(57)【要約】  本発明は、粒子が実質的に存在しない免疫複合体製剤、すなわち以下：免疫複合体、ならびに以下；ショ糖、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、シクロデキストリン、ブドウ糖、グリセロール、ポリエチレングリコール、マンニトール、塩化ナトリウム、およびアミノ酸、から成る群より選択される１つまたはそれより多くの賦形剤、を包含する免疫複合体製剤であって、その場合製剤がｐＨ４．５から７．６を有する緩衝化水溶液である、前記免疫複合体製剤を提供する。本発明はまた、実質的に凝集体を含まない免疫複合体製剤、すなわち、以下：免疫複合体；ならびに、ヒスチジン、ショ糖、グリシン、および塩化ナトリウムから成る群より選択される１つまたはそれより多くの賦形剤、を包含する免疫複合体製剤であって、その場合製剤がｐＨ４．５から７．６を有する緩衝化水溶液である、前記免疫複合体製剤を提供する。本発明はさらに、粒子および凝集体の双方とも実質的に存在しない、免疫複合体製剤を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下：
（ａ）免疫複合体；ならびに
（ｂ）ショ糖、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、シクロデキストリン、ブドウ糖、グリセロール、ポリエチレングリコール、マンニトール、塩化ナトリウム、およびアミノ酸、から成る群より選択される１つまたはそれより多くの賦形剤、
を包含する免疫複合体製剤であって、
製剤が、ｐＨ４．５から７．６を有する緩衝化水溶液である、前記免疫複合体製剤。
【請求項２】
製剤が、以下：
（ｉ）０．１−１２％  ショ糖、
（ｉｉ）０．００５−１．０％  ポリソルベート２０、
（ｉｉｉ）０．５−２％  ベータ−シクロデキストリン、
（ｉｖ）２−８％  グリセロール、
（ｖ）１−５％  ＰＥＧ６０００、
（ｖｉ）２−８％  マンニトール、
（ｖｉｉ）０．００５−１．０％  ポリソルベート８０、
（ｖｉｉｉ）５−２０ｍＭ  ヒスチジン、
（ｉｘ）１００−３００ｍＭ  グリシン、および
（ｘ）５０−３００ｍＭ  塩化ナトリウム、
から成る群より選択される１つまたはそれより多くの賦形剤を包含する、請求項１に記載の製剤。
【請求項３】
製剤が、以下：
（ｉ）５−１０％  ショ糖、
（ｉｉ）０．００５−０．２％  ポリソルベート２０、
（ｉｉｉ）０．５−１％  ベータ−シクロデキストリン、
（ｉｖ）２−５％  グリセロール、
（ｖ）２−３％  ＰＥＧ６０００、
（ｖｉ）３−５％  マンニトール、
（ｖｉｉ）０．００５−０．２％  ポリソルベート８０、
（ｖｉｉｉ）１０−１５ｍＭ  ヒスチジン、
（ｉｘ）１３０−２５０ｍＭ  グリシン、および
（ｘ）１００−２００ｍＭ  塩化ナトリウム
から成る群より選択される１つまたはそれより多くの賦形剤を包含する、請求項２に記載の製剤。
【請求項４】
緩衝化水溶液が、ヒスチジン、コハク酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、および酢酸塩の１つまたはそれより多く含有する、請求項１に記載の製剤。
【請求項５】
ｐＨが５．０から７．０である、請求項４に記載の製剤。
【請求項６】
ｐＨが５．０から６．０である、請求項５に記載の製剤。
【請求項７】
免疫複合体が、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＣ２４２、ｈｕＮ９０１、ＤＳ６、トラスツツマブ、ビバツツマブ、シブロツツマブ、およびリツキシマブ、から成る群より選択されるヒト化抗体を包含する、請求項１に記載の製剤。
【請求項８】
免疫複合体が、メイタンシノイド、タキサン、およびＣＣ−１０６５、から成る群より選択される細胞毒性薬剤を包含する、請求項１に記載の製剤。
【請求項９】
以下：
（ａ）免疫複合体；ならびに
（ｂ）ヒスチジン、ショ糖、グリシン、および塩化ナトリウム、から成る群より選択される、１つまたはそれより多くの賦形剤、
を包含する免疫複合体製剤であって、
製剤が、ｐＨ４．５から７．６を有する緩衝化水溶液である、前記免疫複合体製剤。
【請求項１０】
製剤が、５−２００ｍＭ  ヒスチジン、１００−２００ｍＭ  グリシン、および２−８％  ショ糖、より選択される１つまたはそれより多くの賦形剤を包含する、請求項９に記載の製剤。
【請求項１１】
賦形剤が、５−１００ｍＭ  ヒスチジン、または１００−１５０ｍＭ  グリシンである、請求項１０に記載の製剤。
【請求項１２】
製剤が、２−８％  ショ糖、および１００−１５０ｍＭ  グリシンを含有する、請求項９に記載の製剤。
【請求項１３】
製剤が、１０ｍＭ  ヒスチジン、５％  ショ糖、および１３０ｍＭ  グリシンを含有する、請求項１２に記載の製剤。
【請求項１４】
緩衝化水溶液が、ヒスチジン、コハク酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、および酢酸塩の１つまたはそれより多く含有する、請求項９に記載の製剤。
【請求項１５】
ｐＨが５．０から７．０である、請求項１４に記載の製剤。
【請求項１６】
ｐＨが５．０から６．０である、請求項１４に記載の製剤。
【請求項１７】
ポリソルベート２０および/またはポリソルベート８０をさらに包含する、請求項９に記載の製剤。
【請求項１８】
免疫複合体が、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＣ２４２、ｈｕＮ９０１、ＤＳ６、トラスツツマブ、ビバツツマブ、シブロツツマブ、およびリツキシマブ、から成る群より選択されるヒト化抗体を包含する、請求項９に記載の製剤。
【請求項１９】
免疫複合体が、メイタンシノイド、タキサン、およびＣＣ−１０６５、から成る群より選択される細胞毒性薬剤を包含する、請求項９に記載の製剤。
【請求項２０】
本質的には、以下：
（ａ）０．５−１０ｍｇ/ｍｌの濃度のｈｕＮ９０１−ＤＭ１免疫複合体；
（ｂ）５−１５ｍＭ  ヒスチジン、および/または５−１５ｍＭ  コハク酸塩；
（ｃ）０．１−１０％  ショ糖、および/または１００−３００ｍＭ  グリシン；
（ｄ）０．００５−０．２％  ポリソルベート８０、および/または０．００５−０．２％  ポリソルベート２０、
から成る免疫複合体製剤であって、製剤が、ｐＨ５−６を有する緩衝化水溶液である、前記免疫複合体製剤。
【請求項２１】
本質的には、以下：
（ａ）０．５−１０ｍｇ/ｍｌの濃度のｈｕＣ２４２−ＤＭ４免疫複合体；
（ｂ）５−１５ｍＭ  ヒスチジン；
（ｃ）０．１−１０％  ショ糖、および/または１００−３００ｍＭ  グリシン；
（ｄ）０．００５−０．２％  ポリソルベート８０、および/または０．００５−０．２％  ポリソルベート２０、
から成る免疫複合体製剤であって、製剤が、ｐＨ５−６を有する緩衝化水溶液である、前記免疫複合体製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
[01]本出願は、35 U.S.C.§119(e)の下に２００５年８月３日に提出された出願第６０/７０４，９０２号；２００５年８月１１日に提出された６０/７０７，１６２号；２００６年５月４日に提出された６０/７４６，４５４号；および２００６年５月４日に提出された６０/７４６，４５６号に対する利益を主張し、これらの開示を各々本明細書によりそれらの全内容において参照として援用する。
【０００２】
（発明の技術分野）
[02]本発明は、抗体、および１つまたは数個の共有結合により連結された薬剤の分子、で構成される医薬化合物である、免疫複合体（immunoconjugate)の安定な製剤の調製のための方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
[03]免疫複合体は、癌およびその他の状態の治療のための、非常に強力かつ特異的な物質として開発されている。免疫複合体は、標的細胞抗原、例えば腫瘍細胞抗原、を特異的に認識する抗体、および１つまたは数個の共有結合により連結された薬剤の分子、特に細胞毒性薬剤、例えばメイタンシノイド、タキサン、またはＣＣ−１０６５類似体、から構成される。そのような免疫複合体に対して使用されるもう１つの名称は、抗体−薬剤複合体である。免疫複合体は、循環血中では不活性であるが、標的細胞表面に結合すると、細胞により内部に取り込まれる。まだ完全には理解されていないメカニズムにより、薬剤はその後抗体からはずれ、それらの薬理学的効果を発することができる。
【０００４】
[04]標的細胞、例えば癌組織を構成する細胞、への細胞毒性薬剤の標的型の送達は、細胞毒性薬剤の治療指標を、強力に改善する。典型的には免疫複合体として使用される細胞毒性薬剤は、従来の化学療法薬より１００から１０００倍強力である。そのような免疫複合体の例は、国際（ＰＣＴ）特許出願第ＷＯ  ００/０２５８７号、０２/０６０９５５号、および０２/０９２１２７号；米国特許第５，４７５，０９２号、６，３４０，７０１号、６，１７１，５８６号、６，７０６，７０８  Ｂ２号、および６，７５６，３９７  Ｂ２号；ならびにChari et al., Cancer Res., 52, 127-131 (1992)に開示されている。
【０００５】
[05]免疫複合体のような医薬化合物は一般に、１つまたはそれより多くの医薬的に受容可能な担体、賦形剤、および/または安定剤と組み合わせて、患者への投与、ならびに医薬化合物の保存および輸送を可能にする医薬組成物を提供する。他のタンパク質医薬剤と同様に免疫複合体は、分解、例えば酸化、脱アミド化、ならびに粒子および凝集体の形成、等を起こしやすい(Manning et al., Pharm. Res. 6, 903-918 (1989); Ahern and Manning, Stability of Protein Pharmaceuticals: Part A, Chemical and Physical pathways of Protein Degradation, Plenum, New York, (1992); およびCleland et al., Crit. Rev. Ther. Drug Carrier Syst. 10, 307-377 (1993))。
【０００６】
[06]タンパク質医薬剤における粒子の形成は、特に医薬化合物を不安定化し、したがって製剤を臨床的使用に関してはより低下した効力とする、または有害とさえする可能性がある。例えば注射される医薬製剤中の粒子は、患者における静脈への有意な傷害、または長期化した静脈のうっ滞を引き起こし得る。加えて凝集体の形成は、タンパク質医薬剤の主たる分解経路であり（Chari et al., Pharm Res. 20, 1325-1336 (2003)）、望ましくない影響、例えば免疫原性へと導くと思われる。
【０００７】
[07]しばしば疎水性の低分子である薬剤、殊に細胞毒性薬剤の、親水性のモノクローナル抗体との複合体化は、免疫複合体に付加的な不安定性を誘起する。免疫複合体の抗体成分に起因し得る特性に対処することは、安定な液体または凍結乾燥の医薬製剤の作製に重要な意味を持つ。このため、ＷＯ  ２００４/００４６３９  Ａ２および米国特許出願第２００４/０，２４１，１７４  Ａ１号は、免疫複合体の組成物について記載している。しかしながらこれらの組成物は、免疫複合体の医薬組成物における粒子および凝集体の形成に、十分に対処しているとは言えない。
【０００８】
[08]したがって、粒子および/または凝集体が実質的に存在しない、そして保存および輸送の間に粒子および/または凝集体が実質的に存在しないままである、免疫複合体の医薬組成物が依然として必要とされている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
[09]本発明は、粒子および/または凝集体が実質的に存在しない、そして保存および輸送の間の粒子および/または凝集体の形成を防止する、免疫複合体の医薬組成物を提供する。医薬組成物の使用に関する方法もまた提供する。本発明のこれらおよびその他の利点、ならびに付加的な発明の特徴を、本明細書に提供した本発明の記載から明らかにしていく。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
（発明の簡単な概要）
[10]本発明は、免疫複合体の医薬組成物中の粒子および凝集体の形成は、ある種の賦形剤を使用することにより阻害することができる、という発見に基づく。この新規製剤は、医薬化合物のより高い安定性および実質的により長い有効期間をもたらし、患者の安全性の保証を提供する。
【００１１】
[11]本発明の１つの側面は、粒子が実質的に存在しない免疫複合体製剤、すなわち以下：免疫複合体、ならびに以下：ショ糖、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、シクロデキストリン、ブドウ糖、グリセロール、ポリエチレングリコール、マンニトール、塩化ナトリウム、およびアミノ酸、から成る群より選択される１つまたはそれより多くの賦形剤、を包含する免疫複合体製剤であって、製剤がｐＨ４．５から７．６を有する緩衝化水溶液である前記複合体製剤、を提供する。
【００１２】
[12]本発明の第２の側面は、凝集体が実質的に存在しない免疫複合体製剤、すなわち以下：免疫複合体、ならびにヒスチジン、ショ糖、グリシン、および塩化ナトリウムから成る群より選択される１つまたはそれより多くの賦形剤、を包含する免疫複合体製剤であって、製剤がｐＨ４．５から７．６を有する緩衝化水溶液である前記複合体製剤、を提供する。
