(57)【要約】  本発明は、Ｎ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩またはその溶媒和物、該塩または溶媒和物を含む医薬組成物および治療における該塩または溶媒和物の使用を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩またはその溶媒和物である化合物。
【請求項２】
無水である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
少なくとも以下の特徴的Ｘ線粉末回折ピークを示す請求項２記載の化合物(２θ度で示す)：
(１)  ６.１、１０.７および１９.３、または
(２)  ６.１、１２.２および１４.１、または
(３)  ６.１、１０.７、１２.２、１４.１、１８.１および１９.３、または
(４)  ６.１、１０.７、１２.２、１４.１、１５.７、１８.１および１９.３、または
(５)  ６.１、１０.７、１２.２、１４.１、１５.１および１９.３、または
(６)  ６.１、１０.７、１２.２、１４.１、１５.１、１５.７、１８.１および１９.３、または
(７)  ６.１、１０.７、１２.２、１４.１、１５.１、１５.７、１８.１、１９.３、２１.２および２４.６。
【請求項４】
図１に示すものと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、請求項３記載の実質的に純粋な化合物。
【請求項５】
少なくとも以下の特徴的Ｘ線粉末回折ピークを示す、請求項２記載の化合物(２θ度で示す)：
(１)  ６.５、９.３および１０.５、または
(２)  ６.５、９.３、１７.６および１７.８、または
(３)  ６.５、９.３、１０.５、１２.０および１２.４、または
(４)  ６.５、９.３、１０.５、１２.０、１２.４、１３.０、１３.６、１５.５、１７.６および１７.８、または
(５)  ６.５、１３.０および２０.２、または
(６)  ６.５、９.３、１０.５、１２.０、１２.４、１３.０、１３.６、１５.５、１７.６、１７.８および１９.２、または
(７)  ６.５、９.３、１０.５、１２.０、１２.４、１３.０、１３.６、１５.５、１７.６、１７.８、１９.２、２０.２、２２.８および２６.０、または
(８)  ６.５、９.３、１０.５、１２.０、１２.４、１３.０、１３.６、１５.５、１７.６、１７.８、１９.２、２０.２、２２.８、２４.２、２６.０および３０.７。
【請求項６】
図２に示すものと実質的に同じＸ線粉末回折パターンを有する、請求項５記載の実質的に純粋な化合物。
【請求項７】
請求項１から６のいずれかに記載の化合物を薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と共に含む、医薬組成物。
【請求項８】
乾燥粉末吸入器と組み合わせた、請求項１から６のいずれかに記載の化合物または請求項７記載の医薬組成物。
【請求項９】
治療に使用するための、請求項１から６のいずれかに記載の化合物。
【請求項１０】
ケモカイン受容体１(ＣＣＲ１)活性の調節が有益であるヒト疾患または状態の処置用薬剤の製造における、請求項１から６のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１１】
慢性閉塞性肺疾患の処置に使用するための薬剤の製造における請求項１から６のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１２】
喘息の処置に使用するための薬剤の製造における、請求項１から６のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項１３】
気道疾患に罹患しているまたはこのような疾患の危険性のある患者における該疾患の処置法であって、該患者に治療的有効量の請求項１から６のいずれかに記載の化合物または請求項７記載の医薬組成物を投与することを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ピペリジン誘導体の塩、それを含む医薬組成物および治療におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ケモカイン受容体１(ＣＣＲ１)は種々の自己免疫性、炎症性、増殖性、過増殖性および免疫学が仲介する疾患、例えば喘息、慢性閉塞性肺疾患、多発性硬化症およびリウマチ性関節炎に冒された組織において高度に発現される。故に、本発明の塩での、例えば細胞活性化および移動によるＣＣＲ１仲介事象の阻害は、このような状態の処置に有効であることが期待される。
【０００３】
医薬製剤の製造において、活性化合物が、商業的に価値ある製造法を得るために簡便に取り扱え、そして処理できる形であることが、重要である。これに関連して、活性化合物の化学安定性および物理安定性は重要な因子である。活性化合物、およびそれを含む製剤は、活性成分の物理化学的特性(例えば化学組成、密度、吸湿性および溶解性)に著しい変化を示すことなく、相当な期間にわたり実際に貯蔵できなければならない。
【０００４】
さらに、活性化合物を、例えばTurbuhaler(登録商標)デバイスのような乾燥粉末吸入器を介した、肺投与用の製剤に包含すべきとき、活性化合物が良好な流動毒性を有する粉末を作成するために用意に微粉化でき、そして非常に微細な結晶粒子フラクション(すなわち活性化合物粒子が、１０μm(マイクロメーター)未満の空気動力学的中央粒子径を有するフラクション)を含むことが望まれる。このようなフラクションは肺の奥まで送達されることができ、活性化合物の速く増加した吸収に至る。
【０００５】
国際特許出願公開番号ＷＯ０３／０５１８３９は、ＣＣＲ１アンタゴニストとして活性を有するある種のピペリジニル誘導体を一般的に、そして、特に、化合物４−({(２Ｓ)−３−[２−(アセチルアミノ)−５−ヒドロキシフェノキシ]−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル}アンモニオ)−１−(４−クロロベンジル)ピペリジンおよび薬学的に許容されるその塩または溶媒和物を開示する。該出願に具体的に開示されているこの化合物の塩は、二トリフルオロ酢酸塩であり、それは本質的に無定形であり、そのため肺投与用の乾燥粉末製剤に使用するのに適さない。
【発明の開示】
【０００６】
本発明により、肺投与用乾燥粉末製剤に製剤できる良好な物理化学的特性を有する化合物４−({(２Ｓ)−３−[２−(アセチルアミノ)−５−ヒドロキシフェノキシ]−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル}アンモニオ)−１−(４−クロロベンジル)ピペリジンの塩を製造できることが驚くべきことに判明した。
