(57)【要約】  式Ｉ（Ｉ）の種々の化合物が、与えられている。また、式ＩＩ（ＩＩ）の種々の化合物が、与えられている。また、上の化合物を含んでいる複数の医薬組成物が、与えられている。加え、ある１哺乳類におけるマクロファージ転移阻害因子（ＭＩＦ）活性を阻害していくとの複数の方法が、与えられており、ある１哺乳類における炎症を処置していくかもしくは防いでいくとの複数の方法のようである。更に、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）および／または内毒素ショックを持っているある１哺乳類を処置していくとの複数の方法が、与えられている。また、自己免疫疾患を持っているある１哺乳類を処置していくとの複数の方法、および、ある１腫瘍を持っているある１哺乳類を処置していくとの複数の方法が、与えられている。    【化１】2009530404.tif 000019
2009530404.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2009530404.tif 000013
式中、Ｒ１が、直鎖もしくは分岐Ｃ1〜Ｃ10アルキルであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５が、独立に、ＦもしくはＨであり、式中、もし、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の全てが、Ｈであれば、この時、Ｒ１が、ＣＨ3でない、化合物。
【請求項２】
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の１つだけが、Ｆである、請求項１の化合物。
【請求項３】
Ｒ２が、Ｆである、請求項２の化合物。
【請求項４】
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の全てが、Ｈである、請求項１の化合物。
【請求項５】
Ｒ２が、Ｆである、請求項１の化合物。
【請求項６】
Ｒ１が：
【化２】
2009530404.tif 000014
である、請求項１の化合物。
【請求項７】
前記化合物が、化合物１７であり、式
【化３】
2009530404.tif 000015
を持つ、請求項１の化合物。
【請求項８】
前記化合物が、ＩＳＯ−６３であり、式
【化４】
2009530404.tif 000016
を持つ、請求項１の化合物。
【請求項９】
前記化合物が、ＩＳＯ−６０であり、式
【化５】
2009530404.tif 000017
を持つ、請求項１の化合物。
【請求項１０】
前記化合物が、（Ｒ）異性体（アイソマー）である、請求項１〜９のいずれか１項の化合物。
【請求項１１】
式ＩＩ：
【化６】
2009530404.tif 000018
式中、Ｒ１が、直鎖もしくは分岐Ｃ1〜Ｃ10アルキルであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５が、独立に、ＦもしくはＨであり、但し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５のうちの全てが、Ｈというわけでない、化合物。
【請求項１２】
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５のうちの１つだけが、Ｆである、請求項１１の化合物。
【請求項１３】
Ｒ２が、Ｆである、請求項１１もしくは１２の化合物。
【請求項１４】
医薬として許容可能な賦形剤中、請求項１〜１３のいずれか１項の化合物、もしくは、この医薬として許容可能な塩を含む、医薬組成物。
【請求項１５】
哺乳類におけるマクロファージ転移阻害因子（ＭＩＦ）活性を阻害する方法であって、当該哺乳類におけるＭＩＦ活性を阻害するに有効な量における、請求項１４の医薬組成物を当該哺乳類に投与することを含む、方法。
【請求項１６】
前記哺乳類が、ヒトである、請求項１５の方法。
【請求項１７】
前記哺乳類が、ＭＩＦにより少なくとも一部媒介される炎症サイトカインカスケードを含む病状を持つか、もしくは、これに関するリスクにある、請求項１５の方法。
【請求項１８】
前記病状が、増殖脈管疾患、急性呼吸困難症候群、サイトカイン媒介毒性、乾癬、インターロイキン−２毒性、虫垂炎、消化潰瘍、胃潰瘍、および十二指腸潰瘍、腹膜炎、膵炎、潰瘍結腸炎、偽膜結腸炎、急性結腸炎、および虚血結腸炎、憩室炎、喉頭蓋炎、無弛緩症、胆管炎、胆嚢炎、肝炎、炎症腸疾患、クローン病、腸管炎、ホウィップル病、喘息、アレルギー、アナフィラキシーショック、免疫複合病、臓器虚血、再灌流傷害、臓器壊死、枯草熱、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、内毒素ショック、悪液質（カケクシア）、超高熱、好酸肉芽腫、肉芽腫症、類肉腫症、敗血症流産、副睾丸炎、膣炎、前立腺炎、尿道炎、気管支炎、気腫、鼻炎、嚢胞線維症、肺炎、肺胞炎、細気管支炎、咽頭炎、胸膜炎、副鼻腔炎、インフルエンザ、呼吸多核ウィルス感染、ヘルペス感染、ＨＩＶ感染、Ｂ型肝炎ウィルス感染、Ｃ型肝炎ウィルス感染、伝搬菌血、デング熱、カンジダ症、マラリア、糸状虫症、アメーバ症、包虫嚢胞、火傷、皮膚炎、皮膚筋炎、日焼け、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）、疣、蕁麻疹（ｗｈｅａｌｓ）、脈管炎、血管炎、心内膜炎、動脈炎、粥状（アテローム）硬化、血栓静脈炎、心膜炎、心筋炎、心筋虚血、結節性動脈周囲炎、リューマチ熱、アルツハイマー病、腔疾患、鬱血心不全、髄膜炎、脳炎、多発硬化、脳梗塞、脳塞栓、ギランバレー症候群、神経炎、神経痛、脊髄傷害、麻痺、葡萄膜炎、関節炎、関節痛、骨髄炎、筋膜炎、パジェット病、痛風、歯周病、リューマチ関節炎、滑膜炎、重症筋無力症、甲状腺炎、全身狼紅エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、ベーチェット症候群、同種異系移植片拒絶、移植片対宿主病、強直性脊椎炎、バージャー病、１型糖尿、２型糖尿、バージャー病、ルティエ症候群、もしくはホジキン病である、請求項１７の方法。
【請求項１９】
前記病状が、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックである、請求項１７の方法。
【請求項２０】
前記哺乳類が、自己免疫疾患を持つか、もしくは、自己免疫疾患に関するリスクにある、請求項１５の方法。
【請求項２１】
前記自己免疫疾患が、多発硬化、全身紅斑狼瘡（エリテマトーデス）、リューマチ関節炎、移植片対宿主病、自己免疫肺炎、自己免疫脳脊髄炎、ギランバレー症候群、自己免疫甲状腺炎、インシュリン依存糖尿、クローン病、硬皮症、乾癬、シェーグレン症候群、および自己免疫炎症眼病である、請求項２０の方法。
【請求項２２】
前記哺乳類が、腫瘍を持つ、請求項１０の方法。
【請求項２３】
哺乳類における炎症を処置するかもしくは防ぐ方法であって、当該哺乳類における炎症を処置するかもしくは防ぐに有効な量における、請求項１４の医薬組成物を当該哺乳類に投与することを含む、方法。
【請求項２４】
前記哺乳類が、ヒトである、請求項２３の方法。
【請求項２５】
