(57)【要約】  全身性エリテマトーデス、皮膚エリテマトーデス、及びループス腎炎等のループスの治療方法を提供する。前記方法は非消失性ＣＤ４抗体と、ループスの治療に臨床使用又は実験使用されている別の化合物を併用投与することを含む。腎機能の改善及び／又は蛋白尿もしくは活性尿沈渣の低減をもたらす非消失性ＣＤ４抗体の投与によるループス腎炎の治療方法も提供する。場合によりＭＳの治療に臨床使用又は実験使用されている別の化合物と併用して非消失性ＣＤ４抗体を投与することによる多発性硬化症の治療方法も記載する。移植片レシピエントと、関節リウマチ、喘息、乾癬、クローン病、潰瘍性大腸炎、及びシェーグレン症候群の対象の治療方法も提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物対象におけるループスの治療方法であって、非消失性ＣＤ４抗体と、シクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、及びＣＴＬＡ４−Ｉｇから構成される群から選択される少なくとも第２の化合物の併用剤の治療有効量を対象に投与することを含む前記方法。
【請求項２】
対象がヒトである請求項１に記載の方法。
【請求項３】
第２の化合物がシクロホスファミドである請求項１に記載の方法。
【請求項４】
抗体が配列番号２７のアミノ酸配列をもつＣＤＲを含む請求項１に記載の方法。
【請求項５】
抗体が配列番号３０のアミノ酸配列をもつＣＤＲを含む請求項１に記載の方法。
【請求項６】
抗体が配列番号２５、配列番号２６、及び配列番号２７のアミノ酸配列をもつＣＤＲを含む請求項１に記載の方法。
【請求項７】
抗体が配列番号２８、配列番号２９、及び配列番号３０のアミノ酸配列をもつＣＤＲを含む請求項１に記載の方法。
【請求項８】
抗体が配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、及び配列番号３０のアミノ酸配列をもつＣＤＲを含む請求項１に記載の方法。
【請求項９】
抗体が配列番号３に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号６に記載の重鎖アミノ酸配列、配列番号９に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１２に記載の重鎖アミノ酸配列、配列番号１５に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１８に記載の重鎖アミノ酸配列、又は配列番号２１に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号２４に記載の重鎖アミノ酸配列を含む請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
対象がヒトであり、第２の化合物がシクロホスファミドである請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ループスがループス腎炎である請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ループスがクラスＩＩループス腎炎、クラスＩＩＩループス腎炎、クラスＩＶループス腎炎、又はクラスＶループス腎炎である請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
併用剤の投与開始後に、対象が蛋白尿の低減及び／又は活性尿沈渣の低減を示す請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
抗体が配列番号３に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号６に記載の重鎖アミノ酸配列、配列番号９に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１２に記載の重鎖アミノ酸配列、配列番号１５に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１８に記載の重鎖アミノ酸配列、又は配列番号２１に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号２４に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体のＣＤ４結合フラグメントを含む請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
抗体が配列番号３に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号６に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体、配列番号９に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１２に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体、配列番号１５に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１８に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体、及び配列番号２１に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号２４に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体から構成される群から選択される抗体と同一のエピトープと結合するＣＤ４抗体である請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
抗体がヒト化抗体である請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
抗体が非グリコシル化Ｆｃ部分をもつ請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
抗体がＦｃ受容体と結合しない請求項１に記載の方法。
【請求項１９】
抗体がＦｃ領域の２７０位、３２２位、３２６位、３２７位、３２９位、３１３位、３３３位、及び／又は３３４位のアミノ酸位置の１個以上にＣ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害性を改変するアミノ酸置換を含む請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
抗体がサルベージ受容体結合エピトープを含む請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
抗体が血清アルブミン結合ペプチドを含む請求項１に記載の方法。
【請求項２２】
抗体が３個以上の抗原結合部位を含む請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
ループスが全身性エリテマトーデスである請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
ループスが皮膚エリテマトーデスである請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
ループスがループス腎炎である請求項１に記載の方法。
【請求項２６】
ループスがクラスＩＩループス腎炎、クラスＩＩＩループス腎炎、クラスＩＶループス腎炎、又はクラスＶループス腎炎である請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
併用剤の投与開始後に、対象が蛋白尿の低減及び／又は活性尿沈渣の低減を示す請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
併用剤の投与開始前に対象が蛋白尿を示し、前記蛋白尿が投与により改善される請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
併用剤の投与開始後にループスが改善され、方法が改善の観察後に、対象への併用剤の投与を中断し、治療有効量の非消失性ＣＤ４抗体を対象に投与することを含む請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
併用剤の投与開始後にループスが改善され、方法が改善の観察後に、対象への併用剤の投与を中断し、治療有効量の第２の化合物又は１種以上の他の化合物を対象に投与することを含む請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
哺乳動物対象におけるループス腎炎の治療方法であって、治療有効量の非消失性ＣＤ４抗体を対象に投与することを含み、抗体の投与開始後に対象が腎機能の改善、蛋白尿の低減、及び／又は活性尿沈渣の低減を示す前記方法。
【請求項３２】
対象がヒトである請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
抗体の投与開始前に、対象が＞５００ｍｇ／日、＞１０００ｍｇ／日、＞２０００ｍｇ／日、又は＞３５００ｍｇ／日の蛋白尿を示し、前記蛋白尿が抗体の投与開始後に低減する請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
抗体が、
ａ）配列番号３に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号６に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｂ）配列番号９に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１２に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｃ）配列番号１５に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１８に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｄ）配列番号２１に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号２４に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｅ）ａ）、ｂ）、ｃ）、又はｄ）の抗体のＣＤ４結合フラグメントを含む抗体；
ｆ）配列番号２７のアミノ酸配列をもつＣＤＲを含む抗体；
ｇ）配列番号３０のアミノ酸配列をもつＣＤＲを含む抗体；
ｈ）配列番号２５、配列番号２６、及び配列番号２７のアミノ酸配列をもつＣＤＲを含む抗体；
ｉ）配列番号２８、配列番号２９、及び配列番号３０のアミノ酸配列をもつＣＤＲを含む抗体；並びに
ｊ）配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、及び配列番号３０のアミノ酸配列をもつＣＤＲを含む抗体から構成される群から選択される請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
抗体が配列番号３に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号６に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体、配列番号９に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１２に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体、配列番号１５に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１８に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体、及び配列番号２１に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号２４に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体から構成される群から選択される抗体と同一のエピトープと結合するＣＤ４抗体である請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
ループスがクラスＩＩループス腎炎、クラスＩＩＩループス腎炎、クラスＩＶループス腎炎、又はクラスＶループス腎炎である請求項３１に記載の方法。
【請求項３７】
哺乳動物対象における疾患の治療方法であって、非消失性ＣＤ４抗体と、シクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、及びＣＴＬＡ４−Ｉｇから構成される群から選択される少なくとも第２の化合物の併用剤の治療有効量を対象に投与することを含み；
疾患が関節リウマチ、喘息、乾癬、移植拒絶反応、移植片対宿主病、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、及びシェーグレン症候群から構成される群から選択される前記方法。
【請求項３８】
疾患が関節リウマチ、喘息、乾癬、移植拒絶反応、及び移植片対宿主病から構成される群から選択される請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
対象がヒトである請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
抗体が、
ａ）配列番号３に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号６に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｂ）配列番号９に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１２に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｃ）配列番号１５に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１８に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｄ）配列番号２１に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号２４に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体；
ｅ）ａ）、ｂ）、ｃ）、又はｄ）の抗体のＣＤ４結合フラグメントを含む抗体；
ｆ）配列番号２７のアミノ酸配列をもつＣＤＲを含む抗体；
ｇ）配列番号３０のアミノ酸配列をもつＣＤＲを含む抗体；
ｈ）配列番号２５、配列番号２６、及び配列番号２７のアミノ酸配列をもつＣＤＲを含む抗体；
ｉ）配列番号２８、配列番号２９、及び配列番号３０のアミノ酸配列をもつＣＤＲを含む抗体；並びに
ｊ）配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７、配列番号２８、配列番号２９、及び配列番号３０のアミノ酸配列をもつＣＤＲを含む抗体から構成される群から選択される請求項３７に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願とのクロスリファレンス）
本願は各々言及によりその開示内容全体を全目的で本明細書に組込む以下の先願仮特許出願：ＵＳＳＮ６０／７８３，５３５（出願日２００６年３月１６日、発明の名称「ＣＤ４抗体を使用するループスの治療方法（ＭＥＴＨＯＤＳ  ＯＦ  ＴＲＥＡＴＩＮＧ  ＬＵＰＵＳ  ＵＳＩＮＧ  ＣＤ４  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ）」、発明者Ｂｒｙａｎ  Ｉｒｖｉｎｇ）、及びＵＳＳＮ６０／８７３，８８１（出願日２００６年１２月７日、発明の名称「ＣＤ４抗体を使用するループスの治療方法（ＭＥＴＨＯＤＳ  ＯＦ  ＴＲＥＡＴＩＮＧ  ＬＵＰＵＳ  ＵＳＩＮＧ  ＣＤ４  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ）」、発明者Ｂｒｙａｎ  Ｉｒｖｉｎｇ）の優先権と特典を主張する非仮実用特許出願である。
【０００２】
（発明の技術分野）
本発明は非消失性ＣＤ４抗体を単独使用又は他の化合物と併用する哺乳動物対象におけるループス及び他の自己免疫疾患の治療方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
自己免疫疾患、特に全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、重症筋無力症、多発性硬化症、及び特発性血小板減少性紫斑病は依然としてヒトにおける臨床的に重要な疾患である。その名称が示す通り、自己免疫疾患は生体内の自己免疫系を介してその破壊作用を引き起こす。病理メカニズムは個々の自己免疫疾患の種類により異なるが、１つの一般的なメカニズムは患者の血清中に存在する所定の抗体（本明細書では自己反応性抗体又は自己抗体と言う）と自己核抗原又は細胞内抗原の結合を伴う。
【０００４】
ループスは結合組織を攻撃する抗体に起因する自己免疫疾患である。２０〜４０歳の女性を中心に約百万人の米国人がこの疾患の患者であると推定される。ループスの主要な形態は全身性である（全身性エリテマトーデス；ＳＬＥ）。ＳＬＥは抗核抗体の産生、免疫複合体の循環、及び補体系の活性化に結び付けられる。ＳＬＥは２０〜６０歳の女性の７００人に１人の割合で発生している。ＳＬＥはあらゆる臓器系を冒し、重度組織損傷を生じる可能性がある。ＳＬＥには異なる特異性の多数の自己抗体が存在する。ＳＬＥ患者は抗ＤＮＡ、抗Ｒｏ、及び抗血小板特異性をもち、糸球体腎炎、関節炎、漿膜炎、新生児完全心臓ブロック、及び血液異常等の疾患の臨床特徴を誘発することが可能な自己抗体を産生することが多い。これらの自己抗体は中枢神経系障害に関係している場合もある。ＡｒｂｕｃｋｌｅらはＳＬＥの臨床発症前の抗体の発生について記載している（Ａｒｂｕｃｋｌｅら（２００３）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９（１６）：１５２６−１５３３）。２本鎖天然ＤＮＡに対して免疫反応性の抗体の存在はＳＬＥの診断マーカーとして頻用されている。
【０００５】
ループスを治療せずにおくと、皮膚及び関節の攻撃から肺、心臓及び腎臓等の内臓に進行し、致命的となる恐れがある（腎疾患が特に問題となる）。ループスは主に一連の突発として出現し、疾患徴候が殆ど又は全く現れない介在期間を伴う。尿中の蛋白尿の量により測定される腎損傷はＳＬＥの病因に関連する最も急性の損傷領域の１つであり、この疾患の死亡率と罹病率の少なくとも５０％を占める。
【０００６】
現時点では、ＳＬＥであると診断された患者の治癒治療法は存在しない。実用的観点から、医師は一般に高用量コルチコステロイド（例えばプレドニゾン）又はアザチオプリン又はシクロホスファミド等の多数の強力な免疫抑制薬を利用しており、これらの薬剤は突発期間中に投与されているが、突発頻度の高い患者には継続的に投与する場合もある。症状を緩和し、寿命を延長する有効な治療であっても、これらの薬剤の多くは治療中の患者に潜在的に有害な副作用がある。更に、これらの免疫抑制薬は自己反応性抗ＤＮＡ抗体のみに止まらず、患者の全抗体の産生能を妨害する。免疫抑制剤は他の潜在的病原体に対する生体防御機能も弱めるため、患者は感染や、癌等の他の潜在的致死性疾患に極度に冒され易くなる。これらの場合には、現行治療薬の副作用と疾患の低レベル徴候の持続が相俟って重度障害や早期死亡に至る可能性もある。
【０００７】
最近の治療レジメンとしては、シクロホスファミド、メトトレキセート、抗マラリア剤、ホルモン療法（例えばＤＨＥＡ）、及び抗ホルモン療法（例えば抗プロラクチン剤であるブロモクリプチン）が挙げられる。抗体を利用するＳＬＥの治療方法も記載されている。例えば、Ｄｉａｍｏｎｄら（米国特許第４，６９０，９０５号）の方法は抗ＤＮＡ抗体に対するモノクローナル抗体（本明細書ではモノクローナル抗体を抗イディオタイプ抗体と言う）を作製する段階と、次にこれらの抗イディオタイプ抗体を使用して患者の生体系から病原性抗ＤＮＡ抗体を除去する段階からなる。しかし、治療のために大量の血液を取り出すのは危険で煩雑な方法であると言える。米国特許第６，７２６，９０９号は患者に投与する抗体組成物を精製抗ＤＮＡ抗イディオタイプ抗体から構成し、注射又は他の同等投与方法により投与するＳＬＥの治療方法を開示している。
【０００８】
所定の自己免疫疾患の治療には高用量静脈内免疫グロブリン（ＩＶＩＧ）輸液も使用されている。現時点まででは、ＩＶＩＧによるＳＬＥの治療結果は交錯しており、ループス腎炎は解消している（Ａｋａｓｈｉら，Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  １７：３７５−３７９（１９９０））が、少数の例では蛋白尿及び腎損傷の増悪を生じている（Ｊｏｒｄａｎら，Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．５３：Ｓ１６４−１６９（１９８９））。
【特許文献１】米国特許第４，６９０，９０５
【特許文献２】米国特許第６，７２６，９０９
【非特許文献１】Ａｒｂｕｃｋｌｅら（２００３）Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４９（１６）：１５２６−１５３３
【非特許文献２】Ａｋａｓｈｉら，Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  １７：３７５−３７９（１９９０）
【非特許文献３】Ｊｏｒｄａｎら，Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．５３：Ｓ１６４−１６９（１９８９）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
ループス腎炎の臨床徴候を示すＳＬＥ患者やループス腎炎患者等のループス患者は最終的に腎不全に至る組織損傷を改善する費用効率の高い安全な治療が必要であり、その症状により慢性血液透析及び／又は腎臓移植が必要になる。同様に、多発性硬化症（ＭＳ）、関節リウマチ、重症筋無力症、乾癬、若年性糖尿病、シェーグレン病、甲状腺疾患、及び炎症性腸疾患等の他の自己免疫疾患患者も有効で安全な治療が必要である。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
１つの一般分類の態様は哺乳動物対象（例えばヒト対象）におけるループスの治療方法を提供する。前記方法では、非消失性ＣＤ４抗体と、例えばシクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、及びα４インテグリン抗体等から構成される群から選択される少なくとも第２の化合物の併用剤の治療有効量を対象に投与する。所定態様では、対象はヒトである。所定態様では、第２の化合物はシクロホスファミドである。
【００１１】
１分類の態様では、非消失性ＣＤ４抗体は配列番号３に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号６に記載の重鎖アミノ酸配列、配列番号９に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１２に記載の重鎖アミノ酸配列、配列番号１５に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１８に記載の重鎖アミノ酸配列、又は配列番号２１に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号２４に記載の重鎖アミノ酸配列ををもつ。
【００１２】
１分類の態様では、非消失性ＣＤ４抗体は配列番号３に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号６に記載の重鎖アミノ酸配列、配列番号９に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１２に記載の重鎖アミノ酸配列、配列番号１５に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１８に記載の重鎖アミノ酸配列、又は配列番号２１に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号２４に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体のＣＤ４結合フラグメントを含む。
【００１３】
１分類の態様では、非消失性ＣＤ４抗体は図１Ａに示す軽鎖のＣＤＲ１（配列番号２５）、ＣＤＲ２（配列番号２６）、又は好ましくはＣＤＲ３（配列番号２７）を含み、例えば、抗体は図１Ａに示す軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（即ち配列番号２５、配列番号２６、及び配列番号２７）を含む。同様に、１分類の態様では、抗体は図１Ｄに示す重鎖のＣＤＲ１（配列番号２８）、ＣＤＲ２（配列番号２９）、又は好ましくはＣＤＲ３（配列番号３０）を含み、例えば、抗体は図１Ｄに示す重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（即ち配列番号２８、配列番号２９、及び配列番号３０）を含む。１態様では、抗体は図１Ａに示す軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、図１Ｄに示す重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（即ち配列番号２５〜３０）を含む。他の典型的抗体としては限定されないが、図１〜４のいずれかに示す抗体と同一のエピトープと結合する抗体が挙げられる。
【００１４】
例えば治療する対象がヒトである場合には、非消失性ＣＤ４抗体はヒト化抗体とすることができる。抗体は非グリコシル化Ｆｃ部分をもつことができる。場合により、抗体はＦｃ受容体と結合しない。所定態様では、抗体はＦｃＲＮ受容体と結合することができる抗ＣＤ４変異体抗体である。抗体は場合によりＦｃ領域の２７０位、３２２位、３２６位、３２７位、３２９位、３１３位、３３３位、及び／又は３３４位のアミノ酸位置の１個以上に（例えばこのような置換を含まない親抗体に対して）抗体のＣ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害性を改変するアミノ酸置換を含む。所定態様では、抗体はサルベージ受容体結合エピトープ又は血清アルブミン結合ペプチドを含む。場合により、抗体は３個以上の抗原結合部位を含む。
【００１５】
対象を治療するループスは一般に全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、皮膚エリテマトーデス（ＣＬＥ）、又はループス腎炎である。治療するループスは治療開始時に初期、中期、又は後期段階の疾患とすることができる。ループス腎炎を治療する態様では、ループス腎炎はクラスＩ〜ＶＩのいずれか１種とすることができる。例えば、治療するループスはクラスＩＩループス腎炎、クラスＩＩＩループス腎炎、クラスＩＶループス腎炎、又はクラスＶループス腎炎とすることができる。１態様では、併用剤の投与開始後に、対象は投与開始前に対象が示した蛋白尿及び／又は活性尿沈渣レベルに比較して蛋白尿の低減及び／又は活性尿沈渣の低減を示す。例えば、蛋白尿を少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、又は少なくとも９０％低減することができ、あるいは蛋白尿を１ｇ／日未満又は５００ｍｇ／日未満まで低減することができ、及び／又は活性尿沈渣を少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、又は少なくとも９０％低減することができ、あるいは投与開始後に不活性尿沈渣しか残存しないようにすることができる。
【００１６】
１態様では、併用剤の投与開始前に、対象は蛋白尿を示し、前記蛋白尿は投与後に改善される。例えば、投与開始前に、対象は＞５００ｍｇ／日、＞１０００ｍｇ／日、＞２０００ｍｇ／日、又は＞３５００ｍｇ／日の蛋白尿を示すことができる。投与開始後に、蛋白尿を少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、又は少なくとも９０％低減することができ、あるいは蛋白尿を１ｇ／日未満又は５００ｍｇ／日未満まで低減することができる。別の例として、投与開始前に、対象は＞０．５、＞１、又は＞２の蛋白対クレアチニン比を示すことができ、投与開始後に、対象の尿蛋白対クレアチニン比を少なくとも２５％又は少なくとも５０％低減することができ、あるいは前記比を１未満又は０．５未満まで低減することができる。
【００１７】
１側面では、前記方法は症状を緩和するために非消失性ＣＤ４抗体と第２の化合物を対象に投与する段階と、その後、寛解を維持するために（相互に併用せずに）非消失性ＣＤ４抗体又は第２の化合物の対象への投与を継続する段階を含む。例えば、１分類の態様では、併用剤の投与開始後にループスが改善され、対象への併用剤の投与を中断し、治療有効量の非消失性ＣＤ４抗体を対象に投与する。別の典型的な分類の態様では、併用剤の投与開始後にループスが改善され、対象への併用剤の投与を中断し、治療有効量の第２の化合物又は１種以上の他の化合物を対象に投与する。
【００１８】
別の一般分類の態様は哺乳動物対象（例えばヒト）におけるループス腎炎の治療方法も提供する。前記方法では、治療有効量の非消失性ＣＤ４抗体を対象に投与する。非消失性抗体の投与開始後に、対象は投与開始前に対象が示した蛋白尿及び／又は活性尿沈渣レベルに比較して腎機能の改善、蛋白尿の低減及び／又は活性尿沈渣の低減を示す。例えば、蛋白尿を少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、又は少なくとも９０％低減することができ、あるいは蛋白尿を１ｇ／日未満又は５００ｍｇ／日未満まで低減することができ；蛋白対クレアチニン比を少なくとも２５％又は少なくとも５０％低減することができ、あるいは前記比を１未満又は０．５未満まで低減することができ；及び／又は活性尿沈渣を少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、又は少なくとも９０％低減することができ、あるいは投与開始後に不活性尿沈渣しか残存しないようにすることができる。
【００１９】
ループス腎炎はクラスＩ〜ＶＩのいずれか１種とすることができる。例えば、治療するループスはクラスＩＩループス腎炎、クラスＩＩＩループス腎炎、クラスＩＶループス腎炎、又はクラスＶループス腎炎とすることができる。
【００２０】
１態様では、投与開始前に、対象は＞５００ｍｇ／日、＞１０００ｍｇ／日、＞２０００ｍｇ／日、又は＞３５００ｍｇ／日の蛋白尿を示す。１態様では、蛋白尿は抗体の投与開始後に例えば少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、又は少なくとも９０％低減し、あるいは１ｇ／日未満又は５００ｍｇ／日未満まで低減する。１態様では、蛋白対クレアチニン比は抗体の投与開始後に、例えば少なくとも２５％又は少なくとも５０％低減し、あるいは１未満又は０．５未満まで低減する。
【００２１】
非消失性ＣＤ４抗体は、ａ）配列番号３に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号６に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体；ｂ）配列番号９に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１２に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体；ｃ）配列番号１５に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１８に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体；ｄ）配列番号２１に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号２４に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体；ｅ）ａ）、ｂ）、ｃ）、又はｄ）の抗体のＣＤ４結合フラグメントを含む抗体；ｆ）図１Ａに示す軽鎖のＣＤＲ３（配列番号２７）を含む抗体；ｇ）図１Ｄに示す重鎖のＣＤＲ３（配列番号３０）を含む抗体；ｈ）図１Ａに示す軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（配列番号２５〜２７）を含む抗体；ｉ）図１Ｄに示す重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（配列番号２８〜３０）を含む抗体；並びにｊ）図１Ａに示す軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と図１Ｄに示す重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（配列番号２５〜３０）を含む抗体から構成される群から選択することができる。同様に、抗体は図１〜４のいずれかに示す抗体と同一のエピトープと結合するＣＤ４抗体とすることができる。
【００２２】
例えば非消失性抗体と少なくとも第２の化合物の選択的併用、抗体の種類、及び／又は同等事項等に関して上記方法について記載した基本的に全特徴がこれらの態様にも適宜適用される。例えば、本発明の１態様では、非消失性ＣＤ４抗体は場合によりヒト化抗体であり、非グリコシル化Ｆｃ部分をもち、Ｆｃ受容体と結合せず、Ｃ１ｑ結合及び／又は補体依存性細胞傷害性を改変するアミノ酸置換を含み、サルベージ受容体結合エピトープを含み、血清アルブミン結合ペプチドを含み、及び／又は３個以上の抗原結合部位をもつ。所定態様では、抗体はＦｃＲＮ受容体と結合することができる抗ＣＤ４変異体抗体である。
【００２３】
１つの一般分類の態様は哺乳動物対象（例えばヒト対象）における多発性硬化症の治療方法を提供する。前記方法では、治療有効量の非消失性ＣＤ４抗体及び／又は少なくとも第２の化合物を対象に投与する。例えば、適切な第２の化合物としては限定されないが、例えば細胞傷害性物質；免疫抑制剤（例えばシクロホスファミド）；Ｂ細胞表面マーカーアンタゴニスト；Ｂ細胞表面マーカーに対する抗体；ＣＤ２０抗体（例えばリツキシマブ）；ＣＤ５、ＣＤ２８、又はＣＤ４０抗体又は遮断薬；コルチコステロイド（例えばプレドニゾン）、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、α４インテグリン抗体（例えばナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標）））、ミコフェノール酸モフェチル、スタチン、ＬＦＡ−１又はＣＤ−１１ａ抗体又は遮断薬、インターロイキン−１２抗体、βインターフェロン（例えばインターフェロンβ−１ａ、例えばＡｖｏｎｅｘ（登録商標）又はＲｅｂｉｆ（登録商標）、又はインターフェロンβ−１ｂ、例えばＢｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標））、酢酸グラチラマー（Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標））、ＣＤ５２抗体（例えばアレムツズマブ（ＣａｍＰａｔｈ（登録商標）））、インターロイキン受容体抗体（例えばダクリズマブ（Ｚｅｎａｐａｘ（登録商標））、インターロイキン２受容体αサブユニットに対する抗体）等が挙げられる。
