(57)【要約】  本発明は、癌を治療するための方法、キット、組成物及びそれらの使用に関する。特に、本発明は、タンパク質へ結合された死滅剤を含む、転移性癌の治療、転移性癌に関連する血管新生の治療、転移性癌に関連する血管系の形成を阻害すること、転移性癌に関連する周皮細胞を死滅させること、及び転移性癌に関連する腫瘍毛細血管と近接する癌細胞を死滅させることのための方法、キット、組成物並びにそれらの使用に関し、ここでは上記タンパク質へ結合された上記死滅剤が、上記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
転移性癌の治療方法であって、タンパク質へ結合された治療上有効量の死滅剤を被験体へ投与することを含み、該タンパク質へ結合された該死滅剤が、前記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌の治療方法。
【請求項２】
転移性癌に関連する血管新生の治療方法であって、タンパク質へ結合された治療上有効量の死滅剤を被験体へ投与することを含み、該タンパク質へ結合された該死滅剤が、前記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌に関連する血管新生の治療方法。
【請求項３】
転移性癌に関連する血管系の形成を阻害する方法であって、タンパク質へ結合された治療上有効量の死滅剤を被験体へ投与することを含み、該タンパク質へ結合された該死滅剤が、前記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌に関連する血管系の形成を阻害する方法。
【請求項４】
転移性癌に関連する周皮細胞を死滅させる方法であって、タンパク質へ結合された治療上有効量の死滅剤を被験体へ投与することを含み、該タンパク質へ結合された該死滅剤が、前記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌に関連する周皮細胞を死滅させる方法。
【請求項５】
転移性癌に関連する腫瘍毛細血管と近接する癌細胞を死滅させる方法であって、タンパク質へ結合された治療上有効量の死滅剤を被験体へ投与することを含み、該タンパク質へ結合された該死滅剤が、前記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌に関連する腫瘍毛細血管と近接する癌細胞を死滅させる方法。
【請求項６】
転移性癌に関連する毛細血管中の内皮細胞を死滅させる方法であって、タンパク質へ結合された治療上有効量の死滅剤を被験体へ投与することを含み、該タンパク質へ結合された該死滅剤が、前記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌に関連する毛細血管中の内皮細胞を死滅させる方法。
【請求項７】
前記内皮細胞が、腫瘍毛細血管と近接する他の細胞から放出されるアルファ粒子により死滅される、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記他の細胞が、周皮細胞又は癌細胞である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記転移性癌が、肝臓腫瘍、卵巣腫瘍、結腸直腸腫瘍、肺腫瘍、胸部腫瘍、前立腺腫瘍、膵臓腫瘍、腎臓腫瘍、胃腫瘍、子宮頸部腫瘍、子宮内膜腫瘍、食道腫瘍、脳腫瘍、頭部腫瘍又は頸部腫瘍、腹膜癌症、肉腫或いは黒色腫を含む群から選択される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記タンパク質が、前記転移性癌に関連する前記少なくとも１つの細胞の表面上に発現される抗原に結合する、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記タンパク質が、抗ＭＣＳＰ抗体、抗ＨＭＷ−ＭＡＡ抗体、抗ウロキナーゼプラスミノゲン活性化因子（ｕＰＡ）抗体、抗ｍｕｃ１抗体又は胸部癌細胞抗体を含む群から選択される、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記タンパク質が、プラスミノゲン活性化因子の阻害剤である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記死滅剤が、放射性同位体を含む、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記放射性同位体が、アルファ放出性放射性同位体を含む、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記アルファ放出性放射性同位体が、Ｔｂ−１４９、Ａｔ−２１１、Ｂｉ−２１３、Ａｃ−２２５、Ｒｎ−２１１、Ｒａ−２２４、Ｒａ−２２５、Ｅｓ−２５５又はＦｍ−２５６を含む群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記転移性癌に関連する前記少なくとも１つの細胞が、毛細血管周皮細胞、内皮細胞、メラニン細胞又は任意の他の転移性癌細胞を含む群から選択される、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
転移性癌の治療における使用のためのタンパク質へ結合された死滅剤を製造するプロセスであって、該タンパク質へ結合された該死滅剤が、前記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、タンパク質へ結合された死滅剤を製造するプロセス。
【請求項１８】
転移性癌の治療用の薬剤の製造における死滅剤及びタンパク質の使用であって、該タンパク質へ結合された該死滅剤が、前記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、死滅剤及びタンパク質の使用。
【請求項１９】
転移性癌の治療方法であって、タンパク質へ結合された治療上有効量の死滅剤を被験体へ投与することを含み、該タンパク質へ結合された該死滅剤が、実施例のいずれか１つを参照して上述の請求項の様に実質的に製造される、転移性癌の治療方法。
【請求項２０】
転移性癌の治療における使用のためのタンパク質へ結合された死滅剤を製造するプロセスであって、該タンパク質へ結合された該死滅剤が、実施例のいずれか１つを参照して上述の請求項の様に実質的に製造される、タンパク質へ結合された死滅剤を製造するプロセス。
【請求項２１】
転移性癌の治療用のキットであって、該キットが、タンパク質へ結合された治療上有効量の死滅剤を含み、該タンパク質へ結合された該死滅剤が、前記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌の治療用のキット。
【請求項２２】
転移性癌に関連する血管新生の治療用のキットであって、該キットが、タンパク質へ結合された死滅剤を含み、該タンパク質へ結合された該死滅剤が、前記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌に関連する血管新生の治療用のキット。
【請求項２３】
転移性癌に関連する血管系の形成を阻害するためのキットであって、該キットが、タンパク質へ結合された治療上有効量の死滅剤を被験体へ投与することを含み、該タンパク質へ結合された該死滅剤が、前記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌に関連する血管系の形成を阻害するためのキット。
【請求項２４】
転移性癌に関連する周皮細胞を死滅させるためのキットであって、該キットが、タンパク質へ結合された死滅剤を含み、該タンパク質へ結合された該死滅剤が、前記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌に関連する周皮細胞を死滅させるためのキット。
【請求項２５】
転移性癌に関連する腫瘍毛細血管と近接する癌細胞を死滅させるためのキットであって、該キットが、タンパク質へ結合された死滅剤を含み、該タンパク質へ結合された該死滅剤が、前記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌に関連する腫瘍毛細血管と近接する癌細胞を死滅させるためのキット。
【請求項２６】
転移性癌に関連する毛細血管中の内皮細胞を死滅させるためのキットであって、該キットが、タンパク質へ結合された治療上有効量の死滅剤を被験体へ投与することを含み、該タンパク質へ結合された該死滅剤が、前記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌に関連する毛細血管中の内皮細胞を死滅させるためのキット。
【請求項２７】
前記内皮細胞が、腫瘍毛細血管と近接する他の細胞から放出されるアルファ粒子により死滅される、請求項２６に記載のキット。
【請求項２８】
前記他の細胞が、周皮細胞又は癌細胞である、請求項２６又は２７に記載のキット。
【請求項２９】
（ａ）転移性癌の治療、
（ｂ）転移性癌に関連する血管新生の治療、
（ｃ）転移性癌に関連する血管系の形成を阻害すること、
（ｄ）転移性癌に関連する周皮細胞を死滅させること、及び
（ｅ）転移性癌に関連する腫瘍毛細血管と近接する癌細胞を死滅させること
の任意の１つ又は複数における使用のための組成物であって、該組成物が、タンパク質へ結合された死滅剤を含み、該タンパク質へ結合された該死滅剤が、前記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌を治療するための方法、キット、組成物及びそれらの使用に関する。特に、本発明は、黒色腫を治療するための方法、キット、組成物及びそれらの使用、並びに転移性癌を治療するための方法、化合物及びキットに関する。
【背景技術】
【０００２】
黒色腫は、オーストラリアの女性において３番目に一般的な癌であり、オーストラリアの男性においては４番目に一般的な癌であり、１５歳から４４歳の年齢層では最も一般的な癌である。黒色腫は通常、メラニン細胞としても既知である、皮膚の色素細胞で発生する非常に攻撃的な悪性腫瘍を含む。
【０００３】
さらに、転移性黒色腫は、依然としてあらゆる治療様式が通常効かない難治性疾患である。疾患は通常、悪性細胞が原発腫瘍から抜け出て、血流に入り、最終的には遠位の臓器にとどまる場合に悪化され、転移性癌細胞の前血管新生巣の発達を促進する。血管新生毛細血管形成は、臨床上有意な腫瘍の迅速な発達を伴って、腫瘍成長を加速させる。
【０００４】
転移性黒色腫の現行の治療としては、手術、全身化学療法、局所化学療法及び免疫療法が挙げられる。しかしながら、癌細胞がひとたび分散されれば、治療は、せいぜい一時しのぎにすぎない。したがって、転移性黒色腫の治療に対する新たなアプローチが至急必要とされていることが明らかである。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
