(57)【要約】  本願は、ヒトインターロイキン−２２（ＩＬ−２２）と特異的に結合するヒト抗体およびその抗原結合フラグメントを提供する。これらの抗体はＩＬ−２２活性のアンタゴニストとして作用し、それにより、一般に免疫応答、特に、ＩＬ−２２により媒介されるものを変調することができる。開示される組成物および方法は、例えば、炎症性障害、自己免疫疾患、アレルギー、敗血性ショック、感染性疾患、移植拒絶、癌および他の免疫系障害の診断、治療または予防に使用可能である。
2009531023.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
配列番号５、６、７、２３、２４、２５、４１、４２、４３、５９、６０、６１、７７、７８、７９、９５、９６、９７、１１３、１１４、１１５、１３１、１３２、１３３、１４９、１５０、１５１、１６７、１６８、１６９、１８５、１８６、１８７、２０３、２０４、２０５、２２１、２２２、２２３、２３９、２４０、２４１、２５７、２５８、２５９、２７５、２７６、２７７、２９３、２９４、２９５、３１１、３１２、３１３，３２９、３３０、３３１、３４７、３４８、３４９、３６５、３６６、３６７、３８３、３８４、３８５、４０１、４０２、４０３、４１９、４２０、４２１、４３７、４３８、４３９、４５５、４５６、４５７、４７３、４７４、４７５、４９１、４９２、４９３、５０９、５１０、５１１、５２７、５２８、５２９、５４５、５４６、５４７、５６３、５６４、５６５、５８１、５８２、５８３、５９９、６００、６０１、６１７、６１８、または６１９で示されるヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列を含み、ＩＬ−２２と特異的に結合する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２】
配列番号１４、１５、１６、３２、３３、３４、５０、５１、５２、６８、６９、７０、８６、８７、８８、１０４、１０５、１０６、１２２、１２３、１２４、１４０、１４１、１４２、１５８、１５９、１６０、１７６、１７７、１７８、１９４、１９５、１９６、２１２、２１３、２１４、２３０、２３１、２３２、２４８、２４９、２５０、２６６、２６７、２６８、２８４、２８５、２８６、３０２、３０３、３０４、３２０、３２１、３２２、３３８、３３９、３４０、３５６、３５７、３５８、３７４、３７５、３７６、３９２、３９３、３９４、４１０、４１１、４１２、４２８、４２９、４３０、４４６、４４７、４４８、４６４、４６５、４６６、４８２、４８３、４８４、５００、５０１、５０２、５１８、５１９、５２０、５３６、５３７、５３８、５５４、５５５、５５６、５７２、５７３、５７４、５９０、５９１、５９２、６０８、６０９、６１０、６２６、６２７または６２８で示されるヌクレオチド配列と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列を含み、ＩＬ−２２と特異的に結合する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項３】
配列番号５、６、７、２３、２４、２５、４１、４２、４３、５９、６０、６１、７７、７８、７９、９５、９６、９７、１１３、１１４、１１５、１３１、１３２、１３３、１４９、１５０、１５１、１６７、１６８、１６９、１８５、１８６、１８７、２０３、２０４、２０５、２２１、２２２、２２３、２３９、２４０、２４１、２５７、２５８、２５９、２７５、２７６、２７７、２９３、２９４、２９５、３１１、３１２、３１３，３２９、３３０、３３１、３４７、３４８、３４９、３６５、３６６、３６７、３８３、３８４、３８５、４０１、４０２、４０３、４１９、４２０、４２１、４３７、４３８、４３９、４５５、４５６、４５７、４７３、４７４、４７５、４９１、４９２、４９３、５０９、５１０、５１１、５２７、５２８、５２９、５４５、５４６、５４７、５６３、５６４、５６５、５８１、５８２、５８３、５９９、６００、６０１、６１７、６１８、または６１９示されるようなアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の抗体。
【請求項４】
軽鎖可変領域を有するＶＬドメインと重鎖可変領域を有するＶＨドメインとを含み、その重鎖可変領域が配列番号８、９、１０、２６、２７、２８、４４、４５、４６、６２、６３、６４、８０、８１、８２、９８、９９、１００、１１６、１１７、１１８、１３４、１３５、１３６、１５２、１５３、１５４、１７０、１７１、１７２、１８８、１８９、１９０、２０６、２０７、２０８、２２４、２２５、２２６、２４２、２４３、２４４、２６０、２６１、２６２、２７８、２７９、２８０、２９６、２９７、２９８、３１４、３１５、３１６、３３２、３３３、３３４、３５０、３５１、３５２、３６８、３６９、３７０、３８６、３８７、３８８、４０４、４０５、４０６、４２２、４２３、４２４、４４０、４４１、４４２、４５８、４５９、４６０、４７６、４７７、４７８、４９４、４９５、４９６、５１２、５１３、５１４、５３０、５３１、５３２、５４８、５４９、５５０、５６６、５６７、５６８、５８４、５８５、５８６、６０２、６０３、６０４、６２０、６２１または６２２の１つまたは複数を含む、ＩＬ−２２と特異的に結合する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項５】
軽鎖可変領域が配列番号１１、１２、１３、２９、３０、３１、４７、４８、４９、６５、６６、６７、８３、８４、８５、１０１、１０２、１０３、１１９、１２０、１２１、１３７、１３８、１３９、１５５、１５６、１５７、１７３、１７４、１７５、１９１、１９２、１９３、２０９、２１０、２１１、２２７、２２８、２２９、２４５、２４６、２４７、２６３、２６４、２６５、２８１、１８２、１８３、２９９、３００、３０１、３１７、３１８、３１９、３３５、３３６、３３７、３５３、３５４、３５５、３７１、３７２、３７３、３８９、３９０、３９１、４０７、４０８、４０９、４２５、４２６、４２７、４４３、４４４、４４５、４６１、４６２、４６３、４７９、４８０、４８１、４９７、４９８、４９９、５１５、５１６、５１７、５３３、５３４、５３５、５５１、５５２、５５３、５６９、５７０、５７１、５８７、５８８，５８９、６０５、６０６、６０７、６２３、６２４および６２５の１つまたは複数を含む、請求項４に記載の抗体。
【請求項６】
ＶＨドメインが配列番号５、２３、４１、５９、７７、９５、１１３、１３１、１４９、１６７、１８５、２０３、２２１、２３９、２５７、２７５、２９３、３１１、３２９、３４７、３６５、３８３、４０１、４１９、４３７、４５５、４７３、４９１、５０９、５２７、５４５、５６３、５８１、５９９または６１７のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号６、２４、４２、６０、７８、９６、１１４、１３２、１５０、１６８、１８６、２０４、２２２、２４０、２５８、２７６、２９４、３１２、３３０、３４８、３６６、３８４、４０２、４２０、４３８、４５６、４７４，４９２、５１０、５２８、５４６、５６４、５８２、６００または６１８のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項５に記載の抗体。
【請求項７】
ａ）ＶＨドメインが配列番号１６７または４９１で示されるアミノ酸配列を含み、かつ
ｂ）ＶＬドメインが配列番号１６８または４９２で示されるアミノ酸配列を含む、
請求項６に記載の抗体。
【請求項８】
ａ）ＶＨドメインが配列番号２９３または５４５で示されるアミノ酸配列を含み、かつ
ｂ）ＶＬドメインが配列番号２９４または５４６で示されるアミノ酸配列を含む、
請求項６に記載の抗体。
【請求項９】
ａ）ＶＨドメインが配列番号２０３または６１７で示されるアミノ酸配列を含み、かつ
ｂ）ＶＬドメインが配列番号２０４または６１８で示されるアミノ酸配列を含む、
請求項６に記載の抗体。
【請求項１０】
ａ）ＶＨドメインが配列番号３４７または５９９で示されるアミノ酸配列を含み、かつ
ｂ）ＶＬドメインが配列番号３４８または６００で示されるアミノ酸配列を含む、
請求項６に記載の抗体。
【請求項１１】
重鎖可変領域が
ａ）配列番号１７０または４９４、
ｂ）配列番号１７１または４９５、および
ｃ）配列番号１７２または４９６
を含む、請求項４に記載の抗体。
【請求項１２】
重鎖可変領域が
ａ）配列番号２９６または５４８、
ｂ）配列番号２８７または５４９、および
ｃ）配列番号２９８または５００
を含む、請求項４に記載の抗体。
【請求項１３】
重鎖可変領域が
ａ）配列番号２０６または６２０、
ｂ）配列番号２０７または６２１、および
ｃ）配列番号２０８または６２２
を含む、請求項４に記載の抗体。
【請求項１４】
重鎖可変領域が
ａ）配列番号３５０または６０２、
ｂ）配列番号３５１または６０３、および
ｃ）配列番号３５２または６０４
を含む、請求項４に記載の抗体。
【請求項１５】
軽鎖可変領域が
ａ）配列番号１７３または４９７、
ｂ）配列番号１７４または４９８、および
ｃ）配列番号１７５または４９９
を含む、請求項１１に記載の抗体。
【請求項１６】
軽鎖可変領域が
ａ）配列番号２９９または５５１、
ｂ）配列番号３００または５５２、および
ｃ）配列番号３０１または５５３
を含む、請求項１２に記載の抗体。
【請求項１７】
軽鎖可変領域が
ａ）配列番号２０９または６２３、
ｂ）配列番号２１０または６２４、および
ｃ）配列番号２１１または６２５
を含む、請求項１３に記載の抗体。
【請求項１８】
軽鎖可変領域が
ａ）配列番号３５３または６０５、
ｂ）配列番号３５４または６０６、および
ｃ）配列番号３５５または６０７
を含む、請求項１４に記載の抗体。
【請求項１９】
ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４または３５６Ａ１１により認識されるＩＬ−２２エピトープと特異的に結合して、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４または３５６Ａ１１とヒトＩＬ−２２の結合を競合的に阻害する、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項２０】
配列番号５、６、７、２３、２４、２５、４１、４２、４３、５９、６０、６１、７７、７８、７９、９５、９６、９７、１１３、１１４、１１５、１３１、１３２、１３３、１４９、１５０、１５１、１６７、１６８、１６９、１８５、１８６、１８７、２０３、２０４、２０５、２２１、２２２、２２３、２３９、２４０、２４１、２５７、２５８、２５９、２７５、２７６、２７７、２９３、２９４、２９５、３１１、３１２、３１３、３２９、３３０、３３１、３４７、３４８、３４９、３６５、３６６、３６７、３８３、３８４、３８５、４０１、４０２、４０３、４１９、４２０、４２１、４３７、４３８、４３９、４５５、４５６、４５７、４７３、４７４、４７５、４９１、４９２、４９３、５０９、５１０、５１１、５２７、５２８、５２９、５４５、５４６、５４７、５６３、５６４、５６５、５８１、５８２、５８３、５９９、６００、６０１、６１７、６１８または６１９で示されるようなＶＨドメイン、ＶＬドメインまたはＦｖフラグメントを含む、請求項１９に記載の抗体。
【請求項２１】
ＶＨドメインが配列番号１６７または４９１を含む、請求項２０に記載の抗体。
【請求項２２】
ＶＨドメインが配列番号１６８または４９２を含む、請求項２１に記載の抗体。
【請求項２３】
ＶＨドメインが配列番号２９３または５４５を含む、請求項２０に記載の抗体。
【請求項２４】
ＶＨドメインが配列番号２９４または５４６を含む、請求項２３に記載の抗体。
【請求項２５】
ＶＨドメインが配列番号２０３または６１７を含む、請求項２０に記載の抗体。
【請求項２６】
ＶＨドメインが配列番号２０４または６１８を含む、請求項２５に記載の抗体。
【請求項２７】
ＶＨドメインが配列番号３４７または５９９を含む、請求項２０に記載の抗体。
【請求項２８】
ＶＨドメインが配列番号３４８または６００を含む、請求項２７に記載の抗体。
【請求項２９】
０８７Ｂ０３により認識されるＩＬ−２２エピトープと特異的に結合して、０８７Ｂ０３とヒトＩＬ−２２の結合を競合的に阻害する、請求項１９に記載の抗体。
【請求項３０】
３５４Ａ０８により認識されるＩＬ−２２エピトープと特異的に結合して、３５４Ａ０８とヒトＩＬ−２２の結合を競合的に阻害する、請求項１９に記載の抗体。
【請求項３１】
３６８Ｄ０４により認識されるＩＬ−２２エピトープと特異的に結合して、３６８Ｄ０４とヒトＩＬ−２２の結合を競合的に阻害する、請求項１９に記載の抗体。
【請求項３２】
３５６Ａ１１により認識されるＩＬ−２２エピトープと特異的に結合して、３５６Ａ１１とヒトＩＬ−２２の結合を競合的に阻害する、請求項１９に記載の抗体。
【請求項３３】
０８７Ｂ０３である、請求項２２に記載の抗体。
【請求項３４】
３５４Ａ０８である、請求項２４に記載の抗体。
【請求項３５】
３６８Ｄ０４である、請求項２６に記載の抗体。
【請求項３６】
３５６Ａ１１である、請求項２８に記載の抗体。
【請求項３７】
抗体のヒトＩＬ−２２に対する会合定数が少なくとも１０１０Ｍ−１である、請求項１または２の抗体。
【請求項３８】
ＩＬ−２２により媒介されるＢａＦ３細胞の増殖を１５０ｐＭ以下のＩＣ５０で遮断し、該ＢａＦ３細胞がヒトＩＬ−２２受容体を含む、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項３９】
ＩＬ−２２により媒介されるＨＴ２９細胞からのＧＲＯａ分泌を１５０ｐＭ以下のＩＣ５０で遮断する、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４０】
ＩＬ−２２と特異的に結合し、その抗体のヒトＩＬ−２２に対する会合定数が少なくとも１０１０Ｍ−１である、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４１】
ＩＬ−２２により媒介されるＢａＦ３細胞の増殖を１５０ｐＭ以下のＩＣ５０で遮断し、該ＢａＦ３細胞がヒトＩＬ−２２受容体を含む、単離された抗体またはその抗原結合フラグメント。
【請求項４２】
配列番号１で示される配列中の少なくとも１００個の連続するアミノ酸の配列と少なくとも９５％同一であるアミノ酸配列と特異的に結合する、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４３】
ＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒ、またはＩＬ−２２ＲとＩＬ−１０Ｒ２を含む受容体複合体の結合を阻害する、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４４】
ヒトである、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４５】
ＩｇＧ１またはＩｇＧ４である、請求項１または２に記載の抗体。
【請求項４６】
請求項１または２に記載の抗体を含む、医薬組成物。
【請求項４７】
請求項１または２に記載の抗体をコードする、単離された核酸。
【請求項４８】
請求項４７に記載の核酸を含む、発現ベクター。
【請求項４９】
請求項４８に記載のベクターで形質転換された宿主細胞。
【請求項５０】
細菌、哺乳類細胞、酵母細胞、植物細胞または昆虫細胞である、請求項４９に記載の宿主細胞。
【請求項５１】
抗体の発現を可能とする条件下で請求項５０に記載の宿主細胞を培養すること、および細胞培養物から抗体を単離することを含む、ＩＬ−２２と結合する抗体を生産する方法。
【請求項５２】
配列番号５〜１３、２３〜３１、４１〜４９、５９〜６７、７７〜８５、９５〜１０３、１１３〜１２１、１３１〜１３９、１４９〜１５７、１６７〜１７５、１８５〜１９３、２０３〜２１１、２２１〜２２９、２３９〜２４７、２５７〜２６５、２７５〜２８３、２９３〜３０１、３１１〜３１９、３２９〜３３７、３４７〜３５５、３６５〜３７３、３８３〜３９１、４０１〜４０９、４１９〜４２７、４３７〜４４５、４５５〜４６３、４７３〜４８１、４９１〜４９９、５０９〜５１７、５２７〜５３５、５４５〜５５３、５６３〜５７１、５８１〜５８９、５９９〜６０７または６１７〜６２５の１つで示されるアミノ酸配列を含むタンパク質をコードする、請求項４７に記載の核酸。
【請求項５３】
配列番号１４〜２２、３２〜４０、５０〜５８、６８〜７６、８６〜９４、１０４〜１１２、１２２〜１３０、１４０〜１４８、１５８〜１６６、１７６〜１８４、１９４〜２０２、２１２〜２２０、２３０〜２３８、２４８〜２５６、２６６〜２７４、２８４〜２９２、３０２〜３１０、３２０〜３２８、３３８〜３４６、３５６〜３６４、３７４〜３８２、３９２〜４００、４１０〜４１８、４２８〜４３６、４４６〜４５４、４６４〜４７２、４８２〜４９０、５００〜５０８、５１８〜５２６、５３６〜５４４、５５４〜５６２、５７２〜５８０、５９０〜５９８、６０８〜６１６または６２６〜６３４の１つのヌクレオチド配列を含む、請求項５２に記載の核酸。
【請求項５４】
配列番号１６７、１６８、１６９、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、４９１、４９２、４９３、４９４、４９５、４９６、４９７、４９８または４９９で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質をコードする、請求項５２に記載の核酸。
【請求項５５】
配列番号２９３、２９４、２９５、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、５４５、５４６、５４７、５４８、５４９、５５０、５５１、５５２または５５３で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質をコードする、請求項５２に記載の核酸。
【請求項５６】
配列番号２０３、２０４、２０５、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、６１７、６１８、６１９、６２０、６２１、６２２、６２３、６２４または６２５で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質をコードする、請求項５２に記載の核酸。
【請求項５７】
配列番号３４７、３４８、３４９、３５０、３５１、３５２、３５３、３５４、３５５、５９９、６００、６０１、６０２、６０３、６０４、６０５、６０６または６９７で示されるアミノ酸配列を含むタンパク質をコードする、請求項５２に記載の核酸。
【請求項５８】
配列番号１７６、１７７、１７８、１７９、１８０、１８１、１８２、１８３、１８４、５００、５０１、５０２、５０３、５０４、５０５、５０６、５０７または５０８のヌクレオチド配列を含む、請求項５３に記載の核酸。
【請求項５９】
配列番号３０２、３０３、３０４、３０５、３０６、３０７、３０８、３０９、３１０、５５４、５５５、５５６、５５７、５５８、５５９、５６０、５６１または５６２のヌクレオチド配列を含む、請求項５３に記載の核酸。
【請求項６０】
配列番号２１２、２１３、２１４、２１５、２１６、２１７、２１８、２１９、２２０、６２６、６２７、６２８、６２９、６３０、６３１、６３２、６３３または６３４のヌクレオチド配列を含む、請求項５３に記載の核酸。
【請求項６１】
配列番号３５６、３５７、３５８、３５９、３６０、３６１、３６２、３６３、３６４、６０８、６０９、６１０、６１１、６１２、６１３、６１４、６１５または６１６のヌクレオチド配列を含む、請求項５３に記載の核酸。
【請求項６２】
請求項１または２に記載の抗体を含む、診断キット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）、特に、ヒトＩＬ−２２と結合する抗体、例えばヒト抗体、およびその抗原結合フラグメント、ならびにＩＬ−２２に関連する活性の調節におけるそれらの使用に関する。本明細書に開示される抗体は、ＩＬ−２２に関連する障害、例えば、関節炎を含む自己免疫障害の診断、予防および／または治療に有用である。
【背景技術】
【０００２】
抗原は免疫応答を誘発し、２つの最大のリンパ球集団であるＴ細胞とＢ細胞を活性化する。抗原に出くわした後、Ｔ細胞は増殖し、エフェクター細胞へと分化し、一方、Ｂ細胞は増殖し、抗体分泌形質細胞へと分化する。これらのエフェクター細胞は、リンパ球および他の細胞により分泌される小タンパク質（＜約３０ｋＤａ）であるサイトカインを分泌し、かつ／またはサイトカインに応答する。
【０００３】
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）は、ＩＬ−１０と配列相同性を示すクラスＩＩサイトカインである。その発現はＴ細胞ではＩＬ−９またはＣｏｎＡによりアップレギュレーションされる(Dumoutier L. et al. (2000) Proc Natl Acad Sci USA 97(18):10144-9)。さらなる研究では、ＩＬ−２２  ｍＲＮＡの発現がＬＰＳ投与に応答してin vivoで誘導されること、およびＩＬ−２２が急性期応答の指標であるパラメーターを変調することを示している(Dumoutier L. et al. (2000); Pittman D. et al. (2001) Genes and Immunity 2:172)。さらに、ＩＬ−２２は、β−デフェンシン、Ｓ１００Ａ７、Ｓ１００Ａ８およびＳ１００Ａを含む、宿主防御に関連する抗微生物ペプチドの発現を増強する。Wolk et al., Immunity, 21:241-54 (2004); Boniface et al., J. Immunol. 174:3695-3702 (2005); Liang et al., J. Exp. Med., 203(10):2271-79 (2006)。考え合わせると、これらの所見は、ＩＬ−２２は炎症に役割を果たしていることを示す(Kotenko S.V. (2002) Cytokine & Growth Factor Reviews 13(3):223-40)。
【０００４】
ＩＬ−２２はＩＩ型サイトカイン受容体ファミリー（ＣＲＦ２）の２つのメンバーであるＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２からなる受容体複合体と結合すると考えられている(Xie M. H. et al. (2000) J Biol Chem 275(40):31335-9; Kotenko S.V. et al. (2001) J Biol Chem 276(4):2725-32)。ＩＬ−２２受容体の両鎖はいくつかの器官で構成的に発現される。これらの器官に由来する(derived form)上皮細胞系統はin vitroでＩＬ−２２に応答する(Kotenko S.V. (2002) Cytokine & Growth Factor Reviews 13(3):223-40).
