(57)【要約】移植可能な細胞を用いて人または動物の組織の組織欠陥を治療するための材料および方法について記述する。さらに、これらの手順を向上するための培養技術および因子、細胞生存、および細胞順応について記述する。前記組織欠陥の多くは自己細胞で治療することが可能であるが、非自己細胞または幹細胞がかかわる適用についても記述する。【選択図】  なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
被検体の組織欠陥を治療するための方法であって、前記欠陥を選択する工程と、
（a）有効量のタンパク質を導入する工程、および／または（b）細胞を取得し、前記細胞を生体外で拡大し、かつ、前記細胞の有効量を含む組成物を、前記細胞を前記被検体に配置する工程を有する方法であって、該欠陥が、尿失禁を引き起こす泌尿器の括約筋欠陥、便失禁、膀胱尿管逆流現象、胃食道の括約筋欠陥、胃食道逆流、しわ、殻皮、陥凹性瘢痕またはその他の皮膚の陥没、皮膚線条、唇の成形不全、隆起鼻唇溝、隆起唇溝、尋常性座瘡、鼻形成術後の異常、不全瘢痕、異常肥大の瘢痕、傷、セルライト、肌の弛緩、皮膚の老化、皮膚増強の必要性、及び皮膚の菲薄化、胸組織の不全、傷、やけど、ヘルニア、歯周病、腱裂傷、靭帯裂傷、はげ、組織量調整、組織や臓器の線維症や硬化症、組織の瘢痕、組織の傷、裂肛、瘻、聴力の損失、骨欠陥、骨粗しょう症、骨軟化症、骨減少症、骨折、骨形成異常症、骨代謝欠陥、歯槽骨不全、ガン、循環器疾患、心臓疾患、動脈疾患、静脈疾患、椎間板欠陥、関節欠陥、軟骨欠陥、椎間板欠陥、アルツハイマー病、パーキンソン病、神経系欠陥、脊髄損傷、脊椎円板欠陥、白髪、皮膚の日焼け、皮膚の色素沈着、乾癬、湿疹、眼疾患、白内障、近視、老眼、遠視、網膜の筋変性、目の筋肉不全、夜間視力障害、色盲、涙腺機能障害、間質性の肺の欠陥、肺の欠陥、腎臓機能不全、腎性骨ジストロフィー、肝機能障害、すい臓障害、膵炎、真性糖尿病、内分泌器官障害、甲状腺疾患、副甲状腺、視床下部、下垂体、副腎、松果腺、視交差上核、又はすい臓内分泌の疾病、異常免疫系、慢性炎症、癒着、類線維腫、感染症、味覚又は嗅覚の欠陥、消化管欠陥、血液異常、血圧、歯の成長、組織の弾力性、体温調整、組織の機械的強度、足の強化、臓器または臓器の合成、および身体全体の若返り、からなる群の１つである前記方法。
【請求項２】
前記細胞が該組織血管部位の内部又は末端部に配置される、請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記細胞が幹細胞、該細胞を対象に配置する少なくとも５年前に該対象から取り出した細胞、光又は化学物質への暴露から保護されている組織源から誘導された細胞、又は胎児誘導細胞である、請求項１記載の方法。
【請求項４】
前記細胞が自己細胞である、請求項1記載の方法。
【請求項５】
前記自己細胞が自己血清を含む培養培地中で伸展されている、請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記自己細胞が、非自己である血清とは接触しない、請求項５記載の方法。
【請求項７】
さらに細胞外マトリックスを該自己細胞とともに対象に導入する、請求項４記載の方法。
【請求項８】
前記自己細胞が処理される組織に対し、ネイティブである、請求項４記載の方法。
【請求項９】
（a）前記欠陥は骨吸収性疾患を原因とする欠陥であり、この方法において前記自己細胞は骨芽細胞または骨芽細胞前駆細胞である、または（b）前記欠陥は骨粗しょう症、骨折、または破砕による骨欠陥であり、前記自己細胞は骨細胞または骨前駆細胞を有するものである、請求項４記載の方法。
【請求項１０】
前記自己細胞は、前記細胞を被検体の静脈に注入することによって前記欠陥に配置され、前記欠陥を有する身体領域を流れるものである、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
前記欠陥は骨粗しょう症、骨減少症、または骨軟化症を原因とする骨欠陥であり、前記自己細胞は線維芽細胞を有し、前記組成は患者の皮膚に配置されるものである、請求項４記載の方法。
【請求項１２】
前記欠陥は耳の欠陥であり、前記自己細胞は蝸牛の毛髪細胞または蝸牛の毛髪前駆細胞を有するものである、請求項４記載の方法。
【請求項１３】
前記欠陥は、耳管の開通性および機能性の異常である耳の欠陥であり、前記方法は、さらに、前記組成を耳管の軟骨部に導入する工程を有するものである、請求項４記載の方法。
【請求項１４】
前記欠陥は眼疾患欠陥であって、前記自己細胞は、（a）筋肉細胞であり、前記組成は目の筋肉を強化するために目に導入されるものである、（b）屈折異常を修正するために目に導入される水晶体細胞である、（c）角膜線維芽細胞である、または（d）被検体の目から採取されるものである、請求項４記載の方法。
【請求項１５】
前記欠陥は眼疾患欠陥であって、この欠陥は、（a）黄斑変性であり、前記組成は目の網膜に導入されるものである、（b）白内障を含み、前記自己細胞が毛様筋細胞を有するものである、（c）斜視であり、前記自己細胞が筋肉細胞を有するものである、（d）緑内障であり、前記組成が目の強膜に導入されるものである、または（e）色盲症または夜盲症であり、前記自己細胞が棒細胞を有するものである、請求項４記載の方法。
【請求項１６】
前記欠陥は調節異常による視力欠陥である眼疾患欠陥であって、前記自己細胞は線維芽細胞、棒細胞、前記棒細胞の前駆細胞、外傷治癒線維芽細胞、筋線維芽細胞、周皮細胞、網膜色素性上皮細胞、または角膜上皮細胞を有するものである、請求項４記載の方法。
【請求項１７】
前記欠陥は眼外傷を有する眼疾患欠陥であって、前記自己細胞はその外傷領域由来の細胞を有するものである、請求項４記載の方法。
【請求項１８】
前記欠陥はドライアイである眼疾患欠陥であって、前記自己細胞は涙腺細胞、結合組織細胞、または角膜細胞を有するものである、請求項４記載の方法。
【請求項１９】
前記欠陥は括約筋欠陥であって、前記組成は肛門外括約筋または肛門内括約筋を取り巻く部位に導入されるか、補修または増強される部位に生成される嚢に直接に導入されるものであり、前記組成は線維芽細胞、平滑筋細胞、横紋筋細胞、前脂肪細胞/含脂肪細胞、または間葉細胞幹細胞を有するものである、請求項４記載の方法。
【請求項２０】
前記欠陥は裂肛であって、前記自己細胞は線維芽細胞を有するものである、請求項４記載の方法。
【請求項２１】
前記欠陥は皮膚の日焼けであって、前記自己細胞は色素細胞、色素線維芽細胞、または色素細胞を生成する前駆細胞または幹細胞を有するものである、請求項４記載の方法。
【請求項２２】
前記欠陥は白髪であって、前記自己細胞は、白髪になっていない毛包、色素線維芽細胞、色素細胞幹細胞、または色素細胞前駆細胞から得ることができる毛髪色素細胞を有するものである、請求項４記載の方法。
【請求項２３】
前記欠陥は乾癬またはアトピー性皮膚炎であって、前記自己細胞は、（a）症状のない皮膚部位から採取した皮膚組織からの乳頭線維芽細胞を有するものであり、前記組成は上皮に移植されるものである、（b）線維芽細胞または線維芽細胞の前駆細胞であり、前記組成は皮膚または皮下層に配置されるものである、（c）免疫細胞または免疫細胞の前駆細胞である、請求項４記載の方法。
【請求項２４】
前記欠陥が歯の欠陥、又は歯槽骨不全である、請求項４記載の方法。
【請求項２５】
前記欠陥は足の増強であって、前記組成は被検体の踵の踵骨を覆う天然脂肪層に導入されるものである、請求項４記載の方法。
【請求項２６】
前記欠陥は心臓欠陥であって、前記自己細胞は心膜、外線維層、心膜内壁側板、心嚢、心外膜、心筋、心筋線維、心内膜、乳頭筋、および心弁の開閉を補助する筋肉から成る群から得られるものである、請求項４記載の方法。
【請求項２７】
前記欠陥は血管欠陥であって、前記自己細胞は上皮細胞、上皮前駆細胞、または周皮細胞であり、前記組成を欠陥に用いて新しい血管系を生成する、または血管系を補修する、請求項４記載の方法。
【請求項２８】
前記欠陥は血管欠陥であって、前記自己細胞は線維芽細胞または平滑筋細胞を有するものであり、前記組成は、損傷した血管弁に導入されるものである、請求項４記載の方法。
【請求項２９】
前記欠陥はアテローム斑であって、前記自己細胞は線維芽細胞、マクロファージ、または平滑筋細胞を有するものであり、前記組成は前記アテローム斑に近位の血管媒体および／または血管内膜に導入されるものである、請求項４記載の方法。
【請求項３０】
前記欠陥はかつて冠状動脈ステント、血管形成術、血塊除去、または斑除去による治療を受けた部位の血管欠陥であって、前記自己細胞は結合組織細胞、平滑筋細胞、または線維芽細胞を有するものであり、前記組成は前記部位に導入されるものである、請求項４記載の方法。
【請求項３１】
前記欠陥は肺血管であって、（a）前記自己細胞は線維芽細胞であり、前記組成は線維または瘢痕組織を減らすために肺に導入されるものである、（b）前記自己細胞は肺表面活性剤を生成する肺胞細胞であり、前記組成は肺組織に導入されるものである、請求項４記載の方法。
【請求項３２】
前記欠陥は腎臓血管であって、（a）前記自己細胞はメサンギウム細胞および／または緻密斑細胞および／または腎糸球体細胞を有するものであり、前記組成はネフロン機能またはネフロン数を増すために腎小体に導入されるものである、または（b）前記自己細胞は壁側板の有足細胞または上皮細胞を有するものであり、前記組成はボーマン嚢に導入されるものであって、（a）または（b）は糸球体ろ過率の処置、血圧の調整、電解質バランス異状の調整、または尿濃度の欠乏症の治療をするものである、請求項４記載の方法。
【請求項３３】
前記欠陥は腎臓血管であって、前記自己細胞は、糸球体の線維症または硬化を除去して糸球体機能を向上するために線維芽細胞またはメサンギウム細胞を有するものである、請求項４記載の方法。
【請求項３４】
前記欠陥は腎臓血管であって、前記自己細胞は遠位尿細管の上皮細胞を有するものであり、前記組成は吸収機能の向上のために遠位尿細管に導入される、請求項４記載の方法。
【請求項３５】
前記欠陥は腎臓血管であって、前記自己細胞は腎細胞を有するものであり、前記組成は、骨髄からの赤血球生成を増すエリスロポエチンを生成するために皮質または髄質に導入されるものである、請求項４記載の方法。
【請求項３６】
前記欠陥はアルツハイマー病であって、前記自己細胞はグリア細胞、星状膠細胞、または免疫細胞である、請求項４記載の方法。
【請求項３７】
前記欠陥はパーキンソン病であって、前記自己細胞はドーパミン、網膜色素性上皮細胞、頚動脈細胞体、交感神経副腎細胞、交換神経細胞、副腎髄質クロム親和性細胞、副腎外パラガングリア細胞、グリア細胞、または星状膠細胞を有するものである、請求項４記載の方法。
【請求項３８】
前記欠陥は脊髄損傷であって、前記自己細胞は、前記損傷の近位に導入される前記組成で神経ガイダンスを促進し補修する間葉幹細胞、間葉細胞、および／またはグリア細胞を有するものである、請求項４記載の方法。
【請求項３９】
前記欠陥は多発性硬化症であって、前記自己細胞はオリゴデンドロサイトを有するものであり、前記組成は脱髄神経の近位に導入されるものである、請求項４記載の方法。
【請求項４０】
前記欠陥は肝臓欠陥であって、（a）前記自己細胞は肝細胞、肝星細胞、または線維芽細胞を有するものであり、前記組成は肝実質に移植されるものである、（b）前記自己細胞は肝星細胞、線維芽細胞、または筋線維芽細胞を有するものであり、前記組成は肝組織瘢痕に移植されるものである、または（c）前記自己細胞は凝固タンパク質とともに移入される細胞を有するものであり、前記組成は肝臓に導入されるものである、請求項４記載の方法。
【請求項４１】
前記欠陥は膵臓欠陥であって、（a）前記自己細胞は膵臓星細胞または線維芽細胞を有するものであり、前記組成は瘢痕を除去するために線維領域に導入されるものである、（b）前記自己細胞は上皮細胞を有するものであり、前記組成は小導管または管導管系に導入されるものである、（c）前記自己細胞は膵臓の膵島または導管系から隔離されるβ細胞を有するものであり、前記組成は膵島、膵臓外分泌線部位、または肝実質に導入されるものである、請求項４記載の方法。
【請求項４２】
前記欠陥は免疫欠陥であって、前記自己細胞は免疫細胞を有するものであり、前記組成はアミロイド斑または神経原線維のもつれを分解するために脳実質または付随血管系に導入されるものである、請求項４記載の方法。
【請求項４３】
前記欠陥は免疫欠陥であって、（a）前記自己細胞は胸腺細胞を有するものであり、前記組成は胸腺に導入されるものである、または（b）前記自己細胞は組織の血管形成を増強する上皮細胞、EPC、または周皮細胞を有するものである、請求項４記載の方法。
【請求項４４】
前記欠陥は感染症であって、前記自己細胞は免疫細胞または線維芽細胞を有するものであり、前記組成は前記感染症に導入されるものである、請求項４記載の方法。
【請求項４５】
前記欠陥は慢性炎症であって、（a）前記自己細胞は線維芽細胞を有するものであり、前記組成は炎症のある組織に導入される、または（b）前記自己細胞は線維芽細胞を有するものであり、前記組成はリウマチ性関節炎に導入されるものである、請求項４記載の方法。
【請求項４６】
前記欠陥は、組織繊維症、又は類線維腫及び繊維芽細胞を含む自己細胞であり、前記組成物を繊維性組織又は類線維腫に導入する、請求項４記載の方法。
【請求項４７】
前記欠陥は内分泌系であって、前記自己細胞はホルモン分泌細胞および／または線維芽細胞を有するものであり、前記組成はホルモン組織に導入されるものである、請求項４記載の方法。
【請求項４８】
前記欠陥はがんであり、前記自己細胞はがん細胞および／または前記がん細胞の細胞外基質を有するものである、請求項４記載の方法。
【請求項４９】
前記欠陥は、組織不全、組織ジストロフィー、弛緩、菲薄化、弾性欠損、タンパク質プロフィールの変化、組織塊の減損、細胞外基質量の減少、プロテオグリカンの低下、組織膨圧の低下、プロテアーゼ活性量の増加、細胞数の損失、組織水分の低下、熱制御機能の低下、クッション性の低下、または機械的強度の低下から成る群から選択される、老化を原因とする欠乏症である、請求項４記載の方法。
【請求項５０】
前記タンパク質が細胞外マトリックス分子である、該タンパク質を含む、請求項４９記載の方法。
【請求項５１】
前記欠陥は粘着であって、前記自己細胞は線維芽細胞または上皮細胞を有するものであり、前記組成は粘着部位またはその近くに導入されるものである、請求項４記載の方法。
【請求項５２】
前記欠陥は貧血症であって、前記自己細胞は腎臓管周上皮細胞を有するものであり、前記組成は腎臓に導入されるものである、請求項４記載の方法。
【請求項５３】
前記欠陥は椎間板の変性、破裂、ヘルニア形成、または萎縮であって、前記自己細胞は軟骨細胞、軟骨細胞前駆細胞、軟骨膜軟骨細胞、または線維芽細胞を有するものである、請求項４記載の方法。
【請求項５４】
前記欠陥は瘻孔であって、前記自己細胞は線維芽細胞を有するものである、請求項４記載の方法。
【請求項５５】
前記欠陥は消化管であって、前記自己細胞はビタミンB12を吸収するラクターゼまたは壁細胞の前駆細胞を生成する幹細胞を有するものである、請求項４記載の方法。
【請求項５６】
前記欠陥は老化に関係するものであって、前記自己細胞は、生来の骨髄前駆細胞を増すために骨髄に導入される骨髄前駆細胞を有するものである、請求項４記載の方法。
【請求項５７】
前記欠陥は胃食道逆流疾患であって、前記自己細胞は線維芽細胞、平滑筋細胞、横紋筋細胞、前脂肪細胞/含脂肪細胞、または間葉幹細胞を有するものであり、前記組成は胃食道括約筋に導入されるものである、請求項４記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本出願は、米国申請番号60/719,743に対する優先権の利得を請求し、参照により本明細書に組み入れる。本題に直接関係する共通の発明に関するその他の出願書は、米国申請番号、60/037,961に対する優先権の利得を請求する09/632,581（2000年8月3日に申請）、60/163,734に対する優先権の利得を請求する10/129,180（2002年5月3日に申請）、および、「組織における欠陥の増強と修復のための組成および方法」という名称の2006年9月14日に申請されたPCT出願書_____________があるが、それぞれを参照することにより、本出願の開示と一致する範囲で、本明細書に組み入れる。
【０００２】
（発明の分野）
本発明の分野は、主に、加齢、疾病、組織の変性、内科的疾患、整形的健康状態、手術、または外傷による人間または動物の組織における欠陥の修復または増強のための方法および組成に関する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
（発明の要約）
身体の欠陥には、細胞または特定の細胞の種類を移植することにより治療できるものがある。本出願では、一定の欠陥を治療するための方法と細胞種類を開示する。患者に移植される細胞は、移植先で生存して適応することが必要であるので、生存と適応を向上させる技術も開示される。
【０００４】
本発明の一部の態様は、組織の機能を向上または復元するために、細胞および／または細胞外の基質で欠陥を修正することに関する。欠陥組織は、老化、疾病、変性、内科的疾患、手術または外傷などの原因の結果として、構造的に交代または機能しなくなる。また、機能しなくなった組織または構造的に交代した組織は異常または好ましくない状態、または影響を受ける可能性がある。これらの交代は、欠陥として定義される。本開示では、さまざまな組織欠陥の増強および修復のための物質と方法を説明する。多数の実施形態では、細胞は患者から採取され、体外で培養して、数を増やし、患者の体内に戻して、欠陥を治療する。
以下に詳細を説明するように、治療できる欠陥や状態は、尿失禁、便失禁、膀胱尿管逆流現象を引き起こす泌尿器の括約筋欠陥、胃食道逆流などの胆管や胃と食道の括約筋欠陥がある。皮膚欠陥は、しわ、陥凹性瘢痕またはその他の皮膚の陥没、皮膚線条、唇の成形不全、隆起鼻唇溝、隆起唇溝、尋常性座瘡、鼻形成術後の異常、不全瘢痕、および、異常肥大の瘢痕、傷、セルライト、肌の弛緩、皮膚の老化、皮膚増強の必要性、皮膚の菲薄化、を含む。欠陥には、胸組織の不全、傷・やけど、ヘルニア、歯周病、腱や靭帯裂傷、はげ、組織量調整、さまざまな組織や臓器の線維症や硬化症、組織の瘢痕、組織の傷、裂肛、瘻、聴力の損失や異常、骨粗しょう症などの骨欠陥、骨軟化症、骨減少症、骨折、骨形成異常症、骨代謝欠陥、歯槽骨不全、ガン、循環器および心臓疾患、動脈および静脈疾患椎間板欠陥、関節および軟骨欠陥、椎間板欠陥、アルツハイマー病、パーキンソン病、神経系欠陥および異常、脊髄損傷、脊椎円板欠陥、白髪、皮膚の日焼けおよび色素沈着、乾癬、湿疹、白内障、近視、老眼、遠視、網膜の筋変性、芽の筋肉不全、夜間視力や色盲、涙腺機能障害、などの眼の疾病および異常、間質性およびその他の肺の欠陥、腎臓機能障害および不全、腎性骨ジストロフィー、肝機能障害および不全、すい臓障害、急性および慢性膵炎、および真性糖尿病、甲状腺、副甲状腺、視床下部、下垂体、副腎、松果腺、視交差上核、すい臓内分泌部などの内分泌器官障害および疾病、異常免疫系、慢性炎症、癒着、類線維腫、感染症、味覚および嗅覚の欠陥、消化管欠陥、血液異常、血圧、歯の成長、爪の成長、足の強化、体温調整、皮膚および肌の男性、皮膚および組織の機械的強度、組織の水和および弾力性、老化による欠陥、臓器および組織の移植、臓器または臓器の合成、および身体全体の若返りがある。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００５】
（発明の詳細）
組織は、老化の影響を受けて、時間の経過とともに不全になる。しかし、幸いなことに、多数の組織不全は、生きている細胞を組織に加えることにより治療できることが発見された。老化の1つの影響は、組織の弾力性の喪失である。この影響は、組織とその機能に表れる。本開示では、老化により発生した不全組織を治療するために、試験管内での自己細胞の培養を増やして、細胞を（自己細胞が好ましい）を組織に移植して、患者の組織を治療する方法を説明する。老化および病組織は、細胞種類の適切な数が失われることにより、大部分が機能しなくなる。これによって、以下に詳細を説明するように、中でも、ECM基質、タンパク質、酵素活動（プロテアーゼ）、細胞癒着、細胞移動、細胞増殖、細胞分化、ホルモンや成長因子の製造、経路の信号送信、フィードバック機構、組織の恒常性やジストロフィー組織形態を交代する細胞数が少なくなって遺伝表現が変わる。
本開示で説明する欠陥の多くは、老化過程の結果である。その他の欠陥は、さまざまな疾病の状態や異常による。これらの組織の欠陥は、適切な細胞の種類と数を補充することにより、利益を受ける。
【０００６】
多量の生きている細胞は、最新の細胞培養技術を使用すると、比較的少量の組織検体から取得することができる。従って、患者または別の採取元から組織検体を採取し、組織から細胞を取得し、細胞の数を増大して、細胞を患者に戻して、患者の組織の欠陥を治療することが可能になる。一般的に、初代細胞、幹細胞、および多能性細胞などの細胞を取り出して増大するための、細胞の種類、組織内の細胞の種類の説明、組織の構造や適切な細胞や組織の培養技術は、Atlas of Functional Histology, Kerr, J.B., Mosby, 1999; Gray's Anatomy: The Anatomical Basis of Clinical Practice, 39th Edition, Standring, S., Ed., Elsevier, 2005、およびCulture of Animal Cells: A Manual of Basic Techniques, Freshney, R.I., Wiley-Liss, Inc., New York, 2000にある。線維芽細胞、乳頭層および網状線維芽細胞など、一部の細胞の種類の取り出しや増大の一定の技術は、米国特許番号09/632,581（2000年8月3日に申請）と10/129,180（2002年5月3日に申請）に記述されているが、参照することにより本開示に組み入れる。取り出しとは、組織検体から、純粋なグループの細胞を取得することである。増大とは、細胞の数を増やすことである。培養した細胞を患者の組織に移植する場合、移植した細胞が新しい場所に適応または「なじむ」ことを支援する、という課題がある。患者自身の身体の自己細胞が使用される場合でも、細胞は、以前として、新しい場所に統合し、その他の適応可能な機能、特に、栄養源、および、代謝活動を維持するための受け取り側の臓器にとっての手段を使用あるいは開発することが必要である。
【０００７】
細胞培養技術、治療可能な欠陥、生きている細胞の移植場所への適応の成功を向上する因子、および、その他の情報は、米国特許出願番号60/037,961に対する優先権の利得を請求する09/632,581（2000年8月3日に申請）、60/163,734に対する優先権の利得を請求する10/129,180（2002年5月3日に申請）、および、「組織における欠陥の増強と修復のための組成および方法」という名称の2006年9月14日に申請されたPCT出願書_____________に説明されているが、それぞれを参照することにより、本出願の開示と一致する範囲で、本明細書に組み入れる。従って、これらのその他の出願書で公開された技術や因子は、本開示と組み合わせることができる。このように、一部の実施形態は、試験管培養した細胞を、補助タンパク質またはその他の因子（例えば、タンパク質、高分子、分子）のある細胞とともに、組織欠陥部位に移植することによって、患者の欠陥を治療することを含む。このような因子の例は、中でも、免疫原生のタンパク質、細胞癒着、媒介タンパク質、アポトーシス阻害剤、アノイキス阻害剤、プロテーゼ阻害剤、対象の遺伝子、信号伝達タンパク質、マイトジェン、差別化因子、血管拡張、血管形成タンパク質、炎症前タンパク質、凝固前タンパク質、ECM製造のプロモーター遺伝子、移送タンパク質、生存因子、血清タンパク質、細胞培養結成派生タンパク質や因子、科学誘引物質、ECMタンパク質、成長因子、サイトカイン、ケモカイン、ホルモン、空間充填タンパク質や因子、可溶性タンパク質、不溶性タンパク質、組み換え型タンパク質、タンパク質の基質や断片、ペプチド、ゲル因子を含み、文献や技術分野で明らかである。用途に応じて、細胞の生存を促進して、細胞の機能を最適化するその他のタンパク質や因子を使用できる。
さらに、これらおよびその他のタンパク質や因子は、細胞の試験管内増大にも有用である。特定の細胞および／またはタンパク質は、生体内に移植される組織の試験管内の三次元合成にも有用である。組織の構成要素は、生体内環境を密接にシミュレーションすることが好ましい。あるいは、組織の構成要素は、機能的でありながらも、自然の生体内環境とは異なる。
【０００８】
このように、本発明のさまざまな実施形態は、細胞を取得、培養して患者に導入するために、本明細書で説明される技法を使用して、欠陥を治療するために細胞を患者に導入する。細胞は、説明されるタンパク質、因子および補足物質とともに、またはこれらを併用せずに導入できる。自己細胞、同種細胞、または、異種細胞を使用できる。細胞には、幹細胞、さまざまな分化細胞およびそれらの前駆細胞を含む。導入場所は、説明されるように、欠陥の場所、または、その近辺、あるいは、欠陥から離れた場所にすることができる。細胞培養と細胞導入のさまざまな技術は、特定の欠陥に応じて、説明される任意の欠陥に適用することができる。
【０００９】
説明される欠陥の治療は、一般的に、自然な組織の構造を復元して望ましい組織の機能性を引き出すように、適切な細胞種類の配置を説明する。以下で詳細が説明されるように、説明される欠陥は、一般的に、組織の構造、適切な細胞および適切な細胞相当の説明によって示されるように、天然の細胞を欠陥組織に配置することにより修復できる。一般的に、天然の細胞種類は、欠陥の治療における使用に適しているが、天然の細胞または相当細胞は、説明されるさまざまな細胞種類と組み合わせるだけで、記述されている構造の説明や細胞の機能指針を使用して、治療を実現するために使用することができる。従って、相当する機能の細胞種類を使用できる。欠陥は、例えば、同時またはその後、および／またはタンパク質やポリマーなどその他の基質で、別々に、または治療のその他のモダリティといっしょに、修正できる。さらに、必要に応じて、分化または転移分化による望ましい細胞種類を作成するために、幹細胞または適切な前駆細胞または細胞を使用できる。説明されている一部の欠陥は、特定の疾病状態に原因があるが、老化またはその他の疾病の結果の可能性もある。これらの場合、欠陥を治療するプロトコルは、一般的に、欠陥の正確な原因に関係なく、適している。
【００１０】
骨欠損の増強と修復-骨格、機能および骨細胞
骨の構造は、肉眼的または顕微鏡的種類によって定義できる。肉眼的には、2つの一般的な種類の骨が存在する。濃厚または小型（皮質骨）、および海綿状または網目状（骨梁）。顕微鏡レベルでは、骨（骨組織）の2つの主な組織学的種類、線維性骨と層板骨、が区別できる。線維性骨では、基質に対して細胞量の比率が高く、基質は、均質または、角度のある線維状のパターンの粗い線維から構成される。未発達または、暫定的と見なされ、組織化された骨によって置換されるが、活発な成長期間では典型的である。層板骨は、成熟または大人の種類の骨の構成であり、思春期後に未成熟な骨から変化する。血管周囲の密集した板によって、平行層の通常の増加により合成された複層の基質、あるいは、骨単位（枝分かれして相互に接続した構造であり、皮質骨の構造上の単位である）となる。細胞密度は、線維性骨より低いが、これらの細胞は、放射状の小管で相互に接続される。骨単位は、継続して、骨の再モデル化により置換される。
【００１１】
間接表面を除き、骨は、外側の線維層と細胞形成特性を持つ内側の細胞層という2つの層から構成される特別な接合組織である骨膜によって取り巻かれている。これらの骨内膜細胞は、通常の骨を覆っている、石化していないコラーゲン基質の1〜2umの厚い層の一番上の平坦で細長い細胞の層として、存在する。これらの骨内膜細胞は、破骨細胞の標的のための回帰信号である可能性がある。骨細胞は、骨内膜細胞に、特定の時間と場所で再モデル化の必要があることを指示する。骨内膜は、手足の骨の髄腔の内側の骨膜に存在するが、骨形成原細胞を含む網状組織から構成される。骨膜や骨内膜に存在するこれらの骨内膜細胞は、休眠骨芽細胞または前駆骨芽細胞である可能性がある。これらの骨内膜細胞は、骨単位の循環系を囲む。これらの場所は、さらに成熟した骨細胞種類に対する前駆細胞を提供し、骨組織の欠陥を治療する増強と移植のための前駆細胞の入手源である。網状骨や緻密骨のどちらも、同じ細胞と細胞間基質を含むが、これらの構成要素の配列は異なる。
【００１２】
骨単位（ハバース系）は、ハバース管、骨細胞および細胞間基質から構成される。ハバース管は、骨の長い軸と平行に伸びる管で、血管や神経を運ぶ。これらの管は、密集層または、石化した細胞間基質や骨細胞のラメラにより囲まれる。フォルクマン管は、ハバース管に直交して伸びる。これらの管は、骨単位を隣接の骨単位に接続するとともに、骨膜と骨内膜にも接続する。骨細胞は、骨のラメラの一部である、窩と呼ばれる隙間に存在する。細胞質拡張のある骨細胞は、骨単位内の管に突き出て、その他の骨細胞に接触できる。これらの小管と呼ばれる管は、隣接する骨単位をまたいで、皮質骨の伝達手段となり得る。小管は、ハバース管とつながり、骨細胞に栄養を供給する。ミネラル、特にカルシウムを骨から血管系に交換する場所である。
【００１３】
機能合胞体は、骨細胞から、骨芽細胞まで伸びて、細胞突起が、血管壁を含む類洞の内側にある内皮細胞と伝達し、従って、細胞と骨構造の間で開放された循環系に伸びる、隣接の骨髄細胞と伝達する。
網状骨には、ハバース管のない小柱に再モデル化された骨単位の残留が見られ、ラメラは、薄く、不完全で不規則に配置される。骨細胞はそれぞれの小柱に存在する。小柱の表面は骨芽細胞を含み、造血組織は髄腔を占める。
血管は骨の中に無数にある。血管網または骨の中にある血管の場所は、細胞を骨に注入または移植するために使用できる領域である。
【００１４】
骨の発達は、主に、胎児と出世以後の骨格成長となる、2つのメカニズムから構成される。軟骨内骨化は、手足の骨や軸方向の骨格に発生するような、軟骨性のテンプレートから発達する骨によるメカニズムである。対照的に、膜性骨化は、頭蓋骨の天井、鎖骨、上顎、下顎、および顔面骨を形成する骨棘よりも前に現われる線維細胞の間充組織の胎児期の凝縮から構成される。このように、頭蓋骨や顔面の骨は、形成には軟骨を必要としないが、その他のほとんどの骨は、一般的に、石化基質（骨）の沈着により徐々に置換される骨の軟骨モデルの初期の発達に依存する。
【００１５】
骨組織の細胞構成は、大部分が、骨芽細胞、骨細胞、および、破骨細胞、骨内膜細胞、骨形成原前駆細胞、間質細胞（例えば、線維芽細胞）と、わずかな量の単球／マクロファージとマスト細胞から構成される。骨形成原前駆細胞は、幹細胞（例えば、多能性、多分化能）または骨形成や骨破壊細胞に成長する前駆細胞をいう。前駆細胞は、幹細胞またはその他の、完全に分化していない細胞をいう。骨細胞は、骨形成原前駆細胞、分化した骨形成または骨内膜細胞、および、骨細胞、骨芽細胞、破骨細胞などの前駆細胞および、同上の前駆細胞をいう。特別な骨細胞は、骨芽細胞、破骨細胞または、骨細胞をいう。
【００１６】
骨内膜細胞と骨前駆細胞は、骨芽細胞の形成につながる系統において、骨形成の可能性がある。骨前駆細胞は、破骨細胞の形成につながる系統において、骨の再吸収につながる可能性がある。骨芽前駆細胞は、多能性の間葉幹細胞で、軟骨細胞、含脂肪細胞や筋細胞など、さらに分化した細胞種類にも成長する可能性がある。これらの破芽前駆細胞は、骨髄基質または周皮細胞から発生することができ、間葉細胞は、外側の骨膜の内層に存在するように、血管の内皮層に密着している。破骨前駆細胞は、単球／マクロファージ系統の造血細胞である。骨芽前駆細胞は、おそらく、隣接の接合組織からの前駆細胞の移動により骨に到達するが、破骨前駆細胞は、循環系から骨に到達する。
【００１７】
骨芽細胞は、骨髄やその他の接合組織に存在する間葉前駆細胞から派生した単一の核を持つ細胞である。主な主要な機能は、類骨を構成するコラーゲン（タイプ1）とプロテオグリカン複合物を合成および分泌することと、基質の石化の役割を果たすことである。骨芽細胞のその他の機能は、カルシウム、マグネシウム、リン酸が、骨液に出入りする移動を一定に保って、体内のホルモン上皮小体ホルモン（PTH）、成長ホルモン、甲状腺ホルモン、アンドロゲン、インシュリンに応答することによって、骨の再吸収のシミュレーションを調停することである。
【００１８】
骨細胞は、完全に囲まれた骨芽細胞で、石化した基質のある窩に存在するが、その他の骨細胞や表面の骨芽細胞との細胞質接合を維持する。骨細胞は、骨芽細胞の10倍の量があり、骨の中で最も豊富な細胞の種類である。この細胞網は、循環系との接続を提供する。骨細胞の機能は、骨の基質内のミネラルの絶え間ない交換を維持することと、骨の機械的負荷の変換器として働くことである。骨細胞は、骨格の機能適用の骨の補強または削減の必要性、または、微小損傷の修正の必要性を検出する機械感知細胞の候補である。これらは、骨の中で、特定の時間と場所で再モデリングの必要性を感知する唯一の細胞である。
【００１９】
破骨細胞は、骨の表面で主に発見される、大型の多核細胞である。これらは、骨再吸収と再モデリングの役割を果たす主な細胞である。破骨細胞は、間葉前駆細胞により引き起こされる初期の骨芽細胞系統の枝分かれから、間葉前駆細胞の参加によって骨芽細胞または含脂肪細胞の経路にさらに分化する前に、形成される。
骨芽細胞の動員の2つのモデルは、順次または並行である。順次モデルでは、再吸収骨は因子を開放して、機械的緊張における局部増加が、骨芽前駆細胞の増殖と分化を刺激する。並行モデルでは、骨芽細胞と破骨細胞の前駆細胞の増殖と差別化は、新しいBMUの開始の信号に応答して同時に発生する。どちらのモデルも、骨芽細胞が正しい場所にあることを必要とする。
【００２０】
破骨細胞と骨芽細胞との発達は、骨芽細胞が製造するIL-6によって刺激される。2つの細胞種類は、一時的および空間の直列に機能して、骨を再モデル化する。
骨髄基質は、骨芽細胞と含脂肪細胞の表現型の間に変換できる幹細胞を含む。間質線維芽細胞、前含脂肪細胞および含脂肪細胞、表皮および内皮細胞は、間質に存在する。間質細胞は、骨以外のその他の組織血管でも使用できて、その他の組織の特定の細胞の種類に変換できる（例えば、間葉幹細胞）。骨髄の細胞は、造血、破骨細胞形成、脂肪および骨の形成を支援する。
【００２１】
再モデル化は、全体の形状を変えずに骨組織を削除することや置換することして定義される。骨の再モデル化は、破骨細胞によって実行される骨削除（再吸収）、骨芽細胞により実行される骨形成の過程により実現する。無傷の骨格において、破骨細胞と骨芽細胞はBMU（基礎多細胞単位）と呼ばれる一時的な構造に属する。BMUは、約1〜2mmの長さで0.2〜0.4mmの幅があり、前方の破骨細胞の集合、後方の骨芽細胞の集合、中央の毛細血管、神経分布、および関連の接合組織から構成される。このように、新しい破骨細胞と骨芽細胞を前駆細胞から供給することは、骨髄からのBMUの発生と、骨表面上での発達のために必要である。骨の再吸収と形成は、同時に発生して、骨芽細胞は、破骨細胞が最近吸収を完了した場所だけに集合する。再モデル化は、MMP（基質のメタロプロテアーゼ）を骨形成細胞で直列に導入することにより強化できる。
【００２２】
モデル化は、骨膜や骨内膜での再吸収と骨の負荷成長により、骨組織の形状が変わることとして定義される。モデル化の過程の間、解剖学的BMUは区別できないが、成長している骨格は、骨の再モデル化とは異なる破骨細胞と骨芽細胞の成長先の空間的および時間的協調がまだ必要である。
骨の細胞外基質は、間質または細胞間の基質と見なすことができる。骨芽細胞は、類骨または骨の器官活動相を構成する線維に密集するそれぞれのコラーゲン（タイプ1）分子を分泌する。プロテオグリカンとヒアルロナンは、骨の有機基質に基質を備えるが、骨芽細胞によっても製造される。骨の剛性は、石化した破片により提供される。骨のヒドロキシアパタイトは、マグネシウム、ナトリウム、ストロンチウム、炭酸塩、クエン酸塩、フッ素の置換を有するカルシウムリン酸塩の不完全な結晶である。
【００２３】
骨欠損の治療
