(57)【要約】  二本鎖の短鎖干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）を、それらの遺伝子サイレンシング効果に大きな影響を及ぼさずにそれらの免疫刺激作用を減少または排除するよう修飾する。修飾型ｓｉＲＮＡは、一つまたはそれ以上の２’糖修飾、および場合によりセンス鎖にヌクレオチド間結合を含む。修飾型ｓｉＲＮＡを含む組成物および修飾型ｓｉＲＮＡの製作・使用方法も開示する。新規なおよび前もって特徴付けられたｓｉＲＮＡは、合成により本発明の修飾を組み込むことができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
センス鎖およびアンチセンス鎖を有し、各鎖が５’末端および３’末端を有し、アンチセンス鎖が標的配列に相補的であり、センス鎖がロックト核酸（ＬＮＡ）または２’−Ｏ−メチルヌクレオチドではない２’修飾を有する糖を有する少なくとも一つの修飾型ヌクレオチドを含む、二本鎖短鎖干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）を含む組成物。
【請求項２】
センス鎖が、２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを一つのみ含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
センス鎖が、２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを複数含み、２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドの各々は、それ以外のものから独立して選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
２’修飾が、２’−Ｏ−アルキル、２’−Ｏ−アルケニル、および２’−Ｏ−アルキニルからなる群より選択されるが、２’−Ｏ−アルキルは２’−Ｏ−メチルを含まない、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
２’修飾が、２’−メトキシエチル、２’−Ｏ−アリル、２’−プロピニル、２’−アミノプロパルギル、２’−Ｏ−（３−アミノプロピル）、２’−Ｏ−プロピル、および２’−Ｏ−ブチルからなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
２’修飾が、２’−デオキシ、２’−フルオロ、および２’−アミノからなる群より選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
２’修飾が２'−フルオロである、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
２’修飾が、２’−Ｏ−アルケニル、２’−Ｏ−アルキニル、２’−メトキシエチル、２’−アミノプロパルギル、２’−Ｏ−（３−アミノプロピル）、および２’−アミノから選択される、請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
２’修飾を有する糖を有する少なくとも一つの修飾型ヌクレオチドがセンス鎖の５’末端に存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
２’修飾を有する糖を有する少なくとも一つの修飾型ヌクレオチドがセンス鎖の３’末端に存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
２’修飾を有する糖を有する少なくとも一つの修飾型ヌクレオチドがセンス鎖の５’末端および３’末端より内側に存在する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１２】
センス鎖が、センス鎖の５’末端に、２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを少なくとも一つ含み、かつセンス鎖の３’末端に、２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを少なくとも一つ含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
センス鎖がホスホジエステルバックボーンを有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
センス鎖が、少なくとも一つの安定化型ヌクレオチド間結合を含む安定化型バックボーンを有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１５】
センス鎖が、チオホルムアセタール、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、ボラノホスホネート、およびホルムアセテートからなる群より選択される少なくとも一つの安定化型ヌクレオチド間結合を含む安定化型バックボーンを有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
センス鎖およびアンチセンス鎖を有し、各鎖が５’末端および３’末端を有し、アンチセンス鎖が標的配列に相補的である、二本鎖短鎖干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）の免疫刺激能を減少させる方法であって、ｓｉＲＮＡのセンス鎖に、ロックト核酸（ＬＮＡ）または２’−Ｏ−メチルヌクレオチドではない２’修飾を有する糖を有する少なくとも一つの修飾型ヌクレオチドを導入することからなる上記方法。
【請求項１７】
２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを一つのみ導入することからなる、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを複数導入することからなり、２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドの各々がそれ以外のものから独立して選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
２’修飾が、２’−Ｏ−アルキル、２’−Ｏ−アルケニル、および２’−Ｏ−アルキニルからなる群より選択されるが、２’−Ｏ−アルキルは２’−Ｏ−メチルを含まない、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
２’修飾が、２’−メトキシエチル、２’−Ｏ−アリル、２’−プロピニル、２’−アミノプロパルギル、２’−Ｏ−（３−アミノプロピル）、２’−Ｏ−プロピル、および２’−Ｏ−ブチルからなる群より選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
２’修飾が、２’−デオキシ、２’−フルオロ、および２’−アミノからなる群より選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２２】
２’修飾が２'−フルオロである、請求項１６に記載の方法。
【請求項２３】
２’修飾が、２’−Ｏ−アルケニル、２’−Ｏ−アルキニル、２’−メトキシエチル、２’−アミノプロパルギル、２’−Ｏ−（３−アミノプロピル）、および２’−アミノから選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項２４】
導入がセンス鎖の５’末端において行われる、請求項１６に記載の方法。
【請求項２５】
導入がセンス鎖の３’末端において行われる、請求項１６に記載の方法。
【請求項２６】
導入がセンス鎖の５’末端および３’末端により内側において行われる、請求項１６に記載の方法。
【請求項２７】
導入がセンス鎖の５’末端およびセンス鎖の３’末端において行われる、請求項１６に記載の方法。
【請求項２８】
センス鎖がホスホジエステルバックボーンを有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項２９】
センス鎖が、少なくとも一つの安定化型ヌクレオチド間結合を含む安定化型バックボーンを有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項３０】
センス鎖が、チオホルムアセタール、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、ボラノホスホネート、およびホルムアセテートからなる群より選択される少なくとも一つの安定化型ヌクレオチド間結合を含む安定化型バックボーンを有する、請求項１６に記載の方法。
【請求項３１】
標的配列を有する遺伝子の発現を減少させるために、センス鎖およびアンチセンス鎖を有し、各鎖が５’末端および３’末端を有し、アンチセンス鎖が標的配列に相補的であり、センス鎖がロックト核酸（ＬＮＡ）または２’−Ｏ−メチルヌクレオチドではない２’修飾を有する糖を有する少なくとも一つの修飾型ヌクレオチドを含む、有効量の二本鎖短鎖干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）を、標的配列を有する遺伝子を含む細胞と接触させることを含む、標的配列を有する遺伝子の発現を減少させる方法。
【請求項３２】
センス鎖が２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを一つのみ含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
センス鎖が２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを複数含み、２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドの各々がそれ以外のものから独立して選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
２’修飾が、２’−Ｏ−アルキル、２’−Ｏ−アルケニル、および２’−Ｏ−アルキニルからなる群より選択されるが、２’−Ｏ−アルキルは２’−Ｏ−メチルを含まない、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
２’修飾が、２’−メトキシエチル、２’−Ｏ−アリル、２’−プロピニル、２’−アミノプロパルギル、２’−Ｏ−（３−アミノプロピル）、２’−Ｏ−プロピル、および２’−Ｏ−ブチルからなる群より選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
２’修飾が、２’−デオキシ、２’−フルオロ、および２’−アミノからなる群より選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３７】
２’修飾が２'−フルオロである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３８】
２’修飾が、２’−Ｏ−アルケニル、２’−Ｏ−アルキニル、２’−メトキシエチル、２’−アミノプロパルギル、２’−Ｏ−（３−アミノプロピル）、および２’−アミノから選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３９】
２’修飾を有する糖を有する少なくとも一つの修飾型ヌクレオチドがセンス鎖の５’末端に存在する、請求項３１に記載の方法。
【請求項４０】
２’修飾を有する糖を有する少なくとも一つの修飾型ヌクレオチドがセンス鎖の３’末端に存在する、請求項３１に記載の方法。
【請求項４１】
２’修飾を有する糖を有する少なくとも一つの修飾型ヌクレオチドがセンス鎖の５’末端および３’末端より内側に存在する、請求項３１に記載の方法。
【請求項４２】
センス鎖が、センス鎖の５’末端に、２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを少なくとも一つ含み、かつセンス鎖の３’末端に、２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを少なくとも一つ含む、請求項３１に記載の方法。
【請求項４３】
センス鎖がホスホジエステルバックボーンを有する、請求項３１に記載の方法。
【請求項４４】
センス鎖が、少なくとも一つの安定化型ヌクレオチド間結合を含む安定化型バックボーンを有する、請求項３１に記載の方法。
【請求項４５】
センス鎖が、チオホルムアセタール、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、ボラノホスホネート、およびホルムアセテートからなる群より選択される少なくとも一つの安定化型ヌクレオチド間結合を含む安定化型バックボーンを有する、請求項３１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【背景技術】
【０００１】
リボ核酸（ＲＮＡ）は、その新たに認識された治療剤としての可能性から、近年大きな注目を集めている。例えば、近年、一般的には約２１〜２３ヌクレオチド長の特定配列に特異的な二本鎖ＲＮＡが、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）または転写後遺伝子サイレンシングと呼ばれるプロセスにおいて選択的な様式で遺伝子の発現を抑制するのに使用できることが報告された。このタイプのＲＮＡ干渉に使用する二本鎖ＲＮＡには、特に、いわゆる短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）が含まれる。Ｈａｎｎｏｎ  ＧＪ（２００２）Ｎａｔｕｒｅ  ４１８：２４４−５１。逆に、配列非特異的な二本鎖ＲＮＡは、Ｔｏｌｌ様受容体３（ＴＬＲ３）を介して作用する、免疫刺激作用を誘発する可能性があることも近年報告されている。Ａｌｅｘｏｐｏｕｌｏｕ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｎａｔｕｒｅ  ４１３：７３２−８。さらに、一般的にはグアノシン（Ｇ）およびウリジン（Ｕ）を含み、特に特定の配列モチーフを含む特定の一本鎖ＲＮＡもまた免疫刺激性であることも近年報告されている。Ｌｉｐｆｏｒｄ  ｅｔ  ａｌ．ＵＳ  ２００３／０２３２０７４  Ａ１。
【０００２】
ｓｉＲＮＡの臨床適用に向けた開発努力の中で、少なくとも一部のｓｉＲＮＡもまた免疫刺激性であることが近年明らかになってきた。一部の例においては、遺伝子サイレンシングおよび免疫刺激の両方を有することが望ましい場合がある。しかし、他の状況では、そうではなく、遺伝子サイレンシングを有するが免疫刺激を伴わないことが望ましい。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
本発明は、センス鎖内の特定のヌクレオチド修飾により特徴付けられ、得られる修飾型ｓｉＲＮＡは対応する非修飾型ｓｉＲＮＡよりも免疫刺激性が低い、ｓｉＲＮＡに関する組成物および方法を提供する。センス鎖内の修飾は、そのｓｉＲＮＡが標的遺伝子を抑制する能力にほとんどまたは全く影響を与えない。
【０００４】
一つの局面において、本発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を有し、各鎖が５’末端および３’末端を有し、アンチセンス鎖が標的配列に相補的であり、センス鎖がロックト核酸（ｌｏｃｋｅｄ  ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄ：ＬＮＡ）または２’−Ｏ−メチルヌクレオチドではない２’修飾を有する糖を有する少なくとも一つの修飾型ヌクレオチドを含む、二本鎖短鎖干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）を含む組成物である。
【０００５】
一つの局面において、本発明は、センス鎖およびアンチセンス鎖を有し、各鎖が５’末端および３’末端を有し、アンチセンス鎖が標的配列に相補的である、二本鎖短鎖干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）の免疫刺激能を減少させる方法である。この方法は、ｓｉＲＮＡのセンス鎖に、ロックト核酸（ＬＮＡ）または２’−Ｏ−メチルヌクレオチドではない２’修飾を有する糖を有する少なくとも一つの修飾型ヌクレオチドを導入する工程を含む。
【０００６】
一つの局面において、本発明は、標的配列を有する遺伝子の発現を減少させる方法である。この局面に従う方法は、標的配列を有する遺伝子の発現を減少させるために、センス鎖およびアンチセンス鎖を有し、各鎖が５’末端および３’末端を有し、アンチセンス鎖が標的配列に相補的であり、センス鎖がロックト核酸（ＬＮＡ）または２’−Ｏ−メチルヌクレオチドではない２’修飾を有する糖を有する少なくとも一つの修飾型ヌクレオチドを含む、有効量の二本鎖短鎖干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）を、標的配列を有する遺伝子を含む細胞と接触させる工程を含む。
【０００７】
一つの実施態様において、２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを含むセンス鎖は、２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを一つのみ含むセンス鎖である。
【０００８】
一つの実施態様において、２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを含むセンス鎖は、２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを複数含むセンス鎖であり、２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドの各々は、それ以外のものから独立して選択される。
【０００９】
一つの実施態様において、２’修飾は、２’−Ｏ−アルキル、２’−Ｏ−アルケニル、および２’−Ｏ−アルキニルからなる群より選択されるが、２’−Ｏ−アルキルは２’−Ｏ−メチルを含まない。
【００１０】
一つの実施態様において、２’修飾は、２’−メトキシエチル、２’−Ｏ−アリル、２’−プロピニル、２’−アミノプロパルギル、２’−Ｏ−（３−アミノプロピル）、２’−Ｏ−プロピル、および２’−Ｏ−ブチルからなる群より選択される。
【００１１】
一つの実施態様において、２’修飾は、２’−デオキシ、２’−フルオロ、および２’−アミノからなる群より選択される。
【００１２】
一つの実施態様において、２’修飾は２'−フルオロである。
【００１３】
一つの実施態様において、２’修飾は、２’−Ｏ−アルケニル、２’−Ｏ−アルキニル、２’−メトキシエチル、２’−アミノプロパルギル、２’−Ｏ−（３−アミノプロピル）、および２’−アミノから選択される。
【００１４】
一つの実施態様において、２’修飾を有する糖を有する少なくとも一つの修飾型ヌクレオチドは、センス鎖の５’末端に存在する。一つの実施態様において、２’修飾を有する糖を有する少なくとも一つの修飾型ヌクレオチドは、いずれのオーバーハングを除く、センス鎖の５’末端に存在する。
【００１５】
一つの実施態様において、２’修飾を有する糖を有する少なくとも一つの修飾型ヌクレオチドは、センス鎖の３’末端に存在する。一つの実施態様において、２’修飾を有する糖を有する少なくとも一つの修飾型ヌクレオチドは、いずれのオーバーハングを除く、センス鎖の３’末端に存在する。
【００１６】
一つの実施態様において、２’修飾を有する糖を有する少なくとも一つの修飾型ヌクレオチドは、センス鎖の５’末端および３’末端より内側に存在する。一つの実施態様において、２’修飾を有する糖を有する少なくとも一つの修飾型ヌクレオチドは、いずれのオーバーハングを除く、センス鎖の５’末端および３’末端より内側に存在する。
【００１７】
