(57)【要約】肝線維症は、多くの肝臓病に共通の態様であり、肝臓内における瘢痕組織の形成と定義される。肝線維症は、肝臓組織の永久的な瘢痕化を生じ、これは一般に肝硬変と呼ばれる。本発明は、Ａ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質を用いて肝線維症を予防および処置する方法、ならびにアルコールの乱用、外科的処置、ウィルス性肝炎、肝毒性薬剤の摂取に起因する肝臓障害、またはその他の肝臓病の処置および予防におけるＡ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質の使用に関する。本発明は、この方法に使用される薬学的組成物にも関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
肝臓病を処置または予防する方法であって、治療効果のある量のＡ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質を、処置または予防を必要としている哺乳動物に投与することによって、肝臓病を処置または予防する方法。
【請求項２】
前記肝臓病が、壊死、線維症、胆汁うっ滞、肝硬変、ウィルスおよびアルコール性肝炎、ウィルソン病、血色素症、脂肪症、および非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）から成る群から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記肝臓病が外科的処置の結果である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記肝臓病が肝毒性処置の結果である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記肝毒性処置が肝毒性薬剤の投与を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記肝毒性薬剤が用量依存性肝毒性薬剤である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記肝毒性薬剤が、アセブトロール；アセトアミノフェン；アクチノマイシンｄ；副腎皮質ステロイド；アドリアマイシン；アロプリノール；アモキシシリン／クラブラン酸塩；同化ステロイド薬；抗炎症薬；抗甲状腺薬；アスピリン；アテノロール；アザチオプリン；カプトプリル；カルバマゼピン；カルビマゾール；カルムスティン；セファロスポリン；クロルジアゼポキシド；クロルプロマジン；クロルプロパミド；シメチジン；クロキサシリンフレカイニド；シクロホスファミド；シクロホスファミド／シクロスポリン；シクロスポリン；ダカルバジン；ダナゾール；ダントロレン；ジアゼパム；ジクロフェナク；ジルチアゼム；ジソピラミド；エナラプリル；エンフルラン；エリスロマイシン；エタンブトール；エチオナミド；フルラゼパム；フルタミド；グリブリド；金；グリセオフルビン；ハロペリドール；ハロタン；ヒドララジン；イブプロフェン；イミプラミン；インドメタシン；イソニアジド；ケトコナゾール；ラベタロール；マプロチリン；メルカプトプリン；メトトレキサート；メチルドーパ；メチルテストステロン；メトプロロール；ミアンセリン；マイトマイシン；ナプロキセン；ニコチン酸；ニフェジピン；ニトロフラントイン；非ステロイド系；ノルエタンドロロン；経口避妊薬；オキサシリン；パラアミノサリチル酸；ペニシラミン；ペニシリン；ペニシリン系；フェネルジン；フェニンジオン；フェノバルビタール；フェノチアジン；フェニルブタゾン；フェニトイン；フェニトイントロレアンドマイシン；ピロキシカム；プロベネシド；プロカインアミド；プロポキシフェン；ピラジンアミド；キニジン；キニーネ；ラニチジン；サリチル酸塩；スルホンアミド；スリンダク；タモキシフェン；テルビナフィンｈｃｉ（ラミシール、スポラノックス）；テストステロン；テトラサイクリン；チアベンダゾール；チオクアニン；トロトラスト；トルブタミド；三環系抗鬱薬；バルプロ酸；ベラパミル；ビンクリスチン；ビタミンａ；およびこれらの組合せから成る群から選択される、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記肝毒性処置が放射線処置を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項９】
化学療法または放射線の肝毒性副作用を減少させる方法であって、前記処置を受ける哺乳動物に対し、治療効果のある量のＡ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質を投与することにより化学療法または放射線の肝毒性副作用を減少させる方法。
【請求項１０】
前記Ａ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質が、化学療法または放射線処置の開始以前に投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
Ａ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質が、前記化学療法剤の前記投与と同時に投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記Ａ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質が、式Ｉまたは式ＩＩの構造を有する請求項１に記載の方法：
【化１】
2009530413.tif 000047
ここで：
Ｒ１およびＲ２は、水素、任意に置換されたアルキル、または−Ｄ−Ｅ基から独立して選択され、この場合、Ｄは共有結合またはアルキレンであり、Ｅは、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたアリール、任意に置換されたヘテロアリール、任意に置換されたヘテロシクリル、任意に置換されたアルケニル、または任意に置換されたアルキニルであり、ただし、Ｄが共有結合であるとき、Ｅがアルコキシである可能性はないことが条件であり；
Ｒ３は、水素、任意に置換されたアルキル、または任意に置換されたシクロアルキルであり；
Ｘは、任意に置換されたアリーレン、または任意に置換されたヘテロアリーレンであり；
Ｙは、共有結合、または１つの炭素原子が、−Ｏ−、−Ｓ−、または−ＮＨ−と任意に置換可能なアルキレンであり、ヒドロキシ、アルコキシ、任意に置換されたアミノ、またはＲがヒドロキシ、アルコキシ、もしくはアミノである−ＣＯＲと任意に置換され；
ただし、前記任意の置換がヒドロキシまたはアミノであり、前記置換が、ヘテロ原子に隣接する炭素原子上に存在する可能性がないことを条件とし；
Ｚは水素、任意に置換された単環式アリール、または任意に置換された単環式ヘテロアリールであり；
ただし、
（ａ）Ｚは、Ｙが共有結合、Ｘが、炭素原子によってプリン環に付着した、任意に置換された１，４−ピラゾレンである場合にのみ水素であり；
（ｂ）Ｘが任意に置換されたアリーレンである場合、Ｚは、任意に置換されたイミダゾール以外の任意に置換された単環式ヘテロアリールであることを条件とする。
【請求項１３】
前記Ａ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質が、
３−エチル−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチルアセテート，
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチルブタノエート，
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチル２，２−ジメチルプロパノエート，
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）（１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル）］リン酸ニ水素メチル、並びに薬学的に許容可能な塩、およびこれらの溶剤から成る群から選択される、
請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記Ａ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質が経口投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記Ａ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質がＩＶによって投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
前記Ａ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質が、式Ｉまたは式ＩＩの構造を有する請求項９に記載の方法：
【化２】
2009530413.tif 000048
ここで：
Ｒ１およびＲ２は、水素、任意に置換されたアルキル、または−Ｄ−Ｅ基から独立して選択され、この場合、Ｄは共有結合またはアルキレンであり、Ｅは、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたアリール、任意に置換されたヘテロアリール、任意に置換されたヘテロシクリル、任意に置換されたアルケニル、または任意に置換されたアルキニルであり、ただし、Ｄが共有結合であるとき、Ｅがアルコキシである可能性はないことが条件であり；
Ｒ３は、水素、任意に置換されたアルキル、または任意に置換されたシクロアルキルであり；
Ｘは、任意に置換されたアリーレンまたはヘテロアリーレンであり；
Ｙは、共有結合、または１つの炭素原子が、−Ｏ−、−Ｓ−、または−ＮＨ−と任意に置換可能なアルキレンであり、ヒドロキシ、アルコキシ、任意に置換されたアミノ、またはＲがヒドロキシ、アルコキシ、もしくはアミノである−ＣＯＲと任意に置換され；
ただし、該任意の置換がヒドロキシまたはアミノであり、該置換が、ヘテロ原子に隣接する炭素原子上に存在する可能性がないことが条件であり；
Ｚは水素、任意に置換された単環式アリール、または任意に置換された単環式ヘテロアリールである；
ただし、
（ａ）Ｚは、Ｙが共有結合、Ｘが、炭素原子によって前記プリン環に付着した、任意に置換された１，４−ピラゾレンである場合にのみ水素であり；
（ｂ）Ｘが任意に置換されたアリーレンである場合、Ｚは、任意に置換されたイミダゾール以外の任意に置換された単環式ヘテロアリールであることを条件とする。
【請求項１８】
前記Ａ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質が、
３−エチル−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチルアセテート，
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチルブタノエート，
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチル２，２−ジメチルプロパノエート，
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−ピラゾール−４−イル）（１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル）］リン酸ニ水素メチル、並びに薬学的に許容可能な塩、およびこれらの溶媒和化合物から成る群から選択される、
請求項９に記載の方法。
【請求項１９】
前記Ａ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質が経口投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項２０】
前記Ａ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質がＩＶによって投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項２１】
前記哺乳動物がヒトである、請求項９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本願は、本明細書において、その全体が参考として援用される２００６年３月１７日に出願された米国仮特許出願第６０／７８３，５７５号に対する優先権を主張する。
【０００２】
本発明は、Ａ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質を使用する肝疾患を予防および処置する方法に関する。本発明は、アルコールの乱用、外科的処置、ウィルス性肝炎、肝毒性薬剤の摂取によって生じる肝臓障害、またはその他の肝疾患の処置および予防に用途がある。本発明はさらに、この方法に使用される薬学的組成物に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
肝臓病は、壊死、脂肪症、線維症、および胆汁うっ滞を含む多様な形態を取る可能性があり、形態はこれらだけに限らない。その他の形態の肝疾患は、化学療法剤および抗癌剤、抗生物質、鎮痛薬、制吐薬などの肝毒性医薬品の摂取、並びにその他の投薬に起因する可能性がある。また、アルコールおよび薬剤の乱用も、肝疾患の公知の原因である。肝臓病の代表的な原因としては、ウィルスおよびアルコール性肝炎、ウィルソン病、血色素症、脂肪症、および非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）が挙げられるが、これらだけに限らない。
【０００４】
肝繊維症は、すべてとは言えないが多くの肝臓病に共通の態様であり、肝臓内における瘢痕組織の形成と定義される。瘢痕化は、肝臓が肝臓毒素の摂取によって、慢性肝炎または身体の傷害の結果として生じた細胞傷害を修復しようとする時に発現する。肝繊維症は、外科的処置および肝毒性薬剤療法、つまり肝臓置換もしくは修復、または化学療法の結果として生じる場合もある。多くの場合、肝繊維症は、肝組織の永久的な瘢痕化を生じ、これは、一般に肝硬変と呼ばれる。
【０００５】
最近の研究で、アデノシンは肝繊維症の発現および進行にある役割を果たすことが明らかになった。Ｃｈｕｎｎ等（非特許文献１）は、アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）欠損マウスでは肝繊維症が増加することに気付いた。Ｃｈｕｎｎ等が使用するマウスは、部分ＡＤＡ酵素活性を有し、それによって長期にわたってアデノシンを蓄積するように遺伝子組換えが行われる。
【０００６】
アデノシンは、自然発生的なヌクレオシドであり、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ、およびＡ３として公知のアデノシン受容体ファミリーと相互作用することによってその生物学的効果を発揮し、これらのファミリーはすべて、重要な生理学的プロセスを調整する。様々な受容体の中で、Ａ２Ｂアデノシン受容体は、血管新生因子および炎症性サイトカインおよびケモカインの合成および放出を調整することが実証され、マスト細胞活性化、血管拡張、および細胞増殖の調節との関係を介して、炎症状態に最も著しく関与すると考えられる（非特許文献２；非特許文献３を参照のこと）。
【０００７】
意外なことに、Ａ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質は、肝臓病の予防および処置にも有用である。したがって、効力があり、完全または部分的に選択可能なＡ２Ｂ拮抗物質である化合物、つまりＡ２Ｂアデノシン受容体を抑制する化合物を投与することによって、肝臓病を処置および／または予防する方法を提供することが望ましい。
【非特許文献１】Ｃｈｕｎｎ等（２００６）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  ＭｏＩ  Ｐｈｙｓｉｏｌ，２９０（３）：Ｌ５７９−８７
【非特許文献２】Ａｄｅｎｏｓｉｎｅ  Ａ２Ｂ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｓ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｔａｒｇｅｔｓ，Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  Ｒｅｓ  ４５：１９８
【非特許文献３】Ｆｅｏｋｔｉｓｔｏｖ等、Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ  １９：１４８−１５３
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の要旨）
本発明の一実施態様では、肝臓病を処置および予防するための方法であって、治療効果のある量のＡ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質を、前記処置および予防を必要としている哺乳動物に投与することによって肝臓病を処置および予防するための方法を提供する。肝臓病は、壊死、線維症、胆汁うっ滞、肝硬変、ウィルスおよびアルコール性肝炎、ウィルソン病、血色素症、脂肪症、および非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）の形態を取り得るか、または外科的処置もしくは肝毒性物質による薬物療法、つまり肝臓置換もしくは修復、または化学療法の結果である場合がある。
【０００９】
本発明の第２実施態様では、化学療法または放射線の肝毒性副作用を減少させる方法であって、治療効果のある量のＡ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質を、こうした処置を受ける哺乳動物に投与することによって、化学療法または放射線の肝毒性副作用を減少させる方法を提供する。
【００１０】
本発明の別の実施態様では、必要としている哺乳動物に対し、式Ｉまたは式ＩＩの構造を有する治療効果のある量のＡ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質を投与することによって、肝臓病を処置および予防する方法を提供する：
【００１１】
【化３】
2009530413.tif 000002
ここで：
Ｒ１およびＲ２は、水素、任意に置換されたアルキル、または−Ｄ−Ｅ基から独立して選択され、この場合、Ｄは共有結合またはアルキレンであり、Ｅは、任意に置換されたアルコキシ、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたアリール、任意に置換されたヘテロアリール、任意に置換されたヘテロシクリル、任意に置換されたアルケニル、または任意に置換されたアルキニルであり、ただし、Ｄが共有結合であるとき、Ｅがアルコキシである可能性はないことが条件であり；
Ｒ３は、水素、任意に置換されたアルキル、または任意に置換されたシクロアルキルであり；
Ｘは、任意に置換されたアリーレンであるか、または任意に置換されたヘテロアリーレンであり；
Ｙは、共有結合、または１つの炭素原子が、−Ｏ−、−Ｓ−、もしくは−ＮＨ−と任意に置換可能なアルキレンであり、ヒドロキシ、アルコキシ、任意に置換されたアミノ、またはＲがヒドロキシ、アルコキシ、もしくはアミノである−ＣＯＲと任意に置換され；
Ｚは、任意に置換された単環式アリール、または任意に置換された単環式ヘテロアリールであるか；あるいは、
Ｚは、Ｘが任意に置換されたヘテロアリーレンであり、Ｙが共有結合である場合は水素である。
【００１２】
本発明のさらに別の実施態様では、治療効果のある量のＡ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質、および少なくとも１つの薬学的に許容可能な担体を含む製剤処方を提供する。この処方は、好ましくは経口投与のための処方である。
【００１３】
式ＩおよびＩＩの１つの好ましい群の化合物は、Ｒ１およびＲ２が別個に水素、任意に置換された低級アルキルである化合物であるか、Ｄが共有結合もしくはアルキレンであり、Ｅが任意に置換されたフェニル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたアルケニル、もしくは任意に置換されたアルキニルである−Ｄ−Ｅ基であり、特にＲ３が水素である化合物である。
【００１４】
この群の中では、第１に好ましいクラスの化合物としては、Ｒ１およびＲ２が、別個に、シクロアルキルと任意に置換された低級アルキル、好ましくはｎ−プロピルであり、Ｘが任意に置換されたフェニレンである化合物が挙げられる。このクラスの中では、好ましいサブクラスの化合物は、Ｙが、アルキレンであり、たとえば、炭素原子が、酸素、好ましくは−Ｏ−ＣＨ２−と置換され、特に酸素がフェニレンに対する付着点であるアルキレンである化合物である。このサブクラスの中では、Ｚは、任意に置換されたオキサジアゾール、特に任意に置換された［１，２，４］−オキサジアゾール−３−イル、特に、任意に置換されたフェニルまたは任意に置換されたピリジルと置換された［１，２，４］−オキサジアゾール−３−イルであることが好ましい。
【００１５】
第２の好ましいクラスの化合物としては、Ｘが任意に置換された１，４−ピラゾレンである化合物が挙げられる。このクラスの中で、好ましいサブクラスの化合物は、Ｙが共有結合またはアルキレン、特に低級アルキレンであり、Ｚが水素、任意に置換されたフェニル、任意に置換されたピリジル、または任意に置換されたオキサジアゾールである化合物である。このサブクラスの中で、１つの好ましい実施態様としては、Ｒ１が、シクロアルキルと任意に置換された低級アルキルであり、Ｒ２が水素である化合物が挙げられる。より好ましい実施態様としては、Ｙが−（ＣＨ２）−または−ＣＨ（ＣＨ３）−であり、Ｚが任意に置換されたフェニル、またはＹが−（ＣＨ２）−または−ＣＨ（ＣＨ３）−であり、Ｚが任意に置換されたオキサジアゾール、特に３，５−［１，２，４］−オキサジアゾールであるか、またはＹが−（ＣＨ２）−もしくは−ＣＨ（ＣＨ３）−であり、Ｚが任意に置換されたピリジルである化合物が挙げられる。このサブクラスの中で、Ｒ１およびＲ２が、別個に、シクロアルキルと任意に置換された低級アルキル、特にｎ−プロピルである化合物も好ましい。Ｙが共有結合、−（ＣＨ２）−または−ＣＨ（ＣＨ３）−であり、Ｚが水素、任意に置換されたフェニル、もしくは任意に置換されたピリジル、特にＹが共有結合であり、Ｚが水素である化合物はより好ましい。