前記哺乳類が、増殖脈管疾患、急性呼吸困難症候群、サイトカイン媒介毒性、乾癬、インターロイキン−２毒性、虫垂炎、消化潰瘍、胃潰瘍、および十二指腸潰瘍、腹膜炎、膵炎、潰瘍結腸炎、偽膜結腸炎、急性結腸炎、および虚血結腸炎、憩室炎、喉頭蓋炎、無弛緩症、胆管炎、胆嚢炎、肝炎、炎症腸疾患、クローン病、腸管炎、ホウィップル病、喘息、アレルギー、アナフィラキシーショック、免疫複合病、臓器虚血、再灌流傷害、臓器壊死、枯草熱、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、内毒素ショック、悪液質（カケクシア）、超高熱、好酸肉芽腫、肉芽腫症、類肉腫症、敗血症流産、副睾丸炎、膣炎、前立腺炎、尿道炎、気管支炎、気腫、鼻炎、嚢胞線維症、肺炎、肺胞炎、細気管支炎、咽頭炎、胸膜炎、副鼻腔炎、インフルエンザ、呼吸多核ウィルス感染、ヘルペス感染、ＨＩＶ感染、Ｂ型肝炎ウィルス感染、Ｃ型肝炎ウィルス感染、伝搬菌血、デング熱、カンジダ症、マラリア、糸状虫症、アメーバ症、包虫嚢胞、火傷、皮膚炎、皮膚筋炎、日焼け、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）、疣、蕁麻疹（ｗｈｅａｌｓ）、脈管炎、血管炎、心内膜炎、動脈炎、粥状（アテローム）硬化、血栓静脈炎、心膜炎、心筋炎、心筋虚血、結節性動脈周囲炎、リューマチ熱、アルツハイマー病、腔疾患、鬱血心不全、髄膜炎、脳炎、多発硬化、脳梗塞、脳塞栓、ギランバレー症候群、神経炎、神経痛、脊髄傷害、麻痺、葡萄膜炎、関節炎、関節痛、骨髄炎、筋膜炎、パジェット病、痛風、歯周病、リューマチ関節炎、滑膜炎、重症筋無力症、甲状腺炎、全身狼紅エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、ベーチェット症候群、同種異系移植片拒絶、移植片対宿主病、強直性脊椎炎、バージャー病、１型糖尿、２型糖尿、バージャー病、ルティエ症候群、もしくはホジキン病を持つ、請求項２３の方法。
【請求項２６】
前記哺乳類が、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックを持つ、請求項２３の方法。
【請求項２７】
前記哺乳類が、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックに関するリスクにある、請求項２３の方法。
【請求項２８】
更に、前記哺乳類に第２の抗炎症剤を投与することを含む、請求項２３の方法。
【請求項２９】
第２の抗炎症剤が、ＮＳＡＩＤ、サリチラート、ＣＯＸ阻害剤、ＣＯＸ−２阻害剤、もしくはステロイドである、請求項２８の方法。
【請求項３０】
前記哺乳類が、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックに関するリスクを持つか、または、リスクにあり、第２の処置が、ムスカリンアゴニスト、アドレノメデュリン、アドレノメデュリン結合蛋白、乳脂球状表皮成長因子ＶＩＩＩ、活性化蛋白Ｃ、もしくはα２Ａ−アドレナリン作動アンタゴニストの投与である、請求項２８の方法。
【請求項３１】
敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックを持つ哺乳類を処置する方法であって、該敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックを処置するに有効な量における、請求項１４の医薬組成物を当該哺乳類に投与することを含む、方法。
【請求項３２】
自己免疫疾患を持つ哺乳類を処置する方法であって、該自己免疫疾患を処置するに有効な量における、請求項１４の医薬組成物を当該哺乳類に投与することを含む、方法。
【請求項３３】
前記自己免疫疾患が、多発硬化、全身紅斑狼瘡（エリテマトーデス）、リューマチ関節炎、移植片対宿主病、自己免疫肺炎、自己免疫脳脊髄炎、ギランバレー症候群、自己免疫甲状腺炎、インシュリン依存糖尿、クローン病、硬皮症、乾癬、シェーグレン症候群、および自己免疫炎症眼病である、請求項３２の方法。
【請求項３４】
腫瘍を持つ哺乳類を処置する方法であって、該腫瘍を処置するに有効な量における、請求項１４の医薬組成物を当該哺乳類に投与することを含む、方法。
【請求項３５】
前記医薬組成物が、経口投与される、請求項１５〜３４のいずれか１項の方法。
【請求項３６】
前記医薬組成物が、非経口投与される、請求項１５〜３４のいずれか１項の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対する相互参照
この出願が、２００６年３月２４日出願された米国仮出願第６０／７８５，８９８号の利益を請求する。
【０００２】
（１）本発明分野
本発明が、複数のサイトカイン阻害剤に関する。より具体的には、本発明が、マクロファージ転移阻害因子の幾つかの阻害剤を同定し、特徴化する。
【背景技術】
【０００３】
（２）関連技術の記述
マクロファージ転移阻害因子（ＭＩＦ）が、原炎症サイトカインであり、決定的に炎症疾患の病原中、関与した（ＣａｌａｎｄｒａおよびＲｏｇｅｒ、２００３年；Ｒｉｅｄｅｍａｎｎら、２００３年）。最近の研究が、敗血症の病理生理学における決定因子としてＭＩＦを明確に定義してきている（Ａｌ−Ａｂｅｄら、２００５年）。敗血症の間中の抗体もしくはＩＳＯ−１によるＭＩＦ活性の廃止が、心臓循環器効率を向上させ、敗血症と関連した致死性を防ぐ（Ａｌ−Ａｂｅｄら、２００５年；Ｌｉｎら、２００５年）。ある１イソオキサゾリンたる特異的阻害剤ＩＳＯ−１が、設計（デザイン）されたが、ＭＩＦの疎水性活性部位中に適合（フィット）し、ある１相互作用が、ＩＳＯ−１とのＭＩＦ複合体の結晶構造により確認された（図１、Ｌｕｂｅｔｓｋｙら、２００２年）。敗血症臨床関連モデルにおけるＩＳＯ−１投与が、中庸の保護を（８０％対４０％コントロール）授ける。これらの結果が、治療意図を有する第１のＭＩＦ原炎症活性小分子阻害剤としてＩＳＯ−１を同定し、ヒト敗血症における治療介入に向かう新規標的（ターゲット）としてのＭＩＦ活性部位の潜在力を指し示す。上に基づいたら、ＭＩＦを阻害する他のイソキサゾリンの同定が、望まれている。本発明が、そんな必要に関する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明者が、ＭＩＦ活性を阻害する幾つかの新しい化合物を同定し、特徴化させてきている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明が、これゆえ、式Ｉ：
【０００６】
【化１】
2009530404.tif 000003
【０００７】
の複数の化合物に関している。これらの化合物を用い、Ｒ１が、直鎖もしくは分岐Ｃ1〜Ｃ10アルキルであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５が、独立に、ＦもしくはＨであり、式中、もし、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の全てが、Ｈであれば、この時、Ｒ１が、ＣＨ3でない。
【０００８】
本発明が、式ＩＩ：
【０００９】
【化２】
2009530404.tif 000004
【００１０】
の複数の化合物にも関しており、これらの化合物を用い、Ｒ１が、直鎖もしくは分岐Ｃ1〜Ｃ10アルキルであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５が、独立に、ＦもしくはＨであり、但し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の全てでないのが、Ｈである。
【００１１】
本発明が、医薬として許容可能な担体中、上の複数の化合物のいずれか、もしくは、これの医薬として許容可能な塩を含んでいる医薬組成物にも関している。
【００１２】
本発明が、更に、ある１哺乳類におけるマクロファージ転移阻害因子（ＭＩＦ）活性を阻害していくとの複数の方法に関している。これら方法が、当該哺乳類におけるＭＩＦ活性を阻害するに有効な量における上の医薬組成物を当該哺乳類に投与していくことを含む。
【００１３】
更に、本発明が、ある１哺乳類における炎症を処置していくか、もしくは、防いでいくとの複数の方法に関している。これら方法が、当該哺乳類における当該炎症を処置するか、もしくは、防ぐに有効な量における上の医薬組成物を当該哺乳類に投与していくことを含む。
【００１４】
また、本発明が、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックを持っているある１哺乳類を処置していくとの複数の方法に関している。これら方法が、当該敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックを処置するに有効な量における上の医薬組成物を当該哺乳類に投与していくことを含む。
【００１５】
本発明が、更に、自己免疫疾患を持っているある１哺乳類を処置していくとの複数の方法に関している。これら方法が、当該自己免疫疾患を処置するに有効な量における上の医薬組成物を当該哺乳類に投与していくことを含む。
【００１６】