【００１３】
[13]本発明はさらに、粒子および凝集体の双方とも実質的に存在しない、免疫複合体製剤を提供する。
【００１４】
（発明の詳細な説明）
[14]本発明は、粒子および/または凝集体が実質的に存在しない、そして長期間の保存にわたり、また輸送中も粒子および/または凝集体が実質的に存在しないままである、免疫複合体の安定な医薬組成物を提供する。本発明は、免疫複合体の医薬組成物中の粒子および凝集体の形成が、ある種の賦形剤を使用することにより阻害することができる、という発見に基づく。新規製剤は、医薬化合物のより高い安定性および実質的により長い有効期間をもたらし、患者の安全性の保証を提供する。
【００１５】
[15]そのような製剤は、可視（５０μｍより大きい）および肉眼不可視（５μｍより大きい）の粒子の形成を阻害または低減する賦形剤を含めることにより調製する。本明細書で使用する場合、“粒子が実質的に存在しない”組成物は、１０μｍより大きいサイズの粒子は１容器当たり６０００カウント以下でなければならず、そして２５μｍより大きいサイズの粒子は１容器当たり６００カウント以下でなければならないことを求める、米国薬局方（ＵＳＰ）検査＜７８８＞に通るものとする。米国薬局方、Rockville, MD により編集されたＵＳＰ２８、第７８８章の”Particulate Matter in Injections,” 2004を参照のこと。本明細書で使用する場合、“凝集体が実質的に存在しない”組成物は、保存および輸送の間も凝集体が存在しないままであり、その結果、免疫複合体モノマーレベルが組成物の有効期間を通して９５％より高いまま維持される。
【００１６】
[16]本発明の免疫複合体組成物の典型的な有効期間は、４℃で、約１から５年、好ましくは１から４年、より好ましくは２から４年である。
【００１７】
[17]粒子が実質的に存在しない本発明の免疫複合体製剤は、免疫複合体、ならびにショ糖、ポリソルベート２０、ポリソルベート８０、シクロデキストリン、ブドウ糖、グリセロール、ポリエチレングリコール、マンニトール、塩化ナトリウム、およびアミノ酸、から成る群より選択される１つまたはそれより多くの賦形剤を包含し、その場合製剤は、ｐＨ４．５から７．６を有する緩衝化水溶液である。製剤は、以下：（ｉ）０．１−１２％  ショ糖、（ｉｉ）０．００５−１．０％  ポリソルベート２０、（ｉｉｉ）０．５−２％  ベータ−シクロデキストリン、（ｉｖ）２−８％  グリセロール、（ｖ）１−５％  ＰＥＧ６０００、（ｖｉ）２−８％  マンニトール、（ｖｉｉ）０．００５−１．０％  ポリソルベート８０、（ｖｉｉｉ）５−２０ｍＭ  ヒスチジン、（ｉｘ）１００−３００ｍＭ  グリシン、および（ｘ）５０−３００ｍＭ  塩化ナトリウムから成る群より選択される１つまたはそれより多くの賦形剤を包含してよい。
【００１８】
[18]ある種の好ましい態様において、粒子が実質的に存在しない本発明の製剤は、好ましくは以下：（ｉ）５−１０％  ショ糖；（ｉｉ）０．００５−０．２％  ポリソルベート２０；（ｉｉｉ）０．５−１％  ベータ−シクロデキストリン；（ｉｖ）２−５％  グリセロール；（ｖ）２−３％  ＰＥＧ６０００；（ｖｉ）３−５％  マンニトール；（ｖｉｉ）０．００５−０．２％  ポリソルベート８０；（ｖｉｉｉ）１０−１５ｍＭ  ヒスチジン；（ｉｘ）１３０−２５０ｍＭ  グリシン、および（ｘ）１００−２００ｍＭ  塩化ナトリウム、から成る群より選択される１つまたはそれより多くの賦形剤を包含する。
【００１９】
[19]好ましい態様において、緩衝化水溶液は、ヒスチジン、コハク酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、および酢酸塩の１つまたはそれより多く含有してよく、そしてｐＨは好ましくは５．０から７．０である。製剤のｐＨは、より好ましくは５．０から６．０である。
【００２０】
[20]本発明のある種の態様において、製剤の免疫複合体は、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＣ２４２、ｈｕＮ９０１、ＤＳ６、トラスツツマブ、ビバツツマブ(bivatuzumab)、シブロツツマブ(sibrotuzumab)、およびリツキシマブから成る群より選択されるヒト化抗体を包含する；そして/または免疫複合体は、メイタンシノイド、タキサン、およびＣＣ−１０６５から成る群より選択される細胞毒性薬剤を包含する。本発明の製剤中の免疫複合体の濃度は、１ｍｌ当たり約０．５から２０．０ｍｇの間の範囲とすることができる。好ましくは免疫複合体の濃度は、１ｍｌ当たり０．５から１０ｍｇである。
【００２１】
[21]凝集体が実質的に存在しない本発明の免疫複合体製剤は、以下：免疫複合体；ならびに、ヒスチジン、ショ糖、グリシン、および塩化ナトリウムから成る群より選択される１つまたはそれより多くの賦形剤、を包含し、その場合製剤はｐＨ４．５から７．６を有する緩衝化水溶液である。好ましくは免疫複合体製剤は、５−２００ｍＭ  ヒスチジン、１００−２００ｍＭ  グリシン、および２−８％  ショ糖より選択される１つまたはそれより多くの賦形剤を包含する。
【００２２】
[22]ある種の好ましい態様において、賦形剤は、５−１００ｍＭ  ヒスチジン、もしくは１００−１５０ｍＭ  グリシンである、または製剤は、２−８％  ショ糖、および１００−１５０ｍＭ  グリシンを含有する。ある種のその他の好ましい態様において、製剤は、１０ｍＭ  ヒスチジン、５％  ショ糖、および１３０ｍＭ  グリシンを含有する。
【００２３】
[23]好ましい態様において緩衝化水溶液は、ヒスチジン、コハク酸塩、クエン酸塩、リン酸塩、および酢酸塩の１つまたはそれより多くを含有してよく、そしてｐＨは好ましくは５．０から７．０である。製剤のｐＨは、より好ましくは５．０から６．０である。
【００２４】
[24]本発明のもう１つの側面において、凝集体が実質的に存在しない製剤はさらに、製剤には粒子もまた実質的に存在しないように、ポリソルベート２０および/またはポリソルベート８０を包含する。
【００２５】
[25]本発明のある種の態様において、製剤の免疫複合体は、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＣ２４２、ｈｕＮ９０１、ＤＳ６、トラスツツマブ、ビバツツマブ、シブロツツマブ、およびリツキシマブから成る群より選択されるヒト化抗体を包含する；そして/または免疫複合体は、メイタンシノイド、タキサン、およびＣＣ−１０６５から成る群より選択される細胞毒性薬剤を包含する。本発明の製剤中の免疫複合体の濃度は、１ｍｌ当たり約０．５から２０．０ｍｇの間の範囲とすることができる。好ましくは免疫複合体の濃度は、１ｍｌ当たり０．５から１０ｍｇである。
【００２６】
[26]本発明のある種の好ましい態様において、免疫複合体製剤は、凝集体および粒子の双方とも実質的に存在しない。例えば本発明は、本質的には：０．５−１０ｍｇ/ｍｌの濃度のｈｕＮ９０１−ＤＭ１免疫複合体；５−１５ｍＭ  ヒスチジン、および/または５−１５ｍＭ  コハク酸塩；０．１−１０％  ショ糖、および/または１００−３００ｍＭ  グリシン；０．００５−０．２％  ポリソルベート８０、および/または０．００５−０．２％  ポリソルベート２０から成る免疫複合体製剤を提供し、その場合前記製剤はｐＨ５−６を有する緩衝化水溶液である。製剤は、凝集体および粒子の双方とも実質的に存在しないままである限り、付加的な成分を所望により加えてもよい。
【００２７】
[27]もう１つの例において、免疫複合体製剤は本質的には：（ａ）０．５−１０ｍｇ/ｍｌの濃度のｈｕＣ２４２−ＤＭ４免疫複合体；５−１５ｍＭ  ヒスチジン；０．１−１０％  ショ糖、および/または１００−３００ｍＭ  グリシン；０．００５−０．２％  ポリソルベート８０、および/または０．００５−０．２％  ポリソルベート２０から成り、その場合前記製剤は、ｐＨ５−６を有する緩衝化水溶液である。製剤は、凝集体および粒子の双方とも実質的に存在しないままである限り、付加的な成分を所望により加えてもよい。
【００２８】
[28]一般に、本発明と組み合わせて使用してよい適切な賦形剤は、無機塩、有機酸、糖類、アミノ酸、ポリソルベート、ポリエチレングリコール、およびそれらの組み合わせを含むがこれに限定されない、多様なカテゴリーから選択してよい。好ましい賦形剤は、無機塩、有機カルボン酸、糖類、アミノ酸、ポリソルベート、ポリエチレングリコール、アルブミン、グリセロール、およびそれらの組み合わせから成る群より選択される。
【００２９】
[29]適切な無機塩の例として、塩化ナトリウム、塩化カルシウム、硫酸マグネシウム、塩化マグネシウム、硫酸ナトリウム、およびそれらの組み合わせを含むがこれに限定されない。塩化ナトリウムは本発明において使用するための好ましい賦形剤である。
【００３０】
[30]適切な有機カルボン酸の例として、酒石酸（ラセミの酒石酸、Ｄ−酒石酸およびＬ−酒石酸を含む）、マレイン酸、酢酸、クエン酸、コハク酸、グルクロン酸、およびそれらの組み合わせを含むが、これに限定されない。“酸”は、本明細書において使用する場合、酸ならびにそのあらゆる水和物および塩、すなわちクエン酸塩およびコハク酸塩をいう。コハク酸が、本発明において使用するための好ましい賦形剤である。
【００３１】
[31]適切な糖類の例として、ショ糖、トレハロース、ブドウ糖、マンニトール、シクロデキストリン、およびそれらの組み合わせを含むが、これに限定されない。ショ糖およびシクロデキストリンが、本発明において使用するための好ましい賦形剤である。
【００３２】
[32]適切なアミノ酸の例として、ヒスチジン、グリシン、リジン、アルギニン、およびそれらの組み合わせを含むが、これに限定されない。ヒスチジンおよびグリシンが、本発明で使用するための好ましい賦形剤である。
【００３３】
[33]適切なアルブミンの例として、ヒト血清アルブミンを含む。
【００３４】
[34]適切なポリエチレングリコールの例は、約２００から２０，０００Ｄａの分子量のポリエチレングリコールである。好ましいポリエチレングリコールは、ＰＥＧ４０００、ＰＥＧ５０００、ＰＥＧ６０００、ＰＥＧ８０００、およびＰＥＧ１００００である。
【００３５】
[35]適切なポリソルベートの例は、ポリソルベート２０（ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標））およびポリソルベート８０である。
【００３６】
[36]適切なシクロデキストリンの例は、アルファ−、ベータ−、およびガンマ−シクロデキストリンである。
【００３７】
[37]この発明の教示より、当業者は、所定の免疫複合体溶液において粒子および/または凝集体が実質的に存在しない製剤を、最もよく提供するはずである賦形剤を、容易に決定することができる。
【００３８】
[38]好ましくは免疫複合体製剤の浸透圧は、ほぼヒト血液の値（すなわち等張）である。
【００３９】
[39]適切な浸透圧調節 (tonicifying)剤の例は、塩、アミノ酸、および糖質である。好ましい塩は、１価のナトリウム塩を含む。好ましいアミノ酸は、ヒスチジン、グリシン、リジン、およびアルギニンを含む。最も好ましいのはグリシンである。好ましい糖質は、単糖、二糖、直鎖オリゴ糖、および環式オリゴ糖を含む。好ましい二糖はショ糖である。適切な量の塩、糖類、および/またはアミノ酸を本発明の製剤に加えて、所望の浸透圧を達成することができる。
【００４０】
[40]医薬化合物は、標的細胞抗原を特異的に認識する抗体、および１つまたは数個の共有結合により連結された細胞毒性薬剤、例えばメイタンシノイド、タキサン、またはＣＣ−１０６５類似体、の分子で構成される免疫複合体である。
【００４１】
[41]抗体は、あらゆる種類の細胞に対して、ただし一般的には破壊すべき標的細胞、例えば腫瘍細胞（特に固形腫瘍細胞）、ウイルスに感染した細胞、微生物に感染した細胞、寄生体に感染した細胞、自己免疫細胞（自己抗体を産生する細胞）、活性化細胞（移植片拒絶、もしくは移植片対宿主病に伴うもの）、または他のあらゆるタイプの罹患した細胞もしくは異常な細胞に対して、特異的であることができる。
【００４２】
[42]抗体は、現在公知の、または公知となるあらゆる種類であってよく、そして細胞表面上の抗原に結合することができる（例えば相補性決定領域（ＣＤＲ）を含有する）、あらゆる免疫グロブリン、あらゆる免疫グロブリンフラグメント、例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、ｄｓＦｖ、ｓＦｖ、二重特異性抗体、および三重特異性抗体、または免疫グロブリンキメラ、を含むことができる。あらゆる適切な抗体を、細胞結合物質(cell-binding-agent)として使用することができる。当業者は、適当な抗体の選択は標的である細胞集団に依存することになることを認識するだろう。このことについては、特定の細胞集団（典型的にはそして好ましくは罹患した細胞集団）で選択的に発現される細胞表面分子（すなわち抗原）のタイプおよび数が、本発明の組成物において使用するための適当な抗体の選択を支配することになる。細胞表面の発現プロフィールは、腫瘍細胞タイプを含む広く多様な細胞タイプについて知られており、あるいは知られていない場合には、通例の分子生物学的および組織化学的技術を使用して決定することができる。
【００４３】