【００１６】
その他の下位群の好ましい化合物としては、Ｒ３が、式−ＣＨＲ４ＯＲ５の置換アルキル基であり、その結果、以下の式ＩＩＩの構造を有する化合物、およびその薬学的に許容可能な塩がある：
【００１７】
【化４】
2009530413.tif 000003
ここで、
Ｒ４は、水素またはメチルであり；
Ｒ５は、Ｒが、別個に、任意に置換された低級アルキル、任意に置換されたアリール、もしくは任意に置換されたヘテロアリールである−Ｃ（Ｏ）Ｒであるか；あるいは
Ｒ５は、Ｒ６が水素、またはフェニルもしくはヘテロアリールと任意に置換された低級アルキルである−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ６）２である。
【００１８】
今のところ、本発明に使用することが好ましい化合物としては、以下が挙げられるが、これらだけに限らない：
１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−プロピル−８−［１−ベンジルピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−ブチル−８−（１−｛［３−フルオロフェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−プロピル−８−［１−（フェニルエチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［５−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１−プロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［５−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１−ブチル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−ピラゾール−４−イル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−メチル−３−ｓｅｃ−ブチル−８−ピラゾール−４−イル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−シクロプロピルメチル−３−メチル−８−｛１−［（３−トリフルオロメチルフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジメチル−８−｛１−［（３−フルオロフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−メチル−１−プロピル−８−｛１−［（３−トリフルオロメチルフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−エチル−１−プロピル−８−｛１−［（３−トリフルオロメチルフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［（３−フルオロフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−エチル−３−メチル−８−｛１−［（３−フルオロフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［（２−メトキシフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［３−（トリフルオロメチル）−フェニル］エチル｝ピラゾール−４−イル−）１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［（４−カルボキシフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
２−［４−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル（１，３，７−トリヒドロプリン−８−イル））ピラゾリル］−２−フェニル酢酸；
８−｛４−［５−（２−メトキシフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］フェニル｝−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−｛４−［５−（３−メトキシフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］フェニル｝−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−｛４−［５−（４−フルオロフェニル）−［１，２，４］オキサジアゾール−３−イルメトキシ］フェニル｝−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−（シクロプロピルメチル）−８−［１−（２−ピリジルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−ｎ−ブチル−８−［１−（６−トリフルオロメチルピリジン−３−イルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［３−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−５−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−［１−（｛５−［４−（トリフルオロメチル）フェニル］イソキサゾール−３−イル｝メチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−［１−（２−ピリジルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−｛［４−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−８−イル）ピラゾリル］メチル｝安息香酸；
１，３−ジプロピル−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１，３−ジプロピル−８−｛１−［（３−（１Ｈ−１，２，３，４−テトラアゾール−５−イル）フェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
６−｛［４−（２，６−ジオキソ−１，３−ジプロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−８−イル）ピラゾリル］メチル｝ピリジン−２−カルボン酸；
３−エチル−１−プロピル−８−［１−（２−ピリジルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［５−（４−クロロフェニル）イソキサゾール−３−イル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−３−エチル−１−プロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
８−（１−｛［３−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−５−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−３−エチル−１−プロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−エチル−１−プロピル−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−（シクロプロピルメチル）−３−エチル−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−エチル−１−（２−メチルプロピル）−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチルアセテート；
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチル２，２−ジメチルプロパノエート；
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル］メチルブタノエート；および
［３−エチル−２，６−ジオキソ−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）（１，３，７−トリヒドロプリン−７−イル）］リン酸ニ水素メチルである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１９】
（発明の詳細な説明）
定義および一般的なパラメータ
本明細書で使用する場合、以下の用語および語句は、一般に、以下に記載する意味を有することを意図するが、これらの用語および語句が使用されている文脈がそうではないことを指示する場合は、この限りではない。
【００２０】
「アルキル」という用語は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個の炭素原子を有するモノラジカル分枝または未分枝飽和炭化水素鎖を意味する。この用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−デシル、テトラデシルなどの基によって例証される。
【００２１】
「置換アルキル」という用語は、以下を意味する：
１）アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルフォニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール，−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリールおよび−ＳＯ２−ヘテロアリールから成る群から選択される１、２、３、４または５個の置換基、好ましくは１〜３個の置換基を有する、上記で定義されるアルキル基。定義上別の制約が加えられない限り、すべての置換基は、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲから選択される１、２または３個の置換基と任意にさらに置換することができ、ここでＲはアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である。あるいは、
２）上記で定義され、酸素、硫黄およびＮＲａ−から個々に選択される１〜１０個の原子によって割り込まれているアルキル基であり、Ｒａは、水素、アルキル、シクロアルキル、アルケニル、シクロアルケニル、アルキニル、アリール、ヘテロアリール、およびヘテロシクリルから選択される。すべての置換基は、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、または−Ｓ（Ｏ）ｎＲによって任意にさらに置換することができ、Ｒはアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である。あるいは、
３）上記で定義される１、２、３、４または５個の置換基を有し、かつ上記で定義される１〜１０個の原子によってさらに割り込まれている、上記で定義されるアルキル基。
【００２２】
「低級アルキル」という用語は、１、２、３、４、５、または６個の炭素原子を有するモノラジカル分枝または未分枝飽和炭化水素鎖を意味する。この用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ヘキシル基などの基によって例証される。
【００２３】
「置換低級アルキル」という用語は、置換アルキルで定義したような１〜５個の置換基、好ましくは１、２、もしくは３個の置換基を有する、上記で定義される低級アルキル、または置換アルキルで定義したような１、２、３、４、もしくは５個の原子によって割り込まれている、上記で定義される低級アルキル基、または上記で定義される１、２、３、４、または５個の置換基を有し、かつさらに上記で定義される１、２、３、４、もしくは５個の原子によって割り込まれている上記で定義される低級アルキル基を意味する。
【００２４】
「アルキレン」という用語は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０個の炭素原子、好ましくは１〜１０個の炭素原子、さらに好ましくは１、２、３、４、５または６個の炭素原子を有する分枝または未分枝飽和炭化水素鎖のジラジカルを意味する。この用語は、メチレン（−ＣＨ２−）、エチレン（−ＣＨ２ＣＨ２−）、プロピレンアイソマー（たとえば、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−および−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２−）などの基によって例証される。
【００２５】
「低級アルキレン」という用語は、１、２、３、４、５、または６個の炭素原子を有する好ましくは分枝または未分枝飽和炭化水素鎖のジラジカルを意味する。
【００２６】
「低級アルキレン」という用語は、１、２、３、４、５、または６個の炭素原子を有する好ましくは分枝または未分枝飽和炭化水素鎖のジラジカルを意味する。
【００２７】
「置換アルキレン」という用語は、以下を意味する：
（１）アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルフォニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリールおよび−ＳＯ２−ヘテロアリールから成る群から選択される１、２、３、４、または５個の置換基を有する、上記で定義されるアルキレン基。定義上別の制約が加えられない限り、すべての置換基は、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲから選択される１、２、または３個の置換基と任意にさらに置換することができ、ここでＲはアルキル、アリール、またはヘテロアリール、およびｎは０、１または２である；あるいは
（２）酸素、硫黄およびＮＲａ−から別個に選択される１〜２０個の原子によって割り込まれている、上記で定義されるアルキレン基であり、ここでＲａは水素、任意に置換されたアルキル、シクロアルキル、シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、およびヘテロシクリル、またはカルボニル、カルボキシエステル、カルボキシアミド、およびスルホニルから選択される基である；または
（３）上記で定義される１、２、３、４、または５個の置換基を有し、かつさらに上記で定義される１〜２０個の原子によって割り込まれている上記で定義されるアルキレン基。置換アルキレンの例は、クロロメチレン（−ＣＨ（Ｃｌ）−）、アミノエチレン（−ＣＨ（ＮＨ２）ＣＨ２−）、メチルアミノエチレン（−ＣＨ（ＮＨＭｅ）ＣＨ２−）、２−カルボキシプロピレンアイソマー類（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＯ２Ｈ）ＣＨ２−）、エトキシエチル（−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−）、エチルメチルアミノエチル（−ＣＨ２ＣＨ２Ｎ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２−）、１−エトキシ−２−（２−エトキシーエトキシ）エタン（−ＣＨ２ＣＨ２Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ２ＣＨ２−ＯＣＨ２ＣＨ２−）などである。
【００２８】
「アラルキル」という用語は、アルキレン基に共有結合するアリール基を意味し、アリールおよびアルキレンは本明細書で定義する。「任意に置換されたアラルキル」は、任意に置換されたアルキレン基に共有結合される任意に置換されたアリール基を意味する。こうしたアラルキル基は、ベンジル、フェニルエチル、３−（４−メトキシフェニル）プロピルなどによって例証される。
【００２９】
「アルコキシ」という用語はＲ−Ｏ−基を意味し、ここで、Ｒは任意に置換されたアルキル、または任意に置換されたシクロアルキルであるか、あるいはＲは−Ｙ−Ｚ基であり、Ｙは任意に置換されたアルキレン、Ｚは任意に置換されたアルケニル、任意に置換されたアルキニル；または任意に置換されたシクロアルケニルであり、アルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキルおよびシクロアルケニルは本明細書で定義されるとおりである。好ましいアルコキシ基は、任意に置換されたアルキル−Ｏ−であり、一例として、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソ−プロポキシ、ｎ−ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、ｎ−ヘキソキシ、１，２−ジメチルブトキシ、トリフルオロメトキシなどが挙げられる。
【００３０】
「アルキルチオ」という用語は、Ｒ−Ｓ−基であり、Ｒは、アルコキシの場合と同様に定義される。
【００３１】
「アルケニル」という用語は、好ましくは２〜２０個の炭素原子、より好ましくは２〜１０個の炭素原子、さらに好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、１〜６個、好ましくは１個の二重結合（ビニル）を有する分枝または未分枝不飽和炭化水素基のモノラジカルを意味する。好ましいアルケニル基としては、エテニルまたはビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、１−プロピレンまたはアリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、イソプロピレン（−Ｃ（ＣＨ３）＝ＣＨ２）、ビシクロ［２．２．１］ヘプテンなどが挙げられる。アルケニルが窒素に付着する場合、二重結合は窒素に対してαである可能性はない。
【００３２】
「低級アルケニル」という用語は、２〜６個の炭素原子を有する、上記で定義するアルケニルを意味する。
【００３３】
「置換アルケニル」という用語は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルフォニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリールおよび−ＳＯ２−ヘテロアリールから成る群から選択される１、２、３、４、または５個の置換基、好ましくは１、２、または３個の置換基を有する、上記で定義されるアルケニル基を意味する。定義上別の制約が加えられない限り、すべての置換基は、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲから選択される１、２、または３個の置換基と任意にさらに置換することができ、ここでＲはアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である。
【００３４】
「アルキニル」という用語は、好ましくは２〜２０個の炭素原子、より好ましくは２〜１０個の炭素原子、およびさらに好ましくは２〜６個の炭素原子を有し、少なくとも１個、好ましくは１〜６個の部位のアセチレン（三重結合）不飽和を有する不飽和炭化水素のモノラジカルを意味する。好ましいアルキニル基としては、エチニル、（−Ｃ≡ＣＨ）、プロパルギル（またはプロパ−１−イン−３−イル，−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）などが挙げられる。アルキニルが窒素に付着する場合、三重結合が窒素に対してαである可能性はない。
【００３５】
「置換アルキニル」という用語は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルフォニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール、−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリールおよび−ＳＯ２−ヘテロアリールから成る群から選択される１、２、３、４、または５個の置換基、好ましくは１、２、または３個の置換基を有する、上記で定義されるアルキニル基を意味する。定義上別の制約が加えられない限り、すべての置換基は、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲから選択される１、２、または３個の置換基と任意にさらに置換することができ、ここでＲはアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である。
【００３６】
「アミノカルボニル」という用語は−Ｃ（Ｏ）ＮＲＲを意味し、各々のＲは、別個に水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロシクリルであるか、または両方のＲ基が結合して、ヘテロ環基（たとえば、モルホリノ）を形成する。定義上別の制約が加えられない限り、すべての置換基は、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲから選択した１〜３置換基と任意にさらに置換することができ、Ｒはアルキル、アリール、もしくはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である。
【００３７】
「アシルアミノ」という用語は−ＮＲＣ（Ｏ）Ｒ基を意味し、各々のＲは、別個に水素、アルキル、アリール、ヘテロアリール、またはヘテロシクリルである。定義上別の制約が加えられない限り、すべての置換基は、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲから選択される１〜３置換基と任意にさらに置換することができ、Ｒはアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である。
