(57)【要約】  ヒト又は動物の被験対象における成長ホルモン欠損症を判断する方法であって、該方法は、ＥＰ１５７２(式Ｉ)又はＥＰ１５７３(式ＩＩ)を被験対象に経口的に投与し、被験対象から投与後サンプルを得、サンプル中の成長ホルモンレベルを測定し、サンプル中の成長ホルモンレベルが、被験対象における成長ホルモン欠損症を示すかどうかを判断することを含む。好ましくは、サンプル中のＧＨレベルはイムノアッセイにより測定される。また、(ａ)経口投与用に処方されたＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３と；(ｂ)サンプル中の成長ホルモンレベルを測定する手段を含む診断キットを構成するパーツのキットも開示している。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒト又は動物の被験対象の成長ホルモン欠損症を判断する方法において、被験対象にＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３を経口的に投与し、該被験対象から少なくとも一の投与後サンプルを得、サンプル中の成長ホルモンレベルを測定し、サンプル中のＧＨレベルが、被験対象の成長ホルモン欠損症を示すかどうかを判断することを含む方法。
【請求項２】
ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の投与前に投与前サンプルを採取する請求項１に記載の方法。
【請求項３】
一又は複数の投与後サンプルが適切な時間間隔の後に採取される請求項１に記載の方法。
【請求項４】
各サンプル間の時間間隔を１５〜３０分とすることができる請求項３に記載の方法。
【請求項５】
サンプルが、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の経口投与時間に対して、−３０又は−１５、０、１５、３０、６０、９０及び１２０分で採取される請求項１に記載の方法。
【請求項６】
タイムフレーム中に放出される成長ホルモンのピークレベルの評価が、被験対象の成長ホルモン欠損症を示すために使用される請求項１から５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
ヒト又は動物の被験対象の成長ホルモン欠損症を判断する方法において、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３が経口的に投与された被験対象から少なくとも一の投与後サンプルを得、サンプル中の成長ホルモンレベルを測定し、成長ホルモンレベルが、被験対象の成長ホルモン欠損症を示すかどうかを判断することを含む方法。
【請求項８】
ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の投与前の被験対象からのサンプルが提供される請求項７に記載の方法。
【請求項９】
適切な時間間隔後に採取された一又は複数の投与後サンプルが提供される請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
時間間隔を１５〜３０分とすることができる請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の経口投与時間に対して、−３０又は−１５、０、１５、３０、６０、９０及び１２０分で採取されたサンプルが提供される請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
タイムフレーム中に放出された成長ホルモンのピークレベルの評価が、被験対象の成長ホルモン欠損症を示すために使用される請求項７から１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
ヒト又は動物の被験対象が子供又は成人のいずれかであってよい請求項１から１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
動物の被験対象が、ウシ、ウマ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ネコ又はイヌである請求項１ないし１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
投与されるＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の量が１８〜７５ｍｇである請求項１、７及び１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
サンプルが血液サンプル、血清サンプル又は血漿サンプルである請求項１から１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
サンプル中の成長ホルモンレベルがイムノアッセイを使用して測定される請求項１から１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
ヒト又は動物の被験対象の成長ホルモン欠損症を判断するキットにおけるＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の使用であって、該ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３が経口的に投与される使用。
【請求項１９】
ヒト又は動物の被験対象の成長ホルモン欠損症を判断するために経口投与される組成物の製造におけるＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の使用。
【請求項２０】
