(57)【要約】  α−ケトアミノ酸を含む腹膜透析用組成物およびこれを用いて腹膜透析する方法を開示する。この組成物は従来の組成物の欠点である組織毒性および尿毒症などの副作用なしで安全に持続的に腹膜透析することができる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
α−ケトアミノ酸を含む腹膜透析用組成物。
【請求項２】
前記α−ケトアミノ酸は、グリシン(glycine)、アラニン(alanine)、セリン(serine)、システイン(cysteine)、アスパラギン酸(aspartic  acid)、グルタミン(glutamine)、グルタミン酸(glutamic acid)、ロイシン(leucine)、イソロイシン(isoleucine)、リジン(lysine)、ヒドロキシリジン(hydroxylysine)、アスパラギン(asparagine)、チロシン(tyrosine)、トリプトファン(tryptophan)、ヒスチジン(histidine)、フェニルアラニン(phenylalanine)、システイン(cystine)、プロリン(proline)、ヒドロキシプロリン(hydroxyproline)、トレオニン(threonine)、メチオニン(methionine)、ヒドロキシメチオニン(hydroxymethionine)、バリン(valine)、およびこれらの組み合わせよりなる群から選ばれるアミノ酸のα−アミノ残基がα−ケトン残基で置換されたものであることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記α−ケトアミノ酸は、ロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、バリン、およびこれらの組み合わせよりなる群から選ばれたアミノ酸のα−アミノ残基がα−ケトン残基で置換されたものであることを特徴とする、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記α−ケトアミノ酸は、α−アミノ残基がα−ケトン残基で置換されたロイシン、イソロイシン、フェニルアラニン、およびバリンからなることを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
α−ケトアミノ酸が８０００〜４００００ｍｇ／Ｌの量で含まれたことを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
アミノ酸、ブドウ糖および／または電解質をさらに含むことを特徴とする、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
前記アミノ酸が、グリシン(glycine)、アラニン(alanine)、セリン(serine)、システイン(cysteine)、アスパラギン酸(aspartic  acid)、グルタミン(glutamine)、グルタミン酸(glutamic acid)、ロイシン(leucine)、イソロイシン(isoleucine)、リジン(lysine)、ヒドロキシリジン(hydroxylysine)、アスパラギン(asparagine)、チロシン(tyrosine)、トリプトファン(tryptophan)、ヒスチジン(histidine)、フェニルアラニン(phenylalanine)、システイン(cystine)、プロリン(proline)、ヒドロキシプロリン(hydroxyproline)、トレオニン(threonine)、メチオニン(methionine)、ヒドロキシメチオニン(hydroxymethionine)、バリン(valine)、およびこれらの組み合わせよりなる群から選ばれることを特徴とする、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記アミノ酸が、リジン、トレオニン、トリプトファン、ヒスチジン、チロシン、ヒドロキシメチオニン、およびこれらの組み合わせよりなる群から選ばれることを特徴とする、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
前記アミノ酸を２８０〜１２００ｍｇ／Ｌの量で含むことを特徴とする、請求項６に記載の組成物。
【請求項１０】
前記電解質がナトリウム、カリウム、塩素、カルシウム、マグネシウム、およびこれらの組み合わせであることを特徴とする、請求項６に記載の組成物。
【請求項１１】
