(57)【要約】  本発明ではインフルエンザ、好ましくはトリインフルエンザの治療及び／又は予防用の薬剤の製造におけるインターフェロン（ＩＦＮ）の使用が開示される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
インターフェロン（ＩＦＮ）又はその異性体、突然変異タンパク質、融合タンパク質、官能性誘導体、活性画分又は塩の、インフルエンザ治療及び／又は予防用の薬剤の製造における使用。
【請求項２】
インターフェロン（ＩＦＮ）又はその異性体、突然変異タンパク質、融合タンパク質、官能性誘導体、活性画分又は塩の、抗ウイルス薬との組み合わせによる、同時、逐次又は個別使用のための、インフルエンザ治療及び／又は予防用薬剤の製造における使用。
【請求項３】
インフルエンザがトリインフルエンザである、請求項１又は請求項２に記載の使用。
【請求項４】
トリインフルエンザがインフルエンザウイルスＡ型株又はＢ型株に起因する、請求項１〜３に記載の使用。
【請求項５】
トリインフルエンザがインフルエンザウイルスＡ型株に起因する請求項４記載の使用。
【請求項６】
トリインフルエンザがインフルエンザウイルスＨ５、Ｈ７又はＨ９亜型に起因する、請求項１〜５の何れか一項に記載の使用。
【請求項７】
トリインフルエンザが、インフルエンザウイルスＨ５Ｎ２、Ｈ７Ｎ１、Ｈ７Ｎ７、Ｈ９Ｎ２又はＨ５Ｎ１の何れかの亜型に起因する、請求項１〜６の何れか一項に記載の使用。
【請求項８】
トリインフルエンザがインフルエンザウイルスＨ５Ｎ１亜型に起因する、請求項１〜７の何れか一項に記載の使用。
【請求項９】
抗ウイルス薬が、オセルタミビル（商品名Tamiflu）及びザナミビル（商品名Relenza）等のノイラミニダーゼ阻害薬、アマンタジン（商品名Symmetrel）及びリマンタジン（商品名Flumadine）等のアダマンタン、又はリバビリン（商品名Rebetol）からなる群より選択される、請求項１〜８の何れか一項に記載の使用。
【請求項１０】
抗ウイルス薬がリバビリンである、請求項１〜９の何れか一項に記載の使用。
【請求項１１】
ＩＦＮが組み換えヒトＩＦＮ−βである、請求項１〜１０の何れか一項に記載の使用。
【請求項１２】
ＩＦＮがＣＨＯ細胞由来のグリコシル化を有する組み換えヒトＩＦＮ−βである、請求項１１記載の使用。
【請求項１３】
ＩＦＮがコンセンサス・インターフェロンである、請求項１〜１２の何れか一項に記載の使用。
【請求項１４】
ＩＦＮが融合タンパク質として送達される請求項１〜１３の何れか一項に記載の使用。
【請求項１５】
ＩＦＮが長時間作用型ＩＦＮ−βである、請求項１〜１４の何れか一項に記載の使用。
【請求項１６】
長時間作用型ＩＦＮ−βがＰＥＧ修飾ＩＦＮ−β又はＩＦＮ−βＦｃ融合タンパク質より選択される、請求項１〜１５の何れか一項に記載の使用。
【請求項１７】
ＩＦＮを約１〜５０μｇ／人／日、又は約１０〜３０μｇ／人／日、又は約１０〜２０μｇ／人／日の用量で投与する、請求項１〜１６の何れか一項に記載の使用。
【請求項１８】
ＩＦＮを連日又は隔日投与する、請求項１〜１７の何れか一項に記載の使用。
【請求項１９】
ＩＦＮを週２回又は３回投与する、請求項１〜１８の何れか一項に記載の使用。
【請求項２０】
ＩＦＮを皮下投与する、請求項１〜１９に記載の使用。
【請求項２１】
ＩＦＮを筋肉内投与する、請求項１〜１９に記載の使用。
【請求項２２】
ＩＦＮを噴霧装置で送達する、請求項１〜１９に記載の使用。
【請求項２３】
ＩＦＮを、インフルエンザウイルス感染後３日経たない内に、好ましくは２日経たない内に送達する、請求項１〜２２の何れか一項に記載の使用。
【請求項２４】
ＩＦＮの１回投与当たりの用量を少なくとも４４ｍｃｇ ｓ．ｃ．とする、請求項２０又は請求項２３の何れか一項に記載の使用。
【請求項２５】
ＩＦＮを少なくとも週３回投与する、請求項１〜２４の何れか一項に記載の使用。
【請求項２６】
抗ウイルス薬を約１００〜２０００ｍｇ／人／日、又は約４００〜１２００ｍｇ／人／日、又は約８００〜１０００ｍｇ／人／日、又は約１０００〜１２００ｍｇ／人／日の用量で投与する、請求項１〜２５の何れか一項に記載の使用。
【請求項２７】
リバビリンを経口投与する、請求項１〜２６の何れか一項に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インフルエンザ治療及び／又は予防用薬剤の製造におけるインターフェロンの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
インフルエンザはヒトにおける一般的な感染症であり、インフルエンザウイルスによって引き起こされる。インフルエンザウイルスは感染者の飛沫により容易に伝播する。潜伏期間は２４〜７２時間である。特徴的な症状は、急激な発熱、それに伴う咳、咽喉痛、並びに筋肉痛、関節痛及び倦怠感である。また、これらほど頻繁ではないが、更なる症状として、咽頭炎、結膜炎、気管支炎、下痢又は嘔吐等が見られる場合もある。患者は通常１、２週間で回復する。しかし、脱力感が数週間続く場合もある。インフルエンザウイルスに起因する合併症には、インフルエンザウイルス又は細菌（ブドウ球菌、レンサ球菌、肺炎球菌、インフルエンザ菌）により引き起こされる呼吸困難、肺炎等がある。
【０００３】
トリインフルエンザはインフルエンザウイルスＡ型株に起因する鳥類の感染症である。１００有余年前にイタリアで初めて確認されたが、現在世界中で発生しており、またヒトに感染するおそれもある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明の主目的は、インターフェロン（ＩＦＮ）の、単独又は抗ウイルス薬との組み合わせによる、インフルエンザ治療及び／又は予防用薬剤の製造における使用である。
