(57)【要約】  本発明は式（Ｉ）の化合物、その製造方法、該化合物を含有する医薬組成物および胃腸障害および他の障害の治療におけるそれらの使用に関する。2009531385.tif 000071
2009531385.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ
【化１】
2009531385.tif 000067
［式中、
Ｒａは、置換されていてもよいアリールまたは置換されていてもよいヘテロアリールであり；
ＲｂおよびＲｃは、独立して水素またはＣ１−６アルキルであり；
Ｑは、ＷおよびＸが独立してＣＨまたはＮであり、並びにＹおよびＺが独立してＣＲｄまたはＮである環であり；および、
Ｒｄが存在する場合、Ｒｄは水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシル、トリフルオロメチル、Ｃ１−６ハロアルコキシ、オキソおよびシアノから成る群から独立して選択され；
ここで、ＲｂおよびＲｃの少なくとも一つは、Ｃ１−６アルキルであり、並びにＷ、Ｘ、ＹおよびＺのうち少なくとも一つは、Ｎである］
で示される化合物またはその医薬上許容される誘導体。
【請求項２】
式ＩＡ
【化２】
2009531385.tif 000068
［式中、
Ｒａ、Ｑ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺは、請求項１で定義されるとおり］
で示される化合物またはその医薬上許容される誘導体。
【請求項３】
Ｒａは、置換されていてもよいフェニルであり；および／または
ＲｂおよびＲｃは、両者ともメチルであり；および／または
Ｑは、２−ピリジル、４−ピリジニルおよび４−ピリミジニルから成る群より選択され；および／または
それぞれのＲｄは、水素またはメトキシである、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒａがフラニルによって置換されたフェニルであり、その両方がさらに置換されていてもよい請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｎ−｛６−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−ピリジニル｝−３−フルオロ−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド；
Ｎ−（２−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−４−ピリジニル）−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド；
Ｎ−［６−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−３−フルオロ−４−（５−メチル−２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド；
Ｎ−（２−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−４−ピリミジニル）−３−フルオロ−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド；
２−クロロ−Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３、５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド
２−クロロ−Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−４−（４−メチル２−チエニル）ベンゼンスルホンアミド
２−クロロ−Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−４−（３−フラニル）ベンゼンスルホンアミド
２−クロロ−Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−４−（５−メチル２−チエニル）ベンゼンスルホンアミド
Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド
Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−２’−フルオロ−５’−（メチルオキシ）−４−ビフェニルスルホンアミド
Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−２−フルオロ−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド
Ｎ−｛４−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−ピリジニル｝−３−フルオロ−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド
Ｎ−［５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジニル］−３−フルオロ−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド
Ｎ−｛５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−ピリジニル｝−３−フルオロ−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド
Ｎ−｛５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−オキソ−１、２−ジヒドロ−３−ピリジニル｝−３−フルオロ−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド
から選択される請求項１に記載の化合物またはその医薬上許容される誘導体。
【請求項６】
成長ホルモン分泌促進物質（ＧＨＳ）受容体によって媒介される疾病または障害の治療のための請求項１〜５のいずれか一つに記載の化合物の使用。
【請求項７】
疾病または障害が、悪液質、筋肉減少症、骨粗鬆症、関節リウマチ、変形性関節症、加齢による衰え、成長ホルモン欠損症、代謝障害、睡眠障害、アルツハイマー疾患、鬱血性心不全、胃−食道逆流および／または胃腸障害に伴う症状、食欲性／代謝性悪液質に付随するまたは付随しない症状、嘔吐、胃炎、炎症性腸疾患、経腸栄養法などの操作、麻痺性イレウスまたは偽閉塞の処置、および便秘優性過敏性腸症候群のような便秘に伴う症状の処置の間の腸運動の減少である、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
成長ホルモン分泌促進物質（ＧＨＳ）受容体により媒介される疾患または障害の処置にもちいるための薬剤を製造するための請求項１〜５のいずれか一つに記載の化合物の使用。
【請求項９】
疾病または障害が、悪液質、筋肉減少症、骨粗鬆症、関節リウマチ、変形性関節症、加齢による衰え、成長ホルモン欠損症、代謝障害、睡眠障害、アルツハイマー疾患、鬱血性心不全、胃−食道逆流および／または胃腸障害に伴う症状、食欲性／代謝性悪液質に付随するまたは付随しない症状、嘔吐、胃炎、炎症性腸疾患、経腸栄養法などの操作、麻痺性イレウスまたは偽閉塞の処置、および便秘優性過敏性腸症候群のような便秘に付随する症状の処置の間の腸運動の減少である、請求項８に記載の使用。
【請求項１０】
式ＩＩ
【化３】
2009531385.tif 000069
［式中、
Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ＲｂおよびＲｃは、式（Ｉ）の記載と同じである］で示される化合物またはその保護された誘導体を、
式（ＩＩＩ）
【化４】
2009531385.tif 000070
（ＩＩＩ）
［式中、
Ｒａは式（Ｉ）に定義されたとおりであり、Ｌ１は適当な脱離基である］
で示される化合物とカップリングさせること、
および／または式（Ｉ）の化合物を式（Ｉ）の異なる化合物に変えること、
および／または式（Ｉ）の化合物をその医薬上許容される誘導体に変えること、
を含む請求項１〜５のいずれか一つに記載の化合物の製造方法。
【請求項１１】
請求項１〜５のいずれか一つに記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項１２】
請求項１１に記載の医薬組成物の製造方法。
【請求項１３】
治療的に安全で有効量の式（Ｉ）の化合物またはその医薬上許容される誘導体を対象者に投与することを含む、成長ホルモン分泌促進物質（ＧＨＳ）受容体を介して媒介され得るヒトを含む哺乳類における疾患または障害の治療方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、新規のピペラジン誘導体、それらの調製方法、それを含む医薬組成物、および胃腸および他の障害の治療おける該化合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
グレリンは優勢的に胃によって産生され、またそれほどでないにせよ腸、膵臓、腎臓、胎盤、下垂体および視床下部の弓状核によって産生される２８個のアミノ酸のペプチドである。グレリンは最近になってラットおよびヒトの胃より精製かつ単離されたに過ぎず（Ｋｏｊｉｍａら、Ｎａｔｕｒｅ１９９９；４０２：６５６），胃腺の酸分泌性壁細胞と関連するＸ／Ａ内分泌細胞にて見出された。研究によると、グレリンは、成長分泌促進物質受容体（ＣＨＳ−Ｒ）に作用し、成長ホルモンの放出を刺激し、ラット肥満症を誘発し（Ｔｓｃｈｏｐら、Ｎａｔｕｒｅ  ２０００、４０７（６８０６）、９０８）、胃酸分泌を調節し（Ｍａｓｕｄａら、ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌおよびＢｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ２０００；２７６：９０５）、齧歯類弓状核内で放出されたとき（Ｋｏｊｉｍａら、Ｎａｔｕｒｅ  １９９９；４０２：６５６；Ｌｕら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｅｔｔｅｒｓ。２００２；３２１（３）：１５７）または脳室内に投与（Ｎａｋａｚａｔｏら、Ｎａｔｕｒｅ  ２００１；４０９：１９４；Ｓｈｉｎｔａｎｉら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ２００１；５０：２２７）されたとき、摂食量が増大するよう刺激することがわかった。全身投与されたグレリンも、迷走神経インプットを脳幹迷走神経核に変え、続いて弓状核に変えることによって、同じことを達成することができる（Ｄａｔｅら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ２００２；１２３：１１２０）。これらの研究は、ＧＨＳ−Ｒアゴニストには悪液質と摂食障害の異なる形態の処置において治療的有用性があることを示している。
【０００３】
グレリン受容体のアゴニストは、成長ホルモン欠乏状態を治療し、食料消費の増加を刺激し、それにより体重増または体重の維持もしくは食欲増進を促進することに有用であると記載されている。これは特に、体重減少を伴う、病気や障害を患っている患者、または治療中の患者に有用である。体重減少を伴う病気または障害の例は、摂食障害（食欲不振、過食を含む）、癌悪液質、エイズ、体力消耗、悪液質および虚弱高齢者の体力消耗を含む。体重減少を伴う処置の例は、化学療法、放射線療法、一時的または永久的固定、および透析療法を含む。
【０００４】
さらなる成長ホルモン分泌促進物質［例えば、ＷＯ９７／２４３６９］に関する研究は、加齢に伴う弱さ、骨折骨の修復の促進、大手術後または慢性疾患におけるタンパク質異化の減少、鬱血性心不全の筋力回復および運動調節ならびに他の代謝障害にかかる処置または予防におけるグレリン受容体アゴニストの役割を提示している。当該化合物に関する研究は、睡眠の質の改善にかかる役割［ＷＯ９７／２４３６９］、およびグレリンの投与後の鬱血性心不全の改善における役割（Ｎａｇａｙａら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ。２００１、８６、５８５４−５８５９；Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  ２００１、１０４、１４３０−１４３５）を示唆している。
【０００５】
麻酔をかけて意識のある齧歯類および意識のあるイヌの両者において、グレリンにより胃の運動性と胃内容排出が増大する（麻酔をかけたラットの運動性  Ｍａｓｕｄａら、ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌおよびＢｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ２０００；２７６：９０５；ラットの胃内容排出  Ｔｒｕｄｅｌら、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ２００２；２８２：Ｇ９４８；マウスの胃内容排出  Ａｓａｋａｗａら、胃ｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  ２００１；１２０：３３７）。この作用は、ラットグレリンが齧歯類胃底切片において電気励起した、興奮細胞介在の収縮を促進する能力を有し、部分的５−ＨＴ４受容体アゴニストにより模倣されるように応答し、「運動促進様」応答を示すことを明らかにすることでインビトロにて証明され得る（Ｍｕｒｒａｙら、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２００２；１３６：１８Ｐ）。さらに、意識のあるラットの脳室内にグレリンを投与することにより、胃酸分泌が減少する（Ｓｉｂｉｌｉａら、Ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  ２００２；７５：９２）；皮下注射による投与は効果がなかった。Ｔｒｕｄｅｌと同僚ら（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｙ  ２００２；２８２：Ｇ９４８）は、腸処置で麻痺性イレウスを起こすことによって生じる胃内容うっ滞を、グレリンが回復させることができることを示した。これらのデータをすべて同じく、グレリンが腸ホルモンとして作用し、栄養分の摂取および消化の両方を促進しうることを示す。このことは、血中糖の適当なレベルを維持することが重要である場合に、グレリンが膵インスリン分泌を少し減少させる能力を有することが絶食状態の間にグレリンを放出することと矛盾するものではないとの提案と同一歩調を取るものである（Ｍｕｃｃｉｏｌｉら、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２００２、４４０：２３５参照）。
【０００６】
したがって、悪液質（例えば癌の結果として）、筋肉量の欠損により悪化する筋肉減少症および／またはそれらの慢性疾患（例えば骨粗鬆症、関節リウマチ、変形性関節症、加齢）、成長ホルモン欠損症（例えば、年齢に関する状況に関わるとき）、他の代謝障害、睡眠障害あるいは鬱血性心不全の障害に付随する症状に加えて、ＧＨＳ−Ｒアゴニストは、食欲性／代謝性関連の悪液質に伴う、または伴わない症状、胃−食道逆流および／または胃腸障害に伴う症状、を緩和する有用な治療剤となり得る。このような症状の例は、抗癌治療や他の治療による摂食減少および胃内容うっ滞および嘔吐あるいは類似の症状を引き起こす状態、糖尿病や胃不全麻痺を伴う胃不全麻痺並びに機能的胃腸障害および胃−食道逆流疾患に関する症状を含む。さらに、腸の運動性を刺激する能力があることから、グレリン受容体活性化合物は、麻痺性イレウスまたは偽閉塞、並びに便秘優性過敏性腸症候群のような便秘を伴う状態の治療に有効であることを提案する。炎症を緩和する能力は、胃炎および炎症性腸疾患のような状態の治療における、グレリン受容体活性化合物の使用を提供することができる。
【０００７】
欧州特許出願ＥＰ１１５９９６４号は患者の胃腸系運動を刺激する手段として成長ホルモンの放出を刺激する化合物の使用を特許請求の範囲とする。
【０００８】
ＷＯ９５／０６６３７号は５−ＨＴＩＤ受容体アンタゴニスト活性を有していると言われる一連のピペラジン誘導体を開示している。ＷＯ０２３６５６２号、ＷＯ０１３２６６０号、ＷＯ０００５２２５号、ＷＯ９９４２４６５号およびＷＯ９８２７０８１号はすべて５−ＨＴ６受容体アンタゴニストであるとして請求されているアリールピペラジンスルホンアミドを開示している。ＷＯ０２７４７６４号、ＷＯ０２７４７６８号およびＷＯ０１２３３７４号はすべて選択性５ＨＴ１Ｂ受容体アンタゴニストとして請求されているジメチルピペラジン誘導体を開示している。
【０００９】
ＷＯ０６／０１０６２９号は、成長ホルモン分泌促進物質（ＧＨＳ）受容体でアゴニスト活性を有すると言われている式（Ａ）：
【化１】
2009531385.tif 000003
の一連のアリールピペラジン誘導体を開示している。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
発明者らは、新しい種類の成長ホルモン分泌促進物質（ＧＨＳ）受容体で選択的アゴニスト活性を示すアリールピペラジンスルホンアミド誘導体を見出した。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
したがって、本発明は式（Ｉ）：
【化２】
2009531385.tif 000004
［式中、
Ｒａは、置換されていてもよいアリールまたは置換されていてもよいヘテロアリールであり；
ＲｂおよびＲｃは、独立して水素またはＣ１−６アルキルであり；
Ｑは、ＷおよびＸが独立してＣＨまたはＮであり、並びにＹおよびＺが独立してＣＲｄまたはＮである環であり；および、
Ｒｄが存在する場合、Ｒｄは水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロゲン、ヒドロキシル、トリフルオロメチル、Ｃ１−６ハロアルコキシ、オキソおよびシアノから成る群から独立して選択され；
ここで、ＲｂおよびＲｃの少なくとも一つは、Ｃ１−６アルキルであり、並びにＷ、Ｘ、ＹおよびＺのうち少なくとも一つは、Ｎである］
で示される化合物またはその医薬上許容される誘導体を提供するものである。
【００１２】
単独でまたは他の基の一部であろうと、アルキル基は、直鎖または側鎖であり得る。明細書中「ハロゲン」という用語は、特に明記しない限り、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素から選択される基を表す。
【００１３】
一の基または一の基の一部としての「アリール」という用語は、フェニルおよびナフチルを含む。明細書中に使われているナフチルという用語は、特に明記しない限り、ナフト−１−イルおよびナフト−２−イル基を意味する。
【００１４】
「ヘテロアリール」という用語は、酸素、窒素および硫黄から選択されるヘテロ原子を含む５−６員単環式芳香族環または８−１１員縮合二環式芳香族環を意味する。
【００１５】
