(57)【要約】  アプタマー及びアミノ酸エステル又はアミド、或いは、アプタマー；二価金属カチオン；及びカルボン酸、リン脂質、ホスファチジルコリン又はスフィンゴミエリンを含む、医薬組成物。動物における状態を治療又は予防するための方法であって、該医薬組成物を該動物に投与することを含む方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の：
（ｉ）プロトン化アプタマーと医薬として許容可能な有機塩基の間で形成された塩；及び
（ｉｉ）医薬として許容可能な有機溶媒、
を含む医薬組成物。
【請求項２】
前記医薬組成物が、前記医薬として許容可能な有機溶媒中の塩の溶液である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記医薬として許容可能な有機溶媒中の前記アプタマーの濃度が、前記医薬組成物の少なくとも約２重量パーセントである、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
カルボン酸、リン脂質、スフィンゴミエリン、又はホスファチジルコリンのうちの少なくとも１つをさらに含む、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
前記有機塩基がジアミンである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項６】
カルボン酸、リン脂質、スフィンゴミエリン、又はホスファチジルコリンのうちの少なくとも１つをさらに含む、請求項５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記医薬組成物が水中に注入された場合に沈殿を形成する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項８】
前記医薬組成物が水中に注入された場合に沈殿を形成しない、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項９】
前記組成物が動物に投与された場合にデポーを形成する、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
以下の：
（ｉ）以下の式：
【化１】
2009515962.tif 000039
｛式中、
Ｒは、アミノ酸側鎖であり；そして
Ｒ1は、Ｃ1〜Ｃ22炭化水素基である。｝
により表されるアミノ酸エステル；又は
以下の式：
【化２】
2009515962.tif 000040
｛式中、
Ｒは、アミノ酸側鎖であり；
Ｒ3は、Ｃ1〜Ｃ22炭化水素基であり；そして
Ｒ4は、水素又はＣ1〜Ｃ22炭化水素基である。｝
により表される、アミノ酸アミド；及び
（ｉｉ）プロトン化アプタマー、
を含む、医薬組成物。
【請求項１１】
医薬として許容可能な有機溶媒をさらに含む、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
前記医薬として許容可能な有機溶媒中の前記アプタマーの濃度が、前記医薬組成物の少なくとも約２重量パーセントである、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記医薬組成物が注射可能である、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
前記医薬組成物が水中に注入された場合に沈殿を形成する、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１５】
前記医薬組成物が水中に注入された場合に沈殿を形成しない、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
前記アミノ酸エステル又はアミドが、リジンのエステル又はアミドである、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
前記組成物が動物に投与された場合にデポーを形成する、請求項１３に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
カルボン酸をさらに含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記カルボン酸が脂肪酸である、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
リン脂質をさらに含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
ホスファチジルコリンをさらに含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
スフィンゴミエリンをさらに含む、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
前記アミノ酸エステル又はアミノ酸アミドが、アスパラギン酸又はグルタミン酸のジエステル又はジアミドである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項２４】
アプタマーを動物に投与する方法であって、請求項１０に記載の医薬組成物を前記動物に投与することを含む、前記方法。
【請求項２５】
前記医薬組成物が経口投与される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
前記医薬組成物が注射によって投与される、請求項２４に記載の方法。
【請求項２７】
以下の：
（ｉ）アプタマー；及び
（ｉｉ）二価金属カチオン；及び
（ｉｉｉ）医薬として許容可能な有機溶媒、
を含む医薬組成物。
【請求項２８】
前記医薬として許容可能な有機溶媒中の前記アプタマーの濃度が、前記医薬組成物の少なくとも２重量％である、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記医薬組成物が注射可能である、請求項２８に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記医薬組成物が水中に注入された場合に沈殿を形成する、請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
前記組成物が動物に投与された場合にデポーを形成する、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３２】
前記医薬組成物が水中に注入された場合に沈殿を形成しない、請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
前記二価金属イオンが、以下のアルカリ土類金属カチオン：Zn+2、Cu+2、及びFe+2からなる群から選ばれる、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
前記二価金属イオンが、以下の：Ca+2、Mg+2、Zn+2、Cu+2及びFe+2からなる群から選ばれる、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
前記医薬として許容可能な有機溶媒が、以下の：ピロリドン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセロールフォーマル、イソソルビッドジメチルエーテル、エタノール、ジメチルスルホキシド、テトラグリコール、テトラヒドロフルフリルアルコール、トリアセチン、プロピレンカーボネート、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシドからなる群から選ばれる、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
カルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンのうちの１つ以上をさらに含む、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
カルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンのうちの１つ以上をさらに含む請求項２７に記載の医薬組成物であって、ここで、前記アプタマー上のアニオン性基及び前記カルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上のアニオン性基の、前記二価金属カチオンに対する比が、約４：１〜１：４である、前記医薬組成物。
【請求項３８】
前記１つ以上のカルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンが、カルボキシレートである、請求項３７に記載の医薬組成物。
【請求項３９】
前記カルボキシレートが、脂肪酸のカルボキシレートである、請求項３８に記載の医薬組成物。
【請求項４０】
前記カルボキシレートが、ポリカルボン酸のカルボキシレートである、請求項３８に記載の医薬組成物。
【請求項４１】
前記カルボキシレートが、以下の式（III）：
【化３】
2009515962.tif 000041
｛式中、
Rは、アミノ酸側鎖であり、；そして
R2は、式-C(O)-R5のアシル基であり、ここで、R5は置換されたC1〜C21炭化水素基である。｝
により表されるN-アシルアミノ酸のカルボキシレートである、請求項３８に記載の医薬組成物。
【請求項４２】
医薬として許容可能なポリマーをさらに含む、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項４３】
前記ポリマーが、前記組成物の約０．１〜１０重量％の量で存在する、請求項４２に記載の医薬組成物。
【請求項４４】
アプタマーの動物への投与方法であって、請求項２７に記載の医薬組成物を投与することを含む、前記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
１．関連出願との相互参照
本願は、参考文献として本明細書中に援用されている、２００５年１１月１６日に出願された米国仮特許出願第６０／７３６，８６２号に基づく利益を請求する。
【０００２】
２．技術分野
本発明は、アプタマーを必要とする動物にアプタマーを投与するための医薬組成物に関する。1つの実施態様において、医薬組成物は、（ｉ）アプタマー及び（ｉｉ）アミノ酸エステル又はアミドを含む。他の実施態様において、医薬組成物は、（ｉ）アプタマー；（ｉｉ）二価金属カチオン；及び（ｉｉｉ）場合により、カルボン酸、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンを含む。
【背景技術】
【０００３】
３．背景技術
アプタマーは、タンパク質又は代謝物などの特定の標的分子に結合する、合成又は天然であることのできるオリゴヌクレオチドである。典型的には、結合は、古典的なワトソン−クリックによる塩基対形成以外の相互作用を介する。
【０００４】
アプタマーは、現在、前臨床及び臨床開発されている治療剤の有望なクラスを代表する。ペプチド又はモノクローナル抗体などの生物学的物質のように、アプタマーは分子標的に特異的に結合し、そして結合を介して標的機能を阻害することができる。典型的なアプタマーは、１０〜１５kDaのサイズ（すなわち、３０〜４５ヌクレオチド）であり、ナノモル未満の親和性でその標的に結合し、そして密接に関連した標的を（例えば、典型的には、同じ遺伝子ファミリーからの他のタンパク質に結合せずに）識別する（Griffin, et al.(1993), Gene 137(1): 25-31；Jenison, et al.(1998), Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 8(4): 265-79；Bell, et al. (1999), In Vitro Cell. Dev. Biol. Anim. 35(9): 533-42；Watson, et al. (2000), Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 10(2): 63-75；Daniels, et al. (2002), Anal. Biochem. 305(2): 214-26；Chen, et al. (2003), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 100(16): 9226-31；Khati, et al. (2003), J. Virol. 77(23): 12692-8；Vaish, et al. (2003), Biochemistry 42(29): 8842-51）。
【０００５】
アプタマーは、米国特許第５，４７５，０９６号及び同第５，２７０，１６３号に記載されたランダム配列オリゴヌクレオチドのライブラリーからの完全にインビトロの選択プロセス（Systematic Evaluation of Ligands by Experimental Enrichment、すなわち、SELEX（商標））によって作り出されることができる。アプタマーは、成長因子、酵素、イムノグロブリン及び受容体を含む、治療的に着目される多数のタンパク質に対して生成されてきた（Ellington and Szostak (1990), Nature 346(6287): 818-22；Tuerk and Gold (1990), Science 249(4968): 505-510）。
【０００６】
アプタマーは、治療剤としての用途のために魅力的な多くの特徴を有する。高い標的親和性及び特異性に加えて、アプタマーは毒性又は免疫原性がわずかであるか又はないことが標準的アッセイにおいて示された（Wlotzka, et al. (2002), Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99(13): 8898-902）。実際に、いくつかの治療用アプタマーは、薬物動態分析、細胞内及び病気の動物モデルにおける生物学的有効性の特徴づけ及び予備的な安全性薬理学評価を含む、前臨床開発の様々な段階を通して最適化されそして進歩させられてきた（Reyderman and Stavchansky (1998), Pharmaceutical Research 15(6): 904-10；Tucker et al., (1999), J. Chromatography B. 732: 203-212；Watson, et al. (2000), Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 10(2): 63-75）。
【０００７】
アプタマーを含む全てのオリゴヌクレオチドベースの治療剤についての薬理動態特性が所望の医薬応用に適合するようにあつらえられることが重要である。（アンチセンス及びRNAiベースの治療剤のように）細胞外標的に対するアプタマーが細胞内送達に伴う困難性がない一方、アプタマーは標的器官及び組織に分配され、そして所望の投薬計画に一致する期間の間、（修飾されずに）体内に留まらなくてはならない。核酸ベースの治療剤についての初期の研究は、未修飾のオリゴヌクレオチドがヌクレアーゼ消化によって急速に分解される一方、糖の２’−位における保護的修飾及び［3'-3'dT］などの逆方向末端キャップ構造の使用が、インビトロ及びインビボでの核酸安定性を劇的に改善することを示した（Green, et al. (1995), Chem. Biol. 2(10): 683-95；Jellinek, et al. (1995), Biochemistry 34(36): 11363-72；Ruckman, et al. (1998), J. Biol. Chem. 273(32): 20556-67；Uhlmann, et al. (2000), Methods Enzymol. 313:268-84）。いくつかのSELEX選択法（すなわち、SELEX実験又はSELEXion）においては、アプタマーがそこから選ばれる、核酸の開始プールは、ヌクレアーゼの攻撃に対するアプタマーの耐性を促進するために、典型的には２’−フルオロピリミジン（２’−F）で置換されたヌクレオチドの取り込みなどの化学的修飾によって予め安定化される。２’−O−メチルプリン（２’−OMeプリン）で置換されたヌクレオチドを取り込んだアプタマーも、SELEX後の修飾ステップ、又はより最近ではSELEX法自体の不可欠な成分としての２’−OMe含有ランダム配列ライブラリーの合成を可能とすること、によって開発された。
【０００８】
ヌクレアーゼによるクリアランスに加えて、オリゴヌクレオチド治療剤は腎臓での濾過を介する排泄に供される。したがって、静脈内投与されたヌクレアーゼ耐性のオリゴヌクレオチドは、濾過がブロック可能でない限り、１０分未満のインビボ半減期を示す。これは、血流中から組織への迅速な分配を促進するか又はオリゴヌクレオチドの見かけの分子量を糸球体についての有効なサイズのカットオフよりも大きくなるように増加させることによって達成可能である。PEGポリマーへの結合（ペグ化）は、循環中のアプタマーの耐用時間を劇的に延長し、それによって投薬頻度を減少させ、そして標的に対する有効性を高めることができる。動物における先の研究は、PEG結合アプタマーの血漿中薬物動態特性を調べた（Reyderman and Stavchansky (1998), Pharmaceutical Research 15(6): 904-10；Watson et al. (2000), Antisense Nucleic Acid Drug Dev. 10(2):63-75）。修飾部分に結合されたか又は修飾されたヌクレオチドを含むアプタマー治療剤を含むアプタマー治療剤の血管外漏出の判定、そして特に、アプタマー又はその修飾形態の（炎症部位、又は腫瘍内部などの）病気の組織へアクセスする能力を判定することは、アプタマー介入のための治療機会のスペクトルを定義する。
【０００９】
典型的には、治療用アプタマーは、皮下注射などの注射によって投与される。したがって、アプタマーは投与用の液体ビヒクル中に溶解されなければならない。しかしながら、比較的高分子量のアプタマー、そして特にペグ化などによって誘導体化されたアプタマーは、しばしば医薬組成物を得ることを困難にし、ここで、該アプタマーは、動物への投与のために臨床的に有用な医薬組成物を提供するために十分な濃度で医薬として許容可能な溶媒中に溶解される。
【００１０】
米国特許出願公開第２００５／０１７５７０８号は、哺乳動物へのアプタマーの持続的送達を許容する組成物を開示する。アプタマーは、アプタマーがその生理活性を長期にわたって発揮することができるように、着目の部位へのアプタマーの持続的放出を許容するミクロスフィアとして投与される。アプタマーは抗−VEGFアプタマーであることができる。
【００１１】
P. Burmeister et al. (2004), Chemistry and Biology: 15, 25-33は、血管内皮成長因子に結合し、良好な安定性を示す、２’−O−メチルアプタマー（ARC245）を生成する方法を開示する。
【００１２】
したがって、改善された医薬組成物が必要とされており、ここで、治療剤はアプタマーである。特に、医薬組成物であって、アプタマーが医薬として許容可能な溶媒中に十分な濃度で溶解されて動物への投与のために臨床的に有用な医薬組成物を提供するものが必要とされている。本発明は、このこと並びに他の必要性にも取り組むものである。
【００１３】
本願中でのいかなる参考文献の引用も、かかる参考文献が本願の従来技術であることを認めるものであると解されるべきでない。
【発明の開示】
【００１４】
６．発明の要約
本発明は、以下の：
（ｉ）プロトン化アプタマーと医薬として許容可能な有機塩基の間で形成された塩；及び
（ｉｉ）医薬として許容可能な有機溶媒、
を含む医薬組成物を対象とする。
【００１５】
１つの実施態様においては、溶媒は、医薬として許容可能な有機溶媒である。１つの実施態様においては、医薬組成物は医薬として許容可能な有機溶媒中の塩の溶液である。
【００１６】
本発明はまた、以下の：
（ｉ）以下の式：
【化１】
2009515962.tif 000002
｛式中、
Ｒは、アミノ酸側鎖であり；そして
Ｒ1は、Ｃ1〜Ｃ22炭化水素基である。｝
により表されるアミノ酸エステル；又は
以下の式：
【化２】
2009515962.tif 000003
｛式中、
Ｒは、アミノ酸側鎖であり；
Ｒ3は、Ｃ1〜Ｃ22炭化水素基であり；そして
Ｒ4は、水素又はＣ1〜Ｃ22炭化水素基である。｝
により表される、アミノ酸アミド；及び
（ｉｉ）プロトン化アプタマー、
を含む、医薬組成物にも関する。
【００１７】
1つの実施態様においては、アミノ酸エステル又はアミドは、リジンのエステル又はアミドであり、そして医薬組成物はカルボン酸、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンのうちの１つ以上をさらに含む。
【００１８】
１つの実施態様においては、アミノ酸エステル又はアミドは、アスパラギン酸又はグルタミン酸のジエステル又はジアミドである。
【００１９】
1つの実施態様においては、医薬組成物はさらに溶媒を含む。1つの実施態様においては、溶媒は医薬として許容可能な溶媒である。
【００２０】
本発明はまた、以下の：
（ｉ）アプタマー；及び
（ｉｉ）二価金属カチオン；及び
（ｉｉｉ）医薬として許容可能な有機溶媒、
を含む医薬組成物にも関する。
【００２１】
1つの実施態様においては、医薬組成物は、カルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンをさらに含む。
【００２２】
本発明はまた、本発明の医薬組成物を動物に投与することを含む、該動物にアプタマーを投与する方法にも関する。
【００２３】
本発明はまた、本発明の医薬組成物を動物に投与することを含む、該動物における状態を治療又は予防する方法にも関する。
【００２４】
６．発明の詳細な説明
本発明は、以下の：
（ｉ）プロトン化アプタマーと医薬として許容可能な有機塩基との間で形成された塩；及び
（ｉｉ）医薬として許容可能な有機溶媒、
を含む医薬組成物を対象とする。
【００２５】
1つの実施態様においては、溶媒は医薬として許容可能な有機溶媒である。1つの実施態様においては、医薬組成物は、医薬として許容可能な有機溶媒中の塩の溶液である。
【００２６】
1つの実施態様においては、医薬組成物は、以下の：
（ｉ）アミノ酸エステル又はアミノ酸アミド、及び
（ｉｉ）プロトン化アプタマー、
を含む。
【００２７】
1つの実施態様においては、医薬組成物は溶媒をさらに含む。1つの実施態様においては、溶媒は、医薬として許容可能な有機溶媒である。
【００２８】
1つの実施態様においては、医薬組成物は以下の：
（ｉ）リジンのエステル又はアミド；
（ｉｉ）プロトン化アプタマー；及び
（ｉｉｉ）カルボン酸、
を含む。
【００２９】
1つの実施態様においては、医薬組成物は溶媒をさらに含む。1つの実施態様においては、溶媒は、医薬として許容可能な有機溶媒である。
【００３０】
１つの実施態様においては、医薬組成物は以下の：
（ｉ）リジンのエステル又はアミド；
（ｉｉ）プロトン化アプタマー；及び
（ｉｉｉ）リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン、
を含む。
【００３１】
1つの実施態様においては、医薬組成物は溶媒をさらに含む。1つの実施態様においては、溶媒は、医薬として許容可能な有機溶媒である。
【００３２】
１つの実施態様においては、医薬組成物は以下の：
（ｉ）アスパラギン酸又はグルタミン酸のジエステル又はジアミド；及び
（ｉｉ）プロトン化アプタマー、
を含む。
【００３３】
１つの実施態様においては、医薬組成物は溶媒をさらに含む。1つの実施態様においては、溶媒は医薬として許容可能な有機溶媒である。
【００３４】
他の実施態様においては、医薬組成物は以下の：
（ｉ）アプタマー；及び
（ｉｉ）二価金属カチオン；及び
（ｉｉｉ）医薬として許容可能な有機溶媒、
を含む。
【００３５】
１つの実施態様においては、医薬組成物は、カルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンをさらに含む。
【００３６】
本発明はまた、本発明の医薬組成物を動物に投与することを含む、該動物における状態を治療又は予防する方法にも関する。
【００３７】
６．１  定義
本明細書中で使用されるとき、以下の用語は以下の意味を有する。
【００３８】
本明細書中で使用される「アプタマー」という用語は、合成又は天然であることができるオリゴヌクレオチドであって、ワトソン−クリックによる塩基対形成以外を介してタンパク質又は代謝物などの特定の標的分子に結合可能であって、動物において薬理学的効果を有するものを意味する。アプタマーは、慣用のホスホジエステル結合されたヌクレオチドを用いて合成されることができ、かつ当業者に知られた標準的な固相又は溶液相合成技術を用いて合成されることができる（例えば、米国特許第５，４７５，０９６号及び同第５，２７０，１６３号を参照のこと）。アプタマーの標的ポリペプチドへの結合は、当業者に知られたアッセイによって容易に試験されることができる。本明細書中で使用される「プロトン化アプタマー」という用語は、アプタマーであって、該アプタマーの少なくとも１つのリン酸基がプロトン化されているものを意味する。1つの実施態様においては、アプタマーのすべてのリン酸基がプロトン化されている。