一つの実施態様において、センス鎖は、センス鎖の５’末端に、２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを少なくとも一つ含み、かつセンス鎖の３’末端に、２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを少なくとも一つ含む。一つの実施態様において、センス鎖は、いずれのオーバーハングを除く、センス鎖の５’末端に、２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを少なくとも一つ含み、かつセンス鎖の３’末端に、２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを少なくとも一つ含む。
【００１８】
一つの実施態様において、センス鎖はホスホジエステルバックボーンを有する。
【００１９】
一つの実施態様において、センス鎖は、少なくとも一つの安定化型ヌクレオチド間結合を含む安定化型バックボーンを有する。
【００２０】
一つの実施態様において、センス鎖は、チオホルムアセタール、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、ボラノホスホネート、およびホルムアセテートからなる群より選択される少なくとも一つの安定化型ヌクレオチド間結合を含む安定化型バックボーンを有する。
【００２１】
添付図面において：
図１は、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）によるサイトカイン産生を示す４つのグラフ群である。ＤＯＴＡＰの存在中示された濃度の示された二本鎖ｓｉＲＮＡ（センス（ｓ）：アンチセンス（ａｓ））をヒトＰＢＭＣと共にインキュベートし、ＩＦＮ−アルファ（ｐｇ／ｍｌ；パネルＡおよびＣ）またはＩＬ−１２ｐ４０（ｐｇ／ｍｌ；パネルＢおよびＤ）の量を、２４時間後の上清において、ＥＬＩＳＡにより測定した。パネルＡおよびＢのＲＮＡ配列は以下の通りである：ＭＡＰＫ２  ｓ、配列番号１；ＭＡＰＫ２  ａｓ、配列番号２；ＭＡＰＫ２  Ｅｘｐ２７  ｓ、配列番号３；ＭＡＰＫ２  Ｅｘｐ２７  ａｓ、配列番号４；ＭＡＰＫ２  Ｅｘｐ３０  ｓ、配列番号３；ＭＡＰＫ２  Ｅｘｐ３０  ａｓ、配列番号：５。パネルＣおよびＤのＲＮＡ配列は以下の通りである：Ｌａｍｉｎ  ＡＣ  ｓ、配列番号：６；Ｌａｍｉｎ  ＡＣ  ａｓ、配列番号：７；Ｌａｍｉｎ  ＡＣ  Ｅｘｐ２７  ｓ、配列番号８；Ｌａｍｉｎ  ＡＣ  Ｅｘｐ２７  ａｓ、配列番号９；Ｌａｍｉｎ  ＡＣ  Ｅｘｐ３０  ｓ、配列番号８；Ｌａｍｉｎ  ＡＣ  Ｅｘｐ３０  ａｓ、配列番号１０。
図２は、ヒトＰＢＭＣによるサイトカイン産生を示す１２のグラフ群である。ＤＯＴＡＰの存在中示された濃度の示された種類のＲＮＡ（二本鎖ｓｉＲＮＡ（センス（ｓ）：アンチセンス（ａｓ））；センス鎖単独（ｓ）；およびアンチセンス単独（ａｓ））をヒトＰＢＭＣと共にインキュベートし、ＩＦＮ−アルファ（ｐｇ／ｍｌ；パネルＡおよびＣ）またはＩＬ−１２ｐ４０（ｐｇ／ｍｌ；パネルＢおよびＤ）の量を、２４時間後の上清において、ＥＬＩＳＡにより測定した。パネルＡおよびＢのＲＮＡ配列は以下の通りである：ＭＡＰＫ２  ｓ、配列番号１；ＭＡＰＫ２  ａｓ、配列番号２；ＭＡＰＫ２  Ｅｘｐ２７  ｓ、配列番号３；ＭＡＰＫ２  Ｅｘｐ２７  ａｓ、配列番号４；  ＭＡＰＫ２  Ｅｘｐ３０  ｓ、配列番号３；ＭＡＰＫ２  Ｅｘｐ３０  ａｓ、配列番号５。パネルＣおよびＤのＲＮＡ配列は以下の通りである：Ｌａｍｉｎ  ＡＣ  ｓ、配列番号６；Ｌａｍｉｎ  ＡＣ  ａｓ、配列番号７；Ｌａｍｉｎ  ＡＣ  Ｅｘｐ２７  ｓ、配列番号８；Ｌａｍｉｎ  ＡＣ  Ｅｘｐ２７  ａｓ、配列番号９；Ｌａｍｉｎ  ＡＣ  Ｅｘｐ３０  ｓ、配列番号８；Ｌａｍｉｎ  ＡＣ  Ｅｘｐ３０  ａｓ、配列番号１０。
【００２２】
短鎖干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）技術を含むＲＮＡ干渉は特定の遺伝子のダウンレギュレーションのための重要なツールとなっており、すでにｓｉＲＮＡ療法は開発段階にある。合成ｓｉＲＮＡは、一般的に、ホスホジエステルバックボーンを有する２１〜２３ヌクレオチド長の二本鎖オリゴヌクレオチドからなる。しかし、ｓｉＲＮＡの特定遺伝子標的化効果に加えて、近年、この技術の非特異的効果が記載されている。ｓｉＲＮＡは、特定のサイトカイン、例えばＩ型および／またはＩＩ型インターフェロンならびにＩＬ−１２、ＩＬ−６、および／またはＴＮＦ−アルファの産生のアップレギュレーションを含む、自然免疫系の非特異的活性化を誘導することが示された。これらの効果の原因は、ｓｉＲＮＡによるＴＬＲ７、ＴＬＲ８、および／またはＴＬＲ３等のＴｏｌｌ様受容体の活性化であると考えられる。
【００２３】
免疫系の活性化は多くの場合望ましい効果であるが、ＲＮＡサイレンシングとの関係では、免疫系の非特異的活性化は、ｓｉＲＮＡの実際の作用様式と干渉し、その処置結果を大きく変化させる可能性がある。
【００２４】
以下の記載する実施例において、驚くべきことに、特定位置の２’ヌクレオチド糖の特定の修飾により特徴付けられる一定のｓｉＲＮＡ構築物の免疫刺激の活性は、それらの遺伝子サイレンシング特性を有意に損なわずに低下した免疫刺激特性を有することが見出された。ＭＡＰＫ２（Ｅｒｋ２）およびＬａｍｉｎ  ＡＣ遺伝子の配列由来のｓｉＲＮＡ（表１）は、陽イオン性脂質であるＮ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウム（ＤＯＴＡＰ；図１）の存在下でヒトＰＢＭＣと共にインキュベートされた場合に有意なサイトカイン産生を誘導した。サイトカインの誘導は、このｓｉＲＮＡのアンチセンス鎖および／またはセンス鎖に存在する免疫刺激配列により誘導されるものと考えられる。
【００２５】
本発明に従い、センス鎖およびアンチセンス鎖内の化学修飾がｓｉＲＮＡの免疫刺激性を有意に抑制し得ることが発見された。センス鎖の５’末端および３’末端における２’糖修飾の導入（図１）ならびにアンチセンス鎖の３’末端におけるさらなる２’糖修飾の導入は、ｓｉＲＮＡのＩＬ−１２ｐ４０およびＴＮＦ−アルファ産生を完全に消滅させ、かつＩＦＮ−アルファ産生を有意に減少させた。
【００２６】
驚くべきことに、本発明に従い、導入された修飾は、センス鎖（ｓ、一本鎖ＲＮＡ）ならびにセンス鎖およびアンチセンス鎖を含む二本鎖ｓｉＲＮＡの免疫刺激の活性のみに影響し、アンチセンス鎖（ａｓ、一本鎖ＲＮＡ）には影響せずにその免疫刺激活性の大部分がその後も保持されることが発見された。従って、ｄｓＲＮＡまたはｓｉＲＮＡの刺激活性の抑制は、アンチセンス鎖ではなくセンス鎖の修飾によって実現できるようである。ｓｉＲＮＡのサイレンシング効果はアンチセンス鎖のみが担っていると考えられるので、これは重要なことであり、これによって、免疫刺激を制御するための化学修飾を、アンチセンス鎖に影響を与えず、従ってサイレンシング効果に影響を与えずにセンス鎖に導入できる。
【００２７】
驚くべきことに、本発明に従い、５’および３’の最末端にのみ導入され、特に潜在的な免疫刺激配列内には導入されていないＲＮＡセンス鎖の修飾が、それでもなお免疫刺激活性の強力または完全な抑制をもたらすことも発見された。
【００２８】
さらに、驚くべきことに、本発明に従い、免疫刺激の一本鎖において２’修飾が一つしかなくともその免疫応答に強く影響を及ぼすことが発見され、これにより、ｓｉＲＮＡまたはｄｓＲＮＡの免疫刺激の活性に影響を及ぼすのにセンス鎖における単一のそのような修飾で十分であり得ることが示された。
【００２９】
Ｈｏｒｎｕｎｇらによる最近の発表（Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  １１：２６３−７０，２００５）において、３’末端における免疫刺激モチーフのロックト核酸（ＬＮＡ）修飾がｓｉＲＮＡの免疫刺激特性を減少させることが報告された。Ｈｏｒｎｕｎｇらによる報告とは逆に、本発明によれば予想外にもこの修飾が免疫刺激モチーフ内である必要がないこと、および免疫刺激の活性を抑制するにはセンス鎖のみを非刺激とする修飾で十分であるということが発見された。
【００３０】
一つの局面において、本発明は概して特定の修飾を含む二本鎖ｓｉＲＮＡを含有する組成物および方法に関する。この特定の修飾は、修飾を含まない対応するｓｉＲＮＡと比較してｓｉＲＮＡの免疫刺激能を減少させる。本明細書中で使用する場合、ｓｉＲＮＡは、約２１〜２３ヌクレオチドの長さ、一本鎖のセンス（ｓ）鎖および標的ヌクレオチド配列に相補的なヌクレオチド配列を有する一本鎖のアンチセンス（ａｓ）鎖により特徴付けられる特定のタイプの単離された二本鎖リボ核酸（ＲＮＡ）分子であって、標的配列によりコードされるタンパク質を発現する細胞内に送達された場合に細胞内の標的ヌクレオチド配列（およびコードされるタンパク質）の量を減少させるＲＮＡ分子を意味する。
【００３１】
ｓｉＲＮＡのセンス鎖およびアンチセンス鎖は、相互に対して厳密にまたは少なくとも実質的に相補的なヌクレオチド配列を有し、従ってそれらはインビボまたはインビトロの適当な条件下で安定な二本鎖構造を形成できる。特定の実施態様において、いずれかの鎖の一方または両方の末端は、二本鎖構造における他方の鎖の対応する末端を超えて伸長され、それによってｓｉＲＮＡのいずれかまたは両方の末端に短いオーバーハング配列（一般的には１〜２ヌクレオチド長）を可能にする。
【００３２】
ｓｉＲＮＡは一般的には、ＲＮＡに共通の標準的な核酸塩基、例えばアデニン、シトシン、グアニン、およびウラシルであるがこれらに限定されない、を有するヌクレオチドサブユニットを含む。チミジンおよびヒポキサンチンを含むがこれらに限定されない他の核酸塩基もまた、いくつかの実施態様において存在し得る。
【００３３】
本明細書中でいずれかのＲＮＡ分子に関して使用する場合、免疫刺激能は、免疫応答を刺激、例えば免疫系の細胞を刺激して、増殖、分化、免疫細胞の活性化に関連する分泌産物の発現の増加、細胞表面マーカーもしくは免疫細胞の活性化に関連する共刺激分子の発現の増加、またはそれらの任意の組み合わせを活性化させるＲＮＡ分子の能力を意味する。免疫細胞の活性化に関連する分泌産物は当該分野でよく知られており、サイトカイン、ケモカイン、および抗体が含まれるがこれらに限定されない。
【００３４】
本発明の特徴の一つとして、本発明のｓｉＲＮＡのセンス鎖は、２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを含むが、但しその２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドはロックト核酸（ＬＮＡ）または２−Ｏ'−メチルヌクレオチドではない。センス鎖は２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを一つのみ含むこともあり、各々がそれ以外のものから独立して選択される、二つまたはそれ以上の２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを含むこともある。一つの実施態様において、センス鎖は、各々がそれ以外のものから独立して選択される、２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドのみを含む。より典型的には、センス鎖は、各々がそれ以外のものから独立して選択される、２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを１つ〜６つ含む。２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドが一つ以上存在する場合、２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドは、それらの数が許容する限り、隣接ヌクレオチドとして、非隣接ヌクレオチドとして、または隣接ヌクレオチドおよび非隣接ヌクレオチドの組み合わせとして存在し得る。
【００３５】
本明細書中で使用する場合、ヌクレオチドは、リン酸基および交換可能な有機塩基（例えば核酸塩基）に連結された糖（例えばリボースまたはデオキシリボース）を意味し、これらは置換型ピリミジン（例えばシトシン、チミジン、もしくはウラシル）または置換型プリン（例えばアデニンもしくはグアニン）のいずれかである。本明細書中で使用する場合、それらの核酸塩基としてシトシン、チミジン、ウラシル、アデニン、またはグアニンを有するヌクレオチドは、それぞれ、それらの一般に使われている一文字表記Ｃ、Ｔ、Ｕ、Ａ、またはＧにより表される。リボヌクレオチドには、標準的なＣ、Ｕ、Ａ、およびＧリボヌクレオチドが含まれるがこれらに限定されない。
【００３６】
本明細書中でいずれかの種類のＲＮＡに関して使用する場合、２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドは、その糖がリボヌクレオチドにとって非標準的な置換基を２’位に有するヌクレオチドを意味する。一つの実施態様において、２’修飾を有する糖は２’デオキシリボース糖であり、従って対応するヌクレオチドはデオキシリボヌクレオチドである。一つの実施態様において、２’修飾は、２’−Ｏ−アルキル、２’−Ｏ−アルケニル、および２’−Ｏ−アルキニルからなる群より選択されるが、ただし２’−Ｏ−アルキルは２’−Ｏ−メチルを含まない。一つの実施態様において、２’修飾は、２’−メトキシエチル、２’−Ｏ−アリル、２’−プロピニル、２’−アミノプロパルギル、２’−Ｏ−（３−アミノプロピル）、２’−Ｏ−プロピル、および２’−Ｏ−ブチルからなる群より選択される。一つの実施態様において、２’修飾は、２’−デオキシ、２’−フルオロ−２’−デオキシ（すなわち２’−フルオロ）、および２’−アミノ−２’−デオキシ（すなわち２’−アミノ）からなる群より選択される。一つの実施態様において、２’修飾は２’−フルオロである。一つの実施態様において、２’修飾は、２’−Ｏ−アルケニル、２’−Ｏ−アルキニル、２’−メトキシエチル、２’−アミノプロパルギル、２’−Ｏ−（３−アミノプロピル）、および２’−アミノから選択される。
【００３７】
本明細書中で使用する場合、ロックト核酸（ＬＮＡ）は、リボース環が２’酸素と４’炭素の間のメチレン結合により束縛されているＲＮＡ誘導体を意味する。Ｗａｈｌｅｓｔｅｄｔ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７：５６３３−８。
【００３８】
一般論を言うと、２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドは、センス鎖内のあらゆる位置に存在してよい。特に、一つの実施態様において、２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドは、センス鎖の５’末端に存在する。一つの実施態様において、２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドは、センス鎖の３’末端に存在する。一つの実施態様において、２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドは、センス鎖の５’末端およびセンス鎖の３’末端に存在する。２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドは、センス鎖の末端に存在する必要はなく、センス鎖の両末端の間、すなわちセンス鎖の５’末端および３’末端より内側に存在し得る。特定の実施態様において、２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドは、センス鎖の５’末端および３’末端の一方または両方、ならびにセンス鎖の５’末端および３’末端より内側にも存在する。
【００３９】
センス鎖、アンチセンス鎖、またはセンス鎖およびアンチセンス鎖の両方のヌクレオチド配列は、場合により免疫刺激配列またはモチーフを含み得る。一つの実施態様において、免疫刺激配列またはモチーフは５’−ＲＵＲＧＹ−３’［各Ｒは独立してプリンリボヌクレオチドを表し、Ｙはピリミジンリボヌクレオチドを表す］である。様々な実施態様において、５’−ＲＵＲＧＹ−３’には、具体的に、５’−ＧＵＧＧＵ−３’、５’−ＧＵＧＧＣ−３’、５’−ＧＵＡＧＵ−３’、５’−ＧＵＡＧＣ−３’、５’−ＡＵＧＧＵ−３’、５’−ＡＵＧＧＣ−３’、５’−ＡＵＡＧＵ−３’、および５’−ＡＵＡＧＣ−３’が含まれ得るがこれらに限定されない。一つの実施態様において、免疫刺激配列またはモチーフは５’−ＧＵＡＧＵＧＵ−３’である。一つの実施態様において、免疫刺激配列またはモチーフは５’−ＧＵＵＧＢ−３’［ＢはＵ、Ｇ、またはＣを表す］である。様々な実施態様において、５’−ＧＵＵＧＢ−３’には、具体的に、５’−ＧＵＵＧＵ−３’、５’−ＧＵＵＧＧ−３’、および５’−ＧＵＵＧＣ−３’が含まれる。一つの実施態様において、免疫刺激配列またはモチーフは５’−ＧＵＧＵＧ−３’である。一つの実施態様において、免疫刺激配列またはモチーフは５’−ＧＵＧＵＵＵＡＣ−３’である。一つの実施態様において、免疫刺激配列またはモチーフは５’−ＧＵＡＧＧＣＡＣ−３’である。一つの実施態様において、免疫刺激配列またはモチーフは５’−ＣＵＡＧＧＣＡＣ−３’である。一つの実施態様において、免疫刺激配列またはモチーフは５’−ＣＵＣＧＧＣＡＣ−３’である。
【００４０】
センス鎖が同定可能な免疫刺激配列またはモチーフを含む場合、２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドは、一つの実施態様において、その同定可能な免疫刺激配列またはモチーフ内に存在する。
【００４１】
あるいは、かつこれは重要なことであるが、センス鎖が同定可能な免疫刺激配列またはモチーフを含む場合、２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドは、一つの実施態様において、その同定可能な免疫刺激配列またはモチーフの外側に存在する。センス鎖が同定可能な免疫刺激配列またはモチーフを含み、かつ２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドがその同定可能な免疫刺激配列またはモチーフの外側に存在する場合、一つの実施態様において、２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドは、その同定可能な免疫刺激配列またはモチーフに直に隣接して存在する。一つの実施態様において、直に隣接するとは、免疫刺激配列またはモチーフの５’側に直に隣接するということである。一つの実施態様において、直に隣接するとは、免疫刺激配列またはモチーフの３’側に直に隣接するということである。センス鎖が同定可能な免疫刺激配列またはモチーフを含み、かつ２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドが同定可能な免疫刺激配列またはモチーフの外側に存在する他の実施態様において、２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドは、免疫刺激配列またはモチーフから少なくともヌクレオチド一つ隔てて存在する。様々な実施態様において、２'修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドと免疫刺激配列またはモチーフの間のヌクレオチド数は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、または１８個であり得る。
【００４２】
上記のような、２'修飾を有する糖を有する任意の修飾型ヌクレオチドを含む、センス鎖の任意のヌクレオチドは、場合により、リン酸基を含有する修飾を含み得る。一つの実施態様において、センス鎖はホスホジエステルバックボーンを有する、すなわちセンス鎖のヌクレオチドはホスホジエステル結合により隣のヌクレオチドと連結されている。このようなホスホジエステル結合およびホスホジエステルバックボーンは、天然に存在する核酸分子において典型的であり、それらはインビボでのヌクレアーゼ切断に対する感受性が比較的高い。
【００４３】
一つの実施態様において、センス鎖は安定型のバックボーンを有する。安定化型バックボーンは、ホスホジエステルバックボーンと比較してインビボまたはインビトロでのヌクレアーゼに対して比較的耐切断性があるバックボーンを生じる少なくとも一つの安定化型ヌクレオチド間結合を含む。一つの実施態様において、安定化型バックボーンは、安定化型ヌクレオチド間結合のみを含む。一つの実施態様において、安定化型ヌクレオチド間結合は、チオホルムアセタール、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、ボラノホスホネート、およびホルムアセテートからなる群より選択される。一つの実施態様において、安定化型ヌクレオチド間結合はホスホロチオエート結合である。
