(57)【要約】  【課題】  自動装置化に適した糖鎖の合成方法、及び糖鎖自動合成装置を提供すること。【解決手段】  本発明の糖鎖合成方法は、低分子量ポリエチレングリコールを支持担体とする糖受容体に糖供与体を結合するグリコシル化反応の工程と、グリコシル化反応の生成物中の未反応糖受容体の水酸基をキャッピングする工程と、グリコシル化反応で糖供与体を結合した糖受容体の一時的保護基を脱保護して次のグリコシル化反応のための糖受容体を生成する工程とを備えた構成とし、これら各工程は、各反応の後にシリカゲルカラムを通すことにより低分子量ポリエチレングリコールが結合する生成物のみを回収する精製処理を含むものであり、各工程を順次所定回繰り返すことにより所定段数の糖鎖の化学合成を行う。  【選択図】図１
2006151948.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
低分子量ポリエチレングリコールを支持担体とする糖受容体に糖供与体を結合するグリコシル化反応の工程と、
前記グリコシル化反応の生成物中の未反応糖受容体の水酸基をキャッピングする工程と、
前記グリコシル化反応で糖供与体を結合した糖受容体の保護基を脱保護して次のグリコシル化反応のための糖受容体を生成する工程とを備え、
前記各工程は、各反応の後にシリカゲルカラムを通すことにより前記低分子量ポリエチレングリコールが結合する生成物のみを回収する精製処理を含み、
前記各工程を順次所定回繰り返すことにより所定段数の糖鎖を化学合成することを特徴とする糖鎖合成方法。
【請求項２】
前記各工程を含む糖鎖合成化学反応を複数備え、
何れか一つの糖鎖合成化学反応で攪拌処理を行う間に、他の糖鎖合成化学反応において震盪以外の処理を行うことによって、
前記複数の糖鎖合成化学反応をそれぞれ独立かつ並行して行うことを特徴とする、請求項１に記載の糖鎖合成方法。
【請求項３】
糖に低分子量ポリエチレングリコール（ＣＨ３（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＨ）を支持担体として結合し反応点の一時的保護基を外して水酸基にしたものを糖受容体とし、
イミデート糖、フッ化糖、クロロ糖、ブロモ糖、チオグリコシドの少なくともいずれか一つを糖供与体とし、
グリコシル化反応と、キャッピング反応と、脱保護反応の各純化学反応を順次所定回数繰り返して所定段数の糖の連鎖を生成し、当該生成物から前記低分子量ポリエチレングリコールを分離して糖と糖が連鎖した糖鎖を合成する糖鎖合成方法であり、
前記グリコシル化反応は、
糖受容体に糖供与体を結合する工程であって、
前記糖受容体と糖供与体とを混合して少量の溶媒を添加し、
反応活性剤として三ふっ化ホウ素エーテル錯塩を混合して所定の温度条件で攪拌し、
予め微量の酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒で膨潤したシリカゲルカラムに、前記反応  液、酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒を順に流し込んで廃液を廃棄し、
同カラムに酢酸エチルとメタノールの混合溶媒を流し込んで液体を回収し、
当該回収液体を減圧濃縮により溶媒を溜去する各工程を含み、
前記キャッピング反応は、
糖受容体の未反応水酸基をキャッピングする工程であって、
前記グリコシル化反応の生成物に少量の溶媒を添加し、
イソシアナドベンゾイルを混合して常温にて撹拌し、
微少量のメタノールを添加し、
予め微量の酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒で膨潤したシリカゲルカラムに、前記反応液、酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒を順に流し込んで廃液を廃棄し、
同カラムに酢酸エチルとメタノールの混合溶媒を流し込んで液体を回収し、
当該回収液体を減圧濃縮により溶媒を溜去する各工程を含み、
前記脱保護反応は、
前記グリコシル化反応で糖供与体を結合した糖受容体の一時的保護基を脱保護する工程であって、
前記グリコシル化反応の生成物にピリジンとメタノールの混合溶媒を添加して所定温度条件で撹拌し、
減圧濃縮により溶媒を溜去し、
予め微量の酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒で膨潤したシリカゲルカラムに、前記反応液、酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒を順に流し込んで廃液を廃棄し、
同カラムに酢酸エチルとメタノールの混合溶媒を流し込んで液体を回収し、
当該回収液体を減圧濃縮により溶媒を溜去する各工程を含む、
ことを特徴とする糖鎖合成方法。
【請求項４】
前記グリコシル化反応、キャッピング反応、及び脱保護反応の純化学反応を含む糖鎖合成化学反応を複数備え、
各糖鎖合成化学反応は、他の糖鎖合成化学反応において攪拌処理の実行中に震盪以外の処理を行うことによって、前記複数の糖鎖合成化学反応をそれぞれ独立かつ並行して行うことを特徴とする、請求項３に記載の糖鎖合成方法。
【請求項５】
容器内の減圧・加熱により容器内の溶媒溜去が可能な反応容器と、
前記各反応に用いる試薬を有する試薬瓶と、
前記反応容器に対して広範囲の温度制御を行う温度設定機構と、
前記反応容器またはその内部液体に対して震盪を与える震盪機構と、
前記各反応の生成物を溶媒と共に通すシリカゲルカラムと、
前記シリカゲルカラムの落下部分を回収する回収フラスコと、
シリカゲルカラムからの落下部分をドレインまたは回収フラスコに切り替える切り替え機構と、
前記回収フラスコ、反応容器、試薬瓶、シリカゲルカラムの間で液体の移動を行う液体移動機構と、
反応容器及び／又はシリカゲルカラム内の圧力を制御する圧力制御機構と、
前記各機構の動作を制御する制御手段とを備え、
前記制御手段は各機構を制御し、前記反応容器において糖受容体に糖供与体を結合するグリコシル化反応、糖受容体の未反応水酸基をキャッピングするキャッピング反応、及び前記グリコシル化反応で糖供与体を結合した糖受容体の一時的保護基を脱保護する脱保護反応を順に実行すると共に、
前記シリカゲルカラムにおいて前記各反応の生成物を精製し、回収フラスコに回収した生成物を反応容器に戻す後処理を行うことを特徴とする糖鎖の自動合成装置。
【請求項６】
容器内の減圧・加熱により容器内の溶媒溜去が可能な複数の反応容器と、
前記各反応に用いる試薬を有する試薬瓶と、
前記複数の反応容器に対して広範囲の温度制御を行う温度設定機構と、
前記複数の反応容器またはその内部液体に対して一括して震盪を与える震盪機構と、
前記各反応の生成物を溶媒と共に通すシリカゲルカラムと、
前記シリカゲルカラムの落下部分を回収する回収フラスコと、
シリカゲルカラムからの落下部分をドレインまたは回収フラスコに切り替える切り替え機構と、
前記回収フラスコ、反応容器、試薬瓶、シリカゲルカラムの間で液体の移動を行う液体移動機構と、
反応容器及び／又はシリカゲルカラム内の圧力を制御する圧力制御機構と、
前記各機構の動作を制御する制御手段とを備え、
前記制御手段は各機構を制御し、前記各反応容器において糖受容体に糖供与体を結合するグリコシル化反応、糖受容体の未反応水酸基をキャッピングするキャッピング反応、及び前記グリコシル化反応で糖供与体を結合した糖受容体の一時的保護基を脱保護する脱保護反応を順に実行すると共に、前記震盪機構と液体移動機構を制御し、何れか一つの糖鎖合成化学反応で攪拌処理を行う間に、他の糖鎖合成化学反応において震盪以外の処理を行い、
前記シリカゲルカラムにおいて前記各反応の生成物を精製し、回収フラスコに回収した生成物を反応容器に戻す後処理を行い、
前記複数の糖鎖合成化学反応をそれぞれ独立かつ並行して行うことを特徴とする糖鎖の自動合成装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、糖と糖を連鎖させて糖鎖を化学的に合成する方法、及びその合成手法を自動で行う自動合成装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
糖と糖とを連鎖させる糖鎖の合成については、1993年にDanishefskyらが開発した手法（非特許文献１参照）を皮切りに、固相を担体として化学反応させる方法が広く研究されている。
【０００３】
また、低分子量ポリエチレングリコール（以下PEGと略記する）を担体として化学反応させる方法についても研究が進められている。
【０００４】
上記とは異なる手法として、酵素を用いた糖鎖合成手法も提案されている。この手法については、北大、産総研の西村紳一郎氏らによる発表が知られている。なお、出願人はこれに関する特許文献あるいは論文についての知識を有していない。
【０００５】
また、自動合成装置については、ペプチド合成・コンビナトリアルケミストリなど、化合物を自動合成する手法が実用化されてきている。これらの自動合成の技術を発展させる形で、前記非特許文献１に示すような固相反応による糖鎖自動合成装置がMITのSeebergerらにより既に発表されている（非特許文献２、特許文献１参照）。
【０００６】
前記した酵素を用いた糖鎖合成手法による自動合成装置についても、前記西村紳一郎氏らによって発表されている。
【０００７】
【非特許文献１】Science，1993，260，1370．Danishefsky
【非特許文献２】Science，2001，291，1523．Seeberger
【特許文献１】Seeberger, Peter H.; Plante Obadiash J. Apparatus and methods for the automated synthesisi of oligosaccharides PCT Int Appl (2002) CODEN PIXXD2 WO 2002016384 A2 20020228
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
前記非特許文献１に示される糖の合成方法は、固相樹脂を使用するものである。固相樹脂を用いる手法は反応性が低いという問題があり、また、反応の進行状況の追跡も困難である。
【０００９】