【０００７】
４−({(２Ｓ)−３−[２−(アセチルアミノ)−５−ヒドロキシフェノキシ]−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル}アンモニオ)−１−(４−クロロベンジル)ピペリジンの構造式を以下に示す：
【化１】
2009503064.tif 000002
【０００８】
故に、本発明によって、４−({(２Ｓ)−３−[２−(アセチルアミノ)−５−ヒドロキシフェノキシ]−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル}アンモニオ)−１−(４−クロロベンジル)ピペリジンの安息香酸塩(以後Ｎ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩、“本安息香酸塩”と呼ぶ)を提供する。
【０００９】
本発明はまた本安息香酸塩の溶媒和物(水和物を含む)も提供する。しかしながら、本安息香酸塩は好ましくは無水であり、そして好ましくは溶媒和されていない形である。
【００１０】
本発明の一つの態様において、本安息香酸塩またはその溶媒和物は結晶特性を有し、好ましくは少なくとも５０％結晶性、より好ましくは少なくとも６０％結晶性、さらに好ましくは少なくとも７０％結晶性および最も好ましくは少なくとも８０％結晶性である。結晶性は通常のＸ線回折法により概算できる。
【００１１】
本発明の他の態様において、本安息香酸塩またはその溶媒和物は５０％、６０％、７０％、８０％または９０％から９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％結晶性である。
【００１２】
何ら特定の理論に縛られずに、本安息香酸塩は多形性であると考えられ、今日までに２つの形が単離され、特徴付けされている。
【００１３】
多形の一つ(以後形態Ａと呼ぶ)は、少なくとも以下の特徴的Ｘ線粉末回折(ＸＲＰＤ)ピークを示す(２θ度で示す)(誤差範囲は、United States Pharmacopeia general chapter on X-ray diffraction(USP941)と一致する  −  United States Pharmacopeia Convention. X-Ray Diffraction, General Test <941>. United States Pharmacopeia, 25th ed. Rockville, MD: United States Pharmacopeial Convention; 2002:2088-2089参照)：
(１)  ６.１、１０.７および１９.３、または
(２)  ６.１、１２.２および１４.１、または
(３)  ６.１、１０.７、１２.２、１４.１、１８.１および１９.３、または
(４)  ６.１、１０.７、１２.２、１４.１、１５.７、１８.１および１９.３、または
(５)  ６.１、１０.７、１２.２、１４.１、１５.１および１９.３、または
(６)  ６.１、１０.７、１２.２、１４.１、１５.１、１５.７、１８.１および１９.３、または
(７)  ６.１、１０.７、１２.２、１４.１、１５.１、１５.７、１８.１、１９.３、２１.２および２４.６。
【００１４】
形態Ａは、以下の工程を含む方法により、実質的に他の物理的形態なしに製造できる：
(ｉ)  適当な溶媒または溶媒混合物(極性溶媒のような例えば有機溶媒、その例はメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、アセトンおよび酢酸エチルを含む)に溶解したＮ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミドの加熱した溶液を
(ii)  適当な溶媒または溶媒混合物(例えば極性溶媒のような有機溶媒、その例はメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、アセトンおよび酢酸エチルを含む)に溶解した安息香酸の加熱した溶液と接触させ、混合物を得て、
(iii)  混合物を環境温度(例えば２０℃)に冷却させて、Ｎ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩の形態Ａの沈殿を作り、そして
(iv)  沈殿を混合物から分離する。
【００１５】
多形の他の一つ(以後形態Ｂと呼ぶ)は、少なくとも以下の特徴的Ｘ線粉末回折(ＸＲＰＤ)ピークを示す(２θ度で示す)(誤差範囲はUnited States Pharmacopeia general chapter on X-ray diffraction(USP941)と一致する  −  United States Pharmacopeia Convention. X-Ray Diffraction, General Test <941>. United States Pharmacopeia, 25th ed. Rockville, MD: United States Pharmacopeial Convention; 2002:2088-2089参照)：
(１)  ６.５、９.３および１０.５、または
(２)  ６.５、９.３、１７.６および１７.８、または
(３)  ６.５、９.３、１０.５、１２.０および１２.４、または
(４)  ６.５、９.３、１０.５、１２.０、１２.４、１３.０、１３.６、１５.５、１７.６および１７.８、または
(５)  ６.５、１３.０および２０.２、または
(６)  ６.５、９.３、１０.５、１２.０、１２.４、１３.０、１３.６、１５.５、１７.６、１７.８および１９.２、または
(７)  ６.５、９.３、１０.５、１２.０、１２.４、１３.０、１３.６、１５.５、１７.６、１７.８、１９.２、２０.２、２２.８および２６.０、または
(８)  ６.５、９.３、１０.５、１２.０、１２.４、１３.０、１３.６、１５.５、１７.６、１７.８、１９.２、２０.２、２２.８、２４.２、２６.０および３０.７。
【００１６】
形態Ｂは、実施例に記載の通り形態Ａの制御した加熱により、または例えば、２０％ｗの形態Ａのサンプルを適当な溶媒(例えば極性溶媒のような有機溶媒、その例はメタノール、エタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノールおよびアセトンを含む)に溶解させて、懸濁液を形成し、懸濁液を環境温度(例えば２０℃)で少なくとも７日間均質化させることを含むスラリー技術により、または形態Ａおよび安息香酸を適当な溶媒(例えば加熱したイソプロパノール)に溶解して混合物を形成し、混合物を環境温度に冷却し、混合物に形態Ｂの結晶を定期的に種晶添加することにより、実質的に他の物理形態なしに製造できる。
