(57)【要約】  本発明は、プロドラッグの形態での抗癌薬投与のための脂質ベース薬剤送達系に関するものであり、前記プロドラッグはさらに有機基が加水分解的に開裂して分子内反応を生じることができる程度に、細胞外ホスホリパーゼＡ２の基質であり、前記系はリポポリマーおよび／または糖脂質を含むことで、系の表面上に親水性鎖を提供する。さらに、脂質プロドラッグおよび薬剤担体を、組み込まれた薬剤と組み合わせて用いることができる。その薬剤送達系を含む医薬組成物を、例えば癌、感染状態および炎症状態などの各種障害、すなわち患部組織での細胞外ＰＬＡ２活性のレベル上昇に関連するかそれによって生じる障害および疾患の診断および標的化治療において用いることができる。
2009530318.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
薬剤物質投与用の脂質ベース薬剤送達系であって、前記薬剤物質が前記系に組み込まれており、前記系が（Ｉ）（ａ）少なくとも２個の炭素原子を有する有機基および（ｂ）親水性部分を含む脂質誘導体であって、前記有機基が加水分解的に開裂して分子内環化反応を生じる程度に、細胞外ホスホリパーゼＡ２の基質である前記脂質誘導体、ならびに（ＩＩ）前記系の表面上に親水性鎖を提供するためのリポポリマーおよび／または糖脂質を含む脂質ベース薬剤送達系。
【請求項２】
前記脂質誘導体がさらに、ホスホリパーゼＡ２の加水分解活性によって実質的に影響されず残ることによって、分子内環化反応を行う有機酸断片もしくは有機アルコール断片およびリゾ脂質断片を生じる脂肪族基を含む請求項１に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【請求項３】
前記脂質誘導体がプロドラッグであり、それによって前記薬剤物質がプロドラッグとして前記系に組み込まれている請求項１に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【請求項４】
前記系がさらに、少なくとも１種類の第２の薬剤物質を含む請求項１から３のうちのいずれか１項に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【請求項５】
前記リポポリマーおよび／または糖脂質が前記脂質誘導体の一部によって表される請求項１に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【請求項６】
前記リポポリマーのポリマーが、ポリエチレングリコール、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸）−ポリ（グリコール酸）コポリマー、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリメトキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミドおよび誘導体化セルロース類から選択される請求項１から５のうちのいずれか１項に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【請求項７】
加水分解的に開裂可能である前記有機基が、補助薬剤物質であるか、または前記少なくとも１種類の第２の薬剤物質用の効率改良剤である請求項１から６のうちのいずれか１項に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【請求項８】
前記分子内環化時に放出される前記有機部分が、補助薬剤物質であるか、または前記少なくとも１種類の第２の薬剤物質用の効率改良剤である請求項１から６のうちのいずれか１項に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【請求項９】
前記脂質誘導体が下記式の脂質誘導体である請求項１から８のうちのいずれか１項に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【化１】
2009530318.tif 000009
［式中、
ＲＤは、ＰＬＡ２加水分解時に分子内環化を促進するエステル部分（（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）Ｄ１）であり、ｎは０〜５、好ましくは０〜２の整数であり、Ｄ１は有機部分であり、ＭｅＯＨまたはＥｔＯＨであることができ、好ましくは生理活性を有する有機部分である。ＲＤにおけるＣＨ２基中の水素は、分子内環化促進基、例えばカルボニルに対してαのフッ素で置換されていることができる。ＲＤにおけるＣＨ２基は、特にはカルボニル基に対してα位において、例えばＯ、Ｓ、ＮＨまたはそれらの生物学的等価体で置換されていることができる。あるいはＲＤは、脱離基、例えばヨウ素を含む有機部分であり、すなわちＰＬＡ２加水分解時に分子内環化を促進することができる有機部分であり；
ＸおよびＺは独立に、Ｏ、ＣＨ２、ＮＨ、ＮＭｅ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２、ＯＳ（Ｏ）２、ＯＰ（Ｏ）２、ＯＰ（Ｏ）２Ｏ、ＯＡｓ（Ｏ）２およびＯＡｓ（Ｏ）２Ｏから選択され；
Ｙは、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ、ＯＣ（Ｓ）、ＳＣ（Ｏ）、ＳＣ（Ｓ）、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＮＣ（Ｏ）Ｏから選択され、Ｙは酸素、硫黄、窒素またはカルボニル炭素原子を介してＲ２に連結されており；
Ｒ１は、式Ｙ１Ｙ２の脂肪族基であり、Ｙ１は、−（ＣＨ２）ｎ１−（ＣＨ＝ＣＨ）ｎ２−（ＣＨ２）ｎ３−（ＣＨ＝ＣＨ）ｎ４−（ＣＨ２）ｎ５−（ＣＨ＝ＣＨ）ｎ６−（ＣＨ２）ｎ７−（ＣＨ＝ＣＨ）ｎ８ｒ−（ＣＨ２）ｎ９であり、ｎ１＋２ｎ２＋ｎ３＋２ｎ４＋ｎ５＋２ｎ６＋ｎ７＋２ｎ８＋ｎ９の合計が２〜２９の整数であり；ｎ１は０であるか１〜２９の整数であり、ｎ３は０であるか１〜２０の整数であり、ｎ５は０であるか１〜１７の整数であり、ｎ７は０であるか１〜１４の整数であり、ｎ９は０であるか１〜１１の整数であり；ｎ２、ｎ４、ｎ６およびｎ８はそれぞれ独立に０または１であり；Ｙ２はＣＨ３、ＣＯ２Ｈ、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、Ｐ（Ｏ）２ＯＨ、ＯＰ（Ｏ）２ＯＨ、ＯＨ、ＮＨ２であり；Ｙ１−Ｙ２の各炭素は独立にハロゲンおよび脂肪族置換基で置換されていても良く；
Ｒ２は、少なくとも２個の炭素原子を有する有機基であり；
Ｒ３は、ホスファチジン酸（ＰＯ２−ＯＨ）、ホスファチジン酸の誘導体およびリン酸に対する生物学的等価体およびそれらの誘導体から選択される。］
【請求項１０】
前記脂質誘導体が下記式の脂質誘導体である請求項１から８のうちのいずれか１項に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【化２】
2009530318.tif 000010
［式中、
Ｄ２は、生理活性を有する有機部分、すなわち最も広い意味での薬剤物質であり、ｎは０〜５、好ましくは０〜２の整数であり、ＣＨ２基における水素は、分子内環化促進基、例えばカルボニルに対してαのフッ素で置換されていることができ；
Ｚは、Ｏ、ＣＨ２、ＮＨ、ＮＭｅ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２、ＯＳ（Ｏ）２、ＯＰ（Ｏ）２、ＯＰ（Ｏ）２Ｏ、ＯＡｓ（Ｏ）２およびＯＡｓ（Ｏ）２Ｏから選択され；
ＹはＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ、ＯＣ（Ｓ）、ＳＣ（Ｏ）、ＳＣ（Ｓ）、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＮＣ（Ｏ）Ｏから選択され、Ｙは酸素、硫黄、窒素またはカルボニル炭素原子を介してＲ２に連結されており；
Ｒ２は、少なくとも２個の炭素原子を有する有機基であり；
Ｒ３は、ホスファチジン酸（ＰＯ２−ＯＨ）、ホスファチジン酸の誘導体およびリン酸に対する生物学的等価体およびそれらの誘導体から選択される。］
【請求項１１】
Ｒ２が少なくとも２個の炭素原子の長さの脂肪族基である請求項９または１０に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【請求項１２】
Ｒ２が式Ｙ１Ｙ２の基である請求項１１に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【請求項１３】
前記脂質の少なくとも一部が請求項９で定義の式のものであり、Ｒ３がホスファチジン酸の誘導体であり、それに対してポリエチレングリコール、ポリ（乳酸）、ポリ（グリコール酸）、ポリ（乳酸）−ポリ（グリコール酸）コポリマー、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリメトキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミドおよび誘導体化セルロース類から選択されるポリマーが共有結合的に結合している請求項１から１２のうちのいずれか１項に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【請求項１４】
前記脂質誘導体が総脱水された系の５〜１００ｍｏｌ％を構成している請求項１から１３のうちのいずれか１項に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【請求項１５】
前記リポポリマーが総脱水された系の２〜５０ｍｏｌ％を構成している請求項１から１４のうちのいずれか１項に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【請求項１６】
前記系がリポソームの形態のものである請求項１から１５のうちのいずれか１項に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【請求項１７】
前記少なくとも１種類の第２の薬剤物質が、（ｉ）抗腫瘍薬、（ｉｉ）抗生物質および抗真菌薬または（ｉｉｉ）抗炎症剤から選択される治療活性および／または予防活性物質である請求項１から１６のうちのいずれか１項に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【請求項１８】
請求項１から１７のうちのいずれか１項に記載の薬剤送達系および適宜に製薬上許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１９】
医薬品として使用される請求項１から１７のうちのいずれか１項に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【請求項２０】
哺乳動物組織での細胞外ホスホリパーゼＡ２活性における局所上昇に関連する疾患または状態の治療用の医薬品の製造のための、請求項１から１７のうちのいずれか１項に記載の脂質ベース薬剤送達系の使用。
【請求項２１】
前記疾患または状態が炎症状態および癌からなる群から選択される請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
癌の種類が、脳腫瘍、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巣癌、白血病、リンパ腫、肉腫および癌腫からなる群から選択される請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
細胞外ホスホリパーゼＡ２活性における前記上昇が対象組織での活性の正常レベルと比較して少なくとも２５％である請求項２１から２２のうちのいずれか１項に記載の使用。
【請求項２４】
前記脂質誘導体が下記式の脂質誘導体である請求項１から８のうちのいずれか１項に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【化３】
2009530318.tif 000011
［式中、
ＲＤは、ＰＬＡ２加水分解時に分子内環化を促進するエステル部分（（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）Ｄ１）であり、ｎは０〜５、好ましくは０〜２の整数であり、Ｄ１は有機部分であり、ＭｅＯＨまたはＥｔＯＨであることができ、好ましくは生理活性を有する有機部分である。ＲＤにおけるＣＨ２基中の水素は、分子内環化促進基により、例えばカルボニルに対してαのフッ素により置換されていることができる。ＲＤにおけるＣＨ２基は、特にはカルボニル基に対してα位での、例えばＯ、Ｓ、ＮＨまたはそれらの生物学的等価体で置換されていることができる。あるいはＲＤは、脱離基、例えばヨウ素を含む有機部分であり、すなわちＰＬＡ２加水分解時に分子内環化を促進することができる有機部分であり；