加え、本発明が、ある１腫瘍を持っているある１哺乳類を処置していくとの複数の方法に関しており、本方法が、当該腫瘍を処置するに有効な量における上の医薬組成物を当該哺乳類に投与していくことを含んでいる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１７】
本発明が、ＭＩＦ活性を阻害する幾つかの新しい化合物を与える。実施例参照。
【００１８】
本発明が、これゆえ、式Ｉ：
【００１９】
【化３】
2009530404.tif 000005
【００２０】
の複数の化合物に関しており、式中、Ｒ１が、直鎖もしくは分岐Ｃ1〜Ｃ10アルキルであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５が、独立に、ＦもしくはＨであり、ここで、もし、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の全てが、Ｈであれば、その時、Ｒ１が、ＣＨ3でない。好ましくは、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の１つだけが、Ｆである。より好ましくは、Ｒ２が、Ｆである。
【００２１】
ある幾つかの好ましい化合物を用いると、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の全てが、Ｈである。他の好ましい化合物を用いると、Ｒ２が、Ｆである。
【００２２】
更なる好ましい化合物中、Ｒ１が：
【００２３】
【化４】
2009530404.tif 000006
【００２４】
である。
【００２５】
より好ましい化合物が、化合物１７であり、式：
【００２６】
【化５】
2009530404.tif 000007
【００２７】
を持っている。
【００２８】
更に好ましい化合物が、ＩＳＯ−６３であり、式：
【００２９】
【化６】
2009530404.tif 000008
【００３０】
を持っている。
【００３１】
尚もう１種別の好ましい化合物が、ＩＳＯ−６０であり、式：
【００３２】
【化７】
2009530404.tif 000009
【００３３】
を持っている。
【００３４】
最も好ましい実施形態中、本化合物が、（Ｒ）異性体（アイソマー）である。
【００３５】
本発明に関した重要な発見が、イソキサゾリンＭＩＦ阻害剤の芳香環への１以上の弗素部分の付加が、その阻害活性を向上させることである。実施例１参照。これゆえ、米国特許出願公開第２００５−０，２５０，８２６Ａ１号明細書において開示されたもののような、他のイソキサゾリンＭＩＦ阻害剤が、その芳香環への１以上の弗素部分の付加により向上していると期待されている。これゆえ、本発明が、式ＩＩ：
【００３６】
【化８】
2009530404.tif 000010
【００３７】
の化合物にも関しており、式中、Ｒ１が、直鎖もしくは分岐Ｃ1〜Ｃ10アルキルであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５が、独立に、ＦもしくはＨであり、但し、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の全てでないのが、Ｈである。好ましくは、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の１つだけが、Ｆである。より好ましくは、Ｒ２が、Ｆである。Ｒ２が、Ｆである場合、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５が、Ｈであるのが、好ましい。
【００３８】
本発明が、医薬として許容可能な担体中、上の複数の化合物のいずれか、もしくは、これの医薬として許容可能な塩を含んでいる複数の医薬組成物にも関している。
【００３９】
＜＜医薬として許容可能な＞＞により、（ｉ）本組成物の他の成分と相容れており、その意図された目的に本組成物を不適にしていくことなく、（ｉｉ）本明細書において与えれたとおりの主題を有する使用に適しており、（毒性、侵襲、およびアレルギー応答のような）不要な悪影響を及ぼす副作用のない、ある１素材が、意味されている。副作用が、＜＜不要＞＞であるのは、そのリスクが、本組成物により与えられた益よりも重い場合である。医薬として許容可能な担体の非限定例が、限定なく、燐酸緩衝化生理食塩水溶液のような標準医薬担体、水、油／水エマルション、微小（ミクロ）エマルションのようなエマルション等のいずれかを包含する。
【００４０】
複数の上記化合物が、過度の実験なく、特定の応用に適するよう、ヒトを包含しているある１哺乳類に対する投与用に製剤され得る。加えて、これら組成物の適正な用量が、過度の実験なく、標準用量−応答プロトコルを使用しながら、求められ得る。
【００４１】
従って、経口、舌、舌下、口腔、および口腔内投与用に設計（デザイン）されたこれら組成物が、過度の実験なく、当業界においてよく知られた手段、例えば、不活性稀釈剤を用いてもしくは可食担体を用いて調製され得る。これら組成物が、ゼラチンカプセル中封じられていてもよく、錠剤（タブレット）に圧縮されていてもよい。経口治療投与目的に関し、本発明のこれら医薬組成物が、賦形剤と共に取り込まれていてもよく、タブレット、トローチ、カプセル、エリキシル、サスペンション、シロップ、ウェーハ、チューイングガム、および同様のものの形において使用されていてもよい。
【００４２】
タブレット、ピル、カプセル、トローチ、および同様のものが、バインダー、、崩壊剤、潤滑剤、甘味料、および香料も含有してよい。バインダーのある幾つかの例が、微結晶セルロース、トラガカントガム、もしくはゼラチンを包含する。賦形剤の例が、スターチもしくはラクトースを包含する。崩壊剤のある幾つかの例が、アルギン酸、コーンスターチ、および同様のものを包含する。潤滑剤の例が、ステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カリウムを包含する。潤滑剤（ｇｌｉｄａｎｔ）のある１例が、コロイド状二酸化珪素である。甘味料のある幾つかの例が、スクロース、サッカリン、および同様のものを包含する。香料の例が、ペパーミント、サリチル酸メチル、オレンジ香料、および同様のものを包含する。これらの種々の組成物を調製していくことにおいて使用された素材が、医薬として純粋であり、使用された量において非毒性であるべきである。
【００４３】
これら化合物が、容易に、例えば、静脈内、筋内、蜘蛛膜下、もしくは皮下注射によるよう、非経口投与され得る。非経口投与が、これら化合物をある１溶液もしくは懸濁（サスペンション）中に取り込ませていくことにより達成され得る。このような溶液もしくは懸濁が、注射用水、生理食塩水溶液、固定化油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、もしくは他の合成溶媒のような無菌稀釈剤も包含してよい。非経口製剤が、例えば、ベンジルアルコールもしくはメチルパラベンのような抗菌剤、例えば、アスコルビン酸もしくは重亜硫酸ナトリウムのような抗酸化剤、ならびに、ＥＤＴＡのようなキレート化剤も包含してよい。酢酸塩、クエン酸塩、もしくは燐酸塩のような緩衝剤（バッファー）、ならびに、塩化ナトリウムもしくはデキストロースのような浸透圧調整剤も加えられていてよい。本非経口調製品が、アンプル、使い捨て可能シリンジ、またはガラスもしくはプラスチックから調製された多数回用量バイアル中、封じられ得る。
【００４４】
直腸投与が、直腸もしくは大腸中に医薬組成物中の本化合物を投与していくことを包含する。これが、坐薬もしくは浣腸を使用しながら、達成され得る。坐薬製剤が、容易に、当業界において知られた方法により調製され得る。例えば、坐薬製剤が、グリセリンを約１２０℃に熱していき、本組成物をそのグリセリンに溶かしていき、その熱せられたグリセリンを混ぜていき、その後、精製水が、加えられていてよく、そしてその熱い混合物を坐薬型中に注いでいくことにより調製され得る。
【００４５】
経皮投与が、皮膚を通る本組成物の経皮吸収を包含する。経皮製剤が、パッチ（よく知られたニコチンパッチのような）、外用薬、クリーム、ジェル、軟膏、および同様のものを包含する。
【００４６】