骨欠損は、以下に説明するように、骨の細胞を適切な場所で患者に導入することにより治療できる。特別な骨の細胞またはそれらの前駆細胞（例えば、骨髄間葉幹細胞または、筋肉由来の幹細胞のようなその他の幹細胞）は、骨欠損場所に、あるいはその知覚に導入することができる。導入された細胞は、修復に影響を与える場所またはその近くで、骨の構成に適応する。骨形成原前駆細胞は、例えば、循環系など、場所から離れた地点に導入できる。このような前駆細胞は、骨欠損場所上に侵入できて、修復に影響を与える場所に適応できる。また、細胞は、細胞を骨欠損の近辺に運ぶように計算された場所で導入することもできる。例えば、骨の細胞は、欠損にあるいはその近辺に流れる血管内に導入できる。特に、骨の細胞は、骨欠損を流れる動脈、最動脈、静脈、または、小静脈に導入できる。または、例えば、骨の細胞は、欠損と伝達する生物学的空間に導入できる。特に、骨の細胞は、欠損を有する骨に働く髄腔に導入できる。あるいは、骨の細胞は、欠損に働く血管網および／または管に導入することができる。特に、骨の細胞は、例えば、欠損場所の約1cmから50cmの距離で、欠損と関連づけられている網状骨に導入することができる。当業者は、例えば、約1cmから約30cmまでなど、これらの限界のすべての範囲、ならびに、明示的に記載された範囲内には記述されていないその他の距離が考慮されることを理解する。骨の細胞は、単独の治療で投与または、時間をかけて繰り返し投与することができる。さらに、例えば、さまざまな注入先の場所、または、薬剤治療との組み合わせなど、治療は組み合わせることができる。
【００２４】
骨粗しょう症、骨減少症、くる病または骨軟化症の予防、緩和または治癒に対する別の手法は、皮膚からの細胞で患者の肌を増強することである。皮膚のビタミンDの製造を増加できる皮下および顔面層は、患者の移植した皮膚領域の日光または人口UVに露出する骨形成を増加できる。骨に対する細胞の末梢配置は、中でも、骨折または骨とその構成要素および代謝過程、骨密度の増強、骨欠損の予防、健康および治癒能力のために使用できる。この手法は、ビタミンDが治療として分かっているその他の組織のその他の血管にも使用できる。これには、免疫、筋力、がん予防と治療（例えば、大腸、乳、子宮ガン）、乾癬、歯周病、リュウマチなどの自己免疫病、炎症性大腸炎、多発性硬化症、高血圧および心臓病を含む。
【００２５】
骨の発達および代謝のさまざまな成長因子（例えば、Bmp-2、-7）は、さまざまな骨の形成、修復または再モデル化過程のための細胞注入と連携して使用できる。
骨形成原細胞は、骨形成前駆細胞（骨芽細胞形成につながる間葉幹細胞）、骨芽細胞、骨細胞および、骨髄基からの質線維芽細胞または、身体のその他の部分からの線維芽細胞（例えば、皮膚線維芽細胞）を含む。
【００２６】
骨の細胞は、骨髄または骨生検など、文献に説明されている場所から取得できる。例えば、骨形成原細胞は、骨髄または、骨膜または骨内膜の骨細胞株から取得できる。骨芽細胞は、骨髄または細胞間基質から取得できる。骨細胞は、骨単位から取得できる。破骨細胞は骨髄から取得できる。
治療は、培養した骨の細胞、および／または細胞外基質の効果的な量を骨組織または骨組織の血管部分に配置することにより、効果が上がる可能性がある。骨の細胞は、骨髄または骨生検など、文献に説明されている場所から取得できる。例えば、骨形成原細胞は、骨髄または、骨膜または骨内膜の骨細胞株から取得できる。骨芽細胞は、骨髄または細胞間基質から取得できる。骨細胞は、骨単位から取得できる。破骨細胞は骨髄から取得できる。
【００２７】
破骨細胞および破骨前駆細胞は、骨が再モデル化および／または修復する必要がある場合に使用できる。典型的な例は、骨髄炎による骨折、および、骨減少症、骨軟化症および腎性骨ジストロフィーを含む骨形成の減少という特徴を持つ疾病の患者における、骨折の異常または不完全な硬化（例えば、不一致）、および／または、それ以外は正常な個人の一時的または不完全な骨のカルスの形成による、疑似関節症で実行される。
BMUの置換は、破骨細胞と骨芽細胞の適切な動的および順次導入により、骨欠損のために実行できる。これらの細胞を空間的および時間的に別々に導入することによって、適切な骨の再モデル化を達成するようにこれらの細胞の骨の部位への移植が達成できる。あるいは、適切な手法でこれらの細胞を放出する基質を使用することができる。従って、例えば、基質は、空間的に異なる細胞の構成要素を持つことができる。自然または合成のポリマーを前面に入れて、まず、破骨細胞で放出を行い、次に、後ろからポリマー層に埋め込んだ骨芽細胞を入れると、骨芽細胞の好ましい放出が行える。
【００２８】
移植前に、骨細胞は、論文に説明されるように、あるいは、技術分野で知られているその他の基質の中でも、患者の凝血塊、フィブリン複合物、ペースト、骨細胞ECM、その他の接合組織、ECMまたはその構成タンパク質単独あるいは組み合わせ、その他の生物素材（生物分解性、無細胞、生物的活性硝子、ポリマー）、またはミネラル（リン酸カルシウム）、または、成長因子の組み合わせ（血管内皮および線維芽細胞成長因子）および、ポリマーやミネラルを含む細胞、または、基質（コラーゲン）などの基質に置くことができる。
骨細胞は、中でも、簡単、複雑、あるいは、粉砕した骨折、老化、性ステロイド不足、糖質コルチコイド過剰、骨移植を矯正するために使用できる。
【００２９】
聴覚および耳の欠陥の増強と修復 
内耳は、かたつむりの殻のような構造で、聴覚器官である蝸牛を含む。蝸牛は、液体で満たされ、繊毛のある特別な細胞の層がある。聴覚神経は、蝸牛内に始まり、前庭迷路から始まる前庭部分（身体の位置や回転を感知して、平衡を保つ）でつながり、VIIIの脳神経または内耳神経に届く。迷路は、液体と、微小細胞の毛のようなセンサーを含む、溝の集合と、2つの丸い構造（胞果と小嚢）である。
【００３０】
本発明は、有毛細胞の損失により生じた感覚神経的な聴覚の喪失を治療するための方法論を含む。例えば、喪失した有毛細胞を試験管内で培養した有毛細胞または毛前駆細胞で置換することが可能である。例えば、導入は、乳様突起や蝸牛にアクセスすることにより実現できる。
【００３１】
耳の感染
一定の実施形態は、耳管の開通性や機能性の異常、例えば、慢性の中耳感染（中耳炎）やその他の障害を生じることができる異常の治療に関する。耳管は、例えば、自己細胞などの細胞を使用して、耳管で、またはその近くで組織を増量または増強することにより、修復または再モデル化できる。
【００３２】
平衡状態
目まい、乗り物酔いは、平衡感覚の異常である。本発明の実施形態は、微妙なセンサーを含む細胞の増強、注入、置換または移動である。
【００３３】
眼球異常と視覚障害の増強と修復
眼の構造と機能
眼球の外側の層は、強膜と呼ばれる、硬い線維性の、白く、不透明な膜である（白目）。強膜は、主に、コラーゲンと、弾性線維などの細胞外基質を3層に製造する線維芽細胞の膜である。網膜の外表面は、厚い基底膜、ボーマン細胞膜、コラーゲンの薄膜の上にある5から6層の細胞の厚さの上皮のほとんどが、浅い非ケラチン性の重層扁平上皮と立法形状の上皮細胞である。眼球の中間層は脈絡膜である。脈絡膜は、線維芽細胞、白血球、および一部メラニン細胞を含む。脈絡膜の前面は、眼筋（毛様筋）を含み、眼の丸い色のある部分は虹彩と呼ばれる。虹彩の後部表面は、2層の色素性円柱上皮を含む。前側面は、その数が眼の色を決定するメラニン細胞（少ないと青、多いと茶）から構成される接合組織を含む。眼球の内側の層は、眼球の3分の2を覆う網膜から構成されている。網膜は、視覚情報を処理して脳に送る神経細胞の数層を含む知覚（神経）網膜と、知覚網膜と眼の壁（脈絡膜）との間にある網膜色素上皮（RPE）との2つの層から構成される。神経網膜は光受容細胞（ロッドとコーン）を含む。
【００３４】
レンズの後ろの大部分（硝子体腔）は、硝子体液または硝子体ゲルト呼ばれる、厚い、ゲル上の液体を含む。硝子体は、レンズと網膜を硝子体内の細胞に配置して、硝子体細胞など、液体を合成する。
【００３５】
視覚障害
乱視は、角膜の不均一な屈曲による。
近視、遠視、または老眼には、例えば、必要に応じて接眼筋組織を強化するように、平滑筋細胞を取得して、眼の解剖に導入する技法を使用することができる。例えば、平滑筋細胞は、繊毛筋または線維領域に移植できる。老眼の場合の代わりの方法では、レンズ細胞を導入して、屈折エラーを復元することができる。乱視では、屈折エラーの補正は、角膜の線維芽細胞を角膜に移植すること、取得されている角膜細胞を説明されるように導入することにより実行できる。好ましい実施携帯では、眼、主に角膜、レンズ、毛様筋の調整構造の補正を、これらの構造の細胞種類で実施して、さまざまな調整障害、近視、遠視、老眼、および乱視を補正することができる。好ましい実施形態では、角膜の調整補正は、角膜の線維芽細胞の移植により実施される。
【００３６】
角膜欠損
角膜細胞種類または強膜細胞種類で、角膜の修復または置換を実施することができる。
網膜の黄斑変性（MD）
解剖学&組織学
網膜は、内側の眼をおおう神経組織の薄い層である。組織学的には、神経または細胞体、シナプス、ある基本種類のグリア細胞、ロッドとコーンと呼ばれる光受容細胞、および、一番外側の色素上皮から構成される10層を持つと説明される。
網膜の中央領域は、眼の軸に対応して、網膜の後部中央にある。最も重要な視覚が有効になる点であり、黄色いスポットは、黄斑と呼ばれる。光受容細胞のロッドとコーンが非常に多い。重要な色や視覚の微調整を可能にするなど、網膜で光受容細胞が最も密集している場所は、斑の的の中央領域に見られる。
黄斑変性（MD）は、網膜の黄斑領域の視覚感知細胞の不全を引き起こし、機能を失わせ、最終的には壊死させる。MDには、ドライとウェットの2種類がある。
網膜の中央部分の復元は、網膜の黄斑の視力感知に影響を与える、破壊された斑点神経細胞（例えば、光受容細胞）を移植することにより、実現できる。本発明は、例えば、網膜の色素上皮細胞などの細胞を、例えば、網膜の場所に導入することを含む。これは、代わりの細胞種類として、神経前駆細胞の使用を含む。
【００３７】
白内障
白内障は、通常は透明な眼の水晶の濁りまたは不透明性である。毛様筋細胞を移植して調整を矯正すると、白内障の視力障害が解消できる。また、細胞移植による角膜のさらなる調整を使用して、白内障の障害を解消できる。レンズ細胞を白内障を含むレンズに移植すると、白内障を排除あるいは、視力に追加のレンズ領域を提供することができる。線維芽細胞を白内障領域に注入することにより、線維芽細胞を使用して白内障を排除することができる。角膜の線維芽細胞が好ましい。レンズの上皮細胞を白内障領域に移植して、生体内でレンズを再建できる。試験管内でレンズ細胞から作成された合成レンズをレンズの削除後に移植することができる。
【００３８】
眼筋制御
斜視は視覚障害である。筋細胞（例えば、平滑筋細胞）を使用して、眼筋の欠陥構造に移植することにより、眼筋の形成不全または栄養失調により発生する眼の動きの機能不全による視覚障害を軽減または排除することができる。
【００３９】
緑内障
急性緑内障、排水は、虹彩により閉塞される。
慢性緑内障では、液体が眼の前面室から適切に排出されない。
本発明の一定の実施形態を使用して、これらの眼の構造に存在する細胞種類によって、取り除かれた組織、小柱組織、シュレム管および強膜を復元することができる。好ましい実施例では、線維芽細胞などの細胞や、試験管内で培養された細胞外基質が、強膜など、解剖した組織の場所に縫合される。
【００４０】
色盲と夜盲症
本明細書に開示された技法を使用して、ロッドを網膜領域に移植することにより、眼に対する光の感度を復元することができる。このように、本発明のさまざまな実施形態は、細胞の移植を含むが、例えば、診察によってその色盲には、どのコーン（赤、緑または、希少な場合には青）が網膜領域への移植に必要であるかを診断する。本明細書に開示された技法を使用して、ロッドを網膜領域に移植することにより、眼に対する光の感度を復元することができる。
【００４１】
老化に関連する視力低下
緑内障、白内障、斑点状変性、網膜剥離、網膜血管閉塞、網膜色素変性、色知覚や脈絡膜炎からの瘢痕は、大部分が老化に関連する眼の病気である。瘢痕は、脈絡膜の線維芽細胞などの線維芽細胞で除去できる。網膜色素変性は、夜間の視力低下として知られる。線維芽細胞などの、網膜はく離細胞を使用して、これらの瘢痕を除去できる。試験管内で形成される強膜鞘を使用して、網膜の再接着をすることができる。穴や裂傷は、治癒線維芽細胞または筋線維芽細胞で治療できる。
【００４２】
糖尿病網膜症は、網膜の血管が劣化して、視力を失う可能性がある。内皮細胞の移植、または、VEGFなどの成長因子とともに移植する。
周皮細胞は、血流を増加して、眼の網膜の血管形成を誘発するために使用できる。網膜の色素性上皮細胞の移植など、領域に含まれている細胞で網膜を修復する。
多数の視覚障害は、調整により影響される。これらの障害は、構造本来の適切な細胞で、調整にかかわる構造を増強または修復することにより矯正できる。最も重要なことは、これは、レンズ、網膜、繊毛筋、レンズやレンズ細胞の提靭帯を含むことである。典型的には、上皮層への網膜上皮細胞の移植、接合組織層への網膜線維芽細胞の移植、または、内層への網膜内皮細胞の移植である。好ましい実施形態では、接合組織層が移植される。繊毛筋領域への筋細胞の移植は別の例である。
【００４３】
眼外傷
涙器と涙の産生
本発明の実施形態は、ドライアイを修正して、角膜の傷、角膜や結膜の壊死、眼の感染を防ぐことができる。一部の実施形態では、前駆細胞または成熟細胞を適切な涙腺から取り出して、数を増やす。そして、適切な涙産出細胞が、3層を作る腺または組織、または、対象者の欠陥がある特定の涙の層に移植される。このように、涙の産出（例えば、涙腺細胞）、粘液（例えば、杯細胞）、さらに、油の層（例えば、減数分裂細胞）のそれぞれの細胞を取り出して移植することができる。自己作成ECMは、眼の涙を長時間ためて、涙の排出が多くならないように、点などの排出系をふさぐために使用できる。接合組織細胞（例えば、線維芽細胞）などの細胞は、排出系の長期的増強または閉塞に使用できる。上皮層の下に移植した適切な細胞（例えば、ケラチン細胞または線維芽細胞）は、涙の層の製造を増加することができる。線維芽細胞は、瞼板に移植して、結膜の粘膜分泌上皮細胞の効果を支援することができる。
【００４４】
肛門欠陥-肛門
肛門は、基本的に、4つの主な層からなる筋肉の筒である。これらの層は、内腔から外側へ向かって、1）重層円柱扁平上皮、結合組織、薄い円滑筋で構成される粘膜。上皮の下には、副粘膜が、接続組織（線維芽細胞を含む）の広い領域にあり、大量の動脈と静脈の神経叢組織と脂肪組織（前脂肪細胞／脂肪細胞を含む）を支える。2）内肛門括約筋（IAS）を形成する厚い2層の平滑筋線維から構成される外筋層。IASは、外肛門括約筋（EAS）の表面で皮下の構成要素の交差点で終了する。3）EASは、楕円形の管状の横紋筋の複合物で、主に、タイプ1（ゆっくり収縮）の骨格筋線維から構成される。4）外膜または漿膜は、接合組織と支持組織を覆う薄い外層である。
【００４５】
便失禁 
便失禁は、個人の生活の質を損なうに十分な、固体または液体の便の無意識の喪失として定義できる。便の喪失を伴わない場合も、頻繁または無意識な気体の通過（放屁）である。
本開示で説明される治療は、IASおよび／またはEAS周囲の組織である括約筋構造を増強、改善、または修復するために使用でき、異常な広さと緩い内腔を削減させる。これには、組成をEASまたはIASの周辺領域またはその領域に作成された嚢に直接移植することが必要で、1）中でも、線維芽細胞、筋線維芽細胞、円滑筋細胞、骨格筋細胞、筋芽細胞、未分化間葉細胞、脂肪細胞、前脂肪細胞など、自己細胞および／または培養細胞ECMの注入、または2）前記自己細胞および／またはECMまたは、自己細胞、または基質だけを含むその他の基質から構成される螺旋構造の移植により、修復または増強される。
【００４６】
裂肛
その他の実施形態では、肛門括約筋の増強または修復は、裂肛の発病を防止するために使用される。裂肛は、肛門管の上皮の傷で、痛みを伴う小さい線状潰瘍を見せる場合がある。
従って、一部の実施形態は、例えば、線維芽細胞などの自己細胞を裂傷領域またはその近くに移植することによって、裂傷の治療を達成する方法に向けられる。
これらの技法で治療される欠陥の例は、医原性の裂傷、自然発生的な裂傷、虚血による裂傷、および、感染には限定されないが、感染の二次的炎症による裂傷である。
【００４７】
皮膚色素沈着-皮膚欠陥
皮膚は2つの層から構成される。外側の層は、表皮と呼ばれ、ケラチン生成細胞に重層扁平ケラチン性上皮を多く含む表層で、下の組織からの水分の喪失を制御するので、脱水を防ぐ。内部の層は、真皮で、最も厚いそうであり、最も動的である。線維芽細胞と呼ばれる細胞によって形成されており、細胞外の基質を製造し、血管、神経、さまざまな腺、ほとんどの領域では、毛包を含む。この2つの層は共に、皮膚の構造サポートを形成する。皮下脂肪と筋膜の追加の皮下層も、特に、これらの層は混合して、皮膚の上層に対する補助特性となることから、皮膚の一部と考えられる。
【００４８】
しわ、瘢痕、またはその他の皮膚の欠陥は、皮膚のこれらの層だけでなく、脂肪や筋膜の皮下層やこれらの層の下にある筋肉層にも影響を与える場合がある。さまざまな層または組み合わされた層に移植される細胞は、しわや瘢痕など、多数の皮膚の欠陥を修正することができる。これらの細胞は、中でも、線維芽細胞、前脂肪細胞、含脂肪細胞、筋芽細胞、筋線維芽細胞、筋細胞を含む。例えば、刺青を除去後、皮膚に残っている損傷や瘢痕は、皮膚線維芽細胞を皮膚欠陥またはその近似に移植することにより、修復できる。
【００４９】
皮膚色素沈着
前駆細胞、メラニン幹細胞、またはメラニン芽細胞は、無着色の分化型メラニン前駆細胞で、皮膚、真皮、表皮に存在する。
皮膚の色の増強または修復、あるいは、日焼けは、メラニン細胞、メラニン芽細胞、またはその他の前駆細胞または幹細胞で実施されて、メラニン細胞またはメラニン細胞の表現型を製造する。メラニン細胞は、紫外線に露出またはこれまでに露出することなく、取得できて、細胞培養できる。皮膚に移植するためのメラニン細胞またはメラニン芽細胞、またはメラニン前駆細胞は、皮膚の層から、または、その他の組織から取得することができる。これらの組織は、毛胞殻の細胞を含む。移植のさらなる利点は、移植した皮膚をメラニンで保護することにより、皮膚がんを防止することである。むらのある皮膚の色素沈着や白斑、色素欠乏症などその他の皮膚の色素沈着欠陥がある。
【００５０】
白髪
毛包は、長い管のような構造であり、上下のさやに分かれる。
小胞状鱗茎で、メラニン細胞が髪の色を保っている。髪の基質外で、メラニン細胞は、外側の毛根鞘、漏斗、小胞の隆起と小隆起、皮脂腺周辺にそって、および表皮内にも存在する。メラニン細胞のメラニン芽細胞または前駆細胞は、起毛筋が皮脂腺の下に付いている隆起周囲の外側の根元のさやの中の小胞領域の外側に主に配置することができる。また、これらの細胞は、小胞構造のあらゆる場所にも存在する。
【００５１】
メラニン細胞は、白髪以外の髪の小胞から取得できる。さらに、メラニン芽細胞、メラニン幹細胞、またはメラニン前駆細胞も使用できる。メラニン細胞、メラニン芽細胞またはメラニン前駆細胞は、皮膚など身体のその他の組織から取得できる（例えば、表皮）。それぞれの細胞は、例えば、メラニン芽細胞を小胞領域に、また、メラニン細胞を小胞状鱗茎領域になど、毛包内の自然な場所に移植することができる。あるいは、細胞は、対象の小胞内または周辺に移植できる。移植は、髪の色を制御できる。特に、白髪、その人の自然な髪の色またはその他の色は、メラニン細胞を追加することにより除去することが、好ましい。身体の任意の毛領域は、顔の毛（例えば、口髭）、眉毛、頭の毛、陰毛、手足の毛など、移植できる。
【００５２】
爪
爪の成長のための好ましい実施形態は、爪の基質または爪の基質またはその周囲から取得した前駆細胞を増強してから、増強した基質細胞または爪の基質細胞の前駆細胞を爪の基質、または、基質周辺領域に移植する。さらに、線維芽細胞を真皮層に移植すると、爪板の成長を支援することができる。
【００５３】
皮膚欠陥に関する追加の実施形態
皮膚におけるいくつかの欠陥は、本開示の本文および組み入れた参照で列挙された。炎症、乾燥、調子または組織の容量の損失に伴う追加の皮膚の欠陥は、本発明の特定の細胞種類により治療可能である。例えば、老化する皮膚は、真皮と皮下層におけるECM製造の低下（例えば、プロテオグリカン）により水分が低下する。真皮乳頭層は、表皮下のその他の層に比べて、水和ECM（例えばプロテオグリカン、タイプIIIのコラーゲン）の濃度が高い。線維芽細胞および／またはプロテオグリカン、またはその他の水和因子（例えば、GAG、ヒアルロン酸）、または、タンパク質を移植すると、皮膚の含有湿度を増加し、膨圧を促進して、皮膚の容量を増加することができる。さらに、この施術は、湿度または水分含有を向上させるとともに、追加の弾力性を与えるために、すべての組織や臓器で使用することができる。好ましい実施形態では、乳頭層の線維芽細胞は、皮膚弾力と水分の増加、皮膚量の向上、および、さまざまな皮膚の欠陥の処理に使用される。好ましい実施形態では、乳頭層線維芽細胞は、皮膚、特に、上層に移植されて、皮膚の緩衝作用または絶縁を増加する。これは、前脂肪細胞、筋膜や網状層の線維芽細胞など、その他の細胞種類により、皮膚量を増加することにより、取得することもできる。
【００５４】
真皮乳頭層は、重要な栄養によって無血管表皮を支える血管網を含む。また、体温調節網を提供する。血管系は、血流を増減することにより、熱を保存または消費することができるように組織される。血管系は、真皮の乳頭層領域に互いに入り込む。従って、乳頭層の線維芽細胞を真皮上層あるいはその近くに移植すると、身体の体温調整を制御できる。皮膚のその他の細胞種類、網状線維芽細胞、筋膜の線維芽細胞、および前脂肪細胞／含脂肪細胞も支援できる。
【００５５】
皮膚の機械的強度は、かなりの部分が真皮網状層によって決定される。従って、乳頭層の線維芽細胞を真皮上層あるいはその近くに移植すると、皮膚を強化する。老化とともに、皮膚は、あざができやすく、裂傷しやすくなるので、機械的強度の実施形態は、これらの皮膚状態を支援できる。皮膚のその他の細胞種類、乳頭層線維芽細胞、筋膜線維芽細胞、および前脂肪細胞／含脂肪細胞も、支援できる。
【００５６】
皮膚の弾力は、大部分が、真皮網状層によって決定される。従って、真皮の線維芽細胞を皮膚の網状層にあるいはその近くに移植すると、皮膚の弾力性を高め、正常にする。老化した皮膚は弾力性を失う。皮膚のその他の細胞種類、乳頭線維芽細胞、筋膜の線維芽細胞、および前脂肪細胞／含脂肪細胞も、支援できる。老化は、上記の特性に影響を与えて、欠陥を促進する。同様に、これらの特性は、老化の機能である可能性があり、その他の組織や皮膚系に存在する。
【００５７】
乾癬
これは、慢性の自己免疫性炎症性皮膚疾患である。
好ましい実施形態では、皮膚組織からの乳頭線維芽細胞を、非罹患皮膚部位から採取し、生体外で膨張させ、真皮上層に埋め込む。これらの線維芽細胞は、他の組織線維芽細胞となりうる。線維芽細胞は、症状を緩和するために、乾燥した表皮層に水分を与えることができ、また疾患に伴う慢性炎症を抑えることができる。線維芽細胞は、細胞増殖およびケラチン生成細胞（例：KGF、βIFN）の分化を抑えるための、ケラチン生成細胞調整および成長要素を分泌することができる。本発明の別の側面では、線維芽細胞に対する前駆細胞を使用することができる。本発明の別の側面では、骨髄からの免疫細胞または免疫前駆細胞を移植するか、または注入し、これらの細胞が、免疫学的監視などの通常の方法で、表皮内の自己免疫反応を調整および抑制できるようにすることができる。
【００５８】
湿疹
アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触および刺激性接触皮膚炎、発汗異常性湿疹、貨幣状湿疹、慢性単純性苔癬、乾皮性湿疹、および脂漏性皮膚炎を含む湿疹または皮膚炎。皮膚は、非常に乾燥したものになり得る。
好ましい実施形態では、皮膚組織からの線維芽細胞、乳頭線維芽細胞などの細胞、脂肪細胞、またはその前駆体を、非罹患（皮膚）部位から採取し、好ましくは表皮下真皮、または真皮および皮下層に移植する。線維芽細胞は、症状を緩和するために、乾燥した表皮層に水分を与えることができ、また疾患に伴う慢性炎症を抑えることができる。
【００５９】
歯の成長および異常
歯は、一連の上皮−間葉の相互作用によって発達し、芽を形成し、次に、外間葉細胞が集まって、周囲に内および外エナメル上皮（IEEおよびOEE）を形成する歯冠を形成する。IEEからの細胞は、エナメル質の有機基質を分泌する分泌型エナメル芽細胞に分化する。後に、これらのエナメル芽細胞は、象牙質を生成する象牙芽細胞を形成する。象牙芽細胞によって分泌される、予成象牙質と呼ばれる非ミネラル基質の層によって、髄室の内側が覆われる。歯根は、セメント質と呼ばれる、無血管性骨様の層によって覆われる。セメント質は、皮膚濾胞組織から生じる。この層は、内側にセメント芽細胞（骨内の骨細胞（骨内の骨芽細胞と同様）を含む。外側においては、この層は、セメント破壊細胞（骨内の骨芽細胞と同様）を含む。セメント破壊細胞は、歯の過敏症を治すために、損傷または欠損セメント質層の外側の部分（例：歯肉溝）に移植することができる。移植は、例えば、感染または膿瘍による根管セメント質の異常に対して用いることができる。歯は、歯周病によってぐらつくようになることがあり得る。本発明の別の側面では、セメント破壊細胞の移植は、溝部分における歯の設置を安定させるために、使用することができる。広範囲にわたる歯周病では、固有層の線維芽細胞、または他の組織型線維芽細胞の移植によって、歯周部分を並行して修復することができる。
【００６０】
上皮細胞はエナメル質を作り、間葉細胞は歯の軟組織を作る。歯芽は、歯の部分を形成することができる組織の塊である。上皮の細胞は歯堤を形成し、歯芽は歯冠の形をとる。歯冠の下部は、歯乳頭と呼ばれる。最終段階では、歯冠の上皮はエナメル質を形成する。歯乳頭は、象牙質、セメント質および髄質を形成する。この段階では、歯は、歯の形および外観を持つようになる。歯髄細胞は、神経突起伸長を誘発する。
【００６１】
根は、細胞および細胞外基質を含む、セメント質と呼ばれる骨様の組織の薄層によって覆われる。エナメル質およびセメント質は、通常、歯肉溝で接触する。歯肉は、歯頚または歯頚縁で隣接骨に付着する不全角化重層へん平上皮から成る、口腔粘膜の特定領域である。歯肉上皮は、固有層と呼ばれる、間質結合組織の薄層一面にある。
【００６２】
本発明の特定の実施形態は、歯腔、感染、膿瘍、エナメル質形成不全、神経根管損傷、小歯症、歯数不足症、歯髄ポリープ、歯再生、および新しい歯の成長の必要性によって損傷されたものなど、歯組織の再生を含む歯の異常に対応することができる。さまざまな歯組織に関する上述の細胞種類は、好ましくはそれらを受け取る組織に特有の移植細胞を使用して、異常の元の位置から単離、および異常の元の位置に移植することができる。例えば、新しい象牙質またはエナメル質を生成するための、エナメル芽細胞および／または象牙芽細胞の移植は、対象に歯のホワイトニングを提供する。前駆細胞は、特に新しい歯の成長に使用することができる。新しい永久歯の成長は、歯の芽幹性上皮細胞および／または真皮乳頭細胞を使用して、現在の歯根の周辺の歯肉固有層または歯根膜部分、または歯の位置が求められる部分へ移植することによって、実現することができる。
【００６３】
歯槽骨異常
歯槽骨は、歯を支え保護する上顎および下顎の部分を形成する。本発明は、下顎および上顎の歯槽骨の再生および治療に対して、骨形成原細胞を使用することができる。
踵骨および足底を覆う脂肪体の増強
より圧力に耐える足は、脂肪細胞、前含脂肪細胞、線維芽細胞、筋肉を形成する細胞を移植または挿入して、踵における踵骨を覆う天然脂肪体を増強するものである。
【００６４】
筋肉および筋肉異常
骨格筋細胞は成人において増殖しないが、骨格筋組織内の衛星細胞は、筋芽細胞を生じさせる。線維芽細胞は、生体外で得て膨張させることができ、MyoD、ミオゲニン、Myf-5およびMyf-6、または他の分化転換の転写調節因子、または分化因子によって、骨格筋細胞に転換することができる。得られた骨格筋細胞は、記載されるようにさまざまな側面において使用することができる。例えば、筋肉の加齢に伴う減少は、サルコペニアとして知られており、この疾患を治療するために、筋肉細胞を筋肉組織および周囲組織に移植することができる。筋芽細胞は、成熟した筋原線維の表面で見つかる衛星細胞から、または骨髄もしくは間質結合組織内の細胞から生じる。生理学的恒常性、ホルモン平衡を促進し、代謝活性および血流を促進するために、細胞移植によって筋肉を追加することができる。筋肉細胞は、とりわけ筋肉消耗性疾患、筋ジストロフィー、非活動性萎縮（例：麻酔患者、高齢者）の治療に使用することができる。
【００６５】
平滑筋細胞は成人において増殖することができ、周皮細胞は、新しい細胞を生じさせる。成人における成長は、肥大および増殖によるものである。いかなる筋肉種類に対する損傷（例：けが、病気または加齢による）も、膨張した筋肉細胞の移植によって修復することができる。骨格筋などの筋肉の増強または修復はまた、好ましい実施形態では、衛星細胞から生じる筋芽細胞の移植によって達成することができる。これは、より大きな筋肉組織、強度を築き、生理学的血流の分布領域を増し、生理学的末梢酸素消費量および利用を強化し、またホルモン平衡を改善することができる。それは、骨粗鬆症または骨減少症において起こるような、骨の減少を防ぐことができる。強化された筋肉および機能は、2型糖尿病において正常のグルコース恒常性を回復させることができる。心筋の修復を得るために、他の筋肉細胞を、平滑筋または骨細胞の種類のようなさまざまな組み合わせで、置換することができる。異なる筋肉細胞の種類は、筋肉組織の修復の代替方法において、相互に置換することができる。筋肉の増強は、骨格筋充填または陰茎平滑筋充填など、患者の美容上の理由によって行われる。
【００６６】
心臓血管系異常−心臓および血管
心不全および異常
心筋障害は、心臓機能の異常が、代謝組織の必要条件に相応の速度で脈管系に血液を送り出す心臓の能力が低下する原因となる状態である。鬱血性心不全（CHF）は、血液を充填または拍出する心室の能力を弱める、いかなる構造的または機能的心疾患に起因する。心筋症は、拘束型、肥大型または拡張型に分類することができる。拘束型は、心筋線維症、タンパク質（アミロイド）による心筋梗塞、心内膜心筋瘢痕、および心臓瘢痕によって生成される。心室は、コラーゲン組織によって閉塞することがある。組織線維形成を取り除くために、心臓線維芽細胞、および他の組織種類、ならびに筋肉細胞種類の移植を用いることができる。肥大型心筋症（HCM）は、ミオサイト、筋細線維の乱れを有する。僧帽弁逆流および心房性細動は、HCMの一般的な兆候である。拡張型心筋症は（DC）、最も一般的な心筋症である。それは、一方の、または両方の心室の拡大を特徴とする。DCおよびHCMは、罹患した心室部分への筋肉細胞の移植で治療することができる。心筋肥大は、過剰なコラーゲン沈着によってもたらされる線維形成による可能性がある。他の心臓組織の線維形成に関しては、望ましくは、自己線維芽細胞（例：心臓、真皮）の移植が、心筋肥大を修復することができる。
結合組織の障害は、心臓血管系に影響を及ぼす。心臓の筋肉の3つの層−心筋、心内膜、および心膜が損傷を受ける可能性がある。洞結節の機能不全は、浸潤（例：線維形成）、感染、または梗塞によって起こり得る。
【００６７】
心臓の加齢
ミオサイトの減少、または末梢血管抵抗の増加は、残存ミオサイトにおける肥大をもたらす可能性がある。これは、心筋重量の増加をもたらす可能性があり、それは、多くのアミロイド、コラーゲン、脂肪線維形成、および高度糖化生成物、虚血、または梗塞による可能性がある。洞結節へのプルキンエ線維の移植は、不整脈を防ぐ洞結節の機能を回復するために用いることができる。あるいは、プルキンエ線維、および／またはその前駆体を形成する細胞は、例えば洞結節で、患者に注入されてもよい。いくつかの実施形態では、プルキンエ線維は、自己細胞から生体外で培養される。
【００６８】
治療
心臓筋肉または心臓系に関連する異常は、異常部分の組織の機能を回復するために、異常部分、またはその近くで、細胞を注入することによって治療することができる。本明細書の説明、および異常部位における細胞種類の観点から、細胞種類および送達部位が選択されてもよい。幹細胞は、心臓組織そのものに加えて、骨髄および末梢血液供給から得ることができ、心臓組織から心筋細胞（ミオサイト）への到達後、発達することができる。胎芽、胎児、新生児幹細胞、および成熟心臓ミオサイトおよび骨格筋芽細胞はまた、心筋機能を高めるために使用することができる。血流の前駆細胞、内皮および周皮細胞は、心臓組織への血流、および内因性幹細胞および成熟細胞種類の送達を改善するために、並行して、または単独で使用することができる。
【００６９】
幹細胞および分化細胞（内皮、線維芽細胞、筋肉細胞（心筋芽細胞、骨格または平滑筋芽細胞）は、生体外膨張および移植のために、心臓のいずれの構造からも得ることができる。これらの細胞は、膨張のために体内の他の組織から得てもよい。細胞が得られる心臓内の場所は、心膜、外側の線維層および内側の壁側板の両方、心嚢から、心外膜、心筋または心内膜からを含む。心臓弁、特に三尖弁および僧帽弁の開閉を助ける筋肉である乳頭筋からの細胞は、培養し、弁の機能障害、狭窄、および機能不全を引き起こす、正常に機能しない乳頭筋へ移植することができる。結合組織細胞は、断裂したまたは機能不全の腱索に移植することができる。弁小葉は、結合組織細胞（例：線維芽細胞）で修復することができる。人工弁は、筋肉細胞インプラントで強化された、腱索および乳頭筋によって支えることができる。体内の他の場所からの、他の筋肉細胞種類または筋芽細胞（平滑筋、骨格筋）は、膨張後の移植に使用することができる。心臓の主要なポンプ筋肉である、心室および心房にある心筋は、筋肉細胞および／または線維芽細胞を含む、膨張した培養細胞を移植することによって、筋虚血または梗塞などの疾患に関して、治療することができる。これらの細胞は、心筋組織を含む。心臓内の他の場所からの適切な表現型細胞は、心筋に移植することができる。心臓弁を含む弁尖は、弁損傷の近位部における、弁に付着する線維性支持（例：結合）組織への線維芽細胞の移植、および弁に付着する心筋線維への筋肉細胞の移植によって修復することができる。ペースメーカー細胞は培養し、心臓のリズムおよび鼓動を制御するために、洞（S-A）結節または房室（A-V）結節へ、またはこれらの結節の近位部へ移植することができる。電気化学的勾配を生成するために、細胞を、房室束（His束）または心臓の筋肉の他の部分にさえ、交互に移植することができる。ペースメーカー（P）細胞は、正常の心拍リズムを回復するために使用することができる。ペースメーカー細胞は、結節またはプルキンエ線維に位置する、胎児からの変性心臓または心房心筋細胞、または結節細胞から得ることができる。中隔、特に心室の間の分離は、他の原因もあるが、梗塞後壊死のためにひどく損傷を受ける可能性がある。移植筋肉細胞は、損傷した中隔を修復するために使用することができる。線維芽細胞および筋線維芽細胞は、中隔の損傷が心房の間である場合、使用することができ好ましい代替細胞種類である。
【００７０】
成熟幹細胞のいくつかの例は、造血性幹細胞、骨髄幹細胞、非分画骨髄幹細胞、間葉幹細胞、神経幹細胞、血管内皮細胞、および多能性成熟先駆細胞である。新生児および胎児心筋細胞を使用することができる。骨格筋、ならびに平滑筋細胞および周皮細胞を使用することができる。周皮細胞は、しばしば後毛細血管細静脈の外壁を覆うのが見られる、細長い間葉様細胞であり、ほとんど分化されず、線維芽細胞、マクロファージ、または平滑筋細胞になることができる。骨格筋細胞の利点は、虚血組織環境を生き延びる細胞の能力である。心筋細胞は継続的な血液の供給が必要である。
【００７１】
幹細胞（例：MSC）は、心臓組織そのものに加えて使用することができ、心臓組織から心筋細胞（ミオサイト）への到達後、発達することができる。成熟心臓ミオサイトおよび骨格筋芽細胞もまた、心筋機能を高めるために使用することができる。前駆細胞、内皮および周皮細胞は、血流を改善、従って心臓組織への内因性幹細胞および成熟細胞種類の送達を改善するために、並行して、または単独で使用することができる。
拘束型心筋症、心筋肥大、弁膜硬化、大動脈弁狭窄症、加齢心臓組織、洞結節機能不全、脚ブロック、AVブロック、および他の電気生理学的異常などの、心臓組織の線維形成または硬化症に起因する疾患は、細胞種類の中で、特に自己線維芽細胞、または筋肉細胞で線維形成を取り除くことによって、治療することができる。
心臓のさまざまな部分からの細胞は、膨張および移植に使用してもよい。心臓の異なる層から、および心房または心室のいずれかからの、心臓芽細胞（心臓幹細胞）を含む細胞を使用することができる。さらに、結節部分から、またはプルキンエ線維からの細胞も使用することができる。細胞の梗塞部分への移植における潜在的な問題は、生存率が低いこと、および血液供給のないことである。従って、欠陥由来因子、または周皮細胞のような細胞との同時注入を用いてもよく、または血管拡張神経との同時注入を用いてもよい。細胞は、足場であるECM上で、または細胞が集まって、生体外成長によって三次元的に移植することができる。心臓幹細胞に関して、心臓表現型に分化するこれらの細胞の能力を維持するために、間葉支持細胞膜を配置することができる。
