(57)【要約】本発明は、超臨界ＣＯ２抽出方法を用いた、ウコン種植物性材料の抽出物、アミロイド斑凝集またはこれにともなう原線維形成、例えばアルツハイマー病に罹患している患者を処置する方法、およびアミロイド斑凝集またはその組織中の原線維形成の阻害方法に関する。本発明のウコン種抽出物はさらに、クルクミノイド、ターメロン、多糖類、および／またはターメリンも含む。クルクミノイドは、クルクミン、テトラヒドロクルクミン、デメトキシクルクミン、ビスデメトキシクルクミン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
図９、図１０、または図１４〜図７８のいずれかに記載のリアルタイム直接分析（ＤＡＲＴ）質量分析法クロマトグラムを有する分画を含んでいる、ウコン種抽出物。
【請求項２】
前記分画が、図１４〜図３１、図３６、図３７、図４１、図５１、図５２、または図５６のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する、請求項１に記載のウコン種抽出物。
【請求項３】
図３５、図３８〜図４０、図５０、または図５３〜図５５のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する、請求項１に記載のウコン種抽出物。
【請求項４】
図９、図１０、図４２〜図４６、または図５７〜図６１のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する、請求項１に記載のウコン種抽出物。
【請求項５】
図３２〜図３４、または図４７〜図４９のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する、請求項１に記載のウコン種抽出物。
【請求項６】
図６３〜図７８のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する、請求項１に記載のウコン種抽出物。
【請求項７】
図４７または図６２に記載のＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する、請求項１に記載のウコン種抽出物。
【請求項８】
前記抽出物が、図６３〜図７８のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する精油分画、および図９、図１０、図４２〜図４６、または図５７〜図６１のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する多糖類分画を含んでいる、請求項１に記載のウコン種抽出物。
【請求項９】
前記抽出物が、図６３〜図７８のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する精油分画、図９、図１０、図４２〜図４６、または図５７〜図６１のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する多糖類分画、および図４７または図６２のＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有するターメリン分画を含んでいる、請求項１に記載のウコン種抽出物。
【請求項１０】
前記抽出物が、クルクミノイド、ターメロン、多糖類、および／またはターメリンを含んでいる、請求項１に記載のウコン種抽出物。
【請求項１１】
前記クルクミノイドは、クルクミン、テトラヒドロクルクミン、デメトキシクルクミン、ビスデメトキシクルクミン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１０に記載のウコン種抽出物。
【請求項１２】
前記クルクミノイドの量は、少なくとも約７５重量％である、請求項１０に記載のウコン種抽出物。
【請求項１３】
前記ターメロンは、α−ターメロン、ａｒ−ターメロン、β−ターメロン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１０に記載のウコン種抽出物。
【請求項１４】
前記ターメロンの量は、少なくとも５重量％である、請求項１０に記載のウコン種抽出物。
【請求項１５】
前記ターメリンの量は、少なくとも約５重量％である、請求項１０に記載のウコン種抽出物。
【請求項１６】
前記多糖類は、ウコナンＡ、ウコナンＢ、ウコナンＣ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１０に記載のウコン種抽出物。
【請求項１７】
前記多糖類の量は、少なくとも約５重量％である、請求項１０に記載のウコン種抽出物。
【請求項１８】
請求項１に記載のウコン種抽出物を含んでいる、食品または薬剤。
【請求項１９】
アミロイド斑凝集または原線維形成に罹患している被験体を処置する方法であって、請求項１に記載のウコン種抽出物の有効量を、これを必要とする患者へ投与する工程を含む、方法。
【請求項２０】
前記被験体は、アルツハイマー病に罹患している、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記ウコン種抽出物がさらに、α−ボスウエリア酸および／またはβ−ボスウエリア酸、ならびに／あるいはそのＣ−酢酸塩の相乗作用量も含んでいる、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記被験体が、霊長類、ウシ、ヒツジ、ウマ、ブタ、げっ歯類、ネコ、またはイヌである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記被験体が、ヒトである、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
アミロイド斑凝集または組織中の原線維形成を予防する方法であって、該組織と請求項１に記載のウコン種抽出物の有効量とを接触させることを含む方法。
【請求項２５】
ウコン種抽出物がさらに、α−ボスウエリア酸および／またはβ−ボスウエリア酸、ならびに／あるいはそのＣ−酢酸塩の相乗作用量も含んでいる、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
少なくとも１つの予め決定された特徴を有するウコン種抽出物を調製する方法であって、精油分画、クルクミノイド分画、多糖類分画、およびターメリン分画を生じるために、
ａ．超臨界二酸化炭素抽出によってウコン種植物性材料を抽出して、精油分画および第一残渣を生じる工程；
ｂ．ウコン種植物性材料または工程ａ）からの該第一残渣のいずれかを、超臨界二酸化炭素抽出によって抽出して、クルクミノイド分画および第二残渣を生じる工程；
ｃ．工程ｂ）からの該第二残渣を熱水抽出によって抽出して多糖類溶液を生じ、次いで該多糖類をエタノールで沈殿させて、多糖類分画および第三残渣を生じる工程；ならびに
ｄ．カラムクロマトグラフィによって、工程ｃ）からの該第三残渣からターメリン分画を分離する工程；
によって、ウコン種植物性材料を連続的に抽出する工程を含む、方法。
【請求項２７】
工程ａ）は、
１）粉砕されたウコン種植物性材料を抽出容器に装入する工程；
２）二酸化炭素を超臨界条件下で添加する工程；
３）該粉砕されたウコン種植物性材料と該二酸化炭素とをしばらくの間接触させる工程；および
４）前記精油分画を収集容器に収集する工程；
を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
超臨界条件が、約２５０バール〜約５００バールの圧力、および約３０℃〜約８０℃の温度を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
工程ａ）の抽出条件は、約２５０バール〜５００バールの抽出容器圧力、および約３５℃〜約９０℃の温度、ならびに約４０バール〜約１５０バールの分離収集容器圧力、および約２０℃〜約５０℃の温度を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
工程ｂ）は、
１）粉砕されたウコン種植物性材料または工程ａ）からの前記第一残渣のいずれかを抽出容器に装入する工程；
２）二酸化炭素を超臨界条件下で添加する工程；
３）該粉砕されたウコン種植物性材料または工程ａ）からの該第一残渣と該二酸化炭素とを、しばらくの間接触させる工程；および
４）前記クルクミノイド分画を、分別分離収集容器に収集する工程；
を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
工程ｂ）の抽出条件は、約３５０バール〜約７００バールの抽出容器圧力、および約６０℃〜約９５℃の温度、ならびに約１２０バール〜約２２０バールの分離収集容器圧力、および約５５℃〜約７５℃の温度を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
工程ｃ）は、
１）工程ｂ）からの前記第二残渣と水溶液とを約８５℃〜約１００℃で、多糖類を抽出するのに十分な時間接触させる工程；
２）固体多糖類を該溶液から、エタノール沈殿によって分離する工程；および
３）カラムクロマトグラフィを用いて多糖類分画を精製する工程；
を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３３】
工程ｄ）は、
１）高分子量分子と低分子量分子との分離のために、工程ｃ）からの前記第三残渣を、樹脂カラムに通過させる工程；および
２）カチオン交換樹脂カラムを用いてより高い分子量の流出溶液を精製して、該流出溶液から前記ターメリン分画を収集する工程；
を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３４】
請求項２６〜３３のいずれかに記載の方法によって調製されたウコン種抽出物。
【請求項３５】
クルクミン、該クルクミンの０．１重量％〜５重量％におけるテトラヒドロクルクミン、該クルクミンの１０重量％〜２０重量％におけるデメトキシクルクミン、および該クルクミンの１重量％〜５重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいる、ウコン種抽出物。
【請求項３６】
クルクミン、該クルクミンの０．１重量％〜５重量％におけるテトラヒドロクルクミン、該クルクミンの１５重量％〜２５重量％におけるデメトキシクルクミン、および該クルクミンの１重量％〜１０重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいる、ウコン種抽出物。
【請求項３７】
クルクミン、該クルクミンの０．１重量％〜５重量％におけるテトラヒドロクルクミン、該クルクミンの２０重量％〜３０重量％におけるデメトキシクルクミン、および該クルクミンの１重量％〜１０重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいる、ウコン種抽出物。
【請求項３８】
クルクミン、該クルクミンの３０重量％〜４０重量％におけるデメトキシクルクミン、および該クルクミンの５重量％〜１５重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいる、ウコン種抽出物。
【請求項３９】
クルクミン、該クルクミンの４５重量％〜５５重量％におけるデメトキシクルクミン、および該クルクミンの４０重量％〜５０重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいる、ウコン種抽出物。
【請求項４０】
クルクミン、該クルクミンの１５重量％〜２５重量％におけるデメトキシクルクミン、および該クルクミンの１重量％〜１０重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいる、ウコン種抽出物。
【請求項４１】
クルクミン、該クルクミンの０．１重量％〜５重量％におけるテトラヒドロクルクミン、該クルクミンの２０重量％〜３０重量％におけるデメトキシクルクミン、および該クルクミンの５重量％〜１５重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいる、ウコン種抽出物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本願は、米国仮特許出願第６０／８７３，４５４号（２００６年３月１７日出願）、米国仮特許出願第６０／８４６，２０５号（２００６年９月２１日出願）、および米国仮特許出願第６０／８７３，４０５号（２００６年１２月７日出願）（これらは、その全体が本明細書中に参考として援用される）に基づく優先権の利益を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、ウコン属、特にｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ（ウコン根）の抽出物、およびこれの使用および調製方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
ウコン根は、南アジア原産のウコン属のショウガ科（Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ）中の植物である薬草ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａの乾燥されて粉砕された根茎である。その本来の生育地に加えて、ウコン根は、中国、カリブ諸島、および南米諸国で非常に多く栽培されている。ウコン根は、スパイスとして通常用いられ、カレーおよびマスタード中の着色剤および香味料として、および化粧品および伝統的な薬物療法の成分として広く利用されてきた。ウコン根の黄色がかったフェノール顔料は、クルクミノイドから構成され、これは、商業的に入手可能なウコン根粉末３〜５％およびカレー粉末０．３４〜０．４７％からなる（１）。これらの自然発生酸化防止剤は、ウコン根にともなう薬理活性の原因であると考えられてきた（２）。しかしながら、ペプチドタンパク質であるターメリン（ｔｕｒｍｅｒｉｎ）もまた、強力な酸化防止特性および細胞保護特性を示し、動物およびヒトにおいて所望の臨床効果の生成において、クルクミンと相乗的に作用する（３）。さらには、ウコン根の揮発性油は、ターメロンおよびほかの有利な生物活性化学成分を含有し（４）、ウコン根多糖類もまた、効力のある免疫強化、抗炎症、および抗癌活性を有することが証明されている（５、６）。
【０００４】
ウコン属の中に多様なウコン種があるが、ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ  Ｌ種は、最大の治療的価値を有することが証明されている（７）。これらの治療的に貴重な化学物源は、「ウコン根」とも呼ばれているウコン植物の根茎（根）である。
【０００５】
有利な治療的価値を示す４つの主要な化学成分分画は、次のとおりである：１．ターメロン、ａｒ−ターメロン、α−ターメロン、β−ターメロン、ツルメロノールＡ、ツルメロノールＢ、クルクメン、α−クルクメン、β−クルクミン、クルクメノール、クルロン、クルジオン、α−ピネン、β−ピネン、シネオール、ユージノール、リモネン、リナロール、テルピネン、テルピネオールなどを含有する精油分画（ＥＯＦ）；２．クルクミン、テトラヒドロクルクミン、デメトキシクルクミン、ビスデメトキシクルクミン、クルクミンの３幾何異性体、およびシクロクルクミンを含有するクルクミノイド分画（ＣＦ）；３．ターメリンと呼ばれるポリペプチドタンパク質を含有するターメリン分画（ＴＦ）；および４．少しの分子だけが精製され、特徴決定されている多数の多糖類分子を含む多糖類分画（ＰＦ）、例えばウコナンＡ、ウコナンＢ、ウコナンＣ、およびウコナンＤ（５、８）。
【０００６】
ウコン種中に見られる４つの主要なクルクミノイドがある：１）クルクミン；２）テトラヒドロクルクミン；３）デメトキシクルクミン；および４）ビスデメトキシクルクミン（９）。４つの比較的少量の方のクルクミノイドも単離されている（１０、１１）。主要なクルクミノイドであるクルクミン、およびいくつかの用途におけるテトラヒドロクルクミンは、生物活性の原因である重要な活性成分であるように思われる。ウコン根種のうち、多量の方のクルクミノイドの濃度は、実質的に様々である：１）クルクミン４０〜７０％；２）デメトキシクルクミン１６〜４０％；および３）ビスデメトキシクルクミン０〜３０％。ウコン根の主な活性は抗炎症性であるが、これはまた、強力な酸化防止、抗アレルギー、細胞保護、傷治癒の改良、抗アルツハイマー病、抗コレステロール（ＬＤＬ）、肝保護、胆汁酸流の向上、抗痙攣、抗菌、抗真菌、および抗新生物（癌）活性、ならびに活力の改良も有すると報告されている。Ｈａｒｖａｒｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｈｏｏｌにおいて実施された最近の研究調査は、クルクミンがおそらく、抗ＨＩＶ活性も同様に有するということを示した。これに加えて、Ｙａｌｅ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙの研究者らは、科学誌のＳｃｉｅｎｃｅにおいて、クルクミンは、遺伝子病である嚢胞性線維症のマウスの死亡数を有意に削減したということを最近公開した。
【０００７】
生物活性クルクミノイドに加えて、ウコン根はまた、強力な酸化防止、細胞保護、および抗新生物性であることが証明されている水溶性５−ｋＤ−ペプチド、すなわちウコン根、強い免疫強化、抗炎症、および抗新生物活性を有することが証明されている多糖類、および酸化防止、抗炎症、抗関節炎、抗痙攣、鎮痛、抗アレルギー、細胞保護、胃保護、肝保護、肺保護、抗喘息、神経系保護、抗アルツハイマー病、抗パーキンソン病、抗癌、抗突然変異活性を有することが証明されている精油も含有する。
【０００８】
表１は、Ｃ．ｌｏｎｇａ  Ｌにおいて見られる生物学的に活性な有利な主要公知化学成分を列挙している。
【０００９】
（表１．Ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ  Ｌの生物学的に活性な化学成分（質量％）＊）
【００１０】
【表１】
2009530305.tif 000002
＊科学文献およびＨｅｒａｌＳｃｉｅｎｃｅ  ＧＣ−ＭＳ（ガスクロマトグラフィ−質量分析法）、およびウコン天然供給原料材料のＨＰＬＣ（高性能液体クロマトグラフィ）分析に基づく。
【００１１】
前臨床および臨床毒性調査は、ウコン根精油、ウコン根クルクミノイド、ターメリン、およびウコン根多糖類が、長期間にわたり非常に大きい用量において安全であることを実証した（２、１２〜１６）。
【００１２】
ウコン根の化学成分の治療的価値を簡単に要約すると、最近の研究および臨床調査は、ウコン種の様々な化学物質、化学分画、および総抽出物の次の治療効果を実証した。これは、次のものを包含する：酸化防止活性（ＥＯＦ、ＣＦ、ＴＦ、抽出物）（４、１７、１８）；抗炎症活性（ＥＯＦ、ＣＦ、ＴＦ、ＰＦ、抽出物）（４、１９、２０）；抗関節炎／抗リウマチ（ＥＯＦ、ＣＦ、ＴＦ、ＰＦ、抽出物）（１９〜２１）；抗血小板凝集／抗血栓症（ＥＯＦ、ＣＦ、抽出物）（２３）；抗高コレステロール血症（ＥＯＦ、ＣＦ、抽出物）（１、２４）：抗心臓血管病（ＥＯＦ、ＣＦ、ＴＦ、抽出物）（１、４、１７、１８、２２、２３〜２５）；抗アレルギー（ＥＯＦ、ＣＦ、抽出物）（４、１９、２０、２１）；抗慢性肺疾患／抗喘息（ＥＯＦ、ＣＦ、ＴＦ、ＰＦ、抽出物）（４、１９、２０、２２、２６）；抗嚢胞性線維症（ＥＯＦ、ＣＦ、ＴＦ、ＰＦ、抽出物）（４、１９、２０、２２、２６、２７）；細胞保護（ＥＯＦ、ＣＦ、ＴＦ、抽出物）（４、１７、１８、２８）；胃保護、肝保護、胆嚢保護（ＥＯＦ、ＣＦ、抽出物）（２９）：神経系保護（ＥＯＦ、ＣＦ、ＴＦ、抽出物）（４、１７、１８、２２、２３〜２５）；抗アルツハイマー病および抗パーキンソン病（ＥＯＦ、ＣＦ、抽出物）（３０）；抗多発性硬化症（ＣＦ、抽出物）（３１）；抗癌および抗突然変異（ＥＯＦ、ＣＦ、ＴＦ、ＰＦ、抽出物）（４、６、１３〜１８、３２、３８）；免疫強化（ＥＯＦ、ＰＦ、抽出物）（５、６、３３）；抗ウイルス、抗ＨＩＶ、抗菌、および抗真菌（ＥＯＦ、ＣＦ、ＰＦ、抽出物）（５、６、３３、３４）；および傷治癒の改良（ＥＯＦ、ＣＦ、抽出物）（３５）。ほかの調査は、ウコン種の生物活性化学成分の相乗的相互作用の極めて大きい重要性を実証した（３６、３７）。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
（発明の要旨）
１つの態様において、本発明は、図９、１０、または１４〜７８のリアルタイム直接分析（ＤＡＲＴ）質量分析法クロマトグラムを有する分画を含んでいるウコン種抽出物に関する。さらなる実施形態において、この分画は、図１４〜３１、３６、３７、４１、５１、５２、または５６のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する。さらなる実施形態において、この分画は、図３５、３８〜４０、５０、または５３〜５５のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する。さらなる実施形態において、この分画は、図９、１０、４２〜４６、または５７〜６１のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する。さらなる実施形態において、この分画は、図３２〜３４、または４７〜４９のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する。さらなる実施形態において、この分画は、図６３〜７８のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する。さらなる実施形態において、この分画は、図４７または６２のＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する。さらなる実施形態において、この抽出物は、図６３〜７８のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する精油分画、および図９、１０、４２〜４６、または５７〜６１のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する多糖類分画を含んでいる。さらなる実施形態において、この抽出物は、図６３〜７８のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する精油分画、図９、１０、４２〜４６、または５７〜６１のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する多糖類分画、および図４７または６２のＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有するターメリン分画を含んでいる。
【００１４】
