(57)【要約】  式(Ｉ)  【化１】2009508946.tif 000058（式中R1、Ａ、R2、R3、R4、R5、ｎ、ｍ及びｑは明細書に記載されたとおりである）の化合物、その薬学的に許容しうる塩、その製造方法、それを含有する医薬組成物及びそれを使用する方法。
2009508946.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2009508946.tif 000051
［式中、
R1は、Ｈ、C1-4アルキル−、C3-6シクロアルキル−及びC1-4アルキルOC(O)−より選択され;
Ａはフェニル又はC3-7シクロアルキル−であり;
R2は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−NH2、−CN、ハロゲン、C1-6アルキル−、C3-7シクロアルキル−、C1-6アルコキシ−及びC1-6アルコキシC1-6アルキル−より独立して選択され;
ｎは１、２又は３であり;
R3は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−NH2、−NO2、−CN、ハロゲン、C1-6アルキル−、C1-6アルコキシ−及びC1-6アルコキシC1-6アルキル−より独立して選択され；
ｍは１、２又は３であり;
R4はE−S(O)r−(CH2)p−であり、ここでＥはC1-6アルキル−、C3-6シクロアルキル−、アリール−及びヘテロアリール−より選択され、ｐは０、１、２、３、４、５及び６より選択され、そしてｒは０、１及び２より選択され；
R5は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−CN、ハロゲン、−R6、−OR6、−NR6R7、−SR6、−SOR6及び−SO2R6より独立して選択され;
ｑは１、２又は３であり；
ここで、
R6及びR7は各出現ごとに、Ｈ、直鎖若しくは分枝のC1-6アルキル基、直鎖若しくは分枝のC2-6アルケニル基又はC2-6アルキニル基及び０、１若しくは２個の二重結合又は三重結合を有するC3-7炭素環式基より独立して選択され、ここで該基は、非置換であるか又は−OH、＝O、−NH2、−CN、ハロゲン、アリール及びC1-3アルコキシ−より選択される１つ若しくはそれ以上の部分で置換され;
そして、
R1、R2又はR3がアルキル、シクロアルキル、アルコキシ又はアルコキシアルキル部分である場合、該部分は非置換であるか又は各出現ごとに−OH、−NH2、−CN、フェニル及びハロゲンより独立して選択される１、２、３、４若しくは５個の置換基を有する］
の化合物又はその立体異性体、鏡像異性体、インビボで加水分解可能な前駆体若しくは薬学的に許容しうる塩。
【請求項２】
Ａがフェニルであり;
R1がC1-4アルキル−、C3-6シクロアルキル−及びC1-4アルキルOC(O)−より選択され；
R2がＨ、ハロゲン及び非置換C1-6アルコキシ−より選択され;
R3がＨ又はハロゲンであり;
ｎ及びｍが両方とも１であり、かつ
R1がアルキル、シクロアルキル、アルコキシ又はアルコキシアルキル部分である場合、該部分は非置換であるか各出現ごとに−OH、−NH2、−CN及びハロゲンより独立して選択される１、２、３、４若しくは５個の置換基を有する、
請求項１に記載の化合物又はその立体異性体、鏡像異性体、インビボで加水分解可能な前駆体若しくは薬学的に許容しうる塩。
【請求項３】
Ａがフェニルであり;
R1がC1-4アルキル−及びC3-6シクロアルキル−より選択され；
R2がＨ、ハロゲン及び非置換C1-6アルコキシ−より選択され;
R3がＨ又はハロゲンであり;
ｎ及びｍが両方とも１であり;
R4がE−S(O)r−(CH2)p−であり、ここでＥはC1-6アルキル−、C3-6シクロアルキル−、アリール−及びヘテロアリール−より選択され、ｐが０、１、２及び３より選択され、そしてｒが０、１及び２より選択され；
R5がＨである、
請求項１に記載の化合物又はその立体異性体、鏡像異性体、インビボで加水分解可能な前駆体若しくは薬学的に許容しうる塩。
【請求項４】
Ａがフェニルであり;
R1がエチル又はシクロプロピルであり；
R2がＨ、Ｆ及び−OCH3より選択され;
R3がＨ又はＦであり;
ｎ、ｍ及びｑがそれぞれ１であり;
R4が−(CH2)p−S(O)r−C1-6アルキルより選択され、ここでｐが０、１、２及び３より選択され、そしてｒが０、１及び２より選択され；
R5が各出現ごとに、Ｈ、−OH及びハロゲンより独立して選択される、
請求項１に記載の化合物又はその立体異性体、鏡像異性体、インビボで加水分解可能な前駆体若しくは薬学的に許容しうる塩。
【請求項５】
3−(メチルチオ)−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(メチルスルフィニル)−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(メチルスルホニル)−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド ;
3−(エチルチオ)−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(エチルスルフィニル)−2−フェニル−N−[(S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(エチルスルホニル)−2−フェニル−N−[(S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(ブロモメチル)−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド;
3−[(メチルチオ)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド;
3−[(メチルスルフィニル)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド;
3−[(メチルスルホニル)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド;
3−[2−(メチルスルフィニル)エチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド;
3−[2−(メチルスルホニル)エチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド;
3−[(イソプロピルチオ)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド;
2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]−3−[(ピリジン−4−イルチオ)メチル]キノリン−4−カルボキシアミド;
3−[(イソプロピルスルフィニル)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド;
2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]−3−[(ピリジン−4−イルスルフィニル)メチル]キノリン−4−カルボキシアミド;
3−[(イソプロピルスルホニル)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(メチルチオ)−2−フェニル−N−(1−フェニルプロピル)キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(メチルスルフィニル)−2−フェニル−N−(1−フェニルプロピル)キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(メチルスルホニル)−2−フェニル−N−(1−フェニルプロピル)キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(メチルチオメチル)−2−フェニル−N−(1−フェニルプロピル)キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(メチルスルフィニルメチル)−2−フェニル−N−(1−フェニルプロピル)キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(メチルスルホニルメチル)−2−フェニル−N−(1−フェニルプロピル)キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(2−(メチルチオ)エチル)−2−フェニル−N−(1−フェニルプロピル)キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(2−(メチルスルフィニル)エチル)−2−フェニル−N−(1−フェニルプロピル)キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(2−(メチルスルホニル)エチル)−2−フェニル−N−(1−フェニルプロピル)キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(メチルチオ)−2−フェニル−N−(1−フェニルエチル)キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(メチルスルフィニル)−2−フェニル−N−(1−フェニルエチル)キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(メチルスルホニル)−2−フェニル−N−(1−フェニルエチル)キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(メチルチオメチル)−2−フェニル−N−(1−フェニルエチル)キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(メチルスルフィニルメチル)−2−フェニル−N−(1−フェニルエチル)キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(メチルスルホニルメチル)−2−フェニル−N−(1−フェニルエチル)キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(2−(メチルチオ)エチル)−2−フェニル−N−(1−フェニルエチル)キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(2−(メチルスルフィニル)エチル)−2−フェニル−N−(1−フェニルエチル)キノリン−4−カルボキシアミド;
3−(2−(メチルスルホニル)エチル)−2−フェニル−N−(1−フェニルエチル)キノリン−4−カルボキシアミド;
2−(3−(メチルチオ)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド)−2−フェニルエタン酸メチル；
2−(3−(メチルスルフィニル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド)−2−フェニルエタン酸メチル；
2−(3−(メチルスルホニル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド)−2−フェニルエタン酸メチル；
2−(3−(メチルチオメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド)−2−フェニルエタン酸メチル；
2−(3−(メチルスルフィニルメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド)−2−フェニルエタン酸メチル；
2−(3−(メチルスルホニルメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド)−2−フェニルエタン酸メチル；
2−(3−(2−(メチルチオ)エチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド)−2−フェニルエタン酸メチル；
2−(3−(2−(メチルスルフィニル)エチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド)−2−フェニルエタン酸メチル；
2−(3−(2−(メチルスルホニル)エチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド)−2−フェニルエタン酸メチル；
