(57)【要約】  単糖類−Ｓ−Ｈで示されるチオ単糖類の調製工程であって、前記単糖類が式（Ｐ）単糖類−Ｓ−（Ｐ）に対応する化合物を対象として含み、バーチ還元する少なくとも４つの糖単位からなる（前記（Ｐ）はＯ−またはＳ−保護基（ｓ）を示す）、チオ単糖類の調製工程。【特許請求の範囲】
【請求項１】
単糖類−Ｓ−Ｈで示されるチオ単糖類の調製工程であって、前記単糖類が式（Ｐ）単糖類−Ｓ−（Ｐ）に対応する化合物を対象として含み、バーチ還元する少なくとも４つの糖単位からなる（前記（Ｐ）はＯ−またはＳ−保護基（ｓ）を示す）、チオ単糖類の調製工程。
【請求項２】
前記（Ｐ）がアシルまたはベンジルである、請求項１記載の工程。
【請求項３】
前記（Ｐ）がアセチルまたはベンジルである、請求項１記載の工程。
【請求項４】
前記、単糖類−Ｓ−Ｈが、
式（化合物７８）
【化７８】
2009526031.tif 000081
すなわち、α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）］−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−デオキシ−２−アセトアミド−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシルで示される、請求項１〜３のいずれかに記載の工程。
【請求項５】
前記、単糖類−Ｓ−Ｈが、
式（化合物４７）
【化４７】
2009526031.tif 000082
すなわち、｛２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）｝−｛２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−［２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）｝β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）］−２−デオキシ−２−アセトアミド−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシルで示される、請求項１〜３のいずれかに記載の工程。
【請求項６】
単糖類−ＳＨを単糖類−Ｓ−Ｓｅ−Ｒに変換し、および後者をタンパク質−ＳＨと反応する（前記Ｒは有機基である）、前記いずれかの請求項に記載の工程からなる単糖類−Ｓ−Ｓ−タンパク質で示される、糖タンパク質の調製方法。
【請求項７】
単糖類−ＳＨとタンパク質−Ｓ−Ｓｅ−Ｒが反応する（前記Ｒは請求項６で定義する）、前記いずれかの請求項に記載の工程からなる単糖類−Ｓ−Ｓ−タンパク質で示される、糖タンパク質の調製方法。
【請求項８】
単糖類−ＳＨの二量化を可能とし、および二量体が単糖類−Ｓ−Ｓ−単糖類とタンパク質−ＳＨと反応する、前記いずれかの請求項に記載の工程からなる単糖類−Ｓ−Ｓ−タンパク質で示される、糖タンパク質の調製方法。
【請求項９】
請求項５に記載の化合物。
【請求項１０】
請求項５に記載の化合物を二硫化した、
式（化合物４８）
【化４８】
2009526031.tif 000083
で示される化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はチオ糖類の合成を含む、糖タンパク質を製造するのに有用な方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
国際公開第ＷＯ２００５／００８６２号公報には、チオ糖類を伴うＳＨ基を有し、セレニウム反応を使用するタンパク質のカップリングのための工程が記載されている。これは化合物タンパク質−Ｓ−Ｓｅ−Ｒと単糖類−ＳＨまたはタンパク質−ＳＨとＲ−Ｓｅ−Ｓ−単糖類が反応し、タンパク質−Ｓ−Ｓ−単糖類を生成することを示し得る。Ｒは置換されてもよいアルキル、フェニル、ピリジルまたはナフチルと定義される。
【０００３】
多糖類の合成において、糖単位のカップリングはＯＨのような官能基の選択的保護を必要とする。アセチルおよびベンジルを含む、この目的のための種々の保護基が知られている。最終段階でそのような基の除去が必要となる。
【特許文献１】ＷＯ２００５／００８６２号公報
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ＢｏｏｎｓらのＣｈｅｍｉｓｔｒｙ ＆ Ｂｉｏｌｏｇｙ（２００３）１０，８７およびＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ（２００４），３３９，１８１に、後述する化合物７８のチオ−五糖類が開示されている。該調製はグリコシルクロリドとチオ酢酸カリウムが反応し、次いで脱保護することによるものである。本工程は再現性が容易ではない。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、Ｂｏｏｎｓらによって記載された工程の実用化が低い単糖類に限定されること、および既知の五糖類およびより高い単糖類をバーチ還元によって調製できるという発見に一部基づく。本発明の最初の態様によると、それゆえ、式単糖類−Ｓ−Ｈの多糖類の調製工程は、液体アンモニア中でアルカリ金属を伴う（Ｐ）単糖類−Ｓ−（Ｐ）の反応からなる（前記（Ｐ）はＯ−またはベンジルまたはアセチルのようなＳ−保護基を示す）。
【０００６】
単糖類−Ｓ−Ｈは国際公開第ＷＯ２００５／００８６２号公報に記載の手順により糖タンパク質に変換できる。Ｒは任意の適切な基となり得、例えば上記に定義したものであり、しかし関連する反応が生じる場合があれば、その正確な式は重要ではない。一方、本発明のさらなる態様では、二量化が可能となり得、式単糖類−Ｓ−Ｓ−単糖類の二量体を生じ、次いで糖タンパク質の調製は１またはそれ以上の二量体を伴う利用可能なＳＨ基を含むタンパク質の反応からなる。
【０００７】
チオ十糖類４７およびその二量体４８は、新規な化合物であり、それらは本発明のさらなる態様を構成する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
本発明（後述する化合物４６および７７に図示）で使用するブロック剤は通常、エステルまたはエーテルとしてブロックされたすべてのＯＨ基およびＳＨ基を有する。保護基は脂肪族化合物または芳香族化合物であり得、１２個以内の炭素原子を有し得る。好ましい例としてはアセチルおよびベンジルである。
【０００９】
反応物はまたブロックされたアミノ基も含み得る。それらは必ずしもバーチ還元により影響されない。
【００１０】
反応物および生成物は少なくとも４、好ましくは少なくとも５、例えば１０、１５または２０以内の単糖類単位を有する。
【００１１】
バーチ還元は液体アンモニア中でＬｉ、ＮａまたはＫ、好ましくはＮａのようなアルカリ金属を利用する。
【００１２】
上記に示すように、新規な反応の生成物は国際公開第ＷＯ２００５／００８６２号公報に記載の工程を用い、糖タンパク質に変換され得る。一方、タンパク質−ＳＨとの反応より前に、例えば、シンプルにはチオ糖類水溶液の空気への曝露により二量体が調整され得る。
【００１３】
本発明により製造される糖タンパク質は、１またはそれ以上、例えば２、３または４つの−Ｓ−Ｓ−単糖類基を有する。通常の従来技術の１つにより、容易に理解されるものとして、そのような基の数はタンパク質上の利用可能なＳＨ基の数に依存する。
【００１４】
いくつかのタンパク質は利用可能なＳＨ基を有する。それらは修飾され得ず、１またはそれ以上のＣｙｓ残渣を含む；発明中で使用するタンパク質−ＳＨは、例えば、国際公開第ＷＯ２００５／００８６２号公報に記載の部位特異的突然変異誘発法により調製され得る。修飾され得る有用なタンパク質の例は、エリスロポエチンおよびグルコセレブロシダーゼである。後述する実施例では、ＳＢＬ変種およびＳ１５６Ｃをモデルタンパク質として使用している。
【００１５】
以下に本発明の実施例を示す。特に；
１）十糖類４７、その二量体（化合物４８）およびカップリング、以下の三糖類７、１２および２９により示される部分のそれぞれの合成；および
２）五糖類７８、その二量体（化合物７９）およびカップリング、以下の二糖類６０および７０のそれぞれの合成を記載する。
【００１６】
次の略語を使用する：
ＯＴＣＡ  トリクロロアセトイミドエート
Ｌｅｖ  レブリニル
ＰＭＰ  ｐ−メトキシフェニル
ＮＰｈｔｈ  フタルイミド
Ｐｅｎｔ  ４−ペンテニル
ＴＢＤＭＳ  ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル
ガソリンは４０℃〜６０℃の範囲の沸点留分を指す。
【００１７】
［化合物１  ベンジルα−Ｄ−マンノピラノシド］
【００１８】
【化１】
2009526031.tif 000002
【００１９】
Ｄ−マンノース（６０ｇ）をベンジルアルコール（４００ｍＬ）に加えた。２４時間後、塩化アセチル（２４ｍＬ）を加え、混合物を６０℃で２時間攪拌した。次いで、混合物を室温で夜通し保管した。次いで、混合物を減圧下（約１０ｍｂａｒ）１１６℃に加熱し、余分なベンジルアルコールを除去した。乾燥フラッシュクロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：メタノール（１００：０）→（９２：８）］により得た固体を、イソプロパノール−ガソリンから再結晶し、化合物１を得た（２６．６ｇ）。
【００２０】
［化合物２  ベンジル３，４−Ｏ−（２’，３’−ジメトキシブタン−２’，３’−ジイル）−α−Ｄ−マンノピラノシド］
【００２１】
【化２】
2009526031.tif 000003
【００２２】
ブタン−２，３−ジオン（１．２７ｇ）、オルトギ酸トリメチル（３９．３ｇ）およびカンファースルホン酸（１．７２ｇ）を化合物１の乾燥メタノール（２００ｍＬ）溶液の混合物に加え、混合物をアルゴン雰囲気下１６時間還流した。次いでトリエチルアミン（５０ｍL）、続いて水（２００ｍL）およびジクロロメタン（３００ｍＬ）を加えた。有機層を分離し、水層をジクロロメタン（２×２００ｍＬ）で抽出した。結合有機フラクションを乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下濃縮した。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（８０：２０）］により、化合物２を得た（２０．２ｇ）。
【００２３】
［化合物３  １，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−フタルイミド−Ｄ−グルコピラノーゼ］
【００２４】
【化３】
2009526031.tif 000004
【００２５】
ナトリウムメトキシド（１３．５ｇ）をＤ−（＋）グルコサミン 塩酸塩（５３．９ｇ）のメタノール溶液の懸濁液に加えた。１時間後、反応物を冷えた水浴に保管し、無水フタル酸（３６．９ｇ）を加えた。次いで、トリエチルアミン（３４．７ｇ）を１５分間加えた。２日後、沈殿物をろ取し、メタノール（２×２０ｍＬ）で洗浄し、減圧下蒸発させた。ピリジン（６７５ｇ）を加え、攪拌された混合物を０℃に冷やし、１時間無水酢酸を加えた。１日後、室温で混合物を０℃に冷やしエタノール（２７０ｍＬ）を３０分間加えた。３時間後、混合物を減圧下蒸発させ、ジクロロメタン（１Ｌ）に溶解した。混合物を１Ｍ塩酸（２×５００ｍＬ）および飽和炭酸水素ナトリウム（２×５００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。メタノールからの再結晶により化合物３を得た（４１．８ｇ）。母液を減圧下蒸発させ、クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（５０：５０）により、さらに化合物３を得た（３５．１ｇ）。
【００２６】
［化合物４  フェニルセレニル−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−１，２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノーゼ］
【００２７】
【化４】
2009526031.tif 000005
【００２８】
ボロン三フッ化ホウ素エーテル（１７．５ｍＬ）を化合物３（５２．４ｇ）およびフェニルセレノール（１４．６ｍＬ）の攪拌された乾燥ジクロロメタン溶液（７５０ｍＬ）にアルゴン雰囲気下で加えた。２０時間後、トリエチルアミン（３０ｍＬ）を滴下した。次いで混合物を水（２×２５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（５０：５０）により得た生成物を、酢酸エチル−ガソリンからの再結晶により化合物４を得た（４４ｇ）。