また、酵素を用いた糖鎖合成手法では酵素を使用するため、天然に存在する糖鎖のうちの一部の構造のものしか合成できない等の問題が残る。
【００１０】
また、自動合成において、PEGを担体として化学反応させる方法を自動合成装置に適用した例は現状知られていない。これは、一般に有機合成反応では、固体試薬を使用し、分液操作・濾過などの過程を用いるのが普通であるが、固体試薬の取り扱いが自動化に適していないという点や、また、試薬は温度管理を要するため、試薬類をあらかじめ装置内に準備し長時間常温保持しておかなければならないなどの環境条件の点など、手動と機械装置を用いた自動とでは条件が異なるため、自動装置化することが困難であるためである。
【００１１】
そこで、本発明は上記課題を解決し、自動装置化に適した糖鎖の合成方法、及び糖鎖自動合成装置を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
上記目的を解決するために、本発明の糖鎖合成方法は、低分子量ポリエチレングリコールを支持担体とする糖受容体に糖供与体を結合するグリコシル化反応の工程と、グリコシル化反応の生成物中の未反応糖受容体の水酸基をキャッピングする工程と、グリコシル化反応で糖供与体を結合した糖受容体の保護基を脱保護して次のグリコシル化反応のための糖受容体を生成する工程とを備えた構成とし、これら各工程は、各反応の後にシリカゲルカラムを通すことにより低分子量ポリエチレングリコールが結合する生成物のみを回収する精製処理を含むものであり、各工程を順次所定回繰り返すことにより所定段数の糖鎖の化学合成を行う。
【００１３】
従来の固相反応は、反応系が不均一系となるため反応性が低いという問題があるが、低分子量ポリエチレングリコールは反応条件下において均一系の反応液を与え、また分子量も小さいため反応性の低下を抑えることができる。また、分子量が小さいことから固相反応では困難である反応のスケールアップも可能となる。また、通常の測定方法によって高分子に結合している化合物の構造や純度の確認も可能である。例えば、キャピラリで極少量の反応液を取り出し、質量分析装置、核磁気共鳴装置あるいは呈色反応による反応の進行状況の確認、副生成物の有無などの確認を行い、温度、試薬の量、反応時間などの反応条件をフィードバックすることができる。
【００１４】
各工程では、低分子量ポリエチレングリコールの高い極性の特性を用いて、低分子量ポリエチレングリコールに結合した化合物と結合していない化合物をシリカゲルカラムで容易に分離することができる。
【００１５】
本発明の糖鎖合成方法は、より詳細には、糖に低分子量ポリエチレングリコール（ＣＨ３（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＯＨ）を支持担体として結合し反応点の一時的保護基を外して水酸基にしたものを糖受容体とし、イミデート糖、フッ化糖、クロロ糖、ブロモ糖、チオグリコシドの少なくともいずれか一つを糖供与体とし、グリコシル化反応と、キャッピング反応と、脱保護反応の各純化学反応を順次所定回数繰り返して所定段数の糖の連鎖を生成し、当該生成物から前記低分子量ポリエチレングリコールを分離して糖と糖が連鎖した糖鎖を合成する糖鎖合成方法であり、各グリコシル化反応と、キャッピング反応と、脱保護反応は以下の工程を含む。
【００１６】
グリコシル化反応は、糖受容体に糖供与体を結合する工程であって、糖受容体と糖供与体とを混合して少量の溶媒を添加し、反応活性剤として三ふっ化ホウ素エーテル錯塩を混合して所定の温度条件で攪拌し、予め微量の酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒で膨潤したシリカゲルカラムに、前記反応液、酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒を順に流し込んで廃液を廃棄し、同カラムに酢酸エチルとメタノールの混合溶媒を流し込んで液体を回収し、回収液体を減圧濃縮により溶媒を溜去する。
【００１７】
キャッピング反応は、糖受容体の未反応水酸基をキャッピングする工程であって、グリコシル化反応の生成物に少量の溶媒を添加し、イソシアナドベンゾイルを混合して常温にて撹拌し、微少量のメタノールを添加し、予め微量の酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒で膨潤したシリカゲルカラムに、前記反応液、酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒を順に流し込んで廃液を廃棄し、同カラムに酢酸エチルとメタノールの混合溶媒を流し込んで液体を回収し、回収液体を減圧濃縮により溶媒を溜去する。
【００１８】
脱保護反応は、グリコシル化反応で糖供与体を結合した糖受容体の一時的保護基を脱保護する工程であって、グリコシル化反応の生成物にピリジンとメタノールの混合溶媒を添加して所定温度条件で撹拌し、減圧濃縮により溶媒を溜去し、予め微量の酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒で膨潤したシリカゲルカラムに、反応液、酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒を順に流し込んで廃液を廃棄し、同カラムに酢酸エチルとメタノールの混合溶媒を流し込んで液体を回収し、回収液体を減圧濃縮により溶媒を溜去する。
【００１９】
各グリコシル化反応、キャッピング反応、及び脱保護反応の各反応は、予め微量の酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒で膨潤したシリカゲルカラムに、反応液、酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒を順に流し込んで廃液を廃棄し、同カラムに酢酸エチルとメタノールの混合溶媒を流し込んで液体を回収し、回収液体を減圧濃縮により溶媒を溜去するという、後処理を共通に備え、この後処理によって各反応の生成物を精製することができる。
【００２０】
本発明の糖鎖の合成方法は、使用する試薬として固体試薬を用いずに行うことができ、また、常温保持可能な試薬と用いることができるため、自動合成に適した合成方法である。
【００２１】
また、本発明の糖鎖の自動合成装置は、本発明の糖鎖の合成方法を自動装置で実現するに適した構成であり、容器内の減圧・加熱により容器内の溶媒溜去が可能な反応容器と、前記各反応に用いる試薬を有する試薬瓶と、反応容器に対して広範囲の温度制御を行う温度設定機構と、反応容器またはその内部液体に対して震盪を与える震盪機構と、各反応の生成物を溶媒と共に通すシリカゲルカラムと、シリカゲルカラムの落下部分を回収する回収フラスコと、シリカゲルカラムからの落下部分をドレインまたは回収フラスコに切り替える切り替え機構と、回収フラスコ、反応容器、試薬瓶、シリカゲルカラムの間で液体の移動を行う液体移動機構と、反応容器及び／又はシリカゲルカラム内の圧力を制御する圧力制御機構と、各機構の動作を制御する制御手段とを備えた構成とすることができる。
【００２２】
上記構成において、制御手段は各機構を制御して、反応容器において糖受容体に糖供与体を結合するグリコシル化反応、糖受容体の未反応水酸基をキャッピングするキャッピング反応、及び前記グリコシル化反応で糖供与体を結合した糖受容体の一時的保護基を脱保護する脱保護反応を順に実行すると共に、シリカゲルカラムにおいて各反応の生成物を精製し、回収フラスコに回収した生成物を反応容器に戻す後処理を行う。
【００２３】
本発明によれば、固体試薬の使用・分液操作・濾過などの過程を必要とせず、また常温保持可能な安定試薬のみを用いて糖鎖の合成を行うことができる。
【００２４】
なお、上記反応において、糖供与体は反応活性剤によって糖基が外れる物質であって、イミデート糖、フッ化糖、クロロ糖、ブロモ糖、チオグリコシド（SR基を有するチオグリコシド、及びSPh基を有するチオグリコシド）を用いることができ、イミデート糖の場合には2.5〜3.5当量（糖受容体の量基準）を用意し、シリカゲルカラムは例えば糖受容体の約20倍以上の容量を持つものを用いる。
【００２５】
また、グリコシル化反応、キャッピング反応、及び脱保護反応における反応条件は、一例として以下のように設定することができる。
【００２６】
グリコシル化反応においては、糖受容体と糖供与体を混合の上、少量の溶媒を添加し、反応活性剤として2.5〜3.5当量（糖受容体の量基準）の三ふっ化ホウ素エーテル錯塩を用いて混合し、5℃以下の温度で例えば約45分以上撹拌する。その後のシリカゲルカラムの処理では、予め混合比率が3:1〜5:1の範囲の微量の酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒で膨潤し、続いて、反応液、酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒（混合比率前同）を流し込んで廃液を捨て、同じカラムに酢酸エチルとメタノールの混合溶媒（混合比率3:1〜5:1の範囲）を流し込んで落とした液体を回収し、減圧濃縮により溶媒を溜去する。
【００２７】
キャッピング反応において、グリコシル化反応の生成物に少量の溶媒を添加し、1.5〜2.5当量（糖受容体の量基準）のイソシアナドベンゾイルを混合し、常温にて例えば約45分以上撹拌し、微少量のメタノールを添加する。その後のシリカゲルカラムの処理では、予め混合比率が3:1〜5:1の範囲の微量の酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒で膨潤し、続いて、反応液、酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒（混合比率前同）を流し込んで廃液を捨て、同じカラムに酢酸エチルとメタノールの混合溶媒（混合比率3:1〜5:1の範囲）を流し込んで落とした液体を回収し、減圧濃縮により溶媒を溜去する。
【００２８】