さらなる実施形態において、本発明のウコン種抽出物はさらに、クルクミノイド、ターメロン、多糖類、および／またはターメリンも含む。さらなる実施形態において、クルクミノイドは、クルクミン、テトラヒドロクルクミン、デメトキシクルクミン、ビスデメトキシクルクミン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される。さらなる実施形態において、クルクミノイドの量は、少なくとも約７５、８０、８５、９０、または９５重量％である。さらなる実施形態において、ターメロンは、α−ターメロン、ａｒ−ターメロン、β−ターメロン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される。さらなる実施形態において、ターメロンの量は、少なくとも５、１０、１５、２０、または２５重量％である。さらなる実施形態において、ターメリンの量は、少なくとも約５、１０、１５、２０、または２５重量％である。さらなる実施形態において、多糖類は、ウコナンＡ、ウコナンＢ、ウコナンＣ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される。さらなる実施形態において、多糖類の量は、少なくとも約５、１０、１５、２０、または２５重量％である。
【００１５】
別の態様において、本発明は、本発明のウコン種抽出物を含んでいる食品または薬剤に関する。
【００１６】
別の態様において、本発明は、関節炎患者を処置する方法であって、本発明のウコン種抽出物の有効量を、これを必要とする患者へ投与することを含む方法に関する。さらなる実施形態において、ウコン種抽出物はさらに、α−および／またはβ−ボスウエリア酸、および／またはそのＣ−酢酸塩の相乗作用量も含んでいる。さらなる実施形態において、患者は、霊長類、ウシ、ヒツジ、ウマ、ブタ、げっ歯類、ネコ、またはイヌである。さらなる実施形態において、患者は、ヒトである。
【００１７】
別の態様において、本発明は、アミロイド斑凝集、または原線維形成に罹患している患者を処置する方法であって、本発明のウコン種抽出物の有効量を、これを必要とする患者へ投与することを含む方法に関する。さらなる実施形態において、患者は、アルツハイマー病に罹患している。さらなる実施形態において、患者は、霊長類、ウシ、ヒツジ、ウマ、ブタ、げっ歯類、ネコ、またはイヌである。さらなる実施形態において、患者はヒトである。
【００１８】
別の態様において、本発明は、アミロイド斑凝集、または組織内の原線維形成を予防する方法であって、この組織と、本発明のウコン種抽出物の有効量とを接触させることを含む方法に関する。
【００１９】
別の態様において、本発明は、少なくとも１つの予め決定された特徴を有するウコン種抽出物を調製する方法であって、ウコン種植物性材料を連続的に抽出して、ａ）超臨界二酸化炭素抽出によってウコン種植物性材料を抽出して、精油分画および第一残渣を生じる工程；ｂ）ウコン種植物性材料または工程ａ）からの第一残渣のいずれかを超臨界二酸化炭素抽出によって抽出して、クルクミノイド分画および第二残渣を生じる工程；ｃ）工程ｂ）からの第二残渣を熱水抽出によって抽出して多糖類溶液を生じ、次いでこの多糖類をエタノールで沈殿させて、多糖類分画および第三残渣を生じる工程；およびｄ）カラムクロマトグラフィによって、工程ｃ）からの第三残渣からターメリン分画を分離する工程によって、精油分画、クルクミノイド分画、多糖類分画、およびターメリン分画を生じることを含む方法に関する。
【００２０】
さらなる実施形態において、工程ａ）は、１）粉砕されたウコン種植物性材料を抽出容器に装入する工程；２）二酸化炭素を超臨界条件下で添加する工程；３）粉砕されたウコン種植物性材料と二酸化炭素とをしばらくの間接触させる工程；および４）精油分画を収集容器に収集する工程を含む。さらなる実施形態において、超臨界条件は、約２５０バール〜約５００バールの圧力、および約３０℃〜約８０℃の温度を含む。さらなる実施形態において、工程ａ）の抽出条件は、約２５０バール〜５００バールの抽出容器圧力、および約３５℃〜約９０℃の温度、および約４０バール〜約１５０バールの分離収集容器圧力、および約２０℃〜約５０℃の温度を含む。
【００２１】
さらなる実施形態において、工程ｂ）は、１）粉砕されたウコン種植物性材料または工程ａ）からの第一残渣のいずれかを抽出容器に装入する工程；２）二酸化炭素を超臨界条件下で添加する工程；３）粉砕されたウコン種植物性材料または工程ａ）からの第一残渣と二酸化炭素とをしばらくの間接触させる工程；および４）クルクミノイド分画を、分別分離収集容器に収集する工程を含む。さらなる実施形態において、工程ｂ）の抽出条件は、約３５０バール〜約７００バールの抽出容器圧力、および約６０℃〜約９５℃の温度、および約１２０バール〜約２２０バールの分離収集容器圧力、および約５５℃〜約７５℃の温度を含む。
【００２２】
さらなる実施形態において、工程ｃ）は、１）工程ｂ）からの第二残渣と水溶液とを約８５℃〜約１００℃で、多糖類を抽出するのに十分な時間接触させる工程；２）固体多糖類を溶液から、エタノール沈殿によって分離する工程；および３）カラムクロマトグラフィを用いて多糖類分画を精製する工程を含む。
【００２３】
さらなる実施形態において、工程ｄ）は、１）高分子量分子と低分子量分子との分離のために、工程ｃ）からの第三残渣を、樹脂カラムに通過させる工程；および２）カチオン交換樹脂カラムを用いて高い方の分子量の流出溶液を精製して、流出溶液からターメリン分画を収集する工程を含む。
【００２４】
別の態様において、本発明は、本発明の方法によって調製されたウコン種抽出物に関する。
【００２５】
別の態様において、本発明は、クルクミン、クルクミンの０．１重量％〜５重量％におけるテトラヒドロクルクミン、クルクミンの１０重量％〜２０重量％におけるデメトキシクルクミン、およびクルクミンの１重量％〜５重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいるウコン種抽出物に関する。
【００２６】
別の態様において、本発明は、クルクミン、クルクミンの０．１重量％〜５重量％におけるテトラヒドロクルクミン、クルクミンの１５重量％〜２５重量％におけるデメトキシクルクミン、およびクルクミンの１重量％〜１０重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいるウコン種抽出物に関する。
【００２７】
別の態様において、本発明は、クルクミン、クルクミンの０．１重量％〜５重量％におけるテトラヒドロクルクミン、クルクミンの２０重量％〜３０重量％におけるデメトキシクルクミン、およびクルクミンの１重量％〜１０重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいるウコン種抽出物に関する。
【００２８】
別の態様において、本発明は、クルクミン、クルクミンの３０重量％〜４０重量％におけるデメトキシクルクミン、およびクルクミンの５重量％〜１５重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいるウコン種抽出物に関する。
【００２９】
別の態様において、本発明は、クルクミン、クルクミンの４５重量％〜５５重量％におけるデメトキシクルクミン、およびクルクミンの４０重量％〜５０重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいるウコン種抽出物に関する。
【００３０】
別の態様において、本発明は、クルクミン、クルクミンの１５重量％〜２５重量％におけるデメトキシクルクミン、およびクルクミンの１重量％〜１０重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいるウコン種抽出物に関する。
【００３１】
別の態様において、本発明は、クルクミン、クルクミンの０．１重量％〜５重量％におけるテトラヒドロクルクミン、クルクミンの２０重量％〜３０重量％におけるデメトキシクルクミン、およびクルクミンの５重量％〜１５重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいるウコン種抽出物に関する。
【００３２】
追加の実施形態は、自生の植物性材料、または現在入手しうるウコン種抽出物製品に見られるものに対する、ウコン種の化学成分の質量パーセントでの改変プロフィール（比）である。例えば精油分画は、クルクミノイドおよび／またはターメリンおよび／または多糖類濃度に対して増加されてもよく、または減少されてもよい。同様に、クルクミノイドおよび／またはターメリンおよび／または多糖類は、特定の生物学的効果のために新規成分化学プロフィール組成を可能にするために、ほかの抽出物成分分画に対して増加されてもよく、または減少されてもよい。
【００３３】
本発明のこれらの実施形態、ほかの実施形態、およびこれらの特色、および特徴は、次の説明、図面、および特許請求の範囲から明らかになるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３４】
（発明の詳細な説明）
本発明は、ウコン種、および関連種、例えば非限定的に、ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ  Ｌの抽出物を中心に扱う。本明細書において用いられているように、ウコンとは、植物Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ科に由来する植物または植物性材料のことを言い、本発明において、この属は、Ｃ．ｌｏｎｇａ  Ｌ、Ｃ．ａｒｏｍａｔｉｃａ  Ｓａｌｉｓｂ．、Ｃ．ａｍａｄａ  Ｒｏｘｂ．、Ｃ．ｚｅｏｄａｒｉａ  Ｒｏｓｃ．、およびＣ．ｘａｎｔｈｏｒｒｈｉｚｉａ  Ｒｏｘｂ．を包含するが、これらに限定されるわけではない。この用語は、ウコンおよび関連種のすべてのクローン、栽培品種、変異型、および変種を包含する。
【００３５】
（定義）
冠詞「１つの（ａ）」および「１つの（ａｎ）」は、本明細書において、この冠詞の文法上の目的語の１つまたは１以上（すなわち少なくとも１つ）のことを言うために用いられている。例として「１つの要素」とは、１つの要素または１以上の要素を意味する。
【００３６】
当業界において公知であるように、「化合物」という用語は、１つの分子を意味するわけではなく、１またはそれ以上の化合物上の多重分子または複数モルの分子を意味する。これに加えて、当業界において公知であるように、「化合物」という用語は、識別可能な化学的および物理的特性を有する化学成分を意味し、一方「複数の化合物」とは、１以上の化学成分化合物のことを言う。
【００３７】
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「含んでいる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、包括的な開かれた意味において用いられ、追加の要素が含まれていてもよいことを意味する。
【００３８】
「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」という用語は、これらの要素を、通常それにともなう不純物以外、特定された要素に限定するために用いられる。
【００３９】
「本質的に〜からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」という用語は、これらの要素を、特定された要素、およびその材料または工程の基本的かつ新規な特徴に実質的に影響を与えない要素に限定するために用いられる。
【００４０】
「ウコン（ｃｕｒｃｕｍａ）」という用語はまた、「ウコン根（ｔｕｒｍｅｒｉｃ）」と互換的にも用いられ、植物Ｚｉｎｇｉｂｅｒａｃｅａｅ科からの植物、クローン、変異型、および変種を包含する。
【００４１】
本明細書において用いられているように、「ウコン成分（ｃｕｒｃｕｍａ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ）」または「ウコン根成分（ｔｕｒｍｅｒｉｃ  ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ）」という用語は、ウコン種中に見られる化合物を意味するものとし、上で同定されたすべてのこのような化合物、ならびにウコン種中に見られるほかの化合物を包含するものとし、これは、ターメロン、クルクミノイド、ターメリン、および多糖類を包含するが、これらに限定されるわけではない。
【００４２】
本明細書において用いられているように、「クルクミン」という用語は、クルクミノイドの１つの構成要素のことを言う。その構造は、図７９に表わされている。
【００４３】
本明細書において用いられているように、「クルクミノイド分画」という用語は、ウコン、およびクルクミノイドとして分類される化合物を包含する関連種から得られるか、またはこれらに由来する水不溶性、エタノール溶解性化合物を含む。クルクミノイドの構成要素は、クルクミン、テトラヒドロクルクミン、デメトキシクルクミン、およびビスデメトキシクルクミンを包含し、図７９に表わされている。
【００４４】
本明細書において用いられているような「有効量」という用語は、所望の生体応答を導き出すのに必要な量のことを言う。当業者によって理解されるように、複合剤または生物活性剤の有効量は、例えば所望の生物学的終点、送達されることになる生物活性剤、カプセル化マトリックスの組成物、標的組織などのファクターに応じて、様々であってもよい。
【００４５】
本明細書において用いられているように、「精油分画」という用語は、ウコン、およびターメロンとして分類される化合物を包含する関連種から得られるか、またはこれらに由来する脂質溶解性、水不溶性化合物を含む。
【００４６】
本明細書において用いられているように、「供給原料」という用語は一般に、葉、枝、根茎、根を含む粗植物性材料のことを言い、これは、主根、尾根、および繊維根、茎、葉、種、および花を包含するが、これらに限定されるわけではなく、この場合、この植物または成分部は、生のままであるか、乾燥されるか、蒸されるか、加熱されるか、あるいはまた植物性材料のサイズおよび一体性に影響を与えるために加工処理された材料を含んでいてもよい。時には「供給原料」という用語は、追加の抽出プロセスのための供給原料源として用いられることになる抽出生成物を特徴決定するために用いられてもよい。
【００４７】
本明細書において用いられているように、「分画」という用語は、ある物理的化学的性質、または物理的性質もしくは化学的性質によって特徴決定された化合物の特定群を含んでいる抽出組成物を意味する。例えば精油分画（ＥＯＦ）は、ターメロンならびにほかの化学成分を含有し、クルクミノイド分画は、クルクミノイドならびにほかのエタノール溶解性化学成分を含有し、ターメリン分画は、ターメリンならびにほかの小さい水溶性タンパク質化学成分を含有し、多糖類分画は、ウコナンＡ、Ｂ、Ｃ、およびＤ、ならびに様々な分子量のほかの多糖類を含有する。ウコンおよび関連種のほかの化学成分もまた、これらの抽出物分画中に存在してもよい。
【００４８】
本明細書において用いられているように、「１またはそれ以上の化合物」という用語は、少なくとも１つの化合物、例えばターメロン（精油ウコン根化学成分）、クルクミン（水不溶性、エタノール不溶性ジフェルロイルメタンウコン根化学成分）、ターメリン（水溶性ペプチドタンパク質）、およびウコナンＡ（水溶性、エタノール不溶性多糖類化学成分）が意図されているか、または１以上の化合物、例えばクルクミンおよびターメリンが意図されていることを意味する。
【００４９】
本明細書において用いられているように、「多糖類分画」という用語は、ウコン、およびウコナンとして分類される化合物を包含する関連種から得られた、水溶性、エタノール不溶性化合物を含む。
【００５０】
本明細書において用いられているように、「プロフィール」という用語は、抽出物分画中の化合物の質量パーセント比、または最終ウコン抽出物における４つのウコン分画化学成分の各々のパーセント質量の比のことを言う。
【００５１】
本明細書において用いられているように、「精製された」分画または抽出物という用語は、乾燥質量％でこの分画または抽出物の化学成分の７０％超へ濃縮された、あるいつくかの物理的性質もしくは化学的性質を特徴とする、特定群の化学成分を含んでいる１つの分画または組成物を意味する。換言すれば、精製分画または抽出物は、あるいくつかの所望の物理化学的性質、またはこの分画または抽出物を規定する物理的性質もしくは化学的性質を特徴としない、３０％未満の乾燥質量の化学成分を含んでいる。
【００５２】
本明細書において用いられているように、「根茎」という用語は、一部または全体が地下にあり、さらには上にあるシュート、または非限定的に主根、二次根、および三次根を包含する、下にある根も含んでいる、水平または垂直根の茎または修正茎（例えば塊茎）を含むウコンおよび関連種の構成部分のことを言う。
【００５３】
「相乗作用の」という用語は、当業界で認知されており、一緒に作用し、したがって全体の効果が、これらの構成要素の合計よりも大きい、２またはそれ以上の成分のことを言う。
【００５４】
「処置」という用語は、当業界で認知されており、なんらかの状態または障害の少なくとも１つの症状を治癒すること、ならびに改善することを言う。
【００５５】
本明細書において用いられているように、「ターメリン分画」という用語は、ウコン、およびペプチドであるターメリンとして分類される化合物を包含する関連種から得られるか、またはこれらに由来する水溶性およびエタノール溶解性の化合物を含む。
【００５６】
（抽出物）
（精油分画）
本発明の抽出物は、本明細書において教示されている１またはそれ以上のウコン種の組み合わせを含んでいる。抽出物の１つの実施形態は、表２のＧＣ−ＭＳによって示されているような構成要素を有する精油分画を含む。
【００５７】
ウコン根精油分画は、単一段階加工処理による超臨界二酸化炭素抽出技術によって抽出された。最適な抽出条件は、４０〜６０℃の温度、および１００〜３００バールの圧力であり、約３．５％の収率をともなう。ウコン根中の主な精油化合物は、セスキテルペノイド、例えばＡｒ−ターメロン、ターメロン、およびクルロン、およびセスキテルペン、例えばクルクメンおよびジンジベレンである。ＳＣＣＯ２単一段階抽出によって得られた精油は、４０〜６０℃の温度および３００バールの圧力で抽出された時、９９％の高純度を有する。ターメロンおよびクルロンが主な化合物であり、総精油の７５〜８１％を構成する。セスキテルペンは、精油の５．６〜９．７％を構成し、この中で、クルクメンおよびジンジベレンが、相対的に主なものである。前記化合物は、総ウコン根精油の８５〜８９％を構成する。
【００５８】
これに加えて、クルクミノイド純度は、あるいくつかの条件、例えばＴ＝４０℃および６０℃、および圧力１００〜５００バールにおけるＳＣＣＯ２抽出の単一段階において２．５％以下である。これらの条件は、ウコン根から高純度精油を抽出するために選択することができる。
【００５９】
（表２．ウコン精油において同定された主な化合物）
【００６０】
【表２】
2009530305.tif 000003
これらの化合物は、本明細書において教示されているようなＧＣ−ＭＳ分析方法を用いて、約３０．３６（−クルクメン）、３０．７４（（−）−ジンジベレン）、３１．６８（−セスキフェランドレン）、３３．４５（ベンゼン、１−メチル−４−（１−メチルエチル）−）、３４．２０（ベンゼン、１−メチル−２−（１−メチルエチル）−）、３４．９０（ベンゼン、４−エチル−１，２−ジメチル−）、３５．２１（シクロヘキセン、１−（１−プロピニル）−）、３５．９６（ａｒ−ターメロン）、３６．４３（β−ターメロン）、３７．００（化合物Ｕ１）、３７．３６（α−ターメロン）、３８．３２（（６Ｓ，１’Ｒ）−６−（１’５’−ジメチレンキセ−４’−エニル）−３−メチルシクロヘクス−２−エノン）、３８．５７（化合物Ｕ２）、３８．７３（（＋）−β−アトラントン））、３８．８４（化合物Ｕ３）、３８．９４（化合物Ｕ４）、３９．２４（化合物Ｕ５）、３９．４１（（＋）−α−アトラントン）、３９．６４（化合物Ｕ６）、３９．７６（３−ブテン−２−オン、４−（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）−）、４０．０３（化合物Ｕ７）、４０．７３（化合物Ｕ８）、４１．０２（化合物Ｕ９）、４１．４３（ヘキスデカン酸、メチルエステル）、４２．０５（ペンタデカン酸、１４−メチル−、メチルエステル）、および４２．８９（９，１２−オクタデカジエン酸、メチルエステル、（Ｅ，Ｅ）−）分の保持時間ピークを有する。
【００６１】
（クルクミノイド分画）
ウコン根クルクミノイド分画が、共溶媒としてエタノールを用いた超臨界抽出／分別技術によって抽出され、精製された。クルクミノイド抽出収率は、共溶媒として１．２〜３．７％のエタノールを添加して、０．７４〜２．１０％の範囲内にあった。純粋ＣＯ２を用いることによるクルクミノイド抽出収率は、０．２７％の高さに過ぎなかった。したがって、クルクミノイド抽出収率を増加させるために、共溶媒としてエタノールを用いることが必要である。供給原料中の７０％のクルクミノイドが、共溶媒として３．７％エタノールを添加することによって抽出された。エタノール濃度が高くなれば高くなるほど、抽出収率は高くなる。しかしながら、クルクミノイドについてのＳＣＣＯ２の選択率を最大限にするために、エタノール濃度をさらに増加することは良いことではない。
【００６２】
抽出条件は、８０℃以上の温度、５００バール以上の圧力であった。３つの分離器条件は、それぞれ６０〜６７℃／１５０〜１７０バール、５６℃／１３０バール、および２８．６℃／６０バールであった。標的クルクミノイドは、第一分離器において沈殿される。これに加えて、異なる操作方法がテストされた。例えばＡ：全加工処理の間、３つの分離器の連続的な使用；Ｂ：第三分離器を用いるだけの穏やかな条件において精油を除去するための第一段階、および３つの分離器を連続的に用いることによるクルクミノイドの抽出および分別のための第二段階を用いる２段階プロセス；およびＣ：第二および第三分離器を用いることによる、苛酷な条件において精油を除去するための第一段階、および第一および第三分離器を用いることによるクルクミノイドの抽出および分別のための第二段階を用いる２段階プロセス。要約されたクルクミノイド純度データは、表３に示されている：
（表３．ＳＣＣＯ２抽出／分別プロセスによるクルクミノイドの純度）
【００６３】
【表３】
2009530305.tif 000004
全クルクミノイドの純度は、次のように異なるレベルへ増加させることができる：操作方法に応じて、５５％超、６０％〜７０％、７０％〜８０％、および８０％超。より高い純度は、精油を除去するための第一段階、およびＣＯ２およびエタノール共溶媒を用いてクルクミノイドを抽出するための第二段階の２段階加工処理を用いることによって得られた（方法Ｃ）。要約されたクルクミノイドプロフィールが、表４に示されている。
【００６４】