【０００５】
インフルエンザウイルスはオルトミクソウイルス科に属し、Ａ型、Ｂ型、Ｃ型の３タイプが識別されている。Ｃ型インフルエンザウイルスには、重度の疾患との関連は見られない。最も重い症状を伴うのはＡ型インフルエンザウイルスである。Ａ型インフルエンザウイルスには多数の亜型が知られており、ヘマグルチニン及びノイラミニダーゼの起源に従って分類される。ヘマグルチニンは１５種類が、ノイラミニダーゼは９種類が報告されている。以前からヒト集団に流行しているＡ型インフルエンザの亜型は、１９６８年に出現したインフルエンザＡ（Ｈ３Ｎ２）型と、１９７７年に再出現したインフルエンザＡ（Ｈ１Ｎ１）型である。
【０００６】
より最近では、２種類の新しいトリ由来のインフルエンザウイルスがヒトから検出された。インフルエンザＡ（Ｈ５Ｎ１）型及びインフルエンザＡ（Ｈ９Ｎ２）型株である。香港で６名の死者をもたらした前者は、ニワトリからヒトに直接感染している。後者は香港で２名の入院小児患者から検出されたが、患者は症状が軽く、無事に退院することができた。
【０００７】
１５種類のインフルエンザウイルス亜型が鳥類に感染することが知られており、鳥類集団内に潜在的に流行するインフルエンザウイルスの大規模な感染源となっている。これまで、高病原性インフルエンザの発生は何れも、Ａ型インフルエンザウイルスの亜型であるＨ５及びＨ７に起因してきた。最近の研究によれば、低病原性ウイルスも、家禽集団内を（場合によっては短期間）流通するうちに、高病原性ウイルスに突然変異する場合があることが示されている。Ｈ５Ｎ２型ウイルスは、１９８３〜１９８４年の米国での流行に際し、当初は致死率が低かったものの、６か月間で高病原性となり、致死率は９０％近くにも達した。Ｈ７Ｎ１型ウイルスは、１９９９〜２００１年のイタリアでの流行に際し、当初は低病原性だったものの、突然変異により９か月間で高病原性になった。
【０００８】
最近、他の２種類のトリインフルエンザウイルスが、ヒトの発病をもたらした。２００３年２月にオランダで始まった高病原性Ｈ７Ｎ７トリインフルエンザの発生では、２か月後に獣医１人が死亡し、他にも８３人が軽症となった。香港では小児におけるＨ９Ｎ２型トリインフルエンザの軽症例が、１９９９年（２件）と２００３年１２月半ば（１件）に発生している。Ｈ９Ｎ２型はトリでは高病原性ではない。最も新たな懸案材料は２００４年１月に生じた。ベトナム北部で、ヒト呼吸器疾患重症例からＨ５Ｎ１型トリインフルエンザウイルスの存在が、臨床検査によって確認されたのである。
【０００９】
１５種類の亜型トリインフルエンザウイルスのうち、Ｈ５Ｎ１型は、幾つかの理由から特に懸念される。Ｈ５Ｎ１型は急速に突然変異し、また、他の動物種に感染するウイルスから遺伝子を獲得し易い性質も報告されている。ヒトに重症を引き起こす能力も、既に２度の機会で実証されている。加えて、このウイルスの単離体は高病原性を有し、ヒトに重症を引き起こし得ることも、実験で立証済みである。感染後に生き残ったトリは、少なくとも１０日間（口から、また、糞として）ウイルスを排出する。これによって、生きた家禽の市場におけるウイルス伝播や、渡り鳥によるウイルス伝播が更に生じ易くなる。
【００１０】
抗ウイルス薬（治療と予防の両方に使えるものもある）は、他の点で健康な成人と小児ではインフルエンザウイルスＡ型株に対して臨床的に有効であるが、若干の限界もある。また、かかる薬剤の中には、高価で供給量が限られているものもある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
従って、一態様によれば、本発明は、インターフェロン（ＩＦＮ）又はその異性体、突然変異タンパク質、融合タンパク質、官能性誘導体、活性画分又は塩の、インフルエンザ治療及び／又は予防用薬剤の製造における使用を提供する。
【００１２】
別の態様によれば、本発明は、インターフェロン（ＩＦＮ）又はその異性体、突然変異タンパク質、融合タンパク質、官能性誘導体、活性画分又は塩の、インフルエンザの治療及び／又は予防における使用を提供する。
【００１３】
別の態様によれば、本発明は、インフルエンザ治療及び／又は予防に使用される、インターフェロン（ＩＦＮ）又はその異性体、突然変異タンパク質、融合タンパク質、官能性誘導体、活性画分又は塩を提供する。
【００１４】
インターフェロン（ＩＦＮ）の異性体、突然変異タンパク質、融合タンパク質、官能性誘導体、活性画分又は塩を、以下の記載では一括してインターフェロン（ＩＦＮ）変種と呼ぶ場合もある。
【００１５】
本発明に係るインターフェロン又はインターフェロン変種のこれらの使用には、単剤療法（即ち、インターフェロン又はインターフェロン変種を、患者に投与される唯一の抗ウイルス化合物として使用すること（単剤療法））が包含される。別の実施形態によれば、インターフェロン又はインターフェロン変種は、後に詳述する抗ウイルス薬に加えて、或いは抗ウイルス薬と一緒に投与される（併用療法）。
【００１６】
更なる態様によれば、本発明は、インターフェロン（ＩＦＮ）又はその異性体、突然変異タンパク質、融合タンパク質、官能性誘導体、活性画分又は塩の、抗ウイルス薬との組み合わせによる、同時、逐次又は個別使用のための、インフルエンザ治療及び／又は予防用薬剤の製造における使用を提供する。
【００１７】
好ましい実施形態によれば、インフルエンザはトリインフルエンザである。例えば、トリインフルエンザとしては、インフルエンザウイルスＡ型株又はＢ型株に起因するものが挙げられる。好ましい実施形態によれば、トリインフルエンザは、インフルエンザウイルスＡ型株に起因するものである。
