(57)【要約】ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）であるヒト患者をＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態について処置するための方法が提供される。また、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）であるヒト患者においてＢ細胞による抗体産生を阻害する方法を提供する。該方法は、ヒト患者に治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与することを含む。抗ＣＤ４０抗体で処置可能であり、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））での処置に不応性である癌または前悪性状態を有するヒト患者を同定するための方法およびキット、ならびにリツキシマブ（リツキサン（登録商標））での処置に不応性である癌または前悪性状態を有するヒト患者の処置のための抗体療法を選択するための方法およびキットもまた提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態についてヒト患者を処置するための方法であって、該ヒト患者は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）であり、該方法は、該ヒト患者に治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記癌または前悪性状態がＢ細胞系統の癌である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記Ｂ細胞系統の癌が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ性白血病（ＰＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、へアリーセル白血病、ホジキン病、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、およびびまん性小リンパ球性リンパ腫などのリンパ腫、濾胞性、ＤＬＢＣＬ、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾原発リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、脈管内リンパ腫症、免疫芽球性リンパ腫、ならびにＡＩＤＳ関連リンパ腫からなる群より選択される、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記癌または前悪性状態が非Ｂ細胞血液学的悪性疾患である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記非Ｂ細胞血液学的悪性疾患が急性骨髄性白血病である、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記癌または前悪性状態が充実腫瘍である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記充実腫瘍が、卵巣、肺（例えば、扁平上皮細胞癌腫の非小細胞肺癌、腺癌腫、ならびに大細胞癌腫型および小細胞肺癌）、乳房、結腸、腎臓（例えば、腎細胞癌腫など）、膀胱、肝臓（例えば、肝細胞癌腫など）、胃、頚部、前立腺、鼻咽頭癌、ならびに甲状腺癌（例えば、甲状腺乳頭癌腫）、皮膚癌、例えば、黒色腫および肉腫（例えば、骨肉腫やユーイング肉腫など）からなる群より選択される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記癌または前悪性状態が、ＣＤ２０発現細胞と関連している癌または前悪性状態である、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記癌または前悪性状態がＢ細胞悪性疾患である、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記癌または前悪性状態が、ＣＤ４０およびＣＤ２０の両方を発現する細胞と関連している癌または前悪性状態である、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
前記癌または前悪性状態がＢ細胞悪性疾患である、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記抗ＣＤ４０抗体が非経口投与経路によって投与される、請求項１〜１１いずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記抗ＣＤ４０抗体が静脈内投与または皮下投与される、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者におけるＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態の処置のための医薬の製造における治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体の使用。
【請求項１５】
前記癌または前悪性状態がＢ細胞系統の癌である、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
前記Ｂ細胞系統の癌が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ性白血病（ＰＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、へアリーセル白血病、ホジキン病、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、およびびまん性小リンパ球性リンパ腫などのリンパ腫、濾胞性、ＤＬＢＣＬ、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾原発リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、脈管内リンパ腫症、免疫芽球性リンパ腫、ならびにＡＩＤＳ関連リンパ腫からなる群より選択される、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
前記癌または前悪性状態が非Ｂ細胞血液学的悪性疾患である、請求項１４に記載の使用。
【請求項１８】
前記非Ｂ細胞血液学的悪性疾患が急性骨髄性白血病である、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記癌または前悪性状態が充実腫瘍である、請求項１４に記載の使用。
【請求項２０】
充実腫瘍が、卵巣、肺（例えば、扁平上皮細胞癌腫の非小細胞肺癌、腺癌腫、ならびに大細胞癌腫型および小細胞肺癌）、乳房、結腸、腎臓（例えば、腎細胞癌腫など）、膀胱、肝臓（例えば、肝細胞癌腫など）、胃、頚部、前立腺、鼻咽頭癌、ならびに甲状腺癌（例えば、甲状腺乳頭癌腫）、皮膚癌、例えば、黒色腫および肉腫（例えば、骨肉腫やユーイング肉腫など）からなる群より選択される、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
前記癌または前悪性状態が、ＣＤ２０発現細胞と関連している癌または前悪性状態である、請求項１４に記載の使用。
【請求項２２】
前記癌または前悪性状態がＢ細胞悪性疾患である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
前記癌または前悪性状態が、ＣＤ４０およびＣＤ２０の両方を発現する細胞と関連している癌または前悪性状態である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２４】
前記癌または前悪性状態がＢ細胞悪性疾患である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
前記医薬が非経口投与経路による投与用に製剤化される、請求項１４〜２４いずれか１項に記載の使用。
【請求項２６】
前記医薬が静脈内または皮下投与用に製剤化される、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者においてＢ細胞による抗体産生を阻害する方法であって、該ヒト患者に有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与することを含む、方法。
【請求項２８】
前記ヒト患者がＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態を有する、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者においてＢ細胞による抗体産生を阻害するための医薬の製造における有効量の抗ＣＤ４０抗体の使用。
【請求項３０】
前記抗ＣＤ４０抗体がヒトモノクローナル抗体である、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法または使用。
【請求項３１】
前記ヒト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体がヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む、請求項３０に記載の方法または使用。
【請求項３２】
前記ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域が、配列番号４または配列番号５に示されたアミノ酸配列を含む、請求項３１に記載の方法または使用。
【請求項３３】
前記抗ＣＤ４０抗体には有意なアゴニスト活性がない、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の方法または使用。
【請求項３４】
前記抗ＣＤ４０抗体がＣＤ４０発現細胞におけるＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌシグナル伝達のアンタゴニストである、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の方法または使用。
【請求項３５】
前記抗ＣＤ４０抗体が、
ａ）モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２；
ｂ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体；
ｃ）配列番号２に示された配列、配列番号４に示された配列、配列番号５に示された配列、配列番号２および配列番号４に示された両方の配列ならびに配列番号２および配列番号５に示された両方の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；
ｄ）配列番号１に示された配列、配列番号３に示された配列ならびに配列番号１および配列番号３に示された両方の配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子にコードされたアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；
ｅ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体に結合し得るエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｆ）配列番号７または配列番号９に示されたヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｇ）配列番号７または配列番号９に示されたヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８９を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｈ）競合的結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；
ｉ）前記項目ａ）のモノクローナル抗体または前記項目ｃ）〜ｈ）いずれか１つのモノクローナル抗体であって、該抗体は組換え生成される、抗体；ならびに
ｊ）前記項目ａ）〜ｉ）いずれか１つのモノクローナル抗体の抗原結合断片であるモノクローナル抗体であって、該断片が、ヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持している、抗体
からなる群より選択される、請求項１〜３４のいずれか１項に記載の方法または使用。
【請求項３６】
前記抗ＣＤ４０抗体がモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２である、請求項３５に記載の方法または使用。
【請求項３７】
前記抗原結合断片が、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片および単鎖Ｆｖ断片からなる群より選択される、請求項３５に記載の方法または使用。
【請求項３８】
抗ＣＤ４０抗体で処置可能であり、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））での処置に不応性である癌または前悪性状態を有するヒト患者を同定するための方法であって、該方法は、
ａ）ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態を有するヒト患者を同定すること；および
ｂ）該ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型（Ｖ／Ｖ、Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）を決定すること
を含み、ここで、該癌または前悪性状態は、該ヒト患者がＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である場合、抗ＣＤ４０抗体で処置可能である、方法。
【請求項３９】
リツキシマブ（リツキサン（登録商標））での処置に不応性である癌または前悪性状態を有するヒト患者の処置のための抗体療法を選択するための方法であって、該方法は、
ａ）ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態を有し、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））での処置に不応性であるヒト患者を同定すること；および
ｂ）該ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型（Ｖ／Ｖ、Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）を決定すること
を含み、
ここで、該ヒト患者がＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である場合、抗ＣＤ４０抗体が該癌または前悪性状態の処置のために選択される、方法。
【請求項４０】
前記ヒト患者が抗癌剤での治療に不応性である請求項１〜３９のいずれか１項に記載の方法または使用。
【請求項４１】
前記ヒト患者が抗ＣＤ２０モノクローナル抗体での治療に不応性である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記ヒト患者が抗ＣＤ２０モノクローナル抗体での治療に抵抗性である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記ヒト患者が抗ＣＤ２０モノクローナル抗体での治療に非応答性である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
前記抗ＣＤ２０モノクローナル抗体がリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｎ（登録商標））である、請求項４１〜４３いずれか１項に記載の方法。
【請求項４５】
ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するための試薬を含む、抗ＣＤ４０抗体で処置可能な癌または前悪性状態を有するヒト患者を同定するためのキット。
【請求項４６】
ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するための試薬を含む、ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態を有するヒト患者の処置のための抗体療法を選択するためのキット。
【請求項４７】
１０ヌクレオチド長以上でヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するのに適した配列の少なくとも１つのプローブを含むマイクロアレイを含む、請求項４５または請求項４６に記載のキット。
【請求項４８】
ＦｃγＲＩＩＩａのアミノ酸１５８をコードするゲノム領域のポリメラーゼ触媒型増幅におけるプライマーとしての使用に適したオリゴヌクレオチドを含む、請求項４５または請求項４６に記載のキット。
【請求項４９】
ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するのに適した１種類以上の制限酵素を含む、請求項４５または請求項４６に記載のキット。
【請求項５０】
ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態についてヒト患者を処置するための方法であって、該方法が、該ヒト患者に治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を、投与後、該抗ＣＤ４０抗体がＣＤ４０発現細胞によって有意に内在化されないように投与することを含む、方法。
【請求項５１】
ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態についてヒト患者を処置するための方法であって、該方法が、該ヒト患者に治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を、投与後、該抗ＣＤ４０抗体がＣＤ４０発現細胞の表面上に実質的に均一に分布されたままであるように投与することを含む、方法。
【請求項５２】
ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態についてヒト患者を処置するための方法であって、該方法が、該ヒト患者に抗ＣＤ４０抗体を、投与後、該ヒト患者において治療または予防有効量の該抗ＣＤ４０抗体がＣＤ４０発現細胞の表面に存在するように投与することを含む、方法。
【請求項５３】
ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ発現ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によるＣＤ４０発現細胞の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）がもたらされる、請求項１〜３７または５０〜５２いずれか１項に記載の方法または使用。
【請求項５４】
前記抗ＣＤ４０抗体が、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）のアッセイにおいてリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｎ（登録商標））よりも強力であり、該アッセイが、ＣＤ４０発現細胞およびＣＤ２０発現細胞を単離されたヒトナチュラルキラー（ＮＫ）細胞とともに関連抗体の存在下でインキュベートすることを含む、請求項１〜３７または５０〜５２いずれか１項に記載の方法または使用。
【請求項５５】
前記抗ＣＤ４０抗体が、ヌードマウス異種移植片腫瘍モデルにおいてリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｎ（登録商標））よりも強力である、請求項１〜３７または５０〜５２いずれか１項に記載の方法または使用。
【請求項５６】
前記ヌードマウス異種移植片腫瘍モデルが骨髄腫細胞株のＤａｕｄｉヒトリンパ腫細胞株を使用する、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記抗ＣＤ４０抗体がヒトＣＤ４０に、少なくとも約１０−６Ｍ〜少なくとも約１０−１２Ｍの親和性（ＫＤ）で結合する、請求項１〜３７または５０〜５２いずれか１項に記載の方法または使用。
【請求項５８】
前記抗ＣＤ４０抗体がヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに、少なくとも約０．５μＭの親和性（ＫＤ）で結合する、請求項１〜３７または５０〜５２いずれか１項に記載の方法または使用。
【請求項５９】
前記抗ＣＤ４０抗体がヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに、少なくとも約１２μＭの親和性（ＫＤ）で結合する、請求項１〜３７または５０〜５２いずれか１項に記載の方法または使用。
【請求項６０】
前記抗ＣＤ４０抗体が、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに少なくとも約０．５μＭの親和性（ＫＤ）で結合し、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに少なくとも約１２μＭの親和性（ＫＤ）で結合する、請求項１〜３７または５０〜５２いずれか１項に記載の方法または使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗ＣＤ４０抗体の新規な用途、特に、ＣＤ４０発現細胞と関連している癌および前悪性状態の処置における使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーのリガンドの構成員の多くおよびその対応する受容体は、アポトーシスを誘導すること、または細胞の生存および増殖を増強することにより正常な細胞の成長を調節する。このアポトーシスシグナルと生存および増殖のシグナル間のバランスにより、正常な細胞の恒常性が維持されている。少なくとも２６種類のＴＮＦファミリー受容体および１８種類のＴＮＦファミリーリガンドが、これまでに同定されている。該受容体およびリガンドの両方の生物学的に活性な形態は、自己集合型タンパク質三量体である。該受容体およびリガンドの両方の可溶性の膜貫通形態が同定されている。該受容体の細胞内ドメインは、配列相同性を共有していないが、その細胞外ドメインは、４０アミノ酸のシステイン高含有反復配列を含む。その細胞質テールは、２つの主要な群の細胞内タンパク質：ＴＮＦ受容体関連因子（ＴＲＡＦ）およびデスドメイン（ＤＤ）含有タンパク質と相互作用することによりシグナル伝達する。少なくとも６つのヒトＴＲＡＦと、一部のこれらの受容体の細胞質テール上のＴＲＡＦ結合部位間の相互作用により、いくつかのシグナル伝達経路、例えば、ＡＫＴ（セリン／トレオニンキナーゼ（プロテインキナーゼＢまたはＰＫＢと呼ばれる）、核因子−κＢ（ＮＦ−κＢ）およびマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）が開始される。例えば、ＹｏｕｎｅｓおよびＫａｄｉｎ（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１８：３５２６−３５３４による概説を参照のこと。
【０００３】
ＴＮＦファミリー受容体の構成員であるＣＤ４０は、正常および新生物形成性両方のヒトＢ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、内皮細胞、単球様上皮細胞、ならびに多くの充実腫瘍、例えば、肺、乳房、卵巣、膀胱および結腸の癌の表面上に存在する５０〜５５ｋＤａの細胞表面抗原である。Ｂ細胞膜上のＣＤ４０抗原へのＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）の結合により、Ｂ細胞の活性化および増殖を刺激する共刺激シグナルがもたらされ、高レベルの可溶性免疫グロブリンを分泌する形質細胞へのＢ細胞成熟がもたらされる。ＣＤ４０は、ＴＲＡＦ−２、−３、−５および−６を活性化し、これらが、ＣＤ４０Ｌ（膜結合ＣＤ４０Ｌまたは可溶性ＣＤ４０Ｌのいずれか）によるＣＤ４０のグラフティング（ｅｎｇａｇｅｍｅｎｔ）後の多様なシグナル伝達経路、例えば、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）、ｃ−ｊｕｎアミノ末端キナーゼ（ＪＮＫ）、ｐ３８マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）、ＡＫＴおよびＮＦ−κＢを上方調節する（例えば、ＹｏｕｎｅｓおよびＣａｒｂｏｎｅ（１９９９）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍａｒｋｅｒｓ  １４：１３５−１４３；ｖａｎ  ＫｏｏｔｅｎおよびＢａｎｃｈｅｒｅａｕ（２０００）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．６７：２−１７を参照のこと）。
【０００４】
Ｂ細胞系統の腫瘍型由来の悪性Ｂ細胞は、ＣＤ４０を発現し、生存および増殖に関してＣＤ４０シグナル伝達に依存するようである。低−および高−悪性度のＢ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症ならびにホジキン病を有する患者由来の形質転換細胞は、ＣＤ４０を発現する。ＣＤ４０発現はまた、急性骨髄芽球性白血病およびＡＩＤＳ関連リンパ腫の５０％においても検出される。
【０００５】
いくつかの癌腫および肉腫もまた高レベルのＣＤ４０発現を発現するが、これらの癌細胞におけるＣＤ４０シグナル伝達の役割は、あまり充分理解されていない。ＣＤ４０発現癌腫としては、膀胱癌腫（Ｐａｕｌｉｅら（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２：５９０−５９５；Ｂｒａｅｓｃｈ−Ａｎｄｅｒｓｅｎら（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２：５６２−５６７）、乳癌腫（Ｈｉｒａｎｏら（１９９９）Ｂｌｏｏｄ  ９３：２９９９−３００７；Ｗｉｎｇｅｔｔら（１９９８）Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．Ｔｒｅａｔ．５０：２７−３６）；前立腺癌（Ｒｏｋｈｌｉｎら（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：１７５８−１７６８）、腎細胞癌腫（Ｋｌｕｔｈら（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：８９１−８９９）、未分化鼻咽頭癌腫（ＵＮＰＣ）（Ａｇａｔｈａｎｇｇｅｌｏｕら（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１４７：１１５２−１１６０）、扁平上皮細胞癌腫（ＳＣＣ）（Ａｍｏら（２０００）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１０：４３８−４４２；Ｐｏｓｎｅｒら（１９９９）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５：２２６１−２２７０）、甲状腺乳頭癌腫（Ｓｍｉｔｈら（１９９９）Ｔｈｙｒｏｉｄ  ９：７４９−７５５）、皮膚の悪性黒色腫（ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｏｏｒｄら（１９９６）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１４９：１９５３−１９６１）、胃癌腫（Ｙａｍａｇｕｃｈｉら（２００３）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｎｃｏｌ．２３（６）：１６９７−７０２）、および肝臓癌腫（例えば、Ｓｕｇｉｍｏｔｏら（１９９９）Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ３０（４）：９２０−２６、ｄｉｓｃｕｓｓｉｎｇ  ヒト肝細胞癌腫を参照のこと）が挙げられる。ＣＤ４０発現肉腫については、例えば、ヒト骨肉腫およびユーイング肉腫について論考されたＬｏｌｌｉｎｉら（１９９８）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４（８）：１８４３−８４９を参照のこと。
【０００６】
ＣＤ４０シグナル伝達は、未熟Ｂ細胞およびＢ細胞リンパ腫を、ＩｇＭまたはＦａｓによって誘導されるによってアポトーシスから保護するものである（例えば、Ｗａｎｇら（１９９５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５：３７２２−３７２５を参照のこと）。マントル細胞リンパ腫の細胞は、高レベルのＣＤ４０を発現し、外来ＣＤ４０リガンドの添加により、その生存が増強され、フルダラビン誘導型アポトーシスから救済されることが示された（Ｃｌｏｄｉら（１９９８）Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１０３：２１７−２１９）。悪性Ｂ細胞生存および増殖におけるＣＤ４０シグナル伝達の役割により、ＣＤ４０抗原は抗癌療法の潜在的な標的となる。実際、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、悪性ヒトＢ細胞の増殖および／または分化をインビトロで阻害する（例えば、米国特許出願公開公報第２００４０１０９８５７号を参照のこと）。さらに、侵攻性ヒトリンパ腫のマウスモデルは、動物の生存の増進において抗ＣＤ４０抗体のインビボ有効性を示した。例えば、Ｆｕｎａｋｏｓｈｉら（１９９４）Ｂｌｏｏｄ  ８３：２７８７−２７９４；Ｔｕｔｔら（１９９８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１：３１７６−３１８５；およびＳｚｏｃｉｎｓｋｉら（２００２）Ｂｌｏｏｄ  １００：２１７−２２３を参照のこと。
【０００７】
ＣＤ４０リガンド（ＣＤ４０Ｌ）は、ＣＤ１５４としても知られる３２〜３３ｋＤａの膜貫通タンパク質であり、これはまた、それぞれ１８ｋＤａおよび３１ｋＤａの２つのより小さな生物学的に活性な可溶性形態で存在する（Ｇｒａｆら（１９９５）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：１７４９−１７５４；Ｍａｚｚｅｉら（１９９５）Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：７０２５−７０２８；Ｐｉｅｔｒａｖａｌｌｅら（１９９６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：５９６５−５９６７）。ＣＤ４０Ｌは、活性化されているが休止期でないＣＤ４＋  Ｔ−ヘルパー細胞上で発現される（Ｌａｎｅら（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：２５７３−２５７８；Ｓｐｒｉｇｇｓら（１９９２）Ｊ  Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：１５４３−１５５０；およびＲｏｙら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：１−１４）。ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌはともに、クローニングおよびキャラクタライズされている（Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉら（１９８９）ＥＭＢＯ  Ｊ．８：１４０３−１４１０；Ａｒｍｉｔａｇｅら（１９９２）Ｎａｔｕｒｅ  ３５７：８０−８２；Ｌｅｄｅｒｍａｎら（１９９２）Ｊ．  Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：１０９１−１１０１；およびＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈら（１９９２）ＥＭＢＯ  Ｊ．１１：４３１３−４３２１）。ヒトＣＤ４０Ｌについて記載された米国特許第５，９４５，５１３号もまた参照のこと。ＣＤ４０Ｌ遺伝子でトランスフェクトされ、ＣＤ４０Ｌタンパク質をその表面上に発現する細胞は、Ｂ細胞増殖を誘発し得、他の刺激性シグナルと一緒に抗体産生を誘導し得る（Ａｒｍｉｔａｇｅら（１９９２）前掲；および特許文献１）。リンパ性悪性疾患、自己免疫疾患、心血管疾患および本態性血小板血症を有する患者は、可溶性ＣＤ４０Ｌ（ｓＣＤ４０Ｌ）の血清レベルの上昇を有し、これは健常被験体では見られない。ＣＤ４０Ｌの構成的発現は、いくつかのＢ細胞リンパ性悪性疾患、例えば、マントル細胞リンパ腫、濾胞性リンパ腫、辺縁層リンパ腫、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、びまん性大細胞型リンパ腫（ＤＬＢＣＬ）、濾胞性リンパ腫（ＦＬ）、およびＨＩＶ感染Ｂ細胞リンパ腫を有する患者のサブセットにおいて観察されている。例えば、Ｃｌｏｄｉら（１９９８）Ｂｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１０３：２７０−２７５；Ｓｃｈａｔｔｎｅｒら（１９９８）Ｂｌｏｏｄ  ９１：２６８９−２６９７；Ｍｏｓｅｓら（１９９７）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．３：１２４２−１２４９；Ｔｒｅｎｔｉｎら（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４９４０−４９４７；およびＰｈａｍら（２００２）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １６：３７−５０）を参照のこと。ＣＤ４０Ｌは、ホジキン病領域内の新生物形成性濾胞またはＣＤ４０発現リード−シュテルンベルク細胞において、ＣＤ４０発現腫瘍Ｂ細胞の細胞接触依存性相互作用に重要な役割を果たしている可能性がある（Ｃａｒｂｏｎｅら（１９９５）Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１４７：９１２−９２２）。しかしながら、悪性Ｂ細胞の生存対細胞死応答をもたらすＣＤ４０Ｌ媒介型ＣＤ４０シグナル伝達の機構は、完全にはわかっていない。例えば、濾胞性リンパ腫細胞では、アポトーシス誘導ＴＲＡＩＬ分子（ＡＰＯ−２Ｌ）の下���調節（Ｒｉｂｅｉｒｏら（１９９８）Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．１０３：６８４−６８９）およびｂｃｌ−２の過剰発現、ならびにＢ−ＣＬＬの場合は、ＣＤ９５（Ｆａｓ／ＡＰＯ−ｌ）の下方調節（Ｌａｙｔｒａｇｏｏｎ−Ｌｅｗｉｎら（１９９８）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｈａｅｍａｔｏｌ．６１：２６６−２７１）が、生存の機構として提案されている。対照的に、濾胞性リンパ腫の徴候は、ＣＤ４０活性化により、ＴＮＦ（Ｗｏｒｍら（１９９４）Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．６：１８８３−１８９０）およびＣＤ９５分子（Ｐｌｕｍａｓら（１９９８）Ｂｌｏｏｄ  ９１：２８７５−２８８５）の上方調節がもたらされることを示す。
【０００８】
ヒト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体およびそのいくつかの用途は、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５、特許文献６、特許文献７および特許文献８として公開された共同所有特許出願に開示されている。該出願には、具体的には、ヒトＩｇＧ１重鎖遺伝子座およびヒトκ軽鎖遺伝子座を有するトランスジェニックマウス（ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ａｂｇｅｎｉｘ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）の免疫処置によって生成されるＣＨＩＲ−１２．１２と命名したヒトＩｇＧ１抗ＣＤ４０モノクローナル抗体が開示されている。
【０００９】
ＦＡＣＳ解析によって示されるように、ＣＨＩＲ−１２．１２は、ヒトＣＤ４０に特異的に結合し、ＣＤ４０−リガンド（ＣＤ４０Ｌ）結合を妨げ得る。ＣＨＩＲ−１２．１２は、細胞表面ＣＤ４０に予め結合されたＣＤ４０Ｌと競合して離脱させ得る。ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体は、強力なアンタゴニストであり、インビトロで正常および悪性Ｂ細胞のＣＤ４０Ｌ媒介型増殖を阻害する。ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体は、正常なヒトＢリンパ球において生存およびＣＤ４０Ｌによって媒介されるシグナル伝達経路を直接阻害する。インビトロでは、ＣＨＩＲ−１２．１２は、ＡＤＣＣによってＮＨＬ患者の原発性癌細胞を致死させる。用量依存性の抗腫瘍活性が、異種移植片ヒトリンパ腫モデルにおいて見られた。ＣＨＩＲ−１２．１２は、現在、Ｂ細胞悪性疾患についてフェーズＩ治験中である。
【００１０】
ＣＤ２０は、Ｂ細胞分化の初期に発現される細胞表面抗原であり、Ｂ細胞発達中は、該細胞表面上に留まる。ＣＤ２０は、Ｂ細胞活性化に関与しており、非常に高いレベルで新生物形成性のＢ細胞上に発現され、臨床的には治療標的と認識されている（例えば、Ｈｏｏｉｊｂｅｒｇら（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５５：２６２７を参照のこと）。リツキシマブ（リツキサン（登録商標））などのＣＤ２０を標的化する抗体は、非ホジキンリンパ腫の処置に対して米食品医薬品局によって認可されている（例えば、Ｂｏｙｅら（２００３）Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．１４：５２０を参照のこと）。リツキサン（登録商標）は、低−、中−および高−悪性度非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に対して有効な処置であり、他のＢ細胞悪性疾患において活性であることが示されている。（例えば、Ｍａｌｏｎｅｙら（１９９４）Ｂｌｏｏｄ  ８４：２４５７−２４６６）、ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎら（１９９８）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１６：２８２５−２８３３、Ｍａｌｏｎｅｙら（１９９７）Ｂｌｏｏｄ  ９０：２１８８−２１９５、Ｈａｉｎｓｗｏｒｔｈら（２０００）Ｂｌｏｏｄ  ９５：３０５２−３０５６、Ｃｏｌｏｍｂａｔら（２００１）Ｂｌｏｏｄ  ９７：１０１−１０６、Ｃｏｉｆｆｅｒら（１９９８）Ｂｌｏｏｄ  ９２：１９２７−１９３２）、Ｆｏｒａｎら（２０００）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１８：３１７−３２４、Ａｎｄｅｒｓｏｎら（１９９７）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２５：７０５−７０８、またはＶｏｓｅら（１９９９）Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．１０：５８ａを参照のこと）。
【００１１】
