(57)【要約】  式(I)：2009508837.tif 000081[式中、環Aは、アリールもしくはヘテロアリール環または環システムであり；R1は水素、フルオロ、クロロ、ブロモ、または式(IA)：-X-Alk1-(Z)m-(Alk2)n-Q(IA)（式中、Xは、結合手、-O-、-S-、-S(O)-、-SO2-または-NH-であり、Zは、-O-、-S-、-(C=O)-、-(C=S)-、-S(O)-、-SO2-、-NRA-、またはどちらかの向きの-C(=O)O-、-C(=O)NRA-、-C(=S)NRA-、-SO2NRA-、-NRAC(=O)-もしくは-NRASO2-（ここで、RAは水素、または1以上の水素がフッ素で任意に置換されていてもよいC1-C6アルキルである）であり；Alk1およびAlk2は、任意に置換されていてもよい2価のC1-C3アルキレンもしくはC2-C3 アルケニレン基であり、mおよびnは、独立して0または1であり、そしてQは、水素または任意に置換されていてもよい炭素環式基もしくはヘテロ環式基である）の基であり；R2は、シアノ(-CN)、フルオロ、クロロ、ブロモ、メチル、エチル、-OH、-CH2OH、-C(=O)NH2、-C(=O)H、-C(=O)CH3または-NH2であり；R3およびR4は独立して、水素、フルオロ、クロロ、ブロモ、シアノ(-CN)、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルキル、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルコキシ、-CH=CH2、-C≡CH、シクロプロピルおよび-NH2から選択されるか、またはR3およびR4は一緒になって、環Aに縮合した炭素環もしくはヘテロ環、または1以上の水素がフッ素で任意に置換されていてもよいメチレンジオキシ(-OCH2O-)もしくはエチレンジオキシ(-OCH2CH2O-)を表し；S1は、水素、または明細書中で定義された置換基である］の化合物はHSP90の阻害剤であり、それらは例えば癌の治療に役立つ。
2009508837.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式(I)：
【化１】
2009508837.tif 000079
［式中、
環Aは、アリールもしくはヘテロアリール環または環システムであり；
R1は水素、フルオロ、クロロ、ブロモ、または式(IA)：
-X-Alk1-(Z)m-(Alk2)n-Q   (IA)
（式中、
Xは、結合手、-O-、-S-、-S(O)-、-SO2-または-NH-であり、
Zは、-O-、-S-、-(C=O)-、-(C=S)-、-S(O)-、-SO2-、-NRA-、またはどちらかの向きの-C(=O)O-、-C(=O)NRA-、-C(=S)NRA-、-SO2NRA-、-NRAC(=O)-もしくは-NRASO2-（ここで、RAは水素、または1以上の水素がフッ素で任意に置換されていてもよいC1-C6アルキルである）であり、
Alk1およびAlk2は、任意に置換されていてもよい2価のC1-C3アルキレンもしくはC2-C3アルケニレン基であり、
mおよびnは、独立して0または1であり、そして
Qは、水素または任意に置換されていてもよい炭素環式基もしくはヘテロ環式基である）の基であり；
R2は、シアノ(-CN)、フルオロ、クロロ、ブロモ、メチル、エチル、-OH、-CH2OH、-C(=O)NH2、-C(=O)H、-C(=O)CH3または-NH2であり;
R3およびR4は独立して、水素、フルオロ、クロロ、ブロモ、シアノ(-CN)、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルキル、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルコキシ、-CH=CH2、-C≡CH、シクロプロピルおよび-NH2から選択されるか、またはR3およびR4は一緒になって、環Aに縮合した炭素環もしくはヘテロ環、または1以上の水素がフッ素で任意に置換されていてもよいメチレンジオキシ(-OCH2O-)もしくはエチレンジオキシ(-OCH2CH2O-)を表し；
S1は、水素、またはフルオロ、クロロ、ブロモ、シアノ(-CN)、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルキル、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルコキシ、-CH=CH2、-C≡CH、シクロプロピルおよび-NH2から選択される置換基であるか、またはS1およびR3、もしくはS1およびR4は一緒になって、1以上の水素がフッ素で任意に置換されていてもよいメチレンジオキシ(-OCH2O-)もしくはエチレンジオキシ(-OCH2CH2O-)を表すか；または
S1は、式(IB)：
-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-Q1       (IB)
（式中、
p、qおよびrは独立して、0または1であり；
(a) pが0または1であり、qが1であり、そしてrが0または1であるとき：
Z1は、(i) -S-、-(C=O)-、-(C=S)-、-S(O)-および-SO2-、(ii) -N(RA)C(=O)-*（ここで、*の印が付けられた結合手はQ1に結合している）ならびに(iii) どちらかの向きの-C(=O)O-、-C(=S)NRA-および-SO2NRA-からなる2価の基の群から選択され；
Q1は、(i) 水素もしくは任意の置換基；または(ii) 任意に置換されていてもよい炭素環式基もしくはヘテロ環式基；または(iii) 基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHまたは-O(C1-C3アルキル)であり、xおよびwは独立して1、2もしくは3である）であるか；または
(b) pが1であり、qが1であり、そしてrが0または1であるとき：
Z1は-O-であり、Q1は、(i) 水素、または窒素原子を介して-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-に結合していない任意の置換基；または(ii) 任意に置換されていてもよい炭素環式基；または(iii) 環窒素を介して-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-に結合していない、任意に置換されていてもよい5または6個の環原子のヘテロ環；または(iv) 基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHまたは-O(C1-C3アルキル)であり、xおよびwは独立して、1、2もしくは3である）であるか；または
(c) pが1であり、qが1であり、そしてrが0または1であるとき：
Z1は-NRA-もしくは-C(=O)N(RA)-*（ここで、*の印が付けられた結合手はQ1に結合している）であり、Q1は基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHもしくは-O(C1-C3アルキル)であり、xおよびwは独立して、1、2もしくは3である）であるか；または
(d) pが0であり、qが1であり、そしてrが0または1であるとき：
Z1は-O-もしくは-NRA-であり、Q1は、(i) 水素、または窒素原子を介して-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-に結合していない任意の置換基；または(ii) Q1およびRAは、それらが結合している窒素と一緒になって、任意に置換されていてもよい5または6個の環原子のヘテロ環を形成するか；または(iii) 基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHもしくは-O(C1-C3アルキル)であり、xおよびwは独立して、1、2もしくは3である）であるか；または
(e) pが0もしくは1であり、qが0であり、そしてrが0または1であるとき：
Q1は、(i) 水素、または窒素原子を介して-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-に結合していない任意の置換基；または(ii) 任意に置換されていてもよい炭素環式基；または(iii) 環窒素を介して-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-に結合していない、任意に置換されていてもよい5もしくは6個の環原子のヘテロ環；または(iv) 基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHもしくは-O(C1-C3アルキル)であり、xおよびwは独立して、1、2もしくは3である）である）の基であり；
RAは、水素または1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルキルであり；そして
Alk3およびAlk4は、2価のC1-C3アルキレンもしくはC2-C3アルケニレン基であり、それぞれフルオロ、クロロ、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルキル、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルコキシから選択される1または2個の置換基で任意に置換されていてもよい］
の化合物、またはその塩、N-オキシド、水和物もしくは溶媒和物。
【請求項２】
R2が水素である、請求項1に記載の化合物。
【請求項３】
基R1において、Xが結合手であり、pが1であり、そしてZ1が-O-、-S-、-(C=O)-、-(C=S)-、-SO2-、-C(=O)O-、-C(=O)NRA-、-C(=S)NRA-、-SO2NRA-、-NRAC(=O)-、-NRASO2-または-NRA-（ここで、RAは水素またはC1-C6アルキルである）である、請求項2に記載の化合物。
【請求項４】
基R2において、S1が式(IB)（ここで、pは0もしくは1であり、qは1であり、rは0もしくは1であり、Z1は(i) -S-、-(C=O)-、-(C=S)-および-SO2-；(ii) -N(RA)C(=O)-*（ここで、*の印が付けられた結合手はQ1に結合してる）ならびに(iii) どちらかの向きの-C(=O)O-、-C(=S)NRA-および-SO2NRA-からなる2価の基の群から選択され；そしてQ1は(i) 水素または(ii) 任意に置換されていてもよい炭素環式基もしくはヘテロ環式基である）の基である、請求項3に記載の化合物。
【請求項５】
基R2において、S1が式(IB)（ここで、pは1であり、qは1であり、rは0もしくは1であり、Z1は-O-であり、そしてQ1は(i) 水素；または(ii) 任意に置換されていてもよい炭素環式基；または(iii) 環窒素を介して-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-に結合していない、任意に置換されていてもよい5もしくは6個の環原子のヘテロ環である）の基である、請求項3に記載の化合物。
【請求項６】
基R2において、S1が式(IB)（ここで、pは0もしくは1であり、qは0であり、rは0もしくは1であり、そしてQ1は(i) 水素；(ii) 任意に置換されていてもよい炭素環式基；または(iii) 環窒素を介して-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-に結合していない、任意に置換されていてもよい5もしくは6個の環原子のヘテロ環である）の基である、請求項3に記載の化合物。
【請求項７】
環Aがフェニル環である、請求項1〜6のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項８】
環Aならびに置換基R3、R4およびS1を含む基が、式(IC)：
【化２】
2009508837.tif 000080
［式中、
R3およびR4は請求項1で定義されたとおりであり、
S1は水素、またはフルオロ、クロロ、ブロモ、シアノ(-CN)、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルキル、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルコキシ、-CH=CH2、-C≡CH、シクロプロピルおよび-NH2から選択される置換基であるか、またはS1およびR3、もしくはS1およびR4は一緒になって、1以上の水素がフッ素で任意に置換されていてもよいメチレンジオキシ(-OCH2O-)もしくはエチレンジオキシ(-OCH2CH2O-)を表すか；またはS1は式(IB)：
-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-Q1       (IB)
（式中、
p、qおよびrは独立して、0または1であり；
Z1は、-O-、-S-、-(C=O)-、-(C=S)-、-S(O)-、-SO2-、-NRA-、またはどちらかの向きの-C(=O)N(RA)-もしくは-SO2NRA-であり；
Q1は、(i) 水素もしくは任意の置換基；または(ii) 任意に置換されていてもよい炭素環式基もしくはヘテロ環式基；または(iii) 基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHまたは-O(C1-C3アルキル)であり、xおよびwは独立して、1、2または3である）であり；
RAは、水素または1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルキルであり；そして
Alk3およびAlk4は、それぞれフルオロ、クロロ、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルキル、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルコキシから選択される1または2個の置換基で任意に置換されていてもよい、2価のC1-C3アルキレンもしくはC2-C3 アルケニレン基である）の基である］の基である、請求項1〜6のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項９】
R3がオルト位にあり、R4がパラ位にある、請求項７または８に記載の化合物。
【請求項１０】
S1がフェニル環のメタ位にある、請求項7〜9のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項１１】
R3および／またはR4がフルオロ、クロロ、ブロモおよびメチルから選択される、請求項1〜10のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項１２】
R1が式-W-Alk5-B（ここで、Wは-O-もしくは-S-であり、Alk5は、1以上の水素原子がフッ素原子で置換された、直鎖状もしくは分枝鎖状の2価のC1-C6アルキレン基であり、そしてBは、水素、-NH2、-NHRA、NHRARB（ここで、RAおよびRBは独立して、水素もしくはC1-C6アルキルまたは1以上の水素原子がフッ素原子で置換されたC1-C6アルキルであるか、またはRAおよびRBはそれらが結合している窒素と一緒になって、飽和5員もしくは6員へテロ環を形成する）である）の基である、請求項1〜11のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項１３】
R1がメトキシ、エトキシ、メチルチオまたはエチルチオである、請求項1〜11のいずれか1つに記載の化合物。
【請求項１４】
本明細書中のいずれかの実施例の主体である、請求項1に記載の化合物。
【請求項１５】
請求項1〜14のいずれか1つに記載の化合物を、1以上の医薬的または動物薬的に許容される担体および／または賦形剤とともに含む、医薬もしくは動物薬組成物。
【請求項１６】
インビトロまたはインビボでのHSP90活性の阻害用組成物の製造における、請求項1〜14のいずれか1つに記載の化合物の使用。
【請求項１７】
哺乳動物におけるHSP90活性を阻害するのに有効な量の、請求項1〜14のいずれか1つに記載の化合物を哺乳動物に投与することを含む、前記HSP90活性の阻害に応答する疾病の治療方法。
【請求項１８】
免疫抑制もしくはウイルス病の治療のため、または真菌感染症の治療における抗真菌剤との同時治療のため、慢性関節リウマチ、喘息、多発性硬化症、I型糖尿病、狼瘡、乾癬および炎症性腸疾患のような炎症性疾患；嚢胞性線維症；糖尿病性網膜症、血管腫および子宮内膜症のような血管形成関連疾患の治療、または化学療法により誘発される毒性からの正常細胞の保護；または被アポトーシス不全が基礎的要因である疾病の治療；または心臓および脳のHsp70の上昇による低酸素−虚血性傷害からの保護；スクラピー／ＣＪＤ、ハンチントン病またはアルツハイマー病のための、請求項16に記載の使用または請求項17に記載の方法。
【請求項１９】
癌の治療のための、請求項16に記載の使用または請求項17に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、HSP90阻害活性を有する置換されたプリン化合物、癌のようなHSP90活性の阻害に応答する疾病に関連した医薬での該化合物の使用、および該化合物を含む医薬組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
分子シャペロンは、蛋白質の適切な折り畳みや立体構造を維持し、蛋白質の合成と分解のバランスの調節に非常に重要である。それらは、細胞増殖やアポトーシスのような多くの重要な細胞機能の調節に重要であることが示されている(JollyおよびMorimoto、2000; Smithら、1998; Smith、2001)。
【０００３】
熱ショック蛋白質(HSPs)
細胞が、熱ショック、アルコール、重金属および酸化ストレスを含む多くの環境ストレスに曝されると、熱ショック蛋白質(HSPs)として一般に知られている多くのシャペロンが、細胞に蓄積する。HSPsの誘導は、初期ストレス傷害から細胞を保護し、再生を高め、そしてストレス耐性状態の維持に導く。しかしながら、ある種のHSPsは、正常な、ストレスのない状態のもとで、重要な細胞蛋白質の増殖の一覧(list)である、正確な折り畳み、分解、局在そして機能を調節することにより、主要な分子シャペロンの役割を果たすことも明らかとなっている。
【０００４】
細胞の発現、機能および局在の点で異なっている個々の遺伝子産物をもった多くのHSPs多重遺伝子の一群が存在する。それらは、分子量により、例えば、HSP70、HSP90およびHSP27のように分類される。
【０００５】