【００３８】
「アシルオキシ」という用語は、−Ｏ（Ｏ）Ｃ−アルキル基、−Ｏ（Ｏ）Ｃ−シクロアルキル基、−Ｏ（Ｏ）Ｃ−アリール基、−Ｏ（Ｏ）Ｃ−ヘテロアリール基、および−Ｏ（Ｏ）Ｃ−ヘテロシクリル基を意味する。定義上別の制約が加えられない限り、すべての置換基は、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、または−Ｓ（Ｏ）ｎＲと任意にさらに置換することができ、Ｒはアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である。
【００３９】
「アリール」という用語は、単環（たとえば、フェニル）、多環（たとえば、ビフェニル）、または多縮合（融合）環（たとえば、ナフチルもしくはアントリル）を有する６〜２０個の炭素原子の芳香族炭素環基を意味する。好ましいアリールとしては、フェニル、ナフチルなどがある。
【００４０】
「アリーレン」という用語は、上記で定義するアリール基のジラジカルを意味する。この用語は、１，４−フェニレン、１，３−フェニレン、１，２−フェニレン、１，４’−ビフェニレンなどの基によって例証される。
【００４１】
アリールまたはアリーレン置換基に関して、定義上別の制約が加えられない限り、こうしたアリール基またはアリーレン基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルフォニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール，−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリール、および−ＳＯ２−ヘテロアリールから選択した１〜５個の置換基、好ましくは１〜３個の置換基と任意にさらに置換することができる。定義上別の制約が加えられない限り、すべての置換基は、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲから選択される１〜３個の置換基と任意にさらに置換することができ、Ｒはアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１または２である。
【００４２】
「アリールオキシ」という用語はアリール−Ｏ−基を意味し、アリール基が上記のように定義され、上記のように定義される任意に置換されたアリール基を含む。「アリールチオ」という用語はＲ−Ｓ−基を意味し、Ｒは、アリールに関して定義したとおりである。
【００４３】
「アミノ」という用語は、−ＮＨ２基を意味する。
【００４４】
「置換アミノ」という用語は、各々のＲが、両方のＲ基が水素ではないことを条件として、水素、アルキル、シクロアルキル、カルボキシアルキル（たとえば、ベンジルオキシカルボニル）、アリール、ヘテロアリール、およびヘテロシクリルから成る群から別個に選択される−ＮＲＲ基、あるいは、Ｙが任意に置換されたアルキレン、Ｚがアルケニル、シクロアルケニル、またはアルキニルである−Ｙ−Ｚ基を意味する。定義上別の制約が加えられない限り、すべての置換基は、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲから選択される１〜３個の置換基と任意にさらに置換することができ、Ｒはアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１、または２である。
【００４５】
「カルボキシアルキル」という用語は、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキル基または−Ｃ（Ｏ）Ｏ−シクロアルキル基を意味し、アルキルおよびシクロアルキルは本明細書に定義するとおりであり、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、または−Ｓ（Ｏ）ｎＲ，と任意にさらに置換することができ、ここでＲはアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１、または２である。
【００４６】
「シクロアルキル」という用語は、単環または多縮合環を有する３〜２０個の炭素原子の炭素環基を意味する。こうしたシクロアルキル基は、一例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロオクチルなどの単環構造、またはアダマンタニル、ビシクロ［２．２．１］ヘプタン、１，３，３−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２−イル、（２，３，３−トリメチルビシクロ［２．２．１］ヘプタ−２−イル）、またはアリール基が縮合する炭素環基、たとえばインダンなどの多環構造が挙げられる。
【００４７】
「置換シクロアルキル基」という用語は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルフォニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール，−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリール、および−ＳＯ２−ヘテロアリールから成る群から選択される１、２、３、４、または５個の置換基、好ましくは１、２、または３個の置換基を有するシクロアルキル基を意味する。定義上別の制約が加えられない限り、すべての置換基は、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲから選択される１、２、または３個の置換基と任意にさらに置換することができ、Ｒはアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１、または２である。
【００４８】
「ハロゲン」または「ハロ」という用語は、フルオロ、ブロモ、クロロ、およびヨードを意味する。
【００４９】
「アシル」という用語は−Ｃ（Ｏ）Ｒ基を意味し、ここでＲは水素、任意に置換されたアルキル、任意に置換されたシクロアルキル、任意に置換されたヘテロシクリル、任意に置換されたアリール、および任意に置換されたヘテロアリールである。
【００５０】
「ヘテロアリール」という用語は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、または１５個の炭素原子を有し、並びに少なくとも１つの環内に酸素、窒素、および硫黄から選択される１、２、３、または４個のヘテロ原子を有する芳香族環基（つまり、完全不飽和）から誘導されるラジカルを意味する。こうしたヘテロアリール基は、単環（たとえば、ピリジルもしくはフリル）、または多縮合環（たとえば、インドリジニル、ベンゾチアゾリル、またはベンゾチエニル）を有することが可能である。ヘテロアリールの例としては、［１，２，４］オキサジアゾール、［１，３，４］オキサジアゾール、［１，２，４］チアジアゾール、［１，３，４］チアジアゾール、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、インドリジン、イソインドール、インドール、インダゾール、プリン、キノリジン、イソキノリン、キノリン、フタラジン、ナフチルピリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、カルバゾール、カルボリン、フェナントリジン、アクリジン、フェナントロリン、イソチアゾール、フェナジン、イソキサゾール、フェノキサジン、フェノチアジン、イミダゾリジン、イミダゾリンなど、並びにヘテロアリール化合物を含む窒素のＮ−オキシドおよびＮ−アルコキシ誘導体、たとえばピリジン−Ｎ−オキシド誘導体が挙げられるが、これらだけに限らない。
【００５１】
「ヘテロアリーレン」という用語は、上記のように定義されるヘテロアリール基のジラジカルを意味する。この用語は、２，５−イミダゾレン、３，５−［１，２，４］オキサジアゾレン、２，４−オキサゾレン、１，４−ピラゾレンなどの基によって例証される。たとえば、１，４−ピラゾレンは、以下のとおりである：
【００５２】
【化５】
2009530413.tif 000004
ここで、Ａは付着点を表す。
【００５３】
ヘテロアリールまたはヘテロアリーレン置換基に関して、定義上別の制約が加えられない限り、こうしたヘテロアリールまたはヘテロアリーレン基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルフォニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール，−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリール、および−ＳＯ２−ヘテロアリールから成る群から選択される１〜５個の置換基、好ましくは１〜３個の置換基と任意に置換することができる。定義上別の制約が加えられない限り、すべての置換基は、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲから選択される１〜３個の置換基と任意にさらに置換することができ、Ｒはアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１、または２である。
【００５４】
「ヘテロアラルキル」という用語は、アルキレン基に共有結合されるヘテロアリール基を意味し、ヘテロアリールおよびアルキレンは、本明細書で定義するとおりである。「任意に置換されたヘテロアラルキル」は、任意に置換されたアルキレン基に共有結合される任意に置換されたヘテロアリール基を意味する。こうしたヘテロアラルキル基は、３−ピリジルメチル、キノリン−８−イルエチル、４−メトキシチアゾール−２−イルプロピルなどによって例証される。
【００５５】
「ヘテロアリールオキシ」は、ヘテロアリール−Ｏ−基を意味する。
【００５６】
「ヘテロシクリル」という用語は、１〜４０個の炭素原子を有し、環内に窒素、硫黄、リン、および／または酸素から選択される１〜１０個のヘテロ原子、好ましくは１、２、３または４個のヘテロ原子を有する単環または多縮合環を有するモノラジカル飽和または部分不飽和基を意味する。ヘテロ環基は、単環または多縮合環を有し、テトラヒドロフラニル、モルホリノ、ピペリジニル、ピペラジノ、ジヒドロピリジノなどを含むことが可能である。
【００５７】
ヘテロ環置換基に関して、定義上別の制約が加えられない限り、こうしたヘテロ環基は、アルキル、アルケニル、アルキニル、アルコキシ、シクロアルキル、シクロアルケニル、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アミノ、アミノカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アジド、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ケト、チオカルボニル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、ヘテロシクリルチオ、チオール、アルキルチオ、アリール、アリールオキシ、ヘテロアリール、アミノスルフォニル、アミノカルボニルアミノ、ヘテロアリールオキシ、ヘテロシクリル、ヘテロシクロオキシ、ヒドロキシアミノ、アルコキシアミノ、ニトロ、−ＳＯ−アルキル、−ＳＯ−アリール，−ＳＯ−ヘテロアリール、−ＳＯ２−アルキル、ＳＯ２−アリール、および−ＳＯ２−ヘテロアリールから選択される１、２、３、４、または５個、好ましくは１、２、または３個の置換基と任意に置換することができる。定義上別の制約が加えられない限り、すべての置換基は、アルキル、カルボキシ、カルボキシアルキル、アミノカルボニル、ヒドロキシ、アルコキシ、ハロゲン、ＣＦ３、アミノ、置換アミノ、シアノ、および−Ｓ（Ｏ）ｎＲから選択される１〜３個の置換基と任意にさらに置換することができ、Ｒはアルキル、アリール、またはヘテロアリールであり、ｎは０、１、または２である。
【００５８】
「チオール」という用語は、−ＳＨ基を意味する。
【００５９】
「置換アルキルチオ」という用語は、−Ｓ−置換アルキル基を意味する。
【００６０】
「ヘテロアリールチオール」という用語は、−Ｓ−ヘテロアリール基を意味する。ヘテロアリール基は上記で定義されるとおりであり、やはり上記で定義される任意に置換されたヘテロアリール基を含む。
【００６１】
「スルホキシド」という用語は、Ｒがアルキル、アリール、またはヘテロアリールである−Ｓ（Ｏ）Ｒ基を意味する。「置換スルホキシド」は、Ｒが、上記で定義される置換アルキル、置換アリール、または置換ヘテロアリールである−Ｓ（Ｏ）Ｒ基を意味する。
【００６２】
「スルホン」という用語は、Ｒがアルキル、アリール、またはヘテロアリールである−Ｓ（Ｏ）２Ｒ基を意味する。「置換スルホン」は、Ｒが、本明細書で定義する置換アルキル、置換アリール、または置換ヘテロアリールである−Ｓ（Ｏ）２Ｒ基を意味する。
【００６３】
「ケト」は、−Ｃ（Ｏ）−基を意味する。
【００６４】
「チオカルボニル」という用語は、−Ｃ（Ｓ）−基を意味する。
【００６５】
「カルボキシ」という用語は、−Ｃ（Ｏ）−ＯＨ基を意味する。
【００６６】
「任意の」または「任意に」は、後に続いて記述される事象または状況が発生する場合もあるし、発生しない場合もあり、この記述は、前記の事象または状況が発生する場合、および発生しない場合を含むことを意味する。
【００６７】
「式Ｉおよび式ＩＩの化合物」という用語は、ここに開示する本発明の化合物、薬学的に許容可能な塩、薬学的に許容可能エステル、プロドラッグ、水和物、およびこうした化合物の多形態を含むことを意図する。さらに、本発明の化合物は、１つまたは複数の不斉中心を含む場合があり、ラセミ混合物、または個々の光学異性体もしくはジアステレオ異性体として生成することができる。式Ｉの任意の一定の化合物中に存在する立体異性体の数は、存在する不斉中心の数によって決まる（２ｎ個のの立体異性体の存在が可能であり、ｎは不斉中心の数である）。個々の立体異性体は、合成のある適切な段階における中間体のラセミもしくは非ラセミ混合物を分離するか、または式Ｉの化合物を従来の手段で分離することによって取得することが可能である。個々の立体異性体（個々の光学異性体およびジアステレオ異性体を含む）、並びに立体異性体のラセミおよび非ラセミ混合物は本発明の範囲に含まれ、これらはすべて、特記しない限り、本明細書の構造によって記述することを意図されている。
【００６８】
「異性体」は、同じ分子式を有する異なる化合物である。
【００６９】
「立体異性体」は、原子が空間内に配置される状態のみが異なる異性体である。
【００７０】
「光学異性体」は、互いに重ね合わせることができない鏡像である１対の立体異性体である。１対の光学異性体の１：１の混合物が「ラセミ」混合物である。「（±）」という用語は、適切な場合にラセミ混合物を示すために使用する。
【００７１】
「ジアステレオ異性体」は、少なくとも２つの不斉原子を有するが、これらは互いの鏡像ではない立体異性体である。
【００７２】
絶対立体配置は、Ｃａｈｎ−Ｉｎｇｏｌｄ−Ｐｒｅｌｏｇ  Ｒ−Ｓ法に従って規定される。化合物が純粋な光学異性体である場合、各々のキラル炭素の立体配置は、ＲまたはＳによって規定し得る。絶対構成が未知の分解化合物は、これらが、ナトリウムＤ線の波長で偏向の平面を回転させる方向（右旋回性または左旋回性）に応じて、（＋）または（−）で指示される。
【００７３】
「局所性投与」は、外傷組織および隣接する上皮組織の表面に対する治療薬の送達として定義するものとする。
【００７４】
「非経口投与」は、患者に対する注射を介した治療薬の全身送達である。
【００７５】
「治療効果のある量」という用語は、治療を必要とする哺乳動物に投与する場合、以下で定義するとおり、治療するのに十分な式Ｉの化合物の量を意味する。治療効果のある量は、使用する治療薬の特定の活性、患者の年齢、健康状態、その他の病状有無、および栄養状態に応じて異なるであろう。さらに、患者が服用し得るその他の薬物は、投与する治療薬の治療効果のある量の決定に影響する。
【００７６】
「処置」または「処置する」という用語は、以下など、哺乳動物の疾病の何らかの処置を意味する：
（ｉ）疾病を予防する、つまり、疾病の臨床症状を発現させない；
（ｉｉ）疾病を抑制する、つまり、臨床症状の発現を阻止する；および／または
（ｉｉｉ）疾病を緩和する、つまり、臨床症状を沈静させる。
【００７７】
多くの場合、本発明の化合物は、アミノおよび／またはカルボキシ基、または類似の基の存在によって、酸性および／または塩基性塩を形成することが可能である。「薬学的に許容可能な塩」という用語は、式Ｉの化合物の生物学的効果および特性を維持し、生物学的に、または他の点で望ましくないわけではない塩を意味する。薬学的に許容可能な塩基添加塩は、無機および有機塩基から調製することができる。無機塩基から誘導される塩は、単なる一例として、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウムおよびマグネシウム塩が挙げられる。有機塩基から誘導される塩としては、一級、二級および三級アミンの塩、たとえばアルキルアミン、ジアルキルアミン、トリアルキルアミン、置換アルキルアミン、ジ（置換アルキル）アミン、トリ（置換アルキル）アミン、アルケニルアミン、ジアルケニルアミン、トリアルケニルアミン、置換アルケニルアミン、ジ（置換アルケニル）アミン、トリ（置換アルケニル）アミン、シクロアルキルアミン、ジ（シクロアルキル）アミン、トリ（シクロアルキル）アミン、置換シクロアルキルアミン、二置換シクロアルキルアミン、三置換シクロアルキルアミン、シクロアルケニルアミン、ジ（シクロアルケニル）アミン、トリ（シクロアルケニル）アミン、置換シクロアルケニルアミン、二置換シクロアルケニルアミン、三置換シクロアルケニルアミン、アリールアミン、ジアリールアミン、トリアリールアミン、ヘテロアリールアミン、ジヘテロアリールアミン、トリヘテロアリールアミン、ヘテロ環アミン、ジヘテロ環アミン、トリヘテロ環アミン、混合ジ−およびトリ−アミンが挙げられるが、これらだけに限らず、ここで、アミンの少なくとも２つの置換基は異なり、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ環などから成る群から選択される。また、２個または３個の置換基が、アミノ窒素とともにヘテロ環またはヘテロアリール基を形成するアミンも含まれる。
【００７８】
適切なアミンの特定の例は、単なる一例として、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリ（イソ−プロピル）アミン、トリ（ｎ−プロピル）アミン、エタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、トロメタミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、Ｎ−アルキルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、モルホリン、Ｎ−エチルピペリジンなどが挙げられる。
【００７９】
薬学的に許容可能な酸付加塩は、無機および有機酸から調製することができる。無機酸から誘導される塩としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などが挙げられる。有機酸から誘導される塩としては、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などが挙げられる。
【００８０】
本明細書で使用する場合、「薬学的に許容可能な担体」としては、あらゆる溶剤、分散媒、コーティング、抗菌および抗真菌薬、等浸透圧性および吸収遅延剤などが挙げられる。こうした媒体および薬剤を薬学的に活性の物質に対して使用することは、先行技術で十分に公知である。従来の媒体または薬剤が有効成分と不適合な場合を除いて、これらを治療用組成物に使用することを意図する。補助的な有効成分も、これらの組成物中に組み込むことができる。
【００８１】
命名法
本発明の化合物の命名および番号付けについて、式Ｉの代表的な化合物に関して示し、ここで、Ｒ１はｎ−プロピル、Ｒ２およびＲ３は水素、Ｘはピラゾール−４−イレン、Ｙはメチレン、およびＺは５−（４−クロロフェニル）１，２，４−オキサジアゾール−３−イルであり、
【００８２】
【化６】
2009530413.tif 000005
以下のとおり命名する：
８−（１−｛［５−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１−プロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン。
【００８３】
本発明の方法
本発明は、肝臓病の予防および処置を必要としている哺乳動物に、治療効果のある量のＡ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質を投与することによって、肝臓病を予防および／または処置する方法に関する。理論に拘るつもりはないが、Ａ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質が線維成長を防止する能力は、これらの化合物に対し、肝臓病を予防および処置する能力を与えると考えられる。
【００８４】
肝線維成長は、ウィルスおよびアルコール性肝炎、ウィルソン病、血色素症、脂肪症、および非アルコール性脂肪性肝炎の重要な要素であり、外科的な傷害、つまり肝臓置換もしくは修復、または肝毒性内科療法、つまり放射線、化学療法の薬剤、抗生物質、制吐薬などの結果である場合があるため、本発明の方法は、一般に、上記の症状のどれかを罹患しているか、または肝毒性処置を受けている患者に対して、Ａ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質を投与することを伴うであろう。
【００８５】