正確な作用機構はわかっていないが、リツキサン（登録商標）の抗リンパ腫効果は、一部、補体媒介性細胞傷害性（ＣＭＣ）、抗体依存性細胞媒介型細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、細胞増殖の阻害、および最終的なアポトーシスの直接誘導によるものであることを示す証拠がある。ＡＤＣＣは、多くの市販および研究中のモノクローナル抗体の主要な作用機構である。しかしながら、一部の患者はリツキサン（登録商標）での処置に対して抵抗性となる（Ｗｉｔｚｉｇら（２００２；Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２０：３２６２、Ｇｒｉｌｌｏ−Ｌｏｐｅｚら（１９９８）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１６：２８２５、またはＪａｚｉｒｅｈｉら（２００３）Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．２：１１８３−１１９３を参照のこと）。例えば、一部の患者では、抗ＣＤ２０抗体療法後、悪性Ｂ細胞上でのＣＤ２０発現が低下する（Ｄａｖｉｓら（１９９９）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５：６１１）。さらにまた、低悪性度ＮＨＬを有する患者の３０％〜５０％は、このモノクローナル抗体に対して臨床応答を示さない（Ｈａｉｎｓｗｏｒｔｈら（２０００）Ｂｌｏｏｄ  ９５：３０５２−３０５６；Ｃｏｌｏｍｂａｔら（２００１）Ｂｌｏｏｄ  ９７：１０１−１０６）。また、ＮＨＬにおけるリツキシマブの臨床的活性は、患者のＦｃγＲＩＩＩａ遺伝子型と相関することが示されている。Ｖ／ＶまたはＶ／ＦのＦｃγＲＩＩＩａ  １５８ａａ多型を有する患者はリツキシマブに対して、Ｆ／Ｆを有する患者よりも応答性である（例えば、Ｃａｒｔｒｏｎら（２００２）Ｂｌｏｏｄ  ９９（３）：７５４−７５８またはＤａｌｌ‘ＯｚｚｏらＣａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００４）６４：４６６４−４６６９参照のこと）。このモノクローナル抗体に対して抵抗性を発現しているか、またはこの抗体での初期治療に抵抗性であるＢ細胞リンパ腫を有する患者では、代替形態の治療的介入が必要である。
【特許文献１】米国特許第５，９４５，５１３号明細書
【特許文献２】国際公開第２００５／０４４８５４号パンフレット
【特許文献３】国際公開第２００５／０４４３０４号パンフレット
【特許文献４】国際公開第２００５／０４４３０５号パンフレット
【特許文献５】国際公開第２００５／０４４３０６号パンフレット
【特許文献６】国際公開第２００５／０４４８５５号パンフレット
【特許文献７】国際公開第２００５／０４４３０７号パンフレット
【特許文献８】国際公開第２００５／０４４２９４号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
したがって、癌および前悪性状態のための新たな治療用薬剤および新たな治療ストラテジーの継続的な必要性が存在する。特に、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてホモ接合性またはヘテロ接合性であり、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））などの抗ＣＤ２０抗体での処置に対して不応性である患者の処置のための新たな治療ストラテジーの必要性が存在する。さらに、コンジュゲートを必要とすることなく悪性細胞を致死させ得る抗体は、より廉価に調製され、より少ない副作用を有するものであり得る薬物をもたらす。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
（発明の簡単な概要）
ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）であるヒト患者をＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態について処置するための方法を提供する。該方法は、ヒト患者に治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与することを含む。本発明はまた、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者におけるＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態の処置のための医薬の製造における治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体の使用を提供する。
【００１４】
また、ヒト患者に有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与することを含む、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者においてＢ細胞による抗体産生を阻害する方法を提供する。本発明はまた、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者においてＢ細胞による抗体産生を阻害するための医薬の製造における有効量の抗ＣＤ４０抗体の使用を提供する。
【００１５】
抗ＣＤ４０抗体で処置可能であり、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））での処置に不応性である癌または前悪性状態を有するヒト患者を同定するための方法およびキットもまた提供される。一部のある実施形態において、該方法は、ａ）ＣＤ４０発現細胞と関連し、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））での処置に不応性である癌または前悪性状態を有するヒト患者を同定すること；およびｂ）ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型（Ｖ／Ｖ、Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）を決定することを含み、ここで、該癌または前悪性状態は、ヒト患者がＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である場合、抗ＣＤ４０抗体で処置可能である。本発明は、この方法を用いて同定されたヒト患者に治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与する工程をさらに含むものであり得る。抗ＣＤ４０抗体で処置可能である癌または前悪性状態を有するヒト患者の同定をもたらす本発明のキットは、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するための試薬を含む。
【００１６】
本発明はまた、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））での処置に不応性である癌または前悪性状態を有するヒト患者の処置のための抗体療法を選択するための方法およびキットを提供する。一部のある実施形態において、該方法は、ａ）ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態を有し、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））での処置に不応性であるヒト患者を同定すること；およびｂ）ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型（Ｖ／Ｖ、Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）を決定することを含み、ここで、ヒト患者がＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である場合、抗ＣＤ４０抗体が該癌または前悪性状態の処置のために選択される。本発明は、この方法を用いて同定されたヒト患者に治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与する工程をさらに含むものであり得る。ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態を有するヒト患者の処置のための抗体療法の選択をもたらす本発明のキットは、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するための試薬を含む。
【００１７】
本発明はまた、ヒト患者に低速内在化抗体を投与することを含む、ヒト患者をＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態について処置するための方法を提供する。かかる一実施形態において、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体はヒト患者に、その投与後、抗ＣＤ４０抗体がＣＤ４０発現細胞によって有意に内在化されないように投与される。別のかかる実施形態において、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体はヒト患者に、その投与後、抗ＣＤ４０抗体がＣＤ４０発現細胞の表面上に実質的に均一に分布されたままであるように投与される。また別のかかる実施形態において、抗ＣＤ４０抗体はヒト患者に、その投与後、ヒト患者において治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体がＣＤ４０発現細胞の表面に存在するように投与される。
【００１８】
本発明に従う使用のための抗ＣＤ４０抗体はＣＤ４０抗原に特異的に結合する。一部のある実施形態において、本発明の方法における使用のための抗ＣＤ４０抗体、特にモノクローナル抗体は、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに対する強力な結合親和性、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに対する強力な結合親和性、またはヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８ＶおよびＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆの両方に対する強力な結合親和性を示す。一部のこれらの実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ヒト患者のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上の２つのＦｃγＲＩＩＩａアミノ酸１５８アロタイプのいずれか（ＶまたはＦ）に、強力な抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を引き起こすのに充分な結合特性で結合し得る。好適な抗ＣＤ４０抗体としては、限定されないが、有意なアゴニスト活性がない抗ＣＤ４０抗体、例えばＣＤ４０発現細胞におけるＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌシグナル伝達のアンタゴニストである抗ＣＤ４０抗体などが挙げられる。一部のある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ａ）モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２；ｂ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体；ｃ）配列番号２に示された配列、配列番号４に示された配列、配列番号５に示された配列、配列番号２および配列番号４に示された両方の配列ならびに配列番号２および配列番号５に示された両方の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；ｄ）配列番号１に示された配列、配列番号３に示された配列ならびに配列番号１および配列番号３に示された両方の配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子にコードされたアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；ｅ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体に結合し得るエピトープに結合するモノクローナル抗体；ｆ）配列番号７または配列番号９に示されたヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；ｇ）配列番号７または配列番号９に示されたヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８９を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；ｈ）競合的結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；ｉ）前記項目ａ）のモノクローナル抗体または前記項目ｃ）〜ｈ）いずれか１つのモノクローナル抗体であって、組換えにより作製された抗体；ならびにｊ）前記項目ａ）〜ｉ）いずれか１つのモノクローナル抗体の抗原結合断片であって、ヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持している断片であるモノクローナル抗体からなる群より選択される。
【００１９】
本発明の方法は、ＣＤ４０発現細胞と関連している癌および前悪性状態の処置における用途が見出される。例としては、限定されないが、Ｂ細胞系統の癌、非Ｂ細胞血液学的悪性疾患、例えば、急性骨髄性白血病、充実腫瘍およびＣＤ２０発現細胞と関連している癌または前悪性状態が挙げられる。本発明の方法は、ＣＤ４０およびＣＤ２０の両方を発現する細胞と関連している癌および前悪性状態に関して特に好都合である。この様式において、本発明により、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）についてホモ接合性またはヘテロ接合性である患者に対して、他の癌療法剤、例えば抗ＣＤ２０抗体での治療に不応性である癌または前悪性状態を有する患者の処置が可能になる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
（発明の詳細な説明）
本発明者らは、抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２など）が、他のＡＤＣＣ媒介抗体が有効性が低いか相対的に有効でない条件下で、ＣＤ４０発現標的細胞の強力な抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介し得るという驚くべき所見を見出した。リツキシマブ（リツキサン（登録商標））などの他の抗体とは反対に、本発明に従って使用される抗ＣＤ４０抗体は、ヒト患者のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上の２つのＦｃγＲＩＩＩａアミノ酸１５８アロタイプのいずれか（ＶまたはＦ）に、強力なＡＤＣＣを引き起こすのに充分な結合特性で結合し得る。この所見は予想外であり、患者標本（ｃｒｏｓｓ−ｓｅｃｔｉｏｎ）全体における癌および前悪性状態を処置するための本発明者らの能力における進歩を表す。
【００２１】
したがって、ＣＨＩＲ−１２．１２などの抗ＣＤ４０抗体は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖについてホモ接合性（遺伝子型Ｖ／Ｖ）のヒト患者に加え、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者におけるＣＤ４０発現細胞と関連している癌および前悪性状態の処置において使用され得る。
【００２２】
本発明は、したがって、ヒト患者を、ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態について処置する方法であって、前記ヒト患者がＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）であり、前記ヒト患者に治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与することを含む方法を提供する。本発明はまた、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者におけるＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態の処置のための医薬の製造における治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体の使用を提供する。
【００２３】
上記のように、ＮＨＬにおけるリツキシマブの臨床的活性は、患者のＦｃγＲＩＩＩａ遺伝子型と相関することが示された。Ｆ／ＦのＦｃγＲＩＩＩａ  １５８ａａ多型を有する患者は、Ｖ／ＶまたはＶ／Ｆを有する患者よりもリツキシマブに対して応答性が低い（例えば、Ｃａｒｔｒｏｎら（２００２）Ｂｌｏｏｄ  ９９（３）：７５４−７５８またはＤａｌｌ’Ｏｚｚｏら（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６４：４６６４−４６６９参照のこと）。したがって、本発明は、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））などの抗ＣＤ２０抗体での処置に応答性でない癌および前悪性状態の処置に特に好都合である。
【００２４】
ＣＨＩＲ−１２．１２などの抗ＣＤ４０抗体は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖについてホモ接合性（遺伝子型Ｖ／Ｖ）のヒト患者に加え、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者においてＢ細胞による抗体産生を阻害するための方法において使用され得る。
【００２５】
したがって、本発明は、ヒト患者に有効量の抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２など）を投与することを含む、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者においてＢ細胞による抗体産生を阻害する方法を提供する。本発明はまた、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者においてＢ細胞による抗体産生を阻害するための医薬の製造における有効量の抗ＣＤ４０抗体の使用を提供する。
【００２６】
当業者には、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者においてＢ細胞による抗体産生が阻害され得ることは予測され得なかったであろう。
【００２７】
本発明により、個々のヒト患者に対して、該患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型に基づいて選択された、ＡＤＣＣ媒介抗ＣＤ４０抗体を投与することによる処置レジメンが可能になる。
【００２８】
本発明は、抗ＣＤ４０抗体で処置可能であり、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））での処置に不応性である癌または前悪性状態を有するヒト患者の同定方法であって、
ａ）ＣＤ４０発現細胞と関連し、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））での処置に不応性である癌または前悪性状態を有するヒト患者を同定すること；および
ｂ）前記ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型（Ｖ／Ｖ、Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）を決定すること
を含み、ここで、前記癌または前悪性状態は、前記ヒト患者がＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である場合、抗ＣＤ４０抗体で処置可能である方法を提供する。本発明は、この方法を用いて同定されたヒト患者に治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与する工程をさらに含むものであり得る。
【００２９】
この抗ＣＤ４０抗体で処置可能な癌または前悪性状態を有するヒト患者を同定する方法は、当業者によって適当な診断キットを用いて容易に行なわれ得る。該キットは、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するのに適した試薬を含むものであるのがよい。したがって、本発明はまた、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するための試薬を含む、抗ＣＤ４０抗体で処置可能な癌または前悪性状態を有するヒト患者を同定するためのキットを提供する。好適なキットは、本明細書中のどこかでより詳細に記載している。
【００３０】
本発明はまた、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））での処置に不応性である癌または前悪性状態を有するヒト患者の処置のための抗体療法の選択方法であって、
ａ）ＣＤ４０発現細胞と関連し、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））での処置に不応性である癌または前悪性状態を有するヒト患者を同定すること；および
ｂ）前記ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型（Ｖ／Ｖ、Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）を決定すること
を含み、ここで、前記ヒト患者がＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である場合、抗ＣＤ４０抗体が前記癌または前悪性状態の処置のために選択される方法を提供する。特に、抗ＣＤ４０抗体は、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））での処置に優先して選択され得る。本発明は、この方法を用いて同定されたヒト患者に治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与する工程をさらに含むものであり得る。
【００３１】
この癌または前悪性状態を有するヒト患者の処置のための抗体療法を選択する方法は、当業者によって適当な診断キットを用いて容易に行なわれ得る。該キットは、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するのに適した試薬を含むものであるのがよい。したがって、本発明はまた、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するための試薬を含む、ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態を有するヒト患者の処置のための抗体療法を選択するためのキットを提供する。
【００３２】
本発明者らはまた、ＣＨＩＲ−１２．１２などの抗ＣＤ４０抗体が、投与後、ＣＤ４０発現細胞によって有意に内在化されないという驚くべき所見を見出した。それどころか、ＣＨＩＲ−１２．１２などの抗ＣＤ４０抗体は、投与後、相当な期間、ＣＤ４０発現細胞の表面上に実質的に均一に分布される。これは、他の抗体、特に、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））などの抗ＣＤ２０抗体とは対照的である。
【００３３】
ＣＤ４０発現細胞の表面におけるＣＤ４０結合の持続期間、およびＣＤ４０発現細胞の表面上での抗ＣＤ４０抗体の均一な分布により、抗ＣＤ４０抗体が、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上のＦｃＲ、例えば、ＦｃγＲＩＩＩａへの結合により、ＣＤ４０発現標的細胞の強力な抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介することが可能になる。
【００３４】
したがって、本発明は、ヒト患者に治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を、投与後、抗ＣＤ４０抗体がＣＤ４０発現細胞によって有意に内在化されないように投与することを含む、ヒト患者を、ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態について処置する方法を提供する。
【００３５】
本発明はまた、ヒト患者に治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を、投与後、抗ＣＤ４０抗体がＣＤ４０発現細胞の表面上に実質的に均一に分布されたままであるように投与することを含む、ヒト患者を、ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態について処置する方法を提供する。
【００３６】
本発明はまた、ヒト患者に抗ＣＤ４０抗体を、投与後、前記ヒト患者において治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体がＣＤ４０発現細胞の表面に存在するように投与することを含む、ヒト患者を、ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態について処置する方法を提供する。
【００３７】
本発明のこれらの態様は、したがって、患者に低速内在化抗体抗体を投与することを伴う。「低速内在化抗体」により、細胞表面上に相当な期間、位置したままである抗体が意図される。当業者には認識されるように、この性質は、治療が有効となるために抗体−受容体複合体の内在化が現に必要とされる多くの治療的適用に対して好都合であるとみなされる性質とは対照的である。この状況において、相当な期間は、一般的に、３時間を超え、好ましくは６時間、より好ましくは１２時間、より好ましくは２４時間、３６時間、４８時間、７２時間、９６時間、１２０時間、１４４時間、１６８時間またはそれ以上である。
【００３８】
好ましくは、ＣＤ４０発現細胞の表面上に最初に位置していた抗体の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％またはそれ以上が、上記の相当な期間後、該細胞の表面上に位置したままである。
【００３９】
抗体の内在化は、種々のアッセイによって評価され得る。例えば、Ｄａｕｄｉリンパ腫細胞株またはＡＲＨ７７  ＭＭ細胞株などの細胞株が、内在化に対する候補抗体結合の効果を評価するために使用され得る。細胞は、ヒトＩｇＧ１（対照抗体）または候補抗体とともに、氷上（内在化を阻止するための０．１％アジ化ナトリウムとともに）または３７℃（アジ化ナトリウムなし）である期間、好適には３時間インキュベートされる。冷染色バッファー（例えば、ＰＢＳ＋ｌ％ＢＳＡ＋０．１％アジ化ナトリウム）での洗浄後、細胞は、例えばヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＦＩＴＣで３０分間、氷上にて染色される。次いで、染色の程度が評価され得る。この例では、幾何平均蛍光強度（ＭＦＩ）が、ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒなどによって記録され得る。他の適当なアッセイは、当業者にはわかるであろう（例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｂｇｅｎｉｘ．ｃｏｍ／ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ／ＳＢＳ２００３％２０ｐｏｓｔｅｒ．ｐｄｆを参照のこと）。
【００４０】
本明細書の実施例４および５に示した実験では、ＣＨ１２．１２とともに氷上にてアジ化ナトリウムの存在下で、または３７℃にてアジ化ナトリウムの非存在下でインキュベートした細胞間で、ＭＦＩにおける差は観察されなかった（図７〜１０を参照のこと）。これらのデータは、ＣＨ１２．１２が、ＣＤ４０に結合すると内在化されず、リツキシマブよりも長期間、継続して細胞表面上にディスプレイされることを示す。
【００４１】
本発明を利用するために使用され得る標準的な手法および手順の概要を以下に示す。本発明が、記載の特定の方法論、プロトコル、細胞株、ベクターおよび試薬に限定されないことは理解されよう。また、本明細書で用いる専門用語は、具体的な実施形態を説明する目的のためにすぎないことも理解され、この専門用語によって本発明の範囲が限定されるべきでないことを意図する。本発明の範囲は、添付の特許請求の範囲の用語によってのみ限定される。
【００４２】
本明細書では、ヌクレオチドおよびアミノ酸に対して標準的な略号を用いる。
【００４３】
本発明の実施には、特に記載のない限り、当業者の技量の範囲である分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ手法および免疫学の慣用的な手法が使用される。
【００４４】
かかる手法は、文献に充分説明されている。参照するのに特に適当なテキストの例としては、以下のもの：Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ；Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（第２版）；Ｄ．Ｎ  Ｇｌｏｖｅｒ編（１９８５）ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ、第ＩおよびＩＩ巻；Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ編（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ編（１９８４）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ；Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編（１９８６）Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、１９８６）；Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ（１９８４）Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ；ｔｈｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ｓｅｒｉｅｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．）、特に第１５４および１５５巻；Ｊ．Ｈ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編（１９８７）Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；ＭａｙｅｒおよびＷａｌｋｅｒ編（１９８７）Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ）；Ｓｃｏｐｅｓ（１９８７）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：ＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓおよびＰｒａｃｔｉｃｅ（第２版；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ、Ｎ．Ｙ．）；ならびにＤ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編（１９８６）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第Ｉ〜ＩＶ巻が挙げられる。
【００４５】
本発明の方法は、ＣＤ４０発現細胞と関連している癌および前悪性状態の処置における抗ＣＤ４０抗体の使用を伴う。
【００４６】
「ＣＤ４０」、「ＣＤ４０抗原」または「ＣＤ４０受容体」により、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体ファミリーの５０〜５５ｋＤａの膜貫通糖タンパク質が意図される（例えば、米国特許５，６７４，４９２号および同第４，７０８，８７１号；Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃら（１９８９）ＥＭＢＯ  ８：１４０３；Ｃｌａｒｋ（１９９０）Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ  ３６：３３；Ｂａｒｃｌａｙら（１９９７）Ｔｈｅ  Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｆａｃｔｓ  Ｂｏｏｋ（第２版；Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）を参照のこと）。この遺伝子の選択的スプライシング転写物バリアントにコードされたヒトＣＤ４０の２つのアイソフォームが同定されている。第１のアイソフォーム（「ロングアイソフォーム」または「アイソフォーム１」としても知られる）は、２７７アミノ酸の前駆体ポリペプチド（配列番号９；最初はＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＣＡＡ４３０４５として報告され、アイソフォーム１としてＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿００１２４１で特定される）として発現され、配列番号８（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｘ６０５９２およびＮＭ＿００１２５０を参照のこと）にコードされ、これは、最初の１９残基で表されるシグナル配列を有する。第２のアイソフォーム（「ショートアイソフォーム」または「アイソフォーム２」としても知られる）は、２０３アミノ酸の前駆体ポリペプチド（配列番号７；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿６９０５９３）として発現され、配列番号６（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿１５２８５４）にコードされ、これもまた、最初の１９残基で表されるシグナル配列を有する。ヒトＣＤ４０のこれらの２つのアイソフォームの前駆体ポリペプチドは、共通するその最初の１６５残基（すなわち、配列番号７および配列番号９の残基１〜１６５）を共有する。ショートアイソフォームの前駆体ポリペプチド（配列番号７に示す）は、コードセグメントを欠き、翻訳フレームシフトをもたらす転写物バリアント（配列番号６）にコードされている。得られるＣＤ４０アイソフォームは、より短く、ＣＤ４０のロングアイソフォームに含まれるもの（配列番号９の残基１６６〜２７７に示されるＣ末端）とは異なるＣ末端（配列番号７の残基１６６〜２０３）を含む。本発明の目的のため、用語「ＣＤ４０」または「ＣＤ４０抗原」、「ＣＤ４０細胞表面  抗原」または「ＣＤ４０受容体」には、ＣＤ４０のショートおよびロング両方のアイソフォームが包含される。ＣＤ４０抗原は、完全または部分的にグリコシル化されたものであり得る。
【００４７】
本明細書中のどこかで記載のように、ＣＤ４０は、正常および新生物形成性両方のヒトＢ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、ＣＤ８＋  Ｔ細胞、内皮細胞、単球様上皮細胞、ならびに多くの充実腫瘍、例えば、肺、乳房、卵巣、膀胱および結腸癌の表面上に見られる。Ｂ細胞系統の腫瘍型由来の悪性Ｂ細胞は、ＣＤ４０を発現し、生存および増殖に関してＣＤ４０シグナル伝達に依存するようである。低−および高−悪性度Ｂ細胞リンパ腫、Ｂ細胞急性リンパ芽球性白血病、多発性骨髄腫、慢性リンパ性白血病、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、およびホジキン病を有する患者由来の形質転換細胞は、ＣＤ４０を発現する。ＣＤ４０発現はまた、急性骨髄芽球性白血病およびＡＩＤＳ関連リンパ腫の５０％においても検出される。いくつかの癌腫および肉腫もまた高レベルのＣＤ４０発現を示すが、これらの癌細胞におけるＣＤ４０発現と関連したＣＤ４０シグナル伝達の役割は、あまり充分理解されていない。ＣＤ４０発現癌腫としては、膀胱癌腫、乳癌腫、前立腺癌、腎細胞癌腫、未分化鼻咽頭癌腫（ＵＮＰＣ）、扁平上皮細胞癌腫（ＳＣＣ）、甲状腺乳頭癌腫、皮膚の悪性黒色腫、胃癌腫および肝臓癌腫が挙げられる。
【００４８】
「ＣＤ４０発現細胞」により、本明細書では、検出可能なレベルのＣＤ４０抗原を発現する任意の正常または悪性細胞が意図される。好ましくは、ＣＤ４０発現細胞は、検出可能なレベルの細胞表面ＣＤ４０抗原を発現する細胞である。細胞内におけるＣＤ４０発現を検出するための方法は当該技術分野でよく知られており、限定されないが、ＰＣＲ手法、免疫組織化学検査、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡなどが挙げられる。これらの方法により、ＣＤ４０ｍＲＮＡ、ＣＤ４０抗原および細胞表面ＣＤ４０抗原の検出が可能になる。細胞表面ＣＤ４０発現の検出は、本明細書の実施例３に記載のようにして、または他の適当な方法によって行なわれ得る。
【００４９】
悪性細胞は悪性Ｂ細胞であり得る。「悪性Ｂ細胞」により、任意の新生物形成性Ｂ細胞、例えば、限定されないが、リンパ腫（例えば、低−、中−および高−悪性度Ｂ細胞リンパ腫）、免疫芽球性リンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ホジキン病、エプスタイン‐バーウイルス（ＥＢＶ）誘導性リンパ腫およびＡＩＤＳ関連リンパ腫、ならびにＢ細胞急性リンパ芽球性白血病、骨髄腫、慢性リンパ性白血病などに由来するＢ細胞が意図される。
【００５０】
「ＣＤ４０リガンド」または「ＣＤ４０Ｌ」により、主に、３２〜３３ｋＤａの膜貫通タンパク質が意図され、これはまた、それぞれ１８ｋＤａおよび３１ｋＤａの２つのより小さな生物学的に活性な可溶性形態で存在する（Ｇｒａｆら（１９９５）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：１７４９−１７５４；Ｍａｚｚｅｉら（１９９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：７０２５−７０２８；Ｐｉｅｔｒａｖａｌｌｅら（１９９６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：５９６５−５９６７）。ヒトＣＤ４０Ｌはまた、ＣＤ１５４またはｇｐ３９としても知られている。また、「ＣＤ４０リガンド」または「ＣＤ４０Ｌ」により、１つ以上のＣＤ４０シグナル伝達経路に結合して活性化し得る任意の他のペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質が意図される。したがって、「ＣＤ４０リガンド」としては、限定されないが、完全長ＣＤ４０リガンドタンパク質、ならびにＣＤ４０発現細胞におけるＣＤ４０シグナル伝達に結合して刺激する機能を果たすのに充分な活性を保持しているそのバリアントおよび断片が挙げられる。天然ＣＤ４０リガンド（例えば、ヒトＣＤ４０Ｌ）に対する修飾としては、限定されないが、置換、欠失、切断、伸長、融合タンパク質、断片、ペプチド模倣物などが挙げられる。
【００５１】
「ＣＤ４０シグナル伝達」により、細胞表面ＣＤ４０とＣＤ４０リガンドまたは他のアゴニスト（例えば、アゴニスト抗体など）との相互作用に起因する任意の生物学的活性が意図される。ＣＤ４０シグナル伝達の例は、ＣＤ４０発現細胞の増殖および生存、ならびにＣＤ４０発現細胞内での１つ以上のＣＤ４０シグナル伝達経路の刺激をもたらすシグナルである。ＣＤ４０「シグナル伝達経路」または「シグナル伝達経路」は、ＣＤ４０受容体とＣＤ４０リガンド（例えば、ＣＤ４０Ｌ）との相互作用に起因する少なくとも１つの生化学反応または一群の生化学反応であって、そのシグナル経路を経由して伝達されると、該シグナル伝達カスケードの１種類以上の下流分子の活性化をもたらすシグナルを生成させる反応を意味することが意図される。シグナル伝達経路は、細胞表面ＣＤ４０受容体から細胞の原形質膜を通過する、一連のシグナル伝達分子の１つ以上を経由する、細胞の細胞質を経由する、および場合によっては細胞の核内へのシグナルの伝達をもたらすいくつかのシグナル伝達分子を伴う。本発明に対して特に重要であるのは、ＣＤ４０シグナル伝達経路、例えば、ＡＫＴシグナル伝達経路（これは、ＡＫＴの活性化、および最終的に、ＮＦ−κＢシグナル伝達経路を経由するＮＦ−κＢの活性化をもたらす）；ならびにマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）シグナル伝達経路、例えば、ＭＥＫ／ＥＲＫシグナル伝達経路およびＭＥＫ／ｐ３８シグナル伝達経路（これらは、それぞれＥＲＫおよびｐ３８の活性化をもたらす）である。