[43]抗体はポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体であることができるが、最も好ましくはモノクローナル抗体である。本明細書で使用する場合“ポリクローナル”抗体は、典型的には免疫された動物の血清中に含有される、抗体分子の不均一な集団をいう。“モノクローナル”抗体は、特定の抗原に特異的である抗体分子の均一な集団をいう。モノクローナル抗体は、典型的にはＢリンパ球（“Ｂ細胞”）の単一のクローンにより産生される。モノクローナル抗体は、標準的なハイブリドーマ技術を含む当業者に公知の多様な技術を使用して得てよい（例えばKohler and Milstein, Eur. J. Immunol., 5: 511-519 (1976), Harlow and Lane (編), Antibodies: A Laboratory Manual, CSH Press (1988)、および C.A. Janeway et al. (編), Immunobiology, 第５版, Garland Publishing, New York, NY (2001)を参照のこと）。手短にはモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ法は典型的には、適切なあらゆる動物、典型的および好ましくはマウス、に抗原（すなわち“免疫原”）を注射することを伴う。その後動物を屠殺し、その脾臓から単離したＢ細胞をヒト骨髄腫細胞と融合させる。際限なく増殖し、in vitroで所望の特異性を有する高力価の抗体を継続的に分泌する、ハイブリッド細胞（すなわち“ハイブリドーマ”）が産生される。当該技術に公知のあらゆる適当な方法を使用して、所望の特異性を有する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を同定することができる。そのような方法として、例えば酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ウェスタンブロット解析、およびラジオイムノアッセイを含む。ハイブリドーマの集団をスクリーニングして、その各々が抗原に対して単一の抗体種を分泌する個々のクローンを単離する。各ハイブリドーマは単一のＢ細胞との融合に由来するクローンであるため、そのハイブリドーマが産生するすべての抗体分子は、それらの抗原結合部位およびアイソタイプを含めて、構造上同一である。モノクローナル抗体はまた、ＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（例えばHaskard and Archer, J. Immuol.Methods, 74(2): 361-67 (1984)、およびRoder et al., Methods Enzymol., 121: 140-67 (1986)を参照のこと）、バクテリオファージベクター発現系（例えばHuse et al., Science, 246: 1275-81 (1989)を参照のこと）、または抗体フラグメント、例えばＦａｂおよびｓｃＦｖ（１本鎖可変領域）を包含するファージディスプレーライブラリー（例えば米国特許第５，８８５，７９３号および５，９６９，１０８号、ならびに国際特許出願ＷＯ  ９２／０１，０４７およびＷＯ  ９９/０６，５８７を参照のこと）を含む、他の適切な技術を使用して作製してもよい。
【００４４】
[44]モノクローナル抗体は、あらゆる適切な動物から単離または産生させることができるが、好ましくは哺乳類、より好ましくはマウスまたはヒト、そして最も好ましくはヒトで産生させる。マウスで抗体を産生させるための方法は当業者に周知されており、本明細書に記載する。ヒト抗体に関して、ポリクローナル抗体は、適当な抗原でワクチン接種または免疫されたヒト被験者の血清より単離することができることを、当業者は認識するだろう。あるいはヒト抗体は、ヒト以外の動物、例えばマウスにおいてヒト抗体を産生するための公知の技術を適用することにより、作製することができる。（例えば米国特許第５，５４５，８０６号、５，５６９，８２５号、および５，７１４，３５２号、ならびに米国特許出願公開第２００２/０，１９７，２６６  Ａ１を参照のこと）。
【００４５】
[45]ヒトの治療に適用するための理想的な選択肢である一方で、ヒト抗体、特にヒトモノクローナル抗体は、典型的にはマウスモノクローナル抗体に比して作製はより困難である。しかしながらマウスモノクローナル抗体は、ヒトに投与した時に急速なホストの抗体応答を誘発し、そのことが抗体−薬剤複合体の治療的または診断的潜在能力を低減させる可能性がある。これらの合併症を回避するため、モノクローナル抗体は好ましくは、ヒト免疫系により“外来”として認識されないものとする。
【００４６】
[46]このために、ファージディスプレイを使用して、抗体を作製することができる。このことについては、抗体の抗原結合可変（Ｖ）ドメインをコードするファージライブラリーを、標準的な分子生物学技術およびリコンビナントＤＮＡ技術を使用して作製することができる（例えばSambrook et al. (編), Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 第３版, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York (2001)を参照のこと）。所望の特異性を有する可変領域をコードするファージを、所望の抗原への選択的結合について選択し、選択された可変ドメインを包含する完全なヒト抗体を再構成する。モノクローナル抗体の特徴を有するヒト抗体が細胞により分泌されるように、再構成された抗体をコードする核酸配列を、適切な細胞株、例えばハイブリドーマの産生のために使用される骨髄種細胞内に導入する（例えばJaneway et al., 上記、Huse et al., 上記、および米国特許第６，２６５，１５０号を参照のこと）。あるいはモノクローナル抗体は、特定のヒト重鎖および軽鎖の免疫グロブリン遺伝子に関して遺伝子導入されたマウスから作製することができる。そのような方法は、当該技術において公知であり、例えば米国特許第５，５４５，８０６号および５，５６９，８２５号、ならびにJaneway et al.,上記に記載されている。
【００４７】
[47]最も好ましくは、抗体はヒト化抗体である。本明細書で使用する場合、“ヒト化”抗体は、抗体の抗原結合ループを形成する、マウスモノクローナル抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）が、ヒト抗体分子のフレームワーク上に移植されているものである。マウスおよびヒトの抗体のフレームワークの類似性のおかげで、このアプローチで、抗原としてはヒト抗体と同一であるが、ＣＤＲ配列が由来するマウスモノクローナル抗体と同じ抗原に結合するモノクローナル抗体を産生できることが、当該技術において一般に承認されている。ヒト化抗体を作製するための方法は当該技術において周知されており、例えばJaneway et al.,上記、米国特許第５，２２５，５３９号、５，５８５，０８９号、および５，６９３，７６１号、欧州特許第０，２３９，４００  Ｂ１号、ならびに英国特許第２，１８８，６３８号に、詳細に記載されている。ヒト化抗体はまた、米国特許第５，６３９，６４１号、およびPedersen et al., J. Mol. Biol., 235: 959-973 (1994)、に記載されている抗体の表面再修飾 (resurfacing)技術を使用して作製することもできる。本発明の組成物の免疫複合体に利用する抗体は、最も好ましくはヒト化モノクローナル抗体であるが、上に記載したようなヒトモノクローナル抗体およびマウスモノクローナル抗体もまた、本発明の範囲内である。
【００４８】
[48]少なくとも１つの抗原結合部位を有し、したがって標的細胞の表面上に存在する少なくとも１つの抗原または受容体を認識し結合する抗体フラグメントもまた、本発明の範囲内である。この点において、インタクトな抗体分子のタンパク質分解による開裂は、抗原を認識し結合する能力を保持する多様な抗体フラグメントを生成することができる。例えばプロテアーゼであるパパインを用いての抗体分子の限定的な消化は、典型的には３つのフラグメントを生成し、そのうち２つは同一であり、親抗体分子の抗原結合(antigen binding)活性を保持しているため、Ｆａｂフラグメントという。酵素ペプシンを用いての抗体分子の開裂は通常２つの抗体フラグメントを生成し、そのうち１つは、抗体分子の双方の抗原結合(antigen binding)アームを保持しており、したがってＦ（ａｂ’）２フラグメントという。ジチオスレイトールまたはメルカプトエチルアミンを用いてのＦ（ａｂ’）２フラグメントの還元により、Ｆａｂ’フラグメントというフラグメントを生成する。合成ペプチドを介して抗体軽鎖の可変（Ｖ）ドメインに連結された抗体重鎖のＶドメインを包含する切断型Ｆａｂフラグメントから成る、１本鎖可変(single-chain variable)領域フラグメント（ｓＦｖ）抗体フラグメントは、通例のリコンビナントＤＮＡテクノロジー技術を使用して作製することができる（例えばJaneway et al.,上記を参照のこと）。同様にジスルフィド安定化可変(disulfide-stabilized variable)領域フラグメント（ｄｓＦｖ）は、リコンビナントＤＮＡテクノロジーにより調製することができる（例えばReiter et al., Protein Engineering, 7: 697-704 (1994)を参照のこと）。しかしながら本発明の文脈における抗体フラグメントは、抗体フラグメントのこれらの例示的タイプに限定されない。所望の細胞表面の受容体または抗原を認識し結合する、あらゆる適切な抗体フラグメントを利用することができる。抗体フラグメントについては、さらに例えば、Parham, J. Immunol., 131: 2895-2902 (1983), Spring et al., J. Immunol., 113: 470-478 (1974),およびNisonoff et al., Arch. Biochem. Biophys., 89: 230-244 (1960)に記載されている。抗体−抗原の結合は、当該技術において公知のあらゆる適切な方法、例えばラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）、ＥＬＩＳＡ、ウェスタンブロット、免疫沈降法、および競合的阻害アッセイ、を使用してアッセイすることができる（例えばJaneway et al.,上記、および米国特許出願公開第２００２/０，１９７，２６６  Ａ１を参照のこと）。
【００４９】
[49]加えて、抗体はキメラ抗体、またはその抗原結合フラグメントであることができる。“キメラ”により、抗体が、少なくとも２つの異なる種から得られたまたは由来する、少なくとも２つの免疫グロブリンまたはそのフラグメント（例えば２つの異なる免疫グロブリン、例えばネズミ科の（murine）免疫グロブリン可変領域と組み合わせたヒト免疫グロブリン定常領域）を包含することを意味する。抗体はまた、ドメイン抗体（ｄＡｂ）またはその抗原結合フラグメント、例えばラクダ科抗体（例えばDesmyter et al., Nature Struct. Biol., 3: 752, (1996)を参照のこと）、またはサメ抗体、例えば新規抗原受容体（ＩｇＮＡＲ）（例えばGreenberg et al., Nature, 374: 168 (1995)、およびStanfield et al., Science, 305: 1770-1773 (2004)を参照のこと）であることができる。
【００５０】
[50]あらゆる適切な抗体を本発明の文脈において使用することができる。例えばモノクローナル抗体Ｊ５は、急性リンパ芽球性白血病共通抗原（ＣＡＬＬＡ）に特異的であるネズミ科ＩｇＧ２ａ抗体であり（Ritz et al., Nature, 283: 583-585 (1980)）、ＣＡＬＬＡを発現する細胞(例えば急性リンパ芽球性白血病細胞)を標的とするために使用することができる。モノクローナル抗体ＭＹ９は、ＣＤ３３抗原に特異的に結合するネズミ科ＩｇＧ１抗体であり（Griffin et al., Leukemia Res., 8: 521 (1984)）、ＣＤ３３を発現する細胞（例えば急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）細胞）を標的とするために使用することができる。
【００５１】
[51]同様にモノクローナル抗体である抗Ｂ４（Ｂ４ともいう）は、Ｂ細胞上のＣＤ１９抗原に結合するネズミ科ＩｇＧ１抗体であり（Nadler et al., J. Immunol., 131: 244-250 (1983)）、Ｂ細胞またはＣＤ１９を発現する罹患細胞（例えば非ホジキンリンパ腫細胞、および慢性リンパ芽球性白血病細胞）を標的とするために使用することができる。Ｎ９０１は、小細胞肺腫瘍を含む神経内分泌由来の細胞上に見出されるＣＤ５６（神経細胞接着分子）抗原に結合する、ネズミ科モノクローナル抗体であり、神経内分泌由来の細胞に対して薬剤を標的に向かわせるため、免疫複合体において使用することができる。Ｊ５、ＭＹ９、およびＢ４の抗体は好ましくは、免疫複合体の一部としてそれらを使用する前に、表面再修飾またはヒト化する。抗体の表面再修飾またはヒト化は、例えばRoguska et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91: 969-73 (1994)、に記載されている。
【００５２】