【００２９】
［化合物５  ベンジル−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−［３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−３，４−ジ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マンノピラノシド］
【００３０】
【化５】
2009526031.tif 000006
【００３１】
化合物４（１０．５ｇ）、化合物２（１．５ｇ）、２，６−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−メチルピリジン（５．２ｇ）および粉末活性分子篩（〜１０ｇ）を乾燥ジクロロメタンに加え、混合物をアルゴン雰囲気下で１時間攪拌した。次いでメチルトリフラート（２．１ｍＬ）を加えた。１７時間後、メチルトリフラート（０．３４ｍＬ）を加え、さらに２．５時間後メチルトリフラート（０．２５ｍＬ）を加えた。合計４０時間後、トリエチルアミン（４ｍＬ）を加え、混合物をセライトろ過し、減圧下蒸発させ、酢酸エチル（４００ｍＬ）に溶解した。結果として生じる溶液を水（２×４０ｍＬ）および食塩水（８０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（５０：５０）→（６７：３３）］により化合物（４．１ｇ）を得、トリフルオロ酢酸（４５ｍＬ）および水（５ｍＬ）の混合物に溶解した。２分後、混合物を減圧下濃縮し、ジクロロメタン（７５ｍＬ）および飽和炭酸水素ナトリウム（７５ｍＬ）を加えた。有機層を分離し、水層をジクロロメタン（２×７５ｍＬ）で抽出した。結合有機フラクションを乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させ、クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（８０：２０）→（９０：１０）］により、化合物（１．８４ｇ）を得、乾燥ピリジン（５０ｍＬ）に溶解し、０℃に冷やした。無水酢酸（２５ｍＬ）を混合物に滴下し攪拌し、反応物を室温に暖めた。１８時間後、混合物を０℃に冷やし、水（１００ｍＬ）および酢酸エチル（３００ｍＬ）を加え、有機層を分離した。水層を酢酸エチルおよび結合有機フラクションで抽出し、２Ｍ塩酸（２×１２５ｍＬ）、飽和炭酸水素ナトリウム（１２５ｍＬ）および食塩水（１２５ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（６７：３３）→（７５：２５）］により化合物５を得た（３．３ｇ）。
【００３２】
［化合物６  ３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−［３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−３，４−ジ−Ｏ−アセチル−Ｄ−マンノピラノース］
【００３３】
【化６】
2009526031.tif 000007
【００３４】
水酸化パラジウム（１．５ｇ、２０％炭素吸着）を化合物５（１．７ｇ）のエタノール溶液（２５０ｍＬ）の攪拌された溶液に加えた。混合物を水素パージし、水素雰囲気下で２日間攪拌した。次いで混合物をセライトろ過し、減圧下蒸発させ、化合物６を得た（１．３９ｇ）。
【００３５】
［化合物７  ３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−［３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−３，４−ジ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マンノピラノシル トリクロロアセトイミドエート］
【００３６】
【化７】
2009526031.tif 000008
【００３７】
トリクロロアセトニトリル（０．３２ｍＬ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（０．００５ｍＬ）を化合物６（０．３５ｇ）および活性化した粉末分子篩（〜０．３ｇ）のジクロロメタン（３７０ｍＬ）溶液の攪拌された混合物に、アルゴン雰囲気下、室温で加えた。１時間後、トリクロロアセトニトリル（０．２ｍＬ）を加えた。３時間後、混合物をセライトろ過し、減圧下蒸発させ、クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン：トリエチルアミン（６０：４０：１）］により化合物７を得た（０．３６ｇ）。
【００３８】
［化合物８  ４’−ペンテニル α−Ｄ−マンノピラノース］
【００３９】
【化８】
2009526031.tif 000009
【００４０】
カンファースルホン酸（０．２ｇ）をＤ−マンノース（１５ｇ）および４−ペンテン−１−オール（１００ｇ）の攪拌された混合物に加え、混合物を１００℃に加熱した。２０時間後、混合物を減圧下蒸発させ、残渣をクロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル］により化合物８を得た（１７．１ｇ）。
【００４１】
［化合物９  ４’−ペンテニル ３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノース］
【００４２】
【化９】
2009526031.tif 000010
【００４３】
ビス［トリ−ｎ−ブチルティン（IV）］オキシド（６１ｇ）を化合物８（１６．９ｇ）のトルエン（５００ｍＬ）溶液の攪拌された化合物に加えた。混合物を試薬が溶解するまで９０℃に加熱した。次いで装置をディーン・スタークコンデンサーで適合させ、混合物を１４５℃で４時間加熱した。混合物を室温まで冷やし、減圧下蒸発させ、臭化ベンジル（１００ｍＬ）を加えた。混合物を９０℃で２０時間加熱し、室温まで冷やし、減圧下蒸発させ、クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（２０：８０）→（３３：６７）］により化合物９を得た（２３ｇ）。
【００４４】
［化合物１０  ３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−Ｄ−グルコピラノース］
【００４５】
【化１０】
2009526031.tif 000011
【００４６】
ベンジルアミン（１２．８ｍＬ）を化合物３（５０．８ｇ）のテトラヒドロフラン（３２０ｍＬ）溶液の攪拌された溶液に加えた。２４時間後、１Ｍ塩酸（２２ｍＬ）を加え、混合物を５分間攪拌した。ジクロロメタン（１Ｌ）および１Ｍ塩酸（２００ｍＬ）を加え、有機層を分離した。水層をジクロロメタン（３×３００ｍＬ）で抽出し、結合抽出物を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させ、クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、ジクロロメタン：酢酸エチル（５０：５０）］により化合物１０を得た（２０．８ｇ）。
【００４７】
［化合物１１  ３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−Ｄ−グルコピラノシル トリクロロアセトイミドエート］
【００４８】
【化１１】
2009526031.tif 000012
【００４９】
トリクロロアセトニトリル（１２．２ｍＬ）および１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（０．０３７ｍＬ）を化合物１０（５．５ｇ）のジクロロメタン（３５ｍＬ）溶液の攪拌された溶液に、アルゴン雰囲気下で加えた。３０分後、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（０．０３７ｍＬ）を加えた。１時間後、混合物を減圧下蒸発させ、クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン：トリエチルアミン（４０：６０：１）］により化合物１１を得た（６．０１ｇ）。
【００５０】
［化合物１２  ４’−ペンテニル ３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシド］
【００５１】
【化１２】
2009526031.tif 000013
【００５２】
化合物９（２．５７ｇ）、化合物１１（９．５４ｇ）および粉末活性分子篩（３．５ｇ）をジクロロメタン（１００ｍＬ）中、０℃１０分間および室温で２０分間攪拌した。トリメチルシリルトリフラート（０．１０８ｍＬ）を加え、１．５時間後トリエチルアミン（０．８ｍＬ）を加えた。混合物をセライトろ過し、減圧下蒸発させ、クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（４０：６０）→（４５：５５）］により化合物１２を得た（６．５６ｇ）。
【００５３】
［化合物１３  ｐ−メトキシフェニル ３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【００５４】
【化１３】
2009526031.tif 000014
【００５５】
ボロン三フッ化ホウ素エーテル（４０．４ｍＬ）を化合物３（７６．９ｇ）およびｐ−メトキシフェノール（５０ｇ）の攪拌されたジクロロメタン溶液（９５０ｍＬ）に０℃で加えた。１時間後、混合物を室温まで暖めた。２４時間後、混合物を水（×２）、１Ｍ水酸化ナトリウム（×２）、水（×２）および食塩水で順次洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。酢酸エチル−ガソリンからの再結晶により化合物１３を得た（６２．５ｇ）。
【００５６】
［化合物１４  ｐ−メトキシフェニル ４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【００５７】
【化１４】
2009526031.tif 000015
【００５８】
ナトリウムメトキシド（０．５ｇ）を化合物１３（３３．２ｇ）のメタノール（４５０ｍＬ）溶液の攪拌された溶液に加えた。２０時間後、Ｄｏｗｅｘ５０ＷＸ２（〜スパチュラで２杯）を加えた。３０分後、溶液を中性にした。メタノール（１００ｍＬ）を加え、混合物を加熱し沈殿物を溶解し、ろ過、減圧下蒸発させた。トルエン（５０ｍＬ）を加え、混合物を減圧下蒸発させた。アセトニトリル（３５０ｍＬ）、ベンズアルデヒドジメチルアセタール（２０．２ｍＬ）およびｐ−トルエンスルホン酸（２．４１ｇ）を加えた。２０時間後、トリエチルアミン（４．７ｍＬ）を加え、混合物を減圧下蒸発させ、メタノールからの再結晶により化合物１４を得た（２５．５ｇ）。
【００５９】
［化合物１５  ｐ−メトキシフェニル ３−Ｏ−ベンジル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【００６０】
【化１５】
2009526031.tif 000016
【００６１】
水素化ナトリウム（１．７８ｇ、６０％油性懸濁液）を化合物１４（１５ｇ）の攪拌されたＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（８０ｍＬ）にアルゴン雰囲気下０℃で加えた。１５分後、臭化ベンジル（８０ｍＬ）を加え、混合物を室温まで暖めた。６時間後、水素化ナトリウム（１．０ｇ、６０％油性懸濁液）および臭化ベンジル（４．０ｍＬ）を加えた。２４時間後、メタノール（１０ｍＬ）を加え、混合物を減圧下蒸発させた。生成物を酢酸エチルに溶解し、食塩水（×３）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（３０：７０）→（４０：６０）］により固体を得た。これを、酢酸エチル−ガソリンからの再結晶により化合物１５を得た（１２ｇ）。化合物１５の２回目の収集を用いた（１．８ｇ）。
【００６２】
［化合物１６  ｐ−メトキシフェニル ３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【００６３】
【化１６】
2009526031.tif 000017
【００６４】
ｐ−トルエンスルホン酸（０．６ｇ）を化合物１５（１３．０ｇ）のメタノール（２６０ｍＬ）溶液および１，４−ジオキサン（１４５ｍＬ）の攪拌された溶液に加えた。混合物を１．５時間還流し、次いで室温まで冷やし、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（６０：４０）］により化合物１６を得た（１０．４８ｇ）。