これら化合物が、鼻投与用にも調製され得る。本明細書中、使用されたとおり、鼻投与が、その患者の鼻道もしくは鼻腔の粘膜に本化合物を投与していくことを包含する。本化合物の鼻投与用医薬組成物が、例えば、鼻スプレー、鼻ドロップ、懸濁、ジェル、外用薬、クリーム、もしくは粉末として投与されているよく知られた方法により調製された本化合物の治療有効量を包含する。本化合物の投与が、鼻タンポンもしくは鼻スポンジを使用しながら、行われてもよい。
【００４７】
本発明のこれら化合物が、これら自体投与されていてもよく（原液、ニート）、医薬として許容可能な塩の形にあってもよい。医学において使用された場合、これら塩が、薬理学的におよび医薬として両方許容可能であるべきであるが、医薬として許容不可能な塩が、便利に、使用されていてよく、遊離の活性化合物もしくはこの医薬として許容可能な複数の塩を調製する。薬理学的におよび医薬として許容可能な複数の塩が、以降の酸：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、燐酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、蟻酸、マロン酸、琥珀酸、ナフタレン−２−スルホン酸、およびベンゼンスルホン酸から調製されたものを包含するが、これらに限られていない。また、医薬として許容可能な複数の塩が、そのカルボン酸基のナトリウム塩、カリウム塩、もしくはカルシウム塩のようなアルカリ金属塩もしくはアルカリ土類塩として調製され得る。
【００４８】
本発明が、更に、ある１哺乳類におけるマクロファージ転移阻害因子（ＭＩＦ）活性を阻害していくとの複数の方法に関している。これら方法が、当該哺乳類におけるＭＩＦ活性を阻害するに有効な量における複数の上の医薬組成物のいずれかを当該哺乳類に投与していくことを含む。
【００４９】
これらの方法が、如何なる哺乳類上でも使用され得る。好ましくは、本哺乳類が、ヒトである。本哺乳類が、ＭＩＦにより少なくとも一部媒介されている炎症サイトカインカスケードを含むある１病状を持つか、または、これに関するリスクにあることも好ましい。このような病状の非限定例が、増殖脈管疾患、急性呼吸困難症候群、サイトカイン媒介毒性、乾癬、インターロイキン−２毒性、虫垂炎、消化潰瘍、胃潰瘍、および十二指腸潰瘍、腹膜炎、膵炎、潰瘍結腸炎、偽膜結腸炎、急性結腸炎、および虚血結腸炎、憩室炎、喉頭蓋炎、無弛緩症、胆管炎、胆嚢炎、肝炎、炎症腸疾患、クローン病、腸管炎、ホウィップル病、喘息、アレルギー、アナフィラキシーショック、免疫複合病、臓器虚血、再灌流傷害、臓器壊死、枯草熱、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、内毒素ショック、悪液質（カケクシア）、超高熱、好酸肉芽腫、肉芽腫症、類肉腫症、敗血症流産、副睾丸炎、膣炎、前立腺炎、尿道炎、気管支炎、気腫、鼻炎、嚢胞線維症、肺炎、肺胞炎、細気管支炎、咽頭炎、胸膜炎、副鼻腔炎、インフルエンザ、呼吸多核ウィルス感染、ヘルペス感染、ＨＩＶ感染、Ｂ型肝炎ウィルス感染、Ｃ型肝炎ウィルス感染、伝搬菌血、デング熱、カンジダ症、マラリア、糸状虫症、アメーバ症、包虫嚢胞、火傷、皮膚炎、皮膚筋炎、日焼け、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）、疣、蕁麻疹（ｗｈｅａｌｓ）、脈管炎、血管炎、心内膜炎、動脈炎、粥状（アテローム）硬化、血栓静脈炎、心膜炎、心筋炎、心筋虚血、結節性動脈周囲炎、リューマチ熱、アルツハイマー病、腔疾患、鬱血心不全、髄膜炎、脳炎、多発硬化、脳梗塞、脳塞栓、ギランバレー症候群、神経炎、神経痛、脊髄傷害、麻痺、葡萄膜炎、関節炎、関節痛、骨髄炎、筋膜炎、パジェット病、痛風、歯周病、リューマチ関節炎、滑膜炎、重症筋無力症、甲状腺炎、全身狼紅エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、ベーチェット症候群、同種異系移植片拒絶、移植片対宿主病、強直性脊椎炎、バージャー病、１型糖尿、２型糖尿、バージャー病、ルティエ症候群、およびホジキン病を包含する。好ましいこのような病状が、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）および／または内毒素ショックである。
【００５０】
ＭＩＦが、自己免疫疾患における重要な役を演じると示されてきている。例えば、Ｃｖｅｔｊｏｖｉｃら、２００５年参照。これら本方法が、これゆえ、自己免疫疾患処置において有用であると思われる。これゆえ、これらの方法のある態様中、本哺乳類が、自己免疫疾患を持つかもしくはこれに関するリスクにある。このような自己免疫疾患の非限定例が、多発硬化、全身紅斑狼瘡（エリテマトーデス）、リューマチ関節炎、移植片対宿主病、自己免疫肺炎、自己免疫脳脊髄炎、ギランバレー症候群、自己免疫甲状腺炎、インシュリン依存糖尿、クローン病、硬皮症、乾癬、シェーグレン症候群、および自己免疫炎症眼病である。
【００５１】
ＭＩＦも、腫瘍の浸襲および転移を促進させると知られている。例えば、Ｓｕｎら、２００５年参照。これら本方法が、これゆえ、ある１腫瘍を持つある１哺乳類の処置に有用であると思われる。
【００５２】
本発明が、ある１哺乳類における炎症を処置していくかもしくは防いでいくとの方法にも関している。これら方法が、当該哺乳類における炎症を処置するかもしくは防ぐに有効な量における上の医薬組成物を当該哺乳類に投与していくことを含む。
【００５３】
これらの方法に関し、本哺乳類が、好ましくは、ヒトである。本哺乳類が、炎症、例えば、増殖脈管疾患、急性呼吸困難症候群、サイトカイン媒介毒性、乾癬、インターロイキン−２毒性、虫垂炎、消化潰瘍、胃潰瘍、および十二指腸潰瘍、腹膜炎、膵炎、潰瘍結腸炎、偽膜結腸炎、急性結腸炎、および虚血結腸炎、憩室炎、喉頭蓋炎、無弛緩症、胆管炎、胆嚢炎、肝炎、炎症腸疾患、クローン病、腸管炎、ホウィップル病、喘息、アレルギー、アナフィラキシーショック、免疫複合病、臓器虚血、再灌流傷害、臓器壊死、枯草熱、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、内毒素ショック、悪液質（カケクシア）、超高熱、好酸肉芽腫、肉芽腫症、類肉腫症、敗血症流産、副睾丸炎、膣炎、前立腺炎、尿道炎、気管支炎、気腫、鼻炎、嚢胞線維症、肺炎、肺胞炎、細気管支炎、咽頭炎、胸膜炎、副鼻腔炎、インフルエンザ、呼吸多核ウィルス感染、ヘルペス感染、ＨＩＶ感染、Ｂ型肝炎ウィルス感染、Ｃ型肝炎ウィルス感染、伝搬菌血、デング熱、カンジダ症、マラリア、糸状虫症、アメーバ症、包虫嚢胞、火傷、皮膚炎、皮膚筋炎、日焼け、蕁麻疹、疣、蕁麻疹、脈管炎、血管炎、心内膜炎、動脈炎、粥状（アテローム）硬化、血栓静脈炎、心膜炎、心筋炎、心筋虚血、結節性動脈周囲炎、リューマチ熱、アルツハイマー病、腔疾患、鬱血心不全、髄膜炎、脳炎、多発硬化、脳梗塞、脳塞栓、ギランバレー症候群、神経炎、神経痛、脊髄傷害、麻痺、葡萄膜炎、関節炎、関節痛、骨髄炎、筋膜炎、パジェット病、痛風、歯周病、リューマチ関節炎、滑膜炎、重症筋無力症、甲状腺炎、全身狼紅エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、ベーチェット症候群、同種異系移植片拒絶、移植片対宿主病、強直性脊椎炎、バージャー病、１型糖尿、２型糖尿、バージャー病、ルティエ症候群、もしくはホジキン病に関与している病を持ち得るか、もしくは、これらの病に関するリスクにあり得る。好ましくは、本哺乳類が、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックを持つか、あるいは、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックに関するリスクにある。
【００５４】
これらの方法が、本哺乳類に対する第２の抗炎症剤の投与を包含し得る。このような第２の抗炎症剤の例が、ＮＳＡＩＤｓ、サリチラート、ＣＯＸ阻害剤、ＣＯＸ−２阻害剤、およびステロイドである。好ましくは、本哺乳類が、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックに関するリスクを持つか、または、リスクにあり、第２の処置が、ムスカリンアゴニスト、アドレノメデュリン、アドレノメデュリン結合蛋白、乳脂球状表皮成長因子ＶＩＩＩ、活性化蛋白Ｃ、もしくはα２Ａ−アドレナリン作動アンタゴニストの投与である。