(ａ)経口投与用に処方されたＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３と；
(ｂ)サンプル中の成長ホルモンレベルを測定する手段；
を含む診断キットを構成するパーツのキット。
【請求項２１】
診断に達するのに必要な工程を説明している、診断キットの使用についての説明書のセットをさらに含む請求項２０に記載のパーツのキット。
【請求項２２】
サンプル中の成長ホルモンレベルを測定する手段がイムノアッセイである請求項２０又は２１に記載のパーツのキット。
【請求項２３】
ヒト又は動物の被験対象の成長ホルモン欠損症を診断するためのここに開示した任意の新規方法。
【請求項２４】
ここに開示した任意の新規のパーツのキット。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
本発明は、ヒト又は動物の被験対象の成長ホルモン欠損症の診断に関して使用される方法及びキットに関する。
【０００２】
推定４００人に一人の児童が、特発性下垂体不全が最も一般的な原因である成長ホルモン欠損症(ＧＨＤ；成長ホルモン欠乏症、成長ホルモン分泌不全症)に罹患している。
ＧＨＤを患っている子供では、低身長のみが存在する特徴であると認識されている。成長ホルモン研究学会(Growth Hormone Research Society)では、特定の基準が存在するならば、即時調査を開始すべきであると示唆しており、これらには、１）平均より３標準偏差(ＳＤ)を越えて低い身長と定義される重度の低身長症；２）両親の平均身長より１．５ＳＤを越えて低い身長；３）平均より２ＳＤを越えて低い身長及び実年齢の平均より１ＳＤを越えて低い１年を越える身長発育速度、又は２才以上の子供で１年に亘って０．５ＳＤを越えた身長低下；４）低伸長症ではなく、１年以上平均より２ＳＤを越えて低いか、又は２年以上持続して１．５ＳＤを越えて低い身長発育速度；５）頭蓋内病巣に表れる兆候；６）多発性下垂体ホルモン病(ＭＰＨＤ)の兆候；及び７）新生児の病状及びＧＨＤの兆候が含まれる(Growth Hormone Research Society, J. Clin. Endocrinol. Metab. (2000), 85(11), p 3990-3993)。
【０００３】
しかしながら、ＧＨＤは、乏しい成長速度を伴う小児疾患とは、もはや単純には考えられない。成人は、健康な身体組成及び代謝を維持するために適切なレベルのＧＨを必要とする。ＧＨＤを患っている成人では、腹部脂肪が増加し、心機能が損なわれ、コレステロールレベルが上昇し、運動能力が低下し、脂肪のない体となり、骨塩量が低下する(Growth Hormone Research Society, J. Clin. Endocrinol. Metab. (1998), 83(2), p 379-381)。下垂体を刺激してＧＨを放出させる試験が、成人と子供の双方においてＧＨＤの診断に使用されている。レボドパ、クロニジン、アルギニン、インシュリンを含む様々な成長ホルモン放出誘発剤が存在しており、成長ホルモン放出ホルモン(ＧＨＲＨ)及び種々のＧＨＲＨ類似体が、低身長症を患っている子供及びＧＨＤに関連する所定の範囲の病状を患っている成人におけるＧＨを分泌する能力を評価するために、単独で又は組合せて使用されている(Greenspan, F.及びBaxter, J.D., Chapter 3, Basic & Clinical Endocrinology, 第4版. (1994) Prentice Hall, USA; 国際公開第94/11396号; 及び国際公開第94/11397号)。
【０００４】
インシュリン及びＧＨＲＨプラスアルギニンの組合せは別として、上述した薬剤には、低感受性(「感受性」とは、ＧＨＤと正確に診断された被験対象の割合のことである)又は低特異性(「特異性」とは、ＧＨＤを患っていないと正確に判断された被験対象の割合である)から生じる問題があり、これは、主として、被験対象間のＧＨ反応にかなりの変動があり、偽陽性結果の割合が高いためである。感受性及び特異性の要約は、以下及び表１に含まれる；理想的には、誘発剤は、感受性及び特異性の双方が≧９５％であるべきである(Biller, B. M. Kら J. Clin. Endocrinol. Metab. (2002), 87(5), p2067-2079を参照)。
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【０００５】
静脈内インシュリン不耐性試験(ＩＴＴ)は、ＧＨＤ診断のための最も優れたスクリーニング方法であると考えられている(Mahajanら J. Clim. Endocrin. & Metab. (2000), p1473-1476)。しかしながら、この試験には、被験対象に重篤な害をもたらす危険性があり(例えば、低血糖症による糖尿病性昏睡を引き起こす)、よって、被験対象は、スタッフが適切に配された研究班で長期間に亘って継続的に観察されなければならない。このため、ＩＴＴは、非常に専門的なセンター外では、スクリーニング手順としては非常に高価なものとなる。
【０００６】
ＧＨＲＨプラスＬ-アルギニン試験は、ＩＴＴ試験とほぼ同程度の予測ができると考えられている。しかしながら、血管拡張、又は潮紅、錯感覚、吐き気、及び味覚異常を含む所定範囲の副作用を誘発する可能性がある(Biller, B. M. Kら J. Clin. Endocrinol. Metab. (2002), 87(5), p2067-2079)。
【０００７】
上記試験の全てにおいて、診断を確立するためには、数時間かけて多くのサンプルをしばしば採取しなければならない。さらに、上述した他の試験では、吐き気、嘔吐、錯感覚、めまい、無力症及び頭痛を含む副作用が生じる(同上)。
