(57)【要約】  本願発明の目的は、動脈症治療薬、特に変性炎症性型の動脈症治療薬の調剤のためのアミナフトンの使用である。前記治療薬は、好ましくは経口投与用に調剤される。【選択図】    図１
2009533414.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
動脈症薬の調製のためのアミナフトンの使用。
【請求項２】
前記動脈症が変性・炎症性タイプである請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記動脈症が動脈管構造、好ましくは動脈内皮の炎症状態に起因するものである請求項２に記載の使用。
【請求項４】
前記動脈症が、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、閉塞性動脈症、結合組織病の二次疾患であるレイノー病、初期及び二次肺高血圧症、糖尿病性細小血管症、バージャー病、全身性硬化症、及び内皮障害と内皮活性化とそれらに誘発される組織虚血を特徴とする病気から選択される請求項１〜３のいずれかに記載の使用。
【請求項５】
前記動脈症薬が腸内投与または非経口投与用である請求項１〜４のいずれかに記載の使用。
【請求項６】
前記動脈症薬が経口投与用である請求項５に記載の使用。
【請求項７】
前記動脈症薬に３０〜１５０ｍｇ／投与量、好ましくは５０〜１００ｍｇ／投与量の有効成分アミナフトンが含まれる請求項５または６に記載の使用。
【請求項８】
前記動脈症薬にはさらに、薬剤調製技術で一般的に用いられている、キャリア、緩衝剤、潤滑剤、分散剤、香味剤、甘味剤、安定剤、保存剤、酸化防止剤から選択される所定量の賦形剤が含まれる請求項６に記載の使用。
【請求項９】
前記動脈症薬の１日投与量が３０〜３５０ｍｇ／日；好ましくは５０〜３００ｍｇ／日；より好ましくは７５〜２５０ｍｇ／日である請求項１〜８のいずれかに記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願発明の目的は、アミナフトン（Ａｍｉｎａｐｈｔｏｎｅ）の通称で知られる２−ヒドロキシ−３−メチル−１、４−ナプソヒドロキノン−２−ｐ−アミノベンゾエート（２−ｈｙｄｒｏｘｙ−３−ｍｅｔｈｙｌ−１，４−ｎａｐｔｈｏｈｙｄｒｏｑｕｉｎｏｎｅ−２−ｐ−ａｍｉｎｏｂｅｎｚｏａｔｅ）という化合物（以降単にアミナフトンと呼ぶ）の動脈症治療用、具体的には内皮レベルでの変性・炎症性タイプの動脈症の治療用の薬剤調製のための新規の使用である。
【０００２】
アミナフトンは、既知の薬理活性を有する化合物であり、イタリア等の国々において多年市販されてきた。たとえば、イタリアでは、ピサのラボラトリ  バルダッチ  Ｓ．ｐ．Ａ社（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉ  Ｂａｌｄａｃｃｉ  Ｓ．ｐ．Ａ．、Ｐｉｓａ）の薬剤、キャピラレマ（ＣＡＰＩＬＬＡＲＥＭＡ）薬の有効成分となっている。
【０００３】
アミナフトンの効能として、微小循環の変化が起きるような病態において、静脈系毛細管循環に作用することが知られている。静脈系毛細管循環において、アミナフトンは、血管浸透力（ｖａｓｏｐｅｒｍｅａｂｉｌｉｔｙ）を正常化し、毛細血管抵抗を高める作用を果たす。
【０００４】
実際に、この薬は、下肢の慢性静脈障害の対症療法に広く用いられている。下肢の慢性静脈障害では、うっ血が、構造及び毛細血管の機能性を変化させ、微小循環に影響を与える。
【０００５】