N−(シクロプロピル(フェニル)メチル)−3−(メチルチオ)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(シクロプロピル(フェニル)メチル)−3−(メチルスルフィニル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(シクロプロピル(フェニル)メチル)−3−(メチルスルホニル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(シクロプロピル(フェニル)メチル)−3−(メチルチオメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(シクロプロピル(フェニル)メチル)−3−(メチルスルフィニルメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(シクロプロピル(フェニル)メチル)−3−(メチルスルホニルメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(シクロプロピル(フェニル)メチル)−3−(2−(メチルチオ)エチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(シクロプロピル(フェニル)メチル)−3−(2−(メチルスルフィニル)エチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(シクロプロピル(フェニル)メチル)−3−(2−(メチルスルホニル)エチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(1−シクロヘキシルエチル)−3−(メチルチオ)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(1−シクロヘキシルエチル)−3−(メチルスルフィニル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(1−シクロヘキシルエチル)−3−(メチルスルホニル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(1−シクロヘキシルエチル)−3−(メチルチオメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(1−シクロヘキシルエチル)−3−(メチルスルフィニルメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(1−シクロヘキシルエチル)−3−(メチルスルホニルメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(1−シクロヘキシルエチル)−3−(2−(メチルチオ)エチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(1−シクロヘキシルエチル)−3−(2−(メチルスルフィニル)エチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(1−シクロヘキシルエチル)−3−(2−(メチルスルホニル)エチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(1−(3−フルオロフェニル)プロピル)−3−(メチルチオ)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(1−(3−フルオロフェニル)プロピル)−3−(メチルスルフィニル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(1−(3−フルオロフェニル)プロピル)−3−(メチルスルホニル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(1−(3−フルオロフェニル)プロピル)−3−(メチルチオメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(1−(3−フルオロフェニル)プロピル)−3−(メチルスルフィニルメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(1−(3−フルオロフェニル)プロピル)−3−(メチルスルホニルメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(1−(3−フルオロフェニル)プロピル)−3−(2−(メチルチオ)エチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(1−(3−フルオロフェニル)プロピル)−3−(2−(メチルスルフィニル)エチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(1−(3−フルオロフェニル)プロピル)−3−(2−(メチルスルホニル)エチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(シクロプロピル(3−フルオロフェニル)メチル)−3−(メチルチオ)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(シクロプロピル(3−フルオロフェニル)メチル)−3−(メチルスルフィニル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(シクロプロピル(3−フルオロフェニル)メチル)−3−(メチルスルホニル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(シクロプロピル(3−フルオロフェニル)メチル)−3−(メチルチオメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(シクロプロピル(3−フルオロフェニル)メチル)−3−(メチルスルフィニルメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(シクロプロピル(3−フルオロフェニル)メチル)−3−(メチルスルホニルメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(シクロプロピル(3−フルオロフェニル)メチル)−3−(2−(メチルチオ)エチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(シクロプロピル(3−フルオロフェニル)メチル)−3−(2−(メチルスルフィニル)エチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(シクロプロピル(3−フルオロフェニル)メチル)−3−(2−(メチルスルホニル)エチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(2−シアノ−1−フェニルエチル)−3−(メチルチオ)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(2−シアノ−1−フェニルエチル)−3−(メチルスルフィニル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(2−シアノ−1−フェニルエチル)−3−(メチルスルホニル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(2−シアノ−1−フェニルエチル)−3−(メチルチオメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(2−シアノ−1−フェニルエチル)−3−(メチルスルフィニルメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−((S)−2−シアノ−1−フェニルエチル)−3−(メチルスルフィニルメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(2−シアノ−1−フェニルエチル)−3−(メチルスルホニルメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−((S)−2−シアノ−1−フェニルエチル)−3−(メチルスルホニルメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(2−シアノ−1−フェニルエチル)−3−(2−(メチルチオ)エチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−((S)−2−シアノ−1−フェニルエチル)−3−(2−(メチルスルフィニル)エチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−(2−シアノ−1−フェニルエチル)−3−(2−(メチルスルフィニル)エチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
N−((S)−2−シアノ−1−フェニルエチル)−3−(2−(メチルスルホニル)エチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド、及び
N−(2−シアノ−1−フェニルエチル)−3−(2−(メチルスルホニル)エチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド;
より選択される請求項１に記載の化合物又はその立体異性体、鏡像異性体、インビボで加水分解可能な前駆体若しくは薬学的に許容しうる塩。
【請求項６】
式II：
【化２】
2009508946.tif 000052
（式中、R1、Ａ、R2、ｎ、R3、ｍ、R4、R5及びｑは式Ｉにおいて規定された通りである）の請求項１に記載の化合物又はその立体異性体、インビボで加水分解可能な前駆体若しくは薬学的に許容しうる塩。
【請求項７】
式Ｉ：
【化３】
2009508946.tif 000053
［式中、
R1はＨ、C1-4アルキル−、C3-6シクロアルキル−及びC1-4アルキルOC(O)−より選択され；
Ａはフェニル又はC3-7シクロアルキル−であり;
R2は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−NH2、−CN、ハロゲン、C1-6アルキル−、C3-7シクロアルキル−、C1-6アルコキシ−及びC1-6アルコキシC1-6アルキル−より独立して選択され；
ｎは１、２又は３であり;
R3は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−NH2、−NO2、−CN、ハロゲン、C1-6アルキル−、C1-6アルコキシ−及びC1-6アルコキシC1-6アルキル−より独立して選択され；
ｍは１、２又は３であり;
R4はE−S(O)r−(CH2)p−であり、ここでＥはC1-6アルキル−、C3-6シクロアルキル−、アリール−及びヘテロアリール−より選択され、ｐは０、１、２、３、４、５及び６より選択され、そしてｒは０、１及び２より選択され；
R5は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−CN、ハロゲン、−R6、−OR6、−NR6R7、−SR6、−SOR6及び−SO2R6より独立して選択され;
ｑは１、２又は３であり；
ここで、
R6及びR7は各出現ごとに、Ｈ、直鎖若しくは分枝のC1-6アルキル基、直鎖若しくは分枝のC2-6アルケニル基又はC2-6アルキニル基及び０、１若しくは２個の二重結合又は三重結合を有するC3-7炭素環式基より独立して選択され、ここで該基は、非置換であるか又は−OH、＝O、−NH2、−CN、ハロゲン、アリール及びC1-3アルコキシ−より選択される１つ若しくはそれ以上の部分で置換され;
そして、
R1、R2又はR3がアルキル、シクロアルキル、アルコキシ又はアルコキシアルキル部分である場合、該部分は非置換であるか又は各出現ごとに−OH、−NH2、−CN、フェニル及びハロゲンより独立して選択される１、２、３、４若しくは５個の置換基を有する］
の化合物を製造するための方法であって、
3−メチル−2−フェニル−キノリン−4−カルボン酸(アルキル)−アミドを、N−ブロモコハク酸イミド(NBS)とラジカル開始剤の存在下で反応させて、3−ブロモメチル−2−フェニル−キノリン−4−カルボン酸(アルキル)−アミドを得ること;
該ハロゲン化アルキルをチオールと反応させて対応するチオエーテルを得ること;
該チオエーテルを酸化剤で酸化して対応する3−メタンスルフィニルメチル−2−フェニル−キノリン−4−カルボン酸(アルキル)−アミド又は対応する3−メタンスルホニルメチル−2−フェニル−キノリン−4−カルボン酸(アルキル)−アミドを得ること；
を含むか、又は
エチル又は他のアルキル−連結鎖をキノリンと硫黄原子との間に有する化合物については、
3−ブロモメチル−2−フェニル−キノリン−4−カルボン酸(アルキル)−アミドをチオールの代わりに求核試薬と反応させて、対応する3−(2−メチルスルファニル−エチル)−2−フェニル−キノリン−4−カルボン酸(アルキル)−アミドを得ること;
該3−(2−メチルスルファニル−エチル)−2−フェニル−キノリン−4−カルボン酸(アルキル)−アミドを酸化して対応するスルホキシド又はスルホンを得ること；
を含むか、又は
キノリンに直接結合した硫黄を有する化合物については、 
3−アルキルスルファニル−2−フェニル−キノリン−4−カルボン酸を適切なアミンとカップリング剤の存在下で反応させて3−アルキルスルファニル−2−フェニル−キノリン−4−カルボン酸(アルキル)−アミドを得ること、及び
該3−アルキルスルファニル−2−フェニル−キノリン−4−カルボン酸(アルキル)−アミドを酸化して対応するスルホキシド、又は対応するスルホンを得ることを含む、上記方法。
【請求項８】
NK−3受容体の調節が有益である疾患又は状態の処置又は予防の方法であって、該疾患又は状態に罹患した被験体に、治療有効量の式Ｉ:
【化４】
2009508946.tif 000054
［式中、
R1はＨ、C1-4アルキル−、C3-6シクロアルキル−及びC1-4アルキルOC(O)−より選択され；
Ａはフェニル又はC3-7シクロアルキル−であり;