Ｘ＝Ｙであり；
Ｙは、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ、ＯＣ（Ｓ）、ＳＣ（Ｏ）、ＳＣ（Ｓ）、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＮＣ（Ｏ）Ｏから選択され、Ｙは酸素、硫黄、窒素またはカルボニル炭素原子を介してＲ２に連結されており；
Ｚは、Ｏ、ＣＨ２、ＮＨ、ＮＭｅ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２、ＯＳ（Ｏ）２、ＯＰ（Ｏ）２、ＯＰ（Ｏ）２Ｏ、ＯＡｓ（Ｏ）２およびＯＡｓ（Ｏ）２Ｏから選択され；
Ｒ１は、式Ｙ１Ｙ２の脂肪族基であり、Ｙ１は、−（ＣＨ２）ｎ１−（ＣＨ＝ＣＨ）ｎ２−（ＣＨ２）ｎ３−（ＣＨ＝ＣＨ）ｎ４−（ＣＨ２）ｎ５−（ＣＨ＝ＣＨ）ｎ６−（ＣＨ２）ｎ７−（ＣＨ＝ＣＨ）ｎ８ｒ−（ＣＨ２）ｎ９であり、ｎ１＋２ｎ２＋ｎ３＋２ｎ４＋ｎ５＋２ｎ６＋ｎ７＋２ｎ８＋ｎ９の合計が２〜２９の整数であり；ｎ１は０であるか１〜２９の整数であり、ｎ３は０であるか１〜２０の整数であり、ｎ５は０であるか１〜１７の整数であり、ｎ７は０であるか１〜１４の整数であり、ｎ９は０であるか１〜１１の整数であり；ｎ２、ｎ４、ｎ６およびｎ８はそれぞれ独立に０または１であり；Ｙ２はＣＨ３、ＣＯ２Ｈ、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、Ｐ（Ｏ）２ＯＨ、ＯＰ（Ｏ）２ＯＨ、ＯＨ、ＮＨ２であり；Ｙ１−Ｙ２の各炭素は独立にハロゲンおよび脂肪族置換基で置換されていても良く；
Ｒ２は、少なくとも２個の炭素原子を有する有機基であり；
Ｒ３は、ホスファチジン酸（ＰＯ２−ＯＨ）、ホスファチジン酸の誘導体およびリン酸に対する生物学的等価体およびそれらの誘導体から選択される。］
【請求項２５】
Ｒ２が少なくとも７個の炭素原子の長さの脂肪族基である請求項２３に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【請求項２６】
Ｒ２が式Ｙ１Ｙ２の基である請求項１１に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【請求項２７】
前記系がリポソームの形態のものである請求項１および２６に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【請求項２８】
前記薬剤物質が、（ｉ）抗腫瘍薬、（ｉｉ）抗生物質および抗真菌剤または（ｉｉｉ）抗炎症薬から選択される治療上および／または予防上活性な物質である請求項１から８、２４から２７のうちのいずれか１項に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【請求項２９】
請求項１から８および２４から２８のうちのいずれか１項に記載の薬剤送達系および適宜に製薬上許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項３０】
医薬品として使用される請求項１から８および２４から２８のうちのいずれか１項に記載の脂質ベース薬剤送達系。
【請求項３１】
哺乳動物組織での細胞外ホスホリパーゼＡ２活性における局所上昇に関連する疾患または状態の治療用の医薬品の製造のための、請求項１から８および２４から２８のうちのいずれか１項に記載の脂質ベース薬剤送達系の使用。
【請求項３２】
前記疾患または状態が炎症状態および癌からなる群から選択される請求項３１に記載の使用。
【請求項３３】
癌の種類が、脳腫瘍、乳癌、肺癌、結腸癌、卵巣癌、白血病、リンパ腫、肉腫および癌腫からなる群から選択される請求項３２に記載の使用。
【請求項３４】
細胞外ホスホリパーゼＡ２活性における前記上昇が対象組織での活性の正常レベルと比較して少なくとも２５％である請求項３１から３２のうちのいずれか１項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、例えば癌、感染状態および炎症状態などの各種障害、すなわち患部組織での細胞外ＰＬＡ２活性のレベル上昇に関連するかそれによって生じる障害および疾患の治療で用いられる脂質ベース医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
モノエーテルリゾリン脂質およびアルキルホスホコリン類は、効果的な抗癌剤であることが知られている。（例えばＵＳ３７５２８８６および後の参考文献を参照）。研究が進んでいるモノエーテルアルキルホスホコリンの一つの具体例は、１−Ｏ−オクタデシル−２−Ｏ−メチル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＥＴ１８−ＯＣＨ３）である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
癌細胞に対するエーテル−脂質の毒性作用のいくつかの機序が、癌細胞でのアルキル開裂格子の欠如に関与することが提案されている。これは、膜欠損および恐らくはそれに続く細胞溶解を誘発する細胞膜におけるエーテル−脂質の蓄積を生じる。他の可能な作用機序には、細胞内タンパク質リン酸化に対する効果および脂質代謝の障害などがある。正常細胞は代表的には、その細胞がエーテル−脂質の毒性効果を回避できるようにするアルキル開裂酵素を有する。しかしながら、例えば赤血球などの一部の正常細胞は、癌細胞のように、エーテル脂質の破壊的効果を回避する手段を持たない。従って、エーテル−脂質の治療的使用には、毒性効果から正常細胞を保護し、エーテル脂質を患部組織に送ることができる効果的な薬剤送達系が必要である。
【０００４】
ＵＳ５９８５８５４、ＵＳ６０７７８３７、ＵＳ６１３６７９６およびＵＳ６１６６０８９には、過剰細胞内酵素活性に関係するヒトでの状態または疾患を治療する上で特に有用である細胞への浸透力が高いプロドラッグが記載されている。そのプロドラッグは、リゾリン脂質のＣ−２エステルであることができる。そのような薬剤は、細胞内ホスホリパーゼＡ２によって開裂されるように設計されている。
【０００５】
上記の内容を鑑みても、新規な薬剤送達系、特には癌および炎症などの状態を治療もしくは改善できる薬剤物質の標的化送達のための薬剤送達系がますます必要とされている。癌治療用の薬剤が概して組織に対して特に有害である可能性があるため、患部組織以外の場所での薬剤物質または複数の薬剤物質の放出を抑制することが特に重要である。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、細胞外ＰＬＡ２活性の局所活性を特徴とする疾患の治療または改善において特に有用である薬剤送達系に関するものである。
【０００７】
本願に記載され、図１に示した細胞外ＰＬＡ２によるリポソーム薬剤標的化の新たな原理には、ＰＬＡ２加水分解時に分子内環化を行う脂質ベースのプロドラッグが関与する。この場合、特異的な脂質類縁体化合物を、ポリマーまたは多糖鎖「グラフト」担体リポソームに組み込むことができ、それは細胞外ホスホリパーゼを介した加水分解によって活性薬剤に変わるプロドラッグとして働く。可能な例には、ＰＬＡ２加水分解後に環化して５員環もしくは６員環を形成することにより、図２に示した抗癌活性を示すことが認められている脂質の脂質類縁体を生じるある種の脂質含有エステルであることができると考えられるが、それに限定されるものではない。
【０００８】
図１に示した細胞外ホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）による薬剤標的化、放出および吸収の原理は、薬剤が脂質に付着し、患部標的組織で高濃度で存在する細胞外ＰＬＡ２による加水分解の結果として、分子内環化後に遊離する脂質ベースのプロドラッグも関与する場合に適用することができる。可能な例には、図３および図４に示したものがあるが、これらの例に限定されるものではない。このようにして、治療上活性な物質、例えばプロスタグランジン類、ペプチド類、抗癌エーテル脂質またはレチノール誘導体が、所望の標的部位で放出される。特に興味深い薬剤には、遊離アルコール基を有する薬剤またはそれの生物学的等価体があるが、そのような薬剤に限定されるものではない。さらに、加水分解生成物の中には、発生した抗癌薬の細胞内への輸送を促進する局所浸透性促進剤として働き得るものである。脂質ベースの系を含む医薬組成物は、例えば癌、感染状態および炎症状態の治療において治療に用いることができる。
【０００９】
本発明は、例えばリポソームまたはミセルなどの脂質ベースの担体の形態での、１位でのアルキル連結またはアシル連結および／または別の有機部分およびリン脂質頭部基もしくはそれの生物学的等価体からの正しい距離および立体化学を有する位置でのアシル連結または別のＰＬＡ２分解性結合、例えばＰＬＡ２加水分解可能なエステルの生物学的等価体を含むグリセロリン脂質などの新規な脂質二重層形成性脂質からなるそのような送達系を提供する。代表的には、これは、脂質頭部基にグラフトされたポリマーまたは多糖鎖を有する資質などの１位もしくは３位における骨格置換基を有するかそれを持たないグリセリン骨格を有するリン脂質としてであろう。さらに、担体系は、血管循環時間の増加と結果的に患部標的組織での蓄積を生じる例えばリポポリマー類、糖脂質類およびステロール類などの脂質二重層安定化成分を含むことができる。担体が例えば癌細胞などの治療作用の標的部位に到達すると、アシル連結のＰＬＡ２触媒加水分解によって、治療活性成分、代表的には加水分解で環化するリソエーテル脂質およびエステル連結誘導体が放出される。癌細胞にはほとんど存在しないアルキル開裂酵素とは矛盾して、癌組織では細胞外ＰＬＡ２活性が高い。さらに、細胞外ＰＬＡ２活性は炎症組織などの患部領域で高い。
【００１０】
そこで本発明は、リゾ脂質誘導体またはＰＬＡ２加水分解の結果として分子内環化反応時に薬剤物質を放出可能な脂質に結合することができる薬剤物質から選択される活性薬剤物質の投与のための脂質ベース薬剤送達系を提供する。従って、活性薬剤物質は、プロドラッグの形態での脂質ベースの系中に存在する。リゾ脂質誘導体に関しては、相当するプロドラッグは（ａ）少なくとも２子の炭素原子の長さの脂肪族基および少なくとも２個の炭素原子を有する有機基および（ｂ）親水性部分を有する脂質誘導体であり、前記プロドラッグはさらに、有機基が加水分解的に開裂分離することができ、一方で、脂肪族基は実質的に影響を受けないままで残り、それによって活性薬剤物質が分子内環化を行うリゾ脂質誘導体の形態で放出される程度での、細胞外ホスホリパーゼＡ２に対する基質であり、前記系はリポポリマーおよび／または糖脂質を含むことで、系の表面上に親水性鎖を提供する。
【００１１】
本発明はさらに、少なくとも一つの第２の薬剤物質の投与のための脂質ベース薬剤送達系であって、前記少なくとも一つの第２の薬剤物質が前記系に組み込まれており、前記系は（ａ）少なくとも２個の炭素原子を有する有機基および（ｂ）互いに関して正しい距離および正しい立体化学で配置された親水性部分を有する脂質誘導体を含み、前記脂質誘導体はさらに、有機基が加水分解的に開裂することで、分子内環化を行うことができる有機酸断片もしくは有機アルコール断片およびリゾ脂質断片を生じることができる程度での、細胞外ホスホリパーゼＡ２の基質であり、前記系がリポポリマーおよび／または糖脂質を含むことで、系の表面上に親水性鎖を提供するものである薬剤送達系を提供する。
【００１２】
そこで本発明は、細胞外ホスホリパーゼによって特異的およびごく部分的に開裂されることができ、同時にリポポリマーおよび／または糖脂質を含む脂質誘導体などのリポソーム類（およびミセル類）が、哺乳動物の細網内皮系によって認識されず、しかも細胞壁を貫通せずに、細胞外ＰＬＡ２活性が高い標的組織に到達するうえで十分に長く血流中を循環する特性を有することによりリポソームの脂質誘導体が細胞外ＰＬＡ２によって特異的に開裂されるて所望の箇所で治療上有効成分を放出するという驚くべき知見を利用するものである。
【００１３】
本発明はさらに、本明細書に記載の薬剤送達系の構成要素として特に有用な新規な脂質誘導体の種類を提供するものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明の重要な特徴の一つは、ある種の脂質 誘導体が哺乳動物患部組織の細胞外の箇所で明瞭な形で細胞外ＰＬＡ２によって開裂されることがわかった点である。細胞外ＰＬＡ２がモノエーテル／モノエステル脂質誘導体ならびにグリセリン骨格で置換基を有する脂質を開裂させることができ、それが脂質誘導体を生じ、その誘導体がそれ自体でまたは他の活性化合物と組み合わせて、治療効果を示すことが認められた。
【００１５】
脂質誘導体