（表４．ＳＣＣＯ２抽出／分別プロセスによるクルクミノイドのプロフィール）
【００６５】
【表４】
2009530305.tif 000005
註：１．プロフィール（％）＝（各クルクミノイドの純度）／（クルクミノイドの総純度）×１００によって計算された；２．平均：これは算術平均であり、一群の数を加え、次いでこれらの数の総数で割ることによって計算される；３．標準偏差：標準偏差は、平均値（平均）から、値がどれほど広く分散されているかの測定値である。標準偏差は、次の式によって計算された：
【００６６】
【数１】
2009530305.tif 000006
クルクミノイドのプロフィールは、操作条件に大幅によるのであって、操作方法によるのではない。それは、同じ条件においてであるが、異なる操作方法で得られたクルクミノイドのプロフィールは非常に近く、標準偏差が１％以下であるからである。
【００６７】
供給原料中のクルクミノイドのプロフィールは、６６％クルクミン、１４％デメトキシクルクミン、および２０％ビスデメトキシクルクミンであり、これは、枯渇的エタノールもしくはメタノール抽出のいずれかによって得られた。ＳＣＣＯ２加工処理を用いることによって、クルクミン（Ｃ）、ＤＭＣ、およびＢＤＭＣのプロフィールは、それぞれ６１．８３％〜８２．３６％、１１．１０％〜１５．９５％、および６．５４％〜２３．８６％へ変えることができる。個々のクルクミノイドの相対的存在度におけるこれらの変更または調整は、従来の抽出方法を用いては得ることができない。
【００６８】
（多糖類分画）
ウコン根多糖類および糖−タンパク質は、沈殿のために様々な濃度のエタノールを用いて得られた。これらの結果は、表５に示されている。
【００６９】
（表５．対照標準としてデキストランを用いることによる、ウコン根水浸出収率および多糖類純度分析結果）
【００７０】
【表５】
2009530305.tif 000007
註：Ｆ２０は、ある濃度の溶液を得るために水中に溶解することができないので、分析することができない。
【００７１】
表５のデータから、エタノール沈殿多糖類の収率は、もとのウコン根供給原料を基準にして、２．７７〜１０．２８質量％の範囲内にあったことが分かる。収率は、エタノール濃度の増加によって高められた。
【００７２】
異なる沈殿物の分子量分析から、Ｆ４０およびＦ６０は同様であり；Ｆ８０およびＦ９５は同様であり、Ｆ２０は、これらのすべてと異なることが分かる。同様に、ウコン根多糖類および糖タンパク質は、ある比において異なる分子量の多糖類および糖タンパク質からなっていることも発見された。Ｆ４０およびＦ６０多糖類において、最高分子量化合物群は、２，３００〜２，４００ＫＤａであり、４６〜４８質量％を構成し、平均分子量は、約１，１００〜１，２００ＫＤａであった。Ｆ８０およびＦ９５多糖類−糖タンパク質沈殿物において、最高分子量成分もまた、２，３００〜２，４００ＫＤａであったが、約３０〜３５質量％を構成するだけであった。平均分子量は、７８０〜８９０ＫＤａであった。
【００７３】
（ウコン根分画）
ウコン根タンパク質分画が、６０％エタノール沈殿物の上清を加工処理するために、Ｄｏｗｅｘ５０−ＷＸ２−２００強酸−カチオン交換樹脂（交換基として−ＳＯ３Ｈ基）を用いて精製された。これらの結果が、表６に示されている。
【００７４】
（表６．各工程におけるタンパク質歩留まりおよびＢｒａｄｆｏｒｄ分析結果）
【００７５】
【表６】
2009530305.tif 000008
１９０〜３００ｎｍの波長におけるＵＶ分光光度計走査が、溶液が最大吸収を有する波長をテストするために用いられる。Ｄｏｗｅｘ流出液および溶離液の両方が、２０２ｎｍの波長において最大吸収を有し、負荷溶液は、２１０ｎｍの波長において最大吸収を有する。これに加えて、Ｄｏｗｅｘ流出液は、最高吸収強度を有する。このことは、Ｄｏｗｅｘ流出液中に、より高い濃度のポリペプチドタンパク質があることを意味する。表６の結果はまた、Ｄｏｗｅｘ流出液が、０．３０ｇ  ＢＳＡ当量／ｇ抽出物を有し、これは、Ｄｏｗｅｘ供給原料溶液中のものよりも２．３倍も高いことも示している。
【００７６】
一般に、本発明の方法および抽出は、予め決定された特徴を有するウコン種抽出物の製造方法を含む。このようなウコン種抽出物は、ある一定の生成物に望まれる有利な１または複数の生物効果に応じて、４つの濃縮抽出物分画のいずれか１つ、２つ、３つ、または４つすべてを含んでいてもよい。典型的には、４つすべてのウコン種抽出物分画を含有する抽出物は、自生の植物性材料中に見られる生物学的に有利な主要な化学成分の４つすべてを含有する、高度に精製され、標準化された第一ウコン種抽出生成物を代表するので一般に望ましい。本発明の実施形態は、予め決定された特徴が、別々の抽出分画中に、ウコン種精油、クルクミノイド、ターメリン、および多糖類の選択的に増加された予め決定された濃度を含む方法を含む。
【００７７】
本発明の方法から結果として生じた抽出物は、抽出されたウコン種植物性材料、またはウコン種抽出物、または両方の組み合わせもしくは混合物を含む。抽出物は、予め決定された特徴を有する抽出されたウコン種植物性材料、または予め決定された特徴を有する抽出されたウコン種もしくはウコン種抽出物を含む。
【００７８】
このような抽出物のさらなる実施形態は、天然ウコン種乾燥植物性材料、または従来のウコン種抽出生成物中に見られるものに対して実質的に増加した、予め決定された多糖類濃度を含んでいる。例えば、１つの抽出物は、１０〜９２質量％の水溶性、エタノール不溶性多糖類分画を含んでいてもよい。
【００７９】
このような抽出物の別の実施形態は、天然のウコン種植物性材料、または従来のウコン種抽出物製品中に見られるものに対して実質的に増加した、予め決定されたウコン根分画濃度を含む。例えば１つの抽出物は、０．２〜６．６質量％超のウコン根分画を含んでいてもよい。
【００８０】
（抽出物の純度）
下に記載された抽出方法の実施において、ウコン種のもとの乾燥された根茎供給原料において３つのターメロン（ａｒ−ターメロン、α−ターメロン、およびターメロン）の７０％超の純度を有するウコン種精油の６０質量％超を、ＳＣＣＯ２精製抽出物分画において抽出することができることが発見された（工程１）。
【００８１】
工程１（ＳＣＣＯ２抽出および分別）において教示されているような方法を用いて、高度に精製されたクルクミノイド分画を抽出することができる。この抽出工程からの収率は、天然ウコン種供給原料中に存在するクルクミノイドの約２２％である。抽出されたクルクミノイド抽出物の純度（濃度）は、乾燥質量で８０％超であり、３つの主要なクルクミノイドは、有利にはプロフィールされており（改変された比）、この場合、クルクミンは、総クルクミノイドの質量％で、８０％超のクルクミノイドである。工程２（エタノール浸出抽出）において、工程１のＳＣＣＯ２抽出および分別残渣中に残留するクルクミノイド（７８％）の８０％超を抽出することができる。エタノール抽出されたクルクミノイド分画の工程３のＳＣＣＯ２精製および分別の結果として、この組成物中のクルクミノイド化学成分の＞７０質量％クルクミンを有する、高度に精製された（抽出組成物の＞８５質量％クルクミノイド）を生じる。これらのクルクミノイドの工程４のＳＣＣＯ２精製およびプロファイリングは、工程３のクルクミノイド抽出分画を、クルクミノイド分画組成物であって、クルクミノイドの濃度が９０質量％超であり、クルクミン濃度がクルクミノイド化学成分の７５質量％超であるクルクミノイドプロフィールをともなう組成物へ、さらに精製することができる。事実、クルクミノイドの工程４のＳＣＣＯ２精製およびプロファイリングは、クルクミノイド分画組成物中のクルクミノイド濃度が９５％超であり、クルクミンの濃度がクルクミノイド化学成分の８５質量％超であるクルクミノイド分布がプロフィールされる、高度に濃縮されたクルクミノイド抽出生成物を精製することができる。したがって、この発明において教示されているようなＳＣＣＯ２抽出および分別プロセスは、クルクミノイド化学成分分画組成物を含んでいる個々のクルクミノイドの比（プロフィール）が、特定の医療目的のために、独特のクルクミノイド分画組成プロフィールを作り出すことができるように改変されることを可能にする。
【００８２】
この発明の工程５および６において教示されているような方法を用いて、水溶性、エタノール不溶性抽出分画（多糖類分画組成物）が、ウコン多糖類の９０％超の純度（濃度）を有するもとのウコン種供給原料から、４．５％収率で得られる。このことはさらに、天然のウコン種供給原料中に見られるウコン種多糖類化学成分の７０％収率に等しい。
【００８３】
この発明の工程５、６、および７において教示されているような方法を用いて、もとのウコン種供給原料から、乾燥質量重量％で２．０％のターメリン分画収率が得られる。このターメリン分画中のペプチド、すなわち大部分ターメリンの濃度は、約６．６乾燥質量％であり、これは、自生のウコン種供給原料を基準にして、ペプチドの純度において質量％で６６倍の増加である。これは、Ｂｒａｄｆｏｒｄタンパク質分析を用いて、自生のウコン種植物性材料中に見られるターメリンペプチド化学成分の９０質量％超の収率に等しい。
【００８４】
最後に、本発明において教示されている方法は、精油分画組成物、クルクミノイド分画組成物、多糖類分画組成物、およびターメリン分画組成物の精製（濃度）が、精油分画組成物中の７０％〜９０％もの高さの所望の化学成分、クルクミノイド分画組成物中の９７％もの高さのクルクミノイド、多糖類分画組成物中の９２％もの高さの多糖類、およびターメリン分画組成物中の６．６％もの高さのターメリンペプチドになることを可能にする。用いられる特定の抽出環境、抽出率、溶媒、および抽出テクノロジーは、源材料の出発化学成分プロフィール、および最終抽出生成物において望まれる精製レベルに応じる。本明細書において教示されている特定の方法は、特定の属性を有する産出材料へ加工処理される、出発原料の属性におけるサンプル変動を明らかにするためにプロセスを調節するのに典型的な日常的な実験しか用いずに、当業者によって容易に決定されうる。例えばウコン種植物性材料の特別なロットにおいて、精油、クルクミノイド、多糖類、およびペプチドタンパク質の当初濃度は、本明細書において教示されている、当業者に公知の方法を用いて決定される。当業者は、最終ウコン種組成物製品中の所望濃度に達するために、本明細書において開示されている抽出方法を用いて、クルクミノイドの当初濃度から、例えば最終抽出製品についてのクルクミノイドの予め決定された量への変化量を決定することができる。
【００８５】
（天然ウコンに対する抽出）
本発明の１つの実施形態は、予め決定された精油濃度を含む。この場合、この予め決定された精油濃度は、天然ウコン種植物性材料、または本明細書において教示された抽出技術の結果生じうる従来のウコン種抽出生成物中に存在するものよりも大きい精油の濃度である。例えば１つの組成物は、５〜９９質量％超のウコン種精油化学成分を含みうる。本発明の別の実施形態は、抽出されたウコン種抽出物中の予め決定されたクルクミノイド濃度を含む。この場合、このクルクミノイド濃度は、自生の植物性材料または従来のウコン種抽出物中に見られるものよりも高い。例えば１つの抽出物は、ウコン種クルクミノイドを３５〜９７質量％の濃度で含んでいてもよい。このようなクルクミノイド抽出物の実施形態は、予め決定された好ましい精製クルクミノイド分布プロフィールであって、予め決定されたクルクミン濃度が、天然のウコン種植物性材料、または本明細書において教示された抽出技術の結果生じうる従来のウコン種クルクミノイド抽出生成物中に存在するものよりも大きいプロフィールを含む。例えば、精製クルクミノイド分画は、クルクミンが、これらのクルクミノイドの７５〜９０質量％の濃度にあり、デメトキシクルクミンおよびビスデメトキシクルクミンの濃度の対応減少をともなうクルクミノイドプロフィールを含みうる。
【００８６】
実施形態はまた、精油化学成分、クルクミノイド、ターメリン分画、または多糖類を含むこれらの分画の１またはそれ以上が、自生のウコン植物性材料中に見られるものよりも低い濃度で発見される抽出物も含む。例えば本発明の抽出物は、精油分画の濃度が、自生のウコン種植物性材料の濃度の０．００１〜２２倍である分画、および／またはクルクミノイドの濃度が、自生のウコン種植物性材料の濃度の０．００１〜２５倍である抽出物、および／またはターメリン分画の濃度が、自生のウコン種植物性材料の濃度の０．００１〜６６倍である組成物、および／または多糖類の濃度が自生のウコン種植物性材料の濃度の０．０１〜１６倍である抽出物を含む。組み合わせ抽出物の製造において、約０．００１ｍｇ〜約１００ｍｇの精油分画を用いることができ；約０．００１ｍｇ〜約１，０００ｍｇのクルクミノイド分画を用いることができ；０．００１ｍｇ〜約１００ｍｇのターメリン分画を用いることができ；約０．００１ｍｇ〜約１，０００ｍｇの多糖類分画を用いることができる。
【００８７】
このような抽出物の１つの実施形態は、抽出され、精製され、および／またはプロフィールされた化学成分分画の予め決定された濃度であって、ウコン種精油／クルクミノイド、精油／ターメリン、精油／多糖類、クルクミノイド／ターメリン、クルクミノイド／多糖類、およびターメリン／多糖類濃度（乾燥重量％）プロフィール（比）が、天然乾燥植物性材料または従来のウコン種抽出生成物中に見られるものよりも高いか、または低い濃度を含む。ウコン種の有利な化学成分の濃度関係（化学プロフィール）の改変は、特定のヒトの状態または病気のために設計された、独特のまたは新規なウコン種抽出生成物の配合を可能にする。例えば、抗炎症活性および関節炎療法のための新規かつ強力なウコン種抽出物は、より多量の精製精油、（好ましくはクルクミンの濃度が、これらのクルクミノイドの８０質量％超である改変クルクミノイドプロフィールを有する）クルクミノイド、およびターメリン組成物、およびウコン種自生植物性材料または従来の公知抽出生成物中に見られるものよりも減少した質量％の多糖類組成物を有しうるであろう。対照的に、免疫強化のための新規ウコン抽出物は、ウコン自生植物性材料または従来の公知抽出生成物中に見られるものよりも、質量％でより多量の精製多糖類分画および減少されたクルクミノイド分画およびターメリン分画を有しうるであろう。アルツハイマー病についての新規ウコン抽出プロフィールの別の例は、自生ウコン種自生植物性材料または公知の従来のウコン抽出生成物中に見られるものよりも多量の精製精油およびクルクミノイド組成物、および減少した精製ターメリンおよび多糖類分画を有する抽出プロフィールであってもよいであろう。
【００８８】
（抽出方法）
抽出の出発原料は、ウコン種からの植物性材料である。Ｃ．ｌｏｎｇａ  Ｌが、好ましい出発原料である。この材料は、植物の気中部分であり、これは、葉、茎、またはほかの植物部分を含む。ただし、根茎（根）が好ましい出発原料である。ウコン種植物性材料は、この材料を、抽出のために有用な形態にするために、前抽出工程を受けてもよい。このような前抽出工程は、この材料が切り刻まれるか、細かく刻まれるか、細長い薄片にされるか、粉砕されるか、微粉砕されるか、切断されるか、またはちぎられ、出発原料が、前抽出工程に先立って、乾燥されるか、または新鮮な植物性材料である工程を含むが、これに限定されるわけではない。好ましい前抽出工程は、ウコン種根茎材料を、細かい粉末に粉砕および／または微粉砕することを含む。出発原料、または前抽出工程後の材料は、乾燥されてもよく、または湿分がそれに添加されてもよい。
【００８９】
（ウコンの超臨界流体抽出）
一般に、本発明の方法は部分的に、ウコン種植物性材料が、新規分別超臨界流体二酸化炭素（ＳＣＣＯ２またはＳＦＥ）抽出、次いで１またはそれ以上の溶媒抽出工程、例えば非限定的に水、水アルコール抽出、吸着性樹脂吸着、および追加の新規分別ＳＣＣＯ２抽出プロセスを用いて抽出される方法を含む。本発明のために考察された追加方法は、ほかの有機溶媒、冷媒化学物質、圧縮性ガス、音波処理、圧力液体抽出、プロセス液体クロマトグラフィ、高速向流クロマトグラフィ、ポリマー吸着剤、分子インプリントポリマー、およびほかの公知抽出方法を用いたウコン植物性材料の抽出を含む。このような技術は、当業者に公知である。
【００９０】
本発明は、ＳＣＣＯ２を用いてウコン根植物性材料から含油樹脂を抽出するための方法を含む。本発明は、含油樹脂抽出物の、例えば高純度での精油およびクルクミノイド化学成分への分別を包含する。さらに本発明は、抽出分画中の個々の化学成分が、これらの化学成分比または改変されたプロフィールを有しうるＳＣＣＯ２プロセスを含む。例えばクルクミノイドのＳＣＣＯ２分別分離は、クルクミノイド抽出物分画が、精製クルクミノイド抽出物分画中に存在するクルクミノイドの８０％超のクルクミンの濃度で生成されうるように、ほかのクルクミノイドに対するクルクミンの選択的抽出を可能にする。
【００９１】
ＳＣＣＯ２を用いた植物含油樹脂の「分別抽出」および「分別分離」（米国特許第５，１２０，５５８号参照）は、比較的穏やかな条件下（５０℃またはそれ以下の温度、３００バールまたはそれ以下の圧力）、ウコン精油化学成分の選択的抽出を可能にする。その後、その場合は、一般にＳＣＣＯ２流体中への溶解性がより低いクルクミノイド化学成分を得るために、より厳しい条件下（温度＞５０℃、圧力＞３００バール）、ウコン供給原料材料を再抽出することが可能である。その結果、２つの高度に精製された分画が得られる。すなわち軽質分画（精油分画）および重質分画（クルクミノイド分画）である。高温および高圧における抽出物分画の追加の分別は、抽出物／流体ストリームを一連の３つの分離器を通過させることによって同時に行なわれる。各分離容器中の圧力および温度条件は、個別の該化学成分、例えば非限定的にクルクミンを沈殿させるように正確に選択される。
【００９２】
超臨界流体抽出および分別系は、ＳＣＣＯ２を用いた、植物源からの医薬品の生産のために設計された材料加工処理系である。この系は、適切な前加工処理された天然の植物供給原料材料が、加工処理容器中に装入され、加圧ＣＯ２ストリームへ暴露されて、選択された化学成分を除去し、その後、主ＣＯ２ストリームから所望の化学成分を選択的に分離する化学プロセス設備（分離器）を通過することを可能にする機能を備えている。
【００９３】
このＳＣＣＯ２系は、２つの主抽出容器、３つの分離容器、電気熱交換器、流体冷却された凝縮器、ＣＯ２アキュミュレーター、質量流量計、ＣＯ２ポンプ、付加ポンプ、および冷却装置から構成される。主要な抽出容器は、２４Ｌであり、１７−４ＰＨステンレス鋼から製造され、７００バール（１１，０００ｐｓｉ）へ圧力定格されている。これらの分離容器は、２０Ｌであり、３１６ステンレス鋼で製造され、２００バール（３，０００ｐｓｉ）へ圧力定格されている。各抽出器および分離器には、迅速に作用する閉鎖系が備えられ、これは、抽出系の短い装入および取り出し時間を可能にする。
【００９４】
すべての耐圧部品は、安全バルブによって、圧力に対して保護されている。様々なインターロックが、操作故障を防ぐためにこの系中に組み込まれている。機器またはエネルギー源の故障の場合、すべての空気作動バルブは、フェイルセーフモードになるであろう。付加ポンプが用いられ、共溶媒、例えばエタノールをＣＯ２中へ、０．５Ｌ／分の流量で添加する。ポンプが空洞を作るのを防ぐために、液体ＣＯ２は、ＣＯ２貯蔵容器から冷却器を通ってＣＯ２ポンプへ流れる。ＣＯ２は、ＣＯ２ポンプを用いて所望の抽出圧力へ圧縮され、ヒーターで抽出温度へ加熱される。この系は、２つのＮａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｃｏｍｐａｃｔ  Ｆｉｅｌｄｐｏｉｎｔ  Ｐｒｏｃｅｓｓｏｒｓ（ＣＦＰ−２０２０およびＣＦＰ−２００）を用いて、厳格に制御される。Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｌａｂｖｉｅｗ  ＲＴ（リアルタイム）が、カスタムソフトウエアアプリケーションを用いて、これらのプロセッサで運転される。このＣＰＦは、Ｅｔｈｅｒｎｅｔ（登録商標）を介してオペレータのインターフェースコンピュータへ接続される。
【００９５】
要約すれば、このプロセスは、ＣＯ２貯蔵容器から冷却器を通ってＣＯ２ポンプへ流れる液化ＣＯ２を含む。次いでＣＯ２は、所望の抽出圧力へ圧縮され、所望温度へ加熱される。抽出容器は、前処理された植物供給原料材料の複数のバスケットで満たされ、交互に、または連続して操作される。この系の操作の間、一方の抽出容器はＣＯ２回路にあり、一方、他方の容器は減圧されてもよく、供給原料が交換され、この抽出容器は再加圧されてもよいであろう。この後者の操作モードは、半連続固体材料流を生じる。分離は、３つの厳格に制御された工程において、高圧、中圧、および低圧で、各分離器のために適切な温度調節をともなって実施される。分離器を通過した後のＣＯ２は、今や抽出物を含まず、凝縮器へ流れ、ここでこれは液化される。液体ＣＯ２は次いで、再循環のためにＣＯ２貯蔵容器に流れ込む。
【００９６】
本発明において教示されたＳＣＣＯ２でのウコン種の含油樹脂の抽出は、有機溶媒の使用を排除し、これらの抽出物の同時分別を与える。二酸化炭素は天然の安全な生物学的物質であり、多くの食品および飲料中の一成分である。これは、資本集約的であり、離散バッチモードで操作され、溶媒抽出方法と比較して費用効率が高くない従来のＳＣＣＯ２とは異なる。本発明において、ＳＣＣＯ２分別抽出および分離系は、これらの制限を克服する。
【００９７】
ウコン種の生物活性化学成分の抽出方法の概略図が、図１〜７に図解されている。抽出方法は典型的には７工程であるが、これに限定されるわけではない。本文において参考のため、記号＃がカッコ内［＃ｘ］において現われる時、続く数字は、図１〜７の数字のことである。抽出方法において用いられている分析方法は、例示セクションにおいて提示されている。
【００９８】
（工程１．精油抽出プロセス）
ウコン種精油の疎水性によって、非限定的に超臨界流体抽出物（ＳＦＥ）、例えばＳＣＣＯ２、ヘキサン、石油エーテル、および酢酸エチルを含む非極性溶媒、ならびに蒸気蒸留が、この抽出プロセスのために用いられてもよい。
【００９９】
このプロセス方法は、精油の精製（濃縮）（図１ａ）、または所望であれば、精油を精製しつつ、同時にクルクミノイドを精製し、クルクミノイド化学群中の個々のクルクミノイド化合物の比を改変するための単一抽出工程を含んでいる（図１ｂ）。
【０１００】