【００３９】
典型的には、薬理学的効果は、動物における状態を治療又は予防することである。
【００４０】
本明細書中で使用される「状態」という用語は、体の機能、系又は器官の妨害、休止又は障害を意味する。代表的な状態は、癌、炎症、糖尿病及び器官の不全などの病気を含むが、これらに限定されない。
【００４１】
「治療すること」、「の治療」などの句は、特定の状態の寛解又は休止を含む。
【００４２】
「予防すること」、「の予防」などの句は、状態の発生の回避を含む。
【００４３】
「Ｃ1〜Ｃ22炭化水素基」は、直鎖又は分岐鎖の、飽和又は不飽和の、環状又は非環状の、芳香族又は非芳香族の、炭素環の又は複素環の基であって、１〜２２個の炭素原子を有するものを意味する。同様に、「Ｃ1〜Ｃ22炭化水素基」、「Ｃ1〜Ｃ16炭化水素基」、「Ｃ1〜Ｃ10炭化水素基」、「Ｃ1〜Ｃ5炭化水素基」、「Ｃ1〜Ｃ3炭化水素基」、「Ｃ16〜Ｃ22炭化水素基」、「Ｃ8〜Ｃ18炭化水素基」、「Ｃ10〜Ｃ18炭化水素基」及び「Ｃ16〜Ｃ18炭化水素基」などの句は、直鎖又は分岐鎖の、飽和又は不飽和の、環状又は非環状の、芳香族又は非芳香族の、炭素環の又は複素環の基であって、１〜２１個の炭素原子、１〜１６個の炭素原子、１〜１０個の炭素原子、１〜５個の炭素原子、１〜３個の炭素原子、１６〜２２個の炭素原子、８〜１８個の炭素原子、１０〜１８個の炭素原子、１６〜１８個の炭素原子、をそれぞれ含むものを意味する。したがって、「式‐C(O)-R1のアシル基、ここで、R1はC1〜C21基である」という句は、式‐C(O)-R1のアシル基であって、R1が、直鎖又は分岐鎖の、飽和又は不飽和の、環状又は非環状の、芳香族又は非芳香族の、炭素環の又は複素環の基であって、１〜２１個の炭素原子を含むものを意味する。代表的な式‐C(O)-R1のアシル基であって、R1が非置換のC1〜C21基であるものは、アセチル、プロピオニル、ブタノイル、ヘキサノイル、カプロイル、ラウロイル、ミリストイル、パルミトイル、ステアロイル、パルミオレオイル、オレオイル、リノレオイル、リノレノイル、及びベンゾイルを含むが、これらに限定されない。
【００４４】
本明細書中で使用される「低級アルキル」という用語は、C1〜C6炭化水素基を意味する。
【００４５】
本明細書中で使用される「塩」という用語は、共有結合でなく、イオン性相互作用によって化学的に結合された2つの化合物を意味する。
【００４６】
本明細書中で使用される「医薬として許容可能な」という用語は、医薬組成物の成分に言及する場合、動物に投与されたときに該成分が合理的な利益／リスク比に釣り合って、過剰の毒性、刺激、又はアレルギー反応などの過度の有害効果を有さないことを意味する。したがって、本明細書中で使用される「医薬として許容可能な有機溶媒」という用語は、動物に投与されたときに、合理的な利益／リスク比に釣り合って、過剰の毒性、刺激、又はアレルギー反応などの過度の有害効果を有さない有機溶媒を意味する。好ましくは、医薬として許容可能な有機溶媒は、米国食品医薬品局（「FDA」）によって一般的に安全である（generally recognized as safe「GRAS」）と認められた溶媒である。同様に、本明細書中で使用される「医薬として許容可能な有機塩基」という用語は、動物に投与されたときに、合理的な利益／リスク比に釣り合って、過剰の毒性、刺激、又はアレルギー反応などの過度の有害効果を有さない有機塩基を意味する。
【００４７】
本明細書中で使用される「水混和性の有機溶媒」という用語は、二相に分かれることなく、任意の比率で水と混合することのできる有機溶媒を意味する。
【００４８】
本明細書中で使用される「水溶性の有機溶媒」という用語は、顕著なレベルの水中での溶解度を有する有機溶媒を意味する。典型的には、水溶性の有機溶媒は、少なくとも約５重量％、好ましくは少なくとも約１０重量％、より好ましくは少なくとも約２０重量％、そして最も好ましくは少なくとも約５０重量％の量で水に溶解可能である。例えば、トリアセチンは、約１：１４の比率で水に溶解可能であるため、水溶性溶媒と考えられる。
【００４９】
本明細書中で使用される「沈殿を形成する」という句は、医薬組成物が水中に又は生理学的（インビボ）環境中に注入されたときに、沈殿又は固体を形成することを意味する。沈殿は、インビトロ又は生理学的（インビボ）環境中で、室温において溶媒中に形成される不溶性固体である。沈殿は、固体、結晶、ゴム状のかたまり、又はゲルなどの多くの形態をとることができる。好ましくは、沈殿はゴム状のかたまり又はゲルである。本発明の組成物は、組成物が水と混合されて９８°Fで濾過されたとき、組成物の少なくとも１０％が０．２２μmのフィルター上に残留する場合に水中で沈殿を形成する。典型的には、沈殿を形成するためには、約５０μL〜０．５mLの医薬組成物が約４〜５mLの水中に注入される。1つの実施態様においては、約５０μLの医薬組成物が約４mLの水中に注入される。
【００５０】
本明細書中で使用される「脂肪酸」という用語は、式R-C(O)OHのカルボン酸を意味し、ここで、Rは直鎖又は分岐鎖の、飽和又は不飽和のC6〜C22炭化水素基である。代表的な脂肪酸は、カプロン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、パルミン酸、オレイン酸、リノール酸、及びリノレイン酸を含むが、これらに限定されない。
【００５１】
本明細書中で使用される「ポリカルボン酸」という用語は、1つ超の-C(O)OH基を有するポリマー化合物を意味する。当業者は、1つ超の-C(O)OH基を有するポリマー化合物を容易に認識するであろう。代表的なポリカルボン酸は、ヒアルロン酸、ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸及びポリアクリル酸を含むがこれらに限定されない。
【００５２】
本明細書中で使用される「注射可能な」又は「注射可能な組成物」という句は、シリンジ中に吸い込まれ、そして組成物中の固体物質の存在による有害効果をもたらさずに動物の皮下、腹腔内又は筋肉内に注射されることのできる組成物を意味する。固体物質は、結晶、ゴム状のかたまり、及びゲルを含むがこれらに限定されない。典型的には、製剤又は組成物は、９８°Fで０．２２μmフィルターを通して製剤を濾過したときに、製剤の約１５％以下、好ましくは約１０％以下、より好ましくは約５％以下、さらにより好ましくは約２％以下、そして最も好ましくは約１％以下がフィルター上に残留する場合に、注射可能であると考えられる。しかしながら、容易にシリンジから排出される本発明のいくつかの組成物はゲルであって、０．２２μmフィルター上に残留するであろう。1つの実施態様においては、本明細書中で使用される「注射可能」という用語は、これらのゲル組成物を含む。１つの実施態様においては、本明細書中で使用される「注射可能」という用語は、約４０℃の温度まで温められ、そして０．２２μmフィルターを通して濾過されたときに、製剤の約１５％以下、好ましくは約１０％以下、より好ましくは約５％以下、さらにより好ましくは約２％以下、そして最も好ましくは約１％以下がフィルター上に残留する組成物もさらに含む。１つの実施態様においては、注射可能な医薬組成物の例は、医薬として許容可能な溶媒中の医薬として活性な化合物（例えば、アプタマー）の溶液である。
【００５３】
本明細書中で使用される「溶液」という用語は、典型的には液体である1つ以上の他の物質（溶媒）中に分子又はイオンレベルで均一に分散された1つ以上の物質（溶質）の混合物を意味する。
【００５４】
本明細書中で使用される「懸濁液」という用語は、水性又は非水性であることのできる溶媒中に均一に分散された固体粒子を意味する。
【００５５】
本明細書中で使用される「動物」という用語は、ヒト、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、ブタ、両生類、爬虫類、及び鳥類を含むが、これらに限定されない。代表的な動物は、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、有蹄動物、チンパンジー、サル、ヒヒ、ニワトリ、七面鳥、マウス、ウサギ、ラット、モルモット、イヌ、ネコ及びヒトを含むがこれらに限定されない。１つの実施態様においては、動物は哺乳動物である。１つの実施態様においては、動物はヒトである。１つの実施態様においては、動物は非ヒトである。１つの実施態様においては、動物はイヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジ、又はブタである。
【００５６】
本明細書中で使用される「ドラッグデポー」という句は、治療された動物の体内で形成される、アプタマーを含む沈殿を意味し、医薬としての有効量のアプタマーを提供するように、アプタマーを経時的に放出するものを意味する。
【００５７】
本明細書中で使用される「実質的に〜を含まない」という句は、約２重量％未満を意味する。例えば、「水を実質的に含まない医薬組成物」という句は、医薬組成物中の水の量が、医薬組成物の約２重量％未満であることを意味する。
【００５８】
本明細書中で使用される「有効量」という用語は、動物における状態を治療又は予防するのに十分な量を意味する。
【００５９】
本明細書中で使用される「リン脂質」という用語は、以下の式：
【化３】
2009515962.tif 000004
｛式中、
R1は、O-又は-OHであり；
R2は、（ｉ）-H、又は
（ｉｉ）飽和又は不飽和の、直鎖又は分岐鎖のＣ2〜Ｃ36アシル基であり；
R3は、（ｉ）-H、
（ｉｉ）飽和又は不飽和の、直鎖又は分岐鎖のＣ2〜Ｃ36アシル基、又は
（ｉｉｉ）-C=C-R9、ここでR9は飽和又は不飽和の、直鎖又は分岐鎖のC1〜C22炭化水素基であって、場合により１つ以上の窒素含有基で置換されており；
そして、R2又はR3のうちの1つ以上は-Hでなく；
R4は、（ｉ）-H；
（ｉｉ）-(CH2)n-R5、ここで、R5は、−N(R6)(R7)又は-N+(R6)(R7)(R8)であり、ここで、R6、R7、R8はそれぞれ独立して、−Ｈ、Ｃ1〜Ｃ3アルキル基であるか、又はＲ6とＲ7は結合して５又は６員窒素含有複素環を形成し、ｎは１〜４の整数、好ましくは２であり；
（ｉｉｉ）
【化４】
2009515962.tif 000005
（ｉｖ）
【化５】
2009515962.tif 000006
［式中、
各Ｒ10は、独立して、-H又は-P(O)(OH)2である］；又は
（ｖ）−CH2CH(OH)CH2(OH)である。｝
により表される化合物を意味する。
【００６０】
本明細書中で使用される「飽和又は不飽和の、直鎖又は分岐鎖のC2〜C36アシル基」という用語は、式-O-C(O)-Rの基を意味し、ここで、Rは飽和又は不飽和の、直鎖又は分岐鎖のC1〜C35炭化水素基である。
【００６１】
本明細書中で使用される「スフィンゴミエリン」という用語は、以下の式：
【化６】
2009515962.tif 000007
｛式中、
R1は、O-又は-OHであり；
R4は、（ｉ）-H；又は
（ｉｉ）-(CH2)n-R5、ここで、R5は-N(R6)(R7)又は-N+(R6)(R7)(R8)であり、R6、R7及びR8は、それぞれ独立して、-H、C1〜C3アルキルであるか又はR6とR7は、結合して５員又は６員窒素含有複素環を形成し、そして、ｎは１〜４の整数、好ましくは２であり；そして
R11は、場合により１つ以上の窒素含有基で置換された、飽和又は不飽和の、直鎖又は分岐鎖のC1〜C22炭化水素基である。｝
により表される化合物を意味する。
【００６２】
本明細書中で使用される、値の範囲を記述するための「約」という用語は、該範囲の上限及び下限の両方にあてはまる。例えば、「約９０：１０〜１０：９０の範囲」という句は、「約９０：１０〜約１０：９０の範囲」と同じ意味を有する。
【００６３】
６．２  アプタマー
アプタマーは、当業者に知られた任意のアプタマーであることができる。
【００６４】
１つの実施態様においては、アプタマーはDNA鎖である。1つの実施態様においては、DNAは二本鎖DNAである。１つの実施態様においては、DNAは一本鎖DNAである。
【００６５】
1つの実施態様においては、アプタマーはRNA鎖である。
【００６６】
1つの実施態様においては、アプタマーは８０kD以下の分子量を有する。1つの実施態様においては、アプタマーの分子量は、約１５kD〜８０kDの範囲である。1つの実施態様においては、アプタマーの分子量は、約１０kD〜８０kDの範囲である。１つの実施態様においては、アプタマーの分子量は、約５kD〜８０kDの範囲である。
【００６７】
1つの実施態様においては、アプタマーは、６０kD以下の分子量を有する。1つの実施態様においては、アプタマーの分子量は、約１５kD〜６０kDの範囲である。１つの実施態様においては、アプタマーの分子量は、約１０kD〜６０kDの範囲である。1つの実施態様においては、アプタマーの分子量は、約５kD〜６０kDの範囲である。
【００６８】
1つの実施態様においては、アプタマーは、４０kD以下の分子量を有する。1つの実施態様においては、アプタマーの分子量は、約１５kD〜４０kDの範囲である。１つの実施態様においては、アプタマーの分子量は、約１０kD〜４０kDの範囲である。1つの実施態様においては、アプタマーの分子量は、約５kD〜４０kDの範囲である。
【００６９】
1つの実施態様においては、アプタマーは、３０kD以下の分子量を有する。1つの実施態様においては、アプタマーの分子量は、約１５kD〜３０kDの範囲である。１つの実施態様においては、アプタマーの分子量は、約１０kD〜３０kDの範囲である。1つの実施態様においては、アプタマーの分子量は、約５kD〜３０kDの範囲である。
【００７０】
1つの実施態様においては、アプタマーは、２０kD以下の分子量を有する。１つの実施態様においては、アプタマーの分子量は、約１０kD〜２０kDの範囲である。1つの実施態様においては、アプタマーの分子量は、約５kD〜２０kDの範囲である。
【００７１】
１つの実施態様においては、アプタマーの分子量は、約５kD〜１０kDの範囲である。
【００７２】
アプタマーを作るヌクレオチドは、例えば、それらの安定性を改善するため、すなわち、動物に投与されたときのそれらのインビボ半減期を改善するため、及び／又はそれらの排泄速度を減少させるために修飾されることができる。「修飾された」という用語は、共有結合で修飾された塩基及び／または糖を含むヌクレオチドを包含する。例えば、修飾されたヌクレオチドは、３’位におけるヒドロキシ基以外そして５’位におけるリン酸基を除く低分子量の有機基に共有結合した糖を含むヌクレオチドを含む。修飾されたヌクレオチドはまた、２’−O−メチル；２’−O−アルキル；２’−O−アリル；２’−S−アルキル；２’−S−アリル；２’−フルオロ−；２’−ハロ又は２’−アジド−リボース；炭素環状糖アナログ；α−アノマー糖；及びアラビノース、キシロース、リキソースなどのエピマー糖、ピラノース糖、フラノース糖、及びセドヘプツロースも含んでよい。
【００７３】
修飾されたヌクレオチドは、本分野で知られており、そして、アルキル化プリン及び／又はピリミジン；アシル化プリン及び／又はピリミジン；或いは他の複素環を含むがこれらに限定されない。ピリミジン及びプリンのこれらのクラスは、本分野で知られており、そしてシュードイソシトシン；N4，N4−エタノシトシン；８−ヒドロキシ−N6−メチルアデニン；４−アセチルシトシン、５−（カルボキシヒドロキシメチル）ウラシル；５−フルオロウラシル；５−ブロモウラシル；５−カルボキシメチルアミノメチル−２−チオウラシル；５−カルボキシメチルアミノメチルウラシル；ジヒドロウラシル；イノシン；N６−イソペンチル−アデニン；１−メチルアデニン；１−メチルシュードウラシル；１−メチルグアニン；２，２−ジメチルグアニン；２−メチルアデニン；２−メチルグアニン；３−メチルシトシン；５−メチルシトシン；N６−メチルアデニン；７−メチルグアニン；５−メチルアミノメチルウラシル；５−メトキシアミノメチル−２−チオウラシル；β−D−マンノシルケオシン；５−メトキシカルボニルメチルウラシル；５−メトキシウラシル；２−メチルチオ−N６−イソペンテニルアデニン；ウラシル−５−オキシアセティックアシッドメチルエステル；シュードウラシル；２−チオシトシン；５−メチル−２−チオウラシル；２−チオウラシル；４−チオウラシル；５−メチルウラシル；N−ウラシル−５−オキシアセティックアシッドメチルエステル；ウラシル５−オキシアセティックアシッド；ケオシン；２−チオシトシン；５−プロピルウラシル；５−プロピルシトシン；５−エチルウラシル；５−エチルシトシン；５−ブチルウラシル；５−ペンチルウラシル；５−ペンチルシトシン；及び２，６−ジアミノプリン；メチルシュードウラシル；１−メチルグアニン；及び１−メチルシトシンを含む。
【００７４】
アプタマーは、１つ以上のホスホジエステル結合を他の連結基で置換することによっても修飾されることができる。他の連結基は、P(O)Oが、P(O)S、P(S)S、P(O)NR2、P(O)R、P(O)OR'、CO、又はCH2で置換される実施態様、ここでR又はR'は独立してH又は置換又は非置換のC1〜C20アルキルである、を含むがこれらに限定されない。P(O)NR2基のための好ましいR置換の組は、水素及びメトキシエチルである。典型的には、連結基は-O-結合を介して各隣接ヌクレオチドに結合されるが、-N-又は-S-結合を含むように修飾されてもよい。オリゴマー中のすべての連結が同一である必要はない。
【００７５】
アプタマーはまた、動物に投与されたときの排泄速度を低下させるなどのために、アプタマーをポリマーに結合させることによって修飾されることもできる。例えば、アプタマーは、「ペグ化」、すなわちポリエチレングリコール（「PEG」）に結合されることができる。1つの実施態様においては、PEGは、約２０kD〜８０kDの範囲の平均分子量を有する。アプタマーとPEGなどのポリマーを結合する方法は当業者に周知である（例えば、Greg T. Hermanson, Bioconjugate Techniques, Academic Press, 1966を参照のこと）。
【００７６】
本発明の組成物及び方法において有用な修飾されたアプタマーの例として、P. Burmeister et al., Direct In Vitro Selection of a 2'-O-methyl Aptamer to VEGF, Chemistry and Biology, vol. 12, 25-33, January 2005を参照のこと。
【００７７】
１つの実施態様においては、アプタマーはポリマーに結合される。
【００７８】
１つの実施態様においては、アプタマーはポリマーに結合されているRNA鎖である。
【００７９】
１つの実施態様においては、アプタマーはポリマーに結合されているDNA鎖である。
【００８０】
１つの実施態様においては、アプタマーはPEGに結合される。
【００８１】
1つの実施態様においては、アプタマーはPEGに結合されているRNA鎖である。
【００８２】
１つの実施態様においては、アプタマーはPEGに結合されているDNA鎖である。
【００８３】
１つの実施態様においては、アプタマーはRNA鎖であり、ここで、アプタマーを作る糖の少なくとも１つの２’ヒドロキシルがO-メチル化される。
【００８４】
１つの実施態様においては、アプタマーはRNA鎖であり、ここで、アプタマーを作る少なくとも１つの２’ヒドロキシルがO-メチル化され、かつここで、RNA鎖がポリマーに結合されている。
【００８５】
１つの実施態様においては、アプタマーはRNA鎖であり、ここで、アプタマーを作る少なくとも１つの２’ヒドロキシルがO-メチル化され、かつここで、RNA鎖がPEGに結合されている。
【００８６】
１つの実施態様においては、アプタマーはVEGF（血管内皮成長因子）に結合するアプタマーである。
【００８７】
１つの実施態様においては、アプタマーは、P. Burmeister et al., Direct In Vitro Selection of a 2'-O-methyl Aptamer to VEGF, Chemistry and Biology, vol. 12, 25-33, January 2005中で同定されるARC224である。
【００８８】
１つの実施態様においては、アプタマーは、P. Burmeister et al., Direct In Vitro Selection of a 2'-O-methyl Aptamer to VEGF, Chemistry and Biology, vol. 12, 25-33, January 2005中で同定されるARC245である。
【００８９】
１つの実施態様においては、アプタマーは、P. Burmeister et al., Direct In Vitro Selection of a 2'-O-methyl Aptamer to VEGF, Chemistry and Biology, vol. 12, 25-33, January 2005中で同定されるARC225である。
【００９０】
１つの実施態様においては、アプタマーは、P. Burmeister et al., Direct In Vitro Selection of a 2'-O-methyl Aptamer to VEGF, Chemistry and Biology, vol. 12, 25-33, January 2005中で同定されるARC259である。
【００９１】
１つの実施態様においては、アプタマーは、P. Burmeister et al., Direct In Vitro Selection of a 2'-O-methyl Aptamer to VEGF, Chemistry and Biology, vol. 12, 25-33, January 2005中で同定されるARC259であり、ここで、アプタマーの５’リン酸基が以下の：
【化７】
2009515962.tif 000008
でペグ化されている（以下、「ペグ化ARC259」という）。
【００９２】
６．３  有機塩基
当業者に知られた任意の有機塩基が本発明の医薬組成物中で使用されることができる。好ましくは、有機塩基は、医薬として許容可能な有機塩基である。代表的な有機塩基は、アンモニア；シクロヘキシルアミン、シクロペンチルアミン、シクロヘキシルアミン、ジシクロヘキシルアミン、トリブチルアミン、N-メチルアミン、N-エチルアミン、ジエチルアミン、ジメチルアミン、トリエチルアミン、（モノ−、ビス−又はトリス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、２−ヒドロキシ−tert−ブチルアミン及びトリス−（ヒドロキシメチル）メチルアミンなどの）モノ−、ビス−又はトリス−（２−ヒドロキシ−低級アルキルアミン）、（N，N，−ジメチル−N−（２−ヒドロキシエチル）アミン又はN，N−ジアルキル−N−トリス−（２−ヒドロキシエチル)アミンなどの）N，N，−ジ−低級アルキル−N−（ヒドロキシ低級アルキル）−アミンなどの非置換又はヒドロキシ置換モノ−、ジ−又はトリ−アルキルアミン；ピリジン；ベンジルアミン；フェネチルアミン；N-メチル−D−グルカミン；N，N’−ジベンジルエチレンジアミン；クロロプロカイン；コリン；プロカイン及びアルギニン、リジンなどのアミノ酸などを含むがこれらに限定されない有機アミンを含むがこれらに限定されない(Berge et al., J. Pharm. Sci., 1977, 66, 1も参照のこと）。
【００９３】
本発明はまた、アプタマーとナトリウム、リチウム又はカリウムイオンなどの金属イオンとの間に形成された塩、及び医薬として許容可能な有機溶媒を含む医薬組成物も考慮する。典型的には、これらの組成物は、医薬として許容可能な有機溶媒中の低濃度、一般的に約２５mg/mL未満のアプタマーで十分である場合に有用である。
【００９４】
１つの実施態様においては、アミンはアミノ酸エステルである。
【００９５】
１つの実施態様においては、アミンはアミノ酸アミドである。
【００９６】
１つの実施態様においては、アミンはジアミンである（例えば、N，N’−ジベンジルエチレンジアミン又はリジンのエステル又はアミド）。
【００９７】
１つの実施態様においては、アミンはジアミンであり、そして医薬組成物はカルボン酸、リン脂質、スフィンゴミエリン又はホスファチジルコリンをさらに含む。
【００９８】
６．３．１  アミノ酸エステル
アミノ酸エステルは、例えばアミノ酸のカルボン酸基がC1〜C22アルコールでエステル化されているアミノ酸である、任意のアミノ酸の任意のエステルであることができる。したがって、アミノ酸エステルは、以下の式（I）：
【化８】
2009515962.tif 000009
｛式中、
Rは、アミノ酸側鎖であり；そして
R1は、C1〜C22炭化水素基である。｝
を有する。
