(57)【要約】  本願は、５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミドのプロドラッグ誘導体、それらの製造方法、疾患の処置および／または予防のためのそれらの使用、および疾患の、特に血栓塞栓性障害の処置および／または予防用の医薬を製造するためのそれらの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2009526788.tif 000076
［式中、
Ｒ１は、水素または（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル（これは、ヒドロキシまたは（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシにより置換されていてもよい）であり、
Ｒ２は、水素または（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、
そして、
Ｌは、（Ｃ１−Ｃ４）−アルカンジイル基（ここで、１個のＣＨ２は、Ｏ原子により置き換えられていてもよい）であるか、または、式
【化２】
2009526788.tif 000077
｛式中、
＊は、Ｎ原子への結合点を意味し、
Ｒ３は、天然α−アミノ酸またはそのホモログもしくは異性体の側鎖の基であるか、
または、
Ｒ３はＲ１に結合しており、その２つが一体となって（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４基を形成しており、
Ｒ４は、水素またはメチルであり、
Ｒ５は（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、
そして、
Ｒ６は、水素または（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルである｝
の基である］
の化合物並びにその塩、溶媒和物および塩の溶媒和物。
【請求項２】
式中、
Ｒ１が水素または（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、
Ｒ２が水素であり、
そして、
Ｌが、（Ｃ２−Ｃ４）−アルカンジイル基または式
【化３】
2009526788.tif 000078
｛式中、
＊は、Ｎ原子への結合点を意味し、
Ｒ３は、水素、メチル、プロパン−２−イル、プロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、３−アミノプロパン−１−イルまたは３−グアニジノプロパン−１−イルであるか、
または、
Ｒ３はＲ１に結合しており、その２つが一体となって（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４基を形成しており、
Ｒ４は、水素またはメチルであり、
Ｒ５はメチルであり、
そして、
Ｒ６は、水素またはメチルである｝
の基である、
請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物、並びにその塩、溶媒和物および塩の溶媒和物。
【請求項３】
式中、
Ｒ１が、水素、メチルまたはｎ−ブチルであり、
Ｒ２が、水素であり、
そして、
Ｌが、ＣＨ２ＣＨ２基であるか、または、式
【化４】
2009526788.tif 000079
｛式中、
＊は、Ｎ原子への結合点を意味し、
Ｒ３は、水素、メチル、プロパン−２−イル、プロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、３−アミノプロパン−１−イルまたは３−グアニジノプロパン−１−イルであるか、
または、
Ｒ３はＲ１に結合しており、その２つが一体となって（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４基を形成しており、
Ｒ４は、水素またはメチルであり、
そして、
Ｒ６は、水素またはメチルである｝
の基である、
請求項１または請求項２に記載の式（Ｉ）の化合物、並びにその塩、溶媒和物および塩の溶媒和物。
【請求項４】
請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物の製造方法であって、
［Ａ］化合物（Ａ）
【化５】
2009526788.tif 000080
を、先ず、不活性溶媒中、塩基の存在下、式（ＩＩ）
【化６】
2009526788.tif 000081
（式中、Ｒ２は請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の意味を有し、
そして、Ｑは、例えば、塩素、臭素またはヨウ素などの脱離基である）
の化合物を用いて、式（ＩＩＩ）
【化７】
2009526788.tif 000082
（式中、ＱおよびＲ２は上記の意味を有する）
の化合物に変換し、
次いで、後者を、不活性溶媒中、式（ＩＶ）
【化８】
2009526788.tif 000083
（式中、Ｒ１、Ｒ３およびＲ４は、各々請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の意味を有し、
ＰＧは、例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などのアミノ保護基であり、
そして、ＸはＯまたはＳである）
のα−アミノカルボン酸またはα−アミノチオカルボン酸のセシウム塩と反応させ、式（Ｖ）
【化９】
2009526788.tif 000084
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ＰＧおよびＸの各々は上記の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを除去し、式（Ｉ−Ａ）
【化１０】
2009526788.tif 000085
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＸの各々は上記の意味を有する）
の化合物を得るか、
または、
［Ｂ］化合物（Ａ）を、不活性溶媒中、塩基の存在下、式（ＶＩ）
【化１１】
2009526788.tif 000086
（式中、ＰＧは上記の意味を有し、
Ｒ１Ａは、ヒドロキシまたは（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシにより置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、
そして、Ｌ１は、１個のＣＨ２基がＯ原子により置き換えられていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）−アルカンジイル基である）
の化合物と反応させ、式（ＶＩＩ）
【化１２】
2009526788.tif 000087
（式中、Ｒ１Ａ、Ｌ１およびＰＧの各々は上記の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを除去し、式（Ｉ−Ｂ）
【化１３】
2009526788.tif 000088
（式中、Ｒ１ＡおよびＬ１は上記の意味を有する）
の化合物を得るか、
または、
［Ｃ］化合物（Ｂ）
【化１４】
2009526788.tif 000089
を、先ず、式（ＶＩＩＩ）
【化１５】
2009526788.tif 000090
（式中、ＰＧ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ５の各々は、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の意味を有し、
そして、Ｌ２は、（ＣＨ２）２またはＣＲ３Ｒ４基である（式中、Ｒ３およびＲ４の各々は請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の意味を有する））
の化合物に変換し、
次いで、後者を、不活性溶媒中、塩基の存在下、式（ＩＸ）
【化１６】
2009526788.tif 000091
の化合物と反応させ、式（Ｘ）
【化１７】
2009526788.tif 000092
（式中、ＰＧ、Ｌ２、Ｒ１、Ｒ２およびＲ５の各々は上記の意味を有する）
の化合物を得、
続いて、保護基ＰＧを除去し、式（Ｉ−Ｃ）
【化１８】
2009526788.tif 000093
（式中、Ｌ２、Ｒ１、Ｒ２およびＲ５の各々は上記の意味を有する）
の化合物を得るか、
または、
［Ｄ］化合物（Ａ）を、不活性溶媒中、塩基の存在下、式（ＸＩ）
【化１９】
2009526788.tif 000094
（式中、Ｌ１は、１個のＣＨ２基がＯ原子により置き換えられていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）−アルカンジイル基であり、
そして、ＰＧ１およびＰＧ２は、相互に独立して、例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）またはｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）などのアミノ保護基であり、同一であっても異なっていてもよい）
の化合物と反応させ、式（ＸＩＩ）
【化２０】
2009526788.tif 000095
（式中、Ｌ１、ＰＧ１およびＰＧ２の各々は上記の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧ１およびＰＧ２を、同時または連続的に除去し、式（Ｉ−Ｄ）
【化２１】
2009526788.tif 000096
（式中、Ｌ１は上記の意味を有する）
の化合物を得、
そして、各場合で得られる式（Ｉ−Ａ）、（Ｉ−Ｂ）、（Ｉ−Ｃ）および（Ｉ−Ｄ）の化合物を、必要に応じて、適切な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）酸により、それらの溶媒和物、塩および／または塩の溶媒和物に変換することを特徴とする、方法。
【請求項５】
疾患の処置および／または予防のための、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物。
【請求項６】
血栓塞栓性障害の処置および／または予防用の医薬を製造するための、請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物の使用。
【請求項７】
請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物を、必要に応じて、不活性、非毒性の医薬的に適する補助剤と組み合わせて含む、医薬。
【請求項８】
請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物を、さらなる有効成分と組み合わせて含む、医薬。
【請求項９】
血栓塞栓性障害の処置および／または予防のための、請求項７または請求項８に記載の医薬。
【請求項１０】
静脈内使用のための請求項７ないし請求項９のいずれかに記載の医薬。
【請求項１１】
少なくとも１種の請求項１ないし請求項３のいずれかに記載の式（Ｉ）の化合物または請求項７ないし請求項１０のいずれかに記載の医薬を使用する、ヒトおよび動物における血栓塞栓性障害の処置および／または予防方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミドのプロドラッグ誘導体、それらの製造方法、疾患の処置および／または予防のためのそれらの使用、および疾患の、特に血栓塞栓性障害の処置および／または予防用の医薬を製造するためのそれらの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
プロドラッグは、実際の有効成分が遊離する前に、インビボで酵素的および／または化学的生物変換を１つまたはそれ以上の段階で受ける、有効成分の誘導体である。プロドラッグの残基は、通常、基礎的有効成分の特性のプロフィールを改善するために使用される [P. Ettmayer et al., J. Med. Chem. 47, 2393 (2004)]。最適な効果のプロフィールを達成するために、これに関して、プロドラッグ残渣の設計並びに所望の遊離メカニズムを、個々の有効成分、適応症、作用部位および投与経路と非常に厳密に適合させることが必要である。多数の医薬が、プロドラッグとして投与され、それは、基礎的有効成分と比較して改善されたバイオアベイラビリティーを示し、それは、例えば物理化学的プロフィール、特に溶解性、能動的または受動的吸収特性または組織特異的分布を改善することにより達成される。プロドラッグに関する多岐にわたる文献から言及し得る例は、H. Bundgaard (Ed.), Design of Prodrugs: Bioreversible derivatives for various functional groups and chemical entities, Elsevier Science Publishers B.V., 1985 である。
【０００３】
５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド［ＢＡＹ５９−７９３９、化合物（Ａ）］は、セリンプロテアーゼＸａ因子の経口で有効な直接的阻害剤であり、血液凝固の調節において本質的な機能を果たす。この化合物は、現在、血栓塞栓性障害の予防および治療用の可能性のある新有効医薬成分として、綿密な臨床試験を受けている［S. Roehrig et al., J. Med. Chem. 48, 5900 (2005)］。
【化１】
2009526788.tif 000002
【０００４】
しかしながら、化合物（Ａ）には、水および生理的媒体において限られた溶解性しかなく、例えば有効成分の静脈内投与を困難にしている。従って、上述の媒体において改善された溶解性を有し、同時に、投与後に患者の体内で有効成分（Ａ）の制御された遊離を可能にする化合物（Ａ）の誘導体またはプロドラッグを同定することが、本発明の目的であった。
【０００５】
ＷＯ２００５／０２８４７３は、経口バイオアベイラビリティーを高めるのに役立つ、オキサゾリジノン類のアシルオキシメチルカルバメートプロドラッグを記載している。ＷＯ０１／００６２２は、イノシン−５'−モノホスフェートデヒドロゲナーゼのカルバメート阻害剤のアシルプロドラッグを開示している。基礎的有効成分を多段階の活性化メカニズムにより遊離させるオキサゾリジノン類のさらなるタイプのアミドプロドラッグは、ＷＯ０３／００６４４０に記載されている。
【発明の開示】
【０００６】
本発明は、一般式（Ｉ）
【化２】
2009526788.tif 000003
［式中、
Ｒ１は、水素または（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル（これは、ヒドロキシまたは（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシにより置換されていてもよい）であり、
Ｒ２は、水素または（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、
そして、
Ｌは、（Ｃ１−Ｃ４）−アルカンジイル基（ここで、１個のＣＨ２基は、Ｏ原子により置き換えられていてもよい）であるか、または、式
【化３】
2009526788.tif 000004
｛式中、
＊は、Ｎ原子への結合点を意味し、
Ｒ３は、天然α−アミノ酸またはそのホモログもしくは異性体の側鎖の基であるか、
または、
Ｒ３はＲ１に結合しており、その２つが一体となって（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４基を形成しており、
Ｒ４は、水素またはメチルであり、
Ｒ５は（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、
そして、
Ｒ６は、水素または（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルである｝
の基である］
の化合物並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物に関する。
【０００７】
本発明による化合物は、式（Ｉ）の化合物およびそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、式（Ｉ）に包含される後述する式の化合物およびそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物、並びに、式（Ｉ）に包含される例示的実施態様として後述する化合物およびそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物（後述する式（Ｉ）に包含される化合物が、既に塩、溶媒和物および塩の溶媒和物でない場合に）である。
【０００８】
本発明による化合物は、それらの構造によって、立体異性体（エナンチオマー、ジアステレオマー）で存在し得る。従って、本発明は、エナンチオマーまたはジアステレオマーおよびそれらの各々の混合物に関する。そのようなエナンチオマーおよび／またはジアステレオマーの混合物から、立体異性的に純粋な構成分を既知の方法で単離できる。
本発明による化合物が互変異性体で存在できる場合、本発明は、全ての互変異性体を含む。
【０００９】
本発明の目的上、好ましい塩は、本発明による化合物の生理的に許容し得る塩である。しかしながら、それら自体は医薬適用に適さないが、例えば本発明による化合物の単離または精製に使用できる塩も含まれる。
【００１０】
本発明による化合物の生理的に許容し得る塩には、鉱酸、カルボン酸およびスルホン酸の酸付加塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ナフタレンジスルホン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、クエン酸、フマル酸、マレイン酸および安息香酸の塩が含まれる。
