(57)【要約】本発明は、フラバノール、Ａ型プロシアニジン、Ｂ型プロシアニジンまたはその誘導体を含む、医薬、食品、食品添加物、または栄養補助食品といった組成物、および、閉塞性血栓症および関連する症状の治療および／または予防のためのその使用の方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
【化１】
2009500413.tif 000008
ここで、
（ｉ）単量体単位が４→６および／または４→８フラバン間結合を介して結合している；
（ｉｉ）少なくとも二つの単量体単位がさらにＡ型フラバン間結合（４→８；２→Ｏ→７）または（４→６；２→Ｏ→７）によって結合している；
（ｉｉｉ）ｎが２から１２である；
または医薬品として許容されるその塩または誘導体である、
上式の単量体単位ｎ個から成るＡ型プロシアニジンの有効量を、必要とする対象へ投与することによって、閉塞性血栓症を治療または予防する方法であって、
前記対象がヒトまたは家畜であることを特徴とする方法。
【請求項２】
Ａ型プロシアニジンが単離および精製されていることを特徴とする請求項１の方法。
【請求項３】
Ａ型プロシアニジンが二量体であることを特徴とする請求項１の方法。
【請求項４】
二量体がＡ２二量体であることを特徴とする請求項１の方法。
【請求項５】
Ａ２二量体が単離および精製されていることを特徴とする請求項４の方法。
【請求項６】
対象が閉塞性血栓に罹患するヒトであることを特徴とする請求項１の方法。
【請求項７】
対象が心筋梗塞、虚血性脳卒中、ＤＶＴ、または動脈塞栓または肺塞栓のリスクのあるヒトであることを特徴とする請求項１の方法。
【請求項８】
【化２】
2009500413.tif 000009
ここで、
ｎが２ないし１８の整数である；
ＲおよびＸそれぞれがαまたはβ立体化学を有する；
ＲがＯＨ、Ｏ−糖またはＯ−没食子酸である；
Ｃ−４、Ｃ−６およびＣ−８の置換基はそれぞれＸ、ＺおよびＹであり、および単量体単位の結合はＣ−４、Ｃ−６またはＣ−８で起こる；
任意のＣ−４、Ｃ−６またはＣ−８が別の単量体単位と結合していない場合、各Ｘ、ＹまたはＺは水素または糖であり；および
糖は随意的に、任意の位置でフェノール類部分で置換されるものである、
式Ａｎを有する化合物、または医薬品として許容されるその塩または誘導体（酸化生成物を含む）の有効量を、必要とする対象へ投与することによって閉塞性血栓症を治療または予防する方法。
【請求項９】
Ｒが−ＯＨでありおよびＸ、ＹおよびＺが水素であることを特徴とする請求項８の方法。
【請求項１０】
ｎが２であることを特徴とする請求項８の方法。
【請求項１１】
ｎが２であることを特徴とする請求項９の方法。
【請求項１２】
前記化合物がＢ１二量体であることを特徴とする請求項８の方法。
【請求項１３】
前記対象が閉塞性血栓に罹患するヒトであることを特徴とする請求項８の方法。
【請求項１４】
前記対象が心筋梗塞、虚血性脳卒中、ＤＶＴ、または動脈塞栓または肺塞栓のリスクのあるヒトであることを特徴とする請求項８の方法。
【請求項１５】
フラバノールおよびその誘導体の群から選択される化合物の有効量を、必要とする対象へ投与することによって、閉塞性血栓症を治療または予防する方法。
【請求項１６】
前記化合物がエピカテキンであることを特徴とする請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
前記エピカテキンが（−）−エピカテキンであることを特徴とする請求項１６の方法。
【請求項１８】
前記誘導体がメチル化誘導体であることを特徴とする請求項１５の方法。
【請求項１９】
前記対象が閉塞性血栓に罹患するヒトであることを特徴とする、請求項１５の方法。
【請求項２０】
前記対象が、心筋梗塞、虚血性脳卒中、ＤＶＴ、または動脈塞栓または肺塞栓のリスクのあるヒトであることを特徴とする、請求項１５の方法。
【請求項２１】
前記対象が閉塞性血栓に罹患するヒトであることを特徴とする、請求項１７の方法。
【請求項２２】
前記対象が、心筋梗塞、虚血性脳卒中、ＤＶＴ、または動脈塞栓または肺塞栓のリスクのあるヒトであることを特徴とする、請求項１７の方法。
【発明の詳細な説明】
【関連出願の説明】
【０００１】
本出願は、米国法典第３５編第１１９条に基づき、開示が参照により本開示に含まれる２００５年６月２９日出願の米国仮特許出願第６０／６９５，７３８号の利益を主張する。
【技術分野】
【０００２】
本発明は、フラバノール、Ａ型プロシアニジン、および／またはＢ型プロシアニジンを含む組成物、および、閉塞性血栓に罹患しているかまたは罹患するリスクのあるヒトまたは家畜の予防的または治療的処置のためのその使用の方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
血小板血栓の形成の正常な過程（出血を防ぐための）は、動脈内腔内で血小板およびフィブリンの塊が形成される血栓症の過程では病的になりうる。
【０００４】
動脈血栓性エピソードの大多数は、アテローム性動脈硬化を有する動脈で起こる。アテローム性動脈硬化では、脂質沈着が「プラーク」の形成に繋がる。プラーク形成の最初の段階は、単球の未変化の内皮表面への接着およびそれを通過する遊走を起こさせる、血漿ＬＤＬの修飾が関与する。内膜内で、リポタンパク質は酸化によってさらに修飾され、および単球によって取り込まれて、脂質に満たされた泡沫細胞となり、アテローム性動脈硬化の最初の段階を完了する。この段階は、内膜の表面上に裸眼で見える一連の黄色い点または線として現れる。脂肪の線のそれぞれは、内膜内の脂質に満たされた泡沫細胞の集合である。ここまで、内皮露出は起こっておらず、および血小板接着はプラークの開始に全く関与しない。内皮細胞は、接着分子を過剰発現したり、一酸化窒素（ＮＯ）合成または放出に障害を有したりしうるが、しかし内皮下コラーゲンの露出は無い。
【０００５】
進行病変を形成するに至るプラーク進化は、より多数のマクロファージの動員、およびプラーク内部の細胞外脂質およびコレステロールの核の形成を含む。核形成と同時に、平滑筋増殖が起こり、およびこれらの細胞は、脂質を被包するコラーゲンを合成する。プラークのさらなる進化が起こる際、開始すると、血小板沈着はプラーク増殖の要素となる。この極小の血栓症は、脂肪線段階を越えた事実上すべてのプラークを含む。極小の血栓は、重要な病態生理的意義を有しうるが、しかしあまりに小さすぎて流れを障害しない。極小の血栓は、血管の調節が異常でありおよびＮＯ合成が障害されている機能障害性内皮表面のマーカーである。