従って、本発明の薬剤送達系（リポソームまたはミセル）は、ある場合では、（ａ）少なくとも２個の炭素原子の長さの脂肪族基および少なくとも２個の炭素原子を有する有機基および（ｂ）親水性部分を有する脂質誘導体に依るものであり、前記プロドラッグはさらに、有機基が加水分解的に開裂して分子内環化を生じることができ、一方で、脂肪族基は実質的に影響を受けずにそのまま残り、それによって活性薬剤物質が環化リゾ脂質誘導体の形態で放出される程度での、細胞外ホスホリパーゼＡ２の基質であり、前記系はリポポリマーおよび／または糖脂質を含むことで、系の表面上に親水性鎖を提供するものである。
【００１６】
「脂質」および「リゾ脂質」（リン脂質の文脈で）という用語は当業者には公知の用語であるが、強調すべき点として、本明細書の記述および特許請求の範囲の範囲内で、「脂質」という用語は、下記式の置換グリセリンを意味するものである。
【化１】
2009530318.tif 000003
【００１７】
式中、
ＲＡおよびＲＢは、脂肪酸部分（Ｃ９−３０−アルキル／アルキレン／アルキルジエン／アルキルトリエン／アルキルテトラエン−Ｃ（＝Ｏ）−）であり、ＲＣはホスファチジン酸（ＰＯ２−ＯＨ）またはホスファチジン酸の誘導体またはホスファチジン酸の生物学的等価体である。従って、基ＲＡおよびＲＢはエステル結合を介してグリセリン骨格に連結している。ＲＤは、エステル部分（（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）Ｄ１））であり、それはＰＬＡ２加水分解時に分子内環化を促進し、ｎは０〜５、好ましくは０〜２の整数であり、Ｄ１は有機部分、恐らくはＭｅＯＨまたはＥｔＯＨ、好ましくは生理活性を有する有機部分である。ＲＤでのＣＨ２基における水素は、分子内環化促進基、例えばカルボニルに対してα位のフッ素によって置換されていても良い。ＲＤでのＣＨ２基は、特にはカルボニル基に対してα位で、例えばＯ、Ｓ、ＮＨまたはそれらの生物学的等価体で置換されていても良い。あるいは、ＲＤは、例えばヨウ素などの脱離基、すなわちＰＬＡ２加水分解時に分子内環化を促進し得る有機部分を含む有機部分である。
【００１８】
「リゾ脂質」という用語は、ＲＢ脂肪酸基が存在しない（例えば加水分解的に開裂除去）脂質、すなわちＲＢが水素であるが、他の置換基が実質的に影響をうけていない上記式のグリセリン誘導体を意味するものである。脂質のリゾ脂質への変換は、酵素の作用下に、具体的には細胞ＰＬＡ２ならびに細胞外ＰＬＡ２の作用下に起こり得る。
【００１９】
「脂質誘導体」および「リゾ脂質誘導体」という用語は、それぞれ「脂質」および「リゾ脂質」の群に含まれる上記の可能な化合物の可能な誘導体を網羅するものである。生理活性脂質誘導体およびリゾ脂質誘導体の例が、ホウリハンらの報告（Houlihan， et al.， Med. Res. Rev.， 15， 3， 157-223）に挙げられている。従って、明らかなように、「誘導体」という語尾は、最も広い意味で理解されるべきである。
【００２０】
本願の範囲内で、脂質誘導体およびリゾ脂質は、上記の場合において、一定の機能上の基準（上記を参照）および／または構造的要件を満足するものである。特に言及すべき点として、好適な脂質誘導体の１例は、（ａ）少なくとも２、３、４、５、６、７、８、好ましくは少なくとも９個の炭素原子の長さの脂肪族基および少なくとも２、３、４、５、６、７、８、好ましくは少なくとも９個の炭素原子を有する有機基および（ｂ）親水性部分を有するものである。脂肪族基および有機基が正常な脂質における２つの脂肪酸部分に相当すること、そして親水性部分が（リン）脂質またはそれの生物学的等価体のリン酸部分に相当することは明らかであろう。
【００２１】
そこで、本発明の背後にある考え方は、哺乳動物身体の局所領域、特に患部組織での細胞外ＰＬＡ２活性のレベル上昇を活用することであることから、本発明の範囲内で利用可能な脂質誘導体は細胞外ＰＬＡ２の基質であるべきであり、すなわちその脂質誘導体は、脂肪酸に相当する有機基の加水分解的な酵素開裂を受けることができるものでなければならない。これは最も広い意味において、有機基およびリン脂質頭部基またはリン頭部基の生物学的等価体が、互いに関して正しい距離および正しい立体化学で配置されているべきであること、例えばリン脂質において有機基が２位にあり、または／および頭部基が３位にあることを意味する。細胞外ＰＬＡ２は、酵素綱（ＥＣ）３．１．１．４に属することが知られている。従って、（細胞外）ＰＬＡ２に言及する場合は、脂質における２位での脂肪酸に相当する有機基の加水分解開裂を誘発することができる、例えばリパーゼ類などのこの綱の全ての細胞外酵素であると理解すべきである。脂質ベース薬剤送達系（リポソーム類およびミセル類として）のある特定の利点は、細胞外ＰＬＡ２活性がモノマー基質と比較して組織化された基質に向かってかなり高くなるという点である。
【００２２】
細胞外ＰＬＡ２による加水分解性に対する必要条件を考慮すると、有機基（例えば脂肪族基）が好ましくは、細胞外ＰＬＡ２によって開裂可能である、好ましくは開裂してできた基がカルボン酸である、エステル官能基を介して連結されていることは明らかである。
【００２３】
さらに、本発明の重要な特徴は、脂質誘導体、すなわち細胞外ＰＬＡ２による開裂後のリゾ脂質誘導体の脂肪族基（脂質における１位の脂肪酸に相当する基）が、細胞外ＰＬＡ２の作用により実質的に影響されないというものである。「実質的に影響されない」とは、脂肪族基の完全性が保存され、細胞外ＰＬＡ２の作用下で開裂するのが脂肪族基（１位の脂肪族基）の１ｍｏｌ％未満、好ましくは０．１ｍｏｌ％未満であることを意味している。
【００２４】
本発明の薬剤送達系（リポソームまたはミセル）は、別の例では、（ａ）少なくとも２個の炭素原子を有する有機基および（ｂ）親水性部分を有する脂質誘導体に依るものであり、前記プロドラッグはさらに、有機基が加水分解的に開裂して分子内環化を起こすことができる程度の、細胞外ホスホリパーゼＡ２の基質であり、前記系がリポポリマーおよび／または糖脂質を含むことで、系の表面上に親水性鎖を提供する。
【００２５】
「脂質」という用語は、下記式のトリエステルを意味するものとする。
【化２】
2009530318.tif 000004
【００２６】
式中、
ＲＢは脂肪酸部分（Ｃ９−３０−アルキル／アルキレン／アルキルジエン／アルキルトリエン／アルキルテトラエン−Ｃ（＝Ｏ）−）であり、ＲＣはホスファチジン酸（ＰＯ２−ＯＨ）またはホスファチジン酸の誘導体またはホスファチジン酸の生物学的等価体である。従って、ＲＢはエステル結合を介してグリセリン骨格に連結されている。Ｄ２は生理活性を有する有機部分、すなわち最も広い意味での薬剤物質である。ｎは０〜５、好ましくは０〜２の整数である。ＣＨ２基中の水素は、分子内環化促進基、例えばカルボニルに対してαのフッ素で置換されていることができる。カルボニルに対してαであるＣＨ２基は、Ｏ、Ｓ、ＮＨまたはそれの生物学的等価体で置換されていることもできる。
【００２７】
一部の実施形態において、（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−Ｄ２は、ＲＤに等しいものであっても良い。
【００２８】
本発明の薬剤送達系に組み込む脂質誘導体のある好ましい種類は、下記式によって表すことができる。
【化３】
2009530318.tif 000005
【００２９】
本発明の薬剤送達系に組み込む脂質誘導体の別の好ましい種類は、下記式によって表すことができる。
【化４】
2009530318.tif 000006
【００３０】
式中、
ＲＤは、ＰＬＡ２加水分解時に分子内環化を促進するエステル部分（（ＣＨ２）ｎＣ（Ｏ）Ｄ１）であり、ｎは０〜５、好ましくは０〜２の整数であり、Ｄ１は有機部分であり、ＭｅＯＨまたはＥｔＯＨであることができ、好ましくは生理活性を有する有機部分である。ＲＤにおけるＣＨ２基中の水素は、分子内環化促進基、例えばカルボニルに対してαのフッ素で置換されていることができる。ＲＤにおけるＣＨ２基は、特にはカルボニル基に対してα位での、例えばＯ、Ｓ、ＮＨまたはそれらの生物学的等価体で置換されていることができる。あるいはＲＤは、脱離基、例えばヨウ素を含む有機部分であり、すなわちＰＬＡ２加水分解時に分子内環化を促進することができる有機部分である。
【００３１】
Ｄ２は、生理活性を有する有機部分、すなわち最も広い意味での薬剤物質である。ｎは０〜５、好ましくは０〜２の整数である。ＣＨ２基における水素は、分子内環化促進基、例えばカルボニルに対してαのフッ素で置換されていることができる。ＣＨ２基はさらに、特にカルボニル基に対してα位で、例えばＯ、Ｓ、ＮＨまたはそれらの生物学的等価体で置換されていることができる。
【００３２】
ＸおよびＺは独立に、ＯＣ（Ｏ）、Ｏ、ＣＨ２、ＮＨ、ＮＭｅ、Ｓ、Ｓ（Ｏ）、ＯＳ（Ｏ）、Ｓ（Ｏ）２、ＯＳ（Ｏ）２、ＯＰ（Ｏ）２、ＯＰ（Ｏ）２Ｏ、ＯＡｓ（Ｏ）２およびＯＡｓ（Ｏ）２Ｏから選択され、好ましくはＯ、ＮＨ、ＮＭｅおよびＣＨ２から、特にはＯおよびＣＨ２から選択され；
Ｙは、ＯＣ（Ｏ）、ＯＣ（Ｏ）Ｏ、ＯＣ（Ｏ）Ｎ、ＯＣ（Ｓ）、ＳＣ（Ｏ）、ＳＣ（Ｓ）、ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｏ、ＮＣ（Ｏ）Ｏから選択され、Ｙは酸素、硫黄、窒素またはカルボニル炭素原子を介して、好ましくはカルボニル炭素原子を介してＲ２に連結されており；
Ｒ１は、式Ｙ１Ｙ２の脂肪族基であり；
Ｒ２は、少なくとも２個、好ましくは少なくとも９個の炭素原子の長さを有する脂肪族基などの少なくとも２個の炭素原子を有する有機基であり、好ましくは式Ｙ１Ｙ２の基であり；
Ｙ１は、−（ＣＨ２）ｎ１−（ＣＨ＝ＣＨ）ｎ２−（ＣＨ２）ｎ３−（ＣＨ＝ＣＨ）ｎ４−（ＣＨ２）ｎ５−（ＣＨ＝ＣＨ）ｎ６−（ＣＨ２）ｎ７−（ＣＨ＝ＣＨ）ｎ８ｒ−（ＣＨ２）ｎ９であり、ｎ１＋２ｎ２＋ｎ３＋２ｎ４＋ｎ５＋２ｎ６＋ｎ７＋２ｎ８＋ｎ９の合計が２〜２９の整数であり；ｎ１は０であるか１〜２９の整数であり、ｎ３は０であるか１〜２０の整数であり、ｎ５は０であるか１〜１７の整数であり、ｎ７は０であるか１〜１４の整数であり、ｎ９は０であるか１〜１１の整数であり；ｎ２、ｎ４、ｎ６およびｎ８はそれぞれ独立に０または１であり；Ｙ２はＣＨ３、ＯＨ、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、Ｐ（Ｏ）２ＯＨ、ＯＰ（Ｏ）２ＯＨ、ＮＨ２またはＣＯ２Ｈであり；各Ｙ１−Ｙ２は独立にハロゲンおよび脂肪族置換基で置換されていても良いが、好ましくはＹ１−Ｙ２は未置換であり；
Ｒ３は、ホスファチジン酸（ＰＯ２−ＯＨ）、ホスファチジン酸の誘導体およびリン酸（phosphatic acid）に対する生物学的等価体、例えばＰ（Ｏ）Ｏ、Ｐ（Ｏ）２ＣＨ２、Ｓ（Ｏ）Ｏ、Ｓ（Ｏ）ＣＨ２、Ｃ（Ｏ）Ｏ、Ｃ（Ｏ）Ｎ、Ｃ（Ｓ）Ｏ、Ｐ（Ｓ）Ｏ２、Ｓ（Ｏ）２ＣＨ２およびそれらの誘導体（特には、親水性ポリマーまたは多糖類が共有結合的に結合しているホスファチジン酸誘導体）から選択される。
【００３３】
上記のように、好ましい実施形態は、Ｙが−ＯＣ（Ｏ）−であり、Ｙがカルボキシル原子を介してＲ２に連結されていることを示唆するものである。最も好ましい実施形態は、ＸおよびＺがＯであり、Ｙが−ＯＣ（Ｏ）−であり、Ｙがカルボキシル原子を介してＲ２に連結されていることを示唆する。これは、脂質誘導体が１−モノエーテル−２−モノエステル−リン脂質型の化合物であることを意味する。
【００３４】
脂質誘導体の別の好ましい群は、基ＸがＳであるものである。
【００３５】
１実施形態において、Ｒ１およびＲ２は、式Ｙ１Ｙ２の脂肪族基であって、Ｙ２がＣＨ３、ＯＨ、ＳＨ、Ｓ（Ｏ）２ＯＨ、Ｐ（Ｏ）２ＯＨ、ＯＰ（Ｏ）２ＯＨ、ＮＨ２またはＣＯ２Ｈであるが、好ましくはＣＨ３であり、Ｙ１が−（ＣＨ２）ｎ１（ＣＨ＝ＣＨ）ｎ２（ＣＨ２）ｎ３−（ＣＨ＝ＣＨ）ｎ４−（ＣＨ２）ｎ５−（ＣＨ＝ＣＨ）ｎ６−（ＣＨ２）ｎ７−（ＣＨ＝ＣＨ）ｎ８−（ＣＨ２）ｎ９であり；ｎ１＋２ｎ２＋ｎ３＋２ｎ４＋ｎ５＋２ｎ６＋ｎ７＋２ｎ８＋ｎ９の合計が２〜２９の整数であるものであり、すなわち脂肪族基Ｙ１Ｙ２は、長さが２〜２９個の炭素原子のものである。ｎ１は０に等しいか、１〜２３の整数であり；ｎ３は０に等しいか、１〜２０の整数であり；ｎ５は０に等しいか、１〜１７の整数であり；ｎ７は０に等しいか、１〜１４の整数であり；ｎは９は０に等しいか、１〜１１の整数であり；ｎ２、ｎ４、ｎ６および８はそれぞれ独立に０または１に等しい。
【００３６】