【００９９】
当業者には容易にわかるとおり、広く多様な基がアミノ酸側鎖Rについて可能である。例えば、アミノ酸側鎖は、場合により置換可能な炭化水素基であることができる。好適な置換基は、ハロ、ニトロ、シアノ、チオール、アミノ、ヒドロキシ、カルボン酸、スルホン酸、芳香族基、及び芳香族又は非芳香族複素環基を含むがこれらに限定されない。好ましくは、アミノ酸側鎖は、場合によりチオール、アミノ、ヒドロキシ、カルボン酸、芳香族基又は芳香族若しくは非芳香族の複素環基で置換された、直鎖又は分岐鎖のC1〜C10炭化水素である。
【０１００】
アミノ酸エステルは、天然のアミノ酸又は合成により調製されたアミノ酸のエステルであることができる。アミノ酸は、D-アミノ酸又はL-アミノ酸であることができる。好ましくは、アミノ酸エステルは、天然アミノ酸のエステルである。より好ましくは、アミノ酸エステルは、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、アスパラギン、グルタミン、トリプトファン、プロリン、セリン、トレオニン、チロシン、ヒドロキシプロリン、システイン、メチオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニン、及びヒスチジンから選ばれるアミノ酸のエステルである。
【０１０１】
炭化水素基R1は、C1〜C22炭化水素基のいずれかであることができる。代表的なC1〜C22炭化水素基は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、アリル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シス−９−ヘキサデセニル、シス−９−オクタデセニル、シス，シス−９，１２−オクタデセニル、及びシス，シス，シス−９，１２，１５−オクタデカトリエニルを含むがこれらに限定されない。
【０１０２】
１つの実施態様においては、R1は直鎖炭化水素基である。
【０１０３】
１つの実施態様においては、R1は分岐鎖炭化水素基である。
【０１０４】
１つの実施態様においては、R1は飽和炭化水素基である。
【０１０５】
１つの実施態様においては、R1は不飽和炭化水素基である。
【０１０６】
１つの実施態様においては、R1は直鎖の飽和炭化水素基である。
【０１０７】
１つの実施態様においては、R1は直鎖の不飽和炭化水素基である。
【０１０８】
１つの実施態様においては、R1はC1〜C16炭化水素基である。
【０１０９】
１つの実施態様においては、R1はC1〜C10炭化水素基である。
【０１１０】
１つの実施態様においては、R1はC1〜C5炭化水素基である。
【０１１１】
１つの実施態様においては、R1はC1〜C3炭化水素基である。
【０１１２】
１つの実施態様においては、R1はC6〜C22炭化水素基である。
【０１１３】
１つの実施態様においては、R1はC6〜C18炭化水素基である。
【０１１４】
１つの実施態様においては、R1はC8〜C18炭化水素基である。
【０１１５】
１つの実施態様においては、R1はC10〜C18炭化水素基である。
【０１１６】
１つの実施態様においては、R1はC16〜C18炭化水素基である。
【０１１７】
１つの実施態様においては、R1はC16〜C22炭化水素基である。
【０１１８】
１つの実施態様においては、R1は直鎖C1〜C16炭化水素基である。
【０１１９】
１つの実施態様においては、R1は直鎖C1〜C10炭化水素基である。
【０１２０】
１つの実施態様においては、R1は直鎖C1〜C5炭化水素基である。
【０１２１】
１つの実施態様においては、R1は直鎖C1〜C3炭化水素基である。
【０１２２】
１つの実施態様においては、R1は直鎖C6〜C22炭化水素基である。
【０１２３】
１つの実施態様においては、R1は直鎖C6〜C18炭化水素基である。
【０１２４】
１つの実施態様においては、R1は直鎖C8〜C18炭化水素基である。
【０１２５】
１つの実施態様においては、R1は直鎖C10〜C18炭化水素基である。
【０１２６】
１つの実施態様においては、R1は直鎖C16〜C18炭化水素基である。
【０１２７】
１つの実施態様においては、R1は直鎖C16〜C22炭化水素基である。
【０１２８】
１つの実施態様においては、R1は分岐鎖C1〜C16炭化水素基である。
【０１２９】
１つの実施態様においては、R1は分岐鎖C1〜C10炭化水素基である。
【０１３０】
１つの実施態様においては、R1は分岐鎖C1〜C5炭化水素基である。
【０１３１】
１つの実施態様においては、R1は分岐鎖C1〜C3炭化水素基である。
【０１３２】
１つの実施態様においては、R1は分岐鎖C6〜C22炭化水素基である。
【０１３３】
１つの実施態様においては、R1は分岐鎖C6〜C18炭化水素基である。
【０１３４】
１つの実施態様においては、R1は分岐鎖C8〜C18炭化水素基である。
【０１３５】
１つの実施態様においては、R1は分岐鎖C10〜C18炭化水素基である。
【０１３６】
１つの実施態様においては、R1は分岐鎖C16〜C18炭化水素基である。
【０１３７】
１つの実施態様においては、R1は分岐鎖C16〜C22炭化水素基である。
【０１３８】
１つの実施態様においては、R1は直鎖不飽和C1〜C16炭化水素基である。
【０１３９】
１つの実施態様においては、R1は直鎖不飽和C1〜C10炭化水素基である。
【０１４０】
１つの実施態様においては、R1は直鎖不飽和C1〜C5炭化水素基である。
【０１４１】
１つの実施態様においては、R1は直鎖不飽和C1〜C3炭化水素基である。
【０１４２】
１つの実施態様においては、R1は直鎖不飽和C6〜C22炭化水素基である。
【０１４３】
１つの実施態様においては、R1は直鎖不飽和C6〜C18炭化水素基である。
【０１４４】
１つの実施態様においては、R1は直鎖不飽和C8〜C18炭化水素基である。
【０１４５】
１つの実施態様においては、R1は直鎖不飽和C10〜C18炭化水素基である。
【０１４６】
１つの実施態様においては、R1は直鎖不飽和C16〜C18炭化水素基である。
【０１４７】
１つの実施態様においては、R1は直鎖不飽和C16〜C22炭化水素基である。
【０１４８】
以下に検討するように、R1の構造を変化させることによって、医薬組成物の性質を変化させることができる。
【０１４９】
アミノ酸エステルは、J. March, Advanced Organic Chemistry, Reaction Mechanisms and Structure, 4th ed. John Wiley & Sons, NY, 1992, pp.393-400に記載されたような当業者に周知の方法を用いて、式R1-OHのアルコールによりアミノ酸をエステル化することによって得られることができる。アミノ酸及び式R1-OHのアルコールは商業的に入手可能であるか又は当業者に周知の方法によって調製可能である。式R1-OHのアルコールでアミノ酸をエステル化する場合、アミノ酸又はアルコールのいくつかの他の官能基を、エステル化反応に続いて除去される保護基で保護することが必要であるかもしれない。当業者は、式R1-OHのアルコールでアミノ酸をエステル化する前にどの官能基が保護される必要があるかが容易にわかるであろう。好適な保護基は、T.W. Greene, et al., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd ed. (1999)に記載されたもののように、当業者に知られている。
【０１５０】
６．３．１  アミノ酸アミド
アミノ酸アミドは、任意のアミノ酸の任意のアミドであることができ、すなわち、アミノ酸のカルボン酸基が式HN(R3)(R4)のアミンと反応させられてアミドを提供し、ここで、R3とR4は、上記で定義されたとおりである。したがって、アミノ酸アミドは以下の式（II）：
【化９】
2009515962.tif 000010
｛式中、
Rは、アミノ酸側鎖であり；
R3は、C1〜C22炭化水素基であり；そして
R4は、水素又はC1〜C22炭化水素基である。｝
を有する。
【０１５１】
当業者が容易にわかるとおり、アミノ酸側鎖Rについては広く多様な基が可能である。例えば、アミノ酸側鎖は、場合により置換可能な炭化水素基であることができる。好適な置換基は、ハロ、ニトロ、シアノ、チオール、アミノ、ヒドロキシ、カルボン酸、スルホン酸、芳香族基、及び芳香族又は非芳香族複素環基を含むがこれらに限定されない。好ましくは、アミノ酸側鎖は、場合によりチオール、アミノ、ヒドロキシ、カルボン酸、芳香族基、又は芳香族もしくは非芳香族複素環で置換された直鎖又は分岐鎖C1〜C10炭化水素；芳香族基；或いは芳香族又は非芳香族複素環基である。
【０１５２】
アミノ酸アミドは、天然のアミノ酸又は合成により調製されたアミノ酸のアミドであることができる。アミノ酸は、D-アミノ酸又はL-アミノ酸であることができる。好ましくは、アミノ酸エステルは、天然アミノ酸のエステルである。より好ましくは、アミノ酸エステルは、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、アスパラギン、グルタミン、トリプトファン、プロリン、セリン、トレオニン、チロシン、ヒドロキシプロリン、システイン、メチオニン、アスパラギン酸、グルタミン酸、リジン、アルギニン、及びヒスチジンから選ばれるアミノ酸のエステルである。
【０１５３】
R3基は、C1〜C22炭化水素基のいずれかであることができる。R4基は、水素又はC1〜C22炭化水素基のいずれかであることができる。代表的なC1〜C22炭化水素基は、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、トリデシル、テトラデシル、ペンタデシル、ヘキサデシル、ヘプタデシル、オクタデシル、アリル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シス−９−ヘキサデセニル、シス−９−オクタデセニル、シス，シス−９，１２−オクタデセニル、及びシス，シス，シス−９，１２，１５−オクタデカトリエニルを含むがこれらに限定されない。
【０１５４】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖炭化水素基である。
【０１５５】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は分岐鎖炭化水素基である。
【０１５６】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は飽和炭化水素基である。
【０１５７】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は不飽和炭化水素基である。
【０１５８】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖飽和炭化水素基である。
【０１５９】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖不飽和炭化水素基である。
【０１６０】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3はC1〜C16炭化水素基である。
【０１６１】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3はC1〜C10炭化水素基である。
【０１６２】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3はC1〜C5炭化水素基である。
【０１６３】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3はC1〜C3炭化水素基である。
【０１６４】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3はC6〜C22炭化水素基である。
【０１６５】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3はC6〜C18炭化水素基である。
【０１６６】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3はC8〜C18炭化水素基である。
【０１６７】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3はC10〜C18炭化水素基である。
【０１６８】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3はC16〜C18炭化水素基である。
【０１６９】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3はC16〜C22炭化水素基である。
【０１７０】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖C1〜C16炭化水素基である。
【０１７１】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖C1〜C10炭化水素基である。
【０１７２】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖C1〜C5炭化水素基である。
【０１７３】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖C1〜C3炭化水素基である。
【０１７４】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖C6〜C22炭化水素基である。
【０１７５】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖C6〜C18炭化水素基である。
【０１７６】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖C8〜C18炭化水素基である。
【０１７７】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖C10〜C18炭化水素基である。
【０１７８】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖C16〜C18炭化水素基である。
【０１７９】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖C16〜C22炭化水素基である。
【０１８０】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は分岐鎖C1〜C16炭化水素基である。
【０１８１】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は分岐鎖C1〜C10炭化水素基である。
【０１８２】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は分岐鎖C1〜C5炭化水素基である。
【０１８３】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は分岐鎖C1〜C3炭化水素基である。
【０１８４】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は分岐鎖C6〜C22炭化水素基である。
【０１８５】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は分岐鎖C6〜C18炭化水素基である。
【０１８６】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は分岐鎖C8〜C18炭化水素基である。
【０１８７】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は分岐鎖C10〜C18炭化水素基である。
【０１８８】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は分岐鎖C16〜C18炭化水素基である。
【０１８９】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は分岐鎖C16〜C22炭化水素基である。
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖飽和C1〜C16炭化水素基である。
【０１９０】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖飽和C1〜C10炭化水素基である。
【０１９１】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖飽和C1〜C5炭化水素基である。
【０１９２】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖飽和C1〜C3炭化水素基である。
【０１９３】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖飽和C6〜C22炭化水素基である。
【０１９４】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖飽和C6〜C18炭化水素基である。
【０１９５】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖飽和C8〜C18炭化水素基である。
【０１９６】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖飽和C10〜C18炭化水素基である。
【０１９７】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖飽和C16〜C18炭化水素基である。
【０１９８】
１つの実施態様においては、R4は水素であり、そしてR3は直鎖飽和C16〜C22炭化水素基である。
【０１９９】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖又は分岐鎖の、飽和又は不飽和の炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２００】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、C1〜C16炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２０１】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、C1〜C10炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２０２】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、C1〜C5炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２０３】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、C1〜C3炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２０４】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、C6〜C22炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２０５】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、C6〜C18炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２０６】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、C8〜C18炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２０７】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、C10〜C18炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２０８】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、C16〜C18炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２０９】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、C16〜C22炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２１０】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖C1〜C16炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２１１】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖C1〜C10炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２１２】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖C1〜C5炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２１３】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖C1〜C3炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２１４】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖C6〜C22炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２１５】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖C6〜C18炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２１６】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖C8〜C18炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２１７】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖C10〜C18炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２１８】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖C16〜C18炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２１９】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖C16〜C22炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２２０】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、分岐鎖C1〜C16炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２２１】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、分岐鎖C1〜C10炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２２２】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、分岐鎖C1〜C5炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２２３】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、分岐鎖C1〜C3炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２２４】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、分岐鎖C6〜C22炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２２５】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、分岐鎖C6〜C18炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２２６】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、分岐鎖C8〜C18炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２２７】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、分岐鎖C10〜C18炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２２８】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、分岐鎖C16〜C18炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２２９】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、分岐鎖C16〜C22炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２３０】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖飽和C1〜C16炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２３１】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖飽和C1〜C10炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２３２】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖飽和C1〜C5炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２３３】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖飽和C1〜C3炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２３４】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖飽和C6〜C22炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２３５】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖飽和C6〜C18炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２３６】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖飽和C8〜C18炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２３７】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖飽和C10〜C18炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２３８】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖飽和C16〜C18炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２３９】
