(57)【要約】  本発明は、ＲＡＭＰ（レセプター活性を変調させるタンパク質）タンパク質の、カルシトニンレセプター様レセプター（ＳＲＬＲ）に対する効果を変調させる薬剤に関するものである。また、本発明には、そのような薬剤の方法及び使用、並びに、そのような薬剤を同定するためのアッセイ方法も包含される。本明細書において開示される薬剤は、例えば、ガン、肥満症、及び他の疾患の治療において使用することができる。
2009515827.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）ＲＡＭＰ−３、（ｉｉ）ＲＡＭＰ−２及び（ｉｉｉ）ＲＡＭＰ−１タンパク質から選択される１又は複数のＲＡＭＰタンパク質（受容体活性調節タンパク質）のカルシトニン受容体様受容体（ＣＲＬＲ）と結合、及び／又は影響を調節することができる薬剤。
【請求項２】
ＲＡＭＰの細胞外ドメインと結合する請求項１に記載の薬剤。
【請求項３】
ＲＡＭＰ−３とＣＲＬＰとの相互作用を調節することができる請求項２に記載の薬剤。
【請求項４】
ＲＡＭＰ−３タンパク質の細胞外ドメインと特異的に結合する前記請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項５】
（ａ）図３に示されるヒトＲＡＭＰ−３タンパク質の位置１から位置３１の連続するアミノ酸配列に含まれる連続するアミノ酸残基の配列を含む１から３１アミノ酸残基のペプチド部分、
（ｂ）図３に示されるヒトＲＡＭＰ−３タンパク質の位置３２から位置４６の連続するアミノ酸配列に含まれる連続するアミノ酸残基の配列を含む１から１５アミノ酸残基のペプチド部分、及び
（ｃ）図３に示されるヒトＲＡＭＰ−３タンパク質の位置４７から位置９９の連続するアミノ酸配列に含まれる連続するアミノ酸残基の配列を含む１から５３アミノ酸残基のペプチド部分、
から選択される少なくとも１つのリガンドと結合する前記請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項６】
（ａ）図３に示されるヒトＲＡＭＰ−３タンパク質の位置１から位置３２の連続するアミノ酸配列に含まれる連続するアミノ酸残基の配列を含む１から３２アミノ酸残基のペプチド部分、
（ｂ）図３に示されるヒトＲＡＭＰ−３タンパク質の位置３３から位置４６の連続するアミノ酸配列に含まれる連続するアミノ酸残基の配列を含む１から１４アミノ酸残基のペプチド部分、及び
（ｃ）図３に示されるヒトＲＡＭＰ−３タンパク質の位置４７から位置９９の連続するアミノ酸配列に含まれる連続するアミノ酸残基の配列を含む１から５３アミノ酸残基のペプチド部分、
から選択される少なくとも１つのリガンドと結合する前記請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項７】
ペプチド部分が５から１５アミノ酸長の間である請求項６又は７に記載の薬剤。
【請求項８】
ヒトＲＭＡＰ−３の断片と結合し、外断片がヒトカスパーゼ−３及びヒトカルパイン−１を用いたＲＭＡＰ−３の細胞外ドメインの酵素切断によって生産される、前記請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項９】
ヒトＳＷ−１３細胞の増殖を少なくとも１０％阻害することができ、該阻害がＭＴＴ細胞増殖アッセイを用いて測定される、前記請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項１０】
少なくとも１２％増殖を阻害することができる請求項９に記載の薬剤。
【請求項１１】
少なくとも２０％、選択によっては少なくとも２５％増殖を阻害することができる請求項９に記載の薬剤。
【請求項１２】
少なくとも３０％、選択によっては少なくとも４０％増殖を阻害することができる請求項９に記載の薬剤。
【請求項１３】
アドレノミデュリンで刺激した場合、ヒトＭＧ６３骨肉腫細胞中のｃＡＭＰの生産を少なくとも約１５％減少又は阻害することができる前記請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項１４】
少なくとも約２０％ｃＡＭＰの生産を阻害することができる請求項１３に記載の薬剤。
【請求項１５】
ＲＡＭＰ−１タンパク質が、
ｉ）図１で表される核酸配列からなる核酸分子によってコードされるポリペプチド又はその変異体、
ｉｉ） 上記（ｉ）で定義される核酸分子とストリンジェントな条件下でハイブリッドし、ＣＲＬＲ機能を調節する核酸分子によってコードされるペプチド、
ｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）で定義される核酸配列に対する遺伝子コードの結果として縮重する核酸を含み、該薬剤が医薬としての使用に特徴づけられるポリペプチド、
から選択され、
ＲＡＭＰ−２タンパク質が、
ｉ）図２で表される核酸配列からなる核酸分子によってコードされるポリペプチド又はその変異体、
ｉｉ） 上記（ｉ）で定義される核酸分子とストリンジェントな条件下でハイブリッドし、ＣＲＬＲ機能を調節する核酸分子によってコードされるペプチド、
ｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）で定義される核酸配列に対する遺伝子コードの結果として縮重する核酸を含み、該薬剤が医薬としての使用に特徴づけられるポリペプチド、
から選択され、
さらに、ＲＡＭＰ−３タンパク質が、
ｉ）図３で表される核酸配列からなる核酸分子によってコードされるポリペプチド又はその変異体、
ｉｉ） 上記（ｉ）で定義される核酸分子とストリンジェントな条件下でハイブリッドし、ＣＲＬＲ機能を調節する核酸分子によってコードされるペプチド、
ｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）で定義される核酸配列に対する遺伝子コードの結果として縮重する核酸を含み、該薬剤が医薬としての使用に特徴づけられるポリペプチド、
から選択される請求項１に記載の薬剤。
【請求項１６】
カルシトニン受容体様受容体（ＣＲＬＲ）に対するポリペプチドの影響を調節し、該ポリペプチドが、
ｉ）図１、２又は３で表される核酸配列からなる核酸分子によってコードされるポリペプチド又はその変異体、
ｉｉ） 上記（ｉ）で定義される核酸分子とストリンジェントな条件下でハイブリッドし、ＣＲＬＲ機能を調節する核酸分子によってコードされるペプチド、
ｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）で定義される核酸配列に対する遺伝子コードの結果として縮重する核酸を含み、該薬剤が医薬としての使用に特徴づけられるポリペプチド。
からなるのグループより選択される薬剤 。
【請求項１７】
前記薬剤がアンタゴニストであり、選択により、ＲＡＭＰタンパク質とＣＲＬＲ間の結合を干渉し、及び／又はＣＲＬＲに対するリガンド及び／又はＲＡＭＰタンパク質の結合を干渉する、前記請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項１８】
前記  薬剤がアゴニストである請求項１乃至１５のいずれかに記載の薬剤。
【請求項１９】