癌の処置における化学療法および放射線処置は、最も一般的なタイプの肝毒性処置のうちの２つである。癌の処置に使用される肝毒性薬剤としては、アドリアマイシン、メトトレキサート、６メルカプトプリン、カルボプラチン、ＤＴＩＣ（ダカルバジン）、ＢｉＣＮＵ、１−アスパラギナーゼ、およびペントスタチンが挙げられるが、これらだけに限らない。
【００８６】
肝毒性作用を有することが公知のその他の薬剤としては、アセブトロール；アセトアミノフェン；アクチノマイシンｄ；副腎皮質ステロイド；アドリアマイシン；アロプリノール；アモキシシリン／クラブラン酸塩；同化ステロイド薬；抗炎症薬；抗甲状腺薬；アスピリン；アテノロール；アザチオプリン；カプトプリル；カルバマゼピン；カルビマゾール；カルムスティン；セファロスポリン；クロルジアゼポキシド；クロルプロマジン；クロルプロマジン／バルプロ酸；クロルプロパミド；クロロプロパミド／エリスロマイシン（組合せ）；シメチジン；クロキサシリンフレカイニド；シクロホスファミド；シクロホスファミド／シクロスポリン；シクロスポリン；ダカルバジン；ダナゾール；ダントロレン；ジアゼパム；ジクロフェナク；ジルチアゼム；ジソピラミド；エナラプリル；エンフルラン；エリスロマイシン；エタンブトール；エチオナミド；フルラゼパム；フルタミド；グリブリド；金；グリセオフルビン；ハロペリドール；ハロタン；ヒドララジン；イブプロフェン；イミプラミン；インドメタシン；イソニアジド；ケトコナゾール；ラベタロール；マプロチリン；メルカプトプリン；メトトレキサート；メチルドーパ；メチルテストステロン；メトプロロール；ミアンセリン；マイトマイシン；ナプロキセン；ニコチン酸；ニフェジピン；ニトロフラントイン；非ステロイド系；ノルエタンドロロン；経口避妊薬；オキサシリン；パラ−アミノサリチル酸；ペニシラミン；ペニシリン；ペニシリン系；フェネルジン；フェニンジオン；フェノバルビタール；フェノチアジン；フェニルブタゾン；フェニトイン；フェニトイントロレアンドマイシン；ピロキシカム；プロベネシド；プロカインアミド；プロポキシフェン；ピラジンアミド；キニジン；キニーネ；ラニチジン；サリチル酸塩；スルホンアミド；スリンダク；タモキシフェン；テルビナフィンｈｃｉ（ラミシール、スポラノックス）；テストステロン；テトラサイクリン；チアベンダゾール；チオクアニン；トロトラスト；トルブタミド；三環系抗鬱薬；バルプロ酸；ベラパミル；ビンクリスチン；およびビタミンａが挙げられるが、これらだけに限らない。
【００８７】
肝線維成長の開始は、ヒト肝星細胞（ＨＨＳＣ）の活性化で始まる。ＨＨＳＣは、活性化後、タイプ１コラーゲンが豊富な繊維性マトリックスの合成を開始する。この線維性マトリックスは、最終的には、従来から肝繊維症と呼ばれている瘢痕化を生じる。本願の出願人は、意外にも、Ａ２Ｂアデノシン受容体が肝繊維症の発現に関与していることを発見したが、それは、ＨＨＳＣ中の  Ａ２Ｂ受容体の活性化が、ＩＬ−６の放出およびα−平滑筋アクチンの発現、ＨＨＳＣ活性化の標識を誘発するためである。ＩＬ−６の放出は、ひいてはコラーゲンの生成を刺激することが実証された。Ａ２Ｂ受容体の抑制は、ＮＥＣＡが誘発するＩＬ−６の放出、およびコラーゲンの生成を減少させることが実証された。
【００８８】
Ａ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質は、経口または静脈内投与製剤として全身的に投与されるが、注射を介して肝組織に直接投与するしてもよい。この投与は、単回投与、または複数回の指定された間隔で与えられる反復投与として行うことができる。当業者には、好ましい用量は、処置される症状の患者および重症度に応じて異なることが容易に理解されるであろう。
【００８９】
薬学的組成物
式Ｉの化合物は、アデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗物質として選択された場合、一般に、薬学的組成物の形式で投与される。したがって、本発明は、有効成分として、式Ｉもしくは式ＩＩの１つもしくは複数の化合物、または薬学的に許容可能な塩もしくはそのエステル、並びに薬学的に許容可能な１つまたは複数の賦形剤、不活性固体希釈剤および充填剤を含む担体、減菌水溶液および様々な有機溶剤を含む希釈剤、可溶化剤および補助剤を含有する薬学的組成物を提供する。式Ｉおよび／または式ＩＩの化合物は、単独で、または他の治療薬と組み合わせて投与することができる。こうした組成物は、調合技術で十分に公知の方法で調製される（たとえば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，ペンシルベニア州フィラデルフィア，ＰＡ第１７版（１９８５年）および”Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ”，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．第３版．（Ｇ．Ｓ．Ｂａｎｋｅｒ  ＆  ＣＴ．Ｒｈｏｄｅｓ，Ｅｄｓ．参照）。
【００９０】
Ａ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質
本発明の方法には、任意のＡ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質を使用することができる。Ａ２Ｂ受容体に拮抗する多くの化合物は、特定の化合物がこうした活性を有するかどうかを判断するための方法など、先行技術で公知である。たとえば、Ｆｅｏｋｔｉｓｔｏｖ  ａｎｄ  Ｂａｇｇｉｏｎｉ，（（１９９７年）Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ４９：３８１−４０２）による総説は、アデノシン受容体の４つのサブタイプすべてに対する８つのアデノシン受容体作用物質と、８つの拮抗物質との結合親和性を報告している。本明細書で引用する参考文献は、使用される手順の詳細な説明を提供する。（Ｒｏｂｅｖａ等（１９９６年）Ｊ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．Ｒｅｓ  ３９：２４３−２５２；Ｊａｃｏｂｓｏｎ等（１９９６年）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ．Ｒｅｓ．３９：２８９−３００；Ｆｅｏｋｔｉｓｔｏｖ  ａｎｄ  Ｂａｇｇｉｏｎｉ（１９９３年）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ４３：９０９−９１４）。受容体に対する化合物の結合親和性を判断するのに効果的な方法は、放射性同位体で標識する作用物質または拮抗物質と、この受容体を含むことが公知の膜画分に対する当該化合物との結合の相互関係を使用する；たとえば化合物がＡ２Ｂ拮抗物質であるかどうかを判断する場合、膜画分はＡ２Ｂアデノシン受容体を含むであろう。化合物がＡ２Ｂ拮抗物質であるかどうかを判断するのに特に効果的なもう１つの手順は、米国特許第５，８５４，０８１号に報告されている。
【００９１】
したがって、Ａ２Ｂ受容体のサブタイプのために選択できる化合物は、本発明の方法に好ましい。こうした化合物の一例は、３−ｎ−プロピルキサンチン（エンプロフィリン）だが、これだけに限らない。適切な化合物は、米国特許第６，５４５，００２号にも開示されている。Ａ２Ｂ受容体のほかに、その他の受容体に拮抗する化合物も本発明に使用するのに適する。こうした化合物の一例は、１，３−ジプロピル−８−（ｐ−アクリル）フェニルキサンチンである。
【００９２】
特に好ましい１つのクラスのＡ２Ｂアデノシン受容体拮抗物質は、本願と同一の所有権者による同時係属米国特許第６，８２５，３４９号、米国特許出願公開公報第２００４０１７６３９９号として公開された本願と同一所有権者による同時係属米国特許出願第１０／７１９，１０２号、米国特許出願公開公報第２００６０２９３２８３として公開された本願と同一所有権者による同時係属米国特許出願第１１／４５３，４１４号に開示されている物質である。これらの特許出願に開示されている化合物は、発明の開示に記載する式Ｉ、式ＩＩ、式ＩＩＩの構造を有し、参考文献に記載されているとおり、または以下に説明するように合成することができる。
【００９３】
合成反応パラメータ
「溶剤」、「不活性有機溶剤」、または「不活性溶剤」という用語は、これらに関連して説明される反応の条件下で不活性の溶剤を意味する［たとえば、ベンゼン、トルエン、アセトニトリル、テトラヒドロフラン（「ＴＨＦ」）、ジメチルホルムアミド（「ＤＭＦ」）、クロロホルム、塩化メチレン（またはジクロロメタン）、ジエチルエーテル、メタノール、ピリジンなどを含む］。逆に指定されていない限り、本発明の反応に使用される溶剤は不活性有機溶剤であり、反応は、不活性ガス、好ましくは窒素下で行われる。
【００９４】
「ｑ．ｓ．」という用語は、ある決まった機能を達成するのに十分な量、たとえば溶液を所望の量（つまり１００％）にするのに十分な量を添加することを意味する。
【００９５】
式ＩおよびＩＩの化合物の合成
Ｒ３が水素である式ＩまたはＩＩの化合物を調製するのに好ましい１つの方法を反応スキームＩに示す。
【００９６】
反応スキームＩ
【００９７】
【化７】
2009530413.tif 000006
ステップ１−式（２）の調製
式（２）の化合物は、還元ステップで式（１）の化合物から製造される。従来の還元技術を用いればよく、たとえばアンモニア水溶液中で亜ジチオン酸ナトリウムを使用すればよい；好ましくは、還元は水素および金属触媒を使用して実施される。この反応は、たとえば、１０％パラジウム−炭素触媒などの触媒の存在下、メタノールなどの不活性溶剤中で、水素の雰囲気下において、好ましくはたとえば約３０ｐｓｉの圧力下で約２時間行われる。反応が実質的に完了したら、式（２）の生成物は、従来の手段で単離され、式（２）の化合物を提供する。
【００９８】
ステップ２−式（３）の調製
次に、式（２）の化合物は、カルボジイミド、たとえば１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩の存在下で、式Ｚ−Ｙ−Ｘ−ＣＯ２Ｈのカルボン酸と反応させる。この反応は、プロトン性溶媒、たとえばメタノール、エタノール、プロパノールなど、好ましくはメタノール中で、約２０〜３０℃、好ましくはほぼ室温で、約１２〜４８時間、好ましくは約１６時間にわたって行われる。反応が実質的に完了したら、式（３）の生成物は、従来の方法で、たとえば減圧下で溶剤を除去し、生成物を洗浄することによって単離される。あるいは、次のステップは、さらに精製を行わずに実施することができる。
【００９９】
式（３）の化合物の別の調製
あるいは、式Ｚ−Ｙ−Ｘ−ＣＯ２Ｈのカルボン酸は、先ず、ハロゲン化剤、たとえば塩化チオニルまたは臭化チオニル、好ましくは塩化チオニルと反応させることによって、Ｌがクロロまたはブロモである式Ｚ−Ｙ−Ｘ−Ｃ（Ｏ）Ｌの酸ハロゲン化物に変換される。あるいは、塩化オキサリル、五塩化リン、またはオキシ塩化リンを使用することができる。この反応は、溶剤が存在しない状態で過剰なハロゲン化剤を使用して、約６０〜８０℃、好ましくは約７０℃の温度で、約１〜８時間、好ましくは約４時間にわたって行うことが好ましい。反応が実質的に完了したら、式Ｚ−Ｙ−Ｘ−Ｃ（Ｏ）Ｌの生成物は、従来の方法で、たとえば減圧下で過剰なハロゲン化剤を除去することによって単離される。
【０１００】
この生成物は、次に、アセトニトリルなどの不活性溶剤中で、トリエチルアミンなどの第３級塩基の存在下で、式（２）の化合物と反応させる。この反応は、約０Ｃ初期温度で行われ、次に２０〜３０℃まで、好ましくはほぼ室温まで約１２〜４８時間、好ましくは約１６時間にわたって加熱する。反応が実質的に完了したら、式（３）の生成物は、従来の方法で、たとえば反応混合物を水で希釈し、生成物を濾過して除去し、生成物を水で、次にエーテルで洗浄することによって単離される。
【０１０１】
ステップ３−式Ｉの調製
次に、式（３）の化合物は、環化反応によって式Ｉの化合物に変換する。この反応は、プロトン性溶媒、たとえばメタノール、エタノール、プロパノールなど、好ましくはメタノール中において、塩基、たとえば水酸化カリウム、水酸化ナトリウム、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシド、カリウムｔ−ブトキシド、好ましくは水酸化ナトリウム水溶液の存在下で、約５０〜８０℃、好ましくは約８０℃の温度で、約１〜８時間、好ましくは約３時間にわたって行う。反応が実質的に完了したら、式Ｉの生成物は、従来の方法で、たとえば減圧下で溶剤を除去し、残留物を酸性水溶液で酸性化し、生成物を濾過して除去し、次に生成物を洗浄して乾燥させることによって単離される。
【０１０２】
式（１）の化合物は、様々な方法で調製し得る。１つの好ましい方法を反応スキームＩＩに示す。
【０１０３】
反応スキームＩＩ
【０１０４】
【化８】
2009530413.tif 000007
ステップ１−式（５）の調製
式（４）の化合物は、市販されているか、または先行技術で十分に公知の手段で調製される。この化合物は、プロトン性溶媒、たとえばエタノール中で、ナトリウムエトキシドなどの強塩基の存在下でエチルシアノアセテートと反応させる。この反応は、ほぼ還流温度で、約４〜約２４時間にわたって行われる。反応が実質的に完了したら、こうして生成された式（５）の化合物は、従来の方法で単離される。
【０１０５】
ステップ２および３−式（７）の調製
式（５）の化合物は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの極性溶剤中で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのジメチルアセタールと反応させる。この反応は、約４０℃で約１時間にわたって行われる。反応が実質的に完了したら、こうして生成された式（６）の化合物は、Ｈａｌがクロロ、ブロモ、またはヨードである式Ｒ１Ｈａｌの化合物と、たとえば炭酸カリウムなどの塩基の存在下で反応させる。この反応は、約８０℃で約４〜２４時間にわたって行われる。反応が実質的に完了したら、式（７）の生成物は、従来の方法で、たとえば減圧下で溶剤を蒸発させて単離され、残留物は、さらに精製されることなく、次の反応に使用される。
【０１０６】
ステップ４−式（８）の調製
式（７）の化合物は、たとえばメタノール中に懸濁させた極性溶剤中で、アンモニア水と反応させる。この反応は、ほぼ室温で約１〜３日間にわたって行われる。反応が実質的に完了したら、式（８）の生成物は、従来の方法で、たとえばシリカゲルカラム上のクロマトグラフィ、たとえばジクロロメタン／メタノール混合物による溶出により単離される。
【０１０７】
ステップ５−式（１）の調製
式（８）の化合物は、次に、酸性水溶液性溶剤、好ましくは酢酸および水、たとえば５０％酢酸／水と混合する。この反応は、約５０〜９０℃、好ましくは約７０℃の温度で約１時間にわたって行われる。反応が実質的に完了したら、式（１）の生成物は従来の手段で単離される。
【０１０８】
あるいは、この反応は、ジメチルホルムアミドおよび水などの水性溶剤中で行って、塩酸などの強酸と反応させることができる。
【０１０９】
式（８）の化合物は、反応スキームＩＩＡに示す類似の方法を使用して、式（１０）の化合物から調製することができる。
【０１１０】
反応スキームＩＩＡ
【０１１１】
【化９】
2009530413.tif 000008
ステップ２および３−式（７）の調製
式（１０）の化合物は、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドなどの極性溶剤中で、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミドのジメチルアセタールと反応させる。この反応は、約４０℃で約１時間にわたって行われる。反応が実質的に完了したら、こうして生成された式（６ａ）の化合物は、Ｈａｌがクロロ、ブロモ、またはヨードである式Ｒ２Ｈａｌの化合物と、たとえば炭酸カリウムなどの塩基の存在下で反応させる。この反応は、約８０℃で約４〜２４時間にわたって行われる。反応が実質的に完了したら、式（７）の生成物は、従来の方法で、たとえば、減圧下で溶剤を蒸発させることによって単離し、残留物は、さらに精製されることなく、次の反応に使用される。
【０１１２】
ステップ４−式（８）の調製
式（７）の化合物は、たとえばメタノール中に懸濁させた極性溶剤中で、アンモニア水と反応させる。この反応は、ほぼ室温で、たとえば約１〜３日間にわたって行われる。反応が実質的に完了したら、式（８）の生成物は、従来の方法で、たとえばシリカゲルカラム上のクロマトグラフィ、たとえばジクロロメタン／メタノール混合物による溶出により単離される。
【０１１３】
式（３）の化合物は、様々な方法により調製することもできる。好ましい１つの方法は、反応スキームＩＩＩに示す。
【０１１４】
反応スキームＩＩＩ
【０１１５】
【化１０】
2009530413.tif 000009
ステップ１−式（１０）の調製
市販の化合物６−アミノラウシルは、硫酸アンモニウムなどの触媒の存在下で、たとえば溶剤としての過剰なヘキサメチルジシラザンと反応させることによって先ずシリル化する。この反応は、ほぼ還流温度で約１〜１０時間にわたって行われる。反応が実質的に完了したら、こうして生成されたシリル化化合物は、従来の方法で単離され、次に、Ｈａｌがクロロ、ブロモ、またはヨードである式Ｒ１Ｈａｌの化合物と、好ましくは溶剤の非存在下で反応させる。この反応は、約４〜４８時間、好ましくは約１２〜１６時間にわたってほぼ還流で行われる。反応が実質的に完了したら、式（１０）の生成物は、従来の手段で単離される。
【０１１６】
ステップ２−式（１１）の調製
式（１０）の化合物は、次に、含水酢酸などの酸性水溶液中に溶出し、亜硝酸ナトリウムと反応させる。この反応は、約２０〜５０℃、好ましくは約３０℃の温度で、約３０分間にわたって行われる。反応が実質的に完了したら、式（１１）の生成物は、濾過などの従来の方法で単離される。
【０１１７】
ステップ３−式（１２）の調製
式（１１）の化合物は、次に、ジアミノ誘導体に還元する。一般に式（１１）の化合物はアンモニア水中に溶出させてから、ヒドロ亜硫酸ナトリウムなどの還元剤を添加する。この反応は、約７０℃の温度で行われる。反応が実質的に完了したら、式（１２）の生成物は、従来の方法で、たとえば冷却した反応混合物を濾過することによって単離される。
【０１１８】
ステップ４−式（１３）の調製
式（１２）の化合物は、次に、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩などのカルボジイミドの存在下で、式Ｚ−Ｙ−Ｘ−ＣＯ２Ｈのカルボン酸と反応させる。この反応は、約２０〜３０℃の温度で約１２〜４８時間にわたって行われる。反応が実質的に完了したら、式（１３）の生成物は、従来の方法で、たとえば冷却した反応混合物を濾過することによって単離される。
【０１１９】
あるいは、式Ｚ−Ｙ−Ｘ−ＣＯ２Ｈのカルボン酸は、塩化チオニルまたは臭化チオニルなどのハロゲン化剤と反応させることによって、Ｌがクロロまたはブロモである式Ｚ−Ｙ−Ｘ−Ｃ（Ｏ）Ｌの酸ハロゲン化物に変換する；あるいは、五塩化リンまたはオキシ塩化リンを使用し得る。この反応は、溶剤が存在しない状態で過剰なハロゲン化剤を使用して、たとえば約６０〜８０℃、好ましくは約７０℃の温度で、約１〜８時間、好ましくは約４時間にわたって行うことが好ましい。反応が実質的に完了したら、式Ｚ−Ｙ−Ｘ−Ｃ（Ｏ）Ｌの生成物は、従来の方法で、たとえば過剰なハロゲン化剤を減圧下で除去することによって単離される。
【０１２０】
式Ｚ−Ｙ−Ｘ−Ｃ（Ｏ）Ｌは、次に、アセトニトリルなどの不活性溶剤中で、トリエチルアミンなどの第３級塩基の存在下で式（１２）の化合物と反応させる。この反応は、約０℃の初期温度で行われ、次に、２０〜３０℃まで、好ましくはほぼ室温まで約１２〜４８時間、好ましくは約１６時間にわたって加温する。反応が実質的に完了したら、式（１３）の生成物は、従来の方法で、たとえば反応混合物を水で希釈し、生成物を濾過し、生成物を水、次にエーテルで洗浄することによって単離される。
【０１２１】
ステップ５−式（３）の調製
式（１３）の化合物は、たとえば炭酸カリウムなどの塩基の存在下で、Ｈａｌがクロロ、ブロモ、またはヨードである式Ｒ２Ｈａｌと反応させる。この反応は、ほぼ室温で、約４〜２４時間、好ましくは約１６時間にわたって行われる。反応が実質的に完了したら、式（３）の生成物は、従来の方法で、たとえば減圧下で溶剤を蒸発させることによって単離し、残留物は、従来の方法で精製し得るか、またはさらに精製せずに次の反応で使用することができる。
【０１２２】
式（３）の化合物を調製する別の方法を反応スキームＩＶに示す。
【０１２３】
反応スキームＩＶ
【０１２４】
【化１１】
2009530413.tif 000010
ステップ１−式（１４）の調製
式（５）の化合物は、次に、酸性水溶液性溶剤、好ましくは酢酸および水、たとえば５０％酢酸／水中で亜硝酸ナトリウムと混合する。この反応は、約５０〜９０℃、好ましくは約７０℃の温度で約１時間にわたって行われる。反応が実質的に完了したら、式（１４）の生成物は、従来の手段で単離される。
【０１２５】
あるいは、この反応は、ジメチルホルムアミドおよび水などの水性溶剤中で行い、塩酸などの強酸と反応させることができる。
【０１２６】
ステップ３−式（１５）の調製
式（１４）の化合物は、次に、ジアミノ誘導体に還元される。一般に、式（１４）の化合物はアンモニア水中に溶出させてから、ヒドロ亜硫酸ナトリウムなどの還元剤を添加する。この反応は、約７０℃の温度で行われる。反応が実質的に完了したら、式（１５）の生成物は、従来の方法で、たとえば冷却した反応混合物を濾過することによって単離される。
【０１２７】
ステップ４−式（１６）の調製
式（１５）の化合物は、次に、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩などのカルボジイミドの存在下で、式Ｚ−Ｙ−Ｘ−ＣＯ２Ｈのカルボン酸と反応させる。この反応は、約２０〜３０℃の温度で約１２〜４８時間にわたって、メタノールなどの不活性溶剤中で行われる。反応が実質的に完了したら、式（１６）の生成物は、従来の方法で、たとえば冷却した反応混合物を濾過することによって単離される。
【０１２８】