[52]加えて、モノクローナル抗体Ｃ２４２はＣａｎＡｇ抗原に結合し（例えば米国特許第５，５５２，２９３号を参照のこと）、ＣａｎＡｇを発現する腫瘍、例えば結腸直腸癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、および胃癌に対して、免疫複合体を標的に向かわせるために使用することができる。ＨｕＣ２４２は、モノクローナル抗体Ｃ２４２のヒト型である（例えば米国特許第５，５５２，２９３号を参照のこと）。ＨｕＣ２４２が産生されるハイブリドーマは、ＥＣＡＣＣ同定番号９００１２６０１にて登録されている。ＨｕＣ２４２は、ＣＤＲ移植法（例えば米国特許第５，５８５，０８９号、５，６９３，７６１号、および５，６９３，７６２号を参照のこと）、または表面再修飾技術（例えば米国特許第５，６３９，６４１号を参照のこと）を使用して調製することができる。ＨｕＣ２４２を、ＣａｎＡｇ抗原を発現する腫瘍細胞、例えば結腸直腸癌、膵臓癌、非小細胞肺癌、および胃癌の細胞に対して、免疫複合体を標的に向かわせるために使用することができる。
【００５３】
[53]卵巣癌細胞および前立腺癌細胞を標的とするために、抗ＭＵＣ１抗体を免疫複合体における細胞結合物質として使用することができる。抗ＭＵＣ１抗体は、例えば抗−ＨＭＦＧ−２（例えばTaylor-Papadimitriou et al., Int. J. Cancer, 28: 17-21 (1981)を参照のこと）、ｈＣＴＭ０１（例えばvan Hof et al., Cancer Res., 56: 5179-5185 (1996)）、
およびＤＳ６を含む。前立腺癌細胞はまた、細胞結合物質として抗前立腺特異膜抗原（ＰＳＭＡ）、例えばＪ５９1を使用することにより、免疫複合体を用いて標的に向かわせることができる（例えばLiu et al., Cancer Res., 57: 3629-3634 (1997)を参照のこと）。さらにＨｅｒ２抗原を発現する癌細胞、例えば乳癌、前立腺癌および卵巣癌の細胞は、抗体トラスツツマブを使用して標的に向かわせることができる。インスリン様増殖因子受容体に結合する抗−ＩＧＦ−ＩＲ抗体もまた、免疫複合体において使用することができる。
【００５４】
[54]特に好ましい抗体は、ヒト化モノクローナル抗体であり、その例として、ｈｕＮ９０１、ｈｕＭｙ９−６、ｈｕＢ４、ｈｕＣ２４２、ＤＳ６、トラスツツマブ、ビバツツマブ、シブロツツマブ、およびリツキシマブを含む（例えば米国特許第５，６３９，６４１号、および５，６６５，３５７号；米国特許出願公開第２００５−０１１８１８３号、国際特許出願ＷＯ  ０２/１６，４０１、Pedersen et al.,上記、Roguska et al.,上記、Liu et al.,上記、Nadler et al.,上記、Colomer et al., Cancer Invest., 19: 49-56 (2001), Heider et al., Eur. J. Cancer, 31A: 2385-2391 (1995), Welt et al., J. Clin. Oncol., 12: 1193-1203 (1994)、およびMaloney et al., Blood, 90: 2188-2195 (1997)を参照のこと）。最も好ましくは抗体は、ｈｕＮ９０１ヒト化モノクローナル抗体、またはｈｕＭｙ９−６ヒト化モノクローナル抗体である。その他のモノクローナル抗体も当該技術において知られており、本発明と関連して使用することができる。
【００５５】
[55]免疫複合体は、あらゆる適切な薬剤、典型的には細胞毒性物質を包含することができる。“細胞毒性物質”は本明細書で使用する場合、細胞の死に至らせる、細胞死を誘発する、または細胞の生存率を減少させる、あらゆる化合物をいう。適切な細胞毒性物質は、例えばメイタンシノイドおよびメイタンシノイド類似体、タキソイド、ＣＣ−１０６５およびＣＣ−１０６５類似体、ならびにドラスタチンおよびドラスタチン類似体を含む。本発明の好ましい態様において細胞毒性物質は、メイタンシノールおよびメイタンシノール類似体を含むメイタンシノイドである。メイタンシノイドは、微小管の形成を阻害し、哺乳類細胞に対して高毒性である化合物である。適切なメイタンシノール類似体の例は、修飾された芳香環を有するもの、および他の位置での修飾を有するものを含む。そのようなメイタンシノイドは、例えば米国特許第４，２５６，７４６号、４，２９４，７５７号、４，３０７，０１６号、４，３１３，９４６号、４，３１５，９２９号、４，３２２，３４８号、４，３３１，５９８号、４，３６１，６５０号、４，３６２，６６３号、４，３６４，８６６号、４，４２４，２１９号、４，３７１，５３３号、４，４５０，２５４号、５，４７５，０９２号、５，５８５，４９９号、５，８４６，５４５号、および６，３３３，４１０号に記載されている。
【００５６】
[56]修飾された芳香環を有するメイタンシノール類似体の例は、以下：（１）Ｃ１９−デクロロ（米国特許第４，２５６，７４６号）（アンサマイトシンＰ２のＬＡＨ還元により調製）、（２）Ｃ−２０−ヒドロキシ（またはＣ−２０−デメチル）＋/−Ｃ−１９−デクロロ（米国特許第４，３６１，６５０号および４，３０７，０１６号）（Streptomyces（ストレプトマイセス属）またはActinomyces（アクチノマイセス属）を使用してのデメチル化、またはＬＡＨを使用しての脱塩素により調製）、ならびに（３）Ｃ−２０−デメトキシ、Ｃ−２０−アシルオキシ（−ＯＣＯＲ）、＋/−デクロロ（米国特許第４，２９４，７５７号）（塩化アシルを使用してのアシル化により調製）、を含む。
【００５７】
[57]芳香環以外の位置の修飾を有するメイタンシノール類似体の例は、以下：（１）Ｃ−９−ＳＨ（米国特許第４，４２４，２１９号）（メイタンシノールと、Ｈ２ＳまたはＰ２Ｓ５との反応により調製）、（２）Ｃ−１４−アルコキシメチル（デメトキシ/ＣＨ２ＯＲ）（米国特許第４，３３１，５９８号）、（３）Ｃ−１４−ヒドロキシメチルまたはアシルオキシメチル（ＣＨ２ＯＨまたはＣＨ２ＯＡｃ）（米国特許第４，４５０，２５４号）（Nocardia（ノカルジア属）より調製）、（４）Ｃ−１５−ヒドロキシ/アシルオキシ（米国特許第４，３６４，８６６号）（Streptomycesによるメイタンシノールの変換により調製）、（５）Ｃ−１５−メトキシ（米国特許第４，３１３，９４６号および４，３１５，９２９号）（Trewia nudifloraより単離）、（６）Ｃ−１８−デメチル（米国特許第４，３６２，６６３号および４，３２２，３４８号）（Streptomycesによるメイタンシノールのデメチル化により調製）、ならびに（７）４，５−デオキシ（米国特許第４，３７１，５３３号）（メイタンシノールの三塩化チタン/ＬＡＨ還元により調製）を含む。
【００５８】
[58]本発明の好ましい態様において免疫複合体は、細胞毒性物質として、Ｎ２’−デアセチル−Ｎ２’−（３−メルカプト−１−オキソプロピル）−メイタンシンとしても知られる、チオールを含有するメイタンシノイドＤＭ１を利用する。ＤＭ１の構造は式（Ｉ）：
【００５９】
【化１】
2009503105.tif 000002
により表される。
【００６０】
[59]本発明のもう１つの好ましい態様において、免疫複合体は、細胞毒性物質としてＮ２’−デアセチル−Ｎ２’−（４−メチル−４−メルカプト−１−オキソペンチル）−メイタンシンとしても知られる、チオールを含有するメイタンシノイドＤＭ４を利用する。ＤＭ４の構造は式（ＩＩ）：
【００６１】
【化２】
2009503105.tif 000003
により表される。
【００６２】
[60]例えば、イオウ原子を持つ炭素原子上にモノアルキルまたはジアルキルの置換を持つ、チオールおよびジスルフィドを含有するメイタンシノイドを含む、その他のメイタンシンを、本発明の文脈において使用してよい。特に好ましいのは、Ｃ３位，Ｃ１４ヒドロキシメチル、Ｃ１５ヒドロキシ、またはＣ２０デスメチルの官能基に、立体的に妨害されたスルフヒドリル基を持つアシル基でアシル化されたアミノ酸側鎖を有するメイタンシノイドであり、ここでチオール官能基を持つアシル基の炭素原子は、１または２の置換基を有しており、前記置換基はＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１から１０の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そしてさらにここで置換基の１つはＨであることができ、そしてここでアシル基は、カルボニル官能基およびイオウ原子の間に少なくとも３つの炭素原子の長さの直鎖を有する。
【００６３】
[61]本発明の文脈において使用するための付加的なメイタンシンは、式（ＩＩＩ）により表される化合物：
【００６４】
【化３】
2009503105.tif 000004
を含み、
式中Ｙ’は
【００６５】
【化４】
2009503105.tif 000005
を表し、
ここでＲ１およびＲ２は、各々独立して１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、好ましくはＣＨ３もしくはＣ２Ｈ５、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そしてここでＲ２はまた、Ｈであることもでき、
ここでＡ、Ｂ、Ｄは３−１０の炭素原子を有するシクロアルキルもしくはシクロアルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族、もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、
ここでＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２は各々独立して、Ｈ、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、好ましくはＣＨ３もしくはＣ２Ｈ５、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族、もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、
ここでｌ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｕ、およびｔは、各々独立してゼロ、または１から５の整数であるが、ただしｌ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｕ、およびｔの少なくとも２つは、いずれの時にも同時にゼロではなく、そして
ここでＺはＨ、ＳＲまたはＣＯＲであり、ここでＲは、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族、もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルである。
【００６６】
[62]式（ＩＩＩ）の好ましい態様は、式中（ａ）Ｒ１がＨであり、Ｒ２がメチルであり、そしてＺがＨである、（ｂ）Ｒ１およびＲ２がメチルであり、そしてＺがＨである、（ｃ）Ｒ１がＨであり、Ｒ２がメチルであり、そしてＺが−ＳＣＨ３である、ならびに（ｄ）Ｒ１およびＲ２がメチルであり、そしてＺが−ＳＣＨ３である、式（ＩＩＩ）の化合物を含む。
【００６７】
[63]そのような付加的なメイタンシンはまた、式（ＩＶ−Ｌ）、（ＩＶ−Ｄ）、または（ＩＶ−Ｄ，Ｌ）により表される化合物：
【００６８】
【化５】
2009503105.tif 000006
を含み、
式中、Ｙは
【００６９】
【化６】
2009503105.tif 000007
を表し、
ここでＲ１およびＲ２は、各々独立してＨ、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、好ましくはＣＨ３もしくはＣ２Ｈ５、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、
ここでＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８はおのおの独立して、Ｈ、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、好ましくはＣＨ３もしくはＣ２Ｈ５、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、
ここでｌ、ｍ、およびｎは、各々独立して１から５の整数であり、そして加えてｎはゼロであることができ、
ここでＺはＨ、ＳＲまたはＣＯＲであり、ここでＲは、１から１０の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する環式のアルキルもしくはアルケニル、またはシンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして
ここでＭａｙは、Ｃ−３、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシ、またはＣ−２０デスメチルに側鎖を持つメイタンシノイドを表す。
【００７０】
[64]式（ＩＶ−Ｌ）、（ＩＶ−Ｄ）および（ＩＶ−Ｄ，Ｌ）の好ましい態様は、（ａ）Ｒ１がＨであり、Ｒ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、ｎが０であり、そしてＺがＨである、（ｂ）Ｒ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、ｎが０であり、そしてＺがＨである、（ｃ）Ｒ１がＨであり、Ｒ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、ｎが０であり、そしてＺが−ＳＣＨ３である、または（ｄ）Ｒ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、ｎが０であり、そしてＺが−ＳＣＨ３である、式（ＩＶ−Ｌ）、（ＩＶ−Ｄ）および（ＩＶ−Ｄ，Ｌ）の化合物を含む。