抗体及び抗体断片から選択される抗体産物；タンパク質；ポリペプチド；融合タンパク質；アプタマー；及び化合物 である前記請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項２０】
前記薬剤が抗体又は抗体の活性な結合部分である前記請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項２１】
抗体産物がモノクローナル抗体又はその活性な結合部分である請求項２０に記載の薬剤。
【請求項２２】
抗体産物がキメラ抗体である請求項２０又は２１に記載の薬剤。
【請求項２３】
抗体がヒト化抗体である請求項２０又は請求項２１に記載の薬剤。
【請求項２４】
抗体産物が抗体断片である請求項２０乃至２３のいずれかに記載の薬剤。
【請求項２５】
抗体断片が、一本鎖抗体、一本鎖可変断片（ｓｖＦｖ）、ドメイン抗体（ｄＡＢ）及びナノボディーから選択される請求項２４に記載の薬剤。
【請求項２６】
抗体産物が、例えば、ＰＥＧ分子と結合した結合体である請求項２０乃至２５のいずれかに記載の薬剤。
【請求項２７】
前記薬剤が化学療法剤と結合又はクロスリンクした前記請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項２８】
前記薬剤が検出可能なマーカーを含む前記請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項２９】
前記薬剤が核酸分子である請求項１乃至１９のいずれかに記載の薬剤。
【請求項３０】
前記核酸分子がアンチセンス核酸、アプタマー又は小分子干渉ＲＮＡである請求項２９に記載の薬剤。
【請求項３１】
医薬のために使用される前記請求項のいずれかに記載の薬剤。
【請求項３２】
前記請求項のいずれかに記載される薬剤、及び薬剤的に許容される担体、希釈剤又は賦形剤を含む医薬組成物。
【請求項３３】
請求項１９乃至２５のいずれかに記載の抗体の発現に適合され、選択により、請求項２１に記載のキメラ抗体又は請求項２２に記載のヒト化抗体の発現に適合されたベクター。
【請求項３４】
請求項３３に記載のベクターで形質転換又は形質移入された細胞。
【請求項３５】
請求項２０乃至２５のいずれかに記載の抗体又は抗体断片、及び選択により、請求項２２に記載されるキメラ抗体又は請求項２３に記載されるヒト化抗体の生産方法であって：
ｉ）抗体又は抗体断片をコードする核酸分子を含むベクターで形質転換又は形質移入した細胞を生育させ、
ｉｉ）該細胞又はその生育環境から該抗体を精製する、生産方法。
【請求項３６】
請求項２０に記載  のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞株。
【請求項３７】
ｉ）免疫応答性の哺乳動物を図４、５又は６で表されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのポリペプチド、又は断片又はここで定義されるその変異体を含む抗原で免疫し、
ｉｉ）免疫した免疫応答性哺乳動物のリンパ球をハイブリドーマ細胞を形成させるためにミエローマと融合させ、
ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）のハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体を（ｉ）のポリペプチドに対する結合活性によりスクリーニングし、
ｉｖ）生育及び／又は該モノクローナル抗体を分泌させるためにハイブリドーマ細胞を^培養し；及び
ｖ）培養上清からモノクローナル抗体を回収する、
ステップを含む、請求項２１に記載のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞株の調製方法。
【請求項３８】
（ｉ）のポリペプチドが図７、８又は９に示されるものから選択されるアミノ酸配列を含む請求項３６に記載の方法。
【請求項３９】
図１、２又は３に示される配列のＲＡＭＰタンパク質、又はストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で該核酸分子とハイブリダイズし、図１、２又は３に表されるアミノ酸配列を含む変異体ポリペプチドをコードする核酸分子の発言レベルを決定するためのアッセイであって、その方法が、
ｉ）単離した細胞サンプルをＲＡＭＰタンパク質をコードする核酸分子と結合する結合薬剤と接触させ、
ｉｉ）標準サンプルと該サンプル中の核酸分子の発現を比較する、
ステップを含むアッセイ。
【請求項４０】
結合薬剤がオリゴヌクレオチドプラマー及び図１、２又は３のアミノ酸配列で表されるポリペプチドと特異的に結合する抗体から選択される請求項３９に記載のアッセイ。
【請求項４１】
該アッセイがポリメラーゼ連鎖反応を含む請求項４０に記載のアッセイ。
【請求項４２】
ａ）図１、２又は３に示される核酸配列からなる核酸分子；
ｂ）上記（ｉ）の核酸分子とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、ＣＲＬＲ機能を調節する核酸分子：
からなるグループより選択される核酸分子によってコードされるＲＡＭＰタンパク質の活性を調節する薬剤をスクリーニングする方法であって；該方法が細胞表面上にＲＡＭＰタンパク質を発現する細胞と試験化合物とを接触させ、試験化合物のＲＡＭＰタンパク質の活性を調節する能力を決定することを含む方法。
【請求項４３】
ＣＲＬＲ機能を調節する薬剤の同定におけるポリペプチドの使用であって、該ポリペプチドが、
ｉ）図１、２又は３で表される核酸配列からなる核酸分子によってコードされるポリペプチド又はその変異体、
ｉｉ） 上記（ｉ）で定義される核酸分子とストリンジェントな条件下でハイブリッドし、ＣＲＬＲ機能を調節する核酸分子によってコードされるペプチド、
ｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）で定義される核酸配列に対する遺伝子コードの結果として縮重する核酸を含み、該薬剤が医薬としての使用に特徴づけられるポリペプチド、
からなるのグループより選択される使用 。
【請求項４４】
ＣＲＬＲと、
ｉ）図１、２又は３で表される核酸配列からなる核酸分子によってコードされるポリペプチド又はその変異体、
ｉｉ） 上記（ｉ）で定義される核酸分子とストリンジェントな条件下でハイブリッドし、ＣＲＬＲ機能を調節する核酸分子によってコードされるペプチド、
ｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）で定義される核酸配列に対する遺伝子コードの結果として縮重する核酸を含み、該薬剤が医薬としての使用に特徴づけられるポリペプチド、
からなるのグループより選択されるポリペプチドとの相互作用を調節する薬剤の同定におけるＣＲＬＲの使用 。
【請求項４５】
癌を治療する医薬の製造のための請求項１乃至３０のいずれかに記載の薬剤又は請求項３１に記載の医薬組成物の使用。
【請求項４６】
骨粗鬆症を治療する医薬の製造のための請求項１乃至３１のいずれかに記載の薬剤又は請求項３２に記載の医薬組成物の使用。
【請求項４７】
肥満を治療又は軽減する医薬の製造のための請求項１乃至３１のいずれかに記載の薬剤又は請求項３２に記載の医薬組成物の使用。
【請求項４８】
