(57)【要約】  本発明は、一般に、特定のジアミノフェノチアジニウム化合物、具体的には、ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮを用いたプロセス、使用、方法および物質に関する。これらの化合物は、例えば、タウオパチー（例えば、アルツハイマー病）の処置において、医薬として有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択される、治療によりヒトまたは動物の身体を治療または予防する方法に用いられる化合物。
【請求項２】
以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択される、患者のタウオパチー状態を治療または予防する方法に用いられる化合物。
【請求項３】
以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択される、患者のタウ蛋白質凝集の疾患を治療または予防する方法に用いられる化合物。
【請求項４】
以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択される、患者のアルツハイマー病（ＡＤ）、ピック病、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型痴呆（ＦＴＤ）、第１７染色体に関連するパーキンソン病（ＦＴＤＰ−１７）、脱抑制−痴呆−パーキンソン病−筋萎縮症複合（disinhibition-dementia-parkinsonism-amyotrophy complex）（ＤＤＰＡＣ）、淡蒼球・橋・黒質の変性（ＰＰＮＤ）、グアム島ＡＬＳ症候群、淡蒼球・黒質・ルイ体の変性（ＰＮＬＤ）、または大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）を治療または予防する方法に用いられる化合物。
【請求項５】
以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択される、患者のアルツハイマー病（ＡＤ）を治療または予防する方法に用いられる化合物。
【請求項６】
化合物が、ＥＴＣである、請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項７】
化合物が、ＤＥＭＴＣである、請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項８】
化合物が、ＤＭＥＴＣである、請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項９】
化合物が、ＤＥＥＴＣである、請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１０】
化合物が、ＭＴＺである、請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１１】
化合物が、ＥＴＺである、請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１２】
化合物が、ＭＴＩである、請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１３】
化合物が、ＭＴＩ．ＨＩである、請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１４】
化合物が、ＥＴＩである、請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１５】
化合物が、ＥＴＩ．ＨＩである、請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１６】
化合物が、ＭＴＮである、請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１７】
化合物が、ＥＴＮである、請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１８】
化合物が、ＥＴＣである、請求項１〜５のいずれか１項記載の化合物。
【請求項１９】
化合物が、２０〜３００mgの量のその化合物および薬学的に許容され得る担体、希釈剤または賦形剤を含む投与単位の形態で提供される、請求項１〜１８のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２０】
治療または予防が、以下の投与レジメン：約５０または約７５mgを１日３または４回、による化合物の投与を含む、請求項１〜１９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２１】
治療または予防が、以下の投与レジメン：約１００または約１２５mgを１日２回、による化合物の投与を含む、請求項１〜１９のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２２】
治療または予防が、化合物の経口投与含む、請求項１〜２１のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２３】
治療または予防が、コリンエステラーゼ阻害剤での治療を更に含む、請求項１〜２２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２４】
治療または予防が、ドネペジル（Aricept（商標））、リバスチグミン（Exelon（商標））、またはガランタミン（Reminyl（商標））での治療を更に含む、請求項１〜２２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２５】
治療または予防が、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストでの治療を更に含む、請求項１〜２２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２６】
治療または予防が、メマンチン（Ebixa（商標）、Namenda（商標））での治療を更に含む、請求項１〜２２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２７】
治療または予防が、ムスカリン受容体アゴニストでの治療を更に含む、請求項１〜２２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２８】
治療または予防が、β−アミロイドに変化する(processing)、アミロイド前駆体蛋白質の阻害剤による治療を更に含む、請求項１〜２２のいずれか１項記載の化合物。
【請求項２９】
患者のタウオパチー状態を治療または予防する方法に用いられる医薬の製造における、以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択される化合物の使用。
【請求項３０】
患者のタウ蛋白質凝集の疾患を治療または予防する方法に用いられる医薬の製造における、以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択される化合物の使用。
【請求項３１】
患者のアルツハイマー病（ＡＤ）、ピック病、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型痴呆（ＦＴＤ）、第１７染色体に関連するパーキンソン病（ＦＴＤＰ−１７）、脱抑制−痴呆−パーキンソン病−筋萎縮症複合（ＤＤＰＡＣ）、淡蒼球・橋・黒質の変性（ＰＰＮＤ）、グアム島ＡＬＳ症候群、淡蒼球・黒質・ルイ体の変性（ＰＮＬＤ）、または大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）を治療または予防する方法に用いられる医薬の製造における、以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択される化合物の使用。
【請求項３２】
患者のアルツハイマー病（ＡＤ）を治療または予防する方法に用いられる医薬の製造における、以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択される化合物の使用。
【請求項３３】
化合物が、ＥＴＣである、請求項２９〜３２のいずれか１項記載の使用。
【請求項３４】
化合物が、ＤＥＭＴＣである、請求項２９〜３２のいずれか１項記載の使用。
【請求項３５】
化合物が、ＤＭＥＴＣである、請求項２９〜３２のいずれか１項記載の使用。
【請求項３６】
化合物が、ＤＥＥＴＣである、請求項２９〜３２のいずれか１項記載の使用。
【請求項３７】
化合物が、ＭＴＺである、請求項２９〜３２のいずれか１項記載の使用。
【請求項３８】
化合物が、ＥＴＺである、請求項２９〜３２のいずれか１項記載の使用。
【請求項３９】
化合物が、ＭＴＩである、請求項２９〜３２のいずれか１項記載の使用。
【請求項４０】
化合物が、ＭＴＩ．ＨＩである、請求項２９〜３２のいずれか１項記載の使用。
【請求項４１】
化合物が、ＥＴＩである、請求項２９〜３２のいずれか１項記載の使用。
【請求項４２】
化合物が、ＥＴＩ．ＨＩである、請求項２９〜３２のいずれか１項記載の使用。
【請求項４３】
化合物が、ＭＴＮである、請求項２９〜３２のいずれか１項記載の使用。
【請求項４４】
化合物が、ＥＴＮである、請求項２９〜３２のいずれか１項記載の使用。
【請求項４５】
化合物が、ＥＴＣである、請求項２９〜３２のいずれか１項記載の使用。
【請求項４６】
医薬が、２０〜３００mgの量の化合物および薬学的に許容され得る担体、希釈剤または賦形剤を含む投与単位である、請求項２９〜４５のいずれか１項記載の使用。
【請求項４７】
治療または予防が、以下の投与レジメン：約５０または約７５mgを１日３または４回、による化合物の投与を含む、請求項２９〜４６のいずれか１項記載の使用。
【請求項４８】
治療または予防が、以下の投与レジメン：約１００または約１２５mgを１日２回、による化合物の投与を含む、請求項２９〜４６のいずれか１項記載の使用。
【請求項４９】
治療または予防が、化合物の経口投与含む、請求項２９〜４８のいずれか１項記載の使用。
【請求項５０】
治療または予防が、コリンエステラーゼ阻害剤での治療を更に含む、請求項２９〜４９のいずれか１項記載の使用。
【請求項５１】
治療または予防が、ドネペジル（Aricept（商標））、リバスチグミン（Exelon（商標））、またはガランタミン（Reminyl（商標））での治療を更に含む、請求項２９〜４９のいずれか１項記載の使用。
【請求項５２】
治療または予防が、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニストでの治療を更に含む、請求項２９〜４９のいずれか１項記載の使用。
【請求項５３】
治療または予防が、メマンチン（Ebixa（商標）、Namenda（商標））での治療を更に含む、請求項２９〜４９のいずれか１項記載の使用。
【請求項５４】
治療または予防が、ムスカリン受容体アゴニストでの治療を更に含む、請求項２９〜４９のいずれか１項記載の使用。
【請求項５５】
治療または予防が、β−アミロイドに変化する(processing)、アミロイド前駆体蛋白質の阻害剤による治療を更に含む、請求項２９〜４９のいずれか１項記載の使用。
【請求項５６】
タウ蛋白質の凝集体またはその蛋白質を、以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択される化合物と接触させることを含む、タウ蛋白質の凝集を後退または阻害する方法。
【請求項５７】
以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択される化合物の予防上または治療上効果的な量をホ乳類に投与するステップを含む、凝集がタウ蛋白質凝集の疾患に関連する、前記ホ乳類の脳内のタウ蛋白質の凝集を調節する方法。
【請求項５８】
以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択される化合物の予防上または治療上効果的な量をホ乳類に投与するステップを含む、前記ホ乳類の脳内の蛋白質凝集体の産生を阻害する方法。
【請求項５９】
以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択される化合物を患者に投与することを含む、前記患者のタウオパチー状態を治療または予防する方法。
【請求項６０】