【００４４】
本発明のｓｉＲＮＡは、例えばホスホルアミデート化学またはＨ−ホスホネート化学のいずれかを用いた全自動技術およびデバイスを用いて合成できる。他の核酸バックボーンの修飾および置換を作製する方法は記載されており、それらは本発明における使用が意図されている。Ｕｈｌｍａｎｎ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｃｈｅｍ  Ｒｅｖ  ９０：５４４；Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ  Ｊ（１９９０）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ  １：１６５。
【００４５】
センス鎖およびアンチセンス鎖は別々に合成できる。あるいは、センス鎖およびアンチセンス鎖は一つの構築物として合成し、その後に切り抜きまたはそれ以外では介在するもしくは無関係のヌクレオチドもしくは連結部分を除去する処理をすることができる。どのように合成されたものであっても、所望のｓｉＲＮＡまたはその成分であるセンス鎖およびアンチセンス鎖は、使用前に無関係の合成試薬から単離されるのが好ましく、場合により精製される。
【００４６】
本発明の組成物は、ｓｉＲＮＡの使用が求められるあらゆる状況で有用であると考えられる。従って標的配列は、あらゆる適当な標的配列であり得る。ｓｉＲＮＡの使用が求められる臨床的な状況には、がんを有する対象の処置、感染疾患を有する対象の処置、自己免疫疾患を有する対象の処置、移植片拒絶を有する対象の処置、およびアレルギーまたは喘息を有する対象の処置が含まれるがこれらに限定されない。当業者は、適当な標的配列を選択し、その標的に対するＲＮＡ干渉の効能を評価する方法を熟知している。特定の標的に対するＲＮＡ干渉の効能を評価する方法は、ヌクレオチドおよびタンパク質分析の標準技術、例えば定量的逆転写ポリメラーゼ連鎖反応（ｑＲＴ−ＰＣＲ）、免疫ブロット、および酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）が、例えば増幅プライマーおよび抗体の適切な選択を通じて特定の標的に適合させるのに適している限り、このような技術を用いて達成され得る。
【００４７】
一つの局面において、本発明は、ｓｉＲＮＡの免疫刺激能を減少させる方法を提供する。一つの実施態様において、この方法は、前もって特徴付けられたｓｉＲＮＡの免疫刺激能を減少させるのに使用できる。一つの実施態様において、この方法は、前もって特徴付けられてない、例えばｓｉＲＮＡを初めて設計および合成する際に、ｓｉＲＮＡの免疫刺激能を減少させるのに使用できる。この方法は、センス鎖およびアンチセンス鎖を有し、アンチセンス鎖が標的配列に相補的である二本鎖ｓｉＲＮＡのセンス鎖に、２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを導入する工程を含み、ただし２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドはロックト核酸（ＬＮＡ）または２’−Ｏ−メチルヌクレオチドではない。本明細書中で本発明のこの局面に関して使用する場合、２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドの導入は、既存のまたは天然のヌクレオチドに代えて、上記で定義したような２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドで置換することを意味する。例えば、既存のｓｉＲＮＡにおいてアンチセンス鎖が、センス鎖のＣを求めるＧを有する場合、Ｃはデオキシシチジン（ｄＣ）で置換される。従って２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドをセンス鎖に導入する工程は、典型的には、所望の修飾型ヌクレオチドが生成物のセンス鎖の所望の位置に組み込まれるような様式でセンス鎖の合成を設計および実施することを含む。
【００４８】
本発明は、一つの局面において、本発明のｓｉＲＮＡを用いてＲＮＡ干渉を実行する方法である。とりわけ、本発明のこの局面に従う方法は、標的配列を有する遺伝子の発現を減少させる方法である。本明細書中で使用する場合、一つの実施態様において、標的配列を有する遺伝子の発現の減少は、特定の目的遺伝子から転写されるメッセンジャーＲＮＡの量の減少を意味する。本明細書中で使用する場合、一つの実施態様において、標的配列を有する遺伝子の発現の減少は、細胞内に存在する特定の目的遺伝子によりコードされるタンパク質産物の量の減少を意味する。本発明のこの局面に従う方法は、標的配列を有する遺伝子の発現を減少させるために、センス鎖およびアンチセンス鎖を有し、アンチセンス鎖が標的配列に相補的であり、センス鎖がロックト核酸（ＬＮＡ）または２’−Ｏ−メチルヌクレオチドではない２’修飾を有する糖を有する修飾型ヌクレオチドを含む、有効量の二本鎖短鎖干渉リボ核酸（ｓｉＲＮＡ）を、標的配列を有する遺伝子を含む細胞と接触させる工程を含む。本発明のこの局面に従う方法は、インビトロおよびインビボで実行できる。この方法をインビボで実行する場合、接触工程はさらに、本発明の組成物の対象への投与を伴なう。
【００４９】
本発明のｓｉＲＮＡは、がんを有する対象、感染疾患を有する対象、自己免疫疾患を有する対象、アレルギーを有する対象、および喘息を有する対象を含むがこれらに限定されない対象の処置に特に使用するものである。
【００５０】
本明細書中で使用する場合、「がん」は、身体の器官およびシステムの正常な機能を妨げる制御できない細胞増殖を意味する。がんはそれらの一次部位および種生体器官（ｓｅｅｄ  ｖｉｔａｌ  ｏｒｇａｎ）から移動し、最終的には罹患組織の機能の悪化を通じて対象を死に至らしめ得る。造血系のがん、例えば白血病は、対象の正常な造血系統を競合して取って代り、それによって（貧血、血小板減少、および好中球減少の形式で）造血系の機能不全をもたらし、最終的には死に至らしめる。
【００５１】
本明細書中で使用する場合、がんを有する対象は、検出可能ながん性細胞を有する対象を意味する。
【００５２】
転移は、原発性腫瘍から体内の他の部分へのがん細胞の伝播により生じた、原発性腫瘍の部位とは異なるがん細胞の領域である。原発性の腫瘤の診断時に、対象は転移の存在をモニターされ得る。転移は、特定の症状のモニタリングに加えて、磁気共鳴画像（ＭＲＩ）スキャン、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、血球および血小板の計数、肝機能研究、胸部Ｘ線、および骨のスキャンの単独使用または併用を通じて検出される場合が最も多い。
【００５３】
がんには、基底細胞癌、胆道がん；膀胱がん；骨がん；脳およびＣＮＳがん；乳がん；子宮頸がん；絨毛癌；結腸および直腸がん；結合組織がん；消化器系のがん；子宮内膜がん；食道がん；眼がん；頭頸部のがん；胃がん；上皮内新生物；腎がん；喉頭がん；白血病；肝がん；肺がん（例えば小細胞および非小細胞）；ホジキンリンパ腫および非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫；黒色腫；骨髄腫；神経芽腫；口腔がん（例えば唇、舌、口、および咽頭）；卵巣がん；膵がん；前立腺がん；網膜芽腫；横紋筋肉腫；直腸がん；腎がん；呼吸器系のがん；肉腫；皮膚がん；胃がん（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）；精巣がん；甲状腺がん；子宮がん；泌尿器系のがん、ならびにその他の癌腫および肉腫が含まれるがこれらに限定されない。
【００５４】
本明細書中で使用する場合、「感染疾患」は、感染性の微生物による宿主の表面的、局所的、または全身的な侵入から生じる障害を意味する。感染性微生物には細菌、ウイルス、寄生生物、および真菌が含まれる。
【００５５】
本明細書中で使用する場合、感染疾患を有する対象は、感染性生物に曝された対象および体内に急性的または慢性的な検出可能レベルで感染性生物が存在する対象を意味する。感染性生物への暴露は、一般的に、対象の外表面、例えば皮膚または粘膜で起こり、かつ／または感染生成物による対象の外表面からの浸透を意味する。
【００５６】
ヒトにおいて見出されたウイルスの例には、レトロウイルス科（例えばヒト免疫不全ウイルス、例えばＨＩＶ−１（ＨＤＴＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶＥ、もしくはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶ、またはＨＩＶ−ＩＩＩとも称される）；および他の分離体、例えばＨＩＶ−ＬＰ）；ピコルナウイルス科（例えばポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス；エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）；カルシウイルス科（Ｃａｌｃｉｖｉｒｉｄａｅ）（例えば胃腸炎を引き起こす菌株）；トガウイルス科（例えばウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）；フラビウイルス科（例えばデング熱ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）；コロナウイルス科（Ｃｏｒｏｎｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えばコロナウイルス）；ラブドウイルス科（例えば水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）；フィロウイルス科（例えばエボラウイルス）；パラミクソウイルス科（例えばパラインフルエンザウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス）；オルトミクソウイルス科（例えばインフルエンザウイルス）；ブンガウイルス科（Ｂｕｎｇａｖｉｒｉｄａｅ）（例えばハンターンウイルス、ブンガウイルス（ｂｕｎｇａ  ｖｉｒｕｓｅｓ）、フレボウイルス、およびナイロウイルス）；アレナウイルス科（出血熱ウイルス）；レオウイルス科（例えばレオウイルス、オルビウイルス、およびロタウイルス）；ビルナウイルス科；ヘパドナウイルス科（Ｂ型肝炎ウイルス）；パルボウイルス科（パルボウイルス）；パポバウイルス科（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）；アデノウイルス科（大部分のアデノウイルス）；ヘルペスウイルス科（単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ）１および２、水痘帯状疱疹ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、疱疹ウイルス；ポックスウイルス科（痘瘡ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）；ならびにイリドウイルス科（例えばアフリカ豚コレラウイルス）；ならびに未分類のウイルス（例えばデルタ型肝炎因子（Ｂ型肝炎ウイルスの不完全サテライトであると考えられる）、非Ａ非Ｂ型肝炎因子（クラス１＝内部伝染型；クラス２＝非経口伝染型（すなわちＣ型肝炎）；ノーウォークウイルスおよび関連ウイルス、ならびにアストロウイルス）が含まれるがこれらに限定されない。
【００５７】
グラム陰性細菌およびグラム陽性細菌の両方が、脊椎動物において抗原として機能する。このようなグラム陽性細菌には、パスツレラ属の種、ブドウ球菌属の種、および連鎖球菌属の種が含まれるがこれらに限定されない。グラム陰性細菌には、大腸菌、シュードモナス属の種、およびサルモネラ属の種が含まれるがこれらに限定されない。感染性細菌の特定の例には、ヘリコバクター・ピロリ（Ｈｅｌｉｃｏｂａｃｔｅｒ  ｐｙｌｏｒｉｓ）、ボレリア・バーグドルフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、レジオネラ・ニューモフィラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌｉａ）、ミコバクテリア属の種（例えば、Ｍ．チューベルクロシス（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、Ｍ．アビウム（Ｍ．ａｖｉｕｍ）、Ｍ．イントラセルラーレ（Ｍ．ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、Ｍ．カンサシイ（Ｍ．ｋａｎｓａｓｉｉ）、Ｍ．ゴルドナエ（Ｍ．ｇｏｒｄｏｎａｅ））、スタフィロコッカス・アウレウス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、ナイセリア・ゴノレエ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ）、ナイセリア・メニンジティディス（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、リステリア・モノサイトゲネス（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ）、ストレプトコッカス・ピロゲネス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）（Ａ群連鎖球菌）、ストレプトコッカス・アガラクティエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ）（Ｂ群連鎖球菌）、ストレプトコッカス（ビリダンス群）、ストレプトコッカス・フェカリス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ）、ストレプトコッカス・ボビス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｂｏｖｉｓ）、ストレプトコッカス（嫌気性連鎖球菌）、ストレプトコッカス・ニューモニエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、病原性のカンピロバクター属の種、エンテロコッカス属の種、ヘモフィルス・インフルエンザエ（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）、バチルス・アントラシス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、コリネバクテリウム・ジフテリアエ（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、コリネバクテリウム属の種、エリシペロトリックス・ルシオパシエ（Ｅｒｙｓｉｐｅｌｏｔｈｒｉｘ  ｒｈｕｓｉｏｐａｔｈｉａｅ）、クロストリジウム・パーフリンゲンス（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、クロストリジウム・テタニ（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、エンテロバクター・エロゲネス（Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ  ａｅｒｏｇｅｎｅｓ）、クレブシエラ・ニューモニエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、パスツレラ・ムルトシダ（Ｐａｓｔｕｒｅｌｌａ  ｍｕｌｔｏｃｉｄａ）、バクテロイドデス属の種、フソバクテリウム・ヌクレアタム（Ｆｕｓｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｎｕｃｌｅａｔｕｍ）、ストレプトバチルス・モニリフォルミス（Ｓｔｒｅｐｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ  ｍｏｎｉｌｉｆｏｒｍｉｓ）、トレポネマ・パリジウム（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｉｕｍ）、トレポネマ・パーテニュー（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐｅｒｔｅｎｕｅ）、���プトスピラ、リケッチア、およびアクチノミセス・イスラエリ（Ａｃｔｉｎｏｍｙｃｅｓ  ｉｓｒａｅｌｌｉ）が含まれるがこれらに限定されない。
【００５８】
真菌の例には、クリプトコッカス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、ヒストプラズマ・カプスラタム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、コクシジオイデス・イミチス（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ）、ブラストミセス・ダーマティティディス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、クラミジア・トラコマティス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）が含まれる。
【００５９】
その他の感染性生物（すなわち原生生物）には、プラスモディウム属の種（ｓｐｐ）、例えばプラスモディウム・ファルシパルム（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ）、プラスモディウム・マラリエ（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａｅ）、プラスモディウム・オバレ（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｏｖａｌｅ）、およびプラスモディウム・ビバクス（Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ）、ならびにトキソプラズマ・ゴンジー（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）が含まれる。血液媒介性寄生生物および／または組織寄生生物には、プラスモディウム属の種（ｓｐｐ）、バベシア・ミクロッチ（Ｂａｂｅｓｉａ  ｍｉｃｒｏｔｉ）、バベシア・ディバーゲンス（Ｂａｂｅｓｉａ  ｄｉｖｅｒｇｅｎｓ）、リーシュマニア・トロピカ（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｔｒｏｐｉｃａ）、リーシュマニア属の種（ｓｐｐ）、リーシュマニア・ブラジリエンシス（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓ）、リーシュマニア・ドノバニ（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ）、トリパノソーマ・ガムビエンス（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｇａｍｂｉｅｎｓｅ）およびトリパノソーマ・ローデシエンス（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ）（アフリカ睡眠病）、トリパノソーマ・クルジ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）（シャーガス病）、ならびにトキソプラズマ・ゴンジー（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）が含まれる。
【００６０】