ヘテロアリールが５または６員の基を表すとき、Ｏ、ＮまたはＳから選択されるヘテロ原子を含み、所望によりさらに１から３個の窒素原子を含んでもよい。ヘテロアリールが６員の基を表すとき、１から３個の窒素原子を含む。
【００１６】
ヘテロアリールが８−１１員縮合二環式芳香族環を表すとき、Ｏ、ＮまたはＳから選択される１から３個のヘテロ原子を含む。
【００１７】
このような単環式芳香族環の適当な例は、チエニル、フラニル、ピロリル、トリアゾリル、イミダゾリル、オキサゾリル、チアゾリル、オキサジアゾリル、イソチアゾリル、イソキサゾリル、チアジアゾリル、ピラゾリル、ピリミジル、ピリダジニル、ピラジニルおよびピリジルを含む。８−１１員縮合二環式芳香族基という用語は、環の一つが部分的に飽和している基を含む。
【００１８】
このような縮合芳香族環の適当な例は、キノリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、シンノリニル、ナフチリジニル、インドリル、インダゾリル、ピロロピリジニル、チエノピリジル、ベンゾフラニル、ベンゾチエニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾキサゾリル、ベンズイソキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンズイソチアゾリル、ベンズオキサジアゾリル、ベンゾチアジアゾリル、ベンゾジオキサニル、インドリニル、イソインドリニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、ベンズアゼピニルまたはクロマニルのようなベンゾ縮合複素環を含む。
【００１９】
上記定義によるアリールおよびヘテロアリール基は、同一または異なっていてもよく、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、オキソ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、フルオロメトキシ、ジフルオロメトキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−６シクロアルキル、ペンタフルオロエチル、Ｃ１−６アルコキシ、アリールＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルキルチオ、Ｃ１−６アルコキシＣ１−６アルキル、Ｃ３−７シクロアルキルＣ１−６アルコキシ、Ｃ１−６アルカノイル、Ｃ１−６アルコキシカルボニル、Ｃ１−６アルキルスルホニル、Ｃ１−６アルキルスルフィニル、Ｃ１−６アルキルスルホニルオキシ、Ｃ１−６アルキルスルホニルＣ１−６アルキル、アリールスルホニル、アリールスルホニルオキシ、アリールスルホニルＣ１−６アルキル、アリールオキシ、ヘテロアリールオキシ、アロイル、アロイルＣ１−６アルキル、アリールＣ１−６アルカノイル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリル、またはＮＲ１Ｒ２、ＣＯＮＲ１Ｒ２、ＳＯ２ＮＲ１Ｒ２、ＮＲ１ＣＯＲ２またはＮＲ１ＳＯ２Ｒ２の基（ここで、Ｒ１およびＲ２は、独立して、水素、Ｃ１−６アルキル、Ｃ３−７シクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールを表すか、あるいは窒素原子と一緒になって、Ｏ、ＳまたはＮから選択される付加的な環因子を含むことができる５−から７−員非芳香族複素環を形成する）からなる群より選択される、１から３個の置換基によって所望により置換されていてもよい基を包含する。
【００２０】
適当なＣ３−６シクロアルキル基はシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルを含む。
【００２１】
Ｒａがアリールまたはヘテロアリール基によって置換されるとき、さらなる置換基がアリールまたはヘテロアリールでないことを条件に、これらの置換基は、、さらに置換されてもよい。このようなアリールおよびヘテロアリール基のさらなる置換基は、たとえば、ハロゲン、シアノ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシおよびオキソから選択することができる。特に、クロロ、シアノ、メチル、およびオキソが好ましい。他の態様において、アリールおよびヘテロアリール基の置換基は、例えば、フルオロ、メトキシおよびメトキシメチルから選択される。
【００２２】
「ヘテロシクリル」という用語は、酸素、硫黄または窒素から選択される１から３個のヘテロ原子を含む４−７員単環式飽和または部分的に不飽和脂肪族環を意味する。このような単環の適当な例は、ピロリジニル、ピペリジニル、ピペラジニル、モルフォリニル、チオモルフォリニル、ジアゼパニル、アゼパニル、およびテトラヒドロフラニルを含む。
【００２３】
本発明の適当な一群の化合物は、式（ＩＡ）：
【化３】
2009531385.tif 000005
［式中、
Ｒａ、Ｑ、Ｒｂ、Ｒｃ、Ｒｄ、Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺは、式（Ｉ）に定義されるとおり］で示されるものである。
【００２４】
式（Ｉ）および（ＩＡ）の適当な一群の化合物において：
Ｒａは、置換されたフェニルであり；および／または
ＲｂおよびＲｃは、両者ともメチルであり；および／または
Ｑは、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジニルおよび４−ピリミジニルから成る群より選択され；および／または
それぞれのＲｄは、水素またはメトキシである。
【００２５】
Ｒａは、置換されるフラニルまたは置換されるチエニルによって適当に置換され得る。
【００２６】
式（Ｉ）の具体例は：
Ｎ−｛６−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−ピリジニル｝−３−フルオロ−４−（５−メチル−２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド；
Ｎ−（２−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−４−ピリジニル）−４−（５−メチル−２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド；
Ｎ−［６−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−３−フルオロ−４−（５−メチル−２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド；
Ｎ−（２−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−４−ピリミジニル）−３−フルオロ−４−（５−メチル−２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド；
２−クロロ−Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−４−（５−メチル−２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド；
２−クロロ−Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−４−（４−メチル−２−チエニル）ベンゼンスルホンアミド；
２−クロロ−Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−４−（３−フラニル）ベンゼンスルホンアミド；
２−クロロ−Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−４−（５−メチル−２−チエニル）ベンゼンスルホンアミド；
Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−４−（５−メチル−２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド；
Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−２’−フルオロ−５’−（メチルオキシ）−４−ビフェニルスルホンアミド；
Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−２−フルオロ−４−（５−メチル−２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド；
Ｎ−｛４−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−ピリジニル｝−３−フルオロ−４−（５−メチル−２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド；
Ｎ−［５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジニル］−３−フルオロ−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド；
Ｎ−｛５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−ピリジニル｝−３−フルオロ−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド；
Ｎ−｛５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−オキソ−１、２−ジヒドロ−３−ピリジニル｝−３−フルオロ−４−（５−メチル−２−フラニル）ベンゼンスルホンアミドである。
【００２７】
式（Ｉ）の化合物の医薬上許容される誘導体は、式（Ｉ）の化合物の医薬上許容される塩、エステルまたはかかるエステルの塩であって、レシピアントへの投与は直接的または間接的に式（Ｉ）の化合物あるいはその活性代謝物または残基を提供することを可能にする。
【００２８】
式（Ｉ）の化合物はその酸付加塩を形成することができる。式（Ｉ）の化合物の塩は、医薬の使用のために医薬上許容されるべきものであると解する。適当な医薬上許容される塩は当業者に知られ、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、またはリン酸；および有機酸、例えばコハク酸、マレイン酸、酢酸、フマル酸、クエン酸、酒石酸、安息香酸、ｐ−トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、サリチル酸、乳酸、マンデル酸、またはナフタレンスルホン酸と形成される酸付加塩のようなＪ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ、１９７７、６６、１−１９に記載されたものを含む。
【００２９】
式（Ｉ）の化合物およびそれらの誘導体は、結晶または非結晶形態で調製することができ、結晶形態であれば、水和されるかまたは溶媒和され得る。本発明は、その範囲内で、化学量論的水和物並びに可変量の水を含む化合物を含む。
【００３０】
式（Ｉ）の化合物は、立体異性体（例えば、ジアステレオマーおよびエナンチオマー）で存在することができ、本発明は立体異性体形態並びにラセミ化合物を含むそれらの混合物にまで及ぶ。異なる立体異性体形態は立体特異的なまたは非対称性の合成により得ることができる。本発明は互変異性型およびその混合物にまでも及ぶ。
【００３１】
本発明の化合物は、当該分野で知られる手法と類似する手法を用いて調製することができる。しかしながら、本発明は式（Ｉ）の化合物またはそれらの医薬上許容される誘導体の調製のための方法：
方法（ａ）、
式（ＩＩ）：
【化４】
2009531385.tif 000006
（ＩＩ）
［式中、
Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ＲｂおよびＲｃは、式（Ｉ）にて定義されたとおりである］で示される化合物またはその保護された誘導体を、
式（ＩＩＩ）：
【化５】
2009531385.tif 000007
（ＩＩＩ）
［式中、
Ｒａは式（Ｉ）に定義されたとおりであり、Ｌ１が適当なハロゲン基（例えば、塩素）またはペンタフルオロフェニルオキシ基のような適当な脱離基である］
の化合物とカップリングさせる方法を提供する。
【００３２】
方法（ａ）は、典型的には、ピリジンのような塩基の使用を含む。方法（ａ）は、室温または８０℃などの適当な温度で、ジクロロメタンのような適当な溶媒中、ピリジンなどの塩基の使用を含む。別法として、方法（ａ）は、ジクロロメタンなどの適当な溶媒中にてピリジンなどの塩基を用いてビス−スルホンアミドを形成させ、ついでそれを適当な温度、例えば４０℃で、適当な塩基、例えば水酸化ナトリウム水溶液を用いてモノ−スルホンアミドに開裂することを含んでもよい。
【００３３】
式（ＩＩＩ）の化合物は商業的に入手可能であり、あるいは公知の方法または公知の方法と類似の方法によって調製することができる。
【００３４】
あるいは、方法（ｂ）は、式（Ｉ）化合物の式（Ｉ）の他の化合物への、相互変換を含む。
方法（ｂ）は、従来の遷移金属媒介カップリング反応を用いてなされる。相互変換の手順として有用である遷移金属媒介カップリング反応の例は、以下の工程を含む：有機求電子剤、例えばハロゲン化アリールと、有機金属試薬、例えばスタンナン（スティルクロスカップリング反応）または他の適当な試薬、例えばボロン酸（スズキクロスカップリング反応）との間でパラジウム触媒カップリング反応に付し；ついでフェノールとボロン酸との間でどう銅媒介カップリング反応に付すことを含む。
【００３５】
式（ＩＩ）は下記のスキームに従って調製される：
【化６】
2009531385.tif 000008
［式中、
Ｗ、Ｘ、Ｙ、Ｚ、ＲｂおよびＲｃは、上記のとおり定義され、Ｌ２は、例えばハロゲン（例えば、臭素）などの脱離基である。
【００３６】
脱離基Ｌ２がハロゲン（例えば、臭素または塩素）である場合、工程（ｉ）は、典型的には、式（ＩＶ）の化合物を式（Ｖ）のピペラジンと、適当な温度（例えば、還流温度）でジオキサンなどの適当な溶媒中、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシドなどの塩基の存在下、パラジウム塩（例えば、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０））などの遷移金属触媒を適当なリガンド（例えば、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ビフェニル）と組み合わせて処理することを含む。
【００３７】
工程（ｉｉ）は、式（ＶＩ）の化合物中のニトロ基の式（ＩＩ）のアニリンへの還元反応を含む。工程（ｉｉ）は、典型的に、遷移金属触媒による水素付加条件の下でなされ、例えば、エタノールなどの適した溶媒中木炭上のパラジウム、または適温で（例えば、還流温度）、エタノールなどの適した溶媒中にて塩化スズ（ＩＩ）を用いるなど、適した触媒を利用する水素雰囲気下でなされる。
【００３８】
式（ＩＶ）および（Ｖ）の化合物は商業的に入手されるか、あるいは公知の方法により、または公知の類似の方法に従って調製され得る。
【００３９】
あるいは、方法（ｃ）は、式（ＶＩＩ）：
【化７】
2009531385.tif 000009
［式中、
Ｗ、Ｘ、Ｙ、ＺおよびＲａは、上記のとおり定義され、Ｌ２は、例えばハロゲン（例えば、ヨウ素、臭素、塩素）などの適当な脱離基である］で示される化合物を、式（Ｖ）のピペラジン化合物と反応させ式（Ｉ）の化合物を得る。
【００４０】
方法（ｃ）は、典型的に、パラジウム塩（例えば、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０））などの遷移金属触媒を、適したリガンド（例えば、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ビフェニル）と組み合わせて、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシドなどの塩基存在下で、ジオキサンなどの適した溶媒中、還流のような適温でなされる。該反応は、ジオキサンなどの適した溶媒中、例えば１２０℃の適温で、マイクロ波反応器を用いてなされ得る。方法（ｃ）は、式（ＶＩＩ）の化合物の反応を含み、式（Ｖ）のピペラジンを用いて、例えば１−メチル−２−ピロリジノンまたはピリジンなどの適した溶媒中、１００−２００℃（例えば、マイクロ波反応器で）など適温でなされる。
【００４１】
式（ＶＩＩ）の化合物は、式（ＶＩＩ）の他の化合物に相互変換され得る。
【００４２】
式（ＶＩＩ）の化合物は、方法（ａ）に記載される方法と類似の方法により、式（ＶＩＩＩ）のアニリンおよび式（ＩＩＩ）の化合物から調製され得る。
【００４３】
【化８】
2009531385.tif 000010
［式中
Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺは、上記のとおり定義され、Ｌ２は、例えばハロゲン（例えば、ヨウ素、臭素、塩素）などの適当な脱離基である。］
【００４４】
式（ＶＩＩＩ）のアニリンは、商業的に入手可能であり、または公知の方法または公知の方法と類似の方法に従って調製され得る。例えば、式（ＶＩＩＩ）の化合物は、エタノールなどの適した溶媒中、アンモニア水を用いて式（ＩＸ）のクロロ化合物の置換によって調製され得る。
【００４５】
【化９】
2009531385.tif 000011
［式中、
Ｗ、Ｘ、ＹおよびＺは、Ｌ２は、例えばハロゲン（例えば、ヨウ素、臭素、塩素）などの適当な脱離基である。］
【００４６】
当業者であれば、特定の基を保護する必要があることは理解されるであろう。適した保護基およびそれらの結合および除去の方法は有機化学の分野で一般的なものであり、例えば、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  「有機合成における保護基」（Ｊ．ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎ、  １９９１）に記載されたものなどがある。例えば、ピペラジン基の適当な保護基は、ｔ−ブチルオキシカルボニル、ベンジル、トリフルオロアセチル、ベンジルオキシカルボニル、２’，２’，２’−トリクロロエトキシカルボニルおよびメチルを包含し、そのうちの後者は標準的操作にしたがって１−クロロエチル  クロロギ酸エステルを用いて除去されうる。
【００４７】
式（Ｉ）の化合物は、明細書中に記載のＧＴＰγＳおよびＦＬＩＰＲ（Ｆｌｏｕｒｏｍｅｔｒｉｃ  Ｌｉｇｈｔ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ）アッセイでＧＨＳ−Ｒアゴニストであることがわかった。
【００４８】
