(57)【要約】  本発明の第一の態様は、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−ベータ−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン若しくはその代謝物又はそれらの薬学的に許容される塩と、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物とを含む組合せに関する。本発明の第二の態様は、治療における同時、連続的又は別個の使用のための併用製剤としての上記の組合せを含む医薬品に関する。本発明の第三の態様は、増殖性傷害を治療する方法であって、上記の組合せを同時、連続的又は別個に投与することを含む方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン若しくはその代謝物、又はそれらの薬学的に許容される塩と、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物とを含む組合せ。
【請求項２】
ビンカアルカロイドが、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン及びビノレルビンから選択される請求項１に記載の組合せ。
【請求項３】
ビンカアルカロイドがビノレルビンである請求項１又は請求項２に記載の組合せ。
【請求項４】
タキサンが、ドセタキソール及びタキソールから選択される請求項１に記載の組合せ。
【請求項５】
タキサンがドセタキソールである請求項１に記載の組合せ。
【請求項６】
シトシン類縁体が、ゲムシタビン及びａｒａ−Ｃから選択される請求項１に記載の組合せ。
【請求項７】
シトシン類縁体がゲムシタビンである請求項１に記載の組合せ。
【請求項８】
アントラサイクリンが、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、エピルビシン及びミトキサントロンから選択される請求項１に記載の組合せ。
【請求項９】
アントラサイクリンがドキソルビシンである請求項１に記載の組合せ。
【請求項１０】
白金抗腫瘍薬が、シスプラチン、オキサリプラチン及びカルボプラチンから選択される請求項１に記載の組合せ。
【請求項１１】
白金抗腫瘍薬がシスプラチンである請求項１に記載の組合せ。
【請求項１２】
白金抗腫瘍薬がオキサリプラチンである請求項１に記載の組合せ。
【請求項１３】
代謝物が、１−（２−Ｃ−シアノ−２−デオキシ−β−Ｄ−アラビノ−ペンタフラノシル）−シトシンである請求項１〜１２のいずれかに記載の組合せ。
【請求項１４】
請求項１〜１３のいずれかに記載の組合せと、薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項１５】
増殖性障害の治療用の医薬の製造における請求項１〜１４のいずれかに記載の組合せの使用。
【請求項１６】
治療における同時、連続的又は別個の使用のための併用製剤としての、（ｉ）２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン若しくはその代謝物、又はそれらの薬学的に許容される塩と、（ii）（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物とを含む医薬品。
【請求項１７】
２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン又はその代謝物と、細胞傷害性薬物とが同時に投与される請求項１６に記載の医薬品。
【請求項１８】
２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン又はその代謝物と、細胞傷害性薬物とが、連続的又は別個に投与される請求項１６に記載の医薬品。
【請求項１９】
細胞傷害性薬物が、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン又はその代謝物の前に、連続的又は別個に投与される請求項１８に記載の医薬品。
【請求項２０】
２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン又はその代謝物が、細胞傷害性薬物の前に、連続的又は別個に投与される請求項１８に記載の医薬品。
【請求項２１】
ビンカアルカロイドが、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビンデシン及びビノレルビンから選択される請求項１４〜２０のいずれかに記載の医薬品。
【請求項２２】
ビンカアルカロイドがビノレルビンである請求項１４〜２１のいずれかに記載の医薬品。
【請求項２３】
タキサンが、ドセタキソール及びタキソールから選択される請求項１４〜２０のいずれかに記載の医薬品。
【請求項２４】
タキサンがドセタキソールである請求項１４〜２０のいずれかに記載の医薬品。
【請求項２５】
シトシン類縁体が、ゲムシタビン及びａｒａ−Ｃから選択される請求項１４〜２０のいずれかに記載の医薬品。
【請求項２６】
シトシン類縁体がゲムシタビンである請求項１４〜２０のいずれかに記載の医薬品。
【請求項２７】
アントラサイクリンが、ドキソルビシン、ダウノルビシン、イダルビシン、エピルビシン及びミトキサントロンから選択される請求項１４〜２０のいずれかに記載の医薬品。
【請求項２８】
アントラサイクリンがドキソルビシンである請求項１４〜２０のいずれかに記載の医薬品。
【請求項２９】
白金抗腫瘍薬が、シスプラチン、オキサリプラチン及びカルボプラチンから選択される請求項１４〜２０のいずれかに記載の医薬品。
【請求項３０】
白金抗腫瘍薬がシスプラチンである請求項１４〜２０のいずれかに記載の医薬品。
【請求項３１】
白金抗腫瘍薬がオキサリプラチンである請求項１４〜２０のいずれかに記載の医薬品。
【請求項３２】
代謝物が、１−（２−Ｃ−シアノ−２−デオキシ−β−Ｄ−アラビノ−ペンタフラノシル）−シトシンである請求項１４〜３１のいずれかに記載の医薬品。
【請求項３３】
薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む医薬組成物の形の請求項１４〜３２のいずれかに記載の医薬品。
【請求項３４】
増殖性障害の治療用の請求項１４〜３３のいずれかに記載の医薬品。
【請求項３５】
増殖性障害が癌である請求項３４に記載の医薬品。
【請求項３６】
増殖性障害を治療する方法であって、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン若しくはその代謝物、又はそれらの薬学的に許容される塩と、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物とを、同時、連続的又は別個に投与することを含む方法。
【請求項３７】
代謝物が、１−（２−Ｃ−シアノ−２−デオキシ−β−Ｄ−アラビノ−ペンタフラノシル）−シトシンである請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン又はその代謝物と、細胞傷害性薬物とが、個別の成分についての治療有効量でそれぞれ投与される請求項３６又は請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン又はその代謝物と、細胞傷害性薬物とが、個別の成分についての治療有効量未満でそれぞれ投与される請求項３６又は請求項３７に記載の方法。
【請求項４０】
２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン又はその代謝物と、細胞傷害性薬物とが同時に投与される請求項３６〜３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン又はその代謝物と、細胞傷害性薬物とが、連続的又は別個に投与される請求項３６〜３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４２】
細胞傷害性薬物が、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン又はその代謝物の前に、連続的又は別個に投与される請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン又はその代謝物が、細胞傷害性薬物の前に、連続的又は別個に投与される請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
増殖性障害が癌である請求項３６〜４３のいずれかに記載の方法。
【請求項４５】
癌が結腸癌である請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
増殖性障害の治療用の医薬の製造における、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン若しくはその代謝物、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用であって、前記治療が、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物を、同時、連続的又は別個に対象に投与することを含む使用。
【請求項４７】
増殖性障害の治療用の医薬の製造における、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物の使用であって、前記治療が、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン若しくはその代謝物、又はそれらの薬学的に許容される塩を、同時、連続的又は別個に対象に投与することを含む使用。
【請求項４８】
増殖性障害の治療用の医薬の製造における、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン若しくはその代謝物、又はそれらの薬学的に許容される塩と、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物との使用。
【請求項４９】
増殖性障害の治療用の医薬の製造における、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物の使用であって、前記医薬が、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン若しくはその代謝物、又はそれらの薬学的に許容される塩との併用療法用である使用。
【請求項５０】
増殖性障害の治療用の医薬の製造における、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン若しくはその代謝物、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用であって、前記医薬が、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物との併用療法用である使用。