【００１８】
更に好ましい実施形態によれば、トリインフルエンザは、インフルエンザウイルスＨ５、Ｈ７又はＨ９亜型に起因する。更に好ましい実施形態によれば、トリインフルエンザは、インフルエンザウイルスＨ５Ｎ２、Ｈ７Ｎ１、Ｈ７Ｎ７、Ｈ９Ｎ２又はＨ５Ｎ１の何れかの亜型に起因する。特に好ましい実施形態によれば、亜型はＨ５Ｎ１である。
【００１９】
また、トリインフルエンザ感染患者の治療方法であって、かかる感染患者に治療有効量のインターフェロン（ＩＦＮ）又はその異性体、突然変異タンパク質、融合タンパク質、官能性誘導体、活性画分又は塩を投与する、方法も提供される。一実施形態によれば、インターフェロン（ＩＦＮ）又はその異性体、突然変異タンパク質、融合タンパク質、官能性誘導体、活性画分又は塩は、患者に投与される唯一の抗ウイルス化合物である（単剤療法）。別の実施形態によれば、インターフェロン又はその変種、突然変異タンパク質、融合タンパク質、官能性誘導体、活性画分又は塩は、後に詳述する抗ウイルス薬に加えて、或いはかかる抗ウイルス薬と一緒に投与される（併用療法）。
【００２０】
抗ウイルス薬は、例えば、ノイラミニダーゼ阻害薬、例えばオセルタミビル（商品名Tamiflu）及びザナミビル（商品名Relenza）、アダマンタン、例えばアマンタジン（商品名Symmetrel）及びリマンタジン（商品名Flumadine）、又はリバビリン（商品名Rebetol）からなる群より選択することができる。
【００２１】
また、トリインフルエンザ感染の危険がある者の感染を予防する方法であって、かかる患者に治療有効量のインターフェロン（ＩＦＮ）又はその異性体、突然変異タンパク質、融合タンパク質、官能性誘導体、活性画分又は塩を投与する、方法も提供される。一実施形態によれば、インターフェロン（ＩＦＮ）又はその異性体、突然変異タンパク質、融合タンパク質、官能性誘導体、活性画分又は塩は、患者に投与される唯一の抗ウイルス化合物である（単剤療法）。別の実施形態によれば、インターフェロン又はその変種、突然変異タンパク質、融合タンパク質、官能性誘導体、活性画分又は塩は、後に詳述する抗ウイルス薬に加えて、又はかかる抗ウイルス薬と一緒に投与される（併用療法）。
【００２２】
特に好ましい実施形態によれば、ＩＦＮは組み換えヒトＩＦＮ−βである。好ましい一実施形態によれば、組み換えヒトＩＦＮ−βはＣＨＯ細胞由来のグリコシル化を有する。
【００２３】
別の実施形態によれば、ＩＦＮはコンセンサス・インターフェロンである。
【００２４】
別の実施形態によれば、ＩＦＮは長時間作用型インターフェロンである。例としては、免疫グロブリン（Ｉｇ）断片（好ましくは免疫グロブリンのＦｃ部分）を含む融合タンパク質等が挙げられる。長時間作用型ＩＦＮ−βは、例えば、ＰＥＧ修飾ＩＦＮ−β又はＩＦＮ−β Ｆｃ融合タンパク質から選択することができる。
【００２５】
ＩＦＮは、例えば約１〜５０μｇ／人／日、又は約１０〜３０μｇ／人／日、又は約１０〜２０μｇ／人／日の用量で、投与することができる。
【００２６】
ＩＦＮは、例えば連日又は隔日投与してもよい。
【００２７】
また、ＩＦＮは、例えば週２回又は３回投与してもよい。
【００２８】
一実施形態によれば、ＩＦＮは、例えば皮下投与してもよい。或いは、ＩＦＮは、例えば筋内投与してもよい。更に、ＩＦＮは、噴霧装置で送達してもよい。
【００２９】
好ましい一実施形態によれば、ＩＦＮは、インフルエンザウイルス感染後３日経たない内に、好ましくは２日経たない内に送達する。
【００３０】
別の好ましい実施形態によれば、ＩＦＮの１回投与当たりの用量は、少なくとも４４ｍｃｇ ｓ．ｃ．である。
【００３１】
別の好ましい実施形態によれば、ＩＦＮは少なくとも週３回投与する。
【００３２】
別の好ましい実施形態によれば、抗ウイルス薬は、約１００〜２０００ｍｇ／人／日、又は約４００〜１２００ｍｇ／人／日、又は約８００〜１０００ｍｇ／人／日、又は約１０００〜１２００ｍｇ／人／日の用量で投与する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３３】
インターフェロンはサイトカインという、細胞間の情報伝達を担う可溶性タンパク質であって、感染を引き起こす微生物の死滅を補助するとともに、その結果生じた損傷を修復することにより、免疫系で重要な役割を果たしている。インターフェロンは感染細胞から自然に分泌されるが、１９５７年に初めて同定された。その名前は、ウイルスの複製及び産生を「インターフェア（妨害）」することに由来する。
【００３４】
インターフェロンは抗ウイルス及び抗増殖作用を示す。天然ヒトインターフェロンは、その生化学的及び免疫学的性質から、インターフェロン−α（白血球）、インターフェロン−β（線維芽細胞）及びインターフェロン−γ（免疫細胞）の３種類に大別される。α型インターフェロンは現在、米国や他の諸国において、有毛細胞白血病、性器疣贅、カポジ肉腫（後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）患者に一般に見られるがん）、及び、慢性非Ａ型、非Ｂ型肝炎の治療に承認されている。
【００３５】
更に、インターフェロン類（ＩＦＮｓ）は、生体がウイルス感染に反応して産生する糖タンパク質であり、保護細胞内のウイルス増殖を阻害する。低分子量タンパク質からなるＩＦＮｓは、極めて非特異的に作用する。即ち、あるウイルスによって誘発されるＩＦＮは、他の広範な種類のウイルスに対しても有効である。しかし、ＩＦＮｓは種特異的であり、ある種によって産生されるＩＦＮは、同種又は近縁種の細胞内でしか、抗ウイルス作用を活性化しない。ＩＦＮｓは、その潜在的な抗腫瘍及び抗ウイルス作用が利用されることになった、最初のサイトカイン群である。
