(57)【要約】  本発明は、ワクチンの製造のための、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性物質の免疫原性量および生弱毒化ＰＲＲＳウイルスの免疫原性量の使用、ならびにそのようなワクチンを含むワクチンキットに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）で初回免疫されたブタへのマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンおよびＰＲＲＳＶワクチンの組合せ投与に使用するワクチンの製造のための、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性物質の免疫原性量および生弱毒化ＰＲＲＳウイルスの免疫原性量の使用。
【請求項２】
マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性物質がマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）バクテリンである、請求項１記載の使用。
【請求項３】
生弱毒化ＰＲＲＳウイルスが欧州株のものである、請求項１または２記載の使用。
【請求項４】
組合せ投与に使用するワクチンが生弱毒化ＰＲＲＳウイルスおよびマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性物質を混合形態で含む、請求項１から３のいずれか１項記載の使用。
【請求項５】
請求項１から３のいずれか１項記載のマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性物質および生弱毒化ＰＲＲＳウイルスの組合せ投与に使用するワクチンを含んでなり、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性物質および生弱毒化ＰＲＲＳウイルスがそれぞれ別々の容器内に存在することを特徴とするワクチンキット。
【請求項６】
請求項１から３のいずれか１項記載のマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性物質および生弱毒化ＰＲＲＳウイルスの組合せ投与に使用するワクチンを含んでなり、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性物質および生弱毒化ＰＲＲＳウイルスが１つの単一の容器内に存在することを特徴とするワクチンキット。
【請求項７】
マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンでの第１（初回免疫）ワクチン接種を行い、ついでマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性物質および生弱毒化ＰＲＲＳウイルスでの組合せワクチン接種を行う段階を含んでなる、ＰＲＲＳウイルスおよびマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染に対するブタのワクチン接種のための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ワクチンの製造のための、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性物質の免疫原性量および生弱毒化ＰＲＲＳウイルスの免疫原性量の使用、ならびにそのようなワクチンを含むワクチンキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
細菌病原体マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）により引き起こされるブタのマイコプラズマ性肺炎は、ブタにおいて広く見られる慢性呼吸器疾患である。特に若いブタはこの非致死性疾患に罹りやすい。該流行性肺炎は、食餌変換不良および成長阻害を招く慢性疾患である。該疾患は非常に伝染しやすく、伝染は通常、例えば咳／くしゃみの後の感染飛沫の形態の感染気道分泌物との直接的な接触によるものである。この疾患の最も問題となる結末は、それがあらゆる種類の呼吸系二次感染症の素因を与えることである。例えば米国においては、全養豚場の９９％が感染していると見積もられている。年間損失は１億〜３億ドルであると見積もられている。
【０００３】
もう１つの非常に頻繁に見られるブタにおける呼吸器疾患は、ブタ生殖器呼吸器症候群（Ｐｏｒｃｉｎｅ  Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｖｅ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）（ＰＲＲＳ）およびブタ流行性流産・呼吸器症候群（Ｐｏｒｃｉｎｅ  Ｅｐｉｄｅｍｉｃ  Ａｂｏｒｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｓｙｎｄｒｏｍｅ）（ＰＥＡＲＳ）として一般に知られている疾患である。現在、該疾患は世界的にはＰＲＲＳと呼ばれている。その病状は呼吸器疾患に限定されるものではなく、流産にも及ぶ。該疾患で通常または時々見られる他の症状としては、拒食、食欲不振、末端部（特に眼）の青退色が挙げられる。該疾患の原因因子は小さな包膜ＲＮＡウイルスであることが現在知られている。繁殖用の雌においては、ＰＲＲＳは成熟雌ブタおよび若い雌ブタにおいて発熱、機能低下および食欲不振を引き起こす。ついで生殖器の問題が生じ、主として妊娠後期の雌を冒す。若いブタにおいては、ＰＰＲＳは主として呼吸系を冒す。異常に速い呼吸または「動悸（ｔｈｕｍｐｉｎｇ）」が観察される。他の細菌およびウイルス病原体により、しばしば、問題の重大性が増し、その結果、死亡による損失および治療費が発生すると思われる。機能低下が続発することがあり、それが終わるまでにブタは更に数週間を要する。