【０００６】
二つの異なる機構が、ヒト冠動脈プラーク上の大きい血栓の自然形成を担う。最初に、内皮が引き剥がされ、および露出が広がる。血栓はプラーク表面上に形成する。これは表在性またはレベル１プラーク傷害と呼ばれている。次に、プラークが破れ、脂質核の深部を内腔中の血液へ露出する。血液は脂質核自体に進入し、コラーゲン断片、コレステロールの結晶、およびマクロファージによって産生される組織因子と接触する。この混合物は非常に強力な血栓形成性混合物であり、および血栓がプラーク内に生成する（深在性またはレベル２傷害）。レベル３傷害は、裂傷が入る血管形成術後に生じる。これは動脈血栓の自然原因ではない。内皮腐食およびプラーク破裂（レベル１および２傷害）の両方が通常は、高い脂質含量および広い炎症を伴うプラークの合併症である。内皮の消失は、ミリメートルから閉塞性血栓の範囲にわたる血栓に繋がる。
【０００７】
心筋梗塞に繋がる閉塞性血栓症は、冠動脈内で非常に速やかに発症する可能性があり、または何日かにわたって進化しうる。突発性閉塞性血栓症は通常、プラークの大きな破裂があった患者を示し、その場合には血栓症の刺激は非常に強い。相当数の患者が、小さなプラーク現象に強い反応を有し、個別の予後を判断する際に血栓症への全身的な潜在性が重要な変数でありうることを示唆する。
【０００８】
血栓がほぼまたは完全な閉塞状態に達する際、血栓は動脈内腔内で、通常は下流に増殖し始める。この血栓は異なる形態学的特徴を有し、フィブリンのマトリクスに絡まった赤血球の高い含量を有する。心筋梗塞は、完全な閉塞がある時間起こっていることを含意する。捕捉された細胞を含むフィブリンのマトリクスを伴う閉塞性血栓の最終段階の構造は、それが線溶によって容易に除去されうることを示唆する。臨床試験はこれを例証し、ｔＰＡ（腫瘍プラスミノーゲン活性化因子）は閉塞性血塊を溶解することによって作用する。
【０００９】
閉塞性血栓症を治療する必要性が本分野に依然存在する。出願者らによって得られたｉｎ ｖｉｔｒｏおよび ｉｎ ｖｉｖｏデータの組み合わせは、閉塞性血塊（血栓症）形成（心筋梗塞、虚血性脳卒中、およびＤＶＴを結果として生じうる）の概念を支持し、閉塞性血塊を溶解すること、および心筋梗塞、虚血性脳卒中、およびＤＶＴ形成後の閉塞後治療として役立ち、線溶系をアップレギュレートし、ここに記載の化合物の使用はまた動脈塞栓および肺塞栓形成のリスクを低減しうる。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、フラバノール、Ａ型プロシアニジン、および／またはＢ型プロシアニジンを含む組成物、および、閉塞性血栓症およびそれに関連する症状に罹患しているかまたは罹患するリスクのあるヒトまたは家畜の予防的または治療的処置のためのその使用の方法に関する。
【００１１】
一態様では、本発明は、有効量のフラバノール、Ａ型プロシアニジンおよび／またはＢ型プロシアニジンを含む、医薬、食品、食品添加物、または栄養補助食品といった組成物に関する。組成物は、随意的に追加の循環器保護薬または治療薬を含むことができ、またはそのような薬剤と組み合わせて投与されうる。閉塞性血栓症および関連する症状を防ぐための、上述の組成物およびラベルおよび／または使用説明書を含む包装製品もまた本発明の範囲内にある。
【００１２】
別の一態様では、本発明は、閉塞性血栓症および関連する症状を治療するかまたは予防するための、フラバノール、Ａ型プロシアニジン、および／またはＢ型プロシアニジンの使用の方法に関する。
【００１３】
本明細書中で引用されるすべての特許、特許出願および参照文献は参照により本開示に含まれる。不整合があれば、本開示が適用される。
【００１４】
本発明は、有効量のフラバノール、Ａ型プロシアニジンおよび／またはＢ型プロシアニジン、または医薬品として許容されるその塩または誘導体を含む組成物に関する。
【００１５】
「プロシアニジン」の語はオリゴマーをいう。
【００１６】
本発明のＡ型プロシアニジンは、次式の単量体の、フラバン−３−オール単位から成るオリゴマーであり：
【化１】
2009500413.tif 000002
【００１７】
ここで
（ｉ）単量体単位は４→６および／または４→８フラバン間結合を介して結合している；
（ｉｉ）少なくとも二つの単量体単位がさらにＡ型フラバン間結合（４→８；２→Ｏ→７）または（４→６；２→Ｏ→７）によって結合している；および
（ｉｉｉ）ｎは２から１２である。
【００１８】
Ａ型フラバノイド間結合によって結合した２個のフラバン単位のうち１個は２位および４位で２つの結合を持たなければならないことが当業者に理解される。これらの両方が、αまたはβ立体化学のどちらかを有する、すなわち、結合は２α、４２β、４βである。これらの結合は、Ａ型フラバン間結合によって結合した第二のフラバノール単位の６−および７−Ｏ位、または８−および７−Ｏ位に結合する。Ｃ−２およびＣ−４位にＡ型フラバン間結合を有しないオリゴマーの構成フラバノール単位では、Ｃ−４位の結合は、アルファまたはベータ立体化学のどちらかを有しうる。フラバノール単位のＣ−３位のＯＨ基は、アルファまたはベータ立体化学のどちらかを有する。フラバン−３−オール（単量体の）単位は、（＋）−カテキン、（−）−エピカテキンおよびそれぞれエピマー（たとえば（ カテキンおよび（＋）−エピカテキン））でありうる。
【００１９】
上記で定義されるＡ型プロシアニジンは、一つ以上の構成フラバン−３−オール単位上の一つ以上のＯＨ基で誘導体化、たとえばエステル化されうる。任意のフラバン−３−オール単位はこのように、一つ以上のエステル基、好ましくは没食子酸エステル基を、３−、５−、７−、３'−および４'−環位のうち一つ以上に有しうる。それは特に、モノ−、ジ−、トリ−、テトラ−またはペンタ−没食子酸単位でありうる。
【００２０】
本発明は、整数ｎが３から１２；４から１２；５から１２  １０；または５から１０であることを特徴とする化合物を含む。一部の実施形態では、ｎは２から４、または２から５であり、たとえばｎは２または３である。
