(57)【要約】Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストおよびＴｒｐ−ｐ８アンタゴニストを含む低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーター、低分子Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストを含む組成物、ならびに新規低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターを同定し特徴付ける方法と、Ｔｒｐ−ｐ８を発現する細胞の生存性を減少させ、かつ／または増殖を阻害する方法と、Ｔｒｐ−ｐ８を介した陽イオン流入を活性化する方法と、アポトーシスおよび／またはネクローシスを刺激する方法と、肺癌、乳癌、結腸癌および／または前立腺癌などの癌を含む疾患、および良性前立腺肥大などのＴｒｐ−ｐ８発現に関係する他の疾患の処置のための関連方法とが提供される。
2009526859.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物であって、
【化１】
2009526859.tif 000097
式中、Ｒ１はＨ、アルキル、ヘテロアルキル、アリールアルキル、およびアリールから選択される、または、Ｒ１およびＲ２は窒素基と共に２５個までの原子の環状基または複素環基を形成でき；
Ｒ２は、アリールおよびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ４は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３およびＲ４は、窒素基と共に脂肪族アミンを形成する、化合物。
【請求項２】
式Ｉ−Ａの化合物であって、
【化２】
2009526859.tif 000098
式中、Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、ＣＲ２およびＮから独立に選択され；Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤのうちの少なくとも１つがＣＲ２であり；Ｒ２は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ハロゲン、アリールアルキル、Ｒ６Ｏ−、およびＲ６Ｓ−から選択されたメンバーであり、Ｒ６はアルキルであり；Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤの隣接する２つがＣＲ２であるとき、２つのＲ２が一緒になって単一のアリール基、シクロアルキル基、またはヘテロシクロアルキル基を形成することができ、
Ｒ１は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され、
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、および−ＮＲ７−から選択され、Ｒ７は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択されたメンバーであり、
Ｒ４は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８−、アルキル、アリールアルキル、およびヘテロアルキルから選択され、Ｒ８は、アルキルおよびヘテロアルキルから選択され、
Ｒ５は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され、
Ｒ４およびＲ５は、窒素基と共に脂肪族アミンを形成する、化合物。
【請求項３】
Ｒ１がＨである、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ７がＨである、請求項２に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ８が２個、３個、または４個の炭素を含む、請求項２に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ４が、プロピオニル、エチル、ブチリル、ヒドロキシプロピオニル、および３−ヒドロキシブチリルから選択される、請求項４に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ５がＨおよびメチルから選択される、請求項２に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ６が、１個、２個、３個、４個、５個、または６個の炭素を含む、請求項２に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ２が、メトキシ、メチルスルファニル、フェニル、およびＨから選択される、請求項７に記載の化合物。
【請求項１０】
前記化合物が、２−（２−アミノ−プロピオニルアミノ）−４−メトキシ−フェニル、Ｎ−（２−アミノ−エチル）−２−アミノ−５−メチルスルファニル−フェニル、１−（２−アミノ−エトキシ）−ナフタレン−２−イル、２−（２−アミノエチルアミノ）−４−メチルスルファニル−フェニル、Ｎ−（２−アミノ−エチル）−５−メトキシ−ベンズアミド、２−（２−アミノ−ブチリルアミノ）−４−メトキシ−フェニル、２−（２−アミノ−３−ヒドロキシ−プロピオニルアミノ）−４−メトキシ−フェニル、３−（２−アミノ−エチルアミノ）−ナフタレン−２−イル、Ｎ−（２−アミノ−エチル）−２−アミノベンズアミド、２−（２−アミノ−３−ヒドロキシ−プロピオニルアミノ）−４−メトキシ−フェニル、２−（２−アミノ−アセチルアミノ）−フェニル、２−（２−アミノ−３−ヒドロキシ−ブチリルアミノ）−４−メトキシ−フェニルアミド、および２−（２−アミノ−アセチルアミノ）−４−メトキシ−フェニルから選択された基を含む、請求項２に記載の化合物。
【請求項１１】
式Ｉ−Ｂの化合物であって、
【化３】
2009526859.tif 000099
式中、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ２は、アリール、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され、
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ４は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３およびＲ４は、窒素基と共に脂肪族アミンを形成する、化合物。
【請求項１２】
Ｒ１がＨである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ３が、１個、２個、３個、４個、５個、または６個の炭素を含む、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ３が、メチレン、エチレン、プロピレン、およびブチレンから選択される、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ４がＨおよびメチルから選択される、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ２が、フェニル、フラン、メチルピロール、メチルベンゾアート、アミノフェニル、ヒドロキシフェニル、シアノフェニル、およびメトキシフェニルから選択される、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１７】
前記化合物が、２−（２−アミノ−エチル）−５−フラン−２−イル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−プロピル）−５−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−エチル）−５−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−エチル）−５−（１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−プロピル）−５−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−エチル）−５−（４−アミノ−フェニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−エチル）−５−（４−ヒドロキシ−フェニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−メチルアミノ−エチル）−５−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−プロピル）−５−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−エチル）−５−（３−シアノ−フェニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−エチル）−５−（３−メトキシ−フェニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、４−｛１−（２−アミノ−エチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−安息香酸メチルエステル、２−（２−アミノ−エチル）−５−（３−アミノ−フェニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、および２−（２−アミノ−エチル）−５−（３−ヒドロキシ−フェニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イルから選択された基を含む、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１８】
式Ｉ−Ｃの化合物であって、
【化４】
2009526859.tif 000100
式中、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ２は、アリールおよびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、アリールアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ５−、−ＯＲ５−、および−ＮＨＲ５−から選択され、Ｒ５はアルキルまたはヘテロアルキルであり；
Ｒ４は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３およびＲ４は、窒素基と共に脂肪族アミンを形成する、化合物。
【請求項１９】
Ｒ１がＨである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ２がフェニルである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ５が、メチレン、エチレン、プロピレン、およびブチレンから選択される、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ３が、プロピオニルアミノ、エトキシ、プロポキシ、およびエチルアミノから選択される、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ４がＨおよびメチルから選択される、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２４】
前記化合物が、２−（２−アミノ−プロピオニルアミノ）−２−フェニル−エチル、２−（２−アミノ−エトキシ）−２−フェニル−エチル、２−（２−アミノ−エトキシ）−２−フェニル−エチル、２−（３−アミノ−プロポキシ）−２−フェニル−エチル、２−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−２−フェニル−エチル、および２−（２−アミノ−エチルアミノ）−２−フェニル−エチルから選択された基を含む、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２５】
式Ｉ−Ｄの化合物であって、
【化５】
2009526859.tif 000101
式中、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ２は、アリールおよびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ４は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３およびＲ４は、窒素基と共に脂肪族アミンを形成する、化合物。
【請求項２６】
Ｒ１がＨである、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ２がフェニルおよびフェニルアミノから選択される、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２８】
Ｒ３が、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、ブチルアミノ、およびアセチルから選択される、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｒ４がＨおよびメチルから選択される、請求項２５に記載の化合物。
【請求項３０】
前記化合物が、２−［２−（２−アミノ−エチルアミノ）−フェニル］−エチル、２−（２−アミノメチル−フェニル）−エチル、および２−［（２−アミノ−アセチル）−フェニル−アミノ］−エチルから選択された基を含む、請求項２５に記載の化合物。
【請求項３１】
式Ｉ−Ｅの化合物であって、
【化６】
2009526859.tif 000102
式中、Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、ＣＲ１およびＮから独立に選択され；Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤのうちの少なくとも１つがＣＲ１であり；Ｒ１は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、およびハロゲンから選択され；Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤの隣接する２つがＣＲ１であるとき、２つのＲ１が一緒になって単一のアリール基、シクロアルキル基、またはヘテロシクロアルキル基を形成することができ；
Ｒ２は、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ２およびＲ３は、窒素基と共に脂肪族アミンを形成する、化合物。
【請求項３２】
Ｒ１がＨである、請求項３１に記載の化合物。
【請求項３３】
Ｒ１が−ＯＲｉであり、Ｒｉが、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ブチル、ヒドロキシブチル、アセトニトリル、フェニル、フェニルメトキシ、フェニルエトキシ、フェニルプロポキシ、フェニルブトキシ、およびベンジルから選択される、請求項３１に記載の化合物。
【請求項３４】
Ｒ１が−ＳＲｉｉであり、Ｒｉｉが、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ブチル、ヒドロキシブチル、アセトニトリル、フェニル、フェニルメトキシ、フェニルエトキシ、フェニルプロポキシ、フェニルブトキシ、およびベンジルから選択される、請求項３１に記載の化合物。
【請求項３５】
Ｒ１が−Ｓ（Ｏ）Ｒｉｉｉであり、Ｒｉｉｉが、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ブチル、ヒドロキシブチル、アセトニトリル、フェニル、フェニルメトキシ、フェニルエトキシ、フェニルプロポキシ、フェニルブトキシ、およびベンジルから選択される、請求項３１に記載の化合物。
【請求項３６】
Ｒ１が−Ｓ（Ｏ）２ＲｉＶであり、Ｒｉｖが、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ブチル、ヒドロキシブチル、アセトニトリル、フェニル、フェニルメトキシ、フェニルエトキシ、フェニルプロポキシ、フェニルブトキシ、およびベンジルから選択される、請求項３１に記載の化合物。
【請求項３７】
Ｒ１が−Ｃ（Ｏ）ＮＲｖＲｖｉであり、ＲｖおよびＲｖｉが、Ｈ、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ブチル、ヒドロキシブチル、ジエチルアミノエチル、フェニル、ピリジニル、メトキシエチル、ヒドロキシエトキシエチル、ベンジル、メチルフェニル、フェニルエチル、ヒドロキシヒドロキシメチルフェニルエチル、カルバモイルメチル、およびヒドロキシメチルヒドロキシエチルから独立に選択される、請求項３１に記載の化合物。
【請求項３８】
Ｒ１が−Ｃ（Ｏ）ＮＲＶＲＶｉであり、ＲｖおよびＲＶｉが一緒に、モルホリン、ピペラジン、ピペラジンエチルエステルを形成する、請求項３１に記載の化合物。
【請求項３９】
Ｒ１がＣＦ３またはハロゲンである、請求項３１に記載の化合物。
【請求項４０】
Ｒ２が、メチレン、エチレン、プロピレン、およびブチレンから選択される、請求項３１に記載の化合物。
【請求項４１】
Ｒ２がエチレンであり、Ｒ３がＨである、請求項４０に記載の化合物。
【請求項４２】
Ｒ１がメトキシである、請求項３１に記載の化合物。
【請求項４３】
Ｒ３がＨである、請求項３１に記載の化合物。
【請求項４４】
