(57)【要約】本発明は、長期間高い安定性を有する点で特徴づけられるナノカプセル系を目的とする。これらの系は、医薬品としてまたは化粧品として活性な、高度に親油性の成分の徐放に有用である。系は水系媒体に分散した平均サイズ１μｍ未満のナノカプセルを含み、ナノカプセルは、リン脂質成分および１つ以上の飽和および／または不飽和Ｃ12〜Ｃ24鎖脂肪酸またはその誘導体を含む親油相；およびキトサンまたはその誘導体およびポリオキシアルキレン化化合物を含む親水相を含む構造を有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ナノカプセルが
ａ．下記を含む親油相：
ａ．１）少なくとも１つのリン脂質成分；および
ａ．２）１つ以上の飽和および／または不飽和Ｃ12〜Ｃ24鎖脂肪酸またはその誘導体を含む油；
ｂ．下記を含む親水相：
ｂ．１）キトサンまたはその誘導体；および
ｂ．２）ポリオキシアルキレン化化合物
：を含む構造を有する、水系媒体に分散した１μｍ未満の平均サイズを有するナノカプセルを含む系。
【請求項２】
リン脂質成分が、好ましくはホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルコリン、ホスファチジン酸およびその混合物から選択されるホスホグリセリドを含む、請求項１に記載の系。
【請求項３】
リン脂質成分がレシチン、好ましくは大豆レシチンを含む、請求項２に記載の系。
【請求項４】
レシチンが、重量で３５％ないし７５％、好ましくは３５％ないし５５％のホスファチジルコリン比率を有する、請求項３に記載の系。
【請求項５】
油がヒマシ油を含む、請求項１から４のいずれかに記載の系。
【請求項６】
ポリオキシアルキレン化化合物がポリオキシエチレンまたはエチレンオキサイド−プロピレンオキサイド共重合体である、請求項１から５のいずれかに記載の系。
【請求項７】
ポリオキシエチレン化化合物が、ポロキサマー、好ましくはポロキサマー１８８を含む、請求項６に記載の系。
【請求項８】
系内のリン脂質成分の比率が、水を含む総重量について重量で０．１％ないし１０％、好ましくは０．５％ないし５％、より好ましくは重量で１％ないし２．５％である、請求項１から７のいずれかに記載の系。
【請求項９】
系内の油の比率が、水を含む総重量について重量で１％ないし２０％、好ましくは２．５％ないし１０％、より好ましくは重量で４．５％ないし５．５％である、請求項１から８のいずれかに記載の系。
【請求項１０】
系内のキトサンの比率が、水を含む総重量について重量で０．０５％ないし１０％、好ましくは０．１％ないし２％、より好ましくは重量で０．２５％ないし１％である、請求項１から９のいずれかに記載の系。
【請求項１１】
系内のポリオキシアルキレン化化合物の比率が、水を含む総重量について重量で０．０５％ないし１０％、好ましくは０．１％ないし５％、より好ましくは１％ないし２．５％である、請求項１から１０のいずれかに記載の系。
【請求項１２】
水系媒体が粘性親水性ポリマーをさらに含む、請求項１から１１のいずれかに記載の系。
【請求項１３】
粘性ポリマーが、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、キトサン、ポロキサマー、ポリエチレングリコールおよびその混合物の間から選択される、請求項１２に記載の系。
【請求項１４】
ヒアルロン酸またはその任意の塩をさらに含む、請求項１から１３のいずれかに記載の系。
【請求項１５】
ナノカプセルが平均サイズ１ないし９９９ｎｍ、好ましくは５０ないし８００ｎｍ、より好ましくは２００ないし７００ｎｍを有する、請求項１から１４のいずれかに記載の系。
【請求項１６】
ナノカプセルが、好ましくは＋１ｍＶないし＋７０ｍＶのゼータ電位で表される、正の表面電荷を有する、請求項１から１５のいずれかに記載の系。
【請求項１７】
生物学的に活性な親油性分子をナノカプセルの親油相中にさらに含む、請求項１から１６のいずれかに記載の系。
【請求項１８】
生物学的に活性な親油性分子が、タンパク質、ペプチド、脂質、親油化オリゴヌクレオチド、副腎皮質ステロイド、親油性ビタミン、たとえばＡ、Ｄ、ＫおよびＥ、抗菌剤、静菌剤、治療剤、抗ヒスタミン剤、麻酔剤、鎮痒剤、抗生物質、抗ウイルス剤、消毒薬、にきび薬、脱色薬、抗脂漏薬、免疫抑制剤、非ステロイド抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、およびトウガラシ由来抗炎症剤から成る群から選択される、請求項１７に記載の系。
【請求項１９】
ナノカプセル中の生物学的に活性な親油性分子の比率が、水を含む系の総重量について重量で最大５％である、請求項１７または１８に記載の系。
【請求項２０】
親油性分子がシクロスポリンである、請求項１７に記載の系。
【請求項２１】
ナノカプセル中のシクロスポリンの比率が、水を含む系の総重量について重量で０．０１ないし２％である、請求項２０に記載の系。
【請求項２２】
親油性分子が、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、フルチカゾン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、デキサメタゾン、ベタメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、好ましくは吉草酸ベタメタゾンである、請求項１７に記載の系。
【請求項２３】
ナノカプセルの表面上に吸着された、ペプチド、タンパク質、ホルモン、抗原／アレルゲン、抗体、ヘパリン、ＤＮＡ、ＲＮＡおよびオリゴヌクレオチドから選択される、親水性の生物学的に活性な分子をさらに含む、請求項１から１６のいずれかに記載の系。
【請求項２４】
請求項１から２３のいずれかで定義されるような系を含む医薬組成物。
【請求項２５】
経口、頬側、舌下、局所、目、鼻または膣経路による投与のための、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
請求項１から１９のいずれかで定義されるような系を含む化粧品組成物。
【請求項２７】
皮膚軟化剤、保存料、芳香物質、にきび薬、抗菌剤、抗酸化剤、脱臭剤、制汗剤、ふけ防止剤、脱色剤、抗脂漏剤、色素、日焼けローション、ＵＶ光吸収剤、酵素、および芳香物質から選択される、化粧品として許容される親油性分子を含む、請求項２６に記載の組成物。
【請求項２８】
ｐＨ調整剤、抗酸化剤または保存料をさらに含む、請求項２４から２７のいずれかに記載の組成物。
【請求項２９】