【００１７】
実質的に他の物理形態なし(または実質的に純粋)の形態Ａまたは形態Ｂのいずれかについて本明細書で言及するとき、これは、存在する本安息香酸塩の好ましくは少なくとも９０重量％、例えば９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９または１００％ｗがその物理形態であることを意味する。
【００１８】
以下の表１は、室温で決定した本安息香酸塩の形態ＡおよびＢのさらなる結晶学的データを提供する。
【表１】
2009503064.tif 000003
【００１９】
本発明の化合物は、ＣＣＲ１またはＭＩＰ−１αケモカイン受容体活性のモジュレーターとして有用であり[Ｎ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド二トリフルオロ酢酸塩は、本明細書の実施例部分に記載のようなヒトＣＣＲ１結合アッセイで５０nM以下のＩＣ５０を有する]、そして自己免疫性、炎症性、増殖性および過増殖性疾患および免疫学が仲介する疾患の処置に、ヒトを含む哺乳動物に投与できる。
【００２０】
これらの状態の例は以下の通りである：
１. 呼吸器：以下を含む気道の閉塞性疾患：間欠的および永続性の両方、および全ての重症度、および気道過敏反応性の他の理由を含む、気管支、アレルギー性、内因性、外因性、運動誘発、薬剤誘発(アスピリンおよびＮＳＡＩＤ誘発を含む)喘息、慢性または難治性(inverterate)喘息(例えば遅発性喘息および気道過剰応答)、および粉塵誘発喘息；不可逆性ＣＯＰＤのような慢性閉塞性肺疾患(ＣＯＰＤ)；感染性および好酸球性気管支炎を含む気管支炎；気腫；気管支拡張症；嚢胞性線維症；サルコイドーシス；農夫肺および関連疾患；過敏性肺炎；原因不明線維化肺胞炎、特発性間質性肺炎、抗新生物治療および結核およびアスペルギルス症および他の真菌感染を含む慢性感染に合併する線維症を含む肺線維症；肺移植の合併症；肺脈管構造の脈管および血栓障害、および肺高血圧；気道の炎症性および分泌性状態の関連する慢性咳および医原性咳の処置を含む鎮咳活性；乾酪性鼻炎、肥厚性鼻炎、化膿性鼻炎、乾燥性鼻炎および薬物性鼻炎、および血管運動神経性鼻炎を含む急性、アレルギー性、アトピー性(atropic)鼻炎および慢性鼻炎；クループ性、線維素性および偽膜性鼻炎および腺病性鼻炎を含む膜性鼻炎；神経性鼻炎(枯草熱)を含む通年性および季節性(アレルギー性)鼻炎；鼻のポリープ症；一般的な風邪、および呼吸器多核体ウイルス、インフルエンザ、コロナウイルス(ＳＡＲＳを含む)およびアデノウイルスによる感染を含む急性ウイルス感染；
【００２１】
２. 骨および関節：原発性および、例えば、先天的股関節異形成症に二次的な両方の骨関節症／骨関節症に関連するまたはそれを含む関節症(arthritides)；頸部および腰椎症、および背下部および首痛；リウマチ性関節炎およびスチル病；強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、活動性関節炎および未分化脊椎関節症(spondarthropathy)を含む血清反応陰性脊椎関節症；敗血症性関節炎およびポット病およびポンセ病を含む結核のような他の感染関連関節症および骨障害；尿酸塩痛風、ピロリン酸カルシウム沈着疾患、およびカルシウムアパタイト関連腱、嚢状および滑膜炎症を含む急性および慢性結晶誘発滑膜炎；ベーチェット病；原発性および二次性シェーグレン症候群；全身性硬化症および限局型強皮症；全身性エリテマトーデス、混合型結合組織疾患、および未分化結合組織疾患；皮膚筋炎および多発性筋炎を含む炎症性ミオパシー；リウマチ性多発筋痛症；どのような関節分布であれ特発性炎症性関節症(arthritides)を含む若年性関節炎および関連症候群、およびリウマチ性熱およびその全身合併症；巨細胞性動脈炎、高安動脈炎、チャーグ・ストラウス症候群、結節性多発性動脈炎、顕微鏡的多発動脈炎、およびウイルス感染、過敏症反応、クリオグロブリン、およびパラタンパク質が関連する脈管炎を含む脈管炎；背下部痛；家族性地中海熱、マックル・ウェルズ症候群、および家族性アイルランド熱(Familial Hibernian Fever)、キクチ病；薬剤誘発関節痛、腱炎(tendonititides)、およびミオパシー；およびライター病；
【００２２】
３. 傷害[例えば運動傷害]または疾患による筋骨格障害の疼痛および結合組織リモデリング：関節炎(arthitides)(例えばリウマチ性関節炎、骨関節症、痛風または結晶関節症)、他の関節疾患(例えば椎間板変性または側頭下顎関節変性)、骨リモデリング疾患(例えば骨粗鬆症、パジェット病または骨壊死)、多発性軟骨炎、強皮症、混合型結合組織障害、脊椎関節症または歯周病(例えば歯周炎)；
【００２３】
４. 皮膚：乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎または他の湿疹性皮膚炎、および遅延型過敏症反応；植物および光皮膚炎；脂漏性皮膚炎、疱疹状皮膚炎、扁平苔癬、硬化性萎縮性苔癬、壊疽性膿皮症、皮膚サルコイド、円板状エリテマトーデス、天疱瘡、類天疱瘡、表皮水疱症、蕁麻疹、血管浮腫、脈管炎、紅斑、皮膚好酸球増加症、円形脱毛症、男性型禿頭、スウィート症候群、ウェーバー・クリスチャン症候群、多形性紅斑；感染性および非感染性両方の蜂巣炎；脂肪織炎；皮膚リンパ腫、非黒色腫皮膚癌および他の形成異常病巣；固定薬疹を含む薬剤誘発障害；水疱性天疱瘡；ブドウ膜炎および春季結膜炎；
【００２４】
５. 眼：眼瞼炎；通年性および春季アレルギー性結膜炎を含む結膜炎；虹彩炎；前部および後部ブドウ膜炎；脈絡膜炎；自己免疫性；網膜に影響する変性または炎症性障害；交感神経性眼炎を含む眼炎；サルコイドーシス；ウイルス、真菌および細菌を含む感染；
【００２５】
６. 胃腸管：舌炎、歯肉炎、歯周炎；逆流性を含む食道炎；好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、直腸炎、肛門掻痒症を含む大腸炎；セリアック病、過敏性腸症候群、および消化管の遠隔部位で発現する食物関連アレルギー症状(例えば偏頭痛、鼻炎または湿疹)；
【００２６】
７. 腹部：自己免疫性、アルコール性およびウイルス性を含む肝炎；肝臓の線維症および硬変；胆嚢炎；急性および慢性両方の膵炎；
【００２７】
８. 尿生殖器：間質性および糸球体腎炎を含む腎炎；ネフローゼ症候群；急性および慢性(間質性)膀胱炎およびハンナー潰瘍を含む膀胱炎；急性および慢性尿道炎、前立腺炎、精巣上体炎、卵巣炎および卵管炎；外陰部腟炎；ペイロニー病；勃起不全(男女両方)；
【００２８】
