(57)【要約】【課題】【解決手段】少なくとも１種の非水溶性もしくは難水溶性不飽和脂肪酸またはその塩を含む粗組成物からの、水溶性不飽和脂肪酸塩の調製方法であって、該酸または塩の水溶性アミノアルコール塩を形成するように、水の存在下において該粗組成物に少なくとも１種のアミノアルコール化合物を添加することと；水相を分離することと；任意に該水相から該塩を単離することとを含む方法。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１種の非水溶性もしくは難水溶性不飽和脂肪酸またはその塩を含む粗組成物からの、水溶性不飽和脂肪酸塩の調製方法であって、
該酸または塩の水溶性アミノアルコール塩を形成するように、水の存在下において該粗組成物に少なくとも１種のアミノアルコール化合物を添加することと；
水相を分離することと；
任意に、該水相から該塩を単離することと
を含む方法。
【請求項２】
不飽和脂肪酸またはその塩の非水溶性または難水溶性混合物からの、水溶性不飽和脂肪酸塩の混合物の調製方法であって、
該酸または塩の水溶性アミノアルコール塩を形成するように、水の存在下において非水溶性もしくは難水溶性不飽和脂肪酸またはその塩の該混合物に少なくとも１種のアミノアルコール化合物を添加することと；
水相を分離することと；
任意に、該水相から該塩を単離することと
を含む方法。
【請求項３】
非水溶性もしくは難水溶性不飽和脂肪酸またはその塩からの、水溶性不飽和脂肪酸塩の調製方法であって、
該酸または塩の水溶性ポリアミノアルコール塩を形成するように、水の存在下において該非水溶性もしくは難水溶性不飽和脂肪酸またはその塩に少なくとも１種のポリアミノアルコール化合物を添加することと；
水相を分離することと；
任意に、該水相から該塩を単離することと
を含む方法。
【請求項４】
該粗組成物が粗魚油に由来する、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
請求項１に記載の水溶性不飽和脂肪酸塩の調製方法であって、
（Ｉ）少なくとも１種の不飽和脂肪酸誘導体を含む粗油を加水分解すること、および該脂肪酸を含む油相を形成することと；
（ＩＩ）任意に、得られた油相を水性洗浄剤により洗浄することと；
（ＩＩＩ）該少なくとも１種の不飽和脂肪酸との水溶性塩を形成するように、水の存在下において少なくとも１種のアミノアルコール化合物を工程（Ｉ）の生成物または、工程（ＩＩ）が行われた場合は、工程（ＩＩ）の生成物へ添加し、それによって水相中へ該塩を抽出することと；
（ＩＶ）水相を分離および任意に乾燥することと
を含む方法。
【請求項６】
請求項５に記載の不飽和脂肪酸塩の調製方法であって、
（Ｉ）少なくとも１種の不飽和脂肪酸誘導体を含む粗油を加水分解すること、および該脂肪酸を含む油相を形成することと；
（ＩＩ）非毒性溶媒（例えばヘキサンまたはトルエン）中に、形成された油相を溶解することと；
（ＩＩＩ）任意に、油相を、例えば繰り返し、水性洗浄剤により洗浄することと；
（ＩＶ）任意に、存在するいずれの脂肪酸化合物がＣＯＯＨ形態であることを確実にするために、酸性の水相を添加すること、および水相を分離することと；
（Ｖ）該少なくとも１種の不飽和脂肪酸または塩との水溶性アミノアルコール塩を形成するように、水の存在下において先の工程の油相へ少なくとも１種のアミノアルコール化合物を添加すること、それによって水相中へ該塩を抽出することと；
（ＶＩ）水相を分離することおよび任意で乾燥することと
を含む方法。
【請求項７】
前記加水分解反応が塩基性条件下で行なわれる、請求項５または６に記載の方法。
【請求項８】
前記加水分解反応が、アルコール性溶媒の存在下において起こる、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
工程（Ｉ）が、
（Ｉ）水およびアルコールのような極性有機溶媒の存在下において、少なくとも１種の不飽和脂肪酸誘導体を含む粗油を加水分解することと；
加水分解された粗油をアルカンのような非極性溶媒により洗浄することおよび水相を保つことと；
油相を形成するために該水相を酸性化することと
を含む、請求項５〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
ポリ塩化ビフェニル、ダイオキシン、重金属、難燃剤、フタル酸塩およびコレステロールの少なくとも１つが粗組成物中に存在し、塩形成工程の間に除去される、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
ポリアミノアルコール化合物が使用される、上記いずれか一項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ポリアミノアルコール化合物がキトサンである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
モノアミノアルコール化合物が使用される、請求項１、２および４〜１０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１４】
前記モノアミン化合物が、メグルミンまたはトリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
不飽和脂肪酸の混合物が粗組成物中に存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記水溶性不飽和脂肪酸塩が、オメガ−３不飽和脂肪酸塩であるか、オメガ−３不飽和脂肪酸塩の混合物であるか、またはオメガ−３不飽和脂肪酸塩およびオメガ−６不飽和脂肪酸塩の混合物である、上記いずれか一項に記載の方法。
【請求項１７】
前記不飽和脂肪酸が、式（Ｉ）
ＣＨ3（ＣＨ2）n−（ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2）m−（ＣＨ2）s−ＣＯＯＨ  （Ｉ）
（式中、ｎ、ｍおよびｓは整数である）
の化合物であるか、または式（Ｉ）の化合物から誘導される、請求項１〜１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記塩が乾燥によって単離され、乾燥後に固体が形成される、上記いずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
乾燥が、噴霧乾燥または凍結乾燥によって達成される、上記いずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
（Ａ）少なくとも１種のオメガ−３脂肪酸またはその誘導体を含む粗油（例えば魚油）を加水分解することと；
（Ｂ）該少なくとも１種のオメガ−３脂肪酸をそのＣＯＯＨ形態に変換するために酸性水相を添加すること、および水相を分離することと；
（Ｃ）該少なくとも１種のオメガ−３脂肪酸との塩を形成するように、少なくとも１種のモノアミノアルコール化合物および／またはポリアミノアルコール化合物を含む水相を添加すること、それによって水相中へ該塩を抽出することと
を含むオメガ−３不飽和脂肪酸塩含有組成物の調製のための、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
請求項１〜２０に記載される方法より作製される不飽和脂肪酸の水溶性アミノアルコール塩またはそのような塩の混合物を含む組成物。
【請求項２２】
水溶性トリス−（ヒドロキシメチル）−メチルアミン塩、または不飽和脂肪酸のポリアミノアルコール塩。
【請求項２３】
不飽和脂肪酸の水溶性アミノアルコール塩の混合物を含む組成物。
【請求項２４】
請求項２１または２２に記載の水溶性塩を含む組成物。
【請求項２５】
少なくとも１種の生理学的に許容される抗酸化剤をさらに含む、請求項２３または２４に記載の組成物。
【請求項２６】
少なくとも１種の生理学的に許容される凍結保護剤をさらに含む、請求項２３〜２５に記載の組成物。
【請求項２７】
少なくとも１種のシクロデキストリンをさらに含む、請求項２３〜２６のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２８】
粉末形態での請求項２１〜２７のいずれか一項に記載の組成物または塩。
【請求項２９】
請求項２１〜２７に記載の結晶状組成物または塩。
【請求項３０】
少なくとも１種の脂肪酸塩が、式（Ｉ’）
ＣＨ3ＣＨ2ＣＨ＝ＣＨ−Ｒ−ＣＯＯＨ  （Ｉ’）
（式中、Ｒは、１つまたは複数の二重結合（好ましくは非共役結合）を含んでいてもよいＣ13+アルキレン基（例えばＣ13-25）である）；または
式（ＩＩ）：
ＣＨ3ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ＝ＣＨ−Ｒ’’−ＣＯＯＨ  （ＩＩ）
（式中、Ｒ’’は、１つまたは複数の二重結合を含んでいてもよいＣ5+アルキレン基（例えばＣ10-22）である）
の酸から誘導される、請求項２３〜２８のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３１】
式（Ｉ’）および（ＩＩ）の化合物から誘導された脂肪酸塩が存在する、請求項３０に記載の組成物。
【請求項３２】
ＤＨＡ、ＥＰＡ、リノール酸もしくは共役リノール酸またはその混合物のアミノアルコール塩を含む、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
塩を形成するアミノアルコール化合物が、一般式
（（ＨＯ（Ｒ’）0/1）n）Ｒ1ＮＨＲ2）m  （ＩＩＩ）
（式中、ｎは３〜６の整数であり、Ｒ’はメチルであり、Ｒ1はＣ1-20アルキレン基であり、Ｒ2はＨまたはＣ1-6アルキル側鎖、好ましくはメチルであり、およびｍは１〜２０の整数である）；または
一般式
（Ｃ6Ｈ14ＮＯ5）p  （ＩＶ）
（式中、ｐは２以上の整数である）
のアミノアルコール化合物である、請求項２３〜３２のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項３４】
前記アミノアルコール化合物が、メグルミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンまたはキトサンである、請求項３３に記載の組成物。
【請求項３５】
少なくとも２５０ｇ／Ｌの水溶解度を有する、請求項２１〜３４のいずれか一項に記載の塩または組成物。
