(57)【要約】炎症によって引き起こされるか、悪化されるか、またはそうでなければ影響される疾患および障害の処置において使用され得る組成物および方法が開示される。本発明は特に、ウイルスベクターを含む組成物であって、該ベクターの細胞への送達が炎症のメディエーターを阻害する組成物に関する。このベクターは発現制御配列に作動可能に連結した核酸を含み、この核酸が炎症のメディエーターを阻害する。本発明は、１つの局面においては、炎症を阻害し、そして炎症疾患の被験体を処置するのに使用され得るベクター構築物に関する。
2009501128.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルスベクターを含む組成物であって、該ベクターの細胞への送達が炎症のメディエーターを阻害する、組成物。
【請求項２】
前記ベクターは発現制御配列に作動可能に連結した核酸を含み、該核酸が前記炎症のメディエーターを阻害する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記核酸はｓｉＲＮＡである、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ｓｉＲＮＡは、ＣＯＸ−１の遺伝子発現を阻害する、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ｓｉＲＮＡは、配列番号４９の核酸配列を含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記ｓｉＲＮＡは、ＣＯＸ−２の遺伝子発現を阻害する、請求項３に記載の組成物。
【請求項７】
前記ｓｉＲＮＡは、配列番号５３の核酸配列を含む、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記ｓｉＲＮＡは、ｍＰＧＥＳの遺伝子発現を阻害する、請求項３に記載の組成物。
【請求項９】
前記ｓｉＲＮＡは、配列番号５９に記載の核酸配列を含む、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
前記ｓｉＲＮＡは、ｃＰＧＥＳの遺伝子発現を阻害する、請求項３に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ｓｉＲＮＡは、配列番号４３に記載の核酸配列を含む、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記ベクターは、前記炎症のメディエーターのそのレセプターへの結合を阻害するポリペプチドをコードする核酸を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記ポリペプチドはＩＬ−１レセプターへのＩＬ−１βの結合を阻害する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記ポリペプチドはＩＬ−１ｒａである、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
前記ポリペプチドはヒトＩＬ−１ｒａである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
前記核酸は、配列番号５に示される配列を有する、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１７】
前記核酸は、配列番号３８に示される配列に対して、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％同一なポリペプチドをコードする、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１８】
任意の変化が保存的な変化である、請求項１７に記載の組成物。
【請求項１９】
前記核酸は、ストリンジェントな条件下で配列番号５にハイブリダイズする、請求項１２に記載の組成物。
【請求項２０】
前記発現制御配列は、構成的プロモーターである、請求項２に記載の組成物。
【請求項２１】
前記プロモーターはＣＭＶプロモーターである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２２】
前記ＣＭＶプロモーターは、配列番号１５に示される核酸配列を含む、請求項２１に記載の組成物。
【請求項２３】
前記プロモーターはβアクチンプロモーターである、請求項２０に記載の組成物。
【請求項２４】
前記βアクチンプロモーターは、配列番号１６に示される核酸配列を含む、請求項２３に記載の組成物。
【請求項２５】
前記発現制御配列は組織特異的プロモーターである、請求項２に記載の組成物。
【請求項２６】
前記発現制御配列は誘導性プロモーターである、請求項２に記載の組成物。
【請求項２７】
前記ベクターがさらにマーカー配列を含む、請求項２に記載の組成物。
【請求項２８】
前記ベクターがレンチウイルスである、請求項２に記載の組成物。
【請求項２９】
前記ベクターは、ネコ免疫不全ウイルスを含む、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３０】
前記ベクターは、ヒト免疫不全ウイルスを含む、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３１】
前記ベクターは、少なくとも３ヶ月間安定に組み込まれ得る、請求項２８に記載の組成物。
【請求項３２】
細胞を含む組成物であって、該細胞は、請求項１に記載のベクターを含む、組成物。
【請求項３３】
被験体における炎症を阻害する方法であって、該方法は、該被験体に、請求項１に記載のベクターを投与する工程を包含する、方法。
【請求項３４】
関節炎の被験体を処置する方法であって、該方法は、該被験体に、請求項１に記載のベクターを投与する工程を包含する、方法。
【請求項３５】
前記被験体は、変形性関節炎、慢性関節リウマチ、痛風、強直性脊椎炎、若年性関節炎、全身性エリテマトーデス（狼瘡）、強皮症、または線維筋痛症を有する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
神経炎症から生じる中枢神経系障害を有する被験体を処置する方法であって、該方法は、該被験体に、請求項１に記載のベクターを投与する工程を包含する、方法。
【請求項３７】
前記被験体はアルツハイマー病を有する、請求項３６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
（Ｉ．関連出願への相互参照）
本願は、２００５年１月２０日に出願された、米国仮特許出願第６０／６４６，０９９号に対する利益を主張する。米国仮特許出願第６０／６４６，０９９号は、その全体が本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（ＩＩ．背景）
炎症に関連する多数の疾患および障害が存在し、そして炎症に関連する多数の経路および分子が存在する。本発明で同定された組成物および方法を使用する、炎症疾患の処置の方法が開示される。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本発明の目的に従って、本明細書中に態様化され、そして広範に説明されるように、本発明は、１つの局面においては、炎症を阻害し、そして炎症疾患の被験体を処置するのに使用され得るベクター構築物に関する。
【０００４】
炎症疾患および障害の研究および処置のための、ポリペプチド、核酸、ベクター、細胞、トランスジェニック動物に関連する方法および組成物、ならびにそれらを作製および使用する方法が開示される。
【０００５】
（詳細な説明）
開示された方法および組成物は、具体例の以下の詳細な説明およびその中で、そして、図およびそれらの以前のおよび以下の説明に含まれる実施例を参照することでより容易に理解されることができる。
【０００６】
現在の化合物、組成物、小節果、装置および／または方法が開示されて、記載される前に、それらが特定の合成方法に限られていないことを理解すべきである、または、特に明記しない限り、または、特定の試薬特に明記しない限りに対する特定の組換え型生物工学方法はこのように、もちろん、変化することができる。本願明細書において用いられる用語が具体例だけを記載するためにあって、極限ことを目的としないとも理解される。
【０００７】
Ａ．定義
仕様および添付の請求の範囲において用いられているように、単数形「」「」そして、含む複数の照会先前後関係がさもなければはっきり口述する。このように、例えば、「薬剤担体」の参照は、２またはよりこの種のキャリア、などの混合物を含む。
【０００８】
範囲は、「約」１特定の値より、および／または「ほとんど」他の特定の値まで本願明細書において表されることができる。この種の範囲が表されるときに、他の実施例は１特定の値からおよび／またはその他に特定の値を含む。同様に、値が近似値として表されるときに、「あたりを」先例を用いて、特定の値が他の実施例を形成することが理解されよう。範囲の各々の指標が他の指標に関して、そして、それぞれに他の指標で両方とも重要であると更に理解される。本願明細書において開示される多くの値がある、そして、その特定の値「について」のように、各値も開示されて本願明細書においてあると値自体に加えても理解される。例えば、値「１０」が開示される場合、「約１０」も開示される。値が開示される、それも理解されるその非常に値「以下の」適切に熟練した職人によって理解されるように、値間の「値以上の」および可能な範囲も開示される。例えば、値「１０」が開示される場合、「１０以下の」ものも「１０以上である」のと同程度よく開示される。それも、理解されるそのの全体にわたってアプリケーション、データが、多くの異なるフォーマットにおいて設けられている、そして、このデータが、指標および出発点を表して、データポイントのいかなる組合せのためにも変動する。例えば、特定のデータポイント「１０」および特定のデータポイント１５が開示される場合、それはその超過、超過または同等を理解されるか、より小さいか、より小さいかまたは、１０に対する同等、および同等である、そして、１５は１０および１５との間に同じく開示されて考慮される。
【０００９】
この仕様で、そして、続く請求項で、参照は、以下の意味を有するために定められる多くの条件になされる：
その後記載されているイベントまたは詳細が発生することができるかまたは発生することができない、そして、それがそうしない所で、説明が前記イベントまたは詳細が発生する例および例を含む「任意」または「任意に」手段。
【００１０】
「プライマ」は、酵素操作の若干のタイプをサポートすることができる、そして、酵素操作が発生することができるように、目標核酸によって交雑することができるプローブのサブセットである。下塗りは、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体のいかなる組合せもまたは酵素操作を妨げない技術で利用可能な類似体から製造されることができる。
【００１１】
「プローブ」は、ハイブリダイゼーションで例えば、典型的にシーケンスに特有の方法で、目標核酸と相互に作用することができる分子である。核酸のハイブリダイゼーションは、よく従来技術において理解されて、本願明細書において述べられる。概して、プローブは、従来技術においてヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体のいかなる組合せもまたは利用可能な類似体から製造されることができる。
【００１２】
この用途の全体にわたって、さまざまな刊行物は、参照される。これらの刊行物の開示は、より完全に、これが関係する最高水準の技術を記載するために、全体としてこの用途へ本願明細書に引用したものとする。開示される参照は、すなわち、参照が依存される文で述べられてそれらに含まれる材料のためにも、本願明細書において、個々に、そして、特に引用したものとする。
【００１３】
Ｂ．組成物および方法
組成物自体と同様に開示された組成物に本願明細書において開示される方法の範囲内で用いられるように準備させるために用いる構成要素は、開示される。これらの、そしてまた他の、材料は、本願明細書において開示される、そして、それは、理解される、そのいつの組合せ（サブセット）相互作用、グループ、その他これらの中で材料が開示されること各さまざまな個人および総体的な組合せの特別参照およびこれらの化合物の順列が明確に開示されることができないと共に、各々が、特に考察されて、本願明細書において記載されている。例えば、特定のベクターが開示されて、述べられる、そして、プロモータを含む多くのベクター成分が述べられる場合、特に示されない限り、プロモータおよび他のベクター成分および変更態様のどの組合せおよび順列も非常に可能である、分子Ａ、ＢおよびＣのクラスが分子Ｄ、ＥおよびＦの種類および組合せ分子の例と同様に開示される場合、ＡＤは開示される、そして、各々が個々に詳述されない場合であっても、各々は組合せ、ＡＥ、Ａ−Ｆ５  ＢＤ、Ｂ−Ｅ、ＢＦ、ＣＤ、ＣＥおよびＣＦが開示されて考慮されることを意味して個々に、そして、集合的に考察される。同様に、いかなるサブセットもまたはこれらの組合せは、開示されもする。このように、例えば、ＡＥ、ＢＦおよびＣＥの亜属は、開示されて考慮される。この概念は、開示された組成物を製作し使用する方法におけるステップを含むがこれに限らずこの用途のすべての態様にあてはまる。このように、実行されることができる様々な追加ステップがある場合、その各々のこれらの追加ステップがいかなる特定実施例もまたは開示された方法の実施例の組合せによって実行されることができるものと理解される。
【００１４】
１．  炎症性疾患
ポリペチドを含む組成物、核酸、ベクターおよび細胞（炎症性疾患および障害の研究および治療において使われることができる）が、本願明細書において提供する。炎症は刺激、損傷または感染に対する組織の局所化された防御反応である。そして、痛み、赤み、膨張および時々機能の損失によって特徴づけられる。ここで使用する「炎症性障害」または「炎症性疾患」とは、組織がウイルス、バクテリア、外傷、化学薬品、熱、寒さまたは他のいかなる有害な刺激でも傷つくときに、発生する継続されたか慢性炎症のようないかなる状態、炎症が含まれる疾患または障害、もを指す。刺激または不快は、皮膚炎、目炎症、腸炎症等のため哺乳類の炎症の、例えば、結果として生じることができる。更に、慢性炎症が他の疾患または病気（例えば骨関節炎、自己免疫性疾患、癌等）を呈するために危険を増すことができると通常、思われている。
【００１５】
一つの態様では、設けられている組成物および方法は、研究および関節炎治療に関する。疾患としての関節炎は、多くの異なる障害および症状を含むことができて、本体の多くの部分に影響を及ぼすことができる。関節炎によって、概して、痛み（運動および、時々膨張することの損失）が生じる。関節炎は、実は一組の１００以上の現在の医学的状態のために使用する用語である。関節炎は、最も一般的には年上の個人と関係しているが、幼少という早い時期に始まることができる。若干の形は、それらの若年成人年の人々に影響を及ぼす。関節炎状況の中の一般の態様はそれらが筋骨格系および特にジョイントに影響を及ぼすということである。ここで、二個以上の骨は接触する。関節炎関連の共同の課題は、痛み、剛性、炎症および関節軟骨（骨の端をカバーする丈夫な、なめらかな組織（それらが互いに対してすべることを可能にする））および周囲の構造への損害を含むことができる。この種の損害は、共同の関係の位置に応じて、共同の虚弱、不安定性および可視変形に導くことができる。それらが五体に影響を及ぼすという点で、関節炎状況の多数は全体的である。これらの疾患において、関節炎は実質的にいかなる身体の器官またはシステムにも損傷を引き起こすことがありえる。そして、心臓、肺、腎臓、血管および皮膚を含む。
【００１６】
関節炎の若干の異なる種類は、骨関節炎、慢性関節リウマチ、痛風、強直性脊椎炎、若年性関節炎、全身性エリテマトーデス（狼瘡）強皮症および線維筋痛である。骨関節炎はジョイントの骨の端をカバーする軟骨が悪化する退行性骨関節症である。そして、骨が骨にすれ始めるにつれて、痛みおよび運動の損失を与える。それは、関節炎で最も一般的な形である。慢性関節リウマチは、共同のライニングが本体の免疫システム活動状況の一部として燃やされる自己免疫性疾患である。慢性関節リウマチは最も重大なおよび停止タイプのうちの１つである。そして、大部分は女性に影響を及ぼす。痛風は、大部分は男性を襲う。それは、通常本体化学の欠陥の結果である。この痛みを伴う状態は、多くの場合小さいジョイント（特に親指）を攻撃する。幸いにも、痛風は、たいてい薬物および食事における変更によって完全におさえられることができる。強直性脊椎炎は、脊椎に影響を及ぼす一種の関節炎である。炎症の結果、脊椎の骨は、一緒に成長する。若年性関節炎は、児童に起こる全ての種類の関節炎のための一般項である。児童は、若年性慢性関節リウマチまたは狼瘡、強直性脊椎炎または他のタイプの関節炎の児童形を開発することができる。全身性エリテマトーデス（狼瘡）は、本体の全体にわたってジョイントおよび他の結合組織を燃やすことができて、損傷を与えることができる障害である。強皮症は、肥厚および皮膚の硬化が生じる本体の結合組織の病気である。線維筋痛は、広範囲にわたる痛みが骨まで筋肉および付属品に影響を及ぼす障害である。それは、大部分は女性に影響を及ぼす。
【００１７】
別の態様においては、設けられている組成物および方法は、神経炎症の研究および治療に関する。外傷、発作、感染または神経変性によってであるにせよ、神経炎症（活性小こう細胞および星状細胞および広範囲にわたる炎症伝達物質のローカル表示によって特徴づけられる）は脳外傷に対する基本的な反応である。この局部組織反応は、必ず修理および元気を回復させる方法の一部である。それでも、末梢性疾患の多くの炎症性の状況の様に、神経炎症は、ＣＮＳ障害の病態生理学に関与することができる。例えば、アルツハイマー病（ＡＤ）で、ＡＤの神経炎症、炎症誘発性サイトカイン遺伝子の特定の染色体の多型をもつＡＤのための増加した危険率および非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）をしている個人のための疾患危険の減少の範囲によって証明されたように、Ａβ堆積に対する神経膠の被駆動炎症反応は、神経変性を促進すると考えられる。
【００１８】
いかなる炎症性疾患のも研究および処理に対する設けられている組成物および方法関係の使用は、本願明細書において考慮される。このように、設けられている組成物および方法は、炎症性腸疾患の研究および処理に関する。設けられている組成物および方法は、慢性皮膚科学的障害の研究および治療に関する。
【００１９】
設けられている組成物および方法の特定の効果は、そうである本願明細書炎症伝達物質およびその開示されたモジュレータを分配する能力（周縁管理による脳に対する）を記載されている。例えば、ベクターがそうであるＦＩＶは、缶が配達することを本願明細書において開示した本願明細書主題の範囲内の標的部位に対する核酸を開示する。開示されたＦＩＶ構造物は循環への注入によって、または、局所的に標的部位への注入によって全身的に分配されることができる。そうすると、管理のいずれの方法も脳（例えば小こう細胞または星状細胞）の細胞に結果として核酸の配送になることができる。全身投与の後に核酸または導入遺伝子を脳に分配するＦＩＶベクターの使用はＰａｔｅｎｔ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｏｎ  Ｔｒｅａｔｙ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ＮＯ．ＰＣＴ／ＵＳ０３／１３６７２および米国仮特許出願番号第１０／７８１，１４２号に記載されている。そして、それらがこの教示に関したので、それはそれらの全部の参照によって組み込まれて本願明細書においてある。このように、本願明細書において述べられるように、主題のジョイントの注入を経て、例えば、本願明細書において開示されるように、神経性炎症性障害は炎症性の調停者の出産による既治療でありえる。加えて、本願明細書において述べられるように、骨および／またはジョイントに関連した炎症性の状況はジョイントへの注入によって、または、システム注入またはＩＰ注入で扱われることができる。
【００２０】
２．  炎症性規定能
関節炎および神経炎症のような炎症性疾患は、炎症性規定能の表示または活動を阻害することによって、部分的には、処理されることができる。炎症性規定能（本明細書で用いられる）は、炎症を調整して、例えば、サイトカイン（例えばＥＬ−Ｉβ）プロスタグランジン（例えばプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２））プロスタグランジンシンターゼ（例えばＣＯＸ−Ｉ、ＣＯＸ−２、ｃＰＧＥＳおよびｍＰＧＥＳ）およびそのモジュレータを含むタンパク質に関連する。ａ）インターロイキン−１。
【００２１】
炎症性規定能の実施例は、インターロイキン１（ＩＬ１）である。ＩＬ−１は、２つの主要なイソ型、ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βとして存在する強力な免疫調節性サイトカインである。これらの２つの分子は順番に重要な相違を示して、通常、直接の細胞×細胞コミュニケーションに関与していると考えられるＩＬ−１αを有するいくらか異なる役割があるが、ＩＬ−１βは分泌される。にもかかわらず、これらの２つの分子は、ＮＦＫＢおよびＭＡＰキナーゼの活性化を含む炎症誘発性シグナル伝達カスケードを促進するＥＬ−Ｉレセプタ１型（ＥＬ−１Ｒ１）と同じ公知の膜関連のレセプタによって行う［Ｒｏｔｈｗｅｌｌ、ＮＪおよび、Ｇ．Ｎ。Ｌｕｈｅｓｈｉ．Ｔｒａｎｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．（２０００）  ２３：６１８−６２５］。
【００２２】
Ｅｌｉの効果に対抗する少なくとも２つの分子は、確認された。ＥＬ−Ｉ受容体アンタゴニスト（ＥＬ−ｌｒａ）は受容体結合を争う、そして、ＥＬ−Ｉレセプタ２型（ＥＬ−１Ｒ２）（細胞内の領域を欠いている）はおとりレセプタとして役立つと考えられる［Ｒｏｔｈｗｅｌｌ、ＮＪおよび、Ｇ．Ｎ。Ｌｕｈｅｓｈｉ．Ｔｒａｎｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．（２０００）  ２３：６１８−６２５］。これらの分子の各々の表示は、調整される。炎症反応に対するＥＬ−Ｉの貢献は、従って、これらの家族との間に表現の相対的なバランス次第である［Ａｒｅｎｄ、Ｗ．Ｐ．サイトカイン及びＧｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ．（２００２）１３：３２３−３４０］。一つの実施例において、ＥＬ−１βの成熟形態はＩＬ−１ｒａから分泌シグナルに取り付けられる。そして、それはＩＬ−１βの分泌シグナル・シーケンスと同じシーケンスである。
【００２３】
通常のおよび骨関節炎軟骨からの洗浄および外植体研究は、サイトカインが疾病状態において調整されて上へある主張を支持する。具体的には、Ｍｏｏｓその他は［Ｍｏｏｓ  Ｖ、その他（１９９９）Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ２６：８７０−９］膝からの軟骨または１０人の規制と比較した骨関節炎（ＯＡ）患者の股関節が、ＯＡ軟骨において調整されて上へあるＪＬ−Ｉβを含む、サイトカインを示したことを証明した。脛肉その他［むこうずねＳ−ｊ、など（２００３）Ｊ  Ａｐｐｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ；９５：３０８  −  １３］これらの方法の酸化窒素（ＮＯ）の役割を決定するＩＬ−１βがある場合には、半月のマトリックス回転率上の機械的ストレスの影響を検討した。ＩＬ−１の存在に関係なく、圧縮に応答するプロテオグリカン解放の刺激はＮＯＳ２に依存していた。これらの発見は、ＩＬ−１がＮＯに依存している経路による細胞間マトリックス回転率上の機械的ストレスの効果を調整することができることを示唆する。Ｊｏｏｓｔｅｎその他［Ｊｏｏｓｔｅｎ  ＬＡ、その他（１９９９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ；１６３：５０４９−５５］ＩＬ−１のブロッキングが破壊的な関節炎の軟骨および骨保護療法であることを証明したが、ＴＮＦアルファ拮抗剤は組織滅失にほとんど影響を及ぼさない。Ｗｅｂｂその他は［Ｗｅｂｂ  ＧＲ、その他（１９９８）Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒ及びＣａｒｔｉｌ  ６１６７−７６］ＯＡ滑膜上澄がこれらのサイトカインに対する通常の滑液の上澄および中和抗体が部分的に、または、全く軟骨細胞ｐ５５  ＴＮＦＲ表現を増加させるＯＡ上澄の能力を廃止したより高いインターロイキン１β（ＩＬ−１β）およびインターロイキン６（ＩＬ−６）の濃度を含むことを証明した。これらの結果は、ＯＡ滑膜によってできるＩＬ−１およびＩＬ−６が分解的サイトカインによって軟骨細胞を刺激により影響されやすくすることによって疾患の進行に関与することを示唆する。関節軟骨損害の程度にかかわりなく、鉄工その他は［鉄工ＭＤ、その他（１９９７）Ｊ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ  ２４：３６５−７１］ＯＡ患者から、ＥＬ−ｌα、ＩＬ−１（ＳおよびＴＮＦαｉｎ滑膜の生産を検討した。共同の置換外科療法時に患者に示す最もひどい変化については、それらは、炎症誘発性サイトカインの生産を有する慢性の炎症性の変化が初期のＯＡ患者からの滑膜の特徴であることを示唆する。この低級滑膜炎は、結果としてＯＡの発病学に関与することができるサイトカインの生産になる。
【００２４】
ＩＬ−１の両方のイソ型が脳において作られるにもかかわらず、大部分の仕事は不βの役割に集中した。主に小こう細胞によってできて、ＩＬ−βは、ＣＮＳ損傷の後に急速に誘発される。ＩＬ−βは多くの細胞目標に影響を及ぼす。そして、星状細胞、神経単位および血管内皮細胞を含む。中で、これらのセル群（ＩＬ−１上方制御サイトカインおよびケモカイン）は、細胞表面接着分子およびマトリックス・メタロプロテアーゼの表示を誘導して、細胞増殖を刺激する［Ｓｔ  Ｐｉｅｒｒｅ、Ｂ．Ａ．ＣＮＳ細胞上のサイトカインのなどＥｆｆｅｃｔｓ：グリア（中で）：（編集）Ｒａｎｓｏｈｏｆｆ、Ｒ．Ｍ．Ｅ．Ｎ。Ｂｅｖｅｎｉｓｔｅ、Ｃｙｔｏｋｉｎｅｓ、そして、ＣＮＳ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ）Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ（（１９９６）ｐｐ．１５１−１６８）］。さらに、ＩＬ−βが脳星状細胞のＣＯＸ−２を誘発することが証明された。そして、炎症誘発性プロスタグランジンＰＧＥ２の生産に導いた、［Ｏ’Ｂａｎｉｏｎ、Ｍ．Ｋ．などＮｅｕｒｏｃｈｅｍ．（１９９６）  ６６：２５３２−２５４０］。まとめると、複数の脳細胞タイプ上のＩＬ−１の無数の効果は、重要な役割を脳神経炎症性の反応を調整する際のＩＬ−１家族に提案する。
【００２５】
神経炎症上のＩＬ−１および明らかな脳外傷から神経変性疾患にわたっている状況のその遍在する表現の重大な影響は、それがＣＮＳ損傷に関与するかもしれないことを示唆する［Ｒｏｔｈｗｅｌｌ、ＮＪ．そして、Ｇ．Ｎ．Ｌｕｈｅｓｈｉ．Ｔｒａｎｓ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．（２０００）  ２３：６１８−６２５］。これは、ケースであるように見える。例えば、ＩＬ−βは、発作の試作機において誘発される［Ｍｉｎａｍｉ、Ｍ．Ｋ．などＪ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．（１９９２）５８が：３９０−３９２］そして、ＩＬ−βの注入は、損害を悪化させるが、ＩＬ−ｌｒａまたはＩＬ−１遮断抗体を有する処理は、著しく組織損傷を減らす、［Ｌｏｄｄｉｃｋ、Ｓ．Ａ．およびＮＪ．Ｒｏｔｈｗｅｌｌ．Ｊ．Ｃｅｒｅｂ．血液Ｆｌｏｗ  Ｍｅｔａｂ．（１９９６）１６：９３２−９４０およびＹａｍａｓａｋｉ（Ｙ．Ｎ．Ｍａｔｓｕｕｒａ、Ｈ．Ｓｈｏｚｕｈａｒａ、Ｈ．Ｏｎｏｄｅｒａ、Ｙ．ＩｔｏｙａｍａおよびＫ．Ｋｏｇｕｒｅ）．発作（１９９５）２６：６７６−６８１］。同様に、虚血傷害は、酵素が不足しているマウスを変えているインターロイキン１において、著しく減らされる［Ｆｒｉｅｄｌａｎｄｅｒ、Ｒ．Ｍ．などＪ．Ｅｘｐ．ｍｅｄ．（１９９７）  １８５：９３３−９４０］。別の例として、ヒトＩＬ−ｌｒａ導入遺伝子のＧＦＡＰに誘導された表示は、非開放性頭部損傷［Ｔｅｈｒａｎｉａｎ、Ｒ．Ｓ．などＪ。Ｎｅｕｒｏｔｒａｕｍａ（２００２）１９：９３９−９５１］のネズミのモデルの水腫、サイトカイン生産および神経病学的欠損を減らす。最後に、１型ＩＬ−１レセプタを欠いているマウスの鋭い脳外傷の研究は、小膠細胞活性化、白血球浸入および星状細胞活性化の劇的なアテニュエーションを示した［Ｂａｓｕ、Ａ．などＪ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．（２００２）  ２２：６０７１−６０８２］。血管細胞接着分子−１、いくつかのサイトカインおよびＣＯＸ−２を含む多数の炎症伝達物質の表示はＤＬ−ＩＲｌノックアウト・マウスにおいても非常に還元していた。そして、ＩＬ−１の信号を送っている経路が神経膠の活性化および神経炎症性の反応にとって重要なことを示した。しかしながら、短期注入およびウィルス・デリバリー系は、慢性刺激を提供しない、そして、遺伝子のノックアウト・システムは、現像の間、潜在的代償の変化によって難しくなる。ｂ）シクロオキシゲナーゼＣＯＸ。
【００２６】
炎症性規定能の他の実施例は、酵素シクロオキシゲナーゼ（コックス）である。シクロオキシゲナーゼは非ステロイド系抗炎症薬（剤）（ＮＳＡＤＤｓ）の主要な標的である。そして、それは多くの炎症性の状況の治療のメーンステーである。シクロオキシゲナーゼはプロスタノイドにアラキドン酸の転換の第一段階に触媒作用を及ぼす。そして、一群の強力な脂質規定能が多様な生理的方法で作用する。
【００２７】
シクロオキシゲナーゼは、２つのイソ型の中に存在することは公知である：ＣＯＸ−Ｉ（多くの組織のそれは、プロスタノイドの構成的に表されたおよび（に）責任があるホメオスタシス生産であるように見える）およびＣＯＸ−２（その表現が成育因子、サイトカインおよびホルモン類のような多様な刺激に応答して急速に調整された時から、「誘導性の」イソ型としばしば呼ばれる）［Ｏ’Ｂａｎｉｏｎ  ＭＫ、その他（１９９１）．Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２６６：２３２６１−７；Ｏ’Ｂａｎｉｏｎ  ＭＫ、その他（１９９２）．Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ．Ｓ．Ａ．８９：４８８８−９２］。これらの２つのＣＯＸイソ型の差異、それらが演奏する役割およびプロスタノイドの動作は、以前チェックされた［羽根ＪＲ、その他（１９９８）．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍｏｃｏｌ．毒物学３８：９７−１２０；鉄工、ＷＬ、その他（２０００）．Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  ６９：１４５−８２］。
【００２８】
ＰＧＥ２（原理炎症性プロスタノイド）の選択的に抑制性生産に対する関心は、伝えられるところでは異なったコックス・イソ型に連結する少なくとも２つのＰＧＥ２シンターゼ・イソ型の認識によって高められた。より詳しくは、膜関連のイソ型（ｍＰＧＥＳ）は、ＣＯＸ−２に機能的に連結するが、サイトゾル酵素（ｃＰＧＥＳ）は、ＣＯＸ−Ｉにリンクされるように見える−ＰＧＥ２の中で依存している製造（Ｔａｎｉｏｋａなど２０００；Ｍｕｒａｋａｍｉなど（２０００））。細胞局在が若干の役割を演ずることができるにもかかわらず、機能的な継手は主に発現パターンの要因である：ＣＯＸ−２と同様に、ｍＰＧＥＳは炎症誘発性刺激によって劇的にアップレギュレートされるが、ｃＰＧＥＳは現在まで検討される細胞システムにおいて構成的に表される（Ｊａｃｋｏｂｓｏｎなど、１９９９；Ｓｔｉｃｈｔｅｎｏｔｈなど、２００１；Ｈａｎなど（２００２））。加えて、ＣＯＸ−２およびｍＰＧＥＳは、アジュバント関節炎（Ｍａｎｃｉｎｉなど、２００１）のネズミ・モデルにおいて、同等にアップレギュレートされる。
【００２９】
３．  抑制
炎症性規定能の活動を調整するために行う組成物は、本願明細書において設けられている。「活性」（本明細書で用いられる）は、いかなる機能もまたは本願明細書において開示される組成物の処理に関連して、例えば、転写、翻訳、翻訳後修飾、トランスロケーション、同種親和性であるか好異種の締め具、分泌、エンドサイトーシスまたは分解を含む。本願明細書において設けられている炎症性規定能の一つ以上の動作を禁止する組成物は、従って、開示される。これらの組成物は、炎症性規定能インヒビターとして本願明細書において参照される。抑制または、阻害または抑制のような、本明細書で用いられる抑制の形は、制限するかまたは制限するつもりである。故障排除または、還元または故障排除のような、本明細書で用いられる例えばサイズまたは量の故障排除（ｄｉｍｍｉｓｈのための手段）の形。どこで阻害または故障排除のうちの１つが使われても、明確に別途示されない限り、その他が使われることもできるものと理解される。例えば、何かが「自己抑制的な」ものと呼ばれる場合、それは「還元した」ものと呼ばれるとみなされもする。