【０００８】
最近の数年、数人の研究者が、ＧＨ分泌はヘキサレリン(hexarelin)及び種々のヘキサレリン類似体等のＧＨ放出ペプチド(ＧＨＲＰ)と称される合成オリゴペプチドにより刺激され得ることを実証している(Ghigoら, European Journal of Endocrinology, 136, 445-460, 1997)。これらの化合物は、ＧＨＲＨとは異なる機序を介し(C.Y. Bowers, "Xenobiotic Growth Hormone Secretagogues", Eds. B.Bercu及びR.F. Walker, Pg. 9-28, Springer-Verlag, New York 1996)、視床下部及び下垂体に局在する特定のレセプターと相互作用することにより((a) G. Muccioliら, Journal of Endocrinology, 157, 99-106, 1998; (b) G. Muccioli, "Tissue Distribution of GHRP Receptors in Humans", Abstracts IV European Congress of Endocrinology, Sevilla, Spain, 1998)、作用する。近年、ＧＨＲＰレセプターは視床下部下垂体系ばかりでなく、一般的にＧＨ放出には関連していない種々のヒト組織中に存在していることが示されている(G. Muccioliら, 上述の(a)参照)。
【０００９】
ＧＨＲＰ及びそれらのアンタゴニストは、例えば次の文献：C.Y. Bowers, 上掲, R. Deghenghi, "Growth Hormone Releasing Peptides",同書, 1996, pg. 85-102; R. Deghenghiら, "Small Peptides as Potent Releasers of Growth Hormone", J. Ped. End. Metab., 8, pg. 311-313, 1996; R. Deghenghi, "The Development of Impervious Peptides as Growth Hormone Secretagogues", Acta Paediatr. Suppl., 423, pg. 85-87, 1997; K. Veeraraganavanら, "Growth Hormone Releasing Peptides (GHRP) Binding to Porcine Anterior Pituitary and Hypothalamic Membranes", Life Sci., 50, Pg. 1149-1155, 1992; 及びT.C. Somersら, "Low Molecular Weight Peptidomimetic Growth Hormone Secretagogues", 国際公開第96/15148号(1996年5月23日), 国際公開第95/14666号, 国際公開第01/96300号, 国際公開第91/18016号, 国際公開第96/10040号, 国際公開第97/22620号, 国際公開第99/62539号, 米国特許第5,646,301号, 米国特許第5,955,421号, 米国特許第5,872,100号, 米国特許第5,668,254号, 米国特許第5,635,379号, 米国特許第6,025,471号に記載されている。
【００１０】
成長ホルモン放出ペプチド６(ＧＨＲＰ-６)は、ＧＨＲＨと組み合わせて、ＧＨＤを診断するための誘発剤として使用されている(米国特許第5,811,074号)。この方法はＧＨＲＰ-６及びＧＨＲＨの静脈内投与に依存しており、診断に達するには多くのサンプルと長時間の試験期間を必要とする。
【００１１】
成長ホルモン放出ペプチド２(ＧＨＲＰ-２)は、静脈内注入又は経鼻投与を介して被験対象に投与される場合にＧＨＤの診断においてある程度の有用性があることが実証されている(Pihokerら J. Clin.  Endocrin. & Metab. (1995), p2987-2992)。また、ＧＨＲＰ-２が静脈内投与を介してＧＨＲＨと組合せられる場合、相乗効果が生じ、さらに正確な結果が生じることも記されている。しかしながら、記載された方法は、診断を可能とする前に、被験対象から多くのサンプルと何時間にもわたる期間を必要とするものである。
【００１２】
上記試験(Mahajanら J. Clin. Endorin. & Metab. (2000), p1473-1476)の改良版では、ＧＨＲＰ-２及びＧＨＲＨが併せて静脈内投与され、診断のために血液の単一サンプルが採取される。該文献には、経口投与がこの併用療法に効果的であることについては示唆されていない。
最近、科研製薬が、静脈内投与用に承認されているＧＨＲＰ-２を使用したＧＨＤ診断キットを日本市場で発売した。
【００１３】
本発明者らは、成長ホルモン分泌促進剤(ＧＨＳｓ)ＥＰ１５７２及びＥＰ１５７３の経口投与が、ＧＨＤの診断に効果的かつ信頼性をもって使用可能であることを見出した。
【００１４】
ＥＰ１５７２(式Ｉ)又はＥＰ１５７３(式ＩＩ)は、経口的に付与され得るＧＨＳｓ(それぞれＥＰ１５７２及びＥＰ１５７３である国際公開第01/96300号の実施例１及び実施例５８を参照)である。
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【００１５】
ＥＰ１５７２及びＥＰ１５７３は、Ｈ-Ａｉｂ-Ｄ-Ｔｒｐ-Ｄ-ｇＴｒｐ-ＣＨＯ及びＨ-Ａｉｂ-Ｄ-Ｔｒｐ-Ｄ-ｇＴｒｐ-Ｃ(Ｏ)ＮＨＣＨ２ＣＨ３としてもまた定義することができる。ここで、Ｈは水素、Ａｉｂはアミノイソブチル、Ｄは右旋性異性体、Ｔｒｐはトリプトファン、ｇＴｒｐは式ＩＩＩの基である。
