(57)【要約】  本発明は、樹脂上での分画により得られるチョウセンアザミ抽出物の調製に関する。本発明の方法により、３種の活性成分、即ち、ジカフェオイルキナ酸、ルテオリン及びシナロピクリン配糖体を一定の比で含む、植物のチョウセンアザミの地上部から出発して、抽出物を入手することができる。シナロピクリンは、正確な量の硫化アミノ酸又は適切なチオ誘導体の添加により安定化される。これらの抽出物は、脂質低下活性、抗消化不良活性及び血管抗炎症活性を有する。この抽出物は、マツヨイグサ油中に、又は血管作用を増強するω−３及びω−６酸の多い油中に主として配合される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
チョウセンアザミ有棘品種抽出物の製造方法であって、
ａ）この植物の新鮮又は脱水バイオマスをアルコール又は水−アルコール溶媒で抽出する工程；
ｂ）工程ａ）からの水−アルコール抽出物を２５〜５５℃の範囲の低温で、好ましくは３５℃で、水式真空下で濃縮する工程；
ｃ）沈殿した水難溶性不活性物質を濾別する工程；
ｄ）吸着樹脂カラムで抽出物を精製する工程
を含む方法。
【請求項２】
工程ａ）において、−３０℃の温度で凍結された粉砕植物バイオマスが使用される、請求項１記載の方法。
【請求項３】
植物バイオマスが、２０：８０〜４０：６０の範囲の頭状花序対残りの地上部の比を有する、請求項１又は２記載の方法。
【請求項４】
植物バイオマスが、３０：７０の頭状花序対残りの地上部の比を有する、請求項３記載の方法。
【請求項５】
工程ａ）の抽出が、水−アルコール溶液で行われる、請求項１記載の方法。
【請求項６】
７０％水−アルコール溶液が使用される、請求項５記載の方法。
【請求項７】
７０％エタノール溶液が使用される、請求項５記載の方法。
【請求項８】
工程ａ）の抽出が、１０℃〜８０℃の範囲の温度で、好ましくは２５℃で行われる、請求項１記載の方法。
【請求項９】
工程ｂ）において、溶液が抽出植物材料の容量に相当する容量まで真空下で濃縮される、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
工程ｄ）において、クロマトグラフィー分離が、ポリスチレン、アンバーライト、デュオライト、ＸＡＤ１１８０樹脂から選択される樹脂で行われる、請求項１記載の方法。
【請求項１１】
抽出工程ａ）において、又は続く精製若しくは濃縮工程ｂ）〜ｄ）において、硫化アミノ酸、好ましくはシステインが添加される、請求項１記載の方法。
【請求項１２】
システインが、シナロピクリンの化学量論量よりも１０％多い量で添加される、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
チョウセンアザミのスピノーゾ・サルド種が使用される、請求項１〜１２のいずれか１項記載の方法。
【請求項１４】
チョウセンアザミのテマ種が使用される、請求項１〜１２のいずれか１項記載の方法。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか１項記載の方法により得られる、シナロピクリン含量が高いチョウセンアザミ抽出物。
【請求項１６】
５％を超えるシナロピクリン含量、１：０．２〜１：０．８の範囲、好ましくは１：０．６のカフェオイルキナ酸対シナロピクリンの比、及び２０〜６０％の範囲、好ましくは５０％のルテオリン配糖体対シナロピクリン比を有する、請求項１５記載の抽出物。
【請求項１７】
ω−３及びω−６多価不飽和酸の多い油中に配合された、請求項１５記載の抽出物。
【請求項１８】
マツヨイグサ油中に配合された、請求項１７記載の抽出物。
【請求項１９】
亜麻油中に配合された、請求項１５記載の抽出物。
【請求項２０】
請求項１５〜１９のいずれか１項記載の抽出物を含む組成物。
【請求項２１】
錠剤、糖衣錠、軟及び硬ゼラチンカプセル剤並びにセルロースカプセル剤の剤形の、請求項２０記載の組成物。
【請求項２２】
脂質異常症、アテローム動脈硬化症及び炎症性腸疾患の処置用の医薬の製造のための、請求項１５〜１９のいずれか１項記載の抽出物の使用。