【００３０】
ａ）  遺伝子形質発現のノックダウン
炎症性規定能の活動は、遺伝子形質発現レベルで調整されることができる。開示された炎症性規定能インヒビターは、遺伝子形質発現インヒビターでありえる。ターゲッティング遺伝子形質発現の方法は、通常、目標とされる遺伝子の配列に基づく。炎症性規定能の目標とされたノックダウンに適用されることができるいずれの種類の方法は、開示される。「ノックダウン」によって、検出可能なメッセンジャーＲＮＡ表現の減少は、意味される。核酸が、通常、ノックダウン遺伝子形質発現に用いられて、一般に、標的配列（例えばメッセンジャーＲＮＡ）に交雑することができる配列から成る。この種の機能的な核酸の例としては、アンチセンス分子、リボザイム、三重式の成形核酸、外部のガイド・シーケンス（ＥＧＳ）および小さい干渉するリボゾームリボ核酸（ｓｉＲＮＡ）が挙げられる。
【００３１】
アンチセンス分子は、標準的であるか非正規塩基の対合による目標核酸分子と相互に作用するように設計されている。アンチセンス分子および標的分子の相互作用は、例えば、ＲＮＡｓｅＨによって媒介されるリボゾームリボ核酸−ＤＮＡハイブリッド低下による標的分子の滅失を促進するように設計されている。あるいは、アンチセンス分子は、標的分子（例えば転写または複製）に通常起こる処理機能を中断するように設計されている。アンチセンス分子は、標的分子のシーケンスに基づいて設計されることができる。標的分子で最も近づきやすい地方を見つけることによるアンチセンス効率の最適化のための多数の方法が、存在する。典型的な方法は生体外選択実験である、そして、ＤＮＡ修飾はジメチル硫酸およびＤＥＰＣを使用することを研究する。アンチセンス分子が標的分子を１０−６、１０−８、１０−１０または１０−１２以下の解離定数（ｋｄ）で縛ることが好ましい。方法の代表試料および設計の援助およびアンチセンス分子の使用がアメリカ特許の以下の非限定的なリストにおいて見つけられることができる技術：５，１３５，９１７、５，２９４，５３３、５，６２７，１５８、５，６４１，７５４、５，６９１，３１７、５，７８０，６０７、５，７８６，１３８、５，８４９，９０３、５，８５６，１０３、５，９１９，７７２、５，９５５，５９０、５，９９０，０８８、５，９９４，３２０、５，９９８，６０２、６，００５，０９５、６，００７，９９５、６，０１３，５２２、６，０１７，８９８、６，０１８，０４２、６，０２５，１９８、６，０３３，９１０、６，０４０，２９６、６，０４６，００４、６，０４６，３１９および６，０５７，４３７。しかしながら、リリー硫酸ナイルブルー染色法またはｓｉＲＮＡまたはそれらの使用法の効果は、機構の任意型に限られていない。
【００３２】
シーケンスに基づいて上記の通りに設計されるいかなるアンチセンス分子も、本願明細書において開示する本願明細書炎症伝達物質を開示する。アンチセンス・シーケンスの実施例は、ＩＬ−ｌαのために本願明細書において開示される（配列番号７０）ＩＬ−β（配列番号７１）ＣＯＸ−Ｉ（配列番号７２）ＣＯＸ−２（配列番号７３）ｃＰＧＥＳ（配列番号７４）そして、ｍＰＧＥＳ（ＳＥＱ  Ｅ）ＮＯ：７５）。
【００３３】
リボザイムは、分子内に、または、分子間的に、化学反応に触媒作用を及ぼすことができる核酸分子である。リボザイムは、このように触媒核酸である。リボザイムが分子間反応に触媒作用を及ぼすことが好ましい。ヌクレアーゼに触媒作用を及ぼす多くの異なるタイプのリボザイムまたは自然分類（例えばハンマーヘッド・リボザイム）で見つかるリボザイムに基づく核酸ポリメラーゼ典型的反応が、ある（以下のアメリカ特許に対する有限責任でなく、実施例のために：５，３３４，７１１、５，４３６，３３０、５，６１６，４６６、５，６３３，１３３、５，６４６，０２０、５，６５２，０９４、５，７１２，３８４、５，７７０，７１５、５，８５６，４６３、５，８６１，２８８、５，８９１，６８３、５，８９１，６８４、５，９８５，６２１、５，９８９，９０８、５，９９８，１９３、５，９９８，２０３、ＬｕｄｗｉｇおよびＳｐｒｏａｔによるＷＯ  ９８５８０５８、ＬｕｄｗｉｇおよびＳｐｒｏａｔによるＷＯ  ９８５８０５７およびＬｕｄｗｉｇおよびＳｐｒｏａｔによるＷＯ  ９７１８３１２）ヘアピン・リボザイム（以下のアメリカ特許に対する有限責任でなく、実施例のために：５，６３１，１１５、５，６４６，０３１、５，６８３，９０２、５，７１２，３８４、５，８５６，１８８、５，８６６，７０１、５，８６９，３３９および６，０２２，９６２）そして、テトラヒメナ・リボザイム（以下のアメリカ特許に対する有限責任でなく、実施例のために：５，５９５，８７３、そして、５，６５２，１０７）。自然分類で見つからない、しかし、新規特異反応に触媒作用を及ぼすために設計された多くのリボザイムも、ある（以下のアメリカ特許に対する有限責任でなく、実施例のために：５，５８０，９６７、５，６８８，６７０、５，８０７，７１８、そして、５，９１０，４０８）。好適なリボザイムは、リボゾームリボ核酸またはＤＮＡ基質を切断して、より好ましくは、リボゾームリボ核酸基質を切断する。リボザイムは、概して認識による核酸基質および次の裂開を有する標的基板の締め具を切断する。この認識は、大部分は標準的であるか非正規塩基対相互作用に、しばしば基づく。標的基板の認識が標的基板配列に基づくので、この所有物はリボザイムに特に核酸の目標特異的切断の良好な候補を作る。様々な異なる反応を引き起こすためにリボザイムを製作し使用する方法の代表例は、アメリカ特許の以下の非限定的なリストで見つかることができる：５，６４６，０４２、５，６９３，５３５、５，７３１，２９５、５，８１１，３００、５，８３７，８５５、５，８６９，２５３、５，８７７，０２１、５，８７７，０２２、５，９７２，６９９、５，９７２，７０４、５，９８９，９０６および６，０１７，７５６。
【００３４】
シーケンスに基づいて上記の通りに設計されるいかなるリボザイムも、本願明細書において開示する本願明細書炎症伝達物質を開示する。ハンマーヘッド・リボザイムは、ＧＵＣサイトにすぐ３フィート・メッセンジャーＲＮＡを切断して、実施例（５’−ＧＵＣ−３フィート・シーケンス）のために、リボゾームリボ核酸基質を切断することができる。ハンマーヘッド・リボザイムを設計する、異なるシーケンスのどの開裂が、公知で、例えば、本願明細書において開示される特許において、開示されて、引用したものとされる。ハンマーヘッド・リボザイムは、３つのパーツから典型的に成る。第１の一部は、ＧＵＣ認識部位のシーケンス５フィートに交雑する領域であって、第１のハイブリダイゼーション腕と呼ばれていることができる。第二部品は、ハンマーヘッド・リボザイムの中心的な触媒領域から成って、概してシーケンス３’ＣＡＡＡＧＣＡＧＧＡＧＵＧＣＣＵＧＡＧＵＡＧＵＣ５’を有する（配列番号８２）。このシーケンス上のバリエーションは、公知で、開示されて、本願明細書において開示される特許において参照によって、例えば、組み込まれて本願明細書においてある。１／３一部は、ＧＵＣ切断部位にすぐ３フィート・シーケンスに交雑することができる配列から成って、第２のハイブリダイゼーション腕と呼ばれていることができる。ハイブリダイゼーションアームは、例えば、長く長く３−４０のヌクレオチド、長く５−３０のヌクレオチド、８−２０、長くヌクレオチドおよび１０−１５のヌクレオチド（５０のヌクレオチドまでのいかなる長さと同様にも）から基質と結合することを可能にしているいかなるｌｅｂｇｈｔでもありえる。例えば、ハンマーヘッド・リボザイムはメッセンジャーＲＮＡ標的配列の中で核酸三つ子ＧＵＣを確認することによって設計されることができる、そうすると、触媒コアに本願明細書において述べられるのと同程度本願明細書において述べられる適切な交雑させているアームを確認する。ハンマーヘッド・リボザイム・シーケンスの実施例は、ＥＬ−ｌαのために本願明細書において開示される（配列番号７６）ＩＬ−１β（配列番号７７）ＣＯＸ−Ｉ（配列番号７８）ＣＯＸ−２（配列番号７９）ｃＰＧＥＳ（配列番号８１）そして、ｍＰＧＥＳ（配列番号８０）しかし、本願明細書において述べられるように、その他も開示されるものと理解される。さらにまた、本願明細書において述べられるように、分析を使用して、生体外で、そして、生体内で、１は、所与のリボザイム（またはいかなる機能的な核酸（例えばｓｉＲＮＡまたはアンチセンス）も）を活性のそのレベルを見つけるため検査することができる。
【００３５】
三重式の成形機能的な核酸分子は、二本鎖であるか一本鎖核酸と相互に作用することができる分子である。三重式の分子が目標領域と相互に作用するときに、三重式と呼ばれている構造は形成される。そこにおいて、合成の従属部分をＷａｔｓｏｎ−ＣｒｉｃｋおよびＨｏｏｇｓｔｅｅｎ塩基対合の上に形成しているＤＮＡの３つの要素がある。それらが目標地方を高親和性および特異性で縛ることができるので、三重式の分子は好まれる。三重式の成形分子が標的分子を１０¨６未満の１ｋｄで縛ることが好ましい、１０インチ、１０インチまたは１０インチ。様々な異なる標的分子を結合するために三重式の成形分子を製作し使用する方法の代表例は、アメリカ特許の以下の非限定的なリストで見つかることができる：５，１７６，９９６、５，６４５，９８５、５，６５０，３１６、５，６８３，８７４、５，６９３，７７３、５，８３４，１８５、５，８６９，２４６、５，８７４，５６６および５，９６２，４２６。
【００３６】
外部のガイド・シーケンス（ＥＧＳｓ）は複合体を形成している目標核酸分子を結合する分子である、そして、この複合体はＲＮアーゼＰによって認識される。そして、それは標的分子を切断する。ＥＧＳｓは、特に選択の余地のリボゾームリボ核酸分子を目標とするように設計されていることがありえる。セルの中の処理運搬ＲＮＡ（運搬ＲＮＡ）のＲＮＡｓｅ  Ｐ援助。細菌ＲＮＡｓｅ  Ｐは、目標リボゾームリボ核酸が生じるＥＧＳを用いて実質的にいかなるリボゾームリボ核酸シーケンスも切断するために補充されることができる：自然な運搬ＲＮＡ基質を模倣するために合成のＥＧＳ。（Ｙａｌｅ（そして、Ｆｏｒｓｔｅｒおよびアルタイ山間人）によってＷＯ  ９２／０３５６６  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３８：４０７−４０９の（１９９０））。同様に、リボゾームリボ核酸の真核生物ＥＧＳ／ＲＮＡｓｅ  Ｐに誘導された裂開は、ｅｕｋａｒｏｔｉｃなセルの中で所望の目標を切断するために利用されることができる。（Ｙｕａｎなど、会報Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９：８００６−８０１０の（１９９２）；ＹａｌｅによるＷＯ  ９３／２２４３４；ＹａｌｅによるＷＯ  ９５／２４４８９；Ｙｕａｎおよびアルタイ山間人（ＥＭＢＯ  Ｊ  １４）：１５９−１６８の（１９９５）およびＣａｒｒａｒａなど、会報Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．（ＵＳＡ）９２：２６２７−２６３１の（１９９５））。様々な異なる標的分子の裂開を促進するためにＥＧＳ分子を製作し使用する方法の代表例は、アメリカ特許の以下の非限定的なリストで見つかる：５，１６８，０５３、５，６２４，８２４、５，６８３，８７３、５，７２８，５２１、５，８６９，２４８および５，８７７，１６２。
【００３７】
遺伝子形質発現は、リボゾームリボ核酸干渉（ＲＮＡｉ）による非常に特定の方法で、効果的に静まることもできる。このサイレンシングは、最初は二重鎖ＲＮＡ（二本鎖ＲＮＡ）（Ｆｉｒｅ，Ａ．その他（１９９８）Ｎａｔｕｒｅ、３９１、８０６  ８１１）（Ｎａｐｏｌｉ、Ｃ、その他（１９９０）Ｐｌａｎｔセル２（２７９  ２８９））の追加によって観察された（Ｈａｒｍｏｎ、ＧＪ。（２００２）Ｎａｔｕｒｅ、４１８、２４４  ２５１）。一旦二本鎖ＲＮＡがセルに入ると、それはＲＮアーゼＩＩＩによって切断される−３’末端（Ｅｌｂａｓｈｉｒ、Ｓ．Ｍ．その他（２００１）Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．（１５：１８８−２００））（Ｂｅｒｎｓｔｅｉｎ、Ｅ．その他（２００１）Ｎａｔｕｒｅ、４０９、３６３  ３６６）（Ｈａｍｍｏｎｄ、Ｓ．Ｍ．その他（２０００）Ｎａｔｕｒｅ（４０４：２９３−２９６））上の２つのヌクレオチド突出を含む長さの二本鎖小さい干渉するリボゾームリボ核酸（ｓｉＲＮＡ）２１−２３ヌクレオチドへの酵素（Ｄｉｃｅｒ）のように。ＡＴＰに依存するステップにおいて、ｓｉＲＮＡｓは多サブユニット・タンパク質複合体に組み込まれる。そして、共通にＲＮＡｉによって誘発されたサイレンシング複合体（ＲＩＳＣ）として公知である。そして、それはｓｉＲＮＡｓを目標ＲＮＡ配列（Ｎｙｋａｎｅｎ、Ａ．その他（２００１）セル、１０７：３０９  ３２１）へ導く。数ポイントで、二重ｓｉＲＮＡは解ける、そして、アンチセンスストランドがＲＩＳＣに縛られたままで、内およびエキソヌクレアーゼ（Ｍａｒｔｉｎｅｚ、Ｊ．その他（２００２）セル、１１０：５６３−５７４）の組合せによって補完的なメッセンジャーＲＮＡシーケンスの低下を導くように見える。しかしながら、リリー硫酸ナイルブルー染色法またはｓｉＲＮＡまたはそれらの使用法の効果は、機構のａｎｙｔｙｐｅに限られていない。
【００３８】
短い干渉するリボゾームリボ核酸（ｓｉＲＮＡ）はｓｅｑｕｅｎｃｅ−に特有の転写後遺伝子サイレンシングを誘発することができる二重鎖ＲＮＡである。それによって、減少するかまたは遺伝子形質発現さえ阻害する。一つの実施例において、ｓｉＲＮＡは、ｓｉＲＮＡおよび目標リボゾームリボ核酸との間に配列同一性の領域の中で、相同のリボゾームリボ核酸分子（例えばメッセンジャーＲＮＡ）の特定の分解を誘発する。例えば、３フィートに突き出ている端によってベース・ペアードときに、ＷＯ  ０２／４４３２１は目標メッセンジャーＲＮＡの配列特異的低下ができるｓｉＲＮＡｓを開示する、本願明細書においてこれらのｓｉＲＮＡｓを作る方法のための参照によって組み込まれて。シーケンスに特有の遺伝子サイレンシングは、酵素ダイサーによってできるｓｉＲＮＡｓを模倣する、合成、短い二重鎖ＲＮＡを使用している哺乳動物細胞において成し遂げられることができる（Ｅｌｂａｓｈｉｒ、Ｓ．Ｍ．など（２００１）Ｎａｔｕｒｅ、４１１：４９４  ４９８）（Ｕｉ−Ｔｅｉ、Ｋ．その他（２０００）ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ  ４７９：７９−８２）。ｓｉＲＮＡは、化学的にそうでありえる、または、ｖｚＹｒｏ総合されて中で、または、細胞内部でｓｉＲＮＡｓに処理される短い二本鎖ヘアピンのようなリボゾームリボ核酸（ｓｈＲＮＡｓ）の結果であることができる。合成ｓｉＲＮＡｓは、通常、アルゴリズムおよび従来のＤＮＡ／リボゾームリボ核酸シンセサイザを使用して設計される。供給元は、Ａｍｂｉｏｎ（Ａｕｓｔｉｎ、テキサス州）ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ（Ａｓｈｌａｎｄ、マサチューセッツ州）Ｄｈａｒｍａｃｏｎ（Ｌａｆａｙｅｔｔｅ、コロラド州）Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（英貨、バージニア州）ＭＷＢ  Ｂｉｏｔｅｃｈ（Ｅｓｂｅｒｓｂｅｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）Ｐｒｏｌｉｇｏ（Ｂｏｕｌｄｅｒ、コロラド州）およびＱｉａｇｅｎ（Ｖｅｎｔｏ、Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）を含む。ｓｉＲＮＡは、キット（例えばＡｍｂｉｏｎ）を使用して、生体外で合成されることもできる』ｓ  ＳＩＬＥＮＣＥＲ  ｓｉＲＮＡ  Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎキット。シーケンスに基づいて上記の通りに設計されるいかなるｓｉＲＮＡも、本願明細書において開示する本願明細書炎症伝達物質を開示する。ｓｉＲＮＡの実施例は、以下から成る：ＣＯＸ−Ｉ（配列番号：４７−５２）ＣＯＸ−２（配列番号：５３−５８）ｃＰＧＥＳ（配列番号：４１−４６）そして、ｍＰＧＥＳ（配列番号５９）。
【００３９】
ベクターからｓｉＲＮＡの生産は、ｓｈＲＮＡの転写によって、より共通にされる。例えばＩｍｇｅｎｅｘのＧｅｎｅＳｕｐｐｒｅｓｓｏｒ  Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ＫｉｔｓおよびインビトロゲンのＢＬＯＣＫ−ｉＴ誘導性のＲＮＡｉプラスミドおよびレンチウイルス・ベクターのような、ｓｈＲＮＡから成るベクターの製造のためのキットは、利用できる。シーケンスに基づいて上記の通りに設計されるいかなるｓｈＲＮＡも、本願明細書において開示する本願明細書炎症伝達物質を開示する。ｓｈＲＮＡプライマー配列の実施例は、ＣＯＸ−Ｉのために開示される（配列番号：６４−６５）ＣＯＸ−２（ＳＥＱ  ＤＤ  ＮＯｓ：６６−６７）ｃＰＧＥＳ（配列番号：６０−６１）そして、ｍＰＧＥＳ（配列番号６２−６３）。
【００４０】
ｂ）  結合する抑制
目標とされることができる炎症性規定能の他の活動は、他の分子（例えばレセプタ）に対する同種親和性および好異種の締め具である。このように、炎症性規定能インヒビターは、リガンド結合阻害剤でありえる。タンパク質をそのレセプタに結合することを阻害する方法は、例えば、リガンドかレセプタの結合部を争う分子の使用に基づくことがありえる。６０．  このように、リガンド結合阻害剤は、例えば、レセプタを起動させることのないレセプタの締め具を争うポリペチドでありえる。同様に、リガンド結合阻害剤は、リガンドの締め具を争うおとりレセプタでありえる。この種のおとりレセプタは可溶性のレセプタ（例えば、膜貫通領域を欠いている）でありえる、または、それは信号（例えば、細胞質の尾部を欠いている）を変換する能力が欠如していること以外の細胞において表される変異体レセプタでありえる。リガンドかレセプタに特有の抗体は、締め具を阻害するために用いることもできる。リガンド結合阻害剤が、主題によって自然にできることもできる。あるいは、抑制の分子は、レセプタかリガンドの目標とされた突然変異に基づいて設計されることができる。
【００４１】
このように、図示する実施例として、リガンド結合阻害剤は、ＩＬ−１受容体アンタゴニスト（ＩＬ−Ｉｒａ）でありえる。リガンド結合阻害剤はＩＬ−Ｉｒａの断片から成るポリペチドでもありえる。そこにおいて、断片はＩＬ−１Ｒ１を結合することができる。リガンド結合阻害剤は更にＩＬ−１Ｒ２でありえる。そして、それは結合しているＩＬ−１を争うことができるレセプタの可溶形態である。リガンド結合阻害剤は、更にＩＬ−１Ｒ１の断片から成るポリペチドでありえる。ＩＬ−１Ｒ１断片は細胞質の尾部を欠いていることができる。そして、それはＴｏｌｌ／インターロイキン１（ＤＬＩ）受容体（ＴＩＲ）領域を含む（ＳＥＱ  ＤＤ  ＮＯのアミノ酸３８４−５２８：８）。ＩＬ−１Ｒ１の断片は、膜貫通領域に対応するアミノ酸を欠いていることができる。
【００４２】
４．  抗体
炎症伝達物質またはそれらのレセプタに特有の抗体が、本願明細書において用いられることができる。  設けられている組成物および方法用に例えば、開示するＩＬ−１βまたはＥＬ−Ｉレセプタに特有の中和抗体または前記ａｎｔｉｂｏｄｅｓをコード化している核酸である。
【００４３】
（１）  通常、抗体
条件「抗体」広義に本願明細書において使用されて、そして、ポリクローナルおよび単クローン抗体を含む。完全な免疫グロブリン分子（また、「抗体」がそれらの免疫グロブリン分子の断片またはポリマーである期間に含まれる）および免疫グロブリン分子またはその断片の人間であるかヒト化バージョンに加えて、それらが炎症伝達物質またはそれらのレセプタと相互に作用するそれらの能力のために選択される限り、この種のその炎症伝達物質はそのレセプタと相互に作用するのを妨げられる。抗体は本願明細書において、または、類似した方法によって記載されている生体外分析を使用しているそれらの所望の活性を試験されることができる。そして、それの後、それらの生体内での治療的なおよび／または予防動作は周知の臨床試験方法に従ってテストされる。本明細書で使用される「単クローン抗体」という用語は、抗体、ｉ．ｅ．集団内の抗体が抗体分子の小さいサブセットに存在してもよい可能な自然に生じる突然変異で同一である個人の実質的に均一な人口から得られる抗体を意味する。本願明細書において単クローン抗体は特に、一部の重いおよび／または軽いチェーンが特定の種に由来するかまたは特定の抗体クラスまたはサブクラスに帰属している抗体の対応配列と同一であるか相同である「キメラの」抗体を含む。その一方で、それらが所望の拮抗的な活性（見る、米国特許第４，８１６，５６７号およびＭｏｒｒｉｓｏｎなど、会報Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１：６８５１−６８５５の（１９８４））を呈する限り、チェーン（ｓ）の剰余は他の種に由来するかまたは他の抗体クラスまたはサブクラス（この種の抗体の断片と同様に）に帰属している抗体の対応配列と同一であるか相同である。開示された単クローン抗体は、モノフォニックのクローンの抗体を生産するいかなる手順も使用して作られることができる。例えば、  抗体がハイブリードーマ法を使用して用意されることができるモノクローナルが、開示した  −  例えば、人々は、２５６：４９５にケーラーおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（Ｎａｔｕｒｅ）によって（１９７５）を解説した。ハイブリードーマ法において、マウスまたは他の適当な宿主動物はリンパ球を引き出すために免疫している剤によって典型的に免疫される。そして、それは生じるかまたは特に免疫している剤と結合する抗体を生産してできる。あるいは、リンパ球は生体外で、例えば免疫されることができる。そして、本願明細書において記載されているＨＩＶ  Ｅｎｖ−ＣＤ４−共同−受容体複合体を使用する。単クローン抗体は、組換えＤＮＡ方法（例えば米国特許番号４，８１６，５６７（Ｃａｂｉｌｌｙその他）に記載されているそれら）によって作られることもできる。開示された単クローン抗体をコード化しているＤＮＡは、直ちに分離されることができて、従来の手順（例えば、特にネズミの抗体の重鎖および軽鎖をコード化している遺伝子と結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いて）を用いて順序付けた。抗体または作動中の抗体フラグメントのライブラリは、例えば、Ｂａｒｂａｓその他にＢｕｒｔｏｎその他に対する米国特許番号５，８０４，４４０および米国特許番号６，０９６，４４１にて説明したように、バクテリオファージ表示技術を使用して、発生することもできて、放送されることもできる。生体外方法は、プレペアリング一価抗体にも適している。生産する抗体の消化はそれについて、特に、Ｆａｂフラグメントを分解する、公知技術のルーチン技術を使用して達成されることができる。例えば、消化は、パパインを使用して実行されることができる。パパイン消化の実施例は、１９９４年１２月２２日に発表されるＷＯ  ９４／２９３４８および米国特許番号４，３４２，５６６に記載されている。抗体のパパイン消化は概して２つの同一のＦａｂ分屑を生じる。そして、Ｆａｂフラグメント（単一の抗原結合部位を有する各々）および残余のＦｃフラグメントと呼ばれている。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有して、テストを架橋させることがまだできる断片を得る。他のシーケンスに取り付けられるかどうか、断片は特定領域または特定のアミノ酸残基の挿入、削除、置換または他の選択された変更態様を含むこともできると、抗体の活性が定めた、または、抗体フラグメントは非改質抗体または抗体フラグメントと比較して著しく変えられないかまたは損なわれない。これらの変更態様はさらに若干の所有物が、例えば接着しているジスルフィドができるアミノ酸を除去して／加えるために、そのバイオ長命を増加させるために定めることができる、その分泌の特徴を変えるために、いかなるケースも、抗体または抗体フラグメントにおいてなどは生理活性所有物（例えばその同族のテストに対する特異的結合）を所有しなければならない。抗体または抗体フラグメントの機能的であるか能動的な領域はタンパク質の特定の領域の突然変異生成によって確認されることができる。そして、表されたポリペチドの表示およびテストが続く。この種の方法は、従来技術において熟練した実務家にとって直ちに明らかで、抗体または抗体フラグメントをコード化している核酸の部位特異的突然変異を含むことができる。（Ｚｏｌｌｅｒ、ＭＪ．ゴロゴロ．Ｏｐｉｎ．ｉｏｔｅｃｈｎｏｌ。３：３４８−３５４，  １９９２）。ここで使用しているように、用語「抗体」または「抗体」は、ヒト抗体および／またはヒト化抗体を言及することもできる。多くの人間外の抗体（例えばマウス、ネズミまたはウサギに由来するそれら）は、人間において自然に抗原性で、このように、人間に与えられるときに、望ましくない免疫応答を起こすことができる。従って、方法のヒトであるかヒト化抗体の使用は、人間に投与される抗体が望ましくない免疫応答を呼び起こすという可能性を少なくするのに役立つ。
【００４４】
（２）  ヒト抗体
開示されたヒト抗体は、いかなる技術も使用して準備されることができる。ヒト単クローン抗体産生の技術の実施例は、Ｃｏｌｅその他によって記載されているそれらを含む。｛モノクローナルのＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓおよびＣａｎｃｅｒＴｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ、７７ページ、１９８５）そして、Ｂｏｅｒｎｅｒその他によって（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７（ｌ）：８６−９５，  １９９１）。ヒト抗体（そして、その断片）は、バクテリオファージ表示ライブラリを使用して生じることもできる（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍなど、Ｊ．ＭｏＩ．生物学、２２７：３８１、１９９１；マークなど、Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ、２２２：５８１、１９９１）。開示されたヒト抗体は、トランスジェニック動物から得られることもできる。例えば、ヒト抗体の完全なレパートリを生じることができる、移植遺伝子の、突然変異のマウスは、免疫化に応答して、記載されていた（Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓなど、会報Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９０参照：２５５１−２５５の（１９９３）；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓなど、Ｎａｔｕｒｅ、３６２：２５５−２５８の（１９９３）；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎなど、Ｉｍｍｕｎｏｌ．のＹｅａｒ、７：３３（１９９３））。具体的には、これらのキメラのおよび生殖系列変異体マウスの抗体Ｈ鎖Ｊ領域（Ｊ（Ｈ））遺伝子の同型接合の削除は結果として内因性の抗体産生の完全な抑制になる、そして、この種の生殖系列変異体マウスへのヒト生殖系列抗体遺伝子配列の成功した転送はテスト・チャレンジに応じて結果としてヒト抗体の生産になる。所望の活性を有する抗体は、本願明細書において記載されて、Ｅｎｖ−ＣＤ４−共同−受容体複合体を使用することを選ばれる。
【００４５】
（３）  ヒト化抗体
抗体人間化技術は、抗体分子の一つ以上のポリペプチド鎖をコード化しているＤＮＡの塩基配列を操作するために、一般に組換えＤＮＡ技術の使用を含む。したがって、人間外の抗体（または断片単独）のヒト化形は、ヒト（受取人）抗体のフレームワークに組み込まれる人間外の（ドナー）抗体から一部の抗原結合部位を含むキメラ抗体または抗体チェーン（または断片単独（例えばＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ１または抗体の他の抗原結合性部分））である。ヒト化抗体を生成するために、受取人（人間的な）抗体分子の一つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）から残基は、テストを結合している特徴（例えば特異性の特定のレベルおよび標的抗原のための親和性）を要求したことは公知であるドナー（人間でない）抗体分子の一つ以上のＣＤＲから、残基と交換される。ある場合には、ヒト抗体のＦｖフレームワーク（ＦＲ）残基は、対応する人間外の残基と交換される。ヒト化抗体は、残基ウインチを含むこともできる輸入されたＣＤＲまたはフレームワークのレシピエント抗体が配列するどちらのｍもないことを見つける。
【００４６】
通常、ヒト化抗体は、人間でないソースからそれにもたらされる一つ以上のアミノ酸残基を有する。実際には、ヒト化抗体は、概して、若干のＣＤＲ残基およびおそらく数ＦＲの残基が齧歯目の抗体の類似したサイトから残基によって置換されるヒト抗体である。ヒト化抗体は、少なくとも一般に一部の抗体恒常部（Ｆｃ）（概してヒト抗体のそれ）を含む（ジョーンズなど、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２−５２５の（１９８６）Ｒｅｉｃｈｍａｎｎなど、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３−３２７の（１９８８）およびＰｒｅｓｔａ（Ｃｕｒｒ）．Ｏｐｉｎ．ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ、２：５９３−５９６の（１９９２））。人間外の抗体を人間らしくする方法は、公知技術である。例えば、齧歯目のＣＤＲまたはＣＤＲシーケンスをヒト抗体の対応配列と置換することによって、ヒト化抗体は、冬および同僚（ジョーンズなど、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２−５２５の（１９８６）Ｒｉｅｃｈｍａｎｎなど、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３−３２７の（１９８８）Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎなど、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９：１５３４−１５３６の（１９８８））の方法に従って発生することができる。ヒト化抗体を生じるために用いることができる方法は、米国特許番号４，８１６，５６７（Ｃａｂｉｌｌｙその他）米国特許番号５，５６５，３３２（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍその他）米国特許番号５，７２１，３６７（キーその他）米国特許番号５，８３７，２４３（Ｄｅｏその他）米国特許番号５、９３９，５９８（Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉその他）米国特許番号６，１３０，３６４（Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓその他）および米国特許番号６，１８０，３７７（Ｍｏｒｇａｎその他）に記載されてもいる。
【００４７】
（４）  抗体の管理
本願明細書において開示されるように、抗体の管理はされることができる。抗体送出のための核酸方法も、存在する。広く効力を消している反ｘｘｘ抗体および抗体フラグメントは抗体または抗体フラグメントをコード化する核酸準備（例えばＤＮＡまたはリボゾームリボ核酸）として患者または主題に与えられることもできる。そうすると、患者のまたは主題の自身の細胞は核酸を始めて、コード化された抗体または抗体フラグメントを生じて、隠す。例えば、本願明細書において開示されるように、核酸の配送がいかなる手段によってもあることができる。
【００４８】
Ｃ．組成物
炎症性規定能の活動を阻害することができる構造物は、本願明細書において開示される。一つの態様では、構造物は核酸から成るベクターである。そこにおいて、核酸はインヒビターのために符号化する。構造物の核酸は、炎症性規定能のシーケンスに基づくことがありえる。
【００４９】
１．  炎症伝達物質−シーケンス
開示された構造物は、ＩＬ−１αのシーケンスに基づいて、核酸から成ることができる。核酸一次構造は、ヒトＩＬ−１αのシーケンスに基づくことがありえる。ヒトＩＬ−１αをコード化している核酸の例は、配列番号である：１、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＭ＿０００５７５。
【００５０】