【００５２】
上記のように、本発明は、ヒト患者に治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与することを含む、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である、ヒト患者を、ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態処置する方法を提供する。
【００５３】
「ヒト患者」により、任意のＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態に罹患した、その発症もしくは再発のリスクがあるヒト患者が意図される。
【００５４】
「ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態」により、ＣＤ４０発現細胞と関連していることがわかっている任意のＢ細胞系統の癌、非Ｂ細胞血液学的悪性疾患および充実腫瘍が意図される。
【００５５】
本発明の方法は、Ｂ細胞系統の癌の治療的処置に有用である。ＣＤ４０発現細胞と関連しているＢ細胞系統の癌としては、限定されないが、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ性白血病（ＰＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、へアリーセル白血病、ホジキン病、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、およびリンパ腫、例えば限定されないが、びまん性小リンパ球性リンパ腫、濾胞性、ＤＬＢＣＬ、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾原発リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、脈管内リンパ腫症、免疫芽球性リンパ腫、ＡＩＤＳ関連リンパ腫などが挙げられる。
【００５６】
したがって、本発明は、異常で制御不能なＢ細胞増殖または蓄積に関する非ホジキンリンパ腫を有する被験体の処置における用途が見出される。本発明の目的のため、かかるリンパ腫は、Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ分類スキームに従って表示する、すなわち低悪性度、中悪性度および高悪性度に分類されるＢ細胞リンパ腫と表示する（「Ｔｈｅ  Ｎｏｎ−Ｈｏｄｇｋｉｎ’ｓ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｉｃ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｊｅｃｔ」、Ｃａｎｃｅｒ  ４９（１９８２）：２１１２−２１３５を参照のこと）。したがって、低悪性度Ｂ細胞リンパ腫としては、小リンパ球性、濾胞性小切れ込み核細胞、ならびに濾胞性混合型切れ込み核小および大細胞リンパ腫が挙げられ、中悪性度リンパ腫としては、濾胞性大細胞、びまん性小切れ込み核細胞、びまん性混合型小および大細胞、ならびにびまん性大細胞リンパ腫が挙げられ、高悪性度リンパ腫としては、大細胞免疫芽球性、リンパ芽球性、ならびにバーキットおよび非バーキット型の非切れ込み核小細胞リンパ腫が挙げられる。
【００５７】
本発明の方法は、Ｒｅｖｉｓｅｄ  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  ａｎｄ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ（ＲＥＡＬ）システムに従って分類されるＢ細胞リンパ腫の治療的処置に有用である。かかるＢ細胞リンパ腫としては、限定されないが、前駆体Ｂ細胞新生物に分類されるリンパ腫、例えば、Ｂリンパ芽球性白血病／リンパ腫；末梢Ｂ細胞新生物、例えば、Ｂ細胞慢性リンパ性白血病／小リンパ球性リンパ腫、リンパ形質細胞性リンパ腫／免疫細胞種、マントル細胞リンパ腫（ＭＣＬ）、濾胞中心リンパ腫（濾胞性）（例えば、びまん性小細胞、びまん性混合型小および大細胞ならびにびまん性大細胞リンパ腫）、辺縁層リンパ腫リンパ腫（例えば、節外性、節性および脾臓原発型）、形質細胞種／骨髄腫、亜型縦隔原発（胸腺）のびまん性大細胞Ｂ細胞リンパ腫、バーキットリンパ腫、ならびにバーキット様高悪性度Ｂ細胞リンパ腫；ならびに分類不能な低悪性度または高悪性度Ｂ細胞リンパ腫などが挙げられる。
【００５８】
本発明の方法は、ＭＧＵＳ（意味未確定の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ｇａｍｍｏｐａｔｈｙ  ｏｆ  ｕｎｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅ））として知られる前悪性状態の治療的処置に有用である。ＭＧＵＳを有する患者のほぼ２５％が、最終的に、多発性骨髄腫（ＭＭ）または関連形質細胞障害を発症する（Ｋｙｌｅ（１９９３）Ｍａｙｏ  Ｃｌｉｎｉｃ．Ｐｒｏｃ．６８：２６−３６）。骨髄内での悪性形質細胞の増殖、血清または尿中モノクローナルタンパク質（Ｍタンパク質）、貧血、高カルシウム血症、腎不全および溶解性骨病変の検出は、ＭＭの臨床症状発現であるが、ＭＧＵＳは、臨床的には、他のＭＭの臨床徴候はない血清または尿中におけるＭタンパク質の存在と認識されている（例えば、ＫｙｌｅおよびＬｕｓｔ（１９８９）Ｓｅｍｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ  ２６：１７６−２００；ＧｒｅｉｐｐおよびＬｕｓｔ  Ｓｔｅｍ  Ｃｅｌｌｓ（１９９５）１３：１０−２１を参照のこと）。ＭＧＵＳ患者は無症候性であり、Ｍタンパク質の安定な測定値を有する（Ｋｙｌｅ（１９９３）Ｍａｙｏ  Ｃｌｉｎｉｃ．Ｐｒｏｃ．６８：２６−３６）。被験体においてＭＧＵＳが同定されたら、適切な抗ＣＤ４０抗体、例えばアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を用いた維持療法により、これらの患者において多発性骨髄腫の発達が阻止され得る。
【００５９】
本発明の方法はまた、ＣＤ４０発現細胞と関連している非Ｂ細胞関連造血器悪性疾患、例えば、急性骨髄性白血病などの治療的処置に有用である。
【００６０】
本発明の方法はまた、充実腫瘍の治療的処置に有用である。ＣＤ４０発現細胞と関連している充実腫瘍としては、限定されないが、卵巣、肺（例えば、扁平上皮細胞癌腫の非小細胞肺癌、腺癌腫、ならびに大細胞癌腫型および小細胞肺癌）、乳房、結腸、腎臓（例えば、腎細胞癌腫など）、膀胱、肝臓（例えば、肝細胞癌腫など）、胃、頚部、前立腺、鼻咽頭癌、甲状腺（例えば、甲状腺乳頭癌腫）、皮膚癌、例えば、黒色腫および肉腫（例えば、骨肉腫やユーイング肉腫など）が挙げられる。
【００６１】
ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態は、ＣＤ４０発現細胞上の望ましくないレベルのＣＤ４０シグナル伝達と関連している癌もしくは前悪性状態であり得るか、または該癌もしくは前悪性状態は、間接的にのみＣＤ４０発現細胞と関連しているものであり得る。「望ましくないレベルのＣＤ４０シグナル伝達と関連している癌または前悪性状態」により、その発達または進行が望ましくないレベルのＣＤ４０シグナル伝達と関連している癌または前悪性状態が意図される。
【００６２】
「望ましくないレベルのＣＤ４０シグナル伝達」により、癌または前悪性状態を有するヒト患者のＣＤ４０発現細胞内で起こり得る任意の生理学的に望ましくないレベルのＣＤ４０シグナル伝達が意図される。
【００６３】
該癌または前悪性状態は、ＣＤ２０発現細胞と関連している癌または前悪性状態であり得る。かかる癌または前悪性状態としては、限定されないが、本明細書中のどこかで記載したＢ細胞悪性疾患が挙げられる。
【００６４】
本発明は、本明細書に開示されたＣＨＩＲ−１２．１２などの抗ＣＤ４０抗体の新規な用途が、リツキサン（登録商標）などの抗ＣＤ２０抗体の使用に伴う問題に取り組むものであるため、ＣＤ４０およびＣＤ２０の両方を発現する細胞と関連している癌および前悪性状態について特に好都合である。特に、本発明により、本明細書中のどこかでより詳細に記載したように、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）についてホモ接合性またはヘテロ接合性である患者に対して、他の癌療法剤、例えば、リツキサン（登録商標）などの抗（ａｎｉ−）ＣＤ２０抗体での治療に不応性である癌または前悪性状態を有する患者の処置が可能になる。
【００６５】
本発明の治療方法では、本明細書中のどこかで規定した少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体を用いて、癌または前悪性状態に関する正の治療応答を促進させる。
【００６６】
癌または前悪性状態に関する「正の治療応答」により、抗ＣＤ４０抗体の治療活性と関連した該癌もしくは前悪性状態における改善および／または該癌もしくは前悪性状態と関連している症状における改善が意図される。すなわち、抗増殖効果であるさらなる腫瘍派生物（ｏｕｔｇｒｏｗｔｈ）の抑制、腫瘍の大きさの縮小、癌細胞の数の減少および／またはＣＤ４０発現細胞と関連している１つ以上の症状の低減が観察され得る。したがって、例えば、正の治療応答は、該疾患における下記の改善：（１）腫瘍の大きさの縮小；（２）癌（すなわち、新生物形成性）細胞の数の減少；（３）新生物形成性細胞死の増大；（４）新生物形成性細胞の生存の阻害；（４）腫瘍増殖の阻害（すなわち、ある程度の遅滞、好ましくは停止）；（５）末梢器官内への癌細胞浸潤の阻害（すなわち、ある程度の遅滞、好ましくは停止）；（６）腫瘍転移の阻害（すなわち、ある程度の遅滞、好ましくは停止）；（７）さらなる腫瘍派生物の抑制；（８）患者の生存率の増大；および（９）癌と関連している１つ以上の症状のある程度の緩和の１つ以上をいうものであり得る。
【００６７】
任意の所与の悪性疾患における正の治療応答は、その悪性疾患に対する具体的な標準化された応答基準によって決定され得る。腫瘍の応答は、腫瘍形態（すなわち、ｏｖｅｒａｌｌ  腫瘍負荷量、腫瘍の大きさなど）の変化について、スクリーニング手法、例えば、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャン、Ｘ線計測画像法、コンピュータ連動断層撮影（ＣＴ）スキャン、骨スキャン画像法、内視鏡検査、および腫瘍生検試料採取、例えば、骨髄穿刺（ＢＭＡ）および循環血液中の腫瘍細胞の計数などを用いて評価され得る。これらの正の治療応答に加え、抗ＣＤ４０治療用薬剤での治療を受けている被験体は、その疾患と関連している症状の改善という有益な効果を受けることがあり得る。したがって、Ｂ細胞腫瘍では、被験体は、いわゆるＢ症状、すなわち、寝汗、発熱、体重減少および／または蕁麻疹の低減を経験することがあり得る。前悪性状態では、抗ＣＤ４０治療用薬剤での治療により、意味未確定の単クローン性高ガンマグロブリン血症（ＭＧＵＳ）に苦しむ被験体において、関連悪性状態の進展（例えば、多発性骨髄腫の進展）が阻止され得る、および／または該発達までの時間が延長され得る。
【００６８】
疾患の改善は、完全な応答として特性評価され得る。「完全な応答」により、任意の事前の異常放射線学的試験値（骨髄腫の場合は、骨髄および脳脊髄液（ＣＳＦ）または異常なモノクローナルタンパク質）の標準化による臨床的に検出可能な疾患の非存在が意図される。かかる応答は、本発明による処置後、少なくとも４〜８週間、または特定の疾患では場合により６〜８週間持続するものでなければならない。あるいはまた、疾患の改善は、部分応答に分類されるものであり得る。「部分応答」により、新たな病変の非存在下における測定可能な全腫瘍負荷量（すなわち、被験体内に存在する悪性細胞の数または腫瘤の測定量または異常なモノクローナルタンパク質の量）の少なくとも約５０％の低減および必要に応じて４〜８週間の持続が意図される。骨髄腫では、正常な応答（尿中骨髄腫タンパク質の２５〜５０％の減少）もまた応答とみなす。かかる応答は、測定可能な腫瘍にのみ適用可能である。
【００６９】
「治療または予防有効用量」または「治療または予防有効量」により、投与されると、ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態を有する患者の処置に関して正の治療応答をもたらす抗ＣＤ４０抗体の量が意図される。好適な投薬量は、本明細書中のどこかでより詳細に記載している。該処置方法は、本明細書中のどこかでより詳細に記載した抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量の単回投与または治療有効用量の反復投与を含むものであり得る。
【００７０】
「腫瘍」は、本明細書で用いる場合、あらゆる新生物形成性細胞生長および増殖（悪性であろうと良性であろうと）ならびにあらゆる前癌性および癌性の細胞および組織をいう。「新生物形成性」は、本明細書で用いる場合、異常な組織増殖をもたらす任意の形態の調節異常または無秩序な細胞増殖（悪性であれ良性であれ）をいう。したがって、「新生物形成性細胞」には、調節異常または無秩序な細胞増殖を有する悪性および良性の細胞が含まれる。
【００７１】
用語「癌」および「癌性」は、典型的には無秩序な細胞増殖を特徴とする哺乳動物の生理学的状態をいうか、または示す。癌の例としては、限定されないが、リンパ腫および白血病、ならびに充実腫瘍が挙げられる。「Ｂ細胞関連癌」または「Ｂ細胞系統の癌」により、調節異常または無秩序な細胞増殖がＢ細胞と関連している任意の型の癌が意図される。
【００７２】
「処置」は、本明細書では、患者への抗ＣＤ４０抗体の適用もしくは投与、または患者由来の単離された組織もしくは細胞株への抗ＣＤ４０抗体の適用もしくは投与であって、該患者が疾患、疾患の症状または疾患に対する素因を有し、その目的が、該疾患、疾患の症状または疾患に対する素因を治療、治癒、軽減、緩和、改変、矯正、改善、向上または影響を与えることである投与と規定する。また、「処置」により、患者への抗ＣＤ４０抗体を含む医薬組成物の適用もしくは投与、または患者由来の単離された組織もしくは細胞株への抗ＣＤ４０抗体を含む医薬組成物の適用もしくは投与であって、該患者が疾患、疾患の症状または疾患に対する素因を有し、その目的が、該疾患、疾患の症状または疾患に対する素因を治療、治癒、軽減、緩和、改変、矯正、改善、向上または影響を与えることである投与が意図される。
【００７３】
「抗腫瘍活性」により、悪性ＣＤ４０発現細胞増殖もしくは蓄積の速度の低下、したがって、既存の腫瘍の増殖速度の低下もしくは治療中に生じる腫瘍の低減および／または既存の新生物形成性（腫瘍）細胞もしくは新たに形成された新生物形成性細胞の破壊、したがって、治療中の腫瘍の総体的な大きさの減少が意図される。少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体での治療により、ヒトにおいて、ＣＤ４０発現細胞におけるＣＤ４０シグナル伝達の刺激と関連している疾患状態の処置に関して有益な生理学的応答がもたらされる。
【００７４】
本発明の方法は、ファーストライン癌療法的処置に対して不応性である癌および前悪性状態（例えば、上記のもの）の処置に特に有用である。用語「癌療法的」は、任意の癌処置、例えば、化学療法、外科手術、放射線療法、抗癌抗体療法およびその組合せなどを意味することが意図される。癌療法的処置の例は、本明細書中のどこかでより詳細に記載している。「不応性の」により、その特定の癌が、ある特定の癌療法剤による治療に対して抵抗性であるか、または非応答性であるが意図される。癌は、ある特定の治療用薬剤での治療に対して、該特定の治療用薬剤での処置の開始から不応性（すなわち、該治療用薬剤への初期曝露に対して非応答性）、または該治療用薬剤に対して抵抗性を発現した結果として不応性のものであり得、該治療用薬剤での第１の処置期間の過程において、または該治療用薬剤でのその後の処置期間の間のいずれかで不応性であり得る。したがって、本発明は、抗癌剤での治療に不応性であって、治療に対して抵抗性または該抗癌剤での治療に非応答性のいずれかで場合のヒト患者の処置に有用である。
【００７５】
本発明の方法は、抗ＣＤ４０抗体の使用を伴う。「抗体」は、通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖で構成された約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体の糖タンパク質である。各軽鎖は重鎖に１つの共有結合性ジスルフィド結合によって連結されているが、ジスルフィド結合の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で種々である。各重鎖および軽鎖はまた、規則正しく間隔の空いた鎖内ジスルフィド結合を有する。各重鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＨ）、続いていくつかの定常ドメインを有する。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）および他端に定常ドメインを有し、軽鎖の定常ドメインは、重鎖の最初の定常ドメインと並んでおり、軽鎖の可変ドメインは、重鎖の可変ドメインと並んでいる。特定のアミノ酸残基は、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメイン間の界面を形成していると考えられる。用語「可変」は、可変ドメインの特定のある部分が抗体間で配列が広く異なることをいう。可変領域は、抗原結合特異性を付与する。定常ドメインは、抗原への抗体の結合に直接関与していないが、種々のエフェクター機能、例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合、抗体依存性細胞傷害における当該抗体の関与、補体依存性細胞傷害性の起始、および肥満細胞脱顆粒などを示す。
【００７６】
任意の脊椎動物種由来の抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、その定常ドメインのアミノ酸配列に基づいて、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる明白に異なる２つの型の一方に割り当てられ得る。
【００７７】
その「重鎖」の定常ドメインのアミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは異なるクラスに割り当てられ得る。ヒト免疫グロブリンには主に５つのクラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭがあり、これらのいくつかは、さらにサブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２に分けられ得る。免疫グロブリンの種々のクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、α、δ、ε、γおよびμと呼ばれる。種々のクラスの免疫グロブリンのサブユニットの構造および３次元立体配置はよく知られている。異なるアイソタイプは異なるエフェクター機能を有する。例えば、ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３アイソタイプは、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介型細胞傷害性）活性を有する。ＩｇＧ１抗体、特にヒトＩｇＧ１抗体は、本発明の方法において特に有用である。
【００７８】
「ヒトエフェクター細胞」は、１種類以上のＦｃＲを発現し、エフェクター機能を発揮する白血球である。好ましくは、該細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、抗原依存性細胞媒介型細胞傷害性（ｃｙｏｔｏｘｉｃｉｔｙ）（ＡＤＣＣ）エフェクター機能を発揮する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、マクロファージ、好酸球および好中球が挙げられ、ＰＢＭＣおよびＮＫ細胞が好ましい。ＡＤＣＣ活性を有する抗体は、典型的には、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプのものである。ＩｇＧ１およびＩｇＧ３抗体を単離することに加え、かかるＡＤＣＣ媒介抗体は、非ＡＤＣＣ抗体由来の可変領域または可変領域断片を、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプ定常領域に操作することにより作製され得ることに注意されたい。
【００７９】
用語「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲは、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を示すために用いる。好ましいＦｃＲは、天然配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体（γ受容体）に結合するものであり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体（これらの受容体の対立遺伝子バリアントおよび選択的スプライシング形態を含む）が挙げられる。ＦｃγＲＩＩ受容体としては、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）が挙げられ、これらは、主にその細胞質ドメインが異なる類似したアミノ酸配列を有する。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、イムノレセプターチロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）をその細胞質ドメイン内に含む。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、イムノレセプターチロシン系阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）をその細胞質ドメイン内に含む（Ｄａｅｒｏｎ（１９９７）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４を参照のこと）。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌら（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４；およびｄｅ  Ｈａａｓら（１９９５）Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−３４１
に概説されている。他のＦｃＲも、将来同定されるものも含め、本明細書における用語「ＦｃＲ」に包含される。また、該用語には新生児受容体ＦｃＲｎも含まれ、これは、母体ＩｇＧの胎児への移行を担う（Ｇｕｙｅｒら（１９７６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７およびＫｉｍら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））。
【００８０】
用語「抗体」は、本明細書では最も広い意味において用い、完全に合成された抗体、ＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持している抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖおよび他の断片）、単鎖抗体、ダイアボディ、抗体キメラ、ハイブリッド抗体、二重特異性抗体、ヒト化抗体など）、ならびに前述のものを構成する組換えペプチドを包含する。用語「抗体」は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体の両方を包含する。
【００８１】
本明細書で用いる場合、「抗ＣＤ４０抗体」には、ＣＤ４０抗原を特異的に認識する任意の抗体が包含される。一部のある実施形態において、本発明の方法における使用のための抗ＣＤ４０抗体、特に、モノクローナル抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０抗原に対して強力な単一部位結合親和性を示す。かかるモノクローナル抗体は、ＢｉａｃｏｒｅＴＭなどの標準的なアッセイを用いて測定した場合、少なくとも１０−５Ｍ、少なくとも３×１０−５Ｍ、好ましくは少なくとも１０−６Ｍまたは少なくとも１０−７Ｍまで、より好ましくは少なくとも１０−８Ｍまたは少なくとも１０−１２ＭのＣＤ４０に対する親和性（ＫＤ）を示す。Ｂｉａｃｏｒｅ解析は当該技術分野で知られており、詳細は、「ＢＩＡａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｈａｎｄｂｏｏｋ」に示されている。ＷＯ０１／２７１６０に記載された方法を用いて結合親和性がモジュレートされ得る。
【００８２】
「を特異的に認識する」または「に特異的に結合する」により、抗ＣＤ４０抗体がＣＤ２０抗原などの無関連の抗原に結合しないことが意図される。
【００８３】
一部のある実施形態において、本発明の方法における使用のための抗ＣＤ４０抗体、特にモノクローナル抗体は、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに対する強力な結合親和性を示す。好ましくは、本発明における使用のための抗ＣＤ４０抗体はヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに、ＢｉａｃｏｒｅＴＭなどの標準的なアッセイを用いて測定した場合、少なくとも約０．５μＭの親和性（ＫＤ）で結合する。本明細書の実施例６に開示するように、ＣＨＩＲ−１２．１２抗体はヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに、４９２ｎＭの親和性（ＫＤ）で結合する。
【００８４】
一部のある実施形態において、本発明の方法における使用のための抗ＣＤ４０抗体、特にモノクローナル抗体は、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに対する強力な結合親和性を示す。好ましくは、本発明における使用のための抗ＣＤ４０抗体はヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに、ＢｉａｃｏｒｅＴＭなどの標準的なアッセイを用いて測定した場合、少なくとも約１２μＭの親和性（ＫＤ）で結合する。好ましくは、本発明における使用のための抗ＣＤ４０抗体はヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに、少なくとも約１０μＭ、少なくとも約８μＭ、少なくとも約６μＭ、少なくとも約５μＭ、少なくとも約４μＭまたは少なくとも約３μＭの親和性（ＫＤ）で結合する。本明細書の実施例６に開示するように、ＣＨＩＲ−１２．１２抗体はヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに、２．８μＭの親和性（ＫＤ）で結合する。
【００８５】
一部のある実施形態において、本発明の方法における使用のための抗ＣＤ４０抗体、特にモノクローナル抗体は、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８ＶおよびＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆの両方に対する強力な結合親和性を示す。好ましくは、本発明における使用のための抗ＣＤ４０抗体は、ＢｉａｃｏｒｅＴＭなどの標準的なアッセイを用いて測定した場合、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに少なくとも約０．５μＭの親和性（ＫＤ）で結合し、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに少なくとも約１２μＭの親和性（ＫＤ）で結合する。
【００８６】
本発明の方法における使用のための抗体は、当業者に知られた任意の適当な抗体生成方法を用いて生成させ得る。
【００８７】
本発明の方法において使用される抗ＣＤ４０抗体はポリクローナル抗体であり得る。したがって、ポリクローナル血清は、慣用的な方法によって調製され得る。一般に、目的の抗原（この場合、ＣＤ４０抗原）を含有する溶液を用いて、まず、適当な動物、好ましくは、マウス、ラット、ウサギまたはヤギを免疫処置する。ウサギまたはヤギは、得られ得る血清の容量ならびに標識された抗ウサギおよび抗ヤギ抗体の入手可能性のため、ポリクローナル血清の調製に好ましい。
【００８８】
免疫処置動物由来の血清は、初期抗原に対する抗体反応性に関してスクリーニングされ得る。リンパ球がリンパ節または脾臓細胞から単離され得、さらに、ＣＤ１３８陰性およびＣＤ１９陽性の細胞を選択することによりＢ細胞に関して選択され得る。一態様において、かかるＢ細胞培養物（ＢＣＣ）を骨髄腫細胞と融合させ、本明細書において詳述するハイブリドーマが作製され得る。
【００８９】
ポリクローナル血清はまた、トランスジェニック動物、好ましくは、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を有するマウス内で調製され得る。好ましい実施形態において、目的のタンパク質（この場合、ＣＤ４０抗原）を発現するＳｆ９細胞が免疫原として使用される。免疫処置はまた、抗原含有溶液を生理食塩水中、好ましくはアジュバント（例えば、完全フロイントアジュバント）中で混合または乳化し、該混合物または乳剤を非経口で（一般的には皮下または筋肉内）注射することにより行なわれ得る。典型的には、５０〜２００μｇ／注射の用量で充分である。免疫処置は、一般的に、２〜６週間後に該タンパク質含有生理食塩水の１回以上の注射により、好ましくは不完全フロイントアジュバントを用いて追加免疫される。あるいはまた、抗体は、当該技術分野で知られた方法を用いたインビトロ免疫処置によって調製され得、これは、本発明の目的のため、インビボ免疫処置と等価とみなす。ポリクローナル抗血清は、免疫処置動物からガラスまたはプラスチック容器内に採血し、その血液を２５℃で１時間インキュベートした後、４℃で２〜１８時間インキュベートすることにより得られる。血清は、遠心分離（例えば、１，０００×ｇで１０分間）によって回収される。採血１回あたり約２０〜５０ｍｌがウサギから得られ得る。
【００９０】
Ｓｆ９（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ）細胞の調製は、米国特許第６，００４，５５２号（引用により本明細書に組み込まれる）に開示されている。ＣＤ４０の場合、簡単には、ヒトＣＤ４０をコードする配列をバキュロウイルス内に、転移ベクターを用いて組み換えを行なった。プラスミドを野生型バキュロウイルスＤＮＡによりＳｆ９細胞内にコトランスフェクトした。組換えバキュロウイルス感染Ｓｆ９細胞を同定し、クローン精製した。
【００９１】
本発明の方法において使用される抗ＣＤ４０抗体はモノクローナル抗体であり得る。用語「モノクローナル抗体」（および「ｍＡｂ」）は、本明細書で用いる場合、実質的に均一な抗体集団から得られる抗体をいう、すなわち、該集団を構成する個々の抗体は、考えられ得る天然の微量で存在し得る変異を除き、同一である。該用語は、抗体の種に関して限定されず、なんら特定の方法による抗体の生成を要するものではない。
【００９２】
典型的には異なる抗原性決定基（エピトープ）に対して指向される異なる抗体を含むポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基（エピトープ）に対して指向される。
【００９３】
「エピトープ」により、抗原性の分子の一部分であって、それに対して抗体が生成され、該抗体が結合する一部分が意図される。エピトープは、線状アミノ酸残基（すなわち、エピトープ内の残基は、連続的に次々に線状様式で配置されている）、非線状アミノ酸残基（本明細書では「非線状エピトープ」という；これらのエピトープは、連続的に配置されたものでない）、または線状と非線状両方のアミノ酸残基を含むものであり得る。本発明の方法における使用に適した抗ＣＤ４０モノクローナル抗体は、ヒト細胞の表面上に発現されたヒトＣＤ４０抗原上のエピトープ、すなわち、該細胞の外部に露出したエピトープに特異的結合し得るものである。
【００９４】
本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５によって最初に報告されたハイブリドーマ法によって作製され得るか、または組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号を参照のこと）によって作製され得る。モノクローナル抗体はまた、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４（１９９０）および米国特許第５，５１４，５４８号に記載された手法を用いて作製された抗体ファージライブラリーから単離されたものであり得る。Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８およびＭａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７には、ファージライブラリーを用いたマウスおよびヒト抗体の単離がそれぞれ記載されている。その後の刊行物には、鎖シャッフリング（Ｍａｒｋｓら（１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８３）、ならびにコンビナトリアル感染およびインビボ組換えによる高親和性（ｎＭ範囲）ヒト抗体の作製が、非常に大きなファージライブラリー（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら（１９９３）Ｎｕｃｌｅｉｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６）を構築するためのストラテジーとして記載されている。したがって、これらの手法は、モノクローナル抗体の単離のための、従来のモノクローナル抗体ハイブリドーマ手法の実現可能な代替法である。
【００９５】
Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９６従来法では、典型的には、マウスを抗原含有溶液で免疫処置する。免疫処置は、抗原含有溶液を生理食塩水中、好ましくは完全フロイントアジュバントなどのアジュバント中で混合または乳化し、該混合物または乳剤を非経口で注射することにより行なわれ得る。当該技術分野で知られた任意の免疫処置法を用いて本発明のモノクローナル抗体が得られ得る。動物の免疫処置後、脾臓（および任意選択で、いくつかの大リンパ節）を取り出し、単一の細胞に解離させる。脾臓細胞は、細胞懸濁液を、目的の抗原でコートされたプレートまたはウェルに塗布することによりスクリーニングされ得る。抗原に特異的な膜結合型免疫グロブリンを発現するＢ細胞は該プレートに結合し、リンス処理で除去されない。得られたＢ細胞、または解離させたすべての脾臓細胞を、次いで、骨髄腫細胞と融合してハイブリドーマを形成するように誘導し、選択培地中で培養する。得られた細胞を連続希釈によってプレーティングし、目的の抗原に特異的に結合する（そして無関連の抗原には結合しない）抗体の産生についてアッセイする。選択されたモノクローナル抗体（ｍＡｂ）分泌ハイブリドーマを、次いで、インビトロ（例えば、組織培養ボトルもしくは中空ファイバー反応器内）、またはインビボ（マウスの腹水として）のいずれかで培養する。
【００９６】
別の態様において、Ｂ細胞培養物は、さらに、初期抗原（好ましくは）に対する反応性に関してスクリーニングされ得る。かかるスクリーニングとしては、標的／抗原タンパク質を用いる酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）、目的の抗原に結合する既知抗体を用いる競合アッセイ、および標的抗原を発現する一過的にトランスフェクトされたＣＨＯ細胞または他の細胞に対するインビトロ結合が挙げられる。
【００９７】
本発明における使用のための抗ＣＤ４０抗体が組換えＤＮＡ法を用いて作製される場合、該モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、慣用的な手順を用いて（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合し得るオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）容易に単離され、配列決定される。本明細書に記載のハイブリドーマ細胞は、かかるＤＮＡの好ましい供給源として供される。単離されたら、該ＤＮＡを発現ベクター内に配置し、次いで、これを、他の場合では免疫グロブリンタンパク質を産生しない宿主細胞内（例えば、大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または骨髄腫細胞などなど）にトランスフェクトすると、組換え宿主細胞内でのモノクローナル抗体の合成が得られ得る。細菌における抗体コードＤＮＡの組換え発現に関する概説論文としては、Ｓｋｅｒｒａら（１９９３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２５６およびＰｈｉｃｋｔｈｕｎ（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１が挙げられる。あるいはまた、抗体は、ＣＨＯ細胞株などの細胞株において産生されるものであり得る（米国特許第５，５４５，４０３号；同第５，５４５，４０５号；および同第５，９９８，１４４号に開示；引用により本明細書に組み込まれる）。簡単には、該細胞株を、それぞれ軽鎖および重鎖を発現し得るベクターでトランスフェクトする。２種類のタンパク質を別々のベクターにおいてトランスフェクトすることにより、キメラ抗体が作製され得る。別の利点は、抗体の正確なグリコシル化である。
【００９８】
「宿主細胞」は、本明細書で用いる場合、組換えベクターまたは他の転移ポリヌクレオチドのレシピエントとして使用され得る、または使用されことのある単細胞の存在体として培養された微生物または真核生物細胞もしくは細胞株をいい、トランスフェクトされた元の細胞の子孫を含む。単一の細胞の子孫は、自然な、偶発的または意図的な変異のため、必ずしも元の親と形態学またはゲノムもしくは全ＤＮＡ完全体（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ）において完全に同一とは限らないことを理解されたい。
【００９９】
一部のある実施形態において、ＣＨＩＲ−１２．１２などの抗ＣＤ４０抗体は、マーカーとしてグルタミンシンテターゼが使用されるＧＳ遺伝子発現系（Ｌｏｎｚａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｅｓ、Ｐｏｒｔｓｍｏｕｔｈ、Ｎｅｗ  Ｈａｍｐｓｈｉｒｅ）を用いてＣＨＯ細胞において産生されたものであり得る。また、米国特許第５，１２２，４６４号；同第５，５９１，６３９号；同第５，６５８，７５９号；同第５，７７０，３５９号；同第５，８２７，７３９号；同第５，８７９，９３６号；同第５，８９１，６９３号；および同第５，９８１，２１６号（その内容は、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）も参照のこと。
【０１００】