ヒトのいくつかの疾病は、蛋白質の間違った折り畳みの結果からもたらされ得る(Tytellらの総説、2001; Smithら、1998)。それゆえに、分子シャペロン機構を混乱させる治療の展開が有益であることを立証するかもしれない。ある容態（例えば、アルツハイマー病、プリオン病およびハンチントン病）において、間違って折り畳まれた蛋白質が、神経変性疾患をもたらす蛋白質凝集の原因となり得る。そのうえ、間違って折り畳まれた蛋白質は、野生型蛋白質の機能の損失をもたらし、細胞内で分子および生理的な機能の非調節に導き得る。
【０００６】
HSPsは癌にも関係している。例えば、腫瘍の進行段階に関係のあるHSPsによる分化発現の証拠がある(Martinら、2000; Conroyら、1996; Kawanishiら、1999; Jameelら、1992; Hoangら、2000; Lebeauら、1991)。種々の重大な腫瘍形成経路でのHSP90の関与、および抗癌活性を有するある種の天然物が、この分子シャペロンを標的にしていることの発見の結果から、HSPの機能を阻害すれば、癌治療に役立つかもしれないとの魅力的で新しい概念が、展開されてきた。最初の分子シャペロン阻害剤が、現在、臨床試験中である。
【０００７】
HSP90
HSP90は、全細胞蛋白質の約1〜2％を構成しており、通常は、細胞中で、他の多くの蛋白質の一つと結合して２量体として存在している(例えば、Pratt、1997参照)。それは、細胞生存のために必須のものであり、二相のシャペロン機能を示す(Youngら、2001)。それは、種々の環境ストレス、例えば熱ショックによって本来の立体構造が変化させられた後に多くの蛋白質と相互作用すること、適切な蛋白質の折り畳みを保証すること、および非特異的な凝集を防ぐことによって、細胞のストレス応答において重要な役割を果たす(Smithら、1998)。さらに、最近の結果は、HSP90は、多分、突然変異蛋白質の不適当な折り畳みを修正することにより、突然変異の影響を緩和する役割も果たすことを示唆している(RutherfordおよびLindquist、1998)。
【０００８】
しかしながら、HSP90は、重要な調節の役割も有している。正常な生理的状態下、HSP90は、その小胞体ホモローグのGRP94と一緒に、細胞内でハウスキーピングの役割も果たしており、いくつかの重要なクライエント蛋白質の安定な立体構造および成熟（maturation）を維持する。これらは、３グループ：(a)ステロイドホルモン受容体、(b)Ser/Thrまたはチロシン・キナーゼ（例えば、ERBB2、RAF-1、CDK4およびLCK）および(c)例えば変種p53およびテロメラーゼhTERTの触媒サブユニットのような明らかに無関連の蛋白質の集団に細分化できる。これら全ての蛋白質は、細胞内の多くの生理学的および生化学的工程で、重要な調節の役割を果たしている。新規なHSP90クライエント蛋白質が、絶えず同定されている。
【０００９】
ヒトにおいて、多く貯蔵されているHSP90ファミリーは、４つの遺伝子、すなわち、サイトソルHSP90αおよびHSP90β同種体（isoform）（Hickeyら、1989）、小胞体中のGRP94（Argonら、1999）およびミトコンドリア基質中のHSP75/TRAP1（Feltsら、2000）からなる。それらのファミリー全ては、同じような作用形態を有するが、細胞内での局在により、異なったクライエント蛋白質と結合すると考えられる。例えば、ERBB2は、GRP94の特異的なクライエント蛋白質であることが知られており（Argonら、1999）、そしてタイプ1腫瘍壊死因子受容体（TNFR1）およびRBは両方ともTRAP1のクライエントであることが示されている（Songら、1995；Chenら、1996）。
【００１０】
HSP90は、クライエント蛋白質と調節蛋白質の間での一連の複合相互作用に関与している（Smithら、2001）。正確な分子についての詳細な解明は残っているが、最近数年間に行われた生化学的およびＸ-線結晶学的研究は、HSP90のシャペロン機能にますます詳細な洞察を与えた。
【００１１】
この問題に関する以前の議論に次いで、HSP90は、ATP加水分解に必須であるヌクレオチド結合ドメインの２量体の状態にあるATP-依存性分子シャペロンであり（Prodromouら、1997）、そして今度はこれがシャペロン機能に必須である（Prodromouら、2000a）ことが、今明らかになっている。ATPとの結合は、N末端ドメイン同士を、互いにより近づけて接触しやすい状態にし、そして「かすがい機構（clamp mechanism）」として知られている立体構造の切替えをもたらすドーナツ状の２量体構造の形成をもたらす（ProdromouおよびPearl、2000b）。
【００１２】
公知のHSP90阻害剤
最初に発見されたHSP90阻害剤のクラスは、ベンゾキノン アンサマイシン  クラスで、それは、ハービマイシンＡおよびゲルダナマイシン化合物を含んでいる。それらにより、v-Src癌遺伝子で形質転換された繊維芽細胞の悪性の遺伝表現型が逆転することが示され（Ueharaら、1985）、次いで、インビトロ（Schulteら、1998）およびインビボの動物モデル（Supkoら、1995）の両方で、強力な抗腫瘍活性を有することが示された。
【００１３】
免疫沈降およびアフィニティー・マトリックスの研究により、ゲルダナマイシンの主作用機構は、HSP90との結合であることが示された（Whitesellら、1994；SchulteおよびNeckers、1998）。さらに、Ｘ-線結晶学の研究から、ゲルダナマイシンは、ATPとの結合部位で競合し、HSP90の内因性のATPアーゼ（ATPase）活性を阻害することが示された（Prodromouら、1997；Panaretouら、1998）。そして次に、これがクライエント蛋白質をシャペロンする（chaperoning）ことのできる、成熟した多重結合のHSP90複合体の生成を妨げる。その結果、クライエント蛋白質は、ユビキチン・プロテアソーム経路を経る分解の標的にされる。17-アリルアミノ、17-デメトキシゲルダナマイシン（17AAG）は、クライエント蛋白質を涸渇させるHSP90阻害作用ならびに培養細胞および異種移植モデルでの抗腫瘍活性は保持している（Schulteら、1998；Kellandら、1999）が、肝毒性はゲルダナマイシンよりも有意に弱い（Pageら、1997）。17AAGは、現在、フェーズI臨床試験で評価がなされている。
【００１４】
ラジシコールは、v-Srcおよびv-Ha-Rasにより形質転換された繊維芽細胞の悪性の遺伝表現型を逆転することが示された大環状抗生物質である（Kwonら、1992；Zhaoら、1995）。HSP90阻害により、多くのシグナル蛋白質を分解することが示された（Schulteら、1998）。Ｘ-線結晶学のデータにより、ラジシコールもまたHSP90のN末端ドメインに結合し、内因性ATPase活性を阻害することが確認された（Roeら、1998）。ラジシコールは、化合物が化学的に不安定なために、インビボでは抗腫瘍活性が欠如している。
【００１５】
クマリン抗生物質は、HSP90のそれと相同性のあるATP結合部位でバクテリアのDNAジャイレースに結合することが知られている。クマリン、ノボビオシンは、HSP90のカルボキシ末端、すなわちN-末端で結合するベンゾキノン アンサマイシン類およびラジシコールが占める部位とは異なった部位で結合することが示された（Marcuら、2000b）。しかしながら、これでもHSP90機能を阻害し、HSP90でシャペンロンされる多くのシグナル蛋白質の分解をもたらした（Marcuら、2000a）。ゲルダナマイシンは、ノボビオシンに続いて、HSP90を捕縛することができない。このことは、NおよびC末端ドメインの間に何らかの相互作用が存在しなければならなことを示しており、このことは、両方の部位が、HSP90シャペロンの性質にとって重要である点と矛盾がない。
【００１６】
プリンを基礎とするHSP90阻害剤であるPU3は、ERBB2を含むシグナル分子の分解をもたらし、そして乳癌細胞の細胞周期停止や分化を起こさせることが示されている（Chiosisら、2001）。
【００１７】
特許公開WO 2004/050087およびWO 2004/056782は、HSP90阻害剤である公知のクラスのピラゾール誘導体に関する。
【００１８】
治療標的としてのHSP90
分子シャペロンHSP90が、腫瘍の遺伝表現型を誘導する際に非常に重要である多くのシグナル経路を調節することに関わっていること、およびある種の生理活性天然物が、HSP90への活性を経てそれらの効果を発揮することの発見により、現在、分子シャペロンHSP90が抗癌剤開発のための新規な標的として、評価されている（Neckersら、1999）。
【００１９】
ゲルダナマイシン、17AAGおよびラジシコールの最も重要な作用機作は、蛋白質のN-末端ドメインに存在しているATP結合部位でHSP90と結合することであり、そして、それがHSP90の内因性ATPase活性の阻害に導く（Prodromouら、1997；Stebbinsら、1997；Panaretouら、1998を参照）。
【００２０】
HSP90 ATPase活性の阻害は、コ−シャペロン（co-chaperones）の補充を妨害し、ユビキチン・プロテアソーム経路を経る分解のためにクライエント蛋白質を標的とする、HSP90へテロ複合体型の形成を促進する（Neckersら、1999；Kellandら、1999を参照）。
【００２１】
HSP90阻害剤での処理は、癌において根本的に重要なプロセスである、細胞増殖、細胞周期調節およびアポトーシスに関与する重要な蛋白質の選択的な分解に導く。
【００２２】
HSP90機能の阻害により、根本的に重要であり、そして癌においては一般に非調節な状態にあるプロセスの、細胞増殖、細胞周期調節およびアポトーシスに関与する重要なシグナル蛋白質の選択的な分解を引き起こすことが示されている（例えばHosteinら、2001を参照）。臨床で使用するために、これを標的とする医薬の開発のための魅力的な根拠は、形質転換された遺伝表現型と関連する蛋白質を同時に涸渇することにより、強力な抗腫瘍効果が得られ、癌細胞対正常細胞に対して治療的利点が得られることである。HSP90阻害によるこれら下流の事象が、HSP90阻害剤が培養細胞および動物モデルで抗腫瘍活性を示す原因であると信じられている（例えば、Schulteら、1998；Kellandら、1999参照）。
【００２３】
HSP90阻害剤は、一般に用いられるアゾール抗真菌剤（例えばフルコナゾール）ならびにエキノカンジン類のような最新の抗真菌剤に対して既に耐性な真菌株を再感受性にすることができる（CowenおよびLindquist、Science、309巻、30 Sept 2005、2185-2189参照）。
【発明の開示】
【００２４】
発明の概要
本発明は、アリール-またはヘテロアリール-置換プリン化合物のクラスが、Hsp90阻害活性を有する発見に基づいており、Hsp90活性の阻害に応答する疾病の治療に関する。
【００２５】
特許公開WO 2006/046023は、プロテインキナーゼ阻害剤としてのオルト縮合ピリジンおよびピリミジン誘導体（例えばプリン類）に関する。その公報に関する化合物の定義は、非常に幅広く、プリン骨格を有する化合物を含む。しかしながら、その公報はプロテインキナーゼ阻害剤に関しているので、4-アリールまたは4-ヘテロアリールのプリン誘導体のHsp90に対しての活性に関する情報は提供していない。
【００２６】
発明の詳細な記述
1つの広い観点で、本発明は、式(I)：
【化１】
2009508837.tif 000003
【００２７】
［式中、
環Aは、アリールもしくはヘテロアリール環または環システムであり；
R1は水素、フルオロ、クロロ、ブロモ、または式(IA)：
-X-Alk1-(Z)m-(Alk2)n-Q   (IA)
（式中、
Xは、結合手、-O-、-S-、-S(O)-、-SO2-または-NH-であり、
Zは、-O-、-S-、-(C=O)-、-(C=S)-、-S(O)-、-SO2-、-NRA-、またはどちらかの向きの-C(=O)O-、-C(=O)NRA-、-C(=S)NRA-、-SO2NRA-、-NRAC(=O)-もしくは-NRASO2-（ここで、RAは水素、または1以上の水素がフッ素で任意に置換されていてもよいC1-C6アルキルである）であり、
Alk1およびAlk2は、任意に置換されていてもよい2価のC1-C3アルキレンもしくはC2-C3アルケニレン基であり、
mおよびnは、独立して0または1であり、そして
Qは、水素または任意に置換されていてもよい炭素環式基もしくはヘテロ環式基である）の基であり；
【００２８】
R2は、シアノ(-CN)、フルオロ、クロロ、ブロモ、メチル、エチル、-OH、-CH2OH、-C(=O)NH2、-C(=O)H、-C(=O)CH3または-NH2であり;
R3およびR4は独立して、水素、フルオロ、クロロ、ブロモ、シアノ(-CN)、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルキル、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルコキシ、-CH=CH2、-C≡CH、シクロプロピルおよび-NH2から選択されるか、またはR3およびR4は一緒になって、環Aに縮合した炭素環もしくはヘテロ環、または1以上の水素がフッ素で任意に置換されていてもよいメチレンジオキシ(-OCH2O-)もしくはエチレンジオキシ(-OCH2CH2O-)を表し；
【００２９】
S1は、水素、またはフルオロ、クロロ、ブロモ、シアノ(-CN)、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルキル、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルコキシ、-CH=CH2、-C≡CH、シクロプロピルおよび-NH2から選択される置換基であるか、またはS1およびR3、もしくはS1およびR4は一緒になって、1以上の水素がフッ素で任意に置換されていてもよいメチレンジオキシ(-OCH2O-)もしくはエチレンジオキシ(-OCH2CH2O-)を表すか；または
【００３０】
S1は、式(IB)：
-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-Q1       (IB)
（式中、
p、qおよびrは独立して、0または1であり；
(a) pが0または1であり、qが1であり、そしてrが0または1であるとき：
Z1は、(i) -S-、-(C=O)-、-(C=S)-、-S(O)-および-SO2-、(ii) -N(RA)C(=O)-*（ここで、*の印が付けられた結合手はQ1に結合している）ならびに(iii) どちらかの向きの-C(=O)O-、-C(=S)NRA-および-SO2NRA-からなる2価の基の群から選択され；
Q1は、(i) 水素もしくは任意の置換基；または(ii) 任意に置換されていてもよい炭素環式基もしくはヘテロ環式基；または(iii) 基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHまたは-O(C1-C3アルキル)であり、xおよびwは独立して1、2もしくは3である）であるか；または
【００３１】
(b) pが1であり、qが1であり、そしてrが0または1であるとき：
Z1は-O-であり、Q1は、(i) 水素、または窒素原子を介して-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-に結合していない任意の置換基；または(ii) 任意に置換されていてもよい炭素環式基；または(iii) 環窒素を介して-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-に結合していない、任意に置換されていてもよい5または6個の環原子のヘテロ環；または(iv) 基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHまたは-O(C1-C3アルキル)であり、xおよびwは独立して、1、2もしくは3である）であるか；または
【００３２】
(c) pが1であり、qが1であり、そしてrが0または1であるとき：
Z1は-NRA-もしくは-C(=O)N(RA)-*（ここで、*の印が付けられた結合手はQ1に結合している）であり、Q1は基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHもしくは-O(C1-C3アルキル)であり、xおよびwは独立して、1、2もしくは3である）であるか；または
【００３３】
(d) pが0であり、qが1であり、そしてrが0または1であるとき：
Z1は-O-もしくは-NRA-であり、Q1は、(i) 水素、または窒素原子を介して-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-に結合していない任意の置換基；または(ii) Q1およびRAは、それらが結合している窒素と一緒になって、任意に置換されていてもよい5または6個の環原子のヘテロ環を形成するか；または(iii) 基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHもしくは-O(C1-C3アルキル)であり、xおよびwは独立して、1、2もしくは3である）であるか；または
【００３４】
(e) pが0もしくは1であり、qが0であり、そしてrが0または1であるとき：
Q1は、(i) 水素、または窒素原子を介して-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-に結合していない任意の置換基；または(ii) 任意に置換されていてもよい炭素環式基；または(iii) 環窒素を介して-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-に結合していない、任意に置換されていてもよい5もしくは6個の環原子のヘテロ環；または(iv) 基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHもしくは-O(C1-C3アルキル)であり、xおよびwは独立して、1、2もしくは3である）である）の基であり；
【００３５】
RAは、水素または1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルキルであり；そして
Alk3およびAlk4は、2価のC1-C3アルキレンもしくはC2-C3アルケニレン基であり、それぞれフルオロ、クロロ、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルキル、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルコキシから選択される1または2個の置換基で任意に置換されていてもよい］
