(57)【要約】  本発明は、そのすべての結晶形態および医薬的に許容される塩を含む、式（Ｉ）（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｘ及びｎは本明細書で定義するとおりであり、但し、ＸがＣＨ2であり、ｎが１であり、及びＲ1が−ＣＯＯＨであるとき、Ｒ2は、式（Ａ）（式中、Ａは、ＣＨ3−、ＣＨ3ＣＨ2−又は炭素数１〜２のハロアルキルであり；及びＢはハロゲンである）ではあり得ないこと、及びＸがＣＨ2であり、ｎが２であり、及びＲ1が−ＣＯＯＨであるとき、Ｒ2は、式（Ａ）又は式（Ｂ）ではあり得ないことを条件とする）の化合物を対象とする。本発明はまた、本発明の化合物を含有する組成物及びＣ型肝炎ウイルス感染を治療する又は予防するために化合物を使用する方法を対象とする。    【化１７】2009526065.tif 000026
2009526065.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2009526065.tif 000019
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯ2Ｒ4、シアノ、テトラゾール、場合によりＯＨ、アミン又は−ＣＯＯＨで置換された炭素数１〜６の直鎖アルキル、場合により置換された−Ｃ（Ｏ）−Ｃ1−Ｃ12−アルキル、又は場合により置換された−Ｃ（Ｏ）−Ｃ6−Ｃ12−アリール（式中、Ｒ4は、そのいずれかが場合により置換されてもよい、Ｃ1−Ｃ12−アルキル、Ｃ6−Ｃ12−アリール、Ｃ3−Ｃ12−シクロアルキル、又はＣ2−Ｃ9−ヘテロアリールである）であり；
Ｒ2は、ハロゲン、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｎ3、−ＣＨＯ、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、−Ｒ3、−ＯＲ3、−Ｓ（Ｏ）mＲ3、−ＮＲ3Ｒ3、−ＮＲ3Ｓ（Ｏ）mＲ3、−ＮＲ3Ｃ（Ｏ）Ｒ3、−Ｃ（Ｏ）Ｒ3、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ3、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ3Ｒ3、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ3、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ3、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ3Ｒ3、ＮＲ3Ｃ（Ｏ）Ｒ3、−ＮＲ3Ｃ（Ｏ）ＯＲ3、及び−ＮＲ3Ｃ（Ｏ）ＮＲ3Ｒ3（式中、ｍは０、１又は２であり；Ｒ3は、Ｈ、炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜８の分枝アルキル、炭素数３〜６のシクロアルキル、フェニル、Ｃ2−Ｃ9−ヘテロアリール、炭素数２〜６のアルケニル、又は炭素数２〜６のアルキニルである）からなる群より選択される１〜５個の置換基で場合により置換されたアリール又はヘテロアリール基であり；
Ｘは、ＣＨ2、ＣＨＯＲ3、又はＳであり；及び
ｎは１又は２である）
の化合物及びそのすべての結晶形態及び医薬的に許容される塩であって、但し、
ＸがＣＨ2であり、ｎが１であり、及びＲ1が−ＣＯＯＨであるとき、Ｒ2は、
【化２】
2009526065.tif 000020
（式中、
Ａは、ＣＨ3−、ＣＨ3ＣＨ2−又は炭素数１〜２のハロアルキルであり；及び
Ｂはハロゲンである）
ではあり得ないこと、及び
ＸがＣＨ2であり、ｎが２であり、及びＲ1が−ＣＯＯＨであるとき、Ｒ2は、
【化３】
2009526065.tif 000021
ではあり得ないことを条件とする、前記化合物及びそのすべての結晶形態及び医薬的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ2が、場合により置換されたフェニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ＸがＣＨ2である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
ＸがＣＨ2ＯＲ3であり、及びＲ3がＨ又はＣＨ3である、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
ｎが１である、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
ＸがＳである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
ｎが１である、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ1が、Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、テトラゾール、−ＣＨ2ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ3、又は−Ｃ（Ｏ）−フェニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ1が−ＣＯＯＨである、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
フェニル環が、ＯＨ、ハロゲン、アルキル、アミノ、及び−ＮＲ3Ｃ（Ｏ）Ｒ3から選択される少なくとも１個の置換基によって置換される、請求項２に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ1が−ＣＯＯＨであるとき、Ｒ2が、ＮＨ2、アルキル及びハロゲンで置換されたフェニルではあり得ない、請求項３に記載の化合物。
【請求項１２】
式（ＩＩ）
【化４】
2009526065.tif 000022
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、テトラゾール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ4、又は炭素数１〜４のヒドロキシアルキル（式中、Ｒ4は、炭素数１〜４のアルキル又は場合により置換されたフェニルである）であり；
Ｒ5は、Ｈ、ＯＨ又は−ＯＣＨ3であり；及び
Ｘ1〜Ｘ5は、独立してＨ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ2、炭素数１〜４のアルキル、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ3（式中、Ｒ3は、炭素数１〜４のアルキル、Ｃ6−Ｃ12−アリール、炭素数３〜６のシクロアルキル、又はＣ2−Ｃ9−ヘテロアリールである）である）
の化合物及びそのすべての結晶形態又は医薬的に許容される塩であって、但し、
Ｒ1が−ＣＯＯＨであり、Ｒ5がＨであり、Ｘ3がハロゲンであり、及びＸ4が−ＣＨ3又は−ＣＦ3であるとき、Ｘ1はＮＨ2ではあり得ないこと、及び
Ｒ1が−ＣＯＯＨであり、Ｒ5がＨであり、Ｘ2が−ＣＨ3又は−ＣＦ3であり、及びＸ3がハロゲンであるとき、Ｘ5はＮＨ2ではあり得ないことを条件とする、前記化合物及びそのすべての結晶形態又は医薬的に許容される塩。
【請求項１３】
Ｒ5がＨである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ5がＯＨである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ5が−ＯＣＨ3である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ1が−ＣＯＯＨである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｘ1〜Ｘ5の少なくとも１個がＯＨである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｘ1〜Ｘ5の少なくとも１個が−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ3である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１９】
式（ＩＩＩ）
【化５】
2009526065.tif 000023
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、テトラゾール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ4、又は炭素数１〜４のヒドロキシアルキル（式中、Ｒ4は、炭素数１〜４のアルキル又は場合により置換されたフェニルである）であり；及び
Ｘ1〜Ｘ5は、独立してＨ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ2、炭素数１〜４のアルキル、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）Ｒ3（式中、Ｒ3は、炭素数１〜４のアルキル、Ｃ6−Ｃ12−アリール、炭素数３〜６のシクロアルキル、又はＣ2−Ｃ9−ヘテロアリールである）である）
の化合物及びそのすべての結晶形態及び医薬的に許容される塩であって、但し、
Ｒ1が−ＣＯＯＨであり、Ｘ3がハロゲンであり、及びＸ4が−ＣＨ3又は−ＣＨ2ＣＨ3であるとき、Ｘ1はＮＨ2ではあり得ないこと、及び
Ｒ1が−ＣＯＯＨであり、Ｘ2が−ＣＨ3又は−ＣＨ2ＣＨ3であり、及びＸ3がハロゲンであるとき、Ｘ5はＮＨ2ではあり得ないことを条件とする、前記化合物及びそのすべての結晶形態及び医薬的に許容される塩。
【請求項２０】
Ｒ1が−ＣＯＯＨである、請求項１９に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｘ1〜Ｘ5が、Ｈ、ＮＨ2、ＯＨ、ハロゲン及びアルキルから独立して選択される、請求項１９に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｘ1〜Ｘ5の少なくとも１個がＯＨである、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２３】