【００７１】
[65]好ましくは細胞毒性物質は、式（ＩＶ−Ｌ）により表される。
【００７２】
[66]付加的な好ましいメイタンシンはまた、式（Ｖ）により表される化合物：
【００７３】
【化７】
2009503105.tif 000008
を含み
式中Ｙは
【００７４】
【化８】
2009503105.tif 000009
を表し、
ここでＲ１およびＲ２は、各々独立してＨ、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、好ましくはＣＨ３もしくはＣ２Ｈ５、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、ここでＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８はおのおの独立して、Ｈ、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、好ましくはＣＨ３もしくはＣ２Ｈ５、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、
ここでｌ、ｍ、およびｎは、各々独立して１から５の整数であり、そして加えてｎはゼロであることができ、そして
ここでＺはＨ、ＳＲまたは−ＣＯＲであり、ここでＲは、メチル、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、またはシンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族ラジカルもしくはヘテロシクロアルキルのラジカルである。
【００７５】
[67]式（Ｖ）の好ましい態様は、（ａ）Ｒ１がＨであり、Ｒ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８が各々Ｈであり；ｌおよびｍが各々１であり；ｎが０であり；そしてＺがＨである、（ｂ）Ｒ１およびＲ２がメチルであり；Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり；ｎが０であり；そしてＺがＨである、（ｃ）Ｒ１がＨであり、Ｒ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが各々１であり、ｎが０であり、そしてＺが−ＳＣＨ３である、または（ｄ）Ｒ１およびＲ２がメチルであり、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８が各々Ｈであり、ｌおよびｍが１であり、ｎが０であり、そしてＺが−ＳＣＨ３である、式（Ｖ）の化合物を含む。
【００７６】
[68]まださらに好ましいメイタンシンは、式（ＶＩ−Ｌ）、（ＶＩ−Ｄ）、または（ＶＩ−Ｄ，Ｌ）により表される化合物：
【００７７】
【化９】
2009503105.tif 000010
を含み
式中、Ｙ２は
【００７８】
【化１０】
2009503105.tif 000011
を表し、
ここでＲ１およびＲ２は、各々独立して１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、好ましくはＣＨ３もしくはＣ２Ｈ５、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そしてここでＲ２はまた、Ｈであることもでき、
ここでＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８はおのおの独立して、Ｈ、１から１０の炭素原子を有する直鎖環式のアルキルもしくはアルケニル、好ましくはＣＨ３もしくはＣ２Ｈ５、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、
ここでｌ、ｍ、およびｎは、各々独立して１から５の整数であり、そして加えてｎはゼロであることができ、
ここでＺ２はＳＲまたはＣＯＲであり、ここでＲは、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、またはシンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、そして
ここでＭａｙは、メイタンシノイドである。
【００７９】
[69]付加的な好ましいメイタンシンは、式（ＶＩＩ）により表される化合物：
【００８０】
【化１１】
2009503105.tif 000012
を含み、
式中、Ｙ２’は
【００８１】
【化１２】
2009503105.tif 000013
を表し、
ここでＲ１およびＲ２は、各々独立して、Ｈ、１から１０の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖のアルキルもしくはアルケニル、好ましくはＣＨ３もしくはＣ２Ｈ５、３から１０の炭素原子を有する環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、ここでＡ、Ｂ、およびＤは、各々独立して３から１０の炭素原子を有するシクロアルキルもしくはシクロアルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、
ここでＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２は、各々独立してＨ、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、好ましくはＣＨ３もしくはＣ２Ｈ５、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルであり、
ここでｌ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔおよびｕは、各々独立してゼロ、または１から５の整数であるが、ただしｌ、ｍ、ｎ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕの少なくとも２つは、いずれの時にも同時にゼロではなく、そして
ここでＺ２はＳＲまたは−ＣＯＲであり、ここでＲは、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくはヘテロシクロアルキルのラジカルである。
【００８２】
[70]式（ＶＩＩ）の好ましい態様は、Ｒ１がＨであり、Ｒ２がメチルである式（ＶＩＩ）の化合物を含む。
【００８３】
[71]メイタンシノイドに加えて、免疫複合体において使用する細胞毒性物質は、タキサンまたはその誘導体であることができる。タキサンは、細胞毒性の天然の生成物であるパクリタキセル（Taxol（登録商標））、および半合成誘導体であるドセタキセル（Taxotere（登録商標））を含む化合物のファミリーであり、これらは双方とも癌治療において広く使用されている。タキサンは、チューブリンの脱重合を阻害する紡錘体の毒物であり、細胞死に至らしめる。ドセタキセルおよびパクリタキセルは、癌の治療において有用な物質であるが、一方それらの正常細胞に対する非特異的毒性のために、それらの抗腫瘍活性は限定される。さらにパクリタキセルおよびドセタキセルのような化合物それ自体は、免疫複合体において使用するのに十分なほど強力ではない。
【００８４】
[72]細胞毒性免疫複合体を調製する上で使用するための好ましいタキサンは、式（ＶＩＩＩ）のタキサン：
【００８５】
【化１３】
2009503105.tif 000014
である。
【００８６】
[73]本発明の文脈において使用することのできるタキサンを合成するための方法は、タキサンを、細胞結合物質、例えば抗体と複合体化させるための方法と共に、米国特許第５，４１６，０６４号、５，４７５，０９２号、６，３４０，７０１号、６，３７２，７３８号、６，４３６，９３１号、６，５９６，７５７号、６，７０６，７０８号、および６，７１６，８２１号、ならびに米国特許出願公開第２００４/０，０２４，０４９  Ａ１に詳細に記載されている。
【００８７】
[74]細胞毒性物質はまた、ＣＣ−１０６５またはその誘導体であることができる。ＣＣ−１０６５は、ストレプトマイセス・ゼレンシス（Streptomyces zelensis）の培養ブロスから単離される強力な抗腫瘍抗生物質である。ＣＣ−１０６５は、通常使用される抗癌剤、例えばドキソルビシン、メトトレキサート、およびビンクリスチンに比して、in vitroで約１０００倍強力である（Bhuyan et al., Cancer Res., 42: 3532-3537 (1982)）。ＣＣ−１０６５およびその類似体は、米国特許第５，５８５，４９９号、５，８４６，５４５号、６，３４０，７０１号、および６，３７２，７３８号に開示されている。ＣＣ−１０６５の細胞毒性効力は、そのアルキル化活性、およびそのＤＮＡ結合活性またはＤＮＡ挿入活性と相関されてきた。これら２つの活性は、分子の別個の部分に属する。この点において、アルキル化活性は、ＣＣ−１０６５のシクロプロパピロロインドール（ＣＰＩ）サブユニットに含有され、ＤＮＡ−結合活性は２つのピロロインドールサブユニットに属する。
【００８８】
[75]数種のＣＣ−１０６５類似体が当該技術において知られており、これらもまた免疫複合体の細胞毒性物質として使用することができる（例えばWarpehoski et al., J. Med. Chem., 31: 590-603 (1988)を参照のこと）。そのＣＰＩ部分がシクロプロパベンズインドール（ＣＢＩ）部分により置き換えられた、一連のＣＣ−１０６５類似体が開発されてきた（Boger et al., J. Org. Chem., 55: 5823-5833 (1990)、およびBoger et al., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1: 115-120 (1991)）。これらのＣＣ−１０６５類似体は、マウスにおいて遅延された毒性を引き起こすことなく、親薬剤のin vitroの高い効力を維持している。ＣＣ−１０６５と同様に、これらの化合物もＤＮＡの副溝に共有結合して細胞死を引き起こす、アルキル化物質である。
【００８９】
[76]ＣＣ−１０６５類似体の治療での有効性は、腫瘍部位を標的とした送達を通してin vivoの分布を変化させ、非標的組織へのより低い毒性、したがってより低い全身への毒性が結果的に得られることにより、大きく改善することができる。このために、腫瘍細胞を特異的に標的とする細胞結合物質との、ＣＣ−１０６５の類似体および誘導体の複合体が、作製されてきた（例えば米国特許第５，４７５，０９２号、５，５８５，４９９号、および５，８４６，５４５号を参照のこと）。これらの複合体は典型的に、in vitro における高い標的特異的細胞毒性、およびマウスのヒト腫瘍異種移植片モデルにおける抗腫瘍活性を示す（例えばChari et al., Cancer Res., 55: 4079-4084 (1995)を参照のこと）。
【００９０】
[77]ＣＣ−１０６５類似体を合成するための方法は、米国特許第５，４７５，０９２号、５，５８５，４９９号、５，８４６，５４５号、６，５３４，６６０号、６，５８６，６１８号、および６，７５６，３９７号、ならびに米国特許出願公開第２００３/０，１９５，３６５  Ａ１号に、詳細に記載されている。
【００９１】
[78]メトトレキサート、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロラムブシル、カリケアマイシン、ツブリシン(tubulysin)およびツブリシン類似体、デュオカルマイシンおよびデュオカルマイシン類似体、ドラスタチンおよびドラスタチン類似体もまた、本発明の文脈において使用することができる。ドキサルビシン化合物およびダウノルビシン化合物（例えば米国特許第６，６３０，５７９号を参照のこと）もまた薬剤として使用することができる。
【００９２】
[79]免疫複合体は、in vitroの方法により調製してよい。薬剤またはプロドラッグを抗体と連結するため、連結基を使用する。適切な連結基は当該技術において周知であり、ジスルフィド基、酸に不安的な基、光に不安定な基、ペプチダーゼに不安定な基、およびエステラーゼに不安定な基を含む。好ましい連結基はジスルフィド基である。例えば免疫複合体は、抗体および薬剤またはプロドラッグ間のジスルフィド交換反応を使用して、構成することができる。薬剤分子はまた、中間の担体分子、例えば血清アルブミンを通して抗体に連結することもできる。
【００９３】
[80]抗体は、二官能性架橋試薬との反応により修飾してよく、それにより抗体への架橋分子の共有結合付着をもたらす。本明細書で使用する場合、“二官能性架橋試薬”は、細胞結合物質を薬剤、例えば本明細書に記載した薬剤に共有結合により連結するあらゆる化学的部分である。本発明の好ましい態様において、連結部分の一部は薬剤により提供される。この点において薬剤は、抗体を薬剤に結合させるために使用されるより大きなリンカー分子の一部である連結部分を包含する。例えばメイタンシノイドＤＭ１を形成するため、メイタンシンのＣ−３ヒドロキシル基の側鎖を、遊離スルフヒドリル基（ＳＨ）を有するように修飾する。メイタンシンのこのチオール化された形は、修飾された抗体と反応して、免疫複合体を形成することができる。それ故最終的なリンカーは、そのうちの１つが架橋試薬により提供され、他方はＤＭ１由来の側鎖により提供される、２つの成分から組み立てられる。