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【００１６】
本発明の第１の態様は、ヒト又は動物の被験対象の成長ホルモン欠損症(ＧＨＤ)を判断する方法を提供するものであり、該方法は、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３を被験対象に経口的に投与し、被験対象から少なくとも一の投与後サンプルを得、該サンプル又はサンプル群中の成長ホルモン(ＧＨ)レベルを測定し、サンプル又はサンプル群中のＧＨレベルが被験対象におけるＧＨＤを示すかどうかを判断することを含む。
【００１７】
典型的には、少なくとも一の投与後サンプル中のＧＨレベルは、ＧＨＤでないことが知られている被験対象からの等価な投与後サンプル中に見出され得るレベル、及び／又はＧＨＤであることが知られている被験対象からの等価な投与後サンプル中に見出され得るレベルと比較される。簡便には、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の投与後に処置される被験対象に放出されるＧＨのピーク濃度が、ＧＨＤでないことが知られている被験対象で見出されるピーク濃度、及び／又はＧＨＤであることが知られている被験対象で見出されるピーク濃度と比較され得、双方の場合においてＥＰ１５７２及びＥＰ１５７３の投与後である。
【００１８】
好ましくは、被験対象に投与されるＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の量は、１８〜７５ｍｇである。典型的には、投与される量は０．５ｍｇ／ｋｇであるが、０．１ｍｇ／ｋｇ〜１．０ｍｇ／ｋｇ、又は医師により特定される量であってもよい。肥満体の被験対象には、より多くの用量を使用する必要があるかもしれない。典型的には、被験対象に与えられるＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の量は、被験対象において可能なＧＨ最大放出を誘発する量であると理解される。典型的には、被験対象に与えられる量は、被験対象にＧＨ最大放出を誘発する最小量の１〜３倍である。
【００１９】
とにかく、医師又は当業者は、個々の被験対象に最も適した実際の用量を決定することができるであろうし、それは、種、年齢、体重、性別、腎機能、肝機能、及びＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３で処置された特定の被験対象の反応により変わり得る。上述した用量は平均的な場合の例であり；もちろん、より多い又は少ない用量範囲が有益である個々の例もあり得、これもこの発明の範囲に入る。
【００２０】
好ましくは、少なくとも一の投与前サンプルは、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の投与前に採取し、一又は複数の投与後サンプルは、投与後、適切な時間間隔で採取される。各サンプル間の時間間隔は１５〜３０分であり、サンプルは、投与後３時間までに採取しうる。より好ましくは、サンプルは、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の経口投与時間に対して−３０、及び／又は−１５、０、１５、３０、６０、９０及び１２０分で採取される。典型的には、１又は２のサンプルは、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の投与前に採取され、典型的には、２又は３又は４又は５のサンプルは、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の投与後、様々な時間に採取される。
【００２１】
本発明は、ヒト又は動物の被験対象がＧＨＤに罹患しているかどうかを診断するための方法を含み、該方法は、被験対象にＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３を経口的に投与し、ヒト又は動物の被験対象からサンプルを得、サンプル中のＧＨレベルを測定し、該レベルが、被験対象におけるＧＨＤの兆候であるかどうかを判断することを含むことが理解されるであろう。この判断は診断を補助するであろうし、診断に達するように他の試験又は医師による観察と組合せられうることが理解されるであろう。
【００２２】
本発明は、被験対象にＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３を経口投与し、被験対象から投与後のサンプルを得、サンプル中の成長ホルモン(ＧＨ)レベルを測定し、サンプル中のＧＨレベルが、被験対象におけるＧＨＤを示すかどうかを判断することを含む。
【００２３】
本発明の第２の態様は、ヒト又は動物の被験対象におけるＧＨＤを判断する方法を提供するものであり、該方法は、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３が経口的に投与された被験対象から少なくとも一の投与後サンプルを得、サンプル又はサンプル群中の成長ホルモン(ＧＨ)レベルを測定し、サンプル又はサンプル群中のＧＨレベルが、被験対象における成長ホルモン欠損症を示すかどうかを判断することを含む。
【００２４】
いずれかの態様におけるヒト又は動物の被験対象は、子供又は成人であってよい。動物の被験対象は任意の哺乳動物の被験対象であってよいが、典型的には、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ネコ及びイヌからなる群から選択される。
【００２５】