【請求項３６】
薬における使用または栄養素サプリメントとしての使用のための薬剤の製造における、請求項２１〜３５に記載の水溶性塩または組成物の使用。
【請求項３７】
不飽和脂肪酸の水溶性アミノアルコール塩の混合物の水溶液の噴霧乾燥または凍結乾燥を含む、不飽和脂肪酸の水溶性アミノアルコール塩（好ましくは異なる脂肪酸の同一の塩）の混合物を含む乾燥組成物の調製方法。
【請求項３８】
少なくとも１種の非水溶性もしくは難水溶性飽和脂肪酸またはその塩を含む粗組成物からの、水溶性飽和脂肪酸塩の調製方法であって、
該酸または塩の水溶性アミノアルコール塩を形成するように、水の存在下において該粗組成物に少なくとも１種のアミノアルコール化合物を添加することと；
水相を分離することと；
任意に、該水相から該塩を単離することを含む方法。
【請求項３９】
（Ｉ）少なくとも１種の飽和脂肪酸誘導体を含む粗油を加水分解すること、および該脂肪酸を含む油相を形成することと；
（ＩＩ）任意に、結果として生じる油相を水性洗浄剤により洗浄することと；
（ＩＩＩ）該少なくとも１種の飽和脂肪酸との水溶性塩を形成するように、水の存在下において少なくとも１種のアミノアルコール化合物を工程（Ｉ）の生成物または、工程（ＩＩ）が行われた場合は、工程（ＩＩ）の生成物へ添加し、それによって水相中へ該塩を抽出することと；
（ＩＶ）水相を単離および任意に乾燥することと
を含む水溶性飽和脂肪酸塩含有組成物の調製方法。
【請求項４０】
飽和脂肪酸の水溶性アミノアルコール塩。
【請求項４１】
飽和脂肪酸の水溶性アミノアルコール塩の混合物を含む組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は水溶性不飽和脂肪酸塩の調製方法、例えば不飽和脂肪酸を含む粗組成物、特に脂肪酸の天然源、例えば植物油または魚油のような動物油からの、水溶性オメガ−３脂肪酸塩および／または水溶性オメガ−６脂肪酸塩の調製方法に関する。本発明は、本発明の方法によって調製することができる、特定の新規な水溶性塩およびその混合物にも関する。特に本発明は、オメガ−３脂肪酸の水溶性のモノアミノアルコール塩またはポリアミノアルコール塩が形成され、これらの化合物が健康促進サプリメントまたは薬物製剤として使用される方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
オメガ−３脂肪酸およびオメガ−６脂肪酸は、ヒトの健康にとって必須の脂肪酸であるが、身体によって生産することができないものである。この理由のために、オメガ−３脂肪酸は食料源から得られなくてはならず、魚類および特定の植物油中で見出すことができる。これらの２つの物質が健康を促進するために相互に作用するように、食餌中でオメガ−３およびオメガ−６（他の必須脂肪酸）の適切なバランスを維持することは重要である。オメガ−３脂肪酸およびオメガ−６脂肪酸は、例えば脳機能ならびに正常な成長および発達において重要な役割を果たす。
【０００３】
食品で摂取され身体によって使用される３つの主要なタイプの不飽和脂肪酸があり、それらはオメガ−６脂肪酸のα−リノレン酸（ＡＬＡ）、ならびにオメガ−３脂肪酸のエイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）およびドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）である。一旦食べられたならば、身体はＡＬＡをＥＰＡおよびＤＨＡ（身体によってより容易に利用されるオメガ−３脂肪酸の２つのタイプ）に変換する。広範囲な研究により、オメガ−３脂肪酸は炎症を減少させて、心臓疾患および関節炎のような特定の成人病防止を支援することが示されている。これらの必須脂肪酸は、脳において高度に濃縮され、認識および行動機能のために特に重要であると思われる。実際、妊娠中に母親から十分なオメガ−３脂肪酸を受け取らない乳児は、視力および神経の問題を起こすリスクがある。
【０００４】
今までに述べたように、食餌中のオメガ−３脂肪酸とオメガ−６脂肪酸との間のバランスを維持することは非常に重要である。例えば、オメガ−３脂肪酸は炎症減少を支援するが、大部分のオメガ−６脂肪酸は炎症を促進する傾向がある。これらの必須脂肪酸の適切なバランスにより健康維持およびさらに健康増進も支援されるが、不適当なバランスは疾患の発生の一因となる。健康的な食餌は、オメガ−３脂肪酸よりもおよそ１〜４倍多いオメガ−６脂肪酸からなるべきである。
【０００５】
インスタント食品の発達、および鮮魚、果物および野菜のような健康的な食料の消費の一般的な低下により、典型的なアメリカ人の食餌は、オメガ−３脂肪酸よりも１１〜３０倍多いオメガ−６脂肪酸を含む傾向があり、多くの研究者は、このバランスの悪さが米国における炎症性障害の比率の増加における重要な要因であると考える。
【０００６】
しかしながらこれとは対照的に、地中海的な食餌は、オメガ−３脂肪酸とオメガ−６脂肪酸間のより健康的なバランスからなり、多くの研究によりこの食餌に従う人が心臓疾患を発症する可能性の低いことが示されている。地中海的な食餌は、あまり肉（オメガ−６脂肪酸を多く含有）を含んでおらず、全粒粉、新鮮な果物および野菜、魚類、オリーブオイル、ニンニクを含むオメガ−３脂肪酸の豊富な食品だけでなく、適度なブドウ酒消費を重視する。
【０００７】
したがって１９７０年代におけるそれらの発見以来、そしてオメガ−６脂肪酸に対するオメガ−３脂肪酸の比が、多くの個人の食餌においてバランスが悪いという研究結果以来、オメガ−６に対するオメガ−３の望ましいバランスの回復を試みるために、栄養補助サプリメントとしてオメガ−３脂肪酸またはそれらの誘導体が消費者に利用可能である。関節炎、心筋梗塞および卒中のような様々な病気を防止するために、オメガ−３脂肪酸またはその誘導体は、したがって今や、何十万もの個人によって日常的にとられている。
【０００８】
オメガ−３脂肪酸は多くの場合、天然に存在するトリグリセリド形態で消費者に提供される。オメガ−３脂肪酸トリグリセリドまたは遊離脂肪酸それ自体は、一般に魚油のような天然油から調達される。魚油から高純度でオメガ−３酸を単離するのが困難であるので、オメガ−３サプリメントは多くの場合、消費者が嫌悪する不快な魚臭い後味を有する。オメガ−３物質を含む今日使用されるゼラチンカプセルを呑み込むことはまた、高齢者および子供のような、多くの個人にとって問題である。したがって魚の後味が除去できる十分な純度でオメガ−３化合物を単離することができたならば有益である。天然源と比較して、どのような組成物中でもオメガ−３化合物の濃度を濃縮することができたならばまた有益である。
【０００９】
オメガ−３脂肪酸および長鎖不飽和脂肪酸一般に関する特定の問題は、それらが非水溶性であるということ、およびそのナトリウム塩のようなその典型的な塩もまた非水溶性であるということである。この不溶性は著しく生体利用率を限定し、精製を妨げる。したがってオメガ−３物質を含む粗混合物から水溶性オメガ−３化合物を、例えばトリグリセリド形態または遊離酸形態で、得ることができるならば非常に有益である。
【００１０】
さらに海水と淡水における汚染のために、今や多くの魚油が、ダイオキシン、重金属、ポリハロゲン化難燃剤およびＰＣＢ（ポリ塩化ビフェニル類）のような有毒化合物を高レベルで含んでいる。これらの毒物を除去するのと同じ手段で、粗魚油からオメガ−３脂肪酸を単離することができるならば有益である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
利用されるいずれの分離方法も、安価で工業規模で適用可能であることもまた重要である。オメガ−３サプリメントのための市場は巨大であるが、製品に対する利幅は小さく、製品の小売価格は低い。高価なクロマトグラフィー技術による精製の費用は、オメガ−３を販売するにはあまりにも高価にしてしまうので、したがってそのような技術は粗魚油からオメガ−３酸を単離するために利用することができない。分子蒸留は、例えば薬物オマコー（Ｏｍａｃｏｒ）（登録商標）のための方法におけるように、ＥＰＡおよびＤＨＡのエチルエステルを精製するために今日利用されるが、これは粗魚油の精製のために有用ではない。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明者は、純粋な水可溶性不飽和脂肪酸塩、特にオメガ−３塩が濃縮された組成物の製造のための新規な方法を意外にも見出した。いくつかの実施形態において、本方法は、魚味および不健全な匂いに寄与しかつオメガ−３の健康上の利益に寄与しないより短鎖の脂肪酸および低分子量アミンの除去を可能にし、ダイオキシン、重金属、難燃剤およびＰＣＢのような毒物の排除もまた可能にして、化合物のオメガ−３脂肪酸塩、特にポリアミノアルコール塩を高度に濃縮させる。本方法はコレステロールの存在さえも排除することができる。さらに、水溶性不飽和脂肪酸塩またはその混合物は、薬学的剤形または栄養薬学的剤形でそれらを製剤にとって理想的にする形態である、固体形態（例えば粉末）で単離することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
本発明者は、魚油のような天然に存在する粗脂肪酸誘導体含有油を、疾患の治療および予防のための薬剤製造において直接使用することができる水溶性オメガ−３塩を含む組成物へと変換する手段を見出した。本方法は実施するのには安価で単純であり、高価な精製法を必要としない。
【００１４】
その最も広範囲の実施形態において、本発明の方法は、不飽和脂肪酸の水溶性塩の形成を可能にし、従って、非水溶性不純物を後に残して、水相への水溶性塩の抽出によって所望の酸を含む粗混合物の精製を可能にする。本発明は、新規な水溶性塩（例えば、ポリアミノアルコール化合物に基づいたもの）および水溶性不飽和脂肪酸塩の混合物の形成もまた教示する。
【００１５】
オメガ−３脂肪酸の塩は新しいものではない。例えばＷＯ９６／３３１５５は、ある特定の前精製されたオメガ−３脂肪酸のメグルミン（Ｎ−メチルグルカミン）塩について記載し、その様々な治療上の用途を示唆する。しかしながら本発明は、粗形態で、すなわち不純物の存在下で、不飽和脂肪酸を採取し、その精製された水溶性塩を調製する初めての方法を提供し、水溶性不飽和脂肪酸塩の混合物の初めての開示もまた提供する。この点に関しては、結晶質または半結晶質として本発明に記載の塩混合物を単離することができるのは最も驚くべきことである。化合物の混合物が存在する場合、１つ以上の化合物の存在が融点低下および油状物質の形成を引き起こすので、結晶質の回収はまれである。