【０００４】
マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびＰＲＲＳウイルスにより引き起こされる頻繁に見られる疾患に加えて、現在、ブタにおける経済的に重大な呼吸障害が益々頻繁に見られている。この障害は成長遅延、摂食効率の低下、嗜眠、食欲不振、発熱、咳および呼吸困難により特徴づけられる。それは現在、ブタ呼吸疾患症候群（ｐｏｒｃｉｎｅ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｃｏｍｐｌｅｘ）（ＰＲＤＣ）として一般に知られており、ＰＲＤＣに罹患したブタから分離された２つの最も一般的な病原体はマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびＰＲＲＳウイルスである。どうやら、この疾患はそれらの２つの病原体の何らかの複合作用によって引き起こされるようである。
【０００５】
養豚業は、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染およびＰＲＲＳウイルス感染に対する現在入手可能な有効なワクチンから利益を受けている。そして、特に若い子ブタはマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染およびＰＲＲＳウイルス感染に罹りやすいため、同じ早期の時点において両方の疾患に対してワクチン接種することが最も効率的であろう。
【０００６】
しかし、これは選択肢とならないことが、ここ数年の間に明らかになった。ブタがＰＲＲＳウイルスに感染している又はＰＲＲＳウイルスでワクチン接種されている場合、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンの効力は有意に低下することは、現在確立されている事実である。この作用は、ＰＲＲＳウイルスによる感染またはワクチン接種がマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）でのワクチン接種中または更には該ワクチン接種の１〜２週間後に生じた場合に見られる。ＰＲＲＳウイルスの非病原性ワクチン株でさえもこの作用を示す（Ｐｉｇ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ３０：９−１２（２０００），Ｔｈａｃｋｅｒ，Ｅ．Ｌ．ら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３７：６２０−６２７（１９９９），Ｔｈａｃｋｅｒ，Ｅ．Ｌ．ら，Ｖａｃｃｉｎｅ  １８：１２４４−１２５２（２０００））。
【０００７】
また、ＰＲＲＳ感染はマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染の病状の非常に迅速な発生を誘発することが示された。
【０００８】
さらに、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染はＰＲＲＳ（Ｔｈａｃｋｅｒ，Ｅ．Ｌ．ら，Ｖａｃｃｉｎｅ  １８：１２４４−１２５２（２０００））およびブタインフルエンザ（Ｔｈａｃｋｅｒ，Ｅ．Ｌ．ら，Ｊ．Ｃｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３９：２５２５−２５３０（２００１））のようなウイルス感染全般の持続時間および重症度を増加させる。これは、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に襲われる前の出生後可能な限り早期にＰＲＲＳおよびブタインフルエンザのようなウイルス感染に対してワクチン接種するもう１つの理由である。
【０００９】
したがって、前記の理由により、ＰＲＲＳウイルスワクチン接種およびマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチン接種の両方を適用するのではなく、まず、ＰＲＲＳウイルスワクチンでワクチン接種することが強く優先される。しかし、その結果として、生弱毒化ＰＲＲＳワクチン株が体内から消失するまで待つ必要がある。これは、第１（初回免疫用）マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンが安全に投与可能となる前に少なくとも２〜３週間、好ましくはそれより長く、そして更にはマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンでの第２ワクチン接種（追加ワクチン接種）を行う前に４週間、好ましくはそれより長く待つ必要があることを意味する。もう１つの結果として、子ブタはＰＲＲＳワクチン接種後の少なくとも４週間にわたってマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染に対して無防備のままとなる。しかし、これらの望ましくない結果を回避するための方法は現在存在しない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
前記の問題に対する解決手段を提供することが本発明の目的である。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