前記化合物が、３−（２−アミノ−エチル）−５−メトキシ−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−（３−ヒドロキシ−プロポキシ）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−エトキシ−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−メタンスルホニル−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸アミド、３−（２−アミノ−エチル）−５−メチルスルファニル−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−メタンスルフィニル−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）−アミド、３−（２−アミノ−プロピル）−２，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、［３（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−アセトニトリル、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸エチルアミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ピリジン−３−イルアミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−メトキシ−エチル）−アミド、１−（２−アミノ−エチル）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、１−（２−アミノ−エチル）−１，３−ジヒドロ−ナフト［２，３−ｄ］イミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、３−（２−アミノ−エチル）−５−プロポキシ−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）−アミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ピリジン−４−イルアミド、３−（２−アミノ−エチル）−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−オン、１−（３−アミノ−プロピル）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸フェニルアミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸［２−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−エチル］−アミド、１−（２−アミノ−エチル）−５−トリフルオロメチル−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、１−（２−アミノ−エチル）−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ベンジルアミド、３−（２−アミノ−エチル）−５−（モルホリン−４−カルボニル）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−（２−オキソ−２−フェニル−エトキシ）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−メチルアミノ−エチル）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−ブトキシ−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチル−フェニル−アミド、４−［３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−ピペラジン−１−カルボン酸エチルエステル、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ジエチルアミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸フェネチル−アミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチル−２−フェニル−エチル）−アミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸カルバモイルメチル−アミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチル−エチル）−アミド、Ｎ−｛２−［２−オキソ−２，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−１−イル］−エチル｝−グアニジン、３−（２−アミノ−エチル）−５−ベンジルオキシ−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、および１−（４−アミノ−ブチル）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オンから選択された基を含む、請求項３１に記載の化合物。
【請求項４５】
前記化合物が、３−（２−アミノ−エチル）−１−（２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−５−メトキシ−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オンである、請求項４４に記載の化合物。
【請求項４６】
治療有効量の、式Ｉの化合物、式Ｉ−Ａの化合物、式Ｉ−Ｂの化合物、式Ｉ−Ｃの化合物、式Ｉ−Ｄの化合物、および式Ｉ−Ｅの化合物、ならびにそれらの組合せからなる群から選択された化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩に癌性細胞を接触させるステップを含む、癌の治療方法。
【請求項４７】
Ｔｒｐ−ｐ８を発現する細胞のアポトーシスおよび／またはネクローシスを誘導する方法であって、治療有効量の、式Ｉの化合物、式Ｉ−Ａの化合物、式Ｉ−Ｂの化合物、式Ｉ−Ｃの化合物、式Ｉ−Ｄの化合物、および式Ｉ−Ｅの化合物、ならびにそれらの組合せからなる群から選択された化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩に前記細胞を接触させるステップを含む、方法。
【請求項４８】
細胞生存性を減少させる方法および／または細胞増殖を阻害する方法であって、治療有効量の、式Ｉの化合物、式Ｉ−Ａの化合物、式Ｉ−Ｂの化合物、式Ｉ−Ｃの化合物、式Ｉ−Ｄの化合物、および式Ｉ−Ｅの化合物、ならびにそれらの組合せからなる群から選択された化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩に癌性細胞を接触させるステップを含む、方法。
【請求項４９】
哺乳動物の疾患を処置する方法であって、治療有効量の、式Ｉの化合物、式Ｉ−Ａの化合物、式Ｉ−Ｂの化合物、式Ｉ−Ｃの化合物、式Ｉ−Ｄの化合物、および式Ｉ−Ｅの化合物、ならびにそれらの組合せからなる群から選択された化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を投与するステップを含む、方法。
【請求項５０】
前記哺乳動物がヒトである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記疾患が癌である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
前記疾患が、前立腺、肺、乳房、および結腸の癌である、請求項４９に記載の方法。
【請求項５３】
哺乳動物の疾患を処置する方法であって、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの化合物、ならびにそれらの組合せ、またはそれらの薬学的に許容される塩と、１つ以上の癌治療薬との組合せを投与するステップを含む、方法。
【請求項５４】
前記組合せが同時に投与される、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記哺乳動物がヒトである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
前記疾患が癌である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５７】
前記疾患が、前立腺、肺、乳房、および結腸の癌である、請求項５３に記載の方法。
【請求項５８】
式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの化合物、ならびにそれらの組合せ、またはそれらの薬学的に許容される塩と、薬学的に許容される賦形剤とを含む、薬学的組成物。
【請求項５９】
前記組成物が、薬学的に許容されるキャリアまたは薬学的に許容される薬剤と処方される、請求項５８に記載の薬学的組成物。
【請求項６０】
哺乳動物における、Ｔｒｐ−ｐ８受容体が関与し受容体機能の調節が望まれる疾患または状態を処置する方法であって、有効調節量の、式Ｉの化合物、式Ｉ−Ａの化合物、式Ｉ−Ｂの化合物、式Ｉ−Ｃの化合物、式Ｉ−Ｄの化合物、および式Ｉ−Ｅの化合物、ならびにそれらの組合せからなる群から選択された化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を投与するステップを含む、方法。
【請求項６１】
Ｔｒｐ−ｐ８受容体機能の調節方法であって、有効調節量の、式Ｉの化合物、式Ｉ−Ａの化合物、式Ｉ−Ｂの化合物、式Ｉ−Ｃの化合物、式Ｉ−Ｄの化合物、および式Ｉ−Ｅの化合物、ならびにそれらの組合せからなる群から選択された化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を投与するステップを含む、方法。
【請求項６２】
医療診断または治療での使用のための、式Ｉの化合物、式Ｉ−Ａの化合物、式Ｉ−Ｂの化合物、式Ｉ−Ｃの化合物、式Ｉ−Ｄの化合物、および式Ｉ−Ｅの化合物、ならびにそれらの組合せからなる群から選択された化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩。
【請求項６３】
医療診断または治療が、Ｔｒｐ−ｐ８受容体関連疾患または状態の治療または予防である、請求項６２に記載の化合物。
【請求項６４】
疾患またはＴｒｐ−ｐ８受容体関連状態を治療または予防するために有用な医薬を調製するための、式Ｉの化合物、式Ｉ−Ａの化合物、式Ｉ−Ｂの化合物、式Ｉ−Ｃの化合物、式Ｉ−Ｄの化合物、および式Ｉ−Ｅの化合物、ならびにそれらの組合せからなる群から選択された化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩の使用。
【請求項６５】
Ｔｒｐ−ｐ８発現に関連する疾患を処置する方法であって、治療有効量の、式Ｉの化合物、式Ｉ−Ａの化合物、式Ｉ−Ｂの化合物、式Ｉ−Ｃの化合物、式Ｉ−Ｄの化合物、および式Ｉ−Ｅの化合物、ならびにそれらの組合せからなる群から選択された化合物、またはそれらの薬学的に許容される塩を哺乳動物に投与するステップを含む、方法。
【請求項６６】
Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストを同定する方法であって、Ｔｒｐ−ｐ８を発現する細胞およびＴｒｐ−ｐ８を発現しない細胞を、Ｔｒｐ−ｐ８を発現する前記細胞の生存性を減少させるのには十分な時間であるがＴｒｐ−ｐ８を発現しない前記細胞の生存性を減少させない時間の間、Ｔｒｐ−ｐ８を発現する前記細胞の生存性を減少させるのには十分な量であるがＴｒｐ−ｐ８を発現しない前記細胞の生存性を減少させない量で、式Ｉの化合物、式Ｉ−Ａの化合物、式Ｉ−Ｂの化合物、式Ｉ−Ｃの化合物、式Ｉ−Ｄの化合物、および式Ｉ−Ｅの化合物からなる群から選択された化合物に接触させるステップを含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
本願は、２００６年２月１５日に出願された米国仮特許出願第６０／７７３，４３５号への優先権の利益を主張し、その内容は、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、一般に、細胞生物学、生化学、および有機化学の分野に関する。より具体的には、本発明は、Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストおよびＴｒｐ−ｐ８アンタゴニストを含むＴｒｐ−ｐ８活性の低分子モジュレーター、ならびに低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターを含む組成物を提供する。また、新規低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターを同定し特徴付ける方法、ならびに細胞中のＴｒｐ−ｐ８を介した陽イオン流入、および／またはアポトーシスを調節する方法、およびＴｒｐ−ｐ８の発現、活性化、および／またはシグナル伝達に関わる疾患の関連処置法もまた提供される。本発明の組成物および方法で適切に処置される疾患例には、肺癌、乳癌、結腸癌、および／または前立腺癌などの癌が挙げられる。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
前立腺癌は合衆国における男性で診断される最も一般的な癌であり、肺腺癌に次ぐ２番目に高い癌死亡率をもつ。Ｐａｒｋｅｒら、ＣＡ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．４６巻：５〜２７頁（１９９６年）。臓器に限定された前立腺癌を効果的に処置することは可能であるが、転移性疾患では処置オプションは非常に限定されている。したがって、初期段階の疾患を診断する新規方法を見出し、その疾患の進行および処置の両方を綿密にモニターし、かつ新規治療方法を開発することが非常に重要である。本目的を達成するために、前立腺癌の発達の分子機構を理解し、疾患診断および進行のための新規生化学的マーカーを特定することが重要となる。
【０００４】
現在のところ、利用可能な前立腺特異的マーカーは非常に少ない。実証済の前立腺癌診断値の最もよく知られ、またよく特徴付けられたマーカーは、タンパク質前立腺酸性フォスファターゼ（ＰＡＰ）、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）、および前立腺特異的膜抗原（ＰＳＭＡ）である。これらのタンパク質のそれぞれは、疾患の処置用の新規免疫療法アプローチの標的にもなっている。Ｈｏｒｏｓｚｅｗｉｃｚら、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．７巻：９２７〜９３５頁（１９８７年）；Ｂａｒｒｅｎら、Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ３０巻：６５〜６８頁（１９９７年）；Ｍｕｒｐｈｙら、Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ３３巻：２８１〜２８５頁（１９９７年）；Ｍｕｒｐｈｙら、Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ２６巻：１６４〜１６８頁（１９９５年）；Ｒｏｃｈｏｎら、Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ２５巻：２１９〜２２３頁（１９９５年）；Ｃｏｒｒｅａｌｅら、Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１巻：３１８６〜３１９４頁（１９９８年）；およびＭｕｒｐｈｙら、Ｐｒｏｓｔａｔｅ  ３８巻：７３〜７８頁（１９９９年）。
【０００５】
Ｔｒｐ−ｐ８（一過性受容体ポテンシャル−ｐ８）、ＴＲＰＭ８、およびＣＭＲ１（コールドおよびメントール受容体１）と様々に呼ばれる陽イオンチャネルタンパク質は、前立腺で優先的に発現されることが報告されている。全長ヒトＴｒｐ−ｐ８ｃＤＮＡのクローニングによって、カルシウムチャネルのｔｒｐファミリーと相同性を共有する１１０４アミノ酸ポリペプチドに相当する転写物が明らかになった。非特許文献１および非特許文献２。Ｔｒｐ−ｐ８は、ヒトＴＲＰＣ７遺伝子（脳組織にて高頻度で発現されているｔｒｐファミリーの推定Ｃａ２＋チャネルタンパク質）と特に高い相同性を示している。非特許文献３。Ｔｒｐ−ｐ８はまた、ヒトメラスタチンと有意な相同性を示し、このメラスタチンは、メラニン細胞で発現するもう１つのＴｒｐファミリー関連タンパク質であり、腫瘍抑制遺伝子であると考えられている。非特許文献４および非特許文献５。おそらく最も興味深いのは、Ｔｒｐ−ｐ８遺伝子が、前立腺腫瘍性病変に加え広範囲の非前立腺腫瘍性病変で発現されるように思われることが観察されていることである。非特許文献６。
【０００６】
Ｔｒｐのスーパーファミリーは、２０個を超える関係陽イオンチャネルタンパク質を含み、これらのタンパク質は、血管緊張低下および雄の妊性に関する感覚生理学を含む過程に関与している。Ｔｒｐチャネルの欠陥は、増殖制御および腫瘍抑制の変化に関係している。Ｔｒｐタンパク質はすべて、カルシウムチャネルであるが、それらのタンパク質は、選択性および活性化の様式が有意に変化する。Ｔｒｐスーパーファミリーのメンバーは、顕著な配列相同性および推定膜貫通セグメントのサイズなどの推定構造類似性を共有する。
【０００７】
Ｔｒｐ−ｐ８は、前立腺癌、乳癌、肺癌および結腸癌を含む癌領域で過剰発現され、一方、正常組織内では、優先的に、ヒト前立腺（非特許文献６）および後根神経節（ＤＲＧ、Ｄｅｎｄｒｅｏｎ、未公開観測）で発現される。Ｆｕｅｓｓｅｌらは、Ｔｒｐ−ｐ８は非常に前立腺に特異的な前立腺癌に関係した遺伝子であり、したがって、Ｔｒｐ−ｐ８を特定の治療法のための潜在的な標的として適格であると見なすこと、を報告した。非特許文献７。他の化学種の中では、Ｔｒｐ−ｐ８オルソログもまた、ラット（非特許文献８）およびマウス（非特許文献９）のＤＲＧ、および三卵性神経節（ＴＧ）細胞のサブセットで発現されると報告されている。よって、Ｔｒｐ−ｐ８は疾患診断および処置の間の疾患進行のモニターにおけるかなりの潜在的用途を有する、全腫癌発現マーカーであり、かつ癌治療のための有効な標的である。
【０００８】
Ｔｒｐ−ｐ８が前立腺癌、肺癌、乳癌、および結腸癌に関係していること、ならびに重要な細胞機能で各種イオンチャネルが果たす重要な役割よって、Ｔｒｐ−ｐ８チャネルには癌細胞シグナル伝達および／または癌細胞増殖において重要な機能があり得ることが示唆されている。アゴニストを通して活性化することによる、またはアンタゴニストを通して阻害することによる、Ｔｒｐ−ｐ８活性の調節は、Ｔｒｐ−ｐ８を発現する細胞を特定様式で調節するための治療法として価値があり得る。例えば、米国特許出願１０／９２３，４１３参照。
【非特許文献１】Ｃｌａｐｈａｍら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ２巻：３８７〜３９６頁（２００１年）
【非特許文献２】およびＣｌａｐｈａｍら、ＩＵＰＨＡＲ  Ｃｏｍｐｅｎｄｉｕｍ、ＴＲＰ  Ｃｈａｎｎｅｌｓ（２００２年）
【非特許文献３】Ｎａｇａｍｉｎｅら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ５４巻：１２４〜１３１頁（１９９８年）
【非特許文献４】Ｄｕｎｃａｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５８巻：１５１５〜１５２０頁（１９９８年）
【非特許文献５】Ｈｕｎｔｅｒら、Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ５４巻：１ｌ６〜１２３頁（１９９８年）
【非特許文献６】Ｔｓａｖａｌｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６１巻（９）：３７６０〜９頁（２００１年）
【非特許文献７】Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｊ．  ｏｆ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  ２３巻：２２１〜２２８頁（２００３年）
【非特許文献８】ＭｃＫｅｍｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ４１６巻（６８７６）：５２〜８頁（２００２年）
【非特許文献９】Ｐｅｉｅｒら、Ｃｅｌｌ  １０８巻（５）：７０５〜１５頁（２００２年）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
したがって、当技術分野において、Ｔｒｐ−ｐ８活性の低分子モジュレーター、１つ以上の低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターを含む組成物、細胞中でのＴｒｐ−ｐ８の活性を調節する低分子の同定法および使用法、ならびにＴｒｐ−ｐ８の異常発現に関係する疾患の処置法に対する必要性が残っている。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
（発明の簡単な要旨）