ＣＤ４０に対するモノクローナル抗体は当該技術分野で知られている。例えば、ＭｃＭｉｃｈａｅｌ編（１９８７；１９８９）Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  ＩＩＩ  ａｎｄ  ＩＶ（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）について記載されたセクションＢ細胞抗原；米国特許第５，６７４，４９２号；同第５，８７４，０８２号；同第５，６７７，１６５号；同第６，０５６，９５９号；ＷＯ００／６３３９５；国際特許出願公報番号ＷＯ０２／２８９０５およびＷＯ０２／２８９０４；Ｇｏｒｄｏｎら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：１４２５；Ｖａｌｌｅら（１９８９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９：１４６３；Ｃｌａｒｋら（１９８６）ＰＮＡＳ  ８３：４４９４；Ｐａｕｌｉｅら（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２：５９０；Ｇｏｒｄｏｎら（１９８７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：１５３５；Ｊａｂａｒａら（１９９０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７２：１８６１；Ｚｈａｎｇら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１８３６；Ｇａｓｃａｎら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８；Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕら（１９９１）Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ３：８；およびＢａｎｃｈｅｒｅａｕら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１：７０（これらはすべて、引用により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
【０１０１】
上記のように、用語「抗体」は、本明細書で用いる場合、キメラ抗体が包含される。「キメラ」抗体により、最も好ましくは、組換えデオキシリボ核酸手法を用いて誘導され、ヒト成分（免疫学的に「関連する」種、例えばチンパンジーを含む）と非ヒト成分の両方を含む抗体が意図される。したがって、キメラ抗体の定常領域は、最も好ましくは、天然ヒト抗体の定常領域と実質的に同一であり、キメラ抗体の可変領域は、最も好ましくは、非ヒト供給源に由来し、目的の抗原（ＣＤ４０）に対する所望の抗原性の特異性を有するものである。非ヒト供給源は、ＣＤ４０抗原に対する抗体を生成させるために使用され得る任意の脊椎動物供給源であり得る。かかる非ヒト供給源としては、限定されないが、齧歯類（例えば、ウサギ、ラット、マウスなど；例えば、米国特許第４，８１６，５６７号（引用により本明細書に組み込まれる）を参照のこと）および非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿など；例えば、米国特許第５，７５０，１０５号および同第５，７５６，０９６号を参照のこと；引用により本明細書に組み込まれる）が挙げられる。
【０１０２】
上記のように、用語「抗体」は、本明細書で用いる場合、ヒト化抗体が包含される。「ヒト化」により、非ヒト免疫グロブリン配列由来の最小限の配列を含有する抗体の形態が意図される。たいてい、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域（相補性決定領域またはＣＤＲとしても知られる）由来の残基が、所望の特異性、親和性および能力を有する非ヒト種（マウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類など）（ドナー抗体）の超可変領域由来の残基で置き換えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。語句「相補性決定領域」は、一緒になって天然免疫グロブリン結合部位の天然Ｆｖ領域の結合親和性および特異性を規定するアミノ酸配列をいう。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８７）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ刊行物番号９１−３２４２）を参照のこと。語句「定常領域」は、エフェクター機能を付与する抗体分子の一部分をいう。ヒト疾患の治療における使用のための非免疫原性抗体の作製に関するこれまでの研究では、マウス定常領域をヒト定常領域で置き換えていた。該当するヒト化抗体の定常領域は、ヒト免疫グロブリンから誘導されたものであった。しかしながら、このようなヒト化抗体は、望ましくない潜在的に危険な免疫応答をヒトにおいてを誘発し得、親和性の低下が見られた。
【０１０３】
ヒト化は、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者（Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６）の方法に従って、ヒト抗体の対応する配列の代わりに齧歯類または変異型齧歯類ＣＤＲまたはＣＤＲ配列を用いることにより行なわれ得る。米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；同第５，８５９，２０５号（引用により本明細書に組み込まれる）もまた参照のこと。場合によっては、ヒト免疫グロブリンの１つ以上の可変領域のフレームワーク領域内の残基が、対応する非ヒト残基で置き換えられる（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；および同第６，１８０，３７０号を参照のこと）。さらにまた、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体に見られない残基を含むものであり得る。このような修飾を行ない、抗体性能がさらに精巧になる（例えば、所望の親和性を得るため）。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全部を含み、超可変領域の全部または実質的に全部は、非ヒト免疫グロブリンものに対応し、フレームワーク領域の全部または実質的に全部は、ヒト免疫グロブリン配列のものである。任意選択で、ヒト化抗体はまた、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンのものの少なくとも一部を含むものである。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３３１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９；およびＰｒｅｓｔａ（１９９２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（引用により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。したがって、かかる「ヒト化」抗体は、インタクトなヒト可変ドメインより相当少ない該ドメインが非ヒト種由来の対応する配列で置換された抗体を含み得る。実際には、ヒト化抗体は、典型的には、一部のＣＤＲ残基およびおそらく一部のフレームワーク残基が齧歯類抗体の同様の部位由来の残基で置換されたヒト抗体である。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号；同第５，５８５，０８９号；同第５，６９３，７６１号；同第５，６９３，７６２号；同第５，８５９，２０５号を参照のこと。所定の抗原に対して改善された親和性を有するヒト化抗体を作製するためのヒト化抗体および手法が開示された米国特許第６，１８０，３７０号および国際特許出願公報番号ＷＯ０１／２７１６０もまた参照のこと。
【０１０４】
ヒト化抗ＣＤ４０抗体はまた、Ｈｕｍａｎ  ＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＴＭ手法（Ｘｏｍａ  Ｌｔｄ．、Ｂｅｒｋｅｌｅｙ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を用いて作製され得る。
【０１０５】
ヒト化抗ＣＤ４０モノクローナル抗体には、ＳＧＮ−４０（Ｔａｉら（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６４：２８４６−５２；米国特許第６，８３８，２６１号）（これは、マウス抗ＣＤ４０抗体ＳＧＮ−１４（Ｆｒａｎｃｉｓｃｏら（２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：３２２５−３１）のヒト化形態である）、および米国特許出願公開公報第２００４／０１２０９４８号（引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示された抗体などの抗体が含まれる。
【０１０６】
本発明はまた、内在性免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子座が不活性化されていることを特徴とする非ヒト哺乳動物宿主、より特別にはトランスジェニックマウスにおいて産生される異種抗体または修飾抗体を用いて実施され得る。かかるトランスジェニック動物では、宿主の免疫グロブリンの軽鎖および重鎖のサブユニットの発現に対してコンピテントな内在性遺伝子が、非機能性になっており、同様のヒト免疫グロブリン遺伝子座で置換されている。このようなトランスジェニック動物は、実質的に宿主の免疫グロブリンサブユニットの軽鎖または重鎖の非存在下でヒト抗体を産生する。例えば、米国特許第５，８７７，３９７号および同第５，９３９，５９８号（引用により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
【０１０７】
したがって、一部のある実施形態において、例えば、ＣＤ４０に対する完全ヒト抗体は、トランスジェニックマウスを免疫処置することにより得られる。かかるマウスの一例は、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）手法（Ａｂｇｅｎｉｘ；Ｆｒｅｍｏｎｔ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）を用いて得られ、米国特許第６，０７５，１８１号、同第６，０９１，００１号および同第６，１１４，５９８号（これらはすべて、引用により本明細書に組み込まれる）に開示されている。例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２抗体を作製するため、ヒトＩｇＧ１重鎖遺伝子座およびヒトκ軽鎖遺伝子座が組み換えられたマウスが、ヒトＣＤ４０発現Ｓｆ９細胞で免疫処置された。マウスはまた、他のアイソタイプが組み換えられたものであってもよい。本発明の方法に有用な完全ヒト抗ＣＤ４０抗体は、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体によって示されるものと類似した結合特性を特徴とする。
【０１０８】
上記のように、用語「抗体」はまた、本明細書で用いる場合、抗原に結合し得る抗体断片を包含する。「抗体断片」は、インタクトな抗体の一部、好ましくは、インタクトな抗体の抗原結合または可変領域を含むものである。抗体断片の例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片；ダイアボディ；線状抗体（Ｚａｐａｔａら（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１０：１０５７−１０６２）；単鎖抗体分子；および抗体断片から形成される多重特異性抗体が挙げられる。抗体のパパイン消化により、各々が単一の抗原結合部位を有する「Ｆａｂ」断片と呼ばれる２つの同一の抗原結合断片、および残部「Ｆｃ」断片（その名称は、容易に結晶化する能力を反映している）がもたらされる。ペプシン処理により、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原架橋能を有するＦ（ａｂ’）２断片がもたらされる。
【０１０９】
「Ｆｖ」は、完全な抗原認識および結合部位を含む最小の抗体断片である。この領域は、１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインが強固に非共有結合された二量体からなる。各可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用してＶＨ−ＶＬ二量体の表面上の抗原結合部位を画定するのは、この立体配置においてである。集合的に、この６つのＣＤＲが抗体に抗原結合特異性を付与する。しかしながら、単一の可変ドメイン（すなわち、抗原に特異的な３つだけのＣＤＲを含むＦｖである半分）であっても、抗原を認識して結合する能力を有するが、結合部位全部よりも低い親和性で認識して結合する。
【０１１０】
また、Ｆａｂ断片は、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の最初の定常ドメイン（ＣＨ１）を含む。Ｆａｂ断片はＦａｂ’断片と、該抗体のヒンジ領域の１つ以上のシステインを含む重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端に数個の残基が付加されていることで異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常ドメインのシステイン残基（１つまたは複数）が遊離チオール基を有するＦａｂ’に対する本明細書における命名である。Ｆａｂ’断片は、Ｆ（ａｂ’）２断片の重鎖ジスルフィド結合を還元することにより生成される。抗体断片の他の化学的カップリングもまた知られている。
【０１１１】
抗ＣＤ４０抗体の断片は、完全長抗体の所望の親和性を保持している限り、本発明における使用に適している。したがって、例えば、抗ＣＤ４０抗体の断片は、ＣＤ４０抗原に結合する能力を保持している。かかる断片は、対応する完全長抗体と類似した特性を特徴とする。したがって、例えば、完全長アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の断片は、好ましくは、ヒト細胞の表面上に発現されたヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合し得、有意なアゴニスト活性がないが、ヒトＣＤ４０発現細胞上のＣＤ４０抗原に結合すると、アンタゴニスト活性を示すものである。かかる断片を、本明細書において、「抗原結合」断片という。本発明における使用のための抗ＣＤ４０抗体の断片はまた、好ましくは、該当するＦｃＲまたはＦｃＲに結合する能力を保持している。したがって、例えば、抗ＣＤ４０抗体の断片は、ＦｃγＲＩＩＩａに結合する能力を保持しているものであり得る。したがって、例えば、完全長抗ＣＤ４０抗体の断片は、細胞表面ＣＤ４０抗原に特異的に結合し得るもの、また、ヒトエフェクター細胞（ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞など）上のＦｃγＲＩＩＩａに結合し得るものであり得る。かかる断片を、本明細書において、「ＦｃＲ結合」断片という。かかる断片は、一般的に、重鎖の定常ドメインの少なくとも一部分を含む。
【０１１２】
抗体断片の作製のための種々の手法が、開発されている。従来より、このような断片は、インタクトな抗体のタンパク質分解的消化により誘導されたものであった（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら（１９９２）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１１７（１９９２）およびＢｒｅｎｎａｎら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１を参照のこと）。しかしながら、このような断片は、現在では、組換え宿主細胞によって直接産生され得る。例えば、抗体断片は、前述の抗体ファージライブラリーから単離され得る。あるいはまた、Ｆａｂ’−ＳＨ断片を大腸菌から直接回収し、化学的カップリングによりＦ（ａｂ’）２断片が形成され得る（Ｃａｒｔｅｒら（１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７）。別のアプローチによれば、Ｆ（ａｂ’）２断片は、組換え宿主細胞培養物から直接単離され得る。抗体断片の作製のための他の手法は、当業者に自明であろう。
【０１１３】
好適な抗体の抗原結合断片は、完全長抗体の一部、一般的にはその抗原結合または可変領域を含むものである。抗体断片の例としては、限定されないが、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖ断片ならびに単鎖抗体分子が挙げられる。「Ｆａｂ」により、軽鎖と重鎖の一部で構成された免疫グロブリンの一価の抗原結合断片が意図される。Ｆ（ａｂ’）２により、両方の軽鎖と両方の重鎖の一部を含む免疫グロブリンの二価の抗原結合断片が意図される。「単鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」抗体断片により、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含む断片であって、これらのドメインが単一のポリペプチド鎖内に存在する断片が意図される。例えば、米国特許第４，９４６，７７８号、同第５，２６０，２０３号、同第５，４５５，０３０号および同第５，８５６，４５６号（引用により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。一般的に、Ｆｖポリペプチドは、さらに、ＶＨおよびＶＬドメイン間にポリペプチドリンカーを含み、これにより、ｓＦｖが、抗原結合のための所望の構造を形成すること可能になる。ｓＦｖの概説については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ（１９９４）、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、第１１３巻、ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）、ｐｐ．２６９−３１５を参照のこと。また、本明細書に開示されたアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の抗原結合断片は、標的癌細胞の致死を行なうように細胞毒素にコンジュゲートされたものであり得る（本明細書において後述する）。
【０１１４】
本発明の一部のある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体である。かかる抗体が、ヒト細胞の表面上（ヒトＢ細胞など）にディスプレイされたＣＤ４０に結合すると、有意なアゴニスト活性はもたらされなくなる。一部のある実施形態において、該抗体がヒト細胞の表面上にディスプレイされたＣＤ４０に結合すると、該ヒト細胞の増殖および分化阻害がもたらされる。本発明における使用に適した抗ＣＤ４０抗体としては、細胞表面ＣＤ４０抗原を発現する正常および悪性ヒト細胞に対してアンタゴニスト活性を示し得る抗体が挙げられる。
【０１１５】
「アゴニスト活性」により、物質が、アゴニストとしても機能を果たすことが意図される。アゴニストは、細胞上の受容体と結合し、該受容体の天然リガンドによって開始されるものと類似または同じ反応または活性を起始させる。ＣＤ４０のアゴニストとしては、限定されないが、以下の応答：Ｂ細胞増殖および／または分化；ＩＣＡＭ−１、Ｅ−セレクチン、ＶＣＡＭなどの分子による細胞内接着の上方調節；炎症誘発性サイトカイン、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＴＮＦなどの分泌；ＣＤ４０受容体を介し、ＴＲＡＦ（例えば、ＴＲＡＦ２および／またはＴＲＡＦ３）、ＭＡＰキナーゼ（ＮＩＫ（ＮＦ−κＢ誘導キナーゼ）、Ｉ−κＢキナーゼ（ＩＫＫ  α／β）など）、転写因子ＮＦ−κＢ、ＲａｓおよびＭＥＫ／ＥＲＫ経路、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路、Ｐ３８  ＭＡＰＫ経路などの経路によるシグナル伝達；ＸＩＡＰ、ｍｃｌ−１、ｂｃｌ−ｘなどの分子による抗アポトーシスシグナルの伝達；Ｂおよび／またはＴ細胞記憶の生成；Ｂ細胞抗体産生；Ｂ細胞アイソタイプスイッチ、ＭＨＣクラスＩＩやＣＤ８０／８６などの細胞表面発現の上方調節のいずれかまたはすべてが挙げられる。
【０１１６】
「有意な」アゴニスト活性により、Ｂ細胞応答のアッセイにおいて測定したとき、天然物質または陰性対照によって誘導されるアゴニスト活性より少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または１００％大きいアゴニスト活性が意図される。好ましくは、「有意な」アゴニスト活性は、Ｂ細胞応答のアッセイにおいて測定したとき、天然物質または陰性対照によって誘導されるアゴニスト活性よりも少なくとも２倍大きいか、または少なくとも３倍大きいアゴニスト活性である。したがって、例えば、対象のＢ細胞応答がＢ細胞増殖である場合、「有意な」アゴニスト活性は、天然物質または陰性対照によって誘導されるＢ細胞増殖のレベルよりも少なくとも２倍大きいか、または少なくとも３倍大きいレベルのＢ細胞増殖の誘導であり得る。一実施形態において、ＣＤ４０に結合しない非特異的免疫グロブリン、例えばＩｇＧ１が陰性対照として供される。「有意なアゴニスト活性がない」物質は、Ｂ細胞応答のアッセイにおいて測定したとき、天然物質または陰性対照によって誘導されるアゴニスト活性よりも約２５％より大きくない、好ましくは、天然物質または陰性対照によって誘導されるアゴニスト活性よりも約２０％より、１５％より、１０％より、５％より、１％より、０．５％より大きくない、または約０．１％すらより大きくないアゴニスト活性を示すものであり得る。
【０１１７】
「アンタゴニスト活性」により、物質が、アンタゴニストとしての機能を果たすことが意図される。ＣＤ４０のアンタゴニストは、ＣＤ４０受容体がアゴニストリガンド、特にＣＤ４０Ｌに結合することによって誘導される任意の応答の誘導を抑制または低減させる。該アンタゴニストは、アゴニスト結合に対する応答の任意の１つ以上の誘導を、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、好ましくは、４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、より好ましくは７０％、８０％、８５％、最も好ましくは、９０％、９５％、９９％または１００％低減させるものであり得る。ＣＤ４０リガンドの結合特異性および抗ＣＤ４０治療用薬剤、例えば抗ＣＤ４０抗体のアンタゴニスト活性を測定するための方法は、当該技術分野で知られており、限定されないが、標準的な競合的結合アッセイ、Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌をモニタリングするアッセイ、Ｂ細胞増殖アッセイ、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ−Ｌｉｋｅ−Ｂ細胞増殖アッセイ、抗体産生のＴ細胞ヘルパーアッセイ、Ｂ細胞増殖共刺激アッセイ、およびＢ細胞活性化マーカーの上方調節アッセイが挙げられる。例えば、ＷＯ００／７５３４８および米国特許第６，０８７，３２９号（引用により本明細書に組み込まれる）に開示されたかかるアッセイを参照のこと。また、ＷＯ２００５／０４４８５４、ＷＯ２００５／０４４３０４、ＷＯ２００５／０４４３０５、ＷＯ２００５／０４４３０６、ＷＯ２００５／０４４８５５、ＷＯ２００５／０４４３０７、およびＷＯ２００５／０４４２９４ＷＯ（これらの各々の内容は、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）も参照のこと。
【０１１８】
アンタゴニスト／アゴニスト活性の欠如は、ＣＨＩＲ−１２．１２がアゴニスト活性を欠くことを示すアッセイによって評価され得る。好適なアッセイは、ＵＳ５６７７１６５（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に記載されたアッセイに示されている。
【０１１９】
本発明の一実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体には、１つの細胞応答において有意なアゴニスト活性がない。本発明の別の実施形態では、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体には、１つより多くの細胞応答（例えば、増殖および分化、または増殖、分化、ならびにＢ細胞、抗体産生）のアッセイにおいて有意なアゴニスト活性がない。
【０１２０】
特に重要なのは、本明細書に規定の有意なアゴニスト活性がないが、ヒトＢ細胞上のＣＤ４０抗原に結合するとアンタゴニスト活性を示すアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体である。本発明の一実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体には、１つのＢ細胞応答において有意なアゴニスト活性がない。本発明の別の実施形態では、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体には、１つより多くのＢ細胞応答（例えば、増殖および分化、または増殖、分化、ならびに抗体産生）のアッセイにおいて有意なアゴニスト活性がない。
【０１２１】
当該技術分野で知られた任意のアッセイを用いて、抗ＣＤ４０抗体が１つ以上のＢ細胞応答のアンタゴニストとしての機能を果たすか否かが測定され得る。一部のある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞増殖、Ｂ細胞分化、抗体産生、細胞内接着、Ｂ細胞記憶の生成、アイソタイプスイッチ、ＭＨＣクラスＩＩおよびＣＤ８０／８６の細胞表面発現の上方調節、ならびに炎症誘発性サイトカイン、例えば、ＩＬ−８、ＩＬ−１２およびＴＮＦなどの分泌からなる群より選択される少なくとも１つのＢ細胞応答のアンタゴニストとしての機能を果たす。特に重要なのは、ヒトＢ細胞の表面上のヒトＣＤ４０抗原に結合したとき、Ｂ細胞増殖に関して有意なアゴニスト活性がないアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体である。
【０１２２】
抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞増殖アッセイにおいて測定される、可溶性または細胞表面ＣＤ４０Ｌによって誘導されるＢ細胞増殖のアンタゴニストであり得る。好適なＢ細胞増殖アッセイは、当該技術分野で知られている。また、好適なＢ細胞増殖アッセイも後述する。一部のある実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体はＢ細胞増殖を、天然物質または陰性対照によって誘導されるＢ細胞増殖よりも約２５％より大きくないレベルで、好ましくは、天然物質または陰性対照によって誘導されるＢ細胞増殖よりも約２０％より、１５％より、１０％より、５％より、１％より、０．５％より、または約０．１％すらより大きくないレベルで刺激する。
【０１２３】
他の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞増殖において測定される、別の抗ＣＤ４０抗体（例えば、Ｓ２Ｃ６抗ＣＤ４０抗体）によって誘導されるＢ細胞増殖のアンタゴニストであり、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の存在下で該別の抗ＣＤ４０抗体によって刺激されるＢ細胞増殖のレベルは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の非存在下で該別の抗ＣＤ４０抗体によって誘導されるＢ細胞増殖の約２５％より大きくない（すなわち、少なくとも７５％阻害）、好ましくは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の非存在下で該別の抗ＣＤ４０抗体によって誘導されるＢ細胞増殖の約２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％、または約０．１％すらより大きくない。
【０１２４】
また他の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞活性化アッセイにおいて測定される、細胞株ＥＬ４Ｂ５によって誘導されるＢ細胞増殖のアンタゴニストであり、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の存在下でＥＬ４Ｂ５細胞株によって刺激されるＢ細胞増殖のレベルは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の非存在下でこの細胞株によって誘導されるＢ細胞増殖の約２５％より大きくない（すなわち、少なくとも７５％阻害）、好ましくは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の非存在下でこの細胞株によって誘導されるＢ細胞増殖の約２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％、または約０．１％すらより大きくない。
【０１２５】
さらに他の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞による抗体産生に関するヒトＴ細胞ヘルパーアッセイにおいて測定される、ヒトＢ細胞によるヒトＴ細胞誘導性抗体産生のアンタゴニストである。この様式では、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の存在下でＴ細胞によって刺激されるＢ細胞によるＩｇＧ抗体産生、ＩｇＭ抗体産生、またはＩｇＧおよびＩｇＭ両方の抗体産生のレベルは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の非存在下でＴ細胞によって刺激されるＢ細胞によるそれぞれの抗体産生の約５０％より大きくない（すなわち、少なくとも７５％阻害）、好ましくは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の非存在下でＴ細胞によって刺激されるＢ細胞によるそれぞれの抗体産生の約２５％、２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％、または約０．１％すらより大きくない。さらなるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体としては、５Ｄ１２、３Ａ８および３Ｃ６と称されるモノクローナル抗体が挙げられ、これらは、それぞれ、ＡＴＣＣ受託番号ＨＢ  １１３３９、ＨＢ  １２０２４およびＨＢ  １１３４０を有するハイブリドーマによって分泌される。例えば、米国特許第６，３１５，９９８号（引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
【０１２６】
例えば、以下のアッセイを用いて、抗ＣＤ４０抗体のアンタゴニスト活性が評価され得る。これらのアッセイのためのヒトＢ細胞は、例えば、本質的にＤｅ  Ｇｒｏｏｔら（１９９０）Ｌｙｍｐｈｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９０）９：３２１に記載のようにして、扁桃摘出術を受けた個体から採取された扁桃腺からの単離によって得られ得る。簡単には、組織を外科用メスで分散させ、５ｍＭ  Ｌ−ロイシンメチルエステルでの処置によって食細胞およびＮＫ細胞を枯渇させ、２−アミノエチルイソチオウロニウムブロミドで処理した。ヒツジ赤血球（ＳＲＢＣ）を用いた１サイクルのロゼッティングによってＴ細胞を除去する。得られたＢリンパ球調製物の純度は、抗（ＣＤ２０）ｍＡｂ  Ｂ１（Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｃｌｏｎｅ、Ｈｉａｌｅａｈ、ＦＡ）または抗（ＣＤ３）ｍＡｂ  ＯＫＴ３（Ｏｒｔｈｏ、Ｒａｒｉｔａｎ、ＮＪ）およびウサギ  抗（マウスＩｇ）のＦＩＴＣ−コンジュゲートＦ（ａｂ’）２断片（Ｚｙｍｅｄ、Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ）を用いた間接免疫蛍光標識、ならびにＦＡＣＳ解析によって確認され得る。
【０１２７】
Ｂ細胞増殖アッセイ
Ｂ細胞（４×１０４／ウェル）を、平底９６ウェルマイクロプレート内の１０％ウシ胎仔血清を補給した２００μｌのＩＭＤＭ中で培養する。該Ｂ細胞を、固定化抗（ＩｇＭ）抗体（イムノビーズ；５μｇ／ｍｌ；ＢｉｏＲａｄ、Ｒｉｃｈｍｏｎｄ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）の添加によって刺激する。所望の場合は、１００Ｕ／ｍｌの組換えＩＬ−２を添加する。種々の濃度の試験モノクローナル抗体（ｍＡｂ）をミクロ培養の開始時に添加し、増殖を、第３日に、１８時間のパルシング後（ｐｕｌｓｉｎｇ）の（３Ｈ）−チミジンの取込みの測定によって評価する。アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、固定化抗ＩｇＭの存在下、または固定化抗ＩｇＭおよびＩＬ−２の存在下では、ヒトＢ細胞増殖を有意に共刺激しない。
【０１２８】
Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ−Ｌｉｋｅ  Ｂ細胞増殖アッセイ
抗ＣＤ４０モノクローナル抗体が、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９１）２５１：７０に記載されたものと同様の培養系においてＢ細胞増殖を刺激する能力を試験するため、ヒトＦｃγＲＩＩのＨＲ対立遺伝子形態を発現するマウス３Ｔ６形質転換体細胞を使用する。Ｂ細胞（２×１０４／ウェル）を、平底マイクロウェル内で１×１０４形質転換体細胞（５０００Ｒａｄを照射）の存在下、１０％ウシ胎仔血清および１００Ｕ／ｍｌの組換えＩＬ−４を補給した２００μのＩＭＤＭ中で培養する。Ｂ細胞の添加前、３Ｔ６細胞を培養プラスチック器に少なくとも５時間付着させる。抗ＣＤ４０ｍＡｂを１５ｎｇ／ｍｌ〜２０００ｎｇ／ｍｌの種々の濃度で添加し、Ｂ細胞の増殖を、第７日に、［３Ｈ］チミジンでの１８時間のパルシングの際のチミジン取込みの測定によって評価する。
【０１２９】
アンタゴニスト抗ＣＤ４０ｍＡｂを用いたＳ２Ｃ６刺激型Ｂ細胞増殖の阻害
アンタゴニスト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体（ｍＡｂ）はまた、Ｓ２Ｃ６（ＳＧＮ−１４としても知られ、これは、正常Ｂ細胞増殖のＣＤ４０刺激のアゴニストであると報告されている；Ｆｒａｎｃｉｓｃｏら（２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：３２２５−３２３１）などの抗ＣＤ４０抗体によるＢ細胞増殖の刺激を阻害する能力を特徴とする（上記のＢ細胞増殖アッセイを使用）。ヒト扁桃Ｂ細胞（４×１０４／ウェル）を２００μｌで、マイクロウェル内にてセファロースビーズ（５μｇ／ｍｌ）にカップリングさせた抗ＩｇＭおよび抗ＣＤ４０ｍＡｂ  Ｓ２Ｃ６（１．２５μｇ／ｍｌ）の存在下で培養する。種々の濃度の目的の抗ＣＤ４０ｍＡｂを添加し、３日後、［３Ｈ］−チミジン取込みを評価する。対照として、抗（グルコセレブロシダーゼ）ｍＡｂ  ８Ｅ４が同様の濃度で添加され得る。Ｂａｒｎｅｖｅｌｄら（１９８３）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１３４：５８５。アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ｍＡｂ  Ｓ２Ｃ６による抗ＩｇＭ誘導性ヒトＢ細胞増殖の共刺激を、例えば少なくとも７５％以上阻害し得る（すなわち、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の存在下でのＳ２Ｃ６刺激性増殖は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の非存在下で観察されるものの２５％以下である）。対照的に、β−グルコセレブロシダーに指向される同等量の非関連ｍＡｂ  ８Ｅ４では、有意な阻害は見られ得ない。Ｂａｒｎｅｖｅｌｄら、前掲。かかる結果は、抗ＣＤ４０ｍＡｂがヒトＢ細胞の増殖のための刺激性シグナルを送達しないのではなく、逆に、別のｍＡｂによってＣＤ４０が誘発されることによりもたらされる刺激性シグナルを阻害し得ることを示し得る。
【０１３０】
ＥＬ４Ｂ５細胞を用いたＢ細胞活性化アッセイ
Ｚｕｂｌｅｒら（１９８５）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８５）１３４：３６６２において、マウス胸腺腫ＥＬ−４細胞株の変異型サブクローン（ＥＬ４Ｂ５として知られる）は、インビトロで、マウス起源およびヒト起源両方のＢ細胞を強力に刺激して増殖させ、免疫グロブリン分泌形質細胞に分化させ得ることが観察された。この活性化は、抗原非依存性であり、ＭＨＣ拘束性でないことがわかった。最適なヒトＢ細胞刺激のためには、活性化されたヒトＴ細胞由来の上清みの存在が必要であったが、ＥＬ４Ｂ５細胞をホルボール−１２−ミリステート１３−アセテート（ＰＭＡ）またはＩＬ−１で予備活性化すると、Ｂ細胞応答も起こった。Ｚｕｂｌｅｒら（１９８７）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ９９：２８１；およびＺｈａｎｇら（１９９０）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４４：２９５５。この培養系におけるＢ細胞活性化は、効率的なである。限界希釈実験により、大部分のヒトＢ細胞が活性化されて増殖し、抗体分泌細胞に分化することが示された。Ｗｅｎら（１９８７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：８８７。
【０１３１】
Ｂ細胞（１０００／ウェル）を照射（５０００Ｒａｄ）ＥＬ４Ｂ５細胞（５×１０４／ウェル）と一緒に、平底マイクロプレート内にて、１０％熱不活化ウシ胎仔血清、５ｎｇ／ｍｌホルボール−１２−ミリステート１３−アセテート（Ｓｉｇｍａ）および５％ヒトＴ細胞上清みを補給した２００μｌのＩＭＤＭ中で培養する。ｍＡｂを種々の濃度で培養の開始時に添加し、第６日に、［３Ｈ］−チミジンでの１８時間のパルシング後のチミジン取込みを評価する。Ｔ細胞上清みの調製のため、精製Ｔ細胞を１０６／ｍｌの密度で３６時間、１μｇ／ｍｌのＰＨＡおよび１０ｎｇ／ｍｌのＰＭＡの存在下で培養する。Ｗｅｎら（１９８７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ（１９８７）１７：８８７。Ｔ細胞上清みを細胞の遠心分離によって取得し、−２０℃で保存する。ＥＬ４Ｂ５−Ｂ細胞培養物におけるヒトＢ細胞の増殖の増強におけるＴ細胞上清みの有効性を試験し、最も有効な上清みを実験における使用のためにプールする。ＥＬ４Ｂ５誘導型ヒトＢ細胞増殖に対する抗ＣＤ４０抗体の効果を評価する際、などのモノクローナル抗体がＭＯＰＣ−１４１（ＩｇＧ２ｂ）が対照として添加され得る。
【０１３２】
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ＥＬ４Ｂ５細胞株によって刺激されるＢ細胞増殖を、例えば少なくとも７５％以上阻害し得る（すなわち、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の存在下でのＥＬ４Ｂ５誘導型Ｂ細胞増殖は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の非存在下で観察されるものの２５％以下である）。対照的に、ＭＯＰＣ−１４１などの対照抗体は、ＥＬ４Ｂ５誘導型Ｂ細胞増殖に対して有意な効果を有しないものであり得る。
【０１３３】
Ｂ細胞による抗体産生に対するヒトＴ細胞ヘルパーアッセイ
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞による免疫グロブリン産生のアンタゴニストとしての機能を果たし得る。抗ＣＤ４０抗体は、この型のアンタゴニスト活性について、Ｔ細胞ヘルパーアッセイで活性化Ｔ細胞により接触依存的様式に刺激された該抗体がＢ細胞による免疫グロブリン産生を阻害する能力を評価することにより試験され得る。この様式では、９６ウェル組織培養プレートを抗ＣＤ３  ｍＡｂ  ＣＬＢ−Ｔ３／３（ＣＬＢ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）の１：５００希釈度の腹水液でコートする。指示どおりに、共刺激性ｍＡｂ：抗ＣＤ２  ｍＡｂ  ＣＬＢ−Ｔ１１．１／１およびＣＬＢ−Ｔ１１．２／１（ＣＬＢ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）、ともに腹水１：１０００ならびに抗ＣＤ２８  ｍＡｂ  ＣＬＢ−２８／１（ＣＬＢ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を添加する。続いて、扁桃Ｔ細胞（照射３０００Ｒａｄ；１０５／ウェル）、扁桃Ｂ細胞（１０４／ウェル）およびｒＩＬ−２（２０Ｕ／ｍｌ）を添加する。各細胞培養物の最終容量は２００μｌである。８日後、細胞をスピンダウンし、細胞無含有上清みを回収する。（希釈）試料中のヒトＩｇＭおよびＩｇＧの濃度をＥＬＩＳＡにより下記のようにして測定する。