【００６５】
［化合物１７  ｐ−メトキシフェニル ３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−６−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【００６６】
【化１７】
2009526031.tif 000018
【００６７】
イミダゾール（３．５ｇ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（３．８１ｇ）を化合物１６（１０．４ｇ）の攪拌された無水Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液にアルゴン雰囲気下０℃で加えた。２時間後、混合物を減圧下蒸発させ、酢酸エチルを加え生成物を溶解した。混合物を水（×２）および食塩水（×２）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（３０：７０）］により化合物１７を得た（１２．４３ｇ）。
【００６８】
［化合物１８  ｐ−メトキシフェニル ３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【００６９】
【化１８】
2009526031.tif 000019
【００７０】
化合物１４（２２．７ｇ）を粉末活性分子篩（〜５ｇ）のテトラヒドロフラン（８００ｍＬ）溶液の攪拌された混合物にアルゴン雰囲気下０℃で加えた。１時間後、シアノホウ化水素ナトリウム（５０ｇ）およびメチルオレンジ（１少量）を加えた。１，４−ジオキサン溶液の４Ｍ塩化水素をできるたけ早く加え、色落ちしないピンク色に発展するまで沸騰した（〜１７０ｍＬ）。２４時間後、混合物を氷水に注ぎ、次いでセライトろ過した。混合物をジクロロメタン（×２）で抽出し、結合抽出物を２Ｍ塩酸（〜２００ｍＬ）で２４時間攪拌した。次いで、有機層を分離し、飽和炭酸水素ナトリウム（×２）および水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（３０：７０）］により化合物１８を得た（２１．２ｇ）。
【００７１】
［化合物１９  ｐ−メトキシフェニル ３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−レブリニル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【００７２】
【化１９】
2009526031.tif 000020
【００７３】
Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１１．８ｇ）をレブリン酸（１３．３ｇ）のジクロロメタン（８０ｍＬ）溶液の攪拌された溶液に０℃で加えた。１０分後、混合物を室温まで暖め、３時間攪拌した。次いで、混合物を化合物１８（６．８ｇ）のピリジン（７０ｍＬ）溶液にろ過し、ジクロロメタン（２０ｍＬ）で洗浄した。３日後、混合物を氷水に注ぎ、３０分間攪拌した。混合物をジクロロメタンで抽出し、抽出物を２Ｍ塩酸（×２）、飽和炭酸水素ナトリウム（×２）および水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（４０：６０）→（５０：５０）］により化合物１９を得た（７．８３ｇ）。
【００７４】
［化合物２０  ３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−レブリニル−２−デオキシ−２−フタルイミド−Ｄ−グルコピラノ−ス］
【００７５】
【化２０】
2009526031.tif 000021
【００７６】
硝酸セリウムアンモニウム（２８．１ｇ）を化合物１９（７．８２ｇ）のトルエン（１１５ｍＬ）溶液、アセトニトリル（８４ｍＬ）および水（３７ｍＬ）の激しく攪拌された混合物に加えた。２時間後、酢酸エチルを加え、混合物を水（×２）で洗浄し、結合した水様の抽出物を酢酸エチルで再抽出した。結合有機層を飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させ、化合物２０を得た（６．６４ｇ）。
【００７７】
［化合物２１  ３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−レブリニル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル トリクロロアセトイミドエ−ト］
【００７８】
【化２１】
2009526031.tif 000022
【００７９】
トリクロロアセトニトリル（１１．３ｍＬ）を化合物２０（６．６４ｇ）および粉末活性分子篩（〜２ｇ）のジクロロメタン（７１ｍＬ）溶液の攪拌された混合物に加えた。２時間後、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（０．５６ｍＬ）を加えた。１時間後、混合物をセライトろ過し、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン：トリエチルアミン（４４：５５：１）］により化合物２１を得た（５．６３ｇ）。
【００８０】
［化合物２２  ｐ−メトキシフェニル ３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−レブリニル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−６−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【００８１】
【化２２】
2009526031.tif 000023
【００８２】
化合物２１（２．５１ｇ）、化合物１８（１．６６ｇ）および粉末活性分子篩（〜１ｇ）を攪拌されたジクロロメタン（７５ｍＬ）に加えた。２０分後、混合物を−７８℃まで冷やし、ボロン三フッ化ホウ素エ−テル（０．３２ｍＬ）を加えた。５時間後、−７８℃の混合物をゆっくり夜通し０℃まで暖めた。次いで混合物を室温まで暖め、ジクロロメタン（１００ｍＬ）で洗浄セライトろ過した。混合物を飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させ、クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（３０：７０）］により化合物２２を得た（２．０２ｇ）。
【００８３】
［化合物２３  ｐ−メトキシフェニル ３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−レブリニル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【００８４】
【化２３】
2009526031.tif 000024
【００８５】
ｐ−トルエンスルホン酸を化合物２２（２．０ｇ）のアセトニトリル（２１．５ｍL）溶液および水（１．２ｍＬ）の攪拌された混合物に加え、ｐＨを３に調整した。３．５時間後、酢酸エチルを加え、混合物を水、飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（５０：５０）→（７５：２５）］により化合物２３を得た（１．４９ｇ）。
【００８６】
［化合物２４  １，２，３，４−テトラ−Ｏ−アセチル−Ｌ−フコピラノース］
【００８７】
【化２４】
2009526031.tif 000025
【００８８】
無水酢酸（５７ｍＬ）をＬ−（−）−フコース（８．２ｇ）のピリジン（８０ｍＬ）溶液の攪拌された溶液に０℃で１０分間加えた。２時間後、混合物を室温まで暖めた。２０時間後、混合物を減圧下蒸発させ、水（２００ｍＬ）を加えた。混合物をジクロロメタン（×４）で抽出し、結合抽出物を１Ｍ塩酸（×２）、飽和炭酸水素ナトリウム（×２）、および水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、化合物２４を得た（１５．６ｇ）。
【００８９】
［化合物２５  フェニル ２，３，４−トリ−Ｏ−アセチル−１−チオ−β−Ｌ−フコピラノシド］
【００９０】
【化２５】
2009526031.tif 000026
【００９１】
チオフェノール（１０．５ｍＬ）およびボロン三フッ化ホウ素エ−テル（１６．３ｍＬ）を化合物２４（１５．６ｇ）のジクロロメタン（１６０ｍＬ）溶液の攪拌された溶液に０℃で加えた。１０分後、混合物を室温まで暖めた。２時間後、ジクロロメタン（８０ｍＬ）を加え、混合物を１Ｍ塩酸（×２）および水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（２０：８０）］により化合物２５を得た（１４．８ｇ）。
【００９２】
［化合物２６  フェニル １−チオ−β−Ｌ−フコピラノシド］
【００９３】
【化２６】
2009526031.tif 000027
【００９４】
ナトリウムメトキシド（０．１２ｇ）を化合物２５（１４．８ｇ）のメタノール（７０ｍＬ）溶液の攪拌された溶液にアルゴン雰囲気下で加えた。１８時間後、Ｄｏｗｅｘ５０ＷＸ２（スパチュラで１杯）を加えた。３０分後、混合物をろ過し、減圧下蒸発させ、化合物２６を得た（８．９ｇ）。
【００９５】
［化合物２７  フェニル ２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−１−チオ−β−Ｌ−フコピラノシド］
【００９６】
【化２７】
2009526031.tif 000028
【００９７】
水素化ナトリウム（１０．６ｇ、６０％油性懸濁液）を化合物２６（８．９ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１４０ｍＬ）溶液の攪拌された溶液に０℃で加えた。１５分後、水素の発生が中断したとき、臭化ベンジル（１７．３ｍＬ）を加えた。混合物を室温まで暖め、２時間後、水素化ナトリウム（０．５ｇ、６０％油性懸濁液）を加えた。２時間後、水（１０ｍＬ）をゆっくり加え、混合物を酢酸エチル（５００ｍＬ）に加えた。混合物を水（×３）および食塩水で洗浄した。ガソリンを加え、混合物を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（２０：８０）→（５０：５０）］により固体生成物を得、酢酸エチル−ガソリンから再結晶し、化合物２７を得た（１１．７ｇ）。
【００９８】
［化合物２８  ｐ−メトキシフェニル ３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−レブリニル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）］−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【００９９】
【化２８】
2009526031.tif 000029
【０１００】
化合物２３（１．０ｇ）、化合物２８（０．４８６ｇ）および粉末活性分子篩（〜１ｇ）を攪拌されたジエチルエーテル（４７ｍＬ）にアルゴン雰囲気下で３０分間加えた。次いで混合物を−７８℃まで冷やし、Ｎ−ヨードスクシンイミド（０．５３２ｇ）および銀トリフレート（０．２５５ｇ）を加えた。混合物を−７８℃で夜通し攪拌した後、室温まで暖め、ジクロロメタンを加え、混合物をセライトろ過し、１０％チオ硫酸ナトリウムと食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（４０：６０）］により化合物２８を得た（０．８７４ｇ）。
【０１０１】
［化合物２９  ｐ−メトキシフェニル ３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）］−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０１０２】
【化２９】
2009526031.tif 000030
【０１０３】
ヒドラジン一水和物（１．３５ｍＬ）を化合物２８（４．０３ｇ）のピリジン（７６．５ｍＬ）溶液および酢酸（１９．８ｍＬ）の攪拌された溶液に加えた。５０分後、酢酸エチルを加え、混合物を飽和炭酸水素ナトリウム（×３）および食塩水で洗浄した。洗浄水を酢酸エチルで抽出した。結合有機フラクションを飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させ、クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（３０：７０）→（５０：５０）］により化合物２９を得た（０．２６６ｇ）。