ＩＬ−２２はＪＡＫ／ＳＴＡＴ３およびＥＲＫ経路ならびに他のＭＡＰＫ経路の中間体の活性化を誘導する(Dumoutier L. et al. (2000)前掲; Xie M.H. et al. (2000)前掲; Dumoutier L. et al. (2000) J Immunol 164(4):1814-9; Kotenko S.V. et al. (2001) J Biol Chem 276(4):2725-32; Lejeune, D. et al. (2002) J Biol Chem 277(37):33676-82)。
【０００５】
ＣＲＦ２メンバーは、ＩＦＮα／β、ＩＦＮγ、血液凝固因子ＶＩＩａ、ＩＬ−１０およびＩＬ−１０関連タンパク質ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２２、ＩＬ−２４、ＩＬ−２６、ならびに最近同定されたＩＦＮ様サイトカインＩＬ−２８およびＩＬ−２９の受容体である(Kotenko S.V. (2002) Cytokine & Growth Factor Reviews 13(3):223-40; Kotenko, S.V. et al. (2000) Oncogene 19(21):2557-65; Sheppard, P. et al. (2003) Nature Immunology 4(1):63-8; Kotenko, S.V. et al. (2003) Nature Immunology 4(1):69-77)。これらの膜受容体の他、ＣＲＦ２ファミリーもまた、ＩＬ−２２に特異的であり、その活性を遮断する可溶性タンパク質、ＩＬ−２２結合タンパク質（ＩＬ−２２ＢＰ）を含む(Dumoutier, L. et al. (2001) J Immunol 166(12):7090-5; Kotenko, S.V. et al. (2001) J Immunol 166(12):7096-103; Xu, W. et al (2001) Proc Natl Acad Sci USA 98(17):9511-6; Gruenberg, B.H. et al. (2001) Genes & Immunity 2(6):329-34; Wei C-C et al. (2003) Genes & Immunity 4:204-211)。ＩＬ−２２受容体複合体はＩＬ−２２独自のものであり、各鎖（すなわち、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２）は他のＣＲＦ２メンバーと共通のものであって、ＩＬ−２０、ＩＬ−２４（ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−２０Ｒ２）、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９（ＩＦＮ−λＲ１／ＩＬ−１０Ｒ２）およびＩＬ−１０（ＩＬ−１０Ｒ１／ＩＬ−１０Ｒ２）を含む他のサイトカインに対する機能的受容体を規定している(Dumoutier, L. et al. (2001) J. Immunol. 167(7):3545-9; Wang, M. et al. (2002) J Biol Chem 277(9):7341-7; Parrish-Novak, J. et al. (2002) J Biol Chem 277(49) :47517-23; Kotenko, S.V. et al. (1997) EMBO J. 16(19):5894-903; Spencer, S.D. et al. (1998) J Exp Med 187(4):571-8)。
【０００６】
ＣＲＦ２からなる受容体の両鎖はシグナル伝達に必要である。構成受容体の一方の鎖は、サイトカインに対するその高い親和性に基づき、リガンド結合鎖（例えばＩＦＮγＲ１）として歴史上定義されている。他方の鎖（例えばＩＦＮγＲ２）はヘルパー鎖または補助鎖として同定されており、サイトカインだけに最小の親和性を示す(Kotenko, S.V. et al. (2000) Oncogene 19(21):2557-65)。ＩＬ−２２については、ＩＬ−２２Ｒは次にＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ複合体と結合するＩＬ−１０Ｒ２を含む高親和性受容体サブユニットである(Li, J. et al. (2004) Int. Immunopharmacol. 4(5):673-708; Logsdon, N. J. et al. (2002) J. Interferon Cytokine Res 22(11):1099-1112)。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本願は、少なくとも１つには、インターロイキン−２２（「ＩＬ−２２」）、特に、ヒトＩＬ−２２と高い親和性および特異性で結合する抗体およびその抗原結合フラグメントなどのＩＬ−２２結合剤を提供する。本発明の抗体およびその抗原結合フラグメントはまた、本明細書においてそれぞれ「抗ＩＬ−２２抗体」および「そのフラグメント」とも呼ばれる。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
一態様において、抗体またはそのフラグメントは、ＩＬ−２２活性を低減する、阻害する、またはＩＬ−２２活性に拮抗する。このような抗体は、ＩＬ−２２活性と拮抗することにより免疫応答またはＩＬ−２２関連障害を調節するために使用することができる。他の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体は診断的に、またはＩＬ−２２発現細胞に治療薬もしくは細胞傷害性剤を送達するための標的化抗体として使用することができる。よって、本発明の抗ＩＬ−２２抗体はＩＬ−２２関連障害、例えば、自己免疫障害、例えば、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎、狼瘡性関連関節炎または強直性脊椎炎）、硬皮症、全身性紅斑性狼瘡(systemic lupus erythematosis)、ＨＩＶ、シェーグレン症候群、脈管炎、多発性硬化症、自己免疫甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎）、重症筋無力症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、大腸炎、真性糖尿病（Ｉ型）；例えば、皮膚（例えば、乾癬）、心血管系（例えば、アテローム性動脈硬化症）、神経系（例えば、アルツハイマー病）、肝臓（例えば、肝炎）、腎臓（例えば、腎炎）および膵臓（例えば、膵炎）などの炎症症状；心血管障害、例えば、コレステロール代謝障害、酸素フリーラジカル傷害、虚血；創傷治癒関連の障害；呼吸器系障害、例えば、喘息およびＣＯＰＤ（例えば、嚢胞性繊維症）；急性炎症症状（例えば、内毒素血症、敗血症(sepsis)および敗血症(septicaemia)、毒性ショック症候群および感染症）；移植拒絶およびアレルギーを診断、治療および／または予防するのに有用である。一態様において、ＩＬ−２２関連障害は関節障害、例えば、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎または強直性脊椎炎の１以上から選択される障害；呼吸器系障害（例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））；または例えば、皮膚（例えば、乾癬）、心血管系（例えば、アテローム性動脈硬化症）、神経系（例えば、アルツハイマー病）、肝臓（例えば、肝炎）、腎臓（例えば、腎炎）、膵臓（例えば、膵炎）および消化器官（例えば、大腸炎、クローン病およびＩＢＤ）などの炎症症状である。
【０００９】
よって、一態様において、本発明は、ＩＬ−２２、特に、ヒトＩＬ−２２と結合する単離された抗体を対象とする。ある特定の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体は次の特徴のうち少なくとも１つを有し得る（１）モノクローナルまたは単一特異性抗体であること；ヒト抗体であること；（３）in vitro作製抗体であること；（４）in vivo作製抗体（例えば、トランスジェニックマウス系）であること；（５）ＩＬ−２２と少なくとも１０１２Ｍ−１の会合定数で結合すること；（６）ＩＬ−２２と少なくとも１０１１Ｍ−１の会合定数で結合すること；（７）ＩＬ−２２と少なくとも１０１０Ｍ−１の会合定数で結合すること；（８）ＩＬ−２２と少なくとも１０９Ｍ−１の会合定数で結合すること；（９）ＩＬ−２２と少なくとも１０６Ｍ−１の会合定数で結合すること；（１０）ＩＬ−２２と５００ｎＭ以下の解離定数で結合すること；（１１）ＩＬ−２２と１０ｎＭ以下の解離定数で結合すること；（１２）ＩＬ−２２と１５０ｐＭ以下の解離定数で結合すること；（１３）ＩＬ−２２と６０ｐＭ以下の解離定数で結合すること；（１４）ＩＬ−２２とＩＬ−２２ＲまたはＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２の受容体複合体の結合をＩＣ５０  １０ｎＭ以下で阻害すること；（１５）ＩＬ−２２により媒介される、ＩＬ−２２受容体で操作されたＢａＦ３細胞の増殖を、一態様では１ｎＭ以下のＩＣ５０で、別の実施形態では１５０ｐＭ以下のＩＣ５０で、別の実施形態では１００ｐＭ以下のＩＣ５０で、別の実施形態では１０ｐＭ以下のＩＣ５０で遮断すること；および（１６）ＩＬ−２２により媒介されるＨＴ２９細胞からのＧＲＯａ分泌を、一態様では１ｎＭ以下のＩＣ５０で、別の実施形態では１５０ｐＭ以下のＩＣ５０で、別の実施形態では１０ｐＭ以下のＩＣ５０で遮断すること。ＩＬ−２２により媒介されるＢａＦ３細胞の増殖およびＩＬ−２２により媒介されるＨＴ２９細胞からのＧＲＯａの分泌は実施例に記載されるように測定することができる。
【００１０】
本発明の抗体の非限定例としての実施形態は、本明細書では、「ＧＩＬ０１」、「ＧＩＬ１６」、「ＧＩＬ４５」」、「ＧＩＬ６０」、「ＧＩＬ６８」、「ＧＩＬ９２」、「０９７Ｄ０９」、「０６２Ａ０９」、「０６２Ｇ０５」、「０８７Ｂ０３」、「３６７Ｄ０４」、「３６８Ｄ０４」、「１６６Ｂ０６」、「１６６Ｇ０５」、「３７５Ｇ０６」、「３７６Ｂ１０」、「３５４Ａ０８」、「３５５Ｂ０６」、「３５５Ｅ０４」および「３５６Ａ１１」と呼ばれる。これらの抗体はジャームラインニングされ(germlined)ていてもされていなくてもよい。別の実施形態では、抗体は３５６Ａ１１、３５４Ａ０８、０８７Ｂ０３および３６８Ｄ０４から選択される。本発明の抗体は、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４または３５６Ａ１１が結合するものと同じＩＬ−２２エピトープまたは類似のエピトープ（例えば、オーバーラッピングエピトープ）と特異的に結合し得る。他の実施形態では、抗体はＩＬ−２２のフラグメント、例えば、配列番号１で示されるアミノ酸配列またはそれと少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一の配列の、少なくとも１０、２０、５０、７５、１００、１５０または２００個の連続するアミノ酸のフラグメントと特異的に結合する。他の実施形態では、抗体は、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４または３５６Ａ１１の少なくとも１つとその標的エピトープの結合を競合的に阻害する。
【００１１】
一態様において、本発明の抗体は、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４または３５６Ａ１１のＦｖフラグメントのＶＨドメイン、ＶＬドメインまたはその組合せを含む。例えば、抗体は、表１および７で示されるようなアミノ酸配列（ＶＨは配列番号５、２３、４１、５９、７７、９５、１１３、１３１、１４９、１６７、１８５、２０３、２２１、２３９、２５７、２７５、２９３、３１１、３２９、３４７、３６５、３８３、４０１、４１９、４３７、４５５、４７３、４９１、５０９、５２７、５４５、５６３、５８１、５９９または６１７、ＶＬは配列番号６、２４、４２、６０、７８、９６、１１４、１３２、１５０、１６８、１８６、２０４、２２２、２４０、２５８、２７６、２９４、３１２、３３０、３４８、３６６、３８４、４０２、４２０、４３８、４５６、４７４、４９２、５１０、５２８、５４６、５６４、５８２、６００または６１８）またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一であるか、または配列番号５、６、２３、２４、４１、４２、５９、６０、７７、７８、９５、９６、１１３、１１４、１３１、１３２、１４９、１５０、１６７、１６８、１８５、１８６、２０３、２０４、２２１、２２２、２３９、２４０、２５７、２５８、２７５、２７６、２９３、２９４、３１１、３１２、３２９、３３０、３４７、３４８、３６５、３６６、３８３、３８４、４０１、４０２、４１９、４２０、４３７、４３８、４５５、４５６、４７３、４７４、４９１、４９２、５０９、５１０、５２７、５２８、５４５、５４６、５６３、５６４、５８１、５８２、５９９、６００、６１７または６１８と１、２、５、１０または１５個のアミノ酸残基だけが異なる配列）を有するＶＨおよび／またはＶＬドメインを含む。
【００１２】
別の実施形態では、本発明の抗体は、３５６Ａ１１、３５４Ａ０８、０８７Ｂ０３および３６８Ｄ０４から選択される抗体のＦｖフラグメントのＶＨドメイン、ＶＬドメインまたはその組合せを含む。この実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、
【００１３】
配列番号１６７または４９１で示されるアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび／または配列番号１６８または４９２で示されるアミノ酸配列を含むＶＬドメイン（０８７Ｂ０３）；
【００１４】
配列番号２９３または５４５で示されるアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび／または配列番号２９４または５４６で示されるアミノ酸配列を有するＶＬドメイン（３５４Ａ０８）；
【００１５】
配列番号２０３または６１７で示されるアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび／または配列番号２０４または６１８で示されるアミノ酸配列を含むＶＬドメイン（３６８Ｄ０４）；または
【００１６】
配列番号３４７または５９９で示されるアミノ酸配列を含むＶＨドメインおよび／または配列番号３４８または６００で示されるアミノ酸配列を含むＶＬドメイン（３５６Ａ１１）
を含む。
【００１７】
別の実施形態では、抗体は、表１および７で示されるようなヌクレオチド配列（ＶＨは配列番号１４、３２、５０、６８、８６、１０４、１２２、１４０、１５８、１７６、１９４、２１２、２３０、２４８、２６６、２８４、３０２、３２０、３３８、３５６、３７４、３９２、４１０、４２８、４４６、４６４、４８２、５００、５１８、５３６、５５４、５７２、５９０、６０８または６２６、ＶＬは配列番号１５、３３、５１、６９、８７、１０５、１２３、１４１、１５９、１７７、１９５、２１３、２３１、２４９、２６７、２８５、３０３、３２１、３３９、３５７、３７５、３９３、４１１、４２９、４４７、４６５、４８３、５０１、５１９、５３７、５５５、５７３、５９１、６０９または６２７）またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一であるか、または配列番号１４、１５、３２、３３、５０、５１、６８、６９、８６、８７、１０４、１０５、１２２、１２３、１４０、１４１、１５８、１５９、１７６、１７７、１９４、１９５、２１２、２１３、２３０、２３１、２４８、２４９、２６６、２６７、２８４、２８５、３０２、３０３、３２０、３２１、３３８、３３９、３５６、３５７、３７４、３７５、３９２、３９３、４１０、４１１、４２８、４２９、４４６、４４７、４６４、４６５、４８２、４８３、５００、５０１、５１８、５１９、５３６、５３７、５５４、５５５、５７２、５７３、５９０、５９１、６０８、６０９、６２６または６２７と１、２、３、６、１５、３０または４５個のヌクレオチドだけが異なる配列）を有する核酸によりコードされるＶＨおよび／またはＶＬドメインを含む。
【００１８】
他の実施形態では、抗体は、表１および７で示されるようなアミノ酸配列（配列番号７、２５、４３、６１、７９、９７、１１５、１３３、１５１、１６９、１８７、２０５、２２３、２４１、２５９、２７７、２９５、３１３、３３１、３４９、３６７、３８５、４０３、４２１、４３９、４５７、４７５、４９３、５１１、５２９、５４７、５６５、５８３、６０１または６１９）またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一であるか、または配列番号７、２５、４３、６１、７９、９７、１１５、１３３、１５１、１６９、１８７、２０５、２２３、２４１、２５９、２７７、２９５、３１３、３３１、３４９、３６７、３８５、４０３、４２１、４３９、４５７、４７５、４９３、５１１、５２９、５４７、５６５、５８３、６０１または６１９と１、２、５、１０、１５、２０、３０または３５個のアミノ酸残基だけが異なる配列）を有するＦｖドメインを含む。別の実施形態では、本発明の抗体は、３５６Ａ１１（配列番号３４９または６０１）、３５４Ａ０８（配列番号２９５または５４７）、０８７Ｂ０３（配列番号１６９または４９３）および３６８Ｄ０４（配列番号２０５または６１９）から選択される抗体のＦｖドメインを含む。別の実施形態では、抗体は、表１および７で示されるようなヌクレオチド配列（配列番号１６、３４、５２、７０、８８、１０６、１２４、１４２、１６０、１７８、１９６、２１４、２３２、２５０、２６８、２８６、３０４、３２２、３４０、３５８、３７６、３９４、４１２、４３０、４４８、４６６、４８４、５０２、５２０、５３８、５５６、５７４、５９２、６１０または６２８）またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一であるか、または配列番号１６、３４、５２、７０、８８、１０６、１２４、１４２、１６０、１７８、１９６、２１４、２３２、２５０、２６８、２８６、３０４、３２２、３４０、３５８、３７６、３９４、４１２、４３０、４４８、４６６、４８４、５０２、５２０、５３８、５５６、５７４、５９２、６１０または６２８と１、２、３、６、１５、３０、４５、６０、９０または１０５個のヌクレオチド配列だけが異なる配列）を有する核酸によりコードされるＦｖドメインを含む。さらに他の実施形態では、抗体は、これらのＶＨおよびＶＬドメインの少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。例えば、この抗体は、表１および７で示されるか、または表１および７の配列に含まれるアミノ酸配列（配列番号５、７、８、９、１０、２３、２５、２６、２７、２８、４１、４３、４４、４５、４６、５９、６１、６２、６３、６４、７７、７９、８０、８１、８２、９５、９７、９８、９９、１００、１１３、１１５、１１６、１１７、１１８、１３１、１３３、１３４、１３５、１３６、１４９、１５１、１５２、１５３、１５４、１６７、１６９、１７０、１７１、１７２、１８５、１８７、１８８、１８９、１９０、２０３、２０５、２０６、２０７、２０８、２２１、２２３、２２４、２２５、２２６、２３９、２４１、２４２、２４３、２４４、２５７、２５９、２６０、２６１、２６２、２７５、２７７、２７８、２７９、２８０、２９３、２９５、２９６、２９７、２９８、３１１、３１３、３１４、３１５、３１６、３２９、３３１、３３２、３３３、３３４、３４７、３４９、３５０、３５１、３５２、３６５、３６７、３６８、３６９、３７０、３８３、３８５、３８６、３８７、３８８、４０１、４０３、４０４、４０５、４０６、４１９、４２１、４２２、４２３、４２４、４３７、４３９、４４０、４４１、４４２、４５５、４５７、４５８、４５９、４６０、４７３、４７５、４７６、４７７、４７８、４９１、４９３、４９４、４９５、４９６、５０９、５１１、５１２、５１３、５１４、５２７、５２９、５３０、５３１、５３２、５４５、５４７、５４８、５４９、５５０、５６３、５６５、５６６、５６７、５６８、５８１、５８３、５８４、５８５、５８６、５９９、６０１、６０２、６０３、６０４、６１７、６１９、６２０、６２１または６２２）またはそれと実質的に相同な配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一の配列）を有するＶＨドメインの１つ、２つまたは３つのＣＤＲを含み得る。別の実施形態では、本発明の抗体は、３５６Ａ１１、３５４Ａ０８、０８７Ｂ０３および３６８Ｄ０４から選択される抗体のＶＨドメインの１つ、２つまたは３つのＣＤＲを含む。この実施形態では、抗体またはその抗原結合フラグメントは、
【００１９】
ａ）配列番号１７０または４９４；ｂ）配列番号１７１または４９５；および／またはｃ）配列番号１７２または４９６（０８７Ｂ０３）；
【００２０】
ａ）配列番号２９６または５４８；ｂ）配列番号２９７または５４９；および／またはｃ）配列番号２９８または５５０（３５４Ａ０８）；
【００２１】
ａ）配列番号２０６または６２０；ｂ）配列番号２０７または６２１；および／またはｃ）配列番号２０８または６２２（３６８Ｄ０４）；または
【００２２】
ａ）配列番号３５０または６０２；ｂ）配列番号３５１または６０３；および／またはｃ）配列番号３５２または６０４（３５６Ａ１１）
を含む重鎖可変領域を含む。
【００２３】
別の実施形態では、抗体は、表１および７で示されるか、または表１および７の配列に含まれるアミノ酸配列（配列番号６、７、１１、１２、１３、２４、２５、２９、３０、３１、４２、４３、４７、４８、４９、６０、６１、６５、６６、６７、７８、７９、８３、８４、８５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１１４、１１５、１１９、１２０、１２１、１３２、１３３、１３７、１３８、１３９、１５０、１５１、１５５、１５６、１５７、１６８、１６９、１７３、１７４、１７５、１８６、１８７、１９１、１９２、１９３、２０４、２０５、２０９、２１０、２１１、２２２、２２３、２２７、２２８、２２９、２４０、２４１、２４５、２４６、２４７、２５８、２５９、２６３、２６４、２６５、２７６、２７７、２８１、２８２、２８３、２９４、２９５、２９９、３００、３０１、３１２、３１３、３１７、３１８、３１９、３３０、３３１、３３５、３３６、３３７、３４８、３４９、３５３、３５４、３５５、３６６、３６７、３７１、３７２、３７３、３８４、３８５、３８９、３９０、３９１、４０２、４０３、４０７、４０８、４０９、４２０、４２１、４２５、４２６、４２７、４３８、４３９、４４３、４４４、４４５、４５６、４５７、４６１、４６２、４６３、４７４、４７５、４７９、４８０、４８１、４９２、４９３、４９７、４９８、４９９、５１０、５１１、５１５、５１６、５１７、５２８、５２９、５３３、５３４、５３５、５４６、５４７、５５１、５５２、５５３、５６４、５６５、５６９、５７０、５７１、５８２、５８３、５８７、５８８、５８９、６００、６０１、６０５、６０６、６０７、６１８、６１９、６２３、６２４または６２５）またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一の配列）を有するＶＬドメインの１つ、２つまたは３つのＣＤＲを含み得る。別の実施形態では、本発明の抗体は、３５６Ａ１１、３５４Ａ０８、０８７Ｂ０３および３６８Ｄ０４から選択される抗体のＶＬドメインの１つ、２つまたは３つのＣＤＲを含む。この実施形態において、抗体またはその抗原結合フラグメントは、
【００２４】
ａ）配列番号１７３または４９７；ｂ）配列番号１７４または４９８；および／またはｃ）配列番号１７５または４９９（０８７Ｂ０３）；
【００２５】
ａ）配列番号２９９または５５１；ｂ）配列番号３００または５５２；および／またはｃ）配列番号３０１または５５３（３５４Ａ０８）；
【００２６】
ａ）配列番号２０９または６２３；ｂ）配列番号２１０または６２４；および／またはｃ）配列番号２１１または６２５（３６８Ｄ０４）；または
【００２７】
ａ）配列番号３５３または６０５；ｂ）配列番号３５４または６０６；および／またはｃ）配列番号３５５または６０７（３５６Ａ１１）
を含む軽鎖可変領域を含む。
【００２８】
なおさらなる実施形態では、抗体は、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４または３５６Ａ１１のＶＨドメインのＨ３フラグメント、例えば、表１および７で示されるようなアミノ酸配列（配列番号１０、２８、４６、６４、８２、１００、１１８、１３６、１５４、１７２、１９０、２０８、２２６、２４４、２６２、２８０、２９８、３１６、３３４、３５２、３７０、３８８、４０６、４２４、４４２、４６０、４７８、４９６、５１４、５３２、５５０、５６８、５８６、６０４または６２２）またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一の配列）を有するＨ３フラグメントを含む。
【００２９】
本発明の抗体は全長であってもよいし（例えば、少なくとも１つの完全な重鎖と少なくとも１つの完全な軽鎖）、あるいは抗原結合フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖフラグメント、ＦｄフラグメントまたはｄＡｂフラグメント）だけを含んでもよい。この抗体はκ、λ、α、γ、δ、εおよびμ定常領域遺伝子のいずれかから選択される定常領域またはその一部を含み得る。例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥを含む種々のイソ型の重鎖定常領域を使用することができる。軽鎖定常領域はκまたはλから選択することができる。この抗体はＩｇＧであってもよいし、あるいはＩｇＧ１κまたはＩｇＧ１γであってもよい。
【００３０】
本明細書に記載の抗ＩＬ−２２抗体は誘導体化または別の機能的分子（別のペプチドまたはタンパク質（例えば、Ｆａｂフラグメント））と連結することができる。例えば、本発明の抗体は別の抗体、（例えば、とりわけ、二重特異性または多重特異性抗体）、毒素、放射性同位元素、細胞傷害性剤または細胞増殖抑制剤などの少なくとも１つの他の分子存在と機能的に連結することができる（例えば、化学結合、遺伝子融合、非共有結合またはそれ以外による）。
【００３１】
別の態様において、本発明は、少なくとも１つの抗ＩＬ−２２抗体および薬学上許容される担体を含有する医薬組成物を対象とする。この医薬組成物はさらに、少なくとも１つの抗ＩＬ−２２抗体と少なくとも１つの治療薬（例えば、本発明でさらに詳しく記載されるようなサイトカインおよび増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症薬、代謝阻害剤、酵素阻害剤、細胞傷害性剤、細胞増殖抑制剤またはその組合せ）の組合せを含み得る。抗ＩＬ−２２抗体と治療薬の組合せもまた本発明の範囲内にある。本発明の組成物および組合せは、潜在的に活性化され、組織に局在する免疫細胞に加え、例えば、限定されるものではないが、膵臓、皮膚、肺、消化管、肝臓、腎臓、唾液腺および血管内皮を含む種々の組織の上皮細胞に存在するその受容体を介してＩＬ−２２のシグナル伝達を変調することにより、ＩＬ−２２関連炎症症状を調節するために使用することができる。
【００３２】
別の態様において、本発明は、ＩＬ−２２関連障害を有する対象を治療する方法を対象とする。この方法は、その対象に免疫細胞の少なくとも１つのＩＬ−２２活性を阻害するのに十分な量の抗ＩＬ−２２抗体を投与し、それによりＩＬ−２２関連障害を治療することを含む。
【００３３】
この抗ＩＬ−２２抗体は対象に単独または本明細書に記載されるような他の治療薬と組み合わせて投与することができる。対象は哺乳類、例えばヒトであり得る。例えば、この方法は、自己免疫障害、例えば、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎、狼瘡性関連関節炎または強直性脊椎炎）、硬皮症、全身性紅斑性狼瘡(systemic lupus erythematosis)、ＨＩＶ、シェーグレン症候群、脈管炎、多発性硬化症、自己免疫甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎）、重症筋無力症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、大腸炎、真性糖尿病（Ｉ型）；例えば、皮膚（例えば、乾癬）、心血管系（例えば、アテローム性動脈硬化症）、神経系（例えば、アルツハイマー病）、肝臓（例えば、肝炎）、腎臓（例えば、腎炎）および膵臓（例えば、膵炎）などの炎症症状；心血管障害、例えば、コレステロール代謝障害、酸素フリーラジカル傷害、虚血；創傷治癒関連の障害；呼吸器系障害、例えば、喘息およびＣＯＰＤ（例えば、嚢胞性繊維症）；急性炎症症状（例えば、内毒素血症、敗血症(sepsis)および敗血症(septicaemia)、毒性ショック症候群および感染症）；移植拒絶およびアレルギーなどのＩＬ−２２関連障害を有する対象を治療するために使用することができる。一態様において、ＩＬ−２２関連障害は関節障害、例えば、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎または強直性脊椎炎の１以上から選択される障害；呼吸器系障害（例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））；または例えば、皮膚（例えば、乾癬）、心血管系（例えば、アテローム性動脈硬化症）、神経系（例えば、アルツハイマー病）、肝臓（例えば、肝炎）、腎臓（例えば、腎炎）、膵臓（例えば、膵炎）および消化器官（例えば、大腸炎、クローン病およびＩＢＤ）などの炎症症状である。
【００３４】
別の態様において、本発明は、対象において急性期応答を低下させる、阻害するまたは低減する方法を対象とする。この方法は、対象に、対象において急性期応答を低下させる、阻害するまたは低減するのに十分な量のＩＬ−２２結合剤、例えば、ＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば、本明細書に記載されるような抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメント）を投与することを含む。一態様において、対象は、例えば、呼吸器系障害、炎症性障害および自己免疫障害などを含むＩＬ−２２関連障害に苦しむ哺乳類、例えばヒトである。一態様において、ＩＬ−２２結合剤は局部的に、例えば、局所的、皮下または全身循環におけるものでない他の投与により投与される。
【００３５】