【００７２】
弁の置換は現在、動物弁、心膜、死体同種移植で行うか、または機械によるものであることができる。機械心臓補助装置では、本発明の一側面は、抗凝固剤の必要性を軽減するために、ポンプ室へ生物学的脈管内膜（例：内皮細胞）を挿入することである。筋肉細胞または線維芽細胞などの自己細胞の弁組織への移植は、弁構造を強化し、その機能を高めることができる。自己細胞から、弁の層を交互に作り、弁の置換のために移植することができる。  
心筋再生に関して、梗塞瘢痕のサイズおよび線維形成を減少し、心筋収縮能を改善し、脳室拡張を縮小し、ECM変化による構造変化を制御し、また心室壁の厚さを変化（増大）するために、細胞移植を用いることができる。拡張機能への利益は、壁運動および圧力の改善を通して、収縮機能に対する壁の張力および弾性を高める。
【００７３】
周皮細胞は、毛細血管および後毛細血管細静脈の外面に見られる。これらの細胞は収縮することができ、間葉幹細胞としての役割を果たすことができる。これらの細胞は、増殖によって修復し、新しい血管および結合組織細胞を形成することができる。従って、周皮細胞は、特に記載される新機能異常に対する心臓修復に用いることができる。
損傷した心臓部分への細胞の送達は、心臓切開手術での直接注入による、または好ましくは、経皮電気機械誘導システムなどの腹腔鏡下的手段によることができる。特に心筋に対する冠動脈内送達、または静脈内送達による細胞注入は、細胞を損傷した心臓部分へ誘導する回帰因子を必要とするが、細胞移植の代替手段である。特に、心室内または血管内の手段によるカテーテル誘導を使用してもよい。
【００７４】
血管障害
動脈
動脈は、内膜、中膜および外膜という明確な三つの層から構成されている。内膜は、すべての動脈の内腔の裏側を覆う内皮細胞の一つの連続層である。内皮細胞は、一連の接合部複合体と、基底膜とも呼ばれる緩やかな結合組織から成る下層の薄いメッシュにより、互いに付着されている。中膜は、平滑筋細胞という一つの細胞タイプからのみ構成される層である。外膜は動脈の最外層であり、外弾性板により内腔面で区切られる。この外被は、膠原線（タイプ1）維束、弾性繊維、平滑筋細胞および線維芽細胞の緩く織り合わされた層から構成されている。この層にはまた、栄養血管と神経が含まれる。ECMは血管構造全体を通して存在する。
【００７５】
内皮は数多くの方法で機能する。内皮細胞（EC）は、ECM（例えば、数ある中でもコラーゲンIII、IV、フィブロネクチン、ビトロネクチン、エラスチン、グリコサミノグリカン、プロテオグリカン、プロテアーゼ、プロテアーゼ阻害剤）を内皮下層に分泌し、血液が血管外空間に逃げるのを防ぐ。細胞は、組織プラスミノーゲン活性化因子およびウロキナーゼ（プラスミノーゲンをプラスミンに変換する）の分泌により抗凝固表面として作用し、プロスタサイクリン（PGI2）および内皮由来血管弛緩因子（EDRF）を分泌して、血管の伸張および血小板の粘着や凝集の阻害を引き起こし、抗凝固細胞表面分子（例：グリコサミノグリカン、ヘパリン硫酸-抗トロンビンIIIシステム、トロンビン-トロンボモジュリン-タンパク質Cシステムおよびプラスミノーゲン-プラスミン活性化因子システム）を発現する。損傷への反応として、ECは中膜（エンドセリン-1を分泌する）を血管収縮し、（例：組織因子、フォン・ヴィレブランド因子、因子V、プラスミノーゲン活性化因子阻害剤PAI-1および2、インターロイキン1、腫瘍壊死因子）を凝固させる分子を分泌する。ECは、中膜を血管伸張することもできる。大きな弾性動脈（例：肺動脈、大動脈）およびその最大の分岐（例：腕頭、総頸動脈、鎖骨下および総腸骨動脈）にはエラスチンの有窓層が約30〜50含まれ、各層の間にはECMと平滑筋細胞が存在する。内皮下層は、線維芽細胞や平滑筋から成る結合組織層である。外膜には、扁平な線維芽細胞、マクロファージおよび肥満細胞、神経維束およびリンパ管が含まれる。筋性（分布）動脈（直径0.5mm以上）は、中膜内に隆起した内弾性板と平滑筋細胞を抱える。外膜は厚い。細動脈は1層または2層の平滑筋細胞であり、外膜は薄い。毛細血管（直径4〜8um）壁は、内皮、基底膜およびいくつかの周皮細胞から成る。洞様毛細血管（細胞間に幅広い溝と小窩を持つ内皮細胞の一層）。小静脈には基底膜で囲まれる内皮細胞が含まれ、より大きな小静脈では薄い線維芽細胞の外膜が含まれる。周皮細胞は小静脈壁を取り囲む。小静脈が50um以上の場合は、平滑筋細胞が存在する。小静脈は拡大して静脈を形成する。
【００７６】
静脈
小型および中型の静脈には、十分発達した外膜がある。内膜には連続的な内弾性板がなく、中膜は薄く、平滑筋の分離した2〜3層から構成されている。静脈機能を支援するのは、大部分の静脈に見受けられる弁である。弁は弾性繊維やECM（例：コラーゲン繊維）によって支えられる内膜を内側に延長したものである。
【００７７】
動脈および静脈の病理学。
血管形成を高めるための細胞（例：内皮細胞、内皮前駆細胞、周皮細胞）の移植は、老化組織における血流を向上させるために使用できる。これらの細胞は動脈の完全性を改善し、老化動脈の厚さを減らすことができる。いくつかの実施例においては、細胞は、有益なタンパク質または因子、例えば血管形成因子を伴い、または同左を伴わずに、組織に導入される。別の実施例においては、細胞は、上述した動脈の例えば中膜または外膜などの層の一つに導入される。細胞は、既存の血管構造に貢献する、または血流を高めるために既存の血管に相互接続する血管、例えば毛細血管または毛細血管様の構造を体系化する。
【００７８】
血流
血管形成とは、既存の血管から成長させることによる新しい血管の創造である。脈管形成は、新しい血球の分化による新しい血管の創造である。血液中または骨髄中の内皮細胞の前駆物質は、胚発育中などに新しい血管を発生させることができ、成長を助ける。細胞は、例えば閉塞冠動脈に対する新しい血流を高めるべく動脈形成を再作成するために狭窄周辺に注入させることができる。
【００７９】
好適な実施例においては、新しい血管系を形成、または血管系を修復するべく組織や血管を定住させるために、内皮または内皮前駆細胞または周皮細胞が使用される。老化血管の修復に必要となる内皮前駆細胞（EPC）は、血流に追加することができる。別の方法として、骨髄または末梢前駆細胞を選定することなく使用したり、伸張したり、被験者に戻すこともできる。スタチン治療を含めることで、末梢血液EPCまたはEPCの取得元である骨髄のプールを増大させることができる。
【００８０】
血管芽細胞と呼ばれる内皮幹細胞、または血管芽細胞および内皮細胞の前駆物質を使用することもできる。動脈または静脈からの内皮細胞を使用して、血管形成や血管新生を誘発することもできる。
周皮細胞は、毛細血管の外側表面および後毛細血管小静脈に見受けられる。これらの細胞は、収縮することができ、また間葉性幹細胞としても作用する。これらの細胞は、増殖を通して修復し、新しい血管および結合組織細胞を形成することができる。それゆえ、心臓および血管の修復に周皮細胞を使用することができる。血流を高め、すべての組織に対する血管形成を誘発するために、周皮細胞を使用することもできる。
【００８１】
動脈形成または血管成長を促進するために、マクロファージおよび／またはマクロファージ成長因子を組織に移植することができる。平滑筋細胞および／またはEC細胞および／またはマクロファージを移植物に追加することもできる。空間的および一時的な移植を使用してもよい。
損傷弁表面上にある弁および／または内皮細胞の前部への線維芽細胞または平滑筋細胞および／または支持ECMの移植を使用して、弁を再構築することもできる。弁を伴う、または伴わない静脈セグメントは、これらの細胞タイプを用いて生体外で作成し、その後生体内の適切な場所に移植することができる。静脈壁は、結合組織細胞（例：平滑筋細胞、線維芽細胞）の移植により支持・強化し、内腔を引き締めることができる。
【００８２】
アテローム斑
アテローム性動脈硬化症は、慢性炎症疾患である。斑は動脈壁の肥厚を意味する。移植された線維芽細胞およびマクロファージ（例：望ましくは組織因子を形成するよう活性化されていない、または組織因子を形成しないよう遺伝子デザインされたもの）を、直接的な注入または配置によって使用することもできる。別の方法として、動脈壁は、特に冠状動脈ステント、血管形成術、血塊またはプラークの除去により以前に診療治療された部位において、結合組織細胞（例：平滑筋細胞、線維芽細胞）の移植によって支持・強化することができる。免疫拒絶を伴わずに例えばステントを固定するための医療装置を覆ったり、またその機能を支援するために、自己細胞および／または組織を使用することもできる。
【００８３】
内皮細胞は、脈管系の凝固状態を管理するために移植することができる。ステントの内側表面を被覆し、血小板阻害薬に対するニーズ、また急性冠症候群については灌流治療後のニーズを低下または削除するために、自己内皮細胞を使用することができる。細胞はステントに培養することができ、その後ステントは移植することができる。いくつかの実施例においては、患者の内皮細胞またはその前駆物質は、例えば培養や、三次元ゲル、ペースト、またはステントに塗布されるその他の送達手段を作るためのタンパク質またはその他の物質と細胞との混合などにより、ステントを伴う。または、内皮細胞は、合成シートまたは後ほどステントの内側および／または外側に塗布されるその他の最適な分解性支持体上の層として、生体外で培養される。別の実施例においては、生体外で培養された細胞から収集されたECMはステント上に被覆され、これが上述の通り内皮細胞または前駆物質に最適に伴われる。ECMは、細胞の粘着、拡散、および／または有糸分裂を促進するための環境改善を提供する。いくつかの実施例においては、細胞は、内皮細胞の増殖が生体外でまたは生体内で増加されるように、内皮細胞の有糸分裂を増加させる要因に関連する。
【００８４】
肺障害 - 肺
誘導気道には以下のような6つのタイプの内皮細胞が存在する。線毛円柱細胞は気管支樹中の粘液繊毛輸送の責任を負う。杯細胞は存在している。クララ細胞は内腔に突出する。基底細胞は丸型で多列気道上皮であり、その他の内皮細胞タイプに対しては幹細胞である。刷子細胞には線毛がない。神経内皮体中の神経内分泌細胞は単一または凝集である。
【００８５】
リンパ球、主にリンパ組織に関連する粘膜から由来するT細胞は、すべての誘導気道組織に存在し、上皮の免疫学的監視により機能する。上皮の基底領域に存在する肥満細胞は、アレルゲンを含む刺激物に反応して放出される。粘膜下腺には、線毛性気道上皮の表面上における粘膜性層の発生源である粘膜性と漿液細胞が含まれる。結合組織（例：その他の細胞タイプの中でも線維芽細胞、筋線維芽細胞を含む）および筋肉は伝導系を取り込む。平滑筋は、気管および肺外気管支の後部の非軟骨部分に限られる。細気管内皮細胞タイプの下流である呼吸面には、肺胞細胞（肺細胞）が含まれる。これらの内皮細胞は2つの細胞タイプから構成されている。I型細胞は分割せず、II型細胞から由来する。II型肺胞細胞には、界面活性剤を形成するという重要な機能がある。界面活性剤は表面張力を低下させ、肺胞が極めて効率的となるような換気を認める。粒子を食作用した後、マクロファージは遊走し、肺から取り除かれる。肺胞マクロファージはまた界面活性剤を回転し、通常の肺胞が抗プロテアーゼ（α-アンチトリプシン）に対抗する一方で食作用中にプロテアーゼを分泌する。
【００８６】
間質性肺炎（ILD）および特発性肺線維症（IPF）
間質性肺炎（ILD）は、肺胞、肺胞上皮、毛細血管内皮およびこれらの構造間の空間から成る肺実質、ならびに血管周囲組織やリンパ組織が関与する、不均一状態および大きな一群の状態である。
【００８７】
ILDの組織病理学 
炎症および線維症では、最初の損傷は肺胞炎と呼ばれる肺胞壁の炎症を引き起こす内皮表面への損傷である。疾患が慢性的でくすぶり続ける場合、炎症は間質および血管系の隣接部分に広がり、間質性線維症を引き起こし、肺組織の回復不可能な瘢痕や変形、そして呼吸機能およびガス交換の障害という結果を招く。
特発性肺線維症（IPF）は特発性である。慢性閉塞性肺疾患（COPD）は気流制限を特長とする。
【００８８】
肺機能は、加齢に伴いいくつかの際立つ変化を示す。
肺胞数は加齢に伴い劇的に減少する。これらの細胞の数は、II型肺胞内皮細胞を肺胞表面に移植することで増大させることができる。本発明で使用されるべき肺胞内皮細胞の望ましいタイプはI型である。
換気の力学は、胸壁剛性のために加齢に伴い低下し、肺機能を損ないうる弾性の喪失が生じる。エラスチン形成を通した伸展性の上昇は、罹患した肺実質性結合組織への注入または吸入による線維芽細胞の移植によって達成されうる。場所には、肺胞壁の結合組織層または中隔が含まれる。肋間および腹筋肉への筋肉細胞の移植により、筋肉収縮を高めることができる。さらに、腱細胞を主な腱中心に移植して、換気中の活性を高めることができる。さらなる肋骨の動きを得るために肋骨軟骨に軟骨細胞を移植することもできる。
【００８９】
IPFおよびILDに存在する線維性組織を消化するために、移植された線維芽細胞を使用することもできる。繊維症後の肺疾患の進行度によるが、その他の細胞タイプ（例：肺胞細胞）を肺組織に追加し直すこともできる。界面活性剤はまた、特定の疾患または症状によく見られるマクロファージから放出されるプロテアーゼにより、過剰な組織劣化を無効化することができる。吸入された環境粒子を肺領域（例：肺胞）から取り除くために、移植されたマクロファージを使用することもできる。
【００９０】
腎臓機能および腎不全 
傍糸球体装置は3つの細胞成分から構成され、緻密斑（MD）はその一つである。MDは、傍糸球体細胞からのレニンの放出を調節する。レニンは、レニン-アンジオテンシンシステム（RAS）の一構成要素である。
腎乳頭は、本発明で使用することのできる成人腎臓幹細胞の供給源である。
メサンギウム細胞および／または緻密斑細胞および／または傍糸球体細胞の腎小体への配置は、ネフロン機能を増大させてネフロン数を高めることができる。ボーマン嚢への導入のために、壁層の有足細胞および内皮細胞といったその他の細胞を使用することもできる。この方法は、糸球体ろ過率を修復または増大することができる。この方法は尿中濃度機能の血圧、電解質バランス異常および不足を調節することができる。
糸球体ろ過率、尿中濃度、電解質バランス、および血圧調節といった糸球体機能を改善するべく糸球体の線維症または硬化症を取り除くために、線維芽細胞（例：間質性）またはメサンギウム細胞を使用することができる。
【００９１】
DCTの内皮細胞は、腎疾患および老化を低下させる吸収機能を改善するためにDCTに配置することができる。
ホルモン機能は適切な細胞タイプにより強化することができる。適切な腎細胞を皮質または髄質に導入して、骨髄からの赤血球形成を高め貧血症を治療するためにEPOを生むこともできる。活性型のビタミンDを生む腎細胞を使用して、数ある疾患の中でもカルシウム代謝を管理し骨粗しょう症を治療することもできる。血圧を調節し、特定の疾患における電解質コルチコイド機能および不足を改善させるために、レニンを形成するよう傍糸球体細胞を導入することもできる。尿中濃度を高めるために緻密斑細胞の導入を使用することもできる。この方法は、高齢患者および尿崩症などの疾患を持つ人々に対して有益である。
【００９２】
アルツハイマー病（AD）
ADに対する病理学上の顕著な特徴は、脳皮質におけるニューロンの壊死および消失、神経シナプスの大量喪失、および神経線維性変化（NFT、タウタンパク質の凝集）の組織学上の存在、ならびに脳の中型やより小型の血管における老人斑（凝集β-アミロイドタンパク質および反応グリア細胞から主に成る複雑な細胞外病変）および硬化症または線維症（例：ヒアリン変性）の蔓延である。
皮質は主に、最も数の多い錐体細胞タイプ（皮質ニューロンの70%）および星細胞または顆粒細胞とも呼ばれる非錐体細胞（棘状および非棘状のニューロン）という2つの神経細胞タイプを示す。
【００９３】
その他の重要な細胞群および皮質に存在する細胞で圧倒的に最も数の多い群は、以下のような7つのタイプのグリア細胞（特別な非神経性支持細胞）である。星状膠細胞、乏突起膠細胞、ミクログリア細胞、上衣細胞、脈絡内皮細胞、伸張上衣細胞およびシュワン細胞。星状膠細胞はプロテアーゼを分泌する。星状膠細胞およびその他の脳細胞タイプは、脳の構造を構築する。細胞タイプ、望ましくは脳星状膠細胞を、AD患者の罹患した脳領域に移植することができる。星状膠細胞はプラーク形成を分解し、Aβ凝集（例：硬化症、線維症）周辺で発生する脳組織瘢痕を取り除くことができる。ミクログリアまたは脳マクロファージまたはその他の体型のマクロファージ（例：皮膚から得られるもの）といった免疫細胞を使用して、ADプラークを取り除くこともできる。ADの段階により、移植は拡散的なものでも、特定の破壊領域に行うものでもよい。特に、損傷が激しくなる海馬およびへんとう体におけるニューロンの循環経路は、細胞移植に対する絶好の場所である。グリア細胞を移植して、機能や構造が失われた荒廃領域を再構築することもできる。中枢神経組織および脳については、局所的血流またはCSFによる脳への注入または灌流を使用して、細胞を導入することもできる。
それゆえ、本発明の実施例には、AD治療のための、例えば星状膠細胞、免疫細胞、または前駆物質といった細胞の患者への導入が含まれる。
【００９４】
パーキンソン病 
基底核、線条体、淡蒼球、視床下核。
通常の個人の場合、黒質には約400,000個のドーパミン作動性ニューロンが含まれている。
治療
星状膠細胞、乏突起膠細胞およびミクログリアが、脳および神経システムにおける神経膠またはグリアの3つの主なタイプである。グリア細胞は、エピネフリンまたはグルタミン酸塩といった神経伝達物質との相互作用によって神経刺激を調節し、ニューロンの生存を維持・増大させるために神経栄養因子を分泌し、血液-脳障壁において血管を閉鎖し、脳発達においてニューロンを移動し、ECM形成により脳構造を物理的に支え、栄養素を送達しニューロンにより生じる毒素を取り除く。中枢神経系やミクログリアにおける乏突起膠細胞の有髄軸索は食細胞を示す。星状膠細胞はニューロン、血管およびその他の星状膠細胞と接触して、神経シナプスを取り囲む。
【００９５】
望ましい細胞タイプは、PD疾患経路内で適切な接続を確立するものである。これには、ドーパミンを形成する細胞も含まれる。PDの欠損から回復するためにドーパミンニューロンを移植することが望ましい実施例である。ドーパミン作動性細胞、ドーパミン作動性細胞に対する前駆細胞、幹細胞（例：胎児、新生児、成人、生殖細胞、臍帯、胚）、生体外で伸張されその後ドーパミン作動性ニューロンへと分化される、またはドーパミン作動性ニューロンへと転換するべくドーパミン作動性神経再生やその他のPD領域を確立するために線条体や黒質に移植されるさまざまな細胞タイプを使用することもできる。いくつかの成人幹細胞は、中枢神経システム（例：神経幹細胞）または脳、または最終的にドーパミン作動性表現型を形成することのできる骨髄または脾臓などのその他の組織のものである。使用できる前駆細胞の一つのタイプは、脳側脳室の内側から単離された星状膠細胞である。
【００９６】
中脳または胎児中脳領域、またはドーパミン作動性細胞を提供することのできる脳の他領域から単離することができる。ドーパミンまたはドーパミン形成細胞に対する前駆物質を形成できるその他の細胞タイプも使用することができる。これらの細胞タイプには、交感神経芽細胞、交感神経ニューロン、副腎髄質および交感神経核のSIF（small intensely fluorescent）細胞、交感神経ニューロン、副腎髄質のクロム親和細胞および副腎外側舌グリア細胞などの神経堤幹細胞を含む網膜色素内皮細胞、頚動脈細胞体、交感神経副腎細胞が含まれる。このような細胞は、細胞の生存、ドーパミン作動性細胞の増殖や分化にとって重要なGNDFおよびTGFβといったドーパミン栄養因子を発現し、ドーパミンやノルアドレナリンを放出する。
線維芽細胞などの細胞は、チロシン・ヒドロキシラーゼまたはGTPシクロヒドロラーゼ1といったドーパミンのレベル増大を活発に行うGDNF、GDF-5、ニュールツリン、TGFβ、VEGFまたは酵素活性などのグリア成長因子によりトランスフェクトされる。因子を提供するために星状膠細胞を移植することができる。
ドーパミン作動性細胞は、脳領域に、望ましくは自然な原位置場所に、移植することができる。それゆえ、黒質のほかに、数ある中でも視床下部といった脳の他の部位も移植に使用することができる。
【００９７】
脳の任意の部分の星状膠細胞を使用することができ、また望ましい領域は側脳室の内側からのものである。これらの細胞は嗅球に遊走することができる。これらの細胞は、成熟脳細胞、星状膠細胞、ミクログリアおよび乏突起膠細胞、ならびにニューロンを形成することができる。
それゆえ、さまざまな本発明の実施例には、例えばドーパミンを形成する星状膠細胞、乏突起膠細胞、ミクログリア細胞などの細胞、および成長因子でトランスフェクトされる線維芽細胞などの細胞の導入が含まれる。
【００９８】
脊髄損傷（SCI）
脊髄損傷には、脊柱管内での神経への損傷が関与する。感覚ニューロンは、後根神経節細胞、グリア、または支持細胞と呼ばれる。グリア細胞の一つのタイプである乏突起膠細胞は、軸索を隔離し、神経信号伝送の速度と信頼性を改善するミエリン鞘を形成する。その他のグリアは、車輪のリムとスポークのように脊髄を取り囲み、神経繊維管の昇降に対して仕切りを提供する。大型の星状グリア細胞である星状膠細胞は、神経細胞を取り囲む液体の組成を調節する。これらの細胞のいくつかはまた、損傷後に瘢痕組織を形成する。ミクログリアと呼ばれるより小型の細胞もまた、損傷に反応して活性化し、老廃物を清掃する。これらのグリア細胞はすべて、ニューロンの生存を支え軸索の成長に影響を与える物質を形成する。
病変部位周辺の各々の損傷ニューロン（例：介在ニューロン、運動ニューロン）を伸張したり、前駆細胞を特定の脊髄管に、またはその近くに移植することもできる。特にグリア細胞（例：星状膠細胞）、乏突起膠細胞を使用して損傷した軸索を再有髄化することもできる。グリア細胞、星状膠細胞、前駆細胞、複数神経栄養発現型グリア制限前駆細胞を移植することもできる。骨膜からの間葉性幹細胞（MSC）、神経前駆細胞も送達することができる。
【００９９】
ハンチントン病
この疾患を治すために、コリン作用性および／またはGABA性ニューロンまたはその前駆細胞の尾状核への移植を使用することもできる。
【０１００】
多発性硬化症
ミエリン損傷を修復するために、神経損傷に近位の自己乏突起膠細胞の注入を使用することもできる。
【０１０１】
前駆細胞
脳および神経システムにおける特定のニューロンやその他の細胞タイプに対する前駆細胞の一つの供給源は、脳内の側脳室の内側から得られる星状膠細胞の使用である。これらの細胞は嗅球に遊走することができる。これらの細胞は、成熟脳細胞、星状膠細胞、ミクログリアおよび乏突起膠細胞、ならびにニューロンを形成することができる。
【０１０２】
肝不全-肝臓障害につながる肝臓疾患
肝臓は、代謝平衡の維持において中心的な役割を果たす。肝臓が主要な役割を果たす生化学機能には、タンパク質、糖タンパク質および炭水化物の中間代謝が含まれる。
【０１０３】
構造および組織学
肝体積の約80%および細胞数の60%が肝細胞により形成される。星細胞は元来間葉性であると考えられ、複数の細胞質脂肪滴を特長とする。肝臓損傷に反応して、これらの細胞は活性化し、圧倒的に筋線維芽細胞様となる。これらは、肝臓硬変に進行しうるコラーゲン瘢痕組織  肝線維症により、中毒性をもって損傷された肝細胞の再配置に対する責任を持つ。クッパー細胞として知られるマクロファージは、循環単球から由来する長期肝固有マクロファージである。
【０１０４】
実質肝臓疾患（肝細胞自体の疾患）は、急性または慢性肝炎（例：ウイルス性、薬剤性、毒性）、硬変（例：アルコール性、壊死後、胆管、ヘモクロマトーシス、その他のまれなタイプ）、浸潤（例：グリコーゲン、脂肪、アミロイド、肉芽腫、リンパ腫、白血病）、保管（例：代謝、鉄代謝、銅恒常性の先天異常）、占拠性病変（例：肝臓がん、転移性腫瘍、膿瘍、嚢胞）、および黄疸に関連する機能障害（例：ジルベール病、クリーグラー・ナジャー病、Dubin-Johnson-Rotor症候群、妊娠の胆汁うっ滞）として分類される。
【０１０５】
臨床症状および診断
結果的に肝臓障害および／または全身性障害につながる肝臓損傷を修復するために、肝臓柔組織に移植される伸張肝細胞を使用することもできる。肝臓の線維症または硬変は、肝星細胞、線維芽細胞または筋線維芽細胞により肝臓組織瘢痕を取り除くことにより矯正されうる。必要な場合は、損傷のさらなる矯正は、肝星細胞または線維芽細胞および肝細胞による肝臓柔組織の再合成により進められる。凝固因子などの全身性タンパク質を提供するために、血流に対して肝臓の中心位置である（例：血液を多く含む）ことから、またその代謝により、遺伝子組み換え肝細胞や線維芽細胞を使用することもできる。
【０１０６】
消化器の異常および糖尿病につながる膵機能不全
内分泌膵臓部は、臓器（つまり身体と尾）体積の1〜2%を占めるランゲルハンス島から構成され、少なくとも四つの主要な細胞群を含む。β細胞（各島細胞集団の3分の2）は、インシュリンを分泌し、α細胞はグルカゴンを分泌し、δ細胞はソマトスタチンおよびガストリンを分泌し、PPまたはF細胞は膵臓ポリペプチドホルモンを分泌する。
【０１０７】
膵線維症は膵臓炎から発生する。さらに、I型投入病においては線維症が発生する。1型糖尿病（DM）は、最も一般的な内分泌疾患の一つである。DMは、不十分なインシュリン量の形成につながる、膵臓の大部分のβ細胞のほぼ確実な自己免疫全滅の結末である。
II型糖尿病（DM）は、60歳以上の人々で最も有病率が高く、体重増加により誘発される。細胞はもはやインシュリンに反応しない。より一般的な形態では、島細胞は最終的に消失する。
【０１０８】
本発明の一つの態様は、膵臓炎および糖尿病の間に発生する繊維症により膵臓機能を改善することである。組織瘢痕を取り除くために、膵星細胞または線維芽細胞を線維性領域に移植することができる。本発明の別の態様において、小導管または管状導管システムを修復するために、内皮細胞を使用することもできる。膵臓の島または延性システムから単離されるβ細胞は、生体外で伸張されたり、島に移植されたり、または膵臓の外分泌腺領域に組み入れることができる。β細胞はまた、肝臓柔組織または血液を多く含み代謝活性の高いその他の適切な臓器に移植することができる。別の方法として、骨膜、末梢血液または脾臓から得られるHSC幹細胞を伸張し、島または膵臓に移植することもできる。これらの細胞は血管新生により得られる新しい島機能に結果的につながり、成長因子はβ細胞への幹細胞分化の内因性β細胞増殖を増大させるために放出する。島幹細胞は移植または注入することができ、その中で細胞は膵臓に存在し、機能β細胞に分化されるようになる。好適な実施例においては、脾臓幹細胞が膵臓におけるβ細胞形成に対する最適な幹細胞である。EPC、内皮細胞またはその他の細胞および／または血管新生を誘発するタンパク質は、β細胞形成を増大させるために膵臓に移植することができる。
【０１０９】
内分泌系
組織学および機能
内分泌系は、指定される目標組織または臓器において活性、例えば代謝活性を刺激するために循環系にホルモンを分泌する際立った腺または組織から構成されている。
主要な内分泌腺は、視床下部、下垂体（前部および後部）、松果体、膵臓、副腎、甲状腺および副甲状腺組織である。腹部、腸、肺、胸腺または腎臓などのいくつかの臓器は、局所的または遠隔的に作用するホルモンを分泌する特殊な細胞タイプである。
【０１１０】
視床下部および下垂体
4 cm3の視床下部は、下垂体腺に運搬されるホルモン（主にペプチド）を合成する、一群の神経分泌ニューロンから構成されている。これらのホルモンは、前部下垂体に作用する血液感染性放出ホルモンである。その他のペプチドは、結合軸索を運搬することで後部下垂体に到達する。これは、数あるその他の生理作用の中でも、液体および電解質バランス、食物摂取、エネルギーバランス、代謝、熱調節、免疫系、再形成、情動反応、恒常性、老化を管理する統合システムを含む。
【０１１１】
視床下部構造には、交叉前後野（視索上）、隆起野（漏斗-隆起）および脳室周囲域、中間域（中膜）および外側域の後部野（乳頭）および内外野が含まれる。成長ホルモン放出ホルモン（GHRH）を形成するニューロンは主に弓状核領域に存在し、その一方で脳室周囲核内または脳室周囲視索前野に存在するものもある。脳室周囲核に存在するニューロンは、ソマトスタチン（成長ホルモン放出抑制ホルモン）を形成する。副腎皮質刺激ホルモン分泌細胞放出ホルモン（CRH）ニューロンは、主に小細胞傍脳室領域に存在する。甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（TRH）ニューロンは、脳室周囲核、腹中側核および背内側核に分布される。ドーパミンニューロンは弓状核（A12群）に存在し、漏斗および正中隆起に末端を有する。前部下垂体には五つのタイプの細胞があり、六つの主なタイプのホルモンを分泌する。これらの細胞タイプは、索条組織または不規則な卵胞に配列されたさまざまなサイズや形状の内皮であり、その間は細網結合組織を基盤とする薄壁の血管類洞である。細胞には、1）成長ホルモン（GH）を分泌する成長ホルモン、2）甲状腺刺激ホルモン（TSH）を分泌する甲状腺刺激ホルモン、3）副腎皮質刺激ホルモン（ACTH）を分泌する副腎皮質刺激ホルモン分泌細胞、4）プロラクチン（PRL）を分泌するプロラクチン産生、5）卵胞刺激ホルモン（FSH）および黄体形成ホルモン（LH）を分泌する性腺刺激ホルモンがある。
【０１１２】
後部下垂体は視床下部からの神経繊維から構成されており、その末端は毛細血管と密接に結びついている。視床下部で合成されその後担体タンパク質に結合される後部下垂体ホルモン（ペプチド）は、開口分泌により排泄されるまで軸索末端の顆粒に保管される。視床下部から発生する後部下垂体ホルモンには、1）バソプレッシン（抗利尿ホルモンADH）、2）オキシトシンという二つがある。
【０１１３】
視交差上核（SCN）
この組織は、数あるその他の機能の中でも、自発運動、ホルモンの血漿濃度、体内温度、睡眠、覚醒、腎分泌、生理的リズムおよび日周リズムの昼夜サイクルを管理する数千のニューロンのみを含む。SCNは、バソプレッシン、VIP、神経ペプチドYおよびニューロテンシンなどの数多くの神経伝達物質を含んでいる。
【０１１４】
甲状腺
顕微鏡的に見ると、甲状腺の二つの葉は各々が数十もの卵胞を含有する二つの小葉に分割される。これらの卵胞はコロイドが充満しており、扁平、立方体または低い円柱細胞の一つの内皮層で裏打ちされている。甲状腺はほぼすべてのチログロブリンを含む、トリヨードチロニン（T3）およびトリヨードサイロニン（チロキシン、T4）をコロイドの成分として合成・分泌する。
【０１１５】
副甲状腺
小型副甲状腺は甲状腺の後部表面に存在し、通常は四つの群で見受けられる。腺は、血液中でカルシウムとリン酸の濃度を制御するペプチドである副甲状腺ホルモン（PTH）を分泌する。PTHは青白い細胞質を持つ主細胞、小型立方細胞で合成され、その寿命の後期になって好酸性細胞が現われるようになり、PTHはもはや形成されなくなる。
【０１１６】
副腎
腎臓に存在する各副腎腺は、皮質および髄質という内分泌成分から構成されている。皮質は、三つのゾーンに配列される。1）ミネラルコルチコステロイド アルドステロンを分泌する薄い球状帯（細胞は房状で現われる）、2）束状帯（細胞は縦隊で現われる）、主にグルココルチコイド形成、3）網状層、内側および最深層（細胞は不規則網状で現われる）は、DHEA（デヒドロエピアンドロステロン）およびアンドロステンジオンを分泌する小型好酸球性細胞を特長とし、その他の組織内でアンドロゲンおよびエストロゲンに転換される。
副腎髄質には、クロム親和細胞として指定された神経外胚葉起源の細胞を含む。これらの細胞は、カテコールアミン（主にエピネフリンおよびノルエピネフリン）を分泌・保管する軸索なしのニューロンである。パーキンソン病などにおけるその他のニューロン不足において、移植のためにクロム親和細胞を使用することもできる。
【０１１７】
松果体腺 
この腺は、間脳屋根に存在する非常に小さな臓器（6×4 mm）である。腺には、星状膠細胞様の神経膠と結びつきのある房に配列される修飾光受容体、索条組織および松果体細胞が含まれる。これらの神経膠は、松果茎の主な細胞部分である。松果体細胞は、メラトニン（トリプトファンから合成）を形成する高度修飾ニューロンである。松果体腺は、膵臓、副甲状腺、副腎皮質および髄質、生殖腺、下垂体前葉、および神経下垂体といったその他の内分泌腺の活性（大部分が抑制的）を修飾する。形成されるホルモンは、ポリペプチドまたはインドールアミン（例：メラトニン）である。
【０１１８】
分散神経内分泌系
いくつかの臓器には、ホルモンを分泌する単一細胞または小群の神経内分泌細胞が含まれる。集団的に、アミン前駆物質からカルボキシル基を除去してアミンにする能力があることから、これらはAPUD細胞と呼ばれる。胃腸管には、30つ以上のホルモンを形成する16つ以上の神経内分泌細胞タイプが含まれる。肺は、内皮小体として知られる神経内分泌細胞を含む。皮膚はメルケル細胞を含む。腎臓は、レニンを放出する傍糸球体細胞を含む。
【０１１９】
障害および臨床症状。
内分泌系の主要な異常調節は、老化の結果として発生する。高齢者においては睡眠−覚醒のサイクルが中断される。これはSCNおよび松果体腺により制御されている。それゆえ、腺への適切な細胞タイプの別々または一緒に行う移植は、高齢者における睡眠の異常調節を矯正することができる。日周リズムおよび生理的リズムはSCNにより制御されている。それゆえ、SCNに定住させるための移植細胞は、被験者の通常の生理的恒常性を維持または再導入することができる。
【０１２０】
さまざまな内分泌器官や組織における異なる細胞タイプが、「組織における障害の増大および修復に対する組成および方法（Compositions And Methods for the Augmentation and Repair of Defects in Tissue）」と題するPCT申請_____________（2006年9月14日申請）で記述されるようなさまざまなホルモンを形成する。このようなホルモンは、患者への移植のため細胞組成物に組み入れることができる。上述のホルモンを形成する細胞は、老化または疾患の機能として低下する必要なホルモンの形成またはホルモンやそれらの活性の阻害剤を達成するために、生体内で伸張・移植することができる。本発明の実施例は、特定の臓器によるホルモン形成またはホルモンやそれらの活性の阻害剤が自己細胞の特定系統の注入または直接的な配置によって低下する、機能内分泌障害に対する治療法を記述している。
【０１２１】
興味対象のホルモンを形成する細胞、または当該の特定細胞タイプに対する前駆細胞を使用することもできる。異なるホルモンを形成する細胞タイプを単独または組み合わせて使用することもできる。一般に、細胞タイプは自然な原位置場所に再び移植される。しかしながら、望ましいホルモン細胞表現型が維持され細胞が通常のフィードバック機構により制御されている限り、別の移植部位としてその他の組織（例：皮膚）を使用することができる。いくつかの細胞タイプは、内分泌腺または腺の一部をより機能的または若い状態に再生することが必要となる場合もある。これは、適切な細胞タイプを組織の間質に移植し直すことで達成できる。例えば、線維芽細胞および通常は組織を阻害するその他の細胞タイプといった結合組織細胞を使用することもできる。同様に内皮細胞は、通常は間質組織を一列に並べ基底膜の上に横たわるような本来の場所に配置することができる。結合組織および腺の上皮矯正と併せて、特定のホルモンに対する細胞タイプの移植を使用することもできる。加齢に伴い内分泌特性は変化する。特性を是正または改善するために、ホルモン形成細胞タイプを生体内で伸張・移植することができる。
【０１２２】
免疫系および障害
免疫系は、感染やがんに対する身体の主な防衛力であるリンパ球から構成されている。これは、物理的損傷（創傷）を治癒するが、また自己免疫や炎症を招く可能性もある。免疫反応は、異物または「自己以外」と見なされるすべての物質に対する反応である。中枢組織または一次リンパ組織は、骨髄または胸腺から構成されている。
【０１２３】
免疫反応。
間質細胞、特に線維芽細胞は、先天性免疫から適応免疫へと移行する上で主要な役割を果たす。それゆえ、感染（例：敗血症）および疾患に対する免疫反応を高めるために、健康な組織から得られるものなどの間質細胞の血流への注入、または感染・罹患した臓器への移植を使用することもできる。
【０１２４】
胸腺リンパ球の導入により胸腺（例：髄質領域）を維持することができる。
