(57)【要約】  本発明は、眼内高血圧の治療及び／又は予防における使用のための医薬組成物の製造のための、抗分泌性タンパク質、抗分泌性活性を有するその相同体、誘導体及び／又は断片等の抗分泌性因子の使用に関する。従って、本発明は、好ましくは、高眼圧をもたらす体液の妨げられた流出によって特徴付けられる眼内高血圧の治療及び／又は予防における抗分泌性因子を含む医薬組成物の使用に関する。本発明は、眼内圧力を許容されるレベル、場合により２１ｍｍＨｇ又はそれ以下に変えて、このような状態を治療及び／又は予防するための新規なアプローチを提供する。
2009535329.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
眼内高血圧の予防及び／又は治療のための医薬組成物を製造するための、抗分泌性タンパク質、抗分泌性活性を有するその相同体、誘導体及び／又は断片、及び／又は医薬的に許容されるそれらの塩の使用。
【請求項２】
抗分泌性タンパク質が、次式：
Ｘ１−Ｖ−Ｃ−Ｘ２−Ｘ３−Ｋ−Ｘ４−Ｒ−Ｘ５
に従った配列からなり、式中、Ｘ１が、Ｉであり、配列番号６のアミノ酸１〜３５であり、又は欠失しており、Ｘ２が、Ｈ、Ｒ又はＫであり、Ｘ３が、Ｓ又はＬであり、Ｘ４が、Ｔ又はＡであり、Ｘ５が、配列番号６のアミノ酸４３〜４６、４３〜５１、４３〜８０又は４３〜１６３であり、又は欠失している、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
抗分泌性タンパク質が、配列番号６に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、配列番号６のアミノ酸３８〜４２を含むその相同体、誘導体及び／又は断片である、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
断片が、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
断片が、配列番号２に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
断片が、配列番号３に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項７】
断片が、配列番号４に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項８】
断片が、配列番号５に示されるアミノ酸配列を含む、請求項１に記載の使用。
【請求項９】
医薬組成物が、請求項１〜８に記載の断片の２つ又はそれ以上を含む、請求項１〜８の何れか一項に記載の使用。
【請求項１０】
眼内圧が、２２ｍｍＨｇ又はそれ以上である、請求項１〜９の何れか一項に記載の使用。
【請求項１１】
眼内圧が、２２〜３０ｍｍＨｇである、請求項１〜９の何れか一項に記載の使用。
【請求項１２】
眼内張力が、正常であるか又は低い、請求項１〜９の何れか一項に記載の使用。
【請求項１３】
抗分泌性タンパク質が、このような抗分泌性タンパク質の豊富な卵黄で提供され、そしてここで好ましくは該抗分泌性タンパク質が該卵黄中少なくとも１０００ＦＩＬ単位／ｍＬの濃度で提供される、請求項１〜１２の何れか一項に記載の使用。
【請求項１４】
眼内高血圧が、眼の前房からの房水の流出における抵抗によって生じる、請求項１〜１３の何れか一項に記載の使用。
【請求項１５】
医薬組成物が、線維柱帯網及びシュレム管を通る前房からの房水の流出における抵抗を低下させる、請求項１４に記載の使用。
【請求項１６】
異常な眼内圧が、眼の房水の妨げられた形成によって生じる、請求項１〜１５の何れか一項に記載の使用。
【請求項１７】
医薬組成物が、医薬的に許容される添加剤をさらに含む、請求項１〜１６の何れか一項に記載の使用。
【請求項１８】
医薬組成物が、局所、眼内、鼻腔内、経口、皮下、皮膚、粘膜及び／又は全身の投与のために製剤化される、請求項１〜１７の何れか一項に記載の使用。
【請求項１９】
医薬組成物が、噴霧器により、又は吸入器により、スプレー、エアゾールとして投与するために製剤化される、請求項１〜１８の何れか一項に記載の使用。
【請求項２０】
医薬組成物が、１回の適用及び体重ｋｇ及び１日あたり、０.１μｇ〜１０ｍｇの用量で、好ましくは、１回の適用及び体重ｋｇあたり１〜１０００μｇで血液に全身的に投与される、請求項１〜１９に記載の使用。
【請求項２１】
医薬組成物が、眼に対する局所投与のために製剤化される、請求項１〜２０に記載の使用。
【請求項２２】
医薬組成物が、１回の適用あたり１μｇ〜１０ｍｇの用量で、好ましくは１日あたり５０〜１０００μｇで投与される、請求項２１に記載の使用。
【請求項２３】
医薬組成物が、１日あたり１回又はそれ以上投与される、請求項１〜２２の何れか一項に記載の使用。
【請求項２４】
眼内投与のための医薬組成物の製造のための、抗分泌性タンパク質、抗分泌性活性を有するその相同体、誘導体及び／又は断片、及び／又は医薬的に許容されるそれらの塩の使用。
【請求項２５】
配列番号４に示されるペプチド又はその相同体、誘導体及び／又は断片。
【請求項２６】
医学的使用のための、請求項２５に記載のペプチド。
【請求項２７】
配列番号５に示されるペプチド又はその相同体、誘導体及び／又は断片。
【請求項２８】
医学的使用のための、請求項２７に記載のペプチド。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、好ましくは、高眼圧をもたらす体液の妨げられた流出によって特徴付けられる眼内高血圧の治療及び／又は予防における抗分泌性因子を含む医薬組成物の使用に関する。本発明は、眼内圧力を、許容されるレベル、場合により２１ｍｍＨｇ又はそれ以下に変えて、このような状態を治療及び／又は予防するための新規なアプローチを提供する。本発明は、また抗分泌性因子を含む医薬組成物の投与によって眼内高血圧を治療及び／又は予防するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
高眼圧レベルは、眼からの流体の増加した産生又は流体の妨げられた流出の何れか、又はその代わりのそれらの組み合わせによって引き起こされる。哺乳動物の眼における眼内圧力（ＩＯＰ）は、広範囲の種の間で類似しており、１０〜２０ｍｍＨｇ、１２〜１８ｍｍＨｇなど、１１〜２１ｍｍＨｇのオーダーである。ヒトに関しては、正常な範囲は、ほぼ１１〜２１ｍｍＨｇの間である。それは、２１ｍｍＨｇ、２１〜２４ｍｍＨｇ又は２２〜３０ｍｍＨｇなど、２０ｍｍＨｇを長時間超過する場合、高いと考えられている。ＩＯＰのレベルは、血液を起源とし、毛様体プロセスを介して眼の前房内に転送される流体の房水（ＡＨ）の形成によって制御される。ＡＨは、後房中の硝子体及び水晶体、次いで瞳孔を通過して前房に入る。そこから、ＡＨのほとんどが、虹彩角膜角へ最終的に流れ、シュレム管、房水静脈並びに強膜及び強膜上の静脈を経て線維柱帯網を通って眼から出て行く。ＡＨと、例えば後房の水晶体及び前房の角膜との間には流体及び代謝産物の交換がある。ＡＨの少量の部分が、ぶどう膜強膜路、すなわち虹彩、毛様体筋及び強膜に入り、局所的に産生された組織液と最終的に混合した後、眼から出る（Ｊｅｒｎｄａｌ，Ｈａｎｓｓｏｎ  ＆  Ｂｉｌｌ，１９９０；Ｏｙｓｔｅｒ，１９９９）。ＩＯＰは、主として流出によってモニターされるが、一方成人におけるＡＨの形成は、あまり変化しないと考えられている。ＩＯＰの主要制御因子は、線維柱帯網の内皮、小管近傍（ｊｕｘｔａｃａｎａｌｉｃｕｌａｒ）内皮網及びシュレム管の内壁内皮である（Ｌｕｔｊｅｎ−Ｄｒｅｃｏｌｌ  １９９８；Ｓａｃｃａ  ｅｔ  ａｌ  ２００５）。後者は、前房から循環器系への流れを矯正し及びモニターする上で特に重要である。内皮細胞において、カベオラと呼ばれる陥入部位が形成され、ＡＨで満され、その後主に巨大液胞として内皮細胞を通って転送され、最終的にシュレム管内にその内容物を移す。ＩＯＰが上昇すると、このような巨大液胞の多数の形成をもたらし、ＩＯＰが減少する場合にはその逆になる（Ｊｅｒｎｄａｌ，Ｈａｎｓｓｏｎ  ＆  Ｂｉｌｌ，１９９０；Ｌｕｔｊｅｎ−Ｄｒｅｃｏｌｌ  １９９８）。さらに、これらの細胞は、その細胞容積をモニターする能力を暫定的に有し、それによりＡＨ傍細胞漏出に影響し得る（Ｓｔａｒｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。図１ａは、ヒトの眼の模式図を示し、図１ｂは、成人の眼の虹彩角膜角の走査電子顕微鏡写真を示す。
【０００３】
眼内高血圧という用語は、２１〜２４ｍｍＨｇ、２２〜３０ｍｍＨｇなど、ＩＯＰが２０ｍｍＨｇを超過する慢性疾患のための診断として使用される医療行為におけるものである。眼内高血圧を有する患者は、視野欠損等の続発症の何れかの徴候又は他の徴候を発症することなく網膜及び視神経の異常のその状態に罹患している可能性がある。ＩＯＰの急性の上昇は、例えば発咳、高い作業負荷で、眼球に対する外傷及びバルサルバ手技の後に一過性で起り得る。通常、ＩＯＰの日内変動があり、ヒトでは早朝で最も高い。成人では、１分あたりＡＨ約２〜３μＬが形成され、眼の中のＡＨは、約１＋１／２時間で一新される結果となる。そのことは、形成及び流出が、通常の範囲内でＩＯＰを維持するために、狭い範囲内でモニターされなければならないことを意味する。ＩＯＰは、高過ぎても低過ぎてもいけない。ＡＨの主要な機能は、栄養、酸素、イオン及び流体を例えば水晶体及び角膜に提供すること、及び代謝産物及びゴミを排出することである。さらに、ＩＯＰ及びＡＨは、光学特性及び眼の形状を維持するよう相互作用する。ＡＨの産生は、ＡＨの代謝回転及びその流出を測定するなど幾つかの方法によって明らかにされ得る。眼内圧は、例えば眼圧測定法によって正確に測定される。