炎症性疾患及び／又は炎症性応答を治療又は軽減する医薬の製造のための請求項１乃至３１のいずれかに記載の薬剤又は請求項３２に記載の医薬組成物の使用。
【請求項４９】
前記炎症性疾患が、アテローム性動脈硬化症、リウマチ様関節炎、変形性関節症、敗血症及び多発性関節炎である請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
糖尿病性脈管障害、細小血管障害、大血管障害などの脈管障害を治療又は軽減する医薬の製造のための請求項１乃至３１のいずれかに記載の薬剤又は請求項３２に記載の医薬組成物の使用。
【請求項５１】
心不全を治療する医薬の製造のための請求項１乃至３１のいずれかに記載の薬剤又は請求項３２に記載の医薬組成物の使用。
【請求項５２】
創傷を治療する医薬の製造のための請求項１乃至３１のいずれかに記載の薬剤又は請求項３２に記載の医薬組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
本発明は、アドレノモジュリン仲介シグナル伝達に関連する細胞表面ポリペプチドに基づく治療薬及び治療薬を同定するスクリーニングアッセイに関する。
【０００２】
背景技術
細胞シグナル伝達は生存にとって重要であり、それが無いと、物理的又は化学的に単離された細胞はアポトーシスを受ける。
【０００３】
カルシトニン生物活性ペプチドは、カルシトニン、アミリン、２つのカルシトニン遺伝子関連ペプチド（CGRPl及びCGRP2）、及びアドレノメジュリン（AM）を含む。
【０００４】
アドレノモジュリン(AM)は、５２アミノ酸の降圧ペプチドである。それはCGRP及びアミリンと構造的な類似性を有している。
【０００５】
カルシトニンファミリーのペプチドは、Ｇ-タンパク連結型膜レセプター(GPCRs)を介して作用する。カルシトニンレセプターの遺伝子はクローニングされている。
【０００６】
唯一、CRLRは、AMに対する応答においてシグナルを変換できず、CRLRのリガンド特異性、結合及び活性化を誘発するためにRAMP（レセプター活性変調タンパク質）の存在が必要とされるからである。
【０００７】
CRLRは、RAMPファミリー、RAMP1-3のどのメンバーが発現されるかによって、CGRPレセプター又はAMレセプターのいずれかとして作用しうることが示された。
【０００８】
RAMPファミリーの３つのメンバー、RAMP l、2及び3は、CRLRの異なるリガンド特異性を生じさせる。即ち：
RAMP l + CRLR = CGRP レセプター
RAMP2 + CRLR = AM レセプター
RAMP3 + CRLR = AM レセプター
である。
【０００９】
発明の概要
本発明の第一の態様では、（ｉ）ＲＡＭＰ−３、（ｉｉ）ＲＡＭＰ−２及び（ｉｉｉ）ＲＡＭＰ−１タンパク質から選択される１又は複数のＲＡＭＰタンパク質（受容体活性調節タンパク質）のカルシトニン受容体様受容体（ＣＲＬＲ）と結合、及び／又は影響を調節することができる薬剤が提供される。
【００１０】
一実施態様では、薬剤はRAMPタンパク質の細胞外ドメインと結合する。
【００１１】
一実施態様では、本発明の薬剤は、
（ａ）図３に示されるヒトＲＡＭＰ−３タンパク質の位置１から位置３１の連続するアミノ酸配列に含まれる連続するアミノ酸残基の配列を含む１から３１アミノ酸残基のペプチド部分、
（ｂ）図３に示されるヒトＲＡＭＰ−３タンパク質の位置３２から位置４６の連続するアミノ酸配列に含まれる連続するアミノ酸残基の配列を含む１から１５アミノ酸残基のペプチド部分、及び
（ｃ）図３に示されるヒトＲＡＭＰ−３タンパク質の位置４７から位置９９の連続するアミノ酸配列に含まれる連続するアミノ酸残基の配列を含む１から５３アミノ酸残基のペプチド部分、
から選択される少なくとも１つのリガンドと結合する。
【００１２】
一実施態様では、薬剤は、
（ａ）図３に示されるヒトＲＡＭＰ−３タンパク質の位置１から位置３２の連続するアミノ酸配列に含まれる連続するアミノ酸残基の配列を含む１から３２アミノ酸残基のペプチド部分、
（ｂ）図３に示されるヒトＲＡＭＰ−３タンパク質の位置３３から位置４６の連続するアミノ酸配列に含まれる連続するアミノ酸残基の配列を含む１から１４アミノ酸残基のペプチド部分、及び
（ｃ）図３に示されるヒトＲＡＭＰ−３タンパク質の位置４７から位置９９の連続するアミノ酸配列に含まれる連続するアミノ酸残基の配列を含む１から５３アミノ酸残基のペプチド部分、
から選択される少なくとも１つのリガンドと結合する。
【００１３】
典型的には、ペプチド部分は５から１５アミノ酸長の間である。
【００１４】
ペプチド部分（ｂ）は、推定CRLR結合ドメインの全部又は一部を含み得る。
【００１５】
本発明の薬剤は、任意に、以下の２つの可能性のうち１又はそれ以上を持つ。
【００１６】
本明細書に記載するデータは、一方はRAMP-3とCRLRとの間の相互作用、他方はTAMP-3／CRLR結合複合体とアドレノメデュリン等のリガンドとの間のいずれかの阻害剤がガン及び血管新生の防止に様とを有することを示す。
【００１７】
本発明の一態様によると、カルシトニン受容体様受容体（ＣＲＬＲ）の機能に対するポリペプチドの影響を調節する薬剤であって、該ポリペプチドが、
ｉ）図１、２又は３で表される核酸配列からなる核酸分子によってコードされるポリペプチド又はその変異体、
ｉｉ） 上記（ｉ）で定義される核酸分子とストリンジェントな条件下でハイブリッドし、ＣＲＬＲ機能を調節する核酸分子によってコードされるペプチド、
ｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）で定義される核酸配列に対する遺伝子コードの結果として縮重する核酸を含み、該薬剤が医薬としての使用に特徴づけられるポリペプチド：
からなるのグループより選択される薬剤が提供される。
【００１８】
本明細書で使用される「CRLR機能又は活性」とは、CRLRの全ての生物学的活性を指す。特異的な「機能」は、リガンドに対するCRLR活性化を含み、リガンドの例として、アデノメジュリン(AM)及びCGRPが含まれる。典型的には、AM又はCGRPに対するCRLR活性化は、cAMP発現及び他の第二のメッセンジャーシステムの活性化を含む。
【００１９】
AM又はCGRP等のリガンドは本発明のポリペプチド、即ちRAMPタンパク質に結合するので、当該ポリペプチドがCRLRに結合したときのみ、本発明の薬剤を変調、例えばRAMPタンパク質のCRLRとの結合の阻害のために使用することができる。
【００２０】
好ましい実施態様では、薬剤は抗体物質である。一実施態様では、抗体物質はRAMP-3と結合する。抗体は、RANP-3に特異的に結合してもよい。
本明細書の開示範囲には、医薬として使用するための薬剤が含まれる。
【００２１】
本発明の更なる態様では、薬剤芽、例えば抗体物質又はタンパク質、例えば融合タンパク質である場合、本発明の薬剤の発現のために適合されたベクターが提供される。また本発明は、本明細書に記載されるベクターでトランスフォーム又はトランスフェクトされた細胞も提供する。
本発明の更なる態様では、本明細書に記載するような薬剤、例えば抗体の製造方法が提供される。
【００２２】
幾つかの実施例の詳細な説明
本明細書では以下の用語及び略語が使用される。
定義