すべての胸腺上皮は単一の幹細胞タイプから由来し、後ほど成熟した皮質と髄質内皮亜集団を区別する分子を共発現する。加齢に伴い生じる胸腺の主な変化は定量的なものであり、それゆえ主要なリンパおよび微小環境細胞集団は寿命期間全体にわたり存在するが、胸腺容積、それゆえ胸腺細胞数は加齢に伴い減少する。胸腺退縮は、特定の免疫機能多数の減少に対応する。胸腺萎縮症は若年期に始まる。胸腺内皮細胞機能の退縮および衰退は、脂肪細胞が胸腺細胞に取り代わりT細胞産生が減少する中で発生する。人生60年間の終りまでに、免疫系の機能低下は主として、感染、自己免疫疾患およびがんの発生や進行をもたらす免疫系の胸腺依存部分の定量的変化を理由とするものである。胸腺を胸腺細胞により増大することで、補充リンパ球の増大、T-細胞の分化（つまり受容体の再構成）、活性化マーカーおよびサイトカイン形成の誘発を含む免疫機能を回復することができる。胸腺再生およびT細胞発育を促進するために、胸腺線維芽細胞を移植することができる。
【０１２５】
本発明において、加齢する中および疾患中にB細胞の効果的な形成を維持するために、間質細胞（例：線維芽細胞）を骨髄に追加することができる。
免疫系の調節異常は、自己免疫疾患、アレルギー、炎症を引き起こし、組織の完全性や寿命にマイナスの影響を与える。先天的経路および適応経路の両方ともが、年齢、慢性感染またはがんによる免疫系の不良により影響を受ける。高齢者の健康は、慢性感染、除去が難しい感染、炎症、悪性腫瘍、異常臓器機能、薬物治療、非健康的な生活様式、組織の老化に代表されるが、そのすべてが免疫反応の劣化に影響を与える。調節異常は高齢者に圧倒的に見られる。
【０１２６】
加齢に伴い、異物抗原への免疫反応は低下する一方、自己抗体の陽性率が上昇する。高齢者は、若い人々よりも細菌性、ウイルス性の原生動物および新生組織形成を受けやすい。さらに、慢性炎症反応は、数ある中でも組織損傷、アルツハイマー病およびアテローム性動脈硬化症に関連する可能性がある。年齢を重ねるにつれて、小数の新規T細胞のみが胸腺で形成される。成長ホルモンおよびインシュリンは高齢者の胸腺を刺激してより多くのT細胞を形成することができる。また、年齢を重ねるにつれて骨髄幹細胞の低下は未感作性のより低いT細胞を生むことになり、それゆえより多くの記憶T細胞が存在する。老齢者および罹患人物におけるT細胞形成を高めるために、伸張された骨髄幹細胞の移植を使用することもできる。
【０１２７】
高齢者においては、より少数のT細胞が形成、分化、活性化される。高齢者と若年層と比較した場合の最も劇的な違いは、存在するT細胞の数が低いことである。若い時における主として未感作T細胞の集団から、高齢者における主として記憶T細胞への変化が起こる。未感作細胞が記憶細胞に比して高い割合を持つ場合は、有機体の寿命がより長いことを意味する。それゆえT細胞、特に未感作T細胞の数を増やすことで、こうしたT細胞活性の低下を相殺することができる。
【０１２８】
T細胞のクローン複製老化は免疫反応を傷つける可能性があり、より多数のクローンT細胞が可能となるよう未感作T細胞に戻すことが重要である。本発明において、T細胞（例：未感作T細胞）の導入は、加齢に伴うB細胞活性の損失を相殺することができる。それゆえ本発明においては、免疫細胞による形成された因子（サイトカインなど）の低下を相殺するために、より多くの免疫細胞（T細胞）が使用される。
【０１２９】
加齢に伴い、先天性免疫細胞は変化することができる。NK細胞はある程度の殺傷力を失うが、細胞数の増加により相殺される。本発明において、先天性および適応の免疫反応の両方を高めるべくマクロファージの数を増やすために、マクロファージが移植または注入される。それゆえ、より多くのT細胞がこれらの機能を高めることができる。高齢者はより感染を受けやすい。それゆえ、感染と闘うためにより多くの好中球を追加することができる。
【０１３０】
アジュバントは免疫反応を高める上で有益である。本発明において、予防接種に対する免疫反応を高めるために未感作T細胞を使用することもできる。それゆえ、被験者への適切な免疫細胞の導入により、数多くの疾患に取り組むことができる。
【０１３１】
老齢者においては、免疫細胞の変化による新しい骨形成の損失が存在する。IL-1またはIL-6形成を低下させる細胞またはバランスの取れたT細胞システムは、この機構により骨吸収を防ぐことができる。エストロゲンは単独または細胞と併用して使用することができる。
【０１３２】
老化免疫系の影響に対抗するために、IL-6、IL-10およびTNFαなどのその他の有害なサイトカインを制御する細胞を使用することもできる。
先天性の免疫成分は、アテローム性動脈硬化症に寄与する可能性がある。本発明のこの実施例は、アミロイドプラークおよび神経線維性変化を劣化させるために、脳柔組織および関連する血管系に移植された免疫細胞を使用することができる。マクロファージおよびミクログリア細胞が望ましい細胞である。
【０１３３】
腫瘍細胞は、その表面上に異物抗原を示し、それゆえT細胞、NK細胞およびマクロファージを伴う免疫反応を刺激する。これらの免疫細胞は腫瘍と闘うために生体外で伸張することができる。
炎症の低下は、免疫系にとって重要な目標である。これは主に、T細胞を追加することで達成される。
【０１３４】
好適な実施例においては、T細胞は特に老齢者に対する免疫系の調節異常を矯正するために使用される。本発明において、数あるその他の機能異常の中でもいくつかの自己免疫障害、がん、痴呆症、糖尿病、白内障、および心疾患と闘うために、健康寿命においてかなりの数の未感作T細胞を維持することが重要である。
【０１３５】
高齢者においてはT細胞の増殖能力が低下するため、生体外で発育された多数のT細胞を投入することが重要である。さらに、生体外でのT細胞の増殖と活性化を効果的に高めるために、古い血清ではなく生体外での若い血清を使用することもできる。
【０１３６】
適応経路の力を高めるために、T細胞を培養することが望ましいアプローチである。多数が被験者に導入される前に、選定されなかった集団のT細胞または単クローンT細胞を培養下で伸張することができる。興味対象の特定抗原の親和結合およびその後の生体外での伸張により、T細胞の特定または単クローン集団を選定することができる。別の方法として、興味対象抗原の提示により、選定されなかった集団を生体外で選定することもできる。抗原は非細胞または細胞の形態で提示されうる。望ましい実施例は、望ましいT細胞のクローンの増殖を刺激する形態である。それゆえ、T細胞の選定・伸張のために、IL-2およびIL-4などの補助細胞、抗原およびサイトカインを使用することもできる。細胞の形態は、T細胞の増殖を刺激するために、T細胞に対する抗原または抗体に対する抗原を提示するB細胞またはその他の細胞でありうる。
【０１３７】
適応経路を向上させるために、未感作（抗原に遭遇していない）T細胞を成熟させ、胸腺の重要部位の改善または再生によりその数を増やすことができる。生体外で培養された胸腺細胞は、皮質および髄質領域を含む胸腺部位で成長・移植することができる。組織内での血管形成を強化するために、内皮細胞、EPC、または周皮細胞を胸腺に培養・再移植することができる。
【０１３８】
APC細胞は生体外で培養し、生体内で提示することができる。これらの細胞は、興味対象の抗原を含む樹木状細胞またはマクロファージでありうる。本発明においては、生体内でのAPCのみの多数追加も使用できるが、生体外で活性化されるAPCの追加が好ましい。
【０１３９】
別の実施例において、免疫細胞は増殖能力ならびに病原体や組み換え細胞に対する親和力を高めるために遺伝子組み換えが行われたものである。
免疫細胞は、血液またはリンパなどの末梢位置に加えて上述される内因性位置から得ることができる。例えば、T細胞はドナーから、末梢から、または骨髄もしくは脾臓のT細胞前駆体から得ることができる。
【０１４０】
T細胞の特定の小集団を選択するために、抗体を使用することもできる。例えば、CD4をCD8やこれらのT細胞のその他の亜類型を区別し、未感作細胞および記憶細胞に単離するために、T細胞上の特定の表面受容体に対する抗体を使用することもできる。
【０１４１】
クローンB細胞はT細胞との共培養により生体外で成長することができる。免疫細胞のその他の共培養を使用することもできる。T細胞およびB細胞はIL-2により増殖する。NK細胞はIL-12に反応する。免疫細胞の生体外での増殖を高めるために、これらのサイトカインを使用することもできる。
【０１４２】
局所的感染は免疫細胞の罹患部位への移植または注入により治療することができる。別の方法として、全身性注入（つまり静脈注射）を使用することもできる。広汎性感染または系統的感染（例：敗血症）の場合は、全身性注入が好ましい。免疫細胞により身体の組織を修復または再生するために、類似の戦略を使用することができる。
【０１４３】
感染症
慢性感染症は感染部位への免疫細胞の配置によって治療することができる。敗血症などの全身性感染に対して線維芽細胞を使用することもできる。
慢性炎症
好適な実施例において、慢性炎症は炎症を起こしていない細胞から得られた間質線維芽細胞により治療することができる。治療は線維芽細胞の血流内への注入により行うことができる。別の方法として、慢性炎症が組織などへの限局的なものである場合は、間質線維芽細胞を組織の近くに移植することができる。  
さらに、リウマチ関節炎などの場合では、関節に対する炎症反応を和らげるために非リウマチ線維芽細胞を使用することができる。類似する方法によりその他の自己免疫疾患を対抗させることもできる。
【０１４４】
組織線維症
線維症は、組織機能不全を起こす組織構造または微環境の変形を生む。
組織線維症は大部分の組織で発生しうる。主要な臓器には皮膚、心臓、肺、腎臓、肝臓、および骨膜が含まれる。その他の組織には、数あるその他の組織または臓器タイプの中でも、筋肉、水晶体、膵臓、骨、血管、神経繊維、腱、靭帯、食道、胃腸管、腸、腸管、食道、生殖構造、ならびに甲状腺、下垂体腺、および視床下部などの内分泌器官、ならびに尿管および尿道などの尿細管構造が含まれる。線維症は主に組織に局部的な影響を与えるが、全身性強皮症など全身性でありうる場合もある。
線維症は、数ある中でも全身性硬化症、混合性結合組織疾患、骨硬化症、多発性硬化症、血管炎を含む多くの硬化症状で発生する。
全身性硬化症においては、びまん性線維症は皮膚、関節組織、ならびに心臓、腎臓、肺、胃腸管および食道などの内蔵器官に存在する。血管炎において、血管壁の任意の層は線維性となる可能性がある。本明細書で記述される線維症は線維症と硬化症の分子的特徴の両方を含み、本発明はその両方に適用される。
【０１４５】
HGFは線維症線維芽細胞を予防することができ、肝細胞がHGFを形成する。皮膚組織では、瘢痕は通常、創傷治癒反応によるものであり、ケロイド形成を含む発育不全または異常肥大でありうる。肝線維芽細胞と肝細胞がHGFを形成し、肝線維症を取り除くためにこれらの細胞タイプを使用することができる。骨線維症は、骨芽細胞活性の損傷により骨を分解することができる。骨芽細胞または線維芽細胞の移植は骨線維症を取り除くことができる。骨膜線維症は、数多くの臓器や組織中への細胞の補充に影響を与える幹細胞の形成を抑制することができる。骨膜線維症は、特に骨膜間質からの間質線維芽細胞の移植によって取り除くことができる。腎線維症は数多くの異なる腎臓疾患によって引き起こされうる。糸球体硬化症（巣状分節状）は加齢に伴い発生する。腎線維症を取り除くために、メサンギウム細胞を腎線維芽細胞として使用することもできる。心臓線維症が発生する可能性もある。
【０１４６】
線維症は、肉芽腫性自己免疫甲状腺炎などの多数の組織、鼻ポリープ（炎症細胞による）、炎症性腸疾患（腸筋線維芽細胞が関与）、筋肉組織（例：除神経骨格筋）、慢性膵臓炎（膵星細胞が関与）、柔組織の皮膚脂肪硬化症を招く静脈疾患、水晶体の混濁化（白内障）に発生する。
【０１４７】
肺線維症は肺損傷により発生する。肺線維症の最も一般的なタイプは、未知の原因、職業病およびサルコイドーシスからの特発性のものである。これらには、数ある中でもCOPD、IIP（特発性間質性肺炎）、IPF（特発性肺線維症または間質性肺線維症、DIP、およびDIPおよびUIDが異なる段階でのIPFを定義することになるUID）、骨膜および臓器移植手術後の移植片対宿主病、塵粒子の職業上の吸入、放射および化学療法後などが含まれる。胸膜線維症は気腫に発生する。線維症は肺において広汎性でも斑状でもありうる。脳では、神経組織の瘢痕を取り除くために星状膠細胞またはグリア細胞を使用することができる。
【０１４８】
ECM劣化細胞またはプロテアーゼ分泌活性（MMP）を持つ細胞の使用により、組織瘢痕を取り除くことができる。肉芽腫、嚢胞およびポリープは同様の方法で治療することができる。好適な実施例においては、線維芽細胞が使用される。免疫細胞（例：マクロファージ）などのその他の細胞タイプを使用することもできる。
瘢痕除去により組織機能を再び取り戻すことができる。組織線維症は、組織多数の線維芽細胞の正常表現型などの患者の細胞の機能を損なう。組織機能は、組織の機能細胞を線維症除去細胞とともに、または線維症が除去された後に移植することで増大することができる。
【０１４９】
類線維腫
類線維腫組織の大きさを低くする、または当該組織を排除するために、移植された線維芽細胞を使用することもできる。
癒着
癒着は、あらゆる種類の手術に対する一般的かつ時として深刻な結果である。
癒着を排除または低下させるために、癒着部位内またはその近くの移植された線維芽細胞を使用することもできる。フィブリン基質を劣化させて癒着を排除するべく線溶タンパク質および因子を放出するために、内皮細胞などの血流を高める細胞を使用することもできる。
【０１５０】
血液およびその障害 貧血症
貧血症は、血液中に通常よりも低い数の赤血球（赤血球）が存在する症状である。HYPERLINK "http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/ency/article/000574.htm"ビタミンB12不足による貧血症の一つのタイプは悪性貧血症である。自己胃壁細胞の配置 [translator's note: sentence incomplete]。EPO形成のための自己腎傍尿細管内皮細胞の腎臓への配置は、結果として赤血球数の増加を招く。輸血の代わりにこの方法を使用することもできる。骨膜の化学療法または放射治療といった赤血球形成を損なうその他の身体症状に対してこの方法を使用することもできる。本発明のもう一つの実施例は、生体外での前駆細胞の伸張により赤血球を得ることであり、次に前駆細胞としての伸張後または生体外での成熟した赤血球への分化後にこれを被験者に注入することである。
【０１５１】
前駆細胞は生体外で増殖し、サイトカイン（例：EPO、IL-3、幹細胞因子）や例えば間質細胞による共培養によって生体外で分化することができる。赤血球を使用することも、成熟赤血球を使用することもできる。成熟赤血球は外生因子の抽出により生体外で形成することができるが、間質共培養は維持される。赤血球細胞の増殖やこれらの細胞の分化（例：除核を誘発するためのマクロファージ）のために、骨膜環境に存在するその他の細胞タイプを使用することができる。赤血球細胞の生体外形成の段階は、早期系統前駆細胞の増殖、そしてこれらの細胞の後期赤血球系統細胞への分化、およびこれらの細胞の機能除核細胞への成熟化でありうる。赤血球発達の任意の段階において、細胞を使用することもできるが、望ましい実施例は除核された成熟赤血球である。
【０１５２】
がん
生物学的な治療は、血管形成阻害剤、がん細胞、遺伝子治療、および骨膜ならびに末梢血液幹細胞移植に対して抗体、ワクチンまたはサイトカインを使用した免疫治療でありうる。
がん治療および免疫のための免疫細胞の培養
同様に、がん細胞は患者から取得して培養により伸張することができる。培養された免疫細胞またはがん細胞は、患者のがんを治療するために患者に導入することができる。下記の実施例は自己細胞という観点から記述されているが、同種異系細胞、適合ドナーからの細胞、遺伝子的に関係のあるドナーの細胞、およびより若いドナーからの細胞のほか、免疫表現型を達成するよう運命づけられた、または操作された適切な幹細胞および前駆細胞をすべて使用することができる。
一つの実施例において、がん細胞はがん患者から得られる。細胞は分裂し、その含有物は中度の熱または化学変性剤により最適に変性される。分裂されたがん細胞またはその一部が患者に再導入される。がん細胞の抗原の再導入は、免疫系を誘発して患者のがん症状の改善に影響を与える。細胞は血流に注入される、または例えば骨膜空間など免疫細胞の貯蔵場所としての機能を果たす身体部分に導入される。
【０１５３】
その他の実施例においては、免疫細胞は患者から得られ培養下で伸張される。免疫細胞は、例えばマクロファージ、細胞傷害性T-細胞、ナチュラルキラー細胞、B-細胞、またはそれらの混合といったがん抗原の同定に特に敏感な細胞でありうる。培養された免疫細胞はさまざまな技法で使用することができる。免疫細胞は精製された形であり、その他の細胞タイプに対して強化され、またはその他の細胞タイプと混合した形で存在する。
【０１５４】
最初の技法では、培養された免疫細胞は患者の免疫系を高めるために患者に再導入される。特定の論理に限定されることなく、細胞数の増大は免疫系の反応強化の機能を果たす。いくつかの実施例において、免疫細胞は血流、組織、または骨膜に導入される。別の実施例においては、免疫細胞は腫瘍部位に導入される。患者の免疫系を活性化するために、一つの腫瘍または複数の腫瘍に免疫細胞が注入される。別の方法として、すべてまたは実質的にすべての患者の腫瘍に注入して、導入された免疫細胞が直接腫瘍を攻撃し、かつ／または患者の免疫系を活性化することができる。
【０１５５】
第二の技法では、培養された免疫細胞は患者からのがん細胞とともに培養される、または当該細胞と混合される。がん細胞は一次細胞または患者から得られるがん細胞から培養された細胞である。免疫細胞およびがん細胞は一緒に伸張するか、別の方法として、別々に伸張してから互いに導入することができる。免疫細胞はがん細胞を伴って、あるいは伴わずに患者に導入される。特定の論理に限定されることなく、免疫細胞はがん細胞に反応する、または患者の免疫系においてさらなる反応を誘発するよう活性化される。共培養または混合手順と組み合わせて、がん細胞に反応するための免疫細胞を活性化する生物学的技法を使用することができる。
【０１５６】
さらに、さまざまな腫瘍細胞は単独で、または細胞外基質とともに、がん治療のために注入することができる。細胞は生体外で伸張・変性させ、その後血流に注入し戻す、または腫瘍部位または当該部位近くに置くことができる。患者のがん細胞に対する免疫反応を最適に刺激するために、細胞およびECMを使用することもできる。ECMは、がん細胞抗原に対するアジュバントとして機能する場合がある。特定のがんに対する免疫反応を刺激するために、生体外のみで伸張されたがん細胞からのECMを使用することもできる。本発明の別の態様において、患者のT細胞またはB細胞（例：単離された末梢血流）をがん細胞が存在する中で生体外で活性化させ、その後被験者に再注入することができる。本発明の別の態様において、腫瘍抑制因子などの抗がんタンパク質を送達するために、がんまたは正常の自己細胞（例：線維芽細胞）を遺伝子組み換えすることができる。
【０１５７】
軟骨障害
軟骨は通常、間充組織から発達する。
軟骨は、細胞外基質（ECM）および軟骨芽細胞および軟骨細胞という二つのタイプの細胞から形成される。その他の結合組織と同様に、ECMは支配的成分であり、組織に際立つ特性を与える。軟骨タイプ（例：ヒアリン、弾性または線維軟骨）に従い、ECMの外見、組成およびその繊維の性質はさまざまである。
軟骨タイプは硝子様軟骨、関節軟骨、線維軟骨および弾性軟骨から構成されている。
【０１５８】
加齢に伴い、表面細胞は正常の関節面から漸次的に失われ、より深い層の細胞で置き換えられる。変性細胞は4つの帯のいずれかで発生する場合がある。これは、加齢に伴い軟骨の細胞質、特に表面層が漸減することを説明するものである。線維軟骨は加齢によってもほとんど変性しない。関節軟骨細胞または硝子様軟骨細胞は、加齢に伴い変化する石灰化線に移植することが望ましい。老化軟骨領域の硬化または石灰化を低下させるべく石灰化線に移植するために、帯1または2といった早期の帯からの軟骨細胞または軟骨芽細胞を使用することもできる。
【０１５９】
いくつかの実施例は、生体外で伸張された例えば自己軟骨細胞などの軟骨細胞の関節鏡視下での注入により、膝または肩が主として関与する全層関節の硝子様軟骨病変を治療する方法である。移植用の自己軟骨細胞は、修復されるべき関節の健康かつ軽微な耐力領域から関節鏡を通して生検から得ることができる。移植される細胞は、軟骨のその他の健康な位置から得られた細胞に由来するものでもよい。軟骨細胞に対する前駆細胞を使用することもできる。軟骨膜幹細胞を使用することもできる。軟骨芽細胞を使用することもできる。帯1〜3に位置する細胞が細胞の単離にとっては望ましい。異なるタイプの軟骨（例：線維軟骨、硝子様軟骨、関節軟骨、および弾性軟骨）からの軟骨細胞または前駆細胞を、原位置での細胞の天然位置として使用するのが望ましい。別の方法においては、一つの軟骨タイプから得られる細胞を他の軟骨タイプのために使用することもできる。
【０１６０】
メニスカス
メニスカスの病変の修復には、骨膜から得られる軟骨細胞、軟骨細胞または幹細胞の前駆物質の使用が含まれる。
椎間板
各板は外側の層板線維輪および内側の髄核から構成されている。線維輪には、大量の線維軟骨および外側コラーゲン帯（タイプIおよびIIコラーゲンが豊富）で取り囲まれた微量の硝子様軟骨が含まれる。これらの三つの構造はラメラに体系化される。
椎間板の内側中核である髄核は、誕生時に脊索細胞が豊富な柔らかいゼラチン物質から構成されている。これらの細胞は、人生の最初の十年が経過した後に消滅し、ムコイド物質は次第に線維芽細胞や軟骨細胞により置き換えられる。核は吸水性凝集プロテオグリカンの含有量が高いために誕生時には極めて柔らかく、コラーゲン繊維や線維軟骨を形成する線維芽細胞や軟骨細胞により漸次的に侵入されるため時間とともに硬化する。椎間板の全体的な線維軟骨部分は加齢とともに大きくなる。
【０１６１】
特定の実施例は、硝子様軟骨および線維軟骨を形成するために（例：自己）軟骨細胞の組成注入により、修復、再形成または一括化されるべき椎間板の変性、破裂、ヘルニア形成または萎縮症である病変に向けたものである。別の方法として、特に線維芽細胞などのプロテオグリカンを形成する細胞など、椎間板に対して同様のECMを形成する細胞を使用することもできる。髄核の硬化を逆転させるために、凝集プロテオグリカンを形成する自己軟骨細胞の組成注入による、上記病変が修復、再形成または一括化されるべき椎間板の変性、破裂、ヘルニア形成または萎縮症である別の方法。もう一つの態様では、プロテオグリカンを形成するために、遺伝子組み換え細胞（例：軟骨細胞、線維芽細胞）を使用することができる。成人間葉性幹細胞、またはヒアルロン酸ゲルまたはプロテオグリカンを持つ上述のその他の細胞タイプを担体として使用することもできる。
【０１６２】
瘻孔
瘻孔は、一般的には空洞のある内蔵器官（ 例：腸または肛門）を損傷・露出する、一つの上皮化された表面から別の上皮化された表面への異常な通路から発生する慢性創傷である。瘻孔は身体の多くの部分で発生しうる。
肛門瘻（痔瘻）
実施例にはそれゆえ、例えば瘻管全体にわたる（例：自己）線維芽細胞の患者への移植により、創傷タイプとしての瘻孔の治癒および閉鎖を達成する方法を含む。その他の間葉性細胞および幹細胞、ならびに創傷治癒細胞タイプを使用することもできる。
【０１６３】
治療される障害には下記が挙げられる。医原性瘻孔、自然発生瘻孔、がんの放射治療による瘻孔、虚血による瘻孔、主として二次的なものだが感染のみに限定されない炎症による瘻孔、胃組織、十二指腸組織、膵臓組織、空腸組織、結腸組織または肛門組織の腸管皮膚瘻。および瘻孔は膀胱瘻、膣瘻、子宮膀胱瘻または膀胱膣瘻でもありうる。瘻孔は、気管-食道瘻、気管皮膚瘻、食道皮膚瘻または気管支胸膜瘻でもありうる。
【０１６４】
腸
腸、腸上皮、グリコカリックス腸細胞の内側層におけるラクトース過敏症は、ラクターゼの欠乏によるものである。
吸収は幹細胞の使用により改善することができる。細胞を腺窩の位置4に移植することが望ましい。被験者のラクトース過敏症を矯正するために細胞を使用できるように、例えばラクターゼを含むよう幹細胞の遺伝子組み換えを行うことができる。腸に沿ってビタミンB12を吸収する壁細胞に対する前駆物質は、悪性貧血症を改善するために移植することができる。壁細胞の移植はビタミンDの腸吸収を改善することができる。このような細胞は、腸に関連する障害または症状に対処するために移植することができる。
【０１６５】
嗅覚
いくつかの実施例は従って、例えば高齢者において、または疾患により一般に失われ、または基底幹細胞を補充するために使用される望ましい増大である、嗅覚を改善するための新しい嗅覚受容体ニューロンを提供するために、基底幹細胞を上皮基底に移植することである。
【０１６６】
味覚
味覚は、味蕾と呼ばれる散在する数千もの感覚細胞の群に依存している。それゆえいくつかの本発明の実施例は、味覚の喪失を改善する、または望ましい増大のために、基底味覚細胞や支持細胞中に成長されうるような、舌上皮の幹細胞の移植に向けたものである。
【０１６７】
老化組織および臓器
老化は、ある人物の人生における最適な組織や臓器機能の変化を示す生理的不良と定義することができる。老化によって被験者は、本明細書全体にわたる記述内容や当該技術において知られているものの中でも、疾患、悪化症状および細胞活性にかかりやすくなる。
老化組織の表現型における主要な変化は、結合組織成分の変性である。一般に、結合組織の量低下が観察される。関与する結合組織タンパク質および分子には、数ある中でも異なる形態のコラーゲン（タイプI〜IX）、異なる形態のフィブロネクチン、プロテオグリカン・バイグリカン、デコリン、バーシカン、アグリカン、ヘパリン結合プロテオグリカン、ビトロネクチン、トロンボスポンジン、オステオネクチン、エラスチン、フィブリリン、ラメリン、ヒアルロン酸、エラスチンなどがある。
【０１６８】
組織は加齢に伴い異栄養性になり、その機能を変性または損なうようになる。多くの場合、組織の特定の細胞タイプのプロテアーゼ劣化と比較して構造タンパク質の形成が高くなることから、組織の肥大が存在する。時として萎縮が存在する場合があり、この場合はより若い組織よりも構造タンパク質またはECMの形成量が低い。ジストロフィーは、組織の特定領域の肥大やその他の萎縮の組み合わせでありうる。例えば、MMP活性は老化または光老化した皮膚でより高く、構造タンパク質の豊富さはより若い皮膚に比べて低い。線維芽細胞を形成する結合組織の細胞移植は、老化または光老化した皮膚の機能および構造を改善する任意のまたはすべての活性を変化することができる。
【０１６９】
さらに、結合組織成分の変性（例：エラスチン、プロテオグリカン）による組織の弾性喪失が存在する。例えば、これは若い成人と比較した場合の、高齢者における肺組織機能の急落および腎臓組織機能の40%低下によって反映される。さらに老化組織では湿度または水和作用（例：プロテオグリカンの低下）が存在する。さらに、老化組織には膨圧が存在する。さらに、結合組織成分の変性低下を主な理由とする組織量の喪失が存在する。
多くの老化組織において、追加された細胞は、細胞に固有の欠乏に支援を提供するために、特定の成長因子およびホルモンが一緒に移植された場合により効果が高いことがある。
【０１７０】
本発明の一つの態様において、骨膜前駆細胞は老化の過程により機能異常または機能低下したすべての組織や臓器を活性化させるために使用することのできる前駆細胞の数を補充するべく、骨膜（例：間質）に移植または注入される。身体全体を活性化させるために本発明を使用することもできる。好適な実施例においては、より若い細胞がより高齢の患者に使用される。別の好適な実施例においては、より若い全血／分割血液／血漿／血清がより高齢の患者に定期的に注入され、組織および／または生理的機能を改善させるために間隔をおいて繰り返される。別の方法として、特定の組織が前駆細胞の補充を必要とする場合には、自己前駆細胞、より若い細胞（自己または非自己）および／またはより若い全血／分割血液／血漿／血清を興味対象の組織に注入または移植することができる。
【０１７１】
組織老化中の細胞数の喪失は、本発明で回復することができる。組織に存在する細胞および／または細胞外基質の補充により、組織および臓器の機能を回復または改善することができる。細胞および／または細胞外基質はまた、組織を回復または改善するためにその他のタイプの結合組織から使用することもできる。もう一つの例は、同一人物からの生理的により若い臓器の組織または結合組織成分を、同一人物の別の組織に使用することである。一つの例は、放射、太陽光、温度または化学物質といった外界からの刺激の影響を受けない結合組織起源からの線維芽細胞の使用である。別の方法として、より若いドナーからの組織から得られる細胞および／または細胞外基質を、別のまたはより年老いた宿主の同一または異なる組織に使用することもできる。本書の別の部分で記述されている通り、より若い細胞やより若い血液／血漿／血清の使用により、その他のより若い特性や機能特性を使用することもできる。
【０１７２】
臓器組織工学および臓器組織再生 
臓器置換および合成 
正常に機能するよう臓器を戻すために細胞数を増やす移植、または臓器内の古い細胞をより若いまたは倍増した細胞で補充することで、不良臓器の機能を置換するため、または老化関連の臓器の低下を矯正するために、臓器を開発するべく組織工学および組織再生を使用することもできる。
生物学的な組織および臓器は、細胞外基質（ECM）として知られる複雑な分子構成内に存在する特殊化した細胞から構成されている。組織に適切な三次元構造を提供することに加え、ECMは遊走、増殖および分化といった重要な細胞機能に影響を与える信号経路を促進する。
三次元の生体材料を用いた組織工学分野は、基本的に組織成長の促進・維持のための足場に対する最適な物質の選択、その後に回復、単離、および生体外での培養、そして必要となる組織に従った適切な細胞タイプの播種が続く。
【０１７３】
ほぼすべての足場は、合成または天然ポリマーのどちらかにより形成される。合成ポリマーは一般的に、組織工学用途で使用され、ポリαヒドロキシ酸、ポリオルトエステル、ポリウレタンおよびヒドロゲルが含まれる。コラーゲンベースの物質が幅広く使用されている天然ポリマーである。数ある困難の中でも、確固たる組織を最適に成長させるための細胞環境を作り出すという最適な足場に関する問題が、極めて重要な問題である。さまざまな三次元バイオエンジニアリングや生分解性の足場は、粘着性基質を提供し、生体外での細胞培養のほか生体内での組織再生に対する三次元の物理的な支持マトリックスとして機能することができる。
【０１７４】
必要な細胞は、組織工学または自己移植で臓器を再生するための生体手順により、個人から採取することができる。臓器の完全損傷や不良によりこれが可能ではない場合は、望ましい細胞、胚細胞または成人幹細胞へと分化するために誘導される未分化の間葉性細胞、または望ましくはドナーからの細胞として異なる起源を利用することができる。細胞は、最適な細胞密度が達成され、それゆえ良好な臓器機能が再び確立されるまで、選んだ足場に伸張、装着、播種される。
【０１７５】
光や化学物質、ECM、および血清から保護された組織起源であるより若い細胞タイプ
ヒトを伴う、または伴わない自己細胞または自己細胞を移植のために患者に使用することができる。年老いたものよりもより若い自己細胞および／または血清を使用することができ、被験者に行われた以前の時系順での生検から取得・保管（例：冷凍保存）することができる。別の好適な実施例において、遺伝子的に同様の細胞または血清を自己細胞の代わりに使用することができる。いくつかの実施例においては、自己細胞は細胞再導入の日付から例えば1〜80年間、例えば5、10、または15年前に採取された細胞から由来し、明示的に記述された数値間のすべての範囲や数値が熟考される。
【０１７６】
異種、同種または自己ECMまたはその構成物質を自己または非自己細胞とともに使用することもできる。使用することもできる基質には、天然および合成、望ましくは生分解性のものが含まれ、時間の経過とともに劣化またはその他の機構により取り除かれる免疫原性決定因子を含む。基質には、数あるその他の可能性の中でも希望する細胞の増殖、分化およびその他の機能結果を促進することのできる、ECMタンパク質のマトリカイン、モチーフまたは領域、MMPまたは阻害剤、インテグリンなどのECM受容体、成長因子、サイトカイン、ケモカイン、凝固性配列、プラスミン劣化部位、炎症性配列が含まれる。培養下の細胞は、密度の濃い三次元基質（例：接触阻止に打ち勝つ適切な血清補給を通して）を形成することができ、これらの三次元基質内の細胞は、際立つ粘着の種類を形成する。ECMは培養に含めたり、患者に細胞を移植することができる。
【０１７７】
内皮細胞、上皮細胞または幹細胞といった細胞の増殖、分化および生存を促進するために、通常は基底を成す間質線維芽細胞とともに生体内で存在する幹細胞またはその他の細胞の共培養を使用することもできる。このような共培養は、自己血清および／またはより若い血清を用いて増大することができる。
【０１７８】
その他の側面
一般的には構造の修復は、該当する部分の体細胞または前駆細胞で行える。例えば未発達の線維芽細胞（間葉線維芽細胞）は、発達した線維芽細胞ならびに特別な線維芽細胞の系族の線維芽細胞のそばにある同じ組織空間内にある。異なる解剖学上の箇所からの線維芽細胞は、独特の表現型を示す。頭と首の部分の線維芽細胞は、中胚葉ではなく神経堤組織（外胚葉由来）からできる。そして線維芽細胞は、異なる細胞から由来する細胞表原型と機能特性の数に応じて異種起源である。
【０１７９】
概して幹細胞は多くの場合、幹細胞が存在する組織を、識別し再生する潜在力に制限されないことが注目されている。骨髄幹細胞は血液生成または血液生成ではない間葉の幹細胞、筋肉、心臓、肝臓、血管細胞、その他の間葉細胞の種類に識別できる。さらに生息する周辺器官への循環を介し線維芽細胞の組織への前駆細胞として補充される。
【０１８０】
脳は幹細胞として作用する星状細胞を加え再生できる。脳のどの部分の星状細胞も使えるが、好ましい発源部分は脳側室上皮からである。これら細胞は嗅球へ移動できる。そして、発達した脳細胞、星状細胞、小膠細胞ならびに希突起膠細胞また神経細胞を、これら細胞は構成できる。パーキンソン病、脳の運動系と知覚系、アルツハイマー病に効果がある。
細胞はその他の臓器提供者、あるいは新生児、胎児、生理学的に若いという年少の臓器提供者から得られる。
【０１８１】
胃食道逆流病
胃食道逆流（GER）または胃食道逆流病（GERD）と言われる病気を治療する考案の具体化を行う好ましい方法は、食道内腔へ内視鏡を入れて先端を異常に膨張したLES内腔の適切な視距離に設置する。内視鏡の作動するチャネルから針を入れ、組織を囲むLESに進める。続いて再修正／拡大が、そして理想的にはLES内腔が狭くなるまで薬剤をLESのできれば筋肉層にだけでなく注入する。注射は時計の針で3時と9時の方向へ等分に分けられる。
【０１８２】
使用するのに好い細胞の種類は線維芽細胞および／あるいは前脂肪細胞／脂肪細胞で、括約筋と筋芽細胞の結合組織部分、滑らかな筋肉細胞、さらに線状筋肉細胞へ用い、また括約筋の筋肉組織部分へ使う。加えて、間葉幹細胞と上皮細胞も使える。交互して、結合組織細胞は筋肉部分に移植でき、筋肉細胞の種類または幹細胞は括約筋の結合組織に移植できる。
そして横隔膜ヘルニアを治療するには、生存に適した細胞複合体を手術中に直接に外科的に修復された組織に注射する。こうして外科治療でよくある悪い結果を補強する。
【０１８３】
GERDに適用できる意味ある詳細はここに参照でき、米国特許出願番号で盛り込まれる。60/037,961を優先する09/632,581（2000年8月3日出願）、60/163,734を優先する10/129,180（2002年5月3日出願）、PCT出願_____________2006年9月14日出願「組織の欠陥修復増加の構成と方法（Compositions And Methods for the Augmentation and Repair of Defects in Tissue）」。これら出願はGERDに適用でき本公開の一部を成す、付加的な情報詳細を提供する。
【０１８４】
細胞の種類と培養