したがって、本発明は、アルファ−免疫複合体（ＡＩＣ）抗体による治療が、転移性黒色腫を選択的に標的とし、また死滅させるという驚くべき且つ予期せぬ見解に基づくものである。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の第１の態様によれば、転移性癌の治療方法であって、タンパク質へ結合された治療上有効量の死滅剤を被験体へ投与することを含み、当該タンパク質へ結合された当該死滅剤が、上記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌の治療方法が提供される。
【０００７】
本発明の第２の態様によれば、転移性癌に関連する血管新生の治療方法であって、タンパク質へ結合された治療上有効量の死滅剤を被験体へ投与することを含み、当該タンパク質へ結合された当該死滅剤が、上記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌に関連する血管新生の治療方法が提供される。
【０００８】
本発明の第３の態様によれば、転移性癌に関連する血管系の形成を阻害する方法であって、タンパク質へ結合された治療上有効量の死滅剤を被験体へ投与することを含み、当該タンパク質へ結合された当該死滅剤が、上記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌に関連する血管系の形成を阻害する方法が提供される。
【０００９】
本発明の第４の態様によれば、転移性癌に関連する周皮細胞を死滅させる方法であって、タンパク質へ結合された治療上有効量の死滅剤を被験体へ投与することを含み、当該タンパク質へ結合された当該死滅剤が、上記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌に関連する周皮細胞を死滅させる方法が提供される。
【００１０】
本発明の第５の態様によれば、転移性癌に関連する腫瘍毛細血管と近接する癌細胞を死滅させる方法であって、タンパク質へ結合された治療上有効量の死滅剤を被験体へ投与することを含み、当該タンパク質へ結合された当該死滅剤が、上記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌に関連する腫瘍毛細血管と近接する癌細胞を死滅させる方法が提供される。
【００１１】
本発明の第６の態様によれば、転移性癌に関連する毛細血管中の内皮細胞を死滅させる方法であって、タンパク質へ結合された治療上有効量の死滅剤を被験体へ投与することを含み、当該タンパク質へ結合された当該死滅剤が、上記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌に関連する毛細血管中の内皮細胞を死滅させる方法が提供される。
【００１２】
内皮細胞は、腫瘍毛細血管と近接する他の細胞から放出されるアルファ粒子により死滅され得る。他の細胞は、周皮細胞又は癌細胞であり得る。
【００１３】
内皮細胞は、標的とされる増殖性内皮細胞から放出されるアルファ粒子により死滅され得る。
【００１４】
本発明の第７の態様によれば、転移性癌の治療における使用のためのタンパク質へ結合された死滅剤を製造するプロセスであって、当該タンパク質へ結合された当該死滅剤が、上記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、タンパク質へ結合された死滅剤を製造するプロセスが提供される。
【００１５】
本発明の第８の態様によれば、転移性癌の治療用の薬剤の製造における死滅剤及びタンパク質の使用であって、当該タンパク質へ結合された当該死滅剤が、上記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、死滅剤及びタンパク質の使用が提供される。
【００１６】
転移性癌は、肝臓腫瘍、卵巣腫瘍、結腸直腸腫瘍、肺腫瘍、胸部腫瘍、前立腺腫瘍、膵臓腫瘍、腎臓腫瘍、胃腫瘍、子宮頸部腫瘍、子宮内膜腫瘍、食道腫瘍、脳腫瘍、頭部腫瘍又は頸部腫瘍、腹膜癌症、肉腫或いは黒色腫を含む群から選択され得る。転移性癌は黒色種であってもよい。
【００１７】
タンパク質は、転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞の表面上に発現される抗原に結合し得る。
【００１８】
タンパク質は抗体であり得る。抗体は、モノクローナル抗体であり得る。モノクローナル抗体は、モノクローナル抗ＭＣＳＰ抗体であり得る。モノクローナル抗ＭＣＳＰ抗体は、ＭＣＳＰの任意のエピトープを認識して、それに結合し得る。モノクローナル抗ＭＣＳＰ抗体は、マウス抗ＭＣＳＰモノクローナル抗体であり得る。マウス抗ＭＣＳＰ抗体は、９．２．２７、２２５．２８Ｓ、７６３．４又はＴＰ４１．２を含む群から選択され得る。マウス抗ＭＣＳＰモノクローナル抗体は、９．２．２７であってもよい。
【００１９】
抗体は、ヒト化抗体であってもよい。ヒト化抗体は、ヒト化モノクローナル抗体であり得る。ヒト化モノクローナル抗体は、ヒト化モノクローナル抗ＭＣＳＰ抗体であり得る。
【００２０】
モノクローナル抗体は、モノクローナル抗ＨＭＷ−ＭＡＡ抗体であり得る。モノクローナル抗ＨＭＷ−ＭＡＡ抗体は、ＨＭＷ−ＭＡＡの任意のエピトープを認識して、それに結合し得る。モノクローナル抗ＨＭＷ−ＭＡＡ抗体は、マウス抗ＨＭＷ−ＭＡＡモノクローナル抗体であり得る。マウス抗ＨＭＷ−ＭＡＡモノクローナル抗体は、２２５．２８Ｓ、７６３．４又はＴＰ４１．２を含む群から選択され得る。
【００２１】
抗体は、抗ウロキナーゼプラスミノゲン活性化因子（ｕＰＡ）抗体であってもよい。抗ウロキナーゼプラスミノゲン活性化因子（ｕＰＡ）抗体は、モノクローナル抗ウロキナーゼプラスミノゲン活性化因子（ｕＰＡ）抗体であり得る。モノクローナル抗ウロキナーゼプラスミノゲン活性化因子（ｕＰＡ）抗体は、♯３９４であり得る。
【００２２】
抗体は、抗ｍｕｃ１抗体であってもよい。抗ｍｕｃ１抗体は、ｃ５９５であり得る。
【００２３】
抗体は、胸部癌細胞抗体であってもよい。胸部癌細胞抗体は、トラスツズマブ、リツキシマブ、又はゲムツズマブオゾガマイシンを含む群から選択され得る。
【００２４】
さらに、又はあるいは、タンパク質は組換え型であってもよい。
【００２５】
さらに、又はあるいは、タンパク質は、プラスミノゲン活性化因子の阻害剤であり得る。阻害剤は、プラスミノゲン活性化因子阻害剤−２（ＰＡＩ２）であり得る。ＰＡＩ−２は、ウロキナーゼプラスミノゲン活性化因子を認識して、それに結合し得る。
【００２６】
死滅剤は、放射性同位体を含み得る。放射性同位体は、アルファ放出性放射性同位体を含み得る。アルファ放出性放射性同位体は、Ｔｂ−１４９、Ａｔ−２１１、Ｂｉ−２１３、Ａｃ−２２５、Ｒｎ−２１１、Ｒａ−２２４、Ｒａ−２２５、Ｅｓ−２５５又はＦｍ−２５６を含む群から選択され得る。アルファ放出性放射性同位体は、Ｂｉ−２１３であってもよい。
【００２７】
転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞は、毛細血管周皮細胞、内皮細胞、メラニン細胞又は任意の他の転移性癌細胞を含む群から選択され得る。
【００２８】
本発明の第９の態様によれば、転移性癌の治療のためのキットであって、当該キットが、タンパク質へ結合された治療上有効量の死滅剤を含み、当該タンパク質へ結合された当該死滅剤が、上記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌の治療のためのキットが提供される。
【００２９】
本発明の第１０の態様によれば、転移性癌に関連する血管新生の治療のためのキットであって、当該キットが、タンパク質へ結合された死滅剤を含み、当該タンパク質へ結合された当該死滅剤が、上記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌に関連する血管新生の治療のためのキットが提供される。
【００３０】
本発明の第１１の態様によれば、転移性癌に関連する血管系の形成を阻害するためのキットであって、当該キットが、タンパク質へ結合された治療上有効量の死滅剤を被験体へ投与することを含み、当該タンパク質へ結合された当該死滅剤が、上記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌に関連する血管系の形成を阻害するためのキットが提供される。
【００３１】
本発明の第１２の態様によれば、転移性癌に関連する周皮細胞を死滅させるためのキットであって、当該キットが、タンパク質へ結合された死滅剤を含み、当該タンパク質へ結合された当該死滅剤が、上記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌に関連する周皮細胞を死滅させるためのキットが提供される。
【００３２】
本発明の第１３の態様によれば、転移性癌に関連する腫瘍毛細血管と近接する癌細胞を死滅させるためのキットであって、当該キットが、タンパク質へ結合されたの死滅剤を含み、当該タンパク質へ結合された当該死滅剤が、上記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌に関連する腫瘍毛細血管と近接する癌細胞を死滅させるためのキットが提供される。
【００３３】
本発明の第１４の態様によれば、転移性癌に関連する毛細血管中の内皮細胞を死滅させるためのキットであって、当該キットが、タンパク質へ結合された治療上有効量の死滅剤を被験体へ投与することを含み、当該タンパク質へ結合された当該死滅剤が、上記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、転移性癌に関連する毛細血管中の内皮細胞を死滅させるためのキットが提供される。
【００３４】
内皮細胞は、腫瘍毛細血管と近接する他の細胞から放出されるアルファ粒子により死滅され得る。他の細胞は、周皮細胞又は癌細胞であり得る。
【００３５】
内皮細胞は、標的とされる増殖性内皮細胞から放出されるアルファ粒子により死滅され得る。
【００３６】
本発明の第１５の態様によれば、
（ａ）転移性癌の治療、
（ｂ）転移性癌に関連する血管新生の治療、
（ｃ）転移性癌に関連する血管系の形成を阻害すること、
（ｄ）転移性癌に関連する周皮細胞を死滅させること、及び
（ｅ）転移性癌に関連する腫瘍毛細血管と近接する癌細胞を死滅させること
の任意の１つ又は複数における使用のための組成物であって、当該組成物が、タンパク質へ結合された死滅剤を含み、当該タンパク質へ結合された当該死滅剤が、上記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する、任意の１つ又は複数における使用のための組成物が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
本発明はここで、ほんの一例として添付の図面を参照して説明される。
【００３８】
［定義］
本明細書中で使用する場合、「を含む」という用語は、「主に包含するが、必ずしも単独で包含するわけではない」ことを意味する。さらに、「含む（複数）」及び「含む（単数）」のような「を含む」という語句の変形は、対応して変化させた意義を有する。