【００２１】
一実施形態では、Ａ型プロシアニジンはエピカテキン−（４β→８；２β→Ｏカテキン（すなわち、Ａ１二量体）、または医薬品として許容されるその塩または誘導体であり、および下記の式：
【化２】
2009500413.tif 000003
【００２２】
別の一実施形態では、Ａ型プロシアニジンはエピカテキン−（４β→８；２β→Ｏ→７）−エピカテキン（すなわち、Ａ２二量体）であり、および下記の式を有する：
【化３】
2009500413.tif 000004
【００２３】
（００２９）さらに別の一実施形態では、Ａ型プロシアニジンはＡ型三量体であり、および下記の式： 
【化４】
2009500413.tif 000005
【００２４】
Ａ型プロシアニジンは天然起源のものでよく、または合成によって調製されうる。たとえば、Ａ型プロシアニジンは実施例１で記載される通り、またはそれぞれ関連部分が参照により本開示に含まれるＬｏｕ ｅｔ ａｌ，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５１： ２９７−３０８ （１９９９），または Ｋａｒｃｈｅｓｙ ａｎｄ Ｈｅｍｉｎｇｗａｙ，Ｊ Ａｇｒｉｃ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．，３４：９６６−９７０ （１９８６）に記載される通り、ピーナッツ殻から単離されうる。熟したレッドピーナッツ殻は重量で約１７％のプロシアニジンを含み、および二量体プロシアニジンのうちエピカテキン−（４β→８；２β→Ｏ→７）−カテキンが主であり、より小さい割合のエピカテキン−（４β→８；２β→Ｏ→７）−エピカテキンが存在する。しかし、（４→８；２→Ｏ→７）二結合を有するプロシアニジンに加えて、（４→６；２→Ｏ→７）二結合を有するプロシアニジンもまたピーナッツ殻に見出される。
【００２５】
上記化合物の他の起源は、たとえば、それぞれ関連部分が参照により本開示に含まれるＦｏｏ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ，６３： １２２５−１２２８に、およびＰｒｉｏｒ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．，４９（３）： １２７０−７６ （２００１）に記載される通り、クランベリーである。他の起源は、それぞれ関連部分が参照により本開示に含まれる、Ｅｃｄｙｓａｎｔｈｅｒａ ｕｔｉｌｉｓ （Ｌｉｅ−Ｃｈｗｅｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ，６５：５０５− ８ （２００２））およびＡｅｓｃｕｌｕｓ ｈｉｐｐｏｃａｓｔａｎｕｍ （米国特許第４，８６３，９５６号明細書）を含む。
【００２６】
Ａ型化合物はまた、関連部分が参照により本開示に含まれる Ｋｏｎｄｏ ｅｔ ａｌ，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ Ｌｅｔｔ．，４１ ： ４８５ （２０００）に記載される通り、Ｂ型プロシアニジンから１，１−ジフェニル−２−ピクリルヒドラジル（ＤＰＰＨ）ラジカルを用いる中性条件下での酸化を介して得ることができる。天然および 合成Ｂ型 プロシアニジンを得る方法は本分野でよく知られており、 およびたとえば、開示が参照により本開示に含まれるＲｏｍａｎｃｚｙｋ ｅｔ ａｌへの米国特許第６，６７０，３９０号明細書； Ｒｏｍａｎｃｚｙｋ ｅｔ ａｌへの第６，２０７，８４２号明細書；Ｒｏｍａｎｃｚｙｋ ｅｔ ａｌへの第６，４２０，５７２号明細書； およびＲｏｍａｎｃｚｙｋ ｅｔ ａｌへの第６，１５６，９１２号明細書に記載される。
【００２７】
Ａ型プロシアニジンは、ここに記載の組成物に使用でき、および主成分としてＡ型プロシアニジンを含む抽出物（たとえばピーナッツ殻抽出物）の形で投与されうる。Ａ型プロシアニジンは単離および精製でき、
プロシアニジンが天然起源である）、またはそれらは合成によって調製でき、どちらの場合も夾雑化合物（不純物）のレベルはＡ型プロシアニジンの有効性に顕著に寄与または  しないほどである。たとえば、単離および精製された二量体がＡ２二量体から分離され、それは利用可能な商業的に実行可能な精製および分離方法によって達成される程度に、天然で起こりうる。組成物は実質的に純粋でありうる、すなわち、組成物は利用可能な生成、分離および／または合成技術によって達成されうる最高の程度の均一性を有する。ここでは、「実質的に純粋なＡ１二量体」はＡ２二量体から技術的におよび商業的に可能な程度に分離され、および「実質的に純粋なＡ型三量体」は他のＡオリゴマーから分離されるが（既存の技術で可能な程度に）しかしいくつかのＡ型三量体の混合物を含みうる。すなわち、「単離および精製された三量体」の語句は主として一種類の三量体をいう一方、「実質的に純粋な三量体」は三量体の混合物を包含しうる。
【００２８】
一部の実施形態では、Ａ型プロシアニジンは、少なくとも純度８０％、好ましくは少なくとも純度８５％、少なくとも純度９０％、少なくとも純度９５％、少なくとも純度９８％、または純度９９％である。そのような化合物は、医薬用途に特に適している。
【００２９】
本発明はまた、下記の式Ａｎを有する化合物、または医薬品として許容されるその塩または誘導体（酸化生成物を含む）の有効量を含む組成物に関する：
【化５】
2009500413.tif 000006
【００３０】
ｎは２ないし１８の整数である；
ＲおよびＸそれぞれはαまたはβ立体化学を有する；
ＲはＯＨ、Ｏ−糖またはＯ−没食子酸である；
Ｃ−４、Ｃ−６およびＣ−８の置換基はそれぞれＸ、ＺおよびＹであり、および単量体単位の結合はＣ−４、Ｃ−６またはＣ−８で起こる；
任意のＣ−４、Ｃ−６またはＣ−８が別の単量体単位と結合していない場合、各Ｘ、Ｙ  は水素または糖；および
糖は随意的に、たとえばエステル結合を介して任意の位置でフェノール類部分で置換される。
【００３１】