驚くべきことに、子ブタをまずマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）でワクチン接種し、ついでマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）および生弱毒化ＰＲＲＳウイルスの両方で第２ワクチン接種を行うと、それらはＰＲＲＳウイルス感染およびマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染の両方に対して優れた防御を迅速に現し、そしてより一層意外なことに、有意な有害な反応を伴わずにそれがもたらされることが、本発明において見出された。
【００１２】
この新規アプローチは、現在好ましい方法と比べて、出生後非常に短時間のうちに子ブタがマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染およびＰＲＲＳ感染の両方に対して完全に防御されうるという大きな利点を有する。
【００１３】
どうやら、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンで初回免疫されている子ブタにマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性物質の免疫原性量および生弱毒化ＰＲＲＳウイルスの免疫原性量を組合わせて投与すると、公知の問題が回避されるようである。
【００１４】
マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性物質は例えば細菌であることが可能であり、あるいはそれは免疫原性サブユニットであることが可能である。この免疫原性物質は同様に、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性サブユニットをコードする遺伝物質を発現しうる生弱毒化ベクターウイルスまたは非マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）細菌ベクターでありうる。
【００１５】
免疫原性量は、標的動物において免疫応答を誘導するのに十分な、おそらくはアジュバントと組合される免疫原性物質の量として当技術分野で公知である。
【００１６】
したがって、本発明の第１の実施形態は、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）で初回免疫されたブタへのマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンおよびＰＲＲＳＶワクチンの組合せ投与に使用するワクチンの製造のための、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性物質の免疫原性量および生弱毒化ＰＲＲＳウイルスの免疫原性量の使用に関する。
【００１７】
経済的な観点からは、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）細菌は効果的であり、製造が容易であり、安全であり、高価ではない。したがって、商業的に入手可能なマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンのほとんどはバクテリンに基づくものである。
【００１８】
したがって、この実施形態の好ましい形態は、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）で初回免疫されたブタへのマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンおよびＰＲＲＳＶワクチンの組合せ投与に使用するワクチンの製造のための、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）バクテリンの免疫原性量および生弱毒化ＰＲＲＳウイルスの免疫原性量の使用に関する。
【００１９】
「バクテリン」なる表現は、当技術分野においては、不活化細菌を意味する。そのような不活化は、例えば化学的処理、例えばホルマリン処理、熱処理、フレンチプレスでの処理および放射線により行われうる。生弱毒化ＰＲＲＳウイルスは、標的動物に対して非病原性である、あるいは野生型ウイルスと比べてビルレンスの実質的な低下を示すＰＲＲＳウイルスである。
【００２０】
該組合せ投与に使用するワクチンのマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性物質および生弱毒化ＰＲＲＳウイルスは混合形態で（すなわち、一緒に混合されて）投与されるのが好ましいが、必ずしも該混合形態で投与される必要はない。この理由は、該活性成分のそれぞれの投与経路が、該成分の製剤処方、ブタの収容場所および農場管理によって異なりうることにある。マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性物質（マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ成分とも称される）は、例えば経口的に、鼻腔内に、または注射により投与されうる。該生弱毒化ＰＲＲＳウイルス（ＰＲＲＳＶ成分とも称される）は、例えば、効率上の理由により、皮内適用により投与されることが可能であり、必ずしも筋肉内投与される必要はない。したがって、例えば農場の状況および該ワクチンの製造業者の説明に応じて、該ワクチンのマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびＰＲＲＳＶ成分の投与経路が異なる可能性が十分にある。