式（ＩＶ）
【化６】
2009526065.tif 000024
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、テトラゾール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ4、又は炭素数１〜４のヒドロキシアルキル（式中、Ｒ4は、炭素数１〜４のアルキル又は場合により置換されたフェニルである）であり；及び
Ｘ1〜Ｘ5は、独立してＨ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ2、炭素数１〜４のアルキル、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）Ｒ3（式中、Ｒ3は、炭素数１〜４のアルキル、Ｃ6−Ｃ12−アリール、炭素数３〜６のシクロアルキル、又はＣ2−Ｃ9−ヘテロアリールである）である）
の化合物及びそのすべての結晶形態及び医薬的に許容される塩。
【請求項２４】
Ｒ1が−ＣＯＯＨ又はＨである、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｘ1〜Ｘ5が、Ｈ、ハロゲン、ＮＨ2、アルキル及びＯＨから独立して選択される、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２６】
化合物が、
２，４−ジクロロ−６−｛［（２Ｓ）−２−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）ピロリジン−１−イル］スルホニル｝フェノール；
（２Ｓ）−１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピロリジン−２−カルボニトリル；
（４Ｒ）−４−ヒドロキシ−１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；
１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；
１−［（３−ブロモ−５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；
（４Ｒ）−１−［（３，５−ジブロモ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン；
（４Ｒ）−１−［（３−ブロモ−５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン；
１−［（５−ブロモ−３−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；
１−［（３，５−ジブロモ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；
（４Ｒ）−１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン；
１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；
（４Ｒ）−１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−４−メトキシ−Ｌ−プロリン；
１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｄ−プロリン；
１−［（３−クロロ−５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；
（４Ｓ）−４−ヒドロキシ−１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｄ−プロリン；
１−｛（２Ｓ）−１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピロリジン−２−イル｝エタノン；
１−［（２−アミノ−５−クロロ−４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｄ−プロリン；
（４Ｒ）−１−［（３−クロロ−５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン；
（４Ｓ）−１−［（２−アミノ−５−クロロ−４−メチルフェニル）スルホニル］−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン；
１−［（２−アミノ−５−クロロ−４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；
２，４−ジクロロ−６−｛［（２Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル］スルホニル｝フェノール；
１−［（５−ブロモ−３−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｄ−プロリン；
２，４−ジクロロ−６−（ピロリジン−１−イルスルホニル）フェノール；
（４Ｓ）−１−［（２−アミノ−４−クロロ−５−メチルフェニル）スルホニル］−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン；
（４Ｒ）−１−［（２−アミノ−５−クロロ−４−メチルフェニル）スルホニル］−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン；
１−（｛５−クロロ−４−メチル−２−［（２−チエニルカルボニル）アミノ］フェニル｝スルホニル）−Ｌ−プロリン；
１−［（３，５−ジブロモ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｄ−プロリン；
（４Ｒ）−１−［（２−アミノ−４−クロロ−５−メチルフェニル）スルホニル］−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン；
１−｛（２Ｓ）−１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピロリジン−２−イル｝プロパン−１−オン；
｛（２Ｓ）−１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピロリジン−２−イル｝（フェニル）メタノン；
１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｄ−プロリン；
１−［（２，４，６−トリクロロフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；１−（｛５−クロロ−２−［（シクロプロピルカルボニル）アミノ］−４−メチルフェニル｝スルホニル）−Ｌ−プロリン；
１−｛［２−（ベンゾイルアミノ）−５−クロロ−４−メチルフェニル］スルホニル｝−Ｌ−プロリン；
１−［（３−クロロ−４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；１−［（２，４，５−トリクロロフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；
（２Ｓ）−１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピペリジン−２−カルボン酸；
（２Ｒ）−１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピペリジン−２−カルボン酸；
（２Ｓ）−１−［（３−ブロモ−５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピペリジン−２−カルボン酸；
（２Ｒ）−１−［（３−ブロモ−５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピペリジン−２−カルボン酸；
（２Ｓ）−１−［（３−クロロ−５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピペリジン−２−カルボン酸；
（２Ｒ）−１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピペリジン−２−カルボン酸；
（２Ｓ）−１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピペリジン−２−カルボン酸；
（２Ｒ）−１−［（２−アミノ−５−クロロ−４−メチルフェニル）スルホニル］ピペリジン−２−カルボン酸；
（４Ｒ）−３−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
（４Ｓ）−３−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
（４Ｒ）−３−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
（４Ｒ）−３−［（３，５−ジブロモ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
（４Ｒ）−３−［（３−クロロ−５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
（４Ｓ）−３−［（３−ブロモ−５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
（４Ｓ）−３−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
２，４−ジクロロ−６−（１，３−チアゾリジン−３−イルスルホニル）フェノール；
（４Ｓ）−３−［（２−アミノ−５−クロロ−４−メチルフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
（４Ｒ）−３−［（２−アミノ−４−クロロ−５−メチルフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