【００１６】
したがって１つの態様から見ると、本発明は、非水溶性もしくは難水溶性不飽和脂肪酸またはその塩を含む粗組成物からの、水溶性不飽和脂肪酸塩（例えば水溶性不飽和脂肪酸塩の混合物）の調製方法であって、
該酸または塩の水溶性アミノアルコール塩を形成するように、水の存在下において該粗組成物へ少なくとも１種のアミノアルコール化合物を添加することと；
水相を分離することと；
任意に、該水相から該塩を単離することとを含む方法を提供する。
【００１７】
別の態様から見ると、本発明は、不飽和脂肪酸またはその塩の非水溶性または難水溶性混合物からの、水溶性不飽和脂肪酸塩の混合物の調製方法であって、
該酸または塩の水溶性アミノアルコール塩を形成するように、水の存在下において非水溶性もしくは難水溶性不飽和脂肪酸またはその塩の該混合物へ少なくとも１種のアミノアルコール化合物を添加することと；
水相を分離することと；
任意に、該水相から該塩を単離することとを含む方法を提供する。
【００１８】
別の態様から見ると、本発明は、非水溶性もしくは難水溶性不飽和脂肪酸またはその塩からの、水溶性不飽和脂肪酸塩の調製方法であって、
該酸または塩の水溶性ポリアミノアルコール塩を形成するように、水の存在下において該非水溶性もしくは難水溶性不飽和脂肪酸またはその塩に少なくとも１種のポリアミノアルコール化合物を添加することと；
水相を分離することと；
任意に、該水相から該塩を単離することとを含む方法を提供する。
【００１９】
本発明の第１の方法は、非水溶性不飽和脂肪酸または塩を含む粗組成物から、水溶性不飽和脂肪酸塩または塩の混合物の形成を可能にし、非水溶性不純物から脂肪酸を分離することによってその結果として脂肪酸の精製を可能にする。したがって精製によって、標的物質（すなわち不飽和脂肪酸の非水溶性アミノアルコール塩）が、粗組成物中に存在する少なくとも１つの不純物、好ましくは複数の不純物、特にコレステロールのような複数の水溶性不純物、および以下に言及される毒物から分離されることが意味される。したがって粗組成物は、少なくとも１つの不純物だけでなく、非水溶性もしくは難水溶性不飽和脂肪酸または塩も含んでいる。
【００２０】
本発明の方法は、純粋な形態での非水溶性不飽和脂肪酸混合物または塩混合物の反応によって水溶性アミノアルコール脂肪酸塩の混合物の形成をも可能にし、純粋な形態での不溶性不飽和脂肪酸または塩の反応によってポリアミノアルコール脂肪酸塩の形成を可能にする。これらの方法のうちのいずれにおいても、非水溶性または難水溶性不飽和脂肪酸化合物は、アミノアルコール化合物付加より以前には、好ましくはそのＣＯＯＨ形態である。
【００２１】
続く考察は、非水溶性または難水溶性不飽和脂肪酸がＣＯＯＨ形態であると想定するが、塩形態が出発物質中に存在するならば同様に塩形態に関する。粗組成物中に存在するか、または一般に本方法において使用されるいずれの非水溶性もしくは難水溶性不飽和脂肪酸（好ましくはオメガ−３脂肪酸）も、好ましくは植物油または動物油のような天然源に由来する。不飽和脂肪酸（典型的には脂肪酸のエステルとして存在する）を含む油は、当技術分野において周知である。適切な植物油は、菜種油、トウモロコシ油、大豆油、ヒマワリ油、植物油およびオリーブオイルが挙げられる。しかしながら、好ましくは不飽和脂肪酸の天然源は牛脂油のような動物油である。
【００２２】
しかしながら、非常に好ましくは不飽和脂肪酸の源は、魚油またはオキアミ油のような魚油である。本発明において使用される粗魚油は、魚、特にマグロ、イワシ、サケ、サバ、ニシン、マス、カレイ、タラ、コダラ、ナマズ、シタビラメなどのような海水魚のようないずれの海産源にも由来しうる。脂肪分の多い魚の使用が好ましい。しかしながら、理想的には粗魚油は、アザラシ、セイウチもしくはアシカのような海産哺乳類、好ましくはアザラシ、またはクリールから由来するだろう。アザラシ油がオメガ−３脂肪酸化合物を特に多く含む（例えば約２０〜２５重量％）こと、およびしたがって本発明の粗組成物を形成するために理想的な出発物質を形成することを見出した。アザラシ油は様々な市販の源から利用可能である。
【００２３】
不飽和脂肪酸は１つまたは複数の二重結合を含む。好ましくは、不飽和脂肪酸は多価不飽和である。本発明が実施される粗組成物は、非水溶性もしくは難水溶性不飽和脂肪酸またはそのような不飽和脂肪酸の混合物のようなものを含むことができる。好ましくは、それは不飽和脂肪酸の混合物を含んでおり、従って本方法の生成物は脂肪酸塩の混合物である。飽和脂肪酸もまた天然に存在する不飽和脂肪酸源中に存在するので、当然のことながら粗組成物がさらに飽和脂肪酸を含む可能性がある。
【００２４】
好ましくは、非水溶性または難水溶性不飽和脂肪酸は、炭素鎖の末端（オメガ）から数えて３番目の結合に、カルボン酸官能基から最も遠く離れている二重結合が位置するオメガ−３脂肪酸である。カルボン酸官能基から最も遠く離れている二重結合が、炭素鎖の末端（オメガ）から数えて６番目の結合に位置する場合には、脂肪酸は同様にオメガ−６脂肪酸であってもよい。本発明において使用される粗組成物、例えば、粗魚油は、様々なオメガ−３脂肪酸およびオメガ−６脂肪酸を含むだろう。したがって本発明は、水溶性オメガ−３不飽和脂肪酸塩の混合物が産生される方法を包含する。
【００２５】
粗油中のオメガ−３脂肪酸またはその誘導体の全濃度は問題となる天然源に依存して変化するが、例えば海水魚ではオメガ−３化合物の量はおよそ２５重量％である。
【００２６】
上記のように、脂肪酸は通常、天然源中で遊離酸の誘導体として存在する。不飽和脂肪酸（例えばオメガ−３脂肪酸またはオメガ−６脂肪酸）の誘導体ということによっては、その塩、アミドもしくはエステル、または処理に際して（例えば加水分解に際して）ＣＯＯＨ基に戻るようにＣＯＯＨ基が官能基化される他の化合物が意味される。しかしながら典型的には、粗油中の脂肪酸化合物は、エステル（特にトリグリセリド）の形態であり、すなわち脂肪酸誘導体はトリグリセリドである。
【００２７】
粗組成物の一部を形成することができる不飽和脂肪酸は、次式（Ｉ）のものでありえる。
ＣＨ3（ＣＨ2）n−（ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2）m−（ＣＨ2）s−ＣＯＯＨ  （Ｉ）
式中、ｎ、ｍおよびｓは、例えば１〜１０の整数である。下付き添字ｎは好ましくは１である。下付き添字ｍは好ましくは２〜８である。下付き添字ｓは好ましくは１〜６である。理想的には炭素鎖は直鎖状であるが、骨格がメチルまたはエチルのようなアルキル側鎖を保有することは、本発明の範囲内である。（この式でＤＨＡについてはｎ＝１、ｍ＝６およびｓ＝１、ＥＰＡについてはｎ＝１、ｍ＝５およびｓ＝１。ＡＬＡにおいてはｎ＝４、ｍ＝２およびｓ＝６）。
【００２８】
本発明のアミノアルコール塩に変換可能な、疾患の治療または予防に使用されるオメガ−３脂肪酸は、好ましくは炭素骨格中に少なくとも１８炭素原子を含んでいるものである。より低鎖の脂肪酸（骨格中に１７またはより少ない炭素原子のもの）は、治療上の有益な効果はより少ないように思われるが、魚または動物の飼料のような適用において有用になりえる。したがって好ましい不飽和脂肪酸は、式（Ｉ’）のものである。
ＣＨ3ＣＨ2ＣＨ＝ＣＨ−Ｒ−ＣＯＯＨ  （Ｉ’）
式中、Ｒは、１つ以上の二重結合（好ましくは非共役結合）を含んでいてもよいＣ13+アルキレン基（例えばＣ13-25）である。理想的にはＲ基は直鎖状であるが、骨格がメチルまたはエチルのようなアルキル側鎖を保有することは、本発明の範囲内である。鎖中の炭素原子の合計数は、好ましくは１６〜２２である。さらに、Ｒは好ましくは１３、１５、１７、１９などであり、すなわち鎖中の炭素原子数は好ましくは偶数である。当然のことながら本発明の方法によって作製されたオメガ３濃縮組成物が、様々な異なるオメガ−３に基づく化合物を高い可能性で含むが、式（Ｉ）の非常に好ましい化合物はＣ１８、Ｃ２０およびＣ２２化合物であり、ＡＬＡ、ＤＨＡおよびＥＰＡが特に好ましい。（すなわち式中Ｒが１３、１５または１７炭素原子を含む）。
【００２９】
非常に好ましい実施形態では、脂肪酸はＤＨＡおよびＥＰＡの混合物を含み、すなわち請求の範囲に記載される方法の終了時に形成される塩は、ＤＨＡおよびＥＰＡの塩の混合物を含んでいる。そのような塩の比は３０：７０〜７０：３０、好ましくは４０：６０〜６０：４０  ＥＰＡ／ＤＨＡであってもよい。
【００３０】
粗組成物はオメガ−６脂肪酸も含んでもよい。本発明の所望の水溶性塩の作製のために適切な好ましいオメガ−６脂肪酸は、次式（ＩＩ）のものである。
ＣＨ3ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ2ＣＨ＝ＣＨ−Ｒ’’−ＣＯＯＨ  （ＩＩ）
式中、Ｒ’’は、１つ以上の二重結合を含んでいてもよいＣ5+アルキレン基（例えばＣ10-22）である。理想的にはＲ’’基は直鎖状であるが、骨格がメチルまたはエチルのようなアルキル側鎖を保有することは、本発明の範囲内である。
【００３１】
Ｒ’’中の炭素原子数は、好ましくは１０、１２、１４、１６などであり、すなわち好ましくは鎖中の炭素原子数は偶数である。好ましい実施形態において、オメガ−６脂肪酸はリノール酸または共役リノール酸である。
【００３２】
当然のことながら本発明の方法によって作製された組成物が、様々な異なるオメガ３およびオメガ６に基づく化合物を高い可能性で含むが、式（ＩＩ）の非常に好ましい化合物はＣ１８、Ｃ２０およびＣ２２化合物である。
【００３３】
本発明の方法の終了時のオメガ−３対オメガ−６の重量比は、１：１〜１：３程度であってもよい。
【００３４】
好ましくは、本発明の方法によって形成される塩は分子の脂肪酸部分中に少なくとも１０個の炭素原子、例えば少なくとも１２個の炭素原子、少なくとも１４個の炭素原子、を有する、すなわち脂肪酸は少なくとも１０個の炭素原子を含まなくてはならない。
【００３５】
理想的には式（Ｉ）、（Ｉ’）または（ＩＩ）の化合物は多重不飽和であり、例えば２〜１０の二重結合、特に４〜７の二重結合を含む。好ましくは二重結合は互いに、またはカルボニル官能基に結合しない。
【００３６】