【請求項５１】
増殖性障害の治療用の医薬の製造における、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン若しくはその代謝物、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用であって、前記医薬が、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物との前処置療法用である使用。
【請求項５２】
代謝物が、１−（２−Ｃ−シアノ−２−デオキシ−β−Ｄ−アラビノ−ペンタフラノシル）−シトシンである請求項４６〜５１のいずれかに記載の使用。
【請求項５３】
増殖性疾患が癌である請求項４６〜５２のいずれかに記載の使用。
【請求項５４】
癌が結腸癌である請求項３９に記載の使用。
【請求項５５】
（ｉ）薬学的に許容される希釈剤、賦形剤又は担体と混合されていてもよい２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン又はその代謝物と、
（ii）薬学的に許容される希釈剤、賦形剤又は担体と混合されていてもよい（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物と
を含むキットオブパーツ。
【請求項５６】
実質的に本明細書に記載される組合せ、医薬品、方法又は使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、増殖性障害の治療に適する薬学的組合せに関する。
【背景技術】
【０００２】
増殖性障害の治療におけるピリミジンヌクレオシドの治療のための使用は、当該技術において詳しく記録されている。例として、ピリミジン系列の市販の抗癌剤は、５−フルオロウラシル（非特許文献１）、テガフール（非特許文献２）、ＵＦＴ（非特許文献３）、カルモフール（非特許文献４）、ドキシフルリジン（非特許文献５）、シタラビン（非特許文献６）、アンシタビン（非特許文献７）及びエノシタビン（非特許文献８）を含む。
【０００３】
癌細胞内で代謝拮抗活性を示すヌクレオシド類縁体は、種々のヒト悪性腫瘍の治療において成功して用いられている。１−ベータ−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン（Ａｒａ−Ｃ、1-beta-D-arabinofuranosylcytosine）、フルダラビン及びクラドリビンのようなヌクレオシドは、白血病の治療において重要な役割を演じるが、ゲムシタビンは多くの型の充実性腫瘍の治療において広く用いられている。これらの化合物は、内因性ヌクレオシド及びヌクレオチドと同様の様式で代謝される。活性な代謝物は、ヌクレオシド及びヌクレオチドの新規合成を妨害し、且つ／又はＤＮＡ鎖に組み込まれた後にＤＮＡ鎖の伸長を阻害して、連鎖停止剤として作用する。さらに、ＤＮＡ鎖に組み込まれたヌクレオシド代謝拮抗物質は、鎖切断を誘導し、これは、結局、アポトーシスの誘発をもたらし得る。
【０００４】
ヌクレオシド代謝拮抗物質は、１又は複数の特定の酵素を標的にする（非特許文献９）。標的酵素に対する阻害作用の形態は、Ａｒａ−Ｃ及びゲムシタビンのように同じヌクレオシド塩基を有するヌクレオシド代謝拮抗物質間で異なり得る。どちらのヌクレオシドもデオキシシチジンキナーゼによりリン酸化され、シチジンデアミナーゼの良好な基質でもあるが、ゲムシタビンのみが充実性腫瘍に対して抗腫瘍活性を示す。このことは、これらのヌクレオシド代謝拮抗物質の薬理学的活性には違いがあり、これが標的分子に対する作用の異なる形態を反映し得ることを示唆する。
【０００５】
ｄＣＫ欠損が、種々の細胞及び動物モデルにおけるＡｒａ−Ｃに対する耐性に関連していることが示された（非特許文献１０）。Ａｒａ−Ｃで処置されたＡＭＬ患者におけるｄＣＫ遺伝子の発現の変化又はこの酵素の活性の著しい低下も、臨床的成果と関連している。これらのデータは、ｄＣＫによるＡｒａ−Ｃの細胞内リン酸化が細胞モデル及び患者における細胞傷害性に必須であるという概念と一致する。芽細胞原形質膜でのｈＥＮＴ１の欠損も、Ａｒａ−Ｃに対する細胞の耐性の機構として提案されている。他の著者は、Ａｒａ−Ｃに対する薬剤耐性の機構がＣＤＡのようなＡｒａ−Ｃ分解酵素の増加したレベルと関連することを示唆している。
【０００６】
特許文献１（Sankyo Company Limited社）は、価値のある抗腫瘍活性を示すことが示されている１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシンの種々の２’−シアノ−２’−デオキシ誘導体を開示している。ＥＰ５３６９３６に開示されているある具体的な化合物は、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン（以下、「ＣＹＣ６８２」という）であり、この化合物は、現在、さらに研究されている。
【０００７】
１−（２−Ｃ−シアノ−２−ジオキシ−β−Ｄ−アラビノ−ペントフラノシル）−Ｎ４−パルミトイルシトシンとしても知られるＣＹＣ６８２（非特許文献１１;非特許文献１２;非特許文献１３）は、ヌクレオシドＣＮＤＡＣ、１−（２−Ｃ−シアノ−２−デオキシ−β−Ｄ−アラビノ−ペンタフラノシル）−シトシンの経口投与される新規な２’−デオキシシチジン代謝拮抗プロドラッグである。
【０００８】
【化１】
2009515863.tif 000002
【０００９】
ＣＹＣ６８２は、自発的ＤＮＡ鎖切断作用を有し、種々の株化細胞、異種移植片及び転移癌モデルにおいて有効な抗腫瘍活性をもたらす点において、ゲムシタビンのようなその他のヌクレオシド代謝物に比較して独特な作用形態を有する（非特許文献１４; 非特許文献１５;非特許文献１６）。
【００１０】
ＣＹＣ６８２は、充実性腫瘍における前臨床データに基づくその経口生物学的利用能並びにゲムシタビン（主要な市販のヌクレオシド類縁体）及び５−ＦＵ（広く用いられている代謝拮抗薬）に比較して向上されたその活性の点で、いくつかの研究の対象である。最近、研究者らは、ＣＹＣ６８２が結腸癌のモデルにおいて強い抗癌活性を示したことを報告した。同じモデルにおいて、ＣＹＣ６８２は、生存率の増加及び結腸癌転移の肝臓への広がりの阻害の点で、ゲムシタビン又は５−ＦＵのどちらよりも優れていることが見出された（非特許文献１７）。現在までに、種々の癌の患者からの第Ｉ相データは、ＣＹＣ６８２が、用量制限毒性としての骨髄抑制とともに、ヒトにおいて耐容性がよいことを示唆する。
【００１１】
薬学的活性剤が、治療計画を最適にするために、組合せでしばしば投与され得ることが、当該技術においてよく確立されている。例えば、ＣＤＫ阻害剤と１−（２−Ｃ−シアノ−２−ジオキシ−β−Ｄ−アラビノ−ペントフラノシル）−Ｎ４−パルミトイルシトシン又はその代謝物とを含む組合せ、及び増殖性障害の治療におけるそれらの使用が、特許文献２（Cyclacel Limited社）に開示されている。
【特許文献１】ＥＰ５３６９３６
【特許文献２】ＷＯ２００５／０５３６９９
【非特許文献１】Duschinsky, R., et al., J. Am. Chem. Soc., 79, 4559 (1957)
【非特許文献２】Hiller, SA., et al., Dokl. Akad. Nauk USSR, 176, 332 (1967)
【非特許文献３】Fujii, S., et al., Gann, 69, 763 (1978)
【非特許文献４】Hoshi, A., et al., Gann, 67, 725 (1976)
【非特許文献５】Cook, A. F., et al., J. Med. Chem., 22, 1330 (1979)
【非特許文献６】Evance, J. S., et al., Proc. Soc. Exp. Bio. Med., 106. 350 (1961)
【非特許文献７】Hoshi, A., et al., Gann, 63, 353, (1972)
【非特許文献８】Aoshima, M., et al., Cancer Res., 36, 2726 (1976)
【非特許文献９】Galmarini et al, Nucleoside analogues and nucleobases in cancer treatment. Lancet Oncol. 2002 Jul;3(7):415-24; Review
【非特許文献１０】Galmarini et al, In vivo mechanisms of resistance to cytarabine in acute myeloid leukaemia, Br J Haematol. 2002 Jun;117(4):860-8
【非特許文献１１】Hanaoka, K., et al, Int. J. Cancer, 1999:82:226-236
【非特許文献１２】Donehower R, et al, Proc Am Soc Clin Oncol, 2000: abstract 764
【非特許文献１３】Burch, PA, et al, Proc Am Soc Clin Oncol, 2001: abstract 364
【非特許文献１４】Hanaoka et al, 1999
【非特許文献１５】Kaneko et al, 1997
【非特許文献１６】Wu et al, 2003
【非特許文献１７】Wu M, et al, Cancer Research, 2003:63:2477-2482
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
本発明は、増殖性障害、特に癌の治療に特に適する既知の薬学的作用物質の新規な組合せを提供することに努める。より具体的には、本発明は、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン又はその代謝物を、従来の細胞傷害性薬物とともに含む組合せに関する。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の第一の態様は、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン若しくはその代謝物又はそれらの薬学的に許容される塩と、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物とを含む組合せに関する。
【００１４】
２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン、及び上記の細胞傷害性薬物は、個別の治療薬として当該技術においてよく確立されているが、本発明で請求される特定の組合せが癌の治療に特に有効であることは示唆されていなかった。
【００１５】
第二の態様は、本発明による組合せと、薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤とを含む医薬組成物に関する。
【００１６】
第三の態様は、増殖性障害の治療用の医薬の製造における本発明による組合せの使用に関する。
【００１７】