９. 同種移植片拒絶反応：例えば、腎臓、心臓、肝臓、肺、骨髄、皮膚または角膜移植後のまたは輸血後の急性および慢性拒絶反応；または慢性移植片対宿主病；
【００２９】
１０. ＣＮＳ：アルツハイマー病およびＣＪＤおよびｎｖＣＪＤを含む他の認知症となる障害；アミロイド症；多発性硬化症および他の脱髄症候群；大脳アテローム性動脈硬化症および脈管炎；側頭動脈炎；重症筋無力症；内臓痛、頭痛、偏頭痛、三叉神経痛、非定型顔面痛、関節および骨痛、癌および腫瘍侵襲由来の疼痛、糖尿病性、ヘルペス後およびＨＩＶ関連ニューロパシーを含む神経障害性疼痛症候群を含む急性および慢性疼痛(中枢または末梢の起源にかかわりなく、急性、間欠性または持続性の何れかを問わず)；ニューロサルコイドーシス；悪性、感染性または自己免疫性過程の中枢および末梢神経系合併症；
【００３０】
１１. 橋本甲状腺炎、グレーブス病、アジソン病、真性糖尿病、特発性血小板減少性紫斑病、好酸球性筋膜炎、高ＩｇＥ症候群、抗リン脂質抗体症候群を含む他の自己免疫およびアレルギー性障害；
【００３１】
１２. 炎症性または免疫学的要素を含む他の障害；後天性免疫不全症候群(ＡＩＤＳ)、ハンセン病、セザリー症候群、および新生物随伴症候群；全身性エリテマトーデス；らい腫性(lepromatosous)ハンセン病；Ｉ型糖尿病、ネフローゼ症候群を含む；
【００３２】
１３. 心血管：環状および末梢循環に影響するアテローム性動脈硬化症；心膜炎；心筋サルコイドを含む心筋炎、炎症性および自己免疫心筋症；虚血再灌流傷害；感染性(例えば梅毒性)を含む心内膜炎、弁膜炎、および大動脈炎；脈管炎；深部静脈血栓症および静脈瘤の合併症を含む、静脈炎および血栓症を含む近位および末梢静脈の障害；
【００３３】
１４. 腫瘍学：前立腺、乳房、肺(例えば非小細胞性肺癌(ＮＳＣＬＣ)、卵巣、膵臓、腸および結腸、胃、皮膚および脳の腫瘍、および扁平上皮肉腫、および骨髄(白血病を含む)およびリンパ増殖系に影響する悪性腫瘍、例えばホジキンおよび非ホジキンリンパ腫を含む一般的癌の処置；転移性疾患および腫瘍再発、および新生物随伴症候群の予防および処置を含む；および
【００３４】
１５． 胃腸管：セリアック病、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、潰瘍性大腸炎、顕微鏡的大腸炎、判定不能大腸炎、過敏性腸障害、過敏性腸症候群、非炎症性下痢、消化管の遠隔部位で発現する食物関連アレルギー症状、例えば、偏頭痛、鼻炎および湿疹。
【００３５】
故に、本発明は、治療において使用するためのＮ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩またはその溶媒和物を提供する。
【００３６】
さらなる局面において、本発明は治療に使用するための薬剤の製造におけるＮ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩またはその溶媒和物の使用を提供する。
【００３７】
本明細書の文脈の範囲内で、用語“治療”はまたそれに反する具体的指示がない限り、“予防”も含む。用語“治療的”および“治療的に”はそれにしたがい解釈すべきである。
【００３８】
予防は問題の疾患または状態の以前の事象があるか、または他の理由で高い危険性にあると見なされるヒトの処置に特に関連することが期待される。特定の疾患または状態を発症する危険のあるヒトは、一般に、本疾患または状態の家族歴を有する、または遺伝子試験もしくはスクリーニングで本疾患または状態の発症に特に感受性があると同定されているヒトを含む
【００３９】
本発明はまた炎症性疾患に罹患しているまたは該疾患の危険性のある患者における該疾患の処置方法であって、該患者に治療的有効量のＮ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩またはその溶媒和物を投与することを含む方法を提供する。
【００４０】
本発明はさらに気道疾患、例えば可逆性閉塞性気道疾患に罹患しているまたは該疾患の危険性のある患者における該疾患の処置方法であって、該患者に治療的有効量のＮ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩またはその溶媒和物を投与することを含む方法を提供する。
【００４１】
上記治療的使用のために、投与される投与量はもちろん、投与の形態、望む処置および適応症に依存して変化するが、典型的に０.００１mg／kgから３０mg／kgの範囲である。
【００４２】
本発明の安息香酸塩またはその溶媒和物はそれ自体で使用できるが、一般的に、本安息香酸塩またはその溶媒和物(活性成分)が薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と結合している医薬組成物の形態で投与する。適当な医薬製剤の選択および製造のための慣用の方法は、例えば、“Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs”, M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988に記載されている。
【００４３】
投与形態に依存して、本医薬組成物は０.０５から９９％ｗ(重量パーセント)、より好ましくは０.０５から８０％ｗ、さらに好ましくは０.１０から７０％ｗ、およびなお好ましくは０.１０から５０％ｗの活性成分を含み、全重量パーセンテージは総組成物に基づく。
【００４４】
本発明はまたＮ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩またはその溶媒和物を薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体と共に含む医薬組成物を提供する。
【００４５】
本発明はさらにＮ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩またはその溶媒和物と薬学的に許容されるアジュバント、希釈剤または担体を混合することを含む、本発明の医薬組成物の製造方法を提供する。
【００４６】
本医薬組成物は局所的に(例えば皮膚または肺および／または気道に)、例えば、クリーム、溶液、懸濁液、ヘプタフルオロアルカン(ＨＦＡ)エアロゾルおよび乾燥粉末製剤の形で、例えば、Turbuhaler(登録商標)として既知の吸入器中の製剤の形で；または全身的に、例えば錠剤、カプセル剤、シロップ剤、粉末または顆粒の形での経口投与により；または溶液または懸濁液の形での非経腸投与により；または皮下投与により；または坐薬の形での直腸投与により；または経皮的に投与できる。
【００４７】