R2は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−NH2、−CN、ハロゲン、C1-6アルキル−、C3-7シクロアルキル−、C1-6アルコキシ−及びC1-6アルコキシC1-6アルキル−より独立して選択され；
ｎは１、２又は３であり;
R3は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−NH2、−NO2、−CN、ハロゲン、C1-6アルキル−、C1-6アルコキシ−及びC1-6アルコキシC1-6アルキル−より独立して選択され；
ｍは１、２又は３であり;
R4はE−S(O)r−(CH2)p−であり、ここでＥはC1-6アルキル−、C3-6シクロアルキル−、アリール−及びヘテロアリール−より選択され、ｐは０、１、２、３、４、５及び６より選択され、そしてｒは０、１及び２より選択され；
R5は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−CN、ハロゲン、−R6、−OR6、−NR6R7、−SR6、−SOR6及び−SO2R6より独立して選択され;
ｑは１、２又は３であり；
ここで、
R6及びR7は各出現ごとに、Ｈ、直鎖若しくは分枝のC1-6アルキル基、直鎖若しくは分枝のC2-6アルケニル基又はC2-6アルキニル基及び０、１若しくは２個の二重結合又は三重結合を有するC3-7炭素環式基より独立して選択され、ここで該基は非置換であるか又は−OH、＝O、−NH2、−CN、ハロゲン、アリール及びC1-3アルコキシ−より選択される１つ若しくはそれ以上の部分で置換され;
そして、
R1、R2又はR3がアルキル、シクロアルキル、アルコキシ又はアルコキシアルキル部分である場合、該部分は非置換であるか又は各出現ごとに−OH、−NH2、−CN、フェニル及びハロゲンより独立して選択される１、２、３、４若しくは５個の置換基を有する］
の化合物、又はその立体異性体、鏡像異性体、インビボで加水分解可能な前駆体若しくは薬学的に許容しうる塩を投与することを含む、上記方法。
【請求項９】
疾患又は状態が、抑うつ、不安、統合失調症、認知障害、精神病、肥満、炎症性疾患、過敏性腸症候群、炎症性腸障害、嘔吐、子かん前症、慢性閉塞性肺疾患、過剰のゴナドトロピン及び／又はアンドロゲンに関連する障害（月経困難症、良性前立腺肥大、前立腺癌、及び精巣癌を含む）より選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
薬学的に許容しうる希釈剤、滑沢剤又は担体、及び式Ｉ:
【化５】
2009508946.tif 000055
［式中、
R1はＨ、C1-4アルキル−、C3-6シクロアルキル−及びC1-4アルキルOC(O)−より選択され；
Ａはフェニル又はC3-7シクロアルキル−であり;
R2は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−NH2、−CN、ハロゲン、C1-6アルキル−、C3-7シクロアルキル−、C1-6アルコキシ−及びC1-6アルコキシC1-6アルキル−より独立して選択され；
ｎは１、２又は３であり;
R3は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−NH2、−NO2、−CN、ハロゲン、C1-6アルキル−、C1-6アルコキシ−及びC1-6アルコキシC1-6アルキル−より独立して選択され；
ｍは１、２又は３であり;
R4はE−S(O)r−(CH2)p−であり、ここでＥはC1-6アルキル−、C3-6シクロアルキル−、アリール−及びヘテロアリール−より選択され、ｐは０、１、２、３、４、５及び６より選択され、そしてｒは０、１及び２より選択され；
R5は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−CN、ハロゲン、−R6、−OR6、−NR6R7、−SR6、−SOR6及び−SO2R6より独立して選択され;
ｑは１、２又は３であり；
ここで、
R6及びR7は各出現ごとに、Ｈ、直鎖若しくは分枝のC1-6アルキル基、直鎖若しくは分枝のC2-6アルケニル基又はC2-6アルキニル基及び０、１若しくは２個の二重結合又は三重結合を有するC3-7炭素環式基より独立して選択され、ここで該基は非置換であるか又は−OH、＝O、−NH2、−CN、ハロゲン、アリール及びC1-3アルコキシ−より選択される１つ若しくはそれ以上の部分で置換され;
そして、
R1、R2又はR3がアルキル、シクロアルキル、アルコキシ又はアルコキシアルキル部分である場合、該部分は非置換であるか又は各出現ごとに−OH、−NH2、−CN、フェニル及びハロゲンより独立して選択される１、２、３、４若しくは５個の置換機を有する］
の化合物又はその立体異性体、鏡像異性体、インビボで加水分解可能な前駆体若しくは薬学的に許容しうる塩を含む医薬組成物。
【請求項１１】
治療有効量の請求項１０に記載の医薬組成物を、NK−3受容体の調節が有益である疾患又は状態に罹患した被験体に投与することを含む該疾患又は状態の処置又は予防方法。
【請求項１２】
疾患又は状態が、抑うつ、不安、統合失調症、認知障害、精神病、肥満、炎症性疾患、過敏性腸症候群、炎症性腸障害、嘔吐、子かん前症、慢性閉塞性肺疾患、過剰のゴナドトロピン及び／又はアンドロゲンに関連する障害（月経困難症、良性前立腺肥大、前立腺癌、及び精巣癌を含む）より選択される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
NK−3受容体の調節が有益である疾患又は状態の処置又は予防のための式Ｉ:
【化６】
2009508946.tif 000056
［式中、
R1はＨ、C1-4アルキル−、C3-6シクロアルキル−及びC1-4アルキルOC(O)−より選択され；
Ａはフェニル又はC3-7シクロアルキル−であり;
R2は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−NH2、−CN、ハロゲン、C1-6アルキル−、C3-7シクロアルキル−、C1-6アルコキシ−及びC1-6アルコキシC1-6アルキル−より独立して選択され；
ｎは１、２又は３であり;
R3は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−NH2、−NO2、−CN、ハロゲン、C1-6アルキル−、C1-6アルコキシ−及びC1-6アルコキシC1-6アルキル−より独立して選択され；
ｍは１、２又は３であり;
R4はE−S(O)r−(CH2)p−であり、ここでＥはC1-6アルキル−、C3-6シクロアルキル−、アリール−及びヘテロアリール−より選択され、ｐは０、１、２、３、４、５及び６より選択され、そしてｒは０、１及び２より選択され；
R5は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−CN、ハロゲン、−R6、−OR6、−NR6R7、−SR6、−SOR6及び−SO2R6より独立して選択され;
ｑは１、２又は３であり；
ここで、
R6及びR7は各出現ごとに、Ｈ、直鎖若しくは分枝のC1-6アルキル基、直鎖若しくは分枝のC2-6アルケニル基又はC2-6アルキニル基及び０、１若しくは２個の二重結合若しくは三重結合を有するC3-7炭素環式基より独立して選択され、ここで該基は、非置換であるか又は−OH、＝O、−NH2、−CN、ハロゲン、アリール及びC1-3アルコキシ−より選択される１つ若しくはそれ以上の部分で置換され;
そして、
R1、R2又はR3がアルキル、シクロアルキル、アルコキシ又はアルコキシアルキル部分である場合、該部分は非置換であるか又は各出現ごとに−OH、−NH2、−CN、フェニル及びハロゲンより独立して選択される１、２、３、４若しくは５個の置換基を有する］
の化合物又はその立体異性体、鏡像異性体、インビボで加水分解可能な前駆体若しくは薬学的に許容しうる塩の使用。
【請求項１４】
疾患又は状態が、抑うつ、不安、統合失調症、認知障害、精神病、肥満、炎症性疾患、過敏性腸症候群、炎症性腸障害、嘔吐、子かん前症、慢性閉塞性肺疾患、過剰のゴナドトロピン及び／又はアンドロゲンに関連する障害（月経困難症、良性前立腺肥大、前立腺癌、及び精巣癌を含む）より選択される、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
NK−3受容体の調節が有益である疾患又は状態の処置又は予防のための医薬の製造における、式Ｉ：
【化７】
2009508946.tif 000057
［式中、
R1はＨ、C1-4アルキル−、C3-6シクロアルキル−及びC1-4アルキルOC(O)−より選択され；
Ａはフェニル又はC3-7シクロアルキル−であり;
R2は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−NH2、−CN、ハロゲン、C1-6アルキル−、C3-7シクロアルキル−、C1-6アルコキシ−及びC1-6アルコキシC1-6アルキル−より独立して選択され；
ｎは１、２又は３であり;
R3は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−NH2、−NO2、−CN、ハロゲン、C1-6アルキル−、C1-6アルコキシ−及びC1-6アルコキシC1-6アルキル−より独立して選択され；
ｍは１、２又は３であり;
R4はE−S(O)r−(CH2)p−であり、ここでＥはC1-6アルキル−、C3-6シクロアルキル−、アリール−及びヘテロアリール−より選択され、ｐは０、１、２、３、４、５及び６より選択され、そしてｒは０、１及び２より選択され；
R5は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−CN、ハロゲン、−R6、−OR6、−NR6R7、−SR6、−SOR6及び−SO2R6より独立して選択され;
ｑは１、２又は３であり；
ここで、
R6及びR7は各出現ごとに、Ｈ、直鎖若しくは分枝のC1-6アルキル基、直鎖若しくは分枝のC2-6アルケニル基又はC2-6アルキニル基及び０、１若しくは２個の二重結合又は三重結合を有するC3-7炭素環式基より独立して選択され、ここで該基は非置換であるか又は−OH、＝O、−NH2、−CN、ハロゲン、アリール及びC1-3アルコキシ−より選択される１つ若しくはそれ以上の部分で置換され;
そして、
R1、R2又はR3がアルキル、シクロアルキル、アルコキシ又はアルコキシアルキル部分である場合、該部分は非置換であるか又は各出現ごとに−OH、−NH2、−CN、フェニル及びハロゲンより独立して選択される１、２、３、４若しくは５個の置換基を有する］
の化合物又はその立体異性体、鏡像異性体、インビボで加水分解可能な前駆体もしくは薬学的に許容しうる塩の使用。
【請求項１６】
疾患又は状態が、抑うつ、不安、統合失調症、認知障害、精神病、肥満、炎症性疾患、過敏性腸症候群、炎症性腸障害、嘔吐、子かん前症、慢性閉塞性肺疾患、過剰のゴナドトロピン及び／又はアンドロゲンに関連する障害（月経困難症、良性前立腺肥大、前立腺癌、及び精巣癌を含む）より選択される、請求項１５に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キノリン誘導体、それらを含む医薬組成物、並びに中枢神経系及び末梢の疾患又は障害の処置における上記化合物の使用に関する。本発明はまた、他のCNS薬の効果を増強するために、１つ又はそれ以上の他のCNS薬と組み合わせた上記化合物の使用に関する。本発明の化合物はまた、細胞表面受容体の局在化についてのプローブとしても有用である。
【背景技術】
【０００２】
タキキニン受容体は、構造的に関連したペプチドのファミリー（サブスタンスP(SP)、ニューロキニンＡ(NKA)及びニューロキニンＢ(NKB)を含み、集合的に「タキキニン」）の標的である。タキキニンは中枢神経系(CNS)、及び末梢組織で合成され、そこでそれらは種々の生物学的活性を生じる。３つのタキキニン受容体が知られており、これらはニューロキニン−1(NK−1)受容体、ニューロキニン−2(NK−2)受容体及びニューロキニン−3(NK−3)受容体と名付けられている。NK−1及びNK−2受容体は、多様な末梢組織で発現され、そしてNK−1受容体はまたCNSでも発現されるが、NK−3受容体は主にCNSで発現される。
【０００３】
ニューロキニン受容体は、種々のタキキニン刺激生物学的作用を媒介し、これら作用には：CNS及び末梢における興奮性神経シグナル（例えば疼痛シグナル）の伝達、平滑筋収縮能の調節、免疫応答及び炎症応答の調節、末梢血管の拡張による降圧作用の誘導、並びに内分泌腺及び外分泌腺の分泌の刺激が含まれる。
【０００４】
CNSにおいて、NK−3受容体の活性化は、ドーパミン、アセチルコリン及びセロトニンの放出を調節することが示されており、不安、抑うつ、統合失調症及び肥満を含む種々の障害の処置についてのNK−3リガンドの治療有用性が示唆される。霊長類の脳における研究は、これらの障害に関連する種々の領域におけるNK−3 mRNAの存在を示した。ラットにおける研究は、NK−3受容体が外側視床下部及び不確帯におけるMCH含有ニューロン上にあることを示し、再び肥満についてのNK−3リガンドの治療有用性が示唆された。
【０００５】
非ペプチドリガンドが、タキキニン受容体の各々について開発されているが、公知の非ペプチドNK−3受容体アンタゴニストは、多数の問題、例えば、多くの適切な疾患モデルにおいてこれらの化合物を評価する可能性を限定する種選択性に悩まされている。従って新しい非ペプチドNK−3受容体リガンドは、治療剤としての使用が望ましく、そしてNK−3受容体調節の生物学的重要性を調べるためのツールとしても望ましい。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