その他の医学的に関連する微生物は、文献に十分に記載されており、例えば参照によりその全内容が本明細書に組み込まれるＣ．Ｇ．Ａ  Ｔｈｏｍａｓ，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｂａｉｌｌｉｅｒｅ  Ｔｉｎｄａｌｌ，Ｇｒｅａｔ  Ｂｒｉｔａｉｎ  １９８３を参照されたい。
【００６１】
本発明のｓｉＲＮＡはまた、自己免疫疾患の処置および予防に有用である。自己免疫疾患は、対象自身の抗体が宿主組織と反応する疾患または免疫エフェクターＴ細胞が内在性の自己ペプチドに対して自己反応性であり組織の破壊をもたらす疾患のクラスである。従って、自己抗原と呼ばれる対象自身の抗原に対して免疫反応が惹起される。自己免疫疾患には、関節リウマチ、クローン病、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、自己免疫性脳脊髄炎、重症筋無力症（ＭＧ）、橋本甲状腺炎、グッドパスチャー症候群、天疱瘡（例えば尋常性天疱瘡）、グレーブス病、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少性紫斑病、抗コラーゲン抗体を伴う強皮症、混合性結合組織病、多発性筋炎、悪性貧血、突発性アジソン病、自己免疫関連不妊症、糸球体腎炎（例えば半月体形成性糸球体腎炎、増殖性糸球体腎炎）、水疱性類天疱瘡、シェーグレン症候群、インスリン抵抗性、および自己免疫性糖尿病が含まれるがこれらに限定されない。
【００６２】
本明細書中で使用する場合、アレルギーは、ある物質（アレルゲン）に対する獲得性の過敏症を意味する。アレルギーの状態には、湿疹、アレルギー性鼻炎または鼻感冒、枯草熱、アレルギー性結膜炎、気管支ぜん息、じんま疹（蕁麻疹）および食物アレルギー、ならびにアトピー性皮膚炎；アナフィラキシー；薬物アレルギー；および血管性水腫を含むその他のアトピー性状態が含まれるがこれらに限定されない。アレルギー疾患には、鼻炎（枯草熱）、喘息、じんま疹、およびアトピー性皮膚炎が含まれるがこれらに限定されない。
【００６３】
本明細書中で使用する場合、アレルギーを有する対象は、アレルゲンに対応してアレルギー反応を有する対象である。
【００６４】
アレルゲンは、感受性を有する対象においてアレルギー性または喘息性の反応を誘発し得る物質（抗原）を意味する。アレルゲンのリストは膨大であり、花粉、昆虫毒、動物のふけ、真菌胞子、および薬物（例えばペニシリン）が含まれ得る。自然アレルギー、動物アレルギー、および植物アレルギーの例には、以下の属に特異的なタンパク質が含まれるがこれらに限定されない：イヌ属（カニス・ファミリアリス（Ｃａｎｉｓ  ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ））；ヒョウヒダニ属（例えばダーマトファゴイデス・ファリネ（Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｆａｒｉｎａｅ））；ネコ属（フェリス・ドメスチカス（Ｆｅｌｉｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ））；ブタクサ属（アンブロシア・アルテミイスフォリア（Ａｍｂｒｏｓｉａ  ａｒｔｅｍｉｉｓｆｏｌｉａ）；ドクムギ属（例えばロリウム・ペレンネ（Ｌｏｌｉｕｍ  ｐｅｒｅｎｎｅ）またはロリウム・マルチフロラム（Ｌｏｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ））；スギ属（クリプトメリア・ジャポニカ（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ））；アルテルナリア属（アルテルナリア・アルテルナタ（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ａｌｔｅｒｎａｔａ））；ハンノキ属（Ａｌｄｅｒ）；ハンノキ属（Ａｌｎｕｓ）（アルナス・グルチノアサ（Ａｌｎｕｓ  ｇｕｌｔｉｎｏａｓａ））；カバノキ属（ベツラ・ベルコサ（Ｂｅｔｕｌａ  ｖｅｒｒｕｃｏｓａ））；カシ属（クエルカス・アルバ（Ｑｕｅｒｃｕｓ  ａｌｂａ））；オリーブ属（オレア・ユーロパ（Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐａ））；ヨモギ属（アルテミシア・ブルガリス（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ））；オオバコ属（例えばプランタゴ・ランセオラタ（Ｐｌａｎｔａｇｏ  ｌａｎｃｅｏｌａｔａ））；ヒカゲミズ属（例えばパリエタリア・オフィシナリス（Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）またはパリエタリア・ジュダイカ（Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ  ｊｕｄａｉｃａ））；チャバネゴキブリ属（例えばブラテラ・ゲルマニカ（Ｂｌａｔｔｅｌｌａ  ｇｅｒｍａｎｉｃａ））；ミツバチ属（例えばアピス・マルチフロラム（Ａｐｉｓ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ））；イトスギ属（例えばクプレッスス・セムペルウィレンス（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ｓｅｍｐｅｒｖｉｒｅｎｓ）、クプレッスス・アリゾニカ（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ａｒｉｚｏｎｉｃａ）、およびクプレッスス・マクロカルパ（Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ｍａｃｒｏｃａｒｐａ））；ビャクシン属（例えばジュニペラス・サビノイデス（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｓａｂｉｎｏｉｄｅｓ）、ジュニペラス・バージニアナ（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ）、ジュニペラス・コミュニス（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓ）、およびジュニペラス・アスヘイ（Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ａｓｈｅｉ））；クロベ属（例えばチュヤ・オリエンタリス（Ｔｈｕｙａ  ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ））；ヒノキ属（例えばカマエシィパリス・オブツサ（Ｃｈａｍａｅｃｙｐａｒｉｓ  ｏｂｔｕｓａ））；ワモンゴキブリ属（例えばペリプラネタ・アメリカナ（Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ））；カモジグサ属（例えばアグロピロン・レペンス（Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ  ｒｅｐｅｎｓ））；ライムギ属（例えばセカレ・セレアレ（Ｓｅｃａｌ��  ｃｅｒｅａｌｅ））；コムギ属（例えばトリチカム・エスチバム（Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ））；カモガヤ属（例えばダクチリス・グロメラタ（Ｄａｃｔｙｌｉｓ  ｇｌｏｍｅｒａｔａ））；ウシノケグサ属（例えばフェスツカ・エラチオール（Ｆｅｓｔｕｃａ  ｅｌａｔｉｏｒ））；イチゴツナギ属（例えばポア・プラテンシス（Ｐｏａ  ｐｒａｔｅｎｓｉｓ）またはポア・コンプレッサ（Ｐｏａ  ｃｏｍｐｒｅｓｓａ））；カラスムギ属（例えばアベナ・サチバ（Ａｖｅｎａ  ｓａｔｉｖａ））；シラゲガヤ属（例えばホルカス・ラナタス（Ｈｏｌｃｕｓ  ｌａｎａｔｕｓ））；ハルガヤ属（例えばアントキサンタム・オドラタム（Ａｎｔｈｏｘａｎｔｈｕｍ  ｏｄｏｒａｔｕｍ））；オオカニツリ属（例えばアレナテラム・エラチウス（Ａｒｒｈｅｎａｔｈｅｒｕｍ  ｅｌａｔｉｕｓ））；コヌカグサ属（例えばアグロスティス・アルバ（Ａｇｒｏｓｔｉｓ  ａｌｂａ））；アワガエリ属（例えばフレウム・プラテンス（Ｐｈｌｅｕｍ  ｐｒａｔｅｎｓｅ））；クサヨシ属（例えばファラリス・アルンジナセア（Ｐｈａｌａｒｉｓ  ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ））；スズメノヒエ属（例えばパスパラム・ノタツム（Ｐａｓｐａｌｕｍ  ｎｏｔａｔｕｍ））；モロコシ属（例えばソルグム・ハレペンシス（Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｈａｌｅｐｅｎｓｉｓ））；ならびにスズメノチャヒキ属（例えばブロマス・イネルミス（Ｂｒｏｍｕｓ  ｉｎｅｒｍｉｓ））。
【００６５】
本明細書中で使用する場合、喘息は、炎症、気道の狭窄、および吸入物質に対する気道の反応性亢進により特徴付けられる呼吸器系の障害である。喘息は多くの場合、しかし専らではないが、アトピー性またはアレルギー性状態を伴う。喘息の症状には、喘鳴、息切れ、および胸苦しさの再発性の発作、ならびに咳が含まれ、これらは気道の閉塞に起因する。喘息に関連する気道の炎症は、多くの生理学的変化、例えば気道上皮の裸出、基底膜下へのコラーゲン沈着、浮腫、マスト細胞の活性化、好中球、好酸球（ｉｎｏｓｉｎｅｏｐｈｉｌ）、およびリンパ球を含む炎症細胞の浸潤、の観察を通じて検出することができる。気道の炎症の結果、喘息患者は多くの場合、気道過敏性、気流制限、呼吸器症状、および疾患の慢性化を経験する。気流の制限には、しばしば気管支閉塞をもたらす特徴である、急性気管支収縮、気道の浮腫、粘液栓の形成、および気道のリモデリングが含まれる。一部の喘息の症例において、肺機能の永続的な異常を引き起こす基底膜下線維症が起こり得る。
【００６６】
本明細書中で使用する場合、喘息を有する対象は、炎症、気道の狭窄、および吸入物質に対する気道の反応性亢進により特徴付けられる呼吸器系の障害を有する対象である。喘息は多くの場合、しかし専らではないが、アトピー性またはアレルギー性の症状を伴う。喘息はまた、多くの場合、しかし専らではないが、イニシエーターとの接触を伴う。本明細書中で使用される場合、「イニシエーター」は、喘息を誘発する組成物または環境条件を意味する。イニシエーターには、アレルゲン、低温、運動、ウイルス感染、ＳＯ2が含まれるがこれらに限定されない。
【００６７】
本発明のｓｉＲＮＡは、単独でまたは他の治療剤と組み合わせてのいずれかにより使用できる。一つの実施態様において、他の治療剤は、本発明の別のｓｉＲＮＡである。ｓｉＲＮＡおよび他の治療剤は、同時にまたは逐次的に投与され得る。他の治療剤が同時に投与される場合、それらは、同じ処方物として投与することも、別の処方物としてであるが同時に投与することもできる。他の治療剤およびｓｉＲＮＡの投与が時間間隔をおいて行われる場合、他の治療剤は、互いに、およびｓｉＲＮＡと、逐次的に投与される。これらの化合物の投与の時間間隔は、分単位であってもそれより長くてもよい。他の治療剤には、抗微生物剤、抗がん剤、抗アレルギー剤等が含まれるがこれらに限定されない。
【００６８】
本発明のｓｉＲＮＡは、抗微生物剤と共に対象に投与され得る。本明細書中で使用する場合、抗微生物剤は、感染性微生物を殺傷または阻害することのできる天然化合物または合成化合物を意味する。本発明に従い使用できる抗微生物剤のタイプは、対象が感染したまたは感染する危険のある微生物のタイプに依存する。抗微生物剤には、抗菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤、および駆虫剤が含まれるがこれらに限定されない。「抗感染剤」、「抗菌剤」、「抗ウイルス剤」、「抗真菌剤」、「駆虫剤」、および「殺寄生生物剤」等の語句は、当業者に十分確立した意味を有し、かつ標準的な医学の教科書において定義されている。簡単に言うと、抗菌剤は細菌を殺傷または阻害し、抗生物質およびその他の類似の作用を有する合成または天然化合物が含まれる。抗生物質は、細胞、例えば微生物による二次代謝産物として産生された低分子量の分子である。一般的に、抗生物質は、微生物に特異的で宿主細胞に存在しない一つまたはそれ以上の細菌機能または構造に干渉する。抗ウイルス剤は、天然源から単離することも合成することもでき、これらはウイルスを殺傷または阻害するのに有用である。抗真菌剤は、表在性真菌感染ならびに日和見真菌感染および原発性全身性真菌感染を処置するために使用される。駆虫剤は寄生生物を殺傷または阻害する。
【００６９】
ヒトへの投与に有用な、殺寄生生物剤とも称される駆虫剤の例には、アルベンダゾール、アンホテリシンＢ、ベンズニダゾール、ビチオノール、クロロキンＨＣｌ、リン酸クロロキン、クリンダマイシン、デヒドロエメチン、ジエチルカルバマジン、フロ酸ジロキサニド、エフロルニチン、フラゾリドン（ｆｕｒａｚｏｌｉｄａｏｎｅ）、グルココルチコイド、ハロファントリン、ヨードキノール、イベルメクチン、メベンダゾール、メフロキン、アンチモン酸メグルミン（ｍｅｇｌｕｍｉｎｅ  ａｎｔｉｍｏｎｉａｔｅ）、メラルソプロール、メトリホナート、メトロニダゾール、ニクロサミド、ニフルチモクス、オキサムニキン、パロモマイシン、イセチオン酸ペンタミジン、ピペラジン、プラジカンテル、リン酸プリマキン、プログアニル、パモ酸ピランテル、ピリメタミン（ｐｙｒｉｍｅｔｈａｎｍｉｎｅ）−スルホンアミド、ピリメタミン（ｐｙｒｉｍｅｔｈａｎｍｉｎｅ）−スルファドキシン、キナクリンＨＣｌ、硫酸キニーネ、グルコン酸キニジン、スピラマイシン、スチボグルコネートナトリウム（グルコン酸アンチモンナトリウム）、スラミン、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、チアベンダゾール、チニダゾール、トリメトプリム（ｔｒｉｍｅｔｈｒｏｐｒｉｍ）−スルファメトキサゾール、およびトリパルサミドが含まれるがこれらに限定されない。これらのうちのいくつかは単独でまたは他と組み合わせて使用される。
【００７０】
抗菌剤は、細菌の増殖または機能を殺傷または阻害する。抗菌剤の一つの大きなクラスは抗生物質である。広範囲の細菌を殺傷または阻害するのに有効な抗生物質は、広範囲抗生物質と称される。抗生物質の他のタイプは、主としてグラム陽性またはグラム陰性のクラスの細菌に対して有効である。これらの抗生物質のタイプは、狭範囲抗生物質と称される。単一種の生物または疾患に対して有効であり、他の細菌のタイプに対しては有効でない他の抗生物質は、限定スペクトル抗生物質（ｌｉｍｉｔｅｄ  ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）と称される。抗菌剤は、それらの主たる作用様式に基づき分類されることがある。一般的に抗菌剤は細胞壁合成阻害剤、細胞膜阻害剤、タンパク質合成阻害剤、核酸合成または機能阻害剤、および競合的阻害剤である。
【００７１】
抗ウイルス剤は、ウイルスによる細胞の感染または細胞内でのウイルスの複製を防止する化合物である。ウイルスの複製プロセスは宿主細胞内でのＤＮＡ複製に非常に緊密に関連し、非特異的な抗ウイルス剤は宿主に毒性であることが多いため、抗ウイルス薬は、抗菌薬よりも数が遥かに少ない。ウイルスの感染プロセスにおけるいくつかの段階が、抗ウイルス剤によってブロックまたは阻害できる。これらの段階には、ウイルスの宿主細胞への付着（免疫グロブリンまたは結合ペプチド）、ウイルスの脱殻（例えばアマンタジン）、ウイルスｍＲＮＡの合成または翻訳（例えばインターフェロン）、ウイルスＲＮＡまたはＤＮＡの複製（例えばヌクレオチドアナログ）、新たなウイルスタンパク質の成熟（例えばプロテアーゼ阻害剤）、およびウイルスの出芽および放出が含まれる。
【００７２】
ヌクレオチドアナログは、ヌクレオチドに類似するが不完全または異常なデオキシロボース基またはリボース基を有する合成化合物である。ヌクレオチドアナログは、ひとたび細胞内に入るとリン酸化されて三リン酸を生成し、形成されたこれがウイルスＤＮＡまたはＲＮＡへの組み込みで通常のヌクレオチドと競合する。ひとたびヌクレオチドアナログの三リン酸形態が増殖中の核酸鎖に取り込まれれば、それはウイルスポリメラーゼと不可逆的に結合し、それによって連鎖を停止させる。ヌクレオチドアナログには、アシクロビル（単純疱疹ウイルスおよび水痘・帯状疱疹ウイルスの処置に使用される）、ガンシクロビル（サイトメガロウイルスの処置に有用である）、イドクスウリジン、リバビリン（呼吸器合胞体ウイルスの処置に有用である）、ジデオキシイノシン、ジデオキシシチジン、ジドブジン（アジドチミジン）、イミキモド、およびレスイミキモド（ｒｅｓｉｍｉｑｕｉｍｏｄ）が含まれるがこれらに限定されない。
【００７３】
インターフェロンは、ウイルス感染細胞および免疫細胞から分泌されるサイトカインである。インターフェロンは、感染細胞に隣接する細胞上の特定の受容体に結合することにより機能し、ウイルスによる感染から細胞を保護する変化を細胞内で起こす。αおよびβ−インターフェロンはまた、感染細胞の表面においてクラスＩおよびクラスＩＩ  ＭＨＣ分子の発現を誘導し、宿主の免疫細胞認識のための抗原提示を促進する。αおよびβ−インターフェロンは、組換え体として入手可能であり、慢性Ｂ型肝炎および慢性Ｃ型肝炎の処置に使用されている。抗ウイルス療法において有効な用量において、インターフェロンは重大な副作用、例えば発熱、倦怠感、および体重減を有する。
【００７４】
本発明において有用な抗ウイルス剤には、免疫グロブリン、アマンタジン、インターフェロン、ヌクレオチドアナログ、およびプロテアーゼ阻害剤が含まれるがこれらに限定されない。抗ウイルス剤の特定の例には、アセマンナン；アシクロビル；アシクロビルナトリウム；アデホビル；アロブジン；アルビルセプトスドトクス（Ａｌｖｉｒｃｅｐｔ  Ｓｕｄｏｔｏｘ）；塩酸アマンタジン；アラノチン；アリルドン；アテビルジンメシレート；アブリジン；シドホビル；シパムフィリン（Ｃｉｐａｍｆｙｌｌｉｎｅ）；塩酸シタラビン；デラビルジンメシレート；デスシクロビル；ジダノシン；ジソキサリル；エドクスジン；エンビラデン；エンビロキシム；ファムシクロビル；塩酸ファモチン；フィアシタビン；フィアルリジン；ホサリラート；ホスカルネトナトリウム；ホスホネトナトリウム；ガンシクロビル；ガンシクロビルナトリウム；イドクスウリジン；ケトキサール（Ｋｅｔｈｏｘａｌ）；ラミブジン；ロブカビル；塩酸メモチン；メチサゾン；ネビラピン；ペンシクロビル；ピロダビル；リバビリン；塩酸リマンタジン；サキナビルメシレート；塩酸ソマンタジン；ソリブジン；スタトロン（Ｓｔａｔｏｌｏｎ）；スタブジン；塩酸チロロン；トリフルリジン；塩酸バラシクロビル；ビダラビン；リン酸ビダラビン；リン酸ビダラビンナトリウム；ビロキシム；ザルシタビン；ジドブジン；およびジンビロキシムが含まれるがこれらに限定されない。
【００７５】
抗真菌剤は、感染性真菌の処置および予防に有用である。抗真菌剤は、それらの作用機構により分類されることがある。一部の抗真菌剤は、グルコースシンターゼを阻害することによって細胞壁阻害剤として機能する。これらには、バシウンギン（ｂａｓｉｕｎｇｉｎ）／ＥＣＢが含まれるがこれらに限定されない。他の抗真菌剤は、膜の完全性を不安定化させることにより機能する。これらには、イミダゾール（ｉｍｍｉｄａｚｏｌｅｓ）、例えばクロトリマゾール、セルタコナゾール（ｓｅｒｔａｃｏｎｚｏｌｅ）、フルコナゾール、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾール、およびボリコナゾール（ｖｏｒｉｃｏｎａｃｏｌｅ）、ならびにＦＫ  ４６３、アンホテリシンＢ、ＢＡＹ  ３８−９５０２、ＭＫ  ９９１、プラジミシン、ＵＫ  ２９２、ブテナフィン、およびテルビナフィンが含まれるがこれらに限定されない。他の抗真菌剤は、キチンの分解（例えばキチナーゼ）または免疫抑制（５０１クリーム）によって機能する。
【００７６】
本発明のｓｉＲＮＡはまた、抗がん療法と組み合わせて投与され得る。抗がん療法には、がん医薬、放射線照射、および外科手術が含まれる。本明細書中で使用する場合、「がん医薬」は、がんを処置する目的で対象に投与される薬剤を意味する。本明細書中で使用する場合、「がんを処置する」には、がんの発症を予防すること、がんの症状を軽減すること、および／または既に発症したがんの増殖を阻害することが含まれる。他の局面において、がん医薬は、がんを発症する危険を減らす目的でがんを発症する危険のある対象に投与される。本明細書中には様々なタイプのがん処置用医薬が記載されている。本明細書における目的のために、がん医薬は、化学療法剤、免疫療法剤、がんワクチン、ホルモン療法、および生物学的反応調節物質（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｍｏｄｉｆｉｅｒｓ）に分類する。