少なくとも１つの（例えば２または３）、好ましくはすべての二重結合は、好ましくはシス立体配置である。
【００３７】
粗油は、異なる炭素鎖長および異なる不飽和レベルを有する様々な脂肪酸またはその誘導体（例えばそのエステル、特にトリグリセリド）を含む。もちろん、これらのすべての脂肪酸はオメガ−３不飽和脂肪酸であるとは限らず、いくつかはオメガ−６不飽和脂肪酸、いくつかは飽和油であってもよい。したがって、当然のことながら本発明の方法の実施中に生産された水溶性組成物はオメガ−３塩からなる必要はない。しかしながら、水溶性オメガ−３塩が存在することが好ましい。好ましくは、最終組成物中のオメガ−３化合物の濃度は、粗油と比較して有意に高い。したがって重要なことは、水溶性塩への形成および併用の水抽出によって、最終組成物中のオメガ−３の量が増強されるということである。所望されない不純物を除去することにより濃縮が生じ、オメガ−３物質が比較的より高い濃度になる。
【００３８】
粗組成物は、極性溶媒（例えばエタノールもしくはＤＭＳＯのような非水性溶媒）、またはより好ましくはヘキサンもしくはトルエンのような非極性溶媒を含むことができる。しかしながら、好ましくは水が塩形成の間に存在する唯一の極性溶媒である。
【００３９】
本発明の方法は、粗組成物中に存在する不飽和脂肪酸または塩の水溶性塩アミノアルコール塩を形成することによって行なわれてもよい。アミノアルコール塩は、単一のアミノ基（モノアミノ化合物）または複数のアミノ基（ポリアミノ化合物）を含んでもよい。アミノアルコール化合物は、水酸官能基（すなわちアルコール）、好ましくは複数の水酸基もまた含む。したがって、アミノアルコール化合物は、１つまたは複数のアミノ基および１つまたは複数の水酸基を含み得る。非常に好ましいアミノアルコール化合物は、複数の水酸基および１つのアミノ基を含む、または複数の水酸基および複数のアミノ基を含む。本明細書において使用される用語、ポリアミノアルコールは、複数のアミノ基および少なくとも１つ（好ましくは複数）の水酸基を含む化合物を表わす。
【００４０】
適切なアミノアルコール化合物は、１〜２０のアミノ基（例えば１つのアミノ基または５〜１５のアミノ基）を有してもよい。適切なアミノアルコール化合物は、１〜１００の水酸基（例えば３〜５０の水酸基、例えば５〜１５）を有してもよい。アミノ基は第１級、第２級、または第３級であってもよいが、しかしながら第２級、または特に第１級アミノ基が好ましい。
【００４１】
本発明の水溶性塩の形成を可能にするのに必要なアミノアルコール化合物は、したがって好ましくは、以下の一般式のヒドロキシル化されたアミンである。
（（ＨＯ（Ｒ’）0/1）n）Ｒ1ＮＨＲ2）m  （ＩＩＩ）
式中、ｎは３〜６の整数であり、Ｒ’はメチルであり、Ｒ1はＣ１−２０アルキレン基であり、Ｒ2は水素またはＣ1-6アルキル側鎖（好ましくはメチル）であり、およびｍは１〜２０の整数である。
【００４２】
ｎ＝３であり、Ｒ’が存在しメチルであり、Ｒ1がメチルであり、Ｒ2＝水素である場合には、ヒドロキシアミンはトリス−（ヒドロキシメチル）−メチルアミン（トリス）であってもよい。ｎ＝５であり、Ｒ’が存在せず、Ｒ1が直鎖状の６炭素鎖であり、Ｒ2がＭｅであり、ｍ＝１である場合には、ヒドロキシアミンはメグルミンであってもよい。
【００４３】
脂肪酸のポリアミノアルコール塩はポリアミノアルコール化合物を使用して形成される。ポリアミノ化合物は、脂肪酸のカルボキシル基とのアンモニウム塩の形成のために利用可能な２つまたは複数のアミノ基を含むものである。理想的には、使用されるポリアミノ化合物はポリアミノ糖である。形成される塩の溶解度を上げるために、そのようなポリアミノ糖は好ましくは複数の水酸基と共に複数の糖単位を含む。
【００４４】
適切なポリアミノ糖はキチン、特にキトサンに由来してもよい。適切なポリアミノ糖は、以下の一般式を有してもよい。
（Ｃ6Ｈ14ＮＯ5）p    （ＩＶ）
式中、ｐは２以上の整数、例えば５〜１５である。
【００４５】
特に好ましいポリアミノ糖は、ＦＭＣまたはノバマトリックス（Ｎｏｖａｍａｔｒｉｘ）から入手可能なものである。キトサンは、多くの場合、酢酸塩形態で供給され、すなわちアミン基が保護されている。酢酸塩は、キトサンの遊離ポリアミノ形態を遊離するために公知のイオン交換技術を使用して除去することができる。
【００４６】
モノアミノアルコール化合物が使用される場合、これはメグルミン、トリスまたはグルコサミンであってもよい。反応媒体の操作、例えばその温度、ｐＨまたはイオン強度の変化により、塩の溶解度を高めてもよい。
【００４７】
ポリアミノアルコール塩およびモノアミノアルコール塩の混合物、例えば２つのポリアミノ塩、２つのモノアミノ塩、またはポリアミノ塩およびモノアミノ塩の混合物もまた使用されてよい。
【００４８】
アミノアルコール化合物は、粗組成物中に存在する不飽和脂肪酸または塩と塩を形成し、水溶性となる。形成された水溶性不飽和脂肪酸塩は、好ましくは少なくとも水１Ｌあたり１０ｇの溶解度を有する。好ましくは、形成された塩の溶解度は水１Ｌあたり少なくとも１５ｇである。本発明者は、本発明の方法により作製された脂肪酸塩の溶解度が実際に、著しく高いことを意外にも見出した。本発明の塩の溶解度は４０ｇ／Ｌほど高くてもよく、より好ましくは１００ｇＬ、特に２５０ｇ／Ｌであってもよい。本発明者は、５００ｇ／Ｌ以上の溶解度の物質でさえ見出した。
【００４９】
さらに、本発明の水溶性脂肪酸塩の混合物が、同様の溶解度レベルを有することができることもまた確立された。
【００５０】
粗組成物中の不飽和脂肪酸または塩は、難水溶性または非水溶性である。非水溶性物質は、好ましくは水１Ｌあたり０．１ｇ未満の溶解度を有する。難水溶性物質は、好ましくは水１Ｌあたり１ｇ未満、特に水１Ｌあたり０．５ｇ未満の溶解度を有する。
【００５１】
したがって、従来の非水溶性不飽和脂肪酸／塩または難水溶性脂肪酸／塩は、アミノアルコール塩形成に際して水溶性となる。
【００５２】
実際の塩形成反応それ自体は、脂肪酸または塩（好ましくは酸）が水の存在下においてアミノアルコール化合物と接触させられることのみを必要とする。アミノアルコール化合物および水を同時に（水溶液として）導入することが、最も好都合であるが、当然のことながら当業者はこれらを別々に添加し得る。粗組成物中に既に水が存在するならば、単にアミノアルコール化合物の添加が必要となってもよい。
【００５３】
モノアミノアルコール化合物が使用されるならば、使用される量は、化学量論量または過剰量で使用されてもよい。ポリアミノアルコール化合物が複数のアミノ基を含んでいるので、当然ポリアミノ基に対して複数の結合の可能性がある。したがって、ポリアミノアルコール化合物の過剰量もまた使用されてもよいが、ポリアミノアルコール化合物に対する脂肪酸の比が１：１〜１：３０、例えば１：２〜１：１０、特に１：３〜１：６程度であることが予想される。
【００５４】
所望されるならば、塩形成工程は、加熱または加圧することができるが、塩は容易に形成されるので、これは不必要である。塩形成工程は、撹拌、超音波処理または遠心分離のようなより激しい混合方法もまた含むことができる。しかしながら脂肪酸が、アミノアルコール化合物により塩をより容易に形成できることを確実にするためにそれらの酸形態（塩形態のＣＯＯ−よりもむしろ）であることを確実にするために、反応のｐＨが最初に調整されることは好ましい。
【００５５】
一旦水溶性脂肪酸塩が形成され水相の中へ抽出されたならば、これは有機相から単離することができる。その後水相中の水溶性脂肪酸塩は、当業者が適当と考ればどのようにも扱うことができる。さらに以下に検討されるように水溶性脂肪酸塩を単離することができるか、または遊離酸形態は水相の酸性化および形成される油の分離に際して再び得ることができる。しかしながら、結果として生じる遊離脂肪酸は、出発物質よりもさらに純粋な形態である。したがって、精製された脂肪酸塩は、例えばエステル（例えばグリセリド）または別の塩（例えばメグルミン塩）、リン脂質、アミド、カルバミン酸塩を形成するために、どのような手段でも扱うことができる、または脂肪酸塩はポリマーに結合させてもよい。
【００５６】
不飽和脂肪酸の特定の水溶性塩は新規であり、これらは本発明のさらなる態様を形成する。
【００５７】
別の態様から見ると、本発明は不飽和脂肪酸、好ましくはオメガ−３脂肪酸もしくはオメガ−６脂肪酸の水溶性トリス−（ヒドロキシメチル）−メチルアミン塩またはポリアミノアルコール塩を提供する。
【００５８】
別の態様から見ると、本発明は不飽和脂肪酸、好ましくはオメガ−３脂肪酸またはオメガ−６脂肪酸の水溶性アミノアルコール塩の混合物を提供する。
【００５９】
別の態様から見ると、本発明は不飽和脂肪酸、好ましくはオメガ−３脂肪酸もしくはオメガ−６脂肪酸の水溶性トリス−（ヒドロキシメチル）−メチルアミン塩またはポリアミノアルコール塩または上述のような塩の混合物を含む組成物（例えば医薬組成物）を提供する。
【００６０】
別の態様から見ると、本発明は、薬における使用もしくは栄養素サプリメントとしての使用のための、不飽和脂肪酸、好ましくはオメガ−３脂肪酸もしくはオメガ−６脂肪酸の水溶性トリス−（ヒドロキシメチル）−メチルアミン塩またはポリアミノアルコール塩または上述のような塩の混合物を提供する。
【００６１】
別の態様から見ると、本発明は、薬における使用もしくは栄養素サプリメントとしての使用のための薬剤の製造における、不飽和脂肪酸、好ましくはオメガ−３脂肪酸もしくはオメガ−６脂肪酸の水溶性トリス−（ヒドロキシメチル）−メチルアミン塩またはポリアミノアルコール塩または上述のような塩の混合物の使用を提供する。
【００６２】
したがって本発明は、特定の新規な個別の塩だけでなく、不飽和脂肪酸の水溶性アミノアルコール塩の混合物を提供する。混合物ということによっては、ここで少なくとも２つの異なる化合物が存在することが意味され、当然のことながら塩成分の種類および不飽和脂肪酸の種類という２つの可能性がある。したがって本明細書において定義されるような混合物は、例えばＤＨＡのメグルミン塩およびＥＰＡのメグルミン塩の混合物を包含する。前記混合物はまた、同一の酸の異なる塩、例えばＤＨＡのメグルミン塩およびＤＨＡのキトサン塩の混合物も包含する。前記混合物はまた、さらに異なる酸の異なる塩、例えばＤＨＡのメグルミン塩およびＥＰＡのキトサン塩も包含する。
【００６３】
好ましくは、その混合物は異なる不飽和脂肪酸を含むが同一の塩形成物質を含む。
