(57)【要約】  本発明は、ヤエナリ抽出物含有培地に乳酸菌を培養して得たヤエナリ乳酸菌培養物であって、ヤエナリ抽出物及びギャバ（γ-Aminobutyric Acid：GABA）を含有することでコラーゲン合成促進効果及び炎症緩和効果を奏するため、これを含有する化粧料組成物は、コラーゲン生合成促進用、皮膚老化防止または改善用、抗炎症用、及び肌荒れ防止または改善用化粧料組成物として有用である。
2009501160.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヤエナリ含有培地に乳酸菌を培養して得たヤエナリ乳酸菌培養物であって、ヤエナリ抽出物及びギャバ（γ-Aminobutyric Acid：GABA）を含有することを特徴とするヤエナリ乳酸菌培養物。
【請求項２】
前記ヤエナリ乳酸菌培養物は、ヤエナリ抽出物を含む培地に乳酸菌を接種し培養して得られたものであることを特徴とする請求項１に記載のヤエナリ乳酸菌培養物。
【請求項３】
前記ヤエナリ乳酸菌培養物は、ヤエナリ抽出物及びグルタミン酸モノナトリウム（Monosodium Glutamate）を含む培地に乳酸菌を接種し培養して得られたものであることを特徴とする請求項２に記載のヤエナリ乳酸菌培養物。
【請求項４】
前記ヤエナリ抽出物は、水を使用して抽出したものであることを特徴とする請求項２に記載のヤエナリ乳酸菌培養物。
【請求項５】
前記乳酸菌は、グルタミン酸デカルボキシラーゼを発現してグルタミン酸モノナトリウムをギャバに転換させることができる乳酸菌であることを特徴とする請求項２に記載のヤエナリ乳酸菌培養物。
【請求項６】
前記乳酸菌は、ラクトバチルス・サケイ（Lactobacillus sakei）またはラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）であることを特徴とする請求項５に記載のヤエナリ乳酸菌培養物。
【請求項７】
ヤエナリ含有培地に乳酸菌を培養して得たヤエナリ乳酸菌培養物の製造方法であって、
ヤエナリ抽出物を用意する第１の段階と、
第１の段階で収得したヤエナリ抽出物とグルタミン酸モノナトリウムを含む培地を用意する第２の段階と、
前記第２の段階で用意された培地にグルタミン酸デカルボキシラーゼによってグルタミン酸モノナトリウムをギャバに転換させることができる乳酸菌を接種する第３の段階、及び
前記第３の段階で接種された乳酸菌を培養してヤエナリ抽出物及びギャバが含有されたヤエナリ乳酸菌培養物を調製する第４の段階と、を含むことを特徴とするヤエナリ乳酸菌培養物の製造方法。
【請求項８】
前記第２の段階におけるグルタミン酸モノナトリウムの添加量は、ヤエナリ抽出物の総重量に対して１〜３０重量％であることを特徴とする請求項７に記載のヤエナリ乳酸菌培養物の製造方法。
【請求項９】
ヤエナリ含有培地に乳酸菌を培養して得たヤエナリ乳酸菌培養物含有化粧料組成物の製造方法であって、
請求項７に記載の製造方法によって調製されたヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物から菌体及び不溶性成分をとり除く段階、及び
前記段階で収得した菌体及び不溶性成分がとり除かれたヤエナリ乳酸菌培養物に副材料を混合する段階、を含むことを特徴とするヤエナリ乳酸菌培養物含有化粧料組成物の製造方法。
【請求項１０】
ヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物を有効成分として含有することを特徴とする化粧料組成物。
【請求項１１】
前記ヤエナリ乳酸菌培養物は、請求項７に記載の製造方法によって調製されたものであることを特徴とする請求項１０に記載の化粧料組成物。
【請求項１２】
前記乳酸菌は、グルタミン酸デカルボキシラーゼを発現してグルタミン酸モノナトリウムをギャバに転換させる乳酸菌であることを特徴とする請求項１０に記載の化粧料組成物。
【請求項１３】
前記化粧料組成物は、請求項１２に記載のヤエナリ乳酸菌培養物含有化粧料組成物の製造方法によって調製されたものであることを特徴とする請求項１０に記載の化粧料組成物。
【請求項１４】
前記化粧料組成物は、コラーゲン生合成促進用組成物であることを特徴とする請求項１０に記載の化粧料組成物。
【請求項１５】
前記化粧料組成物は、皮膚老化防止または皮膚老化改善用組成物であることを特徴とする請求項１０に記載の化粧料組成物。
【請求項１６】
前記化粧料組成物は、抗炎症用組成物であることを特徴とする請求項１０に記載の化粧料組成物。
【請求項１７】
前記化粧料組成物は、肌荒れ防止または肌荒れ改善用組成物であることを特徴とする請求項１０に記載の化粧料組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヤエナリ抽出物含有培地に乳酸菌を培養して得たヤエナリ乳酸菌培養物であって、ヤエナリ抽出物及びギャバを含有することを特徴とするヤエナリ乳酸菌培養物及び該培養物の製造方法、並びに該培養物を含有する化粧料組成物、及び該化粧料組成物の製造方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ギャバ（γ-Aminobutyric Acid：GABA）は、非タンパク質アミノ酸であって、動物の中枢神経系の主な抑制性神経伝達物質としてよく知られている。ギャバは、多くの生理学的メカニズムに関与して、動物の場合、脳の血流を活発にさせ、酸素供給量を増大させることで脳細胞の代謝機能を高めることと知られており、プロラクチンの分泌と成長ホルモンの分泌調節にも関与し、血圧降下及び痛症緩和にも効果があることと知られていて、薬理的に非常に関心が高まっている物質である。
【０００３】
ギャバは、上記のような機能から機能性食品素材としての関心が高まっているだけでなく、化粧品の原料としても使用が可能である。
【０００４】
また、近年、皮膚構成細胞に全般的に存在するＰＰＡＲ（Peroxisome proliferators activated receptors）が知られており、このＰＰＡＲが、皮膚傷の治癒及び炎症の治癒過程の発現に重要な役割を果たすことが明らかになった。
【０００５】
すなわち、ＰＰＡＲは、エネルギー恒常性を調節する因子であって、特に、多様な機転を通じて皮膚保護層の透過性調節、表皮層の増殖抑制、表皮層の分化誘導などのような皮膚状態の調節に関与することが知られるようになった。このような特徴から、ＰＰＡＲは、炎症に関連する皮膚疾病だけでなく、表皮層の過増殖による乾癬、傷治癒、にきびなどの各種の皮膚疾患の核心調節子として作用する。
【０００６】