以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択される化合物を患者に投与することを含む、前記患者のタウ蛋白質凝集の疾患を治療または予防する方法。
【請求項６１】
以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択される化合物を患者に投与することを含む、前記患者のアルツハイマー病（ＡＤ）、ピック病、進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）、前頭側頭型痴呆（ＦＴＤ）、第１７染色体に関連するパーキンソン病（ＦＴＤＰ−１７）、脱抑制−痴呆−パーキンソン病−筋萎縮症複合（ＤＤＰＡＣ）、淡蒼球・橋・黒質の変性（ＰＰＮＤ）、グアム島ＡＬＳ症候群、淡蒼球・黒質・ルイ体の変性（ＰＮＬＤ）、または大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）を治療または予防する方法。
【請求項６２】
以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択される化合物を患者に投与することを含む、前記患者のアルツハイマー病（ＡＤ）を治療または予防する方法。
【請求項６３】
以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択され、１種以上の検出性標識を取込むか、またはそれとコンジュゲートされるか、キレート化されるか、もしくは他の方法で結合される、タウプロテイノパチーの診断または予後の方法において使用される、化合物。
【請求項６４】
以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択され、１種以上の検出性標識を取込むか、またはそれとコンジュゲートされるか、キレート化されるか、もしくは他の方法で結合される、患者のタウプロテイノパチーの診断または予後において使用される診断または予後試薬の製造における、化合物の使用。
【請求項６５】
以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択され、１種以上の検出性標識を取込むか、またはそれとコンジュゲートされるか、キレート化されるか、もしくは他の方法で結合される化合物と、タウ蛋白質または凝集したタウ蛋白質を接触させるステップを含む、タウ蛋白質または凝集したタウ蛋白質を標識する方法。
【請求項６６】
以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択され、１種以上の検出性標識を取込むか、またはそれとコンジュゲートされるか、キレート化されるか、もしくは他の方法で結合される化合物と、タウ蛋白質または凝集したタウ蛋白質を接触させるステップ；ならびに
タウ蛋白質（または凝集したタウ蛋白質）に結合した前記化合物の存在および／または量を検出するステップを含む、タウ蛋白質または凝集したタウ蛋白質を検出する方法。
【請求項６７】
（ｉ）以下の化合物：ＥＴＣ、ＤＥＭＴＣ、ＤＭＥＴＣ、ＤＥＥＴＣ、ＭＴＺ、ＥＴＺ、ＭＴＩ、ＭＴＩ．ＨＩ、ＥＴＩ、ＥＴＩ．ＨＩ、ＭＴＮおよびＥＴＮから選択され、１種以上の検出性標識を取込むか、またはそれとコンジュゲートされるか、キレート化されるか、もしくは他の方法で結合される化合物を対象に導入するステップ、
（ii）対象の脳内のタウ蛋白質または凝集したタウ蛋白質に結合した前記化合物の存在および／または量を測定するステップ、
（iii）（ii）で測定した結果を、対象の疾患状態と相関させるステップ、
を含む、該疾患に罹患したと思われる対象におけるタウプロテイノパチーの診断または予後の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本願は、２００６年３月２９日出願の米国特許出願番号60/786,699に関し、その内容は、全体が本明細書に参考として援用される。
【０００２】
技術分野
本発明は、一般に、特定のジアミノフェノチアジニウム化合物を用いたプロセス、使用、方法および物質に属する。この化合物は、例えば、タウオパチー（例えば、アルツハイマー病）の処置において、薬物として有用である。
【０００３】
背景
本発明および本発明が属する技術の状態をより完全に記載および開示するために、多数の特許および発行物が本明細書に引用されている。これらの参考資料はそれぞれ、個々の参考資料が具体的かつ個別に参考として援用されることを指示されたように、本発明の開示に全体が参考として援用される。
【０００４】
以下の特許請求の範囲を含む本明細書全体を通して、他に断りがない限り、語「含む（comprise）」およびその変形、例えば「含む（comprises）」および「含んでいる」が、記載された完全体(integer)もしくはステップ、または完全体群もしくはステップ群を包含するが、それ以外の完全体もしくはステップ、または完全体群もしくはステップ群を除外しないことは理解されよう。
【０００５】
明細書および添付の特許請求の範囲で用いられる単数形「ａ」、「ａｎ」および「the」が、他に明確に記載されない限りは、複数の言及を包含することに留意しなければならない。つまり、例えば「医薬担体」の言及は、そのような担体の２種以上の混合物などを包含する。
【０００６】
範囲は、本明細書では多くの場合、「約」のある一方の特定値から、そして／または「約」のある他方の特定値までとして表されている。そのような範囲が表されている場合、別の実施形態は、その一方の特定値から、そして／またはその他方の特定値までを包含する。同様に、先行詞「約」を使用することで値が近似値として表されている場合、特定の値が別の実施形態を形成しているものと理解する。
【０００７】
アルツハイマー病（ＡＤ）などの痴呆の状態は、多くの場合、罹患した患者の脳内のβ−アミロイド斑および神経原線維変化（neurofibrillary tangle:ＮＦＴ）などの、蛋白質様構造の細胞内および／または細胞外沈着が進行的に蓄積することにより特徴付けられる。これらの病変の出現は、病理的神経原線維変性および脳萎縮、ならびに認知障害に大きく相関する（例えば、Mukaetova-Ladinska, E. B., et al., 2000, Am. J. Pathol., Vol. 157, No.2, pp.623-636参照）。
【０００８】
ＡＤにおいて、神経炎性斑およびＮＦＴは両者とも、ペアード・ヘリカル・フィラメント（ＰＨＦ）を含み、その主な成分は、微小管結合蛋白質タウである（例えば、Wischik et al., 1988, PNAS USA, Vol. 85, pp. 4506-4510参照）。斑は、アミロイド前駆体蛋白質（ＡＰＰ）の異常な進行(processing)により生じた細胞外β−アミロイド線維も含む（例えば、Kang et al., 1987, Nature, Vol. 325, p.733参照）。Wischik他による文献（'Neurobiology of Alzheimer's Disease', 2nd Edtion, 2000, Eds. Dawbarn, D.およびAllen, S. J., The Molecular and Cellular Neurobiology Series, Bios Scientific Publishers, Oxford）は、神経変性型痴呆の病理におけるタウ蛋白質の推定上の役割を詳細に議論する。正常な形態のタウの喪失、病的ＰＨＦの蓄積、および前頭中間皮質のシナプスの喪失は全て、関連の認知障害と相関する。更に、シナプスの喪失および錐体細胞の喪失は両者とも、アルツハイマー病において、可溶性形態から重合形態（即ち、ＰＨＦ）までのタウ蛋白質プールのほぼ全体的再分布に、分子レベルで、相当するタウ反応性神経線維病理の形態測定学的値と相関する。
【０００９】
タウは、微小管結合ドメインに対応する反復配列を３〜４コピー含む選択的スプライシングを受けたアイソフォームに存在する（例えば、Goedert, M., et al., 1989, EMBO J., Vol. 8, pp. 393-399; Goedert, M., et al., 1989, Neuron, Vol. 3, pp. 519-526参照）。ＰＨＦ中のタウは、蛋白質溶解により、反復ドメインの相移動体で構成されたコアドメインに進み（例えば、Wischik, C. M., et al., 1988, PNAS USA, Vol. 85, pp.4884-4888; Wischik et al., 1988, PNAS USA, Vol. 85, pp.4506-4510; Novak, M., et al., 1993, EMBO J., Vol. 12, pp. 365-370参照）、３つの反復のみが、安定したタウ−タウ相互作用に関与する（例えば、Jakes, R., et al., 1991, EMBO J., Vol. 10, pp. 2725-2799参照）。ＰＨＦ様タウ凝集体は、一旦形成されると、更なる捕捉のための種として働き、全長タウ蛋白質を蛋白質溶解進行のためのテンプレートを提供する（例えば、Wischik, et al., 1996, PNAS USA, Vol. 93, pp.11213-11218参照）。
【００１０】
ＰＨＦに取込まれたタウの反復ドメイン内に観察される相移動は、フィラメントへの取り込みの際に、反復ドメインが誘導されるコンホメーション変化をすることを示唆する。ＡＤの発生時に、タウが病的基質（例えば、損傷または突然変異を起した膜蛋白質）に結合することにより、このコンホメーション変化が開始し得ると予見される（例えば、Wischik, C. M., et al., 1997, "Microtubule-associated proteins: modifications in disease", Eds. Avila, J., Brandt, R. and Kosik, K. S.(Harwood Academic Publishers, Amsterdam) pp.185-241参照）。
【００１１】
最初に、ＰＨＦが集まり、それらの形成および蓄積の過程で、おそらくＰＨＦ結合の前または過程に切断された初期タウオリゴマーから、細胞質内に、非晶質凝集体を形成する（例えば、Mena, R., et al., 1995, Acta Neuropathol., Vol. 89, pp. 50-56; Mena, R., et al., 1996, Acta Neuropathol., Vol. 91, pp. 633-641参照）。これらのフィラメントは、その後、古典的な細胞内ＮＦＴを形成し続ける。この状態では、ＰＨＦは、切断タウ（truncated-tau）のコアと、全長タウを含む綿毛状の外皮（fuzzy outer coat）とからなる（例えば、Wischik, et al., 1996, PNAS USA, Vol. 93, pp.11213-11218参照）。集合の過程は、指数関数的であり、正常機能のタウの細胞内プールを消費し、新しいタウの合成を誘導して、欠損を作り出す（例えば、Lai, R. Y. K., et al. 1995, Neurobiology of Ageing, Vol. 16, No. 3, pp. 433-445参照）。最終的に、ニューロンの機能的障害が、細胞死の時点まで進み、細胞外ＮＦＴが後に残される。細胞死は、細胞外ＮＦＴの数に大きく相関する（例えば、Wischik, et al., 'Neurobiology of Alzheimer's Disease', 2nd Edtion, 2000, Eds. Dawbarn, D.およびAllen, S. J., The Molecular and Cellular Neurobiology Series, Bios Scientific Publishers, Oxford参照）。もつれ（tangle）が、細胞外空間まで突出しているため、ニューロンの綿毛状の外皮が進行的に喪失し、対応してＮ末端タウ免疫反応を喪失するが、ＰＨＦコアに関連するタウ免疫反応は保持される（例えば、Bondareff, W. et al., 1994, J. Neuropath. Exper. Neurol., Vol. 53, No. 2, pp. 158-164参照）。
【００１２】
ジアミノフェノチアジンは、タウ蛋白質凝集を阻害し、ＰＨＦの構造を分裂させて、ＰＨＦコアの蛋白質溶解安定性を後退させることが過去に示された（例えば、WO96/30766, F. Hoffman-La Roche参照）。そのような化合物は、アルツハイマー病を含む様々な疾患の治療または予防での使用が開示されている。これらは、とりわけ、
