)おが屑と栄養材を混合後、殺菌し、培養容器に充填する工程
(B)種菌接種後、１８〜２８℃の温度条件下、暗室にて培養する工程
(C)菌廻り完了後、覆土を行い、追加培養する工程、及び
(D)(B)工程より３℃以上低い１２〜１８℃の温度条件下、明室にて子実体を発生させる工程
【００１７】
このような菌株の中でも、得られる子実体の全長と菌柄の太さの比（全長／菌柄の太さ）が１．７〜２．０であるもの、イボの発生率が１０％以下（より好ましくは７％以下）のもの、及び／又は１株当たり２〜１０本の子実体を発生する能力を有するものが、より商品価値が高く、好ましいものとして例示できる。
【００１８】
本発明の菌株は、一方の親株を公知の優良菌株であるＹＧ６Ｌ（ＮＢＲＣ  １００３２５）を用い、他方の親株を野生株またはその他の公知の菌株を用い、公知の人工交配法にて作出した菌株の中から、上記特徴、形質を有するものを小規模試験にて選抜すればよい。
【００１９】
親株として使用できる公知の菌株としては、たとえば１５０３０２−２（ATCC  201196）、ＳＦ−Ｌｓ１Ｆ（ATCC  204314）、ＳＦ−Ｌｓ１２Ｆ（ATCC  204315）、ＳＦ−Ｌｓ６Ｆ（ATCC  204316）、ＦＧＬｓ１Ｆ（ATCC  204317）、ＮＧ２Ｌ（IFO  32779）、ＥＨ２Ｌ（IFO  32780）、ＬＳ−Ｈ００８（日本応用きのこ学会誌、９巻、４号、１７１−１７４頁（2001））等を例示することができる。
【００２０】
このようにして作出、選抜された本発明の菌株を種菌として使用する本発明のホンシメジの生産法は、菌床を用いたホンシメジの公知の人工栽培法に準じて実施することができる。
【００２１】
すなわち、培養基としては、栄養材（きのこ栽培に常用されている穀物粉（麦類、米類など）、ふすま、糠、サトウキビの搾り粕、乾燥おから等）とおが屑（広葉樹単独、または針葉樹の混合おが屑）を混合したものを用いることができる。
【００２２】
このような培養基に水を含ませて水湿潤状態とし、これを常圧又は高圧加熱により滅菌したものを培地として使用する。なお、培養基の含水率としては、５０〜７０重量％、好ましくは５５〜６５重量％が適当である。
【００２３】
このような培養基をナメコビンなどのキノコ栽培用の容器に充填後、上記本発明のホンシメジ菌株を接種後、１８〜２８℃の暗所にて第一段の培養を行ったのち、土（鹿沼土など）で培地表面を被覆し、追加培養後、子実体の発生を促すため、第一段の温度より３℃以上低い１２〜１８℃の温度の明所にて第二段の培養を行なうことで、ホンシメジを生産することができる。
【実施例】
【００２４】
以下、実施例に基づき、詳細に説明するが、本発明がこれに限定されないことは明らかである。
【００２５】
（１）本発明菌株の作出・選抜
日本全国から野生ホンシメジ株４６種を収集し、公知の菌床人工栽培法により栽培可能であり、栽培的特性、形態的特性の優れた菌株の選抜を行った。
栽培特性及び形態的特性が優れた選抜株（広島産）と公知の優良菌株ＹＧ６Ｌから胞子を分離し、対峙培養により交配株を作出・選抜を行った。その中で栽培的特性及び形態的特性の優れた菌株ＹＭＳ２０８株を選抜し、諸性質が安定していることを確認して、育成を完了した。
【００２６】
なお、選抜されたＹＭＳ２０８株は、平成１７年２月９日に特許生物寄託センターに寄託され、受領番号として「ＦＥＲＭ  ＡＰ−２０３９３」が与えられている。
【００２７】
（２）遺伝的特性
Potato Dextrose寒天培地（Difco社製）を使用し、２５℃、３０日間培養し、帯線形成及び嫌色反応の有無を観察した。なお、寒天培地のｐＨは５．６±０．２とし、直径９cmのシャーレを使用した。
【００２８】
その結果、表１に示すように、ＹＭＳ２０８とＹＧ６Ｌとを対峙培養した場合、帯線は形成されず、嫌色反応はコロニー間に隙間や隆起した境界を生じた。なお、判断基準は以下に示すとおりである。
【００２９】
【表１】
2006271234.tif 000002
【００３０】