自生のウコン種供給原料からの精油分画の超臨界流体抽出（ＳＦＥ）分別抽出の一般的説明が、図示されている（図１−工程１）。供給原料［＃１０］は、乾燥され、粉砕されたウコン種根茎供給原料（８〜２０メッシュ）である。この供給原料は、ＳＦＥ抽出容器の中に入れられたバスケット中に装入される［＃２０または＃５０］。溶媒［＃２１０または＃２２０］は、純粋な二酸化炭素（ＣＯ２）である。９５％エタノールが、共溶媒として用いられてもよい［＃２２０］。パージおよび浸出テストの後、このプロセスは、貯蔵容器から冷却器を通ってＣＯ２ポンプへ流れる液化ＣＯ２を含んでいる。このＣＯ２は、所望の圧力へ圧縮され、次いで供給原料を通って抽出容器に流れ込み、ここでは、圧力および温度が、所望レベルに維持されている。抽出のための圧力は、約１００バール〜８００バール、約２００バール〜約６００バール、約３００バール〜約４００バールの範囲にあり、温度は、約３０℃〜約１００℃、約４０℃〜約９０℃、約６０℃〜約８０℃の範囲にある。本明細書において教示されたＳＣＣＯ２抽出は好ましくは、少なくとも１００バールの圧力、および少なくとも３０℃の温度、より好ましくは約３００〜約６００バールの圧力、および約５０℃〜９０℃の温度で実施される。抽出時間は、約３０分〜約２．５時間、約１時間〜約２時間、約１．５時間までの範囲にある。溶媒対供給原料比は、ＳＣＣＯ２抽出物の各々について典型的には５０対１である。ＣＯ２は再循環される。抽出され、精製された精油、および抽出され、精製され、プロフィールされた１または複数のクルクミノイド分画が次いで、収集器または分離容器［＃３０および＃４０、または＃６０、＃３００、および＃８０］に収集され、取り置かれ、暗室に４℃で貯蔵される。ウコン種粉砕根茎供給原料材料［＃１０］は、１工程プロセスにおいて抽出されてもよく、この場合、結果として生じた抽出されたウコン精油分画は、１つの収集器ＳＦＥまたはＳＣＣＯ２［＃２０］系に収集される（上の工程１）。あるいはまた、分別ＳＦＥ系［＃５０］においてのように、ＳＣＣＯ２抽出されたウコン種供給原料材料は、収集容器（分離器）［＃６０、＃３００、＃８０］中に分けられてもよく、したがって収集（分離）容器の１つの中に、精製された精油分画［＃６０］があり、第二収集容器の中に、精製され、プロフィールされたクルクミノイド分画［＃３００］があり、第三収集容器の中に、抽出されたウコン種根茎材料の残渣または残りの部分［＃８０］がある。本発明の１つの実施形態は、３００〜６００バールにおいて、および５０℃〜９０℃の温度において、分別ＳＣＣＯ２抽出を用いてウコン種天然根茎材料を抽出すること、および予め決定された条件（圧力、温度、および密度）および予め決定された間隔（時間）において、様々な収集容器に、抽出されたウコン種材料を収集することを含む。
【０１０１】
その結果生じた抽出ウコン種精製精油分画は、回収することができ、独立して使用することができるか、または組み合わせて１またはそれ以上の抽出ウコン種抽出物を形成しうる。ＳＣＣＯ２抽出精油分画の１つの態様は、自生の植物性材料または従来のウコン種抽出生成物中に見られるものよりも高い、予め決定された精油化学成分濃度を含む。典型的には、精油化学成分の総収率は、９５％超であり、精油抽出分画中の精油化学成分の純度は、９９質量％超である。純度、および精油分画中の化学成分は、ガスクロマトグラフィ−質量分析（ＧＣ−ＭＳ）分析法を用いて測定されてもよい。このような抽出からの分析結果は、表７および８に示されている。このような抽出の実験例は、下に見られる。その結果生じた抽出ウコン種の精製およびプロフィールされたクルクミノイド分画は、独立して回収することができ、独立して使用することができるか、または組み合わせて１またはそれ以上の抽出ウコン種抽出物を形成しうる。
【０１０２】
ＳＣＣＯ２抽出クルクミノイド分画の１つの態様は、ウコンが、自生の植物性材料または従来のウコン抽出生成物中に見られるものよりも高いクルクミノイド濃度と組み合わされた、予め決定されたクルクミノイド化学成分濃度を含む。典型的には、ウコン種供給原料からのクルクミノイド分画の総収率は、これらのクルクミノイドの約２２質量％であり、８０％超のクルクミノイド分画純度、およびこれらのクルクミノイドの８０質量％超ウコンのクルクミノイド分画のプロフィールされた化学成分を有する。純度およびクルクミノイド分布は、ＨＰＬＣ分析を用いて測定される。実施例、ならびにこのような抽出プロセスの結果は、実施例１、および表９および１０に見られる。
【０１０３】
（工程２．エタノール浸出抽出）
エタノール浸出プロセスを用いた、工程１のＳＣＣＯ２抽出プロセスからのウコン種残渣材料［＃４０または＃８０］の一般的説明が、図２−工程２に図示されている。供給原料［＃４０または＃８０］は、工程１ａまたは工程１ｂのいずれかからの残渣である。抽出溶媒［＃２３０］は、９５％エタノールである。この方法において、供給原料および抽出溶媒は、６０〜８０℃へ加熱された抽出容器に別々に装入され、３〜７時間撹拌される。混合が中断された後、溶液は１０〜２０時間放置される。頂部層がデカントされ［＃１００］、濾過され［＃１１０］、遠心分離された［＃１２０］。クルクミノイド強化された上清が、蒸発され［＃１３０］、タルトまたは粉末にされた［＃１４０］。この乾燥抽出生成物［＃１４０］は次いで、さらなる加工処理（工程３）のために用いられる。固体残渣［＃１５０］は取り置かれてもよく、さらなる加工処理（工程４）のために用いられ、ウコン種多糖類およびポリペプチド（ターメリン）の精製分画が得られる。これらの抽出プロセスの１つの実施例ならびに結果が、実施例３および表１１に見られる。
【０１０４】
（工程３．エタノール抽出クルクミノイド分画のＳＣＣＯ２精製）
このプロセス方法は、クルクミノイドを精製する（濃縮する）ため、および所望であれば、クルクミノイド化学群中の個々のクルクミノイドの比を変えるための単一抽出工程を含む。前加工処理工程において、天然ウコン種供給原料中の精油は、ＳＣＣＯ２を用いて抽出され（工程１）、クルクミノイドは次いで、エタノールを用いて工程１の残渣から抽出され（工程２）、真空乾燥されて、工程２において教示されているようにタルト形態を形成し、ガラスビーズと混合されて流動性粉末を形成するか、またはスプレー乾燥されて粉末（１００μｍ超の粒子サイズ）形態にされる。
【０１０５】
工程２の抽出生成物からのクルクミノイド分画［＃１４０］のＳＦＥ分別抽出の一般的な説明は、図３−工程３に図示されている。供給原料［＃１４０］が、ガラスビーズと混合され、ＳＦＥ抽出容器に装入される［＃１６０］。この溶媒は、純粋な二酸化炭素である［＃２４０］。エタノールが共溶媒として用いられてもよい。パージおよび浸出テスト後、このプロセスは、貯蔵容器から冷却器を通ってＣＯ２ポンプへ流れる液化ＣＯ２を含む。このＣＯ２は、所望の圧力へ圧縮され、次いで供給原料を通って、抽出容器に流れ込み、ここでは、圧力および温度が、所望のレベルに維持されている。抽出のための圧力は、約１００バール〜８００バール、約２００バール〜７００バール、約３００バール〜６００バールの範囲にあり、温度は、約３０℃〜約１００℃、約４５℃〜約９５℃、約６０℃〜約９０℃の範囲にある。本明細書において教示されているＳＣＣＯ２抽出は、好ましくは少なくとも３００バールの圧力、および少なくとも４０℃の温度で、より好ましくは約４００バール〜６００バールの圧力、および約６０℃〜約９０℃の温度で実施される。抽出時間は、約３０分〜４時間、約１時間〜３時間、約２時間までの範囲にある。溶媒対供給原料比は典型的には、ＳＣＣＯ２抽出の各々について約１，０００〜１である。ＣＯ２は再循環される。抽出、精製、およびプロフィールされたクルクミノイド分画は次いで、予め決定された設定圧力および温度を有する収集器または分離容器に収集される［＃３１０］。
【０１０６】
本発明の１つの態様は、３００バール〜６００バール、および６０℃〜約９５℃の温度における分別ＳＣＣＯ２抽出を用いて、エタノール強化クルクミノイド材料、または抽出された強化クルクミノイド分画材料のいずれかを抽出すること、および予め決定された条件（圧力、温度、および密度）、および予め決定された間隔（時間）で、様々な収集容器に、抽出されたクルクミノイド分画材料を収集することを含む。各収集器におけるその結果生じた抽出ウコン種精製クルクミノイド分画は、回収することができるか、または独立して使用することができるか、または組み合わせて１またはそれ以上のウコン種抽出生成物を形成しうる。ＳＣＣＯ２抽出ウコン種クルクミノイド分画の１つの態様は、自生のウコン種植物性材料または従来のウコン種抽出生成物中に見られるものよりも高い、予め決定されたクルクミノイド化学成分濃度を含む。本発明のさらなる態様は、ウコンの濃度が、クルクミノイド化学成分質量の７０質量％超である、精油抽出クルクミノイド分画である。典型的には、ウコン種自生根茎材料からの精製クルクミノイド分画の総収率は、約２．６％であり、クルクミノイド抽出分画の８５質量％超のクルクミノイド濃度を有する。さらには、これらのクルクミノイドの濃度プロフィールは、７０質量％超のウコン濃度へ変えることができる。このような抽出プロセスの１つの実施例および結果は、実施例４および表１２に見られる。
【０１０７】
（工程４．クルクミノイドの精製およびプロファイリング）
このプロセス方法は、クルクミノイドの追加精製（濃縮）のための単一抽出工程、および所望であれば、クルクミノイド化学群中の個々のクルクミノイドの比の変更を含む。前加工処理工程において、天然ウコン種供給原料中の精油は、ＳＣＣＯ２を用いて抽出され（工程３）、真空乾燥されてタルト形態を形成し、ガラスビーズと混合されて流動性粉末を形成するか、またはスプレー乾燥されて粉末形態（１００μｍ超の粒子サイズ）にされる。別の前加工処理工程において、高度に強化されたクルクミノイド抽出生成物は、ガラスビーズと混合されて流動性粉末を形成する。
【０１０８】
工程３の抽出生成物からのクルクミノイド分画［＃３１０］、または高度に強化されたクルクミノイド抽出生成物［＃３２０］のＳＦＥ分別抽出の一般的な説明は、図４−工程４に図示されている。供給原料［＃３１０または＃３２０］が、ガラスビーズと混合され、ＳＦＥ抽出容器に装入される［＃１７０］。この溶媒は、純粋な二酸化炭素である［＃２５０］。エタノールが共溶媒として用いられてもよい。パージおよび浸出テスト後、このプロセスは、貯蔵容器から冷却器を通ってＣＯ２ポンプへ流れる液化ＣＯ２を含む。このＣＯ２は、所望の圧力へ圧縮され、次いで供給原料を通って、抽出容器に流れ込み、ここでは、圧力および温度が、所望のレベルに維持されている。抽出のための圧力は、約１００バール〜８００バール、約２００バール〜７００バール、約３００バール〜６００バールの範囲にあり、温度は、約３０℃〜約１００℃、約４５℃〜約９５℃、約６０℃〜約９０℃の範囲にある。本明細書において教示されているＳＣＣＯ２抽出は、好ましくは少なくとも３００バールの圧力、および少なくとも４０℃の温度で、より好ましくは約４００バール〜６００バールの圧力、および約６０℃〜約９０℃の温度で実施される。抽出時間は、約３０分〜４時間、約１時間〜３時間、約２時間までの範囲にある。溶媒対供給原料比は、ＳＣＣＯ２抽出の各々について、典型的には約１，０００対１である。ＣＯ２は再循環される。抽出、精製、およびプロフィールされたクルクミノイド分画が次いで、予め決定された設定圧力および温度を有する収集器または分離容器中に収集される［＃３３０］。本発明の１つの実施形態は、３００バール〜６００バール、および６０℃〜約９５℃の温度における分別ＳＣＣＯ２抽出を用いて、エタノール強化クルクミノイド材料、または抽出された強化クルクミノイド材料を抽出すること、および予め決定された条件（圧力、温度、および密度）、および予め決定された間隔（時間）で、様々な収集容器に抽出されたクルクミノイド分画材料を収集することを含む。各収集器におけるその結果生じた抽出ウコン種精製クルクミノイド分画は、回収することができるか、または独立して使用することができるか、または組み合わせて１またはそれ以上のウコン種抽出生成物を形成しうる。
【０１０９】
ＳＣＣＯ２抽出ウコン種クルクミノイド分画の１つの態様は、自生のウコン種植物性材料または従来のウコン種抽出生成物中に見られるものよりも高い、予め決定されたクルクミノイド化学成分濃度を含む。
【０１１０】
本発明のさらなる態様は、ウコンの濃度が、クルクミノイド化学成分の８０質量％超である精製された抽出クルクミノイド分画である。典型的には、ウコン種自生根茎材料からの精製クルクミノイド分画の総収率は、約０．９質量％であり、８５質量％超クルクミノイドのクルクミノイド濃度を有する。さらには、これらのクルクミノイドの濃度プロフィールは、これらのクルクミノイドの７５質量％超のウコン濃度へ変えることができる。高度に強化されたクルクミノイド抽出生成物に関して、収率は、６０質量％超であり、９５％超のクルクミノイド純度、およびウコンがクルクミノイドの８５質量％超であるクルクミノイドプロフィールをともなう。このような抽出プロセスの実施例および結果は、実施例５および表１３、１４、および１５に見られる。
【０１１１】
（工程５．工程２の残渣の水浸出）
１つの態様において、本発明は、ウコン種植物性材料の生物活性多糖類およびポリペプチド（ターメリン）化学成分の抽出および濃縮を含む。準備抽出工程の一般的な説明が、図５−工程５に図示されている。この工程５の抽出プロセスは、単一段階溶媒浸出プロセスである。この抽出プロセスの供給原料は、工程１ｂの残渣［＃４０］または工程２の残渣［＃１５０］である。抽出溶媒［＃２６０］は、蒸留水である。この方法において、ウコン種残渣および抽出溶媒が、抽出容器に装入され［＃４００］、加熱され、撹拌される。これは１００℃、約９０℃、または約７０〜９０℃へ加熱されてもよい。抽出は、約１〜５時間、約２〜４時間、または約３時間実施される。結果として生じた流体抽出物は濾過され［＃４１０］、遠心分離される［＃４２０］。上清［＃４３０］が蒸発されて［＃４４０］、さらなる加工処理（工程６および＆）のために濃縮上清［＃４５０］にされる。固体残渣が廃棄される［＃４６０］。この抽出工程の１つの実施例が、実施例６に見られ、結果は表１６に見られる。
【０１１２】
（工程６．多糖類分画抽出および精製）
本明細書において教示されているように、ウコン種からの精製された多糖類分画抽出物は、ウコン種供給原料の水性抽出物からの水溶性、エタノール不溶性多糖類のエタノール沈殿、および次いで水溶液中の沈殿物と、固体ポリマー樹脂吸着剤とを接触させて、水溶液中に含有された７００Ｄ未満の分子量の比較的小さい分子を吸着することによって得ることができる。多糖類は次いで、流出液中に濃縮される。結合された分子は溶離され、廃棄される。水性沈殿物溶液中の化学成分の分離に先立って、そこに吸着された望まれない化学成分を有する分子サイズ吸着剤は、いずれかの便利な方法、好ましくは吸着剤との接触方法で流出液（所望の化学成分）から分離されもよく、この分離は、水性抽出生成物を、吸着性材料の抽出カラムまたは床を通過させることによって実施される。
【０１１３】
ウコン種の多糖類化学成分を精製するために、多様な吸着剤を利用することができる。分子サイズ分離吸着剤、例えばＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−１０が、比較的大きい分子量の多糖類分子から、７００未満の分子量の分子を分離するために好ましくは用いられる。
【０１１４】
好ましくは、ウコン種自生供給原料材料は、抽出物を含有する水性多糖類化学成分と親和性吸着剤との接触に先立って、１またはそれ以上の予備精製プロセス、例えば非限定的に工程１、２、および５に記載されているプロセスを受けている。
【０１１５】
本発明において教示されている親和性吸着剤を用いた結果として、天然植物性材料または入手可能な商業用抽出製品中に通常存在するほかの化学成分の中で顕著な、ウコン種の高度に精製された多糖類化学成分を生じる。例えば本発明において教示されている方法は、９０質量％過剰で総多糖類化学成分を含有する、精製された多糖類抽出物を結果として生じうる。
【０１１６】
エタノール沈殿および親和性吸着性樹脂ビーズを用いた、ウコン種の根茎からの多糖類の抽出および精製の一般的な説明は、図６−工程６に図示されている。この抽出のための供給原料［＃４５０］は、工程５の水浸出抽出からの多糖類を含有する濃縮水抽出物溶液であってもよい。水溶液からの多糖類の沈殿に用いられる溶媒［＃２７０］は、エタノールである。濃縮上澄み溶液［＃４５０］は、水溶性、エタノール不溶性多糖類の最大沈殿［＃５００］を生じるのに十分な、希釈された付加エタノール［＃２７０］である。溶液が濾過され［＃５１０］、遠心分離され［＃５２０］、デカントされる［＃５３０］。上澄み残渣［＃５５０］が収集され、ウコン種のターメリン分画化学成分を抽出および精製するためのさらなる加工処理のために取り置かれる。沈殿物［＃５４０］が収集され、沈殿物中のエタノールおよび水は、蒸発によって除去される。適量の吸着性樹脂ビーズ［＃５６０］が洗浄され、水和されて、スラリーをつくり、カラム上に装入される。多糖類沈殿物抽出物が、１％溶液を作るために水中に溶解され、カラム上に装入される［＃５６０］。流出液［＃６００］が収集され、多糖類について分析され、乾燥され、多糖類生成物として取り置かれる。この抽出プロセスの１つの実施例が、実施例７に見られる。
【０１１７】
（工程７．ターメリン分画抽出および精製）
本明細書において教示されているように、ウコン種からの精製されたターメリンポリペプチド分画抽出物は、工程６の水性エタノール溶液上清残渣抽出物を、リン酸緩衝生理食塩水で希釈し、この希釈抽出物溶液と固体サイズ分離親和性吸着剤とを接触させ、次いで流出液を収集し、この流出液とカチオン交換樹脂カラムとを接触させて、それぞれターメリンよりも低い分子量の不純物、およびカチオン交換樹脂カラムとイオン交換する不純物を除去することによって得られてもよい。この流出液は、本明細書において教示されている方法によって生成物として収集され、取り置かれる。結合化学物質（不純物）はその後、吸着剤の各々から溶離され、これはイオン交換樹脂の再生を生じる。
【０１１８】
多様な吸着剤を、ターメリン化学成分分画を精製するために用いることができるが、好ましくはＳｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−１０が、７００分子量またはそれ以下（ターメリンの分子量は５，０００である）の不純物を吸着するためのサイズ分離吸着剤として用いられ、Ｄｏｗｅｘ  ５０−ＷＸＺ−２００、すなわちスルホン酸交換基を有する強酸カチオン交換樹脂ビーズが、カチオン交換吸着剤として用いられる。
【０１１９】
好ましくは、ウコン種供給原料は、抽出物を含有する水性ターメリンと、親和性吸着性樹脂ビーズとを接触させる前に、１またはそれ以上の予備精製プロセス、例えば非限定的に工程１、２、５、および６に記載されているプロセスを受けている。
【０１２０】
本発明において教示されているような親和性吸着剤を用いた結果として、天然植物性材料または入手可能な商業用抽出製品中に通常存在するターメリン濃度と比較して、ウコン種植物性材料からのターメリンの有意な精製が生じる。例えば、本発明において教示されているプロセスの結果として、天然ウコン種根茎中の約０．１質量％から、最終ターメリン分画抽出生成物中の約６．６質量％、すなわち典型的に天然ウコン種供給原料中に見られるものよりも６６倍のターメリンの濃度増加を生じうる。
【０１２１】
親和性吸着性樹脂ビーズを用いて、ウコン種の根茎の抽出物からのターメリン分画の抽出および精製の一般的説明は、図７−工程７に図解されている。
【０１２２】
第一抽出プロセスのための供給原料［＃５５０］は、工程６の多糖類精製からのポリペプチドターメリンを含有する水溶液残渣であってもよい。供給原料溶液を希釈するために用いられる溶媒［＃２８０］は、１ｍｇ／ｍｌの最終濃度までのリン酸緩衝生理食塩水である。希釈された供給原料溶液［＃７００］が、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−１０ビーズ［＃７１０］のきれいな水和スラリー床が充填されたカラム中に、約０．５床容量／時の流量で装入される。流出液［＃７２０］が収集され、さらなる加工処理のために取り置かれる。樹脂ビーズは、溶離され、洗浄され、再循環された。溶離液［＃７３０］は廃棄された。
【０１２３】
第二抽出プロセスのための供給原料［＃７２０］は、サイズ分離樹脂カラムを用いた、第一抽出プロセスからの流出液であってもよい。この供給原料溶液は、きれいな０．１Ｍ  ＨＣｌ浸漬Ｄｏｗｅｘ  ５０−ＷＸ２−２００樹脂ビーズスラリーの床で充填されたカラム中に装入される［＃７４０］。供給原料溶液を装入する前に、カラムは、３床容量の蒸留水で洗浄された。供給原料装入流量は、約３．４床容量／時である。流出液［＃８００］は収集され、ペプチドタンパク質含量について分析され、乾燥され、最終ターメリン分画生成物として取り置かれた。Ｄｏｗｅｘ樹脂ビーズが溶離され、洗浄され、再循環された。溶離液は廃棄された。この抽出プロセスの１つの実施例が、実施例８に見られ、結果は表１８に見られる。
【０１２４】
Ｂｒａｄｆｏｒｄタンパク質分析が、各サンプル中の総タンパク質を計算するために用いられた。粗水抽出物において、溶解質量の２６．４％（［０．８２／３．１］×１００＝２４．４％）タンパク質含量があり、これは、もとの供給原料を基準にして、２．７３質量％の総タンパク質収率であった。図８Ａに図解されているように、ペプチドターメリンと一致する、２０２ｎｍにおける吸光度ピークが観察された。対照的に、６０％エタノール沈殿物中のタンパク質含量は２．２％であったが、約２０２ｎｍにおける吸光度ピークは観察されなかった（図８ＢおよびＣ）。６０％エタノール沈殿後の残留溶液において、２０２ｎｍ吸光度ピークをともなった、溶液における１０％タンパク質があった（図８Ｃ）。７００ＭＷ（ターメリンは、５，０００の分子量を有する）未満の不純物のＳｅｐｈａｄｅｘカラム除去後、２０２ｎｍ吸光度ピークの保持をともなって、流出溶液中に３．７質量％のタンパク質があった（図８Ｄ−Ｄｏｗｅｘ装入溶液）。Ｄｏｗｅｘカラムのための装入溶液は、ｐＨ７．４のリン酸緩衝生理食塩水ｐＨ７．４中に溶解されたＳｅｐｈａｄｅｘ流出液であった。ターメリンの等電点は、４．２であり、したがって、この溶液のｐＨがその等電点よりも低いならば、これは正帯電されるであろう。それ故、ターメリンは、装入溶液中に負帯電され、Ｄｏｗｅｘカチオン交換カラムと結合しないであろう。したがってターメリンは、Ｄｏｗｅｘカラム流出液中にあるであろう。このことは、流出溶液中に見られる高い２０２ｎｍ吸光度（ペプチド結合による）によって確認される（図８Ｄ）。Ｄｏｗｅｘ流出液ターメリン分画生成物は、０．０４ｇウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）当量、およびもとのウコン種供給原料を基準にして、０．１２質量％の総収率を有する。Ｄｏｗｅｘカラム流出液またはターメリン分画において、タンパク質含量は６．６％であったが、このことは、ターメリンペプチドの濃度が、もとの粗供給原料材料の約０．１％の濃度から、乾燥質量で６．６％濃度まで増加したこと、すなわち天然ウコン種供給原料中に見られるものよりも６６倍の濃度増加があることを示している。
【０１２５】
（食品および薬剤）
本発明の食品の一形態として、いずれかの任意形態、例えば顆粒状態、粒状態、ペースト状態、ゲル状態、固体状態、または液体状態へ配合されてもよい。これらの形態において、食品へ添加されることが許された、当業者に従来から公知の様々な種類の物質、例えば結合剤、崩壊剤、増粘剤、分散剤、再吸収促進剤、味覚剤、緩衝剤、界面活性剤、溶解助剤、防腐剤、乳化剤、等張剤、安定剤、またはｐＨ制御剤などが、場合により含有されてもよい。食品へ添加されることになるウコン抽出物の量は、具体的に制限されているわけではなく、例えばこれは、約６０ｋｇの体重の成人による摂取量として一日あたり約１０ｍｇ〜５ｇ、好ましくは５０ｍｇ〜２ｇであってもよい。