別の態様において、ＩＬ−２２結合剤を用い、免疫応答の種類を変更し、かつ／または対象を免疫するために用いるワクチン処方物の有効性を高めることができる。例えば、本発明の抗ＩＬ−２２抗体は、ワクチンの有効性を高めるために免疫の前、免疫中、および／または免疫後に投与することができる。一態様において、このワクチン処方物は１以上のＩＬ−２２アンタゴニストと例えばウイルス抗原、細菌抗原または腫瘍抗原を含む抗原、すなわち免疫原を含む。別の実施形態では、このＩＬ−２２アンタゴニストと免疫原は、互いに例えば１時間以内、３時間以内、１日以内または２日以内に別に投与する。
【００３６】
別の態様において、本発明は、in vitroにおいてサンプル中のＩＬ−２２の存在を検出するための方法を提供する。サンプルは、血清、血漿、組織および生検などの生体サンプルを含み得る、本方法は、本明細書に記載されるようなＩＬ−２２関連障害などの障害を診断するために使用することができる。この方法は、（１）サンプルまたは対照サンプルを抗ＩＬ−２２抗体と接触させることと、（２）抗ＩＬ−２２抗体とサンプルまたは対照サンプルの複合体の形成を検出することを含み、対照サンプルに対するサンプル中の複合体の形成における統計学的に有意な変化が、そのサンプル中のＩＬ−２２の存在の指標となる。
【００３７】
別の態様において、本発明は、in vivoにおいてＩＬ−２２の存在を検出するための方法（例えば、対象におけるin vivoイメージング）を提供する。この方法は、障害、例えば、本明細書に記載されるようなＩＬ−２２関連障害を診断するために使用することができる。この方法は、（１）対象または対照対象に抗ＩＬ−２２抗体を、ＩＬ−２２に対する抗体の結合を可能とする条件下で投与することと、（２）抗体とＩＬ−２２の間の複合体の形成を検出することを含み、対照、例えば対照対象に対する対象中の複合体の形成における統計学的に有意な変化が、ＩＬ−２２の存在の指標となる。
【００３８】
抗体は、結合抗体または非結合抗体の検出を助けるために検出可能物質で直接的または間接的に標識することができる。好適な検出可能物質としては、種々の酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光物質および放射性物質がある。
【００３９】
別の態様において、本発明は、in vivoにおいて薬剤、例えば治療薬または細胞傷害性剤をＩＬ−２２発現細胞に送達または標的化するための方法を提供する。この方法は、抗ＩＬ−２２抗体を対象に、その抗体とＩＬ−２２の結合を可能とする条件下で投与することを含む。抗体は毒素などの第二の治療成分と結合させてもよい。
【００４０】
本開示は、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、Ｏ８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４および３５６Ａ１１のＶＨおよびＶＬドメインに由来する核酸配列を提供する。また、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４および３５６Ａ１１由来の少なくとも１つのＣＤＲを含む核酸配列も提供される。本開示はまた、このような核酸を含むベクターおよび宿主細胞も提供する。
【００４１】
本開示はさらに、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４または３５６Ａ１１のＶＨまたはＶＬドメインに由来するドメインの全てまたは一部を含む新規なＶＨおよびＶＬドメインおよび機能的抗体を生産する方法を提供する。
【００４２】
本開示のさらなる態様はある部分は本明細書に示されており、ある部分は本明細書から明らかであり、あるいは本発明を実施することにより学ぶことができる。本発明は特許請求の範囲に示され、特に特許請求の範囲で指し示され、本開示は特許請求の範囲を限定するものと考えるべきではない。以下の詳細な説明は、本発明の種々の実施形態の例示を含むが、これらは特許請求されるような本発明を限定するものではない。添付の図面は本明細書の一部をなし、説明とともに単に実施例を示すためのものであり、本発明を限定するものではない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４３】
Ｉ．定義
本発明をより容易に理解できるように、特定の用語を最初に定義する。その他の定義は詳細な説明の中に示される。
【００４４】
「抗体」とは、免疫グロブリンまたはそのフラグメントを指し、抗原結合フラグメントまたは抗原結合ドメインを含むいずれのポリペプチドも包含する。この用語は、限定されるものではないが、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単一特異性抗体、多重特異性抗体、非特異的抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、単鎖抗体、キメラ抗体、合成抗体、組換え抗体、ハイブリッド抗体、突然変異抗体、グラフト抗体およびin vitro作製抗体を含む。「抗体」は、「完全な」という用語が付いていなければ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ｄＡｂなどの抗体フラグメントおよび抗原結合機能を保持する他の抗体フラグメントを含む。一般に、このようなフラグメントは抗原結合ドメインを含む。
【００４５】
「抗原結合ドメイン」および「抗原結合フラグメント」とは、抗体と抗原の間の特異的結合を担うアミノ酸を含む抗体分子の一部を指す。抗体によって特異的に認識され、結合されるこの抗原の一部は「エピトープ」と呼ばれる。抗原結合ドメインは抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）と抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含み得るが、両方を含まなくてよい。例えば、Ｆｄフラグメントは２つのＶＨ領域を有し、完全な抗原結合ドメインのいくらかの抗原結合機能を保持する場合が多い。抗体の抗原結合フラグメントの例としては、（１）ＶＬ、ＶＨ、ＣＬおよびＣＨ１ドメインを有する一価フラグメントであるＦａｂフラグメント；（２）ヒンジ領域においてジスルフィド橋により連結された２つのＦａｂフラグメントを有する二価フラグメントであるＦ（ａｂ’）２フラグメント；（３）２つのＶＨドメインとＣＨ１ドメインを有するＦｄフラグメント；（４）抗体の単腕のＶＬドメインとＶＨドメインを有するＦｖフラグメント；（５）ＶＨドメインを有するｄＡｂフラグメント(Ward et al., (1989) Nature 341:544-546)；（６）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）；および（７）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）が挙げられる。Ｆｖフラグメントの２つのドメインＶＬとＶＨは別の遺伝子によりコードされているが、それらは、組換え法を用い、ＶＬ領域とＶＨ領域が対合して一価分子を形成している単一のタンパク質鎖として生成可能とする合成リンカーによって連結することができる（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Bird et al. (1988) Science 242:423-426;およびHuston et al. (1988) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883)。これらの抗体フラグメントは当業者に公知の常法を用いて得られ、それらのフラグメントは完全な抗体の場合と同様にして機能に関して評価される。
【００４６】
「有効量」とは、ＩＬ−２２活性を調節して臨床症状を改善する、または所望の生物学的転帰、例えば、Ｔ細胞および／またはＢ細胞の活性の低下、自己免疫の抑制、移植拒絶の抑制などを達成するのに十分な用量または量を指す。
【００４７】
「ヒト抗体」とは、例えば、Kabat et al. （Kabat, et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, Fifth Edition, U.S. Department of Health and Human Services, NIH Publication No. 91-3242参照）を含む、当技術分野で公知のヒト生殖系列免疫グロブリン配列に実質的に相当する可変領域と定常領域を有する抗体を含む。本発明のヒト抗体は、例えばＣＤＲ、特にＣＤＲ３に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってはコードされていないアミノ酸残基（例えば、in vitroにおいてランダム突然変異もしくは部位特異的突然変異誘発により、またはin vivoにおいて体細胞突然変異により導入された突然変異）を含んでもよい。このヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列によってはコードされていないアミノ酸残基で置換された少なくとも１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたはそれを超える位置を有することができる。
【００４８】
ＩＬ−２２活性およびその同族を「阻害する」またはＩＬ−２２活性およびその同族と「拮抗する」とは、抗ＩＬ−２２抗体と結合することによってＩＬ−２２の少なくとも１つの活性の低下、阻害またはそうでなければ消失を指し、この低減は同じ抗体の不在下でのＩＬ−２２の活性に対するものである。この活性は、例えば実施例７および９に記載されているものを含む、当技術分野で公知のいずれかの技術を用いて測定することができる。阻害または拮抗作用は、ＩＬ−２２ポリペプチドの生物活性の全面的な消失を必ずしも示さない。活性の低下は約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％またはそれ以上であり得る。
【００４９】
「インターロイキン−２２」または「ＩＬ−２２」とは、ＩＬ−２２Ｒおよび／またはＩＬ−２２ＲとＩＬ−１０Ｒ２の受容体複合体と結合することができるクラスＩＩサイトカイン（哺乳類であり得る）を指し、次の特徴の少なくとも１つを有する：（１）天然哺乳類ＩＬ−２２ポリペプチド（全長または成熟型）のアミノ酸配列またはそのフラグメント、例えば、配列番号１（ヒト）または配列番号３（ネズミ）として示されるアミノ酸配列またはそのフラグメント；（２）配列番号１もしくはそのアミノ酸３４〜１７９（ヒト）または配列番号３（ネズミ）もしくはそのフラグメントとして示されるアミノ酸配列と実質的に、例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一のアミノ酸配列；（３）天然哺乳類ＩＬ−２２ヌクレオチド配列もしくはそのフラグメント（例えば、配列番号２もしくはヌクレオチド７１〜６１０（ヒト）または配列番号４（ネズミ）もしくはそのフラグメント）によりコードされるアミノ酸配列；（４）配列番号２として示されるヌクレオチド配列もしくはそのヌクレオチド７１〜６１０（ヒト）または配列番号４（ネズミ）もしくはそのフラグメントと実質的に、例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一のヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列；（５）天然ＩＬ−２２ヌクレオチド配列もしくはそのフラグメント、例えば、配列番号２（ヒト）または配列番号４（ネズミ）もしくはそのフラグメントと縮重したヌクレオチド配列によりコードされるアミノ酸配列；または（６）ストリンジェント条件、例えば、高ストリンジェント条件下で先のヌクレオチド配列の１つとハイブリダイズするヌクレオチド配列。ＩＬ−２２は哺乳類起源、例えば、ヒトまたはマウスのＩＬ−２２Ｒおよび／または１Ｌ−２２ＲとＩＬ−１０Ｒ２の受容体複合体と結合し得る。
【００５０】
ヒトＩＬ−２２のヌクレオチド配列および推定されるアミノ酸配列はそれぞれ配列番号２および配列番号１で示される。成熟ヒトＩＬ−２２のアミノ酸配列は、配列番号１のアミノ酸３４〜１７９に相当する。組換えヒトＩＬ−２２の分析により、多くの構造ドメインが明らかになっている(Nagem et al. (2002) Strucure, 10:1051-62;米国特許出願第２００２／０１８７５１２  Ａ１号)。
【００５１】
「ＩＬ−２２活性」とは、細胞上で、ＩＬ−２２とＩＬ−２２ＲとＩＬ−１０Ｒ２からなる受容体複合体とが結合した結果として誘発または妨害される少なくとも１つの細胞プロセスを指す。ＩＬ−２２活性は、限定されるものではないが、（１）ＩＬ−２２ＲまたはＩＬ−２２ＲとＩＬ−１０Ｒ２の受容体複合体（例えば、ヒトＩＬ−１０Ｒ２を含む、または含まないヒトＩＬ−２Ｒ）との結合；（２）シグナル伝達分子（例えば、ＪＡＫ−１）との会合；（３）ＳＴＡＴタンパク質（例えば、ＳＴＡＴ５、ＳＴＡＴ３またはその組合せ）のリン酸化の刺激；（４）ＳＴＡＴタンパク質の活性化；および（５）上皮細胞、繊維芽細胞または免疫細胞の増殖、分化、エフェクター細胞機能、細胞溶解活性、サイトカイン分泌、生存またはその組合せの変調（例えば、増強または低下）。上皮細胞としては、内皮細胞同様、限定されるものではないが、皮膚、消化管、肝臓および腎臓の細胞が挙げられる。繊維芽細胞としては、限定されるものではないが、滑膜繊維芽細胞が挙げられる。免疫細胞はＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、マクロファージおよび巨核球を含み得る。ＩＬ−２２活性は、例えば実施例２および６に記載されるようなＩＬ−２２受容体阻害アッセイ、実施例９のＧＲＯａ分泌アッセイまたは実施例７のＢＡＦ３増殖アッセイを用い、in vitroで測定することができる。また、ＩＬ−２２活性は、例えば実施例１３に記載されるような免疫応答または障害の進行をスコア化することによりin vivoで測定することもできる。
【００５２】
本明細書において「in vitro作製抗体」とは、可変領域の全てまたは一部（例えば、少なくとも１つのＣＤＲ）が非免疫細胞選択（例えば、in vitroファージディスプレー、タンパク質チップ、または候補配列をそれらの抗原結合能に関して試験することができる他のいずれかの方法）で作製された抗体を指す。この用語は免疫細胞のゲノム再配列によって生じた配列を含まない。
【００５３】
「単離された」とは、その自然環境から実質的に遊離された分子を指す。例えば、単離されたタンパク質は細胞材料またはそれが由来する細胞もしくは組織源に由来する他のタンパク質を実質的に含まない。また、この用語は、単離されたタンパク質が医薬組成物として十分純粋である、または少なくとも７０〜８０％（ｗ／ｗ）の純度、または少なくとも８０〜９０％（ｗ／ｗ）の純度、または少なくとも９０〜９５％の純度、または少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％（ｗ／ｗ）の純度である調製物も指す。
【００５４】
「同一性％(percent identical or percent identity)」とは、少なくとも2つの異なる配列間の類似性を指す。この同一性％は、例えば、Altshul et al. ((1990) J. Mol. Biol., 215:403-410)により記載されたベーシック・ローカル・アライメント・ツール（ＢＬＡＳＴ）；Needleman et al. ((1970) J. Mol. Biol., 48:444-453)のアルゴリズム；またはMeyers et al. ((1988) Comput. Appl. Biosci., 4:11-17)のアルゴリズムなどの標準的なアライメントアルゴリズムにより決定することができる。パラメーターセットは、ギャップ・ペナルティー１２、ギャップ・エクステンド・ペナルティー４およびフレームシフト・ギャップ・ペナルティー５のＢｌｏｓｕｍ  ６２スコアリングマトリックスであり得る。２つのアミノ酸またはヌクレオチド配列間の同一性％はまた、ＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み込まれているE. MeyersおよびW. Miller ((1989) CABIOS, 4:11-17）のアルゴリズムを用い、ＰＡＭ１２０ウエイト・レシジュ・テーブル、ギャップ・レングス・ペナルティー１２およびギャップ・ペナルティー４で決定することもできる。
【００５５】
「レパートリー」とは、少なくとも１つの免疫グロブリンをコードする少なくとも１つの配列に完全にまたは部分的に由来する少なくとも１つのヌクレオチド配列を指す。これらの配列は重鎖のＶ、ＤおよびＪセグメントと軽鎖のＶおよびＪセグメントのin vivo再配列により生じ得る。あるいは、これらの配列は、それに応答して再配列が起こる細胞からも生じ得る（例えば、in vitro刺激）。あるいは、これらの配列の一部または全部はＤＮＡスプライシング、ヌクレオチド合成、突然変異誘発および他の方法により得ることもできる（例えば、米国特許第５，５６５，３３２号参照）。レパートリーは１つの配列だけを含んでもよいし、または遺伝的に多様なコレクション中のものを含む複数の配列を含んでもよい。
【００５６】
「特異的結合」または「特異的に結合する」とは、２つの分子が生理学的条件下で比較的安定な複合体を形成することを指す。特異的結合は、通常中〜高い結合能とともに低親和性を有する非特異的結合とか異なり、高親和性と低〜中の結合能を特徴とする。一般に、結合は、会合定数ＫＡが１０６Ｍ−１より高い場合に特異的であるとみなされる。必要に応じて、非特異的結合は、結合条件を変更することにより、特異的結合に実質的に影響を及ぼすことなく低減することができる。抗体の濃度、溶液のイオン強度、温度、結合させる時間、遮断剤（例えば、血清アルブミン、牛乳カゼイン）の濃度などの適当な結合条件は常法を用いて当業者により至適化することができる。例としての条件が実施例３に示されているが、当業者に公知の他の条件も本発明の範囲内にある。
【００５７】
本明細書において、「ストリンジェント」とは、ハイブリダイゼーションおよび洗浄の条件を表す。ストリンジェント条件は当業者に公知であり、Current Protocols in Molecular Biology, John Wiley & Sons, N.Y. (1989), 6.3.1-6.3.6に見出せる。その参照物件には水性法と非水性法が記載されているが、いずれも使用可能である。ストリンジェントハイブリダイゼーション条件の一例は、約４５℃、６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中でハイブリダイゼーション、その後、５０℃、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で少なくとも１回の洗浄である。もう１つのストリンジェントハイブリダイゼーション条件の例は、約４５℃、６×ＳＳＣ中でハイブリダイゼーション、その後、５５℃、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で少なくとも１回の洗浄である。ストリンジェントハイブリダイゼーション条件の別の例は、約４５℃、６×ＳＳＣ中でハイブリダイゼーション、その後、６０℃、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で少なくとも１回の洗浄である。ストリンジェントハイブリダイゼーション条件のさらなる例は、約４５℃、６×ＳＳＣ中でハイブリダイゼーション、その後、６５℃、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中で少なくとも１回の洗浄である。高ストリンジェント条件は、６５℃、０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳ中でのハイブリダイゼーション、その後、６５℃、０．２×ＳＳＣ、１％ＳＤＳ中での少なくとも１回の洗浄を含む。
【００５８】
「実質的に示されたように」、「実質的に同一の」または「実質的に相同な」とは、示されている配列と比較した際に、関連のアミノ酸配列またはヌクレオチド配列（例えば、ＣＤＲ、ＶＨまたはＶＬドメイン）が同一であるか、または（保存的アミノ酸置換により）実質的でない変化しか持たないことを意味する。実質的でない変化は、特定の領域のアミノ酸５個の配列における１または２個の置換といった微細なアミノ酸変化を含む。抗体の場合、第二の抗体は同じ特異性を有し、第一の抗体の少なくとも５０％の親和性を有する。
【００５９】
本明細書に開示される配列と実質的に同一または相同な配列（例えば、少なくとも約８５％配列同一性）も本願の一部である。いくつかの実施形態において、配列同一性は約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上であり得る。あるいは、その核酸セグメントが選択的ハイブリダイゼーション条件（例えば、高ストリンジェントハイブリダイゼーション条件）下でその鎖の相補物とハイブリダイズする際に実質的同一性または相同性が存在する。これらの核酸は全細胞中に存在してもよいし、細胞溶解液に存在してもよいし、または部分精製形態もしくは実質的に純粋な形態であってもよい。
【００６０】
「治療薬」とは、医学的障害を治療する、または治療を補助する物質である。治療薬としては、限定されるものではないが、抗ＩＬ−２２抗体のＩＬ−２２活性を補足する様式で免疫細胞または免疫応答を変調する物質を含み得る。治療薬の非限定例および使用は本明細書に記載されている。
【００６１】
本明細書において抗ＩＬ−２２抗体の「治療上有効な量」とは、障害もしくは再発障害の少なくとも１つの症候の治療、予防、治癒、遅延、その重篤度の軽減、および／または改善、またはこのような処置を行わない場合の予測を超えての、対象の生存の延長において対象（ヒト患者など）へ単回または複数回投与した際に有効である抗体の量を指す。
【００６２】
「処置」とは、治療的手段または予防的手段を指す。処置は医学的症状を有する対象またはやがてその症状を受け得る対象に、障害もしくは再発障害の１以上の症候を治療する、予防する、治癒させる、遅延させる、その重篤度を軽減する、および／または改善するため、またはこのような処置を行わない場合の予測を超えて対象の生存を延長させるために投じることができる。
【００６３】
ＩＩ．抗ＩＬ−２２抗体
本開示は新規な抗原結合フラグメントを含む新規な抗ＩＬ−２２抗体を提供する。
【００６４】
抗体またはその抗原結合フラグメントを得るためには、当業者に公知の多くの方法が利用できる。例えば、抗体は組換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号）を用いて作製することができる。モノクローナル抗体も、既知の方法に従ったハイブリドーマの作製（例えば、KohlerおよびMilstein (1975) Nature, 256:495-499参照）により作製することができる。このようにして作製されたハイブリドーマを次に、特定の抗原と特異的に結合する抗体を産生する１以上のハイブリドーマを同定するため、酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）および表面プラズモン共鳴（ＢＩＡＣＯ  ＲＥ（商標））分析などの標準的な方法を用いてスクリーニングする。例えば、組換え抗原、天然形態、そのいずれかの変異体またはフラグメント、ならびにその抗原ペプチドなど、いずれの形態の特定の抗原でも免疫原として使用可能である。
【００６５】
抗体を作製する一例としての方法は、タンパク質発現ライブラリー、例えば、ファージまたはリボソームディスプレーライブラリーをスクリーニングすることを含む。ファージディスプレーは、例えば、Ladner et al., 米国特許第５，２２３，４０９号; Smith (1985) Science 228:1315-1317; Clackson et al. (1991) Nature, 352:624-628; Marks et al. (1991) J. MoI. Biol., 222:581-597; ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９１／１７２７１；ＷＯ９２／２０７９１；ＷＯ９２／１５６７９；ＷＯ９３／０１２８８；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９２／０９６９０；およびＷＯ９０／０２８０９に記載されている。
【００６６】
ディスプレーライブラリーの使用の他、特定の抗原を用いて非ヒト動物、例えば齧歯類、例えばマウス、ハムスターまたはラットを免疫することもできる。一態様において、この非ヒト動物は少なくともヒト免疫グロブリン遺伝子の一部を含む。例えば、ヒトＩｇ遺伝子座の大フラグメントを用いて、マウス抗体産生欠陥マウス系統を操作することができる。ハイブリドーマ技術を用い、所望の特異性を有する遺伝子に由来する抗原特異的モノクローナル抗体を産生し、選択することができる。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）、Green et al. (1994) Nature Genetics 7:13-21, US 2003-0070185、１９９６年１０月３１日公開のＷＯ９６／３４０９、および１９９６年４月２９日出願のＰＣＴ出願第ＰＣＴ／ＵＳ９６／０５９２８号参照。
【００６７】
別の実施形態では、非ヒト動物からモノクローナル抗体を得た後、当技術分野で公知の組換えＤＮＡ技術を用い、例えば、ヒト化、脱免疫化、キメラ化などの修飾抗体を作製することができる。キメラ抗体を作製するための種々のアプローチが記載されている。例えば、Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 81:6851 , 1985; Takeda et al., Nature 314:452, 1985, Cabilly et al.,  米国特許第４，８１６，５６７号； Boss et al., 米国特許第４，８１６，３９７号； Tanaguchi et al., 欧州特許公報ＥＰ１７１４９６；欧州特許公報０１７３４９４、英国特許ＧＢ２１７７０９６Ｂ参照。ヒト化抗体はまた、例えば、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子を発現するが、内因性のマウス免疫グロブリン重鎖および軽鎖遺伝子を発現することができないトランスジェニックマウスを用いて作製することもできる。Ｗｉｎｔｅｒは、本明細書に記載のヒト化抗体を作製するために使用可能なＣＤＲグラフト法の例を記載している（米国特許第５，２２５，５３９号）。特定のヒト抗体のＣＤＲの全てを非ヒトＣＤＲの少なくとも一部で置換することもできるし、ＣＤＲの一部だけを非ヒトＣＤＲで置換することもできる。ヒト化抗体の、所定の抗原への結合に必要な数のＣＤＲを置換する必要があるだけである。
【００６８】
ヒト化抗体またはそのフラグメントは、抗原結合に直接関与しないＦｖ可変ドメインの配列をヒトＦｖ可変ドメイン由来の等価配列で置換することにより作製することができる。ヒト化抗体またはそのフラグメントを作製する方法の例は、Morrison (1985) Science 229:1202-1207およびOi et al. (1986) BioTechniques 4:214;および米国特許第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；同第５，８５９，２０５号；および同第６，４０７，２１３号に提供されている。これらの方法は、重鎖または軽鎖の少なくとも一方に由来する免疫グロブリンＦｖ可変ドメインの全部または一部をコードする核酸配列を単離し、操作し、発現させることを含む。このような核酸は上記のような所定の標的に対する抗体を産生するハイブリドーマから得られるもの、ならびに他の供給源から得られるものであってもよい。このヒト化抗体分子をコードする組換えＤＮＡを次に、適当な発現ベクターにクローニングすることができる。
【００６９】
ある特定の実施形態では、ヒト化抗体は保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖系列置換および／または復帰突然変異の導入により至適化される。このような変更された免疫グロブリン分子は当技術分野で公知のいくつかの技術のいずれによっても作製することができ（例えば、Teng et al., Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 80:7308-7312, 1983; Kozbor et al, Immunology Today, 4:7279, 1983; Olsson et al., Meth. Enzymol., 92:3-16, 1982参照）、ＰＣＴ公報ＷＯ９２／０６１９３またはＥＰ０２３９４００の教示に従って作製することができる。
【００７０】
抗体またはそのフラグメントはまた、ＷＯ９８／５２９７６およびＷＯ００／３４３１７に開示されている方法によるヒトＴ細胞エピトープの特異的欠失、すなわち「脱免疫化」によって修飾することができる。要するに、抗体の重鎖および軽鎖可変ドメインを、ＭＨＣクラスＩＩと結合するペプチドに関して分析することができ、これらのペプチドは潜在的Ｔ細胞エピトープを表す（ＷＯ９８／５２９７６およびＷＯ００／３４３１７に定義されている通り）。潜在的Ｔ細胞エピトープの検出に関しては、「ペプチドスレッディング」と呼ばれるコンピューターモデリングアプローチを適用することができ、加えて、ヒトＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドのデータベースを、ＷＯ９８／５２９７６およびＷＯ００／３４３１７に記載されているように、ＶＨ配列およびＶＬ配列中に存在するモチーフに関して検索することができる。これらのモチーフは１８の主要ＭＨＣクラスＩＩ  ＤＲアロタイプのいずれとも結合し、よって、潜在的Ｔ細胞エピトープを構成する。検出された潜在的Ｔ細胞エピトープは、可変ドメイン中の少数のアミノ酸残基を置換すること、または好ましくは、単一アミノ酸置換により削除することができる。一般に、保存的置換が行われる。もっぱらというわけではないが多くの場合、ヒト生殖系列抗体配列中のある位置に共通のアミノ酸を使用することができる。例えば、ヒト生殖系列配列は、Tomlinson, et at. (1992) J. Mol. Biol. 227:776-798; Cook, G. P. et al. (1995) Immunol. Today Vol. 16(5):237-242; Chothia, D. et al. (1992) J. Mol. Biol. 227:799-817;およびTomlinson et al. (1995) EMBO J. 14:4628-4638に開示されている。Ｖ  ＢＡＳＥディレクトリは、ヒト免疫グロブリン可変領域配列の包括的ディレクトリを提供する（Tomlinson, LA. et al. MRC Centre for Protein Engineering, Cambridge, UKによりコンパイルされたもの）。これらの配列を、例えば、フレームワーク領域およびＣＤＲに関するヒト配列の供給源として使用することができる。コンセンサスヒトフレームワーク領域は、例えば米国特許第６，３００，０６４号に記載されているように使用することができる。