開示された構造物は、ＩＬ−１βのシーケンスに基づいて、核酸から成ることができる。核酸一次構造は、ヒトＩＬ−１βのシーケンスに基づいてそうすることができる。ヒトＩＬ−１βをコード化している核酸の例は、配列番号である：２、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＭ＿０００５７６。
【００５１】
開示された構造物は、不ｌｒａのシーケンスに基づいて、核酸から成ることができる。核酸一次構造は、ヒトＩＬ−ｌｒａのシーケンスに基づいてそうすることができる。ヒトＥＬ−ｌｒａをコード化している核酸の例は、配列番号である：５、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＭ＿１７３８４２。
【００５２】
開示された構造物は、ＩＬ−１Ｒ１のシーケンスに基づいて、核酸から成ることができる。
【００５３】
核酸一次構造は、人間のＩＬ−１ＲＡのシーケンスに基づいてそうすることができるヒトＩＬ−１Ｒ１をコード化している核酸の例は、配列番号である：８、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＭ＿０００８７７。
【００５４】
開示された構造物は、ＥＬ−１Ｒ２のシーケンスに基づいて、核酸から成ることができる。核酸一次構造は、ヒトＩＬ−１Ｒ２のシーケンスに基づいてそうすることができる。ヒトＩＬ−１Ｒ２をコード化している核酸の例は、配列番号である：９、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＭ＿１７３３４３。６８．  開示された構造物は、コックス−１のシーケンスに基づいて、核酸から成ることができる。核酸一次構造は、ヒトＣＯＸ−Ｉのシーケンスに基づいてそうすることができる。ヒトＣＯＸ−Ｉをコード化している核酸の例は、配列番号である：１０、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号Ｍ５９９７９。
【００５５】
開示された構造物は、コックス−２のシーケンスに基づいて、核酸から成ることができる。核酸一次構造は、ヒトＣＯＸ−２のシーケンスに基づいてそうすることができる。ヒトＣＯＸ−２をコード化している核酸の例（配列番号１１、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＭ＿０００９６３。
【００５６】
開示された構造物は、ｍＰＧＥＳのシーケンスに基づいて、核酸から成ることができる。核酸一次構造は、ヒトｍＰＧＥＳのシーケンスに基づいてそうすることができる。ヒトｍＰＧＥＳをコード化している核酸の例は、配列番号である：１２、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号ＮＭ＿００４８７８。
【００５７】
開示された構造物は、ｃＰＧＥＳのシーケンスに基づいて、核酸から成ることができる。核酸一次構造は、ヒトｃＰＧＥＳ／ｐ２３のシーケンスに基づいてそうすることができる。ヒトｃＰＧＥＳ／ｐ２３をコード化している核酸の例は、配列番号である：１３、Ａｃｃｅｓｓｉｏｎ番号Ｌ２４８０４。
【００５８】
核酸が炎症の規定能の表示を禁止することができる機能的な核酸は、本願明細書において開示される。また、本願明細書において開示する核酸から成る構造物が、使用可能な状態で発現制御配列との関連がある機能的な核酸をコード化する。機能的な核酸は、ｓｉＲＮＡから成ることができる。ｓｉＲＮＡは、ＣＯＸ−Ｉのための核酸一次構造に由来することができる（配列番号１０）。このように、ｓｉＲＮＡは、核酸一次構造配列番号を有することができる：４７、４８、４９、５０、５１、または５２。ｓｉＲＮＡは、ＣＯＸ−２のための核酸一次構造に由来することができる（配列番号１１）。このように、ｓｉＲＮＡは、核酸一次構造ＳＥＱ  Ｅ）ＮＯを有することができる：５３、５４、５５５、５６、５７、または５８。ｓｉＲＮＡは、ｍＰＧＥＳのための核酸一次構造に由来することができる（配列番号１２）。このように、ｓｉＲＮＡは、核酸一次構造配列番号を有することができる。
【００５９】
ｓｉＲＮＡは、ｃＰＧＥＳのための核酸一次構造に由来することができる（配列番号１３）。このように、ｓｉＲＮＡは、核酸一次構造配列番号を有することができる：４１，４２、４３、４４、４５、または４６。
【００６０】
使用可能な状態で、発現制御配列（ポリペチドがＩＬ−１を不１Ｒ１．に結合することを阻害することができる）との関連があるポリペチドをコード化している核酸から成る構造物は本願明細書において開示するポリペチドは、ＩＬ−１ｒａから成ることができる。ポリペチドは、アミノ酸配列配列番号を有することができる：
ポリペチドは、ＩＬ−１ｒａの断片から成ることができる。ポリペチドは、アミノ酸配列ＳＥＱ  ＥＤ  ＮＯに、少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％のアイデンティティを有することができる：
核酸は、シーケンスＳＥＱ  ＩＤ  ＮＯ．５から成ることができる。核酸は、ポリペチドをコード化する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、核酸一次構造配列番号に対する９５％のアイデンティティによってそれ：５開示もする、核酸一次構造配列番号によって、本願明細書において記載されているにつれて、厳しい状況の下で交雑することができる核酸、か何かが、状況である。
【００６１】
ポリペチドはＩＬ−１Ｒ１の断片から成ることができる。そこにおいて、断片はＩＬ−１を結合することができる、そして、断片は信号ｃａｓｃａｓｅを起動させる還元した能力を有する。当業者が直ちにＩＬ−１を結合するポリペチドの能力を決めることができるかまたは標準生化学および分子遺伝学技術および試薬を使用している信号ｃａｓｃａｓｅを起動させることができるものと理解される。例えば、断片は、膜貫通領域を欠いているトランケーションでありえる。膜貫通領域はどこで確認されなかった、当業者が、例えば、疎水性プロット線を使用しているアミノ酸配列に基づいてこの領域の近似の位置を推定することができるものと理解される。別の例として、断片は細胞質の尾部の一部を欠いていることができる。そして、それはＴｏｌｌ／インターロイキン１（ＩＬ−１）受容体（ＴＩＲ）領域を含む（配列番号のアミノ酸３８４−５２８：８）。ポリペチドは、アミノ酸配列配列番号を有することができる：ポリペチドは、アミノ酸配列配列番号まで少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％のアイデンティティを有することができる：核酸は、シーケンス配列番号から成ることができる：核酸は、ポリペチドをコード化する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、核酸一次構造配列番号に対する９５％のアイデンティティによってそれ：開示もする、核酸一次構造配列番号によって、本願明細書において記載されているにつれて、厳しい状況の下で交雑することができる核酸、か何かが、状況である：
ポリペチドは、ＩＬ−１Ｒ２から成ることができる。ポリペチドは、アミノ酸配列配列番号を有することができる：４０。ポリペチドはＩＬ−１Ｒ２の断片から成ることができる。そこにおいて、断片はＥＬ−Ｉを結合することができる、そして、断片は信号ｃａｓｃａｓｅを起動させる還元した能力を有する。ポリペチドは、アミノ酸配列配列番号まで少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％のアイデンティティを有することができる：４０。核酸は、シーケンス配列番号から成ることができる：９。核酸は、ポリペチドをコード化する少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、核酸一次構造配列番号に対する９５％のアイデンティティによってそれ：９。開示もする、核酸一次構造配列番号によって、本願明細書において記載されているにつれて、厳しい状況の下で交雑することができる核酸、か何かが、状況である：９。
【００６２】
本願明細書、開示されたポリペチドは、分泌シグナルから更に成ることができる。分泌シグナルはＩＬ−ｌｒａ分泌シグナル配列でありえる。そして、それはＩＬ−１βの分泌シグナル・シーケンスと同じシーケンスである。このように、分泌シグナルは、ポリペチド・シーケンス配列番号から成ることができる：１４。分泌シグナルは、核酸一次構造配列番号によってコード化されることができる：６８。
【００６３】
開示された構造物は、ベクター・デリバリー系に組み込まれることができる。かくして、開示する核酸から成るベクターが、本願明細書において提供する。発現制御配列は、通常、プロモータである。プロモータは、いかなるプロモータ（例えば本願明細書において述べられるそれら）でもありえる。
【００６４】
本願明細書において設けられている構造物の目標とされたおよびグローバルな交付も、開示される。グローバルな導入遺伝子送出のための偽型ネコ免疫不全ウイルス（ＦＩＶ）は、開示される。治療的な遺伝子の安定な発現は、治効を強化していて、長期の治療的な結果の原因となっている遺伝子の異常の長期にわたる回復を補助する。本願明細書において開示されるバックボーンＦＩＶシステムのうちの１つは、Ｐｏｅｓｃｈｌａ  ＥＭ、など、Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ４に記載される：３５４−３５７．（１９９８）。例えば、本願明細書において開示する周産期の全身ＦΙＶ後のマウスの３ヵ月以上間のレポーター遺伝子ｌａｃＺの安定な表示が、（ｌａｃＺ）管理である。
【００６５】
これらの構造物の研究のためのモデル系は、移植遺伝子でｅｘｉｓｉｏｎａｌｌｙに起動するＩＬ−１βである（ＸＡＴ）マウス（ＩＬ−１βＸＡＴ）そして、そのバリエーション。バリエーションは、例えば組織特異的プロモータの使用を例えばＣＯＬＬ１Ａ１−ＤＬ−β５ＸＡＴ１マウスに含む。このマウスモデルはＵ．Ｓ．特許出願番号第６０／６２７，６０４号の主題である。そして、それは開示されたマウスモデルに関連した教示のためのその全部の参照によって組み込まれて本願明細書においてある。このマウスモデルは、Ｃｒｅレコンビナーゼ発現ベクター（例えば標的部位に対するＦΙＶ（Ｃｒｅ））の配達に基づいて、局所化された炎症の誘導を考慮に入れる。例えばＣＯＬＬＩ  Ａｌ−ＤＬＩβＸＡＴの接点へのＦΙＶ（Ｃｒｅ）の配達」マウスは、型関節炎に炎症を誘発することができる。モデルがこのようにそうすることができるこのマウスは、例えば、関節炎上の設けられている構造物の効果を試験したものであるかまたは最適化したものである。また、本願明細書において開示するいずれでも分配するＦＩＶベクターの能力をあるの本願明細書ベクターの循環かジョイントへの注入後の主題の脳に対する核酸または導入遺伝子を提供する。このように、ＩＬ−βＸΛＴおよびそのバリエーションが、循環またはジョイントへのＦΙＶ（Ｃｒｅ）の配達後の神経炎症のモデルとして使われることができる。
【００６６】
２．  核酸
本願明細書において開示される様々な分子がある。そして、例えば、例えば、さまざまな機能的な核酸と同様に、本願明細書において開示される他のいかなるタンパク質と同様にも不ｌｒａをコード化する核酸を含む基礎を形成される核酸である。開示された核酸は実施例、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体のためにメイクアップされる、または、ヌクレオチドは置換する。これらおよび他の分子の非限定的な例は、本願明細書において述べられる。例えば、ベクターが細胞（表されたメッセンジャーＲＮＡが概してＡ、Ｃ、ＧおよびＵ．Ｌｉｋｅｗｉｓｅから成り立つ）において表されるときに、例えば、アンチセンス分子が例えば外因の配達による細胞または細胞環境にもたらされる場合、アンチセンス分子が細胞環境のアンチセンス分子の分解を減らすヌクレオチド類似体から成り立つことがａｄｖａｎｔａｇｏｕｓであるものと理解されるものと理解される。
【００６７】
ａ）ヌクレオチドおよび関連した分子
ヌクレオチドは、ベース部分、糖残基およびリン酸塩部分を含む分子である。ヌクレオチドは、インター・ヌクレオシド結合を作成しているそれらのリン酸塩部分および糖残基で結びつけられることができる。ヌクレオチドのベース部分は、アデニン−９−イル（Ａ）細胞罪−１−イル（Ｃ）グアニン−９−イル（Ｇ）ウラシル−１−イル（Ｕ）およびサイミン−１−イル（Ｔ）でありえる。ヌクレオチドの糖残基は、リボースまたはデオキシリボースである。ヌクレオチドのリン酸塩部分は、リン酸五価である。ヌクレオチドの非限定的な実施例は、３’−ＡＭＰ（３’−アデノシン一リン酸）または５’−ＧＭＰ（５’−ＧＭＰ）である。
【００６８】
ヌクレオチド類似体は、若干のタイプの変更態様を含むヌクレオチドであるためにどちらかベース、糖またはリン酸塩部分。ヌクレオチドに対する変更態様は、公知技術である、そして、糖の変更態様またはリン酸塩部分と同様に実施例、５‐メチルシトシン（５−ｍｅ−Ｃ）５‐ヒドロキシメチルシトシン、キサンチン、ヒポキサンチンおよび２−アミノ・アデニンのために含む。
【００６９】
ヌクレオチド代理は、ヌクレオチドに対する類似の機能特性を有する分子である、しかし、いずれが、リン酸塩部分（例えばペプチド核酸（ＰＮＡ））を含まないか。ヌクレオチド代理は、Ｗａｔｓｏｎ−ＣｒｉｃｋまたはＨｏｏｇｓｔｅｅｎ方法の核酸を認識する、しかし、リン酸塩部分以外の部分で結びつけられる分子である。適当な目標核酸と相互に作用するときに、ヌクレオチド代理は二重螺旋タイプ構造にかなうことが可能である。
【００７０】
増強（例えば細胞取り込み）に他のタイプの分子（接合体）をヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体に連結することも、可能である。接合体は、ヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体に化学的にリンクされることができる。この種の接合体としては、コレステロール部分のような脂質部分が挙げられるがこれらに限られない。（Ｌｅｔｓｉｎｇｅｒなど、会報Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９８９，８６、６５５３−６５５６）
Ｗａｔｓｏｎ−筋肉痙攣相互作用は、ヌクレオチド、ヌクレオチド類似体またはヌクレオチド代理のＷａｔｓｏｎ−筋肉痙攣表面を有する少なくとも一つの相互作用である。ヌクレオチドのＷａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ表面、ヌクレオチド類似体またはヌクレオチド代理は、Ｃ２（Ｎｌ）を含む、そして、プリン・ベースのヌクレオチド、ヌクレオチド類似体またはヌクレオチド代理のＣ６位置およびＣ２（Ｎ３、ピリミジン・ベースのヌクレオチドのＣ４位置、ヌクレオチド類似体またはヌクレオチド代理）。
【００７１】
Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ相互作用はヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体のＨｏｏｇｓｔｅｅｎ表面に起こる相互作用である。そして、それは二重鎖のＤＮＡの主溝において露出する。Ｈｏｏｇｓｔｅｅｎ表面は、プリンヌクレオチドのＣ６位置で、Ｎ７位置および反応基（ＮＨ２またはＯ）を含む。
【００７２】
ｂ）配列
例えば、タンパク質がＧｅｎｂａｎｋに開示されることを本願明細書において開示した他のものと同様に不ｌｒａに関連した様々なシーケンスがある、そして、これらのシーケンスその他は全体として、そこにおいて、含まれる個々の部分列のためにと同様に参照によって組み込まれて本願明細書においてある。
【００７３】
様々なシーケンスは本願明細書において設けられている、そして、ｗｗｗ．ｐｕｂｍｅｄ．政府で、これらその他はＧｅｎｂａｎｋで見つかることができる。当業者は、シーケンス矛盾および違いを分解して、特定のシーケンスに関する組成物および方法を他の関連配列に合わせる方法を理解する。プライマおよび／またはプローブは、本願明細書において開示されて、従来技術において公知の情報を与えられるいかなるシーケンスのためにも設計されることができる。
【００７４】
ｃ）始動用燃料注入装置、そして、プローブ
プライマおよびプローブを含む（本願明細書において開示される遺伝子と相互に作用することができる）組成物は、開示される。特定の実施例において、下塗りは、ＤＮＡ増幅反応を支持するために用いる。概して、プライマは、シーケンスに特有の方法で延長されることができる。シーケンスに特有の方法のプライマの拡張は、シーケンスおよび／またはプライマが雑種を作られるかまたはさもなければ関連する核酸分子の組成が構成またはプライマの拡張によってできる製品の配列を導くかまたは影響するいかなる方法も含む。シーケンスに特有の方法のプライマの拡張は、従って、ＰＣＲ、ＤＮＡ塩基配列決定、ＤＮＡ拡張、ＤＮＡポリメリゼーション、ＲＮＡ転写または逆転写を含むが、これに限定されるものではない。シーケンスに特有の方法のプライマを増幅する技術および状況は、好まれる。特定の実施例において、プライマが、ＤＮＡ増幅反応（例えばＰＣＲまたは直接のシークエンシング）のために用いられる。特定の実施例で、プライマが非酵素的技術を使用して延長されることもできるものと理解される。ここで、例えば、それらがシーケンスに特有の方法のプライマを延長するために化学的に反応するように、プライマを延長するために用いるヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチドは修正される。概して、開示されたプライマは核酸または核酸の領域によって交雑する、または、それらは核酸を補うものまたは核酸の領域を補うものによって交雑する。
【００７５】
３．  シーケンス類似点
本願明細書において述べられるように、条件相同およびアイデンティティの使用が類似性と同じものを意味するものと理解される。このように、例えば、語相同の使用が２つの非自然のシーケンスとの間に使われる場合、これがこれらの２つのシーケンスの進化の関係を必ずしも示しているというわけではなくて、むしろそれらの核酸一次構造との類似点または関連性に注目しているものと理解される。それらが進化的に関連があるかどうかに関係なく、２つの進化的に関連した分子間の決定相同のための方法の多数はシーケンス類似性を判断するためにいかなる二個以上の核酸またはタンパク質にも日常的に適用される。
【００７６】
一般に、起こるかもしれないいかなる周知の異型および誘導体またはそれらも定める一つの方法が、開示された遺伝子および本願明細書においてタンパク質の中で、特定の周知のシーケンスに相同に関して異型および誘導体を定めることによってあるものと理解される。本願明細書において開示される特定のシーケンスのこのアイデンティティも、本願明細書において他で述べられる。一般のＩｎ、遺伝子の異型および本願明細書においてタンパク質が、最少、あたりを定まったシーケンスに対する７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、または９９パーセント相同または土地の人でシーケンスを有することを概して開示した。当業者は、容易に、２つのタンパク質または核酸（例えば遺伝子）の相同を決定する方法を理解する。例えば、相同がその最高レベルにあるように、相同は２つのシーケンスを整列配置した後に算出されることができる。
【００７７】
算出相同の他の方法は、発表されたアルゴリズムによって実行されることができる。比較のためのシーケンスの最適配列は、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ  Ａｄｖのローカル相同アルゴリズムによって実行されることができる。出願Ｍａｔｈ．２：４８２の（１９８１）（ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ．４８）の相同配列アルゴリズムによる）：４４３の（１９７０）（ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（会報Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５）の類似性方法の検索による）：２４４４の（１９８８）（これらのアルゴリズム（ウィスコンシンＧｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、５７５人のＳｃｉｅｎｃｅ博士、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ５  ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ）のコンピュータ化された実施態様による、または、点検による）。
【００７８】
相同の同一形式は、例えばＺｕｋｅｒ（Ｍ．科学２４４）において開示されるアルゴリズムによって、核酸のために得られることができる：４８−５２、１９８９、Ｊａｅｇｅｒなど会報国家アカデミちょうこくしつ座ＵＳＡ  ８６：７７０６−７７１０、１９８９、Ｊａｅｇｅｒなど方法Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３：２８１−３０６（少なくとも核酸配列に関連した材料のための参照によって組み込まれて本願明細書においてある１９８９）。方法のいずれかが概して用いられることができる、そして、特定の例で、これらのさまざまな方法の結果が異なることができるものと理解される、しかし、熟練した職人はアイデンティティがこれらの方法のうちの少なくとも１つによって分かる場合、シーケンスが定まったアイデンティティを有して、本願明細書において開示されることが言われているだろうと理解する。
【００７９】
例えば、本願明細書において使われるように、他のシーケンスに特定のパーセント相同を有するとして詳述されるシーケンスは上記の算出方法のいかなる一つ以上もだけ算出されるにつれて、詳述された相同を有するシーケンスに関連する。例えば、他の算出方法のいずれかによって算出されるにつれて第１のシーケンスが第２のシーケンスに８０パーセントの相同を有しない場合であっても、第１のシーケンスがＺｕｋｅｒ算出方法を使用している第２のシーケンスに８０パーセントの相同を有するために算出される場合、第１のシーケンスは第２のシーケンスに８０パーセントの相同を、本明細書で定義されるように、有する。別の例として、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ算出方法、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ算出方法、Ｊａｅｇｅｒ算出方法または他の算出方法のいずれかによって算出されるにつれて第１のシーケンスが第２のシーケンスに８０パーセントの相同を有しない場合であっても、第１のシーケンスがＺｕｋｅｒ算出方法およびＰｅａｒｓｏｎを使用している第２のシーケンスおよびＬｉｐｍａｎ算出方法に８０パーセントの相同を有するために算出される場合、第１のシーケンスは第２のシーケンスに８０パーセントの相同を、本明細書で定義されるように、有する。さらに別の例として、第１のシーケンスが算出方法（実際には、異なる算出方法が結果として異なる算出相同パーセンテージにしばしばなるにもかかわらず）の各々を用いた第２のシーケンスに８０パーセントの相同を有するために算出される場合、第１のシーケンスは第２のシーケンスに８０パーセントの相同を、本明細書で定義されるように、有する。
【００８０】
４．  ハイブリダイゼーション／選択的ハイブリダイゼーション
用語ハイブリダイゼーションは、概して少なくとも２つの核酸分子、例えばプライマまたはプローブの間のシーケンス駆動相互作用および遺伝子を意味する。シーケンス駆動相互作用は、２つのヌクレオチドまたはヌクレオチド類似体との間に発生する相互作用またはヌクレオチド誘導体ｍにヌクレオチドに特有の方法を定める。シーケンス駆動相互作用は、実施例、Ｃと相互に作用しているＧまたはＴと相互に作用しているＡ間である。概して、シーケンス駆動相互作用は、Ｗａｔｓｏｎ−Ｃｒｉｃｋ表面またはヌクレオチドのＨｏｏｇｓｔｅｅｎ表面に起こる。２つの核酸のハイブリダイゼーションは、当業者に知られている多くの状況およびパラメータに影響を受ける。例えば、２つの核酸分子が交雑するかどうか、反応の塩濃度、ｐＨおよび温度はすべて影響する。
【００８１】
２つの核酸分子間の選択的なハイブリダイゼーションのパラメータは、当業者にとって周知である。例えば、若干の実施例で、選択的なハイブリダイゼーション状況は、厳しいハイブリダイゼーション状況として定義されることができる。例えば、ハイブリダイゼーションの厳しさは、ハイブリダイゼーションの一方または両方の温度および塩濃度によって制御されて、ステップを洗っている。例えば、選択的なハイブリダイゼーションを達成するハイブリダイゼーションの条件は、洗っている温度が約５０Ｃ〜Ｔｍの下の２０°Ｃであるように、温度の組合せで洗うことによって続かれるＴｍ（分子の半分がそれらのハイブリダイゼーションからパートナーを分離する融解温度）および選択される塩濃度の下の約１２−２５０Ｃである温度で、ハイブリダイゼーションを高イオン強度溶液（６Ｘ  ＳＳＣまたは６Ｘ  ＳＳＰＥ）に関係させることができる。温度および塩状況は、フィルタに固定される参照ＤＮＡのサンプルが興味がある標識核酸に交雑して、それから異なる厳しさの状態の下で、洗われる予備実験において、経験的に直ちに決定される。ハイブリダイゼーション温度は、ＤＮＡ−リボゾームリボ核酸およびＲＮＡ−リボゾームリボ核酸ハイブリダイゼーションのために典型的により高い。状況が、あるいは、周知のように、厳しさを達成するために上記の通りに使われることができる。（Ｓａｍｂｒｏｏｋなど、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２のＥｄ．Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、コールドスプリングハーバー、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８９；Ｋｕｎｋｅｌなど手法Ｅｎｚｙｍｏｌ．１９８７：１５４：少なくとも核酸のハイブリダイゼーションに関連した材料のための参照によって組み込まれて本願明細書においてある３６７、１９８７）。ＤＮＡの好ましい厳しいハイブリダイゼーション条件：ＤＮＡハイブリダイゼーションが６Ｘ  ＳＳＣの約６８°Ｃ（水溶液において）であることができる、または、６Ｘ  ＳＳＰＥは６８０Ｃで洗うことによって続いた。要求される相補性の程度が減少して、更に、ＧＣまたは可変性が捜されるいかなる領域のＡ−Ｔ豊かさにも依存しているにつれて、ハイブリダイゼーションおよび、必要に応じて、洗うこと厳しさはしたがって、還元していることがありえる。同様に、要求される相同が増加して、更に、ＧＣまたは、すべて周知のように、高い相同が要求されるいかなる領域のＡ−Ｔ豊かさにも依存しているにつれて、ハイブリダイゼーションおよび、必要に応じて、洗うこと厳しさはしたがって、増加することができる。
【００８２】
選択的なハイブリダイゼーションを定める他の方法は、他の核酸に結合される核酸のうちの１つの量（パーセンテージ）に注目することによってある。例えば、若干の実施例で、選択的なハイブリダイゼーション状況は、少なくともあたりを、極限核酸の６０、６５、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００パーセントが非限定的な核酸に密接に結びつく時である。概して、非限定的なプライマは、実施例、１０または１００または１０００倍の過剰に直面しそうである。この種の分析は制限することおよび非限定的なプライマが例えばある状況の下で実行されることができる、１０倍または１００倍または下記の１０００倍それらｋｄ、核酸分子のわずか１つが１０倍または１００倍または１０００倍である所で、または、一つの所で、または、または、両方の核酸分子は上記である。
【００８３】
選択的なハイブリダイゼーションを定める他の方法は、酵素処理でをハイブリダイゼーションが所望の酵素操作を促進することを必要とする状況の下で操作させるプライマのパーセンテージに注目することによってある。例えば、若干の実施例で、選択的なハイブリダイゼーション状況は、少なくともあたりを、プライマの６０、６５、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００パーセントが酵素操作を促進する状況の下で操作される酵素処理でである時である。そして、少なくともプライマの６０、６５、７０、７１、７２、７３、７４、７５、７６、７７、７８、７９、８０、８１、８２、８３、８４、８５、８６、８７、８８、８９、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、１００パーセントについて分子が延長されるときに酵素操作がＤＮＡ拡張、そして状況がそうである選択的なハイブリダイゼーションである場合、実施例間である。好適な状況も、製造業者によって示唆されるか、または操作を実行している酵素に適当であるとして従来技術において示されるそれらを含む。
【００８４】
ちょうど相同と同様に、様々な方法が２つの核酸分子との間にハイブリダイゼーションのレベルを決定するために開示されて本願明細書においてあるものと理解される。これらの方法および状況が２つの核酸分子との間にハイブリダイゼーションの異なるパーセンテージを提供することができるものと理解される、しかし、特に明記しない限り、方法のいずれかのパラメータを満たすことは充分である。例えば、８０％のハイブリダイゼーションが必要とされる場合、そして、ハイブリダイゼーションがこれらの方法のいずれか一つの必須パラメタの中で発生する限り、それは本願明細書において開示されて考慮される。
【００８５】
当業者が構成または方法が集合的に、または、単独で決定ハイブリダイゼーションのこれらの基準のいずれか一つを満たす場合、それが本願明細書において開示される構成または方法であると理解するものと理解される。
【００８６】
５．  細胞に対する組成物の配送
本願明細書、開示された核酸は、主題の細胞または細胞に届けられることができる。生体外で、または、生体内で、核酸を細胞に届けるために用いることができる多くの組成物および方法が、ある。これらの方法および組成物は、主に２つのクラスに細分化されることができる：ウィルス・ベースのデリバリー系および非ウイルス・ベースのデリバリー系。例えば、核酸は、多くの直納方式（例えば細胞またはキャリア（例えばカチオンのリポソーム）の遺伝形質のエレクトロポレーション、リポフェクション、リン酸カルシウム沈殿、プラスミド、ウィルス・ベクター、ウィルス核酸、バクテリオファージ核酸、バクテリオファージ、コスミドまたはバイア転送）で届けられることができる。実施例、Ｗｏｌｆｆ、Ｊ．Ａ．など、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４７、１４６５−１４６８のために、トランスフェクションのための適切な手段は、ウィルス・ベクター、化学トランスフェクタントまたはｐｈｙｓｉｃｏ機械の方法（例えばエレクトロポレーションおよびＤＮＡの直接的な拡散）を含んで、（１９９０）によって記載されている；して、Ｗｏｌｆｆ、Ｊ．Ａ．Ｎａｔｕｒｅ、３５２、８１５−８１８、（１９９１）。この種の方法は、本願明細書において記載されている組成物および方法の用途に、公知技術のおよび、直ちに順応性がある。特定のケースにおいて、方法は、特に大きいＤＮＡ分子によって機能するために、様式でフィードする。更に、これらの方法は、キャリアのターゲッティング特性を用いて特定の疾患および菌体群を目標とするために用いることができる。
【００８７】
ａ）デリバリー系に基づく核酸
導入ベクターは、細胞（例えばプラスミド）に、または、組換えレトロウィルスまたはアデノウィルスの一部として遺伝子を、例えば、届ける一般戦略の一部として遺伝子を届けるために用いるいかなるヌクレオチド構造でもありえる（などＣａｎｃｅｒＲｅを押し込む。５３：８３−８８，  （１９９３））。
【００８８】
ここで使用しているように、プラスミドまたはウィルス・ベクターは、低下のない細胞に開示された核酸（例えばＩＬ−Ｉｒａ、ＣＯＸ−Ｉ  ｓｉＲＮＡ、ＣＯＸ−２  ｓｉＲＮＡ、ｃＰＧＥＳ  ｓｉＲＮＡ）またはｍＰＧＥＳ  ｓｉＲＮＡ構造物を運搬する剤であって、開示されたシーケンスのプロモータを産生している表示をそれが分配される細胞に含む。若干の実施例において、ＩＬ−１ｒａ、ＣＯＸ−１  ｓｉＲＮＡ、ＣＯＸ−２  ｓｉＲＮＡ、ｃＰＧＥＳ  ｓｉＲＮＡまたはｍＰＧＥＳ  ｓｉＲＮＡ構造物のためのベクターは、ウイルス、レトロウィルスまたはレンチウイルスに由来する。ウィルス・ベクターは、例えば、ＨＩＶバックボーンおよびレンチウイルスを有するこれらのウイルスを含むＡｄｅｎｏｖｉｒｕｓ、Ａｄｅｎｏ−付随ウイルス、ヘルペスウイルス、Ｖａｃｃｉｎｉａウイルス、Ｐｏｌｉｏウイルス、ＡＩＤＳウィルス、ニューロンの栄養のウイルス、Ｓｉｎｄｂｉｓおよび他のＲＮＡウィルスでありえる。それらをベクターとしての用途に適しているようにするこれらのウイルスの特性を共有するいかなるウィルス系統も、抜擢されている。レトロウィルスは、ミューリンＭａｌｏｎｅｙ  Ｌｅｕｋｅｍｉａウイルス、ＭＭＬＶおよびベクターとしてＭＭＬＶの望ましい特性を表すレトロウィルスを含む。レトロウイルスベクタは、例えば、より大きい遺伝子の弾頭（すなわち導入遺伝子）を持っていることが可能である。そして、開示されたＩＬ−ｌｒａ、ＣＯＸ−Ｉ  ｓｉＲＮＡ、ＣＯＸ−２  ｓｉＲＮＡ、ｃＰＧＥＳ  ｓｉＲＮＡまたはｍＰＧＥＳ  ｓｉＲＮＡは構成してまたはマーカー遺伝子は他のウイルス性より（進路）誘導する、そして、一般的に用いられるベクターがこの理由間である。しかしながら、それらは、非増殖細胞に役立つものではなくある。アデノウイルスベクタは、比較的安定なおよび、（と）連動して、高力価を有するために容易で、エアゾール製剤において分配されることができて、非分裂細胞をトランスフェクションさせることができる。痘瘡ウィルス・ベクターは大きい、そして、差込み遺伝子のいくつかの場所を有する、それらは耐熱で、室温で、格納されることができる。好ましい実施例はウィルス・ベクターである。そして、それは宿主生物の免疫応答を抑制するために設計された。そして、ウイルス抗原によって引き出される。このタイプの好適なベクターは、インターロイキン８または１０のためのコード領域を担持する。