好ましくは、サンプルは、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の投与前に被験対象から採取されて提供されるもの(すなわち投与前サンプル)であり、一又は複数のサンプルは、投与後、適切な時間間隔の後に被験対象から採取されて提供されるもの(すなわち投与後サンプル)である。各サンプル間の時間間隔は１５〜３０分とすることができる。より好ましくは、提供されるサンプルは、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の経口投与時間に対して−３０、及び／又は−１５、０、１５、３０、６０、９０及び１２０分に被験対象から採取される。典型的には、提供される１又は２のサンプルは、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の投与前に採取され、典型的には、提供される２又は３又は４又は５のサンプルは、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の投与後、様々な時間で採取される。
【００２６】
本発明は、被験対象がＧＨＤに罹患しているかどうかを診断する方法を含み、該方法は、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３が経口的に投与された被験対象から少なくとも一の投与後サンプルを得、サンプル又はサンプル群中の成長ホルモン(ＧＨ)レベルを測定し、サンプル又はサンプル群中のＧＨレベルが、被験対象における成長ホルモン欠損症を示すかどうかを判断することを含むと理解される。
【００２７】
本発明は、被験対象にＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３を経口投与し、被験対象から投与後のサンプルを得、サンプルにおける成長ホルモン(ＧＨ)レベルを測定し、サンプル中のＧＨレベルが、被験対象におけるＧＨＤの兆候であるかどうかを判断することを含む。
【００２８】
典型的には、少なくとも一の投与後サンプル中のＧＨレベルが、ＧＨＤでないことが知られている被験対象からの等価な投与後サンプル中に見出され得るレベル、及び／又はＧＨＤであることが知られている被験対象からの等価な投与後サンプル中に見出され得るレベルと比較される。簡便には、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の投与後に処置される被験対象に放出されるＧＨのピーク濃度が、ＧＨＤでないことが知られている被験対象で見出されるピーク濃度、及び／又はＧＨＤであることが知られている被験対象で見出されるピーク濃度と比較され得、双方の場合においてＥＰ１５７２及びＥＰ１５７３の投与後である。
【００２９】
本発明は、低身長症の子供又はＧＨＤが疑われている子供、例えば癌(例えば白血病)で生存している子供、脳外科手術及び／又は下垂体手術及び／又は化学治療及び／又は放射線治療及び／又は脳損傷を受けた子供の診断評価に使用可能であることが理解されるであろう。
【００３０】
本発明は、小児期にＧＨＤと診断された成人、又はＧＨＤが疑われている成人、例えば癌で生存している成人、脳外科手術及び／又は下垂体手術及び／又は化学治療及び／又は放射線治療及び／又は脳損傷を受けた成人、及び／又は下垂体腺腫を患っている成人又は下垂体腺腫の処置を受けた成人の診断評価に使用可能であると理解されるであろう。
さらに、通常、ＧＨＤに対する試験を受けたある被験対象集団、例えばＨＩＶを患っている被験対象は、この診断評価から恩恵を被ることもまた認識されるであろう。
【００３１】
好ましくは、被験対象はＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の投与前、一晩絶食している。さらに、被験対象が他のホルモン障害を患っていることが分かっているならば、ＧＨＤ診断を受ける前に、その疾患を安定にするための、適切な治療法を施してもよい(例えば、レボチロキシンでの甲状腺機能低下症の治療)。
【００３２】
投与前サンプルとは、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３を経口投与する前に被験対象から採取されるサンプルを意味する。
投与後サンプルとは、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３を経口投与した後に被験対象から採取されるサンプルを意味する。
【００３３】
ヒト又は動物の被験対象からのサンプルは、任意の適切なサンプルであってよい。本発明の特定の実施態様において、適切なサンプルは、判断(例えば診断)されたヒト又は動物の被験対象から得られたものであり、このサンプルはＧＨレベルを分析するために提供される。便宜的に、サンプルは流動サンプルであり、血液、血清又は血漿であってよい。サンプルが被験対象から採取された又は提供された血液サンプルである場合に特に便利であり、ここでサンプル中の成長ホルモンのレベルは、サンプル中のＧＨレベルを測定するための任意の適切な手段を使用して測定される。
【００３４】