【００２４】
関連分類の態様は哺乳動物対象（例えばヒト対象）における疾患の治療方法を提供する。疾患は関節リウマチ、喘息、乾癬、移植拒絶反応、移植片対宿主病、多発性硬化症、クローン病、潰瘍性大腸炎、シェーグレン症候群、又は別の自己免疫障害もしくは疾患とすることができる。前記方法では、非消失性ＣＤ４抗体と少なくとも第２の化合物の併用剤の治療有効量を対象に投与する。１分類の態様では、第２の化合物はシクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、又はＣＴＬＡ４−Ｉｇである。
【００２５】
例えば抗体の種類、第２の化合物の種類、及び／又は同等事項等に関して上記方法について記載した基本的に全特徴がこれらの分類の態様にも適宜適用される。例えば、非消失性ＣＤ４抗体は、ａ）配列番号３に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号６に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体；ｂ）配列番号９に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１２に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体；ｃ）配列番号１５に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１８に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体；ｄ）配列番号２１に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号２４に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体；ｅ）ａ）、ｂ）、ｃ）、又はｄ）の抗体のＣＤ４結合フラグメントを含む抗体；ｆ）図１Ａに示す軽鎖のＣＤＲ３（配列番号２７）を含む抗体；ｇ）図１Ｄに示す重鎖のＣＤＲ３（配列番号３０）を含む抗体；ｈ）図１Ａに示す軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（配列番号２５〜２７）を含む抗体；ｉ）図１Ｄに示す重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（配列番号２８〜３０）を含む抗体；並びにｊ）図１Ａに示す軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と図１Ｄに示す重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（配列番号２５〜３０）を含む抗体から構成される群から選択することができる。同様に、抗体は図１〜４のいずれかに示す抗体と同一のエピトープと結合するＣＤ４抗体とすることができる。
【００２６】
〔図面の簡単な説明〕
〔図１〕図１Ａ〜１ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図１Ａは軽鎖のヌクレオチド配列（配列番号１）及びアミノ酸配列（配列番号２）と、ＣＤＲ領域及びフレームワーク領域を示す。図１Ｂは軽鎖のヌクレオチド配列（配列番号１）を示す。図１Ｃはリーダー配列をもつ軽鎖（配列番号２）ともたない軽鎖（配列番号３）のアミノ酸配列を示す。図１Ｄは重鎖のヌクレオチド配列（配列番号４）及びアミノ酸配列（配列番号５）と、ＣＤＲ領域及びフレームワーク領域を示す。図１Ｅは重鎖のヌクレオチド配列（配列番号４）を示す。図１Ｆはリーダー配列をもつ重鎖（配列番号５）ともたない重鎖（配列番号６）のアミノ酸配列を示す。
【００２７】
〔図２〕図２Ａ〜２ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図２Ａは軽鎖のヌクレオチド配列（配列番号７）及びアミノ酸配列（配列番号８）と、ＣＤＲ領域及びフレームワーク領域を示す。図２Ｂは軽鎖のヌクレオチド配列（配列番号７）を示す。図２Ｃはリーダー配列をもつ軽鎖（配列番号８）ともたない軽鎖（配列番号９）のアミノ酸配列を示す。図２Ｄは重鎖のヌクレオチド配列（配列番号１０）及びアミノ酸配列（配列番号１１）と、ＣＤＲ領域及びフレームワーク領域を示す。図２Ｅは重鎖のヌクレオチド配列（配列番号１０）を示す。図２Ｆはリーダー配列をもつ重鎖（配列番号１１）ともたない重鎖（配列番号１２）のアミノ酸配列を示す。
【００２８】
〔図３〕図３Ａ〜３ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図３Ａは軽鎖のヌクレオチド配列（配列番号１３）及びアミノ酸配列（配列番号１４）と、ＣＤＲ領域及びフレームワーク領域を示す。図３Ｂは軽鎖のヌクレオチド配列（配列番号１３）を示す。図３Ｃはリーダー配列をもつ軽鎖（配列番号１４）ともたない軽鎖（配列番号１５）のアミノ酸配列を示す。図３Ｄは重鎖のヌクレオチド配列（配列番号１６）及びアミノ酸配列（配列番号１７）と、ＣＤＲ領域及びフレームワーク領域を示す。図３Ｅは重鎖のヌクレオチド配列（配列番号１６）を示す。図３Ｆはリーダー配列をもつ重鎖（配列番号１７）ともたない重鎖（配列番号１８）のアミノ酸配列を示す。
【００２９】
〔図４〕図４Ａ〜４ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図４Ａは軽鎖のヌクレオチド配列（配列番号１９）及びアミノ酸配列（配列番号２０）と、ＣＤＲ領域及びフレームワーク領域を示す。図４Ｂは軽鎖のヌクレオチド配列（配列番号１９）を示す。図４Ｃはリーダー配列をもつ軽鎖（配列番号２０）ともたない軽鎖（配列番号２１）のアミノ酸配列を示す。図４Ｄは重鎖のヌクレオチド配列（配列番号２２）及びアミノ酸配列（配列番号２３）と、ＣＤＲ領域及びフレームワーク領域を示す。図４Ｅは重鎖のヌクレオチド配列（配列番号２２）を示す。図４Ｆはリーダー配列をもつ重鎖（配列番号２３）ともたない重鎖（配列番号２４）のアミノ酸配列を示す。
【００３０】
〔図５〕ＳＬＥのＮＺＢｘＷ  Ｆ１前臨床効力モデルにおける月齢に伴う疾患の進行を模式的に示す。
【００３１】
〔図６〕図６Ａ〜６Ｆは非消失性ＣＤ４抗体の投与に対する応答を示すグラフである。８カ月齢で投与を開始した動物について、夫々図６Ａは進行（蛋白尿３００ｍｇ／ｄｌ又は死亡）までの時間、図６Ｂは投与開始後の時間の関数としての生存率百分率、図６Ｃは投与５カ月目の蛋白尿、図６Ｄは投与開始後の時間の関数として平均血中尿素窒素を示すグラフである。６カ月齢で投与を開始した動物について、夫々図６Ｅは進行（蛋白尿３００ｍｇ／ｄｌ又は死亡）までの時間を示し、図６Ｆは投与開始後の時間の関数として生存率百分率を示す。
【００３２】
〔図７〕図７Ａ〜７Ｂは非消失性ＣＤ４抗体投与による重度ループス腎炎の改善を示すグラフである。図７Ａは投与後指定時間で蛋白尿３００ｍｇ／ｄｌ未満のマウスの百分率を示すグラフである。図７Ｂは投与開始から１カ月以内に蛋白尿≧３００ｍｇ／ｄｌから改善したマウスの百分率を示す。
【００３３】
〔図８〕図８Ａ〜８Ｄは非消失性ＣＤ４抗体の投与に対する応答を示すグラフである。図８Ａは登録時のｄｓ−ＤＮＡ抗体力価を示し、図８Ｂは投与後３カ月の力価を示す。図８Ｃは投与後３週間で脾臓に存在するＣＤ４＋ＣＤ６９＋細胞数を示す。図８Ｄは投与後３週間で脾臓に存在するＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞数を示す。
【００３４】
〔図９〕図９Ａ〜９Ｂは投与６カ月の蛋白尿の多重比較分析を示し、図９Ａではシクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））投与群を対照群として使用し、図９ＢではＣＤ４非消失性抗体投与群を対照群として使用した。
【００３５】
〔図１０〕ＭＳの前臨床効力モデルであるＳＪＬ／ＪマウスにＰＬＰペプチド注射により誘発したＥＡＥの再発と緩和により疾患の経時的進行を模式的に示す。
【００３６】
〔図１１〕図１１Ａ〜１１Ｂは非消失性ＣＤ４抗体の投与に対する応答を示すグラフである。図１１Ａは対照抗体である酢酸グラチラマー（Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標））、α４インテグリン抗体ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、及び非消失性ＣＤ４抗体を投与した群について経時的臨床スコアのグラフを示す。図１１Ｂはこれらの群について平均１日臨床スコアを示す。
【００３７】
〔図１２〕図１２Ａ〜１２Ｂは非消失性ＣＤ４抗体の投与に対する応答を示すグラフである。図１２Ａは対照抗体、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、及び非消失性ＣＤ４抗体を投与した群について経時的臨床スコアのグラフを示す。図１２Ｂはこれらの群について平均１日臨床スコアを示す。
【００３８】
〔図１３〕図１３Ａ〜１３Ｂは非消失性ＣＤ４抗体の投与に対する応答を示すグラフである。図１３Ａは対照抗体、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、及び非消失性ＣＤ４抗体を投与した群について経時的臨床スコアのグラフを示す。図１３Ｂはこれらの群について平均１日臨床スコアを示す。
【００３９】
〔図１４〕対照抗体又はＣＤ４抗体を投与したマウスからの脊髄切片を示し、非消失性ＣＤ４抗体投与によりＥＡＥの脱髄が低減していることを示す。
【００４０】
〔図１５〕対照抗体、非消失性ＣＤ４抗体、又はＣＴＬＡ４−Ｔｇを投与した動物の血液１μｌ当たりのＩＣＯＳｈｉＣＤ４又はＩＣＯＳｈｉＣＤ８Ｔ細胞数を示すグラフである。
【００４１】
〔図１６〕ミエリン希突起膠細胞糖蛋白（ＭＯＧ）−ペプチドにより誘発したＥＡＥに対する非消失性ＣＤ４抗体、消失性ＣＤ４抗体、対照抗体、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、又は消失性ＣＤ８抗体の投与を比較した経時的臨床スコアのグラフである。
【００４２】
〔図１７〕図１７Ａ〜１７Ｂは非消失性ＣＤ４抗体の投与に対する応答を示すグラフである。図１７Ａは指定投与後指定時間で蛋白尿３００ｍｇ／ｄｌ未満のマウスの百分率を示すグラフである。図１７Ｂは蛋白尿≧３００ｍｇ／ｄｌから改善したマウスの百分率を示す。
【００４３】
〔図１８〕図１８Ａ〜１８Ｄは治療応答を示すグラフである。非消失性ＣＤ４抗体とＭＭＦ５０ｍｇ／ｋｇ／日を併用投与した動物について、夫々図１８Ａは進行（蛋白尿３００ｍｇ／ｄｌ又は死亡）までの時間、図１８Ｂは投与開始後の時間の関数としての生存率百分率を示すグラフであり、非消失性ＣＤ４抗体とＭＭＦ２５ｍｇ／ｋｇ／日を併用投与した動物について、夫々図１８Ｃは進行までの時間、図１８Ｄは生存率百分率を示すグラフである。
【００４４】
〔図１９〕図１９Ａ〜１９Ｂは対照抗体投与群を対照群として使用した投与２カ月の蛋白尿の多重比較分析を示す。ＭＭＦ５０ｍｇ／ｋｇを毎日（単独又は非消失性ＣＤ４抗体と併用）投与した群の結果を図１９Ａに示し、ＭＭＦ２５ｍｇ／ｋｇを毎日投与した群の結果を図１９Ｂに示す。
【００４５】
〔図２０〕図２０Ａ〜２０Ｉは治療応答を示すグラフである。グラフは対照抗体、非消失性ＣＤ４抗体、指定用量のＭＭＦ、又は非消失性ＣＤ４抗体と指定用量のＭＭＦの併用剤を投与した動物について、夫々血液１μｌ当たりのＣＤ４＋Ｔ細胞数（図２０Ａ）、血液１μｌ当たりのＢ２Ｂ細胞数（図２０Ｂ）、脾臓当たりのＣＤ４＋Ｔ細胞数（図２０Ｃ）、脾臓当たりのＢ２Ｂ細胞数（図２０Ｄ）、ＩｇＭ＋形質細胞数（図２０Ｅ）、アイソタイプ転換形質細胞数（図２０Ｆ）、胚中心細胞数（図２０Ｇ）、脾臓当たりの形質細胞様樹状細胞数（図２０Ｈ）、及び形質細胞様樹状細胞におけるＭＨＣＩＩ発現レベル（図２０Ｉ）を示す。
【００４６】
〔図２１〕図２１Ａ〜２１ＢはヒトＣＤ４の核酸配列とアミノ酸配列を示す。図２１Ａはリーダーを切断した成熟蛋白質のヒトＣＤ４アミノ酸配列を示す。図２１Ｂは成熟ヒトＣＤ４  ＤＮＡ配列を示す。
【００４７】
定義
特に定義しない限り、本明細書で使用する全科学技術用語は本発明が属する分野の当業者に通常理解されている通りの意味をもつ。以下の定義により当分野の定義を補うが、これらの定義は本願に関するものであり、関連又は非関連ケース（例えば同一名義の特許又は出願）に帰属するものではない。本発明の試験の実施には本明細書に記載するものと類似又は等価の任意方法及び材料を使用することができ、本明細書には非限定的な材料及び方法を記載する。従って、本明細書で使用する用語は特定態様のみの説明を目的とし、限定的ではない。
【００４８】
本明細書と特許請求の範囲で使用する単数形はそうでないことが内容から明白である場合を除き、複数も意味する。従って、例えば「蛋白質」と言う場合には複数の蛋白質を含み、「細胞」と言う場合には細胞混合物を含み、他の用語についても同様である。
【００４９】
本明細書で使用する「ループス」とは結合組織を攻撃する抗体に起因する自己免疫疾患又は障害である。ループスの主要な形態は全身性疾患である全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）であり、皮膚性疾患を含む場合もある。本明細書で使用する「ループス」はＳＬＥと他の型のループス（例えば皮膚エリテマトーデス（ＣＬＥ）、ループス腎炎（ＬＮ）、腎外性、脳炎、小児性、非腎、円板状、及び脱毛症）を含む。
【００５０】
本明細書で使用する「対象」とは一般にヒトであるが、非ヒト哺乳動物でもよい。典型的な非ヒト哺乳動物としては実験動物、家畜、ペット、競技用動物、及び牧畜（例えばマウス、ネコ、イヌ、ウマ、及びウシ）が挙げられる。一般に、対象は治療（例えば自己免疫疾患の治療、組織移植に関連する治療等）に適格である。１側面では、このような対象はループスの治療に適格である。本発明の趣旨では、このような適格対象はループスの１種以上の徴候、症状もしくは他の指標を示しているかもしくは示したことがある対象、又はループスと診断されたことがある対象（例えば新規に診断されるか、過去に新規突発と診断されたことがあるか、慢性ステロイド依存性で新規突発と診断された対象）、又はループスを発症する危険がある対象である。ループスの治療に適格な対象は場合により腎生検によりスクリーニングされる対象及び／又は自己抗体産生を定性的、好ましくは定量的に評価する自己抗体検出アッセイ（例えば下記アッセイ）を使用してスクリーニングされる対象として同定することができる。ＳＬＥに関連する典型的なこのような自己抗体は抗核抗体（Ａｂ）、抗２本鎖ＤＮＡ（ｄｓＤＮＡ）Ａｂ、抗Ｓｍ  Ａｂ、抗核リボヌクレオ蛋白Ａｂ、抗リン脂質Ａｂ、抗リボソームＰ  Ａｂ、抗Ｒｏ／ＳＳ−Ａ  Ａｂ、抗Ｒｏ  Ａｂ、及び抗Ｌａ  Ａｂである。
【００５１】
ループスの診断（及び治療適格性の判断）は当分野で定着しているように実施することができる。例えば、ＳＬＥの診断は現行のＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｏｌｌｅｇｅ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ（ＡＣＲ）基準に従うことができる。活性な疾患は例えば米国特許出願公開２００６／００２４２９５（発明者Ｂｒｕｎｅｔｔａ、発明の名称「ループスの治療方法（Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｔｒｅａｔｉｎｇ  ｌｕｐｕｓ）」）で適用されているようなＢｒｉｔｉｓｈ  Ｉｓｌｅｓ  Ｌｕｐｕｓ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｇｒｏｕｐ（ＢＩＬＡＧ）の１種の「Ａ」基準又は２種のＢＩＬＡＧ「Ｂ」基準により定義することができる。Ｔａｎら（１９８２）“Ｔｈｅ  １９８２  Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｃｒｉｔｅｒｉａ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ＳＬＥ”Ａｒｔｈ  Ｒｈｅｕｍ  ２５：１２７１−１２７７からＳＬＥ診断に応用される所定の徴候、症状又は他の指標としては、頬発疹（例えば頬全体の発疹、円板状発疹、又は隆起性紅斑）、光線過敏症（例えば日光に反応することによる皮膚発疹の発生又は増加）、口腔潰瘍（例えば通常は無痛性の鼻腔又は口内潰瘍）、関節炎、例えば２個以上の末梢関節を冒す非糜爛性関節炎（関節周囲の骨が破壊されない関節炎）、漿膜炎、胸膜炎ないし心膜炎、腎障害（例えば過剰尿蛋白）（蛋白尿＞０．５ｇ／日又は検査スティックで３＋）及び／又は細胞円柱（尿及び／又は白血球及び／又は腎尿細管細胞に由来する異常成分）、神経徴候、症状、又は他の指標、発作（痙攣）、及び／又はこのような作用を生じることが知られている薬剤もしくは代謝障害の不在下の精神病、並びに血液徴候、症状、又は指標（例えば溶血性貧血又は白血球減少症）（１立方ミリメートル当たり白血球数４，０００個未満）又はリンパ球減少症（１立方ミリメートル当たりリンパ球１，５００個未満）又は血小板減少症（１立方ミリメートル当たり血小板１００，０００個未満）が挙げられる。白血球減少症とリンパ球減少症は２回以上検出する必要がある。血小板減少症はこれを誘発することが知られている薬剤の不在下で検出する必要がある。本発明はループスのこれらの徴候、症状、又は他の指標に限定されない。
【００５２】
ループス腎炎突発は１）１カ月以内にＳｃｒの＞３０％増加、又は２）ネフローゼ症候群の再発もしくは出現、又は３）基線蛋白尿＞１ｇ／２４時間で尿蛋白の３倍増加として、又は米国特許出願公開２００６／００２４２９５に記載されているように定義することができる。ループス腎炎の治療適格性は米国特許出願公開２００６／００２４２９５に記載されているような腎基準により定義されるような腎炎突発により判定することができる。
【００５３】
ループス腎炎は場合により例えばＷｅｅｎｉｎｇら（２００４）“Ｔｈｅ  ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｌｏｍｅｒｕｌｏｎｅｐｈｒｉｔｉｓ  ｉｎ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ  ｒｅｖｉｓｉｔｅｄ”Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ６５：５２１−５３０に記載されているように、ＩＳＮ／ＷＨＯ  クラスＩ、クラスＩＩ、クラスＩＩＩ、クラスＩＶ、クラスＶ、又はクラスＶＩループス腎炎として診断及び分類される。
【００５４】
本明細書で使用する対象の「治療」とは治療処置と予防措置の両者を意味する。治療を必要とする対象としては既にループス（又は別の疾患又はＭＳ、関節リウマチ、もしくは炎症性腸疾患等の自己免疫疾患）をもつ対象に加え、ループス（又は他の障害）を予防すべき対象が挙げられる。従って、対象はループス（又は他の障害）をもつと診断されたものでもよいし、ループス（又は他の障害）の素因をもつもの又はこれに冒され易いものでもよい。
【００５５】
本明細書で使用する「改善する」又は「改善」なる用語は病態、疾患、障害、又は表現型（異常又は症状を含む）の低減、緩和又は排除を意味する。
【００５６】
疾患又は障害（例えばループス）の「症状」とは対象が遭遇する構造、機能、又は感覚の任意病的現象又は異常であり、疾患を表すものである。
【００５７】
「治療有効量」なる用語は疾患又は障害（例えばループス、ＭＳ、関節リウマチ、又は炎症性腸疾患）を予防、改善、又は治療するために有効な量を意味する。例えば、抗体の「治療有効量」とは指定疾患又は障害を予防、改善、又は治療するために有効な抗体の量を意味する。同様に、抗体と第２の化合物の併用剤の「治療有効量」とは、併用して指定疾患又は障害を予防、改善、又は治療するために有効な抗体の量と第２の化合物の量を意味する。
【００５８】
当然のことながら、２種類の化合物の「併用剤」なる用語は相互に混合して投与する必要がある化合物を意味するものではない。従って、このような併用剤の投与又は使用は化合物の混合物又は化合物の別々の投与を意味し、同日又は別の日の投与を含む。従って、「併用剤」なる用語は２種類以上の化合物を別々又は相互に混合して治療に使用することを意味する。例えば、抗体と第２の化合物を対象に併用投与する場合には、抗体と第２の化合物を対象に別々に投与するか又は混合して投与するかに関係なく、抗体が対象の体内に存在するときに第２の混合物も対象の体内に存在する。
【００５９】
ＣＤ４抗原ないし「ＣＤ４」はＴリンパ球及び所定の他の細胞の表面で発現される糖蛋白質である。文献でＣＤ４に使用されている他の名称としてはｃｌｕｓｔｅｒ  ｏｆ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ４とＬ３Ｔ４が挙げられる。ＣＤ４は例えば、ワールドワイドウェブｗｗｗ（ｄｏｔ）ｎｃｂｉ（ｄｏｔ）ｎｌｍ（ｄｏｔ）ｎｉｈ（ｄｏｔ）ｇｏｖ／ＯｍｉｍでＭａｎデータベースのＯｎｌｉｎｅ  Ｍｅｎｄｅｌｉａｎ  Ｉｎｈｅｒｉｔａｎｃｅのエントリー１８６９４０に記載されている。
【００６０】
「ＣＤ４抗体」とは十分な親和性と特異性でＣＤ４と結合する抗体である。例えば、この抗体は場合によりＣＤ４に対するＴＲＸ１抗体の結合親和性及び特異性と同等又は実質的に同様のＣＤ４に対する親和性及び特異性でＣＤ４と結合する。本明細書で使用する「ＣＤ４抗体」、「抗ＣＤ４抗体」、及び「抗ＣＤ４」は等価用語であり、同義に使用する。
【００６１】
「非消失性ＣＤ４抗体」とはＣＤ４＋細胞の５０％未満、好ましくはＣＤ４＋細胞の２５％未満、最も好ましくはＣＤ４＋細胞の１０％しか消失させないＣＤ４抗体である。逆に、「消失性ＣＤ４抗体」はＣＤ４＋細胞の５０％以上、更にはＣＤ４＋細胞の７５％以上又は９０％以上を消失させるＣＤ４抗体である。ＣＤ４＋細胞の消失（例えば抗体を投与する対象における循環ＣＤ４＋細胞レベルの低下）は抗体依存性細胞介在細胞傷害作用、補体依存性細胞傷害作用、Ｔ細胞増殖の阻害、及び／又はＴ細胞死の誘導等の種々のメカニズムにより得られる。
【００６２】
本明細書における「抗体」なる用語は最も広義に使用し、具体的には所望生物活性（例えばＣＤ４結合）を示すという条件で、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、少なくとも２個の無傷の抗体から形成される多重特異性抗体（例えば二重特異性抗体）、キメラ抗体、ヒト抗体、及び抗体フラグメントを意味する。抗体は免疫グロブリン遺伝子又は免疫グロブリン遺伝子のフラグメントにより実質的又は部分的にコードされる１個以上のポリペプチドを含む蛋白質である。認識される免疫グロブリン遺伝子としてはκ、λ、α、γ、δ、ε及びμ定常領域遺伝子に加え、無数の免疫グロブリン可変領域遺伝子が挙げられる。
【００６３】
「抗体フラグメント」は無傷の抗体の一部を含み、その抗原結合領域を含むことが好ましい。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、及びＦｖフラグメント；ダイアボディ；直鎖抗体；１本鎖抗体分子；並びに抗体フラグメントから形成される多重特異性抗体が挙げられる。
【００６４】
「無傷の抗体」とは重鎖及び軽鎖可変領域とＦｃ領域を含む抗体である。
【００６５】
「天然抗体」とは通常は２本の同一の軽鎖（Ｌ）と２本の同一の重鎖（Ｈ）から構成される約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体糖蛋白質である。各軽鎖は１個の共有ジスルフィド結合により重鎖と結合しており、ジスルフィド結合数は各種免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。各重鎖及び軽鎖は更に等間隔に配置された鎖内ジスルフィド結合をもつ。各重鎖は一端に可変領域（ＶＨ）とそれに続く多数の定常領域をもつ。各軽鎖は一端に可変領域（ＶＬ）をもち、その他端に定常領域をもち、軽鎖の定常領域は重鎖の第１の定常領域と整列しており、軽鎖可変領域は重鎖の可変領域と整列している。特定アミノ酸残基が軽鎖可変領域と重鎖可変領域の間の界面を形成すると考えられる。
【００６６】
「可変」なる用語は可変領域の所定部分の配列が抗体間で著しく相違しており、その特定抗原に対する各特定抗体の結合と特異性に使用されることを意味する。しかし、可変性は抗体の可変領域全体に均等に分配されているわけではない。軽鎖及び重鎖可変領域の両者の超可変領域と呼ばれる３個のセグメントに集中している。可変領域のより高度に保存された部分をフレームワーク領域（ＦＲ）と言う。天然重鎖及び軽鎖の可変領域は各々４個のＦＲを含み、これらは主にβシート構造をとり、３個の超可変領域により相互に結合され、これらの超可変領域はβシート構造と結合し、場合によってはその一部となるループを形成する。各鎖の超可変領域はＦＲにより緊密に結合され、他方の鎖の超可変領域と共に、抗体の抗原結合部位の形成に寄与する（Ｋａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）参照）。定常領域は抗体と抗原の結合に直接関与しないが、抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用への抗体の関与等の各種エフェクター機能を示す。
【００６７】
抗体をパパインで消化すると、各々１個の抗原結合部位をもつ「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２個の同一抗原結合フラグメントと、残りの「Ｆｃ」フラグメントを生じ、後者は容易に結晶できることからこう呼ばれる。ペプシンで処理すると、２個の抗原結合部位をもち、依然として抗原と架橋することが可能なＦ（ａｂ’）２フラグメントを生じる。
【００６８】
「Ｆｖ」とは完全な抗原認識抗原結合部位を含む最小抗体フラグメントである。この領域は１個の重鎖可変領域と１個の軽鎖可変領域が非共有的に緊密に結合した二量体から構成される。この構成では各可変領域の３個の超可変領域はＶＨ−ＶＬ二量体の表面に抗原結合部位を規定するように相互作用する。合計６個の超可変領域が抗体に対する抗原結合特異性を付与する。しかし、完全結合部位より親和性は低いが、１個の可変領域（又は抗原に特異的な超可変領域３個のみを含むＦｖの半分）でも抗原を認識してこれと結合することができる。
【００６９】
Ｆａｂフラグメントは更に軽鎖の定常領域と重鎖の第１の定常領域（ＣＨ１）を含む。Ｆａｂ’フラグメントは抗体ヒンジ領域に由来する１個以上のシステインを含む少数の残基を重鎖ＣＨ１領域のカルボキシ末端に付加した点がＦａｂフラグメントと相違する。定常領域のシステイン残基が少なくとも１個の遊離チオール基をもつＦａｂ’を本明細書ではＦａｂ’−ＳＨと言う。Ｆ（ａｂ’）２抗体フラグメントは元々相互間にヒンジシステインをもつＦａｂ’フラグメントの対として作製された。抗体フラグメントの他の化学的カップリングも知られている。他の抗体フラグメントの更に詳細な記載については、例えばＦｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗ．Ｅ．Ｐａｕｌ，ｅｄ．，Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９９９）参照。
【００７０】
各種抗体フラグメントが無傷の抗体の消化に関して定義されるが、当業者に自明の通り、このようなフラグメントは化学的方法又は組換えＤＮＡ技術の利用によりｄｅ  ｎｏｖｏ合成することができる。従って、本明細書で使用する抗体なる用語は全長抗体の修飾により作製されるか又は組換えＤＮＡ技術を使用してｄｅ  ｎｏｖｏ合成される抗体又はそのフラグメントを含む。
【００７１】
任意脊椎動物種に由来する抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」はその定常領域のアミノ酸配列に基づいてカッパ（κ）及びラムダ（λ）と呼ばれる２個の明白に異なる型の一方に分類することができる。
【００７２】
その重鎖の定常領域のアミノ酸配列により、抗体を異なるクラスに分類することができる。無傷の抗体にはＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭの５種類の主要クラスがあり、これらのいくつかを更にサブクラス（アイソタイプ）（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ、及びＩｇＡ２）に分類することができる。各抗体クラスに対応する重鎖定常領域を夫々α、δ、ε、γ、及びμと言う。各クラスの免疫グロブリンのサブユニット構造と三次元構成は周知である。
【００７３】
「１本鎖Ｆｖ」ないし「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは抗体のＶＨ領域とＶＬ領域を含み、これらの領域は１本のポリペプチド鎖に存在する。ＦｖポリペプチドはｓｃＦｖが抗原結合のために望ましい構造を形成できるようにＶＨ領域とＶＬ領域の間に更にポリペプチドリンカーを含むことが好ましい。ｓｃＦｖについては、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ｖｏｌ．１１３，Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ  ｅｄｓ．，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）参照。
【００７４】
「ダイアボディ」なる用語は２個の抗原結合部位をもつ小さい抗体フラグメントを意味し、このフラグメントは同一ポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）で軽鎖可変領域（ＶＬ）と結合した重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。同一鎖の２領域間の対合には短か過ぎるリンカーを使用することにより、これらの領域を別の鎖の相補的領域と対合させ、２個の抗原結合部位を形成させる。ダイアボディは例えば、ＥＰ  ４０４，０９７；ＷＯ１９９３／１１１６１；及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）に更に詳細に記載されている。
【００７５】
本明細書で使用する「モノクローナル抗体」なる用語は実質的に均質の抗体集団から得られる抗体を意味し、即ちモノクローナル抗体の産生中に生じる可能性のある変異体を除き、集団を構成する個々の抗体は同一であるか、及び／又は同一エピトープと結合し、前記のような変異体は一般に存在するとしても少量である。一般に異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物に対して、各モノクローナル抗体は抗原上の単一決定基に対して産生される。その特異性に加え、モノクローナル抗体は他の免疫グロブリンで汚染されていないという利点もある。修飾語としての「モノクローナル」は抗体が実質的に均質の抗体集団から得られるという特徴を示すものであり、特定方法による抗体の作製が必要であると解釈すべきではない。例えば、本発明に従って使用されるモノクローナル抗体はＫｏｈｌｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）により最初に記載されたハイブリドーマ法により作製することもできるし、組換えＤＮＡ法（例えば米国特許第４，８１６，５６７号参照）により作製することもできる。「モノクローナル抗体」は例えばＣｌａｃｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）に記載の技術を使用してファージ抗体ライブラリーから単離することもできる。
【００７６】
本発明のモノクローナル抗体としては、所望生物活性を示すという条件で、具体的に重鎖及び／又は軽鎖の一部が特定種に由来するか又は特定抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応配列と同一又は相同であり、鎖の残余が別の種に由来するか又は別の抗体クラスもしくはサブクラスに属する抗体の対応配列と同一又は相同である「キメラ」抗体（免疫グロブリン）と、このような抗体のフラグメントが挙げられる（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１−６８５５（１９８４））。本発明の該当キメラ抗体としては非ヒト霊長類（例えばヒヒ、アカゲザル、又はカニクイザル等の旧世界ザル）に由来する可変領域抗原結合配列と、ヒト定常領域配列を含む「霊長類化」抗体が挙げられる（米国特許第５，６９３，７８０号）。
【００７７】
非ヒト（例えばマウス）抗体の「ヒト化」形態は非ヒト免疫グロブリンに由来する最小配列を含むキメラ抗体である。概ね、ヒト化抗体はレシピエントの超可変領域に由来する残基を所望特異性、親和性、及び能力をもつマウス、ラット、ウサギ、又は非ヒト霊長類等の非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域に由来する残基で置換したヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。場合により、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）残基を対応する非ヒト残基で置換する。更に、ヒト化抗体はレシピエント抗体又はドナー抗体に存在しない残基を含む場合もある。これらの改変は抗体性能を更に高めるために行われる。一般に、ヒト化抗体は少なくとも１個、一般には２個の可変領域の実質的に全体を含み、超可変ループの全部又は実質的に全部が非ヒト免疫グロブリンの超可変ループに対応し、上記のようなＦＲ置換を除き、ＦＲの全部又は実質的に全部がヒト免疫グロブリン配列のＦＲである。ヒト化抗体は更に場合により免疫グロブリン定常領域、一般にはヒト免疫グロブリン定常領域の少なくとも一部を含む。更に詳細については、Ｊｏｎｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９（１９８８）；及びＰｒｅｓｔａ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（１９９２）参照。
【００７８】
本明細書で使用する場合の「超可変領域」なる用語は抗原結合に関与する抗体のアミノ酸残基を意味する。超可変領域は「相補性決定領域」ないし「ＣＤＲ」（例えばＫａｂａｔら，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ．（１９９１）参照）に由来するアミノ酸残基及び／又は「超可変ループ」（例えばＣｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）参照）に由来するアミノ酸残基を含む。「フレームワーク」ないし「ＦＲ」残基は本明細書に定義するような超可変領域残基以外の可変領域残基である。
【００７９】
「Ｆｃ受容体」及び「ＦｃＲ」なる用語は抗体のＦｃ領域と結合する受容体の意味で使用する。ＦｃＲはＲａｖｅｔｃｈ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔ（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９：４５７−９２；Ｃａｐｅｌら（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４；及びｄｅ  Ｈａａｓら（１９９５）Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−４１に概説されている。将来同定されるものを含めた他のＦｃＲも本明細書で使用する「ＦｃＲ」なる用語に含む。この用語は更に母親から胎児へのＩｇＧの移動に関与する新生児受容体であるＦｃＲｎも意味する（Ｇｕｙｅｒら（１９７６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７及びＫｉｍら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９）。