本発明の一つの態様において、本発明の安息香酸塩を吸入により投与する。さらなる態様において、本発明の安息香酸塩を乾燥粉末吸入器の手段により投与する。吸入器は単回または複数回吸入器であってよく、そして呼気作動型(breath actuated)乾燥粉末吸入器であてよい。
【００４８】
吸入を介して投与するとき、本発明の化合物化合物(すなわち安息香酸塩)の投与量は、一般に０.１μgから１００００μg、０.１から５０００μg、０.１から１０００μg、０.１から５００μg、０.１から２００μg、０.１から２００μg、０.１から１００μg、０.１から５０μg、５μgから５０００μg、５から１０００μg、５から５００μg、５から２００μg、５から１００μg、５から５０μg、１０から５０００μg、１０から１０００μg、１０から５００μg、１０から２００μg、１０から１００μg、１０から５０μg、２０から５０００μg、２０から１０００μg、２０から５００μg、２０から２００μg、２０から１００μg、２０から５０μg、５０から５０００μg、５０から１０００μg、５０から５００μg、５０から２００μg、５０から１００μg、１００から５０００μg、１００から１０００μgまたは１００から５００μgの範囲であり得る。
【００４９】
本発明の化合物の乾燥粉末製剤および加圧ＨＦＡエアロゾルは、経口または経鼻吸入により投与できる。吸入のために、本化合物は望ましくは微粉化されている。微粉化化合物は、好ましくは１０μm未満の質量中央直径を有し、Ｃ８−Ｃ２０脂肪酸またはその塩(例えば、オレイン酸)、胆汁酸塩、リン脂質、アルキルサッカライド、過フッ素化またはポリエトキシル化界面活性剤、または他の薬学的に許容される分散剤のような分散剤の助けを借りて、噴射剤混合物に懸濁し得る。
【００５０】
一つの可能性は、微粉化された本発明の化合物と担体物質、例えば、モノ、ジまたはポリサッカライド、糖アルコール、または他のポリオールの混合物である。適当な担体は、糖、例えば、ラクトース、グルコース、ラフィノース、メレジトース、ラクチトール、マルチトール、トレハロース、スクロース、マンニトール；およびデンプンである。あるいは微粉化した化合物を他の物質でコートしてよい。粉末混合物をまた、各々所望の用量の活性化合物を含む硬ゼラチンカプセルに分配してもよい。
【００５１】
他の可能性は、吸入過程中に破壊される球形への微粉化粉末の加工である。この球形化粉末を多回投与量吸入器、例えば、投与ユニットが所望量を定量し、次いでそれが患者により吸入されるTurbuhaler(登録商標)として既知の吸入器の薬剤貯蔵部に充填し得る。この径により、活性成分は担体物質と共にまたは無しで、患者に送達される。
【００５２】
経口投与のために、本発明の化合物をアジュバントまたは担体、例えば、ラクトース、サッカロース、ソルビトール、マンニトール；デンプン、例えば、ジャガイモデンプン、コーンデンプンまたはアミロペクチン；セルロース誘導体；結合剤、例えば、ゼラチンまたはポリビニルピロリドン；および／または滑剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウム、ポリエチレングリコール、蝋、パラフィンなどと混合でき、次いで、錠剤に打錠し得る。コーティング錠が必要なとき、上記の通り製造したコアを、例えば、アラビアゴム、ゼラチン、タルクおよび二酸化チタンを含む濃縮糖溶液でコートしてよい。あるいは、本錠剤を、容易に揮発する有機溶媒に溶解した適当なポリマーでコートしてよい。
【００５３】
軟ゼラチンカプセルの製造のために、本発明の化合物を、例えば、植物油またはポリエチレングリコールと混合し得る。硬ゼラチンカプセルは、錠剤について上記の賦形剤のいずれかを使用した、本化合物の顆粒を含み得る。また本発明の化合物の液体または半固体製剤を硬ゼラチンカプセルに充填し得る。
【００５４】
経口投与用の液体製剤はシロップまたは懸濁液の形、例えば、本発明の化合物を含む溶液の形であり得、残りは糖およびエタノール、水、グリセロールおよびプロピレングリコールの混合物である。所望により、このような液体製剤は着色剤、香味剤、サッカリンおよび／または濃厚剤としてのカルボキシメチルセルロースまたは当業者に既知の他の賦形剤を含み得る。
【００５５】
本発明の化合物はまた上記状態の処置に使用される他の化合物と組み合わせても投与できる。
【００５６】
故に、本発明は、本発明の化合物または本発明の化合物を含む医薬組成物もしくは製剤を、記載の状態の１種以上の処置のための、他の１種もしくは複数の治療剤と同時にまたは連続して、または組み合わせ製剤として投与する、組み合わせ治療に関する。
【００５７】
本発明をここで以下の説明的実施例を参照してさらに説明する。
【００５８】
図１はＮ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩(形態Ａ)のＸ線粉末回折パターンを示す。
図２はＮ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩(形態Ｂ)のＸ線粉末回折パターンを示す。
図３は、実施例に記載の微粉化Ｎ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩(形態Ｂ)およびPulmicort(登録商標)Turbuhaler(登録商標)製剤の空気動力学的中央粒子径(ＭＭＡＤ)および幾何学的標準偏差(ＧＳＤ)を示す。エラーバーはＣＩ９５％である。
図４は、実施例に記載の微粉化Ｎ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩(形態Ｂ)およびPulmicort  Turbuhaler(登録商標)製剤の微粒子フラクション(ＦＰＦ)を示す。エラーバーはＣＩ９５％である。
【００５９】
一般法
１Ｈ  ＮＭＲスペクトルはVarian Unity Inova 400 MHz(ソフトウェア：VNMR 6.1CおよびVNMRJ 1.1D；プローブ：Nalorac 5mm DG400-5AT)またはVarian Mercury-VX 300 MHz(ソフトウェア：VNMR 6.1C；プローブ：Varian 5mm AutoSW PFG)装置で２９８Ｋで記録した。アセトン−ｄ６またはジメチルスルホキシド(ＤＭＳＯ)−ｄ６の中央ピークを内部参照として使用した。
【００６０】
以下の方法をＬＣ／ＭＳ分析に使用した：
【表２】
2009503064.tif 000004
【実施例】
【００６１】
実施例１
Ｎ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩(１：１塩)、形態Ａの製造