【００９４】
[81]リンカー試薬が、薬剤および抗体の、それぞれ治療性、例えば細胞毒性、および標的に向かう特性の保持を提供する限り、あらゆる適切な二官能性架橋試薬を、本発明に関連して使用することができる。好ましくはリンカー分子は、薬剤および抗体が互いに化学的にカップルする（例えば共有結合する）ように、化学的結合（上に記載したような）を通して薬剤を抗体に結合する。好ましくは、リンカー試薬は開裂可能なリンカーである。より好ましくは、リンカーはマイルドな条件、すなわち薬剤の活性が影響を受けない細胞内の条件の下で開裂する。適切な開裂可能なリンカーの例は、ジスルフィドリンカー、酸に不安的なリンカー、光に不安定なリンカー、ペプチダーゼに不安定なリンカー、およびエステラーゼに不安定なリンカーを含む。ジスルフィドを含有するリンカーは、生理学的条件下で起こり得るジスルフィド交換を通して開裂可能なリンカーである。酸に不安定なリンカーは、酸性のｐＨで開裂可能なリンカーである。例えばある種の細胞内の一区画、例えばエンドソームおよびリソソームは、酸性のｐＨ（ｐＨ４−５）を有しており、酸に不安定なリンカーを開裂するのに適する条件を提供する。光に不安定なリンカーは、体表面で、および光の届き得る多くの体腔において有用である。さらに赤外光は組織を透過することができる。ペプチダーゼに不安定なリンカーは、細胞内および細胞外のある種のペプチドを開裂するために使用することができる（例えばTrouet et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 79: 626-629 (1982)、およびUmemoto et al., Int. J. Cancer, 43: 677-684 (1989)を参照のこと）。
【００９５】
[82]好ましくは、薬剤はジスルフィド結合を通して抗体に連結する。リンカー分子は、抗体と反応することのできる反応性化学基を包含する。抗体との反応のための好ましい反応性化学基は、Ｎ−スクシンイミジルエステル、およびＮ−スルホスクシンイミジルエステルである。加えてリンカー分子は、薬剤と反応してジスルフィド結合を形成することのできる反応性化学基、好ましくはジチオピリジル基を包含する。特に好ましいリンカー分子は、例えばＮ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート（ＳＰＤＰ）（例えばCarlsson et al., Biochem. J., 173: 723-737 (1978)を参照のこと）、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＰＤＢ）（例えば米国特許第４，５６３，３０４号を参照のこと）、およびＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）（例えばＣＡＳ登録番号３４１４９８−０８−６）を含む。
【００９６】
[83]開裂可能なリンカーを好ましくは本発明の方法において使用するが、一方非開裂(non-cleavable)リンカーを使用してもまた、上に記載した免疫複合体を作製することができる。非開裂リンカーは、薬剤、例えばメイタンシノイド、タキサン、またはＣＣ−１０６５類似体、を細胞結合物質、例えば抗体に、安定な共有結合の様式で連結する能力のある、あらゆる化学的部分である。したがって非開裂リンカーは、薬剤または抗体が活性を維持できる条件下で、酸に誘発される開裂、光に誘発される開裂、ペプチダーゼに誘発される開裂、エステラーゼに誘発される開裂、およびジスルフィド結合の開裂に対して、実質的に抵抗性がある。
【００９７】
[84]薬剤および細胞結合物質間に非開裂リンカーを形成する適切な架橋試薬は、当該技術において周知されている。非開裂リンカーの例は、細胞結合物質との反応のためのＮ−スクシンイミジルエステル部分、またはＮ−スルホスクシンイミジルエステル部分、ならびに薬剤との反応のためのマレイミドまたはハロアセチルを基本とする部分、を有するリンカーを含む。マレイミドを基本とする部分を包含する架橋試薬は、Ｎ−スクシンイミジル４−(マレイミドメチル)シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）、ＳＭＣＣの“長鎖”類似体であるＮ−スクシンイミジル−４−(Ｎ−マレイミドメチル)−シクロヘキサン−１−カルボキシ−(６−アミドカプロエート)（ＬＣ−ＳＭＣＣ）、κ−マレイミドウンデカン酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＫＭＵＡ）、γ−マレイミド酪酸Ｎ−スクシンイミジルエステル（ＧＭＢＳ）、ε−マレイミドカプロン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＥＭＣＳ）、ｍ−マレイミドベンゾイル−Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＭＢＳ）、Ｎ−(α−マレイミドアセトキシ)−スクシンイミドエステル（ＡＭＡＳ）、スクシンイミジル−６−(β−マレイミドプロピオンアミド)ヘキサノエート（ＳＭＰＨ）、Ｎ−スクシンイミジル４−(ｐ−マレイミドフェニル)−ブチレート（ＳＭＰＢ）、およびＮ−(ｐ−マレイミドフェニル)イソシアネート（ＰＭＰＩ）を含む。ハロアセチルを基本とする部分を包含する架橋試薬は、Ｎ−スクシンイミジル−４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ−スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）およびＮ−スクシンイミジル３−(ブロモアセトアミド)プロピオネート（ＳＢＡＰ）を含む。
【００９８】
[85]非開裂リンカーを形成するイオウ原子を含まないその他の架橋試薬もまた、本発明の方法において使用することができる。そのようなリンカーは、ジカルボン酸を基本とする部分から誘導することができる。適切なジカルボン酸を基本とする部分として、一般式（ＩＸ）のα，ω−ジカルボン酸を含むがこれに限定されない：
【００９９】
【化１４】
2009503105.tif 000015
式中Ｘは、２から２０の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖のアルキル基、アルケニル基、またはアルキニル基であり、Ｙは、３から１０の炭素原子を持つ、シクロアルキル基またはシクロアルケニル基であり、Ｚは、６から１０の炭素原子を持つ、置換されたもしくは置換されていない芳香族の基、またはヘテロ原子がＮ、ＯもしくはＳより選択される置換されたもしくは置換されていない複素環式基であり、そして式中ｌ、ｍ、およびｎは各々０または１であるが、ただしｌ、ｍ、およびｎは同時にすべてゼロではない。
【０１００】
[86]本明細書に開示した非開裂リンカーの多くは、米国特許出願公開第２００５−０１６９９３３  Ａ１号に詳細に記載されている。
【０１０１】
[87]あるいは米国特許第６，４４１，１６３  Ｂ１号に開示されているように、薬剤を最初に修飾して、抗体との反応に適する反応性エステルを導入することができる。活性化されたリンカー部分を含有するこれらのメイタンシノイドの、抗体との反応は、開裂可能なまたは非開裂の抗体メイタンシノイド複合体を生成するもう１つの方法を提供する。
【０１０２】
[88]そのような医薬組成物の製造のための過程は、クロマトグラフィーまたはダイアフィルトレーションにより、原体(bulk)の医薬剤を適当な製剤バッファーにバッファー交換し、その後、溶液または固体のいずれかとして所望の量の適当な賦形剤を添加することを伴う。タンパク質濃度および/またはｐＨの最終的な調整をまた行って、所望の組成物を達成してよい。
【０１０３】
[89]本発明の免疫複合体は、本出願に記載した医薬製剤の形で、およびそれ故医薬的に受容可能な担体、賦形剤、または希釈剤と共に患者に投与してよい。使用する場合、“医薬的に受容可能な”は、哺乳類、好ましくはヒトの治療または診断において有用である物質をいう。投与の好ましい様式は、非経口、特に静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、またはリンパ管内の経路による。例えばRemington’s Pharmaceutical Sciences, 第１６版、1980, Mack Publishing Company, Osol et al. 編、を参照のこと。そのような組成物はタンパク質、例えば血清タンパク質、例えばヒト血清アルブミン、バッファーまたは緩衝化物質、例えばリン酸塩、その他の塩、もしくは電解質、等を含んでよい。適切な希釈剤は、例えば無菌水、等張食塩水、ブドウ糖希釈水溶液、多価アルコールまたはそのようなアルコールの混合物、例えばグリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、等を含んでよい。製剤は、保存剤、例えばフェネチルアルコール、メチルパラベンおよびプロピルパラベン、等を含有してよい。所望であれば製剤は、０．０５から約０．２０重量パーセントの抗酸化物を含むことができる。
【０１０４】
[90]投与は、当業者の医師により有効であることが知られているあらゆる経路を介してよい。非経口投与が好ましい。本発明の製剤を投与するための好ましい非経口経路は、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、動脈内を含む。本発明において使用する化合物の、静脈内、腹腔内、筋肉内、および皮下の投与経路が、より好ましい非経口投与経路である。本発明の製剤の静脈内、腹腔内、および皮下の投与経路が、なおより一層好ましい。
【０１０５】
[91]ある種の非経口経路を介しての投与は、本発明の製剤を患者の体内に、針またはカテーテルを通して導入することを伴ってよい。所望によりそのような投与は、無菌のシリンジ、または何らかの他の機械的なデバイス、例えば継続的な輸液システムにより推進してよい。本発明により提供した製剤は、シリンジ、注射器(injector)、ポンプ、もしくはあらゆるその他のデバイスを使用して、または非経口投与用に当該技術で認識されている重力により、投与してよい。製剤は、無菌液の投与剤形で非経口的に投与することができる。これらの製剤は、ボーラスまたは急速な注入として静脈内に投与してよく、またこれらの製剤は、それらの所望の治療的、診断的、または医学的効果に加えて、免疫複合体の放出を引き起こすことができる。
【０１０６】
[92]本発明の免疫複合体は、因子、例えば治療される疾患の容態または修飾される生物学的効果、免疫複合体が投与される様式、患者の年齢、体重および状態、ならびに担当医により決定されるその他の因子、に依存して広範囲の投与量にわたり有効である。したがってあらゆる所定の患者に投与される量は、個々人の基盤の下に決定することができる。
【０１０７】
[93]患者を治療するために投与される本発明の製剤の量は、多数の因子に依存してよく、その中に非限定的に、患者の性別、体重および年齢、治療される状態または疾患の根底にある原因、投与経路およびバイオアベイラビリティ、投与された免疫複合体の体内における持続性、製剤、ならびに免疫複合体の効力が含まれる。投与が間欠的である場合、１投与当たりの量はまた、投与の間隔、および製剤由来の免疫複合体のバイオアベイラビリティを考慮しなければならない。本発明の製剤の投与は、継続的であることができる。所望の臨床的結果を達成するための、本発明の製剤の投与の用量、および注入速度または頻度の設定をすることは、当業者の医師の技術の範囲内である。
【０１０８】
[94]投与される投与量はもちろん、公知の因子、例えば特定の物質の薬力学的特徴、ならびにその投与の様式および経路；レシピエントの年齢、健康状態、および体重；症状の性質および範囲、併用治療の種類、治療の頻度、ならびに所望の効果、に依存して変わることになる。通常、治療上有意な化合物の１日の投与量は、体重１キログラム当たり約０．１から１００ミリグラムであることができる。
【０１０９】
[95]体内への投与に適する投与剤形は、１ユニット当たり約１ミリグラムから約５００ミリグラムの治療上有意な化合物を含有する。これらの医薬組成物において、治療上有意な化合物は、普通、液体製剤中に約０．０５−２％（重量）、そして組成物の総重量に基づいて再構成する前の凍結乾燥製剤中には２−５０％の量で存在するものとする。
【０１１０】
[96]本発明はまた、上に記載した製剤の凍結乾燥粉末を用意する。好ましくは凍結乾燥製剤は、１つまたはそれより多くの付加的な成分、例えば溶解保護剤および/または充填剤を包含する。凍結乾燥粉末は水を用いて再構成して、再構成された溶液を作出することができる。本製剤は、免疫複合体を包含する凍結乾燥製剤について記載している、米国特許出願第２００４/０，２４１，１７４  Ａ１号（同記載を本明細書により参照として援用する）に記載されているように、凍結乾燥および再構成することができる。
【０１１１】
[97]凍結乾燥組成物の再構成の前の、本発明の凍結乾燥組成物を包含する各成分の相対量を、複合体１ｍｇ当たりの賦形剤（例えばバッファー、表面活性剤、充填剤、氷晶防止剤）のｍｇという表し方で記載することができる。
【０１１２】