【０１０４】
＜集合＞
［化合物３０  エチル ２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノース］
【０１０５】
【化３０】
2009526031.tif 000031
【０１０６】
エタンチオール（１０．３ｇ）をグルコースペンタアセテート（５０ｇ）の乾燥ジクロロメタン（１００ｍＬ）溶液の攪拌された溶液に加えた。混合物を０℃まで冷やし、ボロン三フッ化ホウ素エ−テル（１９．５ｍＬ）を滴下した。８時間後、混合物を冷やした飽和炭酸水素ナトリウム（２５０ｍＬ）に注ぎ、有機層を分離した。水層をジクロロメタン（２×５０ｍＬ）で抽出した。結合有機抽出物を水および食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させ、ガソリン−ジクロロメタン（２回）から再結晶し、化合物３０を得た（４２．８ｇ）。
【０１０７】
［化合物３１  エチル １−チオ−β−Ｄ−グルコピラノース］
【０１０８】
【化３１】
2009526031.tif 000032
【０１０９】
ナトリウムメトキシド（０．２７５ｇ）を化合物３０（２０ｇ）のメタノール（１２５ｍＬ）溶液の攪拌された溶液に加えた。４時間後、Ｄｏｗｅｘ５０ＷＸ２）を加え、混合物を中性化し、混合物をろ過し、減圧下蒸発させ、化合物３１を得た（１１．１ｇ）。
【０１１０】
［化合物３２  エチル４，６−Ｏ−ベンジリデン−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノース］
【０１１１】
【化３２】
2009526031.tif 000033
【０１１２】
ベンズアルデヒドジメチルアセタール（１４．９ｇ）およびカンファ−スルホン酸（１．１３ｇ）を化合物３１（１１ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）溶液の混合物に加えた。混合物を６０℃で４時間、１８９ｍｂａで加熱した。次いで混合物を室温まで冷やし、トリエチルアミンを加え、混合塩基を作った。混合物を減圧下蒸発させ、酢酸エチル（２００ｍＬ）に溶解した。混合物を飽和炭酸水素ナトリウム、水および食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。酢酸エチル−ガソリンから再結晶し、化合物３２を得た（１０．５ｇ）。
【０１１３】
［化合物３３  エチル４，６−Ｏ−ベンジリデン−３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノース］
【０１１４】
【化３３】
2009526031.tif 000034
【０１１５】
イミダゾール（１．９６ｇ）を化合物３２（６ｇ）およびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（３．４６ｇ）のＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１００ｍＬ）溶液の攪拌された溶液に０℃で加えた。混合物を室温まで暖め、夜通し攪拌した。酢酸エチルを加え、混合物を水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（４０：６０）］により化合物３３を得た（８．０７ｇ）。
【０１１６】
［化合物３４  エチル４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−Ｏ−レブリニル−３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノース］
【０１１７】
【化３４】
2009526031.tif 000035
【０１１８】
Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（７．７８ｇ）および４−ジメチルアミノピリジン（２．５２ｇ）を化合物３３（８．０５ｇ）のジクロロメタン（１５０ｍＬ）溶液の攪拌された溶液に０℃で加えた。１０分後、レブリン酸（４．３７ｇ）のジクロロメタン（５０ｍＬ）溶液を滴下し、混合物を室温まで暖めた。５時間後、混合物をろ過し、ろ液を飽和炭酸水素ナトリウムおよび水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（１５：８５）］により化合物３４を得た（８．９ｇ）。
【０１１９】
［化合物３５  ｐ−メトキシフェニル ４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−Ｏ−レブリニル−３−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリル−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）］−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０１２０】
【化３５】
2009526031.tif 000036
【０１２１】
化合物３４（１．５３ｇ）および化合物２９（３．２５ｇ）を夜通し減圧下で保管した。次いでＮ−ｌｏｄｏスクシンイミド（０．７８５ｇ）、粉末活性分子篩およびジクロロメタン（４０ｍＬ）を加え、混合物を攪拌した。５分後、混合物を０℃まで冷やし、トリメチルシリルトリフラ−ト（０．５３ｍＬ）を加えた。３０分後、混合物を室温まで３０分間暖めた。混合物をセライトろ過し、ろ液を１０％チオ硫酸ナトリウム、飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（５０：５０）］により化合物３５を得た（３．５４ｇ）。
【０１２２】
［化合物３６  ｐ−メトキシフェニル ４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−Ｏ−レブリニル−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）］−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０１２３】
【化３６】
2009526031.tif 000037
【０１２４】
トリエチルアミン トリフッ化水素（６．８１ｍＬ）を化合物３５（３．８８ｇ）の乾燥テトラヒドロフラン（１５ｍＬ）溶液の攪拌された混合物に滴下した。５５時間後、ジクロロメタンを加え、混合物を飽和重炭酸水素ナトリウムで繰り返し洗浄し、次いで食塩水で洗浄した。混合物を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させ、クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（４０：６０）→（６０：４０）］により化合物３６を得た（３．０１ｇ）。
【０１２５】
［化合物３７  ｐ−メトキシフェニル ｛３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）｝−４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−Ｏ−レブリニル−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）］−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０１２６】
【化３７】
2009526031.tif 000038
【０１２７】
化合物３６（２．０ｇ）および化合物１２（２．９ｇ）を３時間減圧下で保管した。Ｎ−ｌｏｄｏスクシンイミド（１．２８ｇ）、粉末活性分子篩およびジクロロメタン（３５ｍＬ）を加えた。混合物をアルゴン雰囲気下で攪拌し、トリメチルシリルトリフラ−ト（０．３３ｍＬ）を加えた。４５分後、混合物をセライトろ過し、１０％チオ硫酸ナトリウム、炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（５０：５０）］により生成物を得、クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：トルエン（４０：６０）］により化合物３７を得た（２．３４ｇ）。
【０１２８】
［化合物３８  ｐ−メトキシフェニル ｛３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）｝−４，６−Ｏ−ベンジリデン−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）］−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０１２９】
【化３８】
2009526031.tif 000039
【０１３０】
酢酸ヒドラジン（０．１４９ｇ）を化合物３７（２．３６９ｇ）のメタノール（２１ｍＬ）溶液およびテトラヒドロフラン（７ｍＬ）の混合物に加え、混合物を夜通し攪拌した。混合物を減圧下蒸発させ、ジクロロメタンを加え、混合物を水と食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（７０：３０）］により化合物３８を得た（１．８４ｇ）。
【０１３１】
［化合物３９  ｐ−メトキシフェニル ｛３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）｝−４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）］−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０１３２】
【化３９】
2009526031.tif 000040
【０１３３】
ピリジン（１．０５ｇ）を化合物３８（０．７５ｇ）のジクロロメタン（１５ｍＬ）溶液にアルゴン雰囲気下で加えた。混合物を攪拌し、０℃まで冷やし、無水トリフルオロメタンスルホン酸（１．１２ｇ）を滴下した。３０分後、混合物を室温まで暖め、６時間攪拌した。ジクロロメタンを加え、混合物を飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄し、乾燥した（ＭｇＳＯ４）。テトラ酢酸ブチルアンモニウム（１．１２ｇ）および乾燥トルエン（２０ｍＬ）を加え、反応槽を２０時間超音波槽に保管し、混合物をクロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（５０：５０）→（６０：４０）］により化合物３９を得た（０．５７３ｇ）。
【０１３４】
［化合物４０  ｐ−メトキシフェニル ｛３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）｝−２−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）］−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０１３５】
【化４０】
2009526031.tif 000041
【０１３６】
エタンチオール（１．８２ｍＬ）を化合物３９（１．４１ｇ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液の攪拌された溶液に加えた。混合物を０℃まで冷やし、ボロン三フッ化ホウ素エ−テル（０．１３ｍＬ）のジクロロメタン（１ｍＬ）溶液を滴下し、混合物を室温まで暖めた。１時間後、ボロン三フッ化ホウ素エ−テル（０．０７ｍＬ）のジクロロメタン（０．５ｍＬ）溶液を加えた。１時間後、過剰なトリエチルアミン、ジクロロメタンを順次加え、混合物を飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（７０：３０）］により化合物４０を得た（０．７６３ｇ）。
【０１３７】
［化合物４１  ｐ−メトキシフェニル ｛３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）｝−｛３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−［３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−３，４−ジ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）｝−２−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）］−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０１３８】