したがって、式（Ｉ）の化合物およびそれらの医薬上許容される誘導体（下文「本発明の化合物」）は、成長ホルモン促進物質（ＧＨＳ）受容体で作用する化合物によって媒介される疾患または障害の治療に用いられる。特に本発明の化合物は、悪液質、サルコペニア、骨粗しょう症、リウマチ性関節炎，変形性関節症、加齢に伴う虚弱、成長ホルモン欠損症、代謝性障害、睡眠障害、アルツハイマー病、うっ血性心不全、胃−食道逆流に関連するおよび／または消化不良に伴う症状の緩和、食欲性、代謝性関連の悪液質に伴うまたは伴わない症状、嘔吐、胃炎、炎症性腸疾患、経腸栄養法などの方法の間の低下した胃運動性、麻痺性イレウスまたは偽閉塞の治療、および便秘優性過敏性腸症候群などの便秘の症状の治療に用いるものである。
【００４９】
明細書中、使用される「治療」とは予防並びに従来の症状の緩和を含むと解される。
【００５０】
したがって、本発明は、特にＧＨＳ受容体を介する疾患／障害の治療における、治療剤としての使用のために、本発明の化合物またはそれらの医薬上許容されるそれらの誘導体を提供するものである。特に、本発明は、悪液質、サルコペニア、骨粗しょう症、リウマチ性関節炎，変形性関節症、加齢に伴う、成長ホルモン欠損症、代謝性障害、睡眠障害、アルツハイマー病、うっ血性心不全、胃−食道逆流に関連するおよび／または消化不良に関連する症状の緩和、食欲性、代謝性関連の悪液質に伴うまたは伴わない症状、嘔吐、胃炎、炎症性腸疾患、経腸栄養法などの方法の間の低下した胃運動性、麻痺性イレウスまたは偽閉塞の治療、および便秘優性過敏性腸症候群などの便秘の症状の治療における治療剤としての使用のために、本発明の化合物またはその医薬上許容される誘導体を提供する。本発明の化合物は他の治療剤とともにしようされ得ると解される。
【００５１】
さらに、本発明はＧＨＳ受容体を経由して媒介されるヒトを含む哺乳類の疾患または障害の治療の方法を提供するものであって、治療的安全かつ有効量の本発明の化合物を患者に投与することを含む。
【００５２】
他の態様において、本発明は、ＧＨＳ受容体を通して媒介される疾患または障害の治療に用いる薬剤の製造に、発明の化合物を使用するために提供する。
【００５３】
治療に本発明の化合物を使用するために、それらは、標準的な薬務に従って医薬組成物に処方される。本発明は、本発明の化合物、および医薬上許容されるキャリアまたは賦形剤を含む、医薬組成物を提供する。
【００５４】
さらなる態様において、本発明は医薬組成物を調製するための方法を提供するもので、その方法は本発明の化合物および医薬上許容されるキャリアまたは賦形剤の混合を含む。
【００５５】
本発明の医薬組成物（外界温度および大気圧に適して混合して調製され得る）は、経口、非経口または直腸投与に適応され、そして、例えば錠剤、カプセル、経口用液体調製液、粉、顆粒、トローチ剤、再構成され得る粉、注入物質または注入可能な溶液または懸濁液または座薬の形態であってもよい。経口投与可能な組成物は一般的に好まれる。
【００５６】
経口投与のための錠剤およびカプセルは、単位用量の形であってもよく、結合剤（例えば、予めゼラチン化されたトウモロコシ澱粉、ポリビニルピロリドンまたはヒドロキシプロピル・メチルセルロース）；充填剤（例えば、ラクトース、微結晶性セルロースまたはリン酸水素カルシウム）；錠剤潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、滑石またはシリカ）；崩壊剤（例えば、ジャガイモ澱粉またはデンプングリコール酸ナトリウム）；および許容される湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの従来の賦形剤を含んでもよい。錠剤は通常の薬務でよく知られる方法に従ってコーティングされていてもよい。
【００５７】
経口用液体製剤は、例えば、水性または油性懸濁液、溶液、エマルジョン、シロップまたはエリキシル剤の形であってもよく、あるいは使用前に水または他の賦形剤で再構成された乾燥製品の形であってもよい。そのような液体製剤は、懸濁化剤（例えば、ソルビトールシロップ、セルロース誘導体または水素化食用脂）、乳化剤（例えば、レシチンまたはアカシア）、非水性賦形剤（アーモンド脂、油性エステル類、エチルアルコールまたは分別された植物油などの食用脂を含んでもよい）、防腐剤（例えば、メチルまたはプロピル−ｐ−オキシ安息香酸エステルまたはソルビン酸）、および、所望により、必要により、通常の香味剤または着色剤、緩衝塩および甘味剤などの通常の添加剤を含んでいてもよい。経口投与のための製剤は活性化合物の制御放出を生じるように適切に形成され得る。
【００５８】
非経口投与のために、流体単位剤形は、本発明の化合物またはその医薬上許容される誘導体および無菌賦形剤を利用して調製される。注射のための剤形は、本発明の化合物またはその医薬上許容される誘導体および無菌賦形剤を用いて、添加防腐剤とともに、例えば、アンプルで、または、複数回投与など単位剤形で提示され得る。組成物は、油性または水性賦形剤中、懸濁液、溶液またはエマルジョンなどの形態をとってもよく、懸濁化剤、分解防止剤および／または分散剤などの薬剤を含んでもよい。あるいは、活性成分は、使用前に、無菌のピロゲン非包含溶液などの適当な賦形剤に合わせて粉状形態であってもよい。化合物は、使用される賦形剤および濃度に依存して、賦形剤に懸濁されるかまたは溶解することができる。溶液の調製において、該化合物は、適当な瓶またはアンプルに充填および封かんする前に、注射のために溶解され、濾過滅菌され得る。局所麻酔薬、防腐剤および緩衝剤などのアジュバントは、有利に賦形剤に溶解される。安定性を強化するために、該組成物を瓶に充填し、真空下で水を除去した後、凍結することができる。非経口懸濁液は、実質的に同じ方法で調製されるが、ただし、化合物は溶解される代わりにビークルに懸濁され、殺菌は濾過によってなされない。該化合物は、無菌賦形剤に懸濁される前に、酸化エチレンに曝されることによって殺菌され得る。有利には、界面活性剤または湿潤剤を組成物に配合し、化合物の均一な分散を容易にする。
【００５９】
ローション剤は、水性または油性成分で形成されてもよく、一般的に一つまたはそれ以上の乳化剤、分解防止剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤、または着色剤を含む。点滴剤は、一つまたはそれ以上の分散剤、分解防止剤、可溶化剤または懸濁化剤を含む水性または油性成分で形成されてもよい。それらは防腐剤を含んでもよい。
【００６０】
本発明の化合物は、例えば座薬または停留浣腸剤（例えば、ココアバターまたは他のグリセリドなどの従来の座薬基剤を含む）などの直腸の組成物として形成されてもよい。
【００６１】
本発明の化合物は、持続性製剤として形成されてもよい。そのような長時間作用する製剤は、移植（例えば、皮下に、または筋肉に）によって、あるいは筋肉注射によって投与されてもよい。このように、例えば、本発明の化合物は、高分子または疎水性材料（例えば、許容される油中のエマルジョンとして）またはイオン交換樹脂として、あるいは難溶性塩など難溶性誘導体として処方されてもよい。
【００６２】
鼻腔内投与のために、本発明の化合物は、適宜計量されるかまたは単位用量にする装置を介して投与液剤として、あるいは適当な分配装置を用いて投与に適したキャリアと混合させた散薬として形成され得る。したがって、本発明の化合物は、経口投与、口腔投与、非経口投与、局所性投与（経眼および経鼻を含む）、持続性薬剤または直腸投与のために形成され、あるいは吸入または送入による投与（口または鼻のいずれかを介して）に適した形態に処方され得る。
【００６３】
本発明の化合物は、軟膏、クリーム、ゲル、ローション、ペッサリー、エアロゾルまたは点滴薬（例えば、眼、耳、鼻への点滴）の剤形において局所的投与用に処方され得る。例えば、軟膏およびクリームは適した増粘剤および／またはゲル化剤を添加して水溶性剤あるいは油性基剤とともに処方され得る。眼への投与のための軟膏は、殺菌成分を用いて殺菌状態で製造され得る。
【００６４】
当該組成物は、投与方法に応じて、活性剤に対して０．１重量％から９９重量％、好ましくは１０から６０重量％を含むことができる。前記障害の治療に用いた化合物の服用は障害の重症度、患者の体重および他の類似要因による通例方法に変化する。しかしながら、一般的ガイドとして適当な単位服用量は０．０５から１０００ｍｇ、より好ましくは１．０から２００ｍｇであり、このような単位服用量は、例えば、１日、２日、または３日に一度以上服用され得る。このような治療は週または月で延長することができる。
【００６５】
（本発明の）化合物が前記服用量の範囲で投与されたとき、毒物学的影響は示されず、考えもされない。
【００６６】
本出願の明細書に引用された、特許公報および特許出願公開公報を含む（これに限定されないが）すべての出版物は、その出典を明治することで本明細書の一部とする。
【００６７】
下記および実施例により本発明の化合物の調整を説明する。それぞれの実施例により遊離塩基または塩酸塩あるいは時にマスダイレクテッドオートプレプＨＰＬＣより直接的にギ酸塩として特徴づけられ、評価された。該塩酸塩は、純物質をジクロロメタンまたはメタノールに溶解し、エーテルＨＣｌで酸性化することによって調製された。
【００６８】
試験セクションで示されているマイクロ波加熱はＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ  ６０またはＰｅｒｓｏｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｏｐｔｉｍｉｓｅｒ装置で実施された。これらの装置は２５０℃まで温度調節可能であり、２．４５ＧＨｚで３００Ｗまでのマイクロ波放射とともに２０ｂａｒまで加圧可能であった。
【００６９】
マスダイレクテッドオート−プリフィケーションシステムの使用のための条件、ハードウェアおよびソフトウェア
ハードウェア
Ｗａｔｅｒｓ  ２５２５  Ｂｉｎａｒｙ  Ｇｒａｄｉｅｎｔ  Ｍｏｄｕｌｅ
Ｗａｔｅｒｓ  ５１５  Ｍａｋｅｕｐ  Ｐｕｍｐ
Ｗａｔｅｒｓ  Ｐｕｍｐ  Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｍｏｄｕｌｅ
Ｗａｔｅｒｓ  ２７６７  Ｉｎｊｅｃｔ  Ｃｏｌｌｅｃｔ
Ｗａｔｅｒｓ  Ｃｏｌｕｍｎ  Ｆｌｕｉｄｉｃｓ  Ｍａｎａｇｅｒ
Ｗａｔｅｒｓ  ２９９６  Ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ  Ａｒｒａｙ  Ｄｅｃｔｅｃｔｏｒ
Ｗａｔｅｒｓ  ＺＱ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ
Ｇｉｌｓｏｎ  ２０２  ｆｒａｃｔｉｏｎ  ｃｏｌｌｅｃｔｏｒ
Ｇｉｌｓｏｎ  Ａｓｐｅｃ  ｗａｓｔｅ  ｃｏｌｌｅｃｔｏｒ
ソフトウェア
Ｗａｔｅｒｓ  Ｍａｓｓｌｙｎｘ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ４  ＳＰ２
カラム
使用されるカラムはＷａｔｅｒｓ  Ａｔｌａｎｔｉｓであり、そのディメンションは１９ｍｍ×１００ｍｍ（スモールスケール）および３０ｍｍ×１００ｍｍ（ラージスケール）である。その固定相粒径は５μｍである。
溶剤
Ａ：水性溶媒＝水＋０．１％  ギ酸
Ｂ：有機溶媒＝アセトニトリル＋０．１％  ギ酸
構成溶媒＝メタノール：水  ８０：２０
針リンス用溶媒＝メタノール
方法
目的とする化合物の分析的保持時間に応じて使用される４つの方法がある。これらはすべて１３．５分の実行時間を有し、１０分の勾配に続いて１３．５分間のカラム流出および再平衡の工程を含む。
Ｌａｒｇｅ／Ｓｍａｌｌ  Ｓｃａｌｅ  １．０−１．５＝５−３０％Ｂ
Ｌａｒｇｅ／Ｓｍａｌｌ  Ｓｃａｌｅ  １．５−２．２＝１５−５５％Ｂ
Ｌａｒｇｅ／Ｓｍａｌｌ  Ｓｃａｌｅ  ２．２−２．９＝３０−８５％Ｂ
Ｌａｒｇｅ／Ｓｍａｌｌ  Ｓｃａｌｅ  ２．９−３．６＝５０−９９％Ｂ
Ｌａｒｇｅ／Ｓｍａｌｌ  Ｓｃａｌｅ  ３．６−５．０＝８０−９９％Ｂ（６分で）
流動速度
上記方法のすべては２０ｍｌｓ／分（スモールスケール）または４０ｍｌｓ／分（ラージスケール）の流動速度を有する。
【００７０】
分析的ＬＣＭＳシステムの条件、ハードウェアおよびソフトウェア
ハードウェア
Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｇｒａｄｉｅｎｔ  Ｐｕｍｐ
Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒ  
Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  ＤＡＤ  Ｄｅｃｔｅｃｔｏｒ
Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｄｅｇａｓｓｅｒ  
Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｏｖｅｎ
Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｒ
Ｗａｔｅｒｓ  ＺＱ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ
Ｓｅｄｅｒｅ  Ｓｅｄｅｘ  ５５、  Ｓｅｄｅｒｅ  Ｓｅｄｅｘ  ８５  ｏｒ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｌａｂｓ  ＰＬ−ＥＬＳ−２１００
ソフトウェア
Ｗａｔｅｒｓ  ＭａｓｓＬｙｎｘ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ４．０  ＳＰ２
カラム
使用されるカラムはＷａｔｅｒｓ  Ａｔｌａｎｔｉｓであり、そのディメンションは４．６ｍｍ×５０ｍｍである。その固定相粒径は３μｍである。
溶剤
Ａ：水性溶媒＝水＋  ０．０５％  ギ酸
Ｂ：有機溶媒＝アセトニトリル＋  ０．０５％  ギ酸
方法
使用される一般的な方法は５分の実行時間を有する。
時間／分          ％Ｂ
０                    ３
０．１                ３
４                    ９７
４．８                ９７
４．９                ３
５．０                ３
流動速度
上記方法は流動速度３ｍｌ／分である。
ＮＭＲを使用する条件
ハードウェア
Ｂｒｕｋｅｒ  ４００ＭＨｚ    Ｕｌｔｒａｓｈｉｅｌｄ
Ｂｒｕｋｅｒ  Ｂ−ＡＣＳ６０  Ａｕｔｏｓａｍｐｌｅｒ
Ｂｒｕｋｅｒ  Ａｄｖａｎｃｅ  ４００  Ｃｏｎｓｏｌｅ
Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ２５０
Ｂｒｕｋｅｒ  ＡＶＡＮＣＥ  ５００
Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＲＸ６００
ソフトウェア
ユーザーインターフェース−ＮＭＲ  Ｋｉｏｓｋ
ソフトウェア制御−ＸＷｉｎ  ＮＭＲ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ３．０
【００７１】
実施例
記載例１：４−ブロモ−Ｎ−（６−ブロモ−２−ピリジニル）−３−フルオロベンゼンスルホンアミド（Ｄ１）
【化１０】
2009531385.tif 000012
ジクロロメタン（２ｍｌ）中、４−ブロモ−３−フルオロベンゼンスルホニルクロライド（６８４ｍｇ、３７０ｕｌ、２．５ｍｍｏｌ）の溶液をピリジン（２ｍｌ）中、２−アミノ−６−ブロモピリジン（３４６ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）の溶液に、室温でゆっくり加えた。反応混合物を室温で１時間攪拌した。該溶媒を蒸発させて残留物を酢酸エチル（５０ｍｌ）と水（５０ｍｌ）の間に分配した。有機層を水（×２）で洗浄し、分離して乾燥させ、蒸発させた。ヘキサン中２０−６０％酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィによって精製し、表題化合物（Ｄ１）を得た；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４０９，４１１，４１３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００７２】
記載例２：４−ブロモ−Ｎ−（６−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−ピリジニル）−３−フルオロベンゼンスルホンアミド（Ｄ２）
【化１１】
2009531385.tif 000013
１−メチル−２−ピロリジノン（５ｍｌ）と水（０．５ｍｌ）中、４−ブロモ−Ｎ−（６−ブロモ−２−ピリジニル）−３−フルオロベンゼンスルホンアミド（Ｄ１）（３００ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）およびシス−２、６−ジメチルピペラジン（６００ｍｇ、５．４ｍｍｏｌ）の溶液を２００℃で、２０００秒間マイクロ波で処理した。該反応混合物を酢酸エチル（２０ｍｌ）で希釈し、水（３×１０ｍｌ）で洗浄した。ジクロロメタン中５％メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィに付して精製し、表題化合物（Ｄ２）を得た；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４４３，４４５，［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００７３】
記載例３：４−ブロモ−Ｎ−（２−クロロ−４−ピリジニル）ベンゼンスルホンアミド（Ｄ３）
【化１２】
2009531385.tif 000014
４−ブロモベンゼンスルホニルクロライド（３．１９ｇ、１２．５ｍｍｏｌ）をピリジン５ｍｌ）およびジクロロメタン（５ｍｌ）中、４−アミノ−２−クロロピリジン（６４２ｍｇ、５ｍｍｏｌ）の溶液に加えた。該反応物を室温で２時間攪拌した。溶媒を蒸発させて残留物をＮａＯＨ（２５ｍｌ）中に懸濁して６０℃で１時間加熱した。該反応物を酢酸エチル（２×２５ｍｌ）で抽出した。該抽出物を洗浄し、乾燥して蒸発させた。残留物をメタノールに懸濁して濾過した。濾液の蒸発およびジエチルエーテルでのトリチュレーションにより表題化合物（Ｄ３）を得た；１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）δ：６．５４（１Ｈ、ｄ）、６．６２（１Ｈ、ｓ）、７．６０−７．６３（４Ｈ、ｍ）、７．６６（１Ｈ、ｄ）。
【００７４】
記載例  ４：Ｎ−（２−クロロ−４−ピリジニル）−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド（Ｄ４）
【化１３】
2009531385.tif 000015
１、２−ジメトキシエタン（３ｍｌ）と水（１ｍｌ）中、４−クロロ−Ｎ−（２−クロロ−４−ピリジニル）ベンゼンスルホンアミド（Ｄ３）（３５０ｍｇ、１ｍｍｏｌ）、５−メチルフラン−２−ボロン酸（１５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（２３０ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）およびジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（２０ｍｇ、１５ｍｏｌ％）の混合液を１２０℃で、２０分間マイクロ波で処理した。該反応混合物を酢酸エチル（５ｍｌ）と水（５ｍｌ）の間に分配して、有機層を乾燥させて、蒸発させた。ヘキサン中５−５０％酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィによって精製し、表題化合物（Ｄ４）を得た；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ３４９，３５１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００７５】