本発明は、Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストおよびＴｒｐ−ｐ８アンタゴニストを含むＴｒｐ−ｐ８活性の低分子モジュレーター、およびそのようなＴｒｐ−ｐ８モジュレーターを含む組成物、ならびにＴｒｐ−ｐ８モジュレーターの同定法および使用法を提供することによって、これらおよび他の関連要求を満たす。いくつかの実施形態では、本発明の化合物は、陽イオン流入がＴｒｐ−ｐ８モジュレーターにより誘導される毒性に相関している細胞中で、Ｔｒｐ−ｐ８に結合してＴｒｐ−ｐ８を活性化し、かつ／または、カルシウム流入を含むがこれに限定されない、陽イオン流入を刺激する。よって、これらの実施形態および他の実施形態では、本発明のＴｒｐ−ｐ８アゴニストは、Ｔｒｐ−ｐ８を発現する細胞の増殖を阻害すること、ならびに／あるいはＴｒｐ−ｐ８を発現する細胞のアポトーシスおよび／またはネクローシスを誘導するのに効果的である。代替の実施形態では、細胞中のＴｒｐ−ｐ８の基本的活性を低減し、それによってＴｒｐ−ｐ８を発現する細胞の生存性を低減するのに効果的なＴｒｐ−ｐ８アンタゴニストが提供されている。したがって、都合のよいことに、本発明のアゴニストおよびアンタゴニストは、Ｔｒｐ−ｐ８発現に関係している乳房、肺、結腸、および／または前立腺の癌を含むが、これらに限定されない疾患を処置するのに使われ得る。
【００１１】
１つ以上のＴｒｐ−ｐ８モジュレーターが、１つ以上の薬学的に許容されるキャリアもしくは賦形剤、および／または１つ以上のその他の治療化合物を含む薬学的組成物を含む組成物に処方され得る。そのような組成物はＴｒｐ−ｐ８発現に関係している１つ以上の疾患の処置法に利用される。
【００１２】
したがって一実施形態において、本発明は、低分子が下記の式Ｉの化合物を含む低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターおよびその誘導体を提供する：
【００１３】
【化７】
2009526859.tif 000003
式中、Ｒ１はＨ、アルキル、ヘテロアルキル、アリールアルキル、およびアリールから選択される、または、Ｒ１およびＲ２は窒素基と共に２５個までの原子の環状基または複素環基を形成でき；
Ｒ２は、アリールおよびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ４は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３およびＲ４は、窒素基と共に脂肪族アミンを形成する。
【００１４】
関連した実施形態の中で、本発明は、低分子が下記の式Ｉ−Ａの化合物を含む低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターおよびその誘導体を提供する：
【００１５】
【化８】
2009526859.tif 000004
式中、Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、ＣＲ２およびＮから独立に選択され；Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤのうちの少なくとも１つがＣＲ２であり；Ｒ２は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ハロゲン、アリールアルキル、Ｒ６Ｏ−、およびＲ６Ｓ−から選択されたメンバーであり、Ｒ６はアルキルであり；Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤの隣接する２つがＣＲ２であるとき、２つのＲ２が一緒になって単一のアリール基、シクロアルキル基、またはヘテロシクロアルキル基を形成することができ、
Ｒ１は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され、
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、および−ＮＲ７−から選択され、Ｒ７は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択されたメンバーであり、
Ｒ４は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８−、アルキル、アリールアルキル、およびヘテロアルキルから選択され、Ｒ８は、アルキルおよびヘテロアルキルから選択され、
Ｒ５は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され、
Ｒ４およびＲ５は、窒素基と共に脂肪族アミンを形成する。
【００１６】
式Ｉ−Ａのいくつかの例示的な化合物では、Ｒ１はＨであり；Ｒ７はＨであり；Ｒ８は２個、３個、もしくは４個の炭素を含み；Ｒ４は、プロピオニル、エチル、ブチリル、ヒドロキシプロピオニル、および３−ヒドロキシブチリルから選択され；Ｒ５はＨおよびメチルから選択され；Ｒ６は、１個、２個、３個、４個、５個、もしくは６個の炭素を含み；ならびに／または、Ｒ２は、メトキシ、メチルスルファニル、フェニル、およびＨから選択される。
【００１７】
本明細書で例示されるのは、２−（２−アミノ−プロピオニルアミノ）−４−メトキシ−フェニル、Ｎ−（２−アミノ−エチル）−２−アミノ−５−メチルスルファニル−フェニル、１−（２−アミノ−エトキシ）−ナフタレン−２−イル、２−（２−アミノ−エチルアミノ）−４−メチルスルファニル−フェニル、Ｎ−（２−アミノ−エチル）−５−メトキシ−ベンズアミド、２−（２−アミノ−ブチリルアミノ）−４−メトキシ−フェニル、２−（２−アミノ−３−ヒドロキシ−プロピオニルアミノ）−４−メトキシ−フェニル、３−（２−アミノ−エチルアミノ）−ナフタレン−２−イル、Ｎ−（２−アミノ−エチル）−２−アミノ−ベンズアミド、２−（２−アミノ−３−ヒドロキシ−プロピオニルアミノ）−４−メトキシ−フェニル、２−（２−アミノ−アセチルアミノ）−フェニル、２−（２−アミノ−３−ヒドロキシ−ブチリルアミノ）−４−メトキシ−フェニルアミド、および２−（２−アミノ−アセチルアミノ）−４−メトキシ−フェニルから選択された基を含む式Ｉ−Ａの化合物である。
【００１８】
他の関連した実施形態では、本発明は、低分子が下記の式Ｉ−Ｂの化合物を含む低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターおよびその誘導体を提供する：
【００１９】
【化９】
2009526859.tif 000005
式中、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ２は、アリール、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され、
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ４は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３およびＲ４は、窒素基と共に脂肪族アミンを形成する。
【００２０】
式Ｉ−Ｂのいくつかの例示的な化合物では、Ｒ１はＨであり；Ｒ３は、メチレン、エチレン、プロピレン、およびブチレンから選択され；Ｒ４はＨおよびメチルから選択され；ならびに／または、Ｒ２は、フェニル、フラン、メチルピロール、メチルベンゾアート、アミノフェニル、ヒドロキシフェニル、シアノフェニル、およびメトキシフェニルから選択される。
【００２１】
本明細書で例示されるのは、２−（２−アミノ−エチル）−５−フラン−２−イル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−プロピル）−５−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−エチル）−５−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−エチル）−５−（１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−プロピル）−５−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−エチル）−５−（４−アミノ−フェニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−エチル）−５−（４−ヒドロキシ−フェニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−メチルアミノ−エチル）−５−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−プロピル）−５−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−エチル）−５−（３−シアノ−フェニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−エチル）−５−（３−メトキシ−フェニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、４−｛１−（２−アミノ−エチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−安息香酸メチルエステル、２−（２−アミノ−エチル）−５−（３−アミノ−フェニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、および２−（２−アミノ−エチル）−５−（３−ヒドロキシ−フェニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イルから選択された基を含む式Ｉ−Ｂの化合物である。
【００２２】
さらに他の関連した実施形態では、本発明は、低分子が下記の式Ｉ−Ｃの化合物を含む低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターおよびその誘導体を提供する：
【００２３】
【化１０】
2009526859.tif 000006
式中、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ２は、アリールおよびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、アリールアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ５−、−ＯＲ５−、および−ＮＨＲ５−から選択され、Ｒ５はアルキルまたはヘテロアルキルであり；
Ｒ４は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３およびＲ４は、窒素基と共に脂肪族アミンを形成する。
【００２４】
式Ｉ−Ｃのいくつかの例示的な化合物では、Ｒ１はＨであり；Ｒ２はフェニルであり；Ｒ５は、メチレン、エチレン、プロピレン、およびブチレンから選択され；Ｒ３は、プロピオニルアミノ、エトキシ、プロポキシ、およびエチルアミノから選択され；ならびに／または、Ｒ４はＨおよびメチルから選択される。
【００２５】
本明細書で例示されるのは、２−（２−アミノ−プロピオニルアミノ）−２−フェニル−エチル、２−（２−アミノ−エトキシ）−２−フェニル−エチル、２−（２−アミノ−エトキシ）−２−フェニル−エチル、２−（３−アミノ−プロポキシ）−２−フェニル−エチル、２−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−２−フェニル−エチル、および２−（２−アミノ−エチルアミノ）−２−フェニル−エチルから選択された基を含む式Ｉ−Ｃの化合物である。
【００２６】
さらに他の関連した実施形態では、本発明は、低分子が下記の式Ｉ−Ｄの化合物を含む低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターおよびその誘導体を提供する：
【００２７】
【化１１】
2009526859.tif 000007
式中、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ２は、アリールおよびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ４は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３およびＲ４は、窒素基と共に脂肪族アミンを形成する。
【００２８】
式Ｉ−Ｄのいくつかの例示的な化合物では、Ｒ１はＨであり；Ｒ２はフェニルおよびフェニルアミノから選択され；Ｒ３は、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、ブチルアミノ、およびアセチルから選択され；ならびに／または、Ｒ４はＨおよびメチルから選択される。
【００２９】
本明細書で例示されるのは、２−［２−（２−アミノ−エチルアミノ）−フェニル］−エチル、２−（２−アミノメチル−フェニル）−エチル、および２−［（２−アミノ−アセチル）−フェニル−アミノ］−エチルから選択された基を含む式Ｉ−Ｄの化合物である。
【００３０】
さらに他の関連した実施形態では、本発明は、低分子が下記の式Ｉ−Ｅの化合物を含む低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターおよびその誘導体を提供する：
【００３１】
【化１２】
2009526859.tif 000008
式中、Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、ＣＲ１およびＮから独立に選択され；Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤのうちの少なくとも１つがＣＲ１であり；Ｒ１は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、およびハロゲンから選択され；Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤの隣接する２つがＣＲ１であるとき、２つのＲ１が一緒になって単一のアリール基、シクロアルキル基、またはヘテロシクロアルキル基を形成することができ；
Ｒ２は、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ２およびＲ３は、窒素基と共に脂肪族アミンを形成する。
【００３２】
式Ｉ−Ｅのいくつかの例示的な化合物では、
（ｉ）Ｒ１はＨまたは−ＯＲｉであり、Ｒｉは、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ブチル、ヒドロキシブチル、アセトニトリル、フェニル、フェニルメトキシ、フェニルエトキシ、フェニルプロポキシ、フェニルブトキシ、およびベンジルから選択され；
（ｉｉ）Ｒ１は−ＳＲｉｉであり、Ｒｉｉは、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ブチル、ヒドロキシブチル、アセトニトリル、フェニル、フェニルメトキシ、フェニルエトキシ、フェニルプロポキシ、フェニルブトキシ、およびベンジルから選択され；
（ｉｉｉ）Ｒ１は−Ｓ（Ｏ）Ｒｉｉｉであり、Ｒｉｉｉは、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ブチル、ヒドロキシブチル、アセトニトリル、フェニル、フェニルメトキシ、フェニルエトキシ、フェニルプロポキシ、フェニルブトキシ、およびベンジルから選択され；
ｉｖ）Ｒ１は−Ｓ（Ｏ）２ＲｉＶであり、Ｒｉｖは、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ブチル、ヒドロキシブチル、アセトニトリル、フェニル、フェニルメトキシ、フェニルエトキシ、フェニルプロポキシ、フェニルブトキシ、およびベンジルから選択され；
（ｖ）Ｒ１は−Ｃ（Ｏ）ＮＲｖＲｖｉであり、ＲｖおよびＲｖｉは、Ｈ、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ブチル、ヒドロキシブチル、ジエチルアミノエチル、フェニル、ピリジニル、メトキシエチル、ヒドロキシエトキシエチル、ベンジル、メチルフェニル、フェニルエチル、ヒドロキシヒドロキシメチルフェニルエチル、カルバモイルメチル、およびヒドロキシメチルヒドロキシエチルから独立に選択され；
（ｖｉ）Ｒ１は−Ｃ（Ｏ）ＮＲＶＲＶｉであり、ＲｖおよびＲＶｉは一緒に、モルホリン、ピペラジン、ピペラジンエチルエステルを形成し；
（ｖｉｉ）Ｒ２は、メチレン、エチレン、プロピレン、およびブチレンから選択され；
（ｖｉｉｉ）Ｒ２はエチレンであり、Ｒ３はＨであり；
（ｉｘ）Ｒ１はＣＦ３またはハロゲンである。
【００３３】
本明細書で例示されるのは、３−（２−アミノ−エチル）−５−メトキシ−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−（３−ヒドロキシ−プロポキシ）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−エトキシ−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−メタンスルホニル−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸アミド、３−（２−アミノ−エチル）−５−メチルスルファニル−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−メチルスルフィニル−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）−アミド、３−（２−アミノ−プロピル）−２，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、［３（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−アセトニトリル、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸エチルアミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ピリジン−３−イルアミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−メトキシ−エチル）−アミド、１−（２−アミノ−エチル）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、１−（２−アミノ−エチル）−１，３−ジヒドロ−ナフト［２，３−ｄ］イミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、３−（２−アミノ−エチル）−５−プロポキシ−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）−アミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ピリジン−４−イルアミド、３−（２−アミノ−エチル）−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−オン、１−（３−アミノ−プロピル）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸フェニルアミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸［２−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−エチル］−アミド、１−（２−アミノ−エチル）−５−トリフルオロメチル−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、１−（２−アミノ−エチル）−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ベンジルアミド、３−（２−アミノ−エチル）−５−（モルホリン−４−カルボニル）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−（２−オキソ−２−フェニル−エトキシ）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−メチルアミノ−エチル）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−ブトキシ−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチル−フェニル−アミド、４−［３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−ピペラジン−１−カルボン酸エチルエステル、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ジエチルアミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸フェネチル−アミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチル−２−フェニル−エチル）−アミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸カルバモイルメチル−アミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチル−エチル）−アミド、Ｎ−｛２−［２−オキソ−２，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−１−イル］−エチル｝−グアニジン、３−（２−アミノ−エチル）−５−ベンジルオキシ−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、および１−（４−アミノ−ブチル）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オンから選択された基を含む式Ｉ−Ｅの化合物である。上記のような一実施形態においては、化合物３−（２−アミノ−エチル）−１−（２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−５−メトキシ−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オンがもたらされる。