【００８９】
ウィルス・ベクターは、遺伝子を細胞にもたらす化学であるか物理的な方法より高い処理（遺伝子を導く能力）能力を有することができる。概して、ウィルス・ベクター封じ込め、非構造的初期遺伝子、構造後期遺伝子、ＲＮＡポリメラーゼＩＨ反訳記録は、ウィルスゲノムの転写および複製を制御するために、複製およびカプシド形成およびプロモータに必要な末端反復を逆にした。ベクターとして設計されるときに、ウイルスは概して離れた初期遺伝子の一つ以上を有する、そして、遺伝子または遺伝子／プロモータ・カセットは取り除かれたウィルスＤＮＡの代わりにウィルスゲノムに嵌入される。このタイプの構造物は、最高約８ｋｂの外国の遺伝形質を担持することができる。取り除かれた初期遺伝子の必要な機能は、ｔｒａｎｓ．の初期遺伝子の遺伝子産物を表すために設計された細胞系によって、典型的に供給される。
【００９０】
（１）  レトロウイルスベクタ
レトロウィルスは、逆推進ロケット技師ｖｉｒｉｄａｅのウイルス一系統に帰属していて、任意型、サブファミリ、膝または屈性を含んでいる動物ウィルスである。レトロウイルスベクタは、一般に、Ｖｅｒｍａ、Ｉ．Ｍ．Ｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ遺伝子導入ベクターによって記載されている。Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ−１９８５、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、ｐｐ．２２９−２３２、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ、（１９８５）において、いずれが、本願明細書において引用したものとする。遺伝子治療のためのレトロウイルスベクタを使用する方法の実施例は、米国特許番号４，８６８，１１６および４，９８０，２８６に記載されている；ＰＣＴ出願ＷＯ  ９０／０２８０６およびＷＯ  ８９／０７１３６；そして、Ｍｕｌｌｉｇａｎ（科学２６０：９２６−９３２の（１９９３））；という教示いずれが本願明細書に引用したものとする。
【００９１】
レトロウィルスは、基本的に、核酸貨物をそれに包装したパッケージである。核酸貨物は、それによってもたらすパッケージングシグナル（複製された娘分子がパッケージ・コートの範囲内で能率的に包装されることを確実にする）。パッケージ信号に加えて、複製のために、シスおよび複製されたウイルスの包装において必要である分子数が、ある。概して、レトロウイルス・ゲノムは、開口器、ｐｏｌおよびタンパク質外殻で製作中に含まれるｅｎｖ遺伝子を含む。それが的状赤血球へ転送されることになっていることは、開口器、ｐｏｌおよび外来性ＤＮＡと典型的に交換されるｅｎｖ遺伝子である。レトロウィルス・ベクターはパッケージ・コートに編入のためのパッケージングシグナルを装備するのが当り前であると、開口器転写単位の始まりの信号を送るシーケンス、逆転写の運搬ＲＮＡプライマを結合するプライマー結合部位を含む逆転写のために必要な要素、ＤＮＡ合成の間、リボゾームリボ核酸索のスイッチを導くターミナルの反復配列、ＤＮＡ合成の第２の索の合成の初回抗原刺激場所として役立つ３フィートＬＴＲに対するプリンの豊富なシーケンス５フィートおよびＤＮＡの挿入を可能にするＬＴＲの端の近くの特定のシーケンスが宿主ゲノムに嵌入するレトロウィルスの中で述べる。開口器、ｐｏｌおよびｅｎｖ遺伝子の除去は、約８ｋｂの外国のシーケンスがウィルスゲノムに嵌入されて、転写される後退になって、複製に新規なレトロウイルス粒子にパックされるのを許す。核酸のこの量は、各反訳記録のサイズに応じて、多くの遺伝子にものの配送に充分である。挿入物は、他の遺伝子と一緒の陽であるか負の選択マーカを有することが好ましい。
【００９２】
大部分のレトロウイルスベクタの複製機械および包装タンパク質が除去された（開口器、ｐｏｌおよびｅｎｖ）ので、ベクターはそれらを包装細胞系に入れることによって典型的に発生する。包装細胞系は、複製および包装機械を含むレトロウィルスによってトランスフェクションしたかまたは変わった細胞系であるが、いかなるパッケージングシグナルも欠いている。選択の余地のＤＮＡを担持しているベクターがこれらの細胞系にトランスフェクションするときに、ヘルパー細胞によってシスにおいて設けられている機械によって、興味がある遺伝子を含んでいるベクターは複製されて、新規なレトロウイルス粒子にパッケージされる。それらが必要な信号を欠いているので、機械のためのゲノムは包装されない。
【００９３】
（２）  アデノウイルス媒介生物
複製に欠陥があるアデノウィルスの構造は、記載されていた（Ｂｅｒｋｎｅｒなど、Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ６１：１２１３−１２２０の（１９８７）；Ｍａｓｓｉｅなど、ＭｏＩ．細胞．生物学６：２８７２−２８８３の（１９８６）；Ｈａｊ−Ａｈｍａｄなど（Ｊ）。Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ５７：２６７『−２７’４（１９８６）；Ｄａｖｉｄｓｏｎなど、Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ６１：１２２６−１２３９の（１９８７）；Ｚｈａｎｇ「リポソームによって媒介されるトランスフェクションおよびＰＣＲ分析による組換えアデノウィルスの生成および識別」ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １５：８６８−８７２の（１９９３））。ベクターとしてのこれらのウイルスの使用の利益はそれらがそれらが他の細胞型まで広がることができる範囲において制限されるということである。これは、次のことの故である。それらは最初の感染細胞の中で複製することができるが、新規な伝染性ウィルス粒子を形成することができない。組換えアデノウィルスは、気道上皮、肝細胞、脈管内皮、ＣＮＳ実質および多くの他の組織部位への直接の、生体内での配達の後、高性能遺伝子導入を達成することを示した（Ｍｏｒｓｙ、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９２：１５８０−１５８６  （１９９３）；Ｋｉｒｓｈｅｎｂａｕｍ、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９２：３８１−３８７  （１９９３）；Ｒｏｅｓｓｌｅｒ、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９２：１０８５−１０９２  （１９９３）；Ｍｏｕｌｌｉｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ４：１５４−１５９の（１９９３）；Ｌａ  Ｓａｌｌｅ、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５９：９８８−９９０の（１９９３）；Ｇｏｍｅｚ−Ｆｏｉｘ、Ｊ．Ｂｉｏｌ．化学２６７：２５１２９−２５１３４の（１９９２）；Ｒｉｃｈ、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ４：４６１−４７６の（１９９３）；Ｚａｂｎｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ６：７５−８３の（１９９４）；Ｇｕｚｍａｎ、Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ７３：１２０１−１２０７の（１９９３）；Ｂｏｕｔ、Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ５：３−１０の（１９９４）；Ｚａｂｎｅｒ、セル７５：２０７−２１６（１９９３）；Ｃａｉｌｌａｕｄ、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  ５：１２８７−１２９１の（１９９３）；そして、Ｒａｇｏｔ、Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ７４：５０１−５０７の（１９９３））。組換えアデノウィルスは、野生型または複製に欠陥があるアデノウィルスとして同様に特定の細胞表面マーカ（ウイルスがｒｅｃｅｐｔｏｒ−によって媒介されるエンドサイトーシスによって内在化される）と結合することによって、遺伝子トランスダクションを達成する（ＣｈａｒｄｏｎｎｅｔおよびＤａｌｅｓ（Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ４０）：４６２−４７７の（１９７０）；ＢｒｏｗｎおよびＢｕｒｌｉｎｇｈａｍ（Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  １２）：３８６−３９６の（１９７３）；ＳｖｅｎｓｓｏｎおよびＰｅｒｓｓｏｎ（Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ５５）：４４２−４４９の（１９８５）；Ｓｅｔｈ、その他、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．５１：６５０−６５５  （１９８４）；Ｓｅｔｈ、など、Ｍｏｌ．細胞．生物学４：１５２８−１５３３の（１９８４）；Ｖａｒｇａなど、Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ６５：６０６１−６０７０の（１９９１）；Ｗｉｃｋｈａｍその他、セル７３：３０９−３１９（１９９３））。
【００９４】
ウィルス・ベクターは離れたＥｌ遺伝子を有したアデノウィルスに基づく１でありえる、そして、これらのｖｉｒｏｎｓは細胞系（例えばヒト２９３の細胞系）において発生する。他の好ましい例として、ＥｌおよびＥ３遺伝子は、アデノウィルス・ゲノムから除去される。
【００９５】
（３）  アデノ関連ウィルス・ベクター
他のタイプのウィルス・ベクターは、アデノ衛星ウィルス（ＡＡＶ）に基づく。それが多くの細胞型を感染させることができて、人間に非病原であるので、この不完全なパルボウィルスは好適なベクターである。ＡＡＶタイプ・ベクターは約４〜５ｋｂを運搬することができる、そして、野生型ＡＡＶは染色体１９に安定して挿入することは公知である。このサイト固有統合所有物を含む媒介生物は、好まれる。
【００９６】
この種のベクターの特に好適な実施例はＡｖｉｇｅｎ（Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ）によってできるＰ４．１  Ｃベクターである。そして、遺伝子のようなＣＡ（単純ヘルペスウィルス・チミジンキナーゼ遺伝子、ＨＳＶ−ｔｋおよび／またはマーカー遺伝子を含むことができる）が緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）をコード化する。他のタイプのＡＡＶウイルスにおいて、ＡＡＶは、使用可能な状態で異種遺伝子にリンクされる細胞に特有の表現を導くプロモータを含んでいる少なくとも一つのカセットの側面に位置する一対の逆にされた末端反復（ＩＴＲ）を含む。いかなるヌクレオチド配列に対するこの前後関係参照も遺伝子において異形のまたはＡＡＶまたはＢ１９パルボウィルス固有でない。
【００９７】
概して、ＡＡＶおよびＢ  １９コード領域は削除された。そして、結果として安全な、無細胞毒性ベクターになった。ＡＡＶ  ＩＴＲ（またはその変更態様）感染性およびサイトを与える−特定の統合は、細胞毒性でないおよびプロモータ以外の細胞に特有の表現を導く。連合した状態特許番号６，２６１，８３４は、ＡＡＶベクターに関連した材料のための参照によって組み込まれて、本願明細書においてある。
【００９８】
本発明のベクターは、このように、相当な毒性のない哺乳類の染色体への統合ができるＤＮＡ分子を提供する。
【００９９】
ウイルス性において挿入された遺伝子、そして、通常レトロウイルス・プロモータおよび／または所望の遺伝子産物の表示を制御するのを助けるエンハンサを含む。プロモータは、通常、転写開始点に関して比較的固定された場所においてとき機能するＤＮＡの配列または配列である。プロモータは、ＲＮＡポリメラーゼおよび転写因子の基本的な相互作用のために必要な炉心構成要素を含んで、上流要素および反応要素を含むことができる。
【０１００】
（４）  レンチウイルス・ベクター
ベクターは、レンチウイルス・ベクターでありえる以下から成る有限責任でない以外のために、ＳＩＶベクター、ＨＴＶベクターまたはこれらのベクターの複合型構造物（ＨＩＶバックボーンを有するウイルスを含む）。これらのベクターも、第１の、第２のおよび、第三世代のレンチウイルスを含む。第三世代のレンチウイルスは、少なくとも３つの独立プラスミドまたは構造物に分割されるレンチウイルスをパックしている遺伝子を有する。また、ベクターは、それらをベクターとしての用途に適しているようにするこれらのウイルスの特性を共有するいかなるウィルス系統でもありえる。レンチウイルス・ベクターは、感染のための長い潜伏期間を有することによって典型的に特徴づけられる特別なタイプのレトロウイルス・ベクターである。さらにまた、レンチウイルス・ベクターは、非分裂細胞を感染させることができる。レンチウイルス・ベクターは、ウイルスのレンチウイルス一系統から、ウイルスの核酸バックボーンに基づく。概して、レンチウイルス・ベクターは、５フィートおよびレンチウイルス（例えばＳＩＶおよびＨＩＶ）の３フィートＬＴＲ領域を含む。レンチウイルス・ベクターも、レンチウイルス（例えばＳＩＶおよびＨＩＶ）のＲｅｖ  Ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  Ｅｌｅｍｅｎｔ（ＲＲＥ）を装備するのが当り前である。
【０１０１】
（ａ）  ネコ免疫不全ウィルス・ベクター
開示された構造物が中に分配されることができる１種類のベクターは、Ｐｏｅｓｃｈｌａその他によって（１９９８）開発されるＶＳＶ−Ｇ偽入力されたネコ免疫不全ウィルスシステムである。このレンチウイルスは、能率的に分裂終了細胞と同様に分周、成長逮捕者を感染させることを示した。さらに、そのレンチウイルス特性のため、それはホストのゲノムに導入遺伝子の編入を考慮に入れる。そして、安定遺伝子形質発現に導く。これは３−ベクター系である。それによって、各々は異なった指示を与える：ＦＩＶベクターは、変異する包装およびエンベロープ遺伝子を有する興味がある導入遺伝子およびレンチウイルス装置を担持する。小胞性口内炎ウィルスＧ−グリコプロテイン・ベクター（ＶＳＶ−Ｇ；Ｂｕｒｎｓなど、１９９３）ｔｒａｎｓ．のウイルスエンベロープの形成の一因となる。第三段ベクターは、指示をトランス（Ｐｏｅｓｃｈｌａその他、１９９８）で包むことを与える。ＦＩＶ生産は、２９３−Ｔ細胞への上述したベクターの完成した生体外以下の同時トランスフェクションである。ＦＩＶの豊富な上澄が、それから集められて、濾過されて、直接使われることができるかまたは、遠心によって集中に続いている。タイターは、日常的に１０４  −  １０７ｂｆｕ／ｍｌ  −  の間で変動する。
【０１０２】
（５）  ベクターパッケージング
上記のように、レトロウイルスベクタは、ウイルスの統合、組込ウイルスの複製、非組込ウイルスの複製、細胞浸潤および伝染性の粒子へのウイルスの包装と同程度多様なものを制御する多くの異なる配列要素を含むレトロウィルスに基づく。ベクターが理論的にはそれらの必要な要素の全てを含むことができると共に、外因の遺伝子要素（外因の遺伝子要素が十分に小さい場合）と同様に、必要な要素の典型的に多数は取り外される。包装および複製成分の全てが主題の範囲内で用いられる典型的レトロウイルス、含んでいるレンチウイルス・ベクターから取り除かれたので、ベクターはベクターをパッケージして、細胞系をパックすることを用いることにより最初の伝染性の粒子にパッケージされることを必要とする。概して、レトロウィルスの無数の機能が少なくとも２本のベクター、包装ベクターおよび配達ベクター上へ切り離されるように、レトロウイルスベクタは設計された。伝染性の粒子が生じることができる前に、この種のシステムはそれから、同じ細胞の要素の全てを提供しているベクターの全てに存在を要求する。包装ベクターは概して、レトロウィルスに由来する構造および複製遺伝子を担持する、そして、配達ベクターは的状赤血球において好ましくは表される外因の遺伝子要素を担持するベクターである。この種のシステムは、包装ベクターの包装機能を複数のベクター（例えば第三世代レンチウイルス・システム）に分割することができる。ダル、Ｔ．など、「条件つきの包装システムを有するＴｈｉｒｄ−生成レンチウイルス・ベクター」８４６３−７１  （１９９８）。
【０１０３】
レトロウィルスは、外膜タンパク（ｅｎｖ）を装備するのが当り前である。Ｅｎｖタンパク質は、本質的に、核酸貨物を囲むタンパク質である。さらに、細胞感染症特異性は、典型的レトロウィルスと関連した特定のＥｎｖタンパク質に基づく。典型的包装ベクター／送出ベクター系において、タンパク質がそうであるＥｎｖが例えばプロテアーゼ（プロの）またはインテグラーゼタンパク質より別々のベクターから表現した。
【０１０４】
（６）  細胞系パッケージング
ベクターは、それらを包装細胞系に入れることによって、典型的に発生する。包装細胞系は、複製および包装機械を含むレトロウィルスによってトランスフェクションしたかまたは変わった細胞系であるが、いかなるパッケージングシグナルも欠いている。選択の余地のＤＮＡを担持しているベクターがこれらの細胞系にトランスフェクションするときに、ヘルパー細胞によってシスにおいて設けられている機械によって、興味がある遺伝子を含んでいるベクターは複製されて、新規なレトロウイルス粒子にパッケージされる。それらが必要な信号を欠いているので、機械のためのゲノムは包装されない。細胞系をパックすることの１つのタイプは、２９３の細胞系である。
【０１０５】
（７）  大きいペイロード・ウィルス・ベクター
大きいヒトヘルペスウイルスの分子遺伝子の実験は、大きな異形のＤＮＡ断片がヘルペスウィルスへの感染のために寛容な細胞においてクローンをつくられることができて、伝播されることができて、決められることができるそれによって手段を提供した（Ｓｕｎなど、Ｎａｔｕｒｅ遺伝学８：３３−４１，  １９９４；ＣｏｔｔｅｒおよびＲｏｂｅｒｔｓｏｎ．Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  ＭｏＩ  Ｔｈｅｒ  ５：６３３−６４４，  １９９９）。これらの大きいＤＮＡウィルス（単純ヘルペスウィルス（ＨＳＶ）およびＥＢウィルス（ＥＢＶ）には、＞１５０ｋｂ、ヒト異形のＤＮＡの断片を特定の細胞に届けるために、可能性がある。ＥＢＶ組換え型は、エピソームＤＮＡとして感染したＢ細胞のＤＮＡの大きな部分を維持することができる。ヒト・ゲノム挿入物を３３０ｋｂへ担送される個々のクローンは、遺伝的に厩舎にこれらのエピソームの保守がＥＢＶへの感染の間、表されて構成的に特定のＥＢＶ核タンパク質（ＥＢＮＡｌ）を必要とすると明らかだった。加えて、これらのベクターがトランスフェクションのために用いられることができる。ここで、大量のタンパク質は生体外で一過性に発生することができる。ヘルペスウィルス・アンプリコン・システムは、＞２２０ｋｂ、ＤＮＡの部分を包装して、エピソームとしてＤＮＡを安定して維持することができる細胞を汚染するために用いてもいる。
【０１０６】
他の役立つシステムは、例えば、複製することおよびホスト制限された非複製しているワクシニアウィルス・ベクターを含む。
【０１０７】
ｂ）システムベースの非核酸
開示された組成物は、さまざまな方法で的状赤血球に届けられることができる。例えば、あるいは、リン酸カルシウム沈殿で、組成物は、エレクトロポレーションで、または、リポフェクションで届けられることができる。選択される配達メカニズムは目標とされる細胞のタイプに一つには依存する、そして、配達が発生することであるかどうか、生体内で、または、生体外で例示する。
【０１０８】
このように、開示された核酸またはベクターに加えて、組成物は、例えば、リポソーム（例えばカチオンのリポソーム（例えばＤＯＴＭＡ、ドープ、ＤＣ−コレステロール）またはアニオン性リポソーム）のような脂質から成ることができる。リポソームは、必要に応じて、特定の細胞を目標とするのを容易にするために、タンパク質から更に成ることができる。化合物およびカチオンのリポソームから成る構成の管理は、標的器官に血液輸入性に与えられることができるかまたは気道の的状赤血球に、気道に吸入されることができる。リポソームに関して、Ｂｒｉｇｈａｍなど  Ａｍ  Ｊ．Ｒｅｓｐ．細胞．ＭｏＩ．生物学１：９５−１００の（１９８９）；Ｆｅｌｇｎｅｒなど  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８４：７４１３−７４１７の（１９８７）；米国特許Ｎｏ．４，８９７，３５５参照。さらにまた、化合物は、特定の細胞型（例えばマクロファージ）に目標とされることができる、または、化合物の拡散またはミクロ莢膜から化合物の配達が比速度または投与量のために設計されるミクロ莢膜の構成要素として管理されることができる。
【０１０９】
いずれが政府および主題（すなわち遺伝子トランスダクションまたはトランスフェクション）の細胞への外来性ＤＮＡの取り込みを含むかについて記載されている方法において、細胞に対する組成物の配送が、様々な機構を介してあることができる。一つの例として、配達が、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮ、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ、会社、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、ＭＤ）ＳＵＰＥＲＦＥＣＴ（Ｑｉａｇｅｎ，  Ｉｎｃ．Ｈｉｌｄｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）およびＴＲＡＮＳＦＥＣＴ  ＡＭ（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｂｉｏｔｅｃ  Ｉｎｃ．、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ）（従来技術において手順標準に従って開発される他のリポソームと同様に）のような市販のリポソーム準備を使用して、リポソームを介してあることができる。加えて、開示された核酸またはベクターはエレクトロポレーションによって生体内で達成されることができる。そして、それのための技術はＳＯＮＯＰＯＲＡＴＩＯＮ機械（ＩｍａＲｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ社、Ｔｕｃｓｏｎ、ＡＺ）によってと同様にＧｅｎｅｔｒｏｎｉｃｓ，  Ｉｎｃ．（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）から利用できる。
【０１１０】
材料は、溶液（中止（例えば、微小粒子、リポソームまたは細胞に組み込まれる））においてもよい。これらは、抗体、レセプタまたは受容体リガンドを介して特定の細胞型に目標とされることができる。以下の参照は、腫瘍組織に特定のタンパク質を目標とするこの技術の使用の実施例である（Ｓｅｎｔｅｒ、など、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ化学、２：４４７−４５１（（１９９１））；Ｂａｇｓｈａｗｅ、Ｋ．Ｄ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、６０：２７５−２８１（（１９８９））；Ｂａｇｓｈａｗｅ、など、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、５８：７００−７０３（（１９８８））；Ｓｅｎｔｅｒ、など、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ化学、４：３−９（（１９９３））；Ｂａｔｔｅｌｌｉ、など、ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌ。Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３５：４２１−４２５（（１９９２））；ＰｉｅｔｅｒｓｚおよびＭｃＫｅｎｚｉｅ（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ）。再調査、１２９：５７−８０（（１９９２））；そして、Ｒｏｆｆｌｅｒ、など、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、４２：２０６２−２０６５（（１９９１）））。これらの技術が、様々な他のｓｐｅｃｉｉｆｃ細胞型のために用いられることができる。「秘密」および他の抗体のような車両は、リポソーム（結腸癌に脂質によって媒介される薬物ターゲティングを含む）細胞特定のリガンドによるＤＮＡのレセプタによって媒介されるターゲッティング、リンパ球に誘導された腫瘍ターゲッティングおよび生体内ネズミのグリオーマ細胞の非常に特定の治療的なレトロウイルス・ターゲッティングを活用させた。以下の参照は、腫瘍組織に特定のタンパク質を目標とするこの技術の使用の実施例である（Ｈｕｇｈｅｓなど、ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ、４９：６２１４−６２２０（（１９８９））；そして、ＬｉｔｚｉｎｇｅｒおよびＨｕａｎｇ、小Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ（１１０４：１７９−１８７）（１９９２））。一般に、レセプタは、エンドサイトーシス（いずれの構成型またはリガンド起因性も）の経路に関係している。これらのレセプタは、クラトリン−被覆陥入においてクラスター形成するか、クラトリン−被覆小胞を介して細胞に刺さるか、レセプタがソートされる酸性化されたエンドソーム、そうすると、細胞表面に対するいずれのリサイクルも貫通するか、細胞内に格納されるか、または、ライソソームにおいて劣化する。内部移行経路は、様々な機能（例えば養分吸収、活性タンパク質の除去、巨大分子のクリアランス、リガンドのウイルスおよび毒素、解離および低下の日和見主義的なエントリおよびレセプタ・レベルの規則）に間に合う。多くのレセプタは一つ以上の細胞内の経路をたどる。そして、細胞型、レセプタ集中、タイプのリガンド、リガンド結合価およびリガンド集中次第である。受容体依存性エンドサイトーシスの中で分子および細胞状の機構チェックする（Ｂｒｏｗｎ、そして、Ｇｒｅｅｎｅ、ＤＮＡ、そして、セルＢｉｏｌｏｇｙ  １０：６、３９９−４０９（１９９１））。
【０１１１】
宿主細胞ゲノムに組み込まれることになっている細胞に届けられるのが当り前である核酸は、統合シーケンスを装備する。特にウィルス・ベースのシステムが用いられるときに、これらのシーケンスはしばしばウィルス関連配列である。インター・グレーン動作システムがそうでもありえるこれらのウイルス性は配送（例えばリポソーム）の非核の酸ベースのシステムを使用して届けられることになっている核酸に加入させた。そして、核酸が配達において含有するように、システムは宿主ゲノムに組み込まれて来ることでありえる。
【０１１２】
宿主ゲノムへの統合の他の一般の技術は、例えば、宿主ゲノムを有する相同組み換えを促進するように設計されたシステムを含む。これらのシステムは概して、表されるために核酸の側面に位置しているシーケンスに依存する。そして、届けられた核酸に宿主ゲノムに組み込ませられて、ベクター核酸および目標核酸間の遺伝子組換えが起こる宿主細胞ゲノムの範囲内で標的配列を有する十分な相同を有する。ビボ／エキソビボにおいて、相同組み換えを促進するのに必要なこれらのシステムおよび方法は、当業者に知られている。
【０１１３】
ｃ）インビボ／エキソビボ
上述の通り、組成物は、薬学的に受け入れられるキャリアにおいて投与されることができて、生体内で細胞および／または公知技術の（例えば裸のＤＮＡの取り込み、リポソーム融合、遺伝子銃を経たＤＮＡの筋内注射、エンドサイトーシスなど）様々な機構によるエキソビボで主題に届けられることができる。
【０１１４】
生体外方法が使用される場合、細胞または組織は公知技術の標準プロトコルに従って取り出されることができて、本体の外側で維持されることができる。組成物は、いかなる遺伝子導入機構（例えばリン酸カルシウムによって媒介される遺伝子送出、エレクトロポレーション、マイクロインジェクションまたはプロテオリポソーム）を介しても、細胞にもたらされることができる。変換された細胞はそれから注入されることができる（例えば、薬学的に受け入れられるキャリアにおいて）または、ホモ局所的は細胞または組織タイプのための標準分析法につき主題の中へと戻して、移植できた。標準分析法は、主題に移植またはさまざまな細胞の注入で知られている。
【０１１５】
６．  発現系
細胞に届けられる核酸は、表現制御装置を装備するのが当り前である。例えば、ウィルスおよびレトロウイルス・システムの挿入された遺伝子は通常プロモータを含むおよび／または、役に立つエンハンサは所望の遺伝子産物の表示を制御する。プロモータは、通常、転写開始点に関して比較的固定された場所においてとき機能するＤＮＡの配列または配列である。プロモータは、ＲＮＡポリメラーゼおよび転写因子の基本的な相互作用のために必要な炉心構成要素を含んで、上流要素および反応要素を含むことができる。
【０１１６】
ａ）ウィルス・プロモータおよびエンハンサ
哺乳動物宿主細胞のベクターから転写を制御している好適なプロモータは、さまざまなソース（例えば例えばウイルスのゲノム）から得られることができる：ポリオーマ、Ｓｉｍｉａｎ  Ｖｉｒｕｓ  ４０（ＳＶ４０）アデノウィルス、レトロウィルス、Ｂ型肝炎ウィルスおよび最も好ましくはサイトメガロウィルス（或いは異形の哺乳類のプロモータ（例えばβａｃｔｉｉｉプロモータ）から）。ＳＶ４０ウイルスの初期のおよび遅いプロモータは、また、ＳＶ４０ウィルス複製開始点を含むＳＶ４０制限フラグメントとして、便利に得られる（Ｆｉｅｒｓなど、Ｎａｔｕｒｅ、２７３：１１３  （１９７８））。ヒトサイトメガロウイルスの最初期プロモータは、ＨｉｎｄｉπＥ制限フラグメントとして便利に得られる（Ｇｒｅｅｎｗａｙ、ＰＪ．など、Ｇｅｎｅ  １８：３５５−３６０  （１９８２））。もちろん、宿主細胞または近縁種からのもプロモータは、本願明細書において役立つ。エンハンサは、一般に、転写開始点から一定距離で機能しなくて、いずれの５フィート（Ｌａｉｍｉｎｓ、Ｌ．など、会報Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．７８：９９３の（１９８１））または３フィート転写単位（Ｌｕｓｋｙ、Ｍ．Ｌ．など、ＭｏＩ．ＣｅｌｌＢｉｏ．３：１１０８の（１９８３））でもありえる一連のＤＮＡに関連する。さらにまた、エンハンサが、イントロンの中であることができる（Ｂａｎｅｒｊｉ（Ｊ．Ｌ．など）Ｃｅｌｌ３３：７２９の（１９８３））暗号配列自体の中でと同様に（Ｏｓｂｏｒｎｅ、Ｔ．Ｆ．など、ＭｏＩ。細胞Ｂｉｏ．４：１２９３  （１９８４））。それらは通常長さの１０〜３００の塩基対である、そして、それらはシスにおいて機能する。エンハンサは、転写を近くのプロモータから増やすように機能する。エンハンサも、しばしば、転写の調節の媒介となる反応要素を含む。プロモータは、転写の調節の媒介となる反応要素を含むこともできる。エンハンサは、しばしば遺伝子の発現調節を決定する。多くのエンハンサー配列が現在哺乳類の遺伝子（グロビン、エラスターゼ、アルブミン、アルファ−フェトプロテインおよびインシュリン）から公知であると共に、概して、１は一般の表現のための真核細胞ウイルスからエンハンサを使用する。好適な実施例は、複製起点（塩基対１００−２７０）の後期側上のＳＶ４０エンハンサ、サイトメガロウイルス初期プロモーターエンハンサ、複製起点の後期側上のポリオーマエンハンサおよびアデノウィルス・エンハンサである。
【０１１７】
プロモータおよび／またはエンハンサは、それらの機能を起こす光または特定の化学イベントによって特に活性化されることもできる。システムは、試薬（例えばテトラサイクリンおよびデキサメサゾン）によって調整されることができる。照射（例えばガンマ照射またはアルキル化化学療法剤）への露出によってウィルス・ベクター遺伝子形質発現を強化する方法も、ある。
【０１１８】