【００６４】
本発明は、どのように作製された不飽和脂肪酸の水溶性アミノアルコール塩の混合物も包含する。
【００６５】
酸形態（ＣＯＯＨ）または塩形態での脂肪酸を含む粗組成物は、油（本明細書において粗油と呼ばれる）を含む天然の不飽和脂肪酸誘導体の加水分解に好ましくは由来する。上記で言及されるようにおよび非常に詳しく以下に記載されるように、不飽和脂肪酸は、一般に天然環境においてトリグリセリド形態で存在し、したがって遊離酸形態へのそれらの遊離は、グリセリドのエステル結合の加水分解を必要とする。当然のことながら、加水分解された油が不純物を含み、したがって本発明の必要とされる前記酸を含む粗組成物を形成してもよい。
【００６６】
天然に存在する不飽和脂肪酸を含む物質の加水分解は下記に記載されるように行うことが可能であり、加水分解された物質の水洗浄を含み得る。この方法は、本発明のさらなる態様を形成する。したがってさらなる態様から見ると、本発明は、
（Ｉ）少なくとも１種の不飽和脂肪酸誘導体を含む粗油（例えば粗魚油）を加水分解すること、および少なくとも１つの脂肪酸を含む油相を形成することと；
（ＩＩ）任意に、得られた油相を水性洗浄剤により洗浄することと；
（ＩＩＩ）該少なくとも１種の不飽和脂肪酸との水溶性塩を形成するように、水の存在下において少なくとも１種のアミノアルコール化合物を工程（Ｉ）の生成物または、工程（ＩＩ）が行われた場合は、工程（ＩＩ）の生成物へ添加し、それによって水相中へ該塩を抽出することと；
（ＩＶ）水相を分離および任意に乾燥することと
を含む水溶性不飽和脂肪酸塩含有組成物の調製方法を提供する。
【００６７】
したがって上記の方法の第１の段階において、粗（好ましくは海産）油は、その中の脂肪酸誘導体（典型的にはトリグリセリド化合物）をカルボキシル形態ＣＯＯ−へと変換するために加水分解される。この加水分解反応は酸の中で起こりえるが、そのような条件は脂肪酸中に存在する二重結合を異性化する傾向があり、したがって好ましくない。代わりに、加水分解は好ましくは塩基性条件において行われる。そのような反応は化学において周知の鹸化反応である。
【００６８】
したがって、本発明中で使用可能のものとして典型的な鹸化反応において、水酸化カリウム、水酸化リチウムまたは水酸化ナトリウムのような水酸化物を粗油中に存在するトリグリセリドと反応させ、不飽和脂肪酸塩（典型的にはナトリウム塩、リチウム塩またはカリウム塩）およびグリセロールを得る。鹸化は、当技術分野において周知の条件下で、例えば高温で行うことができる。公知であるように高圧力および蒸気もまた使用されてもよい。
【００６９】
好ましい鹸化条件は、塩基水溶液と共にアルコールのような極性溶媒の使用を伴う。そのような溶媒混合物の存在下における鹸化後に、形成される遊離脂肪酸塩はエタノールのようなアルコールに可溶性を示すので、水相に分離する。これにより、鹸化されていない物質が非極性溶媒洗浄剤を使用して、例えばヘキサンにより洗い流されることが可能になる。次に水相を酸性化し、反応媒体中でもはや可溶性ではない遊離酸を形成することができる。
【００７０】
加水分解反応の間に遊離されたより長鎖の脂肪酸は、したがって油相を形成し、グリセロールおよび水性反応媒体からしたがって分離される。より短鎖の脂肪酸（例えばＣ１０以下の脂肪酸）は、例えばカリウム塩またはナトリウム塩として水相中で水溶性であり、したがって非水溶性のより長鎖の成分から分離される。
【００７１】
鹸化反応が大量の水溶性の物質および対応して少量の油相物質を必要とする可能性があるので、油相は、鹸化反応からの油相を溶解するために非毒性有機溶媒（しばしば「環境調和型化学溶媒」と呼ばれる）を添加することによって、この時点で、例えばより多量にすることによって、扱いをより容易にすることができる。この工程の組入れが精製方法を改善することを見出した。適切な非毒性溶媒は、有害になることなく、油を溶解することの両方が可能な溶媒（すなわち本質的に無極性溶媒）である。そのような溶媒は、ペンタン、ヘキサン、エーテル、酢酸塩、ケトン、キシレンおよびトルエンのようなアルカンが挙げられる。ヘキサンおよびトルエンが最も好ましい。
【００７２】
したがって非常に好ましい実施形態において、上述の方法の工程（Ｉ）は、
（Ｉ）水およびアルコールのような極性有機溶媒の存在下において、少なくとも１種の不飽和脂肪酸誘導体を含む粗油を加水分解することと；
アルカンのような非極性溶媒により加水分解された粗油を洗浄すること、および水相を保持することと；
油相を形成するために水相を酸性化することと；
好ましくは該油相に非極性溶媒を添加することと
を含む。
【００７３】
次に油相および水相は、所望されるならば、従来の技術によって分離することができる。
【００７４】
水相が分離された後に、詳細に以下に記載されるように、次に油相が水溶液により洗浄されることが好ましい。しかしながらこれは必須ではない。続く一節において非常に詳しく論じられるように、洗浄工程は、加水分解された粗油から特定の水溶性成分の除去を助け、したがって存在する不飽和脂肪酸の量を増強する。しかしながら、加水分解反応が水溶液中で行なわれるので、加水分解の間のまたは加水分解後の水相からの油相の分離は、水溶性成分が水相中で保持されるので、それ自体効果的に洗浄工程として働く。それでもなお、水溶性成分の除去を最大限にするために、さらに専用の洗浄工程を使用することができる。
【００７５】
さらなる洗浄工程は純水を使用して行なわれてもよいし、または塩基性水溶液（例えば希釈水酸化ナトリウム）を使用して達成されてもよい。この洗浄段階（または油相が形成し加水分解をする間）の間に、より短鎖の脂肪酸化合物（例えば１０以下の炭素原子の脂肪酸）は、カリウム塩またはナトリウム塩としてかなり水溶性、より長鎖の脂肪酸（例えば１８以上の炭素原子を含んでいる脂肪酸）はそうではないが、である傾向があるので、これらの化合物は除去される。
【００７６】
しかしながら、当然のことながら、ＣＯＯ-形態の非常に短鎖の脂肪酸は、水または油（ｄｉｌ）に容易に溶解するが、可溶性は鎖長、イオン強度、ｐＨ、温度などに依存する。水酸化ナトリウム溶液、およびしたがって水性洗浄剤中に除去される、中鎖脂肪酸（例えばＣ１４〜Ｃ１６）は、部分的にのみ可溶であってもよい。
【００７７】
重金属混入物は水溶性である傾向があるので、水性洗浄は加水分解された粗油から重金属混入物もまた除去する。重金属汚染はガンのような疾患と関連しているので、これらの化合物を除去することは重要である。ＥＤＴＡまたはＤＴＰＡのような適切な錯化剤の添加によって重金属を除去することができる。
【００７８】
水による洗浄は、所望の非溶解油相残留物を単離するために使用されている、濾過、分液漏斗または連続抽出により慣例通りに達成される。必要な場合、洗浄工程は繰り返し行なうことができる。
【００７９】
洗浄段階の後に残される残留物は主として、より長鎖の分子（例えばＣ１８またはそれ以上）を、典型的には塩形態（例えばナトリウム塩形態）で含んでいる。かなりの量のより短鎖の脂肪酸が除去され、非常に望ましいオメガ−３脂肪酸の大部分は少なくとも１８の炭素原子を有するので、この段階での後に産生される残留物は、明らかにオメガ−３化合物のような望ましい不飽和脂肪酸化合物に富んでいる。
【００８０】
治療上有用な効果を提供し、理想的には最終的なオメガ−３濃縮組成物中に存在する必要のあるものは、より長鎖のオメガ−３分子である。しかしながらこれらのより長鎖の脂肪酸化合物は水溶性でないので、洗浄後の油状の残留物は投与のための適切な形態ではない。薬剤中の大量のオメガ−３が体液中に溶解せず吸収されないので、したがってその酸形態または非可溶塩形態でオメガ−３化合物を含んでいる薬剤に対する関心は限定的である。それらが吸収されないならば、治療上の利益を提供することができない。
【００８１】
これらが非水溶性であるので、鹸化および洗浄の後に形成される残留物はＰＣＢ、難燃剤およびダイオキシンもまた含んでいる可能性がある。
【００８２】
本発明者は、より長鎖の脂肪酸をアミノアルコール塩（特にポリアミノアルコール塩）へと形成することによって、結果として生じる塩が水溶性であり、したがって有益な薬剤へと、または栄養補助食品もしくは医薬品として容易に製剤化することができることを見出した。さらに水溶性塩は水相中に抽出することができ、それによって油中に存在する水溶性でない不純物から単離される。
【００８３】
この技術によって、粗組成物中に存在するコレステロールまたは他の親油性物質（例えばフタル酸塩）からも脂肪酸物質を分離する。高コレステロールレベルは各種疾患に関連することが周知であり、したがって脂肪酸からのコレステロールの除去も非常に価値がある。上で言及された他の様々な毒物のように、コレステロールが非水溶性であることは、コレステロールが塩形成工程の間に脂肪酸から分離できることを意味する。
【００８４】
この時点までに（すなわち塩形成の直前に）形成される油相が、塩形態で脂肪酸を含むので、さらなる塩形成工程を行なう前に、より長鎖の脂肪酸塩がそれらの酸形態に戻されるならば、それは好ましい。これは、希酸中で容易に達成することができる。酸形態の脂肪酸は実際により疎水性であり、したがってこの時点で再び容易に油相を形成し、塩形成過程の間に形成されたどのような水溶性塩も水相中に単純に除去されることを可能にする。
【００８５】
したがって、油相中のどのような不飽和脂肪酸塩のカルボン酸基も、酸性水相を使用して、ＣＯＯＨ形態に変換することができる。これは脂肪酸がアミノアルコール化合物とのアミノ塩を形成することを可能にするためには好ましい。所望されるならば、非毒性溶媒による有機洗浄はこの工程に続くことが可能である。この段階で形成される組成物は、本発明の方法において使用される好ましい粗組成物である。
【００８６】
塩形成反応それ自体は上述されており、脂肪酸または塩が、水の存在下においてアミノアルコール化合物と接触させられることのみを必要とする。好ましくはアミノアルコール化合物は水溶液中に添加されるが、当然のことながら本明細書で必要とされるのは、形成する水溶性塩が抽出できる水相の存在下において、アミノアルコール化合物が脂肪酸と共に存在するということである。
【００８７】
アミノアルコール塩が形成し、それらは、反応媒体の水相中へと抽出され、油相中に非水溶性不純物が残る。次に水相は非水溶性不純物不含有の組成物を提供するために、標準的な相分離技術によって単離することができる。特にＰＣＢ、難燃剤およびダイオキシンのような一般的な毒物は水溶性ではなく、したがって水相中へと抽出されることはない。コレステロールもまた除去される。これは、不飽和脂肪酸塩を使用する本発明のさらなるそして重要な特徴を形成する。
