(57)【要約】  エリスロポエチン受容体を結合する抗体が提供される。このような抗体を作製及び使用する方法も提供される。このような抗体を含有するキットも提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のものを含む一本鎖可変断片：
ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；
ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；
ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又は
ｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【請求項２】
一本鎖可変断片が以下のものを含む、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片：
ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；
ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；
ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又は
ｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【請求項３】
一本鎖可変断片が更にポリペプチドリンカーを含む、請求項２に記載のＦｃに融合された一本鎖可変断片。
【請求項４】
ＦｃがＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４から得られる、請求項２に記載のＦｃに融合された一本鎖可変断片。
【請求項５】
一本鎖可変断片が以下のものを含む、請求項１に記載の一本鎖可変断片。
ａ）配列番号１のＶＨ鎖の、配列番号２のＶＬ鎖への融合物；
ｂ）配列番号３のＶＨ鎖の、配列番号４のＶＬ鎖への融合物；
ｃ）配列番号５のＶＨ鎖の、配列番号６のＶＬ鎖への融合物；
ｄ）配列番号７のＶＨ鎖の、配列番号８のＶＬ鎖への融合物；
ｅ）配列番号９のＶＨ鎖の、配列番号１０のＶＬ鎖への融合物；
ｆ）配列番号５６のＶＨ鎖の、配列番号５８のＶＬ鎖への融合物；
ｇ）配列番号６０のＶＨ鎖の、配列番号６２のＶＬ鎖への融合物；
ｈ）配列番号６４のＶＨ鎖の、配列番号６６のＶＬ鎖への融合物；
ｉ）配列番号６８のＶＨ鎖の、配列番号７０のＶＬ鎖への融合物；
ｊ）配列番号７２のＶＨ鎖の、配列番号７４のＶＬ鎖への融合物；
ｋ）配列番号７６のＶＨ鎖の、配列番号７８のＶＬ鎖への融合物；
ｌ）配列番号８０のＶＨ鎖の、配列番号８２のＶＬ鎖への融合物；
ｍ）配列番号８４のＶＨ鎖の、配列番号８６のＶＬ鎖への融合物；
ｎ）配列番号８８のＶＨ鎖の、配列番号９０のＶＬ鎖への融合物；
ｏ）配列番号９２のＶＨ鎖の、配列番号９４のＶＬ鎖への融合物；
ｐ）配列番号９６のＶＨ鎖の、配列番号９８のＶＬ鎖への融合物；
ｑ）配列番号１００のＶＨ鎖の、配列番号１０２のＶＬ鎖への融合物；
ｒ）配列番号１０４のＶＨ鎖の、配列番号１０６のＶＬ鎖への融合物；
ｓ）配列番号１０８のＶＨ鎖の、配列番号１１０のＶＬ鎖への融合物；
ｔ）配列番号１１２のＶＨ鎖の、配列番号１１４のＶＬ鎖への融合物；
【請求項６】
ＶＨ鎖のカルボキシ末端がＶＬ鎖のアミノ末端に融合されている、請求項５に記載の一本鎖可変断片。
【請求項７】
請求項１に記載の一本鎖可変断片をコードする配列を含む核酸。
【請求項８】
一つ又はそれ以上の調節要素を更に含み、一つ又はそれ以上の前記調節要素の一つ又はそれ以上が一本鎖可変断片をコードする配列に作用可能に連結されている請求項７に記載の核酸。
【請求項９】
請求項７に記載の核酸を含むベクター。
【請求項１０】
請求項８に記載の核酸を含むベクター。
【請求項１１】
請求項９に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１２】
請求項１０に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項１３】
請求項１に記載の一本鎖可変断片を含む医薬組成物。
【請求項１４】
一本鎖可変断片を患者に投与することを含む患者の貧血を治療する方法であり、前記一本鎖可変断片が以下のものを含む、前記方法。
ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；
ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；
ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又は
ｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【請求項１５】
一本鎖可変断片を患者に投与することを含む患者の組織保護を促進する方法であり、前記一本鎖可変断片が以下のものを含む、前記方法。
ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；
ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；
ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又は
ｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【請求項１６】
一本鎖可変断片の一定量を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物中のエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法であり、一本鎖可変断片が以下のものを含む、前記方法。
ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；
ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；
ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又は
ｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【請求項１７】
エリスロポエチン受容体がヒトエリスロポエチン受容体である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
以下のものを含む抗体：
ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；
ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；
ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又は
ｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【請求項１９】
請求項１８に記載の抗体をコードする配列を含む核酸。
【請求項２０】
一つ又はそれ以上の調節要素を更に含み、一つ又はそれ以上の前記調節要素の一つ又はそれ以上が抗体をコードする配列に作用可能に連結されている請求項１９に記載の核酸。
【請求項２１】
請求項１９に記載の核酸を含むベクター。
【請求項２２】
請求項２０に記載の核酸を含むベクター。
【請求項２３】
請求項２１に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項２４】
請求項２２に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項２５】
請求項１８に記載の抗体を含む医薬組成物。
【請求項２６】
抗体を患者に投与することを含む患者の貧血治療方法であり、前記抗体が以下のものを含む、前記方法。
ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；
ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；
ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又は
ｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【請求項２７】
抗体を患者に投与することを含む患者における組織保護を促進する方法であり、前記抗体が以下のものを含む、前記方法。
ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；
ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；
ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又は
ｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【請求項２８】
抗体の一定量を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物中のエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法であり、前記抗体が以下のものを含む、前記方法。
ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；
ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；
ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又は
ｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【請求項２９】
エリスロポエチン受容体がヒトエリスロポエチン受容体である、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
以下のものを含む一本鎖可変断片：
ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３、配列番号１３４を含むアミノ酸配列；
ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号１：１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含む配列番号；
ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；又は
ｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【請求項３１】
一本鎖可変断片が以下のものを含む、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片：
ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；
ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号１：１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含む配列番号；
ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；又は
ｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【請求項３２】
一本鎖可変断片が更にポリペプチドリンカーを含む、請求項３１に記載のＦｃに融合された一本鎖可変断片。
【請求項３３】
ＦｃがＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４から得られる、請求項３１に記載のＦｃに融合された一本鎖可変断片。
【請求項３４】
一本鎖可変断片が以下のものを含む、請求項１に記載の一本鎖可変断片。
ａ）配列番号１１、配列番号１２及び配列番号１３を含むＶＨ鎖の、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むＶＬ鎖への融合物；
ｂ）配列番号１１、配列番号１２及び配列番号１３を含むＶＨ鎖の、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むＶＬ鎖への融合物；
ｃ）配列番号１１、配列番号１２及び配列番号１３を含むＶＨ鎖の、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むＶＬ鎖への融合物；
ｄ）配列番号２３、配列番号２４及び配列番号２５を含むＶＨ鎖の、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むＶＬ鎖への融合物；
ｅ）配列番号２９、配列番号３０及び配列番号３１を含むＶＨ鎖の、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むＶＬ鎖への融合物；
ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４及び配列番号１２５を含むＶＨ鎖の、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むＶＬ鎖への融合物；
ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０及び配列番号１３１を含むＶＨ鎖の、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むＶＬ鎖への融合物；
ｈ）配列番号１３５、配列番号１３６及び配列番号２１２を含むＶＨ鎖の、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むＶＬ鎖への融合物；
ｉ）配列番号１４０、配列番号１４１及び配列番号１４２を含むＶＨ鎖の、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むＶＬ鎖への融合物；
ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７及び配列番号１４８を含むＶＨ鎖の、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むＶＬ鎖への融合物；
ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３及び配列番号１５４を含むＶＨ鎖の、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むＶＬ鎖への融合物；
ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９及び配列番号１６０を含むＶＨ鎖の、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むＶＬ鎖への融合物；
ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５及び配列番号１６６を含むＶＨ鎖の、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むＶＬ鎖への融合物；
ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１及び配列番号１７２を含むＶＨ鎖の、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むＶＬ鎖への融合物；
ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７及び配列番号１７８を含むＶＨ鎖の、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むＶＬ鎖への融合物；
ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３及び配列番号１８４を含むＶＨ鎖の、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含むＶＬ鎖への融合物；
ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９及び配列番号１９０を含むＶＨ鎖の、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むＶＬ鎖への融合物；
ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５及び配列番号１９６を含むＶＨ鎖の、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むＶＬ鎖への融合物；
ｓ）配列番号２００、配列番号２０１及び配列番号２０２を含むＶＨ鎖の、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むＶＬ鎖への融合物；又は
ｔ）配列番号２０６、配列番号２０７及び配列番号２０８を含むＶＨ鎖の、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むＶＬ鎖への融合物。
【請求項３５】
ＶＨ鎖のカルボキシ末端がＶＬ鎖のアミノ末端に融合されている、請求項３４に記載の一本鎖可変断片。
【請求項３６】
請求項３０に記載の一本鎖可変断片をコードする配列を含む核酸。
【請求項３７】
一つ又はそれ以上の調節要素を更に含み、一つ又はそれ以上の前記調節要素の一つ又はそれ以上が一本鎖可変断片をコードする配列に作用可能に連結されている、請求項３６に記載の核酸。
【請求項３８】
請求項３６に記載の核酸を含むベクター。
【請求項３９】
請求項３７に記載の核酸を含むベクター。
【請求項４０】
請求項３８に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項４１】
請求項３９に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項４２】
請求項３０に記載の一本鎖可変断片を含む医薬組成物。
【請求項４３】
一本鎖可変断片を患者に投与することを含む患者の貧血治療方法であり、前記一本鎖可変断片が以下のものを含む、前記方法。
ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；
ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含むアミノ酸配列；
ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；
ｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【請求項４４】
一本鎖可変断片を患者に投与することを含む、患者における組織保護を促進する方法であり、前期一本鎖可変断片が以下のものを含む、前記方法。
ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号１２３、配列番号１３４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；
ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含むアミノ酸配列；
ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；
ｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【請求項４５】
一本鎖可変断片の一定量を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物におけるエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法であり、前記一本鎖可変断片が以下のものを含む、前記方法。
ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；
ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含むアミノ酸配列；
ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；又は
ｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【請求項４６】
エリスロポエチン受容体がヒトエリスロポエチン受容体である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
以下のものを含む抗体。
ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；
ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含むアミノ酸配列；
ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；又は
ｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【請求項４８】
請求項４７に記載の抗体をコードする配列を含む核酸。
【請求項４９】
一つ又はそれ以上の調節要素を更に含み、一つ又はそれ以上の前記調節要素の一つ又はそれ以上が抗体をコードする配列に作用可能に連結されている請求項４８に記載の核酸。
【請求項５０】
請求項４８に記載の核酸を含むベクター。
【請求項５１】
請求項４９に記載の核酸を含むベクター。
【請求項５２】
請求項５０に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項５３】
請求項５１に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項５４】
請求項４７に記載の抗体を含む医薬組成物。
【請求項５５】
抗体を患者に投与することを含む患者の貧血治療方法であり、前記抗体が以下のものを含む、前記方法。
ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；
ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含むアミノ酸配列；
ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；又は
ｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【請求項５６】
抗体を患者に投与することを含む、患者における組織保護を促進する方法であり、前記抗体が以下のものを含む、前記方法。
ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；
ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含むアミノ酸配列；
ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；又は
ｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【請求項５７】
抗体の一定量を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物におけるエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法であり、前記抗体が以下のものを含む、前記方法。
ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；
ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含むアミノ酸配列；
ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；又は
ｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【請求項５８】
エリスロポエチン受容体がヒトエリスロポエチン受容体である、請求項５７に記載の方法。
【請求項５９】
以下のものを含む抗体。
ａ）配列番号４５を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号４６を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号４７を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号４８を含むアミノ酸配列；又は
ｅ）配列番号４９を含むアミノ酸配列。
【請求項６０】
請求項５９に記載の抗体をコードする配列を含む核酸。
【請求項６１】
一つ又はそれ以上の調節要素を更に含み、一つ又はそれ以上の前記調節要素の一つ又はそれ以上が一本鎖可変断片をコードする配列に作用可能に連結されている請求項６０に記載の核酸。
【請求項６２】
請求項６０に記載の核酸を含むベクター。
【請求項６３】
請求項６１に記載の核酸を含むベクター。
【請求項６４】
請求項６２に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項６５】
請求項６３に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項６６】
請求項５９に記載の一本鎖可変断片を含む医薬組成物。
【請求項６７】
抗体を患者に投与することを含む、患者の貧血を治療する方法であり、前記抗体が以下のものを含む、前記方法。
ａ）配列番号４５を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号４６を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号４７を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号４８を含むアミノ酸配列；又は
ｅ）配列番号４９を含むアミノ酸配列。
【請求項６８】
抗体を患者に投与することを含む、患者における組織保護を促進する方法であり、前記抗体が以下のものを含む、前記方法。
ａ）配列番号４５を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号４６を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号４７を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号４８を含むアミノ酸配列；又は
ｅ）配列番号４９を含むアミノ酸配列。
【請求項６９】
抗体の一定量を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物におけるエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法であり、抗体が以下のものを含む、前記方法。
ａ）配列番号４５を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号４６を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号４７を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号４８を含むアミノ酸配列；又は
ｅ）配列番号４９を含むアミノ酸配列。
【請求項７０】
エリスロポエチン受容体がヒトエリスロポエチン受容体である、請求項６９に記載の方法。
【請求項７１】
宿主細胞中で一本鎖可変断片を発現させることを含む、一本鎖可変断片を作製する方法であり、前記一本鎖可変断片が以下のものを含む、前記方法。
ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；
ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；
ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又は
ｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【請求項７２】
宿主細胞中で、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片を発現させることを含む、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片を作製する方法であり、前記一本鎖可変断片が以下のものを含む、前記方法。
ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；
ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；
ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又は
ｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【請求項７３】
宿主細胞中で一本鎖可変断片を発現させることを含む、一本鎖可変断片の作製方法であり、前記一本鎖可変断片が以下のものを含む、前記方法。
ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；
ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号１：１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含むアミノ酸配列；
ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；又は
ｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【請求項７４】
宿主細胞中で、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片を発現させることを含む、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片を作製する方法であり、前記一本鎖可変断片が以下のものを含む、前記方法。
ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；
ｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；
ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；
ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；
ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；
ｉ）配列番号１：１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；
ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；
ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；
ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；
ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；
ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；
ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；
ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含む配列番号；
ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；
ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；
ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列、又は
ｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【請求項７５】
宿主細胞中で、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片を発現させることを含む、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片を作製する方法であり、前記一本鎖可変断片が以下のものを含む、前記方法。
ａ）配列番号４５を含むアミノ酸配列；
ｂ）配列番号４６を含むアミノ酸配列；
ｃ）配列番号４７を含むアミノ酸配列；
ｄ）配列番号４８を含むアミノ酸配列；又は
ｅ）配列番号４９を含むアミノ酸配列。
【請求項７６】
以下のものに特異的に結合する一本鎖可変断片：
ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；
ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；
ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；
ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；
ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又は
ｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【請求項７７】
Ｆｃに融合された一本鎖可変断片であり、前記一本鎖可変断片が以下のものに特異的に結合する、前記一本鎖可変断片。
ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；
ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；
ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；
ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；
ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又は
ｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【請求項７８】
一本鎖可変断片が更にポリペプチドリンカーを含む、請求項７７に記載のＦｃに融合された一本鎖可変断片。
【請求項７９】
ＦｃがＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４から得られる請求項７７に記載のＦｃに融合された一本鎖可変断片。
【請求項８０】
請求項７６に記載の一本鎖可変断片をコードする配列を含む核酸。
【請求項８１】
一つ又はそれ以上の調節要素を更に含み、一つ又はそれ以上の前記調節要素の一つ又はそれ以上が一本鎖可変断片をコードする配列に作用可能に連結されている、請求項８０に記載の核酸。
【請求項８２】
請求項８０に記載の核酸を含むベクター。
【請求項８３】
請求項８１に記載の核酸を含むベクター。
【請求項８４】
請求項８２に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項８５】
請求項８３に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項８６】
請求項７６に記載の一本鎖可変断片を含む医薬組成物。
【請求項８７】
一本鎖可変断片を患者に投与することを含む、患者の貧血を治療する方法であり、前記一本鎖可変断片が以下のものに特異的に結合する、前記方法。
ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；
ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；
ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；
ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；
ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又は
ｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【請求項８８】
一本鎖可変断片を患者に投与することを含む、患者における組織保護を促進する方法であり、前記一本鎖可変断片が以下のものに特異的に結合する、前記方法。
ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；
ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；
ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；
ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；
ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又は
ｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【請求項８９】
一本鎖可変断片の一定量を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物におけるエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法であり、前記一本鎖可変断片が以下のものに特異的に結合する、前記方法。
ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；
ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；
ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；
ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；
ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又は
ｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【請求項９０】
エリスロポエチン受容体がヒトエリスロポエチン受容体である、請求項８９に記載の方法。
【請求項９１】
以下のものに特異的に結合する抗体。
ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；
ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；
ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；
ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；
ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又は
ｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【請求項９２】
請求項９１に記載の抗体をコードする配列を含む核酸。
【請求項９３】
一つ又はそれ以上の調節要素を更に含み、一つ又はそれ以上の前記調節要素の一つ又はそれ以上が抗体をコードする配列に作用可能に連結されている、請求項９２に記載の核酸。
【請求項９４】
請求項９２に記載の核酸を含むベクター。
【請求項９５】
請求項９３に記載の核酸を含むベクター。
【請求項９６】
請求項９４に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項９７】
請求項９５に記載のベクターを含む宿主細胞。
【請求項９８】
請求項９１に記載の抗体を含む医薬組成物。
【請求項９９】
抗体を患者に投与することを含む、患者の貧血を治療する方法であり、前記抗体が以下のものに特異的に結合する、前記方法。
ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；
ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；
ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；
ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；
ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又は
ｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【請求項１００】
抗体を患者に投与することを含む、患者における組織保護を促進する方法であり、前記抗体が以下のものに特異的に結合する、前記方法。
ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；
ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；
ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；
ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；
ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又は
ｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【請求項１０１】
抗体の一定量を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物におけるエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法であり、前記抗体が以下のものに特異的に結合する、前記方法。
ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；
ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；
ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；
ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；
ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又は
ｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【請求項１０２】
エリスロポエチン受容体がヒトエリスロポエチン受容体である、請求項１０１に記載の方法。
【請求項１０３】
宿主細胞中で、一本鎖可変断片を発現させることを含む、一本鎖可変断片の作製方法であり、前記一本鎖可変断片が以下のものに特異的に結合する、前記方法。
ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；
ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；
ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；
ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；
ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又は
ｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【請求項１０４】
宿主細胞中で、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片を発現させることを含む、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片の作製方法であり、前記一本鎖断片が以下のものに特異的に結合する、前記方法。
ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；
ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３、Ｈ１１４；
ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；
ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；
ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；
ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又は
ｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【請求項１０５】
以下のものから選択される一つ又はそれ以上の配列を含むヒトＥｐｏ受容体に結合する抗体。
Ａ）以下のものを含む第一のアミノ酸配列：
ｉ）式：Ｘ１ＹＷＭＸ５（Ｘ１は任意のアミノ酸であり、及びＸ５は任意のアミノ酸である。）を有するＣＤＲ１；
ｉｉ）式：ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＶＸ１２ＳＶＫＧ（Ｘ１２は、任意のアミノ酸である。）を有するＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ）式：ＶＳＲＧＧＳＸ７ＳＤ（Ｘ７は、任意のアミノ酸である。）を有するＣＤＲ３；並びに
Ｂ）以下のものを含む第二のアミノ酸配列：
ｉ）式：ＴＧＴＳＳＤＸ７ＧＸ９ＹＸ１１ＹＶＳ（Ｘ７は任意のアミノ酸であり、Ｘ９は任意のアミノ酸であり、及びＸ１１は任意のアミノ酸である。）を有するＣＤＲ１；及び
ｉｉ）式：Ｘ１ＶＸ３Ｘ４ＲＰＳ（Ｘ１は任意のアミノ酸であり、Ｘ３は任意のアミノ酸であり、及びＸ４は任意のアミノ酸である。）を有するＣＤＲ２。
【請求項１０６】
Ａ）第一のアミノ酸配列が、
ｉ）Ｘ１がＫ又はＳであり、Ｘ５がＴ又はＳである式：Ｘ１ＹＷＭＸ５を有するＣＤＲ１；
ｉｉ）Ｘ１２がＤ又はＥである式：ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＶＸ１２ＳＶＫＧを有するＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ）Ｘ７がＦ又はＹである式：ＶＳＲＧＧＳＸ７ＳＤを有するＣＤＲ３、を含み；並びに
Ｂ）第二のアミノ酸配列が、
ｉ）Ｘ７がＶ又はＩであり、Ｘ９がＧ、Ａ、Ｔ又はＳであり、Ｘ１１がＮ、Ｄ又はＩである式：ＴＧＴＳＳＤＸ７ＧＸ９ＹＸ１１ＹＶＳを有するＣＤＲ１；及び
ｉｉ）Ｘ１がＤ又はＥであり、Ｘ３がＮ、Ｓ、Ａ又はＴであり、Ｘ４がＫ、Ｎ又はＲである式：Ｘ１ＶＸ３Ｘ４ＲＰＳを有するＣＤＲ２、を含む、
請求項１０５に記載の抗体。
【請求項１０７】
抗体が第一のアミノ酸配列及び第二のアミノ酸配列を含む、請求項１０５に記載の抗体。
【請求項１０８】
第一のアミノ酸配列が第二のアミノ酸配列に共有結合されている、請求項１０７に記載の抗体。
【請求項１０９】
ヒトＥｐｏ受容体に結合する一本鎖可変断片であり、前記一本鎖可変断片が以下のものから選択される一つ又はそれ以上の配列を含む、前記一本鎖可変断片。
Ａ）以下のものを含む第一のアミノ酸配列：
ｉ）Ｘ１が任意のアミノ酸であり、Ｘ５が任意のアミノ酸である式：Ｘ１ＹＷＭＸ５を有するＣＤＲ１；
ｉｉ）Ｘ１２が任意のアミノ酸である式：ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＶＸ１２ＳＶＫＧを有するＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ）Ｘ７が任意のアミノ酸である式：ＶＳＲＧＧＳＸ７ＳＤを有するＣＤＲ３；並びに
Ｂ）以下を含む第二のアミノ酸配列：
ｉ）Ｘ７が任意のアミノ酸であり、Ｘ９が任意のアミノ酸であり、Ｘ１１が任意のアミノ酸である式：ＴＧＴＳＳＤＸ７ＧＸ９ＹＸ１１ＹＶＳを有するＣＤＲ１；及び
ｉｉ）Ｘ１が任意のアミノ酸であり、Ｘ３が任意のアミノ酸であり、Ｘ４が任意のアミノ酸である式：Ｘ１ＶＸ３Ｘ４ＲＰＳを有するＣＤＲ２。
【請求項１１０】
Ａ）第一のアミノ酸配列が、
ｉ）Ｘ１がＫ又はＳであり、Ｘ５がＴ又はＳである式：Ｘ１ＹＷＭＸ５を有するＣＤＲ１；
ｉｉ）Ｘ１２がＤ又はＥである式：ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＶＸ１２ＳＶＫＧを有するＣＤＲ２；及び
ｉｉｉ）Ｘ７がＦ又はＹである式：ＶＳＲＧＧＳＸ７ＳＤを有するＣＤＲ３、を含み；並びに
Ｂ）第二のアミノ酸配列が、
ｉ）Ｘ７がＢ又はＩで、Ｘ９がＧ、Ａ、Ｔ又はＳで、Ｘ１１がＮ、Ｄ又はＩである式：ＴＧＴＳＳＤＸ７ＧＸ９ＹＸ１１ＹＶＳを有するＣＤＲ１；及び
ｉｉ）Ｘ１がＤ又はＥで、Ｘ３がＮ、Ｓ、Ａ又はＴで、Ｘ４がＫ、Ｎ又はＲである式：Ｘ１ＶＸ３Ｘ４ＲＰＳを有するＣＤＲ２、を含む、
請求項１０９に記載の一本鎖可変断片。
【請求項１１１】
抗体が第一のアミノ酸配列及び第二のアミノ酸配列を含む、請求項１０８に記載の一本鎖可変断片。
【請求項１１２】
第一のアミノ酸配列が第二のアミノ酸配列に共有結合されている、請求項１１１に記載の一本鎖可変断片。
【請求項１１３】
野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、３４位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない抗体。
【請求項１１４】
野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの６０位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない抗体。
【請求項１１５】
野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの８８位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない抗体。
【請求項１１６】
野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの１５０位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない抗体。
【請求項１１７】
野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの８７位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない抗体。
【請求項１１８】
野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの６３位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない抗体。
【請求項１１９】
野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの６４位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない抗体。
【請求項１２０】
野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの９９位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない抗体。
【請求項１２１】
野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの３４位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない一本鎖可変断片。
【請求項１２２】
野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの６０位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない一本鎖可変断片。
【請求項１２３】
野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの８８位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない一本鎖可変断片。
