(57)【要約】本発明は、哺乳動物対象における骨成長を誘導もしくは促進する、および／または骨劣化を軽減もしくは防止するための新しい方法を提供する。本発明の方法は全般に、有効量のレゾルビンを対象に投与することを含む。特に、本発明の方法は、歯周病、変形性関節症、および転移性骨疾患ならびに溶骨性骨疾患など、骨の分解、劣化または変性に関連する病状の処置または防止に有用と考えられる。本発明の方法を実施するために使用できる、少なくとも１種のレゾルビンを含む医薬組成物およびキットも提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
脊椎動物対象における骨病状を処置する方法であって、少なくとも１種の有効量のレゾルビンを前記対象に投与するステップを含む方法。
【請求項２】
前記骨病状が骨喪失を伴う、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
骨劣化の防止、骨分解の防止、骨変性の防止、骨量低下の防止、骨密度低下の防止、骨劣化の安定化、骨分解の安定化、骨変性の安定化、骨量低下の安定化、骨密度低下の安定化、骨劣化の軽減、骨分解の軽減、骨変性の軽減、骨量低下の軽減、骨密度低下の軽減、骨量の増加、骨密度の増加、およびその組合せのうち、１つ以上の結果をもたらす、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記脊椎動物対象がヒト患者である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記少なくとも１種のレゾルビンが局所的に投与される、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記少なくとも１種のレゾルビンが対象の口腔に局所的に投与される、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記少なくとも１種のレゾルビンが経腸的に投与される、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記少なくとも１種のレゾルビンが経口的に投与される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記少なくとも１種のレゾルビンが、Ｅ系レゾルビンの構成種、Ｄ系レゾルビンの構成種、およびその組合せからなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項１０】
前記少なくとも１種のレゾルビンが、Ｅ系レゾルビンのジヒドロキシ型の構成種、Ｄ系レゾルビンのジヒドロキシ型の構成種、Ｅ系レゾルビンのトリヒドロキシ型の構成種、Ｄ系レゾルビンのトリヒドロキシ型の構成種、およびその組合せからなる群から選択される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記少なくとも１種のレゾルビンがレゾルビンＥ１を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１２】
骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する有効量の治療剤を前記対象に投与するステップをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項１３】
前記レゾルビンを投与するステップと、骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する前記治療剤を投与するステップとが逐次的に実施される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記レゾルビンを投与するステップと、骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する前記治療剤を投与するステップとが同時に実施される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する前記治療剤が、骨形成因子、骨吸収抑制剤、造骨因子、軟骨由来の形態形成タンパク質、成長ホルモン、エストロゲン、ビスホスホネート、スタチン、分化因子、およびその組合せからなる群から選択される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１６】
前記骨病状が、歯周病、骨折、骨欠損、転移性骨疾患、変形性関節症、および溶骨性骨疾患からなる群から選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項１７】
歯周病が歯肉炎または歯周炎である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
少なくとも１種のレゾルビンと、骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する少なくとも１種の治療剤と、医薬として許容できる少なくとも１種の担体または賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項１９】
骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する前記治療剤が、骨形成因子、骨吸収抑制剤、造骨因子、軟骨由来の形態形成タンパク質、成長ホルモン、エストロゲン、ビスホスホネート、スタチン、分化因子、およびその組合せからなる群から選択される、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記少なくとも１種のレゾルビンが、Ｅ系レゾルビンの構成種、Ｄ系レゾルビンの構成種、およびその組合せからなる群から選択される、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
前記少なくとも１種のレゾルビンが、Ｅ系レゾルビンのジヒドロキシ型の構成種、Ｄ系レゾルビンのジヒドロキシ型の構成種、Ｅ系レゾルビンのトリヒドロキシ型の構成種、Ｄ系レゾルビンのトリヒドロキシ型の構成種、およびその組合せからなる群から選択される、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
前記少なくとも１種のレゾルビンがレゾルビンＥ１を含む、請求項２０に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
局所的に投与されるように処方されている、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
骨喪失を伴う骨病状に罹患しやすいかまたは罹患している対象に局所的に投与されるように処方されている、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
前記骨病状が歯周病、骨折、骨欠損、転移性骨疾患、変形性関節症、および溶骨性骨疾患からなる群から選択される、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
歯周病が歯肉炎または歯周炎である、請求項２５に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
前記対象の口腔に局所的に投与されるように処方されている、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
溶液剤、懸濁剤、分散剤、軟膏、クリーム、ゲル剤、練り歯磨き剤、歯磨き粉、口中錠、膏薬、チューイングガム、エアロゾル剤、口中スプレー、トローチ、サシェ剤、洗口剤、爪楊枝、錠剤、カプセル、およびデンタルフロスからなる群から選択される製剤として処方されている、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
鎮痛剤、麻酔剤、抗菌剤、抗細菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗生物質、抗炎症剤、抗酸化剤、消毒剤、免疫刺激剤、およびその組合せからなる群から選択される少なくとも１種の追加の治療剤をさらに含む、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
必要としている対象への投与が、骨劣化の防止、骨分解の防止、骨変性の防止、骨量低下の防止、骨密度低下の防止、骨劣化の安定化、骨分解の安定化、骨変性の安定化、骨量低下の安定化、骨密度低下の安定化、骨劣化の軽減、骨分解の軽減、骨変性の軽減、骨量低下の軽減、骨密度低下の軽減、骨量の増加、骨密度の増加、およびその組合せのうち、１つ以上の結果をもたらす、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
少なくとも１種のレゾルビンと、骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する少なくとも１種の治療剤とを含む、脊椎動物対象における骨喪失を伴う病状を処置するためのキット。
【請求項３２】
骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する前記治療剤が、骨形成因子、骨吸収抑制剤、造骨因子、軟骨由来の形態形成タンパク質、成長ホルモン、エストロゲン、ビスホスホネート、スタチン、分化因子、およびその組合せからなる群から選択される、請求項３１に記載のキット。
【請求項３３】
前記少なくとも１種のレゾルビンが、Ｅ系レゾルビンの構成種、Ｄ系レゾルビンの構成種、およびその組合せからなる群から選択される、請求項３１に記載のキット。
【請求項３４】
前記少なくとも１種のレゾルビンが、Ｅ系レゾルビンのジヒドロキシ型の構成種、Ｄ系レゾルビンのジヒドロキシ型の構成種、Ｅ系レゾルビンのトリヒドロキシ型の構成種、Ｄ系レゾルビンのトリヒドロキシ型の構成種、およびその組合せからなる群から選択される、請求項３１に記載のキット。
【請求項３５】
前記少なくとも１種のレゾルビンがレゾルビンＥ１を含む、請求項３１に記載のキット。
【請求項３６】
前記骨病状が、歯周病、骨折、骨欠損、転移性骨疾患、変形性関節症、および溶骨性骨疾患からなる群から選択される、請求項３１に記載のキット。
【請求項３７】
歯周病が歯肉炎または歯周炎である、請求項３６に記載のキット。
【請求項３８】
前記少なくとも１種のレゾルビンと、骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する前記治療剤とを脊椎動物対象に投与するための説明書をさらに含む、請求項３１に記載のキット。
【請求項３９】
前記脊椎動物対象がヒト患者である、請求項３８に記載のキット。
【請求項４０】
前記少なくとも１種のレゾルビンおよび骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する前記治療剤の投与が逐次的に実施される、請求項３８に記載のキット。
【請求項４１】
前記少なくとも１種のレゾルビンおよび骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する前記治療剤の投与が同時に実施される、請求項３８に記載のキット。
【請求項４２】
前記少なくとも１種のレゾルビンおよび骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する前記治療剤の投与が局所投与を含む、請求項３８に記載のキット。
【請求項４３】
前記少なくとも１種のレゾルビンおよび骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する前記治療剤の投与が前記対象の口腔への局所的投与を含む、請求項４２に記載のキット。
【請求項４４】
前記少なくとも１種のレゾルビンおよび骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する前記治療剤の投与が経腸投与を含む、請求項４２に記載のキット。
【請求項４５】
前記少なくとも１種のレゾルビンおよび骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する前記治療剤の投与が経口投与を含む、請求項４４に記載のキット。
【請求項４６】
前記少なくとも１種のレゾルビンおよび骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する前記治療剤の投与が、骨劣化の防止、骨分解の防止、骨変性の防止、骨量低下の防止、骨密度低下の防止、骨劣化の安定化、骨分解の安定化、骨変性の安定化、骨量低下の安定化、骨密度低下の安定化、骨劣化の軽減、骨分解の軽減、骨変性の軽減、骨量低下の軽減、骨密度低下の軽減、骨量の増加、骨密度の増加、およびその組合せのうち、１つ以上の結果をもたらす、請求項４２に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願