【００５５】
本発明が、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックを持っている哺乳類を処置していくとの複数の方法にも関している。これら方法が、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックを処置するに有効な量において当該哺乳類に上の医薬組成物を投与していくことを含む。
【００５６】
本発明が、更に、自己免疫疾患を持っている哺乳類を処置していくとの複数の方法に関している。これら方法が、当該自己免疫疾患を処置するに有効な量において当該哺乳類に上の医薬組成物を投与していくことを含む。このような自己免疫疾患の例が、多発硬化、全身狼瘡エリテマトーデス、リューマチ関節炎、移植対宿主疾患、自己免疫肺炎、自己免疫脳脊髄炎、ギラン−バレー症候群、自己免疫甲状腺炎、インシュリン依存糖尿病、クローン病、硬皮症、乾癬、シェーグレン症候群、および自己免疫炎症眼病を包含する。
【００５７】
加え、本発明が、腫瘍を持っている哺乳類を処置していくとの方法に関しており、本方法が、当該腫瘍を処置するに有効な量において当該哺乳類に上の医薬組成物を投与していくことを含んでいる。
【００５８】
これらの化合物が、有効に経口投与されると期待され得る。これゆえ、上の方法のいずれにおいても本医薬組成物が、経口投与され得る。あるいは、本医薬組成物が、非経口投与され得る。
【００５９】
本発明の好ましい実施形態が、以降の実施例中、記載されている。本明細書中の請求項の範囲内の他の実施形態が、本明細書の考慮、もしくは、本明細書中、開示されたとおりの本発明の実際から当業者に明らかとなる。本明細書が、これら実施例と一緒に例えとしてだけ考慮され、本発明の範囲および精神が、これら請求項により指し示されていることが、意図されており、これら実施例に伴う。
【実施例】
【００６０】
実施例１．ＩＳＯ−１スキャッフォールドの決定的な修飾が、マクロファージ転移阻害因子（ＭＩＦ）活性のその潜在的な阻害を向上させる
実施例の要約
【００６１】
ある１原炎症サイトカインＭＩＦ阻害剤たる（Ｓ，Ｒ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）−４，５−ジヒドロ−５−イソキサゾール酢酸メチルエステル（ＩＳＯ−１）のスキャッフォールドに基づいたら、不斉分割および２回の決定的な修飾が、その阻害の潜在力を有意に向上させてきている。（Ｒ）−１７が、ＩＳＯ−１よりも２０倍潜在的であり、５５０ｎＭのＩＣ５０を有し、ＭＩＦ互変化酵素（トートメラーゼ）活性を阻害する。
【００６２】
結果および議論
ＩＳＯ−１の潜在力を向上させるに、ＩＳＯ−１の構造−活性相関が、探された。以前、決定的な複数の官能基が、ＩＳＯ−１スキャッフォールド内で同定されたが、そのパラ−（ｐ−）ヒドロキシル官能基のメチル化へのそのＭＩＦ阻害効果の消失、イソキサゾールにまでの４，５−ジヒドロイソキサゾールの酸化、または、アルコールにまでのメチルエステルの還元により、証明されたとおりである（Ｌｕｂｅｔｓｋｙら、２００２年）。本明細書中、ＩＳＯ−１のフェノール基のオルト位上へのモノ弗素化が、４１％にまでもＭＩＦ活性阻害を向上させたことが、発見された（図３）。また、ＩＳＯ−１のアルキル尾部が、種々のエステル類似体（アナローグ）および種々のアミド類似体（アナローグ）を用いて調べられた。この新しい合成経路（ルート）が、大規模（ラージスケール）においてその前駆体（ＩＳＯ−１−酸）を提供する（図２）。ＩＳＯ−１−酸とアルコール（もしくはアミン）との間でのエステル化およびアミド形成が、標準ＤＣＣカップリングプロトコール（ＤＣＣ、ＤＭＡＰ、もしくはＨＯＢｔ）を使用しながら、達成された（表１）。
【００６３】
【表１】
2009530404.tif 000011
【００６４】
表１および表２において要約されたとおり、我々は、これらエステル類似体（アナローグ）が、その（対応）アミド対旋律よりも潜在的な阻害剤であることを見出した（例えば、化合物１４（ＩＣ50＝２．５μＭ）対化合物６（ＩＣ50＝２４μＭ）および化合物３（ＩＣ50＝８．５μＭ）対化合物７（ＩＣ50＝２６μＭ））。我々は、ＭＩＦ活性を阻害していくという潜在力へのこのエステル基の嵩高さの影響を更に調査した。ＩＳＯ−１−酸のエステル化プロセスが、以降のアルコール：エタノール、１０；１−プロパノール、１１；２−プロパノール、１２；１−ブタノール、１３；シクロヘキサノール、１４；シクロヘキシルメタノール、１５；およびネオペンチルアルコール、１６を使用しながら、ＴＭＳＣｌを用いて達成された（表２）。表３において示されたとおり、最も嵩高いアルコール（化合物１６、ネオペンチルエステル類似体（アナローグ））が、より優れた阻害活性（ＩＣ50＝１．５μＭ）を示し、ＩＳＯ−１よりも約１０倍潜在的である。
【００６５】
【表２】
2009530404.tif 000012
【００６６】
ＭＩＦ／ＩＳＯ−１錯体結晶構造解析が、ＩＳＯ−１の（Ｒ）−異性体（アイソマー）が、（Ｓ）−異性体（アイソマー）よりも良く、その電子密度（電子雲）中に適合（フィット）することを予言し、該（Ｒ）−異性体（アイソマー）が、ＭＩＦ活性部位に対するより高い親和性（アフィニティー）と共に結合することがあることを示唆している（Ｄｉｏｓら、２００２）。以前、そのアミノ酸シッフ塩基（ベース）の絶対配置の重要さが、ＭＩＦ阻害効果に関し、示された（Ｌｕｂｅｔｓｋｙら、２００２）。してみると、この光学活性ＩＳＯ−１の分割およびその阻害活性の決定が、各異性体（アイソマー）に関し、必要とされた。不斉分割が、メチル化ＩＳＯ−１−酸ジアステレオマーシンコニジン塩分画結晶化を通し、以前記載されたとおり、達成された（図３、Ｗｉｔｙａｋら、１９９７）。それらの（Ｓ）−配置の塩が、より可溶性でないと見出され、その不斉混合物から析出された。これら（Ｓ）および（Ｒ）−配置の塩が、次いで、１規定（Ｎ）塩酸（ＨＣｌ）により酸性化され、ＢＢｒ3を用いて脱メチル化され、そしてメタノール（ＭｅＯＨ）中、ＴＭＳＣｌを用いてエステル化されたが、（Ｓ）−ＩＳＯ−１（９０％ｅｅ）および（Ｒ）−ＩＳＯ−１（９０％ｅｅ）を与える。両異性体（アイソマー）が、ＭＩＦドーパクローム互変化酵素（トートメラーゼ）アッセイにおいて活性に関してテストされた。（Ｒ）−ＩＳＯ−１が、約７μＭのＩＣ50を有し、ＭＩＦ互変化酵素（トートメラーゼ）活性を阻害したが、（Ｓ）−ＩＳＯ−１が、約１３μＭのＩＣ50を有し、５０％活性でなかった（図３）。
【００６７】
最も潜在的な特異的な小分子ＭＩＦ阻害剤を得るに当たり、３回の決定的な工程（ステップ）が、本ＩＳＯ−１スキャッフォールド中に統合されている（織り込まれている）ことが必要である：
（１）ＩＳＯ−１のフェノール基の弗素化、好ましくは、該フェノール基のオルト位（ｏ−）上にモノ弗素化；
（２）ＩＳＯ−１のメチルエステルを置き換えている、ネオペンチルエステルのようなより嵩高い官能基；および
（３）（Ｒ）−異性体を得る不斉分割。
こうして、化合物１７（図３）が、最適化されたが、７５０ｎＭのＩＣ50を有する、ＭＩＦ活性潜在的阻害剤である。古典的な不斉分割後、（Ｒ）−１７が、ＭＩＦ互変化酵素（トートメラーゼ）活性を阻害したが、５５０ｎＭのＩＣ50を有し、一方、（Ｓ）−１７が、５０％活性でなかったが、約１．１μＭのＩＣ50を有した（図３）。化合物（Ｒ）−１７が、その親化合物ＩＳＯ−１よりも２０倍潜在的である。
【００６８】
ＩＳＯ−１スキャッフォールド上での決定的な２回の修飾後、我々が、ナノモーラー濃度（５５０ｎＭ）にまで、ＭＩＦ互変化酵素（トートメラーゼ）活性阻害を向上させてきており、ＩＳＯ−１よりも約２０倍潜在的である。
【００６９】
材料および方法