【００１３】
【表１】
2009531405.tif 000002
【００１４】
を含む。
【００１５】
加えて、WO02/055720（The University Court of the University of Aberdeen）は、特に、様々な蛋白質凝集疾患の処置のための、ジアミノフェノチアジンの還元形態の使用を議論しているが、その開示は、主にタウオパチーに関する。
【００１６】
WO02005/030676（The University Court of the University of Aberdeen）は、放射線標識したフェノチアジン、ならびに、例えば、タウオパチーの、診断および治療におけるその使用を議論する。
【００１７】
これらの開示にもかかわらず、これまでに、効果的なタウ蛋白質凝集阻害剤として具体的に同定されていない１種以上の更なる化合物の提示が、当該技術分野に貢献することは理解されよう。
【００１８】
PCT/GB2005/003634（TauRx Therapeutics Pte. Ltd）は、本願の出願前に出願されたが、公告(published)されなかった（WO2006/032879 A2が、２００６年３月３０日に発行された）。その出願は、とりわけ、ＭＴＣおよび本明細書に記載された他の化合物を含む特定の３，７−ジアミノフェノチアジン−５−イウム化合物（「ジアミノフェノチアジニウム化合物」と呼ばれる）を合成および精製する方法に関する。それは更に、これらの化合物の治療的使用を開示する。
【００１９】
発明の記載
本発明者は、例えば、先に議論した先行技術の化合物と比較して、効果的なタウ蛋白質凝集阻害剤として、そして他の特定の望ましい性質を有する好ましい形態で、特定のチオニニウム化合物をここに同定した。
【００２０】
先に議論したとおり、タウ蛋白質は、集合および解離の反復周期の間に、微小管と共精製される多数の蛋白質ファミリーのうちの１種として特徴づけられており（Shelanski et al. (1973) Proc. Natl. Acad. Sci, USA, 70., 765-768）、微小管結合蛋白質（ＭＡＰ）として公知である。タウファミリーのメンバーは、特徴的なＮ−末端セグメントと、脳内で発生的に調節されたＮ−末端セグメントに挿入された約５０のアミノ酸配列と、アミノ酸３１〜３２個でのタンデムリピート３または４個からなる特徴的タンデムリピート領域と、Ｃ−末端と、を有する一般的特徴を共有する。
【００２１】
これらの特異的化合物の１種以上が、当該技術分野で公知であり、例えば、ＭＴＺは、Interscience (London, UK)発行のFundamental Processes of Dye Chemistry,  p308-314のFierz-David and Blangley, 1949, "F. Oxazine and Thiazine Dyes," に記載されている。しかし、これらのいずれも、過去に、先行技術に、タウ蛋白質凝集阻害剤として開示されなかった。
【００２２】
それゆえ本発明は、これらの化合物を、タウ蛋白質凝集阻害剤としてそしてタウ蛋白質凝集に関連する疾患（タウオパチー）の治療薬または予防薬として、用いる方法、使用、組成物および他の物質に関する。本発明は、更に、これらの化合物を製造する方法を提供する。
【００２３】
本発明のこれらの態様、および他の態様は、本明細書の以後により詳細に議論される。
【００２４】
化合物
【００２５】
一般に、本発明は、以下のジアミノフェノチアジニウム化合物から選択される１種以上の化合物に関する。
【００２６】
【表２】
2009531405.tif 000003
2009531405.tif 000004
2009531405.tif 000005
【００２７】
これらの化合物：Ａ〜Ｌは、本明細書では、「ジアミノフェノチアジニウム化合物」または「ＤＡＰＴ化合物」または「本発明の化合物」または（他に断りがなければ）「活性化合物」として記載されている。
【００２８】
同位体類
【００２９】
一つの実施形態において、該化合物の炭素原子１個以上は、１１Ｃまたは１３Ｃまたは１４Ｃである。
一つの実施形態において、該化合物の炭素原子１個以上は、１１Ｃである。
一つの実施形態において、該化合物の炭素原子１個以上は、１３Ｃである。
一つの実施形態において、該化合物の炭素原子１個以上は、１４Ｃである。
一つの実施形態において、該化合物の窒素原子１個以上は、１５Ｎである。
【００３０】
一つの実施形態において、基：−Ｍｅ（または−Ｅｔ）の１個以上または全ての中の炭素原子１個以上または全ては、１１Ｃである。
【００３１】
一つの実施形態において、基：−ＮＭｅ２（または−ＮＥｔ２）１個以上または全ての中の炭素原子１個以上または全ては、１１Ｃである。
【００３２】
一つの実施形態において、基：−ＮＭｅ２は、−Ｎ（１１ＣＨ３）２である。
【００３３】
タウ蛋白質の凝集を後退または阻害するための使用
【００３４】
本発明の一つの態様は、タウ蛋白質の凝集を後退または阻害するジアミノフェノチアジニウム化合物の使用である。この凝集は、インビトロまたはインビボであってもよく、本明細書に議論されたタウオパチー疾患状態に関連してもよい。同じく、その凝集体または蛋白質を本明細書に記載された化合物と接触させることを含む、タウ蛋白質の凝集を後退または阻害する方法も提供する。
【００３５】
好ましい化合物
【００３６】
本発明のこの態様、および他の全ての態様において、他に断りがなければ、該化合物は、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｊ、Ｋ、およびＬ（それぞれの例で、場合により、上記のようなその同位体類である）からなるリストから選択される。
【００３７】
一つの実施形態において、それは、化合物：Ａである。
一つの実施形態において、それは、化合物：Ｂである。
一つの実施形態において、それは、化合物：Ｃである。
一つの実施形態において、それは、化合物：Ｄである。
一つの実施形態において、それは、化合物：Ｅである。
一つの実施形態において、それは、化合物：Ｆである。
一つの実施形態において、それは、化合物：Ｇである。
一つの実施形態において、それは、化合物：Ｈである。
一つの実施形態において、それは、化合物：Ｉである。
一つの実施形態において、それは、化合物：Ｊである。
一つの実施形態において、それは、化合物：Ｋである。
一つの実施形態において、それは、化合物：Ｌである。
【００３８】
一つの実施形態において、ジアミノフェノチアジニウム化合物は、本明細書に記載された方法により得られる、または得ることができる１種であってもよい（以下の「合成の方法」参照）。
【００３９】
本発明の好ましい化合物は、本明細書に記載されたアッセイ、特に、以下に記載されたインビトロアッセイにおいて高活性を示すそれらのものである。好ましい化合物は、本明細書の実施例を参照して測定すると、５００μM未満、より好ましくは３００、２００、１００、９０、８０、７０、６０、５０、４０、３０または２０μM未満のＢ５０を有する。
【００４０】
一つの実施形態において、ジアミノフェノチアジニウム化合物は、１５０以上、より好ましくは１６０以上、１７０以上、１８０以上、１９０以上、２００以上、５００以上、１０００以上、１５００以上、または２０００以上の、本明細書の実施例を参照して測定して得られたRxIndex（RxI）値を有する。
【００４１】
治療または予防の方法、ならびに第１および第２の医療使用
【００４２】
本発明の一つの態様は、本明細書に記載された治療上効果的な量のジアミノフェノチアジニウム化合物を患者に投与することを含む、患者のタウオパチー状態の治療または予防の方法に属する。
【００４３】
本発明の態様は、「タウオパチー」に関する。アルツハイマー病（ＡＤ）だけでなく、ピック病および進行性核上性麻痺（ＰＳＰ）などの神経変性疾患の病因は、それぞれ、歯状回、および新皮質の星状錐体細胞の病的な切断タウ凝集体の蓄積に相関すると考えられる。他の痴呆症は、前頭側頭型痴呆（ＦＴＤ）、第１７染色体に関連するパーキンソン病（ＦＴＤＰ−１７）、脱抑制−痴呆−パーキンソン病−筋萎縮症複合（ＤＤＰＡＣ）、淡蒼球・橋・黒質の変性（ＰＰＮＤ）、グアム島ＡＬＳ症候群、淡蒼球・黒質・ルイ体の変性（ＰＮＬＤ）、大脳皮質基底核変性症（ＣＢＤ）などを含む（詳細な議論には、Wischik et al. 2000,上記引用文献、特に、表５．１参照）。これらの疾患は全て、主に、または部分的に、異常なタウ凝集に特徴づけられ、本明細書では、「タウオパチー」または「タウ蛋白質凝集の疾患」と呼ばれる。
【００４４】
タウオパチーに関連する本発明のこの態様、および他の全ての態様において、好ましくは、タウオパチーは、先の適応症、即ち、ＡＤ、ピック病、ＰＳＰ、ＦＴＤ、ＦＴＤＰ−１７、ＤＤＰＡＣ，ＰＰＮＤ，グアム島ＡＬＳ症候群、ＰＮＬＤ、およびＣＢＤからなるリストから選択される。
【００４５】
一つの好ましい実施形態において、タウオパチーは、アルツハイマー病（ＡＤ）である。
【００４６】
本発明の一つの態様は、治療により、ヒトまたは動物の身体の（例えば、タウオパチー状態の）治療または予防の方法に用いられる、本明細書に記載されジアミノフェノチアジニウム化合物に関する。
【００４７】
本発明の一つの態様は、タウオパチー状態の治療または予防に用いられる医薬の製造における、本明細書に記載されジアミノフェノチアジニウム化合物の使用に関する。
【００４８】
更なる実施形態は、例えば前記疾患状態に関連するタウ蛋白質の凝集を阻害するために、ジアミノフェノチアジニウム化合物、またはそれを含む治療組成物を対象に投与することを含む、本明細書に記載されタウ蛋白質凝集の疾患を治療または予防する方法である。
【００４９】
他の方法および使用
【００５０】
更なる実施形態において、例えば前記疾患状態に関連するタウ蛋白質の凝集を阻害するために、ジアミノフェノチアジニウム化合物または組成物、を対象に投与することを含む、先に記載されたタウ蛋白質凝集の疾患を治療または予防する方法に用いられるジアミノフェノチアジニウム化合物、またはそれを含む治療組成物が開示される。
【００５１】
更なる実施形態において、例えば前記疾患状態に関連するタウ蛋白質の凝集を阻害するために、医薬を対象に投与することを含む、先に記載されたタウ蛋白質凝集の疾患を治療または予防する方法に用いられる医薬の製造におけるジアミノフェノチアジニウム化合物の使用が開示される。
【００５２】
一つの実施形態において、ホ乳類の脳内のタウ蛋白質凝集を調節する方法が開示され、その凝集は、上記の疾患状態に関連し、その処置は、予防上または治療上効果的な量の前記凝集の阻害剤を、前記処置が必要な前記ホ乳類に投与するステップを含み、その阻害剤は、ジアミノフェノチアジニウム化合物である。
【００５３】
本発明の一つの態様は、ホ乳類の脳内の蛋白質凝固体（例えば、場合により神経原線維変化（ＮＦＴ）の、ペアード・ヘリカル・フィラメント（ＰＨＦ）の形態中）の産生を阻害する方法であり、処置は本明細書に記載されている。
【００５４】
一つの態様において、本発明は、タウ蛋白質凝固に関連する疾患状態に罹ったホ乳類において、その疾患状態を処置するための薬物製品を提供し、その薬物製品は、前記疾患の処理用であることを表記した容器、またはそれを示すラベルを添付した容器を含み、その容器は、それぞれ、少なくとも１種の薬学的に許容され得る賦形剤、および、活性成分として、本発明の単離された純粋なジアミノフェノチアジニウム化合物を含む、１種以上の単位用量を含む。
【００５５】
組成物、配合および純度
【００５６】
組成物および配合を、以後により詳細に議論する。
【００５７】
しかし、一つの実施形態において、ジアミノフェノチアジニウム化合物は、純度１００、９９、９８、９７、９６、９５、９４、９３、９２、９１、または９０％以下である組成物中で、提供または使用されてもよい。一つの実施形態において、本発明の化合物は、本願の出願前に出願されたが公表されていない、開示されたPCT/GB2005/003634（TauRx Therapeutics Pte. Ltd）の高純度法により得られる、または得ることができるものではない。
【００５８】
本発明の一つの態様は、本明細書に記載された（例えば、本明細書に記載された方法により得られる、または得ることができ、本明細書に記載された純度などを有する）ジアミノフェノチアジニウム化合物を２０〜３００mg含む投与単位（例えば、医薬錠またはカプセル）に関する。
【００５９】