前記電解質は、ナトリウム１２５〜１４０ｍｍｏｌ／Ｌ、カリウム０〜４ｍｍｏｌ／Ｌ、塩化イオン９５〜１１５ｍｍｏｌ／Ｌ、カルシウム０．５〜３．００ｍｍｏｌ／Ｌ、およびマグネシウム０．１〜０．３ｍｍｏｌ／Ｌを含むことを特徴とする、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
有機酸塩をさらに含むことを特徴とする、請求項５に記載の組成物。
【請求項１３】
前記有機酸塩が乳酸塩、重炭酸塩、およびこれらの組み合わせであることを特徴とする、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記有機酸を３０〜６０ｍｍｏｌ／Ｌの量で含むことを特徴とする、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１５】
請求項１〜６のいずれか１項に記載の腹膜透析用組成物を腎臓疾患者に注入して腹膜透析する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、α−ケトアミノ酸を含む腹膜透析用組成物およびこれを用いて腹膜透析する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
腎不全が進行すると、体内の老廃物が十分排泄できなくなり、尿素窒素（ＢＵＮ）、クレアチニン（Ｃｒ）、リン（Ｐ）、カリウム（Ｋ）、有機酸などの尿毒症性物質の血中濃度が高くなって各種症状が現れる。その症状としては、易疲労感、息切れ、尿量の減少、浮腫および食欲不振があり、その他にも高血圧、代謝性アシドーシス、高カリウム血症、貧血などがある。このような症状をそのまま放置すると死に至るため、尿毒症の治療のために血液透析、腹膜透析または腎臓移植を行う。
【０００３】
透析は、腎臓の不十分な機能を処理するための方法としてよく知られている。透析は、体外的または体内的に行われることができる。特に、腹膜透析は、体内的な方法であって、高張液に対する患者腹膜の毛細血管内で溶質および水を交換する方法をいう。腹膜透析の方法は、間欠的腹膜透析法(Intermittent peritoneal dialysis；ＩＰＤ)、持続的携帯型腹膜透析法(Continuous ambulatory peritoneal dialysis；ＣＡＰＤ)に大別される。ＣＡＰＤは、ＩＰＤ法の利点を導入し、腹腔内に注入する灌流液の貯留時間を長くして１日４回の液交換を行う腹膜透析法である。
【０００４】
一般に、前記腹膜透析法に用いられる腹膜透析液はナトリウム、カリウム、塩素、カルシウム、マグネシウム、乳酸およびブドウ糖から構成されており、この溶液のｐＨは約５．０〜５．９である。このようなブドウ糖を用いた乳酸緩衝液を基にした低ｐＨ腹膜透析液は、現在までも最も多く使用される腹膜透析液であって、ブドウ糖を浸透剤として含有することにより腹膜を介しての適宜な浸透勾配を形成させ、限外濾過を達成することにより、過量の体液が血液の外に流出して腹膜透析溶液内に活発に移動する。ところが、この透析液は、高濃度のブドウ糖、低いｐＨ、高い浸透濃度およびブドウ糖分解産物(glucose degradation products；ＧＤＰｓ)の形成といった問題を持っているため、インビトロ(in vitro)および動物実験で非常に生体非適合であり、腹膜の炎症性サイトカイン、血管内皮増殖因子(vascular endothelial growth factor、ＶＥＧＦ)および腹膜線維化の形成を誘発し、腹膜の防御メカニズムを崩すものとして知られている。前記ＧＤＰｓ(Glucose degradation products)は、ブドウ糖含有透析液の加熱滅菌の際に作られるアセトアルデヒド(acetaldehyde)、ホルムアルデヒド(formaldehyde)、メチルグリコサル(methylgycoxal)、グリコサル(glycoxal)、５−ヒドロキシメチルフルアルデヒド(5-hydroxymethyl furaldehyde)、２−フルアルデヒド(2-furaldehyde)、および３−デオキシグルコソン(3-deoxyglucosone)などの物質をいう。これらのＧＤＰｓおよび高濃度のブドウ糖は、血中および腹膜のＡＧＥｓ(advance glycosylation end-products)の生成を促進して腹膜線維化および全身炎症反応を引き起こすものとして知られている。人体実験では、ブドウ糖に晒された量に比例して漸進的腹膜の損傷が増加するものと報告されている。これは腹膜透析失敗の原因となる。また、吸収されたブドウ糖は、局所効果の他にも、肥満症、過血糖症、過脂質血症などの多様な代謝障害を引き起こすという問題点を持つ。