【００３９】
本明細書中で使用する場合、「を治療すること」及び「治療」という用語は、状態又は症状を改善させるか、状態又は疾患の確立を防止するか、或いは別の状況では、いかなる場合でもどんなものであれ、状態若しくは疾患或いは他の望ましくない症状の進行を防止するか、妨害するか、遅延させるか或いは覆す任意のあらゆる用途を指す。
【００４０】
本明細書中で使用する場合、「有効量」という用語は、無毒性であるが、所望の効果を提供するのに十分な量の作用物質又は化合物をその意義内に包含する。要される正確な量は、治療される種、被験体の年齢及び全身状態、治療されるべき状態の重篤性、投与される特定の作用物質及び投与様式等のような因子に応じて被験体間で様々である。したがって、正確な「有効量」を指定することは不可能である。しかしながら、任意の所定の場合、適切な「有効量」は、単なる日常的な実験を使用して当業者により確定され得る。
【００４１】
本明細書中で使用する場合、「抗体」という用語は、抗原上の特異的なエピトープに結合することが可能な免疫グロブリン分子を意味する。抗体は、ポリクローナル混合物で構成され得るか、或いは事実上モノクローナルであってもよい。さらに、抗体は、天然供給源に、或いは組換え供給源に由来する全免疫グロブリンであり得る。本発明の抗体は、例えば、全抗体として或いは抗体フラグメント又はそれらの免疫学的に活性なフラグメント（例えば、相補性決定領域（ＣＤＲ））としての様々な形態で存在し得る。同様に、抗体は、機能的抗原結合ドメイン、即ち重鎖及び軽鎖可変領域を有する抗体フラグメントとして存在し得る。また、抗体フラグメントは、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）２、ｓｃＦｖ（単鎖Ｆｖ）、ｄＡｂ（単一ドメイン抗体）、二重特異性抗体、ダイアボディ(diabodies)、トリアボディ(triabodies)から成る（が、これらに限定されない）群から選択される形態で存在し得る。したがって、「抗体」という用語は、天然抗体、組換え抗体、それらのフラグメント又は合成結合剤を包含する。
【００４２】
本明細書中で使用する場合、「ＡＩＣ」という用語は、アルファ−免疫複合体を指す。アルファ−免疫複合体は、タンパク質、例えばプラスミノゲン活性化因子阻害剤−２（ＰＡＩ２）タンパク質を包含するがこれらに限定されない抗体又は他の作用物質へ結合されたアルファ放出性放射性同位体である。
【００４３】
本明細書中で使用する場合、「死滅剤」という用語は、転移性癌細胞、黒色腫癌細胞又は転移性血管系の形成に関与する細胞（毛細血管周皮細胞を包含するがこれらに限定されない）を直接的に又は間接的に死滅させることが可能である化合物、物質或いは材料を指す。死滅剤は、アルファ−免疫複合体のような放射性同位体へ結合された抗体を含み得る。同様に、死滅剤は、非放射性化学剤を含んでもよい。
【００４４】
本明細書中で使用する場合、「ＨＭＷ−ＭＡＡ」という用語は、高分子量黒色腫関連高原を指す。
【００４５】
本明細書中で使用する場合、「ＴＡＴ」という用語は、標的アルファ療法を指す。
【００４６】
本明細書中で使用する場合、「ＴＡＶＡＴ」という用語は、標的抗血管アルファ療法を指す。
【００４７】
本明細書中で使用する場合、「ＲＢＥ」という用語は、相対的生物学的効果比を指す。
【００４８】
本明細書中で使用する場合、「ＭＣＳＰ」という用語は、黒色腫関連コンドロイテン硫酸プロテオグリカンを指す。
【００４９】
本明細書中で使用する場合、「ＨＡＭＡ」という用語は、ヒト抗マウス抗体を指す。
【００５０】
本明細書中で使用する場合、「ＬＥＴ」という用語は、線エネルギー付与を指す。
【００５１】
［発明を実施する最良の形態］
黒色腫関連コンドロイテン硫酸プロテオグリカン（ＭＣＳＰ）は、ラットタンパク質ＮＧ２のヒト相同体である腫瘍関連細胞表面タンパク質である。ＭＣＳＰは、黒色腫細胞によるだけでなく、発達中の血管系及び腫瘍血管系においても広く発現される。特に、ＭＣＳＰは、毛細血管を裏打ちする周皮細胞の表面上に発現される。転移中に、毛細血管成長は、血流及びリンパ系中で循環する転移性細胞により開始される可能性があり、「漏出性」となり、それにより腫瘍関連血管系の形成及び血管新生を提供する。
【００５２】
標的アルファ療法（ＴＡＴ）は、アルファ放出性放射性同位体による照射により癌細胞の局所的な死滅を通じて、単離細胞及び細胞クラスターを死滅させて、それにより致死的な転移性癌の発達を防止する能力を有する治療様式である。ＭＣＳＰを対象とする場合、標的抗血管アルファ療法（ＴＡＶＡＴ）により固形腫瘍を後退させるための、及び続いて残留単離細胞及び細胞クラスターを死滅させるための（それにより、致死的な転移性癌の発達を停止させる）ＴＡＴの効果は２倍である。ＴＡＴは、特異的な腫瘍細胞結合特性を有するベクターに連結された放射性核種を使用した特異的に局所的な内部放射線療法である。放射線生物学的視点から、アルファ粒子を放出する核種は、それらの短い飛程、高エネルギー、高い線エネルギー付与及び対応して高い放射線生物学的効果比のため、ベータ放出性放射性同位体を上回る利点を提供する。それらの線エネルギー付与（ＬＥＴ）は、ベータ粒子のＬＥＴよりも約１００倍高く、したがってより高い相対的生物学的効果比（ＲＢＥ）を伴う。したがって、アルファ放出体は、癌細胞を死滅させるのに要されるより少ない核の一撃で、標的癌細胞へ総エネルギーの遥かに高い割合を堆積させる。
【００５３】
９．２．２７モノクローナル抗体は通常、黒色腫細胞及び周皮細胞の表面上に発現されるＭＣＳＰを結合する、良性であるが高度に特異的な抗体である。しかしながら、この抗体と２１３Ｂｉとの結合は、このベクターを、アルファ−免疫複合体（ＡＩＣ）と称される細胞毒性の高い薬剤へ変換させた。ＡＩＣは、黒色腫細胞を選択的に標的として死滅させるのに、並びに血管新生に関与する「漏出性」毛細血管を破壊するのに有効であった。かかる毛細血管は、毛細血管を裏打ちする周皮細胞及び／又は毛細血管近接癌細胞を、ＡＩＣで標的とすることにより破壊された。このようにして、放射性同位体は、毛細血管内皮細胞を死滅させるアルファ放射を放出して、それにより毛細血管を閉鎖して、したがって転移性細胞から必要不可欠な栄養素を取り上げる。したがって、ＡＩＣは、重要な抗新生(neogenic)効果を保有することが実証された。
【００５４】
本発明者等は、１６／１６の続発性黒色腫が、９．２．２７モノクローナル抗体に対して陽性であることを見出しており、薬物動態的データに由来する線量（dose）算出により、ＡＩＣは、全ての正常組織を残したままで、腫瘍に高い放射線量を送達するのに非常に有効であったことが示される。
【００５５】
したがって、本発明者等は、病巣内ＴＡＴは、最大０．５ｍＣｉまで無毒性であり、局所的に効果があることを実証した。抗体単独に関して細胞毒性の徴候は見られず、組織学は、１５０μＣｉでは、数少ない生存細胞クラスターを伴ってほぼ完全な細胞死滅を示した。活性は、腎臓及び膀胱を通じて臓器から迅速に除去された。患者は全て、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答に関して陰性であった。
【００５６】
放射性標識されたモノクローナル抗体に対する懸念は、結合系の安定性である。解離された放射性標識が骨及び／又は肝臓に蓄積するため、したがって望ましくない量の放射線を非標的組織／臓器へ送達するため、放射性金属のｉｎ  ｖｉｖｏでの損失を防止することが重要である。遊離ビスマスが１時間以内に腎臓に蓄積されるために、腎臓における活性の連続した蓄積が観察されなかったことは重要である。腎活性の蓄積の欠如は、２１３Ｂｉが、抗体から著しく解離されなかったこと、即ちアルファ構築物が患者内で安定な化合物のままであったことを示唆する。
【００５７】
ＡＩＣの病巣内注入は、腫瘍全体にわたって活性の放射状の拡散を引き起こした。アルファ粒子の飛程は８０μｍであるため、ＡＩＣの拡散の範囲までは細胞死滅が単に行われ得る。腫瘍からの活性の生物学的クリアランスは、二成分指数関数的動力学に従うものであった。成分の迅速な除去は、腫瘍内圧力、血管排出及び漏出性腫瘍毛細血管の組合せに起因して、未結合のＡＩＣの血管除去に由来した。より遅い成分は、ＡＩＣが標的黒色腫細胞へ特異的且つ首尾よく結合されたことを示す。腫瘍保持に影響を及ぼす要因の幾つかは、腫瘍の大きさ及び血管分布、注入容量並びに注入手順であった。
【００５８】
注入活性当たりの平均生物学的に有効な病巣内腫瘍線量は、３０（１１〜９８）ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉであった。この広い範囲は、注入される腫瘍の種々の形状及び大きさ、針配置及び血管新生を反映するものである。この値は、腎臓に関する値（０．０１ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉ））のおよそ３０００倍である。この顕著な治療比は、病巣内治療の重要性を明らかに識別するものである。
【００５９】
したがって、本発明は、転移性癌の治療方法、転移性癌に関連する血管新生の治療方法、転移性癌に関連する血管系の形成を阻害する方法、転移性癌に関連する周皮細胞を死滅させる方法、転移性癌に関連する腫瘍毛細血管と近接する癌細胞を死滅させる方法、及び転移性癌に関連する毛細血管中の内皮細胞を死滅させる方法を提供し、ここで上記方法は、タンパク質へ結合された治療上有効量の死滅剤を被験体へ投与することを含み、当該タンパク質へ結合された当該死滅剤は、上記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する。
【００６０】
本発明はさらに、転移性癌の治療における使用のためのタンパク質へ結合された死滅剤を製造するプロセスを提供し、ここで当該タンパク質へ結合された当該死滅剤は、上記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する。
【００６１】
本発明はさらに、転移性癌の治療用の薬剤の製造における死滅剤及びタンパク質の使用を提供し、ここで当該タンパク質へ結合された当該死滅剤は、上記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する。
【００６２】
腫瘍
本発明の方法及び組成物は、ＡＩＣによる治療に適用可能な任意の腫瘍型の治療において用途を見出されることが当業者には容易に理解されよう。例えば、本発明の方法を使用して治療され得る腫瘍としては、肝臓腫瘍、卵巣腫瘍、結腸直腸腫瘍、肺腫瘍、胸部腫瘍、前立腺腫瘍、膵臓腫瘍、腎臓腫瘍、胃腫瘍、子宮頸部腫瘍、子宮内膜腫瘍、食道腫瘍、脳腫瘍、頭部腫瘍又は頸部腫瘍、腹膜癌症、肉腫或いは黒色腫が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６３】
組成物及び投与経路