糖はグルコース、ガラクトース、ラムノース、キシロース、およびアラビノースから成る群から選択されうる。糖は好ましくは単糖または二糖である。フェノール類部分は、カフェイン酸、桂皮酸、クマル酸、フェルラ酸、没食子酸、ヒドロキシ安息香酸、およびシナピン酸から成る群から選択される。上式の単量体単位は４→６および４→８結合を介して結合しうる。（４→８）結合のみを有するオリゴマー；直鎖；一方、少なくとも一つの（４→６）結合の存在は分枝オリゴマー．を結果として生じる。少なくとも一つの非天然結合（６→６）、（６→８）、および（８→８）を含むオリゴマーもまた本発明の範囲内にある。
【００３２】
ここに記載の式Ａｎの化合物の例は、整数ｎが２から１８；３から１８；２から１２；３から１２；２から５；３から５；４から１２；５から１２；４から１０；から１０に等しいものである。したがって、上式の範囲内のＢ型プロシアニジンは、二量体、三量体、四量体、五量体、六量体、七量体、八量体、九量体、および十量体、前述のオリゴマーのうち二種類以上の混合物でありうる。一部の実施形態では、ｎは  等しい、すなわち、式Ａｎの化合物は二量体である。
【００３３】
一部の実施形態では、式Ａｎの化合物は、Ｒが−でありおよび／またはＸ、Ｙ、およびＺが水素であるものである。別の実施形態では、式Ａｎの化合物は、Ｒが−Ｏ−没食子酸および／またはＸ、ＹおよびＺが水素である。これらの化合物の例は、二量体、たとえばＢ１、Ｂ２およびＢ５二量体でありうる。
【００３４】
このように、一実施形態では、組成物は、式Ａｎの式を有する化合物、または医薬品として許容されるその塩または誘導体（酸化生成物を含む）の有効量を含む：
【化６】
2009500413.tif 000007
【００３５】
ここで
ｎは２ないし１８の整数である；
ＲおよびＸそれぞれはαまたはβ立体化学を有する；
ＲはＯＨである；
Ｃ−４、Ｃ−６およびＣ−８の置換基はそれぞれＸ、ＺおよびＹであり、および単量体単位の結合はＣ−４、Ｃ−６およびＣ−８で起こる；および
任意のＣ−４、Ｃ−６またはＣ−８が別の単量体単位と結合していない場合、Ｘ、ＹおよびＺ水素。
【００３６】
本発明における使用のためのＢ型プロシアニジンは、天然起源のもの、たとえば、カカオ豆またはポリフェノールの別の天然起源に由来する可能性があり、合成によって調製されうる。たとえば、それらは、関連部分が参照により本開示に含まれる、米国特許第５，５５４，６４５号；同第６，６７０，３９０号；同第６，８６４，３７７号；同第６，４２０，５７２号；同第６，１５２，９１２号；同第６，４７６，２４１号の各明細書に記載の通り調製されうる。当業者は、天然または合成ポリフェノールを、入手可能性またはコストに基づいて選択しうる。ポリフェノールは、たとえばチョコレートに含まれるカカオマスのように、カカオポリフェノールを含むカカオ成分の形で組成物を含みうるか、またはたとえば、抽出物、抽出物画分、単離および精製された個々の化合物、ｐｏ抽出画分または合成によって調製された化合物のように、カカオ成分を独立して添加されうる。「カカオ成分」の語は、チョコレートｌｉおよび部分脱脂または完全脱脂カカオマス（たとえばケーキまたはパウダー）のような、殻を除いたカカオ豆に由来するカカオマスを含む材料をいう。
【００３７】
フラバノール、および有効量のフラバノールを含む組成物もまた本発明の範囲内にある。フラバノールの例は、（−）−エピカテキンおよび（＋）−カテキンのようなエピカテキンおよびカテキンである。
【００３８】
フラバノールおよび／またはプロシアニジン誘導体もまた有用でありうる。これらは、単量体およびオリゴマーのエステル、たとえば没食子酸エステル（たとえばエピカテキン没食子酸およびカテキン没食子酸）；単糖または二糖部分（たとえばβ−Ｄ−グルコース）のような糖部分を有する誘導体化化合物、プロシアニジン単量体およびオリゴマーの代謝体、たとえばグルクロニド化およびメチル化誘導体、および酸化生成物を含む。酸化生成物は、関連部分が参照により本開示に含まれる米国特許第 ５，５５４，６４５号明細書に開示される通り調製されうる。エステル、たとえば没食子酸とのエステルは、既知のエステル化反応を用いて、およびたとえば開示が参照により本開示に含まれる米国特許第６，４２０，５７２号明細書に記載される通り、調製されうる。メチル化誘導体、たとえば３'Ｏ−メチル、４'Ｏ−メチル、および３'Ｏ，４'Ｏ−ジメチル誘導体は、たとえば、開示が参照により本開示に含まれるＣｒｅｎ−Ｏｌｉｖｅ ｅｔ ａｌ，２００２，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ Ｔｒａｎｓ．１，８２１−８３０，および Ｄｏｎｏｖａｎ ｅｔ ａｌ．，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ｂ，７２６ （１９９９） ２７７−２８３に開示される通り調製されうる。グルクロニド化生成物は、Ｙｕ ｅｔ ａｌ，"Ａ ｎｏｖｅｌ ａｎｄ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｐｒｏｃｅｄｕｒｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ ｏｆ ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄｅｓ．" Ｏｒｇａｎｉｃ Ｌｅｔｔｅｒｓ，２（１６） （２０００） ２５３９−４１に記載の通り、およびＳｐｅｎｃｅｒ ｅｔ ａｌ，"Ｃｏｎｔｒａｓｔｉｎｇ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｓ ｏｆ ｇｌｕｃｕｒｏｎｉｄａｔｉｏｎ ａｎｄ Ｏ−ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｐｉｃａｔｅｃｈｉｎ ｏｎ ｈｙｄｒｏｇｅｎ ｐｅｒｏｘｉｄｅ−ｉｎｄｕｃｅｄ ｃｅｌｌ ｄｅａｔｈ ｉｎ ｎｅｕｒｏｎｓ ａｎｄ ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｓ．"Ｆｒｅｅ Ｒａｄｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ ａｎｄ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ ３１（９） （２００１） １１３９−４６のように調製されうる。
【００３９】
使用の方法
本明細書に記載の任意の化合物および組成物が、ここに記載の方法を実施するために使用されうる。
【００４０】