本明細書に記載されたジアミノフェノチアジニウム化合物２０〜３００mgおよび薬学的に許容され得る担体、希釈剤、または賦形剤を含む投与単位（例えば、医薬錠またはカプセル）を、本明細書の以後により詳細に議論する。
【００６０】
一つの実施形態において、その量は、約２５mgである。
一つの実施形態において、その量は、約３５mgである。
一つの実施形態において、その量は、約５０mgである。
一つの実施形態において、その量は、約７０mgである。
一つの実施形態において、その量は、約１２５mgである。
一つの実施形態において、その量は、約１７５mgである。
一つの実施形態において、その量は、約２５０mgである。
【００６１】
好ましい投与レジメン
【００６２】
投与レジメンを、本明細書の以後により詳細に議論する。
【００６３】
しかし、一つの実施形態において、ジアミノフェノチアジニウム化合物は、以下の投与レジメン：約５０または約７５mgを１日３または４回、によりヒト患者に投与される。
【００６４】
一つの実施形態において、ジアミノフェノチアジニウム化合物は、以下の投与レジメン：約１００または約１２５mgを１日２回、によりヒト患者に投与される。
【００６５】
好ましい併用療法
【００６６】
２種以上の処置または治療を、例えば連続してまたは同時に併用する併用処置および療法を、本明細書の以後により詳細に議論する。つまり、本明細書に記載された医薬使用または方法のいずれかを、併用療法で用いてもよいことは理解されよう。
【００６７】
一つの実施形態において、本発明の処置（例えば、本発明の化合物の使用）は、コリンエステラーゼ阻害剤、例えば、ドネペジル（Aricept（商標））、リバスチグミン（Exelon（商標））またはガランタミン（Reminyl（商標））と併用される。
【００６８】
一つの実施形態において、本発明の処置（例えば、本発明の化合物の使用）は、ＮＭＤＡ受容体アンタゴニスト、例えば、メマンチン（Ebixa（商標）、Namenda（商標））と併用される。
【００６９】
一つの実施形態において、本発明の処置（例えば、本発明の化合物の使用）は、ムスカリン受容体アゴニストと併用される。
【００７０】
一つの実施形態において、本発明の処置（例えば、本発明の化合物の使用）は、アミロイド前駆体蛋白質  β−アミロイドの阻害剤（例えば、増加する、β−アミロイドの産生に至るアミロイド前駆体蛋白質変化(processing)の阻害剤）と併用される。
【００７１】
リガンドおよび標識
【００７２】
タウ蛋白質の凝集を阻害し得る、本明細書に議論されるジアミノフェノチアジニウム化合物は、タウ蛋白質（または凝集したタウ蛋白質）のリガンドまたは標識として作用することもできる。こうして、一つの実施形態において、ジアミノフェノチアジニウム化合物は、タウ蛋白質（または凝集したタウ蛋白質）のリガンドである。
【００７３】
そのようなジアミノフェノチアジニウム化合物（リガンド）は、他の化学基、例えば、安定または不安定な検出性同位体、放射線同位体、ポジトロン放出原子、磁気共鳴標識、染色剤、蛍光マーカ、抗原性基、治療性部分、または予後、診断もしくは治療適用において補助し得る他の部分を取込むか、またはそれとコンジュゲートされるか、キレート化されるかもしくは他の方法で結合されうる。
【００７４】
例えば、上記のとおり、一つの実施形態において、ジアミノフェノチアジニウム化合物は、先に定義されたとおりであるが、該化合物が、１種以上の（例えば、１、２、３、４種などの）同位体、放射線同位体、ポジトロン放出原子、磁気共鳴標識、染色剤、蛍光マーカ、抗原性基または治療性部分を取込むか、またはそれとコンジュゲートされるか、キレート化されるかもしくは他の方法で結合されるという更なる限定がある。
【００７５】
一つの実施形態において、ジアミノフェノチアジニウム化合物は、リガンドおよび標識、例えば、タウ蛋白質（または凝集したタウ蛋白質）の標識であり、１種以上の（例えば、１、２、３、４種などの）検出性標識を取込むか、またはそれとコンジュゲートされるか、キレート化されるかもしくは他の方法で結合される。
【００７６】
例えば、一つの実施形態において、ジアミノフェノチアジニウム化合物は、先に定義されたとおりであるが、該化合物が、１種以上の（例えば、１、２、３、４種などの）検出性標識を取込むか、またはそれとコンジュゲートされるか、キレート化されるかまたは他の方法で結合されるという更なる限定がある。
【００７７】
標識されたジアミノフェノチアジニウム化合物（例えば、タウ蛋白質または凝集したタウ蛋白質に連結されている場合）は、適切な手段で視覚化または検出されてもよく、当該技術分野で公知の適切な検出手段を用い得ることは、当業者に理解されよう。
【００７８】
例えば、ジアミノフェノチアジニウム化合物（リガンド−標識）は、ポジトロン放出原子（例えば、１１Ｃ）を取込み（例えば、１個以上のアルキル基置換基、例えばメチル基置換基のうちの一つの炭素原子として）、そして当該技術分野で公知のポジトロン放出トモグラフィー（ＰＥＴ）を用いて該化合物を検出することにより、適切に検出されうる。
【００７９】
これらおよび類似の１１Ｃ標識ジアミノフェノチアジニウムを製造する適切な方法は、例えば、WO02/075318（図１１ａ、１１ｂ、１２を参照）およびWO2005/030676に示されている。
【００８０】
つまり、一つの態様において、本発明は、タウ蛋白質（または凝集したタウ蛋白質）を、１種以上の（例えば、１、２、３、４種などの）検出性標識を取込むか、またはそれとコンジュゲートされるか、キレート化されるかもしくは他の方法で結合されるジアミノフェノチアジニウム化合物と接触させるステップを含む、タウ蛋白質（または凝集したタウ蛋白質）を標識する方法を提供する。
【００８１】
別の態様において、本発明は、タウ蛋白質（または凝集したタウ蛋白質）を、１種以上の（例えば、１、２、３、４種などの）検出性標識を取込むか、またはそれとコンジュゲートされるか、キレート化されるかもしくは結合されるジアミノフェノチアジニウム化合物と接触させるステップ；ならびにタウ蛋白質（または凝集したタウ蛋白質）に結合した前記化合物の存在および／または量を検出するステップを含む、タウ蛋白質（または凝集したタウ蛋白質）を検出する方法を提供する。
【００８２】
別の態様において、本発明は、
（ｉ）タウ蛋白質または凝集したタウ蛋白質、特に、タウ蛋白質を標識し得るジアミノフェノチアジニウム化合物（例えば、１種以上の（例えば、１、２、３、４種などの）検出性標識を取込むか、またはそれとコンジュゲートされるか、キレート化されるかもしくは他の方法で結合されるジアミノフェノチアジニウム化合物）を対象に導入するステップ、
（ii）対象の脳内の、タウ蛋白質または凝集したタウ蛋白質に結合した前記化合物の存在および／または量を測定するステップ、
（iii）（ii）でされた測定結果を、対象の疾患状態と相関させるステップ、
を含む、該疾患にパチー罹患したと思われる対象のタウプロテイノパチーの診断または予後の方法を提供する。
【００８３】
別の態様において、本発明は、タウプロテイノパチーの診断または予後の方法において用いられる、タウ蛋白質または凝集したタウ蛋白質を標識し得るジアミノフェノチアジニウム化合物（例えば、１種以上の（例えば、１、２、３、４種などの）検出性標識を取込むか、またはそれとコンジュゲートされるか、キレート化されるかもしくは他の方法で結合されるジアミノフェノチアジニウム化合物）を提供する。
【００８４】
別の態様において、本発明は、タウプロテイノパチーの診断または予後において使用される、診断または予後試薬の製造方法において、タウ蛋白質または凝集したタウ蛋白質、特にタウ蛋白質を標識し得るジアミノフェノチアジニウム化合物（例えば、１種以上の（例えば、１、２、３、４種などの）検出性標識を取込むか、またはそれとコンジュゲートされるか、キレート化されるかもしくは他の方法で結合されるジアミノフェノチアジニウム化合物）の使用を提供する。
【００８５】
ジアミノフェノチアジニウムリガンド／標識を直接投与する代わりに、同対象に存在する活性化剤または投与された活性化剤により活性形態（例えば、連結形態、標識形態）への変換のため、それらを前駆体形態で投与し得ることは、当業者には理解されよう。
【００８６】
本明細書に開示されたリガンドは、診断または予後の方法の一部として用いてもよい。それを用いて、処置される患者を選択してもよく、または対象に投与される処置または治療薬（例えば、タウ蛋白質凝集の阻害剤）の効果を評価してもよい。
【００８７】
合成の方法
【００８８】
本発明の化合物の化学合成の方法は、本明細書の実施例に記載されている。本発明の他の化合物の合成を促進するために、これらおよび／または他の周知の方法を、公知の手段で修飾および／または適合させてもよい。
【００８９】
つまり、本発明の一つの態様は、本明細書に記載された、本明細書の以後の実施例を参照して記載または実質的に記載された本発明の化合物を合成する方法を提供する。
【００９０】
本発明は、更に、本明細書に記載された方法により得られる、または得ることができる本発明のジアミノフェノチアジニウム化合物を提供する。
【００９１】
本発明の幾つかの態様を、ここにより詳細に説明する。
【００９２】
処置
【００９３】
状態を処置することに関連して本明細書で用いられる用語「処置」は、一般に、ヒトまたは動物（例えば、獣医的適用）のいずれかの処置および治療に関し、そこにおいて、幾つかの所望の治療効果、例えば、その状態の進行の阻害が実現され、それは進行速度の低下、進行速度の停止、状態の緩解、状態の改善、および状態の治癒を含む。予防的手段（例えば、予防、防御）としての処置も包含される。
【００９４】
本明細書で用いられる用語「治療上効果的な量」は、所望の処置レジメンに従って投与された場合に、妥当な利益／リスク比にふさわしい所望の治療効果を生じるのに効果的な、活性化合物の量、または活性化合物を含む物質、組成物もしくは投与形態の量に関する。
【００９５】
同様に、本明細書で用いられる用語「予防上効果的な量」は、所望の処置レジメンに従って投与された場合に、妥当な利益／リスク比にふさわしい所望の予防効果を生じるのに効果的な、活性化合物の量、または活性化合物を含む物質、組成物もしくは投与形態の量に関する。
【００９６】
用語「処置」は、併用処置および治療を包含し、そのうち２種以上の処置または治療を、例えば連続してまたは同時に併用してもよい。処置および治療の例は、非限定的に、化学療法（例えば、医薬、抗体（例えば、免疫療法での）、プロドラッグ（例えば、光学力学療法、ＧＤＥＰＴ、ＡＤＥＰＴでの）を含む活性剤の投与）、手術、放射線療法、および遺伝子療法を含む。
【００９７】
投与経路
【００９８】
ジアミノフェノチアジニウム化合物、またはそれを含む医薬組成物を、全身／末梢または局所（即ち、所望の作用の部位で）のいずれかで、従来の投与経路により、対象／患者に投与されうる。
【００９９】
投与経路は、非限定的に、経口（例えば、摂取）；口腔；舌下；経皮（例えば、パッチ、プラスターなどによる）；経粘膜（例えば、パッチ、プラスターなどによる）；鼻腔内（例えば、鼻腔スプレーによる）；眼内（例えば、点眼薬による）；経肺（例えば、口または鼻を介した、例えばエアロゾルでの、吸入または通気療法による）；経直腸（例えば、坐剤または浣腸による）；経膣（例えば、ペッサリーによる）；非経口、例えば、皮下、皮内、筋肉内、静脈内、動脈内、心臓内、鞘内、脊髄内、関節包内、被膜下、眼窩内、腹腔内、気管内、表皮下、関節内、くも膜下、および胸骨内の注射（例えば、脳への内カテーテル注射を含む）；例えば、皮下または筋肉内へのデポまたはリザーバの移植を含む。
【０１００】
対象／患者
【０１０１】
対象／患者は、動物、ホ乳類、有胎盤ホ乳類、有袋類（例えば、カンガルー、ウォンバット）、単孔類（例えば、カモノハシ）、げっ歯類（例えば、モルモット、ハムスター、ラット、マウス）、ネズミ科動物（例えば、マウス）、ウサギ目動物（例えば、ウサギ）、鳥類（例えば、トリ）、イヌ科動物（例えば、イヌ）、ネコ科動物（例えば、ネコ）、ウマ科動物（例えば、ウマ）、ブタ（porcine）（例えば、ブタ）、ヒツジ（ovine）（例えば、ヒツジ）、ウシ属（例えば、ウシ）、霊長類、サル（simian）（例えば、サルまたはエイプ）、サル（例えば、マーモセット、ヒヒ）、エイプ（例えば、ゴリラ、チンパンジー、オランウータン、テナガザル）、またはヒトであってもよい。
【０１０２】
更に、対象／患者は、その発達形態のいずれか、例えば胎児であってもよい。
【０１０３】
一つの好ましい実施形態において、対象／患者は、ヒトである。
【０１０４】