（４Ｓ）−３−［（２−アミノ−４−クロロ−５−メチルフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
（４Ｒ）−３−［（３−ブロモ−５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
（４Ｓ）−３−［（３−クロロ−５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；及び
（４Ｒ）−３−［（２−アミノ−５−クロロ−４−メチルフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項２７】
化合物が、（４Ｒ）−４−ヒドロキシ−１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリンである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項２８】
化合物が、１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリンである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項２９】
化合物が、（２Ｓ）−１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピペリジン−２−カルボン酸である、請求項１９に記載の化合物。
【請求項３０】
化合物が、（４Ｒ）−３−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸である、請求項２３に記載の化合物。
【請求項３１】
請求項１、１２、１９又は２３の１つから選択される化合物及び医薬的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項３２】
化合物が、（４Ｒ）−４−ヒドロキシ−１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリンである、請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
化合物が、１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリンである、請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
化合物が、（２Ｓ）−１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピペリジン−２−カルボン酸である、請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
化合物が、（４Ｒ）−３−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸である、請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
式（Ｉａ）
【化７】
2009526065.tif 000025
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯ2Ｒ4、シアノ、テトラゾール、場合によりＯＨ、アミン又は−ＣＯＯＨで置換された炭素数１〜６の直鎖アルキル、場合により置換された−Ｃ（Ｏ）−Ｃ1−Ｃ12−アルキル、又は場合により置換された−Ｃ（Ｏ）−Ｃ6−Ｃ12−アリール（式中、Ｒ4は、Ｃ1−Ｃ12−アルキル、Ｃ6−Ｃ12−アリール、Ｃ3−Ｃ12−シクロアルキル、又はＣ2−Ｃ9−ヘテロアリールである）であり；
Ｒ2は、ハロゲン、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｎ3、−ＣＨＯ、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、−Ｒ3、−ＯＲ3、−Ｓ（Ｏ）mＲ3、−ＮＲ3Ｒ3、−ＮＲ3Ｓ（Ｏ）mＲ3、−ＮＲ3Ｃ（Ｏ）Ｒ3、−Ｃ（Ｏ）Ｒ3、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ3、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ3Ｒ3、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ3、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ3、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ3Ｒ3、ＮＲ3Ｃ（Ｏ）Ｒ3、−ＮＲ3Ｃ（Ｏ）ＯＲ3、及び−ＮＲ3Ｃ（Ｏ）ＮＲ3Ｒ3（式中、ｍは０、１又は２であり；Ｒ3は、Ｈ、炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜８の分枝アルキル、炭素数３〜６のシクロアルキル、フェニル、Ｃ2−Ｃ9−ヘテロアリール、炭素数２〜６のアルケニル、又は炭素数２〜６のアルキニルである）からなる群より選択される１〜５個の置換基で場合により置換されたＣ6−Ｃ12−アリール又はＣ2−Ｃ9−ヘテロアリール基であり；
Ｘは、ＣＨ2、ＣＨＯＲ3、又はＳであり；及び
ｎは１又は２である）
の化合物及びそのすべての結晶形態及び医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、ヒトにおいてＣ型肝炎感染を治療する又は予防する方法。
【請求項３７】
化合物が、（４Ｒ）−４−ヒドロキシ−１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリンである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３８】
化合物が、１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリンである、請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
化合物が、（２Ｓ）−１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピペリジン−２−カルボン酸である、請求項３６に記載の方法。
【請求項４０】
化合物が、（４Ｒ）−３−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸である、請求項３６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００６年２月８日出願の米国特許出願第６０／７７１，９０４号の優先権を主張する。
【０００２】
発明の分野
一連のスルホンアミド化合物は、Ｃ型肝炎感染の治療のための有効な薬剤である。
【０００３】
発明の背景
Ｃ型肝炎は、慢性肝炎、肝硬変、肝不全及び肝細胞癌を引き起こし得る一般的な感染である。Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）による感染は、少なくとも８５％の症例において慢性肝炎を導き、肝移植の主要な理由であり、米国では年間に少なくとも１０，０００例の死亡の原因である（Hepatology, 1997, 26 (Suppl. 1), 2S-10S）。
【０００４】
Ｃ型肝炎ウイルスはフラビウイルス科（Flaviviridae family）の成員であり、ＨＣＶのゲノムはプラスセンス鎖の一本鎖線状ＲＮＡである（Hepatology, 1997, 26 (Suppl. 1), 11S-14S）。ＨＣＶは広汎な遺伝的多様性を示す；少なくとも６つの遺伝子型と５０以上のサブタイプが同定されている。
【０００５】
ＨＣＶ感染を予防するための有効なワクチンはない。現在使用可能な唯一の治療は、インターフェロンα（ＩＮＦ−α）による治療又はヌクレオシド類似体リバビリンとＩＮＦ−αの併用療法である(Antiviral Chemistry and Chemotherapy, 1997; 8, 281-301)。しかし、治療された患者の約４０％しか持続的応答を示さず、そのためより有効な抗ＨＣＶ治療薬が求められている。
【０００６】
ＨＣＶゲノムは多くの非構造タンパク質を含有する。ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５Ａ及びＮＳ５Ｂ (J. General Virology, 2000, 81, 1631 - 1648)。ＮＳ５Ｂは、ウイルス複製のために必須のＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼである。それ故、ＮＳ５Ｂの阻害は治療薬の開発のための適切な標的である。
【０００７】
米国特許第３，５０６，６４６号は、６−アミノスルホニル化合物の誘導体である化合物、特に縮合複素環を有する１，２，５−ベンゾチアジアゼピン１，１−ジオキシド、それらを合成するために使用される中間体、並びに利尿薬及び降圧薬としてのそれらの使用に関する。
【０００８】
国際公開公報第ＷＯ９８／０８８１５号は、置換環状アミンメタロプロテアーゼ阻害剤に関する。
【０００９】
Biorganic and medicinal chemistry, 1996, 837-850は、新規クラスの非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤としての５Ｈ−ピロロ［１，２−ｂ］［ｌ，２，５］ベンゾチアジアゼピン（ＰＢＴＤ）を述べている。
【００１０】
国際公開公報第ＷＯ０３／０４３９８５号は、ペルオキシソーム増殖因子活性化受容体アゴニストとしてのスルホンアミドを述べている。
【００１１】
国際公開公報第ＷＯ０２／０２５５４号は、神経障害の治療のために有用なスルホニル−ピロリジン誘導体を述べている。
【００１２】
発明の概要
本発明は、一連のスルホンアミド誘導体、それらの調製のための方法、それらを含有する医薬組成物、及び治療におけるそれらの使用に関する。化合物は、Ｃ型肝炎ポリメラーゼ（ＮＳ５Ｂ）を阻害するそれらの能力により、Ｃ型肝炎の治療において有用であると考えられる。
【００１３】
本発明は、式（Ｉ）
【化８】
2009526065.tif 000003