また、脱保護反応においては、キャッピング反応の生成物にピリジンとメタノールの混合溶媒（混合比率１:5〜5:1の範囲）を添加（当量比条件なし）、45〜60℃の温度で例えば約4時間以上撹拌し、減圧濃縮により溶媒を溜去する。その後のシリカゲルカラムの処理では、予め混合比率が3:1〜5:1の範囲の微量の酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒で膨潤し、続いて、反応液、酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒（混合比率前同）を流し込んで廃液を捨て、同じカラムに酢酸エチルとメタノールの混合溶媒（混合比率3:1〜5:1の範囲）を流し込んで落とした液体を回収し、減圧濃縮により溶媒を溜去する。
【００２９】
本発明の糖鎖の合成方法及び自動合成装置の他の態様では、前記した各工程を含む糖鎖合成化学反応を複数備え、これら複数の糖鎖合成化学反応の内の何れか一つで攪拌処理を行う間に、他の糖鎖合成化学反応において震盪以外の処理を行うことによって、複数の糖鎖合成化学反応をそれぞれ独立かつ並行して行う。
【００３０】
この態様による自動合成装置は、反応容器を複数とし、震盪機構はこれら複数の反応容器を一括して震盪し、制御手段は、震盪機構と液体移動機構を制御し、何れか一つの糖鎖合成化学反応で攪拌処理を行う間に、他の糖鎖合成化学反応において震盪以外の処理を行うことで、複数の糖鎖合成化学反応をそれぞれ独立かつ並行して行う。
【００３１】
この態様によれば、複数の化学反応を一つの装置で行うことができる。この態様によれば、同じ化学反応を複数進行させて結果を比較する場合や、使用する試薬や糖供与体を変えて行う化学反応を同時進行させる場合において、複数台の装置を要することなく、また、広い設置面積を要することなく行うことができる。
【００３２】
現実の化学反応において、試薬・反応液の移動に要する総和時間は１０数分であるのに対して、試薬の混合及び反応の進行を含む震盪の時間は１時間オーダーであって長時間である。この態様は、この震盪時間が長いことを利用することで、複数の化学反応を一台の装置で可能とする。
【発明の効果】
【００３３】
本発明の糖鎖合成方法および糖鎖自動合成装置によれば、固体試薬の使用や分液の操作・濾過などの過程を必要とせず、また常温保持可能な安定試薬のみを用いて糖鎖の合成が行うことができる。
【００３４】
また、従来実用化されていなかった、低分子量ポリエチレングリコール（PEG）を担体とした糖鎖の自動合成装置が実現でき、従来の固相担体の利用による低い反応性の問題や、酵素の利用による合成可能な糖鎖の構造の限界を解決することができる。
【００３５】
また、本発明の糖鎖合成方法は、固体試薬を使用していない・分液操作を行わないなどの点で、低分子量ポリエチレングリコール（PEG）を担体とした糖鎖の合成手法の機械化が、容易に実現できる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３６】
以下、本発明の実施の形態について図を参照しながら詳細に説明する。
【００３７】
はじめに、本発明の糖鎖合成方法の概略手順について図１を用いて説明する。
【００３８】
本発明の糖鎖合成方法は、概して以下のような手順により行うことができる。
【００３９】
図１において、糖鎖合成方法は、グリコシル化反応（１）とキャッピング反応（２）と脱保護反応（３）の各工程を図中に示す円の回りを反時計方向に繰り返すことで行う。
【００４０】
グリコシル化反応は、図の左上部分に示す符号１，２の部分から左下部分に示す符号３，４の部分へ推移する過程である。ここで、符号１は低分子量ポリエチレングリコール（PEG）付き糖であり、これが糖受容体となる。PEGはここでの担体となり、HO（水酸基）が反応点となる。また、符号２は糖供与体であり、ClAcOの部分は反応せず、L部分が反応活性剤によって外れて、糖受容体の反応点と結合する。符号３は、グリコシル化反応の結合による生成物である。
【００４１】
キャッピング反応は、図中の左下部分に示す符号３，４の部分から右下部分に示す符号５，６の部分へ推移する過程である。
【００４２】
符号４は、符号３で示す部分が生成されるグリコシル化反応の過程において反応に使われずに残った糖受容体である。したがって、符号１と符号４とは同じ化合物である。符号４の部分のHO（水酸基）は反応点であるため、以後の処理で反応する可能性がある。そこで、キャッピング反応を行うことによって、この反応点に別の基を結合させて以降の処理において反応しないようにする。符号６の部分は、キャッピング反応の結果を示している。なお、このキャッピング反応では、符号３と符号５の糖供与体が結合された糖受容体に変化はない。
【００４３】
脱保護反応は、図中の右下部分に示す符号５，６部分から右上部分に示す符号７，８部分へ推移する過程である。この脱保護反応では、符号５の部分を次のグリコシル化反応の糖受容体にするために、ClAcOの部分を反応点に変える。このため、この部分の基を外し、水酸基に変える。符号７の部分が脱保護反応の結果である。なお、この脱保護反応では、符号６と符号８のキャッピングされた糖受容体は変化しない。
【００４４】
これによって、上記の過程で生成された符号７の部分は、符号１の部分に符号２の糖供与体が結合されたものとなる。
【００４５】
次に、この生成された符号７の部分を新たな符号１の部分としてみたることによって次のグリコシル化反応を開始させることができ、前記グリコシル化反応、キャッピング反応、及び脱保護反応の過程を繰り返すことで、さらに符号２の糖供与体を結合することができる。
【００４６】
上記工程を、所定回数繰り返すことによって、所定個数の糖供与体を結合することができる。
【００４７】
以下、各反応の化学条件について説明する。
【００４８】
グリコシル化反応、キャッピング反応、脱保護反応のいずれも、それぞれの反応終了後、後処理として試薬類を除去して目的物のみを抽出する必要がある。通常実験室等で行う場合には、分液操作とカラム分離を組み合わせる。しかしここでは、装置化に最適な条件とするため、後処理手段はシリカゲルカラムによる分離のみとなる。
【００４９】
具体的には、後処理は、まず酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒（混合比率4:1）によって試薬・副生成物を流し出し、続いて酢酸エチルとメタノールの混合溶媒（混合比率4:1）によってPEG付き糖を回収する。この回収は、PEGの極性を利用するものである。これについては固定条件とする。
【００５０】
化学条件として、はじめに、糖供与体の選択、およびグリコシル化反応に於ける反応活性化剤の選択について説明する。
【００５１】
糖受容体としては、図２に示すようなPEG付き糖受容体を用いる。
一方、糖供与体としては、一般的には図４に示すような糖を用いることができるが、ここでは図３の２つについて検討した。
【００５２】
図３（ａ）に示す糖供与体を用いて、各種条件でグリコシル化反応を試みたところ、以下の表１に示す結果が得られた。
【００５３】
【表１】
2006151948.tif 000003
【００５４】
一方、図３（ｂ）に示す糖供与体を用いて、各種条件でグリコシル化反応を試みたところ、以下の表２に示す結果が得られた。
【００５５】
【表２】
2006151948.tif 000004
【００５６】
表１，表２に示すいずれの結果においても、「Entry」は評価エントリー、「eq」は当量によって示された量、「Donor」は供与体、「Glycosylate」は収率（実験結果）である。
【００５７】
反応活性化剤については、図３（ａ）に示す糖供与体については「NIS」「TfOH」であり、図３（ｂ）に示す糖供与体については表２の欄外に示している。
【００５８】
これらの結果について検討すると、元々図３（ａ）に示す糖供与体の活性化剤として使用されるNISが固体であり溶解性が低いため、収率は悪い。また、図３（ｂ）に示す糖供与体についてはEntry8は水酸基のTMS化の問題があり、Entry9は糖供与体の分解が生じるという問題がある。
【００５９】
残りのEntryより、収率の良いEntry７が最適条件として判断される。
【００６０】
したがって、糖供与体としては図３（ｂ）に示す糖供与体であるイミデート糖が適当である。
【００６１】
また、反応活性化剤としては三ふっ化ホウ素エーテル錯塩（BF３OEt２）を用いる。これらの当量比は、糖受容体１：糖供与体３：反応活性化剤３とする。
【００６２】
これがグリコシル化反応の最適条件となる。
【００６３】
次に、キャッピング剤の選択について説明する。
【００６４】
各種条件でキャッピング反応を試したところ、以下の表３に示す結果が得られた。
【００６５】
【表３】
2006151948.tif 000005
【００６６】
なお、表３において、Entry欄にキャッピング剤を併記し、yieldはキャッピング率を示している。表３の結果から、キャッピング剤としてEntry1を決定する。
【００６７】
次に、脱保護条件の選択について説明する。
【００６８】
各種条件で脱保護反応を試したところ、以下の表４の結果が得られた。
【００６９】
【表４】
2006151948.tif 000006
【００７０】
なお、Entry欄に脱保護剤を併記し、solvは溶媒、yieldは脱保護率を示している。また、Entry欄の３のHexamethylenetetramineは図５の（ａ）に示し、Entry欄に枠外記載とする４，５は図５（ｂ）に示し、同じく６は図５（ｃ）に示している。
【００７１】
表４において、「カラム溶出」が「×」のものは、シリカゲルカラムによる分離の際に目的外の物質が混じってしまうため、候補として適当でない。また、Entry４はPEGが切れる可能性が指摘されている。反応時間含めて考察して、Entry８を最適条件と判断される。
【００７２】
キャッピング剤として、イソシアナドベンゾイルを２．４当量用いる。また、脱保護剤として、ピリジンとメタノールの混合溶媒（混合比率7:3）を用いる。これが脱保護反応の最適条件となる。
【００７３】
上記した各最適条件は、固体試薬を用いないという条件、分液操作しないという条件、常温で試薬を保管するという条件下においても、収率良い合成を期待できるものと言える。
【００７４】
次に、本発明の糖鎖自動合成装置について図６を用いて説明する。図６は、本発明の糖鎖の合成方法を自動で実現する自動合成装置の一構成例である。なお、ここで示す構成例は、反応容器が１つの場合について示している。
【００７５】