第四の態様は、治療における同時、連続的又は別個の使用のための併用製剤としての、（ｉ）２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン若しくはその代謝物、又はそれらの薬学的に許容される塩と、（ii）（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物とを含む医薬品に関する。
【００１８】
第五の態様は、増殖性障害を治療する方法であって、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン若しくはその代謝物、又はそれらの薬学的に許容される塩と、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物とを、同時、連続的又は別個に投与することを含む方法に関する。
【００１９】
第六の態様は、増殖性障害の治療用の医薬の製造における、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン若しくはその代謝物、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用であって、前記治療が、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物を、同時、連続的又は別個に対象に投与することを含む使用に関する。
【００２０】
第七の態様は、増殖性障害の治療用の医薬の製造における、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物の使用であって、前記治療が、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン若しくはその代謝物、又はそれらの薬学的に許容される塩を、同時、連続的又は別個に対象に投与することを含む使用に関する。
【００２１】
第八の態様は、増殖性障害の治療用の医薬の製造における、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン若しくはその代謝物、又はそれらの薬学的に許容される塩と、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物との使用に関する。
【００２２】
第九の態様は、増殖性障害の治療用の医薬の製造における、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物の使用であって、前記医薬が、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン若しくはその代謝物、又はそれらの薬学的に許容される塩との併用療法用である使用に関する。
【００２３】
第十の態様は、増殖性障害の治療用の医薬の製造における、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン若しくはその代謝物、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用であって、前記医薬が、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物との併用療法用である使用に関する。
【００２４】
本発明の第十一の態様は、増殖性障害の治療用の医薬の製造における、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン若しくはその代謝物、又はそれらの薬学的に許容される塩の使用であって、前記医薬が、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物との前処置療法用である使用に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
以下に記載する好ましい実施形態は、本発明の上記の全ての態様に適用可能である。
【００２６】
本発明のある好ましい実施形態は、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン（ＣＹＣ６８２）又はその代謝物と、ゲムシタビン、オキサリプラチン、ドセタキセル及びドキソルビシンから選択される細胞傷害性薬物とを含む組合せに関する。
【００２７】
本発明の別の態様は、ＣＹＣ６８２又はその代謝物と、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物とを含む医薬組成物に関する。
【００２８】
本発明の別の好ましい実施形態は、ＣＹＣ６８２又はその代謝物と、ゲムシタビン、オキサリプラチン、ドセタキセル及びドキソルビシンから選択される細胞傷害性薬物とを含む医薬組成物に関する。
【００２９】
ある好ましい実施形態において、代謝物は、「ＣＮＤＡＣ」としても知られる１−（２−Ｃ−シアノ−２−デオキシ−β−Ｄ−アラビノ−ペンタフラノシル）−シトシンである。
【００３０】
別の態様は、本発明の組合せを含む増殖性障害の治療用の医薬品に関し、ここで、該障害は好ましくは癌である。
【００３１】
本発明のさらなる態様は、治療における同時、連続的又は別個の使用のための併用製剤としての、ＣＹＣ６８２又はその代謝物と、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物とを含む医薬品に関する。
【００３２】
本発明のある実施形態は、治療における同時、連続的又は別個の使用のための併用製剤としての、ＣＹＣ６８２又はその代謝物と、ゲムシタビン、オキサリプラチン、ドセタキセル及びドキソルビシンから選択される細胞傷害性薬物とを含む医薬品に関する。
【００３３】
さらに別の態様は、増殖性障害を治療する方法に関し、該方法は、本発明の組合せを同時、連続的又は別個に投与することを含む。
【００３４】
本明細書で用いる場合、「同時」とは、２つの作用物質が同時に投与されることを意味するために用いられるが、用語「組合せで」は、それらが、同時でなければ同じ時間枠内で治療的に作用し得るような時間枠で「連続的に」投与されることを意味するために用いられる。つまり、「連続的な」投与は、一方の作用物質が、これらがともに治療量で同時に存在するという条件で、他方の後に５分、１０分又は数時間以内に投与されることを許容する。成分の投与間の時間の遅れは、成分の実際の性質、それらの間の相互作用、及びそれらのそれぞれの半減期に応じて変動する。
【００３５】
「組合せで」又は「連続的に」とは対照的に、「別個に」は、本明細書で用いる場合、一方の作用物質と他方とを投与する間隔が著しい、すなわち最初に投与される作用物質は、第二の作用物質が投与されるときには治療有効量で血流中にもはや存在し得ないことを意味する。
【００３６】
ある好ましい実施形態において、医薬品は、ＣＹＣ６８２又はその代謝物の前に、細胞傷害性薬物を連続的又は別個に投与することを含む。
【００３７】
別の好ましい実施形態において、医薬品は、細胞傷害性薬物の前に、ＣＹＣ６８２又はその代謝物を連続的又は別個に投与することを含む。
【００３８】
ある好ましい実施形態において、ＣＹＣ６８２（又はその代謝物）は、細胞傷害性薬物の少なくとも１時間、又は少なくとも４時間、又は少なくとも８時間、１２時間、２４時間若しくは４８時間前に投与される。
【００３９】
別の好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物は、ＣＹＣ６８２（又はその代謝物）の少なくとも１時間、又は少なくとも４時間、又は少なくとも８時間、１２時間、２４時間若しくは４８時間前に投与される。
【００４０】
別の好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物とＣＹＣ６８２（又はその代謝物）とは、同時に投与される。
【００４１】
ある非常に好ましい実施形態において、ＣＹＣ６８２（又はその代謝物）と細胞傷害性薬物とは、図２に示す計画に従って投与され、すなわち、ＣＹＣ６８２を４８時間投与し、その後細胞傷害性薬物を２４時間投与するか、又は細胞傷害性薬物を２４時間投与し、その後ＣＹＣ６８２を４８時間投与するか、又は細胞傷害性薬物とＣＹＣ６８２とを同時に２４、４８又は７２時間投与する。投与計画は、好ましくは各処置サイクルの間に処置のない期間を有して、所望により反復可能である。
【００４２】
好ましい実施形態において、ＣＹＣ６８２又はその代謝物及び細胞傷害性薬物は、個別の成分について治療有効量でそれぞれ投与される。
【００４３】
別の好ましい実施形態において、ＣＹＣ６８２又はその代謝物及び細胞傷害性薬物は、個別の成分について治療量未満でそれぞれ投与される。
【００４４】
用語「治療量未満」は、ＣＹＣ６８２単独又は細胞傷害性薬物単独での治療について、治療効果を生み出すために典型的に必要とされるよりも低い量を意味する。
【００４５】
さらなる態様は、本発明の組合せの、増殖性障害の治療用の医薬の製造における使用に関する。
【００４６】
本明細書で用いる場合、語句「医薬の製造」は、１若しくは複数の上記の成分の医薬としての直接の使用、又はこのような医薬の製造の任意の段階における使用を含む。
【００４７】
本発明の別の態様は、ＣＹＣ６８２又はその代謝物の、増殖性障害の治療用の医薬の製造における使用に関し、該治療は、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物を、同時、連続的又は別個に対象に投与することを含む。
【００４８】
ある特に好ましい実施形態は、ＣＹＣ６８２又はその代謝物の、増殖性障害の治療用の医薬の製造における使用に関し、該治療は、ゲムシタビン、オキサリプラチン、ドセタキセル及びドキソルビシンから選択される細胞傷害性薬物を、同時、連続的又は別個に対象に投与することを含む。
【００４９】
別の態様は、増殖性障害の治療用の医薬の製造における、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物の使用に関し、該医薬は、ＣＹＣ６８２又はその代謝物との併用療法用である。ある好ましい実施形態において、療法は前処置療法であり得る。
【００５０】
ある特に好ましい実施形態は、ゲムシタビン、オキサリプラチン、ドセタキセル及びドキソルビシンから選択される細胞傷害性薬物の、増殖性障害の治療用の医薬の製造における使用に関し、該医薬は、ＣＹＣ６８２又はその代謝物との併用療法用である。ある好ましい実施形態において、療法は前処置療法であり得る。
【００５１】
別の態様は、ＣＹＣ６８２又はその代謝物の、増殖性障害の治療用の医薬の製造における使用に関し、該医薬は、（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物との併用療法用である。ある好ましい実施形態において、療法は前処置療法であり得る。
【００５２】
ある特に好ましい実施形態は、ＣＹＣ６８２又はその代謝物の、増殖性障害の治療用の医薬の製造における使用に関し、該医薬は、ゲムシタビン、オキサリプラチン、ドセタキセル及びドキソルビシンから選択される細胞傷害性薬物との併用療法用である。ここでまた、ある非常に好ましい実施形態において、療法は前処置療法であり得る。