ａ．リン脂質成分および油、および任意に有効成分として親油性分子の、有機溶媒への溶解による親油相の調製；
ｂ．キトサンおよびポリオキシアルキレン化化合物の水への溶解による親水相の調製；
ｃ．温度４０ないし６０℃への両方の相の加熱；
ｄ．ナノカプセルの自発的形成を伴う親油性および親水相の混合；
ｅ．有機溶媒の除去
：を含む、請求項１から２２のいずれかに記載の系の調製のための製法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、長期間の高い安定性を有する点で特徴づけられるナノカプセル化系を目的とする。これらの系は、特に高度に親油性の、医薬品としてまたは化粧品として活性な分子の放出制御に有用である。それは特に、水相に分散したナノカプセルを含む系、それらを含む化粧品組成物および医薬組成物、およびその調製のための製法を目的とする。
【背景技術】
【０００２】
生物学的に活性な物質を放出するための系は、常に発展している研究分野を成す。それは、高い親油性が皮膚脂質バリアを通る透過を実際上不可能にするという事実のため、有効成分、特に高度に親油性の有効成分の、局所経路（経皮 または粘膜経由）による投与が特に不適当である生薬分野でよく知られている。
【０００３】
このため、最近二十年間で、使用後に上皮を経由するこれらの薬剤のバイオアベイラビリティおよび吸収を高めることを可能にする、この種の分子の放出のためのさまざまな系が開発されている。これらの系のうちから、一または複数の界面活性剤が組み込まれている水相に分散している、有効成分が組み込まれている油相から構成される、リポソーム、マイクロエマルション、ナノスフィアおよびナノ粒子といったコロイド懸濁液の調製物が特に興味深い。
【０００４】
このように、カルボ（Ｃａｌｖｏ）他[Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，１９９６，４８，１１４７−５２］は、界面活性剤としてポロキサマーを含む水相に分散された、レシチンおよびポリ−(−カプロラクトンの油相から成る、眼経路によるインドメタシンの放出のためのコロイド系を開示する。
【０００５】
それに関して、ＥＰ出願７６０ ２３７は、トリグリセリド、レシチンおよび界面活性剤から成る親油性分散相、およびプロピレングリコールを含む水系親水相を含む、シクロスポリンのような非水溶性物質の放出のためのマイクロエマルションに関する。
【０００６】
特許出願ＷＯ９７／２２３５８は、シクロスポリンが、トコフェロールまたはその誘導体から成る疎水相、および炭酸プロピレンおよびポリエチレングリコール、および界面活性剤といった一連の親水性成分を含む系に溶解されるマイクロエマルションを開示する。
【０００７】
にもかかわらず、この種のコロイド系の主な欠点は、それが負の正味電荷を持ち、そのためある種の陽イオン性生体成分（一部のタンパク質、ナトリウムおよびカリウム）との接触は、表面電荷の中和、系の破壊および、結果として、有効成分の損失を生じることである。一方、これらの負に荷電した系はまた、生体膜による静電反発を受ける可能性があり、なぜなら前記膜もまた負電荷を有するためである。
【０００８】
この限界を克服するため、正の正味電荷を有し、および、したがって、陽イオン性の生体環境を経由して吸収されることおよび／または粘膜および皮膚といった生体膜への接着を可能にするコロイド系を開発する目的で、重要な研究が行われている。
【０００９】
特許出願ＷＯ９６／３７２３２は、さまざまな経路による有効成分の投与のための、ナノエマルション、ナノカプセルおよび、親油性核から成りおよびキトサンでコーティングされたナノ粒子に基づく系に関する。親水性キトサンポリマーの水相への組み込みは、前記系に正の正味電荷を与える。それ以来、このポリマーまたは目的の正電荷が提供されることを可能にする別のものを組み込む系が開発されている。
【００１０】
このように、カルボ（Ｃａｌｖｏ）他[Ｃｏｌｌｏｉｄ．Ｐｏｌｙｍ．Ｓｃｉ．，１９９７，２７５，４６−５３］は、前段落で言及した出願と同一の、しかし、ジアゼパムをモデルとして親油性分子を放出するために、さらにポロキサマーを界面活性剤として水相に組み込んだコロイド系を開示する。同様に、エル・シャブーリ（Ｅｌ−Ｓｈａｂｏｕｒｉ）[Ｉｎｔｅｒｎ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃ．，２００２，２４９，１０１−８］の科学論文はコロイド系を記載し、キトサンに加えて、グリコール酸ナトリウムまたはゼラチン−Ａの水相での使用、およびシクロスポリン放出についてのその能力が分析される。
【００１１】
同様に、フィリポビック・グルシック（Ｆｉｌｉｐｏｖｉｃ−Ｇｒｃｉｃ）[Ｊ．Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐ．，２００１，１８（１），３−１２］による論文は、高分子量マーカーが組み込まれた（フルオレセインイソチオシアナート−デキストラン）、キトサンでコーティングされたリポソーム核に基づく粘膜接着系に関し、キトサンの割合およびその分子量の関数として、擬似胃液中での前記系の安定性を分析する。
【００１２】
にもかかわらず、医薬および 化粧品学の分野におけるこの種の系の使用に伴う重要な技術上の問題は、その保存中 およびそのｉｎ ｖｉｖｏ投与後の両方におけるその不安定性に関する。具体的には、これらの系の組成は、一ヶ月を超える期間のおよび室温を上回る温度での保存中に、有効成分が親油相から徐々に放出されおよびそれが不溶である水相へ移動することを引き起こし、その沈澱、および結晶の形成に繋がる。
【００１３】
このデータを踏まえて、安定なナノカプセル系の開発は、活性親油性成分および、適当な生体環境におけるこれらの分子の結合およびその放出のための大きな能力に加えて、工業応用性の観点から必須な特徴である、その保存および輸送中に明らかに改善されている安定性を有するものの放出に、特に必要である。
【００１４】
もう一つの技術上の問題は、オートクレーブまたは低温殺菌といった滅菌工程を受ける際にこれらの系の大部分が不安定であることである。これらの工程は、系を１００℃を上回る温度に短時間供することを含む。一般的に、これらの強い物理条件は、さまざまな成分の溶解性を劇的に変化させ、およびエマルションまたは粒子の破壊に繋がり、有効成分が見出される油相の形成を伴う。したがって、局所投与できおよび滅菌工程に供される場合でさえ安定である、親油性を持つ有効成分または化粧品成分の徐放のための系を見出すことが非常に望ましい。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１５】