【請求項１２４】
野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの１５０位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない一本鎖可変断片。
【請求項１２５】
野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの８７位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない一本鎖可変断片。
【請求項１２６】
野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの６３位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない一本鎖可変断片。
【請求項１２７】
野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの６４位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない一本鎖可変断片。
【請求項１２８】
野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの９９位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない一本鎖可変断片。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００６年４月１４日に出願された米国特許出願６０／７９２，１７４号の優先権の利益を主張する。米国特許出願第６０／７９２，１７４号の全内容は、参照により、その全体が本明細書に具体的に組み込まれる。
【０００２】
本教示は、一般的には、エリスロポエチン受容体アゴニスト、エリスロポエチン受容体アゴニストを含むキット、及びエリスロポエチン受容体アゴニストを使用する方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
エリスロポエチン（Ｅｐｏ）は、赤血球前駆細胞の増殖及び赤血球への成熟に関与する糖タンパク質ホルモンである。ＥＰＯは、胎児期の間には肝臓によって、及び成人の腎臓によって産生され、赤血球前駆体からの赤血球の産生を刺激する。腎不全の結果として、成人に一般に発生するＥＰＯの減少した産生は貧血を引き起こす。ＥＰＯは、エリスロポエチンをコードする遺伝子を形質移入された宿主細胞からのタンパク質の発現及び分泌を含む遺伝子工学技術によって作製されてきた。組み換えＥＰＯの投与は、貧血の治療において有効であった。例えば、Ｅｓｃｈｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．（Ｎ．Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３１６，７３（１９８７））は、慢性腎不全から生じた貧血を治すためのＥＰＯの使用を記載する。
【０００４】
ヒト尿ＥＰＯの精製は、Ｍｉｙａｋｅら（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５２，５５５８（１９７７））によって記載された。エリスロポエチンをコードする遺伝子の同定、クローニング及び発現は、Ｌｉｎに付与された米国特許第４，７０３，００８号に記載されている。細胞培地からの組み換えＥＰＯの精製方法の記述は、Ｌａｉらに付与された米国特許４，６６７，０１６号に含まれている。エリスロポエチン受容体（ＥＰＯ−Ｒ）は、多量体複合体として存在すると考えられている。沈降研究は、その分子量が３３０＋／−４８ｋＤａであることを示唆した（Ｍａｙｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．Ｅｕｒ．Ｊ．ＢｉｏＣｈｅｍ．１９４，２７１（１９９０））。架橋研究は、受容体複合体が複数の異なるポリペプチド、６６から７２ｋＤａ種並びに８５及び１００ｋＤａ種を含むことを示した（Ｍａｙｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６，２３３８０（１９９１））；ＭｃＣａｆｆｅｒｙ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４，１０５０７（１９９１））。異なる９５ｋＤａタンパク質は、ＥＰＯ受容体の免疫沈降によっても検出された（Ｍｉｕｒａ  ＆  Ｉｈｌｅ  Ｂｌｏｏｄ  ８１，１７３９（１９９３））。別の架橋研究は、１１０、１３０及び１４５ｋＤａの複合体を含有する３つのＥＰＯを明らかにした。この１１０及び１４５ｋＤａ複合体はＥＰＯ受容体に対して産生された抗体で免疫沈降され得るので、ＥＰＯ受容体を含有した（Ｍｉｕｒａ＆Ｉｈｌｅ、上記）。カルボキシ末端切断されたＥＰＯ受容体の発現は、１１０ｋＤａの検出をもたらしたが、１４５ｋＤａ複合体の検出をもたらさなかった。このことは、より高い分子量の複合体は、１１０ｋＤａ複合体中に存在するポリペプチド及びさらなる３５ｋＤａタンパク質を含有することを示唆する。
【０００５】
マウス及びヒトＥＰＯ受容体のクローニング及び発現に際して、ＥＰＯ受容体複合体の構造及び機能に関するさらなる洞察が得られた（Ｄ’Ａｎｄｒｅａ  ｅｔ  ａｌ．Ｃｅｌｌ  ５７，２７７（１９８９）；Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  ７６，３１（１９９０）；Ｗｉｎｋｅｌｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｂｌｏｏｄ  ７６，２４（１９９０）；ＰＣＴ出願Ｗ０９０／０８８２２；Ｄ’Ａｎｄｒｅａ  ｅｔ  ａｌ．に付与された米国特許第５，２７８，０６５号）。完全長ヒトＥＰＯ受容体は、約２２４アミノ酸の細胞外ドメイン及び２５アミノ酸のシグナルペプチドを有する４８３アミノ酸の膜貫通タンパク質である。ヒト受容体は、マウス受容体と約８２％のアミノ酸配列相同性を示す。哺乳動物細胞（６６から７２ｋＤａ）中で発現された、クローニングされた完全長ＥＰＯ受容体は、赤血球前駆体細胞上の固有状態の受容体の親和性と同様の親和性でＥＰＯを結合することが示されている。従って、この形態は、主なＥＰＯ結合決定因子を含有するものと考えられている。架橋された複合体の一部として観察された８５及び１００ｋＤａタンパク質はＥＰＯ受容体と異なるが、ＥＰＯはこれらのタンパク質に架橋され得るので、これらのタンパク質は、おそらくＥＰＯと近接している。８５及び１００ｋＤａタンパク質は互いに関連しており、８５ｋＤａのタンパク質は、１００ｋＤａ種のタンパク質分解切断産物であり得る（Ｓａｗｙｅｒ  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４，１３３４３（１９８９））。
【０００６】
細胞外ドメインのみを含有するＥＰＯ受容体の可溶性（末端切断された）形態が産生されており、約１ｎＭの親和性で（すなわち、完全長受容体より約３から１０倍低い）ＥＰＯを結合することが明らかとなっている（Ｈａｒｒｉｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７，１５２０５（１９９２）；Ｙａｎｇ  ＆  Ｊｏｎｅｓ  Ｂｌｏｏｄ  ８２，１７１３（１９９３））。
【０００７】
ＥＰＯ受容体の活性化は、幾つかの生物学的効果をもたらす。活性の３つには、未成熟な赤芽球中での増殖の刺激、未成熟の赤芽球中での分化の刺激及び赤血球前駆体細胞中でのアポトーシスの阻害が含まれる（Ｌｉｂｏｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０，１１３５１（１９９３）；Ｋｏｕｒｙ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４８，３７８（１９９０））。増殖の刺激及び分化の刺激をもたらすシグナル伝達経路は分離可能であるように見受けられる（Ｎｏｇｕｃｈｉ  ｅｔ  ａｌ．Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８，２６０４（１９８８）；Ｐａｔｅｌ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７，２１３００（１９９２）；Ｌｉｂｏｉ  ｅｔ  ａｌ．同書）。
【発明の開示】
【０００８】
要旨
特定の実施態様において、一本鎖可変断片が提供される。特定の実施態様において、一本鎖可変断片は以下のものを含む：ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；ｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又はｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【０００９】
特定の実施態様において、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。特定の実施態様において、一本鎖可変断片は以下のものを含む。ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；ｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又はｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【００１０】
特定の実施態様において、患者の貧血治療方法が提供される。特定の実施態様において、患者の貧血治療方法は、一本鎖可変断片を患者に投与することを含み、前記一本鎖可変断片は以下のものを含む。ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；ｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又はｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【００１１】
特定の実施態様において、患者における組織保護を促進する方法が提供される。特定に実施態様において、患者の組織保護の促進方法は、一本鎖可変断片を患者に投与することを含み、前記一本鎖可変断片は以下のものを含む。ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；ｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又はｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【００１２】
特定の実施態様において、哺乳動物におけるエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法が提供される。特定の実施態様において、哺乳動物におけるエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法は、一本鎖可変断片の一定量を哺乳動物に投与することを含み、前記一本鎖可変断片は以下のものを含む。ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；ｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又はｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【００１３】
特定の実施態様において、抗体が提供される。特定の実施態様において、抗体は以下のものを含む。ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；ｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又はｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【００１４】
特定の実施態様において、患者の貧血を治療する方法が提供される。特定の実施態様において、患者の貧血治療方法は、抗体を患者に投与することを含み、前記抗体は以下のものを含む。ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；ｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又はｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【００１５】
特定の実施態様において、患者における組織保護を促進する方法が提供される。特定に実施態様において、患者の組織保護を促進する方法は、抗体を患者に投与することを含み、前記抗体は以下のものを含む。ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；ｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又はｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【００１６】
特定の実施態様において、哺乳動物におけるエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法が提供される。特定の実施態様において、哺乳動物におけるエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法は、抗体の一定量を哺乳動物に投与することを含み、前記抗体は以下のものを含む。ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；ｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又はｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【００１７】
特定の実施態様において、一本鎖可変断片が提供される。特定の実施態様において、一本鎖可変断片は以下のものを含む。ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；ｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号１：１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含む配列番号；ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；又はｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【００１８】
特定の実施態様において、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。特定の実施態様において、一本鎖可変断片は以下のものを含む。ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；ｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号１：１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含む配列番号；ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；又はｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【００１９】
特定の実施態様において、患者の貧血を治療する方法が提供される。特定の実施態様において、患者の貧血治療方法は、一本鎖可変断片を患者に投与することを含み、前記一本鎖可変断片は以下のものを含む。ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；又はｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号１：１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含む配列番号；ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；又はｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【００２０】
特定の実施態様において、患者における組織保護を促進する方法が提供される。特定に実施態様において、患者の組織保護を促進する方法は、一本鎖可変断片を患者に投与することを含み、前記一本鎖可変断片は以下のものを含む。ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；又はｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号１：１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含む配列番号；ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；又はｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【００２１】
特定の実施態様において、哺乳動物におけるエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法が提供される。特定の実施態様において、哺乳動物におけるエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法は、一本鎖可変断片の一定量を哺乳動物に投与することを含み、前記一本鎖可変断片は以下のものを含む。ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；又はｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号１：１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含む配列番号；ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；又はｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【００２２】
特定の実施態様において、抗体が提供される。特定の実施態様において、抗体は以下のものを含む：ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；又はｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号１：１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含む配列番号；ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；又はｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【００２３】
特定の実施態様において、患者の貧血を治療する方法が提供される。特定の実施態様において、患者の貧血を治療する方法は、抗体を患者に投与することを含み、前記抗体は以下のものを含む。ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；又はｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号１：１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含む配列番号；ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；又はｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【００２４】
特定の実施態様において、患者における組織保護を促進する方法が提供される。特定に実施態様において、患者の組織保護を促進する方法は、抗体を患者に投与することを含み、前記抗体は以下のものを含む。ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；又はｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号１：１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含む配列番号；ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；又はｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【００２５】
特定の実施態様において、哺乳動物におけるエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法が提供される。特定の実施態様において、哺乳動物におけるエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法は、抗体の一定量を哺乳動物に投与することを含み、前記抗体は以下のものを含む。ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；又はｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号１：１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含む配列番号；ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；又はｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【００２６】
特定の実施態様において、抗体が提供される。特定の実施態様において、前記抗体は以下のものを含む。ａ）配列番号４５を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号４６を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号４７を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号４８を含むアミノ酸配列；又はｅ）配列番号４９を含むアミノ酸配列。
【００２７】
特定の実施態様において、患者の貧血治療方法が提供される。特定の実施態様において、患者の貧血治療方法は、抗体を患者に投与することを含み、前記抗体は以下のものを含む。ａ）配列番号４５を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号４６を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号４７を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号４８を含むアミノ酸配列；又はｅ）配列番号４９を含むアミノ酸配列。
【００２８】
特定の実施態様において、患者における組織保護を促進する方法が提供される。特定に実施態様において、患者の組織保護を促進する方法は、抗体を患者に投与することを含み、前記抗体は以下のものを含む。ａ）配列番号４５を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号４６を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号４７を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号４８を含むアミノ酸配列；又はｅ）配列番号４９を含むアミノ酸配列。
【００２９】
特定の実施態様において、哺乳動物におけるエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法が提供される。特定の実施態様において、哺乳動物におけるエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法は、抗体の一定量を哺乳動物に投与することを含み、前記抗体は以下のものを含む。ａ）配列番号４５を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号４６を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号４７を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号４８を含むアミノ酸配列；又はｅ）配列番号４９を含むアミノ酸配列。
【００３０】
特定の実施態様において、一本鎖可変断片の作製方法が提供される。特定の実施態様において、一本鎖可変断片の作製方法は、宿主細胞中で、一本鎖可変断片を発現させることを含み、前記一本鎖可変断片は以下のものを含む。ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；又はｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又はｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【００３１】
特定の実施態様において、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片の作製方法が提供される。特定の実施態様において、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片の作製方法は、宿主細胞中で、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片を発現させることを含み、前記一本鎖可変断片は以下のものを含む。ａ）配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列；又はｅ）配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列；ｈ）配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列；ｑ）配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列；又はｔ）配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列。
【００３２】
特定の実施態様において、一本鎖可変断片の作製方法が提供される。特定の実施態様において、一本鎖可変断片の作製方法は、宿主細胞中で、一本鎖可変断片を発現させることを含み、前記一本鎖可変断片は以下のものを含む。ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；又はｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含むアミノ酸配列；ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；ｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【００３３】
特定の実施態様において、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片の作製方法が提供される。特定の実施態様において、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片の作製方法は、宿主細胞中で、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片を発現させることを含み、前記一本鎖可変断片は以下のものを含む。ａ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５及び配列番号１６を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１７、配列番号１８及び配列番号１９を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号２０、配列番号２１及び配列番号２２を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、配列番号２７及び配列番号２８を含むアミノ酸配列；又はｅ）配列番号２９、配列番号３０、配列番号３１、配列番号３２、配列番号３３及び配列番号３４を含むアミノ酸配列；ｆ）配列番号１２３、配列番号１２４、配列番号１２５、配列番号１２６、配列番号１２７及び配列番号１２８を含むアミノ酸配列；ｇ）配列番号１２９、配列番号１３０、配列番号１３１、配列番号１３２、配列番号１３３及び配列番号１３４を含むアミノ酸配列；ｈ）ｆ）配列番号１３５、配列番号１３６、配列番号２１２、配列番号１３７、配列番号１３８及び配列番号１３９を含むアミノ酸配列；ｉ）配列番号１４０、配列番号１４１、配列番号１４２、配列番号１４３、配列番号１４４及び配列番号１４５を含むアミノ酸配列；ｊ）配列番号１４６、配列番号１４７、配列番号１４８、配列番号１４９、配列番号１５０及び配列番号１５１を含むアミノ酸配列；ｋ）配列番号１５２、配列番号１５３、配列番号１５４、配列番号１５５、配列番号１５６及び配列番号１５７を含むアミノ酸配列；ｌ）配列番号１５８、配列番号１５９、配列番号１６０、配列番号１６１、配列番号１６２及び配列番号１６３を含むアミノ酸配列；ｍ）配列番号１６４、配列番号１６５、配列番号１６６、配列番号１６７、配列番号１６８及び配列番号１６９を含むアミノ酸配列；ｎ）配列番号１７０、配列番号１７１、配列番号１７２、配列番号１７３、配列番号１７４及び配列番号１７５を含むアミノ酸配列；ｏ）配列番号１７６、配列番号１７７、配列番号１７８、配列番号１７９、配列番号１８０及び配列番号１８１を含むアミノ酸配列；ｐ）配列番号１８２、配列番号１８３、配列番号１８４、配列番号１８５、配列番号１８６及び配列番号１８７を含むアミノ酸配列；ｑ）配列番号１８８、配列番号１８９、配列番号１９０、配列番号１９１、配列番号１９２及び配列番号１９３を含むアミノ酸配列；ｒ）配列番号１９４、配列番号１９５、配列番号１９６、配列番号１９７、配列番号１９８及び配列番号１９９を含むアミノ酸配列；ｓ）配列番号２００、配列番号２０１、配列番号２０２、配列番号２０３、配列番号２０４及び配列番号２０５を含むアミノ酸配列；ｔ）配列番号２０６、配列番号２０７、配列番号２０８、配列番号２０９、配列番号２１０及び配列番号２１１を含むアミノ酸配列。
【００３４】
特定の実施態様において、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片の作製方法が提供される。特定の実施態様において、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片の作製方法は、宿主細胞中で、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片を発現させることを含み、前記一本鎖可変断片は以下のものを含む。ａ）配列番号４５を含むアミノ酸配列；ｂ）配列番号４６を含むアミノ酸配列；ｃ）配列番号４７を含むアミノ酸配列；ｄ）配列番号４８を含むアミノ酸配列；又はｅ）配列番号４９を含むアミノ酸配列。
【００３５】
特定の実施態様において、一本鎖可変断片が提供される。特定の実施態様において、一本鎖可変断片は以下のものに特異的に結合する。ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又はｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【００３６】
特定の実施態様において、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。特定の実施態様において、一本鎖可変断片は以下のものに特異的に結合する。ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又はｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【００３７】
特定の実施態様において、患者の貧血を治療する方法が提供される。特定の実施態様において、患者の貧血を治療する方法は、一本鎖可変断片を患者に投与することを含み、前記一本鎖可変断片は以下のものに特異的に結合する。ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又はｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【００３８】
特定の実施態様において、患者における組織保護を促進する方法が提供される。特定に実施態様において、患者の組織保護を促進する方法は、一本鎖可変断片を患者に投与することを含み、前記一本鎖可変断片は特異的に以下のものを結合する。ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又はｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【００３９】
特定の実施態様において、哺乳動物におけるエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法が提供される。特定の実施態様において、哺乳動物におけるエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法は、一本鎖可変断片の一定量を哺乳動物に投与することを含み、前記一本鎖可変断片は以下のものに特異的に結合する。ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又はｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【００４０】
特定の実施態様において、抗体が提供される。特定の実施態様において、抗体は以下のものに特異的に結合する。ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又はｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【００４１】
特定の実施態様において、患者の貧血を治療する方法が提供される。特定の実施態様において、患者の貧血を治療する方法は、抗体を患者に投与することを含み、前記抗体は以下のものに特異的に結合する。ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又はｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【００４２】
特定の実施態様において、患者における組織保護を促進する方法が提供される。特定に実施態様において、患者の組織保護を促進する方法は、抗体を患者に投与することを含み、前記抗体は以下のものに特異的に結合する。ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又はｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【００４３】
特定の実施態様において、哺乳動物におけるエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法が提供される。特定の実施態様において、哺乳動物におけるエリスロポエチン受容体の内因性活性を活性化する方法は、抗体の一定量を哺乳動物に投与することを含み、前記抗体は以下のものに特異的に結合する。ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又はｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【００４４】
特定の実施態様において、一本鎖可変断片の作製方法が提供される。特定の実施態様において、一本鎖可変断片の作製方法は、宿主細胞における一本鎖可変断片の発現を含む。特定の実施態様において、この一本鎖可変断片は以下のものに特異的に結合する。ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又はｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【００４５】
特定の実施態様において、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片の作製方法が提供される。特定の実施態様において、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片の作製方法は、宿主細胞中で、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片を発現させることを含む。特定の実施態様において、一本鎖可変断片は特異的に次に結合する。ａ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４；ｂ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４；ｃ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３；ｄ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０；ｅ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｆ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；ｇ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０；又はｈ）少なくともヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９。
【００４６】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体に結合する抗体が提供される。特定の実施態様において、前記抗体は、以下のものから選択される一つ又はそれ以上の配列を含む。Ａ）以下のものを含む第一のアミノ酸配列：ｉ）Ｘ１が任意のアミノ酸であり、及びＸ５が任意のアミノ酸である式：Ｘ１ＹＷＭＸ５を有するＣＤＲ１；ｉｉ）Ｘ１２が任意のアミノ酸である式：ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＶＸ１２ＳＶＫＧを有するＣＤＲ２；及びｉｉｉ）Ｘ７が任意のアミノ酸である式：ＶＳＲＧＧＳＸ７ＳＤを有するＣＤＲ３；並びにＢ）以下のものを含む第二のアミノ酸配列：ｉ）Ｘ７が任意のアミノ酸であり、Ｘ９が任意のアミノ酸であり、Ｘ１１が任意のアミノ酸である式：ＴＧＴＳＳＤＸ７ＧＸ９ＹＸ１１ＹＶＳを有するＣＤＲ１；及びｉｉ）Ｘ１が任意のアミノ酸であり、Ｘ３が任意のアミノ酸であり、Ｘ４が任意のアミノ酸である式：Ｘ１ＶＸ３Ｘ４ＲＰＳを有するＣＤＲ２。
【００４７】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体に結合する一本鎖可変断片が提供される。特定の実施態様において、前記一本鎖可変断片は、以下のものから選択される一つ又はそれ以上の配列を含む。Ａ）以下のものを含む第一のアミノ酸配列：ｉ）Ｘ１が任意のアミノ酸であり、Ｘ５が任意のアミノ酸である式：Ｘ１ＹＷＭＸ５を有するＣＤＲ１；ｉｉ）Ｘ１２が任意のアミノ酸である式：ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＶ  Ｘ１２  ＳＶＫＧを有するＣＤＲ２；及びｉｉｉ）Ｘ７が任意のアミノ酸である式：ＶＳＲＧＧＳ  Ｘ７  ＳＤを有するＣＤＲ３；並びにＢ）以下を含む第二のアミノ酸配列：ｉ）Ｘ７が任意のアミノ酸で、Ｘ９が任意のアミノ酸であり、Ｘ１１が任意のアミノ酸である式：ＴＧＴＳＳＤＸ７ＧＸ９ＹＸ１１ＹＶＳを有するＣＤＲ１；及びｉｉ）Ｘ１が任意のアミノ酸であり、Ｘ３が任意のアミノ酸であり、Ｘ４が任意のアミノ酸である式：Ｘ１ＶＸ３Ｘ４ＲＰＳを有するＣＤＲ２。
【００４８】
特定の実施態様において、野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの３４位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない抗体が提供される。
【００４９】
特定に実施態様において、野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの６０位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない抗体が提供される。
【００５０】
特定に実施態様において、野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、変異体Ｅｐｏ受容体の細胞外ドメインの８８位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない抗体が提供される。
【００５１】
特定に実施態様において、野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの１５０位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない抗体が提供される。
【００５２】
特定に実施態様において、野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの８７位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない抗体が提供される。
【００５３】
特定に実施態様において、野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの６３位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない抗体が提供される。
【００５４】
特定に実施態様において、野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの６４位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない抗体が提供される。
【００５５】
特定に実施態様において、野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの９９位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない抗体が提供される。
【００５６】
特定に実施態様において、野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの３４位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない一本鎖可変断片が提供される。
【００５７】
特定に実施態様において、野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの６０位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない一本鎖可変断片が提供される。
【００５８】
特定に実施態様において、野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの８８位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない一本鎖可変断片が提供される。
【００５９】
特定に実施態様において、野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの１５０位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない一本鎖可変断片が提供される。
【００６０】
特定に実施態様において、野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの８７位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない一本鎖可変断片が提供される。
【００６１】
特定に実施態様において、野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの６３位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない一本鎖可変断片が提供される。
【００６２】
特定に実施態様において、野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの６４位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない一本鎖可変断片が提供される。
【００６３】
特定に実施態様において、野生型のヒトＥｐｏ受容体に結合するが、細胞外ドメインの９９位のアミノ酸がアルギニンである変異体Ｅｐｏ受容体に結合しない一本鎖可変断片が提供される。
【００６４】
ある実施態様の詳細な説明
特許、特許出願、文献、書物及び論文など（但し、これらに限定されない。）、本願に引用される全ての文献又は文献の一部は、あらゆる目的のために、それらの全体が、参照により、本明細書中に明示的に組み込まれる。参照により組み込まれる文献の１つ又はそれ以上が、本願における用語の定義と矛盾する用語を定義している場合には、本願が優越する。
【００６５】
具体的な定義が記されていなければ、本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学及び医薬品化学及び薬化学に関して使用される命名法、並びに本明細書に記載されている分析化学、合成有機化学及び医薬品化学及び薬化学の実験室操作及び技術は、周知のものであり、本分野で一般的に使用されているものである。化学合成、化学分析、薬学的な調製、調合、送達、及び患者の治療に対しては、標準的な技術を使用し得る。
【００６６】
本願において、単数形の使用は、別段の記載がなければ、複数形を含む。
本願において、「又は」の使用は、別段の記載がなければ、「及び／又は」を意味する。多数従属の請求項における「又は」の使用は、先行する２以上の従属項又は独立項を選択的にのみ引用する。さらに、「含んでいる」という用語並びに「含む」及び「含まれた」などのその他の形式の使用は、限定的なものではない。また、「要素」又は「成分」などの用語は、別段の記載がなければ、一つのユニットを含む要素及び成分並びに１より多いサブユニットを含む要素及び成分を包含する。
【００６７】
本発明に従って使用される場合、以下の用語は、別段の記載がなければ、以下の意味を有するものと理解しなければならない。
【００６８】
本明細書において使用される「単離されたポリヌクレオチド」という用語は、ゲノム、ｃＤＮＡ若しくは合成起源又はこれらの幾つかの組み合わせのポリヌクレオチドを意味するものとし、その起源のために、「単離されたポリヌクレオチド」は、（１）「単離されたポリヌクレオチド」が天然に見出されるポリヌクレオチドの全部又は一部を伴っていない、（２）本来連結されていないポリヌクレオチドに作用可能に連結されている、又は（３）より大きな配列の一部として天然に存在していないものを意味する。
【００６９】
「ポリヌクレオチド」及び「オリゴヌクレオチド」という用語は互換的に使用され、本明細書において、少なくとも２塩基の長さのヌクレオチドのポリマー形態を意味する。ある実施形態において、塩基は、リボヌクレオチド、デオキシリボヌクレオチド及びヌクレオチドの何れかの種類の修飾された形態の少なくとも１つを含み得る。本用語は、ＤＮＡの一本鎖及び二本鎖形態を含む。ある実施形態において、本明細書に記載されているある種のポリペプチドをコードする特異的なポリヌクレオチドと相補的なポリヌクレオチドが提供される。
【００７０】
「天然に存在するヌクレオチド」という用語には、デオキシリボヌクレオチド及びリボヌクレオチドが含まれる。デオキシリボヌクレオチドには、アデノシン、グアニン、シトシン及びチミジンが含まれるが、これらに限定されない。リボヌクレオチドには、アデノシン、シトシン、チミジン及びウラシルが含まれるが、これらに限定されない。「修飾されたヌクレオチド」という用語には、修飾又は置換された糖基などを有するヌクレオチドが含まれるが、これらに限定されない。「ポリヌクレオチド連結」という用語には、ホスホロチオアート、ホスホロジチオアート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノアート、ホスホロアニロチオアート（ｐｈｏｓｐｈｏｒｏａｎｉｌｏｔｈｉｏａｔｅ）、ホスホルアニラダート（ｐｈｏｓｈｏｒａｎｉｌａｄａｔｅ）、ホスホロアミダートなどのポリヌクレオチド連結が含まれる。例えば、ＬａＰｌａｎｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：９０８１（１９８６）；Ｓｔｅｃ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１０６：６０７７（１９８４）；Ｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１６：３２０９（１９８８）；Ｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ６：５３９（１９９１）；Ｚｏｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｕｅｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，ｐｐ．８７−１０８（Ｆ．  Ｅｃｋｓｔｅｉｎ，Ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｅｎｇｌａｎｄ（１９９１））；Ｓｔｅｃ  ｅｔ  ａｌ．米国特許第５，１５１，５１０号；Ｕｈｌｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｐｅｙｍａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ９０：５４３（１９９０）を参照されたい。ある実施形態において、ポリヌクレオチドは、検出用の標識を含むことができる。
【００７１】
「単離されたポリペプチド」という用語は、（１）当該ポリペプチドと通常一緒に見出されるタンパク質の少なくとも幾つかを含まない、（２）同じ源から、例えば、同じ種からの他のタンパク質を実質的に含まない、（３）異なる種から細胞によって発現される、又は（４）天然には存在しないあらゆるポリペプチドを表す。
【００７２】
「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」という用語は、本明細書において互換的に使用され、ペプチド結合又は修飾されたペプチド結合によって互いに連結された２つ又はそれ以上のアミノ酸のポリマー、すなわちペプチド同配体を表す。本用語は、天然に存在するアミノ酸を含有するアミノ酸ポリマー及び１又はそれ以上のアミノ酸残基が天然に存在しないアミノ酸又は天然に存在しないアミノ酸の化学的類縁体であるアミノ酸ポリマーを表す。アミノ酸ポリマーは、翻訳後プロセッシングなどの１つ若しくはそれ以上の天然のプロセスによって修飾された１つ若しくはそれ以上のアミノ酸残基、及び／又は本分野で公知の１つ若しくはそれ以上の化学的修飾技術によって修飾された１つ若しくはそれ以上のアミノ酸残基を含有し得る。
【００７３】
基準ポリペプチドの「断片」は、基準ポリペプチドの何れかの一部から得られるアミノ酸の連続する連なりを表す。断片は、基準ポリペプチドの長さより少ないあらゆる長さの断片であり得る。
【００７４】
基準ポリペプチドの「バリアント」は、基準ポリペプチドに比べて、１つ又はそれ以上のアミノ酸置換、欠失又は挿入を有するポリペプチドを表す。ある種の実施形態において、基準ポリペプチドのバリアントは、変化した翻訳後修飾部位（例えば、グリコシル化部位）を有する。ある種の実施形態において、基準ポリペプチド及び基準ポリペプチドのバリアントは何れも、特異的な結合因子である。ある種の実施形態において、基準ポリペプチド及び基準ポリペプチドのバリアントは何れも抗体である。
【００７５】