ＭＩＦ互変化酵素（トートメラーゼ）活性が、ＵＶ−可視記録分光器（ＳＨＩＭＡＤＺＵ、ＵＶ１６００Ｕ）により、測定された。Ｌ−ドーパクロームメチルエステルの保管（ストック）したての溶液が、過沃素酸ナトリウムを用いたＬ−３，４−ジヒドロキシフェニルアラニンメチルエステルの酸化を通し、２．４ｍＭにおいて調製された。ＭＩＦ溶液（８００〜９００ｎｇ／ｍＬ）１μＬおよび本酵素阻害剤の種々の濃度を有するＤＭＳＯ溶液１μＬが、０．７ｍＬアッセイ用緩衝液（バッファー、５０ｍＭ燐酸カリウム、ｐＨ７．２）を含有しているプラスチックセル（ｃｕｖｅｔｔｅ、１０ｍｍ、１．５ｍＬ）中に加えられた。次いで、Ｌ−ドーパクロームメチルエステル溶液（０．３ｍＬ）が、該アッセイ用緩衝液（バッファー）の混合物に加えられた。活性が、室温（ＲＴ）において求められ、それらの分光測定が、標準溶液に比べ、Ｌ−ドーパクロームメチルエステル脱色速度をモニターしていくことにより、２０秒間、λ＝４７５ｎｍにおいてなされた。
【００７０】
全ての溶媒が、Ｆｉｓｈｅｒ  ＳｃｉｅｎｔｉｆｉｃからのＨＰＬＣ等級（グレード）であった。シリカゲル（Ｓｅｌｅｃｔｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ、３２〜６３μｍ平均粒子サイズ）が、フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＦＣＣ）用に使用された。２５４ｎｍ蛍光指示器ＴＬＣ板（プレート）と共にアルミニウム焼成シリカゲル６０が、使用された。ＴＬＣ板（プレート）上のスポットが、短波長ＵＶ灯（ランプ）下、視覚化されるか、あるいは、Ｉ2蒸気を用いて染色された。ＮＭＲスペクトルが、1Ｈ  ＮＭＲスペクトルに関し、２７０ＭＨｚでの、および、13Ｃ  ＮＭＲスペクトルに関し、６７．５ＭＨｚでのＪｅｏｌ  Ｅｃｌｉｐｓｅ  ２７０分光器上、演算された。重水素化溶媒のピークに相対し、カップリング定数が、ヘルツ（Ｈｚ）単位で報告されており、化学シフト（ケミカルシフト）が、ｐｐｍ単位で報告されている。これらカップリング定数（Ｊ）が、ヘルツ（Ｈｚ）単位で測定されており、シングレット（ｓ）、ダブレット（ｄ）、トリプレット（ｔ）、マルチプレット（ｍ）、およびブロード（ｂｒ）として帰属されている。低分解能質量スペクトルが、陰イオンもしくは陽イオンのモードを有するＴｈｅｒｍｏｆｉｎｎｉｇａｎ  ＬＣＱ  ＤｅｃａＸＰｐｌｕｓ４極イオン捕捉器（トラップ）ＭＳを使用しながら、獲得された。
【００７１】
４−メトキシベンズアルデヒドオキシム調製。
４−メトキシベンズアルデヒド（５．０ｇ、３６．８ミリモル）メタノール（３００ｍＬ）溶液に塩酸ヒドロキシルアミン（７．６ｇ、１１０．４ミリモル）および２規定（Ｎ）水酸化ナトリウム（ＮａＯＨ、３７ｍＬ、７３．６ミリモル）が、加えられた。この混合物が、６時間、室温（ＲＴ）において攪拌された。この混合物が、１規定（Ｎ）塩酸（ＨＣｌ）を使用していくことにより、ｐＨ４にまで、中和された。過剰のメタノールが、真空中、除かれたが、そのオキシム体を沈澱させ切る。これら沈澱が、濾過され、水洗された。生成物が、真空下、乾燥され、白色固体を与える（４．９ｇ、８８％）：1Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、アセトン−ｄ6）δ８．０７（ｓ、１Ｈ）、７．５５（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、２Ｈ）、６．９５（ｄ、Ｊ＝８．２Ｈｚ、２Ｈ）、３．８２（ｓ、３Ｈ）。
【００７２】
ＩＳＯ−１−酸調製。
４−メトキシベンズアルデヒドオキシム（４グラム（ｇ）、２６ミリモル）無水ＤＭＦ（５００ｍＬ）溶液にＮＣＳ（５．２ｇ、３９ミリモル）が、加えられた。この反応混合物が、その塩化オキシム（クロロオキシム）を与えながら、室温（ＲＴ）において５時間、攪拌された。この溶液にビニル酢酸（６．６ｍＬ、７８ミリモル）が、加えられたが、ＤＭＦ（５０ｍＬ）中トリエチルアミン（５．５ｍＬ、３９ミリモル）の滴下により伴われた。この反応混合物が、４８時間、室温（ＲＴ）においてＮ2下、攪拌された。溶媒が、真空中、除かれ、残渣が、ＥｔＯＡｃ中、拾われた。このＥｔＯＡｃ溶液が、０．５規定（Ｎ）ＨＣｌ、水、（飽和）食塩水洗浄され、無水ＭｇＳＯ4（硫酸マグネシウム、硫マグ）乾燥された。最終溶液が、真空中、濃縮され、真空ポンプ下、乾燥されたが、定量的な収率において１を与える。１（乾いたジクロロメタン中、４０〜５０ミリモル（ｍＭ））溶液が、Ｎ2下、０℃において過剰（８〜１０当量）の三臭化硼素（１Ｍジクロロメタン溶液、アルドリッチカタログ＃：２１１２２２）を用いて処理された。この反応混合物が、５〜６時間に亘り、室温（ＲＴ）に届くようにされ、次いで、飽和ＮａＨＣＯ3水を用いて反応停止（クウェンチ）された（注意：ＢＢｒ3が、水と激しく反応する！！！）。この混合物が、１／２時間、攪拌され、次いで、水およびＣＨ2Ｃｌ2を用いて稀釈された。その有機層が、その水層から分離され、廃棄された。この水の部分が、ｐＨ４にまで、１規定（Ｎ）塩酸（ＨＣｌ）を用いて中和され、ＥｔＯＡｃ抽出された。ＥｔＯＡｃ溶液の組み合わせが、（飽和）食塩水洗浄され、無水ＭｇＳＯ4（硫酸マグネシウム、硫マグ）乾燥されたが、良好な収率（７５％）において薄黄色粉末としてＩＳＯ−１−酸を与える。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6）δ１０．６５（ｂｒ、１Ｈ）、８．７５（ｓ、１Ｈ）、７．５２（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、６．８５（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、５．０１（ｍ、１Ｈ）、３．５０（ｍ、１Ｈ）、３．０５（ｍ、１Ｈ）、２．６８（ｍ、２Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ２２０（Ｍ-）。
【００７３】
エステルもしくはアミドの形成に向かっての一般的なＤＣＣカップリング手順。
ＩＳＯ−１−酸（乾いたジクロロメタン中、１００ミリモル（ｍＭ））が、１．１当量のＤＣＣ、０．２当量のＤＭＡＰ、および１．５当量のアルコール（もしくは、０．２当量のＨＯＢｔおよび１．５当量のアミン）を用いて処理された。この混合物が、室温（ＲＴ）において８時間、攪拌された。形成された白色沈澱が、濾過され取り除かれ、ＣＨ2Ｃｌ2洗浄され、その濾液が、乾燥にまで、エバポレーションされた。その残渣が、シリカゲル上、精製され（ヘキサン／酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）／ＭｅＯＨ  ４／３／１）、白色固体としてこれらエステルもしくはアミドを与える。
化合物２（６５％収率）：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6）δ８．７５（ｂｒ、１Ｈ）、７．５４（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．３８（ｍ、２Ｈ）、７．２２（ｍ、１Ｈ）、７．１１（ｍ、２Ｈ）、６．８６（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、５．１０（ｍ、１Ｈ）、３．５４（ｍ、１Ｈ）、３．２７（ｍ、１Ｈ）、２．９６（ｍ、２Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ２９６（Ｍ-）
化合物３（６０％収率）：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6）δ８．７８（ｓ、１Ｈ）、７．５２（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．０２（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、６．９０（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、６．８６（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、５．１０（ｍ、１Ｈ）、３．７６（ｓ、３Ｈ）、３．５３（ｍ、１Ｈ）、３．２５（ｍ、１Ｈ）、２．７６（ｍ、２Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２６（Ｍ-）