図６において、本発明の自動合成装置が備える各構成要素について説明する。
【００７６】
符号１は反応容器であり、例えば、硝子製の二股形状とし、それぞれガス・液体の注入抽出の為に使用することができ、液体口はセプタム密閉される。容量は例えば25mLとすることができる。反応容器１は、容器を覆い包む形状のアルミブロック２内に収納され、支台３により固定される。
【００７７】
アルミブロック２の内部には温度設定機構４が設けられ、アルミブロック２の内部全体を0℃〜50℃まで温度変化し、かつ温度を安定して保つことが出来る。温度設定機構４は、冷却ないし加熱も行うことができる。なお、反応容器１の温度制御を行うアルミブロック２及び温度設定機構４は、上記構成に限らず液流に浸す構成としてもよい。
【００７８】
支台３には、ステッピングモーター等のモーター５で駆動される駆動メカニズム６が接続され、モーター５の回転駆動によって直線往復運動し、反応容器１を震盪する。
【００７９】
シリカゲルカラム１３はシリカゲルカラム受け台７に保持される。このシリカゲルカラム受け台７に保持されるシリカゲルカラム１３において、充填物の上方の数ミリの位置、およびカラム満杯位置の下方の数ミリの位置には、これらの部分に液面がきたことを認識できるために、光センサ１２が設置されている。
【００８０】
密閉ケース８はポンプで内部を減圧できるものとし、内部に回収フラスコ１５を収納可能とうる。回収フラスコ１５は、密閉ケース８を減圧することによってシリカゲルカラム１３を吸引して、シリカゲルカラム１３に注入された反応液を吸引する。なお、密閉ケース８は、通常の吸引マニホールドと同等の機能を持つ構成とすることができる。
【００８１】
上記シリカゲルカラムは、 シリカゲルカラム受け台７に対してカラム移動機構１１によって交換することができる。カラム移動機構１１は、未使用カラムストックスペース１４ａに配置されるシリカゲルカラムをからシリカゲルカラム受け台７上に移動してセットする他、シリカゲルカラム受け台７上からシリカゲルカラム１３を使用済みカラム破棄スペース１４ｂに移動する。これによって、シリカゲルカラムの自動交換を行うことができる。
【００８２】
回収フラスコ１５は、シリカゲルカラム１３を通すことによって精製した反応溶液を回収する容器であり、回収フラスコ１５で回収された反応溶液は反応容器１に戻されて次に反応が行われる。回収フラスコ１５としては、例えば50mL以上のサイズが適当である。なお、シリカゲルカラム１３の下方にはドレイン１６が配置され、シリカゲルカラム１３から落とされたものなどが捨てられる。
【００８３】
回収フラスコ１５やドレイン１６は、回収フラスコ・ドレイン移動機構１７によって、必要に応じて、シリカゲルカラム１３の密閉ケース８内の下方位置への配置、あるいは取り出しが行われる。密閉ケース８の外に取り出された場合には、回収フラスコ１５についてはニードル２０によって注入、抽出を行うことができる。また、ドレイン１６であれば、ニードル２０からの排出の受け皿となる。
【００８４】
カラム移動機構１１及び回収フラスコ・ドレイン移動機構１７は、必要に応じて同時に制御することも、あるいはそれぞれ独立して制御することもできる。
【００８５】
なお、図示していないが、回収フラスコ１５を震盪する構成と設け、震盪制御も可能である。震盪機構としては、前記したモーター５と駆動メカニズム６により構成することができる。
【００８６】
密閉ケース８には、密閉ケース内の圧力を制御する密閉ケース内圧制御機構１８が設けられ、シリカゲルカラム受け台７や密閉ケース８と共に圧力制御を行う。圧力制御としては、密閉ケース８の密閉を外すことによってケース内外で空気を連通させて、その後、密閉した上で大気圧を保つ他、密閉した上で内部を減圧する。密閉ケース８内の減圧は、例えば減圧ポンプ３６で吸引することで行うことができる。
【００８７】
試薬瓶１９は複数用意することができる。試薬瓶１９は、それぞれ、必要とする所定の試薬を瓶内に入れた上で窒素ガス充填し、セプタムキャップ（テフロン（登録商標）＋シリコン）を施す。なお、この試薬瓶の準備は、装置操作に先立って操作者が手動で行うことができる。
【００８８】
用意する試薬瓶としては、例えば、ジクロロメタン、三ふっ化ホウ素エーテル錯塩（BF３・OEt２）、イソシアナドベンゾイル、ピリジンとメタノールの混合溶媒（混合比率7:3）、酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒（混合比率4:1）、酢酸エチルとメタノールの混合溶媒（混合比率4:1又は3:1）、糖供与体溶液、メタノール、ジクロロメタン（洗浄専用）、トルエン、酢酸エチルを用いる。
【００８９】
回収フラスコ１５、反応容器１、試薬瓶１９、シリカゲルカラム１３等の間で試薬や反応溶液等の液体の移動を行う液体移動機構として、ニードル２０及びニードル２０を移動させるニードル平行移動手段２５、ニードル上下移動手段２６を備える。
【００９０】
図６の構成では３本のニードル２０が設けられている。ニードル２０の内の１本は気体用であり、気体チューブ２９とつながり、他の２本は液体用であり、液体チューブ２７，２８とつながっている。液体チューブ２７，２８の内径は、接続されるシリンジ２１，２２のスケールに応じて設定する。なお、図では、使用液体容量のスケール(μL 又はmL)に応じて、２種類のニードル２０、シリンジ２１，２２、及びシリンジの注入・抽出を行うシリンジ動作機構２３，２４を備える構成としているが、単種類とすることも、多種類とすることもできる。３種類以上のスケールで切り替える場合には、その個数に応じてニードル、液体チューブ、シリンジの本数や、シリンジ動作機構の個数を設定する。
【００９１】
なお、試薬瓶にニードルを刺す場合には、気体用と液体用のそれぞれ１本ずつを同時に刺す構成とし、試薬瓶に応じて２本のニードルの間隔を狭く設定する。
【００９２】
なお、シリンジ動作機構２３，２４は、シリンジ２１，２２にシリンジに気体が入ってきたことを認識する気泡センサ（図示していない）を設け、吸引する容器内の液体が少ないことを知らせることができる。
【００９３】
ニードル平行移動手段２５は、ニードル２０を水平（あるいは平面）方向に移動させる機構であり、各試薬瓶１９，反応容器１、回収フラスコ１５、シリカゲルカラム１３の位置にセットすることができる。また、ニードル上下移動手段２６は、ニードル２０を各々独立して上下方向に移動させる機構であり、下降させてニードル２０を試薬瓶１９のセプタムに突き刺す動作や、ニードル２０を試薬瓶１９のセプタムから引き外す動作が可能である。
【００９４】
液体用チューブ２７，２８は、ニードル２０の内で液体用のニードルとシリンジ２１，２２とを結ぶチューブであり、それぞれ１本、計２本を備える。ニードル２０とシリンジ２１，２２との間は、ニードル平行移動手段２５やニードル上下移動手段２６によるニードル移動に関わらず、この液体用チューブ２７，２８で結ばれる。
【００９５】
気体用チューブ２９は、ニードル２０の内で気体用のニードルと窒素ガスボンベ３０とをマニホールド３５を介して結ぶ。ニードル２０とマニホールド３５との間は、ニードル平行移動手段２５やニードル上下移動手段２６によるニードル移動に関わらず、この気体用チューブ２９で結ばれる
【００９６】
ニードル２０は、ニードル洗浄スペース３８においてニードルの外側含めて洗浄を行う。また、微量容器保持手段３９ａには、微量容器３９ｂが保持される。
【００９７】
ニードル２０による吸引、排出や、反応容器１内の圧力調整する機構として、窒素ガスボンベ３０、マニホールド３５，減圧ポンプ３６等を備える。
【００９８】
窒素ガスボンベ３０は、ＰＣ等の制御手段４２の制御によりコックの開閉が行われ、開放後は、一定圧を印加する。符号３１は安全弁であり耐酸性とする。符号３３は電磁弁であり、マニホールド３５のガスチューブ側・ポンプ側に備えられ耐酸性とする。マニホールド３５内は、電磁弁３３を介して減圧ポンプ３６により減圧され、マニホールド３５内の圧力は気圧計３４により測定可能である。
【００９９】
反応容器１の気体注入口とマニホールド３５との間はパイプ３７で密着連結される。反応容器１は、モーター５や駆動メカニズム６で構成される震盪機構によって往復運動されるため、この反応容器の往復運動にかかわらず密着連結されるよう、例えばパイプ３７に柔軟性を持たせる等の機構とする。
【０１００】
マニホールド３５は耐酸性を有し、電磁弁３２を介して気体用チューブ２９と接続され、電磁弁３３を介して減圧ポンプ３６と接続される。減圧ポンプ３６の他端には気体トラップ４１が接続される。気体トラップ４１は逃がされたガス（気化有機溶媒）の処理装置である。
【０１０１】
制御装置４２は、パーソナルコンピュータ（ＰＣ）で構成することができ、操作者により処理プログラムが実行される。制御装置４２は、処理プログラムに従って、インタフェース４３を介して各種機構と通信を行って制御を行う。制御装置４２は、シーケンサと併用することも、あるいはシーケンサにより代用してもよい。
【０１０２】
インタフェース４３は、冷却素子４、モータ５、カラム移動手段１１、回収フラスコ移動手段１７、シリンジ動作機構２３，２４、ニードルの移動手段２５，２６、窒素ガスボンベ３０のコック操作、電磁弁３２，３３、減圧ポンプ３６、気圧計３４、その他必要な機器に制御手段４２からに制御信号を送る。
【０１０３】
また、図示しない操作部には、動作開始、動作中断の他、反応中溶液抽出、微量容器更新などの種々の操作ボタンを用意し、制御手段４２に操作を指令する。
【０１０４】
次に、前記した各構成要素の基本動作について説明する。
【０１０５】
はじめに、シリンジに関わる基本動作について説明する。なお、以下では、各動作を（動作（番号））で示している。
【０１０６】
（動作１）試薬のシリンジへの採取動作：
試薬をシリンジに吸い取る動作では、試薬瓶と吸い取り量のパラメータを指定する。なお、予め、吸い取り量のスケールに応じて、使用する液体ニードル・シリンジを決定しておく。
【０１０７】
ニードルを指定された試薬瓶の上に移動させる。必要であれば、同時に、指定された試薬瓶を、ニードル位置に動かす。次に、試薬瓶にニードルを刺す。この際、液体用ニードルを一本、液の中まで刺す。このとき、最底面まで差し込むことが望ましい。一方、気体用ニードルは、液の上部（気体部分）まで刺す。この後、弁を開放して窒素ガスをニードルに送る。シリンジに指定量について「吸い上げる」動作をさせた後、弁を閉鎖して窒素ガスのニードル送付を停止する。試薬瓶から、ニードルを抜く。