【０００５】
前記ブドウ糖を含んだ腹膜透析液の問題点を解決するために、ブドウ糖代替性浸透剤が開発されてきた。アミノ酸が他の浸透剤として作用することができることが研究された。アミノ酸は吸収され易いので、栄養欠乏患者において有用なタンパク質源として作用することができる。また、１．１％濃度のアミノ酸透析液は１．５％ブドウ糖透析液に類似している超濾過量を得ることができるという特徴がある。ところが、透析の主要機能の一つは腎臓病末期患者の高い尿素濃度を減少させることであるが、アミノ酸投与、特に１００ｍｇ／ｋｇ（体重）／日以上の濃度で投与することは血中窒素を著しく上昇させて血中尿素濃度に悪影響を及ぼすおそれがある。よって、アミノ酸を投与する間、血中尿素濃度を非常に慎重に観察しなければならないという利点があった。
【０００６】
また、代謝性アシドーシスの危険性を回避するために、１日４回の透析液使用量のうち１回のみ使用しなければならないという欠点によって、アミノ酸透析液は、全体的な交換用として投与することができなかった。したがって、透析施行の際に必須的に非アミノ酸透析液の使用が不可避であった。これにより、ブドウ糖透析液の使用による副作用を完全に防止することができないという欠点があった。
そこで、本発明者は、透析液として用いられるブドウ糖またはアミノ酸溶液の副作用を予防し、より安全な透析液を開発する過程で、α−ケトアミノ酸を含む腹膜透析用組成物が、前記の問題点を解決し且つ安全な透析液として使用できることを見出し、本発明を完成した。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明の目的は、α−ケトアミノ酸を含む腹膜透析用組成物を提供することにある。
本発明の他の目的は、前記組成物を用いて腹膜透析する方法を提供することにある。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
一つの様態として、本発明は、α−ケトアミノ酸を含む腹膜透析用組成物に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明において使用された用語「α−ケトアミノ酸」は、アミノ酸の構造でα−アミノ残基がα−ケトン残基で置換されたアミノ酸をいう。このように置換されて本発明で使用可能なアミノ酸としては、グリシン(glycine)、アラニン(alanine)、セリン(serine)、システイン(cysteine)、アスパラギン酸(aspartic  acid)、グルタミン(glutamine)、グルタミン酸(glutamic acid)、ロイシン(leucine)、イソロイシン(isoleucine)、リジン(lysine)、ヒドロキシリジン(hydroxylysine)、アスパラギン(asparagine)、チロシン(tyrosine)、トリプトファン(tryptophan)、ヒスチジン(histidine)、フェニルアラニン(phenylalanine)、システイン(cystine)、プロリン(proline)、ヒドロキシプロリン(hydroxyproline)、トレオニン(threonine)、メチオニン(methionine)、ヒドロキシメチオニン(hydroxymethionine)またはバリン(valine)などを使用することができ、好ましくはロイシン、イソロイシン、フェニルアラニンおよび／またはバリンである。これらのα−ケトアミノ酸は、一つまたはそれ以上組み合わせて使用することができる。前記組み合わせられた一つの具体的例として、本発明の実施例では、α−アミノ残基がα−ケト残基で置換されたロイシン、イソロイシン、フェニルアラニンおよびバリンを含むα−ケトアミノ酸であって、ドイツのＦｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｋａｂｉ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨ社から購入することが可能なＫｅｔｏｓｔｅｒｉｌＴＭを使用したが、本発明はこれに限定されない。
【００１０】
また、本発明のα−ケトアミノ酸は、当業者に公知の方法によって製造することができる。例えば、化学的な合成方法、微生物培養物の分離収得などの方法によって製造することができ、前記ＫｅｔｏｓｔｅｒｉｌＴＭなどの市販されるα−ケトアミノ酸を購入して使用することもできる。