本出願は、仮特許出願第６０／７３８，３２３８号（２００５年１１月１８日出願、発明の名称「Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ａｎｄ  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｂｏｎｅ  Ｌｏｓｓ  Ｕｓｉｎｇ  Ｒｅｓｏｌｖｉｎｓ」）に対する優先権を主張する。この仮特許出願は、本明細書中でその全体が参考として援用される。
【０００２】
政府の支援
本明細書に記載の研究は、国立衛生研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ）により資金助成を受けた（助成金番号ＤＥ１６１９１号）。米国政府は、本発明における一定の権利を有しうる。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
歯肉炎からより重症の歯周炎に至るまで、歯周病は常に重要な健康問題であり、米国および全世界のいずれにおいても成人の歯牙喪失の主要原因である（Ｅ．Ｒｅｉｃｈ  ａｎｄ  Ｋ．Ｈｉｌｌｅｒ、Ｃｏｍｍ．Ｄｅｎｔ．Ｏｒａｌ  Ｅｐｉｄｅｍ．、１９９３年、２１巻、３７９頁；Ｊ．Ａｎｇｅｌｉｌｌｏら、Ｃｏｍｍ．Ｄｅｎｔ．Ｏｒａｌ  Ｅｐｉｄｅｍ．、１９９６年、２４巻、３３６頁；Ｈ．Ｍｕｒｒａｙら、Ｉｎｔ．Ｄｅｎｔ．Ｊ．、１９９７年、４７巻、３〜８頁；Ｒ．Ｃ  Ｏｌｉｖｅｒら、Ｊ．Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ．、１９９８年、６９巻、２６９〜２７８頁；Ｇ．Ｏｎｇ、Ｉｎｔ．Ｄｅｎｔａｌ  Ｊ．、１９９８年、４８巻、２３３〜２３８頁；Ｉ．Ｈａｄｄａｄら、Ｄｅｎｔａｌ  Ｊ．、１９９９年、４９巻、３４３〜３４６頁；Ｅ．Ｆ．Ｃｏｒｂｅｔら、Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌｏｇｙ、２０００年、２９巻、１２２〜１５２頁；Ａ．Ｓｈｅｉｈａｍら、Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌｏｇｙ、２０００年、２９巻、１０４〜１２１頁；Ｉ．Ｃｈｅｓｔｎｕｔｔら、Ｊ．Ｄｅｎｔｉｓｔ．、２０００年、２８巻、２９５〜２９７頁；Ｕ．Ｍ．Ｉｒｆａｎら、Ｊ．Ｉｎｔ．Ａｃａｄ．Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ．、２００１年、３巻、１４〜２１頁）。米国人口の１５〜３５％、患者数に換算して数千万人が様々な種類の歯周病に罹患しており（Ｊ．Ｍ．Ａｌｂａｎｄａｒら、Ｊ．Ｐｅｒｉｄｏｎｔｏｌ．、１９９９年、７０巻、１３〜２９頁）、年間の費用は数十億ドルと推定されている。さらに、歯周病は口腔の組織および構造的完全性に悪影響があるという以上の意味をもち、心血管系疾患、妊娠合併症および糖尿病を含むいくつかの全身性病状の罹患および死亡の増加に対する潜在的なリスク因子を代表している（Ｒ．Ｃ．Ｐａｇｅら、Ａｎｎ．Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ．、１９９８年、３巻、１０８〜１２０頁；Ｒ．Ｉ．Ｇａｒｃｉａら、Ａｎｎ．Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ．、１９９８年、３巻、３３９〜３４９頁）。
【０００４】
歯周炎は、臨床的付着および歯槽骨の喪失につながる恐れのある歯垢の存在により炎症過程が刺激される感染性の疾患である。最も一般的な型の歯周病は成人において観察され、慢性的な進行を示す（Ｉ．Ｂｒｏｏｋ、Ｇｅｎ．Ｄｅｎｔ．、２００３年、５１巻、４２４〜４２８頁）。歯周病の進行は、宿主反応が慢性的に持続することによる。口腔中に存在する数百もの細菌種のうち少数のみが歯周病の病因に関与している（Ｓ．Ｓ．Ｓｏｃｒａｎｓｋｙ  ａｎｄ  Ａ．Ｄ．Ｈａｆｆａｊｅｅ、Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ．、２００２年、２８巻、１２〜５５頁）。バイオフィルムにはポルフィロモナスジンジバリス（Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）、バクテロイデスフォルシサス（Ｂａｃｔｅｒｏｉｄｅｓ  ｆｏｒｓｙｔｈｕｓ）およびトレポネマデンティコラ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｄｅｎｔｉｃｏｌａ）などの細菌が含まれていることがあり、こうした細菌の存在は、歯周病の臨床的特徴、特にポケットの深度およびプロービング時の出血に顕著に関連している（Ｓ．Ｓ．Ｓｏｃｒａｎｓｋｙら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔｏｌ．、１９９８年、２５巻、１３４〜１４４頁）。これらの病原生物の数種は、歯周組織、象牙細管ならびに口腔のその他の領域に侵入しうる。従来の歯周療法は、歯牙構造から付着物を機械的に削り落とすため、歯肉の隙間の中に入れた歯科用器具の使用により、細菌の硬軟の付着物を歯根面から機械的に除去することに力を入れてきた。しかしながら、これらの付着物の除去において、スケーリングおよび根面平滑化は部分的な効果しかもたないことが多い。そのうえ、容易に手の届く領域の場合でも除去されるのは一時的で、細菌は歯根面に再定着する。
【０００５】
病原性の細菌が歯周領域中で繁殖を開始すると、これらの細菌は、炎症反応を誘発し慢性感染を引き起こす恐れのある毒性および病原性の産生物を歯肉縁下に放出する。細菌毒が歯槽骨を溶かすにつれ、歯肉および骨はともに後退し歯根を露出させることがある。その他の例では、骨が後退したとしても歯肉は腫れた状態で残り、失われた骨に取って代わった残骸であるポケットの周囲に壁を形成する。いずれの状況でも、歯根は空気または刺激性の細菌毒のどちらかに曝露することになり、そのいずれも自発痛、あるいは、冷たいもしくは熱い食品、または甘味もしくは酸味のある食品に対する歯牙の過敏症状を引き起こす可能性がある。骨喪失により引き起こされる損傷は通常永久的だが、早期の歯周炎は家庭での正しい口腔衛生で進行を止めることが可能であり、歯牙喪失のリスクは非常に低い。骨喪失が進行するにつれ、歯牙を清潔に保つためにより積極的な処置を行う必要がある。骨喪失が続き歯牙の支えが損なわれると、歯牙は動揺するようになり最終的には喪失するか抜歯が必要となる。
【０００６】
現行の歯周病処置は、抗菌性の化合物または多様な非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）を含有する組成物の使用を主に含む。歯周療法では全身性の抗生物質が使用されてきた（非特許文献１）。しかし、一般に全身送達（例えば、経口または筋肉内）では、長期間にわたって十分な濃度の抗生物質が歯肉の隙間の領域に供給されない。歯周病の進行症例では、歯周ポケットを除去し骨を再構築するための外科的介入が行われることがある。外傷性咬合を解消するために動揺歯の固定および歯牙表面の選択的再形成が必要な場合もある。
【非特許文献１】Ｒ．Ｊ．Ｇｅｎｃｏ、Ｊ．Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ．、１９８１年、５２巻、５４５〜５５８頁
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
これら公知の処置にもかかわらず、歯周病の防止および処置についての新規の改良法がいまだに必要とされている。特に、歯周炎に関連した骨喪失を防止および処置する方法が強く望まれている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
（発明の要旨）
本発明は、骨喪失を伴う骨病状の非侵襲的処置のための新しいシステムおよび戦略に関する。本発明の一態様は、ウサギモデルにおいてＰ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓにより誘発された歯周炎における骨喪失をレゾルビンＥ１の局所投与が予想外に防止するという知見を包括している。特に、本出願人は、レゾルビン処置したウサギには対照群のウサギより明らかに健康的な軟組織が見られることを示した。さらに、レゾルビン処置群における軟組織のポケット深度、硬組織の歯槽頂間距離、硬組織の骨縁下ポケット深度および歯牙動揺度の測定値は対照群の値より低いことが観察され、レゾルビンＥ１が骨の沈着、すなわち骨成長を促進していることを示唆していた。
【０００９】
したがって本明細書においては、ヒトおよび動物を含む脊椎動物対象における骨成長を誘導もしくは促進する、および／または骨吸収を軽減もしくは防止するための方法および組成物を提供する。
【００１０】
より具体的には一態様では、本発明は、少なくとも１種の有効量のレゾルビンを対象に投与するステップを含む、脊椎動物対象における骨病状を処置する方法を提供する。特定の実施形態では、骨病状は骨喪失を伴う。骨病状は、歯周病（例えば、歯肉炎または歯周炎）、骨折、骨欠損、転移性骨疾患、変形性関節症、および溶骨性骨疾患からなる群から選択しうる。
【００１１】
特定の実施形態では、この方法は、骨劣化の防止、骨分解の防止、骨変性の防止、骨量低下の防止、骨密度低下の防止、骨劣化の安定化、骨分解の安定化、骨変性の安定化、骨量低下の安定化、骨密度低下の安定化、骨劣化の軽減、骨分解の軽減、骨変性の軽減、骨量低下の軽減、骨密度低下の軽減、骨量の増加、骨密度の増加、およびその組合せのうち、１つ以上の結果をもたらす。
【００１２】
特定の実施形態では、レゾルビンは局所的に、例えば、対象の口腔に投与される。別の実施形態では、レゾルビンは経腸的に、例えば、経口的に投与される。
【００１３】
本発明に従って投与されるレゾルビンは、Ｅ系レゾルビンの構成種、Ｄ系レゾルビンの構成種、およびその組合せからなる群から選択しうる。例えば、レゾルビンは、Ｅ系レゾルビンのジヒドロキシ型の構成種、Ｄ系レゾルビンのジヒドロキシ型の構成種、Ｅ系レゾルビンのトリヒドロキシ型の構成種、Ｄ系レゾルビンのトリヒドロキシ型の構成種、およびその組合せからなる群から選択しうる。特定の実施形態では、投与されるレゾルビンは、レゾルビンＥ１を含む。
【００１４】
特定の実施形態では、本方法は、骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する有効量の治療剤を対象に投与するステップをさらに含む。レゾルビンを投与するステップと、骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する治療剤を投与するステップとは、逐次的または同時に実施しうる。
【００１５】
特定の実施形態では、骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する治療剤は、骨形成因子、骨吸収抑制剤、造骨因子、軟骨由来の形態形成タンパク質、成長ホルモン、エストロゲン、ビスホスホネート、スタチン、分化因子、およびその組合せからなる群から選択される。
【００１６】
別の一態様では、本発明は、少なくとも１種のレゾルビン、骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する少なくとも１種の治療剤、および医薬として許容可能な少なくとも１種の担体または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００１７】
本発明の医薬組成物中に存在するレゾルビンは、Ｅ系レゾルビンの構成種、Ｄ系レゾルビンの構成種、およびその組合せからなる群から選択しうる。例えば、レゾルビンは、Ｅ系レゾルビンのジヒドロキシ型の構成種、Ｄ系レゾルビンのジヒドロキシ型の構成種、Ｅ系レゾルビンのトリヒドロキシ型の構成種、Ｄ系レゾルビンのトリヒドロキシ型の構成種、およびその組合せからなる群から選択しうる。特定の実施形態では、本発明の医薬組成物中に存在するレゾルビンは、レゾルビンＥ１を含む。
【００１８】
特定の実施形態では、本発明の医薬組成物中に存在する、骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する治療剤は、骨形成因子、骨吸収抑制剤、造骨因子、軟骨由来の形態形成タンパク質、成長ホルモン、エストロゲン、ビスホスホネート、スタチン、分化因子、およびその組合せからなる群から選択しうる。
【００１９】