記載例  ５：６−ブロモ−３−（メチルオキシ）−２−ニトロピリジン（Ｄ５）
【化１４】
2009531385.tif 000016
方法Ａ
アセトン（１００ｍｌ）中、６−ブロモ−３−ヒドロキシ−２−ニトロピリジン（９．４ｇ、４２．８ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（６．９ｇ、５０ｍｍｏｌ）の化合物をヨードメタン（７．１ｇ、３．１１ｍｌ、５０ｍｍｏｌ）で処理し、４０℃で攪拌した。２、４、６および８時間後、さらにヨードメタン（７．１ｇ、３．１１ｍｌ、５０ｍｍｏｌ）を添加した。３６時間後、溶媒を蒸発させ、残留物を酢酸エチルと水とに分けた。有機層を水で洗浄し、乾燥して蒸発させた。ヘキサン中５−５０％酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィによって精製し、表題化合物（Ｄ５）を得た；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ２３３，２３５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００７６】
方法Ｂ
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（７００ｍＬ）をアルゴン下、外界温度にて、６−ブロモ−３−ヒドロキシ−２−ニトロピリジン（７０．９ｇ、３２４ｍｍｏｌ）および炭酸セシウム（２１１ｇ、６４８ｍｍｏｌ）の攪拌混合物に加え、３０℃までの昇温がもたらされた。攪拌混合物を１０℃に冷却し、ヨードメタン（４１ｍｌ、６５９ｍｍｏｌ）を一度に添加した。冷却槽を取り外し、該混合物を、アルゴン下、室温で一晩攪拌した。ＤＭＦを真空下で蒸発させ、残留物に水（１Ｌ）を添加した。該混合物を酢酸エチル（３×５００ｍｌ）で抽出し、混合した抽出物を２Ｍ  水酸化ナトリウム（４００ｍＬ）、飽和塩水（２５ｍＬ）を含む水（８００ｍＬ）および飽和塩水（８００ｍＬ）で連続して洗浄した。有機溶液を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、蒸発させて黄褐色の固体（５２．８ｇ）を得た。
Ｄ５の２つのさらなるバッチ（収量５４．２ｇおよび５２．１ｇ）を、６−ブロモ−３−ヒドロキシ−２−ニトロピリジンより上記と同様の方法にて調製した。
【００７７】
合したバッチから得られた物質１２９ｇをジクロロメタンに溶解させて不溶性物質から濾過することによって精製した。濾液をＦｌａｓｈ  １５０  Ｂｉｏｔａｇｅシリカゲルクロマトグラフィカラムに充填し、ジクロロメタン／ヘキサンの３０％−６０％増加勾配で溶出した。生成物のフラクションをプールし、蒸発させて、淡黄色の固体（９８．１ｇ）の表題化合物（Ｄ５）を得た。δＨ（ＣＤＣｌ３、４００ＭＨｚ）３．９９（３Ｈ、ｓ）、７．４３（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）、７．６９（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ）。
【００７８】
方法Ｃ
６−ブロモ−２−ニトロ−３−ピリジノール（２３．１１ｇ、１０６ｍｍｏｌ）および炭酸カリウム（４３．９５ｇ、３１８ｍｍｏｌ）をアセトン（５００ｍＬ）に懸濁した。ヨウ化メチル（７．９２ｍｌ、１２７ｍｍｏｌ）を加えて、この混合物を５０℃で４時間加熱した。さらにヨウ化メチル（２ｍｌ、３１．８ｍｍｏｌ）を加えて２時間加熱した。さらにヨウ化メチル（３．３ｍｌ、５３ｍｍｏｌ）を加えて、混合物を５０℃で一晩加熱した。該混合反応物を冷まし、濾過して、固体をアセトンで洗浄した。濾液を真空で濃縮した。残留物をクロロホルムでトリチュレートし、濾過した固体と濾液を真空中で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィ（Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｈｏｒｉｚｏｎ、６５、０−１００％酢酸エチル／ヘキサン）によって精製し、表題化合物（Ｄ５）を得た：７．８９ｇ。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ２３３／２３５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００７９】
方法Ｄ
アセトン（７５０ｍｌ）中、６−ブロモ−３−ヒドロキシ−２−ニトロピリジン（４４．８１ｇ、０．２１４ｍｏｌ）、および炭酸カリウム（７４．１７ｇ、０．５３７ｍｏｌ）の混合物をヨードメタン（１５．９９ｍｌ、０．２５６ｍｍｏｌ）で処理し、５０℃で攪拌した。１．２等量のヨードメタンをさらに２回、約４時間にわたって添加した。溶媒を濾過し、蒸発させて、残留物を酢酸エチル（５００ｍＬ）に溶解して、水（３００ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム溶液（３００ｍＬ）、水（３００ｍＬ）および塩水（３００ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥して（ＭｇＳＯ４）、蒸発させた。ヘキサン中０−１００％酢酸エチルで溶出するカラムクロマトグラフィで精製することによってクリーム色の固体として表題化合物（Ｄ５）（１０．４７ｇ）ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ２３３，２３５［Ｍ＋Ｈ］＋を得た。
【００８０】
記載例６：シス−３，５−ジメチル１−［５−（メチルオキシ）−６−ニトロ−２−ピリジニル］ピペラジン（Ｄ６）
【化１５】
2009531385.tif 000017
【００８１】
方法Ａ１
ジオキサン（２０ｍｌ）中、６−ブロモ−３−（メチルオキシ）−２−ニトロピリジン（Ｄ５、方法Ａ）（１．５ｇ、６．４ｍｍｏｌ）、シス−２、６−ジメチルピペラジン（８８０ｍｇ、７．７ｍｍｏｌ）、ナトリウム  ｔｅｒｔ−ブトキシド（１．２４ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（２９４ｍｇ、５ｍｏｌ％）、および２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ビフェニル（３００ｍｇ、１０ｍｏｌ％）の混合液を１１０℃で一晩加熱した。該混合物を酢酸エチルで希釈し、セライトを通して濾過した。濾液を蒸発させ、残留物をジクロロメタン中５％メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィで精製し、続いて、水中５−１００％アセトニトリルで溶出する逆相シリカゲルカラムクロマトグラフィによって精製し、表題化合物（Ｄ６）、ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ２６７［Ｍ＋Ｈ］＋を得た。
【００８２】
方法Ａ２
【化１６】
2009531385.tif 000018
ジオキサン（２０ｍｌ）中、６−ブロモ３−（メチルオキシ）−２−ニトロピリジン（Ｄ５、方法Ａ）（１．０ｇ、４．３ｍｍｏｌ）、シス−２、６−ジメチルピペラジン（９８０ｍｇ、８．６ｍｍｏｌ）、ナトリウム  ｔｅｒｔ−ブトキシド（８２５ｍｇ、８．６ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（１９６ｍｇ、５ｍｏｌ％）および２０ジシクロヘキシルホスフィノ−２’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ビフェニル（１６８ｍｇ、１０ｍｏｌ％）の混合液を１１０℃で一晩加熱した。冷ました反応混合液を酢酸エチル（２０ｍｌ）で希釈し、１Ｍ塩酸で抽出した。該抽出物を５０％水性水酸化ナトリウムで塩基性化し、酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を乾燥させ、蒸発させた。ジクロロメタン中５％メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィで精製し、表題化合物（Ｄ６）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ２６７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００８３】
方法Ｂ
６−ブロモ−３−（メチルオキシ）−２−ニトロピリジン（Ｄ５、方法Ｂ）（４５．０ｇ、１９３ｍｍｏｌ）をジオキサン（１．５Ｌ）に溶解し、アルゴン下、１４℃まで冷ました。シス−２、６−ジメチルピペラジン（４４．１ｇ、３８６ｍｍｏｌ）を一度に加え、１５分後全物質が溶解したとき、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ビフェニル（１１．３ｇ、１５ｍｏｌ％）を加え、２分後、続いてトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（１７．６ｇ、１０ｍｏｌ％）を加えた
。１４℃で１０分攪拌後、アルゴン下で、反応温度を約１４℃に維持しながらナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（２２．３ｇ、２３１ｍｍｏｌ）を３５分間にわたって加えた。反応物を１４℃で３．５時間（ＬＣＭＳによってモニタされる）攪拌し、ついで水（１Ｌ）と氷酢酸（１６．５ｍＬ）を攪拌しながら加えた。炭酸水素ナトリウム（５００ｍｌ）と酢酸エチル（１．１Ｌ）の飽和溶液を混合液に加え、この混合液を分離漏斗で勢いよく振った。層が分離され、有機層を５％塩水（２×１Ｌ）で洗浄した。混合水性抽出物を酢酸エチル（２×５００ｍＬ）で再抽出した。合した有機抽出物を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、Ｋｉｅｓｅｌｇｈｕｒを通して濾過した。濾液を真空中で濃縮し、赤色油として粗製表題化合物を得た。
【００８４】
この粗製物質の他のバッチは６−ブロモ−３−（メチルオキシ）−２−ニトロピリジン（Ｄ５）（４９．０ｇ、２１０ｍｍｏｌ）から上記と同様の方法により精製される。
【００８５】
両バッチから得られた合した粗生成物をカラムクロマトグラフィ（シリカゲル、まず始めに５０％−１００％酢酸エチル／ヘキサン増加勾配で、ついで３％−１５％メタノール中、２Ｍアンモニア／酢酸エチルの増加勾配で溶出する）によって精製した。生成物のフラクションをプールし蒸発させ、赤色油状固体（Ｄ６）（６２．２ｇ、２３４ｍｍｏｌ、５８％）として表題化合物を得た；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ２６７［Ｍ＋Ｈ］＋。表題化合物（３．２ｇ）のさらなる精製バッチを上記と同様の方法で精製した。
【００８６】
表題化合物（３．２ｇ）のさららる精製バッチを上記と同様の方法で精製した。
【００８７】
方法Ｃ
６−ブロモ−３−（メチルオキシ）−２−ニトロピリジン（Ｄ５、方法Ｃ）（６．９９ｇ、３０ｍｍｏｌ）をジオキサン（１５０ｍＬ）に溶かした。トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（１．３８ｇ、１．５ｍｍｏｌ）および２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ビフェニル（１．１８ｇ、３ｍｍｏｌ）を加えた。ナトリウム  ｔｅｒｔ−ブトキシド（５．７７ｇ、６０ｍｍｏｌ）ついで、シス−２、６−ジメチルピペラジン（５．１４ｇ、４５ｍｍｏｌ）を加えて、混合液を室温で５時間攪拌した。混合液をセリットを通して濾過し、酢酸エチルで洗浄して濾液を真空で濃縮した。残留物を酢酸エリルと水の間に分配した。有機層を５０％塩水（×３）、塩水、乾燥された無水硫酸ナトリウムで洗浄し真空中で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィ（ジクロロメタン中、Ｂｉｏｔａｇｅ  ＳＰ４、４０＋Ｍ、０−２０％２Ｍアンモニア／メタノール）で精製し、表題生成物（Ｄ６）：３．１３ｇ、ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ２６７［Ｍ＋Ｈ］＋を得た。
【００８８】
方法Ｄ
６−ブロモ−３−（メチルオキシ）−２−ニトロピリジン（Ｄ５、方法Ｄ）（８．０ｇ、３４．１ｍｍｏｌ）をジオキサン（３００ｍＬ）に溶かし、１３℃まで冷ました。シス−２、６−ジメチルピペラジン（７．７９ｇ、６８．３ｍｍｏｌ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ビフェニル（２．０１３ｇ、１５ｍｏｌ％）およびトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（３．１２１ｇ、１０ｍｏｌ％）を加えた。その後、ナトリウム  ｔｅｒｔ−ブトキシド（６．５５ｇ、６８．３ｍｍｏｌ）を１分間にわたって温度を１５℃より下に維持しながら加えた。該反応物を１８℃で５．５時間攪拌し（ＬＣＭＳでモニターする）、水（２５ｍＬ）を加え、そして反応物をｃｅａｌｉｔｅに通して濾過し、濾液を蒸発させて、酢酸エチル（６００ｍＬ）に溶解させて、飽和炭酸水素ナトリウム（３×３００ｍＬ）および塩水（３０ｍＬ）で洗浄して、暗赤色の半固体を得た。有機層を乾燥させ（ＭｇＳＯ４）蒸発させてクロマトグラフィ（シリカゲル、０から２０％（２Ｍ  アンモニア／メタノール）／酢酸エチルで溶出する）により精製して赤色固体を得た。生成物の蒸発させて赤色固体（Ｄ６）、ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ２６７［Ｍ＋Ｈ］＋として表題化合物を得た。
【００８９】
記載例７：６−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジンアミン（Ｄ７）
【化１７】
2009531385.tif 000019
【００９０】
方法Ａ
塩化スズ（ＩＩ）二水和物（５５０ｍｇ、２．４ｍｍｏｌ）をエタノール（２０ｍｌ）中、シス−３，５−ジメチル−１−［５−（メチルオキシ）−６−ニトロ−２−ピリジニル］ピペラジン（Ｄ６、方法Ａ２）（３２０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）の溶液に加え、８０℃で２時間加熱した。該反応混合物を室温まで冷まし、溶媒を蒸発させて残留物を水（２０ｍｌ）で希釈した。混合物を固体炭酸カリウムを少しずつ添加して塩基性化した。混合物を酢酸エチル（×２）で抽出した。合した有機層を乾燥させ、蒸発させて表題化合物（Ｄ７）を得た；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ２３７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９１】
方法Ｂ
メタノール（１．８Ｌ）中、（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−［５−（メチルオキシ）−６−ニトロ−２−ピリジニル］ピペラジン（Ｄ６、方法Ｂ）（６２．３ｇ、２３４ｍｍｏｌ）の溶液を水中（３０ｍＬ）炭素（９．３ｇ）上１０％パラジウムのスラリーに注いだ。化合物Ｄ６の全体移動をさらなる量のメタノール（１００ｍＬ）を用いて確実にした。懸濁液を周囲の温度および３０℃の間の温度で、水素（１５−１８ｐｓｉ）の雰囲気下で６時間攪拌した。反応混合物をＫｉｅｓｅｌｇｈｕｒに通して、濾過し、その後メタノール（２×２００ｍＬ）で洗浄して、濾液と洗浄物を蒸発させて暗褐色油（５５．７ｇ）を得た。この物質をクロマトグラフィ（シリカゲル、メタノール／ジクロロメタンの０％−２５％増加勾配で溶出する）で精製した。生成物のフラクションをプールし蒸発させ、暗褐色油として表題化合物（Ｄ７）（４０ｇ、１６９ｍｍｏｌ、７２％）を得た；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ２３７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９２】
方法Ｃ
シス−３，５−ジメチル−１−［５−（メチルオキシ）−６−ニトロ−２−ピリジニル］ピペラジン（Ｄ６、方法Ｃ）（３．１３ｇ、１２ｍｍｏｌ）をメタノール（１００ｍＬ）中１０％パラジウム／チャコールペースト（３００ｍｇ）水素の１気圧、室温で、５時間、水素化した。触媒を濾過し、濾液を真空中で濃縮して表題化合物（Ｄ７）、３．４０ｇを得た；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ２３７［Ｍ＋Ｈ］＋。これを、さらに精製することなく、次の工程に用いた。
【００９３】
方法Ｄ
（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−［５−（メチルオキシ）−６−ニトロ−２−ピリジニル］ピペラジン（Ｄ６、方法Ｂ）（０．５ｇ、２．２５ｍｍｏｌ）をメタノール（５０ｍＬ）に溶解し、大気圧で炭素上１０％パラジウム（０．２５ｇ、ペースト）にて水素化した。２時間後、反応混合物を濾過し、蒸発させて淡黄色油（Ｄ７）（推定される収量）ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ２３７［Ｍ＋Ｈ］＋として表題化合物を得た。
【００９４】
方法Ｅ
（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−［５−（メチルオキシ）−６−ニトロ−２−ピリジニル］ピペラジン（Ｄ６、方法Ｄ）（４．３０ｇ、１６．６ｍｍｏｌ）をメタノール（１５０ｍＬ）に溶かし、大気圧で炭素上１０％パラジウム（１ｇ、ペースト）で水素化した。３時間後、反応混合物を濾過し、蒸発させて濃褐色油（Ｄ７）（４．３１ｇ）、ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ２３７［Ｍ＋Ｈ］＋として表題化合物を得た。
【００９５】
記載例８：４−ブロモ−Ｎ−［６−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−３−フルオロベンゼンスルホンアミド（Ｄ８）
【化１８】
2009531385.tif 000020
【００９６】
方法Ａ
２−アミノ−６−ブロモピリジンを（Ｄ７、方法Ａ）と換えて（Ｄ１）と同様の方法で表題化合物を調製した。（Ｄ８）ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４７３、４７５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９７】
方法Ｂ