【請求項２３】
過敏性大腸症候群の処置のための、請求項２２記載の抽出物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、樹脂上での分画により得られる有棘品種（Cynara scolymus thorny varieties）の抽出物の調製、及びその製造方法に関する。
【０００２】
本発明の方法により、３種の活性成分、即ち、ジカフェオイルキナ酸、ルテオリン及びシナロピクリン（cynaropicrin）配糖体を一定の比で含む、チョウセンアザミの有棘品種の地上部から出発して、抽出物を入手することができる。シナロピクリンは、正確な量の硫化アミノ酸又は適切なチオ誘導体の添加により安定化される。これらの抽出物は、脂質低下、抗消化不良及び血管抗炎症活性を有する。この抽出物は、血管作用を増強するω−３及びω−６酸の多い油中に主として配合される。
【０００３】
技術的背景
水性又は水−アルコール性チョウセンアザミ抽出物が、コレステロール低下、胆汁分泌促進及び抗消化不良活性を有することは文献から知られている。コレステロール低下活性は、長年知られており、そして２種の物質に関係する：合成により調製され、そして７０年代まで治療に使用されたジカフェオイルキナ酸である、サイナリン（cynarin）、及び肝臓のコレステロール合成に対するインビトロの阻害活性を有することが判明したフラボノイド。全体の活性は、チョウセンアザミ抽出物に特有の胆汁分泌促進作用に関連しており、そしてこれが、胆汁酸の除去によりコレステロール除去を促進する。
【０００４】
チョウセンアザミの活性成分は、植物材料を乾燥すると容易に分解する、強力な酸化防止剤である。よって植物バイオマスの調製は、活性成分が高含量の抽出物を入手するのに決定的に重要である。
【０００５】
シナロピクリンは、抗炎症活性及び穏やかなコレステロール低下作用を有するテルペンである。全メチレン−γラクトン環セスキテルペン類と同様に、シナロピクリンは、安定性に乏しく、そしてこのことが、抽出物及び配合物中にこの化合物が存在していない理由の１つである。その一方で、血管炎症を調節することができる、抗炎症作用を持つ生物学的に利用可能な物質（ＮＦｋＢ及び反応性プロテインＣ）は、アテローム動脈硬化症及び心疾患の予防及び治療に特に適しているため、抽出物中のこの化合物の存在は決定的に重要である。
【０００６】
発明の開示
本発明は、３種の活性成分である、ジカフェオイルキナ酸、ルテオリン及びシナロピクリン配糖体を一定の比で含む、チョウセンアザミ有棘品種、好ましくはチョウセンアザミのスピノーゾ・サルド種（Cynara scolymus var. Spinoso sardo）又はチョウセンアザミのテマ種（Cynara scolymus var. tema）の新規な抽出物に関する。本発明は更に、該抽出物の製造方法に関する。
【０００７】
驚くべきことに、抽出工程又はこれに続くチョウセンアザミ抽出物の精製若しくは濃縮過程での、硫化アミノ酸、好ましくはシステインの添加により、なお高濃度のシナロピクリンを含む最終抽出物（そしてこれは、治療用配合物中で安定なままである）が提供されることが見い出された。実際には、硫化アミノ酸から、セスキテルペンを安定化し、かつその吸収を促進するアダクトが生じる。血漿では、これらのアダクトは、タンパク質のスルヒドリル基との交換反応を受けることにより、シナロピクリン比活性を回復させる。
【０００８】
本発明の抽出物の重要な治療的使用は、西洋諸国人口の最大９％が罹患している疾患である、過敏性大腸の処置に関する。ＮＦｋＢ、ＴＮＦ−α及び幾つかのインターロイキン類の調節に関連して提案された抗炎症作用は、過敏性大腸の症状の軽減に関係する機序の１つでありうる。
【０００９】
セスキテルペン−ラクトンはまた、直接又は間接に、腸疾患に関係する中枢神経系メディエーターと相互作用する。
【００１０】
本発明によれば、硫化アミノ酸が、抽出及び／又は濃縮工程において安定化剤として使用されない場合、この抽出物を、配合物への硫化アミノ酸の添加により安定化することができる。
【００１１】