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯ2Ｒ4、シアノ、テトラゾール、場合によりＯＨ、アミン又は−ＣＯＯＨで置換された炭素数１〜６の直鎖アルキル、場合により置換された−Ｃ（Ｏ）−Ｃ1−Ｃ12−アルキル、又は場合により置換された−Ｃ（Ｏ）−Ｃ6−Ｃ12−アリール（式中、Ｒ4は、そのいずれかが場合により置換されてもよい、Ｃ1−Ｃ12−アルキル、Ｃ6−Ｃ12−アリール、Ｃ3−Ｃ12−シクロアルキル、又はＣ2−Ｃ9−ヘテロアリールである）であり；
Ｒ2は、ハロゲン、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｎ3、−ＣＨＯ、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、−Ｒ3、−ＯＲ3、−Ｓ（Ｏ）mＲ3、−ＮＲ3Ｒ3、−ＮＲ3Ｓ（Ｏ）mＲ3、−ＮＲ3Ｃ（Ｏ）Ｒ3、−Ｃ（Ｏ）Ｒ3、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ3、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ3Ｒ3、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ3、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ3、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ3Ｒ3、ＮＲ3Ｃ（Ｏ）Ｒ3、−ＮＲ3Ｃ（Ｏ）ＯＲ3、及び−ＮＲ3Ｃ（Ｏ）ＮＲ3Ｒ3（式中、ｍは０、１又は２であり；
Ｒ3は、Ｈ、炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜８の分枝アルキル、炭素数３〜６のシクロアルキル、フェニル、Ｃ2−Ｃ9−ヘテロアリール、炭素数２〜６のアルケニル、又は炭素数２〜６のアルキニルである）からなる群より選択される１〜５個の置換基で場合により置換されたアリール又はヘテロアリール基であり；
Ｘは、ＣＨ2、ＣＨＯＲ3、又はＳであり；及び
ｎは１又は２である）
の化合物及びそのすべての結晶形態及び医薬的に許容される塩を対象とし、但し、
ＸがＣＨ2であり、ｎが１であり、及びＲ1が−ＣＯＯＨであるとき、Ｒ2は、
【化９】
2009526065.tif 000004
（式中、
Ａは、ＣＨ3−、ＣＨ3ＣＨ2−又は炭素数１〜２のハロアルキルであり；及び
Ｂはハロゲンである）
ではあり得ないこと、及び
ＸがＣＨ2であり、ｎが２であり、及びＲ1が−ＣＯＯＨであるとき、Ｒ2は、
【化１０】
2009526065.tif 000005
ではあり得ないことを条件とする。
【００１４】
本発明はまた、式（ＩＩ）
【化１１】
2009526065.tif 000006
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、テトラゾール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ4、又は炭素数１〜４のヒドロキシアルキル（式中、Ｒ4は、炭素数１〜４のアルキル又は場合により置換されたフェニルである）であり；
Ｒ5は、Ｈ、ＯＨ又は−ＯＣＨ3であり；及び
Ｘ1〜Ｘ5は、独立してＨ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ2、炭素数１〜４のアルキル、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ3（式中、Ｒ3は、炭素数１〜４のアルキル、Ｃ6−Ｃ12−アリール、炭素数３〜６のシクロアルキル、又はＣ2−Ｃ9−ヘテロアリールである）である）
の化合物及びそのすべての結晶形態又は医薬的に許容される塩を対象とし、但し、
Ｒ1が−ＣＯＯＨであり、Ｒ5がＨであり、Ｘ3がハロゲンであり、及びＸ4が−ＣＨ3又は−ＣＦ3であるとき、Ｘ1はＮＨ2ではあり得ないこと、及び
Ｒ1が−ＣＯＯＨであり、Ｒ5がＨであり、Ｘ2が−ＣＨ3又は−ＣＦ3であり、及びＸ3がハロゲンであるとき、Ｘ5はＮＨ2ではあり得ないことを条件とする。
【００１５】
本発明のもう１つの態様は、式（ＩＩＩ）
【化１２】
2009526065.tif 000007
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、テトラゾール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ4、又は炭素数１〜４のヒドロキシアルキル（式中、Ｒ4は、炭素数１〜４のアルキル又は場合により置換されたフェニルである）であり；及び
Ｘ1〜Ｘ5は、独立してＨ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ2、炭素数１〜４のアルキル、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）Ｒ3（式中、Ｒ3は、炭素数１〜４のアルキル、Ｃ6−Ｃ12−アリール、炭素数３〜６のシクロアルキル、又はＣ2−Ｃ9−ヘテロアリールである）である）
の化合物及びそのすべての結晶形態及び医薬的に許容される塩であり、但し、
Ｒ1が−ＣＯＯＨであり、Ｘ3がハロゲンであり、及びＸ4が−ＣＨ3又は−ＣＨ2ＣＨ3であるとき、Ｘ1はＮＨ2ではあり得ないこと、及び
Ｒ1が−ＣＯＯＨであり、Ｘ2が−ＣＨ3又は−ＣＨ2ＣＨ3であり、及びＸ3がハロゲンであるとき、Ｘ5はＮＨ2ではあり得ないことを条件とする。
【００１６】
本発明はまた、式（ＩＶ）
【化１３】
2009526065.tif 000008
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、テトラゾール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ4、又は炭素数１〜４のヒドロキシアルキル（式中、Ｒ4は、炭素数１〜４のアルキル又は場合により置換されたフェニルである）であり；及び
Ｘ1〜Ｘ5は、独立してＨ、ハロゲン、ＯＨ、ＮＨ2、炭素数１〜４のアルキル、−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）Ｒ3（式中、Ｒ3は、炭素数１〜４のアルキル、Ｃ6−Ｃ12−アリール、炭素数３〜６のシクロアルキル、又はＣ2−Ｃ9−ヘテロアリールである）である）
の化合物及びそのすべての結晶形態及び医薬的に許容される塩を対象とする。
【００１７】
本発明はまた、本発明の化合物及び医薬的に許容される担体を含有する医薬組成物を対象とする。
【００１８】
本発明はまた、式（Ｉａ）
【化１４】
2009526065.tif 000009
（式中、
Ｒ1は、Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＯ2Ｒ4、シアノ、テトラゾール、場合によりＯＨ、アミン又は−ＣＯＯＨで置換された炭素数１〜６の直鎖アルキル、場合により置換された−Ｃ（Ｏ）−Ｃ1−Ｃ12−アルキル、又は場合により置換された−Ｃ（Ｏ）−Ｃ6−Ｃ12−アリール（式中、Ｒ4は、Ｃ1−Ｃ12−アルキル、Ｃ6−Ｃ12−アリール、Ｃ3−Ｃ12−シクロアルキル、又はＣ2−Ｃ9−ヘテロアリールである）であり；
Ｒ2は、ハロゲン、−ＮＯ2、−ＣＮ、−Ｎ3、−ＣＨＯ、−ＣＦ3、−ＯＣＦ3、−Ｒ3、−ＯＲ3、−Ｓ（Ｏ）mＲ3、−ＮＲ3Ｒ3、−ＮＲ3Ｓ（Ｏ）mＲ3、−ＮＲ3Ｃ（Ｏ）Ｒ3、−Ｃ（Ｏ）Ｒ3、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ3、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ3Ｒ3、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ3、−ＯＣ（Ｏ）ＯＲ3、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ3Ｒ3、ＮＲ3Ｃ（Ｏ）Ｒ3、−ＮＲ3Ｃ（Ｏ）ＯＲ3、及び−ＮＲ3Ｃ（Ｏ）ＮＲ3Ｒ3（式中、ｍは０、１又は２であり；
Ｒ3は、Ｈ、炭素数１〜６のアルキル、炭素数１〜８の分枝アルキル、炭素数３〜６のシクロアルキル、フェニル、Ｃ2−Ｃ9−ヘテロアリール、炭素数２〜６のアルケニル、又は炭素数２〜６のアルキニルである）からなる群より選択される１〜５個の置換基で場合により置換されたＣ6−Ｃ12−アリール又はＣ2−Ｃ9−ヘテロアリール基であり；
Ｘは、ＣＨ2、ＣＨＯＲ3、又はＳであり；及び
ｎは１又は２である）
の化合物及びそのすべての結晶形態及び医薬的に許容される塩の有効量を投与することを含む、ヒトにおいてＣ型肝炎感染を治療する又は予防する方法を含む。
【００１９】
発明の詳細な説明
本発明に関して、「アルキル」という用語は、炭素数１２までの長さ、好ましくは炭素数１〜６、より好ましくは炭素数１〜４の長さを有する直鎖部分を含む。「アルキル」という用語はまた、炭素数３〜１２、好ましくは炭素数１〜８の分枝部分を含む。「アルケニル」という用語は、１つの二重結合を含有する脂肪族炭化水素基を指し、炭素数２〜７の直鎖及び分枝アルケニル部分の両方を含む。そのようなアルケニル部分は、Ｅ又はＺ立体配置で存在し得る；本発明の化合物は両方の立体配置を含む。「アルキニル」という用語は、少なくとも１つの三重結合を有する炭素数２〜７を含有する直鎖及び分枝部分の両方を含む。「シクロアルキル」という用語は、３〜１２個の炭素原子を有する脂環式炭化水素基を指し、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、ノルボルニル又はアダマンチルを含むが、これらに限定されない。好ましいシクロアルキル基は炭素数３−６である。
【００２０】