１つの実施態様においては、R3とR4のそれぞれは、直鎖飽和C16〜C22炭化水素基であり、ここで、R3とR4は同じでも又は異なってもよい。
【０２４０】
１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、少なくとも６である。１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、少なくとも８である。１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、少なくとも１０である。１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、少なくとも１２である。１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、少なくとも１８である。
【０２４１】
１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、６未満である。１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、８未満である。１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、１０未満である。１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、１２未満である。１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、１８未満である。
【０２４２】
１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、約１〜１６の範囲にある。１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、約１〜１０の範囲にある。１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、約１〜５の範囲にある。１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、約１〜３の範囲にある。１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、約１６〜２２の範囲にある。１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、約１６〜１８の範囲にある。１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、約８〜１８の範囲にある。１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、約１０〜１８の範囲にある。１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、約１２〜１８の範囲にある。１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、約６〜３０の範囲にある。１つの実施態様においては、R3及びR4中の炭素原子を併せた数は、約２２〜３０の範囲にある。
【０２４３】
後で検討するように、R3及びR4の構造を変化させることによって、医薬組成物の性質を変化させることができる。
【０２４４】
アミノ酸アミドは、J. March, Advanced Organic Chemistry, Reaction Mechanisms and Structure, 4th ed. John Wiley & Sons, NY, 1992, pp.417-427などに記載された、当業者に周知の方法を用いてアミノ酸のカルボン酸基をアミド基に変換することによって得ることができる。典型的には、アミノ酸は、アミノ酸エステル又はアミノ酸の酸塩化物などのアミノ酸誘導体に変換され、そして、アミノ酸誘導体は式NHR3R4のアミンと反応させられてアミノ酸アミドを提供する。アミノ酸及び式NHR3R4のアミンは商業的に入手可能であるか又は当業者に周知の方法によって調製可能である。アミノ酸誘導体の生成又はアミノ酸誘導体と式NHR3R4のアミンとの反応の場合、アミノ酸誘導体又はアミンのいくつかの他の官能基を、アミド化反応後に除去される保護基で保護する必要があるかもしれない。当業者は、アミノ酸誘導体と式NHR3R4のアミンとの反応の前にどの官能基が保護される必要があるかが容易にわかるであろう。T.W. Greene, et al. Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd ed. (1999)に記載されたもののような、好適な保護基は、当業者に知られているであろう。
【０２４５】
６．４  本発明の医薬組成物の例
６．４．１  （ｉ）医薬として許容可能な有機塩基及び（ｉｉ）プロトン化アプタマーを含む医薬組成物
１つの実施態様においては、医薬組成物は、（ｉ）プロトン化アプタマー及び（ｉｉ）医薬として許容可能な有機塩基を含む。理論にとらわれることは望まないが、塩基−NH2の式により表される医薬として許容可能な有機塩基とプロトン化アプタマーに関して以下に図示するとおり、プロトン化アプタマーの酸性リン酸基が医薬として許容可能な有機塩基のアミン基をプロトン化して、１つ以上の医薬として許容可能な有機塩基分子とアプタマーとの間に塩を形成すると考えられる。
【０２４６】
【化１０】
2009515962.tif 000011
｛式中、
Bは、ヌクレオチドであり、
Sは、糖であり、そして、
塩基−NH3+は、プロトン化された医薬として許容可能な有機塩基である。しかしながら、すべてのリン酸基が医薬として許容可能な有機塩基分子にイオン結合する必要はない。｝
【０２４７】
任意の上記の医薬として許容可能な有機塩基が医薬組成物中で使用可能である。
【０２４８】
任意の上記アプタマーが医薬組成物中で使用可能である。
【０２４９】
１つの実施態様においては、医薬組成物はさらに溶媒を含む。
【０２５０】
１つの実施態様においては、溶媒は水を含む。
【０２５１】
１つの実施態様においては、溶媒は医薬として許容可能な有機溶媒を含む。本明細書中に記載の任意の医薬として許容可能な有機溶媒が本発明の組成物中において使用可能である。
【０２５２】
１つの実施態様においては、医薬組成物は、医薬として許容可能な有機溶媒中の塩の溶液である。
【０２５３】
１つの実施態様においては、医薬組成物は、医薬として許容可能な有機溶媒を含み、そしてさらに、リン脂質、スフィンゴミエリン、又はホスファチジルコリンを含む。理論にとらわれることを望まずに、リン脂質、スフィンゴミエリン、又はホスファチジルコリンは、医薬組成物が水中に注入された場合に沈殿の形成を促進し、そして得られた沈殿からのアプタマーの制御された放出を促進することもできる。典型的には、リン脂質、スフィンゴミエリン、又はホスファチジルコリンは、医薬組成物の０重量％超〜１０重量％の量で存在する。１つの実施態様においては、リン脂質、スフィンゴミエリン、又はホスファチジルコリンは、医薬組成物の約０．１〜１０重量％の量で存在する。１つの実施態様においては、リン脂質、スフィンゴミエリン、又はホスファチジルコリンは、医薬組成物の約１〜７．５重量％の量で存在する。１つの実施態様においては、リン脂質、スフィンゴミエリン、又はホスファチジルコリンは、医薬組成物の約１．５〜５重量％の量で存在する。１つの実施態様においては、リン脂質、スフィンゴミエリン、又はホスファチジルコリンは、医薬組成物の約２〜４重量％の量で存在する。
【０２５４】
アプタマー上の酸性基の医薬として許容可能な有機塩基上の塩基性基に対するモル比は、典型的に、約２：１〜１：２である。１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性基の医薬として許容可能な有機塩基上の塩基性基に対するモル比は、約１．５：１〜１：１．５である。１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性基の医薬として許容可能な有機塩基上の塩基性基に対するモル比は、約１．２５：１〜１：１．２５である。１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性基の医薬として許容可能な有機塩基上の塩基性基に対するモル比は、約１．１：１〜１：１．１である。１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性基の医薬として許容可能な有機塩基上の塩基性基に対するモル比は、約１：１である。しかしながら、アプタマー上の酸性基の医薬として許容可能な有機塩基上の塩基性基に対するモル比のより広い範囲も可能である。例えば、アプタマー上の酸性基の医薬として許容可能な有機塩基上の塩基性基に対するモル比は、約１５：１〜１：１５であることができる。
【０２５５】
６．４．１（ｉ）  （ｉ）アミノ酸エステル又はアミノ酸アミド、及び（ｉｉ）プロトン化アプタマーを含む医薬組成物
理論にとらわれることを望まずに、アミノ酸エステルとアプタマーについて以下に図示するように、プロトン化アプタマーの酸性リン酸基がアミノ酸エステル又はアミドのアミン基をプロトン化して、１つ以上のアミノ酸エステル又はアミド分子とアプタマーの間に塩を形成すると考えられる：
【０２５６】
【化１１】
2009515962.tif 000012
｛式中、
Ｂ、Ｓ、Ｒ及びR1は、上記の意味を有する。しかしながら、すべてのリン酸基がアミノ酸エステル又はアミノ酸アミドにイオン結合する必要はない。｝
【０２５７】
任意の上記アミノ酸又はアミノ酸エステルは医薬組成物中で使用可能である。
【０２５８】
任意の上記アプタマーは医薬組成物中で使用可能である。
【０２５９】
１つの実施態様においては、医薬組成物はさらに溶媒を含む。
【０２６０】
１つの実施態様においては、溶媒は水を含む。
【０２６１】
１つの実施態様においては、溶媒は医薬として許容可能な有機溶媒を含む。任意の上記医薬として許容可能な溶媒は、本発明の組成物中で使用可能である。
【０２６２】
１つの実施態様においては、医薬組成物は、医薬として許容可能な有機溶媒を含み、さらにリン脂質、スフィンゴミエリン、又はホスファチジルコリンを含む。理論にとらわれることを望まずに、リン脂質、スフィンゴミエリン、又はホスファチジルコリンは、医薬組成物が水中に注入された場合に沈殿の形成を促進し、そして、得られた沈殿からのアプタマーの制御された放出も促進すると考えられる。典型的には、リン脂質、スフィンゴミエリン、又はホスファチジルコリンは、医薬組成物の０重量％超〜１０重量％の量で存在する。１つの実施態様においては、リン脂質、スフィンゴミエリン、又はホスファチジルコリンは、医薬組成物の約０．１〜１０重量％の量で存在する。１つの実施態様においては、リン脂質、スフィンゴミエリン、又はホスファチジルコリンは、医薬組成物の約１〜７．５重量％の量で存在する。１つの実施態様においては、リン脂質、スフィンゴミエリン、又はホスファチジルコリンは、医薬組成物の約１．５〜５重量％の量で存在する。１つの実施態様においては、リン脂質、スフィンゴミエリン、又はホスファチジルコリンは、医薬組成物の約２〜４重量％の量で存在する。
【０２６３】
アプタマー上の酸性基のアミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対するモル比は、典型的には、約２：１〜１：２である。１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性基のアミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対するモル比は、約１．５：１〜１：１．５である。１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性基のアミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対するモル比は、約１．２５：１〜１：１．２５である。１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性基のアミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対するモル比は、約１．１：１〜１：１．１である。１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性基のアミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対するモル比は、約１：１である。しかしながら、アプタマー上の酸性基のアミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対するモル比のより広い範囲も可能である。例えば、アプタマー上の酸性基のアミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対するモル比は、約１５：１〜１：１５であることができる。
【０２６４】
６．４．1（ｉ）（ａ）  アミノ酸エステル又はアミドがリジンのアミノ酸エステル又はアミドである、医薬組成物
１つの実施態様においては、医薬組成物はリジンのエステル又はアミドを含む。
【０２６５】
１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性のリン酸基に対してリジン分子はモル等量未満、すなわち、アミノ酸エステル又はアミド分子に対してアプタマー上の酸性リン酸基は過剰、である。
【０２６６】
理論にとらわれることを望まずに、リジンのアミノ酸エステル又はアミドは、以下に示すように、2つのプロトン化アプタマー分子を架橋すると考えられる：
【０２６７】
【化１２】
2009515962.tif 000013
｛式中、
Ｂ、Ｓ及びR1は上記の意味を有する。｝
【０２６８】
リジンのエステル又はアミド、プロトン化アプタマー及びカルボン酸を含む、医薬組成物
１つの実施態様においては、アミノ酸エステル又はアミドは、リジンのエステル又はアミドであり、そして医薬組成物はさらにカルボン酸を含む。理論にとらわれることを望まずに、カルボン酸がリジンのε−アミン基をプロトン化して、以下に示す構造を与えると考えられる：
【０２６９】
【化１３】
2009515962.tif 000014
｛式中、
Ｂ、Ｓ及びR1は上記の意味を有し、かつR9はC1〜C21炭化水素である。｝
【０２７０】
アミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対するアプタマー上の酸性基及びカルボン酸上の酸性基の併合したモル比は、典型的には、約２：１〜１：２である。１つの実施態様においては、アミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対するアプタマー上の酸性基及びカルボン酸上の酸性基の併合したモル比は、約１．５：１〜１：１．５である。１つの実施態様においては、アミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対するアプタマー上の酸性基及びカルボン酸上の酸性基の併合したモル比は、約１．２５：１〜１：１．２５である。１つの実施態様においては、アミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対するアプタマー上の酸性基及びカルボン酸上の酸性基の併合したモル比は、約１．１：１〜１：１．１である。１つの実施態様においては、アミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対するアプタマー上の酸性基及びカルボン酸上の酸性基の併合したモル比は、約１：１である。しかしながら、アミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対するアプタマー上の酸性基及びカルボン酸上の酸性基の併合したモル比のより広い範囲も可能である。例えば、アプタマー上の酸性基及びカルボン酸上の酸性基のアミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対するモル比は、約１５：１〜１：１５であることができる。
【０２７１】
一般的には、アプタマー上の酸性基のカルボン酸上の酸性基に対するモル比は、約２０：１〜１：２０である。１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性基のカルボン酸上の酸性基に対するモル比は、約１５：１〜１：１５である。１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性基のカルボン酸上の酸性基に対するモル比は、約１０：１〜１：１０である。１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性基のカルボン酸上の酸性基に対するモル比は、約５：１〜１：５である。１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性基のカルボン酸上の酸性基に対するモル比は、約２：１〜１：２である。
【０２７２】
カルボン酸
カルボン酸は、任意の医薬として許容可能なカルボン酸であることができる。典型的には、カルボン酸は、C1〜C22カルボン酸である。好適なカルボン酸は、酢酸、プロパン酸、ブタン酸、ペンタン酸、デカン酸、ヘキサン酸、安息香酸、カプロン酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、パルミン酸、オレイン酸、リノール酸、及びリノレン酸を含むが、これらに限定されない。
【０２７３】
１つの実施態様においては、カルボン酸はC1〜C16カルボン酸である。
【０２７４】
１つの実施態様においては、カルボン酸はC1〜C10カルボン酸である。
【０２７５】
１つの実施態様においては、カルボン酸はC1〜C5カルボン酸である。
【０２７６】
１つの実施態様においては、カルボン酸はC1〜C3カルボン酸である。
【０２７７】
１つの実施態様においては、カルボン酸はC6〜C22カルボン酸である。
【０２７８】
１つの実施態様においては、カルボン酸はC6〜C18カルボン酸である。
【０２７９】
１つの実施態様においては、カルボン酸はC8〜C18カルボン酸である。
【０２８０】
１つの実施態様においては、カルボン酸はC10〜C18カルボン酸である。
【０２８１】
１つの実施態様においては、カルボン酸はC6〜C18カルボン酸である。
【０２８２】
１つの実施態様においては、カルボン酸はC16〜C22カルボン酸である。
【０２８３】
１つの実施態様においては、カルボン酸、飽和または不飽和脂肪酸である。
【０２８４】
１つの実施態様においては、カルボン酸は、飽和脂肪酸である。
【０２８５】
１つの実施態様においては、カルボン酸は、不飽和脂肪酸である。
【０２８６】
１つの実施態様においては、カルボン酸は、ジカルボン酸である。好適なジカルボン酸は、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、グルタミン酸、アジピン酸、及びピメリン酸を含むが、これらに限定されない。
【０２８７】
１つの実施態様においては、カルボン酸はポリカルボン酸である。
【０２８８】
カルボン酸は商業的に入手可能であるか、又は当業者に周知の方法によって調製可能である。
【０２８９】
１つの実施態様においては、カルボン酸はN-アシルアミノ酸である。N-アシルアミノ酸は以下の式（III）：
【化１４】
2009515962.tif 000015
｛式中、
Rは、アミノ酸側鎖であり、上記において定義され；そして
R2は、式-C(O)-R5のアシル基であり、ここで、R5は置換されたC1〜C21炭化水素基であり、すなわち、アシル基R2は、C2〜C22アシル基である。｝
により表される。代表的な式-C(O)-R5のアシル基は、アセチル、プロピオニル、ブタノイル、ヘキサノイル、カプロイル、ヘプトイル、オクトイル、ノノイル、デコイル、ウンデコイル、ドデコイル、トリデコイル、テトラデコイル、ペンタデコイル、ヘキサデコイル、ヘプタデコイル、オクタデコイル、ラウロリル、ミリストイル、パルミトイル、ステアロイル、パルミオレオイル、オレオイル、リノレイオイル、リノレノイル、及びベンゾイルを含むが、これらに限定されない。
【０２９０】
１つの実施態様においては、R5は、C1〜C15炭化水素基であり、すなわち、式-C(O)-R5のアシル基は、C2〜C16アシル基である。
【０２９１】
１つの実施態様においては、R5は、C1〜C9炭化水素基であり、すなわち、式-C(O)-R5のアシル基は、C2〜C10アシル基である。
【０２９２】
１つの実施態様においては、R5は、C1〜C5炭化水素基であり、すなわち、式-C(O)-R5のアシル基は、C2〜C6アシル基である。
【０２９３】
１つの実施態様においては、R5は、C1〜C3炭化水素基であり、すなわち、式-C(O)-R5のアシル基は、C2〜C4アシル基である。
【０２９４】
１つの実施態様においては、R5は、C5〜C21炭化水素基であり、すなわち、式-C(O)-R5のアシル基は、C6〜C22アシル基である。
【０２９５】
１つの実施態様においては、R5は、C5〜C17炭化水素基であり、すなわち、式-C(O)-R5のアシル基は、C6〜C18アシル基である。
【０２９６】