本発明の方法によれば、化合物及び組成物は、任意の適切な経路により、全身的に、局所的に或いは限局的に投与され得る。任意の所定の状況で使用されるべき特定の投与経路は、治療されるべき腫瘍の性質、腫瘍の重篤性及び程度、送達されるべき特定の化合物の所要投与量、並びに化合物の潜在的な副作用を含む多数の因子に依存する。
【００６４】
例えば、適切な濃度の所望の化合物が、治療されるべき身体における部位へ直接送達されることが必要である状況では、投与は、全身性ではなく局所的であり得る。局所投与は、非常に高い局所濃度の所望の化合物を所要部位へ送達する能力を提供し、したがって所望の治療効果又は予防効果を達成するのに適している一方で、身体の他の臓器の化合物への暴露を回避して、それにより副作用を潜在的に低減させる。
【００６５】
一例として、本発明の実施形態による投与は、腔内、膀胱内、筋内、動脈内、静脈内、皮下、局所又は経口を含む任意の標準的な経路により達成され得る。腔内投与は、腹腔内又は胸膜腔内であり得る。特定の実施形態では、投与は、静脈内注入又は腹腔内投与であり得る。最も好ましくは、投与は静脈内注入を介するものであり得る。
【００６６】
概して、適切な組成物は、当業者にとって既知である方法に従って製造されてもよく、薬学的に許容可能な希釈剤、補助剤及び／又は賦形剤を包含し得る。希釈剤、補助剤及び賦形剤は、組成物の他の成分と適合可能であるという観点で「許容可能」でなくてはならず、且つそれらのレシピエントにとって有害であってはならない。
【００６７】
薬学的に許容可能な希釈剤の例は、脱塩水又は蒸留水、生理食塩水、植物ベースの油（例えば、ピーナッツ油、ベニバナ油、オリーブ油、綿実油、トウモロコシ油、ゴマ油、ラッカセイ油又はココナッツ油）；シリコーン油（メチルポリシロキサン、フェニルポリシロキサン及びメチルフェニルポリシロキサン（polysolpoxane）のようなポリシロキサンを含む）；揮発性シリコーン；鉱油（例えば、流動パラフィン、軟質パラフィン又はスクアラン）；セルロース誘導体（例えば、メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム又はヒドロキシプロピルメチルセルロース）；低級アルカノール（例えば、エタノール又はイソプロパノール）；低級アラルカノール；低級ポリアルキレングリコール又は低級アルキレングリコール（例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコール又はグリセリン）；脂肪酸エステル（例えば、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピル又はオレイン酸エチル）；ポリビニルピロリドン（polyvinylpyrridone）；寒天；カラギーナン；トラガカントガム又はアラビアゴム、並びに石油ゼリーである。通常、キャリア（単数又は複数）は、組成物の１重量％〜９９．９重量％を成す。最も好ましくは、希釈剤は生理食塩水である。
【００６８】
注入可能溶液又は懸濁液としての投与に関して、無毒性の非経口的に許容可能な希釈剤又はキャリアとして、リンガー溶液、中鎖トリグリセリド（ＭＣＴ）、等張性生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、エタノール及び１，２−プロピレングリコールを挙げることができる。
【００６９】
経口用途のための適切なキャリア、希釈剤、賦形剤及び補助剤の幾つかの例としては、ピーナッツ油、流動パラフィン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム、トラガカントゴム、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、ゼラチン及びレシチンが挙げられる。さらに、これらの経口配合物は、適切な風味剤及び着色剤を含有してもよい。カプセル形態で使用する場合、カプセルは、崩壊を遅延するモノステアリン酸グリセリル又はジステアリン酸グリセリルのような化合物でコーティングされてもよい。
【００７０】
補助剤は通常、皮膚軟化薬、乳化剤、増粘剤、防腐剤、殺菌剤及び緩衝剤が挙げられる。
【００７１】
経口投与用の固体形態は、ヒト及び獣医学薬務で許容可能な結合剤、甘味剤、崩壊剤、希釈剤、風味剤、コーティング剤、防腐剤、潤滑剤及び／又は時間遅延剤を含有してもよい。適切な結合剤としては、アラビアゴム、ゼラチン、コーンスターチ、トラガカントガム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース又はポリエチレングリコールが挙げられる。適切な甘味剤としては、スクロース、ラクトース、グルコース、アスパルテーム又はサッカリンが挙げられる。適切な崩壊剤としては、コーンスターチ、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、グアーガム、キサンタンガム、ベントナイト、アルギン酸又は寒天が挙げられる。適切な希釈剤としては、ラクトース、ソルビトール、マンニトール、デキストロース、カオリン、セルロース、炭酸カルシウム、ケイ酸カルシウム又はリン酸二カルシウムが挙げられる。適切な風味剤としては、ペパーミント油、冬緑油、サクランボ、オレンジ又はラズベリー風味剤が挙げられる。適切なコーティング剤としては、アクリル酸及び／又はメタクリル酸並びに／或いはそれらのエステルのポリマー或いはコポリマー、ワックス、脂肪アルコール、ゼイン、シェラック又はグルテンが挙げられる。適切な防腐剤としては、安息香酸ナトリウム、ビタミンＥ、アルファ−トコフェロール、アスコルビン酸、メチルパラベン、プロピルパラベン又は重亜硫酸ナトリウムが挙げられる。適切な潤滑剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、オレイン酸ナトリウム、塩化ナトリウム又はタルクが挙げられる。
【００７２】
経口投与用の液体形態は、上記作用物質に加えて、液体キャリアを含有してもよい。適切な液体キャリアとしては、水、油（例えば、オリーブ油、ピーナッツ油、ゴマ油、ヒマワリ油、ベニバナ油、ラッカセイ油、ココナッツ油）、流動パラフィン、エチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、グリセロース、脂肪アルコール、トリグリセリド又はそれらの混合物が挙げられる。
【００７３】
経口投与用の懸濁液は、分散剤及び／又は沈殿防止剤をさらに含んでもよい。適切な沈殿防止剤としては、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、アルギン酸ナトリウム又はアセチルアルコールが挙げられる。適切な分散剤としては、レシチン、脂肪酸（例えば、ステアリン酸）のポリオキシエチレンエステル、ポリオキシエチレンソルビトールモノ又はジ−オレエート、−ステアレート又は−ラウレート、ポリオキシエチレンソルビタンモノ又はジ−オレエート、−ステアレート又は−ラウレート等が挙げられる。
【００７４】
経口投与用のエマルジョンは、１つ又は複数の乳化剤をさらに含んでもよい。適切な乳化剤としては、上記で例示するような分散剤、或いはグアーガム、アラビアゴム又はトラガカントガムのような天然ゴムが挙げられる。
【００７５】
非経口投与可能な組成物を製造する方法は、当業者に明らかであり、例えばRemington's Pharmaceutical Science, 15th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa.（参照により本明細書に援用される）でより詳細に記載されている。
【００７６】
組成物は、陰イオン界面活性剤、陽イオン界面活性剤又は非イオン界面活性剤のような任意の適切な界面活性剤（例えば、ソルビタンエステル又はそれらのポリオキシエチレン誘導体）を組み込んでもよい。天然ゴム、セルロース誘導体又は無機材料（例えば、シリカ系シリカ（silicaceous silicas））のような沈殿防止剤、並びにラノリンのような他の成分もまた包含されてもよい。
【００７７】
組成物はまた、リポソームの形態で投与されてもよい。リポソームは概して、リン脂質又は他の脂質物質に由来し、水性媒質中に分散される単層又は多層水化液晶により形成される。リポソームを形成することが可能な任意の無毒性の生理学的に許容可能且つ代謝代謝可能な脂質が使用され得る。リポソーム形態での組成物は、安定剤、防腐剤、賦形剤等を含有してもよい。好ましい脂質は、リン脂質及びホスファチジルコリン（レシチン）（天然及び合成の両方）である。リポソームを形成する方法は、当該技術分野で既知であり、これに関しては、具体的にはPrescott, Ed., Method in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N.Y., (1976), p.33 et seq.（この内容は、参照により本明細書に援用される）を参照されたい。
【００７８】
投与量
任意の特定の被験体に関する投与化合物の有効用量(dose)レベルは、医学で既知である他の関連因子とともに、治療される腫瘍の型及び腫瘍の病期、用いられる化合物の活性、用いられる組成物、患者の年齢、体重、全般的な健康状態、性別及び食習慣、投与時期、投与経路、化合物の封鎖(sequestration)の割合、治療の持続期間、治療と組み合わせて或いは治療と同時に使用される薬物を含む様々な因子に依存する。
【００７９】
当業者は、日常的な実験により、適用可能な状態を治療するのに要される有効な無毒性投与量を確定することが可能である。これらはほとんどの場合、個別に基づいて確定される。
【００８０】
放射能に関して、患者への病巣内投与に関する組成物の治療上有効な投与量は、約１０μＣｉ〜１０ｍＣｉ、１０μＣｉ〜５ｍＣｉ、１０μＣｉ〜４ｍＣｉ、１０μＣｉ〜３ｍＣｉ、１０μＣｉ〜２ｍＣｉ、１０μＣｉ〜１０００μＣｉ、５０μＣｉ〜５００μＣｉ、５０μＣｉ〜４００μＣｉ、５０μＣｉ〜３００μＣｉ、５０μＣｉ〜２００μＣｉ、１００μＣｉ〜２００μＣｉ、１１０μＣｉ〜１９０μＣｉ、１２０μＣｉ〜１８０μＣｉ、１３０μＣｉ〜１７０μＣｉ、１４０μＣｉ〜１６０μＣｉ、１４５μＣｉ〜１５５μＣｉ、１４６μＣｉ〜１５４μＣｉ、１４７μＣｉ〜１５３μＣｉ、１４８μＣｉ〜１５２μＣｉ、或いは１４９μＣｉ〜１５１μＣｉの範囲であり得る。患者への病巣内投与に関する組成物の治療上有効な投与量は、１５０μＣｉであり得る。
【００８１】
患者への全身投与に関する組成物の治療上有効な投与量は、約１００μＣｉ〜１００ｍＣｉ、２００μＣｉ〜９０ｍＣｉ、３００μＣｉ〜８０ｍＣｉ、４００μＣｉ〜７０ｍＣｉ、５００μＣｉ〜６０ｍＣｉ、６００μＣｉ〜５０ｍＣｉ、７００μＣｉ〜４０ｍＣｉ、８００μＣｉ〜３０ｍＣｉ、９００μＣｉ〜２０ｍＣｉ、１０００μＣｉ〜１８ｍＣｉ、１．１ｍＣｉ〜１６ｍＣｉ、１．２ｍＣｉ〜１４ｍＣｉ、１．３ｍＣｉ〜１２ｍＣｉ、１．４ｍＣｉ〜１１ｍＣｉ、或いは１．５ｍＣｉ〜１０ｍＣｉの範囲であり得る。患者への全身投与に関する組成物の治療上有効な投与量は、約１．５ｍＣｉ〜５０ｍＣｉの範囲、或いはさらにはより高い範囲であり得る。
【００８２】