本発明に関して、「アリール」という用語は、少なくとも１つの芳香環を有する芳香族炭化水素部分と定義され、単環式、二環式又は三環式であり、置換されていてもよく又は置換されていなくてもよい。アリール基は、フェニル、α−ナフチル、β−ナフチル、ビフェニル、アントリル、テトラヒドロナフチル、フェナントリル、フルオレニル、インダニル、ビフェニレニル、アセナフテニル、アセナフチレニル又はフェナントレニルから選択され得るが、これらに限定されない。アリール基は、アルキル、ハロアルキル、アシル、アルコキシカルボニル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシアルコキシ、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、トリフルオロプロピル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルキルチオ、メルカプト、ハロアルキルチオ、アリール、アリールオキシ、アリールチオ、ヘテロシクロアルコキシ、ヘテロシクロアルキルチオ、−ＳＯ3Ｈ、−ＳＯ2ＮＨ2、−Ｏ2ＮＨアルキル、−ＳＯ2Ｎ（アルキル）2、−ＣＯ2Ｈ、ＣＯ2ＮＨ2、ＣＯ2ＮＨアルキル及び−ＣＯ2Ｎ（アルキル）2からなる群より選択されるが、これらに限定されない置換基で場合により置換されてもよい。アリール及びヘテロシクロアルキルについての好ましい置換基は、アルキル、ハロゲン、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、アリールアルキル及びアルキルアリールを含む。好ましくは、アリール基は６−１２個の炭素原子からなるが、フェニルが最も好ましい成分である。
【００２１】
本発明に関して、「ヘテロアリール」という用語は、（１）ヘテロアリール部分が、フラン、チオフェン、インドール、アザインドール、オキサゾール、チアゾール、イソオキサゾール、イソチアゾール、イミダゾール、Ｎ−メチルイミダゾール、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピロール、Ｎ−メチルピロール、ピラゾール、Ｎ−メチルピラゾール、１，３，４−オキサジアゾール、１，２，４−トリアゾール、１−メチル−１，２，４−トリアゾール、１Ｈ−テトラゾール、１−メチルテトラゾール、ベンズオキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾフラン、ベンズイソオキサゾール、ベンズイミダゾール、Ｎ−メチルベンズイミダゾール、アザベンズイミダゾール、インダゾール、キナゾリン、キノリン及びイソキノリンから選択される芳香族複素環系（単環式又は二環式）；及び（２）フェニル、ピリジン、ピリミジン又はピリジジン環が、（ａ）１個の窒素原子を有する６員芳香族（不飽和）複素環に縮合している；（ｂ）2個の窒素原子を有する5または6員芳香族（不飽和）複素環に縮合している；（ｃ）１個の酸素原子又は１個の硫黄原子のいずれかと共に１個の窒素原子を有する５員芳香族（不飽和）複素環に縮合している；又は（ｄ）Ｏ、Ｎ又はＳから選択される１個のヘテロ原子を有する５員芳香族（不飽和）複素環に縮合している、二環式芳香族複素環と定義される。好ましくは、ヘテロアリール基は２〜９個の炭素原子からなる。
【００２２】
本発明に関して、「ヒドロキシアルキル」という用語は、ヒドロキシル基で置換された、上記で定義したアルキルと定義される。
【００２３】
本発明の化合物は、不斉炭素原子及び１又はそれ以上の不斉中心を含有してもよく、それ故光学異性体及びジアステレオマーを生じさせ得る。式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）では立体化学を考慮せずに示しているが、本発明は、すべての光学異性体及びジアステレオマー、ラセミ混合物及び分割された鏡像異性的に純粋なＲ及びＳ立体異性体、及びＲ及びＳ立体異性体の他の混合物及びそれらに医薬的に許容される塩を含む。
【００２４】
酸部分を有する式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）の化合物の医薬的に許容される塩は、有機及び無機塩基の両方から形成され得る。例えばアルカリ金属塩、例えばナトリウム、リチウム及びカリウム、及びＮ−テトラアルキルアンモニウム塩、例えばＮ−テトラブチルアンモニウム塩。同様に、本発明の化合物が塩基部分を含有するとき、塩は、有機及び無機酸から形成され得る。例えば塩は、酢酸、プロピオン酸、乳酸、クエン酸、酒石酸、コハク酸、フマル酸、マレイン酸、マロン酸、マンデル酸、リンゴ酸、フタル酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、硝酸、硫酸、メタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、トルエンスルホン酸、カンファースルホン酸、及び同様に公知の許容される酸から形成され得る。
【００２５】
式（Ｉ）の化合物の好ましい実施形態は、ＸがＣＨ2又はＳである場合、特にＸがＳであり、及びｎが１である場合である。
【００２６】
式（Ｉ）の化合物のもう１つの好ましい実施形態は、ＸがＣＨ2ＯＲ3であり、及びＲ3がＨ又はＣＨ3である場合、特にｎが１である場合である。
【００２７】
式（Ｉ）の化合物のもう１つの好ましい実施形態は、Ｒ1が、Ｈ、−ＣＯＯＨ、−ＣＮ、テトラゾール、−ＣＨ2ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ3又は−Ｃ（Ｏ）−フェニルである場合であるが、Ｒ1が−ＣＯＯＨである場合がさらに一層好ましい。
【００２８】
式（Ｉ）の化合物のさらにもう１つの好ましいものは、Ｒ2が、場合により置換されたフェニルである場合、特にフェニル環が、ＯＨ、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ12−アルキル、アミノ及び−ＮＲ3Ｃ（Ｏ）Ｒ3から選択される少なくとも１個の置換基によって置換される場合である。
【００２９】
式（ＩＩ）の化合物の好ましい実施形態は、Ｒ5がＨ、ＯＨ又は−ＯＣＨ3である場合である。
【００３０】
式（ＩＩ）の化合物のもう１つの好ましい実施形態は、Ｒ1が−ＣＯＯＨである場合である。
【００３１】
式（ＩＩ）の化合物のさらにもう１つの好ましい実施形態は、Ｘ1〜Ｘ5の少なくとも１つがＯＨ又は−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ3である場合である。
【００３２】
式（ＩＩＩ）の化合物の好ましい実施形態は、Ｒ1が−ＣＯＯＨである場合である。
【００３３】
式（ＩＩＩ）の化合物のもう１つの好ましい実施形態は、Ｘ1〜Ｘ5が、Ｈ、ＮＨ2、ＯＨ、ハロゲン及びアルキルから独立して選択される場合、特にＸ1〜Ｘ5の少なくとも１つがＯＨである場合である。
【００３４】
式（ＩＶ）の化合物の好ましい実施形態は、Ｒ1が−ＣＯＯＨ又はＨである場合である。
【００３５】
式（ＩＶ）の化合物のもう１つの好ましい実施形態は、Ｘ1〜Ｘ5が、Ｈ、ハロゲン、ＮＨ2、アルキル及びＯＨから独立して選択される場合である。
【００３６】
本発明の好ましい化合物は以下を含む。
２，４−ジクロロ−６−｛［（２Ｓ）−２−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）ピロリジン−１−イル］スルホニル｝フェノール；
（２Ｓ）−１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピロリジン−２−カルボニトリル；
（４Ｒ）−４−ヒドロキシ−１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；
１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；
１−［（３−ブロモ−５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；
（４Ｒ）−１−［（３，５−ジブロモ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン；
（４Ｒ）−１−［（３−ブロモ−５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン；
１−［（５−ブロモ−３−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；
１−［（３，５−ジブロモ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；
（４Ｒ）−１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン；
１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；
（４Ｒ）−１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−４−メトキシ−Ｌ−プロリン；
１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｄ−プロリン；
１−［（３−クロロ−５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；
（４Ｓ）−４−ヒドロキシ−１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｄ−プロリン；
１−｛（２Ｓ）−１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピロリジン−２−イル｝エタノン；
１−［（２−アミノ−５−クロロ−４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｄ−プロリン；
（４Ｒ）−１−［（３−クロロ−５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン；
（４Ｓ）−１−［（２−アミノ−５−クロロ−４−メチルフェニル）スルホニル］−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン；
１−［（２−アミノ−５−クロロ−４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；２，４−ジクロロ−６−｛［（２Ｓ）−２−（ヒドロキシメチル）ピロリジン−１−イル］スルホニル｝フェノール；
１−［（５−ブロモ−３−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｄ−プロリン；