ピリジン（３００ｍＬ）中、６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジンアミン（Ｄ７、方法Ｂ）（３９．５ｇ、１６７ｍｍｏｌ）およびジクロロメタン（１５０ｍＬ）の攪拌された溶液に、ジクロロメタン（１５０ｍＬ）中４−ブロモ−３−フルオロベンゼンスルホニルクロライド（５４．９ｇ、２０１ｍｍｏｌ）の溶液を、アルゴン下、周辺温度で４０分間にわたって加えた。混合液を１８℃で３時間攪拌した後、真空中で濃縮し、暗黒色残留物を得た。この残留物をジクロロメタン（７００ｍｌ）に溶解し、該溶液を０．３Ｍ水酸化ナトリウムで洗浄した。水相をジクロロメタン（２×５００ｍＬ）でさらに抽出した。その後、混合有機抽出物を０．２Ｍ水酸化ナトリウム（５００ｍＬ）で洗浄し、ジクロロメタン（２００ｍＬ）で逆抽出した。混合水相洗浄物（生成物を含む）を、ｐＨ１４で、５Ｍ塩酸（およそ７０ｍｌ）を用いてｐＨ６まで調整し、灰色の沈殿物を得た。この固体を濾過し、水（３×１５０ｍＬ）で洗浄し、週末にかけて真空下、３０℃で乾燥した（５４．４ｇ）。この物質を沸騰したメタノール（６Ｌ）で攪拌し、少量の不溶解固体から濾過し、濾液を真空中で濃縮して１．５Ｌの量を得た。氷冷した後、この溶液を濾過し、メタノール／ジエチルエーテル（１：１）で洗浄して、その後ジエチルエーテルで洗浄して、１時間、４０℃、真空下で乾燥させて、結晶性固体（３０．７ｇ、６４．９ｍｍｏｌ、３９％）を得た；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４７４／４７６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【００９８】
記載例９：４−クロロ−２−ピリミジンアミン
【化１９】
2009531385.tif 000021
０．８８０アンモニア（５０ｍｌ）をエタノール（５０ｍｌ）中、２、４−ジクロロピリミジン（５．０ｇ、３３．６ｍｍｏｌ）の懸濁液にゆっくりと加え、その混合液を室温で５時間攪拌した。減圧下で濃縮して２５ｍｌとし、残りの固体を濾過して、水で洗浄し、４時間かけて真空中で乾燥させた。得られた表題化合物（Ｄ９）、ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ１３０，１３２および２−クロロ−４−ピリミジンアミン  ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ１３０，１３２の混合物をさらに精製することなく次の反応に用いた。
【００９９】
記載例１０：４−ブロモ−Ｎ−（２−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−４−ピリミジニル）−３−フルオロベンゼンスルホンアミド
【化２０】
2009531385.tif 000022
ピリジン２ｍｌ中、記載例９から得られた粗成生物（５００ｍｇ、３．９ｍｍｏｌ）およびシス−２、６−ジメチルピペラジン（８８５ｍｇ、７．８ｍｍｏｌ）の混合物を１００℃で１０分間マイクロ波加熱した。この混合物をトルエンで共沸混合し、乾燥して４−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−ピリミジンアミンおよび２−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−４−ピリミジンアミンの混合物を得た。
【０１００】
残留物（２５０ｍｇ、１．２ｍｍｏｌ）をピリジン（３ｍｌ）中に再溶解し、４−ブロモ−３−フルオロベンゼンスルホニルクロライド（１６０ｕｌ、２９５ｍｇ、１．４４ｍｍｏｌ）を加えた。該混合物を室温で一晩攪拌した。さらに、４−ブロモ−３−フルオロベンゼンスルホニルクロライド（１００ｕｌ、０．７５ｍｍｏｌまたは等量？）を加え、この混合物を８０℃３時間加熱した。反応混合物を減圧下で濃縮し、ＳＣＸカートリッジに充填して、メタノールおよびメタノール中２Ｎ  ＮＨ３で溶出した。塩基性の少量を合わせて、蒸発させ、０−２０％メタノール中２Ｎ  ＮＨ３で溶出するカラムクロマトグラフィにより精製して、表題化合物（Ｄ１０）を得た；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４４４，４４６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０１】
記載例１１：４−ブロモ−２−クロロ−Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］ベンゼンスルホンアミド（Ｄ１１）
【化２１】
2009531385.tif 000023
６−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジンアミン（Ｄ７、方法Ｃ）（４７３ｍｇ、２ｍｍｏｌ）をピリジン（５ｍｌ）およびジクロロメタン（５ｍｌ）に溶解した。４−ブロモ−２−クロロベンゼンスルホニルクロライド（８７０ｍｇ、３ｍｍｏｌ）を加え、この溶液を室温で５時間攪拌した。混合液を真空下で濃縮し、メタノールで共沸混合した。残留物をメタノール中、ＳＣＸカートリッジ（バリアン、１０ｇ）に充填し、メタノールで洗浄して、塩基性生成物を２Ｍアンモニア／メタノールで溶出した。フラクションを含む生成物を真空中で濃縮し、フラッシュクロマトグラフィ（Ｂｉｏｔａｇｅ  ＳＰ４、４０＋Ｓ、ジクロロメタン中０−２０％  ２Ｍ  アンモニア／メタノール）によって精製し、表題化合物（Ｄ１１）を得た；４７８ｍｇ、ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４８９／４９１／４９３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０２】
記載例１２：１、１−ジメチルエチル（２Ｒ，６Ｓ）−４−［６−アミノ−５−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−２、６−ジメチル−１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ１２）
【化２２】
2009531385.tif 000024
６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジンアミン（Ｄ７、方法Ｃ）（１．３７ｇ、５．８ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（６０ｍＬ）中に懸濁し、０℃まで冷却した。トリエチルアミン（０．８９２ｍＬ、６．４１ｍｍｏｌ）、続いて、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネイト（１．３９ｇ、６．４１ｍｍｏｌ）を加え、反応物を０℃で２時間攪拌して、その後室温まで加温して７２時間攪拌した。反応混合物をＤＣＭで希釈して１５０ｍＬとし、飽和炭酸水とナトリウム（２×１００ｍＬ）および塩水（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）させ、蒸発させ、カラムクロマトグラフィ（シリカゲル、０−６０％酢酸エチル／ペンタンで溶出する）で精製して暗褐色油を得た。生成物のフラクションを蒸発させて黄色油として表題化合物（Ｄ１２）を得た；（１．０ｇ）、ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ３３７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０３】
記載例１３：１、１−ジメチルエチル（２Ｒ，６Ｓ）−４−［６−｛［（４−ブロモ−２−クロロフェニル）スルホニル］アミノ｝−５−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−２、６−ジメチル１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ１３）
【化２３】
2009531385.tif 000025
１、１−ジメチルエチル（２Ｒ，６Ｓ）−４−［６−アミノ−５−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−２、６−ジメチル−１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ１２）（１．０ｇ、２．９７ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１０ｍＬ）およびピリジン（１０ｍＬ）中に溶解させ、その後０℃まで冷ました。その後、ＤＣＭ（５ｍＬ）中に溶解した４−ブロモ−２−クロロベンゼンスルホニルクロライド（０．９４６ｇ、３．２７ｍｍｏｌ）を滴下し、反応物を一晩温めた。その後、反応物を最低量まで蒸発させてＤＣＭ（１００ｍＬ）に再度溶解させて、水（５０ｍＬ）で洗浄した。水相をＤＣＭ（２×５０ｍＬ）で抽出し、合した有機層を塩水（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）して、蒸発させて、クロマトグラフィ（シリカゲル、０−５０％酢酸エチル／ペンタンで溶出する）により精製して暗黒色油を得た。生成物のフラクションを蒸発させて黄色のクランチ状の泡沫体（Ｄ１３）（１．２９ｇ）を得た；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ５８９／５９１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０４】
記載例１４：１，１−ジメチルエチル（２Ｒ，６Ｓ）−４−［６−（｛［２−クロロ−４−（４−メチル２−チエニル）フェニル］スルホニル｝アミノ）−５−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−２，６−ジメチル−１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ１４）
【化２４】
2009531385.tif 000026
１，１−ジメチルエチル（２Ｒ，６Ｓ）−４−［６−｛［（４−ブロモ−２−クロロフェニル）スルホニル］アミノ｝−５−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−２，６−ジメチル１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ１３）（０．１５ｇ、０．２５４ｍｍｏｌ）、４−メチルチオフェン−２−ボロン酸（０．０５４ｇ、０．３８２ｍｍｏｌ）、（１，１−ビス（ジフェニルホスフィノ）フェロセン）パラジウム（ＩＩ）クロライド、ＤＣＭ複合体（９．２ｍｇ、０．０１２７ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（０．０５３ｇ、０．５０８ｍｍｏｌ）をＤＭＥ（２ｍＬ）および水（１ｍＬ）中、１２０℃で２０分間マイクロ波で加熱した。その後、酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム（２×３０ｍＬ）および塩水（３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて、クロマトグラフィ（シリカゲル、０−５０％酢酸エチル／ペンタンで溶出する）により精製して暗褐色油を得た。生成物を蒸発させて淡黄色の泡沫体（Ｄ１４）（０．１２７ｇ）を得た；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ６０７／６０９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０５】
記載例１５：１，１−ジメチルエチル（２Ｒ，６Ｓ）−４−［６−（｛［２−クロロ−４−（３−フラニル）フェニル］スルホニル｝アミノ）−５−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−２，６−ジメチル−１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ１５）
【化２５】
2009531385.tif 000027
１，１−ジメチルエチル（２Ｒ，６Ｓ）−４−［６−｛［（４−ブロモ−２−クロロフェニル）スルホニル］アミノ｝−５−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−２、６−ジメチル−１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ１３）（０．１５ｇ、０．２５４ｍｍｏｌ）、２−（３−フラニル）−４，４，５，５−テトラメチル１，３，２−ジオキサボロラン（０．０７３９ｇ、０．３８１ｍｍｏｌ）、パラジウムジクロライド  ジ−トリフェニルホスフィン（９．０ｍｇ、０．０１２７ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（０．０５３ｇ、０．５０８ｍｍｏｌ）をＤＭＥ（２ｍＬ）および水（１ｍＬ）中で、１２０℃、２０分間マイクロ波で加熱した。その後、反応液を酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム（２×３０ｍＬ）および塩水（３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて、クロマトグラフィ（シリカゲル、０−６０％酢酸エチル／ペンタンで溶出する）により精製して、黄色油を得た。生成物を蒸発させて淡黄色泡沫体（Ｄ１５）（０．１７０ｇ）を得た；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ５７７／５７９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０６】
記載例１６：１，１−ジメチルエチル（２Ｒ，６Ｓ）−４−［６−（｛［２−クロロ−４−（５−メチル−２−チエニル）フェニル］スルホニル｝アミノ）−５−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−２，６−ジメチル−１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ１６）
【化２６】
2009531385.tif 000028
１，１−ジメチルエチル（２Ｒ，６Ｓ）−４−［６−｛［（４−ブロモ−２−クロロフェニル）スルホニル］アミノ｝−５−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−２，６−ジメチル−１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ１３）（０．１０ｇ、０．１６９ｍｍｏｌ）、５−メチルチオフェン−２−ボロン酸（０．０７３９ｇ、０．２５４ｍｍｏｌ）、パラジウムジクロライド  ジ−トリフェニルホスフィン（５．９ｍｇ、０．０１２７ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（０．０３５９ｇ、０．３３９ｍｍｏｌ）をＤＭＥ（１ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）中で、１２０℃、２０分間マイクロ波で加熱した。その後、反応液を酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム（２×３０ｍＬ）および塩水（３０ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて、クロマトグラフィ（シリカゲル、０−７０％酢酸エチル／ペンタンで溶出する）により精製して、黄色泡沫体を得た。生成物を蒸発させて淡黄色油（Ｄ１６）（０．０８８ｇ）を得た；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ６０７／６０９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０７】
記載例１７：４−ブロモ−Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］ベンゼンスルホンアミド（Ｄ１７）
【化２７】
2009531385.tif 000029
６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジンアミン（Ｄ７、方法Ｅ）（１．５ｇ、６．３５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（１５ｍＬ）およびピリジン（１５ｍＬ）に溶解し、その後０℃まで冷ます。ＤＣＭ（８ｍＬ）中に溶解された４−ブロモベンゼンスルホニルクロライド（３．０４ｇ、１１．９ｍｍｏｌ）を滴下し、反応液を室温まで一晩温めた。その後、最小限まで蒸発させて、ＤＣＭ（１００ｍＬ）中に再度溶解し、水（５０ｍＬ）で洗浄した。水相をＤＣＭ（１００ｍＬ）で抽出し、合した有機抽出液を飽和炭酸水素ナトリウム（２×１００ｍＬ）および塩水（１００ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて酢酸エチル（３×１０ｍＬ）でトリチュレートし、淡黄色粉体として表題化合物（Ｄ１７）（１．３８２ｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４５５／４５７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０８】
記載例１８：（３Ｒ，５Ｓ）−１−［６−［（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）スルホニル］−５−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−３，５−ジメチルピペラジン（Ｄ１８）
【化２８】
2009531385.tif 000030
６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジンアミン（Ｄ７、方法Ｄ）（２．２５ｍｍｏｌ）をＤＣＭ（５ｍＬ）およびピリジン（５ｍＬ）中に溶解させて、０℃まで冷ました。ＤＣＭ（５ｍＬ）中に溶解させた４−ブロモ−２−フルオロベンゼンスルホニルクロライド（０．７３８ｇ、２．７０６ｍｍｏｌ）を滴下し、その後反応液を一晩温めた。反応液を最小限まで蒸発させ、ＤＣＭ（１００ｍＬ）中に再び溶解させて水（２×７５ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（３×７５ｍＬ）および塩水（７５ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）させて褐色の油を得て、メタノールでトリチュレートし、高真空下５０℃で乾燥させて淡褐色粉体として表題化合物（Ｄ１８）（０．４００ｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４７３／４７５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１０９】
記載例１９：シス−１−（２−クロロ−４−ピリジニル）−３，５−ジメチルピペラジン
【化２９】
2009531385.tif 000031