１つの実施態様においては、R5は、C7〜C17炭化水素基であり、すなわち、式-C(O)-R5のアシル基は、C8〜C18アシル基である。
【０２９７】
１つの実施態様においては、R5は、C9〜C17炭化水素基であり、すなわち、式-C(O)-R5のアシル基は、C10〜C18アシル基である。
【０２９８】
１つの実施態様においては、R5は、C15〜C21炭化水素基であり、すなわち、式-C(O)-R5のアシル基は、C16〜C22アシル基である。
【０２９９】
１つの実施態様においては、式-C(O)-R5のアシル基は、飽和又は不飽和脂肪酸から得られる。
【０３００】
１つの実施態様においては、式-C(O)-R5のアシル基は、カプロイル、ラウロリル、ミリストイル、パルミトイル、ステアロイル、パルミオレオイル、オレオイル、リノレオイル、又はリノレノイル基である。
【０３０１】
N-アシル化アミノ酸は、当業者に周知の方法によって得られることができる。例えば、N-アシル化アミノ酸は、当業者に周知の方法を用いて、式T-C(O)-R5、ここで、Tはハライド、好ましくはクロライドであり、R1は上記の定義のとおりである、の酸ハライドとアミノ酸を反応させることによって得られることができる。式T-C(O)-R5の酸ハライドでアミノ酸をN-アシル化する場合、アミノ酸又は酸ハライドのいくつかの他の官能基を、アシル化反応後に続いて除去される保護基で保護することが必要かもしれない。本分野の当業者は、式T-C(O)-R5の酸ハライドでアミノ酸をアシル化する前にどんな官能基が保護される必要があるかを容易に知ることができるだろう。T.W. Greene, et al., Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd ed.(1999)中に記載されたものなどの好適な保護基は、当業者に知られている。
【０３０２】
酸ハライドは、J.March, Advanced Organic Chemistry, Reaction Mechanisms and Structure, 4th ed. John Wiley & Sons, NY, 1992, pp.437-8に記載されたものなどの、当業者に周知の方法を用いて得られることができる。例えば、酸ハライドは、カルボン酸と塩化チオニル、臭化チオニル、又はヨウ化チオニルを反応させることによって調製可能である。酸塩化物及び臭化物もまた、カルボン酸を三塩化リン、三臭化リンとそれぞれ反応させることによって調製可能である。酸塩化物はまた、カルボン酸とPh3Pを四塩化炭素中で反応させることによっても調製可能である。酸フッ化物は、カルボン酸とフッ化シアヌルを反応させることによって調製可能である。
【０３０３】
後で検討するとおり、カルボン酸の構造を変化させることによって、医薬組成物の性質を変更することが可能である。
【０３０４】
リジンのエステル又はアミド、プロトン化アプタマー、及びリン脂質、ホスファチジルコリン又はスフィンゴミエリンを含む、医薬組成物
他の実施態様においては、アミノ酸エステル又はアミドは、リジンのエステル又はアミドであり、医薬組成物はさらにリン脂質、ホスファチジルコリン又はスフィンゴミエリンを含む。理論にとらわれることを望まずに、リン脂質、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン上のプロトン化リン酸基は、リジンのε−アミノ酸をプロトン化して、リン脂質については以下に示す構造を提供する：
【０３０５】
【化１５】
2009515962.tif 000016
｛式中、
B、S、R1、R2、R3及びR4は、上記で定義されたとおりである。｝
【０３０６】
アミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対する、アプタマー上の酸性基及びリン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上の酸性基の併合されたモル比は、典型的には、約２：１〜１：２である。１つの実施態様においては、アミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対する、アプタマー上の酸性基及びリン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上の酸性基の併合されたモル比は、約１．５：１〜１：１．５である。１つの実施態様においては、アミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対する、アプタマー上の酸性基及びリン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上の酸性基の併合されたモル比は、約１．２５：１〜１：１．２５である。１つの実施態様においては、アミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対する、アプタマー上の酸性基及びリン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上の酸性基の併合されたモル比は、約１．１：１〜１：１．１である。１つの実施態様においては、アミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対する、アプタマー上の酸性基及びリン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上の酸性基の併合されたモル比は、約１：１である。しかしながら、アミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対する、アプタマー上の酸性基及びリン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上の酸性基の併合されたモル比のより広い範囲も可能である。例えば、アミノ酸エステル又はアミノ酸アミド上の塩基性基に対する、アプタマー上の酸性基及びリン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上の酸性基の併合されたモル比は、約１５：１〜１：１５であることができる。
【０３０７】
一般的には、アプタマー上の酸性基のリン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上の酸性基に対するモル比は、約２０：１〜１：２０である。１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性基のリン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上の酸性基に対するモル比は、約１５：１〜１：１５である。１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性基のリン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上の酸性基に対するモル比は、約１０：１〜１：１０である。１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性基のリン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上の酸性基に対するモル比は、約５：１〜１：５である。１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性基のリン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上の酸性基に対するモル比は、約２：１〜１：２である。
【０３０８】
後に検討するとおり、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンの構造を変化させることによって、医薬組成物の性質を変更することが可能である。
【０３０９】
リン脂質
任意の医薬として許容可能なリン脂質が本発明の医薬組成物中で使用可能である。
【０３１０】
代表的な医薬として許容可能なリン脂質は、以下の式：
【化１６】
2009515962.tif 000017
｛式中、
R1、R2、及びR3は、上記の定義のとおりである。｝
により表されるホスファチジン酸を含むがこれらに限定されない。本発明の組成物及び方法中での使用に適した、好適なホスファチジン酸は、Alabaster, ALのAvanti Polar Lipids Inc.から商業的に入手可能な、１−アシル−２−アシル−sn−グリセロ−３−ホスフェート及び１，２−ジアシル−sn−グリセロ−３−ホスフェートを含むが、これらに限定されない。
【０３１１】
以下の式：
【化１７】
2009515962.tif 000018
｛式中、
R1、R2、及びR3は、上記の定義のとおりである。｝
により表されるホスファチジルエタノールアミン。本発明の組成物及び方法中での使用に適した、好適なホスファチジルエタノールアミンは、Alabaster, ALのAvanti Polar Lipids Inc.から商業的に入手可能な、１−アシル−２−アシル−sn−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン及び１，２−ジアシル−sn−グリセロ−３−ホスホエタノールアミンを含むが、これらに限定されない。
【０３１２】
以下の式：
【化１８】
2009515962.tif 000019
｛式中、
R1、R2、及びR3は、上記の定義のとおりである。｝
により表されるホスファチジルコリン。本発明の組成物及び方法中での使用に適した、好適なホスファチジルコリンは、Alabaster, ALのAvanti Polar Lipids Inc.から商業的に入手可能な、1−アシル−２−アシル−sn−グリセロ−３−ホスホコリン及び１，２−ジアシル−sn−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（飽和）、並びに１，２−ジアシル−sn−グリセロ−３−ホスホエタノールアミン（不飽和）、並びに、Cologne, GermanyのPhospholipid GmbHから商業的に入手可能なPhospholipon（登録商標）−５０PG、Phospholipon（登録商標）−５３MCT、Phospholipon（登録商標）−７５SA、Phospholipon（登録商標）−８０、Phospholipon（登録商標）−９０NG、Phospholipon（登録商標）−９０H及びPhospholipon（登録商標）−１００Hを含むが、これらに限定されない。
【０３１３】
以下の式：
【化１９】
2009515962.tif 000020
｛式中、
R1、R2、及びR3は、上記の定義のとおりである。｝
により表されるホスファチジルセリン。本発明の組成物及び方法中での使用に適した、好適なホスファチジルセリンは、Alabaster, ALのAvanti Polar Lipids Inc.から商業的に入手可能な、1−アシル−２−アシル−sn−グリセロ−３−[ホスホ−L−セリン]及び１，２−ジアシル−sn−グリセロ−３−[ホスホ−L−セリン]を含むが、これらに限定されない。
【０３１４】
以下の式：
【化２０】
2009515962.tif 000021
｛式中、
R1及びR2は上記の定義のとおりであり、そしてR3は、-C=C-R9であり、ここで、R9は上記の定義のとおりである。｝
により表されるプラスマローゲン。本発明の組成物及び方法中での使用に適した、好適なプラスマローゲンは、Alabaster, ALのAvanti Polar Lipids Inc.から商業的に入手可能な、C16(Plasm)-12:0 NBD PC、C16(Plasm)-18:1 PC、C16(Plasm)-20:4 PC、C16(Plasm)-22:6 PC、C16(Plasm)-18:1 PC、C16(Plasm)-20:4 PE、及びC16(Plasm)-22:6 PEを含むが、これらに限定されない。
【０３１５】
以下の式：
【化２１】
2009515962.tif 000022
｛式中、
R1、R2及びR3は、上記の定義のとおりである。｝
により表されるホスファチジルグリセロール。本発明の組成物及び方法中での使用に適した、好適なホスファチジルグリセロールは、Alabaster, ALのAvanti Polar Lipids Inc.から商業的に入手可能な、１−アシル−２−アシル−sn−グリセロ−３−[ホスホ−rac−（１−グリセロール）]及び１，２−ジアシル−sn−グリセロ−３−[ホスホ−rac−（１−グリセロール）]を含むが、これらに限定されない。
【０３１６】
以下の式：
【化２２】
2009515962.tif 000023
｛式中、
R1、R2、R3及びR10は上記の定義のとおりである。｝
により表されるホスファチジルイノシトール。本発明の組成物及び方法中での使用に適した、好適なホスファチジルイノシトールは、Alabaster, ALのAvanti Polar Lipids Inc.から商業的に入手可能な、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルイノシトール−４−ホスフェート、及びホスファチジルイノシトール−４，５−ビスホスホネートを含むが、これらに限定されない。
【０３１７】
リン脂質は、商業的に入手可能であるか、又は当業者に周知の方法によって得られることができる。リン脂質を得るための代表的な方法は、Sandra Pesch et al., Properties of Unusual Phopholipids Bearing Acetylenic Fatty Acids, Tettrahedron, vol. 15, no.43, 14627-14634 (1997)；Sepp.D. Kohlwein, Phospholipid Synthesis, Sorting, Subcellular Traffic-The Yeast Approach, Trends in Cell Biology, vol.6, 260-266 (1996), Serguei V. Vinogradov, Synthesis of Phospholipids-Oligodeoxyribonucleotide Conjugates, Tett. Lett., vol. 36, no.14,2493-2496 (1995)及びその中の参考文献に記載されている。
【０３１８】
１つの実施態様においては、リン脂質は、（Cologne, GermanyのPhospholipid GmbH又はOxford, CTのAmerican Lecithin Companyから商業的に入手可能な）Phospholipon（登録商標）−E：８０である。
【０３１９】
１つの実施態様においては、リン脂質は、（Cologne, GermanyのPhospholipid GmbH又はOxford, CTのAmerican Lecithin Companyから商業的に入手可能な）Phopholipon（登録商標）−８０Gである。
【０３２０】
１つの実施態様においては、リン脂質は、（Cologne, GermanyのPhospholipid GmbH又はOxford, CTのAmerican Lecithin Companyから商業的に入手可能な）Phopholipon（登録商標）−８５Gである。
【０３２１】
１つの実施態様においては、リン脂質は、（Cologne, GermanyのPhospholipid GmbH又はOxford, CTのAmerican Lecithin Companyから商業的に入手可能な）Phopholipon（登録商標）−１００Hである。
【０３２２】
スフィンゴミエリン
任意の医薬として許容可能なスフィンゴミエリンが本発明の医薬組成物中で使用可能である。
【０３２３】
１つの実施態様においては、スフィンゴミエリンは、以下の：
【化２３】
2009515962.tif 000024
｛式中、
R11は、直鎖、飽和又は不飽和のC1〜C24炭化水素であり、R4は、-CH2CH2N(CH3)3+である。｝
である。他の実施態様においては、R11は、直鎖、飽和又は不飽和のC8〜C24炭化水素であり、R4は、-CH2CH2N(CH3)3+である。他の実施態様においては、R11は、直鎖、飽和又は不飽和のC16〜C24炭化水素であり、R4は、-CH2CH2N(CH3)3+である。
【０３２４】
好適なスフィンゴミエリンは、Alabaster, ALのAvanti Polar Lipids Inc.から商業的に入手可能な、C2−スフィンゴミエリン、C6−スフィンゴミエリン、C18−スフィンゴミエリン、C6−NBD−スフィンゴミエリン、及びC12−NBD−スフィンゴミエリンを含むが、これらに限定されない。
【０３２５】
同様に、他の実施態様においては、アミノ酸エステル又はアミドは、リジンのエステル又はアミドであり、そして医薬組成物はさらにホスファチジルコリンを含む。理論にとらわれることを望まずに、ホスファチジルコリン上のプロトン化リン酸基がリジンのε−アミン基をプロトン化して、以下に示す構造：
【化２４】
2009515962.tif 000025
｛式中、
S、B及びR1は、上記の定義のとおりである。｝
を提供すると考えられる。
【０３２６】
理論にとらわれることを望まずに、リジンのアミノ酸エステル又はアミドそしてリン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンをさらに含む医薬組成物においては、リジンのエステル又はアミドは、その中でリジンエステル又はアミドの各アミノ基が、リン脂質、ホスファチジルコリン又はスフィンゴミエリン分子によってプロトン化されている構造も形成すると考えられる。かかる構造は、リン脂質に関しては、以下に示される：
【化２５】
2009515962.tif 000026
｛式中、
R1、R2、R3及びR4は、上記の定義のとおりである。｝
【０３２７】
本発明は、リジンのエステル又はアミドを含む、上記のような医薬組成物も含み、ここで、リジンのエステル又はアミドは、N，N'−ジベンジルエチレンジアミンなどの他のジアミンで置換されている。
【０３２８】
６．４．１（ｉ）（ｂ）  アスパラギン酸又はグルタミン酸のジエステル又はジアミド及びプロトン化アプタマーを含む、医薬組成物
他の実施態様においては、アミノ酸エステル又はアミドは、アスパラギン酸又はグルタミン酸のエステル又はアミドであり、アスパラギン酸又はグルタミン酸の側鎖カルボン酸基もエステル化又はアミド化されている、すなわち、アスパラギン酸又はグルタミン酸のジエステル又はジアミンである。理論にとらわれることを望まずに、アスパラギン酸のジエステルに関しては、アプタマーによってプロトン化されて以下に示す構造を与えるように、アプタマーの酸性リン酸基が、グルタミン酸またはアスパラギン酸のジエステル又はジアミドのアミン基をプロトン化して、グルタミン酸またはアスパラギン酸のジエステル又はジアミドとアプタマーとの間の塩を形成すると考えられる：
【０３２９】
【化２６】
2009515962.tif 000027
｛式中、
Ｓ、Ｂ及びR1は、上記の定義のとおりであり、かつ、R6は以下に定義される。｝
【０３３０】
アスパラギン酸及びグルタミン酸のジエステルは、以下の構造：
【化２７】
2009515962.tif 000028
｛式中、R1は、上記に定義され、かつ、R6は、R1と同じである。｝
をそれぞれ有する。R1及びR6は同じでも異なることもできる。しかしながら、典型的には、R1とR6は同じである。
【０３３１】
アスパラギン酸及びグルタミン酸のジアミドは、以下の構造：
【化２８】
2009515962.tif 000029
｛式中、
R3とR4は、上記に定義され、R7は、R3と同じであり、そしてR8は、R4と同じである。アミド基-N(R3)(R4)及び-N(R7)(R8)は同じ又は異なることができる。｝
をそれぞれ有する。しかしながら、典型的には、アミド基-N(R3)(R4)及び-N(R7)(R8)は同じである。
【０３３２】
アプタマー上の酸性基のアスパラギン酸又はグルタミン酸のジエステル又はジアミドに対するモル比は、典型的には、約２：１〜１：２である。１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性基のアスパラギン酸又はグルタミン酸のジエステル又はジアミドに対するモル比は、約１．５：１〜１：１．５である。１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性基のアスパラギン酸又はグルタミン酸のジエステル又はジアミドに対するモル比は、約１．２５：１〜１：１．２５である。１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性基のアスパラギン酸又はグルタミン酸のジエステル又はジアミドに対するモル比は、約１．１：１〜１：１．１である。１つの実施態様においては、アプタマー上の酸性基のアスパラギン酸又はグルタミン酸のジエステル又はジアミドに対するモル比は、約１：１である。しかしながら、アプタマー上の酸性基のアスパラギン酸又はグルタミン酸のジエステル又はジアミドに対するモル比のより広い範囲も可能である。例えば、アプタマー上の酸性基のアスパラギン酸又はグルタミン酸のジエステル又はジアミドに対するモル比は、約１５：１〜１：１５であることができる。
【０３３３】
後に検討するとおり、アスパラギン酸又はグルタミン酸のジエステル又はジアミドの構造、すなわち、ジエステルのR1及びR6並びにジアミドのR3、R4、R7及びR8、を変化させることによって、医薬組成物の性質を変更することが可能である。
【０３３４】
６．４．１（ｉｉ）  （ｉ）プロトン化アプタマー、及び（ｉｉ）ポリリジンを含む、医薬組成物
他の実施態様においては、医薬組成物はプロトン化アプタマー及びポリリジンを含む。
【０３３５】
任意の上記アプタマーは医薬組成物中で使用可能である。
【０３３６】
（後に記載するようにポリリジンに変換されることのできる、Sigma-Aldrich of Milwaukee, WIから臭化水素酸塩として商業的に入手可能な、任意のポリリジンなどの）任意のポリリジンが本発明の医薬組成物中で使用可能である。１つの実施態様においては、ポリリジンは、約１，０００〜４，０００の分子量を有する。１つの実施態様においては、ポリリジンは、約４，０００〜１５，０００の分子量を有する。１つの実施態様においては、ポリリジンは、約１５，０００〜３０，０００の分子量を有する。１つの実施態様においては、ポリリジンは、約３０，０００〜７０，０００の分子量を有する。１つの実施態様においては、ポリリジンは、約７０，０００〜１５０，０００の分子量を有する。１つの実施態様においては、ポリリジンは、約１５０，０００〜３００，０００の分子量を有する。
【０３３７】
理論にとらわれることを望まずに、ポリリジン上のアミン基はアプタマー上の酸性リン酸基によってプロトン化されると考えられる。
【０３３８】
典型的には、アプタマーに対するポリリジンの量は、約３〜１０の範囲のpH値を有する医薬組成物の溶液（例えば、メタノール溶液又は水溶液）を提供するのに十分な量である。１つの実施態様においては、医薬組成物の溶液は、約５〜９の範囲のpH値を有する。１つの実施態様においては、医薬組成物の溶液は、約６〜８の範囲のpH値を有する。１つの実施態様においては、医薬組成物の溶液は、約７のpH値を有する。しかしながら、他のpH範囲も本発明の範囲内にある。例えば、１つの実施態様においては、医薬組成物の溶液は約３〜７の範囲のpH値を有し、そして他の実施態様においては、医薬組成物の溶液は、約７〜１０の範囲のpH値を有する。
【０３３９】
pHは、医薬組成物を（メタノール又は水などの）溶媒に溶解し、そして得られた溶液の数マイクロリッターを取り出し、そしてそれを（例えば、Milwaukee, WIのSigma-Aldrichから商業的に入手可能なものなどの）湿ったpH試験条片であって、溶液の塗布後に該試験条片の色によって溶液のpHを示すものに塗布することによって、容易に測定可能である。
【０３４０】
１つの実施態様においては、プロトン化アプタマー及びポリリジンを含む医薬組成物は、溶媒をさらに含む。１つの実施態様においては、溶媒は水を含む。１つの実施態様においては、溶媒は水である。１つの実施態様においては、溶媒は医薬として許容可能な有機溶媒を含む。１つの実施態様においては、溶媒は医薬として許容可能な有機溶媒である。１つの実施態様においては、溶媒は、N-メチルピロリドンを含む。１つの実施態様においては、溶媒は、N-メチルピロリドンである。
【０３４１】
プロトン化アプタマー及びポリリジンを含む医薬組成物は、水及び有機溶媒中での増加した溶解度を有することが有利である。例えば、ペグ化ARC259と約１３，０００の平均分子量を有するポリリジンの間に形成された医薬組成物は、約１２％（w/v）以下の濃度で水及びN-メチルピロリドンに溶解可能である。対照的に、（商業的に入手可能な臭化水素酸塩から後の記載のとおりに得られた）約１３，０００の平均分子量を有するポリリジン及びプロトン化アプタマーはどちらも、本質的に水及びN-メチルピロリドンに不溶性である。