したがって、皮膚の恒常性に寄与する物質の具体的な信号伝達が多く知られてはいないものの、近年に知られたＰＰＡＲに関連したリン脂質の機能に関する具体的な研究が試みられている。ＰＰＡＲは、３個のサブタイプを有すると知られているが、中でもＰＰＡＲ αがホスファチジルセリン（phosphatidylserine）の収容体としての可能性が明らかになった［Michalik et al., The journal of Cell Biology, 154, pp799-814, 2001］。
【０００７】
実際に、既に知られたＰＰＡＲ αのアゴニストであるクロフィブレート（clofibrate）、Ｗｙ１４６４３などを皮膚に塗布した時、刺激物質による炎症が軽減することが確認されたことがある［Sheu et al., The Journal of investigative Dermatology, 118, pp94-101, 2002］。
【０００８】
現在までグルココルチコイド（glucocorticoid）のような物質が抗炎症剤として使われてきたが、これを持続的に投与したり傷口に塗ったりすると、慢性的な副効果をみせるようになり、主に免疫反応の低下を招き、結果として、その治療に限界をもたらしてしまう。そこで、ＰＰＡＲ αのアゴニストが、グルココルチコイドに比べて局所的で且つ効果的な治療方法であると見なされるようになった。
【０００９】
一方、サイトカインであるインターロイキン−６（ＩＬ−６）は、外部抗原に特異的に反応するＴＮＦ−αによってその分泌が増大し、該増大したインターロイキン−６は、炎症反応を引き起こすと知られている。そこで、インターロイキン−６の発現の軽減は、抗炎症及び過免疫反応を抑制させる指標であるとみることができる。
【００１０】
ヤエナリ（Phaseolus aureus、Phaseolus radiatus、Mung bean）は、東医宝監などの文献に示された皮膚美容に関連した処方をみると、皮膚美容効果を得ることができると記録されており、特に、ヤエナリタンパク質とヤエナリフラボノイド成分は、洗顔に効果的であり、生理活性成分であるビテキシン（vitexin）とイソビテキシン（isovitexin）は、抗酸化効果に優れて、皮膚老化防効果を有するなどの事実が知られている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
したがって、本発明者らは、乳酸菌を利用してギャバを高濃度にて調製することができる方法を研究するために、多様な培地造成実験を実施し、その結果、培地の主原料としてヤエナリを利用して乳酸菌を培養すると、ヤエナリから由来する優れた成分を多量で含むだけでなく、ギャバ−高含量培養物を得ることができることを見い出した。また、上記ヤエナリを利用したヤエナリ抽出物及びギャバ−高含量培養物の様々な効能を調査する間に、上記培養物が皮膚のコラーゲン合成を促進するだけでなく、皮膚中の組職細胞のＰＰＡＲ αの配位子（ligand）として作用する物質を含むことで外部刺激による皮膚の炎症反応を緩和させ、抗炎症と過免疫反応に関連したインターロイキン−６の発現を軽減させることを確認し、本発明を完成するに至った。
【００１２】
本発明の目的は、ヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物及び該培養物の製造方法を提供することである。
【００１３】
本発明の他の目的は、上記ヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物を有効成分として含有する化粧料組成物及び該化粧料組成物の製造方法を提供することである。
【００１４】
また、本発明は、コラーゲン生合成促進用、皮膚老化防止または皮膚老化改善用、抗炎症、及び肌荒れ防止または肌荒れ改善用化粧料組成物を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
上記目的を達成するために、本発明は、ヤエナリ含有培地に乳酸菌を培養して得たヤエナリ乳酸菌培養物であって、ヤエナリ抽出物及びギャバ（γ-Aminobutyric Acid：GABA）を含有することを特徴とするヤエナリ乳酸菌培養物を提供する。
【００１６】
上記ヤエナリ乳酸菌培養物は、ヤエナリ抽出物を含む培地に乳酸菌を接種し培養して得られたものであることを特徴とする。
【００１７】
上記ヤエナリ乳酸菌培養物は、ヤエナリ抽出物及びグルタミン酸モノナトリウム（Monosodium Glutamate）を含む培地に乳酸菌を接種し培養して得られたものであることを特徴とする。
【００１８】
また、上記ヤエナリ抽出物は、水を使用して抽出したものであることを特徴とする。
【００１９】
また、上記乳酸菌は、グルタミン酸デカルボキシラーゼを発現してグルタミン酸モノナトリウムをギャバに転換させることができる乳酸菌であることを特徴とし、好ましくは、ラクトバチルス・サケイ（Lactobacillus sakei）またはラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）であることを特徴とする。
【００２０】
また、本発明は、ヤエナリ含有培地に乳酸菌を培養して得たヤエナリ乳酸菌培養物の製造方法であって、ヤエナリ抽出物を用意する第１の段階と、第１の段階で収得したヤエナリ抽出物とグルタミン酸モノナトリウムを含む培地を用意する第２の段階と、上記第２の段階で用意された培地にグルタミン酸デカルボキシラーゼによってグルタミン酸モノナトリウムをギャバに転換させることができる乳酸菌を接種する第３の段階、及び上記第３の段階で接種された乳酸菌を培養してヤエナリ抽出物及びギャバが含有されたヤエナリ乳酸菌培養物を調製する第４の段階と、を含むことを特徴とするヤエナリ乳酸菌培養物の製造方法を提供する。
【００２１】
上記第２の段階におけるグルタミン酸モノナトリウムの添加量は、ヤエナリ抽出物の総重量に対して１〜３０重量％であることを特徴とする。
【００２２】
また、本発明は、ヤエナリ含有培地に乳酸菌を培養して得たヤエナリ乳酸菌培養物含有化粧料組成物の製造方法であって、上記ヤエナリ乳酸菌培養物の製造方法によって調製されたヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物から菌体及び不溶性成分をとり除く段階、及び上記段階で収得した菌体及び不溶性成分がとり除かれたヤエナリ乳酸菌培養物に副材料を混合する段階、を含むことを特徴とするヤエナリ乳酸菌培養物含有化粧料組成物の製造方法を提供する。
【００２３】
また、本発明は、ヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物を有効成分として含有することを特徴とする化粧料組成物を提供する。