【００８８】
したがって別の態様から見ると、本発明は、ダイオキシン、難燃剤、コレステロールおよび／またはＰＣＢ不含有で、不飽和脂肪酸、特にオメガ−３脂肪酸の水溶性アミノアルコール塩を含む組成物を提供する。
【００８９】
粗魚油中のＰＣＢおよびダイオキシンのレベルは１グラムあたり数百ナノグラムであり、加工された市販の魚油でさえ１キログラムあたり０．１６〜３０ナノグラム範囲のダイオキシンまたはＰＣＢの含量を有する（例えばサルディーン（Ｓａｌｄｅｅｎ），Ｐ．ら、Ｏｂｓｔｅｔｒｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｇｙｎｅｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｕｒｖｅｙ  ５９  （２００４）  ７２２−７３０．を参照）。本発明の方法の後は、好ましくは検出不能レベルである。
【００９０】
上述される全工程は、本発明のなおさらなる態様を形成する。したがって別の態様から見ると、本発明は、
（Ｉ）少なくとも１種の不飽和脂肪酸誘導体を含む粗油（例えば魚油）を加水分解すること、および脂肪酸を含む油相を形成することと；
（ＩＩ）任意に非毒性溶媒（例えばヘキサンまたはトルエン）中に、形成された油相を溶解することと；
（ＩＩＩ）任意に油相を、例えば繰り返し、水性洗浄剤により洗浄することと；
（ＩＶ）任意に、存在するいずれの脂肪酸化合物がＣＯＯＨ形態であることを確実にするために、酸性の水相を添加すること、および水相から分離することと；
（Ｖ）該少なくとも１種の不飽和脂肪酸または塩との水溶性アミノアルコール塩を形成するように、水の存在下において先の工程の油相へ少なくとも１種のアミノアルコール化合物を添加すること、それによって水相中へ該塩を抽出することと；
（ＶＩ）水相を単離することおよび任意に乾燥すること
を含む不飽和脂肪酸塩含有組成物の調製方法を提供する。
【００９１】
好ましい実施形態において、該不飽和脂肪酸はオメガ−３脂肪酸である。さらなる好ましい実施形態において、該少なくとも１つの脂肪酸はオメガ−３脂肪酸およびオメガ−６脂肪酸の混合物を含む。
【００９２】
さらなる任意の工程において、飽和脂肪酸は標的の不飽和脂肪酸物質から分離することができる。本明細書において例示されるように、飽和脂肪酸は、尿素錯体形成を使用して、不飽和脂肪酸（特にシス型立体配置結合を備えたもの）から除去することができる。エタノールのような溶媒中で、尿素は、直鎖脂肪酸鎖の周囲に線状のトンネルを形成し、直鎖脂肪酸鎖を錯体化する傾向があり、その結果として直鎖脂肪酸鎖をエタノール中で不溶性にするが、不飽和脂肪酸は溶液中に残存する。固形物質、すなわち飽和脂肪酸／尿素錯体は次に濾過によって除去されてもよい。
【００９３】
したがって本発明の方法は、油相がアルコール性溶媒（例えばエタノール）中で溶解され、尿素が加えられる工程を含んでもよい。次に、必要な場合その溶液を冷却でき、形成する結晶状生成物は分離される。これは所望されない飽和脂肪酸成分である。エタノールは残存する残留物から除去でき、大抵はかさを与えるために非毒性有機溶媒中で油相を再溶解した後に、油相は該方法のさらなる工程で使用される。
【００９４】
この尿素錯体形成工程は、塩形成の直前に、例えば中和工程（ＩＶ）の後に都合よく起こりうる。
【００９５】
当然のことながら、尿素錯体形成によって除去された飽和脂肪酸に、それ自体の有益な最終用途（例えば飼料、化粧品などにおいて）がある可能性がある。尿素錯体を形成する飽和脂肪酸は、公知の手順を使用して、例えば潜在的に有益な生成物を残す尿素の水抽出によって、容易に回収することができる。尿素錯体形成はこの方式で飽和脂肪酸を単離する周知の反応であるが、上述の鹸化方法と併わせて、本発明のなおさらなる態様を形成する。
（Ｉ）少なくとも１種の不飽和脂肪酸誘導体および少なくとも１種の飽和脂肪酸を含む粗油（例えば魚油）を加水分解すること、および脂肪酸を含む油相を形成することと；
（ＩＩ）任意に、非毒性溶媒（例えばヘキサンおよびトルエン）中に、形成された油相を溶解することと；
（ＩＩＩ）任意に、油相を、例えば繰り返し、水性洗浄剤により洗浄することと；
（ＩＶ）任意に、存在するいずれの脂肪酸化合物がＣＯＯＨ形態であることを確実にするために、酸性の水相を添加すること、および水相を分離することと；
（Ｖ）アルコール性溶媒中で油相を尿素と接触させること、および形成する結晶状生成物を分離することと；
（ＶＩ）結晶状生成物中の飽和脂肪酸を回収すること。
【００９６】
上述の不飽和脂肪酸単離方法は新規であり、したがって、例えばそれらの不純物プロファイルを考慮すると、同様に新規な塩および組成物の形成を可能にする。別の態様から見ると、本発明は、上述の方法によって作製される水溶性不飽和脂肪酸塩を提供する。
【００９７】
別の態様から見ると、本発明は、上述の方法によって作製される水溶性塩を含む組成物（例えば医薬組成物）を提供する。
【００９８】
別の態様から見ると、本発明は、上述の方法によって作製される、薬における使用または栄養素サプリメントとしての使用のための水溶性塩を提供する。
【００９９】
本発明者は、脂肪酸をアミノアルコール塩および／またはポリアミノアルコール塩（特にポリアミノアルコール塩）へと形成することによって、結果として生じる塩が水溶性であり、したがって有益な薬剤へと、または栄養補助食品もしくは医薬品として容易に製剤化することができることを見出した。さらに前記塩は水相中に抽出することができ、それによって水溶性でない魚油中に存在する毒物から単離される。
【０１００】
オメガ−３脂肪酸のアミノアルコール塩が水溶性であるので、それらは生物にとってより利用可能であり、そのような化合物を含む薬剤は、オメガ−３化合物が生物にとってあまり利用できない形態である、現在市場に出ている薬剤よりも、活性薬剤の含有が少なくてすむことを意味する。文献（例えばベッカーマン（Ｂｅｃｋｅｒｍａｎ）ら、Ａｒｚｎｅｉｍｉｔｔｅｌｆｏｒｓｃｈｕｎｇ  ４０  （１９９０）  ７００−７０４）から、遊離脂肪酸（すなわちそれらが胃内の酸性条件において存在しているだろう形態）の生体利用率は、もとのトリグリセリド形態の魚油よりも最大５０％の高い血漿中濃度を導くことが公知である。これは最先端技術の魚油と比較して、本発明において結果として生じる粉末のさらに別の長所である。結果的に、オメガ−３の用量は、より高い生体利用率のために、本発明により有意に少なくなりえる。
【０１０１】
不飽和脂肪酸物質に関するさらなる問題はその中の二重結合が酸化する可能性である。それらが空気または高温に無造作に暴露されて保存または製剤化されるならば、それらの分子中の多数の炭素間二重結合に起因して空気中で酸化が起こりうるので、不快な味および匂いが生じ得る。その結果は、感覚刺激特性の経時的な悪化、および結果としてエポキシ基および短鎖アルデヒドまたはカルボン酸形成の可能性である。
【０１０２】
この酸化過程を回避するために、不飽和水溶性脂肪酸塩が、シクロデキストリン、例えばα−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、特にβ−シクロデキストリンと混合されるならば、それは好ましい。
【０１０３】
したがって、脂肪酸のアミノアルコール塩の最終的な水溶液は、不均質混合物を形成するために、シクロデキストリン（例えばα−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、γ−シクロデキストリンまたはヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン）と混合されてもよい。これは、塩とシクロデキストリンとの間で錯体を形成するために、１〜２４時間の期間の間０℃〜１００℃の温度で撹拌されてもよい。次にこれは、以下に記載される技術、例えば溶媒の真空蒸発、凍結乾燥、噴霧乾燥によって単離することができる。得られる生成物は、水溶性、やや黄色または白色、砕けやすく、実質的には魚臭い味または匂いを有していない。
【０１０４】
加えられるシクロデキストリンの量は変化させることができるが、脂肪酸塩対シクロデキストリンの適切な比は、重量比で２：１〜１：２である。
【０１０５】
したがってさらなる態様から見ると、本発明は、不飽和脂肪酸の水溶性アミノアルコール塩および少なくとも１種のシクロデキストリンを含む組成物を提供する。組成物はこれらの物質の錯体であってもよい。
【０１０６】
１つまたは複数の生理学的に許容される抗酸化剤は、所望のアミノアルコール塩の分解を防止するために、このアミノアルコール塩を含む水相に加えてまたは代わりに添加されてもよい。これらは、水相の単離の前に、またはより好ましくは水相の単離の後に加えられてもよい。本発明における使用のために適切な抗酸化剤は、水溶性化合物および油溶性化合物の両方ならびにその組合せを含むが、アスコルビン酸（特にＬ‐アスコルビン酸）およびクエン酸のような水溶性抗酸化剤が一般に好ましい。使用されてもよい油溶性抗酸化剤は、α−トコフェロール（ビタミンＥ）が挙げられる。抗酸化剤の所望量は当業者によって容易に決定されるが、脂肪酸塩に対して約０．５〜１０重量％であってもよい。
【０１０７】
少なくとも１つの抗酸化剤を含む組成物は、本発明のさらなる態様を形成する。したがってさらなる態様から見ると、本発明は、不飽和脂肪酸の水溶性アミノアルコール塩（好ましくはポリアミノアルコール塩）および少なくとも１種の生理学的に許容される抗酸化剤を含む組成物を提供する。より好ましくは、本発明は、ダイオキシン、難燃剤またはＰＣＢを実質的に不含有であるような組成物もまた提供する。
【０１０８】
アミノアルコール塩（特にポリアミノアルコール塩）のさらなる利点は、それらがオメガ−３物質またはオメガ−６物質中のシス二重結合の異性化を阻害すると考えられるということである。粉末として物質を単離することができるので、シス‐トランス異性は液体油中でよりもはるかに問題が少ない。光に対する暴露は油中の二重結合異性化を引き起こす場合があるが、粉末中で異性化が引き起こされる可能性ははるかに低い。
【０１０９】