基準ポリペプチドのバリアントには、グリコシル化バリアントが含まれるが、これに限定されない。グリコシル化バリアントには、基準ポリペプチドと比べて、グリコシル化部位の数及び／又は種類が変化しているバリアントが含まれる。ある実施形態において、基準ポリペプチドのグリコシル化バリアントは、基準ポリペプチドより、Ｎ結合型グリコシル化部位のより多い数又はより少ない数を含む。ある種の実施形態において、Ｎ結合型グリコシル化部位は、配列：Ａｓｎ−Ｘ−Ｓｅｒ又はＡｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒ（Ｘとして表記されているアミノ酸残基は、プロリンを除く全てのアミノ酸残基であり得る。）によって特徴付けられる。ある種の実施形態において、基準ポリペプチドのグリコシル化バリアントは、１つ又はそれ以上のＮ結合型グリコシル化部位（典型的には、天然に存在するもの）が除去され、及び１つ又はそれ以上の新たなＮ結合型部位が作製されるＮ結合型炭水化物鎖の再配置を含む。
【００７６】
基準ポリペプチドのバリアントには、システインバリアントが含まれるが、これに限定されない。ある種の実施形態において、システインバリアントには、基準ポリペプチドの１つ若しくはそれ以上のシステイン残基が１つ若しくはそれ以上の非システイン残基によって置換されており、及び／又は基準ポリペプチドの１つ若しくはそれ以上の非システイン残基が１つ若しくはそれ以上のシステイン残基によって置換されているバリアントが含まれる。システインバリアントは、ある種の実施形態において、例えば、不溶性封入体の単離後に、あるポリペプチドが生物学的に活性な立体構造に再折り畳みされなければならない場合に有用であり得る。ある種の実施形態において、基準ポリペプチドのシステインバリアントは、基準ポリペプチドより少ないシステイン残基を有する。ある種の実施形態において、基準ポリペプチドのシステインバリアントは、対を形成していないシステインから生じる相互作用を最小限に抑えるために、システインの偶数を有する。ある種の実施形態において、システインバリアントは、固有状態のタンパク質より多いシステイン残基を有する。
【００７７】
基準ポリペプチドの「誘導体」は、（１）基準ポリペプチドの１つ若しくはそれ以上のアミノ酸残基の１つ若しくはそれ以上の修飾を有するポリペプチド、及び／又は（２）１つ若しくはそれ以上のポリペプチド結合が１つ若しくはそれ以上の非ポリペプチド結合で置換されているポリペプチド、及び／又は（３）Ｎ末端及び／又はＣ末端が修飾されているポリペプチドを表す。ある種の典型的な修飾には、アセチル化、アシル化、ＡＤＰリボシル化、アミド化、ビオチン化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチド又はヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質又は脂質誘導体の共有結合、ホスファチジルイノシトールの共有結合、架橋、環状化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、共有架橋の形成、シスチンの形成、ピログルタミン酸の形成、ホルミル化、γ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨード化、メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解プロセッシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレノイル化、硫化、転移ＲＮＡによって媒介されるタンパク質へのアミノ酸の付加（アルギニル化など）及びユビキチン化が含まれるが、これらに限定されない。ある種の実施形態において、基準ポリペプチド及び基準ポリペプチドの誘導体は何れも、特異的な結合因子である。ある種の実施形態において、基準ポリペプチド及び基準ポリペプチドの誘導体は何れも抗体である。
【００７８】
ポリペプチドには、翻訳後プロセッシングなどの天然のプロセスによって、又は本分野で周知である化学的修飾技術によって修飾されたアミノ酸配列が含まれるが、これらに限定されない。ある種の実施形態において、修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖及びアミノ又はカルボキシル末端など、ポリペプチド中のあらゆる場所において起こり得る。ある種のこのような実施形態において、修飾は、あるポリペプチド中の複数の部位において、同じ程度まで、又は異なる程度まで存在し得る。ある種の実施形態において、所定のポリペプチドは、固有配列の１つ又はそれ以上のアミノ酸の欠失、付加及び／又は置換など、修飾の多くの種類を含有する。ある種の実施形態において、ポリペプチドは分岐及び／又は環状であり得る。環状、分岐及び分岐環状ポリペプチドは、翻訳後天然プロセス（ユビキチン化を含むが、これに限定されない。）から生じ得、又は合成法によって作製され得る。ある種の実施形態において、ある種のポリペプチド配列は、少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。
【００７９】
ある対象に対して適用される、「天然に存在する」という用語は、対象を自然に見出すことができることを意味する。例えば、自然の取得源から単離することができる生物（ウイルスを含む。）中に存在し、実験室その他においてヒトが意図的に修飾を加えていないポリペプチド又はポリヌクレオチドは、天然に存在する。
【００８０】
本明細書において使用される「作用可能に連結された」という用語は、それらを所期の様式で機能させることができる関係にある成分を表す。例えば、ポリヌクレオチド配列では、調節配列の機能と適合的な条件下で、コード配列の発現が達成されるように、調節配列及びコード配列が互いに会合している場合に、調節配列はコード配列に「作用可能に連結」され得る。
【００８１】
「調節配列」という用語は、それらが会合しているコード配列の発現及びプロセッシングに影響を与え得るポリヌクレオチド配列を表す。このような調節配列の性質は、宿主生物に応じて異なり得る。原核生物に対するある種の典型的な調節配列には、プロモーター、リボソーム結合部位及び転写終結配列が含まれるが、これらに限定されない。真核生物に対するある種の典型的な調節配列には、プロモーター、エンハンサー及び転写終結配列が含まれるが、これらに限定されない。ある種の実施形態において、「調節配列」は、リーダー配列及び／又は融合対配列を含み得る。
【００８２】
ある種の実施形態において、単一の連続するポリペプチド中に翻訳され得る単一の連続するｍＲＮＡへ、第一及び第二のポリヌクレオチドコード配列が転写される場合に、第一のポリヌクレオチドコード配列は、第二のポリペプチドコード配列へ作用可能に連結されている。
【００８３】
ポリペプチドに関して、連結された各ポリペプチドがその所期の様式で機能することが可能であれば、２つ又はそれ以上のポリペプチドは「作用可能に連結」されている。別のポリペプチドに作用可能に連結された場合に、その所期の様式で機能することができるポリペプチドは、別のポリペプチドに作用可能に連結されていない場合に、その所期の様式で機能することが可能であり得、又は不能であり得る。例えば、ある種の実施形態において、第一のポリペプチドは、連結されていない場合に、その所期の様式で機能することができない場合があり得るが、第一のポリペプチドがその所期の様式で機能することができるように、第二のポリペプチドへ連結されることによって安定化され得る。あるいは、ある種の実施形態において、第一のポリペプチドは、連結されていない場合に、その所期の様式で機能し得、第二のポリペプチドへ作用可能に連結されている場合に、その能力を保持し得る。
【００８４】
本明細書において使用する場合、２つ又はそれ以上のポリペプチドが連結されて、単一の連続する分子を形成する場合に、２つ又はそれ以上のポリペプチドは「融合」されている。ある種の実施形態において、２つ又はそれ以上のポリペプチドは、単一の連続するポリペプチド配列としてそれらを翻訳することによって、又は単一の連続するポリペプチド配列としてそれらを合成することによって融合される。ある種の実施形態において、２つ又はそれ以上の融合されたポリペプチドは、作用可能に連結された２つ又はそれ以上のポリヌクレオチドコード配列から、インビボにおいて翻訳され得る。ある種の実施形態において、２つ又はそれ以上の融合されたポリペプチドは、作用可能に連結された２つ又はそれ以上のポリヌクレオチドコード配列から、インビトロにおいて翻訳され得る。ある種の実施形態において、２つのポリペプチドがポリペプチド又は非ポリペプチドリンカーによって連結されている場合に、２つ又はそれ以上のポリペプチドは融合されている。
【００８５】
本明細書において使用される場合、連結された各ポリペプチドがその所期の様式で機能することが可能であれば、２つ又はそれ以上のポリペプチドは「作用可能に融合」されている。
【００８６】
ある種の実施形態において、第一のポリペプチドの異なるポリペプチド単位の少なくとも１つが第二のポリペプチドに連結されている限り、２つ又はそれ以上の異なるポリペプチド単位を含有する第一のポリペプチドは、第二のポリペプチドに連結されていると考えられる。非限定的な例として、ある種の実施形態において、以下の事例の全てにおいて、抗体は第二のポリペプチドに連結されていると考えられる。（ａ）第二のポリペプチドが抗体の重鎖ポリペプチドの１つに連結されている。（ｂ）第二のポリペプチドが抗体の軽鎖ポリペプチドの１つに連結されている。（ｃ）第二のポリペプチドの第一の分子が抗体の重鎖ポリペプチドの１つに連結されており、及び第二のポリペプチドの第二の分子が抗体の軽鎖ポリペプチドの１つに連結されている。並びに、（ｄ）第二のポリペプチドの第一及び第二の分子が抗体の第一及び第二の重鎖ポリペプチド並びに第二のポリペプチドの第三及び第四分子は抗体の第一及び第二の軽鎖ポリペプチドに連結されている。
【００８７】
ある種の実施形態において、「第二のポリペプチドに連結された第一のポリペプチド」という用語は、（ａ）第一のポリペプチドの唯一つの分子が第二のポリペプチドの唯一つの分子に連結されている、（ｂ）第一のポリペプチドの唯一つの分子が第二のポリペプチドの２以上の分子に連結されている、（ｃ）第一のポリペプチドの２以上の分子が第二のポリペプチドの唯一つの分子に連結されている、及び（ｄ）第一のポリペプチドの２以上の分子が第二のポリペプチドの２以上の分子に連結されている状況を包含する。ある種の実施形態において、連結された分子が第一のポリペプチドの２以上の分子及び第二のポリペプチドの唯一つの分子を包含する場合、第一のポリペプチドの全て又は第一のポリペプチドの全てより少ない分子が第二のポリペプチドに共有結合され、又は非共有結合され得る。ある種の実施形態において、連結された分子が第一のポリペプチドの２以上の分子を含む場合、第一のポリペプチドの１つ又はそれ以上の分子が第一のポリペプチドの他の分子に共有結合され、又は非共有結合され得る。
【００８８】
本明細書において使用される「柔軟なリンカー」とは、その化学的構造により、三次元空間中で固定されると予測されない全てのリンカーを表す。当業者は、あるリンカーが、その予定される文脈において、柔軟であるかどうかを予測することができる。ある種の実施形態において、３つ又はそれ以上のアミノ酸を含むペプチドリンカーが柔軟なリンカーである。
【００８９】
本明細書において使用される、２０の慣用アミノ酸及びそれらの略号は、慣用的な用法に従う。「Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ−Ａ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｅ．Ｓ．  Ｇｏｌｕｂ  ａｎｄ  Ｄ．  Ｒ．  Ｇｒｅｎ，Ｅｄｓ．，Ｓｉｎａｕｅｒ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ，Ｓｕｎｄｅｒｌａｎｄ，Ｍａｓｓ．（１９９１））」を参照されたい。ある種の実施形態において、１つ又はそれ以上の非慣用アミノ酸がポリペプチド中に取り込まれ得る。「非慣用アミノ酸」という用語は、２０の慣用アミノ酸の１つでないあらゆるアミノ酸を表す。「天然に存在しないアミノ酸」という用語は、天然に見出されないアミノ酸を表す。天然に存在しないアミノ酸は、非慣用アミノ酸の亜群である。非慣用アミノ酸には、２０の慣用アミノ酸の立体異性体（例えば、Ｄアミノ酸）、α、α−二置換されたアミノ酸、Ｎ−アルキルアミノ酸、乳酸、ホモセリン、ホモシステイン、４−ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、ε−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルリジン、ε−Ｎ−アセチルリジン、Ｏ−ホスホセリン、Ｎ−アセチルセリン、Ｎ−ホルミルメチオニン、３−メチルヒスチジン、５−ヒドロキシリジン、σ−Ｎ−メチルアルギニン並びに本分野で公知の他の類似のアミノ酸及びイミノ酸（例えば、４−ヒドロキシプロリン）などの非天然アミノ酸が含まれるが、これらに限定されない。本明細書において使用されるポリペプチドの表記法では、標準的な用法と慣習に従って、左手方向がアミノ末端方向であり、右手方向がカルボキシ末端方向である。
【００９０】
ある種の実施形態において、保存的アミノ酸置換は、１つ又はそれ以上の非慣用アミノ酸残基での置換を含む。ある種の実施形態において、非慣用アミノ酸残基は、生物系内での合成によってではなく、化学的なペプチド合成によって取り込まれる。
【００９１】
「酸性残基」という用語は、同一又は異なる２つの他のアミノ酸残基間において、ポリペプチド中に取り込まれた場合に、少なくとも１つの酸性基を含むＤ型又はＬ型のアミノ酸残基を表す。ある種の実施形態において、酸性残基は少なくとも１つの酸性基を含む側鎖を含む。典型的な酸性残基には、アスパラギン酸（Ｄ）及びグルタミン酸（Ｅ）が含まれるが、これに限定されない。ある種の実施形態において、酸性残基は非慣用アミノ酸であり得る。
【００９２】
「芳香族残基」という用語は、少なくとも１つの芳香族基を含むＤ型又はＬ型のアミノ酸残基を表す。ある種の実施形態において、芳香族残基は少なくとも１つの芳香族基を含む側鎖を含む。典型的な芳香族残基には、フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）及びトリプトファン（Ｗ）が含まれるが、これらに限定されない。ある種の実施形態において、芳香族残基は非慣用アミノ酸であり得る。
【００９３】
「塩基性残基」という用語は、同一又は異なる１つ又はそれ以上のアミノ酸残基に隣接して、ポリペプチド中に取り込まれた場合に、少なくとも１つの塩基性基を含み得るＤ型又はＬ型のアミノ酸残基を表す。ある種の実施形態において、塩基性残基は少なくとも１つの塩基性基を含む側鎖を含む。典型的な塩基性残基には、ヒスチジン（Ｈ）、リジン（Ｋ）及びアルギニン（Ｒ）が含まれるが、これらに限定されない。ある種の実施形態において、塩基性残基は非慣用アミノ酸であり得る。
【００９４】
「中性親水性残基」という用語は、同一又は異なる１つ又はそれ以上のアミノ酸残基に隣接して、ポリペプチド中に取り込まれた場合に、少なくとも１つの親水性及び／又は極性基を含むが、酸性又は塩基性基を含まないＤ型又はＬ型のアミノ酸残基を表す。典型的な中性親水性残基には、アラニン（Ａ）、システイン（Ｃ）、セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）、アスパラギン（Ｎ）及びグルタミン（Ｑ）が含まれるが、これらに限定されない。ある種の実施形態において、天然の中性残基は非慣用アミノ酸であり得る。
【００９５】
「親油性残基」及び「Ｌａａ」という用語は、少なくとも１つの非帯電脂肪族基及び／又は芳香族基を有するＤ型又はＬ型のアミノ酸残基を表す。ある種の実施形態において、親油性残基は少なくとも１つの非帯電脂肪族及び／又は芳香族基を含む側鎖を含む。典型的な親油性側鎖には、アラニン（Ａ）、フェニルアラニン（Ｆ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、ノルロイシン（Ｎｌｅ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）、トリプトファン（Ｗ）及びチロシン（Ｙ）が含まれるが、これらに限定されない。ある種の実施形態において、親油性残基は非慣用アミノ酸であり得る。
【００９６】
「両親媒性残基」という用語は、疎水性又は親油性残基の何れかであり得るＤ型又はＬ型のアミノ酸残基を表す。典型的な両親媒性残基には、アラニン（Ａ）が含まれるが、これに限定されない。ある種の実施形態において、両親媒性残基は非慣用アミノ酸であり得る。
【００９７】
「非機能的残基」という用語は、同一又は異なる１つ又はそれ以上のアミノ酸残基に隣接して、ポリペプチド中に取り込まれた場合に、酸性、塩基性及び芳香族基を欠如するＤ型又はＬ型のアミノ酸残基を表す。典型的な非機能的アミノ酸残基には、メチオニン（Ｍ）、グリシン（Ｇ）、アラニン（Ａ）、バリン（Ｖ）、イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）及びノルロイシン（Ｎｌｅ）が含まれるが、これらに限定されない。ある種の実施形態において、非機能的残基は非慣用アミノ酸であり得る。
【００９８】
ある種の実施形態において、グリシン（Ｇ）及びプロリン（Ｐ）は、ポリペプチド鎖の配向性に影響を与えることができるアミノ酸残基と考えられる。
【００９９】
ある種の実施形態において、保存的置換は、１つの残基種のメンバーを同じ残基種のメンバーと置換することを含み得る。非限定的な例として、ある種の実施形態において、保存的置換は、Ｄなどの酸性残基をＥなどの異なる酸性残基と置換することを含み得る。ある種の実施形態において、非保存的置換は、１つの残基種のメンバーを異なる残基種のメンバーと置換することを含み得る。非限定的な例として、ある種の実施形態において、非保存的置換は、Ｄなどの酸性残基をＫなどの塩基性残基と置換することを含み得る。ある種の実施形態において、ポリペプチドの中の当該位置とのジスルフィド結合形成を防ぐために、システイン残基は別のアミノ酸残基で置換される。
【０１００】
保存的又は非保存的置換を作製する上で、ある種の実施形態に従えば、アミノ酸のヒドロパチー指数を検討し得る。各アミノ酸には、その疎水性及び電荷特性に基づいて、ヒドロパチー指数が割り当てられている。天然に存在する２０のアミノ酸のヒドロパチー指数は、イソロイシン（＋４．５）；バリン（＋４．２）；ロイシン（＋３．８）；フェニルアラニン（＋２．８）；システイン／シスチン（＋２．５）；メチオニン（＋１．９）；アラニン（＋１．８）；グリシン（−０．４）；スレオニン（−０．７）；セリン（−０．８）；トリプトファン（−０．９）；チロシン（−１．３）；プロリン（−１．６）；ヒスチジン（−３．２）；グルタミン酸（−３．５）；グルタミン（−３．５）；アスパラギン酸（−３．５）；アスパラギン（−３．５）；リジン（−３．９）；及びアルギニン（−４．５）である。
【０１０１】
タンパク質に対する相互作用性生物機能を付与する上でのヒドロパチーアミノ酸指数の重要性は、本分野において理解されている。Ｋｙｔｅ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，１５７：１０５−１３１（１９８２）。ある種の事例では、ある種のアミノ酸は、類似のヒドロパチー指数又はスコアを有する別のアミノ酸と置換可能であり、類似の生物活性をなお保持し得ることが知られている。ヒドロパチー指数に基づいて変化を行う際には、ある種の実施形態において、そのヒドロパチー指数が±２以内であるアミノ酸の置換が含まれる。ある種の実施形態において、±１以内のものが含まれ、ある種の実施形態においては、±０．５以内のものが含まれる。
【０１０２】
置換によって作製される生物学的に機能的なタンパク質又はペプチドが、本件におけると同様に、免疫学的実施形態において使用されることが意図される場合には、類似アミノ酸の置換は、親水性に基づいて効果的に行い得ることも本分野において理解される。ある種の実施形態において、その隣接するアミノ酸の親水性によって支配される、タンパク質の最大局所平均親水性は、その免疫原性及び抗原性と、すなわち、ポリペプチドの生物学的特性と相関する。
【０１０３】
以下の親水性値が、これらのアミノ酸残基に割り振られている。アルギニン（＋３．０）；リジン（＋３．０）；アスパラギン酸（＋３．０  ±  １）；グルタミン酸（＋３．０  ±  １）；セリン（＋０．３）；アスパラギン（＋０．２）；グルタミン（＋０．２）；グリシン（０）；スレオニン（−０．４）；プロリン（−０．５  ±  １）；アラニン（−０．５）；ヒスチジン（−０．５）；システイン（−１．０）；メチオニン（−１．３）；バリン（−１．５）；ロイシン（−１．８）；イソロイシン（−１．８）；チロシン（−２．３）；フェニルアラニン（−２．５）及びトリプトファン（−３．４）である。類似の親水性値に基づいて変化を行う場合、ある種の実施形態において、その親水性値が±２以内のアミノ酸の置換が含まれ、ある種の実施形態において、±１以内のものが含まれ、ある種の実施形態において、±０．５以内のものが含まれる。ある種の事例において、一次アミノ酸配列由来のエピトープは、親水性に基づいても同定し得る。これらの領域は、「エピトープコア領域」とも称される。
【０１０４】
典型的なアミノ酸置換は、表１に示されている。
【０１０５】
【表１】
2009533057.tif 000002
2009533057.tif 000003
【０１０６】
同様に、本明細書において使用される場合、別段の記載がなければ、一本鎖ポリヌクレオチド配列の左手末端は５’末端である。二本鎖ポリヌクレオチド配列の左手方向は、５’方向と称される。新生ＲＮＡ転写物の５’から３’付加の方向は、本明細書において、転写方向と称される。ＲＮＡと同一の配列をするＤＮＡ鎖上の、ＲＮＡ転写物の５’から５’末端への配列領域は、本明細書において、「上流配列」と称される。ＲＮＡと同一の配列をするＤＮＡ鎖上の、ＲＮＡ転写物の３’から３’末端への配列領域は、本明細書において、「下流配列」と称される。
【０１０７】
ある種の実施形態において、保存的アミノ酸置換は、天然に存在しないアミノ酸残基を包含し、これは、通例、生物系での合成によって又は化学的なペプチド合成によって取り込まれる。天然に存在しないアミノ酸残基には、ペプチド模倣物及びアミノ酸部分の反転又は逆転した形態が含まれるが、これらに限定されない。
【０１０８】
当業者は、周知の技術を用いて、本明細書に記載されている基準ポリペプチドの適切な置換バリアントを決定することが可能である。ある種の実施形態において、当業者は、活性にとって重要でないと思われている領域を標的とすることによって、活性を破壊することなく変化させることができる分子の適切な領域を同定し得る。ある種の実施形態において、類似のポリペプチドの間で保存されている分子の残基及び部分を同定することが可能である。ある種の実施形態において、生物活性を破壊せずに、又はポリペプチド構造に悪影響を及ぼさずに、抗体のＣＤＲなどの（但し、これに限定されない。）生物活性にとって重要であり得る、又は構造にとって重要であり得る領域を保存的アミノ酸置換に供してもよい。
【０１０９】
さらに、ある種の実施形態において、当業者は、活性及び／又は構造にとって重要である、類似のポリペプチド中の残基を同定する構造−機能研究を参照することが可能である。このような比較に照らして、ある種の実施形態において、類似のポリペプチド中の活性又は構造にとって重要であるアミノ酸残基に対応する、ポリペプチド中のアミノ酸残基の重要性を予測することが可能である。ある種の実施形態において、当業者は、このような予測された重要なアミノ酸残基に対する化学的に類似のアミノ酸置換を選択し得る。
【０１１０】
ある種の実施形態において、当業者は、類似のポリペプチド中のその構造に関連して、三次元構造及びアミノ酸配列も分析することが可能である。このような情報に照らして、当業者は、その三次元構造に関して、抗体のアミノ酸残基のアラインメントを予測し得る。ある種の実施形態において、タンパク質の表面上に存在すると予測されるアミノ酸残基は、他の分子との重要な相互作用に関与できるので、このような残基に極端な変化を施さないように選択し得る。さらに、ある種の実施形態において、当業者は、所望される各アミノ酸残基に単一のアミノ酸置換を含有する試験バリアントを作製し得る。ある種の実施形態におい、次いで、このバリアントは、当業者に公知の活性アッセイを用いてスクリーニングすることが可能である。例えば、ある種の実施形態において、抗体に結合するそれらの能力に関してバリアントをスクリーニングすることができる。ある種の実施形態において、このようなバリアントは、適切なバリアントについての情報を集めるために使用し得る。例えば、ある種の実施形態において、あるアミノ酸残基に対する変化が破壊された活性、望ましくない減少した活性又は不適切な活性をもたらせば、このような変化を有するバリアントは回避することが可能である。換言すれば、このような定型的実験から集められた情報に基づいて、当業者は、単独で、又は他の変異と組み合わせて、さらなる置換が回避されるべきアミノ酸を容易に決定することが可能である。
【０１１１】
多数の科学的刊行物が、二次構造の予測に注力している。Ｍｏｕｌｔ  Ｊ．，Ｃｕｎｒ．  Ｏｐ．  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．，７（４）：４２２−４２７（１９９６），Ｃｈｏｕ  ｅｔ  ａｉ，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１３（２）：２２２−２４５（１９７４）；Ｃｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１１３（２）：２１１−２２２（１９７４）；Ｃｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｄｖ．  Ｅｎｚｙｍｏｌ．  Ｒｅｌａｔ．  Ａｒｅａｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４７：４５−１４８（１９７８）；Ｃｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．，４７：２５１−２７６  ａｎｄ  Ｃｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｊ．，２６：３６７−３８４（１９７９）を参照。さらに、二次構造の予測を補助するために、現在、コンピュータプログラムを使用することが可能である。二次構造を予測する１つの方法は、相同性モデリングを基礎とする。例えば、３０％を超える配列同一性又は４０％を超える類似性を有する２つのポリペプチド又はタンパク質は、しばしば、類似の構造的トポロジーを有する。タンパク質構造データベース（ＰＤＢ）の近年の拡充によって、ポリペプチド又はタンパク質の構造内に存在し得る折り畳みの数など、増強された二次構造の予測可能性が得られている。Ｈｏｌｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．，２７（１）：２４４−２４７（１９９９）を参照。あるポリペプチド又はタンパク質中に限定された折り畳みの数が存在すること、及び、構造の臨界数が決定されれば、構造的予測は、劇的により正確になる。例えば、「Ｂｒｅｎｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，７（３）：３６９−３７６（１９９７）」を参照されたい。
【０１１２】
二次構造を予測するさらなる方法には、「スレディング（ｔｈｒｅａｄｉｎｇ）」（Ｊｏｎｅｓ，Ｄ．，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．，７（３）：３７７−８７（１９９７）；Ｓｉｐｐｌ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，４（１）：１５−１９（１９９６）），“ｐｒｏｆｉｌｅ  ａｎａｌｙｓｉｓ”（Ｂｏｗｉｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ．２５３：１６４−１７０（１９９１）；Ｇｒｉｂｓｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍ．１８３：１４６−１５９（１９９０）；Ｇｒｉｂｓｋｏｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．,８４（１３）：４３５５−４３５８（１９８７））及び“進化的連鎖”（Ｈｏｌｍ，ｓｕｐｒａ（１９９９）ａｎｄ  Ｂｒｅｎｎｅｒ，ｓｕｐｒａ（１９９７）参照）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１１３】
ある種の実施形態において、関連するポリペプチドの同一性及び類似性は、公知の方法によって容易に計算することが可能である。このような方法には、「Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８８）；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９３）；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  １，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ（１９９４）；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９８７）；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．  ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ．  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９１）；ａｎｄ  Ｃａｒｉｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．，ＳＩＡＭ  Ｊ.  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ．，４８：１０７３（１９８８）」に記載されているものが含まれるが、これらに限定されない。ある種の実施形態において、実質的に同一のポリペプチドは、基準アミノ酸配列と約９０％、又は約９５％、又は約９６％、又は約９７％、又は約９８％、又は約９９％同一であるアミノ酸配列を有する。
【０１１４】
ある種の実施形態において、同一性を測定するための方法は、検査される配列間で最大の合致を与えるように設計される。ある種の実施形態において、同一性を決定するためのある種の方法は、公に入手可能なコンピュータプログラムに記載されている。２つの配列間の同一性を決定するための好ましいコンピュータプログラム法には、ＧＡＰ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄ．Ｒｅｓ．，１２：３８７（１９８４）；Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ，ＢＬＡＳＴＰ，ＢＬＡＳＴＮ，ａｎｄ  ＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ，Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ，２１５：４０３−４１０（１９９０））などのＧＣＧプログラムパッケージが含まれるが、これに限定されるものでない。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ＮＣＢＩ）及びその他の入手源（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．ＮＣＢ／ＮＬＭ／ＮＩＨ  Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍ２０８９４；Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ（１９９０））から公的に入手可能である。ある種の実施形態において、本分野において公知であるＳｍｉｔｈ  Ｗａｔｅｒｍａｎアルゴリズムも、同一性を決定するために使用し得る。
【０１１５】
２つのアミノ酸配列を併置するためのある種のアラインメントは、２つの配列の短い領域のみのマッチングをもたらし得、併置されたこの小さな領域は、２つの完全長配列の間に有意な関連性が存在しないとしても、極めて高い配列同一性を有し得る。従って、ある種の実施形態において、選択された並置法（ＧＡＰプログラム）は、標的ポリペプチドの少なくとも５０の連続するアミノ酸を包含する並置をもたらす。
【０１１６】
例えば、コンピュータアルゴリズムＧＡＰ（Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いて、２つのポリペプチドの各アミノ酸の最適なマッチングを得るために（本アルゴリズムによって決定される「合致したスパン」）、パーセント配列同一性を決定すべき２つのポリペプチドが併置される。ある種の実施形態において、ギャップオープニングペナルティ（典型的には、３Ｘ平均対角として計算される。「平均対角」は、使用されている比較行列の対角の平均である。「対角」は、この比較行列による各完全なアミノ酸の合致に対して割り当てられるスコア又は数である。）及びギャップ伸長ペナルティー（通常、ギャップオープニングペナルティの１／１０である。）並びにＰＡＭ２５０又はＢＬＯＳＵＭ６２などの比較行列が、アルゴリズムとともに使用される。ある種の実施形態において、標準的な比較マトリックスも、アルゴリズムによって使用される。Ｄａｙｈｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，５（３）（１９７８）ｆｏｒ  ｔｈｅ  ＰＡＭ  ２５０  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｍａｔｒｉｘ；Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，８９：１０９１５−１０９１９（１９９２）ｆｏｒ  ｔｈｅ  ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｍａｔｒｉｘを参照。
【０１１７】
ある種の実施形態において、ポリペプチド配列比較のためのパラメターには、以下のものが含まれる。
［０１５２］  Ｉｎ  ｃｅｒｔａｉｎ  ｅｍｂｏｄｉｍｅｎｔｓ，ｔｈｅ  ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ  ｆｏｒ  ａ  ｐｏｌｙｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ  ｉｎｃｌｕｄｅ  ｔｈｅ  ｆｏｌｌｏｗｉｎｇ：
アルゴリズム：Ｎｅｅｄｌｅｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，４８：４４３−４５３（１９７０）；
比較マトリックス：ＢＬＯＳＵＭ  ６２  ｆｒｏｍ  Ｈｅｎｉｋｏｆｆ  ｅｔ  ａｆ．，ｓｕｐｒａ（１９９２）；
ギャップペナルティ：１２
ギャップ長ペナルティ：４
類似性の閾値：０
【０１１８】
ある種の実施形態において、ＧＡＰプログラムは、上記パラメータとともに使用され得る。ある種の実施形態において、前記パラメータは、ＧＡＰアルゴリズムを用いるポリペプチド比較のための初期設定パラメータ（エンドギャップに対するペナルティーが存在しない。）である。
【０１１９】
ある種の実施形態によれば、アミノ酸置換は、（１）タンパク質分解に対する感受性を低下させる置換、（２）酸化に対する感受性を低下させる置換、（３）タンパク質複合体を形成するための結合親和性を変化させる置換、（４）結合親和性を変化させる置換及び／又は（４）このようなポリペプチドの他の物理化学的又は機能的特性を付与又は修飾する置換である。ある種の実施形態によれば、例えば、単一又は複数のアミノ酸置換（ある種の実施形態において、好ましくは、保存的アミノ酸置換）は、天然に存在する配列中に（ある種の実施形態において、好ましくは、分子間接触を形成するドメイン外のポリペプチドの部分中に）作製し得る。
【０１２０】
ある種の実施形態において、保存的アミノ酸置換は、典型的には、親配列の構造的特徴を実質的に変化させ得ない（例えば、置換アミノ酸は、親配列中に生じるヘリックスを破壊する傾向を示すべきではなく、又は親配列を特徴付ける二次構造の他の種類を崩壊させるべきでない。）。本分野で認められたポリペプチド二次構造及び三次構造の例は、例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ（Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ，Ｅｄ．，Ｗ．Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４））；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｃ．Ｂｒａｎｄｅｎ  ａｎｄ  Ｊ．Ｔｏｏｚｅ，ｅｄｓ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９９１））；及びＴｈｏｒｎｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３５４：１０５（１９９１）に記載されており、これらは各々、参照により本明細書中に組み込まれる。
【０１２１】
本明細書において使用される「ポリペプチド断片」という用語は、アミノ末端及び／又はカルボキシ末端の欠失を有するポリペプチドを表す。ある種の実施形態において、断片は、少なくとも２から１，０００アミノ酸長である。ある種の実施形態において、断片は、少なくとも５、６、８、１０、１４、２０、５０、７０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、４５０、５００又は１，０００アミノ酸長である。
【０１２２】
ペプチド類縁体は、一般に、テンプレートペプチドの特性と類似の特性を有する非ペプチド薬として、製薬産業で使用される。この種の非ペプチド化合物は、「ペプチド模倣体」と名づけられている。「Ｆａｕｃｈｅｒｅ，Ｊ．Ａｄｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓ．１５：２９（１９８６）；Ｖｅｂｅｒ  ａｎｄ  Ｆｒｅｉｄｉｎｇｅｒ  ＴＩＮＳ  ｐ．３９２（１９８５）；及びＥｖａｎｓ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．  Ｃｈｅｍ．３０：１２２９（１９８７）」。このような化合物は、しばしば、コンピュータ化された分子モデリングの助けを借りて開発される。治療的に有用なペプチドと構造的に類似するペプチド模倣体は、類似の治療効果又は予防効果を生じさせるために使用し得る。一般的に、ペプチド模倣体は、ヒト抗体などの模範ポリペプチド（すなわち、生化学的特性又は薬理学的活性を有するポリペプチド）と構造的に類似するが、本分野で周知の方法によって、−−ＣＨ２ＮＨ−−、−−ＣＨ２Ｓ−−、−−ＣＨ２−ＣＨ２−−、−−ＣＨ＝ＣＨ−（シス及びトランス）、−−ＣＯＣＨ２−−、−−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−−及び−−ＣＨ２ＳＯ−−から選択される結合によって必要に応じて置換された一又は複数のペプチド結合を有する。コンセンサス配列の１つ又はそれ以上のアミノ酸を同種のＤアミノ酸で体系的に置換すること（例えば、Ｌ−リジンに代えてＤ−リジン）は、ある種の実施形態において、より安定なペプチドを作製するために使用し得る。さらに、コンセンサス配列又は実質的に同一なコンセンサス配列変異を含む拘束されたペプチドは、本分野で公知の方法によって、例えば、限定を加えることなく、ペプチドを環状化する分子内ジスルフィド架橋を形成することができる内部システイン残基を付加することによって、作製され得る（Ｒｉｚｏ  ａｎｄ  Ｇｉｅｒａｓｃｈ  Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．６１：３８７（１９９２）、参照により、あらゆる目的のために、本明細書に組み込まれる。）。
【０１２３】
「特異的に結合する」という用語は、抗体が、非標的への結合に比べて大きな親和性で、標的に結合する能力を表す。ある実施形態において、特異的結合とは、非標的に対する親和性より少なくとも１０、５０、１００、２５０、５００又は１０００倍大きな親和性での、標的への結合を表す。ある実施形態において、親和性は、アフィニティＥＬＩＳＡアッセイによって決定される。ある実施形態において、親和性は、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイによって決定される。ある種の実施形態において、親和性は、速度論的な方法によって決定される。ある種の実施形態において、親和性は、平衡／溶液法によって測定される。
【０１２４】
「抗体」又は「抗体ペプチド」は何れも、完全な状態の抗体又はその断片を表す。ある種の実施形態において、断片は、完全な状態の抗体の連続する一部を含む。ある種の実施形態において、断片は、完全な状態の抗体の連続していない一部を含む。ある種の実施形態において、抗体はｓｃＦｖを含む。ある種の実施形態において、抗体は少なくとも１つのＣＤＲを含むポリペプチドを含む。ある種の実施形態において、抗体断片は、特異的結合に関して、原型状態の抗体と競合する結合断片であり得る。「抗体」という用語は、ポリクローナル抗体及びモノクローナル抗体も包含する。ある種の実施形態において、結合断片は、組み換えＤＮＡ技術によって産生される。ある種の実施形態において、結合断片は、原型状態の抗体の酵素的又は化学的切断によって産生される。ある種の実施形態において、結合断片は、組み換えＤＮＡ技術によって産生される。結合断片には、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ（マキシボディ）及び一本鎖抗体が含まれるが、これらに限定されない。非抗原結合断片には、Ｆｃ断片が含まれるが、これに限定されない。「抗体」という用語は、別の抗体の可変領域へ特異的に結合する抗イディオタイプ抗体も包含する。ある種の実施形態において、試料中の特定の抗体の存在を検出するために、又は抗体の活性を遮断するために抗イディオタイプ抗体を使用し得る。
【０１２５】
抗体の特異性を測定するためのある種のアッセイが当業者に周知であり、ＥＬＩＳＡ、ＥＬＩＳＰＯＴ、ウェスタンブロット、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイ及び溶液親和性結合アッセイが含まれるが、これらに限定されない。
【０１２６】
本明細書において使用される「単離された抗体」という用語は、（１）当該ポリペプチドと通常一緒に見出されるタンパク質の少なくとも幾つかを含まない、（２）同じ源から、例えば、同じ種からの他のタンパク質を実質的に含まない、（３）異なる種から細胞によって発現される、又は（４）天然には存在しないあらゆる抗体を表す。
【０１２７】
「ポリクローナル抗体」という用語は、同じ抗原の異なるエピトープに結合する抗体の不均一な混合物を表す。
【０１２８】
「モノクローナル抗体」という用語は、同じ核酸分子によってコードされる抗体の集合を表す。ある種の実施形態において、モノクローナル抗体は、単一のハイブリドーマ若しくはその他の細胞株によって、又はトランスジェニック哺乳動物によって産生される。モノクローナル抗体は、典型的には、同じエピトープを認識する。「モノクローナル」という用語は、抗体を作製するための何れの特定の方法にも限定されない。
【０１２９】
「ＣＤＲグラフトされた抗体」という用語は、ある抗体由来のＣＤＲが別の抗体のフレームワーク中に挿入されている抗体を表す。ある種の実施形態において、ＣＤＲが由来する抗体及びフレームが由来する抗体は、異なる種のものである。ある種の実施形態において、ＣＤＲが由来する抗体及びフレームが由来する抗体は、異なるイソタイプのものである。
【０１３０】
「多重特異的抗体」という用語は、２つ又はそれ以上の可変領域が異なるエピトープに結合する抗体を表す。エピトープは、同じ又は異なる標的上に存在し得る。ある種の実施形態において、多重特異的抗体は、同じ又は異なる抗原上の２つの異なるエピトープを認識する「二重特異的抗体」である。
【０１３１】
「触媒性抗体」という用語は、１つ又はそれ以上の触媒性部分が付着されている抗体を表す。ある種の実施形態において、触媒性抗体は、細胞毒性部分を含む細胞毒性抗体である。
【０１３２】
「ヒト化抗体」という用語は、抗体フレームワーク領域の全部又は一部がヒトに由来するが、１つ又はそれ以上のＣＤＲ領域の全部又は一部が、別の種、例えば、マウスに由来する抗体を表す。ある種の実施形態においてヒト化は、ヒト抗体の対応する領域にげっ歯類の相補性決定領域（ＣＤＲ）を置換することによって、本分野で公知の方法に従って実施することが可能である（例えば、Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１，５２２−５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ，３３２，３２３−３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９，１５３４−１５３６（１９８８）を参照）。
【０１３３】
「ヒト抗体」及び「完全ヒト抗体」という用語は互換的に使用され、ＣＤＲ及びフレームワークが何れも、実質的にヒト配列を含む抗体を表す。ある種の実施形態において、完全ヒト抗体は、マウス、ラット及びウサギ目の動物など（但し、これらに限定されない。）、非ヒト哺乳動物中で産生される。ある種の実施形態において、完全ヒト抗体はハイブリドーマ中で産生される。ある種の実施形態において、完全ヒト抗体は組み換え的に産生される。
【０１３４】
「キメラ抗体」は、別の分子、例えば、別の第二の種の抗体定常領域に融合された第一の種の抗体可変領域を有する抗体を表す。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号及びＭｏｒｒｉｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ（ＵＳＡ），８１：６８５１−６８５５（１９８５）を参照されたい。ある種の実施形態において、第一の種は第二の種とは異なり得る。ある種の実施形態において、第一の種は第二の種と同一であり得る。ある種の実施形態において、キメラ抗体は、突然変異導入又はＣＤＲグラフティングを通じて作製され得る。ＣＤＲグラフティングは、典型的には、所望の特異性を有する抗体からのＣＤＲを、別の抗体のフレームワーク領域（ＦＲ）上にグラフティングすることを含む。
【０１３５】
「多重特異的」又は「多重機能性」抗体以外の二価抗体は、ある種の実施形態において、典型的には、その結合部位の各々が同一であると理解される。
【０１３６】
抗体の過剰が、（インビトロ競合結合アッセイで測定された場合に）リガンドに結合された受容体の量を少なくとも約２０％、４０％、６０％、８０％、８５％又はそれ以上低下させる場合に、抗体は受容体へのリガンドの接着を実質的に阻害する。
【０１３７】
「エピトープ」という用語は、特異的な結合因子によって結合され得る分子の一部を表す。典型的なエピトープは、標的への特異的な結合が可能なあらゆるポリペプチド決定基を含み得る。典型的なエピトープ決定基には、分子の化学的に活性な表面基、例えば、アミノ酸、糖側鎖、ホスホリル基及びスルホニル基（但し、これらに限定されない。）が含まれるが、これらに限定されない。ある種の実施形態において、エピトープ決定基は、特異的な三次元構造特性及び／又は特異的な電荷特性を有し得る。ある種の実施形態において、エピトープとは、抗体によって結合される抗原の領域である。エピトープは、連続的又は非連続的であり得る。ある種の実施形態において、抗体を作製するために使用されたエピトープと類似の三次元構造を含むが、抗体を作製するために使用された当該エピトープ中に見出されるアミノ酸残基の全てを含まず、又は一部のみを含むという点で模倣的であり得る。
【０１３８】
「阻害及び／又は中和エピトープ」という用語は、特異的結合因子によって結合された場合に、インビボ、インビトロ及び／又はインサイチュで生物学的活性の減少をもたらすエピトープを表す。ある種の実施形態において、中和エピトープは、標的の生物学的活性領域上に位置し、又は標的の生物学的活性領域を伴っている。
【０１３９】
「活性化エピトープ」という用語は、特異的結合因子によって結合された場合に、インビボ、インビトロ及び／又はインサイチュで生物学的活性の活性化又は維持をもたらすエピトープを表す。ある種の実施形態において、活性化エピトープは、標的の生物学的活性領域上に位置し、又は標的の生物学的活性領域を伴っている。
【０１４０】
本明細書において、「因子」という用語は、化学的化合物、化学的化合物の混合物、生物学的高分子又は生物由来物質から作製された抽出物を表記するために使用される。
【０１４１】
本明細書において使用される「医薬因子又は医薬」という用語は、患者に適切に投与されたときに、所望の治療効果を誘導することができる化学的化合物又は組成物を表す。
【０１４２】
本明細書において使用される「調節物質」という用語は、分子の活性又は機能を変化又は改変させる化合物である。例えば、調節物質は、調節物質の不存在下で観察される活性又は機能の規模と比べて、分子のある種の活性又は機能の規模の増加又は減少を引き起こし得る。ある種の実施形態において、調節物質は、分子の少なくとも１つの活性又は機能の規模を減少させる阻害剤又はアンタゴニストである。ある種の実施形態において、調節物質は、分子の少なくとも１つの活性又は機能の規模を増加させるアゴニストである。分子のある種の典型的な活性及び機能には、結合親和性、酵素活性及びシグナル伝達が含まれるが、これらに限定されない。ある種の典型的な阻害剤には、タンパク質、ペプチド、抗体、ペプチバディ、炭水化物及び小有機分子が含まれるが、これらに限定されるものではない。典型的なペプチバディは、例えば、ＷＯ０１／８３５２５に記載されている。
【０１４３】
本明細書において使用される「実質的に純粋な」とは、対象種が存在する主要な種であることを意味する（すなわち、モルベースで、組成物中の他の何れの各種より豊富に存在する。）。ある種の実施形態において、実質的に精製された画分とは、対象種が（モルベースで）存在する全ての高分子種の少なくとも約５０％を含む組成物である。ある種の実施形態において、実質的に純粋な組成物は、組成物中に存在する全ての巨大分子種の約８０％、８５％、９０％、９５％又は９９％超を含む。ある種の実施形態において、対象種は、組成物が実質的に単一の高分子種からなる、実質的な均一状態（慣用的な検出法によって、莢雑種が組成物中に検出できない。）に精製される。
【０１４４】
「患者」という用語には、ヒト及び動物対象が含まれる。
【０１４５】
「凝集」とは、非共有又は共有相互作用を通じた各タンパク質分子の多量体の形成を表す。凝集は、可逆的又は非可逆的であり得る。ある種の事例において、三次構造の喪失又は部分的な折り畳み構造の崩壊が生じると、折り畳まれたタンパク質構造内に通例隠れていた疎水性アミノ酸残基は溶液に露出される。ある種の事例において、これは、各タンパク質分子間の疎水性−疎水性相互作用を促進し、凝集をもたらす。「Ｓｒｉｓｉａｌａｍ  ｅｔ  ａｌ  Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １２４（９）：１８８４−８（２００２）」は、例えば、タンパク質のある種の立体構造の変化が凝集を伴うこと、及び特異的なタンパク質のある種の領域が凝集物の形成にとって特に必要であると同定され得ることを決定した。ある種の事例では、タンパク質凝集は熱、（Ｓｕｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ  Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ  ５０（６）：１６３６−４２（２００２））、有機溶媒（Ｓｒｉｓａｉｌａｍ  ｅｔ  ａｌ．，ｓｕｐｒａ）並びにＳＤＳ及びリゾリン脂質などの試薬（Ｈａｇｉｈａｒａ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  ４１（３）：１０２０−６（２００２））によって誘導され得る。凝集は、インビトロでのタンパク質精製及び形成において著しい問題となり得る。ある種の事例では、凝集物の形成後には、生物学的活性が回復される前に、強力な変性溶液での可溶化に続く、再生及び適切な再折り畳みが必要とされ得る。
【０１４６】
抗体構造単位は、通例、四量体を含む。このような四量体の各々は、ポリペプチド鎖の２つの同一の対から構成され、各対は１つの完全長「軽」鎖（ある実施形態において、約２５ｋＤａ）及び１つの完全長「重」鎖（ある実施形態において、約５０〜７０ｋＤａ）を有する。「重鎖」という用語は、ある抗原に対して特異性を付与するために、十分な可変領域配列を有するあらゆるポリペプチドを含む。完全長重鎖は、可変領域ドメイン、ＶＨ並びに３つの定常領域ドメインＣＨ１、ＣＨ２及びＣＨ３を含む。ＶＨドメインはポリペプチドのアミノ末端に位置し、ＣＨ３ドメインはカルボキシ末端に位置する。本明細書において使用される「重鎖」という用語は、完全長抗体重鎖及びその断片を包含する。
【０１４７】