【００３６】
３種の主要なＩＦＮは、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γと呼ばれる。これらのＩＦＮｓは当初、由来細胞（白血球、線維芽細胞又はＴ細胞）に従って分類されていた。しかし、１の細胞が複数のタイプを産生し得ることが明らかになった。よって、現在では白血球ＩＦＮをＩＦＮ−α、線維芽細胞ＩＦＮをＩＦＮ−β、Ｔ細胞ＩＦＮをＩＦＮ−γと呼んでいる。第４のタイプのＩＦＮもある。リンパ芽球ＩＦＮといい、（バーキットリンパ腫に由来する）「ナマルバ（Namalwa）」細胞株で産生される。本細胞株は、白血球ＩＦＮと線維芽細胞ＩＦＮとの混合物を産生しているように見える。
【００３７】
インターフェロン単位又はインターフェロン国際単位（Ｕ又はＩＵ）は、ＩＦＮ活性の尺度として知られており、ウイルスによる損傷から５０％の細胞を保護するのに必要な量として定義される。生物活性の測定に使用される試験方法は、既報の細胞変性作用（ＣＰＥ）抑制試験（Rubinstein, et al. 1981; Familletti, P.C., et al. 1981）である。このインターフェロン抗ウイルス試験によれば、５０％の細胞変性作用をもたらすのに必要なインターフェロン量は、約１単位／ｍｌである。かかる単位は、米国国立衛生研究所（the National Institutes of Health）から提供されるヒトＩＦＮ−βの国際標準品を基準として求める（Pestka, S. 1986）。
【００３８】
どのクラスのインターフェロンにも、幾つかの明確なタイプがある。ＩＦＮ−β及びＩＦＮ−γは各々、単一遺伝子の産物である。
【００３９】
ＩＦＮｓ−αに分類されるタンパク質は、最も多様なグループであり、１５種ほどのタイプを含んでいる。ＩＦＮ−α遺伝子群はクラスターとして第９染色体上に存在する。少なくとも２３のメンバーが含まれるが、うち１５のメンバーが活性であり、転写されている。成熟型ＩＦＮｓ−αはグリコシル化されていない。
【００４０】
ＩＦＮｓ−α及びＩＦＮ−βは全て同一鎖長であり（１６５又は１６６アミノ酸残基）、生物活性も類似している。ＩＦＮｓ−γは鎖長が１４６アミノ酸残基であり、α型及びβ型との類似性はより低い。マクロファージを活性化し、或いはキラーＴ細胞の成熟を誘導し得るのは、ＩＦＮｓ−γのみである。これらの新たなタイプの治療薬は、腫瘍への生体の応答に作用して、免疫修飾を介した認識に影響を及ぼすため、生体応答調節薬（ＢＲＭｓ）と呼ばれるときもある。
【００４１】
ヒト線維芽細胞インターフェロン（ＩＦＮ−β）は、抗ウイルス作用を有するとともに、抗新生細胞ナチュラルキラー細胞を刺激し得る、約２０，０００Ｄａのポリペプチドであり、ウイルス及び２本鎖ＲＮＡによって誘発される。線維芽細胞インターフェロンについては、組み換えＤＮＡ技術でクローニングされたその遺伝子のヌクレオチド配列から（Derynk et al, 1980）、当該タンパク質の完全なアミノ酸配列が導き出された。そのアミノ酸残基数は１６６である。
【００４２】
Shepard et al. (1981) は、抗ウイルス作用を破壊する塩基８４２の変異（第１４１位がＣｙｓ→Ｔｙｒ）、並びに第１１１９〜１１２１ヌクレオチドを欠く変異クローンを開示している。
【００４３】
Mark et al.(1984) は、第４６９塩基（Ｔ）を（Ａ）に置換することにより、第１７位にＣｙｓ→Ｓｅｒのアミノ酸交換を引き起こす人工変異を導入した。得られたＩＦＮ−βは「無傷（naive）」ＩＦＮ−βと同程度の安定性を有し、長期間貯蔵（−７０℃）時にも安定であったと報告している。
【００４４】
多発性硬化症（ＭＳ）用のインターフェロン治療における最新の成果である組み換えヒトＩＦＮ−β（商品名Rebif）は、哺乳動物細胞株に由来するＩＦＮ−β１ａである。
【００４５】
インターフェロン単独、或いは他の抗ウイルス薬との併用によるＳＲＳ治療は、文献ではまだ報告されていない。
【００４６】
本発明との関連において「治療」という語は、病気の進行に対する有益な効果を指す。発症後の病理学的展開の減衰、減退、低減又は減少も含まれる。
【００４７】
本明細書において「インターフェロン」又は「ＩＦＮ」は、文献においてそのように定義されている任意の分子を包含する意で使用される。特に、ＩＮＦ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γは、上記の定義に含まれる。本発明ではＩＦＮ−βが好ましいＩＦＮである。本発明において好適なＩＦＮ−βは、例えば以下の商品名で市販されている：Rebif（Sereno社）、Avonex（Biogen社）又はBetaferon（Schering社）。本発明においては、ヒト由来インターフェロンの使用も好ましい。本明細書においてインターフェロンという語は、その塩、官能性誘導体、変種、類似体及び活性画分も包含する意で使用される。
【００４８】
本明細書において「インターフェロン−ベータ（ＩＦＮ−β）」という語は、（特にヒト由来の）体液から単離して得られた、或いは原核又は真核生物の宿主細胞からＤＮＡ組み換え技術によって得られた線維芽細胞インターフェロン、並びにその塩、官能性誘導体、変種、類似体及び活性画分を包含する意で使用される。
【００４９】