病巣内投与に関する注入活性当たりの平均生物学的に活性な有効腫瘍線量は、約１〜１０００ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉ、１０〜１００ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉ、１０〜９０ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉ、１０〜８０ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉ、１０〜７０ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉ、１０〜６０ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉ、１０〜５０ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉ、１５〜４５ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉ、２０〜４０ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉ、２１〜３９ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉ、２２〜３８ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉ、２３〜３７ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉ、２４〜３６ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉ、２５〜３５ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉ、２６〜３４ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉ、２７〜３３ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉ、２８〜３２ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉ或いは２９〜３１ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉの範囲であり得る。注入活性当たりの平均生物学的に活性な有効腫瘍線量は、３０ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉであり得る。
【００８３】
全身投与に関する注入活性当たりの平均生物学的に活性な有効腫瘍線量は、約０．１〜１００ＲＢＥ．ｃＧｙ／ｍＣｉ、０．２〜９０ＲＢＥ．ｃＧｙ／ｍＣｉ、０．３〜８０ＲＢＥ．ｃＧｙ／ｍＣｉ、０．４〜７０ＲＢＥ．ｃＧｙ／ｍＣｉ、０．５〜６０ＲＢＥ．ｃＧｙ／ｍＣｉ、０．６〜５０ＲＢＥ．ｃＧｙ／ｍＣｉ、０．７〜３０ＲＢＥ．ｃＧｙ／ｍＣｉ、０．８〜２０ＲＢＥ．ｃＧｙ／ｍＣｉ、０．９〜１０ＲＢＥ．ｃＧｙ／ｍＣｉ、１．０〜８ＲＢＥ．ｃＧｙ／ｍＣｉ、１．１〜６ＲＢＥ．ｃＧｙ／ｍＣｉ、１．２〜４ＲＢＥ．ｃＧｙ／ｍＣｉ、１．３〜２ＲＢＥ．ｃＧｙ／ｍＣｉ、１．４〜１．８ＲＢＥ．ｃＧｙ／ｍＣｉ、或いは１．５〜１．７ＲＢＥ．ｃＧｙ／ｍＣｉの範囲であり得る。全身投与に関する注入活性当たりの平均生物学的に活性な有効腫瘍線量は、１．６ＲＢＥ．ｃＧｙ／ｍＣｉであり得る。
【００８４】
重量に関して、患者への投与に関する組成物の治療上有効な投与量は、２４時間につき体重１ｋｇ当たり約０．０１ｍｇ〜約１５０ｍｇ、通常２４時間につき体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ〜約１５０ｍｇ、２４時間につき体重１ｋｇ当たり約０．１ｍｇ〜約１００ｍｇ、２４時間につき体重１ｋｇ当たり約０．５ｍｇ〜約１００ｍｇ、或いは２４時間につき体重１ｋｇ当たり約１．０ｍｇ〜約１００ｍｇの範囲であると予想される。より通常には、有効用量範囲は、２４時間につき体重１ｋｇ当たり約５ｍｇ〜約５０ｍｇの範囲であると予想される。
【００８５】
あるいは、有効投与量は、最大約５０００ｍｇ／ｍ２であり得る。概して、有効投与量は、約１０〜約５０００ｍｇ／ｍ２、通常約１０〜約２５００ｍｇ／ｍ２、約２５〜約２０００ｍｇ／ｍ２、約５０〜約１５００ｍｇ／ｍ２、約５０〜約１０００ｍｇ／ｍ２、或いは約７５〜約６００ｍｇ／ｍ２の範囲であると予想される。
【００８６】
さらに、最適量及び個々の投薬の間隔は、治療される状態の性質及び程度、投与の形態、経路及び部位、並びに治療される特定の個体の性質により確定されることは、当業者には明らかであろう。また、かかる最適条件は、従来技術により確定することができる。
【００８７】
また、単位時間当たりの付与される組成物の用量数のような最適な治療過程は、従来の治療過程確定試験を使用して当業者によって確かめることができる。
【００８８】
キット
本発明は、転移性癌の治療、転移性癌に関連する血管新生の治療、転移性癌に関連する血管系の形成を阻害すること、転移性癌に関連する周皮細胞を死滅させること、及び転移性癌に関連する腫瘍毛細血管と近接する癌細胞を死滅させることにおける使用のためのキットを提供し、ここでキットは、タンパク質へ結合された死滅剤を含み、当該タンパク質へ結合された当該死滅剤は、上記転移性癌に関連する少なくとも１つの細胞に結合する。
【００８９】
本発明のキットは、本発明の方法の使用を容易とする。通常、本発明の方法を実施するためのキットは、上記方法を実施するのに必要な試薬を全て含有する。
【００９０】
本発明の状況では、区分化されたキットは、試薬が別個の容器中に含有される任意のキットを包含し、小さなガラス容器、プラスチック容器或いはプラスチック又は紙の片を包含してもよい。かかる容器は、サンプル及び試薬の交差汚染を回避しながらの或る区画から別の区画への試薬の効率的な移動、並びに定量的な様式での或る区画から別の区画への各容器の作用物質又は溶液の添加を可能にし得る。かかるキットはまた、試験サンプルを受ける容器、アッセイで使用される抗体（複数可）を含有する容器、洗浄試薬（例えば、リン酸緩衝生理食塩水、トリス緩衝液等）を含有する容器、及び検出試薬を含有する容器を包含し得る。
【００９１】
通常、本発明のキットはまた、適切な方法を実施するためのキット構成成分の使用説明書を包含する。
【００９２】
ここで本発明はさらに、以下の特定の実施例を参照してより詳細に説明されるが、特定の実施例は、いかなる場合でも本発明の範囲を限定するものと解釈されるものではない。
[実施例]
[実施例１]
【００９３】
一般的な方法
１．１  患者の登録
臨床研究者等は、適格な黒色腫患者を治験に参加するよう求めた。患者には、研究特異的なスクリーニング手順が実施される前に、研究の目的及び危険性について情報が与えられ、同意書に署名をすることが求められた。この研究は、South Eastern Sydney Area Ethics Committee(00/76 Allen)及びNSW Radiation Safety Council and Environmental Protection Authorityにより承認された。
【００９４】
研究への参加に関する基準は、文書化されたＡＪＣＣ／ＵＩＣＣ(American Joint Committee on Cancer/International Union against Cancer)の病期ＩＶ黒色腫、少なくとも６ヶ月の予想生存並びに適正な血液学的腎機能及び肝機能を伴う少なくとも１８歳の切除患者であった。患者は、インフォームドコンセントを提出することが可能であり、且つ少なくとも７０％のカルノフスキー一般状態を有する者でなければならなかった。患者は、活性な脳転移、活動性感染症又は重症の医療共存症を有するか、妊娠しているか、又はマウス製品に対して既知のアレルギーを有する場合には、排除された。また、患者の白血球（ＷＢＣ）計数が２．０×１０９／Ｌ未満であるか、血小板計数が１５０×１０９／Ｌ未満であるか、アスパラギン酸アミノトランスフェラーゼ（ＡＳＴ）及びアラニンアミノトランスフェラーゼ又は血清グルタミン酸オキサロ酢酸トランスアミナーゼ（ＡＬＴ）レベルが、正常の上限の３倍を上回るか、或いは血清クレアチニンレベルが０．２ｍｍｏｌ／Ｌを上回る場合にも、患者は排除された。４週以内に化学療法、放射線療法又は免疫療法で治療した患者もまた排除された。被験体は、彼らが研究参加に関する基準を全て満たすことが認定及び確認される場合に登録された。
【００９５】
総計１６名の患者（彼らの大部分がSydney Melanoma Unit for final assessmentにより紹介された）は、適格性基準を満足し、治験に包含された。男性の平均年齢は７５．６歳（範囲、５６〜８５歳）、及び女性７１．１歳（範囲６９〜８４歳）であった。１６名の患者のうち１４名において、注入部位が脚に位置した。
【００９６】
１．２  研究設計
毒性を研究するために、及びアルファ−免疫複合体である２１３Ｂｉ−ｃＤＴＰＡ−９．２．２７の有効用量を評価するために、コホート用量増加設計を使用して、研究には非盲検第１段階用量増加が含まれた。二次的な目的は、血清マーカー及び免疫組織化学を使用して臨床応答に関する徴候を評価することであった。基線で、並びに２週及び４週で、血液を収集した。有害事象は、National Cancer Institute's Common Toxicity Criteriaのバージョン２．０（１９９８年、２００１年）に従って、グレードＩＩＩ／ＩＶの非血液毒性又はグレードＩＶの血液毒性の存在により確定された。
【００９７】
１．３  手順
アルファ免疫複合体（ＡＩＣ）の線量は、５０μＣｉから開始して、１００μＣｉずつ段階的に増大させた。線量の活性は、ＡＩＣの病巣内投与直前に線量較正器（Ｂｉｏｄｅｘ  Ａｔｏｍｌａｂ  ２００）で測定した。病巣内注入は、腫瘍容積全体にわたってＡＩＣの拡散を最大にするように、腫瘍の大きさ及び形状に応じて腫瘍内又は腫瘍下(sub-tumoral)注入であった。７５％を超える患者に、腫瘍内注入を施した。
【００９８】
放射線モニタリングは、注入後２〜３時間にわたって実施した。較正された放射線検出器（ＮａＩ）を、動態を確立するのに十分な間隔で、所定の４つの主要部位で皮膚に設置した。参照マーキングを患者の皮膚上に行って、所定のこれらの部位にわたるプローブの一貫した位置決めを確実にした。プローブは、注入腫瘍に関して中央に位置付けられ、活性保持を測定した。腎臓測定は、各腎臓の後方にあるプローブで行い、膀胱計数は、前面から行った。患者は、流体の規則正しい摂取によりモニタリング期間全体にわたって十分水和された状態を保った。尿サンプルは、モニタリング期間にわたって３０分毎に採取した。活性は、ＴＡＴの２時間後のガンマカメラ測定には不適当であり、臓器を描写するのに不十分であった。
【００９９】