発明者らは、リン脂質成分および飽和および／または不飽和Ｃ12〜Ｃ24鎖脂肪酸またはその誘導体を含む油を含む親油性核、およびキトサンおよびポリオキシアルキレン化化合物を含む親水相を含むナノカプセルの系は、これらの系の工業的および商業的実行可能性の主要特性を表す、通常の保存条件で２年を上回る期間、水系懸濁液中で高い安定性を有することを見出している。それはさらに、高度に親油性の分子の効率的な結合および以降の放出を可能にする。
【００１６】
これらの系に由来する別の長所は、粒子サイズおよびゼータ電位といった構造および性質を維持する一方で高音での滅菌工程に供される能力である。この側面は、たとえば、滅菌が義務づけられている眼用途でのように、その使用が必要である場合に特に関係する。さらに、これらの系を滅菌する可能性は、最終処方に保存料を使用する必要性の低減および一部の場合には消失を可能にする。
【００１７】
このように、本発明の目的は、１μｍ未満の平均サイズを有する、水系媒体に分散したナノカプセルを含む系から成り、ナノカプセルは
ａ）下記を含む親油相：
ａ．１）少なくとも１つのリン脂質成分；および
ａ．２）１つ以上の飽和および／または不飽和Ｃ12〜Ｃ24鎖脂肪酸またはその誘導体を含む油；
ｂ）下記を含む親水相：
ｂ．１）キトサンまたはその誘導体；および
ｂ．２）ポリオキシアルキレン化化合物
を含む構造を有する。
【００１８】
本発明の特定の一実施形態では、ナノカプセル系はさらに、ナノカプセルの親油相中に、疾患を予防、緩和または治療することができる活性親油性分子を含む。好ましい一実施形態では、活性親油性分子はシクロスポリンである。
【００１９】
別の特定の一実施形態では、ナノカプセル系はさらに、ナノカプセルの表面に吸着された、ペプチド、タンパク質、ホルモン、抗原／アレルゲン、抗体、ヘパリン、ＤＮＡ、ＲＮＡおよびオリゴヌクレオチドから選択される親水性の生物学的に活性な分子を含む。
【００２０】
本発明の第二の目的は、前に定義された系を含む医薬組成物に関する。
【００２１】
本発明のもう一つの目的は、前に定義された系を含む化粧品組成物に関する。本発明の特定の一実施形態では、前記化粧品組成物は、化粧品として活性な分子をさらに組み込むことができる。
【００２２】
本発明の最後の目的は、下記を含む、上で定義される系の調製のための製法に関する：
ａ）リン脂質成分および油、および任意に有効成分として親油性分子の、有機溶媒への溶解による親油相の調製；
ｂ）キトサンおよびポリオキシアルキレン化化合物の水への溶解による親水相の調製；
ｃ）温度４０ないし６０℃への両方の相の加熱；
ｄ）ナノカプセルの自発形成を伴う親油性および親水相の混合；
ｅ）有機溶媒の除去。
【００２３】
本発明の系および組成物は、ナノカプセルの親油相に組み込まれている、親油性を持つ生物学的に活性な分子の投与に特に適する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
本発明の系は、水系媒体に分散したナノカプセルを含み、前記ナノカプセルは、有効成分が組み込まれうる親油相、および親水相を含む構造を有する。
【００２５】
「ナノカプセル」の語は、核を「封入する」正電荷を有するキトサンを含む親水相によって囲まれる親油性の核として理解される。ナノカプセルは水系媒体中に分散され、ここで前記水系媒体は、キトサンおよび／または溶解した他の親水性ポリマーの追加量を含みうる。ナノカプセルのさまざまな親油性および親水性成分の結果として生じるイオン性相互作用は、特徴的な物理的実体を生じ、それは独立しておりおよび観察可能であり、その平均サイズは１(ｍ未満、すなわち平均サイズ１ないし９９９ｎｍである。
【００２６】
「平均サイズ」は、親油相および親水相を含み、水系媒体中で一緒に動く、ナノカプセル集団の平均直径として理解される。これらの系の平均サイズは、当業者に公知でありおよびたとえば下記の実験部分に記載される標準的手順を用いて測定されうる。
【００２７】
本発明の系のナノカプセルは、１(ｍ未満の平均粒子サイズを有する、好ましくは１ないし９９９ｎｍ、好ましくは５０ないし８００ｎｍの平均サイズを有する点で特徴づけられる。カプセルの平均サイズは、リン脂質成分の量によって（より多量では、結果として生じるサイズはより小さい）、キトサンの量および分子量によって（サイズはより大きい量または分子量に伴って増大する）、使用した油の密度、および混合工程における撹拌速度および両方の相の温度といった調製工程のパラメーターによって主に影響される。
【００２８】
さらに、ナノカプセルは、キトサンのアミン基が原因である表面電荷（ゼータ電位で測定される）を有する可能性があり、その大きさは＋１ｍＶないし＋７０ｍＶで変化しうる。
【００２９】
親油相
ナノカプセル中に存在する親油相は、少なくとも１つのリン脂質成分および、一またはいくつかの飽和および／または不飽和長鎖脂肪酸（Ｃ12〜Ｃ24）、またはその誘導体から成る油を含む。その機能は、共に薬学的および化粧品的な意味で活性であるならば、適当な生体環境下で後に放出される、活性な親油性成分が存在する場合に収容することである。
【００３０】
リン脂質成分
本記載では、リン脂質成分は、一種のイオン性脂質と理解され、最も単純な形ではグリセロールを含み、それに２個の脂肪酸（１，２−ジアシルグリセロール）および１個のリン酸基が結合している。通常、リン酸基はホスホジエステル結合によって別の原子の基に結合し、それはしばしばたとえばコリン、セリン、またはエタノールアミンのように窒素を含み、および多くの場合電荷を有する。別のリン脂質は、アミノアルコールのスフィンゴシンまたはジヒドロスフィンゴシンに由来し（スフィンゴ脂質）、および必ずしもグリセロールに由来しない。結果として生じる化合物は、脂肪酸の鎖について親油性を有し、およびリン酸基および電荷について親水性を有する。
【００３１】
本発明の系では、リン脂質成分は好ましくは、ホスホグリセリド、スフィンゴ脂質、セファリンおよびその混合物から選択される。ホスホグリセリド、たとえばホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルグリセリン、ホスファチジルイノシトール、リゾホスファチジルコリンおよびホスファチジン酸は、脂肪酸、グリセリン、リン酸およびアルコール（たとえばコリン、セリン、エタノールアミン、グリセリンまたはイノシトール）によって形成される脂質である。スフィンゴミエリンのようなスフィンゴ脂質は、スフィンゴシン、脂肪酸、リン酸およびアルコールまたはアミノアルコールによって形成される。セファリンは、グリセリン、リン酸、２個の脂肪酸および２個のアルコール塩基（コリンおよびスフィンゴシン）から形成される。