「軽鎖」という用語は、ある抗原に対して特異性を付与するために、十分な可変領域配列を有するあらゆるポリペプチドを含む。完全長軽鎖は、可変領域ドメイン、ＶＬ及び定常領域ドメインＣＬを含む。重鎖と同様に、軽鎖の可変領域ドメインは、ポリペプチドのアミノ末端に位置する。本明細書において使用される「軽鎖」という用語は、完全長軽鎖及びその断片を包含する。
【０１４８】
各鎖のアミノ末端部分は、典型的には抗原認識に必要とされる、約１００〜１１０又はそれ以上のアミノ酸の可変領域（重鎖中のＶＨ及び軽鎖中のＶＬ）を含む。典型的には、各鎖のカルボキシ末端部分は、エフェクター機能に必要であり得る定常領域（重鎖中のＣＨドメイン及び軽鎖中のＣＬ）を規定する。抗体エフェクター機能には、補体の活性化及びオプソニン化貪食作用が含まれる。ヒトの軽鎖は、通例、κ及びλ軽鎖として分類される。重鎖は、通例、μ、δ、γ、α又はεとして分類され、それぞれ、ＩｇＭ、ＩｇＤ、ＩｇＧ、ＩｇＡ及びＩｇＥとして、抗体イソタイプを規定する。ＩｇＧは、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３及びＩｇＧ４などの（但し、これらに限定されない。）幾つかのサブクラスを有する。ＩｇＭは、ＩｇＭ１及びＩｇＭ２などの（但し、これらに限定されない。）サブクラスを有する。ＩｇＡは、同様に、ＩｇＡ１及びＩｇＡ２などの（但し、これらに限定されない。）サブクラスへ細分類される。完全長軽鎖及び重鎖内で、典型的には、可変及び定常領域は、約１２又はそれ以上のアミノ酸の「Ｊ」領域によって連結されており、重鎖はさらに約１０のアミノ酸の「Ｄ」領域も含む。例えば、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｃｈ．７（Ｐａｕｌ，Ｗ．，ｅｄ．，２ｎｄ  ｅｄ．Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９８９））を参照されたい。各軽鎖／重鎖対の可変領域は、典型的には、抗原結合部位を形成する。
【０１４９】
典型的には、可変領域は、３つの超可変領域によって連結された、相対的に保存されたフレームワーク領域（ＦＲ）（相補性決定領域又はＣＤＲとも称される。）の同じ一般的構造を呈する。各対の重鎖及び軽鎖から得られるＣＤＲは、通例、特異的なエピトープへの結合を可能にし得るフレームワーク領域によって並列される。Ｎ末端からＣ末端へと、軽鎖及び重鎖可変領域は何れも、典型的には、ドメインＦＲ１、ＣＤＲ１、ＦＲ２、ＣＤＲ２、ＦＲ３、ＣＤＲ３及びＦＲ４を含む。各ドメインへのアミノ酸の割り当ては、通例、「Ｋａｂａｔ，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ，１９８７  ａｎｄ  １９９１）」又は「Ｃｈｏｔｈｉａ  ＆  Ｌｅｓｋ  Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７（１９８７）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ｅｔ  ａｌ．Ｎａｔｕｒｅ  ３４２：８７８−８８３（１９８９）」の定義に従う。
【０１５０】
上に論述したように、抗体断片の幾つかの種類が存在する。Ｆａｂ断片は、１つの軽鎖及びＣＨ１及び１つの重鎖の可変領域から構成される。Ｆａｂ分子の重鎖は、別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成することができない。Ｆａｂ’断片は、１つの軽鎖と、並びに鎖間ジスルフィド結合が２つの重鎖間に形成されて、Ｆ（ａｂ’）２分子を形成するように、ＣＨ１及びＣＨ２ドメインの間の定常領域のより多くを含有する１つの重鎖とを含有する。Ｆａｂ断片は、分子の重鎖中の定常領域がＣＨ２ドメインの末端まで伸長することを除き、Ｆ（ａｂ’）２分子と類似する。Ｆｖ領域は、重鎖及び軽鎖の両方からの可変領域を含むが、定常領域を欠如する。一本鎖可変断片（ｓｃＦｖ）は、重鎖及び軽鎖の両方からの可変領域を含み、重鎖及び軽鎖可変領域は融合されて、抗原結合領域を形成する単一の分子を形成する。ある種の実施形態において、ｓｃＦｖは単一のポリペプチド鎖を含む。一本鎖抗体はｓｃＦｖを含む。ある種の実施形態において、一本鎖抗体は、例えば、１つ又はそれ以上の定常領域など（これに限定されない。）、ｓｃＦｖに融合されたさらなるポリペプチドを含む。典型的な一本鎖抗体は、例えば、ＷＯ８８／０１６４９並びに米国特許第４，９４６，７７８号、同第５，２６０，２０３号及び同第５，８６９，６２０号に論述されている。Ｆｃ断片は、重鎖のＣＨ２及びＣＨ３ドメインを含有し、並びにＣＨ１とＣＨ２ドメインの間の定常領域の全部又は一部を含有する。ある種の実施形態において、ＣＨ１とＣＨ２ドメインの間の定常領域の全部又は一部は、Ｆｃ断片の間に１つ又はそれ以上の鎖間ジスルフィド結合の形成を可能とする１つ又はそれ以上のシステインを含む。
【０１５１】
ある種の実施形態において、一本鎖抗体はマキシボディ（ｍａｘｉｂｏｄｙ）である。「マキシボディ」という用語は、Ｆｃ又はＦｃ断片に融合されたｓｃＦｖ（リンカー又は直接的な付着によるものであり得る。）を含む。ある種の実施形態において、一本鎖抗体は，ｈｕＥｐｏＲを結合するマキシボディ（「ｈｕＥｐｏＲマキシボディ」）である。ある種の実施形態において、一本鎖抗体は，ｈｕＥｐｏＲに結合し、ｈｕＥｐｏＲを活性化するマキシボディである。典型的なＩｇ様ドメインＦｃ融合物は、米国特許第６，１１７，６５５号に開示されている。
【０１５２】
ある種の実施形態において、抗体は、代替的足場を用いて作製することが可能である。「代替的足場」という用語は、２つの軽鎖及び２つの重鎖の伝統的な抗体フレームワーク以外のフレームワークを表し、フレームワークは、少なくとも１つの標的を特異的に結合する能力を得られたタンパク質に対して付与する１つ若しくはそれ以上の変化したアミノ酸及び／又は１つ若しくはそれ以上の配列挿入（ＣＤＲ配列など）を有し得る。ある種の実施形態において、代替的足場は、抗体を作製するために１つ又はそれ以上のＣＤＲを有する。ある種の実施形態において、代替的足場はヒトタンパク質を基礎とする。ある種の実施形態において、代替的足場は哺乳動物タンパク質を基礎とする。ある種の実施形態において、代替的足場は真核生物由来のタンパク質を基礎とする。ある種の実施形態において、代替的足場は原核生物の由来のタンパク質を基礎とする。
【０１５３】
代替的足場を有する抗体のある種の例には、ナノボディ、アフィボディ、ミクロボディ、エビボディ及びドメイン抗体が含まれるが、これらに限定されない。抗体を作製するのに有用な代替的足場のある種の例には、ラクダ科の動物から得られる単一ドメイン抗体；プロテアーゼ阻害剤；ヒト血清トランスフェリン；ＣＴＬＡ−４；フィブロネクチンＩＩＩ型ドメインを含む（但し、これに限定されない。）フィブロネクチン；Ｃ型レクチン様ドメイン；リポカリンファミリータンパク質；アンキリンリピートタンパク質；プロテインＡのＺドメイン；γ−クリスタリン；テンダミスタット（Ｔｅｎｄａｍｉｓｔａｔ）；ネオカルジノスタチン；ＣＢＭ４−２；Ｔ細胞受容体；Ｉｍ９；設計されたＡＲタンパク質；設計されたＴＰＲタンパク質；亜鉛フィンガードメイン；ｐＶＩＩＩ；鳥類膵臓ポリペプチド；ＧＣＮ４；ＷＷドメイン；Ｓｒｃ相同性３（ＳＨ３）領域；Ｓｒｃ相同性２（ＳＨ２）ドメイン；ＰＤＺドメイン；ＴＥＭ−１β−ラクタマーゼ；ＧＦＰ；チオレドキシン；ブドウ球菌性ヌクレアーゼ；ＰＨＤフィンガードメイン；ＣＩ−２；ＢＰＴＩ；ＡＰＰＩ；ＨＰＳＴＩ；エコチン（Ｅｃｏｔｉｎ）；ＬＡＣＩ−Ｄ１；ＬＤＴＩ；ＭＴＩ−ＩＩサソリ毒素；昆虫デフェンシンＡペプチド；ＥＥＴＩ−ＩＩ；Ｍｉｎ−２３；ＣＢＤ；ＰＢＰ；チトクロムｂ５６２；トランスフェリン；ＬＤＬ受容体ドメインＡ；及びユビキチンが含まれるが、これらに限定されない。代替的足場のある種の例は、Ｈｅｙら“Ａｒｔｉｆｉｃａｌ，ｎｏｎ−ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｏｒ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ａｎｄ  ｉｎｄｕｓｔｒｉａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ”Ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２３：５１４−２２（２００５）及びＢｉｎｚら“Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ｎｏｖｅｌ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｒｏｍ  ｎｏｎｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｄｏｍａｉｎｓ”Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２３：１２５７−６８（２００５）に論述されている。
【０１５４】
ある種の実施形態において、機能的ドメイン、ＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３及び介在配列は、シャッフルされて異なる抗体定常領域を作出することができる。例えば、ある種の実施形態において、このようなハイブリッド定常領域は、血清中での半減期、抗体四量体の集合及び折り畳み及び／又は改善されたエフェクター機能に関して最適化することができる。ある種の実施形態において、修飾された抗体定常領域は、定常領域のアミノ酸配列中に単一の点変異を導入し、改善された質、例えば、上記されているものの１つ又はそれ以上に関して、得られた抗体を検査することによって作製され得る。
【０１５５】
ある種の実施形態において、あるイソタイプの抗体は、特定の標的分子に対するその特異性を喪失せずに、イソタイプスイッチングによって、異なるイソタイプへ転化される。イソタイプスイッチングの方法には、直接的な組換え技術（例えば、米国特許第４，８１６，３９７号を参照。）、細胞−細胞融合技術（例えば、米国特許第５，９１６，７７１号を参照。）が含まれるが、これらに限定されない。ある種の実施形態において、抗体は、ＩｇＧ２サブクラスからＩｇＧ１、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４サブクラスへの転化など（但し、これらに限定されない。）、特定の標的分子に対するその特異性を喪失することなく、上記の技術又は本分野において公知の他の技術を用いて、あるサブクラスを別のサブクラスへ転化することができる。
【０１５６】
ある種の実施形態において、ヒト配列の少なくとも一部と及び別の種の配列とを含むキメラ抗体が提供される。ある種の実施形態において、このようなキメラ抗体は、当該宿主の抗体配列を持たない抗体より、宿主中での低下した免疫応答をもたらし得る。例えば、ある種の事例において、目的の動物は、特定のヒト疾患に対するモデルとして使用され得る。動物宿主中の疾病に対する抗体の効果を研究するために、異なる種から得られた抗体を使用することが可能である。しかし、ある種の事例では、別の種から得られるこのような抗体は、宿主動物中で抗体自身に対する免疫応答を惹起し、これらの抗体の評価を妨害し得る。ある種の実施形態において、抗体のアミノ酸配列の一部を宿主動物由来の抗体アミノ酸配列で置換することによって、宿主動物の抗抗体応答の規模を減少させ得る。
【０１５７】
ある種の実施形態において、キメラ抗体は重鎖及び軽鎖を含み、軽鎖及び重鎖の可変領域は第一の種に由来し、軽鎖及び重鎖の定常領域は第二の種に由来する。ある種の実施形態において、抗体重鎖定常領域は、ヒト以外の種の抗体重鎖定常領域である。ある種の実施形態において、抗体軽鎖定常領域は、ヒト以外の種の抗体軽鎖定常領域である。ある種の実施形態において、抗体重鎖定常領域は、ヒト抗体重鎖定常領域であり、抗体重鎖可変領域はヒト以外の種の抗体重鎖可変領域である。ある種の実施形態において、抗体軽鎖定常領域は、ヒト抗体軽鎖定常領域であり、抗体軽鎖可変領域はヒト以外の種の抗体軽鎖可変領域である。典型的な抗体定常領域には、ヒト抗体定常領域、カニクイザル抗体定常領域、マウス抗体定常領域及びウサギ抗体定常領域が含まれるが、これらに限定されない。典型的な抗体可変領域には、ヒト抗体可変領域、マウス抗体可変領域、ブタ抗体可変領域、モルモットマウス抗体可変領域、カニクイザルマウス抗体可変領域、及びウサギ抗体可変領域が含まれるが、これらに限定されない。ある種の実施形態において、重鎖及び軽鎖中の可変領域のフレームワーク領域は、他の抗体配列に由来するフレームワーク領域と置換され得る。
【０１５８】
ある種の典型的なキメラ抗体は、当業者に公知の方法に従って作製され得る。ある種の実施形態において、重鎖可変領域をコードする第一の種のポリヌクレオチドと重鎖定常領域をコードする第二の種のポリヌクレオチドは融合させることができる。ある種の実施形態において、軽鎖可変領域をコードする第一の種のポリヌクレオチドと軽鎖定常領域をコードする第二の種のヌクレオチド配列は融合させることができる。ある種の実施形態において、これらの融合された配列は、単一の発現ベクター（例えば、プラスミド）又は複数の発現ベクターに入れて、細胞中に導入することができる。ある種の実施形態において、ポリペプチドを作製するために、少なくとも１つの発現ベクターを含む細胞を使用し得る。ある種の実施形態において、これらの融合されたヌクレオチド配列は、別個の発現ベクターに入れて、又は単一の発現ベクターに入れて、細胞中に導入することができる。ある種の実施形態において、宿主細胞は重鎖と軽鎖の両方を発現し、これは両者で抗体を作製する。ある種の実施形態において、抗体を作製するために、少なくとも１つの発現ベクターを含む細胞を使用し得る。抗体を作製及び発現するための典型的な方法は、以下に記載されている。
【０１５９】
ある種の実施形態において、抗体の重鎖及び軽鎖への保存的修飾（及びコードするヌクレオチドへの対応する修飾）は、元の抗体の機能的及び化学的特性と同様の特性を有する抗体を与える。これに対して、ある種の実施形態において、抗体の機能的及び／又は化学的特性の大幅な修飾は、（ａ）置換の領域中の分子骨格の構造、例えば、シート又はへリックス立体構造、（ｂ）標的部位における分子の電荷若しくは疎水性又は（ｃ）側鎖の嵩の維持に対する効果が著しく異なる、重鎖及び軽鎖のアミノ酸配列中の置換を選択することによって達成され得る。
【０１６０】
ある種の望ましいアミノ酸置換（保存的であるか、又は非保存的であるかを問わない。）は、そのような置換が望まれている時点で、当業者によって決定することが可能である。ある種の実施形態において、アミノ酸置換は、抗体の親和性又は抗体のエフェクター機能を増加又は減少させ得る残基など、抗体の重要な残基を同定するために使用することができる。
【０１６１】
抗原に対して特異的な様々な抗体は、多くの方法で作製され得る。ある種の実施形態において、目的のエピトープを含有する抗原は、動物宿主（例えば、マウス）中に導入され得、従って、このエピトープに対して特異的な抗体を作製し得る。ある種の事例において、目的のエピトープに対して特異的な抗体は、天然の状態で当該エピトープに曝露されている宿主から採取された生物学的試料から取得され得る。ある種の事例において、内在性Ｉｇ遺伝子が不活化されているマウス中へのヒト免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子坐の導入によって、ヒトモノクローナル抗体（ＭＡｂ）を得る機会が与えられる。ある種の実施形態において、目的のエピトープに対して特異的な抗体は、軽鎖及び重鎖ライブラリー、例えばファージディスプレイを用いてインビトロスクリーニングによって取得し得る。
【０１６２】
二重特異的又は二機能性抗体は、２つの異なる重／軽鎖対及び２つの異なる結合部位を含む。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合又はＦａｂ’断片の連結など（但し、これらに限定されない。）、様々な方法によって作製され得る。例えば、「Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ  ＆  Ｌａｃｈｍａｎｎ，Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８，１５４７−１５５３（１９９２）」を参照されたい。
【０１６３】
ある種の実施形態において、抗体は、ハイブリドーマ細胞株以外の細胞株中で発現され得る。ある種の実施形態において、適切な哺乳動物宿主細胞の形質転換のために、キメラ抗体を含む特定の抗体をコードする配列を使用することが可能である。ある種の実施形態によれば、形質転換は、宿主細胞中にポリヌクレオチドを導入するためのあらゆる公知の方法によって、例えば、ウイルス中への（又はウイルスベクター中への）ポリヌクレオチドのパッケージング及びウイルス（又はベクター）での宿主細胞の形質導入、例えば、米国特許第４，３９９，２１６号、同第４，９１２，０４０号、同第４，７４０，４６１号及び同第４，９５９，４５５号によって例示されているような、本分野で公知の操作を用いてベクターの形質移入によって実施され得る。
【０１６４】
ある種の実施形態において、発現ベクターは、抗体をコードするポリヌクレオチド配列を含む。ある種の実施形態において、ポリペプチドを産生するために、その中に含有されるポリヌクレオチドを発現するのに適した条件で、発現ベクターを含む細胞中でポリペプチドを産生することを含むポリペプチドを作製する方法が提供される。
【０１６５】
ある種の実施形態において、抗体を産生するために、その中に含有されるポリヌクレオチドを発現させるのに適した条件で、発現ベクターの少なくとも１つを含む細胞中で抗体を産生することを含む抗体を作製する方法が提供される。
【０１６６】
ある種の実施形態において、ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質は宿主細胞から発現される。ある種の実施形態において、宿主細胞中で発現されるｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質の少なくとも幾つかは、二量体などの（但し、これに限定されない。）多量体を形成する。ある種の実施形態において、宿主細胞中で発現されるｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質には、単量体及び多量体が含まれる。
【０１６７】
ある種の実施形態において、ベクターは細胞中に形質移入される。ある種の実施形態において、使用される形質移入操作は、形質転換されるべき宿主に依存し得る。哺乳動物細胞中に異種のポリヌクレオチドを導入するためのある種の方法が本分野において公知であり、デキストランによって媒介される形質移入、リン酸カルシウム沈殿、ポリブレンによって媒介される形質移入、プロトプラスト融合、電気穿孔、リポソーム中へのポリヌクレオチドの封入及び核内へのＤＮＡの直接的微少注入が含まれるが、これらに限定されない。
【０１６８】
発現のための宿主として利用可能なある種の哺乳動物細胞株が本分野において公知であり、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、Ｅ５細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞、サル腎臓細胞（ＣＯＳ）、ヒト肝細胞癌細胞（例えば、ＨｅｐＧ２）、ＮＳ０細胞、ＳＰ２０細胞、ＰｅｒＣ６細胞、２９３細胞及び多数の他の細胞株など（但し、これらに限定されない。）、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）から入手可能な多くの不死化された細胞株が含まれるが、これらに限定されない。ある種の実施形態において、細胞株は、何れの細胞株が高い発現レベルを有し、恒常的な抗原結合特性を有する抗体を産生するかを通じて選択され得る。
【０１６９】
ある種の実施形態において、宿主細胞中に形質移入され得るベクターは、抗体をコードするポリヌクレオチドに作用可能に連結された調節配列を含む。ある種の実施形態において、調節配列は連結されたポリヌクレオチドの発現を促進し、従って、連結されたポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドの産生をもたらす。ある種の実施形態において、ベクターは、宿主細胞中での染色体非依存性複製を可能とするポリヌクレオチドも含み得る。典型的なベクターには、プラスミド（例えば、ＢｌｕｅＳｃｒｉｐｔ、ｐｕｃなど）、コスミド及びＹＡＣＳが含まれるが、これらに限定されない。
【０１７０】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０１７１】
【化１】
2009533057.tif 000004
【０１７２】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０１７３】
【化２】
2009533057.tif 000005
【０１７４】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０１７５】
【化３】
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【０１７６】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０１７７】
【化４】
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【０１７８】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０１７９】
【化５】
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【０１８０】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０１８１】
【化６】
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【０１８２】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０１８３】
【化７】
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【０１８４】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０１８５】
【化８】
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【０１８６】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０１８７】
【化９】
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【０１８８】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０１８９】
【化１０】
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【０１９０】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０１９１】
【化１１】
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【０１９２】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０１９３】
【化１２】
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【０１９４】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０１９５】
【化１３】
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【０１９６】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０１９７】
【化１４】
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【０１９８】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０１９９】
【化１５】
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【０２００】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０２０１】
【化１６】
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【０２０２】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０２０３】
【化１７】
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【０２０４】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０２０５】
【化１８】
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【０２０６】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０２０７】
【化１９】
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【０２０８】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０２０９】
【化２０】
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【０２１０】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０２１１】
【化２１】
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【０２１２】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０２１３】
【化２２】
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【０２１４】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０２１５】
【化２３】
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【０２１６】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０２１７】
【化２４】
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【０２１８】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０２１９】
【化２５】
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【０２２０】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０２２１】
【化２６】
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【０２２２】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０２２３】
【化２７】
2009533057.tif 000030
【０２２４】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０２２５】
【化２８】
2009533057.tif 000031
【０２２６】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０２２７】
【化２９】
2009533057.tif 000032
【０２２８】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０２２９】
【化３０】
2009533057.tif 000033
【０２３０】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０２３１】
【化３１】
2009533057.tif 000034
【０２３２】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０２３３】
【化３２】
2009533057.tif 000035
【０２３４】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０２３５】
【化３３】
2009533057.tif 000036
【０２３６】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０２３７】
【化３４】
2009533057.tif 000037
【０２３８】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０２３９】
【化３５】
2009533057.tif 000038
【０２４０】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０２４１】
【化３６】
2009533057.tif 000039
【０２４２】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０２４３】
【化３７】
2009533057.tif 000040
【０２４４】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０２４５】
【化３８】
2009533057.tif 000041
【０２４６】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０２４７】
【化３９】
2009533057.tif 000042
【０２４８】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０２４９】
【化４０】
2009533057.tif 000043
【０２５０】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＹＷＭＳ（配列番号１１）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号１２）；及びＶＳＲＧＧＳＹＳＤ（配列番号１３）。
【０２５１】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号１４）；ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号１５）；及びＳＳＹＡＧＲＮＷＶ（配列番号１６）。
【０２５２】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＹＷＭＳ（配列番号１１）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号１２）；ＶＳＲＧＧＳＹＳＤ（配列番号１３）；ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号１４）；ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号１５）；及びＳＳＹＡＧＲＮＷＶ（配列番号１６）。
【０２５３】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＩＹＶＳ（配列番号１７）；ＤＶＳＲＲＰＳ（配列番号１８）；及びＮＳＹＴＴＬＳＴＷＬ（配列番号１９）。
【０２５４】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＹＷＭＳ（配列番号１１）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号１２）；ＶＳＲＧＧＳＹＳＤ（配列番号１３）；ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＩＹＶＳ（配列番号１７）；ＤＶＳＲＲＰＳ（配列番号１８）；及びＮＳＹＴＴＬＳＴＷＬ（配列番号１９）。
【０２５５】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＴＧＴＲＳＤＩＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号２０）；ＦＤＶＮＮＲＰＳ（配列番号２１）；及びＮＳＦＴＤＳＲＴＷＬ（配列番号２２）。
【０２５６】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＹＷＭＳ（配列番号１１）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号１２）；ＶＳＲＧＧＳＹＳＤ（配列番号１３）；ＴＧＴＲＳＤＩＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号２０）；ＦＤＶＮＮＲＰＳ（配列番号２１）；及びＮＳＦＴＤＳＲＴＷＬ（配列番号２２）。
【０２５７】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＹＡＭＳ（配列番号２３）；ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２４）；及びＤＲＶＡＶＡＧＫＧＳＹＹＦＤＳ（配列番号２５）。
【０２５８】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＡＶＳ（配列番号２６）；ＹＤＮＬＬＰＳＧ（配列番号２７）；及びＡＡＷＤＤＳＬＮＤＷＶ（配列番号２８）。
【０２５９】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＹＡＭＳ（配列番号２３）；ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２４）；ＤＲＶＡＶＡＧＫＧＳＹＹＦＤＳ（配列番号２５）；ＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＡＶＳ（配列番号２６）；ＹＤＮＬＬＰＳＧ（配列番号２７）；及びＡＡＷＤＤＳＬＮＤＷＶ（配列番号２８）。
【０２６０】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＮＳＡＡＷＮ（配列番号２９）；ＲＴＹＹＲＳＫＷＹＮＤＹＡＶＳＫＳ（配列番号３０）；及びＤＥＧＰＬＤＹ（配列番号３１）。
【０２６１】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＴＧＳＳＳＮＬＧＴＧＹＤＶＨ（配列番号３２）；ＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号３３）；及びＱＳＹＤＦＳＬＳＡＭＶ（配列番号３４）。
【０２６２】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＮＳＡＡＷＮ（配列番号２９）；ＲＴＹＹＲＳＫＷＹＮＤＹＡＶＳＫＳ（配列番号３０）；ＤＥＧＰＬＤＹ（配列番号３１）；ＴＧＳＳＳＮＬＧＴＧＹＤＶＨ（配列番号３２）；ＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号３３）；及びＱＳＹＤＦＳＬＳＡＭＶ（配列番号３４）。
【０２６３】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＤＹＡＭＨ（配列番号１２３）；ＶＩＳＮＨＧＫＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１２４）；及びＤＩＡＬＡＧＤＹ（配列番号１２５）。
【０２６４】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ（配列番号１２６）；ＧＡＳＫＬＱＳ（配列番号１２７）；及びＬＱＤＹＮＹＰＬＴ（配列番号１２８）。
【０２６５】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＤＹＡＭＨ（配列番号１２３）；ＶＩＳＮＨＧＫＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１２４）；ＤＩＡＬＡＧＤＹ（配列番号１２５）；ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ（配列番号１２６）；ＧＡＳＫＬＱＳ（配列番号１２７）；及びＬＱＤＹＮＹＰＬＴ（配列番号１２８）。
【０２６６】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＳＮＷＷＳ（配列番号１２９）；ＥＩＳＱＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＧ（配列番号１３０）；及びＱＬＲＳＩＤＡＦＤＩ（配列番号１３１）。
【０２６７】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＤＫＹＡＳ（配列番号１３２）；ＹＱＤＲＫＲＰＳＧＩ（配列番号１３３）；及びＷＤＳＤＴＳＹＶ（配列番号１３４）。
【０２６８】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＳＮＷＷＳ（配列番号１２９）；ＥＩＳＱＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＧ（配列番号１３０）；ＱＬＲＳＩＤＡＦＤＩ（配列番号１３１）；ＤＫＹＡＳ（配列番号１３２）；ＹＱＤＲＫＲＰＳＧＩ（配列番号１３３）；及びＷＤＳＤＴＳＹＶ（配列番号１３４）。
【０２６９】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＮＹＹＷＳ（配列番号１３５）；ＹＩＨＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲ（配列番号１３６）；及びＶＧＹＹＹＤＳＳＧＹＮＬＡＷＹＦＤＬ（配列番号２１２）。
【０２７０】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＱＧＤＮＬＲＳＹＳＡＴ（配列番号１３７）；ＧＥＮＮＲＰＳ（配列番号１３８）；及びＴＳＲＶＮＳＧＮＨＬＧＶ（配列番号１３９）。
【０２７１】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＮＹＹＷＳ（配列番号１３５）；ＹＩＨＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲ（配列番号１３６）；ＶＧＹＹＹＤＳＳＧＹＮＬＡＷＹＦＤＬ（配列番号２１２）；ＱＧＤＮＬＲＳＹＳＡＴ（配列番号１３７）；ＧＥＮＮＲＰＳ（配列番号１３８）；及びＴＳＲＶＮＳＧＮＨＬＧＶ（配列番号１３９）。
【０２７２】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＧＹＹＭＨ（配列番号１４０）；ＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲ（配列番号１４１）；及びＧＧＨＭＴＴＶＴＲＤＡＦＤＩ（配列番号１４２）。
【０２７３】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＱＧＤＳＬＲＹＹＹＡＴ（配列番号１４３）；ＧＱＮＮＲＰＳ（配列番号１４４）；及びＧＴＷＤＳＳＶＳＡＳＷＶ（配列番号１４５）。
【０２７４】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＧＹＹＭＨ（配列番号１４０）；ＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲ（配列番号１４１）；ＧＧＨＭＴＴＶＴＲＤＡＦＤＩ（配列番号１４２）；ＱＧＤＳＬＲＹＹＹＡＴ（配列番号１４３）；ＧＱＮＮＲＰＳ（配列番号１４４）；及びＧＴＷＤＳＳＶＳＡＳＷＶ（配列番号１４５）。
【０２７５】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＧＹＹＭＨ（配列番号１４６）；ＷＩＮＰＮＳＧＳＴＮＹＡＱＫＦＬＧ（配列番号１４７）；及びＧＨＳＧＤＹＦＤＹ（配列番号１４８）。
【０２７６】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＲＡＳＱＳＶＳＳＷＬＡ（配列番号１４９）；ＡＡＲＬＲＧ（配列番号１５０）；及びＱＱＳＹＳＴＰＩＳ（配列番号１５１）。
【０２７７】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＧＹＹＭＨ（配列番号１４６）；ＷＩＮＰＮＳＧＳＴＮＹＡＱＫＦＬＧ（配列番号１４７）；ＧＨＳＧＤＹＦＤＹ（配列番号１４８）；ＲＡＳＱＳＶＳＳＷＬＡ（配列番号１４９）；ＡＡＲＬＲＧ（配列番号１５０）；及びＱＱＳＹＳＴＰＩＳ（配列番号１５１）。
【０２７８】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＳＡＦＳＷＮ（配列番号１５２）；ＹＩＹＨＴＧＩＴＤＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号１５３）；及びＧＨＧＳＤＰＡＷＦＤＰ（配列番号１５４）。
【０２７９】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＧＤＫＬＧＤＫＹＡＳ（配列番号１５５）；ＲＤＴＫＲＰＳ（配列番号１５６）；及びＱＡＷＤＳＴＴＳＬＶ（配列番号１５７）。
【０２８０】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＳＡＦＳＷＮ（配列番号１５２）；ＹＩＹＨＴＧＩＴＤＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号１５３）；ＧＨＧＳＤＰＡＷＦＤＰ（配列番号１５４）；ＳＧＤＫＬＧＤＫＹＡＳ（配列番号１５５）；ＲＤＴＫＲＰＳ（配列番号１５６）；及びＱＡＷＤＳＴＴＳＬＶ（配列番号１５７）。
【０２８１】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＹＷＭＳ（配列番号１５８）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号１５９）；及びＶＳＲＧＧＳＹＳＤ（配列番号１６０）。
【０２８２】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＦＮＹＶＳ（配列番号１６１）；ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号１６２）；及びＳＳＷＡＰＧＫＮＬ（配列番号１６３）。
【０２８３】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＹＷＭＳ（配列番号１５８）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号１５９）；ＶＳＲＧＧＳＹＳＤ（配列番号１６０）；ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＦＮＹＶＳ（配列番号１６１）；ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号１６２）；及びＳＳＷＡＰＧＫＮＬ（配列番号１６３）。
【０２８４】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＹＡＭＳ（配列番号１６４）；ＧＩＳＧＳＧＳＳＥＧＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１６５）；及びＤＲＰＳＲＹＳＦＧＹＹＦＤＹ（配列番号１６６）。
【０２８５】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＧＮＫＬＧＤＫＹＶＳ（配列番号１６７）；ＱＤＴＫＲＰＳ（配列番号１６８）；及びＱＡＷＤＳＳＴＤＶＶ（配列番号１６９）。
【０２８６】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＹＡＭＳ（配列番号１６４）；ＧＩＳＧＳＧＳＳＥＧＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１６５）；ＤＲＰＳＲＹＳＦＧＹＹＦＤＹ（配列番号１６６）；ＳＧＮＫＬＧＤＫＹＶＳ（配列番号１６７）；ＱＤＴＫＲＰＳ（配列番号１６８）；及びＱＡＷＤＳＳＴＤＶＶ（配列番号１６９）。
【０２８７】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＫＹＷＭＴ（配列番号１７０）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＥＳＶＫＧ（配列番号１７１）；及びＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号１７２）。
【０２８８】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号１７３）；ＤＶＮＫＲＰＳ（配列番号１７４）；及びＮＳＹＡＧＳＮＮＷＶ（配列番号１７５）。
【０２８９】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＫＹＷＭＴ（配列番号１７０）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＥＳＶＫＧ（配列番号１７１）；ＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号１７２）；ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号１７３）；ＤＶＮＫＲＰＳ（配列番号１７４）；及びＮＳＹＡＧＳＮＮＷＶ（配列番号１７５）。
【０２９０】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＫＹＷＭＴ（配列番号１７６）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＥＳＶＫＧ（配列番号１７７）；及びＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号１７８）。
【０２９１】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号１７９）；ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号１８０）；及びＮＳＹＡＧＳＩＹＶ（配列番号１８１）。
【０２９２】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＫＹＷＭＴ（配列番号１７６）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＥＳＶＫＧ（配列番号１７７）；ＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号１７８）；ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号１７９）；ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号１８０）；及びＮＳＹＡＧＳＩＹＶ（配列番号１８１）。
【０２９３】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＴＮＤＩＨ（配列番号１８２）；ＩＩＤＴＳＧＡＭＴＲＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１８３）；及びＥＧＣＴＮＧＶＣＹＤＮＧＦＤＩ（配列番号１８４）。
【０２９４】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＲＡＳＥＧＩＹＨＷＬＡ（配列番号１８５）；ＫＡＳＳＬＡＳ（配列番号１８６）；及びＱＱＹＳＮＹＰＬＴ（配列番号１８７）。
【０２９５】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＴＮＤＩＨ（配列番号１８２）；ＩＩＤＴＳＧＡＭＴＲＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１８３）；ＥＧＣＴＮＧＶＣＹＤＮＧＦＤＩ（配列番号１８４）；ＲＡＳＥＧＩＹＨＷＬＡ（配列番号１８５）；ＫＡＳＳＬＡＳ（配列番号１８６）；及びＱＱＹＳＮＹＰＬＴ（配列番号１８７）。
【０２９６】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＫＹＷＭＴ（配列番号１８８）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＥＳＶＫＧ（配列番号１８９）；及びＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号１９０）。
【０２９７】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＴＧＴＳＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１９１）；ＥＶＳＮＲＰＳ（配列番号１９２）；及びＳＳＬＴＳＳＧＴＷＶ（配列番号１９３）。
【０２９８】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＫＹＷＭＴ（配列番号１８８）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＥＳＶＫＧ（配列番号１８９）；ＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号１９０）；ＴＧＴＳＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１９１）；ＥＶＳＮＲＰＳ（配列番号１９２）；及びＳＳＬＴＳＳＧＴＷＶ（配列番号１９３）。
【０２９９】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＫＹＷＭＴ（配列番号１９４）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＥＳＶＫＧ（配列番号１９５）；及びＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号１９６）。
【０３００】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＴＧＴＳＳＤＶＧＡＹＮＹＶＳ（配列番号１９７）；ＥＶＡＲＲＰＳ（配列番号１９８）；及びＳＳＹＡＧＳＮＮＦＡＶ（配列番号１９９）。
【０３０１】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＫＹＷＭＴ（配列番号１９４）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＥＳＶＫＧ（配列番号１９５）；ＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号１９６）；ＴＧＴＳＳＤＶＧＡＹＮＹＶＳ（配列番号１９７）；ＥＶＡＲＲＰＳ（配列番号１９８）；及びＳＳＹＡＧＳＮＮＦＡＶ（配列番号１９９）。
【０３０２】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＹＷＭＴ（配列番号２００）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２０１）；及びＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号２０２）。
【０３０３】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＴＧＴＳＳＤＩＧＴＹＤＹＶＳ（配列番号２０３）；ＥＶＴＮＲＰＳ（配列番号２０４）；及びＮＳＦＴＫＮＮＴＷＶ（配列番号２０５）。
【０３０４】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＳＹＷＭＴ（配列番号２００）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２０１）；ＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号２０２）；ＴＧＴＳＳＤＩＧＴＹＤＹＶＳ（配列番号２０３）；ＥＶＴＮＲＰＳ（配列番号２０４）；及びＮＳＦＴＫＮＮＴＷＶ（配列番号２０５）。