特に断らない限り、技術用語は従来の用途に従って使用される。分子生物学における共通の用語の定義は、例えば、Benjamin Lewin, Genes V, published by Oxford University Press, 1994 (ISBN 0-19- 854287-9); Kendrew et al. (eds.), The Encyclopedia of Molecular Biology, published by Blackwell Science Ltd. ,1994 (ISBN 0-632-02182-9); 及びRobert A. Meyers (ed. ), Molecular Biology and Biotechnology : a Comprehensive Desk Reference, published by VCH Publishers, Inc., 1995 (ISBN 1-56081-569-8)に見出すことができる。免疫学の分野の当業者に知られた定義及び追加情報は、例えば、Fundamental Immunology, W. E. Paul, ed. , fourth edition, Lippincott-Raven Publishers, 1999に見出される。
【００２３】
抗体断片（特異的抗原結合性を持つ断片）：様々な抗体断片が同定されており、Fab、(Fab')2、Fv、dsFV、、一本鎖Fv (scFv)及びシングルドメイン抗体を含むドメイン抗体を含む。
【００２４】
シングルドメイン抗体は、その相補性決定領域が一本鎖ドメインポリペプチドの一部である抗体である。
【００２５】
dAB （ドメイン抗体）は、抗体の最小の機能的結合単位であり、ヒト抗体の重鎖(VH)又は軽鎖(VL)のいずれかの可変領域に相当する。
【００２６】
細胞株／細胞培養：「細胞株」又は「細胞培養」は、インビトロで成長又は維持された、より高等な真核生物細胞である。
【００２７】
相補性決定領域（CDR）：CDRは、結合した抗体の三次元構造と相補的な抗原結合表面を形成する抗体分子の可変軽鎖（VL)及び可変重鎖（VH)領域のいずれかにある３つの超可変領域である。
【００２８】
Kabat, E. A., et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest (National Institutes of Health, Bethesda, MD (1987) and (1991)からの番号付けスキームを参照する。
【００２９】
CDR及びFR残基は、構造的定義に従っても決定される (Chothia and Lesk, J. MoI. Biol. 196:901-917 (1987)におけるように）。
【００３０】
定常領域：エフェクター機能を持つ抗体分子の部分である。本明細書の開示では、使用する変異抗体は、ヒト免疫グロブリンから誘導された定常領域を含むことができる。
【００３１】
エピトープ：アミノ酸配列の特異性によって決定した場合の、薬剤によって認識される抗体上の部位である。
【００３２】
フレームワーク領域（FR）：抗体の重鎖及び軽鎖の可変領域内にある３つの高度に多様性の相補性決定領域（CDR）に隣接する比較的保存された配列である。
【００３３】
阻害する：相互作用、例えば、(i)RAMPタンパク質とリガンドとの間の結合、又は(ii)RAMPタンパク質とCRLRとの間の結合、又は(iii)RAMP/CRLR複合体とリガンドとの結合、を妨害、ブロック、又は阻止する化学種は、相互作用を阻害すると考えられる。典型的には、阻害は１００％のブロックをもたらさないが、相互作用の量及び/又は速度を減少させる。
【００３４】
免疫原性：対象者に投与したとき、タンパク質、治療部位、又は免疫反応（体液性又は細胞性）を誘発するを薬剤をターゲティングする能力の尺度である。
【００３５】
免疫グロブリン：免疫グロブリン（Ig）分子及びIg分子の免疫原的活性部分、例えば、抗原と特異的に結合（又は相互作用）する抗原結合部位を含む分子である。
【００３６】
天然の抗体又は免疫グロブリン（例えば、IgG）は、ジスルフィド結合で相互に連結された４つのペプチド、即ち２つの重（H）鎖及び２つの軽（L）鎖を含む。
【００３７】
抗体の基本構造単位は、一般的に、２つの同一の免疫グロブリン鎖の対を含むテトラマーであり、各対は、１つの軽鎖及び１つの重鎖を有している。
【００３８】
各鎖は異なる配列ドメインを含む。軽鎖は２つのドメイン、即ち可変ドメイン(VL)及び定常ドメイン(CL)を含む。重鎖は４つのドメイン、即ち可変ドメイン(VH)及び３つの定常ドメイン（CHl、CH2及びCH3、集合的にCHと呼ばれる）を含む。
【００３９】
キメラ抗体は、その軽鎖及び重鎖遺伝子が、異なる種に属する免疫グロブリン可変及び定常領域遺伝子から、典型的には遺伝子加工により組み立てられた抗体である。
【００４０】
「ヒト化」免疫グロブリン又は抗体は、ヒトのフレームワーク領域と、非ヒト（例えば、マウス、ラット又は合成）免疫グロブリンからの１又はそれ以上のCDRとを含む免疫グロブリンである。
【００４１】
ヒト抗体は、軽鎖及び重鎖遺伝子がヒト由来である抗体のことである。ヒト抗体は、当該技術で知られた方法により製造することができる。
【００４２】
抗体は、ファージディスプレー技術を用いて得ることもできる。ファージディスプレー技術は、当該技術で知られており、例えば、Marks et al J. MoI. Biol. 222: 581-597 及び Ckackson et al, Nature 352: 624-628を両方とも参考としてここに取り入れるものとする。
【００４３】
アプタマー：本発明の薬剤はアプタマーであってもよい。アプタマーは、アミノ酸、薬物、タンパク質及び他の分子に対して生成され得る人工核酸リガンドと定義されている。それらは、吸着、回収及び再増幅の反復プロセスによって合成核酸の複合体ライブラリから単離される。
【００４４】
RNAアプタマーは特定の標的分子に対する親和性を持つ核酸分子である。それらは、リガンド結合特性によっって抗体に結合している。
【００４５】
従来技術から、結合、播種及び増幅の繰り返しサイクルによって、生成配列プールから単離する方法が知られている。そのような方法は、米国特許第5,475,096号、第5,270,163号及び欧州特許第0533 38号に記載されており、典型的にはSELEX (Systematic Evolution of Ligands by EX-ponential Enrichment)と呼ばれる。
【００４６】
免疫反応性：薬剤、しばしば抗体が特異的抗原を認識及び結合する能力の尺度である。「特異的に結合する」とは、個々の薬剤又は抗体が抗原と特異的に免疫反応する能力を意味する。
【００４７】
モノクローナル抗体：は、Bリンパ球の単一クローンにより、又は単一の抗体の軽鎖及び重鎖がトランスフェクトされた細胞により生産される。
【００４８】
核酸：「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドの重合体であり、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、及び類似物を任意の組み合わせで含んでいる。
【００４９】
ポリペプチド：用語「ポリペプチド」、「ペプチド」及び「タンパク質」は、本明細書中で交換可能に使用され、任意の長さのアミノ酸のポリマーを意味する。