【００１１】
本発明の目的上、溶媒和物は、固体または液体状態で、溶媒分子との配位により錯体を形成している本発明による化合物の形態である。水和物は、配位が水と起こる、溶媒和物の特別な形態である。本発明に関して、好ましい溶媒和物は水和物である。
【００１２】
本発明に関して、断りのない限り、置換基は、以下の意味を有する：
（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルおよび（Ｃ１−Ｃ３）−アルキルは、本発明に関して、各々１個ないし４個および１個ないし３個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキルラジカルである。１個ないし３個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルキルラジカルが好ましい。好ましく言及し得る例は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチルである。
【００１３】
（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシは、本発明に関して、１個ないし４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖のアルコキシラジカルである。好ましく言及し得る例は、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシである。
【００１４】
（Ｃ１−Ｃ４）−アルカンジイルは、本発明に関して、１個ないし４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖の二価のアルキルラジカルである。２個ないし４個の炭素原子を有する直鎖のアルカンジイルラジカルが好ましい。好ましく言及し得る例は、メチレン、１,２−エチレン、エタン−１,１−ジイル、１,３−プロピレン、プロパン−１,１−ジイル、プロパン−１,２−ジイル、プロパン−２,２−ジイル、１,４−ブチレン、ブタン−１,２−ジイル、ブタン−１,３−ジイル、ブタン−２,３−ジイルである。
【００１５】
Ｒ３の意味におけるα−アミノ酸の側鎖の基は、天然産生α−アミノ酸の側鎖の基およびこれらのα−アミノ酸のホモログおよび異性体の側鎖の基の両方を含む。α−アミノ酸は、これに関して、ＬおよびＤ配置の両方を有し得るか、または、Ｌ体およびＤ体の混合物であり得る。言及し得る側鎖の基の例は、水素（グリシン）、メチル（アラニン）、プロパン−２−イル（バリン）、プロパン−１−イル（ノルバリン）、２−メチルプロパン−１−イル（ロイシン）、１−メチルプロパン−１−イル（イソロイシン）、ブタン−１−イル（ノルロイシン）、フェニル（２−フェニルグリシン）、ベンジル（フェニルアラニン）、ｐ−ヒドロキシベンジル（チロシン）、インドール−３−イルメチル（トリプトファン）、イミダゾール−４−イルメチル（ヒスチジン）、ヒドロキシメチル（セリン）、２−ヒドロキシエチル（ホモセリン）、１−ヒドロキシエチル（スレオニン）、メルカプトメチル（システイン）、メチルチオメチル（Ｓ−メチルシステイン）、２−メルカプトエチル（ホモシステイン）、２−メチルチオエチル（メチオニン）、カルバモイルメチル（アスパラギン）、２−カルバモイルエチル（グルタミン）、カルボキシメチル（アスパラギン酸）、２−カルボキシエチル（グルタミン酸）、４−アミノブタン−１−イル（リジン）、４−アミノ−３−ヒドロキシブタン−１−イル（ヒドロキシリジン）、３−アミノプロパン−１−イル（オルニチン）、３−グアニジノプロパン−１−イル（アルギニン）、３−ウレイドプロパン−１−イル（シトルリン）である。Ｒ３の意味における好ましいα−アミノ酸の側鎖の基は、水素（グリシン）、メチル（アラニン）、プロパン−２−イル（バリン）、プロパン−１−イル（ノルバリン）、イミダゾール−４−イルメチル（ヒスチジン）、ヒドロキシメチル（セリン）、１−ヒドロキシエチル（スレオニン）、カルバモイルメチル（アスパラギン）、２−カルバモイルエチル（グルタミン）、４−アミノブタン−１−イル（リジン）、３−アミノプロパン−１−イル（オルニチン）、３−グアニジノプロパン−１−イル（アルギニン）である。各場合でＬ配置が好ましい。
【００１６】
本発明による化合物中のラジカルが置換されている場合、そのラジカルは、断りのない限り、一置換または多置換されていてよい。本発明に関して、１回より多く出てくる全てのラジカルは、相互に独立の意味を有する。１個または２個の同一かまたは異なる置換基による置換が好ましい。１個の置換基による置換がことさら特に好ましい。
【００１７】
好ましいのは、式中、
Ｒ１が水素または（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、
Ｒ２が水素であり、
そして、
Ｌが、（Ｃ２−Ｃ４）−アルカンジイル基または式
【化４】
2009526788.tif 000005
｛式中、
＊は、Ｎ原子への結合点を意味し、
Ｒ３は、水素、メチル、プロパン−２−イル、プロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、３−アミノプロパン−１−イルまたは３−グアニジノプロパン−１−イルであるか、
または、
Ｒ３はＲ１に結合しており、その２つが一体となって（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４基を形成しており、
Ｒ４は、水素またはメチルであり、
Ｒ５はメチルであり、
そして、
Ｒ６は、水素またはメチルである｝
の基である、
式（Ｉ）の化合物、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００１８】
これに関して、特に重要なのは、式中、Ｒ１が水素または（Ｃ１−Ｃ３）−アルキルである、式（Ｉ）の化合物である。
また特に重要なのは、式中、Ｌが直鎖の（Ｃ２−Ｃ４）−アルカンジイル基である、式（Ｉ）の化合物である。
【００１９】
特に好ましいのは、式中、
Ｒ１が、水素、メチルまたはｎ−ブチルであり、
Ｒ２が、水素であり、
そして、
Ｌが、ＣＨ２ＣＨ２基であるか、または、式
【化５】
2009526788.tif 000006
｛式中、
＊は、Ｎ原子への結合点を意味し、
Ｒ３は、水素、メチル、プロパン−２−イル、プロパン−１−イル、イミダゾール−４−イルメチル、ヒドロキシメチル、１−ヒドロキシエチル、カルバモイルメチル、２−カルバモイルエチル、４−アミノブタン−１−イル、３−アミノプロパン−１−イルまたは３−グアニジノプロパン−１−イルであるか、
または、
Ｒ３はＲ１に結合しており、その２つが一体となって（ＣＨ２）３または（ＣＨ２）４基を形成しており、
Ｒ４は、水素またはメチルであり、
そして、
Ｒ６は、水素またはメチルである｝
の基である、
式（Ｉ）の化合物、並びにそれらの塩、溶媒和物および塩の溶媒和物である。
【００２０】
これに関して、特に重要なのは、式中、Ｒ１が水素またはメチルである、式（Ｉ）の化合物である。
また特に重要なのは、ＬがＣＨ２ＣＨ２基である式（Ｉ）の化合物である。
【００２１】
本発明は、さらに、本発明による式（Ｉ）の化合物の製造方法に関し、それは、
［Ａ］化合物（Ａ）
【化６】
2009526788.tif 000007
を、先ず、不活性溶媒中、塩基の存在下、式（ＩＩ）
【化７】
2009526788.tif 000008
（式中、Ｒ２は上記の意味を有し、
そして、Ｑは、例えば、塩素、臭素またはヨウ素などの脱離基である）
の化合物を用いて、式（ＩＩＩ）
【化８】
2009526788.tif 000009
（式中、ＱおよびＲ２は上記の意味を有する）
の化合物に変換し、
【００２２】
次いで、後者を、不活性溶媒中、式（ＩＶ）
【化９】
2009526788.tif 000010
（式中、Ｒ１、Ｒ３およびＲ４は、各々上記の意味を有し、
ＰＧは、例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）などのアミノ保護基であり、
そして、ＸはＯまたはＳである）
のα−アミノカルボン酸またはα−アミノチオカルボン酸のセシウム塩と反応させ、式（Ｖ）
【化１０】
2009526788.tif 000011
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、ＰＧおよびＸの各々は上記の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを常套の方法により除去し、式（Ｉ−Ａ）
【化１１】
2009526788.tif 000012
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４およびＸの各々は上記の意味を有する）
の化合物を得るか、
または、
【００２３】
［Ｂ］化合物（Ａ）を、不活性溶媒中、塩基の存在下、式（ＶＩ）
【化１２】
2009526788.tif 000013
（式中、ＰＧは上記の意味を有し、
Ｒ１Ａは、ヒドロキシまたは（Ｃ１−Ｃ４）−アルコキシにより置換されていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり、
そして、Ｌ１は、１個のＣＨ２基がＯ原子により置き換えられていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）−アルカンジイル基である）
の化合物と反応させ、式（ＶＩＩ）
【化１３】
2009526788.tif 000014
（式中、Ｒ１Ａ、Ｌ１およびＰＧの各々は上記の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを常套の方法により除去し、式（Ｉ−Ｂ）
【化１４】
2009526788.tif 000015
（式中、Ｒ１ＡおよびＬ１は上記の意味を有する）
の化合物を得るか、
または、
【００２４】
［Ｃ］化合物（Ｂ）
【化１５】
2009526788.tif 000016
を、先ず、ペプチド化学の標準的方法により、式（ＶＩＩＩ）
【化１６】
2009526788.tif 000017
（式中、ＰＧ、Ｒ１、Ｒ２およびＲ５の各々は、上記の意味を有し、
そして、Ｌ２は、（ＣＨ２）２またはＣＲ３Ｒ４基である（式中、Ｒ３およびＲ４の各々は上記の意味を有する））
の化合物に変換し、
【００２５】
次いで、後者を、不活性溶媒中、塩基の存在下、式（ＩＸ）
【化１７】
2009526788.tif 000018
の化合物と反応させ、式（Ｘ）
【化１８】
2009526788.tif 000019
（式中、ＰＧ、Ｌ２、Ｒ１、Ｒ２およびＲ５の各々は、上記の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧを常套の方法により除去し、式（Ｉ−Ｃ）
【化１９】
2009526788.tif 000020
（式中、Ｌ２、Ｒ１、Ｒ２およびＲ５の各々は上記の意味を有する）
の化合物を得るか、
または、
【００２６】
［Ｄ］化合物（Ａ）を、不活性溶媒中、塩基の存在下、式（ＸＩ）
【化２０】
2009526788.tif 000021
（式中、Ｌ１は、１個のＣＨ２基がＯ原子により置き換えられていてもよい（Ｃ１−Ｃ４）−アルカンジイル基であり、
そして、ＰＧ１およびＰＧ２は、相互に独立して、例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）またはｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）などのアミノ保護基であり、同一であっても異なっていてもよい）
の化合物と反応させ、式（ＸＩＩ）
【化２１】
2009526788.tif 000022
（式中、Ｌ１、ＰＧ１およびＰＧ２の各々は、上記の意味を有する）
の化合物を得、続いて、保護基ＰＧ１およびＰＧ２を、常套の方法により同時または連続的に除去し、式（Ｉ−Ｄ）
【化２２】
2009526788.tif 000023
（式中、Ｌ１は上記の意味を有する）
の化合物を得、
そして、各場合で得られる式（Ｉ−Ａ）、（Ｉ−Ｂ）、（Ｉ−Ｃ）および（Ｉ−Ｄ）の化合物を、必要に応じて、適切な（ｉ）溶媒および／または（ｉｉ）酸により、それらの溶媒和物、塩および／または塩の溶媒和物に変換することを特徴とする。
【００２７】
式（Ｉ−Ａ）、（Ｉ−Ｂ）、（Ｉ−Ｃ）および（Ｉ−Ｄ）の化合物は、上記の方法による製造において、それらの塩の形態で直接得てもよい。これらの塩は、必要に応じて、不活性溶媒中、塩基で処理することにより、クロマトグラフィー法により、または、イオン交換樹脂により、各々の遊離塩基に変換できる。
【００２８】
ラジカルＲ１、Ｒ１Ａおよび／またはＲ３中に必要に応じて存在する官能基は、好都合または必要であれば、上記の連続反応において、一時的な保護形態にあってもよい。そのような保護基並びに保護基ＰＧ、ＰＧ１およびＰＧ２の導入および除去は、これに関して、ペプチド化学から知られている常套の方法により行う［例えば、T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Wiley, New York, 1999; M. Bodanszky and A. Bodanszky, The Practice of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin, 1984 参照]。
【００２９】
必要に応じてＲ１、Ｒ１Ａおよび／またはＲ３中に存在するそのような保護基は、これに関して、ＰＧの除去と同時に、または、ＰＧの除去前または後の別の反応段階で、除去し得る。
【００３０】
上記方法において好ましく使用されるアミノ保護基ＰＧ、ＰＧ１またはＰＧ２は、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）またはｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）である。これらの保護基の除去は、常套の方法により、好ましくは、塩化水素、臭化水素またはトリフルオロ酢酸などの強酸と、ジオキサン、ジクロロメタンまたは酢酸などの不活性溶媒中で反応させることにより、実施する；必要に応じて、さらなる不活性溶媒を用いずに除去を実施することも可能である。
【００３１】
変換（Ｂ）→（ＶＩＩＩ）は、化合物（Ｂ）を適切に保護されたジペプチド誘導体でアシル化することにより、または、必要に応じて適切に保護された個々のアミノ酸成分の連続的カップリングにより、ペプチド化学の標準的方法により行う［例えば、M. Bodanszky, Principles of Peptide Synthesis, Springer-Verlag, Berlin, 1993; H.-D. Jakubke and H. Jeschkeit, Aminosaeuren, Peptide, Proteine, Verlag Chemie, Weinheim, 1982 参照]。
【００３２】
工程（Ａ）＋（ＩＩ）→（ＩＩＩ）、（Ａ）＋（ＶＩ）→（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）＋（ＩＸ）→（Ｘ）および（Ａ）＋（ＸＩ）→（ＸＩＩ）で好ましく使用される不活性溶媒は、テトラヒドロフラン、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドまたはジメチルスルホキシドである；Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミドが特に好ましい。これらの反応において特に適する塩基は、水素化ナトリウムである。上述の反応は、一般的に、０℃ないし＋４０℃の温度範囲で、大気圧下で実施する。
【００３３】
工程（ＩＩＩ）＋（ＩＶ）→（Ｖ）は、好ましくは、溶媒としてのＮ,Ｎ−ジメチルホルムアミド中で行う。この反応は、一般的に、０℃ないし＋５０℃の温度範囲で、好ましくは＋２０℃ないし＋５０℃で、大気圧下で行う。この反応は、また、超音波処理により有利に実施できる。
【００３４】
式（ＩＩ）、（ＩＶ）、（ＶＩ）、（ＩＸ）および（ＸＩ）の化合物は、購入できるか、文献から知られているか、または、文献中の常套の方法により製造できる。化合物（Ａ）および（Ｂ）の製造は、S. Roehrig et al., J. Med. Chem. 48, 5900 (2005) に記載されている。
【００３５】
本発明による化合物の製造は、以下の合成スキームにより例示説明できる：
スキーム１
【化２３】
2009526788.tif 000024
［Ｘ＝ＯまたはＳ；ＰＧ＝アミノ保護基、例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）］
【００３６】
スキーム２
【化２４】
2009526788.tif 000025
［ｍ＝１−４；ＰＧ＝アミノ保護基、例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）］
【００３７】
スキーム３
【化２５】
2009526788.tif 000026
［ｎ＝１または２；ＰＧ＝アミノ保護基、例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）またはベンジルオキシカルボニル（Ｚ）］
【００３８】
スキーム４
【化２６】
2009526788.tif 000027
［ｍ＝１−４；ＰＧ１、ＰＧ２＝アミノ保護基、例えば、ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（Ｂｏｃ）、ベンジルオキシカルボニル（Ｚ）またはｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）］
【００３９】
本発明による化合物およびそれらの塩は、有効成分化合物（Ａ）の有用なプロドラッグである。一方では、それらは、ｐＨ４で良好な安定性を示し、他方では、それらは生理的ｐＨおよびインビボで、有効成分化合物（Ａ）への効率的な変換を示す。本発明による化合物は、さらに、水および他の生理的に耐容される媒体中での良好な溶解性を有し、それらを特に静脈内投与での治療的使用に適するものにしている。