の化合物、またはその塩、N-オキシド、水和物もしくは溶媒和物を提供する。
【００３６】
上記(I)の化合物は、式(II)：
【化２】
2009508837.tif 000004
の化合物と互変異性である。
【００３７】
本発明は、いずれかの互変異性型の化合物およびそれらの混合物を含む。本明細書中で式(I)で示されるプリン環構造を有する化合物について述べることは、(II)で示されるプリン環構造を有する化合物およびそれらの混合物を含むこととして理解されるべきである。
【００３８】
本発明の化合物は、式(I)［ここで、環Aがフェニル環であり；R2が水素であり；置換基R1において、Xが結合手であり、pが1であり、Z1が-O-、-S-、-(C=O)-、-(C=S)-、-SO2-、-C(=O)O-、-C(=O)NRA-、-C(=S)NRA-、-SO2NRA-、-NRAC(=O)-、-NRASO2-または-NRA-（ここで、RAは水素またはC1-C6アルキルである）であり；フェニル環Aにおいて：
【００３９】
S1が式(IB)（ここで、pは0または1であり、qは1であり、rは0または1であり、Z1は(i) -S-、-(C=O)-、-(C=S)-および-SO2-；(ii) -N(RA)C(=O)-*（ここで、*の印が付けられた結合手はQ1に結合している）ならびに(iii) どちらかの向きの-C(=O)O-、-C(=S)NRA-および-SO2NRA-からなる2価の基の群から選択され；Q1は、(i) 水素または(ii) 任意に置換されていてもよい炭素環式基もしくはヘテロ環式基である）の基であるか、または
【００４０】
S1が式(IB)（ここで、pは1であり、qは1であり、rは0または1であり、Z1は-O-であり、そしてQ1は(i) 水素；または(ii) 任意に置換されていてもよい炭素環式基；または(iii) 環窒素を介して-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-に結合していない、任意に置換されていてもよい5もしくは6個の環原子のヘテロ環である）の基であるか、または
【００４１】
S1が式(IB)（ここで、pは0または1であり、qは0であり、rは0または1であり、そしてQ1は(i) 水素；または(ii) 任意に置換されていてもよい炭素環式基；または(iii) 環窒素を介して-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-に結合していない、任意に置換されていてもよい5もしくは6個の環原子のヘテロ環である）の基である］のそれらを含む。
【００４２】
本発明は、インビトロまたはインビボでのHSP90活性の阻害用組成物の製造における、上記式(I)の化合物の使用も含む。
もう1つの広い観点において、本発明は、HSP90活性を阻害するために、上記式(I)の化合物の有効量を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物において該HSP90活性の阻害に応答する疾病の治療方法を提供する。
【００４３】
本発明のインビボにおける使用および方法は、免疫抑制のための、またはウイルス病、慢性関節リウマチ、喘息、多発性硬化症、I型糖尿病、狼瘡、乾癬および炎症性腸疾患のような炎症性疾患、嚢胞性線維症、糖尿病性網膜症、血管腫および子宮内膜症のような血管形成関連疾患の治療；または化学療法により誘発される毒性からの正常細胞の保護；または被アポトーシス不全が基礎的要因である疾病の治療；または心臓および脳のHsp70の上昇による低酸素−虚血性傷害からの保護；スクラピー／ＣＪＤ、ハンチントン病またはアルツハイマー病のための使用を含む、HSP90活性が関与する疾病の治療に適用できる。薬剤耐性真菌感染症の治療において、抗真菌剤との同時治療としての使用も指摘される。癌の治療のための使用が、特に指摘される。
【００４４】
本明細書中で用いられる「(Ca-Cb)アルキル」（ここで、aおよびbは整数である）の語は、a〜b個の炭素原子を有する直鎖状または分枝鎖状のアルキル基をいう。したがって、aが1でありbが6であるとき、この語は、例えばメチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、t-ブチル、n-ペンチルおよびn-ヘキシルを含む。
【００４５】
本明細書中で用いられる「2価の(Ca-Cb)アルキレン基」（ここで、aおよびbは整数である）の語は、a〜b個の炭素原子および2つの未結合原子価を有する飽和の炭化水素鎖をいう。
【００４６】
本明細書中で用いられる「（Ca-Cb）アルケニル」（ここで、aおよびbは整数である）の語は、a〜b個の炭素原子を有する直鎖状または分枝鎖状のアルケニル部分をいい、当てはまる場合には、ＥまたはＺの立体配置のどちらかの二重結合を少なくとも1つ有する。この語は、例えばビニル、アリル、1-および2-ブテニルならびに2-メチル-2-プロペニルを含む。
【００４７】
本明細書中で用いられる「2価の(Ca-Cb)アルケニレン基」の語は、a〜b個の炭素原子、少なくとも1つの二重結合および2つの未結合原子価を有する炭化水素鎖をいう。
【００４８】
本明細書中で用いられる「シクロアルキル」の語は、3〜8個の炭素原子を有する飽和炭素環式基をいい、例えばシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルを含む。
【００４９】
本明細書中で用いられる「シクロアルケニル」の語は、少なくも一つの二重結合を含む3〜8個の炭素原子を有する炭素環式基をいい、例えばシクロペンテニル、シクロヘキセニル、シクロヘプテニルおよびシクロオクテニルを含む。
【００５０】
本明細書中で用いられる「アリール」の語は、１、２または３環の炭素環式芳香族基をいう。そのような基の例は、フェニル、ビフェニルおよびナフチルである。
【００５１】
本明細書中で用いられる「炭素環式基」の語は、環原子が全て炭素である環基をいい、単環式アリール、シクロアルキルおよびシクロアルケニル基を含む。
【００５２】
本明細書中で用いられる「ヘテロアリール」の語は、Ｓ、ＮおよびＯから選択される1以上のヘテロ原子を含む１、２または３環式芳香族基をいう。そのような基の例は、チエニル、ベンゾチエニル、フリル、ベンゾフリル、ピロリル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、イソチアゾリル、ベンズイソチアゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、ベンズオキサゾリル、イソキサゾリル、ベンズイソキサゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、ベンゾトリアゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、インドリルおよびインダゾリルである。
【００５３】
本明細書中で用いられる非限定的な語「ヘテロ環式基」または「ヘテロ環システム」は、上で定義された「ヘテロアリール」を含み、特に、Ｓ、ＮおよびＯから選択される1以上のヘテロ原子を含む１、２または３環式の非芳香族基をいい、他の該基または単環の炭素環式基と共有結合している1以上の該ヘテロ原子を含む単環の非芳香族基からなる群をいう。そのような基の例は、ピロリル、フラニル、チエニル、ピペリジニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソキサゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、ピラゾリル、ピリジニル、ピロリジニル、ピリミジニル、モルホリニル、ピペラジニル、インドリル、モルホリニル、ベンゾフラニル、ピラニル、イソオキサゾリル、ベンズイミダゾリル、メチレンジオキシフェニル、エチレンジオキシフェニル、マレイミドおよびスクシンイミド基である。
【００５４】
用語が使用されている文脈中で、別の方法で特定されていなければ、本明細書中のいかなる部分で用いられている「置換された」の語は、例えば、(C1-C6)アルキル、(C1-C6)アルコキシ、ヒドロキシ、ヒドロキシ(C1-C6)アルキル、メルカプト、メルカプト(C1-C6)アルキル、(C1-C6)アルキルチオ、3〜6個の環炭素原子の単環の炭素環式基、5または6個の環原子の単環のヘテロ環式基、ハロ(フルオロおよびクロロを含む)、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、ニトリル(-CN)、オキソ、-COOH、-COORA、-CORA、-SO2RA、-CONH2、-SO2NH2、-CONHRA、-SO2NHRA、-CONRARB、-SO2NRARB、-NH2、-NHRA、-NRARB、-OCONH2、-OCONHRA、-OCONRARB、-NHCORA、-NHCOORA、-NRBCOORA、-NHSO2ORA、-NRBSO2ORA、-NHCONH2、-NRACONH2、-NHCONHRB、-NRACONHRB、-NHCONRARBまたは-NRACONRARB（ここで、RAおよびRBは独立して、1以上の窒素がフッ素で任意に置換されていてもよい(C1-C6)アルキル基であるか、またはRAおよびRBが同一の窒素に結合しているとき、その窒素と一緒になって、モルホリニル、ピぺリジニル、ピペラジニル、N-メチルピペラジニル、ピロリジニルまたは2-オキソ-ピロリジニル環のような環式アミノ環を形成し得る）から選択される少なくとも1つの置換基で置換されることを意味する。
【００５５】
任意の置換基がアルキル基を含む場合、該アルキル基は、1以上のフッ素、および／または3〜6個の環炭素原子の単環の炭素環式基、または5もしくは6個の環原子の単環のヘテロ環式基で置換され得る。任意の置換基が、3〜6個の環炭素原子の単環の炭素環式基か、または5もしくは6個の環原子の単環のヘテロ環式基であるかまたは含む場合、該環自身は、上記で挙げられた非環式の任意の置換基のいずれによって置換され得る。「任意の置換基」は前記の置換基群の1つであり得る。
【００５６】
本明細書中で用いられる「塩」の語は、塩基付加塩、酸付加塩および４級塩を含む。酸性である本発明の化合物は、例えばナトリウム水酸化物およびカリウム水酸化物のようなアルカリ金属水酸化物；例えばカルシウム水酸化物、バリウム水酸化物およびマグネシウム水酸化物のようなアルカリ土類金属水酸化物のような塩基と、また例えばN-エチルピペリジン、ジベンジルアミンなどの有機塩基と、医薬的または動物薬的に許容される塩を含む塩を形成することができる。
【００５７】
塩基性であるこれらの化合物(I)は、例えば塩酸もしくは臭化水素酸のようなハロゲン化水素酸、硫酸、硝酸またはリン酸などの無機酸、ならびに例えば酢酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、リンゴ酸、サリチル酸、クエン酸、メタンスルホン酸およびp-トルエンスルホン酸などの有機酸と、医薬的または動物薬的に許容される塩を含む塩を形成することができる。
【００５８】
適当な塩の総説には、StahlおよびWermuthによるHandbook of Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use (Wiley-VCH, Weinheim, ドイツ, 2002)が参照される。
【００５９】
本明細書中で用いられる「溶媒和物」の語は、本発明の化合物と医薬的に許容される1以上の溶媒分子、例えばエタノールの化学量論量とを含む分子複合体を意味する。「水和物」の語は、該溶媒が水のときに用いられる。
【００６０】
本発明に関する化合物は、不斉原子または回転制限の存在により、1以上の立体異性型で存在し得るし、各々のキラル中心でのＲまたはＳ立体化学を有する多くの立体異性体または各々のキラル軸でのＲまたはＳ立体化学を有するアトロプ異性体として存在することができる。本発明は、そのようなエナンチオマーおよびジアステレオマーならびにそれらの混合物の全てを含む。
【００６１】
式(I)の化合物のいわゆる「プロ-ドラッグ」も、本発明の範囲内である。したがって、それら自身では薬理活性をほとんど有しないかまたは薬理活性を有しないかもしれない式(I)の化合物のある誘導体は、体内または体表に投与されたとき、例えば加水分解により所期の活性を有する式(I)の化合物に変換され得る。そのような誘導体を「プロドラッグ」という。プロドラッグの使用のさらなる情報は、Pro-drugs as Novel Delivery Systems, 14巻, ACS Symposium Series (T. HiguchiおよびW. Stella)およびBioreversible Carriers in Drug Design, Pergamon Press, 1987 (編集者E. B. Roche, American Pharmaceutical Association)中に見出し得る。
【００６２】
本発明に基づくプロドラッグは、例えば、式(I)の化合物中に存在する適当な官能性を、例えば、H. BundgaardによるDesign of Prodrugs (Elsevier, 1985)に記載されたような「プロ-部分(pro-moieties)」として当業者に公知のある部分で交換することにより製造することができる。
【００６３】
式(I)の化合物の代謝物、すなわち薬剤の投与でインビボで形成される化合物も、本発明の範囲に含まれる。
代謝物のいくつかの例は、
(i)  式(I)の化合物がメチル基を含む場合、そのヒドロキシメチル誘導体 (-CH3 -> -CH2OH)；
(ii)  式(I)の化合物がアルコキシ基を含む場合、そのヒドロキシ誘導体 (-OR -> -OH)；
(iii)  式(I)の化合物が3級アミノ基を含む場合、その2級アミノ誘導体 (-NR1R2 -> -NHR1または-NHR2)；
(iv)  式(I)の化合物が2級アミノ基を含む場合、その1級誘導体 (-NHR1 -> -NH2)；
(v)  式(I)の化合物がフェニル部分を含む場合、そのフェノール誘導体 (-Ph -> -PhOH)；および
(vi)  式(I)の化合物がアミド基を含む場合、そのカルボン酸誘導体 (-CONH2 -> COOH)
である。
【００６４】
基R1
R1が式(IA)：
-X-Alk1-(Z)m-(Alk2)n-Q      (IA)
の基であるとき、
Xは-O-、-S-、-S(O)-、-SO2-または-NH-であってもよく。現在のところ、-O-および-S-が好ましく；
Zは、存在するとき、-O-、-S-、-(C=O)-、-(C=S)-、-S(O)-、-SO2-、-NRA-、またはどちらかの向きの-C(=O)O-、-C(=O)NRA-、-C(=S)NRA-、-SO2NRA-、-NRAC(=O)-もしくは-NRASO2-（ここで、RAは水素またはC1-C6アルキルである）であってもよく。現在のところ、-NRA-が好ましく；
【００６５】
Alk1(および存在するときAlk2)は、例えば-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH(CH3)CH2-または-CH2CH=CH-であってもよく；
mおよびnは独立して、0または1である。したがって、基(IA)の1つのクラスにおいて、mおよびnは共に0である。基(IA)のもう1つのクラスにおいて、mは1であり、nは0である。基(IA)のさらなるクラスにおいて、mは0であり、nは1であり;
【００６６】
Qは水素または任意に置換されていてもよい炭素環式基もしくはヘテロ環式基であってもよい。炭素環式基Qの例は、フェニル、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルを含む。ヘテロ環式基Qの例は、ピリジル、チエニルおよびフラニルのようなヘテロアリール基、ならびにピペリジニル、ピペラジニルおよびモルホリニルのような非芳香族へテロ環式基を含む。
【００６７】
現在のところ、Alk1、Alk2および(炭素環式またはヘテロ環式のとき)Qは無置換であるのが好ましい。しかしながら、Alk1、Alk2および(炭素環式またはヘテロ環式のとき)Q中に存在してもよい置換基の例は、メチル、エチル、n-もしくはイソプロピル、ビニル、アリル、メトキシ、エトキシ、n-プロピルオキシ、イソプロピルオキシ、ベンジルオキシ、アリルオキシ、シアノメトキシ、クロロ、ブロモ、シアノ、ホルミル、メチル-、エチル-もしくはn-プロピル-カルボニルオキシ、メチル-もしくはエチルアミノカルボニル、および式-O(CH2)aZ1（ここで、aは1、2または3であり、Z1は1級、2級、3級もしくは環状アミノ基、またはC1-C6アルコキシ基である）；または式-(Alk3)bZ1（ここで、Alk3は直鎖状もしくは分枝鎖状の(C1-C3)アルキレンであり、bは0または1であり、Z1は1級、2級、3級もしくは環状アミノ基、またはC1-C6アルコキシ基である）の基を含む。
【００６８】
本発明の化合物の1つのクラスにおいて、R1は、式-W-Alk5-B［ここで、Wは-O-または-S-であり、Alk5は、1以上の水素原子がフッ素原子で置換された、直鎖状もしくは分枝鎖状の2価のC1-C6アルキレン基であり、Bは水素、-NH2、-NHRA、NHRARB（ここで、RAおよびRBは独立して、水素、C1-C6アルキルまたは1以上の水素原子がフッ素原子で置換されたC1-C6アルキルであるか、またはRAおよびRBは、それが結合する窒素と一緒になって、飽和の5員もしくは6員のヘテロ環を形成する）である］の基である。例えば、-Alk5-は、-CH2CH2-または-CH2CH2CH2-であってもよい。また一例として、Bは、エチルアミノ、ジエチルアミノ、メチルアミノ、ジメチルアミノ、モルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、N-メチルピペラジニル、ピロリジニルまたは2-オキソ-ピロリジニルであってもよい。Bが水素である場合、R1の例は、メトキシ、エトキシ、メチルチオまたはエチルチオを含む。
【００６９】
基R2
現在のところ、R2は水素またはシアノ(-CN)であるのが好ましい。
環A
環Aは、アリールもしくはヘテロアリール環または環システム、例えばフェニル、チエニル、ベンゾチエニル、フリル、ベンゾフリル、ピロリル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、チアゾリル、ベンズチアゾリル、イソチアゾリル、ベンズイソチアゾリル、ピラゾリル、オキサゾリル、ベンゾオキサゾリル、イソオキサゾリル、ベンズイソオキサゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、ベンゾトリアゾリル、チアジアゾリル、オキサジアゾリル、ピリジニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、トリアジニル、インドリルまたはインダゾリルである。現在のところ、環Aはフェニルであるのが好ましい。