そのような場合、該ワクチンのマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびＰＲＲＳＶ成分の投与は必然的に、時間的に若干異なる時点で行われることが明らかである。しかし、該組合せ投与に使用する該ワクチンのマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびＰＲＲＳＶ成分が例えば２４時間未満、好ましくは８時間未満の比較的短い時間間隔で投与される場合には、本発明の利点は尚も達成されうる。実用上の理由により、該間隔は実際には、好ましくはより一層短くなり、４時間未満、２時間未満、１時間未満、３０分未満、１５分未満、１０分未満、５分未満または２分未満となり、その順序で好ましくなる。したがって、組合せ投与は、２４時間未満、８時間未満、４時間未満、２時間未満、１時間未満、３０分未満、１５分未満、１０分未満、５分未満または２分未満（この順序で好ましくなる。）の比較的短い時間間隔でのマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびＰＲＲＳＶ成分の投与である。
【００２１】
本発明の好ましい実施形態は、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）で初回免疫されたブタへのマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンおよびＰＲＲＳＶワクチンの組合せ投与に使用する、該ＰＲＲＳＶ成分および該マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）成分を混合形態で含むワクチンの製造のための、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性物質の免疫原性量および生弱毒化ＰＲＲＳウイルスの免疫原性量の使用に関する。
【００２２】
抗原および遺伝子型の両方の構成において、欧州および北米のＰＲＲＳウイルス株の間に有意な相違が見出されている。欧州ＰＲＲＳウイルスの特徴およびそれが北米株とどのように異なるかは当技術分野でよく知られている。欧州および北米ＰＲＲＳウイルス株間の相違は、とりわけ、Ｍｅｎｇ，Ｘ．−Ｊ．ら，Ａｒｃｈ．Ｖｉｒｏｌ．１４０：７４５−７５５（１９９５）、Ｓｕａｒｅｚ，Ｐ．ら，Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４２：１５９−１６５（１９９６）およびＡｌｌｅｎｄｅ，Ｒ．ら，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．８０：３０７−３１５（１９９９）に記載されている。欧州および北米ＰＲＲＳウイルス株間の交差防御は不十分であるか又は存在さえしないことが、ここ数年で明らかとなった。
【００２３】
したがって、本発明のこの実施形態のもう１つの好ましい形態は、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）で初回免疫されたブタへのマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンおよびＰＲＲＳＶワクチンの組合せ投与に使用するワクチンの製造のための、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性物質の免疫原性量およびヨーロッパ株の生弱毒化ＰＲＲＳウイルスの免疫原性量の使用に関する。ブタ呼吸疾患症候群の欧州の症例の数を抑制し減少させるために、これは特に有利である。
【００２４】
この実施形態のもう１つの好ましい形態において、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンおよびＰＲＲＳＶワクチンの組合せ投与に使用するワクチンの製造において、他のブタ病原性生物もしくはウイルスに由来する１以上の抗原またはそのような抗原をコードする遺伝情報を加える。そのような生物およびウイルスは、好ましくは、仮性狂犬病ウイルス、ブタインフルエンザウイルス、ブタパルボウイルス、ブタ伝染性胃腸炎ウイルス、ロタウイルス、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、エリジペロ・ルジオパシエ（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、ローソニア・イントラセルラリス（Ｌａｗｓｏｎｉａ  ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｉｓ）、ボルデテラ・ブロンキセプチカ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｂｒｏｎｃｈｉｓｅｐｔｉｃａ）、サルモネラ・コレレスイス（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｃｈｏｌｅｒａｓｕｉｓ）、ヘモフィルス・パラスイス（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐａｒａｓｕｉｓ）、パスツレラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、ストレプトコッカス・スイス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｕｉｓ）、ブラキスピラ・ヒョウディセンテリエ（Ｂｒａｃｈｙｓｐｉｒａ  ｈｙｏｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）およびアクチノバシラス・プリュロニュウモニエ（Ａｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｐｌｅｕｒｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の群から選ばれる。