【００３２】
本発明の好ましい一実施形態では、リン脂質成分はホスホグリセリドを含む。より好ましくは、リン脂質成分は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、リゾホスファチジルコリンおよびホスファチジン酸またはその混合物から選択されるホスホグリセリドを含む。
【００３３】
別の好ましい一実施形態では、リン脂質成分はレシチンである。好ましくは市販の大豆レシチンが使用されるが、卵レシチンもまた使用されうる。
【００３４】
レシチンは脂質化合物の複雑な混合物であり、その大部分はリン脂質化合物、具体的にはホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミンおよびリゾホスファチジルコリンである。一般的に、レシチンは商品名および組成中のホスファチジルコリンの割合を示す数字で表される。レシチン中のホスファチジルコリンの割合は、３５％ないし事実上１００％で変動しうるが、にもかかわらず本発明では、この割合が３５％ないし７５％、好ましくは３５％ないし５５％であるレシチンが好ましくは使用される。非常に高い割合のホスファチジルコリン（８０％を超える）を含むレシチンの使用は、ナノカプセル懸濁液中に遊離油の存在を生じるため、勧められない。これに関連して、ホスファチジルコリン割合８０％以下の特性を持つ市販の数種類のレシチンがある。このように、好ましくはエピクロン（Ｅｐｉｋｕｒｏｎ）１３５Ｆ、エピクロン１４５Ｖ、エピクロン１７０、リポイド（Ｌｉｐｏｉｄ）Ｓ３０、リポイドＳ４５およびリポイドＳ７５が使用される。
【００３５】
同様に、ホスファチジルコリン／ホスファチジルエタノールアミン比は、適当な安定性を有するナノカプセルの形成に影響する。したがって、ホスファチジルコリン／ホスファチジルエタノールアミン比が約７／１でありおよびホスファチジルコリンの比率が組成物中で３５％を上回るエピクロン（Ｅｐｉｋｕｒｏｎ）１３５Ｆの使用が、最高の安定性結果を与えることが実証されている。
【００３６】
油
親油相に含まれる油は、一または数種類の不飽和および／または飽和Ｃ12〜Ｃ24鎖脂肪酸またはその誘導体から成る。前記脂肪酸の例は、飽和脂肪酸、たとえばラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、アカシジン酸、カルナシリン酸、アラキジン酸、ベヘン酸、リグノセリン酸、またはセロチン酸；一不飽和脂肪酸、たとえばラウロレイン酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、バクセン酸、ガドレイン酸、セトレイン酸、またはエルカ酸；多価不飽和脂肪酸、たとえばリノール酸、リノレン酸、ガンマリノレン酸、ステアリドン酸、アラキドン酸、イワシ酸またはドコサヘキサエン酸を含むがそれらに限定されない。
【００３７】
同様に、これらの脂肪酸の誘導体もまた使用でき、それはこの定義によって高い親油性を持ちおよびたとえば、前記脂肪酸のエステルまたはアミドといった、アルコールまたはアミンとの酸基の反応の結果として生じる化合物と理解される。同様に、脂肪酸誘導体の定義は、炭化水素鎖の置換基として水酸基、エーテル基またはアルキル基を有する脂肪酸、そのエステルまたはそのアミド、たとえば、セレブロン酸、ヒドロキシネルボン酸、リシノール酸、ツベルクロステアリン酸またはフィタン酸；または炭化水素鎖に環状構造を有する脂肪酸、たとえばラクトバチルス酸またはチョールムーグラ酸を含む。
【００３８】
一般論として、たとえば、ヒマワリ油、トウモロコシ油、大豆油、綿実油、落花生油、大豆油、月見草油、ルリヂサ油、オリーブ油、ココナツ油、パーム油、麻種子油、杏仁油または杏種子油、小麦胚芽油、トウモロコシ胚芽油、ココアバター油、マカダミア油、アーモンド油、アボカド油、カレンデュラ油、グレープシード油、ゴマ油、ホホバ油、ヘーゼルナッツ油などといった任意の植物油が使用されうる。
【００３９】
驚くべきことに、ナノカプセルの組成へのこの種類の油の組み込みは、たとえば商品名をミグリオール（Ｍｉｇｌｉｏｌ）またはラブラファク（Ｌａｂｒａｆａｃ）という油といった最新技術で用いられる他の油と比較して、長期間に系に高い安定性を与えることに特に関連することが見出されている。特に、加速条件でシミュレートされた検定を用いて、本発明の系は５〜６ヶ月間３７℃周辺の温度にて安定であることが観察されており、それは室温にて通常の保存条件で２年間にほぼ同等である。これをミグリオール（Ｍｉｇｌｉｏｌ）８４０およびラブラファク・リポフィル（ＬａｂｒａｆａｃＬｉｐｏｐｈｉｌｅ）（飽和Ｃ8〜Ｃ10鎖脂肪酸のジエステルまたはトリグリセリドの混合物から成る）といった別の種類の油の結果と比較して、系安定性は最大６倍上昇することがわかっている。
【００４０】
本発明の好ましい一実施形態では、親油相に含まれる油はヒマシ油である。前記油はトウゴマ（Ｒｉｃｉｎｕｓ Ｃｏｍｍｕｎｉｓ Ｌ．）種子を非加熱圧搾することによって得られる。しかし、それは市販の製品である。ヒマシ油は、パルミチン酸２％（最大）、ステアリン酸２．５％（最大）、オレイン酸２．５〜６．０％、リノール酸２．５〜７．０％、リノレン酸１％（最大）、およびリシノール酸８５〜９２％の長鎖脂肪酸（Ｃ16〜Ｃ18）組成を有する。
【００４１】
親水相
親水相は、水に加えて、キトサンまたはその誘導体および界面活性剤として作用するポリオキシアルキレン化化合物を含む。この相の機能は、おそらく、ナノカプセルに正電荷を与えて陽イオン性の生体環境を通じて吸収されるのを可能にすることまたはそれへの吸収に加えて、ナノカプセルのコーティングである。
【００４２】
キトサン
キトサンはキチン（ポリ−Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン）に由来する天然起源のポリマーであり、Ｎのアセチル基の重要な部分が加水分解によって除去されている。脱アセチル化の程度は、好ましくは４０％より大、より好ましくは６０％より大である。一変形では、６０〜９８％である。キトサンはしたがってアミノポリ多糖構造および陽イオン性を有する。キトサンは式（Ｉ）のモノマー単位の反復：
2009530241.tif 000002
ここでｎは整数であり、およびさらにアミン基がアセチル化されているｍ個の単位を含む。ｎ＋ｍの合計が重合度、すなわちキトサン鎖中のモノマー単位の数を表す。