【００４０】
本発明はさらに、障害、好ましくは血栓塞栓性障害および／または血栓塞栓性合併症の処置および／または予防のための、本発明による化合物の使用に関する。
【００４１】
本発明に関して、「血栓塞栓性障害」には、特に、ＳＴ上昇型心筋梗塞（ＳＴＥＭＩ）または非ＳＴ上昇型心筋梗塞（非ＳＴＥＭＩ）、安定狭心症、不安定狭心症、血管形成術または大動脈冠動脈バイパス術などの冠動脈介入後の再閉塞および再狭窄、末梢動脈閉塞疾患、肺栓塞症、深部静脈血栓および腎静脈血栓、一過性虚血発作および血栓性および血栓塞栓性卒中などの障害が含まれる。
【００４２】
従って、これらの物質は、例えば心房細動などの急性、間欠性または持続性心不整脈を有する患者、および電気的除細動を受けている者、また、心臓弁疾患を有するか、または人工心臓弁を有する患者における、心原性血栓塞栓症、例えば、脳虚血、卒中および全身性血栓塞栓症および虚血の予防および処置にも適する。加えて、本発明による化合物は、汎発性血管内凝固症候群（ＤＩＣ）の処置に適する。
【００４３】
血栓塞栓性合併症は、また、微小血管障害性溶血性貧血、血液透析などの体外循環、および、心臓代用弁と関連して起こる。
【００４４】
さらに、本発明による化合物は、アテローム硬化性血管障害および炎症障害、例えば筋骨格系のリウマチ性障害の予防および／または処置にも、さらに同様に、アルツハイマー病の予防および／または処置にも適する。さらに、本発明による化合物は、腫瘍成長および転移形成の阻害、微小血管障害、加齢に伴う黄斑変性症、糖尿病性網膜症、糖尿病性腎症および他の微小血管の障害、また、例えば、腫瘍患者における、特に大きい外科的介入または化学療法もしくは放射線治療を受けている者における、静脈血栓塞栓症などの血栓塞栓性合併症の予防および処置にも用いることができる。
【００４５】
本発明は、さらに、障害、特に上述の障害の処置および／または予防のための、本発明による化合物の使用に関する。
【００４６】
本発明は、さらに、障害、特に上述の障害の処置および／または予防用の医薬を製造するための、本発明による化合物の使用に関する。
【００４７】
本発明は、さらに、本発明による化合物を使用する、障害、特に上述の障害の処置および／または予防方法に関する。
【００４８】
本発明は、さらに、特に上述の障害の処置および／または予防のための、本発明による化合物および１種またはそれ以上のさらなる有効成分を含む医薬に関する。
【００４９】
好ましく言及し得る適当な組合せの有効成分の例は、以下のものである：
・脂質低下剤、特にＨＭＧ−ＣｏＡ（３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−補酵素Ａ）リダクターゼ阻害剤；
・冠血管治療剤／血管拡張剤、特にＡＣＥ（アンジオテンシン変換酵素）阻害剤；ＡＩＩ（アンジオテンシンＩＩ）受容体アンタゴニスト；β−アドレナリン受容体アンタゴニスト；アルファ−１−アドレナリン受容体アンタゴニスト；利尿剤；カルシウムチャネル遮断剤；環状グアノシン一リン酸（ｃＧＭＰ）の上昇をもたらす物質、例えば、可溶性グアニル酸シクラーゼの刺激剤；
・プラスミノーゲン活性化剤（血栓溶解剤／線維素溶解剤）および血栓溶解／線維素溶解を高める化合物、例えば、プラスミノーゲン活性化因子阻害因子の阻害剤（ＰＡＩ阻害剤）またはトロンビン活性型繊維素溶解阻害因子の阻害剤（ＴＡＦＩ阻害剤）；
・凝血活性を有する物質（抗凝血剤）；
・血小板凝集阻害性物質（血小板凝集阻害剤）；
・フィブリノーゲン受容体アンタゴニスト（糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａアンタゴニスト）；
・並びに抗不整脈薬。
【００５０】
本発明は、さらに、少なくとも１種の本発明による化合物を、通常１種またはそれ以上の不活性、非毒性の医薬的に適する補助剤と共に含む医薬、および上述の目的でのそれらの使用に関する。
【００５１】
本発明による化合物は、全身的および／または局所的に作用できる。この目的で、それらは、適する方法で、例えば、経口、非経腸、肺または鼻の経路で、投与できる。本発明による化合物は、これらの投与経路に適する投与形で投与できる。
【００５２】
経口投与に適するのは、先行技術に準じて機能し、本発明による化合物を迅速におよび／または改変された様式で送達し、本発明による化合物を結晶および／または無定形および／または溶解形態で含有する投与形であり、例えば、錠剤（非被覆または被覆錠剤、例えば、腸溶性被覆、または、不溶であるか、または、遅れて溶解し、本発明による化合物の放出を制御する被覆を有する錠剤）、口中で迅速に崩壊する錠剤、またはフィルム／オブラート、フィルム／凍結乾燥剤、カプセル剤（例えば、ハードまたはソフトゼラチンカプセル剤）、糖衣錠、顆粒剤、ペレット剤、散剤、乳剤、懸濁剤、エアゾール剤または液剤などである。
【００５３】
非経腸投与は、吸収段階を回避して（例えば、静脈内、動脈内、心臓内、脊髄内または腰椎内に）、または吸収を含めて（例えば、筋肉内、皮下、皮内、経皮または腹腔内）、行うことができる。非経腸投与に適する投与形は、なかんずく、液剤、懸濁剤、乳剤、凍結乾燥剤または滅菌粉末剤の形態の注射および点滴用製剤である。
【００５４】
他の投与経路に適するのは、例えば、粉末吸入器または噴霧器などの吸入用医薬形、または、点鼻薬、液またはスプレーなどの、鼻腔投与できる医薬形である。
非経腸投与、特に静脈内投与が好ましい。
【００５５】
本発明による化合物は、上述の投与形に変換できる。これは、不活性、非毒性、医薬的に適する補助剤と混合することにより、それ自体既知の方法で行うことができる。これらの補助剤には、なかんずく、担体（例えば微結晶セルロース、ラクトース、マンニトール）、溶媒（例えば液体ポリエチレングリコール類）、乳化剤および分散剤または湿潤剤（例えばドデシル硫酸ナトリウム、ポリオキシソルビタンオレエート）、結合剤（例えばポリビニルピロリドン）、合成および天然ポリマー（例えばアルブミン）、安定化剤（例えば抗酸化剤、例えばアスコルビン酸など）、着色料（例えば無機色素、例えば酸化鉄など）および香味および／または臭気の隠蔽剤が含まれる。
【００５６】
一般に、非経腸投与で約０.００１ないし１ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは約０.０１ないし０.５ｍｇ／体重ｋｇの量を投与するのが、有効な結果を達成するために有利であると明らかになった。経口投与の投与量は、約０.０１ないし１００ｍｇ／体重ｋｇ、好ましくは約０.０１ないし２０ｍｇ／体重ｋｇ、ことさら特に好ましくは約０.１ないし１０ｍｇ／体重ｋｇである。
【００５７】
それにも拘わらず、必要に応じて、特に、体重、投与経路、有効成分に対する個体の応答、製剤の性質および投与を行う時間または間隔に応じて、上述の量から逸脱することが必要であり得る。従って、上述の最小量より少なくても十分な場合があり、一方上述の上限を超えなければならない場合もある。大量に投与する場合、これらを１日に亘る数回の個別投与に分割するのが望ましいことがある。
【００５８】
以下の例示的実施態様は、本発明を例示説明する。本発明は、これらの実施例に限定されない。
以下の試験および実施例における百分率のデータは、断りの無い限り、重量パーセントである；部は、重量部である。液体／液体溶液の溶媒比、希釈比および濃度のデータは、各場合で体積に基づく。
【実施例】
【００５９】
Ａ. 実施例
略号および頭字語：
【表１】
2009526788.tif 000028
【００６０】
ＬＣ−ＭＳおよびＨＰＬＣの方法：
方法１（分取用ＨＰＬＣ）：
カラム：VP 250/21 Nukleodur 100-5 C18 ec, Macherey & Nagel No. 762002；溶離剤Ａ：水／０.０１％トリフルオロ酢酸、溶離剤Ｂ：アセトニトリル／０.０１％トリフルオロ酢酸；グラジエント：０分０％Ｂ→２０分２０％Ｂ→４０分２０％Ｂ→６０分３０％Ｂ→８０分３０％Ｂ→９０分１００％Ｂ→１３２分１００％Ｂ；流速：５ｍｌ／分；温度：室温；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００６１】
方法２（分析用ＨＰＬＣ）：
カラム: XTerra 3.9 x 150 WAT 186000478；溶離剤Ａ：水２.５ｌ中の７０％過塩素酸１０ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル；グラジエント：０.０分２０％Ｂ→１分２０％Ｂ→４分９０％Ｂ→９分９０％Ｂ；温度：室温；流速：１ｍｌ／分。
【００６２】
方法３（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：HPLC Agilent Series 1100 を備えた Micromass LCT; カラム: Waters Symmetry C18, 3.5 μm, 50 mm x 2.1 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋９８−１００％ギ酸１ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋９８−１００％ギ酸１ｍｌ；グラジエント：０分１００％Ａ→１分１００％Ａ→６分１０％Ａ→８分０％Ａ→１０分０％Ａ→１０.１分１００％Ａ→１２分１００％Ａ；流速：０−１０分０.５ｍｌ／分→１０.１分１ｍｌ／分→１２分０.５ｍｌ／分；温度：４０℃；ＵＶ検出ＤＡＤ：２０８−５００ｎｍ。
【００６３】
方法４（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：HPLC HP 1100 Series を備えた Micromass ZQ; UV DAD；カラム：Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分→２.５分／３.０分／４.５分２ｍｌ／分；温度：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００６４】
方法５（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：HPLC Agilent Series 1100 を備えた Micromass Quattro LCZ；カラム：Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分→２.５分／３.０分／４.５分２ｍｌ／分；温度：５０℃；ＵＶ検出：２０８−４００ｎｍ。
【００６５】
方法６（ＬＣ−ＭＳ）：
ＭＳ装置タイプ： Micromass ZQ；ＨＰＬＣ装置タイプ：Waters Alliance 2795；カラム：Phenomenex Synergi 2μ Hydro-RP Mercury 20 mm x 4 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２.５分３０％Ａ→３.０分５％Ａ→４.５分５％Ａ；流速：０.０分１ｍｌ／分→２.５分／３.０分／４.５分２ｍｌ／分；温度：５０℃；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００６６】
方法７（キラルＨＰＬＣ、分析用）：
ポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシンジシクロプロピルメチルアミド）をベースとするキラルシリカゲル相（２５０ｍｍｘ４.６ｍｍ）；溶離剤：イソヘキサン／酢酸エチル３５：６５（ｖ／ｖ）；温度：２４℃；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２７０ｎｍ。
【００６７】
方法８（キラルＨＰＬＣ、分析用）：
ポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシンｔｅｒｔ−ブチルアミド）をベースとするキラルシリカゲル相（２５０ｍｍｘ４.６ｍｍ）；溶離剤：イソヘキサン／酢酸エチル３５：６５（ｖ／ｖ）；温度：２４℃；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２７０ｎｍ。
【００６８】
方法９（キラルＨＰＬＣ、分析用）：
ポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシンｔｅｒｔ−ブチルアミド）をベースとするキラルシリカゲル相（２５０ｍｍｘ４.６ｍｍ）；溶離剤：イソヘキサン／酢酸エチル６５：３５（ｖ／ｖ）；温度：２４℃；流速：２ｍｌ／分；ＵＶ検出：２７０ｎｍ。
【００６９】
方法１０（キラルＨＰＬＣ、分取用）：
ポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシンジシクロプロピルメチルアミド）をベースとするキラルシリカゲル相（６７０ｍｍｘ４０ｍｍ）；溶離剤：イソヘキサン／酢酸エチル２５：７５（ｖ／ｖ）；温度：２４℃；流速：８０ｍｌ／分；ＵＶ検出：２７０ｎｍ。
【００７０】
方法１１（キラルＨＰＬＣ、分取用）：
ポリ（Ｎ−メタクリロイル−Ｌ−ロイシンｔｅｒｔ−ブチルアミド）をベースとするキラルシリカゲル相（６７０ｍｍｘ４０ｍｍ）；溶離剤：イソヘキサン／酢酸エチル６５：３５（ｖ／ｖ）；温度：２４℃；流速：５０ｍｌ／分；ＵＶ検出：２６０ｎｍ。
【００７１】
方法１２（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：HPLC Agilent Series 1100 を備えた Micromass Quattro LCZ；カラム：Phenomenex Onyx Monolithic C18, 100 mm x 3 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分９０％Ａ→２分６５％Ａ→４.５分５％Ａ→６分５％Ａ；流速：２ｍｌ／分；オーブン：４０℃；ＵＶ検出：２０８−４００ｎｍ。
【００７２】
方法１３（ＬＣ−ＭＳ）：
装置：HPLC Agilent Series 1100 を備えた Micromass Platform LCZ；カラム：Thermo Hypersil GOLD 3μ, 20 mm x 4 mm；溶離剤Ａ：水１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル１ｌ＋５０％ギ酸０.５ｍｌ；グラジエント：０.０分１００％Ａ→０.２分１００％Ａ→２.９分３０％Ａ→３.１分１０％Ａ→５.５分１０％Ａ；オーブン：５０℃；流速：０.８ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【００７３】
ＮＭＲ分光法：
プロトン周波数４００.１３ＭＨｚでＮＭＲ測定を実施した。サンプルを、通常、ＤＭＳＯ−ｄ６に溶解した；温度：３０２Ｋ。
【００７４】
出発化合物および中間体：
使用した出発物質は、５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド［化合物（Ａ）］および４−｛４−［（５Ｓ）−５−（アミノメチル）−２−オキソ−１,３−オキサゾリジン−３−イル］フェニル｝モルホリン−３−オン［化合物（Ｂ）］であった。その製造は、他の文献に記載されている [S. Roehrig et al., J. Med. Chem. 48, 5900 (2005)]。
【化２７】
2009526788.tif 000029
【化２８】
2009526788.tif 000030
【００７５】
化合物（Ｂ）中のアミノ基のアシル化のための一般方法１：
用いたカルボキシル成分（殆どの場合、適切に保護されたアミノ酸またはペプチド誘導体）は、購入できるか、または、標準的方法により製造される。４−｛４−［（５Ｓ）−５−（アミノメチル）−２−オキソ−１,３−オキサゾリジン−３−イル］フェニル｝モルホリン−３−オン［化合物（Ｂ）］を、好ましくは、適切に保護されたペプチド誘導体で直接アシル化する。代替的な連続的方法では、最初にアミノ酸誘導体に結合させ、続いて必要に応じて脱保護し、次いでさらなる適切に保護されたアミノ酸またはペプチド誘導体と標準的方法で反応させる。
【００７６】
適切なカルボキシル成分２.３ｍｍｏｌを、ＤＭＦ３０ｍｌに溶解し、１−ヒドロキシ−１Ｈ−ベンゾトリアゾール２.３ｍｍｏｌ、Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ'−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）２ｍｍｏｌ、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン４.５ｍｍｏｌおよび次いでアミン成分４−｛４−［（５Ｓ）−５−（アミノメチル）−２−オキソ−１,３−オキサゾリジン−３−イル］フェニル｝モルホリン−３−オン［化合物（Ｂ）］１.５ｍｍｏｌを添加する。反応混合物を、室温で３時間撹拌し、次いで濃縮し、残渣をジクロロメタンに取り、５％強度クエン酸で２回、５％強度重炭酸ナトリウム溶液で２回、そして水で２回抽出する。有機相を濃縮し、アセトニトリル／水３０：１を溶離剤として用いて、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製する。適切な画分を合わせ、溶媒を除去する。残っている残渣をジクロロメタン／メタノールに溶解し、生成物をジエチルエーテルで沈殿させ、高真空下で乾燥する。
【００７７】
中間体１Ａ
５−クロロ−Ｎ−（クロロアセチル）−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド
【化２９】
2009526788.tif 000031