【０３０５】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＫＹＷＭＴ（配列番号２０６）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＥＳＶＫＧ（配列番号２０７）；及びＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号２０８）。
【０３０６】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＴＧＴＳＧＤＶＧＡＹＮＹＶＳ（配列番号２０９）；ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号２１０）；及びＮＳＹＲＧＳＮＧＰＷＶ（配列番号２１１）。
【０３０７】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。ＫＹＷＭＴ（配列番号２０６）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＥＳＶＫＧ（配列番号２０７）；ＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号２０８）；ＴＧＴＳＧＤＶＧＡＹＮＹＶＳ（配列番号２０９）；ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号２１０）；及びＮＳＹＲＧＳＮＧＰＷＶ（配列番号２１１）。
【０３０８】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＹＷＭＳ（配列番号１１）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号１２）；及びＶＳＲＧＧＳＹＳＤ（配列番号１３）。
【０３０９】
特定の実施態様において、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片は、次の配列を含む：ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号１４）；ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号１５）；及びＳＳＹＡＧＲＮＷＶ（配列番号１６）。
【０３１０】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＹＷＭＳ（配列番号１１）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号１２）；ＶＳＲＧＧＳＹＳＤ（配列番号１３）；ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号１４）；ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号１５）；及びＳＳＹＡＧＲＮＷＶ（配列番号１６）。
【０３１１】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＩＹＶＳ（配列番号１７）；ＤＶＳＲＲＰＳ（配列番号１８）；及びＮＳＹＴＴＬＳＴＷＬ（配列番号１９）。
【０３１２】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＹＷＭＳ（配列番号１１）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号１２）；ＶＳＲＧＧＳＹＳＤ（配列番号１３）；ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＩＹＶＳ（配列番号１７）；ＤＶＳＲＲＰＳ（配列番号１８）；及びＮＳＹＴＴＬＳＴＷＬ（配列番号１９）。
【０３１３】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＴＧＴＲＳＤＩＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号２０）；ＦＤＶＮＮＲＰＳ（配列番号２１）；及びＮＳＦＴＤＳＲＴＷＬ（配列番号２２）。
【０３１４】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＹＷＭＳ（配列番号１１）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号１２）；ＶＳＲＧＧＳＹＳＤ（配列番号１３）；ＴＧＴＲＳＤＩＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号２０）；ＦＤＶＮＮＲＰＳ（配列番号２１）；及びＮＳＦＴＤＳＲＴＷＬ（配列番号２２）。
【０３１５】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＹＡＭＳ（配列番号２３）；ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２４）；及びＤＲＶＡＶＡＧＫＧＳＹＹＦＤＳ（配列番号２５）。
【０３１６】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＡＶＳ（配列番号２６）；ＹＤＮＬＬＰＳＧ（配列番号２７）；及びＡＡＷＤＤＳＬＮＤＷＶ（配列番号２８）。
【０３１７】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＹＡＭＳ（配列番号２３）；ＡＩＳＧＳＧＧＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号２４）；ＤＲＶＡＶＡＧＫＧＳＹＹＦＤＳ（配列番号２５）；ＳＧＳＳＳＮＩＧＮＮＡＶＳ（配列番号２６）；ＹＤＮＬＬＰＳＧ（配列番号２７）；及びＡＡＷＤＤＳＬＮＤＷＶ（配列番号２８）。
【０３１８】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＮＳＡＡＷＮ（配列番号２９）；ＲＴＹＹＲＳＫＷＹＮＤＹＡＶＳＫＳ（配列番号３０）；及びＤＥＧＰＬＤＹ（配列番号３１）。
【０３１９】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＴＧＳＳＳＮＬＧＴＧＹＤＶＨ（配列番号３２）；ＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号３３）；及びＱＳＹＤＦＳＬＳＡＭＶ（配列番号３４）。
【０３２０】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＮＳＡＡＷＮ（配列番号２９）；ＲＴＹＹＲＳＫＷＹＮＤＹＡＶＳＫＳ（配列番号３０）；ＤＥＧＰＬＤＹ（配列番号３１）；ＴＧＳＳＳＮＬＧＴＧＹＤＶＨ（配列番号３２）；ＧＮＳＮＲＰＳ（配列番号３３）；及びＱＳＹＤＦＳＬＳＡＭＶ（配列番号３４）。
【０３２１】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＤＹＡＭＨ（配列番号１２３）；ＶＩＳＮＨＧＫＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１２４）；及びＤＩＡＬＡＧＤＹ（配列番号１２５）。
【０３２２】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ（配列番号１２６）；ＧＡＳＫＬＱＳ（配列番号１２７）；及びＬＱＤＹＮＹＰＬＴ（配列番号１２８）。
【０３２３】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＤＹＡＭＨ（配列番号１２３）；ＶＩＳＮＨＧＫＳＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１２４）；ＤＩＡＬＡＧＤＹ（配列番号１２５）；ＲＡＳＱＳＩＳＳＹＬＮ（配列番号１２６）；ＧＡＳＫＬＱＳ（配列番号１２７）；及びＬＱＤＹＮＹＰＬＴ（配列番号１２８）。
【０３２４】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＳＮＷＷＳ（配列番号１２９）；ＥＩＳＱＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＧ（配列番号１３０）；及びＱＬＲＳＩＤＡＦＤＩ（配列番号１３１）。
【０３２５】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＤＫＹＡＳ（配列番号１３２）；ＹＱＤＲＫＲＰＳＧＩ（配列番号１３３）；及びＷＤＳＤＴＳＹＶ（配列番号１３４）。
【０３２６】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＳＮＷＷＳ（配列番号１２９）；ＥＩＳＱＳＧＳＴＮＹＮＰＳＬＫＧ（配列番号１３０）；ＱＬＲＳＩＤＡＦＤＩ（配列番号１３１）；ＤＫＹＡＳ（配列番号１３２）；ＹＱＤＲＫＲＰＳＧＩ（配列番号１３３）；及びＷＤＳＤＴＳＹＶ（配列番号１３４）。
【０３２７】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＮＹＹＷＳ（配列番号１３５）；ＹＩＨＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲ（配列番号１３６）；及びＶＧＹＹＹＤＳＳＧＹＮＬＡＷＹＦＤＬ（配列番号２１２）。
【０３２８】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＱＧＤＮＬＲＳＹＳＡＴ（配列番号１３７）；ＧＥＮＮＲＰＳ（配列番号１３８）；及びＴＳＲＶＮＳＧＮＨＬＧＶ（配列番号１３９）。
【０３２９】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＮＹＹＷＳ（配列番号１３５）；ＹＩＨＹＳＧＳＴＹＹＮＰＳＬＫＳＲ（配列番号１３６）；ＶＧＹＹＹＤＳＳＧＹＮＬＡＷＹＦＤＬ（配列番号２１２）；ＱＧＤＮＬＲＳＹＳＡＴ（配列番号１３７）；ＧＥＮＮＲＰＳ（配列番号１３８）；及びＴＳＲＶＮＳＧＮＨＬＧＶ（配列番号１３９）。
【０３３０】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＧＹＹＭＨ（配列番号１４０）；ＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲ（配列番号１４１）；及びＧＧＨＭＴＴＶＴＲＤＡＦＤＩ（配列番号１４２）。
【０３３１】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＱＧＤＳＬＲＹＹＹＡＴ（配列番号１４３）；ＧＱＮＮＲＰＳ（配列番号１４４）；及びＧＴＷＤＳＳＶＳＡＳＷＶ（配列番号１４５）。
【０３３２】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＧＹＹＭＨ（配列番号１４０）；ＷＩＮＰＮＳＧＧＴＮＹＡＱＫＦＱＧＲ（配列番号１４１）；ＧＧＨＭＴＴＶＴＲＤＡＦＤＩ（配列番号１４２）；ＱＧＤＳＬＲＹＹＹＡＴ（配列番号１４３）；ＧＱＮＮＲＰＳ（配列番号１４４）；及びＧＴＷＤＳＳＶＳＡＳＷＶ（配列番号１４５）。
【０３３３】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＧＹＹＭＨ（配列番号１４６）；ＷＩＮＰＮＳＧＳＴＮＹＡＱＫＦＬＧ（配列番号１４７）；及びＧＨＳＧＤＹＦＤＹ（配列番号１４８）。
【０３３４】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＲＡＳＱＳＶＳＳＷＬＡ（配列番号１４９）；ＡＡＲＬＲＧ（配列番号１５０）；及びＱＱＳＹＳＴＰＩＳ（配列番号１５１）。
【０３３５】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＧＹＹＭＨ（配列番号１４６）；ＷＩＮＰＮＳＧＳＴＮＹＡＱＫＦＬＧ（配列番号１４７）；ＧＨＳＧＤＹＦＤＹ（配列番号１４８）；ＲＡＳＱＳＶＳＳＷＬＡ（配列番号１４９）；ＡＡＲＬＲＧ（配列番号１５０）；及びＱＱＳＹＳＴＰＩＳ（配列番号１５１）。
【０３３６】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＳＡＦＳＷＮ（配列番号１５２）；ＹＩＹＨＴＧＩＴＤＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号１５３）；及びＧＨＧＳＤＰＡＷＦＤＰ（配列番号１５４）。
【０３３７】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＧＤＫＬＧＤＫＹＡＳ（配列番号１５５）；ＲＤＴＫＲＰＳ（配列番号１５６）；及びＱＡＷＤＳＴＴＳＬＶ（配列番号１５７）。
【０３３８】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＳＡＦＳＷＮ（配列番号１５２）；ＹＩＹＨＴＧＩＴＤＹＮＰＳＬＫＳ（配列番号１５３）；ＧＨＧＳＤＰＡＷＦＤＰ（配列番号１５４）；ＳＧＤＫＬＧＤＫＹＡＳ（配列番号１５５）；ＲＤＴＫＲＰＳ（配列番号１５６）；及びＱＡＷＤＳＴＴＳＬＶ（配列番号１５７）。
【０３３９】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＹＷＭＳ（配列番号１５８）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号１５９）；及びＶＳＲＧＧＳＹＳＤ（配列番号１６０）。
【０３４０】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＦＮＹＶＳ（配列番号１６１）；ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号１６２）；及びＳＳＷＡＰＧＫＮＬ（配列番号１６３）。
【０３４１】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＹＷＭＳ（配列番号１５８）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号１５９）；ＶＳＲＧＧＳＹＳＤ（配列番号１６０）；ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＦＮＹＶＳ（配列番号１６１）；ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号１６２）；及びＳＳＷＡＰＧＫＮＬ（配列番号１６３）。
【０３４２】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＹＡＭＳ（配列番号１６４）；ＧＩＳＧＳＧＳＳＥＧＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１６５）；及びＤＲＰＳＲＹＳＦＧＹＹＦＤＹ（配列番号１６６）。
【０３４３】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＧＮＫＬＧＤＫＹＶＳ（配列番号１６７）；ＱＤＴＫＲＰＳ（配列番号１６８）；及びＱＡＷＤＳＳＴＤＶＶ（配列番号１６９）。
【０３４４】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＹＡＭＳ（配列番号１６４）；ＧＩＳＧＳＧＳＳＥＧＧＴＹＹＡＤＳＶＫＧ（配列番号１６５）；ＤＲＰＳＲＹＳＦＧＹＹＦＤＹ（配列番号１６６）；ＳＧＮＫＬＧＤＫＹＶＳ（配列番号１６７）；ＱＤＴＫＲＰＳ（配列番号１６８）；及びＱＡＷＤＳＳＴＤＶＶ（配列番号１６９）。
【０３４５】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＫＹＷＭＴ（配列番号１７０）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＥＳＶＫＧ（配列番号１７１）；及びＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号１７２）。
【０３４６】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号１７３）；ＤＶＮＫＲＰＳ（配列番号１７４）；及びＮＳＹＡＧＳＮＮＷＶ（配列番号１７５）。
【０３４７】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＫＹＷＭＴ（配列番号１７０）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＥＳＶＫＧ（配列番号１７１）；ＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号１７２）；ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号１７３）；ＤＶＮＫＲＰＳ（配列番号１７４）；及びＮＳＹＡＧＳＮＮＷＶ（配列番号１７５）。
【０３４８】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＫＹＷＭＴ（配列番号１７６）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＥＳＶＫＧ（配列番号１７７）；及びＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号１７８）。
【０３４９】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号１７９）；ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号１８０）；及びＮＳＹＡＧＳＩＹＶ（配列番号１８１）。
【０３５０】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＫＹＷＭＴ（配列番号１７６）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＥＳＶＫＧ（配列番号１７７）；ＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号１７８）；ＴＧＴＳＳＤＶＧＧＹＮＹＶＳ（配列番号１７９）；ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号１８０）；及びＮＳＹＡＧＳＩＹＶ（配列番号１８１）。
【０３５１】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＴＮＤＩＨ（配列番号１８２）；ＩＩＤＴＳＧＡＭＴＲＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１８３）；及びＥＧＣＴＮＧＶＣＹＤＮＧＦＤＩ（配列番号１８４）。
【０３５２】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＲＡＳＥＧＩＹＨＷＬＡ（配列番号１８５）；ＫＡＳＳＬＡＳ（配列番号１８６）；及びＱＱＹＳＮＹＰＬＴ（配列番号１８７）。
【０３５３】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＴＮＤＩＨ（配列番号１８２）；ＩＩＤＴＳＧＡＭＴＲＹＡＱＫＦＱＧ（配列番号１８３）；ＥＧＣＴＮＧＶＣＹＤＮＧＦＤＩ（配列番号１８４）；ＲＡＳＥＧＩＹＨＷＬＡ（配列番号１８５）；ＫＡＳＳＬＡＳ（配列番号１８６）；及びＱＱＹＳＮＹＰＬＴ（配列番号１８７）。
【０３５４】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＫＹＷＭＴ（配列番号１８８）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＥＳＶＫＧ（配列番号１８９）；及びＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号１９０）。
【０３５５】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＴＧＴＳＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１９１）；ＥＶＳＮＲＰＳ（配列番号１９２）；及びＳＳＬＴＳＳＧＴＷＶ（配列番号１９３）。
【０３５６】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＫＹＷＭＴ（配列番号１８８）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＥＳＶＫＧ（配列番号１８９）；ＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号１９０）；ＴＧＴＳＳＤＶＧＳＹＮＬＶＳ（配列番号１９１）；ＥＶＳＮＲＰＳ（配列番号１９２）；及びＳＳＬＴＳＳＧＴＷＶ（配列番号１９３）。
【０３５７】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＫＹＷＭＴ（配列番号１９４）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＥＳＶＫＧ（配列番号１９５）；及びＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号１９６）。
【０３５８】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＴＧＴＳＳＤＶＧＡＹＮＹＶＳ（配列番号１９７）；ＥＶＡＲＲＰＳ（配列番号１９８）；及びＳＳＹＡＧＳＮＮＦＡＶ（配列番号１９９）。
【０３５９】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＫＹＷＭＴ（配列番号１９４）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＥＳＶＫＧ（配列番号１９５）；ＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号１９６）；ＴＧＴＳＳＤＶＧＡＹＮＹＶＳ（配列番号１９７）；ＥＶＡＲＲＰＳ（配列番号１９８）；及びＳＳＹＡＧＳＮＮＦＡＶ（配列番号１９９）。
【０３６０】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＹＷＭＴ（配列番号２００）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２０１）；及びＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号２０２）。
【０３６１】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＴＧＴＳＳＤＩＧＴＹＤＹＶＳ（配列番号２０３）；ＥＶＴＮＲＰＳ（配列番号２０４）；及びＮＳＦＴＫＮＮＴＷＶ（配列番号２０５）。
【０３６２】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＳＹＷＭＴ（配列番号２００）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＤＳＶＫＧ（配列番号２０１）；ＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号２０２）；ＴＧＴＳＳＤＩＧＴＹＤＹＶＳ（配列番号２０３）；ＥＶＴＮＲＰＳ（配列番号２０４）；及びＮＳＦＴＫＮＮＴＷＶ（配列番号２０５）。
【０３６３】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＫＹＷＭＴ（配列番号２０６）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＥＳＶＫＧ（配列番号２０７）；及びＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号２０８）。
【０３６４】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＴＧＴＳＧＤＶＧＡＹＮＹＶＳ（配列番号２０９）；ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号２１０）；及びＮＳＹＲＧＳＮＧＰＷＶ（配列番号２１１）。
【０３６５】
特定の実施態様において、次の配列を含むＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。ＫＹＷＭＴ（配列番号２０６）；ＮＩＫＰＤＧＳＥＫＹＹＶＥＳＶＫＧ（配列番号２０７）；ＶＳＲＧＧＳＦＳＤ（配列番号２０８）；ＴＧＴＳＧＤＶＧＡＹＮＹＶＳ（配列番号２０９）；ＥＶＳＫＲＰＳ（配列番号２１０）；及びＮＳＹＲＧＳＮＧＰＷＶ（配列番号２１１）。
【０３６６】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０３６７】
【化４１】
2009533057.tif 000044
【０３６８】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０３６９】
【化４２】
2009533057.tif 000045
【０３７０】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０３７１】
【化４３】
2009533057.tif 000046
【０３７２】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０３７３】
【化４４】
2009533057.tif 000047
【０３７４】
特定の実施態様において、次の配列を含む抗体が提供される。
【０３７５】
【化４５】
2009533057.tif 000048
【０３７６】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４に特異的に結合する、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０３７７】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４に特異的に結合する、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０３７８】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３に特異的に結合する、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０３７９】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０に特異的に結合する、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０３８０】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０に特異的に結合する、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０３８１】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０特異的に結合する、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０３８２】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０に特異的に結合する、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０３８３】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９に特異的に結合する、Ｆｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０３８４】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４に特異的に結合する抗体が提供される。
【０３８５】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４に特異的に結合する抗体が提供される。
【０３８６】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３に特異的に結合する抗体が提供される。
【０３８７】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０に特異的に結合する抗体が提供される。
【０３８８】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０に特異的に結合する抗体が提供される。
【０３８９】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０に特異的に結合する抗体が提供される。
【０３９０】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０に特異的に結合する抗体が提供される。
【０３９１】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９に特異的に結合する抗体が提供される。
【０３９２】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３、Ｅ６０及びＨ１１４に特異的に結合するＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０３９３】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８に特異的に結合するＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０３９４】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６に特異的に結合するＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０３９５】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｗ６４に特異的に結合するＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０３９６】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｈ７０に特異的に結合するＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０３９７】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８及びＷ６４に特異的に結合するＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０３９８】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８及びＬ６６に特異的に結合するＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０３９９】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８及びＲ６８に特異的に結合するＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０４００】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８及びＨ７０に特異的に結合するＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０４０１】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｗ６４及びＲ６８に特異的に結合するＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０４０２】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｗ６４及びＨ７０に特異的に結合するＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０４０３】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ６８に特異的に結合するＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０４０４】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＨ７０に特異的に結合するＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０４０５】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｒ６８及びＨ７０に特異的に結合するＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０４０６】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｅ６２、Ｐ６３、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８、Ｈ７０、Ｓ９１、Ｆ９３、Ｒ９９、Ｈ１１４及びＭ１５０の一つ又はそれ以上に特異的に結合するＦｃに融合された一本鎖可変断片が提供される。
【０４０７】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３、Ｅ６０及びＨ１１４に特異的に結合する抗体が提供される。
【０４０８】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８に特異的に結合する抗体が提供される。
【０４０９】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６に特異的に結合する抗体が提供される。
【０４１０】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｗ６４に特異的に結合する抗体が提供される。
【０４１１】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｈ７０に特異的に結合する抗体が提供される。
【０４１２】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８及びＷ６４に特異的に結合する抗体が提供される。
【０４１３】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８及びＬ６６に特異的に結合する抗体が提供される。
【０４１４】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８及びＲ６８に特異的に結合する抗体が提供される。
【０４１５】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８及びＨ７０に特異的に結合する抗体が提供される。
【０４１６】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｗ６４及びＲ６８に特異的に結合する抗体が提供される。
【０４１７】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｗ６４及びＨ７０に特異的に結合する抗体が提供される。
【０４１８】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ６８に特異的に結合する抗体が提供される。
【０４１９】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＨ７０に特異的に結合する抗体が提供される。
【０４２０】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｒ６８及びＨ７０に特異的に結合する抗体が提供される。
【０４２１】
特定の実施態様において、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｅ６２、Ｐ６３、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８、Ｈ７０、Ｓ９１、Ｆ９３、Ｒ９９、Ｈ１１４及びＭ１５０の一つ又はそれ以上に特異的に結合する抗体が提供される。
【０４２２】
ある種の実施形態において、抗体の効果は、対象疾患の症候の量の低下を測定することによって評価され得る。ある種の実施形態において、対象疾患は、病原体によって引き起こされ得る。ある種の実施形態において、疾患は、（発癌物質などの）物質の導入を含む他の方法及び遺伝的操作によって、動物宿主中に確立され得る。ある種の実施形態において、効果は、動物宿主中の１つ又はそれ以上の有害現象を検出することによって評価され得る。「有害現象」という用語には、抗体を与えられていない動物宿主中に存在しない、抗体を与えられた動物宿主中の有害反応が含まれるが、これに限定されない。ある種の実施形態において、有害現象には、発熱、抗体に対する免疫応答、炎症及び／又は動物宿主の死が含まれるが、これらに限定されない。
【０４２３】
ある種の実施形態において、組成物は、マキシボディ（ｍａｘｉｂｏｄｙ）及び少なくとも１つの糖をさらに含む。本明細書において使用される「糖」という用語は、グルコース及びマンノースなどの単糖、又はスクロース及びラクトースなどの二糖を含む多糖並びに糖アルコール及び糖酸を含む糖誘導体を表す。糖アルコールには、マニトール、キシリトール、エリスリトール、スレイトール、ソルビトール及びグリセロールが含まれるが、これらに限定されない。糖酸の非限定的な例は、Ｌ−グルコナートである。ある種の典型的な糖には、トレハロース、フコース及びグリシンが含まれるが、これらに限定されない。
【０４２４】
ある種の実施形態において、組成物は、少なくとも１つの充填剤／浸透圧制御剤をさらに含む。このような薬剤は、結晶性（例えば、グリシン、マニトール）又は非晶質（例えば、Ｌ−ヒスチジン、スクロース、デキストラン、ポリビニルピロリドン、カルボキシメチルセルロースなどのポリマー及びラクトース）の何れかであり得る。ある種の実施形態において、充填剤／浸透圧制御剤は、２％と５％の間の濃度で与えられる。ある種の実施形態において、充填剤／浸透圧制御剤は、２．５％と４．５％の間の濃度で与えられる。
【０４２５】
ある種の実施形態において、あるタンパク質に結合し、他の結合化合物との相互作用を遮断する抗体は、治療的用途を有し得る。本願では、疾病又は症状を治療する抗体の使用について述べる場合、このような使用は、抗体を含む組成物及び／又は抗体及び１つ又はそれ以上の追加の活性成分を含む併用療法の使用を含み得る。抗体が、疾病又は症状を「治療する」ために使用される場合には、このような治療は、疾病又は症状の予防を含んでもよく、又は含まなくてもよい。
【０４２６】
ある種の実施形態において、抗体は単独で投与される。ある種の実施形態において、抗体は、少なくとも１つの他の治療剤の投与の前に投与される。ある種の実施形態において、抗体は、少なくとも１つの他の治療剤の投与と同時に投与される。ある種の実施形態において、抗体は、少なくとも１つの他の治療剤の投与の後に投与される。
【０４２７】
ある種の実施形態において、抗体は、ペット（イヌ、ネコ、鳥、霊長類など）及び家畜動物（ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、鳥など）の非ヒト動物を治療するために使用され得る。ある種のこのような事例において、適切な用量は、動物の体重に従って決定され得る。例えば、ある種の実施形態において、０．２〜１ｍｇ／ｋｇの用量が使用され得る。ある種の実施形態において、用量は、動物の表面積に従って決定され得、典型的な用量は、０．１〜２０ｍｇ／平方インチ又は５〜１２ｍｇ／ｍ２の範囲である。イヌ又はネコなどの小動物の場合、ある種の実施形態において、適切な用量は０．４ｍｇ／ｋｇである。ある種の実施形態において、抗体は、動物の症状が改善されるまで、毎週１回若しくはそれ以上、注射若しくは他の適切な経路によって投与されるか、又は無限に投与され得る。
【０４２８】
前記医薬又は併用療法への各患者による応答は変動し得、それぞれの患者に対する薬物の適切な有効的組み合わせは、患者の医師によって決定され得る。
【０４２９】
ある種の実施形態において、抗体は、該抗体の全部又は一部と及びプロドラッグとを含む連結体分子の一部であり得る。ある種の実施形態において、「プロドラッグ」という用語は、医薬として活性な物質の前駆体又は誘導体形態を表す。ある種の実施形態において、プロドラッグは、親薬物と比べて、細胞に対する細胞毒性がより低く、より活性な細胞毒性親形態へと酵素的に活性化され、又は変換されることができる。典型的なプロドラッグには、より活性な細胞毒性遊離薬物へと変換されることができる、ホスファート含有プロドラッグ、チオホスファート含有プロドラッグ、サルファート含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄ−アミノ酸によって修飾されたプロドラッグ、グリコシル化されたプロドラッグ、β−ラクタム含有プロドラッグ、場合によって置換されたフェノキシアセトアミド含有プロドラッグ及び場合によって置換されたフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、５−フルオロシトシン及び他の５−フルオロウリジンプロドラッグが含まれるが、これらに限定されない。プロドラッグ形態へと誘導体化することが可能な細胞毒性薬物の例には、上記の細胞毒製剤が含まれるが、これらに限定されない。例えば、米国特許第６，７０２，７０５号を参照。
【０４３０】
ある種の実施形態において、抗体連合体は、分子の抗体部分を有し、分子の細胞毒性部分又はプロドラッグ部分を患者中の特定の細胞の集団へ標的誘導することによって機能する。
【０４３１】
ある種の実施形態において、抗体の治療的有効量を投与することを含む患者を治療する方法が提供される。ある種の実施形態において、抗体連合体の治療的有効量を投与することを含む患者を治療する方法が提供される。ある種の実施形態において、抗体は、上述のように、少なくとも１つの追加の治療剤の治療的有効量とともに使用される。
【０４３２】
上述のように、ある種の実施形態において、抗体は、同じ患者に投与される１つ又はそれ以上の他の薬物と同時に投与され得、各薬物は、その医薬に適した治療計画に従って投与される。このような治療は、前処理、同時処理、逐次処理及び交互治療計画を包含する。このような薬物のさらなる例には、抗ウイルス剤、抗生物質、鎮痛薬、コルチコステロイド、炎症性サイトカインのアンタゴニスト、ＤＭＡＲＤ、非ステロイド性抗炎症薬、化学療法剤、血管新生の阻害剤、及び血管新生の刺激物質が含まれるが、これらに限定されない。
【０４３３】
ある種の実施形態において、組成物は、抗体の有効量並びに医薬として許容される、希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤、防腐剤及び／又はアジュバントを含む。
【０４３４】
ある種の実施形態において、医薬として許容される、希釈剤、担体、可溶化剤、乳化剤、防腐剤及び／又はアジュバントとともに、抗体の治療的有効量及び少なくとも１つのさらなる治療剤の治療的有効量を含む医薬組成物が提供される。
【０４３５】
ある種の実施形態において、許容される製剤材料は、好ましくは、使用される投薬量及び濃度で、服用者に対して無毒である。
【０４３６】
ある種の実施形態において、医薬組成物は、例えば、ｐＨ、モル浸透圧濃度、粘度、透明性、色、等張性、匂い、無菌性、安定性、溶解又は放出の速度、組成物の吸収又は浸透を修飾し、維持し、又は保持するための製剤材料を含有し得る。ある種の実施形態において、適切な製剤材料には、アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニン又はリジンなど）、抗菌剤、抗酸化剤（アスコルビン酸、亜硫酸ナトリウム又は亜硫酸水素ナトリウムなど）、緩衝剤（ボラート、バイカーボナート、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、シトラート、ホスファート又は他の有機酸）、増量剤（マンイトール又はグリシンなど）、キレート剤（エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ））、錯化剤（カフェイン、ポリビニルピロリドン、β−シクロデキストリン又はヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）、充填剤、単糖、二糖及びその他の炭水化物（グルコース、マンノース又はデキストリンなど）、タンパク質（血清アルブミン、ゼラチン又は免疫グロブリン）、着色、着香及び希釈剤、乳化剤、親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）、低分子量ポリペプチド、塩形成カウンターイオン（ナトリウムなど）、防腐剤（塩化ベンズアルコニウム、安息香酸、サリチル酸、チメロサール、フェネチルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン、クロルヘキシジン、ソルビン酸又は過酸化水素）、溶媒（グリセリン、プロピレングリコール又はポリエチレングリコールなど）、糖アルコール（マニトール又はソルビトールなど）、懸濁剤、界面活性剤又は湿潤剤（プロロニック、ＰＥＧ、ソルビタンエステル、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０などのポリソルベート、トリトン、トロメタミン、レシチン、コレステロール、チロキサパルなど）、安定性増強剤（スクロース又はソルビトールなど）、張度増強剤（アルキル金属ハロゲン化物、好ましくは塩化ナトリウム又は塩化カリウム、マニトールソルビトールなど）、送達ビヒクル、希釈剤、賦形剤及び／又は医薬アジュバントが含まれるが、これらに限定されない。（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ａ．Ｒ．  Ｇｅｎｎａｒｏ，ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ（１９９０））。
【０４３７】
ある種の実施形態において、抗体及び／又はさらなる治療分子は、本分野で公知の半減期伸長ビヒクルに連結される。このようなビヒクルは、Ｆｃドメイン、ポリエチレングリコール及びデキストランが含まれるが、これらに限定されない。このようなビヒクルは、例えば、米国特許第６，６６０，８４３号及び公開されたＰＣＴ出願ＷＯ９９／２５０４４に記載されている。
【０４３８】
ある種の実施形態において、最適な医薬組成物は、例えば、所期の投与経路、送達形式及び所望される投薬量に応じて、当業者によって決定される。例えば、上記Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓを参照されたい。ある種の実施形態において、このような組成物は、抗体の物理的状態、安定性、インビボ放出の速度及びインビボクリアランス速度に影響を与え得る。
【０４３９】
ある種の実施形態において、医薬組成物中の主要なビヒクル又は担体は、水性又は非水性の性質であり得る。例えば、ある種の実施形態において、適切なビヒクル又は担体は、非経口投与用組成物と共通の他の材料を補充し得る、注射用の水、生理的食塩水溶液又は人工脳脊髄液であり得る。ある種の実施形態において、中性に緩衝化された生理的食塩水又は血清アルブミンと混合された生理的食塩水は、さらなる典型的ビヒクルである。ある種の実施形態において、医薬組成物は、約ｐＨ７．０から８．５のＴｒｉｓ緩衝液又は約ｐＨ４．０〜５．５の酢酸緩衝液を含み、これらの緩衝液は、ソルビトール又は適切なソルビトール代替物をさらに含み得る。ある種の実施形態において、医薬組成物は、約ｐＨ４．０から５．５の酢酸緩衝液、ポリオール（ポリアルコール）を含み、場合によって界面活性剤を含む水性又は液体製剤であり、前記組成物は、塩（例えば、塩化ナトリウム）を含まず、前記組成物は患者に対して等張である。典型的なポリオールには、スクロース、グルコース、ソルビトール及びマニトールが含まれるが、これらに限定されない。典型的な界面活性剤には、ポリソルベートが含まれるが、これに限定されない。ある種の実施形態において、医薬組成物は、約ｐＨ５．０の酢酸緩衝液、ソルビトール及びポリソルベートを含む水性又は液体製剤であり、前記組成物は、塩（例えば、塩化ナトリウム）を含まず、前記組成物は患者に対して等張である。ある種の典型的な組成物は、例えば、米国特許第６，１７１，５８６号に記載されている。追加の医薬担体には、石油、動物油、植物油、落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油などの油が含まれるが、これに限定されるものではない。ある種の実施形態において、水性デキストロース及びグリセロール溶液は、特に注射可能な溶液に対して、液体担体として使用することも可能である。ある種の実施形態において、少なくとも１つの追加の治療剤とともに、又は少なくとも１つの追加の治療剤なしに抗体を含む組成剤は、純度の所望される程度を有する選択された組成物を、凍結乾燥されたケーキ又は水溶液の形態の、場合によって使用される処方剤（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、上記）を混合することによって保存のために調製され得る。さらに、ある種の実施形態において、少なくとも１つの追加の治療剤あり又はなしで抗体を含む組成物は、適切な賦形剤溶液（例えば、スクロース）を希釈剤として用いて、凍結乾燥物質として調合され得る。
【０４４０】
ある種の実施形態において、抗体は、生理的に許容される、担体、賦形剤又は希釈剤とともに、精製された組換えタンパク質を含む生理的に許容される組成物の形態で投与される。ある種の実施形態において、このような担体は、使用される投薬量及び濃度で、服用者に対して無毒である。ある種の実施形態において、このような組成物を調製することは、抗体を、緩衝液、アスコルビン酸などの抗酸化剤、低分子量ポリペプチド（１０アミノ酸より少ないアミノ酸を有するものなど）、タンパク質、アミノ酸、グルコース、スクロース又はデキストリンなどの炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート剤、グルタチオン及び／又は他の安定化剤並びに賦形剤と組み合わせることを含み得る。ある種の実施形態において、適切な投薬量は、標準的な投薬試験において決定され、選択された投与経路に従って変動し得る。ある種の実施形態において、適切な業界標準を用いて、防腐剤（ベンジルアルコールが含まれるが、これに限定されない。）も添加し得る。ある種の実施形態において、投与の量及び頻度は、治療されている疾病の性質及び重篤度、所望される応答、患者の年齢及び症状などの要因に基づいて決定され得る。
【０４４１】
ある種の実施形態において、医薬組成物は、非経口送達のために選択することが可能である。ある種のこのような医薬として許容される組成物の調製は、当分野の技術に属する。
【０４４２】
ある種の実施形態において、製剤成分は、投与部位に対して許容される濃度で存在する。ある種の実施形態において、生理的ｐＨ又はこれより若干低いｐＨに、典型的には、約５から約８までのｐＨ範囲内に組成物を維持するために、緩衝液が使用される。
【０４４３】
ある種の実施形態において、非経口投与が想定される場合、治療的組成物は、追加の治療剤とともに、又は追加の治療剤なしに、医薬として許容されるビヒクル中に所望の抗体を含む非経口的に許容される無発熱物質の水溶液の形態であり得る。ある種の実施形態において、非経口注射用ビヒクルは、少なくとも１つの追加の治療剤あり又はなしに、適切に保存された無菌の等張溶液として、その中で抗体が調合される無菌蒸留水である。ある種の実施形態において、調製物は、その後デポ注射を介して送達され得る産物の徐放又は持続的放出を提供し得る、注射可能な小球体、生体内分解性粒子、ポリマー性化合物（ポリ乳酸又はポリグリコール酸など）、ビーズ又はリポソームなどの因子との所望の分子の製剤を含むことができる。ある種の実施形態において、ヒアルロン酸も使用することができ、循環中の持続時間を促進する効果を有し得る。ある種の実施形態において、所望の分子を導入するために、インプラント可能な薬物送達装置を使用し得る。
【０４４４】
ある種の実施形態において、医薬組成物は、吸入のために調合され得る。ある種の実施形態において、肺疾患に関連する疾病を治療する場合には、吸入による投与が有益である。ある種の実施形態において、抗体は、少なくとも１つの追加の治療剤を加えて又は加えずに、吸入用乾燥粉末として調合され得る。ある種の実施形態において、抗体を含む吸入溶液は、少なくとも１つの追加の治療剤を加えて又は加えずに、エアロゾル送達用噴射剤とともに調合され得る。ある種の実施形態において、溶液は、噴霧状にされ得る。経肺投与は、化学的に修飾されたタンパク質の経肺送達を記載するＰＣＴ公開ＷＯ９４／２００６９にさらに記載されている。