【０１０８】
（動作２）シリンジの中身の反応容器への移動：
シリンジの移動動作では、液体移動速度（１度にまとめて注入する液体量／注入時間間隔）のパラメータを指定する。移動量はシリンジの内容量の全てであり、制御は中身が入っている方のシリンジおよび液体ニードルに対して行う。
【０１０９】
ニードルを、反応容器の液体注入口の上に移動させ、反応容器の液体注入口（セプタム蓋）にニードルを刺す。窒素ガスボンベを開き、反応容器に即したマニホールドの電磁弁を開く。
【０１１０】
以降、窒素ガスボンベを閉じるまで、マニホールド内で気圧観測を続け、気圧が大気圧の所定以上（例えば1.2倍以上）になったら、安全弁を強制的に所定時間（例えば0.1sec）だけ開放して直ちに閉じる。
【０１１１】
指定パラメータに基づく速度で、シリンジに対して「押し出す」動作をさせる。実際の動作としては、例えば、指定された注入容量に基づいて指定時間を設定する動作を繰り返す。なお、速度指定を伴わない動作としてもよい。シリンジの中身の反応容器への移動の後、電磁弁を閉じて窒素ガスボンベを閉じ、反応容器からニードルを抜く。
【０１１２】
（動作３）反応容器の内容物のシリンジへの吸い取り動作：
内容物の吸い取り動作では、吸い取り量のパラメータを指定する。なお、予め、吸い取り量のスケールに応じて、使用する液体ニードル・シリンジを決定しておく。
【０１１３】
ニードルを、反応容器の液体注入口の上に移動させ、反応容器の液体注入口（セプタム蓋）にニードルを刺す。このとき、ニードルは容器の最底面まで刺す。
【０１１４】
その後、窒素ガスボンベを開き、反応容器に即したマニホールドの電磁弁を開く。シリンジに指定量の「吸い上げる」動作をさせる。なお、量指定として容器内の全量を設定することもできる。この場合、気泡センサで吸い上げ終了を判断してもよい。
【０１１５】
反応容器の内容物のシリンジへの吸い取りの後、電磁弁を閉じて窒素ガスボンベを閉じ、反応容器からニードルを抜く。
【０１１６】
（動作４）シリンジの内容物のドレインへの破棄動作：
シリンジの内容物のドレインへの破棄動作では、シリンジ内の全内容物を破棄する。制御は中身が入っている方のシリンジおよび液体ニードルに対して行う。
【０１１７】
ニードルを、ドレインの上に移動させる。カラムの下で用いた後など必要であれば、ドレインをニードルが使用可能な位置に移動させ、シリンジに「押し出す」動作をさせる。
【０１１８】
（動作５）シリンジの内容物のカラムへの移動動作：
シリンジの内容物のカラムへの移動動作では、液体移動速度（１度にまとめて注入する液体量／注入時間間隔）のパラメータを指定する。制御は、中身が入っている方のシリンジおよび液体ニードルに対して行う。
【０１１９】
ニードルを、シリカゲルカラムの上に移動させ、指定パラメータに基づく速度で、シリンジに「押し出す」動作をさせる。実際の動作としては、例えば、指定された注入容量に基づく指定時間の設定の動作を繰り返す。
【０１２０】
（動作６）回収フラスコの内容物のシリンジへの吸い取り動作：
回収フラスコの内容物のシリンジへの吸い取り動作では、吸い取り量をパラメータとして指定する。予め、吸い取り量のスケールに応じて使用する液体ニードル・シリンジを決定しておく。
【０１２１】
ニードルを、回収フラスコの上に移動させる。
【０１２２】
回収フラスコをカラムの下で用いた後など必要であれば、回収フラスコをニードルが使用可能な位置に移動させ、シリンジに指定量の「吸い上げる」動作をさせる。なお、量指定として容器内の全量を設定することもできる。この場合、気泡センサで吸い上げ終了を判断してもよい。
【０１２３】
（動作７）シリンジの内容物の回収フラスコへの移動動作：
シリンジの内容物の回収フラスコへの移動動作では、シリンジ内容の全てを移動する。中身が入っている方のシリンジおよび液体ニードルを制御するものとする。
【０１２４】
ニードルを、回収フラスコの上に移動させる。回収フラスコをカラムの下で用いた後など  必要であれば、回収フラスコをニードルの使用可能な位置に移動させ、シリンジに「押し出す」動作をさせる。
【０１２５】
次に、反応容器、試薬瓶、及び回収フラスコに関する基本動作について説明する。
【０１２６】
（動作８）反応容器の温度制御：
反応容器の温度制御では、温度をパラメータとして指定する。アルミブロック内の温度制御素子に対して、温度制御命令を発し、温度をモニターして指定温度あるいは許容範囲に制御する。
【０１２７】
（動作９）反応容器、回収フラスコの震盪動作：
震盪動作では、容器、震盪の強さ、時間をパラメータとして設定する。
指定した容器側のモーターを回す。回転速度は、指定された震盪の強さに応じて設定する。指定された時間が経過した後、モーターの停止を指令し、モーターが完全に停止するまで待つ。
【０１２８】
（動作１０）反応容器内の気圧制御動作：
気圧制御動作では、制御気圧をパラメータとして設定する。
【０１２９】
マニホールドのポンプサイドの電磁弁を開き、エアポンプで指定圧力に設定する。設定気圧になった後、設定気圧が大気圧である場合には、電磁弁を閉じてポンプを停止する。なお、設定気圧が減圧設定の場合には、上記処理は行わない。
【０１３０】
（動作１１）試薬瓶の内容の反応容器への移動動作：
試薬瓶の内容物の反応容器への移動動作では、試薬瓶、及び移動量をパラメータとして設定する。
【０１３１】
前記（動作１）の試薬のシリンジへの採取動作に従って、試薬瓶の内容をシリンジに移す。指定された量がシリンジの容量を上回る場合には、シリンジの容量分のみを移す。次に、前記（動作２）のシリンジの中身の反応容器への移動に従って、シリンジの内容物を反応容器に移す。前記処理前記までにおいて移動した容量が指定量に至っていない場合には、残り量に対して前記（動作１）、（動作２）の動作を繰り返す。
【０１３２】
（動作１２）試薬瓶の内容のシリカゲルカラムへの移動動作：
試薬瓶の内容物をシリカゲルカラムに移動する動作では、試薬瓶及び移動量をパラメータとして設定する。
【０１３３】
前記（動作１）の試薬のシリンジへの採取動作に従って、試薬瓶の内容をシリンジに移す。このとき、指定された量がシリンジの容量を上回る場合には、シリンジの容量分のみを移す。次に、前記（動作５）のシリンジの内容物のカラムへの移動動作に従って、シリンジの内容をカラムに移す。なお、実際の動作では、カラムの下方へのドレイン又は回収フラスコの設定動作、カラム落下部の圧力設定動作、カラム容量制限による注入量制御動作等が行われる。
【０１３４】
（動作１３）反応容器の内容のシリカゲルカラムへの移動動作：
反応容器の内容物のシリカゲルカラムへの移動動作では、移動量をパラメータとして設定する。
【０１３５】
前記（動作３）の反応容器の内容物のシリンジへの吸い取り動作に従って、反応容器の内容をシリンジに移す。指定された量がシリンジの容量を上回る場合には、シリンジの容量分のみ移す。次に、前記（動作５）のシリンジの内容物のカラムへの移動動作に従って、シリンジの内容をカラムに移す。
【０１３６】
（動作１４）回収フラスコの内容の反応容器への移動動作：
回収フラスコの内容を反応容器に移す動作では、移動量をパラメータとして設定する。前記（動作６）の回収フラスコの内容物のシリンジへの吸い取り動作に従って、フラスコの内容をシリンジに移す。このとき、指定された量がシリンジの容量を上回る場合には、シリンジの容量分のみを移す。次に、前記（動作２）のシリンジの中身の反応容器への移動に従って、シリンジの内容を反応容器に移す。前記処理までにおいて、移動した容量が指定量に至っていない場合には、残り量に対して前記処理をから繰り返す。
【０１３７】
（動作１５）反応容器の内容のエバポレーション動作：
反応容器の内容のエバポレーション動作では、温度、時間、及び溶媒の種類をパラメータとして設定する。また、前記（動作８）の反応容器の温度制御に従って温度を設定し、前記（動作１０）の反応容器内に気圧制御動作に従って気圧を設定する。温度と気圧の設定は、同時に、時間をかけてゆっくりと設定する。なお、その気圧の設定値及び時間は、溶媒の種類に応じてそれぞれ設定する。
【０１３８】
例えば、ジクロロメタンの溶媒の場合には、大気圧（760mmHg）から短時間で（750mmHg）とし、その後２分かけて（430mmHg）とする。メタノールの場合には、大気圧（760mmHg）から短時間で（280mmHg）とし、その後１分かけて（160mmHg）とする。酢酸エチルの場合には、大気圧（760mmHg）から短時間で（200mmHg）とし、その後１分かけて（100mmHg）とする。トルエンあるいはピリジンの場合には、大気圧（760mmHg）から短時間で（90mmHg）とし、その後２分かけて（22mmHg）とする。
【０１３９】
指定時間が経過した後、前記（動作１０）の反応容器内の気圧制御動作に従って、大気圧に戻し、前記（動作８）の反応容器の温度制御に従って常温に戻す。
【０１４０】
（動作１６）反応容器の内容の廃棄：
反応容器の内容の廃棄では、廃棄量をパラメータとして設定する。
【０１４１】
前記（動作３）の反応容器の内容物のシリンジへの吸い取り動作に従って、反応容器の内容をシリンジに移す。指定された量がシリンジの容量を上回る場合には、シリンジの容量分をのみ移す。次に、前記（動作４）のシリンジの内容物のドレインへの破棄動作に従って、シリンジの内容をドレインに移す。前記処理までにおいて、移動した容量が指定量に至っていない場合には、残り量に対して前記処理を繰り返す。
【０１４２】
（動作１７）試薬瓶の内容の回収フラスコへの移動動作：
試薬瓶の内容の回収フラスコへの移動動作では、移動量をパラメータとして設定する。前記（動作１）の試薬のシリンジへの採取動作に従って、試薬瓶の内容をシリンジに移す。指定された量がシリンジの容量を上回る場合には、シリンジの容量分のみを移す。次に、前記（動作７）のシリンジの内容物の回収フラスコへの移動動作に従って、シリンジの内容を回収フラスコに移す。前記処理までにおいて、移動した容量が指定量に至っていない場合には、残り量に対して前記処理を繰り返す。
【０１４３】
（動作１８）反応容器、回収フラスコの洗浄動作：