５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド［化合物（Ａ）］１ｇ（２.３ｍｍｏｌ）を、無水ＤＭＦ１７０ｍｌにアルゴン下で溶解する。水素化ナトリウム１１０ｍｇ（４.６ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で２０分間撹拌する。次いで、クロロアセチルクロリド３.５ｇ（３１ｍｍｏｌ）を添加し、反応温度を室温に維持する。３０分後、水２５ｍｌを冷却しながら添加し、混合物を室温で２日間静置する。次いで、溶媒を真空で除去し、その間温度は＋２５℃より高く上昇するべきではない。残渣をジクロロメタン５００ｍｌに取り、水２００ｍｌで５回抽出する。有機相を硫酸マグネシウムで乾燥し、濾過し、約５０ｍｌの体積に濃縮する。撹拌しながら、ジエチルエーテル２００ｍｌを添加し、次いで沈殿（殆ど未反応の出発物質）を濾去する。母液を濃縮し、トルエン／エタノール１０：１を溶離剤として用いるシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製する。適切な画分を合わせ、溶媒を除去する。残渣をジオキサンから凍結乾燥する。
収量：１１１ｍｇ（理論値の９.５％）
ＨＰＬＣ（方法２）：室温＝５.０９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：室温＝２.３１分；ｍ／ｚ＝５１２（Ｍ＋Ｈ）＋
【００７８】
中間体２Ａ
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ−メチルグリシル−Ｎ２−メチル−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）グリシンアミド
【化３０】
2009526788.tif 000032
第１段階で、Ｚ−サルコシン５１１ｍｇ（１.５ｍｍｏｌ）を、カルボキシル成分として一般方法１により化合物（Ｂ）と反応させる（収量：６９７ｍｇ、理論値の９２％）。
次いで、標準的方法によるＰｄ／Ｃでの水素化分解により、この中間体２００ｍｇ（０.４ｍｍｏｌ）から、ベンジルオキシカルボニル保護基を除去する（収量：１３０ｍｇ、理論値の８９％）。
次いで、かくして得られる化合物を、第３段階で、再度Ｚ−サルコシン１２０ｍｇ（０.５４ｍｍｏｌ）と一般方法１により結合させる（収量：２０１ｍｇ、理論値の９８％）。
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.２１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１.５４分；ｍ／ｚ＝５６８（Ｍ＋Ｈ）＋
【００７９】
中間体３Ａ
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ−メチルグリシル−Ｎ２−メチル−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）−Ｌ−バリンアミド
【化３１】
2009526788.tif 000033
第１段階で、Ｂｏｃ−Ｎ−メチルバリン５２９ｍｇ（２.３ｍｍｏｌ）を、カルボキシル成分として、一般方法１により化合物（Ｂ）と反応させる（収量：７５０ｍｇ、理論値の９７％）。
次いで、この中間体７５０ｍｇ（１.５ｍｍｏｌ）から、ジクロロメタン中のトリフルオロ酢酸を用いて、標準的方法によりｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を除去する（収量：７４０ｍｇ、理論値の９６％）。
次いで、かくして得られる化合物２００ｍｇ（０.３９ｍｍｏｌ）を、第３段階で、Ｚ−サルコシン１２９ｍｇ（０.５８ｍｍｏｌ）に、一般方法１により結合させる（収量：２０６ｍｇ、理論値の８８％）。
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.６８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.９６分；ｍ／ｚ＝６１０（Ｍ＋Ｈ）＋
【００８０】
中間体４Ａ
ベンジルメチル−｛５−オキソ−５−［（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］ペンチル｝カルバメート
【化３２】
2009526788.tif 000034
５−［［（ベンジルオキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］吉草酸３２ｍｇ（０.１１９ｍｍｏｌ）を、カルボキシル成分として、一般方法１により化合物（Ｂ）と反応させる。
収量：４５ｍｇ（理論値の９１％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.５１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝２.０２分；ｍ／ｚ＝５３９（Ｍ＋Ｈ）＋
【００８１】
中間体５Ａ
ベンジルメチル｛５−オキソ−５−［（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］ブチル｝カルバメート
【化３３】
2009526788.tif 000035
５−［［（ベンジルオキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］ブタン酸３１３ｍｇ（０.９６ｍｍｏｌ）を、カルボキシル成分として、一般方法１により化合物（Ｂ）と反応させる。
収量：２９８ｍｇ（理論値の７１％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.４２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１.８９分；ｍ／ｚ＝５２５（Ｍ＋Ｈ）＋
【００８２】
中間体６Ａ
Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ−メチル−β−アラニル−Ｎ２−メチル−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）グリシンアミド
【化３４】
2009526788.tif 000036
第１段階で、Ｚ−サルコシン５１１ｍｇ（１.５ｍｍｏｌ）を、カルボキシル成分として、一般方法１により化合物（Ｂ）と反応させる（収量：６９７ｍｇ、理論値の９２％）。
次いで、ベンジルオキシカルボニル保護基を、この中間体２００ｍｇ（０.４ｍｍｏｌ）から、標準的方法によるＰｄ／Ｃでの水素化分解により除去する（収量：１３０ｍｇ、理論値の８９％）。
次いで、かくして得られる化合物１００ｍｇを、第３段階で、Ｚ−Ｎ−メチル−β−アラニン９８.２ｍｇ（０.４１ｍｍｏｌ）と、一般方法１により結合させる（収量：８７ｍｇ、理論値の５４％）。
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.２８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１.６０分；ｍ／ｚ＝５８２（Ｍ＋Ｈ）＋
【００８３】
中間体７Ａ
ベンジル（４−クロロ−４−オキソブチル）メチルカルバメート
【化３５】
2009526788.tif 000037
最初に、４−［［（ベンジルオキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］ブタン酸を、文献の方法［Y. Aramaki et al., Chem. Pharm. Bull. 52, 258 (2004)］により、購入できる４−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝ブタン酸から製造する。代替的製造は、また、ベンジルオキシカルボニル保護基を、P. Quitt et al. [Helv. Chim. Acta 46, 327 (1963)］に従って得ることができるω−Ｎ−メチルアミノアルキルカルボン酸に導入することである。
４−［［（ベンジルオキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］ブタン酸１.７４ｇ（６.９２ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン３５ｍｌに溶解し、塩化チオニル３.５ｍｌ（４８ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を還流下で１時間加熱する。次いで、それを真空で濃縮し、残渣を再度ジクロロメタンと混合し、もう一度濃縮する。粘稠性の油状物が残り、それを高真空下で乾燥させる。標的化合物１.８ｇ（理論値の９６％）を得、これ以上精製および特徴解析せずに、さらに反応させる。
【００８４】
中間体８Ａ
ベンジル（５−クロロ−５−オキソペンチル）メチルカルバメート
【化３６】
2009526788.tif 000038
最初に、５−［［（ベンジルオキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］吉草酸を、既知方法により、中間体７Ａと同様に製造する。
５−［［（ベンジルオキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］吉草酸１.９７ｇ（７.４３ｍｍｏｌ）をジクロロメタン３０ｍｌに溶解し、そして、塩化チオニル４.９ｍｌ（６７.３ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を還流下で１時間加熱する。次いで、それを真空で濃縮し、残渣を再度ジクロロメタンと混合し、もう一度濃縮する。粘稠性の油状物が残り、それを高真空下で乾燥させる。標的化合物２ｇ（理論値の９５％）を得、これ以上精製および特徴解析せずにさらに反応させる。
【００８５】
中間体９Ａ
ベンジル（３−クロロ−３−オキソプロピル）メチルカルバメート
【化３７】
2009526788.tif 000039
最初に、３−［［（ベンジルオキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］プロピオン酸を、文献の方法［Y. Aramaki et al., Chem. Pharm. Bull. 52, 258 (2004)］により、購入できる３−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝プロピオン酸から製造する。代替的製造は、また、ベンジルオキシカルボニル保護基を、P. Quitt et al. [Helv. Chim. Acta 46, 327 (1963)］に従い得ることができるω−Ｎ−メチルアミノアルキルカルボン酸に導入することである。
３−［［（ベンジルオキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］プロピオン酸８５０ｍｇ（３.５８ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン１５ｍｌに溶解し、塩化オキサリル１.５ｍｌを添加する。混合物を還流下で３時間加熱する。次いで、それを真空で濃縮し、残渣を再度ジクロロメタンと混合し、もう一度濃縮する。粘稠性の油状物が残り、それを高真空下で乾燥させる。標的化合物９１５ｍｇ（定量的）を得、これ以上精製および特徴解析せずにさらに反応させる。
【００８６】
中間体１０Ａ
ベンジル（６−クロロ−６−オキソヘキシル）メチルカルバメート
【化３８】
2009526788.tif 000040
最初に、６−［［（ベンジルオキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］カプロン酸を、文献の方法［Y. Aramaki et al., Chem. Pharm. Bull. 52, 258 (2004)] により、購入できる６−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝カプロン酸から製造する。代替的製造は、また、ベンジルオキシカルボニル保護基を、P. Quitt et al. [Helv. Chim. Acta 46, 327 (1963)］に従って得られるω−Ｎ−メチルアミノアルキルカルボン酸に導入することである。
６−［［（ベンジルオキシ）カルボニル］（メチル）アミノ］カプロン酸３８５０ｍｇ（１３.８ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン６０ｍｌに溶解し、塩化オキサリル４ｍｌを添加する。混合物を還流下で３時間加熱する。次いでそれを真空で濃縮し、残渣を再度ジクロロメタンと混合し、もう一度濃縮する。粘稠性の油状物が残り、それを高真空下で乾燥させる。標的化合物４.１ｇ（定量的）を得、これ以上精製および特徴解析せずにさらに反応させる。
【００８７】
中間体１１Ａ
５−クロロチオフェン−２−カルボニルクロリド
【化３９】
2009526788.tif 000041
５−クロロチオフェン−２−カルボン酸４８０ｍｇ（２.９５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン２４ｍｌに溶解し、塩化オキサリル２.４ｍｌ（２７.５ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を還流下で１６時間加熱する。次いでそれを真空で濃縮し、残渣を再度ジクロロメタンと混合し、もう一度濃縮する。粘稠性の油状物が残り、それを高真空下で乾燥させる。標的化合物５３４ｍｇ（定量的）を得、これ以上精製および特徴解析せずにさらに反応させる。
【００８８】
中間体１２Ａ
ベンジル（５−クロロ−５−オキソペンチル）（４−メトキシベンジル）カルバメート
【化４０】
2009526788.tif 000042
段階ａ）：
５−アミノ吉草酸１０ｇ（８５.４ｍｍｏｌ）、ｐ−アニスアルデヒド１７.４ｇ（１２８ｍｍｏｌ）および硫酸マグネシウム１０.３ｇ（８５.４ｍｍｏｌ）をエタノール３３０ｍｌに取り、還流下で１時間加熱する。次いで、固体を濾過し、エタノールで洗浄し、続いて全部で１.９４ｇ（５１.２ｍｍｏｌ）の水素化ホウ素ナトリウムを少しずつ１５分間かけて濾液に添加する。最初に水１０ｍｌを、次いで２Ｍ水酸化ナトリウム溶液１２８ｍｌを添加する。５分後、混合物を水３００ｍｌで希釈し、次いで各回２００ｍｌの酢酸エチルで３回抽出する。水相を４Ｍ塩酸でｐＨ２に調節し、真空で濃縮する。アセトニトリル／水／酢酸５：１：０.１を溶離剤として用いて、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製する。生成物画分を濃縮し、酢酸エチルおよびジエチルエーテルで撹拌する。次いで、残渣を吸引濾過し、高真空下で乾燥させる。ｐ−メトキシベンジル−保護５−アミノ吉草酸９.１ｇ（理論値の４５％）を得る。
【００８９】
段階ｂ）：
かくして得られる５−アミノ吉草酸誘導体を、ジオキサン／水（１：１）に取り、水酸化ナトリウム溶液でｐＨ１０に調節し、次いでベンジルクロロカーボネート１２.９７ｇ（７６ｍｍｏｌ）を滴下して添加する。室温で１５分間撹拌した後、ジオキサンを真空で除去し、残っている溶液を２Ｍ塩酸でｐＨ２に調節する。酢酸エチルで抽出した後の有機相を水で２回洗浄する。次いで、有機相を濃縮し、残渣を高真空下で乾燥させる。これに続き、アセトニトリルを溶離剤として用いてシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製する。生成物画分を濃縮し、残渣を高真空下で乾燥させる。Ｚ−保護アミノ酸５.６ｇ（理論値の３８％）を得る。
ＬＣ−ＭＳ（方法３）：Ｒｔ＝２.４７分；ｍ／ｚ＝３７２（Ｍ＋Ｈ）＋
【００９０】
段階ｃ）：
かくして得られる５−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］（４−メトキシベンジル）アミノ｝吉草酸５.６ｇ（１５ｍｍｏｌ）を、ジクロロメタン６０ｍｌに溶解し、塩化チオニル２.２ｍｌを添加する。混合物を還流下で３０分間加熱する。次いでそれを真空で濃縮し、残渣を再度ジクロロメタンと混合し、もう一度濃縮する。粘稠性の油状物が残り、それを高真空下で乾燥させる。標的化合物５.７ｇ（理論値の９８％）を得、これ以上精製および特徴解析せずにさらに反応させる。
【００９１】
中間体１３Ａ
ベンジル（６−クロロ−６−オキソヘキシル）（４−メトキシベンジル）カルバメート
【化４１】
2009526788.tif 000043
中間体１２Ａと同様に、６−アミノカプロン酸から出発して表題化合物を製造する。
【００９２】
中間体１４Ａ
ベンジル（４−クロロ−４−オキソブチル）（４−メトキシベンジル）カルバメート
【化４２】
2009526788.tif 000044
中間体１２Ａと同様に、４−アミノブタン酸から出発して表題化合物を製造する。
【００９３】
中間体１５Ａ
ベンジルブチル（４−クロロ−４−オキソブチル）カルバメート
【化４３】
2009526788.tif 000045
最初に、４−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］（ブチル）アミノ｝ブタン酸を、文献の方法［Org. Prep. Proc. Int. 9 (2), 49 (1977)］により製造し、同時に、続いてＺ保護基を導入する。次いで、対応する酸塩化物を、中間体７Ａについて記載した通りに製造する。
【００９４】
中間体１６Ａ
ベンジル［２−（２−クロロ−２−オキソエトキシ）エチル］（４−メトキシベンジル）カルバメート
【化４４】
2009526788.tif 000046
段階ａ）：
ｔｅｒｔ−ブチル（２−ヒドロキシエチル）カルバメート１２ｇ（７４.４ｍｍｏｌ）を、ｔｅｒｔ−ブチルブロモアセテート４３.６ｇ（２２３.３ｍｍｏｌ）と、トルエン４００ｍｌおよび濃水酸化ナトリウム溶液２０ｇの混合物中で、テトラブチルアンモニウム重硫酸塩２００ｍｇ（０.５９ｍｍｏｌ）の存在下、室温で１時間撹拌する。次いで、さらに１５ｇのｔｅｒｔ−ブチルブロモアセテートを添加し、混合物を室温でさらに１時間撹拌する。次いで、それをトルエンおよび水で希釈し、相を分離する。有機相を乾燥させ、真空で濃縮する。残渣を無水トリフルオロ酢酸１００ｍｌと混合し、室温で９０分間撹拌する。濃縮後のゴム状の残渣を、ジエチルエーテルで処理する。デカンテーション後に残っているゴム状物を、高真空下で乾燥させる。かくして、中間体（２−アミノエトキシ）酢酸１０.８ｇ（理論値の６２％）が、（トリフルオロ酢酸塩として）得られる。