閉塞性血栓症に罹患しているかまたはそのリスクのあるヒトまたは家畜へ投与することによる、閉塞性血栓症を治療および／または予防する方法（すなわち、安定な血塊の治療および／または予防）は本発明の範囲内である。第Ｖ因子ライデンのような遺伝因子は、閉塞性血栓症の高いリスクを示しうる。背景の項で考察した通り、閉塞性血塊は、心筋梗塞、虚血性脳卒中またはＤＶＴ、および動脈塞栓または肺塞栓を結果として生じうる。
【００４１】
したがって、ここに記載の化合物および組成物は、発達中の閉塞性血塊を診断された対象へ、血塊、および／または肺塞栓を破壊するために投与されうる。本化合物はまた、閉塞性血塊形成後および／または発作後治療のために、すなわち、心筋梗塞、虚血性脳卒中またはＤＶＴ、および／または動脈塞栓または肺塞栓の発生後に投与されうる。血管発作／発症を罹患している対象は、もう一度罹患するより高いリスクを有し、したがって本発明の化合物が発作後治療として保護的に投与されうる。
【００４２】
「予防」の語は、疾患および／または症状を発症するのに伴うリスクを低減することを意味し、疾患および／または症状の発症を低減することを含む。たとえば、第Ｖ因子ライデンのような遺伝因子は、閉塞性血栓症の高いリスクを示しうる。
【００４３】
上記の方法における使用のための有効量は、ここで提供される指針および  の一般知識を用いて当業者によって決定されうる。たとえば、有効量は、哺乳類の体内（たとえば血液）で生理的に適切な濃度を達成するようなものでありうる。そのような生理的に適切な濃度は、少なくとも約１０ナノモル（ｎＭ）、好ましくは少なくとも約２０ｎＭ、少なくとも約１００ｎＭ、およびより好ましくは少なくとも約５００ｎＭでありうる。一実施形態では、たとえばヒトのような哺乳類の血液中で少なくとも約１マイクロモルが達成される。ここで定義される式Ａｎの化合物は、約５０ｍｇ／日ないし約１０００ｍｇ／日、好ましくは約１００〜１５０ｍｇ／日ないし約９００ｍｇ／日、および非常に好ましくは約３００ｍｇ／日ないし約５００ｍｇ／日にて投与されうる。しかし、上記よりも高い量が使用されうる。量は、開示が参照により本開示に含まれるＡｄａｍｓｏｎ，Ｇ．Ｅ．ｅｔ ａｌ．Ａｇ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．； １９９９； ４７ （１０） ４１８４−４１８８に記載の通り決定されうる。
【００４４】
本化合物は急性に投与でき、または治療／予防的投与は投与計画として、すなわち、有効な期間、たとえば、毎日、毎月、隔月、年２回、年１回、または何らかの他の投与計画で、経験を有する臨床医によって決定される通り、必要な時間にわたって継続されうる。投与は少なくとも、治療的／予防的作用を示すのに必要な期間にわたって継続されうる。好ましくは、組成物は毎日、非常に好ましくは一日２回または３回、たとえば朝および夜に、哺乳類体内で有効な化合物のレベルを維持するために投与される。最も有益な結果を得るために、組成物は少なくとも約３０日、または少なくとも約６０日にわたって投与されうる。これらの投与計画は周期的に反復されうる。
【００４５】
本発明の化合物は、医薬、食品、食品添加物、または栄養補助食品として投与されうる。
【００４６】
ここでは、「食品」とはタンパク質、糖質および脂質を含む材料であり、増殖、修復およびエネルギーを供給するための必須の過程を維持するために生物の体内で使われる。食品はまた、無機質、ビタミンおよび香辛料といった補助物質も含みうる。Ｍｅｒｒｉａｍ−Ｗｅｂｓｔｅｒ'ｓ Ｃｏｌｌｅｇｉａｔｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ，１０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１!を参照。食品の語は、ヒトまたは動物の消費に合わせた飲料を含む。ここでは、「食品添加物」はＦＤＡによって ２１ Ｃ．Ｆ．Ｒ．１７０．３（ｅ）（１）で定義される通りであり、および、直接および間接添加物を含む。ここでは、「医薬」は医薬品である。Ｍｅｒｒｉａｍ Ｗｅｂｓｔｅｒ'ｓ Ｃｏｌｌｅｇｉａｔｅ Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ，１０ｔｈ Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９３を参照。医薬はまた薬剤ともいうことができる。ここでは、「栄養補助食品」は製品（たばこ以外であり、下記の食品成分のうち一つ以上を有するかまたは含む食事を補足することが意図される：ビタミン、無機質、ハーブまたは他の植物、アミノ酸、一日総摂取量を増加させることによって食事を補足するためのヒトによる使用のための食品物質、または濃縮物、代謝体、成分、抽出物、またはこれらの成分の組み合わせ。
【００４７】
本発明の化合物を、随意的に別の循環系保護剤または治療剤と組み合わせて含む医薬は、経口、舌下、頬側、経鼻、直腸、静脈内、非経口、局所といったさまざまな方法で投与されうる。当業者は、随意的に別の循環器系保護剤または治療剤と組み合わせた、フラバノール、Ａ型プロシアニジン、および／またはＢ型プロシアニジンのデリバリーを最大化するための投与方法を決定できる。したがって、それぞれの投与の型に適合させた剤形は本発明の範囲内にあり、および錠剤、カプセル、ゼラチンカプセル（ジェルキャップ）、バルクまたは単位用量粉剤または顆粒剤、乳剤、懸濁剤、ペースト、クリーム、ジェル、フォーム、ゼリー、または注射用剤形といった、固体、液体、および半固体剤形を含む。徐放剤形もまた本発明の範囲内にある。医薬品として許容される適当なキャリヤー、希釈剤、または添加物は本分野で一般に公知であり、および当業者によって容易に決定されうる。錠剤は、たとえば、組成物および随意的にソルビトール、乳糖、セルロース、またはリン酸二カルシウムといったキャリヤーを含む、有効量のフラバノール型プロシアニジン、および／またはＢ型プロシアニジンを含みうる。当業者は、たとえばＩ．Ｖ．（化合物を送るための最も速い方法であり、Ｉ．Ｖ．投与は、即時作用の媒介が必要な場合に使用されうる）、経口投与（以降の発症予防のために選択されうる）のような、最適の投与方法を決定できる。
【００４８】