血清生化学の分析用に、並びに２週での免疫応答の評価及び４週の期間にわたる処置後の臨床応答との相関を可能にするために、基線で並びに２週及び４週に、静脈血サンプルをヘパリン処置したチューブに収集した。
【０１００】
腫瘍は、腫瘍における任意の変化を確立させるために、基線、２週及び４週で撮影した（図１）。腫瘍を４週目に切除した。腫瘍切片（５μｍ厚）を調製して、組織学及び免疫組織化学用に染色した。ヘマトキシリン及びエオシン（Ｈ＆Ｅ）染色を使用して、組織細胞構造及び細胞生存度を識別した。無傷の核は青色に染色したのに対して、損傷を受けた細胞は染色しなかった。
【０１０１】
１．４  アルファ免疫複合体（ＡＩＣ）の調製
アクチニウム−２２５は、Department of Energy, United Statesから輸入した。硝酸アクチニウムは、０．１ｍｇ／ｍＣｉのＮａＮＯ３及び０．１μｇ／ｍＣｉ未満の全ての他の検出可能な陽イオンを伴って、２２５Ａｃ  ９９％の純度を有した。２１３Ｂｉは、Ａｃ−２２５発生剤から溶出されて、２〜３時間以内に初期活性へと戻って成長する。発生剤は、必要とされる限りはこの期間内に溶出され得る。ビスマス−２１３は、０．１５Ｍの蒸留且つ安定化ヨウ化水素酸を使用して、２２５Ａｃカラムから溶出された。ビスマス−２１３は、４６分の半減期を有し、８．３６ＭｅＶアルファ粒子（９８％）及び４４０ｋｅＶガンマ線（１７％）を放出する。線量較正器（Ｂｉｏｄｅｘ  Ａｔｏｍｌａｂ  ２００）を較正して、その４４０ｋｅＶガンマ放出を介してビスマス−２１３活性を測定した。較正は、２１３Ｂｉと類似したエネルギーの４１２ｋｅＶ光子を放出するＡｕ１９８の較正源を用いて実施した。
【０１０２】
モノクローナル抗体９．２．２７は、Scripps Research Institute由来のRoyal Newcastle Hospitalにより供給された。キレート化剤であるジエチレントリアミン５酢酸（ｃＤＴＰＡ）の環状無水物は、Aldrich Chemical Company, Australiaから購入した。医薬品安全性試薬実施基準の下、標識手順［１］は、クロロホルム中でのキレート化剤ｃＤＴＰＡの調製を包含し、続いてこれを窒素流下で精製した。瞬間薄相クロマトグラフィ（ＩＴＬＣ）は、ゲルマン紙（片の大きさ  １×９ｃｍ）及び溶媒として０．５Ｍ酢酸ナトリウムを使用して実施した。放射性標識した複合体及び／又は非放射性複合体を、紙に沿って遊離の放射性同位体から分離させて、紙をセクションに切断して、各セクションからのガンマ放出を計数した。
【０１０３】
癌細胞に付着するＡＩＣの能力及びその細胞死滅能力は、標識効率及び安定性がひとたび確定されると確認された。ＡＩＣの安定性は、２つのキレート化剤、即ちジエチレントリアミン５酢酸（ｃＤＴＰＡ）及びＣＨＸ−Ａ”の環状無水物を用いて試験した。両方のキレート化剤が、２１３Ｂｉによる高い標識をもたらし、同位体の２．５半減期でｃＤＴＰＡ及びＣＨＸ−Ａ”と類似した（およそ２０％の）浸出を示した［１］。最初の３０分で、浸出は、それぞれほんの８％及び７％であった。これらの再現性のある結果により、２１３Ｂｉに関して両方の複合体の適正な安定性が確認された。同様に、類似した結果が、ＤＴＰＡ負荷試験に関しても見出された。細胞結合研究は、いずれかのキレート化剤に関して、標識抗体と非標識抗体との間で任意の有意な差を示さなかった。したがって、系のコンホメーションは、キレート化及び標識により依然として不変のままであった。ｃＤＴＰＡは市販されており、したがって好ましいキレート化剤であった。必要とされる緩衝液は調製及び滅菌された。
【０１０４】
１．５  血清安定性試験
血清は、採血したてのヒト血液検体から調製した。ＡＩＣは、それぞれＡＩＣ及び血清に関して１：１００の比で３７℃で血清とともにインキュベートした［１］。サンプルを即座に取り出して、このゼロ時間検体をＩＴＬＣに付した。内容物を時折振とうさせて、周期的なサンプルを０．５時間、１時間、１．５時間及び２時間目に採取した。各検体をＩＴＬＣに付して、各時点での相対浸出及び安定割合を、時間の関数として算出した。
【０１０５】
１．６  ＤＴＰＡ負荷
ＡＩＣは、種々の濃度のＤＴＰＡとのインキュベーションによりＤＴＰＡ負荷試験［１］に付して、標識が特異的且つ安定性であることを確実にした。さらに、キレート化されていない抗体もまた、同位体で標識した。ＤＴＰＡ（１０μｍｏｌ）を、キレート化されていない標識抗体とともに、及びさらにＡＩＣとともにインキュベートした。３７℃で０．５時間及び１時間のインキュベーション後に、全ての検体をＩＴＬＣで分析して、抗体の特異的標識及び非特異的標識を確定した。
【０１０６】
１．７  細胞結合アッセイ
一連の標準化手順をｍＡｂ  ９．２．２７に関して行った［１］。種々の濃度の抗体を、フローサイトメトリーチューブにおいて１５分間、１０万個の細胞とともにインキュベートさせた。未処理の細胞を対照として加工処理した。抗体の細胞結合効率は、フローサイトメトリーアッセイにより確定された。
【０１０７】
１．８  放射線モニタリングの薬物動態
単一チャネルアナライザを備えた単一ＮａＩ視準分光計（結晶直径：６０ｍｍ、厚さ：５０ｍｍ、コリメーター直径：１１３ｍｍ、コリメーター長：１９２ｍｍ）（ＥＳＩ  Ｎｕｃｌｅａｒ  Ｔｙｐｅ  ５３５０分光計）を使用して、患者における活性分布及び動態をモニタリングした。プローブ及び分光計（ＥＳＩ  Ｎｕｃｌｅａｒ  ｔｙｐｅ  ５３５０）を較正して、較正されたセシウム−１３７源の６６１ｋｅＶ光子に関して６４２〜６８２ｋｅＶウィンドウを使用して最大計数率を得た。計数時間は、１００秒に予め設定して、ビスマス−２１３からの４４０ｋｅｖガンマ放出に関して、４４０〜４８０ｋｅＶウィンドウが設定された。バックグラウンド計数は、ＡＩＣ測定に先立って行われた。２つの指数関数（Ａｅ−ａｘ＋Ｂｅ−ｂｘ）を用いてデータを適合させた。
【０１０８】
注入腫瘍及び様々な重要な臓器に対する放射線量の推定値を、従来の医療内部被曝線量（ＭＩＲＤ）システム［３、４、５］を使用して算出した［２］。決定論的臓器損傷に対するアルファ放射線に関する有効線量は、ＲＢＥに関して推奨された値＝５を使用する［６］のに対して、確率論的影響又は突然変異誘発に関する等価線量は、放射線荷重計数Ｗｒ＝２０を有する［７］。
【０１０９】
１．９  ガンマカメライメージング
高エネルギーの汎用コリメーターを取り付けた二重頭付きガンマカメラ（Ｐｒｉｓｍ  ２０００ＸＰ：Marconi, Philips)を使用して、患者の平面画像を得た。腎臓、肝臓及び膀胱から構成される腰部領域の１８０°反対の前方及び後方画像を撮った。しかしながら、活性が低すぎて、有用なデータは得られなかった。
【０１１０】
１．１０  ヒト抗マウス抗体応答（ＨＡＭＡ）
ＨＡＭＡ応答は、複合体で使用される抗体がマウス起源である場合に、ＥＬＩＳＡアッセイによりモニタリングされた［８］。患者からの末梢血液を、注射前の０日目に、並びに２週及び４週に収集した。２つの測定を行って、その平均値をとった。抗体の存在はｎｇ／ｍＬで表した。
【０１１１】
１．１１  イムノアッセイ
標的抗原の細胞表面発現は、患者から収集された組織上で、アルカリホスファターゼ抗アルカリホスファターゼ（ＡＰＡＡＰ）及び間接的な複合体ペルオキシダーゼ法によりモニタリングした［９］。ＡＰＡＡＰ染色を使用して、ｍＡｂ  ９．２．２７に結合された抗原複合体の存在を検出した。細胞の膜表面上に存在する抗原を伴う細胞は、鮮やかなピンク色に染色された。
【０１１２】
腫瘍切片はまた、ヘマトキシリン及びエオシンで染色されて、細胞構造の存在が観察された。以下の試験を実施して臨床応答の徴候を評価した。
【０１１３】
１．１２  アポトーシス
アポトーシスは、特異的な形態学的変化を特徴とするプログラム細胞死のプロセスである。これらには、細胞収縮、アポトーシス小体への細胞断片化が包含される。このＴＵＮＥＬ（末端デオキシヌクレオチドトランスフェラーゼ媒介性デオキシウリジンニック末端標識）法は、末端ジデオキシヌクレオチダルトランスフェラーゼ（ＴｄＴ）を使用して、アポトーシス中にＤＮＡに生じる３’鎖切断へ、ハプテンでタグ付けしたヌクレオチドを組み込ませる［１０］。これは、非常に感度のよい方法であり、アポトーシスを受けている細胞の初期段階におけるＤＮＡ鎖破損の検出に基づく。ＤＮＡにおける遊離の３’末端がビオチン−ｄＵＴＰ又はＤＩＧ−ｄＵＴＰで標識される場合、組み込まれたヌクレオチドは、ストレプトアビジンによる第２のインキュベーション工程で検出され得る。免疫複合体は、ストレプトアビジンがレポーター分子（例えば、フルオレセイン）と結合される場合に容易に目に見える。
【０１１４】
１．１３  細胞増殖マーカーｋｉ６７
ｋｉ６７は、増殖を評価するのに使用される既知の方法である。研究により、様々な腫瘍型における増殖率と臨床転帰との間の強力な相関関係が示されており、細胞増殖活性の測定は、幾つかの重要な予後マーカーの１つである［１１］。このモノクローナル抗体は、増殖中のヒト細胞の核中に存在する抗原と反応する。ｋｉ−６７発現は、後期Ｇ１、Ｓ、Ｇ２及びＭとして称される細胞周期の段階中に起きる。しかしながら、抗原は、Ｇ０段階中に検出することができない。したがって、この抗体は、細胞増殖に関するマーカーとしての有用性を有する。
【０１１５】
１．１４  黒色腫阻害活性（ＭＩＡ）タンパク質
一工程免疫反応ＥＬＩＳＡ試験は、血清中のＭＩＡタンパク質の定量化に使用した。「サンドイッチ酵素イムノアッセイ」は、ストレプトアビジンでコーティングしたマイクロタイタープレート中で実施した。ＭＩＡは、ビオチン化モノクローナル抗体及び種々のエピトープを認識するペルオキシダーゼ結合モノクローナル抗体により同時に結合された。形成された複合体は、高い特異性を伴って、ビオチン化抗体を介してマイクロタイタープレートのストレプトアビジンでコーティングされた表面に結合する。アッセイ時間は、およそ２時間であった。血清中のＭＩＡタンパク質の定量化に使用されるＥＬＩＳＡ試験は、高い特異性を有する。特殊な添加剤は、ヒト血清中の妨害抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）から試験系を保護する。
【０１１６】
８．８ｎｇ／ｍＬでのＭＩＡに関する陽性値に対するカットオフ（上位３％）（Lower cut-off for positive values (97th percentile)：陽性値に対する下端のカットオフ（９７パーセンタイル））は、健常な血液被験体の対照群由来の血清に関する結果に基づいて報告されている［１２］。
[実施例２ａ]
【０１１７】
病巣内毒性
登録は、計画的な線量レベルを通じて段階的に進行した。患者には、５０μＣｉから開始して、１００μＣｉの工程で増大させて、ＡＩＣの病巣内注入を施した。最大許容濃度（ＭＴＤ）は、有効病巣内線量が非常に低い活性で得られたため到達しなかった。有害事象は見られなかった。概して、全血球数及び臨床化学は、基線値から変化しなかった。有意な赤血球異常性も基線からの白血球及び血小板における変化も見られなかった。予備の反応性リンパ球がより高い線量で見られた。わずかな多染性が、迅速な血小板ターンオーバーを示す何人かの患者で見られた。予備の反応性リンパ球は、何人かの患者で見られた。ヘモグロビンは、全ての線量で正常範囲内であった。ＴＡＴの４週後に、ナトリウム、アルブミン及びカルシウム、尿素並びにクレアチニンの有意な変化は見られなかった。カリウムは変化せず、患者全てに関して正常範囲内であった。腎障害は観察されなかった。