【００８０】
抗体の「ＣＤ４結合フラグメント」とはＣＤ４との結合能を維持する抗体のフラグメントである。上記のように、フラグメントは場合により無傷の抗体の消化により作製又はｄｅ  ｎｏｖｏ合成される。
【００８１】
「エピトープ」は抗体と結合する抗原分子の特定領域である。
【００８２】
本明細書で使用する「実質的に類似」又は「実質的に同一」なる用語は２個の数値（一般に一方は本発明の抗体に関連し、他方は参照／比較抗体に関連する数値）の類似度が十分に高く、２個の数値の差がこれらの数値（例えばＫｄ値）により測定される生物学的特徴のコンテクスト内で生物学的及び／又は統計的に殆ど又は全く有意でないと当業者に判断されることを意味する。前記２個の数値の差は参照／比較抗体の数値の関数として約５０％未満が好ましく、約４０％未満が好ましく、約３０％未満が好ましく、約２０％未満が好ましく、約１０％未満が好ましい。
【００８３】
「結合親和性」とは一般に分子（例えば抗体）の単一結合部位とその結合パートナー（例えば抗原）の非共有的相互作用の合計の強度を意味する。特に指定しない限り、本明細書で使用する「結合親和性」とは結合対のメンバー（例えば抗体と抗原）間の１：１相互作用を反映する固有結合親和性を意味する。分子ＸのそのパートナーＹに対する親和性は一般に解離定数（Ｋｄ）により表すことができる。親和性は本明細書に記載する方法を含めた当分野で公知の一般方法により測定することができる。低親和性抗体は一般に抗原とゆっくりと結合し、解離し易い傾向があり、高親和性抗体は一般に抗原と迅速に結合し、長時間結合し続ける傾向がある。結合親和性の測定方法は種々のものが当分野で公知であり、本発明の趣旨では、そのうちの任意のものを使用することができる。特定の具体的態様を以下に記載する。
【００８４】
１態様では、本発明による「Ｋｄ」ないし「Ｋｄ値」は、非標識抗原の滴定系列の存在下にＦａｂを最低濃度の［１２５Ｉ］標識抗原で平衡化した後に、抗Ｆａｂ抗体をコーティングしたプレートで結合抗原を捕捉することにより抗原に対するＦａｂの溶液結合親和性を測定する以下のアッセイに記載するように、該当抗体のＦａｂ形態とその抗原を使用して実施される放射性標識抗原結合アッセイ（ＲＩＡ）により測定される（Ｃｈｅｎら（１９９９）Ｊ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２９３：８６５−８８１）。アッセイの条件を設定するために、５０ｍＭ炭酸ナトリウム（ｐＨ９．６）中、５ｕｇ／ｍｌの捕捉用抗Ｆａｂ抗体（Ｃａｐｐｅｌ  Ｌａｂｓ）でマイクロタイタープレート（Ｄｙｎｅｘ）を一晩コーティングした後に、ＰＢＳ中、２％（ｗ／ｖ）ウシ血清アルブミンで２〜５時間室温（約２３℃）にてブロックする。非吸着性プレート（Ｎｕｎｃ  ＃２６９６２０）で、１００ｐＭ又は２６ｐＭ［１２５１］抗原を該当Ｆａｂ（例えばＰｒｅｓｔａら（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４５９３−４５９９に記載の抗ＶＥＧＦ抗体Ｆａｂ−１２の評価に合致するもの）の希釈系列と混合する。次に該当Ｆａｂを一晩インキュベートするが、平衡に達するようにインキュベーションをもっと長くしてもよい（例えば６５時間）。その後、混合物を捕捉用プレートに移し、室温でインキュベーションする（例えば１時間）。その後、溶液を取出し、プレートをＰＢＳ中、０．１％  Ｔｗｅｅｎ−２０で８回洗浄する。プレートが乾燥したら、シンチラント（ＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ（登録商標）−２０；Ｐａｃｋａｒｄ）１５０ｕｌ／ウェルを加え、プレートをＴｏｐｃｏｕｎｔ（登録商標）γカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）で１０分間カウントする。最大結合の２０％以下を示す各Ｆａｂの濃度を競合結合アッセイ用に選択する。別の態様によると、ＫｄないしＫｄ値はＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）−２０００又はＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）−３０００（ＢＩＡｃｏｒｅ，Ｉｎｃ．，Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ）を２５℃で〜１０応答単位（ＲＵ）の固相化抗原ＣＭ５チップと共に使用して表面プラズモン共鳴アッセイを使用することにより測定される。要約すると、カルボキシメチル化デキストランバイオセンサーチップ（ＣＭ５，ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｃ．）を供給業者の指示に従ってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）とＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）で活性化する。抗原を１０ｍＭ酢酸ナトリウム，ｐＨ４．８で５ｕｇ／ｍｌ（〜０．２ｕＭ）に希釈した後、約１０応答単位（ＲＵ）の結合蛋白が得られるように流速５ｕｌ／分で注入する。抗原注入後、１Ｍエタノールアミンを注入し、未反応基をブロックする。動的測定のために、２５℃のＰＢＳ＋０．０５％  Ｔｗｅｅｎ  ２０（ＰＢＳＴ）にＦａｂの２倍希釈系列（０．７８ｎＭ〜５００ｎＭ）を流速約２５ｕｌ／分で注入する。会合及び解離センサーグラムを同時にフィットさせることにより、単純な１対１ラングミュア結合モデル（ＢＩＡｃｏｒｅ（登録商標）Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ３．２）を使用して会合速度（ｋｏｎ）と解離速度（ｋｏｆｆ）を���算する。ｋｏｆｆ／ｋｏｎ比として平衡解離定数（Ｋｄ）を計算する。例えばＣｈｅｎら（１９９９）Ｊ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２９３：８６５−８８１参照。上記表面プラズモン共鳴アッセイにより会合速度が１０６Ｍ−１Ｓ−１を上回る場合には、ストップフロー分光光度計（Ａｖｉｖ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ）又は撹拌機能付きキュベットを備える８０００−ｓｅｒｉｅｓ  ＳＬＭ−Ａｍｉｎｃｏ（登録商標）分光光度計（ＴｈｅｒｍｏＳｐｅｃｔｒｏｎｉｃ）等の分光計で測定した場合に漸増する抗原濃度の存在下で、ＰＢＳ，ｐＨ７．２中、２０ｎＭ抗抗原抗体（Ｆａｂ形態）の２５℃の蛍光発光強度（励起＝２９５ｎｍ；発光＝３４０ｎｍ，１６ｎｍ帯域）の増減を測定する蛍光消光技術を使用して会合速度を測定することができる。
【００８５】
「アミノ酸配列」とは状況に応じてアミノ酸残基のポリマー（蛋白質、ポリペプチド等）又はアミノ酸ポリマーを表す文字列である。
【００８６】
本明細書で使用する「免疫抑制剤」なる用語は本発明で治療する哺乳動物の免疫系を抑制又は遮断するように作用する物質を意味する。この用語はサイトカイン産生を抑制、自己抗原発現をダウンレギュレートもしくは抑制、又はＭＨＣ抗原を遮断する物質を含む。このような物質の例としては２−アミノ−６−アリール−５−置換ピリミジン（米国特許第４，６６５，０７７号参照）；非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）；ガンシクロビルタクロリムス、グルココルチコイド（例えばコルチゾール又はアルドステロン）、抗炎症薬（例えばシクロオキシゲナーゼ阻害剤、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、又はロイコトリエン受容体アンタゴニスト）；プリンアンタゴニスト（例えばアザチオプリン又はミコフェノール酸モフェチル（ＭＭＦ））；アルキル化剤（例えばシクロホスファミド）；ブロモクリプチン；ダナゾール；ダプソン；（米国特許第４，１２０，６４９号に記載されているようにＭＨＣ抗原を遮断する）グルタルアルデヒド；ＭＨＣ抗原及びＭＨＣフラグメントに対する抗イディオタイプ抗体；シクロスポリンＡ；ステロイド（例えばコルチコステロイド又はグルココルチコステロイドもしくはグルココルチコイドアナログ、例えばプレドニゾン、メチルプレドニゾロン、及びデキサメタゾン）；ジヒドロ葉酸レダクターゼ阻害剤（例えばメトトレキセート（経口又は皮下））；ヒドロキシクロロキン；スルファサラジン；レフルノミド；サイトカイン又はサイトカイン受容体抗体、例えば抗インターフェロンα、β、又はγ抗体、抗腫瘍壊死因子α抗体（インフリキシマブ又はアダリムマブ）、抗ＴＮＦαイムノアドヘジン（エタネルセプト）、抗腫瘍壊死因子β抗体、抗インターロイキン−２抗体及び抗ＩＬ−２受容体抗体；抗ＬＦＡ−１抗体（例えば抗ＣＤ１１ａ及び抗ＣＤ１８抗体）；異種抗リンパ球グロブリン；ｐａｎ−Ｔ抗体、好ましくは抗ＣＤ３；ＬＦＡ−３結合ドメインを含む可溶性ペプチド（ＷＯ１９９０／０８１８７、公開日１９９０年７月２６日）；ストレプトキナーゼ；ＴＧＦβ；ストレプトドルナーゼ；宿主由来ＲＮＡ又はＤＮＡ；ＦＫ５０６；ＲＳ−６１４４３；デオキシスペルグアリン；ラパマイシン；Ｔ細胞受容体（Ｃｏｈｅｎら，米国特許第５，１１４，７２１号）；Ｔ細胞受容体フラグメント（Ｏｆｆｎｅｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５１：４３０−４３２（１９９１）；ＷＯ１９９０／１１２９４；Ｉａｎｅｗａｙ，Ｎａｔｕｒｅ，３４１：４８２（１９８９）；及びＷＯ１９９１／０１１３３）；並びにＴ細胞受容体抗体（ＥＰ３４０，１０９）（例えばＴ１０Ｂ９）が挙げられる。
【００８７】
本明細書で使用する「細胞傷害性物質」なる用語は細胞機能を阻害もしくは阻止及び／又は細胞破壊を誘発する物質を意味する。この用語は放射性同位体（例えばＡｔ２１１、Ｉ１３１、Ｉ１２５、Ｙ９０、Ｒｅ１８６、Ｒｅ１８８、Ｓｍ１５３、Ｂｉ２１２、Ｐ３２及びＬｕの放射性同位体）、化学療法剤、及び毒素（例えば小分子性毒素又は細菌、真菌、植物もしくは動物に由来する酵素活性毒素又はそのフラグメント）を含むものとする。
【００８８】
「化学療法剤」は一般に癌治療で有用な化合物である。化学療法剤の例としてはアルキル化剤（例えばチオテパ及びＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）即ちシクロホスファミド）；アルキルスルホネート（例えばブスルファン、インプロスルファン、及びピポスルファン）；アジリジン（例えばベンゾデパ、カルボコン、メツレデパ、及びウレデパ）；エチレンイミン及びメチルメラミン（例えばアルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホロアミド、トリエチレンチオホスホロアミド、及びトリメチロールメラミン）；アセトゲニン（特にブラタシン及びブラタシノン）；カンプトテシン（例えば合成アナログトポテカン）；ブリオスタチン；カリスタチン；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシン、及びビゼレシン合成アナログを含む）；クリプトフィシン（特にクリプトフィシン１及びクリプトフィシン８）；ドラスタチン；デュオカルマイシン（合成アナログ、ＫＷ−２１８９及びＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチイン；スポンジスタチン；ナイトロジェンマスタード（例えばクロラムブシル、クロルナファジン、シクロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロルエタミン、メクロルエタミンオキシド塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード）；ニトロ尿素（例えばカルムスチン、クロロゾトシン、フォテムスチン、ロムスチン、ニムスチン及びラニムスチン）；抗生物質、例えばエンジイン抗生物質（例えばカリケアマイシン、特にカリケアマイシンγ１Ｉ及びカリケアマイシンωＩ１）（例えばＡｇｎｅｗ，Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．，３３：１８３−１８６（１９９４）参照）；ジネマイシン（例えばジネマイシンＡ）；ビホスホネート（例えばクロドロネート）；エスペラマイシン；ネオカルジノスタチンクロモフォア及び関連クロモプロテインエンジイン抗生物質クロモフォア、アクラシノマイシン、アクチノマイシン、アンスラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カラビシン、カルミノマイシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標）即ちドキソルビシン（モルホリノドキソルビシン、シアノモルホリノドキソルビシン、２−ピロリノドキソルビシン、及びデオキシドキソルビシンを含む）、エピルビシン、エソルビシン、イダルビシン、マルセロマイシン、マイトマイシン（例えばマイトマイシンＣ）、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ケラマイシン、ロドルビシン、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ウベニメクス、ジノスタチン、ゾルビシン；代謝拮抗剤（例えばメトトレキセート及び５−フルオロウラシル（５−ＦＵ））；葉酸アナログ（例えばデノプテリン、メトトレキセート、プテロプテリン、トリメトレキセート）；プリンアナログ（例えばフルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン）；ピリミジンアナログ（例えばアンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン、フロクスウリジン）；アンドロゲン（例えばカルステロン、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、テストラクトン）；副腎阻害薬（例えばアミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン）；葉酸補充剤（例えばフォリン酸）；アセグラトン；アルドホスファミドグルコシド；アミノレブリン酸；エニルウラシル；アムサクリン；ベストラブシル；ビサントレン；エダトレキセート；デホファミン；デメコルシン；ジアジコン；エルフォルニチン；酢酸エリプチニウム；エポチロン；エトグルシド；硝酸ガリウム；ヒドロキシ尿素；レンチナン；ロニダミン；メイタンシノイド（例えばメイタンシン及びアンサマイトシン）；ミトグアゾン；ミトキサントロン；モピダモール；ニトラエリン；ペントスタチン；フェナメト；ピラルビシン；ロソキサントロン；ポドフィリン酸；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）即ち多糖複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，Ｏｒｅｇ．）；ラゾキサン；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム；テヌアゾン酸；トリアジコン；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン（特にＴ−２トキシン、ベルカリンＡ、ロリジンＡ及びアングイジン）；ウレタン；ビンデシン；ダカルバジン；マンノムスチン；ミトブロニトール；ミトラクトール；ピポブロマン；ガシトシン；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド（例えばＴＡＸＯＬ（登録商標）即ちパクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ．）、ＡＢＲＡＸＡＮ（登録商標）即ちパクリタキセルのクレモフォアフリーアルブミン結合ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌｌ．）、及びＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）即ちドキセタキセル（Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ））；クロランブシル；ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）即ちゲムシタビン；６−チオグアニン；メルカプトプリン；メトトレキセート；白金アナログ（例えばシスプラチン及びカルボプラチン）；ビンブラスチン；白金；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；ミトキサントロン；ビンクリスチン；ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標）即ちビノレルビン；ノバントロン；テニポシド；エダトレキセート；ダウノマイシン；アミノプテリン；ゼローダ；イバンドロネート；ＣＰＴ−１１；トポイソメラーゼ阻害剤ＲＦＳ  ２０００；ジフルオロメチルオルニチン（ＤＭＦＯ）；レチノイド（例えばレチノイン酸）；カペシタビン；並びに上記化合物の任意のものの医薬的に許容可能な塩、酸、又は誘導体が挙げられる。
【００８９】
ホルモン作用を制御又は阻害するように作用する抗ホルモン剤もこの定義に含まれ、例えば抗エストロゲン及び選択的エストロゲン受容体モジュレーター（ＳＥＲＭ）、例えばタモキシフェン（例えばＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）即ちタモキシフェン）、ラロキシフェン、ドロロキシフェン、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン、ＬＹＩ１７０１８、オナプリストン、及びＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）即ちトレミフェン；副腎におけるエストロゲン産生を調節する酵素アロマターゼを阻害するアロマターゼ阻害剤、例えば、４（５）−イミダゾール、アミノグルテチミド、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）即ち酢酸メゲストロール、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）即ちエキセメスタン、フォルメスタン、ファドロゾール、ＲＴＶＩＳＯＲ（登録商標）即ちボロゾール、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）即ちレトロゾール、及びＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）即ちアナストロゾール；抗アンドロゲン剤、例えばフルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド、及びゴセレリン；トロキサシタビン（１，３−ジオキソランヌクレオチドシトシンアナログ）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に異常細胞増殖に関与するシグナル伝達経路における遺伝子発現を阻害するもの、例えば、ＰＫＣ−α、Ｒａｆ、及びＨ−Ｒａｓ；遺伝子治療用ワクチン等のワクチン、例えば、ＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、及びＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ−２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）トポイソメラーゼ１阻害剤；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；並びに上記化合物の任意のものの医薬的に許容可能な塩、酸、又は誘導体が挙げられる。
【００９０】
「サイトカイン」なる用語は細胞間メディエーターとして別の細胞に作用する特定細胞集団から放出される蛋白質の総称である。このようなサイトカインの例はリンホカイン、モノカイン、インターロイキン（ＩＬ）（例えばＩＬ−１、ＩＬ−１ａ、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５）、腫瘍壊死因子（例えばＴＮＦ−α又はＴＮＦ−β）、及び他のポリペプチド因子（例えばＬＩＦ及びキットリガンド（ＫＬ））である。本明細書で使用するサイトカインなる用語は天然起源又は組換え細胞培養に由来する蛋白質と、天然配列サイトカインの生物学的に活性な等価物（例えば合成により作製した小分子化合物とその医薬的に許容可能な誘導体及び塩）を包含する。
【００９１】
「ホルモン」なる用語は管を備える腺臓器により一般に分泌されるポリペプチドホルモンを意味する。ホルモンとしては例えば成長ホルモン（例えばヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモン、及びウシ成長ホルモン）；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；糖蛋白ホルモン（例えば卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、及び黄体形成ホルモン（ＬＨ））；プロラクチン、胎盤性ラクトゲン、マウスゴナドトロピン関連ペプチド、インヒビン；アクチビン；ミューラー管阻害物質；及びトロンボポエチンが挙げられる。本明細書で使用するホルモンなる用語は天然起源又は組換え細胞培養に由来する蛋白質と、天然配列ホルモンの生物学的に活性な等価物（例えば合成により作製した小分子化合物とその医薬的に許容可能な誘導体及び塩）を包含する。
【００９２】
「増殖因子」なる用語は増殖を促進する蛋白質を意味し、例えば肝細胞増殖因子；繊維芽細胞増殖因子；血管内皮細胞増殖因子；神経増殖因子（例えばＮＧＦ−β）；血小板由来増殖因子；トランスフォーミング増殖因子（ＴＧＦ）（例えばＴＧＦ−α及びＴＧＦ−β）；インスリン様増殖因子Ｉ及びＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン（例えばインターフェロンα、β、及びγ）；並びにコロニー刺激因子（ＣＳＦ）（例えばマクロファージＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）；顆粒球マクロファージＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；及び顆粒球ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ））が挙げられる。本明細書で使用する増殖因子なる用語は天然起源又は組換え細胞培養に由来する蛋白質と、天然配列増殖因子の生物学的に活性な等価物（例えば合成により作製した小分子化合物とその医薬的に許容可能な誘導体及び塩）を包含する。
【００９３】
本発明の趣旨では、「腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）」なる用語はＰｅｎｎｉｃａら，Ｎａｔｕｒｅ，３１２：７２１（１９８４）又はＡｇｇａｒｗａｌら，ＪＢＣ，２６０：２３４５（１９８５）に記載されているようなアミノ酸配列を含むヒトＴＮＦα分子を意味する。
【００９４】
本明細書において「ＴＮＦα阻害剤」とは一般にＴＮＦαとの結合とその活性の中和によりＴＮＦαの生物学的機能をある程度まで阻害する物質である。本発明で特に想定されるＴＮＦ阻害剤の例はエタネルセプト（ＥＮＢＲＥＬ（登録商標））、インフリキシマブ（ＲＥＭＩＣＡＤＥ（登録商標））、及びアダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標））である。
【００９５】
「非ステロイド性抗炎症薬」ないし「ＮＳＡＩＤ」の例はアセチルサリチル酸、イブプロフェン、ナプロキセン、インドメタシン、スリンダク、トルメチンとその塩及び誘導体等である。
【００９６】
「インテグリン」なる用語は細胞を細胞外マトリックスに結合させると共に応答させ、創傷治癒、細胞分化、腫瘍細胞ホーミング、及びアポトーシス等の各種細胞機能に関与する受容体蛋白質を意味する。これらは細胞と細胞外マトリックス及び細胞同士の相互作用に関与する大きな細胞接着受容体ファミリーの一部である。機能的インテグリンは非共有的に結合したα及びβと呼ばれる２個の膜貫通糖蛋白サブユニットから構成される。αサブユニットはいずれも相互にある程度相同であり、βサブユニットも同様である。受容体は常に１本のα鎖と１本のβ鎖を含む。例としてはα６β１、α３β１、α７β１、ＬＦＡ−１等が挙げられる。本明細書で使用するインテグリンなる用語は天然起源又は組換え細胞培養に由来する蛋白質と、天然配列インテグリンの生物学的に活性な等価物（例えば合成により作製した小分子化合物とその医薬的に許容可能な誘導体及び塩）を包含する。「α４インテグリン」は好中球以外の白血球の表面で発現されるα４−β１及びα４−β７インテグリンのα４サブユニットである。
【００９７】
本明細書における「インテグリンアンタゴニスト又は抗体」の例としてはＬＦＡ−１抗体（例えばＧｅｎｅｎｔｅｃｈから市販されているエファリズマブ（ＲＡＰＴＩＶＡ（登録商標）））、又はα４インテグリン抗体（例えば「α４インテグリン抗体」はα４インテグリンと結合する抗体である）（例えばＢｉｏｇｅｎから市販されているナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標）））、あるいはジアザ環状フェニルアラニン誘導体（ＷＯ２００３／８９４１０）、フェニルアラニン誘導体（ＷＯ２００３／７０７０９、ＷＯ２００２／２８８３０、ＷＯ２００２／１６３２９及びＷＯ２００３／５３９２６）、フェニルプロピオン酸誘導体（ＷＯ２００３／１０１３５）、エナミン誘導体（ＷＯ２００１／７９１７３）、プロパン酸誘導体（ＷＯ２０００／３７４４４）、アルカン酸誘導体（ＷＯ２０００／３２５７５）、置換フェニル誘導体（米国特許第６，６７７，３３９号及び６，３４８，４６３号）、芳香族アミン誘導体（米国特許第６，３６９，２２９号）、ＡＤＡＭジスインテグリンドメイミンポリペプチド（ＵＳ  ２００２／００４２３６８）、αｖβ３インテグリンに対する抗体（ＥＰ  ６３３９４５）、アザ架橋二環式アミノ酸誘導体（ＷＯ２００２／０２５５６）等が挙げられる。
【００９８】
「コルチコステロイド」とはステロイドの一般化学構造をもち、天然コルチコステロイドと同等以上の作用をもつ数種の合成又は天然物質のいずれか１種を意味する。合成コルチコステロイドの例としてはプレドニゾン、プレドニゾロン（メチルプレドニゾロンを含む）、デキサメタゾン、トリアムシノロン、及びベタメタゾンが挙げられる。
【００９９】
本明細書における「Ｂ細胞表面マーカー」ないし「Ｂ細胞表面抗原」とはこれと結合するアンタゴニストでターゲティングすることができるＢ細胞の表面で発現される抗原である。典型的なＢ細胞表面マーカーとしてはＣＤ１０、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ２４、ＣＤ３７、ＣＤ４０、ＣＤ５３、ＣＤ７２、ＣＤ７３、ＣＤ７４、ＣＤｗ７５、ＣＤｗ７６、ＣＤ７７、ＣＤｗ７８、ＣＤ７９ａ、ＣＤ７９ｂ、ＣＤ８０、ＣＤ８１、ＣＤ８２、ＣＤ８３、ＣＤｗ８４、ＣＤ８５、及びＣＤ８６白血球表面マーカーが挙げられる（詳細については、Ｔｈｅ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｆａｃｔｓ  Ｂｏｏｋ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．１９９７，ｅｄ．Ｂａｒｃｌａｙら，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｈａｒｃｏｕｒｔ  Ｂｒａｃｅ  ＆  Ｃｏ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ参照）。他のＢ細胞表面マーカーとしてはＲＰ１０５、ＦｃＲＨ２、Ｂ細胞ＣＲ２、ＣＣＲ６、Ｐ２Ｘ５、ＨＬＡ−ＤＯＢ、ＣＸＣＲ５、ＦＣＥＲ２、ＢＲ３、Ｂｔｉｇ、ＮＡＧ１４、ＳＬＧＣ１６２７０、ＦｃＲＨ１、ＩＲＴＡ２、ＡＴＷＤ５７８、ＦｃＲＨ３、ＩＲＴＡ１、ＦｃＲＨ６、ＢＣＭＡ、及び２３９２８７が挙げられる。特に有用なＢ細胞表面マーカーは哺乳動物の他のＢ細胞以外の組織に比較してＢ細胞で優先的に発現され、前駆体Ｂ細胞と成熟Ｂ細胞の両者で発現することができる。
【０１００】
「Ｂ細胞表面マーカーと結合する抗体」とはＢ細胞表面マーカーと結合すると、例えばＢ細胞により誘発される体液性応答を低下又は阻止することにより、哺乳動物でＢ細胞を破壊又は消失させ、及び／又は１種以上のＢ細胞機能を妨害する分子である。この抗体はこれを投与した哺乳動物でＢ細胞を消失（即ち循環Ｂ細胞濃度を低下）できることが好ましい。このような消失は抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）及び／又は補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）、Ｂ細胞増殖の阻害、及び／又は（例えばアポトーシスによる）Ｂ細胞死の誘導等の各種メカニズムにより得られる。
【０１０１】
「アンタゴニスト」とは特定又は指定蛋白質の活性（例えばリガンドの場合には１種以上の受容体とのその結合、又は受容体の場合には１種以上のリガンドとの結合）を中和、遮断、抑制、排除、低下又は妨害することが可能な分子である。アンタゴニストとしては抗体とその抗原結合フラグメント、蛋白質、ペプチド、糖蛋白質、糖ペプチド、糖脂質、多糖、オリゴ糖、核酸、生体有機分子、ペプチドミメティクス、薬剤とその代謝産物、転写及び翻訳調節配列等が挙げられる。アンタゴニストとしては更に蛋白質の小分子阻害剤、蛋白質と特異的に結合することによりそのターゲットとの結合を妨害する融合蛋白質、受容体分子及び誘導体、蛋白質のアンタゴニスト変異体、蛋白質に対するアンチセンス分子、ＲＮＡアプタマー、並びに蛋白質に対するリボザイムが挙げられる。
【０１０２】
「Ｂ細胞表面マーカーアンタゴニスト」とはＢ細胞表面マーカーと結合すると、例えばＢ細胞により誘発される体液性応答を低下又は阻止することにより、哺乳動物でＢ細胞を破壊又は消失させ、及び／又は１種以上のＢ細胞機能を妨害する分子である。このアンタゴニストはこれを投与した哺乳動物でＢ細胞を消失（即ち循環Ｂ細胞濃度を低下）できることが好ましい。このような消失はＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣ、Ｂ細胞増殖の阻害、及び／又は（例えばアポトーシスによる）Ｂ細胞死の誘導等の各種メカニズムにより得られる。本発明の範囲に含まれるアンタゴニストとしてはＢ細胞マーカーと結合する抗体、合成又は天然配列ペプチド、融合蛋白質、及び小分子アンタゴニストが挙げられ、場合により細胞傷害性物質と共役又は融合している。例としては限定されないが、例えばＣＤ２０抗体、ＢＲ３抗体（例えばＷＯ０２２４９０９）、ＢＲ３−Ｆｃ等が挙げられる。
【０１０３】
ＣＤ２０抗体の例としては、「Ｃ２Ｂ８」（現名称「リツキシマブ」）（「Ｒ１ＴＵＸＡＮ（登録商標）」）（米国特許第５，７３６，１３７号）；ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．から市販されている「Ｙ２Ｂ８」ないし「イブリツモマブチウキセタン」（ＺＥＶＡＬＩＮ（登録商標））と呼称されるイットリウム［９０］標識２Ｂ８マウス抗体（米国特許第５，７３６，１３７号；１９９３年６月２２日にアクセション番号ＨＢ１１３８８でＡＴＣＣに登録された２Ｂ８）；場合により１３１Ｉで標識され、「１３１Ｉ−Ｂ１」ないし「ヨウ素Ｉ１３１トシツモマブ」抗体（ＢＥＸＸＡＲ（登録商標））としてＣｏｒｉｘａから市販されているマウスＩｇＧ２ａ「Ｂ１」別称「トシツモマブ」（米国特許第５，５９５，７２１号も参照）；マウスモノクローナル抗体「１Ｆ５」（Ｐｒｅｓｓら，Ｂｌｏｏｄ  ６９（２）：５８４−５９１（１９８７））及び「フレームワーク修復」又はヒト化１Ｆ５を含むその変異体（ＷＯ２００３／００２６０７，Ｌｅｕｎｇ，Ｓ．；ＡＴＣＣ寄託ＨＢ−９６４５０）；マウス２Ｈ７及びキメラ２Ｈ７抗体（米国特許第５，６７７，１８０号）；ヒト化２Ｈ７（例えばＷＯ０４／０５６３１２；ＵＳ２００６００２４２９５参照）；ＨＵＭＡＸ−ＣＤ２０（登録商標）抗体（Ｇｅｎｍａｂ，Ｄｅｎｍａｒｋ）；ＷＯ２００４／０３５６０７（Ｔｅｅｌｉｎｇら）に記載のヒトモノクローナル抗体；ＡＭＥ−１３３（登録商標）抗体（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ）；Ａ２０抗体又はその変異体（例えばキメラ又はヒト化Ａ２０抗体（夫々ｃＡ２０、ｈＡ２０））（ＵＳ  ２００３／０２１９４３３，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ）；並びにＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  Ｗｏｒｋｓｈｏｐ（Ｖａｌｅｎｔｉｎｅら，Ｉｎ：Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  ＩＩＩ（ＭｃＭｉｃｈａｅｌ，Ｅｄ．，ｐ．４４０，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８７））から入手可能なモノクローナル抗体Ｌ２７、Ｇ２８−２、９３−１  Ｂ３、Ｂ−Ｃ１又はＮＵ−Ｂ２が挙げられる。
【０１０４】
「疾患修飾性抗リウマチ薬」ないし「ＤＭＡＲＤ」の例としてはヒドロキシクロロキン、スルファサラジン、メトトレキセート、レフルノミド、エタネルセプト、インフリキシマブ（＋経口及び皮下メトトレキセート）、アザチオプリン、Ｄ−ペニシラミン、金剤（経口）、金剤（筋肉内）、ミノサイクリン、シクロスポリン、ブドウ球菌プロテインＡ免疫吸着剤とその塩及び誘導体等が挙げられる。
【０１０５】
「ＣＴＬＡ４」は活性化Ｔリンパ球で発現され、免疫応答のダウンレギュレーションに関与している。文献中のＣＴＬＡ４の他の呼称としては、細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４、細胞傷害性Ｔリンパ球関連プロテイン４、細胞分化抗原ＣＤ１５２、及び細胞傷害性Ｔリンパ球関連顆粒セリンプロテアーゼ４が挙げられる。
【０１０６】
他の各種用語については本明細書中に定義又は他の方法で説明する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０１０７】
ＣＤ４は大半の胸腺細胞と末梢Ｔ細胞のサブセットを含むＴリンパ球系列の細胞で主に発現される表面糖蛋白質である。リンパ球以外の所定の細胞でも低レベルのＣＤ４が発現されるが、このような広い細胞分布の機能的意味は不明である。成熟Ｔ細胞で、ＣＤ４は抗原提示細胞で発現されるＭＨＣクラスＩＩ分子との相互作用を介して同時認識機能を果たす。ＣＤ４＋Ｔ細胞は主にウイルス、細菌、真菌及び寄生生物感染に対するＴ依存性応答中にＴ及びＢ細胞機能を調節するヘルパーサブセットを構成する。
【０１０８】
自己免疫疾患の発病中、特に自己抗原に対する耐性の低下時に、ＣＤ４＋Ｔ細胞は炎症応答に寄与し、関節と組織の破壊をもたらす。これらのプロセスは例えば造血系列の炎症性細胞の動員、抗体、炎症性サイトカイン及びメディエーターの産生、更にキラー細胞の活性化により助長される。
【０１０９】