【０１２６】
特に、これが健康の保持のための食品、機能食品などとして利用される時、本発明の有効成分を、本発明の予め決定された効果が十分に証明されるような量で含有することが好ましい。
【０１２７】
本発明の薬剤は、場合により従来から公知の方法にしたがって、例えば固体薬剤、例えば錠剤、顆粒、粉末、カプセルなどとして、または液体薬剤、例えば注射などとして調製することができる。これらの薬剤には、一般に用いられているいずれかの材料、例えば結合剤、崩壊剤、増粘剤、分散剤、再吸収促進剤、味覚剤、緩衝剤、界面活性剤、溶解助剤、保存料、乳化剤、等張剤、安定剤、またはｐＨ制御剤が配合されていてもよい。
【０１２８】
薬剤中の有効成分（ウコン抽出物）の投与量は、種類、薬剤形態、年齢、体重、または適用されるべき患者の症状などに応じて様々であってもよく、例えばこれが経口投与される時、これは、約６０ｋｇの体重の成人の場合、一日あたり１回または数回投与され、一日あたり約１０ｍｇ〜５ｇ、好ましくは約５０ｍｇ〜２ｇの量で投与される。有効成分は、ウコン抽出物の１またはいくつかの構成要素であってもよい。
【０１２９】
（送達系）
本発明の抽出物の患者への送達に有用な投与方法は、当業者に通常公知の投与方法、例えば粉末、スプレー、軟膏、ペースト、クリーム、ローション、ジェル、溶液、パッチ、および吸入剤を包含する。
【０１３０】
１つの実施形態において、投与方法は、指定時間放出または制御放出吸入剤形態、例えばリポソーム配合物を包含しうる吸入剤である。このような送達系は、ＳＡＲＳ、鳥インフルエンザなどの患者の処置に有用であろう。この実施形態において、本発明の配合物は、鼻腔内投与に適したいずれかの投薬調合器具において用いられてもよい。この器具は、最適な計量供給精度、および鼻腔配合物とその構成要素、例えば容器、バルブ、およびアクチュエータとの適合性を確実にする目的で構成されるべきであり、機械的ポンプ系、例えば計量供給用量ネブライザー、乾燥粉末吸入器、ソフトミスト吸入器、またはネブライザーの系をベースとしてもよいであろう。多量投与用量によって、好ましい器具は、ジェットネブライザー（例えばＰＡＲＩ  ＬＣ  Ｓｔａｒ，ＡＫＩＴＡ）、ソフトミスト吸入器（例えばＰＡＲＩ  ｅ−Ｆｌｏｗ）、およびカプセルベースの乾燥粉末吸入器（例えばＰＨ  ＆  Ｔ  Ｔｕｒｂｏｓｐｉｎ）を包含する。適切な推進薬は、例えばフルオロカーボン、炭化水素、窒素、および酸化二窒素、またはこれらの混合物の中から選択されてもよい。
【０１３１】
吸入送達器具は、ネブライザーまたは計量式吸入器（ＭＤＩ）、または当業者に公知のいずれかのほかの適切な吸入送達器具であってもよい。この器具は、これらの配合物の単一用量を含有してもよく、これを送達するために用いられてもよく、またはこの器具は、本発明の抽出物の多用量を含有してもよく、これを送達するために用いられてもよい。
【０１３２】
ネブライザー型吸入送達器具は、本発明の抽出物を、通常は水性の溶液、または懸濁液として含有しうる。吸入のための抽出物の霧状スプレーの発生において、ネブライザー型送達器具は、超音波的に、または圧縮空気によって、ほかの気体によって、電子的に、または機械的に駆動されてもよい。超音波ネブライザー器具は通常、急速振動波形を配合物の液体フィルム上へ、電気化学的振動表面を介して課すことによって作動する。ある一定の振幅において、この波形は不安定になり、これにより、これは液体フィルムを崩壊させ、これはこの配合物の小滴を生成する。空気またはほかのガスによって駆動されるネブライザー器具は、高圧ガスストリームが、局部的圧力降下を生じ、これが液体配合物を、ガスストリーム中へ毛管作用を介して引き込むことをベースとして操作される。この細かい液体ストリームは次いで、せん断力によって崩壊される。このネブライザーは携帯式であってもよく、設計上、手持ち式であってもよく、自己収納電気装置が備えられていてもよい。このネブライザー器具は、液体配合物が加速されうる、画定された開口部サイズの２つの一致した出口チャネルを有するノズルを含んでいてもよい。これは結果として、これら２つのストリームの衝突および配合物の噴霧化を生じる。このネブライザーは、液体配合物を、画定された１または複数の開口部サイズの多オリフィスノズルを強制的に通して、吸入のための配合物のエアゾールを生じるために、機械的アクチュエータを用いてもよい。単一用量のネブライザーの設計において、この配合物の単一用量を含有するブリスターパックが用いられてもよい。
【０１３３】
本発明において、例えば肺膜内に粒子を配置するための粒子サイズ決定が最適になることを確実にするために、ネブライザーが用いられてもよい。
【０１３４】
計量式吸入器（ＭＤＩ）が、本発明の抽出物用の吸入送達器具として用いられてもよい。この器具は加圧され（ｐＭＤＩ）、その基本構造は、計量供給バルブ、アクチュエータ、および容器を含んでいる。推進薬が、この器具から配合物を排出するために用いられる。この抽出物は、１または複数の加圧推進薬液体中に懸濁された規定サイズの粒子からなっていてもよく、またはこの抽出物は、１または複数の加圧液体推進薬の溶液または懸濁液中にあってもよい。用いられる推進薬は主として、大気に優しいヒドロフルオロカーボン（ＨＦＣ）、例えば１３４ａおよび２２７である。伝統的なクロロフルオロカーボン、例えばＣＦＣ−１１、１２、および１１４は、必須である時のみ用いられる。この吸入系の器具は、単一用量を、例えばブリスターパックを介して送達しうる。またはこれは、設計上、多用量であってもよい。吸入系の加圧計量式吸入器は、脂質含有配合物の正確な用量を送達するために、呼吸で作動されてもよい。投薬の正確さを保証するために、配合物の送達は、吸入サイクルのある時点で発生するように、マイクロプロセッサを介してプログラミングされてもよい。ＭＤＩは、携帯式かつ手持ち式であってもよい。
【０１３５】
別の実施形態において、送達系は、経皮送達系、例えばヒドロゲル、クリーム、ローション、軟膏、またはパッチであってもよい。週毎のまたは月毎の指定時間送達が望まれる時、特にパッチが用いられてもよい。
【０１３６】
別の実施形態において、非経口投与経路が用いられてもよい。非経口経路は、身体の様々な区画中への注射をともなう。非経口経路は、静脈内（ｉｖ）、すなわち静脈を通っての血管系中への直接投与；動脈内（ｉａ）、すなわち動脈を通っての血管系中への直接投与；腹腔内（ｉｐ）、すなわち腹腔中への投与；皮下（ｓｃ）、すなわち皮膚下への投与；筋肉内（ｉｍ）、すなわち筋肉中への投与；および皮膚内（ｉｄ）、すなわち皮膚層間投与を包含する。非経口経路は、投与された配合物の一部が、胃腸管において一部または全部劣化するような時、経口経路よりも好ましいことがある。同様に、緊急の場合、急速応答の必要性がある場合、非経口投与は、経口よりも通常好ましい。
【０１３７】
（処置方法）
本発明の方法は、ヒトの障害の処置および予防のために新規ウコン抽出物を提供することを含む。例えば、アレルギー、関節炎、リウマチ、心臓血管病、高コレステロール血症、血小板凝集、脳血管病、喘息、慢性肺疾患、嚢胞性線維症、傷の治癒、アルツハイマー病およびパーキンソン病、多発性硬化症、消化性潰瘍病、癌、ＨＩＶ／ＡＩＤＳ、細菌および真菌感染の処置のための新規ウコン種抽出物は、ウコン種自生植物性材料、または従来から公知の製品中に見られるものよりも高い、精油分画濃度、ウコン分画濃度、および多糖類分画濃度の重量％を有しうる。
【０１３８】
好ましい処置方法は、関節炎の処置方法であって、本発明のウコン抽出物の治療的有効量を、これを必要としている患者へ投与することを含む方法を包含する。特に好ましい実施形態において、このウコン抽出物はさらに、Ｂｏｓｗｅｌｌｉａ種、特にＢｏｓｗｅｌｌｉａ構成要素α−および／またはβ−ボスウエリア酸、および／またはこれらのＣ酢酸塩の同様に得られた抽出物の相乗作用量も含む。Ｂｏｓｗｅｌｌｉａ種の抽出方法は、２００６年９月２１日に本発明者らによって出願された仮特許出願に全部が記載され、その全体が本明細書に組み込まれる。相乗作用とは、各抽出物が個々に有する効果と比較して、組み合わされたウコンおよびボスウエリアの抽出物が関節炎に対して有する増加した効果のことを言う。
【０１３９】
前記記載は、本発明の実施の現在最もよく考えられた方法を含む。この記載は、本発明の一般原則を例証する目的で行なわれ、限定的な意味で捕らえるべきでない。この発明は、次の実施例によってさらに例証される。これらの実施例は、まったく本発明の範囲に対して限定を課すと考えられるべきではない。これに対して、本明細書における説明を読んだ後に、本発明の精神から逸脱することなく、当業者の念頭に浮かぶであろう本発明の様々なほかの実施形態、修正例、および同等例に頼ってもよいと理解されるべきであることは明らかである。
【０１４０】
本明細書において用いられているすべての用語は、当業者によって通常受け入れられているこれらの用法において解釈されると考察される。本明細書において引用された特許および特許出願また引例はすべて、その全体が参照して組み込まれる。
【実施例】
【０１４１】
（材料および方法）
（ウコン供給原料）
異なる源からの２つの粉砕されたウコン根が、現在の調査に用いられている。ウコン根抽出物（ロット＃：ＣＬ／０２００５）が、Ｓｕａｎ  Ｆａｒｍａ  Ｉｎｃ．から購入された。活性成分分析結果は、表７に示されている。
【０１４２】
（表７．この調査において用いられたウコン根および抽出物についての供給原料情報）
【０１４３】
【表７】
2009530305.tif 000009
註：１：精油濃度は、ヘキサン枯渇抽出によって１４時間測定された。総収率は７．２４％であり、クルクミノイドは０．６％であり、したがって精油は、７．２４−０．６＝５．９６％であった。２：情報は、２０００年９月に納入業者によって提供された。
【０１４４】
（対照標準および有機溶媒）
クルクミノイド標準は、ＣｈｒｏｍａＤｅｘ，Ｉｎｃ．２９５２  Ｓ．Ｄａｉｍｌｅｒ  Ｓｔ．Ｓａｎｔａ  Ａｎａ  ＣＡ  ９２７０５  Ｔｅｌ：９４９，４１９，０２８８，Ｆａｘ：９４９，４１９，０２９４  ｗｗｗ．ｃｈｒｏｍａｄｅｘ．ｃｏｍから購入され、これらの特性は、表８に列挙されている。
【０１４５】
（表８．クルクミノイド標準の物理的性質）
【０１４６】
【表８】
2009530305.tif 000010
すべての溶媒は、Ｅ．Ｍｅｒｃｋから得られた。これらの性質は、表９に列挙されている。
【０１４７】
（表９．考察された有機溶媒の物理的性質）
【０１４８】
【表９】
2009530305.tif 000011
Ｄｏｗｅｘ  ５０ＷＸ２−２００（Ｈ）カチオン交換樹脂は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．から購入された。これは、２％架橋を有する強酸カチオン交換樹脂；水素イオン形態、１００〜２００メッシュである。
【０１４９】
Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−１０（およその乾燥ビーズ直径４０〜１２０μｍ）が、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｃｏ．から購入された。Ｓｅｐｈａｄｅｘは、デキストランをエピクロロヒドリンで架橋することによって調製されたビーズゲルである。その主な用途は、低分子量および高分子量分子の基分離である。Ｇ−１０は、分子量＜７００を分離するために用いられる。
【０１５０】
（分析方法）
精油の特徴決定および定量：
ウコン根精油の化学組成は、溶融シリカカラム（５％フェニルポリ（ジメチルシロキサン）ＸＴＩ−５、３０ｍ×０．２５ｍｍ  ｉ．ｄ．および０．２５μｍフィルム厚さ、Ｒｅｓｔｅｋ）を備えたＨＰ５８９０シリーズＧＣ−ＭＳ系を用いて決定された。電子イオン化エネルギーは、７０ｅＶであった。キャリアガスは、ヘリウム（１．７ｍｌ／分）であり、１μＬのサンプルが注入された。注入温度は２４０℃であり、検出器の温度は２３０℃であった。温度プログラミングは、５分間５０℃、４℃／分で１８０℃まで、１５℃／分で２８０℃まで増加され、１９分間２８０℃に保持された。化合物の同定は、これらのマススペクトルとＵＳ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｓｔａｎｄａｒｄｓ  ａｎｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（ＮＩＳＴ，ＵＳＡ）およびＷＩＬＥＹ  Ｍａｓｓ  Ｓｐｅｃｔｒａｌ  Ｌｉｂｒａｒｙからのデータとを比較することによって実施された。
【０１５１】
（クルクミノイドの特徴決定および定量）
ＨＰＬＣ分析が、ＬＣ−１０ＡＤＶＰポンプ、ＳＰＤ−Ｍ１０ＡＶＰ光ダイオードアレイ検出器、ＳＣＬ−１０ＡＤＶＰコントローラ、およびＪｕｐｉｔｅｒカラム（２５０ｍｍ  Ｈ、４．６ｍｍ  Ｉ．Ｄ．、５μＣ１８  ３００Å）を用いるＣＴＯ−１０ＡＣＶＰカラムオブンを含む、Ｓｈｉｍａｄｚｕ  ＬＣ−１０ＡＶＰ系を用いて実施された。溶離は、３０℃で１ｍｌ／分の流量での勾配系で実施された。移動相は、２％酢酸（Ａ）、アセトニトリル（Ｂ）、およびメタノール（Ｃ）からなっていた。クルクミノイドの定量レベルは、０〜３０分間、Ａ中の３０〜３６％アセトニトリルから直線的にプログラミングされた上記溶媒を用いて決定された。次いで勾配は、５％Ｃの定数で、３０〜４５分間、Ａ中の３６％から９５％アセトニトリルになった。この方法の直線性は、一連の標準クルクミノイドを分析することによって評価された。０．０６〜２μｇの標準クルクミン、デメトキシクルクミン、およびビスデメトキシクルクミンを含有する５つの作業標準溶液の各々２０μｌが、ＨＰＬＣ中に注入された。標準較正曲線が、標準クルクミノイドの濃度対ピーク面積をプロットすることによって得られた（３つの試験の平均）。較正範囲は、ウコン根サンプル中の普通のクルクミノイド濃度を反映するように選択された。
【０１５２】
（多糖類の特徴決定および定量）
ウコン種中の多糖類を特徴決定するために、比色試験が用いられている。テストに用いられた試薬は、９５．５％硫酸（ＡＣＳ規格に合致、比重１．８４）、および２ｇの蒸留水を３８ｇの試薬グレードフェノールへ添加することによって調製された５％フェノール溶液であった。この混合物は、水−白色液体を形成し、これは容易にピペットで採取される。分子量５，２２０、４８，６００、および４０９，８００のデキストラン（Ｆｌｕｋａ製品）が、標準として用いられた。
【０１５３】
２ｍｌの糖溶液が、比色管にピペットで入れられ、１ｍｌの５％フェノールが添加される。次いで５ｍｌの濃硫酸が急速に添加され、酸のストリームは、良好な混合を得るために、テスト管の側面に対してよりもむしろ液体表面に対して向けられる。これらの管は、１０分放置されたままである。この色は、数時間安定であり、読取りは必要であればその後に行なわれてもよい。特徴的な黄色−オレンジ色の吸光度は、４８８ｎｍで測定される。蒸留水を糖溶液で置換してブランクが調製される。その場合糖の量は、デキストランのために構成された標準曲線を参照して決定されてもよい。すべての溶液は、偶然の汚染の結果生じるエラーを最小限にするために、三重に調製される。この方法をテストするために、これらの実験は、異なる日に繰返された。すべての場合、実験間の変動は、吸光度においてわずか０．０１〜０．０２単位でしかなく、これは、三重のサンプル間の変動と同程度の規模であった。
【０１５４】
多糖類分析のためのリアルタイム直接分析（ＤＡＲＴ）質量分析法
すべてのＤＡＲＴクロマトグラムは、下に記載されている機器および方法を用いて実施された。
【０１５５】
機器：フライト質量分析計のＪＯＥＬ  ＡｃｃｕＴＯＦ  ＤＡＲＴ  ＬＣ時間（Ｊｏｅｌ  ＵＳＡ，Ｉｎｃ．，Ｐｅａｂｏｄｙ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）。このフライト時間（ＴＯＦ）質量分析計テクノロジーは、サンプル調製をまったく必要とせず、０．００００１質量単位まで正確に質量を生じる。
【０１５６】
方法：多糖類分画を捕獲し、分析するために利用される機器設定は次のとおりである：カチオンモードについては、ＤＡＲＴ針電圧は３，０００Ｖであり、加熱要素は２５０℃、電極１は１００Ｖ、電極２は２５０Ｖ、およびヘリウムガス流は７．４５リットル／分（Ｌ／分）である。質量分析計については、オリフィス１は１０Ｖであり、リングレンズは５Ｖであり、オリフィス２は３Ｖである。ピーク電圧は、約６０ｍ／ｚで出発するが、より大きい質量範囲において十分な解像を可能にする解像力を与えるために、６００Ｖに設定される。マイクロチャネルプレート検出器（ＭＣＰ）電圧は、２，４５０Ｖに設定される。較正は、０．５Ｍカフェイン溶液標準（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｒｉｃｈ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＵＳＡ）を用いて、サンプル導入前に毎朝実施される。較正許容差は、≦５ｍｍｕに保持される。
【０１５７】
これらのサンプルは、滅菌ピンセットでＤＡＲＴヘリウム血漿中に導入され、サンプルの最大表面積がヘリウム血漿ビームへ確実に暴露されるようにする。サンプルをビーム中に導入するために、掃引動作が使用される。この動作が、約０．５ｓｅｃ／ｓｗｉｐｅの間、前後ストロークの時に反復してサンプルが暴露されることを可能にする。この動作は、感知できる総イオン電流（ＴＩＣ）信号が、検出器において観察されるまで繰り返され、次いでサンプルが除去され、ベースライン／バックグラウンド標準化が可能にされる。
【０１５８】
アニオンモードについては、ＤＡＲＴおよびＡｃｃｕＴＯＦ  ＭＳは、陰イオンモードに切り換えられる。針電圧は、３，０００Ｖであり、加熱要素は２５０℃、電極１は１００Ｖ、電圧２は２５０Ｖ、ヘリウムガス流は７．４５Ｌ／分である。質量分析計については、オリフィス１は−２０Ｖであり、リングレンズは−１３Ｖであり、オリフィス２は−５Ｖである。ピーク電圧は、２００Ｖである。ＭＣＰ電圧は、２，４５０Ｖに設定される。サンプルは、カチオンモードと正確に同じ方法で導入される。すべてのデータ分析は、この機器で提供されたＭａｓｓＣｅｎｔｅｒＭａｉｎ  Ｓｕｉｔｅソフトウエアを用いて実施される。
【０１５９】
吸光度アッセイ：
溶液におけるタンパク質は、２８０および２００ｎｍでの最大吸光度で紫外線を吸収する。ペプチド結合は主として、２００ｍにおける吸光度の原因である。Ｓｈｉｍａｄｚｕ１７００シリーズ分光光度計が、現在の研究に用いられている。この手順は、次の工程を含む：
ＵＶランプを１５分間暖める；
リン酸緩衝生理食塩水のみでゼロ吸光度へ較正する；
サンプル溶液を１９０から３００ｎｍまで走査する；
最大吸光度波長を発見する。
【０１６０】
Ｂｒａｄｆｏｒｄタンパク質アッセイ：
溶液におけるタンパク質の濃度を決定するために、Ｂｒａｄｆｏｒｄアッセイを用いることができる。この手順は、染料、Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｂｌｕｅ  Ｇ、および溶液におけるタンパク質間の錯体の形成に基づく。タンパク質−染料錯体は、最大吸収において４６５ｎｍから５９５ｎｍまでのシフトを引き起こす。吸収量は、存在するタンパク質に比例する。
【０１６１】
試薬：
Ｂｒａｄｆｏｒｄ試薬（Ｓｉｇｍａ製品、Ｂ６９１９）は、０．００４％Ｂｒｉｌｌｉａｎｔ  Ｂｌｕｅ  Ｇ、１０％リン酸、および４％メタノールからなる。
【０１６２】
リン酸緩衝生理食塩水（ｐＨ＝７．４）（Ｓｉｇｍａ製品、Ｐ３８１３）は、８３．８％塩化ナトリウム、１２％無水リン酸１水素２ナトリウム、２％一塩基性リン酸カリウム、および２％塩化カリウムからなる。
【０１６３】
リン酸生理食塩水ｐＨ＝７．４で緩衝されたウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）：Ｓｉｇｍａ製品、Ｐ３６８８
手順：
０、２００、４００、６００、８００、および１，０００μｇのＢＳＡを含有する６つの標準溶液を調製する。４００〜７００ｎｍの波長範囲にわたって、および０〜２吸光度単位の吸光度範囲にわたってスペクトルを収集するために、分光光度計を設定する。この波長範囲にわたって分光光度計をブランクにするために、蒸留水で満たされた４ｍｌ石英キュベットを用いる。４００〜７００ｎｍの吸光度スペクトルを記録し、５９５ｎｍの吸光度を書き留める。各タンパク質標準について、およびアッセイされることになるサンプルについて、上の工程を繰り返す。これらの標準およびサンプルのスペクトルを調べる。いずれかのスペクトルが、２超の５９５ｎｍにおける吸光度を有するならば、またはいずれかのサンプルが、これらの標準のいずれかについての最大吸光度よりも大きい吸光度を有するならば、公知量によってこのサンプルを希釈し、アッセイを繰り返す。約５７５ｎｍの１つの波長において、これらのスペクトルのすべては同じ吸光度を有すべきである（このような交差点は、等吸収点と呼ばれ、２つの可能な形態を有する、同じ総濃度の吸収種を含有する溶液の決定的特徴である）。いずれかのスペクトルが、等吸収点において、またはその近くでほかのスペクトルと交差しないならば、これは調節されるか、または退けられて、繰り返されるべきである。
【０１６４】
ＢＳＡ濃度に対して５９５ｎｍにおける吸光度のグラフを作成する。その吸光度からのサンプルのタンパク質濃度を決定するために、サンプルと同じ吸光度を有するであろうような標準の濃度を発見するための標準曲線を用いる。
【０１６５】
（チオフラビンＴアッセイ）
Ａβ１−４２繊維の存在は、チオフラビンＴ蛍光によってモニターされた。Ａβ１−４２の三重の１５μＬサンプル［５０ｍＭトリス−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）中の５０μＭ］が、様々な用量における本発明のウコン抽出物または対照化合物の存在下または不存在下に、３７℃で様々な時間、ペプチド溶液のインキュベーション後に除去された。これらのサンプルは各々、蛍光における特徴的な変化が、チオフラビンＴのアミロイド繊維への結合後にモニターされる前に（４５０ｎｍにおける励起および４８２ｎｍにおける発光）、５０ｍＭグリシン／ＮａＯＨ（ｐＨ９．０）中の２ｍＬの１０μＭチオフラビンＴ（Ｓｉｇｍａ）へ添加された。三重のサンプルは、ペプチドの添加前、および添加直後に３回走査された。結果は、これら三重サンプルの平均値±これらの平均値間の差を示している。
【０１６６】
（Ａβ１−４０、４２ＥＬＩＳＡ）