【００７７】
化学療法剤は、メトトレキサート、ビンクリスチン、アドリアマイシン、シスプラチン、糖を含まないクロロエチルニトロソ尿素、５−フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダカルバジン、タキソール、フラジリン（ｆｒａｇｙｌｉｎｅ）、メグラミン（Ｍｅｇｌａｍｉｎｅ）ＧＬＡ、バルルビシン、カルムスタイン（ｃａｒｍｕｓｔａｉｎｅ）およびポリフェルポサン（ｐｏｌｉｆｅｒｐｏｓａｎ）、ＭＭＩ２７０、ＢＡＹ  １２−９５６６、ＲＡＳファメシルトランスフェラーゼ阻害剤（ｆａｍｅｓｙｌ  ｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ）、ファメシルトランスフェラーゼ阻害剤、ＭＭＰ、ＭＴＡ／ＬＹ２３１５１４、ＬＹ２６４６１８／ロメテキソール（Ｌｏｍｅｔｅｘｏｌ）、グラモレク（Ｇｌａｍｏｌｅｃ）、ＣＩ−９９４、ＴＮＰ−４７０、ハイカムチン／トポテカン、ＰＫＣ４１２、バルスポダール／ＰＳＣ８３３、ノバントロン／ミトキサントロン、メタレト（Ｍｅｔａｒｅｔ）／スラミン、バチマスタット、Ｅ７０７０、ＢＣＨ−４５５６、ＣＳ−６８２、９−ＡＣ、ＡＧ３３４０、ＡＧ３４３３、インセル（Ｉｎｃｅｌ）／ＶＸ−７１０、ＶＸ−８５３、ＺＤ０１０１、ＩＳＩ６４１、ＯＤＮ  ６９８、ＴＡ  ２５１６／マルミスタット（Ｍａｒｍｉｓｔａｔ）、ＢＢ２５１６／マルミスタット、ＣＤＰ  ８４５、Ｄ２１６３、ＰＤ１８３８０５、ＤＸ８９５１ｆ、レモナールＤＰ  ２２０２、ＦＫ  ３１７、ピシバニール／ＯＫ−４３２、ＡＤ  ３２／バルルビシン、メタストロン／ストロンチウム誘導体、テモダール／テモゾロミド、エバセット（Ｅｖａｃｅｔ）／リポソーム化ドキソルビシン、ユータキサン（Ｙｅｗｔａｘａｎ）／パクリタキセル、タキソール／パクリタキセル、ゼローダ（Ｘｅｌｏａｄ）／カペシタビン、フルツロン／ドキシフルリジン、シクロパックス（Ｃｙｃｌｏｐａｘ）／経口パクリタキセル、経口タキソイド、ＳＰＵ−０７７／シスプラチン、ＨＭＲ  １２７５／フラボピリドール（Ｆｌａｖｏｐｉｒｉｄｏｌ）、ＣＰ−３５８（７７４）／ＥＧＦＲ、ＣＰ−６０９（７５４）／ＲＡＳオンコジーン阻害剤、ＢＭＳ−１８２７５１／経口白金、ＵＦＴ（テガフール／ウラシル）、エルガミゾール（Ｅｒｇａｍｉｓｏｌ）／レバミゾール、エニルウラシル／７７６Ｃ８５／５ＦＵエンハンサー、カンプト／レバミゾール、カンプトサール（Ｃａｍｐｔｏｓａｒ）／イリノテカン、ツモデックス（Ｔｕｍｏｄｅｘ）／ラルチトレキセド（Ｒａｌｉｔｒｅｘｅｄ）、ロイスタチン／クラドリビン、パゼックス（Ｐａｘｅｘ）／パクリタキセル、ドキシル（Ｄｏｘｉｌ）／リポソーム化ドキソルビシン、カーリクス（Ｃａｅｌｙｘ）／リポソーム化ドキソルビシン、フルダラ／フルダラビン、ファルモルビシン（Ｐｈａｒｍａｒｕｂｉｃｉｎ）／エピルビシン、デポシト（ＤｅｐｏＣｙｔ）、ＺＤ１８３９、ＬＵ  ７９５５３／ビス−ナフタルイミド、ＬＵ  １０３７９３／ドラスタイン（Ｄｏｌａｓｔａｉｎ）、カーティクス（Ｃａｅｔｙｘ）／リポソーム化ドキソルビシン、ジェムザール／ゲムシタビン、ＺＤ  ０４７３／アノルメド（Ａｎｏｒｍｅｄ）、ＹＭ  １１６、ロジンシード（ｌｏｄｉｎｅ  ｓｅｅｄｓ）、ＣＤＫ４およびＣＤＫ２阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、Ｄ４８０９／デクスイホサミド（Ｄｅｘｉｆｏｓａｍｉｄｅ）、イフェス（Ｉｆｅｓ）／メスネクス（Ｍｅｓｎｅｘ）／イホサミド（Ｉｆｏｓａｍｉｄｅ）、ブモン（Ｖｕｍｏｎ）／テニポシド、パラプラチン／カルボプラチン、プランチノール（Ｐｌａｎｔｉｎｏｌ）／シスプラチン、ベプシド（Ｖｅｐｅｓｉｄｅ）／エトポシド、ＺＤ  ９３３１、タキソテール／ドセタキセル、グアニンアラビノシドのプロドラッグ、タキサンアナログ、ニトロソ尿素、アルキル化剤、例えばメルフェランおよびシクロホスファミド、アミノグルテチミド、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、クロラムブシル（Ｃｈｌｏｒｏｍｂｕｃｉｌ）、シタラビンＨＣＩ、ダクチノマイシン、ダウノルビシンＨＣｌ、リン酸エストラムスチンナトリウム、エトポシド（ＶＰ１６−２１３）、フロクスウリジン、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルタミド、ヒドロキシ尿素（ヒドロキシカルバミド）、イホスファミド、インターフェロンアルファ−２ａ、アルファ−２ｂ、酢酸ロイプロリド（ＬＨＲＨ放出因子アナログ）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロレタミンＨＣｌ（ナイトロジェンマスタード）、メルカプトプリン、メスナ、ミトタン（ｏ．ｐ’−ＤＤＤ）、ミトキサントロンＨＣｌ、オクトレオチド、プリカマイシン、プロカルバジンＨＣｌ、ストレプトゾシン、クエン酸タモキシフェン、チオグアニン、チオテパ、硫酸ビンブラスチン、アムサクリン（ｍ−ＡＭＳＡ）、アザシチジン、エリスロポエチン（Ｅｒｔｈｒｏｐｏｉｅｔｉｎ）、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、インターロイキン２、ミトグアゾン（メチル−ＧＡＧ；メチルグリオキサールビス−グアニルヒドラゾン；ＭＧＢＧ）、ペントスタチン（２'デオキシコホルマイシン）、セムスチン（メチル−ＣＣＮＵ）、テニポシド（ＶＭ−２６）、ならびに硫酸ビンデシンからなる群より選択され得るがこれらに限定されない。
【００７８】
免疫療法剤は、リブタキシン（Ｒｉｂｕｔａｘｉｎ）、ハーセプチン、クアドラメット、パノレックス（Ｐａｎｏｒｅｘ）、アイデック（ＩＤＥＣ）−Ｙ２Ｂ８、ＢＥＣ２、Ｃ２２５、オンコリム（Ｏｎｃｏｌｙｍ）、スマート（ＳＭＡＲＴ）Ｍ１９５、アトラゲン（ＡＴＲＡＧＥＮ）、オバレックス、ベキサール（Ｂｅｘｘａｒ）、ＬＤＰ−０３、ｉｏｒ  ｔ６、ＭＤＸ−２１０、ＭＤＸ−１１、ＭＤＸ−２２、ＯＶ１０３、３６２２Ｗ９４、抗ＶＥＧＦ、ゼナパックス（Ｚｅｎａｐａｘ）、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−４４７、メルイミューン２（ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−２）、メルイミューン１（ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−１）、シーサイド（ＣＥＡＣＩＤＥ）、プレターゲット（Ｐｒｅｔａｒｇｅｔ）、ＮｏｖｏＭＡｂ−Ｇ２、ＴＮＴ、グリオマブＨ（Ｇｌｉｏｍａｂ−Ｈ）、ＧＮＩ−２５０、ＥＭＤ−７２０００、リンホシド（ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ）、ＣＭＡ  ６７６、モノファームＣ（Ｍｏｎｏｐｈａｒｍ−Ｃ）、４Ｂ５、ｉｏｒ  ｅｇｆ．ｒ３、ｉｏｒ  ｃ５、ＢＡＢＳ、抗ＦＬＫ−２、ＭＤＸ−２６０、ＡＮＡ  Ａｂ、スマート１Ｄ１０  Ａｂ、スマートＡＢＬ  ３６４  Ａｂ、およびイミュレイト（ＩｍｍｕＲＡＩＴ）−ＣＥＡ、からなる群より選択され得るがこれらに限定されない。
【００７９】
がんワクチンは、ＥＧＦ、抗イディオタイプがんワクチン、Ｇｐ７５抗原、ＧＭＫ黒色腫ワクチン、ＭＧＶガングリオシド接合ワクチン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、オバレックス、Ｍ−Ｖａｘ、Ｏ−Ｖａｘ、Ｌ−Ｖａｘ、ＳＴｎ−ＫＨＬテラトープ（ｔｈｅｒａｔｏｐｅ）、ＢＬＰ２５（ＭＵＣ−１）、リポソーム化イディオタイプワクチン、メラシン（Ｍｅｌａｃｉｎｅ）、ペプチド抗原ワクチン、毒素／抗原ワクチン、ＭＶＡ系ワクチン、ＰＡＣＩＳ、ＢＣＧワクチン、ＴＡ−ＨＰＶ、ＴＡ−ＣＩＮ、ＤＩＳＣ−ウイルス、およびイミュシスト（ＩｍｍｕＣｙｓｔ）／セラシス（ＴｈｅｒａＣｙｓ）からなる群より選択され得るがこれらに限定されない。
【００８０】
本発明のｓｉＲＮＡは、喘息／アレルギー医薬と共に対象に投与され得る。本明細書中で使用する場合、「喘息／アレルギー医薬」は、喘息またはアレルギー反応の症状を軽減し、その発症を予防し、またはそれらを阻害する組成物のことである。様々なタイプの喘息およびアレルギー処置用医薬が、Ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  Ｆｏｒ  Ｔｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｓｔｈｍａ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｐａｎｅｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  ２，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９７／４０５１，Ｊｕｌｙ  １９，１９９７に記載されており、参照により本明細書にその全内容が組み込まれる。ＮＩＨの刊行物に記載される医薬の要約を以下に示す。ほとんどの実施態様において、喘息／アレルギー医薬は、喘息およびアレルギーの両方を処置するのにある程度有用である。
【００８１】
喘息処置用薬剤は一般的に、二つのカテゴリー、急速緩和薬（ｑｕｉｃｋ−ｒｅｌｉｅｆ  ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ）および長期コントロール薬（ｌｏｎｇ−ｔｅｒｍ  ｃｏｎｔｒｏｌ  ｍｅｄｉｃａｔｉｏｎｓ）に分類される。喘息患者は、持続性の喘息のコントロールの達成および維持のために、毎日長期コントロール薬を服用する。長期コントロール薬には、抗炎症剤、例えばコルチコステロイド、クロモリンナトリウム、およびネドクロミル；長時間作用性の気管支拡張剤、例えば長時間作用性β2アゴニストおよびメチルキサンチン；ならびにロイコトリエン修飾薬が含まれる。急速緩和薬には、短時間作用性β2アゴニスト、抗コリン作用薬（ａｎｔｉ−ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃｓ）、および全身用コルチコステロイド（ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｃｏｒｔｉｃｏｓｔｅｒｏｉｄｓ）が含まれる。これらの薬物は各々多くの副作用を伴い、喘息を予防または完全に処置することは、どの薬物を単独使用または併用してもできない。
【００８２】
喘息医薬には、ＰＤＥ−４阻害剤、気管支拡張剤／ベータ２アゴニスト、Ｋ＋チャネル開口薬、ＶＬＡ−４アンタゴニスト、ニューロキニンアンタゴニスト、トロンボキサンＡ２（ＴＸＡ２）合成阻害剤、キサンチン、アラキドン酸アンタゴニスト、５リポキシゲナーゼ阻害剤、ＴＸＡ２受容体アンタゴニスト、ＴＸＡ２アンタゴニスト、５−リポキシゲナーゼ（５−ｌｉｐｏｘ）活性化タンパク質の阻害剤、およびプロテアーゼ阻害剤が含まれるがこれらに限定されない。
【００８３】
気管支拡張剤／β2アゴニストは、気管支拡張または平滑筋弛緩を引き起こす化合物のクラスである。気管支拡張剤／β2アゴニストには、サルメテロール、サルブタモール、アルブテロール、テルブタリン、Ｄ２５２２／ホルモテロール、フェノテロール、ビトルテロール、ピルブテロール（ｐｉｒｂｕｅｒｏｌ）メチルキサンチン、およびオルシプレナリンが含まれるがこれらに限定されない。長時間作用性β2アゴニストおよび気管支拡張剤は、抗炎症療法に加えて症状の長期的な予防のために使用される化合物である。長時間作用性β2アゴニストには、サルメテロールおよびアルブテロールが含まれるがこれらに限定されない。これらの化合物は、通常コルチコステロイドと組み合わせて使用され、一般的にどのような炎症療法であれ、炎症療法なしで使用されることはない。これらは、過量投与における副作用、例えば頻脈、骨格筋の振せん、低カリウム血症、およびＱＴｃ間隔の延長に関連している。
【００８４】
例えばテオフィリンを含むメチルキサンチンは、症状の長期間のコントロールおよび予防のために使用されている。これらの化合物は、ホスホジエステラーゼの阻害およびおそらくはアデノシンへの拮抗作用による気管支拡張を引き起こす。用量に関連する急性毒性は、これらのタイプの化合物に伴う一つの特定の問題である。結果として、代謝クリアランスにおける個人差から生じる毒性および治療範囲の狭さを把握するため、日常の血清濃度を観察しなければならない。副作用には、頻脈、頻脈性不整脈、悪心および嘔吐、中枢神経系の刺激、頭痛、発作、吐血、高血糖、ならびに低カリウム血症が含まれる。短時間作用性β2アゴニストには、アルブテロール、ビトルテロール、ピルブテロール、およびテルブタリンが含まれるがこれらに限定されない。短時間作用性β2アゴニストの投与に伴う副作用の一部には、頻脈、骨格筋の振せん、低カリウム血症、乳酸の増加、頭痛、および高血糖が含まれる。
【００８５】
アレルギーを処置または予防する従来の方法には、抗ヒスタミン剤または脱感作療法の使用が含まれる。抗ヒスタミン剤およびアレルギー反応の化学メディエーターの作用をブロックするその他の薬剤は、アレルギー症状の重症度を調節するのに寄与するが、アレルギー反応を予防するものではなく、その後のアレルギー反応に対する効果を有さない。脱感作療法は、アレルゲンに対するＩｇＧ型反応を誘導するため、通常は皮膚下への注射により、少量のアレルゲンを投与することにより行われる。ＩｇＧ抗体の存在は、ＩｇＥ抗体の誘導により生じたメディエーターの産生を中和するのを助けると考えられている。最初は、重度の反応の誘導を避けるため極少量のアレルゲンで対象を処置し、用量をゆっくりと増加させる。このタイプの治療は、実際にアレルギー反応を引き起こす化合物を対象に投与し、重度のアレルギー反応をひき起こす可能性があるため危険である。
【００８６】
アレルギー医薬には、抗ヒスタミン剤、ステロイド、およびプロスタグランジン誘導剤が含まれるがこれらに限定されない。抗ヒスタミン剤は、マスト細胞または好塩基球から放出されるヒスタミンを相殺する化合物である。これらの化合物は当該分野でよく知られており、アレルギーの処置に一般的に使用されている。抗ヒスタミン剤には、アステミゾール、アゼラスチン、ベタタスチン（ｂｅｔａｔａｓｔｉｎｅ）、ブクリジン、セテリジン（ｃｅｔｅｒｉｚｉｎｅ）、セチリジンアナログ、ＣＳ  ５６０、デスロラタジン（ｄｅｓｌｏｒａｔａｄｉｎｅ）、エバスチン、エピナスチン、フェキソフェナジン、ＨＳＲ  ６０９、レボカバスチン、ロラチジン（ｌｏｒａｔｉｄｉｎｅ）、ミゾラスチン、ノラステミゾール（ｎｏｒａｓｔｅｍｉｚｏｌｅ）、テルフェナジン、およびトラニラストが含まれるがこれらに限定されない。
【００８７】
プロスタグランジン誘導剤は、プロスタグランジン活性を誘導する化合物である。プロスタグランジンは、平滑筋の弛緩を調節することによって機能する。プロスタグランジン誘導剤には、Ｓ−５７５１が含まれるがこれらに限定されない。
【００８８】
喘息／アレルギー医薬には、ステロイドおよび免疫調節剤も含まれる。ステロイドには、ベクロメタゾン、フルチカゾン、トリアムシノロン、ブデゾニド、コルチコステロイドおよびブデゾニドが含まれるがこれらに限定されない。
【００８９】
コルチコステロイドには、二プロピオン酸ベクロメタゾン、ブデゾニド、フルニソリド、プロピオン酸フルチカゾン（ｆｌｕｔｉｃａｏｓｏｎｅ  ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）、およびトリアムシノロンアセトニドが含まれるがこれらに限定されない。デキサメタゾンは抗炎症作用を有するコルチコステロイドであるが、これは吸収率が高く、有効用量で長期的な抑制性の副作用を有するゆえに、吸入形式での喘息／アレルギーの処置に、一般的には使用されない。しかし、デキサメタゾンは、本発明の核酸と組み合わせて投与する場合は低用量で投与でき副作用が軽減されるので、本発明に従う喘息／アレルギーの処置に使用できる。コルチコステロイドに伴う副作用の一部には、咳、発声障害、口腔鵞口瘡（口腔カンジダ症）、ならびに高用量では全身への影響、例えば副腎抑制、骨粗鬆症、成長抑制、皮膚厚減少、およびあざの出来やすさが含まれる。Ｂａｒｎｅｓ  ＆  Ｐｅｔｅｒｓｏｎ（１９９３）Ａｍ  Ｒｅｖ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｄｉｓ  １４８：Ｓ１−Ｓ２６；およびＫａｍａｄａ  ＡＫ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １５３：１７３９−４８。
【００９０】
全身用コルチコステロイドには、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、およびプレドニゾンが含まれるがこれらに限定されない。コルチコステロイド（ｃｏｒｔｏｓｔｅｒｏｉｄ）は、グルコース代謝における可逆的な異常、食欲増加、体液貯留、体重増加、気分の変容、高血圧、消化性潰瘍、および骨の無菌壊死を伴う。これらの化合物は、十分にコントロールされない持続的な喘息における炎症反応の短期間（３〜１０日）の防止に有用である。これらはまた、炎症を抑制およびコントロールならびに実際に逆転させるための、重度の持続的喘息における症状の長期的な防止においても機能する。長期的な使用に伴ういくつかの副作用には、副腎軸抑制、成長抑制、皮膚厚減少、高血圧、糖尿病、クッシング症候群、白内障、筋力低下、および稀な例では免疫機能の損傷が含まれる。このタイプの化合物はそれらの最も低い有効量で使用すべきことが推奨されている（ｇｕｉｄｅｌｉｎｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｓｔｈｍａ；ｅｘｐｅｒｔ  ｐａｎｅｌ  ｒｅｐｏｒｔ  ｔｏ；ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９７−４０５１；Ｊｕｌｙ  １９９７）。
【００９１】
免疫調節剤には、抗炎症剤、ロイコトリエンアンタゴニスト、ＩＬ−４突然変異タンパク質、可溶型ＩＬ−４受容体、免疫抑制剤（例えば寛容化ペプチドワクチン）、抗ＩＬ−４抗体、ＩＬ−４アンタゴニスト、抗ＩＬ−５抗体、可溶型ＩＬ−１３受容体−Ｆｃ融合タンパク質、抗ＩＬ−９抗体、ＣＣＲ３アンタゴニスト、ＣＣＲ５アンタゴニスト、ＶＬＡ−４阻害剤、およびＩｇＥの下方制御剤からなる群が含まれるがこれらに限定されない。
【００９２】
ロイコトリエン修飾薬は、多くの場合、穏やかな持続性の喘息における症状の長期コントロールおよび防止のために使用される。ロイコトリエン修飾薬は、ＬＴＤ−４およびＬＴＥ−４受容体と選択的に競合することによってロイコトリエン受容体アンタゴニストとして機能する。これらの化合物には、ザフィルルカスト錠およびジレウトン錠が含まれるがこれらに限定されない。ジレウトン錠は、５−リポキシゲナーゼ阻害剤として機能する。これらの薬物は、肝酵素の亢進ならびにいくつかの症例では可逆的な肝炎および高ビリルビン血症と関連する。ロイコトリエンは、気道平滑筋を収縮し、血管透過性、粘液質分泌を増加させ、喘息患者の気道における炎症細胞を活性化させる、マスト細胞、好酸球（ｉｎｏｓｉｎｅｏｐｈｉｌｓ）、および好塩基球から放出される生化学的メディエーターである。
【００９３】