この製品の薬理的・臨床的特性については、科学評論誌で発表されており、製品が市販されている国において静脈病変治療のために使用することにより、近年確認されつつある。
【０００６】
しかしながら、今のところ、アミナフトンが、現在知られているものとは異なる機序により、動脈管構造の炎症状態に起因する病理事象に拮抗する能力をも有することについては示されていない。
【０００７】
アテローム性動脈硬化症、糖尿病性細小血管症、レイノー病、バージャー病、閉塞性動脈症、全身性硬化症、結合組織病（ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｉｔｉｓ）、肺高血圧症、及び、一般に組織虚血を伴う内皮障害及び／または血管再形成（ｖａｓｃｕｌａｒ  ｒｅｍｏｄｅｌｌｉｎｇ）を特徴とする全ての病気における内皮成分の重要性は、文献上知られている。実際に、血管内皮は、代謝的に活性な細胞から構成される組織になり、生理的刺激に反応する。前記刺激は綿密な方法により血流を調整し、血管反応性、血小板凝集能、耐トロンビン生成の調整において複雑な役割を果たす。
【０００８】
それらの機能を十分に発揮させるため、内皮細胞は、結合組織の成分及び相互にアンタゴニスト活性を有する分子を合成し分泌する。
【０００９】
内皮の炎症は、進行性があり、空胞変性が存在し、内皮の完全性が損なわれ、リンパ球、マクロファージ、単球、線維芽細胞の血管周囲性浸潤が生じ、かつエンドセリンなどの強力な内生血管収縮剤が形成されるとともに接着分子の発現が増加し、続いて内膜の肥大化、血管の平滑筋細胞の増殖、及び血管再形成を伴う変性／炎症性病理の根底にある。
【００１０】
この内皮の炎症性−変性症状を軽減するため、今のところ、スタチン等いくつかの薬剤が市販されている。しかしながら、これらの薬剤には、高価な治療法であり、かつ患者にとっては完全に無視できない割合でスタチン系ミオパシー（筋疾患）が見られるという二つのデメリットがある。
【００１１】
プロスタノイド（エンドプロスト、ｅｎｄｏｐｒｏｓｔ）の分子アナログも現在市販されているが、非常に高価な薬剤であり、しかも投与方法、分子の半減期及び副作用等があり投与が容易ではない。
【００１２】
したがって、動脈血管系の内皮炎症に対処し、動脈症、特に変性型の動脈症の第一原因を低減及び／または排除できるようにする（適宜、動脈疾患の実質的改善または完全な解決が得られる）ために、新規かつ効果的な治療法が求められている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
本願発明の目的は、上述した必要性に対する解決法を提供することである。
【００１４】
出願人は、有効量のアミナフトンを含む適切な薬剤により、上述の問題が解決できることを完全に予想外に見出し、上記目的及び以下の詳細な説明に記載される他の目的を達成した。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本願発明の目的は、添付の独立請求項に示すように、動脈症治療薬の調製のためのアミナフトンの使用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本願発明の好ましい実施形態は、添付の従属請求項に記載されている。
【００１７】
本願発明の詳細を以下に記載する。さらに、本願発明を添付の図１〜３を用いて示す。
【００１８】
図１には、ヒト内皮細胞ＥＣＶ３０４由来の接着分子Ｅ−セレクチン（Ｅ−ｓｅｌｅｃｔｉｎｅ；ＥＬＡＭ−１）の発現について、投与量の異なるアミナフトンにより発揮される阻害作用が図式化されている。具体的には、図１は、異なるＥＣＶ３０４細胞サンプルにおける細胞蛍光分析（チャネル平均）により決定される膜ＥＬＡＭ−１の蛍光密度を示す。分析条件はそれぞれ以下のとおりである：  