(ａ)Ｎ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド(ＷＯ０３／０５１８３９に記載の方法により、またはＷＯ０１／９８２７３に記載の方法に準じて製造できる；４６２mg、１.０mmol)の酢酸エチル(１０ml)中の熱溶液および安息香酸(２４４mg、２.０mmol)の酢酸エチル(１０ml)を混合した。得られた混合物を密閉バイアル中で環境温度(２０℃)に冷却させた。白色沈殿が混濁なく形成した。環境温度で一晩放置後、得られた沈殿を酢酸エチル(３×１０ml)で洗浄し、真空で６０℃で一晩乾燥させて、オフホワイト色固体として表題の塩を得た(５０６mg、８６％)。本塩は痕跡量の酢酸エチルを含んだ。
【００６２】
1H NMR(399.99 MHz, アセトン-d6)δ 8.77(s, 1H), 8.07 - 8.04(m, 2H), 7.83(d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.55 - 7.50(m, 1H), 7.46 - 7.41(m, 2H), 7.36 - 7.31(m, 4H), 6.52(d, J = 2.6 Hz, 1H), 6.40(dd, J = 8.7, 2.6 Hz, 1H), 3.97(d, J = 9.3 Hz, 1H), 3.89(d, J = 9.3 Hz, 1H), 3.48(s, 2H), 3.29(d, J = 12.1 Hz, 1H), 2.94(d, J = 12.2 Hz, 1H), 2.91 - 2.77(m, 3H), 2.09 - 2.00(m, 4H), 1.98(s, 3H), 1.72 - 1.59(m, 2H), 1.30(s, 3H)
APCI-MS:m/z 462 [MH+]
塩基対酸１：１の化学量論をＮＭＲにより確認した。
【００６３】
さらなる量の表題塩を以下の方法により製造した：
(ｂ)Ｎ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド(４.０ｇ、８.６５mmol)の酢酸エチル(７５ml)中の熱溶液および安息香酸(１.１６ｇ、９.５mmol)の酢酸エチル(７５ml)溶液を混合した。得られた混合物が環境温度(２０℃)に冷却したとき、それを上記(ａ)で得た表題塩の粒子で種晶添加し、一晩、密閉フラスコに放置した。得られた沈殿を酢酸エチル(３×５０ml)で洗浄し、真空で６０℃で一晩乾燥させて、オフホワイト色固体として表題の塩を得た(４.４１ｇ、８７％)。本塩は痕跡量の酢酸エチルを含んだ。
【００６４】
実施例２
Ｎ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩(１：１塩)、形態Ｂの製造
(ａ)実施例１(ｂ)の方法により製造した安息香酸塩(形態Ａ、１０から１５mg)を、示差走査熱量測定パン(しわのよった蓋がある)に入れ、５Ｋ.分−１の加熱速度を使用して、１５５℃の温度に到達するまで加熱した。塩が融解したら(１４６.５℃の融解開始温度が使用した条件で記録された)、融解したサンプルを５Ｋ.分−１の速度で環境温度(２０℃)に冷却した。次いで、同じパンを再び５Ｋ.分−１の速度で１５１℃の温度に到達するまで加熱し、走査は１４８℃での等温線を１０分間にわたり記録した。次いでパンを急速に環境温度に冷却し、結晶の形成をもたらし、それは続いてＸ線粉末回折(ＸＲＰＤ)によりＮ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩(形態Ｂ)の新規物理形態であると確認された。幾分かの無定形安息香酸塩が工程の副産物として製造され得る。
【００６５】
(ｂ)上記の(ａ)に記載の形態Ｂ塩はまた、実施例１(ｂ)の方法で製造した２０％ｗの安息香酸塩(形態Ａ)サンプルを、バイアル中で、メタノール(＞２０mg／ml)、エタノール(＞２０mg／ml)、ｎ−プロパノール(＞２０mg／ml)、イソプロパノール(８.５mg／ml)またはアセトン(９.６mg／ml)のような溶媒に溶解することにより製造した。括弧内の数値はこれらの溶媒中の本塩の概算される溶解度を示す。次いでバイアルを密封し、懸濁液を環境温度(２０℃)で磁気を使用して均質化した。撹拌および温度を少なくとも７日間維持し、その後得られた物質のサンプルを乾燥させ、ＸＲＰＤにより試験した。ＸＲＰＤは、形態Ａから形態Ｂへの完全な変換が起こっていることを確認した。
【００６６】
(ｃ)上記の(ａ)に記載の形態Ｂ塩はまた、丸底フラスコ中で、実施例１(ｂ)の方法により製造した安息香酸塩(形態Ａ)(２２.０ｇ、３７.７mmol)および安息香酸(０.４６ｇ、３.８mmol)を、熱２−プロパノール(１９０ml)に溶解し、赤色がかった溶液を得ることにより製造した。フラスコを４０℃の水浴上、溶液が４０℃になるまでRotavapor装置を使用して回転させ、その後形態Ｂ塩の少しの結晶を種晶添加した。水浴を、環境温度にゆっくり一晩冷却させ、その間フラスコを回転させ、混合物に時々形態Ｂ塩の少しの結晶で種晶添加した。形成したピンク色の沈殿を吸引により単離し、２−プロパノール(２×５０ml)で洗浄し、真空で１００℃で２０時間乾燥させて、表題塩(ＸＲＰＤで確認して)を薄いピンク色固体として得た(１８.５ｇ、８４％)。本塩は痕跡量の２−プロパノールを含んだ。
【００６７】
1H NMR(299.95 MHz, DMSO-d6)δ 8.87(s, 1H), 7.96 - 7.91(m, 2H), 7.59 - 7.52(m, 1H), 7.49 - 7.47(m, 1H), 7.46 - 7.42(m, 2H), 7.36(d, J = 8.6 Hz, 2H), 7.29(d, J = 8.6 Hz, 2H), 6.39(d, J = 2.5 Hz, 1H), 6.29(dd, J = 8.5, 2.5 Hz, 1H), 3.78 − 3.72(m, 2H), 3.41(s, 2H), 2.79 - 2.66(m, 4H), 1.98(s, 3H), 1.97 - 1.88(m, 2H), 1.85 - 1.76(m, 2H), 1.41 - 1.25(m, 2H), 1.19(s, 3H)
APCI-MS:m/z 462 [MH+]
塩基対酸１：１の化学量論をＮＭＲにより確認した。
【００６８】
実施例３
Ｘ線粉末回折分析
一般法
Ｘ線粉末回折(ＸＲＰＤ)分析は、製造したサンプルで標準法に従い行い得る(例えばGiacovazzo et al., eds., Fundamentals of Crystallography, Oxford University Press(1992);Jenkins & Snyder, eds., Introduction to X-Ray Powder Diffractometry, John Wiley & Sons, New York(1996);Bunn, ed., Chemical Crystallography, Clarendon Press, London(1948);およびKlug & Alexander eds., X-ray Diffraction Procedures, John Wiley & Sons, New York(1974)参照)。