反応容器、回収フラスコの洗浄動作では、洗浄する容器をパラメータとして設定する。
【０１４４】
前記（動作１１）の試薬瓶の内容の反応容器への移動動作、あるいは前記（動作１７）の試薬瓶の内容の回収フラスコへの移動動作に従って、ジクロロメタンを試薬瓶から反応容器又は回収フラスコに移す。移動量は、洗浄のための適量を予め定めておく。次に、前記（動作９）の反応容器、回収フラスコの震盪動作に従って容器を震盪させる。震盪時間や強さは、洗浄のための適量を予め定めておく。
【０１４５】
前記（動作１６）の反応容器の内容の廃棄動作（又は以下の（動作２０）の回収フラスコの内容の廃棄動作）に従って、容器の内容を全て捨てる。
【０１４６】
前記各動作を再度繰り返す。
【０１４７】
（動作１９）ニードル、シリンジの洗浄動作：
ニードル、シリンジの洗浄動作は、前記（動作１）の試薬のシリンジへの採取動作に従って、ジクロロメタンを試薬瓶からシリンジに移す。移動量はシリンジ容量とする。次に、前記（動作４）のシリンジの内容物のドレインへの破棄動作に従って、シリンジの内容をドレインに破棄する。前記各処理をさらに２回繰り返した後、ニードル外部を洗浄する。
【０１４８】
（動作２０）回収フラスコの内容の廃棄動作：
回収フラスコの内容の廃棄動作では、廃棄量をパラメータとして設定する。前記（動作６）の回収フラスコの内容物のシリンジへの吸い取り動作に従って、回収フラスコの内容をシリンジに移す。指定された量がシリンジの容量を上回る場合には、シリンジの容量分のみを移す。次に、前記（動作４）のシリンジの内容物のドレインへの破棄動作に従って、シリンジの内容をドレインに移す。前記処理までにおいて、移動した容量が指定量に至っていない場合には、残り量に対して前記各処理を繰り返す。
【０１４９】
（動作２１）経過待ち動作：
所定時間の経過を待つ動作では、時間をパラメータとして設定する。
【０１５０】
次に、シリカゲルカラムに関する基本動作について説明する。
【０１５１】
（動作２２）シリカゲルカラムのセット動作：
シリカゲルカラムのセット動作は、シリカゲルカラムをカラム移動機構１１により、未使用カラムストックスペース１４ａのストックスペースから、シリカゲルカラム受け台７上のシリカゲルカラム１３の設置位置に１つセットする。
【０１５２】
（動作２３）用済みシリカゲルカラムの廃棄動作：
用済みシリカゲルカラムの廃棄動作は、シリカゲルカラムをカラム移動機構１１により、シリカゲルカラムの設置位置から、使用済みカラム破棄スペース１４ｂに移動させる。
【０１５３】
（動作２４）カラム落下側の密閉および圧力制御動作：
カラム落下側の密閉および圧力制御動作では、開放、密閉の上で大気圧、密閉の上で減圧のいずれかを設定する。
【０１５４】
回収フラスコ・ドレイン移動機構１７により、密閉を外しケース内外のエアを通す状態、密閉した上で大気圧を保つ状態、密閉した上で内部を減圧する状態のいずれかの状態に設定する。必要に応じて、減圧ポンプを同時に制御する。
【０１５５】
（動作２５）微量容器への抽出動作：
反応容器または回収フラスコの内容から微量を微量容器に抽出する動作において、容器が震盪中であった場合にはいったん震盪を中止する。
【０１５６】
前記（動作３）の反応容器の内容物のシリンジへの吸い取り動作に従って、反応容器の内容をシリンジに移す。移動量は、予め定められた微量（例えば、10μＬ程度）とする。シリンジの内容を指定位置のチューブ上に吐き出す。震盪が中断されている場合には、容器の震盪を再開する。シリンジ、ニードルを洗浄する。
【０１５７】
以下、前記した構成及び各機能動作に用いた本発明の動作例について説明する。
【０１５８】
本発明の糖鎖自動合成装置の動作では、前準備の後、第１〜第３ラウンドを繰り返すことで糖鎖の化学的合成を行う。なお、第１ラウンドはグリコシル化反応であり、第２ラウンドはキャッピング反応であり、第３ラウンドは脱保護反応である。また、各ラウンドの反応の後は後処理を行い、第３ラウンドから第１ラウンドに戻る際には、第４ラウンドとして次のグリコシル化反応の前処理を行う。
【０１５９】
以下、前準備及び各ラウンドの処理について説明する。
【０１６０】
（Ａ）前準備
はじめに前準備について説明する。なお、以下の説明では、各処理について（前準備（番号））によって順序を示す。
【０１６１】
予め手作業で以下の準備処理を行う。
【０１６２】
各試薬瓶にしかるべき試薬を準備し（前準備１）、所定量の糖受容体及び糖供与体を反応容器に入れておく。糖受容体は、例えば、18.8mg、糖供与体は例えば、27mgとする。これらをセットする際、ジクロロメタンに溶かした上で流し込むことができるが、その際の溶媒使用量は例えば計5mL以内とする（前準備２）。
【０１６３】
全ての試薬瓶について、セプタムキャップで栓を施した上、内部の気体を窒素置換しておく。なお、反応容器の窒素置換は装置機構で行うため省略することができる（前準備３）。
【０１６４】
試薬瓶及び反応容器を所定の位置にセットし（前準備４）、未使用のシリカゲルカラムを未使用カラムストックスペースにセットし（前準備５）、未使用の微量容器を所定位置にセットする（前準備６）。
【０１６５】
（Ｂ）第１ラウンドのグリコシル化反応
次に、第１ラウンドのグリコシル化反応について説明する。なお、以下の説明では、各処理について（第１ラウンド（番号））によって順序を示す。
【０１６６】
はじめに、反応容器をエバポレーションする。エバポレーションは、前記（動作１５）の反応容器の内容のエバポレーション動作に従って行う。エバポレーション動作の動作条件は、例えば、時間10分、温度30℃、溶媒種類ジクロロメタンとする。オンのエバポレーションが終了した後、窒素を送り込んで、反応容器内の気体域に窒素を充満させる（第１ラウンド１）。
【０１６７】
次に、反応容器にジクロロメタンを注入する。ジクロロメタンの注入は、前記（動作１１）の試薬瓶の内容の反応容器への移動動作に従って、ジクロロメタンの試薬瓶から反応容器に移すことで行う。注入量の一例としては0.3mLとすることができる。注入の後、前記（動作９）の反応容器の震盪動作に従って、反応容器１を震盪させる。震盪時間の一例としては例えば１分とする（第１ラウンド２）。
【０１６８】
次に、前記（動作８）の反応容器の温度制御に従って、反応容器を低温に設定し（例えば、温度0℃（〜−10℃））、前記（動作９）の反応容器の震盪動作に従って反応容器１を震盪し続け、低温が馴染むまで待つことによって、反応容器を低温に慣らす（第１ラウンド３）。
【０１６９】
次に、反応容器の三ふっ化ホウ素エーテル錯塩（BF３・OEt２）の注入処理を行う。注入処理は、前記（動作１１）の試薬瓶の内容の反応容器への移動動作に従って、三ふっ化ホウ素エーテル錯塩（BF３・OEt２）溶液の試薬瓶から反応容器１に移し、前記（動作１９）のニードル、シリンジの洗浄動作に従って、ニードル・シリンジを洗浄することで行う。試薬の移動量は、例えば、16μLとする（第１ラウンド４）。
【０１７０】
次に、グリコシル化反応を進行させる。グリコシル化反応の進行は、前記（動作９）の反応容器の震盪動作に従って、反応容器を震盪させる。震盪時間は例えば２４時間とする（第１ラウンド５）。
【０１７１】
次に第１ラウンドの後処理を行う、なお、以下に示す（第１ラウンドの後処理１）は、前記（第１ラウンド５）の終了を待たずに開始させる。例えば、目処として、終了の２分前に開始させる）。また、（第１ラウンドの後処理２）以降は、（第１ラウンド５）の終了後に開始させる。
【０１７２】
（Ｃ）第１ラウンドの後処理
次に、第１ラウンドの後処理について説明する。なお、以下の説明では、各処理について（第１ラウンド後処理（番号））によって順序を示す。
【０１７３】
はじめに、シリカゲルカラムの膨潤処理を行う。シリカゲルカラムの膨潤は、前記（動作２２）のシリカゲルカラムのセット動作に従って、シリカゲルカラムをセットし、カラムの下にドレインをセットする。前記（動作２４）のカラム落下側の密閉および圧力制御動作に従って、カラム落下部分を「密閉、大気圧」とする。前記（動作１２）の試薬瓶の内容のシリカゲルカラムへの移動動作に従って、酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒を試薬瓶からシリカゲルカラムに移す。液体量は例えば3ｍLとする。なお、ここまでの部分で、注入する液体がカラムから溢れることはないとする。
【０１７４】
次に、前記（動作２４）のカラム落下側の密閉動作に従って、カラム落下部分を「密閉解除」とする。光センサ１２による検出により、カラムの充填物近辺に水面が認識されるのを待つ。上記認識がされると直ぐに、前記（動作２４）のカラム落下側の圧力制御動作に従ってカラム落下部分を「密閉、大気圧」とする。前記（動作１９）のニードル、シリンジの洗浄動作に従って、ニードル・シリンジを洗浄する（第１ラウンド後処理１）。
【０１７５】
次に、反応容器の内容をシリカゲルカラムに移す動作を行う。この移動動作では、前記（動作１３）の反応容器の内容のシリカゲルカラムへの移動動作に従って、反応容器の内容をシリカゲルカラムに移す。このとき、液体量は反応容器内の全液体とする。前記（動作１９）のニードル、シリンジの洗浄動作に従ってニードル、シリンジを洗浄し、前記（動作８）の反応容器の温度制御に従って、反応容器を常温にもどす（第１ラウンド後処理２）。
【０１７６】
次に、ジクロロメタンによって反応容器を洗浄し、ここまでの液体をカラムに通す処理を行う。この処理は、前記（動作１１）の試薬瓶の内容の反応容器への移動動作に従って、ジクロロメタンの試薬瓶の内容を反応容器に移す。液体量としては例えば0.2mLとする。前記（動作９）の反応容器の震盪動作に従って反応容器を震盪させる。震盪時間は１分とする。
【０１７７】
前記（動作１３）の反応容器の内容のシリカゲルカラムへの移動動作に従って、反応容器の内容をシリカゲルカラムに移す。移動する液体量は反応容器内の全液体とする。
【０１７８】
次に、前記（動作２４）のカラム落下側の圧力制御動作に従って、カラム落下部分を「密閉減圧」とし、光センサ１２により、カラムの充填物近辺に水面が認識されるのを検出する。
【０１７９】
上記検出により認識すると直ぐに前記（動作２４）のカラム落下側の圧力制御動作に従ってカラム落下部分を「密閉、大気圧」とする。
【０１８０】