ａ）基礎培地中（Ｍｅｄｉｕｍ）および４ｍｃｇ／ｍｌ濃度のアミナフトン（Ａｍｎａ）を添加した基礎培地にて４８時間培養後；  
ｂ）１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−１β（ＩＬ−１）、及びそれぞれ２；４；５ｍｃｇ／ｍｌ濃度のアミナフトン（Ａｍｎａ）を添加したＩＬ−１にて４８時間培養／活性化後。
【００１９】
図２は、ＩＬ−１βで培養／活性化させたヒト内皮細胞ＥＣＶ３０４由来のエンドセリン生成（ＥＴ−１）について、投与量の異なるアミナフトンにより発揮される阻害作用を示すブロック図である。具体的には、図２は、１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−１βのみ（ＩＬ−１）、及びそれぞれ２、４、６ｍｃｇ／ｍｌ濃度のアミナフトン（Ａ２；Ａ４；Ａ６）を添加したＩＬ−１で活性化した異なるＥＣＶ３０４サンプルにおいて、特定のＥＩＡ−Ｋｉｔを投与した場合のＥＴ−１生成経過を示す。
【００２０】
図３は、非活性化ヒト内皮細胞ＥＣＶ３０４由来のエンドセリン生成（ＥＴ−１）について、投与量の異なるアミナフトンにより発揮される阻害作用を示すブロック図である。具体的には、図３は、ＩＬ−１βで活性化せずに、基礎培地（ｂａｓａｌ）のみ、及びそれぞれ２；４；６ｍｃｇ／ｍｌ濃度のアミナフトン（Ａ２；Ａ４；Ａ６）を添加した基礎培地で培養した異なるＥＣＶ３０４サンプルにおけるＥＴ−１生成経過を示す。
【００２１】
本願発明は、動脈症治療薬の調製のためのアミナフトンの使用に関する。好ましくは、該動脈症は、動脈管構造の炎症状態に起因する全種類の動脈症であり、より好ましくは、該動脈管構造は動脈内皮である。
【００２２】
特に、前記治療薬は、動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、閉塞性動脈症、結合組織病の二次疾患であるレイノー病、初期及び二次肺高血圧症、糖尿病性細小血管症、バージャー病、全身性硬化症、及び内皮障害と内皮活性化とそれらに誘発される組織虚血を特徴とする全ての病気等の治療法に適しうる。
【００２３】
本願発明の薬剤の調製は、所望の剤形の種類に応じ、製薬分野の当業者に周知の調製技術を用いて従来法により行う。前記調製には、本願発明の主題である、治療上有効な用量の有効成分アミナフトンに、所定量の適切な添加剤及び賦形剤を加える工程が少なくとも含まれる。なお、添加剤及び賦形剤は、薬剤調製技術で一般的に用いられている、キャリア（ｃａｒｒｉｅｒｓ）、緩衝剤、潤滑剤、分散剤、香味剤、甘味剤、安定剤、保存剤、酸化防止剤から選択される。特に好ましい賦形剤及び添加剤については、単に非限定的な例として、デンプン、ツイーン（Ｔｗｅｅｎ）、マンダリン、グレープフルーツ、イチゴ、ビルベリー、全ての果物類等の香料、ショ糖、ブドウ糖、アセサルフェーム、サッカリン、アスパルテーム、アスコルビン酸、パラベン類、グルタミン、アルギニン、スーパーオキシドジスムターゼ、グルタチオンが挙げられる。
【００２４】
前記薬剤は、さまざまな投与経路で患者に投与できる。本願発明の特に好ましい薬剤は、経口投与用剤形である。
【００２５】
好ましい経口投与用の組成物の形状は、例えば、そのまま摂取可能な、カプセル、ビーズ、溶剤または懸濁液、小袋入りの粉末剤もしくは顆粒剤（服用時に、水または非炭酸かつ非アルコール系飲料に懸濁または溶解する）、または類似の形状、錠剤、発泡性の剤形などである。
【００２６】