ＣＤ４＋Ｔ細胞はループスの病因に関係があるとされている。例えば、ＣＤ４＋Ｔ細胞は糸球体腎炎の部位に存在する。ＳＬＥ患者からのＣＤ４＋Ｔ細胞は抗原に対する反応が亢進し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏアポトーシス耐性であることが報告されている。ＳＬＥ患者にはＢ細胞による自己抗体産生を助長し得る自己抗原特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞（ＩＦＮ−γをを産生するエフェクター／メモリーＣＤ４＋細胞）が存在する。更に、ＭＨＣクラスＩＩ対立遺伝子とＳＬＥの危険の間には強い相関が認められる。
【０１１０】
ＣＤ４＋Ｔ細胞はＭＳの病因にも関係があるとされている。例えば、ＣＤ４＋ヘルパーＴ細胞はＭＳ及び対応する実験モデルである実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）の病因に関与しており、Ｔ細胞を消失させた実験動物はＥＡＥ発症性の低下を示す（ＵＳＰＮ４，６９５，４５９、発明者Ｓｔｅｉｎｍａｎら、発明の名称「Ｌｅｕ３／ＣＤ４表現型Ｔ細胞に媒介される自己免疫疾患の治療方法（Ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  ｔｒｅａｔｉｎｇ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ  ｔｈａｔ  ａｒｅ  ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｂｙ  Ｌｅｕ３／ＣＤ４  ｐｈｅｎｏｔｙｐｅ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ）」、Ｔｒａｕｇｏｔｔら（１９８３）“Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ：ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｓｕｂｓｅｔｓ  ｗｉｔｈｉｎ  ａｃｔｉｖｅ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｌｅｓｉｏｎｓ”Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２１９：３０８−３１０、Ａｒｎａｓｏｎら（１９６２）“Ｒｏｌｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｈｙｍｕｓ  ｉｎ  ｉｍｍｕｎｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒａｔｓ：Ｈ  Ｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｔｈｙｍｅｃｔｏｍｙ  ａｔ  ｂｉｒｔｈ  ｏｎ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｄｅｌａｙｅｄ（ｃｅｌｌｕｌａｒ）ｈｙｐｅｒｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｃｉｒｃｕｌａｔｉｎｇ  ｓｍａｌｌ  ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｅ”Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １１６：１７７−１８６、及びＧｏｎａｔａｓ  ａｎｄ  Ｈｏｗａｒｄ（１９７４）“Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｌｌｅｒｇｉｃ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ  ｓｅｖｅｒｅｌｙ  ｄｅｐｌｅｔｅｄ  ｏｆ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ”Ｓｃｉｅｎｃｅ  １８６：８３９−８４１参照）。ＭＳ病巣にはＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞が存在し、どちらも炎症性サイトカインを産生することが知られているが、病因へのそれらの相対寄与は分かっていない。ＭＳ患者の血液中ではミエリン特異性ＣＤ４＋細胞頻度の４倍の増加が認められる。ＭＳの治療に現在使用されている又は将来使用される可能性の高い数種の薬剤（例えば、Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標）（ナタリズマブ、α４インテグリン抗体）、ＣａｍＰａｔｈ（登録商標）（アレムツズマブ、ＣＤ５２抗体）、及びダクリズマブ（ＩＬ−２Ｒα抗体））はＴ細胞への作用も介して機能すると考えられている。更に、ＭＳの危険の増加はＭＨＣクラスＩＩ対立遺伝子（３．６倍）、及び程度は低いが、クラスＩ対立遺伝子（２倍）と相関している。
【０１１１】
１側面では、本発明は非消失性ＣＤ４抗体と、ループスを治療するために臨床使用又は実験使用されている別の化合物の併用剤を投与することによるＳＬＥとループス腎炎を含むループスの治療方法を提供する。本発明の別の側面は腎機能の改善及び／又は蛋白尿もしくは活性尿沈渣の低減をもたらす非消失性ＣＤ４抗体を投与することによる中期〜後期疾患を含むループス腎炎の治療方法を提供する。本発明の更に別の側面は、場合によりＭＳを治療するために臨床使用又は実験使用されている別の化合物と併用して非消失性ＣＤ４抗体を投与することによるＭＳの治療方法を提供する。本発明の更に別の側面は、自己免疫疾患を治療するために臨床使用又は実験使用されている別の化合物と一般に併用して非消失性ＣＤ４抗体を投与することによる移植レシピエント又は関節リウマチ、喘息、乾癬、炎症性腸疾患（例えばクローン病及び潰瘍性大腸炎）、及びシェーグレン症候群等の自己免疫疾患対象の治療方法を提供する。
【０１１２】
ＣＤ４抗体
消失性と非消失性の両者の多数のＣＤ４抗体が文献に記載されている。自己抗原を含む抗原に対する耐性を誘導するためのこのような抗体の使用も報告されている。例えばＵＳＰＮ４，６９５，４５９；ＵＳＰＮ６，０５６，９５６、発明者Ｃｏｂｂｏｌｄ  ａｎｄ  Ｗａｌｄｍａｎｎ、発明の名称「非消失性抗ＣＤ４モノクローナル抗体と耐性誘導（Ｎｏｎ−ｄｅｐｌｅｔｉｎｇ  ａｎｔｉ−ＣＤ４  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ）」；ＵＳＰＮ５，６９０，９３３、発明者Ｃｏｂｂｏｌｄ  ａｎｄ  Ｗａｌｄｍａｎｎ、発明の名称「耐性誘導用モノクローナル抗体（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｉｎｄｕｃｉｎｇ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）」；ヨーロッパ特許出願公開０２４０３４４、発明者Ｃｏｂｂｏｌｄら、発明の名称「モノクローナル抗体とその使用（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｕｓｅ）」；ＵＳＰＮ６，１３６，３１０、発明者Ｈａｎｎａら、発明の名称「ヒト治療用組換え抗ＣＤ４抗体（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉ−ＣＤ４  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｔｈｅｒａｐｙ）」；ＵＳＰＮ５，７５６，０９６、発明者Ｎｅｗｍａｎら、発明の名称「ヒト治療用組換え抗体（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｔｈｅｒａｐｙ）」；ＵＳＰＮ５，７５０，１０５、発明者Ｎｅｗｍａｎら、発明の名称「ヒト治療用組換え抗体（Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｔｈｅｒａｐｙ）」；ＵＳＰＮ４，３８１，２９５、発明者Ｋｕｎｇ  ａｎｄ  Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ、発明の名称「ヒトヘルパーＴ細胞に対するモノクローナル抗体及びその作製方法（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  ｈｕｍａｎ  ｈｅｌｐｅｒ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  ｐｒｅｐａｒｉｎｇ  ｓａｍｅ）」；Ｗａｌｄｍａｎｎ（１９８９）“Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔ−ｃｅｌｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅｓ  ｗｉｔｈ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”Ａｎｎ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ７：４０７−４４；及びＷｏｆｓｙ  ａｎｄ  Ｓｅａｍａｎ（１９８７）“Ｒｅｖｅｒｓａｌ  ｏｆ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｍｕｒｉｎｅ  ｌｕｐｕｓ  ｉｎ  ＮＺＢ／ＮＺＷ  Ｆ１  ｍｉｃｅ  ｂｙ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｔｏ  Ｌ３Ｔ４”  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １３８：３２４７−５３参照。特に、非消失性ＣＤ４抗体と、耐性誘導におけるその使用については各々言及により本明細書に組込む米国特許出願公開２００３／０１０８５１８、発明者Ｆｒｅｗｉｎら、発明の名称「ＴＲＸ１抗体とその使用（ＴＲＸ１  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｎｄ  ｕｓｅｓ  ｔｈｅｒｅｆｏｒ）」及び米国特許出願公開２００３／０２１９４０３、発明者Ｆｒｅｗｉｎら、発明の名称「霊長類を抗原に耐性にする組成物及び方法（Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  ｔｏｌｅｒｉｚｉｎｇ  ａ  ｐｒｉｍａｔｅ  ｔｏ  ａｎ  ａｎｔｉｇｅｎ）」に記載されている。
【０１１３】
前記方法で使用するのに適した典型的な非消失性ＣＤ４抗体としては、米国特許出願公開２００３／０１０８５１８、発明者Ｆｒｅｗｉｎら、発明の名称「ＴＲＸ１抗体とその使用（ＴＲＸ１  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｎｄ  ｕｓｅｓ  ｔｈｅｒｅｆｏｒ）」及び米国特許出願公開２００３／０２１９４０３、発明者Ｆｒｅｗｉｎら、発明の名称「霊長類を抗原に耐性にする組成物及び方法（Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  ｔｏｌｅｒｉｚｉｎｇ  ａ  ｐｒｉｍａｔｅ  ｔｏ  ａｎ  ａｎｔｉｇｅｎ）」に記載のＴＲＸ１抗体が挙げられる。これらの抗体はヒト抗体の改変定常領域と、ヒト抗体の軽鎖及び重鎖フレームワーク領域と、マウスモノクローナル抗体に由来する軽鎖及び重鎖ＣＤＲを含むヒト化抗体である。
【０１１４】
従って、１分類の態様では、非消失性ＣＤ４抗体は図１〜４のいずれかに示すようなＴＲＸ１抗体である。抗体は配列番号３に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号６に記載の重鎖アミノ酸配列、配列番号９に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１２に記載の重鎖アミノ酸配列、配列番号１５に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１８に記載の重鎖アミノ酸配列、又は配列番号２１に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号２４に記載の重鎖アミノ酸配列をもつことができる。関連分類の態様では、抗体は配列番号３に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号６に記載の重鎖アミノ酸配列、配列番号９に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１２に記載の重鎖アミノ酸配列、配列番号１５に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号１８に記載の重鎖アミノ酸配列、又は配列番号２１に記載の軽鎖アミノ酸配列と配列番号２４に記載の重鎖アミノ酸配列を含む抗体のＣＤ４結合フラグメントを含む。
【０１１５】
前記方法ではＴＲＸ１抗体に由来する１個以上のＣＤＲを含む抗体も有用である。従って、１分類の態様では、非消失性ＣＤ４抗体は図１Ａに示す軽鎖のＣＤＲ１（配列番号２５）、ＣＤＲ２（配列番号２６）、又は好ましくはＣＤＲ３（配列番号２７）を含む。抗体は場合により図１Ａに示す軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（配列番号２５〜２７）を含む。同様に、１分類の態様では、抗体は図１Ｄに示す重鎖のＣＤＲ１（配列番号２８）、ＣＤＲ２（配列番号２９）、又は好ましくはＣＤＲ３（配列番号３０）を含む。抗体は場合により図１Ｄに示す重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（配列番号２８〜３０）を含む。１分類の態様では、抗体は図１Ａに示す軽鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３と、図１Ｄに示す重鎖のＣＤＲ１、ＣＤＲ２、及びＣＤＲ３（配列番号２５〜３０）を含む。抗体は場合により図１Ａ、図２Ａ、図３Ａ、又は図４Ａに示す軽鎖のＦＲ１，ＦＲ２、及び／又はＦＲ３、及び／又は図１Ｄ、図２Ｄ、図３Ｄ、又は図４Ｄに示す重鎖のＦＲ１，ＦＲ２、ＦＲ３、及び／又はＦＲ４も含む。
【０１１６】
他の典型的な抗体としては限定されないが、ＴＲＸ１抗体と同一のエピトープと結合する抗体（例えば図１〜４のいずれかに示す抗体）が挙げられる。
【０１１７】
対象がヒトである場合には、抗体はヒト化抗体又はヒト抗体が好ましい。当然のことながら、非ヒト哺乳動物の治療には、例えば適切な種の哺乳動物からの免疫グロブリンに由来するフレームワーク配列と定常領域配列を組込むことにより、該当動物で使用するように抗体を適応させる。抗体は場合によりモノクローナル抗体、無傷の抗体、抗体フラグメント、及び／又は天然抗体である。
【０１１８】
抗体は場合により、補体活性化及び／又は抗体依存性細胞介在性細胞傷害作用を誘導する能力を低下するように、例えばヒトＩｇＧ１に比較してエフェクター機能を低下させる。例えば、抗体はＦｃ受容体との結合を低下（又は除去）することができる。同様に、抗体は非グリコシル化Ｆｃ部分をもつことができる。抗体は場合によりＦｃＲＮと結合することが可能な抗ＣＤ４変異体抗体でもよい。
【０１１９】
ループスの治療
１側面では、本発明は治療有効量の抗ＣＤ４非消失性抗体及び／又は第２の物質を投与することによる哺乳動物対象（例えばヒト対象）におけるループスの治療方法を提供する。対象を治療するループスは一般に全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、皮膚エリテマトーデス（ＣＬＥ）、又はループス腎炎であるが、腎外、脳炎、小児、非腎、円板状、又は脱毛症等の別の形態のループスでもよい。治療するループスは治療開始時に初期、中期又は後期段階の疾患とすることができる。ループス腎炎を治療する態様では、ループス腎炎はクラスＩ〜ＶＩのいずれか１種とすることができる。例えば、治療するループスはメサンギウム増殖性ループス腎炎（クラスＩＩ）又は膜性ループス腎炎（クラスＶ）とすることができる。一般に、ループスは蛋白尿の低減、活性尿沈渣の低減、及び腎機能の正常化又は安定化を達成する目的で治療する増殖性ループス腎炎（クラスＩＩＩ又はクラスＩＶ）である。例えば、（例えば下記実施例１に記載するようにディップスティック又は他の日常分析を使用して例えば２４時間尿蛋白測定により、当分野で定着しているように測定した場合に）蛋白尿を少なくとも２５％又は少なくとも５０％、更には少なくとも７５％又は少なくとも９０％低減することができ、あるいは蛋白尿を１ｇ／日未満又は５００ｍｇ／日未満まで低減することができる。別の例として、対象の尿蛋白対クレアチニン比を少なくとも２５％又は少なくとも５０％低減することができ、あるいは前記比を１未満又は０．５未満まで低減することができる。同様に、（例えば顕微鏡観察により、当分野で定着しているようにモニターした場合に）活性尿沈渣を少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、又は少なくとも９０％低減することができ、あるいは（赤血球１０個未満／高パワー電場及び赤血球円柱の不在、好ましくは赤血球５個未満／高パワー電場により判定されるように）治療開始後に不活性尿沈渣しか残存しないようにすることができる。１側面では、ループス腎炎を治療する場合には、対象は併用剤の投与開始後に蛋白尿の低減及び／又は活性尿沈渣の低減を示す。例えば、対象の尿蛋白濃度を併用剤の投与開始前の対象の尿蛋白濃度の７５％未満、５０％未満、２５％未満、又は１０％未満まで、あるいは１ｇ／日未満又は５００ｍｇ／日未満まで低減することができ、及び／又は活性尿沈渣を少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、又は少なくとも９０％低減することができ、あるいは治療開始後に不活性尿沈渣しか残存しないようにすることができる（例えば赤血球１０個未満、好ましくは５個未満／高パワー電場）。
【０１２０】
１つの一般分類の態様では、前記方法において、ループスを治療するために非消失性ＣＤ４抗体と少なくとも第２の化合物の併用剤の治療有効量を対象に投与する。非消失性ＣＤ４抗体は本明細書に記載する任意のものとすることができる。第２の化合物は一般にループスの治療に使用される化合物（例えば標準看護又は実験治療薬）である。典型的な第２の化合物としては限定されないが、細胞傷害性物質；免疫抑制剤；抗マラリア薬（例えばヒドロキシクロロキン、クロロキン、又はキナクリン）；化学療法剤；サイトカインアンタゴニスト又は抗体；増殖因子；ホルモン（例えばホルモン置換療法）；抗ホルモン療法；インテグリンアンタゴニスト又は抗体（例えばα４インテグリン抗体又はアンタゴニスト）；Ｂ細胞表面マーカーアンタゴニスト；Ｂ細胞表面マーカーに対する抗体（例えばＣＤ２０抗体、例えばリツキシマブ、別称Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））；ＣＤ５、ＣＤ２８、又はＣＤ４０抗体又は遮断薬；コルチコステロイド（例えば全身コルチコステロイド療法を含む関節注射による例えばメチルプレドニゾロン、プレドニゾン（例えば低用量プレドニゾン）、デキサメタゾン、又はグルココルチコイド）；ＤＭＡＲＤ；あるいは上記化合物の任意組み合わせ等が挙げられる。米国特許出願公開２００６／００２４２９５及び２００３／０２１９４０３も参照。
【０１２１】
１分類の態様では、第２の化合物は例えばシクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、及びＢＲ３−Ｆｃから選択される。シクロホスファミドは商標名Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標）でも知られている。ミコフェノール酸モフェチルはＣｅｌｌＣｅｐｔ（登録商標）、ＭＭＦ、又は（Ｅ）−６−（１，３−ジヒドロ−４−ヒドロキシ−６−メトキシ−７−メチル−３−オキソ−５−イソベンゾフラニル）−４−メチル−４−ヘキセン酸２−モルホリノエチルとも呼ばれる。ＣＴＬＡ４−Ｉｇはヒト細胞傷害性Ｔリンパ球関連抗原４（ＣＴＬＡ−４）の細胞外ドメインをヒト免疫グロブリンの改変Ｆｃ部分と結合したものである（例えばアバタセプト（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ製品Ｏｒｅｎｃｉａ（登録商標）又はＲｅｐｌｉＧｅｎ製品ＲＧ２０７７）。典型的なα４インテグリン抗体はナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））である。ＢＲ３−ＦｃはＢＡＦＦの可溶性アンタゴニストであり、ヒトＢＲ３（Ｂ細胞に存在するＢＡＦＦ受容体）の細胞外ドメインとヒトＩｇＧ１  Ｆｃを含む融合蛋白質である（例えばＶｕｇｍｅｙｓｔｅｒら（２００６）Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  １６８：４７６−４８９及びＫａｙａｇａｋｉら（２００２）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １０：５１５−５２４参照）。場合により第３、第４等の化合物も併用剤に加えてもよく、ほんの１例としてメチルプレドニゾロン及び／又はプレドニゾン等のコルチコステロイドをＣＤ４抗体及びシクロホスファミドと併用投与することができる。
【０１２２】
１態様では、対象は過去にループスを治療するために免疫抑制剤等の薬剤を投与したことがなく、及び／又は過去に抗ＣＤ４抗体を投与したことがない。別の態様では、対象は過去にループスを治療するために薬剤を投与したことがあり、及び／又は過去に抗ＣＤ４抗体を投与したことがある。別の態様では、対象は関節リウマチをもたない。更に別の態様では、対象は多発性硬化症をもたない。更に別の態様では、対象はループス以外の自己免疫疾患をもたない。本明細書における「自己免疫疾患」とは個体自身の組織もしくは臓器に起因し、これを攻撃する疾患もしくは障害又はその同時分離もしくは発現又はその結果として生じる病態である。１態様では、この用語は正常生体組織及び抗原に対して反応性の抗体がＢ細胞により産生されることにより誘発又は悪化する病態を意味する。他の態様では、自己免疫疾患とは自己抗原（例えば核抗原）からのエピトープに特異的な自己抗体の分泌を伴う疾患である。
【０１２３】
１態様では、併用剤の投与開始前に、対象は蛋白尿を示し、前記蛋白尿は投与後に改善される。例えば、投与開始前に、対象は＞５００ｍｇ／日、＞１０００ｍｇ／日、＞２０００ｍｇ／日、又は＞３５００ｍｇ／日の蛋白尿を示すことができ、投与開始後に、蛋白尿を少なくとも２５％、又は少なくとも５０％、又は少なくとも７５％、又は少なくとも９０％低減することができ、あるいは例えば２４時間尿蛋白測定により測定した場合に蛋白尿を１ｇ／日未満又は５００ｍｇ／日未満まで低減することができる。
【０１２４】
蛋白対クレアチニン比の低下をモニターすることもできる。例えばランダム尿サンプルの例えばスポット尿蛋白対クレアチニン比の測定により、当分野で定着しているように尿蛋白及びクレアチニン濃度を測定することができる。１態様では、併用剤の投与開始前に、対象は＞０．５、＞１、又は＞２の蛋白対クレアチニン比を示し、投与開始後に、蛋白対クレアチニン比を例えば１未満（例えば部分的な治療応答の場合）又は０．５未満（例えば完全応答の場合）まで低減することができる。投与開始後に、蛋白対クレアチニン比を投与前の値に比較して少なくとも２５％又は少なくとも５０％低減することができる。１態様では、併用剤の投与開始前に、対象は腎炎範囲の蛋白尿を示し、蛋白対クレアチニン比が３を上回り、投与開始後に蛋白対クレアチニン比は３未満まで低下し、又は場合により少なくとも２５％もしくは少なくとも５０％又は２未満もしくは１未満まで低下する。
【０１２５】
併用剤によるループス腎炎を含むループスの治療に対する応答は例えば補体レベル、自己抗体レベル、及び／又は総合疾患活性をモニターすることにより評価することもできる。例えば、補体レベル（例えばＣ３、Ｃ４、及びＣＨ５０）の正常化を治療の成功の指標とすることができる。同様に、投与開始後に、抗２本鎖ＤＮＡ抗体、ＡＮＡ、及び抗Ｃｌｑ等の自己抗体レベルを例えば少なくとも２５％、少なくとも５０％、又は少なくとも７５％低下させることができる。腎生検の改善も治療の成功の指標として観察することができる。
【０１２６】
場合により、併用剤の投与開始前に、対象はネフローゼ症候群を示す。ネフローゼ症候群の診断は当分野で定着しているように実施することができる。ネフローゼ症候群を診断するために使用することができる所定の徴候、症状、又は他の指標としては３．５ｇ／日を上回る２４時間尿蛋白、３を上回る蛋白対クレアチニン比、低アルブミン血症（血中アルブミン濃度の低下）、特に眼球、足、及び手の周囲の浮腫（腫脹）、及び／又は高コレステロール血症（血中コレステロール濃度の上昇）が挙げられる。本発明はネフローゼ症候群のこれらの徴候、症状、又は他の指標に限定されない。ネフローゼ症候群は場合により併用剤の投与により改善される。例えば、対象は場合により治療開始後に３．５ｇ／日未満まで、例えば３ｇ／日未満、２ｇ／日未満、１ｇ／日未満、更には０．５ｇ／日未満までの蛋白尿低減を示し、及び／又は治療開始後に３未満まで、例えば２未満、１未満、更には０．５未満までの蛋白対クレアチニン比の低下を示す。
【０１２７】
対象に併用剤を投与すると、例えば望ましくない副作用の低減という点で対象に多大な利点が得られる。例えば、非消失性ＣＤ４抗体との併用投与に必要な第２の化合物（例えばシクロホスファミド）の量は第２の化合物の単独投与により症状を改善するために必要な量よりも著しく減らすことができる。例えば、シクロホスファミドは重度の副作用を生じる可能性があるので、治療を達成するためにこの薬剤の使用量を減らすことは非常に望ましい。
【０１２８】
１側面では、前記方法は症状を緩和するために非消失性ＣＤ４抗体と第２の化合物を対象に投与する段階と、その後、寛解を維持するために（第２の化合物と併用せずに）非消失性ＣＤ４抗体の対象への投与を継続する段階を含む。例えば、症状を緩和するために非消失性ＣＤ４抗体とシクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、又はＣＴＬＡ４−Ｉｇの併用剤を対象に投与した後に、寛解を維持するために非消失性ＣＤ４抗体を単独投与する（即ちシクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、又はＣＴＬＡ４−Ｉｇと併用しない）。このような方法も第２の化合物への対象の暴露を最小限にすることにより副作用を減らすことができる。別の態様では、症状を緩和するために非消失性ＣＤ４抗体と第２の化合物を対象に投与した後に、第２の化合物又は非消失性ＣＤ４抗体以外の１種以上の他の化合物の投与を継続する。
【０１２９】
別の一般分類の態様は哺乳動物対象（例えばヒト）におけるループス腎炎の治療方法も提供する。前記方法では、治療有効量の非消失性ＣＤ４抗体を対象に投与する。抗体の投与開始後に、対象は投与開始前に対象が示した蛋白尿及び／又は活性尿沈渣レベルに比較して腎機能の改善、蛋白尿の低減及び／又は活性尿沈渣の低減を示す。例えば、蛋白尿を少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、又は少なくとも９０％低減することができ、あるいは蛋白尿を１ｇ／日未満又は５００ｍｇ／日未満まで低減することができ；尿蛋白対クレアチニン比を少なくとも２５％又は少なくとも５０％低減することができ、あるいは前記比を１未満又は０．５未満まで低減することができ；及び／又は活性尿沈渣を少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、又は少なくとも９０％低減することができ、あるいは投与開始後に不活性尿沈渣しか残存しないようにすることができる。非消失性ＣＤ４抗体は本明細書に記載する任意のものとすることができる。
【０１３０】
１態様では、対象は過去にループス腎炎を治療するために薬剤を投与したことがなく、及び／又は過去に抗ＣＤ４抗体を投与したことがない。別の態様では、対象は過去にループス腎炎を治療するために薬剤を投与したことがあり、及び／又は過去に抗ＣＤ４抗体を投与したことがある。別の態様では、本発明の非消失性抗ＣＤ４抗体はループス腎炎を治療するために対象に投与する唯一の医薬である。別の態様では、本発明の非消失性ＣＤ４抗体はループス腎炎を治療するために使用する医薬の１種である。別の態様では、対象は関節リウマチをもたない。更に別の態様では、対象は多発性硬化症をもたない。更に別の態様では、対象はループス及び／又はループス腎炎以外の自己免疫疾患をもたない。
【０１３１】
１分類の態様では、前記方法は本明細書に記載する任意のもの等の少なくとも第２の化合物を非消失性ＣＤ４抗体と併用投与する段階を含む。例えば、シクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、又はα４インテグリン抗体を対象に非消失性ＣＤ４抗体と併用投与することができる。場合により第３、第４等の化合物も併用剤に加え、例えば、メチルプレドニゾロン及び／又はプレドニゾン等のコルチコステロイドをＣＤ４抗体及びシクロホスファミドと併用投与することができる。
【０１３２】
１態様では、非消失性ＣＤ４抗体の投与開始前に、対象は蛋白尿を示し、前記蛋白尿は非消失性ＣＤ４抗体の投与開始後に低減する。例えば、投与開始前に、対象は＞５００ｍｇ／日、＞１０００ｍｇ／日、＞２０００ｍｇ／日、又は＞３５００ｍｇ／日の蛋白尿を示すことができ、投与開始後に、蛋白尿を少なくとも２５％、少なくとも５０％、少なくとも７５％、又は少なくとも９０％低減することができ、あるいは蛋白尿を１ｇ／日未満又は５００ｍｇ／日未満まで低減することができる。同様に、蛋白対クレアチニン比の低下をモニターすることもできる。１態様では、投与開始前に、対象は＞０．５、＞１、又は＞２の蛋白対クレアチニン比を示し、投与開始後に、蛋白対クレアチニン比を少なくとも２５％又は少なくとも５０％低減することができ、あるいは１未満又は０．５未満まで低減することができる。１態様では、併用剤の投与開始前に、対象は腎炎範囲の蛋白尿を示し、蛋白対クレアチニン比が３を上回り、投与開始後に蛋白対クレアチニン比は３未満まで低下し、又は場合により少なくとも２５％もしくは少なくとも５０％又は２未満もしくは１未満まで低下する。場合により、投与開始前に、対象はネフローゼ症候群を示す。ネフローゼ症候群は場合により投与により改善される。例えば、対象は場合により投与開始後に３．５ｇ／日未満まで、例えば３ｇ／日未満、２ｇ／日未満、１ｇ／日未満、更には１ｇ／日未満又は０．５ｇ／日未満までの蛋白尿の低減を示す。
【０１３３】
多発性硬化症の治療
多発性硬化症（ＭＳ）はヒト中枢神経系（ＣＮＳ）の炎症性脱髄性変性疾患である。これは世界中に広がる疾患であり、米国の患者数は約３００，０００人であり、若年成人の疾患であり、７０％〜８０％が２０〜４０代で発症する（Ａｎｄｅｒｓｏｎら，Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ３１（３）：３３３−６（１９９２）；Ｎｏｏｎａｎら，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ  ５８：１３６−８（２００２））。ＭＳは臨床経過、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャン診断、並びに生検及び検死材料の病理分析に診断される不均一な疾患である（Ｌｕｃｃｈｉｎｅｔｔｉら，Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌ  ４７：７０７−１７（２０００））。この疾患は脊髄、脳幹、脳神経、小脳、大脳、及び認知症候群等の障害の多数の可能な組み合わせとして発現する。特に２５年展望で考えると、大半のＭＳ患者の最終結果は進行性の身体障害である。ＭＳ患者の半数は発症から１５年以内に歩行に杖が必要になる。ＭＳは若年及び中年成人の神経性身体障害の主要な原因であり、過去十年間まで、有益な治療法は分かっていない。ＭＳは非特異的な臨床所見により診断が困難であるため、ＭＲＩスキャン、誘発電位、及び脳脊髄液（ＣＳＦ）検査から構成される数種の先進技術を含む高度に構造化された診断基準が開発されている。全診断基準は種々の時点で中枢白質に発生し、感染、血管障害、又は別の自己免疫疾患等の他の病因により説明されない散在性病巣の一般原理に依存する（ＭｃＤｏｎａｌｄら，Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌ  ５０：１２１−７（２００１））。ＭＳは再発寛解型ＭＳ（ＲＲＭＳ；発症時の症例の８０％〜８５％）、原発性進行性ＭＳ（ＰＰＭＳ；発症時１０％〜１５％）、進行性再発型ＭＳ（ＰＲＭＳ；発症時５％）；及び二次進行性ＭＳ（ＳＰＭＳ）の４つの疾患パターンがある（ＫｒｅｍｅｎｃｈｕｔｚｋｙらＢｒａｉｎ  １２２（Ｐｔ  １０）：１９４１−５０（１９９９）；Ｃｏｎｆａｖｒｅｕｘら，Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３４３（２０）：１４３０−８（２０００））。ＲＲＭＳ患者の５０％が１０年以内にＳＰＭＳを発症し、ＲＲＭＳ患者の９０％までが最終的にＳＰＭＳを発症すると推定される（Ｗｅｉｎｓｈｅｎｋｅｒら，Ｂｒａｉｎ  １１２（Ｐｔ  １）：１３３−４６（１９８９））。
【０１３４】
本発明は哺乳動物対象（例えばヒト対象）における多発性硬化症の治療方法を含む。１側面では、前記方法は治療有効量の非消失性ＣＤ４抗体を対象に投与する段階を含む。非消失性ＣＤ４抗体は本明細書に記載するこれらの抗体の任意のものとすることができる。別の側面では、前記方法は非消失性ＣＤ４抗体と少なくとも第２の化合物の併用剤の治療有効量を対象に投与する段階を含む。この場合も、非消失性ＣＤ４抗体は本明細書に記載するこれらの抗体の任意のものとすることができる。
【０１３５】
第２の化合物は一般にＭＳの治療に使用される化合物（例えば標準看護又は実験治療薬）である。典型的な第２の化合物としては限定されないが、細胞傷害性物質；免疫抑制剤（例えばシクロホスファミド）；Ｂ細胞表面マーカーアンタゴニスト；Ｂ細胞表面マーカーに対する抗体；ＣＤ２０抗体（例えばリツキシマブ、ＵＳ２００６００５１３４５参照）；ＣＤ５、ＣＤ２８、又はＣＤ４０抗体又は遮断薬；コルチコステロイド（例えばプレドニゾン）、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、α４インテグリン抗体又はアンタゴニスト（例えばナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標）））、ミコフェノール酸モフェチル、スタチン、ＬＦＡ−１又はＣＤ−１１ａ抗体又は遮断薬（米国特許出願公開２００５０２８１８１７、発明者Ｊａｒｄｉｅｕら、発明の名称「多発性硬化症の治療方法（Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｔｒｅａｔｉｎｇ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）」参照）、インターロイキン１２抗体、βインターフェロン（例えばインターフェロンβ−１ａ、例えばＡｖｏｎｅｘ（登録商標）又はＲｅｂｉｆ（登録商標）、又はインターフェロンβ−１ｂ、例えばＢｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標））、酢酸グラチラマー（Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標））、ＣＤ５２抗体（例えばアレムツズマブ（ＣａｍＰａｔｈ（登録商標）））、インターロイキン受容体抗体（例えばダクリズマブ（Ｚｅｎａｐａｘ（登録商標））、インターロイキン２受容体αサブユニットに対する抗体）等が挙げられる。
【０１３６】