前記（動作１９）のニードル、シリンジの洗浄動作に従ってニードル、シリンジを洗浄し、前記（動作１８）の反応容器の洗浄動作に従って反応容器を洗浄する。この状態のまま、次の「後処理」を行う（第１ラウンド後処理３）。
【０１８１】
次に、酢酸エチルとヘキサンの混合溶媒をカラムに移す処理を行う。この移動処理は、前記（動作１２）の試薬瓶の内容のシリカゲルカラムへの移動動作に従って、酢酸エチルとヘキサンの試薬瓶の内容をシリカゲルカラムに移す。液体総量は例えば50mLとすることができる。光センサ１２によりカラムの満杯位置近辺に水面が認識された場合には、液体注入を停止する。
【０１８２】
前記（動作２４）のカラム落下側の密閉および圧力制御動作に従って、カラム落下部分を「密閉減圧」とする。光センサ１２により、カラムの充填物近辺に水面が認識されるのを検出する。上記検出により認識された場合には、直ぐに前記（動作２４）のカラム落下側の密閉および圧力制御動作に従って、カラム落下部分を「密閉、大気圧」とする。
【０１８３】
前記処理まででカラムに移した液体量が指定量に満たない場合には、第１ラウンド後処理３以降の前記各処理を繰り返す。
【０１８４】
前記（動作１９）のニードル、シリンジの洗浄動作に従ってニードル・シリンジを洗浄する（第１ラウンド後処理４）。
【０１８５】
次に、酢酸エチルとメタノールの混合溶媒をカラムに移す処理を行う。この移動処理は、カラムの下を回収フラスコに変える。このとき、セットしていたドレイン内の液体は、必要に応じて処分（破棄）する。前記（動作１２）の試薬瓶の内容のシリカゲルカラムへの移動動作に従って、酢酸エチルとメタノールの試薬瓶の内容をシリカゲルカラムに移す。液体総量としては例えば50mLとする。光センサ１２の検出によって、カラム満杯位置近辺に水面が認識された場合、液体注入を停止する。
【０１８６】
前記（動作２４）のカラム落下側の密閉および圧力制御動作に従って、カラム落下部分を「密閉減圧」とし、光センサ１２によって、カラムの充填物近辺に水面が認識されるのを検出する。上記検出によって認識された場合には、直ぐに、前記（動作２４）のカラム落下側の密閉および圧力制御動作に従って、カラム落下部分を「密閉、大気圧」とする。
【０１８７】
前記処理までにおいて、カラムに移した液体量が指定量に満たない場合には、前記の試薬からの処理を繰り返す。
【０１８８】
最後にもう一度、30秒程度カラム落下部分を「密閉減圧」とし、続けて「密閉、大気圧」に戻して、カラム内の液体を落としきる。その後、前記（動作１９）のニードル、シリンジの洗浄動作に従って、ニードル・シリンジを洗浄する（第１ラウンド後処理５）
【０１８９】
次に、回収フラスコの内容を反応容器に移しながらエバポレーション処理を行う。エバポレーション処理では、回収フラスコからニードル抽出できるよう、それぞれの位置をセットする。
【０１９０】
前記（動作１４）の回収フラスコの内容の反応容器への移動動作に従って、回収フラスコの内容を反応容器に移す。例えば、10mLとする。ここでは、最終的に回収フラスコ内全液体を移動させるが、反応容器サイズの制約がある場合には、１回につき例えば10mLの分量として複数回繰り返して移す。
【０１９１】
前記（動作９）の反応容器、回収フラスコの震盪動作に従って、回収フラスコを震盪させる。震盪時間は例えば１分とする。なお、この震盪は、下記の回収フラスコに液体残りがある場合に前記反応容器へ移動した後のみ行う。
【０１９２】
前記（動作１５）の反応容器の内容のエバポレーション動作に従い、反応容器をエバポレーションする。エバポレーション動作の動作条件は、例えば、時間10分、温度45℃、溶媒種類酢酸エチルとする。
【０１９３】
前記までにおいて、回収フラスコに液体残りが有る場合には、前記、回収フラスコの内容の反応容器への移動処理から上記の処理までを繰り返す。
【０１９４】
その後、前記（動作１１）の試薬瓶の内容の反応容器への移動動作に従って、酢酸エチルの試薬瓶の内容を回収フラスコに移す。液体量としては例えば10mLとすることができる。
【０１９５】
前記（動作９）の反応容器、回収フラスコの震盪動作に従って、回収フラスコを震盪させる。震盪時間は例えば１分とすることができる。
【０１９６】
次に、前記（動作１４）の回収フラスコの内容の反応容器への移動動作に従って、再び回収フラスコの内容を反応容器に移す。移す液体量は回収フラスコ内の全液体とする。
【０１９７】
前記（動作１５）の反応容器の内容のエバポレーション動作に従い、エバポレーションを行う。エバポレーション動作の動作条件は、例えば、時間10分、温度45℃、溶媒種類酢酸エチルとする。
【０１９８】
前記（動作１８）の反応容器、回収フラスコの洗浄動作に従って、回収フラスコを洗浄する（第１ラウンド後処理６）。
【０１９９】
次に、反応容器の内容の再度のエバポレーション動作を行う。この再エバポレーション動作では、前記（動作１１）の試薬瓶の内容の反応容器への移動動作に従って、トルエンを試薬瓶から反応容器に移す。液体量は例えば10mLとすることができる。前記（動作９）の反応容器、回収フラスコの震盪動作に従って、反応容器を震盪させる。震盪時間は例えば１分とする。
【０２００】
前記（動作１５）の反応容器の内容のエバポレーション動作に従い、エバポレーションを行う。エバポレーション動作の動作条件としては、例えば、時間10分、温度45℃、溶媒種類トルエンとする（第１ラウンド後処理７）。
【０２０１】
（Ｄ）第２ラウンドのキャッピング反応
次に、第２ラウンドのキャッピング反応について説明する。なお、以下の説明では、各処理について（第２ラウンド（番号））によって順序を示す。
【０２０２】
はじめに、反応容器にジクロロメタンを注入する注入処理を行う。このジクロロメタン注入処理は、前記（動作１１）の試薬瓶の内容の反応容器への移動動作に従って、試薬瓶からジクロロメタンを反応容器に移す。液体量は例えば0.6mLとする。前記（動作９）の反応容器、回収フラスコの震盪動作に従って、反応容器１を震盪させる。震盪時間は例えば１分とする（第２ラウンド１）。
【０２０３】
次に、反応容器にイソシアナドベンゾイルを注入する注入処理を行う。このイソシアナドベンゾイルの注入処理において、予め反応容器１が常温であることを確認しておき、前記（動作１１）の試薬瓶の内容の反応容器への移動動作に従って、イソシアナドベンゾイル溶液の試薬瓶からイソシアナドベンゾイルを反応容器に移す。液体量としては例えば40μLとする。この後、前記（動作１９）のニードル、シリンジの洗浄動作に従って、ニードル・シリンジを洗浄する（第２ラウンド２）。
【０２０４】
次に、キャッピング反応の進行処理を行う。キャッピング反応の進行処理は、前記（動作９）の反応容器、回収フラスコの震盪動作に従って、反応容器を震盪させる。震盪時間は例えば２時間とする（第２ラウンド３）。
【０２０５】
次に、反応容器にメタノールを注入する注入処理を行う。メタノールの注入処理は、前記（動作１１）の試薬瓶の内容の反応容器への移動動作に従って、試薬瓶からメタノールを反応容器に移す。液体量は例えば10μLとする。前記（動作９）の反応容器、回収フラスコの震盪動作に従って、反応容器を震盪させる。震盪時間は例えば５分とする。前記（動作１９）のニードル、シリンジの洗浄動作に従って、ニードル、シリンジを洗浄する（第２ラウンド４）。
【０２０６】
次に第２ラウンドの後処理を行う。この第２ラウンドの後処理は前記した第１ラウンドの後処理と同様とすることができ、（第２ラウンド４）の終了を待たずに開始させる。例えば、目処として、終了の２分前に開始させる。また、（第２ラウンドの後処理２）以降は、（第２ラウンド４）の終了後に開始させる。
【０２０７】
なお、第２ラウンドの後処理は第１ラウンドの後処理と同様であるため、ここでの説明を省略する。
【０２０８】
（Ｅ）第３ラウンドの脱保護反応応
次に、第３ラウンドの脱保護反応について説明する。なお、以下の説明では、各処理について（第３ラウンド（番号））によって順序を示す。
【０２０９】
はじめに、反応容器へのピリジンとメタノールの混合溶媒の注入処理を行う。混合溶媒の注入処理は、前記（動作１１）の試薬瓶の内容の反応容器への移動動作に従って、ピリジンとメタノールの試薬瓶から、混合溶媒を反応容器に移す。液体量としては例えば1.0mLとする。前記（動作９）の反応容器、回収フラスコの震盪動作に従って、反応容器を震盪させる。震盪時間は例えば１分とする（第３ラウンド１）。
【０２１０】
次に、反応容器を高温に慣らす処理を行う。この高温処理は、前記（動作８）の反応容器の温度制御に従って、反応容器を高温に設定する。設定温度は例えば50℃とする。前記（動作１９）のニードル、シリンジの洗浄動作に従って、ニードル、シリンジを洗浄する（第３ラウンド２）。
【０２１１】
次に、脱保護反応を進行させる処理を行う。脱保護反応を進行処理は、前記（動作９）の反応容器、回収フラスコの震盪動作に従って、反応容器を震盪させる。震盪時間は例えば３６時間とする（第３ラウンド３）。
【０２１２】
次に、反応容器の内容のエバポレーション処理を行う。エバポレーション処理は、 反応容器をいったん常温に戻した後、前記（動作１５）の反応容器の内容のエバポレーション動作に従ってエバポレーションを行う。エバポレーション動作の動作条件は、例えば、時間10分、温度45℃、溶媒種類メタノールとする。さらに続けて、別条件でエバポレーションを行う。このときの動作条件は、例えば、時間10分、温度45℃、溶媒種類ピリジンとする。
【０２１３】
上記のように、エバポレーション処理を別条件で２回行う理由は、混合溶媒であるためである。最初のエバポレーションでは沸点の低い溶媒用に圧力を設定し、続けてのエバポレーションではもう一つの溶媒用に圧力を設定する（第３ラウンド４）。
【０２１４】
次に、ジクロロメタンによる反応容器内の反応物の溶解処理を行う。溶解処理は、前記（動作１１）の試薬瓶の内容の反応容器への移動動作に従って、ジクロロメタンの試薬瓶の内容を反応容器に移す。液体量は例えば0.5mLとする。前記（動作９）の反応容器、回収フラスコの震盪動作に従って、反応容器を震盪させる。震盪時間は１分とする（第３ラウンド５）。
【０２１５】