本願発明の薬剤は、耐酸性化するため、コーティングされたり、ラッカー仕上げされたり、カプセル化されたり、マイクロカプセル化された状態で製剤されることもある。
【００２７】
前記薬剤は、有効成分を腸管、特に大腸で選択的に放出するように、放出制御性の形状で製剤されることもある。
【００２８】
しかしながら、治療対象となる患者のタイプや動脈疾患の種類によっては、他の投与形態も除外されない。実際に、非経口投与や経皮投与の剤形もありうる。
【００２９】
発明の好ましい実施形態では、前記薬剤には、３０〜１５０ｍｇ／投与量；好ましくは、５０〜１００ｍｇ／投与量の有効成分アミナフトンが含まれる。
【００３０】
前記薬剤は、通常、１回の投与に際して、平均７５〜４５０ｍｇ；好ましくは、５０〜３００ｍｇ；より好ましくは、７５〜２２５ｍｇの用量で患者に投与される。
【００３１】
後述する実施例及び添付の図１〜３において示すように、アミナフトンを含有する本願発明の薬剤は、内皮障害に関与する細胞及び転写機構の遮断により、動脈血管の内皮細胞の直接的な保護作用を示す。
【００３２】
以下の実施例において、例示として、一連のｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験を示した。これらの試験は、製薬会社ラボラトリ  バルダッチ  Ｓ．ｐ．Ａにより供給されているアミナフトンの有効性を裏付けている。すなわち、アミナフトンは、炎症を起こした動脈の内皮細胞から接着分子と強力な内生血管収縮剤エンドセリンが合成されるのを防ぐことができる。
【００３３】
アミナフトンの作用は、ＥＣＶ３０４系活性化細胞由来のＥ−セレクチン（以降、ＥＬＡＭ−１ともいう）発現及びエンドセリン−１（以降ＥＴ−１ともいう）生成に関し、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで研究されてきた。なお、ＥＣＶ３０４系細胞は、インターロイキン−１β（すなわちＩＬ−１β）存在下及び非存在下で培養することにより活性化及び非活性化されている。ＩＬ−１βは、炎症状態にあるヒトが合成する分子であり、急性期の刺激応答に含まれる連続的な変化に関与している。
【００３４】
ＥＣＶ３０４細胞は、内皮細胞の多くの特性を示すヒト細胞系であり、標準法において、内皮細胞の機能研究に一般に用いられている。
【００３５】
評価の対象とするパラメータは、内皮の炎症性−変性障害の早期段階においてＥ−セレクチン発現が担う決定的な役割に応じて選択する。ヒトにおいて、Ｅ−セレクチン発現は、血小板の接着と、炎症性細胞の接着及び移動を促進することにより、動脈血管病変において重要な役割を担う。一方、エンドセリン−１生成は、内皮障害に典型的な血管収縮及び血管再形成のプロセスにおいて不可欠であるため分析されてきた。エンドセリン−１（ＥＴ−１）は、実際に、たとえば、初期及び二次肺高血圧症、二次性レイノー病、炎症性動脈症、及びアテローム性動脈硬化症など、いくつかのヒトの病理の決定的な病原性の原理の一つとも言われている。さらに、エンドセリン−１は、肥大性心筋症及び動脈圧の上昇を促進する。
【実施例】
【００３６】
アミナフトンの希釈
０．５ｇのアミナフトン粉末（例えば、イタリア  ピサのバルダッチ社製）を５ｍｌのＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）に溶解した。この溶解液５０μｌを５ｍｌのＤＭＳＯで希釈し、続いて、この第２のＤＭＳＯ希釈液１００μｌをＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）で１ｍｌに希釈した。このＰＢＳ希釈液を原液として用いて、異なる実験系において、アミナフトンの最終濃度がそれぞれ２、４、５及び６μｇ／ｍｌとなるように、完全培地で希釈した。これらの濃度は、上述の薬剤キャピラレマ（ＣＡＰＩＬＬＡＲＥＭＡ）のｉｎ  ｖｉｖｏでの治療濃度に基づき選択した。