【０００４】
異常なＩＯＰの存在は、幾人かの緑内障患者において実証可能であり得る。それにもかかわらず、緑内障患者全員が必ずしも眼内高血圧の徴候を示すわけではない。従って、眼内高血圧という用語は、緑内障の医学的診断と混同してはならない。眼内高血圧とは対照的に、緑内障は、網膜神経細胞の進行性の欠損及び視神経の変性に起因する経時的な憎悪と最終的な失明によって特徴付けられる疾患として定義される。状態の広範な範囲は、緑内障という用語の下に含まれ、全てが、最終的に視野の悪化に至ることで共通している（Ｒｉｔｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６）。従って、診断緑内障は、視覚的欠損に関するものであり、異常なＩＯＰの存在に関するものではない。
【０００５】
ＩＯＰは主として、眼の前房から、虹彩角膜角を通ってシュレム管に至る静脈へのＡＨの流出によって制御される。眼からのＡＨ排出が、妨げられ又は遮断さえされる場合、ＩＯＰは、上昇することになる。通常、１２〜１８ｍｍＨｇなど、１０〜２０ｍｍＨｇの範囲のＩＯＰをもたらす、流出に対する抵抗は主として、線維柱帯網及びシュレム管の内皮内膜に集中する。線維柱帯網及びシュレム管における内皮細胞は、ＡＨの流出の制御において相互作用する（Ａｌｖａｒａｄｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００５；Ｊｅｒｎｄａｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１）。一方では前房と、もう一方では強膜及び強膜上の静脈を含むシュレム管との間に直接的なやりとりはない。眼内高血圧を有する対象（ｓｕｂｊｅｃｔ）において、線維柱帯網は、可変の程度までの変性、鞘由来のプラーク物質の蓄積及びＡＨの流出に対する増大した抵抗によって特徴付けられる（Ｒｏｈｅｎ  ｅｔ  ａｌ，１９９３）。さらに、色素及び剥脱物質並びに血液細胞及び血餅の蓄積は、特定の場合、同様に流出に加わり、さらに流出を妨げ、ＩＯＰを上昇させる。過分泌、すなわちＡＨの過剰形成は、眼内高血圧のまれな単独の原因である。従って、ＡＨの代謝回転の改良され持続された制御、特に、虹彩角膜角を通じてのＡＨの流出の制御は、ＩＯＰを低下及び正常化させるのに、眼内高血圧をモニターするために重要である。
【０００６】
臨床診療における眼内高血圧の治療のための利用可能な治療法は、好ましくはＡＨの流出を増大させることを目的としているが、例えばドルゾラミド及びブリンゾラミド等の幾つかの薬物は、ＡＨ産生を低下させる。現に使用されている薬物の幾つかは、形成及び流出経路の両者に影響を及ぼす。ＡＨが、例えば水晶体及び角膜に栄養分、流体及び酸素を供給し、形成された莫大な産物に対処するので、ＡＨの組成及び代謝回転が重要であることが強調されるべきである。副作用は、現に使用される薬物でよく見られ、適切な治療をしばしば妨害する。さらに、利用可能な薬物では十分に治療できない眼内高血圧を有する対象が存在する。従って、ＩＯＰを正常レベルに低下させるための治療上のアプローチが必要である。
【０００７】
抗分泌性タンパク質は、４１ｋＤａタンパク質であり、元々下痢性疾患及び腸管炎症に対する保護を提供すると云われていた（概説については、Ｌａｎｇｅ  ａｎｄ  Ｌｏｎｎｒｏｔｈ，２００１参照）。抗分泌性タンパク質は、配列決定されており、そのｃＤＮＡはクローン化されている。抗分泌性活性は、１〜１６３の間に位置するペプチド、又はより具体的には、抗分泌性タンパク質アミノ酸配列の位置３５〜５０の間によって主としてもたらされているようである。免疫化学的及び免疫組織化学的研究によって、抗分泌性タンパク質が身体中のほとんどの組織及び器官に存在し、またそれらによって合成され得ることが明らかとなった。抗下痢性配列を含む合成ペプチドが、特性化されている（ＷＯ９７／０８２０２；ＷＯ０５／０３０２４６）。抗分泌性因子が、コレラ毒素による処理後の腸管及び中枢神経系の脈絡叢におけるような、病原性流体輸送及び／又は炎症反応を正常化することが既に記載されている（ＷＯ９７／０８２０２）。従って、ＷＯ９７／０８２０２において、抗分泌性因子を食物及び食餌に添加することは、浮腫、下痢、脱水症状及び炎症の治療に有用であることが示唆された。ＷＯ９８／２１９７８には、抗分泌性タンパク質の形成を誘導する食物の生産のための、酵素活性を有する産物の使用が記載されている。ＷＯ００／０３８５３５にはさらに、抗分泌性タンパク質それ自体の豊富な食品が記載されている。
【０００８】
抗分泌性タンパク質及びその断片が、細胞の損失及び／又は獲得と関連した状態の治療において、神経組織の修復、並びに幹細胞及び前駆細胞及びそれらに由来する細胞の増殖、アポトーシス、分化及び／又は遊走を改善することも示されている（ＷＯ０５／０３０２４６）。
【０００９】
本発明者は、今般驚くべきことに、抗分泌性因子タンパク質、それに由来する相同体及びペプチド断片が、眼の虹彩角膜角を通る静脈系へのＡＨの流出に対する抵抗を低下させることを発見した。これは、抗分泌性タンパク質、その相同体及び断片のための新たな治療適用を与え、すなわち、眼内高血圧の治療及び／又は予防のための薬物の調製におけるこのようなタンパク質及び断片の使用を与える。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、眼内高血圧の治療及び／又は予防における抗分泌性因子を含む医薬組成物の使用に関する。本発明は、抗分泌性因子、すなわち抗分泌性タンパク質、並びに抗分泌性活性を有するそのペプチド、誘導体、相同体及び断片が、眼における液体の流出を増大させ、それにより眼内圧を低下させるという発見に基づいている。
【００１１】
第一の側面において、本発明は、眼内高血圧の予防及び／又は治療のための医薬組成物の製造のための抗分泌性タンパク質、若しくは抗分泌性活性を有するその相同体、誘導体若しくは断片、又は医薬的に許容されるそれらの塩の使用に関する。
【００１２】
第二の側面において、本発明は、哺乳動物における眼内高血圧を治療及び／又は予防するための方法に関するものであり、ここで該方法は、抗分泌性タンパク質、若しくは抗分泌性活性を有するその相同体、誘導体若しくは断片、又は医薬的に許容されるそれらの塩を含む医薬組成物の有効量を、上記方法を必要とする哺乳動物に投与することを含む。
【００１３】
定義
本願において、前［眼］房は、虹彩角膜角でつながる虹彩の前部表面と角膜の内皮表面との間の空間として定義される。
【００１４】
後［眼］房は、硝子体及び水晶体の前部表面と虹彩の後部表面との間の空間として定義される。後房及び前房は、瞳孔を通じて接続されている。
【００１５】
本文脈における抗分泌性タンパク質とは、ＷＯ９７／０８２０２及びＷＯ００／３８５３５に既に定義されている抗分泌性特性を有するタンパク質を指す。
【００１６】
本文脈において、抗分泌性因子（ＡＦ）とは、抗分泌性タンパク質若しくは抗分泌性ペプチド又は抗分泌性活性を有するその相同体、誘導体及び／又は断片を指す。本文脈において、このようなペプチド、相同体、誘導体又は断片は、眼内高血圧の治療及び／又は予防において類似の生物活性を有する。抗分泌性因子は、例えばＷＯ９７／０８２０２及びＷＯ０５／０３０２４６に既に記載されている。本文脈において、抗分泌性因子、抗分泌性因子タンパク質、抗分泌性タンパク質、抗分泌性ペプチド、抗分泌性誘導体及び抗分泌性断片という用語は、交換可能に使用される。また、抗分泌性因子という用語によって企図されるのは、以下にさらに記載されるＳＥ９０００２８−２及びＷＯ００／３８５３５において記載されるような抗分泌性因子の豊富な卵黄である。
【００１７】
房水ＡＨによって意味されるのは、毛様体突起で血液から形成される水様流体であり、後房及び瞳孔を通って前房中へと流れた後、主として線維柱帯網及びシュレム管を介して前房を出て、最終的には静脈血管に至る。
【００１８】
ＣＮＳとは、中枢神経系であり、脳及び脊髄を含む。
【００１９】
浮腫によって意味されるのは、細胞、組織又は漿液腔中の水様流体の過剰量の蓄積である（例えば、Ｓｔｅｄｍａｎ’ｓ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ，５th  ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ，２００５参照）。
【００２０】
緑内障によって意味するところは、視野の欠損及び狭窄並びに最終的には失明に至る網膜及び視神経に対する進行性損傷によって特徴付けられる疾患の群である。
【００２１】
眼内圧（ＩＯＰ）とは、眼球中の房水によって加えられる圧である。
【００２２】
眼内高血圧とは、覚醒状態にある対象において、眼球中の圧が、２１ｍｍＨｇのような、２２〜３０ｍｍＨｇのような、２０ｍｍＨｇを超過している状態である。従って、本文脈において、眼内高血圧という用語は、異常な眼内圧と交換可能に使用される。
【００２３】
眼内低血圧によって意味するところは、覚醒中の対象において、眼球中の圧が、１０ｍｍＨｇなど、１１ｍｍＨｇ未満であることである。
【００２４】
虹彩角膜角とは、虹彩と角膜の後部との間の前房における接合部である。
【００２５】
ＰＢＳとは、リン酸緩衝化生理食塩水である。
【００２６】