あるいは、式Ｚ−Ｙ−Ｘ−ＣＯ２Ｈのカルボン酸は、塩化チオニルまたは臭化チオニルなどのハロゲン化剤と反応させることによって、Ｌがクロロまたはブロモである式Ｚ−Ｙ−Ｘ−Ｃ（Ｏ）Ｌの酸ハロゲン化物に変換される；あるいは、五塩化リンまたはオキシ塩化リンを使用することができる。この反応は、溶剤の非存在下で過剰なハロゲン化剤を使用して、たとえば約６０〜８０℃、好ましくは約７０℃の温度で、約１〜８時間、好ましくは約４時間にわたって行うことが好ましい。反応が実質的に完了したら、式Ｚ−Ｙ−Ｘ−Ｃ（Ｏ）Ｌの生成物は、従来の方法で、たとえば減圧下で過剰なハロゲン化剤を除去することによって単離される。
【０１２９】
式Ｚ−Ｙ−Ｘ−Ｃ（Ｏ）Ｌの生成物は、次に、アセトニトリルなどの不活性溶剤中で、トリエチルアミンなどの第３級塩基の存在下で、式（１５）の化合物と反応させる。この反応は、約０Ｃの初期温度で行われ、次に２０〜３０℃まで、好ましくはほぼ室温まで、約１２〜４８時間、好ましくは約１６時間にわたって加温する。反応が実質的に完了したら、式（１６）の生成物は、従来の方法で、たとえば反応混合物を水で希釈し、生成物を濾過して除去し、生成物を水、次にエーテルで洗浄することによって単離される。
【０１３０】
ステップ５−式（３）の調製
式（１６）の化合物は、Ｈａｌがクロロ、ブロモ、またはヨードである式Ｒ１Ｈａｌの化合物と、たとえば炭酸カリウムなどの塩基の存在下で反応させる。この反応は、約８０℃で、約４〜２４時間、好ましくは約１６時間にわたって行われる。反応が実質的に完了したら、式（３）の生成物は、従来の方法で、たとえば減圧下で溶剤を蒸発させることによって単離され、残留物は、従来の方法で精製することができるか、またはさらに精製せずに次の反応に使用することができる。
【０１３１】
Ｘがピラゾール−１，４−イル、Ｙがメチレン、およびＺが３−トリフルオロメチルフェニルであるＺ−Ｙ−Ｘ−ＣＯ２Ｈの化合物の合成の一例を反応スキームＶに示す。
【０１３２】
反応スキームＶ
【０１３３】
【化１２】
2009530413.tif 000011
エチルピラゾール−４−カルボキシレートは、炭酸カリウムの存在下において、アセトン中で１−（ブロモメチル）−３−（トリフルオロメチル）ベンゼンと反応させる。この生成物エチル１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−カルボキシレートは、次に、メタノール中で水酸化カリウムによって加水分解して、１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−カルボン酸を提供する。
【０１３４】
有用性のテストおよび管理
一般的な有用性
本発明の方法および薬学的組成物は、哺乳動物の肝繊維症および／または肝炎の予防および処置に有効である。肝臓病の代表的な原因としては、ウィルスおよびアルコール性肝炎、ウィルソン病、血色素症、脂肪症、および非アルコール性脂肪性肝炎（ＮＡＳＨ）が挙げられるが、これらだけに限らない。肝臓病は、外科的処置、つまり肝臓置換もしくは修復の結果として、または薬物により誘発される肝臓障害の結果としても生じ得る。
【０１３５】
テスト
活性テストは、上記の特許および特許出願、並びに以下の実施例に記載されているように、また当業者にとって明らかな方法で行われる。
【０１３６】
投与
式Ｉの化合物は、類似の効果を有する薬剤の投与に認められている様式の何れかにより単回または複数回の投薬で投与することができ、たとえば、引用することにより本願に援用される特許および特許出願に記載されているように、口腔、鼻腔内、動脈内注射、静脈内、腹腔内、非経口、筋肉注射、皮下、経口などにより、または吸入薬として投与することができる。
【０１３７】
経口投与は、式Ｉの化合物の投与に好ましい手段である。投与は、カプセルまたは腸溶性錠剤などを介して行ってよい。式Ｉの少なくとも１つの化合物を含む薬学的組成物を生成する場合、有効成分は、一般に、賦形剤で希釈されるか、および／または担体内に封入され、こうした担体は、カプセル、サシェ、紙、もしくはその他の容器の形態でよい。賦形剤を希釈剤として使用する場合、有効成分のビヒクル、担体または媒体として作用する固体、半固体、または液体材料（上記）でよい。したがって、組成物は、錠剤、丸剤、粉末、トローチ剤、サシェ、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁液，乳剤，溶液、シロップ、エアロゾル（固体として、または液状媒質中における）、たとえば最大１０重量％の活性化合物を含む軟膏、軟および硬ゼラチンカプセル、無菌注射液剤、および無菌パッケージ化粉末の形態でよい。
【０１３８】
適切な賦形剤のいくつかの例として、乳糖、右旋糖、蔗糖、ソルビトール、マンニトール、澱粉、アカシアガム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、カルシウムシリケート、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、減菌水、シロップ、およびメチルセルロースが挙げられる。製剤はさらに、タルクなどの平滑剤、ステアリン酸マグネシウム、および鉱油；湿潤剤；乳化および懸濁化剤；メチル−およびプロピルヒドロキシ−ベンゾエートなどの保存剤；甘味剤；並びに香味料を含むことができる。
【０１３９】
本発明の組成物は、先行技術で公知の方法により患者に投与した後、有効成分の迅速な、持続的な、または遅延した放出が行われるように処方することができる。経口投与のための制御放出薬物の送達システムは、ポリマー塗布された貯蔵部または薬物−ポリマーマトリックス製剤を含む浸透圧ポンプシステムおよび溶出システムを備える。制御放出システムの例は、米国特許第３，８４５，７７０号；第４，３２６，５２５号；第４，９０２５１４号；および第５，６１６，３４５号に記載されている。本発明の方法に使用される別の製剤は、経皮的送達デバイス（パッチ）を使用する。こうした経皮性パッチは、本発明の化合物を制御された量で連続的または不連続的に注入するために使用し得る。医薬品を送達するための経皮パッチの構造および使用は、先行技術で十分に公知である。たとえば、米国特許第５，０２３，２５２号、第４，９９２，４４５号、および第５，００１，１３９号参照。こうしたパッチは、医薬品を連続的、パルス式、または必要に応じて送達するように構成することができる。
【０１４０】
アデノシンＡ２Ｂ受容体の拮抗物質、たとえば式Ｉの化合物は、広範な投与範囲に効果的であり、一般的に、薬剤有効量で投与される。一般に、経口投与の場合、各々の投与単位は、１ｍｇ〜２ｇ、より一般的には１〜７００ｍｇのアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗物質を含み、非経口投与の場合は、１〜７００ｍｇ、より一般的には約２〜２００ｍｇのアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗物質を含む。しかし、実際に投与されるアデノシンＡ２Ｂ受容体拮抗物質の量は、医師が、処置対象の状態、選択される投与経路、投与される実際の化合物およびその相対的な活性、個々の患者の年齢、体重、および反応、患者の症状の重症度などを含む関連する状況を考慮して決定するであろう。
【０１４１】
錠剤などの固体組成物を調製する場合、主な有効成分は、医薬品賦形剤と混合して、本発明の化合物の均質な混合物を含む固体前処方組成物を形成する。これらの前処方組成物に関して均質と言う場合、有効成分が組成物全体に均一に分散し、その結果、組成物が、錠剤、丸剤、およびカプセルなど、一様に効果的な単位投与形式に容易に再分割し得ることを意味する。
【０１４２】
本発明の錠剤または丸剤は、持続作用の利点を可能にする投与形式を提供するように、または胃の酸性状態から保護するようにコーティングされるか、あるいは調合される。たとえば、錠剤または丸剤は、内側および外側の投与成分を含むことができ、後者は前者の上の外皮の形態である。この２つの成分は、腸溶性層によって隔てられ、この腸溶性層は、胃の内部における分解を阻止するのに役立ち、内部の成分が、原形を保った状態で十二指腸中を通過するか、または放出が遅延することを可能にする。腸溶性層またはコーティングには、多くの材料を使用することができ、こうした材料としては、多くのポリマー酸、並びにポリマー酸と、シェラック、セチルアルコール、およびセルロースアセテートなどの材料との混合物が挙げられる。
【０１４３】
吸入、またはガス注入用組成物としては、薬学的に許容可能な水性もしくは有機溶剤、またはこれらの混合物中の溶液および懸濁液、並びに粉末がある。液体または固体組成物は、上記のとおり、薬学的に許容可能な適切な賦形剤を含むことができる。好ましくは、これらの組成物は、局所的または全身的な効果を得るために、経口または経鼻呼吸経路によって投与される。好ましくは薬学的に許容可能な溶剤中の組成物は、不活性ガスを使用して噴霧することができる。噴霧溶液は、噴霧デバイスから直接吸入するか、または噴霧デバイスをフェースマスクのテント、もしくは断続的な陽圧人工呼吸器に取り付けることができる。溶液、懸濁液、または粉末組成物は、製剤を適切な方法で送達するデバイスから、経口または経鼻的に投与することがし得ることが好ましい。
【０１４４】
以下の実施例は、本発明の好ましい実施態様を実証するために含まれる。当業者は、以下の実施例に開示される技術は、本願の発明者が、本発明を実践するに当たって十分に機能することを発見した技術を表し、したがって、本発明を実施するために好ましい様式を構成することが可能であることを理解するべきである。しかし、当業者は、本発明の開示事項を考慮して、開示されている特定の実施態様に多くの変更を加えることができ、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、同様であるかまたは類似する結果をさらに得ることができることを理解するべきである。
【実施例】
【０１４５】
（実施例１）
式（５）の化合物の調製
Ａ．Ｒ２がエチルである式（５）の化合物の調製
【０１４６】
【化１３】
2009530413.tif 000012
ナトリウムエトキシド溶液は、ナトリウム（４．８ｇ、２２６ｍｍｏｌ）および乾燥エタノール（１５０ｍｌ）から調製した。この溶液に、アミノ−Ｎ−エチルアミド（１０ｇ、１１３ｍｍｏｌ）およびエチルシアノアセテート（１２．８ｇ、１１３ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物は、還流で６時間攪拌して冷却し、溶剤を減圧下で反応混合物から除去した。残留物は、水中（５０ｍｌ）で溶出し、ｐＨを塩酸で７に調節した。この混合物は、一晩０℃で放置して沈殿物を濾過して除去し、水で洗浄して空気で乾燥させ、式（５）の化合物である６−アミノ−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを得た。
【０１４７】
【化１４】
2009530413.tif 000013
Ｂ．Ｒがメチルである式（５）の化合物の調製
同様に、実施例１Ａの手順を行ったが、アミノ−Ｎ−エチルアミドをアミノ−Ｎ−メチルエチルアミドと置換して、６−アミノ−１−メチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを調製した。
【０１４８】
Ｃ．Ｒ２が異なる式（５）の化合物の調製
同様に、実施例１Ａの手順を行ったがアミノ−Ｎ−エチルアミドを式（４）の他の化合物と置換して、式（５）のその他の化合物を調製する。
【０１４９】
（実施例２）
式（６）の化合物の調製
Ａ．Ｒ２がエチルである式（６）の化合物の調製
【０１５０】
【化１５】
2009530413.tif 000014
６−アミノ−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン（０．７７ｇ、５ｍｍｏｌ）を無水Ｎ，Ｎ−ジメチルアセトアミド（２５ｍｌ）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（２．７ｍｌ、２０ｍｍｏｌ）に懸濁させ、４０℃で９０分間加温した。次に、溶剤を減圧下で除去し、残留物をエタノールで粉末化して濾過し、エタノールで洗浄して、式（６）の化合物である６−［２−（ジメチルアミノ）−１−アザビニル］−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを得た。
【０１５１】
【化１６】
2009530413.tif 000015
Ｂ．Ｒ２がメチルである式（６）の化合物の調製
同様に、実施例２Ａの手順を行ったが、６−アミノ−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを６−アミノ−１−メチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンと置換して、６−［２−（ジメチルアミノ）−１−アザビニル］−１−メチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを調製した。
【０１５２】
Ｃ．Ｒ２が異なる式（６）の化合物の調製
同様に、実施例２Ａの手順を行ったが、６−アミノ−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを式（５）の他の化合物と置換して、式（６）の他の化合物を調整する。
【０１５３】
（実施例３）
式（７）の化合物の調製
Ａ．Ｒ１がｎ−プロピル、およびＲ２がエチルである式（７）の化合物の調製
【０１５４】
【化１７】
2009530413.tif 000016
ジメチルホルムアミド（２５ｍｌ）、炭酸カリウム（１．５ｇ、１１ｍｍｏｌ）およびｎ−ヨウ化プロピル（１．５４ｇ、１１ｍｍｏｌ）中の６−［２−（ジメチルアミノ）−１−アザビニル］−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン（１．５ｇ、７．１ｍｍｏｌ）の混合物を８０℃で５時間攪拌した。反応混合物は、室温まで冷却して濾過し、溶剤を蒸発させて、式（７）の生成物である６−［２−（ジメチルアミノ）−１−アザビニル］−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンをそのままで次の反応に使用した。
【０１５５】
Ｂ．Ｒ１およびＲ２が異なる式（７）の化合物の調製
同様に、実施例３Ａの手順を行ったが、６−［２−（ジメチルアミノ）−１−アザビニル］−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを式（６）の他の化合物と置換して、式（７）の次の化合物を調製した：
６−［２−（ジメチルアミノ）−１−アザビニル］−１−メチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン；
６−［２−（ジメチルアミノ）−１−アザビニル］−１−メチル−３−シクロプロピルメチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン；
６−［２−（ジメチルアミノ）−１−アザビニル］−１−エチル−３−シクロプロピルメチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン；
６−［２−（ジメチルアミノ）−１−アザビニル］−１−メチル−３−（２−メチルプロピル）−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン；および
６−［２−（ジメチルアミノ）−１−アザビニル］−１−エチル−３−（２−メチルプロピル）−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン。
【０１５６】
Ｃ．Ｒ１およびＲ２が異なる式（７）の化合物の調製
同様に、実施例３Ａの手順を行ったが、６−［２−（ジメチルアミノ）−１−アザビニル］−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを式（６）の他の化合物と置換して、式（７）の他の化合物を調製する。
【０１５７】
（実施例４）
式（８）の化合物の調製
Ａ．Ｒ１がｎ−プロピル、Ｒ２がエチルである式（８）の化合物の調製
【０１５８】
【化１８】
2009530413.tif 000017
６−［２−（ジメチルアミノ）−１−アザビニル］−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン（２．１ｇ）の溶液は、メタノール（１０ｍｌ）および２８％アンモニア水溶液（２０ｍｌ）の混合物中に溶出し、７２時間にわたって室温で攪拌してから、溶剤を減圧下で除去し、残留物をシリカゲルカラム上のクロマトグラフィで精製し、ジクロロメタン／メタノール（１５／１）混合物で溶出して、式（８）の化合物である６−アミノ−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを得た。
【０１５９】
【化１９】
2009530413.tif 000018
Ｂ．Ｒ１およびＲ２が異なる式（８）の化合物の調製
同様に、実施例４Ａの手順を行ったが、ただし６−［２−（ジメチルアミノ）−１−アザビニル］−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを式（７）の他の化合物と置換して、式（８）の他の化合物を調製した：
６−アミノ−１−メチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン；
６−アミノ−１−メチル−３−シクロプロピルメチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン；
６−アミノ−１−エチル−３−シクロプロピルメチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン；
６−アミノ−１−メチル−３−（２−メチルプロピル）−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン；および
６−アミノ−１−エチル−３−（２−メチルプロピル）−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン。
【０１６０】
Ｃ．Ｒ１がＲ２異なる式（７）の化合物の調製
同様に、実施例４Ａの手順を行ったが、６−［２−（ジメチルアミノ）−１−アザビニル］−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを式（７）の他の化合物と置換して、式（８）の他の化合物を調製する。
【０１６１】
（実施例５）
公式（１）の化合物の調製
Ａ．Ｒ１がｎ−プロピル、Ｒ２がエチルである公式（１）の化合物の調製
【０１６２】
【化２０】
2009530413.tif 000019
５０％酢酸／水（３５ｍｌ）の混合物中の６−アミノ−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン（１．４ｇ、７．１ｍｍｏｌ）の溶液に、亜硝酸ナトリウム（２ｇ、２８．４ｍｍｏｌ）を一部づつ１０分間にわたって添加した。この混合物を７０℃で１時間攪拌してから、反応混合物を減圧下で低容量に濃縮した。固体を濾過して除去し、水で洗浄して、式（１）の化合物である６−アミノ−１−エチル−５−ニトロソ−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを得た。
ＭＳ  ｍ／ｚ２２７．０５（Ｍ＋）、２４９．０８（Ｍ＋＋Ｎａ）
Ｂ．Ｒ１およびＲ２が異なる公式（１）の化合物の調製
同様に、実施例５Ａの手順を行ったが、６−アミノ−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを式（８）の他の化合物と置換し、公式（１）の次の化合物を調製した：
６−アミノ−１−メチル−５−ニトロソ−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン；
６−アミノ−１−メチル−３−シクロプロピルメチル−５−ニトロソ−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン；
６−アミノ−１−エチル−３−シクロプロピルメチル−５−ニトロソ−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン；
６−アミノ−１−メチル−３−（２−メチルプロピル）−５−ニトロソ−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン；および
６−アミノ−１−エチル−３−（２−メチルプロピル）−５−ニトロソ−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン。
【０１６３】
Ｃ．Ｒ１およびＲ２が異なる公式（１）の化合物の調製
同様に、実施例５Ａの手順を行ったが、６−アミノ−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを式（８）の他の化合物と置換して、公式（１）の他の化合物を調製する。
【０１６４】
（実施例６）
公式（２）の化合物の調製
Ａ．Ｒ１がｎ−プロピル、およびＲ２がエチルである公式（２）の化合物の調製
【０１６５】
【化２１】
2009530413.tif 000020
メタノール（１０ｍｌ）中の６−アミノ−１−エチル−５−ニトロソ−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン（３００ｍｇ）の溶液に、炭素触媒（５０ｍｇ）上の１０％パラジウムを添加し、混合物は、３０ｐｓｉの水素下で２時間にわたって水素化した。混合物は、セライトを通して濾過し、溶剤を濾過液から減圧下で除去し、公式（２）の化合物である５，６−ジアミノ−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを得た。
【０１６６】
ＭＳｍ／ｚ２１３．０３（Ｍ＋）、２３５．０６（Ｍ＋＋Ｎａ）
Ｂ．Ｒ１およびＲ２が公式（２）の化合物の調製
同様に、実施例６Ａを行ったが、６−アミノ−１−エチル−５−ニトロソ−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを公式（１）の他の化合物と置換し、公式（２）の以下の化合物を調製した：
５，６−ジアミノ−１−メチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン；