【０３４２】
６．４．２  （ｉ）アプタマー、（ｉｉ）二価金属カチオン、及び（ｉｉｉ）場合によりカルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンを含む、医薬組成物
他の実施態様においては、医薬組成物は、（ｉ）アプタマー、（ｉｉ）二価金属カチオン、及び（ｉｉｉ）場合によりカルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンを含む。理論にとらわれることを望まずに、二価金属カチオンは、アプタマー上のリン酸基と相互反応して以下に示す構造を形成すると考えられる：
【０３４３】
【化２９】
2009515962.tif 000030
｛式中、
M+2は、二価金属カチオンであり、そして、B及びSは、上記の定義のとおりである。｝
【０３４４】
理論にとらわれることを望まずに、医薬組成物が任意のカルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンを含む場合、二価金属カチオンはアプタマー上のリン酸基及び該カルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンと相互反応して、カルボキシレートに関しては以下に示す構造を形成すると考えられる：
【０３４５】
【化３０】
2009515962.tif 000031
｛式中、
M+2、B、S及びR9は、上記の定義のとおりである。｝
【０３４６】
理論にとらわれることを望まずに、上記構造は、二価金属カチオンがリジンに取って代わる以外は、アプタマー；アミノ酸リジン；及びカルボン酸、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンの間に形成される構造に類似している。
【０３４７】
理論にとらわれることを望まずに、医薬組成物が任意のカルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンを含む場合にも、二価金属カチオンは１つ超のカルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンと相互反応して、カルボキシレートに関しては、以下に示す構造を形成すると考えられる：
【０３４８】
【化３１】
2009515962.tif 000032
｛式中、
M+2及びR9は、上記の定義のとおりである。｝
【０３４９】
１つの実施態様においては、医薬組成物はカルボキシレートを含む。
【０３５０】
１つの実施態様においては、医薬組成物はリン脂質を含む。
【０３５１】
１つの実施態様においては、医薬組成物はホスファチジルコリンを含む。
【０３５２】
１つの実施態様においては、医薬組成物はスフィンゴミエリンを含む。
【０３５３】
任意の上記アプタマーが医薬組成物中で使用可能である。
【０３５４】
カルボキシレートは、任意の医薬として許容可能なカルボン酸から得られることができる。本明細書に記載の任意のカルボン酸が、カルボキシレートを提供するために使用可能である。
【０３５５】
１つの実施態様においては、カルボン酸は、式（III）のN-アシルアミノ酸である。任意の上記式（III）のN-アシルアミノ酸が医薬組成物中で使用可能である。
【０３５６】
任意の上記リン脂質が医薬組成物中で使用可能である。
【０３５７】
任意の上記スフィンゴミエリンが医薬組成物中で使用可能である。
【０３５８】
好適な二価金属カチオンは、アルカリ土類金属カチオン、Mg+2、Zn+2、Cu+2、及びFe+2を含むがこれらに限定されない。好ましい二価金属カチオンは、Ca+2、Mg+2、Zn+2、Cu+2、及びFe+2である。
【０３５９】
二価金属カチオンに対する、アプタマー上のアニオン性基とカルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上のアニオン性基の併合されたモル比は、典型的には、約４：１〜１：４である。1つの実施態様においては、二価金属カチオンに対する、アプタマー上のアニオン性基とカルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上のアニオン性基の併合されたモル比は、約３：１〜１：３である。1つの実施態様においては、二価金属カチオンに対する、アプタマー上のアニオン性基とカルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上のアニオン性基の併合されたモル比は、約２．５：１〜１：２．５である。1つの実施態様においては、二価金属カチオンに対する、アプタマー上のアニオン性基とカルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上のアニオン性基の併合されたモル比は、約２：１〜１：２である。1つの実施態様においては、二価金属カチオンに対する、アプタマー上のアニオン性基とカルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上のアニオン性基の併合されたモル比は、約２：１である。しかしながら、二価金属カチオンに対する、アプタマー上のアニオン性基とカルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上のアニオン性基の併合されたモル比のより広い範囲も可能である。例えば、二価金属カチオンに対する、アプタマー上のアニオン性基とカルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上のアニオン性基の併合されたモル比は、約１５：１〜１：１５であることができる。
【０３６０】
一般的には、アプタマー上のアニオン性基の、カルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上のアニオン性基に対するモル比は、約２０：１〜１：２０である。１つの実施態様においては、アプタマー上のアニオン性基の、カルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上のアニオン性基に対するモル比は、約１５：１〜１：１５である。１つの実施態様においては、アプタマー上のアニオン性基の、カルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上のアニオン性基に対するモル比は、約１０：１〜１：１０である。１つの実施態様においては、アプタマー上のアニオン性基の、カルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上のアニオン性基に対するモル比は、約５：１〜１：５である。１つの実施態様においては、アプタマー上のアニオン性基の、カルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリン上のアニオン性基に対するモル比は、約２：１〜１：２である。
【０３６１】
後に検討するように、カルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンの構造を変化させることによって、医薬組成物の性質を変更することが可能である。
【０３６２】
６．５  任意の添加剤
医薬組成物は、動物への投与に好適な剤形を提供するために、場合により１つ以上の追加の賦形剤又は添加剤を含むことができる。動物に投与された場合、アプタマーを含む医薬組成物は、典型的には、動物への適切な投与のための形態を提供するように、医薬として許容可能な担体又は賦形剤を含む組成物の成分として投与される。好適な医薬賦形剤は、本明細書中に参考文献として援用されている、Remington's Pharmaceutical Sciences 1447-1676(Alfonso R． Gennaro ed．， 19th ed． 1995）中に記載されている。医薬組成物は、溶液、懸濁液、エマルジョン、錠剤、ピル、ペレット、カプセル、液体含有カプセル、散剤、坐剤、エマルジョン、エアロゾル、スプレー、懸濁液の形態、又は使用に適した任意の他の形態をとることができる。
【０３６３】
１つの実施態様においては、医薬組成物は、静脈内投与又は腸管外投与のために製剤される。典型的には、静脈内投与又は腸管外投与のための組成物は、好適は滅菌溶媒を含み、これは等張の水性緩衝液又は医薬として許容可能な有機溶媒であってよい。必要に応じて、組成物は溶解剤も含むことができる。静脈内投与のための組成物は、場合により、注射部位における痛みを少なくするためのリドカインなどの局所麻酔剤を含むこともできる。一般的に、成分は、例えば、活性剤の量を示したアンプル又はサシェなどの気密性の密封容器中の凍結乾燥された乾燥散剤又は水を含まない濃縮物などとして、別個に又は単位剤形中に一緒に混合されて供給される。アプタマーを含む医薬組成物が輸注によって投与される場合、それらは、医薬グレードの滅菌水又は食塩水などを含む輸注ボトルなどとともに販売されることができる。医薬組成物が注射によって投与される場合、成分が投与前に混合されることができるように、注射用滅菌水、食塩水又は医薬として許容可能な有機溶媒などの他の溶媒のアンプルが提供されることができる。
【０３６４】
他の実施態様においては、医薬組成物は、経口投与に適合した組成物として日常の手順にしたがって製剤される。経口送達のための組成物は、錠剤、ロゼンジ、水性又は油性懸濁液、粒剤、散剤、エマルジョン、カプセル、シロップ、又はエリキシルなどの形態であることができる。経口用組成物は、マンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、及び炭酸マグネシウムなどの標準的賦形剤を含むことができる。典型的には、賦形剤は医薬グレードのものである。経口で投与される組成物は、医薬としておいしい製剤を提供するために、フルクトース、アスパルテーム又はサッカリンなどの甘味料；ペパーミント、ウィンターグリーン油又はチェリー油などの風味剤；着色剤；及び保存剤などの１つ以上の剤も含むことができる。さらに、錠剤又はピルの形態である場合、組成物は胃腸管内での崩壊そして吸収を遅らせて、それによって持続性の作用を長期にわたって提供するために、コーティングされることができる。浸透活性推進化合物を取り巻く選択的透過性膜も、経口投与用組成物のためには好適である。モノステアリン酸グリセロール又はステアリン酸グリセロールなどの遅延剤も使用可能である。
【０３６５】
さらに溶媒を含む医薬組成物は、所望により微生物増殖に対するさらなる保護を提供するように、場合により好適な量の医薬として許容可能な保存剤を含むことができる。本発明の医薬組成物中で有用な保存剤の例は、ソルビン酸カリウム、メチルパラベン、プロピルパラベン、安息香酸及びその塩、ブチルパラベンなどのパラヒドロキシ安息香酸の他のエステル、エチル又はベンジルアルコールなどのアルコール、フェノールなどのフェノール性化合物、又は塩化ベンザルコニウムなどの四級化合物（例えば、塩化ベンゼトニウム）を含むが、これらに限定されない。
【０３６６】
１つの実施態様においては、本発明の医薬組成物は、場合により好適な量の医薬として許容可能なポリマーを含む。ポリマーは、医薬組成物の粘度を増加させることができる。本発明の組成物及び方法における使用のために好適なポリマーは、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース（HPMC）、キトサン、ポリアクリル酸、及びポリメタクリル酸を含むが、これらに限定されない。
【０３６７】
典型的には、ポリマーは、医薬組成物の０重量％超〜１０重量％の量で存在する。
【０３６８】
１つの実施態様においては、ポリマーは、医薬組成物の約０．１〜１０重量％の量で存在する。
【０３６９】
１つの実施態様においては、ポリマーは、医薬組成物の約１〜７．５重量％の量で存在する。
【０３７０】
１つの実施態様においては、ポリマーは、医薬組成物の約１．５〜５重量％の量で存在する。
【０３７１】
１つの実施態様においては、ポリマーは、医薬組成物の約２〜４重量％の量で存在する。
【０３７２】
１つの実施態様においては、本発明の医薬組成物は実質的にポリマーを含まない。
【０３７３】
１つの実施態様においては、本発明の医薬組成物に添加される任意の追加の成分は、動物による使用又は消費のためにFDAによってGRASと名づけられる。
【０３７４】
１つの実施態様においては、本発明の医薬組成物に添加される任意の追加の成分は、ヒトによる使用又は消費のためにFDAによってGRASと名づけられる。
【０３７５】
医薬組成物の成分（溶媒及び任意の他の成分）は、生物適合性かつ無毒性であり、経時的に体により単純に吸収及び／又は代謝されることが好ましい。
【０３７６】
６．５．１  さらに溶媒を含む医薬組成物
上記のとおり、本発明の医薬組成物はさらに溶媒を含むことができる。
【０３７７】
１つの実施態様においては、溶媒は水を含む。
【０３７８】
１つの実施態様においては、溶媒は、医薬として許容可能な有機溶媒を含む。
【０３７９】
典型的には、アプタマーは金属カチオンの塩、例えば、カリウム又はナトリウム塩、として利用可能である。しかしながら、これらの塩は、典型的には約２５mg/mL未満と、水性溶媒及び／又は有機溶媒中の溶解度が低い。しかしながら、（ｉ）アミノ酸エステル又はアミノ酸アミド及び（ｉｉ）プロトン化アプタマーを含む本発明の医薬組成物は、水性溶媒及び／又は有機溶媒中で顕著により溶解性である。理論にとらわれることを望まずに、アミノ酸エステルまたはアミノ酸アミド及びプロトン化アプタマーは、上記で例解したような塩を形成し、該塩は、水性溶媒及び／又は有機溶媒中で溶解性である。
【０３８０】
同様に、理論にとらわれることを望まずに、（ｉ）アプタマー；（ｉｉ）二価金属カチオン；及び（ｉｉｉ）場合により、カルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンを含む医薬組成物は、上記で例解したような塩を形成し、該塩は、水性溶媒及び／又は有機溶媒中で溶解性である。
【０３８１】
１つの実施態様においては、溶媒中のアプタマーの濃度は、医薬組成物の約２重量％超である。１つの実施態様においては、溶媒中のアプタマーの濃度は、医薬組成物の約５重量％超である。１つの実施態様においては、溶媒中のアプタマーの濃度は、医薬組成物の約７．５重量％超である。１つの実施態様においては、溶媒中のアプタマーの濃度は、医薬組成物の約１０重量％超である。１つの実施態様においては、溶媒中のアプタマーの濃度は、医薬組成物の約１２重量％超である。１つの実施態様においては、溶媒中のアプタマーの濃度は、医薬組成物の約１５重量％超である。１つの実施態様においては、溶媒中のアプタマーの濃度は、医薬組成物の約２〜５重量％である。１つの実施態様においては、溶媒中のアプタマーの濃度は、医薬組成物の約２〜７．５重量％である。１つの実施態様においては、溶媒中のアプタマーの濃度は、医薬組成物の約２〜１０重量％である。１つの実施態様においては、溶媒中のアプタマーの濃度は、医薬組成物の約２〜１２重量％である。１つの実施態様においては、溶媒中のアプタマーの濃度は、医薬組成物の約２〜１５重量％である。１つの実施態様においては、溶媒中のアプタマーの濃度は、医薬組成物の約２〜２０重量％である。
【０３８２】
任意の医薬として許容可能な有機溶媒が、本発明の医薬組成物中で使用可能である。代表的な医薬として許容可能な有機溶媒は、ピロリドン、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール（すなわち、１，３−プロピレングリコール）、グリセロールフォーマル、イソソルビッドジメチルエーテル、エタノール、ジメチルスルホキシド、テトラグリコール、テトラヒドロフルフリルアルコール、トリアセチン、プロピレンカーボネート、ジメチルアセトアミド、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、及びそれらの混合物を含むが、これらに限定されない。
【０３８３】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、水溶性溶媒である。代表的な医薬として許容可能な水溶性有機溶媒は、トリアセチンである。
【０３８４】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、水混和性溶媒である。代表的な医薬として許容可能な水混和性有機溶媒は、グリセロールフォーマル、ポリエチレングリコール、及びプロピレングリコールを含むが、これらに限定されない。
【０３８５】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、ピロリドンを含む。１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、実質的に他の有機溶媒を含まないピロリドンである。
【０３８６】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、Ｎ−メチル−２−ピロリドンを含む。１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、実質的に他の有機溶媒を含まないＮ−メチル−２−ピロリドンである。
【０３８７】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、ポリエチレングリコールを含む。１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、実質的に他の有機溶媒を含まないポリエチレングリコールである。
【０３８８】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、プロピレングリコールを含む。１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、実質的に他の有機溶媒を含まないプロピレングリコールである。
【０３８９】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、グリセロールフォーマルを含む。１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、実質的に他の有機溶媒を含まないグリセロールフォーマルである。
【０３９０】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、イソソルビッドジメチルエーテルを含む。１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、実質的に他の有機溶媒を含まないイソソルビッドジメチルエーテルである。
【０３９１】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、エタノールを含む。１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、実質的に他の有機溶媒を含まないエタノールである。
【０３９２】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、ジメチルスルホキシドを含む。１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、実質的に他の有機溶媒を含まないジメチルスルホキシドである。
【０３９３】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、テトラグリコールを含む。１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、実質的に他の有機溶媒を含まないテトラグリコールである。
【０３９４】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、テトラヒドロフルフリルアルコールを含む。１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、実質的に他の有機溶媒を含まないテトラヒドロフルフリルアルコールである。
【０３９５】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、トリアセチンを含む。１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、実質的に他の有機溶媒を含まないトリアセチンである。
【０３９６】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、プロピレンカーボネートを含む。１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、実質的に他の有機溶媒を含まないプロピレンカーボネートである。
【０３９７】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、ジメチルアセトアミドを含む。１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、実質的に他の有機溶媒を含まないジメチルアセトアミドである。
【０３９８】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、ジメチルホルムアミドを含む。１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、実質的に他の有機溶媒を含まないジメチルホルムアミドである。
【０３９９】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、少なくとも２つの医薬として許容可能な有機溶媒を含む。
【０４００】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、Ｎ−メチル−２−ピロリドン及びグリセロールフォーマルを含む。１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、Ｎ−メチル−２−ピロリドン及びグリセロールフォーマルである。１つの実施態様においては、Ｎ−メチル−２−ピロリドンのグリセロールフォーマルに対する比率は、約９０：１０〜１０：９０である。
【０４０１】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、プロピレングリコール及びグリセロールフォーマルを含む。１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、プロピレングリコール及びグリセロールフォーマルである。１つの実施態様においては、プロピレングリコールのグリセロールフォーマルに対する比率は、約９０：１０〜１０：９０である。
【０４０２】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、投与または動物による消費のために、ＦＤＡによってＧＲＡＳとして認識される溶媒である。
【０４０３】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、投与またはヒトによる消費のために、ＦＤＡによってＧＲＡＳとして認識される溶媒である。
【０４０４】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、実質的に水を含まない。１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、約１重量％未満の水を含む。１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、約０．５重量％未満の水を含む。１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒は、約０．２重量％未満の水を含む。実質的に水を含まない医薬として許容可能な有機溶媒は、それらが細菌の増殖に貢献しないため、有利である。したがって、実質的に水を含まない医薬組成物中に保存剤を含ませることは、典型的には必要でない。好ましくは実質的に溶媒としての水を含まない、医薬として許容可能な有機溶媒を使用する医薬組成物の他の利点は、アプタマーの加水分解が最小限となることである。典型的には、溶媒中に存在する水が多いほど、アプタマーはより容易に加水分解されることができる。したがって、医薬として許容可能な有機溶媒を溶媒として使用するアプタマー含有医薬組成物は、水を溶媒として使用するアプタマー含有医薬組成物よりも安定であることができる。
【０４０５】
１つの実施態様においては、医薬として許容可能な有機溶媒を含んでおり、医薬組成物は注射可能である。
【０４０６】
１つの実施態様においては、注射可能な医薬組成物は粘度が十分に低く、２０ゲージニードルに容易に引き込まれることができ、そして容易に２０ゲージニードルから排出されることができる。典型的には、注射可能な医薬組成物の粘度は、約１，２００cps未満である。１つの実施態様においては、注射可能な医薬組成物の粘度は、約１，０００cps未満である。１つの実施態様においては、注射可能な医薬組成物の粘度は、約８００cps未満である。１つの実施態様においては、注射可能な医薬組成物の粘度は、約５００cps未満である。約１，２００cps超の粘度及び（ゲルなどの）さらに約２，０００cps超の粘度を有する注射可能な医薬組成物も、該組成物が１８〜２４ゲージニードルを通って排出されうることを条件として、本発明の範囲内にある。