【００３４】
本発明の他の態様は薬学的組成物を含む組成物を提供し、これらの組成物は、薬学的に許容される賦形剤、キャリア、および／または希釈剤と共に、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−Ｅの１つ以上の低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターを含む。本明細書において、実施例に例示されるものは、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−Ｅの特異的Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストおよびＴｒｐ−ｐ８アンタゴニスト；式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−Ｅの例示的なＴｒｐ−ｐ８アゴニストおよびＴｒｐ−ｐ８アンタゴニストを合成する方法；ならびに式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−Ｅの開示されたＴｒｐ−ｐ８アゴニストおよびＴｒｐ−ｐ８アンタゴニストそれぞれのインビトロ効果および特異的な活性を例証するＥＣ５０データである。
【００３５】
さらなる態様では、本発明の組成物は、１つ以上の癌治療薬を一緒に処方した、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの１つ以上の化合物を含む。あるいは、本発明の組成物は、独立に、１つ以上の癌治療薬と処方された、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの化合物を含む。すなわち、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの１つ以上の化合物、ならびに癌治療薬は独立して処方される。
【００３６】
適切な癌治療薬には、パクリタキセル、ビンクリスチン、およびエトポシドを含むが、これらに限定されない有糸分裂阻害剤；メクロレタミン、シクロホスファミド、およびカルムスチンを含むが、これらに限定されないアルキル化剤；メトトレキサート、ゲムシタビン、ロメトレキソール（ｌｏｍｅｔｒｅｘｏｌ）、５−フルオロウラシル、および６−メルカプトプリンを含むが、これらに限定されない代謝拮抗剤；ドキソルビシン、ダウノルビシン、ブレオマイシン、マイトマイシンＣ、およびストレプトゾシンを含むが、これらに限定されない細胞傷害性抗生物質；シスプラチンおよびカルボプラチンを含むが、これらに限定されない白金剤；タモキシフェン、およびジエチルスチルベストールなどの抗エストロゲンと、フルタミドなどの抗アンドロゲンとを含むが、これらに限定されないホルモン剤；抗血管新生作用剤；ならびにファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３７】
いくつかの態様では、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの化合物は、それ自体ではＴｒｐ−ｐ８を発現する細胞でＴｒｐ−ｐ８活性を調節するのに効果的ではない癌治療薬と共に投与される。意外にも、これらの型の併用治療法は、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの単一の化合物を単独で使用するのに比べ効力を増すことになる。
【００３８】
他の態様では、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの化合物は、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの化合物を含むが、これらに限定されない、１つ以上の他のＴｒｐ−ｐ８モジュレーターと共に投与される。
【００３９】
これらの実施形態のあるものでは、本明細書に示される低分子Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストの低分子アンタゴニストが提供される。したがって、ある実施形態では、１つ以上の式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−ＥのＴｒｐ−ｐ８アゴニストの式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅ、ならびにそれらの誘導体の低分子Ｔｒｐ−ｐ８アンタゴニストが提供される。
【００４０】
本発明のさらなる実施形態は、細胞生存性を減少させる方法、および／または細胞増殖を阻害する方法、陽イオン流入を刺激する方法、ならびにＴｒｐ−ｐ８を発現する細胞において、アポトーシスおよび／またはネクローシスを誘導する方法を提供する。例示的な上記方法は、細胞生存性を減少させかつ／もしくは細胞増殖を阻害するのに細胞内カルシウムを増加するため、ならびに／または該細胞のアポトーシスおよび／もしくはネクローシスを誘導するために、必要な濃度と時間で、該細胞を式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの化合物と接触させるステップを含む。
【００４１】
さらなる実施形態では、本発明は、哺乳動物、最も典型的にはヒトの疾患を、本発明の１つ以上の化合物および／または組成物を投与することによって処置する方法を提供する。いくつかの態様では、この方法は、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの化合物と、単一処方などにより同時に送達される１つ以上の癌治療薬との組合せを含む組成物を投与するステップを含む。いくつかの他の態様では、本発明の方法は、組合せ療法を含み、この療法では、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの化合物が最初に１つの処方物で投与され、次いで、別の処方物で癌治療薬が投与される。この方法はまた、最初に１つの処方物で供給される癌治療薬を含み、次いで、別の処方物中での、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの化合物を含む。
【００４２】
本発明の治療法は、ある種の結腸癌、肺癌、乳癌、および前立腺癌を含むが、これらに限定されないＴｒｐ−ｐ８の発現に関係する癌の処置に特に効果がある。
【００４３】
添付図面と共に読まれる、以下のより詳細な説明を参照することによって、本発明の上記および他の特徴、ならびにそれらを得る方法が明らかとなり、本発明が最もよく理解されるであろう。
【００４４】
配列番号１は、ヒトＴｒｐ−ｐ８ｃＤＮＡのヌクレオチド配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＹ０９０１０９）である。
【００４５】
配列番号２は、配列番号１のヌクレオチド配列によりコードされたアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿０７６９８５）である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４６】
（発明の詳細な説明）
本発明は、Ｔｒｐ−ｐ８活性のアゴニストを含むいくつかの低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターが、Ｔｒｐ−ｐ８を発現する細胞の増殖を阻害でき、かつ／またはＴｒｐ−ｐ８を発現する細胞におけるアポトーシスおよび／もしくはネクローシスを誘導することができる、という発見に基礎を置いている。どのような特定の作用形態にも限定されることを望むことなく、Ｔｒｐ−ｐ８受容体のＴｒｐ−ｐ８アゴニストを媒介する活性化は実質的に陽イオン流入を増加し、この流入は細胞の傷害性と相関関係があると考えられる。さらに、Ｔｒｐ−ｐ８アンタゴニストは、内因性のＴｒｐ−ｐ８活性の基本的レベル、および／またはネイティブなリガンドによって誘導された活性を阻害でき、この結果、この陽イオンチャネルタンパク質を発現する細胞の増殖減少または死を導くと考えられる。
【００４７】
したがって、本発明は、Ｔｒｐ−ｐ８活性のアゴニストおよびアンタゴニストを含む低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーター、ならびに１つ以上の薬学的に許容されるキャリアおよび／または賦形剤を組み合わせた、１つ以上の低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターを含有する薬学的組成物を含む組成物を提供する。本発明はまた、１つ以上のＴｒｐ−ｐ８モジュレーター、および１つ以上の、例えば癌治療薬などの他の治療化合物、を含有する組合せ組成物を提供する。Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーター、およびＴｒｐ−ｐ８モジュレーターを含む組成物は、細胞内でＴｒｐ−ｐ８により媒介される陽イオン流入を活性化する方法、細胞のアポトーシスおよび／またはネクローシスを誘導する方法、ならびに乳癌、結腸癌、肺癌、および前立腺癌などの癌を含むが、これらに限定されないＴｒｐ−ｐ８発現に関係する疾患の処置のための方法における用途がある。
【００４８】
定義
用語「Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーター」は、集合的に低分子アゴニストおよびアンタゴニストである化合物を意味し、これらの化合物は、細胞中のＴｒｐ−ｐ８に結合し、細胞中のＴｒｐ−ｐ８の活性を、それぞれ増強または低下させる。Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストには、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−Ｅの化合物、ならびにそれらの化学的誘導体が挙げられる。式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−ＥのＴｒｐ−ｐ８アンタゴニストは、当業者よって、本明細書で明白に提供され、かつ／または当技術分野で容易に利用できるような方法を用いることによって、容易に合成および特徴化できる。
【００４９】
句「Ｔｒｐ−ｐ８を活性化する」は、細胞の表面上に発現されたＴｒｐ−ｐ８のアゴニストを媒介にした活性化を意味する。例えば、いくつかの実施形態では、細胞に接触させた場合、および／または哺乳動物の被験体にインビボで投与した場合、本発明のアゴニストは、Ｔｒｐ−ｐ８を活性化し、それにより、細胞増殖の減少、ならびに／またはネクローシスによる細胞死および／またはアポトーシスによる細胞死の開始によって明らかとなるように、細胞に傷害を起こすのに十分な細胞内レベルまで、および／または継続時間の間、カルシウムイオンなどの陽イオンの流入が容易になる。
【００５０】
用語「脂肪族アミン」は置換された窒素原子を意味し、Ｈ以外の置換基が飽和炭素原子によって窒素に結合している。
【００５１】
用語「アルキル」は、単独で、または他の置換基の一部として、他に記述がなければ、直鎖もしくは分枝鎖、または環状の炭化水素基、あるいはそれらの組合せを意味し、アルキルは、完全に飽和していてもよく、単一が、または複数が飽和していてもよく、指定された数の炭素原子を有する（すなわち、Ｃ１〜Ｃ１０は１から１０個の炭素を意味する）、２価および多価の基を挙げることができる。飽和炭化水素基の例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、シクロヘキシル、（シクロヘキシル）エチル、シクロプロピルメチル、例えば、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチル、ｎ−オクチルの同族体、および異性体などが挙げられる。不飽和アルキル基は、１以上の二重結合または三重結合を有するものである。不飽和アルキル基の例としては、ビニル、２−プロペニル、クロチル、２−イソペンテニル、２−（ブタジエニル）、２，４−ペンタジエニル、３−（１，４−ペンタジエニル）、エチニル、１−プロピニル、および３−プロピニル、３−ブチニル、ならびに高級同族体および高級異性体が挙げられる。
【００５２】
用語「アルケニル」は、１つ以上の炭素−炭素二重結合を含む分枝または非分枝の炭化水素鎖を意味する。
【００５３】
用語「アルキニル」は、１つ以上の炭素−炭素三重結合を含む分枝または非分枝の炭化水素鎖を意味する。
【００５４】
用語「アルキレン」は、単独で、または他の置換基の一部として、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−で例示されるようなアルカンから誘導される２価の基を意味する。典型的には、アルキレン基は、１個から２４個の炭素原子を有するが、本発明では、１０個以下の炭素原子を有する基が好ましい。「低級アルキル」または「低級アルキレン」は、より短い鎖のアルキル基、またはアルキレン基であり、一般に、８個以下の炭素原子を有する。
【００５５】
用語「シクロアルキレン」は、単独で、または他の置換基の一部として、シクロヘキシレンで例示されるようなシクロアルカンから誘導される２価の基を意味する。典型的には、シクロアルキレン基は、５個から８個の炭素原子を有するが、本発明では、６個の炭素原子を有する基が好ましい。
【００５６】
用語「アルケニレン」は、単独で、または他の置換基の一部として、−ＣＨ＝ＣＨＣＨ２ＣＨ２−で例示されるようなアルケニルから誘導される２価の基を意味する。典型的には、アルケニレン基は、２個から２４個の炭素原子を有するが、本発明では、１０個以下の炭素原子を有する基が好ましい。
【００５７】
用語「アルコキシ」、「アルキルアミノ」、および「アルキルチオ」は、それぞれ、酸素原子、窒素原子、またはイオウ原子を介して、その分子の残部に結合したアルキル基を有する基を意味する。同様に、用語「ジアルキルアミノ」は、従来の意味で使用され、−ＮＲ’Ｒ”を意味し、ここでＲ基は、同じまたは異なったアルキル基であり得る。
【００５８】
用語「ヘテロアルキル」は、単独で、または他の用語と共に、特に記述がなければ、完全に飽和していているか、または１度から３度の不飽和性を含み、明記された数の炭素原子、ならびにＯ、Ｎ、Ｓｉ、およびＳからなる群から選択される１個から３個のヘテロ原子から構成される安定な直鎖もしくは分枝鎖、または環状炭化水素基、あるいはそれらの組合せを意味し、ここで、窒素原子とイオウ原子は、必要に応じて酸化され、そして窒素ヘテロ原子は、必要に応じて四級化され得る。ヘテロ原子Ｏ、Ｎ、およびＳは、ヘテロアルキル基の内部の任意の位置に位置し得る。ヘテロ原子のＳｉは、ヘテロアルキル基の任意の位置に位置してもよく、この位置には、アルキル基がその分子の残部に結合した位置が挙げられる。例として、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｎ（ＣＨ３−）−ＣＨ３、−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）−ＣＨ３、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ（Ｏ）２−ＣＨ３、−ＣＨ＝ＣＨ−Ｏ−ＣＨ３、−Ｓｉ（ＣＨ３）３、−ＣＨ２−ＣＨ＝Ｎ−ＯＣＨ３、および−ＣＨ＝ＣＨ−Ｎ（ＣＨ３）−ＣＨ３が挙げられる。２個までのヘテロ原子は連続してもよく、例えば、例として、−ＣＨ２−ＮＨ−ＯＣＨ３および−ＣＨ２−Ｏ−Ｓｉ（ＣＨ３）３が挙げられる。また、用語「ヘテロアルキル」には、「ヘテロシクロアルキル」として以下に詳述される基が挙げられる。用語「ヘテロアルキレン」は、単独で、または他の置換基の一部として、−ＣＨ２−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−および−ＣＨ２−Ｓ−ＣＨ２ＣＨ２−ＮＨ−ＣＨ２−で例示されるようなヘテロアルキルから誘導される２価の基を意味する。ヘテロアルキレン基の場合、ヘテロ原子は、鎖末端の一方または両方を占有することもできる。さらに、アルキレン連結基およびヘテロアルキレン連結基の場合、この連結基の配向は考慮されない。
【００５９】
用語「アシル」は、有機酸のヒドロキシ部分を取り除くことで有機酸から誘導される基を意味する。したがって、アシルは、例えば、アセチル、プロピオニル、ブチリル、デカノイル、ピバロイル、ベンゾイルなどを含むことを意味する。
【００６０】
「活性化カルボニル」基は、カルボニルの両側に結合した基の結果として、その求電子性が増強されるカルボニル基である。そのような活性化カルボニル基の例は、（ポリフルオロアルキル）ケトン、（ポルフルオロアルキル）アルデヒド、α−ケトエステル、α−ケト酸、α−ケトアミド、１，２−ジケトン、２−アシルチアゾール、２−アシルイミダゾールなどである。
【００６１】