本発明のα−ケトアミノ酸を含む腹膜透析用組成物は、従来の商業的に使用されていたブドウ糖透析液および／またはアミノ酸透析液の利点を有しながら、これらの透析液が持っていた様々な欠点を克服することができる。例えば、現在、商業的に販売される透析液の一つであるニュートリニールＴＭ溶液（Ｂａｘｔｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＳＡ、Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ ｂｒａｎｃｈ）と比較した実験においても同一の透析能および半透膜間の移動性質を持っていることを、本明細書に添付された表６および表７などによって確認することができ、従来のアミノ酸を含む腹膜透析溶液とは異なりブドウ糖を使用しないことにより、ブドウ糖による体内副作用および毒性の危険性を無くすことができる。従来のアミノ酸を含む腹膜透析液は、多量投与の際に血中尿素窒素値の上昇とこれによる副作用を持つという根本的な問題点を持つが、これに対し、本発明のα−ケトアミノ酸を含む腹膜透析用組成物を使用する場合、かかる問題を効果的に抑制或いは減少させることができる。また、本発明に係る組成物を含む腹膜透析液は、一般なアミノ酸透析液よりタンパク質の供給が有利であって、透析中の末期腎不全患者における死亡率に連関しているタンパク質・カロリー欠乏を効果的に減少させることができる。本発明のα−ケトアミノ酸は、体内に吸収されてアミノ酸に変換される過程で、アミノ基転換酵素の活性を刺激し、体内に過量で存在する主要尿毒素である血中尿素窒素と結合させてアミノ酸を形成するため、腎不全患者の尿素窒素濃度を低めるという効果を持つ。また、α−ケトアミノ酸は、経口投与の際に体内タンパク質の合成を促進し、タンパク質の分解を抑制するうえ、動物性脂肪に主に含まれた硫黄含有アミノ酸で引き起こされる代謝性アシドーシスを減少させる効果を持つものと報告された。これに関連し、従来の経口投与したケトアミノ酸複合剤（ｋｅｔｏｓｔｅｒｉｌＴＭ）の場合、慢性腎不全患者の代謝性アシドーシスを有意に改善させることも報告されたことがある。また、本発明の腹膜透析用組成物は、ブドウ糖透析液と比較して腹膜線維化の度合いを有意に減少させることができる（図９参照）。
【００１１】
このように、本発明の腹膜透析用組成物は、従来のブドウ糖透析液およびアミノ酸透析液の欠点を補完し、腎不全症患者の腹膜透析のための溶液として有用に使用できる。特に、本発明の腹膜透析用組成物は、商業的に用いられているブドウ糖透析液およびアミノ酸透析液との安全性を有するうえ、毒性比較実験においても対等な程度の安全性を有し、毒性がないことを示して腹膜透析液として安全に使用することができる（図４〜図８参照）。
本発明の腹膜透析用組成物は、α−ケトアミノ酸を８０００〜４００００ｍｇ／Ｌ、好ましくは１００００〜３７０００ｍｇ／Ｌ、より好ましくは１１０００〜３４０００ｍｇ／Ｌの量で含む。
本発明のα−ケトアミノ酸を含む腹膜透析用組成物は、ｐＨが４．５〜７．８であり、好ましくはｐＨ６．０〜７．０である。
【００１２】
一つの具体的様態として、本発明の腹膜透析用組成物は、α−ケト酸の他に、一般な透析組成物を含むことができる。前記一般な透析組成物は、α−アミノ残基がα−ケトン残基で置換されていないアミノ酸、ブドウ糖、電解質または有機酸塩などを含む。前記アミノ酸は、通常のアミノ酸であって、これに限定されないが、グリシン(glycine)、アラニン(alanine)、セリン(serine)、システイン(cysteine)、アスパラギン酸(aspartic  acid)、グルタミン(glutamine)、グルタミン酸(glutamic acid)、ロイシン(leucine)、イソロイシン(isoleucine)、リジン(lysine)、ヒドロキシリジン(hydroxylysine)、アスパラギン(asparagine)、チロシン(tyrosine)、トリプトファン(tryptophan)、ヒスチジン(histidine)、フェニルアラニン(phenylalanine)、システイン(cystine)、プロリン(proline)、ヒドロキシプロリン(hydroxyproline)、トレオニン(threonine)、メチオニン(methionine)、ヒドロキシメチオニン(hydroxymethionine)、バリン(valine)  などを含み、好ましくはリジン、トレオニン、トリプトファン、ヒスチジン、チロシンおよび／またはヒドロキシメチオニンを含む。前記アミノ酸は、全体組成物において２８０〜１２００ｍｇ／Ｌ、好ましくは３４０〜１０２０ｍｇ／Ｌの量で含む。前記電解質はこれに限定されないが、ナトリウム、カリウム、塩素、カルシウムおよび／またはマグネシウムをイオンの形で含むことができる。前記ナトリウムは１２５〜１４０ｍｍｏｌ／Ｌ、カリウムは０〜４ｍｍｏｌ／Ｌ、塩化イオンは９５〜１１５ｍｍｏｌ／Ｌ、カルシウムは０．５〜３．００ｍｍｏｌ／Ｌ、マグネシウムは０．１〜０．３ｍｍｏｌ／Ｌの量で含むことが好ましい。前記有機酸塩はこれに限定されないが、乳酸塩または重炭酸塩などを含み、濃度３０〜６０ｍｍｏｌ／Ｌの有機酸塩を含むことができる。