【０４０７】
１つの実施態様においては、医薬組成物は、医薬として許容可能な有機溶媒を含んでおり、注射可能であり、そして水中に注入された場合に沈殿を形成しない。
【０４０８】
１つの実施態様においては、医薬組成物は、医薬として許容可能な有機溶媒を含んでおり、注射可能であり、そして水中に注入された場合に沈殿を形成する。理論にとらわれることを望まずに、プロトン化アプタマー及びアミノ酸エステルまたはアミドを含む医薬組成物については、上記で例解したように、アミノ酸エステルまたはアミノ酸アミドのα−アミノ基がアプタマーによりプロトン化されて塩を形成し、これが医薬として許容可能な有機溶媒には可溶性であるが、水には不溶性であると考えられる。同様に、医薬組成物が（ｉ）アプタマー；（ｉｉ）二価金属カチオン；及び（ｉｉｉ）場合により、カルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンを含む場合、組成物の成分が上記で例解したように塩を形成し、これが医薬として許容可能な有機溶媒には可溶性であるが、水には不溶性であると考えられる。したがって、医薬組成物が動物中に注射されるとき、医薬組成物の少なくとも一部は注射部位で沈殿して、ドラッグデポーを提供する。理論にとらわれることは望まずに、医薬組成物が動物に注射された場合、医薬として許容可能な有機溶媒は注射部位から拡散し、水性の体液が注射部位に向かって拡散し、結果として注射部位における水の濃度が増加して、これが組成物の少なくとも一部を沈殿させ、そしてドラッグデポーを形成する。沈殿は、固体、結晶、ゴム状のかたまり、又はゲルの形態をとることができる。しかしながら、沈殿はアプタマーを経時的に放出するアプタマーのデポーを注射部位において提供する。医薬組成物の成分、すなわち、アミノ酸エステルまたはアミノ酸アミド、医薬として許容可能な有機溶媒、及び他の任意の成分、は生物適合性かつ無毒性であり、そして、経時的に体によって単純に吸収され及び／または代謝される。
【０４０９】
１つの実施態様においては、医薬組成物は、医薬として許容可能な有機溶媒を含み、注射可能であり、かつ水中に注入された場合に（典型的には、約５００μLが約４mLの水の中に注入される）リポソームまたはミセル構造を形成する。リポソームまたはミセル構造は、医薬組成物がリン脂質を含む場合に最も頻繁に形成する。理論にとらわれることを望まずに、塩の形態のアプタマーは、アミノ酸エステルまたはアミドとともに形成された塩であることができるか又は二価金属カチオン、そして場合により、カルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、またはスフィンンゴミエリンとの塩であることができ、そしてリポソームまたはミセル構造内にトラップされる。理論にとらわれることを望まずに、これらの医薬組成物が動物に注射された場合、リポソームまたはミセル構造は経時的にアプタマーを放出すると考えられる。
【０４１０】
１つの実施態様においては、さらに有機溶媒を含む医薬組成物は、医薬として許容可能な有機溶媒中の固体粒子懸濁液である。理論にとらわれることを望まずに、固体粒子は、アミノ酸エステルまたはアミノ酸アミドとプロトン化アプタマーの間に形成された塩を含み、ここで、上記で例解したように、アプタマーの酸性リン酸基がアミノ酸エステルまたはアミノ酸アミドのアミノ基をプロトン化するか、或いは上記で例解したように、アプタマー；二価金属カチオン；及び場合によりカルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリンまたはスフィンゴミエリンの間に形成された塩を含むと考えられる。懸濁液である医薬組成物は、動物に注射された場合、ドラッグデポーを形成することもできる。
【０４１１】
アミノ酸エステルまたはアミノ酸アミドの親油性及び／又は分子量を変化させることによって、これらの成分を含み、さらに有機溶媒を含む医薬組成物の性質を変更することが可能である。アミノ酸エステルまたはアミノ酸アミドの親油性及び／又は分子量は、アミノ酸エステル（又はアミノ酸アミド）を形成するのに使用されるアミノ酸及び／又はアルコール（又はアミン）を変更することによって変更可能である。例えば、アミノ酸エステルの親油性及び／または分子量は、アミノ酸エステルのR1炭化水素基を変更することによって変更可能である。典型的には、R1の分子量を増加させると、アミノ酸エステルの親油性が増加する。同様に、アミノ酸アミドの親油性及び／または分子量は、アミノ酸アミドのR3またはR4基を変更することによって変更可能である。
【０４１２】
例えば、アミノ酸エステルまたはアミノ酸アミドの親油性及び／又は分子量を変化させることによって、アプタマーの水中での溶解度を変更すること、アプタマーの有機溶媒中での溶解度を変更すること、溶媒を含む医薬組成物の粘度を変更すること、そして、医薬組成物の２０ゲージニードル中への引き込まれ易さそして排出され易さを変更することが可能である。
【０４１３】
さらに、アミノ酸エステルまたはアミノ酸アミドの親油性及び／又は分子量を変化させることによって（すなわち、アミノ酸エステルのR1又はアミノ酸アミドのR3及びR4を変更することによって）、水中に注入された場合に、さらに有機溶媒を含む医薬組成物が沈殿を形成するかどうかを制御することが可能である。異なるアプタマーが異なる溶解度及び挙動を示すにもかかわらず、一般に、アミノ酸エステルまたはアミノ酸アミドの分子量が高いほど、水中に注入された場合にプロトン化アプタマー及びアミノ酸エステルまたはアミドの塩は沈殿を形成しやすい。典型的には、アミノ酸エステルのR1が約C16以上の炭化水素である場合、水中に注入されたときに医薬組成物は沈殿を形成し、そしてアミノ酸エステルのR1が約C12以下の炭化水素である場合、水中に注入されたときに医薬組成物は沈殿を形成しないであろう。実際、R1が約C12以下の炭化水素であるアミノ酸エステルでは、プロトン化アプタマーとアミノ酸エステルの塩は、多くの場合、水溶性である。同様に、もし、R3とR4の炭素数の合計が１６以上であるアミノ酸アミドでは、医薬組成物は水中に注入されたときに典型的には沈殿を形成し、R3とR4の炭素数の合計が１２以下であると、医薬組成物は水中に注入されたときに沈殿を形成しないであろう。医薬として許容可能な有機溶媒をさらに含む医薬組成物が、水中に注入されたときに沈殿を形成するか否かは、約０．０５mLの医薬組成物を約４mLの約９８°Fの水に注入し、該組成物が水と混合され、そして濾過された後、どれだけの量の物質が０．２２μmのフィルター上に残るかを測定することによって、容易に決定されることができる。典型的には、製剤の１０％以下がフィルター上に残った場合、製剤または組成物は注射可能であると考えられる。１つの実施態様においては、５％以下の製剤がフィルター上に残る。１つの実施態様においては、２％以下の製剤がフィルター上に残る。１つの実施態様においては、１％以下の製剤がフィルター上に残る。
【０４１４】
同様に、プロトン化アプタマー及びアスパラギン酸又はグルタミン酸のジエステルまたはジアミドを含む医薬組成物においては、アスパラギン酸またはグルタミン酸のジエステルまたはジアミドの量及び／又は親油性及び／又は分子量を変更することによって、医薬組成物の性質を変更することが可能である。同様に、アプタマー；二価金属カチオン；及びカルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンを含む医薬組成物においては、カルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンの量及び／又は親油性及び／又は分子量を変更することによって、医薬組成物の性質を変更することが可能である。
【０４１５】
さらに、有機溶媒をさらに含む医薬組成物は、動物に投与されたときにデポーを形成し、アミノ酸エステルまたはアミノ酸アミドの量及び／又は親油性及び／又は分子量を変更することによって、アプタマーがドラッグデポーから放出される速度を変更することが可能である。一般に、アミノ酸エステルまたはアミノ酸アミドがより親油性であるほど、アプタマーはよりゆっくりとデポーから放出される。同様に、医薬組成物が有機溶媒を更に含みそしてさらにカルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、又はアスパラギン酸若しくはグルタミン酸のジエステル若しくはジアミドも含み、動物に投与されたときにデポーを形成する場合、カルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、又はアスパラギン酸若しくはグルタミン酸のジエステル若しくはジアミドの量及び／又は親油性及び／又は分子量を変更することによって、アプタマーがドラッグデポーから放出される速度を変更することが可能である。
【０４１６】
沈殿からの放出速度は、約５０μLの医薬組成物を、遠心管中の約４mLの脱イオン水中に注入することによって測定可能である。医薬組成物が水中に注入される時間をT=０と記録する。特定の時間Tの後、サンプルは約−９℃に冷却され、そして遠心分離機において約１３，０００rpmで約２０分間回転させられる。得られた上清はHPLCで分析され、水溶液中に存在するアプタマーの量が測定される。遠心分離によって得られたペレット中のアプタマーの量も、ペレットを集め、該ペレットを約１０μLのメタノールに溶解し、そしてHPLCによってメタノール溶液を分析して、沈殿中のアプタマー量を測定することによって決定可能である。水性溶液中のアプタマーの量及び沈殿中のアプタマーの量は、アプタマーピーク面積対アプタマー濃度の標準曲線に対して、アプタマーに想到するHPLCピークのピーク面積を比較することによって決定される。好適なHPLC条件は、当業者によって容易に決定可能である。
【０４１７】
６．６  アプタマー含有医薬組成物の調製方法
医薬組成物は、以下に示すように、アプタマーの無機塩、典型的にはカリウムまたはナトリウム塩、をそれが可溶性である溶媒、例えば、メタノール又は水、中に溶解し、得られた溶液のpHを約２〜３の間の値に、葉酸などの有機酸で調整して、プロトン化アプタマーの溶液を提供することによって調製されることができる：
【０４１８】
【化３２】
2009515962.tif 000033
｛式中、
S及びBは、上記の定義のとおりであり、そしてM+は、金属イオンである。｝
【０４１９】
得られたプロトン化アプタマーの溶液は、過剰の葉酸及び葉酸塩を除去するため、そして中和がメタノール溶媒中で行われる場合などには、メタノールと水を置換するために、水に対して透析される。そして、水はプロトン化アプタマーの水性溶液から凍結乾燥によって除去されて、プロトン化アプタマーを提供することができるか、或いは、プロトン化アプタマーの水性溶液は、水をメタノールで置換するために、メタノールに対して透析され、そして単純に減圧下でメタノールを除去して、プロトン化アプタマーを提供することができる。
【０４２０】
プロトン化アプタマーの溶液は、陽イオン交換樹脂を用いて調製されることもできる。（Torrance, CAのPhenomenexから商業的に入手可能な）Strata（登録商標）SCX陽イオン交換樹脂又は（Midland, MIのDow Chemical Companyから商業的に入手可能な）DOWEX（登録商標）５０などのDOWEX（登録商標）陽イオン交換樹脂などの当業者に知られた任意の陽イオン交換樹脂が使用可能である。典型的には、陽イオン交換樹脂を入れたカラムは、樹脂をプロトン化するために最初に酸性溶液で洗浄され、そして、アプタマーの無機塩、典型的にはカリウムまたはナトリウム塩、のメタノールまたは水などの溶媒中の溶液が樹脂を通過させられて、溶離液として、プロトン化アプタマーの溶液を提供する。
【０４２１】
プロトン化アプタマー及び（代表的な医薬として許容可能な有機塩基としてアミノ酸エステルまたはアミドを用いて）医薬として許容可能な有機塩基を含む医薬組成物を調製するために、プロトン化アプタマーは、典型的には攪拌しながら、メタノールなどの溶媒に溶解され、そして得られた溶液に、以下に示すように、アミノ酸エステル又はアミドが添加される：
【０４２２】
【化３３】
2009515962.tif 000034
｛式中、S、B、R及びR1は、上記の定義のとおりである。｝
【０４２３】
カルボン酸、リン脂質、ホスファチジルコリン、スフィンゴミエリン、又はアスパラギン酸若しくはグルタミン酸のジエステル若しくはジアミドなどの、医薬組成物の他の任意の成分がその後、得られた溶液に添加される。
【０４２４】
典型的には、十分なアミノ酸エステルまたはアミド、そして任意の他の成分が添加されて、約５〜９のpH範囲を有する溶液を提供する。１つの実施態様においては、十分なアミノ酸エステルまたはアミド、そして任意の他の成分が添加されて、約６〜８のpH範囲を有する溶液を提供する。１つの実施態様においては、十分なアミノ酸エステルまたはアミド、そして任意の他の成分が添加されて、約７のpH値を有する溶液を提供する。pHは、数マイクロリッターの溶液を取り出し、そしてそれを（Milwaukee, WIのSigma-Aldrichから商業的に入手可能なものなどの）、湿ったpH試験条片であって溶液の塗布後に該試験条片の色によって溶液のpHを示すものに塗布することによって、容易に測定可能である。そして、溶媒は減圧下で除去されて、アミノ酸エステルまたはアミノ酸アミド及びアプタマーを含む医薬組成物を提供する。得られた組成物はその後、医薬として許容可能な有機溶媒に溶解されて、アミノ酸エステルまたはアミノ酸アミド、プロトン化アプタマー、及び医薬として許容可能な有機溶媒を含む医薬組成物を提供することができる。或いは、プロトン化アプタマー、アミノ酸エステルまたはアミド、及び他の任意の成分、そして医薬として許容可能な有機溶媒を含む医薬組成物は、プロトン化アプタマーを医薬として許容可能な溶媒中に溶解し、そして、好ましくは攪拌しながら、アミノ酸エステルまたはアミド及び他の任意の成分を得られた溶液に添加して、医薬組成物を提供することによって、調製されることができる。
【０４２５】
アプタマー；二価金属カチオン；及びカルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン又はスフィンゴミエリンを含む医薬組成物を調製するために、プロトン化アプタマーがメタノールなどの溶媒に溶解され、そして、得られた溶液に、金属酢酸塩又は金属水酸化物などの金属塩が好ましくは攪拌しながら添加される。そして、得られた溶液に、カルボン酸、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンが、好ましくは攪拌しながら添加される。そして、減圧下で溶媒が除去されて、アプタマー；二価金属カチオン；及びカルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン又はスフィンゴミエリンを含む医薬組成物が提供される。得られた組成物はその後、医薬として許容可能な有機溶媒中に溶解されて、アプタマー；二価金属カチオン；及びカルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン又はスフィンゴミエリン；及び医薬として許容可能な有機溶媒を含む医薬組成物を提供することができる。或いは、アプタマー；二価金属カチオン；及びカルボキシレート、リン脂質、ホスファチジルコリン又はスフィンゴミエリン；及び医薬として許容可能な有機溶媒を含む医薬組成物は、医薬として許容可能な溶媒中にプロトン化アプタマーを溶解し；得られた溶液に金属酢酸塩又は金属水酸化物などの金属塩を好ましくは攪拌しながら添加し；そして、カルボン酸、リン脂質、ホスファチジルコリン、又はスフィンゴミエリンを、好ましくは攪拌しながら添加し、医薬組成物を提供することによって、調製可能である。
【０４２６】
プロトン化アプタマー及びポリリジンを含む医薬組成物を調製するために、（メタノール溶液などの）ポリリジン溶液が（メタノール溶液などの）プロトン化アプタマーの溶液に、好ましくは攪拌しながら、ゆっくりと添加され、そして得られた溶液のpHがモニターされて、所望のpH値を有する溶液を提供する。その後、メタノールが減圧下で除去されて、プロトン化アプタマー及びポリリジンを含む医薬組成物を提供する。
【０４２７】
ポリリジンは、（Sigma-Aldrich, St. Louis, MOから商業的に入手可能な）商業的に入手可能なポリリジンハイドロブロマイドから、ポリリジンハイドロブロマイドの（メタノールまたは水溶液などの）溶液を、水酸化アンモニウムで単純に中和して、約１０〜１２の範囲のpH値を有する溶液を提供することによって得られる。そして、得られたポリリジンの溶液は、過剰のアンモニウムブロマイド及び水酸化アンモニウムを除去するために、そして、中和がメタノール溶媒中で行われた場合には、メタノールを水で置換するために、水に対して透析される。水がその後、凍結乾燥によってポリリジンの水性溶液から除去さてポリリジンを提供するか、或いは、メタノールで水を置換するために、ポリリジンの水性溶液はメタノールに対して透析され、そして減圧下でメタノールが単純に除去されてポリリジンを提供することもできる。
【０４２８】
６．７  動物における状態を治療する方法
本発明の医薬組成物は、ヒト用医薬及び獣医学用医薬において有用である。したがって、本発明はさらに、動物に本発明の医薬組成物の有効量を投与することを含む、動物における状態を治療または予防するための方法に関する。
【０４２９】
１つの実施態様においては、本発明は、治療を必要とする動物に本発明の医薬組成物の有効量を投与することを含む、動物における状態を治療する方法に関する。
【０４３０】
１つの実施態様においては、本発明は、予防を必要とする動物に本発明の医薬組成物の有効量を投与することを含む、動物における状態を予防する方法に関する。
【０４３１】
投与方法は、皮内、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、鼻腔内、硬膜外、経口、舌下、脳内、膣内、経皮、直腸内、吸入又は局所によるものを含むがこれらに限定されない。投与の様式は、医師の判断に任せられる。ほとんどの場合、投与は、血流中へのアプタマーの放出を引き起こす。
【０４３２】
１つの実施態様においては、動物における状態を治療または予防する方法は、治療または予防を必要とする動物に本発明の医薬組成物を腸管外投与することによって有効量のアプタマーを投与することを含む。１つの実施態様においては、医薬組成物は輸注又はボーラス注射によって投与される。１つの実施態様においては、医薬組成物は皮下に投与される。
【０４３３】
１つの実施態様においては、動物における状態を治療または予防する方法は、治療または予防を必要とする動物に本発明の医薬組成物を経口投与することによって有効量のアプタマーを投与することを含む。１つの実施態様においては、組成物はカプセルまたは錠剤の形態である。
【０４３４】
医薬組成物は、上皮または（経口、直腸及び小腸の粘膜などの）皮膚粘膜の裏打ちを介する吸収による局所などの、任意の他の経路で投与されることもできる。
【０４３５】
医薬組成物は、全身に又は局部に投与されることができる。
【０４３６】
医薬組成物は、他の生物学的活性剤とともに投与されることができる。
【０４３７】
１つの実施態様においては、動物は哺乳動物である。
【０４３８】
１つの実施態様においては、動物はヒトである。
【０４３９】
１つの実施態様においては、動物は非ヒト動物である。
【０４４０】
１つの実施態様においては、動物は、イヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ヒツジまたはブタである。
【０４４１】
動物に投与される有効量は、治療される動物の種類、治療される状態、状態の重篤度、及び投与される特定のアプタマーを含むが、これらに限定されない様々な因子に依存する。当業者は、動物における状態を治療するための医薬組成物の有効量が容易にわかるであろう。
【０４４２】
１つの実施態様においては、アプタマーは、抗−血管内皮成長因子（VEGF）アプタマーである。１つの実施態様においては、アプタマーは抗−血管内皮成長因子（VEGF）アプタマーであり、障害は眼の障害である。代表的な眼の障害は、加齢黄斑変性症、視神経乳頭血管新生、虹彩血管新生、網膜血管新生、脈絡膜血管新生、角膜血管新生、硝子体血管新生、緑内障、パンヌス、翼状片、黄斑浮腫、血管性網膜症、網膜変性症、ぶどう膜炎、網膜の炎症性疾患、又は増殖性硝子体網膜症を含むが、これらに限定されない。実際、医薬を眼に送達する任意の方法が、本発明の医薬組成物の送達のために使用されてよい。１つの実施態様においては、医薬組成物は、硝子体内注射などを介して硝子体内に投与される。１つの実施態様においては、医薬組成物は強膜を介して投与される。
【０４４３】
１つの実施態様においては、アプタマーは、血管新生を阻害するアプタマーである。
【０４４４】
１つの実施態様においては、アプタマーは血管新生を阻害するアプタマーであり、そして治療される病気は癌である。１つの実施態様においては、アプタマーは血管新生を阻害するアプタマーであり、そして治療される病気は固形腫瘍である。
【０４４５】
以下の実施例は、本発明の理解を支援するために示され、そして本発明を、本明細書に記載されそして権利請求されたものに限定するものと解してはならない。現在知られ及び後に開発されるすべての等価物による置換であって当業者の範囲内にあるもの、及び製剤における変更または実験計画における小さな変更を含む本発明のかかる変更は、本明細書中に組み込まれた本発明の範囲内にあると考えられるべきである。
【実施例】
【０４４６】
７．  実施例
実施例１：  アミノ酸エステルの調製
トリプトファンブタノエート：１ｇの（Sigma-Aldrich, St. Louis, MOから商業的に入手可能な）トリプトファンブタノエート塩酸塩を、２５mLのジクロロメタンに懸濁し、そして、攪拌しながら６００μＬのトリエチルアミンを該懸濁液に加えた。攪拌を１５分間継続し、そして得られた溶液を分離漏斗に移した。該有機溶液を２５mLの水で２回、続いて２５mLの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄した。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥し、そして減圧下で濃縮して、トリプトファンブタノエートを得た。マススペクトロメトリーを用いて構造を確認した。
【０４４７】
トリプトファンオクタノエート：４ｇの（Sigma-Aldrich, St. Louis, MO（www.sigma-aldrich.com）から商業的に入手可能な）トリプトファンブタノエート塩酸塩を、１００mLのジクロロメタンに懸濁し、そして該懸濁液に３mLのトリエチルアミンを攪拌しながら加えた。１５分間攪拌を続け、そして得られた溶液を分離漏斗に移した。２５mＬの水で２回、続いて２５mLの飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で有機溶液を洗浄した。そして、有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して、トリプトファンオクタノエートを得た。その構造をマススペクトロメトリーを用いて確認した。
【０４４８】
チロシンブタノエート：１８．１９ｇのチロシンを、冷却管とDean-Stark装置を取り付けた５００mLの丸底フラスコ中で、９．８ｇの濃硫酸、４０mLの水、４０mLのブタノール、及び２００mLのトルエンの溶液に懸濁した。得られた溶液をそれ以上水が蒸留されなくなるまで、還流温度で加熱した。得られた溶液を氷浴中で冷却し、これにより溶液が２相に分かれた。上相を捨て、そして油性のシロップである下相が残った。シロップを、酸性不純物を中和するのに十分な５％炭酸水素ナトリウム水溶液と混合して固体を得て、これを濾過により集め、冷水で洗浄した。得られた固体を酢酸エチル中で再結晶化した。
【０４４９】
イソロイシンブチレート：２６．２３ｇのイソロイシンを、冷却管とDean-Stark装置を取り付けた５００mLの丸底フラスコ中で、２０ｇの濃硫酸、２０mLの水、４０mLのブタノール及び２００mLのトルエンの溶液に溶解した。得られた溶液をそれ以上水が蒸留されなくなるまで、還流温度で加熱した。得られた溶液を室温まで冷却し、そして飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄して酸性不純物を中和し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で除去し、得られた液体を真空下で蒸留して、イソロイシンブチレートを無色の液体として得た。
【０４５０】