２，４−ジクロロ−６−（ピロリジン−１−イルスルホニル）フェノール；
（４Ｓ）−１−［（２−アミノ−４−クロロ−５−メチルフェニル）スルホニル］−４−ヒドロキシ−Ｄ−プロリン；
（４Ｒ）−１−［（２−アミノ−５−クロロ−４−メチルフェニル）スルホニル］−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン；
１−（｛５−クロロ−４−メチル−２−［（２−チエニルカルボニル）アミノ］フェニル｝スルホニル）−Ｌ−プロリン；１−［（３，５−ジブロモ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｄ−プロリン；
（４Ｒ）−１−［（２−アミノ−４−クロロ−５−メチルフェニル）スルホニル］−４−ヒドロキシ−Ｌ−プロリン；
１−｛（２Ｓ）−１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピロリジン−２−イル｝プロパン−１−オン；
｛（２Ｓ）−１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピロリジン−２−イル｝（フェニル）メタノン；
１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｄ−プロリン；
１−［（２，４，６−トリクロロフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；
１−（｛５−クロロ−２−［（シクロプロピルカルボニル）アミノ］−４−メチルフェニル｝スルホニル）−Ｌ−プロリン；
１−｛［２−（ベンゾイルアミノ）−５−クロロ−４−メチルフェニル］スルホニル｝−Ｌ−プロリン；
１−［（３−クロロ−４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；
１−［（２，４，５−トリクロロフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン；
（２Ｓ）−１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピペリジン−２−カルボン酸；
（２Ｒ）−１−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピペリジン−２−カルボン酸；
（２Ｓ）−１−［（３−ブロモ−５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピペリジン−２−カルボン酸；
（２Ｒ）−１−［（３−ブロモ−５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピペリジン−２−カルボン酸；
（２Ｓ）−１−［（３−クロロ−５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピペリジン−２−カルボン酸；
（２Ｒ）−１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピペリジン−２−カルボン酸；
（２Ｓ）−１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピペリジン−２−カルボン酸；
（２Ｒ）−１−［（２−アミノ−５−クロロ−４−メチルフェニル）スルホニル］ピペリジン−２−カルボン酸；
（４Ｒ）−３−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
（４Ｓ）−３−［（３，４，５−トリクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
（４Ｒ）−３−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
（４Ｒ）−３−［（３，５−ジブロモ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
（４Ｒ）−３−［（３−クロロ−５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
（４Ｓ）−３−［（３−ブロモ−５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
（４Ｓ）−３−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
２，４−ジクロロ−６−（１，３−チアゾリジン−３−イルスルホニル）フェノール；
（４Ｓ）−３−［（２−アミノ−５−クロロ−４−メチルフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
（４Ｒ）−３−［（２−アミノ−４−クロロ−５−メチルフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
（４Ｓ）−３−［（２−アミノ−４−クロロ−５−メチルフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
（４Ｒ）−３−［（３−ブロモ−５−クロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；
（４Ｓ）−３−［（３−クロロ−５−フルオロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸；及び
（４Ｒ）−３−［（２−アミノ−５−クロロ−４−メチルフェニル）スルホニル］−１，３−チアゾリジン−４−カルボン酸。
【００３７】
本発明の化合物は、Ｃ型肝炎のＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼＮＳ５Ｂを阻害し、それ故Ｃ型肝炎感染の治療のために有用である。本発明は、従って、医薬的に許容される担体と組み合わせて又は共同して式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）から選択される化合物を含む医薬組成物を提供する。組成物は、好ましくは経口又は皮下投与に適合される。しかし、それらは他の投与様式にも適合され得る。投与の一貫性を得るため、本発明の組成物は単位用量の形態であることが好ましい。適切な単位用量形態は、錠剤、カプセル及び小袋又はバイアル中の粉末を含む。そのような単位用量形態は、本発明の化合物０．１〜１００ｍｇ、好ましくは２〜５０ｍｇを含有し得る。さらに一層好ましい単位用量形態は、本発明の化合物５〜２５ｍｇを含有する。本発明の化合物は、約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇの用量範囲で、又は好ましくは０．１〜１０ｍｇ／ｋｇの用量範囲で経口的に投与され得る。そのような組成物は、１日１〜６回、より通常には１日１〜４回投与され得る。本発明の組成物は、従来の賦形剤、例えば充填剤、崩壊剤、結合剤、潤滑剤、着香料等と共に製剤され得る。
【００３８】
本発明はさらに、活性治療物質としての使用のための本発明の化合物を提供する。式（Ｉａ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）の化合物は、Ｃ型肝炎ウイルスによる感染の治療のために特に有用である。
【００３９】
本発明はさらに、ヒトにおいてＣ型肝炎感染を治療する方法を提供し、その方法は、式（Ｉａ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）の化合物又は本発明の医薬組成物の有効量を感染した個人に投与することを含む。
【００４０】
本発明の化合物の調製のための一般的合成スキーム
【００４１】
スキーム１
【化１５】
2009526065.tif 000010
【００４２】
試薬：（ａ）ＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、ＤＩＥＡ、ＤＭＦ、室温、６時間；（ｂ）ＤＭＦ中２０％ピペリジン、室温、２０分間；（ｃ）ピリジン、室温、即時（ＯＮ）；（ｄ）１：１ＴＦＡ−ＤＣＭ、室温、２時間。
【００４３】
スキーム１は、式（Ｉ）の化合物が、樹脂、例えばＷａｎｇ樹脂を使用して固体支持体上でどのようにして調製され得るかを示す。項目（ｉｎｔｅｒｅｓｔ）２のＦｍｏｃ保護されたアミノ酸を、カップリング剤、例えば塩基の存在下でのＥＤＣＩ、ＨＯＢＴ、及び極性溶媒中のＤＩＥＡを使用して樹脂に結合した。ＤＭＦを極性溶媒として使用し得るが、当業者は他の適切な溶媒を認識する。過剰の試薬と溶媒を洗浄した後、樹脂に結合したアミノ酸を、ＤＭＦ中の塩基を使用して脱保護した。適切な塩基はアルキルアミン塩基、例えばピペリジンを含むが、当業者は、使用し得る他の可能な塩基を認識する。遊離アミノ酸をピリジンなどの溶媒中で項目５のスルホニルクロライドと反応させた。スルホニルクロライド上の基の性質に依存して、脱保護工程は、トリフルオロ酢酸及びＤＣＭを使用して樹脂から生成物を切断する前に使用した。当業者は、様々な官能基を酸性切断条件から保護するために使用できる可能な保護基を認識する。
【００４４】
スキーム２
【化１６】
2009526065.tif 000011
【００４５】
試薬：（ｇ）ピリジン、ＴＨＦ、室温、８時間；（ｈ）ＮａＯＨ水溶液、ＥｔＯＨ、室温、８時間。
【００４６】
あるいは、スキーム２に従って類似体も得ることができる。この溶液相法では、項目８のアミノ酸エステルをピリジン中で選択９のスルホニルクロライドと反応させたが、他の溶媒も使用し得る。必要な酸を与えるために塩基、例えば水酸化トリウム又は水酸化リチウムを使用してエステルを加水分解した。
【００４７】
本発明の化合物の調製において使用される試薬は、市販のものを入手し得るか又は文献に述べられている標準手順によって調製し得る。本発明に従って、述べられている化合物は、上記に示す反応スキームによって生産される。
【００４８】
当業者はまた、スキーム１及び２で詳述した調製方法が式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）及び（ＩＶ）の化合物にどのように適用されるかを理解する。
【００４９】
本発明の化合物の詳細な合成
実施例１、２、１１及び２３を、スキーム２に示すように溶液中で合成した。