本発明の医薬組成物は、経腸的に、例えば経口的に、または局所的に投与されるように処方しうる。特定の実施形態では、医薬組成物は、骨喪失を伴う骨病状、例えば、歯周病（例えば、歯肉炎または歯周炎）、骨折、骨欠損、転移性骨疾患、変形性関節症、および溶骨性骨疾患に罹りやすいか、または罹っている対象に、局所的に投与されるように処方される。例えば、医薬組成物は、対象の口腔に投与されるように、例えば、溶液剤、懸濁剤、分散剤、軟膏、クリーム、ゲル剤、練り歯磨き剤、歯磨き粉、口中錠、膏薬、チューイングガム、エアロゾル剤、口中スプレー、トローチ、サシェ剤、洗口剤、爪楊枝、錠剤、カプセル、またはデンタルフロスとして処方しうる。
【００２０】
特定の実施形態では、医薬組成物は、鎮痛剤、麻酔剤、抗菌剤、抗細菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗生物質、抗炎症剤、抗酸化剤、消毒剤、免疫刺激剤、およびその組合せからなる群から選択される少なくとも１種の追加の治療剤をさらに含む。
【００２１】
本発明の医薬組成物の投与は、骨劣化の防止、骨分解の防止、骨変性の防止、骨量低下の防止、骨密度低下の防止、骨劣化の安定化、骨分解の安定化、骨変性の安定化、骨量低下の安定化、骨密度低下の安定化、骨劣化の軽減、骨分解の軽減、骨変性の軽減、骨量低下の軽減、骨密度低下の軽減、骨量の増加、骨密度の増加、およびその組合せのうち、１つ以上の結果をもたらす。
【００２２】
別の一態様では、本発明は、脊椎動物対象における骨喪失を伴う骨病状を処置するためのキットを提供し、本キットは少なくとも１種のレゾルビンと、骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する少なくとも１種の治療剤とを含む。このようなキットのレゾルビンおよび治療剤は、前述したような医薬組成物としうる。同様に、本キットを用いて処置することができる骨病状は前述のとおりである。
【００２３】
特定の実施形態では、本キットは、レゾルビンおよび骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する治療剤を、好ましくは本発明の方法に従って対象（ヒトまたは動物）に投与するための説明書をさらに含む。レゾルビンおよび治療剤の投与（例えば、局所または経腸投与）は、逐次的または同時に実施しうる。
【００２４】
骨喪失を伴う骨病状を処置するための本発明キットを使用すると、好ましくは、骨劣化の防止、骨分解の防止、骨変性の防止、骨量低下の防止、骨密度低下の防止、骨劣化の安定化、骨分解の安定化、骨変性の安定化、骨量低下の安定化、骨密度低下の安定化、骨劣化の軽減、骨分解の軽減、骨変性の軽減、骨量低下の軽減、骨密度低下の軽減、骨量の増加、骨密度の増加、およびその組合せのうち、１つ以上の結果が得られる。
【００２５】
これらをはじめとする本発明の目的、利点および特徴は、以下の詳細な説明を読んだ当業者には明らかとなるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
定義
本明細書を通じ、以下の数段落で定義するいくつかの用語が採用されている。
【００２７】
「個体」および「対象」という用語は、本明細書では互換的に使用される。これらの用語は、レゾルビンの投与が有益である病的状況または状態に罹患する可能性があるが、そのような病的状況または状態を有しても有していなくてもよい高等脊椎動物、好ましくはヒトまたは他の哺乳動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、サル、イヌ、ネコ、ブタ、ウシ、ウマなど）を指す。多くの実施形態では、対象は、骨病状、例えば骨喪失を伴う骨病状に罹患しているか、または罹患しやすい（すなわち、高いまたは高めの発症リスクを示す）。特定の実施形態では、対象はヒトである。この用語は特定の年齢を表してはおらず、そのため成人、小児、および新生児を包含している。
【００２８】
本明細書で使用する場合、「骨病状」という用語は、骨量および／または骨密度を増加、向上または促進する、ならびに／あるいは、骨量および／または骨密度の低下を防止、抑制または低減することが望ましい任意の病状を含む。「骨病状」という用語は、破骨細胞数を増加させ、破骨細胞の活性を高め、骨吸収を増加させ、骨髄の線維化を増加させ、または骨のカルシウム含有量を変化させるあらゆる病状を包含している。
【００２９】
本明細書で使用する場合、「骨喪失」という用語は、骨格量、カルシウムおよびリン酸など骨格の実質またはマトリックスまたは任意の成分が減少するか、あるいは、骨または歯牙が失われ、損傷され、または破壊耐性能力という点などで弱体化する任意の状況を指す。「骨喪失」という用語は、骨劣化、骨分解、骨変性、骨量低下、骨密度低下、およびこれらの病状の任意の組合せを特徴とするあらゆる状況をも包含している。
【００３０】
「歯周病」という用語は、歯牙を取り巻き支える歯周組織についてのすべての疾患を含む（例えば、Ｄ．Ｍ．Ｗｉｌｌｉａｍｓら、「Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｐｅｒｉｏｄｏｎｔａｌ  Ｄｉｓｅａｓｅ」、１９９２年、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓを参照）。このような組織には、歯肉、セメント質、歯周靭帯、歯槽突起骨、および歯牙支持骨が含まれる。具体的には、歯周病には歯肉炎および歯周炎が含まれる。歯肉炎は、炎症が歯肉内に限局しており歯牙と歯肉の間の骨には病変が生じない疾患である、歯周炎は、歯肉炎症が歯周靭帯および歯槽骨に至る疾患である。未処置のまま放置すると、歯周炎は歯牙喪失につながることがある。
【００３１】
「限局的な」および「局所的な」という用語は、化合物または組成物の送達、投与または塗布の特徴を表すために本明細書で使用される場合には、限局的な効果を得るために化合物または組成物を目的部位に直接（例えば、歯周病などの口腔障害に際し口腔中に）送達、投与または塗布することを明示することを意味する。特定の実施形態では、限局的または局所的な投与は、組成物の成分が対象の血流中にさほど吸収されることなく達成される。
【００３２】
本明細書で使用する場合、「有効量」という用語は、１つ以上の意図された目的を達成するために十分な分子、薬剤、因子または組成物の任意の量を指す（例えばその目的は、骨喪失、例えば歯周病に伴う骨喪失を処置または防止することとしうる）。
【００３３】
「処置」という用語は、本明細書では、（１）病的状況もしくは状態の発症を遅らせるか防止すること、（２）臨床的な病状の症状の進行、増悪もしくは悪化を減速させもしくは止めること、（３）病状の症状の改善をもたらすこと、および／または（４）病状を治癒すること、を目的とするプロセス／方法の特徴を表すために使用されている。処置は病状の発症前に予防的行為として施されてもよく、または、病状の発症後に治療的行為として施されてもよい。
【００３４】
本明細書で使用する場合、「生理学的に許容可能な塩またはプロドラッグ」という用語は、健全な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー反応などがなく患者の組織と接触させて使用するのに適し、合理的な便益／リスク比に見合い、また、それらの使用意図にとって有効な、塩またはプロドラッグを指す。
【００３５】
「塩」という用語は、それぞれ対応する遊離塩基または遊離酸の生物活性および特性を保持し、生物学的またはそれ以外の観点から望ましくないものでない任意の酸付加または塩基付加塩を指す。酸付加塩は、無機酸（例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸など）、および有機酸（例えば、酢酸、プロピオン酸、ピルビン酸、マレイン酸、マロン酸、コハク酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸など）で形成される。塩基付加塩は、無機塩基（例えば、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、亜鉛、アルミニウム塩など）および有機塩基（例えば、一級、二級、および三級アミン、天然に生じる置換アミンを含む置換アミン、環状アミンおよび、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリエチルアミン、トリプロピルアミン、エタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、２−ジエチルアミノエタノール、トリメタミン（ｔｒｉｍｅｔｈａｍｉｎｅ）、ジシクロヘキシルアミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、メチルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、Ｎ−エチルピペリジン、ポリアミン樹脂などの塩基性イオン交換樹脂の塩）で形成することができる。
【００３６】
「プロドラッグ」という用語は、ｉｎ  ｖｉｖｏ投与の際に、生物活性、医薬活性または治療活性型の化合物に代謝され、またはその他の方式で変換される化合物を指す。プロドラッグは、化合物の代謝安定性もしくは輸送特性を変化させ、副作用もしくは毒性を遮蔽し、化合物の風味を向上させるように、および／または化合物のその他の特徴もしくは特性を変化させるように設計しうる。薬力学的過程およびｉｎ  ｖｉｖｏでの薬物代謝の知識により、医薬活性化合物が一旦同定されれば、通常の場合、医薬技術分野の当業者は当該化合物のプロドラッグを設計することができる（Ｎｏｇｒａｄｙ、「Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ａ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ」、１９８５年、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ：Ｎ．Ｙ．、３８８〜３９２頁）。適切なプロドラッグの選択および調製の手法も、当技術分野では公知である。本発明における場合、プロドラッグは、好ましくはｉｎ  ｖｉｖｏ投与の際にレゾルビンに代謝されまたはその他の方式で変換される化合物である。
【００３７】
本明細書で使用する場合、「医薬として許容可能な担体または賦形剤」という用語は、活性成分の生物活性の有効性を阻害せず、また、投与される濃度で宿主にとって毒性が強すぎない担体媒体または賦形剤を指す。この用語には、溶媒、分散媒、コーティング、抗細菌剤および抗真菌剤、等張剤、吸収遅延剤などが含まれる。このような媒体および薬剤を医薬活性物質のために使用することは、当技術分野では周知である（例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｅ．Ｗ．Ｍａｒｔｉｎ、第１８編、１９９０年、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．：Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡを参照、当文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【００３８】
本明細書で使用する場合、「骨誘導性の」という用語は、前駆細胞、特に間葉系幹細胞からの骨芽細胞の産生を誘導する化合物、組成物、プロセスまたは材料の能力を指す。骨誘導性の化合物、組成物、プロセスまたは材料は、直接作用しうる（例えば、前駆細胞と相互作用して骨芽細胞の分化を誘導する成長因子など）か、または骨誘導性の成長因子の産生を誘導することにより、間接的に作用しうる。
【００３９】
本明細書で使用する場合、「骨伝導性の」という用語は、造骨細胞の内部成長および配向のための環境を周辺組織から提供する化合物、組成物、プロセスまたは材料の能力を指す。
【００４０】
本明細書で使用する場合、「造骨性の」という用語は、骨形成の原因となる（例えば、開始、促進、助長、加速、強化、刺激する）化合物、組成物、プロセスまたは材料の能力を指す。
【００４１】
（特定の好ましい実施形態の詳細な説明）
上述のように、本発明は、脊椎動物対象（ヒトまたは動物）における骨喪失を防止する、および／または骨成長を増進するための方法および組成物を提供する。本発明の方法は全般に、少なくとも１種のレゾルビンの投与を含む。非外科的、非侵襲的および安全な本発明の方法は、骨分解、骨劣化もしくは骨変性を伴う病的状況または状態の処置および／または防止のために使用することができ、そのような病的状況または状態には歯周病、変形性関節症、転移性骨疾患、および溶骨性骨疾患が含まれるが、限定しない。
【００４２】
Ｉ−レゾルビン
本発明の方法は、少なくとも１種のレゾルビンの投与を含む。本明細書で使用する場合、「レゾルビン」という用語は、レゾルビン、レゾルビンの誘導体およびアナログ、ならびに生理学的に許容可能なそれらの塩およびプロドラッグを包含している。特定の実施形態では、単一のレゾルビンが対象に投与される。別の実施形態では、２種以上のレゾルビンが対象に投与される。このような実施形態では、レゾルビンの投与は、同時（すなわち、本質的に同時に投与、例えば、レゾルビンの混合物の形で）または逐次的（すなわち、異なるレゾルビンを異なる時に投与）としてよい。