【００７１】
ある種の実施形態では、抗体は変更された免疫グロブリン定常領域またはＦｃ領域を含み得る。例えば、本明細書の技術に従って作製された抗体は、エフェクター細胞の活性、溶解、補体媒介活性、抗体クリアランスおよび抗体半減期などの抗体のいくつかの免疫機能を制御することができる、補体および／またはＦｃ受容体などのエフェクター分子とより強固に、またはより特異的に結合し得る。抗体（例えば、ＩｇＧ抗体）のＦｃ受容体と結合する典型的なＦｃ領域としては、限定されるものではないが、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩおよびＦｃＲｎサブクラスの受容体（これらの受容体の対立遺伝子変異体および選択的スプライシング形態を含む）が挙げられる。Ｆｃ受容体は、RavetchおよびKinet, Annu. Rev. Immunol 9:457-92, 1991; Capel et al., lmmunomethods 4:25-34, 1994;およびde Haas et al., J. Lab. Clin. Med. 126:330-41, 1995)に総説がある。
【００７２】
さらなる抗体作製技術に関しては、Antibodies: A Laboratory Manual, Harlow et al.編, Cold Spring Harbor Laboratory, 1988を参照。本発明は特定の供給源、作製方法または抗体の他の特殊な特徴のいずれにも必ずしも限定されない。
【００７３】
抗体は、免疫グロブリンとしても知られ、一般に、各およそ２５ｋＤａの２つの軽（Ｌ）鎖と各およそ５０ｋＤａの２つの重（Ｈ）鎖からなる四量体グリコシル化タンパク質である。抗体には、λおよびκと呼ばれる２種類の軽鎖が見られる。重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列によって、免疫グロブリンをＡ、Ｄ、Ｅ、ＧおよびＭの５つの主要クラスに割り付けることができ、これらのいくつかは、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２などのサブクラス（イソ型）にさらに分けることができる。各軽鎖はＮ末端可変（Ｖ）ドメイン（ＶＬ）と定常（Ｃ）ドメイン（ＣＬ）を含む。各重鎖はＮ末端Ｖドメイン（ＶＨ）と３つまたは４つのＣドメイン（ＣＨ）とヒンジ領域を含む。ＶＨに最も近いＣＨドメインはＣＨ１と呼ばれる。ＶＨおよびＶＬドメインは、フレームワーク領域と呼ばれる、比較的保存された配列の４領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）からなり、これらは超可変配列の３領域（相補性決定領域、ＣＤＲ）のスキャフォールドを形成している。これらのＣＤＲは、抗体と抗原の特異的相互作用を担う残基のほとんどを含んでいる。ＣＤＲはＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と呼ばれる。よって、重鎖のＣＤＲ成分はＨ１、Ｈ２およびＨ３と呼ばれ、軽鎖のＣＤＲ成分はＬ１、Ｌ２およびＬ３と呼ばれる。
【００７４】
ＣＤＲ３は一般に、抗体結合部位内の分子の多様性の最大の源である。例えば、Ｈ３は、アミノ酸残基２個といった短い場合、またはアミノ酸２６を超える場合もある。クラスの異なる免疫グロブリンのサブユニット構造および三次元構造は当技術分野でよく知られている。抗体構造の総説としては、Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Harlow et al.編, 1988を参照。当業者ならば、例えばＣＨ、ＶＨ、ＣＬ、ＶＬ、ＣＤＲ、ＦＲ構造などの各サブユニット構造は、例えば抗原と結合するＶＨ、ＶＬまたはＣＤＲサブユニットの一部などの活性フラグメント、すなわち、抗原結合フラグメント、または例えばＦｃ受容体および／または補体と結合し、かつ／またはそれを活性化するＣＨサブユニットの一部を含むことが分かるであろう。ＣＤＲは一般に、Sequences of Proteins of immunological Interest, US Department of Health and Human Services (1991), Kabat et al.編に記載されているようなＫａｂａｔ  ＣＤＲを指す。抗原結合部位を同定するためのもう１つの標準とは、Ｃｈｏｔｈｉａにより記載されているような超可変ループを指す。例えば、Chothia, D. et al. (1992) J. Mol. Biol. 227:799-817;およびTomlinson et al. (1995) EMBO J. 14:4628-4638参照。さらに別の標準として、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウエアに用いられているＡｂＭ定義がある。一般に、例えば、Protein Sequence and Structure Analysis of Antibody Variable Domains. In: Antibody Engineering Lab Manual (Ed.: Duebel, S. and Kontermann, R., Springer-Verlag, Heidelberg)参照。Ｋａｂａｔ  ＣＤＲに関して記載されている具体例は、Ｃｈｏｔｈｉａ超可変ループまたはＡｂＭ定義ループに関して記載されている類似の関係を用いて実行することができる。
【００７５】
Ｆａｂフラグメント(Fragment antigen-binding)は、これらの定常領域間のジスルフィド結合により連結されたＶＨ−ＣＨ１およびＶＬ−ＣＬドメインからなる。Ｆｖフラグメントはより小さく、非共有結合したＶＨドメインとＶＬドメインからなる。この非共有結合の解離傾向を克服するために、単鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）を構築することができる。このｓｃＦｖは、（１）ＶＨのＣ末端とＶＬのＮ末端、または（２）ＶＬのＣ末端とＶＨのＮ末端を連結するフレキシブルポリペプチドを含む。リンカーとしては１５マー（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３ペプチドが使用可能であるが、他のリンカーも当技術分野で公知である。
【００７６】
組み立ておよび体細胞突然変異後の抗体遺伝子の配列は多様性が高く、これらの多様な遺伝子は１０１０の異なる抗体分子をコードすると推計される(Immunoglobulin Genes, 2nd ed., eds. Jonio et al., Academic Press, San Diego, CA, 1995)。
【００７７】
「二重特異性」または「二機能的抗体」とは、２つの異なる重鎖／軽鎖対と２つの異なる結合部位を有する人工ハイブリッド抗体である。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’フラグメントの連結を含む様々な方法によって作製することができる。例えば、Songsivilai & Lachmann, Clin. Exp. Immunol. 79:315-321 (1990); Kostelny et al., J. Immunol. 148, 1547-1553 (1992)参照。一態様において、二重特異性抗体は、Ｆａｂ’フラグメントなどの第一の結合ドメインポリペプチドが、免疫グロブリン定常領域を介して第二の結合ドメインポリペプチドと連結されたものを含む。
【００７８】
Small Modular lmmunoPharmaceuticals (SMIP（商標）)は、結合ドメインポリペプチドを含む変異体分子の例である。ＳＭＩＰならびにそれらの使用および応用は、例えば、米国公開特許出願第２００３／０１１８５９２号、同第２００３／０１３３９３９号、同第２００４／００５８４４５号、同第２００５／０１３６０４９号、同第２００５／０１７５６１４号、同第２００５／０１８０９７０号、同第２００５／０１８６２１６号、同第２００５／０２０２０１２号、同第２００５／０２０２０２３号、同第２００５／０２０２０２８号、同第２００５／０２０２５３４号および同第２００５／０２３８６４６号およびその関連のパテントファミリーに開示されており、全て出典明示によりそのまま本明細書の一部とされる。
【００７９】
ＳＭＩＰ（商標）は一般に、免疫グロブリンヒンジまたはヒンジ作用領域ポリペプチドと融合されているか、またはそうでなければ接続されている結合ドメインポリペプチドを含む結合ドメイン−免疫グロブリン融合タンパク質を指し、これはさらに、ＣＨ１以外の、免疫グロブリン重鎖由来の１以上の天然または操作型定常領域、例えば、ＩｇＧおよびＩｇＡのＣＨ２およびＣＨ３領域、またはＩｇＥのＣＨ３およびＣＨ４領域を含む領域と融合されるか、またはそうでなければ接続される（より完全な説明としては、出典明示により本明細書の一部とされる、例えば、Ledbetter、 J． et al．による米国第２００５／０１３６０４９号参照）。結合ドメイン−免疫グロブリン融合タンパク質はさらに、ヒンジ領域ポリペプチドと融合されているか、またはそうでなければ接続されている天然または操作型免疫グロブリン重鎖ＣＨ２定常領域ポリペプチド（または全てもしくは一部がＩｇＥに由来する構築物の場合にはＣＨ３）と、ＣＨ２定常領域ポリペプチド（または全てもしくは一部がＩｇＥに由来する構築物の場合にはＣＨ３）と融合されているか、またはそうでなければ接続されている天然または操作型免疫グロブリン重鎖ＣＨ３定常領域ポリペプチド（または全てもしくは一部がＩｇＥに由来する構築物の場合にはＣＨ４）を含む領域を含み得る。一般に、このような結合ドメイン−免疫グロブリン融合タンパク質は、抗体依存性細胞媒介細胞傷害性、補体結合、および／または標的、例えば、ヒトＩＬ−２２などの標的抗原との結合からなる群から選択される少なくとも１つの免疫活性が可能である。
【００８０】
治療タンパク質、すなわち、それが作用する身体の領域に対して、または中間体を介して遠隔作用する身体の領域に対して生物作用を有するタンパク質またはペプチドも、本発明の実施に有用である。治療タンパク質は、ペプチドミメティクスを含み得る。ミメティクスは、タンパク質の二次構造のエレメントを模倣するペプチド含有分子である。例えば、出典明示により本明細書の一部とされる、Johnson et al., “Peptide Turn Mimetics” in BIOTECHNOLOGY AND PHARMACY, Pezzuto et al., Eds., Chapman and Hall, New York (1993)参照。ペプチドミメティクスの使用の背後にある基礎的原理は、タンパク質のペプチド主鎖は主としてアミノ酸側鎖を、抗体と抗原の相互作用など、分子の相互作用を助けるよう方向付けるために存在する。ペプチドミメティックは天然分子に類似の分子相互作用を可能とすること考えられる。これらの原理を用い、本明細書に開示される標的ペプチドの天然の特性の多くを有するが、変更され、可能性として改良された特徴を有する、第二世代の分子を工作することができる。
【００８１】
治療タンパク質の他の具体例は、融合タンパク質を含む。これらの分子は一般に、Ｎ末端またはＣ末端において第二のポリペプチドまたはタンパク質の全てまたは一部に連結された、標的ペプチド、例えば、ＩＬ−２２または抗ＩＬ−２２抗体の全てまたは実質的に一部を有する。例えば、融合には、異種宿主におけるタンパク質の組換え発現を可能とするため、他種に由来するリーダー配列を使用することができる。別の有用な融合には、融合タンパク質の精製を容易にするために、抗体エピトープなどの免疫活性ドメインの付加を含む。融合点またはその付近に切断部位を含めると、精製後の外来ポリペプチドの除去が容易になる。他の有用な融合には、酵素由来の活性部位、グリコシル化ドメイン、細胞標的化シグナルまたはトランスメンブラン領域などの機能的ドメインの連結を含む。融合タンパク質に組み込み得るタンパク質またはペプチドの例としては、細胞増殖抑制タンパク質、細胞致死性タンパク質、プロアポトーシス因子、抗脈管形成因子、ホルモン、サイトカイン、増殖因子、ペプチド薬、抗体、抗体のＦａｂフラグメント、抗原、受容体タンパク質、酵素、レクチン、ＭＨＣタンパク質、細胞接着タンパク質および結合タンパク質が含まれる。融合タンパク質を作製する方法は当業者によく知られている。このようなタンパク質は、例えば、二機能性架橋試薬を用いる化学的結合により、または完全融合タンパク質のde novo合成により、または第二のペプチドまたはタンパク質をコードするＤＮＡ配列への標的化ペプチドをコードするＤＮＡ配列の付着と、その後の完全な融合タンパク質の発現によって生産することができる。
【００８２】
一実施形態では、標的化ペプチド、例えば、ＩＬ−２２または抗ＩＬ−２２抗体を、２つの定常領域ドメインとヒンジ領域を含むが、可変領域を欠いているＦｃフラグメントなどの免疫グロブリン重鎖定常領域と融合させる（出典明示により本明細書の一部とされる、米国特許第６，０１８，０２６号および同第５，７５０，３７５号参照）。このＦｃ領域は天然Ｆｃ領域であってもよいし、あるいは治療の質、循環時間、凝集の軽減などの特定の質を改良するために変更されていてもよい。Ｆｃ領域に融合されているペプチドおよびタンパク質は一般に非融合対応物よりもin vivoにおいて長い半減期を示す。また、Ｆｃ領域との融合により、融合ポリペプチドの二量体形成／多量体形成が可能となる。
【００８３】
当業者に知られているように、ＶＨＨ分子（またはナノボディー）は、出典明示により本明細書の一部とされるＷＯ９４０４６７８に記載されているようなラクダ科由来のものなど、本来軽鎖を欠いている免疫グロブリンに由来する重鎖可変ドメインである。このようなＶＨＨ分子はラクダ科の種、例えば、ラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカおよびグアナコで作製された抗体に由来するものであってよく、ラクダ科またはラクダ化可変ドメインと呼ばれることがある。例えば、出典明示により本明細書の一部とされるMuyldermans., J. Biotechnology (2001) 74(4):277-302参照。ラクダ科以外の他種は、本来軽鎖を欠いた重鎖抗体を産生し得る。ＶＨＨ分子はＩｇＧ分子の約１０分の１の大きさである。それらは単一のポリペプチドであり、極めて安定であり、極端なｐＨおよび温度条件にも耐性がある。さらに、それらはプロテアーゼの作用にも耐性があり、従来の抗体ではこの限りでない。さらに、ＶＨＨのin vitro発現は高収率で、適切に折り畳まされた機能的ＶＨＨを産生する。さらに、ラクダ科で生成される抗体は、抗体ライブラリーの使用により、またはラクダ科以外の哺乳類の免疫化により、in vitroで生成された抗体によって認識されるもの以外のエピトープを認識する（出典明示により本明細書の一部とされるＷＯ９７４９８０５参照）。
【００８４】
本発明の一態様は、ＩＬ−２２と結合する抗体および抗原結合フラグメントを含む。本開示はヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリーに由来する新規なＣＤＲを提供する。ＣＤＲを担持するための構造は一般に、抗体重鎖もしくは軽鎖またはその一部であり、ここで、ＣＤＲは天然ＣＤＲ領域に局在している。可変ドメインの構造と位置は、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, No. 91-3242, National Institutes of Health Publications, Bethesda, MD (1991)に記載されているようにして決定することができる。
【００８５】
本発明の抗ＩＬ−２２抗体（それらのｓｃＦｖフラグメント、ＶＨおよびＶＬドメインならびにＣＤＲを含む）の例示的実施形態のＤＮＡおよびアミノ酸（ＡＡ）配列は図７〜１０に示され、表１および７に挙げられている。生殖系列化されていない抗体の２０の具体例は、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４および３５６Ａ１１として示される。生殖系列化されていない抗体のＶＨおよびＶＬドメインにおけるＣＤＲの位置は表２に挙げられている。生殖系列化されている抗体の１５の具体例は、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０６２Ａ０９、０８７Ｂ０３、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４として示される。
【表１】
2009531023.tif 000003
【表２】
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【表３】
2009531023.tif 000005
【００８６】
本発明の抗ＩＬ−２２抗体は所望により、抗体定常領域またはその一部を含み得る。例えば、ＶＬドメインは、そのＣ末端においてＣκまたはＣλのような軽鎖定常ドメインと結合させることができる。同様に、ＶＨドメインまたはその一部は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭおならびにいずれかのイソ型サブクラスのような重鎖の全てまたは一部と結合させることができる。定常領域は当技術分野で公知である（例えば、Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, No. 91-3242, National Institutes of Health Publications, Bethesda, MD (1991)参照）。よって、本発明の範囲内の抗体は、当技術分野で公知の定常領域と組み合わせられたＶＨおよびＶＬドメインまたはその一部を含む。
【００８７】
ある特定の実施形態は、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４または３５６Ａ１１由来のＦｖフラグメントのＶＨドメイン、ＶＬドメインまたはその組合せを含む。別の実施形態は、３５６Ａ１１、３５４Ａ０８、０８７Ｂ０３および３６８Ｄ０４から選択される抗体に由来するＦｖフラグメントのＶＨドメイン、ＶＬドメインまたはその組合せを含む。さらなる実施形態は、ＶＨおよびＶＬドメインに由来する１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。そのＣＤＲ配列が配列番号５〜１３、２３〜３１、４１〜４９、５９〜６７、７７〜８５、９５〜１０３、１１３〜１２１、１３１〜１３９、１４９〜１５７、１６７〜１７５、１８５〜１９３、２０３〜２１１、２２１〜２２９、２３９〜２４７、２５７〜２６５、２７５〜２８３、２９３〜３０１、３１１〜３１９、３２９〜３３７、３４７〜３５５、３６５〜３７３、３８３〜３９１、４０１〜４０９、４１９〜４２７、４３７〜４４５、４５５〜４６３、４７３〜４８１、４９１〜４９９、５０９〜５１７、５２７〜５３５、５４５〜５５３、５６３〜５７１、５８１〜５８９、５９９〜６０７または６１７〜６２５内に含まれる抗体は、本発明の範囲内に包含される。例えば、一態様において、抗体は、生殖系列化されているまたは生殖系列化されていないＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４または３５６Ａ１１の、または３５６Ａ１１、３５４Ａ０８、０８７Ｂ０３および３６８Ｄ０４から選択される抗体に由来するＶＨドメインのＨ３フラグメントを含む。
【００８８】
ある特定の実施形態では、このＶＨおよび／またはＶＬドメインは生殖系列化されていてもよく、すなわち、これらのドメインのフレームワーク領域（ＦＲ）は、生殖系列の細胞によって産生されるものに適合する従来の分子生物学的技術を用いて突然変異させる。他の実施形態では、ＦＲ配列はコンセンサス生殖系列配列からの発散を維持している。本発明の一態様において、生殖系列化されている抗体は表７に示される。
【００８９】
一態様において、本発明は、生殖系列化されているＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４または３５６Ａ１１のアミノ酸配列および核酸配列を提供する。生殖系列化されているＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０６２Ａ０９、０８７Ｂ０３、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４のＶＨドメインのアミノ酸およびヌクレオチド配列は表７および図８に示されている。生殖系列化されているＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、Ｇ１Ｌ６８、ＧＩＬ９２、０６２Ａ０９、０８７Ｂ０３、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４のＶＬドメインのアミノ酸配列およびヌクレオチド配列も表７および図８に示されている。
【００９０】
一態様において、突然変異誘発を用い、抗体を１以上の生殖系列配列とより類似するようにする。これは、体細胞突然変異誘発またはｅｒｒｏｒ  ｐｒｏｎｅ  ＰＣＲによって抗体のフレームワーク領域に突然変異を導入する場合に望ましいものであり得る。ＶＨおよびＶＬドメインの生殖系列配列は、ＶＢＡＳＥデータベース(MRC Center for Protein Engineering, UK)に対してアミノ酸および核酸配列アラインメントを行うことにより同定することができる。ＶＢＡＳＥは、ＧｅｎｂａｎｋおよびＥＭＢＬデータライブラリーの最新公開を含む、１０００の公開配列からコンパイルされた全ヒト生殖系列可変領域配列の包括的ディレクトリである。いくつかの実施形態において、ｓｃＦｖのＦＲ領域はＶＢＡＳＥデータベースにおける最も近い一致に従って突然変異され、ＣＤＲ部分はそのまま維持される。
【００９１】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４または３５６Ａ１１により認識されるエピトープと同じエピトープと特異的に反応し、その結果、それらはＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４または３５６Ａ１１とヒトＩＬ−２２の結合を競合的に阻害する。このような抗体は競合的結合アッセイで決定することができる。一態様において、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、３６８Ｄ０４により認識されるＩＬ−２２エピトープと結合し、その結果、この抗体は３６８Ｄ０４とヒトＩＬ−２２の結合を競合的に阻害する。別の実施形態では、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、３５６Ａ１１により認識されるＩＬ−２２エピトープと結合し、その結果、この抗体は３５６Ａ１１とヒトＩＬ−２２の結合を競合的に阻害する。別の実施形態では、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、３５４Ａ０８により認識されるＩＬ−２２エピトープと結合し、その結果、この抗体は３５４Ａ０８とヒトＩＬ−２２の結合を競合的に阻害する。別の実施形態では、この抗体またはその抗原結合フラグメントは、０８７Ｂ０３により認識されるＩＬ−２２エピトープと結合し、その結果、この抗体は０８７Ｂ０３とヒトＩＬ−２２の結合を競合的に阻害する。一態様において、ヒトＩＬ−２２に対するこれらの抗体の会合定数（ＫＡ）は少なくとも１０６Ｍ−１である。別の実施形態では、ヒトＩＬ−２２に対するこれらの抗体の会合定数は少なくとも１０９Ｍ−１である。他の実施形態では、ヒトＩＬ−２２に対するこれらの抗体の会合定数は少なくとも１０１０Ｍ−１、少なくとも１０１１Ｍー１または少なくとも１０１２Ｍー１である。結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、生物特異的相互作用分析などのバイオセンサー技術、または本願に記載されているものを含む他の技術といった当技術分野で公知の技術を用いて決定することができる。
【００９２】
本発明の抗体は、例えば、ＩＬ−２２の全てまたは一部を含む組換えタンパク質などの他のタンパク質と結合し得ると考えられる。
【００９３】
当業者ならば、開示されている抗体は、ＩＬ−２２といく分ことなるタンパク質を検出、測定および／または阻害するために使用可能であることが分かるであろう。例えば、これらのタンパク質はＩＬ−２２のホモログであり得る。抗ＩＬ−２２抗体は、配列番号１で示される配列中の少なくとも１００、８０、６０、４０または２０個の連続するアミノ酸のいずれかの配列と少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはそれ以上同一である配列を含むタンパク質と結合すると考えられる。
【００９４】
配列相同性分析の他、エピトープマッピング（例えば、Epitope Mapping Protocols, ed. Morris, Humana Press, 1996参照）ならびに二次元および三次元構造解析を行い、本開示の抗体およびそれらの、抗原との複合体から仮定される特定の３Ｄ構造を特定することができる。このような方法としては、限定されるものではないが、Ｘ線結晶学(Engstom (1974) Biochem. Exp. Biol., 11:7-13)および本抗体の仮想表示のコンピューターモデリング(Fletterick et al. (1986) Computer Graphics and Molecular modeling, in Current Communications in Molecular Biology, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY)が含まれる。
【００９５】
本開示は、変更された表１  ＶＨおよび／またはＶＬ配列を有する抗体を含む抗ＩＬ−２２抗体を得るための方法を提供する。このような抗体は、当業者により、当技術分野で公知の技術を用いて誘導することができる。例えば、ＦＲ領域および／またはＣＤＲ領域にアミノ酸置換、欠失または付加を導入することができる。ＦＲの変化は通常、抗体の安定性および免疫原性を向上させるために設計され、一方、ＣＤＲの変化はその抗原に対する抗体の親和性を高めるように設計される。親和性を高める変化は、ＣＤＲ配列を変更し、その標的に対する抗体の親和性を測定することにより調べることができる（Antibody Engineering, 2nd ed., Oxford University Press, ed. Borrebaeck, 1995参照）。
【００９６】
そのＣＤＲ配列が配列番号５〜１３、２３〜３１、４１〜４９、５９〜６７、７７〜８５、９５〜１０３、１１３〜１２１、１３１〜１３９、１４９〜１５７、１６７〜１７５、１８５〜１９３、２０３〜２１１、２２１〜２２９、２３９〜２４７、２５７〜２６５、２７５〜２８３、２９３〜３０１、３１１〜３１９、３２９〜３３７、３４７〜３５５、３６５〜３７３、３８３〜３９１、４０１〜４０９、４１９〜４２７、４３７〜４４５、４５５〜４６３、４７３〜４８１、４９１〜４９９、５０９〜５１７、５２７〜５３５、５４５〜５５３、５６３〜５７１、５８１〜５８９、５９９〜６０７または６１７〜６２５に含まれる、またはそれらの配列内に含まれるものとは実質的でない違いしかない抗体も本発明の範囲内に包含される。一般に、これは、アミノ酸の、類似の電荷、疎水性または立体化学特性を有するアミノ酸での置換を含む。ＣＤＲ領域とは対照的に、ＦＲ領域におけるより著しい置換も、それらが抗体の結合特性に悪影響（例えば、非置換抗体に比べて５０％を超える親和性の低下）を及ぼさない限り、可能である。置換は抗体を生殖系列化する、または抗原結合部位を安定化するために行うこともできる。
【００９７】
保存的改変は、そのような改変が行われた分子のものと同様の機能的特徴および化学的特徴を有する分子を作り出す。これに対し、分子の機能的特徴および化学的特徴における実質的改変は、（１）例えば、シートまたはらせん構造としての、置換領域における分子主鎖の構造、（２）標的部位における分子の電荷もしくは疎水性、または（３）分子の大きさ、の維持に対するそれらの作用が有意に異なるアミノ酸配列における置換を選択することにより達成することができる。
【００９８】
例えば、「保存的アミノ酸置換」は天然アミノ酸残基を、その位置におけるアミノ酸残基の極性または電荷にほとんど、または全く影響がないような非天然残基での置換を含む。（例えば、MacLennan et al., 1998, Acta Physiol. Scand. Suppl. 643:55-67; Sasaki et al., 1998, Adv. Biophys. 35:1-24参照）。
【００９９】
所望のアミノ酸置換（保存的であれ非保存的であれ）は、このような置換が望まれる際に当業者により決定することができる。例えば、アミノ酸置換は、分子配列の重要な残基を同定するため、または本明細書に記載の分子の親和性を増強もしくは低下させるために使用することができる。例としてのアミノ酸置換は、限定されるものではないが、表３に示されるものがある。
【表４】
2009531023.tif 000006
【０１００】
ある特定の実施形態では、保存的アミノ酸置換はまた、生物系における合成によるものではなく、化学的ペプチド合成により一般に組み込まれた非天然アミノ酸残基も包含する。
【０１０１】
一態様において、変異体ＶＨドメインを作製する方法は、開示されているＶＨドメイン中の少なくとも１個のアミノ酸の付加、欠失もしくは置換すること、または開示されているＶＨドメインと少なくとも１つのＶＬドメインとを組み合わせること、および変異体ＶＨドメインをＩＬ−２２の結合またはＩＬ−２２活性の変調に関して試験することを含む。
【０１０２】
変異体ＶＬドメインを作製するための類似の方法は、開示されているＶＬドメイン中の少なくとも１つのアミノ酸を付加、欠失もしくは置換すること、または開示されているＶＬドメインと少なくとも１つのＶＨドメインとを組み合わせること、および変異体ＶＬドメインをＩＬ−２２の結合またはＩＬ−２２活性の変調に関して試験することを含む。
【０１０３】
本開示のさらなる態様は、ＩＬ−２２と特異的に結合する抗体または抗原結合フラグメントを作製するための方法を提供する。この方法は、
（ａ）少なくとも１つのＣＤＲを欠く、または置換される少なくとも１つのＣＤＲを含むＶＨドメインをコードする核酸の出発レパートリーを提供すること；
（ｂ）出発レパートリーのＣＤＲ領域へ、ＶＨ  ＣＤＲに関して本明細書に実質的に示されるようなアミノ酸配列をコードする少なくとも１つのドナー核酸を挿入すること、または出発レパートリーのＣＤＲ領域を、ＶＨ  ＣＤＲに関して本明細書に実質的に示されるようなアミノ酸配列をコードする少なくとも１つのドナー核酸で置換し、生成物レパートリーを得ること；
（ｃ）生成物レパートリーの核酸を発現させること；
（ｄ）ＩＬ−２２と結合する特異的抗原結合フラグメントを選択すること；および
（ｅ）特異的抗原結合フラグメントまたはそれをコードする核酸を回収すること
を含む。
【０１０４】