化合物４（４０％収率）：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6）δ８．７５（ｂｒ、１Ｈ）、７．５５（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．３９（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．０３（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、６．８５（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、５．１１（ｍ、１Ｈ）、３．５５（ｍ、１Ｈ）、３．２３（ｍ、１Ｈ）、２．９５（ｍ、２Ｈ）、１．３０（ｓ、９Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３５２（Ｍ-）
化合物５（３０％収率）：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6）δ８．７５（ｓ、１Ｈ）、７．７２（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．１７（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、６．８６（ｓ、２Ｈ）、５．１０（ｍ、１Ｈ）、３．５５（ｍ、１Ｈ）、３．２５（ｍ、１Ｈ）、２．９６（ｍ、２Ｈ）、２．０５（ｓ、９Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３３８（Ｍ-）
化合物６（８０％収率）：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6）δ８．７９（ｓ、１Ｈ）、７．５２（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、７．００（ｂｒ、１Ｈ）、６．８５（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、４．９４（ｍ、１Ｈ）、３．６４（ｍ、１Ｈ）、３．４２（ｍ、１Ｈ）、３．１０（ｍ、１Ｈ）、２．５２（ｍ、１Ｈ）、２．３７（ｍ、１Ｈ）、１．９０〜１．００（ｍ、１０Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３０１（Ｍ-）
化合物７（８８％収率）：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6）δ９．１０（ｂｒ、１Ｈ）、８．８０（ｂｒ、１Ｈ）、７．５３（ｍ、４Ｈ）、６．８４（ｍ、４Ｈ）、５．０６（ｍ、１Ｈ）、３．７２（ｓ、３Ｈ）、３．４９（ｍ、１Ｈ）、３．１７（ｍ、１Ｈ）、２．７３（ｍ、１Ｈ）、２．６０（ｍ、１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３２５（Ｍ-）
化合物８（９５％収率）：1Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、アセトン−ｄ6）δ７．５２（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、６．８８（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、６．０７（ｂｒ、１Ｈ）、５．０２（ｍ、１Ｈ）、３．４６（ｍ、１Ｈ）、３．１３（ｍ、５Ｈ）、２．５６（ｍ、２Ｈ）、１．５１（ｍ、４Ｈ）、１．３８（ｓ、９Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ４１４（Ｍ＋Ｎａ+）
化合物９（９０％収率）：1Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、アセトン−ｄ6）δ８．６３（ｂｒ、１Ｈ）、７．５２（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、６．８７（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、５．０４（ｍ、１Ｈ）、３．８４（ｍ、２Ｈ）、３．２８（ｍ、３Ｈ）、２．５８（ｍ、３Ｈ）、１．８６（ｍ、２Ｈ）、１．６５（ｍ、２Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ２９２（Ｍ+）
【００７４】
一般的なＴＭＳＣｌエステル化手順。
ＩＳＯ−１−酸（５０ミリグラム、０．２３ミリモル）３ｍＬアルコール（エタノール、１０；１−プロパノール、１１；２−プロパノール、１２；１−ブタノール、１３；シクロヘキサノール、１４；シクロヘキシルメタノール、１５；およびネオペンチルアルコール、１６）溶液に０．１ｍＬのＴＭＳＣｌが、加えられた。この混合物が、２時間、室温（ＲＴ）において（１４、１５、および１６に関し：５０℃において３時間）攪拌された。この混合物が、乾燥にまで、エバポレーションされたが、その残渣が、シリカゲル上での精製に付された（ヘキサン／酢酸エチル（ＥｔＯＡｃ）４／３）が、定量的な収率で、白色固体もしくは薄黄色油（オイル）を与える。
化合物１０：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6）δ８．７４（ｓ、１Ｈ）、７．５２（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、６．８５（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、４．９７（ｍ、１Ｈ）、４．１０（ｑ、２Ｈ）、３．５１（ｍ、１Ｈ）、３．１２（ｍ、１Ｈ）、２．６６（ｍ、２Ｈ）、１．１９（ｔ、３Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ２４８（Ｍ-）
化合物１１：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6）δ８．７５（ｓ、１Ｈ）、７．５１（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、６．８６（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、４．９８（ｍ、１Ｈ）、４．０１（ｔ、２Ｈ）、３．５１（ｍ、１Ｈ）、３．１５（ｍ、１Ｈ）、２．６６（ｍ、２Ｈ）、１．６０（ｍ、２Ｈ）、０．８９（ｔ、３Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ２６２（Ｍ-）
化合物１２：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6）δ８．７４（ｓ、１Ｈ）、７．５１（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、６．８５（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、４．９７（ｍ、２Ｈ）、４．７２（ｍ、１Ｈ）、３．５１（ｍ、１Ｈ）、３．１２（ｍ、１Ｈ）、２．６３（ｍ、２Ｈ）、１．１８（ｄ、Ｊ＝６．３Ｈｚ、６Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ２６２（Ｍ-）
化合物１３：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6）δ８．７８（ｓ、１Ｈ）、７．５２（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、６．８６（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、４．９９（ｍ、１Ｈ）、４．０５（ｔ、２Ｈ）、３．５１（ｍ、１Ｈ）、３．１２（ｍ、１Ｈ）、２．６８（ｍ、２Ｈ）、１．１０〜１．６０（ｍ、４Ｈ）、０．８８（ｔ、３Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ２７６（Ｍ-）