【００５０】
[実施例１]
２，４−ジクロロ−６−｛［（２Ｓ）−２−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）ピロリジン−１−イル］スルホニル｝フェノール
【００５１】
ＤＭＦ １．５ｍＬ中の（２Ｓ）−１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピロリジン−２−カルボニトリル（３７ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ）、アジ化ナトリウム（２４ｍｇ、０．３６ｍｍｏｌ）、及びトリエチルアミンハイドロクロライド（２５ｍｇ、０．１８ｍｍｏｌ）の混合物を１２０℃で６時間攪拌した。その後反応物を室温に冷却し、１Ｎ ＨＣｌ ２ｍＬを添加して酸性にして、濃縮した。逆相クロマトグラフィー後に２，４−ジクロロ−６−｛［（２Ｓ）−２−（２Ｈ−テトラゾール−５−イル）ピロリジン−１−イル］スルホニル｝フェノール（３１ｍｇ、７１％収率）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８９（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ），７．６０（ｄ，Ｊ＝３．５Ｈｚ，１Ｈ），５．４６（ｄｄ，１Ｈ），３．５６（ｍ，１Ｈ），３．３３（ｍ，１Ｈ），２．３０（ｍ，１Ｈ），１．９６（ｍ，３Ｈ）。ＨＲＭＳ：Ｃ11Ｈ11Ｃｌ2Ｎ5Ｏ3Ｓについて算定した理論値、３６４．００３２５；実測値（ＥＳＩ−，［Ｍ−Ｈ］），３６４．００３４９。
【００５２】
[実施例２]
（２Ｓ）−１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］ピロリジン−２−カルボニトリル
【００５３】
ＣＨ2Ｃｌ2／ピリジン（１：１）２ｍＬ中の（２Ｓ）−ピロリジン−２−カルボニトリルハイドロクロライド（３４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）と３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシ−ベンゼンスルホニルクロライド（５７ｍｇ、０．２２ｍｍｏｌ）の混合物を室温で１６時間攪拌した。次に反応混合物を濃縮し、逆相クロマトグラフィーによって精製して、（２Ｓ）−１−（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシ−ベンゼンスルホニル）−ピロリジン−２−カルボニトリル（３７ｍｇ、５８％収率）を得た。1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．８６（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），７．６３（ｄ，Ｊ＝２．８Ｈｚ，１Ｈ），５．０８（ｂｒ．，１Ｈ），３．４４（ｍ，１Ｈ），３．１８（ｍ，１Ｈ），２．５４（ｍ，１Ｈ），２．１７（ｍ，２Ｈ），１．９３（ｍ，２Ｈ）。ＨＲＭＳ：Ｃ11Ｈ10Ｃｌ2Ｎ2Ｏ3Ｓについて算定した理論値、３２０．９８６２；実測値（ＥＳＩ−，［Ｍ−Ｈ］），３２０．９８６３９。
【００５４】
実施例２３は、（２Ｓ）−ピロリジン−２−カルボニトリルハイドロクロライドの代わりにピロリジンを使用したことを除き、実施例２で述べたのと同じ手順に従って調製した。
【００５５】
[実施例１１]
１−［（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシフェニル）スルホニル］−Ｌ−プロリン
【００５６】
工程１．ピリジン（１００ｍＬ）中のＬ−プロリンメチルエステルハイドロクロライド（８．２４ｇ、５０．１ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃の３，５ジクロロ−２−ヒドロキシベンゼンスルホニルクロライド（１５ｇ、５７．３ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を室温に温め、さらに４時間攪拌した。混合物を濃縮し、シリカゲル（ヘキサン中２５％酢酸エチル）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して、１−（３，５−ジクロロ−２−ヒドロキシ−ベンゼンスルホニル）−ピロリジン−２−カルボン酸メチルエステルを生成した（８．６ｇ、４９％）。
【００５７】
工程２：工程１からのエステルをエタノール（１７５ｍＬ）中に取り、１Ｎ 水酸化ナトリウムを添加して、一晩攪拌した。次に反応混合物を濃縮し、水で希釈して、酢酸エチルで抽出した。水層を２Ｎ ＨＣｌで酸性化して、所望化合物を白色固体として得た（７．３ｇ、８９％）。融点１０７．４℃；１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ７．６（ｄ，１Ｈ），７．５（ｄ，１Ｈ），４．５（ｄｄ，１Ｈ），３．４（ｍ，２Ｈ），２．３（ｍ，２Ｈ），２．０  （ｍ，２Ｈ）；ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３３７．８２；ＨＲＭＳ：Ｃ１１Ｈ１１Ｃｌ２ＮＯ５Ｓについて算定した理論値、３３７．９６６２２；実測値（ＥＳＩ−，［Ｍ−Ｈ］），３３７．９６６１９。
【００５８】
実施例３〜１０、１２〜１７、１８〜１９、２０〜２２、２４〜５８は、スキーム１に示すように、適切に保護されたアミノ酸とスルホニルクロライドを使用して、実施例２０について以下で述べるように固相で調製した。
【００５９】
[実施例２０]
１−［（２−アミノ−５−クロロ−４−メチルフェニル）スルホニル］−L−プロリン
【００６０】
工程１．５−クロロ−２−（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシカルボニルアミノ）−４−メチル−ベンゼンスルホン酸。水（４０ｍＬ）及び重炭酸ナトリウム（２．８ｇ）中の５−クロロ−２−アミノ−４−メチル−ベンゼンスルホン酸（３．３ｇ、１５．１３ｍｍｏｌ）の溶液に、０℃のジオキサン（４０ｍＬ）中の９−フルオレニルメトキシカルボニルクロライド（４．３ｇ、１６．７ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。反応混合物を一晩攪拌し、揮発性物質を減圧下で除去した。水層を２Ｎ ＨＣｌで酸性化し、酢酸エチルで抽出して、乾燥し、濃縮した。残留物をシリカゲル（ＥｔＯＡｃ中１０％ＭｅＯＨ）でのフラッシュカラムによって精製して、白色個体を得た（８９％）。1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ９．９（ｓ，１Ｈ），７．９（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，３Ｈ），７．７（ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ，  ２Ｈ），７．６（ｓ，１Ｈ），７．４（ｍ，２Ｈ），７．３（ｍ，２Ｈ），４．４（ｄ，Ｊ＝  ７Ｈｚ，２Ｈ），４．０（ｔ，Ｊ＝  ７Ｈｚ  １Ｈ），２．３（ｓ，３Ｈ）。
【００６１】
工程２．（４−クロロ−２−クロロスルホニル−５−メチル−フェニル）カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル。工程１からのスルホン酸（３．０ｇ、６．７ｍｍｏｌ）をＤＭＦ ３ｍＬに溶解し、チオニルクロライド ２．５ｍＬを室温で滴下した。生じた溶液を室温でさらに４時間攪拌し、氷と水でクエンチした。白色固体沈殿物をろ過して乾燥し、さらなる精製を行わずに使用した。
【００６２】
工程３．Ｗａｎｇ樹脂へのＮ−Ｆｍｏｃ−Ｌ−プロリンの結合。Ｗａｎｇ樹脂（Ａｎａ  Ｓｐｅｃ  １００〜２００メッシュ、１％架橋；負荷：１．１ｍｍｏｌ／ｇ；５ｇ、５．５ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（２０ｍｌ）中で膨潤させた。無水ＤＭＦ（３０ｍｌ）中のＮ−Ｆｍｏｃ−Ｌ−プロリン（７．４ｇ、２２ｍｍｏｌ）、ＨＯＢＴ（３．３７ｇ、２２ｍｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（２６８．８ｍｇ、２．２ｍｍｏｌ）及びＤＩＣ（３．４ｍｌ、２２ｍｍｏｌ）の溶液を樹脂に添加した。混合物を軌道振とう機にて室温で一晩振とうした。混合物をろ過し、樹脂をＤＭＦ（３×５０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×５０ｍｌ）、ＣＨ2Ｃｌ2（３×５０ｍｌ）で洗浄して、乾燥した。
【００６３】
工程４．Ｆｍｏｃ基の脱保護。上記工程１で述べたように調製した樹脂（５．５ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ中の２０％ピペリジンの溶液で処理して（２×５０ｍｌ、１回目は１０分間、２回目は３０分間）、樹脂からＦｍｏｃ保護基を除去した。混合物をろ過し、樹脂をＤＭＦ（３×５０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×５０ｍｌ）及びＣＨ2Ｃｌ2（３×５０ｍｌ）で洗浄した。
【００６４】
工程５．（４−クロロ−２−クロロスルホニル−５−メチル−フェニル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステルとの反応。Ｗａｎｇ樹脂（５．５ｍｍｏｌ）上のＬ−プロリンに、１：１の無水ＣＨ2Ｃｌ2とピリジン（５０ｍｌ）中の（４−クロロ−２−クロロスルホニル−５−メチル−フェニル）−カルバミン酸９Ｈ−フルオレン−９−イルメチルエステル（５．１ｇ、１１ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。室温で一晩振とうした後、混合物をろ過し、ＭｅＯＨ（３×５０ｍｌ）及びＣＨ2Ｃｌ2（５×５０ｍｌ）で洗浄した。
【００６５】
工程６．Ｆｍｏｃ基の脱保護。工程５から得た樹脂（５．５ｍｍｏｌ）を、再びＤＭＦ中の２０％ピペリジンの溶液と反応させた（２×５０ｍｌ、１回目は１０分間、２回目は３０分間）。混合物をろ過し、樹脂をＤＭＦ（３×５０ｍｌ）、ＭｅＯＨ（３×５０ｍｌ）、ＣＨ2Ｃｌ2（３×５０ｍｌ）で洗浄して、乾燥した。