本発明の適切な対象は、従来の因子に基づいて選択してもよい。つまり患者の初期選択は、経験のある医師による正確な評価；補助的実験室での検査および他の検査により可能な非ＡＤ診断の除外；神経病理学的に検証されたテストを用いた認知機能のレベルの客観的評価、のいずれか１種以上を含んでいてもよい。
【０１０５】
一つの実施形態において、対象／患者は、ヒトではない。
【０１０６】
配合剤
【０１０７】
ジアミノフェノチアジニウム化合物は、単独で用いる（例えば、投与する）ことが可能であるが、多くの場合、組成物または配合剤として存在することが好ましい。
【０１０８】
一つの実施形態において、該組成物は、本明細書に記載されたジアミノフェノチアジニウム化合物、および薬学的に許容され得る担体、希釈剤または賦形剤を含む医薬組成物（例えば、配合剤、調製剤、医薬）である。
【０１０９】
一つの実施形態において、該組成物は、本明細書に記載された少なくとも１種のジアミノフェノチアジニウム化合物を、当業者に周知の１種以上の他の薬学的に許容され得る成分、例えば、非限定的に、薬学的に許容され得る担体、希釈剤、賦形剤、佐剤、充填剤、緩衝液、防腐剤、抗酸化剤、滑剤、安定化剤、可溶化剤、界面活性剤（例えば、湿潤剤）、マスキング剤、着色剤、着香剤、および甘味料を含むものの１種以上と共に含む医薬組成物である。
【０１１０】
一つの実施形態において、該組成物は、更に、他の活性剤、例えば他の治療剤または予防剤を含む。
【０１１１】
適切な担体、希釈剤、賦形剤などは、標準的な医薬教書に見出すことができる。例えば、Handbook of Pharmaceutical Additives, 2nd Edition (eds. M. Ash and I. Ash), 2001 (Synapse Information Resonances, Inc., Endicott, New York, USA), Remington's Pharmaceutical Sciences, 20th edition, pub. Lippicott, Williams & Wilkins, 2000;およびHandbook of Pharmaceutical Excipients, 2nd edition, 1994を参照されたい。
【０１１２】
本発明の別の態様は、本明細書に定義された少なくとも１種の［１１Ｃ］−放射線標識フェノチアジンまたはフェノチアジン様化合物を、１種以上の当業者に周知の他の薬学的に許容され得る成分、例えば担体、希釈剤、賦形剤などと共に混和することを含む、医薬組成物の製造方法に関する。分割された単位（例えば、錠剤など）として配合されている場合、各単位は、活性化合物を所定の量（投与量）含む。
【０１１３】
本明細書で用いられる用語「薬学的に許容され得る」は、健全な医薬的判断のもとで、該当する対象（例えば、ヒト）の組織と接触させる使用に適していて、過剰な毒性、刺激、アレルギー反応、または他の問題もしくは合併症を伴わず、妥当な利益／リスク比にふさわしい化合物、成分、物質、組成物、投与形態等に関する。各担体、希釈剤、賦形剤などは、配合剤の他の成分に適合しているという意味で「許容でき」なければならない。
【０１１４】
該配合剤は、薬学の技術で周知の方法により製造されてもよい。そのような方法は、活性化合物を、１種以上の補助成分を構成する担体と配合するステップを含む。一般に配合剤は、活性成分を担体（例えば、液体担体、微粉砕固体担体など）と均一かつ密接に配合させ、その後、必要に応じて生成物を成形することにより製造される。
【０１１５】
配合剤は、速放もしくは徐放；即放、遅延放出、時間放出、持続性放出；またはそれらの組合せで提供されるように製造されてもよい。
【０１１６】
非経口投与（例えば、注射）に適した配合剤は、水性または非水性、等張性、パイロジェンフリー、滅菌液（例えば、溶液、懸濁液）を含み、そこでは、活性成分が溶解され、懸濁され、または他の方法で（例えば、リポソームまたは他の微粒子中で）提供される。そのような液体は、更に、他の薬学的に許容され得る成分、例えば、抗酸化剤、緩衝液、防腐剤、安定化剤、静菌剤、懸濁剤、増粘剤、および配合剤を予定のレシピエントの血液（または他の関連の体液）と等張にする溶質を含んでいてもよい。賦形剤の例は、例えば、水、アルコール、ポリオール、グリセリン、植物油などを含む。そのような配合剤中で使用される適切な等張性担体の例は、塩化ナトリウム注射、リンゲル溶液、または乳酸リンゲル注射を含む。代表的には、液体中の活性成分の濃度は、約１ng/ml〜約１０μg/ml、例えば、約１０ng/ml〜約１μg/mlである。配合剤は、単位用量または多回用量の密閉容器、例えば、アンプルおよびバイアル中に存在してもよく、凍結乾燥状態で貯蔵されてもよく、その場合、使用の直前に、滅菌液状担体、例えば注射用水を添加することのみが必要となる。即時調合注射溶液および懸濁液は、滅菌粉末、顆粒、および錠剤から製造してもよい。
【０１１７】
配合剤の例
【０１１８】
本発明の一つの態様は、本明細書に記載された（例えば、本明細書に記載された方法により得られるまたは得ることができ、本明細書に記載された純度などを有する）ジアミノフェノチアジニウム化合物２０〜３００mg、および薬学的に許容され得る担体、希釈剤または賦形剤を含む投与単位（例えば、医薬錠またはカプセル）に関する。
【０１１９】
一つの実施形態において、投与単位は、錠剤である。
一つの実施形態において、投与単位は、カプセルである。
【０１２０】
一つの実施形態において、量は、３０〜２００mgである。
一つの実施形態において、量は、約３０mgである。
一つの実施形態において、量は、約６０mgである。
一つの実施形態において、量は、約１００mgである。
一つの実施形態において、量は、約１５０mgである。
一つの実施形態において、量は、約２００mgである。
【０１２１】
一つの実施形態において、薬学的に許容され得る担体、希釈剤または賦形剤は、グリセリド（例えば、Gelucire 44/14（登録商標）；lauroyl macrogol-32 glycerides PhEur, USP）およびコロイド状二酸化ケイ素（例えば、２％Aerosil 200（登録商標）;Colloidal Silicon Dioxide PhEur, USP）の一方または両方であるか、またはそれらを含む。
【０１２２】
投与量
【０１２３】
ジアミノフェノチアジニウム化合物、およびジアミノフェノチアジニウム化合物を含む組成物の適切な投与量が、患者により変動し得ることは、当業者には理解されよう。最適な投与量の決定は、一般に、リスクまたは有害な副作用に対する治療利益のレベルの均衡を保つことを含む。選択された投与レベルは、非限定的に、個々の化合物の活性、投与経路、投与時間、化合物の排出速度、処置の持続時間、併用で用いられる他の薬物、化合物および／または物質、状態の重症度、種、性別、年齢、体重、状態、一般的健康、ならびに患者の過去の医療暦を含む様々な因子に依存する。一般に投与量は、実質的に悪影響のある、または有害な副作用を起さないで、所望の効果を実現する作用部位で、局所濃度が実現されるように選択されるが、化合物の量および投与経路は、最終的には、医師、獣医、または臨床家の裁量でありうる。
【０１２４】
投与は、処置過程の全体を通して、一用量で連続して、または間欠的に（例えば、適切な間隔で、分割用量で）実行することができる。最も効果的な投与手段および投与量を決定する方法は、当業者に周知であり、治療に用いられる配合剤、治療目的、処置される標的細胞、および処置される対象に応じて変動する。単回投与または多回投与を、処置する医師、獣医、または臨床家により選択された用量レベルおよび用量パターンで実行することができる。
【０１２５】
一般に、活性化合物の適切な用量は、一日あたり、対象の体重kgあたり約１００ng〜約２５mg（より代表的には約１μg〜約１０mg）の範囲内である。活性化合物が塩、エステル、アミド、プロドラッグなどである場合、投与量は、親化合物に基づいて計算され、そのため用いられる実際の重量は、比例して増加する。
【０１２６】
一つの実施形態において、活性化合物は、以下の投与レジメン：約１００mgで、１日３回、によりヒト患者に投与される。
【０１２７】
一つの実施形態において、活性化合物は、以下の投与レジメン：約１５０mgで、１日２回、によりヒト患者に投与される。
【０１２８】
一つの実施形態において、活性化合物は、以下の投与レジメン：約２００mgで、１日２回、によりヒト患者に投与される。
【０１２９】
本発明をここに、以下の非限定的実施例を参照しながら更に記載する。本発明の他の実施形態は、これらに照らして当業者が実行することになる。
【０１３０】
本明細書に引用された全ての参考資料の開示は、本発明を実行する当業者により用いられ得るため、クロスリファレンスにより本明細書に具体的に援用される。
【０１３１】
実施例
【０１３２】
実施例１  −  合成の方法
【０１３３】
以下の合成は、単に例示を目的として提供され、本明細書に記載された発明の範囲を限定するものではない。
【０１３４】
【化１】
2009531405.tif 000006
【０１３５】
Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｐ−フェニレンジアミン二塩酸塩
【０１３６】
Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｐ−フェニレンジアミン（５ｇ、３０．４mmol）を、ジエチルエーテル（２５cm３）に溶解し、塩酸（６cm３、１０Ｍ）を添加し、混合物を濃縮して、表題化合物（７．２２ｇ、１００％）を赤／褐  色固体として得た。δＨ（２５０MHz；Ｄ２Ｏ）：７．６８（４Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），３．６９（４Ｈ，ｑ，７．３２，ＮＣＨ２），１．１１（６Ｈ，ｔ，７．３２，ＣＨ３）；δＣ（６２．９MHz；Ｄ２Ｏ）：１２．１（ＣＨ３），５６．４（ＮＣＨ２），１２６．８（ＡｒＣ），１２７．６（ＡｒＣ），１３５．５（ＡｒＣ），１３９．１（ＡｒＣ）。
【０１３７】
塩化エチルチオニニウム
【０１３８】
Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｐ−フェニレンジアミン二塩酸塩（７．２２ｇ、３０．４mmol）を、水（２５０cm３）に溶解し、pHをＨＣｌで１．６に調整し、それに硫化ナトリウム（＞６０％）（３．９５ｇ、３０．４mmol）を少しずつ添加した。硫化ナトリウムが全て溶解するまで、懸濁液を撹拌した。水（２００cm３）中の塩化鉄（III）（２７．１５ｇ、１００mmol）の溶液を調製し、溶液の半分を混合物に添加した。直ちに色が淡黄色から青色に変化した。その後、溶液に１時間給気した後、残りの塩化鉄（III）溶液を添加した。混合物を５℃に冷却した後、ろ過して、淡緑色スラッジを除去した。水性ＨＣｌ（１５cm３、６Ｍ）をろ液に添加し、その後、塩化ナトリウム（６０ｇ）を添加して、懸濁液を５分間撹拌し、ろ過して、固体生成物を得、それをＤＣＭに溶解して、硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮し、紫／緑  色固体（１．２８ｇ、２２％）を得た。紫／緑  色固体を分取Ｃ１８逆相カラムに負荷して、黄色が消えるまでまたは水（１Ｌ）で洗浄した。生成物をＭｅＯＨ／ＨＣｌ（pH２）でカラムから洗い出し、濃縮して、表題化合物（０．６４ｇ、１１％）を粘着性の紫色固体として得た。δＨ（２５０MHz；Ｄ２Ｏ）：１．２６（１２Ｈ，ｔ，６．５，ＣＨ３），３．５６（８Ｈ，ｑ，６．５，ＮＣＨ２），７．０１（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），７．２０（２Ｈ，ｄ，９．２５，ＡｒＨ），７．５４（２Ｈ，ｄ，９．２５，ＡｒＨ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ）３４０．２（１００％，［Ｍ−Ｃｌ］＋）。
【０１３９】
【化２】
2009531405.tif 000007
【０１４０】
３−メチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルフェニレンジアミン二塩酸塩
【０１４１】