化合物、詳細にはNK−3受容体(NK−3r)に対して親和性を有するキノリン誘導体が開示される。これらの化合物は、抑うつ、不安、統合失調症、認知障害、精神病、肥満、炎症性疾患（過敏性腸症候群及び炎症性腸障害を含む）、嘔吐、子かん前症、慢性閉塞性肺疾患、過剰のゴナドトロピン及び／又はアンドロゲンに関連する障害（月経困難症、良性前立腺肥大、前立腺癌、及び精巣癌を含む）を含むがこれらに限定されない、NK−3受容体の活性の調節が有益である広範囲の疾患、障害及び状態の処置に可能性を有する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
開示されるNK−3受容体のリガンド、並びにその立体異性体、鏡像異性体、インビボで加水分解可能な前駆体及び薬学的に許容しうる塩は、式Ｉ、
【化１】
2009508946.tif 000003
［式中:
R1は、Ｈ、C1-4アルキル−、C3-6シクロアルキル−及びC1-4アルキルOC(O)−より選択され;
Ａはフェニル又はC3-7シクロアルキル−であり;
R2は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−NH2、−CN、ハロゲン、C1-6アルキル−、C3-7シクロアルキル−、C1-6アルコキシ−及びC1-6アルコキシC1-6アルキル−より独立して選択され;
ｎは１、２又は３であり;
R3は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−NH2、−NO2、−CN、ハロゲン、C1-6アルキル−、C1-6アルコキシ−及びC1-6アルコキシC1-6アルキル−より独立して選択され；
ｍは１、２又は３であり;
R4はE−S(O)r−(CH2)p−であり、ここでＥはC1-6アルキル−、C3-6シクロアルキル−、アリール−及びヘテロアリール−より選択され、ｐは０、１、２、３、４、５及び６より選択され、そしてｒは０、１及び２より選択され；
R5は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−CN、ハロゲン、−R6、−OR6、−NR6R7、−SR6、−SOR6及び−SO2R6より独立して選択され;
ｑは１、２又は３であり；
ここで:
R6及びR7は各出現ごとに、Ｈ、直鎖若しくは分枝のC1-6アルキル基、直鎖若しくは分枝のC2-6アルケニル基又はC2-6アルキニル基及び０、１若しくは２個の二重結合又は三重結合を有するC3-7炭素環式基より独立して選択され、ここで該基は、非置換であるか又は−OH、＝O、−NH2、−CN、ハロゲン、アリール及びC1-3アルコキシ−より選択される１つ若しくはそれ以上の部分で置換され;
そして
R1、R2又はR3がアルキル、シクロアルキル、アルコキシ又はアルコキシアルキル部分である場合、該部分は非置換であるか又は各出現ごとに−OH、−NH2、−CN、フェニル及びハロゲンより独立して選択される１、２、３、４若しくは５個の置換基を有する］
の化合物である。
【０００８】
これらの化合物を含有する医薬組成物及び製剤、疾患及び状態を処置するためにそれらを単独又は他の治療活性化合物若しくは物質と組み合わせて使用する方法、それらを製造するために使用される方法及び中間体、医薬としてのそれらの使用、医薬の製造におけるそれらの使用並びに診断及び分析目的のためのそれらの使用も開示される。特に、化合物、それらを含有する組成物、並びにNK−3受容体が役割を有すると考えられる広範囲の疾患又は障害に関連した状態及び障害を処置又は予防するためにそれらを使用する方法が開示される。
【０００９】
本発明の化合物は、式Ｉ
【化２】
2009508946.tif 000004
［式中:
R1は、Ｈ、C1-4アルキル−、C3-6シクロアルキル−及びC1-4アルキルOC(O)−より選択され;
Ａはフェニル又はC3-7シクロアルキル−であり;
R2は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−NH2、−CN、ハロゲン、C1-6アルキル−、C3-7シクロアルキル−、C1-6アルコキシ−及びC1-6アルコキシC1-6アルキル−より独立して選択され;
ｎは１、２又は３であり;
R3は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−NH2、−NO2、−CN、ハロゲン、C1-6アルキル−、C1-6アルコキシ−及びC1-6アルコキシC1-6アルキル−より独立して選択され；
ｍは１、２又は３であり;
R4はE−S(O)r−(CH2)p−であり、ここでＥはC1-6アルキル−、C3-6シクロアルキル−、アリール−及びヘテロアリール−より選択され、ｐは０、１、２、３、４、５及び６より選択され、そしてｒは０、１及び２より選択され；
R5は各出現ごとに、Ｈ、−OH、−CN、ハロゲン、−R6、−OR6、−NR6R7、−SR6、−SOR6及び−SO2R6より独立して選択され;
ｑは１、２又は３であり；
ここで:
R6及びR7は各出現ごとに、Ｈ、直鎖若しくは分枝のC1-6アルキル基、直鎖若しくは分枝のC2-6アルケニル基又はC2-6アルキニル基及び０、１若しくは２個の二重結合又は三重結合を有するC3-7炭素環式基より独立して選択され、ここで該基は、非置換であるか又は−OH、＝O、−NH2、−CN、ハロゲン、アリール及びC1-3アルコキシ−より選択される１つ若しくはそれ以上の部分で置換され;
そして
R1、R2又はR3がアルキル、シクロアルキル、アルコキシ又はアルコキシアルキル部分である場合、該部分は非置換であるか又は各出現ごとに−OH、−NH2、−CN、フェニル及びハロゲンより独立して選択される１、２、３、４若しくは５個の置換基を有する］
の化合物、
その立体異性体、鏡像異性体、インビボで加水分解可能な前駆体及び薬学的に許容しうる塩である。
【００１０】
特定の化合物は、式中:
Ａがフェニルであり;
R1がC1-4アルキル−、C3-6シクロアルキル−及びC1-4アルキルOC(O)−より選択され；
R2がＨ、ハロゲン及び非置換C1-6アルコキシ−より選択され;
R3がＨ又はハロゲンであり;
ｎ及びｍが両方とも１であり、かつ
R1がアルキル、シクロアルキル、アルコキシ又はアルコキシアルキル部分である場合、該部分は非置換であるか各出現ごとに−OH、−NH2、−CN及びハロゲンより独立して選択される１、２、３、４若しくは５個の置換基を有する化合物、
その立体異性体、鏡像異性体、インビボで加水分解可能な前駆体及び薬学的に許容しうる塩である。
【００１１】
他の特定の化合物は、式中:
Ａがフェニルであり;
R1がC1-4アルキル−及びC3-6シクロアルキル−より選択され；
R2がＨ、ハロゲン及び非置換C1-6アルコキシ−より選択され;
R3がＨ又はハロゲンであり;
ｎ及びｍが両方とも１であり;
R4がE−S(O)r−(CH2)p−であり、ここでＥはC1-6アルキル−、C3-6シクロアルキル−、アリール−及びヘテロアリール−より選択され、ｐが０、１、２及び３より選択され、そしてｒが０、１及び２より選択され；
R5がＨである化合物、
その立体異性体、鏡像異性体、インビボで加水分解可能な前駆体及び薬学的に許容しうる塩である。
【００１２】
なお他の特定の化合物は、式中:
Ａがフェニルであり;
R1がエチル又はシクロプロピルであり；
R2がＨ、Ｆ及び−OCH3より選択され;
R3がＨ又はＦであり;
ｎ、ｍ及びｑがそれぞれ１であり;
R4がE−S(O)r−(CH2)p−であり、ここでＥはC1-6アルキル−、C3-6シクロアルキル−、アリール−及びヘテロアリール−より選択され、ｐが０、１、２及び３より選択され、そしてｒが０、１及び２より選択され；
R5が各出現ごとに、Ｈ、−OH及びハロゲンより独立して選択される化合物、
その立体異性体、鏡像異性体、インビボで加水分解可能な前駆体及び薬学的に許容しうる塩である。
【００１３】
なお他の特定の化合物は、式II
【化３】
2009508946.tif 000005
［式中、R1、Ａ、R2、ｎ、R3、ｍ、R4、R5及びｑは式Ｉにおいて規定された通りである］の鏡像異性体、
その立体異性体、鏡像異性体、インビボで加水分解可能な前駆体及び薬学的に許容しうる塩である。
【００１４】
特定の化合物は、表１に記載される化合物、その立体異性体、鏡像異性体、インビボで加水分解可能な前駆体及び薬学的に許容しうる塩より選択される。
【００１５】
本発明の化合物は、それらが既知の化合物よりも、より溶解性であり得、インビボでより容易に吸収されてより有効であり、より少ない副作用を生じ、毒性がより低く、より有効であり、より選択的であり、より長く作用し、より少なく代謝され、かつ／若しくはより良好な薬物動態プロファイルを有するか、又は既知の化合物よりも有用な他の薬理学的特性若しくは物理化学的特性を有するという利点を有する。本明細書に記載される機能的活性についてのアッセイを使用して、本発明の化合物は、NK−3受容体に対して約１μMより小さいIC50を有することが見いだされ、そして多くの化合物がNK−3受容体に対して約100nMより小さいIC50を有することが見いだされるだろう。
【００１６】
略号及び定義
本明細書で使用される場合、他に指示がなければ、C1-6アルキルは、単独でも別の基の一部でも、メチル、エチル、n−プロピル、n−ブチル、i−プロピル、i−ブチル、t−ブチル、s−ブチル部分を含むがこれらに限定されず、かつアルキル基は直鎖でも分枝でもよい。
【００１７】
本明細書で使用される場合、他に指示がなければ、C1-6アルコキシは、単独でも別の基の一部でも、−O−メチル、−O−エチル、−O−n−プロピル、−O−n−ブチル、−O−i−プロピル、−O−i−ブチル、−O−t−ブチル、−O−s−ブチル部分を含むがこれらに限定されず、かつアルコキシ基は直鎖でも分枝でもよい。
【００１８】
本明細書で使用される場合、C3-6シクロアルキル基は、環式アルキル部分シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル及びシクロヘキシルを含むがこれらに限定されない。
【００１９】
本明細書で使用される場合、他に指示がなければ、C2-6アルケニルは、1−プロペニル、2−プロペニル、1−ブテニル、2−ブテニル及び3−ブテニルを含むがこれらに限定されない。
【００２０】
本明細書で使用される場合、他に指示がなければ、C2-6アルキニルは、エチニル、1−プロピニル、2−プロピニル、1−ブチニル、2−ブチニル及び3−ブチニルを含むがこれらに限定されない。
【００２１】
本明細書で使用される場合、他に指示がなければ、ハロ又はハロゲンとは、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素を指し;
本明細書で使用される場合、アリールはフェニル及びナフチルを含み;
本明細書で使用される場合、芳香族又は非芳香族の複素環式環は、Ｎ若しくはＣで連結される、フリル、イミダゾリル、オキサゾリル、ピロリジニル、チアゾリル、チオフェニル、ピロリル、モルホリニル、ピペリジニル、ピペラジニル、ピラジニル、ピリジル、ピリミジニル、インダニル、インドリル、キノリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、ベンゾ[b]チオフェニル、ベンゾオキサゾリル、又はベンゾチアゾリルを含むがこれらに限定されず;
DCMはジクロロメタンを指し;
EtOAcは酢酸エチルを指し;
EDCは1−(3−ジメチルアミノプロピル)−3−エチルカルボジイミドを指し;
EDTAはエチレンジアミン四酢酸を指し;
HEPESは4−(2−ヒドロキシエチル)−1−ピペラジンエタンスルホン酸モノナトリウム塩を指し、そして
TEAはトリエチルアミンを指す。
【００２２】
本明細書中に記載される方法において、必要な場合、ヒドロキシ、アミノ、又は他の反応性基は、Greene及びWutsによる標準的な教科書「Protecting groups in Organic Synthesis」、3rd Edition (1999)において記載されるような保護基を使用して保護され得る。
【００２３】
他に指示がなければ、反応は不活性雰囲気下、好ましくは窒素雰囲気下で実施され、そして通常約１〜約３気圧の圧力で、好ましくは周囲圧（約１気圧）で実施される。
【００２４】
本発明の化合物及び中間体は、それらの反応混合物から標準的な技術により単離され得る。
【００２５】
言及され得る式Ｉの化合物の酸付加塩は、鉱酸の塩、例えば塩酸塩及び臭化水素酸塩;並びに有機酸と形成される塩、例えばギ酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、安息香酸塩、酒石酸塩、及びフマル酸塩が挙げられる。
【００２６】
式Ｉの化合物の酸付加塩は、遊離塩基又はその塩、鏡像異性体又は保護した誘導体を、１当量又はそれ以上の適切な酸と反応させることにより形成され得る。この反応は、塩が不溶性である溶媒若しくは媒体中、又は塩が可溶である溶媒中、例えば水、ジオキサン、エタノール、テトラヒドロフラン若しくはジエチルエーテル中、又は溶媒の混合物中で行われ得、これらは真空で、又は凍結乾燥により除去され得る。この反応は複分解（metathetical）プロセスであってもよく、又はイオン交換樹脂上で行われてもよい。
【００２７】