【００３７】
細胞
ＥＣＶ３０４細胞株は、日本人女児の臍帯に由来で、１３６回目に自然に不死化した細胞である（コレクション  オブ  セル  カルチャー（Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅｓ）より購入）。１０％ＦＣＳ（ウシ胎仔血清）（ハイクローン社）を添加した、Ｍｅｄｉｕｍ  １９９、１％のＬ−グルタミン、１％のペニシリン／ストレプトマイシン（インビトロジェン社）からなる完全培地にて、この細胞を培養した。
【００３８】
Ｅ−セレクチン接着分子発現ＣＤ６２（ＥＬＡＭ−１）に対するアミナフトンの作用の細胞蛍光定量分析
２８ｃｍ２ペトリ皿で培養したＥＣＶ３０４系の細胞を、１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−１β（ロシュ社）により、完全培地中及びそれぞれ２；４；５μｇ／ｍｌのアミナフトンを加えた完全培地中で４８時間活性化した。これらのアミナフトン濃度は、１日当たり３カプセル（１日当たりの有効成分７５ｍｇが３カプセルに含有されている）の標準用量でキャピラレマを経口投与した場合のｉｎ  ｖｉｖｏ濃度と同等である。さらに、ＩＬ−１β非処理細胞を、アミナフトンを添加した完全培地にて培養した。このときアミナフトンの添加濃度は４μｇ／ｍｌのみとした。
【００３９】
ＰＢＳで洗浄した後、サンプルをトリプシン−ＥＤＴＡで処理し、培養プレートから除去した。該サンプルを７μｌ／１０６のヒトモノクローナル抗体ＣＤ６２−Ｅ−ＰＥＣｙ５（ＥＬＡＭ−１）（ベクトン・ディッキンソン社）に２０分間インキュベートして、接着分子の発現を検出した。コントロールとなるアイソトープを添加することで、結合特性を確認した。洗浄し、定着液（パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）の１％ＰＢＳ溶液）に再懸濁した後、ＦＡＣＳｄｉｖａソフトウェア（ベクトン・ディッキンソン社）を用いてサンプルをフローサイトメトリーで分析した。データは、チャネル平均蛍光及び陽性細胞の蛍光率で表した。実験時間が異なる各細胞サンプルについて、全実験を５回ずつ繰り返し行った。
【００４０】
エンドセリン（ＥＴ−１）生成の評価
ａ）  ＥＩＡキット
細胞サンプルＥＣＶ３０４の上清を回収し、上記のように培養して１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−１β、またはそれぞれ２；４；６μｇ／ｍｌのアミナフトンを添加した１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−１βで、６時間、１２時間、２４時間、３６時間の処理を行った。さらに、ＩＬ−１βで活性化しないサンプルを、２；４；６μｇ／ｍｌのアミナフトンを添加した状態で培養した。
【００４１】
上清に含まれるＥＴ−１濃度を、０〜２５０ｐｇ／ｍｌの範囲で、エンドセリン−１  ＥＩＡ−Ｋｉｔ（ケイマンケミカル社）を用いて定量化した。この免疫定量試験は、２つの抗体による「サンドウィッチ」技術に基づく。
【００４２】
ｂ）Ｐｒｅ−Ｐｒｏ−ＥＴ−１（ＰＰＥＴ−１）特異的なリアルタイムＲＴ−ＰＣＲ