ＤＣ（アセトニトリル／水／氷酢酸５：１：０.２）：Ｒｆ＝０.０８
【００９５】
段階ｂ）：
次いで、上記で得られるアミノ酸を、中間体１２Ａについて記載した通りに反応させ、（２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］（４−メトキシベンジル）アミノ｝エトキシ）酢酸を得る。
収量：２.５６ｇ（理論値の１３％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝５.１６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝３.１分；ｍ／ｚ＝３７４（Ｍ＋Ｈ）＋
【００９６】
段階ｃ）：
次いで、得られる（２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］（４−メトキシベンジル）アミノ｝酢酸２.５６ｇ（６.８６ｍｍｏｌ）を、中間体１２Ａについて記載した通りに塩化チオニルと反応させ、表題化合物を得る。
収量：２.６５ｇ（理論値の９９％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝５.１１分
【００９７】
例示的実施態様：
カルボン酸のセシウム塩または適切に保護されたアミノ酸誘導体の製造のための一般方法２：
適切なカルボン酸１ｍｍｏｌをジオキサン１０ｍｌおよび水１０ｍｌの混合物に溶解し、炭酸セシウム０.５ｍｍｏｌを添加する。続いてこれを凍結乾燥する。
【００９８】
実施例１
２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−２−オキソエチルグリシネート塩酸塩
【化４５】
2009526788.tif 000047
段階ａ）：
中間体１Ａ１１ｍｇ（２１μｍｏｌ）を、Ｂｏｃ−グリシンのセシウム塩（Ｂｏｃ−グリシンから一般方法２により製造）７.９ｍｇ（２６μｍｏｌ）と共に、ＤＭＦ５ｍｌに溶解する。室温で３時間撹拌し、続いて分取用ＨＰＬＣ（方法１）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥させる。
収量：７ｍｇ（理論値の５０％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝５.２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝２.１１分；ｍ／ｚ＝６５１（Ｍ＋Ｈ）＋
【００９９】
段階ｂ）：
上記で得られる保護中間体７ｍｇ（１１μｍｏｌ）を、ジオキサン中の塩化水素の２２％強度溶液３ｍｌと混合する。３０分後、混合物を真空で、＜２５℃で濃縮し、残渣をジオキサンから凍結乾燥する。
収量：４.５ｍｇ（理論値の７２％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.４１分；ｍ／ｚ＝５５１（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１００】
実施例２
２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−２−オキソエチル−２−メチルアラニネート塩酸塩
【化４６】
2009526788.tif 000048
段階ａ）：
中間体１Ａ３８ｍｇ（７４μｍｏｌ）を、Ｎ−Ｂｏｃ−２−メチルアラニンのセシウム塩（Ｎ−Ｂｏｃ−２−メチルアラニンから一般方法２により製造）３２.３ｍｇ（９６μｍｏｌ）と共に、ＤＭＦ３８ｍｌに溶解する。室温で超音波処理しながら３時間撹拌し、続いて分取用ＨＰＬＣ（方法１）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥させる。
収量：２９ｍｇ（理論値の５８％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝５.３８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝２.２７分；ｍ／ｚ＝６７９（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１０１】
段階ｂ）：
上記で得られる保護中間体１６.３ｍｇ（２４μｍｏｌ）を、ジオキサン中の塩化水素の２２％強度溶液３ｍｌと混合する。３０分後、混合物を真空で、＜２５℃で濃縮し、残渣をジオキサンから凍結乾燥する。
収量：１３ｍｇ（理論値の８８％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１.２７分；ｍ／ｚ＝５７９（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１０２】
実施例３
２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−２−オキソエチルＬ−バリネート塩酸塩
【化４７】
2009526788.tif 000049
段階ａ）：
中間体１Ａ１９ｍｇ（３７μｍｏｌ）を、Ｎ−Ｂｏｃ−バリンのセシウム塩（Ｎ−Ｂｏｃ−バリンから一般方法２により製造）１６.８ｍｇ（４８μｍｏｌ）と、ＤＭＦ１０ｍｌに溶解する。室温で超音波処理しながら１.５時間撹拌し、続いて分取用ＨＰＬＣ（方法１）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥させる。
収量：１３.５ｍｇ（理論値の５３％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝５.４５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝２.６９分；ｍ／ｚ＝６９３（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１０３】
段階ｂ）：
上記で得られる保護中間体１３.５ｍｇ（１９μｍｏｌ）を、塩化水素の２２％強度溶液３ｍｌと、ジオキサン中で混合する。３０分後、混合物を真空で、＜２５℃で濃縮し、残渣をジオキサンから凍結乾燥する。
収量：１２ｍｇ（理論値の９８％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.４３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.５４分；ｍ／ｚ＝５９３（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１０４】
実施例４
２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−２−オキソエチルＬ−プロリネート塩酸塩
【化４８】
2009526788.tif 000050
段階ａ）：
中間体１Ａ２０ｍｇ（３９μｍｏｌ）を、Ｎ−Ｂｏｃ−プロリンのセシウム塩（Ｎ−Ｂｏｃ−プロリンから、一般方法２により製造）１７.６ｍｇ（５１μｍｏｌ）と共に、ＤＭＦ５ｍｌに溶解する。室温で超音波処理しながら２時間撹拌し、続いて分取用ＨＰＬＣ（方法１）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥させる。
収量：１１.４ｍｇ（理論値の４２％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝５.４４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝２.６１分；ｍ／ｚ＝６９１（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１０５】
段階ｂ）：
上記で得られる保護中間体１１.３ｍｇ（１６μｍｏｌ）を、ジオキサン中の塩化水素の２２％強度溶液２.５ｍｌと混合する。３０分後、混合物を真空で、＜２５℃で濃縮し、残渣をジオキサンから凍結乾燥する。
収量：１０ｍｇ（理論値の９７％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.３４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１.２６分；ｍ／ｚ＝５９１（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１０６】
実施例５
２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−２−オキソエチルＮ−メチルグリシネート塩酸塩
【化４９】
2009526788.tif 000051
段階ａ）：
中間体１Ａ２０ｍｇ（３９μｍｏｌ）を、Ｎ−Ｂｏｃ−サルコシンのセシウム塩（Ｎ−Ｂｏｃ−サルコシンから一般方法２により製造）１７.５ｍｇ（５５μｍｏｌ）と共に、ＤＭＦ４ｍｌに溶解する。室温で超音波処理しながら３時間撹拌し、続いて分取用ＨＰＬＣ（方法１）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥させる。
収量：１１ｍｇ（理論値の４２％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝５.３５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２.４３分；ｍ／ｚ＝６６５（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１０７】
段階ｂ）：
上記で得られる保護中間体１１ｍｇ（１６μｍｏｌ）を、ジオキサン中の塩化水素の２２％強度溶液２ｍｌと混合する。３０分後、混合物を真空で、＜２５℃で濃縮し、残渣をジオキサンから凍結乾燥する。
収量：９.５ｍｇ（理論値の９６％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.２４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１.５７分；ｍ／ｚ＝５６５（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１０８】
実施例６
２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−２−オキソエチルＤ−バリネート塩酸塩
【化５０】
2009526788.tif 000052
段階ａ）：
中間体１Ａ２０ｍｇ（４０μｍｏｌ）を、Ｂｏｃ−Ｄ−バリンのセシウム塩（Ｂｏｃ−Ｄ−バリンから一般方法２により製造）１９ｍｇ（５５μｍｏｌ）と共に、ＤＭＦ４ｍｌに溶解する。室温で２時間撹拌し、続いて分取用ＨＰＬＣ（方法１）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥させる。
収量：２３ｍｇ（理論値の８５％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝５.６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝２.７２分；ｍ／ｚ＝６９３（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１０９】
段階ｂ）：
上記で得られる保護中間体２３ｍｇ（３３μｍｏｌ）を、ジオキサン中の塩化水素の２２％強度溶液３ｍｌと混合する。３０分後、混合物を真空で、＜２５℃で濃縮し、残渣をジオキサンから凍結乾燥する。
収量：２０ｍｇ（理論値の９６％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１.３分；ｍ／ｚ＝５９３（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１１０】
実施例７
２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−２−オキソエチルＬ−リジネート二塩酸塩
【化５１】
2009526788.tif 000053
段階ａ）：
中間体１Ａ２０ｍｇ（４０μｍｏｌ）を、Ｎ,Ｎ'−ビス−Ｂｏｃ−リジンのセシウム塩（Ｎ,Ｎ'−ビス−Ｂｏｃ−リジンから一般方法２により製造）２６ｍｇ（５５μｍｏｌ）と共に、ＤＭＦ４ｍｌに溶解する。室温で２時間撹拌し、続いて分取用ＨＰＬＣ（方法１）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥させる。
収量：１４ｍｇ（理論値の４３％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝５.６３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２.６６分；ｍ／ｚ＝８２２（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１１１】
段階ｂ）：
上記で得られる保護中間体１４ｍｇ（１７μｍｏｌ）を、ジオキサン中の塩化水素の２２％強度溶液２.５ｍｌと混合する。３０分後、混合物を真空で、＜２５℃で濃縮し、残渣をジオキサンから凍結乾燥する。
収量：１０ｍｇ（理論値の８６％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝０.９２分；ｍ／ｚ＝６２２（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１１２】
実施例８
２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−２−オキソエチルＬ−ヒスチジネート二塩酸塩
【化５２】
2009526788.tif 000054
段階ａ）：
中間体１Ａ２０ｍｇ（４０μｍｏｌ）を、Ｂｏｃ−Ｌ−ヒスチジンのセシウム塩（Ｂｏｃ−Ｌ−ヒスチジンから一般方法２により製造）２１ｍｇ（５５μｍｏｌ）と共に、ＤＭＦ４ｍｌに溶解する。室温で２.５時間撹拌し、続いて溶媒を真空で除去する。残渣をアセトニトリル／水（１：１）に取り、分取用ＨＰＬＣ（方法１）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥させる。
収量：２１.９ｍｇ（理論値の７７％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.６４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.６７分；ｍ／ｚ＝７３１（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１１３】
段階ｂ）：
上記で得られる保護中間体２１.９ｍｇ（３０μｍｏｌ）を、ジオキサン中の塩化水素の２２％強度溶液６ｍｌと混合する。９０分後、混合物を真空で、＜２５℃で濃縮する。残渣をアセトニトリル／水（１：１）に取り、分取用ＨＰＬＣ（方法１）により精製する。適切な画分を濃縮し、残渣をジオキサンから凍結乾燥する。
収量：７.２ｍｇ（理論値の３４％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.１１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝２.５６分；ｍ／ｚ＝６３１（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１１４】
実施例９
２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−２−オキソエチルＤ−ヒスチジネート二塩酸塩
【化５３】
2009526788.tif 000055
段階ａ）：
中間体１Ａ２５ｍｇ（４９μｍｏｌ）を、Ｂｏｃ−Ｄ−ヒスチジンのセシウム塩（Ｂｏｃ−Ｄ−ヒスチジンから、一般方法２により製造）２６ｍｇ（６８μｍｏｌ）と共に、ＤＭＦ５ｍｌに溶解する。室温で１６時間撹拌し、続いて溶媒を真空で除去する。残渣をアセトニトリル／水（１：１）に取り、分取用ＨＰＬＣ（方法１）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥させる。
収量：１８.３ｍｇ（理論値の５１％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.６２分
【０１１５】
段階ｂ）：
上記で得られる保護中間体１８ｍｇ（２５μｍｏｌ）を、ジオキサン中の塩化水素の２２％強度溶液２ｍｌと混合する。４時間後、混合物を真空で、＜２５℃で濃縮する。残渣をアセトニトリル／水（１：１）に取り、分取用ＨＰＬＣ（方法１）により精製する。適切な画分を濃縮し、残渣をジオキサンから凍結乾燥する。
収量：６ｍｇ（理論値の３７％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.１５分；ｍ／ｚ＝６３１（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１１６】
実施例１０
Ｓ−｛２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−２−オキソエチル｝（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンチオエート臭化水素酸塩
【化５４】
2009526788.tif 000056
段階ａ）：
（２Ｓ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−３−メチルブタンチオンＳ−酸
【化５５】
2009526788.tif 000057
表題化合物を、Ｚ−バリンから、文献からわかる方法と同様に製造する [R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201].