式Ｉの特定の化合物は、互変異性体又は鏡像異性体の形態で存在し得、これら全てが本発明の範囲内に含まれる。種々の光学異性体は、化合物のラセミ混合物の分割により、従来の技術、例えば分別結晶、又はキラルHPLCを使用して単離され得る。あるいは、個々の鏡像異性体は、ラセミ化を引き起こさない反応条件下での適切な光学活性出発物質の反応により製造され得る。
【００２８】
合成及びスキーム
式１の化合物は、一般的な方法により製造され得る。
方法１:
スキームＡ及びＢに示すように、3−メチル−2−フェニル−キノリン−4−カルボン酸(アルキル)−アミドをN−ブロモコハク酸イミド(NBS)とラジカル開始剤、例えば紫外光の存在下で反応させて3−ブロモメチル−2−フェニル−キノリン−4−カルボン酸(アルキル)−アミドを得てもよい。上記ハロゲン化アルキルをチオール、例えばナトリウムメタンチオレートと反応させて対応するチオエーテルを得てもよく、次いでこれを酸化剤、例えば過ヨウ素酸ナトリウムで酸化して対応する3−メタンスルフィニルメチル−2−フェニル−キノリン−4−カルボン酸(アルキル)−アミドを得ても良い。あるいは、上記チオエーテルを酸化剤、例えばメタ−クロロ過安息香酸で酸化して対応する3−メタンスルホニルメチル−2−フェニル−キノリン−4−カルボン酸(アルキル)−アミドを得ても良い。
方法２:
エチル又は他のアルキル−連結鎖（linked tethers）をキノリンと硫黄原子との間に有する化合物は、3−ブロモメチル−2−フェニル−キノリン−4−カルボン酸(アルキル)−アミドを、ナトリウムメタンチオレートの代わりに別の求核試薬、例えばジムシルカリウムと反応させて、対応する3−(2−メチルスルファニル−エチル)−2−フェニル−キノリン−4−カルボン酸(アルキル)−アミドを得ることにより製造することができる。次いでこの物質を方法1に記載されるプロセスに従って酸化して対応するスルホンを得ることができる。
方法３:
硫黄がキノリンに直接結合している化合物は、スキームＢに示すように、3−アルキルスルファニル−2−フェニル−キノリン−4−カルボン酸を、適切なアミンと、適切なカップリング剤系、例えばジシクロヘキシルカルボジイミド及びヒドロキシベンゾトリアゾールの存在下で反応させて、3−アルキルスルファニル−2−フェニル−キノリン−4−カルボン酸(アルキル)−アミドを得ることにより製造することができ、この化合物を過ヨウ素酸ナトリウムのような酸化剤で酸化して対応するスルホキシドを得てもよく、又はメタ−クロロ過安息香酸のような酸化剤で酸化して対応するスルホンを生じ得る。
【００２９】
式Ｉの特定の化合物を形成するための典型的な方法を、スキームＡ及びＢに示す。
【化４】
2009508946.tif 000006
【００３０】
【化５】
2009508946.tif 000007
【００３１】
過ヨウ素酸ナトリウム
従ってスキームＡで説明されるように、3−メチル−2−フェニル−キノリン−4−カルボン酸(1−フェニル−プロピル)−アミドを、N−ブロモコハク酸イミドのようなハロゲン源との、紫外光のようなラジカル開始剤の存在下で高温（典型的には50−100℃)にて四塩化炭素のような適切な溶媒中での反応によりハロゲン化して、3−ブロモメチル−2−フェニル−キノリン−4−カルボン酸(1−フェニル−プロピル)−アミドを生じ得る。この物質をナトリウムメタンチオレートのような適切な求核試薬と反応させて3−(メチルチオメチル)−2−フェニル−N−(1−フェニルプロピル)キノリン−4−カルボキシアミドを生じ得る。この物質を過ヨウ素酸ナトリウムのような酸化剤で酸化して3−(メチルスルフィニルメチル)−2−フェニル−N−(1−フェニルプロピル)キノリン−4−カルボキシアミドが得られ得るか；又はこれをメタ−クロロ過安息香酸のような酸化剤で酸化して3−(メチルスルホニルメチル)−2−フェニル−N−(1−フェニルプロピル)キノリン−4−カルボキシアミドを生じ得る。
【００３２】
さらなる局面において、本発明は、原子の１つ又はそれ以上が同じ元素の放射性同位体である、本明細書に記載される化合物に関する。本発明のこの局面の特定の形態において、化合物はトリチウムで標識される。このような放射標識化合物は、放射標識出発物質を組み込むか、又はトリチウムの場合には、公知の方法により水素をトリチウムと交換することのいずれかにより合成される。公知の方法としては、(1)求電子ハロゲン化、続いてトリチウム源の存在下でのハロゲンの還元、例えばパラジウム触媒の存在下でのトリチウムガスを用いた水素添加反応、又は(2)トリチウムガス及び適切な有機金属（例えばパラジウム）触媒の存在下で行われる水素のトリチウムとの交換が挙げられる。
【００３３】
トリチウムで標識された本発明の化合物は、NK−3受容体に結合してNK−3受容体のアゴニズム、部分的アゴニズム、又はアンタゴニズムにより活性を調節する新規な医薬用化合物の発見のために有用である。このようなトリチウム標識化合物は、NK−3受容体に結合するリガンドの結合を評価するためにこのような化合物の置き換えを測定するアッセイにおいて使用され得る。
【００３４】
さらなる局面において、本発明は、放射性同位体の１つ又はそれ上の原子をさらに含む本明細書に記載される化合物に関する。本発明のこの局面の特定の形態において、化合物は放射性ハロゲンを含む。このような放射標識化合物は、公知の方法により放射標識出発物質を組み込むことにより合成される。本発明のこの局面の特定の実施態様は、放射性同位体が18F、123I、125I、131I、75Br、76Br、77Br又は82Brより選択されるものである。本発明のこの局面の最も特定の実施態様は、放射性同位体が18Fであるものである。放射
性同位体の１つ又はそれ以上の原子を含むこのような化合物は、陽電子放出断層撮影(PET)リガンドとして、ならびにNK3受容体の位置を決定するための他の用途及び技術のために有用である。
【００３５】
化合物の治療用途:
別の局面において、本発明は本明細書に記載される式Ｉの化合物、並びに治療におけるこのような化合物の使用及び治療に有用な組成物における使用に関する。
【００３６】
別の局面において、本発明は、NK−3受容体の作用を通して媒介される疾患の治療のための、本明細書に記載される化合物の使用を包含する。このような局面は、NK−3受容体の調節が有益である疾患又は状態の処置又は予防の方法であって、治療有効量の本発明のアンタゴニスト性化合物を、上記疾患又は状態に罹患した被験体に投与することを含む方法を包含する。
【００３７】
本発明のこの局面の一実施態様は、障害が、抑うつ、不安、統合失調症、認知障害、精神病、肥満、炎症性疾患（過敏性腸症候群及び炎症性腸障害を含む）、嘔吐、子かん前症、慢性閉塞性肺疾患、（月経困難症、良性前立腺肥大、前立腺癌、又は精巣癌を含む）過剰のゴナドトロピン及び／又はアンドロゲンに関連する障害である障害の処置又は予防の方法であって、薬理学的有効量の式Ｉの化合物をそれを必要とする患者に投与することを含む方法である。
【００３８】
本発明のさらなる局面は、本発明の化合物、その鏡像異性体又はその薬学的に許容しうる塩の、NK−3受容体の調節が有益である疾患又は状態の処置又は予防における使用である。処置され得る特定の疾患及び状態は、抑うつ、不安、統合失調症、認知障害、精神病、肥満、炎症性疾患（過敏性腸症候群及び炎症性腸障害を含む）、嘔吐、子かん前症、慢性閉塞性肺疾患、（月経困難症、良性前立腺肥大、前立腺癌、又は精巣癌を含む）過剰のゴナドトロピン及び／又はアンドロゲンに関連する障害である。より特定の実施態様は、不安、抑うつ、統合失調症及び肥満の処置又は予防における化合物の使用を包含する。
【００３９】
本発明のさらなる局面は、本発明の化合物、その鏡像異性体またはその薬学的に許容しうる塩の、本明細書中に記載される疾患又は状態の処置又は予防のための医薬の製造における使用である。本発明のこの局面の特定の実施態様は、抑うつ、不安、統合失調症、認知障害、精神病、肥満、炎症性疾患（過敏性腸症候群及び炎症性腸障害を含む）、嘔吐、子かん前症、慢性閉塞性肺疾患、（月経困難症、良性前立腺肥大、前立腺癌、又は精巣癌を含む）過剰のゴナドトロピン及び／又はアンドロゲンに関連する障害の処置又は予防のための医薬の製造における本発明の化合物の使用である。
【００４０】
医薬組成物
本発明の化合物、その鏡像異性体及びその薬学的に許容しうる塩は、それら自体で、又は腸溶性若しくは非経口投与のための適切な医薬製剤の形態で使用され得る。本発明のさらなる局面によれば、好ましくは80質量％未満、そしてより好ましくは50質量％未満の本発明の化合物を、不活性な薬学的に許容しうる希釈剤、滑沢剤又は担体と混合して含む医薬組成物が提供される。
【００４１】
希釈剤、滑沢剤及び担体の例は:
−錠剤及び糖衣丸には：乳糖、デンプン、タルク、ステアリン酸；
−カプセル剤には：酒石酸又は乳糖；
−注射剤には：水、アルコール、グリセリン、植物油；
−坐剤には：天然若しくは硬化油又はロウである。
【００４２】
このような医薬組成物を製造するための方法も提供され、この方法は、成分を一緒に混合若しくは調合すること、及び混合された成分を錠剤若しくは坐剤に形成すること、成分をカプセル中に封入すること又は成分を溶解して注射剤を形成することを含む。
【００４３】
薬学的に許容しうる誘導体としては、溶媒和物及び塩が挙げられる。例えば、本発明の化合物は、酸、例えば従来の薬学的に許容しうる酸（マレイン酸、塩酸、臭化水素酸、リン酸、酢酸、フマル酸、サリチル酸、クエン酸、乳酸、マンデル酸、酒石酸及びメタンスルホン酸）との酸付加塩を形成し得る。
【００４４】
言及し得る式Ｉの化合物の酸付加塩としては、鉱酸の塩、例えば塩酸塩及び臭化水素酸塩；並びに有機酸と形成される塩、例えばギ酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、安息香酸塩、酒石酸塩、及びフマル酸塩が挙げられる。式Ｉの化合物の酸付加塩は、遊離塩基又はその塩、鏡像異性体若しくは保護された誘導体を、１当量又はそれ以上の適切な酸と反応させることにより形成され得る。この反応は、塩が不溶である溶媒若しくは媒体中、又は塩が可溶である溶媒、例えば水、ジオキサン、エタノール、テトラヒドロフラン若しくはジエチルエーテル、又は溶媒の混合物中で行われ得、これら溶媒は真空で又は凍結乾燥により除去され得る。この反応は複分解プロセスであり得、又はイオン交換樹脂上で行われてもよい。
【００４５】
本明細書で述べられる使用、方法、医薬及び組成物については、使用される化合物の量及び投与される投薬量は、当然、使用される化合物、投与様式及び所望される処置により変化する。しかし、一般的には、本発明の化合物を約0.1mg〜約20mg／（動物の体重１kg）の１日の投薬量で投与する場合に満足な結果が得られる。このような用量は、１日あたり１〜４回の分割用量又は持続放出形態で与えられ得る。ヒトについては、総日用量は５mg〜1,400mgの範囲であり、より好ましくは10mg〜100mgであり、そして経口投与に適した単位投薬形態は、固体又は液体の医薬担体、滑沢剤及び希釈剤と混合された２mg〜1,400mgの化合物を含む。
【００４６】
本発明のいくつかの化合物は、互変異性体、鏡像異性体、立体異性体又は幾何異性体の形態で存在し得、これらの全てが本発明の範囲内に包含される。種々の光学異性体は、従来の技術、例えば分別結晶、又はキラルHPLCを使用して化合物のラセミ混合物の分離により単離され得る。あるいは、個々の鏡像異性体は、適切な光学活性な出発物質の、ラセミ化を引き起こさない反応条件下での反応により作成され得る。
【００４７】
本発明の例示的化合物は、スキームＡに記載される方法と類似の方法により製造され得る。当業者は、多くの適切なアミン並びに酸塩化物及びカルボン酸を使用して、式Ｉとして本明細書に記載される主題の範囲内の化合物を形成し得ることを容易に理解する。
【実施例】
【００４８】
例示化合物
実施例１、２及び３は、スキーム１に従って製造した。
【化６】
2009508946.tif 000008
【００４９】
実施例１. 3−(メチルチオ)−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (1)  
【化７】
2009508946.tif 000009
3−(メチルチオ)−2−フェニルキノリン−4−カルボン酸(150mg、0.51mmol)及びトリエチルアミン(0.17mL、1.22mmol)のEtOAc(2.5mL)溶液に、５℃にて塩化チオニル(0.043mL、0.61mmol)を加えた。冷却浴を外し、そしてこの懸濁液を0.5時間撹拌し、次いで(S)−(−)−1−フェニルプロピルアミン(76mg、0.56mmol)を加え、そして反応液をさらに0.5時間撹拌した。次いで水(２mL)及びEtOAc(２mL)を加え、層を一緒に振盪し、次いで分離し、有機物をNa2SO4で乾燥し、濾過し、そして減圧濃縮した。生じた物質をシリカゲルクロマトグラフィー(0−20％ EtOAc／CH2Cl2)により精製して所望の生成物(150mg、収率70％)を固体として得た。1H NMR (300 MHz、CDCl3)δ 8.11 (d、J＝8.4 Hz、1H)、7.78−7.67 (m、4H)、7.55−7.27 (m、9H)、6.12 (d、J＝8.5 Hz、1H)、5.30 (q、J＝7.6 Hz、1H)、2.16−1.91 (m、5H)、1.06 (t、J＝7.4 Hz、3H); HRMS m/z 413.1669、計算値413.1688。
【００５０】
実施例２.  3−(メチルスルフィニル)−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (2)  
【化８】
2009508946.tif 000010