【００７０】
基R3およびR4
R3およびR4は独立して、水素、フルオロ、クロロ、ブロモ、シアノ(-CN)、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルキル、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルコキシ、-CH=CH2、-C≡CH、 シクロプロピルおよび-NH2から選択されるか、またはR3およびR4は一緒になって、環Aに縮合した炭素環またはヘテロ環、例えばベンズ-縮合環、メチレンジオキシ(-OCH2O-)またはエチレンジオキシ(-OCH2CH2O-)を表し、いずれにおいて、1以上の水素がフッ素で任意に置換されていてもよい。しかしながら、好ましくは、R3およびR4の少なくとも1つは、水素以外であるべきである。現在のところ、R3およびR4の1つもしくは両方が、フルオロ、クロロ、メチルまたはメトキシから選択される場合が好ましい。環Aがフェニルであるとき、R3およびR4の好ましい位置は、パラおよびオルト位である。
【００７１】
基S1
S1が水素以外であり、環Aがフェニルであるとき、現在のところ、S1が環のメタ位にあるのが好ましい。
本発明の化合物(I)の第1のサブクラスは、S1が水素、またはフルオロ、クロロ、ブロモ、シアノ(-CN)、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルキル、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルコキシ、-CH=CH2、-C≡CH、シクロプロピルおよび-NH2から選択される置換基であるか、またはS1およびR3、もしくはS1およびR4が一緒になって、1以上の水素がフッ素で任意に置換されていてもよい、メチレンジオキシ(-OCH2O-)もしくはエチレンジオキシ(-OCH2CH2O-)を表す。
【００７２】
本発明の化合物(I)の第2のサブクラスは、S1が式(IB)：
-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-Q1       (IB)
（式中、p、q、r、Alk3、Alk4、Z1およびQ1は、前記の式(I)に関して定義されているとおりである）
の基である。そのような化合物において、Alk3およびAlk4は、2価のC1-C3アルキレンもしくはC2-C3アルケニレンであり、それぞれ、フルオロ、クロロ、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルキル、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルコキシから選択される1または2個の置換基で任意に置換されていてもよい。存在するとき、基Alk3およびAlk4の例は、例えば-CH2-、-CH2CH2-、-CH2CH2CH2-、-CH(CH3)CH2-、-CH2CH(CH3)CH2-、-CH2CH=CH-；-CH(OCH3)CH2-および-CH2CH(OCH3)CH2-である。
【００７３】
本発明の化合物(I)のこの第2のサブクラスにおいて、p、q、r、Alk3、Alk4、Z1およびQ1からの5つの具体的な組合せ(a)〜(e)がある。
【００７４】
ケース(a)は、pが0または1であり、qが1であり、rが0または1であるときに生じる。ケース(a)において、Z1は、(i) -S-、-(C=O)-、-(C=S)-、-S(O)-および-SO2-、(ii) -N(RA)C(=O)-*（ここで、*の印が付けられた結合手はQ1に結合している）ならびに(iii) どちらかの向きの-C(=O)O-、-C(=S)NRA-および-SO2NRA-からなる2価の基の群から選択され；Q1は、(i) 水素もしくは任意の置換基；または(ii) 任意に置換されていてもよい炭素環式基もしくはヘテロ環式基；または(iii) 基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHまたは-O(C1-C3アルキル)であり、xおよびwは独立して、1、2または3である）である。
【００７５】
Z1中に存在し、水素以外であるとき、RAは、例えばメチル、エチル、n-もしくはイソ-プロピル、またはトリフルオロメチルであり得る。
水素以外のとき、Q1は、例えば、
1級、2級または3級アミノ置換基、例えば-NRARB（ここで、RAおよびRBは独立して、水素および1以上の水素がフッ素で任意に置換されていてもよいC1-C3アルキルである）、例えばメチルアミノ、ジメチルアミノ、エチルアミノ、ジエチルアミノ、n-もしくはイソ-プロピルアミノ、またはN-メチル-N-エチルアミノおよびN-(1,1,1-トリフルオロエチル)-N-エチルアミノ、
【００７６】
非アミノの任意の置換基、例えばクロロ、C1-C3アルコキシ、シアノもしくはアセチル；またはシクロプロピル、シクロペンチルもしくはシクロヘキシル基；
任意に置換されたフェニル基（例えばここで、任意の置換基は、シアノ(-CN)、フルオロ、クロロ、ブロモ、メチル、エチル、-OH、-CH2OH、-C(=O)NH2、-C(=O)H、-C(=O)CH3および-NH2から選択される）；
【００７７】
モルホリノ、ピペリジニル、ピペラジニルもしくはメチルピペリジニルのような環状アミノ基、または式(A)〜(D)：
【化３】
2009508837.tif 000005
のようなフルオロ置換環状アミノ基；
シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはノルボルニルのような飽和炭素環式基；
【００７８】
環Aの例として前で言及した、それらのヘテロアリール基のいずれかのようなヘテロ環式基、または式E：
【化４】
2009508837.tif 000006
（式中、Wは-CH2-、-O-、-S-または-NR9であり、R9は水素、メチル、エチルまたはn-もしくはイソ-プロピルである）
を有するような非芳香族へテロ環式基；
【００７９】
基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHまたは-OCH3であり、xおよびwは独立して、1、2または3である。そのような基は、ポリエーテル基 -O-(CH2)1-3OH、-O-(CH2)1-3O(C1-C3アルキル)、-O-(CH2)1-3-O-(CH2)1-3OHおよび-O-(CH2)1-3-O-(CH2)1-3O(C1-C3アルキル)を含む。）
であり得る。
【００８０】
ケース(b)は、pが1であり、qが1であり、rが0または1であり、Z1が-O-であるときに生じる。ケース(b)において、Q1は、(i) 水素、または窒素原子を介して-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-に結合していない任意の置換基；または(ii) 任意に置換されていてもよい炭素環式基；または(iii) 環窒素を介して-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-に結合していない、任意に置換されていてもよい5もしくは6個の環原子のヘテロ環；または(iv) 基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHまたは-O(C1-C3アルキル)であり、xおよびwは独立して、1、2または3である）である。
【００８１】
このケース(b)において、水素以外のとき、Q1は、例えば、
非アミノの任意の置換基、例えばクロロ、C1-C3アルコキシ、シアノもしくはアセチル；またはシクロプロピル、シクロペンチルもしくはシクロへキシル基；
任意に置換されたフェニル基（例えばここで、任意の置換基は、シアノ(-CN)、フルオロ、クロロ、ブロモ、メチル、エチル、-OH、-CH2OH、-C(=O)NH2、-C(=O)H、-C(=O)CH3および-NH2から選択される）；
シクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはノルボルニルのような、飽和炭素環式基；
【００８２】
環Aの例として前で言及した、それらのヘテロアリール基のいずれかのようなヘテロ環式基、または前で定義された式Eを有するような非芳香族へテロ環式基；または
基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHまたは-OCH3であり、xおよびwは独立して、1、2または3である。そのような基は、ポリエーテル基 -O-(CH2)1-3OH、-O-(CH2)1-3O(C1-C3アルキル)、-O-(CH2)1-3-O-(CH2)1-3OHおよび-O-(CH2)1-3-O-(CH2)1-3O(C1-C3アルキル)を含む。）
であり得る。
【００８３】
ケース(c)は、pが1であり、qが1であり、rが0または1であり、Z1が-NRA-または-C(=O)N(RA)-*（ここで、*の印が付けられた結合手はQ1に結合している）であるときに生じる。このケース(c)において、
水素以外であるとき、
RAは、例えばメチル、エチル、n-もしくはイソ-プロピル、またはトリフルオロメチルであってもよく；そして
【００８４】
Q1は、基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHまたは-O(C1-C3アルキル)であり、xおよびwは独立して、1、2または3である。そのような基は、ポリエーテル基 -O-(CH2)1-3OH、-O-(CH2)1-3O(C1-C3アルキル)、-O-(CH2)1-3-O-(CH2)1-3OHおよび-O-(CH2)1-3-O-(CH2)1-3O(C1-C3アルキル)を含む。）
である。
【００８５】
ケース(d)は、pが0であり、qが1であり、rが0または1であり、Z1が-O-または-NRA-であるときに生じる。このケース(d)において、Q1は、(i) 水素、または窒素原子を介して-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-に結合していない任意の置換基；または(ii) Q1およびRAは、それらが結合する窒素と一緒になって、任意に置換されていてもよい5もしくは6個の環原子のヘテロ環を形成するか；または(iii) 基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHまたは-OCH3であり、xおよびwは独立して、1、2または3である）である。このケース(d)において、水素以外のとき、RAは、例えばメチル、エチル、n-もしくはイソ-プロピル、またはトリフルオロメチルであり；そして、Q1は、例えば：
【００８６】
非アミノの任意の置換基、例えばクロロ、C1-C3アルコキシ、シアノもしくはアセチル；またはシクロプロピル、シクロペンチルもしくはシクロヘキシル基；
基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHまたは-OCH3であり、xおよびwは独立して、1、2または3である。そのような基は、ポリエーテル基 -O-(CH2)1-3OH、-O-(CH2)1-3O(C1-C3アルキル)、-O-(CH2)1-3-O-(CH2)1-3OHおよび-O-(CH2)1-3-O-(CH2)1-3O(C1-C3アルキル)を含む。）
である得るか、または
【００８７】
Q1およびRAは、それらが結合する窒素と一緒になって、任意に置換されていてもよい、5もしくは6個の環原子のヘテロ環、例えば、モルホリノ、ピペリジニル、ピペラジニルもしくはメチルピペリジニル、または式(A)〜(D)：
【化５】
2009508837.tif 000007
のような、フロオロ置換環状アミノ基を形成し得る。
【００８８】
ケース(e)は、pが0または1であり、qが0であり、rが0または1であるときに生じる。このケースにおいて、Q1は、(i) 水素、または窒素原子を介して-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-に結合していない任意の置換基；または(ii) 任意に置換されていてもよい炭素環式基；または(iii) 環窒素を介して-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-に結合していない、任意に置換されていてもよい、5もしくは6個の環原子のヘテロ環式基；または(iv) 基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHまたは-OCH3であり、xおよびwは独立して、1、2または3である）である。このケース(e)において、Q1は、例えば：
【００８９】
非アミノの任意の置換基、例えばクロロ、C1-C3アルコキシ、シアノもしくはアセチル；またはシクロプロピル、シクロペンチルもしくはシクロヘキシル基；
環Aの例として前で言及した、それらのヘテロアリール基のいずれかのヘテロ環式基、または前で定義された式Eを有する非芳香族へテロ環式基；または
基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHまたは-OCH3であり、xおよびwは独立して、1、2または3である。そのような基は、ポリエーテル基 -O-(CH2)1-3OH、-O-(CH2)1-3O(C1-C3アルキル)、-O-(CH2)1-3-O-(CH2)1-3OHおよび-O-(CH2)1-3-O-(CH2)1-3O(C1-C3アルキル)を含む。）
であり得る。
【００９０】
本発明の化合物が、環Aならびに置換基R3、R4およびS1を含む基が、式(IC)：
【化６】
2009508837.tif 000008
［式中、R3およびR4は前で定義され、述べられているとおりであり、S1は水素、もしくはフルオロ、クロロ、ブロモ、シアノ(-CN)、1以上のフッ素置換分で任意に置換されてもよいC1-C3アルキル、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルコキシ、-CH=CH2、-C≡CH、シクロプロピルおよび-NH2から選択される置換基であるか、またはS1およびR3、もしくはS1およびR4は一緒になって、それぞれ、1以上の水素がフッ素によって任意に置換されていてもよいメチレンジオキシ(-OCH2O-)もしくはエチレンジオキシ(-OCH2CH2O-)を表すか；または
【００９１】
S1は、式(IB)：
-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-Q1       (IB)
（式中、
p、qおよびrは独立して0または1であり；
Z1は-O-、-S-、-(C=O)-、-(C=S)-、-S(O)-、-SO2-、-NRA-、または、どちらかの向きの、-C(=O)N(RA)-もしくは-SO2NRA-であり；
【００９２】
Q1は、(i) 水素、または任意の置換基；または(ii) 任意に置換されていてもよい炭素環式基もしくはヘテロ環式基；または(iii) 基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHまたは-O(C1-C3アルキル)であり、 xおよびwは独立して1、2または3である）であり；
RAは、水素、または1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルキルであり；そして
Alk3およびAlk4は、それぞれ、フロオロ、クロロ、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルキル、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルコキシから選択される、1または2個の置換基で任意に置換されていてもよい、2価のC1-C3アルキレンもしくはC2-C3アルケニレン基である）の基である］
の基である、サブクラスを含むことは明らかであろう。
【００９３】
本発明の化合物の直ぐ前記のサブクラスにおいて、現在のところ、S1が環のメタ位にあるのが好ましい。
該前記のサブクラスにおいても、S1は、水素、またはフルオロ、クロロ、ブロモ、シアノ(-CN)、1以上のフッ素置換分で任意に置換されてもよいC1-C3アルキル、1以上のフッ素置換分で任意に置換されてもよいC1-C3アルコキシ、-CH=CH2、-C≡CH、シクロプロピルおよび-NH2から選択される置換基であってもよいか、またはS1およびR3、もしくはS1およびR4は一緒になって、それぞれ、1以上の水素がフッ素で任意に置換されていてもよいメチレンジオキシ(-OCH2O-)もしくはエチレンジオキシ(-OCH2CH2O-)を表してもよい。
【００９４】
あるいは、該前記のサブクラスにおいて、S1は式(IB)：
-(Alk3)p-(Z1)q-(Alk4)r-Q1       (IB)
［式中、
p、qおよびrは独立して、0または1であり;
Z1は、-O-、-S-、-(C=O)-、-(C=S)-、-S(O)-、-SO2-、-NRA-、または、どちらかの向きの-C(=O)N(RA)-もしくは-SO2NRA-であり; 
Q1は、(i) 水素、または任意の置換基；または(ii) 任意に置換されていてもよい炭素環式基もしくはヘテロ環式基；または(iii) 基-CH2[O(CH2)w]xZ2（ここで、Z2はH、-OHもしくは-O(C1-C3アルキル)（ここで、xおよびwは独立して、1、2または3である）であり；
【００９５】
RAは、水素または1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルキルであり；そして
Alk3およびAlk4は、それぞれ、フルオロ、クロロ、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルキル、1以上のフッ素置換分で任意に置換されていてもよいC1-C3アルコキシから選択される1または2個の置換基で任意に置換されていてもよい2価のC1-C3アルキレンもしくはC2-C3 アルケニレン基である］の基であってもよい。
【００９６】
上述の化合物のサブクラスにおいて、S1が式(IB)の基であるとき、そこのZ1、Q1、RA、Alk3およびAlk4は、前記の化合物(I)の、ケース(a)、(b)、(c)、(d)または(e)に関連して、定義され述べられたそれらの基または群のいずれかであってもよい。
【００９７】
本発明にかかわる具体的な化合物は、実施例のもの、特に上記の構造(III)を有する実施例の化合物を含む。