サンプル中のＧＨレベルを測定するための適切な手段の具体例は、限定されるものではないが、ＧＨに選択的に結合する薬剤、例えば抗体又は抗体様分子を使用し、ＧＨを測定するもの(例えば、イムノアッセイ)である。これらには、ポリクローナル抗体ベースの免疫放射線測定法(ｐ-ＩＲＭＡ)、モノクローナル抗体ベースのＩＲＭＡ(ｍ-ＩＲＭＡ)、モノクローナル抗体ベースの時間分解免疫蛍光測定法(ｔｒＩＦＭＡ)、放射性レセプターアッセイ、バイオアッセイ及び免疫機能分析(ＩＦＡ)(Ranke, M.B.(編): Diagnostics of Endocrine Function in Children and adolescents, Basel, Karger, 2003, pp107-128及びChatarine Janssonら, Clin. Chem. (1997) 43(6), pp 950-956を参照)が含まれる。上述のアッセイの例には、Microwell ELISAヒト成長ホルモンイムノアッセイ試験用キット、Diagnostic Automation INC., Calabasas, California 91302 USA (カタログ番号1901)；ヒトＧＨを定量測定するためのイムノアッセイ、Nichols Diagnostic Institute, San Juan Capistrano, California, US (カタログ番号62-7056)；及びヒトＧＨ ＩＲＭＡキット、Institute of Isotopes Co. Ltd., Budapest, Hungaryが含まれる。
【００３５】
投与後サンプル又はサンプル群中のＧＨレベル、及び／又は投与後サンプル中のＧＨレベルを測定することにより決定されるＧＨ生成の動態は、ヒト又は動物の被験対象がＧＨＤであるかどうかを判断するために使用されうる。ＧＨ欠損症であることを示すＧＨレベル又はＧＨ生成動態は容易に測定され、良好な特異性及び感受性を与えるパラメータが使用される。上で検討されたように、測定されるレベルは、同じ試験レジメを受けた正常な被験対象(ＧＨＤではない)又は既知のＧＨＤ被験対象に見出されるレベルと比較され得る。本発明の一実施態様では、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３を使用する最大誘発後に見出されるＧＨのカットオフレベルを使用し、ＧＨＤを判断してもよい。特定用量のＥＰ１５７２及びＥＰ１５７３に対する適切なカットオフレベルは容易に測定される。
【００３６】
本発明の第３の態様は、ヒト又は動物の被験対象における成長ホルモン欠損症を判断するキットにおけるＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の使用を提供する。典型的には、キットは、ヒト又は動物の被験対象におけるＧＨＤを診断するために使用される。
本発明は、ヒト又は動物の被験対象の成長ホルモン欠損症を判断するためのキットにおけるＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の使用を含み、ここでＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３は経口的に投与される。典型的には、キットは、ヒト又は動物の被験対象のＧＨＤを診断するために使用される。
【００３７】
本発明の第４の態様は、ヒト又は動物の被験対象の成長ホルモン欠損症を判断するために経口投与される組成物の製造におけるＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の使用を提供する。
好ましくは、組成物は、単一経口用量の適切量のＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３を含む。典型的には、ヒト又は動物の被験対象のＧＨＤの判断は、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の投与後に採取されたサンプル(群)(投与後サンプル(群))中のＧＨレベルを測定することによりなされる。典型的には、少なくとも一のサンプルはＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の投与前に採取される(投与前サンプル)。
【００３８】
本発明は、ヒト又は動物の被験対象の成長ホルモン欠損症を判断するために経口投与される組成物の製造におけるＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の使用を含む。
【００３９】
本発明の第５の態様は、
(ａ)経口投与用に処方されたＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３と；
(ｂ)サンプル中の成長ホルモンレベルを測定する手段；
を含む診断キットを構成するパーツのキットを提供することにある。
好ましくは、組成物は、単一経口用量で適切な量のＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３を含む。典型的には、ヒト又は動物の被験対象のＧＨＤの判断は、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の投与後に採取されたサンプル(群)(投与後サンプル(群))中のＧＨレベルを測定することによりなされる。典型的には、サンプルはＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３の投与前に採取され(投与前サンプル)、投与後サンプル中のＧＨのピークレベルが測定される。好ましくは、ＧＨレベルを測定するための手段は、上述したものである。より好ましくは、サンプル中のＧＨレベルを測定する手段は、限定されるものではないが、ＧＨに選択的に結合する薬剤、例えば抗体又は抗体様分子を使用し、ＧＨを測定するもの(例えば、イムノアッセイ)、特にポリクローナル抗体ベースの免疫放射線測定法(ｐ-ＩＲＭＡ)、モノクローナル抗体ベースのＩＲＭＡ(ｍ-ＩＲＭＡ)、モノクローナル抗体ベースの時間分解免疫蛍光測定法(ｔｒＩＦＭＡ)、放射性レセプターアッセイ、バイオアッセイ又は免疫機能分析(ＩＦＡ)である。
【００４０】
パーツのキットは、診断に達するのに必要な工程を説明している診断キットの使用に対する説明書のセットをさらに含んでいてもよい。好ましくは、サンプル中の成長ホルモンレベルを測定する手段はイムノアッセイである。