１分類の態様では、前記方法は症状を緩和するために非消失性ＣＤ４抗体と第２の化合物を対象に投与する段階と、その後、寛解を維持するために（第２の化合物と併用せずに）非消失性ＣＤ４抗体の対象への投与を継続する段階を含む。例えば、非消失性ＣＤ４抗体と酢酸グラチラマーの併用剤を対象に投与した後に、寛解を維持するために非消失性ＣＤ４抗体を単独投与することができる。別の態様では、症状を緩和するために非消失性ＣＤ４抗体と第２の化合物を対象に投与した後に、第２の化合物又はＭＳを治療するために一般に使用される非消失性ＣＤ４抗体化合物以外の１種以上の化合物の投与を継続する。
【０１３７】
１態様では、対象は過去に多発性硬化症を治療するために免疫抑制剤等の薬剤を投与したことがなく、及び／又は過去に抗ＣＤ４抗体を投与したことがない。別の態様では、対象は過去に多発性硬化症を治療するために薬剤を投与したことがあり、及び／又は過去に抗ＣＤ４抗体を投与したことがある。
【０１３８】
一般に、対象は多発性硬化症の治療に適格であり、即ち対象はＭＳ対象である。本発明の趣旨では、このようなＭＳ対象は多発性硬化症の１種類以上の徴候、症状もしくは他の指標を示しているか、示したことがあるか、もしくは示す可能性が高い対象；多発性硬化症であると診断されたことがある対象（例えば新規に（「新規発症ＭＳ」であると）診断されるか、過去に新規再発もしくは増悪と診断されたことがあるか、過去に診断され、寛解中の対象等）；及び／又は多発性硬化症を発症する危険がある対象である。多発性硬化症の対象又はその危険のある対象は場合により血清、脳脊髄液（ＣＳＦ）及び／又はＭＳ病巣におけるＣＤ２０陽性Ｂ細胞濃度の上昇についてスクリーニングされた対象、及び／又は自己抗体の検出アッセイを使用してスクリーニングされ、定性、好ましくは定量評価される対象として同定することができる。多発性硬化症に関連する典型的なこのような自己抗体としては、抗ミエリン塩基性蛋白（ＭＢＰ）、抗ミエリン希突起膠細胞糖蛋白（ＭＯＧ）、抗ガングリオシド及び／又は抗ニューロフィラメント抗体か挙げられる。このような自己抗体は対象の血清、脳脊髄液（ＣＳＦ）及び／又はＭＳ病巣で検出することができる。本明細書において自己抗体又はＢ細胞濃度の「上昇」とはこのような自己抗体又はＢ細胞濃度がＭＳをもたない個体における濃度よりも有意に高いことを意味する。
【０１３９】
本発明で治療するＭＳとしては、原発性進行性多発性硬化症（ＰＰＭＳ）、再発寛解型多発性硬化症（ＲＲＭＳ）、二次進行性多発性硬化症（ＳＰＭＳ）、及び進行性再発型多発性硬化症（ＰＲＭＳ）が挙げられる。ＭＳは治療開始時に初期、中期又は後期段階の疾患とすることができる。ＭＳの治療に関して「治療有効量」なる用語は多発性硬化症を予防、改善、又は治療するために有効な抗体（又は抗体と少なくとも第２の化合物の併用剤）の量を意味する。このような有効量は一般にＭＳの徴候、症状又は他の指標の改善、例えば再発率の低下、身体障害の予防、脳ＭＲＩ病巣数及び／又は容積の低下、２５フィート歩行時間の改善、疾患進行までの時間の延長（例えばＥｘｐａｎｄｅｄ  Ｄｉｓａｂｉｌｉｔｙ  Ｓｔａｔｕｓ  Ｓｃａｌｅ，ＥＤＳＳ（総合障害度評価尺度））等をもたらす。１側面では、治療後の対象では脱髄が低減する。
【０１４０】
「原発性進行性多発性硬化症」ないし「ＰＰＭＳ」は再発と寛解の反復を全く伴わずにその発症から疾患が漸次進行することを特徴とする。疾患活動性の安定期間を伴う場合があり、数日間又は数週間の良好な期間と悪化期間を伴う場合がある。ＰＰＭＳは一般に３０代後半又は４０代前半に発症し、男性のほうが女性よりも発症し易く、初期疾患活動が脳ではなく脊髄のことが多いという点でＲＲＭＳ及びＳＰＭＳと相違する。ＰＰＭＳは脳に移動することが多いが、ＲＲＭＳ又はＳＰＭＳよりも脳領域を損傷する確率が低く、例えば、ＰＰＭＳ患者は認知障害を発症する確率が低い。ＰＰＭＳはＭＲＩスキャンで炎症性（ガドリニウム造影）病巣を示す確率が最も低いＭＳのサブタイプである。この疾患の原発性進行性形態は全多発性硬化症人口の１０〜１５％を占める。ＰＰＭＳはＭｃＤｏｎａｌｄら，Ａｎｎ  Ｎｅｕｒｏｌ  ５０：１２１−７（２００１）の基準に従って定義することができる。本発明で治療するＰＰＭＳ対象は通常ではＰＰＭＳの推定又は確定診断を受けた対象である。
【０１４１】
「再発寛解型多発性硬化症」ないし「ＲＲＭＳ」は新しい症状が出現し、古い症状が再来又は悪化する期間である再発（増悪とも言う）を特徴とする。再発後に寛解期間があり、この間に患者は再発中に獲得した障害から完全又は部分的に回復する。再発は数日間、数週間又は数カ月間続き、回復は緩慢で漸進的な場合もあれば、殆ど瞬時の場合もある。ＭＳ患者の大部分は先ずＲＲＭＳと診断される。これは一般には患者が２０代か３０代のときであるが、著しく早期又は後期の診断も知られている。このサブタイプのＭＳの女性は男性の２倍である。再発中には、中枢神経系（ＣＮＳ）の白質領域の神経繊維（ニューロン）の周囲の保護絶縁髄鞘であるミエリンが生体自身の免疫系による炎症応答で損傷を受けると考えられる。この結果、ＣＮＳのどの領域が損傷を受けるかによって大幅に相違する多様な神経症状が発生する。再発直後に、炎症応答は治まり、ＣＮＳにおける特殊なグリア細胞（希突起膠細胞と言う）が髄鞘再形成（軸索周囲の髄鞘ミエリンを修復するプロセス）を助長する。この髄鞘再形成が寛解に関与していると思われる。ＲＲＭＳ患者の約５０％は疾患発症から１０年以内にＳＰＭＳに転換する。３０年後にこの数値は９０％に上昇する。どの時点においても、この疾患の再発寛解型は全ＭＳ人口の５５％を占める。
【０１４２】
「二次進行性多発性硬化症」ないし「ＳＰＭＳ」は再発及び低度の寛解の反復とプラトーを伴うか又は伴わない臨床神経損傷の定常的進行を特徴とする。ＳＰＭＳの発症者は過去に２〜４０年間以上のＲＲＭＳ期間を経ている。再発と寛解の反復を伴う場合には、時と共に先細りになる。疾患の二次進行期の開始から身体障害が開始し、ＲＲＭＳ中よりも著しく速く進行するが、個体によっては進行がかなり遅い場合もある。１０年後に、ＲＲＭＳ患者の５０％がＳＰＭＳを発症する。２５〜３０年以内にこの数値は９０％に上昇する。ＳＰＭＳはＲＲＭＳよりも炎症性病巣形成レベルが低い傾向があるが、疾患の全体的な負担は進行し続ける。どの時点においても、ＳＰＭＳは全多発性硬化症人口の３０％を占める。
【０１４３】
「進行性再発型多発性硬化症」ないし「ＰＲＭＳ」は再発と寛解の反復を伴う臨床神経損傷の定常的進行を特徴とする。再発直後に有意回復が認められるが、次の再発までの間に症状は漸次悪化する。ＰＲＭＳは全多発性硬化症人口の５％を占める。ＰＲＭＳはＰＰＭＳの変形であると考える神経学者もいる。
【０１４４】
他の病態の治療
非消失性ＣＤ４抗体（非消失性ＣＤ４抗体と１種以上の他の化合物の併用剤を含む）はループス又は多発性硬化症以外の障害及び病態（例えばＣＤ４＋Ｔ細胞が関与する病態）の治療にも有用である。従って、本発明の１側面は哺乳動物対象（例えばヒト対象）における病態の治療方法を提供する。前記方法は非消失性ＣＤ４抗体と少なくとも第２の化合物の併用剤の治療有効量を対象に投与する段階を含む。１態様では、対象は組織移植レシピエントであり、治療する病態は移植拒絶反応又は移植片対宿主病である。前記併用剤で治療することができる他の病態としては限定されないが、関節リウマチ、喘息、乾癬、炎症性腸疾患（例えばクローン病又は潰瘍性大腸炎）、及びシェーグレン症候群等の自己免疫障害又は疾患が挙げられる。
【０１４５】
非消失性ＣＤ４抗体は本明細書に記載するこれらの抗体の任意のものとすることができる。第２の化合物は場合により病態を治療するために使用される化合物（例えば標準看護又は実験治療薬）である。典型的な第２の化合物としては限定されないが、細胞傷害性物質；免疫抑制剤（例えばシクロホスファミド）；Ｂ細胞表面マーカーアンタゴニスト；Ｂ細胞表面マーカーに対する抗体；ＣＤ２０抗体（例えばリツキシマブ、ＵＳ２００６００５１３４５参照）；ＣＤ５、ＣＤ２８、又はＣＤ４０抗体又は遮断薬；コルチコステロイド（例えばプレドニゾン）、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、α４インテグリン抗体又はアンタゴニスト（例えばナタリズマブ（Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標）））、ミコフェノール酸モフェチル、スタチン、ＬＦＡ−１又はＣＤ−１１ａ抗体又は遮断薬（米国特許出願公開２００５０２８１８１７、発明者Ｊａｒｄｉｅｕら、発明の名称「多発性硬化症の治療方法（Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｔｒｅａｔｉｎｇ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）」参照）、インターロイキン１２抗体、βインターフェロン（例えばインターフェロンβ−１ａ、例えばＡｖｏｎｅｘ（登録商標）又はＲｅｂｉｆ（登録商標）、又はインターフェロンβ−１ｂ、例えばＢｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標））、酢酸グラチラマー（Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標））、ＣＤ５２抗体（例えばアレムツズマブ（ＣａｍＰａｔｈ（登録商標）））、インターロイキン受容体抗体（例えばダクリズマブ（Ｚｅｎａｐａｘ（登録商標））、インターロイキン２受容体αサブユニットに対する抗体）等が挙げられる。その他の典型的な第２の化合物は本明細書に記載し、及び／又は当分野で公知である。場合により、第２の化合物はシクロホスファミド、ミコフェノール酸モフェチル、及びＣＴＬＡ４−Ｉｇから構成される群から選択される。
【０１４６】
１分類の態様では、前記方法は症状を緩和するために非消失性ＣＤ４抗体と第２の化合物を対象に投与する段階と、その後、寛解を維持するために（第２の化合物と併用せずに）非消失性ＣＤ４抗体の対象への投与を継続する段階を含む。別の態様では、症状を緩和するために非消失性ＣＤ４抗体と第２の化合物を対象に投与した後に、第２の化合物又は病態を治療するために一般に使用される１種以上の化合物の投与を継続する。
【０１４７】
１態様では、対象は病態を治療するために免疫抑制剤等の薬剤を過去に投与されていないか、及び／又は抗ＣＤ４抗体を過去に投与されていない。別の態様では、対象は病態を治療するために薬剤を過去に投与されているか、及び／又は抗ＣＤ４抗体を過去に投与されている。
【０１４８】
一般に、対象は病態の治療に適格である。本発明の趣旨では、このような対象は病態の１種類以上の徴候、症状もしくは他の指標を示しているか、示したことがあるか、もしくは示す可能性が高い対象；病態をもつと診断されたことがある対象（例えば新規に診断されるか、過去に新規再発もしくは増悪と診断されたことがあるか、過去に診断され、寛解中の対象等）；及び／又は病態を発症する危険がある対象である。例えば、移植拒絶反応又は移植片対宿主病の治療に適格な対象は組織移植を待機している対象でもよいし、このような移植を既に受けた対象でもよく、後者の場合には、移植拒絶反応又は移植片対宿主病の１種類以上の徴候、症状もしくは他の指標を示しているか、示したことがあるか、又は示す可能性が高い対象とすることができる。このような病態と各種自己免疫疾患及び障害の症状及び指標は当分野で周知である。
【０１４９】
抗体作製及び投与
本発明の方法はＣＤ４と結合する抗体を使用する。１側面では、抗ＣＤ４抗体は非消失性抗体である。従って、このような抗体の作製方法について以下に記載する。
【０１５０】
抗体の作製又はスクリーニングに使用するＣＤ４抗原は例えば可溶性ＣＤ４（例えばヒトＣＤ４）又は所望エピトープを含むその一部とすることができる。ヒトＣＤ４の核酸配列とアミノ酸配列を図２１に示す。代替又は追加方法として、その細胞表面にＣＤ４を発現する細胞を使用して抗体を作製又はスクリーニングすることもできる。抗体作製に有用な他のＣＤ４形態も当業者に想到されよう。
【０１５１】
以下、本発明により使用する抗体の典型的作製技術について記載する。非消失性ＣＤ４抗体（例えばＴＲＸ１抗体）の作製手順に関する情報を含めたその他の情報については、いずれも言及によりその開示内容全体を全目的で本明細書に組込む米国特許出願公開２００３／０１０８５１８、発明者Ｆｒｅｗｉｎら、発明の名称「ＴＲＸ１抗体とその使用（ＴＲＸ１  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｎｄ  ｕｓｅｓ  ｔｈｅｒｅｆｏｒ）」及び米国特許出願公開２００３／０２１９４０３、発明者Ｆｒｅｗｉｎら、発明の名称「霊長類を抗原に耐性にする組成物及び方法（Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  ｔｏｌｅｒｉｚｉｎｇ  ａ  ｐｒｉｍａｔｅ  ｔｏ  ａｎ  ａｎｔｉｇｅｎ）」参照。
【０１５２】
ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は該当抗原とアジュバントを複数回皮下又は腹腔内注射することにより動物で産生させることが好ましい。二官能性物質又は誘導体化剤（例えばマレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介する共役）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介する）、グルタルアルデヒド、琥珀酸無水物、ＳＯＣｌ２、又はＲ’Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（式中、ＲとＲ’は異なるアルキル基である））を使用し、免疫する種で免疫原性の蛋白質（例えばキーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリン、又は大豆トリプシンインヒビター）と該当抗原を共役させることが有用な場合もある。
【０１５３】
例えば蛋白質又はコンジュゲート（夫々ウサギ又はマウス）１００μｇ又は５μｇをフロイント完全アジュバント３容量に加え、溶液を複数部位に皮内注射することにより抗原、免疫原性コンジュゲート、又は誘導体で動物を免疫する。１カ月後に元の量の１／５〜１／１０のペプチド又はコンジュゲートをフロイント完全アジュバントに加え、皮下注射により動物の複数部位にブースター接種する。７〜１４日後に動物から採血し、血清の抗体力価をアッセイする。力価が一定になるまで動物にブースター接種する。同一抗原のコンジュゲートを動物にブースター接種することが好ましいが、別の蛋白質と共役させてもよいし、及び／又は別の架橋剤を使用してもよい。組換え細胞培養で融合蛋白質としてコンジュゲートを作製することもできる。更に、免疫応答を強化するためにミョウバン等の凝集剤を使用すると適切である。
【０１５４】
モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は実質的に均質抗体の集団から得られ、即ちモノクローナル抗体の産生中に生じる可能性のある変異体を除き、集団を構成する個々の抗体は同一であるか、及び／又は同一エピトープと結合し、前記のような変異体は一般に存在するとしても少量である。従って、修飾語としての「モノクローナル」は抗体が別個ないしポリクローナルな抗体の混合物ではないという特徴を示す。
【０１５５】
例えば、モノクローナル抗体はＫｏｈｌｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５（１９７５）により最初に記載されたハイブリドーマ法を使用して作製することもできるし、組換えＤＮＡ法（米国特許第４，８１６，５６７号）を使用して作製することもできる。
【０１５６】
ハイブリドーマ法では、マウス又は他の適当な宿主動物（例えばハムスター）を上記のように免疫し、免疫に使用した蛋白質と特異的に結合する抗体を産生するか又は産生することが可能なリンパ球を誘導する。あるいは、リンパ球をｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫してもよい。その後、ポリエチレングリコール等の適切な融合剤を使用してリンパ球を骨髄腫細胞と融合し、ハイブリドーマ細胞を形成する（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。
【０１５７】
こうして作製したハイブリドーマ細胞を適切な培地に播種し、増殖させ、培地には未融合親骨髄腫細胞の増殖又は生存を阻害する１種以上の物質を添加することが好ましい。例えば、親骨髄腫細胞が酵素ヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（ＨＧＰＲＴ又はＨＰＲＴ）を欠損する場合には、ＨＧＰＲＴ欠損細胞の増殖を阻害する物質であるヒポキサンチン、アミノプテリン、及びチミジンを一般にハイブリドーマの培地に添加する（ＨＡＴ培地）。
【０１５８】
ハイブリドーマの作製に有用な骨髄腫細胞は効率的に融合し、選択した抗体産生細胞による安定な高レベルの抗体産生を助長し、ＨＡＴ培地等の培地に感受性の細胞である。特に、骨髄腫細胞株の非限定的な例としては、ＳａＩｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆ．ＵＳＡから入手可能なＭＯＰＣ−２１及びＭＰＣ−１１マウス腫瘍や、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍｄ．ＵＳＡから入手可能なＳＰ−２又はＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞から誘導される細胞株等のマウス骨髄腫細胞株が挙げられる。ヒト骨髄腫及びマウス−ヒトヘテロ骨髄腫細胞株もヒトモノクローナル抗体作製用として記載されている（Ｋｏｚｂｏｒ，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３３：３００１（１９８４）；Ｂｒｏｄｅｕｒら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７））。
【０１５９】
ハイブリドーマ細胞が増殖中の培地を抗原に対するモノクローナル抗体の産生についてアッセイする。ハイブリドーマ細胞により産生されるモノクローナル抗体の結合特異性は免疫沈降法又はｉｎ  ｖｉｔｒｏ結合アッセイ（例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）又は酵素免疫法（ＥＬＩＳＡ））により測定することができる。モノクローナル抗体の結合親和性は例えばＭｕｎｓｏｎら，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．，１０７：２２０（１９８０）のスキャッチャードアッセイにより測定することができる。
【０１６０】
所望特異性、親和性、及び／又は活性の抗体を産生するハイブリドーマ細胞の同定後、クローンを限界希釈法によりサブクローニングし、標準方法により増殖させる（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。この目的に適した培地としては、例えば、Ｄ−ＭＥＭ又はＲＰＭＩ−１６４０培地が挙げられる。更に、ハイブリドーマ細胞を動物体内で腹水腫瘍としてｉｎ  ｖｉｖｏ増殖させてもよい。
【０１６１】
サブクローンにより分泌されたモノクローナル抗体は例えばプロテインＡ−Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ（登録商標）架橋アガロース、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析、又はアフィニティークロマトグラフィー等の従来の免疫グロブリン精製法によりは培地、腹水、又は血清から分離すると適切である。
【０１６２】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは（例えばマウス抗体の重鎖と軽鎖をコードする遺伝子と特異的に結合することが可能なオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）従来方法を使用して容易に単離及び配列決定される。ハイブリドーマ細胞はこのようなＤＮＡの有用なソースとして利用できる。単離後、ＤＮＡを発現ベクターに配置した後に、大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、又は免疫グロブリン蛋白質を産生しない骨髄腫細胞等の宿主細胞にトランスフェクトし、組換え宿主細胞でモノクローナル抗体を合成する。抗体をコードするＤＮＡの細菌における組換え発現に関する研究論文としては、Ｓｋｅｒｒａら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，５：２５６−２６２（１９９３）とＰｌｕｃｋｔｈｕｎ，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．，１３０：１５１−１８８（１９９２）が挙げられる。
【０１６３】
別の態様では、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，Ｎａｔｕｒｅ，３４８：５５２−５５４（１９９０）に記載の技術を使用して作製した抗体ファージライブラリーから抗体又は抗体フラグメントを単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）及びＭａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２２２：５８１−５９７（１９９１）は夫々ファージライブラリーを使用したマウス及びヒト抗体の単離を記載している。その後に刊行された文献は、チェーンシャフリング法（Ｍａｒｋｓら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３（１９９２））や、非常に大きなファージライブラリーを構築するためのストラテジーとして感染とｉｎ  ｖｉｖｏ組換えの併用（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．，２１：２２６５−２２６６（１９９３））による高親和性（ｎＭ範囲）ヒト抗体の作製を記載している。従って、これらの技術はモノクローナル抗体の単離用としての従来のモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術の実現可能な代替方法である。
【０１６４】
例えば、相同マウス配列の代わりにヒト重鎖及び軽鎖定常領域をコードする配列で置換する（米国特許第４，８１６，５６７号；Ｍｏｒｒｉｓｏｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８１：６８５１（１９８４））か、又は免疫グロブリンコーディング配列と非免疫グロブリンポリペプチドのコーディング配列の全部もしくは一部を共有結合することにより、ＤＮＡを改変することもできる。
【０１６５】
一般に、抗体の定常領域又は抗体の１個の抗原結合部位の可変領域をこのような非免疫グロブリンポリペプチドで置換し、抗原に対する特異性をもつ１個の抗原結合部位と、別の抗原に対する特異性をもつ別の抗原結合部位を含むキメラ２価抗体を作製する。
【０１６６】
ヒト化抗体
非ヒト抗体のヒト化方法は文献に記載されている。ヒト化抗体は非ヒト由来の１個以上のアミノ酸残基を導入することが好ましい。これらの非ヒトアミノ酸残基は一般に「移入」可変領域に由来することから「移入」残基と呼ばれることが多い。ヒト化はヒト抗体の対応する配列を超可変領域配列で置換することにより、基本的にＷｉｎｔｅｒら（Ｊｏｎｅｓら，Ｎａｔｕｒｅ，３２１：５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３３２：３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２３９：１５３４−１５３６（１９８８））の方法に従って実施することができる。従って、このような「ヒト化」抗体は無傷のヒト可変領域よりも実質的に小さい領域を非ヒト種に由来する対応する配列で置換したキメラ抗体（米国特許第４，８１６，５６７号）である。実際に、ヒト化抗体は一般に所定の超可変領域残基と場合により所定のＦＲ残基を齧歯類抗体の類似部位からの残基で置換したヒト抗体である。
【０１６７】
ヒト化抗体の作製に使用する軽鎖及び重鎖両者のヒト可変領域の選択は抗原性を低減するために非常に重要である。所謂「ベストフィット」法に従い、齧歯類抗体の可変領域の配列を既知ヒト可変領域配列の完全ライブラリーに対してスクリーニングする。その後、齧歯類の配列に最も近いヒト配列をヒト化抗体のヒトフレームワーク領域（ＦＲ）として許容する（Ｓｉｍｓら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２２９６（１９９３）；Ｃｈｏｔｈｉａら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１９６：９０１（１９８７））。別の方法では、軽鎖又は重鎖可変領域の特定サブグループの全ヒト抗体のコンセンサス配列に由来する特定フレームワーク領域を使用する。同一フレームワークを数種の異なるヒト化抗体に使用してもよい（Ｃａｒｔｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５（１９９２）；Ｐｒｅｓｔａら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５１：２６２３（１９９３））。
【０１６８】
抗原に対する高い親和性と他の好ましい生物学的性質を維持しながら抗体をヒト化することが更に重要である。この目的を達成するためには、１方法によると、親配列とヒト化配列の三次元モデルを使用する親配列と各種概念上のヒト化作製物の分析法によりヒト化抗体を作製する。三次元免疫グロブリンモデルは広く入手可能であり、当業者に周知である。選択された候補免疫グロブリン配列の推定三次元立体構造を図解及び表示するコンピュータープログラムが入手可能である。これらの表示を検討すると、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の推定役割を分析することができ、即ち候補免疫グロブリンのその抗原との結合性に影響する残基を分析することができる。こうして、ターゲット抗原に対する親和性の増加等の所望抗体特性が達成されるように、レシピエント及び移入配列からＦＲ残基を選択し、組み合わせる。一般に、抗原結合への影響に直接且つ最も実質的に関与しているのは超可変領域残基である。
【０１６９】
ヒト抗体
ヒト化の代替方法として、ヒト抗体を作製することができる。例えば、免疫後に内在免疫グロブリン産生の不在下でヒト抗体の完全なレパートリーを産生することが可能なトランスジェニック動物（例えばマウス）を作製することが今日では可能である。例えば、キメラ及び生殖細胞系突然変異体マウスの抗体重鎖結合領域（ＪＨ）遺伝子のホモ欠失の結果、内在抗体産生の完全な阻害を生じることが記載されている。ヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子アレイをこのような生殖細胞系突然変異体マウスに導入すると、抗原攻撃後にヒト抗体が産生されよう。例えばＪａｋｏｂｏｖｉｔｓら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら，Ｎａｔｕｒｅ，３６２：２５５−２５８（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｅ，７：３３（１９９３）；並びに米国特許第５，５９１，６６９号、５，５８９，３６９号及び５，５４５，８０７号参照。
【０１７０】
あるいは、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３（１９９０））を使用して非免疫ドナーに由来する免疫グロブリン可変（Ｖ）領域遺伝子レパートリーからヒト抗体及び抗体フラグメントをｉｎ  ｖｉｔｒｏで作製することもできる。この技術によると、抗体Ｖ領域遺伝子をＭ１３やｆｄ等の線状バクテリオファージの大小いずれかのコート蛋白質遺伝子にクローニングし、ファージ粒子の表面に機能的抗体フラグメントを提示させる。線状粒子はファージゲノムの１本鎖ＤＮＡコピーを含むので、抗体の機能的性質に基づいて選択すると、これらの性質を示す抗体をコードする遺伝子も選択される。従って、ファージはＢ細胞の性質にある程度類似している。ファージディスプレイは各種フォーマットで実施することができ、詳細については、例えばＪｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．ａｎｄ  Ｃｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３：５６４−５７１（１９９３）を参照されたい。ファージディスプレイには数種のＶ遺伝子セグメントソースを使用することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８（１９９１）は免疫したマウスの脾臓に由来するＶ遺伝子の小さいランダムコンビナトリアルライブラリーから多様な抗オキサゾロン抗体を単離した。基本的にＭａｒｋｓら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７（１９９１）、又はＧｒｉｆｆｉｔｈら，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５−７３４（１９９３）に記載の技術に従い、非免疫ヒトドナーに由来するＶ遺伝子のレパートリーを構築し、（自己抗原を含む）多様な抗原に対する抗体を単離することができる。米国特許第５，５６５，３３２号及び５，５７３，９０５号も参照。
【０１７１】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏ活性化Ｂ細胞によりヒト抗体を作製することもできる（米国特許第５，５６７，６１０号及び５，２２９，２７５号参照）。
【０１７２】
抗体フラグメント
抗体フラグメントの各種作製技術が開発されている。従来、これらのフラグメントは無傷の抗体の蛋白分解消化により誘導されていた（例えばＭｏｒｉｍｏｔｏら，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１１７（１９９２）及びＢｒｅｎｎａｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）参照）。しかし、現在では組換え宿主細胞によりこれらのフラグメントを直接作製することができる。例えば、上記抗体ファージライブラリーから抗体フラグメントを単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントを大腸菌から直接回収し、化学的にカップリングし、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを形成することができる（Ｃａｒｔｅｒら，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７（１９９２））。別のアプローチによると、組換え宿主細胞培養物からＦ（ａｂ’）２フラグメントを直接単離することができる。他の抗体フラグメント作製技術も当業者に自明である。他の態様では、選択抗体は１本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ１９９３／１６１８５並びに米国特許第５，５７１，８９４号及び５，５８７，４５８号参照。抗体フラグメントは例えば米国特許第５，６４１，８７０号に記載されているような「直鎖状抗体」でもよい。このような直鎖状抗体フラグメントは単一特異性でも二重特異性でもよい。
【０１７３】
二重特異性抗体
二重特異性抗体は少なくとも２個の異なるエピトープに対して結合特異性をもつ抗体である。典型的な二重特異性抗体はＣＤ４抗原の２個の異なるエピトープと結合することができる。他のこのような抗体はＣＤ４と結合すると共に更に第２のＴ細胞表面マーカーと結合することができる。薬剤又は細胞傷害性物質をＴ細胞に局在させるために二重特異性抗体を使用することもでき、これらの抗体はＣＤ４結合アームに加え、薬剤又は細胞傷害性物質と結合するアームをもつ。二重特異性抗体は全長抗体又は抗体フラグメントとして作製することができる（例えばＦ（ａｂ’）２二重特異性抗体）。
【０１７４】
二重特異性抗体の作製方法は当分野で公知である。全長二重特異性抗体の従来の作製方法は各鎖が異なる特異性をもつ免疫グロブリン重鎖−軽鎖対２対の同時発現に基づいている（Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎら，Ｎａｔｕｒｅ，３０５：５３７−５３９（１９８３））。免疫グロブリン重鎖及び軽鎖の組み合わせはランダムであるため、これらのハイブリドーマ（カドローマ）は１０個の異なる抗体分子の混合物を産生するが、このうちで正しい二重特異性構造をもつのは１分子のみである。正しい分子の精製は通常ではアフィニティークロマトグラフィー段階により実施され、かなり煩雑であり、生成物収率は低い。同様の方法がＷＯ１９９３／０８８２９、及びＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら，ＥＭＢＯ  Ｊ．，１０：３６５５−３６５９（１９９１）に開示されている。
【０１７５】
別のアプローチによると、所望結合特異性（抗体抗原結合部位）をもつ抗体可変領域を免疫グロブリン定常領域配列と融合する。ヒンジ、ＣＨ２、及びＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常領域と融合することが好ましい。１つのアプローチでは、軽鎖結合に必要な部位を含む第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）を融合体の少なくとも１個に加える。免疫グロブリン重鎖融合体と、所望により免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡを別々の発現ベクターに挿入し、適切な宿主生物に同時にトランスフェクトする。こうすると、構築に使用する３本のポリペプチド鎖の比が等しくない場合に最適収率が得られる態様で３個のポリペプチドフラグメントの相互比を調節する融通性が増す。他方、少なくとも２本のポリペプチド鎖を等しい比で発現させて高収率が得られる場合や、比に特に意味がない場合には、２本又は全３本のポリペプチド鎖をコードする配列を１個の発現ベクターに挿入することが可能である。
【０１７６】
このアプローチの１態様では、二重特異性抗体は一方のアームに配置された第１の結合特異性をもつハイブリッド免疫グロブリン重鎖と、他方のアームに配置された（第２の結合特異性を提供する）ハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対から構成される。この対称構造では二重特異性分子の半分にしか免疫グロブリン軽鎖が存在しないので分離し易くなり、望ましくない免疫グロブリン鎖の組み合わせから望ましい二重特異性化合物を分離し易くなることが判明した。このアプローチはＷＯ１９９４／０４６９０に開示されている。二重特異性抗体作製の更に詳細については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ，１２１：２１０（１９８６）参照。
【０１７７】
米国特許第５，７３１，１６８号に記載の別のアプローチによると、組換え細胞培養から回収されるヘテロダイマーの百分率を最大にするように１対の抗体分子間の界面を改変することができる。このような界面の１例は抗体定常領域のＣＨ３領域の少なくとも一部を含む。この方法では、第１の抗体分子の界面からの１本以上の小さいアミノ酸側鎖をより大きい側鎖（例えばチロシン又はトリプトファン）で置換する。大きいアミノ酸側鎖をより小さい側鎖（例えばアラニン又はスレオニン）で置換することにより第２の抗体分子の界面に大きい側鎖と同一又は同等寸法の補償「キャビティ」を形成する。こうすると、ホモダイマー等の他の望ましくない終産物よりもヘテロダイマーの収率を増加するメカニズムが得られる。