3−(メチルチオ)−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (1) (60mg、0.145mmol)のEtOH(２mL)溶液を調製し、そしてこれに撹拌しながらNaIO4(37mg、0.174mmol)のH2O(1mL)中の溶液を加えた。次いでさらにH2O(１mL)及びEtOH(２mL)を加え、そして反応液を50℃に２時間加熱した。次いで追加のNaIO4 (10mg)を加え、そして反応液を78℃で14時間加熱した。再び、さらにNaIO4(50mg)を加え、そして反応液を90℃(封管）で３時間加熱し、次いで放冷させた。これを減圧下で濃縮し、EtOAcで希釈し、H2Oで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濾過し、そして再び減圧下で濃縮した。生じた物質をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製して所望の生成物(50mg、収率80％)を固体として得た(1HNMRは２つのジアステレオマーが存在することを示す)。1H NMR (300 MHz、CDCl3)δ 8.20−7.28 (m、14H)、6.96−6.48 (m、1H)、5.31−5.15 (m、1H)、2.94−2.62 (m、3H)、2.32−1.84 (m、2H)、1.07−0.90 (m、3H); HRMS m/z 429.1602、計算値429.1637。
【００５１】
実施例３.  3−(メチルスルホニル)−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (3)
【化９】
2009508946.tif 000011
3−(メチルチオ)−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (1) (40mg、0.097mmol)のCH2Cl2(１mL)中の撹拌溶液に、MCPBA(70−75％を54mg、0.23mmol)を加え、そして溶液を１時間撹拌した。追加のMCPBA(10mg)を加え、そして反応液を40℃に１時間加熱し、次いで放冷させた。次にH2O(１mL)を加え、そしてチオ硫酸ナトリウムの少しの結晶、CH2Cl2(３mL)、及び1N NaOH(２mL−水溶液)を加えた。層を一緒に振盪し、分離し、有機物をNa2SO4で乾燥し、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー(0−25％ EtOAc／CH2Cl2)により精製して所望の生成物(６mg)を白色固体として得た。1H NMR (300MHz、CDCl3、65℃)δ 8.13 (d、J＝8.5 Hz、1H)、7.92−7.76 (m、2H)、7.59−7.25 (m、11H)、6.19−6.08 (m、1H)、5.27−5.15 (m、1H)、2.96 (s、3H)、2.28−1.87 (m、2H)、1.00 (t、J＝7.4 Hz、3H); HRMS m/z 445.1573、計算値445.1586。
【００５２】
実施例４、５、６及び７をスキーム２に従って製造した。
【化１０】
2009508946.tif 000012
【００５３】
実施例４. 3−(エチルチオ)−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (5)
【化１１】
2009508946.tif 000013
3−(エチルチオ)−2−フェニルキノリン−4−カルボン酸(4) (269mg、0.87mmol)、HOBT水和物(230mg、1.5mmol)、4−メチルモルホリン(164μL、1.5mmol)のDCM (30ml)溶液に、EDC(289mg、1.5mmol)を室温にてN2下で加えた。次いで(S)−1−フェニル プロピルアミン(202mg、1.5mmol)を加え、反応混合物を室温で12時間撹拌した。全ての溶媒を真空で除去し、そして残留物を酢酸エチルと0.5N HCl水溶液との間で分配した。有機相を10％炭酸水素ナトリウム水溶液、ブラインで洗浄し、そして硫酸ナトリウムで乾燥した。次いで有機溶液を真空濃縮した。残留物を15−25％ 酢酸エチル／ヘキサンで溶出するクロマトグラフィーにより精製して表題化合物(315mg、収率85％）を固体として得た。1H NMR (300MHz、CDCl3)δ 0.96 (t、3H)、1.22 (t、3H)、2.0 (m、2H)、2.40 (m、2H)、5.28 (q、1H)、7.20 (d、2H)、7.34 (d、2H)、7.39 (m、2H)、7.78 (m、2H)、7.84 (m、2H)、8.00 (m、1H)、8.11 (m、2H)、8.15 (m、2H)。MS APCI、m/z＝427 (M+1)。 LCMS: 2.82分。
【００５４】
出発酸、3−(エチルチオ)−2−フェニルキノリン−4−カルボン酸(4)、を以下の方法で製造した:
【化１２】
2009508946.tif 000014
イサチン(882mg、６mmol)に、水酸化ナトリウム(2.30ｇ、57.5mmol)の水(5.0mL)溶液を加えた。生じた褐色沈殿物を室温で激しく20分間撹拌した後、85℃に加熱した。次いで2−(エチルチオ)−1−フェニルエタノン(1080mg、6.0mmol)のエタノール／THF／水(13mL／2.5mL／13mL）中の溶液を30分かけて滴下した。反応混合物を85℃で撹拌するか、又はさらに４時間撹拌した後室温まで冷却した。全ての有機溶媒を真空で除去し、そして水性残留物を約12mLの体積まで減らした。水性残留物をエーテル(３×10 mL)で洗浄し、次いで水性残留物を冷却しながら濃酢酸を用いてpH４まで酸性化した。形成した沈殿物を集め、水で洗浄し、そして乾燥して表題化合物を固体として得た(1580mg、85.2％)。1H NMR (300MHz、CDCl3)δ 1.22 (t、3H)、2.97 (q、2H)、7.28 (d、1H)、7.35 (d、2H)、7.77 (m、1H)、7.86 (m、1H)、7.99 (m、2H)、8.29 (m、1H)、9.11 (m、1H)、10.33 (b、2H)。 MS APCI、m/z＝310 (M+1)。LCMS: 1.73分。
【００５５】
実施例５.  3−(エチルスルフィニル)−2−フェニル−N−[(S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (6)
【化１３】
2009508946.tif 000015
3−(エチルチオ)−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (5) (300mg、0.70mmol)のMeOH(25mL)溶液に、NaIO4 (300mg、1.4mmol)の水(15mL)溶液を０℃に冷却しながら加えた。冷却浴を外し、そして反応液を12時間撹拌した。LCMSは反応が全く起こっていないことを示していた。さらに２当量のNaIO4を加え、そして反応混合物を８時間加熱還流させた。次いでこれをEtOAcで希釈し、ブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー(10−35％ EtOAc／CH2Cl2)により精製して、所望の生成物(２つのジアステレオマー)を固体として得た(88mg、28.4％)。1H NMR (300MHz、CDCl3)δ 0.97 (t、3H)、1.21 (t、3H)、2.01 (m、2H)、2.71 (m、2H)、5.21 (q、1H)、7.21 (d、2H)、7.34 (d、2H)、7.39 (m、2H)、7.78 (m、2H)、7.84 (m、2H)、8.00 (m、1H)、8.11 (m、2H)、8.14 (m、1H)、8.16 (m、1H)。 MS APCI、m/z＝443 (M+1)。 LCMS: 2.15分。
【００５６】
実施例６.  3−(エチルスルホニル)−2−フェニル−N−[(S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (7)
【化１４】
2009508946.tif 000016
3−(エチルチオ)−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (5) (100mg、0.235mmol)のCH2Cl2 (10mL)溶液に、m−CPBA(112mg、70−75％、0.45mmol)を用いて０℃にて処理した。冷却浴を外し、反応液を12時間撹拌した。LCMSは反応が60％しか進んでいないことを示した。さらに30mgのm−CPBAを加え、そして混合物の撹拌を６時間継続した。次いでCH2Cl2で希釈し、1N NaOH水溶液、ブラインで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー(10−15％ EtOAc／ヘキサン) で精製して所望の生成物を固体として得た(40mg、38.4％)。1H NMR (300MHz、CDCl3)δ 0.98 (t、3H)、1.26 (t、3H)、2.15 (m、2H)、2.96 (m、2H)、5.22 (m、1H)、7.22 (d、2H)、7.36 (d、2H)、7.39 (m、2H)、7.78 (m、2H)、7.84 (m、2H)、8.00 (m、1H)、8.11 (m、2H)、8.14 (m、1H)、8.17 (m、1H)。 MS APCI、m/z＝459 (M+1)。 LCMS: 2.27分。
【００５７】
実施例７、８、９及び10をスキーム３に従って製造した。
【化１５】
2009508946.tif 000017
【００５８】
実施例７.  3−(ブロモメチル)−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (8)
【化１６】
2009508946.tif 000018
3−メチル−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (9.8ｇ、26mmol)を200mLの熱CCl4に(撹拌しながら)N2下で溶解し、そして加熱して穏やかに還流させた。NBS(6.9ｇ、39mmol)を加え、そして溶液に長波長UV光を0.5時間照射した。追加のNBS(1.9ｇ、11mmol)を加え、そして溶液をさらに0.5時間照射し還流させた。次いで放冷して減圧下で濃縮して大部分のCCl4を除去した。次いで残留物をCH2Cl2に溶解し、そしてチオ硫酸ナトリウムの少量の結晶を含有するNaHCO3水溶液で洗浄した。
次いで有機層をNa2SO4で乾燥し、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。次いで得られた物質を、シリカゲルクロマトグラフィー(０−15％ EtOAc／CH2Cl2)を使用して精製して2.9ｇの所望の生成物(24％)を黄白色固体として得た。1H NMR (300 MHz、CDCl3、52℃)δ 8.11
(d、J＝8.1 Hz、1H)、7.81−7.67 (m、2H)、7.67−7.58 (m、2H)、7.55−7.26 (m、9H)、6.39 (d、J＝7.8 Hz、1H)、5.28 (q、J＝7.6 Hz、1H)、4.74−4.50 (m、2H)、2.23−1.91 (m、2H)、1.03 (t、J＝7.4 Hz、3H); LCMS: m/z 459 (MH+)。
【００５９】
実施例８. 3−[(メチルチオ)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (9)  
【化１７】
2009508946.tif 000019
3−(ブロモメチル)−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (8) (2.9ｇ、6.32mmol)の無水THF(35mL)撹拌溶液にN2下でナトリウムチオメトキシド(NaSMe、880mg、12.64mmol)を加え、そして反応液を1.5時間撹拌した。次いでこれをEtOAcで希釈し；0.3N NaOH水溶液、次いでH2O、次いでブラインで洗浄し；Na2SO4で乾燥し；ろ過し；そして減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー(５−15％ EtOAc／CH2Cl2)により精製して所望の生成物(2.5ｇ、収率90％)を固体として得た。1H NMR (300 MHz、CDCl3、52℃)δ 8.10 (d、J＝8.4 Hz、1H)、7.78 (d、J＝8.1 Hz、1H)、7.72−7.60 (m、3H)、7.53−7.25 (m、9H)、6.68 (d、J＝7.8 Hz、1H)、5.29 (q、J＝7.6 Hz、1H)、3.79 (q、J＝13.7 Hz、2H)、2.19−1.90 (m、2H)、1.77 (s、3H)、1.03 (t、J＝7.4 Hz、3H); LCMS: m/z 427 (MH+)。
【００６０】
実施例９.  3−[(メチルスルフィニル)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (10)
【化１８】
2009508946.tif 000020