【０１３４】
一実施形態において、ヒト扁桃Ｂ細胞（１０４／ウェル）を照射精製Ｔ細胞（３０００ｒａｄ、１０５／ウェル）と一緒に、抗ＣＤ３  ｍＡｂでコートされ、さらにＴ細胞を共刺激する異なるｍＡｂでコート、またはコートなしの９６ウェルプレート内で培養する。８日間の培養後、Ｂ細胞による免疫グロブリン産生のために上清みを回収する。Ｂ細胞による免疫グロブリン産生をＥＬＩＳＡアッセイによって下記のようにして評価する。目的の抗ＣＤ４０抗体を培養の開始から種々の濃度で添加する。対照として、ｍＡｂ  ＭＯＰＣ−１４１が添加され得る。
【０１３５】
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、ヒトＴ細胞によって刺激されるＢ細胞のＩｇＧおよびＩｇＭ抗体産生を少なくとも５０％以上阻害し得る（すなわち、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の存在下でのＴ細胞誘導性のＢ細胞による抗体産生は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の非存在下で観察されるものの５０％以下である）。対照的に、ＭＯＰＣ−１４１などの対照抗体は、Ｔ細胞誘導性のＢ細胞による抗体産生に対して有意な効果を有しないものであり得る。
【０１３６】
免疫グロブリン定量のためのＥＬＩＳＡアッセイ
ヒトＩｇＭおよびＩｇＧの濃度は、ＥＬＩＳＡによって測定される。９６ウェルＥＬＩＳＡプレートを４μｇ／ｍｌのマウス抗ヒトＩｇＧ  ｍＡｂ  ＭＨ  １６−０１（ＣＬＢ、Ａｍｓｔｅｒｄａｍ、Ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）または１．２μｇ／ｍｌのマウス抗ヒトＩｇＭ  ｍＡｂ  ４１０２（Ｔａｇｏ、Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、ＣＡ）含有０．０５Ｍ炭酸バッファー（ｐＨ＝９．６）で、４℃で１６時間のインキュベーションによってコートする。プレートを３回ＰＢＳ−０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ）で洗浄し、ＢＳＡで１時間飽和させる。２回洗浄後、プレートを１時間３７℃で、異なる希釈度の試験試料とともにインキュベートする。３回洗浄後、結合されたＩｇを、１時間３７℃で、１μｇ／ｍｌのペルオキシダーゼ標識マウス抗ヒトＩｇＧ  ｍＡｂ  ＭＨ  １６−０１（ＣＬＢ）またはマウス抗ヒトＩｇＭ  ｍＡｂ  ＭＨ  １５−０１（ＣＬＢ）とのインキュベーションによって検出する。プレートを４回洗浄し、結合されたペルオキシダーゼ活性を、基質としてＯ−フェニレンジアミンの添加によって顕現させる。ヒト標準血清（Ｈ００、ＣＬＢ）を用いて、各アッセイのための標準曲線を確立する。
【０１３７】
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は当該技術分野で知られている。例えば、米国特許出願公開公報第２００２０１４２３５８号および同第２００３００５９４２７号（引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）開示されたＦ４−４６５で指定されるハイブリドーマによって産生されるヒト抗ＣＤ４０抗体を参照のこと。Ｆ４−４６５は、ＨＡＣマウス（Ｋｕｒｏｉｗａら（２０００）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  １０：１０８６（２０００））から得られたものであり、したがって、ヒトλ軽鎖を発現する。ＷＯ２００５／０４４８５４、ＷＯ２００５／０４４３０４、ＷＯ２００５／０４４３０５、ＷＯ２００５／０４４３０６、ＷＯ２００５／０４４８５５、ＷＯ２００５／０４４３０７、およびＷＯ２００５／０４４２９４  ＷＯ（これらの各々の内容は、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）もまた参照のこと。
【０１３８】
アンタゴニスト活性に加え、本発明の方法における使用のための抗ＣＤ４０抗体は、好ましくは、標的細胞に対して別の作用機構を有する。例えば、抗ＣＤ４０抗体は、好ましくはＡＤＣＣ活性を有する。あるいはまた、抗ＣＤ４０抗体の可変領域は、ＡＤＣＣ活性を有する別の抗体アイソタイプ上に発現され得る。また、本明細書中のどこかでさらに記載しているように、抗ＣＤ４０抗体の天然形態、組換え形態または抗原結合断片を、細胞毒素、治療用薬剤または放射性金属イオンもしくは放射性同位体にコンジュゲートさせることも可能である。
【０１３９】
本明細書中のどこかで説明しているように、本発明者らは、他の抗体とは反対に、ＣＨＩＲ−１２．１２などの抗ＣＤ４０抗体は、ヒト患者のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上の２つのＦｃγＲＩＩＩａアミノ酸１５８アロタイプのいずれか（ＶまたはＦ）に結合することにより、ＣＤ４０発現標的細胞の強力な抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介し得るという驚くべき所見を見出した。したがって、ＣＨＩＲ−１２．１２などの抗ＣＤ４０抗体は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖについてホモ接合性（遺伝子型Ｖ／Ｖ）のヒト患者に加え、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者における、ＣＤ４０発現細胞と関連している癌および前悪性状態の処置において使用され得る。本発明は、ＮＨＬにおけるリツキシマブの臨床的活性が患者のＦｃγＲＩＩＩａ遺伝子型と相関することが示されたため、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））での処置に応答性でない癌および前悪性状態の処置に特に好都合である。
【０１４０】
したがって、特に好ましい本発明の方法における使用のための抗ＣＤ４０抗体は、アンタゴニスト活性に加え、ＦｃγＲＩＩＩａを発現するヒトエフェクター細胞（ナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）など）によるＣＤ４０発現細胞のＡＤＣＣを媒介し得るものである。最も好ましいのは、本明細書中のどこかでさらに記載しているように、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８ＦおよびＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖの両方に高親和性で結合し得る抗ＣＤ４０抗体である。
【０１４１】
特に好ましい抗ＣＤ４０抗体は、ＷＯ２００５／０４４８５４、ＷＯ２００５／０４４３０４、ＷＯ２００５／０４４３０５、ＷＯ２００５／０４４３０６、ＷＯ２００５／０４４８５５、ＷＯ２００５／０４４３０７、およびＷＯ２００５／０４４２９４ＷＯ（これらの各々の内容は、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）に開示されたものである。
【０１４２】
本発明に特に重要なのは、ＷＯ２００５／０４４８５４、ＷＯ２００５／０４４３０４、ＷＯ２００５／０４４３０５、ＷＯ２００５／０４４３０６、ＷＯ２００５／０４４８５５、ＷＯ２００５／０４４３０７、およびＷＯ２００５／０４４２９４に記載されたＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体の結合特性を共有するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体である。かかる抗体としては、限定されないが、以下のもの：
ａ）モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２；
ｂ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体；
ｃ）配列番号２に示された配列、配列番号４に示された配列、配列番号５に示された配列、配列番号２および配列番号４に示された両方の配列ならびに配列番号２および配列番号５に示された両方の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；
ｄ  ）配列番号１に示された配列、配列番号３に示された配列ならびに配列番号１および配列番号３に示された両方の配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子にコードされたアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；
ｅ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体に結合し得るエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｆ）配列番号７または配列番号９に示されたヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｇ）配列番号７または配列番号９に示されたヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８９を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｈ）競合的結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；
ｉ）前記項目ａ）のモノクローナル抗体または前記項目ｃ）〜ｈ）いずれか１つのモノクローナル抗体であって、組換えにより作製された抗体；ならびに
ｊ）前記項目ａ）〜ｉ）いずれか１つのモノクローナル抗体の抗原結合断片であって、ヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持している断片であるモノクローナル抗体
が挙げられる。
【０１４３】
モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２は、本発明の方法における使用に特に好ましい。
【０１４４】
モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２は、ＷＯ２００５／０４４８５４、ＷＯ２００５／０４４３０４、ＷＯ２００５／０４４３０５、ＷＯ２００５／０４４３０６、ＷＯ２００５／０４４８５５、ＷＯ２００５／０４４３０７、およびＷＯ２００５／０４４２９４に詳細に記載されている。ＣＨＩＲ−１２．１２抗体は、ハイブリドーマ細胞株１５３．８Ｅ２．Ｄ１０．Ｄ６．１２．１２（細胞株１２．１２とも称される）により産生されるＩｇＧ１アイソタイプの完全ヒト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体である。該細胞株は、ヒトＩｇＧ１重鎖遺伝子座およびヒトκ鎖遺伝子座を含む免疫処置された異種型マウス（ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ａｂｇｅｎｉｘ；Ｆｒｅｍｏｎｔ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）由来の脾細胞を用いて創製されたものである。該脾臓細胞をマウス骨髄腫ＳＰ２／０細胞（Ｓｉｅｒｒａ  ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ）と融合させた。得られたハイブリドーマを数回サブクローーニングし、安定なモノクローナル細胞株１２．１２が創製された。本発明における使用に適した他の抗体は、本明細書中のどこかで記載したようなヒト免疫グロブリン遺伝子座が組み換えられたマウスを用い、同様に調製され得る。
【０１４５】
ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体は、ＥＬＩＳＡ型アッセイにおいて可溶性ＣＤ４０に結合し、細胞表面ＣＤ４０へのＣＤ４０−リガンドの結合を妨げ、予め結合されたＣＤ４０−リガンドを移動させる（フローサイトメトリーアッセイによって測定）。抗体ＣＨＩＲ−５．９およびＣＨＩＲ−１２．１２は、ＣＤ４０への結合に関して互いに競合するが、米国特許仮出願第６０／２３７，５５６号（発明の名称「ヒト抗ＣＤ４０抗体」、２０００年１０月２日出願）およびＰＣＴ国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０ｌ／３０８５７（これも発明の名称「ヒト抗ＣＤ４０抗体」、２００１年１０月２日出願（代理人整理番号ＰＰ  １６０９２．００３）、ＷＯ２００２／０２８９０４として公開）（これらはともに、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載された抗ＣＤ４０モノクローナル抗体である１５Ｂ８とは競合しない。インビトロで正常なヒト被験体由来のＢ細胞の増殖に対する効果について試験すると、ＣＨＩＲ−１２．１２  は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体としての機能を果たす。さらにまた、ＣＨＩＲ−１２．１２は、正常な被験体由来のヒトリンパ球の強力な増殖を誘導しない。該抗体は、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）によってＣＤ４０発現標的細胞を死滅させ得る。ヒトＣＤ４０に対するＣＨＩＲ−１２．１２の結合親和性は、ＢｉａｃｏｒｅＴＭアッセイによって測定した場合、５×１０−１０Ｍである。
【０１４６】
ＣＨＩＲ−１２．１２抗体の可変領域のヌクレオチド配列およびアミノ酸配列を本明細書に示す。より詳しくは、ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖および重鎖のリーダー領域、可変領域および定常領域のアミノ酸配列を、配列番号２（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖の完全配列）、配列番号４（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖の完全配列）、および配列番号５（配列番号４に示すｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖のバリアントの完全配列、ここで、該バリアントは、残基配列番号４の１５３位のアラニンの代わりにセリン置換を含む）に示す。ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、配列番号１（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖のコード配列）および配列番号３（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖のコード配列）に示す。ＣＨＩＲ−１２．１２抗体を発現するハイブリドーマは、ＡＴＣＣに、特許寄託表示ＰＴＡ−５５４３で寄託されている。
【０１４７】
本発明の方法における使用のための抗ＣＤ４０抗体としては、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体とは異なるが、ＣＤＲを保持している抗体、および１つ以上のアミノ酸付加、欠失または置換を有する抗体が挙げられる。本発明の方法における使用のための抗ＣＤ４０抗体はまた、脱免疫化抗体、特に脱免疫処理されたアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体であり得、これは、例えば、国際特許出願公報番号ＷＯ９８／５２９７６およびＷＯ００３４３１７（引用により本明細書に組み込まれる）に記載のようにして作製され得る。この様式では、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体内の残基は、該抗体が、ヒトＣＤ４０発現細胞に対するそのアンタゴニスト活性（かかる活性は、本明細書中のどこかで示したアッセイによって測定される）を保持したまま、ヒトに対して非疫原性または低免疫原性となるように修飾される。また、目的の抗体、例えばアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体もしくはアンタゴニスト抗ＣＤ４０Ｌ抗体またはその断片を含み、対応するポリヌクレオチドベクターから合成または発現され得る（当該技術分野で知られている）融合タンパク質も本発明の範囲内に含まれる。かかる融合タンパク質は、本明細書中のどこかで示した抗体のコンジュゲーションに関して記載されている。
【０１４８】
目的の結合特異性を有する任意の既知の抗体は、例えば、特許公開公報番号ＥＰ０９８３３０３  Ａ１、ＷＯ００／３４３１７およびＷＯ９８／５２９７６（引用により本明細書に組み込まれる）に記載された方法を用いてもたらされる配列変異を有するものであり得る。例えば、ＣＤＲ内の配列によって、ＭＨＣクラスＩＩへの抗体の結合が引き起こされ、望ましくないヘルパーＴ細胞応答が誘発され得ることが示されている。同類置換により、抗体が、望ましくないＴ細胞応答を誘発する能力を失うが結合活性を保持することが可能になる。任意のかかる同類または非同類置換は、当該技術分野で認識された方法、例えば、本明細書中のどこかで示したものを用いて行なわれ得、得られる抗体もまた本発明の方法において使用され得る。バリアント抗体は、特定の活性、例えば、アンタゴニスト活性、親和性および特異性について、本明細書に記載された方法を用いて常套的に試験され得る。
【０１４９】
例えば、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体、例えばＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体のアミノ酸配列バリアントは、目的の抗体をコードするクローニングされたＤＮＡ配列における変異によって調製され得る。変異誘発のための方法およびヌクレオチド配列の改変は、当該技術分野でよく知られている。例えば、ＷａｌｋｅｒおよびＧａａｓｔｒａ編（１９８３）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８２：４８８−４９２；Ｋｕｎｋｅｌら（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５４：３６７−３８２；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；米国特許第４，８７３，１９２号；およびそこに挙げられた引用文献（引用により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。目的のポリペプチドの生物学的活性に影響を及ぼさない適切なアミノ酸置換に関する手引きは、Ｄａｙｈｏｆｆら（１９７８）ｉｎ  Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（Ｎａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、Ｄ．Ｃ．）（引用により本明細書に組み込まれる）のモデルを見るとよい。１つのアミノ酸を同様の特性を有する別のものと交換するなどの同類置換なども好ましい場合があり得る。同類置換の例としては、限定されないが、Ｇｌｙ⇔Ａｌａ、Ｖａｌ⇔Ｉｌｅ⇔Ｌｅｕ、Ａｓｐ⇔Ｇｌｕ、Ｌｙｓ⇔Ａｒｇ、Ａｓｎ⇔Ｇｌｎ、およびＰｈｅ⇔Ｔｒｐ⇔Ｔｙｒが挙げられる。
【０１５０】
目的の抗体、例えば、目的のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体ポリペプチドのバリアントの構築において、修飾は、バリアントが継続して所望の活性、すなわち、同様の結合親和性を有するように、およびアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の場合は、ヒト細胞の表面上に発現されたヒトＣＤ４０抗原に特異的結合し得、有意なアゴニスト活性がないが、ヒトＣＤ４０発現細胞上のＣＤ４０抗原に結合するとアンタゴニスト活性を示し得るように行なわれる。明らかに、バリアントポリペプチドをコードするＤＮＡ内になされた任意の変異は、該配列をリーディングフレーム外に配置するものであってはならず、好ましくは、二次ｍＲＮＡ構造をもたらし得る相補領域を生成しないものである。ＥＰ特許出願公開公報第７５，４４４号を参照のこと。
【０１５１】
また、抗体、例えばアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の定常領域は、いくつかの様式で、エフェクター機能を改変するように変異され得る。例えば、米国特許第６，７３７，０５６Ｂ１号および米国特許出願公開公報第２００４／０１３２１０１  Ａ１号を参照のこと。これらには、Ｆｃ受容体への抗体結合を最適化するＦｃ変異が開示されている。
【０１５２】
好ましくは、参照抗体、例えばアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体のバリアントは、該参照抗体、例えばアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体分子、例えば、本明細書に記載のＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体のアミノ酸配列、または該参照抗体分子のより短い一部分と、少なくとも７０％または７５％の配列同一性、好ましくは少なくとも８０％または８５％の配列同一性、より好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％または９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。より好ましくは、該分子は、少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を共有する。本発明の目的のため、配列同一性の割合は、ギャップ開始ペナルティ１２およびギャップ伸張ペナルティ２、ＢＬＯＳＵＭマトリックス６２でアフィンギャップ検索を用い、Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムを用いて決定される。Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９に教示されている。バリアントは参照抗体、例えばアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体と、例えば、１〜１５アミノ酸残基程度の少数、１〜１０アミノ酸残基程度の少数、例えば、６〜１０、５程度の少数、４、３、２程度の少数、または１アミノ酸残基すらだけ異なるものであり得る。
【０１５３】
２つのアミノ酸配列の最適なアラインメントに関して、バリアントアミノ酸配列の連続するセグメントは、参照アミノ酸配列に対して付加アミノ酸残基または欠失アミノ酸残基を有するものであり得る。参照アミノ酸配列との比較に使用される連続セグメントは、少なくとも２０個の連続するアミノ酸残基を含むものであり、３０、４０、５０アミノ酸残基またはそれ以上であり得る。同類の残基置換またはギャップと関連している配列同一性に対する補正が行なわれ得る（Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムを参照のこと）。
【０１５４】
ＣＤ４０に特異的に結合し、アンタゴニスト活性を保持したものであり得る（特に悪性Ｂ細胞上のＣＤ４０抗原に結合したとき）ポリペプチドの正確な化学構造は、いくつかの要素に依存する。イオン化性のアミノ基およびカルボキシル基が分子内に存在するため、具体的なポリペプチドは、酸性もしくは塩基性の塩として、または天然形態で得られ得る。適当な環境条件内に置かれたとき、その生物学的活性を保持しているかかる調製物はすべて、本明細書で用いるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の定義に含まれる。さらに、該ポリペプチドの一次アミノ酸配列は、糖部分（グリコシル化）を用いた誘導体化によって、または他の補助分子、例えば、脂質、リン酸基、アセチル基などによって増大され得る。また、該配列は、糖類とのコンジュゲーションによって増大され得る。かかる増大の特定のある態様は、産生宿主の翻訳後プロセッシング系により行なわれ得、他のかかる修飾は、インビトロで導入され得る。任意の事象において、かかる修飾は、抗ＣＤ４０抗体のアンタゴニスト特性が破壊されていない限り、本明細書で用いる抗ＣＤ４０抗体の定義に含まれる。かかる修飾は、該種々のアッセイにおいて、該ポリペプチドの活性を増強するか、または低下させるかのいずれかにより、定量的または定性的に該活性に影響し得ることが予測される。さらに、鎖内の個々のアミノ酸残基は、酸化、還元または他の誘導体化によって修飾され得、該ポリペプチドは、活性を保持している断片を得るために切断され得る。アンタゴニスト活性を破壊しないかかる改変は、該ポリペプチド配列を本明細書で用いる目的の抗ＣＤ４０抗体の定義から除外しない。
【０１５５】
当該技術分野では、ポリペプチドバリアントの調製および使用に関する相当な手引きが示されている。抗ＣＤ４０抗体バリアントの調製において、当業者は、天然タンパク質のヌクレオチドまたはアミノ酸配列に対して、どの修飾が、本発明の方法において使用される医薬組成物の治療上活性な成分としての使用に適したバリアントをもたらすかを容易に決定することができよう。
【０１５６】
本発明における使用のための抗ＣＤ４０抗体は、好ましくは、インビトロおよび／またはインビボで、以下の生物学的活性：Ｔ細胞によって刺激される正常なヒト末梢Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌の阻害；ＣＤ４０Ｌ発現細胞または可溶性ＣＤ４０リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）によって刺激される正常なヒト末梢Ｂ細胞の生存および／または増殖の阻害；ジャーカットＴ細胞によって刺激される正常なヒト末梢Ｂ細胞の生存および／または増殖の阻害；ｓＣＤ４０Ｌまたは固相ＣＤ４０Ｌによって刺激される任意の細胞における「生存」抗アポトーシスの細胞内シグナルの阻害；ならびにｓＣＤ４０Ｌまたは固相ＣＤ４０Ｌとのライゲーション時の任意の細胞におけるＣＤ４０シグナル伝達の阻害、ＣＤ４０を有する標的細胞またはＣＤ４０に対するコグネートリガンドを有する細胞（例えば限定されないが、Ｔ細胞およびＢ細胞）の欠失、アネルギーおよび／または耐性誘導、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋調節Ｔ細胞の拡大または活性化の誘導の少なくとも１つを有する（例えば、ＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ干渉を介するドナーアロ抗原特異的組織拒絶、ｖａｎ  Ｍａｕｒｉｋら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：５４０１−５４０４）、任意の機構（例えば、限定されないが、抗体依存性細胞媒介型細胞傷害性（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞傷害性（ＣＤＣ）、増殖の下方調節および／または標的細胞におけるアポトーシス）を介する細胞傷害性、標的細胞サイトカイン分泌のモジュレーションおよび／または細胞表面分子発現、ならびにその組合せを参照のこと）。
【０１５７】
かかる生物学的活性のためのアッセイは、本明細書に記載のようにして、およびそれぞれ、２００３年１１月４日、２００３年１１月２６日および２００４年４月２７日に出願され、米国特許仮出願番号６０／５１７，３３７（代理人整理番号ＰＰ２０１０７．００１（０３５７８４／２５８４４２））、６０／５２５，５７９（代理人整理番号ＰＰ２０１０７．００２（０３５７８４／２７１５２５））、および６０／５６５，７１０（代理人整理番号ＰＰ２０１０７．００３（０３５７８４／２７７２１４））が割り当てられた、発明の名称が「アンタゴニスト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体およびその使用方法」である仮出願；ならびに２００４年１１月４日に出願された国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３７１５２（代理人整理番号ＰＰ２０１０７．００４（０３５７８４／２８２９１６））、ＷＯ２００５／０４４８５４として公開（これもまた発明の名称が「アンタゴニスト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体およびその使用方法」である）（これらの各々の内容は、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載のようにして行なわれ得る。Ｓｃｈｕｌｔｚｅら（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９２：８２００−８２０４；Ｄｅｎｔｏｎら（１９９８）Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２：６−１５；Ｅｖａｎｓら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：６８８−６９７；Ｎｏｅｌｌｅ（１９９８）Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ  Ｓｕｐｐｌ．  ４９：１７−２２；Ｌｅｄｅｒｍａｎら（１９９６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３：７７−８６；Ｃｏｌｉｇａｎら（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３：１２；Ｋｗｅｋｋｅｂｏｏｍら（１９９３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７９：４３９−４４４；および米国特許第５，６７４，４９２号および同第５，８４７，０８２号（引用により本明細書に組み込まれる）に記載されたアッセイもまた参照のこと。
【０１５８】
本明細書において同定されたＣＤ４０−抗原エピトープに特異的なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を検出するための代表的なアッセイは、「競合的結合アッセイ」である。競合的結合アッセイは、未知物質が、標識された既知リガンドのその特異的抗体への結合を阻害するその能力によって検出および定量される血清学的アッセイである。これはまた、競合的阻害アッセイとも称される。代表的な競合的結合アッセイでは、標識されたＣＤ４０ポリペプチドを試料中の候補抗体により、例えば、本発明のモノクローナル抗体の１つ以上のエピトープに対して生成させたモノクローナル抗体との組合せで沈殿させる。目的のエピトープと特異的に反応する抗ＣＤ４０抗体は、目的のＣＤ４０タンパク質の特定のエピトープを含むＣＤ４０タンパク質または該タンパク質の断片に対して調製された一連の抗体をスクリーニングすることにより同定され得る。例えば、ヒトＣＤ４０では、目的のエピトープとしては、ヒトＣＤ４０のショートアイソフォームの線状および／または非線状アミノ酸残基を含むエピトープ（配列番号１０に示すＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＰ＿６９０５９３）を参照のこと、配列番号９に示す配列にコードされる；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＮＭ＿１５２８５４もまた参照のこと）、またはヒトＣＤ４０のロングアイソフォームのもの（配列番号１２に示すＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＣＡＡ４３０４５およびＮＰ＿００１２４１を参照のこと、配列番号１１に示す配列にコードされる；ＧｅｎＢａｎｋ受託番号Ｘ６０５９２およびＮＭ＿００１２５０を参照のこと）が挙げられる。あるいはまた、以前に同定された適当なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を用いる競合的結合アッセイを用い、その以前に同定された同定され抗体と同等のモノクローナル抗体が選択され得る。
【０１５９】
かかるイムノアッセイに使用される抗体は、標識されたもの、または未標識のものであり得る。未標識抗体は、凝集において使用され得る。標識抗体は、多種多様な標識を用いて多種多様なアッセイにおいて使用され得る。抗ＣＤ４０抗体と目的のエピトープ間の抗体−抗原複合体の形成の検出は、検出可能な物質を該抗体に結合することにより助長され得る。好適な検出手段としては、放射性核種、酵素、補酵素、蛍光剤、化悪発光剤、色原体、酵素基質または補因子、酵素阻害剤、補欠分子族複合体、フリーラジカル、粒子、色素などの標識の使用が挙げられる。適当な酵素の例としては、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼまたはアセチルコリンエステラーゼが挙げられる；適当な補欠分子族複合体の例としては、ストレプトアビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられる；適当な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニラミンフルオレセイン、塩化ダンシルまたはフィコエリトリンが挙げられる；発光物質の一例はルミノールである；生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられる；ならびに適当な放射性物質の例としては、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓまたは３Ｈが挙げられる。かかる標識された試薬は、さまざまなよく知られたアッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ、酵素イムノアッセイ、例えば、ＥＬＩＳＡ、蛍光イムノアッセイなどにおいて使用され得る。例えば、米国特許第３，７６６，１６２号；同第３，７９１，９３２号；同第３，８１７，８３７号；および同第４，２３３，４０２号を参照のこと。
【０１６０】
また、抗体を、増大されたＡＤＣＣ活性を有するように操作することことも可能である。特に、ＣＨ２ドメインのカルボキシ末端側の半分は、ＦｃＲＩＩＩ受容体により媒介されるＡＤＣＣに必須である。ＣＨ２およびヒンジ領域は、エフェクター機能において重要な役割を有するため、余分なＣＨ２および／またはヒンジ領域を含む一連の多ドメイン抗体が創製され、エフェクター効力における任意の変化について研究され得る（Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ，Ｊ．、Ｇｏｒｍａｎ，Ｓ．Ｄ．、Ｒｏｕｔｌｅｄｇｅ，Ｅ．Ｇ．、Ｌｌｏｙｄ，Ｉ．Ｓ．およびＷａｌｄｍａｎｎ，Ｈ．、Ｔｈｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４  Ｏｃｔ；１（５）：２４７−５５を参照のこと）。択一的なアプローチは、余分なドメインを平行して操作することであり得る（例えば、システインをキメラＩｇのＨ鎖に操作することによる二量体の創製によって）（Ｓｈｏｐｅｓ  Ｂ．（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９２  １；１４８（９）：２９１８−２２を参照のこと）。さらにまた、ＡＤＣＣ活性を増大させるための変更は、変異をＦｃ領域内に導入すること（例えば、ＵＳ６，７３７，０５６  Ｂ１を参照のこと）、細胞をフコシルトランスフェラーゼ欠損細胞株内で発現させること（例えば、ＵＳ２００３／０１１５６１４を参照のこと）、または抗体グリコシル化に対して他の変更を行うこと（例えば、ＵＳ  ６，６０２，６８４を参照のこと）により操作され得る。
【０１６１】
本発明は、患者がＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆ遺伝子型についてホモ接合性またはヘテロ接合性である、ＣＤ４０を発現する癌および前悪性状態の処置に好都合である。
【０１６２】
本明細書で用いる場合、「抗ＣＤ２０抗体」には、ＣＤ２０細胞表面抗原を特異的に認識する任意の抗体、例えば、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単鎖抗体、およびその断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、ならびに親の抗ＣＤ２０抗体の抗原結合機能を保持している他の断片が包含される。本発明の方法との関連において特に重要なのは、ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８モノクローナル抗体（Ｂｉｏｇｅｎ  ＩＤＥＣ  Ｉｎｃ．、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ）によって示される結合特性を有する抗ＣＤ２０抗体またはその抗原結合断片である。
【０１６３】
一部のある実施形態において、本発明において使用される抗ＣＤ４０抗体は、キメラ抗ＣＤ２０モノクローナル抗体ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８よりも強力な治療活性を示すものであり、ここで、抗腫瘍活性は、等量のこれらの抗体を、ヌードマウス異種移植片腫瘍モデル（ヒトリンパ腫または骨髄腫細胞株を使用）において用いてアッセイされる。ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８（ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ；リツキサン（登録商標）の商標名で市販、リツキシマブとも称される）は、ヒトＩｇＧ１およびκ定常領域を、マウス抗ＣＤ２０モノクローナル抗体ＩＤＥＣ−２Ｂ８（Ｒｅｆｆら（１９９４）Ｂｌｏｏｄ  ８３：４３５−４４５）から単離されたマウス可変領域とともに含むキメラ抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である。リツキサン（登録商標）は、再発性のＢ細胞低悪性度または濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の処置に対して許可されている。リツキサン（登録商標）と比べて卓越した治療活性、特に抗腫瘍活性を有する抗体を見い出すことにより、Ｂ細胞リンパ腫、特にＢ細胞非ホジキンリンパ腫などの癌および前悪性状態のための治療方法が劇的に改善され得る。
【０１６４】
好適なヌードマウス異種移植片腫瘍モデルとしては、ナマルバおよびＤａｕｄｉとして知られるヒトバーキットリンパ腫細胞株を用いたものが挙げられる。好ましい実施形態では、抗腫瘍活性は、Ｄａｕｄｉヒトリンパ腫細胞株を用いた病期の（ｓｔａｇｅｄ）ヌードマウス異種移植片腫瘍モデルにおいて、本明細書において以下の実施例７に記載のようにしてアッセイされる。Ｄａｕｄｉリンパ腫細胞株を用いた病期のヌードマウス異種移植片腫瘍モデルは、非病期のモデルよりも、所与の抗体の治療有効性の識別に有効である、それは、病期モデルでは抗体投与が、腫瘍が測定可能な大きさに達した後にのみ開始されるためである。非病期モデルでは、抗体投与は、一般的に、腫瘍接種の１日以内で触診可能な腫瘍が存在する前に開始される。抗体が、病期モデルにおいてリツキサン（登録商標）より優れた性能を示す（すなわち、治療活性の増大を示す）能力は、該抗体がリツキサン（登録商標）よりも治療上有効であることの強力な表示である。さらに、Ｄａｕｄｉモデルでは、リツキサン（登録商標）の標的である抗ＣＤ２０は、細胞表面上にＣＤ４０よりも高レベルで発現される。
【０１６５】
「等量」の本発明の抗ＣＤ４０抗体とリツキサン（登録商標）により、同じｍｇ用量が重量あたりの基準で投与されることが意図される。したがって、抗ＣＤ４０抗体が、０．０１ｍｇ／ｋｇ体重（腫瘍モデルに使用されたマウスの）が投与される場合、リツキサン（登録商標）もまた、０．０１ｍｇ／ｋｇマウス体重で投与される。同様に、抗ＣＤ４０抗体が、０．１、１または１０ｍｇ／ｋｇ体重（腫瘍モデルに使用されたマウスの）で投与される場合、リツキサン（登録商標）もまた、それぞれ、０．１、１または１０ｍｇ／ｋｇマウス体重で投与される。