【００５０】
アミノ酸置換は、或る領域、例えば可変領域の１又はそれ以上のアミノ酸の変化又は修飾から完全な再設計までの範囲である。
【００５１】
本明細書で使用する「変異体」ポリペプチドは、１又はそれ以上の置換、付加、欠失、切断によりアミノ酸配列が相違しており、それらは任意に組み合わせてそんざいしてもよい。
【００５２】
上記したように、本発明の第一の態様は、(i) RAMP-3、(ii)RAMP-2及び(iii)RAMP-1タンパク質から選択される１又はそれ以上のRAMPタンパク質（レセプター活性変調タンパク質）のカルシトニンレセプター様レセプター（CRLR）に結合できる及び/又はその効果を変調させることができる薬剤を提供する。
【００５３】
一実施態様では、薬剤はRAMPタンパク質の細胞外ドメインに結合する。典型的には、薬剤はRAMP-3 とCRLPとの相互作用を変調させることができる。
【００５４】
典型的には、薬剤は少なくとも１２％まで増殖を阻害することができる。幾つかの実施態様では、薬剤は少なくとも２０％、そして任意に少なくとも２５％まで増殖を阻害できる。さらなる態様では、薬剤は少なくとも３０％、さらに任意に少なくとも少なくとも４０％まで増殖を阻害することができる。
【００５５】
本明細書に開示される薬剤は、RAMPタンパク質の効果を変調させることとができ、RAMPタンパク質は、ｉ)図１に示される核酸配列にコードされるポリペプチド、又はその変異体；ｉｉ） 上記（ｉ）で定義される核酸分子とストリンジェントな条件下でハイブリッドし、ＣＲＬＲ機能を調節する核酸分子によってコードされるペプチド、及びｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）で定義される核酸配列に対する遺伝子コードの結果として縮重する核酸を含み、該薬剤が医薬としての使用に特徴づけられるポリペプチドであり、RAMP-2は、ｉ)図２に示される核酸配列にコードされるポリペプチド、又はその変異体；ｉｉ） 上記（ｉ）で定義される核酸分子とストリンジェントな条件下でハイブリッドし、ＣＲＬＲ機能を調節する核酸分子によってコードされるペプチド、及びｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）で定義される核酸配列に対する遺伝子コードの結果として縮重する核酸を含み、該薬剤が医薬としての使用に特徴づけられるポリペプチドであり、RAMP-3は、ｉ)図３に示される核酸配列にコードされるポリペプチド、又はその変異体；ｉｉ） 上記（ｉ）で定義される核酸分子とストリンジェントな条件下でハイブリッドし、ＣＲＬＲ機能を調節する核酸分子によってコードされるペプチド、及びｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）で定義される核酸配列に対する遺伝子コードの結果として縮重する核酸を含み、該薬剤が医薬としての使用に特徴づけられるポリペプチドである。
【００５６】
本発明の更なる態様では、ポリペプチドのカルシトニンレセプター様レセプター（CRLR）機能に対する影響を変調させる薬剤が提供され、該ポリペプチドは図１、２又は３に示すアミノ酸配列を含む。
【００５７】
さらに、本明細書の開示は、ここに記載するポリペプチド配列と少なくとも７５％の同一性を有する配列、又はその断片及び機能的等価なポリペプチドを特徴とする。
【００５８】
本明細書の開示は、図４、５又は６に示すアミノ酸配列又はその断片又は変異体を含むポリペプチドを含む。
【００５９】
本明細書で使用される「図４、５又は６に示すアミノ酸配列を含むポリペプチドの断片」とは、１から９９アミノ酸を含む断片を包含する。
【００６０】
一実施態様では、本開示の薬剤は、ポリペプチドである。
【００６１】
一実施態様では、薬剤はポリペプチドに限られず、薬剤は検出可能なマーカーを含む。
【００６２】
上記に詳細に記載したように、キメラ抗体は、マウス又はラット抗体のV領域の全てがヒト抗体C領域と結合した組み換え抗体である。
【００６３】
一実施態様では、抗体製造物は、抗体断片であり、例えば、一本鎖抗体、一本鎖可変断片（scFv）、ドメイン抗体（dAb）又はナノボディである。
【００６４】
上記に示したように、免疫グロブリン又は抗体の様々な断片が当該分野で知られている。
【００６５】
単一の可変領域、いわゆる一本鎖抗体可変領域断片（scFV）を生成させることが可能である。
【００６６】
本発明の更なる好ましい実施態様では、前記抗体はオプソニン抗体である。
【００６７】
本発明の一実施態様では、前記抗体又は抗体断片は、治療薬と結合又は架橋していた。
【００６８】
よって、本発明の薬剤は、例えば、抗体又は抗体断片、例えばFab断片である。
【００６９】
抗体の単離方法は当該分野で知られている。例えば、Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, New Yorkを参照のこと。
【００７０】
殆どの適用では、一般に、ポリペプチド、例えば抗体が、少なくとも部分的に他の細胞性成分から精製されろのが好ましい。
【００７１】
また、本発明には、抗体製造物、例えば抗体又はここに記載した抗体断片の製造方法も含まれる。
【００７２】
本発明の更なる態様では、本発明のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞株の調製方法が提供される。
【００７３】
本発明の一実施態様では、（ｉ）のポリペプチドは図７、８又は９に示すアミノ酸配列又はポリペプチド変異体を含み、前記変異体は、図７、８又は９に示すアミノ酸配列の少なくとも１つの残基の付加、欠失又は弛緩により修飾され、前記ポリペプチドはＣＲＬＲ機能を変調させる。
【００７４】
本発明の一実施態様では、前記核酸は小さなインターフェアリングＲＮＡであり得る。小インターフェアリングＲＮＡは、以下の（１）−（５）の配列からなる群から選択できる。
TGGCCCATCACCTCTTCATGA (1)
CTGGCTGCTCCTGGCCCATCA (2)
TCCTGGCCCATCACCTCTTCA (3)
CUAUGAGACAGCUGUCCAA (4)
GUUCUUCUCCAACUGCACC (5)
【００７５】
遺伝子機能を特異的に除去する技術は、二本鎖ＲＮＡの導入を介する。
【００７６】
本発明の他の態様では、単離された核酸が提供される。
【００７７】
また、本発明は、薬剤をコードする核酸配列と少なくとも９０％相同性を共有する核酸を含む。
【００７８】
本発明の一態様では、本発明の薬剤が抗体、その断片又は融合タンパク質であるとき、前記薬剤をコードする核酸分子にストリンジェントな条件下でハイブリダイズする核酸が提供される。
【００７９】
更なる態様において、本発明は、上記の核酸及び宿主中でタンパク質又はポリペプチドを発現するのに必要な結合した調節配列を含む発現ベクターを提供する。
【００８０】
形質転換体又はトランスフォームした細胞により、本発明の薬剤、例えば融合タンパク質、抗体又は抗体断片は、細胞内又は培養媒体中で生成される。
【００８１】
例えば、細胞は適切な媒体中で培養され、消費した媒体は抗体源として使用できる。
【００８２】
本発明の更なる態様では、RAMP タンパク質の発現レベルのアッセイ法が提供される。
【００８３】