それぞれ６時間、１２時間、２４時間、３６時間の時点で、ＰＰＥＴ−１遺伝子の発現を検出した。サンプルは、それぞれ、ＩＬ−１β（１００Ｕ／ｍｌ）で処理；アミナフトン（それぞれ２；４；６μｇ／ｍｌ）を添加したＩＬ−１β（１００Ｕ／ｍｌ）で処理；ＩＬ−１βで活性化処理せずにアミナフトンのみで処理した。配列決定装置ＡＢＩ  ＰＲＩＳＭ  ７０００（アプライドバイオシステムズ社）を使用し、ＴａｑＭａｎ技術によるＲＴ−ＰＣＲ技法（アプライドバイオシステムズ社、カリフォルニア州フォスターシティ）を用いて分析した。各ｃＤＮＡから２〜４μｌを回収し、最終容量が２５μｌとなるようにＰＣＲミックスで１：５倍希釈した。ＰＣＲミックスには、ＡｍｐｏＥｒａｓｅ  ＵＮＧ酵素と１×ＴａｑＭａｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ；特定のプライマー及びプローブのＦＡＭ標識ミックス（Ａｓｓａｙ−Ｏｎ−Ｄｅｍａｎｄ  Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ；アプライドバイオシステムズ社）が含まれていた。１回目の増幅では、１０分間９５度に保ちＡｍｐｌｉＴａｑ  Ｇｏｌｄ酵素を活性化した。その後、第一段階では１５秒間９５度；第二段階では１分間６０度として、全５０サイクルの反応を行い、全ての遺伝子を増幅した。特定のｍＲＮＡ  ＰＰＥＴ−１は、構成的遺伝子発現、すなわちグリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ）の発現を標準化して定量した。遺伝子発現の相対的な定量化は、ＣＴ比較法（ΔΔＣＴ）の使用により可能になった。ＣＴ値は、蛍光シグナル（基礎変動の標準偏差の１０倍として定義）を超えるのに必要とされるＰＣＲサイクル数で示す。ΔＣＴ値は、ＲＮＡ  ＰＰＥＴ−１のＣＴとｍＲＮＡ  ＧＡＰＤＨのＣＴとの間の差異で表される。ｍＲＮＡ  ＰＰＥＴ発現の経過は、２−（ΔΔＣＴ）という式により計算された。ここで、ΔΔＣＴは、各ΔＣＴとｍＲＮＡが最も低いサンプル（較正サンプル、ｃａｌｉｂｒａｔｏｒ）のΔＣＴとの間の差異である。
【００４３】
統計分析
統計分析では、ソフトウェアバージョン１２．０（イリノイ州シカゴのＳＰＳＳ社）による分散分析（一元配置分散分析（Ｏｎｅ−ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）、ＡＮａｌｙｓｉｓ  Ｏｆ  ＶＡｒｉａｎｃｅ）を行った。
【００４４】
接着分子の発現
細胞蛍光分析により、完全培地のみで培養された細胞（ＭＣ：平均±標準偏差：２５０＋２２  ｐ＜０．０５；陽性細胞の割合（％）２９．１±３．１；ｐ＜０．０５）と比較すると、アミナフトンがＥＣＶ３０４細胞におけるＥ−セレクチン（ＥＬＡＭ−１）発現（ＭＣ：平均±標準偏差：２１９±８．３；陽性細胞の割合（％）１９．４±１．７）を、統計的に有意に低減できることが実証された。さらに、アミナフトンが、投与量依存的に、活性化細胞における接着分子の発現阻害することも示された（１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−１βにて培養した細胞：ＭＣ：平均±標準偏差：３６９．６±３０．５；陽性細胞の割合（％）：３８．４±３．７）；（２ｍｃｇ／ｍｌのアミナフトン存在下で１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−１βにて培養した細胞：ＭＣ：平均±標準偏差：３３２．２±３６．８  ｐ＜０．００１；陽性細胞の割合（％）：３６．６±４．５  ｐ＝不明）；（４ｍｃｇ／ｍｌのアミナフトン存在下で１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−１βにて培養した細胞：ＭＣ：平均±標準偏差：２７８．４±１６．２  ｐ＜０．００１；陽性細胞の割合（％）：２８．２±２．９  ｐ＜０．００１）；（５ｍｃｇ／ｍｌのアミナフトン存在下で１００Ｕ／ｍｌのＩＬ−１βにて培養した細胞：ＭＣ：平均±標準偏差：２５２．６±１０．３  ｐ＜０．００１；陽性細胞の割合（％）：２７．２±３．７  ｐ＜０．００１）。