５，６−ジアミノ−１−メチル−３−シクロプロピルメチル−１−ジヒドロピリミジン−２，４ジオン；
５，６−ジアミノ−１−エチル−３−シクロプロピルメチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン；
５，６−アミノ−１−メチル−３−（２−メチルプロピル）−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン；および
５，６−ジアミノ−１−エチル−３−（２−メチルプロピル）−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン。
【０１６７】
Ｃ．Ｒ１およびＲ２が異なる公式（２）の化合物の調製
同様に、実施例６Ａの手順を行うが、６−アミノ−１−エチル−５−ニトロソ−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを公式（１）の他の化合物と置換し、公式（２）の他の化合物を調製する。
【０１６８】
（実施例７）
式（３）の化合物の調製
Ａ．Ｒ１がｎ−プロピル、Ｒ２がエチル、Ｘが１，４−ピラゾリル、Ｙがメチレン、およびＺが３−トリフルオロメチルフェニルである式（３）の化合物の調製
【０１６９】
【化２２】
2009530413.tif 000021
メタノール（１０ｍｌ）中の５，６−ジアミノ−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン（１００ｍｇ、０．４７ｍｍｏｌ）および１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−カルボン酸（０．１５１ｇ、０．５６ｍｍｏｌ）の混合物に、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（０．１３５ｇ、０．７ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で一晩攪拌した。溶剤は減圧下で除去し、残留物は、Ｂｉｓｔａｇを使用して精製し、１０％メタノール／塩化メチレンで溶出して、Ｎ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−ピラゾール−４−イル）カルボキサミドを得た。
【０１７０】
【化２３】
2009530413.tif 000022
Ｂ．Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、Ｙ、およびＺが異なる式（３）の化合物の調製
同様に、実施例７Ａまたは７Ｂの手順を行ったが、任意に５，６−ジアミノ−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを公式（２）の他の化合物と置換し、および任意に１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−カルボン酸を式Ｚ−Ｙ−Ｘ−ＣＯ２Ｈの他の化合物と置換して、式（３）の以下の化合物を調製した：
Ｎ−（６−アミノ−１−メチル−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−１−メチル−２，４−ジオキソ−３−シクロプロピルメチル１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ−３−シクロプロピルメチル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−１−メチル−２，４−ジオキソ−３−エチル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−フルオロフェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−１−メチル−２，４−ジオキソ−３−シクロプロピルメチル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−フルオロフェニル］メチル｝−ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ−３−シクロプロピルメチル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−フルオロフェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−［６−アミノ−３−（シクロプロピルメチル）−１−メチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル）］［１−ベンジルピラゾール−４−イル］カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−１−メチル−２，４−ジオキソ−３−シクロプロピルメチル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−シアノフェニル］メチル｝−ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
［１−（２−（１Ｈ−１，２，３，４−テトラアゾール−５−イル）エチル）ピラゾール−４−イル］−Ｎ−［６−アミノ−３−（シクロプロピルメチル）−１−メチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル）］カルボキサミド；
Ｎ−［６−アミノ−３−（シクロプロピルメチル）−１−エチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル）］（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−［６−アミノ−３−プロピル）−１−エチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル）］（１−｛（２−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−［６−アミノ−３−（２−メチルプロピル）−１−メチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル）］［１−ベンジルピラゾール−４−イル］カルボキサミド；
Ｎ−［６−アミノ−３−（２−メチルプロピル）−１−メチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル）］［１−｛［３−フルオロフェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル］カルボキサミド；
Ｎ−［６−アミノ−３−（２−メチルプロピル）−１−エチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル）］［１−｛［３−フルオロフェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル］カルボキサミド；
Ｎ−［６−アミノ−３−（２−メチルプロピル）−１−メチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル）］［１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル］カルボキサミド；および
Ｎ−［６−アミノ−３−（２−メチルプロピル）−１−エチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル）］（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド。
【０１７１】
Ｃ．Ｒ１およびＲ２が異なる公式（２）の化合物の調製
同様に、実施例７Ａの手順を行うが、任意に５，６−ジアミノ−１−エチル−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを公式（２）の他の化合物と置換し、および任意に１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−カルボン酸を式Ｚ−Ｙ−Ｘ−ＣＯ２Ｈの他の化合物と置換し、式（３）の他の化合物を調製する。
【０１７２】
（実施例８）
式Ｉの化合物の調製
Ａ．Ｒ１がｎ−プロピル、Ｒ２がエチル、Ｘが１，４−ピラゾリル、Ｙがメチレン、およびＺが３−トリフルオロメチルフェニルである式Ｉの化合物の調製
【０１７３】
【化２４】
2009530413.tif 000023
Ｎ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−３−イル）カルボキサミド（８０ｍｇ、０．１７ｍｍｏｌ）、１０％水酸化ナトリウム溶液（５ｍｌ）、およびメタノール（５ｍｌ）の混合物を１００℃で２時間攪拌した。この混合物を冷却し、メタノールを減圧下で除去し、残留物を水で希釈し、塩酸で酸性化する。沈殿物を濾過して除去し、水、次にメタノールで洗浄し、式Ｉの化合物である３−エチル−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオンを得た。
【０１７４】
【化２５】
2009530413.tif 000024
Ｂ．Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、Ｙ、およびＺが異なる式Ｉの化合物の調製
同様に、実施例８Ａの手順を行ったが、Ｎ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−メチル｝ピラゾール−３−イル）カルボキサミドを式（３）の他の化合物と置換し、式Ｉの以下の化合物を調製した：
１−シクロプロピルメチル−３−メチル−８−［１−（フェニルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−シクロプロピルメチル−３−メチル−８−｛１−［（３−トリフルオロメチルフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−シクロプロピルメチル−３−エチル−８−｛１−［（３−トリフルオロメチルフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−シクロプロピルメチル−３−メチル−８−｛１−［（３−フルオロフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−シクロプロピルメチル−３−エチル−８−｛１−［（３−フルオロフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−シクロプロピルメチル−３−エチル−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−（｛４−［１−（シクロプロピルメチル）−３−メチル−２，６−ジオキソ−１，３，７−トリヒドロプリン−８−イル］ピラゾリル｝メチル）ベンゼンカルボニトリル；
８−［１−（２−（１Ｈ−１，２，３，４−テトラアゾール−５−イル）エチル）ピラゾール−４−イル］−３−メチル−１−シクロプロピルメチル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−（２−メチルプロピル）−３−メチル−８−［１−ベンジルピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−（２−メチルプロピル）−３−エチル−８−｛１−［（３−フルオロフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−（２−メチルプロピル）−３−メチル−８−｛１−［（３−トリフルオロメチルフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−（２−メチルプロピル）−３−メチル−８−｛１−［（３−フルオロフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
３−エチル−１−（２−メチルプロピル）−８−（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；
１−エチル−３−メチル−８−｛１−［（３−フルオロフェニル）メチル］ピラゾール−４−イル｝−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン；および
３−エチル−１−プロピル−８−［１−（２−ピリジルメチル）ピラゾール−４−イル］−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン。
【０１７５】
Ｃ．Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、Ｙ、およびＺが異なる式Ｉの化合物の調製
同様に、実施例８Ａの手順を行うが、Ｎ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−メチル｝ピラゾール−３−イル）カルボキサミドを式（３）の他の化合物と置換し、式Ｉの他の化合物を調製する。
【０１７６】
（実施例９）
式（１０）の化合物の調製
Ａ．Ｒ１がｎ−プロピルである式（１０）の化合物の調製
【０１７７】
【化２６】
2009530413.tif 000025
６−アミノラウシル（５．０８ｇ、４０ｍｍｏｌ）、ヘキサメチルジシラザン（５０ｍｌ）、および硫酸アンモニウム（２６０ｍｇ、１．９６ｍｍｏｌ）の混合物を１２時間還流させた。冷却後、固体を濾過して除去し、溶剤を減圧下で濾過液から除去し、６−アミノラウシルのトリメチルシリル化誘導体を得た。
【０１７８】
この生成物は、トルエン（１．５ｍｌ）、およびヨードプロパン（７．８ｍｌ、８０ｍｍｏｌ）中に溶出させ、１２０℃のオイルバス中で２時間にわたって加熱した。次に、反応混合物を０℃まで冷却し、飽和水性ナトリウム重炭酸塩を徐々に添加した。結果として生じた沈殿物を濾過して除去し、水、トルエン、およびエーテルで連続的に洗浄し、式（１０）の化合物である６−アミノ−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを得て、これは、さらに精製することなく、次の反応で使用した。
【０１７９】
【化２７】
2009530413.tif 000026
Ｂ．Ｒ１が異なる式（１０）の化合物の調製
同様に、実施例９Ａの手順を行うが、ヨードプロパンを式Ｒ１Ｈａｌの他のハロゲン化アルキルと置換し、以下など、式（１０）の他の化合物を調製する：
６−アミノ−３−シクロプロピルメチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン；および
６−アミノ−３−（２−メチルプロピル）−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン。
【０１８０】
（実施例１０）
式（１１）の化合物の調製
Ａ．Ｒ１がｎ−プロピルである式（１０）の化合物の調製
【０１８１】
【化２８】
2009530413.tif 000027
７０℃の５０％酢酸／水の混合物中の６−アミノ−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン（５．６ｇ）の溶液に、亜硝酸ナトリウム（４．５ｇ）を一部づつ１５分間にわたって添加した。この混合物を７０℃で４５分間攪拌してから、反応混合物を減圧下で低容量に濃縮した。固体は濾過して除去し、水で洗浄して、式（１１）の化合物である６−アミノ−５−ニトロソ−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを得た。
【０１８２】
【化２９】
2009530413.tif 000028
Ｂ．Ｒ１が異なる式（１１）の化合物の調製
同様に、実施例１０Ａの手順を行うが、６−アミノ−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを式（１０）の他の化合物と置換して、以下を含む式（１１）の他の化合物を調製する：
６−アミノ−５−ニトロソ−３−シクロプロピルメチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン；および
６−アミノ−５−ニトロソ−３−（２−メチルプロピル）−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン。
【０１８３】
（実施例１１）
式（１２）の化合物の調製
Ａ．Ｒ１がｎ−プロピルである式（１２）の化合物の調製
【０１８４】
【化３０】
2009530413.tif 000029
７０℃の１２．５％アンモニア水（１３５ｍｌ）中の６−アミノ−５−ニトロソ−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン（５．４ｇ、２７ｍｍｏｌ）の溶液に、亜ジチオン酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ２Ｏ４，９．４５ｇ，５４ｍｍｏｌ）を一部づつ１５分間にわたって添加し、混合物を２０分間攪拌した。この溶液を減圧下で濃縮し、５℃まで冷却して、沈殿物を濾過して除去し、冷水で洗浄して、式（１２）の化合物である５，６−ジアミノ−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを得た。
【０１８５】
【化３１】
2009530413.tif 000030
Ｂ．Ｒ１が異なる式（１２）の化合物の調製
同様に、実施例１１Ａの手順を行うが、６−アミノ−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを式（１１）の他の化合物と置換し、以下を含む式（１２）のその他の化合物を調製する：
５，６−ジアミノ−３−シクロプロピルメチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン；および
５，６−ジアミノ−３−（２−メチルプロピル）−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン。
【０１８６】
（実施例１２）
式（１３）の化合物の調製
Ａ．Ｒ１がｎ−プロピル、Ｘが１，４−ピラゾリル、Ｙがメチレン、およびＺが３−トリフルオロメチルフェニルである式（１３）の化合物の調製
【０１８７】
【化３２】
2009530413.tif 000031
メタノール（５０ｍｌ）中の５，６−ジアミノ−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン（２．３ｇ、１２６ｍｍｏｌ）および１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−カルボン酸（３．７９ｇ、１４ｍｍｏｌ）の混合物に、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（２．６７ｇ、１４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を３日間にわたって室温で攪拌した（ただし、より短時間でも許容可能である）。沈殿物を濾過して除去し、連続的に水およびメタノールで洗浄した。生成物を真空下で乾燥させ、式（１３）の化合物であるＮ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミドを得た。
【０１８８】
【化３３】
2009530413.tif 000032
Ｂ．Ｒ１がｎ−プロピル、Ｘが１，４−ピラゾリル、Ｙがメチレン、およびＺが３−トリフルオロメチルフェニルである式（３）の化合物の別の方法による調製
塩化チオニル（１ｍｌ）中の１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−カルボン酸（１ｇ、３．７ｍｍｏｌ）の溶液を７０℃で４時間にわたって加熱した。過剰な塩化チオニルは蒸留して除去し、残留物を塩化メチレン／へキサンで処理した。溶剤を減圧下で除去し、残留物をアセトニトリル中に溶出させた。この溶液は、０℃のアセトニトリル（２０ｍｌ）中の５，６−ジアミノ−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン（２．３ｇ、１２６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１ｍｌ）の懸濁液に添加し、１６時間にわたって攪拌した。反応混合物は、水（５ｍｌ）で急冷し、塩酸で酸性化させて、３０分間攪拌し、沈殿物を濾過して除去した。生成物をエーテルで洗浄し、式（１３）の化合物であるＮ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミドを得た。
【０１８９】
Ｃ．Ｒ１、Ｘ、Ｙ、およびＺが異なる式（１３）の化合物の調製
同様に、実施例１２Ａまたは１２Ｂの手順を行うが、任意に６−アミノ−３−プロピル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを式（１２）の他の化合物と置換し、任意に１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−カルボン酸を式Ｚ−Ｙ−Ｘ−ＣＯ２Ｈの他の化合物と置換して、以下を含む式（１３）の他の化合物を調製する：