【００５３】
本明細書で用いる場合、用語「併用療法」は、細胞傷害性薬物とＣＹＣ６８２（又はその代謝物）とが、同時でなければ、それらが同じ時間枠内で治療的に働くようにともに利用可能になるような時間枠内で連続的に投与される療法のことである。
【００５４】
本明細書で用いる場合、用語「前処置療法」又は「前処置された」は、第１の作用物質が、別個又は連続的のいずれかで、第２の作用物質の前に投与される計画を意味する。好ましくは、第２の作用物質は、第１の作用物質の投与の少なくとも２時間後に投与される。より好ましくは、第２の作用物質は、第１の作用物質の投与の少なくとも４時間後、より好ましくは少なくとも６又は８時間後に投与される。さらにより好ましくは、第２の作用物質は、第１の作用物質の投与の少なくとも１２時間後、より好ましくは少なくとも１８又は２４時間後に投与される。
【００５５】
好ましくは、ＣＹＣ６８２又はその代謝物と細胞傷害性薬物とは、相乗相互作用する。本明細書で用いる場合、用語「相乗的」は、ＣＹＣ６８２と細胞傷害性薬物とが、組合せで用いた場合に、２つの成分の個別の効果を加えることから予測されるよりも大きい効果を生み出すことを意味する。有利には、相乗的相互作用は、患者に各成分をより少ない用量で投与し、それにより、同じ治療効果を奏し及び／又は維持しながら化学療法の毒性を低減させることを可能にし得る。つまり、特に好ましい実施形態において、各成分は治療量未満で投与され得る。
【００５６】
別の好ましい実施形態において、ＣＹＣ６８２又はその代謝物と細胞傷害性薬物とは、単一療法での個別の成分の使用に関連するか又は既知の組合せにおけるそれらの使用に関連する有害副作用を緩和又は排除するような様式で相互作用する。
【００５７】
本発明のある好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物は、アントラサイクリンである。このクラスの化合物は、ダウノルビシン（セルビジン（Cerubidine））、ドキソルビシン（アドリアマイシン（Adriamycin）、ルベックス（Rubex））、エピルビシン（エレンス（Ellence）、ファーモルビシン（Pharmorubicin））、及びイダルビシン（イダマイシン（Idamycin））を含む。
【００５８】
アントラサイクリン抗生物質は、１９３９年に微生物から最初に単離され、それらの抗生特性は１９５０年代に研究された。これらの抗生物質は、細菌をかなり迅速に死滅させるが、ヒトでの感染を治療するには毒性が強すぎた。アントラサイクリン抗生物質の抗腫瘍特性が試験され、癌細胞に対して活性であることが見出されたのは、１９６０年代になってからであった。
【００５９】
アントラサイクリン類は、全て、ＤＮＡに結合し、それらの細胞毒性は、この結合に大きく起因する。より具体的には、これらは二本鎖ＤＮＡに結合する。アントラサイクリン類で処置したヒト染色体調製物において、結合した薬物は、明確に区別されたオレンジ−赤色の蛍光のバンドとして観察される。ＤＮＡとのこの相互作用が、インターカレーションによるものであり、いくつかの方法によりそうであると同定されている。アントラサイクリン類の構造を、ＤＮＡへの結合を変更するように改変すると、抗腫瘍活性が通常、低下又は喪失する。つまり、ＤＮＡ結合が、これらの薬物の抗癌活性に必須であるようである。しかし、細胞傷害性に導く経路は、明確には明らかにされていない。ＤＮＡ及びＲＮＡ合成の阻害は、これが薬物の高濃度でしか発生しないことから、細胞傷害性に必須であるとは考えられていない。
【００６０】
アントラサイクリン類は、いくつかの重要な効果を有し、その任意の１つ又は全ては、これらの薬物の細胞傷害性作用において役割を有する。まず、これらはＤＮＡにインターカレートすることにより、ＤＮＡ及びＲＮＡ合成を含むＤＮＡの多くの機能に影響を与え得る。ＤＮＡ鎖の切断も発生し得る。これは、酵素ＤＮＡトポイソメラーゼII又はフリーラジカルの形成のいずれかにより媒介されると考えられている。酵素トポイソメラーゼIIの阻害は、例えば、ＤＮＡの二本鎖切断を導く一連の反応を導き得る。
【００６１】
一時的な二本鎖切断は、トポイソメラーゼIIにより、その正常な触媒サイクルの経過において、切断複合体の形成により誘発される。永久的な二本鎖切断をもたらすこの複合体の破壊は、薬物の非存在下ではまれにしか発生しない。トポイソメラーゼIIの阻害剤は、切断複合体を持続させ、それにより切断複合体が不可逆的な二本鎖切断に変換される可能性を増加させる。
【００６２】
アントラサイクリン類も、活性酸素種の形成を引き起こすことができ、これが次いで一本鎖切断を主に引き起こす。アントラサイクリン発色団はヒドロキシキノンを含有し、これはよく知られた鉄キレート形成構造である。薬物−Ｆｅ−ＤＮＡ複合体は、グルタチオンから酸素への電子の移動を触媒し、活性酸素種の形成をもたらす。
【００６３】
本発明のある非常に好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物はドキソルビシンである。ドキソルビシンは、化合物（８Ｓ−シス）−８−アセチル−１０−［（３−アミノ−２，３，６−トリデオキシ−アルファ−Ｌ−リキソ−ヘキソピラノシル）オキシ］７，８，９，１０−テトラヒドロ−６，８，１１−トリヒドロキシ−１−メトキシ−５，１２−ナフタセンジオン、又は（８Ｓ，１０Ｓ）−１０−（４−アミノ−５−ヒドロキシ−６−メチル−テトラヒドロ−２Ｈ−ピラン−２−イルオキシ）−６，８，１１−トリヒドロキシ−８−（２−ヒドロキシアセチル）−１−メトキシ−７，８，９，１０−テトラヒドロテトラセン−５，１２−ジオンである。
【００６４】
好ましくは、細胞傷害性薬物がドキソルビシンである場合、細胞傷害性薬物とＣＹＣ６８２（又はその代謝物）は、別個に又は連続的に、より好ましくは連続的に投与される。
【００６５】
ある特に好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物がドキソルビシンである場合、ＣＹＣ６８２（又はその代謝物）は、細胞傷害性薬物の前に投与され、すなわち、好ましくは、対象はＣＹＣ６８２で前処置される。
【００６６】
別の特に好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物がドキソルビシンである場合、ドキソルビシンは、ＣＹＣ６８２（又はその代謝物）の前に投与され、すなわち、好ましくは、対象はドキソルビシンで前処置される。
【００６７】
ある好ましい実施形態において、本発明の組合せは、ＣＮＤＡＣ（ＣＹＣ６８２の代謝物として）と、細胞傷害性薬物としてのドキソルビシンとを含む。好ましくは、この実施形態について、ドキソルビシンは、ＣＮＤＡＣの前に又はＣＮＤＡＣと同時に投与される。
【００６８】
本発明の別の好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物は、シスプラチン、カルボプラチン又はオキサリプラチンのような白金抗腫瘍薬である。
【００６９】
ある非常に好ましい実施形態において、白金抗腫瘍薬はオキサリプラチンである。
【００７０】
オキサリプラチンは、オキサレート及びジアミノシクロヘキサン（ＤＡＣＨ、diaminocyclohexane）と錯体形成した白金原子を含有する細胞傷害性薬物である。嵩高いＤＡＣＨが、シスプラチン及びカルボプラチンよりも大きい細胞傷害性に貢献すると考えられている（Wiseman LR, Adkins JC, Plosker GL, et al. Oxaliplatin: a review of its use in the management of metastatic colorectal cancer. Drugs Aging 1999;14(6):459-75）。オキサリプラチンの作用は、細胞周期相に特異的でないことが知られているが、その正確な機構は知られていない。オキサリプラチンは、おそらくＤＮＡ分子の鎖間及び鎖内架橋を形成することによりＤＮＡ合成を阻害すると考えられている反応性白金錯体を形成する。オキサリプラチンは、ＤＡＣＨ基及びＤＮＡミスマッチ修復への耐性のために、シスプラチン又はカルボプラチンに対して、通常、交差耐性ではない（Wiseman LR et al, ibid; Misset JL, Bleiberg H, Sutherland W, et al, Oxaliplatin Clinical Activity: A Review; Critical Reviews in Oncology-Hematology 2000;35(2):75-93）。臨床前研究により、オキサリプラチンがフルオロウラシル及びイリノテカンの活性代謝物であるＳＮ−３８と相乗作用を有することが示されている（Cvitkovic E, Bekradda M. Oxaliplatin: A New Therapeutic Option in Colorectal Cancer; Semin Oncol 1999;26(6):647-62）。オキサリプラチンは、放射線増感剤でもある（Freyer G, Bossard N, Romestaing P, et al, Oxaliplatin (OXA), 5-fluorouracil (5FU), L-folinic acid (FA) and concomitant irradiation in patients with rectal cancer: A phase 1 study; Proc Am Soc Clin Oncol 2000; 19 :260a; Carraro S, Roca E, Cartelli C, et al, Oxaliplatin (OXA), 5-fluorouracil (5-Fu) and leucovorin (LV) plus radiotherapy in unresectable rectal cancer (URC): Preliminary results; Proc Am Soc Clin Oncol 2000;19:291a）。
【００７１】
オキサリプラチンは、原発腫瘍の完全切除後の第III期（デュークのＣ期）結腸癌の合併治療、及び転移性結腸直腸癌の治療における５−フルオロウラシル（５−ＦＵ、5-fluorouracil）及びホリニン酸（ＦＡ、folinic acid）との併用における使用が承認されている。
【００７２】
好ましくは、細胞傷害性薬物がオキサリプラチンである場合、細胞傷害性薬物及びＣＹＣ６８２（又はその代謝物）は、別個又は連続的に、より好ましくは連続的に投与される。
【００７３】
ある特に好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物がオキサリプラチンである場合、ＣＹＣ６８２（又はその代謝物）は、細胞傷害性薬物の前に投与され、すなわち、好ましくは、対象はＣＹＣ６８２で前処置される。
【００７４】
別の特に好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物がオキサリプラチンである場合、細胞傷害性薬物は、ＣＹＣ６８２（又はその代謝物）の前に投与され、すなわち、好ましくは、対象はオキサリプラチンで前処置される。