【０１７８】
二重特異性抗体としては架橋又は「ヘテロコンジュゲート」抗体が挙げられる。例えば、ヘテロコンジュゲートの抗体の一方をアビジンと結合し、他方をビオチンと結合することができる。このような抗体は例えば免疫系細胞を望ましくない細胞にターゲティングする目的（米国特許第４，６７６，９８０号）や、ＨＴＶ感染の治療用（ＷＯ１９９１／００３６０、ＷＯ１９９２／２００３７３、及びＥＰ０３０８９）として提案されている。適当な任意架橋法を使用してヘテロコンジュゲート抗体を作製することができる。適切な架橋剤は多数の架橋技術と共に当分野で周知であり、例えば米国特許第４，６７６，９８０号に開示されている。
【０１７９】
抗体フラグメントから二重特異性抗体を作製する技術も文献に記載されている。例えば、化学結合を使用して二重特異性抗体を作製することができる。Ｂｒｅｎｎａｎら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１（１９８５）は無傷の抗体を蛋白分解してＦ（ａｂ’）２フラグメントを作製する方法を記載している。これらのフラグメントをジチオール錯化剤亜ヒ酸ナトリウムの存在下で還元し、ビシナルジチオールを安定化させ、分子間ジスルフィド形成を防止する。次に、作製されたＦａｂ’フラグメントをチオニトロ安息香酸（ＴＮＢ）誘導体に変換する。次にメルカプトエチルアミンで還元することによりＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体の１個をＦａｂ’−チオールに再変換し、等モル量の他のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合し、二重特異性抗体を形成する。作製された二重特異性抗体は酵素の選択的固定化剤として使用することができる。
【０１８０】
組換え細胞培養から二重特異性抗体フラグメントを直接作製及び単離するための各種技術も記載されている。例えば、ロイシンジッパーを使用して二重特異性抗体が作製されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１４８（５）：１５４７−１５５３（１９９２）。Ｆｏｓ及びＪｕｎ蛋白質に由来するロイシンジッパーペプチドを遺伝子融合により２種の異なる抗体のＦａｂ’部分と結合している。抗体ホモダイマーをヒンジ領域で還元し、モノマーを形成した後、再酸化し、抗体ヘテロダイマーを形成している。この方法は抗体ホモダイマーの作製にも利用することができる。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：６４４４−６４４８（１９９３）により記載されている「ダイアボディ」技術は二重特異性抗体フラグメントの代替作製メカニズムを提供している。フラグメントは同一鎖上の２領域を対合させるには短か過ぎるリンカーにより軽鎖可変領域（ＶＬ）と結合した重鎖可変領域（ＶＨ）を含む。従って、１個のフラグメントのＶＨ領域とＶＬ領域を別のフラグメントの相補的なＶＬ領域とＶＨ領域に対合させることにより、２個の抗原結合部位を形成する。１本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーの使用により二重特異性抗体フラグメントを作製する別のストラテジーも報告されている。Ｇｒｕｂｅｒら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１５２：５３６８（１９９４）参照。
【０１８１】
３価以上の抗体も考えられる。例えば、三重特異性抗体を作製することができる。Ｔｕｔｔら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
【０１８２】
抗体のコンジュゲート及び他の修飾物
本発明の方法で使用する抗体又は本発明の製品に含まれる抗体は場合により例えばＷＯ２００４／０３２８２８及び米国特許出願公開２００６／００２４２９５に記載されているように薬剤と共役させる。本発明の抗体はプロドラッグ（例えばペプチド系化学療法剤、ＷＯ１９８１／０１１４５参照）を活性な抗癌薬に変換するプロドラッグ活性化酵素と共役させてもよい。例えば、ＷＯ１９８８／０７３７８、米国特許第４，９７５，２７８号、及び米国特許出願公開２００６／００２４２９５参照。
【０１８３】
本発明では抗体の他の修飾物も想定される。例えば、抗体を各種非蛋白性ポリマーの１種（例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、ポリプロピレングリコール、ポリオキシアルキレン、又はポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールのコポリマー）と結合してもよい。
【０１８４】
本明細書に開示する抗体はリポソームとして製剤化してもよい。抗体を収容するリポソームはＥｐｓｔｅｉｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８（１９８５）；Ｈｗａｎｇら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４０３０（１９８０）；米国特許第４，４８５，０４５号及び４，５４４，５４５号；並びにＷＯ１９９７／３８７３１、公開日１９９７年１０月２３日に記載されているような当分野で公知の方法により作製される。米国特許第５，０１３，５５６号には長時間循環型リポソームが開示されている。
【０１８５】
特に有用なリポソームはホスファチジルコリン、コレステロール及びＰＥＧ修飾ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＰＥ）を含有する脂質組成物を使用して逆相蒸発法により作製することができる。規定細孔寸法のフィルターからリポソームを押出し、所望直径のリポソームを得る。ジスルフィド交換反応によりＭａｒｔｉｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５７：２８６−２８８（１９８２）に記載されているように本発明の抗体のＦａｂ’フラグメントをリポソームと共役させることができる。場合により化学療法剤をリポソーム内に収容する。Ｇａｂｉｚｏｎら，Ｊ．Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｉｓｔ．８１（１９）１４８４（１９８９）参照。
【０１８６】
本明細書に記載する蛋白質又はペプチド抗体のアミノ酸配列改変物も想定される。例えば、抗体の結合親和性及び／又は他の生物学的性質を改善することが望ましい場合がある。適切なヌクレオチド変異を抗体核酸に導入するか又はペプチド合成により抗体のアミノ酸配列変異体を作製する。このような改変としては、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基の欠失、及び／又は挿入及び／又は置換が挙げられる。最終構築物が所望特性をもつという条件で、最終構築物に到達するために欠失、挿入、及び置換の任意組み合わせを行う。アミノ酸変異により、抗体の翻訳後プロセスを改変することもできる（例えばグリコシル化部位数又は位置の改変）。
【０１８７】
突然変異誘発に有用な位置である抗体の所定残基又は領域の有用な同定方法の１つはＣｕｎｎｉｎｇｈａｍ  ａｎｄ  Ｗｅｌｌｓ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５（１９８９）に記載されているように「アラニンスキャニング突然変異誘発法」と呼ばれる。この方法では、残基又はターゲット残基群（例えばａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、及びｇｌｕ等の荷電残基）を同定し、アミノ酸と抗原の相互作用を変化させるように中性又は負荷電アミノ酸（アラニン又はポリアラニンが最も好ましい）で置換する。次に、置換部位に他の変異体を導入することにより、置換に対して機能的感受性を示すこれらのアミノ酸位置を精緻化する。従って、アミノ酸配列変異の導入部位は予め決定しておくが、突然変異自体の種類は予め決定する必要がない。例えば、所与部位の突然変異の性能を分析するためには、ターゲットコドン又は領域でａｌａスキャニング又はランダム突然変異誘発を実施し、発現した抗体変異体を所望活性についてスクリーニングする。
【０１８８】
アミノ酸配列挿入としては、残基１個から１００個以上の残基を含むポリペプチドまでの長さにわたるアミノ及び／又はカルボキシル末端融合と、１個以上のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニン残基をもつ抗体又は細胞傷害性ポリペプチドと融合した抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変異体としては、酵素又は抗体の血清半減期を延長するポリペプチドを抗体のＮ又はＣ末端に融合した融合体が挙げられる。
【０１８９】
別の型の変異体はアミノ酸置換変異体である。これらの変異体は抗体分子の少なくとも１個のアミノ酸残基が別の残基で置換されている。抗体の置換突然変異誘発に最も有用な部位としては超可変領域が挙げられるが、ＦＲ改変も考えられる。保存置換を表１の「保存置換」の欄に示す。このような置換の結果として生物活性が変化する場合には、表１の「典型的置換」の欄に示す変異や、アミノ酸分類を参照して以下に記載するようなより実質的な変異を導入し、産物をスクリーニングすればよい。
【０１９０】
【表１】
2009530290.tif 000002
【０１９１】
抗体の生物学的性質の実質的改変は（ａ）置換の領域におけるポリペプチド主鎖の構造（例えばシート又は螺旋構造）、（ｂ）ターゲット部位における分子の電荷もしくは疎水性、又は（ｃ）側鎖の嵩の維持に及ぼす効果が有意に相違する置換を選択することにより実施される。アミノ酸は（Ａ．Ｌ．Ｌｅｈｎｉｎｇｅｒ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ｓｅｃｏｎｄ  ｅｄ．，ｐｐ．７３−７５，Ｗｏｒｔｈ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９７５）に記載されているように）その側鎖の性質の類似性に従って以下のように分類することができる：（１）非極性：Ａｌａ（Ａ）、Ｖａｌ（Ｖ）、Ｌｅｕ（Ｌ）、Ｉｌｅ（Ｉ）、Ｐｒｏ（Ｐ）、Ｐｈｅ（Ｆ）、Ｔｒｐ（Ｗ）、Ｍｅｔ（Ｍ）；（２）非荷電極性：Ｇｌｙ（Ｇ）、Ｓｅｒ（Ｓ）、Ｔｈｒ（Ｔ）、Ｃｙｓ（Ｃ）、Ｔｙｒ（Ｙ）、Ａｓｎ（Ｎ）、Ｇｌｎ（Ｑ）；（３）酸性：Ａｓｐ（Ｄ）、Ｇｌｕ（Ｅ）；及び（４）塩基性：Ｌｙｓ（Ｋ）、Ａｒｇ（Ｒ）、Ｈｉｓ（Ｈ）。
【０１９２】
あるいは、共通の側鎖性質に基づいて天然残基を以下のように分類することもできる：（１）疎水性：ノルロイシン、Ｍｅｔ、Ａｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ、Ｉｌｅ；（２）中性親水性：Ｃｙｓ、Ｓｅｒ、Ｔｈｒ、Ａｓｎ、Ｇｌｎ；（３）酸性：Ａｓｐ、Ｇｌｕ；（４）塩基性：Ｈｉｓ、Ｌｙｓ、Ａｒｇ；（５）鎖の方向に影響を与える残基：Ｇｌｙ、Ｐｒｏ；及び（６）芳香族：Ｔｒｐ、Ｔｙｒ、Ｐｈｅ。
【０１９３】
非保存置換はこれらの分類の１種のあるメンバーを別の分類のメンバーと交換し、保存置換はこれらの分類の１種のあるメンバーを同一分類内のメンバーと交換する。本明細書に記載するＣＤ４抗体のいずれかのアミノ酸残基のうちの１アミノ酸又は低百分率のアミノ酸（一般に５％未満、より一般には４％、２％又は１％未満）を改変、付加又は欠失させる非保存又は保存置換、欠失、又は付加を含む非消失性ＣＤ４抗体も本発明の方法で使用するのに適している。
【０１９４】
分子の酸化安定性を改善し、異常架橋を防ぐために、抗体の適正なコンフォーメーションの維持に関与しない任意システイン残基も一般にセリンで置換してもよい。逆に、（特に抗体がＦｖフラグメント等の抗体フラグメントである場合には）その安定性を改善するために、システイン残基を抗体に付加してもよい。
【０１９５】
ある種の置換変異体は親抗体の１個以上の超可変領域残基を置換している。一般に、その後の開発のために選択する変異体は変異体の作製に使用した元の親抗体に比較して生物学的性質が改善している。このような置換変異体を作製するための簡便な方法はファージディスプレイを使用する親和性成熟法である。要約すると、数個の超可変領域部位（例えば６〜７部位）を突然変異させ、各部位に可能な全アミノ酸置換を作製する。こうして作製した抗体変異体を各粒子内にパッケージングしたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物との融合体として線状ファージ粒子から１価で提示させる。次に、ファージ提示変異体を本明細書に開示するようにその生物活性（例えば結合親和性）についてスクリーニングする。改変の候補超可変領域部位を同定するためには、アラニンスキャニング突然変異誘発法を実施し、抗原結合に有意に寄与する超可変領域残基を同定することができる。代替又は追加方法として、抗原−抗体複合体の結晶構造を分析し、抗体と抗原の接触点を同定することが有益な場合もある。このような接触残基と隣接残基が本明細書に詳述する技術による置換の候補である。このような変異体を作製したら、変異体群を本明細書に記載するようにスクリーニングし、１種以上の該当アッセイで優れた性質を示す抗体をその後の開発のために選択することができる。
【０１９６】
抗体の別の型のアミノ酸変異体は抗体の元のグリコシル化パターンを改変する。このような改変としては、抗体に存在する１個以上の糖鎖部分の欠失、及び／又は抗体に存在していない１個以上のグリコシル化部位の付加が挙げられる。
【０１９７】
ポリペプチドのグリコシル化は一般にＮ結合型又はＯ結合型である。Ｎ結合型とは糖鎖部分がアスパラギン残基の側鎖と結合していることを意味する。アスパラギン−Ｘ−セリンとアスパラギン−Ｘ−スレオニン（式中、Ｘはプロリン以外の任意アミノ酸である）のトリペプチド配列が糖鎖部分とアスパラギン側鎖の酵素結合の認識配列である。従って、ポリペプチドにこれらのトリペプチド配列のいずれかが存在するならば、潜在的グリコシル化部位が形成される。Ｏ結合型グリコシル化とはＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトース、又はキシロースの糖の１種とヒドロキシアミノ酸、最も一般にはセリン又はスレオニンの結合を意味するが、５−ヒドロキシプロリン又は５−ヒドロキシリジンも使用できる。
【０１９８】
抗体へのグリコシル化部位の付加は上記トリペプチド配列の１個以上を含むようにアミノ酸配列を改変することにより簡便に実施される（Ｎ結合型グリコシル化部位の場合）。元の抗体の配列に１個以上のセリン又はスレオニン残基を付加又は置換することにより改変を行うこともできる（Ｏ結合型グリコシル化部位の場合）。
【０１９９】
抗体がＦｃ領域を含む場合には、これに結合した糖鎖を改変又は除去してもよい。例えば、本発明のグリコシル化変異体の１例では、１個以上のグリコシル化部位を除去するために１個以上のアミノ酸置換を抗体のＦｃ領域に導入する。このような非グリコシル化抗体は補体活性化及び／又は抗体依存性細胞介在細胞傷害作用を誘導する能力が低下するように例えばヒトＩｇＧ１に比較してエフェクター機能が低下しており、非グリコシル化抗体はＦｃ受容体との結合を低減（又は除去）することができる。
【０２００】
所定抗体（例えば本発明の方法で第２の化合物として使用される消失性抗体）では、抗体のＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣを強化するように抗体を改変することが望ましい場合がある。例えば、抗体のＦｃ領域と結合したフコースをもたない成熟糖鎖構造をもつ抗体がＵ．Ｓ．２００３／０１５７１０８（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）に記載されている。Ｕ．Ｓ．２００４／００９３６２１（協和発酵工業株式会社）も参照。抗体のＦｃ領域と結合した糖鎖に二分岐Ｎ−アセチルグルコサミン（ＧｌｃＮＡｃ）をもつ抗体もＷＯ２００３／０１１８７８（Ｊｅａｎ−Ｍａｉｒｅｔら）及び米国特許第６，６０２，６８４号（Ｕｍａｎａら）に記載されている。抗体のＦｃ領域と結合したオリゴ糖に少なくとも１個のガラクトース残基をもつ抗体もＷＯ１９９７／３００８７（Ｐａｔｅｌら）に報告されている。そのＦｃ領域と結合した改変糖鎖をもつ抗体について記載しているＷＯ１９９８／５８９６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）及びＷＯ１９９９／２２７６４（Ｒａｊｕ，Ｓ．）も参照。
【０２０１】
従って、グリコシル化変異体は場合によりＦｃ領域を含み、Ｆｃ領域と結合した糖鎖構造はフコースをもたない。このような変異体はＡＤＣＣ機能が改善されている。場合により、Ｆｃ領域はＡＤＣＣを更に改善する１個以上のアミノ酸置換（例えばＦｃ領域の２９８位、３３３位、及び／又は３３４位の置換）を更に含む（Ｅｕ残基ナンバリング）。「脱フコシル化」ないし「フコース欠損」抗体に関する文献の例としては、Ｕ．Ｓ．２００３／０１５７１０８；ＷＯ２０００／６１７３９；ＷＯ２００１／２９２４６；Ｕ．Ｓ．２００３／０１１５６１４；Ｕ．Ｓ．２００２／０１６４３２８；Ｕ．Ｓ．２００４／００９３６２１；Ｕ．Ｓ．２００４／０１３２１４０；Ｕ．Ｓ．２００４／０１１０７０４；Ｕ．Ｓ．２００４／０１１０２８２；Ｕ．Ｓ．２００４／０１０９８６５；ＷＯ２００３／０８５１１９；ＷＯ２００３／０８４５７０；ＷＯ２００５／０３５５８６；ＷＯ２００５／０３５７７８；Ｏｋａｚａｋｉら，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．３３６：１２３９−１２４９（２００４）；及びＹａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４）が挙げられる。脱フコシル化抗体を産生する細胞株の例としては、蛋白フコシル化欠損Ｌｅｃ１３  ＣＨＯ細胞（Ｒｉｐｋａら，Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２４９：５３３−５４５（１９８６）；Ｕ．Ｓ．２００３／０１５７１０８，Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ；及びＷＯ２００４／０５６３１２，Ａｄａｍｓら，特に実施例１１）と、α−１，６−フコシルトランスフェラーゼ遺伝子ＦＵＴ８ノックアウトＣＨＯ細胞（Ｙａｍａｎｅ−Ｏｈｎｕｋｉら，Ｂｉｏｔｅｃｈ．Ｂｉｏｅｎｇ．８７：６１４（２００４））等のノックアウト細胞株が挙げられる。
【０２０２】
例えば抗体のＡＤＣＣ及び／又はＣＤＣの強化を目的としたエフェクター機能に関する抗体の改変は抗体のＦｃ領域に１個以上のアミノ酸置換を導入することにより実施することができる。代替又は追加方法として、システイン残基をＦｃ領域に導入することにより、この領域に鎖間ジスルフィド結合を形成することができる。こうして作製されたホモダイマー抗体はインターナリゼーション機能の改善及び／又は補体介在性細胞死及びＡＤＣＣの増加が得られる。Ｃａｒｏｎら，Ｊ．Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１７６：１１９１−１１９５（１９９２）及びＳｈｏｐｅｓ，Ｂ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １４８：２９１８−２９２２（１９９２）参照。Ｗｏｌｆｆら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：２５６０−２５６５（１９９３）に記載されているようにヘテロ二官能性架橋剤を使用して抗腫瘍活性を強化したホモダイマー抗体を作製することもできる。あるいは、二重Ｆｃ領域をもつ抗体を作製することにより補体溶解能とＡＤＣＣ機能を強化することもできる。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ３：２１９−２３０（１９８９）参照。ＷＯ２０００／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）はヒトエフェクター細胞の存在下でＡＤＣＣ機能を改善した抗体について記載しており、この抗体はそのＦｃ領域にアミノ酸置換を含む。ＡＤＣＣを改善した抗体はＦｃ領域の２９８位、３３３位、及び／又は３３４位に置換を含むことが好ましい。改変されたＦｃ領域はこれらの位置の１、２、又は３個に置換を含むか又はこれらの位置の置換から構成されるヒトＩｇＧ１  Ｆｃ領域であることが好ましい。
【０２０３】
ＷＯ１９９９／５１６４２と、米国特許第６，１９４，５５１号、６，２４２，１９５号、６，５２８，６２４号、及び６，５３８，１２４号（Ｉｄｕｓｏｇｉｅら）にはＣ１ｑ結合及び／又はＣＤＣを改変した抗体が記載されている。これらの抗体はそのＦｃ領域のアミノ酸位置２７０位、３２２位、３２６位、３２７位、３２９位、３１３位、３３３位、及び／又は３３４位の１個以上にアミノ酸置換を含む。このようなアミノ酸置換を含む非消失性抗ＣＤ４抗体は本発明の１態様を構成する。
【０２０４】
抗体の半減期を延長するためには、例えば米国特許第５，７３９，２７７号に記載されているようにサルベージ受容体結合エピトープを抗体（特に抗体フラグメント）に組込むことができる。本明細書で使用するサルベージ受容体結合エピトープなる用語はＩｇＧ分子（例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のｉｎ  ｖｉｖｏ血清半減期の延長に関与するＩｇＧ分子のＦｃ領域のエピトープを意味する。そのＦｃ領域に置換を含み、血清半減期を延長した抗体もＷＯ２０００／４２０７２（Ｐｒｅｓｔａ，Ｌ．）に記載されている。このようなサルベージ受容体結合エピトープを含む非消失性抗ＣＤ４抗体は本発明の１態様を構成する。
【０２０５】
本発明の任意非消失性（又は他の）抗体はＦｃＲｎ結合又は血清半減期を改善する少なくとも１個の置換をＦｃ領域に含むことができる（例えば非消失性抗ＣＤ４変異体抗体）。例えば、本発明は新生児Ｆｃ受容体（ＦｃＲｎ）結合親和性を改変した変異体Ｆｃ領域を含む抗体も提供する。ＦｃＲｎは主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）と構造的に類似しており、β２−マイクログロブリンと非共有的に結合したα鎖から構成される。新生児Ｆｃ受容体ＦｃＲｎの多重機能はＧｈｅｔｉｅ  ａｎｄ  Ｗａｒｄ（２０００）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１８：３９−７６６に概説されている。ＦｃＲｎは母親から子供への免疫グロブリンＩｇＧの受動的移動と血清ＩｇＧ濃度の調節に役割を果たす。ＦｃＲｎはサルベージ受容体として機能し、飲作用により取込まれた無傷の形態のＩｇＧと結合し、細胞内及び細胞間に輸送し、デフォルト分解経路から救済する。ＩｇＧの救済に関与するメカニズムはまだ不明であるが、未結合ＩｇＧはリソソームで蛋白分解されるが、結合したＩｇＧは細胞の表面に再循環され、放出されると考えられる。この制御は成人組織全体に位置する内皮細胞内で行われる。ＦｃＲｎは少なくとも肝臓、乳腺、及び成人腸で発現される。ＦｃＲｎはＩｇＧと結合し、ＦｃＲｎ−ＩｇＧ相互作用は広く研究されており、ＩｇＧのＦｃ領域のＣＨ２、ＣＨ３ドメイン界面に残基を含むと思われる。これらの残基は主にＦｃＲｎのα２ドメインに位置する残基と相互作用する。
【０２０６】
本発明の所定態様では、非消失性抗ＣＤ４変異体抗体はＦｃＲｎとの結合の増加を示し、Ｆｃ領域の２３８位、２５６位、２６５位、２７２位、２８６位、３０３位、３０５位、３０７位、３１１位、３１２位、３１７位、３４０位、３５６位、３６０位、３６２位、３７６位、３７８位、３８０位、３８２位、４１３位、４２４位又は４３４位のアミノ酸位置の任意１個以上にアミノ酸改変を含むことができる（Ｆｃ領域における残基のナンバリングはＫａｂａｔによるＥＵインデックスに従う）。例えば米国特許第６，７３７，０５６号；及びＳｈｉｅｌｄｓら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：６５９１−６６０４（２００１）参照。本発明の１態様では、抗体は少なくともＡｓｎ４３４→Ｈｉｓ（Ｎ４３４Ｈ）のアミノ酸置換を含む変異体ＩｇＧ  Ｆｃ領域を含む。本発明の１態様では、抗体は少なくともＡｓｎ４３４→Ａｌａ（Ｎ４３４Ａ）のアミノ酸置換を含む変異体ＩｇＧ  Ｆｃ領域を含む。一般に、これらの変異体は天然配列／野生型配列Ｆｃ領域をもつポリペプチドよりもＦｃＲＮに対する結合親和性が高い。これらのＦｃ変異体ポリペプチド及び抗体は分解されずに救済され、再循環されるという利点がある。本発明で提供する方法では、これらの非消失性抗ＣＤ４変異体抗体を使用することができる。非消失性ＣＤ４変異体抗体のほんの１例を挙げると、本明細書に記載する任意ＴＲＸ１抗体は重鎖４３４位に置換（例えばＮ４３４Ａ又はＮ４３４Ｈ）を含むことができる。
【０２０７】
米国出願シリアル番号２００４０００１８２７（Ｄｅｎｎｉｓ，Ｍ．）に開示されているように血清アルブミン結合ペプチドを抗体に組込むことにより抗体の血清半減期を延長することもできる。このような血清アルブミン結合ペプチドを含む非消失性抗ＣＤ４抗体は本発明の１態様を構成する。
【０２０８】
３個以上（好ましくは４個）の機能的抗原結合部位をもつ改変抗体も考えられる（ＵＳ  ２００２／０００４５８７  Ａ１，Ｍｉｌｌｅｒら）。このような多重抗原結合部位を含む非消失性抗ＣＤ４抗体は本発明の１態様を構成する。
【０２０９】
抗体のアミノ酸配列変異体をコードする核酸分子は当分野で公知の各種方法により作製される。これらの方法としては限定されないが、天然資源からの単離（天然アミノ酸配列変異体の場合）又は抗体の以前に作製された変異体もしくは非変異体のオリゴヌクレオチドによる（又は部位特異的）突然変異誘発、ＰＣＲ突然変異誘発、及びカセット突然変異誘発による作製が挙げられる。
【０２１０】
本発明の実施にあたっては、分子生物学、微生物学、及び組換えＤＮＡテクノロジーにおける多数の慣用技術を場合により使用する。これらの技術は周知であり、例えば、Ｂｅｒｇｅｒ  ａｎｄ  Ｋｉｍｍｅｌ，Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ｖｏｌｕｍｅ  １５２  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；Ｓａｍｂｒｏｏｋら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（３ｒｄ  Ｅｄ．），Ｖｏｌ．１−３，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２０００及びＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら，ｅｄｓ．，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，ａ  ｊｏｉｎｔ  ｖｅｎｔｕｒｅ  ｂｅｔｗｅｅｎ  Ｇｒｅｅｎｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｉｎｃ．ａｎｄ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，（２００６年補遺）に説明されている。（例えばその後の核酸又は蛋白質単離のための）例えば細胞単離及び培養に有用な他の文献としては、Ｆｒｅｓｈｎｅｙ（１９９４）Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｏｆ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌｓ，ａ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ，ｔｈｉｒｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋとその引用文献；Ｐａｙｎｅら（１９９２）Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  ｉｎ  Ｌｉｑｕｉｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ；Ｇａｍｂｏｒｇ  ａｎｄ  Ｐｈｉｌｌｉｐｓ（Ｅｄｓ．）（１９９５）Ｐｌａｎｔ  Ｃｅｌｌ，Ｔｉｓｓｕｅ  ａｎｄ  Ｏｒｇａｎ  Ｃｕｌｔｕｒｅ；Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｌａｂ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ（Ｂｅｒｌｉｎ  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）及びＡｔｌａｓ  ａｎｄ  Ｐａｒｋｓ（Ｅｄｓ．）Ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｄｉａ（１９９３）ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦＬが挙げられる。（例えばｉｎ  ｖｉｔｒｏ増幅、細胞からの精製、又は化学的合成による）核酸の作製方法、核酸の操作方法（例えば部位特異的突然変異誘発、制限酵素消化、ライゲーション等）、並びに核酸の操作及び作製に有用な各種ベクター、細胞株等は上記文献に記載されている。更に、（例えば標識又はビオチン化ポリヌクレオチドを含む）基本的に任意ポリヌクレオチドを種々の商業ソースから個別注文又は標準注文することができる。
【０２１１】
投与
当業者に自明の通り、非消失性ＣＤ４抗体の適切な用量は一般に同様の抗体を単独投与又は他の治療薬と併用投与する臨床療法で既に利用されている用量と同等である。試験する病態により、用量は変動する傾向がある。治療薬を投与する医師は個々の対象に適した用量を決定することができよう。非消失性ＣＤ４抗体と併用投与する市販の第２の化合物の調合及び投与スケジュールは製造業者の指示に従って使用してもよいし、当業者が経験により決定してもよい。
【０２１２】
疾患の予防又は治療には、抗体及び前記非消失性抗体と併用する場合には第２の化合物の適切な用量は上記に定義したような治療する疾患の種類、疾患の重篤度と経過、非消失性抗体又は併用剤を予防目的で投与するのか又は治療目的で投与するのか、治療暦、患者の臨床歴及び抗体又は併用剤に対する応答、並びに主治医の判断により異なる。非消失性抗体又は併用剤は一般には一連の治療期間にわたって患者に１回以上投与するのが適切である。
【０２１３】
例えば１回以上に分けて投与するか又は連続輸液により投与するかに拘わらず、疾患の種類と重篤度に応じて非消失性ＣＤ４抗体１μｇ／ｋｇ〜５０ｍｇ／ｋｇ（例えば０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ）が患者への初期候補投与用量である。典型的な１日用量は上記因子に応じて約１μｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ以上を利用ではる。病態に応じて数日間以上反復投与する場合には、疾患症状の所望抑制が生じるまで投与を持続する。しかし、他の用量レジメンが有用な場合もある。一般に、必要な生体効果を生じる用量に達するまで、臨床医は本発明の抗体を（単独又は第２の化合物と併用して）投与する。本発明の治療の進行は慣用技術及びアッセイにより容易にモニターされる。
【０２１４】
例えば、ＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体を場合により上記のように又は米国特許出願公開２００３／０１０８５１８もしくは２００３／０２１９４０３に記載されているように投与する。１態様では、３〜５ｍｇ／ｋｇ（対象体重１ｋｇ当たり抗体ｍｇ）を単独又は本明細書に記載するような第２の化合物と併用投与し、疾患症状の所望抑制が生じるまで投与を継続する。症状の抑制を達成及び維持するように適切なレベルの抗体（あるいは抗体を第２の化合物と併用する場合には、適切なレベルの抗体と第２の化合物の併用剤）を対象に維持するためには、非消失性抗体を場合により一定期間投与する。
【０２１５】
非消失性ＣＤ４抗体は非経口、局所、皮下、腹腔内、肺内、鼻腔内、及び／又は病巣内投与等の適切な任意手段により投与することができる。非経口輸液としては筋肉内、静脈内、動脈内、腹腔内、又は皮下投与が挙げられる。鞘内輸液も考えられる（例えば米国特許出願公開２００２／０００９４４４、発明者Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚ参照）。更に、例えば抗体用量を減らしながら、パルス輸液により抗体を投与すると適切な場合もある。静脈内又は皮下投与が好ましく、場合により静脈内輸液が好ましい。同一又は異なる投与手段を使用して個々の投与を行ってもよい。１態様では、静脈内投与により個々の投与を行う。
【０２１６】
上記のように、非消失性ＣＤ４抗体は単独投与又は少なくとも第２の化合物と併用投与することができる。これらの第２の化合物は一般に従来使用されている用量及び経路と同一の用量及び投与経路で使用するか、又は従来使用されている用量の約１〜９９％を使用する。このような第２の化合物を使用する場合には、その副作用を排除又は低減するように、非消失性ＣＤ４抗体と併用しない場合よりも低用量で使用する。
【０２１７】
同じく上記のように、種々の適切な第２の化合物が当分野で公知であり、このような第２の化合物の用量と投与方法も従来記載されている。ほんの１例を挙げると、ループス（又はＭＳ、関節リウマチ、又は炎症性腸疾患、又は本明細書に記載するような他の障害）を治療するために非消失性ＣＤ４抗体をシクロホスファミドと併用投与することができる。各種シクロホスファミド投与レジメンが文献に記載されている。典型的なレジメンとしては限定されないが、０．５〜１．０ｇ／ｍ２を毎月６カ月間〜３カ月おきに３０カ月間の静脈内投与；５００ｍｇを２週間おきに３カ月間の静脈内投与；１〜３ｍｇ／ｋｇ／日を１２週間又は６カ月間の経口投与が挙げられる。例えばＰｅｔｒｉ（２００４）“Ｃｙｃｌｏｓｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ：ｎｅｗ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｆｏｒ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ”Ｌｕｐｕｓ  １３：３６６−３７１及びＰｅｔｒｉ  ａｎｄ  Ｂｒｏｄｓｋｙ（２００６）“Ｈｉｇｈ−ｄｏｓｅ  ｃｙｃｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ  ａｎｄ  ｓｔｅｍ  ｃｅｌｌ  ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｒｅｆｒａｃｔｏｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ”ＪＡＭＡ  ２９５：５５９−５６０参照。
【０２１８】
非消失性抗ＣＤ４抗体と本発明の任意第２の化合物の投与は例えば単一組成物として又は同一もしくは異なる投与経路を使用する２種以上の別個の組成物として同時に実施することができる。代替又は追加方法として、投与は任意順序で順次実施することができる。所定態様では、２種類以上の組成物の投与間隔は数分間から数日間、数週間、数カ月間とすることができる。例えば、非消失性抗ＣＤ４抗体を先ず投与した後に、本発明の第２の化合物を投与する。しかし、同時投与も考えられるし、本発明の第２の化合物を先に投与することも考えられる。