本件発明にかかわる化合物(I)の合成のためには、多数の合成戦略があるが、全て合成有機化学者に既知の公知の化学を基にする。従って、式(I)の化合物は、標準的な文献に記載され、当業者に周知の方法により合成することできる。典型的な文献源は、"Advanced organic chemistry"、第4版 (Wiley)、J March、"Comprehensive Organic Transformation"、第2版 (Wiley)、R.C. Larock、"Handbook of Heterocyclic Chemistry"、第2版 (Pergamon)、A.R. Katritzky、 "Synthesis"、"Acc. Chem. Res."、"Chem. Rev"中に見出されるような総説論文、あるいはオンラインの標準的文献調査によるかまたは"Chemical Abstracts"もしくは"Beilstein"のような2次情報源より特定された1次文献源である。そのような文献の方法は、ここの製造例の方法およびそれらに類似の方法を含む。
【００９８】
例えば、アリール置換基は、テトラヒドロピランで保護された2,6-ジクロロプリンと置換されたアリールボロン酸とのパラジウムで触媒されるクロスカップリング反応を用いて、プリン環システムの6位に選択的に導入することができ、好適な溶媒は、（限定されないが）DMF/H2Oまたは1,4-ジオキサンである。
【００９９】
【化７】
2009508837.tif 000009
【０１００】
本発明の化合物はHSP90の阻害剤であり、HSP90活性の阻害に応答する疾病、例えば癌；Ｃ型肝炎(HCV)のようなウイルス病(Waxman、2002)；一般に用いられるアゾール抗真菌剤（例えばフルコナゾーール）ならびにエキノカンジン類のような最新の抗真菌剤に対して既に耐性な真菌株を再感受性にすること（CowenおよびLindquist、Science、Vol 309巻、30 Sept 2005、2185-2189参照）；移植におけるような免疫抑制（Bijlmakers、2000およびYorgin、2000）；慢性関節リウマチ、喘息、多発性硬化症（ＭＳ）、I型糖尿病、狼瘡、乾癬および炎症性腸疾患のような抗炎症性疾患(Bucci、2000)；嚢胞性線維症(Fuller、2000)；血管形成関連疾患(Hur、2002およびKurebayashi、2001)；糖尿病性網膜症、血管腫、乾癬、子宮内膜症および腫瘍血管形成の治療に有用である。
【０１０１】
本発明のHsp90阻害剤は、また、化学療法により誘発される毒性から正常細胞を保護し、そして被アポトーシス不全が基礎的要因である疾病に有用である。そのようなHsp90阻害剤は、細胞ストレスの誘導または熱ショック蛋白質応答によって引き起こされる疾病、例えば、心臓(Hutter、1996およびTrost、1998)および脳(Plumier、1997およびRajder、2000)のHsp70の上昇による低酸素−虚血性傷害からの保護にも有用である。
【０１０２】
Hsp90阻害剤により誘発されるHsp70のレベルの上昇は、蛋白質の間違った折り畳みまたは凝集が主な原因である疾病、例えば、スクラピー／クロイツフェルト‐ヤコブ病（ＣＪＤ）、ハンチントン病およびアルツハイマー病(Sittler、2001；Trazelt、1995およびWinklhofer、2001)のような神経発生障害にも用いることができる。
【０１０３】
したがって、本発明は：
(i)上記の式(I)の化合物を医薬的または動物薬的に許容される担体とともに含む、医薬または動物薬組成物
(ii)インビトロおよびインビボでのHSP90活性の阻害用組成物の製造において、上記の式(I)の化合物の使用
(iii)HSP90活性を阻害するために、上記の式(I)の化合物の有効量を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物の該HSP90活性の阻害に応答する疾病または病状の治療方法
を含む。
【０１０４】
特定の患者に対する特定の投与量レベルは、用いられる特定化合物の活性、年齢、体重、身体全体の健康、性別、食事、投与時間、投与経路、排泄速度、薬の組合せ、治療を受ける特定の疾病の原因機序および重篤度を含む種々の要因に依存することが理解されるであろう。
一般的に、経口投与製剤の適切な投与量は、通常、1日当り１回、２回または３回で、0.1〜3000mgの範囲であるか、または点滴もしくは他の経路により投与される１日量に等しい量であろう。しかしながら、最適な投与量レベルおよび投与回数は、当該技術で慣例の臨床試験によって決定されるであろう。
【０１０５】
本発明に関する化合物は、それらの薬物動態の性質と合致した経路による投与を目的として製造される。経口投与可能な組成物は、錠剤、カプセル剤、散剤、顆粒剤、トローチ剤、経口用、局所用または無菌非経口用溶液もしくは懸濁液のような液もしくはゲル製剤の形態である。
経口投与のための錠剤およびカプセル剤は、単位投与量を含む形態であり、それは慣用の賦形剤：例えばシロップ、アラビアゴム、ゼラチン、ソルビトール、トラガカントガムまたはポリビニル−ピロリドンのような結合剤；例えばラクトース、砂糖、トウモロコシデンプン、リン酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシンのような充填剤；例えばステアリン酸マグネシウム、滑石、ポリエチレングリコールまたはシリカのような錠剤用滑沢剤；例えばバレイショデンプンのような崩壊剤、またはラウリル硫酸ナトリウムのような許容される湿潤剤を含んでいてもよい。錠剤は、普通の製薬の実務で周知の方法によりコーティングされてもよい。
【０１０６】
経口液剤は、例えば水性もしくは油性の懸濁液、溶液、乳液、シロップまたはエリキシルの形態であるか、または使用前に水もしくは他の適当な媒体で溶解する乾燥生成物の形態であってもよい。上記の液剤は、慣用の添加剤：例えばソルビトール、シロップ、メチルセルロース、グルコースシロップ、ゼラチン、硬化食用油脂のような懸濁剤；例えばレシチン、ソルビタンモノオレエートまたはアラビアゴムのような乳化剤；例えばアーモンド油、ヤシ油、グリセリン、プロピレングリコールまたはエチルアルコールのような油状エステルのような非水性媒体（食用油を含む）；例えばメチルもしくはプロピルp-ヒドロキシベンゾエートまたはソルビン酸のような保存剤、ならびに所望により慣用の芳香剤または着色剤を含んでいてもよい。
【０１０７】
皮膚への局所適用のために、医薬はクリーム、ローションまたは軟膏にされ得る。そのような医薬のために使用されるクリームもしくは軟膏の製剤化は、例えば英国薬局方のような製剤学の標準的な教科書に記載されているような、当該技術分野で周知慣用の製剤化である。
【０１０８】
活性成分は、無菌媒体中、非経口的にも投与され得る。用いられる媒体および濃度により、医薬は媒体に懸濁させるか、または溶解させることができる。好都合に、局所麻酔剤のような補助剤、保存剤および緩衝剤も媒体に溶解することができる。
【実施例】
【０１０９】
以下の実施例は、本発明の特定の化合物の製造および活性を示している。
【０１１０】
一般的手順
市販品から入手された全ての試薬は、さらなる精製をせずに用いられた。無水溶媒は市販品から得、さらに乾燥せずに用いられた。フラッシュクロマトグラフィーは、プレ-パックシリカゲルカートリッジ(Strata SI-1; 61Å, Phenomenex, Cheshire UKまたはIST Flash II, 54Å, Argonaut, Hengoed, UK)を用いて行なわれた。薄層クロマトグラフィーは、Merck Type 60 F254 シリカゲルで被覆された5×10 cmのプレートを用いて行なわれた。
【０１１１】
本発明の化合物は、4重極検出器と結合されたHewlett Packard 1100シリーズLC/MSD（イオン化モード：電子スプレーポジティブ；カラム：Phenomenex Luna 3u C18(2) 30×4.6 mm；緩衝液Aは、2.5 LのHPLCグレード水に1.93gの酢酸アンモニウムを溶解し、2 mLのギ酸を加えて調製した。緩衝液Bは、2.5 LのHPLCグレードアセトニトリルに132 mLの緩衝液Aを加え、2 mLのギ酸を加えて調製した。3.75分かけた溶出勾配  緩衝液A：緩衝液B  95:5〜5:95。流速＝2.0 mL/分）を用いるLC/MSにより特徴付けられた。
【０１１２】
核磁気共鳴(NMR)分析は、Brucker DPX-400 MHz NMRスペクトロメータを用いて行なわれた。スペクトルの基準は、溶媒の既知のケミカルシフトであった。プロトンNMRデータは次のとおり報告される：ppmでのケミカルシフト(δ)、多重度(s = シングレット、d = ダブレット、t = トリプレット、q = カルテット、p = ペンテット, m = マルチプレット、dd = ダブレット オブ ダブレット、br = ブロード)、カップリング定数、積分。
【０１１３】
本発明のいくつかの化合物は、分取(preparative)HPLCにより精製された。分取HPLC精製は、UVダイオード アレー検出(210〜400 nm)および質量-指向の回収を用いて20 mL 分-1 の流速で稼動する、PhenomenexからのGemini(登録商標) 5μM C18(2)、100 mm × 20 mm i.d. カラムを有するWaters FractionLynx MS Autopurificationシステムで行なわれた。各化合物に用いられた勾配は、表1に示される。
【０１１４】
pH 4で：溶媒A：HPLCグレード水＋10mM 酢酸アンモニウム＋0.08% v/v ギ酸
溶媒B：95% v/v HPLCグレード アセトニトリル＋5% v/v 溶媒A＋0.08% v/v ギ酸
pH 9で：溶媒A：HPLCグレード水＋10 mM 酢酸アンモニウム＋0.08% v/v アンモニア溶液
溶媒B：95% v/v HPLCグレード アセトニトリル＋5% v/v 溶媒A＋0.08% v/v アンモニア溶液
【０１１５】
質量スペクトロメータは、150〜1000の分子量スキャン範囲で、ポジティブまたはネガティブイオン電子スプレーイオン化モードで作動する、Waters Micromass ZQ2000スペクトロメータであった。
【０１１６】
表１  分取HPLC勾配
【表１】
2009508837.tif 000010
【０１１７】
IUPAC化学名は、AutoNom Standardを用いて作成した。
本発明のいくつかの化合物は、（一例として）スキーム1に概略されるルートにしたがって作ることができる。実験方法、試薬および生成物の単離方法は、有機合成の当業者に知られているであろう。その他の方法も用いることができることは理解される。
【０１１８】
スキーム1
【化８】
2009508837.tif 000011
【０１１９】
本発明のいくつかの化合物は、スキーム2に概略されるルートにしたがって作ることができる。
スキーム2
【化９】
2009508837.tif 000012
【０１２０】
実施例1
2-クロロ-6-(2,4-ジクロロ-フェニル)-9H-プリン
【化１０】
2009508837.tif 000013
【０１２１】
工程1
2,6-ジクロロ-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン
【化１１】
2009508837.tif 000014
【０１２２】
乾燥酢酸エチル(25mL)に、50℃で、2,6-ジクロロプリン(3g、16 mmol)、次いでp-トルエンスルホン酸(43mg、0.226 mmol)を加えた。得られた溶液を激しく撹拌し、3,4-ジヒドロ-2H-ピラン(1.63mL、17.9 mmol)を5〜10分間かけて滴下した。これを50〜60℃で1時間撹拌し、次いで放置して室温まで冷却した。水酸化アンモニア(2mL)を加え、溶液を更に5分間撹拌した後、水(2回)で抽出し、酢酸エチル層をMgSO4で乾燥し、真空下に除去して黄白色の固体を得た。この粗生成物を熱酢酸エチルから再結晶するか、または沸騰ヘキサンに10分間懸濁して濾過した。
3.191g、収率73%
LC-MS保持時間：2.120分；[M+H]+ = 191, 189 (運転時間3.75分)
【０１２３】
工程2
2-クロロ-6-(2,4-ジクロロ-フェニル)-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン
【化１２】
2009508837.tif 000015
【０１２４】
DMF(4mL)中の2,6-ジクロロ-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン(150mg、0.55 mmol)に、2,4-ジクロロフェニルボロン酸(115mg、0.605 mmol)および炭酸カリウム(228mg、1.65 mmol)を加えた。この溶液に窒素気流を5分以上バブルすることにより脱気した。テラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(0)(触媒量)を加え、混合物をさらに1分間脱気し、次いで窒素下、100℃で14時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、飽和食塩水を加えた。有機物を酢酸エチル(3回)で抽出し、合わせた有機相をMgSO4で乾燥し、真空下に濃縮した。次いで、これをDCM〜6%メタノール/DCMで溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、よりよい条件はヘキサン〜50%酢酸エチル/ヘキサンであることを見出した。
LC-MS保持時間：2.398分  [M+H]+ = 383 + 385および299 + 301(運転時間3.75分)
【０１２５】
工程3
2-クロロ-6-(2,4-ジクロロ-フェニル)-9H-プリン
【化１３】
2009508837.tif 000016
【０１２６】
1,4-ジオキサン(2mL)中の2-クロロ-6-(2,4-ジクロロ-フェニル)-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリンに、1,4-ジオキサン中の4M HCl(2mL)を加えた。これを15分間撹拌した後、溶媒を蒸発し、残渣をpH 4で分取HPLCにより精製した。
あるいは、この化合物は、2-クロロ-6-(2,4-ジクロロ-フェニル)-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリンのメタノール溶液を、イオン交換カラム(IST SCX II、Argonaut、Hengoed、UK)に適用し、脱保護された生成物を得るためにメタノール、次にメタノール中の7Mアンモニアで溶出し、真空下にフラクション溶媒を除去して製造され得る。
LC-MS保持時間1.889  [M+H]+ =  301 + 299(運転時間3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「A」を有する。
【０１２７】
実施例2
6-(5-ベンジルオキシ-2,4-ジクロロ-フェニル)-2-クロロ-9H-プリン
【化１４】
2009508837.tif 000017
【０１２８】
工程1
1-ベンジルオキシ-2,4-ジクロロ-5-ニトロ-ベンゼン
【化１５】
2009508837.tif 000018
【０１２９】
アセトン中の2,4-ジクロロ-5-ニトロフェノール(Lancaster Synthesis、Morecambe、Lancashire、UK)(15.6g、75mmol)の溶液に炭酸カリウム(12g、87mmol)に加えた。ベンジルブロマイド(9ml、76mmol)を加え、懸濁液を75℃(油浴温度)で〜3時間加熱した。得られた懸濁液を放置して冷却し、水(500ml)を加え、混合物をジクロロメタン(2×200ml)で抽出した。合わせた抽出物を水酸化ナトリルム水溶液(150ml、2M)、水(2×200ml)および飽和食塩水(150ml)で洗浄した。その溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、黄白色の固体(21.5g、96%)まで濃縮した。
Rf 0.73 CH2Cl2 (SiO2)
LC保持時間 2.915分；[M+H]+  非イオン化(運転時間 3.75分)
【０１３０】
工程2
5-ベンジルオキシ-2,4-ジクロロ-フェニルアミン
【化１６】
2009508837.tif 000019
【０１３１】
酢酸(300ml)/水(150ml)中の1-ベンジルオキシ-2,4-ジクロロ-5-ニトロ-ベンゼン(21.5g、72mmol)懸濁液に、鉄粉(21g、376mmol)を加え、混合物を85℃(油浴温度)で〜90分間加熱した。得られた懸濁液を濾過した。濾液を放置して冷却し、水(750ml)を加え、混合物をジクロロメタン(3×150ml)で抽出した。合わせた抽出物を水酸化ナトリウム水溶液(300ml、2M)、水(2×500ml)および飽和食塩水(200ml)で洗浄した。その溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、濾液溶媒を真空下に除去し、淡褐色固体(18.6g、96%)として生成物を得た。
Rf 0.57 CH2Cl2 (SiO2)
LC保持時間：2.792分；[M+H]+  = 270 /268(運転時間 3.75分)
【０１３２】
工程3
1-ベンジルオキシ-2,4-ジクロロ-5-ヨード-ベンゼン
【化１７】
2009508837.tif 000020
【０１３３】
酢酸(240ml)中の5-ベンジルオキシ-2,4-ジクロロ-フェニルアミン(16.2g、60mmol)の溶液に、塩酸(60ml、6M)を加え、得られた懸濁液を冷却(氷/水/食塩)した。亜硝酸ナトリウム水溶液(40ml中に4.8g、69.5mmol)をゆっくりと加えた(温度＜5℃を保って)。滴下終了後、得られた溶液を〜30分間撹拌した。
得られた溶液を、水(200ml)中のヨウ化カリウム(20g、120mmol)およびヨウ素(4g、16mmol)の溶液に注ぎ、混合物を〜90分間撹拌した。水(800ml)を加え、混合物をジクロロメタン(3×250ml)で抽出した。合わせた抽出物をチオ硫酸ナトリウム水溶液(2×150ml、10%)、水酸化ナトリウム水溶液(250ml、2M)、水(2×250ml)および飽和食塩水(200ml)で洗浄した。溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、放置すると固化する淡褐色の油状物まで濃縮した。(20.6g、90%)
Rf 0.82 CH2Cl2 (SiO2)
LC保持時間：3.084分；[M+H]+  非イオン化(運転時間 3.75分)
【０１３４】
工程4
6-(5-ベンジルオキシ-2,4-ジクロロ-フェニル)-2クロロ-9H-プリン
【化１８】
2009508837.tif 000021
【０１３５】