【００７５】
別の特に好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物はシスプラチンである。
【００７６】
一般的にはシスプラチン又はシス−ＤＤＰと呼ばれる化合物シス−ジアミンジクロロ白金（II）は、特に精巣癌の治療において、病院で広く用いられる既知の抗癌剤である。分子構造は比較的単純であり、中央の白金原子の周囲に正方晶系（正方形）の平面構造を形成する、シス位に配置された２つの塩素配位子と２つのＮＨ３配位子とからなる。シスプラチンは、電気的中性の４配位白金錯体として存在する。しかし、２水和（活性）の形がＤＮＡへの結合を促進することが、研究により示されている。
【００７７】
シスプラチンは、通常、滅菌塩水溶液として血流中に静脈内投与される。血流中の高い塩素濃度のために、薬物はその中性の形で無傷のままである。そして、これが拡散により細胞内に入ると、ここで細胞内のより低い塩素濃度の結果として加水分解を受ける。加水分解により、中性の分子は、両方の塩素配位子が水分子に置換された活性加水分解錯体に変換されて、正電荷種を発生する。活性形は、ＤＮＡ塩基対との求核置換を受け得る二官能性求電子物質である。
【００７８】
シスプラチンは、二官能性アルキル化剤のものと同様の生化学的特性を有し、ＤＮＡ内で鎖間、鎖内及び単官能性付加物架橋を生じる。最も一般的な形は、１，２−鎖間架橋である。この付加物において、白金は近接したプリン塩基のＮ７位に共有結合する。その結果、ＤＮＡは巻き戻され、主溝に向かって曲がる。他の白金−ＤＮＡ付加物は、単官能性及び１，３−及びより長い範囲の鎖内、鎖間並びにタンパク質−ＤＮＡの架橋を含む。
【００７９】
グアニンはシトシンと３つの水素結合部位を提供することにより、アデニンとチミンとの間に発生し得る２つの水素結合に比較してより大きい安定性を導くので、ほとんどの付加物がグアニン残基を含むことが研究により示されている。シスプラチン−ＤＮＡ付加物の形成が、ＤＮＡ構造をひずませ、これが次に複製及び転写の破壊を導く。さらに、シスプラチン−ＤＮＡ付加物の形成は、細胞がそれら自体を修復する能力を、タンパク質修復を遮断若しくは遅延させることによるか、又はヌクレオチド除去修復（ＮＥＲ、nucleotide excision repair）タンパク質、特にＸＰＡの機能を負に変更することのいずれかにより破壊する。
【００８０】
シスプラチンは、転移性の非セミノーム性胚細胞癌、進行期及び不応性卵巣癌、肺癌、子宮頸癌、進行期及び不応性膀胱癌、並びに頭頚部の扁平上皮癌の治療における使用について承認されている。シスプラチンは、転移性精巣癌の治療のために別の抗腫瘍薬との組合せでも用いられる。シスプラチン、ビンブラスチン及びブレオマイシンの組合せは、非常に有効であると報告されている。
【００８１】
ある好ましい実施形態において、組合せは、ＣＮＤＡＣ（ＣＹＣ６８２の代謝物として）とシスプラチンとを含む。好ましくは、この実施形態について、シスプラチンは、ＣＮＤＡＣと同時に又はＣＮＤＡＣの前に投与される。より好ましくは、シスプラチンは、ＣＮＤＡＣの前に投与される。
【００８２】
ある好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物は、タキサンである。タキサンは、タキサス属（Taxus）（イチイ）の植物に由来するアルカロイドの種類である。タキサン種の基本的な機構は、微小管機能の阻害であり、これが次に細胞分裂を阻害する。タキサン系統群のメンバーは、ドセタキセル及びタキソールを含む。
【００８３】
ある好ましい実施形態において、本発明の組合せは、ＣＮＤＡＣ（ＣＹＣ６８２の代謝物として）と細胞傷害性薬物としてのシスプラチンとを含む。好ましくは、この実施形態について、シスプラチンは、ＣＮＤＡＣの前に又はＣＮＤＡＣと同時に投与される。
【００８４】
本発明のある非常に好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物はドセタキセルである。
【００８５】
ドセタキセルは、セイヨウイチイの樹木（タキサス・バッカータ（Taxus baccata））の再生可能な針状葉からの半合成により調製されるタキサン系統群の抗癌剤である。ドセタキセルは、病院で広く用いられて、局所進行又は転移性の乳癌、局所進行又は転移性の非小細胞肺癌、及びホルモン不応性前立腺癌を含むいくつかの癌を治療する。作用の機構は、細胞分裂において必須の役割を演じる微小管網の破壊に基づく。より最近の研究は、非小細胞肺癌単独の１次治療、又は頭頚部癌、乳癌、胃癌、前立腺癌及び卵巣癌の組合せでのドセタキセルの使用に焦点を当てている。
【００８６】
好ましくは、細胞傷害性薬物がドセタキセルである場合、細胞傷害性薬物とＣＹＣ６８２（又はその代謝物）は、別個に又は連続的に、より好ましくは連続的に投与される。
【００８７】
ある特に好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物がドセタキセルである場合、細胞傷害性薬物は、ＣＹＣ６８２（又はその代謝物）の前に投与され、すなわち、好ましくは、対象はドセタキセルで前処置される。
【００８８】
別の好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物はビンカアルカロイドである。
【００８９】
ビンカアルカロイドは、ツルニチニチソウ植物であるカタランサス・ロゼウス（Catharanthus roseus）（ビンカ・ロゼア（Vinca rosea）、ロクネラ・ロゼア（Lochnera rosea）及びアンモカリス・ロゼア（Ammocallis rosea）とも呼ばれる）由来のインドール−インドリン二量体の群である。これらは、チューブリンの微小管への重合を阻害することにより、紡錘体の形成を遮断し、中期で細胞を停止させることが知られている。ビンカアルカロイドは、ビンブラスチン、ビンカミン、ビノレルビン、ビンクリスチン、ビンデシン及びビンポセチンを含む。
【００９０】
ある非常に好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物はビノレルビンである。
【００９１】
ビノレルビンは、第３又は４期の非小細胞肺癌の１次治療のため、及びアントラサイクリンを含む計画の後に再発したか又はアントラサイクリンを含む計画に不応性の進行性乳癌第３若しくは４期の治療における単一剤又は組合せとして使用が認可されている。
【００９２】
ある好ましい実施形態において、本発明の組合せは、ＣＮＤＡＣ（ＣＹＣ６８２の代謝物として）と細胞傷害性薬物としてのビノレルビンとを含む。この実施形態について、ビノレルビンは、ＣＮＤＡＣの前、又は同時に、又は後に投与してよい。
【００９３】
本発明のある非常に好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物はシトシン類縁体である。
【００９４】
シトシンは、ＲＮＡ及びＤＮＡに存在するピリミジンに由来する窒素含有塩基である。より具体的には、シトシンは、以下に示す構造を有する４−アミノピリミジン−２（１Ｈ）−オンとして知られる化合物である。
【００９５】
【化２】
2009515863.tif 000003
【００９６】
本明細書において用いる場合、用語「シトシン類縁体」は、化学修飾されたシトシンのことである。このような化学修飾の例は、ハロ基、アルキル基、糖若しくはその誘導体、アシル基又はアミノ基による水素の置換である。好ましくは、シトシンは、１位の窒素の糖又はその誘導体での置換により化学修飾される。
【００９７】
したがって、本発明の関係において、好ましいシトシン類縁体は、限定されないが、ゲムシタビン及びシタラビン（又はＡｒａ−Ｃ、シトシンアラビノシド、４−アミノ−１−［（２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ，５Ｒ）−３，４−ジヒドロキシ−５−（ヒドロキシメチル）オキソラン−２−イル］ピリミジン−２−オン）を含む。
【００９８】
【化３】
2009515863.tif 000004
ゲムシタビン          シタラビン
【００９９】
本発明のある非常に好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物はゲムシタビンである。ゲムシタビン、２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロシチジンは、特に卵巣癌、膵臓癌及び肺癌に対する抗腫瘍活性を示すヌクレオシド類縁体である。
【０１００】
ゲムシタビンは、細胞周期特異性を示し、ＤＮＡ合成を受ける細胞（Ｓ期）を主に死滅させ、且つＧ１／Ｓ期の境界を通る細胞の進行を遮断する。ゲムシタビンは、ヌクレオシドキナーゼにより、活性ジホスフェート（ｄＦｄＣＤＰ）ヌクレオシド及びトリホスフェート（ｄＦｄＣＴＰ）ヌクレオシドに細胞内で代謝される。ゲムシタビンの細胞傷害性効果は、ジホスフェートヌクレオシド及びトリホスフェートヌクレオシドの組み合わされた作用の結果としてのＤＮＡ合成の阻害に帰することが可能である。より具体的には、ゲムシタビンジホスフェートは、ＤＮＡ合成のためのデオキシヌクレオシドトリホスフェートを生じる反応の触媒を担うリボヌクレオチドレダクターゼを阻害する。ジホスフェートヌクレオシドによるこの酵素の阻害は、例えばｄＣＴＰのようなデオキシヌクレオチド濃度の低下の原因となる。さらに、ゲムシタビントリホスフェートは、ＤＮＡへの取り込みについてｄＣＴＰと競合する。ｄＣＴＰの細胞内濃度のその後の低下は、ＤＮＡへのゲムシタビントリホスフェートの取り込みを増進させる（自己強化）。ゲムシタビンヌクレオチドがＤＮＡに一旦取り込まれると、成長するＤＮＡ鎖にさらに１つのヌクレオチドしか付加できず、その後、さらなるＤＮＡ合成の阻害はない。ＤＮＡポリメラーゼは、ゲムシタビンヌクレオチドを除去して、成長するＤＮＡ鎖を修復できない（マスクされた連鎖停止）。ＣＥＭ  Ｔリンパ芽球細胞において、ゲムシタビンは、プログラムされた細胞死の特徴であるヌクレオソーム間ＤＮＡ断片化を誘発する。
【０１０１】
ある特に好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物はゲムシタビンであり、細胞傷害性薬物及びＣＹＣ６８２は同時に投与される。
【０１０２】
別の特に好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物はゲムシタビンであり、細胞傷害性薬物及びＣＹＣ６８２は、別個又は連続的に、より好ましくは連続的に投与される。より好ましくは、ＣＹＣ６８２はゲムシタビンの前に投与され、すなわち、好ましくは、対象はＣＹＣ６８２で前処置される。
【０１０３】
ある好ましい実施形態において、本発明の組合せは、ＣＮＤＡＣ（ＣＹＣ６８２の代謝物として）と、細胞傷害性薬物としてのゲムシタビンとを含む。好ましくは、この実施形態について、ゲムシタビンはＣＮＤＡＣと同時に投与される。