２５０cm３丸底フラスコに、水（１００cm３）を添加し、アイスバスで、温度を５℃に低下させた。この低温溶液に、硫酸（９８％、２２．５ｇ）を注意深く添加した。この溶液に、３−メチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルアニリン（１０ｇ、７４mmol）を、そして、その後に亜硝酸ナトリウム（５．６ｇ、８１．４mmol）を添加し、その溶液を室温で１時間撹拌した。鉄（Ｆｅ）くず（１２．８ｇ、２２９mmol）を添加して、混合物を更に２時間撹拌した。溶液をろ過し、その後、飽和炭酸水素ナトリウムで中和し、有機物を酢酸エチルで抽出した（１００cm３で３回）。抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮して、褐色油状物を得た。その油状物をジエチルエーテル（１００cm３）に溶解し、濃塩酸（５０cm３）を添加した。その溶液を蒸発乾固し、表題化合物（１０ｇ、６０％）を淡褐色固体として得た。νｍａｘ（ＫＢｒ）／cm−１：２８４９（ＣＨ），２８２１（ＣＨ），２５４３（ＣＨ），２４４４（ＣＨ），１５８６（Ｃ＝Ｎ），１４８７（ＣＨ），１４４５（ＣＨ），１４１５（ＣＨ），１１３８（ＣＨ）；δＨ（２５０MHz；Ｄ２Ｏ）：７．５９（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），７．５０（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），３．２４（６Ｈ，ｓ，ＣＨ３），２．３９（３Ｈ，ｓ，ＣＨ３）；δＣ（６２．９MHz；Ｄ２Ｏ）：１８．９（ＣＨ３），４８．８（ＣＨ３），１２２．１（ＡｒＣ），１２６．２（ＡｒＣ），１２７．６（ＡｒＣ），１３３．７（ＡｒＣ），１３７．４（ＡｒＣ），１４４．４（ＡｒＣ）。
【０１４２】
塩化ジメチルメチチオニニウム（Dimethylmethythioninium Chloride）
【０１４３】
５００cm３丸底フラスコに、水性塩酸（５０cm３，３Ｍ）に溶解した３−メチル−Ｎ，Ｎ−ジメチルフェニレンジアミン二塩酸塩（０．９ｇ、４．０３mmol）を添加した後、硫化ナトリウム（＞６０％）（０．５２ｇ、４．０３mmol）を添加した。塩化鉄（III）六水和物（７．２６ｇ、２７mmol）を水（５０cm３）に溶解し、この溶液の半分を反応混合物に注ぐと、直ちに青色になった。その後、溶液に２時間給気した後、残りの水性塩化鉄（III）水溶液を添加した。混合物を５℃に冷却して、ろ過した。沈殿物を沸騰した水（６０cm３）に溶解し、ろ過し、冷却した。塩酸（１０cm３、６Ｍ）を冷却した溶液に添加し、その後、ろ過して、表題化合物（０．２２ｇ、１６％）を紫／青  色固体として得た。νｍａｘ（ＫＢｒ）／cm−１：２９２６（ＣＨ），１６０４（Ｃ＝Ｎ），１５３５，１４９６，１４４４（ＣＨ），１４０４（ＣＨ），１３１５（ＣＨ），１１８５（ＣＨ）；δＨ（２５０MHz；ＤＭＳＯ）：７．２９（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），７．２３（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），３．２９（１２Ｈ，ｓ，ＣＨ３），２．５５（６Ｈ，ｓ，ＣＨ３）；δＣ（６２．９MHz；ＤＭＳＯ）：１８．９（ＣＨ３），４１．５（ＣＨ３），１０５．７（ＡｒＣ），１１８．７（ＡｒＣ），１３３．６（ＡｒＣ），１３４．５（ＡｒＣ），１４７．２（ＡｒＣ），１５４．２（ＡｒＣ）；Ｃ１８Ｈ２２Ｎ３Ｓ・３Ｈ２Ｏでの計算値：Ｃ，５１．９８；Ｈ，６．７４；Ｎ，１０．１１；Ｓ，７．７０．実測値：Ｃ，５２．０３；Ｈ，６．５９；Ｎ，１０．０５；Ｓ，７．６６。
【０１４４】
【化３】
2009531405.tif 000008
【０１４５】
Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｍ−エチルアニリン
【０１４６】
１００cm３丸底フラスコに、３−エチルアニリン（１０ｇ、８２．５mmol）、エタノール（１５cm３）、炭酸ナトリウム（１１．８１ｇ、１１１．４mmol）を添加した。ヨウ化メチル（３１．６３ｇ、２２２mmol）を滴下した。その後、混合物を４５℃で１０時間加熱した後、室温に冷却し、水（１００cm３）を添加した。混合物をジエチルエーテルに抽出し（１００cm３で３回）、抽出物を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮して、表題化合物（４．６８ｇ、３８％）を淡黄色油状物として得た。νｍａｘ（ｎｅａｔ）／cm−１：３０４５（ＣＨ），２９６０（ＣＨ），２９２０（ＣＨ），２８９１（ＣＨ），２７９７（ＣＨ），１５９７（Ｃ＝Ｎ），１４９４（ＣＨ），１４３８（ＣＨ），１３５２（ＣＨ），１２２５（ＣＨ）；δＨ（２５０MHz；ＤＭＳＯ）：７．２２（１Ｈ，ｔ，７．７５，ＡｒＨ），６．６３（３Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），２．９７（６Ｈ，ｓ，ＮＣＨ３），２．６３（２Ｈ，ｑ，７．５，ＣＨ２），１．２７（３Ｈ，ｔ，７．５，ＣＨ３）；δＣ（６２．９MHz；ＣＤＣｌ３）：１５．８（ＣＨ３），２９．５（ＮＣＨ２），４０．８（ＮＣＨ３），１１０．３（ＡｒＣ），１１２．４（ＡｒＣ），１１６．５（ＡｒＣ），１２９．１（ＡｒＣ），１４５．３（ＡｒＣ），１５０．９（ＡｒＣ）。
【０１４７】
Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｍ−エチル−ｐ−フェニレンジアミン二塩酸塩
【０１４８】
２５０cm３丸底フラスコに、Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｍ−エチルアニリン（４．６８ｇ、３１．３mmol）、水（１００cm３）および塩酸（８．５cm３、３７％）を添加し、その溶液を５℃に冷却した。その後、そのアニリン混合物に、亜硝酸ナトリウム（２．４６ｇ、３．５７mmol）の水溶液（８０cm３）を滴下し、室温で３時間撹拌した。鉄（Ｆｅ）くず（５．２４ｇ、９４mmol）および塩酸（８．５cm３、３７％）を添加し、混合物を室温で３時間撹拌した。懸濁液をろ過し、ろ液を重炭酸ナトリウム溶液でpH７に調整した後、酢酸エチルに抽出した（５０cm３で３回）。ひとまとめにした抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮して、褐色油状物を得た。その油状物をエタノール（１００cm３）に溶解し、ジエチルエーテル（８０cm３）および塩酸（７cm３、３７％）を注意深く添加して、表題化合物（７．４２ｇ、７２％）を淡褐色固体として得た。νｍａｘ（ＫＢｒ）／cm−１：２９７６（ＣＨ），２８９４（ＣＨ），２８５９（ＣＨ），２７５３（ＣＨ），１５８３（Ｃ＝Ｎ），１５０８（ＣＨ），１４８６（ＣＨ），１４５９（ＣＨ），１１８３（ＣＨ）；δＨ（２５０MHz；Ｄ２Ｏ）：７．６６（１Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），７．５６（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），３．２９（６Ｈ，ｓ，ＮＣＨ３），２．７４（２Ｈ，ｑ，７．５，ＣＨ２），１．２５（３Ｈ，ｔ，７．５，ＣＨ３）；δＣ（６２．９MHz；ＣＤＣｌ３）：１５．５（ＣＨ３），２５．６（ＮＣＨ２），４８．９（ＮＣＨ３），１２２．１（ＡｒＣ），１２４．６（ＡｒＣ），１２８．１（ＡｒＣ），１３２．６（ＡｒＣ），１４３．３（ＡｒＣ），１４４．９（ＡｒＣ）。
【０１４９】
塩化１，９−ジエチルメチルチオニニウム
【０１５０】
Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｍ−エチル−ｐ−フェニレンジアミン二塩酸塩（１．３ｇ、５．５mmol）を水（５０cm３）に溶解し、その溶液をpH１．６に調整した。その後、その桃色溶液に、６０％＞硫化ナトリウム（０．７１ｇ、５．５mmol）を少しずつ添加した。懸濁液に、塩化鉄（III）（２．２３ｇ、水５０cm３中の８．２mmol）の水溶液を添加すると、直ちに色が紫色に変化した。その後、溶液に１時間給気した後、第２の塩化鉄（III）溶液（２．２３ｇ、水５０cm３中の８．２mmol）を添加した。その溶液を５℃に冷却した後、ろ過して沈殿物を水で洗浄した。ろ液に塩化ナトリウム（５０ｇ）を添加し、溶液を１０分間撹拌すると、生成物が塩析するにつれ、色が赤／紫  色に変化した。懸濁液をろ過し、その固体をジクロロメタン（１００cm３）およびメタノール（１０cm３）に溶解した後、硫酸マグネシウムで乾燥させた。ろ過および濃縮により、表題化合物（０．１５ｇ、１５％）を緑色固体として得た。νｍａｘ（ＫＢｒ）／cm−１：３４０８（ＣＨ），２６１３（ＣＨ），１６０６（Ｃ＝Ｎ），１３９９（ＣＨ），１３１６（ＣＨ）；δＨ（２５０MHz；Ｄ２Ｏ）：６．５５（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），６．２３（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），２．９２（１２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ３），２．５６（４Ｈ，ｑ，７．５，ＣＨ２），０．９９（６Ｈ，ｔ，７．５，ＣＨ３）；（ＥＳＩ），３４０．４（１００％，［Ｍ−Ｃｌ］＋）。場合により、１０％メタノールおよび９０％ジクロロメタンを溶離液として用い、シリカ４０〜６３μ  ６０Åを用いて、フラッシュカラムクロマトグラフィーを実施し、塩化鉄残渣を除去した。
【０１５１】
【化４】
2009531405.tif 000009
【０１５２】
Ｎ，Ｎ−ジエチル−３−メチル−４−フェニレンジアミン二塩酸塩（１０．７４ｇ、５０mmol）を水（４００cm３）に溶解し、pHを１．６に調整し、その後、硫化ナトリウム（＞６０％）（３．９０ｇ、５０mmol）を添加した。塩化鉄（III）（２０．２８ｇ、７５mmol）を水溶液（１７５cm３）として添加すると、直ちに色が黄色から深青色に変化した。混合物に１時間給気した後、第２の水性塩化鉄（III）（２０．２８ｇ、１７５cm３中の７５mmol）を添加した。溶液を５℃に冷却し、その温度を１時間保持した後、ろ過した。ろ液に塩化ナトリウム（２００ｇ）を添加し、ろ過して、粗生成物を青／紫  色固体として得た。粗固体をカラムクロマトグラフィー（溶離液は１０％ＭｅＯＨ、９０％ＤＣＭであり、シリカ４０〜６３μ  ６０Å使用）により精製し、表題化合物（０．８０ｇ、４％）を緑／紫  色固体として得た。νｍａｘ（ＫＢｒ）／cm−１：２９７１（ＣＨ），２９２１（ＣＨ），２８６５（ＣＨ），１６００（Ｃ＝Ｎ），１４１２（ＣＨ），１３２６（ＣＨ）；δＨ（２５０MHz；Ｄ２Ｏ）：６．６２（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），６．３９（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），３．３０（８Ｈ，ｑ，ＮＣＨ２），１．８９（６Ｈ，ｓ，ＡｒＣＨ３）１．０９（１２Ｈ，ｔ，ＣＨ３）；δＣ（６２．９MHz；Ｄ２Ｏ）：１２．６（ＣＨ３），１８．０（ＣＨ２），４６．２（ＮＣＨ２），１０３．６（ＡｒＣ），１１７．１（ＡｒＣ），１３２．３（ＡｒＣ），１３３．９（ＡｒＣ），１４７．３（ＡｒＣ），１５１．９（ＡｒＣ）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ），３６８．１（１００％，［Ｍ−Ｃｌ］＋）。
【０１５３】
【化５】
2009531405.tif 000010
【０１５４】
Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｍ−エチルアニリン
【０１５５】
１００cm３丸底フラスコに、３−エチルアニリン（５．０ｇ、４１．３mmol）、エタノール（７．５cm３）、炭酸ナトリウム（５．９ｇ、５５．７mmol）を添加した。ヨウ化エチル（１７．３８ｇ、１１１．４mmol）を滴下した。その後、混合物を４５℃で１２時間加熱した後、室温まで冷却し、水（５０cm３）を添加した。混合物をジエチルエーテルに抽出し（５０cm３で３回）、硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮し、表題化合物（７．０３ｇ、９６％）を淡黄色油状物として得た。δＨ（２５０MHz；ＣＤＣｌ３）：７．２０（１Ｈ，ｄｄ，９，７．２５，ＡｒＨ），６．６０（３Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），３．４３（４Ｈ，ｑ，７，ＮＣＨ２），２．６９（２Ｈ，ｑ，７．２５，ＣＨ２），１．３２（３Ｈ，ｔ，７．５，ＣＨ３），１．２３（６Ｈ，ｔ，７，ＣＨ３）；δＣ（６２．９MHz；ＣＤＣｌ３）：１２．７（ＣＨ３），１５．８（ＣＨ３），２９．５（ＣＨ２），４４．４（ＮＣＨ３），１０９．４（ＡｒＣ），１１１．４（ＡｒＣ），１１５．１（ＡｒＣ），１２９．２（ＡｒＣ），１４５．４（ＡｒＣ），１４７．９（ＡｒＣ）。