本文脈において、「治療」又は「治療すること」という用語は、眼内高血圧の状態（ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）を治癒又は緩和するための治療上の処置をいう。また、本発明において企図されるのは、眼内高血圧の「予防」であり、これは眼内高血圧の発症を回避するための予防的処置に関するものである。
【００２７】
線維柱帯網によって意味することろは、前房とシュレム管との間の虹彩角膜角で挟まれた、内皮細胞で内側が覆われたコラーゲン性結合組織の小柱及びシートの網である。
【００２８】
シュレム管によって意味するところは、眼の縁領域の内部強膜溝の外側部分にあり、房水静脈を介して、眼の静脈ドレーン系に接続される環状静脈チャネルである。シュレム管は、眼の前房からの房水の主要流出系である。
【００２９】
タンパク質とは、ペプチド結合によって互いに連結されるアミノ酸残基によって構成される生物学的巨大分子である。アミノ酸の線状ポリマーとしてのタンパク質は、ポリペプチドとも呼ばれる。典型的に、タンパク質は、５０〜８００個のアミノ酸残基を有し、それゆえ、約６，０００〜約数十万Ｄａ又はそれ以上の範囲にある分子量を有する。小タンパク質は、ペプチド又はオリゴペプチドと呼ばれる。「タンパク質」及び「ペプチド」という用語は、本文脈において交換可能に使用され得る。
【００３０】
本文脈における「医薬組成物」とは、場合により担体又はビヒクル等の製薬的に活性のある添加剤との組み合わせで、抗分泌性タンパク質の治療活性量を含む組成物を指す。該医薬組成物は、適切な投与経路用に製剤化され、これは、患者の状態、及び年齢又は好ましい選択等の他の要因に応じて変動し得る。抗分泌性タンパク質を含む医薬組成物は、薬物送達システムとして機能する。投与した医薬組成物は、ヒト又は動物の身体に活性物質を与える。本発明に適した医薬組成物は、以下にさらに記載される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
本発明は、抗分泌性タンパク質及びその相同体、誘導体又は断片等の抗分泌性因子（ＡＦ）が、眼の虹彩角膜角を通る静脈系への房水流出に対する抵抗の低下をひき起こし、眼の中に異常に蓄積された流体の流出を増大させるという驚くべき発見に基づいている。それにより、房水の流出が増大し、眼の中の眼内圧が低下するに至る。これは、抗分泌性タンパク質及びその断片についての新たな治療上の適用を与え、すなわち、眼内高血圧の治療及び／又は予防のための医薬組成物の調製におけるこのようなタンパク質及び断片の使用を与える。本発明に従った医薬組成物の使用は、眼内高血圧に進行又は罹患する危険性のある患者において最も有用であるようである。
【００３２】
上述のように、房水の流出は、主として虹彩角を通って生じ、線維柱帯網を形成する細胞によって調節される。房水のほとんどが、シュレム管を介して眼の外に輸送される。房水は、小さな小胞に封入され、線維柱帯網の細胞を通ってシュレム管に、及びある程度は傍細胞に輸送される。さらに、わずかな程度であるが、ＡＨは、虹彩及び強膜の角構造を通って眼から出る。流体の「わずかな部分」が一度に輸送される房水の眼からの流出は、例えば腸におけるイオン及び水の輸送とは根本的に異なり、腸の内皮細胞のイオン及び水のポンプは、その時点で１分子を輸送する。それゆえ、抗分泌性因子が、浮腫、下痢、脱水症状、緑内障及び炎症等の状態の治療における使用に関して既に示唆されている（ＷＯ９７／０８２０２）けれども、これらの疾患の治療における抗分泌性因子の作用機序は、眼の虹彩角膜角を通って静脈系への房水の流出に対する抵抗が、抗分泌性因子によって低下する、本発明の作用機序とは異なっている。しかしながら、とはいえより後期の段階における眼内高血圧が、緑内障をもたらす可能性があり又はもたらさないかも知れないことに、注目すべきである。
【００３３】
それゆえ、第一の側面において、本発明は、眼内高血圧の予防及び／又は治療のための医薬組成物の製造のための抗分泌性タンパク質及び／又は抗分泌性活性を有するその相同体、誘導体若しくは断片、すなわち、抗分泌性因子、及び／又は医薬的に許容されるそれらの塩の使用に関する。
【００３４】
抗分泌性因子とは、身体中に自然に存在するタンパク質である。ヒトの抗分泌性因子は、４１ｋＤａタンパク質であり、脳下垂体から単離される場合、３８２個のアミノ酸を含む。本発明に従った眼内圧を低下させる効果に関する活性部位は、タンパク質のＮ末端近くの領域中に位置し、配列番号６のアミノ酸１〜１６３に、又はこの領域の断片に位置しているようである。
【００３５】
本発明者は、抗分泌性因子が、全ての脊椎動物細胞において、存在する成分、２６Ｓプロテアソーム、のサブユニット、より具体的には１９Ｓ／ＰＡ７００キャップを構成する、Ｒｐｎ１０とも呼ばれるタンパク質Ｓ５ａとある程度相同であることを証明した。本発明において、抗分泌性タンパク質とは、同一の機能特性を有する相同的タンパク質の１クラスとして定義される。プロテアソームは、過剰なタンパク質、並びに短命の、望ましくない、変性した、ミスフォールディングの及びさもなくば異常なタンパク質の分解と関連した多数の機能を有する。さらに、抗分泌性因子／Ｓ５ａ／Ｒｐｎ１０は、一般に入手可能な教科書においてさらに記載されるように、細胞成分、最も明らかにはタンパク質、の細胞内分布及び輸送に関与する。
【００３６】
本発明の抗分泌性タンパク質及び／又はペプチドの相同体、誘導体及び断片は全て、眼内圧を低下できる類似の生物活性を有する。本文脈における抗分泌性の相同体、誘導体及び断片は、天然の抗分泌性タンパク質の少なくとも４個のアミノ酸を含み、これは、眼内高血圧の治療及び／又は予防における抗分泌性因子の生物活性を最適化するために、１つ又はそれ以上のアミノ酸を変化させることによってさらに修飾されていてもよい。
【００３７】
抗分泌性タンパク質の断片は、調製物中にペプチド／アミノ酸配列又はそれらの断片を一般に含み、その中に調製物中のタンパク質の９０％以上、例えば９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％が、本発明のタンパク質、ペプチド及び／又はそれらの断片となる。
【００３８】
さらに、本発明の抗分泌性タンパク質、ペプチド、相同体、誘導体及び／又は断片のアミノ酸配列と、少なくとも７２％、７５％、７７％、８０％、８２％、８５％、８７％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％又は９９％同一であるなど、少なくとも７０％同一である何れかのアミノ酸配列も、本発明の範囲内にあるとされる。本文脈において、相同的及び同一性という用語は、交換可能に使用され、すなわち別のアミノ酸配列と特定の度合の同一性を有するアミノ酸配列は、特定のアミノ酸配列と特定の度合の相同性を有する。
【００３９】
本文脈において、誘導体によって企図するところは、本明細書で定義される抗分泌性活性を有し、直接的に又は修飾若しくは部分的置換によって別の物質から誘導されるタンパク質であり、１つ又はそれ以上のアミノ酸が、修飾された又は非天然アミノ酸であり得る別のアミノ酸によって置換されている。このような修飾された及び／又は非天然のアミノ酸は、当業者によく知られている。例えば、本発明の抗分泌性因子誘導体は、Ｎ末端及び／又はＣ末端保護基を含み得る。Ｎ末端保護基の一例には、アセチルが含まれる。Ｃ末端保護基の一例には、アミドが含まれる。
【００４０】
参照アミノ酸配列と例えば少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するタンパク質、その相同体、ペプチド及び／又は断片によって企図することろは、例えばペプチドのアミノ酸配列が、参照配列と同一であるが、例外は、前記アミノ酸配列が、参照アミノ酸配列の各１００個のアミノ酸あたり５個までの点変異を含み得るということである。言い換えれば、参照アミノ酸配列と少なくとも９５％同一のアミノ酸配列を有するポリペプチドを得るために、参照配列のアミノ酸の５％までを欠失させるか又は別のアミノ酸と置換でき、又は参照配列中のアミノ酸全体の５％までの数のアミノ酸を、参照配列中に挿入し得る。参照配列のこれらの変異は、参照アミノ酸配列のアミノ末端若しくはカルボキシ末端の位置で、又は参照配列列中のアミノ酸の中で個々に、若しくは参照配列内の１つ若しくはそれ以上の連続した基中で散在して、それら末端の位置の間のどこかに存在してもよい。
【００４１】
本発明において、局所アルゴリズムプログラムは、同一性を決定するのに最も良く適している。局所アルゴリズムプログラム（Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ等）は、１つの配列中のサブ配列を、第二の配列中のサブ配列と比較し、サブ配列の組み合わせ及びそれらのサブ配列のアラインメントを発見し、これにより最高の全体的類似スコアが得られる。許容される場合、内部ギャップは、ペナルティ化される。局所アルゴリズムは、単一ドメイン又は共通して１つだけの結合部位を有する２つのマルチドメインタンパク質を比較するのに十分機能する。
【００４２】