【化４１】
2009526031.tif 000042
【０１３９】
化合物４０（０．３３ｇ）および化合物７（０．１９２ｇ）を減圧下で保管した。５時間後、粉末活性分子篩（０．３ｇ）およびジクロロメタン（８．５ｍＬ）を加え、混合物をアルゴン雰囲気下で攪拌した。２０分後、混合物を０℃まで冷やし、トリメチルシリルトリフラ−ト（０．００４３ｍＬ）のジクロロメタン（０．５ｍＬ）溶液を滴下した。１時間後、混合物をセライトろ過し、ろ液を飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。放射状クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（７５：２５）］により化合物４１を得た（０．３０２ｇ）。
【０１４０】
［化合物４２  ｐ−メトキシフェニル ｛３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）｝−｛３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−［３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−３，４−ジ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）｝−２，４−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）］−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０１４１】
【化４２】
2009526031.tif 000043
【０１４２】
無水酢酸（０．７５ｍＬ）を化合物４１（０．１５９ｇ）のピリジン（４ｍＬ）溶液の攪拌された溶液に加えた。２０時間後、酢酸エチルを加え、混合物を飽和炭酸水素ナトリウム、水および食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させ化合物４２（０．１６３ｇ）を得、さらなる精製をせずに用いた。
【０１４３】
［化合物４３  ｛３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）｝−｛３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−［３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−３，４−ジ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）｝−２，４−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）］−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−Ｄ−グルコピラノース］
【０１４４】
【化４３】
2009526031.tif 000044
【０１４５】
硝酸セリウムアンモニウムを化合物４２のアセトニトリル（２ｍＬ）溶液、トルエン（１ｍＬ）および水（０．５ｍＬ）の激しく攪拌された混合物に加えた。４０分後、酢酸エチルを加え、混合物を水および飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させ化合物４３（０．１５２ｇ）を得、さらなる精製をせずに用いた。
【０１４６】
［化合物４４  ｛３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）｝−｛３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−［３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−３，４−ジ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）｝−２，４−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）］−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル トリクロロアセトイミドエ−ト］
【０１４７】
【化４４】
2009526031.tif 000045
【０１４８】
トリクロロアセトニトリル（０．４０ｍＬ）を化合物４３（０．１５０ｇ）のジクロロメタン（１ｍＬ）溶液の攪拌された溶液にアルゴン雰囲気下で加えた。混合物を０℃まで冷やし、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（０．００１７６ｍＬ）を加えた。混合物を室温まで暖めた。２．５時間後、混合物をクロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン：トリエチルアミン（７５：２５：２）］により化合物４４を得た（０．１２２ｇ）。
【０１４９】
［化合物４５  ベンジル｛３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）｝−｛３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−［３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−３，４−ジ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）｝−２，４−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）］−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０１５０】
【化４５】
2009526031.tif 000046
【０１５１】
ベンジルメルカプタン（５．６ｇ）を化合物４４（０．１１８ｇ）および粉末活性分子篩のジクロロメタン（１ｍＬ）溶液の攪拌された混合物にアルゴン雰囲気下で加えた。５分後、混合物を０℃まで冷やし、トリメチルシリルトリフラ−ト（ジクロロメタン１ｍＬ中のトリメチルシリルトリフラ−ト溶液０．０２ｍＬの０．０５ｍＬ）を加えた。４０分後、トリメチルシリルトリフラ−ト（ジクロロメタン１ｍＬ中の溶液０．０２ｍＬの０．０２５ｍＬ）を加えた。２時間後、トリメチルシリルトリフラ−ト（ジクロロメタン１ｍＬ中の溶液０．０２ｍＬの０．０１２ｍＬ）を加えた。３０分後、トリメチルシリルトリフラ−ト（ジクロロメタン１ｍＬ中の溶液０．０２ｍＬの０．０１２ｍＬ）を加えた。３０分後、過剰なトリエチルアミン、酢酸エチルを順次加え、混合物をセライトろ過した。ろ液を飽和炭酸水素ナトリウムで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（７０：３０）］および放射状クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（６５：３５）］により化合物４５を得た（０．０４２ｇ）。
【０１５２】
［化合物４６  ベンジル｛３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）｝−｛３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−［３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−３，４−ジ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）｝−２，４−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［２，３，４−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）］−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−アセトアミド−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０１５３】
【化４６】
2009526031.tif 000047
【０１５４】
エチレンジアミン（１ｍＬ）を化合物４５（０．０４１ｇ）のｎ−ブタノール（４ｍＬ）溶液の攪拌された混合物に加え、１８時間８５℃で加熱した。混合物を減圧下蒸発させ、トルエンを加え、減圧下蒸発させた。ピリジン（５ｍＬ）、無水酢酸（１ｍＬ）を順次加えた。アルゴン雰囲気下で夜通し攪拌した後、酢酸エチル（１５０ｍＬ）を加え、混合物を水（１０ｍＬ）で洗浄した。混合物を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させ、放射状クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル］により化合物４６を得た（０．０２４ｇ）。
【０１５５】
［化合物４７  ｛２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）｝−｛２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−［２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）｝−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）］−２−デオキシ−２−アセトアミド−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノース］
【０１５６】
【化４７】
2009526031.tif 000048
【０１５７】
ナトリウム（０．００５ｇ）をアンモニア液（１０ｍＬ）に−７８℃で加えた。１０分後、化合物４６（０．０２４ｇ）のテトラヒドロフラン（２ｍＬ）溶液に加えた。２０分後、塩化アンモニウム（０．０１９ｇ）を加え、混合物を室温まで暖めた。サイズ排除クロマトグラフィー［バイオラッド Ｐ２ゲル、０．０４Ｍ］により化合物４７を得た（０．００８ｇ）。
【０１５８】
［化合物４８  ２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）｝−｛２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−［２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）｝−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）］−２−デオキシ−２−アセトアミド−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノースの二硫化物］
【０１５９】
【化４８】
2009526031.tif 000049
【０１６０】
水中の化合物４７をチオールが完全に二硫化物に変換されるまで空気雰囲気下で保管した（約５日）。
【０１６１】
＜ＳＢＬ−化合物４７共役＞
化合物４８（１０ｍｇ／ｍＬ溶液の２０μＬ）および炭酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ８．６）（５０μＬ）をサブチリシン バシラス・レンタス（ＳＢＬ）Ｓ１５６Ｃ変種（炭酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ８．６）５０ｍＭの１００μＬ中の溶液０．４ｍｇの５０μＬ）に加えた。混合して４５分後、５μＬアリコートを用いて質量分析（ＥＳＩ−ＴＯＦ）により分析したところ、ＳＢＬ−化合物４７共役への変換を示した（測定質量２８６００、理論値２８５９８）。
【０１６２】
＜ＳＢＬ−化合物４７共役（ＰＭＳＦ不活性化される）＞
フッ化フェニルメチルスルフォニル（ＰＭＳＦ）（エタノール１．０Ｍ溶液の３μＬ）および炭酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ８．６）（５０μＬ）をサブチリシン バシラス・レンタス（ＳＢＬ）変種（炭酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ８．６）５０ｍＭの１００μＬ中の溶液０．４ｍｇの５０μＬ）に加えた。５分後、混合物を５０ｍＭ炭酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ８．６）で前平衡したＺｅｂａ脱塩スピンカラム（ピアス）で脱塩した。化合物４８（２０ｍｇ／ｍＬ溶液の２０μＬ）を加えた。混合して２時間後、５μＬアリコートを用いて質量分析（ＥＳＩ−ＴＯＦ）により分析したところ、ＳＢＬ−化合物４７共役への変換（ＰＭＳＦ不活性化される）を示した（測定質量２８７５２、理論値２８７５２）。