[98]本明細書に記載したあらゆる適切な緩衝化剤を、本発明の凍結乾燥組成物と関連して使用することができるが、凍結乾燥組成物は、好ましくはコハク酸ナトリウムバッファーを包含する。緩衝化剤は、本発明の凍結乾燥組成物中にあらゆる適切な量で存在することができる。特に凍結乾燥組成物は所望により、複合体１ｍｇ当たり約０．１ｍｇから約２ｍｇの緩衝化剤（例えば複合体１ｍｇ当たり約０．１ｍｇから約０．５ｍｇの緩衝化剤、複合体１ｍｇ当たり約０．５ｍｇから約１ｍｇの緩衝化剤、または複合体１ｍｇ当たり約１ｍｇから約２ｍｇの緩衝化剤）を包含する。最も好ましくは凍結乾燥組成物は、複合体１ｍｇ当たり約０．３ｍｇのコハク酸ナトリウムバッファーを包含する。
【０１１３】
[99]凍結乾燥組成物は所望により、複合体１ｍｇ当たり約０．００５ｍｇから約０．１ｍｇのポリソルベート、そして好ましくは複合体１ｍｇ当たり約０．００５ｍｇから約０．０１ｍｇのポリソルベート、複合体１ｍｇ当たり約０．０１ｍｇから約０．０５ｍｇのポリソルベート、または複合体１ｍｇ当たり約０．０５ｍｇから約０．１ｍｇのポリソルベートを包含する。ポリソルベートがポリソルベート２０である場合、凍結乾燥組成物は好ましくは、複合体１ｍｇ当たり約０．０２ｍｇのポリソルベート２０を包含する。
【０１１４】
[100]凍結および乾燥の間の組成物の活性成分の分解を防ぐため、本発明の凍結乾燥組成物はさらに、氷晶防止剤、好ましくはアモルファス氷晶防止剤を包含する。“氷晶防止剤”という用語は本明細書において使用する場合、凍結中に不安定な分子を保護する賦形剤をいう。凍結乾燥組成物において使用するための適切な氷晶防止剤は、当業者に公知であり、例えばグリセロール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、デキストラン、グルコース、トレハローズ、およびショ糖を含む。最も好ましくは氷晶防止剤はショ糖である。氷晶防止剤は、本発明の凍結乾燥組成物中にあらゆる適切な量で存在してよい。凍結乾燥組成物は所望により、複合体１ｍｇ当たり約０．５ｍｇから約５ｍｇ、例えば約０．５ｍｇから約２ｍｇの氷晶防止剤、複合体１ｍｇ当たり約０．８ｍｇの氷晶防止剤、複合体１ｍｇ当たり約２ｍｇの氷晶防止剤、または複合体１ｍｇ当たり約４ｍｇの氷晶防止剤を包含する。氷晶防止剤がショ糖である場合、凍結乾燥組成物は好ましくは、複合体１ｍｇ当たり約０．５ｍｇから約２ｍｇ（例えば約１ｍｇ）のショ糖を包含する。
【０１１５】
[101]凍結乾燥組成物はさらに、充填剤、好ましくは結晶化可能な充填剤を含有することができる。充填剤は典型的には、凍結乾燥の結果生成される“ケーク”に構造および重量を提供するために、当該技術において使用される。当該技術において公知のあらゆる適切な充填剤を、本発明の凍結乾燥組成物と関連して使用してよい。適切な充填剤として、例えばマンニトール、デキストラン、およびグリシンを含む。本発明の組成物中に使用される充填剤は、最も好ましくはグリシンである。凍結乾燥組成物は、あらゆる適切な量の充填剤を含有することができるが、好ましくは凍結乾燥組成物は、複合体１ｍｇ当たり約２ｍｇから約２０ｍｇの充填剤、そして好ましくは複合体１ｍｇ当たり約２ｍｇから約１０ｍｇの充填剤、複合体１ｍｇ当たり約５ｍｇから約１０ｍｇの充填剤、複合体１ｍｇ当たり約１０ｍｇから約１５ｍｇの充填剤、または複合体１ｍｇ当たり約１５ｍｇから約２０ｍｇの充填剤を含有することができる。充填剤がグリシンである場合、凍結乾燥組成物は好ましくは、複合体１ｍｇ当たり約３．８ｍｇのグリシンを包含する。
【０１１６】
[102]したがって本発明に従って、５ｍｇ/ｍＬの複合体（例えば、好ましくはＤＭ１と化学的にカップルしたｈｕＮ９０１を包含する複合体）を含有するように再構成されるものとする凍結乾燥組成物の成分は、好ましくは（ｉ）複合体１ｍｇ当たり約０．３ｍｇのコハク酸ナトリウムバッファー、（ｉｉ）複合体１ｍｇ当たり約０．０２ｍｇのポリソルベート２０、（ｉｉｉ）複合体１ｍｇ当たり約１ｍｇのショ糖、（ｉｖ）複合体１ｍｇ当たり約３．８ｍｇのグリシン、を包含する。一度水で再構成されると、そのような凍結乾燥組成物は好ましくは約５．５のｐＨを有する。さらに凍結乾燥組成物を水で再構成する場合、液体製剤に関連して上に述べた賦形剤の相対的濃度の記載が、前述の凍結乾燥組成物に適用される。
【０１１７】
[103]凍結乾燥の方法は当該技術において周知されており、例えばWang, W., Int. J. Pharm., 203, 1-60 (2000) に記載されている。例えば本発明の凍結乾燥組成物は、以下のステップ：（１）４℃の貯蔵温度および周囲圧での容器圧(ambient chamber pressure)で２．５時間予め冷却、（２）−５０℃の貯蔵温度および周囲圧での容器圧で１４時間凍結、（３）−２０℃の貯蔵温度および周囲圧での容器圧で６時間、グリシンの再結晶化、（４）−５０℃の貯蔵温度および周囲圧での容器圧で１６時間で再凍結、（５）−１３℃の貯蔵温度および１００ｍＴｏｒｒの圧で２４時間、１回目の乾燥、（６）２４℃の貯蔵温度および１００ｍＴｏｒｒの圧で１０時間、２回目の乾燥、ならびに（７）２４℃の貯蔵温度および周囲圧での容器圧で停止期、を包含する凍結乾燥サイクルを使用して、生成することができる。しかしながら凍結乾燥組成物は、上に記載した方法により生成される組成物に限定されない。実際にあらゆる適切な凍結乾燥法を使用して、凍結乾燥組成物を生成することができ、そして選択される凍結乾燥のパラメータ（例えば乾燥時間）は、凍結乾燥する溶液の体積を含む多様な因子に依存して変わることになることは、当業者には明らかであろう。
【０１１８】
[104]もう１つの態様において、本発明は、水溶液製剤を調製するためのキットへの方向づけを行い、このキットは凍結乾燥粉末を含有する第１の容器、および再構成安定剤を包含する水溶液製剤を含有する第２の容器の双方を含有する。溶液中の凍結乾燥粉末の濃度、各容器内に充填される溶液の体積、および容器の容積はすべて、最終的な投与量ユニット中の活性な本体の所望の濃度に依存して、適切に修飾することができる相互に関係するパラメータである。したがってこれらのパラメータは、広い範囲内で変動してよい。
【０１１９】
[105]本明細書に引用したすべての特許、公開、およびその他の参考文献は、特にそれらの全内容において参照として援用する。
【０１２０】
[106]以下の実施例により本発明をさらに記載するが、これら実施例は工程の説明であり、本発明を限定するものとして解釈されるべきではない。以下に提示する工程のパラメータは、特定の必要性に合うように当業者により採用および適応することができる。
【実施例】
【０１２１】
（実施例１）
[107]この実施例は、製剤化したＭＡｂ−ＤＭ１複合体サンプルの視覚的外観における、以下の製剤の賦形剤の効果を示す。
【０１２２】
[108]ｈｕＮ９０１−ＳＰＰ−ＤＭ１のサンプルは、以下に列記した各賦形剤と共に１４０ｍＭ  ＮａＣｌを含む１０ｍＭ  リン酸バッファー  ｐＨ６．５中に１．０ｍｇ/ｍＬとした。賦形剤は、ｗ/ｗ％を基準（賦形剤の重量/溶液の重量）として、ｈｕＮ９０１−ＳＰＰ−ＤＭ１サンプルに直接加えた。賦形剤の添加後直ちに製剤を濾過し、外観および粒子のカウントの検査を行った。その後サンプルは、試験の期間中４℃で保存し、２週および１ヶ月のタイムポイントで再度検査した。外観に関してサンプルは、透明性については白色の背景に対して、そして可視粒子の存否については白色光の下で黒色の背景に対して、少なくとも１．０ｍＬの溶液を調べることにより検査した。結果は、可視粒子の存否として報告する。約５μｍ以上のサイズの肉眼不可視の粒子についてもまた、２および１００μｍ間の粒度を測定するために更正されたＨＩＡＣ粒子カウンターを用いて測定した。
【０１２３】
【表１】
2009503105.tif 000016
ショ糖、ＴＷＥＥＮ−２０（登録商標）、ベータ−シクロデキストリン、ブドウ糖、グリセロール、マンニトール、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）の正の効果が観察された。
【０１２４】
（実施例２）
[109]この実施例は、複合体の凝集に関して、ｈｕＮ９０１−ＳＰＰ−ＤＭ１の安定性におけるアミノ酸の効果を示す。
【０１２５】
[110]ｈｕＮ９０１−ＳＰＰ−ＤＭ１のサンプルは、以下のバッファー中に５．０ｍｇ/ｍＬとし、２−８℃および２５℃で１２ヶ月間保存した。複合体の凝集体の含有量を、１、３、６および１２ヶ月の時点でクロマトグラフィーアッセイにて検査した。
【０１２６】
（１）１０ｍＭ  リン酸ナトリウム、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．５。
【０１２７】
（２）１０ｍＭ  クエン酸ナトリウム、１３５ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０１％  ポリソルベート２０、ｐＨ５．５。
【０１２８】
（３）１０ｍＭ  クエン酸ナトリウム、１３０ｍＭ  ヒスチジン、０．０１％  ポリソルベート２０、ｐＨ５．５。
【０１２９】
（４）１０ｍＭ  クエン酸ナトリウム、１１０ｍＭ  グリシン、８０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０１％  ポリソルベート２０、ｐＨ５．５。
【０１３０】
【表２】
2009503105.tif 000017
[111]実施例１は、複合体の凝集体の形成の防止に関して、ヒスチジンが製剤を改善することを示す。
【０１３１】
（実施例３）
[112]この実施例は、複合体の凝集体の点から、ｈｕＭｙ９−６−ＳＰＤＢ−ＤＭ４の安定性におけるヒスチジンの効果を示す。
【０１３２】
[113]ｈｕＭｙ９−６−ＳＰＤＢ−ＤＭ４複合体は、以下：
（１）１０ｍＭ  クエン酸ナトリウム、１３５ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ５．５
（２）１５０ｍＭ  ヒスチジン/ヒスチジン塩化物、ｐＨ５．５
中に５．０ｍｇ/ｍＬにて製剤化した。
【０１３３】
[114]サンプルは、２−８℃、および２５℃で６ヶ月間インキュベーションし、その後クロマトグラフィーアッセイにより複合体の凝集体について検査した。
【０１３４】
【表３】
2009503105.tif 000018
[115]データは、凝集体の形成の防止におけるヒスチジンの有益な効果を示す。
【０１３５】
（実施例４）
[116]この実施例は、複合体の凝集体に関して、ｈｕＣ２４２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４の安定性における、緩衝化剤、糖質およびアミノ酸の効果を示す。
【０１３６】
[117]ｈｕＣ２４２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４のサンプルは、以下の溶液：
（１）１０ｍＭ  クエン酸ナトリウム、１３５ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ５．５
（２）１０ｍＭ  クエン酸ナトリウム、５％  ショ糖、１３０ｍＭ  グリシン、０．１％ポリソルベート８０、ｐＨ５．５
（３）１０ｍＭ  ヒスチジン/ヒスチジン塩化物、５％  ショ糖、１３０ｍＭ  グリシン、ｐＨ５．５
中に５．０ｍｇ/ｍＬ。
【０１３７】
[118]複合体モノマーおよび凝集体の含有量に関する検査を、Ｔ０、ならびに２−８℃および２５℃での３ヶ月の保存後に行った。
【０１３８】
【表４】
2009503105.tif 000019
[119]データは、ショ糖およびグリシンが上の組み合わせにおいて合わせて、複合体の凝集体に対する防止に関して、製剤を改善することを示す。最大の改善は、ショ糖およびグリシンの組み合わせをヒスチジンと共に使用した時に観察される。
【０１３９】
（実施例５）
[120]この実施例は、ｈｕＮ９０１−ＳＰＰ−ＤＭ１複合体の凝集体の含有量における、グリシンと共にまたは含まずにショ糖を含有する様々な製剤の効果を示す。
【０１４０】
[121]以下の各液体製剤中の５．０ｍｇ/ｍＬの濃度のｈｕＮ９０１−ＳＰＰ−ＤＭ１のサンプルを、モノマーおよび凝集体の含有量について検査した。
【０１４１】
（１）１０ｍＭ  クエン酸ナトリウム、１３５ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０１％  ポリソルベート２０、ｐＨ５．５
（２）１０ｍＭ  クエン酸ナトリウム、６０ｍＭ  ＮａＣｌ、５％  ショ糖、ｐＨ５．５
（３）１０ｍＭ  クエン酸ナトリウム、６０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０１％  ポリソルベート２０、５％  ショ糖、ｐＨ５．５
（４）１０ｍＭ  リン酸ナトリウム、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、ｐＨ６．５
（５）１０ｍＭ  コハク酸ナトリウム、０．２５Ｍ  グリシン、０．０１％  ポリソルベート２０、０．５％  ショ糖、ｐＨ５．５
[122]２５℃で保存したサンプルを、３、６および１２ヶ月の時点で凝集体の含有量について検査した。
【０１４２】
【表５】
2009503105.tif 000020
[123]すべてのケースにおいて、ショ糖を含有する製剤は、ショ糖を含まないものより低い凝集体の含有量を有する。グリシンを含有する製剤（組成５）は、この実施例において最大の安定性を有した。
【０１４３】
（実施例６）
[124]この実施例は、撹拌により誘発される粒子の形成における、ポリソルベート８０の効果を示す。このストレスの状態（撹拌）は、静的保存（実施例１で検討している）の間に遭遇するストレスとは反対に、液体の複合体を輸送し取り扱う間に遭遇する擬似的ストレスと期待される。