類似の方法では、本発明の少なくとも１つのＶＬＣＤＲを、少なくとも１つのＣＤＲを欠く、または置換される少なくとも１つのＣＤＲを含むＶＬドメインをコードする核酸のレパートリーと組み合わせる。この少なくとも１つのＶＨまたはＶＬＣＤＲは、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、２６、２７、２８、２９、３０、３１、４４、４５、４６、４７、４８、４９、６２、６３、６４、６５、６６、６７、８０、８１、８２、８３、８４、８５、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３３７、３５０、３５１、３５２、３５３、３５４、３５５、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、４０９、４２２、４２３、４２４、４２５、４２６、４２７、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４７６、４７７、４７８、４７９、４８０、４８１、４９４、４９５、４９６、４９７、４９８、４９９、５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５３０、５３１、５３２、５３３、５３４、５３５、５４８、５４９、５５０、５５１、５５２、５５３、５６６、５６７、５６８、５６９、５７０、５７１、５８４、５８５、５８６、５８７、５８８、５８９、６０２、６０３、６０４、６０５、６０６、６０７、６２０、６２１、６２２、６２３、６２４または６２５に示されているものを含む、表１または７に示されているものなどの、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３またはＶＨＣＤＲとＶＬＣＤＲの組合せを含むその組合せであり得る。
【０１０５】
一態様において、可変ドメインは、置換されるＣＤＲ３を含むか、またはＣＤＲ３コード領域を含み、少なくとも１つのドナー核酸は、実質的に配列番号１０、１３、２８、３１、４６、４９、６４、６７、８２、８５、１００、１０３、１１８、１２１、１３６、１３９、１５４、１５７、１７２、１７５、１９０、１９３、２０８、２１１、２２６、２２９、２４４、２４７、２６２、２６５、２８０、２８３、２９８、３０１、３１６、３１９、３３４、３３７、３５２、３５５、３７０、３７３、３８８、３９１、４０６、４０９、４２４、４２７、４４２、４４５、４６０、４６３、４７８、４８１、４９６、４９９、５１４、５１７、５３２、５３５、５５０、５５３、５６８、５７１、５８６、５８９、６０４、６０７、６２２または６２５で示されるようなアミノ酸をコードする。
【０１０６】
別の実施形態では、可変ドメインは、置換されるＣＤＲ１を含むか、またはＣＤＲ１コード領域を欠き、少なくとも１つのドナー核酸は、実質的に配列番号８、１１、２６、２９、４４、４７、６２、６５、８０、８３、９８、１０１、１１６、１１９、１３４、１３７、１５２、１５５、１７０、１７３、１８８、１９１、２０６、２０９、２２４、２２７、２４２、２４５、２６０、２６３、２７８、２８１、２９６、２９９、３１４、３１７、３３２、３３５、３５０、３５３、３６８、３７１、３８６、３８９、４０４、４０７、４２２、４２５、４４０、４４３、４５８、４６１、４７６、４７９、４９４、４９７、５１２、５１５、５３０、５３３、５４８、５５１、５６６、５６９、５８４、５８７、６０２、６０５、６２０または６２３で示されるようなアミノ酸配列をコードする。
【０１０７】
別の実施形態では、可変ドメインは置換されるＣＤＲ２を含むか、またはＣＤＲ２コード領域を欠き、少なくとも１つのドナー核酸は、実質的に配列番号９、１２、２７、３０、４５、４８、６３、６６、８１、８４、９９、１０２、１１７、１２０、１３５、１３８、１５３、１５６、１７１、１７４、１８９、１９２、２０７、２１０、２２５、２２８、２４３、２４６、２６１、２６４、２７９、２８２、２９７、３００、３１５、３１８、３３３、３３６、３５１、３５４、３６９、３７２、３８７、３９０、４０５、４０８、４２３、４２６、４４１、４４４、４５９、４６２、４７７、４８０、４９５、４９８、５１３、５１６、５３１、５３４、５４９、５５２、５６７、５７０、５８５、５８８、６０３、６０６、６２１または６２４で示されるようなアミノ酸配列をコードする。
【０１０８】
別の実施形態では、可変ドメインは置換されるＣＤＲ３を含むか、またはＣＤＲ３コード領域を欠き、かつ、さらに置換されるＣＤＲ１を含むか、またはＣＤＲ１コード領域を含み、少なくとも１つのドナー核酸は、実質的に表１または７で示されるようなアミノ酸配列をコードする。
【０１０９】
別の実施形態では、可変ドメインは置換されるＣＤＲ３を含むか、またはＣＤＲ３コード領域を欠き、かつ、さらに置換されるＣＤＲ２を含むか、またはＣＤＲ２コード領域を欠き、少なくとも１つのドナー核酸は、実質的に表１または７で示されるようなアミノ酸配列をコードする。
【０１１０】
別の実施形態では、可変ドメインは置換されるＣＤＲ３を含むか、またはＣＤＲ３コード領域を欠き、かつ、さらにＣＤＲ１および置換されるＣＤＲ２を含むか、またはＣＤＲ１およびＣＤＲ２コード領域を欠き、少なくとも１つのドナー核酸は、実質的に表１または７で示されるようなアミノ酸配列をコードする。
【０１１１】
組換えＤＮＡ戦略を用い、開示されているＣＤＲ配列を、個々のＣＤＲを欠くＶＨまたはＶＬドメインのレパートリーに導入することができる(Marks et al. (BioTechnology (1992) 10: 779-783)。例えば、可変ドメインの５’末端に隣接するプライマーと第３のＦＲに対するプライマーを用い、ＣＤＲ３を欠く可変ドメイン配列のレパートリーを作製することができる。このレパートリーは、開示されている抗体のＣＤＲ３と組み合わせることができる。同様の技術を用い、開示されているＣＤＲ配列の部分は他の抗体に由来するＣＤＲ配列の部分とシャッフルし、ＩＬ−２２と結合する抗原結合フラグメントのレパートリーを提供することができる。いずれのレパートリーもファージディスプレーなどの宿主系で発現させることができ（ＷＯ９２／０１０４７およびその対応する米国特許第５，９６９，１０８号に記載）、従って、ＩＬ−２２と結合する好適な抗原結合フラグメントを選択することができる。
【０１１２】
さらなる別法では、開示されているＶＨまたはＶＬ配列のランダム突然変異誘発を用いて、ＩＬ−２２となお結合し得る変異体ＶＨまたはＶＬドメインを作製する。ｅｒｒｏｒ−ｐｒｏｎｅ  ＰＣＲを用いた技術は、Gram et al. (Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. (1992) 89: 3576-3580)により記載されている。
【０１１３】
別法では、開示されているＶＨまたはＶＬ配列の指定突然変異誘発を用いる。このような技術はBarbas et al. (Proc. Nat. Acad. Sci. U.S.A. (1994) 91 : 3809-3813)およびSchier et al. (J. Mol. Biol. (1996) 263:551-567)により開示されている。
【０１１４】
可変ドメインの一部は、実質的に本明細書に示されるような少なくとも１つのＣＤＲ領域と所望により、本明細書に示されるようなＶＨまたはＶＬドメイン由来の介在フレームワーク領域を含む。この部分はＦＲ１のＣ末端半分および／またはＦＲ４のＮ末端半分を含み得る。可変ドメインのＮ末端またはＣ末端の付加的残基は、天然抗体に見られるものと同じ残基でなくてもよい。例えば、組換えＤＮＡ技術による抗体の構築は多くの場合、そのリンカーの使用に由来するＮ末端またはＣ末端残基を導入する。可変ドメインを他の可変ドメイン（例えば、ダイアボディー）、定常ドメインまたはタンパク質性標識と連結するためにはいくつかのリンカーを使用することができる。
【０１１５】
実施例に示される実施形態は、ＶＨおよびＶＬドメインの「一致」対を含むが、当業者ならば、別の実施形態が、ＶＬまたはＶＨドメインのいずれかに由来するただ１つのＣＤＲを含む抗原結合フラグメントを含み得る。単鎖特異的抗原結合ドメインのいずれか１つを用い、例えば、ＩＬ−２２と結合し得る２ドメイン特異的抗原結合フラグメントを形成し得る相補的ドメインをスクリーニングすることができる。このスクリーニングは、ＷＯ９２／０１０４７に開示されている、いわゆる階層的二重コンビナトリアルアプローチを用いファージディスプレースクリーニング法によって達成できる。このアプローチでは、Ｈ鎖またはＬ鎖クローンのいずれかを含む個々のコロニーを用い、他の鎖（ＬまたはＨ）をコードするクローンの完全ライブラリーを感染させ、得られた２鎖特異的抗原結合ドメインを記載のようなファージディスプレー技術に従って選択する。
【０１１６】
別のいくつかの実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体は、化学的架橋または組換え法により、タンパク質（例えば、アルブミン）に連結させることができる。開示されている抗体はまた、米国特許第４，６４０，８３５号；同第４，４９６，６８９号；同第４，３０１，１４４号；同第４，６７０，４１７号；同第４，７９１，１９２号；または同第４，１７９，３３７号に示されている方法で種々の非タンパク質性ポリマー（例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールまたはポリオキシアルキレン）に連結させることができる。これらの抗体は、例えば、生態循環中でのそれらの半減期を高めるために、ポリマーに共有結合させることにより化学的に修飾することができる。ポリマーおよび結合法の例は米国特許第４，７６６，１０６号；同第４，１７９，３３７号；同第４，４９５，２８５号；および同第４，６０９，５４６号に示されている。
【０１１７】
開示されている抗体はそれらのグリコシル化を変更するよう修飾することができ、すなわち、少なくとも１つの炭水化物部分を欠失させるか、または抗体に付加することができる。グリコシル化部位の欠失または付加は、グリコシル化コンセンサス部位を欠失または付加するようにアミノ酸配列を変化させることにより達成することができ、これらは当技術分野で周知である。炭水化物部分を付加する別法は、抗体のアミノ酸残基にグリコシドを化学的または酵素的に結合させることである（ＷＯ８７／０５３３０およびAplin et al. (1981) CRC Crit. Rev. Biochem., 22:259-306参照）。炭水化物部分の除去もまた化学的または酵素的に達成することができる（Hakimuddin et al. (1987) Arch. Biochem. Biophys., 259:52; Edge et al. (1981) Anal. Biochem., 118:131; Thotakura et al. (1987) Meth. Enzymol., 138:350参照）。
【０１１８】
抗体定常領域を変更するための方法は当技術分野で公知である。機能の変更された抗体（例えば、細胞上のＦｃＲまたは補体のＣ１成分などのエフェクターリガンドに対する親和性が変更）は、その抗体の定常部分の少なくとも１つのアミノ酸残基を異なる残基で置換することにより作製することができる（例えば、ＥＰ３８８，１５１  Ａ１、米国特許第５，６２４，８２１号および同第５，６４８，２６０号参照）。ネズミまたは他種の抗体に適用される場合、類似の機能を低減または排除する類似の種類の変更が挙げられる。
【０１１９】
例えば、ＦｃＲ（例えば、ＦｃγＲ１）またはＣ１ｑに対する抗体（例えば、ヒトＩｇＧなどのＩｇＧ）のＦｃ領域の親和性を変更することができる。この親和性は、少なくとも１つの特定の残基をその側鎖に適当な官能基を有する少なくとも１つの残基で置換することにより、またはグルタミン酸基もしくはアスパラギン酸基などの荷電官能基、またはおそらくはフェニルアラニン、チロシン、トリプトファンまたはアラニンなどの芳香族非極性残基を導入することにより変更することができる（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号参照）。
【０１２０】
例えば、ＩｇＧ定常領域における残基２９７（アスパラギン）のアラニンでの置換はエフェクター細胞の補充を有意に阻害するが、Ｃ１ｑに対する親和性をわずかに低下させる（約３分の１弱い）だけである（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号参照）。重鎖の残基の符番はＥＵインデックス(Kabat et al., 1991 前掲)の符番である。この変更はグリコシル化部位を破壊し、この炭水化物の存在はＦｃ受容体結合に必要であると考えられる。グリコシル化部位を破壊するこの部位における他の置換は、溶解活性に同様の低下を生じると考えられる。他のアミノ酸置換、例えば、残基３１８（Ｇｌ）、３２０（Ｌｙｓ）および３２２（Ｌｙｓ）のいずれか１つの、Ａｌａへの変化もまた、ＩｇＧ抗体のＦｃ領域へのＣ１ｑ結合を無効にすることが知られている（例えば、米国特許第５，６２４，８２１号参照）。
【０１２１】
Ｆｃ受容体との相互作用が低下した修飾抗体を作製することができる。例えば、ヒトＦｃγＲ１受容体と結合するヒトＩｇＧ３において、Ｌｅｕ２３５からＧｌｕへの変化はその受容体との相互作用を破壊することが示されている。また、抗体のヒンジ結合領域における隣接または近接部位に対する突然変異（例えば、残基２３４、２３６または２３７のＡｌａとの置換）を用いて、ＦｃγＲ１受容体に対する抗体親和性に影響を及ぼすことができる。重鎖における残基の符番はＥＵインデックス（Kabat et al., 1991 前掲参照）に基づいている。
【０１２２】
例えば、ＣＨ２ドメインのＮ末端領域において少なくとも１つのアミノ酸を変更することにより抗体の溶解活性を変化させるためのさらなる方法が、Morgan et al.によるＷＯ９４／２９３５１および米国特許第５，６２４，８２１号に記載されている。
【０１２３】
本発明の抗体は検出可能または機能的標識でタグ付けすることができる。これらの標識としては、放射性標識（例えば、１３１Ｉまたは９９Ｔｃ）、酵素標識（例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼまたはアルカリ性ホスファターゼ）および他の化学部分（例えば、ビオチン）を含む。
【０１２４】
本発明はまた、ＩＬ−２２、特に、ヒトＩＬ−２２と結合する単離された抗体を特徴とし得る。ある特定の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体は次の特徴の少なくとも１つを有し得る：（１）モノクローナルまたは単一特異性抗体であること；（２）ヒト抗体であること；（３）in vitro生成抗体であること；（４）in vivo生成抗体（例えば、トランスジェニックマウス系）であること；（５）ＩＬ−２２と少なくとも１０１２Ｍ−１の会合定数で結合すること；（６）ＩＬ−２２と少なくとも１０１１Ｍ−１の会合定数で結合すること；（７）ＩＬ−２２と少なくとも１０１０Ｍ−１の会合定数で結合すること；（８）ＩＬ−２２と少なくとも１０９Ｍー１の会合定数で結合すること；（９）ＩＬ−２２と少なくとも１０６Ｍ−１の会合定数で結合すること；（１０）ＩＬ−２２と５００ｎＭ以下の解離定数で結合すること；（１１）ＩＬ−２２と１０ｎＭ以下の解離定数で結合すること；（１２）ＩＬ−２２と１５０ｐＭ以下の解離定数で結合すること；（１３）ＩＬ−２２と６０ｐＭ以下の解離定数で結合すること；（１４）ＩＬ−２２と、ＩＬ−２２ＲまたはＩＬ−２２ＲとＩＬ−１０Ｒ２の受容体複合体との結合をＩＣ５０  １０ｎＭ以下で阻害すること；（１５）ＩＬ−２２により媒介される、ＩＬ−２２受容体操作ＢａＦ３細胞の増殖を、一態様においてはＩＣ５０  １ｎＭ以下で、別の実施形態ではＩＣ５０  １５０ｐＭ以下で、別の実施形態ではＩＣ５０  １００ｐＭ以下で、別の実施形態ではＩＣ５０  １０ｐＭ以下で遮断すること；および（１６）ＩＬ−２２により媒介されるＨＴ２９からのＧＲＯａ分泌を、一態様においてはＩＣ５０  １ｎＭ以下で、別の実施形態ではＩＣ５０  １５０ｐＭ以下で、別の実施形態ではＩＣ５０  １０ｐＭ以下で遮断すること。
【０１２５】
当業者ならば、上記の修飾が全てを網羅するものではないこと、および多くの他の修飾が当技術分野で本開示の教示を鑑みて当業者にとって自明であることが分かるであろう。
【０１２６】
ＩＩＩ．核酸、クローニングおよび発現系
本開示は、開示されている抗体をコードする単離された核酸を提供する。これらの核酸はＤＮＡを含んでもＲＮＡを含んでもよく、合成（完全または部分的）であっても組換え（完全または部分的）であってもよい。本発明に示されるヌクレオチド配列の参照は、特定の配列を有するＤＮＡ分子を包含し、ＴがＵに置換されている特定の配列を有するＲＮＡ分子を包含する。
【０１２７】
また、本明細書に開示されるように、１つ、２つまたは３つのＣＤＲ、ＶＨドメイン、ＶＬドメインまたはその組合せのコード配列、またはそれと実質的に同一の配列（例えば、それと少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％またはそれ以上同一であるか、または開示されている配列とストリンジェント条件下でハイブリダイズし得る配列）を含む核酸も提供される。
【０１２８】
一態様において、単離された核酸は、配列番号８〜１３、２６〜３１、４４〜４９、６２〜６７、８０〜８５、９８〜１０３、１１６〜１２１、１３４〜１３９、１５２〜１５７、１７０〜１７５、１８８〜１９３、２０６〜２１１、２２４〜２２９、２４２〜２４７、２６０〜２６５、２７８〜２８３、２９６〜３０１、３１４〜３１９、３３２〜３３７、３５０〜３５５、３６８〜３７３、３８６〜３９１、４０４〜４０９、４２２〜４２７、４４０〜４４５、４５８〜４６３、４７６〜４８１、４９４〜４９９、５１２〜５１７、５３０〜５３５、５４８〜５５３、５６６〜５７１、５８４〜５８９、６０２〜６０７または６２０〜６２５のアミノ酸配列から選択される少なくとも１つのＣＤＲを有する抗ＩＬ−２２抗体の重鎖および軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列、または本明細書に開示される配列と１または２個のアミノ酸で異なるＣＤＲをコードする配列を有する。
【０１２９】
この核酸は軽鎖または重鎖可変領域のみをコードすることもできるし、あるいは対応する可変領域と作動可能なように連結された抗体軽鎖または重鎖定常領域をコードすることもできる。一態様において、軽鎖可変領域はκまたはλ定常領域から選択される定常領域に連結されている。軽鎖定常領域はヒトκまたはλであってもよい。別の実施形態では、重鎖可変領域はＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥから選択される抗体イソ型の重鎖定常領域と連結されている。重鎖定常領域はＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１）イソ型であり得る。
【０１３０】
本発明の核酸組成物は、修飾部位以外の天然配列（ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡまたはその混合物の）に多いが、遺伝子配列を提供するための標準的な技術に従って突然変異させることができる。コード配列に関して、これらの突然変異は、所望のようにアミノ酸配列に影響を及ぼすことができる。特に、天然Ｖ、Ｄ、Ｊ、定常、スイッチおよび本明細書に記載の他のこのような配列と実質的に同一であるか、またはそれらに由来するヌクレオチド配列が意図される（ここで、「由来する」とは、配列が同一であるか、または別の配列から改変されたことを示す）。
【０１３１】
一態様において、この核酸は提供される配列とは異なる（例えば、置換、挿入または欠失により異なる）（例えば、少なくとも１つ、１０、２０、３０または４０未満のヌクレオチド、少なくとも１つ、対象核酸の１％、５％、１０％または２０％のヌクレオチドが異なる）。欠失もしくは挿入、または誤対合からの「ループ状の」外部配列も違いとみなされる。この違いは非必須残基をコードするヌクレオチドであってもよいし、あるいは違いは保存的置換であってもよい。
【０１３２】
本開示はまた、核酸構築物を、本明細書に記載されるような少なくとも１つの核酸を含むプラスミド、ベクター、転写または発現カセットの形態で提供する。
【０１３３】
本開示はさらに、本明細書に記載の少なくとも１つの核酸構築物を含む宿主細胞を提供する。
【０１３４】
また、本明細書に記載の配列を含む核酸からコードされているタンパク質を作製する方法も提供する。この方法は宿主細胞を、それらがその核酸に由来するタンパク質を発現するのに適当な条件下で培養することを含む。発現および産生の後、ＶＨまたはＶＬドメインまたは特異的結合メンバーを好適ないずれかの技術を用いて単離および／または精製し、適宜使用することができる。この方法はまた、ｓｃＦｖをコードする核酸と抗体のＦｃ部分をコードする核酸とを融合させるステップを含み得る。この方法は生殖系列化するステップも含み得る。
【０１３５】
抗原結合フラグメント、ＶＨおよび／またはＶＬドメイン、ならびにコード核酸分子およびベクターは、それらの天然環境から、実質的に純粋もしくは均質な形態で、または核酸の場合には必要な機能を有するポリペプチドをコードする配列以外の起源の核酸または胃を含まないか、もしくは実質的に含まない形態で単離および／または精製することができる。
【０１３６】
種々の宿主細胞においてポリペプチドをクローニングおよび発現する系は当技術分野で公知である。抗体の産生に好適な細胞は、例えば、Fernandez et al. (1999) Expression Systems, Academic Press, eds.に記載されている。要するに、好適な宿主細胞としては、哺乳類細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母細胞または原核細胞、例えば、大腸菌が挙げられる。当技術分野で異種ポリペプチド発現に利用可能な哺乳類細胞としては、リンパ系細胞系統（例えば、ＮＳＯ）、ＨＥＫ２９３細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＯＳ細胞、ＨｅＬａ細胞、ベイビーハムスター腎臓細胞、卵母細胞細胞、およびトランスジェニック動物由来の細胞、例えば、乳房上皮細胞が挙げられる。一態様において、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４および３５６Ａ１１抗体はＨＥＫ２９３またはＣＨＯ細胞で発現される。別の実施形態では、３６５Ａ１１、３５４Ａ０８、０８７Ｂ０３および３６８Ｄ０４から選択される抗体の選択は、ＨＥＫ２９３またはＣＨＯ細胞で発現される。他の実施形態では、本発明の抗体をコードする核酸は組織特異的プロモーター（例えば、哺乳類特異的プロモーター）の制御下に置かれ、抗体はトランスジェニック動物で産生される。例えば、これらの抗体はトランスジェニックウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギまたは齧歯類などのトランスジェニック動物の乳汁中に分泌される。
【０１３７】
好適なベクターは、プロモーター配列、ターミネーター配列、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、マーカー遺伝子および他の配列を含む適当な調節配列を含むように選択または構築される。これらのベクターはまた、プラスミドまたはウイルス骨格も含む。詳細については、Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)を参照。ＤＮＡの操作、調製、突然変異誘発、シーケンシングおよびトランスフェクションを含む多くの確立された技術が、Current Protocols in Molecular Biology, Second Edition, Ausubel et al. eds., John Wiley & Sons (1992)に記載されている。
【０１３８】
本開示のさらなる態様は核酸を宿主細胞に導入する方法を提供する。真核細胞については、好適なトランスフェクション技術としては、リン酸カルシウム、ＤＥＡＥ−デキストラン、エレクトロポレーション、リポソーム媒介トランスフェクションおよびレトロウイルスまたは他のウイルス、例えば、ワクシニアウイルスまたはバキュロウイルスを用いた形質導入が含まれる。細菌細胞については、好適な技術としては、塩化カルシウム形質転換、エレクトロポレーションおよびバクテリオファージを用いたトランスフェクションが含まれる。ＤＮＡ導入の後、その核酸を含む細胞を選択するために選択法（例えば、薬剤耐性）を行うことができる。
【０１３９】
ＩＶ．抗ＩＬ−２２抗体の使用
ＩＬ−２２に対するアンタゴニストとして働く抗ＩＬ−２２抗体は、充実組織中の上皮細胞に作用するなどの少なくとも１つのＩＬ−２２媒介免疫応答の調節、および例えばＴＨ１７Ｔ細胞を含むＴ細胞のサブセットの発現を遮断するなどの顆粒免疫応答の間接的調節に使用することができる。一態様において、本発明の抗体は、免疫応答を調節するための方法に使用され、その方法は、ＩＬ−２２と本発明の抗体を接触させ、それにより免疫応答を調節することを含む。一態様において、この免疫応答は細胞増殖、細胞溶解活性、サイトカイン分泌またはケモカイン分泌を含む。
【０１４０】
よって、本発明の抗体は、免疫細胞または造血系細胞（例えば、骨髄、リンパ系の細胞、または赤血球系統もしくはその前駆体細胞）の活性（例えば、増殖、分化および／または生存）を直接的または間接的に阻害するために使用することができ、従って、種々の免疫障害および過剰増殖性障害の治療に使用することができる。治療可能な免疫障害の限定されない例としては、限定されるものではないが、自己免疫障害、例えば、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎、狼瘡性関連関節炎または強直性脊椎炎）、硬皮症、全身性紅斑性狼瘡(systemic lupus erythematosis)、ＨＩＶ、シェーグレン症候群、脈管炎、多発性硬化症、自己免疫甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎）、重症筋無力症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、大腸炎、真性糖尿病（Ｉ型）；例えば、皮膚（例えば、乾癬）、心血管系（例えば、アテローム性動脈硬化症）、神経系（例えば、アルツハイマー病）、肝臓（例えば、肝炎）、腎臓（例えば、腎炎）および膵臓（例えば、膵炎）などの炎症症状；心血管障害、例えば、コレステロール代謝障害、酸素フリーラジカル傷害、虚血；創傷治癒関連の障害；呼吸器系障害、例えば、喘息およびＣＯＰＤ（例えば、嚢胞性繊維症）；急性炎症症状（例えば、内毒素血症、敗血症(sepsis)および敗血症(septicaemia)、毒性ショック症候群および感染症）；移植拒絶およびアレルギーが挙げられる。一態様において、ＩＬ−２２関連障害は関節障害、例えば、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症、乾癬性関節炎または強直性脊椎炎の１以上から選択される障害；呼吸器系障害（例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））；または例えば、皮膚（例えば、乾癬）、心血管系（例えば、アテローム性動脈硬化症）、神経系（例えば、アルツハイマー病）、肝臓（例えば、肝炎）、腎臓（例えば、腎炎）、膵臓（例えば、膵炎）および消化器官（例えば、大腸炎、クローン病およびＩＢＤ）などの炎症症状；急性炎症症状、例えば、内毒素血症、敗血症(sepsis)および敗血症(septicaemia)、毒性ショック症候群および感染症；多臓器不全；呼吸器系疾患（ＡＲＤ）；類デンプン症；糸球体硬化症、膜性神経障害、腎臓動脈硬化症、糸球体腎炎、腎臓の繊維増殖性疾患などの腎症、ならびに他の腎不全および腎腫瘍がある。上皮に対するＩＬ−２２の作用のために、抗ＩＬ−２２抗体は、上皮癌、例えば、癌腫、黒色腫およびその他の治療に使用することができる。これらおよびその他の病態におけるＩＬ−２２阻害の原理に関する記載としては、ＷＯ０３／０８３０６２（５８〜７５頁）を参照。
【０１４１】
多発性硬化症は、炎症と、神経を絶縁し、適切な神経機能に必要とされるミエリン鞘の欠損を特徴とする中枢神経系疾患である。ＩＬ−２２に依存する免疫応答から生じる炎症は、本発明の抗体および組成物で治療することができる。多発性硬化症の実験的自己免疫脳炎（ＥＡＥ）マウスモデル(Tuohy et al. (J. Immunol. (1988) 141:1126-1130)、Sobel et al. (J. Immunol. (1984) 132: 2393-2401)およびTraugott (Cell Immunol. (1989) 119:114-129) では、ＥＡＥの誘発前に（また同時に）マウスをＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５ＢＯ６、３５５Ｅ０４または３５６Ａ１１注射で処置すると、この疾病の発症を著しく遅延させることができる。これは本発明の抗体の使用を確認するためのモデルとして役立ち得る。本発明の抗体は同様にヒトにおいて多発性硬化症を治療するために使用することができる。
【０１４２】
関節炎は関節における炎症を特徴とする疾病である。関節リウマチ（ＲＡ）は最も多い形態の関節炎であり、結合組織および関節内面の膜である滑膜の炎症を含む。炎症を受けた滑膜はしばしば関節に浸潤し、関節の軟骨および骨を損傷する。ＩＬ−２２およびＩＬ−２２Ｒタンパク質および／または転写物は双方のヒト疾病に関連する。ＲＡ滑膜生検では、ＩＬ−２２タンパク質はビメンチン＋滑膜繊維芽細胞といくらかのＣＤ６８＋マクロファージで検出され、一方、ＩＬ−２２Ｒは滑膜繊維芽細胞で検出される。滑膜繊維芽細胞をＩＬ−２２で処置すると、単球化学遊走物質タンパク質−１であるＭＣＰ−１の産生、ならびに全般的な代謝活性が誘導される(Ikeuchi, H., et al. (2005) Arthritis Rheum. 52:1037-46)。ＩＬ−２２の阻害剤は関節リウマチの症候を改善する（ＷＯ２００５／０００８９７  Ａ２；米国特許第６，９３９，５４５号）。炎症性サイトカインおよびケモカインの分泌の上昇、さらに重要には、ＩＬ−２２に依存する免疫応答から起こる疾病の増長は本発明の抗体で治療することができる。同様に、本発明の抗体および組成物はヒトにおいてＲＡまたはその他の関節性疾患を治療するためにも使用可能である。
【０１４３】
移植拒絶は、ドナー由来の組織が宿主の免疫細胞により特異的に「攻撃される」、免疫現象である。主たる「攻撃」細胞はＴ細胞であり、そのＴ細胞受容体はドナーのＭＨＣ分子を「外来」と認識する。この認識はＴ細胞を活性化し、Ｔ細胞は種々のサイトカインおよび細胞溶解性タンパク質を増殖および分泌し、やがて移植片を破壊する。ＭＬＲおよび移植モデルはCurrent Protocols in Immunology, Second Edition, Coligan et al. eds., John Wiley & Sons, 1994; Kasaian et al. (Immunity (2002) 16:559-569); Fulmer et al. (Am. J. Anat. (1963) 113:273-285)およびLenschow et al. (Science (1992) 257:789-792)に記載されている。本発明の抗体および組成物はＭＬＲを低下させるため、ならびに移植拒絶およびＩＬ−２２に依存するヒトにおける関連の疾病（例えば、移植片対宿主病）を治療するために使用することができる。