【０１６３】
［化合物４９  ブロモ−２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−α−Ｄ−マンノピラノシド］
【０１６４】
【化４９】
2009526031.tif 000050
【０１６５】
臭化水素の３３％酢酸（８０ｍＬ）溶液をマンノースペンタアセテート（１０ｇ）の乾燥ジクロロメタン（５０ｍＬ）溶液の攪拌された混合物に加えた。４時間後、ジクロロメタン（１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）を加え、有機層を分離し、水層をジクロロメタン（２×２５ｍＬ）で抽出した。結合有機フラクションを飽和炭酸水素ナトリウム、水および食塩水で洗浄し、混合物を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させ、化合物４９（８．０６ｇ）を得、さらなる精製をせずに用いた。
【０１６６】
［化合物５０  １，２−Ｏ−（エキソ−１−メトキシエチリデン）−３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノース］
【０１６７】
【化５０】
2009526031.tif 000051
【０１６８】
メタノ−ル（１．５８ｍＬ）および２，６−ルチジン（４．５３ｍＬ）を化合物４９（８．０ｇ）の乾燥ジクロロメタン（４０ｍＬ）溶液の攪拌された溶液に加え、混合物を５５℃に暖めた。２４時間後、混合物を室温まで冷やし、水で洗浄し（３×２０ｍＬ）、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下蒸発させた。ガソリン−ジエチルエーテルで粉末化し、続いてろ過し、化合物５０を得た（５．０５ｇ）。
【０１６９】
［化合物５１  １，２−Ｏ−（エキソ−１−メトキシエチリデン）−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−β−Ｄ−マンノピラノース］
【０１７０】
【化５１】
2009526031.tif 000052
【０１７１】
ナトリウムメトキシド（０．４５２ｇ）を化合物５０（３０ｇ）のメタノール（２５０ｍＬ）溶液の攪拌された混合物に加えた。３時間後、混合物を減圧下蒸発させ、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（２００ｍＬ）を加えた。混合物を０℃まで冷やし、水素化ナトリウム（１５．０ｇ、６０％油性懸濁液）をそれらの３ロットに１５分間隔で加えた。１時間後、臭化ベンジル（４０ｍＬ）を滴下した。２４時間後、混合物が透明になるまでメタノールを滴下した。酢酸エチル（５００ｍＬ）を加え、混合物を水（５×１００ｍＬ）および食塩水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ２ＳＯ４）、減圧下蒸発させた。ガソリン−ジエチルエーテルで粉末化し、続いてろ過し、化合物５０を得た（５．０５ｇ）。
【０１７２】
［化合物５２  １，２−ジ−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノース］
【０１７３】
【化５２】
2009526031.tif 000053
【０１７４】
水（３００ｍＬ）を化合物５１（２３ｇ）の酢酸（４５０ｍＬ）溶液の攪拌された混合物に加えた。６時間後、酢酸エチルおよび水を加え、有機層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した。結合有機フラクションを水、飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄し、混合物を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。ピリジン（１５０ｍＬ）、無水酢酸（１７．８ｇ）を順次加え、混合物をアルゴン雰囲気下で夜通し攪拌した。酢酸エチル（３００ｍＬ）を加え、混合物を２０％塩酸、飽和炭酸水素ナトリウムおよび水で洗浄し、混合物を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させ、化合物５２を得（２２．７ｇ）、さらなる精製をせずに用いた。
【０１７５】
［化合物５３  ２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−Ｄ−マンノピラノース］
【０１７６】
【化５３】
2009526031.tif 000054
【０１７７】
ベンジルアミド（３．０ｇ）を化合物５２（１０ｇ）のテトラヒドロフラン（１００ｍＬ）溶液に加え、混合物を夜通し攪拌した。２Ｍ塩酸（５０ｍＬ）、酢酸エチルを順次加えた。有機層を分離し、水層を酢酸エチルで抽出した。結合有機フラクションを１Ｍ塩酸および食塩水で洗浄し、混合物を乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させ、クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン：（２０：８０）］により化合物５３を得た（８．９ｇ）。
【０１７８】
［化合物５４  ２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシルトリクロロアセトイミドエ−ト］
【０１７９】
【化５４】
2009526031.tif 000055
【０１８０】
化合物５３（４．２ｇ）、トリクロロアセトニトリル（８．５ｍＬ）および粉末活性分子篩（〜１ｇ）をジクロロメタン（４０ｍＬ）中、アルゴン雰囲気下で攪拌した。１時間後、１，８−ジアザビシクロ［５，４，０］ウンデカ−７−エン（０．２５ｍＬ）を加えた。１．５時間後、混合物をセライトろ過し、減圧下蒸発させ、クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン：トリエチルアミン（３３：６６：１）］により化合物５４を得た（５．３２ｇ）。
【０１８１】
［化合物５５  エチル ２，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０１８２】
【化５５】
2009526031.tif 000056
【０１８３】
エタンチオール（２．４６ｍＬ）をグルコースペンタアセテート（１０ｇ）の乾燥ジクロロメタン（４０ｍＬ）溶液の攪拌された溶液に加えた。混合物を０℃まで冷やし、ボロン三フッ化ホウ素エ−テル（３．９ｍＬ）を滴下し、混合物を夜通し攪拌した。飽和炭酸水素ナトリウムを加え、有機層を分離した。水層をジクロロメタン（２×２００ｍＬ）で抽出した。結合有機フラクションを水および食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。ガソリン−ジエチルエーテルで粉末化し、化合物５５を得た（７．２ｇ）。
【０１８４】
［化合物５６  エチル １−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０１８５】
【化５６】
2009526031.tif 000057
【０１８６】
ナトリウムメトキシドを化合物５５（２０ｇ）の乾燥メタノール（１２５ｍＬ）溶液の攪拌された混合物に加えた。４時間後、Ｄｏｗｅｘ樹脂（５０×２）を混合物に加え中性化した。混合物をろ過し、ろ液を減圧下蒸発させ、化合物５６（１１．１ｇ）を得た。
【０１８７】
［化合物５７  エチル ４，６−Ｏ−ベンジリデン−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０１８８】
【化５７】
2009526031.tif 000058
【０１８９】
ベンズアルデヒドジメチルアセタール（１４．９ｇ）およびカンファ−スルホン酸（１．１３ｇ）を化合物５６（１１ｇ）および乾燥Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（５０ｍＬ）の混合物に加えた。混合物を１８９ｍｂａで４時間、６０℃まで加熱した。過剰なトリエチルアミンを加え、混合物を減圧下蒸発させた。酢酸エチルを加え、混合物を飽和炭酸水素ナトリウム、水および食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。酢酸エチル−ガソリン（２回）から再結晶し、化合物５７を得た（１０．５ｇ）。
【０１９０】
［化合物５８  エチル ２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−４，６−Ｏ−ベンジリデン−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０１９１】
【化５８】
2009526031.tif 000059
【０１９２】
化合物５４（５．４８ｇ）、化合物５７（２．４４ｇ）および粉末活性分子篩（〜１．５ｇ）を乾燥ジクロロメタン（３００ｍＬ）に加え１時間攪拌した。混合物を−７８℃まで冷やし、トリメチルシリルトリフラ−ト（０．１４１ｍＬ）を加えた。１８時間後、混合物を室温まで暖めセライトろ過した。ろ液を飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。酢酸エチル−ガソリンから再結晶し、化合物５８を得た（１．９９ｇ）。母液をクロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（１０：９０）→（３０：７０）］、酢酸エチル−ガソリンから再結晶し、さらに化合物５８を得た（０．４２ｇ）。
【０１９３】
［化合物５９  エチル ２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−Ｏ−レブリニル−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０１９４】
【化５９】
2009526031.tif 000060
【０１９５】
化合物５８（３．２５ｇ）、Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１．７ｇ）、４−ジメチルアミノピリジン（０．０５ｇ）およびレブリン酸（０．９５９ｇ）をジクロロメタン中でアルゴン雰囲気下攪拌した。２０時間後、４−ジメチルアミノピリジン（０．０５ｇ）を加え、さらに６時間後、無水レブリン酸（レブリン酸（１．９２ｇ）およびＮ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１．７ｇ）のジクロロメタン溶液（１５ｍＬ）から調製した）およびトリエチルアミン（５ｍＬ）を加えた。３日後、混合物をセライトろ過し、水で洗浄した。水フラクションをジクロロメタンで抽出し、結合有機フラクションを飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（３０：７０）］により、化合物５９を得た（３．６５ｇ）。
【０１９６】
［化合物６０  １，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−Ｄ−グルコピラノ−ス］
【０１９７】
【化６０】
2009526031.tif 000061
【０１９８】
ナトリウムメトキシド（１３．５ｇ）をＤ−（＋）−グルコサミン塩酸塩（５３．９ｇ）のメタノール溶液の攪拌された懸濁液に加えた。１時間後、反応物を冷たい水槽に保管し、無水フタル酸（３６．９ｇ）を加えた。次いでトリエチルアミン（３４．７ｍＬ）を１５分間加えた。２日後、沈殿物をろ過によりろ取し、メタノール（２×２０ｍＬ）で洗浄し、減圧下蒸発させた。ピリジン（６７５ｍＬ）を加え、攪拌された混合物を０℃まで冷やし、無水酢酸（６７５ｍＬ）を１時間加えた。１日後、室温の混合物を０℃まで冷やし、３０分間エタノール（２７０ｍＬ）を加えた。３時間後、混合物を減圧下蒸発させ、ジクロロメタン（１Ｌ）に溶解した。混合物を１Ｍ塩酸（２×５００ｍＬ）および飽和炭酸水素ナトリウム（２×５００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。メタノールから再結晶し、化合物６０を得た（４１．８ｇ）。母液を減圧下蒸発させ、クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（５０：５０）］により、さらなる化合物６０を得た（３５．１ｇ）。