【００２５】
言うまでもなく、原則として、この群の細菌またはウイルスは、原則として、それらが本発明の使用の有益な効果に悪影響を及ぼさない限り、初回免疫に使用されるマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）にも加えられうる。
【００２６】
本発明のもう１つの実施形態は、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）成分が１つの容器内に好ましくは懸濁状態で存在し、ＰＲＲＳＶ成分が第２の容器内に好ましくは凍結乾燥形態で存在する形態の、該組合せ投与に使用するワクチンを含むワクチンキットに関する。そのようなキットの利点は以下のとおりである。該マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）成分は第１容器からシリンジの針を介して吸引されることが可能であり、ついで該凍結乾燥ＰＲＲＳＶ成分を溶解するために第２容器に加えられることが可能である。ついでこの混合物は組合せ投与にそのまま使用されるであろう。
【００２７】
あるいは、該ワクチンキットは、ＰＲＲＳＶ成分およびマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）成分が１つの容器内に存在する、組合せ投与に使用するワクチンを含む。そのような容器は例えばワクチンバイアルでありうる。それらの成分が同一容器内に存在する場合、それらは必ずしも予め混合されている必要はない。例えば、それらは、投与前に、バリヤー（障壁）、例えば膜により隔てられていることが可能である。投与時点で、投与用シリンジの針が該膜に孔をあけ、ついでそれらの成分が混合されることになる。ついでそれらは、該シリンジを満たすために混合物として使用され、混合物として投与されうる。それらの成分は、１つの同一バイアル内に、分離された凍結乾燥ケークまたは凍結乾燥体としても存在しうる。ついで希釈剤の添加は投与前のそれらの成分の混合を誘発するであろう。
【００２８】
したがって、この実施形態のもう１つの形態は、本発明のマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性物質および生弱毒化ＰＲＲＳウイルスの組合せ投与に使用するワクチンを含む、該マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）成分および該ＰＲＲＳＶ成分が１つの単一容器内に存在する、ワクチンキットに関する。
【００２９】
マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）で初回免疫されたブタは、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびＰＲＲＳＶワクチンの組合せ投与の前にマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンでワクチン接種されたブタである。該ブタの初回免疫用ワクチン接種の結果として、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する一次免疫応答が生じる。そのような免疫応答の生成は或る程度の時間を要する。しかし、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびＰＲＲＳウイルスの組合せ投与に使用するワクチンがその効力を発揮するためには、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対する適当な初回免疫反応が存在する必要がある。したがって、好ましくは、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびＰＲＲＳウイルスの組合せ投与に使用するワクチンはブタの初回免疫の７日以上後に投与されるであろう。マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）およびＰＲＲＳＶワクチンの組合せ投与は、好ましくは初回免疫後３５日以内、より好ましくは初回免疫後１４〜３５日以内に行われるであろう。マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）（追加ワクチン接種）およびＰＲＲＳＶウイルスの組合せ投与に使用するワクチンが投与されない限り、該ブタはマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）感染に対してもＰＲＲＳウイルス感染に対しても完全には防御されない。したがって、好ましくは、組合せ投与に使用するワクチンの投与はマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）初回免疫の７〜３５日後、より好ましくはマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）初回免疫の１４〜３５日後、より一層好ましくは２１〜２８日後に行われる。
【００３０】