本明細書において「突然変異タンパク質」という語は、天然ＩＦＮの１又は２以上のアミノ酸残基が、他のアミノ酸残基に置換され、若しくは欠失し、又は、天然ＩＦＮ配列に１又は２以上のアミノ酸残基が付加したＩＦＮ類似体であって、得られる生成物の活性が野生型ＩＦＮと比較して大きく変化していないものを指す。これらの変異タンパク質は、公知の合成法及び／又は部位特異的突然変異生成法により、或いは他の任意の好適な手法により調製される。好ましい変異タンパク質としては、例えばShepard et al. (1981) 又はMark et al. (1984) に開示されているものが挙げられる。
【００５０】
かかる変異タンパク質は何れも、ＩＦＮと実質的に同等又はそれ以上の活性を示す程度に、ＩＦＮ配列とアミノ酸配列が重複していることが好ましい。インターフェロンの生物学的機能は当業者には周知であり、確立された生物学的標準品が例えば、英国国立生物基準管理研究所（the National Institute for Biological Standards and Control。http://immunology.org/links/NIBSC）等から入手可能である。
【００５１】
ＩＦＮ活性を測定するための生物アッセイは既に報告されている。ＩＦＮアッセイは、例えば、Rubinstein et al. (1981) に開示の手順で行なうことができる。即ち、任意の変異タンパク質がＩＦＮと実質的に同等又はそれ以上の活性を示すか否かは、定型的な実験法を用いて決定することができる。
【００５２】
本発明において使用可能なＩＦＮの変異タンパク質、又はそれをコード化する核酸には、実質的に対応する有限群の配列も包含される。これらは、本明細書に記した教示や指針に基づいて、過度の実験を要することなく、当業者が定型的に得ることができる置換ペプチド又はポリヌクレオチドとして規定される。
【００５３】
本発明に係る変異タンパク質の好ましい変異としては、いわゆる「保存（conservative）」置換が挙げられる。本発明のポリペプチド又はタンパク質の保存アミノ酸置換としては、群内の同義アミノ酸であって、群のメンバー間の置換後も分子の生物学的機能が保持される程度に物理化学的性質が類似する同義アミノ酸が挙げられる。当然ながら、上述の配列に対して、その機能を変更しない場合には、アミノ酸の挿入又は欠失を導入してもよい。かかる場合としては、特に、その挿入又は欠失が少数（例えば３０未満、好ましくは１０未満）のアミノ酸にしか関与せず、且つ、機能性立体構造に欠かせないアミノ酸（例えばシステイン残基等）を除去又は置換しない場合が挙げられる。かかる挿入及び／又は欠失により生成されたタンパク質及び変異タンパク質も、本発明の範囲内に属する。
【００５４】
同義アミノ酸群としては、表１に示すものが好ましい。中でも、表２に示す同義アミノ酸群がより好ましく、表３に示す同義アミノ酸群が最も好ましい。
【００５５】
表１
好ましい同義アミノ酸群
【表１】
2009515933.tif 000002
【００５６】
表２
より好ましい同義アミノ酸群
【表２】
2009515933.tif 000003
【００５７】
表３
最も好ましい同義アミノ酸群
【表３】
2009515933.tif 000004
【００５８】
本発明において使用されるＩＦＮの変異タンパク質を得るために使用可能な、タンパク質におけるアミノ酸置換の形成法としては、任意の公知の方法、例えば、Mark et al.による米国特許第４，９５９，３１４号、４，５８８，５８５号及び４，７３７，４６２号の各明細書、Koths et al.による米国特許第５，１１６，９４３号、Namen et al.による米国特許第４，９６５，１９５号、Chong et al.による米国特許第４，８７９，１１１号、Lee et al.による米国特許第５，０１７，６９１号の各明細書に開示の工程や、Shaw et al.による米国特許第４，９０４，５８４号明細書に開示のリシン置換タンパク質が挙げられる。ＩＦＮ−βの変異タンパク質の具体例は、例えばMark et al. (1984)に開示されている。
【００５９】
「融合タンパク質」という語は、ＩＦＮ又はその変異タンパク質が、別のタンパク質（例えば、体液中での滞留時間が延長されたタンパク質等）と融合されたものを含んでなるポリペプチドをいう。即ち、ＩＦＮを別のタンパク質やポリペプチド等（例えば、免疫グロブリン又はその断片等）に融合させてもよい。
【００６０】
本明細書において使用される「官能性誘導体」は、ＩＦＮ誘導体、並びにその変異タンパク質及び融合タンパク質であって、残基又はＮ−又はＣ−末端基の側鎖として存在する官能基から、本技術分野において公知の手法により調製されるものを対象とする。かかる官能性誘導体は、医薬的に許容し得る限りにおいて、即ち、ＩＦＮの活性と実質的に同等なタンパク質の活性を破壊せず、また、それを含む組成物に対して有害な性質を付与しない限りにおいて、本発明に包含される。これらの誘導体は、例えば、抗原部位をマスクしてＩＦＮの体液中での滞留時間を延長するポリエチレングリコール側鎖等を含んでもよい。他の誘導体としては、カルボキシ基の脂肪族エステル、カルボキシ基とアンモニア又は第１級若しくは第２級アミンとにより形成されるアミド、アミノ酸残基の遊離アミノ基とアシル部分（アルカノイル基又は炭素環アロイル基）とにより形成されるＮ−アシル誘導体、又は（例えばセリル残基又はトレオニル残基の）遊離ヒドロキシ基とアシル部分とにより形成されるＯ−アシル誘導体等である。
【００６１】
ＩＦＮ、或いはその変異タンパク質及び融合タンパク質の「活性画分」として、本発明は、任意のタンパク質分子のポリペプチド鎖断片若しくは前駆体の単体、又はこれらに別の分子が会合し、又は残基（例えば糖鎖若しくはリン酸基）が結合したもの、又はタンパク質分子の凝集体若しくは糖鎖自体を、その画分の活性が対応するＩＦＮに比べて著しく低下していない限りにおいて対象とする。
【００６２】