【００４３】
レゾルビンは、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）またはドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）などの食事性のω−３多価不飽和脂肪酸（ＰＵＦＡ）、シクロオキシゲナーゼ−ＩＩ（ＣＯＸ−２）、およびアスピリンＡＳＡなどの鎮痛剤の間での相互作用により生成する化合物である。ＣＯＸ−２が発現しているｉｎ  ｖｉｖｏのマウスおよびｉｎ  ｖｉｔｒｏのヒト組織をＡＳＡ処理すると、これまでに記録されていない前炎症反応（すなわち、サイトカイン産生、腹膜炎）を経由して新規の１７Ｒ−ヒドロキシ系ドコサノイドの産生を開始することが最近示された。ストレス下ではこれらの細胞経路は、ω−３脂肪酸を利用して、抗炎症シグナル伝達の働きをする内因性化合物を生合成する。ω−３脂肪酸から誘導されるこのような新しいジヒドロキシおよびトリヒドロキシ含有化合物は「レゾルビン」と名づけられたが、その理由は、これらの化合物が、（ａ）少なくとも部分的に、急性炎症反応の回復期（ｒｅｓｏｌｕｔｉｏｎ  ｐｈａｓｅ）中に細胞−細胞間の相互作用の産物として形成され、（ｂ）炎症部位への好中球の滲出を「停止」させ、また、（ｃ）滲出液を減少させる、ことによる（Ｃ．Ｎ．Ｓｅｒｈａｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、２００２年、１９６巻、１０２５〜１０３７頁）。
【００４４】
エイコサペンタエン酸から誘導される化合物は、その前駆物質であるＥＰＡを意味するＥ系に属するものとして名づけられ、Ｅ系レゾルビン（例えば、レゾルビンＥ１またはＲｖＥ１）と呼ばれる。ドコサヘキサエン酸から誘導される化合物は、Ｄ系レゾルビン（例えば、レゾルビンＤ１またはＲｖＤ１）と呼ばれる。
【００４５】
本発明の方法における使用に適したレゾルビンは、レゾルビンとして知られる化合物群の任意の構成種であってよく、例えば、米国特許第６９４９６６４号；米国特許出願第２００５／０２３８５８９号、同第２００５／０２２８０４７号、同第２００５／００７５３９８号、同第２００４／０１１６４０８号、および同第２００３／０１９１１８４号；国際公開第２００５／０８９７４４号、同第２００５／０１３９０８号、同第２００４／０１４８３５号、同第２００３／０８４３０５号、および同第２００３／０５３４２３号；ならびに欧州特許出願第１５３７０６７号などに記載がある（各文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。その他の適切なレゾルビンには、例えば、Ｃ．Ｎ．Ｓｅｒｈａｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、２００２年、１９６巻、１０２５〜１０３７頁；Ｓ．Ｈｏｎｇら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２００３年、２７８巻、１４６７７〜１４６８７頁；Ｖ．Ｌ．Ｍａｒｃｈｅｓｅｌｌｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２００３年、２７８巻、４３８０７〜４３８１７頁；Ｃ．Ｎ．Ｓｅｒｈａｎ  ａｎｄ  Ｎ．Ｃｈｉａｎｇ、Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．、２００４年、３０巻、６９〜９５頁；Ｃ．Ｎ．Ｓｅｒｈａｎら、Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ  Ｏｔｈｅｒ  Ｌｉｐｉｄ  Ｍｅｄｉａｔ．、２００４年、７３巻、１５５〜１７２頁；Ｃ．Ｎ．Ｓｅｒｈａｎら、Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．、２００４年、１２２巻、３０５〜３２１頁；Ｃ．Ｎ．Ｓｅｒｈａｎら、Ｌｉｐｉｄ、２００４年、３９巻、１１２５〜１１３２頁；Ｃ．Ｎ．Ｓｅｒｈａｎ、Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｈｅｒ．、２００５年、１０５巻、７〜２１頁；Ｃ．Ｎ．Ｓｅｒｈａｎ．、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．Ｍｅｔａｂ．Ｃａｒｅ、２００５年、８巻、１１５〜１２１頁；Ｇ．Ｌ．Ｂａｎｎｅｎｂｅｒｇら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００５年、１７４巻、４３４５〜４３５５頁；Ｕ．Ｎ．Ｄａｓ、Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．Ｍｏｎｉｔ．、２００５年、１１巻、ＲＡ２３３〜２３７頁；およびＵ．Ｎ．Ｄａｓ、Ｊ．Ａｓｓｏｃ．Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ  Ｉｎｄｉａ、２００５年、５３巻、６２３〜５２７頁（各文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）などに記載のレゾルビンが含まれる。
【００４６】
特定の実施形態では、骨成長を増進もしくは促進する、および／または骨喪失を防止もしくは軽減するために、レゾルビンＥ１が使用される。レゾルビンＥ１は、アスピリン修飾されたＣＯＸ−２によりω−３多価不飽和脂肪酸からｉｎ  ｖｉｖｏで生成される、一連の天然の生物活性脂質に属している（Ｃ．Ｎ．Ｓｅｒｈａｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、２０００年、１９２巻、１１９７頁；Ｃ．Ｎ．Ｓｅｒｈａｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、２００２年、１９６巻、１０２５頁）。以下の「実施例」の項では、レゾルビンＥ１を使った実験を記載してある。
【００４７】
本発明の方法および組成物中で使用されるレゾルビンは、ｉｎ  ｖｉｖｏまたはｉｎ  ｖｉｔｒｏで調製した後、当技術分野で公知の技術により実質的に精製および単離してもよい（例えば、米国特許第６６７０３９６号を参照、当文献は参照によりその全体が本明細書に組み込まれる）。限定はしないが、この化合物の純度は一般に少なくとも約９０％、好ましくは少なくとも約９５％、および最も好ましくは少なくとも約９９％である。本発明の方法において使用される特定のレゾルビンは、１種または複数種の精製化合物を化学的に修飾することにより調製してもよい。例えば、精製化合物を化学的に修飾し、医薬として許容可能な塩またはプロドラッグとしてもよい。追加または代替的に、当該分子のヒドロキシ、チオールまたはアミノ基１個または複数を、当技術分野で周知の方法を用いて保護してもよい。レゾルビンは、従来の合成法を用いて独立に製造することもできる。
【００４８】
ＩＩ−骨成長増進および／または骨喪失防止の方法
本発明の方法は、骨の喪失／吸収を防止、抑制、または軽減するために使用しうる。代替または追加的に、本発明の方法は、骨成長を増大、増進、向上または促進するために使用しうる。例えば、本発明の特定の方法は、骨分解、骨変性、および／もしくは骨劣化を処置、防止もしくは遅延させるため；骨量および／もしくは骨密度を増加もしくは維持／安定化するため；ならびに／または骨喪失、骨分解、骨変性および／もしくは骨劣化を回復させるため、に使用しうる。
【００４９】
本発明の方法では、レゾルビンは骨喪失を伴う病態生理学的な状態の発症前に予防的行為として投与してもよく、またはその状態の発症後に治療的行為として投与してもよい。
【００５０】
一般に、本発明の方法を用いて処置することができる脊椎動物対象（ヒトまたはその他の哺乳動物）は、骨喪失を伴う疾患もしくは病状に罹患するか、または骨喪失を伴う疾患もしくは病状に罹患しやすい（例えば、そのような疾患もしくは病状発症について高いもしくは高めのリスクを示しているか、または、骨喪失を引き起こし、結果として生じ、もしくは伴うことが知られている病的状況もしくは状態と診断されたことがある）。
【００５１】
本発明の方法を使用して処置および／または防止しうる、骨喪失を伴う病的状況および状態には、骨分解、骨劣化または骨変性を特徴とし、併発し、伴い、結果として生じ、または誘発する、例えば、骨量の低下および／または骨密度の低下につながる任意の病状が含まれる。このような病状の例としては、歯周炎などの歯周病、骨折または骨欠損、変形性関節症、転移性骨疾患、および溶骨性骨疾患が挙げられるが、限定しない。このような病状の他の例を限定せずに挙げると、癌および腫瘍（骨肉種および多発性骨髄腫など）、腎疾患（急性腎不全、慢性腎不全、腎性骨ジストロフィーおよび腎再灌流傷害を含む）、腎臓病、および早発卵巣機能不全がある。したがって、本発明の方法は、骨喪失の防止、骨欠損部の充填、骨折部、移植片、および人工骨の速やかな融合への刺激、ならびに骨粗鬆症の骨の強化促進のために使用しうる。
【００５２】
本発明の特定の方法では、レゾルビンは、骨吸収を抑制する治療剤または骨成長を促進する治療剤の少なくとも１種と併用投与される。例えば、このような薬剤は、骨形成因子、骨吸収抑制剤、造骨因子、軟骨由来の形態形成タンパク質、成長ホルモン、エストロゲン、ビホスホネート、スタチン、分化因子、またはその組合せとすることができる。
【００５３】
本発明の一部の方法では、レゾルビンは、１種または複数種の追加の治療剤と併用投与される。追加の治療剤の例としては、鎮痛剤、麻酔剤、抗菌剤、抗細菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗生物質、抗炎症剤、抗酸化剤、消毒剤、免疫刺激剤、およびその組合せが挙げられるが、限定しない。例えば、そのような薬剤は、抗菌性の化合物および／または非ステロイド系抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）とすることができる。特定の実施形態では、追加の１種または複数種の治療剤は、選択的なＣＯＸ−２阻害剤、例えば、セレコキシブ、ロフェコキシブ、および／またはバルデコキシブなどのＣＯＸ−２阻害剤である。このような実施形態では、レゾルビンおよびその他の薬剤を逐次または併用／同時投与することができる。
【００５４】
代替または追加的に、レゾルビンは、医療手技と組み合わせて（すなわち、手技の前、同時、および／または後に）投与することもできる。例えば、この医療手技は、歯周ポケットを除去するため、および／もしくは骨を再構築するための外科的介入、または歯周病に罹患している対象における歯牙表面の選択的再形成であってよい。あるいは、この医療手技は骨移植、外科的な腫瘍摘出などでもよい。
【００５５】
ＩＩＩ−レゾルビン組成物
別の一態様では、本発明は、少なくとも１種のレゾルビン、少なくとも１種の治療剤、および医薬として許容可能な少なくとも１種の担体または賦形剤を含む医薬組成物を提供する。特定の実施形態では、治療剤は、骨喪失を制限する能力、および／または骨成長を促進する、または増進する能力という観点で選択される。代替または追加的に、治療剤は、レゾルビンの作用を増加、刺激、激化、助長または加速する能力という観点で選択される。代替または追加的に、本治療剤の存在により、組成物には少なくとも１つの追加の治療特性／活性（例えば、抗炎症、抗菌および／または鎮痛活性）が賦与される。特定の実施形態では、そのような追加の治療活性は、骨の健康にとって、および／または骨を取り巻く組織の健康にとって、有益である。
【００５６】
本発明の組成物中で使用できる治療剤の例としては、骨形成因子、骨吸収抑制剤、造骨因子、軟骨由来の形態形成タンパク質、成長ホルモン、エストロゲン、ビホスホネート、スタチン、分化因子、およびその組合せが挙げられるが、限定しない。本発明の組成物中での使用に適した治療剤のその他の例としては、鎮痛剤、麻酔剤、抗菌剤、抗細菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗生物質、抗炎症剤、抗酸化剤、消毒剤、免疫刺激剤、およびその組合せが挙げられるが、限定しない。
【００５７】
当業者には理解されるだろうが、治療剤は合成化合物でも天然由来の化合物でもよく、単一分子でも、異なる分子の複合体でも、または異なる分子の混合物／組成物でもよい。
【００５８】
骨成長刺激または骨喪失防止のための治療剤