【００６９】
上記実施例１および２に記載の形態Ａおよび形態Ｂ塩(無水形)のＸ線粉末回折パターンを以下の通り得た：
単色ＣｕＫα照射(４５kVおよび４０mA)を使用したBragg-Brentano近位焦点(parafocusing)粉末Ｘ線回折装置を分析に使用した。一次光学はsollerスリットおよび自動発散スリットを含んだ。平らなサンプルを測定中回転する０バックグラウンドプレート上に調製した。二次光学はsollerスリット、自動散乱除去スリット、受信用スリットおよび単色光分光器を含んだ。回折シグナルを比例的キセノン充填検出器で検出した。回折パターンを２°≦２θ(シータ)≦４０°で、０.０１６°  ２θのステップサイズで４°  ２θ／分の速度の連続スキャンモードで集めた。生データを電気的に貯蔵した。評価を生または平滑化した回折パターンで行った
【００７０】
反射モードのPanalytical X'pert PRO MPD  θ−θ回折計を上記測定に使用した。当業者は、示しているデータと同等の回折データを集めることができるように粉末Ｘ線回折装置の装置パラメータを設定できる。
得られた結果を図１および図２に示す。
【００７１】
実施例４
示差走査熱量測定(ＤＳＣ)
標準法、例えばHoehne, G. W. H. et al(1996), Differential Scanning Calorimetry, Springer, Berlinに記載の方法を使用して、温度を上昇させるための試験サンプルの熱量応答をQ1000 Modulated Temperature Differential Scanning Calorimeter(MTDSC)を使用して、“加熱のみ”モードで、５℃／分のランプ速度で試験した。約２から５mgの試験サンプルを、窒素雰囲気下、蓋(しわなし)付きのアルミニウムカップに入れた。
ＤＳＣ開始およびピーク温度が、サンプルの純度および装置のパラメータ、とりわけ温度走査速度により変化し得ることは既知である。当業者は、示しているデータと同等のデータを集めることができるように示差走査熱量計の装置パラメータを設定するために、慣用の最適化／較正を使用できる。
無水形態Ａ塩の典型的なサンプルの融点は１４６℃±２℃(開始)であることが判明した。
無水形態Ｂ塩の典型的なサンプルの融点は１５４℃±２℃(開始)であることが判明した。
【００７２】
実施例５
吸湿性決定
試験サンプルの室温(２５℃)および８０％相対湿度(ＲＨ)での重量変化を、対称蒸気収着アナライザーSGA-100(VTI Corporation)を使用して、以下に主要な特性を記載する種々の方法を使用して、吸着−脱着等温線を記録することにより試験した：０.００２％のｄｍ／ｄｔトリガー値での１０％ＲＨステップで０から９０％ＲＨまでの１回吸着／脱着サイクル(ｄｍ／ｄｔ＝経時的な重量変化−平衡安定性がこの値内であるならば、次のステップが自動的に始まるが、これらの条件が達成されないならば、各ステップについて６時間のデフォルトの最大時間が存在する)。約２から１０mgの試験サンプルをサンプルホルダー内に入れ、異なる相対湿度に曝した。
【表３】
2009503064.tif 000005
【００７３】
実施例６
微粉化塩の脱凝集特性の評価
方法
このスクリーニング試験は、無水Ｎ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩、形態Ｂ(この実施例の残りの部分では“形態Ｂ塩”と呼ぶ)の脱凝集特性に関する幾分かの評価を得ることを意図した。結果を、同様に試験した確立された製品粉末であるPulmicort(登録商標)Turbuhaler(登録商標)製剤と比較した。
【００７４】
形態Ｂ塩を５μM未満の粒子径を得るために微粉化した。Pulmicort(登録商標)Turbuhaler(登録商標)粉末をPulmicort(登録商標)Turbuhaler(登録商標)から抜き取った。後者の製剤は、小さいペレットに球形化されている微粉化ブデソニド粉末から成る。形態Ｂ塩の微粉化をスパイラル・ジェット・ミルで行った。ジェットミルの内部環状空間内で、球形分類がされる。微粒子はこの分類ゾーンを通過し、ミルの下のサイクロンを通って出てくる。ミルの排気フィルターに捕捉されたフラクションは排気した。
粉末(Pulmicort(登録商標)Turbuhaler(登録商標)製剤および形態Ｂ塩両方)の脱凝集について、これらの粉末を、垂直部品と水平部品を含むＬ字型円筒状溝を含む単純な吸入装置にかき集めて入れた。
【００７５】
Turbuhaler(登録商標)マウスピースを水平部品の末端に粉末固定して粉末の脱凝集を促進させ、そして試験すべき粉末を垂直溝を通してこの溝の屈曲部(すなわちＬ字型溝の角)に入れた。次いで気流パルス(下記参照)が、溝の垂直部品を通る気流を活性化し、屈曲部に位置する粉末を運び、そして空気−粒子混合物がその後にシリンダーの水平部品を介して移動し、最終的にTurbuhaler(登録商標)マウスピースを通過した。
【００７６】
Turbuhaler(登録商標)マウスピースを外した後、エアロゾル剤をその空気力学的特性および微粒子フラクションについて分析できるImpactor Inlet 3306装置を備えたTSI Aerodynamic Particle Sizer(ＡＰＳ(登録商標))に移した。ＡＰＳ装置を、最適気流での薬用量の回収と、その後の計数および粒子毎基準での粒子の力学的分類(約０.３−２０μm)が可能となるような方法で配置した。簡単に言うと、ＵＳＰ喉部と3306 Impacter Inletの間に、３方向空気弁およびＮＧＩプレ・セパレーターを配置した。加えて、タイマー制御の電磁弁(Triggor Box)を介した真空源へのチューブを、Ｔ字型結合の形でバルブとプレ・セパレーターの間に配置した。次いで、短気流パルスをTriggor boxを使用して吸入器、ＵＳＰ喉部、およびプレ・セパレーターを通して発生させる。空気パルス終了後、空気弁を、プレ・セパレーター中で雲状になっているエアロゾル剤を、空気力学的評価のために3306 Impacter Inletを介してＡＰＳに吸引する。
【００７７】
各用量は、最大気流６０lpmで０.４秒間の気流パルスにより吸引し、続いてＡＰＳ装置にサンプリングした。ＡＰＳソフトウェア中のサンプリング時間は２０秒に設定した。ＡＰＳでの結果のパラメータは、空気動力学的中央粒子径(ＭＭＡＤ)、幾何学的標準偏差(ＧＳＤ)、および微粒子用量(ＦＰＤ)と呼ばれる投与量の指標(粒子密度＝１を使用して、粒子計数データを質量データに変化)であった。