帯線形成：コロニー間に、着色した線を形成する。      ＋
コロニー間に、薄く着色した線を形成する。  ±
コロニー間に、着色した線を形成しない。    −
【００３１】
嫌色反応：コロニー間に、明瞭な隙間や隆起した境界を生じる。  ＋
コロニー間に、隙間や隆起した境界を生じる。        ±
コロニー間に、隙間や隆起した境界を生じない。      −
【００３２】
（３）生理的特性
Potato Dextrose寒天培地（Difco社製）を使用し、５℃，１５℃，２０℃，２３℃，２５℃，２８℃の各温度帯で菌糸成長速度を測定した。なお寒天培地のｐＨは５．６±０．２とした。
その結果、表２に示すように、ＹＭＳ２０８の最適成長温度は２３℃前後であることが確認された。
【００３３】
【表２】
2006271234.tif 000003
（単位 ：mm/day）
【００３４】
次に、Potato Dextrose寒天培地における菌叢の密度、性状、周縁部の性状、色を観察した。その結果、（a）密度は普通で、（b）菌叢表面の性状は平滑で、（c）菌叢周辺部の性状は整一で、（d）菌叢の色は普通で、（e）高温及び低温に対する耐性はなかった。なお、培養には直径９ｃｍのシャーレを用い、７０％程度伸長したときに測定、観察した。
【００３５】
また、ポテト・デキストロース寒天培地を用いた菌学的特徴は次のとおりである。
（ａ）ポテト・デキストロース寒天培地で２５℃、１０日間の培養で、コロニー径は４０ｍｍとなり良好に生長した。白色の菌叢で表面は平である。コロニーの周縁部は整一、菌糸の厚さ及び密度は中程度である。
（ｂ）ポテト・デキストロース寒天培地に直径５ｍｍの菌糸片を接種した後、温度を段階的に変えて７日間培養し、コロニーの直径を測定したところ、最も良好に生長する温度は２３〜２５℃であった。また、３５℃或いは１０℃では生長がかなり悪いとともに、５℃或いは４０℃ではほとんど生長しない。
（ｃ）ポテト・デキストロース寒天培地でｐＨを段階的に調整するとともに、直径５ｍｍの菌糸片を接種した後、２５℃で７日間培養し、コロニーの直径を測定したところ、ｐＨ４．０〜８．０の間で菌糸は生長し、最も生長の良好なｐＨは５．４〜５．８であった。
【００３６】
（４）栽培特性
（試験方法）
栽培特性試験は、広葉樹おがくずまたは針葉樹おがくずとの混合物に、麦、米などの穀物粉を容量比２：１の割合で混合し、含水率を６０％程度に調整した培地で行った。栽培容器は口径７５ｍｍ、容量８００ｃｃのナメコワイドPPビンを用いた。培地充填量は１ビンあたり５５０ｇとし、ビンの肩まで詰めて高圧滅菌した。滅菌放冷後、約２０ｍｌのおがくず種菌を接種し、２２±２℃で培養を行った。
【００３７】
菌廻り完了まで培養し（約７０〜８０日間）、湿らせた鹿沼土を覆土してさらに同条件で１０日間の追培養を行った。追加培養後、子実体の発生・生育は、１５〜１６℃の温度条件下、湿度９５％以上、明るさ３００〜５００ルクス（Lux）で約２５〜３０日間行った。
【００３８】
発生した子実体が十分に成長し、傘が八部開き程度の状態の時にホンシメジを収穫した。なお、本栽培試験は、最低１区２５本を３回繰り返し行った。
【００３９】
（結果）
栽培試験より得られたＹＭＳ２０８とＹＧ６Ｌの相違点を以下に示す。
＜種菌接種から子実体発生最盛期までの期間＞
ＹＭＳ２０８  平均１１８日、  ＹＧ６Ｌ  平均１２２日
【００４０】
＜覆土後最適温度における子実体収穫最盛期までの期間＞
ＹＭＳ２０８  ３１〜３５日、  ＹＧ６Ｌ  ２６〜３０日
【００４１】
＜子実体の発生型＞
ＹＭＳ２０８  株状型、  ＹＧ６Ｌ  群状型
＜子実体収量＞
ＹＭＳ２０８  平均９９．６ｇ／ビン、  ＹＧ６Ｌ  平均９４．１ｇ／ビン
【００４２】
＜菌傘の大きさ＞
ＹＭＳ２０８  平均３５．７ｍｍ、  ＹＧ６Ｌ  平均３１．２ｍｍ
＜菌傘の厚さ＞
ＹＭＳ２０８  平均１３．４ｍｍ、  ＹＧ６Ｌ  平均１５．３ｍｍ
【００４３】
＜菌柄の長さ＞
ＹＭＳ２０８  平均４４．２ｍｍ、  ＹＧ６Ｌ  平均４３．２ｍｍ
＜菌柄の太さ＞