同一性及び相同性を決定する方法は、公的に利用可能なプログラムにおいてコード化される。２つの配列間の同一性及び相同性を決定する好ましいコンピュータプログラム方法には、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ  ｅｔ  ａｌ（１９９４））ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ及びＦＡＳＴＡ（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ（１９９０））が含まれるが、それらに限定されるわけではない。ＢＬＡＳＴＸプログラムは、ＮＣＢＩ及び他の源（ＢＬＡＳＴ  Ｍａｎｕａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ，Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ｅｔ  ａｌ（１９９０））から公的に利用可能である。各配列分析プログラムは、デフォルトスコア化マトリックス及びデフォルトギャップペナルティを有する。一般的に、分子生物学者により、選択されたソフトウェアプログラムによって確立されたデフォルト設定が使用されると予想される。
【００４３】
本発明の抗分泌性活性を有する高分泌性タンパク質又はペプチド又はそれらの相同体、誘導体若しくは断片は、５〜１６個のアミノ酸、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９若しくは２０個又はそれ以上のアミノ酸など、４個又はそれ以上のアミノ酸であり得る。他の好ましい実施態様において、抗分泌性因子は、４２、４３、４５、４６、５１、８０、１２８、１２９又は１６３個のアミノ酸からなる。好ましい実施態様において、抗分泌性因子は、５、６、７、８又は１６個のアミノ酸からなる。
【００４４】
別の好ましい実施態様において、本発明の抗分泌性タンパク質、ペプチド及び／又はそれらの相同体、誘導体若しくは断片は、次式
Ｘ１−Ｖ−Ｃ−Ｘ２−Ｘ３−Ｋ−Ｘ４−Ｒ−Ｘ５
に従った配列からなり、式中、Ｘ１は、Ｉであり、配列番号６のアミノ酸１〜３５であり、又は欠失しており、Ｘ２は、Ｈ、Ｒ又はＫであり、Ｘ３は、Ｓ又はＬであり、Ｘ４は、Ｔ又はＡであり、Ｘ５は、配列番号６のアミノ酸４３〜４６、４３〜５１、４３〜８０又は４３〜１６３であり、又は欠失している。
【００４５】
本発明の抗分泌性因子は、インビボ又はインビトロで、例えば組換え生産し、化学合成し、及び／又はブタ脳下垂体又はトリの卵等に由来する分泌性因子の天然源から単離することが可能である。生産後、抗分泌因子は、化学的又は酵素的切断によって、より小さな抗分泌性活性断片に、又はアミノ酸の修飾によって、さらに処理することがきる。精製によって純粋な形態で抗分泌性因子を得ることは今のところ可能ではない。しかしながら、ＷＯ９７／０８２０２及びＷＯ０５／０３０２４６においてすでに記載されているように、生物活性のある抗分泌性因子タンパク質を組換えで生産することは可能である。ＷＯ０５／０３０２４６及びＷＯ９７／０８２０２には、このタンパク質の生物活性のある断片の生産も記載されている。
【００４６】
本発明の抗分泌性因子は、Ｎ末端及び／又はＣ末端保護基をさらに含み得る。Ｎ末端保護基の一例には、アセチルが含まれる。Ｃ末端保護基の一例には、アミドが含まれる。
【００４７】
「医薬的に活性のある塩」という用語は、いわゆるＨｏｆｍｅｉｓｅｒシリーズをベースにした、抗分泌性タンパク質に由来する何れかの塩であり得る抗分泌性タンパク質の塩を指す。タンパク質及びペプチドは両性であるので、「医薬的に許容される塩」という用語は従って本発明の範囲を制限することなく、例えばトリフルオロ酢酸塩又は酢酸塩として貯蔵される場合本発明の抗分泌性因子のより安定した形態をも意味する。
【００４８】
本発明の医薬組成物又は薬剤は、本分野で公知のものなど、１つ又はそれ以上の薬理学的に許容される担体、添加剤又は賦形剤をさらに含み得る。
【００４９】
組成物又は薬剤は、以下に限定されるわけではないが、例えば、滅菌生理食塩水、種々の塩溶液、グルコース溶液、リン酸緩衝化生理食塩水、血液、血漿又は水等の溶解された輸液、粉末、マイクロカプセル、マイクロスフェア、ナノ粒子、スプレー、エアゾール、吸入デバイス、溶液、分散液、懸濁液、エマルション及びそれらの混合物等の液体、半液体、半固体又は固体の組成物の形態にあり得る。組成物は、ペプチド又はタンパク質の安定性及び反応性を考慮に入れ得る。
【００５０】
本発明の医薬組成物は、例えば、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｙ」，第２１版、ＩＳＢＮ  ０−７８１７−４６７３−６又は「Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ」，第２版、Ｓｗａｒｂｒｉｃｋ  Ｊ．編、ＩＳＢＮ：０−８２４７−２１５２−７に記載の従来の製薬プラクティスに従って製剤化され得る。
【００５１】
本発明の好ましい一実施態様において、抗分泌性タンパク質は、配列番号６に示されるアミノ酸配列を有する抗分泌性タンパク質、又は配列番号６のアミノ酸３８〜４２を含むその相同体、誘導体及び／又は断片である。
【００５２】
本発明の好ましい実施態様において、抗分泌性因子は、配列番号１〜６から選択されたものであり、すなわち、アミノ酸の一般的な１文字略記を使用して、ＶＣＨＳＫＴＲＳＮＰＥＮＮＶＧＬ（配列番号１、本文脈ではＡＦ−１６とも呼ばれる）、ＩＶＣＨＳＫＴＲ（配列番号２）、ＶＣＨＳＫＴＲ（配列番号３）、ＣＨＳＫＴＲ（配列番号４）、ＨＳＫＴＲ（配列番号５）、又は（図４にも示される）配列番号６に従った抗分泌性タンパク質のアミノ酸配列である。配列番号１、２及び３は、例えばＷＯ０５／０３０２４６及び米国特許第６３４４４４０号中の配列番号６に既に記載されている。付随する配列の列挙において特定されるように、上述の特定された配列中のアミノ酸の幾つかは、他のアミノ酸によって置換され得る。本段落の以下において、特定のアミノ酸配列中の特定のアミノ酸の位置は、左から計算され、最もＮ末端のアミノ酸を、その特定の配列中の位置１にあるものとして示す。以下に特定したように、何れかのアミノ酸置換は、その配列中の何れかの他のアミノ酸置換とは独立して達成し得る。配列番号１において、位置２におけるＣは、Ｓによって置換され得、位置３におけるＨは、Ｒ又はＫによって置換され得、位置４におけるＳは、Ｋと置換され得、及び／又は位置６におけるＴは、Ａと置換され得る。配列番号２において、位置３におけるＣは、Ｓによって置換され得、位置４におけるＨは、Ｒ又はＫによって置換され得、位置５におけるＳは、Ｌによって置換され得、及び／又は位置７におけるＴは、Ａによって置換され得る。配列番号３において、位置２におけるＣは、Ｓによって置換され得、位置３におけるＨは、Ｒ又はＫによって置換され得、位置４におけるＳは、Ｌによって置換され得、及び／又は位置６におけるＴは、Ａによって置換され得る。配列番号４において、位置１におけるＣは、Ｓによって置換され得、位置２におけるＨは、Ｒ又はＫによって置換され得、位置３におけるＳは、Ｌによって置換され得、及び／又は位置５におけるＴは、Ａによって置換され得る。配列番号５において、位置１におけるＨは、Ｒ又はＫによって置換され得、位置２におけるＳは、Ｌによって置換され得、及び／又は位置４におけるＴは、Ａによって置換され得る。
【００５３】
本発明の好ましい一実施態様において、前記断片は、配列番号１において示されるアミノ酸配列を含む。
【００５４】
本発明の好ましい一実施態様において、前記断片は、配列番号２において示されるアミノ酸配列を含む。
【００５５】
本発明の好ましい一実施態様において、前記断片は、配列番号３において示されるアミノ酸配列を含む。
【００５６】
本発明の好ましい一実施態様において、前記断片は、配列番号４において示されるアミノ酸配列を含む。
【００５７】
本発明の好ましい一実施態様において、前記断片は、配列番号５において示されるアミノ酸配列を含む。
【００５８】
また、本発明によって企図されるのは、本発明の抗分泌性因子の何れかのうちの２つ又はそれ以上の組み合わせであり、また場合により抗分泌性因子の豊富な卵黄との組み合わせである。
【００５９】
本発明の好ましい一実施態様において、抗分泌性因子は、眼内高血圧の治療及び／又は予防のための医薬組成物を製造するために、又は眼内高血圧を治療及び／又は予防する方法において使用され、ここで、眼内張力は、２２ｍｍＨｇ又はそれ以上のような、２１ｍｍＨｇ又はそれ以上である。本発明の別の好ましい実施態様において、眼内張力は、正常であり又は低くさえあり、すなわち、１１〜２１ｍｍＨｇの間のような、２１〜２４ｍｍＨｇ未満、好ましくは１０〜１２ｍｍＨｇ未満である。１０ｍｍＨｇ未満のような、１０〜１２ｍｍＨｇ未満のような、１１ｍｍＨｇ未満のＩＯＰは、正常よりも低いとして、すなわち低いと考えられている。正常であり又は正常を下回りさえする眼内圧を有する哺乳動物に対しても本発明の医薬組成物の投与することの有益な効果は、このような哺乳動物も、１日にわたって眼内圧にピークを有する可能性があり、従って本発明の医薬組成物によって治療し及び／又は予防することが可能であるということである。別の好ましい実施態様において、眼内張力は、２１〜２４ｍｍＨｇのような、２２〜３０ｍｍＨｇのような、２１ｍｍＨｇを超過している。
【００６０】