窒素雰囲気下、DMF(20 mL)中の1-ベンジルオキシ-2,4-ジクロロ-5-ヨード-ベンゼン(180 mg、1当量)およびビス(ピナコラート)ジボロン(132 mg、1.1当量)の溶液に、酢酸カリウム(140 mg、3当量)を加えた。酢酸パラジウム(5 モル%)を加え、混合物を油浴温度90℃で18時間加熱した。得られた溶液の溶媒を真空下に除去し、残渣を酢酸エチル中に採取し、その溶液を水(3×)および飽和食塩水(1×)で洗浄した。その溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、淡褐色のガムまで濃縮した。
【０１３６】
残渣を1,4-ジオキサン(20 mL)中に採取し、窒素雰囲気下に2,6-ジクロロ-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン(117 mg、0.9当量)およびリン酸カリウム水溶液(2ml、2M)を加えた。ジクロロ ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)(触媒量)を加え、混合物を油浴温度100℃で〜3時間加熱した。混合物を放置して冷却し、酢酸エチル(50ml)を加えた。混合物を飽和食塩水(50ml)で洗浄し、褐色の油状物まで蒸発した。これをメタノールに溶解し、イオン交換カラム(IST SCX II、Argonaut、Hengoed、UK)に適用し、メタノール、次いでメタノール中の7Mアンモニアで溶出し、真空下にフラクション溶媒を除去後、脱保護された生成物を得た。粗生成物を分取HPLC(pH 4)で精製し、生成物を固体として得た。
LC-MS保持時間：2.279分；[M+H]+ =  407 + 405 (運転時間 3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「A」を有する。
【０１３７】
次の表(表2)内に含まれる化合物は、実施例1の方法およびスキーム1に概略したルートにより製造された。後記の蛍光偏光分析での各実施例化合物の活性を、カラム「HSP90 IC50」中に示す。
【０１３８】
【表２−１】
2009508837.tif 000022
【０１３９】
【表２−２】
2009508837.tif 000023
【０１４０】
実施例12
6-(5-ベンジルオキシ-2,4-ジクロロ-フェニル)-2-メチルスルファニル-9H-プリン
【化１９】
2009508837.tif 000024
【０１４１】
DMF(3 mL)中の6-(5-ベンジルオキシ-2,4-ジクロロ-フェニル)-2-クロロ-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン(工程4、実施例2)にナトリウム メタンチオール(1.2当量)を加え、反応混合物をSmithマイクロウエーブ合成装置中、120℃で10分間加熱した。反応混合物(20 mL)に飽和重炭酸ナトリウム水溶液を加え、有機物を酢酸エチル(2×25 mL)で抽出し、次いで飽和食塩水(20 mL)で洗浄した。該プリン体は、メタンスルファニル生成物のメタノール溶液をイオン交換カラム(IST SCX II、Argonaut、Hengoed、UK)に適用することにより脱保護され、メタノール、次いでメタノール中の7Mアンモニアで溶出し、真空下にフラクション溶媒を蒸発後、脱保護された生成物を得た。
LC-MS保持時間：2.353分；[M+H]+ =  419 + 417 (運転時間 3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「A」を有する。
【０１４２】
実施例13
6-(4-シアノ-フェニル)-2-メチルスルファニル-9H-プリン
【化２０】
2009508837.tif 000025
【０１４３】
この化合物は、実施例12の方法により製造された。
LC-MS保持時間 1.939分 [M+H]+ =  268.1 (運転時間3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「A」を有する。
【０１４４】
実施例14
6-(2,4-ジクロロ-フェニル)-2-メチルスルファニル-9H-プリン
【化２１】
2009508837.tif 000026
【０１４５】
この化合物は、2-クロロ-6-(2,4-ジクロロ-フェニル)-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン(実施例1)から、実施例12の方法により製造された。
LC-MS保持時間：2.242分；[M+H]+ =  313, 311 (運転時間3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「A」を有する。
【０１４６】
実施例15
6-(2-メチル-4-フルオロ-フェニル)-2-メチルスルファニル-9H-プリン
【化２２】
2009508837.tif 000027
【０１４７】
この化合物は実施例12の方法、ならびにスキーム1およびスキーム2に概略したルートにより製造された。
LC-MS保持時間 2.109分；[M+H]+ =  275 (運転時間3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「A」を有する。
【０１４８】
次の表(表3)内に含まれる化合物は、実施例1および実施例2の方法ならびにスキーム1およびスキーム2に概略したルートにより製造された。適当なボロン酸と硫黄ベースの求核試薬が各実施例に対して用いられ、それらは当業者に知られているであろう。後記の蛍光偏光分析における各実施例化合物の活性をカラム「HSP90 IC50」中に示す。
【０１４９】
【表３−１】
2009508837.tif 000028
【０１５０】
【表３−２】
2009508837.tif 000029
【０１５１】
実施例23
6-(2,4-ジクロロ-フェニル)-2-メトキシ-9H-プリン
【化２３】
2009508837.tif 000030
【０１５２】
2-クロロ-6-(2,4-ジクロロ-フェニル)-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン(実施例1、工程2)(0.070g、0.183 mmol)をDMF(2 ml)に溶解し、ナトリウムメトキシド(0.013 g、0.237 mmol)を加えた。反応混合物をバイアル中に密封し、マイクロウエーブ合成装置中、125℃で1時間加熱した。反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液中に注ぎ、酢酸エチルで抽出した。有機相を飽和NaCl溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥した。混合物を濾過し、濾液溶媒を真空下に蒸発した。粗生成物をSiO2(ヘキサン中0〜10%酢酸エチル)でのフラッシュクロマトグラフィーで精製した。THP保護基は、2-メトキシ-6-(2,4-ジクロロ-フェニル)-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリンのメタノール溶液を、イオン交換カラム(IST SCX II、Argonaut、Hengoed、UK)に適用することにより除去され、メタノール、次いでメタノール中の7Mアンモニアで溶出すし、真空下にフラクション溶媒の除去後、脱保護された生成物を得た。
LC-MS保持時間 2.041分；[M+H]+ =  297, 295 (運転時間 3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「A」を有する。
【０１５３】
実施例24
｛4-[2,4-ジクロロ-5-(2-クロロ-9H-プリン-6-イル)-フェノキシメチル]-ベンジル｝-ジエチル-アミン
【化２４】
2009508837.tif 000031
【０１５４】
工程1
4-(2,4-ジクロロ-5-ニトロ-フェノキシメチル)-安息香酸メチルエステル
【化２５】
2009508837.tif 000032
【０１５５】
アセトン中の2,4-ジクロロ-5-ニトロフェノールの溶液に、炭酸カリウムを加えた。(4-ブロモメチル)安息香酸メチルを加え、懸濁液を75℃で〜3時間加熱した。得られた懸濁液を放置して冷却し、水を加え、混合物をジクロロメタンで抽出した。合わせた抽出物を水酸化ナトリウム水溶液、水および飽和食塩水で洗浄した。溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、黄白色の固体まで濃縮した。
【０１５６】
工程2
4-(5-アミノ-2,4-ジクロロ-フェノキシメチル)-安息香酸メチルエステル
【化２６】
2009508837.tif 000033
標記化合物は、実施例2の工程2の方法により作られた。
【０１５７】
工程3
4-(2,4-ジクロロ-5-ヨード-フェノキシメチル)-安息香酸メチルエステル
【化２７】
2009508837.tif 000034
この化合物は、実施例2の工程3の方法により作られた。
【０１５８】
工程4
[4-(2,4-ジクロロ-5-ヨード-フェノキシメチル)-フェニル]-メタノール
【化２８】
2009508837.tif 000035
【０１５９】
窒素雰囲気下、ジイソブチルアルミニウムハイドライド溶液(ジクロロメタン中1M)を、ジクロロメタン中の4-(2,4-ジクロロ-5-ヨード-フェノキシメチル)-安息香酸メチルエステルの溶液に-78℃で加えた。溶液を-78℃で〜60分間、室温で〜2時間撹拌した。得られた溶液を-78℃に冷却し、メタノールを加えた。溶液を室温で〜60分間撹拌した。ジクロロメタンを加え、溶液を水および飽和食塩水で洗浄した。溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、褐色の固体まで濃縮した。粗生成物を、ジクロロメタンで溶出するシリカのカラムクロマトグラフィーで精製し、オフホワイトの固体を得た。
【０１６０】
工程5
4-(2,4-ジクロロ-5-ヨード-フェノキシメチル)-ベンズアルデヒド
【化２９】
2009508837.tif 000036
【０１６１】
エチレングリコールジメチルエーテル中の[4-(2,4-ジクロロ-5-ヨード-フェノキシメチル)-フェニル]-メタノールの溶液に、二酸化マンガンを加え、その懸濁液を〜18時間撹拌した。得られた懸濁液を濾過し、濾液を濃縮し、オフホワイトの固体を得た。
【０１６２】
工程6
｛4-[2,4-ジクロロ-5-(2-クロロ-9H-プリン-6-イル)-フェノキシメチル]-ベンジル｝-ジエチル-アミン
【化３０】
2009508837.tif 000037
【０１６３】
窒素雰囲気下、DMF中の4-(2,4-ジクロロ-5-ヨード-フェノキシメチル)-ベンズアルデヒドおよびビス(ピナコラート)ジボロンの溶液に、酢酸カリウムを加えた。酢酸パラジウム(II)を加え、混合物を90℃で〜18時間加熱した。得られた溶液を濃縮し、残渣を酢酸エチル中に採取し、溶液を水および飽和食塩水で洗浄した。溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、淡褐色のガム状になるまで濃縮した。
【０１６４】
残渣を1,4-ジオキサン中に採取し、窒素雰囲気下、2,6-ジクロロ-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリンおよびリン酸カリウム水溶液を加えた。ジクロロ ビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)(触媒量)を加え、混合物を100℃で、〜3時間加熱した。混合物を放置して冷却し、酢酸エチルを加えた。混合物を飽和食塩水で洗浄した。溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、オレンジ色/褐色のガムまで濃縮した。粗生成物を、酢酸エチルとヘキサンの混液で溶出するシリカのカラムクロマトグラフィーで精製し、生成物をオフホワイトの固体として得た。
【０１６５】
ジクロロメタン中の4-｛2,4-ジクロロ-5-[2-クロロ-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン-6-イル]-フェノキシメチル｝-ベンズアルデヒドの溶液に、ジエチルアミンを加え、その溶液を撹拌した。ナトリウム トリアセトキシボロハイドライドを加え、溶液を〜72時間撹拌した。ジクロロメタンを加え、溶液を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液、水および飽和食塩水で洗浄した。溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、無色のガムまで濃縮した。粗生成物をジクロロメタンとメタノールの混液およびメタノールとジイソプロピルエチルアミンとの混液で溶出する、イオン交換樹脂のカラムクロマトグラフィーで精製した。粗生成物を分取HPLCで精製し、生成物をオフホワイトの固体として得た。
LC保持時間 1.816分；[M+H]+ = 490.05/492.1 (運転時間 3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「A」を有する。
【０１６６】
実施例25
6-(2,4-ジクロロ-フェニル)-2-メタンスルホニル-7H-プリン
【化３１】
2009508837.tif 000038
【０１６７】
6-(2,4-ジクロロフェニル)-2-メチルスルファニル-9-(テトラヒドロピラン-2-イル)-9H-プリン(実施例1、工程2)(0.14mmol)をジクロロメタンに溶解し、0℃に冷却した。これに、メタ-クロロ過安息香酸(0.29mmol)を少しずつ加え、次いでこれを1.5時間撹拌し、その後、飽和重炭酸ナトリウム溶液(4 mL)で反応をクエチし、有機物を酢酸エチルで2回抽出し、飽和食塩水で洗浄し、MgSO4で乾燥した。これを、ヘキサン〜1:1 酢酸エチル/ヘキサンで溶出するフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製した。生成物は、SCX-IIトシル酸カラム(Phenomenex)を用いて脱保護され、メタノールで洗浄し、7Nのメタノール性アンモニアで脱保護された生成物を遊離した。これをpH 4で分取HPLCによりさらに精製した。
LC-MS保持時間：1.964分；[M+H]+ = 343 + 345 (運転時間 3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「B」を有する。
【０１６８】
実施例26
6-(2,4-ジクロロ-フェニル)-2-メタンスルフィニル-7H-プリン
【化３２】
2009508837.tif 000039
【０１６９】
6-(2,4-ジクロロフェニル)-2-メチルスルファニル-9-(テトラヒドロピラン-2-イル)-9H-プリン(0.3mmol)(実施例1、工程2)をジクロロメタンに溶解し、0℃に冷却した。これに、メタ-クロロ過安息香酸(0.24mmol)を加えた。これを10分間撹拌し、次いで、飽和重炭酸ナトリウム溶液(4mL)でクエンチし、有機物を酢酸エチルで2回抽出し、飽和食塩溶液で洗浄し、MgSO4で乾燥した。生成物は、SCX-IIトシル酸カラムを用いて脱保護され、メタノールで洗浄し、7Nのメタノール性アンモニアで脱保護された生成物を遊離した。これをpH 4で分取HPLCによりさらに精製した。
LC-MS保持時間 1.808分；[M+H]+ = 327 + 329 (運転時間 3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「B」を有する。
【０１７０】
実施例27
4-クロロ-5-(2-クロロ-9H-プリン-6-イル)-2-メチル-フェノール
【化３３】
2009508837.tif 000040
【０１７１】
工程1
炭酸4-クロロ-2-メチル-フェニルエステルエチルエステル
【化３４】
2009508837.tif 000041
【０１７２】
ジクロロメタン(35 ml)中の4-クロロ-2-メチルフェノール(5.0g)の溶液に、ピリジン(4.22 ml)を加えた。混合物を0℃に冷却し、エチルクロロホルメート(3.69 ml)を滴下して加えた。反応混合物を室温に戻し、3時間撹拌した(白色の沈殿が生じた)。2N HCl(25 ml)を加え、有機相を分離した。有機相を硫酸銅溶液、次いで、飽和NaCl溶液で洗浄し、MgSO4で乾燥した。
混合物を濾過し、濾液溶媒を真空下に除去し、透明で無色の油状物(7.19 g、96%)を得た。
Rf = 0.47 (1:9 EtOAc：ヘキサン)
【０１７３】
工程2
炭酸4-クロロ-2-メチル-5-ニトロ-フェニルエステルエチルエステル
【化３５】
2009508837.tif 000042
【０１７４】
氷浴で冷却した濃硫酸に、濃硝酸(11 ml)を注意深く加え、混合物を0℃で撹拌した。炭酸4-クロロ-2-メチル-フェニルエステルエチルエステルを滴下して加え、黄色の溶液を得た。冷却浴を取り去り、混合物を4時間撹拌し、次いで、氷-水混合物にゆっくりと注いだ。混合物をDCM(3×20 ml)で抽出し、合わせた有機物を2N NaOH溶液、次いで飽和NaCl(aq)溶液で洗浄し、MgSO4で乾燥した。混合物を濾過し、濾液溶媒を真空下に除去し、黄色の油状物(7.23 g、84%)を得た。
【０１７５】
工程3
炭酸5-アミノ-4-クロロ-2-メチル-フェニルエステルエチルエステル
【化３６】
2009508837.tif 000043
【０１７６】
酢酸(75 ml)および水(37 ml)中の炭酸4-クロロ-2-メチル-5-ニトロ-フェニルエステルエチルエステル(7.23 g)の懸濁液に鉄粉(7.8 g)を加えた。反応混合物を85℃で90分間加熱した。熱懸濁液をセライトのパッドで濾過し、濾液を放置して冷却した。水を加え、混合物をジクロロメタンで抽出した。有機相を2N NaOH溶液(aq)、次いで飽和NaCl(aq)溶液で洗浄し、MgSO4で乾燥した。混合物を濾過し、濾液溶媒を真空下に除去し、生成物を褐色の油状物(5.448 g、85%)として得た。
【０１７７】
工程4
炭酸4-クロロ-2-メチル-5-ヨード-フェニルエステルエチルエステル
【化３７】
2009508837.tif 000044
【０１７８】
炭酸5-アミノ-4-クロロ-2-メチル-フェニルエステルエチルエステル(5.48 g)を酢酸(45 m)に溶解し、混合物を0℃に冷却した。6N HCl(15 ml)を加え、懸濁液を得た。この懸濁液に、内温が5℃未満になるように亜硝酸ナトリウム溶液(16.6 mlの水に1.96 g)を滴下して加えた。添加が終了後、混合物を0℃で30分間撹拌し、次いで、ヨウ化カリウム(5.5 g)およびヨウ素(1.8 g)の水溶液に注いだ。混合物を室温で90分間撹拌した。水(40 ml)を加え、混合物をジクロロメタン(3回)で抽出した。合わせた有機物をチオ硫酸ナトリウム溶液(10% w/v)、次いで飽和NaCl(aq)溶液で洗浄し、MgSO4で乾燥した。混合物を濾過し、濾液溶媒を真空下に除去し、生成物を褐色の固体(6.67 g、83%)として得た。