脂肪族基は不飽和であることができ、ハロゲン（フッ素、塩素、臭素、ヨウ素）およびＣ１−１０基（すなわち分岐脂肪族基を形成）で置換されていても良いが、Ｒ１およびＲ２としての脂肪族基は、１実施形態において好ましくは、飽和しており、未分岐であり、すなわちそれらは好ましくは、隣接する炭素原子間に二重結合を持たず、ｎ２、ｎ４、ｎ６およびｎ８のそれぞれが０に等しい。従って、Ｙ１は好ましくは（ＣＨ２）ｎ１である。より好ましくは（この実施形態では）、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立に（ＣＨ２）ｎ１ＣＨ３であり、最も好ましくは、（ＣＨ２）１７ＣＨ３または（ＣＨ２）１５ＣＨ３である。別の実施形態では、それらの基は１以上の二重結合を有することができ、すなわちそれらは不飽和で、ｎ２、ｎ４、ｎ６およびｎ８のうちの１以上が１であることができる。例えば、飽和炭化水素が１個の二重結合を有する場合、ｎ２は１であり、ｎ４、ｎ６およびｎ８はそれぞれ０であり、Ｙ１は（ＣＨ２）ｎ１ＣＨ＝ＣＨ（ＣＨ２）ｎ３である。ｎ１は０に等しいか、１〜２１の整数であり、ｎ３も０であるか、１〜２０の整数であり、ｎ１またはｎ３のうちの少なくとも一方が０以外である。
【００３７】
ある特定の実施形態において、脂質誘導体は、ＸおよびＺがＯであり、Ｒ１およびＲ２が独立にアルキル基である（ＣＨ２）ｎＣＨ３から選択され、ｎが１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８または２９、好ましくは１４、１５または１６、特には１４であり；Ｙが−ＯＣ（Ｏ）−であり、Ｙがカルボニル炭素原子を介してＲ２に結合しているモノエーテル脂質であるものである。
【００３８】
Ｒ３に相当する親水性部分（多くの場合「頭部基」とも称される）に関しては、ホスファチジン酸（ＰＯ２−ＯＨ）、ホスファチジン酸の誘導体およびリン酸に対する生物学的等価体およびそれらの誘導体に相当する非常に多様な基を用いることができると考えられる。明らかなように、Ｒ３に対する非常に重要な要件は、その基が細胞外ＰＬＡ２によるＲ２基（例えばＲ２−Ｃ（＝Ｏ）またはＲ２−ＯＨ）の酵素開裂を可能とすべきであるという点である。「ホスファチジン酸に対する生物学的等価体およびそれらの誘導体」は、そのような基が、ホスファチジン酸として、細胞外ＰＬＡ２による酵素的開裂を可能とすべきであることを示唆するものである。
【００３９】
Ｒ３は代表的には、ホスファチジン酸（ＰＯ２−ＯＨ）、ホスファチジルコリン（ＰＯ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）３）、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）、Ｎ−メチル−ホスファチジルエタノールアミン（ＰＯ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２ＮＨＣＨ３）、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトールおよびホスファチジルグリセリン（ＰＯ２−Ｏ−ＣＨ２ＣＨＯＨＣＨ２ＯＨ）から選択される。他の可能なホスファチジン酸誘導体は、グルタル酸、セバシン酸、コハク酸および酒石酸などのジカルボン酸が、ホスファチジルエタノールアミン類、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトールなどの末端窒素にカップリングしているものである。
【００４０】
脂質誘導体の一部がリポポリマーまたは糖脂質でもある特定の実施形態では、親水性ポリマーまたは多糖類は代表的には、脂質誘導体のホスファチジル部分に共有結合的に結合している。別の特定の脂質誘導体は、脂質の頭部基に結合したアシル鎖を含む。
【００４１】
好適であって、本発明の脂質誘導体に組み込まれることでリポポリマーを形成することができる親水性ポリマーは、容易に水に溶けることができ、小胞形成性脂質に共有結合的に結合することができ、毒性効果を生じることなくイン・ビボで耐容される（すなわち、生体適合性である）ものである。好適なポリマーには、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ乳酸（ポリラクチドとも称される）、ポリグリコール酸（ポリグリコリドとも称される）、ポリ乳酸−ポリグリコール酸コポリマー、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ポリメトキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミドおよびヒドロキシメチルセルロースまたはヒドロキシエチルセルロースなどの誘導体化セルロース類などがある。
【００４２】
好ましいポリマーは、約１００ダルトンから約１００００ダルトン以下、より好ましくは約３００ダルトンから約５０００ダルトンの分子量を有するものである。特に好ましい実施形態では、そのポリマーは、約１００から約５０００ダルトンの分子量、より好ましくは約３００から約５０００ダルトンの分子量を有するポリエチレングリコールである。特に好ましい実施形態では、前記ポリマーは、７５０ダルトンのポリエチレングリコール（ＰＥＧ（７５０））である。ポリマーは、そこにあるモノマーの数によって定義することもでき、本発明の好ましい実施形態は、３種類のモノマーからなるＰＥＧポリマー（約１５０ダルトン）などの少なくとも約３種類のモノマーのポリマーを用いるものである。
【００４３】
糖脂質またはリポポリマーが脂質誘導体の割合によって表される場合、そのような脂質誘導体（ポリマーまたは多糖類鎖を有する脂質誘導体）は代表的には、総脱水された脂質ベース系の１〜８０ｍｏｌ％、例えば２〜５０ｍｏｌ％または３〜２５ｍｏｌ％を構成する。しかしながら、ミセル組成物の場合、その割合は、総脱水された脂質ベース系のより高い値、例えば１〜１００ｍｏｌ％、１０〜１００ｍｏｌ％などであることができる。
【００４４】
ホスファチジル部分に共有結合的に連結されている（例えば、ホスファチジルエタノールアミンの末端窒素を介して）好ましいポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリラクチド（polyactide）、ポリグリコール酸、ポリラクチド−ポリグリコール酸コポリマーおよびポリビニルアルコールである。
【００４５】
本発明のある非常に興味深い側面は、基Ｒ２を修飾することで脂質誘導体の医薬的効果を変えることが可能であるという点である。理解すべき点として、Ｒ２は少なくとも２個の炭素原子を有する有機基（ある一定の長さ（少なくとも２個、好ましくは９個の炭素原子）を有する脂肪族基など）である必要があり、高い変動性が可能であり、例えばＲ２は必ずしも長鎖残基である必要はないが、より複雑な構造を表すものであることができる。
【００４６】
一般に、Ｒ２は、細胞外ＰＬＡ２によってそれが遊離できる環境にはかなり不活性であるか、Ｒ２が代表的には補助薬剤物質またはリゾ脂質誘導体および／または環境中に存在する他の（第２の）薬剤物質についての効率改良剤として、活性な医薬的役割を果たすことができると考えられる。
【００４７】
一部の実施形態において、Ｒ１基およびＲ２基は、長鎖残基、例えば脂肪酸残基（その脂肪酸は、基Ｙからのカルボニルを含む）である。これについては上記で詳細に説明してある。この下位群に含まれるＲ２としての補助薬剤物質の興味深い例には、多価不飽和酸類、例えばオレイン酸、リノール酸、リノレン酸、ならびにアラキドン酸誘導体はプロスタグランジン類、トロンボキサン類およびロイコトリエン類の作用などのホルモン作用の調節剤であることが知られていることからアラキドン酸の誘導体（Ｙからのカルボニルを含む）、例えばプロスタグランジンＥ１などのプロスタグランジン類がある。Ｒ２としての効率改良剤の例には、標的細胞膜の浸透性を高め、さらには細胞外ＰＬＡ２または活性薬剤物質もしくは第２の薬剤物質の活性を高めるものがある。それの例には、短鎖（Ｃ８−１２）脂肪酸がある。
【００４８】
しかしながら、有機基Ｒ２として他の基が有用である可能性があることも想定され、それには例えばビタミンＤ誘導体、ステロイド誘導体、レチノイン酸（全てのトランス−レチノイン酸、全てのシス−レチノイン酸、９−シス−レチノイン酸、１３−シス−レチノイン酸など）、コレカルシフェロールおよびトコフェロール類縁体、分岐脂肪族カルボン酸類（例：バルプロ酸およびＷＯ９９／０２４８５に記載のもの）、サリチル酸類（例：アセチルサリチル酸）、ステロイド系カルボン酸類（例：リゼルグ酸およびイソリゼルグ酸）、単複素環系カルボン酸類（例：ニコチン酸）および多複素環系カルボン酸類（例：ペニシリン類およびセファロスポリン類）、ジクロフェナク、インドメタシン、イブプロフェン、ナプロキセン、６−メトキシ−２−ナフチル酢酸などの薬理活性なカルボン酸類がある。
【００４９】
理解すべき点として、可能なＲ２基の各種の例は、基の名称ではなく個別の化学種の名称によって呼ばれている。さらに理解すべき点として、それらの可能な例は、有機基が脂質骨格に連結される上で介在する結合のカルボニル基またはオキシ基（上記式で「Ｙ」に相当）を含むことができる。これは当然のことながら、当業者には理解されるものである。
【００５０】
本発明の範囲内で使用される脂質誘導体の好適な例に関して一般式中で具体的に示されていなかったとしても、脂質誘導体のグリコール部分が置換されていることで、例えば細胞外ＰＬＡ２による開裂速度を変えたり、または単純に脂質誘導体を含むリポソームの特性を変えることが可能であることは理解しておくべきである。
【００５１】
さらに本発明は、好ましくは医薬組成物中に存在する医薬品として使用されるそのような脂質誘導体に関するものであり、さらには哺乳動物組織での細胞外ホスホリパーゼＡ２活性における局所上昇に関連する疾患または状態の治療用の医薬品の製造のための上記で定義の脂質誘導体の使用に関するものである。そのような疾患または状態は代表的には、癌、例えば脳腫瘍、乳癌、肺癌、結腸癌もしくは卵巣癌、または白血病、リンパ腫、肉腫、癌腫および炎症状態から選択される。本発明の組成物および使用は、細胞外ＰＬＡ２活性における上昇が、対象となる組織（その組織は哺乳動物、特にはヒトでのものである）での正常な活性レベルと比較して少なくとも２５％である場合で特に適用可能である。
【００５２】
プロドラッグとしての脂質誘導体
上記のように、本発明は、リゾ脂質誘導体および／または脂質に共有結合的に結合していることができる薬剤物質から選択される活性薬剤物質の投与のための脂質ベース薬剤送達系であって、前記活性薬剤物質がプロドラッグの形態で脂質ベースの系中に存在し、前記プロドラッグが（ａ）少なくとも２個の炭素原子を有する有機基および（ｂ）親水性部分を有する脂質誘導体であり、前記プロドラッグがさらに、前記有機基が加水分解的に開裂して分子内環化反応を生じることができ、それによって前記活性薬剤物質がリゾ脂質誘導体の形態で放出される程度に細胞外ホスホリパーゼＡ２の基質であり、前記系がリポポリマーおよび／または糖脂質を含むことにより、前記系の表面上に親水性鎖を提供する薬剤送達系を提供するものである。
【００５３】
「活性薬剤物質」という用語は、哺乳動物、特にヒトの身体において予防的または治療的効果を提供する化学体を意味する。従って本発明は、主として治療分野に関するものである。
【００５４】
「プロドラッグ」という用語は、通常の意味で理解されるべきであり、すなわち所期の薬剤物質に変換する（代表的には開裂によってであるが、イン・ビボでの化学変換によっても）目的でマスクまたは保護された薬剤として理解されるべきである。当業者であれば、「プロドラッグ」という用語の範囲はわかるであろう。
【００５５】
活性薬剤物質は、ＰＬＡ２加水分解時に分子内環化を起こすことができる脂質に薬剤を結合させることができる化学構造を有するリゾ脂質誘導体および／または治療効果を有する薬剤から選択され、そのことは特許請求の範囲を含む本説明から明らかになろう。
【００５６】
特許請求の範囲を含む本説明から理解されるように、脂質誘導体は多くの場合、上記で言及したプロドラッグを構成し、それにより、リゾ脂質誘導体は活性薬剤物質、多くの場合モノエーテルリゾ脂質誘導体を構成する。しかしながら理解すべき点として、これは、本発明の薬剤送達系中の、第２の薬剤物質と称される他の薬剤物質含有の可能性を排除するものではなく、細胞外ＰＬＡ２の作用によって加水分解的に開裂可能な有機基が、ある種の医薬的効果（例えば、補助薬剤物質または本明細書の別の箇所に記載の効率改良剤として）を有することができることも排除するものではない。さらに、「活性薬剤物質」、すなわちリゾ脂質誘導体の医薬的効果は、第２の薬剤物質が含まれている場合は最も支配的である必要はなく、実際に、他の主要な実施形態（下記の「薬剤送達系としての脂質誘導体リポソーム」参照）で明らかになるように、第２の薬剤物質の効果が最も支配的となる可能性が高い。
【００５７】
プロドラッグ（脂質誘導体）からの活性薬剤物質（リゾ脂質誘導体）放出は、下記の例に示したように起こると考えられる。
【化５】
2009530318.tif 000007
【００５８】
さらに、置換基Ｒ２および／または置換基Ｄの両方が補助薬剤物質または活性薬剤物質用の効率改良剤を構成することができ、同時に細胞外ＰＬＡ２の作用下に放出される。
【化６】
2009530318.tif 000008