【０１４４】
本発明の抗体はまた、対象において、ＩＬ−２２および／またはＩＬ−２２Ｒおよび／またはＩＬ−１０Ｒ２応答細胞を阻害する、またはその過剰増殖を軽減するのに十分な量の抗体を投与し、それらの抗体にその障害を治療または予防させることによる、ＩＬ−２２応答細胞およびＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２応答細胞の異常な活性に関連のある過剰増殖性障害を治療するために使用することもできる。ＩＬ−２２およびＩＬ−２２Ｒ発現は、限定されるものではないが、膵臓、肺、皮膚、消化管、肝臓、腎臓を含むいくつかの組織の上皮細胞を構成している(Kotenko, S.V. et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:2725-32; Xie, M.H. et al. (2000) J. Biol. Chem. 275:31335-9; Wolk, K. et al. (2004) Innunity 21:241-54)。さらに、ＩＬ−２２受容体複合体もまた、罹患関節および正常消化管に由来する繊維芽細胞の表面で発現する(Ikeuchi, H. et al. (2005) Arthritis Rheum. 52:1037-46; Andoh, A. et al. (2005) Gastroenterology 129:969-84)。これらの細胞種の新生物性の派生物はＩＬ−２２に対する応答性を助け、その生物内でのこれらの細胞の生存力を変調することができる。従って、ＩＬ−２２に対する抗体は、このような新生物、例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌、移行上皮細胞乳頭腫および癌腫、腺腫、腺癌、形成性胃組織炎、インスリノーマ、グルカゴノーマ、ガストリノーマ、ビポーマ、胆管癌、肝細胞癌、腺様嚢胞癌、虫垂のカルチノイド腫瘍、プロラクチノーマ、膨大細胞種腫、ヒュルトレ細胞腺腫、腎細胞癌、グラビッツ腫瘍、多発性内分泌腺腫、類内膜腺腫、付属器および皮膚付属器新生物、粘膜表皮新生物、嚢胞性、粘液性および血清性新生物、嚢胞腺腫、腹膜偽粘液腫、腺管性、小葉性髄質新生物、腺房細胞新生物、複合上皮新生物、ウォーシン腫瘍、胸腺腫、特殊な性腺新生物、性索間質腫瘍、莢膜腫、顆粒膜細胞腫、男性胚細胞腫、ｓｅｒｔｏｌｉ−ｌｅｙｄｉｇ細胞腫、傍神経節腫、クロム親和性細胞腫、グロムス腫瘍、色素細胞性母斑(malanocytic nevus)、悪性黒色腫、黒色腫、結節性黒色腫、異形成母斑、悪性黒子、表在拡大型黒色腫または末端黒子型黒色腫の進行を阻害するために症可能である。ＩＬ−２２受容体ex vivoナイーブまたは活性化免疫細胞では検出されないが、この受容体の調節不全は、このような派生新生細胞をＩＬ−２２応答性とする可能性があり、従って、ＩＬ−２２に対する抗体により阻害される。
【０１４５】
別の態様において、本発明は、対象において急性期応答を低下、阻害または軽減する方法を特徴とする。この方法は、その対象に本明細書に記載されるような抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントを、対象の急性期応答を低下、阻害または軽減するのに十分な量で投与することを含む。一態様において、この対象は哺乳類、例えば、呼吸器系障害、炎症性障害および自己免疫障害を含む、本明細書に記載されるようなＩＬ−２２関連障害に罹患しているヒトである。一態様において、このＩＬ−２２結合剤は、例えば、局所投与、皮下投与、または全身循環ではないその他の投与で局部的に投与する。
【０１４６】
ＩＬ−２２は、直接的全身作用とは対照的に、例えば、組織炎症のモジュラーまたはレギュレーターとして作用する（例えば、直接的に作用する）ことにより、その炎症作用を局部的に発揮すると考えられる。よって、例えば、本発明の抗ＩＬ−２２抗体を用いてＩＬ−２２活性を阻害すると、全身性の抗炎症理学療法よりも有効な（例えば、毒性の低い）組織特異的な抗炎症薬が得られる可能性がある。さらに、例えば本明細書に記載の抗ＩＬ−２２抗体またはそのフラグメントを用いて局部的にＩＬ−２２を阻害することにより、全身性の抗炎症理学療法と組み合わせるための有用な候補が得られる可能性がある。
【０１４７】
Ｖ．併用療法
一態様では、少なくとも１つの抗ＩＬ−２２抗体と少なくとも１つの治療薬を含む医薬組成物を併用療法として投与する。この療法は、免疫障害および炎症性障害などの病態または障害を治療するのに有用である。これに関して「併用」とは、抗体組成物と治療薬が実質的に同時的に（同時または逐次のいずれか）与えられることを意味する。一態様において、逐次に与えられる場合、第二の化合物の投与の開始時に、２つの化合物のうち最初のものは処置部位に有効濃度でなお検出可能である。別の実施形態では、逐次に与えられる場合、第二の化合物の投与の開始時に、２つの化合物のうち最初のものは処置部位に有効濃度で検出できない。
【０１４８】
例えば、併用療法は、少なくとも１種類の付加的治療薬と一緒に処方された、および／または同時に投与される少なくとも１種類の抗ＩＬ−２２抗体を含み得る。これらの付加的治療薬は、下記に詳細に記載されているように、少なくとも１種類のサイトカイン阻害剤、増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症薬、代謝阻害剤、酵素阻害剤、細胞傷害性剤および細胞増殖抑制剤を含み得る。一態様において、付加的薬剤は、限定されるものではないが、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）；プレドニゾロン、プレドニゾン、コルチゾンおよびトリアムシノロンを含むコルチコステロイド；メトトレキサート、ヒドロキシクロロキン（Ｐｌａｑｕｅｎｉｌ）およびスルファサラジン、レフルノミド（Ａｒａｖａ）などの疾病改善抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）；エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ）、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ）（メトトレキサートを含む、または含まない）およびアダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ）を含む腫瘍壊死因子阻害剤；抗ＣＤ２０抗体（例えば、リツキサン）；アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ）などの可溶性インターロイキン−１受容体；金、ミノサイクリン（Ｍｉｎｏｃｉｎ）；ペニシラミン：ならびにアザチオプリン、シクロホスファミドおよびシクロスポリンを含む細胞傷害性剤を含む、関節炎に対する標準的な処置剤である。このような併用療法は有利には投与する治療薬のより低用量を使用することができ、よって、種々の単独療法に関連する、起こり得る毒性または合併症を回避する。さらに、本明細書に開示される付加的治療薬は、ＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２経路に加え、またはそれらとは異なる経路に作用し、従って、抗ＩＬ−２２抗体の作用を増強する、または相乗作用を示すと予測される。
【０１４９】
抗ＩＬ−２２抗体と併用される治療薬は自己免疫およびその後の炎症性応答に種々の段階で干渉する薬剤であり得る。一態様において、本明細書に記載の少なくとも１種類の抗ＩＬ−２２抗体を少なくとも１種類のサイトカインおよび／または増殖因子アンタゴニストと一緒に処方するか、かつ／または同時投与することができる。これらにアンタゴニストとしては、可溶性受容体、ペプチド阻害剤、小分子、リガンド融合物、抗体およびその結合フラグメント（サイトカインまたは増殖因子またはそれらの受容体または他の細胞表面分子と結合する）ならびに「抗炎症性サイトカイン」およびそのアゴニストを含み得る。
【０１５０】
本明細書に記載の抗ＩＬ−２２抗体と併用可能な薬剤の限定されない例としては、限定されるものではないが、少なくとも１種類のインターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２（またはそのサブユニットｐ３５もしくはｐ４０の１つ）、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７Ａ−Ｆ（そのヘテロ二量体、例えば、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を含む）、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１およびＩＬ−２３（またはそのサブユニットｐ１９またはｐ４０の１つ））；サイトカイン（例えば、ＴＮＦα、ＬＴ、ＥＭＡＰ−ＩＩおよびＧＭ−ＣＳＦ）；および増殖因子（例えば、ＦＧＦおよびＰＤＧＦ）のアンタゴニストが挙げられる。これらの薬剤としてはまた、限定されるものではないが、インターロイキン、サイトカインおよび増殖因子の少なくとも１つの受容体のアンタゴニストが含まれる。抗ＩＬ−２２抗体はまた、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２０（例えば、リツキサン）、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０またはそれらのリガンド（例えば、ＣＤ１５４（ｇｐ３９、ＣＤ４０Ｌ））またはＬＦＡ−１／ＩＣＡＭ−１およびＶＬＡ−４／ＶＣＡＭ−１(Yusuf-Makagiansar et al. (2002) Med Res Rev 22(2): 146-67)）などの細胞表面分子に対する阻害剤（例えば、抗体またはその結合フラグメント）と組み合わせることができる。ある特定の実施形態では、本明細書に記載の抗ＩＬ−２２抗体と併用が可能なアンタゴニストとしては、ＩＬ−１、ＩＬ−１２（またはそのサブユニットｐ３５もしくはｐ４０の１つ）、ＴＮＦα、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７Ａ−Ｆ（そのヘテロ二量体、例えば、１Ｌ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を含む）、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１およびＩＬ−２３（またはそのサブユニットｐ１９もしくはｐ４０の１つ）およびそれらの受容体のアンタゴニストを含み得る。
【０１５１】
これらの薬剤の例としては、ＩＬ−１２アンタゴニスト（ＩＬ−１２（例えば、ＷＯ００／５６７７２参照）またはそのサブユニットｐ３５もしくはｐ４０の１つと結合する抗体など）；ＩＬ−１２受容体阻害剤（ＩＬ−１２受容体に対する抗体など）；および可溶性ＩＬ−１２受容体およびそのフラグメントが含まれる。ＩＬ−１５アンタゴニストの例としては、ＩＬ−１５またはその受容体、ＩＬ−１５受容体の可溶性フラグメントおよびＩＬ−１５−結合タンパク質に対する抗体が含まれる。ＩＬ−１８アンタゴニストの例としては、ＩＬ−１８、ＩＬ−１８受容体の可溶性フラグメントおよびＩＬ−１８結合タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ、Mallet et al. (2001) Circ. Res. 28）に対する抗体が含まれる。ＩＬ−１アンタゴニストの例としては、インターロイキン−１変換酵素（ＩＣＥ）阻害剤（Ｖｘ７４０など）、ＩＬ−１アンタゴニスト（例えば、ＩＬ−１  ＲＡ（ＡＮＩＫＩＮＲＡ、ＡＭＧＥＮ））、ｓｌＬ−１ＲＩＩ（Ｉｍｍｕｎｅｘ）および抗ＩＬ−１受容体抗体が含まれる。
【０１５２】
一態様において、併用療法としては、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体またはＩＬ−２３（またはそのサブユニットｐ１９もしくはｐ４０の１つ）の少なくとも１つの抗体またはその抗原結合フラグメントまたは可溶性受容体などのアンタゴニストと一緒に処方された、および／または同時に処方される少なくとも１種類の抗ＩＬ−２２抗体が含まれる。
【０１５３】
ＴＮＦアンタゴニストの例としては、Ｄ２Ｅ７に対する抗体（ヒト抗ＴＮＦα抗体、米国特許第６，２５８，５６２号、Ｈｕｍｉｒａ（商標）、ＢＡＳＦ）などのＴＮＦ（例えば、ヒトＴＮＦα）；ＣＤＰ−５７１／ＣＤＰ−８７０／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦα抗体、Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ）；ｃＡ２（キメラ抗ＴＮＦα抗体、Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標）、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ）；および抗ＴＮＦ抗体フラグメント（例えば、ＣＰＤ８７０）が含まれる。他の例としては、可溶性ＴＮＦ受容体（例えば、ヒトｐ５５またはｐ７５）フラグメントおよび誘導体、例えば、ｐ５５  ｋｄＴＮ  ＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ（商標））および７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、Ｅｎｂｒｅｌ（商標）、Ｉｍｍｕｎｅｘ、例えば、Arthritis & Rheumatism (1994) Vol. 37, S295; J. Invest. Med. (1996) Vol. 44, 235A参照）が含まれる。さらなる例としては、酵素アンタゴニスト（例えば、ＴＮＦα変換酵素阻害剤（ＴＡＣＥ）、例えば、α−スルホニルヒドロキサム酸誘導体（ＷＯ０１／５５１１２）またはＮ−ヒドロキシホルムアミド阻害剤（ＧＷ３３３３、−００５または−０２２））およびＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦＲ（可溶性ＴＮＦ結合タンパク質、例えば、Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S284;およびAm. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. (1995) Vol. 268, pp. 37-42参照）が含まれる。ＴＮＦアンタゴニストは、可溶性ＴＮＦ受容体（例えば、ヒトｐ５５またはｐ７５）フラグメントおよび誘導体、例えば、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ；およびＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤であり得る。
【０１５４】
他の実施形態では、抗本明細書に記載のＩＬ−２２抗体は、次の少なくとも１つと組み合わせて投与することができる：ＩＬ−１３アンタゴニスト、例えば、可溶性ＩＬ−１３受容体および／または抗ＩＬ−１３抗体；およびＩＬ−２アンタゴニスト、例えば、ＩＬ−２融合タンパク質（例えば、ＤＡＢ  ４８６−ＩＬ−２および／またはＤＡＢ  ３８９−ＩＬ−２、Ｓｅｒａｇｅｎ（例えば、Arthritis & Rheumatism (1993) Vol. 36, 1223参照）および抗ＩＬ−２Ｒ抗体（例えば、抗Ｔａｃ（ヒト化抗体、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ、Cancer Res. 1990 Mar 1;50(5):1495-502参照））。別の組合せとしては、抗ＩＬ−２２抗体と、ＩＤＥＣ−ＣＥ９．１／ＳＢ２１０３９６（抗ＣＤ４抗体、ＩＤＥＣ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）などの非枯渇抗ＣＤ４阻害剤との組合せが含まれる。さらに他の組合せとしては、ＣＤ８０（Ｂ７．１）およびＣＤ８６（Ｂ７．２）などの共刺激分子のアンタゴニスト（例えば、抗体、可溶性受容体またはアンタゴニストリガンド）；ＩＣＯＳＬ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８およびＣＴＬＡ４（例えば、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ）；Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）；ならびに抗炎症性サイトカインおよびそのアゴニスト（例えば、抗体）を伴う抗ＩＬ−２２抗体が含まれる。抗炎症性サイトカインとしては、ＩＬ−４（ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１０（ＳＣＨ  ５２０００、組換えＩＬ−１０、ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）；ＩＬ−１３；およびＴＧＦが含まれる。
【０１５５】
他の実施形態では、少なくとも１種類の抗ＩＬ−２２抗体を少なくとも１種類の抗炎症性薬、免疫抑制薬、代謝阻害剤および酵素阻害剤と一緒に処方することができ、かつ／または同時に投与することができる。本明細書に記載のＩＬ−２２アンタゴニストと併用可能な薬剤または阻害剤の非限定例としては、限定されるものではないが、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（イブプロフェン、テニダップ（例えば、Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S280)）、ナプロキセン（例えば、Neuro Report (1996) Vol. 7, pp. 1209-1213）、メロキシカム、ピロキシカム、ジクロフェナクおよびインドメタシン）；スルファサラジン（例えば、Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S281）；コルチコステロイド（プレドニゾロンなど）；サイトカイン抑制性抗炎症薬（ＣＳＡＩＤ）；およびヌクレオチド生合成阻害剤（プリン生合成阻害剤（例えば、メトトレキサートなどの葉酸拮抗薬）およびレフルノミド（例えば、Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S131; Inflammation Research (1996) Vol. 45, pp. 103-107)）などのピリミジン生合成阻害剤（例えば、ジヒドロオロチン酸デヒドロゲナーゼ（ＤＨＯＤＨ）阻害剤の少なくとも１つが含まれる。ＩＬ−２２／ＩＬ−２２ＲまたはＩＬ−２２／ＩＬ−１０Ｒ２アンタゴニストと併用するための治療薬としては、ＮＳＡＩＤ、ＣＳＡＩＤ、ＤＨＯＤＨ阻害剤（レフルノミドなど）および葉酸拮抗薬（メトトレキサートなど）を含み得る。
【０１５６】
さらなる阻害剤の例としては、コルチコステロイド（経口、吸入および局所注射）；免疫抑制薬（シクロスポリンおよびタクロリムス（ＦＫ−５０６）など）；ｍＴＯＲ阻害剤（シロリムス（ラパマイシン）またはラパマイシン誘導体（例えば、ＣＣＩ−７７９(Elit. L. (2002) Current Opinion Investig. Drugs 3(8):1249-53; Huang, S. et al. (2002) Current Opinion Investig. Drugs 3(2):295-304))などのエステルラパマイシン誘導体）；ＴＮＦαおよびＩＬ−Ｉ（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）などの炎症性サイトカインのシグナル伝達を妨げる薬剤；ＣＯＸ２阻害剤（例えば、セレコキシブおよびその変種（ＭＫ−９６６）、例えば、Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S81参照）；ホスホジエステラーゼ阻害剤（Ｒ９７３４０１など、例えば、Arthritis & Rheumatism (1996) Vol. 39, No. 9 (supplement), S282参照）；ホスホリパーゼ阻害剤（例えば、トリフルオロメチルケトン類似体（米国特許第６，３５０，８９２号）などのサイトゾルホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）の阻害剤）；血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）の阻害剤；ＶＥＧＦ受容体の阻害剤；および脈管形成の阻害剤の少なくとも１つを含む。抗ＩＬ−２２抗体と併用するための治療薬としては、免疫抑制薬（シクロスポリンおよびタクロリムス（ＦＫ−５０６）など）；およびｍＴＯＲ阻害剤（シロリムス（ラパマイシン）またはラパマイシン誘導体（例えば、ＣＣＩ−７７９などのエステルラパマイシン誘導体）など）；ＣＯＸ２阻害剤（セレコキシブおよびその変異体など）；およびホスホリパーゼ阻害剤（サイトゾルホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）の阻害剤（例えば、トリフルオロメチルケトン類似体）など））を含み得る。
【０１５７】
少なくとも１種類の抗ＩＬ−２２抗体と同時投与し得る、および／または一緒に処方し得る治療薬の例としては、限定されるものではないが、ＴＮＦアンタゴニスト（抗ＴＮＦ抗体など）；ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント（例えば、ヒトｐ５５およびｐ７５）およびその誘導体（ｐ５５  ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ（商標）など）および７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、Ｅｎｂｒｅｌ（商標））；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト（ＴＡＣＥ阻害剤）；ＩＬ−１２のアンタゴニスト（またはそのサブユニットｐ３５もしくはｐ４０の１つ）、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７Ａ−Ｆ（そのヘテロ二量体、例えば、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を含む）、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、１Ｌ−２１、ＩＬ−２２およびＩＬ−２３（またはそのサブユニットｐ１９もしくはｐ４０の１つ）；Ｔ細胞およびＢ細胞枯渇薬（抗ＣＤ４または抗ＣＤ２２抗体）；小分子阻害剤（メトトレキサートおよびレフルノミドなど）；シロリムス（ラパマイシン）およびその類似体（ＣＣＩ−７７９など）；Ｃｏｘ−２およびｃＰＬＡ２阻害剤；ｐ３８、ＴＰＬ−２、Ｍｋ−２およびＮＦＫＢ阻害剤；ＲＡＧＥおよび可溶性ＲＡＧＥ；Ｐ−セレクチンおよびＰＳＧＬ−１阻害剤（抗体および小分子阻害剤）；およびエストロゲン受容体β（ＥＲＢ）アゴニストおよびＥＲＢ−ＮＦｋｂアンタゴニストの少なくとも１つが挙げられる。少なくとも１種類の抗ＩＬ−２２抗体と同時投与され得る、および／または一緒に処方され得る治療薬としては、ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント（例えば、ヒトｐ５５またはｐ７５）、例えば、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、Ｅｍｂｒｅｌ（商標））；メトトレキサート；レフルノミド；およびシロリムス（ラパマイシン）およびその類似体（ＣＣＩ−７７９など）の少なくとも１つを含み得る。
【０１５８】
本明細書に開示される抗ＩＬ−２２抗体は、以下にさらに詳しく記載されるように、特定の免疫障害を治療するために他の治療薬と併用することができる。
【０１５９】
抗ＩＬ−２２抗体と併用可能な関節障害（例えば、関節リウマチ、炎症性関節炎、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、変形性関節症および乾癬性関節炎）の治療のための薬剤の非限定例としては、ＴＮＦアンタゴニスト（抗ＴＮＦ抗体など）；ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント（例えば、ヒトｐ５５およびｐ７５）およびその誘導体（ｐ５５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤ  ＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ（商標）など）および７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレル（商標）など））；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト（ＴＡＣＥ阻害剤など）；ＩＬ−１２のアンタゴニスト（またはサブユニットｐ３５もしくはｐ４０の１つ）、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７Ａ−Ｆ（そのヘテロ二量体、例えば、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆヘテロ二量体を含む）、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２、ＩＬ−２３（またはそのサブユニットｐ１９もしくはｐ４０の１つ）およびＩＬ−２４；Ｔ細胞およびＢ細胞枯渇薬（抗ＣＤ４、抗ＣＤ２０または抗ＣＤ２２抗体など）；小分子阻害剤（メトトレキサートおよびレフルノミドなど）；シロリムス（ラパマイシン）およびその類似体（例えば、ＣＣＩ−７７９）；Ｃｏｘ−２およびｃＰＬＡ２阻害剤；ＮＳＡＩＤ；ｐ３８、ＴＰＬ−２、Ｍｋ−２およびＮＦＫＢ阻害剤；ＲＡＧＥまたは可溶性ＲＡＧＥ；Ｐ−セレクチンまたはＰＳＧＬ−１阻害剤（小分子阻害剤およびそれに対する抗体など）；エストロゲン受容体β（ＥＲＢ）アゴニストおよびＥＲＢ−ＮＦＫＢアンタゴニストの少なくとも１つを含み得る。少なくとも１種類のＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２アンタゴニストと同時投与され得る、および／または一緒に処方され得る治療薬としては、ＴＮＦ受容体の可溶性フラグメント（例えば、ヒトｐ５５またはｐ７５）、例えば、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤＴＮＦ受容体−ＩｇＧ融合タンパク質、エンブレル（商標））；メトトレキサート；レフルノミド；およびシロリムス（ラパマイシン）またはその類似体（例えば、ＣＣＩ−７７９）の少なくとも１つを含み得る。
【０１６０】
抗ＩＬ−２２抗体と併用可能な多発性硬化症の治療のための薬剤の非限定例としては、インターフェロン−β（例えば、ＩＦＮβ−１ａおよびＩＦＮβ−１ｂ）、コパキソン(Copaxone)、コルチコステロイド、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤、ＣＤ４０リガンドに対する抗体、ＣＤ８０に対する抗体およびＩＬ−１２アンタゴニスト（ＩＬ−１２と結合する抗体（またはそのサブユニットｐ３５もしくはｐ４０の１つ）を含む）が含まれる。
【０１６１】
抗ＩＬ−２２抗体と併用可能な炎症性腸疾患またはクローン病の治療のための薬剤の非限定例としては、ブデノシド；上皮細胞増殖因子；コルチコステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチレート；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジド；抗酸化薬；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１モノクローナル抗体；抗ＩＬ−６モノクローナル抗体；増殖因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；本明細書に記載されるようなＴＮＦアンタゴニスト；ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３および／またはＴＧＦβまたはそのアゴニスト（例えば、アゴニスト抗体）；ＩＬ−１１；プレドニゾロン、デキサメタゾンまたはブデソニドのグルクロニド−またはデキストランコンジュゲートプロドラッグ；ＩＣＡＭ−１アンチセンスホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチド（ＩＳＩＳ  ２３０２；Isis Pharmaceuticals, Inc.）；可溶性補体受容体１（ＴＰ１０；T Cell Sciences, Inc.）；徐放性メサラジン；メトトレキサート；血小板活性化因子（ＰＡＦ）のアンタゴニスト；シプロフロキサシン；およびリグノカインが含まれる。
【０１６２】
他の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体は、免疫応答の調節に関与する他の標的に向けられた少なくとも１つの抗体と併用することができる（例えば、移植拒絶または移植片対宿主病）。本発明のＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ１０Ｒ２アンタゴニストが併用可能な免疫応答を治療するための薬剤の非限定例としては、細胞表面分子に対する抗体が挙げられ、限定されるものではないが、ＣＤ２５（ＩＬ−２受容体α）、ＣＤ１１ａ（ＬＦＡ−１）、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）、ＣＤ４、ＣＤ４５、ＣＤ２８／ＣＴＬＡ４、ＣＤ８０（Ｂ７−１）、ＣＤ８６（Ｂ７−２）またはその組合せが含まれる。別の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体は、シクロスポリンＡまたはＦＫ５０６などの少なくとも１種類の一般的な免疫抑制薬と併用可能である。
【０１６３】
よって、本発明のもう１つの態様は、抗ＩＬ−２２抗体と他の治療薬の組合せ投与を行うためのキットに関する。一態様において、このキットは、医薬担体中に処方された少なくとも１種類の抗ＩＬ−２２抗体と、１以上の別の医薬製剤として適宜処方された少なくとも１種類の治療薬とを含む。
【０１６４】
ＶＩ．診断的使用