したがって本発明の最も重要な利点は、油と比較して、それらの取り扱いと製剤化を単純にする粉末形態（最も好ましくは結晶形態）での脂肪酸塩を単離することができるということである。粉末は、例えば油を包むために必要とされ、今日典型的に市場で利用されるカプセル剤よりも好ましいタブレットへと容易に作製される。
【０１１０】
粉末の形態での塩を得るには、水相を単に蒸発させる必要があるだけであるが、凍結乾燥または噴霧乾燥を利用ことが好ましい。典型的には粉末として塩混合物を単離することができないので、塩の混合物が存在する場合には、塩の粉末形態の形成は特に重要である。
【０１１１】
したがってさらなる態様から見ると、本発明は、不飽和脂肪酸の水溶性アミノアルコール塩の混合物の水溶液の噴霧乾燥または凍結乾燥を含む、不飽和脂肪酸の水溶性アミノアルコール塩（好ましくは異なる脂肪酸の同一の塩）の粉末（好ましくは結晶性）混合物の調製の方法を提供する。
【０１１２】
噴霧乾燥技術は、「噴霧乾燥ハンドブック（Ｓｐｒａｙ  Ｄｒｙｉｎｇ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ）」、Ｋ．マスターズ（Ｍａｓｔｅｒｓ）、第５版、ロングマン・サイエンティフィック・テクニカル（Ｌｏｎｇｍａｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ）社、イギリス、１９９１年において開示され、それらの開示は少なくとも噴霧乾燥方法の教示のための参照により本明細書に援用される。脂肪酸に基づく生成物の粉末を産生するための噴霧乾燥の使用の例は、先行技術において、例えば、ＵＳ５１０６６３９において見出すことができる。本発明において記載されるような塩の水溶液は、２０〜５０℃の温度まで加熱され、５０〜１８０℃の送風を使用して噴霧乾燥機中で乾燥されてもよい。
【０１１３】
凍結乾燥は従来の方法により実施されてもよい。しかしながら、この手順を実施する場合に、凍結防止効果のある１つまたは複数の薬剤を含むことは有利かもしれない。いずれの生理学的に許容される凍結防止剤を使用してもよく、そのような薬剤の例は当技術分野において周知である。これらの例として、グリセロールのようなポリオール；グリシンのようなアミノ酸；炭水化物（例えばショ糖、マンニトール、トレハロース、グルコース、ラクトースまたはデキストランのようなポリサッカライドのような糖）が挙げられる。ショ糖のような生理学的に許容性の良好な糖が特に好ましい。凍結防止剤の所望量は、当業者により容易に決定されるが、脂肪酸塩に対して約０．５〜１０重量％であってもよい。
【０１１４】
１つまたは複数の凍結保護剤の存在下において形成される凍結乾燥生成物は、本発明のさらなる態様を形成する。別の態様から見ると、本発明はしたがって、不飽和脂肪酸の水溶性アミノアルコール塩（例えばポリアミノアルコール塩）および少なくとも１種の生理学的に許容される凍結保護剤を含む組成物（好ましくは凍結乾燥された組成物）を提供する。より好ましくは、本発明は、少なくとも１種の生理学的に許容される抗酸化剤、シクロデキストリン、をさらに含むような組成物および／またはダイオキシン、難燃剤またはＰＣＢを実質的に不含有でもある組成物を提供する。
【０１１５】
本発明のさらなる実施形態において、乾燥工程は、凍結乾燥または噴霧乾燥により行なうことができる。
【０１１６】
非常に好ましい実施形態において、したがって本発明の方法は、
（Ａ）少なくとも１つの不飽和（好ましくはオメガ−３）脂肪酸誘導体を含む粗油（例えば魚油）を加水分解することと；
（Ｂ）該少なくとも１種のオメガ−３脂肪酸をそのＣＯＯＨ形態に変換するために酸性水相を加える工程、および水相を分離することと；
（Ｃ）該少なくとも１つの不飽和（好ましくはオメガ−３）脂肪酸により水溶性塩を形成するように、少なくとも１種のアミノアルコール化合物を含む水相を添加すること、それによって水相中へ該塩を抽出することと
を少なくとも含む。
【０１１７】
本発明の方法により産生された不飽和脂肪酸の塩、特にオメガ−３塩およびオメガ−６塩は、健康用サプリメントにおいて直接使用することができる。それらは、熟練した薬剤師に周知の従来の技術を使用して、慣例通りに薬剤へと製剤化することができる。したがって、化合物は、抗酸化剤、防腐剤、着色剤、着香剤などのような周知のレシピエントまたは従来の添加物と共に製剤化されてもよい。
【０１１８】
本発明の化合物は、タブレット、コーティング錠、ピル、粉末、カプセル剤、エマルジョン、クリーム、ペッサリー、坐剤などのような任意の都合のよい形態で製剤化されてもよい。投与形態は、経口、経鼻、経粘膜、非経口、局所、皮内などのような任意の公知の形態であってもよい。経口投与が好ましい。本発明の方法が高収率で高純度オメガ−３化合物を提供するので、「一日に一度」の組成物におけるオメガ−３サプリメントを提供することが可能である。そのような組成物は１００〜３００ｍｇのオメガ−３物質を含むべきである。
【０１１９】
好ましい実施形態において、水可溶性およびタブレット特性を付与するために、濃縮されたオメガ−３組成物は、リン脂質および／または単糖と共に製剤化される。
【０１２０】
本発明の方法を使用して産生されるオメガ−３塩は、オメガ−３が役立つとされるいずれのの症状の治療および／または予防において利用することができる。そのような症状は、自己免疫障害、炎症、卒中、高血圧症、皮膚病、ガン、脳および網膜機能、神経学的障害、乳児の成長および発達ならびに特に心臓の健康におけるものを含む。オメガ３はトリアシルグリセロールレベルを低下させる可能性があり、低密度リポタンパク質コレステロールレベル、不整脈の発生率、アテローム性動脈硬化／血栓症を低下させる可能性がある。したがって、これらの症状のうちのいずれの治療または予防のための薬剤の製造における本発明のオメガ３の使用は、本発明のさらなる態様を形成する。
【０１２１】
不飽和脂肪酸化合物が有益な治療上の利益を提供することが公知であるので、本発明は不飽和脂肪酸化合物に関して記載されてきた。しかし、当然のことながら全く同一の原理を使用して、飽和脂肪酸化合物を単離するために、本明細書において記載された技術を使用できる。これらの物質は飼料において使用されるため、水溶性形態および粉末形態でこれらの物質を得る能力も非常に有益である。
【０１２２】
したがって別の態様から見ると、本発明は、少なくとも１種の非水溶性飽和脂肪酸もしくは難水溶性飽和脂肪酸またはその塩を含む粗組成物からの、水溶性飽和脂肪酸塩の調製方法であって、
該酸または塩の水溶性アミノアルコール塩を形成するように、水の存在下において該粗組成物に少なくとも１種のアミノアルコール化合物を添加することと；
水相を分離することと；
任意に、該水相から該塩を単離することと
を含む方法を提供する。
【０１２３】
別の態様から見ると、本発明は、
（Ｉ）少なくとも１種の飽和脂肪酸誘導体を含む粗油（例えば粗魚油）を加水分解すること、および該脂肪酸を含む油相を形成することと；
（ＩＩ）任意に、結果として生じる油相を水性洗浄剤により洗浄することと；
（ＩＩＩ）該少なくとも１種の飽和脂肪酸との水溶性塩を形成するように、水の存在下において少なくとも１種のアミノアルコール化合物を工程（Ｉ）の生成物または、工程（ＩＩ）が行われた場合は、工程（ＩＩ）の生成物へ添加し、それによって水相中へ該塩を抽出することと；
（ＩＶ）水相を単離および任意に乾燥することと
を含む水溶性飽和脂肪酸塩含有組成物の調製方法を提供する。
【０１２４】
別の態様から見ると、本発明は、飽和脂肪酸の水溶性アミノアルコール塩、好ましくは少なくとも１０炭素原子、特に少なくとも１２炭素原子を含む飽和脂肪酸の水溶性アミノアルコール塩を提供する。
【０１２５】
別の態様から見ると、本発明は、飽和脂肪酸のアミノアルコール塩を含む組成物（例えば医薬組成物）を提供する。
【０１２６】
別の態様から見ると、本発明は、薬における使用または栄養素サプリメントとしての使用のための飽和脂肪酸のアミノアルコール塩を提供する。
【０１２７】
上述の好ましい塩および方法の特徴は、飽和脂肪酸の単離に同様に適用されるが、尿素錯体形成工程は明らかに望ましくない。この様に形成することができる好ましい飽和脂肪酸塩は、Ｃ１０またはそれ以上、例えばＣ１２またはそれ以上、好ましくはＣ１４またはそれ以上、特にＣ１６またはそれ以上の飽和脂肪酸塩が挙げられる。炭素骨格は好ましくは直鎖状である。
【０１２８】
本発明は、ここでは以下の非限定的実施例を参照して記載されるだろう。
【実施例１】
【０１２９】
キトサンとのＤＨＡ塩の調製（５：１）
脱イオン水（４ｍＬ）中のキトサン酢酸塩（１００ｍｇ；１７μｍｏｌ）の溶液を、アンバーリスト（Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ）（登録商標）Ａ−２６（ＯＨ）樹脂（１ｇ）のカラムに通した。樹脂を脱イオン水（１０ｍＬ）により洗った。９６％エタノール（０．５ｍＬ）中の（オールシス）−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（２８ｍｇ；８５μｍｏｌ）の溶液を、合わせた溶出液に添加し、濁った溶液を得た。凍結乾燥後に５３ｍｇのオフホワイトの固体が得られ、３５０℃まで加熱した場合溶けずに焦げた。生成物を冷凍庫中で保存した。
【実施例２】
【０１３０】
キトサンとのＤＨＡ塩の調製（２０：１）
先の手順を、キトサン酢酸塩（１００ｍｇ；１７μｍｏｌ）および（オールシス）−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（１１２ｍｇ；３４０μｍｏｌ）を使用して、繰り返した。凍結乾燥から１３１ｍｇの固体が生じた。
【実施例３】
【０１３１】
タブレット調製
ＤＨＡ塩（実施例１）を含むタブレットは、ＤＨＡ塩（２５ｍｇ）、微結晶性セルロース（アビセル（Ａｖｉｃｅｌ））（１４０ｍｇ）およびラクトース一水和物（１３５ｍｇ）の混合物の直接圧縮により調製された。タブレット重量３００ｍｇ。タブレット直径７ｍｍ。
【実施例４】
【０１３２】
ＤＨＡ（シス−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸）の精製