また、パーツのキットはＧＨＤの判断のためのシステムであるとみなすこともできる。典型的には、システムは、経口製剤中のＥＰ１５７２及びＥＰ１５７３と、ＧＨ用のイムノアッセイを含む。
【００４１】
さらに、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３は、ヒト又は動物の被験対象のＧＨＤを判断するのにそれ自体で有用であるが、一又は複数の誘発剤、例えばレボドパ、クロニジン、アルギニン、インシュリン、成長ホルモン放出ホルモン(ＧＨＲＨ)、ＧＨＲＨの種々の類似体、ＧＨＲＰで、ヒト又は動物の被験対象においてＧＨＤを判断するものと組合せて、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３を使用することも有益である。また、ＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３は、成長ホルモン学会(Growth Hormone Society)のガイドラインに記載されている試験(J. Clin. Endocrinol. Metab. (2000), 85(11), p 3990-3993)及びJ. Clin. Endocrinol. Metab. (1998), 83(2), p 379-381)等、ＧＨＤ用の他の試験に対する補助として、又は組合せて使用されてもよい。
【００４２】
よって、本発明の第１及び第２の態様の方法では、ヒト又は動物の被験対象に、一又は複数の他の誘発剤並びにＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３が投与されうる。同様に、本発明の第３及び第５の態様では、キットは一又は複数の他の誘発剤並びにＥＰ１５７２又はＥＰ１５７３をさらに含んでいてもよい。本発明の第４の態様では、組成物は、一又は複数の他の誘発剤をさらに含有していてもよく、又はヒトもしくは動物の被験対象には、一又は複数の誘発剤が投与されてもよい。
ヒト又は動物の被験対象は、一又は複数の他の誘発剤を使用して、別々にかつ独立してＧＨＤが判断されることが理解されるであろう。
【００４３】
また、本発明の方法及びキットには、上述した兆候又は他のものに使用されるかどうかによらず、従来技術で知られた方法及びキットよりも、効果的であり、毒性が少なく、あまり副作用が生じることなく、及び／又は良好な薬物動態プロファイルを有し、及び／又は他の有用な薬理学的特性を有しているという利点がある。
【００４４】
この明細書において先に公開された文献の列挙又は論議は、文献が従来技術の一部であるか又は技術常識であることを認めたものと必ずしも取ってはならない。
特許明細書に引用された全ての文献は、出典明示によりここに援用する。
以下の非限定的な実施例及び図を参照して、本発明をさらに詳細に記載する。
【００４５】
実施例１：ＥＰ１５７２の経口生物学的利用能及び経口投与後のＧＨの誘導
ＥＰ１５７２７を用いた誘発試験の後、ＥＰ１５７２の薬物動態プロファイル及び経口投与に応じて放出されるＧＨレベルを、種々の用量で３６人の健常な男性被験対象において確証した。
７０ｋｇの体重の被験対象について使用された各用量の製剤を以下に記載する。
０．００５ｍｇ／ｋｇに対して、６ｍｇのＥＰ１５７２を４０ｍＬの蒸留水に溶解させた。この溶液のアリコート２．３３ｍＬを、１７．６７ｍＬの水で希釈して、２０ｍＬの溶液として最終用量の製剤を作製した。
０．０５ｍｇ／ｋｇに対して、１５ｍｇのＥＰ１５７２を４０ｍＬの蒸留水に溶解させた。この溶液のアリコート９．３３ｍＬを、１０．６７ｍＬの水で希釈して、２０ｍＬの溶液として最終用量の製剤を作製した。
０．１２５ｍｇ／ｋｇに対して、８．７５ｍｇのＥＰ１５７２を、２０ｍＬの蒸留水と４０μＬの塩酸１モル溶液を含有する溶液に溶解させた。
０．２５ｍｇ／ｋｇに対して、１７．５ｍｇのＥＰ１５７２を、２０ｍＬの蒸留水と４０μＬの塩酸１モル溶液を含有する溶液に溶解させた。
０．５ｍｇ／ｋｇに対して、３５ｍｇのＥＰ１５７２を、２０ｍＬの蒸留水と４０μＬの塩酸１モル溶液を含有する溶液に溶解させた。
【００４６】
ＥＰ１５７２の投与の３０分及び１５分前に、血液サンプルを被験対象から採取した。０．５ｍｇ／ｋｇのＥＰ１５７２を含む水性製剤を被験対象に経口投与する直前に、被験対象から血液サンプルを採取した。投与から１５、３０、６０、９０、１２０、１５０、１８０、２１０、２４０、２７０及び３００分後、被験対象からさらに血液サンプルを採取し、各サンプルの一部を、以下に概説するアッセイプロトコルに従いプロセシングした。各サンプル中に存在するＧＨのレベルを、以下に概説するアッセイ方法により測定し、被験対象に対するピーク濃度(Ｃｍａｘ)を測定した。サンプルの残りを使用し、体循環中に存在するＥＰ１５７２のレベルを測定した(以下に概説)。
【００４７】
ＧＨレベルアッセイ
製造者の標準操作手順に記載された材料と方法(Nichols Institute Diagnostics, 1311 Calle Batido, San Clemente, California 92673, USA)を使用し、ヒト血清中のヒト成長ホルモン濃度を定性的測定するニコルズ・アドバンテージ(登録商標)・スペシャルティー・システム(Nichols Advantage Specialty System)を用いて、ニコルズ・アドバンテージ(登録商標)ヒト成長ホルモンイムノアッセイを使用するアッセイを実施した。
【００４８】
血液中のＥＰ１５７２レベルを測定するためのアッセイ