【００４３】
本発明のナノカプセルを製造するのに用いられるキトサンは、２ないし２０００ｋＤａ、好ましくは２ないし５００ｋＤａ、より好ましくは５ないし１５０ｋＤａの分子量を有する。使用されうる市販のキトサンの例は、ノバマトリクス社（ＮｏｖａＭａｔｒｉｘ）（ノルウェー、ドランメン（Ｄｒａｍｍｅｎ））から入手可能なＵＰＧ１１３、ＵＰＣＬ２１３およびＵＰＣＬ１１３である。
【００４４】
キトサンの代替物として、キトサンの溶解性を高める目的でまたはその接着性を高める目的で１つ以上の水酸基および／または１つ以上のアミン基が修飾されているキトサンと理解されるその誘導体もまた使用されうる。これらの誘導体は、特に、ロバーツ（Ｒｏｂｅｒｔｓ）の『キチン化学』（Ｃｈｉｔｉｎ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）、マクミラン社（Ｍａｃｍｉｌｌａｎ），１９９２，１６６に記載される通り、アセチル化、アルキル化またはスルホン化キトサン、チオール化誘導体を含む。好ましくは、誘導体が使用される場合、誘導体はＯ−アルキルエーテル、Ｏ−アシルエステル、トリメチルキトサン、ポリエチレングリコール修飾キトサンなどから選択される。他の可能な誘導体は、クエン酸、硝酸、乳酸、リン酸、グルタミン酸などといった塩である。いずれにしろ、当業者には、最終処方の安定性および商業的実行可能性に影響することなく、キトサンになされうる修飾を特定する方法が公知である。
【００４５】
ポリオキシアルキレン化化合物
その役割について、ポリオキシアルキレン化化合物は、構造内にアルキレンオキサイド単位を有する非イオン性の合成親水性ポリマーを意味すると理解され、ポリオキシエチレン（ＰＥＯ）またはエチレンオキサイド−プロピレンオキサイド（ＰＥＯ−ＰＰＯ）共重合体の使用が好ましい。この最後の場合については、ＰＥＯおよびＰＰＯの共重合体が使用される場合、共重合体中のＰＥＯの比率は重量で１０％ないし８０％の範囲にわたることができ、残り（最大１００％）がＰＰＯである。
【００４６】
これらのポリマーはさまざまな分子量で市販されているが、にもかかわらず、本発明では１０００ないし２５０００の分子量を有するポリオキシエチレン化誘導体の使用が好ましい。好ましい一実施形態では、ポリオキシエチレン化誘導体は、たとえば市販名ポロキサマーといった三ブロック共重合体（ＰＥＯ−ＰＰＯ−ＰＥＯ）である。たとえばプルロニック（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ）Ｆ６８（ポロキサマー１８８）を用いて良好な結果が得られている。
【００４７】
ポリオキシアルキレン化化合物は、系内で界面活性剤として使用され、およびその存在は、系に安定性を与えるのに特に必要であり、さもなければナノカプセルは保存中に凝集する。このように、それが存在しなければ、粒子サイズの増大が３７℃にて２週間後に観察されている。さらに、表Ｉで観察できる通り、この化合物の組み込みは、形成されるナノカプセルのサイズにほとんど影響しないことを実証できている。
【表１】
2009530241.tif 000003
【００４８】
本発明の一変形では、系は、水を含む系の総重量について重量で好ましくは０．１％ないし１０％、好ましくは０．５％ないし５％、より好ましくは重量で１％ないし２．５％のリン脂質成分の比率を有する。リン脂質成分の比率０．１％未満は、ナノカプセル懸濁液中の遊離油の存在に繋がるため推奨されない；対照的に、１０％を上回る比率は、負電荷を有する脂質成分と正電荷を有するキトサンの相互作用のため、粒子の形成およびカプセル化されない系の形成に繋がる。
【００４９】
一方、本発明の別の一変形では、系内の油の比率は、水を含む系の総重量について重量で１％〜２０％、好ましくは２．５％ないし１０％の範囲にわたる。より小さな量はカプセル化されうる活性成分の低減を伴い、一方、より大きな量は、系内の遊離油の存在を回避するためにリン脂質成分といった別の成分の比率の増大を必要とする。
【００５０】
本発明の別の一変形では、キトサン、またはその誘導体の比率は、水を含む系の総重量について重量で好ましくは０．０５％ないし１０％、好ましくは０．１％ないし２％、およびより好ましくは０．２５％ないし１％である。上記より大きい比率は懸濁液の粘度の増大を生じ、それは一部の用途について有利でありうるが、しかし溶媒除去相および処方濃縮を顕著に妨害する。
【００５１】
その役割について、ポリオキシアルキレン化化合物の比率は重量で好ましくは０．０５％ないし１０％、重量で好ましくは０．１％ないし５％、より好ましくは１％ないし２．５％である。
【００５２】
すべての場合で、残りの比率は主に、ナノカプセルが分散される精製水に相当する。これは、別の成分がナノカプセル（１つ以上の親油性有効成分、化粧品成分など）に、それが分散される水系媒体（増粘剤、保存料、香料など）に、またはそれらに吸着されて（親水性有効成分、ヒアルロン酸など）存在できないという意味ではない。
【００５３】
本発明の系の一変形では、ナノカプセルは水系媒体に分散され、水系媒体はさらに親水性ポリマーを含み、親水性ポリマーの機能は、系に粘性を与え、その密度を大幅に高めることである。この成分の添加は、本発明の水系溶媒に分散されたナノカプセル系が結果として一部の場合では、特にゼリー、クリーム、軟膏またはバームといった半固体の医薬組成物または化粧品組成物を製造したい場合に、用途の観点から流動性が高すぎるためである。粘性を有する親水性ポリマーのうち、特に、炭化水素および誘導体、カルボン酸、ポリビニルアルコールのようなポリグリコール、ポリビニルピロリドンの誘導体、キトサンまたはその誘導体、ポロキサマー、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸またはその混合物が使用されうる。
【００５４】
本発明の別の一変形では、ナノカプセルの形成後に、ヒアルロン酸またはその塩を、そのさまざまな性質および機能のために、水系媒体に組み込む。一方で、それはナノカプセルに吸収され、電荷とその性質の一部を変化させる。他方で、それは細胞膜およびムチン（粘膜中に存在するタンパク質）との相互作用を促進できることが知られている。加えて、使用する品質に依存して、それは水系媒体中に溶解したままであることが可能であり、および系の粘度の調節に寄与する。いずれにしろ、表ＩＩで判る通り、特に系のサイズおよびゼータ電位の測定において、それは系の性質に悪影響を与えないことが知られている。
【表２】
2009530241.tif 000004
【００５５】