ネイティブ細胞とは、同じ細胞の種類、または機能的に同様で、組織で交換される細胞の種類、あるいは細胞を受ける部分にある細胞の種類である。ネイティブ細胞は損傷した部分から、同じ組織の種類で負傷していないものから、または患者以外の臓器提供者の対応する組織から得られる。ここに設定する方法に即し使用できる細胞の種類には、他の場所で示されるものとここに使用できる細胞の例を表す次の分類を含む。角質化上皮細胞、湿った階層化障壁上皮細胞、外分泌腺上皮細胞、ホルモン分泌細胞、上皮吸収細胞（内臓、外分泌腺、泌尿生殖器路）、新陳代謝と貯蔵細胞、障壁機能細胞（肺、内臓、外分泌腺、泌尿生殖器路）、上皮細胞上皮閉鎖の体内空洞、推進機能がある線毛細胞、細胞外基質分泌細胞、収縮性細胞、血液免疫系細胞、感覚変換細胞、自律神経細胞、感覚器官と周辺神経細胞支援細胞、中枢神経系神経、神経と神経膠細胞、レンズ細胞、色素細胞、生殖細胞、ナース細胞。
【０１８５】
角質化上皮細胞：角質化上皮細胞は体内のさまざまな組織に、上記に示されるように存在し、以下を含む。例：表皮性ケラチン生成細胞（識別化表皮性細胞）、表皮性基底細胞（幹細胞）、指の爪と足指の爪ケラチン生成細胞、基盤基底細胞（幹細胞）、髄質毛幹細胞、皮質毛幹細胞、小皮毛幹細胞、小皮毛根鞘細胞、フックスレー層の毛根鞘細胞、ヘンレ層の毛根鞘細胞、外部毛根鞘細胞、毛マトリックス細胞（幹細胞）。
【０１８６】
湿った階層化障壁上皮細胞：湿った階層化障害上皮細胞は体内のさまざまな組織に、上記に示されるように存在し、以下を含む。例：角膜階層化扁平上皮乳頭腫上皮の表面上皮細胞、舌、口腔、食道、肛門管、尿道と膣の末端、角膜上皮の基底細胞（幹細胞）、舌、口腔、食道、肛門管、尿道と膣の末端、泌尿器上皮細胞（膀胱上皮と尿管）。
【０１８７】
外分泌腺上皮細胞：外分泌腺上皮細胞は体内のさまざまな組織に存在し、それは以下の通りである。外分泌腺上皮細胞は次を含む。例：唾液腺粘液細胞（多糖類が豊富な分泌）、唾液腺漿液細胞（糖蛋白酵素が豊富な分泌）、舌のヴォン・エブナー腺（味覚芽を洗う）、乳房腺（乳分泌）、涙腺細胞（涙分泌）、細胞耳の耳垢分泌（耳垢分泌）、エクリン汗腺暗細胞（糖蛋白分泌）、エクリン汗腺明細胞（小分子分泌）、離出分泌汗腺細胞（芳しい分泌、性ホルモンに敏感）、瞼のモール細胞（特に汗腺）、脂腺細胞（脂質豊富な皮脂分泌）、鼻のボーマン腺細胞（嗅上皮を洗う）、十二指腸のブラナー腺細胞（酵素とアルカリ性粘液）、精嚢細胞（精液構成要素の分泌、泳ぐ精子の果糖を含む）、前立腺細胞（精液構成要素の分泌）、尿道球腺細胞（粘液分泌）、腺細胞（膣液分泌）、リットル細胞の腺（粘液分泌）、子宮内膜細胞（糖質分泌）、気道と消化管の分離した杯細胞（粘液分泌）、胃上皮粘液細胞（粘液分泌）、胃腺酵素原細胞（ペプシノゲン分泌）、胃腺酸分泌細胞（塩化水素酸分泌）、膵臓腺房細胞（炭酸水素塩と消化力ある酵素分泌）、小腸のパネス細胞（リゾチーム分泌）、種類II肺胞細胞（界面活性剤分泌）、肺のクララ細胞。
【０１８８】
ホルモン分泌細胞：ホルモン分泌細胞は、前記の通り、体内のさまざまな組織内に存在し、例えば、下垂体前葉細胞、ソマトトロピン産生細胞、プロラクチン産生細胞、甲状腺刺激ホルモン（TSH）産生細胞、性腺刺激物、副腎皮質刺激ホルモン産生細胞などの下垂体前葉細胞、メラニン細胞刺激ホルモンを分泌する下垂体中間細胞、例えばオキシトシンやバソプレシンなどを分泌する大型細胞系の神経分泌細胞、例えばセロトニン、エンドルフィン、ソマトスタチン、ガストリン、セクレチン、コレシストキン、インスリン、グルカゴン、ボンベシンなどを分泌する腸管および呼吸器系の細胞、甲状腺上皮細胞や傍濾胞細胞などの甲状腺細胞、上皮小体主細胞や好酸性細胞などの副甲状腺細胞、例えばステロイドホルモン（ミネラルコルチコステロイドおよびグルココルチコステロイド）を分泌するクロム親和細胞など副腎腺細胞、テストステロンを分泌する精巣のライディッヒ細胞、エストロゲンを分泌する卵巣濾胞の内莢膜、プロゲステロンを分泌する卵巣濾胞の黄体細胞、腎臓の傍糸球状体装置細胞（レニン分泌）、腎臓の緻密班細胞、腎臓の極周囲の細胞、腎臓のメサンギウム細胞が含まれる。
【０１８９】
上皮吸収細胞：上皮吸収細胞は、前記の通り、体内のさまざまな組織内に存在する。上皮吸収細胞（腸管、外分泌腺、および泌尿器系にある）には、例えば、消化管刷子縁膜細胞（絨毛付）、外分泌腺線条管細胞、胆嚢上皮細胞、腎臓近位管状縁膜細胞、腎臓遠位縁膜細胞、輸出管無繊毛細胞、精巣上体主細胞および精巣上体基底細胞などが含まれる。
【０１９０】
代謝細胞および貯蔵細胞： 代謝細胞および貯蔵細胞は、前記の通り、体内のさまざまな組織内に存在し、例えば、肝細胞（肝臓の細胞）、白色脂肪細胞、褐色脂肪細胞、および肝臓の脂肪細胞が含まれる。
【０１９１】
関門機能細胞： 関門機能細胞は、前記の通り、さまざまな体内組織に存在する。関門機能細胞（肺、外分泌腺、および泌尿器系にある）には、例えば、I型肺細胞（肺の気腔部上皮）、膵臓導管細胞（中央腺房細胞）、（汗腺、唾液腺、乳腺の）非線条導管細胞、腎臓糸球体壁細胞、腎臓糸球体足細胞、（腎臓中の）ヘンレ係締薄層細胞、腎臓集合管細胞、および（精嚢、前立腺などの）導管細胞 が含まれる。
【０１９２】
体内閉鎖腔の裏側にある上皮細胞： 体内閉鎖腔の裏側にある上皮細胞は、前記の通り、体内のさまざまな組織内に存在し、例えば、血管およびリンパ管系内皮有窓細胞、血管およびリンパ管系内皮連続細胞、血管およびリンパ管系内皮脾細胞、化滑膜細胞（関節腔部、ヒアルロン酸分泌）、漿膜細胞（腹膜、胸膜、心膜の腔部の上皮）、扁平上皮細胞（耳の外リンパ部の上皮）、扁平上皮細胞（耳の内リンパ部の上皮）、微絨毛のある内リンパ嚢の円柱細胞（耳の内リンパ部の上皮）、微絨毛のない内リンパ嚢の円柱細胞（耳の内リンパ部の上皮）、暗細胞（耳の内リンパ部空間の上皮）、前庭膜細胞（耳の内リンパ部空間の上皮）、血管条基底細胞（耳の内リンパ部空間の上皮）、血管条周辺細胞（耳の内リンパ部空間の上皮）、クラウディウス細胞（耳の内リンパ部空間の上皮）、ボエッチャー細胞（耳の内リンパ部空間の上皮）、脈絡叢上皮細胞（脳脊髄液の分泌）、軟膜くも膜扁平上皮、眼の色素沈着した毛様体上皮、眼の色素沈着していない毛様体上皮、および角膜の内皮細胞が含まれる。
【０１９３】
推進力を有する繊毛細胞：推進力を有する繊毛細胞は、前記の通り、体内のさまざまな組織中に存在し、例えば、呼吸器系の繊毛細胞、（女性の）卵管繊毛細胞、（女性の）子宮内膜繊毛細胞、（男性の）精巣網繊毛細胞、（男性の）精巣輸出管繊毛細胞、中秋神経系の繊毛上衣細胞（脳腔被膜）が含まれる。
【０１９４】
細胞外マトリックス分泌細胞：細胞外マトリックス分泌細胞は、前記の通り、体内のさまざまな組織中に存在し、例えば、エナメル芽上皮細胞（歯のエナメル分泌）、耳の前庭器の半月面上皮細胞（プロテオグリカン分泌）、コルチ器官の歯間上皮細胞（有毛細胞を被う蓋膜を分泌する）、疎性結合組織線維芽細胞、腱線維芽細胞、骨髄細毛組織線維芽細胞、他の非上皮線維芽細胞、毛細血管周皮細胞、椎間板の髄核細胞、セメント芽細胞・セメント細胞（歯根の骨のようなセメント分泌）、象牙芽細胞・象牙細胞（歯の象牙質の分泌）、硝子様軟骨細胞、繊維軟骨細胞、弾性軟骨細胞、骨芽細胞・骨細胞、骨幹細胞（骨芽細胞の幹細胞）、眼の硝子体の硝子細胞、耳の外リンパ空間の星細胞、収縮細胞、赤色骨格筋細胞（徐速）、白色骨格筋細胞（高速）、中間骨格筋細胞、筋紡錘の核袋細胞、筋紡錘の核連鎖細胞、衛星細胞（幹細胞）、普通心筋細胞、節の心筋細胞、プルキニエ繊維細胞、平滑筋（多種）、虹彩の筋上皮細胞、外分泌腺の筋上皮細胞、および赤血球細胞などが含まれる。
【０１９５】
血液および免疫系の細胞：血液および免疫系の細胞は、前記の通り、体内のさまざまな組織中に存在し、例えば、赤血球（赤色の血液細胞）、巨球核（血小板前駆体）、単球、結合組織マクロファージ（多種）、表皮ランゲルハンス細胞、破骨細胞（骨中の）、樹状細胞（リンパ組織中の）、ミクログリア細胞（中枢神経系中の）、好中性顆粒球、好酸性顆粒球、好塩基性顆粒球、マスト細胞、ヘルパーT細胞、抑制T細胞、細胞障害性T細胞、B細胞、ナチュラルキラー細胞、網状赤血球、血液および免疫系の幹細胞および前駆細胞（多種）が含まれる。
【０１９６】
感覚変換細胞：感覚変換細胞は、前記の通り、体内のさまざまな組織中に存在し、 例えば、眼の光受容桿状体細胞、眼の光受容体の青感性錐体細胞、眼の光受容体の緑感性錐体細胞、眼の光受容体の赤感性錐体細胞、コルチ器官の聴覚内部有毛細胞、コルチ器官の聴覚外部有毛細胞、耳の前庭器の有毛細胞（加速および重力）、耳の前庭器のii型有毛細胞（加速および重力）、i型の味覚細胞、嗅覚受容体の神経細胞、嗅覚上皮の基底細胞（嗅覚神経細胞の幹細胞）、i型頚動脈小体細胞（血液PHセンサー）、ii型頚動脈小体細胞（血液PHセンサー）、表皮のメルケル細胞（触覚センサー）、触覚感受性の一次知覚神経細胞（多種）、低温感受性の一次知覚神経細胞、感受性の一次知覚神経細胞、痛み感受性の一次知覚神経細胞（多種）、固有感覚の一次知覚神経細胞（多種）、コリン作用神経系細胞などの自立性神経細胞（多種）、アドレナリン作用神経系細胞（多種）、ペプチド作用神経系細胞（多種）、コルチ器官の内柱細胞、コルチ器官の外柱細胞、コルチ器官の内側の支持細胞、コルチ器官の支持細胞、コルチ器官の境界細胞、コルチ器官の細胞、前庭器支持細胞、I型の味覚支持細胞、嗅覚上皮組織支持細胞、シュワン細胞、衛星細胞（封入周辺神経細胞体）、腸内神経膠細胞、ニューロン細胞などの中枢神経系神経細胞および神経膠細胞（多種）、星状膠細胞（多種）、および乏突起膠細胞などの感覚器官および周辺神経支援細胞、前水晶上皮細胞およびクリスタリンを含む水晶体繊維細胞、メラニン細胞などの色素細胞および色素沈着網膜上皮細胞、卵原細胞・卵母細胞、精子細胞、精母細胞な、精原細胞（精子細胞の幹細胞）および精子などの胚細胞、卵胞細胞などのナース細胞、セルトリ細胞（精巣中）および胸腺上皮細胞が含まれる。
【０１９７】
これらの細胞は、従って、本文中に記されている方法を使用することにより、本文中に記されているタンパク質およびさまざまな因子とともに移植および／または培養することができる。実施例の一部では、ヒト被験者の欠陥における欠陥の修正の方法は、対外で複数の生存細胞を培養して生存細胞数を増殖し、体外培養細胞および／またはECMを作成し、その血管を治療するために被験者の細胞中に体外培養された細胞および／またはタンパク質の有効量を入れることによる哺乳類細胞の使用の段階から成る。既に説明したとおり、前記の細胞には、幹細胞、胚幹細胞が含まれ、細胞は体細胞核移植によりクローン化され、細胞種は分化転換されるか、他の細胞種へ転換される。細胞は、本文中に記される通り、自己移植血清を含む培地または無血清培地で培養できる。
【０１９８】
一般に、これらのさまざまな細胞種、初代細胞、幹細胞、多能性細胞を含め、細胞種、組織中の細胞種の記述、およびその細胞の隔離および増殖に利用可能である適切な細胞および組織培養の手法は、例えば、Atlas of Functional Histology（機能性組織学の地図）、Kerr, J.B.、Mosby、1999年、Gray's Anatomy: The Anatomical Basis of Clinical Practice（グレイス・アナトミー：臨床診療の解剖学的基礎）、第39版、Standring, S.編、Elsevier、2005年、Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Techniques（動物細胞の培養：基礎的方法の手引）、Freshney, R.  I. 編、（Alan R.  Liss & Co., New York 1987）、Animal Cell Culture: A Practical Approach（動物細胞の培養：実践的アプローチ）、Freshney, R. I. 編、（IRL Press, Oxford, England（1986）、Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Techniques（動物細胞の培養：基礎的方法の手引）、Freshney, R.I. 、Wiley-Liss, Inc.、New York、2000年、およびMethods in Molecular Biology Volume 290 Basic Cell Culture Protocols 3rd Edition（分子生物学における方法、第290巻、基本的細胞培養計画、第3版）、Cheryl D. HelgasonおよびCindy L. Miller、Human Press Inc.、Totowa、New Jersey、2005年に記されており、これによりそれぞれが本文中に参照され、編入される。線維芽細胞、乳頭および網状の線維芽細胞を含む一部の細胞種の隔離および培養の特定手法は、米国特許申請連番第09/632,581（2000年8月3日出願）および第10/129,180（2002年5月3日出願）に記されており、これによりこれらは本文中に参照され、編入される。隔離とは、組織サンプルから精製された細胞集合を取得することを意味する。増殖とは細胞数の増加を意味する。一般に、増殖と分化は相互に逆に関連しており、細胞を分化させる傾向の培養条件は増殖を抑制する傾向である。これらの細胞は細胞倍増数を少なくして被験者の体内に導入するために採取されることになり、欠陥の治療に有害または活性がない可能性がある老化したに近いまたは老化した細胞の使用を避けることができるので、組織の酵素消化または組織から抽出された多数の細胞から始める方法が好ましい。
【０１９９】
組織欠損の増殖および修復の構成および方法
既にここで説明されている実施例は、実質上ここで再生された「組織欠陥の増殖および修復の構成および方法」と題するPCT出願＿＿＿＿＿＿＿＿（2006年9月14日出願）に記述されている材料および方法を組み合わせて使用されうる。
【０２００】
一部の実施例は、欠陥部またはその周辺部を組織修復または増殖させるために、自己細胞を生体外拡大培養させ、免疫原性の可溶性タンパク質を持つゲル化しない生理溶液に、自己細胞をけん濁させ、かつ患者の欠陥部に細胞およびタンパク質を蓄積することにより、患者の欠陥部を治療することから成り立つ。細胞は欠陥治療用の追加タンパク質の有無にかかわらずゲル化可能な溶液内に使用することができる。さまざまなタンパク質が記述されている。
数多くの治療に細胞増殖が使用されうるが、一部の欠陥は、組織または他の供給源から得た細胞を増殖させずに細胞の分離を行うことにより治療されうる。細胞株はドナーの組織から由来する細胞の初代培養と同様に使用できる。
【０２０１】
別の実施例は、欠陥を治療するために遺伝子キャリアを移植することによる遺伝子治療から成る。目的遺伝子を含むさまざまな細胞型はキャリアになり得る。タンパク質をエンコードする遺伝子を含むほかのキャリア形態も使用することができる。
【０２０２】
一般的に、結合性または結合組織細胞を含む老化組織では、少なめの水分または水和容量、少なめのプロゲステロンまたは基質含有量、および低めの基調または膨圧が示される。例えば、皮膚では全組織層において、特に皮層および皮下層においてこれは真実である。老化組織はしばしば細胞外マトリックス（ECM）が少なく、プロテアーゼの活性が高い。このような変化を改善する細胞（線維芽細胞など）および／またはタンパク質（プロテオグリカンなど）のような因子は、老化組織を特定の若い組織のパラメータや機能に修復または復活させることが可能である。
【０２０３】
十分な数の生きた細胞は、現代的な細胞培養技術を使用する場合、比較的小さな組織サンプルから得られうる。このように、組織サンプルを患者または他の供給源から手に入れ、組織から細胞を得、細胞数を増殖させ、かつ細胞を患者に再導入して患者の組織欠陥を治療することが可能である。培養された細胞を患者組織へ移植するのでは、移植細胞を新しい部位へ「順応」させるのが難しく、過去に適切な対処が成されたことがない。患者自身の身体の自己細胞を使用する場合でも、それでもやはり細胞は新しい部位に統合され、酸素を得る手段、栄養源、および代謝活性維持の手段を使用または形成しなければならない。
【０２０４】
生きた細胞は一般的に、移植後一時的に細胞を維持できる若干の内部資源を持つが、それでも移植後は迅速に順応する必要がある。例えば、細胞は新しい環境に適切に対応しなければならない。このような対応の一部は、細胞が新しい環境から受け取る合図に依存する。しかしながら、適切な合図がない場合には、細胞は不十分に対応するか、または死に至ることがありうる。順応過程はそれ故に、適した合図を直接細胞に提供できるように、移植プロセス中にタンパク質や他の生体分子を細胞に供給することによって、容易になりうる。そのようなタンパク質は、特定の代謝反応を刺激し、有用なタンパク質を生成させ、または別の方法で細胞の順応を支えるために生化学的な合図を提供しうる。さらに、そのようなタンパク質は、細胞固定へのサポートまたは移植部位の不必要な合図を覆い隠すことによってメカニズムの効果をもたらし得る。そのようなタンパク質の一部は、細胞移植時に供給されるか、または細胞によって供給される有用な生体分子を蓄積する役割を持ちうる。
有用なタンパク質のいくつかには免疫原性タンパク質がある。過去に一部の科学者たちは、移植に関する細胞およびその他の物質は基本的に非免疫原性である必要性を強調したが、適切に管理された中で免疫原性タンパク質を使用することは有用でありうる。
【０２０５】
タンパク質という用語にはプロテオグリカン、さらに少なくとも3残基をもつペプチドが含まれる。残基は、自然界で見つかるアミノ酸、または合成残基、例えば変化した骨格または側鎖をもつ残基でありうる。タンパク質はさまざまな供給源から、例えば、自然源、化学合成によるもの、組み換えDNA、または細胞培養の翻訳系から得られうる。タンパク質断片が使用されうる、タンパク質が他の化学物質、ポリマー、もしくはタンパク質と組み合わされうるまたは修飾されうる、および選択的に翻訳されたバージョンが使用されうることが認識されている。
【０２０６】
ある実施例では、溶液はゲル化しない、および／またはタンパク質はゲル化されない、および溶液および／またはタンパク質は身体に導入される際にゲル化しない。その代わりにタンパク質は、導入される細胞に、および／または移植部位で細胞またはECMおよび組織に、自由に関係する。細胞は欠陥治療用の追加タンパク質の有無にかかわらずゲル化可能な溶液内に使用することができる。細胞は必要に応じてさまざまな組織培養マトリックスとともに使用されうる。一般的に、タンパク質は移植部位または移植部位の近くで効果を発揮する。同時に、非ゲル状態のため、タンパク質は、ゲル化タンパク質または交差結合によりヒドロゲルを形成するタンパク質に対して、有効性および拡散性が強化された。免疫原性タンパク質の場合、移植された細胞の「順応」を強化するために免疫反応を司る働きをしうる。ゲルは、静止状態では一部がけん濁またはコロイド分散によると想定される半固形でゼリー状の状態に言及する。交差結合されたゲルは不溶性である。ゲル化可能な溶液は、例えば時間、pH変化、または温度変化でゲル化するゲル、溶液、けん濁液または分散を形成できる液体である。
【０２０７】
別の有用なタンパク質または因子は既定のアポトーシス阻害因子である。既定は、患者に導入する特有の因子の選択に言及する。理論上、細胞培養または組織供給源に由来する複合化合物に細胞がある場合、一部の因子は細胞と一緒に時々偶然に患者に導入されうることが認識されている。しかし、そのような因子が偶然に取り込まれることは、特定の濃度、量、または望ましい効果を達成するために意図的に導入および／または調整することができる既定因子を選択することとは異なる。アポトーシス阻止および／またはアポトーシス阻害は、患者に導入した後の調整期中に寿命を延ばすことによって、移植された細胞の「順応」を有利に強化する。因子とは広義語で、タンパク質、天然起源または合成起源の分子、プロテオグリカン、多糖類、グリコサミノグリカン、ホルモン、および小分子の薬を含む生物学的に活性な分子に言及する。
【０２０８】
科学文献には、特定の細胞のアポトーシスを阻害する因子について記述している研究が多く載せられているので、適用可能な因子を選択するためのガイドとして普通にその文献を使用できる。以下のアポトーシス因子の詳細な考察では、適用可能な因子の選択における詳しい情報を提供している。
【０２０９】
別の有用なタンパク質には血清タンパク質がある。血清タンパク質が有利な点の1つは、それが自己またはその他のドナー供給源から簡単に得ることができるという点である。血清タンパク質は、生体外での細胞維持に重要なことが証明されており、また同様に、移植部位の生体内での細胞維持に有効性がある。血清タンパク質の有効性は完全に理解されている訳ではないが、ある意味では細胞接着因子、成長因子、さまざまな輸送タンパク質および／またはプロ凝固因子の存在に関連しうる。一般的に、生体外で細胞培養に使用される血清因子は、移植される細胞と組み合わせて適用される場合に有利に使用されうる。ある実施例では、血清タンパク質は溶液またはけん濁液内にあり、ゲル化または交差結合しないので、細胞との相互作用が完全に可能で、随時受容体相互作用、シグナル伝達経路の形質導入、内面化および／または細胞ダウンレギュレーションの傾向がある。血清因子の詳細は以下に記述されている。実施例は、生体外で細胞培養を増殖させ、細胞および血清タンパク質から成る組成を作成し、欠陥部位で組成を蓄積することにより欠陥部位またはその周辺の組織を修復または増殖させて、患者の欠陥部位を治療する方法である。細胞は例えば自己性でありうる。
【０２１０】
別の有用なタンパク質にはプロテアーゼタンパク質がある。プロテアーゼはタンパク質を分解する。それ自体は、細胞および／または細胞に必要な細胞因子にダメージを与える。以下に今まで以上に詳しく記述されているが、プロテアーゼ阻害剤はプロテアーゼ活性を有利に制限するために移植部位に導入されうる。実施例は、生体外で細胞培養を増殖させ、既定のプロテアーゼ阻害因子を欠陥部位で組成を蓄積することにより欠陥部位またはその周辺の組織を修復または増殖させて、患者の欠陥部位を治療する方法である。細胞は例えば自己性でありうる。
【０２１１】
他の有用なタンパク質および因子は凝固を誘発するタンパク質またはその他の因子である。プロ凝固タンパク質は、移植部位の失血および出血の低減に有用である。これらのタンパク質はまた、細胞数の移植部位への導入を強化する多くの細胞型に対してマイトジェン性である。
このようなタンパク質や他のタンパク質は、生体外での細胞の増殖および／または欠陥の治療に有用である。
【０２１２】
このようなタンパク質および他のタンパク質は、生体内に移植される予定の組織を生体外で3次元的に合成するのに有用である。望ましくは、組織成分が生体内環境を綿密に刺激するのがよいが、組織構成は機能的だが、自然の生体内環境とは異なる。本実施例には器官または組織の生体外合成を含む。
欠陥治療の構成は、細胞およびタンパク質またはここで記述されている因子を混合することによって形成されうる。従って、自己細胞または自己細胞は、細胞を移植部位の導入する手助けをする有用なタンパク質と併用しうる。
【０２１３】
さらに本発明は、例えば、細胞、タンパク質、またはここで説明されるその他の因子に加えて、または組み合わせてヒアルロン酸またはBOTOXを使用するような、従来の患者の組織の治療法との併用使用が可能である。従って、治療前、治療時、または治療後に既知の治療法との併用が可能である。例えば、ヒアルロン酸またはBOTOXはしわの治療に細胞と併用できる。BOTOXはボツリヌストキシンのブランド名で、非常に免疫原性であるが、神経筋相互作用のために、うまくしわをフリーズする。従って、細胞療法前または後に平行して注入されるBOTOXは、しわなどの欠陥に対する短期間および長期間の増殖に使用されうる。コラーゲン（ブランド名：ZYMED またはZYPLASTなど）のような市場で入手可能なその他の治療にもいえる事である。ヒアルロン酸（ブランド名：RESTYLANE）は低い免疫原性を持つが、細胞治療とともに短期間および長期間の増殖にも有利である。カルシウムヒドロキシアパタイト（ブランド名：Radiesse）、ポリメチルメタクリエート（ブランド名：Artecoll）または別のタンパク質類のようなポリマーを含むその他の生体材料のブランド品はまた、上記の状況で使用可能である。
【０２１４】
免疫原性
細胞またはタンパク質の移植は免疫反応を起こす可能性がある。非自己細胞とは異なって、自己細胞は免疫原性タンパク質と併用することができ、また免疫原性剤との相性の欠落が予測できるので、細胞は免疫系からの特異的な攻撃を受けずにいられる。
【０２１５】
免疫反応は、導入された細胞が宿主拒否反応を起こさない間、組織の欠陥治療に有利になりうる。免疫原性剤は、免疫細胞および免疫反応によって産生されるサイトカインを含む多くの炎症反応の特性を活性化させる免疫反応を誘発することが可能である。例えば、免疫反応は局部炎症および紅斑を起こす。炎症および紅斑は血流を増加させ、栄養の部位への配達を促進する。白血球、とりわけマクロファージおよび多形核型は、部位に移動し、サイトカインまたは線維芽細胞または細胞による結合組織マトリックスの蓄積を制御する成長因子を産生する。この一連の後には線維増殖が続き、線維芽細胞の急増および細胞外マトリックスの蓄積をもたらす。血管形成がおこなわれ、その結果導入された細胞の生存および増殖を増やすのに必要な栄養を運ぶため、局部の血液および栄養供給が増加する。マクロファージおよびその他の免疫細胞は成長因子およびサイトカインを分泌するので、導入された細胞の生存および増殖を高める。炎症が低減すると、血管形成が中止され、線維増殖が終了する。
【０２１６】
免疫反応はまた、導入局部周辺の瘢痕化を起こす。瘢痕それ自体は組織を増大できる。瘢痕は、コラーゲンの合成およびその他の細胞外マトリックスタンパク質および分子を増加させる。瘢痕は、細胞の移動が欠陥の目標部位に妨げられないように細胞の局在を維持できる。変化した血管系パターンが、瘢痕、肉芽組織およびコラーゲン、およびその他の細胞外マトリックスの蓄積に見られ、リモデリングが新血管形成の経路に沿って起こる。
異種は、その他の種からの供給源（組織、細胞、タンパク質、巨大分子、分子）に言及する。同種または同族は、同じ種内の別の個人からの供給源に言及する。自己生成または自己由来は、同じ個人からの供給源に言及する。
【０２１７】
免疫原性反応
中和抗体、結合抗体、または過敏性反応は免疫原性反応の種類である。反応はT細胞の手を借りずに行われうるので、遷移は薬物動態を変化させ、サンプルの抗体が得られない。細胞性免疫反応は、 HYPERLINK "http://encyclopedia.laborlawtalk.com/Antibodies" 抗体を伴わない HYPERLINK "http://encyclopedia.laborlawtalk.com/Immune_response" 免疫反応である。体液性の免疫が抗体に関与している。免疫原はB細胞またはT細胞の反応を引き出し、その反応による生成物と相互作用をもつ。免疫寛容原は抗原で、免疫寛容を誘発する。
【０２１８】
免疫原性因子
サイズ、自己抗体、変性、凝集、形、アジュバント  
製品の起源、一次構造
血清中のタンパク質は、患者の年齢に基づいて免疫原性であり得る。患者の年齢が高ければ高いほど、前進性グリコシル化終末産物（AGE）の量が多い。AGEは、アミロイド、ヘモグロビン、アルブミン、およびβ2ミクログロブリンなどの多数の血清中のタンパク質に含まれる。AGE生成物である細胞外マトリックス（ECM）は、コラーゲン、エラスチン、β-アミロイド、神経原線維のもつれ、リポタンパク質、酸化LDL、（AGE）修飾LDLである。合成ポリペプチドの抗原はリジン（ポリ-L-リジン）を含むことができるアミノ酸で構成される。
欠陥を治療するために、細胞構成の一部である場合は、単独および0％以上100％未満なら、免疫原性剤を0％以上100％v/vまで、または0％以上100％w/wまで濃度を変化させることができる。
【０２１９】
細胞および血清型
細胞は一般的に束縛されない多能性細胞から分化した終末細胞への分化段階を経て成長する。分化は、次第に特定化される細胞のプロセスで、第一段階から他の安定段階まで移行することによって特徴付けられる。さまざまな細胞型を介する分化の経路および成長は細胞の系譜である。完全な未分化細胞の例には全能性胚細胞または生殖細胞がある。未分化細胞は末端分化を行っていない細胞を表わし、従って完全に未分化またはほんの部分的に分化しているだけである。細胞の末端分化は通常生体組織で見つかり、非分化細胞の、最後の正常な分化段階を表わす。例えば、網状または乳頭皮膚線維芽細胞は末端分化細胞の一例であるが、完全に網状または乳頭皮膚線維芽細胞に分化する前は、皮膚の細胞またはその他の前駆細胞は皮膚線維芽細胞の系譜内で非分化または部分的に分化した前駆細胞である。
【０２２０】
使用可能な細胞型は成人、胎児、新生児、臍帯、または体細胞核の移植からのもので、幹細胞として現われる。細胞は、初代培養として生きた供給源から直接分離、または細胞株への成長が可能である。幹細胞は、生殖細胞を含むどんな細胞型の系譜でも生成する可能性をもつために、全体的に非分化が可能（分化全能性）、または制限された細胞型または複数の系譜のセットを形成するために、部分的に分化（多能性）が可能である。幹細胞は自己または異種の供給源からが可能である。成体幹細胞の例としては、造血幹細胞、骨髄幹細胞、非分画骨髄幹細胞、間葉幹細胞、神経幹細胞および多能性成体前駆細胞がある。骨髄細胞は、造血幹細胞、間葉幹細胞、多能性成体前駆細胞、および前駆内皮細胞の4つの細胞系譜を含有できる。
【０２２１】
ESおよびその他の非自己幹細胞は、生体外および生体内で分化または成長するにつれて非自己免疫原性タンパク質および分子を発現する。体細胞核の移植によって得られる胚幹細胞のような、ドナー／レシピエントの不適合性および移植拒絶反応を克服するために細胞の修正がなされない限り、胚盤胞から確立される胚幹細胞、胎児の生殖細胞から確立される胚生殖細胞株、胚様体からは幹細胞、およびこれらの供給源から確立される下流の中間幹細胞は、異種として使用可能である。
【０２２２】
分化転換は、1つの細胞型から別の細胞型に変換できる細胞に言及する。分化転換は、末端分化細胞を他の細胞型に変換することができる。
1つの細胞型を望む細胞型、すなわち細胞の分化転換または前駆細胞の分化のどちらかへの変換は、生体外または生体内のどちらかで成し遂げることができる。細胞の増殖前、増殖中、または増殖後に生体外における細胞外マトリックスを追加することによって（特に、望む細胞型からのECM）、細胞を望ましい細胞型に変換することができる。別の方法では、望ましい標的細胞表現型からの細胞抽出物は、望ましい細胞型を生成するために細胞に加えることができる。3番目の方法では、望ましい細胞型をもつ細胞の共培養は、望ましい細胞型に変換することができる。別に、一時的な方法で、特定のホルモンおよび／または成長因子を細胞に追加することで、望ましい細胞型を作り出すことができる。特定の細胞表現型の維持は、望ましい細胞型のECM，細胞抽出物、望ましい細胞型の共培養、および成長因子またはホルモンなどのその他の因子が継続的に存在することによって成し遂げられる。生体外での細胞外マトリックスまたは細胞抽出物は、組織または細胞型の存在から、または望ましい細胞型の培養および／または増殖から得ることができる。望ましい実施例では、前駆細胞の分化、細胞型の分化転換、および特定の細胞表現型の維持は、望ましい細胞型ECMの細胞型を培養により生体外で成し遂げることができ、および生体外で望ましい細胞型、または望ましい組織ECMから得ることができる。生体内では、望ましい細胞型環境（細胞外マトリックスまたは特定のそのままの細胞型）への移植は、移植された細胞を望ましい細胞型に変換できる。細胞を望ましい細胞型に適切に分化または分化転換するように、一時的、順次的、および／または上記の方法および空間要素を加える上述の方法およびその他の方法を使用することができる。
【０２２３】
三次元または二次元で合成されたECMを使用することができる。細胞表現型の維持、細胞の生存、およびアノイキス阻害をさらに確実にするために、ECMを移植に含むことができる。異種、同種、または自己ECM、もしくはその構成要素は、自己または非自己細胞とともに使用できる。使用可能な、天然および合成マトリックスは、生分解性であることが望ましく、時間とともに分解またはその他のメカニズムによって除去される免疫原性の決定因子を含むことができる。マトリックスには、さまざまな物理学的形状の分子を含むことができる。それは、骨格、ナノ線維、スポンジ、泡、および多くのポリマー型、バイポリマー、タンパク質、帯電または疎水性の表面などで、構成要素として使用できる。マトリックスは、各層に異なるタンパク質、分子、およびポリマーを持つ多重構造を作ることができる。マトリックスは、移植に有利な各種のタンパク質の全体または部分に含むことができる。マトリックスは、マトリカイン、ECMタンパク質のモチーフまたはドメイン、MMPまたはECMレセプター阻害剤、例えばインテグリン、成長因子、サイトカイン、ケモカイン、一連のプロ凝固、プラスミン分解部位、一連のプロ炎症性、およびその他の多数の可能性などを含むことができ、手に入れたい細胞増殖、分化、およびその他の機能転帰を促進できる。培養内の細胞は密集した3Dマトリックス（例えば、接触阻害を克服する、適切な血清の補給を介して）を作り出すことができ、3Dマトリックス内の細胞は、はっきりと異なる種類の接着を形成する。フィブロネクチンの長い原線維または3Dマトリックス付着物を含む線維状の接着物は、インテグリンα5β1およびフィブロネクチンに依存する。細胞は、2Dマトリックスまたは3Dコラーゲンゲルよりも、より迅速に3Dマトリックスに接着し、より迅速に移動、増殖、形態学的な変化を行う。
【０２２４】
血清が使用される場合、培養細胞および移植細胞に望ましい実施形態は自己血清の使用である。家族の自己血清、とりわけ遺伝子が厳密に適合するものは、家族から血清が得られる場合に置き換えて使用できる。古い血清ではなく、若い血清には、より良い成長および増殖、細胞の接着および移動、および細胞表現型の維持または分化を促進する因子が含まれている。若い血清は幹細胞および分化された細胞の増殖を促進する。古い血清と反対に、若い血清は、異なる濃度および／または型の成長因子およびホルモンを含む若い表現型に関係する因子を含む。関係のないヒトからの若い血清は、望ましい実施例、とりわけESまたは幹細胞の培養に使用することができる。
【０２２５】
細胞型は、血清を含まないか、またはヒトまたは自己血清を含む細胞培養培地で生育することができる。このような血清培地の条件は、未分化細胞の維持または未分化細胞を部分的または完全に分化細型の段階に分化するために使用することができる。望ましい実施例では、ESまたは幹細胞が別の細胞型に分化されるのを妨げるために、支持細胞層として被験者自身の線維芽細胞を使用することができる。その他のヒト細胞型および非自己ヒト細胞は、支持細胞層の代替法として使用することができる。また、上述の細胞型からのECMおよび成長因子は、細胞の代わりに、または支持細胞層の細胞と組み合わせて使用することができる。動物血清は、病気を伝染させたり、または細胞を免疫原性して宿主より拒絶されたりする可能性がある汚染があるという不利な点をもっている。ウシ血清には、ES細胞に吸収されるN-グリコシル・ノイラミン酸を含まれる。このシアル酸は、ヒト血清に存在するシアル特異抗体に免疫反応を起こさせる。動物血清は汚染物質を含み、従って幹細胞の免疫原性を変えることが可能なので、その結果、幹細胞の免疫原性を増加させ、続いて宿主による拒否反応を起こす。動物血清はまた、同様な成り行きで同様な方法により、正常な非幹細胞を汚染させることが可能である。
【０２２６】
ヒト血清は、胚幹細胞、その他の幹細胞型、および体細胞型に存在するこの問題を防ぐことができる。細胞の成長を強化するための、胚幹細胞、その他の幹細胞型、および体細胞の培養に望ましい血清は、移植された被験者の血清、または若いヒト血清である。望ましい実施例では、被験者からの自己血清が、被験者に移植されることになる細胞の培養に使用される。このような細胞は、幹細胞、分化された成体細胞、胎児および幼若細胞を含む自己細胞と同様に非自己細胞であり得る。別の望ましい実施例では、一般集団よりも、家族などの遺伝的に適合する血清または遺伝的に被験者に近い個人からの血清を細胞の培養に使用することができる。
【０２２７】
別の望ましい実施例では、細胞を培養するために、若いヒトからの血清が被験者の血清または古い血清の代わりに使用される。その結果、組織幹細胞の促進を含んだ、細胞がより良く生存および増殖する。その他の血清供給源としては、あらゆるヒトの血清が可能である。羊水は、細胞培養においてヒト血清の供給源になりうる。血清を含まない培地も同時に使用することができる。使用可能なその他の血清としては、臍帯血清または血液および卵胞液または血清がある。血清を含まない培地内で、成長因子（インシュリン、セレニウム、トランスフェリンなど）、ミルク、およびデキストリン、アガロースのような砂糖代替物質を使って、血清を含まない条件を使用することができる。これらの代替的な血清の供給源の利点には、細胞の増殖能力の増加、老化の減少、および培養された体細胞のアポトーシスがある。
【０２２８】