【０１５６】
Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｍ−エチル−ｐ−フェニレンジアミン二塩酸塩
【０１５７】
２５０cm３丸底フラスコに、Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｍ−エチルアニリン（５ｇ、２８．２mmol）、水（５０cm３）および塩酸（９cm３、３７％）を添加し、その溶液を５℃に冷却した。その後、そのアニリン混合物に、亜硝酸ナトリウム（２．１４ｇ、３１．０mmol）の水溶液（２０cm３）を滴下し、低温で１時間撹拌した。鉄（Ｆｅ）くず（４．７２ｇ、８４．６mmol）および塩酸（９cm３、３７％）を添加して、混合物を３０℃未満で２時間撹拌した。懸濁液をろ過し、ろ液を炭酸水素ナトリウム溶液でpH７に調整した後、酢酸エチルに抽出した（５０cm３で３回）。ひとまとめにした抽出液を硫酸マグネシウムで乾燥させ、ろ過し、濃縮し、褐色油状物を得た。その粗油状物をカラムクロマトグラフィー（溶離液は酢酸エチルであり、シリカ４０〜６３μ  ６０Å使用）により精製し、フェニレンジアミン（２．２ｇ、４１％）を褐色油状物として得た。その油状物を、ジエチルエーテル（５０cm３）および添加した塩酸（２．５cm３、３７％）に溶解し、その溶液を濃縮して、表題化合物（２．７６ｇ、４１％）を淡褐色固体として得た。δＨ（２５０MHz；Ｄ２Ｏ）：７．５０（３Ｈ，ｍ，ＡｒＨ），３．５９（４Ｈ，ｑ，７．２５，ＮＣＨ２），２．６９（２Ｈ，ｑ，７．５，ＣＨ２），１．２０（３Ｈ，ｔ，７．５，ＣＨ３），１．０３（６Ｈ，ｔ，７．２５，ＣＨ３）；δＣ（６２．９MHz；Ｄ２Ｏ）：１２．１（ＣＨ３），１５．５（ＣＨ３），２５．５（ＣＨ２），５６．３（ＮＣＨ２），１２３．９（ＡｒＣ），１２６．０（ＡｒＣ），１２７．９（ＡｒＣ），１３３．１（ＡｒＣ），１３９．４（ＡｒＣ），１４３．３（ＡｒＣ）。
【０１５８】
塩化１，９−ジエチルエチルチオニニウム
【０１５９】
Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｍ−エチル−ｐ−フェニレンジアミン二塩酸塩（２ｇ、７．５mmol）を水（７５cm３）に溶解し、溶液をpH１．６に調整した。その後、その桃色溶液に、硫化ナトリウム（６０％＞）（１．３５ｇ、１０．４mmol）を少しずつ添加した。懸濁液に塩化鉄（III）（４．２２ｇ、水３５cm３中の１５．６mmol）の水溶液を添加すると、直ちに色が紫色に変化した。その後、溶液に１時間給気した後、第２の塩化鉄（III）溶液（４．２２ｇ、水３５cm３中の１５．６mmol）を添加した。溶液を５℃に冷却した後、ろ過して、沈殿物を水で洗浄した。沈殿物は、エタノールおよび濃縮したエタノールでも洗浄し、粘着性の紫色固体を得た。水性のろ液に、塩化ナトリウム（５０ｇ）を添加し、溶液を１０分間撹拌すると、生成物が塩析するにつれ、色が赤／紫  色に変化した。懸濁液をろ過し、その固体をジクロロメタン（１００cm３）およびメタノール（１０cm３）に溶解した後、硫酸マグネシウムで乾燥させた。エタノール可溶性生成物をろ過および濃縮して、表題化合物（０．０６ｇ、３％）を紫固体として得た。δＨ（２５０MHz；Ｄ２Ｏ）：６．７３（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），６．４８（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），３．４５（８Ｈ，ｂｒｄｑ，ＮＣＨ２），２．４６（４Ｈ，ｑ，７．５，ＣＨ２），１．１７（１２Ｈ，ｂｒｄｔ，ＣＨ３），０．９３（６Ｈ，ｔ，７．５，ＣＨ３）；ｍ／ｚ（ＥＳＩ）３９６．２（１００％，［Ｎ−Ｃｌ］＋）。場合により、１０％メタノールおよび９０％ジクロロメタンを溶離液として用い、シリカ４０〜６３μ  ６０Åを用いて、フラッシュカラムクロマトグラフィーを実施し、塩化鉄残渣を除去した。
【０１６０】
【化６】
2009531405.tif 000011
【０１６１】
Ｈ２Ｏ（１００cm３）中のＮ，Ｎ−ジエチル−ｐ−フェニレンジアミン（５．０ｇ、３０．４mmol）とＨ２ＳＯ４（濃、９８％、１cm３）との撹拌混合物を、非還元ＺｎＣｌ２溶液（ＺｎＣｌ２、７．６０ｇ、Ｎａ２Ｃｒ２Ｏ７・２Ｈ２Ｏ  １００mgと共にＨ２Ｏ  １５cm３中に５５mmol）で処理して、赤色がかった反応混合物を生成させた。Ａｌ２（ＳＯ４）３・１６Ｈ２Ｏ溶液（５．８０ｇ、Ｈ２Ｏ  １０cm３中に９．２mmol）、Ｎａ２Ｓ２Ｏ３・５Ｈ２Ｏ溶液（８．０ｇ、Ｈ２Ｏ  １０cm３中に３２．２mmol）およびＮａ２Ｃｒ２Ｏ７・２Ｈ２Ｏの溶液（８．７ｇ、Ｈ２Ｏ  １５cm３中に２９．２mmol）の１／３を添加し、その後、温度を４０℃に急速に上昇させた。Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン（３．０ｇ、濃ＨＣｌ  ４cm３中の２０．１mmol）の溶液を添加し、その後、残りのＮａ２Ｃｒ２Ｏ７・２Ｈ２Ｏ  溶液を添加した。暗緑色沈殿物が観察された。温度を７５℃に急速に上昇させ、その後、活性化ＭｎＯ２（３．８０ｇ、Ｈ２Ｏ  ５cm３中に４４．７mmol）のスラリーを添加した。温度を８５℃に上昇させ、その温度で３０分間撹拌し続けた。沈殿のある青色溶液が観察された。反応混合物を５０℃に冷却し、Ｈ２ＳＯ４（濃、１１cm３）を緩やかに添加した。反応物を更に２０℃に冷却し、真空ろ過して、沈殿物を回収し、その後、ブライン（飽和塩水）で洗浄した。この黒色固体を１００℃のＨ２Ｏ（２５０cm３）に再溶解し、冷却した後、真空ろ過して、不溶物を除去した。ろ液をＺｎＣｌ２（４ｇ）およびＮａＣｌ（２３ｇ）で処理し、冷凍庫に１６時間放置し、その後、得られた沈殿物を真空ろ過により取り出して、ブライン（３０cm３）で洗浄し、真空オーブンで３時間乾燥させて、表題化合物（５．７ｇ、７１％）を赤さび色粉末として得た。δＨ（２５０MHz；Ｄ２Ｏ）：１．２０（１２Ｈ，ｂｒ  ｔ，ＣＨ３），３．５０（８Ｈ，ｂｒ  ｑ，ＣＨ２），６．８０（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），７．５０（２Ｈ，ｂｒ  ｄ，ＡｒＨ）および７．３０（２Ｈ，ｂｒ  ｄ，ＡｒＨ）。例えば、Interscience(London, UK)により発行された、Fundamental Processes of Dye Chemistry, pp.308-314のFierz-David and Blangley, 1949, "F. Oxazine and Thiazine Dyes,"を参照されたい。
【０１６２】
【化７】
2009531405.tif 000012
【０１６３】
塩化メチルチオニニウム（２．００ｇ、６．２５mmol）を水（５０cm３）に溶解し、撹拌しながら、ヨウ化カリウム（１．５６ｇ、９．４mmol）を添加した。形成した沈殿をろ過し、固体を沸騰した水（５０cm３）から再結晶化させて、表題化合物（１．９８ｇ、７７％）を微細な緑色針状物として得た。δＨ（２５０MHz；ＤＭＳＯ）：７．８８（２Ｈ，ｂｒ  ｄ，ＡｒＨ），７．４９（４Ｈ，ｂｒ  ｓ，ＡｒＨ），３．３７（１２Ｈ，ｓ，ＣＨ３）。Ｃ１６Ｈ１８Ｎ３ＳＩでの計算値：Ｃ，４６．７２；Ｈ，４．４１；Ｎ，１０．２２；Ｓ，７．８０；Ｉ，３０．８５；実測値：Ｃ，４６．３０；Ｈ，４．２１；Ｎ，１０．１４；Ｓ，７．８６；Ｉ，２９．３４。
【０１６４】
【化８】
2009531405.tif 000013
【０１６５】
ヨウ化メチルチオニニウム（０．５０ｇ、１．２２mmol）をメタノール（２０cm３）に溶解し、撹拌しながらヨウ化メチル（１．９０ｇ、１３．３７mmol）を添加した。混合物を１８時間加熱還流した後、更なるヨウ化メチル（０．４２ｇ、６．６９mmol）を添加して、混合物をもう一度加熱還流し、８時間撹拌した。混合物を室温に冷却し、固体を得て、それをろ過して、メタノールで洗浄し、表題化合物（０．３０ｇ、４６％）を銅緑色固体として得た。δＨ（２５０MHz；ＤＭＳＯ）：７．８２（２Ｈ，ｄ、Ｊ＝８．５，ＡｒＨ），７．４２（４Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），３．３４（１２Ｈ，ｓ，ＣＨ３）。δＣ（６２．９MHz；ＤＭＳＯ）：１５３．８（ＡｒＣ），１３７．９（ＡｒＣ），１３４．９（ＡｒＣ），１３３．５（ＡｒＣ），１１９．１（ＡｒＣ），１１８．８（ＡｒＣ），１０６．９（ＡｒＣ），１０６．６（ＡｒＣ），４１．１（ＮＣＨ３）。
【０１６６】
【化９】
2009531405.tif 000014
【０１６７】
水性塩酸（０．５Ｍ、２００cm３）中のＮ，Ｎ−ジエチル−ｐ−フェニレンジアミン（１０．０ｇ、６１mmol）の撹拌混合物を、水性水酸化ナトリウム（１０％）でpH２に調整した。ジアミン溶液を５℃に冷却した後、水性Ｎａ２Ｓ２Ｏ３・５Ｈ２Ｏ（１６．６５ｇ、Ｈ２Ｏ  ２０cm３中に６７mmol）を添加した。Ｎａ２Ｃｒ２Ｏ７・２Ｈ２Ｏの溶液（７．２７ｇ、Ｈ２Ｏ  ３５cm３中に２４mmol）の水溶液を混合物に１５分間かけて滴下して、黒色懸濁液を得た。懸濁液を５℃で１時間撹拌した（pH８．０７、Ｔ＝３．７℃）。Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン（８．２５ｇ、６１mmol）、Ｈ２ＳＯ４（６ｇ）および水（１０cm３）の溶液を５℃に冷却した後、懸濁液に添加した。その後、Ｎａ２Ｃｒ２Ｏ７・２Ｈ２Ｏ  （１９．０９ｇ、Ｈ２Ｏ  ５０cm３中に６４mmol）の水溶液を、混合物に２０分間かけて滴下し、粘着性の暗緑色懸濁液を得た。混合物を５℃で２時間撹拌した後（pH６．７５、Ｔ＝６℃）、ろ過した。得られた緑紫色固体を水で洗浄した（５０cm３で２回）。その固体を水性塩酸（３００cm３、pH２）中にスラリー化させて、２２℃で、pH６．３７の懸濁液を得た。懸濁液に、ＣｕＳＯ４（１．５２ｇ、６．１mmol）を添加し、混合物を９０℃に加熱すると、深青色溶液が形成した。この温度で１時間撹拌した後、混合物を２５℃に冷却して、ろ過した。その固体を水で洗浄した（５０cm３で２回）。ろ液を塩酸（５Ｍ）で、pH６．３３〜pH２．００（Ｔ＝２５℃）に調整した。深青色溶液を８０℃に加熱し、ヨウ化カリウム（１４ｇ）を添加し、冷却すると、橙紫色沈殿物が析出した。ろ過により、紫色粉末（８．８ｇ、３１％）が得られ、それを高温エタノール（４００cm３）から再結晶化して、表題化合物を微細な紫色針状物として得た。Ｍｐ２１１℃；νｍａｘ（ＫＢｒ）／cm−１：３５７４（ＣＨ），３４８４（ＣＨ），３０２８（ＣＨ），２９６５（ＣＨ），１６６２（Ｃ＝Ｃ），１５３９（ＣＨ），１４７４（ＣＨ），１３４６（ＣＨ）；δＣ（６２．９MHz；ＣＤＣｌ３）：１．３３（１２Ｈ，ｔ，７，ＣＨ３），３．７２（８Ｈ，ｑ，７，ＮＣＨ２），７．２３（２Ｈ，ｄ，９．７５，ＡｒＨ），７．４１（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），７．８３（２Ｈ，ｄ，９．７５，ＡｒＨ）；δＨ（６２．９MHz；ＣＤＣｌ３）：１５２．４, １３８．８, １３５．７, １３５．２, １１８．３，１０６．４，４６．８，１３．２。
【０１６８】
【化１０】
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【０１６９】
ヨウ化エチルチオニニウム（２．００ｇ、４．２８mmol）を、エタノール（１００cm３）に溶解し、撹拌しながら、ヨウ化エチル（２７．３５ｇ、１７５mmol）を添加した。混合物を１８時間加熱還流し、その後、室温に冷却して、沈殿物を得、ろ過して、エタノールで洗浄し、表題化合物（１．０２ｇ、４０％）を銅色固体として得た。δＨ（２５０MHz；Ｄ２Ｏ）：７．９０（２Ｈ，ｂｒ  ｄ，ＡｒＨ），７．４２（４Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），２．４５（８Ｈ，ｂｒ  ｑ，ＮＣＨ２），１．２３（１２Ｈ，ｂｒ  ｔ，ＣＨ３）。
【０１７０】
【化１１】
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【０１７１】