【０１９９】
［化合物６１  ｐ−メトキシフェニル ３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０２００】
【化６１】
2009526031.tif 000062
【０２０１】
ボロン三フッ化ホウ素エ−テル（４０．４ｍＬ）化合物６０（７６．９ｇおよびｐ−メトキシフェノール（５０ｇ）のジクロロメタン溶液（９５０ｍＬ）の攪拌された溶液に０℃で加えた。１時間後、混合物を室温まで暖めた。２４時間後、混合物を水（×２）、１Ｍ水酸化ナトリウム（×２）、水（×２）、および食塩水の順で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。酢酸エチル−ガソリンから再結晶し、化合物６１を得た（６２．５ｇ）。
【０２０２】
［化合物６２  ｐ−メトキシフェニル ４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０２０３】
【化６２】
2009526031.tif 000063
【０２０４】
ナトリウムメトキシド（０．５ｇ）を化合物６１（３３．２ｇ）のメタノール溶液（４５０ｍＬ）の攪拌された溶液に加えた。２０時間後、Ｄｏｗｅｘ５０ＷＸ２（〜スパチュラで２杯）を加えた。３０分後、溶液を中性にした。メタノール（１００ｍＬ）を加え、混合物を加熱し沈殿物を溶解し、ろ過、減圧下蒸発させた。トルエン（５０ｍＬ）を加え、混合物を減圧下蒸発させた。アセトニトリル（３５０ｍＬ）、ベンズアルデヒドジメチルアセタール（２０．２ｍＬ）およびｐ−トルエンスルホン酸（２．４１ｇ）を加え、混合物を攪拌した。２０時間後、トリエチルアミン（４．７ｍＬ）を加え、混合物を減圧下蒸発させ、メタノールからの再結晶により化合物６２を得た（２５．５ｇ）。
【０２０５】
［化合物６３  ｐ−メトキシフェニル ３−Ｏ−ベンジル−４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０２０６】
【化６３】
2009526031.tif 000064
【０２０７】
水素化ナトリウム（１．７８ｇ、６０％油性懸濁液）を化合物６２（１５ｇ）の攪拌されたＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド溶液（８０ｍＬ）にアルゴン雰囲気下０℃で加えた。１５分後、臭化ベンジル（７．１ｍＬ）を加え、混合物を室温まで暖めた。６時間後、水素化ナトリウム（１．０ｇ、６０％油性懸濁液）および臭化ベンジル（４．０ｍＬ）を加えた。２４時間後、メタノール（１０ｍＬ）を加え、混合物を減圧下蒸発させた。生成物を酢酸エチルに溶解し、食塩水（×３）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（３０：７０）→（４０：６０）］により固体を得た。これを、酢酸エチル−ガソリンからの再結晶により化合物６３を得た（１２ｇ）。化合物６３の２回目の収集を用いた（１．８ｇ）。
【０２０８】
［化合物６４  ｐ−メトキシフェニル ３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０２０９】
【化６４】
2009526031.tif 000065
【０２１０】
化合物６３（２２．７ｇ）を粉末活性分子篩（〜５ｇ）のテトラヒドロフラン（８００ｍＬ）溶液の攪拌された混合物にアルゴン雰囲気下０℃で加えた。１時間後、シアノホウ化水素ナトリウム（５０ｇ）およびメチルオレンジ（１少量）を加えた。１，４−ジオキサン溶液の４Ｍ塩化水素をできるたけ早く加え、色落ちしないピンク色に発展するまで沸騰した（〜１７０ｍＬ）。２４時間後、混合物を氷水に注ぎ、次いでセライトろ過した。混合物をジクロロメタン（×２）で抽出し、結合抽出物を２Ｍ塩酸（〜２００ｍＬ）で２４時間攪拌した。次いで、有機層を分離し、飽和炭酸水素ナトリウム（×２）および水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（３０：７０）］により化合物６４を得た（２１．２ｇ）。
【０２１１】
［化合物６５  ｐ−メトキシフェニル ３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−レブリニル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０２１２】
【化６５】
2009526031.tif 000066
【０２１３】
Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（１１．８ｇ）をレブリン酸（１３．３ｇ）のジクロロメタン（８０ｍＬ）溶液の攪拌された溶液に０℃で加えた。１０分後、混合物を室温まで暖め、３時間攪拌した。次いで、混合物を化合物６４（６．８ｇ）のピリジン（７０ｍＬ）溶液にろ過し、ジクロロメタン（２０ｍＬ）で洗浄した。３日後、混合物を氷水に注ぎ、３０分間攪拌した。混合物をジクロロメタンで抽出し、抽出物を２Ｍ塩酸（×２）、飽和炭酸水素ナトリウム（×２）および水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（４０：６０）→（５０：５０）］により化合物６５を得た（７．８３ｇ）。
【０２１４】
［化合物６６  ３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−レブリニル−２−デオキシ−２−フタルイミド−Ｄ−グルコピラノース］
【０２１５】
【化６６】
2009526031.tif 000067
【０２１６】
硝酸セリウムアンモニウム（２８．１ｇ）を化合物６５（７．８２ｇ）のトルエン（１１５ｍＬ）溶液、アセトニトリル（８４ｍＬ）および水（３７ｍＬ）の激しく攪拌された混合物に加えた。２時間後、酢酸エチルを加え、混合物を水（×２）で洗浄し、結合した水様の抽出物を酢酸エチルで再抽出した。結合有機層を飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させ、化合物６６を得た（６．６４ｇ）。
【０２１７】
［化合物６７  ３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−レブリニル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル トリクロロアセトイミドエ−ト］
【０２１８】
【化６７】
2009526031.tif 000068
【０２１９】
トリクロロアセトニトリル（１１．３ｍＬ）を化合物６６（６．６４ｇ）および粉末活性分子篩（〜２ｇ）のジクロロメタン（７１ｍＬ）溶液の攪拌された混合物に加えた。２時間後、１，８−ジアザビシクロ［５．４．０］ウンデカ−７−エン（０．５６ｍＬ）を加えた。１時間後、混合物をセライトろ過し、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン：トリエチルアミン（４４：５５：１）］により化合物６７を得た（５．６３ｇ）。
【０２２０】
［化合物６８  ｐ−メトキシフェニル ３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−４−Ｏ−レブリニル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０２２１】
【化６８】
2009526031.tif 000069
【０２２２】
化合物６７（７．９４ｇ）、化合物６４（６．４５ｇ）および粉末活性分子篩（〜３ｇ）をジクロロメタン（１５５ｍＬ）に加え３０分間攪拌した。次いで混合物を−７８℃まで冷やし、トリメチルシリルトリフラ−ト（０．１９６ｍＬ）を加えた。４時間後、混合物を室温まで暖め、セライトろ過した。ろ液を飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させ、クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、（３０：７０）→（４０：６０）］により化合物６８を得た（２．７２ｇ）。
【０２２３】
［化合物６９  ｐ−メトキシフェニル ３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０２２４】
【化６９】
2009526031.tif 000070
【０２２５】
酢酸（４６ｍＬ）およびヒドラジン一水和物（３．２ｍＬ）を化合物６８（７．３２ｇ）のピリジン（１７８ｍＬ）溶液の攪拌された混合物に加えた。５０分後、酢酸エチルを加え、混合物を飽和炭酸水素ナトリウム（×３）および食塩水で洗浄した。抽出液を酢酸エチルで抽出し、結合有機フラクションを飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。トルエンを加え、混合物を減圧下蒸発させた。トルエンの追加および減圧下蒸発を２回繰り返した。ジクロロメタンを加え、混合物を減圧下蒸発させた。ジクロロメタンの追加および減圧下蒸発を２回繰り返した。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（３０：７０）→（５０：５０）］により化合物６９を得た（６．３６ｇ）。
【０２２６】
［化合物７０  ｐ−メトキシフェニル ２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−Ｏ−レブリニル−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０２２７】
【化７０】
2009526031.tif 000071
【０２２８】
化合物５９（３．６５ｇ）、化合物６９（４．３６ｇ）および粉末活性分子篩（〜３ｇ）をジクロロメタン（５００ｍＬ）に加え、混合物をアルゴン雰囲気下で攪拌した。１時間後、メチルトリフラート（２．１７ｍＬ）を加えた。２２時間後、トリエチルアミン（３０ｍＬ）を加えた。１５分後、混合物をセライトろ過し、ろ液を水および食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（３０：７０）→（４０：６０）］により不純な化合物７０を得た。ジクロロメタン（３５ｍＬ）、４−ジメチルアミノピリジン（０．４３ｇ）、トリエチルアミン（５ｍＬ）および４−ヘキシル−塩化ベンゾイル（１．５６ｍＬ）を加えた。２０時間後、酢酸エチル、水および食塩水を加えた。有機フラクションを分離し、水フラクションを酢酸エチルで抽出した。結合有機フラクションを１Ｍ塩酸、飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（３０：７０）→（５０：５０）］により、化合物７０（５．０９ｇ）を得た。
【０２２９】
［化合物７１  ｐ−メトキシフェニル ２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−４，６−Ｏ−ベンジリデン−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０２３０】
【化７１】
2009526031.tif 000072
【０２３１】
酢酸ヒドラジン（０．８６ｇ）を化合物７０（５．９ｇ）のメタノール（２５０ｍＬ）溶液の混合物に加え、混合物を夜通し６０℃で加熱した。混合物を冷やし、飽和炭酸水素ナトリウム（１００ｍＬ）およびジクロロメタン（２００ｍＬ）を加えた。有機層を分離し、水層をジクロロメタン（２×１００ｍＬ）で抽出した。結合抽出物を食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（５０：５０）］により化合物７１を得た（４．０ｇ）。
【０２３２】
［化合物７２  ｐ−メトキシフェニル ２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０２３３】
【化７２】
2009526031.tif 000073
【０２３４】
化合物７１（４．４ｇ）および無水ピリジン（６．３ｍＬ）をジクロロメタン（５０ｍＬ）に溶解した。混合物を０℃まで冷やし、無水トリフルオロメタンスルホン酸（５．６ｍＬ）を加えた。混合物を室温まで２時間暖め、ジクロロメタンおよび飽和炭酸水素ナトリウムを加えた。有機層を分離し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。トルエン（１００ｍＬ）およびテトラ−酢酸ブチルアンモニウム（５．１ｇ）を加え、反応槽を１６時間超音波槽に保管した。混合物を減圧下蒸発させ、クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（５０：５０）］により化合物７２を得た（３．０ｇ）。