また本発明によって企図されるのは、抗分泌性因子の豊富な卵黄を使用して、眼内高血圧を治療及び／又は予防し、及び／又は医薬組成物を調製する可能性である。ＳＥ９００００２８−２には、トリにおいて抗分泌性因子の形成をどのように刺激することができるか、次に抗分泌性因子を卵黄の消化物からどのように回収又は濃縮するかが記載されている。ＷＯ００／３８５３５にはさらに、このように回収され又は濃縮された抗分泌性因子を食事又は食餌と共に、又は多かれ少なかれ単離された生産物として、医薬製品中に製剤化され、動物又はヒトへ、どのように投与することができるかが記載されている。それゆえ、また本願において企図されるのは、医薬組成物等の製品を調製するための、眼内高血圧を治療及び／若しくは予防するための、又はこのような治療方法に使用するための、抗分泌性因子の豊富な卵黄の使用である。好ましい実施態様において、前記抗分泌性タンパク質は、前記卵黄中少なくとも１０００ＦＩＬ単位／ｍＬの濃度で提供される。本文脈において、ＷＯ００／３８５３５及びＳＥ９００００２８−２に記載されているように、ＦＩＬ単位は、抗分泌性因子の供給なしの対照と比較して、腸における流体流れの５０％の低下に相当する。本発明に従った抗分泌性因子はそれゆえ、「医療用食品」の形態で投与することも可能である。本文脈において、医療用食品とは、抗分泌性タンパク質を有する組成物で調製されている食品を指す。該食品は、液体又は粉末等の流体又は固体の形態にある何れかの適切な食品、又は何れかの他の適切な食材であり得る。このような物の例は、ＷＯ００／３８５３５において見出され得る。
【００６１】
本発明の好ましい一実施態様において、治療しようとする及び／又は予防しようとする眼内高血圧は、眼の前房からの房水の流出における抵抗によって引き起こされる。
【００６２】
別の好ましい実施態様において、本発明で使用される医薬組成物は、線維柱帯網及びシュレム管を通る前房からの房水の流出における抵抗を低下させる。
【００６３】
本発明の一実施態様において、本発明の医薬組成物は、医薬的に許容される添加剤をさらに含む。医薬的に許容される添加剤及び本発明の使用のための該添加剤の最適濃度に関する選択は、実験によって当業者によって容易に決定され得る。本発明の使用のための医薬的に許容される添加剤には、溶剤、緩衝剤、保存料、キレート化剤、抗酸化剤、安定剤、乳化剤、懸濁化剤及び／又は賦形剤が含まれる。
【００６４】
医薬的に許容される添加剤とは、組成物を投与することになる個体に対して実質的に無害である物質である。このような添加剤は通常、薬物に関する国家機関によって定められた必要条件を満たす。米国薬局方及び欧州薬局方等の公的薬局方は、よく知られた医薬的に許容される添加剤に関する基準を設定している。
【００６５】
以下は、本発明の使用のための関連する医薬組成物の概説である。概説は、特定の投与経路に基づいている。しかしながら、医薬的に許容される添加剤が異なる剤形又は組成物において採用され得る場合において、当然ながら、特定の医薬的に許容される添加剤の適用が、特定の剤形又は添加剤の特定の機能に限定されるわけではない。
【００６６】
非経口的組成物：
全身的適用のため、本発明組成物は、マイクロスフェア及びリポソームを含む従来の非毒性の医薬的に許容される担体及び添加剤を含有し得る。
【００６７】
本発明の使用のための組成物には、固体、半固体及び液体の組成物の全種類が含まれ得る。
【００６８】
医薬的に許容される添加剤には、溶剤、緩衝剤、保存料、キレート化剤、抗酸化剤、安定剤、乳化剤、懸濁化剤及び／又は賦形剤が含まれ得る。種々の作用剤の例は、以下に付与される。
【００６９】
多様な作用剤の例：
溶剤の例には、水、アルコール、血液、血漿、髄液、腹水及びリンパ液が含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００７０】
緩衝剤の例には、クエン酸、酢酸、酒石酸、乳酸、リン酸水素（ｈｙｄｒｏｇｅｎｐｈｏｓｐｈｏｒｉｃ  ａｃｉｄ）、炭酸水素塩、リン酸塩、ジエチルアミン等が含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００７１】
キレート化剤の例には、ＥＤＴＡナトリウム及びクエン酸が含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００７２】
抗酸化剤の例には、ブチル化ヒドロキシルアニソール（ＢＨＡ）、アスコルビン酸及びその誘導体、トコフェロール及びその誘導体、システイン、並びにそれらの混合物が含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００７３】
賦形剤及び崩壊剤の例には、乳糖、ショ糖、エムデックス（ｅｍｄｅｘ）、リン酸カルシウム、炭酸カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、デンプン及び微結晶セルロースが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００７４】
結合剤の例には、ショ糖、ソルビトール、アカシアゴム、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、デンプン、セルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリビニルピロリドン及びポリエチレングリコールが含まれるが、それらに限定されるわけではない。
【００７５】
本発明に使用される医薬組成物又は物質は好ましくは、患者への末梢静脈内注入を介して又は筋肉内注射若しくは皮下注射を介して、又は口腔（ｂｕｃｃａｌ）、肺、鼻、皮膚又は経口の経路を介して投与される。さらに、外科的に挿入されたシャントを通して患者の脳室内に医薬組成物又は医薬的に活性のある物質を投与することも可能である。
【００７６】
一実施態様において、本発明の医薬組成物は、眼内、鼻腔内、経口、皮下及び／又は全身の投与用に製剤化される。医薬組成物は、１日あたり１回又はそれ以上投与することが可能である。本発明の好ましい実施態様において、医薬組成物は、スプレー、エアゾールとして、噴霧器による、又は吸入器による投与のために製剤化される。別の好ましい実施態様において、本発明の組成物は、スプレー、エアゾールで又は噴霧器で、経鼻的に及び／又は気道に、吸入するための、懸濁液又はさらにより好ましくは粉末として適用することによって投与しようとするものである。噴霧器とは、液体投薬物を霧の状態で気道に送達する医療用装置である。噴霧圧縮器は、液体薬物で満たされた医薬カップ内にチューブを通して空気を送り込む。空気力により、液体は、気道内に深く吸入することが可能なごく小さな霧様粒子にされる。本文脈において「エアゾール」という用語は、微細な固体又は液体粒子のガス状懸濁物を指す。抗分泌性因子を含む粉末の形態にある医薬組成物は、安定性及び投与量、及び乾燥粉末は吸入器で投与できるという点でさらなる利点を有する。医薬組成物は、また、眼に局所的に、眼内で、鼻腔内で、経口で、皮下的に及び／又は血管を介して全身的に適用可能である。好ましい実施態様において、医薬組成物は、眼に対する局所適用のために製剤化される。典型的には、眼に対する局所適用のために使用される場合、本発明の組成物で１日あたりに適用される濃度は、１回あたり１μｇ〜１ｍｇのような１回あたり１μｇ〜１０ｍｇ、好ましくは１日あたり５０〜５００μｇ、１日あたり５０〜２５０μｇ、１日あたり１００〜２５０μｇ、１日あたり５００〜２５０μｇ、１日あたり５００〜７５０μｇ、又は１日あたり５０〜１００μｇのような、１日あたり５０〜１０００μｇであり、１日あたりの単回用量として又は１日あたりの単眼あたりに反復された複数回としての何れかである。血液に全身投与する場合、用量は典型的には、１回の適用及び体重ｋｇ及び１日あたり、０.１μｇ〜１ｍｇのような、１回の適用及び体重ｋｇ及び１日あたり、０.１μｇ〜１０ｍｇの範囲であり、好ましくは１〜１０００μｇ／体重ｋｇであり、さらに好ましくは１〜１００μｇ／体重ｋｇであり、１日あたりの単回用量として又は１日あたりに反復される複数回としての何れかである。抗分泌性因子の豊富な卵黄を、本発明で使用する場合、これを、好ましくは経口的に投与する。ＡＦタンパク質、ペプチド、それらの断片及び／又は誘導体の重要な特徴は、高用量でさえ局所の又は全身的な副作用が認められないことであり、公知のリスクなしに、強力な治療が可能であることである。
【００７７】
本発明は、また、眼内投与のための医薬組成物を製造するための抗分泌性タンパク質、又は抗分泌性活性を有するその相同体、誘導体及び／又は断片、及び／又は医薬的に許容されるそれらの塩の使用に関する。
【００７８】
本発明は、また、配列番号４に示されるペプチド、その相同体、誘導体及び／又は断片それら自体に関する。本発明はさらに、医学的使用のための配列番号４に従ったペプチドの使用に関する。
【００７９】
本発明は、また、配列番号５に示されるペプチド、その相同体、誘導体及び／又は断片それら自体に関する。本発明はさらに、医学的使用のための配列番号５のペプチドの使用に関する。このようなペプチドは、コンパートメント症候群の治療及び／または予防における使用のための医薬組成物を調製するための使用に関する、同一出願人からの係属中の出願にも記載されている。
【００８０】
本発明は、また、眼内高血圧の治療及び／又は予防を必要とする哺乳動物において、眼内高血圧を治療及び／又は予防する方法に関するものであって、該方法は抗分泌性タンパク質又は抗分泌性活性を有するその相同体、誘導体若しくは断片、及び／又は医薬的に許容されるそれらの塩を含む医薬組成物の有効量を投与することを含む。このような方法において使用するための医薬組成物は、上で記載したとおりである。
【００８１】
従って、本発明は、眼内高血圧の治療及び／又は予防を必要とする哺乳動物において、眼内高血圧を治療及び／又は予防するための方法に関するものであって、該方法は、抗分泌性タンパク質、抗分泌性活性を有するその相同体、誘導体及び／又は断片、及び／又は医薬的に許容されるそれらの塩を含む医薬組成物の有効量を投与することを含む。
【００８２】
好ましい実施態様において、本発明の方法は、前記医薬組成物を眼内で投与することを含む。
【００８３】