言うまでもなく、ワクチン接種するブタの初回免疫には、明らかにほとんどのマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンが適している。マイコプラズマワクチンは例えばＰＣＴ出願ＷＯ９１／１８６２７、米国特許ＵＳ５，３３８，５４３および欧州特許ＥＰ５５０．４７７に開示されている。そのようなワクチン（主としてバクテリン）はまた、種々の製造業者から容易に商業的に入手可能である。商業的に入手可能なマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンとしては、Ｐｏｒｃｉｌｉｓ（登録商標）Ｍ  Ｈｙｏ、ＰｒｏＳｙｓｔｅｍ（登録商標）Ｍ（Ｐｏｒｃｉｌｉｓ（登録商標）Ｍ）（Ｉｎｔｅｒｖｅｔ  Ｉｎｔ．Ｂ．Ｖ．）、ＰｒｏＳｙｓｔｅｍ（登録商標）ＢＰＭ（Ｐｏｒｃｉｌｉｓ（登録商標）ＢＰＭ）（Ｉｎｔｅｒｖｅｔ  Ｉｎｔ．Ｂ．Ｖ．）、ＲｅｓｐｉＳｕｒｅ（登録商標）（Ｐｆｉｚｅｒ）、Ｓｔｅｌｌａｍｕｎｅ（登録商標）（Ｐｆｉｚｅｒ）、Ｓｕｖａｘｙｎｅ（登録商標）Ｍ．ｈｙｏ（Ｆｏｒｔ  Ｄｏｄｇｅ）、Ｈｙｏｒｅｓｐ（登録商標）（Ｍｅｒｉａｌ）およびＭ＋Ｐａｃ（登録商標）（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ）が挙げられる。
【００３１】
本発明の組合せ投与に使用するワクチンの製造において使用するマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）成分についても同様のことが言える。例えばＷＯ９１／１８６２７、米国特許ＵＳ５，３３８，５４３および欧州特許ＥＰ５５０．４７７に開示されているマイコプラズマワクチンが容易に使用されうる。原則として、商業的に入手可能なマイコプラズマワクチン（例えば、前記のもの）も適している。
【００３２】
本発明の組合せ投与に使用するワクチンの製造において使用するワクチンのＰＲＲＳＶ成分に関しては、とりわけ欧州特許ＥＰ６７６．４６７、ＥＰ８３５．９３０、米国特許ＵＳ５，５１０，２５８およびＵＳ５，５８７，１６４に開示されている生弱毒化ＰＲＲＳワクチンが容易に使用されうる。原則として、商業的に入手可能なＰＲＲＳワクチン、例えばＩｎｔｅｒｖｅｔ  Ｉｎｔ．Ｂ．Ｖ．から入手可能なもの、例えばＰｏｒｃｉｌｉｓ（登録商標）ＰＲＲＳも効果的に使用されうる。したがって、当業者は、本発明の組合せ投与に使用するワクチンの製造に必要な基本成分を構成するマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）成分および生弱毒化ＰＲＲＳ成分の選択に際して何ら問題を伴わず、また、初回免疫用のマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンの選択の際にも何ら問題を伴わないであろう。
【００３３】
該ワクチンの投与方法は当業者に公知であろう。マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンおよび生弱毒化ＰＲＲＳワクチンの投与量および投与経路は明らかに、商業用ワクチンを使用する場合には、製造業者により与えられた説明に従って行われ、あるいは非商業用ワクチンの場合には、例えば前記特許のいずれかに開示されている方法に従って行われる。
【００３４】
単なる一例として、当業者がマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンとしてＰｏｒｃｉｌｉｓ（登録商標）Ｍ  Ｈｙｏを選択し、ＰＲＲＳワクチンとしてＰｏｒｃｉｌｉｓ（登録商標）ＰＲＲＳワクチンを選択した場合、２ｍｌ用量での初回免疫が好ましくは５〜９日齢で行われ、本発明のマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンおよび生弱毒化ＰＲＲＳＶワクチンの組合せ投与に使用するワクチンの投与が好ましくは２３〜３０日齢で行われるであろう。
【００３５】
したがって、本発明のもう１つの実施形態は、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンでの第１（初回免疫）ワクチン接種を行い、ついでマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性物質および生弱毒化ＰＲＲＳウイルスでの組合せワクチン接種を行う段階を含む、ＰＲＲＳウイルスおよびマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）による感染に対するブタのワクチン接種のための方法に関する。このように、該組合せワクチン接種は、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）の免疫原性物質を第２（追加）ワクチン接種として機能させるものである。
【００３６】
マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンで初回免疫されたブタへのマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンおよびＰＲＲＳＶの組合せ投与に使用するワクチンの有益な効果を、以下に記載する実施例により例示する（該実施例に限定されるものではない）。
【００３７】
実施例
【実施例１】
【００３８】
マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）バクテリン（Ｐｏｒｃｉｌｉｓ（登録商標）Ｍ  Ｈｙｏ）および修飾生ＰＲＲＳワクチン（Ｐｏｒｃｉｌｉｓ（登録商標）ＰＲＲＳ）の同時使用の効力を、以下の実験計画に従い、ＳＰＦ子ブタにおけるワクチン接種−チャレンジ実験において試験した。