【０１７９】
工程5
炭酸4-クロロ-2-メチル-5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル-フェニルエステルエチルエステル
【化３８】
2009508837.tif 000045
【０１８０】
炭酸4-クロロ-2-メチル-5-ヨード-フェニルエステルエチルエステル(6.67 g)をDMF(40 ml)に溶解し、ビス-(ピナコラート)ジボロン(5.23 g)、続いて酢酸カリウム(5.77 g)を加えた。この混合物に窒素ガスを10分間バブリングすることにより、この混合物を脱気した。酢酸パラジウム(II)を加え、混合物を窒素雰囲気下、90℃で18時間加熱した。次いで、反応混合物を放置して冷却し、酢酸エチルで希釈し、セライトのパッドで濾過し、有機濾液を水(2回)で洗浄し、MgSO4で乾燥した。混合物を濾過し、濾液溶媒を真空下に除去し、生成物を褐色の固体として得た。
【０１８１】
工程6
4-クロロ-5-[2-クロロ-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン-6-イル]-2-メチル-フェノール
【化３９】
2009508837.tif 000046
【０１８２】
炭酸4-クロロ-2-メチル-5-(4,4,5,5-テトラメチル-[1,3,2]ジオキサボロラン-2-イル-フェニルエステルエチルエステルをジオキサン(20 ml)に溶解し、K3PO4(1.14 g、5.4 mlの水で)を加えた。この混合物に窒素ガスを10分間バブリングすることにより、この混合物を脱気した。ジクロロビス(トリフェニル-ホスフィン)パラジウム(II)(40 mg)を加え、窒素雰囲気下、混合物を100℃で7時間加熱した。1,1'-ビス(ジ-tert-ブチル)フェロセンパラジウム(II)ジクロライド(触媒量)を加え、引き続き24時間以上加熱した。反応混合物を放置して室温に冷却し、次いで、酢酸エチルで希釈した。有機相を飽和NaCl(aq)溶液で洗浄し、MgSO4で乾燥した。混合物を濾過し、濾液溶媒を真空下に除去し、生成物を油状物として得た。粗生成物をヘキサン中の0〜60%酢酸エチル(勾配)で溶出するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、標記化合物をオレンジ色の油状物として得た。
【０１８３】
工程7
4-クロロ-5-(2-クロロ-9H-プリン-6-イル)-2-メチル-フェノール
【化４０】
2009508837.tif 000047
【０１８４】
4-クロロ-5-[2-クロロ-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン-6-イル]-2-メチル-フェノールを、実施例1の工程3に概略したSCX IIの方法を用いて脱保護した。
LC-MS保持時間 1.919分；[M+H]+ = 297, 295 (運転時間 3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「A」を有する。
【０１８５】
実施例28
｛2-[4-クロロ-5-(2-クロロ-9H-プリン-6-イル)-2-メチル-フェノキシ]-エチル｝-ジエチル-アミン
【化４１】
2009508837.tif 000048
【０１８６】
工程1
(2-｛4-クロロ-5-[2-クロロ-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン-6-イル]-2-メチル-フェノキシ｝-エチル)-ジエチル-アミン
【化４２】
2009508837.tif 000049
【０１８７】
窒素雰囲気下、4-クロロ-5-[2-クロロ-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン-6-イル]-2-メチル-フェノール(200 mg)をTHF(10 ml)に溶解し、トリフェニルホスフィン(208 mg)、続いて2-(ジエチルアミノ)エタノール(0.084 ml)を加えた。ジイソプロピルアゾジカルボキシレート(0.155 ml)を加え、反応混合物を室温で3時間撹拌した。水を加え、混合物を酢酸エチル(3回)で抽出し、合わせた有機物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、次いで、飽和NaCl(aq)溶液で洗浄し、MgSO4で乾燥した。混合物を濾過し、濾液溶媒を真空下に除去し、生成物を油状物として得た。粗生成物を、ジクロロメタン中の0〜8%メタノール(勾配)で溶出するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで精製し、標記化合物を油状物として得た。
【０１８８】
工程2
｛2-[4-クロロ-5-(2-クロロ-9H-プリン-6-イル)-2-メチル-フェノキシ]-エチル｝-ジエチル-アミン
【化４３】
2009508837.tif 000050
【０１８９】
次いで、(2-｛4-クロロ-5-[2-クロロ-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン-6-イル]-2-メチル-フェノキシ｝-エチル)-ジエチル-アミンをジオキサン(2 ml)に溶解し、4M HCl(aq)(2 ml)を加えた。混合物を2時間撹拌し、溶媒を真空下に除去した。粗生成物を分取HPLC(pH 4)で精製し、生成物をギ酸塩として得た。
LC-MS保持時間 1.605分、[M+H]+ = 396, 394 (運転時間 3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「A」を有する。
【０１９０】
実施例29
｛2-[4-クロロ-2-メチル-5-(2-メチルスルファニル-9H-プリン-6-イル)-フェノキシ]-エチル｝-ジエチル-アミン
【化４４】
2009508837.tif 000051
【０１９１】
この化合物は、(2-｛4-クロロ-5-[2-クロロ-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン-6-イル]-2-メチル-フェノキシ｝-エチル)-ジエチル-アミン(実施例28の工程1)から、実施例12の方法により作られた。生成物は分取HPLC(pH 4)で精製された。
LC-MS保持時間 1.694分；[M+H]+ = 406 (運転時間 3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「A」を有する。
【０１９２】
実施例30
2-｛6-[2-クロロ-5-(2-ジエチルアミノ-エトキシ)-4-メチル-フェニル]-9H-プリン-2-イルスルファニル｝-N-エチルアセトアミド
【化４５】
2009508837.tif 000052
【０１９３】
この化合物は、(2-｛4-クロロ-5-[2-クロロ-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン-6-イル]-2-メチル-フェノキシ｝-エチル)-ジエチル-アミン(実施例28の工程1)およびN-エチル-2-メルカプト-アセトアミドから、実施例12の方法により作られた。生成物を分取HPLC(pH 4)で精製し、標記化合物をギ酸塩として得た。
LC-MS保持時間 1.584分；[M+H]+ = 479 (運転時間 3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「A」を有する。
【０１９４】
実施例31
8-クロロ-6-(2,4-ジメチル-フェニル)-2-メチルスルファニル-9H-プリン
【化４６】
2009508837.tif 000053
【０１９５】
工程1
2-クロロ-6-(2,4-ジメチル-フェニル)-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン
【化４７】
2009508837.tif 000054
【０１９６】
この化合物は、2,4-ジメチルフェニルボロン酸および2,6-ジクロロ-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン(実施例1、工程1)から、実施例1の方法により製造された。
LC-MS保持時間：2.65分；[M+H]+ = 343 (運転時間 3.75分)
【０１９７】
工程2
6-(2,4-ジメチル-フェニル)-2-メチルスルファニル-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン
【化４８】
2009508837.tif 000055
【０１９８】
この化合物は、ナトリウムメタンチオレートおよび2-クロロ-6-(2,4-ジメチル-フェニル)-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリンから、実施例12の方法により製造された。
LC-MS保持時間：2.71分；[M+H]+ = 355 (運転時間 3.75分)
【０１９９】
工程3
8-クロロ-6-(2,4-ジメチル-フェニル)-2-メチルスルファニル-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン
【化４９】
2009508837.tif 000056
【０２００】
ヘキサン中のブチルリチウム(170 μL、0.423 mmol、2.5 M)の撹拌溶液に、0℃でTHF(0.5 mL)中のジイソプロピルアミン(59 μL、0.423 mmol)を加えた。混合物を0℃で10分間撹拌し、次いで、-78℃に冷却した。THF(0.5 mL)中の6-(2,4-ジメチル-フェニル)-2-メチルスルファニル-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン)(50.0mg、0.141 mmol)の溶液を加えた。その溶液を15分間撹拌し、次いで、THF(0.5 mL)中のN-クロロスクシンイミド(57.0mg、0.423 mmol)の溶液を滴下して加えた。混合物を20分間撹拌し、次いで、飽和重炭酸ナトリウム水溶液(5 mL)を加え、混合物を室温に戻した。混合物を酢酸エチルで希釈し、次いで、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で抽出し、次いで、飽和食塩水で洗浄した。有機抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、次いで真空下に濃縮し粗生成物を得、それをフラッシュカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル/ヘキサン 2:5で溶出)で精製し、標記化合物を白色の固体(21.1 mg)として得た。
LC-MS保持時間 2.88  [M-THP+H]+ = 305 (運転時間 3.75分)
【０２０１】
工程4
8-クロロ-6-(2,4-ジメチル-フェニル)-2-メチルスルファニル-9H-プリン
【化５０】
2009508837.tif 000057
【０２０２】
メタノール(1.0 mL)中の8-クロロ-6-(2,4-ジメチル-フェニル)-2-メチルスルファニル-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン(10.0 mg, 25.8 μmol)の溶液を、イオン交換カラム(IST SCX II、Argonaut、Hengoed、UK)に装填した。次いで、カラムをメタノールでフラッシュし、次いで、メタノール中のアンモニア溶液(7 M)を用いて、標記化合物を溶出した。粗生成物をシリカに吸着し、フラッシュカラムクロマトグラフィー(ヘキサン/酢酸エチル 4:1で溶出)で精製し、標記化合物を白色の固体(5.0 mg)として得た。
LC-MS保持時間：2.48分；[M+H]+ = 305 (運転時間 3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「B」を有する。
【０２０３】
実施例32
6-(2,4-ジメチル-フェニル)-8-メチル-2-メチルスルファニル-9H-プリン
【化５１】
2009508837.tif 000058
【０２０４】
工程1
【化５２】
2009508837.tif 000059
【０２０５】
THF(2 mL)中の8-クロロ-6-(2,4-ジメチル-フェニル)-2-メチルスルファニル-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン(実施例31の工程3)(25.0mg, 67.9 μmol)の撹拌溶液に、-78℃でメチルリチウム溶液(100 μL、170 μmol、ジエチルエーテル中1.6M)を加え、反応混合物を-78℃で30分間、次いで0℃で30分間撹拌した。反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液で希釈し、次いで、酢酸エチルで抽出した。有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、次いで、粗固体まで濃縮した。次いで、この固体をフラッシュカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル/ヘキサン 1:1で溶出)で精製し、次いでメタノールに溶解し、イオン交換カラム(IST SCX II、Argonaut、Hengoed、UK)に装填した。次いで、カラムをメタノールでフラッシュし、次いで、標記化合物をメタノール中のアンモニア(7 M)溶液を用いて溶出した。真空下に濃縮して、標記化合物を白色の固体(5.0mg)として得た。
LC-MS保持時間：2.21分；[M+H]+ =  285 (運転時間 3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「B」を有する。
【０２０６】
実施例33
6-(2,4-ジメチル-フェニル)-2-メチルスルファニル-9H-プリン-8-カルボニトリル
【化５３】
2009508837.tif 000060
【０２０７】
ヘキサン中のブチルリチウム(170 μL、0.423 mmol、2.5 M)の撹拌溶液に、0℃でTHF(0.5 mL)中のジイソプロピルアミン(59 μL、0.423 mmol)を加えた。混合物を0℃で10分間撹拌し、次いで-78℃に冷却した。THF(1.0 mL)中の6-(2,4-ジメチル-フェニル)-2-メチルスルファニル-9-(テトラヒドロ-ピラン-2-イル)-9H-プリン)(50.0mg、0.141 mmol)の溶液を加えた。その溶液を25分間撹拌し、次いで、THF(1.0 mL)中のp-トルエンスルホニルシアニド(77.0 mg、0.423 mmol)の溶液を滴下して加えた。混合物を1時間、次いで0℃で1時間撹拌した。反応混合物を飽和重炭酸ナトリウム水溶液と酢酸エチルの間で分配した。次いで、有機抽出物を飽和食塩水で洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥し、濾過し、次いで真空下に濃縮し、粗油状物を得、それをフラッシュカラムクロマトグラフィー(酢酸エチル/ヘキサン 1:8で溶出)で精製した。得られた中間体を、イオン交換カラム(実施例31の工程4のように)を用いて脱保護し、標記化合物を白色の固体(9.0 mg)として得た。
LC-MS保持時間：2.60分；[M+H]+ =  296 (運転時間 3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「B」を有する。
【０２０８】
実施例34
｛3-[2,4-ジクロロ-5-(2-クロロ-9H-プリン-6-イル)-フェノキシ]-プロピル｝-ジメチル-アミン
【化５４】
2009508837.tif 000061
【０２０９】
工程1
2,6-ジクロロ-9-(4-メトキシ-ベンジル)-9H-プリン
【化５５】
2009508837.tif 000062
【０２１０】
DMSO(25ml)にK2CO3(3.84g、27.8mmol)、続いて2,6-ジクロロプリン(5g、26.5mmol)を加えた。得られた懸濁液を10分間撹拌し、次いで、4-メトキシベンジルクロライド(3.59ml、26.5mmol)を加え、反応混合物を室温で18時間撹拌した。水(100ml)を反応混合物に加え、生成物を酢酸エチル(3×150ml)で抽出した。合わせた有機抽出物を飽和食塩溶液(2×100ml)で洗浄し、MgSO4で乾燥し、真空下に濃縮した。残渣を溶出液として40%酢酸エチル/ヘキサンを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。
3.72g、収率46%
LC-MS保持時間 2.366分(270nm) [M+H]+ 311, 309 (運転時間 3.75分)
【０２１１】
工程2
6-(5-ベンジルオキシ-2,4-ジクロロ-フェニル)-2-クロロ-9-(4-メトキシ-ベンジル)-9H-プリン
【化５６】
2009508837.tif 000063
【０２１２】
窒素雰囲気下、DMF(50 ml)中の1-ベンジルオキシ-2,4-ジクロロ-5-ヨード-ベンゼン(3.79g、10mmol)(実施例2におけるようにして製造)およびビス(ピナコラート)ジボロン(2.67g、10.5mmol)の溶液に、酢酸カリウム(2.95g、30mmol)を加えた。酢酸パラジウム(112mg、5モル%)を加え、混合物を油浴温度90℃で〜18時間加熱した。得られた溶液の溶媒を真空下に除去し、残渣を酢酸エチル中に採取し、その溶液を水(3×)および飽和食塩水(1×)で洗浄した。溶液を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、淡褐色のガムまで濃縮した。
【０２１３】
残渣を1,4-ジオキサン(50 ml)中に採取し、窒素雰囲気下、2,6-ジクロロ-9-(4-メトキシ-ベンジル)-9H-プリン(2.16g、7mmol、0.7当量)およびリン酸カリウム水溶液(21mmol、2M溶液10.5ml)を加えた。その混合物を脱気し、次いで、ジクロロビス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(II)(245mg、5モル%)を加え、混合物を油浴温度100℃で18時間加熱した。混合物を放置して冷却し、酢酸エチル(150ml)を加えた。混合物を飽和食塩水(5×100ml)で洗浄し、MgSO4で乾燥し、真空下に濃縮した。残渣を溶出液として30%酢酸エチル/ヘキサンを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。
1.29g、収率35%
LC保持時間 2.849分 (270nm)  [M+H]+ 527, 525 (運転時間 3.75分)