本発明の系のより興味深い用途の一つは、親油性分子の投与目的、特に、それらが医薬品としてまたは化粧品として活性な化合物である場合である。本発明に記載される系は、ナノカプセル内の生物学的に活性な親油性分子の結合のための高い能力を有する。
【００５６】
したがって、本発明のナノカプセル系はさらに、疾患を予防、緩和または治療できる、生物学的に活性な親油性分子を親油相に含みうる。
【００５７】
「生物学的に活性な親油性分子」の語は、疾患の治療、治癒、予防または診断に使用されるかまたは、ヒトおよび動物の身体的および精神的福祉を改善するために使用される、親油性の任意の物質に関する。親油性を有するこれらの分子は、タンパク質、ペプチド、脂質、修飾オリゴヌクレオチド（親油化）、副腎皮質ステロイド、親油性ビタミン、たとえばＡ、Ｄ、ＫおよびＥ、抗菌剤、静菌剤、治療剤、抗ヒスタミン剤、麻酔剤、鎮痒剤、抗生物質、抗ウイルス剤、消毒薬、にきび薬、脱色薬、抗脂漏薬、免疫抑制剤、非ステロイド抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）、トウガラシ由来抗炎症剤を含みうる。
【００５８】
好ましい一実施形態では、生物学的に活性な親油性分子はシクロスポリンである。
【００５９】
別の好ましい一実施形態では、生物学的に活性な親油性分子は、たとえば、ヒドロコルチゾン、プレドニゾン、フルチカゾン、プレドニゾロン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、デキサメタゾン、ベタメタゾン、ベクロメタゾン、ジプロピオン酸ベクロメタゾンといった副腎皮質ステロイドである。
【００６０】
好ましい一変形では、副腎皮質ステロイドは吉草酸ベタメタゾンである。
【００６１】
ナノカプセルに封入された有効成分の比率は、水を含む系の総重量について重量で最大５％となりうる；より多量は、系の安定性を低減させ、およびすべての有効成分を封入するためにより多量のリン脂質成分の添加を必要にする。にもかかわらず、適当な比率は、それぞれの場合で封入すべき有効成分に依存する。
【００６２】
有効成分としてシクロスポリンを封入する具体的な場合に、前記系内のその比率は、重量で好ましくは０．０１％ないし５％、より好ましくは０．１％ないし２％となる。
【００６３】
吉草酸ベタメタゾンが組み込まれる場合、系に含まれるこの成分の割合は、好ましくは０．０１％ないし３％、より好ましくは０．０５％ないし０．５％の範囲となる。
【００６４】
本発明の別の一態様では、ナノカプセルを含む系はまた、高い親油性を有しない有効成分の投与に使用されうる。その場合、それらはナノカプセルに封入されるが、その表面に吸収される。この変形は、特にペプチド、タンパク質、ホルモン（インシュリン、ＬＲＨ、ＬＤなど）、目的に応じて免疫応答または寛容を生じるための抗原／アレルゲン（破傷風トキソイド、ジフテリア毒素など）、抗体、ヘパリン（低分子量および非分画）、ＤＮＡ、ＲＮＡおよびオリゴヌクレオチドといった、親水性の生物学的に活性な分子の投与のための、安定な系の調製に有用でありうる。
【００６５】
本発明の別の目的は、上記で定義された通りのナノカプセル化系を含む医薬組成物に関する。
【００６６】
医薬組成物の例は、経口、頬側、舌下、局所、眼、鼻、または膣投与のための任意の液体組成物（すなわちナノカプセルの懸濁液または分散系）または、局所、眼、鼻または膣投与のためのゼリー、軟膏、クリームまたはバームの形態の任意の組成物を含む。
【００６７】
好ましい一態様では、処方は粘膜を経由して投与される。ナノカプセルが有する正の表面電荷は、負に荷電した粘膜および上皮細胞の表面との相互作用を介して、粘膜表面上の薬剤のより良好な吸収を提供する。
【００６８】
別の好ましい一態様では、処方は皮内にまたは経皮的に投与され、皮膚を通じたまたは皮膚上の投与と理解される。この形態の投与は、本発明の系は経皮経路による薬物の吸収および透過を促進するだけでなく、皮膚表面上の系の吸着および以後の有効成分の徐放（「デポ」型）を促進するため特に有意義である。
【００６９】
皮膚上または皮膚を通じた投与のための良好な性質のため、および長期安定性のため、本発明のナノカプセル系はまた化粧品用途に非常に適している。
【００７０】
したがって、本発明の別の目的は、以前に定義されたナノカプセル系を含む化粧品組成物から成る。これらの化粧品組成物は、任意の液体組成物（ナノカプセルの懸濁液または分散系）、または本発明の系を含みおよび局所投与のためにゼリー、クリーム、軟膏またはバームの形態である任意の組成物を含む。前記組成物は、結合している化粧品として活性な分子を保たない場合でさえ、皮膚軟化、保護および治癒特性を有する点で特徴づけられる。
【００７１】
本発明の一変形では、化粧品組成物はまた、治療効果を何ら有しなくても化粧品物質としての性質を有する、親油性の活性分子を組み込むことができる。ナノカプセルに組み込まれうる活性分子のうち、特に、皮膚軟化剤、保存料、芳香物質、にきび薬、抗菌剤、抗酸化剤、脱臭剤、制汗剤、ふけ防止剤、脱色剤、抗脂漏剤、色素、日焼けローション、ＵＶ光吸収剤、酵素、芳香物質を挙げることができる。
【００７２】
医薬品組成物および化粧品組成物はさらに、たとえば組成物のｐＨが５を下回る値に低下するのを防ぐ緩衝剤のようなｐＨ調整剤、リン脂質成分および油の酸化を阻害する抗酸化剤、および処方の重要な構造変化を回避する保存料を含む。このように、一変形では、ｐＨの調節および同時に抗酸化剤としての作用を可能にする二機能を有するクエン酸緩衝液が親油相に使用され、および保存料としてパラベンが親水相に使用される。
【００７３】
機能に応じて、これらの追加の成分は、ナノカプセルを構成する相に、またはナノカプセルが分散される水系媒体に、またはナノカプセルに完全にまたは一部が吸収されて存在しうる。当業者は、どの追加の成分が使用されうるかを決定でき、およびそれらが必要である場合は、その多数は医薬品組成物および化粧品組成物で共通に使用される。
【００７４】
本発明の最後の目的は、上記で定義されおよびナノカプセルを含む本発明の系の調製のための製法に関する。前記製法は、一方で、リン脂質成分および油の有機溶媒への溶解による親油相の調製を含む。随意的な医薬品または化粧品親油性有効成分の組み込みは、溶液に添加される順序にかかわらず、リン脂質成分および油と共にこの親油相へのその溶解によって実施される。
【００７５】