【０１６６】
ヌードマウス異種移植片腫瘍モデルに投与される場合、一部の抗ＣＤ４０抗体は、等量のリツキサン（登録商標）よりも有意に縮小された腫瘍体積をもたらす。例えば、完全ヒトモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２は、Ｄａｕｄｉヒトリンパ腫細胞株を用いた病期のヌードマウス異種移植片腫瘍モデルにおいて、本明細書の実施例７に記載の様式でアッセイした場合、等用量のリツキサンで観察されるものと比べて、少なくとも２０％の抗腫瘍活性の増大を示し、このアッセイでは、５０％〜６０％もの抗腫瘍活性の増大が示され得る。この抗腫瘍活性の増大は、等用量のリツキサン（登録商標）と比べた場合、本発明の抗ＣＤ４０抗体で観察されるものより大きな腫瘍体積の減少、またはより完全な応答の誘導に反映される。したがって、例えば、腫瘍接種後の時間の長さに応じて、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２は、等用量のリツキサン（登録商標）で観察されるもの約３分の１から約２分の１の腫瘍体積を示し得る。
【０１６７】
抗体有効性における別の差は、ＮＫ細胞の存在下、インビトロで腫瘍細胞の最大溶解を得るために必要とされる抗体の濃度をインビトロで測定されるものである。例えば、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、リツキサン（登録商標）の濃度の１／２、好ましくは１／４、最も好ましくは１／１０のＥＣ５０で、Ｄａｕｄｉ細胞の最大溶解に達する。この型の測定もまた、本明細書の実施例に記載する。
【０１６８】
上記のアッセイにおいて、等量のリツキサン（登録商標）有意に大きい有効性を有することの恩恵を受ける抗ＣＤ４０抗体としては、
ａ）モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２；
ｂ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体；
ｃ）配列番号２に示された配列、配列番号４に示された配列、配列番号５に示された配列、配列番号２および配列番号４に示された両方の配列ならびに配列番号２および配列番号５に示された両方の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；
ｄ  ）配列番号１に示された配列、配列番号３に示された配列ならびに配列番号１および配列番号３に示された両方の配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子にコードされたアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；
ｅ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体に結合し得るエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｆ）配列番号７または配列番号９に示されたヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｇ）配列番号７または配列番号９に示されたヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８９を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｈ）競合的結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；
ｉ）前記項目ａ）のモノクローナル抗体または前記項目ｃ）〜ｈ）いずれか１つのモノクローナル抗体であって、組換えにより作製された抗体；ならびに
ｊ）前記項目ａ）〜ｉ）いずれか１つのモノクローナル抗体の抗原結合断片であって、ヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持している断片であるモノクローナル抗体
が挙げられ得る。
【０１６９】
本発明は、抗ＣＤ４０抗体で処置可能な癌または前悪性状態を有するヒト患者の同定方法であって、
ａ）ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態を有するヒト患者を同定すること；および
ｂ）前記ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型（Ｖ／Ｖ、Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）を決定すること
を含み、ここで、前記癌または前悪性状態は、前記ヒト患者がＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である場合、抗ＣＤ４０抗体で処置可能である方法を提供する。該癌または前悪性状態は、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））での処置に対して不応性のものであり得る。
【０１７０】
抗ＣＤ４０抗体で処置可能な癌または前悪性状態を有するヒト患者が同定されたら、該ヒト患者は、次いで、抗ＣＤ４０抗体で処置され得る。したがって、該方法は、さらなる工程（ｃ）ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）と同定されたヒト患者に、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与することを含むものであり得る。
【０１７１】
この抗ＣＤ４０抗体で処置可能な癌または前悪性状態を有するヒト患者の同定方法は、当業者によって適当な診断キットを用いて容易に行なわれ得る。該キットは、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するのに適した試薬を含むものであるのがよい。したがって、本発明はまた、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するための試薬を含む、抗ＣＤ４０抗体で治療可能な癌または前悪性状態を有するヒト患者を同定するためのキットを提供する。好適なキットは、本明細書中のどこかでより詳細に記載している。
【０１７２】
本発明はまた、癌または前悪性状態を有するヒト患者の処置のための抗体療法の選択方法であって、
ａ）ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態を有するヒト患者を同定すること；および
ｂ）前記ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型（Ｖ／Ｖ、Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）を決定すること
を含み、ここで、前記ヒト患者がＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である場合、抗ＣＤ４０抗体が前記癌または前悪性状態の処置のために選択される方法を提供する。該癌または前悪性状態は、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））での処置に対して不応性のものであり得る。
【０１７３】
癌または前悪性状態を有するヒト患者の処置のための抗ＣＤ４０抗体療法が選択されたら、該ヒト患者は、次いで、抗ＣＤ４０抗体で処置され得る。したがって、該方法は、さらなる工程（ｃ）ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）と同定されたヒト患者に、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与することを含むものであり得る。
【０１７４】
この癌または前悪性状態を有するヒト患者の処置のための抗体療法選択方法もまた、当業者よって、適当な診断キットを用いて容易に行なわれ得る。該キットは、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するのに適した試薬を含むものであるのがよい。したがって、本発明はまた、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するための試薬を含む、ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態を有するヒト患者の処置のための抗体療法を選択するためのキットを提供する。
【０１７５】
「抗ＣＤ４０抗体で治療可能な」により、ヒト患者（すなわち、癌または前悪性状態を有する個体）が、抗ＣＤ４０抗体で処置されると、該処置に求められる癌または前悪性状態に関する「正の治療応答」（本明細書中（ｈｅｒｉｎ）のどこかで規定）の成果を享受し得ることが意図される。
【０１７６】
ヒト患者から採取された生物学的試料を用いるヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するための任意の方法が想定される。
【０１７７】
例えば、本発明は、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型の決定における使用のためのキットであって、１０ヌクレオチド長以上の少なくとも１つのプローブを含み、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するのに適した配列のマイクロアレイを含むキットを提供する。標識したＲＮＡまたはＤＮＡを、アレイ上の相補的なプローブにハイブリダイズさせ、次いで、レーザースキャニングによって検出する。アレイ上の各プローブに対するハイブリダイゼーション強度を測定し、相対遺伝子発現レベルを表す定量的な値に変換する。プローブの配列および長さの選択は、当業者によって容易に行なわれ得る。ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８  ＦおよびＶアロタイプをコードするヒト遺伝子およびｍＲＮＡのヌクレオチド配列は既知である。したがって、当業者は、適切な実験条件下で標的配列のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型の決定を可能にするプローブ（１種類または複数種）を選択することができよう。
【０１７８】
機械的合成法を用いたこれらのアレイ合成のための手法は、例えば、米国特許第５，３８４，２６１号（引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）に記載されている。平面状のアレイ表面が好ましいが、アレイは、事実上任意の形状の表面上、または多数の表面上に作製されたものであってもよい。アレイは、ビーズ、ゲル、ポリマー表面、繊維（例えば、光ファイバーなど）、ガラスまたは任意の他の適切な基材上のペプチドまたは核酸であり得る。米国特許第５，７７０，３５８号、同第５，７８９，１６２号、同第５，７０８，１５３号、同第６，０４０，１９３号および同第５，８００，９９２号（これらの各々は、あらゆる目的のために、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）を参照のこと。アレイは、診断学または包括的デバイスの他の操作を可能にするような様式でパッケージングされたものであってもよい。例えば、米国特許第５，８５６，１７４号および同第５，９２２，５９１号（引用により本明細書に組み込まれる）を参照のこと。
【０１７９】
例えば、本発明はまた、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型の決定における使用のためのキットであって、ＦｃγＲＩＩＩａのアミノ酸１５８をコードする遺伝子またはｍＲＮＡの領域のポリメラーゼ触媒型増幅におけるプライマーとしての使用に適したオリゴヌクレオチドを含むキットを提供する。プライマーの配列および長さの選択は、当業者によって容易に行なわれ得る。ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８  ＦおよびＶアロタイプをコードするヒト遺伝子およびｍＲＮＡのヌクレオチド配列は既知である。したがって、当業者は、適切な実験条件下でＦｃγＲＩＩＩａのアミノ酸１５８をコードする遺伝子またはｍＲＮＡの領域の増幅を可能にするプライマーを選択することができよう。増幅された配列は、次いで、患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するための既知の方法を用いて配列決定され得る。
【０１８０】
ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するための別の方法は、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型に特徴的なＤＮＡ断片化が検出される核酸系の方法を使用することである。アガロースゲル上での電気泳動を用いて分離した場合、
各ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型のＤＮＡは、特徴的なパターンを有する。したがって、本発明はまた、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型の決定における使用のためのキットであって、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するのに適した１種類以上の制限酵素を含むキットを提供する。好適な制限酵素は当該技術分野で知られている（例えば、Ｋｏｅｎｅら（１９９７）Ｂｌｏｏｄ  ９０（３）：１１０９−１１１４を参照のこと）。
【０１８１】
また、本発明のキットは、キットをどのように使用してヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するかが示された使用説明書を含むものであり得る。キットはまた、例えば、緩衝剤、保存剤またはタンパク質安定化剤を含むものであり得る。キットの各成分は、通常、個々の容器内に封入されており、これらの種々の容器がすべて単一のパッケージ内に、使用説明書（キットをどのように使用してヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するかが示されている）とともに存在している。
【０１８２】
本発明は、本明細書中のどこかで記載した、ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態を処置するための医薬の製造における抗ＣＤ４０抗体の使用を提供する。
【０１８３】
本発明の抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態を予防または処置するのに治療上有効である濃度で投与される。この目的を達成するため、該抗体は、当該技術分野で知られたさまざまな許容され得る担体および／または賦形剤を用いて製剤化され得る。抗ＣＤ４０抗体は、非経口投与経路によって投与され得る。典型的には、該抗体は、静脈内または皮下いずれかの注射によって投与される。この投与を行なうための方法は、当業者にはわかる。
【０１８４】
静脈内投与は、好ましくは、約１時間未満〜約１０時間（１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０時間未満）の期間にわたる注入によって行なわれる。その後の注入は、約１時間未満〜約６時間、例えば、約１〜約４時間、約１〜約３時間もしくは約１〜約２時間または１時間未満などの期間にわたって投与され得る。あるいはまた、用量は皮下投与され得る。
【０１８５】
本発明の医薬組成物は、その意図される投与経路と適合性となるように製剤化される。非経口適用に使用される液剤または懸濁剤は、以下の成分：滅菌希釈剤（注射用水、生理食塩水溶液など）；抗菌剤（ベンジルアルコールまたはメチルパラベンなど）；抗酸化剤（アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウムなど）；キレート化剤（エチレンジアミン四酢酸など）；バッファー（酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩など）および張性を調整するための薬剤（塩化ナトリウムまたはデキストロースなど）を含有するものであり得る。ｐＨは、酸または塩基（例えば、塩酸または水酸化ナトリウムなど）で調整され得る。非経口用調製物は、アンプル、使い捨てシリンジ、またはガラスもしくはプラスチック製の反復投与用バイアル内に封入され得る。
【０１８６】
抗ＣＤ４０抗体は、典型的には、標準的な手法によって、薬学的に許容され得るバッファー、例えば、滅菌生理食塩水、滅菌緩衝水、前述のものの組合せ中に提供される。非経口投与可能な薬剤の調製方法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版；Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｔｏｎ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ、１９９０）（引用により本明細書に組み込まれる）に記載されている。また、例えば、ＷＯ９８／５６４１８も参照のこと。これには、本発明の方法における使用に適した安定化された抗体医薬製剤が記載されている。
【０１８７】
投与される少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体の量は、当業者によって容易に決定される。投与様式および少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体のそれぞれの量に影響する要素としては、限定されないが、疾患の重症度、疾患の既往歴、治療を受けている個体の年齢、身長、体重、健康、疾患の型、および体調、または抗体注入に対する応答が挙げられる。同様に、投与される抗ＣＤ４０抗体の量は、投与様式および被験体がこの抗腫瘍剤を単回投与または反復投与のいずれで受けているかに依存性である。一般的に、抗ＣＤ４０抗体の投薬量が多いほど好ましく、治療を受けている被験体の体重の増加を伴う。
【０１８８】
投与される抗ＣＤ４０抗体の単回投与では、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇの範囲である。
【０１８９】
したがって、例えば、用量は、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇ、もしくは５０ｍｇ／ｋｇ、または約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇの範囲内に含まれる他のかかる用量であり得る。
【０１９０】
治療有効量の抗体での被験体の処置は、単回処置を含むものであり得、または好ましくは、一連の処置を含むものであり得る。したがって、本発明の別の実施形態において、該方法は、反復投与での抗ＣＤ４０抗体の投与を含む。該方法は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０回またはそれ以上の治療有効用量の抗ＣＤ４０抗体を含む医薬組成物の投与を含むものであり得る。反復投与での抗ＣＤ４０抗体含有医薬組成物の投与頻度および持続期間は、当業者によって、必要以上に実験を行なうことなく容易に決定され得る。同じ治療有効用量の抗ＣＤ４０抗体が処置期間の過程にわたって投与され得る。あるいはまた、異なる治療有効用量の抗ＣＤ４０抗体が、処置期間の過程にわたって使用され得る。
【０１９１】
一例において、被験体は、約０．１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲の抗ＣＤ４０抗体で、１週間に１回で約１〜１０週間、好ましくは約２〜８週間、より好ましくは約３〜７週間、さらにより好ましくは約４、５または６週間処置される。処置は、再発を予防するため、または再発の徴候時に、２〜１２ヶ月毎に行なわれ得る。処置に使用される抗体の有効な投薬量は、具体的な処置の過程において増減され得ることは認識されよう。投薬量の変更は、本明細書に記載された診断用アッセイの結果であり得、該アッセイの結果から明白となるものであり得る。
【０１９２】
したがって、一実施形態において、投与レジメンは、処置期間の第１、８、１５および２２日における治療有効用量の少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体の第１の投与を含む。
【０１９３】
別の実施形態において、投与レジメンとしては、毎日、または処置期間の１週間のうちの第１、３、５および７日における治療有効用量の少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体の第１の投与を有する投与レジメン；処置期間の１週間のうちの第１および３〜４日における治療有効用量の少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体の第１の投与を含む投与レジメン；および処置期間の１週間のうちの第１日における治療有効用量の少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体の第１の投与を含む好ましい投与レジメンが挙げられる。処置期間は、１週間、２週間、３週間、１ヶ月、２ヶ月、３ヶ月、６ヶ月または１年を含むものであり得る。処置期間は、次に１週間、２週間、１ヶ月、３ヶ月、６ヶ月または１年後に行なわれるか、または該期間、互いに間隔が空けられ得る。
【０１９４】
他の実施形態において、本明細書中のどこかで規定した抗ＣＤ４０抗体の初期治療有効用量は、より少ない用量範囲（すなわち、約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ）であり得、その後の用量は、より多い用量範囲（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ）に含まれる。
【０１９５】
択一的な実施形態において、本明細書中のどこかで規定した抗ＣＤ４０抗体の初期治療有効用量は、上限用量範囲（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ）であり得、その後の用量は、下限用量範囲（すなわち、０．３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ）に含まれる。したがって、本発明の一部のある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体療法は、「負荷用量」の該抗体を、治療を必要とする被験体に投与することにより開始され得る。「負荷用量」により、被験体に投与される抗ＣＤ４０抗体の初期用量が意図され、ここで、投与される該抗体の用量は、高用量範囲（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ）に含まれる。「負荷用量」は、完全な「負荷用量」が約２４時間の期間に投与される限り、単回投与、例えば、該抗体をＩＶ投与する単回注入として投与されても、反復投与、例えば、該抗体をＩＶ投与する反復注入として投与されてもよい。「負荷用量」の投与後、次いで、被験体には、１回以上のさらなる治療有効用量の抗ＣＤ４０抗体が投与される。その後の治療有効用量は、例えば、毎週投薬スケジュールに従って、または２週間に１回、３週間に１回もしくは４週間１回投与され得る。かかる実施形態において、その後の治療有効用量は、一般的に、低用量範囲（すなわち、０．３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ）に含まれる。
【０１９６】
あるいはまた、一部のある実施形態において、「負荷用量」後、その後の治療有効用量の抗ＣＤ４０抗体は、「維持スケジュール」に従って投与され、この場合、治療有効用量の該抗体は、１ヶ月に１回、６週間に１回、２ヶ月に１回、１０週間に１回、３ヶ月に１回、１４週間に１回、４ヶ月に１回、１８週間に１回、５ヶ月に１回、２２週間に１回、６ヶ月に１回、７ヶ月に１回、８ヶ月に１回、９ヶ月に１回、１０ヶ月に１回、１１ヶ月に１回、または１２ヶ月に１回投与される。かかる実施形態において、抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量は、低用量範囲（すなわち、０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ）に含まれる（特に、その後の用量が高頻度な間隔で、例えば、２週間に１回〜１ヶ月に１回投与される場合）か、または高用量範囲（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ）に含まれる（特に、その後の用量が低頻度な間隔で、例えば、その後の用量が約１ヶ月〜約１２ヶ月空けて投与される場合）。
【０１９７】
本発明における使用のための本明細書に記載の医薬組成物中に存在させる抗ＣＤ４０抗体は、天然のものであり得るか、または組換え手法によって得られるものであり得、任意の供給源、例えば、哺乳動物供給源（例えば、マウス、ラット、ウサギ、霊長類、ブタおよびヒトなど）のものであり得る。好ましくは、かかるポリペプチドは、ヒト供給源に由来するものであり、より好ましくはハイブリドーマ細胞株由来の組換えヒトタンパク質である。
【０１９８】
本発明に有用な医薬組成物は、本明細書中のどこかで記載した本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の生物学的に活性なバリアントを含むものであり得る。
【０１９９】
本明細書に記載の結合特性を有する抗ＣＤ４０抗体を、治療上活性な成分として含む任意の医薬組成物が、本発明において使用され得る。したがって、１種類以上の抗ＣＤ４０抗体を含む、液状、凍結乾燥、または噴霧乾燥組成物が、本発明に従う被験体へのその後の投与のための水性もしくは非水性液剤または懸濁剤として調製され得る。これらの組成物は各々、少なくとも１種類の抗ＣＤ４０抗体を治療または予防上活性な成分成分として含む。「治療または予防上活性な成分成分」により、医薬組成物が被験体に投与されると、該被験体の疾患または状態の処置、予防または診断に関して所望の治療応答または予防応答がもたらされるように、抗ＣＤ４０抗体が該組成物内に特異的に組み込まれることが意図される。好ましくは、該医薬組成物は、調製および保存中でのタンパク質の安定性および生物学的活性の低下に伴う問題を最小限にするため、適切な安定化剤、増量剤、ならびに両方を含む。
【０２００】
製剤化剤が、本発明の抗ＣＤ４０抗体を含む医薬組成物添加され得る。このような製剤化剤としては、限定されないが、油類、ポリマー、ビタミン類、炭水化物、アミン酸、塩、バッファー、アルブミン、界面活性剤または増量剤が挙げられ得る。好ましくは、炭水化物としては、糖または糖アルコール、例えば、単−、二−または多糖類、または水可溶性グルカンが挙げられる。糖類またはグルカンとしては、フルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、スクロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、αおよびβシクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプン、およびカルボキシメチルセルロース、またはその混合物が挙げられ得る。「糖アルコール」は、ヒドロキシル基を有するＣ４〜Ｃ８炭化水素と規定し、ガラクチトール、イノシトール、マンニトール、キシリトール、ソルビトール、グリセロール、およびアラビトールが挙げられる。これらの糖類または糖アルコールは、個々に、または組合せで使用され得る。糖または糖アルコールの濃度は、１．０％〜７％ｗ／ｖ、より好ましくは２．０％〜６．０％ｗ／ｖである。好ましくは、アミノ酸としては、左旋性（Ｌ）形態のカルニチン、アルギニンおよびベタインが挙げられる；しかしながら、他のアミノ酸を添加してもよい。好ましいポリマーとしては、２，０００〜３，０００の平均分子量を有するポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、または３，０００〜５，０００の平均分子量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。製剤に添加され得る界面活性剤は、ＥＰ２７０，７９９および２６８，１１０に示されている。
【０２０１】
さらに、抗体は、例えば、その循環半減期を増大させるため、ポリマーへの共有結合性コンジュゲーションにより化学的に修飾されたものであってもよい。好ましいポリマー、およびそのペプチドへの結合方法は、米国特許第４，７６６，１０６号；同第４，１７９，３３７号；同第４，４９５，２８５号；および同第４，６０９，５４６号（これらはすべて、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）に示されている。好ましいポリマーは、ポリオキシエチル化ポリオールおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。ＰＥＧは、室温で水に可溶性であり、一般式：Ｒ（Ｏ−ＣＨ２−ＣＨ２）ｎＯ−Ｒ（式中、Ｒは、水素、またはアルキルもしくはアルカノール基などの保護基であり得る）を有する。好ましくは、保護基は、１〜８個の炭素を有し、より好ましくはメチルである。記号ｎは正の整数、好ましくは１〜１，０００、より好ましくは２〜５００である。ＰＥＧは、好ましい平均分子量１，０００〜４０，０００を有し、より好ましくは２，０００〜２０，０００、最も好ましくは３，０００〜１２，０００である。好ましくは、ＰＥＧは、少なくとも１つのヒドロキシ基を有し、より好ましくは、それは末端ヒドロキシ基である。このヒドロキシ基が、好ましくは活性化されて阻害剤上の遊離アミノ基と反応する。しかしながら、該反応性基の型および量は、共有結合によりコンジュゲートされた本発明のＰＥＧ／抗体を得るために変更され得ることは理解されよう。
【０２０２】
水溶性のポリオキシエチル化ポリオールもまた、本発明において有用である。これらとしては、ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、ポリオキシエチル化グリセロール（ＰＯＧ）などが挙げられる。ＰＯＧが好ましい。理由の１つは、ポリオキシエチル化グリセロールのグリセロール主鎖が、例えば動物およびヒトのモノ−、ジ−、トリグリセリドに天然に存在する主鎖と同じであるためである。したがって、この分枝は、体内では、必ずしも外来因子とみなされ得ない。ＰＯＧは、ＰＥＧと同じ範囲の好ましい分子量を有する。ＰＯＧの構造は、Ｋｎａｕｆら（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６３：１５０６４−１５０７０に示されており、ＰＯＧ／ＩＬ−２コンジュゲートの論考については、米国特許第４，７６６，１０６号をみるとよい（これらはともに、引用によりその全体が本明細書に組み込まれる）。
【０２０３】
循環半減期を増大させるための別の薬物送達系はリポソームである。リポソーム送達系の作製方法は、Ｇａｂｉｚｏｎら（１９８２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４２：４７３４；Ｃａｆｉｓｏ（１９８１）Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ａｃｔａ  ６４９：１２９；およびＳｚｏｋａ（１９８０）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｅｎｇ．９：４６７に論考されている。他の薬物送達系は、当該技術分野で知られており、例えば、Ｐｏｚｎａｎｓｋｙら（１９８０）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｒ．Ｌ．Ｊｕｌｉａｎｏ編、Ｏｘｆｏｒｄ、Ｎ．Ｙ．）ｐｐ．２５３−３１５；Ｐｏｚｎａｎｓｋｙ（１９８４）Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｖｓ  ３６：２７７に記載されている。
【０２０４】
医薬組成物内に組み込まれる製剤化剤は、抗ＣＤ４０抗体の安定性をもたらすものであるのがよい。すなわち、抗ＣＤ４０抗体は、その物理的および／または化学安定性を保持しており、所望の生物学的活性、すなわち、本明細書において上記に規定のアンタゴニスト活性の１つ以上、例えば、限定されないが、Ｔ細胞によって刺激される正常なヒト末梢Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌の阻害；ジャーカットＴ細胞によって刺激される正常なヒト末梢Ｂ細胞の生存および／または増殖の阻害；ＣＤ４０Ｌ発現細胞または可溶性ＣＤ４０リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）によって刺激される正常なヒト末梢Ｂ細胞の生存および／または増殖の阻害；ｓＣＤ４０Ｌまたは固相ＣＤ４０Ｌによって刺激される任意の細胞における「生存」抗アポトーシスの細胞内シグナルの阻害；ｓＣＤ４０Ｌまたは固相ＣＤ４０Ｌとのライゲーション時の任意の細胞におけるＣＤ４０シグナル伝達の阻害；および本明細書中のどこかで示したヒト悪性Ｂ細胞の増殖の阻害を有するものであるのがよい。
【０２０５】
タンパク質の安定性のモニタリング方法は、当該技術分野でよく知られている。例えば、Ｊｏｎｅｓ（１９９３）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１０：２９−９０；Ｌｅｅ編（１９９１）Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｉｎｃ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；および本明細書において以下に開示する安定性アッセイを参照のこと。一般的に、タンパク質の安定性は、選択した温度において指定した期間で測定される。好ましい実施形態では、安定な抗体医薬製剤は、室温（約２５℃）で保存した場合、少なくとも１ヶ月、少なくとも３ヶ月もしくは少なくとも６ヶ月の抗ＣＤ４０抗体の安定性をもたらす、および／または約２〜８℃で、少なくとも６ヶ月、少なくとも９ヶ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２４ヶ月安定である。
【０２０６】
抗体などのタンパク質は、医薬組成物に製剤化されている場合、時間が経過した所与の時点で、その医薬組成物において沈殿、凝集および／または変性の視覚的表示（すなわち、変色または透明性の低下）または測定可能な表示（例えば、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）もしくはＵＶ光散乱を使用）が示されないならば、その物理的安定性を保持しているとみなされる。化学安定性に関して、抗体などのタンパク質は、医薬組成物に製剤化されている場合、時間が経過した所与の時点で、化学安定性の測定により、その医薬組成物において該タンパク質（すなわち、抗体）が目的の生物学的活性を保持していることが示されるならば、その化学安定性を保持しているとみなされる。化学安定性の変化をモニタリングするための方法は、当該技術分野でよく知られており、限定されないが、クリッピング（ｃｌｉｐｐｉｎｇ）の結果などのタンパク質の化学的に改変された形態を検出するための方法（例えば、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＳＥＣおよび／またはマトリックス支援レーザー脱離イオン化法／飛行時間型質量分析解析を使用）；ならびに分子変化の変化に伴う（例えば、脱アミド化に伴う）分解を検出するための方法（例えば、イオン交換クロマトグラフィーを使用）が挙げられる。例えば、本明細書において以下に開示する方法を参照のこと。
【０２０７】
抗ＣＤ４０抗体は、医薬組成物に製剤化されている場合、時間が経過した所与の時点で、その時点の所望の生物学的活性が、所望の生物学的活性に対する適当なアッセイで測定したとき、該医薬組成物が調製された時点で示される所望の生物学的活性の約３０％以内、好ましくは約２０％以内であるならば、所望の生物学的活性を保持しているとみなされる。抗ＣＤ４０抗体の所望の生物学的活性を測定するためのアッセイは、本明細書の実施例に記載のようにして行なわれ得る。Ｓｃｈｕｌｔｚｅら（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ９２：８２００−８２０４；Ｄｅｎｔｏｎら（１９９８）Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２：６−１５；Ｅｖａｎｓら（２００Ｏ）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：６８８−６９７；Ｎｏｅｌｌｅ（１９９８）Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ  Ｓｕｐｐｌ．４９：１７−２２；Ｌｅｄｅｒｍａｎら（１９９６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３：７７−８６；Ｃｏｌｉｇａｎら（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３：１２；Ｋｗｅｋｋｅｂｏｏｍら（１９９３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７９：４３９−４４４；ならびに米国特許第５，６７４，４９２号および同第５，８４７，０８２号（引用により本明細書に組み込まれる）に記載されたアッセイもまた参照のこと。
【０２０８】
本発明の一部のある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は液状医薬製剤に製剤化される。抗ＣＤ４０抗体は、当該技術分野で知られた任意の方法、例えば、本明細書において上記に開示した方法を用いて調製され得る。一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ＣＨＯ細胞株において組換えにより作製されたものである。
【０２０９】
抗ＣＤ４０抗体がその製剤化の前に保存される場合、これは、例えば≦−２０℃で凍結され、次いで、室温で解凍され、さらに製剤化され得る。液状医薬製剤は、治療有効量の抗ＣＤ４０抗体を含む。製剤中に存在させる該抗体の量には、投与経路および所望の投与容量が考慮される。
【０２１０】
この様式では、液状医薬組成物は抗ＣＤ４０抗体を、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５０．０ｍｇ／ｍｌ、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約４０．０ｍｇ／ｍｌ、約１．０ｍｇ／ｍｌ〜約３０．０ｍｇ／ｍｌ、約５．０ｍｇ／ｍｌ〜約２５．０ｍｇ／ｍｌ、約５．０ｍｇ／ｍｌ〜約２０．０ｍｇ／ｍｌ、または約１５．０ｍｇ／ｍｌ〜約２５．０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。一部のある実施形態において、液状医薬組成物は抗ＣＤ４０抗体を、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５．０ｍｇ／ｍｌ、約５．０ｍｇ／ｍｌ〜約１０．０ｍｇ／ｍｌ、約１０．０ｍｇ／ｍｌ〜約１５．０ｍｇ／ｍｌ、約１５．０ｍｇ／ｍｌ〜約２０．０ｍｇ／ｍｌ、約２０．０ｍｇ／ｍｌ〜約２５．０ｍｇ／ｍｌ、約２５．０ｍｇ／ｍｌ〜約３０．０ｍｇ／ｍｌ、約３０．０ｍｇ／ｍｌ〜約３５．０ｍｇ／ｍｌ、約３５．０ｍｇ／ｍｌ〜約４０．０ｍｇ／ｍｌ、約４０．０ｍｇ／ｍｌ〜約４５．０ｍｇ／ｍｌ、または約４５．０ｍｇ／ｍｌ〜約５０．０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。他の実施形態において、液状医薬組成物は抗ＣＤ４０抗体を、約１５．０ｍｇ／ｍｌ、約１６．０ｍｇ／ｍｌ、約１７．０ｍｇ／ｍｌ、約１８．０ｍｇ／ｍｌ、約１９．０ｍｇ／ｍｌ、約２０．０ｍｇ／ｍｌ、約２１．０ｍｇ／ｍｌ、約２２．０ｍｇ／ｍｌ、約２３．０ｍｇ／ｍｌ、約２４．０ｍｇ／ｍｌ、または約２５．０ｍｇ／ｍｌの濃度で含む。液状医薬組成物は、抗ＣＤ４０抗体、ならびに製剤のｐＨをｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０の範囲（例えば、ｐＨ約５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、およびｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０の範囲内の他のかかる値）に維持するバッファーを含む。一部のある実施形態において、バッファーは、製剤のｐＨをｐＨ約５．０〜ｐＨ約６．５、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約６．０、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約５．５、ｐＨ約５．５〜約７．０、ｐＨ約５．５〜ｐＨ約６．５、またはｐＨ約５．５〜ｐＨ約６．０の範囲に維持する。