本発明方法の好ましい実施態様において、前記医薬組成物は、配列番号１〜６に示されるアミノ酸配列を含む断片の１つ又はそれ以上を含む。
【００８４】
本発明方法の好ましい実施態様において、前記抗分泌性タンパク質は、次式
Ｘ１−Ｖ−Ｃ−Ｘ２−Ｘ３−Ｋ−Ｘ４−Ｒ−Ｘ５
に従った配列からなり、式中、Ｘ１は、Ｉであり、配列番号６のアミノ酸１〜３５であり、又は欠失しており、Ｘ２は、Ｈ、Ｒ又はＫであり、Ｘ３は、Ｓ又はＬであり、Ｘ４は、Ｔ又はＡであり、Ｘ５は、配列番号６のアミノ酸４３〜４６、４３〜５１、４３〜８０又は４３〜１６３であり、又は欠失している。
【００８５】
本発明方法の好ましい実施態様において、抗分泌性タンパク質は、配列番号６に示されるアミノ酸配列を有するタンパク質、配列番号６のアミノ酸３８〜４２を含むその相同体、誘導体及び／又は断片である。
【００８６】
本発明方法の好ましい実施態様において、前記抗分泌性タンパク質の断片は、配列番号１に示されるアミノ酸配列を含む。
【００８７】
本発明方法の好ましい実施態様において、前記抗分泌性タンパク質の断片は、配列番号２にあるようなアミノ酸配列を含む。
【００８８】
本発明方法の好ましい実施態様において、前記抗分泌性タンパク質の断片は、配列番号３にあるようなアミノ酸配列を含む。
【００８９】
本発明方法の好ましい実施態様において、前記抗分泌性タンパク質の断片は、配列番号４にあるようなアミノ酸配列を含む。
【００９０】
本発明方法の好ましい実施態様において、前記抗分泌性タンパク質の断片は、配列番号５にあるようなアミノ酸配列を含む。
【００９１】
本発明方法の好ましい実施態様において、前記医薬組成物は、本発明の抗分泌性因子の任意の２つ又はそれ以上を、場合により抗分泌性因子の豊富な卵黄とも組み合わせて含む。
【００９２】
本発明方法の好ましい実施態様において、哺乳動物における眼内張力は、２１ｍｍＨｇ又はそれ以上である。
【００９３】
本発明方法の好ましい実施態様において、眼内張力は、正常であり又は低い。
【００９４】
本発明方法の好ましい実施態様において、抗分泌性タンパク質は、このような抗分泌性タンパク質の豊富な卵黄で提供され、該抗分泌性タンパク質は、好ましくは該卵黄中少なくとも１０００ＦＩＬ単位／ｍＬの濃度で提供される。
【００９５】
本発明方法の好ましい実施態様において、眼内高血圧は、眼の前房からの房水の流出における抵抗によって引き起こされる。
【００９６】
本発明方法の好ましい実施態様において、医薬組成物は、線維柱帯網及びシュレム管を通しての前房からの房水の流出における抵抗を低下させる。
【００９７】
本発明方法の好ましい実施態様において、医薬組成物は、医薬的に許容される添加剤をさらに含む。
【００９８】
本発明方法の好ましい実施態様において、医薬組成物は、眼内、鼻腔内、経口、皮下及び／又は全身の投与用に製剤化される。
【００９９】
本発明方法の好ましい実施態様において、医薬組成物は、スプレー、エアゾールとして製剤化され、又は噴霧器若しくは吸入器による投与のために製剤化される。
【０１００】
本発明方法の好ましい実施態様において、医薬組成物は、１回の適用及び体重ｋｇ及び１日あたり、０.１μｇ〜１０ｍｇの用量で、好ましくは、１回の適用及び体重ｋｇあたり１〜１０００μｇで血液に全身的に投与される。ＡＦタンパク質、ペプチド、それらの断片及び／又は誘導体に関する重要な特徴は、高用量でさえ局所的又は全身的な副作用が認められないことであり、公知のリスクなしに、強力な治療が可能であることである。
【０１０１】
本発明方法の同様に好ましい実施態様において、医薬組成物は、１回の適用及び体重ｋｇ及び１日あたり０.１μｇ〜１ｍｇの用量のような、１回の適用及び体重ｋｇ及び１日あたり０.１μｇ〜１０ｍｇの用量で、好ましくは１回の適用及び体重ｋｇあたり１〜１００μｇで血液に全身的に投与される。
【０１０２】
本発明方法の好ましい実施態様において、医薬組成物は、眼に対する局所投与のために製剤化される。
【０１０３】
本発明方法の好ましい実施態様において、医薬組成物は、１回の適用あたり１μｇ〜１０ｍｇの用量で、好ましくは１日あたり５０〜１０００μｇで局所的に投与される。
【０１０４】
本発明方法の同様に好ましい実施態様において、医薬組成物は、１回の適用あたり１μｇ〜１ｍｇの用量のような、１回の適用及び体重ｋｇ及び１日あたり０.１μｇ〜１０ｍｇの用量で、好ましくは１日あたり５０〜２５０μｇで投与される。
【０１０５】
本発明方法の好ましい実施態様において、医薬組成物は、１日あたり１回又はそれ以上投与される。
【実施例】
【０１０６】
実験セクション
実施例１
若齢成体ウサギ（Ｎｅｗ  Ｚｅａｌａｎｄ  Ｗｈｉｔｅ，ＮＺＷ）の日内リズムを、午前９時から午後９時まで暗にさらし、それに対して午後９時から午前９時まで点灯することによって調整した。これにより、正常ウサギにおけるＩＯＰが暗の開始時に増大しているので、ＩＯＰの動態を知った。眼球とテノン嚢（Ｔｅｎｏｎ’ｓ  ｃａｐｓｕｌｅ）との間に１０〜５０μｇのＡＦ−１６（配列番号１）（１０又は５０％エタノールを添加したＰＢＳ中に溶解）の片側デポジッション（ｕｎｉｌａｔｅｒａｌ  ｄｅｐｏｓｉｔｉｏｎ）の結果、ＴｏｎｏＰｅｎ（登録商標）（Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ  Ｉｎｃ．，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ  ＭＮ，ＵＳＡ）を用いて測定して、麻酔したウサギにおいて、ＩＯＰが２時間で２.５ｍｍＨｇほど一過性に降下した。色素フルオレセイン（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｉｎｃ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ；ＰＢＳ中に溶解したナトリウム塩）を静脈注射し、スリットランプ配置を装備した手術用顕微鏡でトレーサーの出現を測定した。ＡＦ−１６で処置した眼と、ビヒクルだけで処置した反対の眼との間に色素フルオレセインの出現時間に関する差はなかった。記載した手法を反復し、同一の結果を実証した。同様のＩＯＰ低下効果は、より高用量である１００μｇのＡＦ−１６で達成された。従って、使用されたトレーサーであるフルオレセインが、ＡＦ−１６処置された眼とビヒクル処置された眼とでそれぞれほぼ同時に出現することが示され得たという事実によって反映されているように、ＡＨの産生は明らかに、ＡＦ−１６処置によって顕著には影響を受けなかったと結論付けられた。
【０１０７】
実施例２
若齢成体ＮＺＷウサギの日内リズムを、午前９時から午後９時まで暗にさらし、それに対して午後９時から午前９時まで点灯することによって調整した。これにより、ＩＯＰの動態を知った。２羽の麻酔したウサギの眼球とテノン嚢との間の耳側に１０〜５０μｇのＡＦ−１６（１０又は５０％エタノールを添加したＰＢＳ中に溶解）を注入することによる片側デポジッションの結果、ＴｏｎｏＰｅｎ（登録商標）を用いて測定して、ＩＯＰが２時間で約２.５ｍｍＨｇほど低下した。次に、３％エバンスブルー（Ｍｅｒｃｋ，Ｓｉｇｍａ）及び２％ウシ血清アルブミン（Ｓｉｇｍａ）を含有するＰＢＳ中の溶液２０又は５０μＬを両眼内に、毛様体扁平部を通って後眼房と硝子体との間の境界中に注射した。灌流及び漏出を防止するために、眼の縫合により注射部位を封鎖した。青色の色素が前房に入り、強膜上静脈を通って眼から離れるのを観察し、ビヒクルのみで処置された反対の眼においてよりもＡＦ−１６で前処置された眼においてより迅速であった。翌日に、実験を１回反復し、同一の結果であった。従って、虹彩角膜角を通ってシュレム管及びそれに隣接している静脈に至るアルブミン−色素複合体によって可視化されるＡＨの流出は、ペプチドＡＦ−１６の適用によって見かけ上促進された。
【０１０８】
実施例３
麻酔された成体動物は、確立され繰り返し発表されるアプローチである強膜吸引キャップ技術に従って決定されるＡＨの流量及び流出に対する抵抗を有した。さらなるアプローチを使用することにより、これらのパラメータを測定することになる。それにより、正常動物及び実験的に高ＩＯＰを有する動物におけるＡＨ及びＩＯＰの動態に及ぼすＡＦ−１６の効果に関して、定量的及び定性的なデータを得ることになる。同じことが、先天性の眼内高血圧を有する動物についてもいえる。
【０１０９】
実施例４
若齢成体ＮＺＷウサギの日内リズムを、午前９時から午後９時まで暗にさらし、それに対して午後９時から午前９時まで点灯することによって調整した。これにより、暗の最初の数時間に、ＩＯＰが数ｍｍＨｇほど上昇する。ビヒクル（１０％エタノールを有するＰＢＳ）のみをデポジットした（ｄｅｐｏｓｉｔ）反対の眼におけるＩＯＰと比較して、テノン嚢の真下に、１０％エタノールの添加されたＰＢＳ中に溶解した最高１００μｇのＡＦ−１６を麻酔した動物へ片側デポジッションすると、１時間でＩＯＰが最大５ｍｍＨｇほど有意な降下を引き起こした。ＡＦ−１６による処置後のＩＯＰの低下は、少なくとも４時間持続した後、翌日測定して、反対の眼のＩＯＰと同等の値に戻った。これらの結果は、３羽のウサギで３日連続して反復することが可能であった。ＡＦ−１６は、正常な眼でＩＯＰを数ｍｍＨｇ効率的に低下させており、ＩＯＰを低下させることを目的とした他の薬物で達成されたと報告されているものに相当していると結論付けられた。
【０１１０】
実施例５