【０２１４】
工程3
2,4-ジクロロ-5-[2-クロロ-9-(4-メトキシ-ベンジル)-9H-プリン-6-イル]-フェノール
【化５７】
2009508837.tif 000064
【０２１５】
ジクロロメタン(50ml)に、6-(5-ベンジルオキシ-2,4-ジクロロ-フェニル)-2-クロロ-9-(4-メトキシ-ベンジル)-9H-プリン(1.078g、2.05mmol)を加え、混合物を-78℃に冷却した。BCl3(10.25mmol、ジクロロメタン中の1M溶液10.25ml)を滴下して加え、次いで、冷却を取り去り、反応混合物を室温になるように放置した。次いで、反応混合物を-30℃に冷却し、水(50ml)を注意深く滴下して加えることによりクエンチした。ジクロロメタン層を分離し、飽和食塩溶液(2×50ml)で洗浄し、MgSO4を用いて乾燥し、溶媒を真空下に濃縮した。残渣を、溶出液として50%酢酸エチル/ヘキサンを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。
0.554g、収率62%
LC保持時間 2.542分 (270nm)  [M+H]+ 437, 435 (運転時間 3.75分)
【０２１６】
工程4
(3-｛2,4-ジクロロ-5-[2-クロロ-9-(4-メトキシ-ベンジル)-9H-プリン-6-イル]-フェノキシ｝-プロピル)-ジメチル-アミン
【化５８】
2009508837.tif 000065
【０２１７】
2,4-ジクロロ-5-[2-クロロ-9-(4-メトキシ-ベンジル)-9H-プリン-6-イル]-フェノール(175mg、0.402mmol)、3-ジメチルアミノ-1-プロパノール(50mg、0.482mmol)およびトリフェニルホスフィン(158mg、0.603mmol)を無水テトラヒドロフラン(2ml)中で10分間撹拌し、次いで、反応混合物を0℃に冷却した。無水テトラヒドロフラン(1ml)中のジイソプロピルアゾジカルボキシレート(122mg、0.603mmol)を滴下して加え、添加後、冷却を取り去り、反応混合物を室温に戻した。室温で2時間撹拌後、反応混合物を酢酸エチルと水の間で分配した。有機層を分離し、水、飽和重炭酸ナトリウム溶液、飽和食塩溶液で洗浄し、MgSO4で乾燥した。溶媒を真空下に除去し、残渣を、溶出液として5%メタノール/ジクロロメタンを用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。
0.048g、収率23%
LC保持時間 1.955分 (270nm)  [M+H]+ 522, 520 (運転時間 3.75分)
【０２１８】
工程5
｛3-[2,4-ジクロロ-5-(2-クロロ-9H-プリン-6-イル)-フェノキシ]-プロピル｝-ジメチル-アミン
【化５９】
2009508837.tif 000066
【０２１９】
(3-｛2,4-ジクロロ-5-[2-クロロ-9-(4-メトキシ-ベンジル)-9H-プリン-6-イル]-フェノキシ｝-プロピル)-ジメチル-アミン(48mg、0.092mmol)をトリフルオロ酢酸(5ml)中、70℃(油浴温度)で3時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、次いで、激しく撹拌する氷/水(25ml)に注意深く加えた。次いで、この水性混合物を、水酸化アンモニウム溶液を用いて、注意深くpH 9に塩基性化し、ジクロロメタン(2×20ml)を用いて抽出した。合わせた抽出物を、MgSO4用いて乾燥し、溶媒を真空下に除去した。残渣をpH 4で分取HPLCにより精製した。
LC保持時間 1.621分 (270nm)  [M+H]+ 402, 400 (運転時間 3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「A」を有する。
【０２２０】
実施例35
｛2-[2,4-ジクロロ-5-(2-クロロ-9H-プリン-6-イル)-フェノキシ]-エチル｝-ジエチル-アミン
【化６０】
2009508837.tif 000067
【０２２１】
工程1
(2-｛2,4-ジクロロ-5-[2-クロロ-9-(4-メトキシ-ベンジル)-9H-プリン-6-イル]-フェノキシ｝-エチル)-ジエチル-アミン
【化６１】
2009508837.tif 000068
【０２２２】
2,4-ジクロロ-5-[2-クロロ-9-(4-メトキシ-ベンジル)-9H-プリン-6-イル]-フェノール(実施例34、工程3で製造)(175mg、0.402mmol)、2-(ジエチルアミノ)-エタノール(56mg、0.482mmol)およびトリフェニルホスフィン(158mg、0.603mmol)を無水テトラヒドロフラン(2ml)中で10分間撹拌し、次いで、反応混合物を0℃に冷却した。無水テトラヒドロフラン(1ml)中のジイソプロピルアゾジカルボキシレート(122mg、0.603mmol)を滴下して加え、添加後、冷却を取り去り、反応混合物を室温に戻した。室温で2時間撹拌後、反応混合物を酢酸エチルと水との間で分配した。有機層を分離し、水、飽和重炭酸ナトリウム溶液、飽和食塩溶液で洗浄し、MgSO4で乾燥した。溶媒を真空下に除去し、残渣をMP-TsOHカートリッジ(2.5g、ex Argonaut、Hengoed、UK)で精製した。
0.200g、収率93%
LC保持時間 1.963分 (270nm)  [M+H]+ 536, 534 (運転時間 3.75分)
この物質は、さらに精製することなく次の反応に用いた。
【０２２３】
工程2
(2-｛2,4-ジクロロ-5-[2-クロロ-9-(4-メトキシ-ベンジル)-9H-プリン-6-イル]-フェノキシ｝-エチル)-ジエチル-アミン
【化６２】
2009508837.tif 000069
【０２２４】
(2-｛2,4-ジクロロ-5-[2-クロロ-9-(4-メトキシ-ベンジル)-9H-プリン-6-イル]-フェノキシ｝-エチル)-ジエチル-アミン(200mg、0.374mmol)をトリフルオロ酢酸(7ml)中、70℃(油浴温度)で18時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、次いで、激しく撹拌する氷/水(25ml)に注意深く加えた。次いで、この水性混合物を、水酸化アンモニウム溶液を用いて、注意深くpH 9に塩基性化し、ジクロロメタン(2×20ml)を用いて抽出した。合わせた抽出物を、MgSO4を用いて乾燥し、溶媒を真空下に除去した。残渣をpH 4で分取HPLCにより精製した。化合物を、MP-TsOHカートリッジ(0.5g ex Argonaut、Hengoed、UK)でさらに精製した。
LC保持時間 1.642分 (270nm)  [M+H]+ 416, 414 (運転時間 3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「A」を有する。
【０２２５】
実施例36
2-クロロ-6-[2,4-ジクロロ-5-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-9H-プリン
【化６３】
2009508837.tif 000070
【０２２６】
工程1
2-クロロ-6-[2,4-ジクロロ-5-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-9-(4-メトキシ-ベンジル)-9H-プリン
【化６４】
2009508837.tif 000071
【０２２７】
2,4-ジクロロ-5-[2-クロロ-9-(4-メトキシ-ベンジル)-9H-プリン-6-イル]-フェノール(実施例34の工程3で製造)(200mg、0.459mmol)、炭酸セシウム(300mg、 0.92mmol)および1-(2-クロロエチル)ピロリジン塩酸塩(94mg、0.552mmol)を140℃(油浴温度)で5時間加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルと水の間で分配した。有機層を飽和食塩溶液(5×50ml)で洗浄し、MgSO4で乾燥し、真空下に濃縮した。残渣をイオン交換カラム(IST SCX II、10g ex Argonaut、Hengoed、UK)で精製した。
0.135g、収率55%
LC保持時間 1.967分 (270nm) [M+H]+ 534, 532 (運転時間 3.75分)
【０２２８】
工程2
2-クロロ-6-[2,4-ジクロロ-5-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-9H-プリン
【化６５】
2009508837.tif 000072
【０２２９】
2-クロロ-6-[2,4-ジクロロ-5-(2-ピロリジン-1-イル-エトキシ)-フェニル]-9-(4-メトキシ-ベンジル)-9H-プリン(135mg、0.254mmol)をトリフルオロ酢酸(7ml)中、70℃(油浴温度)で18時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、次いで、激しく撹拌する氷/水(25ml)に注意深く加えた。次いで、この水性混合物を、水酸化アンモニウム溶液を用いてpH 9に注意深く塩基性化し、ジクロロメタン(2×20ml)を用いて抽出した。合わせた抽出物を、MgSO4を用いて乾燥し、溶媒を真空下に除去した。残渣をpH 4で分取HPLCにより精製した。
LC保持時間 1.619分 (270nm)  [M+H]+ 414, 412 (運転時間 3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「A」を有する。
【０２３０】
実施例37
1-｛2-[2,4-ジクロロ-5-(2-クロロ-9H-プリン-6-イル)-フェノキシ]-エチル｝-ピロリジン-2-オン
【化６６】
2009508837.tif 000073
【０２３１】
工程1
1-(2-クロロ-エチル)-ピロリジン-2-オン
【化６７】
2009508837.tif 000074
【０２３２】
クロロホルム(5ml)中の1-(2-ヒドロキシエチル)-2-ピロリジノン(500mg、3.87mmol)の溶液に、チオニルクロライド(0.491ml、4.26mmol)を加えた。得られた溶液を3時間加熱還流し、その時間後には、出発物質は残らなかった。反応混合物を真空下に濃縮し、残渣を溶出液として酢酸エチルを用いるフラッシュカラムクロマトグラフィーで精製し、標記化合物を淡褐色の液体(530mg、 93%)として得た。
【０２３３】
工程2
1-(2-｛2,4-ジクロロ-5-[2-クロロ-9-(4-メトキシ-ベンジル)-9H-プリン-6-イル]-フェノキシ｝-エチル)-ピロリジン-2-オン
【化６８】
2009508837.tif 000075
【０２３４】
2,4-ジクロロ-5-[2-クロロ-9-(4-メトキシ-ベンジル)-9H-プリン-6-イル]-フェノール(実施例34の工程3で製造)(100mg、0.230mmol)、炭酸セシウム(150mg、0.46mmol)および1-(2-クロロエチル)-ピロリジン-2-オン(37mg、0.253mmol)を140℃(油浴温度)で3時間加熱した。反応混合物を冷却し、酢酸エチルと水の間で分配した。有機層を飽和食塩溶液(5×50ml)で洗浄し、MgSO4で乾燥し、真空下に濃縮した。残渣を5%酢酸エチル/ジクロロメタン、次いで5%メタノール/ジクロロメタンで溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。
0.120g、収率97%
LC保持時間 2.551分 (270nm) [M+H]+  548, 546 (運転時間 3.75分)
【０２３５】
工程3
1-｛2-[2,4-ジクロロ-5-(2-クロロ-9H-プリン-6-イル)-フェノキシ]-エチル｝-ピロリジン-2-オン
【化６９】
2009508837.tif 000076
【０２３６】
1-(2-｛2,4-ジクロロ-5-[2-クロロ-9-(4-メトキシ-ベンジル)-9H-プリン-6-イル]-フェノキシ｝-エチル)-ピロリジン-2-オン(120mg、0.22mmol)をトリフルオロ酢酸(5ml)中、70℃(油浴温度)で3時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、次いで、激しく撹拌する氷/水(25ml)に注意深く加えた。次いで、この水性混合物を、水酸化アンモニウム溶液を用いてpH 9に塩基性化し、ジクロロメタン(2×20ml)を用いて抽出した。合わせた抽出物を、MgSO4を用いて乾燥し、溶媒を真空下に除去した。残渣をpH 4で分取HPLCにより精製した。
LC保持時間 2.072分 (270nm)  [M+H]+ 428, 426 (運転時間 3.75分)
この化合物は、後記の蛍光偏光分析で活性「A」を有する。
【０２３７】
蛍光偏光分析法
蛍光偏光(蛍光異方性としても知られている)は、溶液中の蛍光発光種の回転を測定する。この場合、分子が大きいほど、蛍光発光をより偏光させる。蛍光体が偏光で励起されるときに、発光もまた偏光される。分子サイズは蛍光発光の偏光に比例する。
【０２３８】
蛍光標識プローブ−VER00051001-FAM−
【化７０】
2009508837.tif 000077
がHSP90(全長ヒト、全長酵母またはN-末端ドメインのHSP90)と結合し、その異方性(プローブ:蛋白質複合体の回転)が測定される。
試験化合物を分析プレートに加え、平衡状態にし、その異方性を再度測定する。異方性の変化は、化合物のHSP90との競合的な結合(それによりプローブが遊離する)に由来する。
【０２３９】
材料
試薬は市販品で最高純度のものであり、全ての水溶液はAR水を用いて調製される。
1) コスター 96-ウェル ブラック分析プレート♯3915
2) (a)100mM Tris pH7.4； (b)20mM KCl； (c)6mM MgCl2の分析緩衝液、室温で保存
3) BSA(ウシ血清アルブミン)10mg/ml(New England Biolabs ♯ B9001S)
4) 100%DMSO中の20mMプローブ貯蔵濃度。暗所、RTで貯蔵。作業濃度はAR水で希釈し200nMであり、4℃で貯蔵。分析での最終濃度は80nM。
5) E.coliにより発現されたヒト全長HSP90蛋白質、＞95%に精製し(例えば、Panaretouら、1998参照)、50μLに分割して-80℃で保存
【０２４０】
プロトコール
1) 100μl 1×緩衝液をウェル11Aおよび12A(=FP BLNK)に加える。
2) 分析混合物を調製−プローブが光感受性なので、全試薬はバケツに蓋をして氷上で保存される。
【０２４１】
【表４】
2009508837.tif 000078
3) 全ての他のウェルに100μlの分析混合物を分割
4) プレートで覆い、平衡状態にするために暗所、室温で20分間放置
【０２４２】
化合物希釈プレート−1×3の一連の希釈
1) きれいな96-ウェルv底プレート−[♯VWR007/008/257]のウェルB1〜H11に100%DMSO 10μlを加える。
2) ウェルA1〜A11に100%DMSO 17.5μlを加える。
3) 2.5μlのcpdをA1に加える。これはcpds 20mMと仮定して、2.5mM(50×)貯蔵cpdを与える。
4) ウェルA2〜A10に対して繰り返す。列11および列12は対照。
5) 列12を除いた行Aから行Bに5μlを移す。よく混合。
6) 行Bから行Cへ5μlを移す。よく混合。
7) 行Gまで繰り返す。
8) 行Hには化合物を加えない−これが0行。
9) これにより50μM〜0.07μMの1×3の一連の希釈ができる。
【０２４３】
10) ウェルB12に100μM標準化合物溶液20μlを調製する。
11) 最初のインキュベーション後、分析プレートをFusionTM α-FPプレート リーダー(Packard BioScience、Pangbourne、Berkshire、UK)で読み取る。
12) 最初の読み取り後、希釈された化合物の2μlを列1〜列10の各ウェルに加える。列11(検量線を与える)において、B11〜H11にだけ化合物を加える。100mM標準cpdの2μlをウェルB12からH12(陽性対照である)に加える。
13) Z'因子は0対照および陽性ウェルから計算される。それは典型的に0.7〜0.9の値を与える。
上記の分析で試験された化合物に対して、二つの活性範囲、すなわちA=＜10μM；B=＞10μMのうちの一つが割り当てられ、これらの割り当てが上に報告されている。
【０２４４】
増殖阻害分析も、HSP90阻害剤候補の評価に使用された。
スルホロダミンＢ(SRB)分析による細胞毒性試験：50%阻止濃度(IC50)の計算
1日目
1) 血球計数器により細胞数を測定する。
2) ８チャンネルマルチピペッターを用いて、細胞懸濁液(3600細胞/ウェルまたは2×104細胞/ml)の160μlを96-ウェルマイクロタイタープレートの各ウェルに加える。
3) CO2インキュベーター内で37℃で一晩インキュベートする。
【０２４５】
2日目
4) 薬物の貯蔵溶液を調製し、各薬物の連続希釈を媒体中で行い、ウェル中に最終濃度のものを作成した。
5) マルチピペッターを用いて、薬物の40μl(5×最終濃度で)を四重のウェルに加える。
6) 対照ウェルは96ウェルプレートのいずれかの端であり、ここに媒体の40μlを加える。
7) CO2インキュベーター中で4日間(48時間)、プレートをインキュベートする。
【０２４６】
6日目
8) 媒体を流しに捨て、プレートを10%氷冷トリクロロ酢酸(TCA)中にゆっくりと浸す。氷上で約30分間放置する。
9) プレートを水道水浴に浸した後、それを捨てることによって、プレートを水道水で3回洗浄する。
10) インキュベーター中で乾燥する。
11) 1%酢酸中の0.4%SRBの100μlを各ウェルに加える(96ウェルプレートの最後の行(右側)を除いて、これは0%対照、すなわち無薬物、無染色である。一番目の行は、無薬物だが有染色の100%対照となる)。15分間放置する。
12) 結合しなかったSRB染色剤を1%酢酸で4回洗浄して洗い流す。
13) インキュベーター中でプレートを乾燥する。
14) 10mMのTrisベースの100μlを用いてSRBを可溶化し、プレートをプレート振盪器の上に5分間置く。
15) プレートリーダーを用いて540nmでの吸光度を測定する。四重のウェルの平均吸光度を計算し、対照の未処理のウェルに対する値のパーセントとして表す。
16) 対数薬物濃度に対する吸光度％をプロットし、IC50を決定する。
【０２４７】
参考文献
本発明、および本発明が属する技術の状況を、より十分に記載し、開示するために、多くの刊行物を上で引用している。これら参考文献の完全な引用を以下に示す。これらの参考文献の各々が、本明細書の中で完全に言及され、ここに組み込まれている。
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