特定の実施形態では、本発明の医薬組成物は、骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する治療剤を含む。本明細書で使用する場合、「骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する治療剤」という用語は、分解、変性、劣化、骨量低下および／または骨密度低下をきたしている骨または骨組織における有益／治療的な効果を直接または間接的に有する任意の化合物、薬剤、因子または組成物を指す。特定の実施形態では、この治療剤は、骨の形成／成長を促進（すなわち、開始、助長、加速、強化、増加、刺激など）する。別の実施形態では、治療剤は、骨喪失／吸収を抑制（すなわち、防止、低下、最小化、制限、遅延、維持、安定化など）する。さらに別の実施形態では、治療剤は、骨形成を促進し、骨吸収を抑制する。
【００５９】
例えば、治療剤は、体内に自然に存在する生体分子、および／または骨の成長／形成が行われている部位で自然に分泌し骨形成過程の１つ以上の段階において役割を果たす生体分子でもよい。当業者には自明であろうが、これらの生体分子の変異体、合成アナログ、誘導体、および活性部分は、それらが本来の生体分子と実質的に同種の特性／活性を示す限りは、本発明の組成物中で代替的に使用することができる。そのような変異体、合成アナログ、誘導体または活性部分は、「治療用生体分子」という用語の範囲内にあることを意図している。
【００６０】
治療用生体分子は、哺乳動物の組織から抽出し、未精製または精製後のいずれかの状態で本発明において使用しうる。あるいは、本生体分子は、合成遺伝子または部位特異的な変異誘発性により変異させた遺伝子の発現などを経て、化学的に、または従来の遺伝子工学技術により、調製してもよい。
【００６１】
骨量または骨密度を増加させる治療剤には、成長因子（ＩＧＦ−１、ＩＧＦ−２、マクロファージ成長因子、血小板由来成長因子（ＰＦＧＤ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）、トランスフォーミング成長因子（ＴＧＦ）など）、軟骨由来の形態形成タンパク質（ＣＤＭＰ−１、ＣＤＭＰ−２、ＣＤＭＰ−３）および結合組織活性化ペプチド（ＣＴＡＰ）、ミネラル（カルシウム、アルミニウム、ストロンチウムおよびフッ化物など）、ビタミン（ビタミンＤ３など）、ホルモン（副甲状腺ホルモン（ＰＴＨ）、および副甲状腺ホルモン関連タンパク質（ＰＴＨｒＰ）など）、プロスタグランジン（ＰＤＧ１、ＰＤＧ２、ＰＧＥ２、ＰＧＥ１およびＰＧＦ２など）、１５−リポキシゲナーゼ阻害剤、デキサメタゾン、スタチン、ならびに骨形成タンパク質（ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−４およびＢＭＰ−７など）が挙げられるが、限定しない。
【００６２】
特定の実施形態では、治療剤はトランスフォーミング成長因子−β（ＴＧＦ−β）である。ＴＧＦ−βは、広範囲の生物学的過程に関係している細胞外ポリペプチドであり（Ｊ．Ｍａｓｓａｇｕｅ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、１９９０年、６巻、５９７〜６４１頁）、胚形成中、成人の組織修復中、および免疫抑制中の主要な事象において中心的な役割を果たす（Ｍ．Ｂ．Ｓｐｏｒｎ  ａｎｄ  Ａ．Ｂ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、１９９２年、１１９巻、１０１７〜１０２１頁；Ｓ．Ｗ．Ｗａｈｌ、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９２年、１２巻、６１〜７４頁；Ｄ．Ｍ．Ｋｉｎｇｓｌｅｙ、Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．、１９９４年、８巻、１３３〜１４６頁）。ＴＧＦ−βは、骨芽細胞の増殖および分化を誘発することが知られている（Ｍ．Ｃｅｎｔｒｅｌｌａら、Ｊ．Ｂｏｎｅ  Ｊｏｉｎ．Ｓｕｒｇ．、１９９１年、７３巻、１４１８〜１４２８頁；Ｔ．Ａ．Ｍｕｓｔｏｅら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９８７年、２３７巻、１３３３〜１３３６頁；Ｌ．Ｓ．Ｂｅｃｋら、Ｊ．Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．、１９９１年、６巻、９６１〜９６８頁）。ＴＧＦ−βは、骨形成の初期段階で重要な役割を果たすことも知られている（Ｓ．Ｄｉｅｕｄｏｎｎｅら、Ｊ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１９９９年、７６巻、２３１〜２４３頁）。本発明の組成物中で使用されるＴＧＦ−βは、組換え細胞の培養物から作製してもよい。あるいはＴＧＦ−βは、適切な任意の方法を用いて、血小板またはその他任意の哺乳動物の組織から誘導してもよい。好ましくは、ＴＧＦ−βはヒトの組織から誘導する。しかし、ＴＧＦ−βは種特異的ではないため、代替的に、ブタの骨などの動物源から誘導してもよい。特定の場合、ＴＧＦ−βは、好ましくは、連続的なゲル濾過、陽イオン交換クロマトグラフィー、または高速液体クロマトグラフィーなどを用いて本質的に均質に精製される。
【００６３】
別の実施形態では、治療剤は、骨形成タンパク質（ＢＭＰ）である。ＢＭＰは骨を形成するタンパク質であり、多能性の細胞を刺激して軟骨細胞および骨形成細胞に分化させ、また、骨再生において重要な役割を果たすことが報告されている、（Ｍ．Ｒ．Ｕｒｉｓｔ、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９６５年、１５０巻、８９３〜８９９頁；Ｍ．Ｒ．ＵｒｉｓｔおよびＢ．Ｓ．Ｓｔｒａｔｅｓ、Ｊ．Ｄｅｎｔ．Ｒｅｓ．、１９７１年、５０巻、１３９２〜１４０６頁；Ｊ．Ｍ．Ｗｏｚｎｅｙ、Ｍｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｄｅｖ．、１９９２年、３２巻、１６０〜１６７頁；Ｊ．Ｍ．Ｗｏｚｎｅｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９８８年、２４２巻、１５２８〜１５３４頁；Ｉ．Ｏｎｏら、Ｃｒａｎｉｏｆａｃ．Ｓｕｒｇ．、１９９６年、７巻、４１８〜４２５頁）。本発明において使用しうるＢＭＰとしては、ＢＭＰ−１、ＢＭＰ−２α、ＢＭＰ−２β、ＢＭＰ−３β、ＭＰ−４、ＢＭＰ−５、ＢＭＰ−６、ＢＭＰ−７、ＢＭＰ−８β、ＢＭＰ−９、ＢＭＰ−１０、ＢＭＰ−１１、ＢＭＰ−１２、ＢＭＰ−１３、ＢＭＰ−１４、およびＢＭＰ−１５が挙げられるが、限定しない。
【００６４】
さらに別の実施形態では、本組成物は、組成物の塗布部位内および周辺で、溶解したカルシウム（Ｃａ２＋）およびリン酸（ＰＯ４−）の可溶性濃度を限局的に高めるカルシウム源およびリン酸源を含む。このカルシウム源およびリン酸源は、同一物質でもよく異なる物質でもよい。本発明における使用に適したカルシウム源としては、リン酸カルシウム塩（例えば、リン酸モノカルシウム、リン酸カルシウム二水和物（ダイカルとしても知られる）、およびピロリン酸カルシウム）またはクエン酸カルシウム塩など任意の酸性カルシウム塩が挙げられる。本発明における使用に適したリン酸源としては、リン酸カルシウム塩（例えば、酸性リン酸カルシウム塩）およびリン酸ナトリム塩などの任意のリン酸塩が挙げられる。酸性リン酸カルシウム塩の例としては、リン酸水素カルシウム二水和物、リン酸モノカルシウム、およびピロリン酸カルシウムが挙げられる。
【００６５】
さらに別の実施形態では、治療剤はスタチンである。「スタチン」および「ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤」という用語は、本明細書では互換的に使用され、３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリルコエンザイムＡ（ＨＭＧ−ＣｏＡ）還元酵素という酵素を阻害する化合物を指す。ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素は、細胞のコレステロール生合成に関与している主要な律速酵素である。スタチンは、骨芽細胞、すなわち新しい骨を作る細胞の産生を強化し、骨芽細胞の分化を強化する（Ｅ．Ｈａｒｒｉｓら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｄｉｆｆ．、１９９５年、３巻、１３７〜１４７頁；Ｇ．Ｍｕｎｄｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ、１９９９年、２８６巻、１９４６〜１９４９頁）。特に、スタチンは、ＢＭＰ産生を組織的にまたは骨折部位において促進することが示されている（米国特許第６０２２８８７号、同第６０８０７７９号、および同第６３７６４７６号）。本発明における使用に適したスタチンの例としては、ロバスタチン、プラバスタチン、ベロスタチン、シンバスタチン、フルバスタチン、セリバスタチン、メバスタチン、ダルバスタチン、フルインドスタチン、アトルバスタチン、そのプロドラッグ、またはその生理学的に許容可能な塩が挙げられるが、限定しない。
【００６６】
本発明において使用できる骨喪失／吸収を防止する薬剤としては、プロゲスチン、エストロゲン、エストロゲン／プロゲスチン合剤、エストロン、エストリオール、１７αまたは１７β−エチニルエストラジオール、ＳＢ２４２７８４、ポリホスホネート、およびビスホスホネートが挙げられるが、限定しない。市販されているビスホスホネートとしては、エチドロネート、クロドロネート、チルドロネート、アレンドロネート、パミドロネート、およびイバンドロネートが挙げられる。
【００６７】
鎮痛剤
本発明は、骨喪失の防止および／または骨形成の促進中の疼痛、圧痛または不快感を防止または緩和するために使用できる組成物を提供する。本発明で使用するための鎮痛剤としては、一時的な鎮痛、麻酔、麻痺、弛緩、および／または鎮静効果を有する化合物、分子または薬剤が挙げられるが、限定しない。特定の実施形態では、これらの化合物、分子または薬剤は、局所的に塗布した際に鎮痛効果を有する。
【００６８】
本発明での使用に適した鎮痛剤としては、非ステロイド系の抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）が挙げられる。ＮＳＡＩＤは、鎮痛、解熱および抗炎症活性を有する。この薬剤は末梢性に作用し、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）阻害を通じてプロスタグランジンの合成を妨げることにより鎮痛効果をもたらす。アスピリンおよびその他のサリチル酸を含め、ＮＳＡＩＤには多くの異なる種類がある。その例としては、イブプロフェン、ナプロキセン、スリンダク、ジクロフェナク、ピロキシカム、ケトプロフェン、ジフルニサル、ナブメトン、エトドラク、オキサプロジン、およびインドメタシンが挙げられるが、限定しない。より強力なＮＳＡＩＤのいくつかは、身体の有痛部位への限局的な塗布のための局所用製品に開発されてきた。
【００６９】
キシロカイン、リドカインもしくはベンゾカイン（または以下に記載の物質などその他の薬剤）などの麻酔剤は、鎮痛剤が十分に効果を発揮するまでの間、即効性ではあるが短期間の鎮痛をもたらすために、本発明の鎮痛剤組成物に添加しうる。本発明の実施における使用に適した麻酔剤としては、ナトリウムチャネル遮断剤が挙げられる。ナトリウムチャネル遮断剤は、ナトリウムイオン、すなわちＮａ＋に対する興奮性の膜の透過性が一時的に大きく高まることを抑制または防止することにより神経インパルスの発生および伝導を防止する。
【００７０】
ナトリウムチャネル遮断剤の例としては、アンブカイン、アモラノン、アミルカイン（ａｍｙｌｃａｉｎｅ）、ベノキシネート、ベンゾカイン、ベトキシカイン、ビフェナミン、ブピバカイン、ブタカイン、ブタンベン、ブタニリカイン、ブテサミン、ブトキシカイン、カルチカイン、クロロプロカイン、コカエチレン、コカイン、シクロメチカイン、ジブカイン、ジメチソキン、ジメトカイン（ｄｉｍｅｔｈｏｃａｉｎｅ）、ジペロドン、ジクロニン、エコゴニジン、エコゴニン、エチドカイン、ユープロシン、フェナルコミン、フォルモカイン（ｆｏｒｍｏｃａｉｎｅ）、ヘキシルカイン、ヒドロキシテトラカイン、イソブチルｐ−アミノ安息香酸、ロイシノカイン、レボキサドロール、リドカイン、メピバカイン、メプリルカイン、メタブトキシカイン、塩化メチル、ミルテカイン、ナエパイン、オクタカイン、オルトカイン（ｏｒｔｈｏｃａｉｎｅ）、オキセサゼイン、パレントキシカイン（ｐａｒｅｎｔｈｏｘｙｃａｉｎｅ）、フェナカイン、フェノール、ピペロカイン、ピリドカイン、ポリドカノール、プラモキシン、プリロカイン、プロカイン、プロパノカイン、プロパラカイン、プロピポカイン、プロポキシカイン、スードコカイン（ｐｓｅｕｄｏｃｏｃａｉｎｅ）、ピロカイン、ロピバカイン、サリチルアルコール、テトラカイン、トリカイン、トリメカイン、ゾラミン、およびその活性誘導体、プロドラッグ、アナログ、医薬として許容可能な塩、または混合物が挙げられるが、限定しない。