【００２４】
上記ヤエナリ乳酸菌培養物は、上記ヤエナリ乳酸菌培養物の製造方法によって調製されたものであることを特徴とする。
【００２５】
上記乳酸菌は、グルタミン酸デカルボキシラーゼを発現してグルタミン酸モノナトリウムをギャバに転換させる乳酸菌であることを特徴とする。
【００２６】
上記化粧料組成物は、上記ヤエナリ乳酸菌培養物含有化粧料組成物の製造方法によって調製されたものであることを特徴とする。
【００２７】
上記化粧料組成物は、コラーゲン生合成促進用組成物であることを特徴とする。
【００２８】
上記化粧料組成物は、皮膚老化防止または皮膚老化改善用組成物であることを特徴とする。
【００２９】
上記化粧料組成物は、抗炎症用組成物であることを特徴とする。
【００３０】
上記化粧料組成物は、肌荒れ防止または肌荒れ改善用組成物であることを特徴とする。
【発明の効果】
【００３１】
本発明によるヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物は、コラーゲン合成促進効果を通じて皮膚老化防止または皮膚老化改善効果を奏し、また、炎症緩和効果を通じて抗炎症、及び皮膚刺激緩和または皮膚刺激改善効果を奏し得ることが分かる。よって、上記ヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物は、コラーゲン生合成促進用、皮膚老化防止または皮膚老化改善用、抗炎症用、及び皮膚刺激緩和または皮膚刺激改善用化粧料組成物として有用である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３２】
以下、本発明を詳しく説明する。
【００３３】
本発明者らは、乳酸菌を利用してギャバを高濃度にて調製可能な方法を研究する間に、ヤエナリ抽出物を培地の原料としてギャバを生産する乳酸菌を接種して培養すると、ヤエナリの有用成分はもちろんギャバ及び乳酸菌が生産する各種のペプチド成分が含まれた培養物が得られることを確認した。また、このようにして調製された培養物を化粧品原料として使用するために、固形分及び色素成分をとり除き、副材料などを添加すると、コラーゲン合成促進及び炎症緩和などの効果を奏するため、老化防止用及び抗炎症用などの化粧品の原料として使用可能であることを見い出した。
【００３４】
また、本発明者らは、上記乳酸菌として、キムチからスクリーニングしたギャバ生産が可能な乳酸菌株であるラクトバチルス・サケイ  Ｂ２−１６（寄託番号：ＫＦＣＣ−１１３２１）（韓国特許出願第２００３−５８２８号参照）をヤエナリ原料の培地成分を利用して培養に成功することにより、既存のヤエナリ抽出物及び乳酸菌培養物の長所を持つ天然素材を得ることができた。
【００３５】
本発明によるヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物の製造方法は、下記のとおりである。
【００３６】
本発明によるヤエナリ含有培地に乳酸菌を培養して得たヤエナリ乳酸菌培養物は、ヤエナリ抽出物を用意する第１の段階と、第１の段階で収得したヤエナリ抽出物とグルタミン酸モノナトリウムを含む培地を用意する第２の段階と、上記第２の段階で用意された培地にグルタミン酸デカルボキシラーゼによってグルタミン酸モノナトリウムをギャバに転換させることができる乳酸菌を接種する第３の段階、及び上記第３の段階で接種された乳酸菌を培養してヤエナリ抽出物とギャバが含有された培養物を調製する第４の段階と、を含む方法から収得することができる。
【００３７】
上記第１の段階において、上記ヤエナリ抽出物を収得するためのヤエナリは、同じ地域から持続的な供給を受けることが有利であるが、ヤエナリの産地によってギャバの生産歩留まりに僅かの差が生じるだけで醗酵物の最終品質には特に影響しない。
【００３８】
また、ヤエナリは、培地の成分として利用する前に洗浄するのが好ましく、これは、表面に残留する農薬をとり除くためである。洗浄工程は、３０℃以下の冷水を使用するのが好ましく、水溶性栄養成分の流出を防止するためにできる限り３０分以内の短時間で処理するのが有利である。これは、洗浄水の温度が３０℃を超え、洗浄にかかる時間が３０分を超えると、ヤエナリの栄養成分が失われ得るためである。
【００３９】
また、培地として使用するヤエナリは、脱皮した或いは脱皮していない何れのものを使用してもよく、何れの場合でも最終品質には特に影響しない。
【００４０】
洗浄の終わったヤエナリは、粉碎して使用するのが抽出工程の際に有利であるが、本発明の抽出条件では、粉碎していないものを使用してもよい。
【００４１】
上記培地に含まれるヤエナリ抽出物は、当業界に公知された各種の抽出溶媒を利用して収得することができる。このとき、利用可能な抽出溶媒としては、水、メタノール、エタノール、ブタノール、プロパノールのような炭素数１〜４の無水または含水低級アルコール及び該低級アルコールと水との混合溶媒、アセトン、エチルアセテート、クロロホルム、酢酸ブチル及び１,３−ブチレングリコールを含む群より選択された一種以上を使用することができるが、好ましくは、水を使用すればよい。なぜならば、最終産物の安全性及び乳酸菌培養を考慮すれば、水が最も好ましく、水を使用しても本発明に適合した抽出物を十分に収得することができるためである。
【００４２】
上記ヤエナリ抽出物を収得するための抽出溶媒の使用量は、ヤエナリの２〜２０倍、好ましくは、５〜１５倍である。これは、抽出溶媒が少なすぎると抽出効率が落ちるという短所があり、逆に、抽出溶媒の量が多すぎると抽出後の有効成分の濃度が低くなるため、醗酵源として使われる際におけるギャバへの転換率が低いという問題点が生じ得るためである。
【００４３】
また、上記ヤエナリ抽出物の抽出温度は４０〜７０℃が好ましく、これは、抽出温度が低いと水溶性栄養成分の抽出時間が長くなり、抽出温度が７０℃以上であるとヤエナリの澱粉質がゼラチン化して有用成分の分離が難しくなるためである。
【００４４】
また、上記ヤエナリ抽出物の抽出時間は３〜２４時間が好ましく、より好ましくは、６〜１８時間であり、最も好ましくは、３０〜１００ｒｐｍの速度で撹拌しながら６〜１８時間にかけて抽出する。これは、抽出時間が不足した場合、栄養成分の濃度が不足し、抽出時間が長すぎると、工程上多くの負担を招き得るためである。
【００４５】
上記収得されたヤエナリ抽出物を遠心分離にかけて固形分をとり除いた上澄液を得た後、ギャバ生産のための培地の栄養成分として添加する。このとき、固形分の除去は、培養後に行っても特に問題がない。
【００４６】
上記第２の段階において、上記培地は、ヤエナリ抽出物及びグルタミン酸モノナトリウムを含むことを特徴とする。
【００４７】