有機溶媒の選択は、組み込まれる有効成分に大幅に依存する。たとえばエタノールおよびイソプロパノールといった、医薬品として許容される有機溶媒の使用が好ましいが、シクロスポリンを封入したいような一部の場合には、下記の表から判る通り、シクロスポリンへの高い親和性を有するエタノールまたはイソプロパノールといった溶媒は、水相および親油相の以降の混合中に有効成分の水相への拡散を引き起こすため、アセトンを使用する。
【表３】
2009530241.tif 000005
【００７６】
有機溶媒は残りの工程中に完全にまたは一部がさらに除去されなければならなくなるため、有機溶媒の最小量を使用することが好ましい。
【００７７】
特定の一実施形態では、有機溶媒は重量で０．００５％ないし０．０１５％の量のリン脂質成分、重量で約０．０２５％の量の油、および重量で０．００２５％ないし０．００５％の量の有効成分へ添加され、すべての割合は有機溶媒の総重量について測定される。
【００７８】
一方、親水相は、キトサンおよびポリオキシアルキレン化化合物を見ずに溶解することによって調製される。好ましい一実施形態では、重量で０．０００５％ないし０．００２％のキトサンおよび０．００１％ないし０．００５％のポリオキシアルキレン化化合物が水に溶解され、すべての割合は水の総重量について測定される。
【００７９】
次に、両方の相を温度４０℃ないし６０℃、好ましくは５０℃へ加熱し、およびついでそれらを混合する。ナノカプセル、および安定な系が、その範囲の温度で形成されるとは予想されないため、これは驚くべきことである。その最大値を超えて加熱される場合、結果として得られる調製物は、懸濁物中の遊離油の存在のため不適当であることが観察できている。対照的に、４０℃未満で加熱される場合、親油性成分の固化の開始が観察される。添加順序は系の特性に影響しないため、この混合段階は、水相を有機相へ、および有機相を水相へ、加えることの両方によって実施されうる。両方の相を混合する際に、ナノカプセルが溶媒置換過程によって自発的に形成され、ここで一方の相が他方の相に組み込まれる際、有機溶媒が水相へ拡散し、リン脂質成分、油および任意に有効成分から成る脂質小滴を形成する。後者は高度に負である点によって特徴づけられ、キトサンポリマーの正電荷のためのイオン性相互作用によってその周囲へのキトサンの直接配置を生じ、それはまたさらに、系の表面電荷もまた正にする。
【００８０】
ナノカプセルが一旦形成されると、使用した有機溶媒は当業者に公知である任意の方法によって除去される。有機溶媒の除去は、医薬組成物中にその存在が勧められないという事実のためである。
【００８１】
次に、ナノカプセル系の調製において典型的な工程の一つは、成分濃度を高めるためのその濃縮である。本発明では、初期体積が予想外に、ナノカプセル処方の体積より最大で１７倍小さく濃縮されうることが観察されており、それを下回ると系が安定性を失いはじめる。
【００８２】
有機溶媒の除去後または濃縮段階後、上記の追加の物質が添加されうる（増粘剤、ヒアルロン酸またはその塩、保存料など）。
【００８３】
系が、非親油性の生物学的に活性な分子の投与のために使用される場合、それらはナノカプセルの形成後に、または有機溶媒の除去後に添加されうる。
【００８４】
さらに、驚くべきことに、本発明の水相に分散されたナノカプセル系は、安定性に影響することなく高温滅菌工程に供することができるのが観察されている。前記工程は、たとえば、オートクレーブ処理、チンダリゼーション、ＨＴＳＴ（高温短時間）およびＵＨＴ（超高温）を含む。これらの工程は当業者に公知であり、および、眼経路による投与でそうであるように、本発明の系を滅菌が必要な用途に使用できる目的で実施される。同様に、この特徴に由来する別の長所は、別の経路を目的とする市販処方の製造において保存料の使用を顕著に低減することを可能にする点である。
【００８５】
高温滅菌に一般的に使用される条件は、ナノカプセルの融解、および、したがって、有効成分の放出を引き起こしうる。にもかかわらず、本発明のナノカプセルが滅菌工程後にサイズおよび表面電荷を維持することが観察できており、および、さらに、系において有効成分の結晶の出現は観察されない。これは、ナノカプセルから水相への前記有効成分の放出がないことを明らかにする。
【００８６】
別の特徴として、滅菌工程に供されている系はまた長期にわたって安定であることも極めて重要であり、その安定性は少なくとも４ヶ月３７℃にての加速試験で証明されており、それは本発明に付属の実施例で示される通り通常条件で１年より長期に相当し、したがってこれらの系の工業的および商業的実行可能性が確認される。
【００８７】
下記で、本発明の特徴および長所を明らかにするいくつかの例示的な実施例が記載されるが、しかし、それらは請求項で定義される本発明の目的を限定すると解釈されない。
【実施例】
【００８８】
下記に詳細に示す実施例に共通する工程として、ナノカプセルは、サイズ、ゼータ電位（または表面電荷）、封入効力およびシクロスポリンＡ結晶の存在の観点から特徴づけられている。ナノカプセル安定性試験はハイドルフ（Ｈｅｉｄｏｌｐｈ）ストーブ（タイトラマックス（Ｔｉｔｒａｍａｘ）１０００）で、およびオートクレーブ処理はプレソクレーブ（Ｐｒｅｓｏｃｌａｖｅ）７５（セレクタ社（Ｓｅｌｅｃｔａ））で実施された。
【００８９】
サイズ分布は光子相関スペクトル法（ＰＣＳ；ゼータサイザー（Ｚｅｔａ Ｓｉｚｅｒ）、ナノシリーズ、ナノ−ＺＳ、マルバーン・インスツルメンツ社（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）、英国）を用いて実施し、ナノ粒子集団の平均サイズ値を得ている。
【００９０】
ゼータ電位はレーザードップラー流速法（ＬＤＡ；ゼータサイザー（Ｚｅｔａ Ｓｉｚｅｒ）、ナノシリーズ、ナノ−ＺＳ、マルバーン・インスツルメンツ社（Ｍａｌｖｅｒｎ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）、英国）を用いて測定されている。電子移動度を測定するために、試料をミリＱ（Ｍｉｌｌｉ−Ｑ）水に希釈した。
【００９１】
キトサンナノカプセルからのシクロスポリンＡおよび吉草酸ベタメタゾンの放出は、目視で評価されており、水相に結晶の形成があるかを観察し、およびシクロスポリン濃度をＨＰＬＣによって（外相中の最大溶解度１６(ｇ／ｍｌ）または吉草酸ベタメタゾン（外相中の最大溶解度５(ｇ／ｍｌ）を、封入された有効成分に応じて定量している。この方法で、外相中に定量された量が有効成分の最大溶解度に等しい場合、目に見えなくても結晶形成が存在すると推論される。
【００９２】