【０４４５】
ある種の実施形態において、製剤は経口投与され得ることが想定される。ある種の実施形態において、少なくとも１つの追加の治療剤を加えて又は加えずに、この様式で投与される、抗体は、錠剤及びカプセルなどの固体剤形の配合において慣用的に使用される担体を加えて又は加えずに調合され得る。ある種の実施形態において、生物学的利用可能性が最大化され、前全身分解が最小化される胃腸管内の地点で、製剤の活性部分を放出するように設計し得る。ある種の実施形態において、抗体及び／又は何れかのさらなる治療剤の吸収を促進するために、少なくとも１つの追加の因子を含めることが可能である。ある種の実施形態において、希釈剤、着香剤、低融点の蝋、植物油、潤滑剤、懸濁剤、錠剤崩壊剤及び／又は結合剤も使用し得る。
【０４４６】
ある種の実施形態において、医薬組成物は、錠剤の製造に適した無毒の賦形剤との混合物中に、少なくとも１つの追加の治療剤を加えて又は加えずに、抗体の有効量を含み得る。ある種の実施形態において、無菌水又は別の適切なビヒクル中に錠剤を溶解させることによって、単位投薬形態中に溶液を調製され得る。適切な賦形剤には、炭酸カルシウム、炭酸ナトリウム又は重炭酸ナトリウム、ラクトース又はリン酸カルシウムなどの不活性な希釈剤、並びにデンプン、ゼラチン及びアラビアゴムなどの結合剤、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸及びタルクなどの潤滑剤が含まれるが、これらに限定されるものではない。
【０４４７】
持続的送達又は徐放送達製剤中に、少なくとも１つのさらなる治療剤とともに、又は少なくとも１つのさらなる治療剤なしに抗体を含む製剤など、さらなる医薬組成物が当業者に自明である。ある種の典型的な持続的送達又は徐放送達製剤において、リポソーム担体、生体内分解性微粒子、多孔性ビーズ及びデポ注射が含まれるが、これらに限定されるものではない。ある種の製剤を調製するためのある種の典型的技術は、当業者に公知である。例えば、医薬組成物の送達用の多孔性ポリマー微粒子の徐放について記載しているＰＣＴ公開ＷＯ９３／１５７２２号を参照。ある種の実施形態において、徐放調製物は、成型された製品、例えばフィルム又はマイクロカプセルの形態の半透過性ポリマーマトリックスを含み得る。持続的放出マトリックスには、ポリエステル、ヒドロゲル、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号及びＥＰ０５８，４８１）、Ｌ−グルタミン酸とγエチル−Ｌ−グルタミン酸の共重合体（Ｓｉｄｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ，２２：５４７−５５６（１９８３））、ポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリラート）（Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．，１５：１６７−２７７（１９８１）及びＬａｎｇｅｒ，Ｃｈｅｍ．Ｔｅｃｈ．，１２：９８−１０５（１９８２））、エチレン酢酸ビニル（Ｌａｎｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ、上記）及びポリ−Ｄ（−）−３−ヒドロキシ酪酸（ＥＰ１３３，９８８）が含まれるが、これらに限定されない。ある種の実施形態において、徐放組成物は、リポソームも含み得、これは、ある種の実施形態において、本分野で公知の幾つかの方法の何れかによって調製することが可能である。例えば、Ｅｐｐｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８２：３６８８−３６９２（１９８５）；ＥＰ０３６，６７６；ＥＰ０８８，０４６及びＥＰ１４３，９４９を参照されたい。
【０４４８】
ある種の実施形態において、インビボ投与のために使用されるべき医薬組成物は無菌である。ある種の実施形態において、インビボ投与のために使用されるべき医薬組成物は、無菌ろ過膜を通じたろ過によって無菌とされる。組成物が凍結乾燥されるある種の実施形態において、無菌ろ過膜を用いた滅菌は、凍結乾燥及び再構成の前又は後の何れかにおいて実施し得る。ある種の実施形態において、非経口投与用組成物は、凍結乾燥された形態で、又は溶液中に保存し得る。ある種の実施形態において、非経口組成物は、一般的に、無菌アクセスポートを有する容器中に、例えば、皮下注射針によって突き刺すことが可能なストッパーを有する静脈内溶液袋又は容器中に配置される。
【０４４９】
ある種の実施形態において、非経口組成物は、医薬組成物が調合された後、溶液、懸濁液、ゲル、エマルジョン、固体として、又は脱水若しくは凍結乾燥された粉末として、無菌容器中に保存され得る。ある種の実施形態において、このような製剤は、即時使用形態で、又は投与前に再構成される形態（例えば、凍結乾燥された形態）の何れかで保存し得る。
【０４５０】
ある種の実施形態において、単回投薬投与単位を製造するためのキットが提供される。ある種の実施形態において、キットは、それぞれ、乾燥されたタンパク質を有する第一の容器と、水性製剤を有する第二の容器の両方を含有し得る。ある種の実施形態において、単一及び／又は複数チャンバーの予め充填された注射器（例えば、液体注射器及びリオシリンジ）を含有するキットが含まれる。
【０４５１】
ある種の実施形態において、少なくとも１つの追加の治療剤あり又はなしに、治療的に使用されるべき抗体を含む医薬組成物の有効量は、例えば、治療的な文脈及び目的に依存する。当業者は、ある種の実施形態に従って、治療用の適切な投薬レベルは、従って、送達される分子、少なくとも１つの追加の治療剤とともに又は少なくとも１つの追加の治療剤なしに抗体が使用されている適応症、投与の経路及びサイズ（体重、体表面又は臓器サイズ）及び／又は患者の症状（年齢及び一般的な健康）に部分的に依存して変動する。ある種の実施形態において、医師は、最適な治療効果を得るために、投薬量を滴定し、投与の経路を修飾し得る。ある種の実施形態において、典型的な投薬量は、上述の要因に応じて、約０．１μｇ／ｋｇから最大約１００ｍｇ／ｋｇ又はそれ以上の範囲であり得る。ある種の実施形態において、投薬量は、０．１μｇ／ｋｇから最大約１００ｍｇ／ｋｇ又は１μｇ／ｋｇから最大約１００ｍｇ／ｋｇ又は５μｇ／ｋｇから約１００ｍｇ／ｋｇ又は０．１ｍ／ｋｇから最大約１００ｍｇ／ｋｇの範囲であり得る。
【０４５２】
ある種の実施形態において、投薬の頻度は、使用される製剤中の抗体及び／又は何れかのさらなる治療剤の薬物動態学的パラメータを考慮に入れる。ある種の実施形態において、臨床医は、所望の効果を達成する投薬量が達成するまで、組成物を投与する。ある種の実施形態において、組成物は、従って、単回用量として、又は経時的に２回若しくはそれ以上の用量（所望の分子の同じ用量を含有してもよく、含有しなくてもよい。）として、又はインプラント装置又はカテーテルを介した連続注入として投与され得る。適切な投薬量をさらに精密にするある種の方法は、当分野の技術に属する。ある種の実施形態において、適切な投薬量は、適切な用量応答データの使用を通じて確認し得る。
【０４５３】
ある種の実施形態において、医薬組成物の投与経路は、公知の方法に従い、例えば、経口的に、静脈内、腹腔内、脳内（実質内）、脳室内、筋肉内、眼内、動脈内、門脈内、又は病変内経路による注射を通じて、徐放システムによって又はインプラント装置によって行われる。ある種の実施形態において、組成物は、ボーラス注射によって、又は注入により連続的に、又はインプラント装置によって投与され得る。
【０４５４】
上述のように、様々な実施形態において、抗体を投与するために、有効な投与経路の何れも使用し得る。注射されるのであれば、ある種の実施形態において、抗体は、例えば、関節内、静脈内、筋肉内、病変内、腹腔内、頭蓋内、鼻内、吸入又はボーラス注射による若しくは連続注入による皮下経路を介して投与され得る。投与の典型的な方法には、インプラントからの持続的放出、エアロゾル吸入、点眼薬、経口調製物並びにローション、ゲル、スプレー、軟膏及び他の適切な技術などの局所調製物が含まれるが、これらに限定されない。
【０４５５】
抗体が１つ又はそれ以上の他の生物学的に活性な化合物と組み合わせて投与される場合には、ある種の実施形態において、これらは、同じ経路又は異なる経路によって投与され得、及び一緒に、別個に、又は順次に投与され得る。
【０４５６】
ある種の実施形態において、組成物は、膜、スポンジ又は所望の分子がその上に吸収又は封入された別の適切な材料の植え込みを介して、局所的に投与され得る。植え込み装置が使用されるある種の実施形態において、装置は、あらゆる適切な組織又は臓器中に植え込むことができ、所望の分子の送達は、核酸、持続放出型の巨丸剤又は連続投与を介して行われ得る。
【０４５７】
ある種の実施形態において、エキソビボ様式で、少なくとも１つの追加の治療剤あり又はなしで、抗体を含む医薬組成物を使用することが望ましい場合があり得る。このような実施形態において、患者から採取された細胞、組織及び／又は臓器は、少なくとも１つのさらなる治療剤あり又はなしに抗体を含む医薬組成物に曝露され、この後、細胞、組織及び／又は臓器は、続いて、患者中に戻されて植え込まれる。
【０４５８】
ある種の実施形態において、第一の抗体は分子上の第一のエピトープに結合し、第二の抗体は同じ分子上の第二のエピトープに結合する。ある種のこのような実施形態において、第一の抗体又は第二の抗体のうち何れかの、分子への結合が、他の抗体の前記分子への結合を阻害するように、第一のエピトープは、第二のエピトープと重複する。ある種のこのような実施形態において、第一の抗体又は第二の抗体のうち何れかの、分子への結合が、他の抗体の結合を阻害しないように、第一のエピトープは、第二のエピトープと重複しない。
【０４５９】
ある種の実施形態において、受容体上のエピトープは、受容体上のリガンド結合部位と重複する。ある種のこのような実施形態において、受容体への抗体の結合は、受容体へのリガンドの結合を阻害する。ある種の実施形態において、受容体への抗体の結合は、受容体へのリガンドの結合を遮断する。ある種の実施形態において、抗体の結合は、受容体へのリガンドの結合を部分的に阻害する。
【０４６０】
ある種の実施形態において、受容体上のエピトープは、受容体上のリガンド結合部位と重複しない。ある種のこのような実施形態において、エピトープへの抗体の結合は、受容体を少なくとも部分的に活性化する。ある種の他の実施形態において、エピトープへの抗体の結合は受容体を活性化させない。
【０４６１】
ある種の実施形態において、受容体分子上のエピトープは、受容体上のリガンド結合部位と重複する。ある種のこのような実施形態において、エピトープへの抗体の結合は、受容体を少なくとも部分的に活性化する。ある種の他の実施形態において、エピトープへの抗体の結合は受容体を活性化させない。ある種の実施形態において、受容体上のエピトープへの抗体の結合は、受容体リガンドによる受容体の活性化を阻害する。ある種の実施形態において、受容体上のエピトープへの抗体の結合は、受容体リガンドによる受容体の活性化を遮断する。
【０４６２】
ある種の実施形態において、受容体の二量体化はその活性化を増加させる。ある種の実施形態において、受容体は活性化するために二量体化しなければならない。ある種の実施形態において、二価抗体は受容体の二量体化を促進する。ある種の実施形態において、二価の分子を作製するために、一価抗体は別の一価抗体と架橋される。
【０４６３】
ある種の実施形態において、ＥｐｏＲアゴニストは、ｈｕＥｐｏＲを活性化させる抗体である。ある種の実施形態において、ｈｕＥｐｏＲを活性化させる抗体（ｈｕＥｐｏＲ抗体）はマキシボディである。ある種の実施形態においてｈｕＥｐｏＲ抗体は、赤血球新生刺激タンパク質（ＥＳＰ；ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｓｉｓ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ）より少ない頻度で投与される。ＥＳＰの例には、エポイエチンα、エポイエチンβ及びダルベポイエチンαが含まれる。ある種の実施形態において、ｈｕＥｐｏＲ抗体は、月に約１回又は２ヶ月ごとに約１回又は３ヶ月ごとに約１回又は４ヶ月ごとに約１回又は５ヶ月ごとに約１回又は６ヶ月ごとに約１回投与される。
【０４６４】
ある種の実施形態において、ｈｕＥｐｏＲ抗体に対する抗体は、固有状態のエリスロポエチン（Ｅｐｏ）と反応することができず、従って、赤芽球癆（ＰＲＣＡ）を誘導することができない。その結果、他の赤血球新生刺激タンパク質の投与と比べた場合、ｈｕＥｐｏＲ抗体の投与はＰＲＣＡを誘導する低下したリスクを有する。ある種の実施形態において、ＰＲＣＡを誘導する低下したリスクを有するｈｕＥｐｏＲ抗体は、長期間にわたって徐放性放出を可能とするための投与方法を用いて、疾病又は症状を治療するために使用される。例えば、限定することなく、ｈｕＥｐｏＲ抗体は、ＰＲＣＡのリスクを増大させることなく、経口的に、又は非侵襲性送達装置を用いて投与することができる。
【０４６５】
ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、少なくとも１つの抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、配列番号１及び配列番号２を含むアミノ酸配列を含む抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、配列番号３及び配列番号４を含むアミノ酸配列を含む抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、配列番号５及び配列番号６を含むアミノ酸配列を含む抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、配列番号７及び配列番号８を含むアミノ酸配列を含む抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、配列番号９及び配列番号１０を含むアミノ酸配列を含む抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、配列番号５６及び配列番号５８を含むアミノ酸配列を含む抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、配列番号６０及び配列番号６２を含むアミノ酸配列を含む抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、配列番号６４及び配列番号６６を含むアミノ酸配列を含む抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、配列番号６８及び配列番号７０を含むアミノ酸配列を含む抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、配列番号７２及び配列番号７４を含むアミノ酸配列を含む抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、配列番号７６及び配列番号７８を含むアミノ酸配列を含む抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、配列番号８０及び配列番号８２を含むアミノ酸配列を含む抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、配列番号８４及び配列番号８６を含むアミノ酸配列を含む抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、配列番号８８及び配列番号９０を含むアミノ酸配列を含む抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、配列番号９２及び配列番号９４を含むアミノ酸配列を含む抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、配列番号９６及び配列番号９８を含むアミノ酸配列を含む抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、配列番号１００及び配列番号１０２を含むアミノ酸配列を含む抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、配列番号１０４及び配列番号１０６を含むアミノ酸配列を含む抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、配列番号１０８及び配列番号１１０を含むアミノ酸配列を含む抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、配列番号１１２及び配列番号１１４を含むアミノ酸配列を含む抗体が使用される。
【０４６６】
ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３及びＨ１１４に特異的に結合する抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｓ９１、Ｆ９３及びＨ１１４に特異的に結合する抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｆ９３に特異的に結合する抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｅ６２、Ｆ９３及びＭ１５０に特異的に結合する抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｅ６２、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０に特異的に結合する抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｖ４８、Ｗ６４、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０に特異的に結合する抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ａ４４、Ｖ４８、Ｐ６３、Ｌ６６、Ｒ６８及びＨ７０に特異的に結合する抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病又は症状を治療するために、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸Ｌ６６及びＲ９９に特異的に結合する抗体が使用される。
【０４６７】
ある種の実施形態において、治療される疾病又は症状は、減少した赤血球及び／又はヘモグロビンレベルを伴う。ある種の実施形態において、治療される疾病又は症状は貧血である。ある種の実施形態において、ｈｕＥｐｏＲ抗体での貧血の治療は、他のＥＳＰを用いて観察されるより、より長い持続時間の赤血球応答によって特徴付けられる。
【０４６８】
ある種の実施形態において、慢性的な疾病又は症状の貧血を治療するために、ｈｕＥｐｏＲ抗体が使用される。慢性的とは、持続的又は持続性を意味する。ある種の実施形態において、時間が経過するにつれて、慢性的な疾病又は症状は悪化し得る。ある種の実施形態において、時間が経過するにつれて、慢性的な疾病又は症状は悪化し得ない。典型的な慢性的疾病には、慢性の腎臓病、うっ血性心不全及び骨髄異形成症候群が含まれるが、これらに限定されない。
【０４６９】
ある種の実施形態において、ｈｕＥｐｏＲ抗体は、慢性的な疾病又は症状を治療するのに適した薬物動態学的特性を有する。ある種のこのような実施形態において、ｈｕＥｐｏＲ抗体は、他のＥＳＰで観察される赤血球新生応答に比べてより長い期間にわたって伸長する赤血球新生応答を含む薬物動態学的特性を有する。
【０４７０】
ある種の実施形態において、癌の貧血、化学療法によって誘導された貧血、高齢者の貧血、又は感染による貧血、炎症、鉄欠乏、失血、溶血、続発性副甲状腺機能亢進、不十分な透析、タンパク質エネルギー栄養障害、ビタミン欠乏若しくは金属毒性（例えば、アルミニウム）などの（但し、これらに限定されない。）貧血などのその他の貧血を治療するために、ｈｕＥｐｏＲ抗体が使用される。ある種の実施形態において、疾病の結果として、又は赤血球新生薬の投与に応じてＰＲＣＡを発症する患者中の本症状を治療するために、ｈｕＥｐｏＲ抗体が使用される。
【０４７１】
ある種の実施形態において、エリスロポエチン応答性細胞、組織及び臓器中の組織保護を促進するために、ｈｕＥＰｐｏＲ抗体が使用される。例えば、限定することなく、ある種の実施形態において、心筋梗塞若しくは発作中又は心筋梗塞若しくは発作後組織保護を促進するために、ｈｕＥｐｏＲ抗体が使用される。ある種の実施形態において、エリスロポエチンの投与によって保護され得る組織中の組織保護を促進するために、ｈｕＥｐｏＲ抗体が使用される。エリスロポエチンの投与によって保護され得る細胞、組織及び臓器のある種の例は、ＰＣＴ公報ＷＯ０２／０５３５８０及びＷＯ００／６１１６４に記載されている。
【０４７２】
ある種の実施形態において、ヘマトクリットを増加させることを必要とする患者において、ヘマトクリットを増加させるために、ｈｕＥｐｏＲ抗体が使用される。ある種の実施形態において、ｈｕＥｐｏＲ抗体は、約３０日又は約６０日又は約９０日又は約１２０日又は約１５０日又は約１８０日の期間にわたってヘマトクリットを増加させるために、一回投与される。
【実施例】
【０４７３】
（実施例１）
固有状態のヒトｓｃＦｖファージディスプレイライブラリ由来の抗ｈｕＥｐｏＲ抗体の同定
選択戦略１
選択の第一ラウンドにおいて、ＰＢＳ／０．１％トゥイーン２０（ＰＢＳ／Ｔ）中の２％無脂肪乾燥乳１ｍＬ中で、固有状態のファージライブラリ由来の約１０１２個のヒトｓｃＦｖファージを２００ｎＭのビオチン化ｈｕＥｐｏＲと共に定温放置した。ストレプトアビジンによりコーティングされた磁気ビーズを使用して、ｈｕＥｐｏＲに結合したｓｃＦｖファージを捕捉した。１ｍＬのトリプシン処理溶液（ｐＨ８．０の５０ｍＭトリスＨＣｌ／１ｍＭＣａＣｌ２中の５０μｇ／ｍＬのブタトリプシン）と共に３７℃で１０分間定温放置することによって、結合したファージを磁気ビーズから放出した。
【０４７４】
放出されたファージをイー・コリ（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞中に再度導入するために、対数期のＴＧ１細胞１０ｍＬを使用して、磁気ビーズから放出されたファージの集合体全部を３７℃で３０分間振盪せずに定温放置し、さらに３０分間ゆっくり振盪しながら定温放置した。穏やかにペレットにしたＴＧ１細胞を２×ＹＴ培地約１．５ｍＬ中に再懸濁し、１００μｇ／ｍＬカルベニシリン及び４％グルコースを補充された２×ＹＴ培地を有する２Ｎｕｎｃプレート（２５ｃｍ×２５ｃｍ）上に延展し、３０℃で一晩増殖した。次に、増幅した細胞をプレートから剥離し、集めた。放出されたファージ粒子の１０倍以上に及ぶ集めた細胞約１０から１００μＬを使用して、２×ＹＴ培地／１００μｇ／ｍＬカルベニシリン及び２％グルコース２５ｍＬに播種し、３７℃で振盪しながら、０．５のＯＤ６００になるまで増殖した。次に、この対数相培養物を約１０１１個のＭ１３ＫＯ７ヘルパーファージで、３７℃で３０分間超感染させ、さらに３０分間穏やかに振盪した。細胞をペレットにし、１００μｇ／ｍＬカルベニシリン及びカナマイシン２５μｇ／ｍＬを補充された２×ＹＴ培地２５ｍＬ中に再懸濁した。細胞を２５０ｒｐｍで、２５℃で一晩振盪した。１０，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離することによって、培養上清を回収した。２０％ＰＥＧ８０００／２．５ＭＮａＣｌの１／５容積を添加して、氷上で３０分間以上定温放置することによって、上清中のファージを沈殿させた。次に、１０，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離することによってファージをペレットにし、ＴＥ緩衝液（１０ｍＭトリス及び１ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ７．５）中に再懸濁した。
【０４７５】
選択の第二ラウンドにおいて、再懸濁されたｓｃＦｖファージを５０ｎＭビオチン化ｈｕＥｐｏＲと共に室温で１時間定温放置した後、ＰＢＳ／０．１％トゥイーン２０を使用して１０回洗浄した。ストレプトアビジンによって被膜された磁気ビーズを使用して、ｈｕＥｐＲ結合ｓｃＦｖファージを捕捉した。１ｍＬのトリプシン処理溶液と共に３７℃で１０分間定温放置することによって、結合したファージを磁気ビーズから放出した。放出されたファージの半分を、以下に記載される選択戦略２において使用した。
【０４７６】
適切に希釈されたファージを中間対数相のイー・コリ細胞と共に定温放置することによって、選択の第二ラウンド由来の放出されたファージの少量の画分をＴＧ１中に再度導入した。次に、ＴＧ１細胞を２×ＹＴ１００μｇ／ｍＬカルベニシリンペトリ皿プレート上に播種し、単一コロニーを発生させた。３８４個の無作為に選択された単一コロニーをペトリ皿プレートから個々に拾い上げ、１００μｇ／ｍＬカルベニシリン及び２％グルコースで補充された２×ＹＴ培地１００μＬを含有する９６ウェルプレートの個別のウェル中に配置し、９６ウェル実験プレートを作製した。ＴＧ１細胞が約０．５のＯＤ６００（中間対数相）に到達するまで、９６ウェル実験プレートを３７℃で振盪しながら定温放置した。
【０４７７】
別個の工程として、上述の同一培地を含有する９６ウェル培養プレートの新たなセットに、９６ウェル実験プレート中で増殖している培養物の少量の画分を播種し、複製プレートを作製した。これらの複製プレートを３７℃で一晩増殖させた。次に、５０％グリセロール溶液２０μＬをプレートの各ウェルに添加し、プレートをドライアイス上で凍結させ、マスタープレートとして−７０℃で保存した。
【０４７８】
次に、９６ウェル実験プレート中の中間対数相培養物を約１０９個のＭ１３ＫＯ７ヘルパーファージで３７℃で３０分間超感染させ、さらに３０分間穏やかに振盪した。次に、９６ウェルプレートを３０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、プレートを反転させることによって、ウェル中の上清を除去した。１００μｇ／ｍＬのカルベニシリン及びカナマイシン２５μｇ／ｍＬで補充された２×ＹＴ培地２００μＬを各ウェルに添加し、２５０ｒｐｍ、３０℃で一晩振盪しながらプレートを定温放置した。ファージを一晩培養した物を３，０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、得られた上清試料を使用して、ＥＬＩＳＡ実験を実施した。
【０４７９】
１μｇ／ｍＬのｈｕＥｐｏＲをプレートのウェルに添加し、プレートを４℃で一晩定温放置することによって、Ｎｕｎｃ−Ｉｍｍｕｎｏ  Ｐｏｌｙｓｏｒｐ９６ウェルＥＬＩＳＡプレート（Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）の新たなセットを調製した。ＰＢＳ／Ｔ中の２％無脂肪乾燥乳溶液中の３８４個の異なるモノクローナルファージのうちの１つを含有する培養上清の１／２０希釈を、表面上をコーティングされたｈｕＥｐｏＲを含有する９６ウェルプレートの各個別のウェルに添加した。プレートを１時間定温放置した後、ＰＢＳ／Ｔ中で３回洗浄した。抗Ｍ１３モノクローナル抗体／ＨＲＰ接合体（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を使用した後、ＰＢＳ／Ｔ中で３回洗浄することによって、結合したファージの検出を実施した。基質としてＡＢＴＳを使用し、４０５ｎｍでの吸光度を検出した。３８４個の無作為に拾い上げたファージクローンのＥＬＩＳＡスクリーニングから、ｈｕＥｐｏＲに結合する合計９６個のファージを同定した。
【０４８０】
選択戦略２
第４６５段落中に記載されている選択戦略１における第２ラウンドの選択から溶出されたファージの半分を、ＴＧ１細胞に再度導入し、選択戦略１の第４６４段落に記載されているのと同一の手法を使用して、ファージ調製を実施した。約１０１２個に増幅されたｓｃＦｖファージを使用して、ｓｃＦｖファージをｈｕＥｐｏＲ発現ＵＴ−７細胞（１ｍＬのＰＢＳ／２％ＢＳＡ中の２×１０６個の細胞）と共に４℃で２時間定温放置した後、ＰＢＳ／Ｔで１０回洗浄することによって、細胞パニングを実施した。
【０４８１】
１ｍＬグリシン／ＨＣｌ緩衝液（１００ｍＭグリシン／ＨＣｌ、ｐＨ２．５）と共に１０分間定温放置した後、３，０００ｒｐｍで５分間遠心分離することによって、ＵＴ−７結合ファージを細胞表面から溶出した。溶出されたファージを含有する酸性上清を１Ｍトリス塩基溶液５０μＬで中和した。
【０４８２】
ファージ感染を通じて、ＵＴ−７細胞パニングから溶出されたファージの少量の一定分量をＴＧ１細胞中に導入した。次に、ファージ感染したＴＧ１細胞を２×ＹＴ１００μｇ／ｍＬカルベニシリンペトリ皿プレート上に播種し、単一コロニーを発生させた。１９２個の無作為に選択された単一コロニーをペトリ皿プレートから拾い上げ、１００μｇ／ｍＬカルベニシリン及び２％グルコースで補充された２×ＹＴ培地１ｍＬを含有する２枚の９６深ウェルプレートの個別のウェル中に個々に配置した。培養物が約０．５のＯＤ６００に到達するまで、２枚の９６深ウェルプレートを３７℃で振盪しながら定温放置した。
【０４８３】
別個の工程として、上述の同一培地を含有する９６ウェル培養プレートの新たなセットに、９６深ウェルプレート中で増殖している培養物の少量の画分を播種し、複製プレートを作製した。これらの複製プレートを３７℃で一晩増殖させた。次に、５０％グリセロール溶液２０μＬをプレートの各ウェルに添加し、プレートをドライアイス上で凍結させ、マスタープレートとして−７０℃で保存した。
【０４８４】
マスタープレートを播種した後、約０．５のＯＤ６００の培養物を有する２枚の９６深ウェルプレートを使用して、以下に記載のとおりＦＡＣＳ実験を実施した。
【０４８５】
ＦＡＣＳによるＵＴ−７細胞結合ファージのスクリーニング
１００μｇ／ｍＬカルベニシリン及び２％グルコースを補充した２×ＹＴ／２×ＹＴ培地１ｍＬを９６深ウェルプレートの各ウェル中に配置した。９６深ウェルプレートの各ウェル中の培地を、マスタープレート上の対応するウェル由来の細胞と共に定温放置することによって、選択戦略１においてＥＬＩＳＡによって同定された９６個の陽性クローンの新たなファージ試料を調製した。培養物が約０．５のＯＤ６００に到達するまで、９６深ウェルプレートを３７℃で振盪しながら定温放置した。
【０４８６】
選択戦略２において論議されているように、培養物が、約０．５のＯＤ６００に到達するまで、選択戦略２とは異なる１９２個のファージを含有する培養物を２枚の９６深ウェルプレート中で、３７℃で振盪しながら定温放置した。
【０４８７】
次に、（２つの前述の段落に記載されている）対数相の培養物を含有する３枚の９６深ウェルプレートを、約１０９個のＭ１３ＫＯ７ヘルパーファージで、３７℃で３０分間超感染させ、さらに３０分間穏やかに振盪した。次に、プレートを３０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、プレートを反転させることによって、上清を除去した。次に、１００μｇ／ｍＬのカルベニシリン及びカナマイシン２５μｇ／ｍＬで補充された２×ＹＴ培地１ｍＬを各ウェルに添加し、２５０ｒｐｍ、３０℃で一晩振盪することによって、プレートを定温放置した。一晩培養した物を３０００ｒｐｍで５分間遠心分離することによって、ファージを含有する上清を調製した。２０％のＰＥＧ８０００／２．５ＭＮａＣｌ溶液の１／５容積を添加することによって、ファージを上清から精製した。沈殿したファージを遠心分離によってペレットにし、９６深ウェルプレートの各ウェル中の得られたファージペレットを、ＴＥ緩衝液（１０ｍＭトリスＨＣｌ、１ｍＭＥＤＴＡ、ｐＨ７．５）１００μＬ中に再懸濁し、ＦＡＣＳ実験において使用した。
【０４８８】
３枚の９６ウェルプレートの新たなセットの各ウェルにおいて、単一ファージ１０μＬの一定分量及び２％ＢＳＡＰＢＳ／Ｔ９０μＬと共に、ＵＴ−７細胞を４℃で１時間定温放置した。冷ＰＢＳを使用して迅速に２回洗浄した後、２％ＢＳＡＰＢＳ／Ｔ中の１μｇ／ｍＬの抗Ｍ１３マウスモノクローナル抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）１００μＬと共に細胞を４℃で１時間定温放置した。冷ＰＢＳで迅速に２回洗浄した後、１μｇ／ｍＬのフィコエリトリン結合ヤギＦ（ａｂ’）２抗マウスＩｇＧＦｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）をプレート上の各ウェルに添加した。冷ＰＢＳを使用して、細胞を再度２回洗浄し、固定緩衝液（２％パラホルムアルデヒドＰＢＳ、ｐＨ７．４）１ｍＬ中に再懸濁した。Ｍｕｌｔｉｗｅｌｌ  Ｃａｌｉｂｅｒフローサイトメーターを使用して、ＦＡＣＳを実施した。
【０４８９】
ＥｐｏＲを発現するＵＴ−７細胞の結合剤として、選択戦略１由来の１４個のファージクローン及び選択戦略２由来の３８個のファージクローンを同定した。これらのｓｃＦｖファージ試料のＤＮＡ配列決定分析の結果、合計２９個の独特なｓｃＦｖ配列が得られた。
【０４９０】
（実施例２）
ファージｓｃＦｖのｓｃＦｖ−Ｆｃ、ＩｇＧ２及びＩｇＧ１タンパク質発現への変換並びに精製
合理化したサブクローニング法を使用して、２９個のファージｓｃＦｖクローン全てをｓｃＦｖ−Ｆｃ融合タンパク質へ変換した（図２）。一対のベクター特異的プライマー（ｐＵＣＲｅｖ／ＦｄＴｅｔ）を使用するＰＣＲによって、クローンをコードするファージミドを使用して、ｓｃＦｖをコードするＤＮＡを増幅した。ＳｃＦｖのＮｃｏＩ及びＮｏｔＩ制限断片を、（ＮｃｏＩにより付着末端を作製する）ＰｃｉＩ及びＮｏｔＩで消化された哺乳動物発現ベクターｐＤＣ４０９ａ―Ｇ１Ｆｃに連結することによって、ｓｃＦｖをヒトＩｇＧ１Ｆｃに融合した。ｐＤＣ４０９ａ−ｈｕＧ１Ｆｃは、ＮｏｔＩ部位の後ろにヒトＩｇＧ１Ｆｃを含有している。ＮｃｏＩ及びＰｃｉＩ制限断片は、同一の付着末端を有する。ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質の分泌は、ＶＨ５αシグナル配列によって仲介される。個々のファージクローン由来のマキシボディ（ｍａｘｉｂｏｄｙ）は、記号表示「Ｍｘｂ  ｘ」によって表され、ｘは、クローン番号を表す。
【０４９１】
ｓｃＦｖクローンをＩｇＧ２発現構築物へ変換するために、各可変ドメインに特異的なプライマーを使用して、ＶＨ又はＶＬ領域をコードするＤＮＡ断片を、クローンをコードするファージミドからＰＣＲ増幅した。ＶＨ（Ｎｈｅ／ＡｓｃＩ）断片を、同様に制限消化されたＩｇＧ２重鎖発現ベクターｐＶＥ４１４ＮｈｕＩｇＧ２へ連結することによって、抗体重鎖発現構築物が得られた。Ｖλ  ＮｈｅＩ／ＮａｒＩ断片を、同様に制限消化された軽鎖発現ベクターｐＶＥ４１４ＮｈｕλＬＣへ連結することによって、抗体λ軽鎖発現構築物が得られた。Ｖκ  ＮｈｅＩ／ＢｓｉＷＩ断片を、同様に制限消化された軽鎖発現ベクターｐＶＥ４１４ＮｈｕκＬＣへ連結することによって、抗体κ軽鎖発現構築物が得られた。軽鎖定常種の選択は、可変軽鎖分子種に符合する。
【０４９２】
ＩｇＧ１発現構築物の作製のために、ＩｇＧ２発現構築物に使用される同一のＶＨ  Ｎｈｅ／ＡｓｃＩ断片を、同様に制限消化されたｐＶＥ４１４ＮｈｕＩｇＧ１ベクターに連結した。前述の段落において記載されている軽鎖発現構築物を使用して、ＩｇＧ１軽鎖及びＩｇＧ２軽鎖を発現させた。
【０４９３】
抗体重鎖及び軽鎖発現構築物の同時形質移入によって、ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質を哺乳動物ＣＯＳ−１  ＰＫＢ  Ｅ５細胞において一過性に発現させた。抗体重鎖及び軽鎖発現構築物の同時形質移入によって、ＩｇＧ１タンパク質も哺乳動物ＣＯＳ−１  ＰＫＢ  Ｅ５細胞において一過性に発現させた。抗体重鎖及び軽鎖発現構築物の同時形質移入によって、ＩｇＧ２タンパク質も哺乳動物ＣＯＳ−１  ＰＫＢ  Ｅ５細胞において一過性に発現させた。プロテインＡアフィニティクロマトグラフィーを使用して、条件培地から、発現した抗体を９５以上の純度まで精製した。Ｎ末端アミノ酸配列決定によってタンパク質の同一性を認証し、２８０ｎｍでの吸光度によって、濃度を測定した。
【０４９４】
（実施例３）
ＦＡＣＳによる細胞表面ｈｕＥｐｏＲに結合している抗体の分析
ＦＡＣＳを使用して、細胞表面に発現したｈｕＥｐｏＲに対するｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質の結合を分析した。５ｎＭｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質単独と共に又は５ｎＭ  ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質＋ｒＨｕＥｐｏ０．５μｇ／ｍＬと共に、ＵＴ−７細胞を４℃で１時間定温放置した。冷ＰＢＳを使用して迅速に２回洗浄した後、１μｇ／ｍＬフィコエリトリン結合ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）と共に、ＵＴ−７細胞を４℃で１時間定温放置した。冷ＰＢＳを使用して細胞を２回洗浄し、固定緩衝液（２％パラホルムアルデヒドＰＢＳ  ｐＨ７．４）１ｍＬ中に再懸濁した。ＦＡＣＳＣａｌｉｂｅｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して、ＦＡＣＳを実施した。
【０４９５】
ｓｃＦｖ−Ｆｃ発現ベクターから発現したタンパク質のＦＡＣＳトレースを図３に示す。クローン２、クローン５、クローン７、クローン１０及びクローン３０は全て、ｈｕＥｐｏＲを発現しているＵＴ−７細胞に結合する（図３Ａ）が、陰性対照細胞には結合しない（図３Ｂ）。ｒＨｕＥｐｏの過剰量によって、クローン２、クローン５、クローン７及びクローン１０のＵＴ−７細胞表面結合を遮断した（図３Ａ）。ｒＨｕＥｐｏは、クローン３０の結合を遮断しなかった（図３Ａ）。
【０４９６】
（実施例４）
クローン２、５、７、１０及び３０の配列
標準的な技術を使用して、クローン２、クローン５、クローン７、クローン１０及びクローン３０を配列決定した。クローン２、クローン５、クローン７、クローン１０及びクローン３０の可変重鎖及び可変軽鎖は、以下のとおりである。各アミノ酸配列内で順に、重鎖及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３に下線を付している。
【０４９７】
クローン２番可変重鎖核酸配列
【０４９８】
【化４６】
2009533057.tif 000049
【０４９９】
クローン２番可変重鎖アミノ酸配列
【０５００】
【化４７】
2009533057.tif 000050
【０５０１】
クローン２番可変軽鎖核酸配列
【０５０２】
【化４８】
2009533057.tif 000051
【０５０３】
クローン２番可変軽鎖アミノ酸配列
【０５０４】
【化４９】
2009533057.tif 000052
【０５０５】
クローン５番可変重鎖核酸配列
【０５０６】
【化５０】
2009533057.tif 000053
【０５０７】
クローン５番可変重鎖アミノ酸配列
【０５０８】
【化５１】
2009533057.tif 000054
【０５０９】
クローン５番可変軽鎖核酸配列
【０５１０】
【化５２】
2009533057.tif 000055
【０５１１】
クローン５番可変軽鎖アミノ酸配列
【０５１２】
【化５３】
2009533057.tif 000056
【０５１３】
クローン７番可変重鎖核酸配列
【０５１４】
【化５４】
2009533057.tif 000057
【０５１５】
クローン７番可変重鎖アミノ酸配列
【０５１６】
【化５５】
2009533057.tif 000058
【０５１７】
クローン７番可変軽鎖核酸配列
【０５１８】
【化５６】
2009533057.tif 000059
【０５１９】
クローン７番可変軽鎖アミノ酸配列
【０５２０】
【化５７】
2009533057.tif 000060
【０５２１】
クローン１０番可変重鎖核酸配列
【０５２２】
【化５８】
2009533057.tif 000061
【０５２３】
クローン１０番可変重鎖アミノ酸配列
【０５２４】
【化５９】
2009533057.tif 000062
【０５２５】
クローン１０番可変軽鎖核酸配列
【０５２６】
【化６０】
2009533057.tif 000063
【０５２７】
クローン１０番可変軽鎖アミノ酸配列
【０５２８】
【化６１】
2009533057.tif 000064
【０５２９】
クローン３０番可変重鎖核酸配列
【０５３０】
【化６２】
2009533057.tif 000065
【０５３１】
クローン３０番可変重鎖アミノ酸配列
【０５３２】
【化６３】
2009533057.tif 000066
【０５３３】
クローン３０番可変軽鎖核酸配列
【０５３４】
【化６４】
2009533057.tif 000067
【０５３５】
クローン３０番可変軽鎖アミノ酸配列
【０５３６】
【化６５】
2009533057.tif 000068
【０５３７】
クローン２、５、７、１０及び３０を使用して、ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質を作製した。前記クローンがコードするｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質の核酸配列及びアミノ酸配列を以下に示す。
【０５３８】
Ｍｘｂ２番ｓｃＦｖ−Ｆｃ核酸配列：
【０５３９】
【化６６】
2009533057.tif 000069
【０５４０】
Ｍｘｂ２番ｓｃＦｖ−Ｆｃアミノ酸配列：
【０５４１】
【化６７】
2009533057.tif 000070
【０５４２】
Ｍｘｂ５番ｓｃＦｖ−Ｆｃ核酸配列：
【０５４３】
【化６８】
2009533057.tif 000071
【０５４４】
Ｍｘｂ５番ｓｃＦｖ−Ｆｃアミノ酸配列：
【０５４５】
【化６９】
2009533057.tif 000072
【０５４６】
Ｍｘｂ７番ｓｃＦｖ−Ｆｃ核酸配列：
【０５４７】
【化７０】
2009533057.tif 000073
【０５４８】
Ｍｘｂ７番ｓｃＦｖ−Ｆｃアミノ酸配列：
【０５４９】
【化７１】
2009533057.tif 000074
【０５５０】
Ｍｘｂ１０番ｓｃＦｖ−Ｆｃ核酸配列：
【０５５１】
【化７２】
2009533057.tif 000075
【０５５２】
Ｍｘｂ１０番ｓｃＦｖ−Ｆｃアミノ酸配列：
【０５５３】
【化７３】
2009533057.tif 000076
【０５５４】
Ｍｘｂ３０番ｓｃＦｖ−Ｆｃ核酸配列
【０５５５】
【化７４】
2009533057.tif 000077
【０５５６】
Ｍｘｂ３０番ｓｃＦｖ−Ｆｃアミノ酸配列：
【０５５７】
【化７５】
2009533057.tif 000078
【０５５８】
（実施例５）
ｈｕＥｐｏＲに対する競合的結合
プレートベースのＥＬＩＳＡを使用して、ｈｕＥｐｏＲに対する結合に関してクローン５及びクローン３０のｓｃＦｖファージと競合する、クローン２、クローン５、クローン７、クローン１０及びクローン３０のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質の能力について検査した。ビオチン化ｈｕＥｐｏＲをストレプトアビジンプレート上に固定した。ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質及びｓｃＦｖファージをプレートに添加した。次に、抗Ｍ１３マウスモノクローナル抗体後にフィコエリトリン結合ヤギＦ（ａｂ’）２抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を使用して、ｓｃＦｖファージの結合を検出した。各ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質に関する一連の８個の濃度（０、０．０３２、０．１６、０．８、４、２０、１００及び５００ｎＭ）を使用することによって、クローン２、クローン５、クローン７、クローン１０及びクローン３０のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質によるファージ結合の阻害を検査した。クローン２、クローン５、クローン７及びクローン１０のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質は、クローン５のｓｃＦｖファージのｈｕＥｐｏＲに対する結合が用量依存的に阻害されることを示した（図４Ａ）。しかしながら、クローン３０のｓｃＦＶ−Ｆｃタンパク質は、５００ｎＭまでの濃度で、ｈｕＥｐｏＲに対するクローン５のｓｃＦｖファージの結合を阻害しなかった（図４Ａ）。用量依存的な様式で、クローン３０のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質によって、ｈｕＥｐｏＲに対するクローン３０のｓｃＦｖファージの結合を阻害したが、５００ｎＭまでの濃度でクローン２、クローン５、クローン７又はクローン１０のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質によっては阻害しなかった（図４Ｂ）。これらの結果は、クローン２、クローン７及びクローン１０のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質に関するエピトープが、クローン５のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質のエピトープと重複するが、クローン３０のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質が、クローン２、クローン５、クローン７及びクローン１０のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質のエピトープと重複していないエピトープに結合することを示唆している。
【０５５９】
（実施例６）
マウスＥｐｏＲ−Ｆｃタンパク質（ｍｕＥｐｏＲ−Ｆｃ）に対する抗体の結合
ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、クローン２、クローン５、クローン７、クローン１０及びクローン３０のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質並びにクローン２、クローン５、クローン７、クローン１０及びクローン３０のＩｇＧ２タンパク質とマウスＥｐｏＲ（ｍｕＥｐｏＲ）との交差反応性を決定した。個々のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質又はＩｇＧ２タンパク質（５０ｍＭＮａＨＣＯ３、ｐＨ８．５中の１μｇ／ｍＬ抗体ストック１００μＬ）を、Ｎｕｎｃ−Ｉｍｍｕｎｏ  Ｐｏｌｙｓｏｒｐ  ＥＬＩＳＡプレート（Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ）上の各ウェルに添加し、それにより、各ウェルが、単一のクローンのみを含んだ。プレートを４℃で一晩定温放置した。４％乳／ＰＢＳ／０．１％トゥイーン２０でウェルを室温で１時間遮断した後、プレートをＰＢＳ／０．１％トゥイーン２０で３回洗浄した。５μｇ／ｍＬのビオチン化ｍｕＥｐｏＲ−Ｆｃタンパク質１００μＬを各ウェルに添加し、２５℃で１時間定温放置した。ストレプトアビジン−ＨＲＰ結合体（４％乳ＰＢＳ／０．１％トゥイーン２０中の１：１０００希釈）を使用して、結合したｍｕＥｐｏＲ−Ｆｃを検出した。２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンズチアゾリン-６-スルホン酸)(ＡＢＴＳ）を基質として使用し、プレートリーダー上で４０５ｎｍでの吸光度を測定した。抗体（クローン２、クローン５、クローン７、クローン１０及びクローン３０のｓｃＦＶ−Ｆｃタンパク質並びにクローン２、クローン５、クローン７、クローン１０及びクローン３０のＩｇＧ２タンパク質）は全て、ｍｕＥｐｏＲ−Ｆｃとの交差反応性の有意なレベルを示した（図５）。
【０５６０】
（実施例７）
ビアコアを使用することによるｈｕＥｐｏＲに対する結合動態の測定
クローン２、クローン５、クローン７、クローン１０及びクローン３０のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質に対する親和性を、ＢＩＡｃｏｒｅ３０００機（ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ）で測定した。Ｎ−ヒドロキシルスクシンアミド化学反応を通じて活性化されたＣＭ４チップ（ＢＩＡｃｏｒｅ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ＡＢ）上に、ヤギ抗ヒトＦｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）を固定した。ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質溶液をチップに流し、固定されたヤギ抗ヒトＦｃ抗体に結合しているＦｃを通じて、溶液中のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質をチップ上に捕捉した。各動態試行は、２５℃で５０μＬ／分の流速を使用した。各試行は、分析物として１０００ｎＭまでの濃度で、ｈｕＥｐｏＲタンパク質を使用した。ＢＩＡｃｏｒｅによって提供されるＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア第３版を使用する質量転移＋局所Ｒｍａｘ適合を伴う１：１Ｌａｎｇｍｕｉｒによって、１分間の結合相及び５分間の解離相を使用してデータ分析した。捕捉されたｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質を除去するためにチップ上に低ｐＨのグリシン緩衝液（５０ｍＭグリシンＨＣｌ、ｐＨ１．５）を流すことで、ヤギ抗ヒトＦｃ抗体ＣＭ４チップ表面を再生した。この同一チップ表面を使用して、５個のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質の各々を個別に捕捉した。
【０５６１】
ビアコア動態結合センソグラム（ｓｅｎｓｏｇｒａｍ）を図６に示し、結合パラメータを以下の表２に要約する。５個の異なるｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質に対する親和性は、１．１ｎＭから１４，９００ｎＭまで変動した。５個のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質全てに関する結合及び解離速度（それぞれ、ｋｏｎ及びｋｏｆｆ）は、抗体に関して典型的な範囲内であった。最高の親和性のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質であるクローン１０のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質は、ｋｏｆｆが最も遅かった（２．２×１０−４ｓ−１）。最低の親和性のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質であるクローン３０のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質は、ｋｏｎが最も遅く（１．８×１０４Ｍ−１ｓ−１）、ｋｏｆｆが最も速かった（２，７４０×１０−４ｓ−１）。
【０５６２】
【表２】
2009533057.tif 000079
（実施例８）
ヒトエリスロポエチン受容体の活性化のためのインビトロでのｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質のスクリーニング