【０２１９】
上記のように、場合により第３、第４等の化合物を非消失性ＣＤ４抗体及び第２の化合物と併用剤投与する。同様に、例えば非消失性ＣＤ４抗体又は併用剤の投与中に、ループスに続発もしくは関連する症状（例えば痙縮、失禁、疼痛、疲労）又はＭＳ、関節リウマチ、炎症性腸疾患、又は他の病態もしくは疾患の治療薬を対象に投与してもよい。
【０２２０】
医薬製剤
本発明に従って使用される抗体の治療用製剤は所望純度をもつ非消失性ＣＤ４抗体を任意成分としての医薬的に許容可能なキャリヤー、賦形剤、又は安定剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０））と凍結乾燥製剤又は水溶液として混合することにより保存可能に製造される。許容可能なキャリヤー、賦形剤、又は安定剤は使用する用量と濃度でレシピエントに非毒性であり、緩衝剤（例えばリン酸、クエン酸、及び他の有機酸）；酸化防止剤（例えばアスコルビン酸やメチオニン）；防腐剤（例えば塩化オクタデシルジメチルベンジルアンモニウム；塩化ヘキサメトニウム；塩化ベンズアルコニウム、塩化ベンズエトニウム；フェノール、ブチル又はベンジルアルコール；アルキルパラベン（例えばメチルパラベン又はプロピルパラベン）；カテコール；レゾルシノール；シクロヘキサノール；３−ペンタノール；及びｍ−クレゾール）；低分子量（約１０残基未満）ポリペプチド；蛋白質（例えば血清アルブミン、ゼラチン、又は免疫グロブリン）；親水性ポリマー（例えばポリビニルピロリドン）；アミノ酸（例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、又はリジン）；単糖類、二糖類、及び他の糖質（例えばグルコース、マンノース、又はデキストリン）；キレート剤（例えばＥＤＴＡ）；糖類（例えばスクロース、マンニトール、トレハロース又はソルビトール）；塩形成性対イオン（例えばナトリウム）；金属錯体（例えばＺｎ−蛋白質錯体）；及び／又は非イオン性界面活性剤（例えばＴｗｅｅｎ（登録商標）、Ｐｌｕｒｏｎｉｃｓ（登録商標）、又はＰＥＧ）が挙げられる。
【０２２１】
皮下投与に適した凍結乾燥製剤は例えば米国特許第６，２６７，９５８号（Ａｎｄｙａら）に記載されている。このような凍結乾燥製剤は適切な希釈剤で高蛋白濃度まで再構成することができ、再構成した製剤を本発明で治療する哺乳動物に皮下投与することができる。抗体の結晶形態も考えられる。例えば、Ｕ．Ｓ．２００２／０１３６７１９Ａ１（Ｓｈｅｎｏｙら）参照。
【０２２２】
本発明の製剤は治療する特定徴候の必要に応じて少なくとも第２の化合物、好ましくは相互に悪影響を与えない相補的活性をもつものを加えることができる。例えば、細胞傷害性物質（例えばメトトレキセート、シクロホスファミド、又はアザチオプリン）、化学療法剤、免疫抑制剤、サイトカイン、サイトカインアンタゴニスト又は抗体、増殖因子、ホルモン、インテグリン、インテグリンアンタゴニスト又は抗体（例えばＬＦＡ−１抗体、又はα４インテグリン抗体（例えばナタリズマブ））、インターフェロン類薬剤（例えばＩＦＮ−β−１ａ又はＩＦＮ−β−１ｂ）、オリゴペプチド（例えば酢酸グラチラマー）、静脈内免疫グロブリン（γグロブリン）、リンパ球消失性薬剤（例えばミトキサントロン、シクロホスファミド、ＣａｍＰａｔｈ（登録商標）抗体、又はクラドリビン）、非リンパ球消失性免疫抑制薬（例えばＭＭＦ又はシクロスポリン）、「スタチン」類のコレステロール低下薬、エストラジオール、ループス、ＭＳ、関節リウマチ、又は炎症性腸疾患に続発又は関連する症状（例えば痙縮、失禁、疼痛、疲労）を治療する薬剤、ＴＮＦ阻害剤、ＤＭＡＲＤ、ＮＳＡＩＤ、コルチコステロイド（例えばメチルプレドニゾロン、プレドニゾン、デキサメタゾン、又はグルココルチコイド）、レボチロキシン、シクロスポリンＡ、ソマトスタチンアナログ、代謝拮抗剤、Ｔ又はＢ細胞表面アンタゴニスト／抗体等、あるいは上記のような他の化合物を更に製剤に加えると望ましい場合がある。このような他の薬剤の種類と有効量は例えば製剤中に存在する抗体の量、治療するループス又はＭＳ又は他の病態もしくは疾患の種類、及び対象の臨床パラメーターにより異なる。
【０２２３】
例えばコアセルベーション技術又は界面重合により製造したマイクロカプセル（例えば、夫々ヒドロキシメチメルセルロース又はゼラチンマイクロカプセル及びポリ−（メチルメタクリレート）マイクロカプセル）、コロイドドラッグデリバリーシステム（例えばリポソーム、アルブミンマイクロスフェア、マイクロエマルション、ナノ粒子及びナノカプセル）又はマクロエマルションに活性成分を封入してもよい。このような技術は例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １６ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｏｓｏｌ，Ａ．Ｅｄ．（１９８０）に開示されている。
【０２２４】
徐放製剤を製造してもよい。徐放製剤の適切な例としては非消失性抗体を収容した成形品（例えばフィルム又はマイクロカプセル）の形態の固体疎水性ポリマーの半透性マトリックスが挙げられる。徐放マトリックスの例としてはポリエステル、ヒドロゲル（例えば、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）又はポリ（ビニルアルコール））、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸とＬ−グルタミン酸エチルのコポリマー、非分解性エチレン−酢酸ビニル、分解性乳酸−グリコール酸コポリマー（例えばＬｕｐｒｏｎ  Ｄｅｐｏｔ（登録商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーと酢酸ロイプロリドから構成される注射用マイクロスフェア）、及びポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が挙げられる。
【０２２５】
ｉｎ  ｖｉｖｏ投与に使用する製剤は無菌でなければならない。これは滅菌濾過膜で濾過することにより容易に実施される。
【０２２６】
製品
本発明の別の態様では、ループス、ＭＳ、関節リウマチ、炎症性腸疾患、又は他の上記病態もしくは疾患の治療に有用な材料を含む製品を提供する。製品は（ａ）非消失性ＣＤ４抗体と医薬的に許容可能なキャリヤー又は希釈剤を含有する組成物を収容する容器と；（ｂ）抗体を単独投与又は少なくとも第２の化合物と併用投与することにより対象におけるループス、ＭＳ、関節リウマチ、炎症性腸疾患、又は他の病態もしくは疾患を治療するための注意書きを記載したパッケージインサートを含むことが好ましい。
【０２２７】
パッケージインサートは容器に貼付又は添付する。適切な容器としては、例えばボトル、バイアル、シリンジ等が挙げられる。容器はガラスやプラスチック等の各種材料から形成することができる。容器はループス、ＭＳ、関節リウマチ、炎症性腸疾患、又は他の病態もしくは疾患を治療するために有効な組成物を保持又は収容しており、滅菌取出口を備えることができる（例えば、容器は静脈内溶液バッグ又は皮下注射針により穿孔可能なストッパー付きバイアルとすることができる）。組成物中の少なくとも１種の活性剤は非消失性抗体である。ラベル又はパッケージインサートには、治療に適格な対象でループス、ＭＳ、関節リウマチ、炎症性腸疾患、又は他の病態もしくは疾患を治療するために組成物を使用することを表示すると共に、抗体及び併用する場合には他の薬剤の投与量と投与間隔に関する個別の注意書きを記載する。
【０２２８】
製品は更に医薬的に許容可能な希釈用緩衝液（例えば静菌性注射用水（ＢＷＦＴ）、リン酸緩衝食塩水、リンゲル液、及びデキストロース液）を収容する第２の容器を含むことができる。製品は場合により第２の化合物（例えば本明細書に記載する任意化合物）を収容する第２又は第３の容器を含み、製品は更に対象に第２の化合物を投与するための注意書きをパッケージインサートに加える。あるいは、非消失性ＣＤ４抗体を含有する組成物に第２の化合物を加えてもよい。製品は更に商業的観点及び使用者の観点から望ましい他の材料（例えば他の緩衝液、希釈剤、フィルター、針及びシリンジ）を同梱してもよい。
【０２２９】
当然のことながら、本明細書に記載する実施例及び態様は例証の目的に過ぎず、これらの記載に鑑み、種々の変形又は変更が当業者に想到され、これらの変形又は変更も本願の精神及び範囲と特許請求の範囲に含むものとする。従って、以下の実施例は特許請求の範囲に記載する発明を例証するものであって、限定するものではない。
【実施例１】
【０２３０】
非消失性ＣＤ４抗体単独又は併用によるループスの治療
本実施例は非消失性ＣＤ４抗体がＳＬＥの前臨床モデルで有効であることを実証する一連の実験について記載する。抗体の性能を典型的な看護及び実験治療標準の性能と比較する。
【０２３１】
ＮＺＢｘＷ  Ｆ１マウスは自発性ループス様腎疾患を示すのでＳＬＥの有用な前臨床効力モデルとなる（例えばＴｈｅｏｆｉｌｏｐｏｕｌｏｓ（１９９２）“Ｍｕｒｉｎｅ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ  ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ”  ｉｎ  Ｓｙｓｔｅｍｉｃ  Ｌｕｐｕｓ  Ｅｒｙｔｈｅｍａｔｏｓｕｓ，Ｌａｈｉｔａ（ｅｄ．）Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１２１−１９４参照）。図５はこのモデルにおける月齢に伴う疾患の進行を模式的に示す。観察される症状としては、ｄｓ−ＤＮＡ抗体の出現、蛋白尿、腎組織異常、血中尿素窒素（ＢＵＮ）の増加、及び死亡率の増加が挙げられる。矢印は非消失性ＣＤ４抗体を他の治療と比較する２種類の試験で抗体投与を開始した時点を示す。
【０２３２】
このモデルで、非消失性ＣＤ４抗体ＹＴＳ１７７（Ｃｏｂｂｏｌｄら（１９９０）“Ｔｈｅ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｋｉｎｇｒａｆｔ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ  ｉｎ  ＭＨＣ−ｍｉｓｍａｔｃｈｅｄ  ｏｒ  ｐｒｉｍｅｄ  ｒｅｃｉｐｉｅｎｔｓ：ｐｒｉｍｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ｃａｎ  ｂｅ  ｔｏｌｅｒｉｚｅｄ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｐｅｒｉｐｈｅｒｙ  ｗｉｔｈ  ＣＤ４  ａｎｄ  ＣＤ８  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ”Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０：２７４７−２７５５）の前臨床効力を非結合性対照抗体（対照Ａｂ又は対照Ｉｇ）、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ（臨床開発中）、及びシクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標），ＣＴＸ；看護治療の現在の標準）の効力と比較した。ＹＴＳ１７７非消失性ＣＤ４抗体はＨｅｒｍａｎ  Ｗａｌｄｍａｎｎ，Ｏｘｆｏｒｄから寄贈されたものを使用した。対照抗体は無関係のＩｇＧ１抗体とした（無関係のラット抗体は自己免疫応答を誘発する可能性があり、疾患過程に影響を与え、ラット抗ＣＤ４抗体はこのような自己応答を阻止するので、対照にはマウス抗体を使用した）。使用したＣＴＬＡ４−Ｉｇ構築物はヒトＩｇＧ１ヒンジ−Ｃ３，Ｃ４  ＩｇドメインにマウスＣＴＬＡ−４の細胞外ドメインを融合したものであり、Ｌｉｎｓｌｅｙら（１９９１）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７４（３）：５６１によりモデル化されている。
【０２３３】
８カ月齢でＮＺＢｘＮＺＷマウスを蛋白尿についてスクリーニングし、その蛋白尿スコアに基づいてランダムに５群に分けた。この月齢で、疾患は中等度〜重度とみなす。実験開始時に、マウス１９匹からなる各群の尿中蛋白濃度分布は＞３００ｍｇ／ｄｌ  ３２％；１００〜３００ｍｇ／ｄｌ  ２４％；及び３０〜１００ｍｇ／ｄｌ  ４４％であった。いずれかの対照抗体（対照Ａｂ又は対照Ｉｇ）、ＹＴＳ１７７（非消失性抗ＣＤ４）、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、シクロホスファミド（ＣＴＸ）、又は抗ＣＤ４とＣＴＸの併用剤をマウスに６カ月間連続投与した。ＹＴＳ１７７とＣＴＬＡ４−Ｉｇは５ｍｇ／ｋｇを週３回腹腔内（ＩＰ）注射により投与し；シクロホスファミド（ＣＴＸ）は５０ｍｇ／ｋｇを（単独又は指定量のＹＴＳ１７７と併用して）１０日おきにＩＰ投与した。尿蛋白濃度（例えば蛋白尿）、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、及び生存率の変化についてマウスをモニターした。
【０２３４】
図６に示すように、非消失性ＣＤ４抗体を投与すると進行までの時間が延び（図６Ａ）、生存率が上昇し（図６Ｂ）、蛋白尿が低減し（図６Ｃ，投与後５カ月のデータを示す）、平均ＢＵＮが低下した（図６Ｄ）。
【０２３５】
図７に示すように、非消失性ＣＤ４抗体を投与すると、重度ループス腎炎を改善することができる。図７Ａは投与後指定時点における蛋白尿３００ｍｇ／ｄｌ未満のマウスの百分率を示す。非消失性ＣＤ４抗体を単独又はシクロホスファミドと併用投与した結果、蛋白尿＞３００ｍｇ／ｄｌを示すマウスは最終的に減少し、ごく後期にネフローゼ症状が改善されたが、対照抗体、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、又はシクロホスファミドを単独投与した群ではこのような結果は認められなかった。図７Ｂは投与から最初の１カ月以内に蛋白尿３００ｍｇ／ｄｌから改善したマウスの百分率を示す。（図７Ｂは本明細書に記載する試験と３種の同様の試験を含む４種の試験からの結果をまとめたデータを示す。データは投与開始時に蛋白尿が＞３００ｍｇ／ｄｌであったマウスのみのデータである。）ＣＤ４抗体をシクロホスファミド（ＣＴＸ）と併用した場合には、蛋白尿改善能の相乗効果が認められた。
【０２３６】
非消失性ＣＤ４抗体とシクロホスファミドの併用投与も蛋白尿の低減に有効である。図９はダネット法を使用した投与６カ月の蛋白尿の多重比較分析を示し、図９Ａではシクロホスファミド投与群を参照対照群とし、図９Ｂでは非消失性ＣＤ４抗体投与群を参照対照群としている。参照対照群は太字で示し、参照対照に対して統計的有意性に達する群のｐ値のみをグラフに示す。これらの結果からも、非消失性ＣＤ４抗体は蛋白尿の低減においてＣＴＬＡ４−Ｉｇよりも優れていることが実証された（例えば図９Ｂ参照）。また、非消失性ＣＤ４抗体とシクロホスファミドを併用すると、このモデルで蛋白尿を低減するのにシクロホスファミド単独よりも有意効果があることも実証された（例えば図９Ａ参照）。
【０２３７】
ＣＤ４とＣＤ８に対して染色した腎切片を検査した処、対照抗体の投与４カ月後に腎髄質又は骨盤間質へのリンパ球浸潤が判明した。他方、ＣＤ４抗体又はＣＴＬＡ４−Ｉｇを投与すると、投与後４カ月に腎間質で観察されるＣＤ４＋細胞は減少した。ＣＤ４抗体投与は腎臓で観察されるＣＤ８＋Ｔ細胞数に影響を与えなかった。
【０２３８】
自発性ループス様腎疾患を示すＮＺＢｘＷ  Ｆ１マウス（ＳＬＥマウスモデル）に非消失性ＣＤ４抗体を投与すると、ｄｓ−ＤＮＡ抗体力価の上昇も抑えられた。図８に示すように、ｄｓ−ＤＮＡ抗体力価の経時的上昇は対照抗体を投与した動物に比較して非消失性ＣＤ４抗体を投与した動物にほうが少なかった。登録時の力価（各投与群の概算平均３ｌｏｇ）を示す図８Ａと、投与後３カ月の力価（非消失性抗ＣＤ４抗体投与群と対照抗体投与群で夫々約３．５ｌｏｇ及び４．５ｌｏｇ）を示す図８Ｂを比較されたい。本実験では、８カ月齢ではなく、６カ月齢で投与を開始した。
【０２３９】
更に、ＣＤ４抗体を投与すると、Ｔ細胞活性化に関連する表面蛋白に対する抗体を使用してフローサイトメトリーにより測定した場合に、脾臓に存在する活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞数も減少した。図８に示すように、投与後３週間に脾臓に存在するＣＤ４＋ＣＤ６９＋細胞数（図８Ｃ）とＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞数（図８Ｄ）はいずれも非消失性ＣＤ４抗体を投与した動物のほうが対照抗体を投与した動物に比較して少なかった（８カ月齢で投与開始）。
【０２４０】
中等度〜重度ではなく、軽度疾患に導入した場合も、非消失性ＣＤ４抗体投与は有効であった。いずれも蛋白尿３０〜１００ｍｇ／ｄｌを示す６カ月齢ＮＺＢｘＮＺＷマウスに基本的に上記のように対照Ａｂ、ＹＴＳ１７７（非消失性抗ＣＤ４）、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、又はシクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））を投与した。蛋白尿と生存率の変化についてマウスをモニターした。図６に示すように、６カ月齢で非消失性ＣＤ４抗体投与を開始すると、対照に比較して進行までの時間が延び（図６Ｅ）、生存率が上昇し（図６Ｆ）、非消失性ＣＤ４抗体は軽度疾患に導入した場合に非常に有効であることが分かった。（全投与は対照に比較して非常に有効であった：７カ月の進行までの時間＊ｐ＜０．０２５（図６Ｅ）及び生存率＊ｐ＜０．０４（図６Ｆ））。
【０２４１】
以上をまとめると、非消失性ＣＤ４抗体投与は疾患初期又は後期に導入した場合にＮＺＢｘＷ  Ｆ１マウスで有効であった。抗体を投与すると、無疾患進行期間と生存期間が延び、ＢＵＮ上昇と糸球体腎炎発症が遅れ、抗ｄｓＤＮＡ力価上昇が抑えられ、活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞数が減少した。抗体投与５カ月又は６カ月で観察された効果は蛋白尿の低減に関してシクロホスファミドの効果と同等であり、ＣＴＬＡ４−Ｉｇよりも優れており、後期疾患では抗ＣＤ４とＣＴＬＡ４−Ｉｇの差はより明白であった。更に、非消失性ＣＤ４抗体をシクロホスファミドと併用すると、ＳＬＥのＮＺＢＡＶ  Ｆ１モデルでシクロホスファミド単独よりも有意な効果が得られた。
【０２４２】
実験手順
検尿
蛋白尿はＣｌｉｎｉｔｅｋ（登録商標）５０  Ｕｒｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｂａｙｅｒ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｅｌｋｈａｒｔ，ＩＮ，ＵＳＡ）を使用して測定した。新たに採取した尿１滴を試薬ストリップ（Ｍｕｌｔｉｓｔｉｘ（登録商標）１０  ＳＧ，Ｂａｙｅｒ）に滴下し、清浄なゲージスポンジで拭って過剰の尿を除去した後にストリップをすぐに分析器に挿入した。
【０２４３】
血中尿素窒素濃度の測定
血中尿素窒素はＣｏｂａｓ  Ｉｎｔｅｇｒａ（登録商標）４００化学分析器（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）と尿素検出試薬（同じくＲｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ製品）を製造業者に指示に従って使用して測定した。Ｐｒｅｃｉｎｏｒｍ（登録商標）及びＰｒｅｃｉｐａｔｈ（登録商標）凍結乾燥ヒト血清対照（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を夫々正常及び異常対照として使用した。
【０２４４】
ＣＤ４及びＣＤ８に対する腎切片染色
ＣＤ４／ＣＤ８二重標識免疫組織化学分析のために、厚さ５ミクロンの凍結腎切片を切りとり、氷冷アセトン（−２０℃）で５分間固定し、２×５分間ＴＢＳ／０．１％  Ｔｗｅｅｎ  ２０（ＴＢＳＴ）でリンスした後、グルコースオキシダーゼで１時間３７℃にて内在ペルオキシダーゼ活性をブロックした。次に切片をＴＢＳＴでリンスし、  Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ，Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）製品であるアビジン／ビオチンブロッキングキットを使用して内在アビジン／ビオチンをブロックした。ＴＢＳＴで更にリンスした後、１０％ウサギ血清／３％ＢＳＡ／ＴＢＳで３０分間室温（ＲＴ）にて内在免疫グロブリンをブロックした。
【０２４５】
ＣＤ８標識のために、切片をビオチン化ラット抗マウスＣＤ８モノクローナル抗体（ＭＡｂ）クローン５３．６−７（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）８ｕｇ／ｍｌと共に１時間室温でインキュベートした。陰性対照では、ナイーブアイソタイプラットＩｇＧ２ａを一次抗血清として使用した。ＴＢＳＴでリンスした後、切片をＶｅｃｔａｓｔａｉｎ  ＡＢＣ−Ｅｌｉｔｅ試薬（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ）中で３０分間室温にてインキュベートした。次に発色基質として金属増感型ＤＡＢ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を使用して染色反応を可視化した。
【０２４６】
ＣＤ４抗体による二次標識のために、Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓアビジン／ビオチンブロッキングキットを使用して切片の（一次反応からの）アビジン／ビオチンをもう一度ブロックした。次に切片をラット抗マウスＣＤ４  ＭＡｂクローンＲＭ４−４（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）０．５ｕｇ／ｍｌと共に１時間室温でインキュベートした。陰性対照では、ナイーブアイソタイプラットＩｇＧ２ｂを一次抗血清として使用した。ＴＢＳＴでリンスした後、切片を次にＴＳＡ（登録商標）（チラミドシグナル増幅）キット（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ＬＡＳ  Ｉｎｃ．，Ｂｏｓｔｏｎ  ＭＡ）からのストレプトアビジン−ＨＲＰ複合体と共に３０分間室温にてインキュベートした。ＴＢＳＴでリンスした後、切片を次にビオチン化ＴＳＡ（登録商標）増幅試薬（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ＬＡＳ  Ｉｎｃ）と共に３分間室温にてインキュベートした後、ストレプトアビジン−ＨＲＰと共に３０分間室温で２回目のインキュベーションを行った。次に発色基質としてＶｅｃｔｏｒ（登録商標）Ｒｅｄ（Ｖｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｓ）を使用して染色反応を可視化した。
【０２４７】
次に二重標識切片をマイヤーヘマトキシリンで１分間軽く対比染色し、水道水でリンスし、Ｃｒｙｓｔａｌ／Ｍｏｕｎｔ（Ｂｉｏｍｅｄａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）を使用してカバースリップで覆った。
【０２４８】
２本鎖ＤＮＡ抗体力価の測定
抗ｄｓ−ＤＮＡ抗体力価をＥＬＩＳＡにより測定した。Ｎｕｎｃ  ＭＡＸＩｓｏｒｂ  ｉｍｍｕｎｏｐｌａｔｅ  ３８４ウェルプレート（型番４６４７１８）にポリ−Ｌ−リジン（２５μｌ／ウェル，０．０１％、Ｓｉｇｍａ  Ｐ４７０７）を１時間室温でコーティングし、脱イオン水で洗浄し、室温で１時間風乾した後、ウシ胸腺ＤＮＡ（Ｓｉｇｍａ  Ｄ１５０１，２５μｌ／ウェル，ＰＢＳ中２．５μｇ／ｍｌ）を４℃で一晩コーティングした。ウシ胸腺ＤＮＡ溶液をプレートからデカントし、ブロッキングバッファー（ＰＢＳ，０．５％  ＢＳＡ  ｐＨ７．２）５０μｌを加え、プレートを１時間室温で震盪した。次にプレートを洗浄用バッファー（ＰＢＳ，０．０５％  Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０（モノラウリン酸ポリオキシエチレン（２０）ソルビタン），ｐＨ７．２）で３回洗浄した。
【０２４９】
アッセイバッファー（ＰＢＳ，０．５％  ＢＳＡ，０．０５％  Ｔｗｅｅｎ（登録商標）２０，０．０１％  Ｐｒｏｃｌｉｎｅ  ３０００）で血清サンプルの希釈系列を作製し、まず２５倍に希釈した後、Ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ  ２０００（登録商標）自動ピペッティングシステムを使用して３倍希釈系列を実施した。こうして陰性対照血清の希釈系列（抗ｄｓＤＮＡ抗体レベルが低いか又はバックグラウンドであるマウス血清プール）を作製した。陽性対照血清の１種以上の希釈液も場合により調製する（例えばＮＺＢ  Ｆ１血清の５０００倍希釈液）。
【０２５０】
希釈血清サンプルを洗浄済みプレートに加え、例えば高速プレートロボットを使用して希釈血清２５ｕｌを加えた。プレートを２時間室温で静かに撹拌しながらインキュベートした後、洗浄用バッファーで６回洗浄した。ＨＲＰ（西洋ワサビペルオキシダーゼ）標識抗マウスＦｃ抗体（アッセイバッファーで５０００倍に希釈したＪａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．，の抗ｍｕ−ＦｃＨＲＰ(カタログ番号１１５−０３５−０７１）２５μｌ）を各ウェルに加え、プレートを静かに撹拌しながら室温で１時間インキュベートした。基質溶液（２５μｌ／ウェル；いずれもＫｉｒｋｅｇａａｒｄ  ＆  Ｐｅｒｒｙ製品であるＴＭＢ基質１部＋Ｐｅｒｏｘｉｄａｓｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｂ  １部）を加え、発色させた。停止溶液（１Ｍ  Ｈ３ＰＯ４  ２５μｌ／ウェル）を加え、プレートを４５０／６２０ｎｍで読み取った。
【０２５１】
下式：
2009530290.tif 000003
［式中、ＣＰ（カットポイント）は陰性対照血清平均の吸光度の３倍であり、ＨｉｇｈＡ４５０／６２０はカットポイントの値に最も近いが、それよりも高い吸光度（Ａ４５０／６２０）であり、ＬｏｗＡ４５０／６２００はカットポイントの値に最も近いが、それよりも低い吸光度（Ａ４５０／６２０）であり、ＤＦ１はカットポイントの値に最も近いが、それよりも低いＬｏｗＡ４５０／６２０値の希釈倍率であり、ＤＦ２はカットポイントの値に最も近いが、それよりも高いＨｉｇｈＡ４５０／６２０値である。］を使用して血清サンプルの抗ｄｓ−ＤＮＡ抗体力価を計算した。
【０２５２】
フローサイトメトリー
脾臓に存在する活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞数をフローサイトメトリーにより以下のように測定した。脾臓全体を摘出し、シングルセル懸濁液で粉砕した後、ＥＬバッファー（Ｑｉａｇｅｎ，Ｖａｌｅｎｃｉａ，ＣＡ製品の赤血球溶解用バッファー，カタログ番号７９２１７）を使用して赤血球を溶解させ、７０ミクロンセルストレーナーに通した後、細胞カウントのために再懸濁した。規定容量の各細胞懸濁液を既知濃度の蛍光ビーズ（Ｐｏｌｙｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．，カタログ番号１８８６２）溶液と混合した。次に混合物をＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｆｒａｎｋｌｉｎ  Ｌａｋｅｓ，ＮＪ）製品ＦＡＣＳｃａｎ（登録商標）フローサイトメーターに流した。混合物毎に規定数のビーズを採取することにより合計生存細胞数を計算した後にこれを使用し、更にＦＡＣＳ分析後に各マウスの脾臓の合計細胞サブ集団数を決定した。
【０２５３】
細胞１×１０６個に飽和量のフルオロフォア標識抗体を加え、氷上で３０分間インキュベートした後、冷緩衝液で洗浄した。脾細胞を抗ＣＤ４（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，カタログ番号５５３０５５，クローンＲＭ４−４）、抗ＣＤ３（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，カタログ番号５５５２７６，クローン１７Ａ２）、及び抗ＣＤ６９（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，カタログ番号５５３２３７，クローンＨ１．２Ｆ３）又は抗ＣＤ４、抗ＣＤ３、及び抗ＣＤ２５（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ，カタログ番号１３０−０９１−０１３）で染色した。ＣＤ８細胞はＣＤ３に陽性であり、ＣＤ４に陰性であるため、ＣＤ３染色により、ＣＤ４Ｔ細胞とＣＤ８Ｔ細胞の分離が容易になった。サンプルをＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製品ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ（登録商標）フローサイトメーターでフローサイトメトリーにより分析した。
【実施例２】
【０２５４】
非消失性ＣＤ４抗体による多発性硬化症の治療
本実施例は非消失性ＣＤ４抗体がＭＳの前臨床モデルで有効であることを実証する一連の実験について記載する。抗体の性能を典型的な看護及び実験治療標準の性能と比較する。
【０２５５】
実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）はＭＳと類似する中枢神経系（ＣＮＳ）の炎症性病態であり、いずれも脱髄の結果として神経伝導障害と麻痺を生じる。ＳＪＬ／Ｊマウスにプロテオリピド蛋白（ＰＬＰ）ペプチドを注射することにより誘発した再発寛解型ＥＡＥはＭＳの有用な前臨床効力モデルとなる（例えばＭｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｋａｒｐｕｓ（１９９６）“Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  Ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｍｏｕｓｅ”ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｉｇａｎら（ｅｄｓ．），Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．及びＳｏｂｅｌら（１９９０）“Ａｃｕｔｅ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ａｌｌｅｒｇｉｃ  ｅｎｃｅｐｈａｌｏｍｙｅｌｉｔｉｓ  ｉｎ  ＳＪＬ／Ｊ  ｍｉｃｅ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ａ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｏｆ  ｍｙｅｌｉｎ  ｐｒｏｔｅｏｌｉｐｉｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ”Ｊ  Ｎｅｕｒｏｐａｔｈｏｌ  Ｅｘｐ  Ｎｅｕｒｏｌ．４９（５）：４６８−７９参照）。
【０２５６】
図１０はこのモデルにおけるＰＬＰペプチド注射後の疾患の経時的進行を模式的に示す。０日に注射後に疾患発症（０〜１５日）、寛解（１５〜２５日）、及び再発（２５日から６０〜７０日の試験終了まで）をたどる。標準化臨床神経スコアを次のように割り当てる。０−無疾患；１−尾の脱力又は後肢弱化が認められるが、両方は認められない；２−尾の脱力と後肢弱化；３−部分的な後肢麻痺；４−完全な後肢麻痺；５−瀕死状態、ＥＡＥによる死亡、安楽死。図中、矢印は非消失性ＣＤ４抗体を他の治療と比較する試験で抗体投与を開始した時点を示す。黒丸は他の治療が過去に有効であると示されている時点を示す。
【０２５７】
このモデルで、非消失性ＣＤ４抗体の前臨床効力を対照抗体（上記）、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、α４インテグリン抗体、及び酢酸グラチラマー（Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標））の効力と比較した。ＳＪＬ／Ｊマウスに０日にＰＬＰ−１３９−１５１ペプチドのＣＦＡ（完全フロイントアジュバント）溶液を免疫した。マウスを週３回上記のような疾患スコアについてスクリーニングし、終点で組織異常（脳及び脊髄）を試験した。疾患発症後に治療を開始した場合には、マウスの疾患スコアをモニターした後に、治療前に同等疾患スコアの群にランダムに分けた。３回の別個の試験で、疾患発症期である８日、疾患のピーク期である１４日、又はトラフ期である２４日に抗体（又は他の）投与を開始した。非消失性ＣＤ４抗体、対照抗体、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、α４インテグリン抗体、及び酢酸グラチラマー１０ｍｇ／ｋｇを週３回投与した。
【０２５８】
指定しない限り、これらの実験で使用した非消失性ＣＤ４抗体はマウス化ＹＴＳ１７７抗体とした。マウス化ＹＴＳ１７７はマウスＩｇＧ２ａ重鎖及びκ軽鎖定常領域配列の上流にラットＹＴＳ１７７抗体に由来する重鎖及び軽鎖可変領域をクローニングしたものである。重鎖はＦｃ受容体結合領域の２カ所に１アミノ酸置換を含む（ヒトＩｇＧ１残基Ｄ２６５及びＮ２９７に対応する残基がアラニンに置換されている）。
【０２５９】
図１１に示すように、疾患発症時に導入した場合（８日に投与開始）には非消失性ＣＤ４抗体はＣＴＬＡ４−Ｉｇ及び酢酸グラチラマーよりも優れていた。図１１Ａは対照抗体、酢酸グラチラマー、α４インテグリン抗体、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、及びＣＤ４抗体を投与した群の経時的臨床スコアのグラフを示す。図１１Ｂはこれらの群の平均１日臨床スコアを示す。
【０２６０】
図１２に示すように、疾患のピーク時に導入した場合（１４日に投与開始）にもＣＤ４抗体はＣＴＬＡ４−Ｉｇよりも優れていた。図１２Ａは対照抗体、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、及びＣＤ４抗体を投与した群の経時的臨床スコアのグラフを示す（酢酸グラチラマーとα４インテグリン抗体はこの時点で無効である）。図１２Ｂはこれらの群の平均１日臨床スコアを示す。ＣＤ４抗体で観察された効果は３回の独立した実験の代表的なものである。
【０２６１】
図１３に示すように、疾患後期に導入した場合（２４日に投与開始）にもＣＤ４抗体はＣＴＬＡ４−Ｉｇよりも優れていた。図１３Ａは対照抗体、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、及びＣＤ４抗体を投与した群の経時的臨床スコアのグラフを示す。図１３Ｂはこれらの群の平均１日臨床スコアを示す。非消失性ＣＤ４抗体で観察された効果は２回の独立した実験の代表的なものである。
【０２６２】
図１４に示すように、非消失性ＣＤ４抗体を投与すると、ＥＡＥの脱髄は低減した。疾患急性期のピーク付近（１２日）で抗体（本実験ではマウス化ＹＴＳ１７７ではなくＹＴＳ１７７）投与を開始し、８０日の試験終了まで続けた。脊髄を摘出し、固定し、（無傷のミエリンを暗青色に染色する）Ｌｕｘｏｌ  Ｆａｓｔ  Ｂｌｕｅ色素で染色した。線で囲んだ領域は脱髄領域を示す。選択したマウスは各群の平均脱髄スコアの代表的なものである。
【０２６３】
ＣＤ４抗体（マウス化ＹＴＳ１７７）を投与すると、再発寛解型ＥＡＥモデルにおけるＣＤ４＋Ｔ細胞浸潤も低減した。例えば、１４日に投与開始後６０日に動物から脊髄切片を採取し、実施例１に記載したようにＣＤ４とＣＤ８で染色した処、対照抗体を投与した動物に比較してＣＤ４抗体を投与した動物ではＣＤ４＋浸潤が低減したが、ＣＤ８＋浸潤は低減しなかった。