実施例に使用したキトサン（プロタサン（Ｐｒｏｔａｓａｎ）ＵＰ Ｃｌ １１３）はノバマトリクスＦＭＣバイオポリマー（ＮｏｖａＭａｔｒｉｘ−ＦＭＣＢｉｏｐｏｌｙｍｅｒ）、シクロスポリンＡはＬＣラボラトリーズ（ＬＣＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）、吉草酸ベタメタゾンはギナマ（Ｇｕｉｎａｍａ）、ヒマシ油はガリンド社（Ｇａｌｉｎｄｏ）、ホスファチジルコリンはデグッサ（Ｄｅｇｕｓｓａ）（エピクロン（Ｅｐｉｋｕｒｏｎ）１３５Ｆ）、ポロキサマー１８８はＢＡＳＦ（ＢＡＳＦＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）、アセトンはボルキミカ（Ｖｏｒｑｕｉｍｉｃａ）（アナレマ（Ａｎａｌｅｍａ））および使用したそれ以外の製品はシグマアルドリッチ（ＳｉｇｍａＡｌｄｒｉｃｈ）（スクロース、グルコースおよびマンニトール）から入手する。
【００９３】
実施例１
３７℃でのシクロスポリンＡを含むキトサンナノカプセルの懸濁液中の安定性試験
シクロスポリンＡを含むキトサンナノカプセルは下記の通り調製する：
ａ）レシチン２５０ｍｇ、ヒマシ油０．５ｍｌ、シクロスポリンＡを５０または１００ｍｇおよびアセトン２５ｍｌを用いて油相の調製。
ｂ）キトサン５０ｍｇ、ポロキサマー１８８を１２５ｍｇ、および蒸留水１００ｍｌを用いて水相の調製。
【００９４】
両方の相を５０℃へ加熱し、および次いで有機相を水相へ加え、ナノカプセルが自発的に形成される。
【００９５】
次いで、アセトンを減圧下で加熱（３７℃）することによって除去し、および残量を次いで水１０ｍＬが残るまで濃縮する。
【００９６】
その調製の結果として生じたナノカプセルは、一ミクロン未満のナノサイズ、およびより具体的には２００〜７００ｎｍ、正ゼータ電位（＋１０ｍＶ〜＋７０ｍＶ）、事実上１００％のシクロスポリンＡ封入効力（これは有効成分の分解および抽出後に直接的に、および外水相の定量後に間接的に定量された）。
【００９７】
それらのナノカプセルを安定性試験に供し、その間ナノカプセルは３７℃にて６ヶ月保存され、粒子サイズ、ゼータ電位およびシクロスポリンの水相中の存在を１ヶ月間隔で測定した。シクロスポリンは水に不溶である事実のため、不安定性の場合には、沈澱しおよび可視的結晶の出現を生じる傾向がある。
【表４】
2009530241.tif 000006
【００９８】
表ＩＶに示す通り、１％シクロスポリンを含むナノカプセルは、１ミクロン以下の直径、正のゼータ電位を維持し、およびそれらは少なくとも２ヶ月間３７℃にて安定である。
【表５】
2009530241.tif 000007
【００９９】
表Ｖで見られる通り、シクロスポリンＡ（０．５％）を組み込んだキトサンナノカプセルは、少なくとも５ヶ月間３７℃にて安定であり、１μｍ未満の直径、正のゼータ電位およびシクロスポリンＡ結晶形成の不在を維持し、分子がナノカプセルの油核内に留まることを示す。系はサイズおよび電位について最低６ヶ月間（試験の最長時間）安定である。
【０１００】
実施例２
シクロスポリンＡを含むキトサンナノカプセルのオートクレーブ処理に対する安定性試験
シクロスポリンＡを含むキトサンナノカプセルを実施例１に記載の製法に従って調製し、および、次いで、一部をオートクレーブ処理（１２０℃２０分間）に供した。この試験の主な目的は、ナノカプセルのサイズおよび電位がオートクレーブ処理中に変化しているかを評価することであった。
【表６】
2009530241.tif 000008
【０１０１】
表ＶＩで見られる通り、オートクレーブ処理後、ナノカプセルはサイズおよび表面電荷を維持する。さらに、オートクレーブ処理後、シクロスポリンＡ結晶は出現せず、それはナノカプセルから水相への活性分子の有意な放出が無いことを明らかにする。
【０１０２】
実施例３
３７℃での懸濁液中のオートクレーブされたシクロスポリンＡ含有キトサンナノカプセルの安定性試験
シクロスポリンＡを含むキトサンナノカプセルを実施例１に記載の製法に従って調製し、次いでそれを実施例２に記載の処理後にオートクレーブし、および３７℃にて５ヶ月間保存した。この系の安定性を評価する目的で、粒子サイズ、ゼータ電位およびシクロスポリン結晶の水相中の存在を、１ヶ月間隔で測定した。
【表７】
2009530241.tif 000009
【０１０３】
キトサンでコーティングされた、およびオートクレーブされた、シクロスポリンＡ含有ナノカプセルは、３７℃にて少なくとも４ヶ月間安定である（表ＶＩＩ）。
【０１０４】
実施例４
吉草酸ベタメタゾンを含むキトサンナノカプセルの調製
キトサンナノカプセルを、吉草酸ベタメタゾンを用いて下記の通り調製した：
ａ）レシチン２５０ｍｇ、ヒマシ油０．５ｍｌ、吉草酸ベタメタゾン１０ｍｇおよびアセトン２５ｍｌを用いて油相の調製。
ｂ）キトサン５０ｍｇ、ポロキサマー１８８を１２５ｍｇ、および蒸留水１００ｍｌを用いて水相の調製。
ｃ）両方の相を５０℃へ加熱し、および次いで有機相を水相へ加え、ナノカプセルが自発的に形成される。
【０１０５】
得られたエマルションを、熱（３７℃）および真空を加えて終容量１０ｍｌへ濃縮する（有機溶媒を除去）。
【０１０６】
その調製の結果として生じたナノカプセルは、一ミクロン未満のナノサイズ、およびより具体的には２００〜６００ｎｍ）、正ゼータ電位（＋２５ｍＶ〜＋６０ｍＶ）、吉草酸ベタメタゾン封入効力９９．９％（これは外水相の定量後に間接的に定量された）を有する。より具体的には、ナノカプセルの物理化学的特徴および封入効力を表ＶＩＩＩに記載する。
【表８】
2009530241.tif 000010
【０１０７】
実施例５
室温にて懸濁液中の吉草酸ベタメタゾン含有キトサンナノカプセルの安定性試験
実施例４に示す通り調製されたナノカプセルを、安定性試験に供し、室温にて６ヶ月間保存し、粒子サイズ、ゼータ電位および吉草酸ベタメタゾンの水相中の存在を測定した。表ＩＸに示す通り、ナノカプセルはナノサイズ、正ゼータ電位を維持し、および吉草酸ベタメタゾンはナノカプセルの脂質核内に留まる。
【表９】
2009530241.tif 000011
【０１０８】
実施例６
３７℃にて懸濁液中の吉草酸ベタメタゾン含有キトサンナノカプセルの安定性試験
実施例４に示す通り調製されたナノカプセルを、安定性試験に供し、３７℃にて６ヶ月間保存し、粒子サイズ、ゼータ電位および吉草酸ベタメタゾンの水相中の存在を測定した。吉草酸ベタメタゾン含有キトサンナノカプセルは表Ｘに示す通り安定である。
【表１０】
2009530241.tif 000012
【国際調査報告】
2009530241.tif 000013
2009530241.tif 000014
2009530241.tif 000015