用語「シクロアルキル」および「ヘテロシクロアルキル」は、単独で、または他の用語と併せて、特に記述しない限り、それぞれ、「アルキル」および「ヘテロアルキル」の環状版を表す。さらに、ヘテロシクロアルキルの場合、ヘテロ原子は、複素環基が分子の残部に結合している位置を占有できる。シクロアルキルの例には、シクロペンチル、シクロヘキシル、１−シクロヘキシニル、３−シクロヘキシニル、シクロヘプチルなどが挙げられる。ヘテロシクロアルキルには、例えば、１−（１，２，５，６−テトラヒドロピリジル）、１−ピペリジニル、２−ピペリジニル、３−ピペリジニル、４−モルホリニル、３−モルホリニル、テトラヒドロフラン−２−イル、テトラヒドロフラン−３−イル、テトラヒドロチエン−２−イル、テトラヒドロチエン−３−イル、１−ピペラジニル、２−ピペラジニルなどが挙げられる。
【００６２】
用語「ハロ」または「ハロゲン」は、単独で、または他の置換基の一部として、特に記述しない限り、フッ素原子、塩素原子、臭素原子、またはヨウ素原子を意味する。さらに、「フルオロアルキル」などの用語は、モノフルオロアルキルおよびポリフルオロアルキルを含むことを意味する。
【００６３】
用語「アリール」は、単独で使用されるか、または他の用語と共に使用され（例えば、アリールオキシ、アリールチオキシ、アリールアルキル）、特に記述しない限り、芳香族置換基を意味し、この基は単環、または縮合もしくは共有結合した複数環（３環まで）であり得る。用語「ヘテロアリール」は、Ｎ、Ｏ、およびＳから選択される０個から４個のヘテロ原子を含むアリール環を含むことを意味し、窒素原子とイオウ原子は必要に応じて酸化され、窒素原子は必要に応じて四級化される。「ヘテロアリール」基は、ヘテロ原子を介して分子の残部に結合できる。アリール基およびヘテロアリール基の非限定的な例としては、フェニル、１−ナフチル、２−ナフチル、４−ビフェニル、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル、３−ピラゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、ピラジニル、２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、２−フェニル−４−オキサゾリル、５−オキサゾリル、３−イソオキサゾリル、４−イソオキサゾリル、５−イソオキサゾリル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル、２−フリル、３−フリル、２−チエニル、３−チエニル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−ピリミジル、４−ピリミジル、５−ベンゾチアゾリル、プリニル、２−ベンゾイミダゾリル、５−インドリル、１−イソキノリル、５−イソキノリル、２−キノキサリニル、５−キノキサリニル、３−キノリル、および６−キノリルが挙げられる。上記アリール環系のそれぞれに対する置換基は、下記の許容できる置換基の群から選択される。用語「アリールアルキル」は、アリール基またはヘテロアリール基が、アルキル基に結合している基（例えば、ベンジル、フェネチル、ピリジルメチルなど）、またはヘテロアルキル基に結合している基（例えば、フェノキシメチル、２−ピリジルオキシメチル，３−（１−ナフチルオキシ）プロピルなど）を含むことを意味する。
【００６４】
上記用語（例えば、「アルキル」、「ヘテロアルキル」、および「アリール」）は、各々、示された基の置換形および非置換形の両方を含むことを意味する。各型の基に対する好ましい置換基は、以下で提供される。
【００６５】
アルキル基およびヘテロアルキル基に対する置換基（アルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニル、およびヘテロシクロアルケニルとしばしば呼ばれる基を含む）は各種の基であり得、これらの基は−ＯＲ’、＝Ｏ、＝ＮＲ’、＝Ｎ−ＯＲ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＳＲ’、−ハロゲン、−ＳｉＲ’Ｒ”Ｒ”’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＣＯ２Ｒ’、ＣＯＮＲ’Ｒ”、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ”Ｒ”’、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＨ、−ＮＲ’Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＨ、−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＲ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ”、−ＣＮ、および−ＮＯ２から選択され、ここで数はゼロから（２Ｎ＋１）の範囲にあり、Ｎはそのような基の炭素の全数である。Ｒ’、Ｒ”、およびＲ”’は、各々独立に、水素、非置換（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルおよびヘテロアルキル、非置換アリール、１個から３個のハロゲンで置換されたアリール、非置換アルキル、アルコキシまたはチオアルコキシ基、またはアリール−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル基を意味する。Ｒ’およびＲ”が、同じ窒素原子に結合している場合、それらはその窒素原子と一緒になり、５員環、６員環、または７員環を形成し得る。例えば、−ＮＲ’Ｒ”は、１−ピロリジニルおよび４−モルホリニルを含むことを意味する。置換基の上記議論から、当業者は、用語「アルキル」はハロアルキル（例えば、−ＣＦ３および−ＣＨ２ＣＦ３）およびアシル（例えば、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＦ３、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２ＯＣＨ３など）のような基を含むことを意味することを理解するであろう。
【００６６】
同様に、アリール基に対する置換基は様々であり、−ハロゲン、−ＯＲ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ’Ｒ”、−ＳＲ’、−Ｒ’、−ＣＮ、−ＮＯ２、−ＣＯ２Ｒ’、−ＣＯＮＲ’Ｒ”、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＮＲ”Ｃ（Ｏ）２Ｒ’、−ＮＲ’−Ｃ（Ｏ）ＮＲ”Ｒ”’、−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＨ、−ＮＲ’Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＨ、−ＮＨ−Ｃ（ＮＨ２）＝ＮＲ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’Ｒ”、−ＮＲ”−Ｓ（Ｏ）２−Ｒ’、−Ｎ３、−ＣＨ（Ｐｈ）２、パーフルオロ（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、およびパーフルオロ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから選択され、数はゼロから芳香族環系の空いている原子価の全数の範囲にあり；Ｒ’、Ｒ”、およびＲ”’は、水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルおよびヘテロアルキル、非置換アリール、（非置換アリール）−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ならびに（非置換アリール）オキシ−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルから独立に選択される。
【００６７】
アリール環の隣接原子上の置換基の２個は、必要に応じて、式−Ｔ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｑ−Ｕ−の置換基で置き換えられ得、ここでＴおよびＵは、独立して、−ＮＨ−、−Ｏ−、−ＣＨ２−または単結合であり、下付き文字のｑは、０から２までの整数である。あるいは、アリール環の隣接原子上の置換基の２個は、必要に応じて、式−Ａ−（ＣＨ２）ｒ−Ｂ−の置換基で置き換えられ得、ここでＡおよびＢは、独立して、−ＣＨ２−、−Ｏ−、−ＮＨ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’−または単結合であり、ｒは１から３までの整数である。そのようにして形成された新しい環の単結合の１個は、必要に応じて、二重結合で置換してもよい。あるいは、アリール環の隣接原子上の置換基の２個は、必要に応じて、式−（ＣＨ２）ｓ−Ｘ−（ＣＨ２）ｔ−の置換基で置き換えられ得、ここでｓおよびｔは、独立して、０から３までの整数であり、Ｘは、−Ｏ−、−ＮＲ’−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、または−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’−である。−ＮＲ’−および−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ’における置換基Ｒ’は、水素または非置換（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルから選択される。
【００６８】
本明細書で使われる場合、用語「ヘテロ原子」は、酸素（Ｏ）、窒素（Ｎ）、およびイオウ（Ｓ）を含むことを意味する。
【００６９】
用語「薬学的に許容される塩」とは、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−Ｅの活性な化合物の塩であって、本明細書で記述した化合物に見出される特定の置換基に依存して、比較的非毒性の酸または塩基を使用して調製される塩を含むことを意味する。薬学的に許容される塩基付加塩の例としては、ナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩、アンモニウム塩、有機アミノ塩、マグネシウム塩、または他の同様な塩が挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に許容される酸付加塩の例としては、塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、炭酸一水素酸、正リン酸、リン酸一水素酸、ジヒドロリン酸、硫酸、硫酸一水素酸、ヨウ化水素酸、亜リン酸などのような無機酸から誘導されるもの、ならびに酢酸、プロピオン酸、イソ酪酸、シュウ酸、マレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、スベリン酸、フマル酸、マンデル酸、フタル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸などのような比較的非毒性の有機酸から誘導された塩が挙げられるが、これらに限定されない。
【００７０】
Ｔｒｐ−ｐ８活性の低分子モジュレーター
本発明の組成物および方法に適切に使用される低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターは、本明細書で開示する式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの化合物、ならびにその誘導体によって本明細書で例示される。
【００７１】
したがって一実施形態において、本発明は、低分子が下記の式Ｉの化合物を含む低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターおよびその誘導体を提供する：
【００７２】
【化１３】
2009526859.tif 000009
式中、Ｒ１はＨ、アルキル、ヘテロアルキル、アリールアルキル、およびアリールから選択される、または、Ｒ１およびＲ２は窒素基と共に２５個までの原子の環状基または複素環基を形成でき；
Ｒ２は、アリールおよびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ４は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３およびＲ４は、窒素基と共に脂肪族アミンを形成する。
【００７３】
関連した実施形態の中で、本発明は、低分子が下記の式Ｉ−Ａの化合物を含む低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターおよびその誘導体を提供する：
【００７４】
【化１４】
2009526859.tif 000010
式中、Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、ＣＲ２およびＮから独立に選択され；Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤのうちの少なくとも１つがＣＲ２であり；Ｒ２は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、ハロゲン、アリールアルキル、Ｒ６Ｏ−、およびＲ６Ｓ−から選択されたメンバーであり、Ｒ６はアルキルであり；Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤの隣接する２つがＣＲ２であるとき、２つのＲ２が一緒になって単一のアリール基、シクロアルキル基、またはヘテロシクロアルキル基を形成することができ、
Ｒ１は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され、
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、−Ｓ（Ｏ）２−、および−ＮＲ７−から選択され、Ｒ７は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択されたメンバーであり、
Ｒ４は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８−、アルキル、アリールアルキル、およびヘテロアルキルから選択され、Ｒ８は、アルキルおよびヘテロアルキルから選択され、
Ｒ５は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され、
Ｒ４およびＲ５は、窒素基と共に脂肪族アミンを形成する。
【００７５】
式Ｉ−Ａのいくつかの例示的な化合物では、Ｒ１はＨであり；Ｒ７はＨであり；Ｒ８は２個、３個、もしくは４個の炭素を含み；Ｒ４は、プロピオニル、エチル、ブチリル、ヒドロキシプロピオニル、および３−ヒドロキシブチリルから選択され；Ｒ５はＨおよびメチルから選択され；Ｒ６は、１個、２個、３個、４個、５個、もしくは６個の炭素を含み；ならびに／または、Ｒ２は、メトキシ、メチルスルファニル、フェニル、およびＨから選択される。
【００７６】
本明細書で例示されるのは、２−（２−アミノ−プロピオニルアミノ）−４−メトキシ−フェニル、Ｎ−（２−アミノ−エチル）−２−アミノ−５−メチルスルファニル−フェニル、１−（２−アミノ−エトキシ）−ナフタレン−２−イル、２−（２−アミノ−エチルアミノ）−４−メチルスルファニル−フェニル、Ｎ−（２−アミノ−エチル）−５−メトキシ−ベンズアミド、２−（２−アミノ−ブチリルアミノ）−４−メトキシ−フェニル、２−（２−アミノ−３−ヒドロキシ−プロピオニルアミノ）−４−メトキシ−フェニル、３−（２−アミノ−エチルアミノ）−ナフタレン−２−イル、Ｎ−（２−アミノ−エチル）−２−アミノ−ベンズアミド、２−（２−アミノ−３−ヒドロキシ−プロピオニルアミノ）−４−メトキシ−フェニル、２−（２−アミノ−アセチルアミノ）−フェニル、２−（２−アミノ−３−ヒドロキシ−ブチリルアミノ）−４−メトキシ−フェニルアミド、および２−（２−アミノ−アセチルアミノ）−４−メトキシ−フェニルから選択された基を含む式Ｉ−Ａの化合物である。
【００７７】
他の関連した実施形態では、本発明は、低分子が下記の式Ｉ−Ｂの化合物を含む低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターおよびその誘導体を提供する：
【００７８】
【化１５】
2009526859.tif 000011
式中、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ２は、アリール、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され、
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ４は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３およびＲ４は、窒素基と共に脂肪族アミンを形成する。
【００７９】
式Ｉ−Ｂのいくつかの例示的な化合物では、Ｒ１はＨであり；Ｒ３は、メチレン、エチレン、プロピレン、およびブチレンから選択され；Ｒ４はＨおよびメチルから選択され；ならびに／または、Ｒ２は、フェニル、フラン、メチルピロール、メチルベンゾアート、アミノフェニル、ヒドロキシフェニル、シアノフェニル、およびメトキシフェニルから選択される。
【００８０】
本明細書で例示されるのは、２−（２−アミノ−エチル）−５−フラン−２−イル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−プロピル）−５−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−エチル）−５−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−エチル）−５−（１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−プロピル）−５−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−エチル）−５−（４−アミノ−フェニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−エチル）−５−（４−ヒドロキシ−フェニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−メチルアミノ−エチル）−５−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−プロピル）−５−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−エチル）−５−（３−シアノ−フェニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、２−（２−アミノ−エチル）−５−（３−メトキシ−フェニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、４−｛１−（２−アミノ−エチル）−１Ｈ−ピラゾール−３−イル｝−安息香酸メチルエステル、２−（２−アミノ−エチル）−５−（３−アミノ−フェニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル、および２−（２−アミノ−エチル）−５−（３−ヒドロキシ−フェニル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イルから選択された基を含む式Ｉ−Ｂの化合物である。
【００８１】