状態調節された媒質が収集され、以前に記載された（Ｔａｎら、２００２年）方法を用いて、１：１希釈で分析され、値が、対照に対して分泌されたＡβ１−ｘのパーセンテージとして報告された。総Ａβ種の定量が、公開された方法（Ｍａｒａｍｂａｕｄら、２００５年；Ｏｂｒｅｇｏｎら、２００６年）にしたがって実施された。簡単に言えば、６Ｅ１０（捕獲抗体）が、ＰＢＳ中の２μｇ／ｍＬでコーティングされ、９６ウエルイムノアッセイプレートに一晩４℃で入れられた。これらのプレートは、ＰＢＳ中０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０で５回洗浄され、遮断緩衝液（１％ＢＳＡ、５％ウマ血清を有するＰＢＳ）で２時間室温で遮断された。状態調節された媒質またはＡβ標準が、これらのプレートへ添加され、一晩４℃でインキュベートされた。３回の洗浄後、ビオチニル化抗体、４Ｇ８（１％ＢＳＡを有するＰＢＳ中の０．５μｇ／ｍＬ）が、これらのプレートへ添加され、２時間室温でインキュベートされた。５回の洗浄後、ストレプトアビジン−ホースラディッシュペルオキシダーゼ（１％ＢＳＡを有するＰＢＳ中の１：２００希釈）が、９６ウエルへ３０分間室温で添加された。テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質が、これらのプレートへ添加され、１５分間室温でインキュベートされた。５０μＬの停止液（２Ｎ  Ｎ２ＳＯ４）が、これらのプレートの各ウエルへ添加された。各ウエルの光学密度は、４５０ｎｍでマイクロプレートリーダーによって直ちに決定された。Ａβレベルは、対照のパーセンテージとして表示された（未処理Ｎ２ａＳｗｅＡＰＰ細胞からの状態調節された培地）。
【０１６７】
（実施例１）
（単一工程ＳＣＣＯ２抽出の実施例）
抽出は、ＳＦＴ−２５０  ＳＦＴ／ＳＦＲ  Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ  Ｐｌａｔｆｏｒｍ、Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｆｌｕｉｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗａｒｋ，Ｄｅｌａｗａｒｅを用いて実施された。ウコン種精油分画が、半連続流抽出プロセスにおいてＳＣＣＯ２で抽出された。貯蔵シリンダーからの液体二酸化炭素が、冷却浴を通過させられ、次いで空気駆動Ｈａｓｋｅｌポンプによって操作圧へ圧縮された。圧縮二酸化炭素は、３０グラム粉砕ウコン種根茎粉末（２０メッシュ）が入っている１００ｍｌ抽出容器中へ、溶質がこの抽出容器の出口でまったく観察されなくなる時点まで流入した。抽出されることになる粗植物性材料が入っている抽出容器は、サーモスタット制御されたオブン中にあった。抽出容器の内部の温度は、デジタルコントローラで＋／−０．１℃の精度内に制御された。二酸化炭素の流量は、１０Ｌ／分（１９ｇ／分）であった。消費された二酸化炭素の容量は、流量および試験時間を用いて計算された。抽出生成物は、高さ６５ｍｍ、直径２４ｍｍのガラスアンプルにおいて、一定の時間間隔で、各試験につき５分画に収集され、重力測定されて、抽出曲線が得られた。これらの実験は、３００バールの圧力、４０℃の温度で実施された。抽出された二酸化炭素溶解性材料の量が、抽出物の総質量と天然供給原料材料の総質量との比として計算された。この抽出生成物が、ガスクロマトグラフィ−質量分析（ＧＣ−ＭＳ）のためにヘキサン中に溶解された。これらの結果は、表２および６に示されている。もとのウコン供給原料の重量、および精油分画の７６．５質量％を構成する３つの主要なターメロン、すなわちａｒ−ターメロン、β−ターメロン、およびα−ターメロンの高い濃度を基準にして、４．２質量％の高い総収率があった。精油化学成分の純度は、９９％超であった。
【０１６８】
上記手順は、様々な温度および圧力で数回実施された。これらの試験からの分画は、収集され、ＤＡＲＴ質量分析法によって分析され、図６３〜７８に現われている。
【０１６９】
（実施例２）
（ＳＣＣＯ２抽出および分別の実施例）
ウコン種供給原料のＳＣＣＯ２抽出および分別が、以前に記載された自社独自的な超臨界流体抽出および分別系を用いて実施された。２，０００ｇの粉砕ウコン種根茎供給原料が、２４Ｌ抽出容器に導入された。抽出温度および圧力が調節され、二酸化炭素供給が開始された。圧縮ＣＯ２が、垂直に取り付けられた床を通って上方に流れるままにされ、精油、およびクルクミノイドを含むほかの親油性化学成分が抽出された。溶液は、圧力降下バルブを通って抽出容器から出て行き、第一分離器中に流れ込んだ。ここで、二酸化炭素が蒸発され、再循環された。これらの抽出物の段階的沈殿は、溶媒圧力を解放し、直列の３つの分別分離器を用いて３段階で温度を減少させて達成された。分離器１および３が、分別のために用いられた。重質抽出生成物（クルクミノイド分画）が、より高圧で分離器１収集容器において沈殿し、軽質生成物（精油）が、より低い圧力で分離器３に回収された。消費されたＣＯ２の総重量および流体の流量は、質量流量計およびフロー時間によって測定された。圧力は、抽出容器において＋／−３バール、分離容器において＋／−１バールの精度で、自動背圧バルブによって設定された。温度は、サーモスタットで、＋／−１℃の精度で調節された。抽出温度および圧力は次のとおりである：抽出容器については７０℃および４５０バール；分離器１については６５℃および１７０バール；分離器２については５９℃および１３０バール；および分離器３については２８℃および６０バール。ＳＣＣＯ２抽出条件および収率（供給原料に基づく質量％）は、表８に記録されている。
【０１７０】
精油は、分離器３に収集された。ＧＣ−ＭＳ分析結果は、表６および７に示されている。分別分離のための上記ＳＣＣＯ２条件を用いて、供給原料中の精油の９５．５％が、３０分の抽出時間後に抽出されうる。この高度に精製された（＞９９％）精油分画において、３つの化学成分、すなわちａｒ−ターメロン、α−ターメロン、およびβ−ターメロンが、７３．６質量％を構成した。
【０１７１】
（表１０．異なる溶媒によるウコン根精油抽出物のピーク面積％）
【０１７２】
【表１０】
2009530305.tif 000012
（表１１．総収率、ピークパーセンテージによって表示された３つのターメロン分布）
【０１７３】
【表１１】
2009530305.tif 000013
（表１２．ＳＣＣＯ２抽出／分別実験運転条件および収率。収率は、抽出物／供給原料によって計算された）
【０１７４】
【表１２】
2009530305.tif 000014
高度に精製された（８１．３％）クルクミノイド分画が、上記実験例において分離器１に収集された（分離器２の収率は、０．０２％にすぎず、精油またはクルクミノイド化学成分のどちらの有意量も存在せず、したがって廃棄された）。総収率は、供給原料を基準にして、１．８０質量％であり、クルクミノイドの８１．３％の濃度をともなった。クルクミノイドの収率は、供給原料を基準にして、２２質量％であった。しかしながら、ＳＣＣＯ２残渣中に残っているクルクミノイドの７８％（５．４２質量％）が残留し、これは、下の工程２において取り扱われた。分離器１の抽出クルクミノイド分画のＨＰＬＣ分析結果は、表１３に記録されている。
【０１７５】
（表１３．分離器１のクルクミノイド抽出分画）
【０１７６】
【表１３】
2009530305.tif 000015
Ｃｕｒ＝クルクミノイド；Ｃ＝クルクミン；ＤＭＣ＝デメトキシクルクミン；ＢＤＭＣ＝ビスデメトキシクルクミン。
【０１７７】
（実施例３）
（工程２抽出の実施例）
ＳＦＥ工程１の残渣４００ｇが、９５％エタノールとともに抽出容器中に装入され、５時間７５℃で混合された。混合は次いで中断され、溶液は１６時間放置された。頂部層がデカントされ、４〜８μｍ粒子保持サイズを有するＦｉｓｈｅｒｂｒａｎｄ  Ｐ４濾紙で２回濾過され、３，０００ｒｐｍで遠心分離された。クルクミノイド強化された上清が蒸発され、５０℃で真空炉乾燥されてタルト形態になるか、またはスプレー乾燥されて乾燥流動性粉末にされた。この乾燥された抽出生成物は次いで、さらなる加工処理のために用いられた（工程３）。ＨＰＬＣ分析およびデータは、表１４に示されている。浸出プロセスの総収率は、もとのウコン供給原料を基準にして、４．５２重量％であり、３７．８％のクルクミノイド純度をともなった。クルクミノイド分布、またはクルクミノイドの質量％プロフィールは、クルクミン３５．１％、ビスデメトキシクルクミン３９．０％、およびデメトキシクルクミン２５．９％であった。この抽出プロセスでは、ＳＦＥ残渣供給原料中のクルクミノイド化学成分の８３．３％を抽出することができ、もとの自生ウコン種供給原料を基準にして、１１．９％の総収率をともなった。固体残渣（底部層）は、ウコンペプチドタンパク質およびウコン多糖類の精製分画を得るためのさらなる加工処理のために取り置かれた（工程５、６、および７）。
【０１７８】
（表１４．工程１のＳＦＥ残渣を供給原料として用いることによる、浸出歩留まりおよび抽出物中のクルクミノイド純度）
【０１７９】
【表１４】
2009530305.tif 000016
（実施例４）
（エタノール浸出生成物のＳＣＣＯ２精製の実施例）
クルクミノイド強化エタノール浸出プロセス抽出生成物の３００ｇポーションが、２，０００ｇのガラスビーズ（Ｏ．Ｄ．＝８０ｍｍ）と混合され、次いで２４Ｌ  ＳＦＥ抽出容器中に装入された。ひとたび抽出温度および圧力が調節されたら、二酸化炭素流が開始された。圧縮ＣＯ２は、抽出容器中の垂直に取り付けられた床を通って上方へ流れるままにされた。親油性物質、例えばクルクミノイドが抽出された。この溶液は、抽出容器を離れて、圧力降下バルブを通り、分離器１に流入し、ここでＣＯ２は、再循環のために蒸発された。抽出物溶液の段階的沈殿は、直列の３つの分離器を用いて、３段階において溶媒圧力および温度を解放することによって達成された。分離器１において圧力および温度を降下させた後、クルクミノイドを含有する重質生成物が、分離器１において沈殿した。ＨＰＬＣ分析で本質的にクルクミノイドを含まない親油性化学成分から構成された、軽質な方の生成物が、分離器２および３に回収され、廃棄された。この流体の流量は、質量流量計を用いて、３．５ｋｇ／分であると測定された。総試験時間は１２０分であり、溶媒／供給原料比は４２６であった。抽出容器の条件は、４００バールの圧力、９０℃の温度であった。これらの分離器についての圧力および温度は、次のように設定された：分離器１  −  １７０バール、６３℃；分離器２  −  １３０バール、６５℃；および分離器３  −  ６０バール、２８℃。分離器１の抽出生成物の結果は、表１５に示されている。この抽出物のクルクミノイド化学成分をさらに精製およびプロフィールするために、追加のＳＣＣＯ２抽出および分別工程（工程４）が必要とされた。
【０１８０】
（表１５．供給原料としての工程１のＳＦＥ残渣の工程２のエタノール浸出抽出を用いた、ＳＣＣＯ２プロセス（工程３）収率、および抽出生成物中のクルクミノイド純度）
【０１８１】
【表１５】
2009530305.tif 000017
（実施例５）
（工程３のクルクミノイド抽出生成物の精製およびプロファイリングの実施例）
工程３の抽出生成物１０ｇが、４０ｍｌ（４５ｇ）のガラスビーズ（直径＝４ｍｍ）と混合され、次いで、２４Ｌ生産スケールシステムに基づいたモデルの、自社独自的なＨｅｒｂａｌＳｃｉｅｎｃｅ設計の１Ｌ実験室規模ＳＦＥ分別系の１Ｌ抽出容器１の中に装入された。パージおよび浸出テスト後、抽出容器は、４１３バールの圧力、および９０℃の温度にされた。分別のために２つの分離器が用いられた。分離器１の温度および圧力は、６５℃および１７０バールへ設定され、分離器２の温度および圧力は、６５℃および１３０バールへ設定された。ひとたびこの系が、設定条件において平衡に達したら、二酸化炭素は、４０Ｌ／分の流量で、抽出容器中の垂直に取り付けられた供給原料床の底部から頂部まで流れる。総二酸化炭素フロー時間は１２０分であり、溶媒対供給原料比は７０５であった。これらの分離器の各々において抽出された分画は、クルクミノイド化学成分の同定、およびこれらの成分の純度の計算のために、ＨＰＬＣを用いて分析された。これらの結果は、表１６に示されている。
【０１８２】
（表１６．工程３の抽出生成物のＳＣＣＯ２精製およびプロファイリング）
【０１８３】
【表１６】
2009530305.tif 000018
（強化クルクミノイド抽出生成物の精製およびプロファイリングの実施例）
クルクミノイドの精製および分別プロファイリングの別の実施例において、Ｓｕａｎ  Ｆａｒｍａ，Ｉｎｃ．から購入された高度にクルクミノイド濃縮された抽出生成物（ロット番号：ＣＬ０２００５）が、供給原料として用いられた。この供給原料抽出物において、総クルクミノイド濃度は、９１．１４質量％であり、次のようなクルクミノイド分布をともなった：クルクミン（Ｃ）６８．２２％；デメトキシクルクミン（ＤＭＣ）９．６３％；およびビスデメトキシクルクミン（ＢＤＭＣ）４．８１％。１，２００ｇのガラスビーズ（Ｏ．Ｄ．＝１ｃｍ）と混合されたこの抽出生成物３００ｇが、２４Ｌ抽出容器中に装入された。抽出温度および圧力が調節され、次いで二酸化炭素供給が開始された。圧縮された二酸化炭素が、抽出容器中の垂直に取り付けられた供給原料の床を通って上方に流れるままにされ、クルクミノイドを含む親油性化学成分が抽出された。３０分毎に、１．３８Ｌエタノール共溶媒が、高圧Ｈａｓｋｅｌ液体ポンプを用いて、抽出容器の底部から添加され、動的ＣＯ２流を開始させる前に５分間放置された。抽出溶液は、圧力降下バルブを通って抽出容器を離れ、分離器１に流入し、ここで二酸化炭素が、再循環のために蒸発された。抽出物の段階的な沈殿が、直列の３つの分離器を用いて３段階で圧力および温度を低下させて達成された。圧力を降下させた後、最も重質な化学成分が分離器１中に沈殿し、比較的軽い化学成分が分離器２および３において沈殿した。消費された二酸化炭素の総重量が、質量流量計およびフロー時間によって測定された。圧力は、抽出容器については＋／−３バールの精度、分離容器については＋／−１バールの精度で、自動背圧バルブによって設定された。温度は、サーモスタットを用いて、＋／−１℃の精度で調節された。この流体の流速は、質量流量計を用いて測定された。加工処理時間は２時間であり、ＣＯ２流量は３．５ｋｇ／分であった。無水エタノールの５．５Ｌの容量が、共溶媒として用いられた。エタノール共溶媒は、分離器３においてＣＯ２から相分離され、この系におけるエタノール蓄積を避けるために、３０分毎にこの系から引き出された。エタノールは、蒸留を介して再循環された。この実施例の抽出の結果は、表１７および１８に示されている。
【０１８４】
（表１７．Ｓｕａｎ  Ｆａｒｍａ供給原料についてのＳＣＣＯ２抽出／分別条件および収率）
【０１８５】
【表１７】
2009530305.tif 000019
（表１８．Ｓｕａｎ  Ｆａｒｍａ供給原料についてのＳＣＣＯ２分離器１の抽出／プロファイリング抽出生成物）
【０１８６】
【表１８】
2009530305.tif 000020
＊収率質量／供給原料質量
＊＊クルクミン質量／収率質量
（実施例６）
（工程２の残渣の水浸出の実施例）
３０ｇのウコンエタノール抽出残渣（工程２）が、オープンフラスコに３時間９０℃で、２０容量の蒸留水とともに一定の磁気撹拌をともなって装入された。スラリーが、１５分間３，０００ｒｐｍで遠心分離された。上清が収集された。総乾燥質量収率は、もとの供給原料を基準にして、９．９％であった。水を蒸発させ、抽出物を約６０％濃縮させるために、回転蒸発が用いられた。固体残渣が廃棄された。分析結果は、表１９に「粗材料」として列挙されている。
【０１８７】
（表１９．エタノールおよび多糖類分析によって沈殿させられたウコン種水抽出物の収率）
【０１８８】
【表１９】
2009530305.tif 000021
（実施例７）
（工程６の多糖類分画および精製の実施例）
工程５からの濃縮上澄み溶液が、最終６０％エタノール／水濃度溶液を作るのに十分なエタノールを添加して希釈された。これは結果として、水溶性、エタノール不溶性多糖類の沈殿を生じる。この溶液は次いで、３，０００ｒｐｍで１５分間遠心分離され、次いでこの沈殿物からデカントされた。残渣溶液は、精製ターメリン（ペプチド）分画を得るためのさらなる加工処理（工程７）のために取り置かれた。沈殿物収率は、もとのウコン種供給原料を基準にして、６．４質量％であった。沈殿物中に残留するエタノールおよび水は、回転蒸発を用いて除去された。乾燥された沈殿物は、比色方法を用いて多糖類含量について測定された。これらの結果は表１５に見られる。６０％エタノール／水溶液を用いた多糖類沈殿が選ばれたが、それは、より高い濃度のエタノールが多糖類沈殿物の収率に実質的に加わらなかったからである。さらには、残渣溶液の１９０〜３００ｎｍのＵＶ走査は、約２０２ｎｍでの最大吸光度（ターメリンペプチド結合による吸光度）が８０％エタノール／水溶液中に消滅することを明らかにした。またはより高い濃度は、ペプチド、すなわちターメリンがこれらのエタノール濃度において沈殿して行くことを示した。
【０１８９】
６０％エタノール沈殿によって得られた多糖類分画をさらに精製するために、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−１０カラムが用いられた。Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−１０は、架橋デキストラン分子の小さい多孔質球形ビーズからなる。Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−１０は、１０〜４０μｍ直径の球形ビーズの形態において、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｓ，Ｍｏ）から供給された。材料中の細孔は、水中に懸濁された時、７００未満の分子量の分子を受け入れるであろう。Ｓｅｐｈａｄｅｘビーズは、１６時間、蒸留水で水和された。カラムは、３０ｍｌの床を作るために、Ｓｅｐｈａｄｅｘ懸濁液の添加によって調製された。沈殿多糖類は、蒸留水中に、１質量％の濃度まで溶解され、カラム上に装入された。供給原料装入流量は、約１．８床容量／時である。流出液が収集され、多糖類含量について測定された。比色分析の結果は表２０に示されている。さらには、ＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量分析法が、多糖類分画を含んでいる化合物の分子量をさらにプロフィールするために用いられた。これらの結果は、図９、１０、４２〜４６、および５７〜６１に示されている。これらのデータは、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−１０カラムが、ウコン種多糖類分画を約９２％のレベルまで精製することができ、もとの供給原料を基準にして、４．５重量％の収率をともなうことを示している。
【０１９０】
（表２０．供給原料としてエタノール抽出残渣を用いた、水抽出物および６０％エタノール沈殿物についての多糖類分析（工程２））
【０１９１】
【表２０】
2009530305.tif 000022
（実施例８）
（工程７のターメリン分画抽出および精製の実施例）
工程６の多糖類分画抽出からの上清残渣溶液は、０．３質量％濃度を有することが発見された（４３８．９ｇのエタノール／水溶液中の１．３ｇ固体）。この濃度濃縮溶液は次いで、リン酸緩衝生理食塩水溶液（０．０１Ｍ  ＮａＣｌ、０．００２７Ｍ  ＫＣｌ、７．４ｐＨ、２５℃）で、１ｍｇ／ｍｌの最終濃度に希釈された（総溶液＝１，３００ｍｌ）。この溶液は次いで、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−１０カラムおよびＤｏｗｅｘカチオン交換カラムによって精製された。
【０１９２】
Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−１０ビーズは、２００ｍｌの蒸留水中に１６時間浸漬された。水がデカントされ、これらのビーズは、新鮮な蒸留水と混合されて、スラリーが作られた。カラムは、Ｓｅｐｈａｄｅｘスラリーの３０ｍｌ床で充填された。１ｍｇ／ｍｌ溶液の１７５ｍｌの容量が、１２時間にわたってカラム中に装入された（１４．６ｍｌ／ｈ）。流出液が収集された。質量分析は、１４．５％固体がこの工程の間に除去され、溶液中に０．１５０ｇの固体を残した。
【０１９３】
交換基としてスルホン酸（−ＳＯ３Ｈ）基を有するＤｏｗｅｘ５０−ＷＸ２−２００強酸カチオン交換樹脂ビーズが、流出溶液のさらなる精製のために用いられた。Ｄｏｗｅｘ樹脂ビーズは、デカントされた蒸留水で洗浄された。Ｄｏｗｅｘは次いで、０．１Ｍ  ＨＣｌ中に１時間浸漬され、スラリーが作られた。Ｄｏｗｅｘスラリーは、ガラスカラム中に装入され、３５ｍｌ床を作った。この樹脂床は、蒸留水の３床容量で濯ぎ洗いされた。洗浄後、ＤｏｗｅｘスラリーのｐＨは、２．４であった。上のＳｅｐｈａｄｅｘ工程からの流出液が、２ｍｌ／分の率でカラム上に装入された。Ｄｏｗｅｘカラムは次いで、ＨＣｌで４．２２に調節されたｐＨを有するリン酸緩衝生理食塩水溶液で、１．９ｍｌ／分の流量で９０分間溶離された。流出溶液および溶離溶液は、個別に収集され、物質収支およびタンパク質含量について分析された。物質収支は、装入された固体（０．０６８ｇ）の４５．５％が、溶離溶液中にあり、５４．５％（０．０８２ｇ）が、流出溶液中にあることを実証した。流出液は、回転蒸発器を用いて蒸発され、最終ターメリン分画生成物が、オブン乾燥された。
【０１９４】
工程６および７からのサンプルのすべてが、ＵＶ分光計、Ｂｒａｄｆｏｒｄタンパク質分析、および物質収支によって分析された。これらの分析の結果は、表２１に示されている。ＵＶスペクトル結果は、図８に記録されている。ＤＡＲＴ質量分析クロマトグラムが、図４７および６２に現われている。
【０１９５】
（表２１．各工程におけるタンパク質歩留まりおよびＢｒａｄｆｏｒｄ分析結果）
【０１９６】
【表２１】
2009530305.tif 000023
（実施例９）
次の成分が、配合物のために混合される：
【０１９７】
【化１】
2009530305.tif 000024
新規ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ  Ｌ．は、精製精油分画、クルクミノイド分画、ターメリン分画、および多糖類分画を、天然根茎材料または従来の抽出生成物中に見られるものよりも大きい質量％で含む。これに加えて、クルクミノイド分画中のクルクミノイドの純度は、クルクミノイド化学成分の８５質量％超のウコンで９５％超である。これらの配合物は、いずれかの経口投薬形態に作られ、所望の生理学的および心理学的効果（記憶および認知の強化、鎮痛、および慢性関節障害、リウマチ障害、および炎症障害からの緩和）および医学的効果（酸化防止およびフリーラジカル捕捉、抗血小板凝集および抗血栓症、心臓血管および脳血管病予防および処置、抗アテローム性動脈硬化症、抗高コレステロール血症、細胞保護、神経系保護、神経変性病、例えばアルツハイマー病およびパーキンソン病予防および処置、抗炎症、抗アレルギー、免疫強化、抗ウイルス、抗慢性肺疾患、肝臓保護および疾患、抗消化性潰瘍病、抗ウイルスおよび抗−ＨＩＶ、および癌の予防および処置）のために必要に応じて毎日、または一日１５回まで投与することができる。