【００７１】
抗感染剤
本発明の組成物中で使用するための抗感染剤は、抗感染活性を有する（すなわち、感染リスクを低減させ、感染を防止し、または感染を阻害、抑制し、それに対抗し、もしくはその他の方法で処置することができる）化合物、分子または薬剤である。特定の実施形態では、これらの化合物、分子または薬剤は、局所的に塗布されたときに抗感染活性を有する。本発明における使用に適した抗感染剤としては、消毒剤、抗菌剤、抗生物質、抗細菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、抗原虫剤、免疫刺激剤、およびその任意の組合せが挙げられるが、限定しない。
【００７２】
抗ウイルス剤は、ウイルス感染を防止するため、および／またはある部位におけるウイルス力価を減少させるために組成物中に存在させうる。適切な抗ウイルス剤としては、ＲＮＡ合成阻害剤、タンパク質合成阻害剤、免疫刺激剤、およびプロテアーゼ阻害剤が挙げられる。抗ウイルス剤は、例えば、アシクロビル、塩酸アマンタジン、ホスカルネットナトリウム、ガネイクロビルナトリウム（ｇａｎｅｉｃｌｏｖｉｒ  ｓｏｄｉｕｍ）、フェノール、リバビリン、ビダラビン、およびジドブジンからなる群から選択しうる。
【００７３】
抗真菌剤は、多種多様な治療剤から選択しうる。例えば、乳酸（すなわち、２−ヒドロキシプロパン酸）は、病原菌の成長を阻害することが知られている抗真菌剤である。ソルビン酸（すなわち、２，４−ヘキサジエン酸）は、カンジダアルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）を殺菌する天然の抗真菌剤である。その他の抗真菌剤としては、アンホテリシンＢ、シクロピロックス、クロトリマゾール、エニルコナゾール、エコナゾール、フルコナゾール、グリセオフルビン、ハログロピン（Ｈａｌｏｇｒｏｐｉｎ）、イントロコナゾール（Ｉｎｔｒｏｃｏｎａｚｏｌｅ）、ケトコナゾール、ミコナゾール、ナフチフィン、ナイスタチン、オキシコナゾール、スルコナゾール、チアベンダゾール、テルビナフィン、トルナフテート、ウンデシレン酸、マフェニド、スルファジアジン銀、およびカルボルフシュシン（Ｃａｒｂｏｌ−Ｆｕｓｈｓｉｎ）が挙げられるが、限定しない。
【００７４】
抗生物質およびその他の抗菌剤は、バシトラシン；セファロスポリン（セファドロキシル、セファゾリン、セファレキシン、セファロチン、セファピリン、セフラジン、セファクロル、セファマンドール、セフォニシド、セフォラニド、セフォキシチン、セフロキシム、セフォペラゾン、セフォタキシム、セフォテタン、セフタジジム、セフチゾキシム、セフトリアキソン、およびメロペネムなど）；シクロセリン；ホスホマイシン、ペニシリン（アムジノシリン、アンピシリン、アモキシシリン、アゾシリン、バカミピシリン（ｂａｃａｍｉｐｉｃｉｌｌｉｎ）、ベンザチンペニシリンＧ、カルベニシリン、クロキサシリン、シクラシリン、ジクロキサシリン、メチシリン、メズロシリン、ナフシリン、オキサシリン、ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、ピペラシリン、およびチカルシリンなど）；リストセチン；バンコマイシン；コリスチン；ノボビオシン；ポリミキシン（コリスチン、コリスチマテート（ｃｏｌｉｓｔｉｍａｔｈａｔｅ）、およびポリミキシンＢなど）；アミノグリコシド（アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、パロモマイシン、スペクチノマイシン、ストレプトマイシン、およびトブラマイシンなど）、テトラサイクリン（デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、メタサイクリン、ミノサイクリン、およびオキシテトラサイクリンなど）；カルバペネム（イミペネムなど）；モノバクタム（アズトレオナムなど）；クロラムフェニコール；クリンダマイシン；シクロヘキシミド；フシジン；リンコマイシン；ピューロマイシン；リファンピシン；その他のストレプトマイシン；マクロライド（エリスロマイシンおよびオレアンドマイシンなど）；フルオロキノロン；アクチノマイシン；エタンブトール；５−フルオロシトシン；グリセオフルビン；リファマイシン；スルホンアミド（スルファシチン（ｓｕｌｆａｃｙｔｉｎｅ）、スルファジアジン、スルフィソキサゾール、スルファメトキサゾール、スルファメチゾール、およびスルファピリジンなど）；およびトリメトプリムからなる群から選択しうる。
【００７５】
その他の適切な抗細菌剤としては、ビスマス含有化合物（アルミン酸ビスマス、次クエン酸ビスマス、次没食子酸ビスマスおよび次サリチル酸ビスマスなど）、ニトロフラン（ニトロフラゾン、ニトロフラントイン、およびフラゾリドンなど）、メトロニダゾール、チニダゾール、ニモラゾール、および安息香酸が挙げられるが、限定しない。
【００７６】
消毒剤は、塩化ベンザルコニウム、クロルヘキシジン、過酸化ベンゾイル、過酸化水素、ヘキサクロロフェン、フェノール、レゾルシノール、および塩化セチルピリジニウムからなる群から選択しうる。
【００７７】
本発明の組成物中での使用に適した免疫刺激剤は、インターロイキン１作動薬、インターロイキン２作動薬、インターフェロン作動薬、ＲＮＡ合成阻害剤、およびＴ細胞刺激剤などの多様な治療剤から選択しうる。
【００７８】
抗炎症剤
本発明は、骨喪失の防止および／または骨形成の促進中に、炎症の持続および／または重症度を軽減するために使用できる抗炎症性の組成物を提供する。本発明で使用するための抗炎症剤は、抗炎症活性を有する（すなわち、炎症の持続および／または重症度を防止または軽減し、組織に対する損傷を防止または軽減し、ならびに／あるいは紅斑、腫脹、組織虚血、発熱などの炎症症状の少なくとも１つを緩和することができる）化合物、分子または薬剤である。特定の実施形態では、これらの化合物、分子または薬剤は、局所的に塗布したときに抗炎症活性を有する。
【００７９】
本発明での使用に適した抗炎症剤は、多種多様なステロイド系および非ステロイド系の抗炎症剤から選択しうる。ＮＳＡＩＤの例は上述部分で確認することができる。ステロイド系抗炎症剤の例としては、ジプロピオン酸アクロメタゾン、フルニソリド、フルチカゾン、ブデソニド、トリアムシノロン、トリアムシノリンアセトニド（ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｉｎｅ  ａｃｅｔｏｎｉｄｅ）、ジプロピオン酸ベクロメタゾン、吉草酸ベタメタゾン、ジプロピオン酸ベタメタゾン、ヒドロコルチゾン、コルチゾン、デキサメタゾン、フランカルボン酸モメタゾン、プレドニゾン、アセポン酸メチルプレドニゾロン、およびプレドニゾロンが挙げられるが、限定しない。
【００８０】
抗炎症剤は、抗酸化剤活性を呈する多種多様な化合物、分子、および薬剤から代替または追加的に選択しうる。抗酸化剤は、組織に対する酸化損傷を防止または軽減することができる薬剤である。抗酸化剤は、ビタミンＡ（レチナール）、ビタミンＢ（３，４−ジデヒドロレチノール）、ビタミンＣ（Ｄ−アスコルビン酸、Ｌ−アスコルビン酸）、α−カロテン、β−カロテン、γ−カロテン、δ−カロテン、ビタミンＥ（α−トコフェロール）、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、δ−トコフェロール、トコキノン、トコトリエノール、ブチルヒドロキシアニソール、システイン、およびその活性誘導体、アナログ、前駆物質、プロドラッグ、医薬として許容可能な塩または混合物からなる群から選択しうる。
【００８１】
本発明の組成物中に存在する１種または複数種の治療剤（例えば、造骨因子、成長ホルモン、鎮痛剤、抗炎症剤）の量は、特定の治療剤について推奨または許容される用量のほか、処置すべき骨喪失の種類、ならびに組成物中の他の含有物／成分の存在および性質により変化しうる。特定の実施形態では、存在する治療剤の用量は、局所投与を通じ望ましい結果を得るために必要な通常の用量である。そのような用量は、医薬または医療技術分野の当業者には、公知であるかまたは容易に決定される。
【００８２】
ＩＶ−レゾルビンの処方、用量および投与
レゾルビンは、それ自体で、または医薬として許容可能な担体または賦形剤と混合した医薬組成物として、投与しうる。レゾルビンまたはその医薬組成物は、任意の適切な手段を用いて対象に投与することができる。一般に、適切な投与手段としては、局所、経口、非経口（例えば、静脈内、皮下、または筋肉内）、直腸、嚢内、膣内、腹腔内、経眼または経鼻経路が挙げられるが、限定しない。特定の好ましい実施形態では、レゾルビンまたはその組成物は、局所的に投与される。
【００８３】
投与様式によっては、レゾルビンまたはその組成物は、液状、固形、または半固形の投与製剤の形状であってよい。例えば、組成物は、溶液剤、分散剤、懸濁剤、乳剤、混合剤、ローション、塗り薬、ゼリー、軟膏、クリーム、ペースト、ゲル、ヒドロゲル、エアロゾル剤、スプレー、マイクロカプセル、マイクロスフィア、ナノ粒子、ペレット、アガロースまたはキトサンビーズ、カプセル、粒剤、顆粒、粉末、硬膏、絆創膏、シート、泡、フィルム、スポンジ、包帯剤、水薬、生体吸着性パッチ、スティック、送達機器およびインプラントとして処方しうる。
【００８４】
口腔への局所投与としては、レゾルビンまたはその組成物は、溶液剤、懸濁剤、分散剤、軟膏、クリーム、練り歯磨き剤を含むペースト、ゲル、歯磨き粉を含む粉末、練り歯磨き剤、口中錠、膏薬、チューイングガム、エアロゾル剤、口中スプレーを含むスプレー、トローチ、サシェ剤、洗口剤、爪楊枝、錠剤、カプセル、およびデンタルフロスとして処方しうる。このような製剤には、抗う蝕剤、抗歯垢剤、抗歯石剤、抗炎症剤、歯牙研磨剤、界面活性剤、着香料、甘味料、結合剤、湿潤剤、糊料、緩衝剤、保存料、着色料、および色素、香味料、充填剤、安定化剤、エタノールおよび水などの局所、経口担体を含みうる。
【００８５】
処方
レゾルビンおよびその医薬組成物は、一般的な医薬手順に従って処方しうる（例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」および「Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」、Ｊ．Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ、およびＪ．Ｃ．Ｂｏｙｌａｎ  （編）、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８８年を参照）。
【００８６】
本発明の実施において使用するための医薬として許容可能な担体、媒体、および／または賦形剤は、当業者が特定の使用のために通常の手順で選択することができる。これらには、溶媒、緩衝剤、不活性の希釈剤または充填剤、懸濁剤、分散剤または湿潤剤、保存料、安定化剤、キレート化剤、乳化剤、消泡剤、ゲル形成剤、軟膏基剤、浸透促進剤、保湿剤、および皮膚軟化剤が挙げられるが、限定しない。
【００８７】
溶媒の例は、水、アルコール、野菜、魚および鉱物の油、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、グリセロール、および液体ポリアルキルシロキサンである。不活性の希釈剤または充填剤は、ショ糖、ソルビトール、糖、マンニトール、微結晶性のセルロース、デンプン、炭酸カルシウム、塩化ナトリウム、乳糖、リン酸カルシウム、硫酸カルシウム、またはリン酸ナトリウムであってよい。緩衝剤の例としては、クエン酸、酢酸、乳酸、ヒドロゲノリン酸、およびジエチルアミンが挙げられる。適切な懸濁剤は、例えば、天然産のゴム（例えば、アカシア、アラビア、キサンタン、およびトラガカントゴム）、セルロース（例えば、カルボキシメチル、ヒドロキシエチル、ヒドロキシプロピル、およびヒドロキシプロピルメチルセルロース）、アルギン酸およびキトサンである。分散剤または湿潤剤の例は、天然産のリン脂質（例えば、レシチンまたは大豆レシチン）、脂肪酸または長鎖脂肪族アルコールとのエチレンオキシド縮合生成物（例えば、ステアリン酸ポリオキシエチレン、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール、およびモノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン）である。
【００８８】
保存料は、製剤の安定性に影響を与えたり患者に感染を引き起こしたりする可能性がある微生物汚染を防止するために、レゾルビンまたはその医薬組成物に加えてよい。保存料の適切な例としては、パラベン（メチル、エチル、プロピル、ｐ−ヒドロキシ安息香酸、ブチル、イソブチル、およびイソプロピルパラベンなど）、ソルビン酸カリウム、ソルビン酸、安息香酸、安息香酸メチル、フェノキシエタノール、ブロノポール、ブロニドクス、ＭＤＭヒダントイン、ブチルカルバミン酸ヨウ化プロピニル、塩化ベンザルコニウム、セトリミド、およびベンジルアルコールが挙げられる。キレート化剤の例としては、ＥＤＴＡナトリウムおよびクエン酸が挙げられる。