【０１１７】
段階ｂ）：
（２Ｓ）−２−｛［（ベンジルオキシ）カルボニル］アミノ｝−３−メチルブタンチオンＳ−酸２００ｍｇ（７４８μｍｏｌ）を、ジオキサン１０ｍｌおよび水１０ｍｌに取り、炭酸セシウム１１０ｍｇ（３３７μｍｏｌ）を添加する。透明な溶液が産生されたらすぐに、それを凍結乾燥する。セシウム塩３００ｍｇを定量的収量で得る。
このセシウム塩２７ｍｇ（６８μｍｏｌ）および中間体１Ａ２５ｍｇ（４９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ５ｍｌに溶解する。室温で２時間撹拌し、続いて溶媒を真空で除去する。残渣をアセトニトリル／水（１：１）に取り、分取用ＨＰＬＣ（方法１）により精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥させる。
収量：２４ｍｇ（理論値の６６％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝５.６２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝２.４７分；ｍ／ｚ＝７４３（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１１８】
段階ｃ）：
上記で得られる保護中間体２４ｍｇ（３２.３μｍｏｌ）を、臭化水素の３３％強度溶液２ｍｌと、氷酢酸中で混合する。室温で１時間撹拌した後、混合物を真空で、＜２５℃で濃縮し、残渣をジオキサン／水から凍結乾燥する。
収量：２１ｍｇ（理論値の９４％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.４３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１.６３分；ｍ／ｚ＝６０９（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１１９】
実施例１１
Ｓ−｛２−［［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）アミノ］−２−オキソエチル｝（２Ｓ）−２−アミノ−３−メチルブタンチオエート塩酸塩
【化５６】
2009526788.tif 000058
段階ａ）：
（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−メチルブタンチオンＳ−酸
【化５７】
2009526788.tif 000059
表題化合物をＢｏｃ−バリンから、文献からわかる方法と同様に製造する［R. Michelot et al., Bioorg. Med. Chem. 1996, 4, 2201)。
【０１２０】
段階ｂ）：
（２Ｓ）−２−［（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）アミノ］−３−メチルブタンチオンＳ−酸２００ｍｇ（８５７μｍｏｌ）を、ジオキサン１０ｍｌおよび水１０ｍｌに取り、炭酸セシウム１２６ｍｇ（３８６μｍｏｌ）を添加する。透明な溶液が産生されたらすぐに、それを凍結乾燥する。セシウム塩３１０ｍｇを定量的収量で得る。
このセシウム塩２５ｍｇ（６８μｍｏｌ）および中間体１Ａ２５ｍｇ（４９μｍｏｌ）を、ＤＭＦ４ｍｌに溶解する。室温で１時間撹拌し、続いて溶媒を真空で除去する。残渣をアセトニトリル／水（１：１）に取り、分取用ＨＰＬＣ（方法１）により精製する。適する画分を濃縮し、高真空下で乾燥させる。
収量：２３ｍｇ（理論値の６５％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝５.６４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝２.７６分；ｍ／ｚ＝７０９（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１２１】
段階ｃ）：
上記で得られる保護中間体２３ｍｇ（３２μｍｏｌ）を、ジオキサン中の塩化水素の２２％強度溶液４ｍｌと混合する。室温で１時間撹拌した後、混合物を真空で、＜２５℃で濃縮し、残渣をジオキサンから凍結乾燥する。
収量：２０ｍｇ（理論値の９７％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.４７分；
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１.３５分；ｍ／ｚ＝６０９（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１２２】
実施例１２
５−クロロ−Ｎ−［４−（メチルアミノ）ブタノイル］−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド臭化水素酸塩
【化５８】
2009526788.tif 000060
段階ａ）：
化合物（Ａ）１４５.４ｍｇ（０.３３４ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ２５ｍｌに溶解し、水素化ナトリウム２４ｍｇ（１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌する。次いで、中間体７Ａ１.８ｇ（６.６７ｍｍｏｌ）を添加する。混合物を室温でさらに１５分間撹拌し、次いで数滴の水を添加する。次いで、それを濃縮し、残渣をジクロロメタン３００ｍｌに取る。最初に水で、次いで５％強度重炭酸ナトリウム溶液３００ｍｌで３回、抽出を実施する。ジクロロメタン相を分離し、濃縮する。残渣をジクロロメタン１５ｍｌおよびジエチルエーテル１０ｍｌの混合物と撹拌する。不溶物を濾過により除去し、残っている溶液を濃縮する。残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１）により精製する。モノアシル化合物のエノール化後に産生されるビスアシル化副生成物を含有する適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥させる。純粋な画分４１ｍｇ（理論値の１３.６％）およびわずかに純粋でない画分５９ｍｇ（理論値の１９.６％）を得、一緒に次の段階に用いる。
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝６.０６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２.８８分；ｍ／ｚ＝９０２（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１２３】
段階ｂ）：
上記で得られるＺ−保護中間体１００ｍｇ（０.１１ｍｍｏｌ）を、氷酢酸３.３ｍｌに取り、氷酢酸中の臭化水素の３３％強度溶液１７ｍｌを添加する。これらの条件下で、エノールエステルの切断もある。室温で５分間撹拌した後、標的化合物への変換が完了し、混合物を高真空下で濃縮する。残渣をアセトニトリルから２回濃縮し、次いで、分取用ＨＰＬＣにより精製する。
収量：２９.６ｍｇ（理論値の７３.５％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１.１９分；ｍ／ｚ＝５３５（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１２４】
実施例１３
５−クロロ−Ｎ−［４−（メチルアミノ）ブタノイル］−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化５９】
2009526788.tif 000061
実施例１２由来の化合物５９ｍｇ（０.０９６ｍｍｏｌ）を、アセトニトリル／水（１：１）４０ｍｌに溶解し、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルピロカーボネート（「Ｂｏｃ無水物」）１ｇ（４.８ｍｍｏｌ）を添加する。次いで、Ｎ,Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン３７μｌを少しずつ添加し、その間にｐＨ７.８を超えない。約１５分後に反応が完了した後、酢酸でｐＨ３ないし４に調節し、混合物を真空で濃縮する。残渣をアセトニトリルに取り、分取用ＨＰＬＣ（方法１）により精製する。適切な画分を濃縮し、真空で乾燥させる。Ｂｏｃ−保護中間体１５.５ｍｇ（理論値の２６％）を得る。次いで、その１２.５ｍｇ（０.０２ｍｍｏｌ）を、ジオキサン中の塩化水素の２２％強度溶液５ｍｌで処理する。１０分後、混合物を真空で、＜２５℃で濃縮する。残渣を水に取り、ジクロロメタンと共に徹底的に振盪する。水相を塩酸でｐＨ４に調節し、次いで凍結乾燥する。
収量：３.５ｍｇ（理論値の３１％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.２４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.４３分；ｍ／ｚ＝５３５（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１２５】
実施例１４
５−クロロ−Ｎ−［５−（メチルアミノ）ペンタノイル］−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド臭化水素酸塩
【化６０】
2009526788.tif 000062
段階ａ）：
化合物（Ａ）１５３.６ｍｇ（０.３５２ｍｍｏｌ）をＤＭＦ２５ｍｌに溶解し、水素化ナトリウム２５ｍｇ（１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌する。次いで、ＤＭＦ５ｍｌに溶解した中間体８Ａ２ｇ（７.０５ｍｍｏｌ）を添加する。室温でさらに１５分間撹拌した後、数滴の水を混合物に添加する。次いでそれを濃縮し、残渣をジクロロメタン５００ｍｌに取る。溶液を５％強度重炭酸ナトリウム溶液３００ｍｌで２回抽出する。ジクロロメタン相を分離し、濃縮する。残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１）により精製する。モノアシル化合物のエノール化の後に産生されるビスアシル化副生成物を含有する適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥させる。わずかに純粋でない画分５０ｍｇ（理論値の１５.２％）を得、そのまま次の段階で用いる。
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝６.２３分
【０１２６】
段階ｂ）：
上記で得られるＺ−保護中間体５０ｍｇ（０.０２７ｍｍｏｌ）を、氷酢酸１ｍｌに取り、氷酢酸中の臭化水素の３３％強度溶液５ｍｌを添加する。これらの条件下で、エノールエステルの切断もある。室温で１０分間撹拌した後、標的化合物を与える反応が完了し、混合物を高真空下で濃縮する。残渣をアセトニトリルから２回濃縮し、次いで分取用ＨＰＬＣで繰り返し精製する。
収量：０.５ｍｇ（理論値の３％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.３２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１.３１分；ｍ／ｚ＝５４９（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１２７】
実施例１５
Ｎ−メチルグリシル−Ｎ−［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］−Ｎ２−メチル−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）グリシンアミド臭化水素酸塩
【化６１】
2009526788.tif 000063
段階ａ）：
中間体２Ａ１０８ｍｇ（０.１９ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ２５ｍｌに溶解し、水素化ナトリウム１４ｍｇ（０.５７ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１５分間撹拌する。次いで、ＤＭＦ５ｍｌに溶解した中間体１１Ａ５３４ｍｇ（２.９５ｍｍｏｌ）を添加する。室温でさらに１０分間撹拌した後、数滴の水を混合物に添加する。次いで、それを濃縮し、残渣をジクロロメタン５００ｍｌに取る。溶液を５％強度重炭酸ナトリウム溶液３００ｍｌで３回抽出する。ジクロロメタン相を分離し、濃縮する。残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１）により２回精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥させる。
収量：３１ｍｇ（理論値の２３％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝５.１５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２.２８分；ｍ／ｚ＝７１２（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１２８】
段階ｂ）：
上記で得られるＺ−保護中間体３１ｍｇ（０.０４４ｍｍｏｌ）を、氷酢酸１ｍｌに取り、氷酢酸中の臭化水素の３３％強度溶液３ｍｌを添加する。室温で４５分間撹拌し、続いて高真空下で濃縮する。残渣を分取用ＨＰＬＣにより繰り返し精製する。
収量：１ｍｇ（理論値の３.３％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.２３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法４）：Ｒｔ＝１.３２分；ｍ／ｚ＝５７８（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１２９】
実施例１６
Ｎ−メチル−β−アラニル−Ｎ−［（５−クロロ−２−チエニル）カルボニル］−Ｎ２−メチル−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）グリシンアミド臭化水素酸塩
【化６２】
2009526788.tif 000064
段階ａ）：
中間体６Ａ４０ｍｇ（０.０６９ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１０ｍｌに溶解し、水素化ナトリウム５ｍｇ（０.２１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で１５分間撹拌する。次いで、ＤＭＦ５ｍｌに溶解した中間体１１Ａ２４９ｍｇ（１.３８ｍｍｏｌ）を添加する。室温でさらに１５分間撹拌した後、数滴の水を混合物に添加する。次いでそれを濃縮し、残渣をジクロロメタン５００ｍｌに取る。溶液を５％強度重炭酸ナトリウム溶液５０ｍｌで２回抽出する。ジクロロメタン相を分離し、濃縮する。残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１）により２回精製する。適切な画分を濃縮し、高真空下で乾燥させる。
収量：４.６ｍｇ（理論値の９.２％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝５.１６分；
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝２.１７分；ｍ／ｚ＝７２６（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１３０】
段階ｂ）：
上記で得られるＺ−保護中間体４.２ｍｇ（０.００６ｍｍｏｌ）を、氷酢酸中の臭化水素の３３％強度溶液１ｍｌと混合する。室温で３０分間撹拌し、続いて高真空下で濃縮する。残渣を水に取り、ジクロロメタンで抽出し、次いで水相を凍結乾燥する。
収量：２ｍｇ（理論値の５１％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.２５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１.１６分；ｍ／ｚ＝５９２（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１３１】