特定の実施例において、プロモータおよび／またはエンハンサ領域は、転写される転写単位の領域の表示を最大にするために、構成型プロモータおよび／またはエンハンサとして働くことができる。特定の構造物においてプロモータおよび／またはエンハンサ領域がすべての真核細胞タイプにおいて作動中であることそれが特定の時刻に１種類の特定の細胞において表されるだけの場合であっても。このタイプの好適なプロモータは、ＣＭＶプロモータ（６５０のベース）である。他の好適なプロモータは、ＳＶ４０プロモータ、サイトメガロウィルス（完全長プロモータ）およびレトロウイルス・ベクターＬＴＦである。
【０１１９】
真核生物宿主細胞（イースト、菌類、昆虫、設備、動物、人間または有核細胞）において使用する発現ベクターは、メッセンジャーＲＮＡ表現に影響を及ぼすことができる転写の終了のために必要なシーケンスを含むこともできる。これらの地方は、メッセンジャーＲＮＡをコード化している組織因子タンパク質の非翻訳部分のポリアデニル化部分として転写される。３フィート非翻訳地方も、転写終結部位を含む。転写単位もポリアデニル化領域を含むことが好ましい。この領域の１つの利益は、それが転写された装置がメッセンジャーＲＮＡのように処理されて、輸送されるという可能性を増加させるということである。識別および表現構造物のポリアデニル化信号を使用する能力は、確立されている。相同のポリアデニル化信号が導入遺伝子構造物において使われることが好ましい。特定の転写単位において、ポリアデニル化領域は、ポリアデニル化信号前半Ｓ  Ｖ４０に由来して、約４００のベースから成る。転写された装置が単独で、または、シーケンスが表現を改善する上記と結合して他の標準シーケンス、または、安定性の、構造物を含むことは、好まれもする。
【０１２０】
特定の実施例において、プロモータは、構成型プロモータである。これは、他の要素の追加がない場合転写制御が生じるいかなるプロモータでもありえる。この種のプロモータの例は、ＣＭＶプロモータおよびβアクチン・プロモータ（本願明細書においてジ苦しめられる他と同様に）である。特定の実施例において、プロモータは、プロモータの一つ以上の異なるタイプの融合から成ることができる。例えば、ＣＭＶプロモータおよびβアクチン・プロモータの制御領域は周知で、理解した、実施例はいずれがあるかについて本願明細書において明らかにした。例えば、これらのプロモータの部分は、生産物に融着されることができるＣＭＶ−βアクチン融合プロモータ（例えば配列番号ものに示されるもの）１８．この種のプロモータがＣＭＶ成分およびβアクチン成分を有するものと理解される。これらの部品は、それぞれにプロモータとして機能することができて、このように、βアクチン・プロモータおよびＣＭＶプロモータとそれ自身考えられる。プロモータは、プロモーター作用が生じる周知のプロモータのいかなる部分でもありえる。ＣＭＶおよびＢｅｔａ  Ａｃｔｉｎプロモータを含む多くのプロモータが理解される機能的な領域を有することが、そして、これらがβアクチン・プロモータまたはＣＭＶプロモータとして使われることができることが、周知である。さらにまた、これらの領域は、決定されることができる。例えば、配列番号  １５−３３は、多くのＣＭＶプロモータ、βアクチン・プロモータおよび融合プロモータを示す。これらのプロモータは比較されることができる、そして、例えば、本願明細書において記載されているにつれて、機能地域は正確に概説した。さらにまた、これらのシーケンスの各々は、プロモーター領域を開示された核酸に提供するために、いかなる組合せにおいても、それぞれに、または、一緒に機能することができる。
【０１２１】
プロモータは、非構成型プロモータ（例えば細胞特定のプロモータ）でもありえる。これらは、現像またはステージまたは１種類の特定の細胞（例えば心臓細胞であるか、神経細胞または骨細胞）の特定の時刻にオンにされるプロモータである。特定のプロモータがそうである細胞、神経エノラーゼｓｐｅｃｉｆｃプロモータ（ＮＳＥ）プロコラーゲン・プロモータＣＯＬＬ１Ａ１の若干の実施例（配列番号３５）そして、ＣＯＬ２Ａ１（配列番号３６）ＣＤｌＩｂプロモータ（特定のＰＢＭＣ−ｍｉｃｒｏｇｌｉａ／ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ／ｍｏｎｏｃｙｔｅ）（配列番号６９）そして、神経膠の特定の神経膠の筋原線維の酸タンパク質（ＧＦＡＰ）プロモータ（配列番号３４）。
【０１２２】
組換え型システムが組織特異的方法で表されることができるものと理解される。組織特異的発現が組織の存在のため発生することができるものと理解される−具体的なプロモータ。概して、プロモータがそれが特有である組織に存在することによって作動中になるときに、組織特異プロモータの制御下のタンパク質は転写される。従って、すべての細胞は、グローバルな表現のない特定の遺伝子のために符号化することができる。このように、標識タンパク質は、結果を難しくすることができる他の近くの組織の表現のない特定の組織または表現がホストに有害である組織のタンパク質の発現に存在することを示すことができる。方法が、開示する。そこにおいて、レコンビナーゼは、ＥＤＡプロモータ、胸部組織に特有のプロモータ、例えばＷＡＰプロモータ、卵巣の組織に特有のプロモータ、例えばＡＣＴＢプロモータまたは骨組織（例えばオステオカルシン）に特有のプロモータの管理下である。いかなる組織特定のプロモータも、用いられることができる。前立腺（精巣）に固有なプロモータ、そして、神経開示もする。若干の組織特異プロモータの例は限定されるものではないが、ＭＵＣｌ、ＥＥＡ、ＡＣＴＢ、ＷＡＰ、ｂＨＬＨ−ＥＣ２、ＨＯＸＡ−Ｉ、Ａｌｐｈａ−フェトプロテイン（ＡＦＰ）オプシン、ＣＲｌ／２、Ｆｃ−γ−Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  １（Ｆｃ−γ−Ｒｌ）ＭＭＴＶＤ−ＬＴＲ、ヒトインスリン促進、Ｐｄｈａ−２を包含する。例えば、ＡＦＰプロモータの使用は、肝臓のための特異性を作成する。他の実施例、ＨＯＸＡ−Ｉはニューロンの組織特異的プロモータである、そして、このように、ＨＯＸＡ−１の制御中で表されるタンパク質はニューロンの組織において表されるだけである。ｗｗｗ．ｐｕｂｍｅｄ．ｇｏｖで、これらおよび他の組織特異プロモータのためのシーケンスは、従来技術において周知で、例えば、Ｇｅｎｂａｎｋにおいて見つかる。
【０１２３】
ｂ）マーカー
ウィルス・ベクターは、標識製品をコード化している核酸一次構造を含むことができる。この標識製品は遺伝子が細胞に届けられたかどうか決定するために用いる、そして、分配される一度は表されている。好適なマーカー遺伝子はＥ．ＣｏＩｉ  ｌａｃＺ遺伝子である。そして、それはβ−ガラクトシダーゼおよび緑色蛍光タンパク質をコード化する。
【０１２４】
若干の実施例において、標識は、選べる標識でありえる。哺乳動物細胞のための適切な選択マーカの実施例は、ジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）チミジンキナーゼ、ネオマイシン、ネオマイシン類似体Ｇ４１８、ｈｙｄｒｏｍｙｃｉｎおよびピューロマイシンである。この種の選択マーカが哺乳類の宿主細胞にうまく変えられるときに、選択圧の下に配置される場合、変わる哺乳類の宿主細胞は生存することができる。選択的な制度の２つの広く使われている異なったカテゴリが、ある。第１のカテゴリは、細胞の代謝および補足培地から独立しているようになる能力が欠如している突然変異細胞線の使用に基づく。２つの実施例は、以下の通りである：ＣＨＯ  ＤＨＦＲ−細胞およびマウスＬＴＫ−細胞。これらの細胞は、チミジンまたはヒポキサンチンのような栄養分の追加なしで成長する能力が欠如している。これらの細胞が完全なヌクレオチド合成経路のために必要な特定の遺伝子を欠いているので、失ったヌクレオチドが補足培地において設けられていない限り、それらは生存することができない。媒体を補充することの変形例は完全なＤＨＦＲまたはＴＫ遺伝子をそれぞれの遺伝子を欠いている細胞にもたらすことである。このように、それらの成長要求性を変える。ＤＨＦＲまたはＴＫ遺伝子によって変わらなかった別体セルは、非補足培地の生存ができない。
【０１２５】
第２類は、いかなる細胞型においても使用する抜取方式に関連して、突然変異細胞線の使用を必要としない有力な適任者である。これらの方式は、概して、宿主細胞の成長を抑えるために、薬を使用する。新規な遺伝子を有するそれらの細胞は、タンパク質を運搬している薬剤耐性を表して、選択を生き残る。この種の有力な適任者の実施例は、薬ネオマイシンを使用する、（Ｓｏｕｔｈ  Ｐ．およびＢｅｒｇ、Ｐ．Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ａｐｐｌ．Ｇｅｎｅｔ．１：３２７の（１９８２））ミコフェノール酸、（Ｍｕｌｌｉｇａｎ、Ｒ．Ｃ．およびＢｅｒｇ（Ｐ．Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２０９）：１４２２の（１９８０））またはハイグロマイシン、（Ｓｕｇｄｅｎ、Ｂ．など、ＭｏＩ．細胞．生物学５：４１０−４１３  （１９８５））。３つの実施例は、それぞれ、適当な薬Ｇ４１８またはネオマイシン（ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）に対する抵抗、ｘｇｐｔ（ミコフェノール酸）またはハイグロマイシンを伝達するために、真核生物制御中で細菌遺伝子を使用する。他は、ネオマイシン類似体Ｇ４１８およびｐｕｒａｍｙｃｉｎを含む。
【０１２６】
ｃ）転写後調節エレメント
開示されたベクターは、転写後調節エレメントを含むこともできる。転写後調節エレメントは、メッセンジャーＲＮＡ安定性を強化することができるかまたは転写されたメッセンジャーＲＮＡの翻訳を強化することができる。典型的な転写後調節配列は、ウッドチャック肝炎ウィルスから分離されるＷＰＲＥシーケンスである。［Ｚｕｆｆｅｒｅｙ  Ｒ、など、Ｊ  Ｖｉｒｏｌ；７３：２８８６−９２  （１９９９）］。転写後調節エレメントは３フィートおよび外因の遺伝子に対する５フィート配置されることができる、しかし、それらが外因の遺伝子に３フィート配置されることが好ましい。
【０１２７】
ｄ）トランスダクション効率要素
トランスダクション効率要素は、ベクターの包装およびトランスダクションを強化するシーケンスである。これらの要素は、ポリ・プリン・シーケンスを装備するのが当り前である。トランスダクション効率要素の実施例は、中心ポリ・プリン路（ｐｐｔ）を含むｐｐｔ−ｃｔｓシーケンスおよびＨＴＶ−Ｉ  ｐＳＧ３分子クローンからの中央端末サイト（ｃｔｓ）である（配列番号であるＨＩＶ−Ｉ  ｐＳＧ３クローンの中で１塩基対４３２７〜４４８３）。
【０１２８】
ｅ）３フィート非翻訳地方
真核生物宿主細胞（イースト、菌類、昆虫、設備、動物、人間または有核細胞）において使用する発現ベクターは、メッセンジャーＲＮＡ表現に影響を及ぼすことができる転写の終了のために必要なシーケンスを含むこともできる。これらの３フィート非翻訳地方は、外因の遺伝子をコード化しているメッセンジャーＲＮＡの非翻訳部分のポリアデニル化部分として転写される。３フィート非翻訳地方も、転写終結部位を含む。転写単位も、ポリアデニル化領域を含むことができる。この領域の１つの利益は、それが転写された装置がメッセンジャーＲＮＡのように処理されて、輸送されるという可能性を増加させるということである。識別および表現構造物のポリアデニル化信号を使用する能力は、確立されている。相同のポリアデニル化信号が、導入遺伝子構造物において使われることができる。転写単位の実施例において、ポリアデニル化領域は、ポリアデニル化信号前半ＳＶ４０に由来して、約４００のベースから成る。転写された装置は、単独で、または、シーケンスが表現を改善する上記と結合する他の標準シーケンスまたは安定性を含むことができる、構造物。
【０１２９】
７．  ペプチド
ａ）タンパク質異型
ポリペチドをコード化する核酸から成る構造物は、本願明細書において開示される。本願明細書において述べられるように、これらのポリペチド（例えばＩＬ−Ｉｒａ）の各々の多数の異型があることができて、それは、考察されて本願明細書においてある。加えて、開示される周知の機能蛋白質に、ＩＬ−Ｉｒａのような、また、開示されたメタうなずきおよび組成物において機能するこれらのタンパク質の誘導体も、ある。タンパク質異型および誘導体は当業者に周知である、そして、アミノ酸配列変更態様は含むことができる。例えば、アミノ酸配列変更態様は、概して３つのクラスの一つ以上に落ちる：代用であるか、挿入性であるか、欠失の異型。挿入は、一つであるか複数のアミノ酸残基の内部シーケンス挿入と同様にアミノおよび／またはＣ末端融合を含む。例えば、挿入は、通常、アミノまたはＣ末端融合のおよそ１〜４つの残基程度それらより小さい挿入である。免疫原の融合タンパク誘導体（例えば実施例に記載されているそれら）は、生体外で架橋させることによって標的配列に免疫原性を与えるために十分に大きいポリペチドを溶解させることによって作られるかまたは組換え細胞培養物によって融合をコード化しているＤＮＡによって変わる。削除は、タンパク質配列から一つ以上のアミノ酸残基の除去によって特徴づけられる。概して、２から６までだけについて、残基は、タンパク質分子の中でいかなる唯一のサイトでも削除される。これらの異型は通常、タンパク質をコード化しているＤＮＡのヌクレオチドのサイト固有突然変異生成によって準備される。それによって、異型をコード化しているＤＮＡを生産する、そして。その後で、組換え細胞培養物のＤＮＡを表す。実施例Ｍｌ  ３プライマ突然変異生成およびＰＣＲ突然変異生成のために、周知のシーケンスを有するＤＮＡの予め定められたサイトで置換突然変異をもたらすことの技術は、周知である。アミノ酸置換は、概して一つの残基であるが、すぐに多くの異なる場所で発生することができる；挿入が、通常およそ１からの１０のアミノ酸残基に対するについて程度ある；そして、削除は、１から３０の残基にについて変動する。削除または挿入は、隣接対（すなわち２つの残基の削除または２つの残基の挿入）において、好ましくはなされる。置換、削除、挿入またはいかなるそれらの組み合わせも、最終的な構造物に到達するために化合することができる。突然変異は、解読枠からシーケンスを配置してはならなくて、好ましくは、第２のメッセンジャーＲＮＡ構造を生産することができる補完的な地方をつくらない。代用の異型は少なくとも一つの残基が取り除かれたそれらである、そして、異なる残基がその位置に嵌入される。この種の置換は、一般に以下の表１および２に従ってなされて、保存的置換と呼ばれる。
【０１３０】
【表１−１】
2009501128.tif 000003
【０１３１】
【表１−２】
2009501128.tif 000004
【０１３２】
【表２】
2009501128.tif 000005
機能または免疫学的なアイデンティティの相当な変化は、すなわち、表２のそれらより保守的でないセレクティング置換によってなされる。そして、より（ａ）を維持することの置換におけるポリペチド・バックボーンの構造が例えば標的部位の分子または側の大半（ｃ）のシートであるからせんのコンフォメーション、負担（ｂ）または疎水性として鎖をつくるというそれらの趣旨の著しく異なる残基を選択する。一般に、タンパク質所有物において最も大きな変化をもたらすと思われる置換はそれらであるそれ（ａ）親水性残基（例えばセリルまたはスレオニル）は恐怖病の残基（例えばロイシル、イソロイシル、フェニルアラニル、バリルまたはアラニル）間で（またはそばに）置換される；システインまたはプロリンは、他のいかなる残基（またはそばに）とも置換される（ｂ）；電気陽性の側鎖（例えばリジル、アルギニルまたはヒスチジル）を有する残基は、電気的陰性残基（またはそばに）（例えばグルタミルまたはアスパルチル）と置換される（ｃ）；または、大きな側鎖（例えばフェニルアラニン）を有する残基は、硫酸化および／またはグリコシル化の場所の数を増加させることによって、この場合、側鎖（例えばグリシン）（ｅ）を有していない（またはそばに）ものと置換される（ｄ）。１２２．  例えば、生物学上および／または化学的に類似しているもう一方を有する１つのアミノ酸残基の置換は、保存的置換として当業者に公知である。例えば、保存的置換は、もう一方のための１つの恐怖病の残基またはもう一方のための１つの極地の残基を交換している。置換は、組合せ（例えばＧＩｙ、Ａｌａ）を含む；ＶａＩ、Ｈｅ、Ｌｅｕ；Ａｓｐ、ＧＩｕ；Ａｓｎ、ＧＩｎ；Ｓｅｒ、Ｔｈｒ；Ｌｙｓ、Ａｒｇ；そして、Ｐｈｅ、チロシン基。各明確に開示されたシーケンスのこの種の保守的に置換されたバリエーションは、本願明細書において設けられているモザイク・ポリペチドの中で含まれる。
【０１３３】
代用であるか欠失の突然変異生成は、Ｎ−グリコシル化（Ａｓｎ−Ｘ−Ｔｈｒ／Ｓｅｒ）またはＯ−グリコシル化（ＳｅｒまたはＴｈｒ）の場所を嵌入するために使用されることができる。システインまたは他の不安定な残基のも削除は、望ましくてもよい。削除または潜在的プロテオリシス・サイト（例えばＡｒｇ）のうち置換塩基性残基の１つを削除するかまたはグルタミニルまたはヒスチジル残基によって１つを置換することによって、例えば完成している。
【０１３４】
特定の翻訳後誘導体化は、表されたポリペチド上の組換え宿主細胞の動作の結果である。グルタミニルおよびアスパラギニル残基は、しばしば、対応するグルタミルおよびａｓｐａｒｙｌ残基に非アミド化される翻訳後である。あるいは、これらの残基は、緩酸性状況の下で非アミド化される。他の後翻訳変更態様は、プロリンおよびリシンのヒドロキシル化、セリルまたはトレオニン残基の水酸基のリン酸化、リシンのｏ−アミノ基のメチル化、アルギニンおよびヒスチジン側鎖（Ｔ．Ｅ．Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ：構造、そして、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ、Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ＆  Ｃｏ．Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ  ｐｐ  ７９−８６［１９８３］）Ｎ末端アミンの中でアセチル化、そして、若干の例（Ｃ末端のカルボキシルのアミド化）を含む。
【０１３５】
本願明細書において開示されたタンパク質の異型および誘導体を定める一つの方法が特定の周知のシーケンスに相同／アイデンティティに関して異型および誘導体を定めることによってあるものと理解される。例えば、配列番号：５は、ＩＬ−ｌｒａおよび配列番号の特定のシーケンスを記載する：９は、ＩＬ−１Ｒ２タンパク質の特定の配列を記載する。これらの異型が特に開示する、そして、本願明細書において他のタンパク質は開示した。そして、少なくともそうした、定まったシーケンスに対する７０％または７５％または８０％または８５％または９０％または９５％の相同。当業者は、容易に、２つのタンパク質の相同を決定する方法を理解する。例えば、相同がその最高レベルにあるように、相同は２つのシーケンスを整列配置した後に算出されることができる。
【０１３６】
算出相同の他の方法は、発表されたアルゴリズムによって実行されることができる。比較のためのシーケンスの最適配列は、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ  Ａｄｖのローカル相同アルゴリズムによって実行されることができる。Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２の（１９８１）（ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈ（Ｊ．ＭｏＬ  Ｂｉｏｌ．４８）の相同配列アルゴリズムによる）：４４３の（１９７０）（ＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ（会報Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８５）の類似性方法の検索による）：２４４４の（１９８８）（これらのアルゴリズム（ウィスコンシンＧｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ、Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ、５７５人のＳｃｉｅｎｃｅ博士、Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＴのＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡおよびＴＦＡＳＴＡ）のコンピュータ化された実施態様による、または、点検による）。
【０１３７】
相同の同一形式は、例えばＺｕｋｅｒ（Ｍ．科学２４４）において開示されるアルゴリズムによって、核酸のために得られることができる：４８−５２、１９８９、Ｊａｅｇｅｒなど会報Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：７７０６−７７１０、１９８９、Ｊａｅｇｅｒなど方法Ｅｎｚｙｍｏｌ．１８３：２８１−３０６（少なくとも核酸配列に関連した材料のための参照によって組み込まれて本願明細書においてある１９８９）。
【０１３８】
保守的な突然変異および相同の説明が一緒に、いかなる組合せ（例えば異型が保守的な突然変異である特定のシーケンスに少なくとも７０％の相同を有する実施例）にも組み込まれることができるものと理解される。
【０１３９】
この仕様がさまざまなタンパク質およびタンパク質配列について述べるように、それらのタンパク質配列をコード化することができる核酸も開示されるものと理解される。これは変性核酸を含んで特定のタンパク質配列（すなわちすべての核酸と同様に１つの特定のタンパク質配列をコード化するシーケンスを有するすべての核酸）に関連したすべての変性シーケンスを含む。そして、タンパク質配列の開示された異型および誘導体をコード化する。このように、各特定の核酸一次構造が本願明細書において書かれることができないと共に、どのシーケンスも事実開示されて、開示されたタンパク質配列で本願明細書において記載されているものと理解される。アミノ酸配列がどんな特定のＤＮＡの塩基配列が有機体の範囲内でそのタンパク質をコード化するかについて指し示さないと共に、開示されたタンパク質の特定の異型が本願明細書において開示されそして、記載される本願明細書で、そのタンパク質をそのタンパク質が起こる特定の有機体にコード化する周知の核酸一次構造も公知であるとも理解される。
【０１４０】
開示された組成物に組み込まれることができる多数のアミノ酸およびペプチド類似体があるものと理解される。例えば、表１および表２に示される異なる機能的な置換基、それからアミノ酸を有する多数のＤアミノ酸またはアミノ酸が、ある。ペプチド類似体の立体異性体と同様に、自然に生じるペプチドの逆の立体異性体は、開示される。これらのアミノ酸は運搬ＲＮＡ分子に、例えば、アンバーコードンを利用する優れたおよび工学遺伝子の構造物のアミノ酸を充填することによってポリペプチド鎖に直ちに組み込まれることができる。そして、アナログのアミノ酸をサイト固有方法のペプチド鎖に嵌入する、（Ｔｈｏｒｓｏｎなど、Ｍｏｌｅｃの手法．生物学７７：４３−７３の（１９９１）Ｚｏｌｌｅｒ、ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙのＣｕｒｒｅｎｔオピニオン、３：３４８−３５４の（１９９２）；Ｉｂｂａ、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ及びＧｅｎｅｔｉｃ  Ｅｎｇｉｎｅｒｒｉｎｇ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３：１９７−２１６の（１９９５）Ｃａｈｉｌｌなど、ＴＢＳ、１４の（１０）：４００−４０３  （１９８９）；Ｂｅｎｎｅｒ、ＴＩＢ  Ｔｅｃｈ、１２：１５８−１６３の（１９９４）；ＩｂｂａおよびＨｅｎｎｅｃｋｅ、Ｂｉｏ／技術、１２：６７８−６８２の（１９９４）本願明細書においていずれが少なくともアミノ酸アナログに関連した材料間の参照によって全部組み込まれる）。
【０１４１】
ペプチドに似ている分子は、生じることができる、しかし、いずれが、自然なペプチド結合を介して接続されない。例えば、アミノ酸のための結合またはアミノ酸アナログは、ＣＨ２ＮＨ−を含むことができる−ＣＨ２Ｓ−−ＣＨ２−ＣＨ２−−ＣＨ＝ＣＨ−（シスおよびトランス）−ＣＯＣＨ２−−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２−そして−ＣＨＨ２ＳＯ−（これらその他は、Ｓｐａｔｏｌａ、Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄｓ、ＰｅｐｔｉｄｅｓおよびＰｒｏｔｅｉｎｓのＣｈｅｍｉｓｔｒｙおよびＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙのＡ．Ｆ．Ｂ．Ｗｅｉｎｓｔｅｉｎ、編集、Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２６７ページ（１９８３）で見つかることができる；Ｓｐａｔｏｌａ、Ａ．Ｆ．Ｖｅｇａ  Ｄａｔａ（１９８３  ３月）第１巻、発行３、Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｂａｃｋｂｏｎｅ  Ｍｏｄｉｆｉｃａｔｉｏｎｓ（一般の再調査）；Ｍｏｒｌｅｙ、傾向Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ（１９８０）ｐｐ．４６３−４６８；Ｈｕｄｓｏｎ、Ｄ．など、Ｉｎｔ  Ｊ  Ｐｅｐｔ  Ｐｒｏｔ  Ｒｅｓ  １４：１７７−１８５の（１９７９）（−ＣＨ２ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２）；ＳｐａｔｏｌａなどＬｉｆｅ  Ｓｃｉ  ３８：１２４３−１２４９の（１９８６）（−ＣＨ  Ｈ２Ｓ）；Ｈａｎｎ  Ｊ．化学Ｓｏｃ  Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．１３０７−３１４の（１９８２）（−ＣＨ−ＣＨ−シスおよびトランス）；ＡｌｍｑｕｉｓｔなどＪ．Ｍｅｄ．化学２３：１３９２−１３９８の（１９８０）（−ＣＯＣＨ２）；２３：２５３３（１９８２）Ｊｅｎｎｉｎｇｓ−ＷｈｉｔｅなどＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ（−ＣＯＣＨ２）；Ｓｚｅｌｋｅなどヨーロッパ人Ａｐｐｌｎ、ＥＰ  ４５６６５  ＣＡ（１９８２）：９７：３９４０５（１９８２）（−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２）；ＨｏｌｌａｄａｙなどＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ．Ｌｅｔｔ  ２４：４４０１−４４０４の（１９８３）（−Ｃ（ＯＨ）ＣＨ２）；そして、Ｈｒａｂｙ  Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ  ３１：１８９−１９９の（１９８２）（−ＣＨ２−Ｓ）；各々いずれが本願明細書に引用したものとする。非ペプチド−ＣＨ２ＮＨ結合が特に好適である。ペプチド類似体が結合原子（例えばｂ−アラニン、ｇ−アミノ酪酸、など）との間に一つ以上の原子を有することができるものと理解される。
【０１４２】
アミノ酸アナログおよび類似体およびペプチド類似体は、しばしば強化されたか望ましい特性（例えばより経済的な製造、より大きな化学的安定性、強化された薬理学的性質（半減期、吸収、効力、有効性、その他）変えられた特異性（例えば生物学的活性度の広域抗菌スペクトル）還元した抗原性、その他）を有する。
【０１４３】
Ｄ−アミノ酸はより安定ペプチドを生成するために用いることができる。−その理由は、次のことにある。Ｄアミノ酸はペプチダーゼその他によって認識されない。同一形式（例えばＬ−リシンの代わりにＤ−リシン）のＤ−アミノ酸を有する共通配列の一つ以上のアミノ酸の組織的置換は、より安定ペプチドを生成するために用いることができる。システイン残基は、環化するかまたは一緒に二個以上のペプチドを取り付けるために用いることができる。これは、特定のコンフォメーションにペプチドを拘束するために有益でありえる。（ＲｉｚｏおよびＧｉｅｒａｓｃｈ  Ａｎｎ．６１：３８７（１９９２）Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．（ここにて組み込まれる））。
【０１４４】
８．  製薬製品の薬剤担体／配送
本願明細書において開示される組成物は、薬学的に受け入れられるキャリアにおいて生体内に投与されることもできる。「薬学的に受け入れられる」によって意味する、材料はそれほど生物学上、または、別に望ましくなくなくて、すなわち、でなくて、材料は、核酸またはベクターとともに、いかなる望ましくない生体影響も引き起こすことのない主題に与えられることができてまたはそれがある医薬品組成物の他の構成要素のいずれかを有する有害な方法で相互に作用することが、含有した。キャリアは当然、主成分のいかなる低下も最小化して、主題のいかなる逆副作用も最小化するように選択される。そして、そのことは当業者にとって周知である。
【０１４５】
組成物は、腹こう内投与によって、非経口的に（例えば、静注で）筋肉内投与によって経口投与されることができる経皮的、体外で、局所的等吸入薬による局在鼻腔内の管理または管理を含む。ここで使用しているように、「局在鼻腔内の管理」は、鼻および鼻孔の一方または両方を通る鼻の通路に組成物の配送を意味して、吹付け機構または液滴メカニズムによって、または、核酸またはベクターのエアロゾール適用で配達から成ることができる。吸入薬による組成物の管理は、吹付けまたは液滴メカニズムによって配達を経て鼻または口によってありえる。配達が、直接挿管法を介して呼吸器（例えば肺）のいかなる領域にもあることもできる。必要な組成物の正確な量は、主題、治療されているアレルギー性障害のひどさ、特定の核酸または使用する媒体動物の種、年齢、重量および全身状態次第であって、その投与様式などを従属させるために、主題から変化する。このように、すべての構成のための正確な量を特定することは、可能でない。しかしながら、適当な量は、従来技術において、教示を本願明細書において与えられるルーチン試験だけを使用して、当業者で測定されることができる。
【０１４６】
使われる場合、構成の非経口投与は通常、注入によって特徴づけられる。液溶体またはサスペンション（サスペンションの注入より前の液体の溶解に適している確実な形）として、または、エマルジョン類として、注射剤は、従来の形で準備されることができる。恒常的な投与量が維持されるように、非経口投与のためのより最近修正されたアプローチは遅い解放または持効性システムの使用を必要とする。米国特許番号３，６１０，７９５（本願明細書において引用したものとする）参照。
【０１４７】
材料は、溶液（中止（例えば、微小粒子、リポソームまたは細胞に組み込まれる））においてありえる。これらは、抗体、レセプタまたは受容体リガンドを介して特定の細胞型に目標とされることができる。以下の参照は、腫瘍組織に特定のタンパク質を目標とするこの技術の使用の実施例である（Ｓｅｎｔｅｒ、など、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ化学、２：４４７−４５１（（１９９１））；Ｂａｇｓｈａｗｅ、Ｋ．Ｄ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、６０：２７５−２８１（（１９８９））；Ｂａｇｓｈａｗｅ、など、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、５８：７００−７０３（（１９８８））；Ｓｅｎｔｅｒ、など、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ化学、４：３−９（（１９９３））；Ｂａｔｔｅｌｌｉ、など、ＣａｎｃｅｒＩｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．３５：４２１−４２５（（１９９２））；ＰｉｅｔｅｒｓｚおよびＭｃＫｅｎｚｉｅ（Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇ）．再調査、１２９：５７−８０（（１９９２））；そして、Ｒｏｆｆｌｅｒ、など、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ、４２：２０６２−２０６５（（１９９１）））。
【０１４８】