その他の望ましい実施例では、若い全血液、分画された血液、血漿、および／または血清が、被験者の組織または全身に移植または注入される。若い全血液または分画された血液は、ホルモン、成長因子のように（若い）血漿または血清でも見られるその他の因子、および比較的古い組織または病気の組織を機能回復または機能改善させることができるその他の因子と同様に、前駆細胞を含むことができる。動物血清または動物支持細胞型（例えば、細胞共培養）は、ある細胞の応用に使用することができる。
【０２２９】
生体外で細胞を増殖するために使用される血清の濃度は、細胞型および細胞増殖のタイプ（例えば、マトリックス）に依存するが、0％以上100％の間で、望ましい濃度範囲は20％未満である。血清は、0％以上100％未満の範囲の濃度の移植において細胞に加えることができる。移植中、細胞なしで使用される血清は、0％から100％の濃度で使用することができる。
【０２３０】
血清由来のタンパク質は、一つずつ別々に細胞培養培地に使用することができる。血清由来のタンパク質は、細胞増殖プロセスの培養培地へ、または移植部位へ加えることができる。血清由来のタンパク質は、異種、同種、自己、および／または組み換え、ペプチド供給源、およびその他の供給源から得ることができる。血清由来のタンパク質は、随意に免疫原性であり得る。
若い細胞には、例えば、若年成人、十代前、新生、および胎児細胞が含まれる。
【０２３１】
タンパク質および巨大分子
さまざまなタンパク質またはその他の巨大分子が、これらの方法に使用されうる。
上記に記載されている、および／または血清、ECM，成長因子、サイトカイン、マイトジェン、ホルモン、およびその他に存在している因子のどれでも、別々に、または目的組織または全器官、または目的身体に加えることで細胞と組み合わせて本発明に使用することができる。組織の欠陥に対する利点が見られる場合、これらの因子の阻害剤を使用することができる。また、タンパク質の機能を代表する完全なタンパク質、小部分、ドメイン、モチーフ、およびペプチドなどの全型が使用できる。これらの型は、天然の供給源、組み換え、化学合成、タンパク質分解、およびその他の数々の人工的な方法で手に入れることができる。タンパク質の自己、同種、または異種の供給源は使用可能である。
【０２３２】
追加の有用なタンパク質および因子は、米国特許出願第09/632,581号（2000年8月3日出願）で、これは第60/037,961号に対して優先権を主張している；第10/129,180号（2002年5月3日出願）では、第60/163,734号に対して優先権を主張している；2006年9月14日出願のPCT出願＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿題名「組織欠陥の増殖および修復の構成および方法」、および2005年9月21日出願の第60/719,743号はここに言及することにより本文書に加えられるものとする。
【０２３３】
細胞外基質
細胞外基質（ECM）は哺乳類組織中の細胞を取り巻く構造的存在である。細胞とタンパク質および／または因子の異なった組み合わせを相互に用いて欠陥の治療が行われる。細胞外基質も多くの血清タンパク質、成長因子、サイトカイン、ケモカイン、ホルモンを含む。
【０２３４】
細胞外基質分子の例には、アネキシン、軟骨基質タンパク質（コンドロネクチン）、コンドロアドヘリン、コラーゲン、象牙質細胞外基質タンパク質、エラスチン、フィブリリン、フィブリン（fibrin）、フィブリノゲン、フィブロネクチン、フィブリン（fibulin）、ゼラチン（変性コラーゲン）、特定の糖タンパク質、特定のグリコアミノグリカン（GAG）、成長因子、ヒアルロナン、ラミニン、タンパク質を結合させている潜在的な転換成長因子-β、リンクタンパク質、基質GLaタンパク質、ミクロフィブリル結合糖タンパク質、脂質、単糖類、ニドゲン、オリゴ糖、オステオカルシン、オステオネクチン、オステオポンチン、特定の多糖、プロアルギン、プロコラーゲン、多数のプロテオグリカン、特定の血清タンパク質、テネイシン、トロンボスポンジン、ビトロネクチン、フォン・ヴィレブランド因子などが含まれる。
【０２３５】
細胞外基質はアンコリン、アンキリン、フィブロネクチン、オステオネクチン、ビトロネクチン、プロコラーゲン、コラーゲンの種類、ラミニン、フィブリリン、エラスチン、プロテオグリカン、アネキシン、インテグリン、成長因子および血清タンパク質（例えば、アルブミン）で構成されており、これは細胞外基質との関連で高分子細胞外基質となりえる。
基底膜はシート状のECMで、表皮が皮膚の中で真皮と隔てられているように、上皮組織および間葉細胞の一部は基底膜で結合組織から隔てられている。皮膚の中で基底膜は、コラーゲンタイプIVのラミニンを通して表皮・真皮接合部位と結合している。
【０２３６】
細胞接着媒介タンパク質
多くの細胞外基質分子は細胞接着媒介タンパク質である。高分子の中では特にCAM（免疫グロブリン・スーパーファミリー細胞接着分子）、インテグリン、カドヘリン、レクチン、セレクチン、ECM、血清タンパク質が挙げられる。接着、細胞伸展、細胞移動、細胞増殖は細胞接着の際の細胞活動に続く段階である。
【０２３７】
インテグリン  ECMおよび血清タンパク質のインテグリンに対するリガンドの例としては、コラーゲン、ラミニン、ニドゲン／エンタクチン、フィブロネクチン、テナスチン、フィブリリン、フィブリン（fiblins）、骨シアロタンパク質、プロテオグリカン、パールカン、ビトロネクチン、フィブリノゲン、フィブリン（fibrin）、トロンボスポンジン、フォン・ヴィレブランド因子、ゼラチン、変性コラーゲン、その他の変性ECMまたは血清タンパク質、血液凝固因子X、ICAMおよびそのイソ型、VCAM、MAdCAMおよびオステオポンチンが挙げられる。
ディスインテグリンは、ポリペプチドまたはRGD配列を含むタンパク質であり、インテグリン受容体を結合することによりインテグリン−リガンドの相互作用を競合的に抑制する。
【０２３８】
CAM:  CAMは、インテグリン、免疫グロブリン細胞接着分子、カドヘリン、セレクチン、CD44関連分子および膜貫通プロテオグリカンといった異なるグループで構成されている。
ICAM VCAM-1 PECAM-1 ALCAM BOC、CDO、CEACAM-1、CAMのL1ファミリー、コンタクチン（-1から-6まで）ESAM、キレル2、ネクチン（例えば-2、-4）、OCAM、ICAM（-1から-5）JAM-A NCAMおよびNrCAM RAGE（糖化最終産物の受容体）リガンドは、AGE（糖化最終産物）、アミロイドβペプチド、HMG-1およびS100タンパク質スーパーファミリーメンバー、RAGEの一部である。
【０２３９】
カドヘリン
レクチン 
レクチンファミリーの構成員の一部としては、CD 72、CD94、コンドロレクチン、CL-P1、CLEC-1、-2、DC-SIGN、DC-SIGN関連タンパク質、DCI受容体、デクチン-1、2a、DLEC、フェセプシロン（Fcepsilon）RII、フィコリン、ランゲリン、レイリン、LOX-1がある。
シアロ接着因子はMAG、CD22、CD33およびシュワン細胞ミエリンタンパク質で構成される。コレクチン（レクチン様のコラーゲン）にはマンナン結合タンパク質、コングルチニン、肺表面タンパク質SP-AおよびDが含まれる。ガレクチンは炭水化物結合タンパク質のファミリーである。
【０２４０】
培養細胞は濃厚3-D基質（例えば、接触阻止を越える適切な血清補充）を生成することができ、これらの3-D基質内の細胞は明確な段階の接着を形成する。
フィブロネクチン（血漿、細胞、組み換え断片III-C、組み換え断片III-Cおよび血漿フィブロネクチン錯体、フィブロネクチンの小断片、フィブロネクチン様の人口タンパク質、スーパーフィブロネクチン、ヘパリン結合断片のフィブロネクチン領域の30kDa、ゼラチン結合断片の45kDA、ヘパリンおよびゼラチン結合断片の70kDa、フィブロネクチン接着促進ペプチドのTyp-Gln-Pro-Pro-Arg-Ala-Arg-IleまたはLys-Asn-Asn-Gln-Lys-Ser-Glu-Pro-Leu-Ile-Gly-Arg-Lys-Lys-Thr）間葉細胞、線維芽細胞、上皮、内皮および神経細胞に接着する。
ゼラチン、ビトロネクチン、ラミニン、テネイシン
【０２４１】
細胞外基質接着タンパク質
細胞外基質タンパク質には、他の細胞外基質タンパク質および自己と相互作用する結合部位がある。
糖タンパク質
細胞接着媒介タンパク質は、その大部分が糖タンパク質であるが、トロンボスポンジン、フォン・ヴィレブランド因子、フィブロネクチン、ビトロネクチン、コンドロネクチン、プロコラーゲンおよびコラーゲン（タイプI、III、IV、VおよびタイプII  XIXの多く）、ラミニン、フィブリリン、フィブリノゲン、エンタクチン、MAGP、LTBP、オステオポンチン、プロコラーゲンCプロテイナーゼ、象牙質細胞外基質、リン酸ホリンおよびアネキシンを含む。多くの接着糖タンパク質でフィブロネクチンのタイプIIIとEGFのリピートが見られる。RGD（Arg-Gly-Asp）配列とRGDを含むポリペプチドのプロセスの多くは、受容体のインテグリンファミリーを通して細胞の接着を媒介する。
【０２４２】
細胞の接着領域は、フィブロネクチン（IIIのリピート領域）およびその他のタンパク質の細胞結合領域を含み、細胞結合領域は、短い細胞結合アミノ酸配列を含む。これにはRGD（Arg-Gly-Asp）、RGDS（Arg-Gly-Asp-Ser）、RGDSP（Arg-Glp-Asp-Ser-Pro）、LDV（Leu-Asp-Val）、REDV（Arg-Glu-Asp-Val）およびPro-His-Ser-Arg-Asnアミノ酸配列が含まれる。これらの細胞接着配列は合成分子、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質といった分子とともに、またはその一部として用いることができる。
【０２４３】
タンパク質を内包するRGD配列は、フィブロネクチン、エンタクチン、ラミニン、コラーゲンおよびフィブリノゲンを含む。細胞接着に関連してこのRGDを内包し、タンパク質コラーゲンを媒介するペプチドには、コラーゲンタイプのIからXIX（1-19）までによって構成される少なくとも34の遺伝子でコードされた、19の明確な遺伝子型が存在する。
【０２４４】
コラーゲンンにはいくつかの領域が含まれる。コラーゲンは他のいくつかのタンパク質と相互作用する。コラーゲンIはDGEA細胞接着部位を有し、コラーゲンIIIはコラーゲン2の領域とコラゲナーゼ切断部位を含む。
皮膚など老化および光損傷の影響を受けた組織では、コラーゲンおよびその他のECMとの間で起きる線維芽細胞の相互作用が減少する。
コラーゲン、CyCAP、CCN CYR61、CCN 2、3、4、5、6、ジストログリカン、可溶性トロポエラスチン、エラスチン、細胞外基質タンパク質-1（ECM-1）、ECM-2、フィブリン-1、-2、-3、-4。
【０２４５】
フィブロネクチンには、フィブリン、ヘパリン、ゼラチン、コラーゲンおよび因子XIIIaトランスグルタミナーゼの架橋結合による結合領域が含まれる。細胞に結合しているフィブロネクチンはアノイキスあるいは独立したアポトーシスを抑制する。フィブロネクチンは、RGD、IDAPS、LDVおよびREDV細胞接着部位を有する。タンパク質はフィブリン、ヘパリン、コラーゲン、DNAおよび細胞との結合部位を有する。フィブロネクチンには、タイプI、II、IIIのリピート、ED-A、ED-Bおよび代替的に接着されたIIICS領域が含まれる。
【０２４６】
レトロネクチンは商業的な組み換えDNAバージョンの細胞接着媒介タンパク質であり、フィブロネクチンの細胞結合領域断片（C279）は三つのタイプIIIリピート（III8-10）で構成されている。プロネクチンF、プロネクチンLはラミニンアルファ鎖によるIKVAVエピトープを示す試薬である。
【０２４７】
フィブリリン-1および-2、フィブリノゲン、フレム1、ラミニン、潜在的な転換成長因子-β結合タンパク質、ミクロフィブリル関連糖タンパク質1および2、ミスティーク、ニドゲン、オステオネクチンまたはSPARC、スポンジン1および2、テネイシン-C、-R、-X、-Y、トロンボスポンジン-1、-2、-3、-4、ビトロネクチン（VN）が血漿およびECM、フォン・ヴィレブランド因子、オステオポンチン、骨シアロタンパク質、オステオカルチン、基質Glaタンパク質内で細胞接着を媒介する。コンドロネクチン、コンドロアドヘリン、象牙質細胞外基質タンパク質リン酸ホリン、象牙質シアロタンパク質、象牙質基質タンパク質（DMP1）。基質細胞外リン酸糖タンパク質（デントニン）が歯髄幹細胞の増殖と分化、βig-h3（TGFβによる遺伝子生成）を刺激する。
【０２４８】
追加的ECMタンパク質
酵素はECM内に存在する。ECMコラーゲン、エラスチンおよびその他のタンパク質との架橋結合と安定化のためにリシルオキシダーゼおよびトランスグルタミナーゼが必要である。BMP-1はECM前駆細胞タンパク質の鎖状構造を開裂し、ECMタンパク質へと成熟させる。メタロプロテアーゼ、ADAMTS、スーパーオキサイドジムスターゼ（SOD）は細胞外流動体の中にあり、抗酸化剤として機能する。多くの組織が提示。その他のSODの形態にはマンガン、銅および亜鉛SODがある。組織トランスグルタミナーゼ（tTG）、凝固トランスグルタミナーゼ因子XIIIa、リシルオキシダーゼ（LOX）、1ヘパラン硫酸（HS）硫酸転移酵素HS6ST2様のキチナーゼ、エンドグリンエプフリンタイプAおよびB、細胞外基質ヒストンH1フィブスタチンFP-1は細胞外基質タンパク質であり、毛周期に基づく方法（例えば、毛周期成長期のみでその他の時期には発現しないなど）で濾胞パピラ細胞によって発現する。
【０２４９】
マトリリン1、2、3および4。他のいくつかのECM結合タンパク質コラーゲンIと同様、ラミニン−ニドゲン錯体、フィブリリン-2およびフィブロネクチン、マトリリンはその他のECMタンパク質、基質Glaタンパク質、ミンジン、ケラチン、PRELPを結合する。
【０２５０】
プロテオグリカン
アグレカンは、ヒアルロン酸結合領域および結合タンパク質によってヒアルロン酸と相互作用し、免疫グロブリン、結合タンパク質、EGF、レクチンおよびCCPリピートを含む。これはケラタン硫酸およびコンドロイタン硫酸結合領域を含み、N-結合グリコシル化部位を有する。また、テナスチン-Cを含むその他の多くのECMタンパク質を結合する。アグレカンおよびいくつかのイソ型または選択的スプライスによる変異体は軟骨、脊髄、皮膚細胞外基質の中に存在する。これは膨圧を組織に伝える。SOX9のような転写因子およびレチノイン酸のようなビタミン誘導体はアグレカン遺伝子の発現を亢進する。選択的スプライスによる領域の変形およびアグレカンを含むプロテオグリカンの変化した読み枠が本発明の中で利用可能である。
【０２５１】
アグリン、バマカン、BEHABは結合タンパク質、βグリカン、バイグリカン、ブレビカン、デコリン、フィブロモジュリンである。
ヘパラン硫酸プロテオグリカン（HSPG）は多くの組織に存在し、細胞を結合したり成長因子を細胞に放出したりする能力を有する。HSPGは、中でもその糖成分、FGF（FGF2）、MMPを結合分子としてラミニン、フィブロネクチン、コラーゲンタイプIV、VEGF、VEGF受容体といったECMの多くの構成要素と結合する。
【０２５２】
ケラトカン、ルミカン、パールカン、シンデカン1から4、テスティカン 
バーシカンは大型のコンドロイチン硫酸プロテオグリカンで、線維芽細胞によって分泌される。バーシカンは、ヒアルロン酸結合領域、レクチン、補体制御タンパク質、EGFリピートに対し、アグリカンとかなり近い領域を内包している。バーシカンは多様な結合パートナーを有しており、それにはコラーゲンタイプI、フィブロネクチン、テネイシン-R、フィブリリン-1、フィブリン-1および-2、ヒアルロン酸、P-およびL-セレクチン、ケモキン、細胞表面タンパク質のインテグリンβ1、EGF受容体、CD44、P-セレクチン糖タンパク質であるリガンド-1など、その他のECM構成要素が含まれる。バーシカンは細胞間シグナル伝達、細胞認識、細胞外基質要素と細胞表面糖タンパク質の結合に関与する。
【０２５３】
ヒアルロン酸は、二糖類単位のリピートにおいて重要な要素となっており、二糖類単位によって修復および組織の形態形成時の細胞移動が可能となり、また間接内では潤滑油として機能し、創傷治癒時には大量に生成される。ヒアルロン酸の機能の多くはプロテオグリカンとその他タンパク質との特定の相互作用に基づいている。CD44は細胞表面のヒアルロン酸受容体である。
【０２５４】
結合タンパク質はECMの中でプロテオグリカンとヒアルロン酸TSG-6、分泌された35 kDA糖タンパク質を結合し、リンク・モジュール領を含み、ヒアルロン酸およびアグレカンと相互作用する。TSG-6は炎症誘発因子であるTNF、IL-1、またはLPSによって維芽細胞、軟骨細胞、滑膜細胞および単核細胞に誘導可能である。TSG-6は、その結合および血漿阻害物質IαIの増強による抗炎症薬である。
【０２５５】
欠陥はプロトグリカン、コアタンパク質部分（グリコシル化されているかどうかにかかわらず）、コアタンパク質領域、選択的にスプライスされたコアタンパク質とPGの変形、ヒアルロン酸鎖、結合タンパク質、PGの断片またはモチーフ、GAGの側鎖、サッカリド残基（モノ、ジ、オリゴ、ポリ）を用いて治療することができる。
【０２５６】
細胞外基質内容物
移植の領域において細胞外基質の生成またはECM内容物の増加は欠陥の治療にはプラスとなる。こうした事例でECMの合成を増加させるその他のタンパク質または分子が必要とされる。
【０２５７】
血清タンパク質および分子
もう一つの有益なタンパク質は血清タンパク質である。血清はさまざまな高分子タンパク質、運搬体タンパク質を提供し、可溶性分子、栄養素およびタンパク質因子、接着因子、ホルモン、成長因子、サイトカイン、ケモカイン、リンフォカイン、毒性物質を中和または緩衝させるタンパク質などを提供している。
【０２５８】
細胞のための血清およびそのタンパク質の主な機能には、細胞接着、細胞伸展、細胞移動、細胞移転、栄養、微量元素、ビタミンおよびエネルギー代謝、ECM生成、ホルモン移転、細胞の刺激、細胞の増殖、細胞の差別化、細胞の保護および細胞の生き残りなどがある。フィブロネクチンなどの接着タンパク質、ビトロネクチンおよびラミニンを含むその他の接着タンパク質。血清タンパク質は脂質向けの運搬体タンパク質として機能することが可能で、アルブミン（脂肪酸、ホルモン、成長因子およびビタミン移動）、トランスフェリン（鉄輸送）、セルロプラスミン（銅輸送）、フェリチン（鉄輸送）、リポタンパク質（HDL、LDL、VLDL、アポA1、アポリポタンパク質A-II、アポリポタンパク質B）などの成分をコレステロールおよび脂肪酸運搬のために追跡することができる。
【０２５９】
血漿または血清内における9,500以上のタンパク質の濃度範囲は、アルブミンのほとんどミリモルのレベル（6700mg/100mlまで）から腫瘍壊死因子（TNF）のフェントモルのレベル、さらに瀕死の細胞から「漏出」（細胞は内容物を血流に放出）する際の、より低いレベルまで広がっている。アルブミン、免疫グロブリン、トランスフェリン、フィブリノゲン、補体成分、アポリポタンパク質。
【０２６０】
血清タンパク質は特定の成長因子、サイトカイン、細胞外基質分子、細胞接着因子、運搬体タンパク質を内包することができる。
血清中に含まれるさまざまなタンパク質は以下の通り：タンパク質およびポリペプチドアルブミン、フェチュイン、グロブリン、α-1グロブリン、α-2グロブリン、βグロブリン、γグロブリン、トランスフェリン、プロテアーゼ阻害剤α1-抗トリプシンおよびα2-マクログロブリン、フィブロネクチン、補体と結合するビトロネクチン、EGF、FGF、IGF IおよびII、PDGF、IL-1、IL-6、インスリン、VEGF、アンギオジェニン、その他の成長因子、IgE、リノール酸、ハプトグロビン、セルロプラスミン、ヘモペキシン、プレアルブミンまたはトランスサイレチン、β2糖タンパク質、高濃度リポタンパク質、フィブリン、オレイン酸、エタノールアミン、ホスホエタノールアミンはアルブミンなどのタンパク質と結合される。微量元素および鉄、銅および亜鉛は血清プロテインと結合することができる。
【０２６１】
血清中のタンパク質は以下のものを含む：フェチュイン（A&B）、アシアロフェチュイン、補体C1-C9、ACE（アンギオテンシン変換酵素）、アンギオテンシンII、抗トロンビンIII、抗キモトリプシン、β2-ミクログロブリン、カルボキシペプチダーゼ、CRP C反応性タンパク質、ゲルゾリン、タンパク質C、グリコフォリン、グロブリンIV分画、HSアルファ2糖タンパク質、TPA組織プラスミノーゲンA活性剤および阻害剤（PA1-1）、アルカリ性ホスファターゼ、乳酸脱水素酵素その他多くのこうぞの活動、上皮小体ホルモン、トロポニン、アネキシンV、血管作用アンジオテンシン、PAP1、PP4、CPB-1、CaBP33、VACa、アンコリンCII、リポコルチン-V、エンドネクシンII、トロンボプラスチン阻害剤、ハプトグロブリン、マクログロブリン、S100タンパク質、オロソムコイド、α1糖タンパク質、β2糖タンパク質、寒冷凝集素、クリオグロブリン、クリオフィブリノゲン、血小板因子4、凝固および補体タンパク質、グレリン、血清レシチンコレステロールアシルトランスフェラーゼなどのコレステロール代謝タンパク質、コレステロールエステル転送タンパク質、リポタンパク質リパーゼ、脂肪細胞のaP2生産、リポタンパク質リパーゼ、アジプシン、レプチンおよびレジスチン、インスリンやパラトルモンなどの血漿内分泌性ホルモン、IGFBP3、TNFなどの成長因子、αフェトプロテイン、マンノースなどの血清結合タンパク質、性ホルモングロブリンおよびその他の結合タンパク質。
無血清培養内で検査を行った補体の一部および活性濃度を以下に記す。その一部は体内の血清濃度と一致するが、一部は対外の細胞活動のため、一致していない。
【０２６２】
多くの組織成長因子、サイトカイン、ケモキン、ホルモンおよび補体は0.1 から100 ng/mlの範囲では活性化している。細胞培養した組織成長因子の例としては、以下のものが挙げられる。EGF、ヘレグリン（HRG）、β-セルリン、αFGF、βFGF、IGF-I、IGF-II、KGF、PDGF、TGF-β1、2、3、4、5のTGFファミリー、アクチビンA、B、C、インヒビンA、B、ニューロトロピンまたはNGF、GDNF、NT3、NT 4/5、SMDF、BDNF、CTNF、セロトニン、T-細胞成長因子のサイトカイン、TNFα、TNFβ、G-MCSF、GCSF、インターロイキン、結合タンパク質または運搬体タンパク質、セルロプラスミン、BSA、α2-マクロブロブリン、ホリスタチン、IGF-1結合タンパク質、レチノイド結合タンパク質、インスリンホルモン、濾胞刺激ホルモン、黄体化ホルモン、黄体化ホルモン関連ホルモン、グルカゴン、上皮小体ホルモン、成長ホルモン、ソマトスタチン、TSH、TRH、T3、T4、カルシトニン、カエルリン（caerulin）、GLP、ガストリン、サブスタンスP、ヒドロコルチゾン、テストステロンエストラジオール、プロゲステロン、プロスタグランジンE1、E2aおよびF、接着因子の一部はフィブロネクチンの可能性あり、（Clg）10 ug/ml またはコート、ラミニン、ラミンまたはコート、コラーゲン・コート、ポリリジン・コート、その他の添加物の一部は微量元素の混合物である。トロンビン、アプロチニン（aproteinin）、ビタミン、脂肪酸、リノール酸、リン脂質、そしてコレステロール。上記因子その他については高低の濃度を細胞培養および細胞移植に用いることができた。
【０２６３】
急性期の血清タンパク質はα-1抗トリプシン、α-1糖タンパク質、アミロイドA & P、抗トロンビンIII、C反応性タンパク質、C1エステラーゼ阻害因子、セルロプラスミン、ハプトグロビン、オロソムコイド、プラスミノーゲンおよび転写補体タンパク質C2、C3、C4、C5、C9、B因子、C1阻害因子、C4結合タンパク質、凝固タンパク質、フィブリノゲンおよびフォン・ヴィレブランド因子。
【０２６４】
アミロイドPは可溶性の血清タンパク質、アミロイドAA、SAP、α-フェトプロテイン、α1-ミクログロブリンは細胞の移植によるいかなる肉芽形成も阻止することができる。これは免疫原の投与後、免疫反応を弱めることができる。アンジオテンシン−レニン系、アンジオテンシン（1-7）β2ミクログロブリン、C反応性タンパク質、セルロプラスミン。
【０２６５】
補体は、可溶性の血漿タンパク質の20系であある。補体システムタンパク質は以下のものを含む：C1、C1エステラーゼ阻害因子、C1 阻害因子、C1q、C1r、C1s、C2、C2a、C2b、C3、C3a、C3b、C3bi、C3c、C3転換酵素、C3d、C3dg、C3e、C3f、C3g、Ce前駆賦活体、C4、C4a、C4A、C4b、C4B、C4b結合タンパク質、C4bi、C4b不活性化因子、C4c、C4d、C5、C5a、C5b、C5転換酵素、C6、C7、C8およびC9。
【０２６６】
サイトケラチン、CRISP-3。
サイトカインはインターロイキン1、腫瘍壊死因子、αおよびβインターフェロン、コロニー刺激因子などのマクロファージによって作られるモノカインおよびインターロイキン、インターフェロン、GM-CSF 、リンフォトキシン、TCGF、T細胞成長因子1（IL-2）またはT細胞成長因子2（IL-4）などのリンフォカインを含む。成長因子は、特にPDGF、エリスロポエチン、IL-2（T細胞成長因子）の細胞の増殖を促進するサイトカインとすることができる。エンドセリン、エンドセリン-1。
【０２６７】
フィブリン、プラスミン。フィブリン／フィブリノゲンは血液凝固を促進し、出血場所からの注入により出血を抑えるために使用することができる。
AGE（糖化最終産物）は本発明において、AGEと親和性のあるRAGEの可溶性受容体またはRAGE受容体の細胞外部位の結合領域とともに培養することにより、隔離することができる。
血清はスーパーオキシドジスムターゼ、カタラーゼ、グルタチオン、ペルオキシダーゼ、グルタチオン転移酵素を含む。
【０２６８】
血清グロブリンはアルファ、β、ガンマのタイプに分かれる。
メラノトロピン、チロトロピン、エリトロポエチン、プロラクチンおよびインスリン。サイトカイン、NGF、グリア細胞成長因子、エピモルフィン、CNTF、HGF、TGFβ。
運搬体タンパク質はチロキシン結合グロブリン、トランスコルチン、トランスフェリン、フェリチンとなりえる。
血清内の成長因子は以下のものを内包する。
BDNF、FGF（線維芽細胞成長因子）、造血細胞成長因子、G-CSF、GM-CSF、インスリン様成長因子、PDGF、TGF（形質転換成長因子）、TGF-α、GF-β、TNF α、TNF、β VEGF。
【０２６９】
金属結合タンパク質にはハプトグロブリン、ヘモペキシン、セルロプラスミン、スーパーオキシドジスムターゼ、フェリチン、トランスフェリンが含まれる。負の急性反応物にはアルブミン、プレアルブミン、トランスフェリン、アポA1、アポA11、α2-HS糖タンパク質、インター-α-トリプシン阻害因子、ヒスチジンを多く含む糖タンパク質が含まれる。
【０２７０】
その他含まれるタンパク質のα1酸性糖タンパク質、ヘム・オキシゲナーゼ、マンノース結合タンパク質、白血球タンパク質1、リポタンパク質（a）、リポ多糖体結合タンパク質、ラミニン、（高密度および低密度）および超低密度のリポタンパク質、カイロミクロン、アポA1、アポリポタンパク質A-II、アポリポタンパク質B、リンフォカインIL-2、IL-3およびγインターフェロン、マクログロブリン、α2マクログロブリン、ミクログロブリン、プラスミノーゲン、プラスミンは細胞培養下の接触阻止からの開放を促進する。従って体外での線維芽細胞の増殖に使用される。プラスミノーゲン活性化因子、老化細胞抗原、血清拡散因子、サブスタンスP、トロンボモジュリン、胸腺ホルモン、胸腺液性因子（THF）、サイモシン、サイモポエチン、血清胸腺因子、サイモペンチン、組織因子、タフトシン、ユビキチンはタンパク質をマークし、分解、VCAM-1、ビトロネクチンに進める。ビトロネクチンは細胞培養血清中の主要な細胞接着タンパク質である。血漿VNは、凝固、線維素溶解、補体活性化、細胞外固定または接着および細胞の増殖、伸展、移転および接着を規制する。
フォン・ヴィレブランド因子創傷治癒因子は、線維β-NGF、NT-3およびL1（ジストログリカン）を含む。皮膚創傷ではPDGF（例えば、BB、AB）、VEGF121、165、Ang1、ECMタンパク質、BMP-2、IGF-1およびPTH1-34が用いられる。
【０２７１】
凝血促進剤
凝固系は少なくとも12の血清タンパク質からなる段階状の相互作用で、結果として線維素が生成される。凝血促進剤は移植によるすべての出血に対し、有効に利用できる。
血液凝固系には因子（F）および活性化因子（a）：因子I（フィブリノゲン）、II（プロトロンビン）、IIa（トロンビン）、III、IV、V、Va、VII、VIIa、VIII、VIIIa、IX、IXa、X、Xa、XI、Xia、XII（ハーゲマン因子）、XIIa、XIII、XIIIa、プレカリクレイン、および高分子量キニノゲンが含まれる。キニノゲンのL鎖の領域が含まれることもある。
トロンビンは凝固における主要なタンパク質である。凝固プロテアーゼは線維芽細胞およびその他の細胞タイプに対するマイトジェンになりえる。例えば、因子VIIa、Xa、XIIIa（IXaは含まず）が挙げられる。
凝固過程の阻害因子もしくは抗凝血剤は、組織因子経路阻害剤（TFPI）、トロンボモジュリン（TM）抗トロンビン（AT）である。
【０２７２】
線溶系はフィブリン塊を溶解し、以下のものが含まれる。プラスミノーゲン、t-PA、u-PA、プラスミン、プロテアーゼ活性化因子VII（線溶活性化因子）。
線溶系の阻害因子は（PAI-1、PAI-2）、α2-抗プラスミン（AP）、（TAFI）、アンギオスタチンである。プラスミンは細胞培養下の接触阻止からの開放を促進する。従って体外での細胞増殖（例えば線維芽細胞）に使用される。血漿は注射部位から形成された塊の除去で有効な役割を果たす。
カリクレインは血液凝固を活性化する。ブラジキニンは血管拡張を引き起こす。
キニナーゼはキニンを分解する。キニンは血管拡張をもたらす。血管拡張は血中栄養素および成長因子を移植部位に供給する上で有用である。
【０２７３】
炎症
凝固および炎症は集約される。炎症性タンパク質の例としては、免疫複合体、酸化LDL、TNFα、IL-8、MCP-1（単球走化性タンパク質1）、PDGF（BB）、C反応性タンパク質（CRP）、ホルミルMet-Leu-Phe（fMLP）、ケモカインSDF-1（ストロマ由来因子）およびサイトカインTGFβが挙げられる。
炎症分子の例としては、サイトカインIL-α、IL-β、IL-6、TNFα、F2-イソプラスタン、補体タンパク質、インターフェロン、コロニー刺激因子、多数のケモカイン、特定の成長因子などがある。
【０２７４】
本発明における炎症に関する優位性は、血流の増加、望ましい種類の細胞の化学的誘引向上によって効果が一過性となり、移植部位、組織の再構築および修復においてタンパク質活動が及ぶ範囲を限定し、免疫細胞をはじめとするその他の有益なタンパク質、成長因子、ホルモン、ECMタンパク質その他の移植部位への参集が教科されることである。ケモカインおよびサイトカインは、必要であればECMの生成を促進するその他の免疫細胞を誘引する。
一時的な炎症は血流の増加、栄養およびホルモンの供給など多くの有用な事象が推進される。従って、ここで代謝や移植された細胞の延命と増殖に加え、細胞の播種を行うことが好ましい。これはまた、すでに組織内に存在する細胞にとっても有用なことである。
【０２７５】
血流
移植領域における血流の増加は欠陥の治療に有益である。本発明に記される通り、栄養素、成長因子、ホルモン、生存因子、その他多数の有益な機能のデリバリー増加が得られる。これには、血管拡張、血管形成、炎症、凝固、補完反応および免疫反応を局部的に増加させるタンパク質が含まれる。
【０２７６】
機能を果たしていない血管拡張には、増加した血管収縮（例えば、エンドセリン-1）が含まれる。一酸化窒素または内皮細胞の生成を増加させるタンパク質は、血管拡張に使用できる。血管形成は、VEGFおよびそのイソ型（例、121および165）、アンギオジェニン1、マトリックス接着因子L1およびエフリンB2により促進される。TSPおよびオステオネクチンは抗血管形成である。
成長因子受容体チロシンキナーゼは、血管形成および脈管形成の役割がある。VEGF、PDGF、FGF2、TGF-β、およびステロイドホルモンを含む血管形成成長因子を使用できる。
【０２７７】
化学誘引物質
特定細胞種の移植領域への移動は、欠陥の治療に有益な可能性がある。特定細胞種の移動は、本発明中に記されている他の望ましい機能の中でも、ECMタンパク質および生存因子の生成の誘引、凝血の除去に役立つ可能性がある。従って、特定細胞種を誘引する細胞や高分子が望ましい。つまり、血管拡張、血管形成、炎症、凝固、補完反応および免疫反応を局部的に増加させる望ましいタンパク質は、化学誘引物質としてまたは細胞移動の源としての役割を果たすことができる。連合組織の成長因子およびトロンビンは線維芽細胞の化学誘引物質の例である。
【０２７８】
輸送タンパク質
【０２７９】
タンパク質は、ミネラル、脂肪酸、成長因子、サイトカイン、ホルモン、その他多数の分子の担体としてしばしば必要とされ、本文中では輸送タンパク質と呼ばれる。血清グロブリン、プレアルブミン（トランスチレチン）、急性反応タンパク質（ARP）、α-1抗トリプシン、ヘパトグロビン、セルロプラスミン、CRP、C3、α-1 酸性糖タンパク質、CRP-β-γ、ヘパトグロビン-α2、AFP、ステロイド結合タンパク質TBG、免疫グロブリンのIgG、IgM、IgD、IgG、IgA、α-2 マクログロブリン、βリポプロテイン、および補体の構成要素。
【０２８０】
グロブリンは、α型、β型、およびγ型に分けられる。α-1グロブリンには、α-1抗トリプシン、サイロキシン結合グロブリン（T3、T4、レチノール、RT3U）が含まれる。α-2グロブリンには、ヘパトグロビン、セルロプラスミン、HDL、およびα2-マクログロブリンが含まれる。βグロブリンには、トランスフェリン、プラスミノーゲン、およびβリポプロテイン（LDL）が含まれる。γグロブリンは免疫グロブリンのM、G、およびAを含む。
【０２８１】
ホルモンおよび成長因子の結合タンパク質（HBP）は血液などの細胞外液である。このような輸送タンパク質の例は、アンドロゲン結合タンパク質（ABP）、ステロイド結合グロブリン（GBG）、ヒト成長ホルモン結合タンパク質（GHBP、インスリン様成長因子結合タンパク質（IGFBPの1〜10））である。トランスチレチン、サイロキシン結合グロブリンであるレチノイド結合タンパク質（RBP）、LBP（リポ多糖体結合タンパク質）、リポカリン、コルチゾール結合タンパク質、副腎皮質刺激ホルモンを放出するホルモン結合タンパク質（CRHBP）、アルブミン、（ステロイド結合グロブリン）、コルチコステロイド結合タンパク質性ホルモン結合グロブリン（SHBG）、ビタミンD結合タンパク質（VDBP）、TGF-β結合タンパク質、BMP結合タンパク質PLTP（リン脂質エステル転換タンパク質およびCETP（コレステロールエステル転換タンパク質）、マンノース結合タンパク質、補体結合タンパク質、FGFの成長因子結合タンパク質、HB-FGF、潜在TGFβ結合タンパク質（LTBP）、NGF、およびヘパリン結合タンパク質は、特定ホルモン、成長因子、サイトカイン、栄養素、微量元素、その他に対して特定であり血清中に存在するその他多数のグロブリンおよびタンパク質の一部でしかない。
【０２８２】
ホルモン結合タンパク質（HBP）は、細胞増殖、分化、生存、アポトーシス、移動、拡散、細胞寸法などに影響を及ぼす。
栄養素は、ECM、血清および液体結合タンパク質により細胞からまたは細胞へ運ばれる。これにより、エネルギー代謝、細胞生存、成長、増殖などが強化される。アルブミン、トランスフェリン、フェリチン、セルプラスミン、グルコース輸送タンパク質、リポタンパク質（HDL、LDL、VLDL、アポA1、アポリポタンパク質A-II、アポリポタンパク質B）、脂肪酸結合タンパク質（FABP）、その他多数の栄養素輸送タンパク質が存在する。
【０２８３】
成長因子とサイトカイン
成長因子はしばしば対象とする細胞のマイトジェンである。また、成長因子は、分化、ECM合成および劣化、プロテアーゼおよびプロテアーゼ抑制物質の生成、化学誘引、代謝にもかかわっている。TGF-α、TGF-β、PDGF、FGF、EGFおよびIGF.などの多数の成長因子が存在する。
【０２８４】