【０１１８】
患者は全て、注入部位で疼痛を報告しており、これを１〜１０段階に基づいて等級分けした。１人の患者について、疼痛は５以下であった。しかしながら、上前頭部上の腫瘍への注入に関しては、疼痛は１０と記載された。１１／１６の患者に関して、疼痛は７を超えた。しかしながら、患者は全て、強烈であるが短く、３〜４秒続くと疼痛を説明した。
[実施例２ｂ]
【０１１９】
全身毒性
動態データを放射性壊変に関して補正して、腫瘍及び正常組織における吸収線量を、測定した活性から算出した。線量測定分析は、注入腫瘍、膀胱及び腎臓にわたって位置するＮａＩ分光計を使用して測定された動態、並びに尿活性測定に基づいている。活性のクリアランスに対する二重指数関数適合により、腫瘍からの或る程度は可変性の迅速なクリアランス速度及び遅いクリアランス速度が示された。平均強度及び指数は下記のようであることがわかった。
迅速なクリアランス          ０．６１±０．０９      ０．１０±０．０２
遅いクリアランス            ０．１６±０．０１      ０．０３±０．０３
Ｐ値                        ０．０００２            ０．００３
【０１２０】
これらの値は有意に異なり、より大きな割合のＡＩＣが腫瘍から迅速に除去され、より小さな割合が、黒色腫細胞上の受容体により保持されることを示す。それにもかかわらず、病巣内ＡＩＣは、他の組織を残しながら腫瘍へ高い線量を送達するのに非常に有効であり、吸収される線量は、任意の他の組織に対する最高線量よりも、腫瘍において３桁高かった。
[実施例３]
【０１２１】
腫瘍における活性の保持
腫瘍からの活性のクリアランスは、二成分指数関数動態に従うものであった。活性の生物学的クリアランスは、成分の初期の迅速なクリアランスを特徴とし、そこでは５０％を超えるＡＩＣが、ＴＡＴ後４０分以内に注入腫瘍から除去された（図１）。成分の第２の除去は遥かに遅く、活性のかなりの部分が腫瘍における注入部位に残存することを示した。
[実施例４]
【０１２２】
膀胱及び腎臓における活性の蓄積
物理的衰退及びサンプル計数器効率に関して補正した尿サンプル計数により、患者が排尿するたびに、活性の量が放出されることを示した。続いて、この活性は、膀胱測定の効率を確定するために放出前及び後に膀胱に関して測定した計数の差と比較した。放出の間での膀胱における活性の蓄積は、時間とともに変化した。膀胱中の蓄積がほとんど観察されなくなるまで、取込み速度は、モニタリング期間（６０〜１００分）の後半部向かって次第により遅くなっている（図２）。投与される活性の割合は、ほぼ全ての患者において約１０〜２０％が残存し、８０％を超える活性は、モニタリングの最後までに排除された。
【０１２３】
排尿は、活性排出の唯一の手段である。排出された活性は、尿サンプリング毎に増大する階段関数を特徴とし、膀胱活性は顕著に低減された。腎臓における活性は、２０分で横ばいになり、モニタリング期間全体にわたって、投与された活性の３〜９％で一定状態を保った。モニタリング期間の大部分の間の腎臓における活性の一定レベルは、取込み及びクリアランス速度が類似しており、保持の徴候が見られなかったことを示す。
[実施例５]
【０１２４】
病巣内療法に関する有効線量及び等価線量
外部ビーム放射線療法に関する耐容線量［１３］は、線量を受取った５年以内に、５日にわたって分割された臓器全体に適用される線量に起因する合併症に関して５％蓋然性として定義される。さらに、上体への１０００ｃＧｙ光子の単一線量は十分耐性である［１４］。Ｂｉ−２１３の半減期は４６分であり、５日分割データは直接的には適用可能ではないため、これらの分割値は、単に指標となる尺度として使用され得る。
【０１２５】
Cassady［１５］は、１５００ｃＧｙで症候性放射線ネフロパシーに関する閾値、２０００ｃＧｙで５％発生、及び３８００ｃＧｙで９５％発生を示す利用可能なデータから線量応答曲線を作成した。腎臓の耐性（ＴＤ  ５／５）は、Rubin他［１６］により、両方の腎臓の外部ビームの分割光子照射に関して２０００ｃＧｙであると測定されている［１６］。線形二次式を使用して、等価単回線量は、８００ｃＧｙであると算出される。腎臓の算出された単回耐容線量は、膀胱、肝臓及び赤色骨髄とともに表１に与えられる。
【０１２６】
【表１】
2009501731.tif 000002
【０１２７】
合併症は、各臓器に関する決定論的な又は臨床的に関連する評価項目に関して定義され、それに関してアルファに関してＲＢＥ＝５［６］が上限であると仮定される。放射線荷重計数（ＷＲ＝２０）が、突然変異誘発及び発癌を招く確率論的事象の蓋然性を確定するのに使用される［６］。有効線量又はＲＢＥ線量の単位は、ＲＢＥ．ｃＧｙであり。確率論的影響に関する等価線量に関しては、ｃＳＶである。
【０１２８】
この研究における最高臓器線量は、腎臓により受取られるものであり、ここで０．０１ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉの平均値が、アルファ放射に関してＲＢＥ＝５を使用して、組織損傷に適用された。この研究における最大注入活性は４５０μＣｉであり、腎臓に対しては４．５ＲＢＥ．ｃＧｙ、或いは７０ｋｇの被験体に関しては０．０６ＲＢＥ．ｃＧｙ／ｋｇのＲＢＥ線量に相当した。ＴＡＴに関するこの最大ＲＢＥ線量は、腎臓に対する推奨最大線量のほんの０．６％に過ぎない。
【０１２９】
骨髄に対する有効線量は、０．００１ＲＢＥ．ｃＧｙ／μＣｉであると推定され、４５０μＣｉに関しては、ほんの０．４５ＲＢＥ．ｃＧｙ、すなわち１０００ｃＧｙの推定単回組織耐容線量の０．０５％に過ぎなかった。
【０１３０】
Memorial Sloan Kettering Cancer Center［１７］は、１ｍＣｉ／ｋｇの注入ＡＩＣ又は７０ｍＣｉが、回復可能な骨髄除去により安全であると報告した。本発明者等の投与最大活性は、この値の０．６％であった。
【０１３１】
注入腫瘍に対して算出されるＲＢＥ線量が、種々の投与活性に関して表２に与えられる。これらの線量は、表１に与えられる臓器に関する線量よりもおよそ３０００倍大きい。
【０１３２】
【表２】
2009501731.tif 000003
[実施例６]
【０１３３】
有効なターゲッティング及び黒色腫細胞死滅の徴候
臨床応答の予備的な徴候が、皮膚黒色腫の変化の直接的な観察により得られた（図３）。概して、腫瘍は、白血球浸潤の結果としてより大きく且つより軟質になった。処理した腫瘍を４週後に切除した。切除した腫瘍の容積は、２２〜１０１６ｍｍ３の範囲であった。
【０１３４】
ＡＩＣの相対毒性効果は、線量レベル２５０μＣｉで３名の患者それぞれにおいて３つの病巣を使用して試験した。各患者の皮膚上の類似した大きさの３つの黒色腫が確認され、１つの腫瘍を未処理の状態のままにして（図４Ａ）、第２の腫瘍には抗体のみを注入して（図４Ｂ）、第３の腫瘍にはＡＩＣを注入した（図４Ｃ）。非放射性抗体を注入した腫瘍における黒色腫細胞は全て、未処理腫瘍と類似した染色を伴って残存し、抗体単独が黒色腫細胞に対して毒性がなく、また抗体単独が局所ＨＡＭＡ応答を誘導することを示した。しかしながら、ＡＩＣ処理した黒色腫細胞は全て、図４Ｃに示されるように、それらの構造を失い、腫瘍細片に置き換えられた。したがって、ＡＩＣは、注入病巣において黒色腫細胞を標的として、それらを死滅させた。
【０１３５】
場合によっては、全ての黒色腫細胞が死滅されたとは限らず、わずかな残存細胞は、血管に対して近接している場合には、再発の島を生成する可能性がある。例を図４Ｄに示しており、ここでは生存可能な黒色腫細胞の島（Ｈ＆Ｅ染色）が幾つかの毛細血管周辺で成長している。
【０１３６】
ＴＵＮＥＬアッセイにより、細胞が、プログラム細胞死のプロセスであるアポトーシスにより死んだことが示された。褐色染色により、高い細胞死指標が確認された（図５Ａ）。細胞増殖ｋｉ６７に関する結果により、構造を損失している多数の細胞が示され、増殖の低減をもたらしたことが示された（図５Ｂ）。したがって、免疫染色、アポトーシス及びｋｉ６７増殖マーカーは全て、ＡＩＣが黒色腫細胞を標的とし、且つ破壊したという一貫した徴候を提供する。
【０１３７】
黒色腫患者のＭＩＡレベルを、健常な被験体と比較した。黒色腫患者におけるＭＩＡは遥かに高かった（１５〜４９ｎｇ／ｍＬ）のに対して、健常な被験体では、最大ＭＩＡは３．５ｎｇ／ｍＬ（Ｐ＝０．０００１）であった。
【０１３８】
処理後の６名の黒色腫（病期ＩＩＩ／ＩＶ）患者のＭＩＡ測定を、基線、ＴＡＴ後の２週及び４週で比較した（図６）。ＭＩＡレベルは、４名の患者では２週目に減少した後、４週目に増大し、また他の２目の患者では、ＭＩＡは４週目に減少した（Ｐ＝０．０１）。
[実施例７]
【０１３９】
臨床的適応
臨床応答は、細胞表面発現、アポトーシス、Ｋｉ６７、黒色腫阻害活性（ＭＩＡ）タンパク質値及びヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答を含む多数の独立した方法により観察された。
【０１４０】
標的抗原の細胞表面発現は、ＡＰＡＡＰ染色によりモニタリングして、ｍＡｂ９．２．２７に結合する抗原複合体の存在を検出した。細胞の膜表面上に存在する抗原を伴う生存細胞は、鮮やかなピンク色だったのに対して、標的とされる細胞は染色しなかった。３名の患者における３つの腫瘍由来の切片を染色した結果により、非放射性ＭＡｂは完全に効果がない一方で、ＡＩＣは非常に高い細胞毒性であることが示された。
【０１４１】
アポトーシスは、特異的な形態学的変化を特徴とするプログラム細胞死のプロセスであり、これらには、細胞収縮、アポトーシス小体への細胞断片化が包含される。ＴＵＮＥＬアッセイにより、図５Ａにおける非放射性腫瘍セクションと比較して、図５Ｂに示されるようにＤＮＡの遊離末端が褐色に染色されたため、高い細胞死指標が確認された。
【０１４２】
Ｋｉ６７増殖マーカーにより、図５Ｃに示されるように、黒色腫細胞はＡＩＣにより標的とされて、増殖の低減を引き起こしたことが示された。
【０１４３】
３名の健常な被験体に関する黒色腫阻害活性（ＭＩＡ）タンパク質の値（３．５±０．２ｎｇ／ｍＬ）は、推奨されるカットオフ値よりも遥かに低かった。増強されたＭＩＡ値は、手術及び化学療法後のＭＩＡ血清レベルの大幅な低下を伴って、病期ＩＶにおける転移悪性黒色腫を伴う患者から得られる血清の９７％で観察されている［１８］。本発明者等の結果により、２００μＣｉでの病巣内注入後の４週にＴＡＴ後のＭＩＡにおける大幅な低下（Ｐ＝０．０１）が確認され（図６）、ＴＡＴが、腫瘍負荷を低減させた可能性があることを示唆した。ＭＩＡ値のわずかな低下でさえ、黒色腫が進行性疾患であるため、かかる低い線量で有望であり、ＭＩＡ値は、４週かけて増大すると予想されたのに対して、本発明者等は、いくらかのＭＩＡ値がＴＡＴ後に低減することを観察した。