【００１３】
本発明の腹膜透析用組成物の浸透圧は、３００〜１１００ｍＯｓｍ／Ｌ、好ましくは３５０〜１０５０ｍＯｓｍ／Ｌに調整することが好ましい。
別の様態として、本発明は、前記腹膜透析用組成物を腎臓疾患者に注入して腹膜透析する方法に関する。
本発明の腎臓疾患者は、例えば慢性腎不全症患者、急性腎不全症患者などであり、ヒトを含むマウス、ラット、ウサギ、猿などの哺乳動物をいう。
【００１４】
具体的様態として、腹腔にカテーテルを植え、腎臓疾患患者の腹膜中に当該カテーテルを介して、本発明のα−ケトアミノ酸を含む腹膜透析用組成物を約１．５〜３．０Ｌの量で注入する方法で行い、約５〜６時間貯留させた後、排液を行う。一般に、この操作を１日３〜５回繰り返し行う。
本発明は下記の実施例によってさらに具体的に説明されるであろう。このような実施例は本発明がよく理解できるように例示的に提示されるものなので、これらの実施例に本発明の範囲を限定してはならない。
【００１５】
実施例１：α−ケトアミノ酸を含む腹膜透析用組成物の製造
本発明のα−ケトアミノ酸を含む腹膜透析用組成物を製造するために、下記表１の組成比を持つｇａｍｂｒｏｓｏｌ ｔｒｉｏ ４０Ｃ溶液（Ｇａｍｂｒｏ Ｌｕｎｄｉａ ＡＢ、Ｓｗｅｄｅｎ）に、下記表２の組成を持つ市販のα−ケトアミノ酸であるｋｅｔｏｓｔｅｒｉｌＴＭ--（Ｆｒｅｓｅｎｉｕｓ Ｋａｂｉ Ｄｅｕｔｓｃｈｌａｎｄ ＧｍｂＨ、ドイツ）を１１．５５ｇ／Ｌの濃度で室温で溶解させた。
【００１６】
【表１】
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【００１７】
【表２】
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【００１８】
実施例２：分光光度計を用いたアミノ酸およびケトアミノ酸の濃度分析
紫外線分光光度計（ＵＶ１６０１、Ｓｈｉｍａｄｚｕ、日本）を用いて、アミノ酸含有溶液および実施例１で製造されたα−ケトアミノ酸含有溶液の時間による濃度変化を測定した。まず、２溶液の２３０〜３５０ｎｍ範囲における吸光度を測定することにより、アミノ酸誘導体の拡散を確認し(UV spectra were obtained by measuring the absorbance at various wave lengths using UV spectrophotometer(UV1601, Shimadzu, Japan))、アミノ酸の定量に一般に使用される波長２８０ｎｍにおける吸光度を比較して濃度の変化を知ることができた。これに対する結果が表３および図１、表４および図２に示されている。表４にはα−ケトアミノ酸を含む腹膜透析用組成物の希釈割合による吸光度を示した。
【００１９】
【表３】
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【００２０】
【表４】
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【００２１】
アミノ酸とα−ケトアミノ酸は、分子的類似性があるが、α−ケトアミノ酸はアミノ酸のα−アミノ残基がα−ケトン残基で置換されているという差異があり、実験に使用された２溶液間の各誘導体の組成比率が異なることにより、２溶質間の吸光度が同じ濃度で一致しないものと推定されたが、実験結果、２溶液とも本実験に使用された濃度の範囲で吸光度が線形比例するものと確認され、実験上の吸光度を用いて溶液の濃度変化が分かった。
【００２２】
実施例３：波長区間による吸光度ピークの形態調査
対照群（ニュートリニール溶液）と実験群（α−ケト酸）における波長区間による吸光度のピークを調査した。これに対する結果が表５および図３に示されている。
【００２３】
【表５】
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【００２４】