また本発明の好適な具現例によれば、本発明の培地は、上記ヤエナリ抽出物及びグルタミン酸モノナトリウムだけでなく、炭素源、窒素源、微量元素、界面活性剤またはこれらの混合物をさらに含む。より好ましくは、炭素源及び窒素源を含み、最も好ましくは、炭素源及び窒素源を含み、これに微量元素または界面活性剤を含む。
【００４８】
本発明の培地における利用可能な上記炭素源としては、グルコース、スクロース、マルトース、フルクトース、ラクトース、キシロース、ガラクトース、アラビノース及びこれらの組み合わせからなる群より選択された一種以上であり、好ましくは、スクロース、フルクトース、グルコース、ガラクトース、アラビノース及びラクトースからなる群より選択された一種以上であり、より好ましくは、スクロース、フルクトース及びグルコースからなる群より選択された一種以上である。
【００４９】
炭素源の使用量は、好ましくは、上記ヤエナリ抽出物の総重量に対して１〜２０重量％であり、より好ましくは、２〜１０重量％であり、最も好ましくは、３〜６重量％である。
【００５０】
本発明の培地における利用可能な上記窒素源としては、酵母抽出物、ソイトン（soytone）、ペプトン、牛肉抽出物、トリプトン、カシトン及びこれらの組み合わせからなる群より選択された一種以上であり、好ましくは、酵母抽出物、ペプトン、トリプトン及びソイトンからなる群より選択された一種以上であり、より好ましくは、酵母抽出物またはソイトンである。
【００５１】
窒素源の使用量は、好ましくは、上記ヤエナリ抽出物の総重量に対して１〜２０重量％であり、より好ましくは、１〜１０重量％であり、最も好ましくは、２〜４重量％である。
【００５２】
本発明の培地における利用可能な上記微量元素としては、硫酸マグネシウム、硫酸ナトリウム、硫酸マンガン、硫酸（第二）鉄、塩化カルシウム及びこれらの組み合わせからなる群より選択された一種以上である。
【００５３】
微量元素の使用量は、好ましくは、上記ヤエナリ抽出物の総重量に対して０．００１〜１重量％であり、より好ましくは、０．０１〜１重量％であり、最も好ましくは、０．０３〜０．３重量％である。
【００５４】
本発明の培地の特徴の一つは、界面活性剤を微量成分として利用することができるということである。かかる界面活性剤を利用する場合は、培地における上記微量元素の必要性を省くことができる。本発明の培地に利用される界面活性剤は、好ましくは、モノステアリン酸グリセリンのようなポリアルコール脂肪酸、ステアリン酸ポリオキシルのようなポリエチレングリコール脂肪酸、ラウルマクロゴ−ルのようなポリオキシエチレンアルコール、オレイン酸ソルビタンのようなソルビタン脂肪酸、ポリソルベートのようなポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸及びこれらの組み合わせからなる群より選択された一種以上の非イオン性界面活性剤であり、より好ましくは、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸であり、最も好ましくは、ポリソルベートである。
【００５５】
上記のような非イオン性界面活性剤を添加して培地を造成する場合は、上記微量元素が添加されなくても乳酸菌の培養が正常に行われ得るため、培地において上記微量元素の必要性を省くことができるのである。
【００５６】
微量成分としての上記界面活性剤の使用量は、好ましくは、上記ヤエナリ抽出物の総重量に対して０．０１〜１重量％であり、より好ましくは、０．０１〜１重量％であり、最も好ましくは、０．０５〜０．３重量％である。
【００５７】
また、上記第２の段階において、上記グルタミン酸モノナトリウムの添加量は、好ましくは、ヤエナリ抽出物の総重量に対して１〜３０重量％であり、より好ましくは、１〜２０重量％であり、最も好ましくは、１〜１５重量％である。これは、添加されるグルタミン酸モノナトリウムの量が多すぎるとギャバに転換されないグルタミン酸モノナトリウムが最終製品に残留する問題点があり、グルタミン酸モノナトリウムの量が少なすぎると最終製品のギャバの含量が低くなるという問題点があるためである。
【００５８】
次いで、すべての成分（ヤエナリ抽出物、グルタミン酸モノナトリウム及びその他培地成分）が混合されてなる培地は、殺菌処理を施すことが好ましい。この際の殺菌処理は、６０〜１２１℃の温度で１５〜３０分間施すのが好ましく、これは、栄養素の破壊を最小化するためであって、殺菌処理温度が低すぎるかその時間が短いと殺菌効果が落ち、殺菌処理温度が高すぎるか殺菌時間が長いと栄養素の破壊がひどくなる。
【００５９】
上記第３の段階において、上記第２の段階で殺菌処理が終わった培地に乳酸菌を接種するようになる。
【００６０】
本発明の方法による上記グルタミン酸モノナトリウム基質のギャバへの転換には、グルタミン酸デカルボキシラーゼが関与し、この酵素は、乳酸菌において発現される。
【００６１】
本発明に利用される乳酸菌は、グルタミン酸デカルボキシラーゼを発現する限り制限はなく、好ましくは、ラクトバチルス属菌株であり、より好ましくは、ラクトバチルス・サケイ（Lactobacillus sakei）またはラクトバチルス・ブレビス（Lactobacillus brevis）であり、最も好ましくは、韓国特許出願第２００３−５８２８号においてギャバ生産菌株として開示されたことがある、ラクトバチルス・サケイ  Ｂ２−１６（寄託番号：ＫＦＣＣ−１１３２１）、ラクトバチルス・ブレビス  Ｂ１−１４、ラクトバチルス・ブレビス  Ｂ１−３１、ラクトバチルス・ブレビス  Ｂ２−２２、ラクトバチルス・ブレビス  Ｂ２−２７、ラクトバチルス・ブレビス  Ｂ２−２９、ラクトバチルス・ブレビス  Ｂ３−１８、ラクトバチルス・ブレビス  Ｂ３−２５、ラクトバチルス・ブレビス  Ｂ３−３０、及びラクトバチルス・ブレビス  Ａ１２８からなる群より選択された少なくとも何れか一種である。
【００６２】
上記乳酸菌の接種量は、接種後の初期菌数が１０5〜１０8ｃｆｕ／ｍｌになるようにすることが好ましく、これは、それ以下の菌数ではギャバの生産のための培養時間が長くなり、それ以上の菌数を接種するためには種菌の生産に負担となるためである。
【００６３】
上記第４の段階では、上記第３の段階で乳酸菌接種が終わったヤエナリ抽出物含有培地を均一に混合して２０〜３５℃で醗酵を進行させる。これは、それ以下の温度では醗酵が起き難く、それ以上の温度では熱に弱い乳酸菌が死滅してギャバを生産することができないためである。
【００６４】
上記乳酸菌を培養する時間は、好ましくは、３０〜９０時間であり、より好ましくは、４８〜７２時間である。
【００６５】