【０２１１】
該抗体の物理化学的安定性および所望の生物学的活性が本明細書において上記に示したように保持される限り、液状抗ＣＤ４０抗体製剤のｐＨをｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０の範囲に維持する任意の適当なバッファーが、製剤に使用され得る。好適なバッファーとしては、限定されないが、慣用的な酸およびその塩（この場合、その対イオンは、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウムまたはマグネシウムであり得る）が挙げられる。液状医薬製剤に対するバッファーに使用され得る慣用的な酸およびその塩の例としては、限定されないが、コハク酸またはコハク酸塩、クエン酸またはクエン酸塩、酢酸または酢酸塩、酒石酸または酒石酸塩、リン酸またはリン酸塩、グルコン酸またはグルコン酸塩、グルタミン酸またはグルタミン酸塩、アスパラギン酸またはアスパラギン酸塩、マレイン酸またはマレイン酸塩、およびリンゴ酸またはリンゴ酸塩バッファーが挙げられる。製剤中のバッファー濃度は、約１ｍＭ〜約５０ｍＭ、例えば、約１ｍＭ、２ｍＭ、５ｍＭ、８ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、または約１ｍＭ〜約５０ｍＭの範囲内の他のかかる値であり得る。一部のある実施形態において、製剤中のバッファー濃度は、約５ｍＭ〜約１５ｍＭ、例えば、約５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭ、１５ｍＭ、または約５ｍＭ〜約１５ｍＭの範囲内の他のかかる値である。
【０２１２】
本発明の一部のある実施形態において、液状医薬製剤は、治療有効量の抗ＣＤ４０抗体、および製剤のｐＨをｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０、好ましくはｐＨ約５．０〜ｐＨ約６．５の範囲に維持する濃度のコハク酸バッファーまたはクエン酸バッファーを含む。「コハク酸バッファー」または「クエン酸バッファー」により、それぞれ、コハク酸の塩またはクエン酸の塩を含むバッファーが意図される。好ましい実施形態において、コハク酸塩またはクエン酸塩の対イオンはナトリウムカチオンであり、したがって、バッファーは、それぞれ、コハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムである。しかしながら、任意のカチオンが有効であることが予測される。他の可能なコハク酸塩またはクエン酸塩のカチオンとしては、限定されないが、カリウム、アンモニウム、カルシウムおよびマグネシウムが挙げられる。上記のように、製剤中のコハク酸またはクエン酸バッファーの濃度は、約１ｍＭ〜約５０ｍＭ、例えば、約１ｍＭ、２ｍＭ、５ｍＭ、８ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、または約１ｍＭ〜約５０ｍＭの範囲内の他のかかる値であり得る。一部のある実施形態において、製剤中のバッファー濃度は、約５ｍＭ〜約１５ｍＭ、例えば、約５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭまたは約１５ｍＭである。他の実施形態において、液状医薬製剤は、抗ＣＤ４０抗体を約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５０．０ｍｇ／ｍｌ、または約５．０ｍｇ／ｍｌ〜約２５．０ｍｇ／ｍｌの濃度で、およびコハク酸塩またはクエン酸バッファー、例えば、コハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムバッファーを約１ｍＭ〜約２０ｍＭ、約５ｍＭ〜約１５ｍＭ、好ましくは約１０ｍＭの濃度で含む。
【０２１３】
液状医薬製剤がほぼ等張性であることが望ましい場合、抗ＣＤ４０抗体およびバッファーを含む液状医薬製剤は、該製剤をほぼ等張性にするのに充分な量の等張剤をさらに含むものであり得る。「ほぼ等張性」により、水性の製剤が約２４０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３６０ｍｍｏｌ／ｋｇ、好ましくは約２４０〜約３４０ｍｍｏｌ／ｋｇ、より好ましくは約２５０〜約３３０ｍｍｏｌ／ｋｇ、さらにより好ましくは約２６０〜約３２０ｍｍｏｌ／ｋｇ、なおより好ましくは約２７０〜約３１０ｍｍｏｌ／ｋｇの容量オスモル濃度を有することが意図される。溶液の等張性の測定方法は、当業者にはわかる。例えば、Ｓｅｔｎｉｋａｒら（１９５９）Ｊ．Ａｍ．Ｐｈａｒｍ．Ａｓｓｏｃ．４８：６２８を参照のこと。
【０２１４】
当業者は、医薬組成物に等張性をもたらすのに有用なさまざまな薬学的に許容され得る溶質について熟知している。等張剤は、本発明の液状医薬製剤の浸透圧を体液のものにほぼ等しい値に調整し得る任意の試薬であり得る。生理学的に許容され得る等張剤使用することが望ましい。したがって、治療有効量の抗ＣＤ４０抗体およびバッファーを含む液状医薬製剤は、さらに、等張性をもたらすために使用され得る成分、例えば、塩化ナトリウム；アミノ酸、例えば、アラニン、バリンおよびグリシンなど；糖類および糖アルコール（ポリオール）、例えば、限定されないが、グルコース、デキストロース、フルクトース、スクロース、マルトース、マンニトール、トレハロース、グリセロール、ソルビトールおよびキシリトール；酢酸、他の有機酸またはその塩、ならびに相対的に少量のクエン酸塩またはリン酸塩を含むものであり得る。当業者なら、最適な張性の液状製剤を提供するのに適したさらなる薬剤がわかるだろう。
【０２１５】
一部のある好ましい実施形態では、抗ＣＤ４０抗体およびバッファーを含む液状医薬製剤は、さらに、等張剤として塩化ナトリウムを含む。製剤中の塩化ナトリウムの濃度は、張性への他の成分寄与に依存する。一部のある実施形態において、塩化ナトリウムの濃度は、約５０ｍＭ〜約３００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約２５０ｍＭ、約５０ｍＭ〜約２００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約１７５ｍＭ、約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約７５ｍＭ〜約１７５ｍＭ、約７５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１００ｍＭ〜約１７５ｍＭ、約１００ｍＭ〜約２００ｍＭ、約１００ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１２５ｍＭ〜約１７５ｍＭ、約１２５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１３０ｍＭ〜約１７０ｍＭ、約１３０ｍＭ〜約１６０ｍＭ、約１３５ｍＭ〜約１５５ｍＭ、約１４０ｍＭ〜約１５５ｍＭまたは約１４５ｍＭ〜約１５５ｍＭである。かかる一実施形態において、塩化ナトリウムの濃度は約１５０ｍＭである。他のかかる実施形態では、塩化ナトリウムの濃度が約１５０ｍＭであり、バッファーが、約５ｍＭ〜約１５ｍＭの濃度のコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムバッファーであり、液状医薬製剤が治療有効量の抗ＣＤ４０抗体を含み、該製剤は、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約６．０またはｐＨ約５．５〜ｐＨ約６．５のｐＨを有する。他の実施形態において、液状医薬製剤は、抗ＣＤ４０抗体を約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５０．０ｍｇ／ｍｌまたは約５．０ｍｇ／ｍｌ〜約２５．０ｍｇ／ｍｌの濃度で含み、約１５０ｍＭの塩化ナトリウムおよび約１０ｍＭのコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムを含み、ｐＨ約５．５のｐＨである。
【０２１６】
本発明の液状医薬製剤の加工処理中の凍結解凍または機械的剪断によるタンパク質の分解は、溶液−空気界面における表面張力を低下させるための界面活性剤を製剤中に組み込むことによって抑制され得る。したがって、一部のある実施形態において、液状医薬製剤は、治療有効量の抗ＣＤ４０抗体、バッファーを含み、さらに界面活性剤を含む。他の実施形態において、液状医薬製剤は、抗ＣＤ４０抗体、バッファー、等張剤を含み、さらに界面活性剤を含む。
【０２１７】
使用される典型的な界面活性剤は、非イオン界面活性剤、例えば、ポリオキシエチレンソルビトールエステル（ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）およびポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ２０）など）；ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンエステル（Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８など）；ポリオキシエチレンアルコール（Ｂｒｉｊ  ３５など）；シメチコン；ポリエチレングリコール（ＰＥＧ４００など）；リゾホスファチジルコリン；ならびにポリオキシエチレン−ｐ−ｔ−オクチルフェノール（Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００など）である。界面活性剤または乳化剤による医薬品の古典的な安定化は、例えば、Ｌｅｖｉｎｅら（１９９１）Ｊ．Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．４５（３）：１６０−１６５（引用により本明細書に組み込まれる）に記載されている。本発明の実施において使用される好ましい界面活性剤は、ポリソルベート８０である。界面活性剤を含める場合、典型的には、約０．００１％〜約１．０％（ｗ／ｖ）、約０．００１％〜約０．５％、約０．００１％〜約０．４％、約０．００１％〜約０．３％、約０．００１％〜約０．２％、約０．００５％〜約０．５％、約０．００５％〜約０．２％、約０．０１％〜約０．５％、約０．０１％〜約０．２％、約０．０３％〜約０．５％、約０．０３％〜約０．３％、約０．０５％〜約０．５％、または約０．０５％〜約０．２％の量で添加される。
【０２１８】
したがって、一部のある実施形態において、液状医薬製剤は、治療有効量の抗ＣＤ４０抗体を含み、バッファーが、約１ｍＭ〜約５０ｍＭ、約５ｍＭ〜約２５ｍＭまたは約５ｍＭ〜約１５ｍＭの濃度のコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムバッファーである；該製剤は、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約６．０またはｐＨ約５．５〜ｐＨ約６．５のｐＨを有する；および該製剤は、さらに界面活性剤、例えばポリソルベート８０を約０．００１％〜約１．０％または約０．００１％〜約０．５％の量で含む。かかる製剤は、任意選択で、塩化ナトリウムなどの等張剤を、約５０ｍＭ〜約３００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約２００ｍＭまたは約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭの濃度で含むものであってもよい。他の実施形態において、液状医薬製剤は、約０．１ｍｇ／ｍｌ〜約５０．０ｍｇ／ｍｌまたは約５．０ｍｇ／ｍｌ〜約２５．０ｍｇ／ｍｌ（例えば、約２０．０ｍｇ／ｍｌ）の濃度の抗ＣＤ４０抗体；約５０ｍＭ〜約２００ｍＭ  塩化ナトリウム（例えば、約１５０ｍＭ  塩化ナトリウム）；約５ｍＭ〜約２０ｍＭのコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム（例えば、約１０ｍＭのコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム）；約５０ｍＭ〜約２００ｍＭ（例えば、約１５０ｍＭ）の濃度の塩化ナトリウム；および任意選択で、約０．００１％〜約１．０％（例えば、約０．００１％〜約０．５％）の量の界面活性剤、例えばポリソルベート８０を含み、ここで、該液状医薬製剤は、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約７．０、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約６．０、ｐＨ約５．０〜ｐＨ約５．５、ｐＨ約５．５〜ｐＨ約６．５またはｐＨ約５．５〜ｐＨ約６．０のｐＨを有する。
【０２１９】
液状医薬製剤は、本明細書において上記に示した保存剤および他の担体、賦形剤または安定剤をいずれも本質的に含まないものであり得る。あるいはまた、該製剤は、本明細書において上記の１種類以上の保存剤、例えば、抗菌剤、薬学的に許容され得る担体、賦形剤または安定剤を含むものであり得るが、これらは、抗ＣＤ４０抗体の物理化学的安定性に悪影響を及ぼさないものとする。許容され得る担体、賦形剤および安定剤の例としては、限定されないが、さらなる緩衝剤、補助溶媒、界面活性剤、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸およびメチオニン）、キレート化剤（ＥＤＴＡなど）、金属複合体（例えば、Ｚｎ−タンパク質複合体）、ならびに生分解性ポリマー（ポリエステルなど）が挙げられる。製剤化ならびに薬学的に許容され得る担体、安定剤およびイソモライト（ｉｓｏｍｏｌｙｔｅ）の選択の充分な論考については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版；Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｔｏｎ、Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ、１９９０）（引用により本明細書に組み込まれる）をみるとよい。
【０２２０】
「担体」は、本明細書で用いる場合、使用される投薬量および濃度において、曝露させる細胞または哺乳動物に対して無毒性である薬学的に許容され得る担体、賦形剤または安定剤を包含する。多くの場合、生理学的に許容され得る担体は、水性のｐＨ緩衝溶液である。生理学的に許容され得る担体の例としては、バッファー（リン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩および他の有機酸など）；抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸）；低分子量（約１０残基未満）のポリペプチド；タンパク質（血清アルブミン、ゼラチンまたは免疫グロブリンなど）；親水性ポリマー（ポリビニルピロリドンなど）；アミノ酸（グリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンまたはリシンなど）；単糖類、二糖類および他の炭水化物（例えば、グルコース、マンノースまたはデキストリン）；キレート化剤（ＥＤＴＡなど）；糖アルコール（マンニトールまたはソルビトールなど）；塩形成性対イオン（ナトリウムなど）；および／または非イオン界面活性剤（ＴＷＥＥＮ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびＰｌｕｒｏｎｉｃｓなど）が挙げられる。
【０２２１】
１種類以上のさらなる治療用薬剤「との組合せで」の投与としては、同時（ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ）（並行（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔ））および任意の順序の連続投与が挙げられる。
【０２２２】
本明細書に記載の液状医薬製剤または他の医薬組成物は、調製された後、分解を抑制するために凍結乾燥され得る。液状組成物の凍結乾燥方法は、当業者にはわかる。使用直前、組成物は、滅菌希釈剤（例えば、リンゲル液、蒸留水または滅菌生理食塩水）（これらは、さらなる成分を含むものであってもよい）を用いて再構成され得る。再構成されたら、組成物は、好ましくは、被験体に、当業者に知られた方法を用いて投与される。
【０２２３】
一部のある実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、少なくとも１種類の他の癌療法、例えば、限定されないが、外科手術、放射線療法、化学療法、サイトカイン療法、または対象の充実腫瘍の処置における使用が意図される他のモノクローナル抗体と組合せて投与され得る。この場合、該さらなる癌療法は、抗ＣＤ４０抗体療法の前、該療法中またはその後に投与される。したがって、併用療法が、別の治療用薬剤（化学療法、サイトカイン療法または他のモノクローナル抗体など）の投与との組合せでの抗ＣＤ４０抗体の投与を含むものである場合、本発明には、別々の製剤または単一の医薬製剤、およびいずれかの順序の連続投与を用いた共投与が包含され、この場合、好ましくは、期間は、両方（またはすべての）活性剤が同時にその治療活性を発揮するものである。本発明の方法が併用療法レジメンを含む場合、これらの治療法は、同時に行なわれ得る、すなわち、抗ＣＤ４０抗体が他の癌療法と同時進行で（ｃｏｎｃｕｒｒｅｎｔｌｙ）投与されるか、または同じ時間枠内（すなわち、複数の治療法が並行して行なわれるが、抗ＣＤ４０抗体は、他の癌療法と正確に同時に投与されない）で投与される。あるいはまた、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、その他の癌療法の前または後に投与されることもあり得る。異なる癌療法のその後の投与は、処置されている被験体が第１の治療過程に応答して寛解または再発の可能性が減少しているか否かとは無関係に行なわれ得る。併用療法が細胞傷害剤の投与との組合せでの抗ＣＤ４０抗体の投与を含む場合、好ましくは、抗ＣＤ４０は、細胞傷害剤を投与する前に投与される。
【０２２４】
この様式では、抗ＣＤ４０抗体は、少なくとも１種類の他の癌療法、例えば、限定されないが、外科手術または外科的手順（例えば、脾臓摘出術、肝切除術、リンパ節切除術、白血球除去（ｌｅｕｋｏｐｈｏｒｅｓｉｓ）、骨髄移植など）；放射線療法；化学療法と組合せて、任意選択で自己骨髄移植と組合せて投与され、ここで、適当な化学療法用薬剤としては、限定されないが、リン酸フルダラビンまたはフルダラビン、クロラムブシル、ビンクリスチン、ペントスタチン、２−クロロデオキシアデノシン（クラドリビン）、シクロホスファミド、ドキソルビシン、プレドニゾン、およびその組合せ、例えば、アントラサイクリンを含むレジメン、例えば、ＣＡＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン＋プレドニゾン）、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ビンクリスチン、プレドニゾン＋ドキソルビシン）、ＶＡＤ（ビンクリスチン、ドキソルビシン＋デキサメタゾン）、ＭＰ（メルファラン＋プレドニゾン）、ならびに化学療法に使用される他の細胞傷害剤および／または治療用薬剤、例えば、ミトキサントロン、ダウノルビシン、イダルビシン、アスパラギナーゼ、ならびに代謝拮抗剤、例えば限定されないが、シタラビン、メトトレキセート、５−フルオロウラシル  デカルバジン、６−チオグアニン、６−メルカプトプリンおよびネララビン；他の抗癌モノクローナル抗体療法（例えば、アレムツズマブ（Ｃａｍｐａｔｈ（登録商標））または悪性Ｂ細胞上のＣＤ５２細胞表面糖タンパク質を標的化する他の抗ＣＤ５２抗体；リツキシマブ（リツキサン（登録商標））、完全ヒト抗体ＨｕＭａｘ−ＣＤ２０、Ｒ−１５９４、ＩＭＭＵ−１０６、ＴＲＵ−０１５、ＡＭＥ−１３３、トシツモマブ／Ｉ−１３１トシツモマブ（Ｂｅｘｘａｒ（登録商標））、イブリツモマブチウキセタン（Ｚｅｖａｌｉｎ（登録商標））、または悪性Ｂ細胞上のＣＤ２０抗原を標的化する任意の他の治療用抗ＣＤ２０抗体；抗ＣＤ１９抗体（例えば、ＭＴ１０３、二重特異性抗体）；抗ＣＤ２２抗体（例えば、ヒト化モノクローナル抗体エプラツズマブ）；ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））またはヒト血管内皮増殖因子を標的化する他の抗癌抗体；悪性Ｂ細胞上のＣＤ２２抗原を標的化する抗ＣＤ２２抗体（例えば、モノクローナル抗体ＢＬ−２２、αＣＤ２２毒素）；マクロファージコロニー刺激因子を標的化するα−Ｍ−ＣＳＦ抗体；核因子−κＢの受容体活性化因子を標的化する抗体（ＲＡＮＫ）およびそのリガンド（ＲＡＮＫＬ）（これらは、多発性骨髄腫において過剰発現される）；悪性Ｂ細胞上のＣＤ２３抗原を標的化する抗ＣＤ２３抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１５２）；ＣＤ８０抗原を標的化する抗ＣＤ８０抗体（例えば、ＩＤＥＣ−１１４）；悪性Ｂ細胞上のＣＤ３８抗原を標的化する抗ＣＤ３８抗体；悪性Ｂ細胞上に発現される主要組織適合複合体クラスＩＩ受容体（抗ＭＨＣ抗体）を標的化する抗体；悪性Ｂ細胞上のＣＤ４０抗原を標的化する他の抗ＣＤ４０抗体（例えば、ＳＧＮ−４０）；ならびに腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導性リガンド受容体１（ＴＲＡＩＬ−Ｒ１）を標的化する抗体（例えば、アゴニストヒトモノクローナル抗体ＨＧＳ−ＥＴＲ１）およびいくつかの充実腫瘍および造血系起源���腫瘍上に発現されるＴＲＡＩＬ−Ｒ２を標的化する抗体）；小分子系癌療法、例えば、限定されないが、微小管および／またはトポイソメラーゼ阻害剤（例えば、有糸分裂阻害剤ドラスタチンおよびドラスタチン類縁体；チューブリン結合剤Ｔ９００６０７；ＸＬ１１９；およびトポイソメラーゼ阻害剤アミノカンプトセシン）、ＳＤＸ−１０５（塩酸ベンダムスチン）、イクサベピロン（エポシロン類縁体、ＢＭＳ−２４７５５０とも称される）、プロテインキナーゼＣ阻害剤、例えば、ミドスタウリン（（ＰＫＣ−４１２、ＣＧＰ  ４１２５１、Ｎ−ベンゾイルスタウロスポリン）、ピキサントロン、エロキサチン（抗新生物形成剤）、ガナイト（硝酸ガリウム）、Ｔｈａｌｏｍｉｄ（登録商標）（サリドマイド）、サリドマイドの免疫調節性誘導体（例えば、レブリミド（以前はレビミド））、ＡｆｆｉｎｉｔａｋＴＭ（プロテインキナーゼＣ−αのアンチセンス阻害剤）、ＳＤＸ−１０１（Ｒ−エトドラク、悪性リンパ球のアポトーシスを誘導）、第２世代プリンヌクレオシド類縁体、例えば、クロファラビン、癌細胞によるタンパク質Ｂｃｌ−２産生の阻害剤（例えば、アンチセンス薬剤オブリメルセンおよびＧｅｎａｓｅｎｓｅ（登録商標））、プロテオソーム阻害剤（例えば、ＶｅｌｃａｄｅＴＭ（ボルテゾミブ））、小分子キナーゼ阻害剤（例えば、ＣＨＩＲ−２５８）、小分子ＶＥＧＦ阻害剤（例えば、ＺＤ−６４７４）、熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）９０の小分子阻害剤（例えば、１７−ＡＡＧ）、ヒストンデアセチラーゼの小分子阻害剤（例えば、ハイブリッド／極性細胞分化ＨＰＣ）スベロイルアニリドヒドロキサム（ｓｕｂｅｒａｎｉｌｏｈｙｄｒｏｘａｍｉｃ）酸（ＳＡＨＡ）およびＦＲ−９０１２２８等の薬剤）ならびにアポトーシス剤、例えば、Ｔｒｉｓｅｎｏｘ（登録商標）（三酸化ヒ素）およびＸｃｙｔｒｉｎ（登録商標）（モテクサフィンガドリニウム）；ワクチン／免疫療法系癌療法、例えば、限定されないが、ワクチンアプローチ（例えば、Ｉｄ−ＫＬＨ、オンコファージ、ビタレチン（ｖｉｔａｌｅｔｈｉｎｅ））、個別免疫療法または活性イディオタイプ免疫療法（例えば、ＭｙＶａｘ（登録商標）個別免疫療法、以前はＧＴＯＰ−９９と表示）、Ｐｒｏｍｕｎｅ（登録商標）（ＣｐＧ  ７９０９、合成アゴニスト  ｆｏｒ  ｔｏｌｌ−ｌｉｋｅ受容体９（ＴＬＲ９））、ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ａｌｐｈ治療、インターロイキン−２（ＩＬ−２）療法、ＩＬ−１２療法、ＩＬ−１５療法およびＩＬ−２１療法；ステロイドＩＬ−２１療法；または他の癌療法が挙げられる；この場合、さらなる癌療法は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体療法の前、該療法中またはその後に投与される。
【０２２５】
一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、特に、多発性骨髄腫の処置のためにボルテゾミブ（ＶＥＬＣＡＤＥ（登録商標））と組合せて投与される。ＷＯ２００５／０４４８５５  Ａ２には、ＣＨＩＲ−１２．１２とボルテゾミブ療法との併用により、実験的多発性骨髄腫モデルにおいて腫瘍増殖の阻害の有効性が増大することが開示されている。
【０２２６】
一実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、特に、Ｂ細胞リンパ腫の処置のためにＩＬ−２と組合せて投与される。ＷＯ２００５／０４４２９４  Ａ２には、ＣＨＩＲ−１２．１２とＩＬ−２処置との併用により、ナマルバ腫瘍に対して相加的な抗腫瘍活性がもたらされたことが開示されている。
【０２２７】
したがって、本発明は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者における、ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態の処置のための医薬の製造における治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体の使用を提供し、ここで、該医薬は、少なくとも１種類の他の癌療法での処置とコーディネートされるものである。
【０２２８】
「コーディネートされる」により、抗ＣＤ４０抗体を含む医薬が、少なくとも１種類の他の癌療法での被験体の処置の前、該処置中またはその後のいずれかで使用されることが意図される。
【０２２９】
本発明はまた、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）であり、少なくとも１種類の他の癌療法的で前処置されたことがあるヒト患者をＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態について処置するための医薬の製造における抗ＣＤ４０抗体の使用を提供する。
【０２３０】
「前処置された」または「前処置」により、被験体が、抗ＣＤ４０抗体を含む医薬を受ける前に１種類以上の他の癌療法を受けたことがある（すなわち、少なくとも１種類の他の癌療法で処置されたことがある）ことが意図される。「前処置された」または「前処置」には、抗ＣＤ４０抗体を含む医薬での処置の開始前に、２年以内、１８ヶ月以内、１年以内、６ヶ月以内、２ヶ月以内、６週間以内、１ヶ月以内、４週間以内、３週間以内、２週間以内、１週間以内、６日以内、５日以内、４日以内、３日以内、２日以内、または１日以内すらに、少なくとも１種類の他の癌療法で処置されたことがある被験体が含まれる。被験体が先の１種類以上の癌療法での前処置に対するレスポンダーであったことは必要ではない。したがって、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を含む医薬を受ける被験体は、先の癌療法での前処置または前処置が多数の癌療法で構成される先の癌療法の１つ以上に対して応答し得た、または応答し得なかった（すなわち、癌が不応性であった）被験体である。抗ＣＤ４０抗体を含む医薬を受ける前に被験体が受けたことがあり得る前処置のための他の癌療法の例としては、限定されないが、外科手術；放射線療法；化学療法（任意選択で、自己骨髄移植との組合せで）が挙げられ、ここで、適当な化学療法用薬剤としては、限定されないが、本明細書ならびにＷＯ２００５／０４４８５４、ＷＯ２００５／０４４３０４、ＷＯ２００５／０４４３０５、ＷＯ２００５／０４４３０６、ＷＯ２００５／０４４８５５、ＷＯ２００５／０４４３０７、およびＷＯ２００５／０４４２９４に記載のものが挙げられる；他の抗癌モノクローナル抗体療剤としては、限定されないが、本明細書ならびにＷＯ２００５／０４４８５４、ＷＯ２００５／０４４３０４、ＷＯ２００５／０４４３０５、ＷＯ２００５／０４４３０６、ＷＯ２００５／０４４８５５、ＷＯ２００５／０４４３０７、およびＷＯ２００５／０４４２９４に記載の抗癌抗体が挙げられる；小分子系癌療剤としては、限定されないが、本明細書ならびにＷＯ２００５／０４４８５４、ＷＯ２００５／０４４３０４、ＷＯ２００５／０４４３０５、ＷＯ２００５／０４４３０６、ＷＯ２００５／０４４８５５、ＷＯ２００５／０４４３０７、およびＷＯ２００５／０４４２９４に記載の小分子が挙げられる；ワクチン／免疫療法系癌療剤としては、限定されないが、本明細書ならびにＷＯ２００５／０４４８５４、ＷＯ２００５／０４４３０４、ＷＯ２００５／０４４３０５、ＷＯ２００５／０４４３０６、ＷＯ２００５／０４４８５５、ＷＯ２００５／０４４３０７、およびＷＯ２００５／０４４２９４に記載のもの；ステロイド療法；他の癌療法；またはその任意の組合せが挙げられる。
【０２３１】
「処置」は、抗ＣＤ４０抗体と１種類以上の他の癌療法とのコーディネート使用の状況において、本明細書では、抗ＣＤ４０抗体もしくは他の癌療剤の患者への適用もしくは投与、または患者由来の単離された組織もしくは細胞株への適用または投与であって、該患者が疾患、疾患の症状または疾患に対する素因有し、その目的が、該疾患、疾患の症状または疾患に対する素因を治療、治癒、軽減、緩和、改変、矯正、改善、向上または影響を与えることである適用または投与と規定する。また、「処置」により、抗ＣＤ４０抗体もしくは他の癌療剤を含む医薬組成物の患者への適用もしくは投与、または抗ＣＤ４０抗体もしくは他の癌療剤を含む医薬組成物の患者由来の単離された組織もしくは細胞株への適用もしくは投与であって、該患者が疾患、疾患の症状、ｏｒ  疾患に対する素因を有し、その目的が、該疾患、疾患の症状または疾患に対する素因を治療、治癒、軽減、緩和、改変、矯正、改善、向上または影響を与えることである適用または投与が意図される。
【０２３２】
一部のある実施形態において、併用療法は、単独で投与された場合の個々の治療用薬剤と比べて、治療有効性に相乗的な改善をもたらすものである。用語「相乗」は、それぞれの各活性剤の個々の効果の和よりも大きい２種類以上の活性剤の複合効果を示すために用いる。したがって、２種類以上の薬剤の複合効果により、活性またはプロセス（例えば、腫瘍増殖）の「相乗的な阻害」がもたらされる場合、該活性またはプロセスの阻害が、それぞれの各活性剤の阻害性効果の和より大きいことが意図される。用語「相乗的な治療効果」は、２種類以上の治療剤の組合せで観察される治療効果であって、それぞれの個々の治療剤で観察される個々の治療効果の和より大きい治療効果（任意のいくつかのパラメータによって測定）をいう。
【０２３３】
次に、本発明の種々の態様および実施形態を、ほんの一例として詳細に記載する。本発明の範囲を逸脱することなく詳細の変形が行なわれ得ることは認識されよう。
【０２３４】
実験
以下の実施例に用いた抗ＣＤ４０抗体は、ＣＨＩＲ−１２．１２である。ＣＨＩＲ−１２．１２抗体の作製、配列決定およびキャラクタライゼーションは、ＷＯ２００５／０４４８５４、ＷＯ２００５／０４４３０４、ＷＯ２００５／０４４３０５、ＷＯ２００５／０４４３０６、ＷＯ２００５／０４４８５５、ＷＯ２００５／０４４３０７、およびＷＯ２００５／０４４２９４として公開された国際特許出願に詳細に記載されている。ＣＨＩＲ−１２．１２抗体を発現するハイブリドーマ株１５３．８Ｅ２．Ｄ１０．Ｄ６．１２．１２（ＣＭＣＣ＃１２０５６）は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ［ＡＴＣＣ；１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．、Ｍａｎａｓｓａｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ  ２０１１０−２２０９（ＵＳＡ）］に、特許寄託番号ＰＴＡ−５５４３で寄託されている。
【実施例】
【０２３５】
実施例１：細胞株におけるＡＤＣＣの解析
ＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブを、ＣＤ４０抗原およびＣＤ２０抗原の両方を発現するさまざまな悪性Ｂ細胞株、例えば、リンパ腫細胞株（Ｄａｕｄｉ、ナマルバ）、多発性骨髄腫細胞株（ＡＲＨ７７、ＩＭ−９）、Ｂ−ＡＬＬ細胞株（ＣＣＲＦ−ＳＢ）、およびＢ−ＣＬＬ細胞株（ＥＨＥＢ）に対するそのＡＤＣＣ活性について比較した。
【０２３６】
それぞれ、最大溶解割合およびＥＤ５０として測定されたＡＤＣＣの有効性および効力を、ＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブで比較した。これらの実験の結果を図１Ａ〜１Ｆに示す。すべての標的細胞株で、ＣＨＩＲ−１２．１２は、リツキシマブよりも強力で有効なＡＤＣＣの媒介体であった。試験した６種類の細胞株において、細胞あたりの細胞表面ＣＤ２０分子の数は、ＣＤ４０よりも２．６〜３０．８倍多かった。これらのデータは、ディスプレイされているＣＤ４０分子がＣＤ２０よりも少ないにもかかわらず、悪性Ｂ細胞株は、ＣＨＩＲ−１２．１２によってリツキシマブよりも有効に溶解されることを示す。
【０２３７】
実施例２：ＣＬＬ患者細胞におけるＡＤＣＣの解析
８例の患者由来のエキソビボ一次ＣＬＬ細胞に対するＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブの相対ＡＤＣＣ活性を比較した。ＣＨＩＲ−１２．１２は、すべての患者のＣＬＬに対してリツキシマブよりも大きなＡＤＣＣを示した（図２Ａ〜Ｄおよび図３参照）。ＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブによる平均最大溶解割合は、それぞれ、４９±１６％および３１±１４％であった。ＣＨＩＲ−１２．１２は、ＥＤ５０値によって測定するとリツキシマブよりも１０倍超強力であった（それぞれ、１４．１ｐＭ対１５５．５ｐＭ）。
抗体依存性細胞媒介型細胞傷害性（ＡＤＣＣ）の実験計画
標的細胞：ＣＬＬ患者細胞、５０００／ウェル。エフェクター細胞：精製された正常ヒトＮＫ細胞、５０，０００／ウェル。Ｅ：Ｔ比：１０。Ａｂ濃度：０．００００１、０．０００１、０．００１、０．０１、０．１、１および１０μｇ／ｍｌ。インキュベーション時間：４時間。培養培地：ＲＰＭＩ（フェノールレッドなし）＋１０％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓ。培養デバイス：９６ウェル丸底プレート。読出し：４８５ｎｍ励起／５３５ｎｍ発光を用いた自由裁量蛍光単位（ＡＦＵ）によって測定されるカルセインＡＭ放出。計算：特異的溶解％＝１００×（ＡＦＵ試験−ＡＦＵ自発放出１）／（ＡＦＵ最大放出２−ＡＦＵ自発）。陰性対照：抗体またはＮＫ細胞の非存在下で標的細胞によって放出されたカルセイン。陽性対照：デタージェント（１％ＮＰ４０）による溶解時に標的細胞によって放出されたカルセイン。
【０２３８】
図２および３に示す結果は、ＣＨＩＲ−１２．１２が、ＣＬＬ患者細胞に対して、リツキシマブよりも大きなＡＤＣＣを媒介することを示す。このＡＤＣＣの差の大きさは、標的細胞またはＮＫドナー細胞のいずれかに依存性であり得るが、すべての患者試料では観察されなかった。単一の患者由来のＣＬＬ細胞を２種類の異なるＮＫドナーを用いて試験すると、ＣＨＩＲ−１２．１２は、両方のＮＫドナー細胞で、リツキシマブよりも大きなＡＤＣＣを媒介したが、ＡＤＣＣの差の大きさは同一ではなかった（図４参照）。この卓越したＡＤＣＣの機構的根拠としては、標的抗原の相対発現レベル（ＣＤ２０およびＣＤ４０）、該抗体の内在化の程度、ならびにＮＫ細胞上のＦｃγＩＩＩａ受容体に対する該抗体の親和性が挙げられ得る。したがって、ＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブのＡＤＣＣ活性に対するこれらの要素の影響を調べた。
【０２３９】
実施例３：細胞表面ＣＤ４０およびＣＤ２０分子の定量
ＣＬＬ細胞上の定量的ＣＤ２０およびＣＤ４０密度（実施例３）および抗体内在化の程度（実施例４）を、ＡＤＣＣ活性における上記の差の潜在的な理由として調べた。次いで、９例の患者由来のエキソビボ一次ＣＬＬ細胞に対するＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブの相対ＡＤＣＣ活性を比較した。ＣＨＩＲ−１２．１２は、すべての患者のＣＬＬに対してリツキシマブよりも大きなＡＤＣＣを示した（図２Ａ〜Ｄおよび図３参照）。ＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブによる平均最大溶解割合は、それぞれ、４８±１５％および３０±１４％であった。ＣＨＩＲ−１２．１２は、ＥＤ５０値によって測定するとリツキシマブよりも１０倍超強力であった（それぞれ、１３．２ｐＭ対１４７．２ｐＭ、図６）。
【０２４０】
ＣＨＩＲ−１２．１２のＡＤＣＣ活性および有効性がより大きいことは、細胞表面上でＣＤ４０分子よりもＣＤ２０の数が１．３〜１４倍多かったことから、細胞表面ＣＤ４０分子がより高密度であることに依存性ではなかった（図５および図６参照）。
【０２４１】
方法
細胞を１ｍｇ／ｍｌのヒトＩｇＧ１とともに、染色バッファー（ＰＢＳは１％ＢＳＡ、０．１％アジ化Ｎａを含有）中でプレインキュベートし、非特異的結合部位をブロックした。これを、３０分間４℃で（氷上で）インキュベートした。次いで、ＦＩＴＣコンジュゲートヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照、ＦＩＴＣコンジュゲートＣＨＩＲ−１２．１２、またはＦＩＴＣコンジュゲートリツキシマブを、１００、１０、１、０．１μｇ／ｍｌで添加し、細胞を３０分間４℃で（氷上で）インキュベートした。細胞を染色バッファー（ＰＢＳ＋１％ＦＢＳ＋０．１％アジ化ナトリウム）で洗浄し、ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒによって解析した。
【０２４２】
幾何平均蛍光強度をＦＡＣＳによって測定した。次いで、蛍光量（Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｏｆ  Ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ  Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｆｌｕｏｒｃｈｒｏｍｅ）（ＭＥＳＦ）を、較正ＦＩＴＣビーズを用いて確立した標準曲線に基づいて計算した。
【０２４３】
実施例４：ＣＨ１２．１２は、細胞株上のＣＤ４０への結合時に内在化を誘導しない
リンパ腫細胞株であるＤａｕｄｉ、およびＭＭ細胞株であるＡＲＨ７７を用い、内在化に対するＣＨ１２．１２結合の効果を評価した。細胞を、１μｇ／ｍＬのヒトＩｇＧ１（対照抗体）またはＣＨ１２．１２とともに、氷上で（内在化を阻止するための０．１％アジ化ナトリウムとともに）または３７℃で（アジ化ナトリウムなし）３時間インキュベートした。冷染色バッファー（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋０．１％アジ化ナトリウム）での洗浄後、細胞をヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＦＩＴＣで３０分間、氷上にて染色した。幾何平均蛍光強度（ＭＦＩ）をＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒによって記録した。ＣＨ１２．１２とともに、氷上にてアジ化ナトリウムの存在下で、または３７℃にてアジ化ナトリウムの非存在下でインキュベートした細胞間に、ＭＦＩの差は観察されなかった（図７）。これらのデータは、ＣＨ１２．１２が、ＣＤ４０への結合時、内在化されず、継続して細胞表面上にディスプレイされることを示す。