【００４５】
蛍光チャネル平均（ＭＣ）で表された分析結果を、添付の図１に示す。この結果から、アミナフトンによる接着分子Ｅ−セレクチン発現の阻害活性が確認できる。
【００４６】
エンドセリン（ＥＴ−１）の生成
ＥＩＡキットにより、ＰＲＥ−ＰＲＯ−ＥＴ−１の遺伝子転写レベルで既に見られた傾向、すなわち、アミナフトンが、ＩＬ−１で活性化し培地のみで培養したＥＣＶ３０４細胞サンプルからのＥＴ−１生成を低下させる傾向にあるという点が確認できる。さらに、こうしたＥＴ−１生成の阻害はどの時点でも確認され、投与量依存性があることもわかった（図２及び図３）。計測時点ごとにアミナフトン濃度を増加させた際にみられるＥＴ−１濃度の線状の減少傾向は、以下の場合に統計的有意性に達する：
６時間：ＩＬ−１βと、ＩＬ−１β＋アミナフトン４ｍｃｇ／ｍｌとの比較：ｐ＜０．００１；ＩＬ−１βと、ＩＬ−１β＋アミナフトン６ｍｃｇ／ｍｌとの比較：ｐ＝０．０００；
１２時間：ＩＬ−１βと、ＩＬ−１β＋アミナフトン４ｍｃｇ／ｍｌとの比較：ｐ＜０．０５；ＩＬ−１βと、ＩＬ−１β＋アミナフトン６ｍｃｇ／ｍｌとの比較：ｐ＝０．０００；
３６時間：ＩＬ−１βと、ＩＬ−１β＋アミナフトン６ｍｃｇ／ｍｌとの比較：ｐ＝０．０００．
【００４７】
ＩＬ−１により活性化せずに、異なる濃度のアミナフトンを添加した培地で培養した細胞の場合、以下の場合に統計的有意性に達する：
１２時間：基礎培地と、アミナフトン６ｍｃｇ／ｍｌ添加培地との比較：ｐ＜０．０５；
２４時間：基礎培地と、アミナフトン４ｍｃｇ／ｍｌ添加培地との比較：ｐ＜０．０５；基礎培地と、アミナフトン６ｍｃｇ／ｍｌとの比較：ｐ＜０．０５；
３６時間：基礎培地と、アミナフトン４ｍｃｇ／ｍｌとの比較：ｐ＝０．０００；基礎培地と、アミナフトン６ｍｃｇ／ｍｌとの比較：ｐ＝０．０００
【００４８】
得られた結果を添付の図２及び図３に示す。これらの結果から、アミナフトンによるエンドセリン−１生成の阻害活性が確認できる。
【００４９】
上記に示す実験結果から、本願発明の明細書及び請求の範囲に記載されたアミナフトンの新規の使用が確認できる。
【図面の簡単な説明】
【００５０】
【図１】図１には、ヒト内皮細胞ＥＣＶ３０４由来の接着分子Ｅ−セレクチンの発現について、投与量の異なるアミナフトンにより発揮される阻害作用が図式化されている。
【図２】図２は、ＩＬ−１βで培養／活性化させたヒト内皮細胞ＥＣＶ３０４由来のエンドセリン生成（ＥＴ−１）について、投与量の異なるアミナフトンにより発揮される阻害作用を示すブロック図である。
【図３】図３は、非活性化ヒト内皮細胞ＥＣＶ３０４由来のエンドセリン生成（ＥＴ−１）について、投与量の異なるアミナフトンにより発揮される阻害作用を示すブロック図である。
【図１】
2009533414.tif 000003
【図２】
2009533414.tif 000004
【図３】
2009533414.tif 000005
【国際調査報告】
2009533414.tif 000006
2009533414.tif 000007
2009533414.tif 000008