水性塩酸（０．５Ｍ、２００cm３）中のＮ，Ｎ−ジエチル−ｐ−フェニレンジアミン（１０．０ｇ、６１mmol）の撹拌混合物を、水性水酸化ナトリウム（１０％）でpH２に調整した。そのジアミン溶液を５℃に冷却した後、水性Ｎａ２Ｓ２Ｏ３・５Ｈ２Ｏ（１６．６５ｇ、Ｈ２Ｏ  ２０cm３中に６７mmol）を添加した。Ｎａ２Ｃｒ２Ｏ７・２Ｈ２Ｏ（７．２７ｇ、Ｈ２Ｏ  ３５cm３中に２４mmol）の水溶液を混合物に１５分間かけて滴下して、黒色懸濁液を得た。懸濁液を５℃で１時間撹拌した（pH８．０７、Ｔ＝３．７℃）。Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン（８．２５ｇ、６１mmol）、Ｈ２ＳＯ４（６ｇ）および水（１０cm３）の溶液を５℃に冷却した後、懸濁液に添加した。その後、Ｎａ２Ｃｒ２Ｏ７・２Ｈ２Ｏ  （１９．０９ｇ、Ｈ２Ｏ  ５０cm３中に６４mmol）の水溶液を、混合物に２０分間かけて滴下し、粘着性の暗緑色懸濁液を得た。混合物を５℃で２時間撹拌した後（pH６．７５、Ｔ＝６℃）、ろ過した。得られた緑紫色固体を水で洗浄した（５０cm３で２回）。その固体を水性塩酸（３００cm３、pH２）中にスラリー化させて、２２℃で、pH６．３７の懸濁液を得た。懸濁液にＣｕＳＯ４（１．５２ｇ、６．１mmol）を添加し、混合物を９０℃に加熱すると、深青色溶液が形成した。この温度で１時間撹拌した後、混合物を２５℃に冷却して、ろ過した。その固体を水で洗浄し（５０cm３で２回）、ろ液を塩酸（５Ｍ）で、pH６．３３〜pH２．００（Ｔ＝２５℃）に調整した。深青色溶液を８０℃に加熱し、硝酸ナトリウム（５０ｇ）を添加し、穏やかに撹拌しながら、ゆっくりと２５℃に放冷した。生成物（６．８０ｇ、２８％）を緑色針状物としてろ過した。δＨ（２５０MHz；ＣＤＣｌ３）：１．３６（１２Ｈ，ｔ，７，ＣＨ３），３．７２（８Ｈ，ｑ，７，ＮＣＨ２），７．２３（２Ｈ，ｄ，９．５，ＡｒＨ），７．３９（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），７．８９（２Ｈ，ｄ，９．５，ＡｒＨ）；δＨ（６２．９MHz；ＣＤＣｌ３）：１５２．５, １３８．８, １３５．７, １３５．６, １１８．１，１０６．４，４６．６，１２．９。
【０１７２】
【化１２】
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【０１７３】
Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−エチル−ｐ−フェニレンジアミン（５．１５ｇ、３１．４mmol）を、水性塩酸（０．５Ｍ、１００cm３）に溶解した。得られた溶液を、水性水酸化ナトリウム（１０％）でpH１２に調整し、５℃に冷却した。Ｎａ２Ｓ２Ｏ３・５Ｈ２Ｏ（８．５７ｇ、Ｈ２Ｏ  １０cm３中に３４．６mmol）の水溶液を、撹拌した溶液に滴下した。Ｎａ２Ｃｒ２Ｏ７・２Ｈ２Ｏ（３．７４ｇ、Ｈ２Ｏ  １８cm３中に１２．６mmol）の水溶液を１５分間かけて滴下して、黒色懸濁液を得た。５℃で１時間撹拌し続けた。Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−エチルアニリン（４．６８ｇ、３１．４mmol）を水性硫酸（水５cm３中に３．００ｇ）に溶解し、得られた溶液を５℃に冷却した後、反応混合物に添加した。Ｎａ２Ｃｒ２Ｏ７・２Ｈ２Ｏ  （９．８３ｇ、Ｈ２Ｏ  ２５cm３中に３３．０mmol）の水溶液を２０分間かけて滴下し、暗緑色懸濁液を得た。５℃で更に２時間撹拌し続けた後、固体をろ過により集めた。その固体を水で洗浄した後（３０cm３で３回）、水性塩酸（１５０cm３、pH２）中にスラリー化させた。ＣｕＳＯ４（７８５mg、３．１４mmol）を懸濁液に添加し、混合物を９０℃で１時間加熱した。得られた深青色混合物をろ過し、その固体を水で洗浄した（４０cm３で３回）。ろ液を塩酸（１Ｍ）でpH２に調整した。その溶液を８０℃に加熱した後、ＮａＣｌ（２．００ｇ、３４．５mmol）を添加した。その溶液を室温まで放冷すると、沈殿が析出した。固体をろ過により集め、表題化合物（１．８９ｇ、１６％）を暗緑色固体として得た。δＨ（２５０MHz；Ｄ２Ｏ）：６．６５（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），６．２３（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），２．９２（１２Ｈ，ｓ，ＮＣＨ３），２．５６（４Ｈ，ｑ，７．５，ＣＨ２），０．９９（６Ｈ，ｔ，７．５，ＣＨ３）；νｍａｘ（ＫＢｒ）／cm−１：３０４８（ＣＨ），２６１３（ＣＨ），１６０６（Ｃ＝Ｎ），１３９９（ＣＨ），１３１６（ＣＨ）。ＭＳ（ＥＳＩ）３４０．４（１００％，［Ｍ−Ｃｌ］＋）。
【０１７４】
この合成は、上記合成３の別法を表している。上記合成３に比較した、この合成の主な利点は、（ａ）高収率、（ｂ）より高濃度で実施できるため、工業的規模での使用により適していること、（ｃ）Ｈ２Ｓを生成しないため、工業的規模で実施した場合に、より安価かつより簡便であること、である。
【０１７５】
【化１３】
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【０１７６】
予め５℃に冷却したＮ，Ｎ−ジエチル−ｐ−フェニレン（６．６１ｇ、４０mmol）および水性塩酸（０．５Ｍ、１３２mL）の溶液に、水性チオ硫酸ナトリウム（１０．９１ｇ、Ｈ２Ｏ  １５mL中に４４mmol）を一度に添加した。ジクロム酸ナトリウム（４．９６ｇ、Ｈ２Ｏ  １０mL中に１５．７５mmol）を１０分間かけて滴下し、その黒色溶液を５℃で１時間撹拌した（pH８．２２、温度＝１．８℃）。一方で、Ｎ，Ｎ−ジエチルアニリン（５．９６ｇ、４０mmol）、硫酸（３．９６ｇ）、および水（６．６０mL）を含む不均一溶液を調製し、５℃に冷却し、その後、撹拌した黒色懸濁液に一度に添加した。第２のジクロム酸ナトリウム（１２．５２ｇ、Ｈ２Ｏ  ４０mL中に４２mmol）溶液を１５分間かけて滴下し、形成された暗緑色懸濁液を５℃で２時間撹拌し続けた（pH７．２３、温度＝８．０℃）。水性溶液としての亜ジチオン酸ナトリウム（１．４８ｇ、８．４４mmol）を一度に添加し、混合物を１５分間撹拌して、室温（２２℃）に加温した。その後、得られた反応混合物を以下の２つの代替法の一方または他方に用いた。
【０１７７】
一方の代替法（ＢＧのろ過（２ポット））：形成された暗緑色固体をろ別し、水で洗浄して（５０mLで２回）、吸引して、適正に乾固した（３０分間）。暗緑色固体を水中で撹拌し、塩酸でpH２に酸性化して、ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ（０．９９ｇ、４．００mmol）を添加した。その溶液を９０℃に加熱し、この温度で１時間撹拌して、非常に濃い青色の溶液を形成させた。加熱を停止して、反応混合物を室温になるまで放置した。青色溶液をろ過し、不溶物を除去して、固体を水で洗浄した（５０mLで２回）。ろ液を塩酸（５Ｍ、５mL）でpH２に酸性化し、ＮａＮＯ３（３３ｇ、３８８mmol）を一度に添加した。その溶液を８０℃に加熱して、穏やかに撹拌しながら室温まで放冷した。得られた緑色針状物を溶液からろ過し、吸引乾固して、表題化合物（４．３８ｇ、２８％）を得た。Ｍｐ１７８℃；νｍａｘ（ＫＢｒ）／cm−１  ３５６４（ＣＨ），３４６３（ＣＨ），３０４８（ＣＨ），２９７５（ＣＨ），１５２２（Ｃ＝Ｃ），１４８９（ＣＨ），１３７０（ＣＨ）；δＨ（２５０MHz；ＣＤＣｌ３）  １．３６（１２Ｈ，ｔ，７，ＣＨ３），３．７２（８Ｈ，ｑ，７，ＮＣＨ２），７．２３（２Ｈ，ｄ，９．５，ＡｒＨ），７．３９（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），７．８９（２Ｈ，ｄ，９．５，ＡｒＨ）；δＣ（６２．９MHz；ＣＤＣｌ３）：１５２．５, １３８．８, １３５．７, １３５．６, １１８．１, １０６．４，４６．６，１２．９。
【０１７８】
別の代替法（ＢＧのろ過なし（１ポット））：溶液が加温されたら、ＣｕＳＯ４・５Ｈ２Ｏ（０．９９ｇ、４．００mmol）を添加した。その後、その溶液を９０℃に加熱し、この温度で１時間撹拌すると、その後、溶液が深青色に変化した。その青色溶液を室温まで放冷し、ろ過して、不溶物を除去した。ろ液を塩酸（５Ｍ、約２０mL）でpH２に調整し、ＮａＮＯ３（３３ｇ、３８８mmol）を添加した。その撹拌溶液を８０℃に加熱し、穏やかに撹拌しながら一晩放冷した。得られた緑色針状物を溶液からろ過し、吸引乾固して表題化合物（１ｇ、５％）を得た。Ｍｐ１７８℃；νｍａｘ（ＫＢｒ）／cm−１  ３５６４（ＣＨ），３４６３（ＣＨ），３０４８（ＣＨ），２９７５（ＣＨ），１５２２（Ｃ＝Ｃ），１４８９（ＣＨ），１３７０（ＣＨ）；δＨ（２５０MHz；ＣＤＣｌ３）  １．３６（１２Ｈ，ｔ，７，ＣＨ３），３．７２（８Ｈ，ｑ，７，ＮＣＨ２），７．２３（２Ｈ，ｄ，９．５，ＡｒＨ），７．３９（２Ｈ，ｓ，ＡｒＨ），７．８９（２Ｈ，ｄ，９．５，ＡｒＨ）；δＣ（６２．９MHz；ＣＤＣｌ３）：１５２．５, １３８．８, １３５．７, １３５．６, １１８．１, １０６．４，４６．６，１２．９。
【０１７９】
実施例２  −  活性および治療指数
【０１８０】
Ｂ５０を確立するためのインビトロアッセイ
【０１８１】
これは、WO96/30766に詳細に記載されている。要約すると、固相の基板に吸着させた、コア反復ドメインに対応するタウのフラグメントが、可溶性の全長タウを捕捉して、高い親和力でタウに結合することができる。この結合は、凝集したタウ分子の蛋白質分解的(proteolytic)消化に対する安定性を付与する。その工程は、自己増殖型であり、プロトタイプの医薬により選択的に遮断することができる。
【０１８２】
より具体的には、炭酸緩衝液（pH９．６）で希釈した切断タウ（残基２９７〜３９０；ｄＧＡ）を、アッセイプレートに結合させ、全長タウ（Ｔ４０）を水相に添加した。水相に結合した緩衝液は、リン酸緩衝生理食塩水（pH７．４）中にTween-20  ０．０５％およびゼラチン１％を含有した。水相の全長タウ内のＮ−末端エピトープは認識するが、固相に結合した切断タウフラグメントは認識できないｍＡｂを用いて、結合したタウを検出した。
【０１８３】
タウ−タウ結合を５０％阻害するのに必要な化合物の濃度は、Ｂ５０値と呼ばれる。
【０１８４】
ＥＣ５０を確立するための細胞アッセイ
【０１８５】
その工程は、WO02/055720により詳細に記載されている。本質的に、線維芽細胞（３Ｔ６）は、誘導性プロモータの制御下での全長タウ（Ｔ４０）、および低い構成レベルのＰＨＦ−コアのタウフラグメント（１２ｋＤフラグメント）を発現する。Ｔ４０発現が導入されると、それは細胞内のＮ−末端では、〜αα２９５で、Ｃ末端では、〜αα３９０で凝集に依存して切断を受け、それにより、より高レベルの１２kD  ＰＨＦコアドメインフラグメントが生成される。１２kDフラグメントの生成を、タウ凝集阻害剤により、用量依存的に阻害することができる。事実、細胞内の１２kDフラグメントの蛋白質分解的生成に関する化合物の阻害活性量を、全体として、インビトロでのタウ−タウ結合の阻害を記載する、同じパラメータで記載することができる。即ち、１２kDフラグメントの蛋白質分解的生成の程度は、全体としては、反復ドメインを介したタウ−タウ結合の程度により決定される。細胞内の関連するプロテアーゼの利用度は、非限定的である。
【０１８６】
結果を、１２kDフラグメントの生成を５０％阻害する濃度として表す。これは、ＥＣ５０値と呼ばれる。
【０１８７】
細胞内毒性  −  ＬＤ５０および治療指数（ＲｘＩ）
【０１８８】
本明細書に記載された化合物の毒性を、ＥＣ５０の評価に用いられる細胞基準アッセイで評価した。残った細胞を溶解した後、製造業者の使用説明書に従って、乳酸デヒドロゲナーゼアッセイキットＴＯＸ−７（Sigma Biosciences）を用い、化合物に２４時間暴露した後の細胞数により毒性を測定した。あるいは、同じく製造業者の使用説明書に従って、Promega UKのキット（Cyto Tox 96）を使用した。
【０１８９】
治療指数（ＲｘＩ）を、以下のとおり計算した：ＲｘＩ＝ＬＤ５０／ＥＣ５０
【０１９０】
【表３】
2009531405.tif 000019
【国際調査報告】
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2009531405.tif 000021
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