3−[(メチルチオ)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (9) (1.7ｇ、3.98mmol)のEtOH(40mL)溶液を０℃に冷却し、そしてこれに撹拌しながらNaIO4 (1.02ｇ、4.78mmol)のH2O(20mL)中の溶液を加えた。冷却浴を外し、そして反応液を３時間撹拌し、次いで減圧下で濃縮して大部分のEtOHを除去した。次いでこれをEtOAcで希釈し、H2O(エマルジョンを減らすためにいくらかのNaClを含有する)で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー(10−35％ EtOAc／CH2Cl2)により精製して所望の生成物(２つのジアステレオマー)をそれぞれ固体として得た。
【００６１】
異性体Ａ：1H NMR (300 MHz、CDCl3、52℃)δ8.66 (d、J＝6.6 Hz、1H)、8.11 (d、J＝
8.4 Hz、1H)、8.02 (d、J＝7.6 Hz、1H)、7.73 (t、J＝8.4 Hz、1H)、7.62−7.51 (m、3H)、7.50−7.25 (m、8H)、5.31 (q、J＝8.0 Hz、1H)、3.96 (s、2H)、2.10−1.90 (m、5H)、1.04 (t、J＝7.3 Hz、3H); LCMS: m/z 443 (MH+)。
異性体Ｂ：1H NMR (300 MHz、CDCl3、52℃)δ 8.43 (d、J＝7.6 Hz、1H)、8.09 (d、J＝8.1 Hz、1H)、7.75−7.64 (m、2H)、7.57−7.26 (m、11H)、5.20 (q、J＝7.6 Hz、1H)、4.25 (q、J＝16.7 Hz、2H)、2.43 (b、3H)、2.20−1.88 (m、2H)、1.00 (t、J＝7.4 Hz、3H); LCMS: m/z 443 (MH+)。
【００６２】
実施例10.  3−[(メチルスルホニル)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (11)
【化１９】
2009508946.tif 000021
3−[(メチルチオ)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (9) (800mg、1.87mmol)の撹拌溶液に０℃にてMCPBA(900mg、70−75％、4.31mmol)を加え、冷却浴を外し、そして反応液を１時間撹拌した。追加のMCPBA(100mg)を加え、そして反応液を短時間40℃に加熱し、次いで放冷した。チオ硫酸ナトリウム(Na2S2O3.5H2O−1.5ｇ)及びH2O(10mL)を加え、そして懸濁液を10分間激しく撹拌し、CH2Cl2で希釈し、0.3N NaOH水溶液で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー(０−25％ EtOAc／CH2Cl2)により精製して所望の生成物(630mg、収率73％)を固体として得た。1H NMR (300 MHz、CDCl3、52℃)δ 8.12 (d、J＝8.4 Hz、1H)、7.83−7.68 (m、2H)、7.61 (d、J＝7.7 Hz、2H)、7.56−7.26 (m、10H)、5.22 (q、J＝7.6 Hz、1H)、4.74 (d、J＝12.3 Hz、2H)、2.31 (s、3H)、2.20−1.88 (m、2H)、1.00 (t、J＝7.4 Hz、3H); LCMS: m/z 459 (MH+)。
【００６３】
実施例11及び12はスキーム４に従って製造した。
【化２０】
2009508946.tif 000022
【００６４】
実施例11.  3−[2−(メチルスルフィニル)エチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (12)
【化２１】
2009508946.tif 000023
DMSO (0.075mL、1.05mmol)及びHMPA (0.38mL、2.2mmol)の無水THF(３mL)溶液をN2下で調製し、そして−78℃に冷却した。これにn−BuLi(0.71mL、ヘキサン中1.6M、1.13mmol)の溶液を加え、反応液を10分間撹拌し、次いで3−(ブロモメチル)−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (8) (200mg、0.44mmol)を無水THF(１mL)中の溶液として加えた。反応液を10分間撹拌し、追加の無水THF(１mL)を加え、そして反応液をさらに10分間撹拌した。次いで冷却浴を外し、飽和NH4Cl(１mL)水溶液、H2O(１mL)で洗浄し、そしてEt2O(１mL)を加え、層を一緒に振盪し、次いで分離した。次いで有機物をNa2SO4で乾燥し、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー(EtOAc／CH2Cl2)により精製して所望の生成物(170mg、収率85％)を固体として得た。1H NMR (300 MHz、CDCl3、52℃)δ 8.10 (d、J＝8.0 Hz、1H)、7.86−7.61 (m、2H)、7.55−7.25 (m、12H)、5.29−5.16 (m、1H)、3.44−3.07 (m、2H)、2.73−2.37 (m、2H)、2.27−2.15 (m、3H)、2.15−1.86 (m、2H)、1.02 (t、J＝7.4 Hz、3H); LCMS: m/z 457 (MH+)。HRMS m/z 457.1927、計算値457.1950。
【００６５】
実施例12.  3−[2−(メチルスルホニル)エチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (13)
【化２２】
2009508946.tif 000024
3−[2−(メチルスルフィニル)エチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (12) (60mg、0.13mmol)のCH2Cl2中撹拌溶液に０℃にてMCPBA(70−75％、36mg、0.16mol)を加えた。冷却浴を外し、反応液を２時間撹拌し、次いでチオ硫酸ナトリウム(1.2当量)及びH2O(１mL)を加え、そして懸濁液を全ての固体が溶解するまで撹拌した。次いで1N NaOH(１mL)水溶液及びCH2Cl2(２mL)を加え、層を一緒に振盪し、分離し、有機物をNa2SO4で乾燥し、ろ過し、そして減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー(５−20％ EtOAc／CH2Cl2)により精製して所望の生成物(40mg、収率65％)を固体として得た。1H NMR (300 MHz、CDCl3、52℃)δ 8.12 (d、J＝8.2 Hz、1H)、7.78−7.65 (m、2H)、7.56−7.26 (m、11H)、6.31 (d、J＝7.7 Hz、1H)、5.23 (q、J＝7.6 Hz、1H)、3.36−2.88 (m、4H)、2.45−2.34 (m、3H)、2.16−1.88 (m、2H)、1.04 (t、J＝7.4 Hz、3H); HRMS m/z 473.1878、計算値473.1899. 
【００６６】
実施例13. 3−[(イソプロピルチオ)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド
【化２３】
2009508946.tif 000025
この化合物を、ナトリウム2−プロパンチオレートをナトリウムチオメトキシドの代わりに使用したこと以外は3−[(メチルチオ)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (9、スキーム３)と同様にして製造した。(過剰のナトリウム2−プロパンチオレートを加え、そして反応液を65℃で１時間加熱して変換を達成した)1H NMR (300 MHz、CDCl3、52℃)δ 8.09 (d、J＝8.4 Hz、1H)、7.78 (d、J＝8.5 Hz、1H)、7.71−7.61 (m、3H)、7.54−7.25 (m、9H)、6.69 (d、J＝7.7 Hz、1H)、5.28 (q、J＝7.5 Hz、1H)、3.91−3.72 (m、2H)、2.61−2.48 (m、1H)、2.20−1.90 (m、2H)、1.08−0.91 (m、9H); HRMS m/z 455.2127、計算値455.2157。
【００６７】
実施例14. 2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]−3−[(ピリジン−4−イルチオ)メチル]キノリン−4−カルボキシアミド
【化２４】
2009508946.tif 000026
3−(ブロモメチル)−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (8) (150mg、0.33mmol)をCH3CN(２mL)にN2下で溶解し、そしれこれに撹拌しながらK2CO3 (140mg、0.99mmol)を加え、次いで4−メルカプトピリジン(40mg、0.36mmol)を加えた。懸濁液を終夜撹拌し；濃縮し；EtOAcで希釈し；0.5N NaOH、次いでH2Oで洗浄し；Na2SO4で乾燥し；ろ過し、そして減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルクロマトグラフィー(EtOAc／CH2Cl2)により精製して所望の生成物を油状物(120mg、収率74％)として得た。1H NMR (300 MHz、CDCl3、52℃)δ 8.30 (s、2H)、8.14 (d、J＝8.4 Hz、1H)、7.80 (d、J＝7.2 Hz、1H)、7.76−7.69 (m、1H)、7.62−7.49 (m、3H)、7.43−7.37 (m、3H)、7.35−7.28 (m、2H)、7.25−7.19 (m、3H)、6.80 (d、J＝4.4 Hz、2H)、6.37 (d、J＝7.9 Hz、1H)、5.21 (q、J＝7.6 Hz、1H)、4.36−4.23 (m、2H)、2.08−1.82 (m、2H)、0.95 (t、J＝7.4 Hz、3H); HRMS m/z 490.1931、計算値490.1953。
【００６８】
実施例15.  3−[(イソプロピルスルフィニル)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド
【化２５】
2009508946.tif 000027
この化合物[２つのジアステレオマー]を、3−[(イソプロピルチオ)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド(実施例13)を3−[(メチルチオ)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (1)の代わりに使用したこと以外は3−[(メチルスルフィニル)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (2、スキーム１)と同様にして製造した。1H NMR (300 MHz、CDCl3)δ 8.90−8.68 (m、1H)、8.16−8.03 (m、2H)、7.80−7.27 (m、12H)、5.35−5.12 (m、1H)、4.30−3.67 (m、2H)、2.86−1.83 (m、3H)、1.19−0.55 (m、9H); HRMS m/z 471.2077、計算値471.2106。
【００６９】
実施例16.  2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]−3−[(ピリジン−4−イルスルフィニル)メチル]キノリン−4−カルボキシアミド
【化２６】
2009508946.tif 000028
この化合物[２つのジアステレオマー、TFA塩]を、2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]−3−[(ピリジン−4−イルチオ)メチル]キノリン−4−カルボキシアミド (実施例14)を3−[(メチルチオ)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (1)の代わりに使用したこと以外は3−[(メチルスルフィニル)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド (2)と同様にして製造した。(過剰のNaIO4を加え、そして反応液を加熱して変換を達成した。生成物は逆相HPLCを使用して精製した)1H NMR (300 MHz、CDCl3、52℃)δ8.81−8.43 (m、2H)、8.23−8.12 (m、2H)、8.08−7.90 (m、1H)、7.86−7.73 (m、2H)、7.71−7.26 (m、12H)、7.11−7.03 (m、1H)、6.69−6.61 (m、1H)、5.32−5.15 (m、1H)、4.50−4.11 (m、2H)、2.21−1.94 (m、2H)、1.08−0.95 (m、3H); LCMS: m/z 506 (MH+)。
【００７０】
実施例17. 3−[(イソプロピルスルホニル)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド
【化２７】
2009508946.tif 000029
この化合物を3−[(イソプロピルチオ)メチル]−2−フェニル−N−[(1S)−1−フェニルプロピル]キノリン−4−カルボキシアミド(実施例13)の製造における二次生成物として単離した。1H NMR (300 MHz、CDCl3、52℃)δ 8.11 (d、J＝8.4 Hz、1H)、7.88−7.25 (m、14H)、5.28−5.15 (m、1H)、4.76−4.51 (m、2H)、2.61−2.43 (m、1H)、2.21−1.88 (m、2H)、1.09−0.86 (m、9H); HRMS m/z 487.2008、計算値487.2055。