本明細書において「塩」という語は、上述のタンパク質又はその類似体のカルボキシ基の塩とアミノ基の酸付加塩との両方を指す。カルボキシ基の塩は、本技術分野で公知の方法により形成することができ、例としては、ナトリウム、カルシウム、アンモニウム、鉄又は亜鉛の塩等の無機塩や、例えばトリエタノールアミン、アルギニン又はリシン、ピペリジン、プロカイン等のアミン類により形成される有機塩基との塩が挙げられる。酸付加塩としては、塩酸や硫酸等の無機酸との塩や、酢酸やシュウ酸等の有機酸との塩が挙げられる。勿論、かかる塩は何れも、本発明に関するタンパク質（ＩＦＮ）の生物活性、即ち、対応する受容体に結合して受容体シグナル伝達を開始する能力を保持していなければならない。
【００６３】
本発明の一実施形態によれば、式（Ｉ）のＲ1はＨである。別の実施形態によれば、Ｒ2はＯＨである。更なる実施形態によれば、ＡはＮである。本発明の更に別の実施形態によれば、Ｒ3とＲ5は６員複素環を形成する。本発明の好ましい実施形態によれば、該複素環はピリミジン又はピリミジンオンである。
【００６４】
本発明では、インターフェロンの有益な効果を強化すべく、抗ウイルス薬と併用してもよい。本発明では抗ウイルス薬として、リバビリン（１−β−Ｄ−リボフラノシル−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド）の使用が特に好ましい。
【００６５】
本発明では、組み換えヒトＩＦＮ−βと本発明の化合物との併用がより一層好ましい。
【００６６】
特殊なインターフェロン変種が最近報告された。通称「コンセンサス・インターフェロン」、ＩＦＮの非天然型変種である（米国特許第６，０１３，２５３号明細書）。本発明の好ましい実施形態によれば、本発明の化合物は、コンセンサス・インターフェロンと併用される。
【００６７】
本明細書で使用される場合、ヒトインターフェロンコンセンサス（ＩＦＮ−ｃｏｎ）とは、非天然型ポリペプチドであって、大多数の天然型ヒト白血球インターフェロン亜型配列を代表するＩＦＮ−αの部分集合配列と共通するアミノ酸残基を主に有するが、全亜型に共通のアミノ酸が存在しない１又は２以上の部位に、その部位に主に存在するアミノ酸を有するとともに、少なくとも１つの天然型亜型においてその部位に存在しないアミノ酸残基を一切有さないものを指す。ＩＦＮ−ｃｏｎとしては、米国特許第４，６９５，６２３号、第４，８９７，４７１号及び第５，５４１，２９３号の各明細書に開示されている、ＩＦＮ−ｃｏｎ１、ＩＦＮ−ｃｏｎ２及びＩＦＮ−ｃｏｎ３と命名されたアミノ酸配列が挙げられるが、それらに限定されるものではない。ＩＦＮ−ｃｏｎをコード化するＤＮＡ配列は、上述の特許に開示されている手順で作製してもよく、又は他の標準的な方法で作製してもよい。
【００６８】
更なる好適な実施形態によれば、融合タンパク質はＩｇ融合を含んでなる。この融合は直接融合でもよく、短いリンカーペプチドを介した融合でもよい。リンカーペプチドの鎖長は、１〜３アミノ酸残基程度の短いものでもよく、より長い（例えば１３アミノ酸残基）ものでもよい。当該リンカーは、例えば、アミノ酸配列がＥ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチドでも、Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔを含んでなる１３のアミノ酸の配列でもよく、ＩＦＮ配列と免疫グロブリン配列との間に導入される。得られる融合タンパク質は、体液中滞留時間（消失半減期）の延長、比活性の向上、発現レベルの上昇又は精製の簡易化等、性質の改善を伴うものでもよい。
【００６９】
更なる好ましい実施形態によれば、ＩＦＮはＩｇ分子の定常領域に融合される。中でも、ヒトＩｇＧ１のＣＨ２及びＣＨ３ドメイン等の、重鎖領域に融合されるのが好ましい。Ｉｇ分子の他の異性体も、本発明による融合タンパク質の生成に好適である。例としては、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３又はＩｇＧ４等の異性体や、他のＩｇクラス、例えばＩｇＭやＩｇＡ等が挙げられる。融合タンパク質は単量体でも多量体でもよく、また、ヘテロ多量体でもホモ多量体でもよい。
【００７０】
更なる好ましい実施形態によれば、官能性誘導体は、アミノ酸残基の１又は２以上の側鎖として存在する１又は２以上の官能基に結合された構成部分を少なくとも１つ含んでなる。この部分としては、ポリエチレン（ＰＥＧ）部分が好ましい。ＰＥＧ化は公知の方法により、例えば国際公開第９９／５５３７７号パンフレット等に開示の方法により、行なうことができる。
【００７１】
個人に投与される用量（単回又は多回用量）は、種々の因子に応じて異なる。かかる因子としては、薬物動態特性、投与経路、患者の状態及び性質（性別、年齢、体重、健康状態、体格）、症状の程度、並行治療の有無、治療頻度、所望の効果等が挙げられる。
【００７２】
ヒトＩＮＦ−βの標準用量は、８０，０００〜２００，０００ＩＵ／ｋｇ／日、又は６〜１２ＭＩＵ（１００万国際単位）／人／日、又は２２〜４４μｇ（マイクログラム）／人の範囲である。本発明によれば、ＩＦＮは、約１〜５０μｇ／人／日の用量で投与することが好ましく、より好ましくは約１０〜３０μｇ／人／日、又は約１０〜２０μｇ／人／日である。
【００７３】
本発明に係る有効成分の投与は、静脈内、筋肉内、皮下の何れの経路で行なってもよい。好ましいＩＦＮの投与経路は、皮下経路である。
【００７４】
ＩＦＮの投与は、連日でも隔日でもよく、或いはより低頻度でもよい。中でも、ＩＦＮは週１回、２回又は３回投与するのが好ましい。
【００７５】