成長因子およびサイトカインはECMおよび血清中に存在する。因子の一部としては、内皮成長因子、EGF、HGF、ニューレギュリン、PDGF、IGF-1、IGF-II、FGF、インターロイキン、インターフェロン、TGF、NGF、ニューロロイキン、GRP、CSF-1、G-CSF、TNF、EGF、VEGF、その他多数がある。
【０２８５】
欠陥を治療するため、ECM、成長因子、サイトカイン、ケモカイン、ホルモン、血清タンパク質、およびその他のタンパク質は、その濃度が単独で使用する場合は＞0%から100%まで細胞構成の一部である場合は＞0%から＜100%と変わる。
【０２８６】
細胞の成長および増殖  −  成長因子、サイトカイン、ケモカイン、ホルモン
ホルモンおよび成長因子の補完体の一部には、アルドステロン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、テストステロン、ジヒドロテストステロン、βエストラジオール、チロキシン、トリイオード-L-サイロニン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、ルテインホルモン放出ホルモン、プロゲステロン、インスリン、グルカゴン、プロスタグランジンのD2、E1、E2、F2、リノール酸、ソマトスタチン、成長ホルモン、トロンビン、およびトランスフェリンが含まれる。
【０２８７】
成長因子の多数は、TNF、EGF、FGF、IGF、VEGF、PDGF、ヘッジホッグ、TGF-β上科、プロテオグリカンおよび調節因子、Wnt-関連タンパク質などの科また上科の一種であり、またはSCF、Flt-3およびM-CSFなどの他の成長因子である。個別の種および一部の機能は下記の通りである。
【０２８８】
EGF（上皮成長因子：epidermal growth factor）科のメンバーには、TGFα、ARおよび他のレギュリン、SDGF（ラット神経鞘腫から派生した成長因子）、VGF（痘疹成長因子）、HER2/erbB2/neu受容体、エピジェン、βセリュリンのリガンドが含まれる。
【０２８９】
23ほどあるFGF（線維芽細胞成長因子）科のメンバーは、FGF R1-R5受容体を使用する。他の成長因子とは異なり、FGFはヘパリンまたはヘパリンプロオテグリカン（HSPG）とともに作用し、FGF受容体を活性化させる。メンバーは、FGFBP（FGF結合タンパク質）などのFGF結合タンパク質により調節される。FGFは、マイトジェニックペプチドであり、FGF酸性がFGF1、FGF塩基性がFGF2、FGF5およびFGF6であり、FGF 7（ケラチノサイト成長因子）は間質細胞（例、線維芽細胞）、FGF 10bおよびc、FGF 8から成る。
【０２９０】
IGF（インスリン様成長因子）。IGF-1神秘的雰囲気は細胞の付着および移動を細胞のコラーゲンおよびフィブロネクチンへの粘着を通して促進する、IGFIにより調整されるPDZ-LIMドマンタンパク質である。
IGF結合タンパク質科には、IGFBP1-6、IFBP-7、NOV/CCN3、エンドカン、CTGF/CCN2およびALSが含まれる。
【０２９１】
PDGFおよびVEGF科のメンバーは、多数の細胞種に対してマイトジェニックであり、創傷の治癒においては血管形成的役割である。他の科のメンバーは、VEGF-A、B、C、Dおよびニューロピリン（例、1および2）である。VEGF受容体はチロシンキナーゼである。
【０２９２】
TGF-β上科は、細胞の増殖、移動、分化、形態形成、およびその他多数の機能にかかわっている。この上科は、骨形態形成タンパク質（BMP）、成長分化因子（GDF）、アクチビン、インヒビン、GDNF（グリア細胞から派生した向神経因子）リガンド、TGF-βメンバー、レフティ、ノーダル、MIS（ミューラー阻害物質：Mullerian Inhibiting Substance）／AMHなどの他のリガンドの亜族に配置された30以上のタンパク質から成る。
【０２９３】
BMPには、2、3、3b、4、5、6、7、および8の科メンバーが含まれる。関連BMPは20以上ある。
TGFβ 上科メンバーのタンパク質調節物質および抑制物質には、無羊膜、BAMBI/NMA、コーディン、コーディン様1および2、CRIM1、クリプト、無横脈-2、微小血管、デコリン、FLRG、ホリスタチン、ホリスタチン様1、GASP-1および2、NCAM-1、ノッギング、スマッド1、4、5、7、8、SOST、潜在TGFβ bp1、TMEFF1および2、バソリン、およびセルベラス/DAN科が含まれる。
【０２９４】
TNF上科は、メンバーTNFSF（腫瘍壊死因子上科）1〜18から成る。その一部は、TNFβ（TNSF1、リンフォトキシン）、TNFα（TNFSF2、カケチン）、CD40リガンド（TNFSF5）、Fasリガンド（TNFSF 6）、CD27リガンド（TNFSF 7）、CD30リガンド（TNFSF 8）、TWEAK（TNFSF 12）、APRIL（TNFSF13）、BAFF/BLyS（TNFSF 13B）、LIGHT（TNFSF 14）、VEGI（TNFSF15）およびGITRリガンド（TNFSF 18）としてよりよく知られている。TNFSFの多数はアポトーシスにかかわっている。TNFαおよびTNFβなどのその他は、特定の細胞種（例、線維芽細胞、破骨細胞、PMN細胞）の細胞増殖に拍車を掛けることができる。一般に、TNFは特定の正常な細胞に対してマイトジェニックな可能性があるが、形質転換された細胞および特定の細胞種においてアポトーシスを開始させる。
ヘッジホッグ科のメンバーは、ソニック、デザート、およびインディアンである。
Wntリガンドの少なくとも19メンバーは、Wntの1、2、2b、3、3a、4、5a、5b、6、7a、7b、8a〜d、9a、9b、10a、10b、11、12、13、14、14b、15、および16を含む分泌された糖タンパク質である。β-カテニン、GSK-3、ケルメン-1、2、LRP-1、-6、ROR 1、2、WISP-1/CCN4。LRP-6は縮れタンパク質とのコレセプターである。
【０２９５】
プロテオグリカンは成長因子として役割を果たすことができる。この科には、メンバーであるアグレカン、ビグリカン、デコリン、エンドカン、エンドレペリン、グリピカン（例、2、3、6）、マイムカン、およびテスティカン（例、1、2、3）が含まれる。
【０２９６】
他の成長因子には、HGF（肝細胞成長因子）、NGF（神経成長因子）が含まれ、α、β、およびγの副次的単位があり、神経分化誘導物質（NT）はNGF科のメンバーであり、結合細胞成長因子（CTGF、CCN2）、内皮成長因子、M-CSF、EPO、レセプターチロシンキナーゼが含まれる。
成長因子は、中でも、細胞の粘着、細胞の移動、細胞の増殖、アポトーシス、アノイキス、タンパク質分解、分化、ECM合成および劣化、創傷治癒を含む多数の過程にかかわっている。
【０２９７】
サイトカイン
サイトカインは細胞外の短距離のポリペプチドまたは広範な作用を持つ小さなタンパク質介在物質である。成長因子およびサイトカイン用語はしばしば互換性があるとして使われている。
インターフェロンのIFN-αおよびIFN-β、
インターフェロンγ（IFN γ）はサイトカイン、リンフォカインである。インターフェロンは一般に抗成長である。
インターロイキン科には32を超えるメンバーがある。
IL-1αおよびIL-β、IL-2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、IL-15は免疫細胞のマイトジェンであり、IL-16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28A、28B、29、30、31、32。
他のサイトカインには、Mer、AxlおよびDtkレセプターチロシンキナーゼ、オンコスタチンM、繊毛神経親和因子、プレイオトロフィン、幹細胞因子、LIF（白血病阻害因子）、カーディオトロフィン-1、DCC、DNAM-1、Ties、TPOが含まれる。
【０２９８】
uPA（ウロキナーゼ型のプラスミノーゲン活性化物質）は、レセプターuPARのリガンドであり、uPARは正常なインテグリン粘着機能を抑制し、uPAR上の親和性の高い結合部位への粘着を促進できる。
アンギオジェニンは内皮および線維芽細胞の粘着および拡散を支える。アンギオアレスティンは腫瘍阻害性の抗血管由来のタンパク質である。
【０２９９】
ケモカイン
一般に、ケモカインの~8から14 kDaは、G-タンパク質結合受容体を通して白血球を活性化または化学誘引する溶解性のサイトカインである。
ケモカインの4つの主要な亜族（CXC、CC、CX3C、およびC）には50以上のメンバーがある。ケモカインは、ヘパラン（HS）などのGAG、硫酸コンドロイチン（CS）またはこれらのGAGを含むプロテオグリカン（PG）を結合でき、それらの受容体へのケモカインの提示を促進または妨害できる。HSPGがケモカインのデリバリーを促進するのに対して、CSPG（バーシカン）はケモカインの結合を減衰させるため、インテグリン介在細胞の細胞粘着を下方調整し、MMPはケモカインを分解させる。
ケモカインの一部には以下が含まれる。
CCL1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、19、20、21、22、23、24、25、26、28、CXCL1（GROα）、CXCL5、CSCL6、CXCL7、CSCL10、CXCL13、CX3CL1、XCL1、CINC。
【０３００】
免疫細胞、ケモカイン、およびサイトカインは多数の病状にかかわっている。
成長因子の一部の主要な受容体区分、受容体の種類、およびリガンド結合連鎖、サイトカインまたはケモカインとしては、造血ドメイン受容体区分、第II種サイトカイン受容体区分、ホスホチロシンキナーゼ受容体区分、セリン・トレオニンキナーゼ受容体区分、TNF受容体区分、Igのような受容体区分、Serp.7 膜貫通型Gタンパク質共役受容体区分がある。
【０３０１】
ホルモン
ホルモンおよび成長因子は用語が随時置き換えられる。ホルモンの多数は、エンドセリン-1、TSH、FSH、LH、プロラクチン成長ホルモン、ACTH、抗利尿ホルモン、オキシトシン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン、性腺刺激物質放出ホルモン、GnRGの合成アナログであるトリプトレリンペプチド、成長ホルモン放出ホルモン、副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン、ソマトスタチン、メラニン形成細胞刺激ホルモン、ドーパミン、メラトニン、チロキシン（T4、T3）、カルシトニン、副甲状腺ホルモン、ステロイド、グルココルチコイド、（コルチゾール、コルチコステロン）、ミネラロコルチコイド（アルドステロン）、アンドロゲン（テストステロン、ジヒドロテストステロン）、エストロゲン（エストラジオール、エストラトリオール、エストロン）、プロゲステロン、アンドロステンジオン、プレグネノロン、（DHEA）、DHEA-S、アンドロステンジオール、7-ケトンDHEA、（HCG）、アドレナリン、ノアドレナリンインスリン、グルカゴン、アミリン、（GLP-1）、分化、細胞再生、および細胞保護を促進する、EPO、カルシトリオール、カルシフェロール（ビタミンD3）、ANP、ガストリン、分泌、コレシストキニン（CCK、ニューロペプチドY、ニューロフィジン、オレキシン、グレリン、PYY3-36、インスリン様成長因子（IGF-1、アンギオテンシノゲン、トロンボポエチン、レプチン、アディポネクチン、レニン-アンギオテンシン系、レチノイド、プロリフェリン、カルシトニン、血清ゴナドトロピン、胎盤成長ホルモン（PGH）、ブセレリン、ゴセレリン、ロイプロレリン、松果体ペプチド（エピタルミン）およびホルモン、およびアンギオテンシン（例、1〜7）、ガストリン放出ペプチド、エイコサノイド、HETE、ロイコトリエンのB4、B4 R1、プロスタグランジンの1、2、PGF1a、PGJ2、トロンボキサンのA2およびB2である。
前項で記した通り、望ましくないホルモン、成長因子、サイトカイン、ケモカイン作用の抑制は、受容体に対する抗体の使用、またはRNAおよび溶解性受容体を阻害するリガンド、自然抑制物質、結合タンパク質、アンチセンスオリゴヌクレオチドにより実行できる。
【０３０２】
細胞増殖 マイトジェン
マイトジェンは細胞分裂を刺激する。細胞増殖は、マイトジェン経路により増加され、成長抑制経路により阻害される（例えばp53経路など）。
分子、主にタンパク質は、細胞増殖を強化または刺激する。これには、既知の成長因子、サイトカイン、および自己分泌、周辺分泌、および内分泌を行うホルモン、および細胞周期に影響を及ぼすECMおよび血清タンパク質が含まれる。
【０３０３】
含脂肪細胞前駆体は、血清、EGF、ヘパリン、ヒドロコルチゾン、およびIL-11により増殖するように刺激される。血清は含脂肪細胞前駆体の分化に抑制作用がある。分化は、インスリン、デキサメタゾン、L-チロキシンおよびd-バイオチンが存在するときに進む。分化された含脂肪細胞には血清、EGF、ヘパリン、ヒドロコルチゾンを含む栄養媒質がある。
【０３０４】
表皮細胞の増殖は、成長因子であるEGF、HB-EGF、TGFα、βFGF、βNGF、FGF（FGF-7および10）、インターロイキン、下垂体ホルモンおよび他の免疫サイトカインにより刺激される。これらの細胞は、ケラチノサイトからIL-6を放出してその成長を刺激するIL-1αを生成する。ケラチノサイトはテストステロンを5αジヒドロテストステロンに転換する。アンドロゲンおよびビタミンAはケラチノサイトにマイトジェニックである。ケラチノサイトから派生した因子は、表皮性メラニン細胞の増殖および分化を調整する。ケラチノサイトのマイトジェンには、IL-8、βNGF、HGF、アンフィレグリン、KGF（FGF7）HB-EGF、下垂体ホルモン、EGF、TGFα、インスリン、ヒドロコルチゾン、トランスフェリン、およびエピネフリンが含まれる。ケラチノサイトの成長抑制物質には、TGFβ、IFNα、γ、TNFおよび基底層真上の細胞により生成されたポリペプチドのケイロンが含まれる。
【０３０５】
メラニン細胞のマイトジェンには、HGF、FGF6、コレラ毒素、ホルボールエステル（TPA、PMA）、視床下部ホルモン、FGF2、ヒドロコルチゾンおよびロイコトリエンC4が含まれる。
上皮細胞は、ECMタンパク質CYR61、プレイオトロフィン、ヒアグリン、βNGF、EGF、FGF2、FGF10、HGF、アンフィレグリン、βセリュリン、KGF、下垂体ホルモン、ペプチドYY、プロラクチン、インスリン、ヒドロコルチゾンインスリン、グルココルチコイド（例、ヒドロコルチゾン）、コレラ毒素、下垂体ホルモン、トリイオード-L-サイロニン、トランスフェリン、レチノイン酸により増殖するように刺激される。血清およびアンドロゲンは上皮細胞の増殖を抑制できる。
【０３０６】
内皮細胞は、ECM-1、ECMタンパク質CYR61、プレイオトロフィン、βNGF、EGF、FGF2、FGF4、FGF5、FGF6、FGF10、VEGF、EG-VEGF、PD-ECGF、HGF、βセリュリン、GM-CSF、IL-1、下垂体ホルモン、血清、ヘパリン、ヒドロコルチゾン、IGF-1（長いR3）、下垂体ホルモン、アンギオジェニン、フェツイン、アポトランスフェリン（低い鉄分）またはホロトランスフェリン（鉄飽和）に増殖するように刺激される。
平滑筋細胞は、血清、EGF、FGF2、およびインスリンにより増殖するように刺激される。
骨格筋細胞は、血清、フェツイン、EGF、FGF2、インスリン、およびデキサメタゾンにより増殖するように刺激される。骨格筋細胞はインスリンが存在する場合に分化する。
【０３０７】
線維芽細胞の増殖は、TGFα、TGFβ、TNF、IL-1、PDGF（AA、AB）、CTGF、トロンビン、凝固プロテアーゼ、血液凝固因子のXa、VIIa、およびXIIIa、フィブリノゲン、溶解性の部分的に分解されたフィブリノゲン、EGF、HB-EGF、FGF（例、FGF-2、4、5、6、9、17）、IGF（例、IGF-1）、インスリン、さまざまなインターロイキン（例、IL-1）、MDGF（白血球細胞から派生した成長因子LDGF-3）、アンギオテンシンII、エンドセリン-1、ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（uPA）、CYR61、オンコスタチンM、プレイオトロフィン、白血病抑制因子、アンフィレグリン、およびβセリュリンにより刺激される。皮膚乳頭の線維芽細胞は下垂体ホルモンによって増殖するように刺激される。非タンパク質因子は本発明において使用できる。例えば、アジアチコシド、トリテルペン配糖体は、皮膚線維芽細胞などの線維芽細胞を含め、細胞増殖を増加させる。
【０３０８】
特定のレクチンは、コンカナバリンA、ヤマゴボウ・レクチン、白血球凝集素PHA-LおよびフィトヘモアグルチニンPHA-Pなどのさまざまな凝集素などのマイトジェン作用を誘発する。
細胞周期の事象の大多数がサイクリン-Cdk（サイクリン依存キナーゼ）作用により開始される。従って、細胞周期は、抑制機構、DNA補修および細胞外条件により制御されている。
【０３０９】
タンパク質、主に酵素が、細胞周期を管理する。Cdk（サイクリン依存キナーゼ）は、周期を通して細胞が進化するにつれ働きを変える複数タンパク質キナーゼから成る科である。サイクリンはCdkの主な調節物質である。
JNK、p38タンパク質キナーゼ、ERK（細胞外信号から調節されるキナーゼ）およびMAPK（マイトジェンにより活性化されるタンパク質キナーゼ）を含め、さまざまなキナーゼ経路が増殖にかかわっている。
【０３１０】
RelBおよびNF-κBは、PDGF、TNF-α、ホルボールエステルまたは血清が存在するDNA結合活動を増加することにより活性化される。PDGFなど、細胞内のcAMPレベルを促進する薬剤がG0/G1細胞周期段階を妨害する。
さまざまな細胞内のタンパク質活動を制御する成長因子、ECMおよび血清タンパク質などの主に細胞外のタンパク質が細胞周期を調整する。
【０３１１】
分化
一般に、分化が進むにつれ、細胞増殖は減衰し、最後には停止される。分化では、最終的には、非分化の細胞型を血管を治療するために適切な組織機能を特定する望ましい表現型を持つ細胞に拡大する。前駆細胞の分化は、正しい誘導物質を加えた場合、細胞培養で起きる可能性がある。移植時、分化は細胞およびECMにおける原位置（in situ）の環境的きっかけによって起きる可能性がある。タンパク質および分子の移植物との導入は、適切な空間（例、3次元ECM）および一時的環境のきっかけは既に細胞に存在するので、効果的に細胞を分化できる。きっかけには、細胞から細胞、細胞からECM、および細胞との3次元的インターアクションが含まれる。生理学的な分化の誘導物質は、数ある中でも、ECMタンパク質、血清タンパク質、ホルモン、サイトカイン、ケモカイン、成長因子、他の高分子、小分子である可能性がある。また、因子は、現在の細胞型の分化を維持するためにも使用できる。
【０３１２】
分化の溶解性誘導物質の例には、HGF、HGF、KGF、成長因子およびホルモン、メラノトロピン、スライヨトロピン、インスリン、プロラクチン、TGFβおよび上皮、TGFβ、βNGF、グリア成熟因子、IFNγ、CNTF、EPO、G-CSF、GM-CSF、IL-1、IL-6、カルシウム、ビタミンD、レチノイドが含まれる。他の例は文中を通して、また技術に存在する文章中に記されている。
【０３１３】
アポトーシス抑制因子
アポトーシス
細胞の損失はアポトーシスにより促進される。
アポトーシスは、特定の「死」信号により開始される細胞内でプログラミングされた細胞の死である。生存因子なしでは、細胞はアポトーシスにより死する。生存因子は、マイトジェンや成長因子が細胞増殖や細胞成長する場合と同様に、細胞表面の受容体に通常は結合する。
【０３１４】
プロアポトーシスにかかわるタンパク質には、多数ある中でも、リガンド、リガンド受容体、アダプタタンパク質、プロテアーゼ（例、カスパーゼ）が含まれるが、それらに限られない。リガンドの例には、TNF-β、TNFαのTNFリガンド上科、βNGF（神経成長因子）、BDNF、NT-3および-4、OX40L、TNFSF9、CD30、CD27、CD40、Fas、TRAIL（RANK）、（OPG）、（TWEAK）、（APRIL）、TNFSF13B（LIGHT）、（VEGI）、（GITR）、FASα、IL-18、他のインターロイキン、およびTRANCEが含まれる。アポストーシスリガンドの受容体には、TNF/NGF（神経成長因子）受容体科の死亡受容体の腫瘍壊死因子受容体-1（TNFR1）、TNFRII（LTβR）、（CD40）、アポ-1/Fas）、（CD27）、（CD30）、（4-1BB）、RANK、オステオプロテゲリン、（HVEM）、NGFR、OX40、ATAR、TRAMP、TACIおよびTRAIL-受容体が含まれる。TRAILおよびTRANCE信号経路を活性化させる受容体は、（TNFRSF10A）、（TNFRSF10B）、（TNFRSF10C）、（TNFRSF10D）、DR3、DR4およびDR5である。
【０３１５】
胸腺細胞からのグルココルチコイドまたは線維芽細胞からの血清など、ホルモンの中止はアポトーシスに至る可能性がある。
抗アポトーシスを通しての細胞生存を促進するとして知られている典型的なタンパク質の中には、サバイビン、IAP-1、XIAP、NAIP、DIAP1、c-FLIP、cIAP、cIAP-1、cIAP-2、CrmA、ARC、IEX-1L、Bcl-2、BIRC5、CASPER、BAG-1、Bax、Bcl-6、ウスーピン、ICAD、リビン、タンパク質Cおよびタンパク質A20、成長因子、転写調節因子、キナーゼ、おとり受容体、ECMおよび血清タンパク質を含むIAP（アポトーシスタンパク質の抑制物質）、その他のタンパク質の中では、他のアポトーシス受容体、FGF-2、FGF-9、TRAIL、DCR-1から-5などのおとり受容体、溶解性受容体、リガンドや膜貫通型の受容体を含む、既知のプロアポトーシスタンパク質に対する抗体、またはプロアポトーシスタンパク質、カスパーゼなどのプロテアーゼの抑制物質、プロカスパーゼのプロテアーゼ抑制物質と相互作用し中性化するECMや血清タンパク質がある。ペプチドまたはアポトーシスタンパク質に対して競合するペプチドの遮断を使用できる。
【０３１６】
AGE（糖化最終産物）は、究極的にECMの形成を削減するRAGE受容体との相互作用を通してアポトーシスを促進する。線維芽細胞アポトーシスのより高い率が、老化する組織、不良好な創傷の治癒、糖尿病組織および炎症で見られる。アポトーシスのより高い率は、これらの組織におけるAGEの形成に平行している。RAGE可溶受容体、受容体の細胞外の部分、AGEの結合部位を含むペプチド、AGEに対する抗体またはRAGE受容体に対する抗体の付加は、AGEの結合および除去、またRAGE信号の無効化に使用できる。同じような戦略は、アポトーシスについて他のリガンドや受容体でも使用できる。アポトーシスへの外因経路について受容体への抗体の遮断を使用できる。アンチセンス、siRNA、および他の細胞内作用物の介在物は、アポトーシスタンパク質の形成を防止するために使用できる。アポトーシス促進を使用するための似たような戦略は、過剰増殖細胞（例えば、ガン細胞、繊維症を起こす細胞）を除去する必要がある場合にも使用できる。
【０３１７】
アノイキス
細胞培養、細胞単離、低温保存、移植という移植の過程において、高い比率でアポトーシスが発生する。細胞外基質からの細胞の分離によって発生するアポトーシスは、「アノイキス」と称される現象である。アノイキスは、基質への不適切な接着によって、通常の細胞で引き起こされるアポトーシス反応である。成長と生存のために、細胞は細胞基質へ著しく依存している。このように、細胞外基質や血漿基質を除去すると、結果的に細胞死を招くことになる。
【０３１８】
多細胞生物では、細胞は単独ではなく隣接した細胞や細胞外環境と連携しながら存在している。細胞外基質（ECM：extracellular matrix）はこの環境の一部であり、細胞が接着する物理的な枠組みとして役立っている。細胞外基質はまた、組織や器官内の状態に関する情報や、増殖、移動、分化、生存に必要な情報を細胞に提供する。ほとんどの細胞-細胞外基質間の相互作用は、インテグリンを介して行われる。
【０３１９】
正常な人体では、アノイキスによって細胞が不適切な場所で生存出来ないようになっている。このようにアノイキスは、細胞の遊離または浮遊によって引き起こされるアポトーシスである。本発明の細胞外基質タンパク質と血漿タンパク質一覧は、アノイキスを予防する上で有益であり、生体外での増殖だけでなく移植された細胞の生存も促進する。細胞外基質を産生した細胞、細胞結合部位を含む分解していない細胞外基質、細胞受容体との細胞結合タンパク質ドメインが残っている部分的に分解した細胞外基質、単独の、または結合した細胞外基質の構成要素、細胞結合部位が損傷していない細胞外基質断片、細胞結合部位または細胞外基質結合部位を含む組み換えまたは人工タンパク質のアミノ酸配列を含有することにより、アノイキスを防ぎ、生体外で細胞から基質が離脱しないよう細胞を安定化させることが可能である。このように、細胞接着タンパク質は抗アノイキスタンパク質である。ディスインテグリンはアノイキス促進タンパク質である。細胞の収縮と遊離によりタンパク質はアノイキスを引き起こす可能性があり、本発明ではこれらのタンパク質に対する阻害剤（例：結合タンパク質や抗体）を使用して、アノイキスを防ぐことができる。
【０３２０】
血漿、成長因子サイトカイン、または細胞分裂促進因子（マイトジェン）の枯渇により、アノイキスが引き起こされる可能性がある。これらと同様の因子の存在によって、アノイキスによる細胞死を防ぐことができる。IGF-1は線維芽細胞を、HGF（hepatocyte growth factor：肝細胞成長因子）は肝細胞をアノイキスから守る。細胞外基質や血漿タンパク質を追加することにより、細胞の移植や培養のための基質を提供することができる。またアノイキスはインテグリンによって抑制することができる。
【０３２１】
細胞外基質やフィブロネクチン、ビトロネクチン等の血漿タンパク質は、それらのインテグリン受容体を通じ、RGDと補助ドメイン経由で生存シグナルを送り、例えばフィブロネクチンのヘパリン結合ドメインなどのように、細胞外基質と結合する。このように、細胞外基質や血漿成分との結合を利用してアノイキスを防ぐことができる。また、細胞の接着によって増殖が促進されるタンパク質を利用することができる。
【０３２２】
トリペプチド（Arg-Gly-Asp）RGDは、重要な細胞接着モチーフである。これは数多くの細胞外タンパク質や血漿タンパク質中に含まれている。インテグリンファミリーの接着受容体は、アノイキスの防止と細胞の成長、増殖、移動、分化の促進に関与しており、非共有結合したαおよびβサブユニットによって形成されている。抗体を活性化することで、フィブロネクチン、ビトロネクチン、フィブリノゲン等の、RGD配列をもつリガンドと受容体を活性化することができる。フィブロネクチン等のタンパク質の相乗的な部位の代わりに、RGDモチーフのみが出現して結合できるように、TS2/16、8A2、TASC、9EG7、12G10、HUTS等の抗体を活性化して、インテグリンを活性化することができる。
【０３２３】
プロテアーゼ阻害剤
プロテアーゼ阻害剤は、ある種のプロテアーゼの活動を特異的に阻害する。（アプロチニン、α2-マクログロブリン）プロテアーゼ阻害剤は、ここで述べられている細胞および／または他の因子、例えば細胞外基質分子や細胞接着タンパク質等とともに追加してもよく、これらのうちのいくつかはまた、プロテアーゼ阻害剤としても機能する。プロテアーゼ阻害剤は、タンパク質分解性のタンパク質破壊率を軽減し、細胞やタンパク質等の移植材料の破壊進行を遅らせるために、効果的に使用することができる。いくつかの実施例では、特別な細胞外基質分子が患者への導入として選択され、その細胞外基質を攻撃するプロテアーゼを阻害するプロテアーゼ阻害剤が選択されている。例えばプラスミン阻害剤はフィブリンと結合し、TIMPはコラーゲン、アグリカンと結合する。また、基質（例：特定の細胞外基質分子）であるかプロテアーゼの受容体であるか、阻害剤が競合的であるか非競合的であるかは、阻害の最も一般的なメカニズムとなっている。
【０３２４】
プロテアーゼ阻害剤は、細胞の培養過程においてプロテアーゼ活動（例：トリプシン）を抑制するために使用される。
タンパク質分解の調整または阻害のためのコントロールとして次のものがある。組織型プラスミノーゲン活性化因子経由でのプラスミノーゲン活性化因子による、プラスミンへのプラスミノーゲン前駆体変換等の、前駆体の局所的活性化によるもの。移動細胞前縁にある結合ウロキナーゼ型プラスミノーゲン活性化因子（uPA）等の、細胞受容体を通じた吸収によるもの。TIMP等の阻害剤の分泌によるもの。プロテアーゼ活性を抑制する過度の基質の出現によるもの。GASP等のタンパク質中にある、ホリスタチン、WAP、クニッツ、ネトリンプロテアーゼ阻害剤ドメイン等のプロテアーゼ阻害剤の、特異的ドメインの出現によるもの。阻害剤ドメインの単独、または組み合わせの出現によるもの。プロテアーゼ産生や活性、プロテアーゼ阻害剤産生や活性、プロテアーゼまたはそのシグナル経路に対する受容体結合活性を制御する成長因子やその他のタンパク質によるもの。特定のプロテアーゼを分解するプロテアーゼを選択して使用することによるもの。調整されたタンパク質（例えば体内に自然に生じた細胞で、組み換えDNAで、化学的に調整されたタンパク質）を使用して、糖化タンパク質等がタンパク質分解しないよう保護することによるもの。その他のプロテアーゼ阻害手段によるもの。
【０３２５】
以下はプロテアーゼとその基質、およびα1-アンチトリプシン、α1-アンチキモトリプシン、α2-アンチプラスミン、ヘパリン共同因子II、1型プラスミノーゲン活性化因子阻害剤等のプロテアーゼ阻害剤のいくつかを一覧にしたものである。
プロテアーゼの4つの主な一般的分類は、メタロプロテアーゼ、セリンプロテアーゼ、アスパラギン酸プロテアーゼおよびシステインプロテアーゼである。すべてのプロテアーゼ分類に対する共通阻害剤は、プロテアーゼ基質や血漿タンパク質α2-マクログロブリンの、溶解性プロテアーゼ受容体またはドメイン等のタンパク質と結合する、高濃度のプロテアーゼ基質の存在である。
【０３２６】
MMP、パパリシン、BMP-1、ADAMTSとして分泌されるメタロプロテアーゼは、MT-MMP、ADAM、ACE、ネプリリシンのような膜結合型、THOP1とインシュリシンのような細胞質型に分類できる。
MMPとそのECMの基質のいくつかは次の通りである。MMP1 MMP2 MMP3 MMP7 MMP8 MMP9 MMP10 MMP11MMP12 MMP13 MMP-15 MMP-16 MMP-17 MMP-18 MMP-19 MMP-20 MMP-21 MMP-22 MMP-23 MMP-24 MMP-25 MMP-26 MMP-28MMP-27。
【０３２７】
メタロプロテアーゼのTIMPまたは組織阻害剤は、MMPの活性やタンパク質分解活動を制限する。TIMP 1、TIMP 2、TIMP 3、TIMP 4等のTIMPは、多くのADAM、ADAMTS、その他のトロンボスポンジン（TS）ドメインを含むプロテアーゼ、ADAMTS 2、4、5、8、9、13、14に対する阻害剤である。
【０３２８】
ADAM（A Disintegrin and Metalloprotease）はADAM 11、12、17、28 その他からなる。ADAM 9、10、17、19
BMP-1、ACE（angiotensin converting enzyme：アンギオテンシン変換酵素）、ACE-2、メチオニンアミノペプチダーゼ、血漿カルシノナーゼ、ECEはプロテアーゼである。
【０３２９】
これらのメタロプロテアーゼの共通阻害剤は、高濃度のプロテアーゼ基質とα2-マクログロブリンである。他の阻害剤には、リポカリン-2、TIMP-1、-2、-3、-4、テスティカン1-3、RECK、PCPE等がある。
【０３３０】
セリンプロテアーゼは、凝固、補体等の数多くの生物学的プロセスに関与している。これに分類されるものには次のものがある。トリプシン、キモトリプシン、エラスターゼ、プロテイナーゼK、アンギオスタチン、補体成分（C1r、C1s、C2）、補体因子D、MASP、カテプシンA、凝固因子II（スロンビン）、VII、X、XI、およびB、D、G、H等のグランザイム、イソ型3-8、10、11、14、15等のカリクレイン、血漿カリクレイン、プラスミノーゲン、uPA、プロテイナーゼK、イソ型α、β-1、γ-1、5等のトリプターゼ、TSP50、HGF活性剤、HTRA、フリン、コリン、DPP6、DPPIV、スピネシンおよびマラスピン、フィブリノゲンをフィブリンに開裂するトロンビン、カリクレインファミリー（KLK1-15）、グランザイムセリンプロテアーゼ、トリプターゼ、スピネシン。
【０３３１】
ほとんどのセリンプロテアーゼは、チモーゲンの活性または阻害剤結合による非活性化により抑制される。セルピンは35以上のメンバーを有する。（例： A1、A5、B5、C1、D1、E1、E2、F1、F2、G1、I2 uPAR プラスミノーゲン クリングル 5 WAP、ホリスタチン、ネトリンドメイン）その他のセリンプロテアーゼ阻害剤には次のものがある。アプロチニン（トリプシン、プラスミン、カリクレインなどの強力阻害剤）、α1-アンチトリプシン、1型プラスミノーゲン活性化因子阻害剤、EPCR、レウペプチン、アンチペイン、キモスタチン、エラスチン、カリクレイン阻害剤、大豆トリプシン阻害剤、TFPI-2、ヒルジン、ビクニン、I-α-Iファミリーのメンバー、クニッツ、カザルおよびSTI-クニッツファミリーのメンバー。α1-アンチトリプシン（A1AT）は、トリプシン、キモトリプシン、エラスターゼその他のプロテアーゼを阻害する血漿糖タンパク質である。アミロイドタンパク質はエラスターゼ阻害剤となり得る。卵白由来のオボムコイドは、ある種のエラスターゼ、トリプシン、キモトリプシンを阻害する。IαI（インター-アルファ-インヒビター）、塩基性膵トリプシン阻害剤、およびライマメトリプシン阻害剤はプラスミンを阻害する。
強力トリプシン阻害剤としては、α1-アンチトリプシン、アプロチニン、トリプスタチン、大豆トリプシン阻害剤、ライマメトリプシン阻害剤、塩基性膵トリプシン阻害剤（クニッツ型）、卵白由来のオボスタチンとオボムコイド等がある。
【０３３２】
アスパラギン酸プロテアーゼのメンバーには次のものがある。BACE-1、BACE-2、プレシニリン-1、プレシニリン-2、カテプシンD、カテプシンE、βおよびγセクレターゼ。共通阻害剤としてはペスプタチン、ペプチドVdLPFFVdLがある。
システインプロテアーゼ にはカスパーゼ-1〜-13、カテプシン1、3、6、B、C、F、H、L、O、S、V、X、レグマイン、パパイン、セパレースがある。
カスパーゼ阻害剤はNAIP、cIAP-1、cIAP-2、XIAP、スルビビン、リビン等IAPファミリーのメンバーである。DAIBLOおよびOmiはIAP活性を抑制する。システインプロテアーゼのその他の阻害剤には、システインA、B、C、D、E/M、F、H、H2、S、SA、SN、フェチュインAおよびB、HPRG、キニノゲン、キニノスタチン、リポカリン-1、アプロチニン、α2-マクログロブリン等がある。
血漿中で見つかるα-マクログロブリン補体ファミリーの、その他の非特異的、共通阻害剤としては、α1-マクログロブリン、α1-阻害剤III等がある。
さらに、プロテアーゼ活性およびプロテアーゼ阻害剤活性の情報伝達系を調整する因子（例：タンパク質、成長因子）を使用することができる。
【０３３３】
加齢時に出現する高分子（タンパク質）
例えば細胞外基質、血漿、その他のタンパク質等の高分子は、加齢によってその様相、活性、構造を変化させる。
AGE（advanced glycation end-products：後期糖化反応生成物）は組織内で生成される。例えば、コラーゲンとその他すべての細胞外基質、血漿タンパク質は、加齢とともに酵素を介さず糖化される。糖付加物は、しばしばリジンやヒドロキシリジンの残留物と結合する。AGEは多くの細胞機能やタンパク質機能に影響する。これらの影響には、リガンド結合、他の高分子との相互作用、タンパク質の免疫原生の増加、タンパク質のプロテアーゼ感受性の減少、タンパク質ポリペチド内でのタンパク質架橋結合の増加、タンパク質に対する細胞内、細胞間架橋結合、LDLや免疫グロブリンのような非糖付加型タンパク質捕捉の増加、例えば線維芽細胞や平滑筋細胞内での異常細胞の増殖、細胞外基質成分の増加、その他さまざまな有害反応がある。AGE（後期糖化反応生成物）は、ヘモグロビン等の血漿タンパク質、β2-ミクログロブリン、またコラーゲン、エラスチン、β-アミロイドのような細胞外基質タンパク質等の数多くのタンパク質と相互作用し、TNFαのようなサイトカインの産生と転写因子経路であるNF-κBを増加し、組織の炎症と細胞のアポトーシスを促進する。数多くのAGEが糖化タンパク質を含む血漿中に存在している。