他の免疫調節剤には、免疫調節特性を有することが示された神経ペプチドが含まれる。機能研究は、例えば、サブスタンスＰが、特異的受容体により媒介される機構によりリンパ球の機能に影響を及ぼし得ることを示した。サブスタンスＰはまた、粘膜のマスト細胞からのアラキドン酸誘導メディエーターの生成を刺激することによって、顕著な即時型過敏反応を調節することが示された。ＭｃＧｉｌｌｉｅｓ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７）Ｆｅｄ  Ｐｒｏｃ  ４６：１９６−９（１９８７）。サブスタンスＰは、１９３１年に初めて同定された神経ペプチドである。Ｖｏｎ  Ｅｕｌｅｒ  ａｎｄ  Ｇａｄｄｕｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ（Ｌｏｎｄｏｎ）７２：７４−８７（１９３１）。そのアミノ酸配列は、Ｃｈａｎｇらによって１９７１年に報告された。Ｃｈａｎｇ  ＭＭ  ｅｔ  ａｌ．（１９７１）Ｎａｔｕｒｅ  Ｎｅｗ  Ｂｉｏｌ  ２３２：８６−８７。サブスタンスＰのフラグメントの免疫調節活性は、Ｓｉｅｍｉｏｎ  ＩＺ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｍｏｌｅｃ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２７：８８７−８９０（１９９０）によって研究されている。
【００９４】
別のクラスの化合物は、ＩｇＥの下方制御剤である。これらの化合物には、ＩｇＥ受容体に結合することによって抗原特異的なＩｇＥの結合を妨げる能力を有するペプチドまたはその他の分子が含まれる。別のタイプのＩｇＥ下方制御剤は、ヒトＩｇＥ分子のＩｇＥ受容体結合領域に対するモノクローナル抗体である。従って、ＩｇＥ下方制御剤の一つのタイプは抗ＩｇＥ抗体または抗体フラグメントである。抗ＩｇＥは、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ社により開発されつつある。当業者は、同じ機能を有する結合ペプチドの機能性抗体フラグメントを調製することができる。他のタイプのＩｇＥ下方制御剤は、ＩｇＥ抗体が細胞表面のＦｃ受容体に結合するのをブロックできるポリペプチドおよびすでに結合したＩｇＥを結合部位からはがすことができるポリペプチドである。
【００９５】
ＩｇＥ下方制御剤に関連する一つの問題は、多くの分子がネイティブＩｇＥ分子とその受容体の間の非常に強力な相互作用に対応する受容体に対する結合強度を有さない点である。この強度を有する分子は、不可逆的に受容体に結合する傾向がある。しかし、このような物質は、体内の他の構造的に類似する分子と共有結合しこれをブロックする可能性があるため比較的毒性が高い。この文脈で注目されるのは、ＩｇＥ受容体のα鎖が、例えば様々な異なるＩｇＧ  Ｆｃ受容体を含む大きな遺伝子ファミリーに属することである。これらの受容体は、身体の防御、例えば細菌感染に対する防御のために絶対的に必要である。さらに、共有結合性が活性化された分子は、比較的不安定な場合が多く、従ってそれらはおそらく、マスト細胞および好塩基性リンパ球において絶えず再生されるＩｇＥ受容体のプールを完全にブロックするために、一日に数回かつ比較的高濃度で投与される必要がある。
【００９６】
クロモリンナトリウムおよびネドクロミルは、主として運動により生じる喘息の症状またはアレルゲンにより生じるアレルギー症状を防止するための長期コントロール薬として使用される。これらの化合物は、塩化物チャネルの機能を妨げることによってアレルゲンに対する初期反応および後期反応をブロックすると考えられている。これらはまた、マスト細胞膜を安定化し、好酸球（ｉｎｏｓｉｎｅｏｐｈｉｌｓ）および上皮細胞からのメディエーターの活性化および放出を阻害する。一般的に、最大効果を達成するためには、４〜６週間の投与が必要である。
【００９７】
抗コリン作用剤は、一般的に、急性気管支痙攣の緩和のために使用される。これらの化合物は、ムスカリン性コリン受容体の競合的阻害により機能すると考えられる。抗コリン作用剤には、臭化イプラトロピウムが含まれるがこれに限定されない。これらの化合物は、コリン媒介性の気管支痙攣のみを逆転させ、抗原に対するいかなる反応も変化させない。副作用には、口腔内の乾きおよび呼吸器内分泌物（ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｓｅｃｒｅｔｉｏｎｓ）、一部の個体においては喘鳴の増加、ならびに目に噴霧された場合のかすみ目が含まれる。
【００９８】
インビトロおよびインビボでの使用について、本発明のｓｉＲＮＡは、一般的には有効量で使用される。本明細書中で使用する場合、有効量は、一般的に、所望の生物学的効果を達成するのに十分な任意の量を意味する。一つの実施態様において、有効量は、疾患を有する対象を処置するのに十分ないずれかの量である、臨床有効量である。本明細書中で使用する場合、処置および処置するは、疾患を有するまたはその危険のある対象において疾患の少なくとも一つの徴候または症状を軽減、除去、または予防することを意味する。本明細書中で使用する場合、対象はヒトまたはその他の哺乳動物を意味する。
【００９９】
本明細書中に提供される教示と合わせて、様々な活性化合物および重要な要素、例えば効力、相対的な生物学的利用能、患者の体重、不都合な副作用の重症度、および好ましい投与様式の中から選択することによって、重大な毒性を引き起こさずに特定の対象を処置するのにそれでも有効である効果的な予防的または治療的な処置レジメンを計画できる。いずれの特定の適用についての有効量は、処置されている疾患または状態、投与される特定のｓｉＲＮＡ、対象のサイズ、疾患または状態の重症度等の要因に依存して変更され得る。当業者は、過度の実験を必要とすることなく特定のｓｉＲＮＡおよび／またはその他の治療剤の有効量を経験的に決定することが出来る。一般的には、最大用量、すなわちいくつかの医学的判断に従う最も高用量で安全な量が使用されることが好ましい。化合物の適切な全身レベルを達成するために、一日につき反復投与が意図され得る。適切な全身レベルは、例えばその薬物の患者のピークレベルまたは持続的血清レベルを測定することによって決定できる。「用量」および「投与量」は本明細書中で互換的に使用する。
【０１００】
一般的に、活性化合物の一日の経口用量は、約０.０１ミリグラム／ｋｇ／日〜１０００ミリグラム／ｋｇ／日である。一日一回または数回の投与による、０.５〜５０ミリグラム／ｋｇの範囲の経口用量が所望の結果をもたらすものと予期される。投与量は、投与様式に依存して、局所的または全身的な所望の薬物レベルを達成するよう適切に調節され得る。例えば、静脈内投与では、一日あたり一桁〜数桁の規模で少ない用量になると予期される。対象の反応がそのような用量で不十分な事象においては、患者の耐容性が許す限り、それよりも高用量（または別のより局所的な送達経路による効果的な高用量）が使用され得る。化合物の適当な全身レベルを達成するために、一日につき反復投与も意図される。
【０１０１】
本明細書中に記載される任意の化合物についての治療有効量は、最初に動物モデルから測定され得る。治療有効用量はまた、ヒトにおいて試験したｓｉＲＮＡについておよび類似の薬理学的活性を示すことが既知の化合物、例えば他の関連する活性な薬剤についてのヒトデータから測定され得る。非経口投与にはより高用量が必要とされる場合がある。適用される用量は、投与される化合物の相対的な生物学的利用能および効力に基づき調整され得る。上記の方法および当該分野でよく知られた他の方法に基づき最大効果を達成するよう用量を調整することは、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０１０２】
細胞へのｓｉＲＮＡの送達を促進するため、ｓｉＲＮＡは、場合により陽イオン性脂質と共存させ、これを用いて処方し、またはそれ以外ではこれと混和され得る。一つの実施態様において、このような陽イオン性脂質はＤＯＴＡＰである。
【０１０３】
治療上の使用のために、有効量のｓｉＲＮＡは、ｓｉＲＮＡを所望の表面に送達する任意の様式により対象に投与され得る。本発明の薬学的組成物の投与は、当業者に公知の任意の手段により達成され得る。好ましい投与経路には、経口経路、非経口経路、筋肉内経路、鼻腔内経路、舌下経路、気管内経路、吸入経路、眼経路、膣経路、および直腸経路が含まれるがこれらに限定されない。
【０１０４】
本発明のｓｉＲＮＡは、ベクターの助けを得て、特定の組織、細胞型、もしくは免疫系に、またはその全てに送達され得る。その最も広義の意味において、「ベクター」は、標的細胞への組成物の移動を促進することの出来る任意の媒体である。ベクターは一般的に、ベクターの非存在下で起こりうる分解の程度と比較して分解を減少させつつ、標的細胞にｓｉＲＮＡ、抗体、抗原、および／または障害特異的な医薬を輸送する。
【０１０５】
一般的に、本発明において有用なベクターは、二つのクラス：生物学的ベクターおよび化学的／物理的ベクターに分類される。生物学的ベクターおよび化学的／物理的ベクターは、本発明の治療剤の送達および／または取り込みに有用である。
【０１０６】
本明細書中で使用する場合、「化学的／物理的ベクター」は、ｓｉＲＮＡおよび／またはその他の医薬を送達できる、細菌学的またはウイルス学的な供給源に由来する分子以外の天然分子または合成分子を意味する。
【０１０７】
本発明の好ましい化学的／物理的ベクターは、コロイド分散系である。コロイド分散系には、水中油型エマルジョン、ミセル、混合ミセル、およびリポソームを含む脂質ベースの系が含まれる。本発明の好ましいコロイド系はリポソームである。リポソームは、インビボまたはインビトロで送達ベクターとして有用な人工の膜小胞である。サイズが０.２〜４.０μｍの範囲の大きな一枚膜リポソーム（ＬＵＶ）は、大きな高分子を被包できることが示されている。ＲＮＡ、ＤＮＡ、およびインタクトなビリオンを、水性の内部に被包でき、生物学的に活性な形態で細胞に送達できる。Ｆｒａｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９８１）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｃｉ  ６：７７。
【０１０８】
リポソームは、リポソームを特定のリガンド、例えばモノクローナル抗体、糖、糖脂質、またはタンパク質と結合させることによって特定の組織に標的化され得る。リポソームを免疫細胞に標的化するのに有用であり得るリガンドには、免疫細胞特異的な受容体および分子と相互作用するインタクトな分子または分子のフラグメント、例えば免疫細胞の細胞表面マーカーと相互作用する抗体が含まれるがこれらに限定されない。このようなリガンドは、当業者によく知られた結合アッセイによって容易に同定され得る。さらに他の実施態様において、リポソームは、それを前に議論された免疫療法用の抗体の一つと結合させることによってがんに対して標的化され得る。さらに、ベクターは、ベクターを宿主細胞の核に誘導する核標的化ペプチドと結合され得る。
【０１０９】
トランスフェクションのための脂質処方物は、例えばＥＦＦＥＣＴＥＮＥTM（特別なＤＮＡ凝縮エンハンサーを有する非リポソーム脂質）およびＳＵＰＥＲＦＥＣＴTM（新らしい作用を有するデンドリマー技術）がＱＩＡＧＥＮ社から販売されている。
【０１１０】
リポソームは、例えば陽イオン性脂質、例えばＮ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）−プロピル］−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロリド（ＤＯＴＭＡ）およびジメチルジオクタデシルアンモニウムブロミド（ＤＤＡＢ）から形成された、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮTMおよびＬＩＰＯＦＥＣＴＡＣＥTMがＧｉｂｒｏ  ＢＲＬ社から販売されている。リポソームの作製方法は当該分野でよく知られており、多くの刊行物に記載されている。リポソームは、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ  Ｇ（１９８５）Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  ３：２３５−２４１においても概説されている。
【０１１１】
一つの実施態様において、媒体は、哺乳動物レシピエントへの埋入または投与に適した生体適合性の微粒子またはインプラントである。この方法に従い使用される典型的な生体浸食性（ｂｉｏｅｒｏｄｉｂｌｅ）インプラントは、国際特許出願公開ＷＯ９５／２４９２９、発明の名称「Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｇｅｎｅ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍ」に記載されている。ＷＯ９５／２４９２９は、適切なプロモーターの制御下にある外来遺伝子を収容するための生体適合性、好ましくは生分解性のポリマーマトリクスを記載する。このポリマーマトリクスは、対象において治療剤の徐放性を達成するのに使用できる。
【０１１２】
ポリマーマトリクスは、好ましくは、微粒子、例えばマイクロスフェア（核酸および／または他の治療剤が固体ポリマーマトリクス全体に分散されたもの）またはマイクロカプセル（核酸および／または他の治療剤がポリマーシェルの核に収納されたもの）の形態である。治療剤を収納するためのポリマーマトリクスの他の形態には、フィルム、コーティング、ゲル、インプラント、およびステントが含まれる。ポリマーマトリクスデバイスのサイズおよび組成は、マトリクスを導入する組織において好ましい放出速度が得られるよう選択される。ポリマーマトリクスのサイズはさらに、使用しようとする送達方法、典型的には組織への注射またはエアゾールによる鼻および／もしくは肺領域への懸濁物の投与、に従い選択される。好ましくは、エアゾール経路が使用される場合、ポリマーマトリクスならびに核酸および／または他の治療剤は界面活性媒体（ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  ｖｅｈｉｃｌｅ）に包含される。ポリマーマトリクスの組成は、好ましい分解速度を有し、生体接着性（ｂｉｏａｄｈｅｓｉｖｅ）の物質から形成され、マトリクスが損傷を受けた鼻および／または肺表面に投与される場合、転移の有効性をさらに高めるよう選択され得る。マトリクスの組成はまた、分解ではなく、長時間にわたる拡散により放出されるよう選択され得る。いくつかの好ましい実施態様において、核酸はインプラントを通じて対象に投与されるが、他の治療剤は急性投与される。送達、例えば経口送達または粘膜送達に適した生体適合性のマイクロスフェアは、Ｃｈｉｃｋｅｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ｂｉｏｅｎｇ  ５２：９６−１０１およびＭａｔｈｉｏｗｉｔｚ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｎａｔｕｒｅ  ３８６：４１０−４１４ならびにＰＣＴ特許出願公開ＷＯ９７／０３７０２に開示されている。
【０１１３】
非生分解性ポリマーマトリクスおよび生分解性ポリマーマトリクスは両方とも、核酸および／または他の治療剤を対象に送達するのに使用できる。生分解性マトリクスが好ましい。このようなポリマーは、天然ポリマーまたは合成ポリマーであり得る。ポリマーは、放出が望まれる期間、一般的には数時間から一年またはそれ以上のオーダーの期間、に基づき選択される。典型的には、特に核酸薬剤については、数時間から３〜１２ヶ月の範囲の期間にわたる放出が最も望ましい。ポリマーは、場合により、水で最大その重量の約９０％を吸収できるヒドロゲルの形態であり、さらに、場合により、多価イオンまたは他のポリマーと架橋される。
【０１１４】
特に興味深い生体接着性ポリマーには、その教示が本明細書に組み込まれるＨ．Ｓ．Ｓａｗｈｎｅｙ，Ｃ．Ｐ．Ｐａｔｈａｋ  ａｎｄ  Ｊ．Ａ．Ｈｕｂｅｌｌ  ｉｎ  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，（１９９３）２６：５８１−５８７に記載された生体浸食性ヒドロゲルが含まれる。これらには、ポリヒアルロン酸、カゼイン、ゼラチン、グルチン、ポリアンヒドリド、ポリアクリル酸、アルギネート、キトサン、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、およびポリ（オクタデシルアクリレート）が含まれる。
【０１１５】
圧縮剤（ｃｏｍｐａｃｔｉｏｎ  ａｇｅｎｔｓ）の使用もまた望ましい場合がある。圧縮剤はまた、単独でまたは生物学的ベクターもしくは化学的／物理的ベクターと組み合わせて使用できる。本明細書中で使用する場合、「圧縮剤」は、核酸の負電荷を中和することによって核酸を細粒に圧縮することを可能にする薬剤、例えばヒストンを意味する。核酸の圧縮は、標的細胞による核酸の取り込みを促進する。圧縮剤は、単独で、すなわち細胞により効率的に取り込まれる形態で核酸を送達するために使用でき、より好ましくは上記のベクターの一つまたはそれ以上と組み合わせて使用され得る。
【０１１６】
核酸の取り込みを促進するために使用できる他の典型的な組成物には、リン酸カルシウム、および細胞内転送の他の化学メディエーター、マイクロインジェクション組成物、エレクトロポレーションおよび相同組換え組成物が含まれる（例えば、核酸を標的細胞の染色体内の予め選択された位置に組み込むため）。
【０１１７】
化合物は、（例えば、生理食塩水または緩衝液中で）単独で、または当該分野で公知の任意の送達ベクターを用いて投与され得る。例えば、以下の送達用媒体が記載されている：渦巻体（ｃｏｃｈｌｅａｔｅｓ）（Ｇｏｕｌｄ−Ｆｏｇｅｒｉｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，１９９６）；エマルソーム（Ｅｍｕｌｓｏｍｅｓ）（Ｖａｎｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｌｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）；ＩＳＣＯＭ（Ｍｏｗａｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｃａｒｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｈｕ  ｅｔ．