本発明によるヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物を有効成分として含有する化粧料組成物の製造方法は、下記のとおりである。
【００６６】
上記ヤエナリ乳酸菌培養物を有効成分として含有する化粧料組成物は、上記ヤエナリ乳酸菌培養物の製造方法によって製造されたヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物から菌体及び不溶性成分をとり除く段階、及び上記段階で収得した菌体及び不溶性成分がとり除かれたヤエナリ乳酸菌培養物に副材料を混合する段階を含む方法から製造することができる。
【００６７】
上記ヤエナリ乳酸菌培養物から菌体及び不溶性成分をとり除く段階において、活性炭で処理するか通常のろ過方法（例えば、フィルタープレス（filter press）、メンブレインフィルター（membrane filter）などを利用）を用いて菌体及び不溶性成分をとり除き、好ましくは、活性炭処理後に通常のろ過方法にてろ過を行う。
【００６８】
特に、上記菌体及び不溶性成分は、活性炭処理で脱色工程を行う。このために上記培養物を活性炭が充填されているコラムを通過させる工程を経るか、直接に上記培養物と活性炭とを混合処理する工程などを経るが、本発明の目的が達成できるのであれば、特にその工程に制限はない。
【００６９】
本発明では、工程の単純化のために培養後に培養物に活性炭粉末を直接に添加する工程を用いることにする。
【００７０】
一般に、活性炭は、その形態によって粉状及び粒状に分けられるが、液体に添加して脱色する用途としては粉状が通常に使用される。
【００７１】
上記活性炭の添加量は、好ましくは、培養物の０．１〜１０重量％であり、より好ましくは、０．５〜５重量％であり、最も好ましくは、１．０〜３．０重量％である。これは、活性炭の量が多すぎると活性炭をとり除くのに多くのコストがかかり、活性炭の量が少なすぎると脱色が十分に起きないためである。
【００７２】
上記活性炭の添加後、直ぐ加熱工程に進むようになり、加熱工程は、微生物の醗酵を中断させ活性炭の反応を促進させる効果がある。加熱する場合、最終温度が４０〜１００℃になるようにするが、これは、最終温度が４０℃以下であると、醗酵に使用された微生物が死滅せず反応時間が長くなり、最終温度が１００℃以上であると、逆反応のおそれがあるためである。
【００７３】
上記加熱が終わった培養物は、活性炭が沈まないように撹拌しながら３〜２４時間放置するが、これは、放置時間が３時間未満と短いと十分な脱色が起きなく、２４時間を超えて長すぎると工程からくる負担が大きくなるためである。以降は、通常のろ過方法（例えば、フィルタープレス、メンブレインフィルターを利用）を用いて菌体及び不溶性成分をとり除く。
【００７４】
また、上記菌体及び不溶性成分がとり除かれたヤエナリ乳酸菌培養物に副材料を混合する段階を含んで、各剤形に包装された化粧料組成物を調製する。
【００７５】
本発明の方法によって収得したヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物は、既存に化粧品用として使用されていたヤエナリ製品に比べてコラーゲン合成促進効果及び皮膚炎症緩和効果が遥かに高いだけでなく、最終的に老化防止及び抗炎症などに適用される化粧品の素材に利用され得る。また、従来に開発されたヤエナリ抽出物または乳酸菌培養物を含んだ製品と比較すると、本発明によって開発されたヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物は、多くの長所を持っていることが理解できる。
【００７６】
本発明者らは、上記ヤエナリを利用して収得したヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物が、実際にコラーゲン分泌に有用であるかを調べるために、Ｓｉｒｃｏｌアッセイ法（Sircol Assay method）を行い、その結果、ヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物を０．０１％処理した時に、陽性コントロール群として使用したゲニステイン（genistein、Sigma、ＵＳＡ）を１０μＭ処理した時に誘導されるコラーゲン分泌とほぼ同じ程度にコラーゲン分泌が促進されたことを確認し、これは、無処理群に比べて３０％以上のコラーゲン分泌促進効果を示したことである。
【００７７】
また、本発明者らは、上記ヤエナリを利用して収得したヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物が、実際に炎症緩和に有用であるかを調べるために、実験動物に炎症を誘発した後に上記培養物を処理し、その結果、本発明のヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物を０．５％処理した時に炎症が緩和したことを確認した。
【００７８】
したがって、本発明は、ヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物を有効成分として含有することを特徴とする化粧料組成物を提供する。
【００７９】
本発明による上記化粧料組成物は、上記した成分の他、本発明が目的とする主な効果を損なわない範囲内で、好ましくは、主な効果に相乗効果を与えることができる他の成分などを含有してもよい。
【００８０】
また、上記化粧料組成物は、溶液、エマルジョン、粘性混合物などの形状を有すればよい。
【００８１】
本発明による化粧料組成物は、その剤形において特に限定はないが、例えば、乳液、化粧水、クリーム、ローション、エッセンス、パック、ジェルのような皮膚粘着タイプの化粧料、パウダー、リップスティック、メーキャップベース、ファウンデーションのような剤形を有する化粧料、シャンプー、リンス、ボディクレンザー、化粧水、クレンジングフォーム、クレンジングクリーム、クレンジングウォーター、せっけんのような洗浄化粧料の剤形を有すればよい。
【００８２】
各剤形の化粧料組成物において、上記成分以外の成分は、その他の化粧料の剤形または使用目的に応じて当業者が特に困難さなく適宜選択して配合することができる。
【００８３】
また、本発明の化粧料組成物は、水溶性ビタミン、有用性ビタミン、高分子ペプチド、高分子多糖、スフィンゴ脂質及び海草エキスからなる群より選択された組成物を含むことができる。
【００８４】
本発明の化粧料組成物には、上記必須成分と共に、必要に応じて通常の化粧料に配合される他の成分を配合してもよい。
【００８５】
その他に添加してもよい配合成分としては、油脂成分、保湿剤、エモリエント剤、界面活性剤、有無機顔料、有機粉体、紫外線吸収剤、防腐剤、殺菌剤、酸化防止剤、植物抽出物、ｐＨ調整剤、アルコール、色素、香料、血行促進剤、冷感剤、制汗剤、精製水などが挙げられる。