「秘密」および他の抗体のような車両は、リポソーム（結腸癌に脂質によって媒介される薬物ターゲティングを含む）細胞特定のリガンドによるＤＮＡのレセプタによって媒介されるターゲッティング、リンパ球に誘導された腫瘍ターゲッティングおよび生体内ネズミのグリオーマ細胞の非常に特定の治療的なレトロウイルス・ターゲッティングを活用させた。以下の参照は、腫瘍組織に特定のタンパク質を目標とするこの技術の使用の実施例である（Ｈｕｇｈｅｓなど、ＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ、４９：６２１４−６２２０、（１９８９）；そして、ＬｉｔｚｉｎｇｅｒおよびＨｕａｎｇ、小Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ（１１０４：１７９−１８７）（１９９２））。一般に、レセプタは、エンドサイトーシス（いずれの構成型またはリガンド起因性も）の経路に関係している。これらのレセプタは、クラトリン−被覆陥入においてクラスター形成するか、クラトリン−被覆小胞を介して細胞に刺さるか、レセプタがソートされる酸性化されたエンドソーム、そうすると、細胞表面に対するいずれのリサイクルも貫通するか、細胞内に格納されるか、または、ライソソームにおいて劣化する。内部移行経路は、様々な機能（例えば養分吸収、活性タンパク質の除去、巨大分子のクリアランス、リガンドのウイルスおよび毒素、解離および低下の日和見主義的なエントリおよびレセプタ・レベルの規則）に間に合う。多くのレセプタは一つ以上の細胞内の経路をたどる。そして、細胞型、レセプタ集中、タイプのリガンド、リガンド結合価およびリガンド集中次第である。受容体依存性エンドサイトーシスの中で分子および細胞状の機構チェックする（Ｂｒｏｗｎ、そして、Ｇｒｅｅｎｅ、ＤＮＡ、そして、セルＢｉｏｌｏｇｙ  １０：６、３９９−４０９（１９９１））。
【０１４９】
ａ）薬学的に受け入れられるキャリア
組成物が、抗体を含んで、薬学的に受け入れられるキャリアと組み合わせて治療的に用いられることができる。
【０１５０】
適切なキャリアおよびそれらの製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎに記載されている：薬局（第１９の編集）編集Ａ．Ｒ．のＳｃｉｅｎｃｅおよび実践Ｇｅｎｎａｒｏ、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ社、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ  １９９５。概して、薬学的に受け入れられる塩の適当な量が、製剤を均等緊張にするために、製剤において使われる。薬学的に受け入れられるキャリアの例には、制限されるわけではないが、食塩水、リンゲル液およびブドウ糖溶液が含まれる。溶液のｐＨは、好ましくは約５つの乃至約８から、そして、より好ましくは、約７つの乃至約７．５からある。更なるキャリアは、例えば、抗体（マトリックスが造形品の形である）を含んでいる固体の疎水性ポリマーの半透性の母体のような持効性薬剤を含むフィルム、リポソームまたは微小粒子。例えば、特定のキャリアが投与経路および管理されている構成の集中によって、より好ましくてもよいことは、それらの当業者にとって明らかである。
【０１５１】
薬剤担体は、当業者に公知である。これらは最も概して人間に対する薬の投与のための標準キャリアである。そして、溶液（例えば生理的ｐＨの無菌水、食塩水および緩衝された溶液）を含む。組成物は、筋注で、または、皮下に投与されることができる。他の化合物は、当業者によって使われる標準手順に従って管理される。
【０１５２】
医薬品組成物は、選択の余地の分子に加えて、キャリア、増粘剤、希釈液、バッファ、防腐剤、表面活性剤および同類を含むことができる。医薬品組成物は、一つ以上の主成分（例えば抗菌因子、抗炎症薬、麻酔薬、など）を含むこともできる。
【０１５３】
医薬品組成物は、局所であるか全身治療が要求されるかどうかに依存している多くの方法で、そして、既治療である領域上に投与されることができる。管理は、経口的に、吸入によって、または、非経口的に、例えば点滴静注（皮下であるか、腹腔内であるか、筋肉内の注入）による局所的（眼科学的に、経膣的に、直腸に、鼻腔内に含むこと）でありえる。開示された抗体は、静注で、腹膜内に、筋注で、皮下に、内部空腔、または、経皮的を施されることができる。
【０１５４】
非経口投与に対する準備は、滅菌水性であるか非水溶溶液、サスペンションおよびエマルジョン類を含む。非水性溶媒の例は、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、植物油、および注射用有機エステルである。水性担体は食塩および緩衝剤を含む水、アルコール／水溶液、懸濁液または乳濁液などである。非経口的車両は、塩化ナトリウム溶液、リンゲルのブドウ糖、ブドウ糖および塩化ナトリウムを含むか、リンゲルのものを泌乳したか、または、油を固定した。静脈内溶媒は、流体および栄養を含む補液、電解質補充薬（例えばリンゲルのブドウ糖に基づくそれら）などを含む。防腐剤および他の添加物は、現在（例えば抗微生物性、抗酸化剤、キレート剤および不活性ガスなど）でもありえる。
【０１５５】
局所投与用製剤は、軟膏、ローション剤、クリーム、ゲル類、低下、坐薬、スプレー、液体および粉を含むことができる。従来の薬剤担体（水性の）は粉末になる、または、油性ベース、増粘剤などは必要でありえたか望ましくありえた。
【０１５６】
内服のための組成物は、粉または顆粒、サスペンションまたは溶液を水または非水系媒体、カプセル、小さい袋または錠剤に含む。増粘剤、調味料、希釈液、乳化剤、分散している援助または結合剤は、望ましくありえた。
【０１５７】
組成物のいくつかは、薬学的に受け入れられるａｃｉｄ−またはｂａｓｅ−付加塩（塩酸、臭化水素酸、過塩素酸、硝酸、チオシアン酸、硫酸およびリン酸のような無機酸および蟻酸、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、ピルビン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸およびフマル酸のような有機酸を有する反応によって形成される）として、または、無機塩基（例えばモノ、ｄｉ−トリアルキルおよびアリール・アミンおよび置換されたエタノールアミンのような水酸化ナトリウム、安水、水酸化カリウムおよび有機塩基）を有する反応によって投与されることができる。
【０１５８】
ｂ）治療的な用途
組成物を投与するための有効薬量およびスケジュールは経験的に決定されることができる、そして、この種の決定をすることは従来技術において技術の範囲内である。組成物の管理のための用量範囲は、障害の症状が影響を受ける所期の効果を生じるのに十分大きなそれらである。投与量は、逆副作用（例えば不必要な交差反応、アナフィラキシー反応、など）を引き起こすほど大きくてはならない。通常、投薬は年齢、状態、性交および患者（投与経路）の疾患の範囲によって変化するまたは、他剤が療法および缶に含まれるかどうか、当業者で測定される。投与量は、いかなる反表示の場合にはも個々の医師によって調整されることができる。１または数日間、投薬は、変化することができて、毎日一つ以上の服用政権において管理されることができる。ガイダンスは、製薬製品の所与の種類のための適切な投薬のための文献で見つかることができる。例えば、抗体のためのセレクティング適当な線量のガイダンスは、抗体（例えばＭｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓのＨａｎｄｂｏｏｋ、Ｆｅｒｒｏｎｅなど、編集、Ｎｏｇｅｓ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｐａｒｋ  Ｒｉｄｇｅ、ＮＪ．（１９８５）ｃｈ．）を治療的な使用する能力についての文献で見つかることができる。２２およびｐｐ．３０３−３５７；鉄工など、Ｈｕｍａｎ  ＤｉａｇｎｏｓｉｓおよびＴｈｅｒａｐｙのＡｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｈａｂｅｒなど、編集、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９７７）ｐｐ．３６５−３８９。使用する抗体の典型的１日の適用量は日につき約１つのμｇ／キログラムから少なくとも最高１００ｍｇ／ｋｇの体重に単独でわたるかもしれない。そして、前述の要因次第である。
【０１５９】
処理、抑制または防止炎症のための開示された構成（例えばベクター）の管理の後に、治療的なベクターの有効性は、よく熟練した実務家に知られているさまざまな方法で評価されることができる。例えば、当業者は、構成（例えばベクター）が本願明細書において開示されて構成が炎症を減らすと述べることによって主題の処理または抑制性炎症において有効であると従来技術において理解する。
【０１６０】
９．  動物
ベクターのいずれかの生殖系列伝送から成っているトランスジェニック動物または本願明細書において設けられている核酸は、本願明細書において設けられている。一つの態様では、本願明細書において設けられているトランスジェニック動物は、切除活性トランスジェニック（ＸＡＴ）動物である。開示された遺伝子導入実験動物は、導入遺伝子表現を時間的に、そして、炎症要素の中で空間的に調整することができた（Ｂｒｏｏｋｓ、ＡＩ、など１９９１。自然Ｂｉｏｔｅｃｈ  １５：５７−６２；Ｂｒｏｏｋｓ、ＡＩ、など１９９９．神経報告１０：３３７−３４４；Ｂｒｏｏｋｓ、ＡＬ、など２０００。Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７：１３３７８−１３３８３）。トランスジェニック動物が組換え部位から成る核酸から成る所で、本願明細書において開示されるように、レコンビナーゼの配達がＣｒｅレコンビナーゼのような細胞に設けられているトランスジェニック動物の中でそれらのセルの中で結果として炎症性モジュレータ（例えばＪＬ−Ｉβ、ＪＬ−ｌｒａ、ＣＯＸ−２）の表示になるものと理解される。
【０１６１】
「導入遺伝子」によって、技術によって細胞に嵌入されて、その細胞およびその後継者のゲノムの一部になる核酸一次構造は、意味される。この種の導入遺伝子細胞に異形で（例えば、異なる種に由来する）部分的に、または、完全に、ある（しかし、必ずあるというわけではない）。おそらくゲノムに通常存在しないシーケンス、あるが、通常転記しなくて、所与のゲノムまたは他のいかなる遺伝子においても並進した（「表される」）遺伝子または１がゲノムにもたらすことを望むＤＮＡを有する遺伝子またはＤＮＡを含むがこれに限らず、用語「導入遺伝子」は、広く、動物のゲノムにもたらされるいかなる核酸にも関連する。これは、遺伝子を含むことができるそれ通常そうである１が表現において変わったことを望む、または１が変えられたか異なる形で導くことを望む非移植遺伝子のゲノムに存在する。導入遺伝子は一つ以上の転写性調節配列を含むことができる、そして、他のいかなる核酸（例えばイントロン）も選択された核酸の最適発現のために非常に必要でありえる。導入遺伝子は、長くわずか１対のヌクレオチドでありえるが、長く、または、より長くさえ少なくとも好ましくは５０、１００、１５０、２００、２５０、３００、３５０、４００、または５００ヌクレオチドについてあって、例えば、全てのゲノムでありえる。導入遺伝子は、符号化または非コード・シーケンスまたはそれらの組み合わせでありえる。通常導入遺伝子には、適当な状況の下で一つ以上の導入遺伝子の表示をドライブすることができる調節性の要素が具備されている。「トランスジェニック動物」によって、上記の通りの導入遺伝子から成る動物は、意味される。トランスジェニックアニマルは、公知技術である技術によって作られる。本願明細書において開示されるように、いかなる組合せにおいても、開示された核酸（全体または一部の）は導入遺伝子でありえる。
【０１６２】
本願明細書において開示される核酸分子のいずれかをもつ動物の範囲内で細胞をトランスフェクションさせる方法によってできる動物は、開示される。核酸分子のいずれかが本願明細書において開示した動物の範囲内で細胞をトランスフェクションさせる方法によってできる動物が、開示する、そこにおいて、動物は、哺乳類である。開示もする動物の範囲内で細胞をトランスフェクションさせる方法によってできる動物が、本願明細書において開示される核酸分子のいずれかである、そこにおいて、哺乳類は、マウス、ネズミ、ウサギ、ウシ、ヒツジ、ブタまたは霊長類である。
【０１６３】
開示されたトランスジェニック動物はいかなる人間以外の動物（好ましくは非人間哺乳類（例えばマウス、ネズミ、ウサギ、リス、ハムスター、ウサギ、モルモット、ブタ、マイクロ・ブタ、プレーリードッグ、ヒヒ、リスザルおよびチンパンジ、など）鳥または両生類）でもありえる。そこにおいて、一つ以上の細胞は人間の介入として、例えば公知技術の移植遺伝子の技術によって導かれる異形の核酸を含む。核酸は、マイクロインジェクションによって、または、組換えウイルスへの感染によって例えば、直接、または、間接的に、細胞の前駆体へのはじめにによって、細胞にもたらされる。開示されたトランスジェニック動物は、直接操作された、または、開示された核酸の一つ以上を受信する最初の動物であった動物の結果を含むこともできる。この分子は染色体の範囲内で集積されることができる、または、それはＤＮＡを染色体外で複製していることができる。トランスジェニック動物の製造に関連した技術のために、なかでも、Ｈｏｇａｎその他を（１９８６）見ることＭａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｍｂｒｙｏ−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、コールドスプリングハーバー、Ｎ．Ｙ．１９８６）。
【０１６４】
移植遺伝子の実験に適している動物は、標準商業的なソース（例えばＣｈａｒｌｅｓ川（Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ、Ｍａｓｓ．）Ｔａｃｏｎｉｃ（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ、Ｎ．Ｙ．）およびＨａｒｌａｎ  ＳＤ系（Ｉｎｄｉａｎａｐｏｌｉｓ、若者。））から得られることができる。例えば、トランスジェニック動物がマウスである場合、多くのマウス圧力は適切である、しかし、Ｃ５７ＢＬ／６雌のマウスが胚の検索および転送のために用いられることができる。Ｃ５７ＢＬ／６雄が交接のために用いられることができる、そして、ｖａｓｅｃｔｏｍｉｚｅｄされたＣ５７ＢＬ／６種畜は擬似妊娠を刺激するために用いることができる。Ｖａｓｅｃｔｏｍｉｚｅｄマウスおよびネズミは、供給元から得られることができる。トランスジェニックアニマルは、ミクロインジェクション法および胚幹細胞方法を含むいかなる周知の手順によっても作られることができる。齧歯目の胚の操作のための、そして、ＤＮＡのマイクロインジェクションのための手順は、Ｈｏｇａｎその他において詳述する、Ｍａｎｉｐｕｌａｔｉｎｇ  Ｍｏｕｓｅ  Ｅｍｂｒｙｏ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、コールドスプリングハーバー、Ｎ．Ｙ−１９８６）（いずれの教示も一般に公知で、本願明細書において組み込まれる）。
【０１６５】
トランスジェニックアニマルは、それらのＤＮＡを分析することによって確認されることができる。この目的のために、例えば、トランスジェニック動物が尾部（例えば齧歯動物）をもつ動物であるときに、尾部サンプル（１〜２ｃｍ）は３週間目の動物から取り除かれることができる。これらからのＤＮＡまたは他のサンプルは（ｌｏｒ実施例）それから準備されることができて、解析した。そして、トランスジェニックを検出するサザンブロット、ＰＣＲまたはスロット汚点によって、（Ｆ（Ｏ））動物およびそれらの後継者（Ｆ（１）およびＦ（２））は失敗する。更なる本発明は、本発明のトランスジェニック動物および第２の動物の雑種の結果である移植遺伝子の人間以外の動物を提供する。トランスジェニックアニマルは他のトランスジェニック動物によって飼育されることができる。ここで、２つのトランスジェニック動物は異なる導入遺伝子を使用して発生した。そして、他の遺伝子産物上の１つの遺伝子産物の効果を試験するかまたは２つの遺伝子産物の併用効果をテストする。
【０１６６】
設けられている組成物は、関節炎のマウスモデルを使用して評価されることができる。ジョイントのＩＬ−１βの長期にわたる表示が関節炎患者に示してそれと類似の関節症の現像に導くことができるにつれて、ＴＬ−β．の長期にわたる、低い水平な関節腔内の移植遺伝子の表示に基づく関節炎のマウスモデルは開示するＴＬ−βの役割、ＴＮＦαおよび他の炎症伝達物質（例えばプロスタノイド）は、関節炎の病因において、よく認識される。２つは、最も一般的には関節炎の中で形をなす骨関節炎（ＯＡ）（６５歳以上のすべての成人の約８０％−９０％に影響を及ぼす）および慢性関節リウマチ（ＲＡ）（一般のＵ．Ｓ．人口のほぼ１％に影響を及ぼす）である。異なった違いがＯＡおよびＲＡの間に存在するにもかかわらず、両方とも炎症誘発性カスケードに二次性を開発するように見える。以前の動物モデルは、関節炎を調査して、ＴＮＦαトランスジェニック・マウスモデルと同様に、遺伝子工学による滑膜細胞の生体外転送の後にメチル化ウシ血清アルブミン／ＩＬ−ｌβのモデル、ＩＬ−１βの関節腔内の管理、ＴＬ−βの構成型関節腔内の表示を含む新規な治療法をテストする際に貴重であると判明した。上述したＪＬ−Ｉβモデルは有害な剤の直接の管理に基づくが、ＴＮＦｃｅ遺伝子導入マウスは生体内でＴＮＦｃｅの長期にわたる表示に基づいて、ＴＮＦｏの役割上の有益な洞察をここまで得た；関節炎の発現において。しかしながら、大多数のトランスジェニックマウスと同様に、ＴＮＦαトランス起源は、抑制されていないおよび特徴のない発達上の代償の変化に影響されやすい。
【０１６７】
生殖系列を利用している方法（身体のモザイク分析）に基づく設けられているマウス母数模型は、興味がある遺伝子を「活性化する」Ｃｒｅレコンビナーゼを表すウィルス・ベクターの休止中の転写単位および身体の遺伝子導入を含んでいる組換え性基質を送信した。ＩＬ−１βは切除されたでトランスジェニック（ＪＬ−ＩβＸＡτ）マウスを起動させた、そして、そのバリエーションはこの方法を使用して発生した。設けられているマウスモデルはＵ．Ｓ．特許出願番号第６０／６２７，６０４号の主題である。そして、それは完全に参照によって組み込まれて本願明細書においてある。このマウスモデルは、Ｃｒｅレコンビナーゼ発現ベクター（例えば標的部位に対するＦΙＶ（Ｃｒｅ））の配達に基づいて、局所化された炎症の誘導を考慮に入れる。バリエーションは、例えば細胞であるか組織特異的プロモータの使用を例えばＣＯＬＬ１Ａ１−ＩＬ−１βＸＡＴマウスに含む。例えば、ＣＯＬＬ１Ａ１−ＩＬ−βＸＡＴマウスの接点へのＦΙＶ（Ｃｒｅ）の配達は、例えば、型関節炎に炎症を誘発することができる。このマウスモデルが、このように、例えば、試験に用いられることができるかまたは関節炎上の設けられている構造物の効果を最適化することができる。別の例として、ＦΙＶ（Ｃｒｅ）の配布への配達またはＣＯＬＬ１Ａ１−ＩＬ−１β１マウスのジョイントは、モデル（例えばアルツハイマー病）に、脳の炎症を誘発することができる。
【０１６８】
ＩＬ−１βＸＡＴ調節は側頭部（時間）において制御される、そして、生殖系列を利用している（１）Ｃｒｅ／ｌｏｘＰ分子遺伝学的方法による空間（場所）傾向は興味がある遺伝子を「活性化する」Ｃｒｅレコンビナーゼを表すウィルス・ベクターの休止中の転写単位および（２）身体の遺伝子導入を含んでいる組換え性基質（例えば結腸Ｌｉ−悪いβＸＡＴ）を送信した。このように、これらのマウスが、マウスのジョイント（例えば膝）のＩＬ−１β構成的発現を誘発するために、本願明細書において用いられることができる。例えば、局所化された導入遺伝子活性化（すなわちＩＬ−１β）は、関心領域に、ＦΙＶ（Ｃｒｅ）（ジョイントの柔らかいおよび硬い薄紙を変換することができるレンチウイルス）の嚢内の注入および遺伝子転写に導いている
【０１６９】
【数４】
2009501128.tif 000006
カセットの組換え性切除によってＩＬ−１βマウスにおいて達成されることができる。遺伝子組換えによって媒介される遺伝子「活性化」は、永久に、このように慢性のＩＬ−β合成を許容している感染細胞の遺伝子の構成を変える。ＣＯＬＬ１Ａ１プロモータは軟骨細胞、骨細胞および繊維芽細胞に遺伝子形質発現を目標とするために更に用いることができる。そして、興味があるいかなるジョイントの関節炎の研究も利用できるこの遺伝子導入マウスを作る。このプロモータは、骨および軟骨の遺伝子形質発現を目標とすることを示して、ＣＭＶプロモータ（図１）の代わりに、ＩＬ−１βＸＡＴ遺伝子においてクローンをつくられた：（ＣＯＬＬ１Ａ１−ＩＬ１βＸＡＴ）ＣＯＬＬ１Ａ１＝＞
【０１７０】
【数５】
2009501128.tif 000007
ＩＬ１β−ＩＲＥＳ−ｌａｃＺ。
【０１７１】
ＣＯＬＬ２は、他の適切なプロモータである。この導入遺伝子は、ｐＲｃ／ＣＭＶ−ＣｒｅＷＴ発現ベクターの一時的なトランスフェクションによるＣｒｅレコンビナーゼの表示の後に、または、レンチウイルス・ベクターＦΙＶ（Ｃｒｅ）による感染の後、建設されて、ネズミのＮＴＨ  ３Ｔ３安定細胞系においてテストされた。
【０１７２】
レコンビナーゼの身体の遺伝子導入は、Ｃｒｅのようなレコンビナーゼを生じているベクター系の任意型を使用して実行されることができる。しかしながら、特定の実施例において、例えば、ベクター系が自己不活性化しているベクター系（。そこにおいて、プロモータ）であることレコンビナーゼの組換え部位によってそのように側面に位置するレコンビナーゼの製造に応じて、レコンビナーゼが、それ自身の製造を減少して調整する。レコンビナーゼのための配達ベクターは、伝達されるＣＲＥでありえる。
【０１７３】
例えば、休止中のＣＯＬＬＩ−ＩＬβＸＡＴの活性化は、自動不活性化しているＣｒｅネコ免疫不全ウイルスＦΙＶ（Ｃｒｅ）を介して、関心領域（例えば膝）に、Ｃｒｅレコンビナーゼの転送によって伝達されることができる。このＦＩＶベクター系の効果は、以前、ウィルス溶液の関節内投与を受信したマウスのレポーター遺伝子ｌａｃＺ（β−ガラクトシダーゼ）を使用して検討された［Ｋｙｒｋａｎｉｄｅｓ  Ｓ、その他（２００４）。Ｊ  Ｄｅｎｔａｌ  Ｒｅｓ  ８３：６５−７０］そこにおいて、柔らかい（関節円板）および硬い（軟骨）ＴＭＪ薄紙のトランスダクションは、示された。ＦＩＶ（Ｃｒｅ）ベクターは、ｌａｃＺ遺伝子の場所のｌｏｘＰの側面に位置された（「ｆｌｏｘｅｄされた」）ｎｌｓＣｒｅカセットのクローンをつくることによって造られた；核移行信号（ｎｌｓ）は、ＰＣＲによってｃｒｅ転写解読枠に融和して、オーダーメードのｆｌｏｘｅｄされたクローン化カセットを使用している製造業者の指示につき、ＴＯＰＯにその後２．１本のベクター（インビトロゲン）のクローンをつくった。自動不活性化しているｃｒｅ遺伝子を開発する理由は、最近の紙に基づく［Ｐｆｅｉｆｅｒ  ＡおよびＢｒａｎｄｏｎ  ＥＰ、Ｋｏｏｔｓｔｒａ  Ｎｅｅｌｔｊｅ、Ｇａｇｅ  ＦＨ、Ｖｅｒｍａ  ＩＭ（２００１）。Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  Ｕ．Ｓ．Ａ．９８：１１４５０−５］それによって、著者は、レンチウイルス・ベクターを使用している感染によって伝達されるＣｒｅレコンビナーゼの長期にわたる表示のため、細胞毒性を報告した。設けられている構造物（ＣＯＬＬＩの切除された活性化を生じるＣｒｅレコンビナーゼの十分なレベルの製造の）において−ＦΙＶ（Ｃｒｅ）を有する的状赤血球の成功したトランスダクションの後に、遺伝子組換えＩＬｌβＸＡＴ、Ｃｒｅが切除されたｌｏｘＰ−に誘導された自己によってｃｒｅ遺伝子を非活性化することが、予期される。
【０１７４】
１０．  キット
本願明細書において開示される方法を実施する際に用いられることができる試薬に引かれるキットは、本願明細書において開示される。キットはいかなる試薬もまたは本願明細書において述べられる試薬の組合せを含むことができる、または、それは必要であるためによく理解されているか開示された方法の実行において有益である。例えば、キットは、意味されるにつれてバッファおよび酵素がプライマを使用することを必要としたのと同程度よく、方法の特定の実施例で述べられる増幅反応を実行するために、プライマを含むことができる。
【０１７５】
Ｄ．手法
さもなければ特に強調されない限り、本願明細書において開示される組成物および開示された方法を実行するのに必要な和議はその特定の試薬または化合物のための当業者に知られているいかなる方法も使用してなされることができる。
【０１７６】
１．  核酸合成
例えば実施例（核酸）のために、プライマとして使用されるオリゴヌクレオチドが、標準化学合成法を使用して作られることができるかまたは酵素法または他のいかなる周知の方法も使用してできることができる。この種の方法はヌクレオチド断片隔離が続く標準酵素消化から変動することができる（実施例、Ｓａｍｂｒｏｏｋなど、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇのために見る。ＴＡ「研究所マニュアル、第２版（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、コールドスプリングハーバー、Ｎ．Ｙ．１９８９）Ｃｈａｐｔｅｒｓ  ５、６、例えば、Ｍｉｌｌｉｇｅｎを使用しているシアノエチル・ホスホラミダイト方法またはベックマン・システムに単に合成方法）ｌＰｌｕｓ  ＤＮＡ合成装置（例えば、モデル８７００は、Ｍｉｌｌｉｇｅｎ−Ｂｉｏｓｅａｒｃｈ、Ｂｕｒｌｉｎｇｔｏｎ、ＭＡまたはＡＢＩモデル３８０Ｂのシンセサイザを自動化した）。オリゴヌクレオチドを作ることに役立つ合成方法は、Ｉｋｕｔａなど（Ａｎｎ）によっても記載されている。Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．５３：３２３−３５６の（１９８４）（リン酸トリエステル、そして、亜リン酸エステル−トリエステル法）およびＮａｒａｎｇなど、手法ＥｎｚｙｍｏＬ、６５：６１０−６２０の（１９８０）（ホスフォトリエステル法）。核酸分子がそれらのような周知の方法を用いて作られることができるタンパク質は、Ｎｉｅｌｓｅｎによって、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇに記載された（化学５：３−７の（１９９４））。
【０１７７】
２．  ペプチド合成
開示されたタンパク質（例えば配列番号）を生産する１つの方法：５は、タンパク質化学技術によって二個以上のペプチドまたはポリペチドを結びつけることである。例えば、ペプチドまたはポリペチドは、Ｆｍｏｃ（９−ｆｌｕｏｒｅｎｙｈｎｅｔｈｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｙｌ）かＢｏｃ（ｔｅｒｔ−ｂｕｔｙｌｏｘｙｃａｒｂｏｎｏｙｌ）化学を使用している今日到達している実験装置を使用して、化学的に合成されることができる。（ＡＢＩ、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、ＣＡ）。当業者は、開示されたタンパク質に対応するペプチドまたはポリペチドが、例えば、標準化学反応によって合成されることができると直ちに認めることができる。例えば、ペプチドまたはポリペチドは合成されることができて、その合成樹脂から隔離されることができないが、ペプチドまたはタンパク質の他の断片は総合されることができて、その後樹脂から隔離されることができる。それによって、他の断片に機能的に防がれる末端基を露出させる。ペプチド縮合反応によって、これらの２つの断片は、それぞれ、抗体または断片単独を形成するためにそれらのカルボキシルおよびアミノ末端でペプチド結合を介して接続される共有結合ででありえる。（ＧＡ（１９９２）にＳｙｎｔｈｅｔｉｃ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓを与える：使用者Ｇｕｉｄｅ．Ｗ．Ｈ．Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．Ｎ．Ｙ．（１９９２）；Ｂｏｄａｎｓｋｙ  ＭおよびＴｒｏｓｔ  Ｂ．（Ｅｄ）。Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓの（１９９３）Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ。Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ社、ＮＹ（それは、少なくともペプチド合成に関連した材料のための参照によって組み込まれて、本願明細書においてある）。あるいは、本願明細書において記載されているにつれて、ペプチドまたはポリペチドは生体内でそれぞれに合成される。一旦分離されると、これらの独立ペプチドまたはポリペチドは類似のペプチド縮合反応を介してペプチドまたは断片単独を形成するために連結されることができる。
【０１７８】
例えば、部分によって比較的短いペプチド断片がそうであることができる、クローンをつくられたか合成ペプチドの酵素ライゲーションは、より大きなペプチド断片、ポリペチドまたは総タンパク領域（Ａｂｒａｈｍｓｅｎ  Ｌなど、生化学、３０：４１５１（１９９１））を生じるために接続した。あるいは、合成ペプチドの自国の化学ライゲーションは、総合的により短いペプチド断片から大きいペプチドまたはポリペチドを造るために利用されることができる。この方法は、２つのステップ化学反応から成る（Ｎａｔｉｖｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  ＬｉｇａｔｉｏｎによるＰｒｏｔｅｉｎｓのＤａｗｓｏｎなどＳｙｎｔｈｅｓｉｓ。科学、２６６：７７６−７７９の（１９９４））。第一段階は、最初の共有結合的製品としてチオエステルにリンクされた中間体を与えるためにアミノ末端システイン残基を含んでいる他の保護されていないペプチド部分を有する保護されていない合成ｐｅｐｔｉｄｅ−チオエステルの化学選択的な反応である。反応条件の変化なしで、この中間体は、ライゲーション・サイトで自国のペプチド結合を形成するために、自然発生的な、急速な分子内反応を受ける（Ｂａｇｇｉｏｌｉｎｉ  Ｍその他（１９９２）ＦＥＢＳ会報３０７：９７−１０１；Ｃｌａｒｋ−ルイスＩその他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１６０７５（１９９４）；Ｃｌａｒｋ−ルイスＩその他、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３０：３１２８（１９９１）；Ｒａｊａｒａｔｈｎａｍ  Ｋなど、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３３：６６２３−３０の（１９９４））。
【０１７９】
あるいは、化学ライゲーションの結果として、ペプチド部分との間に形成される結合が不自然な（非ペプチド）結合（Ｓｃｈｎｏｌｚｅｒ、Ｍなど科学、２５６：２２１（１９９２））である所で、保護されていないペプチド部分は化学的に連結される。この技術は、完全な生物学的活性度を有する大量の比較的純粋なタンパク質と同様にタンパク質領域の類似物を総合するために用いた（非リスルＭｉｌｔｏｎ  ＲＣなど、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＩＶの技法。Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ｐｐ．２５７−２６７（１９９２））。
【０１８０】
３．  組成物を作製する方法
組成物に導いている中間体を作るのと同様に、和議をする方法は、開示される。これらの和議（例えば合成化学法および標準分子生物学方法）をするために用いられることができる様々な方法が、ある。これらを作る方法およびその他が組成物が特に開示されることを開示したものと理解される。
【０１８１】
プロモータ要素および核酸要素が本願明細書において開示した手術の方法の結鎖を含んでいる方法によってできる核酸分子は、開示される。核酸要素は、例えば、リガンド結合阻害剤をコード化することができる。かくして、開示する手術の方法の結鎖から成る方法によってできる核酸分子が、プロモータ要素およびＩＬ−ｌｒａ要素である。開示もする手術の方法の結鎖から成る方法によってできる核酸分子が、プロモータ要素およびＩＬ−１Ｒ２要素である。開示もする分子が手術の方法の結鎖から成る方法によって生産した核酸が、プロモータ要素およびＩＬ−１Ｒ１断片要素である。開示もする分子が手術の方法の結鎖から成る方法によって生産した核酸が、プロモータ要素およびＩＬ−１断片要素である。
【０１８２】
開示もする手術の方法の結鎖から成る方法によってできる核酸分子が、核酸が本願明細書において開示される遺伝子形質発現ｉｎｈｉｎｉｔｏｒをコード化するプロモータ要素および核酸要素である。一例として、開示する手術の方法で方法から成っている結鎖を私によってできる核酸分子が、プロモータ要素およびＣＯＸ−Ｉ  ｓｉＲＮＡ要素である。開示もする手術の方法の結鎖から成る方法によってできる核酸分子が、プロモータ要素およびＣＯＸ−２  ｓｉＲＮＡ要素である。開示もする手術の方法の結鎖から成る方法によってできる核酸分子が、プロモータ要素およびｍＰＧＥＳ  ｓｉＲＮＡ要素である。開示もする手術の方法の結鎖から成る方法によってできる核酸分子が、プロモータ要素およびｃＰＧＥＳ  ｓｉＲＮＡ要素である。
【０１８３】
開示された核酸のいずれかを有する細胞を変える方法によってできる細胞は、更に開示される。非天然に存在する開示された核酸のいずれかを有する細胞を変える方法によってできる細胞は、開示される。
【０１８４】