【００５９】
基Ｒ２が、例えば補助薬剤物質または例えば浸透性または細胞溶解改良剤などの効率改良剤として、活性薬剤物質との関連で各種の独立の効果または相乗効果をどのように有することができるかについて、Ｒ２の定義下で、上記で説明した。留意すべき点として、Ｒ２に相当する基（例えばＲ２−ＯＨまたはＲ２−ＣＯＯＨ）は、リゾ脂質誘導体（活性薬剤物質）の効果に関して支配的な医薬効果を有する可能性がある。上記の点はＤにも当てはまる。
【００６０】
リポソームとして製剤された脂質誘導体
「脂質ベース薬剤送達系」という用語は、主要構成要素として、脂質または脂質誘導体を含む巨大分子構造を包含すべきものである。それに関しての好適な例は、リポソームおよびミセルである。現時点では、リポソームが最も広い利用範囲を提供するものと考えられており、リポソームについて下記でかなり詳細に説明している。リポソームは現在、好ましい脂質ベースの系であると考えられるが、ミセル系も、本発明の範囲内の興味深い実施形態を提供するものと考えられる。
【００６１】
本明細書に記載の実施形態と有利に組み合わせることが可能な一つの重要な変形形態では、脂質誘導体（例えばプロドラッグ）は、唯一の構成要素として、またはより一般的であるが他の構成要素（他の脂質、ステロール類など）と組み合わせてリポソーム中に含まれる。従って、本明細書に記載の脂質ベースの系は好ましくはリポソームの形態であり、そのリポソームは脂質誘導体（例えばプロドラッグ）を含む層を構成するものである。
【００６２】
「リポソーム」は、１以上の脂質二重層を含む自己集合構造として知られており、それらの層のそれぞれが水系の区画を囲み、両親媒性脂質分子の２つの向き合った単層を含む。両親媒性脂質（すなわち脂質誘導体）は、１個もしくは２個の非極性（疎水性）脂肪族基（脂質誘導体におけるＲ１およびＲ２に相当する）に共有結合的に連結された極性（親水性）頭部基領域（脂質誘導体における置換基Ｒ３に相当）を有する。疎水性基と水系媒体との間のエネルギー的に好ましくない接触により、脂質分子の再配列が誘発されて、極性頭部基は水系媒体に向かって配向し、疎水性基は二重層の内側方向に再配向するようになると考えられる。疎水性基が水系媒体との接触から効果的に遮断されるエネルギー的に安定な構造が形成される。
【００６３】
リポソームは、単一の脂質二重層（単ラメラリポソーム、「ＵＬＶ」）または複数の脂質二重層（多ラメラリポソーム、「ＭＬＶ」）を有することができ、各種方法によって製造することができる（総覧に関しては、例えばDeamer and Uster， Liposomes， Marcel Dekker， N.Y.， 1983， 27-52を参照する）。これらの方法には、多ラメラリポソーム（ＭＬＶ）の製造のためのバンガム（Bangham）の方法；レンク（Lenk）、ファウンテン（Fountain）およびキュウリス（Cullis）による実質的に等しいラメラ間溶質分布を有するＭＬＶの製造方法（例えば、ＵＳ４５２２８０３、ＵＳ４５８８５７８、ＵＳ５０３０４５３、ＵＳ５１６９６３７およびＵＳ４９７５２８２参照）；およびパパハジョポウロス（Papahadjopoulos）らによるオリゴラメラリポソーム製造のための逆相蒸着法（ＵＳ４２３５８７１）などがある。ＵＬＶは、超音波処理（Papahadjopoulos et al， Biochem， Biophys. Acta， 135， 624 (1968)参照）または押出（ＵＳ５００８０５０およびＵＳ５０５９４２１）などの方法によってＭＬＶから製造することができる。本発明のリポソーム は、これらの開示（これらの内容については、参照によって本明細書に組み込まれる）のいずれかの方法によって製造することができる。
【００６４】
超音波処理、均質化、フレンチプレス加圧および粉砕などの各種方法を用いて、相対的に大きいリポソームから相対的に大きさが小さいリポソームを製造することができる。押出（ＵＳ５００８０５０参照）を用いて、リポソームの大きさを小さくする、すなわち加圧下に規定の選択された大きさのフィルター孔を強制的に通過させることで、所定の平均径を有するリポソームを製造することができる。接線流濾過（ＷＯ８９／０８８４６参照）を用いて、リポソームの大きさを調節する、すなわち径の不均一度が小さく、より均一で規定の粒径分布を有するリポソームの群を有するリポソームを製造することもできる。これらの文書の内容は、参照によって本明細書に組み込まれる。リポソームの径は、当業者の技術の範囲内である擬似電気（quasielectric）光散乱などの多くの方法により、そして例えばニコンプ（Nicomp；登録商標）粒子選別機を用いて求めることもできる。
【００６５】
言及すべき非常に興味深い点として、系がリポソーム系であったとしても、本発明の脂質誘導体は脂質ベースの系の主要部分を構成可能である。これは、本発明の脂質誘導体と脂質との間の構造的（機能的ではない）類似性によるものである。従って、本発明における脂質誘導体が、リポソームの唯一の構成要素であることができると考えられており、すなわち総脱水されたリポソームの１００ｍｏｌ％まで、脂質誘導体によって構成することが可能である。これは、リポソームの少量部分のみ構成可能なＥＴ−１８−ＯＣＨ３などの公知のモノエーテルリゾ脂質とは対照的である。
【００６６】
代表的には、下記で詳細に述べるよに、リポソームは有利には、医薬的効果を持っても持たなくても良いが、リポソーム構造をより安定とする（あるいはより不安定とする））か、クリアランスに対してリポソームを保護することで、循環時間を延長して、リポソームを含む医薬の全体的な効率を改善する他の構成要素を含む。
【００６７】
そうは言っても、特定の脂質誘導体は代表的には、総脱水されたリポソームに基づいて５〜１００ｍｏｌ％、例えば５０〜１００ｍｏｌ％、好ましくは７５〜１００ｍｏｌ％、特には９０〜１００ｍｏｌ％を構成すると考えられる。
【００６８】
リポソームは、単ラメラまたは多ラメラであることができる。一部の好ましいリポソームは単ラメラであり、約４００ｎｍ未満、より好ましくは約４０ｎｍより大きく約４００ｎｍ未満の直径を有する。
【００６９】
リポソームは代表的には、当業界で知られているように、（ａ）脂質誘導体を有機溶媒に溶かす段階；（ｂ）段階（ａ）の脂質誘導体溶液から有機溶媒を除去する段階；および（ｃ）段階（ｂ）の生成物を水系溶媒で水和させることでリポソームを形成する段階を有する方法によって製造される。
【００７０】
その方法はさらに、少なくとも一つの第２の薬剤物質（下記参照）を段階（ａ）の有機溶媒または段階（ｃ）の水相に加える段階を含むことができる。
【００７１】
次に、前記方法は、段階（ｃ）で製造したリポソームをフィルターを通して押し出すことで、ある一定の大きさ、例えば１００ｎｍのリポソームを製造する段階を有することができる。
【００７２】
広い範囲を網羅する大きさの脂質ベースの粒子系、すなわちリポソームならびにミセルを、上記の技術に従って製造することができる。投与経路に応じて、医薬用途用の好適な粒径は、通常は２０〜１００００ｎｍの範囲、特には３０〜１０００ｎｍの範囲である。５０〜２００ｎｍの範囲の粒径が通常は好ましいが、それはこの粒径範囲のリポソームが、哺乳動物の細網内皮系（「ＲＥＳ」）によってより迅速に認識されることから、より急速に循環からクリアランスされる相対的に大きいリポソームより、哺乳動物の循環系で長時間循環すると考えられるからである。血管循環が長時間となることで、より多くのリポソームがそれの所期の作用部位、例えば腫瘍または炎症に到達できるようにすることで、治療効力を高めることができる。
【００７３】
静脈注射および筋肉注射によって投与されるように作られた本明細書における実施形態で定義の薬剤送達系の場合、リポソームは好ましくは約１００ｎｍの平均粒径を有するべきであると考えられる。従って、その粒径は、通常は４０〜４００ｎｍの範囲内であるべきである。
【００７４】
さらに、皮下注射によって投与されるように作られた薬剤送達系の場合、リポソームは好ましくは、１００〜５０００ｎｍの平均粒径を有するべきであり、そのリポソームは単層または多層であることができる。
【００７５】
リポソーム中に脂質誘導体を含有させることで得られる利点の一つは、特に下記で記載のように安定化した場合に、リポソーム構造が、個別の化合物としての脂質誘導体よりかなり長い血管循環時間を有するという点である。さらに、脂質誘導体は、リポポリマーおよび／または糖脂質が含まれたリポソームに「パッキングされた」場合には多少不活性となるか、「見えなくなる」ことさえある。これは、不利な効果、例えば溶血効果が起こる可能性を低くすることができることを意味している。
【００７６】
リポソームは好ましくは、例えば癌化、感染もしくは炎症患部領域もしくは組織などの対象領域に到達するまでは不活性な構成要素として作用すべきである。下記で説明するように、リポソームは多くの他の構成要素を含むことができる。特に、本発明による薬剤送達系はさらに、第２の薬剤物質、細胞外ＰＬＡ２活性抑制剤または浸透性促進剤、例えば短鎖脂質およびリポポリマー／糖脂質の放出を制御する成分を含むことができる。
【００７７】
改良剤としてリポソーム中に含まれる化合物の２つの非常に重要な群は、ＰＥＧ分子量が１００〜１００００ダルトンであるリポポリマー（例：ポリエチレンオキサイド−ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン、ＤＰＰＥ−ＰＥＧ、ポリエチレンオキサイド−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ＤＳＰＥ−ＰＥＧ）などの安定化化合物であるリポポリマーおよび糖脂質である。リポポリマーがリポソーム用の安定剤として機能すること、すなわちリポポリマーが循環時間を延長し、そして本発明の文脈で非常にう興味深いのであるが、細胞外ＰＬＡ２用の活性化剤として機能することが明らかになっている。その安定化効果について下記で説明する。
【００７８】
リポソームの外側表面は、哺乳動物の循環系では、オプソニン類などの血清タンパク質でコーティングされるようになると考えられる。いかなる形でも特定の理論に限定されるものではないが、リポソームの外表面を修飾することでリポソームのクリアランスを阻害することにより、それへの血清タンパク質の結合が大きく阻害されるものと考えられる。極性頭部基が、リポソームへの血清タンパク質の結合を阻害することができる化学部分の結合によって誘導体化されて、哺乳動物の循環系におけるリポソームの薬物動態挙動が変わり、細胞外ＰＬＡ２の活性が上記リポポリマーに関して説明したように強化されるリポソーム二重層脂質への組み込みによって、効果的な表面修飾、すなわちリポソームの外表面に対する変化によるオプソニン化およびＲＥＳ取り込みの阻害が達成されるものと考えられる。
【００７９】
急速なＲＥＳ取り込みを回避し、それによって血流中での半減期を延長するリポソーム製剤が作られている。ＳＴＥＡＬＴＨ（登録商標）リポソーム（Liposome Technology Inc.， Menlo Park， Calif.）は、総脱水されたリポソームの約５ｍｏｌ％でポリエチレングリコール（ＰＥＧ）グラフト脂質を含む。外部リポソーム表面でのポリマーの存在により、ＲＥＳの臓器によるリポソームの取り込みが低下する。リポソーム膜は、そこに含まれる界面活性剤の破壊効果に耐えるように構築することができる。例えば、構成要素として、親水性（すなわち水溶性）ポリマーで誘導体化した脂質を含むリポソーム膜は通常、高い安定性を有する。脂質二重層のポリマー成分は、ＲＥＳによる取り込みからリポソームを保護し、従って、血流中でのリポソームの循環時間が長くなる。
【００８０】
リポポリマーでの使用に好適な親水性ポリマーは、容易に水に溶解し、ベシクル形成性脂質に共有結合的に結合することができ、毒性効果を伴わずに（すなわち生体適合性である）イン・ビボで耐容されるものである。好適なポリマーには、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリ乳酸（ポリラクチドとも称される）、ポリグリコール酸（ポリグリコリドとも称される）、ポリ乳酸−ポリグリコール酸コポリマーおよびポリビニルアルコールなどがある。好ましいポリマーは、約１００または１２０ダルトンから約５０００または１００００ダルトン以下、より好ましくは約３００ダルトンから約５０００ダルトンの分子量を有するものである。特に好ましい実施形態では、そのポリマーは、約１００〜約５０００ダルトンの分子量を有する、より好ましくは約３００〜約５０００ダルトンの分子量を有するポリエチレングリコールである。特に好ましい実施形態では、前記ポリマーは７５０ダルトンのポリエチレングリコール（ＰＥＧ（７５０））である。ポリマーは、そこにあるモノマーの数によって定義することもでき、本発明の好ましい実施形態は、３種類のモノマーからなるＰＥＧポリマー（約１５０ダルトン）などの少なくとも約３種類のモノマーのポリマーを用いるものである。本発明での使用に好適である可能性がある他の親水性ポリマーには、ポリビニルピロリドン、ポリメトキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミドおよびヒドロキシメチルセルロースまたはヒドロキシエチルセルロースなどの誘導体化セルロース類などがある。