【００８６】
なお、その他に添加してもよい配合成分はこれに限定されるものではなく、また、上記何れの成分も本発明の目的及び効果を損なわない範囲内で配合可能であるが、総重量に対して、好ましくは、０．０１〜５重量％、より好ましくは、０．０１〜３重量％で配合される。
【実施例】
【００８７】
以下、実施例及び実験例を通じて本発明をより詳しく説明する。なお、これら実施例及び実験例は、本発明をより具体的に説明するためのものであり、本発明の要旨によって本発明の権利範囲がこれら実施例及び実験例により制限されるものではないことは当業界における通常の知識を有する者には自明であろう。
【００８８】
＜実施例１〜４．ヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物の調製及びこれを含有する化粧料組成物の調製＞
下記実施例１〜４では、ヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物を調製し、これを有効成分として含有する化粧料組成物を調製する方法を示した（図１参照）。
【００８９】
実施例１．ヤエナリ抽出物の調製
ヤエナリを３０℃以下の冷水で洗浄し粉碎した後、上記ヤエナリ１００ｇに抽出溶媒としての水を１０倍加え、６０℃の温度で１２時間にかけて抽出した後、遠心分離（６０００ｒｐｍ、１５分）を施して上澄液を分離してヤエナリ抽出物８００ｇを収得した。
【００９０】
実施例２．ヤエナリ乳酸菌培養物の調製
上記実施例１で収得したヤエナリ抽出物５００ｇを下記表１の成分及び含量の培地５００ｇに加えて混合した後、８０℃で３０分間加熱して殺菌処理してヤエナリを含有した乳酸菌培養用培地を用意した後、乳酸菌としてラクトバチルス・サケイ  Ｂ２−１６（寄託番号：ＫＦＣＣ−１１３２１）（特許出願第２００３−５８２８号参照）を初期菌数が１０7〜１０8ｃｆｕ／ｍｌになるように接種した後、５０ｒｐｍで撹拌しながら３０℃で、６０時間培養してヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物を収得した。
【００９１】
【表１】
2009501160.tif 000003
【００９２】
実施例３．ヤエナリ乳酸菌培養物の処理
上記実施例２で収得したヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物に活性炭（ｓｈｉｎ−ｋｉ  ｃｈｅｍｉｃａｌ社製）を培養物の２．５重量％添加した後、最終温度が７０℃になるように加熱処理した後、加熱を終了し、活性炭が沈まないように１０時間にかけて撹拌しながら放置した後にフィルタープレスを利用して菌体及び不溶性成分をとり除き、菌体及び不溶性成分がとり除かれたヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物を回収した。
【００９３】
実施例４．ヤエナリ乳酸菌培養物含有化粧料組成物の調製
上記実施例３で収得した菌体及び不溶性成分がとり除かれたヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物に、所望の剤形に応じてそれぞれ下記製剤例に示した副材料を混合して化粧料組成物を調製した。
【００９４】
＜実験例１．ギャバの含有有無＞
上記実施例２で調製されたヤエナリ乳酸菌培養物が実際にギャバを含有するか否かを調べるために、上記培養物を試料としてそのギャバ含量を逆相ＨＰＬＣ（Ｗａｔｅｒｓ）を用いて次のように分析した。
【００９５】
逆相ＨＰＬＣを用いての分析条件は、イボヤ（Ibolya）氏らが報告したことを参照にして確立した。まず、試料を８０００ｒｐｍで１０分間遠心分離を施した後、上澄液をメンブレインフィルターでろ過し適当な濃度にて３次蒸溜水に希釈した。このようにして用意した試料に対して、o−フタルアルデヒド（o-phthaldialdehyde：ＯＰＡ）を用いたフリー・コラム反応の誘導体化過程後に逆相ＨＰＬＣを行った。ＯＰＡ溶液（ｐＨ９．３）は、５．０ｍｌのメタノール性ＯＰＡ、２０ｍｌのホウ酸塩緩衝液（ｐＨ９．９）及び５０μｌの２−メルカプトエタノールを混合して調製した。メタノール性ＯＰＡは、２．５６ｇのＯＰＡを５０ｍｌのメタノールに溶解して調製し、ホウ酸塩緩衝液は、０．２Ｍのホウ酸及び０．２Ｍの水酸化ナトリウムを５０：５０（ｖ／ｖ）の割合で混合した後、０．２Ｍの塩化カリウムを入れて使用した。ＯＰＡ溶液は、２時間が経過してから使用し、調製してから一週間程度までは安定した。調製したＯＰＡ溶液３８０μｌと１２０μｌの試料とをよく混合した後、８分程度常温で反応させた。この時、必要以上に長く常温に放置すると誘導体の不安定性のため、逆相ＨＰＬＣのピーク模様や面積値が異なって出ることもあることから、常温で１〜２時間以上放置せずに逆相ＨＰＬＣを行い、誘導体化された試料２０μｌをコラムに注入した。
【００９６】
ＨＰＬＣコラムとしては、ＸＴｅｒｒａコラム（Ｗａｔｅｒｓ：ＲＰ１８ ５ｍ、４．６ｍｍ×１５０ｍｍ）を使用し、移動相としては、０．０５Ｍの酢酸ナトリウム（ｐＨ７．２）を溶媒Ａとして、そして０．１Ｍの酢酸ナトリウム、アセトニトリル（ＨＰＬＣ等級）及びメタノール（ＨＰＬＣ等級）がそれぞれ４６：４４：１０（ｖ／ｖ）の割合で混合されたもの（ｐＨ７．２）を溶媒Ｂとして使用した。移動相の濃度勾配は、溶媒Ａを１００％として分析を開始してから３０分経過後は溶媒Ｂが１００％になり、４０分経過後まで溶媒Ｂが１００％、４５経過後までは再び溶媒Ａが１００％になるようにし、６０分後まで溶媒Ａが１００％になるように調節した。移動相の流速は１ｍｌ／分に固定し、３５８ｎｍのＵ．Ｖ．検出器でギャバを検出した。このような条件でギャバとグルタミン酸塩の保持時間は、それぞれ２１．０１及び９．８９分であったし、検出限界濃度は０．１ｍＭであった。また、ギャバの濃度が１０ｍＭを超えると検出器の検出上限線を超えることから、これに合わせて希釈して測定した。この時、標準物質としては、試薬用に販売されるシグマ社の９９％ギャバを使用した。
【００９７】
その結果、図２から分かるように、ギャバが存在することを確認した。
【００９８】
＜実験例２．ヤエナリ乳酸菌培養物のコラーゲン合成促進効果＞
上記実施例２で収得したヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物のコラーゲン合成促進効果を調べるために、Ｓｉｒｃｏｌアッセイ法を用いた。すべてのコラーゲンは、［Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙ］ｎの構造を有するが、上記Ｓｉｒｃｏｌアッセイ法では、かかる部位に特異に結合される染料を使用して、コラーゲンと染料の結合体を定量する方法でコラーゲンを測定する。