実施例１７
５−クロロ−Ｎ−［５−（メチルアミノ）ペンタノイル］−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化６３】
2009526788.tif 000065
段階ａ）：
化合物（Ａ）１.９６ｇ（４.５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ７０ｍｌに溶解し、水素化ナトリウム３２３ｍｇ（１３.５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を３０分間撹拌する。次いで、ＤＭＦ１０ｍｌに溶解した中間体８Ａ５.１ｇ（１８ｍｍｏｌ）を添加する。室温でさらに１５分間撹拌した後、水２０ｍｌを混合物に添加する。次いで、それを濃縮し、残渣を酢酸エチル５００ｍｌに取る。溶液を５％強度重炭酸ナトリウム溶液３００ｍｌで３回抽出する。酢酸エチル相を分離し、濃縮する。残渣をジクロロメタン／ジエチルエーテル混合物（２：１）４０ｍｌと撹拌し、次いで濾過する。残っている溶液を真空で濃縮する。次いで残渣を、ジクロロメタン中の塩化水素の飽和溶液１００ｍｌと２時間撹拌し、その間に最初に産生されたエノールエステルが切断される。次いで、混合物を濃縮し、残っている残渣を、酢酸エチル／トルエン５：１を溶離剤として用いてシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。適切な画分を濃縮し、Ｚ−保護中間体７２１ｍｇ（理論値の２３.５％）を得る。
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝５.５４分
【０１３２】
段階ｂ）：
上記で得られるＺ−保護中間体７２０ｍｇ（１.０５ｍｍｏｌ）を、無水トリフルオロ酢酸２０ｍｌ中で終夜撹拌する。次いで、混合物を高真空下で濃縮し、温度を約２０℃に維持する。残渣を塩酸１００ｍｌに取り、ｐＨ３に調節し、各回１００ｍｌのジクロロメタンおよび１００ｍｌの酢酸エチルで２回抽出する。水相を濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製する。適切な画分の濃縮および塩酸（ｐＨ３）からの凍結乾燥により、標的化合物を得る。
収量：２０ｍｇ（理論値の３.３％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.２９分；
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.２７分；ｍ／ｚ＝５４９（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１３３】
実施例１８
５−クロロ−Ｎ−［６−（メチルアミノ）ヘキサノイル］−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化６４】
2009526788.tif 000066
段階ａ）：
化合物（Ａ）２ｇ（４.５９ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ７０ｍｌに溶解し、水素化ナトリウム３３０ｍｇ（１３.８ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌する。次いで、ＤＭＦ１０ｍｌに溶解した中間体１０Ａ５.１ｇ（１８ｍｍｏｌ）を添加する。室温でさらに１５分間撹拌した後、水２０ｍｌを混合物に添加する。次いで、それを濃縮し、残渣をジクロロメタン中の塩化水素の飽和溶液１００ｍｌと２時間撹拌し、その間に最初に産生されたエノールエステルが切断される。次いで、混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチル６００ｍｌに取る。溶液を１０％強度炭酸ナトリウム溶液で３回抽出する。酢酸エチル相を分離し、濃縮する。残渣をジクロロメタン／ジエチルエーテル混合物（２：１）１５０ｍｌと撹拌し、次いで濾過する。残っている溶液を真空で濃縮し、酢酸エチル／トルエン５：１を溶離剤として用いて、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製する。適切な画分を濃縮し、依然としてわずかに純粋でない生成物を得る。アセトニトリル／ジクロロメタン１：１を溶離剤として用いるシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより再度精製し、次いでより純粋なＺ保護中間体５７２ｍｇ（理論値の１８％）を得る。
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝５.６８分
【０１３４】
段階ｂ）：
上記で得られる中間体５７２ｍｇ（０.８２ｍｍｏｌ）を、無水トリフルオロ酢酸５０ｍｌ中、超音波浴で６時間処理する。次いで、混合物を高真空下で濃縮し、温度を約２０℃に維持する。残渣を塩酸１００ｍｌに取り、ｐＨ３に調節し、濾過する。水相を濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製する。適切な画分の濃縮および塩酸（ｐＨ３）からの凍結乾燥により、標的化合物２８３ｍｇ（理論値の５８％）を得る。
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.３５分；
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１.２４分；ｍ／ｚ＝５６３（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１３５】
実施例１９
Ｎ−（４−アミノブタノイル）−５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化６５】
2009526788.tif 000067
段階ａ）：
化合物（Ａ）１.３３ｇ（３.０６ｍｍｏｌ）をＤＭＦ７５ｍｌに溶解し、水素化ナトリウム２２０ｍｇ（９.２ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌する。次いで、ＤＭＦ１０ｍｌに溶解した中間体１４Ａ１１.５ｇ（３０.６ｍｍｏｌ）を添加する。室温でさらに１５分間撹拌した後、水２０ｍｌを混合物に添加する。次いで、それを濃縮し、残渣を酢酸エチル３００ｍｌに取る。溶液を１０％強度炭酸ナトリウム溶液３００ｍｌで３回抽出する。有機相を分離し、濃縮し、残渣をジクロロメタン５０ｍｌに取る。短時間撹拌した後、不溶成分を濾過し、ジクロロメタン相を濃縮する。残渣を、酢酸エチル／トルエン５：１を溶離剤として用いてシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。ビスアシル化副生成物（ｍ／ｚ＝１１１３）を含有する生成物含有画分を濃縮する。次いで、残渣をジクロロメタン中の塩化水素の飽和溶液１０ｍｌと２時間撹拌し、その間に最初に産生されたエノールエステルが切断される。次いで、混合物を濃縮し、酢酸エチル／トルエン５：１を溶離剤として用いて、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより、残っている残渣を再度精製する。適切な画分を濃縮し、２箇所保護された中間体１５１ｍｇ（理論値の７％）を得る。
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝５.８３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝２.６１分；ｍ／ｚ＝７７５（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１３６】
段階ｂ）：
上記で得られる中間体１５１ｍｇ（０.２ｍｍｏｌ）を、無水トリフルオロ酢酸８ｍｌ中、室温で終夜撹拌する。次いで、混合物を高真空下で濃縮し、温度を約２０℃に維持する。残渣をｐＨ３に調節した塩酸１００ｍｌに取り、ジクロロメタン７５ｍｌで、次いで酢酸エチルで２回抽出する。水相を濃縮し、残渣を塩酸（ｐＨ３）から凍結乾燥する。
収量：７０ｍｇ（理論値の６４％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.１３分；
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝１.３８分；ｍ／ｚ＝５２１（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１３７】
実施例２０
Ｎ−（５−アミノペンタノイル）−５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化６６】
2009526788.tif 000068
段階ａ）：
化合物（Ａ）２.８３ｇ（６.５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ１００ｍｌに溶解し、水素化ナトリウム４６８ｍｇ（１９.５ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌する。次いで、ＤＭＦ１０ｍｌに溶解した中間体１２Ａ７.６ｇ（１９.５ｍｍｏｌ）を添加する。室温でさらに１５分間撹拌した後、水２０ｍｌを混合物に添加する。次いで、それを濃縮し、残渣をジクロロメタン中の塩化水素の飽和溶液１５０ｍｌで１時間撹拌し、その間に最初に産生されたエノールエステルが切断される。次いで、混合物を濃縮し、残渣を酢酸エチル７００ｍｌに取る。溶液を各回１０％強度炭酸ナトリウム溶液２００ｍｌで２回抽出する。有機相を分離し、濃縮し、残渣を酢酸エチル３０ｍｌおよびジエチルエーテル３０ｍｌに取る。短時間撹拌した後、不溶性成分を濾過し、有機相を濃縮する。残渣を、酢酸エチル／トルエン４：１を溶離剤として用い、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより精製する。適切な画分を濃縮し、残渣を酢酸エチル１０ｍｌに取る。冷たいジエチルエーテル１００ｍｌを添加し、混合物を０℃で３０分間静置する。濾過後の残渣をジエチルエーテル１００ｍｌで再度処理する。再度濾過した後、残渣を回収し、乾燥させる。２箇所保護された中間体１ｇ（理論値の２０％）を得る。
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝５.９２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝２.６８分；ｍ／ｚ＝７８９（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１３８】
段階ｂ）：
得られる中間体１ｇ（１.３ｍｍｏｌ）を、無水トリフルオロ酢酸７０ｍｌ中、超音波浴で６時間処理する。次いで、混合物を高真空下で濃縮し、温度を約２０℃で維持する。残渣を塩酸３５０ｍｌに取り、ｐＨ３に調節し、室温で１５分間撹拌した後、ジクロロメタン１００ｍｌで抽出する。水相を分離し、次いで酢酸エチル１００ｍｌで再度抽出する。水相を分離し、次いで、高真空下で短時間蒸留し、残っている酢酸エチルを除去し、最後に凍結乾燥する。
収量：５８６ｍｇ（理論値の８１％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.２分；
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１.１７分；ｍ／ｚ＝５３５（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１３９】
実施例２１
Ｎ−（６−アミノヘキサノイル）−５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化６７】
2009526788.tif 000069
段階ａ）：
化合物（Ａ）１.６ｇ（３.７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ５０ｍｌに溶解し、水素化ナトリウム２６３ｍｇ（１１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌する。次いで、ＤＭＦ１０ｍｌに溶解した中間体１３Ａ１４.１ｇ（３６.６ｍｍｏｌ）を添加する。室温でさらに１５分間撹拌した後、水２０ｍｌを混合物に添加する。それを濃縮し、残渣を酢酸エチル５００ｍｌに取る。溶液を各回１０％強度炭酸ナトリウム溶液１００ｍｌで３回抽出する。有機相を分離し、濃縮し、残渣をジクロロメタン／ジエチルエーテル（２：１）１５ｍｌに取る。短時間撹拌した後、不溶成分を濾過し、有機相を濃縮する。酢酸エチル／トルエン５：１を溶離剤として用い、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製する。二保護中間体２５６ｍｇ（理論値の９％）を得る。
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝６.０７分；
ＬＣ−ＭＳ（方法５）：Ｒｔ＝２.９２分；ｍ／ｚ＝８０３（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１４０】
段階ｂ）：
上記で得られる中間体２５６ｍｇ（０.３２ｍｍｏｌ）を、無水トリフルオロ酢酸１０ｍｌ中、室温で終夜撹拌する。次いで、混合物を高真空下で濃縮し、温度を約２０℃に維持する。残渣をｐＨ３に調節した塩酸１００ｍｌに取り、室温で１５分間撹拌した後、ジクロロメタン１００ｍｌで抽出する。水相を分離し、次いで酢酸エチル１００ｍｌで再度抽出する。水相を濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣにより精製する。適切な画分を濃縮し、残渣を塩酸（ｐＨ３）から凍結乾燥する。
収量：２９ｍｇ（理論値の１６％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.２８分；
ＬＣ−ＭＳ（方法６）：Ｒｔ＝１.２４分；ｍ／ｚ＝５４９（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１４１】
実施例２２
Ｎ−［４−（ブチルアミノ）ブタノイル］−５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化６８】
2009526788.tif 000070
段階ａ）：
化合物（Ａ）３.２１５ｇ（７.３８ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ６０ｍｌに溶解し、水素化ナトリウム５３１ｍｇ（２２.１ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌する。次いで、ＤＭＦ１０ｍｌに溶解した中間体１５Ａ６.９ｇ（２２.１ｍｍｏｌ）を添加する。室温でさらに１０分間撹拌した後、水１０ｍｌを混合物に添加する。次いで、それを濃縮し、残渣をジクロロメタン中の塩化水素の飽和溶液７０ｍｌと終夜撹拌し、その間に最初に産生されたエノールエステルが切断される。混合物を濾過し、残っている溶液を濃縮する。残渣を酢酸エチル６００ｍｌに取り、１０％強度炭酸ナトリウム溶液１００ｍｌで３回、そして水で１回抽出する。酢酸エチル相を分離し、濃縮する。アセトニトリル／ジクロロメタン１：１を溶離剤として用いて、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製する。適切な画分を濃縮する。残っている樹脂状生成物を酢酸エチル２０ｍｌに取り、冷たいジエチルエーテル４０ｍｌを添加する。濾過後に残っている残渣をジエチルエーテルで洗浄する。高真空下で乾燥し、Ｚ−保護中間体１.７ｇ（理論値の３２.４％）を得る。
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝６.０分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝３.９分；ｍ／ｚ＝７１１（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１４２】