ヒト血漿中の有機成分を、全量５００ｍＬの酢酸エチル／イソ-プロパノール混合物(それぞれ８２．５％及び１７．５％)を使用して抽出した。収集した有機フラクションの乾燥(硫酸ナトリウムを使用)及び濃縮後、メタノール、水及びギ酸(それぞれ６５％、３５％及び０．１％)の溶出混合物を使用し、検体を逆相ＨＰＬＣ(メルク社(Merck)、逆相シリカゲル、LiChroCART、１２５ｘ４ｍｍ)により分離させ、質量分析計(Finnigan TSQ 7000)により分析した。内部標準としてＥＰ１５７３を用い、定量を実施した(ピーク面積比評価)。
【００４９】
上述した製剤を使用し、０．００５、０．０５、０．２５及び０．１２５ｍｇ／ｋｇの用量を被験対象に投与し、さらなる投薬実験を実施した。
結果を、以下の図１〜３及び表２に報告する。
2009526989.tif 000007
ＡＵＣ＝曲線下の面積
Ｃｍａｘ＝最大観測濃度
Ｔｍａｘ＝最大観測濃度に達する時間
【００５０】
実施例２：ＧＨＲＨ＋Ａｒｇ試験に対するＥＰ１５７２の感受性及び特異性の比較
被験対象(健常か、又は成人発症視床下部下垂体疾患又は多発性下垂体ホルモン欠損症が疑われる)に、ＧＨＲＨプラスＬ-アルギニン試験又は経口投与ＥＰ１５７２を利用する試験のいずれかを施す。
静脈内ボーラス投与された１μｇ／ｋｇ用量のＧＨＲＨを用い、続いて３０ｇのＬ-アルギニンを３０分注入することにより、Biller, B. M. Kら J. Clin. Endocrinol. Metab. (2002)，87(5), p2067-2079に記載されているようにして、ＧＨＲＨプラスＬ-アルギニン試験を実施する。血液サンプルを、投与の−３０又は−１５、０、１５、３０、６０、９０、１２０及び１５０分後に被験対象から採取する。
０．５ｍｇ／ｋｇ用量を使用し、上述したようにしてＥＰ１５７２試験を実施し、血液サンプルを、投与−３０分又は−１５、０、１５、３０、６０、９０、１２０及び１５０分後に被験対象から採取する。
【００５１】
少なくとも７日後、ＧＨＲＨプラスＬ-アルギニン試験にかけた被験対象に、ＥＰ１５７２試験を施し、またその逆も行う。
ついで、上で参照したアッセイに記載されているようにして、サンプルを分析し、その結果を使用し、Biller, B. M. K. et al. J. Clin. Endocrinol. Metab. (2002), 87(5), p2067-2079に記載されているようにして、結果の統計的分析(９５％感受性、９５％特異性)に基づき、被験対象がＧＨＤであるかどうかを決定する。
【００５２】
実施例３：標準的プロトコル
ＥＰ１５７２サンプル５０ｍｇを、１００ｍＬの精製水を添加することにより、２５０ｍＬの目盛り付きバイアルにおいて振盪し、溶解させる。また、２５ｍｇのＥＰ１５７２をそれぞれ含有する２つの分散性錠剤も、同様の方法で溶解させることができる。
被験対象から、ＥＰ１５７２投与の１５分前に、血液サンプルを採取する。体重１ｋｇ当たり５０ｍｇ又は１ｍＬのいずれかの固定用量で、ＥＰ１５７２水溶液を被験対象に経口的に投与する直前に、血液サンプルを被験対象から採取する。投与から１５、３０、６０、９０及び１２０分後、被験対象からさらに血液サンプルを採取し、各サンプル中に存在するＧＨのレベルを、上述したアッセイ法により測定し、ついでそのピークレベルを使用し、被験対象がＧＨＤに罹患しているかどうかを決定する。正常なヒトと比較したときに、ＧＨ濃度が欠如しているか又はその増加度が鈍い場合はＧＨＤを示している。
【００５３】
実施例４：臨床的に使用されるＥＰ１５７２の調製
１．５０ｍＬのシリンジ及び針を用いて、ＥＰ１５７２を含む１００ｍｌのボトルに、潅注用の水５０ｍｌを注入する。
２．完全に溶解するまで、ボトルを激しく振盪する。ボトルを開け、ガラスビーカー／測定用シリンダーに溶液を注ぐ。
３．潅注用の水をさらに５０ｍｌ用いて１００ｍｌのガラスボトルをすすぎ、ガラスビーカー／測定用シリンダーに溶液を注ぐことで、ＥＰ１５７２の最終濃度約０．５ｍｇ／ｍｌが得られる。
４．賦形剤の入ったサシェの全ての内容物を添加し、それを溶解させる。
５．被験対象の体重に応じて、適切な容量の溶液を分別用メスシリンダーで測定することで、０．５ｍｇ／ｋｇ(すなわち、体重１ｋｇ当たり１ｍｌの溶液)のＥＰ１５７２の用量が得られる。
６．被験対象の体重＞１００ｋｇであるならば、成分の第２セットを用いて、工程１−４を繰り返す。
７．溶液は、被験対象に直ぐに投与されなければならない。
【００５４】
実施例５：臨床的に使用されるＥＰ１５７２の調製
ＥＰ１５７２(５０ｍｇ)と賦形剤を収容しているサシェの全ての内容物を、１００ｍＬの精製水を添加することにより、バイアル内で振盪して溶解させる(サシェの可能な内容物については表３を参照)。被験対象の体重に応じて、適切な容量の溶液を分別用メスシリンダーで測定することで、０．５ｍｇ／ｋｇ(すなわち、体重１ｋｇ当たり１ｍｌの溶液)のＥＰ１５７２の用量が得られる。被験対象の体重＞１００ｋｇであるならば、さらなるサシェを１００ｍＬの精製水に溶解させる。溶液は、直ちに被験対象に投与されなければならない。
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【図面の簡単な説明】
【００５５】
【図１】健常な男性被験対象に様々な用量のＥＰ１５７２を経口投与した後のＥＰ１５７２の血漿濃度(平均±ＳＥＭ)を示す。
【図２】健常な男性被験対象に様々な用量のＥＰ１５７２を経口投与した後に放出される成長ホルモンの血漿濃度(平均±ＳＥＭ)を示す。
【図３】健常な男性被験対象におけるベースラインを越えた、全ＧＨ分泌に対する様々な用量の経口ＥＰ１５７２の用量反応を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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