実施例１において同定された２９個のｓｃＦｖ配列を、ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質として、又はｈｕＥｐｏＲの活性化のためのＩｇＧタンパク質としての何れかとしてスクリーニングした。ルシフェラーゼ受容体の前の９個のＳＴＡＴ５結合部位を含有する構築物で形質移入されたＵＴ−７細胞（ヒト巨核芽球）（ＵＴ−７−ＬＵＣ細胞）においてルシフェラーゼベースの受容体アッセイ（ルシフェラーゼアッセイ）によって、ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質及びＩｇＧタンパク質のインビトロでのスクリーニングを実施した。別段の記載がなければ、５％ＣＯ２／９５％大気の加湿された恒温器中において、３７℃で、全ての細胞を維持し、全ての細胞アッセイを実施した。使用前に、全てのウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を５５℃で４５分間熱失活させた。細胞操作に使用されるダルベッコリン酸塩類緩衝液（ＰＢＳ）は全て、塩化カルシウム及び塩化マグネシウムを含有しなかった。１０％ＦＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ；Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）、５００μｇ／ｍＬハイグロマイシン（Ｒｏｃｈｅ；Ｐｅｎｚｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、２９２μｇ／ｍＬ  Ｌ−グルタミン（１×ＰＳＧ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及び１Ｕ／ｍＬ組換えヒトエリスロポエチン（Ｅｐｏｅｔｉｎ  Ａｌｐｈａ，ｒＨｕＥｐｏ；Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ）を含有するＩＭＤＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を含む増殖培地中で、ＵＴ−７−ＬＵＣ細胞（Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．；Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，ＣＡ）を維持した。細胞をＰＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で２回洗浄し、アッセイ培地（１％ＦＢＳ、１×ＰＳＧ及び１２．５ｍＭＨＥＰＥＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を有するＲＰＭＩ  Ｍｅｄｉｕｍ  １６４０）中で、１ｍＬあたり４００，０００個で再懸濁した。一晩の定温放置の後、細胞数及び生存率を測定し、アッセイ培地中で、１ｍＬあたり２００，０００個で細胞を再懸濁した。
【０５６３】
９６ウェルの不透明プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ；Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）中に、各ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質を連続希釈した。各希釈を３個組で実施し、ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質の以下の濃度を使用した：Ｍｘｂ５、Ｍｘｂ１０及びＭｘｂ３０：１０００、３３３、１１１、３７．０４、１２．３５、４．１１５、１．３７２、０．４５７、０．１５２、０．０５１、０．０１７及び０．００６ｎＭ。Ｍｘｂ２及びＭｘｂ７に関して：２５００、１２５０、６２５、３１２．５、１５６．２５、７８．１２５、３９．０６２５、１９．５３１２５、９．７６５６２５、４．８８２８１３、２．４４１４０６、１．２２０７０３、０．６１０３５２、０．３０５１７５８、０．１５２５８７９、０．７６２９４、０．０３８１４７、０．０１９０７３、０．００９５３７、０．００４７６８、０．００２３８４、０．００１１９２、０．０００５９６、０．０００２９８ｎＭ。対照標準物質として供するために、各ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質を検査するのに使用される同一のプレート中で、ｒＨｕＥｐｏを連続希釈した。各Ｅｐｏ希釈を３個組で実施し、Ｅｐｏの以下の濃度を使用した：Ｍｘｂ２、Ｍｘｂ５、Ｍｘｂ１０及びＭｘｂ３０を有するプレートに関して：１００、１０、１、０．１、０．０１及び０．００１ｎＭＭｘｂ７を検査するプレートに関して：１４８８、７４４、３７２、１８６、９３、４６．５、２３．２、１１．６、５．８、２．９、１．５、０．７１、０．３６、０．１８、０．０９、０．０４５、０．０２３、０．０１１、０．００６、０．００３、０．００１５、０．０００７、０．０００４、０．０００２ｎＭ。約１０，０００個の細胞を各ウェルに添加した。次に、細胞を６時間培養し、Ｓｔｅａｄｙ−Ｇｌｏ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に関する製造元のプロトコールに従って、アッセイを実施した。
【０５６４】
実施例１において同定された２９個のマキシボディのうちの２２個は、ｈｕＥｐｏＲを結合し、変動する程度のＵＴ−７−Ｌｕｃ細胞において反応を誘導するのが示された。Ｍｘｂ２、Ｍｘｂ５、Ｍｘｂ７、Ｍｘｂ１０及びＭｘｂ３０を図７に図示する。
【０５６５】
（実施例９）
ｈｕＥｐｏＲの活性化に関するインビトロでの抗体のスクリーニング
実施例２に記載されている２９個のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質及びまた実施例２に記載されている２９個のＩｇＧ２タンパク質を個々に使用して、実施例８におけるｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質に関して上述に報告されているルシフェラーゼベースの受容体アッセイを使用して、ｈｕＥｐｏＲを活性化した。得られた用量−力価を、組換えヒトエリスロポエチン（ｒＨｕＥｐｏ）標準物質の最大ルシフェラーゼシグナルに対する抗体（ｓｃＦｖ-Ｆｃタンパク質又はＩｇＧ２タンパク質）の最大ルシフェラーゼシグナルの比に変換した。クローン２、クローン５、クローン７、クローン１０及びクローン３のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質並びにクローン２、クローン５、クローン７、クローン１０及びクローン３０のＩｇＧ２タンパク質に関する結果を図８に図示する。クローン２、クローン５、クローン７、クローン１０及びクローン３０のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質は、対応するクローン２、クローン５、クローン７、クローン１０及びクローン３０のＩｇＧ２タンパク質よりも、ｈｕＥｐｏＲのより有力なアゴニストであった。
（実施例１０）
【０５６６】
インビトロでのシグナル伝達実験：
１０％ＦＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、２９２μｇ／ｍＬ  Ｌ−グルタミン（１×ＰＳＧ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及び１Ｕ／ｍＬ  ｒＨｕＥｐｏ（Ｅｐｏｅｔｉｎ  Ａｌｐｈａ，ｒＨｕＥｐｏ；Ａｍｇｅｎ  Ｉｎｃ．）を含有するＩＭＤＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）からなる増殖培地中で、ＵＴ−７細胞を維持した。細胞をＰＢＳ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で２回洗浄し、ＩＭＤＭ及び０．５％ＦＢＳからなる飢餓培地中で再懸濁した。一晩の定温放置後、細胞数及び生存率を測定し、５０ｎｇ／ｍＬｒＨｕＥｐｏ、１μｇ／ｍＬＭｘｂ２、１μｇ／ｍＬ  Ｍｘｂ５、１．５４μｇ／ｍＬクローン２ＩｇＧ２タンパク質（ＩｇＧ２２）、１．５４μｇ／ｍＬクローン５ＩｇＧ２タンパク質（ＩｇＧ２５）かＰＢＳかの何れかを含有するＩＭＤＭ中で、１ｍＬあたり３，０００，０００個で細胞を再懸濁した。３７℃に加熱したブロック中で、０、２、１５又は６０分間、細胞を刺激した。ｒＨｕＥｐｏによるこれらの細胞の活性化は、ｈｕＥｐｏＲに関与し、シグナル伝達分子Ｓｔａｔ５及びＡｋｔのリン酸化を誘導する。次に、細胞懸濁物を４℃、７０００ｒｐｍで１分間遠心分離し、上清を除去した。細胞ペレットを氷冷ＰＢＳで洗浄し、４℃、７０００ｒｐｍで１分間遠心分離した。上清を除去し、完全（無ＥＤＴＡ）プロテアーゼ阻害剤カクテル錠剤（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）を補充したＭ−ＰＥＲ哺乳動物タンパク質抽出試薬（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．；Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ）を使用して、細胞可溶化液を作製した。次に、試料をすべて１０秒間ボルテックスし、可溶化液を室温で５分間、時々ボルテックスしながら定温放置した。次に、可溶化液を２０００ｒｐｍで５分間遠心分離し、上清を一定分量に転移し、ドライアイス／エタノール槽中で容易に凍結させ、使用時まで−８０℃で保存した。
【０５６７】
ウェスタンブロッティング：全てのタンパク質試料を１×ＮｕＰＡＧＥ  Ｓａｍｐｌｅ  Ｒｅｄｕｃｉｎｇ  Ａｇｅｎｔ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及び１×ＮｕＰＡＧＥ  ＬＤＳ試料緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と組み合わせ、１００℃で５分間定温放置し、あらかじめ成型された４から２０％のトリス−グリシンゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）で泳動した。全てのゲルにＳｅｅＢｌｕｅ  Ｐｌｕｓ２タンパク質ラダー（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を負荷した。次に、０．４５μｍ孔サイズのニトロセルロースメンブレンフィルターと紙のサンドイッチ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）にタンパク質を転移させた。タンパク質の転移後、トゥイーン２０を有するトリス緩衝塩類溶液（ｐＨ８．０、ＴＢＳ−Ｔ；ＳＩＧＭＡ）中で、５％ブロッティング等級ブロッカー無脂肪乾燥乳（乳；Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ）中で、メンブレンを室温で少なくとも１時間遮断した。まず、ＴＢＳ−Ｔ中の２．５％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ；ＳＩＧＭＡ）中で１μｇ／ｍＬで抗リン酸化Ｓｔａｔ５Ａ／Ｂ抗体（Ｕｐｓｔａｔｅ；Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ，ＶＡ）でメンブレンをブロットした。振盪台上で、抗リン酸化Ｓｔａｔ５Ａ／Ｂ抗体による定温放置を室温で１時間実施した後、３回すすぎ、ＴＢＳ−Ｔ中で１５分間に３回洗浄した。次に、ＴＢＳ−Ｔ中の１．２５％ＢＳＡ中で１：２０００に希釈したヤギ抗マウス−西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）結合抗体（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ）でメンブレンをブロットした。ヤギ抗マウス−ＨＲＰ結合抗体による定温放置を全て、振盪台上で室温で１時間実施した後、３回すすぎ、ＴＢＳ−Ｔ中で１５分間に３回洗浄した。次に、化学発光用Ｋｏｄａｋ  ＢＩＯＭＡＸ  Ｌｉｇｈｔ  Ｆｉｌｍ（Ｋｏｄａｋ；Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ，ＮＹ）にメンブレンを曝露した。検出後、Ｒｅｓｔｏｒｅ  Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｂｌｏｔ  Ｓｔｒｉｐｐｉｎｇ  Ｂｕｆｆｅｒ（ＰＩＥＲＣＥ）中にメンブレンを２０分間曝露した。
【０５６８】
以下の抗体に関して、上述と同一の過程を使用して、ブロッティングを反復した：Ｓｔａｔ５全体：一次抗体−１：１０００での抗Ｓｔａｔ５（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｇｙ；Ｄａｎｖｅｒｓ，ＭＡ）、二次抗体−１：２０００希釈でのヤギ抗ウサギＨＲＰ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．）。リン酸化Ａｋｔ：一次抗体−１：１０００希釈の抗リン酸化Ａｋｔ（Ｔｈｒ３０８）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、二次抗体−１：２０００希釈のヤギ抗ウサギＨＲＰ。Ａｋｔ全体：一次抗体−１：１０００希釈の抗Ａｋｔ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）、二次抗体−１：２０００希釈のヤギ抗ウサギＨＲＰ。
【０５６９】
本実験の結果は、Ｍｘｂ２、Ｍｘｂ５、ＩｇＧ２２及びＩｇＧ２５が、ｈｕＥｐｏＲを活性化し、Ｓｔａｔ５及びＡｋｔの両者のリン酸化を誘導することを示した。Ｍｘｂ２、Ｍｘｂ５、ＩｇＧ２２及びＩｇＧ２５によるリン酸化の動態は、ｒＨｕＥｐｏに関してわずかに遅延した。Ｍｘｂ２及びＩｇＧ２２に関する結果を図９に示す。図９は、ＵＴ−７細胞のｒＨｕＥｐｏ刺激の後、Ｓｔａｔ５の強力なリン酸化が、２分以内に検出され、１５分で最大に到達したのに対し、Ｍｘｂ２及びＩｇＧ２２の場合では、Ｓｔａｔ５のリン酸化レベルは、刺激２分後で低かったことを示している。同じことは、Ａｋｔのリン酸化に関して真であった。Ｓｔａｔ５及びＡｋｔのリン酸化レベルは、Ｍｘｂ２によって刺激された細胞と比較して、ＩｇＧ２２によって刺激された細胞において低かった。このシグナル伝達実験は、Ｍｘｂ２及びＩｇＧ２２が、ｒＨｕＥｐｏよりも弱い、ｈｕＥｐｏＲのアゴニストであることを示した。
【０５７０】
（実施例１１）
ＢＦＵ−Ｅアッセイ：
赤芽球バースト形成細胞（ＢＦＵ−Ｅ）アッセイを使用して、ＣＤ３４＋ヒト末梢血前駆細胞（ＣＤ３４＋ＰＢＰＣ）に関してＭｘｂ２、Ｍｘｂ５、Ｍｘｂ７及びＭｘｂ３０を含むＭｘｂのサブセットの活性を評価した。ＢＦＵ−Ｅアッセイは、Ｅｌｌｉｏｔｔら、Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｅｒｙｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ（ＥＰＯ）  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｂｙ  ｂｉｖａｌｅｎｔ  ａｎｔｉ−ＥＰＯ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１（４０），２４６９１−２４６９７に記載されている。この場合、ＢＦＵ−Ｅアッセイは、健常なボランティアの血液から単離されたヒト初代細胞由来の赤血球コロニーの産生を刺激するｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質の能力を検査した。赤血球コロニー形成を促進する特定の薬剤はまた、赤血球前駆細胞の増殖を促進し、アポトーシスを予防し、細胞分化を誘導する。
【０５７１】
本アッセイに関し、ｒｈＧ−ＣＳＦにより動員される血液学的に正常なドナーから得られる除去療法産物から、ＣＤ３４＋ＰＢＰＣを精製した。ｒＨｕＥｐｏの０．１から１，０００ｎｇ／ｍＬの、又はＭｘｂ２、Ｍｘｂ５、Ｍｘｂ７又はＭｘｂ３０の何れかの１から１０，０００ｎｇ／ｍＬの用量を対数増大して、ｒｈＳＣＦ、ｒｈＩＬ−３及びｒｈＩＬ−６各１００ｎｇ／ｍＬを含有するメチルセルロースベースの培地（ＭＥＴＨＯＣＵＬＴ（商標）Ｈ４２３０、ＳｔｅｍＣｅｌｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｖａｎｃｏｕｖｅｒ，ＢＣ，Ｃａｎａｄａ）中で３５ｍｍペトリ皿において１ｍＬあたり１０００個のＣＤ３４＋ＰＢＰＣを培養し、全て３個組とした。加湿されたチャンバー中で５％ＣＯ２／９５％大気中で、３７℃で培養物を定温放置し、１４日後、ＢＦＵ−Ｅ由来のコロニー数を計数した。各培養物を観察し、２０倍で、手術用顕微鏡で計数した。ＢＦＵ−Ｅ由来のコロニーを、５０個以上の細胞を含有する単一焦点又は多焦点ヘモグロビン化細胞クラスターとして定義した。
【０５７２】
Ｍｘｂ２、Ｍｘｂ５、Ｍｘｂ７及びＭｘｂ３０は、ヘモグロビン含有赤血球コロニーの形成を誘導したが、マキシボディは全て、ＢＦＵ−Ｅ由来のコロニーを誘導する上でｒＨｕＥｐｏよりも有意に弱かった。マキシボディの何れかによって誘導されたコロニーの最大数は、ｒＨｕＥｐｏによって誘導された数よりも有意に少なく、この際台数は、図１０に見られるｒＨｕＥｐｏの場合よりも有意に高い濃度で誘導された。これらのデータは、ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質が、ｒＨｕＥｐｏと比較して、ｈｕＥｐｏＲの弱いアゴニストであることを示唆している。
【０５７３】
（実施例１２）
インビボでの実験：
Ｍｘｂ２、Ｍｘｂ５、Ｍｘｂ７又はＭｘｂ１０の単回注射の効果を、マウスにおいて幾つもの実験で検査した。
【０５７４】
（実施例１２Ａ）
マウスにおけるＭｘｂ５用量力価実験：
２００μＬの最終容積の担体（０．１％ＢＳＡを有するＰＢＳ）、３μｇ／ｋｇのＰＥＧ−ＮＥＳＰ（ＰＥＧ−ＮＥＳＰ及びＰＥＧ−ＮＥＳＰを調製する方法は、ＰＣＴ刊行物ＷＯ０１／７６６４０に一般的に記載されている。）、又は、０．５、２．５、５若しくは７．５ｍｇ／ｋｇのＭｘｂ５を２ヶ月齢の雌ＢＤＦ−１マウスに皮下注射した。６０日間までの数多くの時点で眼窩後部洞から血液を回収し、ＡＤＶＩＡ血液分析装置を使用してＣＢＣパラメータを評価した。データを図１２及び図１３に呈し、各時点でｎ＝５である。
【０５７５】
０．５ｍｇ／ｋｇで活性が非常に限定されたＭｘｂ５の明白な用量効果があったが、２．５ｍｇ／ｋｇと７．５ｍｇ／ｋｇとの間のＭｘｂ５の用量で注入したマウスにおいて、有意な赤血球新生活性を観察した。Ｍｘｂ５の活性特性は、ＰＥＧ−ＮＥＳＰの活性特性とは異なり；ピークの網状赤血球数は、ＰＥＧ−ＮＥＳＰ又はＭｘｂ５の何れかの注射後第４日目で達成されたが、網状赤血球反応の期間は、２．５ｍｇ／ｋｇと７．５ｍｇ／ｋｇとの間のＭｘｂ５の用量を受容したマウスにおいて有意に延長した。網状赤血球数は、ＰＥＧ−ＮＥＳＰで処置したマウスにおいて第８日目に基線に戻ったが、Ｍｘｂ５で処置したマウスにおいては、網状赤血球が基線に戻るのに１４から１８日間かかった。５ｍｇ／ｋｇと７．５ｍｇ／ｋｇとの間の用量でＭｘｂ５を注入されたマウスにおいて、ヘモグロビンレベルは、４６から５２日間基線を上回って留まった。対照的に、ＰＥＧ−ＮＥＳＰで処置したマウスにおけるヘモグロビンレベルは、第１６日目に基線に戻り、従って、Ｍｘｂ５又はＰＥＧ−ＮＥＳＰで処置したマウスにおけるヘモグロビン反応の期間及び程度に非常に有意な差があることを示した。本実験は、Ｍｘｂ５の単注入が、マウスにおける赤血球細胞の全寿命期間（４０日間）よりも長い期間、基線を上回ってヘモグロビンレベルを増大させることを示している。赤血球新生剤の投与後のヘモグロビンの低下率が、赤血球の寿命（ヒトでは１２０日間）と関連しているので、ヒトにおけるＭｘｂ５の単回投与は、２から４ヶ月間にわたって貧血を補償するのに十分である可能性があり得る。
【０５７６】
（実施例１２Ｂ）
マウスにおけるＭｘｂ７用量力価実験：
２００μＬの最終容積で、担体（０．１％ＢＳＡを有するＰＢＳ）、３μｇ／ｋｇのＰＥＧ−ＮＥＳＰ（Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．）、又は、０．５、２．５、５若しくは７．５ｍｇ／ｋｇのＭｘｂ７（Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．）を２ヶ月齢の雌ＢＤＦ−１マウスに皮下注射した。２４日間までの数多くの時点で眼窩後部洞から血液を回収し、ＡＤＶＩＡ血液分析装置を使用してＣＢＣパラメータを評価した。データを図１４及び図１５に呈し、各時点でｎ＝５である。
【０５７７】
網状赤血球数と、用量依存的であり、長期間にわたって持続するヘモグロビンレベルとが、Ｍｘｂ７の単回注射によって増大した。７．５ｍｇ／ｋｇでのＭｘｂ７の単回皮下（ＳＣ）注射の後、網状赤血球数は、１２日間基線を上回って留まったのに対し、ＰＥＧ−ＮＥＳＰを注射したマウスでは、網状赤血球数は、８日間基線を上回って留まった。本実験において、ヘモグロビンレベルを２４日間測定し、この期間に、ヘモグロビンの上昇は、ＰＥＧ−ＮＥＳＰで処置したマウスと比較して、７．５ｍｇ／ｋｇでＭｘｂ７を受容したマウスにおいてより高いレベルでより長い期間持続した。ＰＥＧ−ＮＥＳＰの単回注射の後、ヘモグロビンのピークは第５日目に到達し、ヘモグロビンは、第１４日目に基線に戻った。対照的に、Ｍｘｂ７の単回注射（７．５ｍｇ／ｋｇ）の後、ヘモグロビンピークは、第１２日目に到達し、ヘモグロビンは、第２４日目に基線に戻った。本実験は、Ｍｘｂ７が、ＰＥＧ−ＮＥＳＰとは非常に異なる特性を有したことを示している。網状赤血球数及びヘモグロビンレベルの上昇によって示されるように、単回投与後、Ｍｘｂ７で処置したマウスは、ＰＥＧ−ＮＥＳＰで処置したマウスよりも、より長い期間の赤血球新生反応を有した。
【０５７８】
（実施例１２Ｃ）
マウスにおけるＭｘｂ１０用量力価実験：
２００μＬの最終容積で、担体（０．１％ＢＳＡを有するＰＢＳ）、３μｇ／ｋｇのＰＥＧ−ＮＥＳＰ（Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．）、又は、０．０５、０．１５、０．５、１．５、３若しくは５ｍｇ／ｋｇのＭｘｂ７（Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．）を２ヶ月齢の雌ＢＤＦ−１マウスに皮下注射した。５２日間までの数多くの時点で眼窩後部洞から血液を回収し、ＡＤＶＩＡ血液分析装置を使用してＣＢＣパラメータを評価した。データを図１６及び図１７に呈し、各時点でｎ＝５である。
【０５７９】
Ｍｘｂ１０の非常に明白な用量依存的効果があった。網状赤血球数及びヘモグロビンレベルの変化は、ＰＥＧ−ＮＥＳＰの３μｇ／ｋｇと非常に類似した活性を有するＭｘｂ１０の最低用量（０．０５ｍｇ／ｋｇ）でさえ明白であった。Ｍｘｂ１０は、Ｍｘｂ２、Ｍｘｂ７及びＭｘｂ５よりも有力な薬剤であった。Ｍｘｂ２の０．１５ｍｇ／ｋｇで処置したマウスにおいて、網状赤血球数は、１０日間基線を上回って留まり、ヘモグロビンレベルは、１９日間基線を上回った。Ｍｘｂ１０の０．５ｍｇ／ｋｇの用量で、網状赤血球数は、１３日間基線を上回って留まり、ヘモグロビンレベルは、３１日間基線を上回った。Ｍｘｂ１０の１．５ｍｇ／ｋｇの用量で、網状赤血球数は、１８日間基線を上回って留まり、ヘモグロビンレベルは、４０日間基線を上回った。Ｍｘｂ１０の３ｍｇ／ｋｇの用量で、網状赤血球数は、２３日間基線を上回って留まり、ヘモグロビンレベルは、５０日間基線を上回った。最後に、Ｍｘｂ１０の５ｍｇ／ｋｇの用量で、網状赤血球数は、２８日間基線を上回って留まり、実験が終了した第５２日目で、ヘモグロビンレベルは、基線をなおも上回っていた。Ｍｘｂ１０の５ｍｇ／ｋｇで投与されたマウスを使用する別の実験において、ヘモグロビンレベルは、Ｍｘｂ１０の単回皮下注射後第５６日目に基線に戻った。
【０５８０】
（実施例１２Ｄ）
マウスにおけるＭｘｂ２単回投与実験：
２００μＬの最終容積で、担体（０．１％ＢＳＡを有するＰＢＳ）、３μｇ／ｋｇのＰＥＧ−ＮＥＳＰ（Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．）又は１３ｍｇ／ｋｇのＭｘｂ２（Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．）を３ヶ月齢の雌ＢＤＦ−１マウスに皮下注射した。２４日間までの数多くの時点で眼窩後部洞から血液を回収し、ＡＤＶＩＡ血液分析装置を使用してＣＢＣパラメータを評価した。データを図１８及び図１９に呈し、各時点でｎ＝５である。
【０５８１】
本実験において、Ｍｘｂ２の単回投与の赤血球新生効果を、対照剤ＰＥＧ−ＮＥＳＰによって誘導される赤血球新生効果と比較した。Ｍｘｂ２を受容した動物において、網状赤血球数は、さらなる日数の間基線を上回って留まった（ＰＥＧ−ＮＥＳＰで処置した動物における８日間対Ｍｘｂ２で処置したマウスにおける９日間）が、赤血球新生反応における差異の程度は、ヘモグロビン反応を考慮すると、有意に顕著であった。ＰＥＧ−ＮＥＳＰ処置の１４日後、ヘモグロビンレベルは基線に戻ったのに対し、Ｍｘｂ２で処置したマウスでは、ヘモグロビンが基線に戻るのに２４日間かかった。これらのデータは、Ｍｘｂ２によって誘導される赤血球新生反応が、ＰＥＧ−ＮＥＳＰによって誘導される赤血球新生反応よりも有意に長いことを示した。
【０５８２】
（実施例１３）
Ｍｘｂ５及びＩｇＧ１５の薬物動態研究
Ｍｘｂ５及びＩｇＧ１５の薬物動態（ＰＫ）特性を、雌ＢＤＦ−１マウスで特徴付けた。３．７５ｍｇ／ｋｇのＭｘｂ５又は５．７ｍｇ／ｋｇのＩｇＧ１５（等モル量）の何れかを動物に静脈内注射した。１００日間までの数多くの時点で眼窩後部洞から又は心臓穿刺によっての何れかで血液を回収し、各時点でｎ＝４であった。血液試料をＣｏｓｔａｒ微量遠心チューブに転移し、凝血させた。次に、４℃、１１，５００ｒｐｍで試料を１０分間遠心分離した。次に、得られた血清試料を個々のチューブ中に転移し、−７０℃で保存した後、分析した。固定されたｈｕＥｐｏＲタンパク質及び抗ヒトＦｃ／ＨＲＰ結合体を使用するＥＬＩＳＡによって、試料中のＭｘｂ５及びＩｇＧ１５濃度を測定した。血清濃度値を使用して、薬物動態分析を経時的に実施した。
【０５８３】
本分析に使用された各時点の各タンパク質（平均混成物）の血清濃度の平均及び標準偏差を図１９に図示する。ＩｇＧ１５及びＭｘｂ５の幾つかの薬物動態パラメータを、図２１Ａ、図２１Ｂ及び図２２に示す。ＩｇＧ１５は、Ｍｘｂ５よりも半減期が長いことを示した（それぞれ、３２０．１時間対１５８．３時間）。常に、清掃率は、Ｍｘｂ５よりもＩｇＧ１５の方が遅く（それぞれ０．０１２ｍＬ／時対０．００７１ｍＬ／時）、平均残留時間は、Ｍｘｂ５よりもＩｇＧ１５のほうが長い（それぞれ２１７．５１時間対４８２．２７時間）。本分析は、これら２つのタンパク質の薬物動態特性に有意差があり、そのより遅い排除のために、Ｍｘｂ５よりもＩｇＧ１５の方が、残留時間が長いことを示唆している。
【０５８４】
（実施例１４）
さらなるクローンのスクリーニング及び同定
実施例１に記載されている選択戦略を使用して、可溶性ｈｕＥｐｏＲに関する選択の２つのラウンドを通じて、固有状態のファージライブラリ由来のｓｃＦｖファージを処理した。選択の２回のラウンドの後、ファージブールから２，０００個のｓｃＦｖファージを無作為に拾い上げた。ＥＬＩＳＡスクリーニングに２，０００個のファージを使用し、同定された９６０個のｓｃＦｖファージは、ｈｕＥｐｏＲに特異的に結合するように見えた。
【０５８５】
９６０個のｓｃＦｖファージクローン由来のプラスミドＤＮＡ少量調製物を調製し、プールした。９６０個のｓｃＦｖファージクローン由来のＤＮＡプールをＮｃｏＩ及びＮｏｔＩで消化した。得られた０．７５ｋｂの断片を、ＰｃｉＩ及びＮｏｔＩで消化した哺乳動物発現ベクターｐＤＣ４０９ａ−Ｇ１Ｆｃに連結した。ｐＤＣ４０９ａ−Ｇ１Ｆｃは、実施例２に記載されている。連結産物をＴＧ１細胞中に形質転換した。連結後、１，９２０個の単一コロニーを拾い上げ、Ｑｉａｇｅｎ  ＢｉｏＲｏｂｏｔ  ３０００を使用して、１，９２０ｋのコロニーの各々に由来するプラスミドＤＮＡ少量調製物を、９６ウェルプレート中に作製した。これらの９６ウェルプレートをストックプレートとして供した。ストックプレート中の各ウェルのＤＮＡ濃度は、５０ｎｇ／μＬと２００ｎｇ／μＬとの間であった。
【０５８６】
ストックプレート由来のＤＮＡの一定分量を、９６ウェルプレートの新たなセット（検査プレートの第一のセット）中で、リポフェクタミン２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と組み合わせた。検査プレートの第一のセットのウェル中で室温で３０分間定温放置することによって、脂質／ＤＮＡ複合体を形成した。次に、Ｃｏｓ  ＰＫＢ細胞を含有する９６ウェルプレートの第二のセット（検査プレートの第二のセット）に、脂質／ＤＮＡ複合体を添加した。脂質ＤＮＡ複合体を、Ｃｏｓ  ＰＫＢ細胞中に形質移入した。
【０５８７】
形質移入の５日後、発現したタンパク質を含有する培養上清を、検査プレートの第二のセットから回収した。インビトロでのＥｐｏＲ活性化アッセイを使用して、ＥｐｏＲを結合する能力に関して、培養上清を検査した。２回のインビトロでのＥｐｏＲ活性化アッセイを、検査されている各タンパク質に関して実施した。第一のアッセイは、１：２の最終希釈で培養上清を使用した。第二のアッセイは、１：２０の最終希釈で培養上清を使用した。
【０５８８】
検査プレートの第二のセット由来の上清は、ＦｃＥＬＩＳＡによってタンパク質力価に関しても検査した。ＦｃＥＬＩＳＡ由来の濃度範囲は、５から２０μｇ／ｍＬの間であった。
【０５８９】
これらのスクリーニングは、クローンの第二のセットを同定した：クローン２０１、クローン２７６、クローン２９５、クローン３０７、クローン３１８、クローン３１９、クローン３２３、クローン３３０、クローン３５２及びクローン３７８。
【０５９０】
実施例１に一般的に記載されるように、クローン１３、クローン１５、クローン１６、クローン２９及びクローン３４を単離した。
【０５９１】
実施例２に記載されているクローニング戦略を使用して、クローンの第二のセットを含有するＩｇＧ２及びＦａｂ発現構築物を構築した。
【０５９２】
Ｎ末端アミノ酸配列決定によってタンパク質の同一性を認証し、２８０ｎｍでの吸光度によって、分光光度計で濃度を測定した。
【０５９３】
クローンの第二のセットを配列決定した。クローン１３、クローン１５、クローン１６、クローン２９、クローン３４、クローン２０１、クローン２７６、クローン２９５、クローン３０７、クローン３１８、クローン３１９、クローン３２３、クローン３３０、クローン３５２及びクローン３７８に関する可変重鎖及び可変軽鎖のＤＮＡ及びアミノ酸の配列を以下に示す。各配列内で順に、重鎖及び軽鎖ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３に下線を付している。
【０５９４】
１３番可変重鎖核酸配列
【０５９５】
【化７６】
2009533057.tif 000080
【０５９６】
１３番可変重鎖アミノ酸配列
【０５９７】
【化７７】
2009533057.tif 000081
【０５９８】
１３番可変軽鎖核酸配列
【０５９９】
【化７８】
2009533057.tif 000082
【０６００】
１３番可変軽鎖アミノ酸配列
【０６０１】
【化７９】
2009533057.tif 000083
【０６０２】
１５番可変重鎖核酸配列
【０６０３】
【化８０】
2009533057.tif 000084
【０６０４】
１５番可変重鎖アミノ酸配列
【０６０５】
【化８１】
2009533057.tif 000085
【０６０６】
１５番可変軽鎖核酸配列
【０６０７】
【化８２】
2009533057.tif 000086
【０６０８】
１５番可変軽鎖アミノ酸配列
【０６０９】
【化８３】
2009533057.tif 000087
【０６１０】
１６番可変重鎖核酸配列
【０６１１】
【化８４】
2009533057.tif 000088
【０６１２】
１６番可変重鎖アミノ酸配列
【０６１３】
【化８５】
2009533057.tif 000089
【０６１４】
１６番可変軽鎖核酸配列
【０６１５】
【化８６】
2009533057.tif 000090
【０６１６】
１６番可変軽鎖アミノ酸配列
【０６１７】
【化８７】
2009533057.tif 000091
【０６１８】
２９番可変重鎖核酸配列
【０６１９】
【化８８】
2009533057.tif 000092
【０６２０】
２９番可変重鎖アミノ酸配列
【０６２１】
【化８９】
2009533057.tif 000093
【０６２２】
２９番可変軽鎖核酸配列
【０６２３】
【化９０】
2009533057.tif 000094
【０６２４】
２９番可変軽鎖アミノ酸配列
【０６２５】
【化９１】
2009533057.tif 000095
【０６２６】
３４番可変重鎖核酸配列
【０６２７】
【化９２】
2009533057.tif 000096
【０６２８】
３４番可変重鎖アミノ酸配列
【０６２９】
【化９３】
2009533057.tif 000097
【０６３０】
３４番可変軽鎖核酸配列
【０６３１】
【化９４】
2009533057.tif 000098
【０６３２】
３４番可変軽鎖アミノ酸配列
【０６３３】
【化９５】
2009533057.tif 000099
【０６３４】
２０１番可変重鎖核酸配列
【０６３５】
【化９６】
2009533057.tif 000100
【０６３６】
２０１番可変重鎖アミノ酸配列
【０６３７】
【化９７】
2009533057.tif 000101
【０６３８】
２０１番可変軽鎖核酸配列
【０６３９】
【化９８】
2009533057.tif 000102
【０６４０】
２０１番可変軽鎖アミノ酸配列
【０６４１】
【化９９】
2009533057.tif 000103
【０６４２】
２７６番可変軽鎖核酸配列
【０６４３】
【化１００】
2009533057.tif 000104
【０６４４】
２７６番可変重鎖核酸配列
【０６４５】
【化１０１】
2009533057.tif 000105
【０６４６】
２７６番可変軽鎖核酸配列
【０６４７】
【化１０２】
2009533057.tif 000106
【０６４８】
２７６番可変軽鎖アミノ酸配列
【０６４９】
【化１０３】
2009533057.tif 000107
【０６５０】
２９５番可変重鎖核酸配列
【０６５１】
【化１０４】
2009533057.tif 000108
【０６５２】
２９５番可変重鎖アミノ酸配列
【０６５３】
【化１０５】
2009533057.tif 000109
【０６５４】
２９５番可変軽鎖核酸配列
【０６５５】
【化１０６】
2009533057.tif 000110
【０６５６】
２９５番可変軽鎖アミノ酸配列
【０６５７】
【化１０７】
2009533057.tif 000111
【０６５８】
３０７番可変重鎖核酸配列
【０６５９】
【化１０８】
2009533057.tif 000112
【０６６０】
３０７番可変重鎖アミノ酸配列
【０６６１】
【化１０９】
2009533057.tif 000113
【０６６２】
３０７番可変軽鎖核酸配列
【０６６３】
【化１１０】
2009533057.tif 000114
【０６６４】
３０７番可変軽鎖アミノ酸配列
【０６６５】
【化１１１】
2009533057.tif 000115
【０６６６】
３１８番可変重鎖核酸配列
【０６６７】
【化１１２】
2009533057.tif 000116
【０６６８】
３１８番可変重鎖アミノ酸配列
【０６６９】
【化１１３】
2009533057.tif 000117
【０６７０】
３１８番可変軽鎖核酸配列
【０６７１】
【化１１４】
2009533057.tif 000118
【０６７２】
３１８番可変軽鎖アミノ酸配列
【０６７３】
【化１１５】
2009533057.tif 000119
【０６７４】
３１９番可変重鎖核酸配列
【０６７５】
【化１１６】
2009533057.tif 000120
【０６７６】
３１９番可変重鎖アミノ酸配列
【０６７７】
【化１１７】
2009533057.tif 000121
【０６７８】
３１９番可変軽鎖核酸配列
【０６７９】
【化１１８】
2009533057.tif 000122
【０６８０】
３１９番可変軽鎖アミノ酸配列
【０６８１】
【化１１９】
2009533057.tif 000123
【０６８２】
３２３番可変重鎖核酸配列
【０６８３】
【化１２０】
2009533057.tif 000124
【０６８４】
３２３番可変重鎖アミノ酸配列
【０６８５】
【化１２１】
2009533057.tif 000125
【０６８６】
３２３番可変軽鎖核酸配列
【０６８７】
【化１２２】
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【０６８８】
３２３番可変軽鎖アミノ酸配列
【０６８９】
【化１２３】
2009533057.tif 000127
【０６９０】
３３０番可変重鎖核酸配列
【０６９１】
【化１２４】
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【０６９２】
３３０番可変重鎖アミノ酸配列
【０６９３】
【化１２５】
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【０６９４】
３３０番可変軽鎖核酸配列
【０６９５】
【化１２６】
2009533057.tif 000130
【０６９６】
３３０番可変軽鎖アミノ酸配列
【０６９７】
【化１２７】
2009533057.tif 000131
【０６９８】
３５２番可変重鎖核酸配列
【０６９９】
【化１２８】
2009533057.tif 000132
【０７００】
３５２番可変重鎖アミノ酸配列
【０７０１】
【化１２９】
2009533057.tif 000133
【０７０２】
３５２番可変軽鎖核酸配列
【０７０３】
【化１３０】
2009533057.tif 000134
【０７０４】
３５２番可変軽鎖アミノ酸配列
【０７０５】
【化１３１】
2009533057.tif 000135
【０７０６】
３７８番可変重鎖核酸配列
【０７０７】
【化１３２】
2009533057.tif 000136
【０７０８】
３７８番可変重鎖アミノ酸配列
【０７０９】
【化１３３】
2009533057.tif 000137
【０７１０】
３７８番可変軽鎖核酸配列
【０７１１】
【化１３４】
2009533057.tif 000138
【０７１２】
３７８番可変軽鎖アミノ酸配列
【０７１３】
【化１３５】
2009533057.tif 000139
【０７１４】
（実施例１５）
ＦＡＣＳによる細胞表面ｈｕＥｐｏＲに結合している抗体の分析
ＦＡＣＳを使用して、細胞表面に発現されたｈｕＥｐｏＲに対するｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質の結合を分析した。使用されるｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質は全て、ＩｇＧ１由来のＦｃを有していた。５ｎＭｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質単独と共に又は５ｎＭｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質＋ｒＨｕＥｐｏ０．５μｇ／ｍＬと共に、ＵＴ−７細胞を４℃で１時間定温放置した。冷ＰＢＳを使用して迅速に２回洗浄した後、１μｇ／ｍＬフィコエリトリン結合ヤギＦ（ａｂ’）２抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）と共に、ＵＴ−７細胞を４℃で１時間定温放置した。冷ＰＢＳを使用して細胞を２回洗浄し、固定緩衝液（２％パラホルムアルデヒドＰＢＳ  ｐＨ７．４）１ｍＬ中に再懸濁した。ＦＡＣＳＣａｌｉｂｅｒフローサイトメーター（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を使用して、ＦＡＣＳを実施した。
【０７１５】
ｓｃＦｖ−Ｆｃ発現ベクターから発現したタンパク質のＦＡＣＳトレースを図２２に示す。クローン１３、クローン１５、クローン１６、クローン２９及びクローン３４は全て、ｈｕＥｐｏＲを発現しているＵＴ−７細胞に結合する（図２２Ａ）が、陰性対照細胞には結合しなかった（図２２Ｂ）。ｒＨｕＥｐｏの過剰量によって、クローン１５、クローン１６及びクローン３４のＵＴ−７細胞表面結合を遮断した（図２２Ａ）。ｒＨｕＥｐｏは、クローン１３又はクローン２９の結合を遮断しなかった（図２２Ａ）。
【０７１６】
（実施例１６）
ｈｕＥｐｏＲに対するクローン２０１、クローン２７６、クローン２９５、クローン３０７、クローン３１８、クローン３１９、クローン３２３、クローン３３０、クローン３５２及びクローン３７８の競合的結合：
プレートベースのＥＬＩＳＡを使用して、ｈｕＥｐｏＲ．Ｆｃに対する結合のためにＥｐｏと競合する能力に関して、クローン２０１、クローン２７６、クローン２９５、クローン３０７、クローン３１８、クローン３１９、クローン３２３、クローン３３０、クローン３５２及びクローン３７８を検査した。使用されるｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質は全て、ＩｇＧ１由来のＦｃを有していた。ｈｕＥｐｏＲ．Ｆｃに結合するビオチン化Ｅｐｏを、競合剤として使用した。ｈｕＥｐｏＲ．Ｆｃをポリソープ（ｐｏｌｙｓｏｒｐ）ＥＬＩＳＡプレート上に固定した。ストレプトアビジン−ＨＲＰ結合体を使用して、０から５０μｇ／ｍＬの各タンパク質による濃度力価によって、ｓｃＦｖ−Ｆｃにおいて、クローン２０１、クローン２７６、クローン２９５、クローン３０７、クローン３１８、クローン３１９、クローン３２３、クローン３３０、クローン３５２及びクローン３７８によって結合するＥｐｏの阻害を検査した。クローン１３、クローン１５、クローン１６、クローン２９、クローン３０及びクローン３４以外のクローンは全て、高濃度で結合するＥｐｏを実質的に遮断した（図２３）。実施例５に一般的に記載されるように、ＥｐｏＲに結合するために、マキシボディフォーマットにおけるクローン５及びクローン３０と競合する能力に関して、ファージフォーマットにおけるクローン２、クローン５、クローン７、クローン１０、クローン１３、クローン１５、クローン１６、クローン２９、クローン３０及びクローン３４を検査した。
【０７１７】
（実施例１７）
マウスＥｐｏＲ（ｍｕＥｐｏＲ）及びカニクイザルＥｐｏＲ（ｃｙｎｏＥｐｏＲ）に結合する抗体：
ＥＬＩＳＡアッセイを使用して、ｓｃＦｖ−Ｆｃフォーマットにおける特定のクローンの交差反応性を検査した。使用されるｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質は全て、ＩｇＧ１由来のＦｃを有していた。検査されるクローンは：クローン１３、クローン１５、クローン１６、クローン２９、クローン３４、クローン２０１、クローン２７６、クローン２９５、クローン３０７、クローン３１８、クローン３１９、クローン３２３、クローン３３０、クローン３５２及びクローン３７８であった。（５０ｍＭＮａＨＣＯ３、ｐＨ８．５中の）１μｇ／ｍＬのｃｙｎｏＥｐｏＲ又はｍｕＥｐｏＲ１００μＬを、ポリソープＥＬＩＳＡプレート上の各ウェルに添加し、４℃で一晩定温放置した。４％乳／ＰＢＳ／０．１％トゥイーン２０でウェルを室温で１時間遮断後、プレートをＰＢＳ／０．１％トゥイーン２０で３回洗浄した。５μｇ／ｍＬのｓｃＦｖ−Ｆｃ１００μＬを各ウェルに添加し、２５℃で１時間定温放置した。抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃ−ＨＲＰ結合体（４％乳ＰＢＳ／０．１％トゥイーン２０中の１：１０００希釈）を使用して、結合したｃｙｎｏＥｐｏＲ又はｍｕＥｐｏＲを検出した。ＡＢＴＳ（２，２’−アジノ−ビス（３−エチルベンズチアゾリン_-６-スルホン酸））を基質として使用し、プレートリーダー上で４０５ｎｍで吸光度を測定した。クローンは全て、ｃｙｎｏＥｐｏＲに対する交差反応性の有意なレベルを示した（図２３）。クローン２７６、クローン３２３、クローン３５２及びクローン３７８は、ｍｕＥｐｏＲに対する交差反応性の実質的なレベルを示した（図２３）。
【０７１８】
（実施例１８）
ビアコアを使用したヒト及びｃｙｎｏＥｐｏＲに関する速度定数及び親和性定数の測定：
ＣＭ５センサーチップを装備したＢｉａｃｏｒｅＴ１００機（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）を使用して、表面プラズモン共鳴実験を２５℃で実施した。ＣＭ５チップ上の各流動細胞を、０．１Ｍ  Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）と０．４Ｍ１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣ）との１：１（ｖ／ｖ）の混合物で活性化した。１０，０００共鳴単位（ＲＵ）の標的レベルによる標準的なアミン結合化学反応を使用して、１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）中で３０μｇ／ｍＬのＦｃγ断片特異的ＡｆｆｉｎｉＰｕｒｅヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体を、ＣＭ５チップ上の２つの流動細胞に固定した。１Mエタノールアミンの注入で、残留反応表面を非活性化した。次に、残りの工程全てに関して、実行緩衝液をＨＢＳ−ＥＰ＋０．１ｍｇ／ｍＬＢＳＡに切り替えた。
【０７１９】
検査されるべき各ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質に関して、実行緩衝液中でｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質を２００ｎｇ／ｍＬに希釈し、マキシボディを捕捉するために１０μＬ／分で２分間、検査流動細胞上に注入した。使用されるｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質は全て、ＩｇＧ１由来のＦｃを有していた。ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質を対照流動細胞表面上に捕捉した。次に、緩衝液ブランクと共に、２４．７から６０００ｎＭの範囲の濃度で、２つの流動細胞上にヒト又はｃｙｎｏのＥｐｏＲの何れかを流した。５０μＬ／分の流速を使用して、１分間の結合相の後、５分間（ｃｙｎｏＥｐｏＲ用）又は１０分間（ｈｕＥｐｏＲ用）の解離相を使用した。各周期の後、表面を１０ｍＭグリシン（ｐＨ１．５）の３０秒間の注入で再生した。次に、新鮮なｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質を検査流動細胞上で捕捉し、次の周期のために準備した。
【０７２０】
対照表面反応を減じることによって、データを二重参照して、バルクの屈折率の変化を除去した後、平均化した緩衝液ブランク反応を減じて、実験流動細胞から系統的な人為産物を除去した。Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｔ１００  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ第１．１版（Ｂｉａｃｏｒｅ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎ）において、ＥｐｏＲデータを処理し、質量転移及び局所Ｒｍａｘを有する１：１の相互作用モデルに包括的に適合した。クローン３０とヒトＥｐｏＲ；クローン３４とｃｙｎｏＥｐｏＲ；及びクローン３１８とｃｙｎｏＥｐｏＲとの間の測定された相互作用は、迅速すぎて正確に測定できない速度外値（ｏｆｆ−ｒａｔｅ）を有し、そのために、代わりに、データは、定常状態モデルに適合した。定常状態モデルは結果として、親和性のみ測定でき、動態値は測定できない。
【０７２１】
速度定数及び親和性定数を表３に要約する。ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質に対するｈｕＥｐｏＲに関して算出された親和性は、クローン１０番についての１．１ｎＭ（表２に示された前述のデータ）から、クローン２０１番についての４０３０ｎＭまで変動した。ＣｙｎｏＥｐｏＲに関しては、範囲は、クローン１０番についての６．８３ｎＭから、クローン２０１番についての１８，６００までであった。クローン１０番は、最も遅いｋｏｆｆを有したのに対し、クローン２０１番は、最も遅いｋｏｎを有していた。一般的に、算出された親和性は、ヒト及びカニクイザルのＥｐｏＲと非常に同様であり、２つのｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質（クローン３４番及び３０７番）のみが、種間で１０倍以上大きな変動を示した。
【０７２２】
【表３】
2009533057.tif 000140
【０７２３】
（実施例１９）
ヒトエリスロポエチン受容体の活性化のためのインビトロでのｓｃFv-Fcタンパク質のスクリーニング：
ｈｕＥｐｏＲの活性化のために、ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質をスクリーニングした。ルシフェラーゼ受容体遺伝子の前の９個のＳＴＡＴ５結合部位を含有する構築物で形質移入されたＵＴ−７細胞（ヒト巨核芽球）（ＵＴ−７−ＬＵＣ細胞）においてルシフェラーゼベースの受容体アッセイ（ルシフェラーゼアッセイ）によって、ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質のインビトロでのスクリーニングを実施した。使用されるｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質は全て、ＩｇＧ１由来のＦｃを有していた。別段の記載がなければ、５％ＣＯ２／９５％大気の加湿された恒温器中で、３７℃で、全ての細胞を維持し、全ての細胞アッセイを実施した。使用前に、全てのウシ胎仔血清（ＦＢＳ）を５５℃で４５分間熱失活させた。細胞操作に使用されるダルベッコリン酸塩類緩衝液（ＰＢＳ）は全て、塩化カルシウム及び塩化マグネシウムを含有しなかった。１０％ＦＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ；Ｌｏｇａｎ，ＵＴ）、５００μｇ／ｍＬハイグロマイシン（Ｒｏｃｈｅ；Ｐｅｎｚｂｅｒｇ，Ｇｅｒｍａｎｙ）、１００Ｕ／ｍＬペニシリン、１００μｇ／ｍＬストレプトマイシン、２９２μｇ／ｍＬ  Ｌ−グルタミン（１×ＰＳＧ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）及び０．５Ｕ／ｍＬ組換えヒトエリスロポエチン（Ｅｐｏｅｔｉｎ  Ａｌｐｈａ，ｒＨｕＥｐｏ；Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ）を含有するＩＭＤＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ；Ｃａｒｌｓｂａｄ，ＣＡ）を含む増殖培地中で、ＵＴ−７−ＬＵＣ細胞（Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．；Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ，ＣＡ）を維持した。アッセイ培地（１％ＦＢＳ、１×ＰＳＧ及び１２．５ｍＭＨＥＰＥＳを有するＲＰＭＩ  Ｍｅｄｉｕｍ  １６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））中で細胞を２回洗浄し、アッセイ培地中で１ｍＬあたり４００，０００個で再懸濁した。一晩の定温放置の後、細胞数及び生存率を測定し、アッセイ培地中で１ｍＬあたり２００，０００個で細胞を再懸濁した。
【０７２４】
９６ウェルの不透明プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ；Ｃｏｒｎｉｎｇ，ＮＹ）中に、各ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質を連続希釈した。各実験で、濃度範囲、希釈倍数、希釈回数及び複製数は変動し、表４に示す。対照標準物質として供するために、各９６ウェルプレートの７ウェル中に組換えヒトＥＰＯを２個組で、０．８２ｎＭから５．２５Ｅ−０５ｎＭ間での終濃度で連続希釈した。約１０，０００個の細胞を各ウェルに添加した。次に、細胞を１８から２４時間培養し、Ｓｔｅａｄｙ−Ｇｌｏ  Ｌｕｃｉｆｅｒａｓｅ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に関する製造元のプロトコールに従って、アッセイを実施した。ルシフェラーゼ活性を９６ウェルプレートルミノメーター上で読み取った。データをプロットして、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）ソフトウェアを使用して、結合曲線及びＥＣ５０値を生じた。平均ＥＣ５０±標準偏差として、表５にデータを表す。
【０７２５】
【表４】
2009533057.tif 000141
【０７２６】
【表５】
2009533057.tif 000142
【０７２７】
表５は、Ｍｘｂ２、Ｍｘｂ５、Ｍｘｂ７、Ｍｘｂ１０、Ｍｘｂ１３、Ｍｘｂ１５、Ｍｘｂ１６、Ｍｘｂ２９、Ｍｘｂ３０、Ｍｘｂ３４、Ｍｘｂ２０１、Ｍｘｂ２７６、Ｍｘｂ２９５、Ｍｘｂ３０７、Ｍｘｂ３１８３２３、Ｍｘｖ３３０、Ｍｘｂ３５２及びＭｘｂ３７８に関するｈｕＥｐｏＲ活性化及びＥｐｏＲ活性レベルのＥＣ５０値を示す。（何れの背景減算もしない）ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアを使用して算出された平均ＥＣ５０値±標準偏差として結果を表す。１回の実験のみが実施される場合、標準偏差をＮ／Ａとして表す。
【０７２８】
（実施例２０）
Ｍｘｂ２７６、Ｍｘｂ３２３、Ｍｘｂ３５２及びＭｘｂ３７８によるインビボでの実験