ジオキサン（２０ｍｌ）中、４−ブロモ−２−クロロピリジン（２．０ｇ、１０．４ｍｍｏｌ）、シス−２、６−ジメチルピペラジン（１．３ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）、ナトリウム  ｔ−ブトキシド（２．０ｇ、２０．８ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（２３０ｍｇ、２．５５ｍｏｌ％）、および２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ビフェニル（２３０ｍｇ、５ｍｏｌ％）の混合液を１００℃で１時間攪拌した。混合物を室温まで冷まし、「セライト」を通してし、溶媒を蒸発させた。ジクロロメタン中０−５％メタノールで溶出するフラッシュクロマトグラフィの精製により表題化合物（Ｄ１９）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  ＣＤＣｌ３  ｐｐｍ  δ１．１５（６Ｈ，ｄ）、２．４２−２．４５（２Ｈ、ｍ）、２．９０−２．９７（２Ｈ、ｄ）、３．６１−３．６７（２Ｈ、ｍ）、６．５６（１Ｈ、ｄ）、６．６４（１Ｈ、ｓ）、８．００（１Ｈ、ｓ）。
【０１１０】
記載例２０：４−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−Ｎ−（ジフェニルメチリデン）−２−ピリジンアミン
【化３０】
2009531385.tif 000032
出発物質としてシス−１−（２−クロロ−４−ピリジニル）−３，５−ジメチルピペラジン（Ｄ１９）およびベンゾフェノンイミンを用いて、シス−１−（２−クロロ−４−ピリジニル）−３，５−ジメチルピペラジン（Ｄ１９）と同様の方法で表題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ３７１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１１】
記載例２１：４−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−ピリジンアミン  
【化３１】
2009531385.tif 000033
テトラヒドロフラン（５ｍｌ）中、４−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−Ｎ−（ジフェニルメチリデン）−２−ピリジンアミン（Ｄ２０）（６５０ｍｇ、１．７６ｍｍｏｌ）の溶液を１．０Ｍ塩酸で処理し、混合液を室温で１時間攪拌した。混合液を水で希釈し、ジエチルエーテルで洗浄した。水相を５０％水性水酸化ナトリウムで塩基性化し、その後塩化ナトリウムで飽和させた。混合液を酢酸エチル（×２）で抽出した。合した抽出物を乾燥させ、蒸発させて表題化合物（Ｄ２１）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  ＣＤＣｌ３  ｐｐｍδ１．１３（６Ｈ、ｄ）、２．３３−．２３８（２Ｈ、ｍ）、２．９１−２．９６（２Ｈ、ｍ）、３．５８−３．６２（２Ｈ、ｍ）、５．８５（１Ｈ、ｓ）、６．１８−６．２０（１Ｈ、ｍ）、７．７８−８．００（１Ｈ、ｄ）。
【０１１２】
記載例２２：４−ブロモ−Ｎ−｛４−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−ピリジニル｝−３−フルオロベンゼンスルホンアミド
【化３２】
2009531385.tif 000034
出発物質として４−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−ピリジンアミン（Ｄ２１）および４−ブロモ−３−フルオロベンゼンスルホニルクロライドを用いて、４−ブロモ−Ｎ−（２−クロロ−４−ピリジニル）ベンゼンスルホンアミド（Ｄ３）と同様の方法で表題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４４３、４４５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１３】
記載例２３：１，１−ジメチルエチル５−ブロモ−２−（メチルオキシ）−３−ピリジンカルボキシレート
【化３３】
2009531385.tif 000035
トルエン（１００ｍｌ）中、５−ブロモ−２−メトキシ−３−ピリジンカルボン酸（９．３ｇ、４０ｍｍｏｌ）の懸濁液をＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド  ジ−ｔ−ブチルアセタール（１６．３ｇ、８０ｍｍｏｌ）で処理し、混合液を８０℃で２時間加熱した。混合液を冷まして、溶媒を蒸発させた。残留物を酢酸エチルに溶解して、水（×２）で洗浄した。有機層を乾燥させ、蒸発させて表題化合物（Ｄ２３）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ  ＣＤＣｌ３  ｐｐｍ  δ１．５８（９ｈ、ｓ）、４．０１（３Ｈ、ｓ）、８．１４（１Ｈ、ｓ）、８．３（１Ｈ、ｓ）。
【０１１４】
記載例２４：１，１−ジメチルエチル５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジンカルボキシレート
【化３４】
2009531385.tif 000036
出発物質として１，１−ジメチルエチル５−ブロモ−２−（メチルオキシ）−３−ピリジンカルボキシレート（Ｄ２３）およびシス−２、２−ジメチルピペラジンを用いたシス−１−（２−クロロ−４−ピリジニル）−３，５−ジメチルピペラジン（Ｄ１９）と同様の方法で表題化合物を調製した。
【０１１５】
記載例２５：１，１−ジメチルエチル５−［シス−３，５−ジメチル４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジンカルボキシレート
【化３５】
2009531385.tif 000037
Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）中、１，１−ジメチルエチル５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジンカルボキシレート（Ｄ２４）（５００ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）、炭酸カリウム（４３０ｍｇ、３．１２ｍｍｏｌ）および臭化ベンジル（２６６ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）の混合液を８０℃で４時間攪拌した。反応混合物を酢酸エチルと水の間に分配した。有機層を水で洗浄し、乾燥させて、蒸発させた。ヘキサン中５−２０％酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィで精製して表題化合物（Ｄ２５）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４１２［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１６】
記載例２６：５−［シス−３，５−ジメチル−４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジンカルボン酸
【化３６】
2009531385.tif 000038
ジクロロメタン（５ｍｌ）中、１，１−ジメチルエチル５−［シス−３，５−ジメチル−４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジンカルボキシレート（Ｄ２５）をトリフルオロ酢酸（５ｍｌ）で処理し、該混合液を室温で２時間攪拌した。溶媒を蒸発させて、残留物をメタノール中２Ｍアンモニアで溶出するＳＣＸで精製して、表題化合物（Ｄ２６）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ３５６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１７】
記載例２７：１，１−ジメチルエチル［５−［（３−シス−３，５−ジメチル−４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジニル］カルバミン酸塩
【化３７】
2009531385.tif 000039
ｔ−ブタノール（３ｍｌ）およびトルエン（３ｍｌ）中、５−［シス−３，５−ジメチル−４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジンカルボン酸（Ｄ２６）（１００ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）、ジフェニルホスホリルアジド（１１５ｍｇ、０．４２ｍｍｏｌ）、およびトリエチルアミン（８５ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）の混合液を６５℃で１時間加熱し、その後１１０℃で２４時間加熱した。反応混合物を室温まで冷まし、溶媒を蒸発させた。ヘキサン中５−２５％酢酸エチルで溶出するフラッシュクロマトグラフィで精製して表題化合物（Ｄ２７）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４２７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１８】
記載例２８：Ｎ−［５−［シス−３，５−ジメチル−４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジニル］−２，２，２−トリフルオロアセトアミド
【化３８】
2009531385.tif 000040
ジクロロメタン（２ｍｌ）中１，１−ジメチルエチル［５−［シス−３，５−ジメチル４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジニル］カルバミン酸塩（Ｄ２７）（１１９ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の溶液をトリフルオロ酢酸（２ｍｌ）で処理し、室温で２時間攪拌した。溶媒を蒸発させて、残留物とトルエン（×２）と共沸混合させて表題化合物（Ｄ２８）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４２３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１１９】
記載例２９：５−［シス−３，５−ジメチル−４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジンアミン
【化３９】
2009531385.tif 000041
メタノール（５ｍｌ）中、Ｎ−［５−［シス−３，５−ジメチル−４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジニル］−２，２，２−トリフルオロアセトアミド（Ｄ２８）（９７ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）の溶液を炭酸カリウム（５００ｍｇ、過剰）で処理した。混合液を室温で２４時間攪拌した。混合物を酢酸エチルで希釈し、水および塩水で洗浄した。有機層を乾燥し、蒸発させて、表題化合物（Ｄ２９）を得、それをさらに精製することなく使用した。
【０１２０】
記載例３０：４−ブロモ−Ｎ−［（４−ブロモ−３−フルオロフェニル）スルホニル］−Ｎ−［５−［シス−３，５−ジメチル−４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジニル］−３−フルオロベンゼンスルホンアミド
【化４０】
2009531385.tif 000042
出発物質として５−［シス−３，５−ジメチル−４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジンアミン（Ｄ２９）および４−ブロモ−３−フルオロベンゼンスルホニルクロライドを用いて４−ブロモ−Ｎ−（２−クロロ−４−ピリジニル）ベンゼンスルホンアミド（Ｄ３）と同様の方法で表題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ７９９、８０１、８０３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２１】
記載例３１：Ｎ−［５−［シス−３，５−ジメチル−４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジニル］−３−フルオロ−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド
【化４１】
2009531385.tif 000043
出発物質として４−ブロモ−Ｎ−［（４−ブロモ−３−フルオロフェニル）スルホニル］−Ｎ−［５−［シス−３，５−ジメチル−４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジニル］−３−フルオロベンゼンスルホンアミド（Ｄ３０）を用いて、実施例１（Ｅ１）と同様の方法で表題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ５６５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２２】
記載例３２：エチル５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−ピリジンカルボキシレート
【化４２】
2009531385.tif 000044
出発物質（Ｄ１９）としてエチル５−ブロモ−３−ピリジンカルボキシレートおよびシス−２，２−ジメチルピペラジンを用いて、シス−１−（２−クロロ−４−ピリジニル）−３，５−ジメチルピペラジンと同様の方法で表題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ２６４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２３】
記載例３３：５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−ピリジンカルボン酸
【化４３】
2009531385.tif 000045
テトラヒドロフラン（５ｍｌ）中、エチル５−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−ピリジンカルボキシレート（Ｄ３２）（８００ｍｇ、３ｍｍｏｌ）溶液を０．５Ｍ水酸化リチウムで処理した。混合物を室温で２時間攪拌した。反応物を酢酸（１ｍｌ）で急冷した。溶媒を蒸発させ、残留物をメタノール中２Ｍアンモニアで溶出したＳＣＸで精製して、表題化合物（Ｄ３３）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ２３６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２４】
記載例３４：１，１−ジメチルエチル｛５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−ピリジニル｝カルバミン酸塩
【化４４】
2009531385.tif 000046
出発物質として５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−ピリジンカルボン酸（Ｄ３３）を用いた１，１−ジメチルエチル［５−［（３−シス−３，５−ジメチル４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジニル］カルバミン酸塩（Ｄ２６）と同様の方法で表題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ３０７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２５】
記載例３５：Ｎ−｛５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−ピリジニル｝−２，２，２−トリフルオロアセトアミド
【化４５】
2009531385.tif 000047
出発物質として１，１−ジメチルエチル｛５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−ピリジニル｝カルバミン酸塩（Ｄ３４）を用いて、Ｎ−［５−［シス−３，５−ジメチル−４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジニル］−２，２，２−トリフルオロアセトアミド（Ｄ２８）と同様の方法で表題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ３０３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２６】
記載例３６：５−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−ピリジンアミン
【化４６】
2009531385.tif 000048
出発物質としてＮ−｛５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−ピリジニル｝−２，２，２−トリフルオロアセトアミド（Ｄ３５）を用いて、５−［シス−３，５−ジメチル−４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジンアミン（Ｄ２９）と同様の方法で表題化合物を調製した。
【０１２７】
記載例３７：４−ブロモ−Ｎ−｛５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−ピリジニル｝−３−フルオロベンゼンスルホンアミド
【化４７】
2009531385.tif 000049
出発物質として５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−ピリジンアミン（Ｄ３６）および４−ブロモ−３−フルオロベンゼンスルホニルクロライドを用いて、４−ブロモ−Ｎ−（２−クロロ−４−ピリジニル）ベンゼンスルホンアミド（Ｄ３）と同様の方法で表題化合物を調製した。
【０１２８】
記載例３８：エチル５−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジンカルボキシレート
【化４８】
2009531385.tif 000050
出発物質としてエチル５−ブロモ−２−（メチルオキシ）−３−ピリジンカルボキシレートおよび１−ベンジル−（シス−２，２−ジメチル）ピペラジンを用いて、シス−１−（２−クロロ−４−ピリジニル）−３，５−ジメチルピペラジン（Ｄ１９）と同様の方法で表題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ３８４［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１２９】
記載例３９：５−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジンカルボン酸