【０１０４】
増殖性障害
用語「増殖性障害」は、本明細書において、細胞周期の制御を必要とする任意の障害、例えば再狭窄及び心筋症のような心血管障害、糸球体腎炎及び関節リウマチのような自己免疫障害、乾癬のような皮膚障害、マラリアのような抗炎症性、抗真菌、抗寄生虫障害、気腫並びに脱毛症を含む広い意味で用いられる。これらの疾患において、本発明の化合物は、所望により望ましい細胞内でアポトーシスを誘導するか又は静止を維持し得る。
【０１０５】
上記の全ての態様及び実施形態において、好ましくは、増殖性障害は癌、より好ましくは結腸癌である。
【０１０６】
別の好ましい実施形態において、癌は、肺癌、より好ましくは非小細胞肺癌である。
【０１０７】
ある好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物がゲムシタビンである場合、増殖性障害は、肺癌、乳癌、膀胱癌又は膵臓癌である。
【０１０８】
別の実施形態において、細胞傷害性薬物がオキサリプラチンである場合、増殖性障害は、結腸直腸癌である。
【０１０９】
さらに別の好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物がドキソルビシンである場合、増殖性障害は、乳癌、前立腺癌又は血液の癌である。
【０１１０】
さらに別の好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物がドセタキセルである場合、増殖性障害は、乳癌、肺癌又は前立腺癌である。
【０１１１】
さらに別の好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物がシスプラチンである場合、増殖性障害は、卵巣癌、肺癌、子宮頸癌、精巣癌、膀胱癌又は頭頚部の扁平上皮癌である。
【０１１２】
さらに別の好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物がビノレルビンである場合、増殖性障害は、乳癌又は肺癌である。より好ましくは、増殖性障害は非小細胞肺癌である。
【０１１３】
医薬組成物
特に好ましい実施形態において、本発明の医薬品は、薬学的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む医薬組成物の形である。
【０１１４】
本発明の化合物（それらの薬学的に許容される塩、エステル及び薬学的に許容される溶媒和物を含む）は単独で投与され得るが、これらは、通常、特にヒトの治療のために、薬学的な担体、賦形剤又は希釈剤と混合して投与される。医薬組成物は、ヒト及び動物用の医薬におけるヒト又は動物用であってよい。
【０１１５】
本明細書に記載される医薬組成物の種々の異なる形のための適切な賦形剤の例は、“Handbook of Pharmaceutical Excipients", 2nd "Edition, (1994), Edited by A Wade and PJ Wellerに見出し得る。
【０１１６】
治療用の許容される担体又は希釈剤は、製薬技術において公知であり、例えばRemington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Co. (A. R. Gennaro edit. 1985)に記載されている。
【０１１７】
適切な担体の例は、乳糖、デンプン、ブドウ糖、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、マンニトール、ソルビトールなどを含む。適切な希釈剤の例は、エタノール、グリセロール及び水を含む。
【０１１８】
薬学的な担体、賦形剤又は希釈剤の選択は、意図する投与経路及び標準的な薬学のプラクティスに関して選択され得る。医薬組成物は、担体、賦形剤若しくは希釈剤として、又はこれらに加えて、任意の適切な結合剤、滑沢剤、懸濁化剤、被覆剤、可溶化剤を含み得る。
【０１１９】
適切な結合剤の例は、デンプン、ゼラチン、ブドウ糖、無水乳糖、流動性乳糖、ベータ−乳糖、トウモロコシ製甘味料のような天然の糖、アカシア、トラガカント又はアルギン酸ナトリウムのような天然及び合成のガム、カルボキシメチルセルロース並びにポリエチレングリコールを含む。
【０１２０】
適切な滑沢剤の例は、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどを含む。
【０１２１】
防腐剤、安定化剤、着色料及び香料でさえも、医薬組成物に加えてよい。防腐剤の例は、安息香酸ナトリウム、ソルビン酸及びｐ−ヒドロキシ安息香酸のエステルを含む。抗酸化剤及び懸濁化剤も用いてよい。
【０１２２】
塩／エステル
本発明の作用物質は、塩又はエステル、特に薬学的に許容される塩又はエステルとして存在し得る。
【０１２３】
本発明の作用物質の薬学的に許容される塩は、その適切な酸付加塩又は塩基性塩を含む。適切な薬学的な塩の総説は、Berge et al, J Pharm Sci, 66, 1-19 (1977)に見出し得る。塩は、例えば、鉱酸、例えば硫酸、リン酸又はハロゲン化水素酸のような無機強酸；酢酸のような非置換又は置換（例えばハロゲンにより）の炭素原子数１〜４のアルカンカルボン酸のような有機強カルボン酸；例えばシュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、フタル酸若しくはテトラフタル酸のような飽和又は不飽和のジカルボン酸；例えばアスコルビン酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸又はクエン酸のようなヒドロキシカルボン酸；例えばアスパラギン酸又はグルタミン酸のようなアミノ酸；安息香酸；或いはメタンスルホン酸若しくはｐ−トルエンスルホン酸のような非置換又は置換（例えばハロゲンにより）の（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル又はアリール−スルホン酸のような有機スルホン酸と形成される。
【０１２４】
エステルは、エステル化される官能基に応じて、有機酸又はアルコール／水酸化物のいずれかを用いて形成される。有機酸は、カルボン酸、例えば、酢酸のような非置換又は置換（例えばハロゲンにより）の炭素原子数１〜１２のアルカンカルボン酸；例えばシュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、フタル酸若しくはテトラフタル酸のような飽和又は不飽和のジカルボン酸；例えばアスコルビン酸、グリコール酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸又はクエン酸のようなヒドロキシカルボン酸；例えばアスパラギン酸又はグルタミン酸のようなアミノ酸；安息香酸；或いはメタンスルホン酸若しくはｐ−トルエンスルホン酸のような非置換又は置換（例えばハロゲンにより）の（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル又はアリール−スルホン酸のような有機スルホン酸を含む。適切な水酸化物は、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化カルシウム、水酸化アルミニウムのような無機水酸化物を含む。アルコールは、非置換又は置換（例えばハロゲンにより）されていてよい炭素原子数１〜１２のアルカンアルコールを含む。
【０１２５】
鏡像異性体／互変異性体
本発明は、適切であれば、上記の作用物質の全ての鏡像異性体及び互変異性体も含む。当業者は、光学的特性（１又は複数のキラル炭素原子）又は互変異性の特徴を有する化合物を認識するだろう。対応する鏡像異性体及び／又は互変異性体は、当該技術において知られる方法により単離／調製してよい。
【０１２６】
立体異性体及び幾何異性体
本発明の作用物質のいくつかは、立体異性体及び／又は幾何異性体として存在してよい。例えば、これらは、１又は複数の非対称中心及び／又は幾何中心を有してよく、よって、２以上の立体異性及び／又は幾何異性の形で存在してよい。本発明は、これらの阻害物質の全ての個別の立体異性体及び幾何異性体並びにそれらの混合物の使用を意図する。請求項で用いる用語は、これらの形を包含するが、但し、これらの形が適切な機能的活性を保持する（同程度を必要としないが）ことを条件とする。
【０１２７】
本発明は、上記の作用物質又はそれらの薬学的に許容される塩の全ての適切な同位体変形も含む。本発明の作用物質又はそれらの薬学的に許容される塩の同位体変形は、少なくとも１つの原子が、同じ原子番号を有するが、天然で通常見出される原子質量と異なる原子質量を有する原子で置き換えられているものと定義される。作用物質及びその薬学的に許容される塩に取り込まれ得る同位体の例は、それぞれ２Ｈ、３Ｈ、１３Ｃ、１４Ｃ、１５Ｎ、１７Ｏ、１８Ｏ、３１Ｐ、３２Ｐ、３５Ｓ、１８Ｆ及び３６Ｃｌのような水素、炭素、窒素、酸素、リン、硫黄、フッ素及び塩素の同位体を含む。作用物質及びそれらの薬学的に許容される塩のある同位体変形、例えば３Ｈ又は１４Ｃのような放射活性同位体が取り込まれたものは、薬物及び／又は基質の組織分布研究に有用である。トリチウム化された、すなわち３Ｈ及びカーボン１４、すなわち１４Ｃ同位体は、それらの調製及び検出が容易であるために特に好ましい。さらに、重水素、すなわち２Ｈのような同位体での置換は、より大きい代謝安定性、例えば増加したインビボ半減期又は減少した用量要求性による、ある程度の治療上の利点を与え得るので、ある状況において好ましい場合がある。本発明の作用物質及びそれらの本発明の薬学的に許容される塩の同位体変形は、適切な試薬の適切な同位体変形を用いる通常の方法により一般に調製できる。
【０１２８】
溶媒和物
本発明は、本発明の作用物質の溶媒和物の形も含む。請求項で用いられる用語は、これらの形を包含する。
【０１２９】
多形
本発明は、さらに、その種々の結晶形、多形及び（無）水和物の形の本発明の作用物質に関する。化合物を、このような化合物の合成に用いる溶媒からの精製及び／又は単離の方法をわずかに変更することにより任意のこのような形で単離し得ることは、製薬工業においてよく確立されている。
【０１３０】
プロドラッグ
本発明は、さらに、プロドラッグの形の本発明の作用物質を含む。このようなプロドラッグは、一般に、１又は複数の適切な基が、ヒト又は哺乳動物の対象に投与される際に修飾が復元し得るように修飾されている化合物である。インビボで復元を行うためにこのようなプロドラッグとともに第２の作用物質を投与することも可能であるが、このような復元は、このような対象に天然に存在する酵素により通常行われる。このような修飾の例は、復元がエステラーゼなどにより行われ得るエステル（例えば上記の任意のもの）を含む。このような他の系は、当業者に公知である。
【０１３１】
投与
本発明の医薬組成物は、経口、直腸、経膣、非経口、筋内、腹腔内、動脈内、鞘内、気管支内、皮下、皮内、静脈内、経鼻、頬側又は舌下の投与経路用に適合されてよい。
【０１３２】
経口投与のために、圧縮錠剤、丸剤、錠剤、ゲル剤（gellules）、滴剤及びカプセル剤が特に用いられる。好ましくは、これらの組成物は、用量当たり１〜２０００ｍｇ、より好ましくは５０〜１０００ｍｇの活性成分を含有する。