【０２３５】
［化合物７３  ｐ−メトキシフェニル ２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）−２−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０２３６】
【化７３】
2009526031.tif 000074
【０２３７】
ｐ−トルエンスルホン酸（０．０３２ｇ）を化合物７２（３．０９ｇ）のメタノール溶液（５０ｍＬ）および１，４−ジオキサン（３０ｍＬ）の混合物に加えた。混合物を８５℃で２時間加熱し、次いで室温まで冷やした。水（１００ｍＬ）およびジクロロメタン（１００ｍＬ）を加え、有機層を分離した。水層をジクロロメタン（２×５０ｍＬ）で抽出し、結合有機フラクションを炭酸水素ナトリウム（１００ｍＬ）および食塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（５０：５０）→（６７：３３）］により化合物７３を得た（１．５ｇ）。
【０２３８】
［化合物７４  ｐ−メトキシフェニル ２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）−［２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）］−２−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０２３９】
【化７４】
2009526031.tif 000075
【０２４０】
化合物７３（０．５００ｇ）、化合物６（０．１８４ｇ）および粉末活性分子篩を乾燥ジクロロメタン（３０ｍＬ）中、アルゴン雰囲気下で攪拌した。混合物を−４０℃まで冷やし、トリメチルシリルトリフラ−ト（０．００３ｍＬ）を加えた。２時間後、混合物をセライトろ過し、ろ液を飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（３３：６７）→（５０：５０）］により、化合物７４を得た（０．４０ｇ）。
【０２４１】
［化合物７５  ２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）−［２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）］−２，４−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−１−Ｏ−アセチル−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０２４２】
【化７５】
2009526031.tif 000076
【０２４３】
硝酸セリウムアンモニウム（０．１８５ｇ）を化合物７４（０．１５ｇ）のアセトニトリル（３ｍＬ）、トルエン（２ｍＬ）および水（１ｍＬ）の激しく攪拌された混合物に加えた。２５分後、酢酸エチルを加え、混合物を水、飽和炭酸水素ナトリウムおよび食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。ジクロロメタン（２ｍＬ）およびピリジン（２．２ｍＬ）を加え、次いで無水酢酸（０．７ｍＬ）を滴下した。混合物を２０時間攪拌し、ジクロロメタンを加えた。混合物を飽和炭酸水素ナトリウム、水および食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（５０：５０）］により、化合物７５を得た（０．１２７ｇ）。
【０２４４】
［化合物７６  ベンジル ２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）−［２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）］−２，４−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−フタルイミド−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０２４５】
【化７６】
2009526031.tif 000077
【０２４６】
ボロン三フッ化ホウ素エ−テル（０．００９ｍＬ）を化合物７５（０．１２３ｇ）およびベンジルメルカプタン（０．０１３ｍＬ）の乾燥ジクロロメタン（２ｍＬ）の攪拌された混合物に加えた。２時間後、ジクロロメタン（５０ｍＬ）を加え、混合物を飽和炭酸水素ナトリウム、水および食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。放射状クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（４０：６０）］により化合物７６を得た（０．１０３ｇ）。
【０２４７】
［化合物７７  ベンジル ２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）−［２−Ｏ−アセチル−３，４，６−トリ−Ｏ−ベンジル−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）］−２，４−ジ−Ｏ−アセチル−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−２−アセトアミド−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシド］
【０２４８】
【化７７】
2009526031.tif 000078
【０２４９】
エチレンジアミン（２ｍＬ）を化合物７６（０．０９６ｇ）およびｎ−ブタノール（１０ｍＬ）溶液の攪拌された混合物にアルゴン雰囲気下で加え、混合物を８０℃で加熱した。２０時間後、混合物を減圧下蒸発させた。トルエン（２０ｍＬ）を加え、混合物を減圧下蒸発させた。トルエン追加および減圧下蒸発を２回繰り返した。ピリジン（５ｍＬ）および無水酢酸（１ｍＬ）を加え、混合物を１６時間アルゴン雰囲気下で攪拌した。酢酸エチルを加え、混合物を飽和炭酸水素ナトリウム、水および食塩水で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、減圧下蒸発させた。クロマトグラフィー［ＳｉＯ２、酢酸エチル：ガソリン（７０：３０）］により化合物７７を得た（０．０６９ｇ）。
【０２５０】
［化合物７８  α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）］−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−デオキシ−２−アセトアミド−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノース］
【０２５１】
【化７８】
2009526031.tif 000079
【０２５２】
ナトリウム（０．０１０ｇ）を−７８℃の液体アンモニア（１０ｍＬ）に加えた。１０分後、化合物７７（０．０３０ｇ）のテトラヒドロフラン溶液（２ｍＬ）を加えた。３０分後、塩化アンモニウム（０．０３８ｇ）を加え、混合物を室温まで暖めた。水（１ｍＬ）を加え、混合物をサイズ排除クロマトグラフィー［バイオラッド Ｐ２ゲル、０．０４Ｍ炭酸アンモニウム］および凍結乾燥により化合物７８を得た（０．００９ｇ）。
【０２５３】
［化合物７９  α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）］−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−デオキシ−２−アセトアミド−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノースの二硫化物］
【０２５４】
【化７９】
2009526031.tif 000080
【０２５５】
水中の化合物７８をチオールが完全に二硫化物に変換されるまで空気雰囲気下で保管した（約５日）。
【０２５６】
＜ＳＢＬ−化合物７８共役の合成（ＰＭＳＦで不活性化される）＞
フッ化フェニルメチルスルフォニル（ＰＭＳＦ）（エタノール１．０Ｍ溶液の６μＬ）をサブチリシン バシラス・レンタス（ＳＢＬ）Ｓ１５６Ｃ変種（０．３ｇ）の炭酸アンモニウム緩衝溶液（ｐＨ８．６）（１００μＬ）に加えた。５分後、混合物を５０ｍＭ炭酸アンモニウム緩衝液（ｐＨ８．６）で前平衡したＺｅｂａ脱塩スピンカラム（ピアス）で脱塩した。化合物３１（４ｍｇ／ｍＬ水溶液の２５μＬ）を加えた。２時間後、５μＬアリコートを用いて質量分析（ＥＳＩ−ＴＯＦ）により分析したところ、ＳＢＬ−化合物７８共役への変換（ＰＭＳＦで不活性化される）を示した（測定質量２７７９２、理論値２７７９３）。
【手続補正書】
【提出日】平成20年4月21日(2008.4.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
単糖類−Ｓ−Ｈで示されるチオ単糖類の調製工程であって、前記単糖類が式（Ｐ）単糖類−Ｓ−（Ｐ）に対応する化合物を対象として含み、バーチ還元する少なくとも４つの糖単位からなる（前記（Ｐ）はＯ−またはＳ−保護基（ｓ）を示す）、チオ単糖類の調製工程。
【請求項２】
前記（Ｐ）がアシルまたはベンジルである、請求項１記載の工程。
【請求項３】
前記（Ｐ）がアセチルまたはベンジルである、請求項１記載の工程。
【請求項４】
前記、単糖類−Ｓ−Ｈが、
式（化合物７８）
【化７８】
2009526031.tif 000084
すなわち、α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）−［α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）］−β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−２−デオキシ−２−アセトアミド−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシルで示される、請求項１〜３のいずれかに記載の工程。
【請求項５】
前記、単糖類−Ｓ−Ｈが、
式（化合物４７）
【化４７】
2009526031.tif 000085
すなわち、｛２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］−α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→３）｝−｛２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→６）−［２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→２）］α−Ｄ−マンノピラノシル−（１→６）｝β−Ｄ−マンノピラノシル−（１→４）−２−デオキシ−２−アセトアミド−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−［α−Ｌ−フコピラノシル−（１→６）］−２−デオキシ−２−アセトアミド−１−チオ−β−Ｄ−グルコピラノシルで示される、請求項１〜３のいずれかに記載の工程。
【請求項６】
単糖類−ＳＨを単糖類−Ｓ−Ｓｅ−Ｒに変換し、および後者をタンパク質−ＳＨと反応する（前記Ｒは有機基である）、前記いずれかの請求項に記載の工程からなる単糖類−Ｓ−Ｓ−タンパク質で示される、糖タンパク質の調製方法。
【請求項７】
単糖類−ＳＨとタンパク質−Ｓ−Ｓｅ−Ｒが反応する（前記Ｒは請求項６で定義する）、前記いずれかの請求項に記載の工程からなる単糖類−Ｓ−Ｓ−タンパク質で示される、糖タンパク質の調製方法。
【請求項８】
単糖類−ＳＨの二量化を可能とし、および二量体が単糖類−Ｓ−Ｓ−単糖類とタンパク質−ＳＨと反応する、前記いずれかの請求項に記載の工程からなる単糖類−Ｓ−Ｓ−タンパク質で示される、糖タンパク質の調製方法。
【請求項９】
請求項５に記載の化合物。
【請求項１０】
請求項５に記載の化合物を二硫化した、
式（化合物４８）
【化４８】
2009526031.tif 000086
で示される化合物。
【請求項１１】
前記単糖類が少なくとも５つの糖単位からなる、請求項１記載の工程。
【請求項１２】
前記単糖類が少なくとも４つの糖単位からなる、請求項３記載の工程。
【国際調査報告】
2009526031.tif 000087
2009526031.tif 000088
2009526031.tif 000089