【化４９】
2009531385.tif 000051
エタノール（１０ｍｌ）中、エチル５−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジンカルボキシレート（Ｄ３８）（３．４ｇ、８．９ｍｍｏｌ）の溶液および２Ｍ水酸化ナトリウム（１０ｍｌ）を６０℃で２時間加熱した。エタノールを蒸発させ、残留物を水で希釈して、この混合物を氷酢酸で酸性化し、酢酸エチル（×２）で抽出した。合した抽出物を乾燥し、蒸発させた。メタノール中２Ｍアンモニアで溶出するＳＣＸで精製して表題化合物（Ｄ３９）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ３５６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３０】
実施例１：Ｎ−（６−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−ピリジニル）−３−フルオロ−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド塩酸塩（Ｅ１）
【化５０】
2009531385.tif 000052
１，２−ジメトキシエタン（３ｍｌ）および水（１ｍｌ）中４−ブロモ−Ｎ−（６−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−ピリジニル）−３−フルオロベンゼンスルホンアミド（Ｄ２）（４０ｍｇ、０．０９ｍｍｏｌ）、５−メチルフラン−２−ボロン酸（１５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（３５ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）およびジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（５ｍｇ、５ｍｏｌ％）の混合物を１２０℃で２０分間、マイクロ波加熱した。反応混合物をジエチルエーテル（５ｍｌ）および水（２ｍｌ）との間で分配した。有機層を乾燥させ、蒸発させた。残留物をジエチルエーテルおよび酢酸エチルでトリチュレートした後、メタノールに溶解してジエチルエーテル中塩酸で処理して塩酸塩にした。ジエチルエーテルを用いてトリチュレートし、表題化合物（Ｅ１）を得た；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４４５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３１】
実施例２：Ｎ−（２−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−４−ピリジニル）−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド塩酸塩（Ｅ２）
【化５１】
2009531385.tif 000053
ジオキサン（４ｍｌ）中、Ｎ−（２−クロロ−４−ピリジニル）−４−（５−メチル−２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド（Ｄ４）（２５０ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）、シス−２，６−ジメチルピペラジン（１７０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）、ナトリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１４０ｍｇ、１．４８ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（１５ｍｇ、５ｍｏｌ％）、および２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ビフェニル（３０ｍｇ、１０ｍｏｌ％）の混合液を１２０℃で１時間マイクロ波加熱した。反応混合物を酢酸エチルおよび水の間に分配した。水相を蒸発させ残留物をジクロロメタン中５−１０％メタノールで溶出するカラムクロマトグラフィによって精製した。生成物をメタノールに溶解して、ジエチルエーテル中、塩酸で処理して塩酸塩にし、表題化合物（Ｅ２）を得た；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４２７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３２】
実施例３：Ｎ−［６−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−３−フルオロ−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド塩酸塩（Ｅ３）
【化５２】
2009531385.tif 000054
【０１３３】
方法Ａ
（Ｄ２）を（Ｄ８、方法Ａ）で置換して（Ｅ１）と同様の方法で表題化合物を調製した。（Ｅ３）ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４７５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１３４】
方法Ｂ
１，２−ジメトキシエタン（２９０ｍｌ）中、４−ブロモ−Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−３−フルオロベンゼンスルホンアミド（Ｄ８、方法Ｂ）（２９．１ｇ、６１．５ｍｍｏｌ）の攪拌された溶液に大気温度、アルゴン下で、水（１４５ｍｌ）中、炭酸ナトリウム（３４．３ｇ、３２４ｍｍｏｌ）の溶液を加えた。その後、混合液に二塩化パラジウムジ−トリフェニルホスフィン（０．８４４ｇ、１．２ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物を勢いよく攪拌し、３５℃まで加熱し、その温度で、１，２−ジメトキシエタン（２５ｍｌ）中、４，４，５，５−テトラメチル−２−（５−メチル−２−フラニル）−１，３，２−ジオキサボロラン（１２．８ｇ、６１．４ｍｍｏｌ）の溶液を３０秒かけて加えた。還流が１時間にわたって達成されるように加熱を続けた。その後さらに１時間還流を維持した。１、２−ジメトキシエタン（２５ｍｌ）中、４，４，５，５−テトラメチル−２−（５−メチル２−フラニル）−１，３，２−ジオキサボロラン（１２．８ｇ、６１．４ｍｍｏｌ）を加え、還流を０．７５時間維持した。その後反応混合物を大気温度まで冷却し、濃縮して残留物を得た。残留物に水（１Ｌ）を加え、この攪拌された混合物に、上澄みがｐＨ７に達するまで、５Ｍ塩酸（およそ５５ｍＬ）を加えた。沈殿した反応生成物を直径の大きなガラス漏斗を通して吸引濾過し、水（３×１００ｍＬ）で洗浄した。その後固体を４０℃真空下で２４時間乾燥して淡褐色粉体（２９ｇ）を得た。母液から別の収量の固体（２．０ｇ）を回収した。
【０１３５】
上記と同様の方法で、他のバッチの固体（０．５ｇ）を４−ブロモ−Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−３−フルオロベンゼンスルホンアミド（Ｄ８、方法Ｂ）（１．０ｇ、２．１ｍｍｏｌ）から調製した。
【０１３６】
すべての固体をあわせて回収（３１．５ｇ）し、沸騰したメタノール（３．２Ｌ）で攪拌し、Ｋｉｅｓｅｌｇｈｕｒを通して濾過し、温めながら暗紫色固体の少量を取り除いた。濾液を真空中で濃縮し、およそ１．５Ｌの量とし、室温で０．５時間放置して、真空中でさらに蒸発させて最終容量２５０ｍｌとした。混合液を氷浴にて１時間冷却し、結晶性固体を濾過して、メタノール／ジエチルエーテル（１：１）（２×７５ｍＬ）で洗浄し、その後ジエチルエーテル（２×７５ｍｌ）で洗浄して、真空下で、４０℃、１８時間乾燥した（１７．４ｇ）。
【０１３７】
大気温度で、メタノール（４００ｍＬ）中、前記物質の懸濁液に濃塩酸（３．７ｍｌ）を加えた。得られた溶液をさらなるメタノール（１００ｍｌ）で希釈し、５５℃まで加熱し、パラジウム残留物を取り除くために、この温度で、Ｉｓｏｌｕｔｅ  Ｓｉ−Ｔｈｉｏｌ粉末（仕入れ先：Ｂｉｏｔａｇｅ）（１．３ｍｍｏｌ／ｇ、２０ｇ）で処理した。この温度で１．５時間後、混合物をＫｉｅｓｅｌｇｈｕｒに通して吸引濾過した。濾液を濃縮し、およそ２００ｍｌの容量とし、攪拌しながらジエチルエーテル（２００ｍｌ）で希釈した。０．５時間後、得られた懸濁液を濾過しメタノール／ジエチルエーテル（１：１）（８０ｍＬ）で洗浄し、その後、ジエチルエーテル（２×１００ｍＬ）で洗浄し、真空下、４０℃で１時間乾燥した（１７．３ｇ）。この物質を沸騰したメタノール（３５０ｍＬ）で攪拌し、０．５時間氷浴で冷却する前に、この溶液を濃縮して１００ｍＬとした。淡黄色の結晶性固体が濾過され、メタノール／ジエチルエーテル（１：１）（２×３０ｍＬ）で洗浄し、その後ジエチルエーテル（２×５０ｍＬ）で洗浄して、真空下、４０℃で１８時間乾燥した。
【０１３８】
ついで、この物質を真空下、６０℃で２１時間加熱し、すべてのメタノール溶液を除去した（１２．０１ｇ）、（Ｅ３）。
δＨ  （ｄ６−ＤＭＳＯ、４００ＭＨｚ）１．２０（６Ｈ、ｄ、Ｊ＝６．４Ｈｚ）、２．３９（３Ｈ、ｓ）、２．４０−２．４５（２Ｈ、ｍ）、３．１２−３．１５（２Ｈ、ｂｒ、ｍ）、３．７６（３Ｈ、ｓ）、３．８２−３．８６（２Ｈ、ｍ）、６．３５−６．３６（１Ｈ、ｍ）、６．５５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝９．２Ｈｚ）、６．９２−６．９３（１Ｈ、ｍ）、７．３５（１Ｈ、ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．７８−７．８０（２Ｈ、ｍ）、７．９４（１Ｈ、ｔ、Ｊ＝８Ｈｚ）、８．８（１Ｈ、ｂｒ、ｓ）、９．４（１Ｈ、ｂｒ、ｓ）、１０．５（１Ｈ、ｂｒ、ｓ）。
【０１３９】
実施例４：Ｎ−（２−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−４−ピリミジニル）−３−フルオロ−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド（Ｅ４）
【化５３】
2009531385.tif 000055
１，２−ジメトキシエタン（３ｍｌ）および水（１ｍｌ）中、４−ブロモ−Ｎ−｛２−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−４−ピリミジニル｝−３−フルオロベンゼンスルホンアミド（Ｄ１０）（９０ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）、５−メチルフラン−２−ボロン酸エステル（８５ｍｇ、０．４ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（８６ｍｇ、０．８ｍｍｏｌ）およびジクロロビス（トリフェニルホスフィン）パラジウム（０）（７ｍｇ、５ｍｏｌ％）の混合物を１１０℃で２０分間マイクロ波加熱した。反応混合液をｈｙｄｒｏｍａｔｒｉｘ  カートリッジに充填してメタノールで溶出した。メタノールを減圧下で取り除き、残留物をＳＣＸカートリッジに充填して、メタノールおよびメタノール中２Ｎ  ＮＨ３で溶出した。塩基性のフラクションを合わせて、蒸発し、トルエンと共沸混合して残留物をＤＭＡＷ６０（ジクロロメタン：メタノール：酢酸：水＝６０：１８：２：３）で溶出するカラムクロマトグラフィにより精製した。生成物をメタノールに溶解し、ジエチルエーテル中塩酸で処理することによって塩酸塩として表題化合物（Ｅ４）を得た；ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４４６［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４０】
実施例５：２−クロロ−Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド塩酸塩（Ｅ５）
【化５４】
2009531385.tif 000056
１，２−ジメトキシエタン（４ｍｌ）および水（２ｍｌ）中、４−ブロモ−２−クロロ−Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］ベンゼンスルホンアミド（Ｄ１１）（２４５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（５−メチルフラン−２−イル）−［１，３，２］−アロキサボララン（１１３ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）および炭酸ナトリウム（２１２ｍｇ、２ｍｍｏｌ）を１３０℃で２０分間マイクロ波反応器で加熱した。反応混合物を酢酸エチルと水との間に分配した。有機層を水（×３）、塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥し、真空で濃縮した。残留物をフラッシュクロマトグラフィ（Ｂｉｏｔａｇｅ  ＳＰ４、２５＋Ｓ、ジクロロメタン中、０−２０％  ２Ｍ  アンモニア／メタノール）によって二度精製して、表題化合物を得た。これを塩酸塩（ジエチルエーテルおよびＭｅＯＨ中１Ｍ塩化水素）にして表題化合物（Ｅ５）の塩酸塩を得た：９０ｍｇ、ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４９１／４９３［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４１】
実施例６：２−クロロ−Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−４−（４−メチル２−チエニル）ベンゼンスルホンアミド塩酸塩（Ｅ６）
【化５５】
2009531385.tif 000057
ジオキサン（５ｍｌ）１，１−ジメチルエチル（２Ｒ，６Ｓ）−４−［６−（｛［２−クロロ−４−（４−メチル２−チエニル）フェニル］スルホニル｝アミノ）−５−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−２，６−ジメチル−１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ１４）（０．１２８ｇ）をジオキサン（５ｍｌ）に溶解し、４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサン（５ｍＬ）を加えて反応物を２４時間攪拌した。反応混合物を蒸発させて、淡黄色固体（Ｅ６）（０．１１１ｇ）として表題化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ５０７／５０９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４２】
実施例７：２−クロロ−Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−４−（３−フラニル）ベンゼンスルホンアミド塩酸塩（Ｅ７）
【化５６】
2009531385.tif 000058
１，１−ジメチルエチル（２Ｒ，６Ｓ）−４−［６−（｛［２−クロロ−４−（３−フラニル）フェニル］スルホニル｝アミノ）−５−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−２、６−ジメチル−１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ１５）（０．１７０ｇ）を４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサン（６ｍＬ）に溶解し、反応物を３５℃で２時間攪拌した。反応混合物を蒸発させて、酢酸エチル／エーテル（×３）でトリチュレートし、高真空下、５０℃で乾燥させて白色固体を得て、該化合物を白色固体（Ｅ７）（０．１１９ｇ）として化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４７７／４７９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４３】
実施例８：２−クロロ−Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−４−（５−メチル２−チエニル）ベンゼンスルホンアミド塩酸塩（Ｅ８）
【化５７】
2009531385.tif 000059
１，１−ジメチルエチル（２Ｒ，６Ｓ）−４−［６−（｛［２−クロロ−４−（５−メチル２−チエニル）フェニル］スルホニル｝アミノ）−５−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−２，６−ジメチル−１−ピペラジンカルボキシレート（Ｄ１６）（０．１７０ｇ）を４Ｎ  ＨＣｌ／ジオキサン（５ｍＬ）中に溶解し、反応混合物を２４時間攪拌した。反応混合物を蒸発させて酢酸エチル／エーテル  ×３でトリチュレートし、高真空下、５０℃で乾燥した白色固体（Ｅ８）（０．０６６ｇ）として化合物を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ５０７／５０９［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４４】
実施例９：Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド塩酸塩（Ｅ９）
【化５８】
2009531385.tif 000060
４−ブロモ−Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］ベンゼンスルホンアミド（Ｄ１７）（０．１０ｇ、０．２１９ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（５−メチル２−フラニル）−１，３，２−ジオキサボロラン（０．０６８ｇ、０．３２９ｍｍｏｌ）、パラジウムジクロライド  ジ−トリフェニルホスフィン（７．７ｍｇ、０．０１０９ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（０．０８４ｇ、０．８７８ｍｍｏｌ）をＤＭＥ（２ｍＬ）および水（１．０ｍＬ）中において１２０℃で２０分間マイクロ波加熱した。その後、反応物を酢酸エチル（２０ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム（２×１５ｍＬ）および塩水（１５ｍＬ）で洗浄した。有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて、クロマトグラフィ（シリカゲル、０−１５％メタノール／ＤＣＭで溶出する）で４５分かけて精製した。生成物フラクションを蒸発させ、ＤＣＭに再び溶かし、遊離塩基を１Ｍ  ＨＣｌ／エーテルで塩酸塩に変えた。生成物を蒸発し、エーテル／アセトンでトリチュレートし、高真空下５０℃で一晩乾燥した（Ｅ９）（０．０１２ｇ）ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４５７［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４５】