フェニルアラニンブチレート：１６．５２ｇのイソロイシンを、冷却管とDean-Stark装置を取り付けた５００mLの丸底フラスコ中で、１０ｇの濃硫酸、２０mLの水、２０mLのブタノール及び２００mLのトルエンの溶液に溶解した。得られた溶液をそれ以上水が蒸留されなくなるまで、還流温度で加熱した。得られた溶液を室温まで冷却し、そして飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄して酸性不純物を中和し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で除去し、得られた液体を真空下で蒸留して、フェニルアラニンブチレートを得た。
【０４５１】
フェニルアラニンオクタノエート：１６．５２ｇのフェニルアラニンを、冷却管とDean-Stark装置を取り付けた５００mLの丸底フラスコ中で、１０ｇの濃硫酸、２０mLの水、２０mLのオクタノール及び１２０mLのトルエンの溶液に溶解した。得られた溶液をそれ以上水が蒸留されなくなるまで、還流温度で加熱した。得られた溶液を室温まで冷却し、そして飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄して酸性不純物を中和し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。そして、溶媒を減圧下で除去して、フェニルアラニンオクタノエートを白色固体として得て、これをシリカゲルカラムを用いて１：９のメタノール：ジクロロメタン混合物で溶出して精製した。
【０４５２】
フェニルアラニンドデカノエート：１６．５２ｇのフェニルアラニンを、冷却管とDean-Stark装置を取り付けた５００mLの丸底フラスコ中で、１０ｇの濃硫酸、２０mLの水、２０mLのドデカノール及び１２０mLのトルエンの溶液に溶解した。得られた溶液をそれ以上水が蒸留されなくなるまで、還流温度で加熱した。得られた溶液を室温まで冷却し、そして飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄して酸性不純物を中和し、飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。そして、溶媒を減圧下で除去して、フェニルアラニンドデカノエートを固体として得て、これをシリカゲルカラムを用いて１：９のメタノール：ジクロロメタン混合物で溶出して精製した。
【０４５３】
チロシンオクタノエート：９．０６ｇのチロシンを、冷却管とDean-Stark装置を取り付けた５００mLの丸底フラスコ中で、１０ｇの濃硫酸、２０mLの水、１０mLのオクタノール及び２００mLのトルエンの溶液に溶解した。得られた溶液をそれ以上水が蒸留されなくなるまで、還流温度で加熱した。得られた溶液を室温まで冷却し、そして飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄して酸性不純物を中和してエマルジョンを得た。約１５０mLの酢酸エチルを加えてエマルジョンを２相とした。水相を捨て、有機相を飽和食塩水で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で除去して、チロシンオクタノエートを白色固体として得て、これをシリカゲルカラムを用いて１：９のメタノール：ジクロロメタン混合物で溶出して精製した。
【０４５４】
イソロイシンオクタノエート：１３．１ｇのイソロイシンを、冷却管と油浴中に置いたDean-Stark装置を取り付けた５００mLの丸底フラスコ中で、１０ｇの濃硫酸、２０mLの水、２０mLのオクタノール及び２００mLのトルエンの溶液に溶解した。得られた溶液をそれ以上水が蒸留されなくなるまで、還流温度で加熱した。得られた溶液を室温まで冷却し、そして、１２０mLの酢酸エチルで希釈し、有機層を飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄して酸性不純物を中和し、飽和食塩水で洗浄して無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で除去し、得られた液体を真空下で蒸留して、イソロイシンオクタノエートを無色の液体として得た。
【０４５５】
プロリンブタノエート：３４．５ｇのプロリンを、冷却管とDean-Stark装置を取り付けた５００mLの丸底フラスコ中で、３５ｇの濃硫酸、４０mLの水、１２０mLのブタノール及び２００mLのトルエンの溶液に溶解した。得られた溶液をそれ以上水が蒸留されなくなるまで、還流温度で加熱した。得られた溶液を室温まで冷却し、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液で洗浄して酸性不純物を中和し、飽和食塩水で洗浄して無水硫酸ナトリウムで乾燥した。溶媒を減圧下で除去し、得られた液体を蒸留して、プロリンブタノエートを無色の液体として得た。
【０４５６】
リジンヘキサデカノエート：BOC保護されたリジン（６．２５ｇ、０．０１８モル）を、窒素大気下で約４０mLのテトラヒドロフランに溶解した。氷浴を用いて溶液を約０℃まで冷却し、そして冷却溶液にカルボニルジイミダゾール（２．９３ｇ、０．０１８モル）を加えた。反応混合物を約５分間、約５℃で、そして約３０分間、室温で攪拌した。得られた溶液に、約１０mLのテトラヒドロフラン中のヘキサデカノール（４．３８ｇ、０．０１８モル）を滴下して加えた。得られた溶液を約４５℃まで温め、そして約１２時間攪拌した。攪拌後、溶媒を減圧下で蒸発させ；得られた残渣を酢酸エチルに溶解し；酢酸エチルを、０．１N塩酸（３回）、飽和炭酸水素ナトリウム水溶液（３回）、及び塩水（３回）で洗浄し；そして、有機相を乾燥した（Na2SO4）。酢酸エチルを減圧下で除去して、BOC保護されたリジンヘキサデカノエートの粗生成物を得て、これを、シリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いてヘキサン中、０から２０％の酢酸エチルで溶出して精製した。そして、溶媒を減圧下で蒸発させてBOC保護されたリジンヘキサデカノエート精製物を得た。トリフルオロ酢酸（２０mL）をBOC保護されたリジンヘキサデカノエート精製物に加え、得られた反応混合物を約５時間攪拌した。過剰のトリフルオロ酢酸を減圧下で除去した。得られた残渣をメタノールに溶解し、そして、（Midland MichiganのDow Chemical Companyから商業的に入手可能な）Dowex 550A(OH)樹脂（５０ｇ）を通し、そして溶媒を減圧下で除去し、リジンヘキサデカノエートを得て、これを真空下で乾燥して、乾燥リジンヘキサデカノエート（３．６ｇ）を得た。
【０４５７】
実施例２：  本発明の医薬組成物
ペグ化ARC259を含む医薬組成物を、１０８mgのプロトン化ペグ化ARC259を８００μLのN−メチル−２−ピロリドンに加え、そして、得られた混合物を約２５分間超音波処理して、透明な濃い溶液を得ることによって調製した。透明な濃い溶液に、１２０μLのN−メチル−２−ピロリドン中のイソロイシンブチレート溶液（約７１．５mg/mL）を加え、そして得られた透明な溶液にN−メチル−２−ピロリドンを加えて１mLとして、医薬組成物を得た。
【０４５８】
５０μLの医薬組成物を４mLの水の中に注入した。医薬組成物を水中に注入したとき、沈殿は観察しなかった。
【０４５９】
実施例３：  本発明の医薬組成物
ペグ化ARC259を含む医薬組成物を、１０８mgのプロトン化ペグ化ARC259を８００μLのN−メチル−２−ピロリドンに加え、そして、自動シェーカーを用いて得られた混合物を約１４時間振とうして、透明な濃い溶液を得ることによって調製した。透明な濃い溶液に、１２０μLのN−メチル−２−ピロリドン中のイソロイシンブチレート溶液（約７１．５mg/mL）を加え、そして得られた透明な溶液にN−メチル−２−ピロリドンを加えて１mLとして、医薬組成物を得た。
【０４６０】
５０μLの医薬組成物を４mLの水の中に注入した。医薬組成物を水中に注入したとき、沈殿は観察しなかった。
【０４６１】
実施例４：  本発明の医薬組成物
ペグ化ARC259を含む医薬組成物を、１０８mgのプロトン化ペグ化ARC259を８００μLのグリセロールフォーマルに加え、そして、得られた混合物を約２５分間超音波処理して、透明な濃い溶液を得ることによって調製した。透明な濃い溶液に、１２０μLのグリセロールフォーマル中のイソロイシンブチレート溶液（約７１．５mg/mL）を加え、そして得られた透明な溶液にグリセロールフォーマルを加えて１mLとして、医薬組成物を得た。
【０４６２】
５０μLの医薬組成物を４mLの水の中に注入した。医薬組成物を水中に注入したとき、沈殿は観察しなかった。
【０４６３】
実施例５：  エステル鎖長の関数としての、有機溶媒中にアプタマーとアミノ酸エステルを含む医薬組成物の粘度
N−メチル−２−ピロリドン中に溶解した、約１０％（w/v）の濃度のペグ化ARC259、及びアプタマー上の酸性基あたり１等量のイソロイシンエタノエート、イソロイシンブタノエート、イソロイシンヘキサノエート、イソロイシンオクタノエート、イソロイシンデカノエート、イソロイシンドデカノエート、又はイソロイシンヘキサデカノエートを含む医薬組成物を調製した。医薬組成物を、７５mgのプロトン化アプタマーを０．７mLのN−メチル−２−ピロリドンに加え、そして、以下に示す適切な量のイソロイシンエステルを加えることによって調製した。
【０４６４】
【表１】
2009515962.tif 000035
【０４６５】
必要に応じて、N−メチル−２−ピロリドンで溶液の体積を０．７５mLとして、透明な溶液を得た。
【０４６６】
得られた医薬組成物の粘度を、（Marlboro, MAのBrookfieldから商業的に入手可能な）コーン及びプレートサンプラーを備えたBrookfield DV-II-PRO粘度計、CPE-40スピンドル、０．５mLのサンプルサイズ、３rpmのスピード及び２５℃に制御された温度を用いて測定した。
【０４６７】
図１は、医薬組成物の粘度対イソロイシンエステルのアルコール基の炭素数をグラフで表す。結果は、総じて、エステルのアルコール基の炭素が８以下の医薬組成物の粘度は、エステルのアルコール基中の炭素数が増加すると減少することを示す。しかしながら、C12エステルは、C16エステルよりも粘度が低い。
【０４６８】
実施例６：アプタマー上の酸性官能基の等量当たりのエステルの等量の関数としての、有機溶媒中のアミノ酸エステル及びアプタマーを含む医薬組成物の粘度
N−メチル−２−ピロリドン中に溶解した、約１０％（w/v）の濃度のペグ化ARC259及びアプタマー上の酸性基の等量あたり１等量、２等量、又は６等量のイソロイシンデカノエートを含む医薬組成物を調製した。組成物は、７５mgのプロトン化アプタマーを０．７mLのN−メチル−２−ピロリドンに加え、そして、１等量（１０．６mg、１２．７μL）、２等量（２１．２mg、２５．４μL）又は３等量（３１．８mg、３８．１μL）のイソロイシンデカノエートを加えることによって調製した。必要に応じて、溶液の体積をN−メチル−２−ピロリドンで０．７５mLの体積として、透明な溶液を得た。
【０４６９】
得られた組成物の粘度は、上記の方法を用いて測定した。
【０４７０】
図２は、医薬組成物の粘度対アプタマー上の酸性官能基の等量当たりのイソロイシンデカノエートの等量をグラフで表す。結果は、イソロイシンデカノエートの等量数が、アプタマー上の酸性官能基の等量当たり約２等量のイソロイシンデカノエートまで増加するまでは、医薬組成物の粘度は減少することを示す。その後、アプタマー上の酸性官能基の等量当たり６等量のイソロイシンデカノエートまでは、粘度は不変であるようである。
【０４７１】
実施例７：  有機溶媒中のアプタマーとアミノ酸エステルを含む医薬組成物のインビトロでのデポー形成
Ａ．  N−メチル−２−ピロリドン中に溶解した、約１０％（w/v）の濃度のペグ化ARC259及びアプタマー上の酸性基の等量あたり４等量、又は６等量のイソロイシンデカノエートを含む医薬組成物を調製した。組成物は、７５mgのプロトン化アプタマーを０．７mLのN−メチル−２−ピロリドンに加え、そして、以下に示す適切な量のエステルを加えることによって調製した。
【０４７２】
【表２】
2009515962.tif 000036
【０４７３】
必要に応じて、N−メチル−２−ピロリドンで溶液の体積を０．７５mLとして、透明な溶液を得た。
【０４７４】
５０μLの各医薬組成物を４mLの水に注入した。各場合において、医薬組成物が水中に注入されたときに沈殿の形成を観察した。
【０４７５】
Ｂ．  N−メチル−２−ピロリドン中に溶解した、約１０％（w/v）の濃度のペグ化ARC259及びアプタマー上の酸性基の等量あたり１、２、４、６、８又は１０等量のリジンヘキサデカノエートを含む医薬組成物を、上記と同じ手順にしたがって調製し、透明な溶液を得た。５０μLの各組成物を４mLの水に注入した。各場合において、医薬組成物が水中に注入されたときに沈殿の形成を観察した。
【０４７６】
アプタマー上の酸性基の等量あたり１〜４等量のリジンヘキサデカノエートを有する医薬組成物が水中に注入された場合、振とうすることによって水に溶解することのできた油性沈殿が形成した。
【０４７７】
アプタマー上の酸性基の等量あたり４〜１０等量のリジンヘキサデカノエートを有する医薬組成物が水中に注入された場合、振とうすることによっては溶解しないゲル様沈殿が形成した。同様に、アプタマー上の酸性基の等量あたり４〜１０等量のリジンヘキサデカノエートを有する医薬組成物が、リン酸緩衝食塩水液（PBS）又は約０．６４３μMのウシ血清アルブミンを含む水の中に注入された場合、振とうすることによっては溶解しないゲル様沈殿が形成した。アプタマー上の酸性基の等量あたりのリジンヘキサデカノエートの等量数がより大きいと、溶解前により長い間沈殿が残った。例えば、アプタマー上の酸性基の等量あたり４等量のリジンヘキサデカノエートを有する医薬組成物については、沈殿は溶解前に約２日残存した。アプタマー上の酸性基の等量あたり６等量及び１０等量のリジンヘキサデカノエートを有する医薬組成物については、沈殿は、溶解前にそれぞれ約４日及び６日残存した。
【０４７８】
実施例８：  有機溶媒中のアプタマー及びリジンエステル及び脂肪酸を含む医薬組成物
６５０μLのN−メチル−２−ピロリドンに、１００mgのペグ化ARC259と、（アプタマー上の酸性基の等量あたり約１等量の）リジンヘキサデカノエートとの間に形成した９．６mgのエステルを加えて、医薬組成物を調製した。さらに３０．４mgのリジンヘキサデカノエート、続いて１５mgのラウリン酸を得られた溶液に加えた。得られた溶液の体積を、N−メチル−２−ピロリドンで１mLとして、透明な溶液を得た。５０μLの医薬組成物を４mLの水中に注入すると、沈殿の形成が観察された。
【０４７９】
実施例９：  アプタマー、イソロイシンエステル及びリン脂質を含む医薬組成物
３０７mgの（Cologne, GermanyのPhopholipid GmbH又はOxford, CTのAmerican Lecithin Companyから商業的に入手可能な）Phospholipon（登録商標）８０を、５mLのN−メチル−２−ピロリドンに溶解して、「溶液A」を得た。１０８mgのペグARC259、続いて１１．５μLのイソロイシンブチレートを８００μLの溶液Aに溶解した。得られた混合物を超音波処理して、透明な溶液を得て、その溶液の体積を溶液Aで１mLとし、透明な溶液として医薬組成物を得た。５０μLの医薬組成物を４mLの水に注入した場合、ゲル様の沈殿の形成を観察した。沈殿の水溶液を振とうすると、リポソーム及びミセル構造も観察し、これは０．２２μmフィルター上に残存することはできない。
【０４８０】
同様の医薬組成物が、アミノ酸の他のエステルまたはアミド、他の有機溶媒、及び／又は他のリン脂質を用いて製造可能である。
【０４８１】
実施例１０：アプタマー、二価金属イオン、及びリン脂質を含む医薬組成物
１９mgのペグ化ARC259を、１０％（w/v）の（Cologne, GermanyのPhopholipid GmbH又はOxford, CTのAmerican Lecithin Companyから商業的に入手可能な）Phopholipon（登録商標）８０を含む０．５mLのN−メチル−２−ピロリドン中に溶解することによって医薬組成物を調製した。得られた溶液に、０．４mLの未処理のN−メチル−２−ピロリドン、続いて２５mgの酢酸亜鉛を混合しながら加えて、透明な溶液を得た。５０μLの医薬組成物を４mLの水に注入した場合、ゲル様の沈殿の形成を観察した。沈殿の水溶液を振とうすると、リポソーム及びミセル構造も観察し、これは０．２２μmフィルター上に残存することはできない。
【０４８２】
同様の医薬組成物が、アミノ酸の他のエステルまたはアミド、他の二価金属イオン、他の有機溶媒、及び／又は他のリン脂質を用いて製造可能である。
【０４８３】
実施例１１：  本発明の医薬組成物のHPLC分析及び本発明の医薬組成物からのアプタマーの放出速度を測定する方法
時間の関数としての、沈殿から放出されたアプタマーの量は、約５０μLの医薬組成物を遠心管中の約４mLの脱イオン水中に注入して沈殿を形成することによって、測定可能である。医薬組成物を水中に注入する時間を、T=0と記録する。特定の時間Tの後、場合により約−９℃に冷却されたサンプルを約１３，０００rpmで約２０分間、遠心分離にかけ、デカントして容易に分離可能なペレット及び液体上清を得る。得られた上清を好適なHPLC法によって分析して、水溶液中に存在するアプタマーの量を決定する。ペレット中のアプタマー量も、ペレットを約３mLのメタノールに溶解し、そして、該メタノール溶液を好適なHPLC法によって分析して、沈殿中のアプタマーの量を決定する。水溶液中のアプタマーの量及び沈殿中のアプタマーの量は、アプタマーに相当するHPLCピークのピーク面積を、アプタマー濃度対ピーク面積の標準曲線と比較することによって決定可能である。好適なHPLC法は、当業者によって容易に決定可能である。例えば、上記の実験中で使用されるアプタマー（すなわち、ペグ化ARC259）については、以下のHPLC法が使用可能である。
【０４８４】
【表３】
2009515962.tif 000037
【０４８５】
以下のグラジエント溶出プロフィールを用いてHPLCカラムを溶出する：
【０４８６】
【表４】
2009515962.tif 000038
【０４８７】
これらの条件下では、アプタマーは約３分間の滞留時間を有する。
【０４８８】
１０等量のリジンヘキサデカノエートを含む実施例７Bの医薬組成物５０μLを４mＬの水中に注入して、沈殿を得て、該沈殿と上清を上記の手順にしたがって遠心分離により分離して、ペレットと液体上清を得た。ペレットを約３mLのメタノールに溶解した。上清及びペレットのメタノール溶液を、塩基性移動相を用いる上記条件を用いて、HPLCによって分析した。
【０４８９】
図３は、上清のHPLCクロマトグラム（下図）及びペレットメタノール溶液のHPLCクロマトグラム（上図）を示す。HPLCクロマトグラムは、アプタマーの約５％が上清中にあり、アプタマーの約９５％がペレット中にあったことを示す。
【０４９０】
図４は、１０等量のリジンヘキサデカノエートを含む実施例４Bの医薬組成物のHPLC分析を示す。５０μLの医薬組成物を約３mLのメタノール中に注入し、そして得られたメタノール溶液を、上記のHPLCパラメータを用いてHPLC分析する。図Aは、医薬組成物の塩基性移動相を用いて得られたHPLCクロマトグラムである。図Bは、医薬組成物の酸性移動相を用いて得られたHPLCクロマトグラムである。図Cは、メタノール中に溶解されたアプタマーの塩基性移動相を用いて得られたHPLCクロマトグラムである。
【０４９１】
図４は、酸性移動相を用いて医薬組成物を分析した場合、塩基性移動相を用いた分析に比べて、より遅い滞留時間においてよりシャープでないピークが得られた（図B）ことも示す。理論にとらわれることを望まずに、酸性移動相を用いた場合、アプタマーとリジンヘキサデカノエートは結合したままであり、アプタマーに相当するピークがより遅く溶出し、よりシャープでないピークとなると考えられる。しかしながら、塩基性移動相を用いた場合には、アプタマーとリジンヘキサデカノエートは結合せず、より早く溶出するアプタマーに相当するピークがよりシャープなピークとなる。
【０４９２】
図４は、塩基性移動相が、HPLCによるアプタマーの分析によりよいことを示す。
【０４９３】
図４は、アプタマーと（この実施例では、リジンヘキサデカノエートである）アミノ酸の間の複合体が、酸性条件下では結合したままであることも示す。したがって、これは、本発明の医薬組成物が動物に経口投与された場合、アプタマーとアミノ酸の複合体が、胃の酸性条件下では結合したままであり、これがアプタマーの延長された放出及び／又はアプタマーのよりよい吸収をもたらしうることを示唆する。
【０４９４】
実施例１２：  有機溶媒中のアプタマー、リジンエステル及び脂肪酸を含む医薬組成物であって、リジンエステルがアプタマーに対して過剰に存在する、医薬組成物
１００mgのペグ化ARC259を１mLのN−メチル−２−ピロリドンに添加することによって医薬組成物を調製した。得られた混合物をボルテックスミキサーを用いて混合し、時々超音波処理して透明で粘ちょうな溶液を得た。この透明で粘ちょうな溶液に４０mgのリジンヘキサデカノエートを加え、得られた混合物をボルテックスミキサーを用いて混合し、透明な溶液を得た。（Milwaukee,WIのSigma-Aldrichから商業的に入手可能なものなどの）湿ったpH試験条片を用いて上記のように測定した、得られた溶液のpHは塩基性であった。該塩基性溶液に、１５mgのラウリン酸を加え、得られた混合物をボルテックスミキサーを用いて混合して、透明な溶液を得た。湿ったpH試験条片を用いて上記のように測定した透明な溶液のpHは、中性、すなわち、約pH７であった。５０μLの医薬組成物を４mLの水中に注入した場合、沈殿の形成が観察された。
【０４９５】
実施例１３：  アプタマーとポリカルボン酸を含む医薬組成物
１００mgのペグ化ARC259を１mLのN−メチル−２−ピロリドンに添加することによって医薬組成物を調製した。得られた混合物をボルテックスミキサーを用いて混合し、時々超音波処理して透明で粘ちょうな溶液を得た。８mgの（分子量２０，０００、Milwaukee, MIのSigma-Aldrichから商業的に入手可能な）ポリアクリル酸を上記透明で粘ちょうな溶液に加え、そして、得られた混合物を、ボルテックスミキサーを用いて混合して、透明な溶液を得た。（Milwaukee,WIのSigma-Aldrichから商業的に入手可能なものなどの）湿ったpH試験条片を用いて上記のように測定した、得られた溶液のpHはわずかに塩基性であった。わずかに塩基性の溶液に少量のポリアクリル酸を加え、ボルテックスミキサーを用いて混合物をよく混合し、pHを再度チェックした。混合しつつ少量のポリアクリル酸をさらに加え、そして、得られた溶液が約pH７となるまで得られた溶液のpHをチェックした。５０μLの医薬組成物を４mLの水中に注入した場合、沈殿の形成が観察された。
【０４９６】
本発明は、本発明のいくつかの側面を例解することを目的とする実施例中に開示された特定の実施態様によって範囲が限定されてはならず、機能的に等価な任意の実施態様は本発明の範囲内にある。実際に、本明細書中に示され、そして記載された本発明の様々な改変は、当業者に明らかとなるであろうし、そして添付する請求項の範囲に属することを意図される。
【０４９７】
多数の参考文献が引用され、その開示の全体が参考文献として本明細書中に援用される。
【図面の簡単な説明】
【０４９８】
【図１】図１は、N−メチル−２−ピロリドン中に溶解された１０％（w/v）の濃度のアプタマー及びアプタマー上の酸性基の等量あたり１等量のイソロイシンエタノエート、イソロイシンブタノエート、イソロイシンヘキサノエート、イソロイシンオクタノエート、イソロイシンデカノエート、イソロイシンドデカノエート、又はイソロイシンヘキサデカノエートを含む、医薬組成物の粘度をグラフで表すものである。
【図２】図２は、N−メチル−２−ピロリドン中に溶解された１０％（w/v）の濃度のアプタマー及びアプタマー上の酸性基の等量あたり１、２又は６等量のイソロイシンデカノエートとの間に形成されたエステルを含む、本発明の医薬組成物の粘度をグラフであらわしたものである。
【図３】図３は、実施例１１に記載のHPLCパラメータを用いて得られた、５０μLの、１０等量のリジンヘキサデカノエートを含む実施例７Bの医薬組成物を４mLの水中に注入して沈殿を得て、得られた沈殿及び上清を実施例８の記載のとおりに遠心分離により分離して形成された、上清（下図）及びペレット（上図）のHPLCクロマトグラムである。
【図４】図４は、１０等量のリジンヘキサデカノエートを含む実施例７Bの医薬組成物の、実施例１１に記載のHPLCパラメータを用い、塩基性移動相（図A）及び酸性移動相（図B）を用いて得られた、HPLCクロマトグラムである。図Cは、メタノール中に溶解されたアプタマーのHPLCクロマトグラムである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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