本発明の一態様では、患者におけるガンを同定するための診断アッセイが提供される。
【００８４】
本発明の更なる態様は、核酸分子によってコードされるRAMPタンパク質の活性を変調させる薬剤のスクリーニング方法を提供する。
【００８５】
本開示は、CRLR機能を変調させる薬剤の同定におけるRAMPタンパク質の使用を提供する。
【００８６】
本発明の更なる態様によれば、図１、２又は３に示すアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸分子と特異的に反応する結合剤を含むキットが提供される。
【００８７】
本発明の代替的な好ましい実施態様では、前記キットは図１、２又は３に示すアミノ酸配列を含むポリペプチドをコードする核酸分子と特異的に反応する抗体を含む。
【００８８】
本発明の更なる態様によれば、核酸分子によってコードされるポリペプチドの活性を変調させる薬剤のスクリーニング方法が提供される。
【００８９】
RAMP細胞外ドメイン（ECD）に相当する図４から６（図７から９を含む）に示すアミノ酸配列は、RAMPのCRLRへの結合の変調等を介してCRLR機能を変調する分子の構造ベースの設計に使用できる。
【００９０】
上記したように、本発明は、或る実施態様において、ここに記載したポリペプチドから誘導される「ドメインネガティブ」ポリペプチド」も提供する。
【００９１】
当業者は、本開示によるペプチド薬剤のアミノ酸配列の修飾が、標的配列に対するペプチドの結合性及び/又は安定性を向上させうる事を理解するであろう。
【００９２】
更なる態様において、本発明は、CRLR機能を変調させる薬剤の同定におけるポリペプチドの使用を提供する。
【００９３】
医薬的方法、製造物の使用
他の態様では、本発明は、前記した試薬の医薬としての使用を提供する。更なる態様では、前記の試薬を含有する医薬組成物を提供する。組成物は、少なくとも一つの付加的な製薬上許容される成分、例えば、賦形剤、希釈剤又は担体を含んでいてもよい。好ましくは、組成物は、非経口投与を意図するものである。特別な実施態様では、組成物は、抗体、例えばRAMP-3タンパク質に結合する抗体である試薬を含む。
【００９４】
保護の範囲は、それらが実際にそのような試薬を含有するか否かに関わりなく、そしてそのような試薬が製薬上有効な量で含まれているか否かに関わりなく、本発明の試薬を含む又は含むことを意図した偽の又は不正な製造物を含む。従って、パッケージが本発明の化学種又は組成物を含むことを表示した記載又は指示を含むパッケージ、及びそのような組成物又は化学種である又は含む、あるいは含むことを意図した製造物は、保護の範囲に含まれる。
【００９５】
本発明の更なる実施態様では、本発明の試薬を含有する医薬組成物が提供される。好ましい実施態様では、試薬は抗体、特にRAMP-3タンパク質に結合する抗体である。
【００９６】
本明細書の開示には、図４、５又は６に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチド、又はそれらの断片又は変異体ポリペプチドであって、前記変異体が図４、５又は６に示されるアミノ酸配列のアミノ酸残基の少なくとも１つの付加、欠失又は置換によって修飾され、前記変異体ポリペプチドがCRLR機能を変調させるものを含有する組成物が含まれる。
【００９７】
本明細書で使用する「図４、５又は６に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドの断片」は、１〜５０アミノ酸、例えば１〜３０アミノ酸、例えば１〜３０アミノ酸を含む断片を含む。図４、５又は６に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドの断片は、図７、８又は９に示されるアミノ酸配列又は変異体ポリペプチドであって、前記変異体が図７、８又は９に示されるアミノ酸配列のアミノ酸残基の少なくとも１つの付加、欠失又は置換によって修飾され、前記変異体ポリペプチドがCRLR機能を変調させるものを含んでいてもよい。
【００９８】
また、本明細書の開示は、
ｉ）図４、５又は６に示される核酸配列の全部又は一部を含む核酸分子；
ｉｉ）上記（ｉ）の核酸分子にストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、ポリペプチドをコードする核酸分子であって、そのポリペプチドがＣＲＬＲ機能を変調させる核酸分子
からなる群から選択される、ワクチンとして使用するための核酸分子を含有する医薬組成物を含む。
【００９９】
本明細書の開示は、図４、７、８又は９に示される核酸配列を含む核酸分子を含有する組成物も想定している。
本発明の好ましい実施態様では、前記組成物はアジュバント及び/又はキャリアを含む。
【０１００】
アジュバントは、免疫細胞の活性を変調させることにより抗原に対する特異的な免疫反応を増強する物質又は手段である。アジュバントの例は、例示のみだが、フロイントアジュバント、ムラミールジペプチド、リポソームを含む。キャリアは、第二の分子に結合したときに、後者に対する免疫反応を増強する免疫原性分子である。幾つかの抗原は本来的に免疫原性ではなく、外来タンパク質分子、例えばキーホール-リンペットヘモシアニン又は破傷風トキソイドと結合したときに抗体反応を生じさせる。そのような抗原は、Ｂ細胞エピトープを含むがＴ細胞エピトープは含まない。そのような複合体のタンパク質部分（「キャリア」タンパク質）は、ヘルパーＴ細胞を刺激するＴ細胞エピトープを提供し、それは翻って抗原特異的Ｂ細胞のプラズマ細胞への分化を刺激して、抗原に対する抗体を産生する。ヘルパーＴ細胞は、他の免疫細胞、例えば細胞傷害性Ｔ細胞も刺激し、キャリアは細胞媒介免疫性並びに抗体の産生において類似の役割を果たし得る。
【０１０１】
本開示には、以下のパラグラフの内容も含まれる。
１．   カルシトニン受容体様受容体（ＣＲＬＲ）の機能に対するポリペプチドの影響を調節する薬剤であって、該ポリペプチドが、
ｉ）図１、２又は３で表される核酸配列からなる核酸分子によってコードされるポリペプチド又はその変異体、
ｉｉ） 上記（ｉ）で定義される核酸分子とストリンジェントな条件下でハイブリッドし、ＣＲＬＲ機能を調節する核酸分子によってコードされるペプチド、
ｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）で定義される核酸配列に対する遺伝子コードの結果として縮重する核酸を含み、該薬剤が医薬としての使用に特徴づけられるポリペプチド：
からなるのグループより選択される薬剤 。
２．薬剤がアンタゴニストであるパラグラフ１に記載の薬剤。
３．薬剤がアゴニストであるパラグラフ１に記載の薬剤。
４．薬剤がポリペプチドであるパラグラフ１に記載の薬剤。
５．薬剤が図４、５又は６に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチド、又はその断片又は変異体であるパラグラフ１に記載の薬剤。
６．図４、５又は６に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドの断片が、図４、５又は６に示されるアミノ酸配列のＮ末端の１から３０アミノ酸を含む断片を包含する、パラグラフ５に記載の薬剤。