【００８９】
乳化剤の例は、天然産のゴム、天然産のリン脂質（例えば、大豆レシチン、モノオレイン酸ソルビタン誘導体）、ソルビタンエステル、モノグリセリド、脂肪アルコール、および脂肪酸エステル（例えば、脂肪酸のトリグリセリド）である。消泡剤は通常、製造を容易にするもので、気液界面を不安定化することにより泡を消散させ、空気ポケットから液体を流出させる。消泡剤の例としては、シメチコン、ジメチコン、エタノール、およびエーテルが挙げられる。
【００９０】
ゲル基剤または増粘剤の例は、液体のパラフィン、ポリエチレン、脂肪油、コロイド状のシリカまたはアルミニウム、グリセロール、プロピレングリコール、カルボキシビニルポリマー、ケイ酸マグネシウムアルミニウム、親水性ポリマー（例えば、デンプンまたはセルロースの誘導体など）、水膨潤性の親水コロイド、カラギーナン、ヒアルロン酸、およびアルギン酸である。本発明の実施における使用に適した軟膏基剤は、疎水性でも親水性でもよく、パラフィン、ラノリン、液体ポリアルキルシロキサン、セタノール、パルミチン酸セチル、野菜油、脂肪酸のソルビタンエステル、ポリエチレングリコール、および脂肪酸のソルビタンエステルとエチレンオキシド間の縮合生成物（例えば、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン）、およびポリソルベートを含んでもよい。
【００９１】
湿潤剤の例は、エタノール、イソプロパノールグリセリン、プロピレングリコール、ソルビトール、乳酸、および尿素である。適切な皮膚軟化剤としては、コレステロールおよびグリセロールが挙げられる。皮膚保護剤の例としては、ビタミンＥ、アラトイン、グリセリン、酸化亜鉛、ビタミン、および日焼け防止剤が挙げられる。
【００９２】
レゾルビン医薬組成物は、糊料、生体接着性ポリマー、および浸透促進剤などその他の種類の賦形剤を代替または追加的に含みうる。
【００９３】
糊料は一般に、粘度を増加させ医薬組成物の生体接着性を向上させるために使用される。糊料の例としてはセルロース、ポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、天然産のゴム、ゼラチン、カラヤ、ペクチン、アルギン酸、およびポビドンが挙げられるが、限定しない。特に興味深いのは、揺変特性を有する糊料（すなわち、振動または攪拌により粘度が低下する作用物）である。組成物中にそのような作用物を存在させると、投与時には局所塗布を容易にするために組成物の粘度を低下させ、塗布後は組成物が投与部位に維持されるように粘度を増加させることができる。
【００９４】
生体接着性ポリマーは、皮膚または粘膜に水分補給し、その浸透性を高めるために有用である。生体接着性ポリマーは、糊料としても機能しうる。生体接着性ポリマーの例としては、ペクチン、アルギン酸、キトサン、ポリソルベート、ポリ（エチレングリコール）、オリゴ糖類および多糖類、セルロースエステルおよびセルロースエーテル、ならびに修飾されたセルロースポリマーが挙げられるが、限定しない。
【００９５】
浸透促進剤は、皮膚／粘膜経由での活性成分の送達に影響する特定の作用物を含有する媒体である。浸透促進剤は一般に、溶媒および界面活性化合物（両親媒性分子）の２種類に分類される。溶媒型浸透促進剤の例としては、アルコール（例えば、エチルアルコール、イソプロピルアルコール）、ジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、１−ドデシルアゾシロヘプタン（ｄｏｄｅｃｙｌａｚｏｃｙｌｏｈｅｐｔａｎ）−２−オン、Ｎ−デシルメチルスルホキシド、乳酸、Ｎ，Ｎ−ジエチル−ｍ−トルアミド、Ｎ−メチルピロリドン、ノナン、オレイン酸、ワセリン、ポリエチレングリコール、プロピレングリコール、サリチル酸、尿素、テルペン、およびトリクロロエタノールが挙げられる。本発明の医薬組成物中の界面活性剤型浸透促進剤は、非イオン性、両性、陽イオン性、または双性イオン性であってよい。適切な非イオン性界面活性剤としては、ポロキサマーとして商業的に知られるポリ（オキシエチレン）−ポリ（オキシプロピレン）ブロックコポリマー、エトキシ化水素化ヒマシ油、Ｔｗｅｅｎ２０またはＴｗｅｅｎ８０などのポリソルベートが挙げられる。両性界面活性剤としては四級化されたイミダゾール誘導体が挙げられ、陽イオン性界面活性剤としては塩化セチルピリジニウムが挙げられ、また、双性イオン性界面活性剤としてはベタインおよびスルホベタインが挙げられる。
【００９６】
レゾルビンの制御放出
特定の実施形態では、レゾルビン医薬組成物は活性成分の１種または複数種を限局的に制御放出するように処方される。局所投与に適した、医薬として許容可能な任意の担体媒体または製剤を採用してよい。当技術分野で公知の徐放性製剤としては、コーティングしたペレット、ポリマー製剤（ベシクルまたはリポソームなど）、微粒子（例えば、マイクロスフィアまたはマイクロカプセル）が挙げられる。
【００９７】
制御放出を実施するためには、多種多様な生分解性材料を使用しうる。制御放出用の材料は生体適合性とすべきであり、本材料は、組織の自然過程により適切な期間（例えば、１年未満、６カ月未満、および１カ月未満、１週間未満、１日未満または数時間未満）で投与部位から除去されるように安全かつ医薬として許容可能な方法でｉｎ  ｓｉｔｕで分解、溶解または吸収されるべきである。制御放出用の担体は、望ましくない限局的な組織反応を一切引き起こしてはならず、全身または限局的な毒性を誘発してもならない。
【００９８】
本発明の組成物の処方での使用に適した制御放出用の生分解性ポリマーは、ポリラクチド、ポリグリコリド、ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、ポリ酸無水物、ポリオルトエステル、ポリカプロラクトン、多糖類、ポリホスファゼン、タンパク質様ポリマーおよびその可溶性誘導体（ゲル化する生分解性合成ポリペプチド、アルキル化したコラーゲン、およびアルキル化したエラスチンなど）、多糖類、ポリペプチド、ポリエステル、およびポリオルトエステルの可溶性誘導体を含みうる。
【００９９】
これらの製剤の薬物動態的な放出プロファイルは、所望の期間にわたり所望の治療効果を供給するために１次、０次、２相または多相としうる。所望の放出プロファイルは、放出速度が異なるおよび／または担持率（％）が異なる１種もしくは複数種の組成物成分を有するポリマーの混合物を用いることにより達成できる。コーティングしたペレット、リポソーム、マイクロスフィアおよびマイクロカプセルの製造方法は、当技術分野では周知である。
【０１００】
用量
レゾルビンまたは本発明の組成物の投与は、送達される量が意図した目的にとって有効であるような用量で行われることになろう。投与経路、投与される剤形および用量は、特定の処置対象部位の性質、大きさ、および位置、骨喪失がすでに見られる場合はその重症度、なんらかの感染の存在、患者の年齢、体重および健康状態、また、使用される組成物の効力、生体内利用率、および  ｉｎ  ｖｉｖｏでの半減期に依存するであろう。これらの要素は、治療過程に携わっている医師により容易に決定される。代替または追加的に、特定の型の治療対象部位／疾患について動物モデルを使用する試験から投与用量を決定することもできる。各処置について必要な総用量は、多回用量または単回用量で投与しうる。このような方法に基づき最大効果を達成するための用量調節は当技術分野では周知であり、教育を受けた医師の能力内で対応できるものである。試験を実施すれば、多様な種類の骨喪失または骨分解の処置における適切な用量レベルおよび期間に関しさらなる情報が明らかになろう。
【０１０１】
投与
レゾルビンまたは本発明のレゾルビン組成物の投与様式は、選択される製剤の形状に主に依存すると思われる。例えば、ゲル、ローション、クリームおよび軟膏は、処置が必要な表面領域上に手で塗布するか、またはスプレーしうる（手動式ポンプを用いるかまたは医薬として許容可能な適切な噴霧ガスを利用するかのいずれかによる）。あるいは、ブラシ、シリンジ、へら、または特別に設計された容器（先端が細い管など）を使用して製剤を塗布することもできる。
【０１０２】
特定の実施形態では、レゾルビンまたはその医薬組成物は、外科手術中または術後に使用される（例えば、歯周ポケットを除去するための介入および／または骨の再構築、歯牙表面の選択的再形成、骨移植、腫瘍切除など）。このような環境下では、レゾルビンまたはその医薬組成物は、例えば、縫合糸、ステープル、接着テープまたは組織接着剤を用いた縫合の前に、外科的処置が行われている骨に塗布することができる。この組成物は、例えば、縫合中に局所麻酔または知覚麻酔を施すため、および／または手術処置中およびその後の疼痛を防止または軽減するための鎮痛剤および／または麻酔剤を含みうる。組成物は、感染を防止するための抗感染剤を代替または追加的に含みうる。外科的処置が癌の腫瘍切除に関連している場合、組成物は、残存している任意の癌細胞からの腫瘍の再増殖を防止するために化学療法用の抗癌剤をさらに含みうる。外科的処置に骨移植が含まれる場合、組成物は、移植片拒絶を防止するために免疫抑制剤をさらに含みうる。
【０１０３】
Ｖ−キット
別の一態様では、本発明は、少なくとも１種のレゾルビンと、骨成長を促進する、または骨吸収を抑制する少なくとも１種の治療剤とを含むキットを提供する。キット中の少なくとも１種のレゾルビンおよび少なくとも１種の治療剤は、別々にまたは混合物として供給しうる。
【０１０４】
例えば、キットは、レゾルビンまたはその組成物を含む第１の容器と、治療剤またはその組成物を含む第２の容器とからなる、２つの別々の容器を備えうる。あるいは、キットは、レゾルビンおよび治療剤を含んだ混合物または組成物を含む第１の容器と、すぐに使える状態の組成物を得るために使用前に第１の容器に加えることを意図された適切な媒体を含む第２の容器とからなる、２つの別々の容器を備えていてもよい。キットは、代替または追加的に、レゾルビンおよび治療剤を含んだ混合物または組成物を含む容器と、第１の組成物の混合物または組成物を塗布するために使用する用具（例えば、ブラシ、シリンジ、へら）とから構成されていてもよい。
【０１０５】
特定の実施形態では、個々の容器（例えば、バイアル、アンプル、フラスコ、瓶、先端の細い管）は、商業的利用のために厳重に密封して維持される。
【０１０６】
本発明のキットは、本発明に従ってレゾルビンおよび治療剤（ならびにその他任意の追加の薬剤および試薬）を使用するための説明書をさらに含みうる。本発明の１つ以上の方法に従ってキットを使用するための説明書は、適応症、１種または複数種の好ましい投与様式、１種または複数種の好ましい投与計画、好ましい用量、潜在的な副作用などに関する情報を含みうる。キットは、医薬品の製造、使用、または販売を規制する政府機関（例えば、ＦＤＡ）により規定された形式の注意書きを含んでもよい。識別子、例えば、バーコード、無線タグ、ＩＤタグなどをキットの中または表面に存在させうる。この識別子は、例えば、品質管理、在庫管理、現場間の移動追跡などの目的でキットを個々に識別するために使用できる。本発明の特定の実施形態では、キットは、政府機関（例えば、ＦＤＡ）認可医薬品に定められた適正製造基準に従って製造される。
【実施例】
【０１０７】
以下の実施例では、本発明の製造および実施の好ましい態様をいくつか説明する。しかしながら、これらの実施例が例証のみを目的としたものであり本発明の範囲を限定することを意図していないことは理解されるべきである。さらに、「実施例」中の説明が過去形で書かれていなければ、その文は、本明細書のそれ以外の箇所と同様に、実験が実際に行われまたはデータが実際に得られたということを示唆する意図のものではない。
【０１０８】
材料および方法
動物モデル
試験プロトコルおよび実験計画は、試験開始に先立ち、ボストン大学医療センター内動物管理使用委員会（Ｂｏｓｔｏｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）（ＢＵＭＣ  ＩＡＣＵＣ）により検討および承認を受けた（ＩＡＣＵＣプロトコル番号ＡＮ−１３９４８号）。加えて、ＢＵＭＣ内バイオハザード委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｈａｚａｒｄ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）（ＩＢＣ）により、歯周病を誘発するために今回の動物モデルにポルフィロモナスジンジバリス（Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ）を使用することが承認された（ＩＢＣプロトコル番号Ａ−２６９号）。
【０１０９】