これらの抗体はまた、生体サンプル中のＩＬ−２２の存在を検出するためにも使用可能である。これらのタンパク質の存在またはレベルを医学的症状と相関させることにより、当業者は関連の医学的症状を診断することができる。例えば、ＩＬ−２２は炎症性サイトカイン（ＩＬ−１およびＴＮＦａ）により引き起こされるものに関連する変化を誘導し、ＩＬ−２２の阻害剤は関節リウマチの症状を改善する（ＷＯ２００５／０００８９７  Ａ２）。本発明の抗体により診断可能な医学的症状としては、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患、膵炎および移植拒絶が含まれる。
【０１６５】
抗体に基づく検出法は当技術分野で周知であり、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ、免疫ブロット、ウエスタンブロット、フローサイトメトリー、免疫蛍光、免疫沈降および他の関連技術が含まれる。これらの抗体は、ＩＬ−２２を検出するためのこれらの手順の少なくとも１つを組み込んだ診断キットとして提供することができる。このキットは、タンパク質の検出およびキットの使用を助ける他の成分、パッケージング、説明書または他の材料を含み得る。
【０１６６】
抗体は、リガンド基（例えば、ビオチン）、蛍光団および発色団、放射性同位元素、高電子密度試薬または酵素を含む検出可能なマーカーで修飾することができる。酵素はそれらの活性により検出される。例えば、セイヨウワサビペルオキシダーゼは、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）から、分光光度計で定量可能な青色色素へ変換するその能力により検出される。他の好適な結合相手としては、ビオチンおよびアビジン、ＩｇＧとＡタンパク質および当技術分野で公知の他の受容体−リガンド対が含まれる。
【０１６７】
抗体は、とりわけ、別の抗体（例えば、二重特異性または多重特異性抗体）、毒素、放射性同位元素、細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤などの少なくとも１つの他の分子存在と機能的に連結することもできる（例えば、化学結合、遺伝子融合、非共有結合またはそれ以外の方法による）。他の入れ替えや可能性も当業者には明らかであり、それらは本発明の範囲内で等価なものとみなされる。
【０１６８】
ＶＩＩ．医薬組成物および投与方法
本発明のある特定の実施形態は、開示されている抗体を含む組成物を含む。これらの組成物は医薬的使用および患者に対する投与に好適であり得る。これらの組成物は本発明の抗体と医薬賦形剤とを含む。本明細書において「医薬賦形剤」とは、溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張剤および吸収遅延剤など、医薬投与に適合するものが含まれる。医薬上活性な物質に対するこれらの薬剤の使用は当技術分野で周知である。これらの組成物はまた、補足的、付加的なまたは増強された治療機能を提供する他の有効化合物も含み得る。これらの医薬組成物はまた、投与に関する説明書とともに容器、パックまたはディスペンサーに含まれていてもよい。
【０１６９】
本発明の医薬組成物はその意図する投与経路に適合するように処方される。投与を遂行する方法は当業者に知られている。医薬組成物は局所投与または経口投与することもできるし、または粘膜を透過させることもできる。医薬組成物の投与の例としては、経口摂取または吸入が含まれる。投与または、静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、腔内投与、皮下投与、皮膚投与または経皮投与であってもよい。
【０１７０】
局所的皮内または皮下適用に用いる溶液または懸濁液としては一般に以下の成分：水、生理食塩水、硬化油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたは他の合成溶剤などの無菌希釈剤；ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなどの抗菌剤；アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウムなどの抗酸化剤；エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）などのキレート剤；酢酸、クエン酸またはリン酸などのバッファー；および塩化ナトリウムまたはデキストロースなどの等張剤の少なくとも１つを含む。ｐＨは酸または塩基によって調整することができる。このような製剤はアンプル、ディスポーザブルシリンジまたは複数用量バイアルに封入することができる。
【０１７１】
静脈内投与に用いる溶液または懸濁液は、生理食塩水、静菌水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）(BASF, Parsippany, NJ)、エタノールまたはポリオールなどの担体を含む。いずれの場合でも、これらの組成物は無菌かつシリンジ操作が容易な流動性がなければならない。適切な流動性は多くの場合、レシチンまたは界面活性剤を用いて得ることができる。この組成物はまた、製造および保存の条件下で安定でなければならない。微生物の回避は抗菌剤および抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサールなどで達成することができる。多くの場合、等張剤（糖）、ポリアルコール（マンニトールおよびソルビトール）または塩化ナトリウムを組成物に含めることができる。組成物の吸収延長は、吸収を遅延させる薬剤、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを添加することによって達成することができる。
【０１７２】
経口組成物としては、不活性希釈剤または可食担体を含む。この組成物はゼラチン中に封入、または錠剤へと打錠することができる。経口投与の目的では、これらの抗体は賦形剤を配合し、錠剤、トローチ剤またはカプセル剤とすることができる。医薬上適合する結合剤またはアジュバント剤を組成物に含めることもできる。錠剤、トローチ剤およびカプセル剤は、（１）微晶質セルロース、トラガカントガムまたはゼラチンなどの結合剤；（２）デンプンまたはラクトースなどの賦形剤、（３）アルギン酸、プリモゲルまたはコーンスターチなどの崩壊剤；（４）ステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤；（５）コロイド状二酸化ケイ素などの磨砕剤；または（６）甘味剤または香味剤を含み得る。
【０１７３】
この組成物はまた、経粘膜経路または経皮投与により投与することもできる。例えば、Ｆｃ部分を含む抗体は、腸、口腔または肺の粘膜を通過し得る（Ｆｃ受容体を介する）。経粘膜投与は、ロゼンジ、鼻腔スプレー、吸入剤または坐剤の使用により達成することができる。経皮投与もまた、当技術分野で公知の軟膏、膏薬、ゲルまたはクリームを含む組成物の使用により達成することができる。経粘膜投与または経皮投与では、透過する障壁に適当な透過剤を用いる。吸入による投与では、抗体は、噴射剤（例えば、液体または気体）を含む加圧容器もしくはディスペンサーまたはネブライザーからエアゾールスプレーとして送達される。
【０１７４】
ある特定の実施形態では、本発明の抗体は身体からの急速な排除から抗体を保護するために担体とともに調製する。生分解性ポリマー（例えば、エチレンビニルアセテート、ポリ無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル、ポリ乳酸）が用いられることが多い。このような処方物の調製方法は、当業者に知られている。リポソーム懸濁液も薬学上許容される担体として使用することができる。これらのリポソームは当技術分野で公知の確立された方法（米国特許第４，５２２，８１１号）に従って調製することができる。
【０１７５】
本発明の抗体または抗体組成物は、記載されているように治療上有効な量で投与される。治療上有効な量は対象の年齢、状態、性別および医学的症状の重篤度によって異なる場合がある。適当な用量は臨床適応に基づいて医師が決定することができる。これらの抗体または組成物は、最長時間、抗体の循環レベルを最大とするためにボーラス投与として与えることもできる。ボーラス投与の後に持続的注入を用いることもできる。
【０１７６】
本明細書において「対象」とは、ヒトおよび非ヒト動物を含むものとする。対象は、ＩＬ−２２を発現する細胞、例えば、癌細胞または免疫細胞を特徴とする障害を有するヒト患者を含み得る。本発明の「非ヒト動物」とは、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類などの全ての脊椎動物を含む。
【０１７７】
対象に投与可能な用量範囲の例は、１μｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、１μ／ｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇ〜１００μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、２５０μｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ、２５０μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ〜５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ〜２０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ〜２５ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇ〜３０ｍｇ／ｋｇ（またはそれを超える）から選択することができる。これらの用量は、用量、投与方法、処置する障害または症候、および個々の対象の特徴に応じて、毎日、毎週、隔週、毎月または例えば隔年などのより低頻度で投与することができる。用量はまた持続的注入（ポンプを介するものなど）により投与することもできる。投与量はまた、投与経路によっても異なる。例えば、皮下投与は静脈内投与よりも高用量を必要とする。
【０１７８】
ある特定の状況では、組成物を投与の容易性および用量の均一性のための単位投与形で処方するのが有利であり得る。本明細書で用いる単位投与形は患者に適した物理的に別個の単位を指す。各投与単位は、治療作用をもたらすように算出された所定量の抗体を担体とともに含む。投与単位は抗体の特徴および達成すべき特定の治療作用によって異なる。
【０１７９】
組成物の毒性および治療効力は、例えば、ＬＤ５Ｏ（集団の５０％に致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％に治療上有効な用量）を決定するなど、細胞培養または実験動物における標準的な薬学的手順により決定することができる。毒性と治療作用の間の用量比が治療係数であり、ＬＤ５０／ＥＤ５Ｏ比として表すことができる。大きな治療係数を示す抗体は毒性が低く、かつ／または治療効果が高い。
【０１８０】
細胞培養アッセイおよび動物試験から得られたデータは、ヒトにおける用量範囲を処方するために使用することができる。これらの化合物の用量は、毒性がほとんどまたは全く無いＥＤ５０を含む血中循環抗体濃度の範囲内にあればよい。用量はこの範囲で、使用する投与組成物の形態および投与経路によって可変である。本発明で用いる抗体では、治療作用はまず細胞培養アッセイを用いて評価することができる。用量は、ＩＣ５０（すなわち、症候の最大阻害の半分を達成する抗体の濃度）を含む循環血漿濃度範囲に達するように動物モデルで処方することができる。特定の用量の作用は好適なバイオアッセイによってモニタリングすることができる。好適なバイオアッセイの例としては、ＤＮＡ複製アッセイ、転写に基づくアッセイ、ＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ結合アッセイ、ＩＬ−２２／ＩＬ−１０Ｒ２結合アッセイ、ＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２および他の免疫アッセイが含まれる。
【実施例】
【０１８１】
実施例１：抗ＩＬ−２２  ｓｃＦｖの選択
親ＧＩＬ０１およびＧＩＬ６８の選択
ＧＩＬ０１およびＧＩＬ６８は、ＩＬ−２２に対する可溶性選択によりｓｃＦｖライブラリーから単離したものである。可溶性選択は、Ｎ末端Ｈｉｓ／ＦＬＡＧタグの付いたタンパク質を含むビオチン化ＩＬ−２２（ｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆ）を用いて行った。ｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆは、最初、１００ｎＭの濃度で用いた。記載されている(Vaughan et al., 1996) １．３８×１０１０ライブラリーの拡張型であるｓｃＦｖファージミドライブラリーを用い、ＩＬ−２２に特異的な抗体を選択した。精製したｓｃＦｖファージ（１０１２ｔｒａｎｓｄｕｃｉｎｇ  ｕｎｉｔｓ（ｔｕ））を１００μｌ  ３％ＭＰＢＳ（ＰＢＳ中３％の乳粉）中で３０分間ブロッキングし、その後、ｂｉｏ．ＩＬ−２２  Ｈ／Ｆを加え、室温で１時間インキュベートした。ファージ／抗原を、１ｍｌの３％ＭＰＢＳ中、３７℃で１時間ブロッキングした５０μｌのＤｙｎａｌ  Ｍ２８０ストレプトアビジン磁性ビーズに加えた後、室温でさらに１５分間インキュベートした。ビーズを、磁気ラックを用いて捕捉し、１ｍｌの３％ＭＰＢＳ／０．１％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０中で４回洗浄した後、ＰＢＳ中で３回洗浄した。最後の洗浄後、ビーズを１００μｌのＰＢＳ中に再懸濁させ、これを用い、対数増殖中の大腸菌(E. coli)ＴＧ−１細胞５ｍｌを感染させた。ビーズ上の細胞およびファージを３７℃で１時間インキュベートし（３０分は静置、３０分は２５０ｒｐｍで振盪）、その後、２ＴＹＡＧプレート上に拡げた。プレートを３０℃で一晩インキュベートし、翌日、コロニーを可視化した。コロニーをプレートから１０ｍｌの２ＴＹ培養液中に掻き取り、−７０℃で保存のために１５％グリセロールを加えた。
【０１８２】
１回目のパンニング選択からのグリセロール保存培養物にヘルパーファージを重複感染させ、救済し、２回目の選択のためのｓｃＦｖ抗体を発現するファージ粒子を得た。２回目および３回目の可溶性選択を、ｂｉｏ．ＩＬ−２２  Ｈ／Ｆの濃度を５０ｎＭまで落として上記の通りに行った。
【０１８３】
親ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０およびの単離
ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０およびＧＩＬ９２をｓｃＦｖライブラリーから、ＩＬ−２２融合タンパク質でのパンニングとｂｉｏ．ＩＬ−２２  Ｈ／Ｆでの可溶性選択の組合せにより単離した。マイクロタイタープレートのウェルを１０μｇ／ｍｌ（ダルベッコのＰＢＳ、ｐＨ７．４）ヒトＩＬ−２２融合タンパク質でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。ウェルをＰＢＳ中で洗浄し、３％ＭＰＢＳ中、３７℃で２時間ブロッキングした。１００μｌの３％ＭＰＢＳ中、精製ファージ（１０１２ｔｕ）を加えてウェルをブロッキングし、室温で１時間インキュベートした。ウェルをＰＢＳＴ（０．１％ｖ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ）で１０回洗浄した後、ＰＢＳで１０回洗浄した。結合したファージ粒子を３７℃で３０分間、１００μｌトリプシン溶液（５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８、１ｍＭ  ＣａＣｌ２中、０．５μｇ／ｍｌトリプシン）で溶出させた。溶出したファージを用い、１０ｍｌの対数増殖中の大腸菌ＴＧ１を用いた。感染細胞を上記のように２ＴＹ培養液中、３７℃で１時間増殖させた後、２ＴＹＡＧプレート上に線条接種し、３０℃で一晩インキュベートした。出現コロニーをプレートから掻き取り、ファージを上記のように救済した。１００ｎＭ  ｂｉｏ．ＩＬ−２２  Ｈ／Ｆを用い、２回目の可溶性選択を上記の通りに行った。
【０１８４】
実施例２：ｓｃＦｖはＩＬ−２２とＩＬ−２２Ｒの結合を遮断する
親抗体ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８およびＧＩＬ９２に対して阻害アッセイを行い、ＩＬ−２２と１Ｌ−２２Ｒおよび／またはＩＬ−２２受容体複合体の結合を遮断または変更する抗体を同定した。原形質周辺の抽出液を含有する粗ｓｃＦｖを、ｂｉｏ．ＩＬ−２２  Ｈ／ＦとヒトＩＬ−２２受容体タンパク質（ｈＩＬ−２２Ｒ）の結合を阻害する能力に関してスクリーニングした。選択から出現したコロニーを、１００μｌ  ２ＴＹＡＧを含有する９６ウェルプレートに採取した。対数増殖中の培養物に１ｍＭ  ＩＰＴＧを加え、３０℃で一晩インキュベートすることによりｓｃＦｖの産生を誘発した。原形質周辺の抽出液を５０ｍＭ  ＭＯＰＳ  ｐＨ７．４／０．５ｍＭ  ＥＤＴＡ／０．５Ｍソルビトール中に調製した(Griffiths et al., 1993)。
【０１８５】
マイクロタイタープレートを室温にて１．５時間、１．２５μｇ／ｍｌのＩＬ−２２受容体タンパク質抗体（ＰＢＳ中でコーティングした。その後、プレートをＰＢＳ中で３回洗浄し、室温にて１時間、２％乳粉を含有するＰＢＳ（２％ＭＰＢＳ）でブロッキングした。さらに３回洗浄した後、ＩＬ−２２受容体タンパク質を含有する５０μｌの２５％細胞馴化培地を各ウェルに加え、４℃で一晩インキュベートした。翌日、２５μｌのサンプルおよび２５μｌのｂｉｏ．ＩＬ−２２  Ｈ／Ｆ（ＰＢＳ／０．０５％  ＢＳＡ／０．０５％  Ｔｗｅｅｎ中、５４ｎｇ／ｍｌ）を洗浄プレートに加え、室温で１．５時間インキュベートした。ＰＢＳＴ中で３回洗浄した後、ｂｉｏ．ＩＬ−２２  Ｈ／Ｆの結合をユウロピウム−ストレプトアビジンで検出し、ＴＲＦをＤＥＬＦＩＡ（登録商標）試薬キットおよびＶｉｃｔｏｒ  ２（商標）プレートリーダー(Perkin Elmer)で検出した。
【０１８６】
ＩＬ−２２結合の阻害を示したクローンを精製ｓｃＦｖとして再試験した。ＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ結合アッセイ（上記）およびＩＬ−２２／ＩＬ−２２受容体複合体アッセイ（下記）の双方を用いた。アッセイＩＣ５０値により測定されるクローン能力を確認するためにｓｃＦｖ濃度を滴定した。これらはＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウエアおよび４パラメーターロジスティック方程式曲線の当てはめを用いて求めた。ＩＬ−２２受容体複合体アッセイからのサンプルの結果を図１に示す。
【０１８７】
実施例３：ファージＥＬＩＳＡによるＩＬ−２２結合の証明
ＩＬ−２２に対するｓｃＦｖの特異性を確認するため、ＩＬ−２２融合タンパク質、ＩＬ−２２  Ｈ／Ｆおよび無関連のタンパク質を用い、ファージＥＬＩＳＡを行った。ファージミドを含む個々の大腸菌コロニーを、１ウェル当たり１００μｌの２ＴＹＡＧを含有する９６ウェルプレートに接種した。Ｍ１３Ｋ０７ヘルパーファージを、対数増殖中の培養物に多重感染度（ｍｏｉ）が１０となるように加え、これらのプレートを３７℃でさらに１時間インキュベートした。プレートをベンチトップ遠心機にて２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清を除去し、細胞ペレットを１００μｌの２ＴＹＡＫに再懸濁させ、振盪しながら３０℃で一晩インキュベートした。翌日、プレートを２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離し、各ウェルから１００μｌのファージ含有上清を新しい９６ウェルプレートに移した。ファージサンプルを室温にて１時間、終濃度３％のＭＰＢＳ中でブロッキングした。
【０１８８】
マイクロタイタープレートを１μｇ／ｍｌ  ＩＬ−２２融合タンパク質、ＩＬ−２２  Ｈ／Ｆまたは無関連のタンパク質でコーティングし、４℃で一晩インキュベートした。コーティング後、これらの溶液をウェルから除去し、プレートを室温にて１時間、３％のＭＰＢＳ中でブロッキングした。プレートをＰＢＳですすいだ後、各ウェルに５０μｌの、予めブロッキングしたファージを加えた。これらのプレートを室温で１時間インキュベートした後、ＰＢＳＴを３回交換し、その後、ＰＢＳを３回交換して洗浄した。各ウェルに、抗Ｍ１３−ＨＲＰコンジュゲート(Pharmacia)の１：５０００希釈溶液５０μｌを加え、これらのプレートを室温で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳＴで３回、その後、ＰＢＳで３回洗浄した。各ウェルに５０μｌのＴＭＢ基質を加え、発色するまでインキュベートした。この反応を、２５μｌの０．５Ｍ  Ｈ２ＳＯ４を添加することにより停止させ、４５０ｎｍで吸光度を測定した。これらの試験から、ｓｃＦｖクローンとＩＬ−２２の特異的結合が確認された。
【０１８９】
実施例４：ｓｃＦｖからＩｇＧへの変換
ｓｃＦｖクローン由来の重鎖および軽鎖Ｖ領域を、クローン特異的プライマーを用いて増幅させた。ＰＣＲ産物を適当な制限酵素で消化し、ヒトＩｇＧ４重鎖定常ドメインを含有するベクター（ＶＨドメインの場合）または適当であればヒトλまたはκ軽鎖定常ドメインを含有するベクター（ＶＬドメイン）にサブクローニングした。ＶＨおよびＶＬセグメントの最も近縁の生殖系列を決定し、この情報を用い、κまたはλ軽鎖定常ドメインが使用されたかどうかを示した（表４）。Ｖ領域ドメインがプラスミドに適切に挿入されていることは、個々の大腸菌コロニー由来のプラスミドＤＮＡをシーケンシグすることによって確認した。プラスミドは大腸菌培養物から標準的な技術により調製し、標準的な技術を用い、重鎖および軽鎖構築物をＨＥＫ２９３ＥＢＮＡ細胞に同時にトランスフェクトした。分泌されたＩｇＧを、Ａタンパク質セファロース(Pharmacia)を用いて精製し、バッファーをＰＢＳに交換した。
【表５】
2009531023.tif 000007
【０１９０】
精製ＩｇＧの効力を下記のような生化学的ＩＬ−２２受容体複合体阻害アッセイで確認した。効力の値を得るため、ＩｇＧ濃度を滴定した。サンプル効力データを表５に示す。
【表６】
2009531023.tif 000008
【０１９１】
実施例５：ＩＬ−２２抗体の至適化
大きなリボソームディスプレーライブラリーを作製し、本質的にHanes et al. (2000)に記載されているように、組換えヒトＩＬ−２２を特異的に認識するｓｃＦｖに関してスクリーニングした。まず、５つの親クローン（ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８およびＧＩＬ９２）をリボソームディスプレー形式に変換し、次に、この鋳型をライブラリーの作製に用いた。ＤＮＡレベルで、ｍＲＮＡへ効率的に転写させるために、５’末端にＴ７プロモーターを付加した。ｍＲＮＡレベルで、この構築物は原核生物リボソーム結合部位（Ｓｈｉｎｅ−Ｄａｌｇａｒｎｏ配列）ならびにｍＲＮＡ安定性のための５’および３’ステムループを含んだ。単鎖の３’末端において、停止コドンを除去し、スペーサーとして働かせるためにｇＩＩＩ部分を付加し、リボゾームトンネルから離れてｓｃＦｖを保持させた(Hanes et al. 2000)。
【０１９２】
主要クローンに由来するリボソームディスプレーライブラリーを、ＰＣＲを非校正Ｔａｑ  ＤＮＡポリメラーゼとともに用い、単鎖相補性決定領域（ＣＤＲ）の突然変異誘発によって作出した。このライブラリーをｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆと、その後、ストレプトアビジンコーティング常磁性ビーズ（Ｄｙｎａｌ  Ｍ２８０）とともにインキュベートする、親和性に基づく選択を行った。三元複合体（ｍＲＮＡ−リボソーム−ｓｃＦｖ）を磁気分離により回収し、結合していない複合体を洗い流した。次に、結合ｓｃＦｖをコードするｍＲＮＡを記載のような(Hanes et al, 2000)ＲＴ−ＰＣＲにより救済し、この選択プロセスを、ｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆの濃度を引き下げて（５回で１００ｎＭ〜１０ｐＭ）繰り返した。
【０１９３】
ライブラリーサイズをさらに大きくするために、Ｅｒｒｏｒ  ｐｒｏｎｅ  ＰＣＲを導入した。使用した誤り率は、CadwellおよびJoyce (1992)の方法に基づく標準的なＰＣＲ反応の後に１，０００ｂｐ当たり平均７．２の突然変異を作り出した。最初のｅｒｒｏｒ  ｐｒｏｎｅ  ＰＣＲ反応は１回目の選択と２回目の選択の間に行った。
【０１９４】
各親クローンについてのＶＨ／ＶＬ組換えライブラリーを、２回目の選択または４回目の選択のいずれかの後、ＶＨおよびＶＬＣＤＲリボソームディスプレー産物から作製した。特定系列のＶＨ  ＣＤＲ選択産物のＶＨ部分を、クローン特異的プライマーを用いて特異的にＰＣＲ増幅させた。同じ系列のＶＬＣＤＲ選択産物のＶＬ部分を別に増幅させた。これらの２つのＰＣＲ産物を重複ＰＣＲ反応により組み換えた。これにより、さらなるリボソームディスプレー選択に必要な全ての成分を含有するｓｃＦｖ産物の完全ライブラリーを作出した。
【０１９５】
いくつかのクローンでは、ファージディスプレーライブラリーも用いた。ファージライブラリーは、ＰＣＲ反応を適当なプライマーとともに用い、単鎖ＣＤＲの突然変異誘発により作出し、上記のように選択した。これらの産物も、リボソームディスプレー選択産物と合わせ、ＶＨ／ＶＬ組換えライブラリーを作出した。４回目のリボソームディスプレーからのＶＨ選択産物を、３回目のファージディスプレーからの産物とともに、同じ系列に由来するＶＬ産物と組み換えた。これは、クローン特異的プライマーとオーバーラッピングＰＣＲを用いて行い、ＶＨ／ＶＬ組換えライブラリーを作製した。可溶性ｂｉｏ．ＩＬ−２２  Ｈ／Ｆによる選択を上記のようなリボソームディスプレー形式で継続した。選択産物のｓｃＦｖ領域を、生化学的ハイスループットスクリーニング用のｓｃＦｖを作製するためにｐＣＡＮＴＡＢ６に指定クローニングした。
【０１９６】
実施例６：至適化クローンの同定
選択産物のハイスループットスクリーニングのため、２つのアッセイを用いた。クローンＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６およびＧＩＬ６８由来の産物は均一時間分解蛍光アッセイ（ＨＴＲＦ（登録商標）、Cis Biointernational)でスクリーニングし、ＧＩＬ６０およびＧＩＬ９２産物はＤＥＬＦＩＡ（登録商標）(Perkin Elmer)アッセイでスクリーニングした。
【０１９７】
ＨＴＲＦ（登録商標）エピトープ競合アッセイ
ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６およびＧＩＬ６８産物クローンの粗ｓｃＦｖを含有する培養上清を上記のように調製し、ＨＴＲＦアッセイで、ｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆ結合ＧＩＬ６８の阻害に関してスクリーニングした。
【０１９８】
クリプタート標識ＧＩＬ６８  ＩｇＧ（Cis Biointernationalからの標識キット）をアッセイバッファー（ＰＢＳ／０．４Ｍ  ＫＦ／０．０５％ＢＳＡ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ）で４００倍希釈した後、７．５ｎＭストレプトアビジンＸＬ６６５（Ｘｌｅｎｔ、Cis Biointernational）を加えた。この溶液を、Ｐａｃｋａｒｄブラック３８４ウェルオプティプレート(Perkin Elmer)中で、粗ｓｃＦｖサンプル（１２５倍希釈）およびｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆと混合した。プレートを室温で１時間インキュベートした後、Ｖｉｃｔｏｒ  ２（商標）プレートリーダー(Perkin Elmer)を用いて読み取った。６６５ｎＭ／６２０ｎＭの発光比を用いて各ウェルの特異的結合の割合％を算出した。
【０１９９】
ＤＥＬＦＩＡ（登録商標）時間分解蛍光アッセイ
ＧＩＬ６０およびＧＩＬ９２産物クローンをＩＬ−２２受容体複合体に対するｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆ結合の阻害に関してスクリーニングした。
【０２００】
マイクロタイタープレートをＩＬ−２２受容体複合体抗体（ＰＢＳ中１μｇ／ｍｌ）でコーティングし、室温で１．５時間インキュベートした。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄し、室温にて１時間、２％ＭＰＢＳでブロッキングした。さらに３回洗浄した後、ＩＬ−２２受容体複合体を含有する希釈細胞馴化培地を加え、４℃で一晩インキュベートした。粗ｓｃＦｖ上清を上記のように調製した。翌日、２５μｌの希釈ｓｃＦｖサンプルと２５μｌのｂｉｏ．ＩＬ−２２  Ｈ／Ｆ（６ｎｇ／ｍｌ）を洗浄プレートに加え、室温で１．５時間インキュベートした。プレートをＰＢＳＴで３回洗浄した後、ｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／ＦとＩＬ−２２受容体複合体の結合をユウロピウム−ストレプトアビジンおよびＤＥＬＦＩＡ（登録商標）試薬キット(Perkin Elmer)で検出した。時間分解蛍光を、Ｖｉｃｔｏｒ  ２（商標）プレートリーダー(Perkin Elmer)を用いて測定した。
【０２０１】
スクリーニングから確認された陽性クローン由来の精製ｓｃＦｖを、上記のように、ＤＥＬＦＩＡ（登録商標）ＩＬ−２２受容体複合体競合アッセイで試験した。アッセイにおいてＩＣ５０値により測定されるようなクローン能を確立するために、ｓｃＦｖ濃度の滴定を用いた。サンプル結果を図２に示す。１４の至適化クローンを０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４および３５６Ａ１１と呼んだ。
【０２０２】
実施例７：ＢＡＦ３−ＩＬ−２２増殖アッセイにおける至適化クローンのランキング
ＩＬ−２２により媒介されるＢａＦ３細胞増殖を遮断する抗体の能力を評価するため、増殖アッセイを行った。ｈＩＬ２２Ｒ−ＧＦＰおよびｈＩＬ１０Ｒ２−ＹＦＰでＢａＦ３細胞を同時にトラスフェクトすることにより、ｈＩＬ２２Ｒ／ｈＩＬ１０Ｒ２を発現するＢａＦ３細胞を作製した。ｈＩＬ２２ＲとｈＩＬ１０Ｒ２の双方を発現するＢａＦ３細胞（ＢａＦ３−ＩＬ−２２受容体細胞）をＦＡＣＳにより選別および回収した。
【０２０３】