【０１４４】
[125]ｈｕＣ２４２−ＳＰＤＢ−ＤＭ４のサンプルは、以下のバッファー中に１ｍｇ/ｍＬとし、ＵＳＰタイプ１ガラスバイアル内に入れ（１０ｍＬのバイアル内に５ｍＬ）、これをFlurotec（登録商標）Stopperで封をした。バイアルを、Lab-Line Orbital Shakerを使用して室温で１００ｒｐｍにて４８時間震盪した。
【０１４５】
（１）１０ｍＭ  クエン酸ナトリウム、１３５ｍＭ  塩化ナトリウム、ｐＨ５．５
（２）１０ｍＭ  ヒスチジン、５％  ショ糖、１３０ｍＭ  グリシン、ｐＨ５．５
（３）１０ｍＭ  ヒスチジン、５％  ショ糖、１３０ｍＭ  グリシン、０．１％  ポリソルベート８０、ｐＨ５．５
（４）１０ｍＭ  ヒスチジン、１％  ショ糖、２５０ｍＭ  グリシン、ｐＨ５．５
（５）１０ｍＭ  ヒスチジン、１％  ショ糖、２５０ｍＭ  グリシン、０．１％  ポリソルベート８０、ｐＨ５．５
（６）１０ｍＭ  ヒスチジン、２８０ｍＭ  グリシン、ｐＨ５．５
（７）１０ｍＭ  ヒスチジン、２８０ｍＭ  グリシン、０．１％  ポリソルベート８０、ｐＨ５．５
（８）１０ｍＭ  ヒスチジン、１０％  ショ糖、ｐＨ５．５
（９）１０ｍＭ  ヒスチジン、１０％  ショ糖、０．１％  ポリソルベート８０、ｐＨ５．５
[126]４８時間震盪後、すべてのバイアルを目視により検討した。ポリソルベート８０を含有したもの（組成３、５、７および９）は透明のままだったが、ポリソルベート８０を含有しなかったもの（組成１、２、４、６および８）はすべて濁っていた。これらのデータは、液体複合体の輸送および取り扱いの間に遭遇すると思われるような、撹拌による粒子を低減する上での、ポリソルベート８０の有益な効果を実証する。
【手続補正書】
【提出日】平成20年4月7日(2008.4.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６２】
[60]例えば、イオウ原子を持つ炭素原子上にモノアルキルまたはジアルキルの置換を持つ、チオールおよびジスルフィドを含有するメイタンシノイドを含む、その他のメイタンシンを、本発明の文脈において使用してよい。特に好ましいのは、Ｃ３位，Ｃ１４ヒドロキシメチル、Ｃ１５ヒドロキシ、またはＣ２０デスメチルの官能基に、立体的に妨害されたスルフヒドリル基を持つアシル基でアシル化されたアミノ酸側鎖を有するメイタンシノイドであり、ここでチオール官能基を持つアシル基の炭素原子は、１または２の置換基を有しており、前記置換基はＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、１から１０の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくは複素環式のラジカルであり、そしてさらにここで置換基の１つはＨであることができ、そしてここでアシル基は、カルボニル官能基およびイオウ原子の間に少なくとも３つの炭素原子の長さの直鎖を有する。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６５】
【化４】
2009503105.tif 000021
を表し、
ここでＲ１およびＲ２は、各々独立して１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、好ましくはＣＨ３もしくはＣ２Ｈ５、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくは複素環式のラジカルであり、そしてここでＲ２はまた、Ｈであることもでき、
ここでＡ、Ｂ、Ｄは３−１０の炭素原子を有するシクロアルキルもしくはシクロアルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族、もしくは複素環式のラジカルであり、
ここでＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２は各々独立して、Ｈ、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、好ましくはＣＨ３もしくはＣ２Ｈ５、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族、もしくは複素環式のラジカルであり、
ここでｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕは、各々独立してゼロ、または１から５の整数であるが、ただしｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕの少なくとも２つは、いずれの時にも同時にゼロではなく、そして
ここでＺはＨ、ＳＲまたはＣＯＲであり、ここでＲは、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族、もしくは複素環式のラジカルである。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６６】
[62]式（ＩＩＩ）の好ましい態様は、式中（ａ）Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、そしてＺがＨである、（ｂ）Ｒ１およびＲ２がメチルであり、そしてＺがＨである、（ｃ）Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨであり、そしてＺが−ＳＣＨ３である、ならびに（ｄ）Ｒ１およびＲ２がメチルであり、そしてＺが−ＳＣＨ３である、式（ＩＩＩ）の化合物を含む。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００６９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００６９】
【化６】
2009503105.tif 000022
を表し、
ここでＲ１およびＲ２は、各々独立してＨ、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、好ましくはＣＨ３もしくはＣ２Ｈ５、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくは複素環式のラジカルであり、
ここでＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８はおのおの独立して、Ｈ、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、好ましくはＣＨ３もしくはＣ２Ｈ５、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくは複素環式のラジカルであり、
ここでｌ、ｍ、およびｎは、各々独立して１から５の整数であり、そして加えてｎはゼロであることができ、
ここでＺはＨ、ＳＲまたはＣＯＲであり、ここでＲは、１から１０の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する環式のアルキルもしくはアルケニル、またはシンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくは複素環式のラジカルであり、そして
ここでＭａｙは、Ｃ−３、Ｃ−１４ヒドロキシメチル、Ｃ−１５ヒドロキシ、またはＣ−２０デスメチルに側鎖を持つメイタンシノイドを表す。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７４
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７４】
【化８】
2009503105.tif 000023
を表し、
ここでＲ１およびＲ２は、各々独立してＨ、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、好ましくはＣＨ３もしくはＣ２Ｈ５、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくは複素環式のラジカルであり、ここでＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８はおのおの独立して、Ｈ、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、好ましくはＣＨ３もしくはＣ２Ｈ５、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくは複素環式のラジカルであり、
ここでｌ、ｍ、およびｎは、各々独立して１から５の整数であり、そして加えてｎはゼロであることができ、そして
ここでＺはＨ、ＳＲまたは−ＣＯＲであり、ここでＲは、メチル、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、またはシンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族ラジカルもしくは複素環式のラジカルである。
【手続補正６】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７８
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７８】
【化１０】
2009503105.tif 000024
を表し、
ここでＲ１およびＲ２は、各々独立して１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、好ましくはＣＨ３もしくはＣ２Ｈ５、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくは複素環式のラジカルであり、そしてここでＲ２はまた、Ｈであることもでき、
ここでＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲ８はおのおの独立して、Ｈ、１から１０の炭素原子を有する直鎖環式のアルキルもしくはアルケニル、好ましくはＣＨ３もしくはＣ２Ｈ５、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくは複素環式のラジカルであり、
ここでｌ、ｍ、およびｎは、各々独立して１から５の整数であり、そして加えてｎはゼロであることができ、
ここでＺ２はＳＲまたはＣＯＲであり、ここでＲは、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、またはシンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくは複素環式のラジカルであり、そして
ここでＭａｙは、メイタンシノイドである。
【手続補正７】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８１】
【化１２】
2009503105.tif 000025
を表し、
ここでＲ１およびＲ２は、各々独立して、Ｈ、１から１０の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖のアルキルもしくはアルケニル、好ましくはＣＨ３もしくはＣ２Ｈ５、３から１０の炭素原子を有する環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくは複素環式のラジカルであり、ここでＡ、Ｂ、およびＤは、各々独立して３から１０の炭素原子を有するシクロアルキルもしくはシクロアルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくは複素環式のラジカルであり、
ここでＲ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、およびＲ１２は、各々独立してＨ、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、好ましくはＣＨ３もしくはＣ２Ｈ５、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、フェニル、置換されたフェニル、または複素環式芳香族もしくは複素環式のラジカルであり、
ここでｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔおよびｕは、各々独立してゼロ、または１から５の整数であるが、ただしｌ、ｍ、ｎ、ｏ、ｐ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔ、およびｕの少なくとも２つは、いずれの時にも同時にゼロではなく、そして
ここでＺ２はＳＲまたは−ＣＯＲであり、ここでＲは、１から１０の炭素原子を有する直鎖のアルキルもしくはアルケニル、３から１０の炭素原子を有する分枝鎖もしくは環式のアルキルもしくはアルケニル、シンプルなアリールもしくは置換されたアリール、または複素環式芳香族もしくは複素環式のラジカルである。
【手続補正８】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８２
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８２】
[70]式（ＶＩＩ）の好ましい態様は、Ｒ１がメチルであり、Ｒ２がＨである式（ＶＩＩ）の化合物を含む。
【国際調査報告】
2009503105.tif 000026