アミノ酸水溶液の検出波長として知られている２８０ｎｍ区間における吸光度のピークが２溶液ともで一致する結果を確認した。この結果より、本実験で実験溶液として用いたケト酸の濃度分析に２８０ｎｍにおける吸光度を利用することができることを確認した。
【００２５】
実験例４：時間経過による透析液の質量およびα−ケトアミノ酸の濃度変化
実施例１で製造されたα−ケトアミノ酸含有腹膜透析用組成物を、蒸留水に３０分間沸かして不純物を除去した透析膜に入れ、対照群（ニュートリニールＰＤ−４（Ｂａｘｔｅｒ Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ ＳＡ、Ｓｉｎｇａｐｏｒｅ ｂｒａｎｃｈ）と実験群をそれぞれ１００ｍＬずつ仕込み、透析緩衝液としてハートマン液１Ｌ（ＣＪ Ｉｎｃ．、韓国）を仕込んだ水槽でマグネチックバーを用いて同一条件の下で透析を行った。実験開始後各０、５、３０、６０、１２０、２４０分経過時毎に、透析液および透析緩衝液をそれぞれ１ｍＬずつ採取し、その質量および濃度の変化を測定した。
腹膜透析が行われるにつれて、透析膜を基準として透析膜の内部と外部の透析液の質量変化および本発明のα−ケトアミノ酸の濃度変化を観察した。これに対する結果として、表６では時間経過による透析液および透析緩衝溶液の濃度変化を示し、表７では時間経過による透析液の質量変化を示した。
【００２６】
【表６】
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【００２７】
【表７】
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【００２８】
実験開始時に測定された各区間別α−ケトアミノ酸の透析液および透析緩衝液内の濃度の変化は２群間に非常に類似の様相を示し、特に最初透析液内の濃度に対する時間帯別緩衝溶液との割合が２群間にほぼ同一の値を示して、対照群および実験群でアミノ酸とα−ケトアミノ酸の半透膜内の移動特性がほぼ一致することを確認した。また、透析液の質量変化も２群間に類似の結果を示していることを確認した。
以上の結果より、本実験に使用された１．１％のα−ケトアミノ酸透析液は既存のアミノ酸透析液と同等の透析能を示し、且つ対等な程度の半透膜間の移動性質を持っていることを確認した。
【００２９】
実験例５：α−ケトアミノ酸を含む腹膜透析液の安定性実験
５−１．α−ケトアミノ酸を含む腹膜透析液の製造
本発明のα−ケトアミノ酸を含む腹膜透析用組成物を製造するために、蒸留水に、前記表２の組成を持つα−ケトアミノ酸（ＫｅｔｏｓｔｅｒｉｌＴＭ、ドイツ）１２．７３５ｇ／Ｌ、ナトリウム１３２ｍｍｏｌ／Ｌ、カルシウム１．２５ｍｍｏｌ／Ｌ、マグネシウム０．２５ｍｍｏｌ／Ｌ、乳酸４０ｍｍｏｌ／Ｌ、塩素１０５ｍｍｏｌ／Ｌを室温で溶解させ、１２０℃で２０分間加圧滅菌器で滅菌して製造した。製造された腹膜透析用組成物のｐＨは６.７であり、浸透圧は３６６ｍＯｓｍ／Ｌであった。
【００３０】
５−２．腹膜透析カテーテルの製造
内径１／１６インチ、外径１／１８インチのシリコンチュービング（Ｃｏｌｅ Ｐａｌｍｅｒ Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔ Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｃｈｉｃａｇｏ、Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）を１２インチの長さに切断して準備した。ポリエステル布をチュービングの末端から１インチと３インチの距離にそれぞれ約１ｃｍの幅でシラスティック医療用接着剤（Ｄｏｗ Ｃｏｒｎｉｎｇ Ｃｏｒｐ．、Ｍｉｄｌａｎｄ、Ｍｉｃｈ．）で堅く固定させ、カテーテル末端部に直径１ｍｍの側面孔を２０個作った。
１５ゲージニードルの末端を切断した後、内腔を密閉させ、これをカテーテルストッパーとして用いた。
【００３１】
５−３．動物実験
体重２５０〜３００ｇの雄性Ｓｐｒａｇｕｅ Ｄａｗｌｅｙ白鼠９匹を実験に使用した。それぞれの白鼠をエーテルによる麻酔の下に腹部正中線に沿って剣状突起から下方に３ｃｍ皮膚を切開した後、剣状突起から下方約１．５ｃｍ部位の腹壁を切開した。腹腔が開くと、準備した腹膜透析用カテーテルを腹腔内に挿入し、糸で縫合してカフを腹壁に固定させた。カテーテルの外側部分はトロカールを用いて皮下トンネルを介して白鼠の肩甲骨間の喉頭から抜き出してカテーテルストッパーで密封した。皮膚は９ｍｍ手術用クリップで縫合して手術を仕上げした。