ＹＭＳ２０８  平均２９．３ｍｍ、  ＹＧ６Ｌ  平均２１．７ｍｍ
【００４４】
＜菌傘の直径と菌柄の長さとの比率＞
ＹＭＳ２０８  平均１．２、  ＹＧ６Ｌ  平均１．４
＜全長と菌柄の太さとの比率＞
ＹＭＳ２０８  平均１．９、  ＹＧ６Ｌ  平均２．８
【００４５】
なお、ホンシメジの計測は、各栽培ビンから大きい子実体４本を選抜し、図１に示す各項目（１：全長、２：菌柄の太さ（最も太い部分）、３：菌傘の径、４：菌傘の厚さ、５：菌柄の長さ）について測定を行った。
【００４６】
次に、イボの発生率については、菌傘上に発生したイボの発生ビン数を測定することにより行った。その結果を表３に示す。
【００４７】
表３から明らかなように、優良菌株ではＹＧ６Ｌにおいても２５〜４０％の頻度でイボが発生するのに対し、ＹＭＳ２０８のイボの発生率は１０％以下で、ＹＧ６Ｌの発生率と比較して格段にイボの発生が抑制されていることが明らかとなった。
【００４８】
【表３】
2006271234.tif 000004
【００４９】
（５）消費者特性
ランダムに選出した人に、ＹＭＳ２０８とＹＧ６Ｌの見かけ、香り、味を比較してもらったところ、香りと味に関してはほとんど差が見られなかったが、見かけにおいては、約８０％に人がＹＭＳ２０８の方が好ましいと回答した。
また、菌傘にイボのあるＹＭＳ２０８とイボのないＹＭＳ２０８の実物を提示し、どちらを購入したいか聞いてみたところ、約９５％の人がイボのあるＹＭＳ２０８の方を購入すると回答した。
【００５０】
＜受領書＞
2006271234.tif 000005
【図面の簡単な説明】
【００５１】
【図１】図１は、ホンシメジ子実体の測定部位を模式的に示したものである。
【図１】
2006271234.tif 000006
【手続補正書】
【提出日】平成17年5月10日(2005.5.10)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項７】
ホンシメジ（Lyophyllum shimeji）ＹＭＳ２０８株（ＦＥＲＭ  Ｐ−２０３９３）である、請求項１記載の菌株。
【手続補正２】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項９】
ホンシメジ（Lyophyllum shimeji）ＹＭＳ２０８株（ＦＥＲＭ  Ｐ−２０３９３）又はその変異株。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１１】
［７］ホンシメジ（Lyophyllum shimeji）ＹＭＳ２０８株（ＦＥＲＭ  Ｐ−２０３９３）である、上記［１］記載の菌株。
［８］菌床を用いた人工栽培法でホンシメジを生産する方法であって、種菌として上記［１］〜［７］いずれかに記載の菌株を用いる、ホンシメジの生産法。
［９］ホンシメジ（Lyophyllum shimeji）ＹＭＳ２０８株（ＦＥＲＭ  Ｐ−２０３９３）又はその変異株。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１４】
（１）本発明菌株
本発明の菌株は、以下の(1)〜(4)の特長を有するホンシメジ（Lyophyllum shimeji）に属する菌株であって、そのような菌株を具体的に例示すれば、ホンシメジＹＭＳ２０８株（ＦＥＲＭ  Ｐ−２０３９３）を挙げることができる。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
なお、選抜されたＹＭＳ２０８株は、平成１７年２月９日に特許生物寄託センターに寄託され、受託番号として「ＦＥＲＭ  Ｐ−２０３９３」が与えられている。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００５０
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００５０】
＜受託書＞
2006271234.tif 000007