さらに他の関連した実施形態では、本発明は、低分子が下記の式Ｉ−Ｃの化合物を含む低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターおよびその誘導体を提供する：
【００８２】
【化１６】
2009526859.tif 000012
式中、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ２は、アリールおよびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、アリールアルキル、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ５−、−ＯＲ５−、および−ＮＨＲ５−から選択され、Ｒ５はアルキルまたはヘテロアルキルであり；
Ｒ４は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３およびＲ４は、窒素基と共に脂肪族アミンを形成する。
【００８３】
式Ｉ−Ｃのいくつかの例示的な化合物では、Ｒ１はＨであり；Ｒ２はフェニルであり；Ｒ５は、メチレン、エチレン、プロピレン、およびブチレンから選択され；Ｒ３は、プロピオニルアミノ、エトキシ、プロポキシ、およびエチルアミノから選択され；ならびに／または、Ｒ４はＨおよびメチルから選択される。
【００８４】
本明細書で例示されるのは、２−（２−アミノ−プロピオニルアミノ）−２−フェニル−エチル、２−（２−アミノ−エトキシ）−２−フェニル−エチル、２−（２−アミノ−エトキシ）−２−フェニル−エチル、２−（３−アミノ−プロポキシ）−２−フェニル−エチル、２−（２−ジメチルアミノ−エトキシ）−２−フェニル−エチル、および２−（２−アミノ−エチルアミノ）−２−フェニル−エチルから選択された基を含む式Ｉ−Ｃの化合物である。
【００８５】
さらに他の関連した実施形態では、本発明は、低分子が下記の式Ｉ−Ｄの化合物を含む低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターおよびその誘導体を提供する：
【００８６】
【化１７】
2009526859.tif 000013
式中、Ｒ１は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ２は、アリールおよびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３は、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ４は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３およびＲ４は、窒素基と共に脂肪族アミンを形成する。
【００８７】
式Ｉ−Ｄのいくつかの例示的な化合物では、Ｒ１はＨであり；Ｒ２はフェニルおよびフェニルアミノから選択され；Ｒ３は、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、メチルアミノ、エチルアミノ、プロピルアミノ、ブチルアミノ、およびアセチルから選択され；ならびに／または、Ｒ４はＨおよびメチルから選択される。
【００８８】
本明細書で例示されるのは、２−［２−（２−アミノ−エチルアミノ）−フェニル］−エチル、２−（２−アミノメチル−フェニル）−エチル、および２−［（２−アミノ−アセチル）−フェニル−アミノ］−エチルから選択された基を含む式Ｉ−Ｄの化合物である。
【００８９】
さらに他の関連した実施形態では、本発明は、低分子が下記の式Ｉ−Ｅの化合物を含む低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターおよびその誘導体を提供する：
【００９０】
【化１８】
2009526859.tif 000014
式中、Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤは、ＣＲ１およびＮから独立に選択され；Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤのうちの少なくとも１つがＣＲ１であり；Ｒ１は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、アリール、アリールアルキル、およびハロゲンから選択され；Ａ、Ｂ、Ｃ、およびＤの隣接する２つがＣＲ１であるとき、２つのＲ１が一緒になって単一のアリール基、シクロアルキル基、またはヘテロシクロアルキル基を形成することができ；
Ｒ２は、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ３は、Ｈ、アルキル、ヘテロアルキル、およびアリールアルキルから選択され；
Ｒ２およびＲ３は、窒素基と共に脂肪族アミンを形成する。
【００９１】
式Ｉ−Ｅのいくつかの例示的な化合物では、
（ｉ）Ｒ１はＨまたは−ＯＲｉであり、Ｒｉは、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ブチル、ヒドロキシブチル、アセトニトリル、フェニル、フェニルメトキシ、フェニルエトキシ、フェニルプロポキシ、フェニルブトキシ、およびベンジルから選択され；
（ｉｉ）Ｒ１は−ＳＲｉｉであり、Ｒｉｉは、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ブチル、ヒドロキシブチル、アセトニトリル、フェニル、フェニルメトキシ、フェニルエトキシ、フェニルプロポキシ、フェニルブトキシ、およびベンジルから選択され；
（ｉｉｉ）Ｒ１は−Ｓ（Ｏ）Ｒｉｉｉであり、Ｒｉｉｉは、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ブチル、ヒドロキシブチル、アセトニトリル、フェニル、フェニルメトキシ、フェニルエトキシ、フェニルプロポキシ、フェニルブトキシ、およびベンジルから選択され；
（ｉｖ）Ｒ１は−Ｓ（Ｏ）２ＲｉＶであり、Ｒｉｖは、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ブチル、ヒドロキシブチル、アセトニトリル、フェニル、フェニルメトキシ、フェニルエトキシ、フェニルプロポキシ、フェニルブトキシ、およびベンジルから選択され；
ｖ）Ｒ１は−Ｃ（Ｏ）ＮＲｖＲｖｉであり、ＲｖおよびＲｖｉは、Ｈ、メチル、ヒドロキシメチル、エチル、ヒドロキシエチル、プロピル、ヒドロキシプロピル、ブチル、ヒドロキシブチル、ジエチルアミノエチル、フェニル、ピリジニル、メトキシエチル、ヒドロキシエトキシエチル、ベンジル、メチルフェニル、フェニルエチル、ヒドロキシヒドロキシメチルフェニルエチル、カルバモイルメチル、およびヒドロキシメチルヒドロキシエチルから独立に選択され；
（ｖｉ）Ｒ１は−Ｃ（Ｏ）ＮＲＶＲＶｉであり、ＲｖおよびＲＶｉは一緒に、モルホリン、ピペラジン、ピペラジンエチルエステルを形成し；
（ｖｉｉ）Ｒ２は、メチレン、エチレン、プロピレン、およびブチレンから選択され；
（ｖｉｉｉ）Ｒ２はエチレンであり、Ｒ３はＨであり；
（ｉｘ）Ｒ１はＣＦ３またはハロゲンである。
【００９２】
本明細書で例示されるのは、３−（２−アミノ−エチル）−５−メトキシル−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−（３−ヒドロキシ−プロポキシ）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−エトキシ−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−メタンスルホニル−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸アミド、３−（２−アミノ−エチル）−５−メチルスルファニル−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−メタンスルフィニル−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）−アミド、３−（２−アミノ−プロピル）−２，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、［３（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−アセトニトリル、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸エチルアミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ピリジン−３−イルアミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−メトキシ−エチル）−アミド、１−（２−アミノ−エチル）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、１−（２−アミノ−エチル）−１，３−ジヒドロ−ナフト［２，３−ｄ］イミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、３−（２−アミノ−エチル）−５−プロポキシ−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−４−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）−アミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ピリジン−４−イルアミド、３−（２−アミノ−エチル）−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−オン、１−（３−アミノ−プロピル）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸フェニルアミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸［２−（２−ヒドロキシ−エトキシ）−エチル］−アミド、１−（２−アミノ−エチル）−５−トリフルオロメチル−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、１−（２−アミノ−エチル）−１，３−ジヒドロ−イミダゾ［４，５−ｃ］ピリジン−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ベンジルアミド、３−（２−アミノ−エチル）−５−（モルホリン−４−カルボニル）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−（２−オキソ−２−フェニル−エトキシ）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−メチルアミノ−エチル）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−５−ブトキシ−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチル−フェニル−アミド、４−［３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボニル］−ピペラジン−１−カルボン酸エチルエステル、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ジエチルアミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸フェネチル−アミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチル−２−フェニル−エチル）−アミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸カルバモイルメチル−アミド、３−（２−アミノ−エチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチル−エチル）−アミド、Ｎ−｛２−［２−オキソ−２，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−１−イル］−エチル｝−グアニジン、３−（２−アミノ−エチル）−５−ベンジルオキシ−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン、および１−（４−アミノ−ブチル）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オンから選択された基を含む式Ｉ−Ｅの化合物である。上記のような一実施形態においては、化合物３−（２−アミノ−エチル）−１−（２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−５−メトキシ−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オンがもたらされる。
【００９３】
低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターの合成
上述したように、本発明の化合物には、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−Ｅの化合物が挙げられる。いくつかの態様では、化合物は、当技術分野で容易に利用できる合成法を使用して、市販の出発原料を使用して製造できる。式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−Ｅの化合物は、当技術分野で知られている典型的な単離および精製技術を用いて単離され得、これらの技術には、例えば、クロマトグラフィーおよび再結晶法が挙げられる。
【００９４】
当業者は、本発明の組成物および方法に適切に含まれた化合物が、複数のシス異性体およびトランス異性体、Ｅ形／Ｚ形、ジアステレオマー、および光学異性体で存在し得ることを容易に理解するであろう。よって、本発明の組成物および方法に使用される化合物は、そのような組合せ、および変種をすべて含む。
【００９５】
式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−Ｅの化合物において、４個の同一でない置換基が結合している炭素原子は非対称である。したがって、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−Ｅの化合物は、エナンチオマー、ジアステレオマー、またはそれらの混合物として存在し得る。それらのエナンチオマーおよびジアステレオマーは、クロマトグラフ法、または結晶化法、または当技術分野で知られている他の方法によって分離できる。不斉炭素原子は、２つの立体配置、すなわちＲまたはＳ、の１つで存在し得、これらの両方が本発明の範囲内にある。最終的に精製した生成物中に、対立するエナンチオマーまたはジアステレオマーが少量存在しても、そのような化合物の治療上の用途に影響しない。
【００９６】
式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−Ｅの化合物はさらに処理されて、薬学的に許容される塩を形成し得る。本発明の化合物を酸または塩基で処理することによって、それぞれ、薬学的に許容される酸付加塩、および薬学的に許容される塩基付加塩を形成し得、各々は既に定義されている。本明細書で既に述べられたものを含む当技術分野で知られている各種の無機および有機の酸と塩基は、塩への変換を行う際に使用し得る。
【００９７】
本発明はまた、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−Ｅの化合物の薬学的に許容される異性体、水和物、および溶媒和物に関する。これらの式の化合物はまた、そのような異性体および互変異性体の薬学的に許容される塩、水和物、および溶媒和物を含む各種異性体形および互変異性形で存在し得る。
【００９８】
本発明はまた、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−Ｅの化合物のプロドラッグ誘導体を含む。用語「プロドラッグ」とは、親薬物を放出するために、生物内で、自発的または酵素的な生体内変換を必要とする、親薬物分子の誘導体を意味する。プロドラッグは、代謝条件下で開裂可能な基を有する本発明の式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−Ｅの化合物の変形物、または誘導体である。プロドラッグは、生理学的条件下で、加溶媒分解するか、または酵素による分解を受ける場合、インビボで薬学的に活性である本発明の化合物になる。本発明の化合物と共に適切に使用できる例示的なプロドラッグ技術は、プロテアーゼにより活性化される癌治療（ＰＡＣＴ）技術であり、この技術は米国特許出願第１０／１５６，２１４号、および国際公開第０２／０９５００７号で詳述されており、両出願は本明細書において参照により組み込まれる。
【００９９】
式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−Ｅの化合物の合成は、ｐ−メンタン−３−カルボン酸と塩化チオニルとを反応させて得られる酸塩化物と、適切なアミンとを反応させることによって達成され得る。以下に述べるように、典型的には、この反応は、溶液中において室温で塩化水素の受容体（例えば、水酸化ナトリウム）の存在下で行われる。
【０１００】
塩基性のｐ−メンタン構造は、椅子形分子であり、シス形でもトランス形でも存在し得る。カルボキシル基またはアミド基をその３位へ置き換えると、置き換えがアキシアルでそのシス異性体になるかトランス異性体になるか、またはエクアトリアルでそのシス異性体になるかトランス異性体になるかに依存して、４つの立体配置異性体、または幾何異性体を生じ、これら４つの異性体は、メントールのようにネオメントール、イソメントール、およびネオイソメントールに関係している。
【０１０１】
例示的な実施形態では、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−Ｅの化合物は、特定の立体化学によって合成され、メンタン環に関する相対立体化学はメントールの相対立体化学であり、かつ／またはメンタン環に関する絶対立体化学は（−）−メントールの絶対立体化学である。
【０１０２】
本発明の例示的な式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−Ｅの低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターを調製する合成方法は、実施例１〜９で本明細書に示す。
【０１０３】
低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターを含む組成物
先に議論したように、本発明は、Ｔｒｐ−ｐ８に結合し、かつＴｒｐ−ｐ８の活性を変化させる、Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストおよびＴｒｐ−ｐ８アンタゴニストを含む低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターに関する。いくつかの実施形態では、Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターはアゴニストであり、このアゴニストは、いくつかの例では、Ｔｒｐ−ｐ８チャネルタンパク質を発現する細胞内の陽イオンの流入を刺激でき、またＴｒｐ−ｐ８チャネルタンパク質を発現する細胞の毒性を刺激できる。代替の実施形態では、Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターは、細胞中で発現したＴｒｐ−ｐ８の活性を減少できる、Ｔｒｐ−ｐ８活性のアンタゴニストである。よって、本発明のＴｒｐ−ｐ８モジュレーターは、薬学的組成物を含む組成物に用途があり、これらの組成物は、Ｔｒｐ−ｐ８発現に関係する疾患の処置に有用である。本発明によれば、適切な組成物は、一種以上の薬学的に許容されるキャリアまたは賦形剤と共に、上述したような、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−Ｅの１つ以上のＴｒｐ−ｐ８アゴニスト、ならびに／または式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−Ｅの１つ以上のＴｒｐ−ｐ８アンタゴニストを含む。