好ましい投与経路は皮下投与であり、その頻度は例えば週３回である。別の好ましい投与経路は筋肉内投与であるが、その頻度は例えば週１回でもよい。
【００７６】
好ましくは、２２〜４４μｇ、又は６ＭＩＵ〜１２ＭＩＵのＩＦＮ−βを週３回、皮下注射で投与する。
【００７７】
また、２５０〜３００μｇ、又は８ＭＩＵ〜９．６ＭＩＵのＩＦＮ−βを、隔日で皮下投与してもよい。
【００７８】
更に、３０μｇ又は６ＭＩＵのＩＦＮ−βを週１回、皮下投与してもよい。
【００７９】
好ましい実施形態によれば、ＩＦＮ−βとの組み合わせでリバビリンを投与するが、その用量は約１００〜２０００ｍｇ／人／日、好ましくは約４００〜１２００ｍｇ／人／日、より好ましくは約８００〜１０００ｍｇ／人／日、又は約１０００〜１２００ｍ／人／日である。体重６５ｋｇ未満の患者の場合、通常の用量は８００ｍｇ／日であり、体重６５〜８５ｋｇの患者の場合、通常の用量は１０００ｍｇ／日であり、体重８５ｋｇ超の患者の場合、通常の用量は１２００ｍｇ／日である。実際の用量は、患者の条件や治療対象疾患の重篤度に応じて増減してもよい。患者の実態に応じた適正な用法・用量の決定は、本技術分野では公知である。便宜上、必要に応じて総日用量を分割し、分割量を１日に複数回投与してもよい。
【００８０】
好ましい実施形態によれば、リバビリンを経口投与する。
【００８１】
リバビリンは注射で投与してもよいが、経口投与するのが好ましい。投与形態に応じて、本化合物を適当な希釈剤や担体と共に、化合物含量が約０．０１〜約１５重量％（好ましくは約１〜１０重量％）の軟膏、クリーム、フォーム及び溶液に製剤することができる。注射の場合は、リバビリンを生理適合溶液に約１０ｍｇ／ｍｌ〜約１５００ｍｇ／ｍｌの割合で溶解又は懸濁させた溶液又は懸濁液の形とする。注射は静脈内、筋肉内、脳内、皮下、腹腔内の何れでもよい。
【００８２】
経口投与の場合は、リバビリンをカプセル剤、錠剤、経口懸濁液剤又はシロップ剤等にしてもよい。錠剤又はカプセル剤は、リバビリン含量が約１０〜５００ｍｇでもよいが、約３００ｍｇが好ましい。カプセル剤は、通常のゼラチンカプセル剤でよく、前記含量のリバビリンに加えて、少量（例えば５重量％未満）のステアリン酸マグネシウム等を賦形剤として含んでもよい。錠剤は、前記含量の化合物に加えて、結合剤を含んでもよい。結合剤としては、ゼラチン溶液、水性でんぷんのり、水性ポリビニルアルコール等と、通常の糖衣材とが挙げられる。
【００８３】
本発明の化合物及びＩＦＮは、医薬組成物に調製してもよい。
【００８４】
「医薬的に許容し得る」という語は、有効成分の効果に干渉せず、投与を受ける宿主に対して無害である、任意の担体を包含する意味である。例えば、非経口投与の場合は、食塩液、ブドウ糖液、血清アルブミン液及びリンガー液等のビヒクル中、活性タンパク質を単位量投与形態の注射剤に調製してもよい。
【００８５】
本発明による医薬組成物の有効成分は、種々の方式で個人に投与することができる。投与経路としては、皮内、経皮（例えば徐放剤の場合）、筋肉内、腹腔内、静脈内、皮下、経口、硬膜外、局所、鼻内等が挙げられる。また、治療上有効な他の任意の投与経路も使用できる。例えば、上皮又は内皮組織経由の吸収や、活性物質をコード化するＤＮＡ分子を患者に（ベクターを介して）投与し、活性物質をインビボ（in vivo）で発現、分泌させるという遺伝子療法等である。加えて、本発明のタンパク質は他の生物活性薬剤成分、例えば、医薬的に許容し得る界面活性剤、賦形剤、担体、希釈剤及びビヒクルと一緒に投与してもよい。
【００８６】
本発明においては皮下経路が好ましい。
【００８７】
本発明を実施する別の形態としては、ＩＦＮの遺伝子を内因的に活性化することが考えられる。この場合は、通常はＩＦＮの発現を休止している細胞、或いはＩＦＮの発現量が十分でない細胞内で、ＩＦＮの内因的産生を誘導及び／又は強化するためのベクターをインフルエンザ治療に使用する。このベクターは、ＩＦＮの発現が望まれる細胞の中で機能する調節配列を含んでもよい。かかる調節配列としては、例えばプロモーターやエンハンサーが挙げられる。次いでこの調節配列を、相同組み換えによりゲノム中の適正位置に導入し、発現を誘導又は強化する必要のある遺伝子に、調節配列を作動式に連結させればよい。この技術は通常「内因性遺伝子活性化（ＥＧＡ）」といい、例えば国際公開第９１／０９９５５号パンフレット等で開示されている。
【００８８】
本発明は更に、ＩＦＮを産生するよう遺伝子組み換えを行なった細胞の、インフルエンザ治療及び／又は予防用薬剤の製造における使用に関する。
【００８９】
非経口（例えば静脈内、皮下、筋肉内）投与の場合は、医薬的に許容し得る非経口用ビヒクル（例えば水、食塩液、ブドウ糖液）や、等張性を維持するための添加物（例えばマンニトール）又は化学安定性を維持するための添加物（例えば防腐剤や緩衝剤）と共に、ＩＦＮを溶液、懸濁液、乳液又は凍結乾燥粉末に製剤することができる。製剤は常法により滅菌する。
【００９０】
本発明によれば、本発明の化合物及びＩＦＮは、個人に対して予防目的又は治療目的で、他の治療計画又は治療薬（例えば多剤療法）に先立って、それと同時に、又はそれに連続して、治療有効量を投与することができる。活性薬剤を他の治療薬と同時に投与する場合、同一の組成物として投与しても、別の組成物として投与してもよい。
【００９１】
学術論文又はその要約、公開又は未公開の米国又は外国の特許出願明細書、発行された米国又は外国の特許明細書、又は他の任意の文献を含む、本明細書で引用された参考文献は、それらの引用文献に記載された諸々のデータ、表、図及び本文を含む全体が、援用により本明細書に組み込まれる。また、本明細書で引用した参考文献の中で引用されている参考文献の内容も、その全体が援用により本明細書に組み込まれる。