実施例１０：Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−２’−フルオロ−５’−（メチルオキシ）−４−ビフェニルスルホンアミド塩酸塩（Ｅ１０）
【化５９】
2009531385.tif 000061
４−ブロモ−Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］ベンゼンスルホンアミド（Ｄ１７）（０．１０ｇ、０．２１９ｍｍｏｌ）、２−フルオロ−５−メトキシベンゼンボロン酸（０．０５６ｇ、０．３２９ｍｍｏｌ）、パラジウムジクロライド  ジ−トリフェニルホスフィン（７．７ｍｇ、０．０１０９ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（０．０８４ｇ、０．８７８ｍｍｏｌ）をＤＭＥ（２ｍＬ）および水（１．０ｍＬ）において１２０℃で２０分間マイクロ波で加熱した。その後、反応物を酢酸エチル（２０ｍＬ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム（２×１５ｍＬ）および塩水（１５ｍＬ）で洗浄した有機層を乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発させて、クロマトグラフィ（シリカゲル、０−１５％メタノール／ＤＣＭで溶出する）で精製した。生成物フラクションを蒸発させ、ＤＣＭに再び溶かし、遊離塩基を１Ｍ  ＨＣｌ／エーテルで塩酸塩に変えた。蒸発させ、エーテル／アセトンで粉末化して高真空下５０℃で一晩乾燥した（Ｅ１０）（０．００４ｇ）ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ５０１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４６】
実施例１１：Ｎ−［６−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−２−フルオロ−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド塩酸塩（Ｅ１１）
【化６０】
2009531385.tif 000062
（３Ｒ，５Ｓ）−１−［６−［（４−ブロモ−２−フルオロフェニル）スルホニル］−５−（メチルオキシ）−２−ピリジニル］−３，５−ジメチルピペラジン（Ｄ１８）（０．１５ｇ、０．３１７ｍｍｏｌ）、４，４，５，５−テトラメチル−２−（５−メチル２−フラニル）−１，３，２−ジオキシボロラン（０．０９８ｇ、０．４７５ｍｍｏｌ）、パラジウムジクロライド  ジ−トリフェニルホスフィン（１１．１ｍｇ、０．０１５８ｍｍｏｌ）、炭酸ナトリウム（０．１２１ｇ、１．２６８ｍｍｏｌ）をＤＭＥ（２ｍＬ）および水（１．０ｍＬ）中において、１２０℃で１０分間マイクロ波加熱した。その後、反応混合物をＳＣＸ−シリカ上に注ぎ、メタノール（８０ｍＬ）で洗浄し、２Ｍアンモニア／メタノール溶液（８０ｍＬ）で溶出した。この溶離液を蒸発させてクロマトグラフィ（シリカゲル、０−１０％メタノール／ＤＣＭで溶出する）で精製した。カラムから得られた少量の不溶性物質を蒸発させた純粋な精製物と一緒にした。生成物をＤＣＭに再度溶解させ、１Ｍ  ＨＣｌ／ジエチルエーテルで処理し、蒸発させ、アセトン／ジエチルエーテルでトリチュレートし、高真空下で一晩乾燥した後に固体として表題化合物を得た。（Ｅ１１）（０．１２９ｇ）ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４７５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４７】
実施例１２：Ｎ−｛４−［（３Ｒ，５Ｓ）−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−ピリジニル｝−３−フルオロ−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド塩酸塩
【化６１】
2009531385.tif 000063
出発物質として４−ブロモ−Ｎ−｛４−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−ピリジニル｝−３−フルオロベンゼンスルホンアミド（Ｄ２２）を用いて実施例（Ｅ１）と同様の方法で表題化合物を調製した。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４４５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４８】
実施例１３：Ｎ−［５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジニル］−３−フルオロ−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド塩酸塩
【化６２】
2009531385.tif 000064
エタノール（５ｍｌ）中、Ｎ−［５−［シス−３，５−ジメチル−４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジニル］−３−フルオロ−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド（Ｄ３１）（６０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）および炭素（１０ｍｇ）上１０％パラジウムを含む２Ｍ塩酸（０．５ｍｌ）の溶液を水素雰囲気下で２時間攪拌した。混合物を「セライト」を通して濾過し、溶液を蒸発させた。ジクロロメタン中５％メタノールで溶出するフラッシュクロマトグラフィにより残留物を精製し、続いて、ジエチルエーテル中、１．０Ｍ塩化水素で処理して表題化合物（Ｅ１３）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４７５［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１４９】
実施例１４：Ｎ−｛５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−ピリジニル｝−３−フルオロ−４−（５−メチル−２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド塩酸塩
【化６３】
2009531385.tif 000065
出発物質として４−ブロモ−Ｎ−｛５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−３−ピリジニル｝−３−フルオロベンゼンスルホンアミド（Ｄ３７）を用いて実施例１（Ｅ１）と同様の方法で表題化合物を調製した。
【０１５０】
実施例１５：Ｎ−｛５−［シス−３，５−ジメチル−１−ピペラジニル］−２−オキソ−１、２−ジヒドロ−３−ピリジニル｝−３−フルオロ−４−（５−メチル−２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド
【化６４】
2009531385.tif 000066
ジオキサン（２ｍｌ）中、Ｎ−［５−［シス−３，５−ジメチル−４−（フェニルメチル）−１−ピペラジニル］−２−（メチルオキシ）−３−ピリジニル］−３−フルオロ−４−（５−メチル２−フラニル）ベンゼンスルホンアミド（Ｄ３１）（６０ｍｇ、０．１ｍｍｏｌ）の溶液をジオキサン（１ｍｌ）および水（０．５ｍｌ）中４．０Ｍ塩化水素で処理した。混合物を７０℃で４時間加熱した。溶液を蒸発させ、残留物をエタノール（５ｍｌ）および２Ｍ塩酸（２ｍｌ）中に溶解した。炭素上１０％パラジウムを加え、混合物を水素雰囲気下で４時間攪拌した。混合物を「セライト」に通して濾過し、溶液を蒸発させた。ＭＤＡＰで精製し、表題化合物（Ｅ１５）を得た。ＭＳ（ＥＳ＋）ｍ／ｅ４６１［Ｍ＋Ｈ］＋。
【０１５１】
検査操作
グレリン受容体ＧＨＳ−Ｒのクローニング
ヒトＧＨＳ−Ｒはヒト視床下部ｃＤＮＡおよびｐＣＲ２．１にクローン化されたＴＯＰＯ  Ｔａからクローニングされた。配列を確認し、発現解析のためｐＣＤＮに移植した。配列を再度確認して、プラスミドをＣＨＯ細胞に電気穿孔した。クローンをＦＬＩＰＲ（蛍光イメージングプレートリーダー）によりスクリーニングした。
【０１５２】
ＧＨＳ−Ｒ  ｂａｃｍａｍウイルスの産生およびウイルス力価測定
ウイルス産生
ＧＨＳ−ＲのオープンリーディングフレームをｐＣＤＮからｐＦａｓｔＢａｃｍａｍベクターに移入した。このベクターは、昆虫細胞特異性ポリへドリンプロモーターが哺乳類の細胞活性プロモーター、この場合ＣＭＶ、に変換される組換えバキュロウイルスの産生に使用された。その後これはＢａｃ  ｔｏ  Ｂａｃ発現システム（インビトロゲン）とともに使われた。簡単に言えば、このベクターをＤＨ１０ｂａｃ  Ｅ．ｃｏｌｉに転換し、バクミドを形質転換細胞から単離した。その後、組換えバキュロウイルス粒子を生成するために、６−ウェルシャーレ中ＥｘＣｅｌｌ  ４２０（ＪＲＨ）で成長させたＳｆ９昆虫細胞に、このバクミドを形質導入した。
【０１５３】
これらの細胞の上澄みから組換えＧＨＳ−Ｒ  ｂａｃｍａｍウイルスが含まれたものを採取した。さらにウイルスを増幅させ、Ｐ１ストックを提供するために、ＥｘＣｅｌｌ  ４２０倍地上１×１０６個／ｍｌのＳｆ９細胞の２００ｍｌｓの感染に、このＰ０ウイルスのストックを用いた。
【０１５４】
ついで、このＰ１ウイルスストックを用いて、１０個の１リットルのエルレンマイアー振盪フラスコのＰ２ウイルスストックを増幅させ、この細胞の上澄みを再度採取した。その後、これを、検査のため哺乳類の細胞の形質導入に用いた。
【０１５５】
ラット脳ｃＤＮＡからｐＣＤＮＡ３ベクターへのＰＣＲによってＧαｏ  Ｇ−タンパク質のオープンリーディングフレームをクローン化した。その後、これをｐＦａｓｔ  Ｂａｃｍａｍベクターに形質導入し、組換えバキュロウイルス粒子を上記のとおり産生した。
【０１５６】
ウイルス力価測定
ｇｐ６４エンベロープタンパク質モノクローナル抗体を用いたプラークＥＬＩＳＡ法によりウイルス増幅のすべての段階でウイルス力価測定を行った。
【０１５７】
ＳＦ９細胞を９６ウェルシャーレに移し、一定範囲のウイルスの希釈体を当該細胞に１時間加えた。このウイルスを取り出し、１％メチルセルロースおよび培地の混合物を細胞に加えて４８時間インキュベートした。その後、この細胞をホルムアルデヒドおよびアセトンの混合液に８分間固定した。その後、細胞をリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）で洗浄し、標準ヤギ血清を２５分間加えた。その後これを取り出し、ｇｐ６４標準抗体を２５分間加えた。その後ウェルをＰＢＳで洗浄し、ヤギ抗体−マウス／ＨＲＰ接合抗体を２５分間加えた。ウェルをＰＢＳで洗浄し、Ｔｒｕｅ  Ｂｌｕｅ  ペルオキシダーゼ基質溶液（Ｋｉｒｋｅｇａａｒｄ  ＆  Ｐｅｒｒｙ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を加え、６０分間インキュベートした。青色病巣（ｂｌｕｅ  ｆｏｃｉ）について個々のウェルを数え、希釈因子を考慮して、ウイルスの１ｍｌ当たりのプラーク形成単位を測定した。
【０１５８】
１．ＧＨＳ−Ｒ  ＧＴＰγＳ  機能的アゴニストアッセイ
グレリン受容体ＧＨＳ−Ｒを一時的に発現する細胞の生成
ＨＥＫ２９３Ｔ  細胞（ＳＶ４０ラージＴ抗原を安定して発現するＨＥＫ２９３細胞）を１０％（ｖ／ｖ）新生仔ウシ血清および２ｍＭグルタミンを含むＤＭＥＭ中に維持した。細胞を６０ｍｍ培養皿に播種し、リポフェクタミン試薬を用いた関連ＤＮＡ種を含むｐＣＤＮＡ３での形質導入に先立って、６０−８０％密集度（１８−２４ｈｒｓ）まで成長させた。形質導入に関して、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．）０．２ｍＬ中、ＤＮＡ３μｇをリポフェクタミン１０μｌと混合し、Ｏｐｔｉ−ＭＥＭ  １．６ｍＬを追加するのに先立って、室温で３０分間インキュベートした。共トランスフェクション実験に関して、それぞれのｃＤＮＡ種１．５μｇを用いた。細胞をリポフェクタミン／ＤＮＡ混合液に５時間曝し、その後、ＤＭＥＭ中１０％（ｖ／ｖ）新生仔ウシ血清２ｍＬを加えた。形質導入して４８時間後細胞を採取した。
【０１５９】
グレリン受容体ＧＨＳ−ＲおよびラットＧαｏ  Ｇ−タンパク質を一時的に発現する細胞の生成
フリースタイル培地１リットル中の３×１０８個のＨＥＫＦ細胞にＧＨＳ−Ｒウイルス（１×１０８  ｐｆｕ／ｍｌ）３００ｍｌおよびＧαｏ  Ｇ−タンパク質（４×１０８個ｐｆｕ／ｍｌ）３０ｍｌを加えることによって、フリースタイル培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で維持したＨＥＫ２９３Ｆ細胞にＧＨＳ−ＲおよびラットＧαｏ  Ｇ−タンパク質の両者を共形質導入した。形質導入から２４時間経過した後、２ｍＭ酪酸ナトリウムを加え、発現を強化した。酪酸ナトリウム添加から２４時間後、膜標本により細胞を採取した。
【０１６０】
培養細胞から膜標本
プロトコルのすべての工程は４℃で行われ、予め冷やされた試薬を用いる。１０−４Ｍ  ロイペプチン（アセチル−ロイシル−ロイシル−アルギナール；Ｓｉｇｍａ  Ｌ２８８４）、２５μｇ／ｍＬ  バアシトラシン（Ｓｉｇｍａ  Ｂ０１２５）、１ｍＭ  エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、１ｍＭ  フェニルメチルスルホニルフルオライド（ＰＭＳＦ）および２×１０−６Ｍ  ペプスタイン  Ａ（Ｓｉｇｍａ）で補充した５０ｍＭ  Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）  （ｐＨ  ７．４０）を含む１０倍量のＡ２バッファに細胞ペレットを再懸濁した。その後、細胞を１リッターグラスワーリングブレンダーで２×１５秒バーストによって均質化し、続いて２０分間５００ｇで遠心分離した。その後、３０分間４８，０００ｇで上清を高速回転させた。ペレットを５秒間ボルテックスして、続いて、Ｄｏｕｎｃｅホモジナイザー（１０−１５ストローク）で均質化した。４倍量のＡ２バッファに再懸濁し、この時点で該調製物をポリプロピレン管にアリコートし、−７０℃で保存した。
【０１６１】
本発明の化合物は下記のＧＴＰγＳアッセイにしたがって、インビトロでの生物活性を試験した：
ＧＨＳ−Ｒ  ＧＴＰγＳ機能的アゴニストアッセイプロトコル
各化合物をアッセイするために、Ｏｐｔｉクリアボトム９６ウェルプレートにて：
（ａ）１００％ＤＭＡＯ中、必要な濃度に希釈され、１５μｌアッセイバッファ（２０ｍＭ  Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）＋１００ｍＭ  ＮａＣｌ＋１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、ｐＨをＮａＯＨで７．４に調整）を加えた５ｕｌの試験化合物を加え；
（ｂ）２０μｌグアノシン５’［γ３５−Ｓ］チオトリリン酸、トリエチルアミン塩（Ａｍｅｒｓｈａｍ；放射能濃度＝３７ｋＢｑ／μｌまたは１ｍＣｉ／ｍｌ；比放射能  １１６０Ｃｉ／ｍｍｏｌ）をアッセイバッファ中、１．９ｎＭに希釈して最終０．３８ｎＭを得；
（ｃ）（上記方法に従って調製された）膜をアッセイバッファにて希釈し、６０μｌ中ウェルにつき５μｇタンパク質を含む最終濃度を得た。グアノシン５’二リン酸塩（ＧＤＰ）（Ｓｉｇｍａ；アッセイバッファ中で希釈）の最終濃度４０μＭを加え、アッセイに添加する前に１０分間インキュベートした。
このアッセイは、（ａ）、（ｂ）、（ｃ）からの成分を混合することによって開始され、３０分間室温でインキュベートした；
（ｄ）コムギ胚芽凝集素−ポリビニルトルエン（ＷＧＡ−ＰＶＴ）シンチレーション近接アッセイ（ＳＰＡ）ビーズを、アッセイバッファ中で２０ｍｇｓ／ｍｌまで希釈した。
その後、ビーズ２５μｌを反応混合液に加え、アッセイを３０分間室温で振動させながらインキュベートした。続いてこれを５分間１５００ｒｐｍで遠心分離した。遠心分離を終えた３時間と６時間の間で、１分正規化トリチウム計数プロトコルに基づいてＷａｌｌａｃ  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａカウンターにて該プレートを読み取った。データを４−変数ロジスティック式を用いて解析した。基底活性を最小活性として用いた。
【０１６２】
２．ＧＨＳＲアゴニストＢＡＣＭＡＭ  ＦＬＩＰＲアッセイ
グレリン受容体ＧＨＳ−Ｒを一時的に発現するＵ２ＯＳの生成
アッセイに２４時間先立ってコンフルエンス１００％のＵ２ＯＳ細胞を採取し、遠沈させた。上澄みを除去し、細胞を培地（ＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋１％Ｌ−グルタミン）に再懸濁させる。細胞の計数をＣｅｄｅｘ計測機器を用いて行い、細胞濃度を培地を用いて調節して２０Ｋ細胞／ｍｌ（１０Ｋ細胞／５０ｕｌ）を得た。
【０１６３】
ヒトＧＨＳＲ  ＢＡＣＭＡＭウイルスを、適当な容量％（ウイルス力価量が変化する場合ＢＡＣＭＡＭウイルスの個々のバッチを計算する）細胞懸濁液に加える。この形質導入された細胞の懸濁液をＦＬＩＰＲ  ３８４−ウェルクリアボトムプレートに５０ｕｌ／ウェルにて分配する。細胞プレートを３７℃で一晩インキュベートする。
【０１６４】
化合物調製
マスター化合物プレートを１００％ＤＭＳＯ中に調製する。３ｍＭが最も高い濃度（最終濃度１０μＭ）であり、それらを連続的に４の１に薄めた。マスタープレートからの１ｕｌを娘プレートに移し、それに、化合物希釈バッファ（Ｔｙｒｏｄｅｓ＋１ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡ＋１。５ｍＭ  ＣａＣｌ２）の５０μｌを加える。このプレートをアッセイに用いる。
【０１６５】
発明の化合物の生物活性を、下記のＦＬＩＰＲアッセイにしたがってインビトロで試験した：
ＧＨＳＲアゴニストＢＡＣＭＡＭ  ＦＬＩＰＲアッセイプロトコル
セルウォッシャを用いて培地を吸引する（１０ｕｌの培地が残る）。細胞を即座にローディングバッファ（Ｔｙｒｏｄｅｓ（Ｅｌｇａ水＋１４５ｍＭ  ＮａＣｌ＋５ｍＭ  ＫＣｌ＋２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ＋１０ｍＭ  グルコース＋１ｍＭ  ＭｇＣｌ２）＋１．５ｍＭ  ＣａＣｌ２＋０．７１４ｍｇ／ｍｌ  Ｐｒｏｂｅｎｉｃｉｄ（１Ｍ  ＮａＯＨ中に予め溶解する）＋０．５ｍＭ  ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  ｂｌａｃｋ＋２．５ｕＭ  Ｆｌｕｏ  ４染料）で充填し、３７．５℃で１時間インキュベートする。その後、ＦＬＩＰＲ３カルシウムイメージング装置を用いて、化合物プレートから１０μｌを即座に細胞プレートに加える。蛍光測定を行う。
実施例の化合物はＧＨＳＲアゴニストＢＡＣＭＡＭ  ＦＬＩＰＲアッセイで１μＭより小さなＥＣ５０値を有した。
【国際調査報告】
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