【００８１】
糖脂質は、親水性多糖類鎖が共有結合的に結合している脂質である。糖脂質をリポポリマーのように利用可能であることは明らかであるが、現時点ではリポポリマーが最も有望な結果を与える。
【００８２】
リポポリマーの含有率は有利には、総脱水されたリポソームに基づいて１〜５０ｍｏｌ％、例えば２〜２５%、特には２〜１５ｍｏｌ％の範囲であると考えられる。
【００８３】
リポソームの二重層または多層は、他の脂質、ステロール系化合物、安定剤としてのポリマー−セラミド類および標的化化合物などの他の構成要素を含むこともできる。
【００８４】
脂質誘導体を含むリポソームは、（原則として）専ら脂質誘導体からなることができる。しかしながら、リポソームを修飾するため、「他の脂質」も含有させることができる。他の脂質は、二重層の脂質誘導体成分との適合性充填コンフォメーションを作り上げることで、全ての脂質構成要素が密に充填され、二重層からの脂質誘導体の放出が防止されるようにする能力に関して選択される。適合性充填コンフォメーションに寄与する脂質ベースの要素は当業者には公知であり、アシル鎖長および不飽和度、ならびに頭部基の大きさおよび電荷などがあるが、これらに限定されるものではない。従って、当業者であれば、不要な実験を行うことなく、卵ホスファチジルエタノールアミン（「ＥＰＥ」）またはジオレオイルホスファチジルエタノールアミン（「ＤＯＰＥ」）などの各種のホスファチジルエタノールアミン類（「ＰＥ類」）を含む好適な他の脂質を選択することができる。脂質は、例えばグルタル酸、セバシン酸、コハク酸および酒石酸などのジカルボン酸による頭部基の誘導体化などの各種方法で修飾することができ、好ましくはジカルボン酸はグルタル酸（「ＧＡ」）である。従って、好適な頭部基誘導体化脂質には、ジパルミトイルホスファチジルエタノールアミン−グルタル酸（「ＤＰＰＥ−ＧＡ」）、パルミトイルオレオイルホスファチジルエタノールアミン−グルタル酸（「ＰＯＰＥ−ＧＡ」）およびジオレオイルホスファチジルエタノールアミン−グルタル酸（「ＤＯＰＥ−ＧＡ」）などのホスファチジルエタノールアミン−ジカルボン酸類などがある。最も好ましくは、誘導体化脂質はＤＯＰＥ−ＧＡである。
【００８５】
「他の脂質」の総含有率は、代表的には、総脱水されたリポソーム基準で０〜３０ｍｏｌ％、特には１〜１０ｍｏｌ％の範囲である。
【００８６】
リポソームに含まれているステロール系化合物は、脂質二重層の流動性に影響を与え得る。従って、周囲の炭化水素基とのステロールの相互作用により、二重層からのこれらの基の移動が防止される。リポソームに含有させるステロール系化合物（ステロール）の１例はコレステロールであるが、各種の他のステロール系化合物が可能である。ステロール系化合物が存在する場合、それの含有率は、総脱水されたリポソーム基準で０〜２５ｍｏｌ％、特には０〜１０ｍｏｌ％、例えば０〜５ｍｏｌ％の範囲であると考えられる。
【００８７】
ポリマー−セラミド類は、血管循環時間を改善する安定剤である。例には、セラミドのポリエチレングリコール誘導体（ＰＥＧ−セラミド）、特にはポリエチレングリコールの分子量が１００〜５０００であるものがある。ポリマー−セラミドの含有率は、総脱水されたリポソーム基準で０〜３０ｍｏｌ％、特には０〜１０ｍｏｌ％の範囲であると考えられる。
【００８８】
さらなる他の成分は、総脱水されたリポソーム基準で０〜２ｍｏｌ％、特には０〜１ｍｏｌ％を構成することができる。
【００８９】
本発明の１実施形態によれば、リポソームの脂質二重層は、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）で誘導体化されていることで、ＰＥＧ鎖が脂質二重層の内側表面からリポソームによって包み込まれた内部腔部に延び、脂質二重層の外部から周囲環境に延びるようになっている脂質を含む（例えばＵＳ５８８２６７９および図１参照）。
【００９０】
ポリエチレングリコールなどの生体適合性の親水性ポリマーで誘導体化されたベシクル形成性脂質を製造するための各種カップリング方法が当業界では公知である（例えば、ＵＳ５２１３８０４；ＵＳ５０１３５５６参照）。
【００９１】
本発明によるリポソームの誘導体化脂質成分はさらに、患部部位での過剰発現されたペプチダーゼまたはエステラーゼ酵素または還元剤の存在下等の選択的病態生理学的状態下に開裂可能なペプチド、エステルまたはジスルフィド連結などの不安定な脂質−ポリマー連結を含むことができる。リン脂質にポリマーを連結される上でのそのような連結の使用によって、投与後数時間にわたりそのようなリポソームの血中レベルを高くすることができ、その後に可逆的連結の開裂および外側リポソーム二重層からのポリマーの脱離が起こる。次に、ポリマーを持たないリポソームは、ＲＥＳ系による急速な取り込みを受ける（例えば、ＵＳ５３５６６３３参照）。
【００９２】
さらに、本発明によるリポソームは、ハプテン類、酵素、抗体もしくは抗体断片、サイトカイン類およびホルモン（例えば、ＵＳ５５２７５２８参照）および他の小分子タンパク質、ポリペプチド類、単一の糖多糖類部分またはリポソームに対する特定の酵素的または表面認識部分を与える非タンパク質分子などのリポソーム外側に結合した非ポリマー分子を含むことができる。公開ＰＣＴ出願ＷＯ９４／２１２３５を参照する。特定の臓器または細胞型にリポソームを優先的に標的指向させる表面分子を、本明細書においては「標的化分子」と称し、それには例えば、抗体および糖部分、例えばガングリオシド類または（糖部分に対する受容体）特異的抗原を有する特異的細胞にリポソームを指向させるマンノースおよびガラクトースに基づくものなどがある。表面分子をリポソームにカップリングさせる技術は、当業界では公知である（例えば、ＵＳ４７６２９１５を参照する）。
【００９３】
リポソームは、脱水、保存、そして再生することで、それの内部含有物のかなりの部分を保持することができる。リポソームの脱水には、リポソーム二重層の内側および外側の両方の表面での二糖類などの親水性乾燥保護剤を用いる必要がある（ＵＳ４８８０６３５参照）。この親水性化合物は、リポソームにおける脂質の再配列を防止することで、乾燥手順中およびそれに続く再水和を通じて、大きさおよび内容物を維持するものと考えられる。そのような乾燥保護剤の適切な量は、それらが強力な水素結合受容体であり、リポソーム二重層成分の分子内スペーシングを保存する立体化学的特徴を有するようなものである。あるいは、リポソーム製剤が脱水前に冷凍されず、脱水後の製剤中に十分な水が残っている場合には、乾燥保護剤は省略することができる。
【００９４】
薬剤担体系としての脂質誘導体リポソーム
上記のように、本発明の脂質誘導体を含むリポソームは、少なくとも１種類の第２の薬剤物質も含むことができる。特定の実施形態では、上記の脂質ベース薬剤送達系は、少なくとも１種類の第２の薬剤物質が組み込まれたリポソームの形態のものである。理解すべき点として、第２の薬剤物質は、脂質誘導体およびリゾ脂質誘導体組み合わせて個々の医薬効果または相乗的医薬効果を有し得る医薬有効成分を含むことができる。「第２の」という用語は、少なくとも１種類の第２の薬剤物質の医薬効果が、例えばプロドラッグから誘導される活性薬剤物質の効果に関して劣るということを必ずしも示唆するものではなく、単に２つ群の物質間で区別するのに用いられているものである。
【００９５】
そうではあるが、本発明は、リポソームの形態であって、第２の薬剤物質が組み込まれた薬剤送達系をも提供する。
【００９６】
可能な「第２の薬剤物質」は、哺乳動物、好ましくはヒトに投与することができる化合物または物質の組成物である。そのような薬剤は、哺乳動物において生理活性を有することができる。リポソームに加えることができる第２の薬剤物質には、アシクロビル、ジドブジンおよびインターフェロン類などの抗ウィルス薬；アミノグリコシド類、セファロスポリン類およびテトラサイクリン類などの抗細菌薬；ポリエン系抗生物質、イミダゾール類およびトリアゾール類などの抗真菌薬；葉酸およびプリンおよびピリミジン類縁体などの代謝拮抗薬；アントラサイクリン系抗生物質および植物アルカロイド類などの抗悪性腫瘍薬；コレステロールなどのステロール類；例えば、糖類およびデンプン類などの炭化水素類；細胞受容体タンパク質類、免疫グロブリン類、酵素類、ホルモン類、神経伝達物質および糖タンパク質類などのアミノ酸類、ペプチド類、タンパク質類；色素；放射性同位元素および放射性同位元素で標識した化合物などの放射能標識物；放射線不透過性化合物；蛍光性化合物；散瞳薬化合物；気管支拡張薬；局部麻酔薬などがあるが、これらに限定されるものではない。
【００９７】
リポソーム性第２薬剤物質製剤は、薬剤の毒性を低下させることで、第２の薬剤物質の治療指数を高めるものである。リポソームは、第２の薬剤物質の哺乳動物の血管循環からのクリアランスの速度を低下させることもできる。従って、第２の薬剤物質のリポソーム製剤は、所望の効果を達成するのに必要な薬剤投与量が少ないことを意味し得る。
【００９８】
リポソームには、リポソームを製造するのに用いられる脂質または水相中に薬剤を溶かすことで、少なくとも１種類の第２の薬剤物質を負荷させることができる。あるいは、最初にリポソームを形成し、例えばｐＨ勾配により、最外のリポソーム二重層を横断する電気化学電位を確定し、イオン化可能な第２の薬剤物質をリポソーム外部の水系媒体に加えることで、イオン化可能な第２の薬剤物質をリポソームに負荷することができる（例えば、ＵＳ５０７７０５６およびＷＯ８６／０１１０２参照）。
【００９９】
リポソームまたはミセルの製剤に好適な親油性薬剤誘導体を製造する方法が当業界で知られている（例えば、リン脂質の脂肪酸鎖への治療薬の共有結合的結合について記載したＵＳ５５３４４９９およびＵＳ６１１８０１１を参照）。タキソールのミセル製剤について、文献に記載されている（Alkan-Onkyuksel et al.， Pharmaceutical Research， 11:206 (1994)）。
【０１００】
従って、少なくとも１種類の第２の薬剤物質は、非常に多様な公知および可能な医薬有効成分のいずれかであることができるが、好ましくは治療上および／または予防上活性な物質である。本発明のリポソームの分解に関与する機序のため、少なくとも１種類の第２の薬剤物質が細胞外ＰＬＡ２活性の局所的上昇に関連する疾患および／または状態に関係するものであることが好ましい。
【０１０１】
特に興味深い第２の薬剤物質は、（ｉ）アントラサイクリン誘導体、シスプラチン、パクリタキセル、５−フルオロウラシル、エキシスリンド、シス−レチノイン酸、スルジナク（suldinac）スルフィド、ビンクリスチン、インターロイキン類、オリゴヌクレオチド類、ペプチド類、タンパク質類およびサイトカイン類などの抗腫瘍薬、（ｉｉ）抗生物質および抗真菌薬、ならびに（ｉｉｉ）ステロイド類および非ステロイド類などの抗炎症薬から選択される。特に、ステロイド類は、リポソームに対する安定化効果も有し得る。
【０１０２】
ペプチド類などの活性薬剤およびインターフェロン類、インターロイキン類およびオリゴヌクレオチド類などのタンパク質誘導体も、ＰＬＡ２分解性の脂質ベース担体に組み込むことができる。
【０１０３】
広範囲の抗癌剤の細胞傷害性効果は、本発明の担体中に包み込むと改善する可能性がある。さらに、続いて加水分解生成物、すなわちモノエーテルリゾ脂質および／またはエステル連結リゾ脂質誘導体が、放出された脂肪酸誘導体とともに、患部組織で担体が局所的に破壊した時に標的膜を通る薬剤浸透の吸収促進剤として作用するものと予想される。
【０１０４】
少なくとも１種類の第２の薬剤物質が親水性に従ってリポソーム中に分布する、すなわち親水性の第２の薬剤物質がリポソームの空洞部に存在する傾向があり、疎水性の第２の薬剤物質が疎水性の二重層中に存在する傾向があることが想到される。薬剤物質の組み込み方法は、上記で明瞭になったように当業界では公知である。
【０１０５】
上記の内容から理解すべき点として、脂質誘導体はプロドラッグまたは個別の構成要素として、医薬活性を有する可能性がある。しかしながら、特定の実施形態において、本発明はさらに、少なくとも１種類の第２の薬剤物質の投与用の脂質ベース薬剤送達系であって、前記少なくとも１種類の第２の薬剤物質が前記系に組み込まれ（例えば、前記第２の薬剤物質がリポソームの内部またはリポソームの膜部分またはミセルのコア領域に包み込まれている）、前記系が（ａ）少なくとも２個の炭素原子の長さの脂肪族基および少なくとも２個の炭素原子を有する有機基および（ｂ）親水性部分を有する脂質誘導体を含み、前記脂質誘導体がさらに前記有機基が加水分解的に開裂可能であり、前記脂肪族基が実質的に影響を受けない状態で残り、それによって有機酸断片もしくは有機アルコール断片およびリゾ脂質断片を生じる程度に、細胞外ホスホリパーゼＡ２の基質であり、前記系がリポポリマーおよび／または糖脂質を含むことで前記系の表面上に親水性基を提供する脂質ベース薬剤送達系に関するものである。