【０１３３】
投与の他の形は、静脈内、動脈内、鞘内、皮下、皮内、腹腔内又は筋内に注入され得、且つ滅菌若しくは滅菌可能な溶液から調製される液剤又はエマルジョンを含む。本発明の医薬組成物は、坐剤、膣坐剤、懸濁剤、エマルジョン、ローション剤、軟膏、クリーム、ゲル、噴霧剤、液剤又は散粉剤の形であってもよい。
【０１３４】
経皮投与の別の手段は、皮膚貼布の使用による。例えば、活性成分を、ポリエチレングリコール又は流動パラフィンの水性エマルジョンからなるクリームに混合し得る。活性成分は、１〜１０重量％の濃度で、白ろう又は白色軟ワセリン基剤と所望により安定剤及び防腐剤とからなる軟膏にも混合できる。
【０１３５】
注射可能な形は、用量当たり１０〜１０００ｍｇ、好ましくは１０〜５００ｍｇの活性成分を含有してよい。
【０１３６】
組成物は、単位剤形、すなわち単位用量を含有する別個の部分、又は単位用量の複数若しくは単位未満の形で処方されてよい。
【０１３７】
特に好ましい実施形態において、本発明の組合せ又は医薬組成物は、静脈内投与される。
【０１３８】
投与量
当業者は、過度の実験を行わずに、対象に投与する本発明の組成物の１つの適切な用量を容易に決定できる。典型的には、医師は、個別の患者に最も適するであろう実際の投与量を決定し、それは、用いる具体的な化合物の活性、その化合物の代謝安定性及び作用の長さ、年齢、体重、全身の健康、性別、食餌、投与の形態及び時間、排泄速度、併用薬剤、具体的な状態の重篤度、並びに個人が受けている治療を含む種々の因子に依存する。本明細書に開示される投与量は、平均的な場合の例である。より高い又はより低い投与量範囲が正当である個別の場合がもちろんあり得、これらも本発明の範囲内である。
【０１３９】
必要に応じて、作用物質は、２〜２０ｍｇ／ｋｇのような０．１〜３０ｍｇ／ｋｇ体重、より好ましくは０．１〜１ｍｇ／ｋｇ体重の用量で投与してよい。
【０１４０】
手引きとして、細胞傷害性薬物は、典型的に、該細胞傷害性薬物についての承認された投与量の間の投与量で医師に指示に従って投与される。該投与量は、製造業者から得ることができる各作用物質についての製品の特性のまとめ又は例えばwww.emea.eu.int/htms/human/epar/a-zepar.htmのような文献から入手可能である。
【０１４１】
手引きとして、ＣＹＣ６８２は、ヒトの成人患者について０．０５〜５ｇの投与量で医師の指示に従って典型的に投与される。好ましくは、該投与量は、経口で、１〜１２０ｍｇ／ｍ２体表面である。用量は、１週間に５日間で４週間、又は１週間に３日間で４週間与え得る。投与量及び投与頻度は、患者の全身の医療状態、及び引き起こされる有害事象の重篤度、特に造血、肝臓及び腎臓系に引き起こされるものに典型的に適合される。ＣＹＣ６８２の合計１日用量は、単一用量として投与され得るか、又は別々の投与量に分けて、好ましくは１日当たり２、３若しくは４回投与され得る。
【０１４２】
好ましくは、細胞傷害性薬物は、ＣＹＣ６８２又はその代謝物の投与の少なくとも２時間前に投与される。より好ましくは、細胞傷害性薬物は、ＣＹＣ６８２又はその代謝物の投与の少なくとも４時間、より好ましくは少なくとも６又は８時間前に投与される。さらにより好ましくは、細胞傷害性薬物は、ＣＹＣ６８２又はその代謝物の投与の少なくとも１２時間、より好ましくは少なくとも１８又は２４時間前に投与される。
【０１４３】
別の好ましい実施形態において、細胞傷害性薬物は、ＣＹＣ６８２又はその代謝物の投与の少なくとも２時間後に投与される。より好ましくは、細胞傷害性薬物は、ＣＹＣ６８２又はその代謝物の投与の少なくとも４時間、より好ましくは少なくとも６又は８時間後に投与される。さらにより好ましくは、細胞傷害性薬物は、ＣＹＣ６８２又はその代謝物の投与の少なくとも１２時間、より好ましくは少なくとも１８〜２４時間後に投与される。
【０１４４】
キットオブパーツ（kit of parts）
本発明のさらなる態様は、
（ｉ）薬学的に許容される希釈剤、賦形剤又は担体と混合されていてもよい２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン又はその代謝物と、
（ii）薬学的に許容される希釈剤、賦形剤又は担体と混合されていてもよい（ａ）ビンカアルカロイド、（ｂ）タキサン、（ｃ）シトシン類縁体、（ｄ）アントラサイクリン及び（ｅ）白金抗腫瘍薬から選択される細胞傷害性薬物と
を含むキットオブパーツに関する。
【０１４５】
本発明のある特に好ましい実施形態は、
（ｉ）薬学的に許容される希釈剤、賦形剤又は担体と混合されていてもよい２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン又はその代謝物と、
（ii）薬学的に許容される希釈剤、賦形剤又は担体と混合されていてもよいゲムシタビン、オキサリプラチン、ドセタキセル及びドキソルビシンから選択される細胞傷害性薬物と
を含むキットオブパーツに関する。
【０１４６】
好ましくは、２’−シアノ−２’−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−β−Ｄ−アラビノフラノシル−シトシン又はその代謝物及び細胞傷害性薬物は、それぞれ単位剤形にある。好ましくは、キットオブパーツは、各成分、すなわち上記の成分（ｉ）及び（ii）の単位剤形の複数を含有する。
【０１４７】
所望により、キットオブパーツは、具体的な投与計画、例えば、いつ、どのように、そしてどのような頻度で各成分の単位剤形を摂取すべきかを示す指示を含む服薬遵守を促進するための手段をさらに含んでいてもよい。
【０１４８】
本発明は、実施例により及び以下の図面を参照してさらに説明される。
［実施例］
【０１４９】
材料及び方法
ドキソルビシン及び組織培養試薬は、Sigma Aldrich社により供給される。ＣＹＣ６８２は、Cyclacel Ltd.社（英国、ダンディー）により供給された。ドセタキソール（Taxotere（登録商標）、Aventis社製）を臨床製剤として用いた。ゲムシタビンは、Lilly社により供給された。オキサリプラチンは、Sanofi社により供給された。シスプラチン及びビノレルビンは、Sigma Aldrich社から得た。
【０１５０】
ＣＹＣ６８２の調製（ＥＰ５３６９３６に従う）
ＣＹＣ６８２は、Sankyo Company Limited社のＥＰ５３６９３６の実施例１及び２に記載される方法に従って調製した。
【０１５１】
株化細胞
全ての株化細胞は、ＡＴＣＣ（メリーランド州ロックヴィル）から得た。細胞を、１０％胎児ウシ血清（Invitrogen社製、フランス、セルジー−ポントアーズ）、２ｍＭグルタミン、１００単位／ｍｌペニシリン及び１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを補ったＲＰＭＩ培地で単層として成長させた。全ての細胞を、トリプシン／ＥＤＴＡ（それぞれ０．２５％及び０．０２％；Invitrogen社製、フランス、セルジー−ポントアーズ）を用いて１週間に２回剥離し、２．５×１０４細胞／ｍｌの濃度で播種した。全ての株化細胞を、Stratagene社製のキット（カリフォルニア州ラホーヤ）を用いるＰＣＲによりマイコプラズマ（Mycoplasma）汚染について定期的に試験した。
【０１５２】
インビトロ成長阻害アッセイ（ＭＴＴアッセイ）
ＭＴＴアッセイは、以前に記載されたようにして行った（Hansen MB, Nielsen SE, Berg K. Re-examination and further development of a precise and rapid dye method for measuring cell growth/cell kill. J Immunol Methods. 1989 May 12;119(2):203-10）。簡単に、細胞を、９６ウェル組織培養プレートに２×１０３細胞／ウェルの密度で播種した。細胞生存率を、黄色の水溶性テトラゾリウムであるＭＴＴ（３−［４，５−ジメチルチアゾール−２−イル］−２，５−ジフェニルテトラゾリウムブロミド；Sigma社製、フランス、サンカンタンファラヴィエール）の、紫色で水不溶性のフォルマザンへの色の変換により、１２０時間のインキュベーションの後に決定した。この反応は、ミトコンドリアのデヒドロゲナーゼにより触媒され、生存細胞の相対数を評価するために用いられる（Mosmann, T, Rapid colorimetric assay for cellular growth and survival: application to proliferation and cytotoxicity assays. J Immunol Methods. 1983 Dec 16;65(l-2):55-63）。細胞を、０．４ｍｇ／ｍｌのＭＴＴと３７℃にて４時間インキュベートした。インキュベーションの後に、上清を捨て、細胞沈殿物を０．１ｍｌのＤＭＳＯに再懸濁し、吸光度を５６０ｎｍにてマイクロプレートリーダー（Dynatech社製、ミシガン）を用いて測定した。未処理の細胞又は細胞を含まない薬剤含有培地を含むウェルは、それぞれ陽性対照及び陰性対照として用いた。成長阻害曲線を、未処理の対照細胞の百分率としてプロットした。
【０１５３】
単一作用物質研究
細胞を、９６ウェルプレートに２×１０３細胞／ウェルで播種し、２４時間後に漸増濃度のＣＹＣ６８２で処理した。１時間、２４時間又は４８時間のインキュベーション時間の後に細胞を洗浄し、薬剤フリー培地で７２時間、後インキュベートした。次いで、成長阻害をＭＴＴアッセイにより決定した。
【０１５４】
ＣＹＣ６８２と他の薬物の同時曝露
同時の薬物曝露のために、細胞を、９６ウェルプレートに２×１０３細胞／ウェルで播種し、２４時間後に漸増濃度のＣＹＣ６８２単独、又はＩＣ２０、ＩＣ４０又はＩＣ６０値に対応する種々の濃度の別の薬物とともに処理した。倍化時間のほぼ４倍（１２０時間）の後に、成長阻害効果をＭＴＴアッセイにより測定した。
【０１５５】
ＣＹＣ６８２と他の薬物への連続的曝露
細胞を、９６ウェルプレートに２×１０３細胞／ウェルで播種し、２４時間成長させた。次いで、細胞を種々の濃度の第１薬物に１時間／２４時間／４８時間曝露し、薬物を除去し、細胞を洗浄し、第２薬物を加えた。さらなる薬物曝露の後に、第２薬物を除去し、細胞を洗浄し、薬剤フリー培地で７２時間インキュベートした。次いで、成長阻害をＭＴＴアッセイにより決定した。
【０１５６】
ＣＮＤＡＣ併用
ＮＳＣＬＣ株化細胞であるＨ１２９９又はＲＥＲＦ−ＬＣ−ＭＡでの実験を、１０％（ｖ／ｖ）ＦＣＳ含有ＤＭＥＭ中、３，０００／ウェルの密度で播種した細胞を含む９６ウェルプレートで行った。全ての薬物の貯蔵溶液は、０．９％（ｗ／ｖ）の滅菌塩水溶液に溶解したゲムシタビン以外はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中で作製した。
【０１５７】