【０１９８】
（実施例１０）
次の成分が、次の配合物のために混合された：
【０１９９】
【化２】
2009530305.tif 000025
ｃｕｒｃｕｍａ  ｌｏｎｇａ  Ｌ．の新規抽出物は、精製新規精油、クルクミノイド、ターメリン、および多糖類化学成分分画を、天然植物性材料または従来の抽出生成物中に見られるものよりも大きい質量％で含む。同様に、ウコン種抽出物中のプロフィール変化にも注目されたい（供給原料中の精油／クルクミノイド比は、０．９７／１であり、抽出物中では０．２／１であった；供給原料中の精油／多糖類比は、１．１／１であり、抽出物中では０．６／１であった；供給原料中の精油／ターメリン比は、６６．４／１であり、抽出物中では３４／１であった；供給原料中のクルクミノイド／多糖類比は、１．２／１であり、抽出物中では２／０／１であった；供給原料中のクルクミノイド／ターメリン比は、６６．４／１であり、抽出物中では１１３／１であった；供給原料中の多糖類／ターメリン比は、５９／１であり、抽出物中では５６／１であった）。さらには、クルクミノイド分布は、天然供給原料植物性材料中のクルクミン６６％の濃度を、クルクミノイドの質量％として、７５％超へ増加するために改変された。この配合物は、いずれかの経口投薬形態に作ることができ、所望の生理学的、心理学的、および医学的効果のために、必要に応じて一日あたり１５回まで、安全に投与することができる（上記実施例１参照）。
【０２００】
（実施例１１）
凝集アッセイ  −  これらのアッセイは、５〜８０μＭの様々な濃度で本発明によるウコン抽出物で（図１１）、または７２時間の時点までの異なる時間ウコン抽出物および対照（１０μＭで）で（図１２）インキュベートされた合成Ａβ１−４２ペプチドを用いて実施され、凝集は、チオフラビンＴ方法によってモニターされた。チオフラビンＴ方法は主として、成熟したβ−プリーツシートアミロイド繊維を検出する。ウコン抽出物は、対照化合物と比較して、このアッセイにおけるＡβ１−４２凝集の有効な阻害剤であった。図１１に示されているように、ウコン抽出物は、１０または２０μＭにおいて、Ａβ１−４２凝集を有意に阻害する（Ｐ＜０．００１；ＡＮＯＶＡ）。さらに図１２は、Ａβ１−４２凝集へのウコン抽出物の時間依存的効果についてのデータを示している。１０μＭでのこれらの実験において、ウコン抽出物インキュベーションは、４８時間まで有意であり、７２時間のインキュベーションにおいてさらに増加した凝集の時間依存的阻害を示している。
【０２０１】
Ａβ  ＥＬＩＳＡ  −  ＡＰＰ（アミロイド先駆物質タンパク質）の切断へのウコン抽出物の効果を調べるために、ＳｗｅＡＰＰ  Ｎ２ａ細胞が、これらの化合物の各々の幅広い用量範囲で１２時間処理された。ウコン抽出物は、ＳｗｅＡＰＰ  Ｎ２ａ細胞におけるＡβ発生（Ａβ１−４０およびＡβ１−４２ペプチドの両方）を用量依存的に減少させることが発見された（図１２）。最も重要なことは、１０または２０μＭの濃度において、ウコン抽出物は、未処理細胞と比較して、ＳｗｅＡＰＰ  Ｎ２ａ細胞からのＡβ発生を３０〜３８％減少させる。
【０２０２】
（参考文献）
【０２０３】
【化３】
2009530305.tif 000026
【０２０４】
【化４】
2009530305.tif 000027
【図面の簡単な説明】
【０２０５】
【図１】図１は、精油分画の例示的調製方法を示す。
【図２】図２は、エタノール浸出抽出物の例示的実施方法を示す。
【図３】図３は、エタノール抽出されたクルクミノイド分画の例示的ＳＣＣＯ２精製方法を示す。
【図４】図４は、クルクミノイドの例示的精製およびプロファイリング方法を示す。
【図５】図５は、エタノール浸出抽出からの残渣の水浸出の例示的実施方法を示す。
【図６】図６は、多糖類分画の例示的調製方法を示す。
【図７】図７は、ターメリン分画の例示的調製方法を示す。
【図８】図８は、ターメリン抽出方法についての２００〜３００ｎｍのＵＶスペクトル走査を示す。
【図９】図９は、本発明の１つの実施形態による、精製ウコン根多糖類分画についての代表的ＤＡＲＴマススペクトル正イオンモードフィンガープリントを示す。
【図１０】図１０は、本発明の１つの実施形態による、精製ウコン根多糖類分画についての代表的ＤＡＲＴマススペクトル負イオンモードフィンガープリントを示す。
【図１１】図１１は、チオフラビンＴアッセイで決定された、Ａβ１−４２凝集に対するウコン抽出物の効果を示す。（５０μＭにおける）Ａβ１−４２ペプチドが、３７℃においてそのままで、および指摘されているような様々な用量で７２時間、ウコン抽出物または対照化合物の存在下においてもインキュベートされた。すべての実験は、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ緩衝液（ｐＨ７．４）中で実施された。データは、相対蛍光単位（ｎ＝３）として表わされている。一元ＡＮＯＶＡ、次いでこの後の比較は、１０および２０μＭ処理濃度において、ウコン根抽出物と対照化合物との間の有意な差を明らかにした（Ｐ＜０．００１、ＡＮＯＶＡ）。
【図１２】図１２は、チオフラビンＴアッセイで決定された、Ａβ１−４２凝集に対するウコン抽出物の効果を示す。Ａβ１−４２ペプチド（５０μＭにおいて）が、３７℃においてそのままで、およびウコン根抽出物または対照化合物（１０μＭにおいて）の存在下または不存在下においても、指摘されているような様々な時間インキュベートされた。データは、相対蛍光単位（ｎ＝３）として表わされている。一元ＡＮＯＶＡ、次いでこの後の比較は、４８時間および７２時間インキュベーションにおいて、ウコン根抽出物と対照化合物との間の有意な差を明らかにした（Ｐ＜０．００１）。
【図１３】図１３は、ウコン根抽出物処理が、培養されたニューロン細胞におけるＡβ発生をどのように阻害するかをを示す。Ａβ１−４０、４２ペプチドが、ＥＬＩＳＡによってＳｗｅＡＰＰ  Ｎ２ａ細胞からの状態調節された培地中で分析された（各々の条件についてｎ＝３）。データは、対照（未処理）に対するウコン根抽出物処理の１２時間後に分泌されたＡβ１−４０、４２ペプチドのパーセンテージとして表わされている。一元ＡＮＯＶＡ、次いでこの後の比較は、５、１０、２０、４０、および８０μＭ処理濃度において、ウコン根抽出物と対照化合物との間の有意な差を明らかにした（Ｐ＜０．００５）。
【図１４】図１４は、ウコン根抽出物＃１３９についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。テトラヒドロクルクミン（３７３．１６４２）（存在度＝０．１６）、クルクミン（３６９．１３３２）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３９．１２２８）（存在度＝１７．２７）、およびビスデメトキシクルクミン（３０９．１１３２）（存在度＝２．９３）が検出された。
【図１５】図１５は、ウコン根抽出物＃３１０についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。クルクミン（３６９．１３４９）（存在度＝３４．５４）、デメトキシクルクミン（３３９．１２５１）（存在度＝９．５１）、およびビスデメトキシクルクミン（３０９．１１４４）（存在度＝５．８２）が検出された。
【図１６】図１６は、ウコン根抽出物＃３１１についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。
【図１７】図１７は、ウコン根抽出物＃３１２についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。
【図１８】図１８は、ウコン根抽出物＃３１３についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。
【図１９】図１９は、ウコン根抽出物＃３１４についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。テトラヒドロクルクミン（３７３．１６６７）（存在度＝０．５５）、クルクミン（３６９．１３４５）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３９．１２３９）（存在度＝２０．４１）、およびビスデメトキシクルクミン（３０９．１１３８）（存在度＝５．１８）が検出された。
【図２０】図２０は、ウコン根抽出物＃３１５についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。テトラヒドロクルクミン（３７３．１６７４）（存在度＝０．３７）、クルクミン（３６９．１３５８）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３９．１２３６）（存在度＝１６．５８）、およびビスデメトキシクルクミン（３０９．１１３５）（存在度＝３．５０）が検出された。
【図２１】図２１は、ウコン根抽出物＃３１６についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。テトラヒドロクルクミン（３７３．１６３１）（存在度＝０．３６）、クルクミン（３６９．１３６）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３９．１２２８）（存在度＝２２．８４）、およびビスデメトキシクルクミン（３０９．１１２２）（存在度＝７．５９）が検出された。
【図２２】図２２は、ウコン根抽出物＃３１７についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。テトラヒドロクルクミン（３７３．１６４２）（存在度＝０．２６）、クルクミン（３６９．１３４３）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３９．１２３８）（存在度＝２５．３１）、およびビスデメトキシクルクミン（３０９．１１４）（存在度＝５．７５）が検出された。
【図２３】図２３は、ウコン根抽出物＃１３９についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。クルクミン（３６７．１１６）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３７．１０６）（存在度＝３５．４８）、およびビスデメトキシクルクミン（３０７．０９６５）（存在度＝９．０２）が検出された。
【図２４】図２４は、ウコン根抽出物＃３１０についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。クルクミン（３６７．１１２７）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３７．１０３３）（存在度＝５０．０６）、およびビスデメトキシクルクミン（３０７．０９４２）（存在度＝４４．２６）が検出された。
【図２５】図２５は、ウコン根抽出物＃３１１についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。クルクミン（３６７．１１２７）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３７．１０３３）（存在度＝４９．８２）、およびビスデメトキシクルクミン（３０７．０９４１）（存在度＝４４．０４）が検出された。
【図２６】図２６は、ウコン根抽出物＃３１２についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。クルクミン（３６７．１１３）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３７．１０４）（存在度＝１８．６２）、およびビスデメトキシクルクミン（３０７．０９９）（存在度＝３．０８）が検出された。
【図２７】図２７は、ウコン根抽出物＃３１３についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。クルクミン（３６７．１１３３）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３７．１０４１）（存在度＝１９．５６）、およびビスデメトキシクルクミン（３０７．０９７６）（存在度＝３．７５）が検出された。
【図２８】図２８は、ウコン根抽出物＃３１４についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。クルクミン（３６７．１１３３）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３７．１０４２）（存在度＝１９．７１）、およびビスデメトキシクルクミン（３０７．０９８２）（存在度＝３．９８）が検出された。
【図２９】図２９は、ウコン根抽出物＃３１５についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。クルクミン（３６７．１１２８）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３７．１０３６）（存在度＝２６．３２）、およびビスデメトキシクルクミン（３０７．０９５３）（存在度＝８．３８）が検出された。
【図３０】図３０は、ウコン根抽出物＃３１６についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。テトラヒドロクルクミン（３７１．１３０６）（存在度＝０．９９）、クルクミン（３６７．１１３１）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３７．１０４３）（存在度＝２６．５４）、およびビスデメトキシクルクミン（３０７．０９５８）（存在度＝９．４８）が検出された。
【図３１】図３１は、ウコン根抽出物＃３１７についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。クルクミン（３６７．１１２８）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３７．１０３５）（存在度＝３５．４８）、およびビスデメトキシクルクミン（３０７．０９４８）（存在度＝８．４３）が検出された。
【図３２】図３２は、７５％ＥｔＯＨ溶液（ＨＳ＃１３６）でのウコン根抽出物についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。テトラヒドロクルクミン（３７３．１６７８）（存在度＝０．４１）、クルクミン（３６９．１４１８）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３９．１３０４）（存在度＝２２．００）、およびビスデメトキシクルクミン（３０９．１２０１）（存在度＝５．３６）が検出された。
【図３３】図３３は、８０％ＥｔＯＨ溶液（ＨＳ＃１３７）でのウコン根抽出物についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。テトラヒドロクルクミン（３７３．１６５５）（存在度＝１．０９）、クルクミン（３６９．１３３０）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３９．１２４）（存在度＝１８．０４）、およびビスデメトキシクルクミン（３０９．１１３１）（存在度＝５．１０）が検出された。
【図３４】図３４は、８５％ＥｔＯＨ溶液（ＨＳ＃１３８）でのウコン根抽出物についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。テトラヒドロクルクミン（３７３．１７２２）（存在度＝０．３１）、クルクミン（３６９．１３６５）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３９．１２５４）（存在度＝１３．１４）、およびビスデメトキシクルクミン（３０９．１１５６）（存在度＝２．４８）が検出された。
【図３５】図３５は、商業的に入手しうる（Ｈａｒａ種）ウコン根（ＨＳ＃１６０）についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。クルクミン（３６９．１３２）（存在度＝０．３１）が検出された。
【図３６】図３６は、中国からのウコン根（ＨＳ＃１６１）についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。クルクミン（３６９．１２７３）（存在度＝１．２０）が検出された。
【図３７】図３７は、インドからのウコン根（ＨＳ＃１６２）についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。クルクミン（３６９．１３３５）（存在度＝０．５４）が検出された。
【図３８】図３８は、商業的に入手しうる（シンガポール、タイ、英国）ウコン根（ＨＳ＃１６３）についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。クルクミン（３６９．１３２）（存在度＝２０．８０）、デメトキシクルクミン（３３９．１２）（存在度＝４．８３）、およびビスデメトキシクルクミン（３０９．１１１）（存在度＝２．０５）が検出された。
【図３９】図３９は、商業的に入手しうる（シンガポール、タイ、英国）ウコン根（ＨＳ＃１６４）についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。クルクミン（３６９．１３４）（存在度＝１１．０２）、デメトキシクルクミン（３３９．１２０５）（存在度＝２．１８）、およびビスデメトキシクルクミン（３０９．１１２２）（存在度＝１．４６）が検出された。
【図４０】図４０は、商業的に入手しうる（Ｓｕａｎ  Ｆａｒｍｓ）ウコン根（ＨＳ＃１６５）についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。テトラヒドロクルクミン（３７３．１６５８）（存在度＝０．２８）、クルクミン（３６９．１３３１）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３９．１２２１）（存在度＝１６．２６）、およびビスデメトキシクルクミン（３０９．１１６）（存在度＝２．６５）が検出された。
【図４１】図４１は、ナポリからのウコン根（ＨＳ＃１６６）についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。クルクミン（３６９．１３４５）（存在度＝３．９４）、デメトキシクルクミン（３３９．１１９８）（存在度＝０．３５）、およびビスデメトキシクルクミン（３０９．１１０６）（存在度＝０．１４）が検出された。
【図４２】図４２は、商業的に入手しうるウコン根（Ｈａｒａ  Ｓｐｉｃｅ）（ＨＳ＃３０２）の抽出物から２０％ＥｔＯＨ溶液によって沈殿された多糖類についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。
【図４３】図４３は、商業的に入手しうるウコン根（Ｈａｒａ  Ｓｐｉｃｅ）（ＨＳ＃３０３）の抽出物から４０％ＥｔＯＨ溶液によって沈殿された多糖類についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。
【図４４】図４４は、商業的に入手しうるウコン根（Ｈａｒａ  Ｓｐｉｃｅ）（ＨＳ＃３０４）の抽出物から２０％ＥｔＯＨ溶液によって沈殿された多糖類についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。
【図４５】図４５は、商業的に入手しうるウコン根（Ｈａｒａ  Ｓｐｉｃｅ）（ＨＳ＃３０５）の抽出物から８０％ＥｔＯＨ溶液によって沈殿された多糖類についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。
【図４６】図４６は、商業的に入手しうるウコン根（Ｈａｒａ  Ｓｐｉｃｅ）（ＨＳ＃３０６）の抽出物から９５％ＥｔＯＨ溶液によって沈殿された多糖類についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。クルクミン（３６９．１４３１）（存在度＝３．６６）、デメトキシクルクミン（３３９．１４３６）（存在度＝０．７３）、およびビスデメトキシクルクミン（３０９．１１８７）（存在度＝０．９７）が検出された。
【図４７】図４７は、商業的に入手しうるウコン根（Ｈａｒａ  Ｓｐｉｃｅ）（ＨＳ＃３０７）の抽出物からの６０％上清から加工処理されたポリペプチドターメリンについてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（正イオンモード）を示す。
【図４８】図４８は、ウコン根（ＨＳ＃１３６）の７５％ＥｔＯＨ抽出物についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。クルクミン（３６７．１１２３）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３７．１０２８）（存在度＝４２．６０）、およびビスデメトキシクルクミン（３０７．０９４１）（存在度＝１４．０９）が検出された。
【図４９】図４９は、ウコン根（ＨＳ＃１３８）の８５％ＥｔＯＨ抽出物についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。クルクミン（３６７．１１１７）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３７．１０３）（存在度＝２３．６１）、およびビスデメトキシクルクミン（３０７．０９５３）（存在度＝５．４６）が検出された。
【図５０】図５０は、商業的に入手しうる（Ｈａｒａ  Ｓｐｉｃｅ）ウコン根（ＨＳ＃１６０）についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。クルクミン（３６７．１１２５）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３７．１０３３）（存在度＝３３．８９）、およびビスデメトキシクルクミン（３０７．０９４０）（存在度＝１９．４６）が検出された。
【図５１】図５１は、中国からのウコン根（ＨＳ＃１６１）についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。テトラヒドロクルクミン（３７１．１３３５）（存在度＝４．３４）、クルクミン（３６７．１１２６）（存在度＝１００）、デメトキシクルクミン（３３７．１０３５）（存在度＝９０．３１）、およびビスデメトキシクルクミン（３０７．０９４３）（存在度＝３９．５８）が検出された。