化合物１４：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6）δ８．８４（ｂｒ、１Ｈ）、７．５２（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、６．８６（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、４．９８（ｍ、１Ｈ）、４．７２（ｍ、１Ｈ）、３．５１（ｍ、１Ｈ）、３．１５（ｍ、１Ｈ）、２．６６（ｍ、２Ｈ）、１．９０〜１．２０（ｍ、１０Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３０２（Ｍ-）
化合物１５：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6）δ８．７８（ｓ、１Ｈ）、７．５５（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、６．８８（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、５．０２（ｍ、１Ｈ）、３．９０（ｄ、Ｊ＝６．７Ｈｚ、２Ｈ）、３．５１（ｍ、１Ｈ）、３．１５（ｍ、１Ｈ）、２．７２（ｍ、２Ｈ）、１．８０〜０．９０（ｍ、１１Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ３０２（Ｍ-）
化合物１６：1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、アセトン−ｄ6）δ８．７９（ｓ、１Ｈ）、７．５４（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、６．８８（ｄ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、２Ｈ）、５．０５（ｍ、１Ｈ）、３．８２（ｍ、２Ｈ）、３．５２（ｍ、１Ｈ）、３．１８（ｍ、１Ｈ）、２．７５（ｍ、２Ｈ）、０．９６（ｓ、９Ｈ）；ＥＳＩ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ２９２（Ｍ+）
【００７５】
これらシンコニジン塩の結晶化経由の酸１の古典的分割。
（Ｒ，Ｓ）−１（１．３グラム、５．５ミリモル）が、熱アセトン（２５ｍＬ）に溶解され、シンコニジン（１．６１グラム、５．５ミリモル）が、加えられ、そしてこの溶液が、室温（ＲＴ）にまで、冷やされ、終夜、−２０℃においておかれた。この結果得られてくる白色固体が、濾過されたが、（Ｓ）−１塩を与える。濾液が、真空中、濃縮されたが、（Ｒ）−１塩を与える。（Ｒ）−１塩もしくは（Ｓ）−１塩（２００ミリグラム、０．４ミリモル）のクロロホルム（３ｍＬ）溶液にエーテル（３ｍＬ、３ミリモル）中１規定（１Ｎ）塩酸（塩化水素、ＨＣｌ）が、加えられた。この結果得られてくる白色沈澱が、濾過して除かれ、濾液が、真空中、濃縮されたが、定量的な収率で、（Ｒ）−１もしくは（Ｓ）−１を与える。
【００７６】
実施例２．急性炎症に対する応答における白血球の動員へのイソキサゾリンＭＩＦ阻害剤の効果。
空気（エア）パウチが、０日目（６ｍＬ）および３日目（３ｍＬ）、無菌空気（エア）を皮下注射していくことによりスイスウェブスター（Ｓｗｉｓｓ  Ｗｅｂｓｔｅｒ）雄マウス（複数、２５〜３０ｇ）上、標準手順（Ｇａｒｃｉａ−Ｒａｍａｌｌｏら、２００２）に従いながら、調製された。６日目、複数の動物が、ビヒクル（２０％ＤＭＳＯ３５０μＬ）、ＩＳＯ−１（４０ｍｇ／ｋｇ）、もしくはＩＳＯ−６３（４０ｍｇ／ｋｇ）を用いる単回腹腔内（ｉ．ｐ．）注射と共に処理された。１５分後、これら動物が、該空気（エア）パウチの空洞中に（ＰＢＳ中）１％カラゲナン１ｍＬを注射していくことにより挑まれた。ガラゲナン注射５時間後、これら動物が、犠牲にされ、これらパウチが、ＰＢＳ洗浄され、滲出物が、回収され、そして浸潤細胞合計数が、定量された。
【００７７】
図５が、このアッセイの結果を要約する。ＩＳＯ−６３処理が、急性炎症に対する応答における白血球の動員における有意な抑制を引き起こしたが、ＩＳＯ−１処理が、そうでなかった。
【００７８】
実施例３．マトリゲル（Ｍａｔｒｉｇｅｌ）中へのリューマチ関節炎線維芽細胞様滑膜細胞（ＲＡ−ＦＬＳ）の浸潤へのイソキサゾリンＭＩＦ阻害剤の効果。
浸潤が、マトリゲル浸潤チャンバー（Ｍａｔｒｉｇｅｌ  Ｉｎｖａｓｉｏｎ  Ｃｈａｍｂｅｒｓ、Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ、ＭＡ）を通して細胞浸潤を測定していくことによりアッセイされた。２５μＭのＩＳＯ−１もしくは１００ｎＭのＩＳＯ−６３を用いるＲＡ−ＦＬＳ処理１日後、４×１０4個の細胞が、無血清培地中の上の方のチャンバーに入れられた。１０％ＦＢＳおよび１０％ヒト血清を含有している５００μＬの全培地が、底の方のチャンバーに加えられた。３７℃でのインキュベート２４時間後、フィルターの上の方の表面上の細胞が、Ｑ−チップを用いて拭き取られたが、該フィルターが、４％ホルムアルデヒド／ＰＢＳ中、固定された。クリスタルヴァイオレットを用いて染色した後、転移した細胞が、倒立顕微鏡を使用しながら、計数された。
【００７９】
図６が、このアッセイの結果を要約する。ＩＳＯ−６３処理が、ＩＳＯ−１処理よりも遙かに大きい程度にまで、細胞浸潤を抑えた。
【００８０】
参照
Al-Abed, Y.; Dabideen, D.; Aljabari, B.; Valster, A.; Messmer, D.; Ochani, M.; Tanovic, M.; Ochani, K.; Bacher, M.; Nicoletti, F.; Metz, C.; Pavlov, V. A.; Miller, E. J.; Tracey, K. J. J. Biol. Chem. 2005, 280, 36541.
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米国特許出願第２００５−０，２５０，８２６Ａ１号明細書
【００８１】
上の観点中、本発明の幾つかの利点が、達成されており、他の利点が、達成されたことが、分かる。
【００８２】
種々の変更が、本発明範囲から逸脱していくことなく、上の方法および上の組成物中、なされ得るので、上の記載中、含有された、添付図面中、示された全事項が、例示として解釈されているべきであり、限定していく感覚中でないと意図されている。
【００８３】
この明細書中、引用された全参照が、本明細書により援用されている。本明細書中のこれら参照の議論が、単にその著者らによりなされた主張を要約すると意図されており、如何なる参照も先行技術を構成すると全く認められていない。出願人どもが、これら引用参照の正確さおよび適切さに挑むに当たっての権利を保留する。
【図面の簡単な説明】
【００８４】
【図１】マクロファージ転移阻害因子（ＭＩＦ）に関与している化学経路を示し、ＭＩＦが、ドーパクロームメチルエステルをおよびＭＩＦ阻害剤ＩＳＯ−１の構造をも互変異性化させることを示している。
【図２】ＩＳＯ−１−酸の合成に向かっての化学スキームを示す。
【図３】ＩＳＯ−１および化合物１７の立体異性体（ステレオアイソマー）の合成に向かっての化学スキームを示す。これら同定された化合物のＭＩＦ阻害活性も、与えられている。
【図４】２種のジイソプロピルメチルエステルイソキサゾリン化合物の合成に向かっての化学スキームを示す。これら同定された化合物のＭＩＦ阻害活性も、与えられている。
【図５】ＩＳＯ−６３が、急性炎症の樹立されたモデルにおける白血球動員を阻害することを示している複数の実験結果のグラフである。＊＊ビヒクル単独に相対し、ｐ＜０．００７（ｎ＝７）。
【図６】ＩＳＯ−６３が、マトリゲル中へのリューマチ関節炎線維芽細胞様滑膜細胞（ＲＡ−ＦＬＳ）の浸潤を阻害することを示している複数の実験結果のグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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