【０１０６】
他の実施形態による系について前述のように、加水分解的に開裂可能な有機基は、補助薬剤物質または第２の薬剤物質用の効率改良剤であることができる。理解すべき点として、脂質誘導体は上記でさらに定義されている脂質誘導体である。代表的には、前記脂質誘導体は、総脱水された（リポソーム）系の５〜１００ｍｏｌ％、例えば５０〜１００ｍｏｌ％を構成する。
【０１０７】
上記から理解すべきであるように、本発明は、製薬上許容される担体および上記のいずれかの脂質ベース薬剤送達系を含む医薬組成物をも提供する。その組成物について、下記で詳細に説明する。
【０１０８】
本発明はさらに、医薬品としての本明細書に記載のいずれかの脂質ベース薬剤送達系の使用、ならびに哺乳動物組織における細胞外ホスホリパーゼＡ２活性の局所的上昇に関連する疾患もしくは状態の治療用の医薬品製造における本明細書に記載のいずれかの脂質ベース薬剤送達系の使用に関するものである。そのような疾患または状態は代表的には、癌、例えば脳腫瘍、乳癌、肺癌、結腸癌もしくは卵巣癌、または白血病、リンパ腫、肉腫、癌腫および炎症状態から選択される。本発明の組成物および使用は、細胞外ＰＬＡ２活性における上昇が、対象となる組織（その組織は哺乳動物、特にはヒトでのものである）での正常な活性レベルと比較して少なくとも２５％である場合に特に適用可能である。
【０１０９】
言及すべき点として、前記の新規かつ合成的な脂質類縁体は、それを患部標的細胞中の過剰発現した細胞内ＰＬＡ２用の好ましい基質たらしめる細胞内細胞取り込みの増加を生じる遊離薬剤としての非粒子形態で投与することができる。
【０１１０】
医薬製剤および治療的使用
本発明では、適宜に製薬上許容される担体および例えばリポソームとしての本発明の脂質誘導体を含む医薬組成物も提供される。
【０１１１】
本明細書で使用される「製薬上許容される担体」とは、ヒトなどの哺乳動物へのリポソーム薬剤製剤などの脂質およびリポソームの投与が関係する使用において許容される媒体である。製薬上許容される担体は、使用される特定の活性薬剤物質および／または少なくとも１種類の第２の薬剤物質、リポソーム製剤、それの濃度、安定性および所期の生物学的利用能；リポソーム組成物で治療される疾患、障害または状態；対象者、それの年齢、大きさおよび全身の状態；および組成物の所期の投与経路、例えば、経鼻、経口、眼球、皮下、乳房内、腹腔内、静脈もしくは筋肉投与など（これらに限定されるものではない）、決定および考慮すべき当業者の範囲内である多くの要素に従って製剤される。非経口薬剤投与に用いられる代表的な製薬上許容される担体には、例えばＤ５Ｗ（５重量／体積％のブドウ糖を含む水溶液）および生理食塩水などがある。製薬上許容される担体は、追加の成分、例えば保存剤および酸化防止剤などの含まれる有効成分の安定性を高めるものを含むことができる。
【０１１２】
リポソームまたは脂質誘導体は代表的には、分散媒体、例えば製薬上許容される水系媒体中で製剤される。
【０１１３】
抗癌的に有効量の脂質誘導体、代表的には脂質誘導体約０．１〜約１０００ｍｇ／哺乳動物体重ｋｇを含む組成物量を、好ましくは静脈投与する。本発明に関しては、リポソーム脂質誘導体の「抗癌的に有効量」は、脂質誘導体が投与された哺乳動物での１以上の癌を阻害、改善、低減し、またはそれの発生、増殖、転移もしくは浸潤を防止する上で有効な量である。抗癌的に有効量は通常は、多くの要素、例えば対象者の年齢、大きさおよび全身の状態、治療される癌および所期の投与経路に従って選択され、各種手段、例えば本発明の内容を知った当業者には公知で、容易に実践される用量範囲試験によって決定される。本発明のリポソーム薬剤／プロドラッグの抗新生物的に有効量は、遊離で非リポソームの薬剤／プロドラッグのそのような量とほぼ同じであり、例えば脂質誘導体約０．１ｍｇ／治療を受ける哺乳動物の体重ｋｇから約１０００ｍｇ／ｋｇである。
【０１１４】
好ましくは、投与されるリポソームは、平均直径約５０ｎｍ〜約２００ｎｍである単ラメラリポソームである。抗癌治療法は、リポソーム薬剤に加えて少なくとも１種類の第２の薬剤物質の投与を含むことができ、これらの別の薬剤は脂質誘導体と同じリポソームに含まれている。リポソームの内部区画に捕捉されるか、それの脂質二重層で隔離されることができる第２の薬剤物質は、好ましくは抗癌剤であるが、必ずしもそれである必要はない。
【０１１５】
医薬組成物は好ましくは、従来の無毒性で製薬上許容される担体および補助剤を含む製剤、処方または例えば好適な送達機器もしくはインプラントで、注射、注入または埋め込み（静脈、筋肉、動脈および皮下など）によって非経口的に投与される。
【０１１６】
そのような組成物の製剤および調製は、医薬製剤の当業者には公知である。具体的な製剤は、「レミントンの薬学（Remington′s Pharmaceutical Sciences）」というタイトルの教科書に記載されている。
【０１１７】
そこで、本発明による医薬組成物は、無菌注射液の形態で活性薬剤物質を含むことができる。そのような組成物を調製するためには、好適な活性薬剤物質を、非経口的に許容される液体媒体に分散させ、その媒体は簡便には、懸濁剤、可溶化剤、安定剤、ｐＨ調節剤および／または分散剤を含むことができる。使用可能な許容される媒体の中には、水、適切な量の塩酸、水酸化ナトリウムもしくは好適な緩衝剤を加えることで好適なｐＨに調節した水、１，３−ブタンジオール、リンゲル液および等張性塩化ナトリウム溶液がある。水系製剤は、１以上の保存剤、例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチル、エチルもしくはｎ−プロピルを含むこともできる。
【０１１８】
腫瘍または新生物の治療が望まれる場合、血流を介したリポソーム封入薬剤の効果的な送達には、そのリポソームが、血液を腫瘍に供給する血管を取り巻く連続する（しかし「漏出性の」）内皮層および下層の基底膜を貫通できることが必要である。大きさがより小さいリポソームが、毛細血管を腫瘍細胞から分離する内皮細胞障壁および下層の基底膜を通る腫瘍への血管外遊出においてより効果的であることが認められている。
【０１１９】
本明細書で使用される場合、「固形腫瘍」とは、血流以外の解剖学的部位で増殖するものである（白血病などの血液腫瘍とは対照的）。固形腫瘍は、増殖する腫瘍組織に栄養を送るための小血管および毛細血管の形成を必要とする。
【０１２０】
本発明によれば、選択された抗腫瘍または抗新生物剤を、本発明によるリポソーム内に捕捉する。リポソームは、内皮障壁および基底膜障壁を通過することが知られている大きさで製剤する。得られたリポソーム製剤は、好ましくは静脈投与により、そのような処置を必要とする対象者に対して非経口的に投与することができる。腫瘍増殖の領域における血管系の浸透性の急性上昇を特徴とする腫瘍が、本発明による治療に特に適している。リポソームは最終的に、腫瘍部位でのリパーゼの作用のために分解するか、例えば熱照射または超音波照射によって浸透性とすることができる。次に、薬剤が生体が利用可能で輸送可能な溶解形態で放出される。さらに、患部組織において多く見られるように温度のわずかな上昇が、細胞外ＰＬＡ２の刺激をさらに高める可能性がある。
【０１２１】
炎症の部位特異的治療が望まれる場合、薬剤の効果的なリポソーム送達には、リポソームが長い半減期を有し、炎症部位に隣接する血管周囲の連続的な内皮細胞層および下層の基底膜を透過可能であることが必要である。大きさがより小さいリポソームが、内皮細胞障壁を通過して、関連する炎症領域に入る血管外遊出でより効果的であることが認められている。しかしながら、従来の小型リポソーム製剤の薬剤運搬能力が限られているため、そのような目的における有効性には制限があった。
【０１２２】
本発明によれば、選択された抗炎症薬を、本発明によるリポソーム内に捕捉する。リポソームは、内皮障壁および基底膜障壁を通過することが知られている大きさで製剤する。得られたリポソーム製剤は、好ましくは静脈投与により、そのような処置を必要とする対象者に対して非経口的に投与することができる。炎症領域における血管系の浸透性の急性上昇を特徴とする炎症領域が、本発明による治療に特に適している。
【０１２３】
細胞外ＰＬＡ２の活性が癌、炎症などによって罹患した哺乳動物身体領域で異常に高いことが知られている。本発明は、この事実を利用する方法を提供しており、細胞外ＰＬＡ２活性は、比較対象の正常領域と比べて身体の疾患領域において少なくとも２５％高いものである（細胞外環境で測定）べきであると考えられる。しかしながら、細胞外ＰＬＡ２活性のレベルが、例えば少なくとも１００%、例えば少なくとも２００%、例えば少なくとも４００%というかなり高いものであることが多いことが想定される。これは、細胞外ＰＬＡ２活性が「正常」レベルである組織に対する影響をごく軽微としながら、治癒または緩和を目的とした治療を必要とする哺乳動物の治療を実施できるということを意味している。これは、特に、かなり負担の大きい薬剤（第２の薬剤物質）が必要な場合が多い癌治療には極めて妥当なものである。
【０１２４】
そこで、本発明の背後にある理解を念頭に、本発明は、有効量の本明細書で定義の薬剤送達系を処置を必要とする哺乳動物に投与することで、患部領域、例えば哺乳動物、好ましくは前記領域における正常な活性と比較して少なくとも２５％高い細胞外ホスホリパーゼＡ２（細胞外ＰＬＡ２）活性を有するヒトの身体内の領域などの新生物細胞を含む領域に対して薬剤を選択的に標的指向させる方法を提供する。
【０１２５】
例えば脳腫瘍、乳癌、肺癌、結腸癌または卵巣癌などの癌または白血病、リンパ腫、肉腫、癌腫を患っている哺乳動物の治療方法であって、哺乳動物に対して本発明の医薬組成物を投与する段階を含む方法も提供される。リポソーム形態で脂質誘導体および／または少なくとも１種類の第２の薬剤物質は、腫瘍細胞に対して選択的に傷害性であると考えられる。
【０１２６】
新規かつ合成の脂質からなる脂質ベースの担体による皮膚における患部の標的化
新規な標的化リポソームプロドラッグおよび薬剤送達系は、細胞外ＰＬＡ２レベル上昇に関連するかそれを原因として生じる皮膚での障害の治療または改善において有用である。特に、脂質ベースのプロドラッグおよび薬剤送達系は、細胞外ＰＬＡ２の基質であるエーテル−リゾ脂質および／または脂質プロドラッグの脂肪酸誘導体から選択される活性薬剤物質の投与において有用である。
【０１２７】
ＰＬＡ２による柔軟性リポソーム担体の分解により、癌および炎症などの各種形態の皮膚疾患の治療において有効となるよう設計されたリゾ脂質および／または脂肪酸誘導体の放出を生じる。さらに、新規なプロドラッグリポソーム担体は、ＰＬＡ２レベル上昇に関連する皮膚の患部領域への従来の薬剤の標的化送達に有用となり得る。
【０１２８】
例えば癌、炎症、乾癬および湿疹などの皮膚特有のものであるか、全身疾患の徴候である多くの皮膚疾患がある。皮膚または粘膜に限定されている多くのこれらの疾患は、投与によって活性成分の効率的な取り込みが生じるのであれば、医薬製剤の局所投与によって治癒または改善することができると考えられる。治療または予防を目的として、多くの製剤が局所的に皮膚に投与される。しかしながら、皮膚は異物に対する身体の最も有効な障壁の一つを形成しており、皮膚の不透過性のために、皮膚が標的臓器であったとしても、多くの治療薬を経口または非経口で投与しなければならない。
【０１２９】
リポソーム製剤は、多くの薬剤における皮膚送達形態として、かなり研究されてきた。局所投与の場合に、新世代の柔軟性リポソームが他の製剤にまさるいくつかの利点を提供することを示す証拠が徐々に増えている。そのような利点には、投与薬剤の高全身吸収に関連する副作用の低減、所望の標的での投与薬剤の蓄積増加および皮膚への親水性および疎水性の両方の非常に多様な薬剤の投与が可能な点などがある。
【０１３０】
皮膚の主要な物理化学的障壁は、皮膚の最外の角化層である角質層に局在している。角質層および下層構造にある孔は通常は非常に狭いため、皮膚のみが４００ダルトンより小さい物を通過させることができる。しかしながら、超柔軟性のリポソームが、３０ｎｍより小さい皮膚の孔を通過できることが明らかになっている（Cevc et al. (Biochem Biophys Acta (1998) 1368, p 201-215、ＵＳ特許６１８０３５３）。
【０１３１】