ＢａＦ３−ＩＬ−２２受容体細胞は通常、１０％ＦＢＳおよび１ｎｇ／ｍＬネズミＩＬ−３を含むＲＰＭＭ６４０で維持した。アッセイ設定の直前に、細胞をアッセイ培地（１０％ＦＢＳ、１００Ｕ／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを含むＲＰＭＩ１６４０）で４回洗浄し、アッセイ培地に再懸濁させ、３７℃、５％ＣＯ２中で６〜８時間インキュベートした。アッセイプレートを調製するため、１００μｌの細胞（アッセイ培地中１×１０５／ｍｌ）を、９６ウェル平底組織培養プレート(Costar)の中央の６０ウェルに加えた。試験ｓｃＦｖまたはＩｇＧサンプルは、保存サンプルをアッセイ培地で希釈した後、０．２２μＭフィルターで濾過することで調製した。連続５倍希釈のサンプルを別の希釈プレートで調製した。細胞を含むウェルを５０μｌのサンプル、次いで５０μｌのヒトＩＬ−２２（アッセイ培地中４０ｎｇ／ｍｌ）で処理し、その後、３７℃、５％ＣＯ２中で４０時間インキュベートした。対照ウェルは培地単独、および細胞を単独で、または１０ｎｇ／ｍＬヒトＩＬ−２２の存在下で含んだ。
【０２０４】
細胞増殖は、２０μｌのＡｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ(Serotec)をウェルに加えた後、３７℃、５％ＣＯ２中で５時間±３０分間インキュベートすることにより検出した。蛍光の測定（励起＝５６０ｎＭ、発光＝５９０ｎＭ）前にウェル中のシグナルを一様とするためにプレートを軽くたたくことで混合する。４パラメーターロジスティック曲線の当てはめ（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ２ソフトウエア）を用いてＥＣ５０およびＩＣ５０値を評価し、これを用いて抗体のランク付けを行った。至適化ｓｃＦｖおよびＩｇＧに関するサンプル効力データを表６に示す。
【表７】
2009531023.tif 000009
【０２０５】
実施例８：生殖系列化
６つの親クローンに関する配列データを用い、各クローンの重鎖および軽鎖の最も近い生殖系列配列を同定した。標準的な部位特異的突然変異誘発技術を適当な突然変異誘発プライマーとともに用いて適当な突然変異を作出した。配列の突然変異は配列解析により確認した。生殖系列化されたクローンならびにそれらのｓｃＦｖおよびＶＨおよびＶＬドメインの配列を表７に示す。生殖系列化された親クローンから精製したｓｃＦｖを最初に記載したようなビオチン化ＩＬ−２２結合ＩＬ−２２受容体複合体競合アッセイで試験し、アッセイでＩＣ５０値により測定されるようなクローン能を確認した。結果を表８にまとめる。
【表８】
2009531023.tif 000010
【０２０６】
【表９】
2009531023.tif 000011
【０２０７】
【表１０】
2009531023.tif 000012
【０２０８】
上記のように生殖系列化された至適化抗体は無かった。８つの生殖系列化されたＩｇＧを上記のようなＢａＦ３−ＩＬ−２２増殖アッセイで試験した。代表的な実験からの抗体のＩＣ５０値を表９に示す。
【０２０９】
次に、抗体配列をGENEART North America (28 Kirk Bradden Rd. East, Toronto, ON, Canada M8Y2E6)に送り、そこでそれらは、GENEARTの特許至適化アルゴリズムを用い、ＣＨＯ細胞において至適化発現のために合成された。
【表１１】
2009531023.tif 000013
【０２１０】
実施例９：抗体はＩＬ−２２による誘発されるＨＴ２９細胞からのＧＲＯａ分泌を阻害する
ＩＬ−２２により誘発されるＨＴ２９細胞からのＧＲＯａ分泌を遮断する抗体の能力を評価するため、ＧＲＯａアッセイを行った。ＨＴ２９細胞を、９６ウェル平底組織培養プレート(Corning Inc. Cat. #3595)にて、ＤＭＥＭ培地（ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋１００単位／ｍｌペニシリンおよびストレプトマイシン＋２ｍＭグルタミン）中、５×１０４／ウェルで播種した。１０ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−２２を、ＤＭＥＭ培地で連続希釈した抗体と混合し、３７℃で３０分間インキュベートした。播種２４時間後に、ＨＴ２９細胞から培地を除去し、９６ウェルプレート中、これらの細胞に予め混合したＩＬ−２２と抗体を加えた。
【０２１１】
３７℃、５％ＣＯ２で４８時間インキュベートした後、培地を採取し、分泌されたＧＲＯａを、ヒトＧＲＯａイムノアッセイキット(R&D Systems, Cat. DGROO)を製造者の指示に従って用いて試験した。結果を図３に示す。
【０２１２】
実施例１０：抗体は種々の種のＩＬ−２２と結合し、それを阻害する
生殖系列化された、また、生殖系列化されていない至適化抗体の種間交差反応性を次のように判定した：ＥＬＩＳＡプレート(Costar, Cat. #3590)を、ＰＢＳバッファー中、１μｇ／ｍｌのラット、マウスまたはヒトＩＬ−２２またはヒトＩＬ−２６で一晩コーティングした。プレートをＰＢＳＴバッファー（ＰＢＳ中０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄した後、室温にて１時間、１％ＢＳＡ(Sigma A8918)／ＰＢＳＴでブロッキングした。抗体を１μｇ／ｍｌで加え、２５℃で１時間インキュベートした。これらのプレートを洗浄した後、ＨＲＰコンジュゲートヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体(Southern Biotech Association, Cat. #2040-05)を加えた。これらのプレートを２５℃で１時間インキュベートした後、ＰＢＳＴで洗浄し、ＴＭＢ(KPL, Cat. #50-76-04)で現像した。反応を０．１８Ｍ  Ｈ２ＳＯ４で停止させた。プレートをＯＤ４５０ｎｍで読み取った。結果を図４に示す。
【０２１３】
また、これらの抗体をＧＲＯａ細胞アッセイおよびＢａＦ３−ＩＬ−２２増殖アッセイの双方で評価した。表１０（ａ）および１０（ｂ）に示されるように、これらの抗体はヒトＩＬ−２２受容体を介したヒト、サル、ラットおよびマウスＩＬ−２２シグナル伝達の活性を遮断した。３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４はまた、実施例１１にさらに述べられるように、リアルタイム生体特異的相互作用分析（ＢＩＡ）を用い、ネズミ、ラットおよびサルＩＬ−２２に対する種間交差反応性を証明した。
【０２１４】
表１０（ａ）．ＩＬ−２２抗体は、ＧＲＯａ細胞に基づくアッセイ系において示されるように他種のＩＬ−２２の遮断に極めて有効である。示されている値はＩＣ５０値（ｐＭ）を表す。
【表１２】
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【０２１５】
表１０（ｂ）．ＩＬ−２２抗体は、ＢａＦ３細胞に基づくアッセイ系において
示されるように他種のＩＬ−２２の遮断に極めて有効である。
示されている値はＩＣ５０値（ｐＭ）を表す。
【表１３】
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【０２１６】
実施例１１：ラット抗ＩＬ−２２モノクローナル抗体とヒト抗ＩＬ−２２モノクローナル抗体の間の結合速度の比較
ヒトモノクローナル抗ＩＬ−２２抗体（３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４）およびラットモノクローナル抗ＩＬ−２２抗体（ＷＯ２００５／０００８９７およびＷＯ０２／０６８４７６からのＰ３／３（Ａｂ−０２）およびＰ３／２（Ａｂ−０４））のヒトＩＬ−２２に対する結合速度を、表面プラズモン共鳴技術を用い、リアルタイム生体特異的相互作用分析（ＢＩＡ）により評価した。
【０２１７】
ラットモノクローナル抗体のバイオセンサー表面を作製するため、アミン結合を用い、Ａ／Ｇタンパク質(Pierce #21186, Rockford, IL)を研究級のカルボキシメチルデキストランチップ（ＣＭ５）に固定した。この表面をＥＤＣ／ＮＨＳで活性化させた。Ａ／Ｇタンパク質を酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ４．０）中５０μｇ／ｍｌの濃度で注射した。免疫化は、Ａ／Ｇタンパク質に対して３０００（ＲＵ）を目的としたウィザードツールを用いて行った。残留する活性化基を１．０Ｍエタノールアミン（ｐＨ８．０）でブロッキングした。最初のフローセルを、内部屈折率、マトリックス効果および非特異的結合に関して補正するための参照表面として用いた。第２、第３および第４のフローセルを捕捉分子でコーティングした。Ａ／Ｇタンパク質と結合するラットモノクローナル抗体Ａｂ−０２およびＡｂ−０４を、１μｇ／ｍｌ溶液３０μｌを注射することにより、Ａ／Ｇタンパク質表面に捕捉させた。基準値とＡｂ−０２またはＡｂ−０４注射が完了してからおよそ９０秒後の時点の間の正味の違いを用い、結合したリガンドの量を表した。
【０２１８】
ヒトモノクローナル抗体のバイオセンサー表面を作製するため、ヒトモノクローナル抗体（３５６Ａ１１または３６８Ｄ０４）または対照抗体ＰＤ−１（＃１７）のいずれかを、標準的なアミン結合を用い、研究級のカルボキシメチルデキストランチップ（ＣＭ５）に固定した。この表面をＥＤＣ／ＮＨＳで活性化させた。捕捉抗体を酢酸ナトリウムバッファー（ｐＨ５．５）中１μｇ／ｍｌの濃度で注射した。残留する活性化基を１．０Ｍエタノールアミン（ｐＨ８．０）でブロッキングした。最初のフローセルを、内部屈折率、マトリックス効果および非特異的結合に関して補正するための参照表面として用いた。第２、第３および第４のフローセルを捕捉分子でコーティングした。
【０２１９】
Ａｂ−０２およびＡｂ−０４では、ヒトＩＬ−２２溶液を３００、１００、５０、２５、１２．５、６．４、３．２、１．６および０ｎＭ濃度で３０μｌ／分の流速にて３分間、３回注入し、結合した物質の量を時間の関数としてセンサーグラムに記録した。同じ流速で１０分間ＨＢＳ／ＥＰバッファー中、その後、０．１％ＴＦＡ  ５μｌの注入、およびグリシンｐＨ１．５  ５μｌの注入で解離段階をモニタリングし、完全に活性な表面を再生した。
【０２２０】
３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４では、ヒトＩＬ−２２溶液を４００、２００、１００、５０、２５、１２．５、６．２５および０ｎＭで、１００μｌ／分の流速（非特異的結合を回避するために高い流速）にて３分間、３回注入し、結合した物質の量を時間の関数としてセンサーグラムに記録した。同じ流速で６分間ＨＢＳ／ＥＰバッファー中、その後、グリシンｐＨ１．５  ５μｌの２回の注入で解離段階をモニタリングし、完全に活性な表面を再生した。
【０２２１】
速度実験は全て、２２．５℃にてＨＢＳ／ＥＰバッファー中で行った。二重参照を用い、各センサーグラムについてブランクとバッファー効果を差し引いた。対照実験では、最初の注入はバッファーを含んだ。
【０２２２】
速度データは、１：１モデルに当てはめたＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウエア３．０．２を用いて分析した。グローバル分析を用い、センサーグラムの適当な領域から、見掛けの解離速度定数（Ｋｄ）および結合速度定数（Ｋａ）を算出した。抗体と分析物の間の相互作用の親和性定数を、速度定数から次の式：ＫＤ＝Ｋｄ／Ｋａ（式中、ＫＤは解離定数である）、ＫＡ＝Ｋａ／Ｋｄ（式中、ＫＡは会合定数である）により算出した。Ａｂ−０２およびＡＢ−０４の結合データを表１１Ａおよび１１Ｂにまとめる。３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４の結合データを表１２にまとめる。
【表１４】
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【表１５】
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【表１６】
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【０２２３】
これらの結果は、本発明のヒトモノクローナル抗ＩＬ−２２抗体は、ヒトＩＬ−２２を中和する能力を有するとＷＯ２００５／０００８９７およびＷＯ０２／０６８４７６に記載されているラットモノクローナル抗ＩＬ−２２抗体Ａｂ−０２およびＡｂ−０４よりもヒトＩＬ−２２に対して有意に高い親和性を有することを示す。特に、ヒトＩＬ−２２に対する３５６Ａ１１の解離定数（ＫＤ＝５．４０×１０ー１１Ｍまたは０．０５４ｎＭ）は、それぞれＡｂ−０２（ＫＤ＝５．２２×１０−８Ｍまたは５２ｎＭ）およびＡｂ−０４（ＫＤ＝２．３８×１０ー９Ｍまたは２．３８ｎＭ）の解離定数のおよそ１０００倍、および４０倍高い。同様に、３６８Ｄ０４（ＫＤ＝１．３２×１０ー１０Ｍまたは０．１３２ｎＭ）はヒトＩＬ−２２に対して、Ａｂ−０２およびＡｂ−０４よりもそれぞれおよそ４００倍および１８倍強い親和性を有する。サル、ネズミおよびラットＩＬ−２２に対する３５６Ａ１１および３６８０４の結合プロフィールはヒトＩＬ−２２のもの（データは示されていない）と類似していた。
【０２２４】
また、３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４の結合特異性を、ＢＩＡを用いて評価した。ヒトＩＬ−１０、ヒトＩＬ−１９、ヒトＩＬ−２０、ヒトＩＬ−２４、ヒトＩＬ−２８Ａ、ヒトＩＬ−２９、ヒトＩＦＮ−α２ｃまたはヒトＩＦＮ−ωと交差反応性を示した抗体は無かった（データは示されていない）。
実施例１２：関節炎治療のためのモデル
【０２２５】
関節炎は関節の炎症を特徴とする疾病である。関節リウマチ（ＲＡ）は最も多い形態の関節炎であり、結合組織および関節内面の膜である滑膜の炎症を含む。炎症を受けた滑膜はしばしば関節に浸潤し、関節の軟骨および骨を損傷する。ＩＬ−２２およびＩＬ−２２Ｒタンパク質および／または転写物は双方ともヒト疾病に関連する。ＲＡ滑膜生検では、ＩＬ−２２タンパク質はビメンチン＋滑膜繊維芽細胞といくらかのＣＤ６８＋マクロファージで検出され、一方、ＩＬ−２２Ｒは滑膜繊維芽細胞で検出される。滑膜繊維芽細胞をＩＬ−２２で処置すると、単球化学遊走物質タンパク質−１であるＭＣＰ−１の産生、ならびに全般的な代謝活性が誘導される(Ikeuchi, H., et al. (2005) Arthritis Rheum. 52:1037-46)。
【０２２６】
ＩＬ−２２を用い、関節内面の膜である滑膜由来の細胞に対するその作用を研究した。ヒト繊維芽細胞様滑膜細胞（ＨＦＬＳ）(Cell Applications (San Diego, CA))を、関節手術を受けた関節リウマチ患者の滑膜組織から単離する。ＨＦＬＳをヒトＩＬ−２２とともに４８時間培養し、上清を取り出し、ケモカインおよびサイトカインに関してＥＬＩＳＡにより試験する。ＩＬ−２２はケモカインＭＣＰ−１、エオタキシンおよびＩＰ−１０ならびにサイトカインＴＮＦα、ＩＬ−６およびＩＬ−８のＨＦＬＳ分泌を高める。これらのケモカインおよびサイトカインはいくつかの活性を介して炎症を促進し、ＩＬ−２２により引き起こされる関節における濃度上昇が炎症およびＲＡを悪化させることが当技術分野で知られている。
【０２２７】
ＩＬ−２２を用い、ＣＩＡ（コラーゲン誘導関節炎）の臨床進行を調節する。ＣＩＡは関節リウマチを研究するための標準的なマウスおよびラットモデルである（例えば、Holmdahl et al., (2002) Ageing Res. Rev., 1:135参照）。０日目に、マウスにフロイントの完全アジュバント中、１００μｇのＩＩ型コラーゲンを注射し、２１日目にこのマウスに、フロイントの不完全アジュバント中、１００μｇのＩＩ型コラーゲンで追加刺激する。２１日目にはまた、マウスに毎日１μｇのＩＬ−２２を注射し、毎日、マウスの疾病を調べる。臨床徴候を次のようにスコアリングする：０＝腫脹なし、１＝１〜２箇所の指の腫脹または足首の腫脹、２＝２箇所を超える指の腫脹または軽度の足の腫脹、３＝広範囲の足の腫脹および４＝足の硬直。コラーゲン注射後にＰＢＳを注射したマウスは徐々に疾病を発症した。コラーゲン注射後にＩＬ−２２を注射したマウスは徐々により重篤な疾病を発症した。ＩＬ−２２処置は特にＣＩＡを悪化させるので、抗ＩＬ−２２抗体、例えば、生殖系列化された０８７Ｂ０３、３６８Ｄ０４、３５４Ａ０８または３５６Ａ１１による処置は、ＣＩＡを抑制または遅延させると予測される。よって、このモデルはＲＡの治療有効性を予測することから、生殖系列化された、または生殖系列化されていない０８７Ｂ０３、３６８Ｄ０４、３５４Ａ０８または３５６Ａ１１を含む抗ＩＬ−２２抗体による処置は、ヒトにおいてＲＡを抑制または遅延させると予測される。
【０２２８】
実施例１３：患者の処置
本発明の抗体で処置可能な患者のタイプとしては、自己免疫障害、呼吸器系障害、皮膚、心血管系、神経系、腎臓、肝臓および膵臓の炎症症状を有する患者または移植患者が挙げられる。０８７Ｂ０３、３６８Ｄ０４、３５４Ａ０８および３５６Ａ１１を含む本発明の抗体の治療計画および予測される転帰の例を以下に示す。表１３のもの以外の用量および
投与頻度も使用可能である。当業者ならば、投与経路または処置する患者の年齢、体重、状態、性別、医学的症状の重篤度などの他の既知の変数に基づき、必要に応じて治療計画を調整することができる。
【表１７】
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【０２２９】
本明細書は、本明細書に引用されている参照文献の教示に照らせば最もよく理解される。本明細書内の実施形態は、本発明の実施形態の例を示すものであって、本発明の範囲を限定するものではない。当業者ならば、他の多くの実施形態が本発明に包含されることが容易に分かる。本開示に引用されている全ての刊行物および特許は出典明示によりそのまま本明細書の一部とされる。出典明示により本明細書の一部とされる文書が本明細書に矛盾するか、または一致しない限り、本明細書はこのような文書に取って代わる。本明細書のいずれの参照文献の引用も、そのような参照文献が本発明の先行技術であることを認めるものではない。
【０２３０】
特に断りのない限り、特許請求の範囲を含め、本明細書に用いられる成分、反応条件などの量を表す数字は全て、全ての場合で、「約」という言葉で修飾されるものと理解すべきである。よって、特に断りのない限り、数的パラメーターは近似値であり、本発明によって得ようとする所望の特性によって異なる。少なくとも、特許請求の範囲と等価な教義の適用を制限するものではなく、各数的パラメーターは有意な桁数および通常の概数化に照らして解釈すべきである。
【０２３１】
特に断りのない限り、一連の要素に先行する「少なくとも」とは、その一連の全ての要素を指すと理解すべきである。当業者ならば、通常の実験だけを用いて、本明細書に記載される本発明の特定の実施形態に対する多くの等価物を認識または確認することができる。このような等価物も特許請求の範囲に包含されるものとする。
【図面の簡単な説明】
【０２３２】
【図１】ＩＬ−２２受容体複合体アッセイにおける親抗ＩＬ−２２  ｓｃＦｖクローンの効力：ｂｉｏ．ＩＬ−２２結合ＩＬ−２２受容体複合体ＤＥＬＦＩＡ競合アッセイ
【図２】ＩＬ−２２受容体複合体アッセイにおける主要ｓｃＦｖクローンのプロファイリング：ｂｉｏ．ＩＬ−２２結合ＩＬ−２２受容体複合体ＤＥＬＦＩＡ競合アッセイ。（Ａ）ＧＩＬ  １由来。（Ｂ）ＧＩＬ  １６由来。（Ｃ）ＧＩＬ  １６、ＧＩＬ  ６０およびＧＩＬ  ６８由来。（Ｄ）ＧＩＬ  ６０由来。（Ｅ）ＧＩＬ  ６８由来。（Ｆ）ＧＩＬ  ６８由来。（Ｇ）ＧＩＬ  ９２由来。
【図３】ＧＲＯａ細胞アッセイにおけるＩｇＧの効力。ｈｕｌＬ−２２  ＧＲＯａアッセイにおける至適化ＧＩＬ−ＩｇＧｓ。（Ａ）生殖系列化されたＩｇＧ。（Ｂ）生殖系列化されていないＩｇＧ。
【図４】ＥＬＩＳＡによるＩＬ−２２抗体の種間交差反応性。至適化ＧＩＬ−ＩｇＧはＩＬ−２２と特異的に結合する。（Ａ）生殖系列化されたＩｇＧ。（Ｂ）生殖系列化されていないＩｇＧ。
【図５】ヒトＩＬ−２２のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列。ヒトＩＬ−２２のヌクレオチド配列は配列番号２であり、ポリ（Ａ）テールを含む。開示されるヌクレオチド配列は、オープンリーディングフレームを含み、先のヌクレオチド配列に相当する全長ＩＬ−２２タンパク質のアミノ酸配列は配列番号１で示される。成熟ＩＬ−２２のアミノ酸配列は、配列番号１のほぼアミノ酸３４〜１７９に相当する。
【図６】マウスＩＬ−２２のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列。
【図７】ＶＨおよびＶＬドメインおよびＣＤＲ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３）を含む、生殖系列化されていないＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４および３５６Ａ１１のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列。
【図８】ＶＨおよびＶＬドメインおよびＣＤＲ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３）を含む、生殖系列化されているＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０６２Ａ０９、０８７Ｂ０３、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列。
【図９】下線のＣＤＲ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３）を含む、生殖系列化されていないＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４および３５６Ａ１１のｓｃＦｖのアミノ酸配列およびヌクレオチド配列。
【図１０】下線のＣＤＲ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３）を含む、生殖系列化されているＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０６２Ａ０９、０８７Ｂ０３、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列。
【図１】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
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【図２Ｇ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
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【図６】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図７−３】
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【図７−４】
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【図７−５】
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【図７−６】
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【図７−７】
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【図７−８】
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【図７−９】
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【図７−１０】
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【図７−１１】
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【図７−１２】
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【図７−１３】
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【図７−１４】
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【図７−１５】
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【図７−１６】
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【図７−１７】
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【図８−１】
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【図８−２】
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【図８−３】
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【図８−４】
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【図８−５】
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【図８−６】
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【図８−７】
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【図８−８】
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【図８−９】
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【図８−１０】
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【図８−１１】
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【図８−１２】
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【図８−１３】
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【図９−１】
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【図９−２】
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【図９−３】
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【図９−４】
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【図９−５】
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【図９−６】
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【図９−７】
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【図９−８】
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【図９−９】
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【図９−１０】
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【図９−１１】
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【図９−１２】
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【図９−１３】
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【図９−１４】
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【図９−１５】
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【図９−１６】
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【図９−１７】
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【図９−１８】
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【図９−１９】
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【図９−２０】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１０−３】
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【図１０−４】
2009531023.tif 000092
【図１０−５】
2009531023.tif 000093
【図１０−６】
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【図１０−７】
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【図１０−８】
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【図１０−９】
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【図１０−１０】
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【図１０−１１】
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【図１０−１２】
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【図１０−１３】
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【図１０−１４】
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【図１０−１５】
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【手続補正書】
【提出日】平成20年10月21日(2008.10.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2009531023000001.app
【国際調査報告】
2009531023.tif 000104
2009531023.tif 000105