【００９９】
先ず、コラーゲンの測定のために使用した細胞株は、線維芽細胞  ＮＩＨ  ３Ｔ３細胞株であって（ＡＴＣＣ、ＵＳＡ）、ＤＭＥＭ培地（ＦＢＳ１０％）で培養しながら維持し、実験時にＤＭＥＭ培地（ＦＢＳ２％）から２４−ウェルプレート（well plate）にそれぞれ４×１０4個の細胞を分注した。各ウェルは、いずれも１ｍｌの細胞培養物を満たしたが、最初の物質の処理前に、細胞の接着のために５００μｌの細胞培養物を分注して１２時間にかけて培養した。
【０１００】
また、各処理群に使用される培養物は、陽性コントロール群としてコラーゲン合成効果に優れたものと既に知られているゲニステイン（genistein、Sigma、ＵＳＡ）をＤＭＳＯに溶かして用意した。本発明による上記実施例２のヤエナリ乳酸菌培養物及びゲニステインの処理濃度は、それぞれ０．００５％、０．０１％、０．１０％と０．５μＭ、１μＭ、１０μＭであった。
【０１０１】
１２時間にかけて培養した２４−ウェルプレートに上記実施例２のヤエナリ乳酸菌培養物及びゲニステインをそれぞれ５００μｌずつ分注した後、２４時間にかけて培養した。培養後、上澄液８００μｌを得てから１２０００ｇで遠心分離を施して、細胞を除いた培養物を得た。
【０１０２】
水溶性コラーゲン全体の定量のために、上記培養物を遠心分離して得た上澄液を測定試料とした。先ず、定量的標準カーブを得るために提供される水溶性コラーゲンを濃度別に標準溶液に分注しておき、実験する培養物を１．５ｍｌチューブに５００μｌずつ４群に分けて分注した。上記上澄液をＳｉｒｃｏｌアッセイ（Sircol Assay、Biocolor、N.Ireland）より提供されるシリアスレッド（sirius red）染料１ｍｌと混ぜ合わせた後、３０分間常温に放置した。コラーゲンと染料との化合物を得るために１６,０００ｇで５分間遠心分離を施し、エチルアルコールで２回繰り返し洗浄した後、５ＮのＮａＯＨ  １ｍｌに再び溶かした。これを９６―ウェルプレートに適量移した後、可視光線／紫外線吸光測定器により５４０ｎｍにて吸光度を測定して定量した。
【０１０３】
その結果、図３に示すようにヤエナリ乳酸菌培養物（図３においてヤエナリと表記）を０．００５％処理した時、陽性コントロール群として使用したゲニステイン（Genistein、Sigma、ＵＳＡ）を１０μＭ処理した時に比べて誘導されるコラーゲン分泌がより促進したことを確認した。
【０１０４】
＜実験例３．ＴＰＡによる炎症緩和効果＞
上記実施例２で収得したヤエナリ抽出物及びギャバを含有したヤエナリ乳酸菌培養物の炎症（皮膚刺激）緩和効果を調べるために、Ｓｈｅｕ氏ら（The journal of Investigative Dermatology, 118, pp94-101, 2002）が用いた方法にて下記のような実験を行った。
【０１０５】
先ず、実験対象としては、ＣＤ−１マウス（male & female、6-8 weeks、Charles River、ＵＳＡ）を使用し、刺激物質としては、ＴＰＡ（12-0-tetradecanoylphorbol-13-acetate）０．０３％（wt/vol.  in acetone）液１０μｌを上記実験動物の両耳の内外側に処理した。処理物質によって耳が厚くなりながら炎症反応が起きた後に、既に知られた陽性コントロール群としてＰＰＡＲ α アゴニストであるクロフィブレート（clofibrate）（１ｍＭ）、Ｗｙ１４６４３［Sheu et al., The Journal of investigative Dermatology, 118, pp94-101, 2002］（１ｍＭ）を、試験物質として上記実施例２のヤエナリ乳酸菌培養物を、それぞれ炎症誘発後４５分、４時間目に耳の両側面に平方センチメートル当たりに３０μｌを処理した。以後、耳の処理部位を生体検査し、組織の膨らみによる組織の重さの変化を測定した。
【０１０６】
その結果、図４に示すように、ＴＰＡだけを処理した対照群（Blank）に比べて、ＴＰＡ及びＷｙ１４６４３処理群（図４においてＴＰＡ＋Ｗｙ１４６４３と表記）とＴＰＡ及び上記実施例２のヤエナリ乳酸菌培養物０．５％処理群（図４においてＴＰＡ＋ヤエナリ０．５％と表記）における膨らみが減少し、後者の場合、より優れた減少効果を示すことを確認した。
【０１０７】
また、より詳しい細胞学的所見を得るために４％ホルムアルデヒドに固定し、次いでＨ＆Ｅ染色を施し、Ｈ＆Ｅ染色を施した組織スライドを１００倍拡大した写真から炎症緩和を確認した。
【０１０８】
その結果、図５に示すように、ＴＰＡのみを処理した対照群（Blank）Ａにおいて組職が相当に肥大していることを確認することができた。これに対し、上記実施例２のヤエナリ乳酸菌培養物０．５％処理群であるＤでは、炎症が遥かに緩和したことを確認し、陽性コントロール群であるＰＰＡＲ αのアゴニストであるＷｙ１４６４３処理群Ｃ及びクロフィブレート処理群Ｂにおいても炎症が緩和したことが確認された。
【０１０９】
＜実験例４．皮膚角質細胞において紫外線の照射後にインターロイキン−６分泌に及ぼす効果＞
上記実施例２で収得したヤエナリ抽出物及びギャバを含有したヤエナリ乳酸菌培養物が皮膚角質細胞において紫外線の照射後に抗炎症及び過免疫反応に関連したインターロイキン−６（ＩＬ−６）の分泌に及ぼす効果を調べるために、下記のような実験を行った。
【０１１０】
先ず、２４−ウェルプレートに５×１０4細胞／ウェルの皮膚角質細胞（ＨａＣａＴ、ＡＴＣＣ、ＵＳＡ）を接種した後、翌日に培地をとり除いてから５００μｌのＰＢＳを添加し、これに２５ｍＪ／ｃｍ2のＵＶＢを照射した後にＰＢＳをとり除き、その後、これを、上記実施例２のヤエナリ乳酸菌培養物をそれぞれ０．０１％（以下、ｐＧＢ０．０１という）及び０．１％（以下、ｐＧＢ０．１という）含有した場合と比較物質としてそれぞれギャバを０．０１％（以下、ＧＢ０．０１という）及び０．１％（ＧＢ０．１という）含有した場合に、既存の抗炎症効果が立証された陽性コントロール群（Kippenberger et al., J. Invest Dermaltol., 117, pp1430-1436, 2001）としてのＷｙ１４６４３  ２００μＭを添加した培地に投与し、２４時間にかけてさらに培養を施行した。
【０１１１】