【０３３４】
AGE（advance glycation end-products：後期糖化反応生成物）は、最終的には細胞外基質の構造を縮小するRAGE受容体との相互作用を通じて、アポトーシスを促進する。RAGEの抗体は、AGEのタンパク質結合を阻害する。AGEはまた、アポトーシスとは無関係にNF-κB活性を誘発する。線維芽細胞のアポトーシスが、加齢した組織、創傷治癒の遅延、糖尿病患者の組織と炎症において、高い比率で観察されている。RAGEの可溶性の受容体、受容体の細胞外部位、またはAGE結合部位を含むペプチドを付加して、AGEを血漿や細胞外基質に結合したり、それらから取り外したりすることができる。カルシノンはAGEの形成を防ぐことができる。ALT-711やその他の架橋切断因子によって、AGEを除去することができる。タンパク質を含む抗酸化剤を追加して、AGEの形成、細胞やタンパク質の酸化を予防することができる。例えば、スーパーオキシドジスムターゼ（例：SOD-3）は細胞外基質や血漿中に存在して細胞を保護している。
【０３３５】
アミロイドβ-ペプチド（Aβ）、ネプリリシンおよびその他のプロテアーゼを分解するアンギオテンシン変換酵素は、アミロイドβペプチドを開裂することができる。アミロイド前駆体変換の阻害剤としては、例えばβおよびγセクレターゼに対する阻害剤等がある。
加齢した組織で産生されるさまざまな細胞や、これらの細胞によって産生されるタンパク質は、時系列的に保持された自己移植の細胞等の修復治療に使用することができる。
【０３３６】
成長因子、サイトカイン、ケモカイン、ホルモン、細胞外基質、および血漿タンパク質は加齢とともに量的、質的に変化する。これらの因子やホルモンの適切な型、形態、濃度で、生体外や生体内で細胞を培養することにより、本発明における細胞の生存、振舞、増殖を拡大することができる。皮膚の線維芽細胞、エストロゲン、プロゲステロンは、メタロプロテイナーゼを阻害することにより、細胞外基質の分解を抑制し、エストロゲンはコラーゲン、ヒアルロン酸、GAG、特定のプロテオグリカンなどに対するECM合成を高める。皮膚の肥厚は維持・改善することができる。さらに、これらのステロイドによりケラチノサイトが増殖し、一方でエストロゲンがアポトーシスを抑制して表皮萎縮を予防する。創傷治癒時、エストロゲンはマクロファージを刺激して、ケラチノサイト内にNGF、GM-SCF、線維芽細胞内にβFGF、TGF-β1を産生し、創傷部の神経分布再生、上皮再形成、肉芽組織の形成を強化する。加齢した組織（例：皮膚）では、細胞外基質の構造を維持する上で過度のプロテアーゼ活性がみられる。サイトカインTGFαやIL-1βを含む皮膚等の、紫外線によって加齢した組織では、フィブリンの減少、MMP-1、-2および-9の増加、トロポエラスチン、コラーゲンおよびTIMP、成長ホルモン、IGF-1、DHEA、性ステロイドの合成変化がみられる。
【０３３７】
細胞の老化-テロメア、細胞の休止-血漿枯渇
身体の細胞数を十分に増加させるための3つの制約として、細胞の休止、細胞の老化、細胞間接触の阻害がある。細胞の休止は、血漿のない媒体の使用時、または血漿が枯渇している場合に発生し、細胞増殖の停止が引き起こされて、細胞周期がG0の段階でロックされ、血漿によってG1からS段階までが誘発される。また生体外の細胞が融合性になり、細胞が低密度状態で再度投入されるまで増殖が停止する場合に、細胞間接触の阻害が発生する。この細胞増殖の抑制は、成長のための血漿因子の損失による可能性がある。
【０３３８】
遺伝的に決定された複製可能期間によって身体細胞数が制限され、細胞がG1細胞周期段階に永久に留まる場合に、細胞の老化が発生する。X線照射、酸化ストレスや内因性の要因により、p53、Rb、p16/INK4A等の腫瘍抑制タンパク質が活性化し、細胞が老化する可能性がある。テロメアの不足は老化の内因性の原因となる。
老化は停止可能であり、エプスタイン・バー・ウイルス、シミアン・ウイルス40 T抗原、アデノウイルスE1AおよびE1B、またはヒトパピローマウイルスE6およびE7からのウイルス遺伝子でウイルス形質転換を行うことにより、複製期間の永久的な延長が可能である。これらのプロセスに関与する多くのタンパク質は、細胞周期タンパク質として出現する。細胞増殖の阻害剤としては次のものがある。
【０３３９】
細胞周期に従う細胞は、例えば血漿中に存在するような成長因子の出現によって増殖を行う。この成長因子の枯渇は逆の結果を引き起こし、細胞周期のG0段階で細胞がロックされる。
TGF-β、レチノイド、p53、ヒストンアセチラーゼ阻害剤p38、p27、p19、p16、p14、p21、pRbは老化を引き起こし得るチェックポイントとなるタンパク質である。テロメア経路は老化を防ぐ手段となる。
【０３４０】
老化細胞の産生は、コラゲナーゼ、ストロモリシン、プラスミノーゲン活性化因子、TIMP活性その他によって増加する。細胞が生体外で増殖しないから老化するわけではないことが重要である。しかし、増殖期間中、老化細胞に接近しないこともまた重要である。さもないと、移植のために適切な細胞数を得ることは困難か、不可能になってしまう。さらに、細胞は表現型が変化し、移植される組織（細胞外基質合成が少なく、プロテアーゼ活性が高い）を損傷しかねない。また、変化した遺伝子発現プロファイルのために細胞が拒絶され、免疫システムによって不適切なタンパク質の産生と認識されてしまう可能性がある。
【０３４１】
DNAの損傷、酸化ストレス、過度の増殖、細胞の培養条件が変化し、細胞が適応できないことによる培養ショック（例：細胞の成長用プラスチック面に対する支持細胞層）によって、未熟な細胞の老化が起こり得る。インスリン様成長因子Iは、細胞（例：骨格筋未分化細胞）の複製可能期間を生体外で延長することができる。G1/S期間を延長可能なその他の因子も同様である。RasやRafのようながん遺伝子の過剰発現を利用したり、特定の成長因子またはフィブロネクチンや細胞接着タンパク質のような特定の細胞外基質構成要素を、好ましい実施形態において追加することで、細胞増殖を維持することができる。
【０３４２】
テロメアの不足によって危険な状態になるまでは、網膜芽細胞腫（pRB）やp53腫瘍抑制経路の阻害によって、老化を防ぐことができる。細胞のあらゆる複製可能段階におけるTERT（telomerase reverse transcriptase：テロメラーゼ逆転写酵素）の内因性の発現によって、本発明の一部である反老化戦略即ち細胞増殖と老化の予防・逆転に関して、細胞の永久性が示されることになる。好ましくは、テロメアの保護や細胞培養での付加につながる、テロメラーゼ活性を増加させるTERTや因子の追加によって、これがなされるべきである。
【０３４３】
細胞の接触阻害は、低密度での再添加または血漿や血漿因子の追加によって克服することができる。再添加しない場合、血漿または血漿因子によって、生体外における細胞の3次元の凝集や形成が可能となる。このように、生体外における組織や器官の合成においては、枠組みの導入なしに、組織成分の配置が3次元的に自然に行われて細胞が形成される。さらに、前記配置の進行によって、細胞がより移植に適するようになるが、これは細胞が生体内での自然な組織環境における形態に整形されるからである。
【０３４４】
分子およびタンパク質を細胞に添加
移植の前に、当該細胞に分子およびタンパク質を添加することができる。分子およびタンパク質は、被検体あるいは生体外での細胞の拡大に導入される細胞の共注入液または組成の一部として添加することができる。この分子またはタンパク質の添加の目的は、前記細胞の効果またはそれ自体の欠陥を維持または改善することである場合がある。前記細胞の細胞播種、移植位置への細胞粘着、細胞移動、生存、増殖、栄養、代謝、分化、および成長は、前記分子またはタンパク質の添加が前記細胞に与え得るいくつかの有益な特性である。前記分子またはタンパク質を選択的に免疫原生にすることができる。血清内のタンパク質および他の分子を選択的に免疫原生にすることができ、かつ前記欠陥および／または前記細胞の培養の処置に重要な活性を提供することも可能である。従って本書に記述されるさまざまなタンパク質および他の因子は、選択的に免疫原生であり得、例えば細胞培養に導入される物質または細胞とともに患者に導入される物質として、本書に記述される組成および方法の一部として用いることが可能である。例えば、前記タンパク質または他の因子を、前記細胞培地または前記細胞の成長に用いられる血清の一部とすることができる。前記細胞培地からの因子を前記細胞とともに残し前記患者に導入すること、あるいは代わりに、患者に導入される細胞に前記培地からの因子を添加することができる。
【０３４５】
いくつかの実施形態において、培養細胞の収集は、例えばかき取り、振動、剥離、トリプシン処理、圧力、またはキレート剤の使用など、機械的、物理的、または化学的な手段で行われる。前記細胞を遠心分離すること、洗浄すること、および生理溶液、培地、または浸透圧が均等な製剤中に懸濁することができる。前記細胞を含有する溶液に因子を添加することにより、収集された細胞を因子で培養することができる。前記因子は、予め定められた時間、前記細胞と接触した状態に維持される。この時間を経て、前記因子は前記細胞と相互作用し、前記細胞上または前記細胞内への望ましい度合いでの組み込みが達成される。
【０３４６】
吸収性タンパク質の有効量で前記細胞を培養することができる。前記タンパク質は、細胞の数および濃度に相応した濃縮液に添加されるときに、収集細胞に添加され、前記細胞の表面に吸収される。次に、前記タンパク質は、前記細胞上で利用可能な細胞表面受容体と特定の相互作用をする。この特定の相互作用は前記細胞に信号を提供し、移植前の前記収集細胞においてもしくは患者への導入後のいずれかに望ましい効果を達成する。こうして、吸収性タンパク質は前記収集細胞内の細胞のみに効果的に結合し、他の表面または物質とは結合しない。細胞のみと結合するタンパク質は、前記細胞によって取り込まれるまたは分解され得る。前記タンパク質の分解または取り込みすなわち誘発される信号変換は細胞とタンパク質の相互作用を調整する上でしばしば重要な要素となるので、多くの場合、この吸収性は有利である。これに対し、組織の一部であるか、基質内にあるか、または表面に吸収されているタンパク質は、細胞上または細胞内へ吸収されにくい。細胞吸収性とは、細胞上への受容体の特定の結合を起こし、かつ細胞のみへの特定の結合をする吸収性タンパク質を表す用語である。細胞吸収性タンパク質は、定義上、基質または組織内のタンパク質ではない。有効量とは、前記細胞の有意な部分を反応させるために十分な量である。前記細胞を前記タンパク質で処置する目的は、前記細胞内に望ましい効果を生成することにより十分な数の細胞および細胞受容体を前記因子に暴露し、結果を得ることである。従って、有効量は、因子への偶然の暴露または微量の暴露など（これらに限定せず）とは容易に区別されるものである。しかしながら、タンパク質に関係する発明の実施形態は、適切であれば、吸収性または非吸収性タンパク質を含む場合がある。
【０３４７】
患者に導入される細胞の収集体は、細胞培養または患者内の細胞の群からそれを区別する特定の性質を有する。患者に導入するための収集は、例えば、慎重な滅菌法、適切な数および濃度の細胞の収集、意図しない副作用のない慎重に選択された試薬の使用、例えば適切な血清、成長因子、および他の成分の使用などを必要とする。これに対し、細胞の培養は、継代または分析を目的としたより低い細胞濃度、異なる試薬の使用、および異なる装置の使用がかかわることが予期される場合がある。さらに、当該分野の当業者であれば、例えばバイオケミカルマーカーまたは細胞（および細胞を含む組織）の形態の視覚化によって、培養細胞を患者生来の細胞と区別することができる。
【０３４８】
列挙されるタンパク質およびそれら各々の類も、本発明の特定の実施形態に含まれる。本書に記述されるタンパク質を（例えば化学的に）改変すること、あるいは選択的にスプライスして異なる特徴および能力を表現することができる。大半のタンパク質は、ヒトゲノム・プロジェクト（Human Genome Project）で示されたように選択的にスプライスされるものであり、当業者であれば、これらの選択的にスプライスされたバージョンを本発明に組み込むことができる。本文を通して言及したものおよび当該技術で既知のものの他に、前記タンパク質に固有の機能的フラグメント、ドメイン、モチーフ、およびシーケンスを用いることができる。
【０３４９】
加えて、アミノ酸または他の化学組成のポリマーを、本発明の細胞とともに使用することができる。血清タンパク質およびECMタンパク質の多く、および他のタンパク質因子は、受容体を通して作用し、信号伝達経路を指揮する。受容体を用いて、意図される信号伝達経路を起動すること、あるいは適切な生体リガンドを結合することにより自然の受容体経路を抑制することができる。前記信号伝達経路にかかわるさまざまな信号伝達経路またはタンパク質を制御する因子を用いることができる。
【０３５０】
装置
本発明の組成は、組織の欠陥および位置に依存し皮下注射器、腹腔鏡、または他の手段である装置を使用して供給することができる。例えば、被検体の皮膚欠陥を補修する場合、皮下注射器はシリンジチャンバと、そこに配置されるポジションと、前記チャンバと伝達するオリフィスと、前記細胞を有する懸濁液とを有することになる。医薬的に受け入れられる担体液に前記懸濁液を入れ、前記オリフィスに皮下針を固着する。これらおよび他の細胞を異なる組織に注入する場合の腹腔鏡による注入の場合も同様である。組織にタンパク質および／または細胞を伝達するための他の手段は、貫通剤、血管拡張剤のような化学的手段、吸収、散布、超音波、バリスティック伝達、エレクトロポレーションのような物理的手段などである。欠陥を治療するために用いられる装置（例えばステント）を、好ましくは自己組織である組織で包むことにより、導入される組織に対するホストの反応を防いだり、前記装置の「取り入れ」を向上したりすることなどができる。前記装置に付着する前に生体外で立体的にこの組織を培養することができる。組織から独立にあるいは組織とともに、前記装置はそこに付着された細胞（好ましくは自己細胞）を有することができる。タンパク質のような付着因子を用いて細胞を前記装置に結合することができる。細胞または組織を用いて、タンパク質のような細胞因子を生成し、欠陥を治療することあるいは時間をかけ最終的に前記装置を交換すること（例えば生分解可能なステント）も可能である。上記と同様の機能的方法で、タンパク質または分子も前記装置に付着することができる。前記装置への付着またはコーティングは部分的でも全体的でもよい。
【０３５１】
ヒトである患者における欠陥の治療および生体内テスト
組織は細胞の収集体であり、収集体として体内で特定の機能を行う。本書に記述されるプロセスは、肥大、萎縮、ジストロフィーの影響を受けた多くの組織を含む組織の形態の変更、調整、および／または回復に有用である。他の実施形態は、既存の組織を細胞および／またはタンパク質で賦活して付加的組織構造および／または機能を提供することによってこれらおよび他の欠陥を補修することを目的とする。
【０３５２】
その他の組織欠陥を治療するための方法および組成について説明する。前記欠陥としては、米国特許出願第09/632,581号（2000年8月3日付で出願）に含まれる欠陥が含まれ、前記特許出願はその優先特許出願第60/037,961号および第10/129,180号（2002年5月3日付で出願）を伴うものであり、前記優先特許出願はその優先特許出願第60/163,734号を伴うものであって、これら特許出願の各々は本書におけるこの参照によりここに組み込まれる。欠陥は、尿失禁に至る泌尿器括約筋の欠陥、肛門括約筋変性または欠陥による便失禁、膀胱尿管逆流現象の原因となる尿管口変性または欠陥、および胃食道逆流のような胃食道括約筋の欠陥を含む（ただし限定せず）。皮膚欠陥は、しわ、陥没型瘢痕または他の皮膚陥没、ストレッチマーク、唇の形成不全、隆起ホウレイ線、隆起陰唇線、尋常性座瘡、鼻形成術後の異常、栄養不全の瘢痕、栄養過多の瘢痕（例えばケロイド）、外傷、予防接種、外科手術、およびその他の原因による瘢痕、セルライト、皮膚弛緩、皮膚の老化、皮膚の菲薄化、および皮膚賦活の必要を含む。欠陥として、乳房組織欠乏症、傷および火傷、ヘルニア、歯周病および歯周障害、腱、筋肉、および靭帯の裂傷、脱毛症および組織塊調整が含まれるが、これらに限定されない。
【０３５３】
一般に、増強および補修の方法は、治療または増強を受ける欠陥またはその近くの組織に、本書に記述するように細胞および他の組成を配置する工程を含むことができる。前記欠陥に近位に細胞を配置することによって多くの欠陥補正を行うことができるが、細胞を遠位に配置することによって行われる欠陥治療および補正もある。一例は、被検体に細胞を全身的に導入することである。別の例は、欠陥を治療するために欠陥として一組織または同一組織の遠位部分内に細胞を配置することである。前記細胞は一重項状態すなわち前記細胞の少なくとも約4分の3が他の細胞に付着していない状態の場合がある。前記細胞は互いに独立している、すなわち前記細胞数の約半分は、注入時に他の細胞に付着していない場合がある。前記細胞は互いに部分的に独立している、すなわち前記細胞数の少なくとも約半分は約10細胞未満の集合にある場合がある。あるいは、前記細胞は互いに付着している、すなわち前記細胞数の少なくとも約半分は約50細胞以上の集合にある場合がある。前記細胞は、例えば板にあること、例えば細胞培養フラスコまたはローラーボトルからのものであること、または3次元基質にある場合がある。前記細胞のあり方および正確な配置は、治療または望ましい増強を受ける欠陥に依存するものであり、一般に、その組織の構造および機能に関係する。
【０３５４】
本発明の特定の実施形態および付加的特徴
本発明の特定の実施形態は、（A）自己細胞および免疫原生細胞吸収性タンパク質を生体外で生成する方法または組成と、（B）患者の欠陥を治療する組成または方法であって、生体外で自己細胞の培養物を拡大する工程と、患者に導入するためにその培養された細胞を収集する工程と、前記培養された細胞を細胞培地血清誘導タンパク質とともに前記患者の欠陥またはその近くに沈着する工程とを有する組成または方法と、（C）患者の欠陥を治療する組成または方法であって、生体外で自己細胞の培養物を拡大する工程と、患者に導入するためにその培養された細胞を収集する工程と、免疫原生細胞吸収性タンパク質の有効量で前記細胞を培養して前記細胞のみに限定的に前記タンパク質を結合させる工程であって、前記タンパク質が前記細胞の細胞表面受容体と特定の相互作用をする工程と、前記患者の欠陥またはその近くに、前記欠陥またはその近くを補修または増強するために前記細胞を沈着する工程とを有する組成または方法と、（D）自己細胞と、前記自己細胞を寄与した個体に関係する免疫原生細胞吸収性タンパク質を生体外で生成する方法または組成と、（E）患者の欠陥を治療する組成または方法であって、生体外で自己細胞の培養物を拡大する工程と、欠陥またはその近くにある組織を補修または増強するために前記患者の欠陥またはその近くにある予め定められたアポトーシス抑制タンパク質とともに細胞を沈着する工程とを有する組成または方法と、（F）患者の欠陥を治療する組成または方法であって、生体外で自己細胞の培養物を拡大する工程と、前記細胞と精製吸収性血清タンパク質とを有する混合物を調製する工程と、欠陥またはその近くにある組織を補修または増強するために欠陥またはその近くに前記混合物を沈着する工程とを有する組成または方法と、（G）患者の欠陥を治療する組成または方法であって、生体外で自己細胞の培養物を拡大する工程と、予め定められたプロテアーゼ抑制因子と前記細胞とを有する混合物を、前記欠陥またはその近くにある組織を補修または増強するために前記欠陥またはその近くに沈着する工程とを有する組成または方法と、（H）患者の組織を治療する組成または方法であって、生体外で自己細胞の培養物を拡大する工程と、前記組織を治療するために、老化による欠乏症のある組織欠陥またはその近くに前記自己細胞を移植する工程とを有する組成または方法と、（I）患者の欠陥を治療する組成または方法であって、前記患者の欠陥またはその近くに、前記欠陥またはその近くにある組織を補修または増強するために、細胞粘着修正タンパク質を沈着する工程とを有する組成または方法と、（J）患者の欠陥を治療する組成または方法であって、生体外で自己細胞の培養物を拡大する工程と、前記自己細胞を、さらに吸収性免疫原生タンパク質を有するゲル化しない生理溶液中で培養する工程と、前記細胞と前記タンパク質との混合物を、前記欠陥またはその近くにある組織を補修または増強するために前記患者の欠陥またはその近くに沈着する工程であって、この工程において選択的に前記タンパク質を例えば非溶解性タンパク質、細胞外基質分子（細胞外基質タンパク質を含む）、または血清タンパク質にする工程とを有する組成または方法と、（K）患者の���陥を治療する組成または方法であって、生体外で自己細胞の培養物を拡大する工程と、前記患者に導入するために前記細胞を収集する工程と、前記細胞とタンパク質との混合物を前記患者の欠陥またはその近くに、前記欠陥の近くまたは欠陥のある組織を補修または増強するために沈着する工程とを有する組成または方法と、（L）患者を治療する組成または方法であって、非自己細胞を自己血清で培養する工程と、前記非自己細胞を前記患者に導入する工程とを有する組成または方法と、（M）患者の欠陥を治療する組成または方法であって、培養細胞を形成するために生体外で自己細胞の培養地を拡大する工程と、前記患者に導入するために前記培養細胞を収集する工程と、前記培養細胞を、血清誘導タンパク質とともに前記患者の欠陥またはその近くに沈着する工程とを有する組成または方法と、（N）患者の組織欠陥を治療する組成または方法であって、哺乳類細胞を前記組織欠陥またはその近くに配置する工程を有する組成または方法と、（O）患者の組織欠陥を治療する組成または方法であって、哺乳類細胞および免疫原生タンパク質を被検体の前記組織欠陥またはその近くに配置する工程を有する組成または方法と、（P）患者を治療する組成または方法であって、組織欠陥またはその近くに移植するために、前記患者より若いドナーからの全血、分割血、血漿、および／または血清を用いて、自己細胞の培養物を生体外で拡大し、老化による欠乏症のある前記組織を治療する工程を有する組成または方法と、（Q）患者を治療する組成または方法であって、前記患者より若いドナーからの全血、分割血、血漿、および／または血清を自己細胞から拡大された細胞の培養物と組み合わせて前記患者に移植する工程を有する組成または方法と、（R）患者を治療する組成または方法であって、前記組織欠陥またはその近くで、例えば老化による欠乏症のある組織を治療するために、前記患者より若いドナーからの細胞および／または全血、および／または分割血、および／または血漿、および／または血清を用いる工程を有する組成または方法と、（S）患者を治療する組成または方法であって、例えば老化による欠乏症のために組織、組織群または全身を治療するために、前記患者より若いドナーからの細胞および／または全血、および／または分割血、および／または血漿、および／または血清を用いる工程を有する組成または方法と、（T）とを含むものである。
【０３５５】
上記（A）〜（T）の特徴、工程、または他の要素は、副結合を含む自己矛盾のない任意の組み合わせにおいて、本書にローマ数字で示される以下の要素、すなわち（i）前記タンパク質が組み換えタンパク質、溶解性タンパク質、非溶解性タンパク質、細胞外基質分子、血清タンパク質、成長因子、ホルモン、サイトカイン、ケモカイン、または細胞粘着タンパク質である、（ii）前記タンパク質が非自己タンパク質である、（iii）前記タンパク質が細胞培養中に用いられる、または前記細胞の培養完了後に前記細胞に付加される、（iv）前記タンパク質が細胞結合部位を含む、またはさらにECM結合部位を含む、（v）前記タンパク質がプロテオグリカン、フィブロネクチン、ビトロネクチン、コンドロネクチン、ラミニン、テネイシン、フィブリン、フィビュリン、ボンウィルブランド因子、またはエラスチンである、（vi）さらに、組織に付加的弾性を提供するタンパク質を有する、（via）前記タンパク質が前記組織に付加的弾性を提供する、（vii）前記欠陥が、しわ（rhytid）、ストレッチマーク、陥没瘢痕、皮膚陥没、唇の形成不全、しわ（wrinkle）、隆起ホウレイ線、隆起陰唇線、および尋常性座瘡から成る群から選択される、（viii）前記欠陥が、皮膚弛緩、皮膚の菲薄化、栄養不全瘢痕、ケロイド、外傷、火傷、ヘルニア、乳房欠乏症、靭帯裂傷、腱裂傷、筋肉裂傷、脱毛症、歯周障害、歯周病、括約筋構造欠乏症から成る群から選択される、（ix）前記欠陥が組織不全、組織ジストロフィー、弛緩、菲薄化、弾性欠損、タンパク質プロフィールの変化、組織塊の減損、細胞外基質量の低下、プロテオグリカンの低下、組織膨圧の低下、組織水分の低下、プロテアーゼ活性量の増加、細胞数の損失、または前駆細胞または幹細胞の損失から成る群から選択される老化を原因とする欠乏症である、（x）前記タンパク質がアグレカン、アグリン、バマカン、脳濃縮ヒアルロナン、ビグリカン、ブレビカン、デコリン、フィブロモジュリン、ケラトカン、ルミカン、ニューロカン、パーレカン、シンデカン、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、およびベルシカンから成る群から選択されるプロテオグリカンである、（xi）前記タンパク質がアポトーシス抑制タンパク質、アノイキス抑制タンパク質、血管形成タンパク質、血管拡張タンパク質、炎症性タンパク質、充填または賦活タンパク質、分化タンパク質、細胞マイトジェン、細胞外基質生成促進剤、化学誘引物質、細胞培地血清誘導タンパク質、凝固性タンパク質、輸送タンパク質、またはプロテアーゼ抑制因子である、（xii）さらに、アポトーシス抑制タンパク質を前記細胞とともに前記欠陥またはその近くに導入する工程を有する、（xiii）さらに、アノイキス抑制タンパク質を前記細胞とともに前記欠陥に導入する工程を有する、（xiv）さらに、プロテアーゼ抑制因子を前記細胞とともに前記欠陥またはその近くに導入する工程を有する、（xv）さらに、輸送タンパク質を前記細胞とともに前記欠陥またはその近くに導入する工程を有する、（xvi）さらに、凝固性タンパク質を前記細胞とともに前記欠陥またはその近くに導入する工程を有する、（xvii）さらに、細胞培地血清タンパク質を前記細胞とともに前記欠陥またはその近くに導入する工程を有する、（xviii）さらに、化学���引物質を前記細胞とともに前記欠陥またはその近くに導入する工程を有する、（xix）さらに、細胞外基質生成促進剤を前記細胞とともに前記欠陥またはその近くに導入する工程を有する、（xx）さらに、細胞マイトジェンを前記細胞とともに前記欠陥またはその近くに導入する工程を有する、（xxi）さらに、分化タンパク質を前記細胞とともに前記欠陥またはその近くに導入する工程を有する、（xxii）さらに、充填または賦活タンパク質を前記細胞とともに前記欠陥またはその近くに導入する工程を有する、（xxiii）さらに、炎症性タンパク質を前記細胞とともに前記欠陥またはその近くに導入する工程を有する、（xxiv）さらに、血管拡張タンパク質を前記細胞とともに前記欠陥またはその近くに導入する工程を有する、（xxvi）前記自己細胞が乳頭線維芽細胞、網状線維芽細胞、筋膜線維芽細胞、前脂肪細胞、または含脂肪細胞を有するものである、（xxvii）前記自己細胞が皮膚線維芽細胞を有するものである、（xxviii）前記自己細胞が固有層線維芽細胞、間質線維芽細胞、筋線維芽細胞、皮膚乳頭線維芽細胞、筋肉細胞、平滑筋細胞、骨格筋繊維目細胞、横紋筋細胞、筋芽細胞、上皮細胞、内皮細胞、または皮下細胞を有するものである、（xxix）前記自己細胞が間葉細胞、非分化間葉細胞、または幹細胞である、（xxx）前記タンパク質が自己細胞または非自己細胞である、（xxxi）前記タンパク質が、前記細胞の培養中に用いられるもしくは前記細胞の培養完了後に前記細胞に付加される、（xxxii）前記タンパク質が、細胞結合部位またはECM結合部位を含むものである、（xxxiii）前記タンパク質が細胞マイトジェン、分化タンパク質、充填または賦活タンパク質、炎症性タンパク質、血管拡張タンパク質、血管形成タンパク質、化学誘引剤、血管拡張剤、ECM生成促進剤、細胞増殖タンパク質、分化タンパク質、または細胞培地血清誘導タンパク質である、（xxxiv）前記自己細胞が乳頭線維芽細胞、網状線維芽細胞、筋膜線維芽細胞、前脂肪細胞、および含脂肪細胞から成る群から選択されるものである、（xxxv）前記自己細胞が皮膚線維芽細胞を有するものである、（xxxvi）前記自己細胞が固有層線維芽細胞、間質線維芽細胞、筋線維芽細胞、皮膚乳頭線維芽細胞、筋肉細胞、平滑筋細胞、骨格筋細胞、横紋筋細胞、筋芽細胞、上皮細胞、内皮細胞、または皮下細胞を有するものである、（xxxvii）前記自己細胞が、間葉細胞、非分化間葉細胞、または幹細胞である、（xxxvii）前記タンパク質が、アノイキスの抑制に有効な溶解性または吸収性の細胞外基質分子である、（xxxviii）前記細胞外基質分子が、アポトーシスまたはアノイキスの抑制に有効な（有効）量のフィブロネクチンまたはビトロネクチンである、（xxxix）前記タンパク質が、腫瘍壊死因子、Fas、βNGF、RANK、TRAIL、およびRAGE受容体、またはアポトーシス受容体の抑制物質である、（xl）前記アポトーシス受容体抑制物質が、PDGF、IGF、FGFs、IL-15（xli）のおとり受容体であるか、溶解性受容体であるか、または前記アポトーシス受容体である、（xli）さらに、前記欠陥またはその近くに、前記細胞とともに、細胞外基質分子を導入する工程を有する、（xlii）前記細胞外基質分子が自己細胞によってインヴィトロ生成される、（xliii）さらに、前記欠陥またはその近くに、前記細���とともに、アグレカン、アグリン、バマカン、脳濃縮ヒアルロナン、ビグリカン、ブレビカン、デコリン、フィブロモジュリン、ヘパラン硫酸プロテオグリカン、ケラトカン、ルミカン、ニューロカン、パーレカン、シンデカン、およびベルシカンから成る群から選択されるプロテオグリカンを導入する工程を有する、（xliv）さらに、前記欠陥またはその近くに、プロテアーゼ抑制因子を導入する工程を有する、（xlv）前記欠陥を有する細胞または組織の源として用いられる組織が、筋膜、乳頭、結合組織、網状組織、固有層、脂肪、腱、または靭帯である、（xlvi）前記欠陥を有する細胞または組織の源として用いられる組織が、真皮、間質、毛包部位、真皮乳頭、表皮組織、上皮組織、または筋肉組織である、（xlvii）前記自己細胞が皮膚線維芽細胞、乳頭線維芽細胞、網状線維芽細胞、筋膜線維芽細胞、前脂肪細胞、または含脂肪細胞を有するものである、（xlviii）前記自己細胞が固有層線維芽細胞、間質線維芽細胞、筋線維芽細胞、皮膚乳頭線維芽細胞、筋肉細胞、平滑筋細胞、骨格筋細胞、横紋筋細胞、筋芽細胞、上皮細胞、または表皮細胞を有するものである、（xlix）前記自己細胞が間葉細胞または非分化間葉細胞を有するものである、（l）さらに、前記アポトーシス抑制タンパク質と、アノイキス抑制タンパク質、血管形成タンパク質、血管拡張タンパク質、炎症性タンパク質、充填または賦活タンパク質、分化タンパク質、細胞マイトジェン、細胞外基質生成促進物質、化学誘引物質、細胞培地血清誘導タンパク質、凝固性タンパク質、輸送タンパク質、またはプロテアーゼ抑制因子のうち少なくとも1つとを組み合わせる工程を有するものである、（li）前記自己細胞が前記血清タンパク質とともに培養される、（lii）血清タンパク質が血清タンパク質の混合物の一部である、（liii）（前記混合物が）、さらに、前記血清タンパク質を特定結合する細胞培地因子を有するものである、（liv）前記血清タンパク質がアルブミンであり、前記細胞培地因子が脂質である、（lv）前記血清タンパク質がフェリチンであり、前記細胞培地因子が鉄である、（lvi）前記血清タンパク質が輸送タンパク質である、（xlvii）前記血清タンパク質が輸送タンパク質であり、血清成長因子、サイトカイン、ケモカイン、またはホルモンと結合するものである、（lviii）前記血清タンパク質がトランスフェリン、トランスコバラミン、高密度リポタンパク質、低密度リポタンパク質、セルロプラスミン、またはホルモン結合タンパク質である、（lix）さらに、前記欠陥またはその近くに、前記細胞とともに、細胞外基質分子を導入する工程を有するものである、（lx）前記細胞外基質分子が生体外で前記自己細胞によって生成されるものである、（lxi）（前記混合物が）、さらに、アポトーシス抑制タンパク質、アノイキス抑制タンパク質、血管形成タンパク質、血管拡張タンパク質、炎症性タンパク質、充填または賦活タンパク質、分化タンパク質、細胞マイトジェン、細胞外基質生成促進物質、化学誘引物質、細胞培地血清タンパク質、凝固性タンパク質、輸送タンパク質、またはプロテアーゼ抑制因子を有するものである、（lii）前記血清タンパク質がアポトーシス抑制タンパク質、アノイキス抑制タンパク質、血管形成タンパク質���血管拡張タンパク質、炎症性タンパク質、充填または賦活タンパク質、分化タンパク質、細胞マイトジェン、細胞外基質生成促進物質、化学誘引物質、細胞培地血清誘導タンパク質、凝固性タンパク質、輸送タンパク質、またはプロテアーゼ抑制因子である、（liii）前記欠陥を有する組織または細胞源として用いられる組織が筋膜、結合組織、乳頭、網状組織、固有層、脂肪、腱、または靭帯である、（liv）前記プロテアーゼ抑制因子が基質メタロプロテイナーゼ抑制物質、メタロプロテイナーゼの組織抑制物質、α1抗トリプシン、大豆トリプシン抑制物質またはα2マクログロブリンである、（lv）前記タンパク質が溶解性タンパク質、非溶解性タンパク質、ゲル中のタンパク質、細胞外基質分子、血清タンパク質、成長因子、ホルモン、サイトカイン、または細胞粘着タンパク質である、（lvi）前記タンパク質が免疫原生である、（lvii）前記タンパク質が前記細胞の培養中に用いられるもしくは前記細胞の培養完了後に前記細胞に付加される、（lviii）前記タンパク質が細胞結合部位を含む、またはさらに、ECM結合部位を含む、および／または（lix）免疫原生タンパク質、血清誘導タンパク質、血清タンパク質、または他のタンパク質が、例えば0.1％より高い濃度または0.15％〜20％の濃度で存在する、一つのもしくはそれ以上を選択的目的とすることができる。
【０３５６】
追加的実施形態は、本発明の特定の実施形態の特徴として独立もしくは組み合わせにおいて考慮され、これらは、既に上述した実施形態L、M、N、O、P、Q、R、S、およびTを含む。これらの実施形態を以下の要素（これらは実施形態A〜Kと組み合わせることもできる）、すなわち（lx）前記（非自己）細胞が幹細胞、臍帯細胞、体核転送細胞、胚幹細胞である、（lxi）細胞を用いて行う患者の治療が、ヒト血清で前記細胞を培養する工程であって、前記細胞が選択的に哺乳類細胞、幹細胞、胚幹細胞である、（lxii）前記細胞を受け取る患者より若い人からのヒト血清で細胞を培養する工程、（lxiii）成人ではない人からのヒト血清で細胞を培養する工程であって、前記細胞が、選択的に哺乳類細胞、幹細胞、胚幹細胞（lxiv）家族からの血清を前記細胞の培養に用いる工程、（lxv）臍帯血清で細胞を培養する工程、（lxvi）ヒト胎児血清で細胞を培養する工程、（lxvii）患者の組織欠陥を治療する工程であって、前記組織欠陥またはその近くに哺乳類細胞を配置する工程を有する工程、（lxviii）前記自己細胞が、前記患者が前記細胞を受け取るときに前記患者の細胞より若いものである、（lxix）前記哺乳類細胞または結成が被検体と組織適合性があるものである、（lxx）前記哺乳類細胞が前記患者の家族からのものである、（lxxi）前記家族が前記患者より若い家族である、（lxxii）前記哺乳類細胞が若い成人、思春期前の若者、新生児、胎児、または胚期組織である、（lxxiii）被検体より若い前記細胞および／または血清を用いて組織欠陥を治療する、（lxxiv）患者の組織欠陥を治療する工程であって、哺乳類細胞および免疫原生タンパク質を被検体の組織欠陥またはその近くに配置する工程であり、前記哺乳類細胞が選択的に自己細胞である、（lxxv）前記患者に導入される細胞および／または血清が、遺伝的関係を有する家族であるドナーからのものである、と適宜組み合わせることができる。
【０３５７】
本書で言及されるすべての特許、特許出願、公告、機関誌記事、および出版物は、参照によりここに組み込まれる内容が本書に明示される開示と矛盾しない限り、この参照によりここに組み込まれる。本書に記述されるさまざまな実施形態の要素は、機能的実施形態を得るために適宜互いに組み合わせること、およびさまざまに取り合わせることができる。
【国際調査報告】
2009508650.tif 000002