次に第３ラウンドの後処理を行う。この第３ラウンドの後処理は前記した第１ラウンドの後処理と同様とすることができ、（第３ラウンド５）の終了を待たずに開始させる。例えば、目処として、終了の２分前に開始させる。また、（第３ラウンドの後処理２）以降は、（第３ラウンド５）の終了後に開始させる。
【０２１６】
なお、第３ラウンドの後処理は第１ラウンドの後処理と同様であるため、ここでの説明を省略する。
【０２１７】
この後、（Ｂ）の第１ラウンドに戻って、前記した第１〜第３ラウンドを繰り返して糖鎖の化学的合成を行う。この第１ラウンドに戻る際、第４ラウンドとして前処理を行う。
【０２１８】
（Ｆ）第４ラウンドの前処理
次に、第４ラウンドの前処理について説明する。この前処理は、次のグリコシル化反応の前に行う処理である。なお、以下の説明では、各処理について（第４ラウンド（番号））によって順序を示す。
【０２１９】
前処理では、反応容器への糖供与体溶液の注入処理を行う。この糖供与体の注入処理は、前記（動作１１）の試薬瓶の内容の反応容器への移動動作に従って、糖供与体溶液の試薬瓶から反応容器に移す（第４ラウンド１）。液体量は、糖供与体を例えば27mg溶かした分量とする。前記（動作９）の反応容器、回収フラスコの震盪動作に従って、反応容器を震盪させる。震盪時間は例えば１分とする（第４ラウンド２）。
【０２２０】
この後、前記した第１ラウンドに戻り処理を繰り返す。
【０２２１】
上記した動作例では、（Ａ）前準備、（Ｂ）第１ラウンドのグリコシル化反応、（Ｃ）第１ラウンドの後処理、（Ｄ）第２ラウンドのキャッピング反応、（Ｅ）第３のラウンドの脱保護反応、（Ｆ）第４ラウンドの前処理の繰り返しを、一つの反応容器について行う場合について示している。
【０２２２】
本発明は、上記一連の処理の繰り返しを一つの反応容器に限らず複数の反応容器についても適用し、何れか一つの反応容器における糖鎖合成化学反応で攪拌処理を行う間に、他の反応容器の糖鎖合成化学反応において震盪以外の処理を行うことで、複数の糖鎖合成化学反応をそれぞれ独立かつ並行して行う。
【０２２３】
以下、上記の第２の態様の自動合成装置の一構成例について図７を用いて説明する。図７は、前記図６に示した構成例の図とほぼ同様であり、主に複数の反応容器が設けられる点で相違する。なお、図７では２つの反応容器の場合について説明する。
【０２２４】
図７に示す構成例において、図６に示す構成例と相違する部分は、糖鎖合成化学反応を独立して並行して行う複数の反応容器１，１′、各反応容器１，１′を覆い包むアルミブロック２，２′、複数の反応容器１，１′及びアルミブロック２，２′を同時に固定する支台３、各アルミブロック２，２′内に設けられる温度設定機構４，４′、各反応容器１，１′に各パイプ３７，３７′を介して接続されるマニホールド３５，３５′、各マニホールド３５，３５′に設けられる複数組の安全弁３１，３１′、複数の電磁弁３２，３２′，３３，３３′及び複数の気圧計３４，３４′である。ＰＣ等の制御手段４２は、これらコックの開閉を制御することで、複数の反応容器１，１′によって糖鎖合成化学反応を独立して並行して行う。
【０２２５】
また、複数の反応容器１，１′において糖鎖合成化学反応を行うために、前記した各動作は、以下の機能を備える。
【０２２６】
（動作２）シリンジの中身の反応容器への移動：
この動作では、指定すべきパラメータとして、液体移動速度（１度にまとめて注入する液体量／注入時間間隔）の他に、反応容器の選択が加わる。なお、移動量そのものはシリンジ内容の全てである。
【０２２７】
（動作３）反応容器の内容物のシリンジへの吸い取り動作：
この動作は、指定すべきパラメータとして、吸引量の他に、反応容器の選択が加わる。
【０２２８】
（動作８）反応容器の温度制御：
この動作は、指定すべきパラメータとして、制御温度の他に、反応容器の選択が加わる。
【０２２９】
（動作９）反応容器、回収フラスコの震盪動作：
この動作は、指定すべきパラメータとして、反応容器か回収フラスコの選択、震盪の強度、震盪時間がある。なお、反応容器を震盪する場合には、複数の反応容器は同時に震盪するため、反応容器は選択できない。
【０２３０】
（動作１０）反応容器内の気圧制御動作：
この動作は、指定すべきパラメータとして、設定気圧の他に、反応容器の選択が加わる。
【０２３１】
（動作１１）試薬瓶の内容の反応容器への移動動作：
この動作は、指定すべきパラメータとして、試薬瓶、試薬量の他に、反応容器の選択が加わる。
【０２３２】
（動作１３）反応容器の内容のシリカゲルカラムへの移動動作：
この動作は、指定すべきパラメータとして、量の他に、反応容器の選択が加わる。
【０２３３】
（動作１４）回収フラスコの内容の反応容器への移動動作：
この動作は、指定すべきパラメータとして、量の他に、反応容器の選択が加わる。
【０２３４】
（動作１５）反応容器の内容のエバポレーション動作：
この動作は、指定すべきパラメータとして、温度、時間、溶媒種類他に、反応容器の選択が加わる。
【０２３５】
（動作１６）反応容器の内容の廃棄：
この動作は、指定すべきパラメータとして、量の他に、反応容器の選択が加わる。
【０２３６】
（動作１８）反応容器、回収フラスコの洗浄動作：
この動作は、指定すべきパラメータとして、反応容器か回収フラスコの選択がある。反応容器の場合には、反応容器の選択が加わる。
【０２３７】
（動作２５）微量容器への抽出動作：
この動作は、指定すべきパラメータとして、反応容器か回収フラスコの選択がある。反応容器の場合には、反応容器の選択が加わる。
【０２３８】
以下、２つの糖鎖合成化学反応を独立して並行して行う場合の各工程の関係を、表１〜表９に示す。各反応中の工程は前記した（Ａ）〜（Ｆ）の処理と同様である。
【０２３９】
【表５】
2006151948.tif 000007
【０２４０】
【表６】
2006151948.tif 000008
【０２４１】
【表７】
2006151948.tif 000009
【０２４２】
【表８】
2006151948.tif 000010
【０２４３】
【表９】
2006151948.tif 000011
【０２４４】
【表１０】
2006151948.tif 000012
【０２４５】
【表１１】
2006151948.tif 000013
【０２４６】
【表１２】
2006151948.tif 000014
【０２４７】
【表１３】
2006151948.tif 000015
【０２４８】
複数の糖鎖合成化学反応において、一つの反応が含む長時間（例えば２時間）の震盪を利用し、この震盪の間において、他の反応の「震盪」以外の処理を進行させることで、複数の反応を並行して行う。これらの処理は、工程レベルで見ると時間的にシフトしているが、糖鎖合成化学反応全体として見ると、同時進行と言うこともできる。
【０２４９】
複数の糖鎖合成化学の個数は上記した２個に限らず３以上とすることもできる。例えば３つの糖鎖合成化学反応を進行させるのであれば、１つの反応系が震盪以外の処理を行っている間、他の２つの反応系が長時間（例えば２時間）の震盪になるよう、時間的動作状態の関係をコントロールすることになる。
【０２５０】
複数の反応容器の震盪機構は共通しているため、長時間の震盪動作中に、例えば他の反応容器のニードル動作等のための短時間の震盪を中断する必要がある。とはいえ、この短時間の震盪中断は、長時間の震盪の効果に影響を及ぼすものではない。
【０２５１】
なお、上記した例では、同じ化学反応を複数行う例を示しているが、上記例に限らず、別の糖供与体を使った反応、別の反応活性化剤を用いた反応としてもよい。この場合には、試薬瓶に必要な試薬（糖供与体／反応活性化剤）を用意しておく。
【０２５２】
本発明の構成は、他の多くの構成を変更することなく共通に用い、反応容器の個数を増加させるだけで構成することができるため、反応数と同数の複数台の装置を用意する構成と比較して、省スペースとすることができる。
【産業上の利用可能性】
【０２５３】
本発明は、主に生化学の実験分野に適用することができ、糖鎖解析装置の標品作成、合成した糖鎖を用いての研究、あるいは糖鎖のみならず有機化合物合成を行う過程において利用または使用することができる。
【図面の簡単な説明】
【０２５４】
【図１】本発明の糖鎖合成方法の概略手順を説明するための図である。
【図２】PEG付き糖受容体を説明するための図である。
【図３】本発明の糖鎖合成に用いる糖供与体の例を説明するための図である。
【図４】本発明の糖鎖合成に用いる糖供与体の他の例を説明するための図である。
【図５】本発明の糖鎖合成に用いる脱保護剤の例を説明するための図である。
【図６】本発明の糖鎖の合成方法を自動で実現する自動合成装置の一構成例を説明するための図である。
【図７】本発明の糖鎖の合成方法を自動で実現する自動合成装置の他の構成例を説明するための図である。
【符号の説明】
【０２５５】
１，１′…反応容器、２，２′…アルミブロック、３…支台、４，４′…温度設定機構、５…モーター、６…駆動メカニズム、７…シリカゲルカラム受け台、８…密閉ケース、１１…カラム移動機構、１２…光センサ、１３…シリカゲルカラム、１４ａ…未使用カラムストックスペース、１４ｂ…使用済みカラム破棄スペース、１５…回収フラスコ、１６…ドレイン、１７…回収フラスコ・ドレイン移動機構、１８…密閉ケース内圧制御機構、１９…試薬瓶、２０…ニードル、２１，２２…シリンジ、２３，２４…シリンジ動作機構、２５…ニードル平行移動手段、２６…ニードル上下移動手段、２７，２８…液体チューブ、２９…気体チューブ、３０…窒素ガスボンベ、３１，３１′…安全弁、３２，３２′，３３…電磁弁、３４，３４′…気圧計、３５，３５′…マニホールド、３６…減圧ポンプ、３７，３７′…パイプ、３９ａ…微量容器保持手段、３９ｂ…微量容器、４１…気体トラップ、４２…制御手段、４３…インタフェース。
【図１】
2006151948.tif 000016
【図２】
2006151948.tif 000017
【図３】
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【図４】
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【図５】
2006151948.tif 000020
【図６】
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【図７】
2006151948.tif 000022