Ｎ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−シクロプロピルメチル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−（２−メチルプロピル）（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−フルオロフェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−シクロプロピルメチル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−フルオロフェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−（２−メチルプロピル）（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−フルオロフェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−［１−ベンジル］ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−シクロプロピルメチル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−［１−ベンジル］ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−（２−メチルプロピル）（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−［１−ベンジル］ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−シアノフェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−シクロプロピルメチル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−シアノフェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−（２−メチルプロピル）（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−シアノフェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［１−（２−（１Ｈ−１，２，３，４−テトラアゾール−５−イル）エチル）ピラゾール−４−イル｝カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−シクロプロピルメチル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［１−（２−（１Ｈ−１，２，３，４−テトラアゾール−５−イル）エチル）ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−（２−メチルプロピル）（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［１−（２−（１Ｈ−１，２，３，４−テトラアゾール−５−イル）エチル）ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−シクロプロピルメチル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；および
Ｎ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−（２−メチルプロピル）（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド。
【０１９０】
（実施例１３）
式（３）の化合物の調製
Ａ．Ｒ１がｎ−プロピル、Ｒ２がエチル、Ｘが１，４−ピラゾリル、Ｙがメチレン、およびＺが３−トリフルオロメチルフェニルである式（３）の化合物の調製
【０１９１】
【化３４】
2009530413.tif 000033
ジメチルホルムアミド（１０ｍｌ）中のＮ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）−フェニル］メチル｝ピラゾール−３−イル）カルボキサミド（８７２ｍｇ、２ｍｍｏｌ）の溶液、炭酸カリウム（５５２ｍｇ、４ｍｍｏｌ）およびヨウ化エチル（０．２４ｍｌ、３ｍｍｏｌ）の混合物を室温で一晩攪拌した。反応混合物を濾過して、溶剤を減圧下で濾過液から蒸発させた。残留物を２時間にわたって室温で水とともに攪拌し、沈殿物を濾過して除去し、水で洗浄してから、メタノール中に溶出させた。この溶剤は、次に減圧下で除去して、式（３）の化合物であるＮ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミドを得た。
【０１９２】
【化３５】
2009530413.tif 000034
Ｂ．Ｒ１、Ｘ、Ｙ、およびＺが異なる式（１３）の化合物の調製
同様に、実施例１３Ａの手順を行うが、Ｎ−（６−アミノ−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）−フェニル］メチル｝ピラゾール−３−イル）カルボキサミドを式（１３）の他の化合物と置換し、以下を含む式（３）の他の化合物を調製する：
Ｎ−（６−アミノ−１−メチル−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝−ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−１−メチル−２，４−ジオキソ−３−シクロプロピルメチル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ−３−シクロプロピルメチル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−１−メチル−２，４−ジオキソ−３−エチル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−フルオロフェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−１−メチル−２，４−ジオキソ−３−シクロプロピルメチル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−フルオロフェニル］メチル｝−ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ−３−シクロプロピルメチル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−フルオロフェニル］メチル｝−ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−［６−アミノ−３−（シクロプロピルメチル）−１−メチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル）］［１−ベンジルピラゾール−４−イル］カルボキサミド；
Ｎ−（６−アミノ−１−メチル−２，４−ジオキソ−３−シクロプロピルメチル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−シアノフェニル］メチル｝−ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
［１−（２−（１Ｈ−１，２，３，４−テトラアゾール−５−イル）エチル）ピラゾール−４−イル］−Ｎ−［６−アミノ−３−（シクロプロピルメチル）−１−メチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル）］カルボキサミド；
Ｎ−［６−アミノ−３−（シクロプロピルメチル）−１−エチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル）］（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−［６−アミノ−３−プロピル）−１−エチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル）］（１−｛（２−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド；
Ｎ−［６−アミノ−３−（２−メチルプロピル）−１−メチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル）］［１−ベンジルピラゾール−４−イル］カルボキサミド；
Ｎ−［６−アミノ−３−（２−メチルプロピル）−１−メチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル）］［１−｛［３−フルオロフェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル］カルボキサミド；
Ｎ−［６−アミノ−３−（２−メチルプロピル）−１−エチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル）］［１−｛［３−フルオロフェニルｊメチル｝ピラゾール−４−イル］カルボキサミド；
Ｎ−［６−アミノ−３−（２−メチルプロピル）−１−メチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル）］［１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル］カルボキサミド；および
Ｎ−［６−アミノ−３−（２−メチルプロピル）−１−エチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル）］（１−｛［６−（トリフルオロメチル）（３−ピリジル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミド。
【０１９３】
（実施例１４）
式Ｉの化合物の調製
Ａ．Ｒ１がｎ−プロピル、Ｒ２がエチル、Ｘが１，４−ピラゾリル、Ｙがメチレン、およびＺが３−トリフルオロメチルフェニルである式Ｉの化合物の調製
【０１９４】
【化３６】
2009530413.tif 000035
Ｎ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−３−イル）カルボキサミド（８５０ｍｇ、２．３４ｍｍｏｌ）、１０％水酸化ナトリウム水溶液（１０ｍｌ）、およびメタノール（１０ｍｌ）の混合物を１００℃で１８時間にわたって攪拌した。この混合物を冷却し、減圧下でメタノールを除去し、残っている混合物を塩酸でｐＨ２まで酸性化させた。沈殿物を濾過して除去し、水／メタノール混合物で洗浄して、式Ｉの化合物である３−エチル−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオンを得た。
【０１９５】
【化３７】
2009530413.tif 000036
Ｂ．Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、Ｙ、およびＺが異なる式Ｉの化合物の調製
同様に、実施例１４Ａの手順を行うが、Ｎ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−３−イル）カルボキサミドを公式（１３）の他の化合物と置換し、実施例８に記載した化合物を含む式Ｉの化合物を調製する。
【０１９６】
（実施例１５）
式（１４）の化合物の調製
Ａ．Ｒ２がエチルである式（１４）の化合物の調製
【０１９７】
【化３８】
2009530413.tif 000037
７０℃の５０％酢酸／水（５０ｍｌ）の混合物中の６−アミノ−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン（５．０ｇ、３２．３ｍｍｏｌ）溶液に、亜硝酸ナトリウム（４．４５ｇ、６４．５ｍｍｏｌ）を一部づつ３０分間にわたって添加した。この混合物を７０℃でさらに３０分間攪拌した。反応混合物を冷却し、沈殿物を濾過して除去し、水、次にメタノールで洗浄して、式（１４）の化合物である６−アミノ−１−エチル−５−ニトロソ−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを得た。
【０１９８】
【化３９】
2009530413.tif 000038
Ｂ．Ｒ２が異なる式（１４）の化合物の調製
同様に、実施例１５Ａの手順を行ったが、６−アミノ−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを６−アミノ−１−メチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンと置換して、６−アミノ−１−メチル−５−ニトロソ−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを調製した。
【０１９９】
Ｃ．Ｒ２が異なる式（１４）の化合物の調製
同様に、実施例１５Ａの手順を行うが、６−アミノ−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを式（１４）の他の化合物と置換して、式（１４）の他の化合物を調製する。
【０２００】
（実施例１６）
式（１５）の化合物の調製
Ａ．Ｒ２がエチルである式（１５）の化合物の調製
【０２０１】
【化４０】
2009530413.tif 000039
５０℃の１４．５％アンモニア水（５０ｍｌ）中の６−アミノ−１−エチル−５−ニトロソ−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン（３．９ｇ、２１．２ｍｍｏｌ）の溶液に、亜ジチオン酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ２Ｏ４、７．３７ｇ、４２．４ｍｍｏｌ）を一部づつ１５分間にわたって添加して、混合物を２０分間攪拌した。この溶液を減圧下で３０ｍｌの容量まで濃縮し、５℃まで冷却して、沈殿物を濾過して除去し、冷水で洗浄して、式（１５）の化合物である５，６−ジアミノ−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを得た。
【０２０２】
【化４１】
2009530413.tif 000040
Ｂ．Ｒ２が異なる式（１５）の化合物の調製
同様に、実施例１６Ａの手順を行ったが、６−アミノ−１−エチル−５−ニトロソ−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを６−アミノ−１−メチル−５−ニトロソ−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンと置換して、５，６−ジアミノ−１−メチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを調製した。
【０２０３】
Ｃ．Ｒ２が異なる式（１５）の化合物の調製
同様に、実施例１６Ａの手順を行うが、６−アミノ−１−エチル−５−ニトロソ−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを式（１４）の他の化合物と置換し、式（１５）の他の化合物を調製する。
【０２０４】
（実施例１７）
式（１６）の化合物の調製
Ａ．Ｒ２がエチル、Ｘが１，４−ピラゾリル、Ｙがメチレン、およびＺが３−トリフルオロメチルフェニルである式（１６）の化合物の調製
【０２０５】
【化４２】
2009530413.tif 000041
メタノール（５０ｍｌ）中の５，６−ジアミノ−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオン（２ｇ、１１．７６ｍｍｏｌ）および１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−カルボン酸（３．５ｇ、１２．９４ｍｍｏｌ）の混合物に、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（２．４７ｇ、１２．９４ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を１６時間にわたって室温で攪拌し、溶剤を減圧下で除去し、残留物を水およびメタノールで洗浄した。生成物を真空下で乾燥させて、式（１６）の化合物であるＮ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミドを得た。
【０２０６】
【化４３】
2009530413.tif 000042
Ｂ．Ｒ２、Ｘ、Ｙ、およびＺが異なる式（１６）の化合物の調製
同様に、実施例１７Ａの手順を行ったが、５，６−ジアミノ−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを５，６−ジアミノ−１−メチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンと置換して、Ｎ−（６−アミノ−１−メチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミドを調製した。
【０２０７】
Ｃ．Ｒ２、Ｘ、Ｙ、およびＺが異なる式（１６）の化合物の調製
同様に、、実施例１６Ａの手順を行うが、５，６−ジアミノ−１−エチル−１，３−ジヒドロピリミジン−２，４−ジオンを式（１４）の他の化合物と置換して、式（１５）の他の化合物を調製する。
【０２０８】
（実施例１８）
式（３）の化合物の調製
Ａ．Ｒ１がｎ−プロピル、Ｒ２がエチル、Ｘが１，４−ピラゾリル、Ｙがメチレン、およびＺが３−トリフルオロメチルフェニルである式（３）の化合物の調製
【０２０９】
【化４４】
2009530413.tif 000043
ジメチルホルムアミド（３０ｍｌ）中のＮ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−３−イル）カルボキサミド（１．５ｇ、３．５５ｍｍｏｌ）の溶液、炭酸カリウム（９８０ｍｇ、７．１ｍｍｏｌ）、およびヨウ化プロピル（７２４ｍｇ、４．２６ｍｍｏｌ）の混合物を室温で一晩攪拌した。水を添加し、沈殿物を濾過して除去し、式（３）の化合物であるＮ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミドを得た後、この化合物をさらに精製せずに、次の反応に使用した。
【０２１０】
【化４５】
2009530413.tif 000044
Ｂ．Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、Ｙ、およびＺが異なる式（３）の化合物の調製
同様に、実施例１８Ａの手順を行ったが、Ｎ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］−メチル｝ピラゾール−３−イル）カルボキサミドをＮ−（６−アミノ−１−メチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））と置換して、Ｎ−（６−アミノ−１−メチル−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）カルボキサミドを調製した。
【０２１１】
Ｃ．Ｒ１、Ｒ２、Ｘ、Ｙ、およびＺが異なる式（３）の化合物の調製
同様に、実施例１８Ａの手順を行うが、任意にＮ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−３−イル）カルボキサミドを式（１５）の他の化合物と置換し、任意にヨウ化プロピルを式Ｒ１Ｈａｌの他の化合物と置換して、式（３）の他の化合物を調製する。
【０２１２】
（実施例１９）
式Ｉの化合物の調製
Ａ．Ｒ１がｎ−プロピル、Ｒ２がエチル、Ｘが１，４−ピラゾリル、Ｙがメチレン、およびＺが３−トリフルオロメチルフェニルである式Ｉの化合物の調製
【０２１３】
【化４６】
2009530413.tif 000045
Ｎ−（６−アミノ−１−エチル−２，４−ジオキソ−３−プロピル（１，３−ジヒドロピリミジン−５−イル））（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−３−イル）カルボキサミド（３００ｍｇ、４６４ｍｍｏｌ）、２０％水酸化ナトリウム溶液（５ｍｌ）、およびメタノール（１０ｍｌ）の混合物を８０℃で３時間攪拌した。この混合物を冷却し、減圧下でメタノールを除去し、残っている混合物を塩酸でｐＨ２まで酸性化した。沈殿物を濾過して除去し、水およびメタノールで洗浄して、式Ｉの化合物である３−エチル−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオンを得た。
【０２１４】
【化４７】
2009530413.tif 000046
（実施例２０）
Ａ２Ｂ拮抗物質の特性化
Ａ２Ｂアデノシン受容体の放射性リガンド結合
ヒトのＡ２Ｂアデノシン受容体ｃＤＮＡは、ＨＥＫ−２９３細胞（ＨＥＫ−Ａ２Ｂ細胞と呼ばれる）に安定してトランスフェクトされた。ＨＥＫ−Ａ２Ｂ細胞の単分子層は、ＰＢＳで１回洗浄し、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１０ｍＭのＥＤＴＡおよびプロテアーゼ阻害剤を含む緩衝液中に採取した。これらの細胞は、ポリトロン中で１分間、設定４で均質化し、２９０００ｇで１５分間にわたって４℃で遠心処理した。この細胞ペレットは、１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、１ｍＭのＥＤＴＡおよびプロテアーゼ阻害剤を含む緩衝液で１回洗浄し、１０％の蔗糖を補足した同じ緩衝液中に再懸濁させた。冷凍したアリコットを−８０℃に維持した。
【０２１５】
競合アッセイは、１０ｎＭ３のＨ−ＺＭ２４１３８５（Ｔｏｃｒｉｓ  Ｃｏｏｋｓｏｎ）を、様々な濃度のテスト化合物、５０μｇの膜タンパク質を、１単位／ｍＬのアデノシンデアミナーゼを追加したＴＥ緩衝液（５０ｍＭのトリスおよび１ｍＭのＥＤＴＡ）中で混合することによって開始した。このアッセイは、９０分間培養し、Ｐａｃｋａｒｄ収穫機を使用して濾過することによって停止し、氷のように冷却したＴＭ緩衝液（１０ｍＭのトリス、１ｍＭのＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４）で４回洗浄した。１０μＭのＺＭ２４１３８５の存在下で、特異的な結合は判定されなかった。化合物の親和性（つまり、Ｋｉ値）は、ＧｒａｐｈＰａｄソフトウェアを使用して計算した。
【０２１６】
その他のアデノシン受容体の放射性リガンド結合