７．図４、５又は６に示されるアミノ酸配列を含むポリペプチドの断片が、図７、８又は９から選択されるアミノ酸配列からなる断片を包含する、パラグラフ５に記載の薬剤。
８．薬剤が検出可能マーカーと共に供給されるパラグラフ５に記載の薬剤。
９．薬剤が抗体又は抗体の活性な結合部分であるパラグラフ１に記載の薬剤。
１０．抗体がモノクローナル抗体又はその活性な結合部分であるパラグラフ９に記載の薬剤。
１１．抗体がキメラ抗体であるパラグラフ９に記載の薬剤
１２．抗体が、該抗体の可変領域とヒト抗体の不変又は定常領域を含むように、組換え法によって生産されるヒト化抗体であるパラグラフ９に記載の薬剤。
１３．抗体が抗体断片であるパラグラフ９に記載の薬剤。
１４．抗体断片が一本鎖抗体可変領域断片であるパラグラフ１４に記載の薬剤。
１５．抗体が検出可能マーカーと共に供給されるパラグラフ９乃至１４のいずれかに記載の薬剤。
１６．抗体又は抗体断片が化学療法剤と結合又はクロスリンクするパラグラフ９乃至１４のいずれかに記載の薬剤。
１７．薬剤が核酸分子であるパラグラフ１に記載の薬剤。
１８．核酸がアンチセンス核酸、アプタマー又は小分子干渉ＲＮＡであるパラグラフ１７に記載の薬剤。
１９．前記パラグラフのいずれかに記載の薬剤及びアジュバント又は薬剤的に許容な担体を含む医薬組成物。
２０．ｉ）図４、５又は６に表される核酸配列の全て又は一部を含む核酸分子；
ｉｉ）上記（ｉ）核酸分子とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、ＣＲＬＲ機能を調節するポリペプチドをコードする核酸分子、
からなるグループより選択される核酸分子を含むワクチンとしての使用のための医薬組成物。
２１．核酸分子が、図４、７、８又は９で表される核酸配列を含むパラグラフ２０の組成物。
２２．パラグラフ１１のキメラ抗体又はパラグラフ１２のヒト化抗体の発現に適合されるベクター。
２３．パラグラフ２２のベクターで形質転換又は形質移入される細胞。
２４．パラグラフ１１のキメラ抗体又はパラグラフ１２のヒト化抗体の産生のための方法であって、
ｉｉｉ）ヒト化又はキメラ抗体をコードする核酸分子を含むベクターで形質転換又は形質移入される細胞を提供し、
ｉｖ）該抗体の製造を生じさせる条件下で該細胞を生育させ、
ｖ）該細胞又はその生育環境から該抗体を精製する、
ことを含む方法。
２５．パラグラフ１０のモノクローナル抗体を生産するハイブリドーマ細胞。
２６．パラグラフ２５のハイブリドーマ細胞株を使用してパラグラフ２５のモノクローナル抗体を生産する方法。
２７．ｉ）免疫応答性の哺乳動物を図４、５又は６で表されるアミノ酸配列を有する少なくとも１つのポリペプチド、又は断片又はここで定義されるその変異体を含む抗原で免疫し、
ｉｉ）免疫した免疫応答性哺乳動物のリンパ球をハイブリドーマ細胞を形成させるためにミエローマと融合させ、
ｉｉｉ）ステップ（ｉｉ）のハイブリドーマ細胞によって産生されるモノクローナル抗体を（ｉ）のポリペプチドに対する結合活性によりスクリーニングし、
ｉｖ）生育及び／又は該モノクローナル抗体を分泌させるためにハイブリドーマ細胞を^培養し；及び
ｖ）培養上清からモノクローナル抗体を回収する、
ステップを含む、パラグラフ１０に記載のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞株の調製方法。
２８．（ｉ）のポリペプチドが図７、８又は９に示されるものから選択されるアミノ酸配列を含むパラグラフ２７に記載の方法。
２９．ｉｉｉ）単離された細胞サンプルを提供し、
ｉｖ）（ｉ）のサンプルと図１、２又は３に表されるアミノ酸配列を含むポリペプチド、又はその断片又は変異体をコードする核酸分子、又は該核酸分子とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、図１、２又は３に表されるアミノ酸配列を含む変異体ポリペプチドをコードする核酸分子と結合する結合薬剤と接触させ、
ｖ）対応する正常サンプルと比較して、該サンプル中の該核酸分子の発現を決定する：
ステップを含む被検対象中の癌の判定のための診断アッセイ。
３０．結合約合いがオリゴヌクレオチドプライマーであるパラグラフ２９のアッセイ。
３１．結合薬剤がオリゴヌクレオチドプライマーであるパラグラフ２９のアッセイ。
３２．結合薬剤が、図１、２又は３のアミノ酸配列で表される該ポリペプチドと特異的に結合する抗体であるパラグラフ２９に記載の薬剤。
３３．ａ）図１、２又は３に示される核酸配列からなる核酸分子；
ｂ）上記（ｉ）の核酸分子とストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、ＣＲＬＲ機能を調節する核酸分子；
からなるグループより選択される核酸分子によってコードされるポリペプチドの活性を調節する薬剤のスクリーニングする方法であって、
ｉ）ポリペプチド又はその配列変異体及び少なくとも１つの試験薬剤を含む調製物を作製し、
ｉｉ）該ポリペプチドの活性について該薬剤の活性を測定するスクリーニング方法。
３４．  ＣＲＬＲ機能を調節する薬剤の同定におけるポリペプチドの使用であって、該ポリペプチドが、
ｉ）図１、２又は３で表される核酸配列からなる核酸分子によってコードされるポリペプチド又はその変異体、
ｉｉ） 上記（ｉ）で定義される核酸分子とストリンジェントな条件下でハイブリッドし、ＣＲＬＲ機能を調節する核酸分子によってコードされるペプチド、
ｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）で定義される核酸配列に対する遺伝子コードの結果として縮重する核酸を含み、該薬剤が医薬としての使用に特徴づけられるポリペプチド、
からなるのグループより選択される使用 。
３５．  ＣＲＬＲと、
ｉ）図１、２又は３で表される核酸配列からなる核酸分子によってコードされるポリペプチド又はその変異体、
ｉｉ） 上記（ｉ）で定義される核酸分子とストリンジェントな条件下でハイブリッドし、ＣＲＬＲ機能を調節する核酸分子によってコードされるペプチド、
ｉｉｉ）（ｉ）及び（ｉｉ）で定義される核酸配列に対する遺伝子コードの結果として縮重する核酸を含むポリペプチド、
からなるのグループより選択されるポリペプチドとの相互作用を調節する薬剤の同定におけるＣＲＬＲの使用 。
３６．パラグラフ１乃至１８のいずれかの薬剤、又はパラグラフ２１のいずれかの組成物の医薬のための使用。
３７．パラグラフ１乃至１８のいずれかの薬剤の有効量を投与することを含む被検対象における癌の治療方法。
３８．パラグラフ２０又は２１の組成物の有効量を投与することを含む癌について動物を免疫する方法。
３９．パラグラフ１乃至１８のいずれかの薬剤の有効量を投与することを含む被検対象における骨粗鬆症の治療方法。
４０．パラグラフ１乃至１８のいずれかの薬剤の有効量を投与することを含む被検対象における肥満の治療方法。
４１．パラグラフ１乃至１８のいずれかの薬剤の有効量を投与することを含む被検対象における炎症性疾患の治療方法。
４２．炎症性疾患が、アテローム性動脈硬化症、リウマチ様関節炎、変形性関節症及び多発性関節炎から選択されるパラグラフ４１の方法。
４３．パラグラフ１乃至１８のいずれかの薬剤の有効量を投与することを含む被検対象における創傷の治療方法。
【図面の簡単な説明】
【０１０２】