，１９９８，Ｍｏｒｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）；リポソーム（Ｃｈｉｌｄｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｍｉｃｈａｌｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，１９９２，ｄｅ  Ｈａａｎ  １９９５ａ，１９９５ｂ）；生細菌ベクター（例えばサルモネラ、大腸菌、カルメット・ゲラン菌、赤痢菌、乳酸杆菌）（Ｈｏｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｐｏｕｗｅｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｃｈａｔｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｓｔｏｖｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｎｕｇｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）；生ウイルスベクター（例えばワクシニア、アデノウイルス、単純疱疹）（Ｇａｌｌｉｃｈａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，１９９５，Ｍｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｎｕｇｅｎｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｆｌｅｘｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｍｏｒｒｏｗ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９）；マイクロスフェア（Ｇｕｐｔａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｊｏｎｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｍａｌｏｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｍｏｏｒｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｏ'Ｈａｇａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｅｌｄｒｉｄｇｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９）；核酸ワクチン（Ｆｙｎａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｋｕｋｌｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｓａｓａｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｏｋａｄａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｉｓｈｉｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７）；ポリマー（例えばカルボキシメチルセルロース、キトサン）（Ｈａｍａｊｉｍａ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｊａｂｂａｌ−Ｇｉｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）；ポリマー環（Ｗｙａｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）；プロテオソーム（Ｖａｎｃｏｔｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｌｏｗｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，１９９６，１９９７）；フッ化ナトリウム（Ｈａｓｈｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）；トランスジェニック植物（Ｔａｃｋｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｍａｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｈａｑ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５）；ビロソーム（Ｇｌｕｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｍｅｎｇｉａｒｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｃｒｙｚ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）；および、ウイルス様粒子（Ｊｉａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｌｅｉｂｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８）。
【０１１８】
本発明の処方物は、薬学的に許容される濃度の塩、緩衝剤、保存剤、適合性の担体、アジュバント、および場合により他の治療成分を通常含み得る薬学的に許容される液剤として投与される。
【０１１９】
薬学的に許容される担体という用語は、ヒトまたは他の脊椎動物への投与に適する一つまたはそれ以上の適合性の固体または液体の増量剤、希釈剤、または被包物質を意味する。担体という用語は、適用を容易にするため活性成分と混合される、天然または合成の、有機または無機成分を表す。薬学的組成物の成分はまた、所望の薬学的効率を実質的に損ねる相互作用を起こさない様式で、本発明の化合物と、および相互に混合できるものである。
【０１２０】
経口投与用の化合物（すなわちｓｉＲＮＡおよび場合により他の治療剤）は、活性化合物を当該分野でよく知られた薬学的に許容される担体と組み合わせることによって容易に処方できる。このような担体により、本発明の化合物を、処置しようとする対象による経口摂取のために錠剤、丸剤、糖剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー剤、懸濁剤等として処方することができる。経口使用の薬学的製剤は、固体賦形剤との混合物として獲得でき、場合により得られる混合物を粉砕し、必要な場合は錠剤または糖剤のコアを獲得するために適当な補助物質を加えた後に顆粒の混合物を処理する。適当な賦形剤は、特に、増量剤、例えばラクトース、スクロース、マンニトール、またはソルビトールを含む糖；セルロース調製物、例えばトウモロコシデンプン（ｍａｉｚｅ  ｓｔａｒｃｈ）、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガントゴム、メチルセルロース、ヒドロキプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）である。必要な場合、崩壊剤、例えば架橋型ポリビニルピロリドン、寒天、もしくはアルギン酸、またはそれらの塩、例えばアルギン酸ナトリウムが添加され得る。場合により、経口用処方物はまた、内部の酸条件を中和するため、生理食塩水または緩衝剤中、例えばＥＤＴＡで処方され得るか、またはいかなる担体も伴わずに投与され得る。
【０１２１】
また特に意図されるものは、上記の成分または成分群の経口用剤形である。成分または成分群は、それらの誘導体の経口送達を効果的に行えるよう化学修飾され得る。一般的に、意図される化学修飾は、少なくとも一つの部分の、その成分分子自体への結合であって、該部分が（ａ）タンパク質分解の阻害；および（ｂ）胃または腸から血流への取り込みを可能にするものである。成分または成分群の全体の安定性の向上および体内循環時間の増加もまた望ましい。このような部分の例には、ポリエチレングリコール、エチレングリコールおよびプロピレングリコールのコポリマー、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、ならびにポリプロリンが含まれる。Ａｂｕｃｈｏｗｓｋｉ  ａｎｄ  Ｄａｖｉｓ，１９８１，“Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒ−Ｅｎｚｙｍｅ  Ａｄｄｕｃｔｓ”Ｉｎ：Ｅｎｚｙｍｅｓ  ａｓ  Ｄｒｕｇｓ，Ｈｏｃｅｎｂｅｒｇ  ａｎｄ  Ｒｏｂｅｒｔｓ，ｅｄｓ．，Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，ｐｐ．３６７−３８３；Ｎｅｗｍａｒｋ，ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．４：１８５−１８９。使用できる他のポリマーは、ポリ−１，３−ジオキソランおよびポリ−１，３，６−チオキソカン（ｔｉｏｘｏｃａｎｅ）である。上記のように、ポリエチレングリコール部分は薬学的使用に好ましい。
【０１２２】
成分（または誘導体）の放出部位は、胃、小腸（十二指腸、空腸、もしくは回腸）、または大腸であり得る。当業者は、胃で溶解せず、十二指腸または腸内の他の場所で物質を放出する処方物を利用できる。好ましくは、放出は、ｓｉＲＮＡ（もしくは誘導体）の保護により、または生物学的に活性な物質を胃内環境の先、例えば腸内で放出することによって、胃内環境の悪影響を回避する。
【０１２３】
十分な耐胃液性を確保するためには、少なくともｐＨ５.０で不浸透性のコーティングが必須である。腸溶コーティング剤として使用されるより一般的な不活性成分の例は、セルロースアセテートトリメリテート（ＣＡＴ）、ヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレート（ＨＰＭＣＰ）、ＨＰＭＣＰ  ５０、ＨＰＭＣＰ  ５５、ポリビニルアセテートフタレート（ＰＶＡＰ）、オイドラギット（Ｅｕｄｒａｇｉｔ）Ｌ３０Ｄ、アクアテリック（Ａｑｕａｔｅｒｉｃ）、セルロースアセテートフタレート（ＣＡＰ）、オイドラギット  Ｌ、オイドラギット  Ｓ、およびシェラック（Ｓｈｅｌｌａｃ）である。これらのコーティング剤は混合フィルムとして使用され得る。
【０１２４】
コーティングまたはコーティング混合物は、胃に対する保護を意図しない錠剤においても使用できる。これには、糖衣、または錠剤の嚥下を容易にするコーティングが含まれ得る。カプセル剤は、乾燥治療剤、すなわち粉末の送達の場合はハードシェル（例えばゼラチン）からなり得；液体形態の場合はソフトゼラチンシェルが使用され得る。カシェ剤のシェル材料は、厚みのあるデンプンまたはその他の可食性ペーパーであり得る。丸剤、ロゼンジ剤、湿製錠剤、または錠剤摩砕薬（ｔａｂｌｅｔ  ｔｒｉｔｕｒａｔｅｓ）については、加湿マス化（ｍｏｉｓｔ  ｍａｓｓｉｎｇ）技術が使用され得る。
【０１２５】
治療剤は、約１ｍｍの粒子サイズの顆粒またはペレットの形態中の細かい多量の微粒子として処方物に含まれ得る。カプセル投与用の物質の処方物は、粉末、軽度に圧縮されたプラグ（ｌｉｇｈｔｌｙ  ｃｏｍｐｒｅｓｓｅｄ  ｐｌｕｇｓ）であってもよく、または錠剤でさえあり得る。治療剤は圧縮により調製され得る。
【０１２６】
着色剤および着香剤は全て含まれ得る。例えば、ｓｉＲＮＡ（または誘導体）は処方され（例えばリポソームまたはマイクロスフェアによる被包によって）、次いで可食性の製品、例えば着色剤および着香剤を含む冷蔵保存された飲物にさらに含有され得る。
【０１２７】
不活性物質で治療剤を希釈するかまたはその量を増やす場合もある。これらの希釈剤には、糖質、特にマンニトール、ａ−ラクトース、無水ラクトース、セルロース、スクロース、修飾デキストラン、およびデンプンが含まれ得る。三リン酸カルシウム、炭酸マグネシウム、および塩化ナトリウムを含む特定の無機塩もまた、増量剤として使用できる。市販の希釈剤には、ファスト・フロー（Ｆａｓｔ−Ｆｌｏ）、エムデックス（Ｅｍｄｅｘ）、ＳＴＡ−Ｒｘ  １５００、エムコンプレス（Ｅｍｃｏｍｐｒｅｓｓ）、およびアビセル（Ａｖｉｃｅｌｌ）がある。
【０１２８】
崩壊剤は、治療剤を固体剤形に処方する際に含まれ得る。崩壊剤として使用される物質には、市販のデンプンベースの崩壊剤、エクスプロタブ（Ｅｘｐｌｏｔａｂ）を含むデンプンが含まれるがこれらに限定されない。デンプングリコール酸ナトリウム、アンバーライト、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ウルトラマイロペクチン（ｕｌｔｒａｍｙｌｏｐｅｃｔｉｎ）、アルギン酸ナトリウム、ゼラチン、オレンジピール、酸性カルボキシメチルセルロース、海綿、およびベントナイトは全て使用され得る。別の形態の崩壊剤は、不溶性陽イオン交換樹脂である。粉末ゴムは崩壊剤としておよび結合剤として使用され得、これらには、寒天、カラヤ、またはトラガント等の粉末ゴムが含まれ得る。アルギン酸およびそのナトリウム塩も崩壊剤として有用である。
【０１２９】
結合剤は、治療剤を保持して硬い錠剤を一緒に形成するために使用され得、天然産物由来の物質、例えばアカシア、トラガント、デンプン、およびゼラチンが含まれる。他には、メチルセルロース（ＭＣ）、エチルセルロース（ＥＣ）、およびカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）が含まれる。ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）は両方とも、治療剤を造粒するためのアルコール溶液中で使用できる。
【０１３０】
減摩剤（ａｎｔｉ−ｆｒｉｃｔｉｏｎａｌ  ａｇｅｎｔ）は、処方プロセスの間のスティッキングを防止するために治療剤の処方物に含まれ得る。滑沢剤は、治療剤とダイス壁間の層として使用され得、これらには、ステアリン酸マグネシウム塩およびカルシウム塩を含むステアリン酸、ポリテトラフルオロエチレン（ＰＴＦＥ）、流動パラフィン、植物油、およびロウが含まれ得るがこれらに限定されない。可溶性の滑沢剤、例えばラウリル硫酸ナトリウム、ラウリル硫酸マグネシウム、様々な分子量のポリエチレングリコール、カーボワックス（Ｃａｒｂｏｗａｘ）４０００および６０００もまた使用され得る。
【０１３１】
処方時の薬物の流動特性を改善し、圧縮時の再配列を補助し得る流動促進剤が添加され得る。流動促進剤には、デンプン、タルク、発熱性シリカ、およびアルミニウムケイ酸水和物が含まれ得る。
【０１３２】
治療剤の水性環境への溶解を補助するため、湿潤剤として界面活性剤が添加され得る。界面活性剤には、陰イオン性界面活性剤、例えばラウリル硫酸ナトリウム、スルホコハク酸ジオクチルナトリウム、およびスルホン酸ジオクチルナトリウムが含まれ得る。陽イオン性界面活性剤も使用され得、これらには塩化ベンザルコニウムまたは塩化ベンゼトニウム（ｂｅｎｚｅｔｈｏｍｉｕｍ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）が含まれ得る。界面活性剤として処方物に含んでいてもよい潜在的な非イオン性界面活性剤のリストは、ラウロマクロゴール４００、ステアリン酸ポリオキシル４０、ポリオキシエチレン硬化ヒマシ油１０、５０、および６０、モノステアリン酸グリセリン、ポリソルベート４０、６０、６５、および８０、スクロース脂肪酸エステル、メチルセルロース、ならびにカルボキシメチルセルロースである。これらの界面活性剤は、単独でまたは様々な比率の混合物としてのいずれかでｓｉＲＮＡまたは誘導体の処方物に含まれ得る。
【０１３３】
経口的に使用できる薬学的製剤には、ゼラチンで形成されるプッシュフィットカプセル、ならびにゼラチンおよび可塑剤、例えばグリセリンまたはソルビトールで形成されるソフトシールカプセルが含まれる。プッシュフィットカプセルは、増量剤、例えばラクトース、結合剤、例えばデンプン、および／または滑沢剤、例えばタルクもしくはステアリン酸マグネシウム、ならびに場合により安定剤と共に活性成分を含み得る。ソフトカプセルにおいて、活性化合物は、適当な液体、例えば脂肪油、流動パラフィン、または液体ポリエチレングリコールに溶解または懸濁され得る。さらに、安定剤が添加され得る。経口投与用に処方されたマイクロスフェアもまた使用され得る。このようなマイクロスフェアは当該分野で十分明確である。全ての経口投与用処方物は、このような投与に適した用量であるべきである。
【０１３４】
口腔投与のための組成物は、従来の様式で処方された錠剤またはロゼンジ剤の形態をとり得る。
【０１３５】
吸入による投与について、本発明に従い使用するための化合物は、適当な噴出剤、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適当なガスを使用して、加圧容器またはネブライザーからのエアゾールスプレー提示の形態で送達されるのがよい。加圧エアゾールの場合、投与量単位は、計量された量を送達するための弁を提供することによって決定され得る。化合物および適当な粉末基剤、例えばラクトースまたはデンプンの粉末混合物を含む、例えば吸入器または注入器において使用するためのゼラチン製のカプセルおよびカートリッジが処方され得る。
【０１３６】
ｓｉＲＮＡ（またはその誘導体）の肺送達もまた本発明において意図される。ｓｉＲＮＡ（または誘導体）は、吸入の間に哺乳動物の肺に送達され、肺上皮層を超えて血流に至る。他の吸入される分子の報告にはＡｄｊｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，７：５６５−５６９；Ａｄｊｅｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，６３：１３５−１４４（酢酸ロイプロリド）；Ｂｒａｑｕｅｔ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，１３（ｓｕｐｐｌ．５）：１４３−１４６（エンドセリン−１）；Ｈｕｂｂａｒｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，１１１：２０６−２１２（アルファ１−抗トリプシン）；Ｓｍｉｔｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８４：１１４５−１１４６（ａ−１−プロテイナーゼ）；Ｏｓｗｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，“Ａｅｒｏｓｏｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ”，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ｏｎ  Ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ＩＩ，Ｋｅｙｓｔｏｎｅ，Ｃｏｌｏｒａｄｏ，Ｍａｒｃｈ，（組換えヒト成長ホルモン）；Ｄｅｂｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：３４８２−３４８８（インターフェロン−ガンマおよび腫瘍壊死因子アルファ）ならびにＰｌａｔｚらの米国特許第５,２８４,６５６号（顆粒球コロニー刺激因子）が含まれる。全身作用性の薬物の肺送達のための方法および組成物は、Ｗｏｎｇらに対して１９９５年９月１９日に発行された米国特許第５,４５１,５６９号に記載されている。
【０１３７】
ネブライザー、定量吸入器、および粉末吸入器を含むがこれらに限定されない、治療製品の肺送達用に設計された広範囲の機械的デバイスは、本発明の実施の際の利用が意図されており、これらは全て当業者に熟知されている。
【０１３８】
本発明を実施するのに適した市販のデバイスのいくつかの具体例は、Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ，Ｉｎｃ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｉｓｓｏｕｒｉにより製造されたウルトラベント（Ｕｌｔｒａｖｅｎｔ）ネブライザー；Ｍａｒｑｕｅｓｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｎｇｌｅｗｏｏｄ，Ｃｏｌｏｒａｄｏによって製造されたエイコン（Ａｃｏｒｎ）ＩＩネブライザー；Ｇｌａｘｏ  Ｉｎｃ．，Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｔｒｉａｎｇｌｅ  Ｐａｒｋ，Ｎｏｒｔｈ  Ｃａｒｏｌｉｎａにより製造されたベントリン（Ｖｅｎｔｏｌｉｎ）定量吸入器；およびＦｉｓｏｎｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｅｄｆｏｒｄ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓにより製造されたスピンヘイラー（Ｓｐｉｎｈａｌｅｒ）粉末吸入器である。
【０１３９】
全てのこのようなデバイスは、ｓｉＲＮＡ（または誘導体）の分配に適した処方物の使用を必要とする。典型的には、各々の処方物は、使用されるデバイスのタイプに特異的なものであり、かつ治療上有用な通常の希釈剤、アジュバント、および／または担体に加えて適切な噴出物質の使用を必要とし得る。リポソーム、マイクロカプセルもしくはマイクロスフェア、包接錯体（ｉｎｃｌｕｓｉｏｎ  ｃｏｍｐｌｅｘｅｓ）、またはその他のタイプの担体の使用もまた意図される。化学修飾されたｓｉＲＮＡもまた、化学修飾のタイプまたは使用するデバイスのタイプに依存して異なる処方物として調製され得る。
【０１４０】
ジェット式または超音波式のいずれかのネブライザーとともに使用するのに適した処方物は、典型的には、１ｍＬの溶液あたり約０.１〜２５ｍｇの生物学的に活性なｓｉＲＮＡの濃度で水に溶解されたｓｉＲＮＡ（または誘導体）を含む。処方物はまた、（例えばｓｉＲＮＡの安定化および浸透圧の調節のために）緩衝剤および単純な糖を含み得る。ネブライザー用処方物はまた、エアゾールを形成する際の溶液の噴霧化により引き起こされるｓｉＲＮＡの表面誘起性の凝集を軽減または防止するために界面活性剤を含み得る。
【０１４１】