【０１０４】
一実施形態では、本発明は、滅菌した生理食塩水または他の媒体、水、ゼラチン、油などのような薬学的に許容される賦形剤と共に低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターを提供して、薬学的に許容される組成物を形成する。これらの組成物および／またはアゴニストは、単独で、またはいずれかの都合のよいキャリア、希釈剤などと共に投与され得、そのような投与は、単回または多回用量で提供され得る。有用なキャリアには、固体、半固体、または水および非毒性の有機溶媒を含む液体媒体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０５】
本発明の薬学的組成物は、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの１つ以上のＴｒｐ−ｐ８アゴニストと薬学的に許容されるキャリアまたは薬学的に許容される薬剤とを混合して調製され得る。あるいは、薬学的組成物は、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの１つ以上のＴｒｐ−ｐ８アンタゴニストと薬学的に許容されるキャリアまたは薬学的に許容される薬剤とを混合して調製され得る。それに加え、薬学的組成物はさらに、賦形剤、安定剤、希釈剤などを含み得、除放処方物または時限放出処方物で供給され得る。治療用途のための許容されるキャリア、薬剤、賦形剤、安定剤、希釈剤などは薬学分野で周知であり、例えば、本明細書において参照により組み込まれる「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ（編）、１９８５年）。そのような物質は、使用される投与量および濃度でレシピエントに対して毒性ではなく、そのような物質には、リン酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、および他の有機酸塩などの緩衝剤、アスコルビン酸などの酸化防止剤、ポリアルギニンなどの低分子量ペプチド、セラムアルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどのタンパク質、血清アルブミン、ゼラチン、または免疫グロブリンなどの親水性のポリマー、ポリビニルピロリジノンなどの親水性のポリマー、グリシン、グルタミン酸、アスパラギン酸、またはアルギニンなどのアミノ酸、単糖類、二糖類、およびセルロースもしくはその誘導体、グルコース、マンノースまたはデキストリンを含む他の炭水化物、ＥＤＴＡなどのキレート剤、マンニトールまたはソルビトールなどの糖アルコール、ナトリウムなどの対イオン、ならびに／あるいはＴＷＥＥＮまたはポリエチレングリコールなどの非イオン性界面活性剤が挙げられる。
【０１０６】
さらなる態様では、本発明の組成物は、１つ以上の癌治療薬と共に処方される式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの化合物を含む。あるいは、本発明の組成物は、１つ以上の癌治療薬と独立に処方される式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの化合物を含む。すなわち、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの化合物、ならびに癌治療薬は別々に処方される。
【０１０７】
適切な癌治療薬には、パクリタキセル、ビンクリスチン、およびエトポシドを含むが、これらに限定されない有糸分裂阻害剤；メクロレタミン、シクロホスファミド、およびカルムスチンを含むが、これらに限定されないアルキル化剤；メトトレキサート、ゲムシタビン、ロメトレキソール、５−フルオロウラシル、および６−メルカプトプリンを含むが、これらに限定されない代謝拮抗剤；ドキソルビシン、ダウノルビシン、ブレオマイシン、マイトマイシンＣ、およびストレプトゾシンを含むが、これらに限定されない細胞傷害性抗生物質；シスプラチンおよびカルボプラチンを含むが、これらに限定されない白金剤；タモキシフェン、およびジエチルスチルベストールなどの抗エストロゲンと、フルタミドなどの抗アンドロゲンとを含むが、これらに限定されないホルモン剤；抗血管新生作用剤；ならびにファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１０８】
いくつかの態様では、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの化合物は、Ｔｒｐ−ｐ８を介した陽イオン流入を刺激する際に効果的ではない癌治療薬と共に投与される。
【０１０９】
他の態様では、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの化合物は、式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの化合物を含むが、これらに限定されない、１つ以上の他のＴｒｐ−ｐ８モジュレーターと共に投与される。
【０１１０】
考慮される特定の処置養生法に依存するが、本発明の薬学的組成物は、非経口的に、局所的に、経口的に、または局部的に投与され得る。いくつかの態様では、薬学的組成物は、非経口的に、例えば、静脈内に、皮下に、皮内に、または筋肉内に投与される。一実施形態では、本発明は、水性キャリアなどのキャリアに溶解または懸濁させた、本発明の化合物を含む非経口投与のための組成物を提供する。
【０１１１】
固体の処方物の場合、化合物は、例えば、薬学的グレードのマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルク、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウムなどのような、従来の非毒性の固体キャリアと混合され得る。
【０１１２】
エアゾール投与の場合、本発明の化合物は、微細に分割した形で、非毒性の界面活性剤および噴霧剤と共に供給され得る。例示的なそのような薬剤は、カプロン酸、アクタン（ａｃｔａｎｏｉｃ）酸、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、リノール酸、オレステリン酸、およびオレイン酸などの６〜２２個の炭素原子を含む脂肪酸のエステルまたは不完全エステルである。
【０１１３】
本発明の組成物は、注入によって、すなわち、静脈内に、筋肉内に、皮内に、皮下に、十二指腸内に（ｉｎｔｒｏａｄｕｏｄｅｎａｌｌｙ）、または腹膜内に投与され得る。あるいは、組成物は、経鼻投与などの吸入によって投与され得、またパッチなどを介するなど、経皮的に投与され得る。
【０１１４】
薬学的組成物を含む組成物の実際的な好ましい処方は、投与の形態、および処置されている特定の疾患によって変わることが理解されるであろう。最適な処方物および投与の形態は、当業者により、疾患ごとまた患者ごとのベースで、慣用的に決定される。
【０１１５】
Ｔｒｐ−ｐ８の低分子モジュレーターのインビトロおよびインビボの効力を同定および特徴付けるための方法
先に議論したように、本発明は、Ｔｒｐ−ｐ８活性のアゴニストおよびアンタゴニストを含む低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターを対象とする。本明細書で開示しているのは、既に本明細書で記述した式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの化合物で例示されるＴｒｐ−ｐ８モジュレーターである。本発明はさらに、他のＴｒｐ−ｐ８モジュレーターが本発明の組成物および方法で適切に使用され得ることも意図している。
【０１１６】
他のまたは代替のＴｒｐ−ｐ８アゴニストおよびアンタゴニストは、付随の実施例で開示される方法によって同定され得る。例えば、Ｔｒｐ−ｐ８発現に関係する疾患を処置する際に効力を有するＴｒｐ−ｐ８アゴニストには、以下の１事項以上の結果となる低分子が挙げられる。すなわち、（１）Ｔｒｐ−ｐ８を発現する細胞の増殖を阻害するまたはＴｒｐ−ｐ８を発現する細胞の生存性を減少させる；（２）Ｔｒｐ−ｐ８を発現する細胞におけるカルシウムおよび／または他の陽イオンの流入を刺激する；（３）Ｔｒｐ−ｐ８を発現する細胞のアポトーシスおよび／またはネクローシスの誘導；ならびに／あるいは（４）ヒト疾患の１つ以上の動物モデル系における効力。Ｔｒｐ−ｐ８発現に関係する疾患の処置をする際に効力を有するＴｒｐ−ｐ８アンタゴニストには、以下の１事項以上の結果となる低分子が挙げられる。すなわち、（１）インビトロのモデル系におけるアゴニストの毒性効果からＴｒｐ−ｐ８を発現する細胞を保護する（２）内因性のＴｒｐ−ｐ８発現を有する癌細胞株の増殖を阻害しかつ／または内因性のＴｒｐ−ｐ８発現を有する癌細胞株を殺傷する（３）ヒト疾患の１つ以上の動物モデル系において有効である。
【０１１７】
よって、いくつかの実施形態では、本発明は、Ｔｒｐ−ｐ８を発現する細胞の増殖を阻害し、かつ／またはＴｒｐ−ｐ８を発現する細胞の生存性を減少させるのに十分な時間および量で、Ｔｒｐ−ｐ８を発現する細胞と候補Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストとを接触させるステップを含む、Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストを同定する方法を提供し、ここで阻害された増殖および／または減少した生存性は、候補Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストが上記細胞によって発現されたＴｒｐ−ｐ８を活性化できることを示す。
【０１１８】
他の実施形態は、カルシウムおよび／または他の陽イオンをＴｒｐ−ｐ８を発現する細胞に流入するのを誘導するのに十分な時間および量で、上記細胞と候補Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストとを接触させるステップを含む、Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストを同定する方法を提供し、ここで増加した陽イオンの流入は増加した細胞の毒性に相関する。
【０１１９】
さらなる実施形態は、Ｔｒｐ−ｐ８を発現する新生細胞の増殖を阻害し、かつ／または上記細胞のアポトーシスおよび／またはネクローシスを誘導し、それによりその動物の生存を増加させるために十分な時間ならびに量で、１つ以上の上記細胞を有する動物に候補Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストを投与するステップを含む、Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストを同定する方法を提供し、ここで細胞増殖の阻害、アポトーシスの誘導、ネクローシスの誘導、および／または動物の増加した生存のうちのいずれか１つ以上がＴｒｐ−ｐ８アゴニストの効力を示す。
【０１２０】
本発明は、本明細書に開示されたＴｒｐ−ｐ８アンタゴニストに加えて、Ｔｒｐ−ｐ８アンタゴニストの同定のための方法を提供する。上記方法には、以下の事項が挙げられる。すなわち、（１）Ｔｒｐ−ｐ８を発現する細胞をＴｒｐ−ｐ８アゴニストにより誘導された毒性から保護することを検出するためのインビトロアッセイ系；（２）Ｔｒｐ−ｐ８を内因的に発現する癌細胞および／または癌細胞株の増殖の阻害を検出するインビトロおよびインビボアッセイ系（３）インビボ動物モデル系、これによって１つ以上の候補Ｔｒｐ−ｐ８アンタゴニストは、細胞の増殖を阻害し、かつ／または細胞のアポトーシスおよび／もしくはネクローシスを誘導するのに十分な時間ならびに量で、Ｔｒｐ−ｐ８を発現する１つ以上の新生細胞を有する動物に投与され、それによって上記動物の生存を増加する。
【０１２１】
Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターの使用方法
本発明の低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターは、細胞中のＴｒｐ−ｐ８を介したカルシウムの流入を調節する（すなわち、活性化するまたは減少させる）ための方法、およびＴｒｐ−ｐ８の発現に関連した１つ以上の疾患の処置のための治療法に適切に使用され得る。例えば、上述したように、異常なＴｒｐ−ｐ８発現は、乳房組織、結腸組織、肺組織、および前立腺組織を含む各種癌組織の新生細胞の表現型に関連していることが観察された。Ｔｓａｖａｌｅｒら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、前述。
【０１２２】
よって、いくつかの実施形態では、細胞中でＴｒｐ−ｐ８を介したカルシウムの流入を活性化するための方法が提供され、そのような方法は、Ｔｒｐ−ｐ８を発現する細胞の増殖を阻害し、かつ／あるいは細胞中のネクローシスおよび／またはアポトーシスを誘導するのに十分な時間、上記細胞をある量のＴｒｐ−ｐ８アゴニストに接触させるステップを含む。Ｔｒｐ−ｐ８を活性化するための例示的な方法が、本明細書に示した実施例おいて提供される。
【０１２３】
本発明の他の実施形態は、Ｔｒｐ−ｐ８の発現に関係する疾患の処置のための治療法を提供し、そのような方法は、細胞の増殖を阻害し、かつ／あるいは細胞中のネクローシスおよび／またはアポトーシスを誘導するのに十分な時間、哺乳動物、典型的にはヒトにＴｒｐ−ｐ８アゴニストを含む治療有効量の組成物を投与するステップを含む。本明細書で使われる場合、句「治療有効量」とは、疾患を処置するために哺乳動物に投与したとき、その疾患に対してそのような処置を行うのに十分である化合物の量を意味する。「治療有効量」は、化合物、処置される哺乳動物の疾患、ならびにその重傷度、および年齢、体重などに依存して変化する。
【０１２４】
本明細書で使用される場合、用語「処置する」、「処置すること」、および「処置」には、（１）前記疾患を防ぐこと、すなわち、疾患に罹患しやすくなっている可能性があるが、まだその疾患のいかなる症状にも直面していない哺乳動物で、疾患の臨床症状を発現させないようにすること；（２）その疾患を阻害すること、すなわち、疾患の発病、もしくはその臨床症状を阻止するか、軽減すること；または（３）その疾患を和らげる、すなわち、その疾患またはその臨床症状を後退させることが含まれる。
【０１２５】
処置療法の頻度および投薬は、疾患および処置される患者といった要因に依存して変化するが、式Ｉ、Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの１つ以上の化合物を含む組成物は、典型的には、約０．００１ｍｇ化合物／ｋｇ体重から約１０００ｍｇ／ｋｇまでの範囲で投与される。典型的には、処置は、化合物の最適服用量より少ない服用量で始められる。その後、最適な効果が達成されるまで、服用量を増加させることができる。
【０１２６】
ほとんどの場合、本発明の化合物の投与は、式Ｉ、Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの化合物に全身を曝露することを保証するいかなる方法によっても達成される。したがって、組成物は、経口で、非経口で、十二指腸内で、および鼻腔内で投与され得る。典型的には、そのような組成物は、本明細書で既にさらに詳細に記述したように、１つ以上の薬学的に許容されるキャリアまたは希釈剤と共に、１つ以上のそのような化合物を含む。
【０１２７】
本発明の他の実施形態は、組合せ療法を提供し、この組合せ療法では、式Ｉ、Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの１つ以上の化合物が、本明細書で既にさらに詳細に記述したように、有糸分裂阻害剤、アルキル化剤、代謝拮抗物質、細胞傷害性抗生物質、白金剤、ホルモン剤、および／または抗アンドロゲンなどの１つ以上の癌治療薬と一緒に投与される。本発明のさらなる実施形態は、組合せ療法を提供し、式Ｉ、Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および／または式Ｉ−Ｅの２つ以上の化合物が、望ましい治療結果が得られるまで、同時または連続して投与される。
【０１２８】
したがって、本明細書で使われている場合、用語「組合せ」は、組合せ治療で、少なくとも２つの化合物が、同時に送達され得ることを意味し、この組合せ治療法では、第１の化合物が最初に投与され、続いて第２の化合物が投与されるほか、第２の化合物が最初に送達され、続いて第１の化合物が投与される。望ましい結果は、投薬の受容者における、症状の主観的軽減か、または客観的に確認できる改善であり得る。
【０１２９】
以下の実施例は、例示として提供するものであり、限定するために提供するものではない。
【実施例】
【０１３０】
（実施例１）
メンタン−３−カルボキサミド化合物の合成
本実施例は、メンタン−３−カルボキサミド化合物の合成のための方法を開示する。
【０１３１】
メンタン−３−カルボン酸
大きな攪拌棒を備えた２Ｌのエルレンマイヤーフラスコに水（３００ｍｌ）を投入した。硫酸（５００ｍｌ）を、攪拌しながら注意深く加えた。この溶液を７５℃まで放冷し、Ｎ−エチル−ｐ−メンタン−３−カルボキサミド（６２．５ｇ）を加えた。温度をホットプレートで７５℃に保持し、亜硝酸ナトリウム（３１ｇ）を注意深く添加した。さらに３１グラムのＮａＮＯ２を１時間の間隔で２回加え、混合物を７５℃で一晩攪拌した。
【０１３２】
この混合物を室温まで冷却し、約１Ｌの氷水で希釈し、約５００ｍｌのエーテルで抽出した。エーテル層を分離し、水で洗浄し、３５０ｍｌの１ＭのＮａＯＨで２回抽出した。水層を濃ＨＣｌで酸性にし、エーテルで抽出した。このエーテル層をＭｇＳＯ４で乾燥させ、蒸発して、メンタン−３−カルボン酸（３３．２ｇ、６１％）を結晶性固体として得た。□□□＝−５０．３度（ｃ＝１、ＣＨＣｌ３、２５℃）。
【０１３３】
メンタン−３−カルボニルクロリド
メンタン−３−カルボン酸（５４．３５ｇ）を８０ｍｌの塩化チオニルと共に３時間還流した。ＳＯＣｌ２を蒸留で除去し、その酸塩化物を１１４〜１１５℃（８トル）で蒸留した。（文献より、３．５トルで沸点：８４〜８５℃）。収率：５０ｇ（８４％）。
【０１３４】
メンタン−３−カルボキサミドの調製のための一般的手順
１ｍｌのアセトニトリルまたはＮＭＰおよび０．４ｍｍｏｌのＤＩＰＥＡ中の０．２ｍｍｏｌのアミンの攪拌溶液に、０．０２２ｍｌのメンタン−３−カルボニルクロリドを加えた。反応混合物を３時間振とうした。より低反応性のアミンの場合、この混合物を加熱（６０℃）し、２４時間振とうした。生成物をＨＰＬＣにより粗反応混合物から精製し（ＣＨ３ＣＮ中の０．０５％ＴＦＡおよびＨ２Ｏ中の０．０５％ＴＦＡを使用して、１０分にわたって４０〜９５％の勾配）、蒸発乾固させた。
【０１３５】
（実施例２）
式Ｉ−Ｅのジヒドロベンゾイミダゾール化合物の合成
本実施例は、式Ｉ−ＥのジヒドロベンゾイミダゾールＴｒｐ−ｐ８モジュレーターの合成のための方法を開示する。
【０１３６】
【化１９】
2009526859.tif 000015