腹膜透析カテーテルを挿入した白鼠を２群に分け、対照群３匹は標準ブドウ糖透析液（ｄｉａｎｅａｌ、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｃ）を、標準アミノ酸透析液群３匹はアミノ酸透析液（ｎｕｔｒｉｎｅａｌ、Ｂａｘｔｅｒ Ｉｎｃ）を、α−ケトアミノ酸透析液群３匹はα−ケトアミノ酸透析液をそれぞれ３０ｃｃ１日２回腹腔内に注入した。
【００３２】
実験０、１、３および５週に各群の血中ｈｓＣＲＰ、ＢＵＮ（尿素窒素）、クレアチニン(creatinine)、タンパク質、アルブミンの量を（比色法よび比色免疫定量法、ＡＤＶＩＡ１６５０、Ｂａｙｅｒ、米国）測定し（図４〜図８）、実験開始５週後には白鼠をペントタール(pentothal)５０ｍｇ／ｋｇで麻酔して開腹した後、腹膜を得て１０％中和緩衝ホルマリン(meutral-buffered formalin)に固定し、しかる後に、標準的方法で処理し、５ｍｍの切片に切った。得られた腹膜標本に、線維化の度合いを比較するためにトリクローム(Trichrome)染色を行い、これを比較した。
【００３３】
５−４．実験結果
（１）各群間の生存率の比較
実験開始５週後まで各群の白鼠は全て生存が良好であった。
（２）各群間の検査指標比較
標準ブドウ糖透析液群（対照群）、アミノ酸透析液群、α−ケトアミノ酸群で実験０、１、３、５週にわたってブドウ糖、ＢＵＮ、クレアチニン、タンパク質、アルブミン、ｈｓＣＲＰの平均値は、意味のある差異を示さなかった（図４〜図９）。すなわち、ＢＵＮおよびクレアチニンの新機能指標は３群の全てで一定に維持され、栄養指標であるタンパク質およびアルブミンも３群で一定に維持された。また、炎症の度合いを示すｈｓＣＲＰの場合、３群間に有意な差異を示さなかった。
特に、本実験の各群間には炎症数値を示すｈｓＣＲＰ値に有意な差異がなく、アルブミン数値の差異もなかったので、本発明のα−ケトアミノ酸を含む腹膜透析溶液の安全性が他の標準ブドウ糖透析液群およびアミノ酸透析液群と対等であることが分かった。
【産業上の利用可能性】
【００３４】
上述したように、本発明に係るα−ケトアミノ酸を含む腹膜透析用組成物は、従来のブドウ糖またはアミノ酸を含む腹膜透析溶液の使用による腹膜の損傷、過血糖症、過脂質血症、心血管系損傷などの副作用を予防し、既存のアミノ酸透析液が持っていた血中尿素窒素の上昇などの副作用を除去することにより、より安全且つ効果的な腹膜透析を行うことができる。
以上、本発明を例示的に記述したが、使用した用語は本発明を限定するためのものでなく、本発明の特徴を説明するために意図されたものと理解されるべきである。本発明の様々な変更および変形は前記開示された内容に照らして可能である。したがって、添付された請求の範囲から外れない範囲内で、本発明は前述した実施例以外の方式で別に実施できるものと理解すべきである。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】図１はニュートリニール溶液の希釈割合による吸光度を示す。
【図２】図２は本発明の腹膜透析用組成物の希釈割合による吸光度を示す。
【図３】図３はニュートリニール溶液と本発明の腹膜透析用組成物の吸光度を比較して示すグラフである。
【図４】図４は対照群（ブドウ糖透析液）、アミノ酸透析液およびα−ケトアミノ酸透析液が投与された白鼠の血中ブドウ糖の変化を示す図である。
【図５】図５は対照群（ブドウ糖透析液）、アミノ酸透析液およびα−ケトアミノ酸透析液が投与された白鼠の血中尿素窒素（ＢＵＮ）の変化を示す図である。
【図６】図６は対照群（ブドウ糖透析液）、アミノ酸透析液およびα−ケトアミノ酸透析液が投与された白鼠の血中クレアチニン(Creatinine)の変化を示す図である。
【図７】図７は対照群（ブドウ糖透析液）、アミノ酸透析液およびα−ケトアミノ酸透析液が投与された白鼠の血中タンパク質の変化を示す図である。
【図８】図８は対照群（ブドウ糖透析液）、アミノ酸透析液およびα−ケトアミノ酸透析液が投与された白鼠の血中アルブミンの変化を示す図である。
【図９】図９は対照群（ブドウ糖透析液）、アミノ酸透析液およびα−ケトアミノ酸透析液が投与された白鼠のｈｓＣＲＰ(high sensitivity C-reactive protein) 値の変化を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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