ヒトＡ１、Ａ２Ａ、Ａ３アデノシン受容体ｃＤＮＡは、ＣＨＯまたはＨＥＫ−２９３細胞（ＣＨＯ−Ａ１、ＨＥＫ−Ａ２Ａ、ＣＨＯ−Ａ３と呼ばれる）の何れかに安定してトランスフェクトされた。膜は、上記と同じプロトコルを使用して、これらの細胞から調製した。競合アッセイは、０．５ｎＭ３のＨ−ＣＰＸ（ＣＨＯ−Ａ１の場合）、２ｎＭ３のＨ−ＺＭ２１４３８５（ＨＥＫ−Ａ２Ａ）、または０．１ｎＭの１２５Ｉ−ＡＢ−ＭＥＣＡ（ＣＨＯ−Ａ３）を、様々な濃度のテスト化合物、およびＴＥ緩衝液（５０ｍＭのトリス、並びにＣＨＯ−Ａ１、およびＨＥＫ−Ａ２Ａの１ｍＭのＥＤＴＡ）、または１単位／ｍＬのアデノシンデアミナーゼを追加したＴＥＭ緩衝液（ＣＨＯ−Ａ３の場合、５０ｍＭのトリス、１ｍＭのＥＤＴＡ、および１０ｍＭのＭｇＣｌ２）中の投影膜と混合することによって開始した。このアッセイは、９０分間培養して、Ｐａｃｋａｒｄ収穫機を使用して濾過することによって停止し、氷のように冷却したＴＭ緩衝液（１０ｍＭのトリス、１ｍＭのＭｇＣｌ２、ｐＨ７．４）で４回洗浄した。１μＭのＣＰＸ（ＣＨＯ−Ａ１）、１μＭのＺＭ２４１３８５（ＨＥＫ−Ａ２Ａ）、および１μＭのＩＢ−ＭＥＣＡ（ＣＨＯ−Ａ３）の存在下で、特異的な結合は判定されなかった。化合物の親和性（つまり、Ｋｉ値）は、ＧｒａｐｈＰａｄ（商標）ソフトウェアを使用して計算した。
【０２１７】
ｃＡＭＰの測定
トランスフェクトされた細胞の単分子層は、５ｍＭのＥＤＴＡを含むＰＢＳ中に収集した。細胞は、ＤＭＥＭで１回洗浄し、細胞が１００，０００〜５００，０００個／ｍｌの密度で１単位／ｍＬのアデノシンデアミナーゼを含むＤＭＥＭ中に再懸濁させた。１００μｌの細胞懸濁液は、様々な作用物質および／または拮抗物質を含む２５μｌと混合し、反応を３７℃で１５分間維持した。１５分間の終わりに、１２５μｌの０．２Ｎ  ＨＣｌを添加して反応を停止した。細胞は、１０００ｒｐｍで１０分間遠心処理した。１００μｌの浮遊物を除去し、アセチル化した。浮遊物中のｃＡＭＰの濃度は、Ａｓｓａｙ  Ｄｅｓｉｇｎの直接ｃＡＭＰアッセイを使用して測定した。Ａ２ＡおよびＡ２Ｂアデノシン受容体は、Ｇｓタンパク質に結合し、その結果、Ａ２Ａアデノシン受容体（たとえばＣＧＳ２１６８０）、またはＡ２Ｂアデノシン受容体（たとえばＮＥＣＡ）の作用物質はｃＡＭＰの濃度を増加させるが、これらの受容体に対する拮抗物質は、作用物質によって誘発されるｃＡＭＰの蓄積の増加を防止する。Ａ１およびＡ３アデノシン受容体はＧｉタンパク質に結合し、その結果、Ａ１アデノシン受容体（たとえばＣＰＡ）、またはＡ３アデノシン受容体（たとえばＩＢ−ＭＥＣＡ）の作用物質は、フォルスコリンによって誘発されるｃＡＭＰの蓄積の増加を抑制する。Ａ１およびＡ３受容体に対する拮抗物質は、ｃＡＭＰの蓄積の抑制を防止する。
【０２１８】
リアルタイムＲＴ−ＰＣＲは、一次培養ヒト肝星細胞（ＨＨＳＣ）に関するアデノシン受容体（ＡｄｏＲ）サブタイプの発現量を判断するために行った。ＡｄｏＲの４つのサブタイプの中では、Ａ２ＢＡｄｏＲが最高レベルで発現した。さらに、細胞ｃＡＭＰの濃度を関数値として使用すると、その結果は、Ａ２ＢＡｄｏＲはＨＨＳＣ上で機能的に発現するが、Ａ１、Ａ２Ａ、またはＡ３ＡｄｏＲは発現しないことを示した。アデノシンの安定した類似物であるアデノシンまたはＮＥＣＡが、炎症性サイトカインの発現に与える作用は、ＥＬＩＳＡを使用して判断した。アデノシンおよびＮＥＣＡは、濃度に依存する方法でＩＬ−６の放出を増加させ、基礎レベルで最大１１．９±３．１倍の増加である。さらに、ＮＥＣＡは、α−平滑筋アクチンおよびα−１プロ−コラーゲンの発現、並びにＨＨＳＣからのコラーゲンの生成を増加させた。ＮＥＣＡの作用は、Ａ２ＢＡｄｏＲ拮抗物質によって完全に無効にされ、ＩＬ−６中和抗体によって部分的に阻止された。
【０２１９】
（実施例２１）
ヒト肝星細胞に対するＡ２Ｂ拮抗物質の作用
略語
Ａｂ          抗体
ＡｄｏＲ      アデノシン受容体
ＡＤＡ        アデノシンデアミナーゼ
ＡＮＯＶＡ    変化の分析
ＡＳＴ        アスパラギン酸塩アミノ基転移酵素
ＣＰＡ        Ｎ６−シクロペンチルアデノシン
ＤＭＥＭ      Ｄｕｌｂｅｃｃｏの変性イーグル培地
ＤＭＳＯ      ジメチルスルホキシド
ＤＮａｓｅ    デオキシリボヌクレアーゼ
ＨＥＰＥＳ    ４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルフォン酸
ＨＨＳＣ      ヒト肝星細胞
ＮＥＣＡ      ５’−（Ｎ−エチルカルボキシアミド）−アデノシン
材料および方法：
材料
Ａ２Ｂ受容体（８−（１−｛［５−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１−プロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン（化合物（１））および３−エチル−１−プロピル−８−（１−｛［３−（トリフルオロメチル）フェニル］メチル）ピラゾール−４−イル）−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン（化合物（２））に対する選択的な拮抗物質は、ＣＶ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．（カリフォルニア州、パロアルト）の生物有機化学部門によって合成され、我々の以前の出版物、Ｚｈｏｎｇ等（２００４年）Ａｍ  ＪＲｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ；３０（１）：１１８−１２５に記載された。その他のすべての試薬、たとえばロリプラム、フォルスコリン、ＮＥＣＡ、およびアデノシンは、特記しない限り、Ｓｉｇｍａ（ミズーリ州、セントルイス）から調達した。
【０２２０】
細胞培養
一次培養された健康なヒト肝星細胞（ＨＨＳＣ）は、ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（カリフォルニア州、サンディエゴ）から入手し、星形細胞増殖培地（ＳｃｉｅｎＣｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用して培養した。ＨＨＳＣは、加湿培養器５％ＣＯ２で３７℃において、規定どおりに成長させ、約８０〜９０％の密集度に達した時点で再播種した。各々の再播種は、継代と呼ばれる。以下の研究では、２〜５継代の細胞を使用した。
【０２２１】
ＨＨＳＣの刺激
ＨＨＳＣは、ウェルが１２個の組織培養プレート内に、星形細胞増殖培地内のウェルごとに１×１０５の細胞密度で播種し、一晩付着させて約９０％の密集度にする。細胞は、ＨＥＰＥＳ緩衝食塩水中で２回洗浄し、ＡｄｏＲの様々な作用物質または拮抗物質を含むＤＭＥＭ中で１または２４時間にわたって培養した。
【０２２２】
ＲＮＡの抽出およびリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ
全体のＲＮＡは、ＳｔｒａｔａｇｅｎｅのＡｂｓｏｌｕｔｅｌｙ  ＲＮＡ（商標）ＲＴ−ＰＣＲ  Ｍｉｎｉｐｒｅｐ  Ｋｉｔを使用してＨＨＳＣから抽出し、次にＤＮａｓｅ処理を行って、ゲノムＤＮＡの潜在的な汚染を排除した。アデノシン受容体用のリアルタイムＲＴ−ＲＣＲは、Ｚｈｏｎｇ等（２００４年）Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ；３０（１）：１１８−１２５に以前に記載されたように実施した。
【０２２３】
使用したα−平滑筋アクチンの特定のプライマーは、以下のとおりである：
順方向：５’ＴＧＧＧＡＡＴＧＧＧＡＣＡＡＡＡＡＧＡＣＡ３’（配列識別番号：１）；および
逆方向：５’ＣＧＧＧＴＡＣＴＴＣＡＧＧＧＴＣＡＧＧＡＴ３’（配列識別番号：２）、
一方、α−１  プロ−コラーゲン用のプライマーは、以下のとおりである：
順方向：５’ＣＡＣＣＡＡＴＣＡＣＣＴＧＣＧＴＡＣＡＧＡ３’（配列識別番号：３）；および
逆方向：５’ＣＡＧＡＴＣＡＣＧＴＣＡＴＣＧＣＡＣＡＡＣ３’（配列識別番号：４）、
また、これらの各々のプライマーは、Ｐｒｉｍｅｒ  Ｅｘｐｒｅｓｓ  ２．０（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、Ｇｅｎｂａｎｋのシーケンスに基づいて推奨されるガイドラインに従って設計した。ＰＣＲサイクルの終わりに、１つの生成物の増幅を確実にするために解離曲線を生成し、各々の遺伝子の閾値サイクル時間（Ｃｔ値）を決定した。相対ｍＲＮＡレベルは、Ｃｔ値に基づいて計算し、同じサンプル中のβ−アクチンに正規化し、β−アクチンｍＲＮＡの割合として提示した。
【０２２４】
ｃＡＭＰの蓄積の測定
細胞は、ＰＢＳ中で０．００２５％のトリプシンおよび２ｍＭのＥＤＴＡを使用して採取して洗浄し、フェノールを含まないＤＭＥＭ中に、細胞が１×１０６個／ｍｌの濃度まで再懸濁させた後、１Ｕ／ｍｌのＡＤＡで３０分間にわたって室温で培養した。次に、細胞は、５０μＭのホスホジエステラーゼＩＶ阻害剤、ロリプラムの存在下で、ＡｄｏＲ作用物質、拮抗物質、およびフォルスコリンを使って処理した。細胞は、３７℃で１５分間培養した後に溶出させて、ｃＡＭＰ−Ｓｃｒｅｅｎ  Ｄｉｒｅｃｔ（商標）Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を使用して、メーカーの指示に従ってｃＡＭＰ濃度を判定した。
【０２２５】
ＩＬ−６、コラーゲン、およびアスパラギン酸塩アミノ基転移酵素（ＡＳＴ）の測定
細胞媒体中のＩＬ−６の濃度は、Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ（カリフォルニア州、カマリロ）から調達したＥＬＩＳＡキットを使用して、メーカーの指示に従って判定した。これらのキットによるＩＬ−６の最低検出レベルは、２ｐｇ／ｍｌだった。細胞媒体中の可溶性コラーゲンの濃度は、Ｓｉｒｃｏｌコラーゲンアッセイ（Ｂｉｏｃｏｌｏｒ  Ｌｔｄ．、ベルファスト、北アイルランド）を使用して、メーカーの指示に従って測定した。マウスプラズマ中のＡＳＴの活性度は、Ｉｎｆｉｎｉｔｙ（商標）ＡＳＴアッセイ（Ｔｈｅｒｍｏ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、マサチューセッツ州、ウォルサム）を使用して判定した。
【０２２６】
マウス
アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）−欠損マウスは、Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ等（１９９８）、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２７３（９）：５０９３−５１００に記載されているように生成し、遺伝子型を分類した。ヌルＡｄａ対立遺伝子に対して同型接合のマウスは、ＡＤＡ−欠損（ＡＤＡ−／−）として指示し、ヌルＡｄａ対立遺伝子に対して異型接合のマウスは、ＡＤＡ対照マウス（ＡＤＡ＋）として指示した。すべてのマウスは、混合１２９ｓｖ／Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ背景上にあり、すべての表現型の比較は、同腹子に関して行った。動物の世話は、協会およびＮＩＨのガイドラインに従って行った。マウスは、マイクロアイソレータの蓋が装備されて、厳格な閉じ込めプロトコルに従って維持管理されている換気式ケージ内に収容した。細菌、寄生性、または真菌感染の徴候は見られず、ケージの同腹子に関する血清学的測定値は、最も一般的な１２のネズミ科動物のウィルスに関して陰性だった。
【０２２７】
拮抗物質処置
ＡＤＡ−／−マウスは、Ｙｏｕｎｇ等（２００４年）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ，１７３（２）：１３８０−１３８９に記載されているように、血液中のＡＤＡ酵素活性度に関してスクリーニングすることによって、出生時に識別した。ＡＤＡ−／−マウスは、やはりＹｏｕｎｇ等（２００４）に記載されているように、出生２日後から出生２１日後まで、ＡＤＡ酵素治療で維持した。この段階で、化合物（２）（１回の注射当たり１ｍｇ／ｋｇ）またはビヒクル（コーン油／エタノール／ＤＭＳＯ）による処置を開始した。処置は、１７日間にわたる午前中および夕方の腹腔内ｉ．ｐ．注射から構成した。処置群には、化合物（２）、ビヒクルを受領するか、または処置を受けないＡＤＡ−／−またはＡＤＡ＋マウスが含まれた。すべてのマウスは同腹子であり、雄および雌の両方がこれらの実験に含まれた。
【０２２８】
統計的分析
データは、少なくとも３回の別個の実験の平均±ＳＥＭとして提示した。統計的分析は、両側Ｓｔｕｄｅｎｔのｔ−検定、またはＡＮＯＶＡを用いて実施し、次にＮｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ検定を実施して、複数の比較を行った。＜０．０５のｐ値は、重症であると考えた。
【０２２９】
結果
ＨＨＳＣにおけるＡｄｏＲサブタイプの発現
リアルタイムＲＴ−ＰＣＲは、ＡｄｏＲに関するトランスクリプトのレベルを定量化するために実施した。４つのサブタイプの中で、Ａ２Ｂ受容体は、最高のトランスクリプトレベルを有していた（図１）。より低レベルのＡ１およびＡ２Ａ受容体トランスクリプトも検出されたが、Ａ３受容体のトランスクリプトは検出レベル未満だった。したがって、ＡｄｏＲ  ｍＲＮＡレベルの順位はＡ２Ｂ＞＞Ａ２Ａ＞Ａ１＞＞Ａ３だった。
【０２３０】
多くの細胞型では、Ａ２ＡまたはＡ２Ｂ受容体の活性は、細胞ｃＡＭＰの蓄積が増加する原因になるが、Ａ１またはＡ３受容体の活性は、アデニル酸シクラーゼ活性剤、フォルスコリンによって生じる細胞ｃＡＭＰの蓄積を減少させる。ＨＨＳＣ内で機能的に発現するＡｄｏＲサブタイプ（類）を特定するため、非選択的作用物質のＮＥＣＡ、およびいくつかのその他の選択的作用物質が細胞ｃＡＭＰの蓄積に与える作用を判断した。ＮＥＣＡは、アデノシンの安定した類似物であり、Ａ２Ｂ受容体を含む４つのＡｄｏＲすべてのサブタイプを活性化させる。図２Ａに示すように、ＮＥＣＡは、濃度に依存する方法で、細胞ｃＡＭＰの蓄積を増加させた。対照的に、Ａ２Ａ選択的作用物質ＣＧＳ−２１６８０（≦１０μＭ）は、細胞ｃＡＭＰ濃度を著しく増加させることはなかった。さらに、Ａ１選択的作用物質のＣＰＡ（１μＭ）、およびＡ３選択的作用物質のＩＢ−ＭＥＣＡ（１μＭ）は、フォルスコリン（１０μＭ、図２Ｂ）によって生じる細胞ｃＡＭＰの蓄積を抑制しなかった。
【０２３１】
Ａ２Ｂ受容体の選択的作用物質はないため、Ａ２Ｂ受容体に対する選択的拮抗物質の作用、ＮＥＣＡによって誘発される細胞ｃＡＭＰの蓄積に対する化合物（１）の作用を判断した。化合物（１）は、Ａ２Ｂ受容体に対して高い親和性（Ｋｉ＝７ｎＭ）を有し、他の３つのＡｄｏＲサブタイプに対して非常に低い親和性を有する（Ｋｉ値は、Ａ１、Ａ２Ａ、およびＡ３受容体の場合は５μＭを超える）（Ｚｈｏｎｇ等（２００４年）およびＺｈｏｎｇ等（２００５年）Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ，３２（１）：２−８）。図２Ａに示すように、化合物（１）（１μＭ）は、ＮＥＣＡによって誘発される細胞ｃＡＭＰの蓄積を著しく弱めた。したがって、細胞ｃＡＭＰの濃度をＡｄｏＲの機能的発現の指示値として使用すると、その結果は、Ａ２Ｂ受容体はＨＨＳＣ内で機能的に発現するが、Ａ１、Ａ２Ａ、またはＡ３受容体は発現しないことを示す。
【０２３２】
Ａ２B受容体の活性は、ＨＨＳＣからのＩＬ−６の放出を増加させた。
【０２３３】
アデノシンおよびＮＥＣＡで処理された細胞の培地におけるＩＬ−６の濃度は、ＥＬＩＳＡを使用して測定した。図３に示すように、アデノシンおよびＮＥＣＡは、濃度に依存する方法でＩＬ−６の放出を増加させた。ＮＥＣＡ（１００μＭ）によって、ビヒクルで処理した細胞と比べて、ＩＬ−６の放出は１１．９±３．１倍増加した。ＮＥＣＡによって誘発されるＩＬ−６の生成におけるＡ２Ｂ受容体の役割を判断するため、細胞は、化合物（１）（１μＭ）およびＮＥＣＡ（１０μＭ）で培養した。Ａ２Ｂ受容体拮抗物質、化合物（１）（１μＭ）は、ＮＥＣＡによって誘発されるＩＬ−６の放出を９０．７±０．１％減少させた（図３Ｂ）。これらの結果は、ＮＥＣＡによって誘発されるＩＬ−６の放出が、Ａ２Ｂ受容体の亜類型によって媒介されることを裏付けた。
【０２３４】
α−平滑筋アクチンおよびα−１プロ−コラーゲンの発現に対するＮＥＣＡの作用
間質コラーゲンの蓄積によるＨＨＳＣの活性化は、肝臓繊維症の顕著な特徴であり、α−平滑筋アクチンは筋線維芽細胞のマーカーであるため、α−平滑筋アクチンの発現の増加は、筋線維芽細胞に分化するＨＨＳＣの指標である。α−平滑筋アクチンおよびα−１プロ−コラーゲンの発現に対するＮＥＣＡの影響は、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲを使用して判断した。図４に示すように、ＮＥＣＡは、α−平滑筋アクチン（図４Ａ）およびα−１プロ−コラーゲン（図４Ｂ）の発現を著しく増加させた。これらの結果は、ＮＥＣＡがＨＨＳＣの活性化およびコラーゲンの生成を促進し得ることを示唆した。
【０２３５】
Ａ２Ｂ受容体の活性化によるコラーゲン生成の増加は、ＩＬ−６によって部分的に媒介される。
【０２３６】
コラーゲンの生成におけるＮＥＣＡの役割を確認するため、ＮＥＣＡで処理した細胞の培地における可溶性コラーゲンの濃度を測定した。ＮＥＣＡは、コラーゲンの著しい増加を生じさせた（図５）。ＮＥＣＡのこの作用は、Ａ２Ｂ拮抗物質、化合物（１）によって無効にされた。コラーゲンの生成に対するＮＥＣＡの作用が、ＩＬ−６の放出によって左右されるかどうかを判断するため、ＮＥＣＡによる処理時に、Ａｂを中和するＩＬ−６を細胞場位置に添加した。Ａｂを中和するＩＬ−６は、部分的にＮＥＣＡの作用を著しく減少させた。これらの結果は、Ａ２Ｂ受容体の活性化が、コラーゲンの生成を増加させ、この作用が、ＨＨＳＣからのＩＬ−６の放出によって部分的に媒介されることを実証する。
【０２３７】
ＡＤＡ−欠損マウスのＡＳＴレベルに対するＡ２Ｂ受容体の作用
ＡＤＡは、アデノシンを代謝する；その結果、増加したアデノシンのレベルは、ＡＤＡ−欠損マウスの肝臓を含む組織に広がる。Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ等（１９９８年），Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２７３（９）：５０９３−５１００参照。ビヒクルまたは化合物（２）で処理したＡＤＡ＋およびＡＤＡ−／−マウスで、プラズマＡＳＴレベルを検査した。ＡＳＴレベルは、ＡＤＡ＋マウスよりＡＤＡ−／−マウスの方が高かった。ＡＤＡ−／−マウスを化合物（２）で処理すると、ＡＳＴレベルは著しく減少した（図６）。これらの結果は、Ａ２Ｂ受容体拮抗作用がＡＤＡ−／−マウスにおけるＡＳＴの増加を防止することが可能であることを示唆している。
【図面の簡単な説明】
【０２３８】
【図１】図１は、ＨＨＳＣ中のＡｄｏＲサブタイプのｍＲＮＡレベルをグラフで示す。ＨＨＳＣから単離した全ＲＮＡは、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲ分析を行った。ＡｄｏＲの相対レベルは、β−アクチントランスクリプトの割合として示される。図示のデータは、平均±ＳＥＭ（ｎ＝４）である。ｎｄは、検出されなかったことを意味する。
【図２】図２は、ＨＨＳＣ中における細胞ｃＡＭＰに対するＡｄｏＲ作用物質および拮抗物質の作用をグラフで示す。（Ａ）Ａ２Ｂ受容体拮抗物質８−（１−｛［５−（４−クロロフェニル）（１，２，４−オキサジアゾール−３−イル）］メチル｝ピラゾール−４−イル）−１−プロピル−１，３，７−トリヒドロプリン−２，６−ジオン（化合物（１））（１μＭ）が存在するか（四角形）または存在しない（三角形）状態におけるＣＧＳ−２１６８０（ＣＧＳ、円形）およびＮＥＣＡの濃度反応曲線。（Ｂ）フォルスコリン（Ｆｓｋ、１０μＭ）誘導細胞ｃＡＭＰの蓄積に対するＣＰＡ（１μＭ）およびＩＢ−ＭＥＣＡ（ＩＭ、１μＭ）の影響がない状態。図示のデータは、平均±ＳＥＭ（Ａではｎ＝６、Ｂではｎ＝５）。
【図３】図３は、ＨＨＳＣによるＩＬ−６の放出に対するアデノシン（Ａ）およびＮＥＣＡ（Ｂ）の作用をグラフで示す。細胞は、化合物（１）が存在するかまたは存在しない状態で２４時間にわたって、ビヒクル、アデノシン、およびＮＥＣＡで処理した。処理された細胞からの培地を収集し、ＥＬＩＳＡを使用して、ＩＬ−６の濃度を決定した。図示のデータは、平均±ＳＥＭ（ｎ＝３）である。＊：対照と比較してｐ＜０．０５；＃：ＢのＮＥＣＡ（１０μＭ）処理細胞と比較してｐ＜０．０５。
【図４】図４は、リアルタイムＲＴ−ＰＣＲを使用して決定したα−平滑筋アクチン（Ａ）およびα−１プロ−コラーゲン（Ｂ）のｍＲＮＡレベルに対するＮＥＣＡの作用を示す。ＨＨＳＣは、ＮＥＣＡ（１０μＭ）で１時間培養した。ビヒクルで培養した細胞は、対照として使用した。標的ｍＲＮＡの発現量は、β−アクチンの発現に対して正規化した。図示のデータは、平均±ＳＥＭ（Ａではｎ＝４、Ｂではｎ＝５）である。＊：対照と比較してｐ＜０．０５。
【図５】図５は、ＨＨＳＣによるコラーゲンの生成に対するＮＥＣＡの作用を示す。細胞は、化合物（１）または抗−ＩＬ−６抗体が存在するかまたは存在しない状態で２４時間にわたって、ビヒクル、ＮＥＣＡで処理した。処理された細胞からの培地を収集し、Ｓｉｒｃｏｌコラーゲンアッセイを使用して濃度を決定した。図示のデータは、平均±ＳＥＭ（ｎ＝４〜６）である。＊：対象と比較してｐ＜０．０５。＃：ＮＥＣＡ（１０μＭ）処理細胞と比較してｐ＜−０．０５。
【図６】図６は、ＡＤＡ−／−マウス中のプラズマＡＳＴレベルに対するＡ２Ｂ受容体拮抗作用の作用を示す。マウスプラズマは、ＥＤＴＡ中で収集し、ＡＳＴの活性は、Ｉｎｆｉｎｉｔｙ（商標）ＡＳＴアッセイを使用して決定した。図示のデータは、平均±ＳＥＭ（ｎ＝６〜８）である。＊：ビヒクル（ＡＤＡ＋Ｖ）で処理したＡＤＡ＋と比較してｐ＜０．０５；＃：ビヒクル（ＡＤＡ−／−Ｖ）で処理したＡＤＡ−／−マウスと比較してｐ＜０．０５。
【図１】
2009530413.tif 000049
【図２】
2009530413.tif 000050
【図３】
2009530413.tif 000051
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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2009530413.tif 000056
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