開示された核酸のいずれかを表す方法によってできるペプチドのいずれか、開示される。開示された核酸のいずれかを表す方法によってできる非自然に生じる開示されたペプチドのいずれか、開示される。非自然に開示された核酸のいずれかを表す方法によってできる開示されたペプチドのいずれか、開示される。
【０１８５】
本願明細書において開示される核酸分子のいずれかをもつ動物の範囲内で細胞をトランスフェクションさせる方法によってできる動物は、開示される。核酸分子のいずれかが本願明細書において開示した動物の範囲内で細胞をトランスフェクションさせる方法によってできる動物が、開示する、そこにおいて、動物は、哺乳類である。開示もする動物の範囲内で細胞をトランスフェクションさせる方法によってできる動物が、本願明細書において開示される核酸分子のいずれかである、そこにおいて、哺乳類は、マウス、ネズミ、ウサギ、ウシ、ヒツジ、ブタまたは霊長類である。開示もする哺乳類がマウス、有ていまたは人間以外の霊長類である哺乳類である。
【０１８６】
また、開示する、動物に合計加算の方法によってできる動物が、本願明細書において開示される細胞のいずれかである。
【０１８７】
Ｅ．  組成物を使用する手法
１．  調査ツールとして組成物を使用する方法
開示された組成物が、調査ツールとしてさまざまな方法で用いられることができる。例えば、開示された組成物（例えば配列番号）：例えば結合するインヒビターとして働くことによって、５は、ＩＬ−１およびＩＬ−１Ｒ１の間の相互作用を研究するために用いることができる。
【０１８８】
２．  治療的な用途
組成物を投与するための有効薬量およびスケジュールは経験的に決定されることができる、そして、この種の決定をすることは従来技術において技術の範囲内である。組成物の管理のための用量範囲は、障害の症状が影響を受ける所期の効果を生じるのに十分大きなそれらである。投与量は、逆副作用（例えば不必要な交差反応、アナフィラキシー反応、など）を引き起こすほど大きくてはならない。通常、投薬は年齢、状態、性交および患者（投与経路）の疾患の範囲によって変化するまたは、他剤が療法および缶に含まれるかどうか、当業者で測定される。投与量は、いかなる反表示の場合にはも個々の医師によって調整されることができる。１または数日間、投薬は、変化することができて、毎日一つ以上の服用政権において管理されることができる。ガイダンスは、製薬製品の所与の種類のための適切な投薬のための文献で見つかることができる。
【０１８９】
処理、抑制または防止炎症のための開示された構成（例えば開示された構造物）の管理の後に、治療的な構造物の有効性は、よく熟練した実務家に知られているさまざまな方法で評価されることができる。例えば、当業者は、構成（例えば開示された構造物）が本願明細書において開示されて炎症または抑制を処理するかまたは構成がこれらの疾患と関連した状況の開始を減らすと述べることによって主題の炎症の影響を減らす際に有効であると従来技術において理解する。さらにまた、構造物から作り出されるタンパク質または反訳記録の量は、いかなる診断法も使用して分析されることができる。例えば、それは、主題または患者からサンプル（例えば、（制限されないが）血液またはその他細胞（例えば神経細胞））の構造物から作り出されるタンパク質の存在を検出するために構造物核酸または抗体分析の存在を検出するためにＰＣＲ法分析を使用して測定されることができる。
【実施例】
【０１９０】
Ｆ．実施例
以下の実施例は、当業者に完全な開示および本願明細書において請求される化合物、組成物、小節果、装置および／または方法が行われて、評価される方法の説明を提供するために出されて、単に典型的なことを目的として、開示を制限することを目的としない。効果は数（例えば総計、温度、その他）に関して精度を確実にするために実行された、しかし、いくらかのエラーおよび偏差は占められなければならない。特に明記しない限り、パーツは重量部である、温度は０Ｃにおいてあるかまたは外界温度である、そして、圧力は大気のもので、又はその近くで、ある。
【０１９１】
１．  実施例１−誘導性のインターロイキン−１β導入遺伝子の構造−ＩＬ−１βＸＡＴ
ヒトＩＬ−１β相補ＤＮＡは、以下の通りにＰＣＲ法（ＰＣＲ）によって、ヒトＵ９３７細胞（ＡＴＣＣ、Ｍａｎａｓｓａｓ  ＶＡ）からクローンをつくられた：完全メッセンジャーＲＮＡは、製造業者の指示につきＴＲＩｚｏｌＲ試薬（インビトロゲン、Ｃａｒｌｓｂａｄ  ＣＡ）を使用して抽出された。ＰＣＲ下塗りは、成熟した、分泌されたＩＬ−１βタンパク質に対応する相補ＤＮＡの部分の増幅のために設計された。ヒトＩＬ−１受容体アンタゴニスト遺伝子（ＩＬｌ−ＲＡ）のペプチド分泌シグナル（一本鎖）は、ＴＬＩβ転写解読枠（ＯＲＦ）に上流で、適当な区画化および移植遺伝子のＩＬ−１βペプチドの分泌を確実にするために、上のＰＣＲプライマに組み込まれた。このＰＣＲを合成された一本鎖−ＩＬｌβ融合構造物は、製造業者の指示につきＴＯＰＯ  ２．１ベクター（インビトロゲン）に、直接クローンをつくられた。その後、細胞自主的なおよび不必要なβ−ガラクトシダーゼ・レポーター遺伝子（ｌａｃＺ）はＩＬ−βＯＲＦに対する挿入されたダウンストリームであった。そして、ウシ成長ホルモン・ポリＡ尾部（ピコアンペア）シーケンスが続いた：ｓｓＩＬ−ｌβ−ＩＲＥＳ−ｌａｃＺ双シストロン性遺伝子（図１）。第２のＯＲＦ（ｌａｃＺ）の翻訳は、内部リボソーム入力順（ＩＲＥＳ）によって促進性である。実験の初期の間、双シストロン性ｓｓＩＬ−ｌβ−ＩＲＥＳ−ｌａｃＺ導入遺伝子の表示はサイトメガロウィルス・プロモータ（ＣＭＶ）によって偏在してドライブされた。そして、それの転写はｌｏｘＰの側面に位置された（ｆｌｏｘｅｄされた）転写性終了カセットＳＴＯＰｆｌ／ｆｌ．によって禁止された。転写性活性化および導入遺伝子表現は、ｌｏｘＰに誘導されたＤＮＡ組換によってオンにされることができるバクテリオファージＰｌ  Ｃｒｅレコンビナーゼ（Ｃｒｅ／ｌｏｘＰシステム）によって仲介する。
【０１９２】
ａ）Ｃｒｅによって媒介される誘導性の導入遺伝子の活性化
ＴＬＩβＸＡτの機能は、２つの異なる実験的な戦略によって生体外で試験された。第一に、Ｃｒｅレコンビナーゼによる調節は、生体外でＮＩＨ  ３Ｔ３マウス繊維芽細胞（ＡＴＣＣ）において評価された。遺伝子は野生型ｃｒｅ遺伝子によって一過性に共同表された（発現ベクターｐＲｃ／ＣＭＶ−ＣｒｅＷＴに、クローンをつくった；インビトロゲン）ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥを使用している一時的なトランスフェクションの後に、製造業者につき２０００の試薬（インビトロゲン）は、指示である。予想されるにつれて、ｌｏｘＰ目指してなられるＣｒｅレコンビナーゼの一時的発現および「ｆｌｏｘｅｄされた」転写性終了シグナル
【０１９３】
【数６】
2009501128.tif 000008
の切除は最終的に遺伝子活性化に導く。コントロールの条件は、ｊＬ＿１βＸＡτｗ−ｔｏ足指ｅＸｐｒｅｓｓｊｏｎベクターｐＲｃ／ＣＭＶ−（いかなる遺伝子も欠く）（単純なＮＴＨ  ３Ｔ３細胞と同様に）の同時トランスフェクションを含んだ。ＴＬＩβ表現はリバーストランスクリプターゼＰＣＲ（ＲＴ−ＰＣＲ）によってメッセンジャーＲＮＡレベルと評価された、そして、ｌａｃＺ表現はＸ−ｇａｌ組織化学によって評価された。手短に言えば、ＩＬ−１β反訳記録は、単純なＮＩＨ  ３Ｔ３細胞において検出されなかった；対照的に、ＴＬＩβと７＋Ｃｒｅ同時トランスフェクションがｓｓＩＬ−１βおよびｌａｃＺ遺伝子形質発現（図２）の誘導において結果になった。加えて、ＩＬ−１βＸＡＴ機能は、誘導性のＣｒｅレコンビナーゼ細胞系において評価された。そして、本願明細書において２９３ＨＧＬＶＰ／ＣｒｅＰｒ（最近Ｃｒｅ／ｌｏｘＰ技術を利用している切除されたで活性遺伝子の規則をテストするために開発されて、Ｕ．Ｓ．特許出願番号第１０／９７８９２７号に記載されている安定細胞系）が、参照によって組み込まれる）。この細胞系は、転写性双対の下にＣｒｅレコンビナーゼを配置することによる誘導性の、ｌｏｘＰに誘導されたＤＮＡ組換系と翻訳後制御（Ｋｙｒｋａｎｉｄｅｓなど、２００３、（本願明細書において参照によって組み込まれる））とを具備している。手短に言えば、システムは、２つの構成要素から成る：（１）キメラの転写性アクティベータＧＬＶＰおよびＣｒｅＰｒ融合タンパク（２）（細菌Ｃｒｅレコンビナーゼおよび変異するプロゲステロンレセプタｈＰＲ８９１遺伝子から成る）カスタムメイドのＧＡＬ４５／ＴＡＴＡ最小のプロモータによってドライブされて。変異するｈＰＲ８９１レセプタは、合成プロゲステロン化合物ミフェプリストーン（ＲＵ４８６）に、非常に影響される。ｈＰＲ８９１に対するＲＵ４８６の締め具は結果としてＧＬＶＰの活性化およびＣｒｅＰｒの次の合成になる。そして、それの活動は翻訳後レベルの回されたｏｎｂｙＲＵ４８６でもある。ＪＬ−ＩβＸＡΥトランスフェクション後の２９３ＨＧＬＶＰ／ＣｒｅＰｒ細胞のＲＵ４８６管理は、結果としてＤＮＡ切除された遺伝子組換えおよびヒトＩＬ−１βおよび細菌β−ガラクトシダーゼ・レポーター遺伝子（ｌａｃＺ）の次の発現になった。実験の概要のための図３を言及する。
【０１９４】
ｂ）ＩＬ−１βＸＡＴ活性化は、生物学上強力なＩＬ−１βサイトカインを生じる
生物学上作動中のＴｌ−βサイトカインを合成して、分泌するネズミの細胞の能力は、以下の通りに生体外で試験された。図２に記載されているそれと類似の実験において、ネズミのＮＩＨ  ３Ｔ３繊維芽細胞は、ＥＬ−１βＸＡＴ遺伝子によってトランスフェクションした。付随して、Ｃｒｅレコンビナーゼはこれらの細胞（ｐＲｃ／ＣＭＶ−ＣｒｅＷＴベクターの同時トランスフェクション）において一過性に表された、そして、条件付きの上澄の媒体は７２時間に集められた。ヒトＩＬ−１βの存在は、ＥＬＩＳＡによって確認された。馴化培地はそれから単純なネズミの繊維芽細胞に配置された、そして、誘導性のシクロオキシゲナーゼＣＯＸ−２のレベルは以前記載されているプロトコルを使用している全ｎｉＲＮＡ抽出物の定量的ＲＴ−ＰＣＲによるサイトカイン効力の基準として評価された［Ｍｏｏｒｅ、ＡＨ、などＮｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｊｏｕｒｎａｌ。１４８（ｌ−２）：３２−４０，  ２００４］。制御実験条件は、ＩＬ−１βτ遺伝子（単純な細胞と同様に）に加えてｐＲｃ／ＣＭＶ−バックボーン・ベクター（ｃｒｅ遺伝子を欠く）によって共同トランスフェクションする細胞に由来する馴化培地を含んだ。手短に言えば、Ｃｒｅ活性ＩＬ−１β５ＣＡＸ細胞から集められる均し培地で処理されるネズミの繊維芽細胞は、ｐＲｃ／ＣＭＶ−既治療または単純な細胞に由来するメディアにさらされる細胞と比較して、結果として重要なＣＯＸ−２誘導になった。実験の概要のための図４を参照。
【０１９５】
ｃ）ＩＬ−１βは、下流の炎症関連の遺伝子を誘導する
ＩＬ−１βは多分化能炎症誘発性サイトカインである。そして、それの表示は急速にアップレギュレートされた以下の外傷および／または炎症である。さらに、あり余る程の炎症関連の遺伝子はＩＬ−１βによって次々に誘導される。そして、炎症反応の増悪に導く。ＩＬ−１βは下流の炎症性の遺伝子を調整する。そして、コラゲナーゼＡ（ＭＭＰ−２）およびＢ（ＭＭＰ−９）と同様にシクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ−２）および細胞間の粘着力ｍｏｌｅｃｕｌｅ−１（ＩＣＡＭ−１）（単核細胞化学誘引物質ｐｒｏｔｅｉｎ−１（ＭＣＰ−Ｉ））の誘導性のイソ型を含む。ＩＣＡＭ−ｌおよびＭＣＰ−Ｉは損傷（すなわち好中球および単核細胞、それぞれ）の部位の循環免疫細胞の補充と関連した分子であるが、ＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９は関節炎および損傷の間の組織滅失と関連したコラゲナーゼである。主要なネズミ血管内皮細胞は、転写性レベル（メッセンジャーＲＮＡ）で酵素活性レベル（ザイモグラフィ）と同様にＩＣＡＭ−Ｉ、ＭＣＰ−Ｉ、ＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９の調節上のＩＬ−１βの効果を調査する代表的な齧歯目のモデルとして使用された。図５は、時間とともにこれらの遺伝子の調節を要約する。ＩＬ−１βはＣＯＸ−２、ＭＣＰ−Ｉ、ＩＣＡＭ−Ｉおよび誘導性のコラゲナーゼＢ（ＭＭＰ−９）の統合をアップレギュレートした。構成型コラゲナーゼＢ（ＭＭＰ−２）のメッセンジャーＲＮＡレベルはＪＬ−Ｉβによって変えられなかった、しかし、面白いことに、おそらく他のＭＭＰから翻訳後活性化のため、ＭＭＰ−２酵素活性も時間とともに増加した。
【０１９６】
ｄ）  ＣＯＬＬ１Ａ１プロモータは、細胞を生じているコラーゲンｉに、不β表現をドライブする
ジョイントのＩＬ−１βの長期にわたる表示は、関節炎患者に示して、それと類似の関節症の開発に導くことができる。これはマウスのＥＬ−１βの時間的に、そして、空間的に制御された表示を使用して示されることができる。そして、それはプロコラーゲン１遺伝子のＡｌ連鎖の３．６Ｋｂのプロモータによって軟骨細胞、骨細胞および繊維芽細胞にターゲッティングＩＬ−１βＸＡＴ導入遺伝子表現によって達成されることができる。このプロモータは、骨および軟骨の遺伝子形質発現を目標とすることを示して、ＣＭＶプロモータ（図１）の代わりに、ＩＬ−ｌβＸＡＴ遺伝子においてクローンをつくられた：（ＣＯＬＬＩＡＩ−ＩＬＩ１Ｓ１）ＣＯＬＬ１Ａ１＝＞
【０１９７】
【数７】
2009501128.tif 000009
ｓｓＩＬｌβ−ＩＲＥＳ−ｌａｃＺ。
【０１９８】
コラーゲン１プロモータはＦΙＶ（Ｃｒｅ）が主に関節嚢の中で表面的に位置する細胞を汚染するという予測に基づいて選択された。そして、半月、軟骨およびおそらく骨（Ｋｙｒｋａｎｉｄｅｓなど、２００４）を含んだ。ＣＯＬＬ２は、他の適切なプロモータである。この導入遺伝子は、ｐＲｃ／ＣＭＶ−ＣｒｅＷＴ発現ベクターの一時的なトランスフェクションによるＣｒｅレコンビナーゼの表示の後に、または、レンチウイルス・ベクターＦΙＶ（Ｃｒｅ）による感染の後、建設されて、ネズミのＭＨ  ３Ｔ３厩舎細胞系においてテストされた。Ｃｒｅレコンビナーゼの表示は、導入遺伝子活性化およびＩＬ−１β表現に導いた。実験の概要のための図６を言及する。
【０１９９】
ｅ）  Ｃｏｌｌ−病気／Ｊ７マウスのジョイントの導入遺伝子活性化
ＣｏＩｌ−ＢＬ１βＸＡＴマウス（２セットのＣｏｌｌアール−ＪＬβ）のジョイントの導入遺伝子活性化の効果を評価するために１マウスは、左右の膝（左右の顎関節（ＴＭＪ）と同様に）の関節腔内のＦΙＶ（Ｃｒｅ）注入（合計１０６の伝染性の粒子）を受信した。マウスは、身繕い挙動および移動における変更のための８週の期間にわたってモニタされた。マウスはその後殺された、そして、それらの膝およびＴＭΒは組織学的に分析された。
【０２００】
行動の変化は、前述したように評価された（Ｄｕｂｕｉｓｓｏｎ、Ｄ．およびＤｅｎｎｉｓ（Ｓ．Ｐａｉｎ  １９７７）；４：１６１−７４；Ａｂｂｏｔｔ  ＦＶ、などＥｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １９８６；１２６：１２６−４１）本願明細書においてどのアールが、これらの方法に関連した教示のための参照によって加入させた。手短に言えば、一群のＣｏＩＬ−１Ｌｌ／７トランスジェニックマウス（Ｎ＝３）は、生後２ヵ月で左右の膝のＦΙＶ（Ｃｒｅ）の１０６の伝染性の粒子の単一の関節内投与を受信した。加えて、マウス（Ｎ＝３）の第二群は、塩分のある注入を受信して、規制として役立った。セッションの間に、各マウスは、１時間ビデオテープに録画された。テープは、それからデジタル的にコンピュータへ移されて、それぞれ３分の２０の期間において分析された。各マウスを示している身繕いおよび一なめの継続は、動物のグループ譲渡に盲目だった調査者による秒として記録されて、合計された。Ｃｏｌｌ−ＩＬ１βＸＡＴトランスジェニックマウスの膝へのＦΙＶ（Ｃｒｅ）の注入は、食塩水を注入された規制（図９、Ｐ＜０．０５）と比較して、結果として身繕いの継続の４倍の増加になった。
【０２０１】
回転シリンダ（２０回転数／分）を離れたマウス伐採量が記録されるまで、マウス（Ｎ＝３）の４つのグループはｒｏｔｏｒｏｄ機器（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ計測器、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ  ＯＨ）および経過時間によって機関車挙動に関して評価された。マウスは、関節内投与（８週  −  １６週の年齢）の後に、８週の期間にわたって評価された。図１０に示すように、ＦＩＶ（Ｃｒｅ）−注入されたＣｏｌｌ−ＩＬｌｊ３ＸΛＴトランスジェニックマウスが制御ＦΙＶ（ｇｆｐ）ベクター（ＴＧ＋ｇｆｐ）（他の対照動物グループ（ＷＴ−Ｃｒｅ及びＷＴ−食塩水）と同様に）を注射されるトランスジェニックマウスと比較して重要な機関車悪化（Ｔｇ＋Ｃｒｅ）を開発することが証明された。
【０２０２】
レポーター遺伝子β−ガラクトシダーゼの免疫細胞化学的検出は、β−ガラクトシダーゼおよびＣｒｅレコンビナーゼに対して上がるこのマウスモデルを使用している抗体のＦΙＶ（Ｃｒｅ）によってＣｏｌｌ−病気／Ｓ１導入遺伝子の活性化を確認するために使用された。β−ガラクトシダーゼ（図１１Ａ）Ｃｒｅレコンビナーゼ（図１１Ｂ）のテキサス州Ｒｅｄ抱合型免疫検出、同じ顕微鏡視野（図１１Ｃ）のＢ／Ｗイメージ、パネルＡ＋Ｂ方式（図１１Ｄ）の重なりおよびパネルＡ＋Ｂ＋Ｃ（１１Ｅ図）の重なりのＦＩＴＣ複合免疫検出が、図１１において示す。β−ガラクトシダーゼおよびＣｒｅレコンビナーゼの共発現は、生体内で（図１１、中実の矢）示される。すべての感染細胞が同じ容量の導入遺伝子ＣｏＩｌＡｌ→ＩＬｌβ−ＩＲＥＳ−ｌａｃＺを表すというわけではないことを示している緑色細胞（図１１、開いた矢）より多くの赤血球があることに注意されたい。
【０２０３】
４ヵ月のＣｏｌｌから集められる膝部のＨ＆Ｅ染色−ＦΙＶ（Ｃｒｅ）によって注入されるＩＬ  １β５１遺伝子導入マウスは、繊維性攣縮（図１２  Ａ、中実の矢）の、そして、関節唇（Ｆｉｇ．ｌ２Ｂ、開いた矢）の形成を明らかにした。対照的に、制御ベクターＦｌＶ（ＧＦＰ）を受信した遺伝子導入マウスは、この種の解剖学精神錯乱（図１２Ｂ）を呈しなかった。アルシアンブルー／オレンジ半定量的評価は、軟骨（図１２Ｃ、より少ない青変病）の減少およびＣｏｌｌの骨（図１２Ｄ、より少ないレッドステイン）密度を示した−規制（１２Ｅ図）と比較したＥＬｌβＸＡＴ＋ＦＩＶ（Ｃｒｅ）膝。さらに、関節の表面の肥厚と一緒の増加したクローン化は、実験動物（Ｆｉｇ．ｌ２Ｃ（小さい矢によって示される））において観察された。これらの観察は、Ｃｒｅレコンビナーゼによって導入遺伝子誘導の後に膝の関節炎の存在を示す。
【０２０４】
膝のＦΙＶ（Ｃｒｅ）注入およびＣｏｌＭＬｌβＸＡＴマウスのＴＭＪの８週後に、脳は、免疫細胞化学によって小こう細胞および星状細胞の活性化のために評価された。ＭＨＣ−クラスＩＩ抗原に対して上がる単クローン抗体を使用して、活性小こう細胞の存在は、脳（図１３  Ａ、Ｃ）において検出された。対照的に、対照動物は、いかなるＭＨＣ−ＩＩ陽性細胞も示さなかった。面白いことに、グリア原線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）（図１３Ｂ，Ｄ）によって評価されるにつれて、これらの動物の脳の星状細胞活性化の欠如があった。一般に、対照動物（不活発なトランスジェニックマウス）は、ＭＨＣ−ＩＩまたはＧＦＡＰ免疫細胞化学によって脳炎の徴候を示さなかった。
【０２０５】
ＣｏｌｌのＴＭＪのＦΙＶ（Ｃｒｅ）注入の数週間後に８−ジョイントの解剖学異常がそうであった悪いβ５７マウスは、半定量的アルシアンブルー  −  オレンジＧ組織化学  −  によって評価した。半月と同様に顆状ヘッドを表している非アクティブのＣｏｌｌ−ＩＬ１ＸＡＴマウスからのＴＭＪ部が、図１４ＡおよびＣで示す。比較として、図１４ＢおよびＣは、Ｃｏｌｌから集められるＴＭＪ部を表す−ＴＭＪのＦΙＶ（Ｃｒｅ）を注射されるＩＬβＸＡＴマウス。ＴＭＪ細胞層の見かけの再編成はＦΙＶ（Ｃｒｅ）注入に続いているのを認められた。それによって、最も表面的な細胞層の損失は軟骨細胞（図１４、開いた矢）の増殖の層の分裂を伴って強調された。加えて、アルシアンブルー−オレンジＧ組織化学（図１４）−によって半定量的に評価されるにつれて、軟骨容量の減少はＦＩＶ（Ｃｒｅ）−既治療Ｃｏｌｌ−ＪＪＬ１ＸＡＴマウスの顆状上部において観察された。
【０２０６】
２．  実施例２−成熟したマウスの関節炎の発現：ＩＬ−１β身体のモザイクモデル
ａ）  不１Ｂ身体のモザイク・マウスの開発
成熟したマウスのＪＸ−１βの長期にわたる、低レベルの関節腔内の表示は、結果として関節炎の発現になることができる。感染細胞の遺伝子の構成の永続的な変化により、特定の場所で、そして、特定の発育時期の間、これは、ＩＬ−１βの長期の表示の誘導のための身体のモザイク分析法を使用して示されることができる。身体のモザイク分析モデルは従来のトランスジェニックマウスと比較して重要な効果を提供する。−その理由は、次のことにある。それは現像の間、トランスジェニックマウスにおいてしばしば遭遇される代償の改作を回避して、遺伝子（Ｂｒｏｏｋｓなど、１９９７、１９９９）の局所の活性化を許容する。コラーゲンＩ、プロモータは、ＦＦＶ（Ｃｒｅ）が主に、半月、軟骨およびおそらく海綿状の骨細胞を含む、関節嚢の中で表面的に位置する細胞を汚染するという予測に基づいて導入遺伝子表現をドライブするために基礎を形成されて選択された。ＣＯＬＬ２は、適切なプロモータの他の選択である。
【０２０７】
ＣＯＬＬＩ−ＩＬ１βＸＡＴは、施肥されたＣ５７ＢＬ／６卵母細胞において微量注入されて、その後偽妊娠母に植設された。マイクロインジェクションのワンセットは８匹の子犬を非常に与えられてすでに実行された。それについて、３はＥＬｌβＸＡＴ導入遺伝子に対して特に設計されるプライマを使用している尾部格安品から抽出されるゲノムＤＮＡのＰＣＲによる陽創設者と確認された。３人の創設者は、機能的な導入遺伝子の生殖系列伝送の分析のためのＣ５７Ｂ１／６野生型在庫マウスで育てられた（Ｎｇｏなど、２００２；Ｐｉｎｋｅｒｔ  ２００３）。事実、少なくとも２人の創設者は研究費提出時に移植遺伝子の子犬をうまく与えた。そして、それは更なる繁殖のための満期まで上がっていた。
【０２０８】
ｂ）  生体内でＣＯＬＬｌ−病気／の活性化を特徴づける
ＣＯＬＬＩ−ＩＬ１βＸＡＴ機能は、３ヵ月のマウスの膝関節カプセル（５０μｌ体積のほぼ１０７の伝染性の粒子）へのＦΙＶ（Ｃｒｅ）注入の後の移植遺伝子の境界および休止中のＣＯＬＬＩ−悪いβＸＡＴの活性化において評価されることができる。休止中のＣＯＬＬＩを起動させるＦΙＶ（Ｃｒｅ）の能力−本願明細書においてこの教示のための参照によって組み込まれて、ＩＬｌβＸＡＴ遺伝子は、Ｕ．Ｓ．特許出願Ｎｏ  ６０／６２７，６０４において先に述べていた。ＣＯＬＬｌ−ＩＬｌ／１活性化は、以下の通りに評価されることができる。第一に、ｌａｃＺ表現は、前述したように（Ｋｙｒｋａｎｉｄｅｓなど、２００１、２００４）Ｘ−ｇａｌ組織化学および免疫細胞化学によって脱石灰された組織学部において直ちに評価されることができる。ｓｓＩＬ−１βおよびｌａｃＺ反訳記録レベルは、実験的なＦΙＶ（Ｃｒｅ）関節内注入および制御ＦΙＶ（ｌａｃＺ）関節内投与マウスから全メッセンジャーＲＮＡ膝抽出物の半定量的ＲＴ−ＰＣＲによって評価されることができる。ｓｓＩＬ−１βおよびβ−ガラクトシダーゼの局在は、細菌β−ガラクトシダーゼおよびヒトＩＬ−１βに対して特に上がる免疫細胞化学を使用している抗体によって、組織学部に達成されることができる；変換された細胞のアイデンティティは、以下のテストに対して上がる倍の免疫蛍光法を使用している抗体によって確認されることができる。骨細胞／骨送風は、表現アルカリホスファターゼ、オステオカルシン、タイプＩコラーゲンによって確認されることができる。軟骨細胞は、コラーゲンＩＩ（Ｓｃｏｔｔ−一般経費など、２００２）の検出によって確認されることができる。組織学的に、ｓｓＩＬ−１βメッセンジャーＲＮＡ局在は、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリッド形成（ＩＳＨ）によって実行されることができる；変換された細胞のアイデンティティは免疫細胞化学（ＩＣＣ）を有する結合ＩＳＨによって確認されることができる。そして、上述した抗体を使用する。共同の滑液の分泌されたヒトＩＬ−ｌβのレベルは実施例１にて説明したように、ＥＬＩＳＡによって分析されることができる（＃ＤＬＢ５０のカタログ化する；研究開発Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ  ＭＮ））。３−５のマウス線は、遺伝子活性化の後にメッセンジャーＲＮＡ、タンパク質および組織学レベルで導入遺伝子機能のために分析されることができる。この目的のために、トランスジェニックマウスは、生後２ヵ月で関節内にＦΙＶ（Ｃｒｅ）ＦＩＶ（ｌａｃＺ）または食塩水を注射されることができて、４週後に、その後分析されることができる。２本のマウス線は結果としてなる。そして、１が更に分析されることができるＩＬ−１βの「適度な」レベルを有する「高さ」およびもう一方を表す。
【０２０９】
ｃ）  膝の不１Ｂ表現の長期間作用を調査する
膝のＩＬ−１β表現の効果は、ＦΙＶ（Ｃｒｅ）ＦΙＶ（ｌａｃＺ）または食塩水の関節内投与の後、時間とともに（４−８−１２−１６週）若年成人（３ヵ月）ＣＯＬＬｌ−ＥＬβＸＡＴトランスジェニックマウスにおいて研究されることができる。ＣＯＬＬＩの膝に対するＣｒｅレコンビナーゼの関節腔内の転送−ＩＬｌβＸＡＴトランスジェニックマウスは、感染細胞によって結果としてヒトＩＬ−１βの継続された表示になることができる。対照的に、ＦＩＶ（ｌａｃＺ）−注入されたマウスは、検出可能な人間のＩＬｌβ表現が欠如している。食塩既治療マウスは、規制として役立つこともできる。関節内投与の後、動物は、それらのケージに戻されることができる。その後、ＦΙＶ（Ｃｒｅ）ＦΙＶ（ｌａｃＺ）および食塩関節内投与の効果は、２つのＣＯＬＬＩにおいて分析されることができる−上で確認されるＩＬ１βτ遺伝子導入マウス線：マウスの中のＩＬ−１βの最も高い表示によって特徴づけられる１つは、ＩＬ−１β（「適度な」）の正中の表示を、分析（膝ホモジェネートのＥＬＩＺＡによって定まる）以下のＦΙＶ（Ｃｒｅ）ｉｎｔｒａ−骨関節注入（「高い」）および第２のマウス線に沿って並べる。ＩＬ−１β式の効果は、時間とともに評価されることができる（４−８−１２−１６週）。
【０２１０】
ｄ）  分析的な−行動の評価
関節痛および共同の機能不全（膝の痛み）は（１）機関車性能で測定されることができる回転シリンダ（ｒｏｔｏｒｏｄ機器、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ計測器、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ  ＯＨ）および（２）筋力に評価されるにつれて、逆にされたメッシュ法によって評価されるにつれて。手短に言えば、この方法は、握力を評価することによって、神経筋の状態を評価する。ワイヤラスによって一端にカバーされた透明プラスチック・シリンダ（２０ｃｍのｘ  ２０ｃｍ×３０ｃｍ）は、造られた。メッシュワイヤ棒は、離れて直径１ｍｍおよび１ｃｍであった。動物がメッシュの中央に閉じこもるように、スクリーンの矩形領域はテープを巻かれた。マウスがスクリーンに配置されたあと、シリンダは上に向かい横に寝具を通じて下にされた：メッシュからのそれらの落下までの経過時間は、数秒で記録された。マウスが第１のトライの１０ｓより少なく落ちる場合、この動物は第２のチャンスを与えられた。これらの方法は、臨床経験から採用されて、関節痛をもつヒト患者に示す行動のおよび身体のイベントを繰り返すことをねらう。メッシュを離れたマウス落下までの完全経過時間は、このように記録されることができる。
【０２１１】
ｅ）  周縁評価
不βが多くのｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ−関連の遺伝子を誘導することは公知の多分化能サイトカインであるので、サイトカイン（ＴＮＦα、ＴＬ−６、ネズミのＩＬ−１β）接着分子（ＩＣＡＭ−Ｉ５  ＶＣＡＭ−Ｉ）ケモカイン（ＭＣＰ−Ｉ）およびコラゲナーゼ（ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−９）の表示はメッセンジャーＲＮＡおよびタンパク質レベルで評価されることができる。加えて、プロスタグランジンＰＧＥ２の生産と同様に、誘導性のＣＯＸ−２、ＣＯＸ−１、ｍＰＧＥＳおよびｃＰＧＥＳのレベルは、前述したように（ＲＥＦ）メッセンジャーＲＮＡおよびタンパク質レベルで測定されることができる。さらに、共同の形態学は、以下の通りにＨ＆Ｅで染色した組織学部において評価されることができる。関節軟骨の変形性変化は、評価されることができて、光学顕微鏡の下で検討される矢状切片において等級分けされることができて、５つのカテゴリにスコアされることができた：等級０、見かけの変化でない；等級１、関節軟骨の表面的な繊維性攣縮；等級２、非石灰化された軟骨に限られている欠陥；等級３、石灰化軟骨に達している欠陥；そして、等級４、関節の表面の軟骨下骨層の露顕。各ジョイントは、連続切片の中で観察される最高スコアに従って等級分けされることができる。ジョイントの好中球、単核細胞／マクロファージおよびリンパ球を含む炎症細胞の存在は免疫細胞化学によって組織学レベルで調査されることができる、そして、実験的なおよび制御マウスの二重免疫蛍光法は４−８−１２−１６週後療法を犠牲にした。手短に言えば、好中球は、ネズミ反マウス好中球抗体によって検出されることができる（ＭＣＡ７７１ＧＡ；血清科学技術、Ｒａｌｅｉｇｈ、ＮＣ）；単核細胞及びマクロファージは、ネズミ反マウスＣＤ１１ｂ抗体で着色されることができる（ＭＣ  Ａ７４；血清科学技術のＩｎｃ）；活性細胞は、ネズミ反主組織適合性複合系クラスＩＩ抗体によって免疫局在性でありえる（ＭＨＣ−ＩＩ；Ｂａｃｈｅｍ、Ｔｏｒｒａｎｃｅ、ＣＡ；クローンＥＲ−ＴＲ３）。リンパ球は、ＣＤ３に対して上がる単クローン抗体によって検出されることができる（ＭＣＡ  １４７７；血清科学技術）そして、細胞の数のＣＤ４（血清科学技術）定量化は、分野（汚染性プロフィールと同様に）につき、陽性細胞の数に関して、両方とも記載されていることができる。血管内皮細胞は、ＰＥＣＡＭ−Ｉ（ＣＤ３１）（Ｋｙｒｋａｎｉｄｅｓなど２００３）に対して上がる抗体によって検出されることができる。
【０２１２】
ＦＩＶタンパク質の導入がＦＩＶベクターを有するマウス既治療の免疫性反応を誘発することができるので、ホストの免疫性反応はＦＩＶ関節内投与の後に特徴づけられることができる。ウィルスおよび移植遺伝子のタンパク質に対する抗体の存在（タイター）は、異なる実験的な時点で血清において量的に評価されることができる。この目的で、ヒトＩＬ−１βと同様にＦＩＶ  ｐ２４テストのための免疫グロブリンＧおよび免疫グロブリンＭタイターは、カスタマイズされたＥＬＩＳＡ方法によって評価されることができる。手短に言えば、ＥＬＩＳＡプレートは、ヒトＩＬ−１βの５つのμｇでおおわれていることができる（シグマ体；Ｓｔ．  Ｌｏｕｉｓ  ＭＯ）またはｐ２４組換え型タンパク質（ＩＤＥＸＸ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ社；Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ  ＭＥ）。試験血清を有する培養の後、プレートは、アルカリ性ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ−複合ヤギ抗マウス免疫グロブリンＧおよび免疫グロブリンＭによって暖められることができる（Ｓｏｕｔｈ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ａｓｓｏｃｉａｔｅｓ、Ｉｎｃ；Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ  ＡＬ）。Ａｎｘｉｂｏｄｙタイターは、線形外挿（Ｋａｎｇなど、２００２）を仮定している塩分のある注射されたマウスの吸光度レベル（４０５ナノメートルで）に達した血清希釈剤として確立されることができる。
【０２１３】
ｆ）  中枢神経系評価
多くの小さい神経ペプチド（例えばＰ物質（ＳＰ）およびカルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ））は、末梢から中枢神経系（ＣＮ）まで痛みの伝送に関係した。マウス膝のＤＬ−１βの継続された表示は、周辺炎症反応に加えて、ＣＮＳの神経伝達物質の表示の変化を誘発することができる。従って、ＳＰおよびＣＧＰｖＰの表示は、以前記載されている（Ｋｙｒｋａｎｉｄｅｓなど２００２ａ、２００２ｂ）方法を適応させている実験的なおよび制御マウスの脊髄において評価されることができる。特定の強調は、膝からの侵害受容の求心性神経が脊髄の背角でシナプスを形成する脊髄の領域に与えられることができる。
【０２１４】
ｇ）  結果および変形例