【０２４４】
実施例５：ＣＬＬ患者細胞への結合後のＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブの内在化：ＦＡＣＳおよび共焦点顕微鏡
共焦点顕微鏡方法論
細胞を、Ａｌｅｘａ  ４８８またはＦＩＴＣコンジュゲートＣＨＩＲ−１２．１２、リツキシマブ、および１０μｇ／ｍｌのＩｇＧ１とともに、３時間、４０℃（０．１％アジ化Ｎａとともに）または３７℃（アジ化Ｎａなし）でインキュベートした。次いで、細胞を洗浄し、２％ホルムアルデヒドで、５分間室温で固定した。次いで、細胞洗浄し、ポリ−Ｌ−リシンコートスライド上に配置し、マウントし、密封し、次いで、共焦点画像法によって解析した。
【０２４５】
結果
これらの実験の結果を、図８（ＦＡＣＳ）ならびに図９および１０（共焦点顕微鏡）に示す。これらの実験の結果を図１１にまとめる。一次ＣＬＬ細胞およびＢ細胞を使用し、フローサイトメトリーおよび共焦点顕微鏡検査によって行なったこれらの抗体内在化試験は、３７℃でＣＤ４０に結合すると、ＣＨＩＲ−１２．１２は、３時間後であっても細胞表面上に均一に分布されたままであることを示す。対照的に、３７℃で結合後、リツキシマブは、キャップ状（ｃａｐ）に再分布され、内在化される。これらのデータは、ＣＨＩＲ−１２．１２の強力なＡＤＣＣ活性は、自身を標的細胞の表面上に均一にディスプレイし、エフェクター細胞との最適な相互作用を可能にするその能力と関連し得ることを示す。これらの結果は、ＣＨＩＲ−１２．１２がインビボでＣＬＬ細胞に対して強力なＡＤＣＣの媒介において有効であり得ることを示す。
【０２４６】
実施例６：リツキサンおよびＣＨＩＲ−１２．１２によるＦｃγＲＩＩＩａ結合のＢｉａｃｏｒｅ解析
ＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブに対するＦｃγＲＩＩＩａのａａｌ５８Ｆおよびａａｌ５８Ｖ対立遺伝子の親和性を、標準的なＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）解析によって比較した。ＣＨＩＲ−１２．１２はリツキシマブと比べ、４．６倍高い親和性でａａｌ５８Ｆ対立遺伝子に結合した（それぞれ、２．８μＭ対１３μＭのＫＤ）。これらの実験の結果を以下の表にまとめる。
【０２４７】
【表１】
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実施例７：ＮＫエフェクター細胞によるＡＤＣＣに対するＦｃγＲＩＩＩａ多型の効果
抗体依存性細胞媒介型細胞傷害性（ＡＤＣＣ）は、多くの市販のモノクローナル抗体および研究用モノクローナル抗体にとって主要な作用機構である。リツキシマブ（リツキサン（登録商標））は、濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の処置用に市販され、他のＢ細胞悪性疾患に対して活性であるが、その主な作用機構の１つとしてＡＤＣＣを有すると考えられている。注目すべきことに、ＮＨＬにおけるリツキシマブの臨床的活性は、ＦｃγＲＩＩＩａ遺伝子型と相関することが示された。Ｖ／ＶまたはＶ／ＦのＦｃγＲＩＩＩａ  １５８ａａ多型を有する患者は、Ｆ／Ｆを有する患者よりもリツキシマブに対して応答性である（例えば、Ｃａｒｔｒｏｎら（Ｂｌｏｏｄ（２００２）、９９（３）：７５４−７５８またはＤａｌｌ’ＯｚｚｏらＣａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００４）６４：４６６４−４６６９を参照のこと）。
【０２４８】
これらの実験において、種々のＦｃγＲＩＩＩａびａａｌ５８多型を発現する多数のヒトドナー由来の精製ＮＫエフェクター細胞を、標的細胞としてヒトリンパ腫Ｄａｕｄｉ細胞株を用いて評価した（図１２および１３参照）。これらの図に示されるように、ＣＨＩＲ−１２．１２は、３つの遺伝子型すべてのＮＫ細胞で、強力なＡＤＣＣを誘導した。Ｄａｕｄｉ細胞株の溶解に対するＣＨＩＲ−１２．１２のＥＤ５０は、Ｆ／Ｆ、Ｖ／ＦおよびＶ／Ｖで、それぞれ４、２および０．４ｐＭであった（図１３）。Ｄａｕｄｉ細胞株の溶解に対するリツキシマブＥＤ５０は、Ｆ／Ｆ、Ｖ／ＦおよびＶ／Ｖで、それぞれ５３、２１および９ｐＭであった（図１３）。
【０２４９】
また、種々のＦｃγＲＩＩＩａのａａｌ５８多型を発現する多数のヒトドナー由来の精製ＮＫエフェクター細胞を、標的細胞としてＣＬＬ患者細胞を用いて評価した（図１４参照）。ＣＨＩＲ−１２．１２は、試験したすべてのＣＬＬ患者細胞に対して、リツキシマブよりも強力なＡＤＣＣの媒介体であることがわかった（図１４）。これらのデータは、ａａｌ５８Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ  遺伝子型のＮＫ細胞の場合であっても、ＣＨＩＲ−１２．１２がリツキシマブよりも強力なＡＤＣＣ媒介体であることを示す。
【０２５０】
これらの所見は、Ｆ／ＦまたはＶ／ＦのＦｃγＲＩＩＩａ  １５８ａａ多型のＮＫ細胞を用いたＡＤＣＣアッセイでは、Ｖ／Ｖを有するものよりもＣＨＩＲ−１２．１２の効力が有意に低いことが予測され得たため、驚くべきことである。繰り返すが、ＮＨＬにおけるリツキシマブの臨床的活性は、ＦｃγＲＩＩＩａ遺伝子型と相関することが示された。Ｖ／ＶまたはＶ／ＦのＦｃγＲＩＩＩａの１５８ａａ多型を有する患者は、Ｆ／Ｆを有する患者よりもリツキシマブに対して応答性である。リツキシマブもまた、Ｂ細胞表面上に発現された抗原に結合するＩｇＧ１モノクローナル抗体であるため、ＣＨＩＲ−１２．１２は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ多型に対して同じ優先性を示すことが予測され得た。そうではなく、ＣＨＩＲ−１２．１２は、３つのすべての遺伝子型のＮＫ細胞で強力なＡＤＣＣを誘導することがわかった。
【０２５１】
本発明が関する技術分野の当業者には、前述の説明および付随の図面に示した教示の恩恵を受けて、本明細書に示した本発明の多くの変形および他の実施形態が思い浮かぶであろう。したがって、本発明は、開示された具体的な実施形態に限定されないこと、ならびに変形および他の実施形態は、添付の特許請求の範囲内に含まれることが意図されることを理解されたい。特定の用語を本明細書において用いたが、これは、一般的かつ説明的な意味でのみ使用し、限定を目的とするものではない。
【０２５２】
本明細書に挙げたすべての刊行物および特許出願は、引用によって、引用により組み込まれる個々の各刊行物または特許出願が、あたかも、個々の各刊行物または特許出願が、引用によって具体的に個々に示されているのと同程度に充分本明細書に組み込まれる。
【０２５３】
【数１】
2009517339.tif 000003
【０２５４】
【数２】
2009517339.tif 000004
【図面の簡単な説明】
【０２５５】
【図１Ａ】図１Ａは、６つの細胞株における抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の解析の結果を示す。
【図１Ｂ】図１Ｂは、６つの細胞株における抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の解析の結果を示す。
【図１Ｃ】図１Ｃは、６つの細胞株における抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の解析の結果を示す。
【図１Ｄ】図１Ｄは、６つの細胞株における抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の解析の結果を示す。
【図１Ｅ】図１Ｅは、６つの細胞株における抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の解析の結果を示す。
【図１Ｆ】図１Ｆは、６つの細胞株における抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の解析の結果を示す。
【図２Ａ】図２Ａは、ＣＬＬ患者細胞（ｎ＝８）における抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の解析の結果を示す。
【図２Ｂ】図２Ｂは、ＣＬＬ患者細胞（ｎ＝８）における抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の解析の結果を示す。
【図２Ｃ】図２Ｃは、ＣＬＬ患者細胞（ｎ＝８）における抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の解析の結果を示す。
【図２Ｄ】図２Ｄは、ＣＬＬ患者細胞（ｎ＝８）における抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）の解析の結果を示す。
【図３】図３は、ＣＬＬ患者細胞（ｎ＝９）におけるＡＤＣＣの解析の結果を一覧にしたものである。
【図４】図４は、２つの異なるドナーに由来するＮＫエフェクター細胞を用いたＣＬＬ患者細胞におけるＡＤＣＣの解析の結果を示す。
【図５】図５は、ＣＬＬ患者細胞および正常Ｂ細胞上でのＣＤ４０およびＣＤ２０細胞表面発現の定量の結果を示す。
【図６】図６は、細胞のＡＤＣＣ活性を、定量されたＣＤ４０およびＣＤ２０細胞表面発現とともに一覧にしたものである。
【図７】図７は、ＤａｕｄｉおよびＡＲＨ７７細胞株上の細胞表面結合ＣＨＩＲ−１２．１２のレベルを示す棒グラフである。
【図８】図８は、ＦＡＣＳ解析によるＣＬＬ患者細胞におけるＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブの内在化の研究の結果を示す。
【図９】図９は、ＦＩＴＣ標識抗体の共焦点顕微鏡検査による正常Ｂ細胞におけるＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブの内在化の研究の結果を示す。
【図１０】図１０は、Ａｌｅｘａ４８８標識抗体の共焦点顕微鏡検査によるＣＬＬ患者細胞におけるＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブの内在化の研究の結果を示す。
【図１１】図１１は、ＡＤＣＣ活性と内在化との関係を一覧にしたものである。
【図１２】図１２は、異なるＦｃγＲＩＩＩａ遺伝子型を有するドナー由来の精製ＮＫエフェクター細胞によるＣＨＩＲ−１２．１２またはリツキシマブによるＤａｕｄｉ細胞の特異的溶解の最大割合を示す棒グラフである。
【図１３】図１３は、異なるＦｃγＲＩＩＩａ遺伝子型を有するドナー由来の精製ＮＫエフェクター細胞による（ｂｙ  ｉｎ）Ｄａｕｄｉ細胞上のＣＨＩＲ−１２．１２またはリツキシマブのＡＤＣＣ効力（ＥＤ５０）を示す棒グラフである。
【図１４】図１４は、多重遺伝子型のヒトドナー由来のヒトＮＫ細胞によるＣＬＬ患者細胞（ｎ＝９）に対するＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブの競合的ＡＤＣＣを一覧にしたものである。
【図１Ａ】
2009517339.tif 000005
【図１Ｂ】
2009517339.tif 000006
【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
2009517339.tif 000008
【図１Ｅ】
2009517339.tif 000009
【図１Ｆ】
2009517339.tif 000010
【図２Ａ】
2009517339.tif 000011
【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
2009517339.tif 000014
【図３】
2009517339.tif 000015
【図４】
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【図５】
2009517339.tif 000017
【図６】
2009517339.tif 000018
【図７】
2009517339.tif 000019
【図８】
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【図９】
2009517339.tif 000021
【図１０】
2009517339.tif 000022
【図１１】
2009517339.tif 000023
【図１２】
2009517339.tif 000024
【図１３】
2009517339.tif 000025
【図１４】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成20年9月18日(2008.9.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態についてヒト患者を処置するための組成物であって、該ヒト患者は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）であり、該組成物は、抗ＣＤ４０抗体を含む、組成物。
【請求項２】
前記癌または前悪性状態がＢ細胞系統の癌である、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記Ｂ細胞系統の癌が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ性白血病（ＰＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、へアリーセル白血病、ホジキン病、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、およびびまん性小リンパ球性リンパ腫などのリンパ腫、濾胞性、ＤＬＢＣＬ、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾原発リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、脈管内リンパ腫症、免疫芽球性リンパ腫、ならびにＡＩＤＳ関連リンパ腫からなる群より選択される、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記癌または前悪性状態が非Ｂ細胞血液学的悪性疾患である、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記非Ｂ細胞血液学的悪性疾患が急性骨髄性白血病である、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記癌または前悪性状態が充実腫瘍である、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記充実腫瘍が、卵巣、肺（例えば、扁平上皮細胞癌腫の非小細胞肺癌、腺癌腫、ならびに大細胞癌腫型および小細胞肺癌）、乳房、結腸、腎臓（例えば、腎細胞癌腫など）、膀胱、肝臓（例えば、肝細胞癌腫など）、胃、頚部、前立腺、鼻咽頭癌、ならびに甲状腺癌（例えば、甲状腺乳頭癌腫）、皮膚癌、例えば、黒色腫および肉腫（例えば、骨肉腫やユーイング肉腫など）からなる群より選択される、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記癌または前悪性状態が、ＣＤ２０発現細胞と関連している癌または前悪性状態である、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
前記癌または前悪性状態がＢ細胞悪性疾患である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記癌または前悪性状態が、ＣＤ４０およびＣＤ２０の両方を発現する細胞と関連している癌または前悪性状態である、請求項８に記載の組成物。
【請求項１１】
前記癌または前悪性状態がＢ細胞悪性疾患である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記抗ＣＤ４０抗体が非経口投与経路によって投与される、請求項１〜１１いずれか１項に記載の組成物。
【請求項１３】
前記抗ＣＤ４０抗体が静脈内投与または皮下投与される、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者におけるＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態の処置のための医薬の製造における治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体の使用。
【請求項１５】
前記癌または前悪性状態がＢ細胞系統の癌である、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
前記Ｂ細胞系統の癌が、急性リンパ芽球性白血病（ＡＬＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、前リンパ性白血病（ＰＬＬ）、小リンパ球性白血病（ＳＬＬ）、へアリーセル白血病、ホジキン病、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、Ｈ鎖病、およびびまん性小リンパ球性リンパ腫などのリンパ腫、濾胞性、ＤＬＢＣＬ、粘膜関連リンパ組織リンパ腫、単球様Ｂ細胞リンパ腫、脾原発リンパ腫、リンパ腫様肉芽腫症、脈管内リンパ腫症、免疫芽球性リンパ腫、ならびにＡＩＤＳ関連リンパ腫からなる群より選択される、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
前記癌または前悪性状態が非Ｂ細胞血液学的悪性疾患である、請求項１４に記載の使用。
【請求項１８】
前記非Ｂ細胞血液学的悪性疾患が急性骨髄性白血病である、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記癌または前悪性状態が充実腫瘍である、請求項１４に記載の使用。
【請求項２０】
充実腫瘍が、卵巣、肺（例えば、扁平上皮細胞癌腫の非小細胞肺癌、腺癌腫、ならびに大細胞癌腫型および小細胞肺癌）、乳房、結腸、腎臓（例えば、腎細胞癌腫など）、膀胱、肝臓（例えば、肝細胞癌腫など）、胃、頚部、前立腺、鼻咽頭癌、ならびに甲状腺癌（例えば、甲状腺乳頭癌腫）、皮膚癌、例えば、黒色腫および肉腫（例えば、骨肉腫やユーイング肉腫など）からなる群より選択される、請求項１９に記載の使用。
【請求項２１】
前記癌または前悪性状態が、ＣＤ２０発現細胞と関連している癌または前悪性状態である、請求項１４に記載の使用。
【請求項２２】
前記癌または前悪性状態がＢ細胞悪性疾患である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
前記癌または前悪性状態が、ＣＤ４０およびＣＤ２０の両方を発現する細胞と関連している癌または前悪性状態である、請求項２１に記載の使用。
【請求項２４】
前記癌または前悪性状態がＢ細胞悪性疾患である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
前記医薬が非経口投与経路による投与用に製剤化される、請求項１４〜２４いずれか１項に記載の使用。
【請求項２６】
前記医薬が静脈内または皮下投与用に製剤化される、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者においてＢ細胞による抗体産生を阻害するための組成物であって、抗ＣＤ４０抗体を含む、組成物。
【請求項２８】
前記ヒト患者がＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態を有する、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者においてＢ細胞による抗体産生を阻害するための医薬の製造における有効量の抗ＣＤ４０抗体の使用。
【請求項３０】
前記抗ＣＤ４０抗体がヒトモノクローナル抗体である、請求項１〜１３、２７および２８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３１】
前記ヒト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体がヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
前記ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域が、配列番号４または配列番号５に示されたアミノ酸配列を含む、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記抗ＣＤ４０抗体には有意なアゴニスト活性がない、請求項１〜１３、２７、２８および３０〜３２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３４】
前記抗ＣＤ４０抗体がＣＤ４０発現細胞におけるＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌシグナル伝達のアンタゴニストである、請求項１〜１３、２７、２８および３０〜３３のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３５】
前記抗ＣＤ４０抗体が、
ａ）モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２；
ｂ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体；
ｃ）配列番号２に示された配列、配列番号４に示された配列、配列番号５に示された配列、配列番号２および配列番号４に示された両方の配列ならびに配列番号２および配列番号５に示された両方の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；
ｄ）配列番号１に示された配列、配列番号３に示された配列ならびに配列番号１および配列番号３に示された両方の配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子にコードされたアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；
ｅ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体に結合し得るエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｆ）配列番号７または配列番号９に示されたヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｇ）配列番号７または配列番号９に示されたヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８９を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｈ）競合的結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；
ｉ）前記項目ａ）のモノクローナル抗体または前記項目ｃ）〜ｈ）いずれか１つのモノクローナル抗体であって、該抗体は組換え生成される、抗体；ならびに
ｊ）前記項目ａ）〜ｉ）いずれか１つのモノクローナル抗体の抗原結合断片であるモノクローナル抗体であって、該断片が、ヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持している、抗体
からなる群より選択される、請求項１〜１３、２７、２８および３０〜３４のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３６】
前記抗ＣＤ４０抗体がモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２である、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３７】
前記抗原結合断片が、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片および単鎖Ｆｖ断片からなる群より選択される、請求項３５に記載の組成物。
【請求項３８】
抗ＣＤ４０抗体で処置可能であり、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））での処置に不応性である癌または前悪性状態を有するヒト患者を同定するためのキットであって、
ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態を有するヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型（Ｖ／Ｖ、Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）を決定するための試薬
を含み、ここで、該癌または前悪性状態は、該ヒト患者がＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である場合、抗ＣＤ４０抗体で処置可能である、キット。
【請求項３９】
リツキシマブ（リツキサン（登録商標））での処置に不応性である癌または前悪性状態を有するヒト患者の処置のための抗体療法を選択するためのキットであって、
ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態を有し、リツキシマブ（リツキサン（登録商標））での処置に不応性であるヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型（Ｖ／Ｖ、Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）を決定するための試薬
を含み、
ここで、該ヒト患者がＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆについてヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である場合、抗ＣＤ４０抗体が該癌または前悪性状態の処置のために選択される、キット。
【請求項４０】
前記ヒト患者が抗癌剤での治療に不応性である請求項１〜１３、２７、２８および３０〜３７のいずれか１項に記載のキット。
【請求項４１】
前記ヒト患者が抗ＣＤ２０モノクローナル抗体での治療に不応性である、請求項４０に記載の組成物。
【請求項４２】
前記ヒト患者が抗ＣＤ２０モノクローナル抗体での治療に抵抗性である、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４３】
前記ヒト患者が抗ＣＤ２０モノクローナル抗体での治療に非応答性である、請求項４１に記載の組成物。
【請求項４４】
前記抗ＣＤ２０モノクローナル抗体がリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｎ（登録商標））である、請求項４１〜４３いずれか１項に記載の組成物。
【請求項４５】
ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するための試薬を含む、抗ＣＤ４０抗体で処置可能な癌または前悪性状態を有するヒト患者を同定するためのキット。
【請求項４６】
ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するための試薬を含む、ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態を有するヒト患者の処置のための抗体療法を選択するためのキット。
【請求項４７】
１０ヌクレオチド長以上でヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するのに適した配列の少なくとも１つのプローブを含むマイクロアレイを含む、請求項４５または請求項４６に記載のキット。
【請求項４８】
ＦｃγＲＩＩＩａのアミノ酸１５８をコードするゲノム領域のポリメラーゼ触媒型増幅におけるプライマーとしての使用に適したオリゴヌクレオチドを含む、請求項４５または請求項４６に記載のキット。
【請求項４９】
ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するのに適した１種類以上の制限酵素を含む、請求項４５または請求項４６に記載のキット。
【請求項５０】
ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態についてヒト患者を処置するための組成物であって、抗ＣＤ４０抗体を含み、投与後、該抗ＣＤ４０抗体がＣＤ４０発現細胞によって有意に内在化されないことを特徴とする、組成物。
【請求項５１】
ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態についてヒト患者を処置するための組成物であって、抗ＣＤ４０抗体を含み、投与後、該抗ＣＤ４０抗体がＣＤ４０発現細胞の表面上に実質的に均一に分布されたままであることを特徴とする、組成物。
【請求項５２】
ＣＤ４０発現細胞と関連している癌または前悪性状態についてヒト患者を処置するための組成物であって、抗ＣＤ４０抗体を含み、投与後、該ヒト患者において治療または予防有効量の該抗ＣＤ４０抗体がＣＤ４０発現細胞の表面に存在することを特徴とする、組成物。
【請求項５３】
ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ発現ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によるＣＤ４０発現細胞の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）がもたらされる、請求項１〜１３、２７、２８、３０〜３７または５０〜５２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５４】
前記抗ＣＤ４０抗体が、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）のアッセイにおいてリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｎ（登録商標））よりも強力であり、該アッセイが、ＣＤ４０発現細胞およびＣＤ２０発現細胞を単離されたヒトナチュラルキラー（ＮＫ）細胞とともに関連抗体の存在下でインキュベートすることを含む、請求項１〜１３、２７、２８、３０〜３７または５０〜５２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５５】
前記抗ＣＤ４０抗体が、ヌードマウス異種移植片腫瘍モデルにおいてリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｎ（登録商標））よりも強力である、請求項１〜１３、２７、２８、３０〜３７または５０〜５２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５６】
前記ヌードマウス異種移植片腫瘍モデルが骨髄腫細胞株のＤａｕｄｉヒトリンパ腫細胞株を使用する、請求項５５に記載の組成物。
【請求項５７】
前記抗ＣＤ４０抗体がヒトＣＤ４０に、少なくとも約１０−６Ｍ〜少なくとも約１０−１２Ｍの親和性（ＫＤ）で結合する、請求項１〜１３、２７、２８、３０〜３７または５０〜５２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５８】
前記抗ＣＤ４０抗体がヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに、少なくとも約０．５μＭの親和性（ＫＤ）で結合する、請求項１〜１３、２７、２８、３０〜３７または５０〜５２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項５９】
前記抗ＣＤ４０抗体がヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに、少なくとも約１２μＭの親和性（ＫＤ）で結合する、請求項１〜１３、２７、２８、３０〜３７または５０〜５２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６０】
前記抗ＣＤ４０抗体が、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに少なくとも約０．５μＭの親和性（ＫＤ）で結合し、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに少なくとも約１２μＭの親和性（ＫＤ）で結合する、請求項１〜１３、２７、２８、３０〜３７または５０〜５２のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項６１】
前記抗ＣＤ４０抗体がヒトモノクローナル抗体である、請求項１４〜２６および２９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６２】
前記ヒト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体がヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む、請求項６１に記載の使用。
【請求項６３】
前記ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域が、配列番号４または配列番号５に示されたアミノ酸配列を含む、請求項６２に記載の使用。
【請求項６４】
前記抗ＣＤ４０抗体には有意なアゴニスト活性がない、請求項１４〜２６、２９および６１〜６３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６５】
前記抗ＣＤ４０抗体がＣＤ４０発現細胞におけるＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌシグナル伝達のアンタゴニストである、請求項１４〜２６、２９および６１〜６４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６６】
前記抗ＣＤ４０抗体が、
ａ）モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２；
ｂ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体；
ｃ）配列番号２に示された配列、配列番号４に示された配列、配列番号５に示された配列、配列番号２および配列番号４に示された両方の配列ならびに配列番号２および配列番号５に示された両方の配列からなる群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；
ｄ）配列番号１に示された配列、配列番号３に示された配列ならびに配列番号１および配列番号３に示された両方の配列からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子にコードされたアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；
ｅ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって産生されるモノクローナル抗体に結合し得るエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｆ）配列番号７または配列番号９に示されたヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｇ）配列番号７または配列番号９に示されたヒトＣＤ４０配列の残基８２〜８９を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｈ）競合的結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；
ｉ）前記項目ａ）のモノクローナル抗体または前記項目ｃ）〜ｈ）いずれか１つのモノクローナル抗体であって、該抗体は組換え生成される、抗体；ならびに
ｊ）前記項目ａ）〜ｉ）いずれか１つのモノクローナル抗体の抗原結合断片であるモノクローナル抗体であって、該断片が、ヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持している、抗体
からなる群より選択される、請求項１４〜２６、２９および６１〜６５のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６７】
前記抗ＣＤ４０抗体がモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２である、請求項６６に記載の使用。
【請求項６８】
前記抗原結合断片が、Ｆａｂ断片、Ｆ（ａｂ’）２断片、Ｆｖ断片および単鎖Ｆｖ断片からなる群より選択される、請求項６６に記載の使用。
【請求項６９】
前記ヒト患者が抗癌剤での治療に不応性である請求項１４〜２６、２９および６１〜６８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項７０】
前記ヒト患者が抗ＣＤ２０モノクローナル抗体での治療に不応性である、請求項６９に記載の使用。
【請求項７１】
前記ヒト患者が抗ＣＤ２０モノクローナル抗体での治療に抵抗性である、請求項７０に記載の使用。
【請求項７２】
前記ヒト患者が抗ＣＤ２０モノクローナル抗体での治療に非応答性である、請求項７０に記載の使用。
【請求項７３】
前記抗ＣＤ２０モノクローナル抗体がリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｎ（登録商標））である、請求項７０〜７２いずれか１項に記載の使用。
【請求項７４】
ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ発現ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によるＣＤ４０発現細胞の抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）がもたらされる、請求項１４〜２６、２９または６１〜６８いずれか１項に記載の使用。
【請求項７５】
前記抗ＣＤ４０抗体が、抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）のアッセイにおいてリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｎ（登録商標））よりも強力であり、該アッセイが、ＣＤ４０発現細胞およびＣＤ２０発現細胞を単離されたヒトナチュラルキラー（ＮＫ）細胞とともに関連抗体の存在下でインキュベートすることを含む、請求項１４〜２６、２９または６１〜６８いずれか１項に記載の使用。
【請求項７６】
前記抗ＣＤ４０抗体が、ヌードマウス異種移植片腫瘍モデルにおいてリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｎ（登録商標））よりも強力である、請求項１４〜２６、２９または６１〜６８いずれか１項に記載の使用。
【請求項７７】
前記ヌードマウス異種移植片腫瘍モデルが骨髄腫細胞株のＤａｕｄｉヒトリンパ腫細胞株を使用する、請求項７６に記載の使用。
【請求項７８】
前記抗ＣＤ４０抗体がヒトＣＤ４０に、少なくとも約１０−６Ｍ〜少なくとも約１０−１２Ｍの親和性（ＫＤ）で結合する、請求項１４〜２６、２９または６１〜６８いずれか１項に記載の使用。
【請求項７９】
前記抗ＣＤ４０抗体がヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに、少なくとも約０．５μＭの親和性（ＫＤ）で結合する、請求項１４〜２６、２９または６１〜６８いずれか１項に記載の使用。
【請求項８０】
前記抗ＣＤ４０抗体がヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに、少なくとも約１２μＭの親和性（ＫＤ）で結合する、請求項１４〜２６、２９または６１〜６８いずれか１項に記載の使用。
【請求項８１】
前記抗ＣＤ４０抗体が、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに少なくとも約０．５μＭの親和性（ＫＤ）で結合し、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに少なくとも約１２μＭの親和性（ＫＤ）で結合する、請求項１４〜２６、２９または６１〜６８いずれか１項に記載の使用。
【国際調査報告】
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