【００７１】
表１における例示の化合物及び方法は、理解の明確さのために説明及び例として本発明を記載する。しかしながら、当業者にとって、本発明の化合物、プロセス及び方法の教示を考慮すれば、本発明の精神又は範囲から逸脱することなくそれらに対して改変及び変更がなされ得ることは明らかだろう。
【００７２】
【表１】
2009508946.tif 000030
【００７３】
【表２】
2009508946.tif 000031
【００７４】
【表３】
2009508946.tif 000032
【００７５】
【表４】
2009508946.tif 000033
【００７６】
【表５】
2009508946.tif 000034
【００７７】
【表６】
2009508946.tif 000035
【００７８】
【表７】
2009508946.tif 000036
【００７９】
【表８】
2009508946.tif 000037
【００８０】
【表９】
2009508946.tif 000038
【００８１】
【表１０】
2009508946.tif 000039
【００８２】
【表１１】
2009508946.tif 000040
【００８３】
【表１２】
2009508946.tif 000041
【００８４】
【表１３】
2009508946.tif 000042
【００８５】
【表１４】
2009508946.tif 000043
【００８６】
【表１５】
2009508946.tif 000044
【００８７】
【表１６】
2009508946.tif 000045
【００８８】
実施例88. N−[(1S)−2−シアノ−1−フェニルエチル]−3−[(メチルスルホニル)メチル]−2−フェニルキノリン−4−カルボキシアミド (5)
【化２８】
2009508946.tif 000046
【００８９】
実施例88の化合物を以下のスキームに従って製造した:
【化２９】
2009508946.tif 000047
【００９０】
(a) 3−(ブロモメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボン酸
【化３０】
2009508946.tif 000048
3−メチル−2−フェニルキノリン−4−カルボン酸(1.5ｇ、5.7mmol)及びN−ブロモコハク酸イミド(1.52ｇ、8.5mmol)の四塩化炭素(25mL)溶液に、過酸化ベンゾイル(約10mg)を加え、そして長波長紫外線ランプ(Blak−ray model B100−AP、Upland、CA)を使用して照射しながら加熱還流した。４時間後、N−ブロモコハク酸イミド(750mg、4.2mmol)及び過酸化ベンゾイル(約10mg)の追加分を加えた。さらに２時間後、冷却した混合物を水で希釈した。チオ硫酸ナトリウム(１ｇ)を加え、次いで希HCl及びNaOHを加えることによりpHを約4.0に調節した。この混合物をさらに酢酸エチルで希釈し、抽出し、そして乾燥して(MgSO4)、生成物を淡褐色粉末として得た(1.62ｇ、6.2mmol)。1H NMR (300 MHz、DMSO)δ 8.09 (d、J＝8.4 Hz、1H)、7.96−7.86 (m、2H)、7.76 (d、J＝8.2 Hz、1H)、7.68−7.64 (m、2H)、7.61−7.55 (m、3H)、4.75 (s、2H).  LRMS m/z 342.0。
【００９１】
(b) 3−[(メチルスルファニル)メチル]−2−フェニルキノリン−4−カルボン酸
【化３１】
2009508946.tif 000049
3−(ブロモメチル)−2−フェニルキノリン−4−カルボン酸(650mg、1.9mmol)のテトラヒドロフラン(40mL)溶液に、ナトリウムメタンチオレート(400mg、5.7mmol)を加えた。この混合物を終夜撹拌し、濃縮し、pH４緩衝液(40mL)及び酢酸エチル(40mL)で希釈し、そして抽出した。有機相を乾燥し(MgSO4)、そして濃縮して所望の生成物を褐色油状物として得、これを精製することなく使用した。
【００９２】
(c). 3−[(メタンスルホニル)メチル]−2−フェニルキノリン−4−カルボン酸
【化３２】
2009508946.tif 000050
3−[(メチルスルファニル)メチル]−2−フェニルキノリン−4−カルボン酸(450mg、1.5mmol)のTHF(２mL)溶液をNaIO4(400mg、1.9mmol)の溶液に０℃で加えた。この混合物を室温まで昇温させながら２時間撹拌して、スルホキシドとスルホンの混合物を得た。この混合物を濃縮し、そして分取逆相HPLCにより精製し、次いで凍結乾燥して所望の生成物を白色粉末として得た(135mg、0.40mmol)。1H NMR (300.132 MHz、DMSO)δ 8.12−8.09 (m、2H)、7.90 (t、J＝7.2 Hz、1H)、7.76 (t、J＝7.4 Hz、1H)、7.63−7.53 (m、5H)、4.89 (s、2H)、2.73 (s、3H); LRMS m/z 342.1
【００９３】
(d)  表題化合物を製造するために、3−メタンスルホニルメチル−2−フェニルキノリン−4−カルボン酸(100mg、0.32mmol)の塩化メチレン(５mL)溶液に塩化オキサリル(28μL、0.32mmol)及びジメチルホルムアミド(約１μL)を加えた。３時間撹拌した後、反応混合物を濃縮し、そして塩化メチレン(５mL)に再溶解した。トリエチルアミン(135μL、0.97mmol)及び(S)−3−アミノ−3−フェニル−プロピオニトリル(1a)を加えた。４時間撹拌した後、混合物を濃縮し、そして0.1％トリフルオロ酢酸を含む水及びアセトニトリルのグラジエント溶出を使用する分取逆相クロマトグラフィーにより精製した。凍結乾燥後に、所望の生成物をトリフルオロ酢酸塩として得た(８mg、0.017mmol)。1H NMR (300 MHz、DMSO)δ 9.76 (d、J＝8.0 Hz、1H)、8.08 (d、J＝8.2 Hz、1H)、7.86 (s、1H)、7.56−7.40 (m、11H)、5.60 (s、1H)、4.96−4.60 (m、2H)、3.19 (s、2H)、3.19 (s、3H). HRMS m/z 470.1507、C27H23N3O3Sについての計算値 470.1538。
【００９４】
生物学的試験
NK−3受容体結合活性:
一般に、NK−3r結合活性は、Krause et al.(Proc. Natl. Acad. Sci. USA 94: 310−315、1997)に記載されるように行われるアッセイを使用して評価し得る。NK−3r相補DNAを、標準的手順を使用してヒト視床下部RNAからクローン化する。受容体cDNAを、チャイニーズハムスター卵巣細胞株にトランスフェクトされた適切な発現ベクターに挿入し、そして安定に発現しているクローン細胞株を単離し、特徴付けし、そして実験に使用し得る。
当業者に公知の技術により組織培養培地で細胞を培養し、そして低速遠心分離により回収し得る。細胞ペレットをホモジナイズし、全細胞膜を高速遠心分離により単離し、そして緩衝化生理食塩水に懸濁し得る。一般に、受容体結合アッセイは、適切な量の精製した膜調製物を125I−メチルPhe7−ニューロキニンＢと共に、試験化合物の存在下又は不在下でインキュベートすることにより行われ得る。膜タンパク質を急速ろ過により採取し得、そして放射活性をβ−プレートシンチレーションカウンターで定量し得る。適切なコントロールの使用により特異的結合から非特異的結合を消去し得、発現した受容体に対する化合物の親和性は、異なる濃度の化合物を使用することにより決定し得る。
【００９５】
クローン化したNK−3受容体でトランスフェクトされたCHO細胞からの膜の調製:
ヒトNK−3受容体遺伝子を、他のヒトNK受容体について記載された方法(Aharony et al.、Mol. Pharmacol. 45:9−19、1994; Caccese et al.、Neuropeptides 33、239−243、1999)と類似の方法を使用してクローン化した。クローン化したNK−3受容体のDNA配列は、公開されている配列(Buell et al.、FEBS Letts. 299,90−95、1992; Huang et al.、Biochem. Biophys. Res. Commun. 184,966−972、1992)と異なり、コード配列のヌクレオチド1320にサイレントな単一T＞C塩基変化を有する。この変化はサイレントなので、クローン化遺伝子は、公開されている配列と同一のコード化NK−3受容体タンパク質についての一次アミノ酸配列を生じる。受容体 cDNAを使用して、標準的方法を使用してCHO−K1細胞をトランスフェクトし、受容体を安定に発現しているクローンを単離し、そして特徴付けした。これらの細胞からの原形質膜を公開されているように調製した(Aharony et al.、1994)。
細胞を採取し、そして遠心分離して培地を除去した。細胞ペレットを、50mM Tris−HCl(pH 7.4)、120mM NaCl、５mM KCl、10mM EDTA及びプロテアーゼ阻害剤(0.1mg／ml ダイズトリプシン阻害剤、及び１mMヨードアセトアミド)からなる緩衝液中でホモジナイズした(Brinkman Polytron、氷上で３回の15秒バースト（bursts）)。ホモジネートを1000xgで10分間４℃にて遠心分離して細胞残屑を除去した。ペレットをホモジナイズ緩衝液で１回洗浄した。上清を合わせ、40,000xgで20分間４℃にて遠心分離した。膜含有ペレットを前と同じようにPolytronを用いてホモジナイズした。懸濁液を40,000xgで20分間４℃にて遠心分離し、ペレットを緩衝液(20mM HEPES、pH7.4、３mM MgCl2、30mM KCl、及び100μM thiorphanを含有)に懸濁させ、そしてタンパク質濃度を決定した。次いで膜懸濁液を、0.02％ BSAを含有する緩衝液で３mg／mlに希釈し、そして急速冷凍した。サンプルを、使用するまで−80℃で保存した。
【００９６】
NK−3受容体結合活性についてのアッセイ:
[125I]−MePhe7−NKBを用いる受容体結合アッセイ法を、Aharony et al.、J. Pharmacol. Exper. Ther.、274:1216−1221、1995により記載される方法から変更した。
競合実験を、膜(２μg タンパク質／反応)、試験された競合物（competitors）及び[125I]−MePhe7NKB(0.2nM)を含有する0.2mLアッセイ緩衝液(50 mM Tris−HCl、４mM MnCl2、10μM thiorhan、pH 7.4)で行った。標識していない相同リガンド(0.5μM)を使用して、非特異的結合を規定した。インキュベーションを25℃で90分間行った。受容体結合リガンドをPackard Harvesterで真空ろ過により、0.5％ BSAに予め浸したGF／Cプレート上に単離した。プレートを0.02 M Tris、pH 7.4で洗浄した。平衡結合定数(KD及びKi)、受容体密度(Bmax)、及び統計分析の計算を、GraphPad Prism又はIDBS XLfitソフトウェアを使用して以前に公開された(Aharony et al.、1995)ように行った。
【００９７】
NK−3機能的活性:
一般に、NK−3機能的活性は、安定なNK−3r発現細胞株においてカルシウム動員アッセイを使用することにより評価され得る。メチルPhe7−ニューロキニンＢアゴニストにより誘発されたカルシウム動員は、FLIPR(Molecular Devices)機器を使用して製造者により記載される方法でモニタリングされ得る。アゴニストを細胞に加え、そして蛍光応答を５分まで連続して記録し得る。アンタゴニストの作用は、メチルPhe7−ニューロキニンＢアゴニストの投与の前に細胞をプレインキュベートすることにより評価し得る。アゴニストの作用は、このような系におけるそれら固有の活性を観察することにより評価し得る。
【００９８】
NK−3機能的活性についてのアッセイ:
NK−3受容体を発現しているCHO細胞を、成長培地(Ham's F12培地、10％ FBS、２mM L−グルタミン、及び50mg／mL ハイグロマイシンＢ)中で維持した。アッセイの１日前に細胞を384−ウェルプレートに２mM L−グルタミンを含むUltraculture培地(Cambrex Bio Science)中に分配して、70−90％のコンフルエンシーに到達させた。NK−3受容体誘発カルシウム動員を定量するために、細胞を最初にハンクス平衡塩溶液、15mM HEPES、及び2.5mM プロベネシド、pH7.4からなるアッセイ緩衝液で洗浄した。次いで細胞にアッセイ緩衝液中のFluo4／AM色素(4.4μM)を取り込ませた。細胞を１時間インキュベートし、次いでアッセイ緩衝液で洗浄し、0.02−300nMのセンクチドに暴露し、そして蛍光応答をFLIPR機器(Molecular Devices Corporation)を使用して記録した。アゴニスト応答のアンタゴニズムを定量するために、細胞を様々な濃度の試験化合物と共に２−20分間プレイインキュベートし、次いで２nMのセンクチド（単独で約70％最大カルシウム応答を惹起する濃度）に暴露した。得られたデータをXLfitソフトウェア(IDBS製造者)を使用して解析し、EC50値及びIC50値を決定した。
【国際調査報告】
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