ＦΙＶ（Ｃｒｅ）の関節内投与は、結果としてＩＬ−１βの表示になることができる：ジョイントのＦＩＶ−によって媒介されるＣｒｅレコンビナーゼ表現は、永久に膝の感染細胞の遺伝子の構成を変えることができて、結果としてＩＬ−１βの関節腔内の表示になることができる。ＦＩＶを有する以前の仕事は、関節内投与の後にウイルスによって柔らかいおよび硬い関節の薄紙の成功した感染症を示した（Ｋｙｒｋａｎｉｄｅｓ  Ｓ．などＤｅｎｔａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ．８３（ｌ）：本願明細書においてこの教示のための参照によって組み込まれる６５−７０（２００４））。ＦΙＶ（Ｃｒｅ）注入はＣＯＬＬｌ−ＩＬｌβＸＡＴトランスジェニックマウスに繰り返されることもできる。そして、動物が２６週間生存することができる。その時には、それらは犠牲にされることができて、前述したように分析されることができる。ＣＯＬＬＩ−ＩＬｌβ遺伝子は、ＦｒＶ（ＣＯＬＬｌ−ＩＬ１β）（ＣＯＬＬ１Ａ１駆動ｓｓＩＬ−１Ｌｌ｜８を有する細胞を変換することができるウイルス）を開発するために確立した分子生物学方法を使用しているＦＩＶバックボーン・ベクターにクローンをつくられることもできる。さらに、より強いプロモータは、チキンβ−アクチン／ＣＭＶ融合プロモータ（Ｄａｌｙなど、１９９９）のような、新規なＦＩＶ（ＣＯＬＬｌ−ＩＬＩｉＳ）ベクターの関節内投与の後にｓｓＩＬ−１βを膝に吹きつけるために使用されることができる。これは、身体のモザイクモデルに対する現実的代案である。この目的で、レポーター遺伝子β−ガラクトシダーゼの表示は、膝（Ｋｙｒｋａｎｉｄｅｓなど、２００４）の最高５週および生体内肝臓および脳の最高３ヵ月間観察された。身体のモザイクモデルの効果は、ＦΙＶ（Ｃｒｅ）注入が結果として細胞ゲノムの永続的な変更になって、ヒト患者のその守る（遵守する）と類似の慢性低レベルの炎症に導くということである。
【０２１５】
３．  実施例３−関節炎の管理のための小さい抑制のｓｉＲＮＡベースの処理
ＩＬ−１βは、シクロオキシゲナーゼ−２（コックス−２）（炎症の間のプロスタノイドの生産の鍵となる律速酵素）のインデューサである。それが関節痛の場合しばしば利用される市販の店頭および処方薬の標的であった時から、ＣＯＸ−２は特定の治療的な関心の中である。ｃｙｃｌｏｏｘｙｇｅｎａｓｅ−プロスタグランジン経路のＣＯＸ−２、同じく他の部材を減らすことができる小さい抑制のリボゾームリボ核酸（ｓｉＲＮＡ）構造物は開発された。そして、ｍＰＧＥＳおよびｃＰＧＥＳを含んだ。これらのｓｉＲＮＡ構造物が、ネコのような免疫不全ウィルス・プラットフォーム（例えばＦＩＶ（ｓｉＲＮＡ））から表されることができて、関節炎治療のための遺伝子治療のために使われることができる。従って、ＦＩＶ（ｓｉＲＮＡ）導入ベクターは、ＣＯＸ−２、構成型イソ型ＣＯＸ−Ｉ、同じくｃＰＧＥＳおよびｍＰＧＥＳのために発生することができる。この目的で、共同の病理学および挙動は、関節炎の誘導の後のさまざまな時点で、そして、ＣＯＸ−２およびＣＯＸ−Ｉ（混合インヒビター（すなわちイブプロフェン）と同様に）のための薬理学的選択的阻害剤で治療されるマウスと比較してＦＩＶ（ｓｉＲＮＡ）を有するＩＬ−１βＸＡＴマウス既治療において調査されることができる。
【０２１６】
ａ）  トランスジェニックマウスの抗炎症の療法
不Ｉβがコックス−２の表示をプロスタグランジンＥ２（ＰＧＥ２）（ジョイントを含む多くの組織の炎症の主要な規定能）を形成するようにすると確認された。ＣＯＸ−２（構成的に表されたＣＯＸ−Ｉと同様に）時間的に（時間経過）空間的に分子レベルで特徴づけられて、そして、（表現のサイト）そして、関節炎（ＩＬ−１βトランスジェニックマウスの神経伝達物質表現および行動の計測と同様に）に関連したＰＧＥ２レベルおよび他の炎症伝達物質によって関連させることができる。実施例２において確認される創設者線のトランスジェニックマウスは、ＣＯＸ−Ｉ、ＣＯＸ−２、ｍＰＧＥＳおよびｃＰＧＥＳのためのＦＩＶ（ｓｉＲＮＡ）を有する既治療でありえる。加えて、マウスの他のグループは、ＣＯＸ−２（ＮＳ−３９８）に対して、食事のＮＳＡＩＤイブプロフェンと同様にｐｈａｒａｍｏｃｏｌｏｇｉｃなインヒビターを与えられることができる。手短に言えば、膝炎症は、ＦΙＶ（Ｃｒｅ）の関節内投与によって、８週間目のＣ０ＬＬｌ−ＩＬｌｊ３ＸＡＴトランスジェニックマウスにおいて誘発されることができる。抗炎症の制度の臨床用途に合わせて、ＦＩＶ（Ｃｒｅ）−ｍｊｅｃｔｅｄマウスが膝関節病理学および機能不全（実施例２に由来するデータに基づく）を示し始めるときに、抗炎症の処理は始められることができる。あるいは、抗炎症性処理は、ＦΙＶ（Ｃｒｅ）注入の前か後に、硬化時間から始まることができる。マウスは、抗炎症の処理（４−８−１２−１６週）の開始の後に、さまざまな時点で殺されることができる。従って、中枢神経系変化にと同程度よく、治療の効果は、膝関節炎（解剖学、組織学的の、分子変化）および機能不全（行動の変化）に特徴づけられることができる。
【０２１７】
ｂ）  ＦＩＶ（ｓｉＲＮＡ）開発および管理
偽入力されたレンチウイルスは、インターロイキン１駆動炎症が始められた小さい抑制のリボゾームリボ核酸（ｓｉＲＮＡ）種マウス接点の表示をドライブするために用いることができる。１９−２１の塩基対のサイズを有するこれらの短い二重鎖ＲＮＡは、生体外で、そして、生体内で（Ｈａｎｎｏｎ、２００２）目標メッセンジャーＲＮＡシーケンスのガイディング配列特異的低下によって、哺乳動物細胞の遺伝子サイレンシングを能率的に伝達することができる。ＦＩＶはＲＮＡポリメラーゼＥｌプロモータを含むベクターの基礎を形成した。そして、一本鎖ＲＮＡのドライブ表示はそれにおいて活発に抑制のリボゾームリボ核酸種を届けるために用いることができる。これらのリボゾームリボ核酸種は、短いヘアピン・リボゾームリボ核酸（ｓｈＲＮＡ）を細胞内の処理から形成する茎−ループ構造を含む（システムＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｐａｄｄｉｓｏｎなど（２００４））。これらのような方法が、多種多様な生体内でのシステムで用いられた（Ｔｉｓｃｏｒｎｉａなど、２００３；Ｒｕｂｉｎｓｏｎなど、２００３）含むことは、脳（Ｈｏｍｍｅｌなど、２００３）の特定の遺伝子形質発現の中でｓｉｌｉｅｎｃｉｎｇすることを局所化した。効果的に脂質仲介のＰｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎ  Ｅ２の生産に関係する多くのキー分子の遺伝子サイレンシングを伝達するｓｉＲＮＡｓは、本願明細書において開示される。これは、例えば、ＣＯＸ−Ｉおよび−２を含む、そして、細胞内可溶質およびタイプ−１膜はプロスタグランジンＥ２シンターゼ（ＰＧＥＳ）を結びつけた。ｓｈＲＮＡのもののためのシーケンス符号化は、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）レポーター遺伝子を含んでいるＦＩＶクローニングベクタに、下位クローンをつくられることができる。培養組織の細胞のトランスフェクションのｓｉＲＮＡ活性の成功したテストの後、ＶＳＶ−Ｇ偽入力されたウィルス粒子は、レンチウイルス表現／クローニングベクタの同時発現によってパックされることができて、ベクターを２９３Ｔの細胞で包んでいることができる。これらのウィルス粒子は、複製不適格者以外の感染症コンピテントでありえて、テストされることができて、炎症を起こしたジョイントに噴射される前に、生体外でタイターした。
【０２１８】
ｃ）  薬理学的抗炎症の療法
コックス−２選択的阻害剤（ＮＳ−３９８；Ｋｙｒｋａｎｉｄｅｓなど、２００２）ＣＯＸ−ＩインヒビターＳＣ−５６０（食事の６４ｐｐｍ）または混合インヒビター（食事の３７５ｐｐｍのイブプロフェン）は、食事を介してマウスに与えられることができる。この投与経路は長期間治療（週−月）を単純化する、そして、生体内に特にこれらの酵素を阻害するために必要な経口投与量は前もって決定されていた（Ｊａｎｔｚｅｎなど、２００２；ミュラー−Ｄｅｃｋｅｒなど、２００２）。
【０２１９】
ｄ）  結果及び変形例
抗炎症の治療は、侵害知覚を減らすことができる。しかしながら、ＮＳＡＩＤは、ＣＯＸから独立した機構によって炎症に影響することができる。例えば、若干のＮＳＡＩＤは、ペルオキシゾーム増殖因子活性レセプタＰＰＡＲ−γのためのリガンドであって、この機構（ｈｉ追加）によるいくつかのＮＳＡＩＤＳがＩＫＢキナーゼを阻害することによって炎症誘発性ＮＦ−／ｃＢ活性の刺激に対する反応を抑制することを示したという抗炎症の趣旨を行うことができる。他のポイントの潜在的重要性は、ＣＯＸイソ型を目標としている薬が平行した５−リポキシゲナーゼ経路の付随するアップレギュレーションに導くことができるということである。シクロオキシゲナーゼおよび５−リポキシゲナーゼ（ＭＬ３０００）の二重インヒビターの効果の最近の研究は、同時抑制が消炎作用の十分なレベルを得ることを必要とすることができることを示唆する。事実、この種の大型そりは、現在Ｅｕｒｏｐｅの位相ＨＩ臨床試験においてある。この種の通りが、本願明細書において使われることもできる。
【０２２０】
面白いことに、ＣＯＸ−Ｉおよびコックス−２は、末梢性炎症でのそれらの役割に加えて、両方とも中枢神経系のレベルで痛みの中心処理の数度に関係されるように見える。全体の、行動のおよび、病理学的利点は、予想されるｆｒｏｎｉＮＳ−３９８管理およびＣＯＸ−２ノックアウト・マウスである。若干のモデル系において、ＣＯＸ−Ｉが、炎症および痛みに影響するとわかった。このように、ＣＯＸ−Ｉ選択的阻害剤およびＣＯＸ−Ｉノックアウト・マウスを有する結果は、利点を示すこともできる。最近、ＣＯＸ−ＩおよびＣＯＸ−２に加えて、少なくとも２つの新規なＰＧＥ２シンターゼ・イソ型は、結果としてプロスタグランジンの生産になる酵素の一系統に加えられた：膜関連のｍＰＧＥＳ（ＣＯＸ−２に機能的に連結する）およびＣＯＸ−Ｉに依存するＰＧＥ２生産との関連があるように見える細胞内可溶質ｃＰＧＥＳ。細胞局在が若干の役割を演ずることができるにもかかわらず、機能的な継手は主に発現パターンの要因である：ＣＯＸ−２と同様に、ｍＰＧＥＳは炎症誘発性刺激によって劇的にアップレギュレートされるが、ｃＰＧＥＳは現在まで検討される細胞システムにおいて構成的に表される。加えて、ＣＯＸ−２およびｍＰＧＥＳは、アジュバント関節炎のネズミ・モデルにおいて、同等にアップレギュレートされる。従って、ｍＰＧＥＳは、ＪＩＬ−１βによって誘発された関節炎で役割を果たすことができる。このように、ｍＰＧＥＳの調節も、本願明細書において考慮される。これは、確立したおよび日常的に使用される方法を使用することによって、直ちに達成されることができる。事実、少なくともＩＬ−１β誘導された脳炎モデル（Ｍｏｏｒｅなど２００４）で、最近のデータは、ＣＯＸ−２が転写性レベルでｍＰＧＥＳを調整することを示唆する。
【０２２１】
選択される線量が以前、重大な毒性の証拠のない長期のマウス実験のコックス活動を害することを示したことは、指摘にとって重要である。しかしながら、ＮＳＡＩＤ食事（そして、規制）を入れられる動物は、ドラッグ処理の可能な毒作用を評価するために、毎週量られることができる。
【０２２２】
【数８】
2009501128.tif 000010
【０２２３】
【数９】
2009501128.tif 000011
【０２２４】
【数１０】
2009501128.tif 000012
【０２２５】
【数１１】
2009501128.tif 000013
【０２２６】
【数１２】
2009501128.tif 000014
【０２２７】
【数１３】
2009501128.tif 000015
【０２２８】
【数１４】
2009501128.tif 000016
【０２２９】
【数１５】
2009501128.tif 000017
【０２３０】
【数１６】
2009501128.tif 000018
【０２３１】
【数１７】
2009501128.tif 000019
【０２３２】
【数１８】
2009501128.tif 000020
【０２３３】
【数１９】
2009501128.tif 000021
【０２３４】
【数２０】
2009501128.tif 000022
【０２３５】
【数２１】
2009501128.tif 000023
【０２３６】
【数２２】
2009501128.tif 000024
【０２３７】
【数２３】
2009501128.tif 000025
【０２３８】
【数２４】
2009501128.tif 000026
【０２３９】
【数２５】
2009501128.tif 000027
【０２４０】
【数２６】
2009501128.tif 000028
【０２４１】
【数２７】
2009501128.tif 000029
【０２４２】
【数２８】
2009501128.tif 000030
【０２４３】
【数２９】
2009501128.tif 000031
【０２４４】
【数３０】
2009501128.tif 000032
【０２４５】
【数３１】
2009501128.tif 000033
【０２４６】
【数３２】
2009501128.tif 000034
【０２４７】
【数３３】
2009501128.tif 000035
【０２４８】
【数３４】
2009501128.tif 000036
【０２４９】
【数３５】
2009501128.tif 000037
【０２５０】
【数３６】
2009501128.tif 000038
【０２５１】
【数３７】
2009501128.tif 000039
【０２５２】
【数３８】
2009501128.tif 000040
【０２５３】
【数３９】
2009501128.tif 000041
【図面の簡単な説明】
【０２５４】
添付の図面（中に組み込まれて、この仕様の一部を構成する）は、いくつかの実施例を例示して、説明と共に開示された組成物および方法を例示する。
【図１】図１は、ＩＬ−１βＸＡＴ−切除されて活性化された導入遺伝子−を示す。ＩＬ−１βＸＡＴは、サイトメガロウィルス・プロモータ（ＣＭＶ）から成る双シストロン性遺伝子である、「ｆｌｏｘｅｄされた」転写性終了カセット
【０２５５】
【数１】
2009501128.tif 000042
が続く。ヒトＩＬ−１  ＲＡペプチド分泌シグナル（一本鎖）は、成熟したヒトＩＬ−１βＯＲＦ（ｓｓＩＬ−１β）レポーターｌａｃＺ遺伝子およびウシ成長ホルモン・ポリＡメッセンジャーＲＮＡ尾部（ピコアンペア）に溶融した。内部リボゾーム進入シグナルは、第１のＯＲＦのほぼ４５％で、翻訳および第２のＯＲＦ（ｌａｃＺ）の表示を容易にする。
【図２】図２は、誘導性のＩＬ−βＸＡＴ導入遺伝子のＣｒｅによって媒介される活性化を示す。ＥＬ−１βＸＡＴ遺伝子は、ネズミの繊維芽細胞ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞線にトランスフェクションした。発現ベクターｐＲｃ／ＣＭＶ−ＣｒｅＷＴの同時トランスフェクション後のＣｒｅレコンビナーゼの一時的発現は結果としてＩＬ−１ΒＸＡＴ活性化になった。そして、ＩＬ−１βメッセンジャーＲＮＡの高次はＲＴ−ＰＣＲ（Ｘ−ｇａｌ組織化学（１０Ｘ）によって評価されるｌａｃＺ表現と同様に）によって検出した。コントロールの条件は（ａ）純粋なＮＩＨ  ３Ｔ３細胞（ＬＬ−１βＸＡＴおよびｐＲｃ／ＣＭＶ−バックボーン・ベクター（ｃ）によって共同トランスフェクションする（ｂ）細胞と同様に）を含んだ。そして、それは強いＣＭＶプロモータから最小の自然発生的なリードスルーのためおそらくＩＬ−１βおよびｌａｃＺ表現の背景レベルを示した。
【図３】図３は、ＣｒｅＰｒが切除されたｌｏｘＰに誘導されたＩＬ−１βを誘発することを示す遺伝子組換え、そして、遺伝子活性化。ＩＬ−１βＸＡＴ遺伝子は２９３ＨＧＬＶＰ／ＣｒｅＰｒ細胞およびＴＬ−βの表示に一過性にトランスフェクションした、そして、ｌａｃＺはＲＵ４８６（１０−７Ｍ）管理の後に評価された。ＲＴ−ＰＣＲによって評価されるにつれて、ＲＬＪ４８６によるＣｒｅレコンビナーゼの（Ａ）活性化は結果としてＴＬ−βおよびｌａｃＺメッセンジャーＲＮＡの増加機構になった。デモンストレーション目的のために、ＩＬ−１β標準曲線（１μｇ−１０−５μｇ）は、このパネルに含まれる。（Ｂ）Ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔｌｙ、ヒトＴＬ−βのためのＥＬＩＳＡによって評価されるにつれて、タンパク質がＲＵ４８６−既治療細胞の上澄の媒体で見つけられた分泌されたＴＬ−βの著しくより高いレベル。レポーター遺伝子β−ガラクトシダーゼの表示は、Ｘｇａｌ組織化学によっても確認された（Ｃ）：単純な細胞は背景染色の最小のレベルだけを提示するが、培養基のＲＵ４８６の追加は結果としてＸ−ｇａｌ陽性細胞の数の重要な増加になった。切除されたＤＮＡ組換がそうであった（Ｄ）ＥＬ−１βＸＡＴは、ゲノムＤＮＡのＰＣＲによって、
【０２５６】
【数２】
2009501128.tif 000043
の側面に位置したプライマ・セット（ＵＰ及びＬＰ）を使用しているＲＵ４８６（１０−７Ｍ）を含んでいるメディアと同様に質素な成長媒体で処理される細胞からの抽出物を確認したシーケンス。質素な媒体の下の細胞のＰＣＲ増幅は、全長の産物（約３Ｋｂ）休止中のＩＬ−１β状態の直説法、コントラスト、大きさにおいて１Ｋｂ、ＰＣＲ製品を産生されるＲＵ４８６−既治療細胞、ＤＮＡ組換の直説法および
【０２５７】
【数３】
2009501128.tif 000044
カセットの切除を得た。
【図４】図４は、生物学上強力なＥＬ−１βサイトカインの表示のＴＬ−βＸＡＴ駆動結果を示す。導入遺伝子から派生したＩＬ−１βサイトカインの生物学的効力は、以下の通りに生体外で評価された。マウスの繊維芽細胞は、以前上の（ｐＲｃ／ＣＭＶ−ｃｒｅＷＴベクターを有する同時トランスフェクション）図２にて説明したように、Ｃｒｅによって誘発されたＩＬ−１βＸＡＴによってトランスフェクションした洗練されたＮＴＨ  ３Ｔ３細胞から集められる馴化培地を有する既治療であった。ＣＯＸ−２反訳記録レベルは、的状赤血球（ネズミの繊維芽細胞）において前述したように測定されて、ＴＬ−β生物学的効力の基準として使用された。馴化培地は、的状赤血球への追加の前に、３７℃で２時間の中和抗体によって暖められた。中間の収集した調子単純なＮＥＨ  ３Ｔ３細胞（ＥＬＩＳＡによって定まる含んでいる＜３．９ｐｇ／ｍＬのｈＩＬ−ｌβ）がそうであった（Ａ）馴化培地は、ネズミの繊維芽細胞（次々にネズミのＣＯＸ−２メッセンジャーＲＮＡの低次を示した）に配置した。さらに、また、ＩＬ−１βＸＡＴ＋ｐＲｃ／ＣＭＶ−バックボーン・ベクター（含まれた＜３．９ｐｇ／ｍＬのｈＣＬ−ｌβ）によってトランスフェクションするＮＴＨ  ３Ｔ３細胞から（Ｂ）均し培地は、ネズミのＣＯＸ−２メッセンジャーＲＮＡの低次を示した。対照的に、ＩＬ−１βＸＡＴ＋ｐＲｃ／ＣＭＶ−ＣｒｅＷＴから（Ｃ）均し培地は、ＣＯＸ−２メッセンジャーＲＮＡを著しく誘発されるＮＩＨ  ３Ｔ３細胞（１ｎｇ／ｍＬのＫＴＬ−Ｉβ）をトランスフェクションさせた的状赤血球；制御ウサギＩｇＧ抗体（５つのμｇ／ミリリットルＩｇＧ１アイソタイプ）を有する均し培地の（Ｄ）プレインキュベーションは、ＣＯＸ−２規則に最小の影響を及ぼした。しかしながら、ウサギ反ｈＩＬ−１β（５つのμｇ／ミリリットルＩｇＧ１）抗体を有する均し培地の（Ｅ）プレインキュベーションは、ＣＯＸ−２誘導を減らした。（Ｆ）陽性のコントロール：ヒト組換えＩＬ−１β（１ｎｇ／ｍＬ＋５μｇ  ＩｇＧ１アイソタイプ）の相加。（Ｇ）ヒト組換えＩＬ−１βは、５つのμｇ／ミリリットル中和抗体によって、前孵化した。結果は、結論においてグループＡ．と関連してＣＯＸ−２メッセンジャーＲＮＡの誘導を折り畳むにつれて、この実験がＥＬ−ｌβＸＡＴ遺伝子の活性化が結果として生物学上強力なＩＬ−１βの生産およびその後誘導性のＣＯＸ−２の増加機構になることを証明したことを明らかにされる。（Ｎ＝３）。＊ｐ＜０．０５；Ｓ．Ｅ．Ｍ。
【図５】図５は、ＩＬ−１βが炎症関連の遺伝子を誘導することを示す。ＩＬ−１βの効果は、代表的な齧歯目の細胞型として主要なネズミ内皮細胞培養を利用して、生体外で評価された。この実験では、ネズミのＩＬ−１β（１０ｎｇ／ｍＬ）は、洗練された一次細胞に与えられて、７２時間のコースの上の反訳記録レベルで、その後いくつかの炎症関連の遺伝子の調節がないか調べられた。これらの分子は、コラゲナーゼ−Ａ（Ｂ）（ＭＭＰ−２）と同様に、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ−２）（細胞間の粘着力ｍｏｌｅｃｕｌｅ−１（ＩＣＡＭ−Ｉ）および単核細胞化学誘引物質タンパク質−１（ＭＣＰ−Ｉ））の誘導性のイソ型を含む（Ａ）そして−Ｂ（ＭＭＰ−９）。ザイモグラフィによって評価されるにつれて、パネル（Ｃ）はＭＭＰ−２およびＭＭＰ−９の酵素活性レベルを表す。
【図６】図６は、ＣＯＬＬＩ−ＩＬβＸＡＴ遺伝子のＣｒｅによって媒介される活性化を示す。プロコラーゲンのＡｌ一続きの中で３．６Ｋｂのプロモーター、遺伝子（骨および軟骨の遺伝子形質発現を目標とすることを示した）は、ｐＲｃ／ＣＭＶ−ＣｒｅＷＴベクターおよびＨΙＶ（Ｃｒｅ）ウイルスへの感染を有するｔｒａｓｆｅｃｔｉｏｎの後に、ＩＬ−１βＸＡＴ遺伝子の発現をＮＥＨ  ３Ｔ３安定細胞系に吹きつけた。パネル（Ａ）はｐＲｃ／ＣＭＶ−ＣｒｅＷＴを有するこの種の安定細胞系のトランスフェクション（＋）を表す。そして、ＲＴ−ＰＣＲによって検出されるにつれて、付随してＣｒｅレコンビナーゼを有する人間のＩＬ−１β表現の表示に導く。対照的に、未処理の細胞、（）ＩＬ−１βおよびＣｒｅレコンビナーゼの欠如によって特徴づけられた。ＣＯＬＬＩのＲＴ−ＰＣＲ以下の感染症によって評価されるにつれて、パネル（Ｂ）は類似のＩＬ−１βおよびＣｒｅ表現を表す−ＨΙＶ（Ｃｒｅ）ウイルスを有するＩＬ−１βＸＡＴ細胞系。細胞のＩＬ−１βＸＡＴの存在は、示すようにＰＣＲによって確認された。
【図７】図７は、トランスジェニックマウスを示す。マイクロインジェクションの２つの連続は、総勢３本の候補トランスジェニックＣＯＬＬ１Ａ１−ＩＬ−１βＸＡＴマウス線を得た：＃４、＃１１および＃１２。この図は、また、低次で内因性のネズミのＩＬ−１β遺伝子を増幅するプライマーセットを使用している導入遺伝子のＰＣＲ増幅を表す。導入遺伝子伝送は、＃４、１１および１２人の移植遺伝子の創設者の子において検討された。Ｆ２マウスは、膝関節にＦΙＶ（ｃｒｅ）を両側性に注射されて、毎週機関車挙動および質量の変化をモニタされている。ｃ＝ｃｏｎｔｒｏｌ；トランスジェニックマウスが線をひく４、１１、１２、１３、１４＝；＋＝ＰＣＲ正の制御；−＝ＰＣＲ下塗り制御。
【図８】図８は、プロスタグランジンＥ２炎症性の経路のメッセンジャーＲＮＡの符号化遺伝子のｓｉＲＮＡ。ｓｉＲＮＡノックダウンによって、メッセンジャーＲＮＡノックダウンを示す。ＮＥＨ３Ｔ３のものは、１００−２００ｎＭ化学的に総合されたｓｉＲＮＡ種を有する標準状態の下でトランスフェクションした、そして、完全リボゾームリボ核酸は、６０時間後に集められた。メッセンジャーＲＮＡノックダウンは、ＱＲＴ−ＰＣＲを使用して決定された。西洋のイムノブロッティングは、ｃＰＧＥＳ、ｍＰＧＥＳ、ＣＯＸ−２およびＣＯＸ−Ｉタンパク質のｓｉＲＮＡノックダウンを示すために用いた。ＮＩＨ３Ｔ３細胞はｃＰＧＥＳ、ｍＰＧＥＳ、ＣＯＸ−２およびＣＯＸ−Ｉと相補的な２００ｎＭの化学的に合成されたｓｉＲＮＡによってトランスフェクションした、そして、総タンパクは６０時間後に集まった。それぞれ、サンプルは、抗マウスｃＰＧＥＳ、ｍＰＧＥＳ、ＣＯＸ−２およびＣＯＸ−Ｉ抗体によって探索された。
【図９】図９は、膝のＦΙＶ（Ｃｒｅ）の注入の後、Ｃｏｌｌ−ＩＬｌβτマウスの行動の変化を示す。Ａグループ・トランスジェニックマウス（Ｎ＝３）は、生後２ヵ月で左右の膝のＦΙＶ（Ｃｒｅ）の１０６の伝染性の粒子の単一の関節内投与を受信した。加えて、マウス（Ｎ＝３）の第二群は、塩分のある注入を受信して、規制として役立った。セッションの間に、各マウスは、１時間ビデオテープに録画された。テープは、それからデジタル的にコンピュータへ移されて、それぞれ３分の２０の期間において分析された。各マウスを示している身繕いおよび一なめの継続は、秒として記録されて、合計された。反応の分析は、動物のグループ譲渡に盲目だった調査者によってなされた。統計解析は、ｔ−Ｔｅｓｔなものによって実行された。エラーは、＝ＳＥＭを閉鎖する。＊＝Ｐ＜０．０５。
【図１０】図１０は、膝のＦΙＶ（Ｃｒｅ）の注入の後、Ｃｏｌｌ−ＩＬ１βＸＡＴマウスの機関車悪化を示す。マウス（Ｎ＝３）の４つのグループは回転機器（Ｃｏｌｕｍｂｕｓ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ、Ｃｏｌｕｍｂｕｓ  ＯＨ）によって機関車挙動に関して評価された、そして、回転シリンダ（２０回転数／分）からよいマウスまでの経過時間は記録された。マウスは、関節内投与（８週  −  １６週の年齢）の後に、８週の期間にわたって評価された。
【図１１】図１１はＣｏｌｌの膝のＦΙＶ（Ｃｒｅ）注入に明らかにする−悪いβ５マウスは結果として導入遺伝子誘導になった。レポーター遺伝子β−ガラクトシダーゼの免疫細胞化学的検出は、Ｃｏｌｌの活性化を確認するために使用された−β−ガラクトシダーゼおよびＣｒｅレコンビナーゼに対して上がるこのマウスモデルを使用している抗体のＦΙＶ（Ｃｒｅ）によるＩＬｌβＸＡＴ導入遺伝子。（Ａ）ＦＩＣＴ−は、β−ガラクトシダーゼの免疫検出、Ｃｒｅレコンビナーゼの（Ｂ）テキサス州Ｒｅｄ抱合型免疫検出および同じ顕微鏡視野の（Ｃ）Ｂ／Ｗイメージを接合した。パネルＡ＋Ｂ方式の（Ｄ）オーバーラップおよび生体内でβ−ガラクトシダーゼおよびＣｒｅレコンビナーゼの共発現を示しているパネルＡ＋Ｂ＋Ｃの（Ｅ）重なり（中実の矢；すべての画像は、２ＯＸの拡大で捕えられた。”ｍ”＝ｍｅｎｉｓｃｕｓ；”ａ”＝ａｒｔｉｃｕｌａｒ面；”Ｉ”＝骨関節空間内。
【図１２】図１２は、ＦΙＶ（Ｃｒｅ）の注入の後に、Ｃｏｌｌ−ＩＬ１βＸＡＴマウスの膝関節の関節炎変化を示す。ＦΙＶ（Ｃｒｅ）によって注入される４ヵ月のＣｏｌｌ−ＩＬ１βＸＡＴ遺伝子導入マウスから集められる膝部の（Ａ）Ｈ＆Ｅ染色は、繊維性攣縮（中実の矢）の、そして、関節唇（開いた矢）の形成を明らかにした。対照的に、制御ベクターＦＩＶ（ＧＦＰ）を受信した遺伝子導入マウスは、この種の解剖学精神錯乱を呈しなかった（Ｂ）。（Ｃ）アルシアンブルー／オレンジ半定量的評価は、軟骨の減少およびＣｏＩｌの骨密度を示した。（Ｄ）規制と比較したＴＬｌβＴ＋ＦＩＶ（Ｃｒｅ）膝。さらに、関節の表面の肥厚と一緒の増加したクローン化は、実験動物（小さい矢によって示される）において観察された。
【図１３】図１３は、Ｃｏｌｌの脳炎を示す−膝およびＴＭＪのＦＩＶ（Ｃｒｅ）の注入後のＩＬ１βＸＡＴマウス。膝のＦΙＶ（Ｃｒｅ）注入およびＣｏｌｌ−ＩＬ１βＸＡＴマウスのＴＭＪの８週後に、脳は、免疫細胞化学によって小こう細胞および星状細胞の活性化のために評価された。単クローン抗体がＭＨＣ−クラスＩＩ抗原に対して上げた（Ａ）Ｕｓｉｎｇ、活性小こう細胞の存在は、脳において検出された。対照的に、対照動物は、いかなるＭＨＣ−ＩＩ陽性細胞も示さなかった。（Ｃ）大グリア原線維酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）によって評価されるにつれて、パネルＡ．（Ｂ）Ｔｈｅｒｅの拡大がこれらの動物の脳の星状細胞活性化の欠如であって。パネルＢ．の中で（Ｄ）大拡大
【図１４】図１４は、ＣｏｌｌのＴＭＪの関節炎のような変化を示す−ＦΙＶ（Ｃｒｅ）の関節内注入の後のＩＬ１βＸＡＴマウス。ＣｏｌｌのＴＭＪのＦΙＶ（Ｃｒｅ）注入の数週間後に８−ＩＬｌβジョイントのマウス解剖学異常は、半定量的アルシアンブルー  −  オレンジＧ組織化学  −  によって評価された。半月と同様に顆状ヘッドを表している非アクティブのＣｏｌｌ−ＩＬ１βＸＡＴマウスからの（Ａ）ＴＭＪ部。Ｊｎ比較、ＴＭＪのＦΙＶ（Ｃｒｅ）を注射されるＣｏｌｌ−ＩＬ１βＸＡＴマウスから集められるＴＭＪ部（Ｂ）。パネルＢ．の確認された領域の中で（Ｃ）大パネルＡ．（Ｄ）の確認された領域の中で拡大。
【図１５】図１５は、遺伝子および蛋白質療法のためのカスケードの炎症カスケードおよび戦略目標を示す。図１３は、ＩＬ−１βの抑制を示す』中和抗体による生物学の活性。中間の収集した調子単純なＮＩＨ  ３Ｔ３細胞がそうであった（Ａ）Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄは、ネズミの繊維芽細胞（次々にネズミのＣＯＸ−２の低次にリボゾームリボ核酸を示した）に配置した。ＩＬ−１βＸＡＴ＋ｐＲｃ／ＣＭＶ−バックボーン・ベクターによってもトランスフェクションするＮＨＪ  ３Ｔ３細胞からの（Ｂ）Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ媒体は、ネズミのＣＯＸ−２メッセンジャーＲＮＡの低次を示した。対照的に、ＩＬ−１βＸＡＴ＋ｐＲｃ／ＣＭＶ−ＣｒｅＷＴトランスフェクションするＮＤＨ  ３Ｔ３細胞から（Ｃ）均し培地は、著しく標的遺伝子のＣＯＸ−２メッセンジャーＲＮＡを誘発した；制御ウサギＩｇＧ抗体（５ｎｇ／ｍＬのＩｇＧ１アイソタイプ）を有する均し培地の（Ｄ）プレインキュベーションは、ＣＯＸ−２規則に最小の影響を及ぼした。しかしながら、ウサギ反ＥＬ１β（５ｎｇ／ｍＬのＩｇＧ１）抗体を有する均し培地の（Ｅ）プレインキュベーションは、ＣＯＸ−２誘導を減らした。（Ｆ）ポジティブコントロール：ヒト組換えＩＬ−１β（１ｎｇ／ｍＬ＋５ナノグラムＩｇＧ１アイソタイプ）の追加。（Ｇ）ヒト組換えＩＬ−１βは、５ｎｇ／ｍＬの中和抗体によって、前孵化した。結果は、グループＡと関連するＣＯＸ−２メッセンジャーＲＮＡの折り目誘導として示される。
【図１６】図１６は、不βの抑制が中和抗体による生物学の活性であることを示す。中間の収集した調子単純なＮＩＨ  ３Ｔ３細胞がそうであった（Ａ）Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄはネズミの繊維芽細胞上に配置した。そして、それは次々にネズミのＣＯＸ−２メッセンジャーＲＮＡの低次を示した。ＩＬ−１βＸＡＴ＋ｐＲｃ／ＣＭＶ−バックボーン・ベクターによってもトランスフェクションするＮＩＨ  ３Ｔ３細胞からの（Ｂ）Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｅｄ媒体は、ネズミのＣＯＸ−２メッセンジャーＲＮＡの低次を示した。対照的に、ＩＬ−１βＸＡＴ＋ｐＲｃ／ＣＭＶ−ＣｒｅＷＴトランスフェクションするＮＩＨ  ３Ｔ３細胞から（Ｃ）均し培地は、著しく的状赤血球のＣＯＸ−２メッセンジャーＲＮＡを誘発した；制御ウサギＩｇＧ抗体（５ｎｇ／ｍＬのＩｇＧ１アイソタイプ）を有する均し培地の（Ｄ）プレインキュベーションは、ＣＯＸ−２規則に最小の影響を及ぼした。しかしながら、ウサギ反ＩＬ−ｌβ（５ｎｇ／ｍＬのＩｇＧ１）抗体を有する均し培地の（Ｅ）プレインキュベーションは、ＣＯＸ−２誘導を減らした。（Ｆ）ポジティブコントロール：ヒト組換えＩＬ−１β（１ｎｇ／ｍＬ＋５ナノグラムＩｇＧ１アイソタイプ）の追加。（Ｇ）ヒト組換えＩＬ−１βは、５ｎｇ／ｍＬの中和抗体によって、前孵化した。結果は、グループＡと関連するＣＯＸ−２メッセンジャーＲＮＡの折り目誘導として示される。
【図１７】図１７は、ＦＩＶ（ＩＬ１ｒａ）がＩＬ−１ｒａ受容体アンタゴニストを表している遺伝子を有する細胞をうまく変換することを示す。ＦＩＶ（ＩＬ１ｒａ）は、パネルＡにて図示するように、建設されて、限定酵素によって、パネルＢ．ＦＩＶ（ＩＬ１ｒａ）において表される分析がそれから生体外で検証されることを確認した；ＩＬ１ｒａ表現は、メッセンジャーＲＮＡおよびタンパク質レベルでこのウイルスに感染しているネズミのＮＩＨ  ３Ｔ３細胞において評価された。感染細胞の（Ｃ）ＲＴ−ＰＣＲ分析は、ＩＬ１ｒａメッセンジャーＲＮＡの表示を示した。対照的に、単純な細胞は、いかなるＩＬ１ｒａ表現も示さなかった。ハウスキーピング遺伝子Ｇ３ＰＤＨも、使用された。注入された細胞の媒体の（Ｄ）ＩＬ１ｒａタンパク質レベルは、ＥＬＩＳＡによって評価された。ＦＩＶ（ＩＬ１ｒａ）による細胞の感染は、結果として治療的なＩＬ１ｒａレベル（＞３０μｇ／ミリリットル）になった。対照的に、ＦΙＶ（ｇｆｐ）および単純な細胞は、ＩＬ１ｒａを表さなかった。
【図１】
2009501128.tif 000045
【図２】
2009501128.tif 000046
【図３】
2009501128.tif 000047
【図４】
2009501128.tif 000048
【図５】
2009501128.tif 000049
【図６】
2009501128.tif 000050
【図７】
2009501128.tif 000051
【図８】
2009501128.tif 000052
【図９】
2009501128.tif 000053
【図１０】
2009501128.tif 000054
【図１１】
2009501128.tif 000055
【図１２】
2009501128.tif 000056
【図１３】
2009501128.tif 000057
【図１４】
2009501128.tif 000058
【図１５】
2009501128.tif 000059
【図１６】
2009501128.tif 000060
【図１７】
2009501128.tif 000061
【配列表】
2009501128000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成20年3月7日(2008.3.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2009501128000001.app