若齢成体ＮＺＷウサギの日内リズムを、午前９時から午後９時まで暗にさらし、それに対して午後９時から午前９時まで点灯することによって調整した。これにより、ＩＯＰの日内動態を知った。ビヒクルであるリン酸塩類緩衝溶液（ＰＢＳ）のみをデポジットした反対の眼におけるＩＯＰと比較して、下結膜円蓋（結膜嚢）において、麻酔した動物に対し、２５μＬのＰＢＳ中の（全体で５０μｇ中の）２５μｇのＡＦ−１６を、２分間隔で２回片側デポジッションすると、１時間後にＩＯＰが１.５〜２.５ｍｍＨｇほど降下した。ＡＦ−１６による処置後のＩＯＰの低下は、少なくとも４時間持続した後、翌日、反対の眼のＩＯＰと同等の値に戻った。これらの結果は、２羽のウサギで２日連続して反復することが可能であった。従って、これらの実験は、正常ウサギの結膜嚢におけるＡＦ−１６の局所デポジッションの結果、ＩＯＰが一過性に低下することを示した。
【０１１１】
実施例６
若齢成体ＮＺＷウサギの日内リズムを、午前９時から午後９時まで暗にさらし、それに対して午後９時から午前９時まで点灯することによって調整した。これにより、ＩＯＰの日内動態を知った。ビヒクルをデポジットした反対の眼におけるＩＯＰと比較して、下結膜嚢（下結膜円蓋）において、麻酔した動物に対し、５０μＬのＰＢＳ中の（全体で１００μｇ中の）５０μｇのＡＦ−１６を、２分間隔で２回片側デポジッションすると、１時間後にＩＯＰが２〜４ｍｍＨｇほど降下した。ＡＦ−１６による処置後のＩＯＰの低下は、少なくとも４時間持続した後、翌日、反対の眼のＩＯＰと同等の値に戻った。これらの結果は、２羽のウサギで３日連続して反復することが可能であった。実施例５において記載したように、ＡＦ−１６の２倍用量による正常眼の局所処置は、同様にＩＯＰを一過性に低下させ、明らかな局所的又は全身的な副作用が認められなかったと結論付けられた。
【０１１２】
実施例７
出願人に代わってＶｉｓｉｏｎａｒ  ＡＢ，Ｕｐｐｓａｌａ，Ｓｗｅｄｅｎによって実施された本実験の目的は、ＡＦ−１６による局所処置後のウサギにおけるＩＯＰの動態を研究すること、及び達成された効果を、眼内高血圧を低下させることが公知である薬物Ｔｉｍｏｌｏｌ（登録商標）（２，５ｍｇ／ｍＬ；Ａｌｃｏｎ  Ｓｗｅｄｅｎ  ＡＢ，Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ，Ｓｗｅｄｅｎ）の効果及びビヒクルであるＰＢＳと比較することであった。体重２.１〜２.４ｋｇの２０羽のアルビノ雌ＮＺＷウサギを購入し、単一ケージで個々に、自由摂餌（Ｋ１，Ｌａｃｔａｍｉｎ，Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ，Ｓｗｅｄｅｎ）及び自由摂水（常水）で飼育した。午前９時と午後９時の間点灯することによって、明暗サイクルを調節した。３週間の長期順化の間、角膜に麻酔を局所適用した後のＩＯＰを測定する検査状況で動物を毎日訓練した。
【０１１３】
動物を次の２群に無作為に分けた：
第１群（ｎ＝１０）。これらの動物に、単眼で（全体で５０μｇ、５０μＬのＰＢＳ中の）ＡＦ−１６を２滴デポジッションし、等容量のビヒクルＰＢＳ２×２５μＬを反対の眼にデポジッションした。
第２群（ｎ＝１０）。これらの動物に、単眼で１滴（Ｔｉｍｏｌｏｌ（登録商標）５０μＬ；１２５μｇ）デポジッションし、等容量のＰＢＳを反対の眼にデポジッションした。Ｔｉｍｏｌｏｌ（登録商標）は、ウサギにおいて眼内圧を低下させることが公知であり、それゆえ、基準としてモデルを検証するために使用した。局所麻酔剤として各角膜にＴｅｔｒａｋａｉｎ  Ｃｈａｕｖｉｎ（登録商標）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃｓ，Ｔａｂｙ，Ｓｗｅｄｅｎ）を１滴適用した後、ＴｏｎｏＰｅｎ  ＸＬ（登録商標）（Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ）によってＩＯＰを測定した。従って、最終プロトコールにおいて、測定の２つのシリーズをスケジュール化した。１つのシリーズは、ＡＦ−１６及びビヒクルで５日間局所処置した後のものであり、別のシリーズは、Ｔｉｍｏｌｏｌ（登録商標）又はビヒクルで５日間局所処置した後のものであった。
【０１１４】
ＩＯＰが、日内サイクルによって上昇することが予期されたので、第一の測定において、Ｔｉｍｏｌｏｌ（登録商標）のＩＯＰ低下効果は、５回目及び６回目の測定で見出されると期待された。ＩＯＰ測定の最後の日は、データが延長された期間に得られることを確実にするために、延長された期間（動物飼育室における暗の開始１、２、３.２５、４.２５、５.５、６.５、７.７５、９及び１０時間後）に実施した。結果を以下の図３に表す。５日間の処置期間の開始時のＩＯＰを図２に示す。局所的又は全身的の何れにおいても、ＡＦ−１６による処置において、不都合な作用も合併症も認められなかった。
【０１１５】
ＡＦ−１６が、ＩＯＰに及ぼす低下効果を有し、ビヒクルであるＰＢＳのみによる処理後に測定されたＩＯＰとは有意に異なることは、データから明らかであった。ＡＦ−１６によって発揮される非常に有意な効果は、Ｔｉｍｏｌｏｌ（登録商標）の効果に匹敵した（図３）。これらのデータは、ＡＦ−１６が、このような効果を有することが公知である一般に使用される薬物（Ｔｉｍｏｌｏｌ（登録商標））と同じように、ウサギにおいてＩＯＰを効果的に低下させ得ることを示していると結論付けられた。従って、ＡＦ−１６は、ヒトにおける眼内高血圧の治療に有用であり得た。
【０１１６】
実施例８
２羽の若齢成体ＮＺＷウサギ（２.４〜２.９ｋｇ、雌）の日内リズムを、午前９時から午後９時まで暗にさらし、それに対して午後９時から午前９時まで点灯することによって調整した。これにより、ＩＯＰの日内動態を知った。ビヒクルのみをデポジットした反対の眼におけるＩＯＰと比較して、麻酔した動物に対し、下結膜嚢（下結膜円蓋）に、各回５０μＬのＰＢＳ中の合成ヘキサペプチド  ＣＨＳＫＴＲ  ５０又は１００μｇ（全体で１００〜２００μｇ中の）を、２分間隔で２回片側デポジッションすると、１時間後にＩＯＰが２〜３ｍｍＨｇほど降下した。ヘキサペプチドによる処置後のＩＯＰの低下は、少なくとも２時間持続した後、翌日測定して、反対の眼のＩＯＰと同等の値に戻った。これらの結果は、２羽のウサギで達成することが可能であった。下位涙嚢にデポジットした、配列番号６の抗分泌性タンパク質の活性配列の一部であるＣＨＳＫＴＲ（配列番号４）を有する合成ペプチドによる正常眼の局所処置は、ＩＯＰを低下させると結論付けられた。
【０１１７】
実施例９
２羽の正常な若齢成体ＮＺＷウサギ（２.４〜２.９ｋｇ、雌）の日内リズムを、午前９時から午後９時まで暗にさらし、それに対して午後９時から午前９時まで点灯することによって調整した。これにより、ＩＯＰの日内動態を知った。麻酔した動物に、テノン嚢の下の耳側の位置で、１０％エタノールを有する１００μＬＰＢＳ中に溶解した合成ヘキサペプチド  ＣＨＳＫＴＲ  ５０又は１００μｇを片側デポジットすると、ビヒクルを同様に併せてデポジットした反対の眼におけるＩＯＰと比較して、３０分後にＩＯＰが２〜４ｍｍＨｇほど低下した。ヘキサペプチドによる処置後のＩＯＰの低下は、少なくとも２時間持続した。翌日測定して、ＩＯＰは、両動物において、反対の眼のＩＯＰと同等の値に戻った。これらの結果は、その後２日間達成することが可能であった。配列番号６の抗分泌性タンパク質の活性配列の一部を有する合成ペプチドＣＨＳＫＴＲ（配列番号４）とともに、眼球の外側に試験物質を注射することによる正常眼の局所処置は、何れの局所的又は全身的副作用を誘導することなく、ＩＯＰを低下させると結論付けられた。
【０１１８】
実施例１０
若齢成体ＮＺＷウサギの日内リズムを、午前９時から午後９時まで暗にさらし、それに対して午後９時から午前９時まで点灯することによって調整した。これにより、ＩＯＰの日内動態を知った。麻酔したウサギに、１０％エタノールを添加したＰＢＳ中に溶解した５０又は１００又は１０００μｇ／体重ｋｇのうちの２つの用量レベルの何れかで、ＡＦ−１６を静脈内注射すると、ＡＦ−１６の注射直前に測定したＩＯＰと比較して、１時間後に、ＩＯＰが何れかの眼で２〜３ｍｍＨｇほど低下した。ＡＦ−１６による処置後のＩＯＰの低下は、少なくとも２時間持続した。これらの動物の左眼と右眼との間で、ＩＯＰにおける明白な差はなかった。ＩＯＰは、翌日もう一度何れかの眼で測定され、ＡＦ−１６処置の前日の値近くにまで戻った。明白な副作用は、認められなかった。５０、１００又は最も効率的には１０００μｇ／体重ｋｇの何れかでＡＦ−１６を静脈内注射すると、ＩＯＰの低下を１時間で証明可能であり、ＩＯＰの低下が数時間持続し、ＩＯＰが、１日で元のレベルに回復したと結論付けられた。処置したウサギの両眼は、ＩＯＰに及ぼすＡＦの効果に関して、同一の動的パターンを示した。静脈内投与の場合、すなわち、全身的に投与する場合、ペプチドＡＦ−１６は、ＩＯＰを効率的に低下させるが、異常に低いＩＯＰを引き起こすことがない程、許容される程度までであると結論付けられた。
【０１１９】
実施例１１
若齢成体ＮＺＷウサギの日内リズムを、午前９時から午後９時まで暗にさらし、それに対して午後９時から午前９時まで点灯することによって調整した。これにより、ＩＯＰの日内動態を知った。ＰＢＳ中に溶解した５０、１００又は１０００μｇ／体重ｋｇのＡＦ−１６の経鼻デポジッションを、麻酔された３羽のウサギで実施し、その結果、外鼻孔にＡＦ−１６をデポジッションする直前に測定されたＩＯＰと比較して、１時間で、ＩＯＰが、何れかの眼で少なくとも２ｍｍＨｇほど降下した。ＡＦ−１６の高用量による処置後のＩＯＰの低下は、調査し時間の２時間及び３時間持続した。同一動物の左眼と右眼との間でＩＯＰに差はなかった。ＩＯＰを、翌日もう一度何れかの眼で測定し、ＡＦ−１６処置の前日の値にまでほぼ戻っていたことが示された。明白な副作用は、認められなかった。ＡＦ−１６の１０００μｇ／ｋｇまでの鼻腔内注入の結果、１時間以内でＩＯＰの低下を証明可能であり、ＩＯＰの低下が少なくとも３時間持続し、ＩＯＰが１日で元のレベルに回復すると結論付けられた。各ウサギの両眼は、同一の圧力パターンを示した。局所的又は全身的な副作用は認められなかった。