トルエン（１０ｍＬ）中の（オール−シス）−４，７，１０，１３，１６，１９−ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）（１００ｍｇ；０．３０ｍｍｏｌ）および２，４，５−トリクロロビフェニル（１．０ｍｇ；３．９ｍｍｏｌ）の溶液を、水（５ｍＬ）中のＮ−メチルグルカミン（０．５ｇ；２．６ｍｍｏｌ）の溶液により抽出した。黄色のエマルジョンを約１２分間遠心分離機にかけた。トルエン相のＧＬＣ分析は、トリクロロビフェニルのみが存在することを示した。水相を１Ｍの塩酸（５ｍＬ）により酸性化し、トルエン（１×０．５ｍＬ）により抽出した。抽出物のＧＬＣ分析は、０．２５％ＰＣＢ、９８．５％ＤＨＡおよび１．３％他の不純物が含まれることを示した。塩形成工程を繰り返し、遊離脂肪酸を再単離した後では、ＰＣＢ化合物のレベルはあまりにも少なくて検出することができない。
【実施例５】
【０１３３】
メグルミンでの抽出によるアザラシ海獣油からの遊離脂肪酸の精製
水酸化カリウム（５．７５ｇ）を、水（１１ｍｌ）およびメタノール（６６ｍｌ）中のアザラシ海獣油（ＳＢＯ）（２５ｇ）およびデカブロモジフェニルエーテル（１．２５ｇ）の混合物へ添加した。その混合物をアルゴン雰囲気下で一晩加熱還流し、室温へ冷却し、鹸化された混合物を水（５０ｍｌ）により希釈した。鹸化されていない物質は、ｎ−ヘキサン（２×１００ｍｌ）中へ抽出され廃棄された。水層は２Ｍの塩酸によりｐＨ２まで酸性化され、遊離脂肪酸（ＦＦＡ）はｎ−ヘキサン（２×５０ｍｌ）中へ抽出された。有機層を無水硫酸ナトリウムの上で乾燥し、４０℃で真空にて溶媒を除去して、黄色の油としてＦＦＡを残した。
【０１３４】
尿素（２０ｇ）を、９６％エタノール水溶液（１００ｍｌ）中に溶解されたＦＦＡ（１０ｇ）のサンプルへ添加した。透明になるまでその混合物を撹拌し加熱した。その溶液を冷凍庫中に一晩保存した。尿素錯体を液体からろ過した。濾液を等容量の水により希釈し、２Ｍの塩酸によりｐＨ２まで酸性化した。ｎ−ヘキサン（１００ｍｌ）を水性混合物へ添加し、１／２時間撹拌した。有機層を１０％メグルミン水溶液（２×５０ｍｌ）により分離し抽出した。有機層を分離し廃棄した。メグルミン水溶液をｎ−ヘキサン（２×５０ｍｌ）により洗浄し、次に２Ｍの塩酸によりｐＨ２まで酸性化した。ＦＦＡをｎ−ヘキサン（２×５０ｍｌ）中へ抽出し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥し、溶媒を真空で蒸発した。ＦＦＡのＧＣ分析は、デカブロモジフェニルエーテルが含まれないことを示した。
【実施例６】
【０１３５】
キトサンおよび添加水溶性抗酸化剤によるＥＰＡ塩の調製
キトサン粉末（低分子量）（２ｇ）を、室温のアルゴン雰囲気下で、ＤＭＳＯ（５ｍｌ）および水（１０ｍｌ）中のシス−５，８，１１，１４，１７−エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）（０．５ｇ）の撹拌溶液へ添加した。Ｌ‐アスコルビン酸（１００ｍｇ）およびクエン酸（１００ｍｇ）を添加し、混合物を２時間撹拌し、黄色の固体として生成物を残すために、次に一晩凍結乾燥した。
【実施例７】
【０１３６】
キトサンおよび添加水溶性抗酸化剤による遊離脂肪酸（ＦＦＡ）塩の調製
キトサン粉末（低分子量）（２ｇ）を、室温のアルゴン雰囲気下で、ＤＭＳＯ（５ｍｌ）および水（１０ｍｌ）中のＦＦＡ（ＦＦＡのメグルミン抽出によりアザラシ海獣油から得られた）（０．５ｇ）の撹拌溶液へ添加した。Ｌ‐アスコルビン酸（１００ｍｇ）およびクエン酸（１００ｍｇ）を添加し、混合物を２時間撹拌し、黄色の固体として生成物を残すために、次に一晩凍結乾燥した。
【実施例８】
【０１３７】
添加水溶性抗酸化剤およびα−トコフェロールによるＥＰＡキトサン塩の調製
キトサン粉末（低分子量）（２ｇ）を、室温のアルゴン雰囲気下で、ＤＭＳＯ（５ｍｌ）および水（１０ｍｌ）中のＥＰＡ（０．５ｇ）の撹拌溶液へ添加した。Ｌ‐アスコルビン酸（１００ｍｇ）、クエン酸（１００ｍｇ）およびα−トコフェロール（１００ｍｇ）を添加し、混合物を２時間撹拌し、黄色固体として生成物を残すために、次に一晩凍結乾燥した。
【実施例９】
【０１３８】
添加水溶性抗酸化剤およびα−トコフェロールとの熱的に安定化されたＥＰＡメグルミン塩
ｎ−ヘキサン（１０ｍｌ）中のＥＰＡ（１．０ｇ）の溶液を、１０％メグルミン水溶液（３０ｍｌ）により抽出した。メグルミン水溶液をエルレンマイヤーフラスコへ移し、Ｌ‐アスコルビン酸、クエン酸およびα−トコフェロール（各々５０ｍｇ）を、添加し、激しく撹拌した。水性混合物を３×１０ｍｌサンプルに分割し、５００ｍｌの丸底フラスコへ移した。サンプルを以下のように処理した：ａ）凍結防止剤を加えなかった；ｂ）３．３ｇのショ糖を添加した；およびｃ）凍結乾燥の前に６．６ｇのショ糖を添加した。結晶性固体として生成物を残すために、結果として生じる混合物を一晩凍結乾燥した。
【実施例１０】
【０１３９】
添加水溶性抗酸化剤およびα−トコフェロールとの熱的に安定化された遊離脂肪酸（ＦＦＡ）メグルミン塩
概要が実施例５において概説される手順に従って、粗アザラシ油（ＧＣリーバー・オイルズ（Ｒｉｅｂｅｒ  Ｏｉｌｓ）ＡＳからの）を、ＦＦＡを産生するために加水分解した。ｎ−ヘキサン（１０ｍｌ）中のＦＦＡ（１．０ｇ）のサンプルを、１０％メグルミン水溶液（３０ｍｌ）で抽出した。メグルミン水溶液を、Ｌ‐アスコルビン酸、クエン酸およびα−トコフェロール（各々５０ｍｇ）へ添加し、力強く撹拌した。水性混合物を３×１０ｍｌサンプルに分割し、５００ｍｌの丸底フラスコへ移した。サンプルは以下のように処理した：ａ）３．３ｇのショ糖を添加した；ｂ）６．６ｇのショ糖を添加した；およびｃ）凍結乾燥の前に９．９ｇのショ糖を添加した。結晶性固体として生成物を残すために、結果として生じる混合物を一晩凍結乾燥した。
【実施例１１】
【０１４０】
メグルミン、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンおよび水酸化ナトリウムによる異なる脂肪酸の抽出
ｎ−ヘキサン（２００ｍｌ）中のカプリン酸（１．０ｇ）、ラウリン酸（１．０ｇ）、ミリスチン酸（１．０ｇ）、パルミチン酸（１．０ｇ）、ステアリン酸（１．０ｇ）およびアラキジン酸（１．０ｇ）の混合物を、１Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（３×５０ｍｌ）により洗浄した。水酸化ナトリウム水溶液を２Ｍの塩酸によりｐＨ２まで酸性化し、ＦＦＡをｎ−ヘキサン（２×１００ｍｌ）中へ抽出した。ｎ−ヘキサン抽出物のＧＬＣ分析は、水酸化ナトリウムはカプリン酸（Ｃ10Ｈ20Ｏ2）の抽出のために使用できるが、より長い鎖長のＦＦＡの抽出には使用できないことを示した。
【０１４１】
実験を繰り返したが、有機層は１０％メグルミン水溶液および１０％トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン溶液によりそれぞれ洗浄した。メグルミンおよび（トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタンによる抽出は、すべてのＦＦＡが、有機層から水溶液中へ抽出されることを示した。
【実施例１２】
【０１４２】
熱的に安定化されたＦＦＡメグルミン塩
Ｎ−メチルグルカミン（０．５７ｇ）を、水（３０ｍｌ）中のＦＦＡ（実施例５から得られた）（０．５ｇ）の撹拌エマルジョンへ添加した。結果として生じるメグルミン水溶液を５００ｍｌの丸底フラスコへ移し、半結晶性固体として生成物を残すために一晩凍結乾燥した。
【実施例１３】
【０１４３】
β−シクロデキストリンを添加した熱的に安定化されたＦＦＡメグルミン塩
Ｎ−メチルグルカミン（３．０ｇ）およびβ−シクロデキストリン（１．０ｇ）を、水（３０ｍｌ）中のＦＦＡ（実施例５から得られた）（０．５ｇ）の撹拌エマルジョンへ添加した。結果として生じるメグルミン水溶液を５００ｍｌの丸底フラスコへ移し、白色の粉体として生成物を残すために一晩凍結乾燥した。
【実施例１４】
【０１４４】
β−シクロデキストリンおよびＬ‐アスコルビン酸を添加した熱的に安定化されたＦＦＡメグルミン塩
Ｎ−メチルグルカミン（０．５７ｇ）およびβ−シクロデキストリン（０．５ｇ）を、水（３０ｍｌ）中のＦＦＡ（実施例５から得られた）（０．５ｇ）の撹拌エマルジョンへ添加した。結果として生じるメグルミン水溶液をＬ‐アスコルビン酸（５０ｍｇ）に添加し、５００ｍｌの丸底フラスコへ移動し、黄色の粉末として生成物を残すために一晩凍結乾燥した。
【実施例１５】
【０１４５】
β−シクロデキストリンを添加した熱的に安定化されたＦＦＡトリス塩
トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン（０．３５ｇ）およびβ−シクロデキストリン（０．５ｇ）を、水（３０ｍｌ）中のＦＦＡ（実施例５から得られた）（０．５ｇ）の撹拌エマルジョンへ添加した。結果として生じる水性トリス溶液を５００ｍｌの丸底フラスコへ移し、白色の粉体として生成物を残すために一晩凍結乾燥した。
【実施例１６】
【０１４６】
非水性条件下で調製された熱的に安定化されたＦＦＡメグルミン塩
メタノール（４０ｍｌ）中のＦＦＡ（実施例５から得られた）（０．５ｇ）およびｎ−メチルグルカミン（０．３７ｇ）の混合物を、２時間６０℃で還流し、室温へ冷却し、半結晶性固体としてＦＦＡメグルミン塩を残すために真空で蒸発させた。
【実施例１７】
【０１４７】
β−シクロデキストリンを添加したＦＦＡメグルミン塩およびＦＦＡトリス塩の溶解度
ＦＦＡメグルミン塩（実施例１２から）およびＦＦＡトリス塩（実施例１５から）の溶解度は、水（１．０ｍｌ）のバイアルにこれらの塩を添加することによって測定した。ＦＦＡメグルミン塩の溶解度はおよそ６５０ｍｇ／ｍｌと測定された。ＦＦＡトリス塩の溶解度はおよそ５０ｍｇ／ｍｌと測定された。
【実施例１８】
【０１４８】
ＦＦＡエステルおよび他の誘導体の調製
実施例５からのＦＦＡ混合物を、アミノアルコール塩を含む水溶液の酸性化、適切な有機低公害型溶剤（例えばヘキサン、トルエン）中への抽出、および溶媒の蒸発により再度単離する。単離されたＦＦＡの混合物を無水エタノール中で溶解する。触媒量の塩酸を添加し、溶液を２４時間周囲温度で撹拌する。この期間溶媒の一部を留去し、新しい溶媒をもとの容量まで添加する。その溶液を蒸発させ、脂肪酸エステルの混合物を分子蒸留により単離する。
【国際調査報告】
2009526033.tif 000002
2009526033.tif 000003
2009526033.tif 000004