【図１】ＲＡＭＰ１のＤＮＡ配列（上）（配列番号：１）及び該ＤＮＡ配列にコードされるアミノ酸配列（下）（配列番号：２）を示す図である。
【図２】ＲＡＭＰ２のＤＮＡ配列（上）（配列番号：３）及び該ＤＮＡ配列にコードされるアミノ酸配列（下）（配列番号：４）を示す図である。
【図３】ＲＡＭＰ３のＤＮＡ配列（上）（配列番号：５）及び該ＤＮＡ配列にコードされるアミノ酸配列（下）（配列番号：６）を示す図である。
【図４】ＲＡＭＰ１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）領域に対応するＤＮＡ配列（上）（配列番号：７）及び該ＤＮＡ配列にコードされるアミノ酸配列（下）（配列番号：８）を示す図である。
【図５】ＲＡＭＰ２の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）領域に対応するＤＮＡ配列（上）（配列番号：９）及び該ＤＮＡ配列にコードされるアミノ酸配列（下）（配列番号：１０）を示す図である。
【図６】ＲＡＭＰ３の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）領域に対応するＤＮＡ配列（上）（配列番号：１１）及び該ＤＮＡ配列にコードされるアミノ酸配列（下）（配列番号：１２）を示す図である。
【図７Ａ】ＲＡＭＰ１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の切断されたＮ末端領域に対応するＤＮＡ配列（上）（配列番号：１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９及び２０）及び該ＤＮＡ配列にコードされるアミノ酸配列（下）（配列番号：２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７及び２８）を示す図である。断片の長さは太字で示した。
【図７Ｂ】ＲＡＭＰ１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の切断されたＮ末端領域に対応するＤＮＡ配列（上）（配列番号：１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９及び２０）及び該ＤＮＡ配列にコードされるアミノ酸配列（下）（配列番号：２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７及び２８）を示す図である。断片の長さは太字で示した。
【図７Ｃ】ＲＡＭＰ１の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の切断されたＮ末端領域に対応するＤＮＡ配列（上）（配列番号：１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９及び２０）及び該ＤＮＡ配列にコードされるアミノ酸配列（下）（配列番号：２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７及び２８）を示す図である。断片の長さは太字で示した。
【図８Ａ】ＲＡＭＰ２の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の切断されたＮ末端領域に対応するＤＮＡ配列（上）（配列番号：２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６及び３７）及び該ＤＮＡ配列にコードされるアミノ酸配列（下）（配列番号：３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６及び４７）を示す図である。断片の長さは太字で示した。
【図８Ｂ】ＲＡＭＰ２の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の切断されたＮ末端領域に対応するＤＮＡ配列（上）（配列番号：２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６及び３７）及び該ＤＮＡ配列にコードされるアミノ酸配列（下）（配列番号：３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６及び４７）を示す図である。断片の長さは太字で示した。
【図８Ｃ】ＲＡＭＰ２の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の切断されたＮ末端領域に対応するＤＮＡ配列（上）（配列番号：２９、３０、３１、３２、３３、３４、３５、３６及び３７）及び該ＤＮＡ配列にコードされるアミノ酸配列（下）（配列番号：３８、３９、４０、４１、４２、４３、４４、４５、４６及び４７）を示す図である。断片の長さは太字で示した。
【図９Ａ】ＲＡＭＰ３の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の切断されたＮ末端領域に対応するＤＮＡ配列（上）（配列番号：４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４及び５５）及び該ＤＮＡ配列にコードされるアミノ酸配列（下）（配列番号：５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２及び６３）を示す図である。断片の長さは太字で示した。
【図９Ｂ】ＲＡＭＰ３の細胞外ドメイン（ＥＣＤ）の切断されたＮ末端領域に対応するＤＮＡ配列（上）（配列番号：４８、４９、５０、５１、５２、５３、５４及び５５）及び該ＤＮＡ配列にコードされるアミノ酸配列（下）（配列番号：５６、５７、５８、５９、６０、６１、６２及び６３）を示す図である。断片の長さは太字で示した。
【図１０Ａ】ＣＲＬＲのＤＮＡ配列（上）（配列番号：６４）及びアミノ酸配列（下）（配列番号：６５）を示す図である。
【図１０Ｂ】ＣＲＬＲのＤＮＡ配列（上）（配列番号：６４）及びアミノ酸配列（下）（配列番号：６５）を示す図である。
【図１１】マウス抗-ＲＡＭＰポリクローナル抗体についてのＥＬＩＳＡデータを示す図である。
【図１２】ポリクローナル抗-ＲＡＭＰ-３抗体の、ヒトＭＧ６３骨肉腫細胞のおけるアデノメジュリンが環状ＡＭＰを増大させる効果を調節する能力を試験した結果を示すグラフである。全ての抗体がアデノメジュリンの効果を減少させた。
【図１３】モノクローナル抗-ＲＡＭＰ-３抗体の、（増殖部位にマッピングされるミトコンドリアスクシネートデヒドロゲナーゼのＭＴＴアッセイに基づいて）増殖阻害を油発する能力を試験した結果を示すグラフである。１：５０の濃度は約５０ｎｇの最終濃度に等しい。
【図１４】マウス１からのポリクローナル抗体のウエスタンブロットである。
【図１５】マウス２からのポリクローナル抗体のウエスタンブロットである。
【図１６】マウス３からのポリクローナル抗体のウエスタンブロットである。
【図１】
2009515827.tif 000003
【図２】
2009515827.tif 000004
【図３】
2009515827.tif 000005
【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【国際調査報告】
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