本明細書で示す実験においては、ニュージーランドシロウサギ（雄性、それぞれ３．５〜４．０ｋｇ）を使用した。この動物を、以下のように分配した。Ａ群：結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ（すなわち「歯周病、非処置」群）、Ｂ群：結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ＋媒体のみ（すなわち「媒体」群）、Ｃ群：結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ＋媒体中のレゾルビンＥ１（すなわち「ＲｖＥ１」群）。すべての動物は、Ｐｉｎｅ  Ａｃｒｅ  Ｆａｒｍｓ（Ｂｅｒｔｈｏｕｄ、ＣＯ）から購入した。動物の体重は厳密に管理され、実験開始時点ではすべての動物の体重は３．５〜４．０ｋｇの間であった。順化のために、動物はＢＵＭＣの実験動物科学センター（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｎｉｍａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｃｅｎｔｅｒ）（ＢＵＭＣ  ＬＡＳＣ）において少なくとも５日間、個別のケージで維持され、水を自由に摂取し、経験を積んだ有資格の実験技師により特別食（固形飼料）が与えられた。
【０１１０】
実験的歯周炎
ケタミン（４０ｍｇ／ｋｇ）およびキシラジン（５ｍｇ／ｋｇ）の注射を用いた全身麻酔下で、結紮糸の留置を実施した。動物には下顎の両四分区の第２小臼歯周囲に３−０号の縫合絹糸を留置した。前述したようにＰ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ（菌株名Ａ７４３７６）を増殖させた。手短かに言うと、酵母エキス０．５％（ｗ／ｖ）、ヒツジの脱線維素赤血球５％、ヘミン５μｇ、およびビタミンＫを１μｇ／ｍＬ添加したトリプチカーゼ大豆寒天培地を含有する寒天プレート上で細菌を培養した。嫌気的に維持された広口瓶内で、パラジウムで触媒した水素／二酸化炭素の外袋（ＧａｓＰａｋ  Ｐｌｕｓ、ＢＤ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓｐａｒｋｓ、ＭＤ）を通して寒天プレートを３日間、３７℃でインキュベートした。コロニーを無作為に選択し、ビタミンＫおよびヘミンを添加したＳｃｈａｅｄｌｅｒのブロス中で一晩、３７℃で嫌気的に培養した。細菌数を６００ｎｍの分光法により測定した後、１０９ＣＦＵ（０．８ＯＤ）をカルボキシメチルセルロースと混合して濃いスラリーを形成し、結紮した歯牙にこのスラリーを局所塗布した。動物に接触するたびに縫合糸を確認し、失われたり緩んだりした縫合糸は交換した。
【０１１１】
レゾルビンＥ１の局所塗布
図１に示すように、結紮およびＰ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ開始後６週間、イソフルラン（４．０ＭＡＣ／２．０ＭＡＣ）を用いた吸入麻酔下で１日おきに６週間、局所塗布を実施した。「媒体」群では、レゾルビンＥ１用の担体媒体として使用したエタノール（７μＬ）を、また、Ｃ群では、エタノール中に懸濁させたレゾルビンＥ１（７μｇ／μＬ）を塗布した。試験終了時（すなわち、結紮およびＰ．ｇｉｎｇｉｖｉｔｉｓによる歯周病誘発の１２週間後）、ＩＡＣＵＣにより承認されたプロトコルに従い、過量のペントバルビタール（安楽死）注射（１２０ｍｇ／ｋｇ）を用いて動物を安楽死させた。本試験を通じた実験手順中には動物の管理に関連した有害事象は一切観察されず、動物が本試験の途中で死ぬことはなかった。
【０１１２】
形態計測分析
動物を屠殺した後、骨に付着した歯肉を無傷に保ったまま、下顎骨を筋肉および軟組織から切り離した。次に、下顎骨を中切歯間の正中線から２つに半分割した。片側半分を骨喪失の形態計測分析用に確保し、他方の半分を歯周炎の組織学的評価に使用した。解体した下顎骨の半分を１０％過酸化水素中に浸漬（１０分間、室温）することにより、肉を除去した。軟組織を慎重に除去した後、歯牙と骨との間の差がはっきり見えるように下顎骨をメチレンブルーで染色した（図４を参照）。次に、０．５ｍｍの目盛り付き歯周プローブにより第２小臼歯の周囲の骨レベルを直接測定した。
【０１１３】
頬側および舌側で各３箇所、歯槽頂の骨レベルの測定を行った。歯牙周囲の歯槽頂の骨レベルの平均を計算した。同様に、隣接部の骨レベルについて、歯牙の近心面および遠位面で測定を行った。第２小臼歯の両側の隣接面上の頬側および舌側両方から測定値を得て、隣接骨レベルの平均を計算した。また、骨レベルを画像解析（Ｉｍａｇｅ−Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓ４．０、Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ、Ｓｉｌｖｅｒ  Ｓｐｒｉｎｇ、ＭＤ）により定量化した。解体した下顎骨を載せ、倒立顕微鏡を用いて１０倍率で撮影した。取込み画像も上述のように解析し、歯牙周囲の歯槽頂の骨レベルの平均をミリメートル単位で計算した。
【０１１４】
Ｘ線分析
骨内部に占める歯牙の比率（％）を、Ｂｊｏｒｎ法（Ａ．Ｊａｉｎら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．、２００３年、７１巻、６０１２〜６０１８頁）を用いてＸ線撮影により計算した。Ｘ線写真は、デジタルＸ線（Ｓｃｈｉｃｋ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｉｎｃ．、Ｌｏｎｇ  Ｉｓｌａｎｄ  Ｃｉｔｙ、ＮＹ）で撮影した。骨喪失を定量化するため、歯尖の先端部から歯根の頂端までの歯牙の長さを測定し、同様に、骨の外側の歯牙構造の長さ、すなわち歯尖の先端部から隣接骨の冠状部までを測定した。これらの測定値から、骨の内部に占める歯牙の比率（％）を計算した。骨の値は、骨内の歯牙の比率（％）（すなわち、［骨内の歯牙の長さ×１００］／歯牙全長）として表してある。
【０１１５】
組織学的分析
組織学的解析としては、下顎骨の他方半分を、少なくとも切片の大きさの１０倍に等しい体積のイムノカル（ｉｍｍｕｎｏｃａｌ）（Ｄｅｃａｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｔａｌｌｍａｎ、ＮＹ）中に浸漬し、７２時間のうち２４時間ごとに溶液を交換した。
【０１１６】
２週間にわたり１日おきに撮影した連続的なＸ線写真により脱灰度を評価、確認した。脱灰後、組織のｐＨを中和し、包埋および染色の特徴を強化し、また、組織が脱灰しすぎないようさらなる脱灰を止めるために、組織を流水で１〜３分間すすぎ、Ｃａｌ−Ａｒｒｅｓｔ（Ｄｅｃａｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、Ｔａｌｌｍａｎ、ＮＹ）中に留置した。組織をこの溶液中に２〜３分間保持し、脱イオン水の流水で少なくとも３分間再度すすいだ後、ホルマリン中で少なくとも２４時間保持してからパラフィン中に包埋した。薄い切片（５μｍ）を切り、炎症性浸潤物の細胞組成を同定するためにヘマトキシリンおよびエオシン（Ｈ＆Ｅ）を用いてその切片を従来法で染色し、破骨細胞の活性を検出するために５μｍの切片１７０枚を酒石酸耐性酸性ホスファターゼ（ＴＲＡＰ）で染色した。
【０１１７】
結果
図２は、結紮およびＰ．ｇｉｎｇｉｖｉｔｉｓ局所塗布のみで処置されたか、または、結紮およびＰ．ｇｉｎｇｉｖｉｔｉｓ局所塗布で処置した後に媒体（すなわち、エタノール）のみの局所塗布もしくはエタノール中のレゾルビンＥ１の局所塗布のどちらかを受けたウサギの下顎骨を示している。レゾルビン処置群の軟組織は対照群より明らかに健康であることが判明した。予想したとおり、媒体のみで処置した動物においては疾患が進行した。レゾルビンで処置した動物のほうが、軟組織のポケット深度が低い測定値を示した（図３を参照）。より具体的には、ベースラインを超える向上が見られた。同様の結果が硬組織の歯槽頂間距離の測定値でも見られた（図４および図５を参照）。予想外なことに、硬組織の骨縁下ポケット深度の測定値もベースラインを超える向上を示し（図６を参照）、また、歯牙動揺度の測定値も同様であった（図７を参照）ことから、レゾルビンが骨の沈着（すなわち、骨成長）を促進するという結論が導かれた。
【０１１８】
その他の実施形態
本発明のその他の実施形態は、本明細書または本明細書で開示した本発明の実施内容を検討することにより当業者には明らかとなろう。本明細書および「実施例」は、以下の特許請求の範囲により示されている本発明の真の範囲にある例としてのみ検討されることを意図したものである。
【図面の簡単な説明】
【０１１９】
【図１】図１は、「実施例」の項で報告する実験の計画を示す概略図である。
【図２】図２は、「実施例」の項に記載のように、結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ（最初の列）、結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ＋媒体のみ（中央の列）、結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ＋媒体中のレゾルビンＥ１（ＲｖＥ１）（最後の列）により処置されたウサギの頬側および舌側の下顎骨の写真を示すものである。
【図３】図３は、口腔中の位置（すなわち、頬側および舌側）の関数として、また、異なる動物群（すなわち、結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの「歯周病（非処置）」群、結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ＋媒体のみの「媒体」群、および結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ＋媒体中のレゾルビンＥ１の「ＲｖＥ１」群）が受けた処置の関数として、軟組織のポケット深度測定値の定量分析の結果をグラフ上に示すものである。
【図４】図４は、骨を直接調べるために顎の肉を除去した後のウサギの頬側および舌側の下顎骨の写真を示すものである。ウサギは結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ（最初の列）、結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ＋媒体のみ（中央の列）、結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ＋媒体中のレゾルビンＥ１（ＲｖＥ１）（最後の列）により処置された。
【図５】図５は、口腔中の位置（すなわち、頬側および舌側）の関数として、また、異なる動物群（すなわち、結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの「歯周病（非処置）」群、結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ＋媒体のみの「媒体」群、および結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ＋媒体中のレゾルビンＥ１の「ＲｖＥ１」群）が受けた処置の関数として、硬組織の歯槽頂間距離測定値の定量分析の結果をグラフ上に示すものである。
【図６】図６は、口腔中の位置（すなわち、頬側および舌側）の関数として、また、異なる動物群（すなわち、結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの「歯周病」群、結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ＋媒体のみの「媒体」群、および結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ＋媒体中のレゾルビンＥ１の「ＲｖＥ１」群）が受けた処置の関数として、硬組織の骨縁下ポケット深度測定値の定量分析の結果をグラフ上に示すものである。
【図７】図７は、異なる動物群（すなわち、結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓの「歯周病」群、結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ＋媒体のみの「媒体」群、および結紮＋Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ＋媒体中のレゾルビンＥ１の「ＲｖＥ１」群）が受けた処置の関数として、歯牙動揺度の定量分析の結果をグラフ上に示すものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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