【図５２】図５２は、インドからのウコン根（ＨＳ＃１６２）についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。クルクミン（３６７．１１２９）（存在度＝０．１６）、デメトキシクルクミン（３３７．１０４１）、およびビスデメトキシクルクミン（３０７．０９４４）が検出された。
【図５３】図５３は、商業的に入手しうる（シンガポール、タイ、英国）ウコン根（ＨＳ＃１６３）についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。クルクミン（３６７．１１４２）、デメトキシクルクミン（３３７．１０５２）、およびビスデメトキシクルクミン（３０７．０９６３）が検出された。
【図５４】図５４は、商業的に入手しうる（シンガポール、タイ、英国）ウコン根（ＨＳ＃１６４）についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。クルクミン（３６７．１１４７）、デメトキシクルクミン（３３７．１０５９）、およびビスデメトキシクルクミン（３０７．０９５）が検出された。
【図５５】図５５は、商業的に入手しうる（Ｓｕａｎ  Ｆａｒｍｓ）ウコン根（ＨＳ＃１６５）についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。テトラヒドロクルクミン（３７１．１２８２）、クルクミン（３６７．１１５１）、デメトキシクルクミン（３３７．１０６１）、およびビスデメトキシクルクミン（３０７．０９８１）が検出された。
【図５６】図５６は、ナポリからのウコン根（ＨＳ＃１６６）についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。クルクミン（３６７．１１５２）、デメトキシクルクミン（３３７．１０６４）、およびビスデメトキシクルクミン（３０７．０９６６）が検出された。
【図５７】図５７は、商業的に入手しうるウコン根（Ｈａｒａ  Ｓｐｉｃｅ）（ＨＳ＃３０２）の抽出物からの２０％ＥｔＯＨ溶液によって沈殿された多糖類についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。
【図５８】図５８は、商業的に入手しうるウコン根（Ｈａｒａ  Ｓｐｉｃｅ）（ＨＳ＃３０３）の抽出物から４０％ＥｔＯＨ溶液によって沈殿された多糖類についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。
【図５９】図５９は、商業的に入手しうるウコン根（Ｈａｒａ  Ｓｐｉｃｅ）（ＨＳ＃３０４）の抽出物から６０％ＥｔＯＨ溶液によって沈殿された多糖類についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。
【図６０】図６０は、商業的に入手しうるウコン根（Ｈａｒａ  Ｓｐｉｃｅ）（ＨＳ＃３０５）の抽出物から８０％ＥｔＯＨ溶液によって沈殿された多糖類についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。クルクミン（３６７．１１０７）およびデメトキシクルクミン（３３７．１１１４）が検出された。
【図６１】図６１は、商業的に入手しうるウコン根（Ｈａｒａ  Ｓｐｉｃｅ）（ＨＳ＃３０６）の抽出物から９５％ＥｔＯＨ溶液によって沈殿された多糖類についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。クルクミン（３６７．１１４１）が検出された。
【図６２】図６２は、商業的に入手しうるウコン根（Ｈａｒａ  Ｓｐｉｃｅ）（ＨＳ＃３０７）の抽出物から６０％上清で加工処理されたポリペプチドターメリンについてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（負イオンモード）を示す。クルクミン（３６７．１１６３）が検出された。
【図６３】図６３は、４０℃および８０バールにおけるウコン根のＣＯ２超臨界抽出物からの精油分画についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（ＨＳ＃１６０）（正イオンモード）を示す。
【図６４】図６４は、４０℃および３００バールにおけるウコン根のＣＯ２超臨界抽出物からの精油分画についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（ＨＳ＃１６０）（正イオンモード）を示す。
【図６５】図６５は、４０℃および５００バールにおけるウコン根のＣＯ２超臨界抽出物からの精油分画についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（ＨＳ＃１６０）（正イオンモード）を示す。
【図６６】図６６は、６０℃および１００バールにおけるウコン根のＣＯ２超臨界抽出物からの精油分画についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（ＨＳ＃１６０）（正イオンモード）を示す。
【図６７】図６７は、６０℃および３００バールにおけるウコン根のＣＯ２超臨界抽出物からの精油分画についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（ＨＳ＃１６０）（正イオンモード）を示す。
【図６８】図６８は、８０℃および１００バールにおけるウコン根のＣＯ２超臨界抽出物からの精油分画についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（ＨＳ＃１６０）（正イオンモード）を示す。
【図６９】図６９は、８０℃および３００バールにおけるウコン根のＣＯ２超臨界抽出物からの精油分画についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（ＨＳ＃１６０）（正イオンモード）を示す。
【図７０】図７０は、４０℃および５００バールにおけるウコン根のＣＯ２超臨界抽出物からの精油分画についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（ＨＳ＃１６４）（正イオンモード）を示す。
【図７１】図７１は、４０℃および８０バールにおけるウコン根のＣＯ２超臨界抽出物からの精油分画についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（ＨＳ＃１６０）（負イオンモード）を示す。
【図７２】図７２は、４０℃および３００バールにおけるウコン根のＣＯ２超臨界抽出物からの精油分画についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（ＨＳ＃１６０）（負イオンモード）を示す。
【図７３】図７３は、４０℃および５００バールにおけるウコン根のＣＯ２超臨界抽出物からの精油分画についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（ＨＳ＃１６０）（負イオンモード）を示す。
【図７４】図７４は、６０℃および１００バールにおけるウコン根のＣＯ２超臨界抽出物からの精油分画についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（ＨＳ＃１６０）（負イオンモード）を示す。
【図７５】図７５は、６０℃および３００バールにおけるウコン根のＣＯ２超臨界抽出物からの精油分画についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（ＨＳ＃１６０）（負イオンモード）を示す。
【図７６】図７６は、８０℃および１００バールにおけるウコン根のＣＯ２超臨界抽出物からの精油分画についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（ＨＳ＃１６０）（負イオンモード）を示す。
【図７７】図７７は、８０℃および３００バールにおけるウコン根のＣＯ２超臨界抽出物からの精油分画についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（ＨＳ＃１６０）（負イオンモード）を示す。
【図７８】図７８は、４０℃および５００バールにおけるウコン根のＣＯ２超臨界抽出物からの精油分画についてのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴマススペクトル（ＨＳ＃１６４）（負イオンモード）を示す。
【図７９】図７９は、本明細書において「クルクミノイド」と呼ばれている化合物群を一緒に形成する、クルクミン、テトラヒドロクルクミン、デメトキシクルクミン、およびビスデメトキシクルクミンの化学構造を示す。
【図８０】図８０は、ウコン抽出物の精油分画中に見られる化合物のいくつかの化学構造を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
2009530305.tif 000035
【図９】
2009530305.tif 000036
【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
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【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
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【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【図６４】
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【図６５】
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【図６６】
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【図６７】
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【図６８】
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【図６９】
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【図７０】
2009530305.tif 000097
【図７１】
2009530305.tif 000098
【図７２】
2009530305.tif 000099
【図７３】
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【図７４】
2009530305.tif 000101
【図７５】
2009530305.tif 000102
【図７６】
2009530305.tif 000103
【図７７】
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【図７８】
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【図７９】
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【図８０】
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【手続補正書】
【提出日】平成20年12月29日(2008.12.29)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
図９、図１０、または図１４〜図７８のいずれかに記載のリアルタイム直接分析（ＤＡＲＴ）質量分析法クロマトグラムを有する分画を含んでいる、ウコン種抽出物。
【請求項２】
前記分画が、図１４〜図３１、図３６、図３７、図４１、図５１、図５２、または図５６のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する、請求項１に記載のウコン種抽出物。
【請求項３】
図３５、図３８〜図４０、図５０、または図５３〜図５５のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する、請求項１に記載のウコン種抽出物。
【請求項４】
図９、図１０、図４２〜図４６、または図５７〜図６１のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する、請求項１に記載のウコン種抽出物。
【請求項５】
図３２〜図３４、または図４７〜図４９のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する、請求項１に記載のウコン種抽出物。
【請求項６】
図６３〜図７８のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する、請求項１に記載のウコン種抽出物。
【請求項７】
図４７または図６２に記載のＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する、請求項１に記載のウコン種抽出物。
【請求項８】
前記抽出物が、図６３〜図７８のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する精油分画、および図９、図１０、図４２〜図４６、または図５７〜図６１のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する多糖類分画を含んでいる、請求項１に記載のウコン種抽出物。
【請求項９】
前記抽出物が、図６３〜図７８のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する精油分画、図９、図１０、図４２〜図４６、または図５７〜図６１のいずれかのＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有する多糖類分画、および図４７または図６２のＤＡＲＴ質量分析法クロマトグラムを有するターメリン分画を含んでいる、請求項１に記載のウコン種抽出物。
【請求項１０】
前記抽出物が、クルクミノイド、ターメロン、多糖類、および／またはターメリンを含んでいる、請求項１に記載のウコン種抽出物。
【請求項１１】
前記クルクミノイドは、クルクミン、テトラヒドロクルクミン、デメトキシクルクミン、ビスデメトキシクルクミン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１０に記載のウコン種抽出物。
【請求項１２】
前記クルクミノイドの量は、少なくとも約７５重量％である、請求項１０に記載のウコン種抽出物。
【請求項１３】
前記ターメロンは、α−ターメロン、ａｒ−ターメロン、β−ターメロン、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１０に記載のウコン種抽出物。
【請求項１４】
前記ターメロンの量は、少なくとも５重量％である、請求項１０に記載のウコン種抽出物。
【請求項１５】
前記ターメリンの量は、少なくとも約５重量％である、請求項１０に記載のウコン種抽出物。
【請求項１６】
前記多糖類は、ウコナンＡ、ウコナンＢ、ウコナンＣ、およびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項１０に記載のウコン種抽出物。
【請求項１７】
前記多糖類の量は、少なくとも約５重量％である、請求項１０に記載のウコン種抽出物。
【請求項１８】
請求項１に記載のウコン種抽出物を含んでいる、食品または薬剤。
【請求項１９】
アミロイド斑凝集または原線維形成に罹患している被験体を処置するための組成物であって、請求項１に記載のウコン種抽出物の有効量を含む、組成物。
【請求項２０】
前記被験体は、アルツハイマー病に罹患している、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記ウコン種抽出物がさらに、α−ボスウエリア酸および／またはβ−ボスウエリア酸、ならびに／あるいはそのＣ−酢酸塩の相乗作用量も含んでいる、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
前記被験体が、霊長類、ウシ、ヒツジ、ウマ、ブタ、げっ歯類、ネコ、またはイヌである、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２３】
前記被験体が、ヒトである、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２４】
アミロイド斑凝集または組織中の原線維形成を予防するための組成物であって、請求項１に記載のウコン種抽出物の有効量を含む、組成物。
【請求項２５】
前記ウコン種抽出物がさらに、α−ボスウエリア酸および／またはβ−ボスウエリア酸、ならびに／あるいはそのＣ−酢酸塩の相乗作用量も含んでいる、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
少なくとも１つの予め決定された特徴を有するウコン種抽出物を調製する方法であって、精油分画、クルクミノイド分画、多糖類分画、およびターメリン分画を生じるために、
ａ．超臨界二酸化炭素抽出によってウコン種植物性材料を抽出して、精油分画および第一残渣を生じる工程；
ｂ．ウコン種植物性材料または工程ａ）からの該第一残渣のいずれかを、超臨界二酸化炭素抽出によって抽出して、クルクミノイド分画および第二残渣を生じる工程；
ｃ．工程ｂ）からの該第二残渣を熱水抽出によって抽出して多糖類溶液を生じ、次いで該多糖類をエタノールで沈殿させて、多糖類分画および第三残渣を生じる工程；ならびに
ｄ．カラムクロマトグラフィによって、工程ｃ）からの該第三残渣からターメリン分画を分離する工程；
によって、ウコン種植物性材料を連続的に抽出する工程を含む、方法。
【請求項２７】
工程ａ）は、
１）粉砕されたウコン種植物性材料を抽出容器に装入する工程；
２）二酸化炭素を超臨界条件下で添加する工程；
３）該粉砕されたウコン種植物性材料と該二酸化炭素とをしばらくの間接触させる工程；および
４）前記精油分画を収集容器に収集する工程；
を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記超臨界条件が、約２５０バール〜約５００バールの圧力、および約３０℃〜約８０℃の温度を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
工程ａ）の抽出条件は、約２５０バール〜５００バールの抽出容器圧力、および約３５℃〜約９０℃の温度、ならびに約４０バール〜約１５０バールの分離収集容器圧力、および約２０℃〜約５０℃の温度を含む、請求項２７に記載の方法。
【請求項３０】
工程ｂ）は、
１）粉砕されたウコン種植物性材料または工程ａ）からの前記第一残渣のいずれかを抽出容器に装入する工程；
２）二酸化炭素を超臨界条件下で添加する工程；
３）該粉砕されたウコン種植物性材料または工程ａ）からの該第一残渣と該二酸化炭素とを、しばらくの間接触させる工程；および
４）前記クルクミノイド分画を、分別分離収集容器に収集する工程；
を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
工程ｂ）の抽出条件は、約３５０バール〜約７００バールの抽出容器圧力、および約６０℃〜約９５℃の温度、ならびに約１２０バール〜約２２０バールの分離収集容器圧力、および約５５℃〜約７５℃の温度を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
工程ｃ）は、
１）工程ｂ）からの前記第二残渣と水溶液とを約８５℃〜約１００℃で、多糖類を抽出するのに十分な時間接触させる工程；
２）固体多糖類を該溶液から、エタノール沈殿によって分離する工程；および
３）カラムクロマトグラフィを用いて多糖類分画を精製する工程；
を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３３】
工程ｄ）は、
１）高分子量分子と低分子量分子との分離のために、工程ｃ）からの前記第三残渣を、樹脂カラムに通過させる工程；および
２）カチオン交換樹脂カラムを用いてより高い分子量の流出溶液を精製して、該流出溶液から前記ターメリン分画を収集する工程；
を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３４】
請求項２６〜３３のいずれかに記載の方法によって調製されたウコン種抽出物。
【請求項３５】
クルクミン、該クルクミンの０．１重量％〜５重量％におけるテトラヒドロクルクミン、該クルクミンの１０重量％〜２０重量％におけるデメトキシクルクミン、および該クルクミンの１重量％〜５重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいる、ウコン種抽出物。
【請求項３６】
クルクミン、該クルクミンの０．１重量％〜５重量％におけるテトラヒドロクルクミン、該クルクミンの１５重量％〜２５重量％におけるデメトキシクルクミン、および該クルクミンの１重量％〜１０重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいる、ウコン種抽出物。
【請求項３７】
クルクミン、該クルクミンの０．１重量％〜５重量％におけるテトラヒドロクルクミン、該クルクミンの２０重量％〜３０重量％におけるデメトキシクルクミン、および該クルクミンの１重量％〜１０重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいる、ウコン種抽出物。
【請求項３８】
クルクミン、該クルクミンの３０重量％〜４０重量％におけるデメトキシクルクミン、および該クルクミンの５重量％〜１５重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいる、ウコン種抽出物。
【請求項３９】
クルクミン、該クルクミンの４５重量％〜５５重量％におけるデメトキシクルクミン、および該クルクミンの４０重量％〜５０重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいる、ウコン種抽出物。
【請求項４０】
クルクミン、該クルクミンの１５重量％〜２５重量％におけるデメトキシクルクミン、および該クルクミンの１重量％〜１０重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいる、ウコン種抽出物。
【請求項４１】
クルクミン、該クルクミンの０．１重量％〜５重量％におけるテトラヒドロクルクミン、該クルクミンの２０重量％〜３０重量％におけるデメトキシクルクミン、および該クルクミンの５重量％〜１５重量％におけるビスデメトキシクルクミンを含んでいる、ウコン種抽出物。
【国際調査報告】
2009530305.tif 000108