本抽出物は、ジカフェオイルキナ酸割合の高い頭状花序；フラボノイド及び全てのシナロピクリンを主として含む葉などの、植物の地上部を用いて調製される。
【００１２】
本発明により、新鮮な又は脱水された丸ごとの植物、好ましくは新鮮な植物は、２０：８０〜４０：６０の範囲、好ましくは３０：７０の頭状花序と残りの地上部との間の固定比で使用することができる。
【００１３】
既に言及されたように、植物バイオマスの調製は、植物材料を乾燥するときの活性成分の分解を回避するために決定的に重要である。
【００１４】
本発明により、植物材料は、植物中に天然に存在する多数のオキシダーゼ及びヒドロラーゼの作用を低下させるために、収集直後に凍結することができる。凍結バイオマスは、−３０℃で粉砕して、直ちに抽出アルコール溶媒に浸漬することにより、酵素の不活化、更には活性成分の抽出を完了させる。水−アルコール溶液、好ましくは種々の成分間の最良の比を提供する７０％溶液が、活性成分の全てを抽出するために使用される。
【００１５】
抽出中に、シナロピクリンの化学量論量より１０％多い量のシステインを溶媒に加える。生じる水−アルコール抽出液は、２５〜５５℃の範囲、好ましくは３５℃の低温で、水式真空下で濃縮する。濃縮中に、植物材料中に通常存在するクロロフィル及びある種のカロテノイドのような水難溶性不活性物質が沈殿するが、これらは、本発明の抽出物が示すいかなる活性も示さないため、除去する。この水溶液を濾過して、溶媒及び不要物質を除去し、生じる溶液を真空下で濃縮して、抽出植物材料の容量に相当する容量にして、次いでポリスチレン樹脂、アンバーライト、デュオライト及びＸＡＤ１１８０のような吸着樹脂で精製する。この樹脂を水で徹底的に洗浄して、樹脂が涸渇するまで所望の抽出物を９０％エタノールで溶出する。
【００１６】
得られた本発明の抽出物は、先行技術の抽出物と比較して新規な組成を有し、特にシナロピクリン含量＞５％、１：０．２〜１：０．８の範囲（好ましくは１：０．６）のカフェオイルキナ酸対シナロピクリンの比、及び２０〜６０％の範囲（好ましくは５０％）のルテオリン配糖体対シナロピクリンの比を有する。
【００１７】
本発明の抽出物は、一連の薬理学的試験において生物学的研究に付した。本発明の抽出物は、エタノール誘導高脂質血症試験において、それぞれ４０及び３５％のコレステロール及びトリグリセリドの減少を、またカラゲニン浮腫試験において最大７５％の浮腫の用量依存的減少を誘導した。
【００１８】
ラットにおける胆汁分泌促進作用により、文献に報告されたデータを確認した。
【００１９】
この抽出物は、錠剤、糖衣錠、軟及び硬ゼラチンカプセル剤並びにセルロースカプセル剤のような製剤に組み込むのに適している。この抽出物は、好ましくは、マツヨイグサ（Enothera biennis）油又はアマ（Linum usitatissimum）油（亜麻油（flax oil））のような、ω−３及びω−６多価不飽和酸の多い油中に配合されよう。
【００２０】
ヒトにおける有効用量は、処置すべき疾患の重篤度により、１日に５０〜１０００mgの範囲である。
【００２１】
本発明は、以下の実施例において更に詳細に記述される。
【００２２】
実施例１：チョウセンアザミのスピノーザ種の抽出物の調製
アーティチョークの植物丸ごと（頭状花序、茎及び葉）４．１２kgを、この植物材料が涸渇するまでパーコレーター中で７０％エタノールにより７０℃で抽出する。およそ５０ｌの浸出液を回収し、次に減圧下で濃縮してエタノールを除去する。生じた水性濃縮液（約１．５kg）を遠心分離して不溶物を分離する。生じた清澄な溶液を、前もって水中で調整した、ＸＡＤ１１８０樹脂（約１４００ml）を含むクロマトグラフィーカラムに装填する。このカラムを水約２．８ｌで洗浄し、溶出液を廃棄して、精製した抽出物を９０％v/vエタノール３．５ｌでの溶出により回収する。
【００２３】
水−アルコール溶出液を濃縮し、ＨＰＬＣによりシナロピクリン含量をチェックして、少量の水に溶解したＬ−システインを加える（存在するシナロピクリンの化学量論に対して１０％過剰で）。５０℃で減圧下での更なる濃縮及び乾燥により、精製乾燥抽出物４９．４ｇを得る（全カフェオイルキナ酸ＨＰＬＣ含量１５．１％、全フラボノイドＨＰＬＣ含量３．１５％、全シナロピクリンＨＰＬＣ含量７．６４％）。