【０１４４】
全体として、免疫染色、アポトーシス、ｋｉ６７増殖マーカー及び血清マーカーＭＩＡにより示される臨床応答のかなりの徴候が存在する。
【０１４５】
ＨＡＭＡは、マウスモノクローナル抗体への暴露により誘導される免役応答の一部においてヒト患者により生産され得る。試験した患者は全て、ＨＡＭＡ応答に関して陰性であり、ＨＡＭＡ値は、正常な上限１８０ｎｇ／ｍＬ以下であった。
[実施例８]
【０１４６】
確立された黒色腫の全身後退
黒色腫の大きさ及び数の低減は、図７に示されるように、Ｂｉ−２１３−９．２．２７の１．６ｍＣｉの単一全身（静脈内）投与後に黒色腫患者の脚において標的抗血管アルファ療法（ＴＡＶＡＴ）を用いて観察された。大きな腫瘍の本来の大きさは、黒い輪で示される。２１個のうち２０個の腫瘍が消滅して、１つの残存腫瘍は、２０ｍｍから５ｍｍにまで低減した。腫瘍床の病態は、生存可能な黒色腫細胞を示さなかった。これは、完全に予期せぬ結果であり、この線量は、予想された最大耐容線量のほんのわずかの割合であり、またSloan Kettering Memorial Cancer Centerによる末期段階の急性骨髄性白血病に使用される線量のほんのわずかの割合である。この結果は、全ての黒色腫細胞がＴＡＴ療法中にＴＡＴにより死滅されるとは限らず、むしろ新生毛細血管は、腫瘍に栄養分を与えないようにＴＡＶＡＴにより封鎖され、それにより完全な後退を引き起こすという提案の基盤を提供する。
[実施例９]
【０１４７】
病巣内ＴＡＴの臨床応用
実施例９．１：脳への黒色腫転移
放射線療法は、脳への黒色腫転移用の一次治療である。線量３０００ｃＧｙを２週間かけて付与して、頭蓋照射は、脳転移を伴う患者の大多数へ有用な一時的な緩和を提供する。患者によっては加速分割により脳への転移性黒色腫の改善された後退の徴候が見られる。化学療法は、脳転移を治療するのに限られた役割を有する。多くの化学療法薬は、血液脳関門を渡らずに、血液脳関門における局所的な崩壊を通じて脳における悪性腫瘍に到達することができる。腫瘍切除後のＡＩＣの病巣内注入は、このＡＩＣによるＴＡＴの実現可能且つ効果的な適用と意図される。
【０１４８】
実施例９．２：多形神経膠芽腫
また、ＭＣＳＰのマウス相同体であるＮＧ２は、多形神経膠芽腫により発現される。患者は、診断後６ヶ月から１年しか生存しないという点で、予後は非常に乏しい。通常、神経膠芽腫は、焦点地域を含む腫瘤病変と見なされる。腫瘍切除後のＡＩＣの病巣内注入は、このＡＩＣによるＴＡＴの実現可能且つ効果的な適用と意図される。
【０１４９】
実施例９．３：眼黒色腫
眼黒色腫を伴う患者に関する５年全生存率は、５０％〜７０％であると推定され、約４０％〜６０％の患者が転移を発症する［１９］。予後に影響を与える原発性眼黒色腫に関連する因子としては、病変部位、細胞型及び位置が挙げられる［１９］。眼黒色腫へのＡＩＣの病巣内投与は、新規アプローチとして意図され、これは、摘出の必要性を不要にする可能性があり、全身ＴＡＴがその後に続く場合には、疾患の経過を変化させ得る。
【図面の簡単な説明】
【０１５０】
【図１】ＡＩＣの病巣内注入後の黒色腫患者における腫瘍からの活性の生物学的クリアランスを示す説明図であり、５０％を超えるＡＩＣが、半減期４６分以内で除去される。
【図２】ＡＩＣの病巣内注入後の必要不可欠な臓器における投与活性の取込みを示す説明図であり、８０％を超える活性が、モニタリング期間の最後までに排除された。
【図３】ＡＩＣの病巣内注入による黒色腫患者におけるＴＡＴ後の臨床応答を示す説明図である。
【図４】下記のような腫瘍セクションの組織構造を示す説明図であり、Ａ．従来の組織構造を示す未処理腫瘍、Ｂ．腫瘍に対して効果を示さない抗体のみで処理した腫瘍、Ｃ．ＡＩＣの病巣内注入を使用したＴＡＴで処理し、且つ壊死組織片を示す腫瘍、Ｄ．ＡＩＣの病巣内注入を使用したＴＡＴで処理し、且つ血管付近の幾つかの生存細胞を示す島を伴うセクションの大部分全体にわたって壊死組織片を示す腫瘍をそれぞれ示す。
【図５】下記のようなセクションを示す説明図であり、Ａ．褐色染色のない非照射細胞の対照セクション、Ｂ．ＡＩＣの病巣内注入を使用したＴＡＴで処理し、且つアポトーシス細胞死を確認する（ＴＵＮＥＬアッセイ）褐色染色を示すセクション、Ｃ．ＡＩＣの病巣内注入を使用したＴＡＴで処理した腫瘍の一部において活性の損失を示す細胞増殖マーカーｋｉ６７をそれぞれ示す。
【図６】基線、ＡＩＣの病巣内注入を使用したＴＡＴの２週後及び４週後での黒色腫患者における血清マーカー黒色腫阻害活性タンパク質レベル（ｎｇ／ｍｌ）を示す説明図である。
【図７】Ｂｉ−２１３−９．２．２７を使用した全身（静脈内）アルファ治療（標的抗血管アルファ療法（ＴＡＶＡＴ））後の黒色腫患者の脚における黒色腫の大きさ（大きな腫瘍の本来の大きさは、黒い輪で示される）及び数の低減を示す説明図であり、２１個のうち２０個の腫瘍が消滅して、１つの腫瘍は、２０ｍｍから５ｍｍにまで低減した。腫瘍床の病態は、生存可能な黒色腫細胞を示さない。
【図１】
2009501731.tif 000004
【図２】
2009501731.tif 000005
【図３】
2009501731.tif 000006
【図４】
2009501731.tif 000007
【図５】
2009501731.tif 000008
【図６】
2009501731.tif 000009
【図７】
2009501731.tif 000010
【手続補正書】
【提出日】平成19年5月18日(2007.5.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
血管新生化腫瘍の治療方法であって、抗体へ結合された治療上有効量のアルファ放出性放射性同位体を被験体へ全身投与することを含み、該抗体へ結合された該アルファ放出性放射性同位体が、前記血管新生化腫瘍に関連する周皮細胞に結合する、血管新生化腫瘍の治療方法。
【請求項２】
血管新生化腫瘍に関連する血管新生の治療方法であって、抗体へ結合された治療上有効量のアルファ放出性放射性同位体を被験体へ全身投与することを含み、該抗体へ結合された該アルファ放出性放射性同位体が、前記血管新生化腫瘍に関連する周皮細胞に結合する、血管新生化腫瘍に関連する血管新生の治療方法。
【請求項３】
血管新生化腫瘍に関連する血管系の形成を阻害する方法であって、抗体へ結合された治療上有効量のアルファ放出性放射性同位体を被験体へ全身投与することを含み、該抗体へ結合された該アルファ放出性放射性同位体が、前記血管新生化腫瘍に関連する周皮細胞に結合する、血管新生化腫瘍に関連する血管系の形成を阻害する方法。
【請求項４】
血管新生化腫瘍に関連する周皮細胞を死滅させる方法であって、抗体へ結合された治療上有効量のアルファ放出性放射性同位体を被験体へ全身投与することを含み、該抗体へ結合された該アルファ放出性放射性同位体が、前記血管新生化腫瘍に関連する周皮細胞に結合する、血管新生化腫瘍に関連する周皮細胞を死滅させる方法。
【請求項５】
血管新生化腫瘍に関連する毛細血管中の内皮細胞を死滅させる方法であって、抗体へ結合された治療上有効量のアルファ放出性放射性同位体を被験体へ全身投与することを含み、該抗体へ結合された該アルファ放出性放射性同位体が、前記血管新生化腫瘍に関連する周皮細胞に結合する、血管新生化腫瘍に関連する毛細血管中の内皮細胞を死滅させる方法。
【請求項６】
前記血管新生化腫瘍が、肝臓腫瘍、卵巣腫瘍、結腸直腸腫瘍、肺腫瘍、胸部腫瘍、前立腺腫瘍、膵臓腫瘍、腎臓腫瘍、胃腫瘍、子宮頸部腫瘍、子宮内膜腫瘍、食道腫瘍、脳腫瘍、頭部腫瘍又は頸部腫瘍、腹膜癌症、肉腫及び黒色腫から成る群から選択される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記抗体が、前記血管新生化腫瘍に関連する前記内皮細胞の表面上に発現される抗原に結合する、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記抗体が、抗ＭＣＳＰ抗体である、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記アルファ放出性放射性同位体が、Ｔｂ−１４９、Ａｔ−２１１、Ｂｉ−２１３、Ａｃ−２２５、Ｒｎ−２１１、Ｒａ−２２４、Ｒａ−２２５、Ｅｓ−２５５及びＦｍ−２５６から成る群から選択される、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
血管新生化腫瘍の治療用の薬剤の製造におけるアルファ放出性放射性同位体及び抗体の使用であって、該抗体へ結合された該アルファ放出性放射性同位体が、前記血管新生化腫瘍に関連する周皮細胞に結合し、前記薬剤は全身投与に適している、アルファ放出性放射性同位体及び抗体の使用。
【請求項１１】
血管新生化腫瘍の治療方法であって、抗体へ結合された治療上有効量のアルファ放出性放射性同位体を被験体へ全身投与することを含み、該抗体へ結合された該アルファ放出性放射性同位体が、実施例のいずれか１つを参照して上述の請求項の様に実質的に製造される、血管新生化腫瘍の治療方法。
【請求項１２】
血管新生化腫瘍の治療のためのキットであって、該キットが、抗体へ結合された治療上有効量のアルファ放出性放射性同位体を含み、該抗体へ結合された該アルファ放出性放射性同位体が、前記血管新生化腫瘍に関連する周皮細胞に結合する、血管新生化腫瘍の治療のためのキット。
【請求項１３】
血管新生化腫瘍に関連する血管新生の治療のためのキットであって、該キットが、抗体へ結合されたアルファ放出性放射性同位体を含み、該抗体へ結合された該アルファ放出性放射性同位体が、前記血管新生化腫瘍に関連する周皮細胞に結合する、血管新生化腫瘍に関連する血管新生の治療のためのキット。
【請求項１４】
血管新生化腫瘍に関連する血管系の形成を阻害するためのキットであって、該キットが、抗体へ結合されたアルファ放出性放射性同位体を含み、該抗体へ結合された該アルファ放出性放射性同位体が、前記血管新生化腫瘍に関連する周皮細胞に結合する、血管新生化腫瘍に関連する血管系の形成を阻害するためのキット。
【請求項１５】
血管新生化腫瘍に関連する周皮細胞を死滅させるためのキットであって、該キットが、抗体へ結合されたアルファ放出性放射性同位体を含み、該抗体へ結合された該アルファ放出性放射性同位体が、前記血管新生化腫瘍に関連する周皮細胞に結合する、血管新生化腫瘍に関連する周皮細胞を死滅させるためのキット。
【請求項１６】
血管新生化腫瘍に関連する内皮細胞を死滅させるためのキットであって、該キットが、抗体へ結合されたアルファ放出性放射性同位体を含み、該抗体へ結合された該アルファ放出性放射性同位体が、前記血管新生化腫瘍に関連する周皮細胞に結合する、血管新生化腫瘍に関連する内皮細胞を死滅させるためのキット。
【国際調査報告】
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