フラバノール、Ａ型プロシアニジン、および／またはＢ型プロシアニジン、または医薬品として許容されるその塩または誘導体、および随意的に別の循環器系保護剤または治療剤を含む栄養補助食品は、本分野で公知の方法を用いて調製でき、およびたとえば、リン酸二カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、硝酸カルシウム、ビタミン、および無機質といった成分を含みうる。
【００４９】
ここでは、「循環器系保護剤または治療剤」の語は、循環器系を治療または保護するのに有効である、フラバノール、Ａ型プロシアニジンまたはＢ型プロシアニジン以外の薬剤をいう。そのような薬剤の例は、抗血小板治療剤（たとえばアスピリンのようなＣＯＸ阻害剤）；ＮＯ調節剤；コレステロール低下剤（たとえばステロール、スタノール）；および抗凝固剤／血液抗凝固薬（たとえばヘパリン、ワーファリン）である。
【００５０】
さらに本発明の範囲内にあるのは、本発明の組成物（たとえば食品、栄養補助食品、医薬）、および、本発明の化合物の存在または含量強化を示すかまたはここに記載の方法のための組成物の使用を指示するラベルを含む包装製品のような製品である。
【００５１】
また本発明の範囲内にあるのは、少なくとも一つの容器、および少なくとも一つのフラバノール、Ａ型プロシアニジン、および／またはＢ型プロシアニジン、または医薬品として許容されるその塩または誘導体を含む、併用療法における使用に適合された、（包装製品またはキットのような）製品である。製品はさらに、少なくとも一つの別の薬剤、循環器系保護剤または治療剤（すなわち、フラバノール、Ａ型プロシアニジン、Ｂ型プロシアニジン、または医薬品として許容されるその塩または誘導体以外の）を含み、薬剤は別の組成物として別の容器で、または本発明の化合物と混合して提供されうる。
【００５２】
フラバノール、Ａ型および／またはＢ型プロシアニジンおよび／またはそれらの誘導体、および随意的に別の循環器系保護／治療剤を含む食品は、ヒトまたは動物の使用に適応でき、およびペットフードを含む。食品は菓子以外でありうるが、しかし、好ましいコレステロール低下食品は、たとえば米国の商品規格(standard of identify)（ＳＯＩ）および非ＳＯＩチョコレート、たとえばブラックチョコレート、低脂肪チョコレートおよびチョコレートコーティングキャンディでありうるキャンディを含む、ミルク、スイートおよびセミスイートチョコレートのような菓子である。他の例は、焼成品（たとえばブラウニー、ベイクトスナック、クッキー、ビスケット）香辛料、グラノーラバー、トフィーチュー、代替食バー、スプレッド、シロップ、粉末飲料ミックス、ココアまたはチョコレート着香飲料、プディング、餅、米を含む。食品製品は、たとえばピーナッツ、クルミ、アーモンド、およびヘーゼルナッツといったナッツを含むグラノーラバーのような、チョコレートおよびキャンディバーでありうる。一実施形態では、ナッツ殻、すなわちピーナッツ殻が、チョコレートキャンディのヌガーに加えられる。
【００５３】
フラバノールおよび／またはＡ型および／またはＢ型プロシアニジンの一日有効量は一食量で提供されうる。したがって、菓子（たとえばチョコレート）は少なくとも約１００ｍｇ／食（たとえば１５０−２００、２００−４００ｍｇ／食）を含みうる。
【００５４】
本発明はさらに下記の非限定的実施例に記載される。
【実施例】
【００５５】
実施例１−Ａ型プロシアニジンの抽出および単離
抽出
微粉砕したピーナッツ殻（４９８ｇ）をヘキサンで脱脂した（２ｘ２０００ｎ  ヘキサンは室温にて５分間３５００ｒｐｍで遠心分離によって除去され、および廃棄された。残留ヘキサンは一夜蒸発させた。翌日、脱脂ピーナッツ殻を２時間室温にてアセトン：水：酢酸（７０：２９．５：０．５ｖ／ｖ／ｖ）（２ｘ２０００ｍＬ）で抽出した。抽出物を遠心分離によって回収した（室温、５分間、３５００ｒｐｍで）。有機溶媒はロータリーエバポレーションによって部分圧（４０℃）で除去した。抽出溶媒の水系部分を凍結乾燥によって除去し、褐赤色の皮状の固体（５１．３６ｇ）を与えた。
【００５６】
粗ピーナッツ殻抽出物のゲル浸透
上記の通り得られた粗ピーナッツ殻抽出物（２４ｇ）を７０％メタノール（１５０ｍＬ）に溶解し、１時間冷蔵し、３秒間ボルテックスし、次いで室温にて５分間３５００ｒｐｍで遠心分離した。上清を、メタノールで予め膨潤させたＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ−２０（４００ｇ）の入った大カラムに負荷した。カラムを１００％メタノールの定組成で流速１０ｍＬ／分にて溶出した。各２５０ｍＬの２９画分を回収し、およびＮＰ−ＨＰＬＣ（Ａｄａｍｓｏｎ ｅｔ ａｌ，Ｊ．Ａｇ．Ｆｏｏｄ Ｃｈｅｍ．，４７： ４１８４−４１８８，１９９９）によって測定された通り組成物に基づいて合わせ、計８画分を与えたｖｉｉｉ）。画分ｉは単量体エピカテキンおよびカテキンを含み、画分ｉｉ〜ｖｉｉはｄ： 三量体またはその混合物を含んだ。画分ｖ（１．８ｇ）およびｖｉｉ（２．７ｇ）は二量体および三量体の大部分をそれぞれ含み、および以降の精製のために選択された。
【００５７】
Ａ型二量体および三量体の精製
画分ｖ（１．８ｇ）を０．１％酢酸含有２０％メタノール（４０ｍｇ／ｍＬ）に溶解した。注入量は２ｍＬであった。分離はＨｙｐｅｒｓｉｌ ＯＤＳ （２５０ ｘ ２３ ｍｍ）でグラジエント条件下で実施した。移動相は０．１％酢酸を含む水（移動相Ａ）および０．１％酢酸を含むメタノール（移動相Ｂ）から成った。グラジエント条件は：０〜１０分、２０％Ｂ定組成；１０〜６０分、２０〜４０％Ｂ直線；６０〜６５分、４０〜１００％Ｂ直線であった。分離は２８０ｎｍにて監視した。数回の調製分離に由来する等しい保持時間の画分を合わせ、４０℃にて部分減圧下でロータリーエバポレーションし、および凍結乾燥した。５つの画分（ａ〜ｅ）が得られた。画分ｄおよびｅはＬＣＭＳによってそれぞれ二量体Ａ１およびＡ２と特徴付けられた。Ａ１およびＡ２二量体に加えて、４種類の異なる二量体が以前にピーナッツ殻から単離された（Ｌｏｕ ｅｔ ａｌ，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ５１，２９７−３０８，１９９９）。
【００５８】