可能性のある相乗相互作用の実験的評価のために、同時処置計画は、７２時間のＣＮＤＡＣと調査中の他の作用物質とで細胞を同時処置することと、それに並行して、個別の化合物単独で７２時間処置する細胞の適切な対照とを含んでいた。連続処置計画では、一方の薬物を、播種の２時間後に細胞に加え、２４時間放置した。次いで、培地を吸引し、第２薬物を含有する新鮮な培地に置き換えて、７２時間インキュベートした。連続処置計画のための２つの個別処置の対照では、薬物処置の一方を薬物フリー培地に置換することを含んでいた。薬物処置の後に、各ウェル中の細胞数を、１０％アラマーブルー（Roche社製、英国、イーストサセックス、ルイス）含有培地中で１時間インキュベートし、吸光度を４８８〜５９５ｎｍで測定することにより評価した。薬物相互作用は、以下に記載されるCalcusynソフトウェアパッケージ（BioSoft社製、英国、ケンブリッジ）を用いて分析した。１の併用指数（Ｃ．Ｉ．、Combination Index）は、相加的薬物相互作用を示すが、１より大きいＣ．Ｉ．はアンタゴニスト作用であり、１未満のスコアは相乗作用である。
【０１５８】
統計分析及び相乗活性の決定
薬剤併用の効果を、半有効原理に基づくＣｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙの方法を用いて評価した（Chou TC, Talalay P. Quantitative analysis of dose-effect relationships: the combined effects of multiple drugs or enzyme inhibitors. Adv Enzyme Regul. 1984;22:27-55）。これは、等式：ｆａ／ｆｕ＝（Ｃ／Ｃｍ）ｍ（式中、ｆａは薬物濃度Ｃにより影響される細胞画分であり（例えば細胞成長が９０％阻害されると０．９）、ｆｕは影響されない画分であり、Ｃは薬物濃度であり、ＩＣ５０は最大効果の半分に必要な濃度であり（すなわち、細胞成長の５０％阻害）、ｍは濃度−効果曲線のシグモイド係数である）を用いて、各薬物と、複数の希釈された固定された比の組合せとについての用量−効果曲線をプロットすることを含む。組合せでの各薬物についての曲線の傾きに基づいて、薬物が、互いに排他的でない効果を有するか（例えば独立した又は相互作用的な作用形態）を決定できる。
【０１５９】
併用指数（ＣＩ）は、次いで、等式：
ＣＩ＝［（Ｃ）１／（Ｃｘ）１］＋［（Ｃ）２／（Ｃｘ）２］＋［α（Ｃ）１（Ｃ）２／（Ｃｘ）１（Ｃｘ）２］
（式中、（Ｃｘ）１は、その薬物単独のｘパーセントの効果を生じるのに必要な薬物１の濃度であり、（Ｃ）１は、（Ｃ）２との組合せで同じｘパーセントの効果を生じるのに必要な薬物１の濃度である）により決定される。薬物の作用形態が互いに排他的又は非排他的である場合、αはそれぞれ０又は１である。ＣＩ値は、異なる値のｆａ（すなわち、異なる程度の細胞成長阻害）を用いてこの等式により算出される。＜１のＣＩ値は相乗作用を示し、１の値は相加効果を示し、＞１の値はアンタゴニスト作用を示す。データは、ＩＢＭ−ＰＣコンピュータで、マイクロコンピュータソフトウェア用の濃度−効果分析を用いて（Biosoft社製、英国、ケンブリッジ）分析した。統計分析及びグラフについて、本発明者らは、Instat and Prismソフトウェア（GraphPad社製、米国、サンディエゴ）を用いる。単独又は対にした組合せで試験した薬物についての用量−効果の関係は、半有効プロット分析に供して、それらの相対的効力（ＩＣ５０）、形（ｍ）及び同調性（ｒ）を、それぞれの選択した株化細胞において決定した。上記のように、ＩＣ５０及びｍの値は、ＣＩ等式に基づいて、相乗作用及びアンタゴニスト作用を計算するためにそれぞれ用いた。結果は、２重で行った少なくとも３回の実験の平均±標準偏差として表した。各実験において、細胞を、上記のように、対にした組合せに４８時間曝露した。平均及び標準偏差は、スチューデントのｔ検定（両側ｐ値）を用いて比較した。
【０１６０】
結果
単一作用物質の研究
ヒト癌株化細胞のパネルでの単一作用物質として与えられたＣＹＣ６８２及びＣＮＤＡＣの増殖抑制効果
図１は、株化細胞のパネルにおけるＣＹＣ６８２及びＣＮＤＡＣの効果を示す。各点は、それぞれ２重で行った少なくとも３回の個別の実験の平均である。４８時間曝露についてのＩＣ５０を表１に示す。ＣＹＣ６８２及びＣＮＤＡＣへの２４時間の曝露を試験し、ＣＮＤＡＣ細胞傷害性について十分でないことが見出された。４８時間の曝露は、最も感受性が高いヒト癌株化細胞におけるＣＹＣ６８２の増殖抑制効果を観察するために最適であることが示された。各点は、それぞれ２重で行った少なくとも３回の個別の実験の平均である。ＣＹＣ６８２は、いくつかのヒト癌株化細胞に対する細胞傷害性効果を示し、ＨＣＴ１１６が最も感受性が高い癌株化細胞であった。
【０１６１】
ＣＹＣ６８２細胞傷害性の他の抗癌剤との比較
比較は、ＣＹＣ６８２の細胞傷害性効果と、オキサリプラチン、シスプラチン、ドキソルビシン、ゲムシタビン、ビノレルビン、５ＦＵ及びＡｒａ−Ｃを含むいくつかの抗癌剤の細胞傷害性効果との間で行った（表１）。データは、ＣＹＣ６８２が、ほとんどの癌株化細胞においてマイクロモルの濃度で増殖抑制活性を示し、そのプロファイルは、オキサリプラチン及びシスプラチンのような伝統的な抗癌剤のものとも、シタラビン及びゲムシタビンのような近縁の代謝拮抗物質のものとも異なることを示す。このことは、ヒト癌細胞における作用機序及びＣＹＣ６８２に対する耐性が、Ａｒａ−Ｃ及びゲムシタビンのものとは少なくとも部分的に異なるであろうことを示唆する。
【０１６２】
薬物併用研究
ＣＹＣ６８２と、オキサリプラチン、ドキソルビシン、ドセタキセル及びゲムシタビンとへの連続的及び同時の曝露の効果（図２）を、２つの感受性結腸癌株化細胞であるＣＯＬＯ２０５及びＨＣＴ１１６において、Chou及びTalalayにより以前に記載されたようなＩＣ５０に相当する薬物濃度についての影響される画分を表す併用指数を用いて研究した。
【０１６３】
ドセタキセル−ＣＹＣ６８２の組合せ
図３に示すように、両方の株化細胞において、ドセタキセルをＣＹＣ６８２の前に与えた場合、相乗効果が観察された。
【０１６４】
ゲムシタビン−ＣＹＣ６８２の組合せ
ゲムシタビンの後にＣＹＣ６８２という順序は、両方の株化細胞において相乗作用があった（図４）。ＣＹＣ６８２とゲムシタビンとの相乗作用は、近縁ではあるが、これらの２つの化合物が、癌細胞において異なる作用機序を有し得ることを示唆する。
【０１６５】
ドキソルビシン−ＣＹＣ６８２の組合せ
ＣＹＣ６８２のドキソルビシンとの組合せは、連続曝露を用いて、高濃度で相乗作用があった（図５）。
【０１６６】
オキサリプラチン−ＣＹＣ６８２の組合せ
ＣＹＣ６８２のオキサリプラチンとの組合せは、ＣＹＣ６８２をオキサリプラチンの前又は後に投与したときにＨＣＴ１１６細胞において相乗活性を導いた（図６）。ＣＯＬＯ２０５細胞では、ＣＹＣ６８２をオキサリプラチンの前に与えた場合に相乗作用が得られた。
【０１６７】
ＣＮＤＡＣの組合せ
ＣＮＤＡＣは、ドキソルビシン、シスプラチン、ゲムシタビン又はドセタキセルとの組合せで試験し、結果は、これらの全ての組合せが相乗薬物相互作用を生じることを示唆する（表３）。
【０１６８】
ＣＮＤＡＣは、Ｈ１２９９細胞においてビノレルビンとの組合せでも試験し、結果は、この組合せが、試験した３つの処置計画の全てで相乗作用を生じることを示す（表４）。
【０１６９】
Ｈ１２９９細胞において、ＣＮＤＡＣ及びドキソルビシンは、ドキソルビシン前処置及び同時前処置計画を用いて、ＥＤ５０（細胞集団の５０％が死滅するとき）にて相乗作用を生じた。
【０１７０】
ＥＤ５０において、ＣＮＤＡＣ及びシスプラチンは、シスプラチン前処置を用いて相乗作用を生じ、同時処置を用いて弱い相乗作用を生じた。
【０１７１】
ＣＮＤＡＣ及びゲムシタビンは、同時処置計画で試験し、これはＥＤ５０で相乗作用を生じた。
【０１７２】
考察
上記のデータは、ＣＹＣ６８２が広範囲のヒト癌株化細胞に対して細胞傷害活性を示し、ＨＣＴ１１６が最も感受性が高いことを示す。ＣＹＣ６８２及びＣＮＤＡＣは、シタラビン、ゲムシタビン、５ＦＵ及び他の細胞傷害性薬物（オキサリプラチン、シスプラチン、ドキソルビシン、ビノレルビン、ドセタキセル）のような伝統的な代謝物とは異なる特異な活性スペクトルを示す。
【０１７３】
併用研究は、ＣＹＣ６８２（又はＣＮＤＡＣ）を、ヒト結腸癌細胞及びＮＳＣＬＣ細胞において広い濃度範囲にわたってオキサリプラチン、ゲムシタビン、ドセタキセル、ビノレルビン、シスプラチン及びドキソルビシンのような薬物と組み合わせたときに、相乗効果を証明した。ＣＹＣ６８２とゲムシタビンとの相乗作用は、近縁であっても、これらの２つの化合物が癌細胞において異なる作用機序を有することを強く示唆する。
【０１７４】
本発明の範囲及び趣旨を逸脱することなく、本発明の種々の修飾及び変更が当業者には明らかである。本発明は、特定の好ましい実施形態に関連して記載しているが、請求される本発明は、このような特定の実施形態に不当に限定されるべきでないことが理解されるはずである。実際に、関連分野の当業者に明らかな本発明を行うための記載された形態の種々の修飾は、本発明により包含されることを意図する。
【０１７５】
【表１】
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【０１７６】
表３及び４：種々の細胞傷害性薬物との組合せのＣＮＤＡＣを用いて得られた結果のまとめ。細胞を、実施例の部分に記載するようにして、３つの異なる処置計画を用いて、記載される細胞傷害性薬物との組合せのＣＮＤＡＣを用いて処置した。結果は、少なくとも３回の独立した実験の平均である。
【０１７７】
【表２】
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【０１７８】
【表３】
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【図面の簡単な説明】
【０１７９】
【図１】株化細胞のパネルに対するＣＹＣ６８２及びＣＮＤＡＣの影響を示すグラフである（μＭでの濃度に対する％生存）。
【図２】ＣＹＣ６８２に基づく組合せの影響を評価する順序１、２及び３を示す図である。読み取りは、薬物への曝露の後の曝露Ｈ７２の直後に行った。
【図３】ＣＯＬＯ２０５及びＨＣＴ１１６のヒト癌株化細胞におけるＣＹＣ６８２及びドセタキセルの相互作用を示すアイソボログラムである。
【図４】ＣＯＬＯ２０５及びＨＣＴ１１６のヒト癌株化細胞におけるＣＹＣ６８２及びゲムシタビンの相互作用を示すアイソボログラムである。
【図５】ＣＯＬＯ２０５及びＨＣＴ１１６のヒト癌株化細胞におけるＣＹＣ６８２及びドキソルビシンの相互作用を示すアイソボログラムである。
【図６】ＣＯＬＯ２０５及びＨＣＴ１１６のヒト癌株化細胞におけるＣＹＣ６８２及びオキサリプラチンの相互作用を示すアイソボログラムである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【国際調査報告】
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