【００７８】
２個の最初の用量(各製剤について)を放出し、重力測定により測定した。“測定用量”または充填用量と呼ばれるこれらの重量測定投与量の平均値を(ＦＰＤ)の標準化に使用し、それは微粒子フラクション(ＦＰＦ)の指標を与える。ＦＰＦは、故に、２種の粉末製剤の間の直接比較に使用できる(使用した装置設定について)。微粒子の制限を、７μmの空気力学的粒子サイズと設定した。次いで、各々７用量および５用量をＡＰＳでPulmicort(登録商標)Turbuhaler(登録商標)製剤および形態Ｂ塩について分析した。
【００７９】
結果
結果を表２に示す。微粒子フラクションは、各製剤の２回の測定の算術平均である測定用量で割ったＦＰＤである。
結果を図３(ＭＭＡＤおよびＧＳＤ)および図４(ＦＰＦ)にプロットする。ＭＭＡＤおよびＧＳＤ結果は非常に小さな変動しか示さず(小さい信頼区間)、これらの２つのパラメータに関する２製剤間の差異は非常に小さく、だいたい等しいと見なすことができる。
【００８０】
ＦＰＦについて、形態Ｂ塩で大きな変動が得られ、これは恐らく粉末が充填特性に関して最適化されていないとの事実によるものである。しかしながら、驚くことにＦＰＦが一般に形態Ｂ塩でPulmicort(登録商標)Turbuhaler(登録商標)製剤よりも高いことが注目され、これはまた形態Ｂ塩についての標準化されたＦＰＦを反映する。
【００８１】
【表４】
2009503064.tif 000006
【００８２】
上記の結果から、形態Ｂ塩製剤が、確立された製品製剤(Pulmicort(登録商標)Turbuhaler(登録商標)製剤)と非常に類似した粒子サイズ中間点(ＭＭＡＤ)および粒子サイズ分布(ＧＳＤ)を示すと結論付けることができる。呼吸管への薬剤送達の成功に重要である微粒子に分配された粉末のフラクション(微粒子フラクション)は、２つの異なる粉末で類似の範囲であったが、形態Ｂ塩で良かった。この試験で得られたデータから、塩Ｂ製剤は有益な脱凝集特性を示すと結論付ける。」
【００８３】
ヒトＣＣＲ１結合アッセイ
膜
組み換えヒトＣＣＲ１(ＨＥＫ−ＣＣＲ１)を安定に発現するＥＣＡＣＣからのＨＥＫ２９３細胞を使用して、ＣＣＲ１含有細胞膜を調製した。膜を−７０℃で貯蔵した。各バッチの膜濃度を３３pM  [１２５Ｉ]  ＭＩＰ−１αの１０％特異的結合に調製した。
【００８４】
結合アッセイ
１７５００単位／Ｌ  バシトラシン(Sigma, Cat No B1025)を添加したアッセイ緩衝液  ｐＨ７.４(１３７mM  ＮａＣｌ(Merck, Cat No 1.06404)、５.７mM  グルコース(Sigma, Cat No G5400)、２.７mM  ＫＣｌ(Sigma, Cat No P-9333)、０.３６mM  ＮａＨ２ＰＯ４×Ｈ２Ｏ(Merck, Cat No 1.06346)、１０mM  ＨＥＰＥＳ(Sigma, Cat No H3375)、０.１％(ｗ／ｖ)ゼラチン(Sigma, Cat No G2625))に希釈した１００μLのＨＥＫ−ＣＣＲ１膜を、９６ウェルフィルタープレート(０.４５μm  opaque Millipore cat no MHVB N4550)の各ウェルに添加した。１２μLの１０％ＤＭＳＯを含むアッセイ緩衝液中の化合物を添加して、最終化合物濃度１×１０−５.５−１×１０−９.５Ｍとした。１０％ＤＭＳＯを補ったアッセイ緩衝液中１０nM  最終濃度の１２μl  冷ヒト組み換えＭＩＰ−１α(270-LD-050, R&D Systems, Oxford, UK)を一定のウェル(化合物なし)に非特異的結合対照(ＮＳＢ)として入れた。１０％ＤＭＳＯを含む１２μlアッセイ緩衝液を一定のウェル(化合物なし)に添加して、最大結合(Ｂ０)を検出した。
【００８５】
アッセイ緩衝液でウェル中の最終濃度３３pMまで希釈した１２μL  [１２５Ｉ]  ＭＩＰ−１αを全ウェルに添加した。次いで蓋付きプレートを１.５時間、室温でインキュベートした。インキュベーション後、ウェルを真空濾過(MultiScreen Resist Vacuum Manifold system, Millipore)により空にし、１回２００μlアッセイ緩衝液で洗浄した。洗浄後、全ウェルに５０μLのシンチレーション液(OptiPhase “Supermix”, Wallac Oy, Turko, Finland)を添加した。結合した[１２５Ｉ]  ＭＩＰ−１αをWallac Trilux 1450 MicroBetaカウンターを使用して測定した。窓設定：低５−高１０２０、１分計数／ウェル。
【００８６】
置換パーセントの計算およびＩＣ５０
以下の式を使用して置換パーセントを計算した。
置換パーセント＝１−((cpm試験−cpm  ＮＳＢ)／(cpm  Ｂ０−cpm  ＮＳＢ))、式中：
cpm試験＝膜および化合物および[１２５Ｉ]  ＭＩＰ−１α  cpmのデュプリケートウェルの平均cpm；
ＮＳＢ＝膜およびＭＩＰ−１αおよび[１２５Ｉ]  ＭＩＰ−１α(非特異的結合)  cpmのウェルの平均cpm；
Ｂ０＝膜およびアッセイ緩衝液および[１２５Ｉ]  ＭＩＰ−１α(最大結合)のウェルの平均cpm。
５０％置換をもたらす化合物のモル濃度(ＩＣ５０)をエクセルをベースにしたプログラムXLfit(version 2.0.9)を使用して演算した。
【図面の簡単な説明】
【００８７】
【図１】Ｎ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩(形態Ａ)のＸ線粉末回折パターンを示す。
【図２】Ｎ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩(形態Ｂ)のＸ線粉末回折パターンを示す。
【図３】実施例に記載の微粉化Ｎ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩(形態Ｂ)およびPulmicort(登録商標)Turbuhaler(登録商標)製剤の空気動力学的中央粒子径(ＭＭＡＤ)および幾何学的標準偏差(ＧＳＤ)を示す。エラーバーはＣＩ９５％である。
【図４】実施例に記載の微粉化Ｎ−{２−[((２Ｓ)−３−{[１−(４−クロロベンジル)ピペリジン−４−イル]アミノ}−２−ヒドロキシ−２−メチルプロピル)オキシ]−４−ヒドロキシフェニル}アセトアミド安息香酸塩(形態Ｂ)およびPulmicort  Turbuhaler(登録商標)製剤の微粒子フラクション(ＦＰＦ)を示す。エラーバーはＣＩ９５％である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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