画分ｖｉｉは上記の通り精製され、上に示す式を有するＡ結合を持つ単一の三量体を得た。
【００５９】
精製された化合物の構造は質量分析によって確認され、および化合物の純度はＨＰＬＣを用いてＵＶ２８０ｎｍにて測定された。Ａ１二量体は純度９５％であり，Ａ２二量体は純度９１％であり，およびＡ三量体は純度８４％であった。
【００６０】
実施例２
下記の実験は、（−）−エピカテキン（（−）−エピカテキン代謝体の混合物を含む）、プロシアニジン二量体Ｂ１、およびプロシアニジン二量体Ａ２が、安定な血塊（血栓）形成の調節に不可欠なタンパク質、具体的には組織プラスミノーゲン活性化因子（ｔＰＡ）、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（ｕＰＡ）、およびプラスミノーゲン活性化因子阻害因子１（ＰＡＩ−１）の発現および分泌に対して著しい作用を有しうることを示す。
【００６１】
我々は、（−）−エピカテキン（（−）−エピカテキン代謝体の混合物を含む）、プロシアニジン二量体Ｂ１、およびプロシアニジン二量体Ａ２の、ヒト内皮細胞の遺伝子発現に対するｉｎ ｖｉｔｒｏ作用を包括的に調べるためのゲノム的方法を用いている。Ａｆｆｙｍｅｔｒｉｘオリゴヌクレオチド・マイクロアレイ・遺伝子発現分析システムを用いた大規模な評価の完了後、我々は続いて我々の知見をＴａｑｍａｎ（登録商標）遺伝子発現アッセイを用いて検証し、および、培養ヒト内皮細胞およびヒト血漿においてそれぞれ、標的タンパク質の量または活性を直接評価することによって、その後のデータを確認した。
【００６２】
総合すれば、我々の結果は、（−）−エピカテキン（（−）−エピカテキン代謝体の混合物を含む）、プロシアニジン二量体Ｂ１、およびプロシアニジン二量体Ａ２が循環器系機能に関連するさまざまなタンパク質の発現、分泌または活性を調節したことを実証した。下記に示す情報は、血栓症および線溶の調節に密接に関係した、およびしたがって循環器系の健康および疾患に密に関連したタンパク質の一群、すなわちｔＰＡ（組織プラスミノーゲン活性化因子）、ｕＰＡ（ウロキナーゼまたは尿プラスミノーゲン活性化因子）およびＰＡＩ（プラスミノーゲン活性化因子阻害因子）に焦点を当てる。
【００６３】
Ｂ１二量体はヒト臍帯静脈内皮細胞由来のｔＰＡおよびＰＡＩの遺伝子発現をＩＮ ＶＩＴＲＯで調節する
方法論的背景
ヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）を内皮特異的、２％血清含有、増殖因子添加、抗生物質フリー培地中で培養した。白人男性１名に由来する継代１回または２回の凍結保存細胞を、フィブロネクチン被覆６ウェルプレートに５０００細胞／ｃｍ２の播種密度で直接播種し、および継代せずに標準的細胞培養条件を用いて培養した。集密に達するまで培地の５０％を２４時間毎に新しい培地に交換した。細胞をＢ１二量体で終濃度μ５Ｍにてそれぞれ０．５、２、４、および２４時間処理し、およびｍＲＮＡをＱｉａｇｅｎ ｍＲＮＡ単離システムを用いて単離した。ｃＤＮＡをｍＲＮＡ試料から、ＨＰＬＣ精製Ｔ７オリゴ（ｄＴ）プライマーおよびＳｕｐｅｒｓｃｒｉｐｔ ＩＩ逆転写酵素（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いて合成した。その後のｃＤＮＡ試料を、Ｑｉａｇｅｎ ＰＣＲ精製システムを用いて精製した。ｃＤＮＡテンプレートを、標準化Ｔａｑｍａｎ（登録商標）遺伝子発現アッセイ（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）反応混合物に加え、および標準化熱サイクリング条件を用いてリアルタイムＰＣＲを実施した。遺伝子発現レベルを分析する絶対定量法を各試料の３連の反応に用い、およびＡｐｐｌｉｅｄ Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ ７９００ＨＴ迅速リアルタイムＰＣＲシステムによって精製された増幅プロットを、ＡＢＩ Ｐｒｉｓｍ ＳＤＳ ｖ２．１ソフトウェアを用いて分析した。
【００６４】
ｔＰＡ、ｕＰＡ、およびＰＡＩ ｍＲＮＡ発現におけるＢ１二量体に媒介される変化
図１は、Ｂ１二量体のＨＵＶＥＣ培養への投与が、ｔＰＡ（図１Ａ）、ｕＰＡ（図１Ｂ）についてｍＲＮＡ発現の時間依存的増加、およびＰＡＩ ｍＲＮＡ（図１Ｃ）の発現の低下を媒介したことを実証する。
【００６５】
Ｂ１二量体はヒト臍帯静脈細胞からのｔＰＡの放出をＩＮ ＶＩＴＲＯで調節する
ＨＵＶＥＣ培養を上で詳述する通り、フィブロネクチン被覆６ウェルプレートに５０００細胞／ｃｍ２の播種密度でＨＵＶＥＣを播種することによって確立した。細胞を継代せずに標準的細胞培養条件を用いて培養した。培地の５０％を２４時間毎に新しい培地に交換した。濃度５μＭにて被験化合物とのＨＵＶＥＣの２４ｈのインキュベート後、培地の部分標本を回収し、および、ｔＰＡおよびＰＡＩの含量についてそれぞれ分析した。残りの培地を回収し、および重量を以降の活性計算のために記録した（計算のために培地ｇ＝１ｍＬとした）。ｔＰＡおよびＰＡＩ放出は、回収された培地中の各タンパク質の活性として、ＥＬＩＳＡに基づく検定法［Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈｆｉｅｌｄ，ＭＩ，ＵＳＡ］を取扱説明書に従って用いて測定した。
【００６６】
Ｂ１二量体はＨＵＶＥＣ培地中のｔＰＡ活性の上昇を媒介する
図２に示す通り、ＨＵＶＥＣのＢ１二量体での処理は、インキュベート２４時間後の細胞培養培地中のｔＰＡ活性の上昇を結果として生じた。ＨＵＶＥＣｔＰＡ放出に対するＢ１二量体の作用は用量依存性であり（図２）、および、Ｂ１二量体濃度５μＭおよび１０μＭでの培地に存在するｔＰＡ活性の上昇は溶媒処理とそれぞれ有意差がある（一元配置ＡＮＯＶＡに続くＴｕｋｅｙ検定、図２）。培地中のＰＡＩの活性の測定は、一見して、二量体がＰＡＩ活性の用量依存性低下を引き起こしたことを示した。しかし、これらの変化は統計的に有意とはいえなかった（Ｐ＝０．０６１、一元配置ＡＮＯＶＡ）。より高い統計的検出力を得るためには、独立した実験の現在の数（ｎ）を増やすことが勧められうる。加えて、総ＰＡＩ（遊離およびｔＰＡ／ｕＰＡ結合）の測定は、被験化合物が有意な用量依存性作用を発揮し、濃度１μＭと比較して５μＭにて総ＰＡＩの増加を引き起こしたことを実証した（図３、一元配置ＡＮＯＶＡに続くＴｕｋｅｙ検定）。