【００２４】
実施例２：チョウセンアザミのテマ種の抽出物の調製
アーティチョークの植物丸ごと（頭状花序、茎及び葉）４．１２kgを、活性成分が完全に抽出するまでパーコレーター中で７０％エタノールにより７０℃で抽出する。合わせた抽出液中のシナロピクリン含量を測定し、次にＬ−システインを化学量論に対して１０％過剰で加える。水−エタノール抽出物を真空下で約３０℃を超えない温度で濃縮する。この水性濃縮液を４℃で一晩静置し、次に主としてクロロフィル及びカロテノイドからなる固形残渣をデカントする。この溶液を濾過し、次にＸＡＤ１１８０樹脂に吸収させ、次に不要な不溶物が完全に除去されるまで、これを水で洗浄する。樹脂を９０％エタノールで洗浄し、この溶出液を１０％w/w残渣になるまで濃縮し、そしてこれをアトマイズすることにより、カフェオイルキナ酸１５．８％、ルテオリン配糖体４．２％及びシナロピクリン８．６％を含む抽出物４０ｇを得る。
【００２５】
実施例３：チョウセンアザミのスピノーゾ・サルド種の抽出物の調製
アーティチョークの植物丸ごと（頭状花序、茎及び葉）４．１２kgを、活性成分が完全に抽出するまでパーコレーター中で７０％エタノールにより３５℃で抽出する。合わせた抽出液を５ｌまで濃縮して、冷蔵庫で１５時間静置する。生じた懸濁液を遠心分離する。この清澄な溶液をＸＡＤ１１８０樹脂に吸収させ、次にこれを水で洗浄して、０．０１％未満の乾燥残渣（水洗浄液中）にする。この樹脂を９０％エタノールで洗浄し、この溶出液を真空下で４０℃未満の温度で濃縮することにより、カフェオイルキナ酸１６．２％、ルテオリン配糖体４．０２％及びシナロピクリン８．０１％を含む抽出物４０ｇを得る。
【００２６】
実施例４：軟ゼラチンカプセル剤用の油性懸濁液にした抽出物の配合物
単位組成：
実施例１の抽出物                ２００mg
サラシミツロウ                  １５mg
大豆レシチン                    ２０mg
大豆油                          ２１５mg
【００２７】
実施例５：軟ゼラチンカプセル剤用の油性懸濁液にした抽出物の配合物
単位組成：
実施例２の抽出物                ２００mg
大豆レシチン                    ２４０mg
サラシミツロウ                  ６mg
マツヨイグサ油                  ２１５mg
【００２８】
実施例６：硬ゼラチンカプセル剤にした抽出物の配合物
単位組成：
実施例１の抽出物                ２００mg
微結晶セルロース                ２００mg
乳糖                            ９０mg
二酸化ケイ素                    ５mg
ステアリン酸マグネシウム        ５mg
【００２９】
実施例７：硬ゼラチンカプセル剤にした抽出物の配合物
単位組成：
実施例３の抽出物                ２００mg
Ｌ−システイン                  １００mg
微結晶セルロース                １５０mg
乳糖                            ９０mg
二酸化ケイ素                    ５mg
ステアリン酸マグネシウム        ５mg
【００３０】
実施例８：軟ゼラチンカプセル剤用の油性懸濁液にした抽出物の配合物
単位組成：
実施例３の抽出物                ２００mg
大豆レシチン                    ２４０mg
サラシミツロウ                  ６mg
亜麻油                          ２１５mg
【国際調査報告】
2009501708.tif 000002
2009501708.tif 000003
2009501708.tif 000004
2009501708.tif 000005