その後、ＩＬ−６の減少量を測定するために、ＥＬＩＳＡキット［ＣｙｔＥｌｉｓａ  Ｈｕｍａｎ  ＩＬ―６  ＥＬＩＳＡ  Ｋｉｔ、ＵＳＡ］を使用した。実験方法は、製造メーカより提供する方法を適用して下記のように実験を行った。２４時間にかけての培養を終えた培養液１００μｌを採取し、９６−ウェルプレートに分注した後、抗インターロイキン−６  ２５μｌを入れてアセテートプレートシーラーで封じ止めてから常温で３時間にかけて反応させ、その後、ＰＢＳで５回洗浄した後、ヤギ抗ウサギ（Goat anti-rabbit）アルカリ性ホスファターゼを各ウェルに入れて、さらに封じ止めた後、常温で４５分間にかけて反応させた。その後、発色剤を２００μｌずつ分注し、色変化が現われるまでに常温で反応させた後、色変化が現われれると反応終了液を５０μｌ分注し、４９０ｎｍで吸光度を測定してＩＬ−６含量を測定し、その結果を図６に示した。図６において（−）は、ＵＶＢ照射後にビークル（vehicle）だけを処理した群であり、ノーマル（nomal）はＵＶＢを照射する前の状態であって、それぞれは、ＵＶＢの照射後に上述したように物質を処理した群である
図６に示すように、実施例２のヤエナリ乳酸菌培養物を処理した場合、その濃度に比例して典型的な抗炎症効果を見せるＷｙ１４６４３よりも高いＩＬ−６減少効果を示し、ＧＡＢＡ基準物質よりも高いＩＬ−６減少効果を示すことが分かった。これにより、本発明によるヤエナリ抽出物及びギャバを含有したヤエナリ乳酸菌培養物の優れた抗炎症効果を確認することができた。
【０１１２】
以下、上記組成物の製剤例を説明するが、これは、本発明をこれら例に限定するためでなく、具体的に説明するためである。
【０１１３】
製剤例１．せっけん製造
実施例３のヤエナリ乳酸菌培養物．．．．．．．．１．００（重量％）
油脂．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．適量
水酸化ナトリウム．．．．．．．．．．．．．．．適量
塩化ナトリウム．．．．．．．．．．．．．．．．適量
香料．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．少量
精製水を加えて全量を１００とし、上記配合比にてせっけんを製造した。
【０１１４】
製剤例２．ローション製造
実施例３のヤエナリ乳酸菌培養物．．．．．．．．．．３．００（重量％）
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸マグネシウム塩．．．１．００
水溶性コラーゲン（１％水溶液）．．．．．．．．．．１．００
クエン酸ナトリウム．．．．．．．．．．．．．．．．０．１０
クエン酸．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．０．０５
甘草エキス．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．０．２０
１，３−ブチレングリコール．．．．．．．．．．．．３．００
精製水を加えて全量を１００とし、上記配合比にてローションを製造した。
【０１１５】
製剤例３．クリーム製造
実施例３のヤエナリ乳酸菌培養物．．．．．．．．．．１．００（重量％）
ポリエチレングリコールモノステアレート．．．．．．２．００
自己乳化型モノステアリン酸グリセリン．．．．．．．５．００
セチルアルコール．．．．．．．．．．．．．．．．．４．００
スクアレン．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．６．００
トリ２―エチルヘキサン酸グリセリル．．．．．．．．６．００
スフィンゴ糖脂質．．．．．．．．．．．．．．．．．１．００
１，３−ブチレングリコール．．．．．．．．．．．．７．００
精製水を加えて全量を１００とし、上記配合比にてクリームを製造した。
【０１１６】
製剤例４．パック製造
実施例３のヤエナリ乳酸菌培養物．．．．．．．．．．５．００（重量％）
ポリビニルアルコール．．．．．．．．．．．．．．１３．００
Ｌ−アスコルビン酸−２−リン酸マグネシウム塩．．．１．００
ラウロイルヒドロキシプロリン．．．．．．．．．．．１．００
水溶性コラーゲン（１％水溶液）．．．．．．．．．．２．００
１，３−ブチレングリコール．．．．．．．．．．．．３．００
エタノール．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．５．００
精製水を加えて全量を１００とし、上記配合比にてパックを製造した。
【０１１７】
製剤例５．化粧水製造
実施例３のヤエナリ乳酸菌培養物．．．．．．．．．．２．００（重量％）
ヒドロキシエチレンセルロース（２％水溶液）．．．．１２．００
キサンタンゴム（２％水溶液）．．．．．．．．．．．２．００
１，３−ブチレングリコール．．．．．．．．．．．．６．００
濃いグリセリン．．．．．．．．．．．．．．．．．．４．００
ヒアルロン酸ナトリウム（１％水溶液）．．．．．．．５．００
精製水を加えて全量を１００とし、上記配合比にて化粧水を製造した。
【産業上の利用可能性】
【０１１８】
本発明によるヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物は、コラーゲン合成促進効果を通じて、皮膚老化防止または皮膚老化改善効果を奏し、また、炎症緩和効果を通じて抗炎症、及び皮膚刺激緩和または皮膚刺激改善効果を奏し得ることが分かる。よって、上記ヤエナリ抽出物及びギャバを含有するヤエナリ乳酸菌培養物は、コラーゲン生合成促進用、皮膚老化防止または皮膚老化改善用、抗炎症用、及び皮膚刺激緩和または皮膚刺激改善用化粧料組成物として有用である。
【図面の簡単な説明】
【０１１９】
【図１】ヤエナリを利用して本発明によるヤエナリ乳酸菌培養物を調製する過程の一実施例を示す概路図である。
【図２】下記実施例２において調製されたヤエナリ乳酸菌培養物中のギャバ含量をＨＰＬＣで測定した結果図である。
【図３】本発明によるヤエナリ乳酸菌培養物のコラーゲン合成促進効能を測定した結果図である。
【図４】本発明によるヤエナリ乳酸菌培養物のＴＰＡ（12-0-tetradecanoylphorbol-13-acetate）による炎症緩和効能を測定した結果図である。
【図５】本発明によるヤエナリ乳酸菌培養物の炎症緩和効能を測定した写真図である。
【図６】本発明によるヤエナリ乳酸菌培養物が抗炎症及び過免疫反応に関連したインターロイキン−６（ＩＬ−６）の分泌に及ぼす効果を測定した結果図である。
【図１】
2009501160.tif 000004
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
2009501160.tif 000009
【国際調査報告】
2009501160.tif 000010
2009501160.tif 000011