【００９２】
公知の工程、慣用の工程、公知の方法又は慣用の方法への言及は、本発明の何れかの態様、説明又は実施形態が従来技術において開示、教示又は示唆されていることを何ら認めるものではない。
【００９３】
具体的な実施形態に関する以上の説明によって、本発明の一般的性質は十分に明らかとなり、当業者がその技能の範囲内の知識を（本明細書で引用した参考文献の内容を含めて）応用すれば、過度の実験を必要とすることなく、また、本発明の基本思想から逸脱することなく、かかる具体的な実施形態を、種々の用途に合わせて容易に改変及び／又は応用できるはずである。従って、そうした応用や改変は、開示される実施形態の、本明細書で開示した教示や指針に基づく等価物の範囲に包含されるものとする。本明細書の語句や用語は、限定ではなく説明を目的とするものであり、当業者はかかる語句や用語を、本明細書で開示した教示や指針を考慮して、当業者の知識と組み合わせて解釈すべきである。
【実施例】
【００９４】
［実施例１］
ＩＦＮの有効性をインフルエンザウイルス感染実験モデルのマウスで調べる。このモデルではウイルスを鼻内接種して、感染後７〜１０日で動物を死亡させるような重篤な出血性肺炎を生じさせる。この実験計画は、感染動物の生存率に基づく評価によって、対象物質の治療有効性を予想するものである。この目的のために、種々の用量のＩＦＮを動物に対し、感染数時間後から開始して７日間毎日投与する。
【００９５】
トリインフルエンザウイルス、特にＨ５Ｎ１型株等を使用することが好ましい。
【００９６】
インターフェロン（ＩＦＮ）（好ましくは組み換えＩＦＮ−β）は単剤療法で、並びに抗ウイルス薬（例えばオセルタミビル（商品名Tamiflu）及びザナミビル（商品名Relenza）等のノイラミニダーゼ阻害薬、アマンタジン（商品名Symmetrel）及びリマンタジン（商品名Flumadine）等のアダマンタン、又はリバビリン（商品名Rebetol））との併用で、試験に供する。
【００９７】
治療を受ける動物では死亡率の低下が観測される。
【００９８】
［実施例２］
４週齢雌性近交系Ｂａｌｂ／ｃ ＡｎＣｒｌＢＲマウスを使用する。インフルエンザウイルス感染後の様々な時点で、適切なＩＦＮ製剤を動物に腹腔内投与する。製剤のＩＦＮ含量は、インビトロ（in vitro）での有効範囲と同様の範囲の動物血中量が得られるように選定する。
【００９９】
マウスをエーテルで軽麻酔した後、感染多重度２ＨＡＵ／マウスのインフルエンザウイルスＡ／ＰＲを含む懸濁液を鼻内（ｉ．ｎ．）接種する。過去の実験データによれば、この感染多重度のインフルエンザウイルスは、感染後１週間で８０％の動物を死亡させるような出血性肺炎を起こす。感染の趨勢をモニターする意味で、生存曲線の研究に加えてウイルス学的、免疫学的両パラメーターをモニターする。
【０１００】
ウイルス学的パラメーターとしては、ウイルス量を求める。感染後の様々な時点で、感染マウス及び対照マウスの肺をサンプルとして摘出し、計量し、抗生物質を含むＲＰＭＩを加えてホモジナイズ処理する。遠心分離後、上清を適宜希釈し、ウイルス量をＣＰＥ−５０％抑制試験法で分析する。この方法では、コンフルエント状態のＭＤＣＫ細胞を抗生物質添加２％ＦＣＳ含有ＲＰＭＩで連続希釈した上清で感染させ、５％ＣＯ2雰囲気下、３７℃で３日間培養する。希釈ごとに、陽性効果を示すウェルをカウントし、陰性の細胞変性効果を示すウェルと比較する。比較はＲｅｅｄ−Ｍｕｅｎｃｈ式に従って行なう。ＣＰＥ−５０％力価を単位／ｍｌで計算する。
【０１０１】
免疫学的パラメーターとしては、炎症性サイトカインの産生量をＥＬＩＳＡ法で評価する。実験には９６穴プレートを使用する。プレートを、対象サイトカインに対する単クローン性抗体でコートし、４℃で終夜インキュベートする。その後、２００μｌ／ウェルの１％ＢＳＡ／炭酸塩緩衝剤を３０分間、３７℃で加える。次いで０．２５％ＴＢＳ＋Ｔｗｅｅｎ２０で洗浄し、サンプルを４時間、３７℃で加える。参照曲線として組み換えサイトカイン／スカラー希釈液を使用する。次いで洗浄を行い、最初の抗体とは異なる抗サイトカイン多クローン性抗体を加え、４℃で終夜放置する。０．５％ＴＢＳ＋Ｔｗｅｅｎ２０、ＭｇＣｌ2 ２ｎＭの洗浄液に、酵素アルカリ性ホスファターゼに結合させた第３の抗体を４時間、３７℃で加える。最後に、該酵素の基質（１００μｌ／ウェル）を加え、ＥＬＩＳＡリーダーと４０５ｎｍフィルターを使用して測定する。以下の抗体が分析される：１）単クローン性ラット抗マウスＴＮＦ−α／組み換えマウスＩＬ−６；２）組み換えマウスＴＮＦ−α／組み換えマウスＩＬ−６；３）多クローン性ウサギ抗マウスＴＮＦ−α／多クローン性ヤギ抗マウスＩＬ−６；４）ヤギ抗ウサギＩｇＧ−アルカリ性ホスファターゼ／抗ヤギＩｇＧ−アルカリ性ホスファターゼ。
【０１０２】
トリインフルエンザウイルス、特にＨ５Ｎ１株等を使用することが好ましい。
【０１０３】
インターフェロン（ＩＦＮ）（好ましくは組み換えＩＦＮ−β）は単剤療法で、並びに抗ウイルス薬（例えばオセルタミビル（商品名Tamiflu）及びザナミビル（商品名Relenza）等のノイラミニダーゼ阻害薬、アマンタジン（商品名Symmetrel）及びリマンタジン（商品名Flumadine）等のアダマンタン、又はリバビリン（商品名Rebetol））との併用で、試験に供する。
【０１０４】
治療を受ける動物では死亡率の低下が観測される。
【０１０５】
参考文献
【表４】
2009515933.tif 000005
【国際調査報告】
2009515933.tif 000006
2009515933.tif 000007
2009515933.tif 000008