【００６６】
工程７．樹脂からの切断。上記樹脂を１：１のＴＦＡ：ＣＨ2Ｃｌ2（５０ｍｌ）で処理し、室温で４時間振とうした。混合物をろ過し、樹脂をＣＨ2Ｃｌ2（３×１０ｍｌ）で洗浄した。併合したＣＨ2Ｃｌ2を濃縮し、ＨＰＬＣによって精製した。1Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）δ７．４（ｓ，１Ｈ）、６．８（ｓ，１Ｈ），６．３（ｓ，２Ｈ），４．３（ｍ，１Ｈ），３．２（ｔ，２Ｈ），２．２（ｓ，３Ｈ），２．１（ｍ，１Ｈ），１．９（ｍ，１Ｈ），１．６５−１．８（ｍ，２Ｈ）．ＨＲＭＳ：Ｃ12Ｈ15ＣｌＮ2Ｏ4Ｓについて算定した理論値、３１９．０５１３９；実測値（ＥＳＩ−ＦＴＭＳ，［Ｍ＋Ｈ］），３１９．０５１７９。
【実施例】
【００６７】
本発明の化合物の実施例を表１に列挙する。
【表１】
2009526065.tif 000012
2009526065.tif 000013
2009526065.tif 000014
【００６８】
生物学的試験手順の簡単な説明及び結果のテキスト要約
Ｃ型肝炎ポリメラーゼを阻害する本発明の化合物の能力を以下の実験手順によって確認した。
【００６９】
ＢＫ系統（１ｂ亜型）からのＮＳ５Ｂを、２１個のＣ末端アミノ酸が短いリンカーとヘキサヒスチジンタグ（ＧＳＨＨＨＨＨＨ）で置換されるタンパク質として大腸菌において発現させる。精製したタンパク質を放射性ヌクレオチドと混合し、内因性の短いヘアピンによってプライムされるヘテロポリマーＲＮＡ基質を複製させて、約７６０ヌクレオチドの産物を生成する。放射性生成物をフィルター上に捕獲し、組み込まれていないヌクレオチドの除去後に定量する。
【００７０】
試薬
１０ｍＭ ＵＴＰ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｎｏ．ｐ１１６Ｂ）
１０ｍＭ ＡＴＰ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｎｏ．ｐ１１３Ｂ）
１０ｍＭ ＣＴＰ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｎｏ．ｐ１１４Ｂ）
１０ｍＭ ＧＴＰ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｎｏ．ｐ１１５Ｂ）
ＢＳＡ  １０ｍｇ／ｍｌ  ＮＥＢ（１０ｍｇ／ｍｌで１００Ｘ）Ｎｏ．００７−ＢＳＡ
ＲＮａｓｅＩｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｎｏ．Ｎ２５１Ｘ）４０Ｕ／μｌ
33Ｐ−ＧＴＰ（ＮＥＮ−ｅａｓｙｔｉｄｅｓ  ＮＥＧ／６０６Ｈ  ３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ、３７０ＭＢｑ／ｍｌ、１０ｍＣｉ／ｍｌ）
Ｆａｌｃｏｎポリプロピレン９６穴プレート（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  Ｎｏ．３５１１９０）
Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎ  ９６穴ろ過プレートＮｏ．ＭＡＤＥ  ＮＯＢ  ５０
Ｆｉｓｈｅｒによって製剤されたＯｐｔｉｐｈａｓｅ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（Ｗａｌｌａｃ）
ＭｉｃｒｏＢｅｔａ  １４５０−１０６カセット（Ｗａｌｌａｃ）における使用のためのＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎライナー
ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ  Ｎｏ．１４５０−４３３
１Ｍ ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．３
Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃ（ＵＳ１６９２４−５００ｍｌ）
１Ｍ  ＭｇＣｌ2（ＳＩＧＭＡ  Ｎｏ．Ｍ１０２８）
ＤＴＴ（固体）（ＳＩＧＭＡ  Ｎｏ．Ｄ９７７９）
ＲＮアーゼ不含水（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ  Ｎｏ．１０９７７−０２３）
ジメチルスルホキシド（Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｎｏ．２７６８５−５）
Ｂａｓｉｌｅｎ  Ｂｌｕｅ（Ｓｉｇｍａ，Ｂ５５２０）
０．５Ｍ ＥＤＴＡ、ｐＨ８（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ  Ｎｏ．１５５７５−０２０）
リン酸水素二ナトリウム７水和物（Ｎａ2ＨＰＯ4・７Ｈ2Ｏ；Ｂａｋｅｒ  Ｎｏ．３８２４−０７）
リン酸（Ｂａｋｅｒ、Ｎｏ．０２６２．０２）
【００７１】
さらなる試薬の調製
０．５Ｍ リン酸ナトリウム緩衝液１リットルにつき、Ｎａ2ＨＰＯ4．７Ｈ2Ｏ １３４ｇを計量する；水を加えて９００ｍｌにする。リン酸でｐＨを７．０に調製する。水を加えて１Ｌにする。
【００７２】
ヌクレオチドをＲＮアーゼ不含水に１：１０００希釈して１０μＭ（ＧＴＰ及びＣＴＰ）に又は１：１００希釈して１００μＭ（ＡＴＰ及びＵＴＰ）にする。
【００７３】
手順
（１）１５％ＤＭＳＯ中１０μｇ／ｍｌの化合物１０μｌ
１％ＤＭＳＯ中の１００μｇ／ｍｌ化合物ストックから出発するときは：
３０％ＤＭＳＯ ５μｌ／穴を分注する。
化合物５μｌ（１００μｇ／ｍｌ）／穴を分注する。
１５％ＤＭＳＯ中の５０μｇ／ｍｌ化合物ストックから出発するときは：
化合物１０μｌ／穴を添加する。
【００７４】
（２）酵素混合物
【表２】
2009526065.tif 000015
【００７５】
酵素混合物２０μｌをアッセイプレートの各々の穴に加える。化合物と酵素を室温で１５分間インキュベートする。
【００７６】
（３）鋳型混合物−前もって調製する。
ＲＮＡ（７５％エタノール及び０．３Ｍ 酢酸ナトリウム中で保存した５μｇ／チューブ）のチューブをマイクロ遠心機にて４℃で２０分間遠心沈殿する。１つのチューブは１1/2プレートに十分である。チューブを逆さにすることによってできるだけ多くのエタノールをチューブから取り出す。ペレットのＲＮＡがチューブに付着しないように静かに行う。ＲＮＡを真空乾燥する。ＤＥＰＣ水１ｍｌを添加してＲＮＡを再懸濁し、チューブのふたをしっかり締める。ＲＮＡを溶解するため、ＲＮＡ溶液を氷上で〜６０分間インキュベートし、静かにボルテックスする。ふたを開ける前にすべてのＲＮＡ溶液がチューブの底に下降するように手早く回転させる。ＲＮＡ溶液を静かに５ｍｌ又はより大きなチューブに移す。さらに３ｍｌのＤＥＰＣ水を添加する（合計容量４ｍｌ）。
【００７７】
以下の容量の試薬を添加する。
【表３】
2009526065.tif 000016
【００７８】
１回の反応当たり鋳型混合物２０μｌ（すなわちＰＯＦ ２０ｎｇ／反応又は〜３ｎＭ）を添加する。
【００７９】
（４）反応物を室温（２２〜２５℃）で２時間インキュベートする。
【００８０】
（５）１７０ｍＭ ＥＤＴＡ ５０μｌを添加することによって反応を停止させる。
【００８１】
ＥＤＴＡの最終濃度は８５ｍＭである。
【００８２】
（６）各々の穴に０．５Ｍ リン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．０  ２００μｌを添加してＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎフィルタープレートのフィルターをあらかじめ湿らせる。室温で２〜３分間放置する。
【００８３】
（７）ＭｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎフィルタープレートをＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍａｎｉｆｏｌｄ上に置き、真空のスイッチを入れて緩衝液を流れさせる。真空のスイッチを切る。反応生成物８０μｌをフィルタープレートの各々の穴に移す。２〜３分間放置する。真空のスイッチを入れて反応生成物をろ過する。
【００８４】
（８）真空のスイッチを切る。０．５Ｍ リン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ７．０  ２００μｌを各々の穴に添加してフィルターを洗浄する。真空のスイッチを入れる。
【００８５】
工程（８）をさらに３回反復する。
【００８６】
（９）ポリプロピレンの底部を取り出す。底部の乾いたフィルターにペーパータオルで染みをつける。フィルタープレートをベンチ上で１時間空気乾燥させる。Ｓｕｐｅｒ  Ｍｉｘシンチラント４０μｌを添加する。プレートの上部をテープで密閉する。プレートをＰａｃｋａｒｄキャリア又はＭｉｃｒｏＢｅｔａキャリアに入れる。
【００８７】
（１０）Ｐａｃｋａｒｄ  Ｔｏｐｃｏｕｎｔ又はＭｉｃｒｏＢｅｔａカウンターを用いてプレートを計数する。Ｔｏｐ  ｃｏｕｎｔでは33Ｐのためのプログラム１０又はＭｉｃｒｏ−Ｂｅｔａでは33Ｐプログラム。
【００８８】
結果の分析
バックグランドを差し引いた後、阻害パーセントを陽性対照（陰性対照を除いたプレートの平均値）と比較した活性の低下パーセントとして算定する。一次スクリーニングのために、≧７５％阻害を示すものをヒットとして選択した。
【００８９】
表２は、ＨＣＶポリメラーゼに対する本発明の化合物のインビトロでの阻害活性を示す。
【００９０】
【表４】
2009526065.tif 000017
2009526065.tif 000018
【配列表】
2009526065000001.xml
【国際調査報告】
2009526065.tif 000028
2009526065.tif 000029
2009526065.tif 000030
2009526065.tif 000031
2009526065.tif 000032
2009526065.tif 000033
2009526065.tif 000034