段階ｂ）：
保護中間体１.７ｇ（２.３９ｍｍｏｌ）を無水トリフルオロ酢酸５０ｍｌに取り、５時間超音波処理する。次いで、混合物を高真空下で濃縮し、温度を約２０℃に維持する。残渣をｐＨ３に調節した塩酸２００ｍｌに取り、酢酸エチル２５ｍｌで３回抽出する。水相を凍結乾燥し、次いで、再度塩酸（ｐＨ３）に取り、濾過し、再度凍結乾燥する。
収量：４５０ｍｇ（理論値の３１％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.５７分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１３）：Ｒｔ＝２.８１分；ｍ／ｚ＝５７７（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１４３】
実施例２３
Ｎ−［（２−アミノエトキシ）アセチル］−５−クロロ−Ｎ−（｛（５Ｓ）−２−オキソ−３−［４−（３−オキソモルホリン−４−イル）フェニル］−１,３−オキサゾリジン−５−イル｝メチル）チオフェン−２−カルボキサミド塩酸塩
【化６９】
2009526788.tif 000071
段階ａ）：
化合物（Ａ）５８９.６ｍｇ（１.３５ｍｍｏｌ）をＤＭＦ２５ｍｌに溶解し、水素化ナトリウム９７ｍｇ（４ｍｍｏｌ）を添加し、混合物を室温で３０分間撹拌する。次いで、ＤＭＦ４ｍｌに溶解した中間体１６Ａ２.６５ｇ（６.７６ｍｍｏｌ）を添加する。室温でさらに１０分間撹拌した後、水５ｍｌを混合物に添加する。次いで、それを濃縮し、残渣をジクロロメタン中の塩化水素の飽和溶液１５０ｍｌで終夜撹拌する。次いでそれを再度濃縮し、残渣を酢酸エチル２００ｍｌに取る。溶液を各回１０％強度炭酸ナトリウム溶液５０ｍｌで２回抽出する。有機相を分離し、濃縮し、残渣を酢酸エチル３０ｍｌで撹拌する。不溶成分を濾過し、有機相を濃縮する。アセトニトリル／ジクロロメタン１：１を溶離剤として用いて、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製する。生成物含有画分を濃縮し、残渣を分取用ＨＰＬＣ（方法１）により再度精製する。適切な画分を濃縮し、乾燥させる。二保護中間体３０ｍｇ（理論値の３％）を得る。
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝５.７１分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝３.７４分；ｍ／ｚ＝７９１（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１４４】
段階ｂ）：
保護中間体３０ｍｇ（０.０３８ｍｍｏｌ）を無水トリフルオロ酢酸５０ｍｌ中で終夜撹拌する。次いで、混合物を高真空下で濃縮し、温度を約２０℃に維持する。残渣をｐＨ３に調節した塩酸３０ｍｌに取り、ジクロロメタン２０ｍｌを混合物に添加する。相を分離し、水相を再度ジクロロメタン２０ｍｌで、続いて酢酸エチル２０ｍｌで抽出する。水相を分離し、次いで、高真空下で短時間蒸留して残っている酢酸エチルを除去し、最後に凍結乾燥する。
収量：１７ｍｇ（理論値の７８％）
ＨＰＬＣ（方法２）：Ｒｔ＝４.１４分；
ＬＣ−ＭＳ（方法１２）：Ｒｔ＝１.６７分；ｍ／ｚ＝５３７（Ｍ＋Ｈ）＋
【０１４５】
Ｂ. 溶解性、安定性および遊離挙動の測定
ａ）溶解度の決定：
試験物質を水または希塩酸（ｐＨ４）に懸濁する。この懸濁液を室温で２４時間振盪する。２２４０００ｇで３０分間の超遠心後、上清をＤＭＳＯで希釈し、ＨＰＬＣにより分析する。ＤＭＳＯ中の試験化合物の２点較正プロットを定量に使用する。
【０１４６】
ＨＰＬＣ方法：
DAD (G1315A)、quat. ポンプ (G1311A)、オートサンプラーCTC HTS PAL、脱気装置(G1322A) およびカラムサーモスタット (G1316A)を備えた Agilent 1100; カラム: Zorbax Extend-C18 3.5 μ；温度：４０℃；溶離剤Ａ：水＋過塩素酸５ｍｌ／ｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル；流速：０.７ｍｌ／分；グラジエント：０−０.５分９８％Ａ、２％Ｂ；勾配０.５−４.５分１０％Ａ、９０％Ｂ；４.５−６分１０％Ａ、９０％Ｂ；勾配６.５−６.７分９８％Ａ、２％Ｂ；６.７−７.５分９８％Ａ、２％Ｂ。
【０１４７】
代表的な例示的実施態様の希塩酸（ｐＨ４）中の溶解性を、表１に示す：
表１
【表２】
2009526788.tif 000072
【０１４８】
これらの溶液における例示的化合物の分解は観察されない。
基礎となる活性物質［化合物（Ａ）］の希塩酸（ｐＨ４）中の溶解性は、この試験で８.１ｍｇ／ｌであると測定される。
実施例１３の化合物について見出された、塩酸でｐＨ４に調節した５％デキストロース中での溶解性は、２.７０ｇ／ｌである；実施例２０、２１および２２の化合物について測定された溶解性は、３ｇ／ｌより高い。
【０１４９】
ｂ）様々なｐＨ値のバッファー中での安定性：
試験物質０.３ｍｇを、２ｍｌのＨＰＬＣバイアルに量り入れ、アセトニトリル０.５ｍｌを添加する。物質を、サンプル容器を超音波浴に約１０秒置くことにより溶解する。次いで、各バッファー溶液０.５ｍｌを添加し、サンプルを再度超音波浴で処理する。
【０１５０】
用いるバッファー溶液：
ｐＨ４.０：Millipore 水１ｌを、１Ｎ塩酸でｐＨ４.０に調節する；
ｐＨ７.４：塩化ナトリウム９０ｇ、リン酸二水素カリウム１３.６１ｇおよび１Ｍ水酸化ナトリウム溶液８３.３５ｇを、Millipore 水で１ｌとし、次いで１：１０に希釈する。
試験溶液５μｌ分を、ＨＰＬＣにより、未変化の試験物質の内容量について、３７℃で２４時間にわたり毎時間分析する。適切なピークのパーセントの面積を定量に使用する。
【０１５１】
ＨＰＬＣの方法：
DAD (G1314A)、バイナリーポンプ (G1312A)、オートサンプラー (G1329A)、カラムオーブン (G1316A)、サーモスタット (G1330A) を備えた Agilent 1100; カラム: Kromasil 100 C18, 125 mm x 4.6 mm, 5 μm；カラム温度：３０℃；溶離剤Ａ：水＋過塩素酸５ｍｌ／ｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル。
グラジエント１：
０−１.０分９８％Ａ、２％Ｂ→１.０−１３.０分５０％Ａ、５０％Ｂ→１３.０−１７.０分１０％Ａ、９０％Ｂ→１７.０−１８.０分１０％Ａ、９０％Ｂ→１８.０−１９.５９８％Ａ、２％Ｂ→１９.５−２３.０分９８％Ａ、２％Ｂ；流速：２.０ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
グラジエント２：
０−３.０分７８％Ａ、２２％Ｂ→３.０−１５.０分７８％Ａ、２２％Ｂ→１５.０−１７.０分１０％Ａ、９０％Ｂ→１７.０−１８.０分１０％Ａ、９０％Ｂ→１８.０−２０.０９８％Ａ、２％Ｂ→２０.０−２３.０分９８％Ａ、２％Ｂ；流速：２.０ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
グラジエント３：
０−３.０分７０％Ａ、３０％Ｂ→３.０−１５.０分７０％Ａ、３０％Ｂ→１５.０−１７.０分１０％Ａ、９０％Ｂ→１７.０−１８.０分１０％Ａ、９０％Ｂ→１８.０−２０.０９８％Ａ、２％Ｂ→２０.０−２３.０分９８％Ａ、２％Ｂ；流速：２.０ｍｌ／分；ＵＶ検出：２１０ｎｍ。
【０１５２】
各時点でのピーク面積（Ｆ）の比を、開始時のピーク面積と比較して、各例示的実施態様について表２に示す：
表２
【表３】
2009526788.tif 000073
【０１５３】
この試験では、ｐＨ７.４で、試験物質の内容量の減少と同時に有効成分化合物（Ａ）の増加が見出される。
【０１５４】
ｃ）ラット血漿におけるインビトロの安定性（ＨＰＬＣ検出）：
物質１ｍｇをジメチルスルホキシド１.２５ｍｌに溶解する。次いで、水１.２５ｍｌを添加する。このサンプル溶液５００μｌをラット血漿５００μｌと３７℃で混合し、振盪する。最初のサンプル（１０μｌ）をすぐにＨＰＬＣ分析用に取る。インキュベーションの開始後２時間までの期間に、さらなるアリコートを２、５、１０、３０、６０および９０分後に取り、各試験物質およびそこから遊離した有効成分化合物（Ａ）の内容量を決定する。
【０１５５】
ＨＰＬＣ方法：
DAD (G1314A)、バイナリーポンプ (G1312A)、オートサンプラー (G1329A)、カラムオーブン (G1316A)、サーモスタット (G1330A) を備えた Agilent 1100; カラム: Kromasil 100 C18, 250 mm x 4.6 mm, 5 μm；カラム温度：３０℃；溶離剤Ａ：水＋過塩素酸５ｍｌ／ｌ、溶離剤Ｂ：アセトニトリル。
グラジエント：
０−０.５分９８％Ａ、２％Ｂ→０.５−３.０分７３％Ａ、２７％Ｂ→３.０−１８.０分７３％Ａ、２７％Ｂ→１８.０−２０.０分１０％Ａ、９０％Ｂ→２０.０−２１.０９０％Ａ、１０％Ｂ→２１.０−２２.５.０分９８％Ａ、２％Ｂ→２２.５−２５.０分９８％Ａ、２％Ｂ；流速：２.０ｍｌ／分；ＵＶ検出：２４８ｎｍ。
【０１５６】
結果：
実施例１３、１７、２０、２２および２３の化合物は、この試験において２分未満の半減期で分解され、有効成分化合物（Ａ）を遊離させる。
【０１５７】
ｄ）ラットおよびヒト血漿におけるインビトロの安定性（ＬＣ／ＭＳ−ＭＳ検出）：
所定の血漿体積（例えば２.０ｍｌ）を、水浴中の密閉試験管で３７℃に温める。意図した温度に達した後、所定の量の試験物質を溶液（溶媒の体積は、血漿体積の２％以下である）として添加する。血漿を振盪し、最初のサンプル（５０−１００μｌ）をすぐに取る。次いで４−６個のさらなるアリコートを、インキュベーション開始後２時間までの期間中に取る。
【０１５８】
アセトニトリルを血漿サンプルに添加し、タンパク質を沈殿させる。遠心分離後、上清中の試験物質および、必要に応じて、試験物質の既知の切断生成物を、適するＬＣ／ＭＳ−ＭＳ方法により定量的に測定する。
ヘパリン化ラットまたはヒト血液における安定性の決定は、血漿について記載した通りに実施する。
【０１５９】
Wistar ラットの血漿において様々な時点で測定した、実施例６の化合物およびそれから遊離した有効成分化合物（Ａ）の濃度ｃを、表３に示す：
表３
【表４】
2009526788.tif 000074
【０１６０】
Wistar ラットの血漿において様々な時点で測定した、実施例１３の化合物およびそれから遊離した有効成分化合物（Ａ）の濃度ｃを、表４に示す：
表４
【表５】
2009526788.tif 000075
ｎ.ｄ.＝測定不能（検出限界より低い）
【０１６１】
ｅ）Wistar ラットにおけるｉ.ｖ.薬物動態：
物質投与の前日に、実験動物（オスの Wistar ラット、体重２００−２５０ｇ）の頸静脈に、血液を得るためのカテーテルを、イソフルラン（登録商標）麻酔下で移植する。
実験当日、所定の用量の試験物質を、Hamilton（登録商標）ガラスシリンジを使用して、溶液として尾静脈に投与する（ボーラス投与、投与期間＜１０秒）。血液サンプル（８−１２時点）を、カテーテルを通して、物質投与後２４時間の期間にわたり連続的に取る。ヘパリン処理管でサンプルを遠心分離することにより、血漿を得る。アセトニトリルを時点毎に所定の血漿体積に添加し、タンパク質を沈殿させる。遠心分離後、上清における試験物質、および、必要に応じて、試験物質の既知の切断生成物を、適するＬＣ／ＭＳ−ＭＳ方法を使用して定量的に測定する。
【０１６２】
測定される血漿濃度を使用して、試験物質およびそこから遊離した有効成分化合物（Ａ）の、ＡＵＣ、Ｃｍａｘ、Ｔ１／２（半減期）およびＣＬ（クリアランス）などの薬物動態的パラメーターを算出する。
【０１６３】
ｆ）代謝的安定性を測定するための肝細胞アッセイ：
肝細胞の存在下の試験化合物の代謝的安定性は、実験において可能な限り線形の動態学的条件を確実にするために、化合物を低濃度（好ましくは１μＭ未満）および少数の細胞（好ましくは１ｘ１０６細胞／ｍｌ）でインキュベートすることにより測定する。化合物の半減期（即ち、分解）を測定するために、インキュベーション溶液の７個のサンプルを、固定した時間パターンで、ＬＣ−ＭＳ分析用に取る。様々なクリアランスパラメーター（ＣＬ）およびＦｍａｘ値をこの半減期から算出する（下記参照）。
【０１６４】
ＣＬおよびＦｍａｘ値は、肝細胞における第１相および第２相の化合物の代謝の測定を表す。インキュベーション混合物中の酵素に対する有機溶媒の影響を最小化するために、この濃度を一般的に１％（アセトニトリル）または０.１％（ＤＭＳＯ）に限定する。
【０１６５】
１.１ｘ１０８細胞／肝臓１ｇの肝臓中の肝細胞の細胞数を、全ての種（species and breeds)について計算に使用する。インキュベーション時間（通常９０分間）を超えて延びる半減期に基づいて算出したＣＬパラメーターは、大まかなガイドラインと見なし得るだけである。
【０１６６】
算出したパラメーターおよびそれらの意味は、以下の通りである:
Ｆｍａｘ十分に撹拌［％］    経口投与後の最大の可能なバイオアベイラビリティー
計算：    （１−ＣＬ血液十分に撹拌／ＱＨ）＊１００
ＣＬ血液十分に撹拌［Ｌ／（ｈ＊ｋｇ）］    算出される血液クリアランス（十分に撹拌したモデル）
計算：    （ＱＨ＊ＣＬ'内因性）／（ＱＨ＋ＣＬ'内因性）
ＣＬ'内因性［ｍｌ／（分＊ｋｇ）］    化合物を代謝する肝臓の（肝細胞の）最大能力（肝臓の血流が律速ではないと仮定して）
計算：    ＣＬ'内因性、明白ｘ種特異的肝細胞数［１.１ｘ１０８／肝臓１ｇ］ｘ種特異的肝臓重量［ｇ／ｋｇ］
ＣＬ'内因性、明白［ｍｌ／（分＊ｍｇ）］    用いた肝細胞の細胞数ｘ（ｘ＊１０６／ｍｌ）で除去定数（elimination constant）を除すことにより、それを標準化する
計算：    ｋｅｌ［１／分］／（細胞数［ｘ＊１０６］／インキュベーション体積［ｍｌ］）
（ＱＨ＝種特異的な肝臓の血流）
【０１６７】
ｇ）ラットの動静脈シャントモデルにおける抗血栓効果の測定：
絶食中のオスのラット (系統: HSD CPB:WU) を、Rompun/Ketavet 溶液（１２ｍｇ／ｋｇ／５０ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内投与により麻酔する。P.C. Wong et al. [Thrombosis Research 83 (2), 117-126 (1996)] により記載された方法に基づき、動静脈シャントで血栓形成を誘導する。この目的で、左頸静脈および右頸動脈を露出させる。８ｃｍ長のポリエチレンカテーテル（PE60、Becton-Dickinsonより）を動脈に設置し、続いて、血栓形成性表面をもたらすために、二重ループにした粗いナイロンのループ（60 x 0.26 mm、Berkley Trileneより）を含む６ｃｍ長の Tygon チューブ (R-3606, ID 3.2 mm, Kronlabより）を設置する。２ｃｍ長のポリエチレンカテーテル（PE60、Becton-Dickinson より）を頸静脈に設置し、６ｃｍ長のポリエチレンカテーテル（PE160、Becton-Dickinson より) により Tygon チューブに連結する。シャントを開く前に、そのチューブを生理塩水で満たす。体外循環を１５分間維持する。次いで、シャントを取り除き、すぐに血栓を伴うナイロン糸の重量を量る。ナイロン糸の空の重量は、実験開始前に見出された。体外循環を取り付ける前に、試験物質（０.１Ｎ塩酸でｐＨ４に調節した生理塩水中の溶液として）をボーラス注射として投与する。
【０１６８】
Ｃ. 医薬組成物の例示的実施態様
本発明による化合物は、例えば、以下の方法で医薬製剤に変換できる：
ｉ.ｖ.溶液：
本発明による化合物を、生理的に耐容される溶媒に飽和溶解度より低い濃度で溶解する（例えば、等張塩水、５％グルコース溶液および／または３０％ＰＥＧ ４００溶液、各々ｐＨ３−５に調節する）。溶液を必要に応じて濾過滅菌し、かつ／または、無菌かつパイロジェン不含の注射容器に分配する。
【国際調査報告】
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