【００６７】
ヒトＢ１二量体摂取および血漿ｕＰＡおよびＰＡＩレベルの急性変化
方法論的背景
被験化合物を、ＩＲＢ承認プロトコルに従いおよび本報告の前項で詳述された通り、ヒトボランティアに投与した。血漿中のｔＰＡ、ｕＰＡ、およびＰＡＩの活性を、ＥＬＩＳＡに基づく検定法［Ｉｎｎｏｖａｔｉｖｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ Ｉｎｃ．，Ｓｏｕｔｈｆｉｅｌｄ，ＭＩ，ＵＳＡ］を取扱説明書に従って用いて測定した。
【００６８】
ｔＰＡ
変形していない（生）データセットの結果として、Ｂ１二量体の摂取は血漿ｔＰＡ活性に時間依存性上昇を引き起こした［一元配置ＡＮＯＶＡ、Ｐ＝０．３３３］一方、溶媒単独の摂取は作用を有しなかった［Ｐ＝０．８０３］。血漿ｔＰＡ活性の平均（ｎ＝４）最大上昇［ｔＰＡｍａｘ］に基づき、Ｂ１二量体の摂取がｔＰＡｍａｘに４６％の上昇を引き起こし［平均ｔＰＡｍａｘ＝２６１．４＋／−３９．４ｍＵ／ｍＬ］、一方、溶媒単独の摂取はｔＰＡｍａｘ１６％を媒介したことが実証できる。さらに比較のため、データを個別のベースライン値に関して正規化している［図４］。結果はまた、Ｂ１二量体の摂取が溶媒（水）の摂取と比較して閉鎖時間の増大を結果として生じたことを示す［図４］。作用の時間依存性に関して個人差に基づく変動を除去するため、正規化データセット［図４］に基づく個別の曲線下面積（ＡＵＣ）を計算しおよび図５に示す。［図４］に示されたデータから確認されうる通り、血漿ｔＰＡ活性は観察の時間経過内でベースライン値に復帰せず、したがって我々は、さらなる調査を実施する場合は時間経過を延長することおよびボランティアの数を増やすことを提案する。
【００６９】
血漿ｔＰＡ活性の測定に加えて、我々は血漿中のｔＰＡｔｏｔａｌの量（ｔＰＡｔｏｔａｌ＝遊離および結合ｔＰＡ）を測定した。変形していない（生）データセットに基づき、Ｂ１二量体の摂取も溶媒の摂取も、血漿ｔＰＡｔｏｔａｌレベルの時間依存性変化を引き起こさなかった［一元配置ＡＮＯＶＡ、それぞれＰ＝０．７６９およびＰ＝０．８１２］。全測定の相加平均は、ｔＰＡｔｏｔａｌについて血漿濃度は６．８＋／−１．６ ｎｇ／ｍＬに等しいことを示す。
【００７０】
ｕＰＡおよびＰＡＩ
変形していない（生）データセットの結果として、Ｂ１二量体の摂取は血漿ｕＰＡおよびＰＡＩ活性に、統計的に有意な時間依存性変化を引き起こさなかった。しかし、これはボランティア１名が他の３名のボランティアの値よりもベースラインで既に４００％高いＰＡＩ値を示した事実に基づく可能性がある。溶媒対照のものでなく二量体に基づき、時間依存的にＰＡＩ血漿活性を、摂取後４時間で統計的に有意に低下させた（Ｐ＝０．０１１、ｔ検定）。
【００７１】
図６、７、および８は、（−）−エピカテキン（）−エピカテキン代謝体の混合物を含む）、プロシアニジン二量体Ｂ１、およびプロシアニジン二量体Ａ２を用いたデータ、およびＨＵＶＥＣにおけるｔＰＡ、ｕＰＡ、またはＰＡＩ発現に対するそれらの作用を示す。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】図１Ａ〜Ｃは、ｔＰＡ、ｕＰＡ、およびＰＡＩのヒト臍帯静脈内皮細胞（ＨＵＶＥＣ）ｍＲＮＡ発現におけるＢ１二量体媒介性変化を表す。ＨＵＶＥＣはＢ!二量体５μＭと０．５および２４時間インキュベートされ、およびｍＲＮＡは実施例１で詳述される通り単離された。ＴＡＱＭＡＮ検定が実施され、および結果はｔＰＡ（Ａ）、ｕＰＡ９（Ｂ）、およびＰＡＩそれぞれについてのｍＲＮＡ発現の相対量として表された。データは平均値＋／−ＳＤとして示され、および独立した３回の実験を表す。統計的評価（Ｔ検定）の結果が各データ列の上に示される。
【図２】図２はＨＵＶＥＣからのｔＰＡ放出のＢ１二量体誘導性増強を表す。ＨＵＶＥＣをさまざまな濃度のＢ１二量体で２４時間処理し、培地を回収し、および培地中のｔＰＡ活性を測定した。データは実験であった（ｎの値が各治療群の上に示される）。統計的評価は、Ｂ１二量体がＨＵＶからのｔＰＡ放出の用量依存性増加を媒介したことを示す  は溶媒対照との有意差を示す）。
【図３】図３は、総ＰＡＩの培地濃度を調節するＢ１二量体を用いたＨＵＶＥＣの処理を示す。ＨＵＶＥＣをさまざまな濃度のＢ１二量体で２４時間処理し、培地を回収し、および総濃度（遊離および結合）を測定した。データは総ＰＡＩとしてｎｇ／ｍＬで表され、および独立したｎ回の実験の平均値＋／−ＳＤを示す（ｎの値が各治療群の上に示される）。統計的評価は、Ｂ１二量体がＨＵＶＥＣからのｔＰＡ放出の用量依存性増加を媒介したことを示す（＊は溶媒対照との有意差を示す）。
【図４】図４は、血漿ｔＰＡ活性を上昇させるＢ１摂取を示す。Ｂ１（および溶媒が二重盲検交差設計を用いてヒトボランティアに摂取された。血漿ｔＰＡ活性は上に詳述する通り評価され、データは各人のベースラインについて正規化され、平均ｔＰＡ活性＋／−ＳＤ（ｎ＝４）として表され、および時間の関数としてプロットされた。［＊］データ点はその時点で溶媒対照と比較して統計的に差がある。
【図５】図５は、血漿ｔＰＡ活性を上昇させるＢ１摂取を示す。血漿ｔＰＡ活性についての各人のデータセットはベースラインについて正規化され、時間に対してプロットされ、および個別のＡＵＣ［ｍＵ＊ｍｌ−１／２４０分］が計算された。示したデータはＢ１二量体、溶媒のみのそれぞれ、摂取について個別のＡＵＣの平均値＋／−ＳＤ（ｎ＝４）を表す。
【図６】図６はＨＵＶＥＣにおけるｔＰＡ発現のＴＡＱＭＡＮ（登録商標）分析を表す。
【図７】図７はＨＵＶＥＣにおけるｕＰＡ発現のＴＡＱＭＡＮ（登録商標）分析を表す。
【図８】図８はＨＵＶＥＣにおけるＰＡＩ１発現のＴＡＱＭＡＮ（登録商標）分析を表す。
【図１】
2009500413.tif 000010
【図２】
2009500413.tif 000011
【図３】
2009500413.tif 000012
【図４】
2009500413.tif 000013
【図５】
2009500413.tif 000014
【図６】
2009500413.tif 000015
【図７】
2009500413.tif 000016
【図８】
2009500413.tif 000017