【０２６４】
非消失性ＣＤ４抗体を投与したマウスは免疫適格のままであり、Ｌｉｓｔｅｒｉａ感染後に正常生存率を示した。例えば、Ｌｉｓｔｅｒｉａ感染後８日目に、非消失性ＣＤ４抗体（マウス化ＹＴＳ１７７）を投与した動物１０匹中１０匹が生存しており、これに対して対照Ｉｇ抗体を投与した動物は１０匹中８匹、ＣＴＬＡ４−Ｉｇを投与した動物は１０匹中３匹、ＴＮＦＲＩＩ−Ｆｃを投与した動物は１０匹中０匹であった（Ｗｏｏｌｅｙら（１９９３）Ｊ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５１（１１）：６６０２）。Ｌｉｓｔｅｒｉａ接種の１日前に初期用量２０ｍｇ／ｋｇで治療薬の投与を開始した後、試験期間中、全治療薬を５ｍｇ／ｋｇで週３回投与した。
【０２６５】
図１５に示すように、ＣＤ４抗体を投与すると、血液中のＣＤ４＋エフェクター／メモリー細胞が選択的に減少した。対照抗体、ＣＤ４抗体、又はＣＴＬＡ４−Ｉｇを投与した動物でフローサイトメトリーにより測定した血液１μｌ当たりのＩＣＯＳｈｉＣＤ４又はＩＣＯＳｈｉＣＤ８Ｔ細胞数を示す（ＩＣＯＳｈｉはエフェクター／メモリーＴ細胞のマーカーであり、正常マウスの血液中のＴ細胞の４％未満に相当し、ＥＡＥ発症後に約１５〜２０％まで増加するとみなされる。）。ＣＴＬＡ４−Ｉｇと異なり、非消失性ＣＤ４抗体はＣＤ８＋細胞数を減らすことなしにＣＤ４＋細胞数を減らした。この実験では、１４日に投与を開始し、４６日に細胞をカウントした。
【０２６６】
以上をまとめると、非消失性ＣＤ４抗体投与は再発寛解型ＥＡＥのＳＪＬ／Ｊモデルで有効である。この抗体を投与すると、全介入時点で臨床スコアが低下し、脳及び脊髄で組織スコアが低下し、ＣＮＳでＣＤ８＋浸潤は低減せずにＣＤ４＋が低減し、ＣＤ８＋Ｔ細胞数は減少せずにＩＣＯＳｈｉＣＤ４＋Ｔ細胞数が減少した。ＣＤ４抗体の効力はＣＴＬＡ４−Ｉｇ及び酢酸グラチラマーよりも優れており、α４インテグリンモノクローナル抗体と少なくとも同等であった。
【０２６７】
ＣＤ４抗体投与は別のＭＳモデルであるＣ５７Ｂ１ｋ６マウスにＭＯＧ−ペプチドにより誘発したＥＡＥでも有効である。ＭＯＧモデルは周期的寛解を示さないので、ＭＳの急性／慢性モデルといえる。疾患のピーク付近で投与を開始した場合に、ＳＪＬ／Ｊモデルで観察されたと同様の神経症状の急激な改善がＭＯＧモデルでも認められた。図１６に示すように、非消失性（又は消失性）ＣＤ４抗体を投与すると、対照抗体、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、又は消失性ＣＤ８抗体を投与した場合に比較して臨床スコアが低下した。
【０２６８】
実験手順
フローサイトメトリー
血液中のエフェクター／メモリー細胞数をフローサイトメトリーにより以下のように測定した。規定容量の血液を眼窩後方からヘパリン管に採血した後、赤血球を溶解させ、赤血球カウントのために再懸濁した。実施例１に記載したように、規定容量の各細胞懸濁液を既知濃度の蛍光ビーズ溶液と混合し、各マウスの血液の合計細胞サブ集団数を決定した。
【０２６９】
細胞１×１０６個に飽和量のフルオロフォア標識抗体を加え、氷上で３０分間インキュベートした後、冷緩衝液で洗浄した。血球を抗ＣＤ４（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，カタログ番号５５３０５５，クローンＲＭ４−４）、抗ＣＤ８ａ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，カタログ番号５５３０３３，クローン５３−６．７）、ビオチン化抗ＩＣＯＳ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，カタログ番号５５２１４５、クローン７Ｅ．１７Ｇ９）で染色した後、洗浄した。次に血球をストレプトアビジン−ＡＰＣ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ，カタログ番号５５４０６７）で染色し、再び洗浄した。サンプルをＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製品ＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒでフローサイトメトリーにより分析した。
【０２７０】
脊髄切片のＬｕｘｏｌ  Ｆａｓｔ  Ｂｌｕｅ染色
４μｍに切りとったホルマリン固定パラフィン包埋脊髄切片でＬｕｘｏｌ  Ｆａｓｔ  Ｂｌｕｅ染色を実施した。脊髄切片を脱パラフィンし、９５％エタノールまで水和した。次に、一晩（少なくとも１６時間）Ｌｕｘｏｌ  Ｆａｓｔ  Ｂｌｕｅで６０℃にて染色した。過剰の色素を９５％エタノールで洗い流し、スライドをｄＨ２Ｏで洗浄した。次に０．０５％炭酸リチウムに１０〜２０秒間素早く浸すことによりスライドを分別した後、灰白質を識別できるようになるまで７０％エタノールを数回交換した。次にスライドをクレジルバイオレットで５分間３７℃にて染色し、９５％エタノールでリンスし、ゆっくりと脱水し、透徹し、マウントした。Ｓｈｅｅｈａｎ（１９８０）Ｔｈｅｏｒｙ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｈｉｓｔｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ．２ｎｄ  ｅｄ．ｐｐ．２６３−２６４参照。
【０２７１】
Ｌｉｓｔｅｒｉａ感染
Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ（ＡＴＣＣ株＃４３２５１）１００，０００コロニー形成単位をＰＢＳ  １００μｌで希釈し、マウスに静脈内接種した。Ｌｉｓｔｅｒｉａ注射の前日にモノクローナル抗体又は融合蛋白質（マウス１匹当たり４００μｇ(２０ｍｇ／ｋｇに等価)をＰＢＳ  １００μｌで希釈）のＩＰ注射を開始し、Ｌｉｓｔｅｒｉａ注射後１０日間週３回１００μｇ（５ｍｇ／ｋｇ）の投与を続けた。マウスの疾患徴候を１日２回モニターした。
【０２７２】
Ｌｉｓｔｅｒｉａの作製
Ｃ５７Ｂ１／６マウスで連続継代によりＬｉｓｔｅｒｉａビルレンスを維持した。脳・心臓滲出液（ＢＨＩ）又はＢＨＩ寒天プレート（Ｄｉｆｃｏ  Ｌａｂｓ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ）で増殖させた感染脾臓から新鮮な単離物を得た。細菌を反復洗浄し、滅菌ＰＢＳに再懸濁し、ＰＢＳ＋２０％  グリセロール中で−８０℃にて保存した。
【実施例３】
【０２７３】
ＣＤ４抗体とＭＭＦの併用によるループスの治療
本実施例は非消失性ＣＤ４抗体が単独又はミコフェノール酸モフェチルと併用した場合にＳＬＥの前臨床モデルで有効であることを実証する一連の実験について記載する。
【０２７４】
ＳＬＥのＮＺＢｘＷ  Ｆ１マウスモデルについては上記実施例１に記載した。このモデルで非消失性ＣＤ４抗体（上記ＹＴＳ１７７）の前臨床効力を非結合性対照抗体（上記）、ミコフェノール酸モフェチル（ＣｅｌｌＣｅｐｔ（登録商標）ないしＭＭＦ、現在の治療薬）、及びＣＤ４抗体とＭＭＦの併用剤の効力と比較した。
【０２７５】
９カ月齢でＮＺＢ  ｘ  ＮＺＷマウスの治療を開始した。マウスを蛋白尿についてスクリーニングし、その蛋白尿スコアに基づいてランダムに群に分けた。実験開始時に、各群はマウス１５匹からなり、その７３％が＞３００ｍｇ／ｄｌの蛋白尿レベルを示した（なお、上記実施例１に記載した実験の開始時に蛋白尿＞３００ｍｇ／ｄｌのマウスは３２％に過ぎず、本実施例のほうが重度の疾患状態である。）。対照Ａｂ、非消失性ＣＤ４抗体（抗ＣＤ４）、ＭＭＦ（ＣｅｌｌＣｅｐｔ（登録商標））、又は非消失性抗ＣＤ４とＭＭＦの併用剤をマウスに２カ月間連続投与した。蛋白尿（検尿は上記実施例１に記載したように実施した）、疾患進行、及び生存率の変化についてマウスをモニターした。非消失性ＣＤ４抗体（ＹＴＳ１７７）は５ｍｇ／ｋｇを週３回腹腔内（ＩＰ）注射により投与した。ＭＭＦは（単独又はＣＤ４抗体と併用して）２５ｍｇ／ｋｇを毎日又は５０ｍｇ／ｋｇを毎日ＩＰ投与した。
【０２７６】
重度疾患状態で投与を開始した本実験では、ＣＤ４抗体又はＭＭＦを個々に投与した場合には重度蛋白尿を有意に改善するには不十分であった（一部のマウスでは改善するが、その数は有意とみなすには不十分である）。しかし、両剤を併用すると相乗作用を生じて有意効果を示し、図１７に示すように、ＣＤ４抗体をＭＭＦと併用投与した場合には、蛋白尿改善能に相乗効果が認められた。図１７Ａは投与後指定時点における蛋白尿３００ｍｇ／ｄｌ未満のマウスの百分率を示す。ＣＤ４抗体をＭＭＦ（ＣｅｌｌＣｅｐｔ（登録商標））と併用投与した結果、蛋白尿＞３００ｍｇ／ｄｌを示すマウスは最終的に減少し、ごく後期疾患でネフローゼ症状の改善を示したが、対照抗体投与群又はＣＤ４抗体もしくはＭＭＦを個々に投与した群ではこのような結果は認められなかった。図１７Ｂは投与から１カ月後に蛋白尿３００ｍｇ／ｄｌから改善したマウスの百分率を示す。
【０２７７】
図１８に示すように、非消失性ＣＤ４抗体をＭＭＦと併用投与すると、どちらの用量のＭＭＦ（図１８Ａ及び１８Ｂでは５０ｍｇ／ｋｇ／日、図１８Ｃ及び１８Ｄでは２５ｍｇ／ｋｇ／日）でも進行までの時間が延び（図１８Ａ及び１８Ｃ）、生存率が上昇した（図１８Ｂ及び１８Ｄ）。非消失性ＣＤ４抗体とＭＭＦの併用は非消失性ＣＤ４抗体又はＭＭＦ単独よりも有効であった。図１８Ａ〜１８Ｄでは、参照対照（対照抗体投与群）を太字で示し、参照対照に対して統計的有意性に達する群のｐ値のみをグラフに示す。
【０２７８】
ＣＤ４抗体とＭＭＦの併用投与は蛋白尿の低減にも有効である。図１９は対照抗体投与群を参照対照群としてダネット法を使用した投与２カ月の蛋白尿の多重比較分析を示す。ＭＭＦ  ５０ｍｇ／ｋｇを毎日単独又はＣＤ４抗体と併用投与した群の結果を図１９Ａに示し、ＭＭＦ  ２５ｍｇ／ｋｇを毎日単独又はＣＤ４抗体と併用投与した群の結果を図１９Ｂに示す。参照対照（対照抗体投与群）を太字で示し、参照対照に対して統計的有意性に達する群のｐ値のみをグラフに示す。この結果、ＣＤ４抗体とＭＭＦを併用すると、このモデルで蛋白尿を低減するのに有意効果があったが、対照抗体、抗ＣＤ４単独又はＭＭＦ単独の投与では蛋白尿の統計的に有意な低減を示さなかった。
【０２７９】
非消失性ＣＤ４抗体とＭＭＦの併用剤を投与すると、脾臓に存在するＣＤ４＋Ｔ細胞数が減少した。図２０Ｃに示すように、併用剤を２カ月間投与した動物では対照抗体を投与した動物に比較して脾ＣＤ４＋Ｔ細胞数が減少した（ｐ＝０．００２）。併用剤投与の効果は下流でも観察され、例えばＢ細胞及び樹状細胞集団でも観察された。例えば、図２０Ｄに示すように、ＣＤ４抗体とＭＭＦの併用剤を投与すると、脾臓に存在するＢ２Ｂ細胞数が減少した（対照抗体を投与した動物に対してｐ＝０．０１７）。血中合計ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＢ２Ｂ細胞数（夫々図２０Ａ及び２０Ｂ）から明らかなように脾ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＢ２Ｂ細胞の減少は抗体による細胞消失に起因するものではなかった。実際に、夫々５０ｍｇ／ｋｇ  ＭＭＦをＣＤ４抗体と併用投与した群及び２５ｍｇ／ｋｇ  ＭＭＦを投与した群では血中ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＢ２Ｂ細胞数の増加が認められた（但し、これらの増加は統計的に有意とは言えない）。ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＢ２Ｂ細胞数は各種細胞集団を同定するための抗体を使用して基本的に上記のようにフローサイトメトリーにより測定し、（合計リンパ球の）各集団の百分率に合計リンパ球数を乗じた値を使用して各集団数を決定した。Ｂ２２０（ＣＤ４５）とＣＤ３８に対する陽性染色によりＢ２細胞（大半のＢ細胞）を同定した。抗Ｂ２２０／ＣＤ４５と抗ＣＤ３８はＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎから入手した。
【０２８０】
図２０Ｅに示すように、非消失性ＣＤ４抗体とＭＭＦの併用剤を投与すると、ＩｇＭ＋形質細胞数も減少した。ＩｇＭ＋形質細胞数は基本的に上記のようにフローサイトメトリーにより測定した。シンデカン−１の発現により形質細胞を同定し、その表面にＩｇＭも発現するシンデカン−１陽性細胞をＩｇＭ形質細胞とした。シンデカン−１とＩｇＭに対する抗体はＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎから入手した。対照抗体投与群を参照対照群（太字で示す）としてダネット法を使用して比較を実施し、参照対照に対して統計的有意性に達する群のｐ値のみをグラフに示す。
【０２８１】
同様に、図２０Ｆに示すように、ＣＤ４抗体とＭＭＦの併用剤を投与すると、アイソタイプ転換形質細胞数も減少した。アイソタイプ転換形質細胞数は基本的に上記のようにフローサイトメトリーにより測定した。シンデカン−１の発現により形質細胞を同定し、ＩｇＭ発現に陰性のシンデカン−１陽性抗体を（ＩｇＭ以外のアイソタイプ、例えばＩｇＧ、ＩｇＥ等を発現する）アイソタイプ転換形質細胞とした。シンデカン−１とＩｇＭに対する抗体はＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎから入手した。対照抗体投与群を参照対照群（太字で示す）としてダネット法を使用して比較を実施し、参照対照に対して統計的有意性に達する群のｐ値のみをグラフに示す。
【０２８２】
図２０Ｇに示すように、併用剤を投与すると、胚中心Ｂ細胞数も減少した。胚中心Ｂ細胞数は基本的に上記のようにフローサイトメトリーにより測定した。胚中心Ｂ細胞はＢ２２０に陽性でＣＤ３８表面発現に陰性の細胞として同定した（Ｂ２２０とＣＤ３８を同時発現するＢ２細胞から区別する）。抗Ｂ２２０／ＣＤ４５及び抗ＣＤ３８はＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎから入手した。対照抗体投与群を参照対照群（太字で示す）としてダネット法を使用して比較を実施し、参照対照に対して統計的有意性に達する群のｐ値のみをグラフに示す。
【０２８３】
形質細胞様樹状細胞は多量のタイプＩインターフェロン（α及びβインターフェロン）を分泌することから潜在的に重要なループス誘発因子である。従って、図２０Ｈに示すように、ＣＤ４抗体を単独又はＭＭＦと併用投与すると、脾臓形質細胞様樹状細胞数が減少したことは注目に値する。形質細胞様樹状細胞数は基本的に上記のようにフローサイトメトリーにより測定した。夫々マーカーＣＤ１９及びＣＤ３を使用してＢ細胞とＴ細胞を排除し、残りの細胞のうちでその固有のｐＤＣＡ発現とＢ２２０のその中間発現に基づいて形質細胞様樹状細胞を同定した。抗ｐＤＣＡはＭｉｌｔｅｎｙｉから入手したが、それ以外の抗体はＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎから入手した。対照抗体投与群を参照対照群（太字で示す）としてダネット法を使用して比較を実施し、参照対照に対して統計的有意性に達する群のｐ値のみをグラフに示す。
【０２８４】
更に、図２０Ｉに示すように、抗体を（単独又はＭＭＦと併用）投与すると、これらの樹状細胞におけるＭＨＣクラスＩＩの発現レベルも低下した。形質細胞様樹状細胞数はｐＤＣＡに対する抗体（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）を使用して基本的に上記のようにフローサイトメトリーにより測定し、ＩＡｄ及びＩＥｄＭＨＣＩＩ分子の共通エピトープに対する抗体（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を使用してそのＭＨＣＩＩレベルを評価した。対照抗体投与群を参照対照群（太字で示す）としてダネット法を使用して比較を実施し、参照対照に対して統計的有意性に達する群のｐ値のみをグラフに示す。ＭＨＣＩＩレベルは一般にこれらの樹状細胞の活性化状態に関連しており、レベルの増加は活性化状態の増加に相当するので、この知見からＣＤ４抗体投与によりこの樹状細胞集団の活性化状態を低下できると考えられる。
【０２８５】
以上をまとめると、例えばＭＭＦとの併用による非消失性ＣＤ４抗体の投与は疾患後期に導入した場合でもＮＺＢｘＷ  Ｆ１マウスで有効であった。併用投与により無疾患進行期間と生存期間が延び、脾ＣＤ４＋Ｔ細胞数が減少した。更に、非消失性ＣＤ４抗体をＭＭＦと併用すると、ＳＬＥのＮＺＢ／Ｗ  Ｆ１モデルにおける
蛋白尿の改善にＭＭＦ単独よりも有意効果があった。非消失性ＣＤ４抗体は単独で大半のＢ細胞（Ｂ２細胞）に有意影響を与えずに胚中心Ｂ細胞とアイソタイプ転換形質細胞の数を選択的に減らすこともできた。更に、抗ＣＤ４はタイプＩインターフェロンとＩＦＮ−α及びβの産生によりＳＬＥの病因に結び付けられている細胞である形質細胞様樹状細胞数を減らすこともできた。
【０２８６】
以上、明確に理解できるように本発明を多少詳細に記載したが、本発明の真の範囲を逸脱することなく形態や細部に種々の変更が可能であることは以上の開示から当業者に自明である。例えば、上記全技術及び組成物は種々に組合せて使用することができる。本明細書に引用した全刊行物、特許、特許出願、及び／又は他の文献は言及によりその開示内容全体を全目的で組込み、各刊行物、特許、特許出願、及び／又は他の文献を言及により全目的で組込むと個々に記載しているものとみなす。
【図面の簡単な説明】
【０２８７】
【図１Ａ】図１Ａ〜１ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図１Ａは軽鎖のヌクレオチド配列（配列番号１）及びアミノ酸配列（配列番号２）と、ＣＤＲ領域及びフレームワーク領域を示す。
【図１Ｂ】図１Ａ〜１ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図１Ｂは軽鎖のヌクレオチド配列（配列番号１）を示す。
【図１Ｃ】図１Ａ〜１ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図１Ｃはリーダー配列をもつ軽鎖（配列番号２）ともたない軽鎖（配列番号３）のアミノ酸配列を示す。
【図１Ｄ】図１Ａ〜１ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図１Ｄは重鎖のヌクレオチド配列（配列番号４）及びアミノ酸配列（配列番号５）と、ＣＤＲ領域及びフレームワーク領域を示す。
【図１Ｅ】図１Ａ〜１ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図１Ｅは重鎖のヌクレオチド配列（配列番号４）を示す。
【図１Ｆ】図１Ａ〜１ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図１Ｆはリーダー配列をもつ重鎖（配列番号５）ともたない重鎖（配列番号６）のアミノ酸配列を示す。
【図２Ａ】図２Ａ〜２ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図２Ａは軽鎖のヌクレオチド配列（配列番号７）及びアミノ酸配列（配列番号８）と、ＣＤＲ領域及びフレームワーク領域を示す。
【図２Ｂ】図２Ａ〜２ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図２Ｂは軽鎖のヌクレオチド配列（配列番号７）を示す。
【図２Ｃ】図２Ａ〜２ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図２Ｃはリーダー配列をもつ軽鎖（配列番号８）ともたない軽鎖（配列番号９）のアミノ酸配列を示す。
【図２Ｄ】図２Ａ〜２ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図２Ｄは重鎖のヌクレオチド配列（配列番号１０）及びアミノ酸配列（配列番号１１）と、ＣＤＲ領域及びフレームワーク領域を示す。
【図２Ｅ】図２Ａ〜２ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図２Ｅは重鎖のヌクレオチド配列（配列番号１０）を示す。図２Ｆはリーダー配列をもつ重鎖（配列番号１１）ともたない重鎖（配列番号１２）のアミノ酸配列を示す。
【図２Ｆ】図２Ａ〜２ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図２Ｆはリーダー配列をもつ重鎖（配列番号１１）ともたない重鎖（配列番号１２）のアミノ酸配列を示す。
【図３Ａ】図３Ａ〜３ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図３Ａは軽鎖のヌクレオチド配列（配列番号１３）及びアミノ酸配列（配列番号１４）と、ＣＤＲ領域及びフレームワーク領域を示す。
【図３Ｂ】図３Ａ〜３ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図３Ｂは軽鎖のヌクレオチド配列（配列番号１３）を示す。
【図３Ｃ】図３Ａ〜３ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図３Ｃはリーダー配列をもつ軽鎖（配列番号１４）ともたない軽鎖（配列番号１５）のアミノ酸配列を示す。
【図３Ｄ】図３Ａ〜３ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図３Ｄは重鎖のヌクレオチド配列（配列番号１６）及びアミノ酸配列（配列番号１７）と、ＣＤＲ領域及びフレームワーク領域を示す。
【図３Ｅ】図３Ａ〜３ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図３Ｅは重鎖のヌクレオチド配列（配列番号１６）を示す。
【図３Ｆ】図３Ａ〜３ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図３Ｆはリーダー配列をもつ重鎖（配列番号１７）ともたない重鎖（配列番号１８）のアミノ酸配列を示す。
【図４Ａ】図４Ａ〜４ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図４Ａは軽鎖のヌクレオチド配列（配列番号１９）及びアミノ酸配列（配列番号２０）と、ＣＤＲ領域及びフレームワーク領域を示す。
【図４Ｂ】図４Ａ〜４ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図４Ｂは軽鎖のヌクレオチド配列（配列番号１９）を示す。
【図４Ｃ】図４Ａ〜４ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図４Ｃはリーダー配列をもつ軽鎖（配列番号２０）ともたない軽鎖（配列番号２１）のアミノ酸配列を示す。
【図４Ｄ】図４Ａ〜４ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図４Ｄは重鎖のヌクレオチド配列（配列番号２２）及びアミノ酸配列（配列番号２３）と、ＣＤＲ領域及びフレームワーク領域を示す。
【図４Ｅ】図４Ａ〜４ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図４Ｅは重鎖のヌクレオチド配列（配列番号２２）を示す。
【図４Ｆ】図４Ａ〜４ＦはＴＲＸ１非消失性ＣＤ４抗体の１態様の重鎖及び軽鎖のヌクレオチド配列とアミノ酸配列を示す。図４Ｆはリーダー配列をもつ重鎖（配列番号２３）ともたない重鎖（配列番号２４）のアミノ酸配列を示す。
【図５】ＳＬＥのＮＺＢｘＷ  Ｆ１前臨床効力モデルにおける月齢に伴う疾患の進行を模式的に示す。
【図６Ａ】図６Ａ〜６Ｆは非消失性ＣＤ４抗体の投与に対する応答を示すグラフである。８カ月齢で投与を開始した動物について、図６Ａは進行（蛋白尿３００ｍｇ／ｄｌ又は死亡）までの時間を関数として平均血中尿素窒素を示すグラフである。
【図６Ｂ】図６Ａ〜６Ｆは非消失性ＣＤ４抗体の投与に対する応答を示すグラフである。８カ月齢で投与を開始した動物について、図６Ｂは投与開始後の時間を関数としての生存率百分率を関数として平均血中尿素窒素を示すグラフである。
【図６Ｃ】図６Ａ〜６Ｆは非消失性ＣＤ４抗体の投与に対する応答を示すグラフである。８カ月齢で投与を開始した動物について、図６Ｃは投与５カ月目の蛋白尿を関数として平均血中尿素窒素を示すグラフである。
【図６Ｄ】図６Ａ〜６Ｆは非消失性ＣＤ４抗体の投与に対する応答を示すグラフである。８カ月齢で投与を開始した動物について、図６Ｄは投与開始後の時間を関数として平均血中尿素窒素を示すグラフである。
【図６Ｅ】図６Ａ〜６Ｆは非消失性ＣＤ４抗体の投与に対する応答を示すグラフである。６カ月齢で投与を開始した動物について、図６Ｅは進行（蛋白尿３００ｍｇ／ｄｌ又は死亡）までの時間を示す。
【図６Ｆ】図６Ａ〜６Ｆは非消失性ＣＤ４抗体の投与に対する応答を示すグラフである。６カ月齢で投与を開始した動物について、図６Ｆは投与開始後の時間を関数として生存率百分率を示す。
【図７】図７Ａ〜７Ｂは非消失性ＣＤ４抗体投与による重度ループス腎炎の改善を示すグラフである。図７Ａは投与後指定時間で蛋白尿３００ｍｇ／ｄｌ未満のマウスの百分率を示すグラフである。図７Ｂは投与開始から１カ月以内に蛋白尿≧３００ｍｇ／ｄｌから改善したマウスの百分率を示す。
【図８】図８Ａ〜８Ｄは非消失性ＣＤ４抗体の投与に対する応答を示すグラフである。図８Ａは登録時のｄｓ−ＤＮＡ抗体力価を示し、図８Ｂは投与後３カ月の力価を示す。図８Ｃは投与後３週間で脾臓に存在するＣＤ４＋ＣＤ６９＋細胞数を示す。図８Ｄは投与後３週間で脾臓に存在するＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞数を示す。
【図９】図９Ａ〜９Ｂは投与６カ月の蛋白尿の多重比較分析を示し、図９Ａではシクロホスファミド（Ｃｙｔｏｘａｎ（登録商標））投与群を対照群として使用し、図９ＢではＣＤ４非消失性抗体投与群を対照群として使用した。
【図１０】ＭＳの前臨床効力モデルであるＳＪＬ／ＪマウスにＰＬＰペプチド注射により誘発したＥＡＥの再発と緩和により疾患の経時的進行を模式的に示す。
【図１１】図１１Ａ〜１１Ｂは非消失性ＣＤ４抗体の投与に対する応答を示すグラフである。図１１Ａは対照抗体である酢酸グラチラマー（Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標））、α４インテグリン抗体ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、及び非消失性ＣＤ４抗体を投与した群について経時的臨床スコアのグラフを示す。図１１Ｂはこれらの群について平均１日臨床スコアを示す。
【図１２】図１２Ａ〜１２Ｂは非消失性ＣＤ４抗体の投与に対する応答を示すグラフである。図１２Ａは対照抗体、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、及び非消失性ＣＤ４抗体を投与した群について経時的臨床スコアのグラフを示す。図１２Ｂはこれらの群について平均１日臨床スコアを示す。
【図１３】図１３Ａ〜１３Ｂは非消失性ＣＤ４抗体の投与に対する応答を示すグラフである。図１３Ａは対照抗体、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、及び非消失性ＣＤ４抗体を投与した群について経時的臨床スコアのグラフを示す。図１３Ｂはこれらの群について平均１日臨床スコアを示す。
【図１４】対照抗体又はＣＤ４抗体を投与したマウスからの脊髄切片を示し、非消失性ＣＤ４抗体投与によりＥＡＥの脱髄が低減していることを示す。
【図１５】対照抗体、非消失性ＣＤ４抗体、又はＣＴＬＡ４−Ｔｇを投与した動物の血液１μｌ当たりのＩＣＯＳｈｉＣＤ４又はＩＣＯＳｈｉＣＤ８Ｔ細胞数を示すグラフである。
【図１６】ミエリン希突起膠細胞糖蛋白（ＭＯＧ）−ペプチドにより誘発したＥＡＥに対する非消失性ＣＤ４抗体、消失性ＣＤ４抗体、対照抗体、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ、又は消失性ＣＤ８抗体の投与を比較した経時的臨床スコアのグラフである。
【図１７】図１７Ａ〜１７Ｂは非消失性ＣＤ４抗体の投与に対する応答を示すグラフである。図１７Ａは指定投与後指定時間で蛋白尿３００ｍｇ／ｄｌ未満のマウスの百分率を示すグラフである。図１７Ｂは蛋白尿≧３００ｍｇ／ｄｌから改善したマウスの百分率を示す。
【図１８Ａ】図１８Ａ〜１８Ｄは治療応答を示すグラフである。非消失性ＣＤ４抗体とＭＭＦ５０ｍｇ／ｋｇ／日を併用投与した動物について、図１８Ａは進行（蛋白尿３００ｍｇ／ｄｌ又は死亡）までの時間を関数としての生存率百分率を示すグラフである。
【図１８Ｂ】図１８Ａ〜１８Ｄは治療応答を示すグラフである。非消失性ＣＤ４抗体とＭＭＦ５０ｍｇ／ｋｇ／日を併用投与した動物について、図１８Ｂは投与開始後の時間の関数としての生存率百分率を示すグラフである。
【図１８Ｃ】図１８Ａ〜１８Ｄは治療応答を示すグラフである。非消失性ＣＤ４抗体とＭＭＦ２５ｍｇ／ｋｇ／日を併用投与した動物について、図１８Ｃは進行までの時間を示すグラフである。
【図１８Ｄ】図１８Ａ〜１８Ｄは治療応答を示すグラフである。非消失性ＣＤ４抗体とＭＭＦ２５ｍｇ／ｋｇ／日を併用投与した動物について、図１８Ｄは生存率百分率を示すグラフである。
【図１９】図１９Ａ〜１９Ｂは対照抗体投与群を対照群として使用した投与２カ月の蛋白尿の多重比較分析を示す。ＭＭＦ５０ｍｇ／ｋｇを毎日（単独又は非消失性ＣＤ４抗体と併用）投与した群の結果を図１９Ａに示し、ＭＭＦ２５ｍｇ／ｋｇを毎日投与した群の結果を図１９Ｂに示す。
【図２０Ａ】図２０Ａ〜２０Ｉは治療応答を示すグラフである。グラフは対照抗体、非消失性ＣＤ４抗体、指定用量のＭＭＦ、又は非消失性ＣＤ４抗体と指定用量のＭＭＦの併用剤を投与した動物について、血液１μｌ当たりのＣＤ４＋Ｔ細胞数（図２０Ａ）を示す。
【図２０Ｂ】図２０Ａ〜２０Ｉは治療応答を示すグラフである。グラフは対照抗体、非消失性ＣＤ４抗体、指定用量のＭＭＦ、又は非消失性ＣＤ４抗体と指定用量のＭＭＦの併用剤を投与した動物について、血液１μｌ当たりのＢ２Ｂ細胞数（図２０Ｂ）を示す。
【図２０Ｃ】図２０Ａ〜２０Ｉは治療応答を示すグラフである。グラフは対照抗体、非消失性ＣＤ４抗体、指定用量のＭＭＦ、又は非消失性ＣＤ４抗体と指定用量のＭＭＦの併用剤を投与した動物について、脾臓当たりのＣＤ４＋Ｔ細胞数（図２０Ｃ）を示す。
【図２０Ｄ】図２０Ａ〜２０Ｉは治療応答を示すグラフである。グラフは対照抗体、非消失性ＣＤ４抗体、指定用量のＭＭＦ、又は非消失性ＣＤ４抗体と指定用量のＭＭＦの併用剤を投与した動物について、脾臓当たりのＢ２Ｂ細胞数（図２０Ｄ）を示す。
【図２０Ｅ】図２０Ａ〜２０Ｉは治療応答を示すグラフである。グラフは対照抗体、非消失性ＣＤ４抗体、指定用量のＭＭＦ、又は非消失性ＣＤ４抗体と指定用量のＭＭＦの併用剤を投与した動物について、ＩｇＭ＋形質細胞数（図２０Ｅ）を示す。
【図２０Ｆ】図２０Ａ〜２０Ｉは治療応答を示すグラフである。グラフは対照抗体、非消失性ＣＤ４抗体、指定用量のＭＭＦ、又は非消失性ＣＤ４抗体と指定用量のＭＭＦの併用剤を投与した動物について、アイソタイプ転換形質細胞数（図２０Ｆ）を示す。
【図２０Ｇ】図２０Ａ〜２０Ｉは治療応答を示すグラフである。グラフは対照抗体、非消失性ＣＤ４抗体、指定用量のＭＭＦ、又は非消失性ＣＤ４抗体と指定用量のＭＭＦの併用剤を投与した動物について、胚中心細胞数（図２０Ｇ）を示す。
【図２０Ｈ】図２０Ａ〜２０Ｉは治療応答を示すグラフである。グラフは対照抗体、非消失性ＣＤ４抗体、指定用量のＭＭＦ、又は非消失性ＣＤ４抗体と指定用量のＭＭＦの併用剤を投与した動物について、脾臓当たりの形質細胞様樹状細胞数（図２０Ｈ）を示す。
【図２０Ｉ】図２０Ａ〜２０Ｉは治療応答を示すグラフである。グラフは対照抗体、非消失性ＣＤ４抗体、指定用量のＭＭＦ、又は非消失性ＣＤ４抗体と指定用量のＭＭＦの併用剤を投与した動物について、形質細胞様樹状細胞におけるＭＨＣＩＩ発現レベル（図２０Ｉ）を示す。
【図２１】図２１Ａ〜２１ＢはヒトＣＤ４の核酸配列とアミノ酸配列を示す。図２１Ａはリーダーを切断した成熟蛋白質のヒトＣＤ４アミノ酸配列を示す。図２１Ｂは成熟ヒトＣＤ４  ＤＮＡ配列を示す。
【図１Ａ】
2009530290.tif 000004
【図１Ｂ】
2009530290.tif 000005
【図１Ｃ】
2009530290.tif 000006
【図１Ｄ】
2009530290.tif 000007
【図１Ｅ】
2009530290.tif 000008
【図１Ｆ】
2009530290.tif 000009
【図２Ａ】
2009530290.tif 000010
【図２Ｂ】
2009530290.tif 000011
【図２Ｃ】
2009530290.tif 000012
【図２Ｄ】
2009530290.tif 000013
【図２Ｅ】
2009530290.tif 000014
【図２Ｆ】
2009530290.tif 000015
【図３Ａ】
2009530290.tif 000016
【図３Ｂ】
2009530290.tif 000017
【図３Ｃ】
2009530290.tif 000018
【図３Ｄ】
2009530290.tif 000019
【図３Ｅ】
2009530290.tif 000020
【図３Ｆ】
2009530290.tif 000021
【図４Ａ】
2009530290.tif 000022
【図４Ｂ】
2009530290.tif 000023
【図４Ｃ】
2009530290.tif 000024
【図４Ｄ】
2009530290.tif 000025
【図４Ｅ】
2009530290.tif 000026
【図４Ｆ】
2009530290.tif 000027
【図５】
2009530290.tif 000028
【図６Ａ】
2009530290.tif 000029
【図６Ｂ】
2009530290.tif 000030
【図６Ｃ】
2009530290.tif 000031
【図６Ｄ】
2009530290.tif 000032
【図６Ｅ】
2009530290.tif 000033
【図６Ｆ】
2009530290.tif 000034
【図７】
2009530290.tif 000035
【図８】
2009530290.tif 000036
【図９】
2009530290.tif 000037
【図１０】
2009530290.tif 000038
【図１１】
2009530290.tif 000039
【図１２】
2009530290.tif 000040
【図１３】
2009530290.tif 000041
【図１４】
2009530290.tif 000042
【図１５】
2009530290.tif 000043
【図１６】
2009530290.tif 000044
【図１７】
2009530290.tif 000045
【図１８Ａ】
2009530290.tif 000046
【図１８Ｂ】
2009530290.tif 000047
【図１８Ｃ】
2009530290.tif 000048
【図１８Ｄ】
2009530290.tif 000049
【図１９】
2009530290.tif 000050
【図２０Ａ】
2009530290.tif 000051
【図２０Ｂ】
2009530290.tif 000052
【図２０Ｃ】
2009530290.tif 000053
【図２０Ｄ】
2009530290.tif 000054
【図２０Ｅ】
2009530290.tif 000055
【図２０Ｆ】
2009530290.tif 000056
【図２０Ｇ】
2009530290.tif 000057
【図２０Ｈ】
2009530290.tif 000058
【図２０Ｉ】
2009530290.tif 000059
【図２１】
2009530290.tif 000060
【国際調査報告】
2009530290.tif 000061
2009530290.tif 000062