定量吸入デバイスと共に使用するための処方物は一般的に、界面活性剤の助けをかりて噴出剤に懸濁されたｓｉＲＮＡ（または誘導体）を含む微粉化粉末を含む。噴出剤は、この目的で使用される任意の従来の物質、例えばクロロフルオロカーボン、ヒドロクロロフルオロカーボン、ヒドロフルオロカーボン、またはトリクロロフルオロメタン、ジクロロジフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタノール、および１，１，１，２−テトラフルオロエタン、もしくはこれらの組み合わせを含む炭化水素であり得る。適当な界面活性剤には、トリオレイン酸ソルビタンおよびダイズレシチンが含まれる。オレイン酸もまた界面活性剤として有用であり得る。
【０１４２】
粉末吸入デバイスから分配するための処方物は、ｓｉＲＮＡ（または誘導体）を含む微粉化乾燥粉末を含み、かつデバイスからの粉末の分配を容易にする量、例えば処方物の重量の５０〜９０％のバルキング剤、例えばラクトース、ソルビトール、スクロース、またはマンニトールを含み得る。ｓｉＲＮＡ（または誘導体）は、肺末梢への最も効果的な送達のために、平均粒子径が１０μｍ（ミクロン）未満、最も好ましくは０.５〜５μｍの微粒子形態で調製されるのが最もよいはずである。
【０１４３】
本発明の薬学的組成物の経鼻送達もまた意図される。経鼻送達は、治療製品を鼻に投与した後直接的に本発明の薬学的組成物を血流へと通過させることができ、肺にその製品を蓄積する必要がない。経鼻送達用の処方物にはデキストランまたはシクロデキストランを含む処方物が含まれる。
【０１４４】
経鼻送達に有用なデバイスは定量噴霧器が装着された小型のハードボトルである。一つの実施態様において、秤量された用量は、エアゾール化のための寸法の開口部およびチャンバー内の液体が加圧された際の噴霧の形成によるエアゾール処方物を有する規定量のチャンバーに本発明の薬学的組成物の溶液をくみ出すことにより送達される。本発明の薬学的組成物を投与するためチャンバーは加圧される。特定の実施態様において、チャンバーはピストン構成である。このようなデバイスは販売されている。
【０１４５】
あるいは、絞った際の噴霧の形成によりエアゾール処方物をエアゾール化するための寸法の開口部または孔を有するプラスチック製のスクイーズボトルが使用される。孔は通常、ボトルの頂上に見出され、頂上は一般的に、エアゾール処方物の効率的な投与のために鼻の通路と部分的にフィットするようテーパー状になっている。好ましくは、経鼻吸入器は、秤量された用量の薬物の投与のために、秤量された量のエアゾール処方物を提供する。
【０１４６】
化合物は、全身的な送達が望ましい場合、注射、例えばボーラス注射または連続注入による非経口投与用に処方され得る。注射用処方物は、保存剤が添加された単位剤形、例えばアンプルまたは反復投与用容器に含まれ得る。組成物は、油状媒体または水性媒体中の懸濁剤、液剤、または乳剤等の形態をとり得、懸濁化剤、安定剤、および／または分散剤等の処方化剤を含み得る。
【０１４７】
非経口投与用の薬学的処方物には、水溶性形態の活性化合物の水性液剤が含まれる。さらに、活性化合物の懸濁剤は、適切な油状注射用懸濁剤として調製され得る。適当な親油性溶媒または媒体には、脂肪油、例えばゴマ油、もしくは合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチルもしくはトリグリセリド、またはリポソームが含まれる。水性の注射用懸濁剤は、懸濁液の粘性を増加させる物質、例えばカルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、またはデキストランを含み得る。場合により、懸濁液はまた、適当な安定剤または高濃縮液剤の調製を可能にするよう化合物の溶解性を高める薬剤を含み得る。
【０１４８】
あるいは、活性化合物は、適当な媒体、例えば無菌、発熱物質非含有の水で使用前に構成するための粉末形態であり得る。
【０１４９】
化合物はまた、例えば従来の坐剤基剤、例えばカカオ脂またはその他のグリセリドを含む直腸または膣用組成物、例えば坐剤または停留浣腸剤（ｒｅｔｅｎｔｉｏｎ  ｅｎｅｍａｓ）として処方され得る。
【０１５０】
上記の処方物に加えて、化合物はまたデポー製剤として処方され得る。このような長時間作用性の処方物は、適当なポリマーまたは疎水性物質（例えば許容される油中のエマルジョンとして）もしくはイオン交換樹脂を用いて、または低溶解性の誘導体、例えば低溶解性の塩として処方され得る。
【０１５１】
薬学的組成物はまた、適当な固相またはゲル相の担体または賦形剤を含み得る。このような担体または賦形剤の例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖、デンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリマー、例えばポリエチレングリコールが含まれるがこれらに限定されない。
【０１５２】
適当な液体または固体の薬学的製剤の形態は、例えば、吸入用の水性液剤もしくは生理食塩水液剤、マイクロカプセル化、渦巻内包化（ｅｎｃｏｃｈｌｅａｔｅｄ）、微小な金粒子上のコーティング、リポソームによる収納、噴霧化、エアゾール剤、皮膚へのインプラント用のペレット剤、または皮膚中にスクラッチしようとする鋭利な物品への乾燥である。薬学的組成物には、顆粒剤、散剤、錠剤、コート錠、（マイクロ）カプセル剤、坐剤、シロップ剤、乳剤、懸濁剤、クリーム剤、点滴剤、または活性化合物を持続的に放出する製剤も含まれ、これらの製剤において、賦形剤および添加剤ならびに／または補助物質、例えば崩壊剤、結合剤、コーティング剤、膨張剤、滑沢剤、着香剤、甘味剤、または溶解剤が上記のように慣習的に使用される。薬学的組成物は、様々な薬物送達系における使用に適する。薬物送達法の簡単な概説については、参照により本明細書に援用するＬａｎｇｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３，１９９０を参照のこと。
【０１５３】
ｓｉＲＮＡおよび場合により他の治療剤は、それ自体を（手を加えずに）または薬学的に許容される塩の形態で投与され得る。医薬として使用する場合、塩は薬学的に許容されるものであるべきであるが、薬学的に許容されない塩は、その薬学的に許容される塩を調製するために従来通り使用され得る。このような塩には、以下の酸から調製される塩が含まれるがこれらに限定されない：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸、およびベンゼンスルホン酸。このような塩はまた、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩として、例えばカルボン酸基のナトリウム塩、カリウム塩、またはカルシウム塩としても調製できる。
【０１５４】
適当な緩衝剤には、酢酸および塩（１〜２％  ｗ／ｖ）；クエン酸および塩（１〜３％  ｗ／ｖ）；ホウ酸および塩（０.５〜２.５％  ｗ／ｖ）；ならびにリン酸および塩（０.８〜２％  ｗ／ｖ）が含まれる。適当な保存剤には、塩化ベンザルコニウム（０.００３〜０.０３％  ｗ／ｖ）；クロロブタノール（０.３〜０.９％  ｗ／ｖ）；パラベン（０.０１〜０.２５％  ｗ／ｖ）、およびチメロサール（０.００４〜０.０２％  ｗ／ｖ）が含まれる。
【０１５５】
本発明の薬学的組成物は、薬学的に許容される担体中に含まれる有効量のｓｉＲＮＡおよび場合により一つまたはそれ以上のさらなる治療剤を含む。
【０１５６】
治療剤、特にｓｉＲＮＡが含まれるがこれらに限定されない、は粒子状で提供され得る。本明細書中で使用する場合、粒子は、本明細書中に記載されるｓｉＲＮＡまたは他の治療剤の全体またはその一部で構成され得るナノ粒子または微粒子（または一部の例においてはそれよりも大きい粒子）を意味する。粒子は、腸溶性コーティングが含まれるがこれらに限定されないコーティングに包まれたコア中に治療剤を含み得る。治療剤はまた、粒子全体に分散され得る。治療剤はまた、粒子に吸着され得る。粒子は、ゼロオーダーの放出、一次の放出、二次の放出、遅延放出、徐放、即時放出、およびそれらの任意の組み合わせ等を含む任意のオーダーの放出速度を有し得る。粒子は、治療剤に加えて、浸食性物質、非浸食性物質、生分解性物質、もしくは非生分解性物質、またはこれらの組み合わせが含まれるがこれらに限定されない製薬および医療の分野で型通りに使用されている物質のいずれをも含み得る。粒子は、溶液状態または半固体状態でｓｉＲＮＡを含むマイクロカプセルであり得る。粒子は、実質的に任意の形状を有し得る。
【０１５７】
非生分解性および生分解性の両方のポリマー物質が、治療剤を送達するための粒子の製造において使用できる。このようなポリマーは、天然ポリマーまたは合成ポリマーであり得る。ポリマーは、放出が望まれる期間に基づき選択される。特に注目される生体接着性ポリマーには、その教示が本明細書に組み込まれる、Ｈ．Ｓ．Ｓａｗｈｎｅｙ，Ｃ．Ｐ．Ｐａｔｈａｋ  ａｎｄ  Ｊ．Ａ．Ｈｕｂｅｌｌ  ｉｎ  Ｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ，（１９９３）２６：５８１−５８７により記載される生体浸食性ヒドロゲルが含まれる。これらには、ポリヒアルロン酸、カゼイン、ゼラチン、グルチン、ポリアンヒドリド、ポリアクリル酸、アルギネート、キトサン、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ブチルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソデシルメタクリレート）、ポリ（ラウリルメタクリレート）、ポリ（フェニルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、およびポリ（オクタデシルアクリレート）が含まれる。
【０１５８】
治療剤は、制御放出系に含まれ得る。用語「制御放出」は、その処方物からの薬物放出の様式およびプロフィールが制御される任意の薬物含有処方物をさすことを意図する。これは、即時放出および非即時放出性の処方物を意味し、非即時放出処方物には徐放処方物および遅延放出処方物が含まれるがこれらに限定されない。用語「徐放」（「持続放出」とも称される）は、その従来の意味で使用され、長期間にわたる薬物の漸進的な放出を提供し、好ましくは、しかし必ずしも必要とは限らないが、長期間にわたって実質的に一定の血中薬物レベルを提供する薬物処方物を意味する。用語「遅延放出」は、その従来の意味で使用され、処方物の投与と処方物からの薬物の放出の間に時間的遅延が生じる薬物処方物を意味する。「遅延放出」は、長期間にわたる薬物の漸進的放出を伴うものでも伴わないものでもよく、従って「徐放」性であってもそうでなくてもよい。
【０１５９】
長期間徐放性インプラントの使用は、慢性状態の処置に特に適している。本明細書中で使用する場合、「長期間」の放出は、少なくとも７日間、好ましくは３０〜６０日間、治療レベルの活性成分を送達するようインプラントが構築および配置されることを意味する。長期間徐放性インプラントは当業者によく知られており、上記の放出系のいくつかが含まれる。
【０１６０】
本発明は以下の実施例によってさらに例証されるが、以下の実施例はいかなる様式によってもさらなる限定と解釈されるべきではない。本願を通じて引用される参照（参考文献、発行された特許、公開された特許出願、および同時係属中の特許出願を含む）の全ての内容全体が、参照により本明細書に明示的に組み込まれる。
【実施例】
【０１６１】
実施例１
一本鎖および二本鎖ＲＮＡ種の調製
一連の合成性一本鎖オリゴリボヌクレオチド対（ｓｓＯＲＮ）は、ヒトＭＡＰＫ２（Ｅｒｋ２）およびＬａｍｉｎ  ＡＣ遺伝子の配列由来のｓｉＲＮＡとして使用するために選択し、これらは従来の技術および試薬を用いて調製した。二本鎖ｓｉＲＮＡとして使用するため、各対の一本鎖メンバーを適当な温度条件下でアニールした後、ＨＰＬＣを用いて二本鎖ｓｉＲＮＡを残留するｓｓＯＲＮから単離した。配列は表１に示す。各ヌクレオチドは非修飾リボヌクレオチドであり、各ヌクレオチド間結合は特記がある場合を除いてホスホジエステル結合である。二本鎖ｓｉＲＮＡ構造は、一方または両方の末端に０〜２個の対を形成しないヌクレオチド（すなわち一本鎖オーバーハング）を含むものであったことが理解されるであろう。
【０１６２】
【表１】
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*  太字で示されるヌクレオチドおよび／またはヌクレオチド間のヌクレオチド間結合は修飾されたものであり、本明細書中に記載されるような２’糖修飾および二つの３’末端ヌクレオチド間の安定化型結合から選択される。
【０１６３】
実施例２
二本鎖ｓｉＲＮＡのセンス鎖の修飾はｓｉＲＮＡによる免疫刺激を阻害する
ヒトＰＢＭＣを、フィコール・ハイパックによる密度勾配遠心分離により健常な個体から全血から単離した。次いで単離したＰＢＭＣをマルチウェル培養プレートの個々のウェルの適当な培養培地にプレーティングした。様々な二本鎖ｓｉＲＮＡを、ＤＯＴＡＰの存在下、一定範囲濃度で（約２ｎＭ〜０.５μＭ）で個々のウェルに加え、この細胞を２４時間インキュベートした。インキュベーション後の培養上清を採取し、ＩＦＮ−アルファおよびＩＬ−１２ｐ４０について適当なＥＬＩＳＡを用いてアッセイした。試験した様々な二本鎖ｓｉＲＮＡは、ＭＡＰＫ２、ＭＡＰＫ２  Ｅｘｐ２７、ＭＡＰＫ２  Ｅｘｐ３０、Ｌａｍｉｎ  ＡＣ、Ｌａｍｉｎ  ＡＣ  Ｅｘｐ２７、およびＬａｍｉｎ  ＡＣ  Ｅｘｐ３０であった。結果を図１に示す。データは平均±ＳＥＭで表す。
図１に示されるように、これらのｓｉＲＮＡのセンス鎖に２’糖修飾を有するヌクレオチドを導入すると、ｓｉＲＮＡとの２４時間のインキュベーション後にＰＢＭＣにより分泌されるＩＦＮ−アルファおよび特にＩＬ−１２ｐ４０の量が対照と比較して顕著かつ有意に減少した。
【０１６４】
実施例３
ｓｉＲＮＡによる免疫刺激の阻害には二本鎖ｓｉＲＮＡのセンス鎖の修飾で十分である
実施例２のようにヒトＰＢＭＣを単離し、マルチウェル培養プレートにプレーティングした。様々な種類の一本鎖および二本鎖のＲＮＡを、ＤＯＴＡＰの存在下、一定範囲濃度で（約２ｎＭ〜０.５μＭ）で個々のウェルに加え、この細胞を２４時間インキュベートした。インキュベーション後の培養上清を採取し、ＩＦＮ−アルファおよびＩＬ−１２ｐ４０について適当なＥＬＩＳＡを用いてアッセイした。実験では、二本鎖（ｓ：ａｓ）ｓｉＲＮＡを対応する個々のセンスおよびアンチセンスの一本鎖ＲＮＡと比較することを計画した。試験した様々な二本鎖ｓｉＲＮＡは、ＭＡＰＫ２、ＭＡＰＫ２  Ｅｘｐ２７、ＭＡＰＫ２  Ｅｘｐ３０、Ｌａｍｉｎ  ＡＣ、Ｌａｍｉｎ  ＡＣ  Ｅｘｐ２７、およびＬａｍｉｎ  ＡＣ  Ｅｘｐ３０であった。試験した様々な一本鎖ＲＮＡは、ＭＡＰＫ２  ｓ、ＭＡＰＫ２  ａｓ、ＭＡＰＫ２  Ｅｘｐ２７  ｓ、ＭＡＰＫ２  Ｅｘｐ２７  ａｓ、ＭＡＰＫ２  Ｅｘｐ３０  ｓ、ＭＡＰＫ２  Ｅｘｐ３０  ａｓ、Ｌａｍｉｎ  ＡＣ  ｓ、Ｌａｍｉｎ  ＡＣ  ａｓ、Ｌａｍｉｎ  ＡＣ  Ｅｘｐ２７  ｓ、Ｌａｍｉｎ  ＡＣ  Ｅｘｐ２７  ａｓ、Ｌａｍｉｎ  ＡＣ  Ｅｘｐ３０  ｓ、およびＬａｍｉｎ  ＡＣ  Ｅｘｐ３０  ａｓであった。結果を図２に示す。データは平均±ＳＥＭで表す。
図２に示されるように、これらのｓｉＲＮＡのセンス鎖に２’糖修飾を有するヌクレオチドを導入すると、二本鎖ｓｉＲＮＡまたは一本鎖センス鎖のみのいずれかとの２４時間のインキュベーション後にＰＢＭＣにより分泌されるＩＦＮ−アルファおよび特にＩＬ−１２ｐ４０の量が対照と比較して顕著かつ有意に減少した。対照的に、修飾型アンチセンス鎖単独では強い免疫刺激性が維持された。しかし、これらの同一のアンチセンス鎖が、二本鎖ｓｉＲＮＡとして用いられた場合、免疫刺激性はずっと小さかった。これは、二本鎖ｓｉＲＮＡの免疫刺激性を減少させるのにセンス鎖のみにおける修飾が必要かつ十分であるという着想に当てはまるものである。
【０１６５】
実施例４
免疫刺激性の低下した修飾型ｓｉＲＮＡは遺伝子サイレンシング特性を維持する
修飾型ｓｉＲＮＡの遺伝子サイレンシング特性を評価するため、実施例２に記載されるように単離および培養したヒトＰＢＭＣを、ＭＡＰＫ２およびｌａｍｉｎ  ＡＣの転写物について、調査する各転写物に適したプライマー対を用いる定量的逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応法を用いてアッセイした。測定値を標準化するため、ハウスキーピング遺伝子の転写物も測定した。タンパク質の対応する減少を確認するためにウェスタンブロットおよび免疫組織化学を使用した。ＭＡＰＫ２およびｌａｍｉｎ  ＡＣの転写レベルは、ｓｉＲＮＡの濃度に基づき用量依存的な様式で、かつ、これが重要なのであるが、修飾型ｓｉＲＮＡおよび対応する対照ｓｉＲＮＡについて同程度に減少した。
【０１６６】
実施例５
ｓｉＲＮＡのセンス鎖における他のヌクレオチドの２’糖修飾は免疫刺激性を減少させ遺伝子サイレンシングを維持する
以下のｓｉＲＮＡのセンス鎖における少なくとも一つのヌクレオチドの様々な２’糖修飾のいずれかを有する追加のｓｉＲＮＡを合成した：２'−Ｏ−メチル、２'−デオキシ、２'−フルオロ−２'−デオキシ、２'−アミノ−２'−デオキシ、２'−メトキシエチル（ＭＯＥ）、２'−Ｏ−アリル、２'−プロピニル、２'−アミノプロパルギル、２'−Ｏ−（３−アミノプロピル）、２'−Ｏ−プロピル、２'−Ｏ−ブチル、または概して２'−Ｏ−アルキル、２'−Ｏ−アルケニル、および２'−Ｏ−アルキニル。さらに、ロックト核酸（ＬＮＡ）およびアラビノシドを使用した。様々な２’糖修飾は、センス鎖の様々な位置に様々な数を導入した。免疫刺激作用および遺伝子サイレンシング効果は、上記の実施例２〜４に記載されたのと類似の様式で評価した。
【０１６７】
実施例６
センス鎖における安定型ヌクレオチド間結合の導入
センス鎖における以下のヌクレオチド間結合のいずれか少なくとも一つと共に、ｓｉＲＮＡのセンス鎖の少なくとも一つのヌクレオチドに様々な２’糖修飾のいずれかを導入したさらなるｓｉＲＮＡを合成した：チオホルムアセタール、ホスホロチオエート、メチルホスホネート、ボラノホスホネート、ホルムアセテート、およびその他の脱リン酸化アナログ（その全内容が本明細書に参照により組み込まれるＵｈｌｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｐｅｙｍａｎ，１９９３，Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ａｎａｌｏｇｓ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｄｅｐｈｏｓｐｈｏ  ｉｎｔｅｒｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｌｉｎｋａｇｅｓ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，２０：３５５，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓに記載される）。様々な２’糖およびヌクレオチド間結合の修飾は、センス鎖の様々な位置に様々な数を導入した。免疫刺激作用および遺伝子サイレンシング効果は、上記の実施例２〜４に記載されたのと類似の様式で評価した。
【０１６８】
等価物に関して
上記記述による説明は、当業者が本発明を実施するのに十分であると考える。実施例は本発明の一つの局面の一つの例証であるため、本発明は提供された実施例によりその範囲を限定されてはならず、他の機能的に等価な実施態様も本発明の範囲に含まれる。本明細書中に示され記載されたものに加えて、本発明の様々な改良物が上記記載から当業者に明らかになるであろう。そしてそれらは添付の特許請求の範囲に含まれるものである。本発明の利点および目的物は、必ずしも本発明の各々の実施態様に含まれているとは限らない。
【図面の簡単な説明】
【０１６９】
【図１】ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）によるサイトカイン産生を示す４つのグラフ群である。
【図２】ヒトＰＢＭＣによるサイトカイン産生を示す１２のグラフ群である。
【図１】
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【図２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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