【０１２０】
実施例１２
若齢成体ＮＺＷウサギの日内リズムを、午前９時から午後９時まで暗にさらし、それに対して午後９時から午前９時まで点灯することによって調整した。これにより、ＩＯＰの日内動態をモニターして知った。全身酔下だが、このようなウサギの胃に、ＡＦタンパク質の豊富な凍結乾燥卵黄（ＳａｌｏｖｕｍTM、希釈された市販のオレンジジュース中に溶解）１０ｇをデポジットした。ＡＦタンパク質のこのような胃内デポジッションにより、ＳａｌｏｖｕｍTMを入れる直前に測定されたＩＯＰと比較して、１時間で、何れかの眼のＩＯＰが低下した。動物の左眼と右眼との間でＩＯＰに差はなかった。ＩＯＰを、翌日もう一度何れかの眼で測定し、ＡＦ−１６処置の前日の値にまでほぼ戻っていた。明白な副作用は、認められないようである。抗分泌性タンパク質の豊富な卵黄、例えばＳａｌｏｖｕｍTMを経口消化すると、ほぼ１時間以内でＩＯＰの低下を証明可能であり、ＩＯＰの低下が持続し、ＩＯＰが１日で元のレベルに回復すると結論付けられた。両眼は、同一のＩＯＰパターンを示した。
【０１２１】
実施例１３
片側にわずかな牛眼症（左眼球膨大）を有する若齢成体ＮＺＷウサギを麻酔し、ＴｏｎｏＰｅｎ（登録商標）眼圧計を用いて、該ウサギのＩＯＰを測定した。反復して調査して、牛眼症の眼のＩＯＰは、３０〜３２ｍｍＨｇであったのに対し、正常な反対の眼においては、１１〜１２ｍｍＨｇであった。１０％エタノールを有する１００μＬのＰＢＳ中の５０μｇのＡＦ−１６を、麻酔された動物に対し、テノン嚢の真下で耳側で片側注射すると、１時間でＩＯＰが１４〜１６ｍｍＨｇにまで低下した。反対の眼に対してＡＦ−１６の同一量を注射すると、ＴｏｎｏＰｅｎ（登録商標）で測定して、ちょうど約２ｍｍＨｇの低下が生じた。翌日、牛眼症の左眼におけるＩＯＰは、３０ｍｍＨｇを丁度超過するまで増大し、すなわち、左眼の元のレベルに戻った。ＡＦ−１６をさらに一度注注射すると、２時間で再度ＩＯＰが１５〜１６ｍｍＨｇになったのに対し、ＡＦ−１６の同一用量で、右眼ではＩＯＰが１〜２ｍｍＨｇだけ低下した。不都合な作用は認められ得なかった。従って、眼球での注射による局所デポジッションは、牛眼症の眼において高眼内圧を通常レベルにまで一過性で低下させると結論付けられた。
【０１２２】
実施例１４
若齢成体ＮＺＷウサギの日内リズムを、午前９時から午後９時まで暗にさらし、それに対して午後９時から午前９時まで点灯することによって調整した。これにより、ＩＯＰの動態を、ＩＯＰにおける日内変動と同調させた。科学的な国際医学雑誌における最近の刊行物（Ｋｒａｖｅ  Ｕ，Ｈｏｊｅｒ  Ｓ  ＆  Ｈａｎｓｓｏｎ  Ｈ．−Ａ．，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ，２１，２８６７−２８８２，２００５）において記載されているように、矢状面回転加速インパルスにこのようなウサギを曝露することにより、びまん性脳損傷を生じさせることに加え眼を損傷させることが本調査の間に発表された。麻酔したウサギを前部から後部への矢状面回転加速インパルスに、又は後部から前部への矢状面回転加速インパルスに、最大２００ｋｒａｄ／秒2の力で曝露すると、眼において機械的な歪み及び力負荷が生じた。次の３０分間で、麻酔された動物においてＴｏｎｏＰｅｎ（登録商標）眼圧計で測定して、ＩＯＰは、３５〜４０ｍｍＨｇにまで増大し、数時間上昇したままであった。矢状面回転加速衝撃の１０〜３０分後に、眼の耳側の領域のテノン嚢と強膜との間にＡＦ−１６（１０％エタノールを有する１００μＬのＰＢＳ）の溶液の注射によって、ＡＦ−１６を体重ｋｇあたり１００μｇデポジッションすると、１時間以内で、ＩＯＰがほぼ正常レベルに回復した。何れのＡＦ−１６も与えていない反対の眼のＩＯＰは、上昇したままであった。
【０１２３】
このような矢状面回転加速インパルスにウサギを曝露すると、例えば神経細胞及び血管細胞において細胞骨格の広範な変化が生じる（Ｈａｍｂｅｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。同じことがブタ脳を高いエネルギー負荷に曝露した後で、既に証明されている（Ｓｕｎｅｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０）。従って、回転加速外傷によって誘発される線維柱帯網及びシュレム管における細胞の膜変化及び細胞骨格変化によって、前房からのＡＨの流出が一過性で損なわれ、ＩＯＰの一過性の上昇が生ずると結論付けられた。ペプチドＡＦ−１６による局所処置は、上昇したＩＯＰを改善するようである。
【０１２４】
実施例１５
ラットの４つの強膜上静脈のうちの３つが片側だけ閉塞した。これにより、手術された眼の前セグメントからの静脈血には、眼の前セグメントからの血液の流出にとって唯一の単一静脈しか有していないことになった。その処置によって、数週間で、処理された眼のＩＯＰが上昇する。高ＩＯＰの眼を、ＰＢＳ中のＡＦ−１６で局所的に及び／又は全身的に処置して、ＡＦ−１６によるこのような処置が、ＩＯＰを正常化するかどうかを測定する。このような結果によって、ＡＨ形成速度及び流出特性の算出が可能となり、それにより、眼を通してのＡＨ流れの経路におけるＡＦ−１６の作用部位をつきとめることが可能となる。
【０１２５】
実施例１６
さらなるラットの耳側の強膜上静脈に高張生理食塩水注射し、一方その他の３つの強膜上静脈の血流を一過性で遮断した。Ｍｏｒｒｉｓｏｎらの文献における記載によればその処理の結果、処理された眼において数週間で高ＩＯＰが生じる。高ＩＯＰの眼を、ＰＢＳ中のＡＦ−１６で局所的に及び／又は全身的に処置して、ＡＦ−１６によるこのような処置が、ＩＯＰを正常化するかどうかを測定する。このような結果によって、ＡＨ形成速度及び流出特性の算出が可能となり、それにより、眼を通してのＡＨ流れの経路におけるＡＦ−１６の作用部位をつきとめることが可能となる。
【０１２６】
実施例１７
高頻度で高眼内圧を発症させる、その幾つかがトランスジェニックである一定の齧歯類の系続が交配されている。局所適用の、局所的に及び又は全身的にＡＦ−１６がＩＯＰに及ぼす効果が評価される。このような結果によって、ＡＨ形成速度及び流出特性の算出が可能となり、それにより、眼を通してのＡＨ流れの経路におけるＡＦ−１６の作用部位をつきとめることが可能となる。このような動物の使用は、眼内高血圧の治療を目的とした薬物を評価するための標準的なアプローチを構成するとされる。
【０１２７】
要約及び結論
記載した本実験により、抗分泌性因子による処置が、哺乳動物の高眼圧を低下させ、及び正常化しさえすることを不均一ながら開示した。これは、眼内高血圧を有する患者において高ＩＯＰを制御するための臨床診察における抗分泌性因子、タンパク質、ペプチド、相同体及び断片を含む薬物の有用性を示している。抗分泌性因子ＡＦ−１６が、ＩＯＰの高眼圧を効率的に正常化することを実験的に開示した。ＡＦ−１６の主要な効果は、房水の流出を改善する能力によって発揮される。従って、ＡＦ−１６が、線維柱帯網及びシュレム管の細胞を通してＡＨの放出を促進することによって、眼内高血圧を低下させ及び正常化することが明らかであると結論付けられた。
【０１２８】
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20.  WO 98/21978
21.  米国特許第6344440号
【図面の簡単な説明】
【０１２９】
【図１ａ】ヒトの眼の概略図を示す（１−１）。シュワン管（Ｓｃｈ）は、より高い倍率で、線維柱帯網（Ｔ）によって前房（ＡＣ）から隔てられているのが見える（１−２）。また、各小柱（Ｔｒ）が、内皮細胞（ＥＣ）によって包まれていることも示されている（１−３）。房水は、図１−１においてフレームをつけられた領域の右側に見られる毛様体突起において形成される。Ｌ＝水晶体；Ｃ＝角膜；Ｉ＝虹彩；Ｓ＝強膜；Ｒ．Ｖ．Ｋｒｓｔｉｃ，１９９１から改変。
【図１ｂ】球後腫瘍により眼が摘出された５５歳の男性由来のヒトの眼の虹彩角膜角の操作電子顕微鏡写真である。Ｕで記号を付けた線維柱帯網は、かなり密な組織によって、シュレム管（Ｓｃｈｌｅｍｍ）から隔てられているのが見える。Ｃ＝角膜；Ｓｐ＝強膜岬；Ｉ＝虹彩；Ｃｐ＝毛様体突起；Ｓ＝シュワルベ線。大気は、右上部にある。Ｊｅｒｎｄａｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１より。
【図２】実施例７に従った、ＡＦ−１６（▼）、薬物Ｔｉｍｏｌｏｌ（登録商標）（▲）及びＰＢＳビヒクル（■）それぞれによるウサギの眼の局所処置における眼内圧を示す。
【図３】実施例７に従った、ＡＦ−１６（▼）、薬物Ｔｉｍｏｌｏｌ（登録商標）（▲）及びＰＢＳビヒクル（■）それぞれによるウサギの眼の局所処置の５日後の眼内圧を示す。
【図４】本発明の配列番号６に従った抗分泌性タンパク質のアミノ酸配列を示す。配列は、米国特許第６３４４４４０号からの配列番号２に相当する。
【図１ａ】
2009535329.tif 000003
【図１ｂ】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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