皮膚に物質が取り込まれる時に重要な点として、確実に主として関連する細胞が医薬活性成分に曝露されるようにするという問題がある。新規な標的化プロドラッグ系は、主として関連する細胞が薬剤に曝露されるようにするという重要な問題ならびに「エッジ（edge）活性物質」を含む非常に柔軟性のリポソームが角質層を通過し、高いＰＬＡ２レベルで皮膚の患部領域に深く侵入することができるという事実の両方に対処するものである。理解すべき重要な点として、プロドラッグリポソームは、皮膚を介した血液中への薬剤投与のためのものではない。
【０１３２】
多くの皮膚の炎症疾患、最も顕著には乾癬および湿疹において、細胞外ホスホリパーゼＡ２（ＰＬＡ２）の活性が、高まることが認められている（Forster et al. (1985) Br J Dermatol 112:135-47; Forster et al. (1983) Br J Dermatol 108:103-5）。さらに、細胞外ＰＬＡ２がプロドラッグ脂質誘導体を開裂させることで、単独もしくは他の活性化合物と組み合わせて効果を示すエーテル−リゾ脂質誘導体を製造することが可能であることも認められている。そこで、新たなプロドラッグリポソームは、部位特異的誘発機序としてＰＬＡ２活性の上昇を用いて皮膚における標的細胞で、医薬活性エーテル−リゾ脂質を特異的に送達させることができるようにするものである。さらに、ＰＬＡ２加水分解によって活性薬剤に変わる特異的な脂肪酸誘導体を、新規な合成脂質から構成される脂質ベース担体のＣ−３位に連結させることができる。可能な例には、Ｃ３位にエステル結合することで、二重プロドラッグ脂質をＰＬＡ２の基質とすることができる、多価不飽和脂肪酸およびビタミンＤ誘導体、ステロイド誘導体、レチノイル誘導体およびトコフェロール類縁体などの他の親油性基などがある。さらに、従来の薬剤物質は、新規な脂質ベースの担体によって、罹患部位に特異的に組み込みおよび輸送することができる。
【０１３３】
従って、前記新たな担体リポソームは、無傷の皮膚の透過の問題ならびにＰＬＡ２レベル上昇を特徴とする皮膚における細胞、組織もしくは組織部分の特異的標的化の問題の両方に対する解決法を提供するものである。
【０１３４】
新規かつ合成の脂質から構成される造影担体による患部組織の撮像
新規な脂質ベースの担体系は、細胞外ＰＬＡ２の局所かつ高い活性を特徴とする癌、感染および炎症などの疾患の標的化診断において有用である。微小粒子が漏出性毛細血管を通る血管外遊出を介した患部組織で蓄積するという所見と組み合わせたＰＬＡ２活性上昇が、強調撮像に造影剤微小担体を用いる基礎を与えるものである。
【０１３５】
そこで、新規な診断系は、細胞外ＰＬＡ２によって特異的に分解され得るリポソーム（およびミセル）も、ＰＬＡ２活性が上昇している標的組織に到達するだけ長い期間にわたり血流中で循環するよう設計可能であるという事実を利用するものである。患部部位では、リポソームの脂質誘導体がＰＬＡ２によって開裂されて、画像強調剤を遊離させる。
【０１３６】
画像診断は医学において広く使用されている。その場合には、対象領域からの信号の適切な強さが得られて、正常な周囲組織から患部組織を区別することが必要とされる。撮像には、対象領域の３つの空間次元と診断薬の薬物動態と画像取得に必要な期間の両方に関係する第４の次元である時間との関係が関与する。画像信号を得るのに用いることができる物理特性には、例えば放射線の放出もしくは吸収、核磁気のモーメントおよび緩和ならびに超音波の伝達もしくは反射などがある。通常、多くの病気の早期検出および場所特定のための各種臓器および組織の画像撮影は、適切な造影剤を用いずに良好に行うことはできない。
【０１３７】
画像撮影用造影剤とは、周囲の組織よりかなり強いある種の信号を吸収することができる物質に関するものである。造影剤は各画像撮影技術に固有のものであり、対象となるある患部部位で蓄積することで、適切な撮像技術を用いると、それらの部位は肉眼で見ることができる。画像撮影を確実に良好に行うことができる組織濃度は、診断技術間で変動する。
【０１３８】
患部領域での造影剤の蓄積を促進するため、造影剤用の担体として各種微粒子が提案されている。微小担体の中では、特性制御が容易であることから、リポソームが特に注目すべきものである。ほぼ２０年間にわたり、リポソームは、（１）リポソームが完全に生体適合性である；（２）それが実際にあらゆる薬剤もしくは診断薬を、化合物の物理化学的特性に応じて、内部の水区画もしくは膜自体に捕捉することができる；（３）リポソームに取り込まれた化合物が身体における失活効果から保護されるが、同時に望ましくない副反応を生じない；（４）リポソームがさらに、細胞または個々の細胞区画内にも医薬もしくは診断剤を送達する特注の機会を提供するという理由から、薬剤および診断剤用の有望な担体として認められてきた。各種のイン・ビボでの送達上の目的を達成すべく、リポソームの大きさ、電荷および表面特性は、単に各種脂質の組み込みおよび／または製造方法の変更によって簡単に変えることができる。
【０１３９】
新規な造影剤負荷リポソームの重要な利用分野の一つは、腫瘍の画像撮影である。ＰＬＡ２が悪性腫瘍細胞によって分泌されることがわかっており、膵臓癌、乳癌および胃癌などの各種癌の免疫組織化学的染色がＰＬＡ２のレベル上昇を示している。ＰＬＡ２の発現および分泌の上昇は、ＩＬ−６などのインターロイキン類によって刺激されたいくつかの癌細胞系でも認められる。さらに、細胞外ＰＬＡ２活性の上昇は、炎症組織および感染組織でも報告されている。
【０１４０】
腫瘍におけるリポソーム蓄積の主たる機序は、間質腔への漏出性腫瘍毛細血管からの血管外遊出を介したものである。腫瘍蓄積は、長期循環性ポリマーコーティングリポソームを用いることで有意に増加させることができる。
【０１４１】
脂質ベース微小担体を、炎症部位および感染部位の視覚化に用いることもできる。癌組織に関して知られている内容と同様、ＰＬＡ２活性上昇を特徴とする感染部位および炎症部位の視覚化のための微粒子造影剤の使用は、微粒子が漏出性毛細血管からの血管外遊出を介して蓄積する能力に基づいたものである。
【０１４２】
新規な診断薬系の重要な特徴の一つは、ある特定の脂質誘導体がＰＬＡ２の活性上昇を特徴とする患部哺乳動物組織の固有の細胞外箇所で、よくわかっている形態で細胞外ＰＬＡ２によって開裂されるという点である。細胞外ＰＬＡ２がモノエーテル／モノエステル脂質誘導体を開裂させて、関連する患部組織での診断薬標識を標的とすることができるということが認められている。ＰＬＡ２による脂質誘導体およびリポソームの分解により、患部組織での診断造影剤の部位特異的放出が生じる。
【０１４３】
新規な合成脂質から構成される脂質ベース担体による感染組織の標的化
標的化送達系の重要な特徴の一つは、単核食細胞系（ＭＰＳ）の細胞によるイン・ビボでのリポソームの急速な取り込みである。ＭＰＳは、リポソームなどの異物粒子のクリアランスに関与する免疫系の最も重要な成分の一つであるマクロファージを含む。マクロファージは各種の臓器および組織にあり、例えば脾臓および肝臓（クッパー細胞）にあって、骨髄およびリンパ節では遊離および固定化マクロファージとして存在する。
【０１４４】
プロドラッグ脂質から構成される新規な脂質ベースの系は、リポソームの蓄積および感染組織でのプロドラッグ開裂性ＰＬＡ２酵素のレベル上昇のために、寄生虫が入り込んでいる罹患した肝臓または脾臓に各種の脂質プロドラッグおよび封入薬剤を直接送達させることができる。さらに、脂質ベース薬剤送達系の一つの特定の利点は、モノマー脂質基質と比較して、プロドラッグリポソームなどの秩序的な脂質基質に対して、細胞外ＰＬＡ２活性が有意に高くなるという点である。
【０１４５】
ＰＬＡ２の作用によって発生する放出されたエーテル−脂質類縁体は、レーシュマニアおよびトリパノソーマなどの寄生虫における非常に重要な調節酵素の障害を生じさせることが明らかになっていることから（Lux et al. Biochem. Parasitology 111 (2000) 1-14）、十分な量で投与した場合に寄生虫に対して毒性である。肝臓、脾臓および骨髄が多価濃度のマクロファージが認められ得る臓器および組織であることから、これらの臓器に入り込んだ寄生虫に対する毒性の薬剤の標的化送達を行うことができる。さらに、マラリアを引き起こす寄生虫などのＰＬＡ２レベル上昇を特徴とする寄生虫感染も、新規なプロドラッグリポソームによる治療の標的である。寄生虫である熱帯熱マラリア原虫によって引き起こされるマラリア感染でのＰＬＡ２のレベル上昇については、例えば場出すらの報告（Vadas et al., Infection and Immunity, 60 (1992) 3928-3931 and Am. J. Trop. Hyg. 49 (1993) 455-459）で報告されている。
【０１４６】
正常細胞は代表的には、エーテル−脂質の毒性効果を回避できるようにするエーテル開裂酵素を有する。しかしながら、赤血球などの一部の正常細胞は、癌細胞のように、エーテル−脂質の破壊的効果を回避する手段を持たない。従って、エーテル−脂質の治療的使用では、毒性効果から正常細胞を保護し、エーテル−脂質を患部組織に直接送ることができる効果的な薬剤送達系が必要である。
【０１４７】
従って、新規な標的化プロドラッグ送達系を、感染組織におけるＰＬＡ２レベル上昇を特徴とする寄生虫感染の治療に用いることができる。これは、細胞外ＰＬＡ２の基質である脂質プロドラッグの形態で活性薬剤物質が存在する有効量（約１０００ｍｇ／ｋｇ以下）のリポソームを投与することで行われる。さらに、プロドラッグリポソームは、ＰＬＡ２発生によるリゾ脂質および／または脂肪酸誘導体と組み合わせた従来の薬剤の有効性の強化を行うことができると考えられる、封入された従来の駆虫薬の標的化輸送のための候補である。
【０１４８】
毒性
脂質誘導体を含むリポソームの毒性は、化合物の溶血誘発と腫瘍細胞増殖の阻害能力との間の関係から誘導される数値である治療ウィンドウ「ＴＷ」を求めることで評価することができる。ＴＷ値は、ＨＩ５／ＧＩ５０（「ＨＩ５」は培地中の赤血球の５％の溶血を誘発する化合物濃度に等しく、「ＧＩ５０」は薬剤に曝露された細胞群における５０％増殖阻害を誘発する化合物用量に等しい）と定義される。薬剤のＨＩ５値が高いほど、薬剤の溶血性が低い。相対的に高いＨＩ５値は、化合物が５％溶液を誘発する上で存在する必要がある化合物濃度が相対的に高いことを意味する。従って、ＨＩ５が相対的に低い薬剤と同じ量の溶血を誘発するまでにより多くの量を与えることができることから、ＨＩ５が高いほど、化合物の治療上の有用性が高い。対照的に、相対的に低いＧＩ５０値は、相対的に良好な治療薬であることを示す。相対的に低いＧＩ５０値は、５０％増殖阻害を行うのに要する薬剤濃度が相対的に低いことを示している。従って、ＨＩ５値が高いほど、そしてＧＩ５０値が低いほど、化合物の薬剤の治療特性は良好である。
【０１４９】
概して、薬剤のＴＷが１未満の場合、それは治療剤として効果的に用いることができない。すなわち、許容できないレベルの溶血を生じることなく、十分なレベルの腫瘍増殖阻害を達成するだけの薬剤を投与することはできないほどに、薬剤のＨＩ５値が低く、それのＧＩ５０値が高い。前記脂質誘導体リポソームは、患部組織における活性と比較して血流中の細胞外ＰＬＡ２活性が低いことを利用することから、正常なモノエーテルリゾ脂質の場合よりＴＷがかなり高いものと考えられる。活性における変動は数桁に及ぶものであり、リポソームは高い細胞外ＰＬＡ２活性を有する組織に「捕捉される」ことから、本発明のリポソームのＴＷは約３より大きい、より好ましくは約５より大きい、さらにより好ましくは約８より大きいものと考えられる。
【図面の簡単な説明】
【０１５０】
【図１】多孔質患部組織でのリポソーム薬剤担体の蓄積およびその後の薬剤の放出および細胞外ＰＬＡ２活性を介した標的膜を通過しての輸送が関与する脂質ベースの薬剤標的化および薬剤誘発原理の模式図であり、  （Ｉ）漏出性毛細血管のある病理組織、  （ＩＩ）プロドラッグおよび薬剤を含むリポソーム、  （ＩＩＩ）標的細胞および細胞膜、  （ＩＶ）例えばプロドラッグ（脂質）、プロエンハンサー（脂質）、プロアクチベータ（脂質）などの新規な類縁体、  （Ｖ）薬剤（リゾ脂質および脂肪酸誘導体）、エンハンサー（リゾ脂質＋脂肪酸）、ＰＬＡ２活性化剤（リゾ脂質＋脂肪酸）（リゾ脂質は次に、分子内環化を行う）である。
【図２】ＰＬＡ２加水分解によって発生する形成されたリゾ脂質が分子内環化を行って、環状抗癌脂質を生じるある特定のプロドラッグの１例を示す図である。
【図３】ＰＬＡ２加水分解によって、環化して環状抗癌脂質を形成するリゾ脂質が生じるある特定のプロドラッグの１例を示す図である（さらに、薬剤補助物質が分子内環化の結果として放出される）。
【図４】ＰＬＡ２加水分解により、分子内環化の結果として薬剤補助物質の放出を生じる特定のプロドラッグの１例を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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