【００３９】
【表１】
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【００４０】
マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンを２ｍｌの筋肉内用量として投与し、また、凍結乾燥ＰＲＲＳワクチン株を、希釈剤（Ｄｉｌｕｖａｃ  Ｆｏｒｔｅ，Ｉｎｔｅｒｖｅｔ  Ｉｎｔ．Ｂ．Ｖ．，Ｗｉｍ  ｄｅ  Ｋｏｒｖｅｒｓｔｒａａｔ  ３５，Ｂｏｘｍｅｅｒ，ｔｈｅ  Ｎｅｔｈｅｒｌａｎｄｓ）（群５）またはマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチン（群１および４）中での還元後、２ｍｌの筋肉内用量として投与した。該実験中、幾頭かの子ブタが、ワクチン接種またはチャレンジ感染とは無関係な理由により死亡した。
【００４１】
マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）でのチャレンジを、連続した２日間にわたり、低継代マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）野外分離株の培養物の１０８．５  ＣＣＵの該子ブタへの気管内接種により行った。チャレンジの３週間後、該ブタを剖検に付し、固質化肺病変をＧｏｏｄｗｉｎ＆Ｗｈｉｔｔｌｅｓｔｏｎｅ（Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｖｅｔ．Ｊｏｕｒｎ．１２９：４５６−４６４（１９７３））に従いスコア（得点）化した。マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）特異的肺病変は、対照と比較して群１および群２の両方において統計的に有意であった。群１および群２の間の差異は統計的に有意ではなかった（ｐ＝０．８３，Ｍａｎｎ−ＷｈｉｔｎｅｙＵ−検定）。
【００４２】
【表２】
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【００４３】
ＰＲＲＳＶチャレンジを、１ｍｌのＰＢＳ中の、外鼻孔当たり１０５  ＴＣＩＤ５０の野生型ＰＲＲＳＶ株の点鼻により行った。チャレンジの３、５、７、１０、１４および２１日後、ブタ肺胞マクロファージ（ＰＡＭ）上でのウイルス力価測定のために全ての子ブタから血液サンプルを採取した。簡潔に説明すると、９６ウェルプレート内のＰＡＭの単層に該血清サンプルの１０倍系列希釈物を４通りに接種し、ついで３７℃で７日間インキュベートした。細胞をＣＰＥに関して毎日モニターし、ウイルス力価をＲｅｅｄおよびＭｕｅｎｃｈの方法に従いＴＣＩＤ５０／ｍｌとして表した。全てのサンプル採取日に、該チャレンジウイルスの力価はワクチン接種群４および５においては有意に低かった。群４および５における防御のレベルは異ならなかった。
【００４４】
【化１】
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【実施例２】
【００４５】
また、マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）に対するマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）バクテリン（Ｐｏｒｃｉｌｉｓ  Ｍ  Ｈｙｏ）および修飾生ＰＲＲＳワクチン（Ｐｏｒｃｉｌｉｓ  ＰＲＲＳ）の同時使用の効力を商業用子ブタにおいて試験した。
【００４６】
【表３】
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【００４７】
マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチンを２ｍｌの筋肉内用量として投与し、また、凍結乾燥ＰＲＲＳワクチン株を、希釈剤（群２）またはマイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）ワクチン（群１）中での還元後、２ｍｌの筋肉内用量として投与した。該実験中、群２の１頭の子ブタを、劣悪な全身健康状態のため、ワクチン接種前に安楽死させ、群２、３および４群の数頭の子ブタを、胸膜炎のため、病変スコア化から除外しなければならなかった。
【００４８】
マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）でのチャレンジを、連続した２日間にわたり、低継代マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）野外分離株の培養物の１０８．５  ＣＣＵの該子ブタへの気管内接種により行った。チャレンジの３週間後、該ブタを剖検に付し、固質化肺病変をＧｏｏｄｗｉｎ＆Ｗｈｉｔｔｌｅｓｔｏｎｅに従いスコア（得点）化した。マイコプラズマ・ヒョウニューモニエ（Ｍ．ｈｙｏｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）特異的肺病変は、対照と比較して群１および群３の両方において統計的に有意であった。群１および群３の間の差異は統計的に有意ではなかった（ｐ＝０．１３，Ｍａｎｎ−ＷｈｉｔｎｅｙＵ−検定）。
【００４９】
【表４】
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【国際調査報告】
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