マウスにおいて、ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質Ｍｘｂ２７６、Ｍｘｂ３２３、Ｍｘｂ３５２又はＭｘｂ３７８の単回注射の効果を検査した。ＩｇＧ１ｆｃ又はＩｇＧ２ｆｃの何れかを有するｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質を検査した。ＩｇＧ１ｆｃを有するｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質を、Ｍｘｂ  Ｘ Ｇ１ＭＢ又はＸ  Ｇ１ＭＢと略記し、「Ｘ」は、クローン番号である。ＩｇＧ２ｆｃを有するｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質を、Ｍｘｂ  Ｘ Ｇ２ＭＢ又はＸ Ｇ２ＭＢと略記し、「Ｘ」は、クローン番号である。本実験において、陽性対照としてＰＥＧ−ＮＥＳＰを使用した。陰性対照として、担体（１０ｍＭリン酸カリウム、１６１ｍＭＬ−アルギニン、ｐＨ７．５）を使用した。
【０７２９】
２００μＬの最終容積で、担体（０．１％ＢＳＡを有するＰＢＳ）、３μｇ／ｋｇのＰＥＧ−ＮＥＳＰ（Ａｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．）又はｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質１００μｇを、２ヶ月齢の雌ＢＤＦ−１マウスに皮下注射した。マウス１匹あたり１００μｇの単回急速投与で、以下のｓｃＦｖ-Ｆｃタンパク質を検査した：Ｍｘｂ２７６ Ｇ１ＭＢ、Ｍｘｂ３２３ Ｇ１ＭＢ、Ｍｘｂ３５２ Ｇ１ＭＢ、Ｍｘｂ３７８ Ｇ１ＭＢ、Ｍｘｂ２７６ Ｇ２ＭＢ、Ｍｘｂ３２３ Ｇ２ＭＢ、Ｍｘｂ３５２ Ｇ２ＭＢ及びＭｘｂ３７８ Ｇ２ＭＢ。数多くの時点で眼窩後部洞から血液を回収し、ＡＤＶＩＡ血液分析装置を使用してＣＢＣ（競合血液計数）パラメータを評価した。第一の実験については、担体及び２７６＿Ｍｘｂ群に関する第２、３、５、９、１１、１５、２０、２２、２７、２９、３６及び３８日目に血液を回収した。ＰＥＧ−ＮＥＳＰで処置されたマウスの群については、第２、３、５、９、１１、１５、２０及び２２日目に血液を回収した。全ての他の群については、第２、３、５、９、１１及び１６日目に血液を回収した。第二の実験において、全ての群に関し、第２、３、５、９、１１及び１６日目に血液を回収した。図２４及び２５において見られるように、全てのマウスが、全３８日間モニターされたわけではなかった。ＣＢＣパラメータが基線レベルに戻ったとき、回収を停止した。各時点で５匹のマウスから回収した。データを図２４及び図２５に表す。
【０７３０】
Ｍｘｂ２７６ Ｇ１ＭＢは、１００μｇ／マウスの用量でヘモグロビン及び網状赤血球数の増加によって観察されるように、赤血球新生刺激効果を有した。本実験で検査された他のＭｘｂの何れに関しても、この用量で有意な効果は観察されなかった。ＰＥＧ−ＮＥＳＰは、陽性対照として作用し、予測されたように機能した。Ｍｘｂ２７６ Ｇ１ＭＢの活性特性は、ＰＥＧ−ＮＥＳＰの活性特性とは異なり；ピーク網状赤血球数は、ＰＥＧ−ＮＥＳＰ又はＭｘｂ２７６ Ｇ１ＭＢの何れかの注射後第５日目に達成されたが、網状赤血球反応の期間は、Ｍｘｂ２７６ Ｇ１ＭＢの用量を受容したマウスにおいて有意に延長した。網状赤血球数は、ＰＥＧ−ＮＥＳＰ処置したマウスにおいて第９日目に基線に戻ったが、Ｍｘｂ２７６ Ｇ１ＭＢ処置したマウスでは、網状赤血球が基線に戻るのに１９から２０日間かかった。この用量でＭｘｂ２７６ Ｇ１ＭＢを注射したマウスにおいて、ヘモグロビンレベルは、２２から２９日間基線を上回って留まった。対照的に、ＰＥＧ−ＮＥＳＰで処置したマウスにおけるヘモグロビンレベルは、第１５日目に基線に戻り、従って、Ｍｘｂ２７６＿Ｇ１ＭＢで処置したマウスにおいて、ＰＥＧ−ＮＥＳＰで処置したマウスに対して、ヘモグロビン反応の期間及び程度に非常に有意な差があることを示した。本実験は、Ｍｘｂ２７６ Ｇ１ＭＢの単回注入が、マウスにおける赤血球細胞の全寿命期間（約４０日間）に近い有意な期間、基線を上回ってヘモグロビンレベルを増大させることを示している。赤血球新生剤の投与後のヘモグロビンの低下率が、赤血球の寿命（ヒトでは約１２０日間）と関連しているので、ヒトにおけるＭｘｂ２７６ Ｇ１ＭＢの単回投与は、２から３ヶ月間にわたって貧血を補償するのに十分であり得る可能性がある。
【０７３１】
（実施例２１）
Ｍｘｂヒト点変異体Ｆｃ及びＭｘｂカニクイザル点変異体Ｆｃの作製
（ヒトＦｃを有する）Ｍｘｂ５、Ｍｘｂ１０及びＭｘｂ３０並びに（カニクイザルＦｃを有する）Ｍｘｂ５を、タンパク質のＦｃ部分のアスパラギン２９７で変異させた。変異したアスパラギンは、ヒトＩｇＧのＣＨ２ドメインのアスパラギン２９７と等価の位置にある。ＳｔｒａｔａｇｅｎｅのＱｕｉｃｋＣｈａｎｇｅ  ＩＩ  Ｓｉｔｅ−Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ  Ｋｉｔを使用して、変異体（Ｎ２９７Ｓ）全体におけるセリン残基によって、位置２９７でのアスパラギンを置換した。ヒトＦｃ変異誘発のために、反応において、プライマー４６０６−７８（ＣＧＧ  ＧＡＧ  ＧＡＧ  ＣＡＧ  ＴＡＣ  ＡＧＣ  ＡＧＣ  ＡＣＧ  ＴＡＣ  ＣＧＴ  ＧＴＧ）及び４６０６−７９（ＣＡＣ  ＡＣＧ  ＧＴＡ  ＣＧＴ  ＧＣＴ  ＧＣＴ  ＧＴＡ  ＣＴＧ  ＣＴＣ  ＣＴＣ  ＣＣＧ）を使用した。カニクイザルＦｃ変異誘発のために、プライマー４６０６−７６（ＧＧＧ  ＡＧＡ  ＧＧＣ  ＡＧＴ  ＴＣＡ  ＧＣＡ  ＧＣＡ  ＣＧＴ  ＡＣＣ  ＧＣＧ）及び４６０６−７７（ＣＧＣ  ＧＧＴ  ＡＣＧ  ＴＧＣ  ＴＧＣ  ＴＧＡ  ＡＣＴ  ＧＣＣ  ＴＣＴ  ＣＣＣ）を使用した。製造元の説明書に従って、変異誘発を実施した。テンプレートＤＮＡを図２８に示す。
【０７３２】
インビボで存在する効果器細胞のＦｃγ受容体ＩＩＩ（「ＦｃｇＲＩＩＩ」）に対するＭｘｂの結合を阻害するために、アスパラギン２９７に変異させた。目的は、ＦｃｇＲＩＩＩを発現する免疫効果器細胞によって、骨髄中の造血性前駆細胞の何れかの死滅を最小化することであった。効果器細胞における本受容体の結合は、ＡＤＣＣ（抗体依存性の細胞仲介性細胞毒性）を引き起こす。例えば、Ｒａｄａｅｖら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００１  Ｍａｙ  １１；２７６（１９）：１６４７８−８３及びＲａｄａｅｖら、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２００１  Ｍａｙ  １１；２７６（１９）：１６４６９−７７を参照されたい。
【０７３３】
変異誘発の後、コロニーを拾い、配列分析を介して、正確なＤＮＡ配列を確認した。
【０７３４】
製造元の説明書に従って、Ｑｉａｇｅｎ  Ｃｏｍｐａｃｔ  Ｐｒｅｐ  Ｋｉｔを使用して、クローンＭｘｂ５番−ｈｕＦｃ−Ｎ２９７Ｓ（２１４５７）、Ｍｘｂ１０番−ｈｕＦｃ−Ｎ２９７Ｓ（２１４８０）、Ｍｘｂ３０番−ｈｕＦｃ−Ｎ２９７Ｓ（２１４８１）及びｃｙｎｏ−Ｆｃ  Ｎ２９７Ｓ（２１４５６）のＤＮＡ多量調製物（ｍａｘｉｐｒｅｐ）を調製した。ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を介して、５’ＨｉｎｄＩＩＩ部位及び３’ＢａｍＨＩ部位を各クローンに付加した。ＰＣＲ反応のためのテンプレートＤＮＡとして、上述の多量調製物を使用した。
【０７３５】
Ｍｘｂ５番−ｈｕＦｃ−Ｎ２９７Ｓ、Ｍｘｂ１０番−ｈｕＦｃ−Ｎ２９７Ｓ、及びＭｘｂ３０番−ｈｕＦｃ−Ｎ２９７ＳのためのＰＣＲにおいて、プライマー４６１１−６３（ＧＡＣ  ＴＧＣ  ＡＡＧ  ＣＴＴ  ＧＡＣ  ＡＣＣ  ＡＴＧ  ＧＧＧ  ＴＣＡ  ＡＣＣ  ＧＣＣ）及び４６１１−６４（ＧＣＡ  ＴＡＣ  ＧＧＡ  ＴＣＣ  ＴＣＡ  ＴＴＴ  ＡＣＣ  ＣＧＧ  ＡＧＡ  ＣＡＧ）を使用した（図２７）。
【０７３６】
（カニクイザルＦｃを有する）Ｍｘｂ５に関し、ＰＣＲ反応において、クローン５のｓｃＦｖを増幅し、５’ＨｉｎｄＩＩＩ部位を付加するために、プライマー４６１１−６３及び４６０６−８４（ＣＡＴ  ＧＧＧ  ＧＧＴ  ＧＴＧ  ＡＡＣ  ＴＣＴ  ＧＣＧ  ＧＣＣ  ＧＣＴ  ＡＧＧ  ＡＣＧ  Ｇ）を使用した。ＰＣＲ反応において、ｃｙｎｏ−Ｆｃ  Ｎ２９７Ｓを増幅し、３’ＢａｍＨＩ部位を付加するために、プライマー４６０６−８３（ＣＣＧ  ＴＣＣ  ＴＡＧ  ＣＧＧ  ＣＣＧ  ＣＡＧ  ＡＧＴ  ＴＣＡ  ＣＡＣ  ＣＣＣ  ＣＡＴ  Ｇ）及び４６１１−６５（ＧＣＡ  ＴＣＡ  ＧＧＡ  ＴＣＣ  ＴＣＡ  ＴＴＴ  ＡＣＣ  ＣＧＧ  ＡＧＡ  ＣＡＣ）を使用した。次に、重複伸長「ＳＯＥする」ＰＣＲ反応による遺伝子スプライシングにおいて、テンプレートとして、クローン５のｓｃＦｖ増幅産物及びｃｙｎｏ−Ｆｃ  Ｎ２９７Ｓ増幅産物を使用した（図２７）。前記反応において、プライマー４６１１−６３及び４６１１−６５を使用した。
【０７３７】
Ｅｘｐａｎｄ  Ｈｉｇｈ  Ｆｉｄｅｌｉｔｙ  ＰＣＲ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｒｏｃｈｅ、Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、ＩＮ、カタログ番号１１７３２６５０００１）を使用するＭＪ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｅｌｔｉｅｒ  Ｔｈｅｒｍａｌ  Ｃｙｃｌｅｒ（ＰＴＣ、Ｗａｌｔｈａｍ、ＭＡ）において、全てのＰＣＲ反応を実施した。ＰＣＲのための反応及び条件を図２７に示す。
【０７３８】
ＰＣＲ増幅の後、製造元の説明書に従って、ＱｉａｇｅｎのＱｉａｑｕｉｋ  Ｇｅｌ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔを使用して、増幅産物を全てカラム精製した。次に、増幅産物をＨｉｎｄＩＩＩで９０分間切断した。製造元の説明書に従って、ＱｉａｇｅｎのＱｉａｑｕｉｋ  Ｇｅｌ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔを使用して、増幅産物をカラム精製した。次に、増幅産物をＢａｍＨＩで９０分間切断した。製造元の説明書に従って、ＱｉａｇｅｎのＱｉａｑｕｉｋ  Ｇｅｌ  Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  Ｋｉｔを使用して、切断産物をゲル精製した後、Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏｌａｂのＴ４リガーゼを使用して、ｐＴＴ５  ＢａｍＨＩ／ＨｉｎｄＩＩＩに一晩連結した。
【０７３９】
翌日、連結産物をカラム精製し、電気穿孔法を介して、ＤＨ１０Ｂ細胞に形質転換した。次に、配列決定用にコロニーを拾い、配列決定した。４個のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質配列を図２９に表す。
【０７４０】
（実施例２２）
カニクイザルにおけるＭｘｂ５、Ｍｘｂ１０及びＭｘｂ３０の用量漸増研究
実施例２１に記載されている４個のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質の各々をカニクイザルに静脈内投与し、静脈内投与後の薬力学的効果（血液学的効果）及び薬物動態（ＰＫ）効果を測定した。実施例２１に記載されているように、検査されたｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質のＦｃ領域は、ＦｃｇＲＩＩＩに対して結合する能力を欠失していた。ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質において使用されるヒト点変異体Ｆｃは、ＦｃｇＲＩＩＩ結合に必要とされるグリコシル化部位を欠失しているヒトＩｇＧ１点変異体Ｆｃであった。ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質において使用されるカニクイザル点変異体Ｆｃは、ＦｃｇＲＩＩＩ結合に必要とされるグリコシル化部位をこれもまた欠失しているｃｙｎｏＩｇＧ１Ｆｃであった。検査されるｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質は、Ｍｘｂ５ヒト点変異体Ｆｃ（非グリコシル化Ｆｃ）、Ｍｘｂ５カニクイザル点変異体Ｆｃ（非グリコシル化Ｆｃ）、Ｍｘｂ１０ヒト点変異体Ｆｃ（非グリコシル化Ｆｃ）及びＭｘｂ３０ヒト点変異体Ｆｃ（非グリコシル化Ｆｃ）であった。
【０７４１】
本研究において、２ｋｇと４ｋｇとの間の体重の合計１８匹の雌カニクイザルを使用した。以下の６個の実験群にサルを分けた。
【０７４２】
１．媒体対照（１０ｍＭリン酸カリウム、１６１ｍＭＬ−アルギニン、ｐＨ７．５）
２．陽性対照群（Ｐｅｇ−ＮＥＳＰ）
３．Ｍｘｂ５番ヒト点変異体Ｆｃ
４．Ｍｘｂ１０番ヒト点変異体Ｆｃ
５．Ｍｘｂ３０番ヒト点変異体Ｆｃ
６．Ｍｘｂ５番カニクイザル点変異体Ｆｃ
【０７４３】
研究の期間は３１日間であり、ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質又は対照試料を各動物に静脈内注射によって２回投与した。ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質、媒体対照及び陽性対照（Ｐｅｇ−ＮＥＳＰ）の投与は、研究の第１日目及び第１５日目に実施した。各ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質注射の用量は、第１日目の第一の投与に関して、１０ｍＭリン酸カリウム、１６１ｍＭＬ−アルギニン、ｐＨ７．５中の０．５ｍｇ／ｋｇ、第１５日目の第二の投与に関して、１０ｍＭリン酸カリウム、１６１ｍＭＬ−アルギニン、ｐＨ７．５中の５ｍｇ／ｋｇであった。Ｐｅｇ−Ｎｅｓｐの用量は、両注射に関して、０．０３ｍｇ／ｋｇであった。媒体対照（１０ｍＭリン酸カリウム、１６１ｍＭＬ−アルギニン、ｐＨ７．５）の用量は、両注射に関して、１ｍＬ／ｋｇであった。
【０７４４】
静脈内投与の後、投与前（第−２日目）、投与前（第１日目）並びに第一の用量が投与された１２０、１９２、２８８、３６０、４５６、５２８、６２４及び６９６時間後、ＰＫ及び血液学的分析用に血液（約１ｍＬ）を各動物から回収した。
【０７４５】
データの予備分析は、Ｍｘｂ５、Ｍｘｂ１０及びＭｘｂ３０間の差異を示した。図２６Ａ及び図２６Ｂを参照されたい。５ｍｇ／ｋｇで投与されたとき、Ｍｘｂ５の２個の変異体は、網状赤血球レベル及びヘモグロビンレベルの低下を誘導したが、Ｍｘｂ３０及びＭｘｂ１０は、網状赤血球又はヘモグロビンに何れの低下も誘導しなかった。さらに、第一の用量の投与後第５日目に、Ｍｘｂ１０を投与されたサルにおける網状赤血球レベルの増大は、投与前の網状赤血球基線レベルと比較した場合、統計的に有意であった（ｐ＝０．０２９、Ｆ検定）。
【０７４６】
（実施例２３）
ＥｐｏＲの抗ＥｐｏＲ  ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質アラニン走査のエピトープマッピング
リガンドに複合体形成したＥｐｏＲの細胞外リガンド結合ドメインの結晶構造は、決定されている（Ｓｙｅｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  ３９５，  ５１１−６（１９９８））。この情報を使用して、抗体結合に関与する個々の表面残基をマッピングするのに使用され得る変異体のパネルを作製した。アラニン走査戦略をＥｐｏＲに関して遂行した。変異するための残基を選択するのに使用された方法は、コンピュータによる機構及び相互作用構造分析の両者を包含した。全ての残基を赤色に着色した。次に、二量体中の全ての残基の溶媒曝露を算出した。表面積が６０Å２以上の残基又は溶媒曝露率が５０％以上の残基を、緑色に着色した。次に、正のΦ角度を有するグリシンを赤紫色に着色し、Ｎ末端螺旋をキャッピングする理由から、Ａｓｐ８及びＰｒｏ９も同様に着色した。次に、表面間隙を充填するために、残基（青に着色）を選択した。次に、表面の方に向いている残基に関する構造を観察することによってさらなる残基を選択したが、溶媒曝露算出においては前記残基を除外した。これらは、青緑色に着色した。変異数を９５にまで下げるために、プロリン、順に、特に残基２３、５０及び２０３を赤紫色に着色した。次に、溶媒曝露及び溶媒曝露率によって、青緑色の残基を選別した。各測定の上位６個をそのままにしたが、残りは、赤紫色に着色した。非アラニン残基をアラニンに変異させ、アラニンをセリンに変異させた。
【０７４７】
抗原に対する抗体の結合は、抗体結合領域における抗原の表面積を覆う。この抗体残基の覆われた区画には、抗体結合に直接関与する残基、及び結合に直接関与し得ない抗体結合領域中にある残基の両者が含まれる。抗原残基の覆われた区画は、抗原上の構造的エピトープを規定する。アラニン走査によって抗体を結合することに直接関与するものとしては見られないこの覆われた区画内の残基は、他の相互作用を通じて抗体結合全体に関与しているかもしれない。
【０７４８】
アラニン走査は、変異した残基が、機能的エピトープの一部であるかどうかを検査する方法である。機能的エピトープとは、抗体結合に直接関与する抗原中の残基を指す。単一部位のアラニン変異体を使用して、抗体結合に直接関与する側鎖を有する抗原中で残基を決定する。アラニンは、グリシン以外の他の全ての残基よりも小さな側鎖を有し、それゆえ、側鎖結合部位の損失を生じ、抗体結合に影響する。
【０７４９】
エピトープマップの異なる種類は、構造的エピトープ、接触しているか又は抗体によって埋没されている抗原中の残基である。抗原中にある義認変異体を導入することは、残基が、構造的エピトープの一部であるかどうかを検査する方法である。アルギニン側鎖は、大きくかつ分厚く、野生型残基が、抗体結合に直接関与しているかどうかに関わらず、抗体結合を効果的に遮断する。従って、単一部位のアルギニン変異体を使用して、覆われた区画中にある抗原中の残基を決定した。アルギニンに変異した抗原残基が、抗体の結合を調節する場合、前記残基は、構造的エピトープの一部であると示唆される。抗原野生型残基が、アルギニンである場合、グルタミン酸に変異される。
【０７５０】
アラニン変異体の構築、発現及び特徴づけ
標準的な技術に従って、９５個の個々のアラニン又はセリン変異体を作製した。変異した残基を含有するセンス及びアンチセンスオリゴヌクレオチドを９６ウェルフォーマットにおいて合成した。製造元の説明書に従って、Ｑｕｉｃｋｃｈａｎｇｅ  ＩＩキット（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）を使用して、野生型（ＷＴ）ｈｕＥｐｏＲの変異誘発を実施した。変異体は全て、ｐＴＴ５ベクター中で構築し、Ｃ末端で６ｘＨｉｓ−Ａｖｉｔａｇ（Ａｖｉｄｉｔｙ，ＬＬＣ，Ｄｅｎｖｅｒ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ）でタグ付けした。変異誘発反応及び形質転換を９６ウェルフォーマットで実施した。２９３６−Ｅ懸濁細胞（ＮＲＣＣ）を一過的に形質移入した。条件培地中の組換えタンパク質の発現レベル及び完全性を、ウェスタン分析によってチェックした。平均発現レベルは、〜５μｇ／ｍＬであると概算された；６個の変異体は発現しなかったが、別の８個の変異体は不十分に発現した。
【０７５１】
ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインにおける位置によって、全てのアミノ酸残基を同定した。以下の変異体は、発現が全くないか又は発現が不十分であるために、マッピングされたエピトープである可能性がなかった：Ｒ３２Ａ、Ｓ５４Ａ、Ｋ６５Ａ、Ｑ７１Ａ、Ｗ８２Ａ、Ｒ１０８Ａ、Ｗ２０９Ａ及びＷ２１２Ａ。最後に、変異した残基Ｆ２０８Ａ及びＰ８６Ａは、ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質全部の結合に影響しており、不正確に折りたたまれたようである。従って、前記残基は、抗体結合を低下させるにもかかわらず、エピトープの一部であるとは考えられなかった。可能な場合、正確に折りたたまれたことを確認するために、Ｅｐｏに結合する能力に関して変異体をチェックした。
【０７５２】
アッセイ方法論
１．ＥＬＩＳＡ結合アッセイ
ＥＬＩＳＡ結合アッセイを使用して、関心対象の変異体タンパク質を含有する条件上清に対する抗ＥｐｏＲ抗体の結合を測定した。１×ＰＢＳで精製されたｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質１００μＬをＮｕｎｃ  Ｍａｘｉｓｏｒｐプレート上に被膜し、４℃で一晩定温放置した。使用されるｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質は全て、ＩｇＧ１由来のＦｃを有していた。２％ＢＳＡ／ＰＢＳ／０．１％トゥイーン２０でウェルを室温で１時間遮断した後、プレートをＰＢＳ／０．１％トゥイーン２０で３回洗浄した。ＷＴタンパク質に相対的なゲル濃度測定に基づいて、ＥｐｏＲ変異体タンパク質濃度を標準化した。抗６×Ｈｉｓモノクローナル抗体−ＨＲＰ（Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ）の１：５０００の定常希釈も含有する０．１％ＢＳＡ／ＰＢＳ／０．１％トゥイーン２０中に、ＥｐｏＲ変異体タンパク質を３倍連続希釈したＥｐｏＲ変異体／抗６×Ｈｉｓモノクローナル抗体−ＨＲＰ混合物を室温で２時間捕捉した。ＴＭＢ（３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン）を基質として使用し、プレートリーダー上で４５０ｎｍで吸光度を測定した。非直線回帰分析（シグモイド状用量−反応、可変傾斜）によって、結合データを分析し、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）ソフトウェアを使用して、ＥＣ５０値を算出した。消滅した結合又は野生型に対して５０％ほど結合の低下した変異が、エピトープの一部であることが示唆された。代表的なデータを図３０に示す。
【０７５３】
２．ＥｐｏＲ  ＬＡＮＣＥ結合アッセイ
Ｅｕ−キレート結合抗ＩｇＧモノクローナル抗体及びＡＰＣ結合抗ｐＨｉｓモノクローナル抗体を使用する、ＥｐｏＲ−抗体結合のための均一なＬＡＮＣＥ  ＦＲＥＴ（蛍光共鳴エネルギー転移）アッセイも使用した。野生型タンパク質に相対的なゲル濃度測定に基づいて、ＥｐｏＲ変異体濃度を標準化した。精製された抗ＥｐｏＲ  ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質（１．５ｎＭ）、０．７５ｎＭ  Ｅｕキレート標識抗ＩｇＧモノクローナル抗体（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）及び３５ｎＭ  ＡＰＣ抗Ｈｉｓモノクローナル抗体（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）の混合物中で、変異体ＥｐｏＲタンパク質を２倍連続希釈した。試料を室温で２時間定温放置した後、５３５ｎｍでの励起及び６５５ｎｍでの検出を蛍光プレートリーダーで実施した。エピトープの一部であると示唆されたＥｐｏＲ変異体は、ＦＲＥＴシグナルを低下又は消滅させる。結合データをプロットして、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍ（登録商標）ソフトウェアを使用して、結合曲線及びＥＣ５０値を生じた。消滅した結合又は野生型に対して５０％ほど結合の低下した変異が、エピトープの一部であることが示唆された。代表的なデータを図３１に示す。
【０７５４】
アルギニン走査
上述のように、ヒトＥｐｏ受容体の細胞外ドメインにおける位置によって、全てのアミノ酸残基を同定した。以下の変異体：Ｅ３４Ｒ、Ｅ６０Ｒ、Ｐ６３Ｒ、Ｗ６４Ｒ、Ｔ８７Ｒ、Ａ８８Ｒ、Ｒ９９Ｅ、Ａ１０３Ｒ、Ｖ１１２Ｒ、Ｍ１５０Ｒ、Ｈ１５３Ｒ及びＡ１６６Ｒも、アラニン変異体と同一の方法によって作製した。アルギニン変異体は、アラニン変異体よりも大きな構造的混乱を導入すると期待され、従って、これらの残基に関する本発明者の指摘を確認した。
【０７５５】
８個の候補アゴニストｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質Ｍｘｂ２番、５番、７番、１０番、１３番、１５番、２９番及び３０番をマッピングした。ＬＡＮＣＥ及びＥＬＩＳＡアッセイの両者によるＷＴに対して５０％超ほど結合を低下させるか又は結合を消滅させるアラニン変異の要約を、表６に示す。ＥＬＩＳＡアッセイによって、ＷＴに対して５０％超ほど結合を低下させ、又は結合を消滅させるアルギニン変異の要約も、表６に示す。前記表は、表中に列挙されていない他の残基を、エピトープの一部であることから排除しない。前記残基は、変異されていなかった可能性があり、又は、本アッセイは、エピトープの一部であるとして前記残基を同定するのに十分な感度がなかった可能性がある。
【０７５６】
【表６】
2009533057.tif 000143
2009533057.tif 000144
【０７５７】
これらの抗体に対するエピトープは、２つの別個のクラスに分類される。
第一のクラスは、Ｅｐｏ競合的ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質である（Ｍｘｂ２、Ｍｘｂ５、Ｍｘｂ７及びＭｘｂ１０）。第二のクラスは、Ｅｐｏと競合しないｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質である（Ｍｘｂ３０、Ｍｘｂ１３、Ｍｘｂ１５及びＭｘｂ２９）。これらのデータは、非Ｅｐｏ競合的ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質が、二量体のリガンド結合ポケットに対して遠位の領域に結合することによってＥｐｏＲ受容体を刺激するという仮説と一致する。
【０７５８】
（実施例２４）
ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質可変重鎖及び可変軽鎖ＣＤＲ領域の配列アラインメント及び系統発生分析：
ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質のＣＤＲ間の多様性を決定するために、ＣＤＲの電子スプライシングを使用した。まず、ＣＤＲ領域を同定した。次に、フレームワークを配列から除去し、小ペプチド配列をＣＤＲ間のリンカーとして使用した。電子的にスプライスした配列の多重アラインメントを使用して、系統発生樹を作成した。可変重鎖配列及び可変軽鎖配列の両者に関して、本過程を使用した。ＭｉｎｉＰｉｌｅｕｐプログラム（ＣＧＣソフトウェア）を使用して、多重アラインメント及び系統発生樹を作成した（図３３及び図３４）。系統発生近隣接合分析において、結果を要約する（図３４）。クローン３０７、クローン２、クローン３１８、クローン３７８、クローン３３０、クローン２７６、クローン３５２、クローン７、クローン５及びクローン３２３は、可変重鎖ＣＤＲ領域において、同一性の比較的高レベルを共有している。これらのクローンのうち、可変軽鎖のアミノ酸配列の多様性は、主としてＣＤＲ３領域において見られる。クローン１６、クローン２０１、クローン１５、クローン１３、クローン１０、クローン２９５、クローン２９、クローン３４、クローン３１９及びクローン３０は、可変重鎖及び可変軽鎖の両ＣＤＲにおいて、配列変動のより高いレベルを示す。
【図面の簡単な説明】
【０７５９】
【図１】図１は、実施例１において論議される作業に従って、ヒトｓｃＦｖファージディスプレイライブラリからＥｐｏＲアゴニスト抗体をスクリーニングするための工程の流れ図を示す。
【図２】図２は、実施例２に論議される作業に従って、ファージディスプレイライブラリから、哺乳動物発現構築物におけるｓｃＦｖ−Ｆｃフォーマットに流線を変換することを記載する模式図を示す。ＮｃｏＩ及びＰｃｉＩは、連結のための付着末端を作製する。ｓｃＦｖ  ＮｃｏＩ／ＮｏｔＩ制限断片のＰｃｉＩ／ＮｏｔＩ制限ｐＤＣ４０９ａ−ｈｕＧ１Ｆｃベクターへのバッチごとの変換の過程は、非常に効率的である。
【図３】図３は、実施例３において論議される作業に従った、細胞に結合している抗体のＦＡＣＳ分析を示す。染色に使用される抗体及びＥｐｏ濃度は、５μｇ／ｍＬである。パネルＡは、染色中のヒトＥｐｏの存在下（実線）及び非存在下（点線）でのｓｃＦｖ−Ｆｃにおけるクローン２、クローン５、クローン７、クローン１０又はクローン３０の結合の際のＵＴ−７細胞の蛍光強度を示す。使用される抗体及びＥｐｏ濃度は両者とも、５μｇ／ｍＬである。陰影の付いた曲線は、何れの一次抗体も有しないフィコエリトリン結合ヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）２のみによる染色によるものである。パネルＢは、ｓｃＦｖ−Ｆｃにおけるクローン２、クローン５、クローン７、クローン１０又はクローン３０の結合の際のＣＯＳ−１細胞の蛍光強度を示す（実線）。陰影の付いた曲線は、何れの一次抗体も有しないフィコエリトリン結合ヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）２のみによる染色によるものである。
【図４】図４は、実施例５に論議される作業に従ったＥＬＩＳＡによる、クローン番号２、５、７、１０及び３０の可溶性ｈｕＥｐｏＲに対する競合的結合を示す。パネルＡは、ｓｃＦｖ−Ｆｃフォーマットにおけるクローン５ファージとクローン２、クローン５、クローン７、クローン１０又はクローン３０との間の競合的結合を示す。パネルＢは、ｓｃＦｖ−Ｆｃフォーマットにおけるクローン３０ファージとクローン２、クローン５、クローン７、クローン１０及びクローン３０との間の競合的結合を示す。
【図５】図５は、実施例６に論議される作業に従ったＥＬＩＳＡによるマウスＥｐｏＲ（ｍｕＥｐｏＲ）タンパク質に結合しているクローン２、クローン５、クローン７、クローン１０又はクローン３０抗体を示す。白いバーは、ＩｇＧ２フォーマットにおける結合を示す。
【図６】図６は、実施例７で論議される作業に従った、ＣＭ４チップ上で捕捉されたクローン２、クローン５、クローン７、クローン１０及びクローン３０のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質に対するｈｕＥｐｏＲタンパク質のビアコアセンソグラム（ｓｅｎｓｏｇｒａｍ）を示す。
【図７】図７は、実施例８に論議される作業に従った、マキシボディＭｘｂ２、Ｍｘｂ５、Ｍｘｂ７、Ｍｘｂ１０及びＭｘｂ３０に関するｈｕＥｐｏＲの活性化の用量−力価曲線を示す。Ｍｘｂ５、Ｍｘｂ１０及びＭｘｂ３０に関しては１０００、３３３、１１１、３７．０４、１２．３５、４．１１５、１．３７２、０．４５７、０．１５２、０．０５１、０．０１７及び０．００６ｎＭの、Ｍｘｂ２及びＭｘｂ７に関しては２５００、１２５０、６２５、３１２．５、１５６．２５、７８．１２５、３９．０６２５、１９．５３１２５、９．７６５６２５、４．８８２８１３、２．４４１４０６、１．２２０７０３、０．６１０３５２、０．３０５１７５８、０．１５２５８７９、０．７６２９４、０．０３８１４７、０．０１９０７３、０．００９５３７、０．００４７６８、０．００２３８４、０．００１１９２、０．０００５９６、０．０００２９８ｎＭの終濃度に関して、３個組で、９６ウェルプレート中の連続希釈したマキシボディと共に、ＵＴ−７−Ｌｕｃ細胞（ルシフェラーゼリポーター遺伝子を含有するＵＴ−７細胞）を６時間処理した。組換えヒトＥｐｏを基準標準物質として使用し、各マキシボディを検査するのに使用されるのと同一のプレート中で連続希釈した。Ｍｘｂ２、Ｍｘｂ５、Ｍｘｂ１０及びＭｘｂ３０に関しては以下の濃度：１００、１、１、０．１、０．０１及び０．００１ｎＭで、Ｍｘｂ７に関しては以下の濃度：１４８８、７４４、３７２、１８６、９３、４６．５、２３．２、１１．６、５．８、２．９、１．５、０．７１、０．３６、０．１８、０．０９、０．０４５、０．０２３、０．０１１、０．００６、０．００３、０．００１５、０．０００７、０．０００４、０．０００２ｎＭで、３個組で各Ｅｐｏ希釈を実施した。ルシフェラーゼ基質の添加後、９６ウェルプレートルミノメーター上でルシフェラーゼ活性を読み取った。背景発光（培地のみを含有するウェル由来の値）を減じることによって生データを処理し、３つの値の平均±標準偏差として表した。
【図８】図８は、実施例９において論議される作業に従った、ｈｕＥｐｏＲの誘導におけるＩｇＧ２タンパク質（抗体）及びｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質（Ｍｘｂ）に関する最大活性レベルの比較を示す。各検査試薬に関するルシフェラーゼの最大活性は、各個々のプレート上のｒＨｕＥｐｏの用量力価曲線から取られたｒＨｕＥｐｏ標準物質に関するルシフェラーゼの最大活性によって除された各ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質及びＩｇＧ２タンパク質の用量力価曲線から取った最高値であった。この比は、上述に表され、３つの値の平均±標準偏差である。
【図９】図９は、実施例１０において論議される作業に従った、シグナル伝達分子Ｓｔａｔ５及びＡｋｔのリン酸化によって示されるｒＨｕＥｐｏ、Ｍｘｂ２及びＩｇＧ２２によるＵＴ−７細胞の活性化を示す。
【図１０】図１０は、実施例１１において論議される作業に従って、ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質Ｍｘｂ２、Ｍｘｂ５、Ｍｘｂ７及びＭｘｂ３０が、ＣＤ３４＋ヒト末梢血前駆細胞（ＣＤ３４＋ＰＢＰＣ）を活性化し、ＢＦＵ−Ｅ由来のコロニーの産生を刺激することを示す。
【図１１】図１１は、実施例１２Ａにおいて論議される作業に従って、用量依存的であり、ＰＥＧ−ＮＥＳＰで処置した動物においてよりも有意に長い期間にわたって持続する網状赤血球数の増加を、Ｍｘｂ５の単回注射が生じることを示す。
【図１２】図１２は、実施例１２Ａにおいて論議される作業に従って、用量依存的であり、ＰＥＧ−ＮＥＳＰで処置した動物においてよりも有意に長い期間にわたって持続するヘモグロビンレベルの増大を、Ｍｘｂ５の単回注射が生じることを示す。
【図１３】図１３は、実施例１２Ｂにおいて論議される作業に従って、用量依存的であり、ＰＥＧ−ＮＥＳＰで処置した動物においてよりも有意に長い期間にわたって持続する網状赤血球数の増加を、Ｍｘｂ７の単回注射が生じることを示す。
【図１４】図１４は、実施例１２Ｂにおいて論議される作業に従って、用量依存的であり、ＰＥＧ−ＮＥＳＰで処置した動物においてよりも有意に長い期間にわたって持続するヘモグロビンレベルの増大を、Ｍｘｂ７の単回注射が生じることを示す。
【図１５】図１５は、実施例１２Ｃにおいて論議される作業に従って、用量依存的であり、ＰＥＧ−ＮＥＳＰで処置した動物においてよりも有意に長い期間にわたって持続する網状赤血球数の増加を、Ｍｘｂ１０の単回注射が生じることを示す。
【図１６】図１６は、実施例１２Ｃにおいて論議される作業に従って、用量依存的であり、ＰＥＧ−ＮＥＳＰで処置した動物においてよりも有意に長い期間にわたって持続するヘモグロビンレベルの増大を、Ｍｘｂ１０の単回注射が生じることを示す。
【図１７】図１７は、実施例１２Ｄにおいて論議される作業に従って、ＰＥＧ−ＮＥＳＰで処置した動物において測定されるものと同様の期間にわたって持続する網状赤血球数の増加を、Ｍｘｂ２の単回注射が生じることを示す。
【図１８】図１８は、実施例１２Ｄにおいて論議される作業に従って、ＰＥＧ−ＮＥＳＰで処置した動物においてよりも有意に長い期間にわたって持続するヘモグロビンレベルの増大を、Ｍｘｂ２の単回注射が生じることを示す。
【図１９】図１９は、実施例１３において論議される作業に従った、Ｍｘｂ５（「５番ｓｃｆｖ−Ｆｃ」）及びＩｇＧ１５（「５番ＩｇＧ１」）の血清濃度における経時的変化を示す。
【図２０】図２０は、実施例３１において論議される作業に従った、マウスにおけるＩｇＧ１５及びＭｘｂ５の薬物動態パラメータを示す。
【図２１】図２１は、Ｍｘｂ２、Ｍｘｂ５、Ｍｘｂ７、Ｍｘｂ１０及びＭｘｂ３０由来のＣＤＲを示す。
【図２２】図２２は、実施例１５において論議される作業に従った、細胞に結合している特定のｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質のＦＡＣＳ分析を示す。染色に使用される抗体及びＥｐｏ濃度は、５μｇ／ｍＬである。陰影の付いた曲線は、何れの一次抗体も有しないフィコエリトリン結合ヤギ抗ヒトＦ（ａｂ’）２のみによる染色によるものである。パネルＡ：染色中のヒトＥｐｏの存在下（実線）及び非存在下（点線）でのＭｘｂ１３、Ｍｘｂ１５、Ｍｘｂ１６、Ｍｘｂ２９又はＭｘｂ３４の結合の際のＵＴ−７細胞の蛍光強度。パネルＢ．Ｍｘｂ１３、Ｍｘｂ１５、Ｍｘｂ１６、Ｍｘｂ２９又はＭｘｂ３４の結合の際のＣＯＳ−１細胞の蛍光強度（実線）。
【図２３】図２３は、実施例１５、１６及び１７において論議される作業に従った、ＥｐｏＲ結合及びｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質の競合的結合を示す。ヒト（ｈｕ）、マウス（ｍｕ）及びカニクイザル（ｃｙｎｏ）に結合するＥｐｏＲを、ＥＬＩＳＡ及びＦＡＣＳによって検査した。ＥｐｏＲに結合するためにクローン２、クローン５、クローン７、クローン１０、クローン１３、クローン１５、クローン１６、クローン２９、クローン３０又はクローン３４と競合するＥｐｏの能力を、ＵＴ−７細胞においてＦＡＣＳによって検査した。ＥｐｏＲに結合するためにクローン２０１、クローン２７６、クローン２９５、クローン３０７、クローン３１８、クローン３１９、クローン３２３、クローン３３０、クローン３５２又はクローン３７８と競合するＥｐｏの能力を、競合ＥＬＩＳＡによって検査した。ＥｐｏＲに結合するためにクローン２、クローン５、クローン７、クローン１０、クローン１３、クローン１５、クローン１６、クローン２９、クローン３０又はクローン３４と競合するクローン５の能力を、プレートベースのＥＬＩＳＡによって検査した。ＥｐｏＲに結合するためにクローン２、クローン５、クローン７、クローン１０、クローン１３、クローン１５、クローン１６、クローン２９、クローン３０又はクローン３４と競合するクローン３０の能力を、プレートベースのＥＬＩＳＡによって検査した。
【図２４】図２４は、実施例２０において論議される作業に従って、ある期間にわたって持続する網状赤血球数の増加を、Ｍｘｂ２７６＿Ｇ１ＭＢの単回注射が生じることを示す。
【図２５】図２５は、実施例２０において論議される作業に従って、ある期間にわたって持続するヘモグロビンの増大を、Ｍｘｂ２７６＿Ｇ１ＭＢの単回注射が生じることを示す。ヘモグロビンの増大は、ＰＥＧ−ＮＥＳＰで処置された動物においてよりも有意に長く持続する。
【図２６Ａ】図２６Ａは、実施例２２において論議される作業に従った、Ｍｘｂ５ヒト点変異体Ｆｃ（非グリコシル化Ｆｃ）（図中では「ｈｕＭｘｂ５番」）、Ｍｘｂ５カニクイザル点変異体Ｆｃ（非グリコシル化Ｆｃ）（図中では「ｃｙｎｏＭｘｂ５番」）、Ｍｘｂ１０ヒト点変異体Ｆｃ（非グリコシル化Ｆｃ）（図中では「ｈｕＭｘｂ１０番」）及びＭｘｂ３０ヒト点変異体Ｆｃ（非グリコシル化Ｆｃ）（図中では「ｈｕＭｘｂ３０番」）、又は対照注射物（図中では「Ｐｅｇ−ＮＥＳＰ」及び「媒体」）の投与後のカニクイザルにおける網状赤血球の絶対数を示す。各サルに静脈注射によって２回投与し、注射の第一の投与は、第１日目に、第二の投与は、第１５日目に実施した。ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質の用量は、第１日目の第一の投与に関しては０．５ｍｇ／ｋｇ、第１５日目の第二の投与に関しては０．０３ｍｇ／ｋｇであった。Ｐｅｇ−Ｎｅｓｐの用量は、両注射に関して０．０３ｍｇ／ｋｇであった。媒体対照（図中では「媒体」）（１０ｍＭリン酸カリウム、１６１ｍＭＬ−アルギニン、ｐＨ７．５）の用量は、両注射に関して、１ｍＬ／ｋｇであった。
【図２６Ｂ】図２６Ｂは、実施例２２において論議される作業に従った、ｈｕＭｘｂ５番、ｃｙｎｏＭｘｂ５番、ｈｕＭｘｂ１０番及びｈｕＭｘｂ３０番又は対照注射物の投与後の各群に関する網状赤血球基線レベルの％としてグラフ化された網状赤血球数を示す。網状赤血球基線レベルは、第一の投与の前の第１日目に回収された血液の分析から得た。各サルに静脈注射によって２回投与し、検査標品の第一の投与は、第１日目に、第二の投与は、第１５日目に実施した。ｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質の用量は、第１日目の第一の投与に関しては０．５ｍｇ／ｋｇ、第１５日目の第二の投与に関しては５ｍｇ／ｋｇであった。Ｐｅｇ−Ｎｅｓｐの用量は、両注射に関して０．０３ｍｇ／ｋｇであった。媒体対照の用量は、両注射に関して１ｍＬ／ｋｇであった。
【図２７】図２７は、実施例２１において論議される作業に従って構築物を作製するために使用される特定のＰＣＲ反応条件を示す。
【図２８Ａ】図２８Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤは、実施例２１において論議される作業に従った、ヒト及びカニクイザルのＦｃにおけるＮ２９７Ｓのグリコシル化部位の変異誘発のためのテンプレートとして使用したアミノ酸配列を示す。赤色でハイライトを付されたアミノ酸は、Ｎ２９７Ｓの変異が生じていることを示す。黄色の部分は、ＶＨ５リーダー配列であり、緑色は、ｓｃＦｖであり、青色は、Ｆｃ領域である。図２８Ａ、２８Ｂ及び２８Ｃ中の白色の部分は、もとのｓｃＦｖライブラリ由来のＧ及び、クローニングを容易にするために制限部位に導入したアミノ酸を含む。
【図２８Ｂ】図２８Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤは、実施例２１において論議される作業に従った、ヒト及びカニクイザルのＦｃにおけるＮ２９７Ｓのグリコシル化部位の変異誘発のためのテンプレートとして使用したアミノ酸配列を示す。赤色でハイライトを付されたアミノ酸は、Ｎ２９７Ｓの変異が生じていることを示す。黄色の部分は、ＶＨ５リーダー配列であり、緑色は、ｓｃＦｖであり、青色は、Ｆｃ領域である。図２８Ａ、２８Ｂ及び２８Ｃ中の白色の部分は、もとのｓｃＦｖライブラリ由来のＧ及び、クローニングを容易にするために制限部位に導入したアミノ酸を含む。
【図２８Ｃ】図２８Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤは、実施例２１において論議される作業に従った、ヒト及びカニクイザルのＦｃにおけるＮ２９７Ｓのグリコシル化部位の変異誘発のためのテンプレートとして使用したアミノ酸配列を示す。赤色でハイライトを付されたアミノ酸は、Ｎ２９７Ｓの変異が生じていることを示す。黄色の部分は、ＶＨ５リーダー配列であり、緑色は、ｓｃＦｖであり、青色は、Ｆｃ領域である。図２８Ａ、２８Ｂ及び２８Ｃ中の白色の部分は、もとのｓｃＦｖライブラリ由来のＧ及び、クローニングを容易にするために制限部位に導入したアミノ酸を含む。
【図２８Ｄ】図２８Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤは、実施例２１において論議される作業に従った、ヒト及びカニクイザルのＦｃにおけるＮ２９７Ｓのグリコシル化部位の変異誘発のためのテンプレートとして使用したアミノ酸配列を示す。赤色でハイライトを付されたアミノ酸は、Ｎ２９７Ｓの変異が生じていることを示す。黄色の部分は、ＶＨ５リーダー配列であり、緑色は、ｓｃＦｖであり、青色は、Ｆｃ領域である。図２８Ａ、２８Ｂ及び２８Ｃ中の白色の部分は、もとのｓｃＦｖライブラリ由来のＧ及び、クローニングを容易にするために制限部位に導入したアミノ酸を含む。
【図２９Ａ】図２９Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤは、実施例２１において論議される作業に従った、変異したｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質Ｍｘｂ５番ヒト点変異体Ｆｃ、Ｍｘｂ１０番ヒト点変異体Ｆｃ、Ｍｘｂ３０番ヒト点変異体Ｆｃ、Ｍｘｂ５番カニクイザル点変異体Ｆｃの最終的なクローン及び配列を示す。赤色でハイライトを付されたアミノ酸は、Ｎ２９７Ｓ変異を示す。黄色の部分は、ＶＨ５リーダー配列であり、緑色は、ｓｃＦｖであり、青色は、Ｆｃ領域である。白色の部分は、もとのｓｃＦｖライブラリ由来のＧ及び、クローニングを容易にするために制限部位に導入したアミノ酸を含む。
【図２９Ｂ】図２９Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤは、実施例２１において論議される作業に従った、変異したｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質Ｍｘｂ５番ヒト点変異体Ｆｃ、Ｍｘｂ１０番ヒト点変異体Ｆｃ、Ｍｘｂ３０番ヒト点変異体Ｆｃ、Ｍｘｂ５番カニクイザル点変異体Ｆｃの最終的なクローン及び配列を示す。赤色でハイライトを付されたアミノ酸は、Ｎ２９７Ｓ変異を示す。黄色の部分は、ＶＨ５リーダー配列であり、緑色は、ｓｃＦｖであり、青色は、Ｆｃ領域である。白色の部分は、もとのｓｃＦｖライブラリ由来のＧ及び、クローニングを容易にするために制限部位に導入したアミノ酸を含む。
【図２９Ｃ】図２９Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤは、実施例２１において論議される作業に従った、変異したｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質Ｍｘｂ５番ヒト点変異体Ｆｃ、Ｍｘｂ１０番ヒト点変異体Ｆｃ、Ｍｘｂ３０番ヒト点変異体Ｆｃ、Ｍｘｂ５番カニクイザル点変異体Ｆｃの最終的なクローン及び配列を示す。赤色でハイライトを付されたアミノ酸は、Ｎ２９７Ｓ変異を示す。黄色の部分は、ＶＨ５リーダー配列であり、緑色は、ｓｃＦｖであり、青色は、Ｆｃ領域である。白色の部分は、もとのｓｃＦｖライブラリ由来のＧ及び、クローニングを容易にするために制限部位に導入したアミノ酸を含む。
【図２９Ｄ】図２９Ａ、Ｂ、Ｃ及びＤは、実施例２１において論議される作業に従った、変異したｓｃＦｖ−Ｆｃタンパク質Ｍｘｂ５番ヒト点変異体Ｆｃ、Ｍｘｂ１０番ヒト点変異体Ｆｃ、Ｍｘｂ３０番ヒト点変異体Ｆｃ、Ｍｘｂ５番カニクイザル点変異体Ｆｃの最終的なクローン及び配列を示す。赤色でハイライトを付されたアミノ酸は、Ｎ２９７Ｓ変異を示す。黄色の部分は、ＶＨ５リーダー配列であり、緑色は、ｓｃＦｖであり、青色は、Ｆｃ領域である。白色の部分は、もとのｓｃＦｖライブラリ由来のＧ及び、クローニングを容易にするために制限部位に導入したアミノ酸を含む。
【図３０】図３０は、実施例２３において論議された作業に従った、Ｍｘｂ１０に対して結合する変異体ＥｐｏＲタンパク質に関するＥＬＩＳＡ結合アッセイを示す。Ｅ６２Ａ、Ｆ９３Ａ及びＭ１５０Ｍは、ＷＴに対して結合を低下させ、Ｍｘｂ結合エピトープの一部であるようである。
【図３１】図３１は、実施例２３において論議された作業に従った、変異体ＥｐｏＲタンパク質に結合するＭｘｂ１０に関するＬＡＮＣＥアッセイを示す。Ｅ６２Ａ、Ｆ９３Ａ及びＭ１５０Ｍは、ＷＴに対して結合を低下させ、Ｍｘｂ１０結合エピトープの一部であるようである。
【図３２Ａ】図３２は、実施例２３において論議される作業に従った、アルギニン及びアラニンＥｐｏＲ変異体に結合するＭｘｂ１０の比較を示す。図３２Ａは、Ｗ６４のアルギニン又はアラニンへの変異が、ＷＴと比較して結合を低下させなかったことを示す。Ｗ６４Ａは、Ｍｘｂ１０エピトープの一部ではないようである。図３２Ｂは、Ｍｘｂ１０の結合が、Ｍ１５０のアラニンへの変異によって低下したことを示す。Ｍ１５０のアルギニンへの変異は、結合を大きく低下させた。
【図３２Ｂ】図３２は、実施例２３において論議される作業に従った、アルギニン及びアラニンＥｐｏＲ変異体に結合するＭｘｂ１０の比較を示す。図３２Ａは、Ｗ６４のアルギニン又はアラニンへの変異が、ＷＴと比較して結合を低下させなかったことを示す。Ｗ６４Ａは、Ｍｘｂ１０エピトープの一部ではないようである。図３２Ｂは、Ｍｘｂ１０の結合が、Ｍ１５０のアラニンへの変異によって低下したことを示す。Ｍ１５０のアルギニンへの変異は、結合を大きく低下させた。
【図３３Ａ】図３３は、実施例２４において論議される作業に従った、Ａ）可変重鎖ＣＤＲ領域及びＢ）可変軽鎖ＣＤＲ領域の配列アラインメントを示す。配列アラインメントは、電子的にスプライシングしたＣＤＲ領域を使用するＭｉｎｉＰｉｌｅｕｐプログラムに基づいた。アラインメントは、極性アミノ酸（青色）、非極性アミノ酸（赤色）、酸性アミノ酸（緑色）及び塩基性アミノ酸（黄色）を示すよう色別にコード化した。記号「＊」は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を分離するリンカー領域を表す。
【図３３Ｂ】図３３は、実施例２４において論議される作業に従った、Ａ）可変重鎖ＣＤＲ領域及びＢ）可変軽鎖ＣＤＲ領域の配列アラインメントを示す。配列アラインメントは、電子的にスプライシングしたＣＤＲ領域を使用するＭｉｎｉＰｉｌｅｕｐプログラムに基づいた。アラインメントは、極性アミノ酸（青色）、非極性アミノ酸（赤色）、酸性アミノ酸（緑色）及び塩基性アミノ酸（黄色）を示すよう色別にコード化した。記号「＊」は、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２及びＣＤＲ３を分離するリンカー領域を表す。
【図３４Ａ】図３４は、実施例２４において論議される作業に従ったＡ）可変重鎖ＣＤＲ領域及びＢ）可変軽鎖ＣＤＲ領域の系統発生分析を示す。系統樹は、ＣＤＲ領域のアミノ酸配列の近隣接合分析に基づいている。
【図３４Ｂ】図３４は、実施例２４において論議される作業に従ったＡ）可変重鎖ＣＤＲ領域及びＢ）可変軽鎖ＣＤＲ領域の系統発生分析を示す。系統樹は、ＣＤＲ領域のアミノ酸配列の近隣接合分析に基づいている。
【図３５】図３５は、実施例２４において論議される作業に従った、図３３の配列アラインメントにおける可変重鎖及び可変軽鎖のＣＤＲにおける共通配列を示す。記号「Ｘ」は、共通配列において変動し得るアミノ酸を表す。「Ｘ」の隣の下付き文字は、配列中のアミノ酸の位置を表し、例えば、「Ｘ１」は、共通配列中の最初のアミノ酸を表す。
【図３６】図３６Ａは、Ｅｐｏ受容体の全長のアミノ酸配列を示す。図３６Ｂは、Ｅｐｏ受容体の細胞外ドメインのアミノ酸配列を示す。細胞外ドメインのアミノ酸配列を使用して、実施例２３及び図３０から３２に記載されるエピトープマッピング実験においてアミノ酸を同定した。細胞外ドメインは、全長のＥｐｏ受容体のアミノ酸配列中に存在する最初の２４個のアミノ酸を欠失している。細胞外ドメインは、全長のＥｐｏ受容体のアミノ酸２５１から５０８も欠失している。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６Ａ】
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【図２６Ｂ】
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【図２７】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２８Ｃ】
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【図２８Ｄ】
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【図２９Ａ】
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【図２９Ｂ】
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【図２９Ｃ】
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【図２９Ｄ】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２Ａ】
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【図３２Ｂ】
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【図３３Ａ】
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【図３３Ｂ】
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【図３４Ａ】
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【図３４Ｂ】
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【図３５】
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【図３６】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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