４−メトキシ−２−フルオロ−１−ニトロベンゼン
攪拌棒および還流冷却器を備えた２Ｌの丸底フラスコに、アセトニトリル（１Ｌ）、Ｋ２ＣＯ３（２６３ｇ、１．９ｍｏｌ）および４−ヒドロキシ−２−フルオロ−１−ニトロベンゼン（１００ｇ、０．６４ｍｏｌ）を投入した。反応混合物にヨウ化メチル（２７１ｇ、１．９ｍｏｌ）を加え、還流温度で激しく攪拌しながら５時間加熱した。アセトニトリルを除去し、酢酸エチル（１Ｌ）およびＨ２Ｏ（７００ｍＬ）を加えた。不均一混合物を分液ロートに移し、そこで水相を分離し、酢酸エチル（２×２００ｍＬ）で再抽出した。有機相を混合し、Ｈ２Ｏ（２×５００ｍＬ）、ブライン（５００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮してわずかに黄色の固体（１０７ｇ、９８％）として所望の生成物を得た。
【０１３７】
【化２０】
2009526859.tif 000016
［２−（５−メトキシ−２−ニトロフェニルアミノ）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
攪拌棒を備えた２Ｌのフラスコに、ＤＭＳＯ（８００ｍＬ）、Ｋ２ＣＯ３（１６１ｇ、１．６ｍｏｌ）および４−メトキシ−２−フルオロ−１−ニトロベンゼン（１００ｇ、０．５８ｍｏｌ）を投入した。反応混合物にモノ−Ｎ−Ｂｏｃ−１，２−ジアミノエタン（９４ｇ、０．５５ｍｏｌ）を加え、６０℃で１２時間攪拌した。反応混合物を氷冷水（１．２Ｌ）で粉砕し、得られた黄色の沈殿物を真空ろ過によって収集した。この沈殿物を水で数回（５×１Ｌ）洗浄し、高真空で４８時間乾燥させて、鮮黄色の固体（１７８ｇ、９８％）として所望の生成物を得た。
【０１３８】
【化２１】
2009526859.tif 000017
［２−（５−メトキシ−２−アミノ−フェニルアミノ）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
攪拌棒を備えた２Ｌの丸底フラスコに、２０％のＰｄ（ＯＨ）２（５ｇ）および１，４−ジオキサン（８００ｍＬ）の懸濁液を投入した。この懸濁液に［２−（５−メトキシ−２−ニトロフェニルアミノ）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１００ｇ、０．３２ｍｏｌ）を加えた。反応混合物を（原料が消費されるまで）４８時間水素化（バルーン）した後で、混合物にＫ２ＣＯ３（１００ｇ）を加え、さらに１２時間攪拌して微量の水を除去した。懸濁液をろ過してＰｄ（ＯＨ）２およびＫ２ＣＯ３を除去した。ろ液は、さらなる精製を行わずに次のステップに使用した（収率は求めていない）。
【０１３９】
【化２２】
2009526859.tif 000018
［２−（６−メトキシ−２−オキソ−２，３−ジヒドロベンゾイミダゾール−１−イル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
上記溶液を過剰のカルボニルジイミダゾール（１０４ｇ、０．６４ｍｏｌ）で処理し、９０℃で４時間加熱した。１，４−ジオキサンを除去し、残留物を水（１．５Ｌ）で粉砕した。得られた沈殿物を真空ろ過によって収集し、水で数回（５×５００ｍＬ）洗浄した。粗生成物は、高真空で１２時間７０℃で乾燥させ、さらなる精製を行わずに使用した（６６ｇ、２つのステップの収率６７％）。
【０１４０】
【化２３】
2009526859.tif 000019
｛２−［３−（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキサンカルボニル）−６−メトキシ−２−オキソ−２，３−ジヒドロベンゾイミダゾール−１−イル］−エチル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
攪拌棒を備えた２Ｌのフラスコに、［２−（２−オキソ−２，３−ジヒドロベンゾイミダゾール−１−イル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（４０ｇ、０．２０ｍｏｌ）、ＤＭＡＰ（４８ｇ、０．３９ｍｏｌ）、およびＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）を投入した。塩化メントイル（４０ｇ、０．２０ｍｏｌ）を１５分間にわたって滴下し、周囲温度で４時間攪拌した。反応混合物を１Ｎ  ＨＣｌでクエンチし、さらに２０分間攪拌した。不均一混合物を分液ロートに移し、そこで水相を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×２００ｍＬ）で再抽出した。有機相を混合し、１Ｎ  ＨＣｌ（２×３００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（３００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）（２×３００ｍＬ）、ブライン（３００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物を最小量のＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、シリカゲルプラグに通して溶出させて（溶出には１０％ヘキサン／酢酸エチル）、無色の固体（９３ｇ、９６％）として所望の生成物を得た。
【０１４１】
【化２４】
2009526859.tif 000020
３−（２−アミノエチル）−１−（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキサンカルボニル）−５−メトキシ−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン（化合物番号３６）のＴＦＡ塩。
【０１４２】
５００ｍＬの丸底フラスコに、｛２−［３−（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキサンカルボニル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロベンゾイミダゾール−１−イル］−エチル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（９０ｇ、０．１９ｍｏｌ）および９５％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏ（２００ｍＬ）を投入した。反応を２時間攪拌し、ＴＦＡを減圧下で除去して、（真空下に置くと凝固して壊れやすいフォームを形成する）濃い油として粗生成物を得た。この粗生成物を３０％のアセトニトリル／Ｈ２Ｏに溶解させ、（０．１％ＴＦＡを含む）４０〜６０％アセトニトリル／Ｈ２Ｏ勾配を使用して分取ＨＰＬＣ（Ｕｌｔｒｏ  １２０（１０μｍ）Ｃ１８Ｑ）によって精製した。純粋留分を混合、濃縮し、凍結乾燥させて、軽い綿毛状の無色の固体（７９ｇ、９４％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３７４（Ｍ＋＋１）。
【０１４３】
【化２５】
2009526859.tif 000021
３−（２−アミノエチル）−５−エトキシ−１−（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキサンカルボニル）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン（化合物番号３８）のＴＦＡ塩
化合物番号３６の合成と同様の手順で、（臭化エチルおよび４−ヒドロキシ−２−フルオロ−１−ニトロベンゼンから調製した）４−エトキシ−１−２−フルオロ−１−ニトロベンゼンから化合物番号３８を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３８７（Ｍ＋＋１）。
【０１４４】
【化２６】
2009526859.tif 000022
１−（２−アミノエチル）−３−（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキサンカルボニル）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン（化合物番号５０）のＴＦＡ塩
化合物番号３６の合成と同様の手順で、２−フルオロ−１−ニトロベンゼンから化合物番号５０を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３４４（Ｍ＋＋１）。
【０１４５】
【化２７】
2009526859.tif 000023
３−（２−アミノエチル）−５−（３−ヒドロキシプロポキシ）−１−（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキサンカルボニル）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン（化合物番号３７）のＴＦＡ塩
化合物番号３６の合成と同様の手順で、（１−ブロモ−３−ｔｅｒｔ−ブトキシプロパンおよび４−ヒドロキシ−２−フルオロ−１−ニトロベンゼンから調製した）４−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシプロポキシ）−２−フルオロ−１−ニトロベンゼンから化合物番号３７を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４１８（Ｍ＋＋１）。
【０１４６】
【化２８】
2009526859.tif 000024
３−（２−アミノエチル）−５−（２−ヒドロキシエトキシ）−１−（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキサンカルボニル）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン（化合物番号４０）のＴＦＡ塩
化合物番号３６の合成と同様の手順で、（１−ブロモ−３−ｔｅｒｔ−ブトキシエタンおよび４−ヒドロキシ−２−フルオロ−１−ニトロベンゼンから調製した）４−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシエトキシ）−２−フルオロ−１−ニトロベンゼンから化合物番号４０を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４０４（Ｍ＋＋１）。
【０１４７】
【化２９】
2009526859.tif 000025
１−（２−アミノ−２−（Ｒ）−メチルエチル）−３−（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキサンカルボニル）−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン（化合物番号４５）のＴＦＡ塩
化合物番号３６の合成と同様の手順で、２−フルオロ−１−ニトロベンゼンおよび（２−アミノ−１−（Ｒ）−エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルから化合物番号４５を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３５８（Ｍ＋＋１）。
【０１４８】
（実施例３）
式Ｉ−Ｅのさらなるジヒドロベンゾイミダゾール化合物の合成
本実施例は、式Ｉ−ＥのジヒドロベンゾイミダゾールＴｒｐ−ｐ８モジュレーターの合成のための方法を開示する。
【０１４９】
【化３０】
2009526859.tif 000026
【０１５０】
【化３１】
2009526859.tif 000027
３−フルオロ−４−ニトロ安息香酸メチルエステル
攪拌棒および還流冷却器を備えた１Ｌの丸底フラスコに、Ｈ２ＳＯ４（４ｍＬ）、メタノール（４００ｍＬ）、および３−フルオロ−４−ニトロ安息香酸（１０ｇ）を投入した。反応混合物を１８時間激しく攪拌しながら還流温度で加熱した。メタノールを除去し、粗生成物をヘキサンで粉砕し、濃縮して無色の固体（９．７９ｇ）を得た。この無色の固体は、さらなる精製を行わずに使用した。
【０１５１】
【化３２】
2009526859.tif 000028
３−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチルアミノ）−４−ニトロ安息香酸メチルエステル
攪拌棒を備えた２Ｌのフラスコに、１，４−ジオキサン（３００ｍＬ）、ＤＭＦ（４０ｍＬ）、Ｋ２ＣＯ３（１０ｇ）、および３−フルオロ−４−ニトロ安息香酸（９．７ｇ）を投入した。反応混合物にモノ−Ｎ−Ｂｏｃ−１，２−ジアミノエタン（８．６ｇ）を加え、６０℃で１２時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、残留物をＣＨ２Ｃｌ２（４００ｍＬ）およびＨ２Ｏ（５００ｍＬ）に溶解させた。不均一混合物を分液ロートに移し、そこで水相を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１００ｍＬ）で再抽出した。有機相を混合し、Ｈ２Ｏ（５×１００ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮してオレンジ色の固体（１４ｇ、８４％）として標記の化合物を得た。
【０１５２】
【化３３】
2009526859.tif 000029
４−アミノ−３−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチルアミノ）−安息香酸メチルエステル
攪拌棒を備えた２Ｌの丸底フラスコに、２０％Ｐｄ（ＯＨ）２および１，４−ジオキサン（４００ｍＬ）の懸濁液を投入した。この懸濁液に４−アミノ−３−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−エチルアミノ）−安息香酸メチルエステル（１４ｇ）を加えた。反応混合物を（原料が消費されるまで）４８時間水素化（バルーン）した後で、混合物にＫ２ＣＯ３（１００ｇ）を加え、さらに１２時間攪拌して微量の水を除去した。懸濁液をろ過してＰｄ（ＯＨ）２およびＫ２ＣＯ３を除去した。ろ液は、さらなる精製を行わずに次のステップに使用した。
【０１５３】
【化３４】
2009526859.tif 000030
３（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル
上記溶液を過剰のカルボニルジイミダゾール（２６．８ｇ、４当量）で処理し、９０℃で４時間加熱した。１，４−ジオキサンを除去し、残留物を水（１．５Ｌ）で粉砕した。得られた沈殿物を真空ろ過によって収集し、水で数回（５×５００ｍＬ）洗浄した。粗生成物を最小量のＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して（溶出には１０％メタノール／ＣＨ２Ｃｌ２）、白色の固体（１１．８ｇ、８５％）として所望の生成物を得た。
【０１５４】
【化３５】
2009526859.tif 000031
３−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸
攪拌棒を備えた２Ｌのフラスコに、Ｈ２Ｏ（３００ｍＬ）に溶解させた１，４−ジオキサン（７０ｍＬ）、３−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸メチルエステル（１０．４ｇ）およびＬｉＯＨ（３．７ｇ）を投入した。反応溶液を６５℃で６時間攪拌した。混合物を濃縮し、粗残留物をＨ２Ｏに溶解させた。溶液を濃ＨＣｌ（水溶液）で中和し、得られた沈殿物を真空ろ過によって収集した。固体をＨ２Ｏで数回洗浄し、高真空で一晩乾燥させて、白色の固体（８．６６ｇ、８７％）として所望の生成物を得た。
【０１５５】
【化３６】
2009526859.tif 000032
３−（２−アミノ−エチル）−１−（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキサンカルボニル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸のＴＦＡ塩
攪拌棒を備えた１００ｍＬの反応容器内に、ＴＨＦ（２０ｍＬ）、ＤＭＡＰ（１．８ｇ）、および３−（２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノエチル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（４ｇ）を投入した。反応混合物を０℃まで冷却し、塩化メントイル（２．９ｇ）で処理した。反応混合物を周囲温度に温め濃縮した。１Ｎ  ＨＣｌ（水溶液）（５０ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）を加えた。不均一混合物を分液ロートに移し、そこで水相を分離し、酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で再抽出した。有機相を混合し、１Ｎ  ＨＣｌ（２×５０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して（溶出には４：１ＣＨ２Ｃｌ２／ＴＨＦ）、無色の固体（３．２ｇ、５２％）として標記の化合物を得た。
【０１５６】
【化３７】
2009526859.tif 000033
３−（２−アミノ−エチル）−１−（２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベノイミダゾール−５−カルボン酸アミド（化合物番号４１）のＴＦＡ塩
攪拌棒を備えた１０ｍＬの反応容器内に、ＤＭＦ（５ｍＬ）、３−（２−アミノ−エチル）−１−（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキサンカルボニル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（１．５ｇ、３．９ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（８２４ｍｇ、４．３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（５８１ｍｇ、４．３ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（１．１１ｇ、８．６ｍｍｏｌ）、およびＮＨ４Ｃｌ（２３０ｍｇ、４．３ｍｍｏｌ）を投入した。反応混合物を６０℃でマイクロ波によって１０分間加熱し、酢酸エチル（５０ｍＬ）および１Ｎ  ＨＣｌ（５０ｍＬ）の混合物に注いだ。不均一混合物を分液ロートに移し、そこで水相を分離し、酢酸エチル（２×５０ｍＬ）で再抽出した。有機相を混合し、１Ｎ  ＨＣｌ（１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（２×１００ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（３×１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。残留物を９５％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏに溶解させ、２時間攪拌し、濃縮した。粗生成物を３０％アセトニトリル／Ｈ２Ｏに溶解させ、（０．１％ＴＦＡを含む）１０〜６０％アセトニトリル／Ｈ２Ｏ勾配を使用して分取ＨＰＬＣ（Ｕｌｔｒｏ  １２０（１０μｍ）Ｃ１８Ｑ）によって精製した。純粋留分を混合、濃縮し、凍結乾燥させて軽い綿毛状の無色の固体（９１０ｍｇ、６１％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３８７（Ｍ＋＋１）。
【０１５７】
【化３８】
2009526859.tif 000034
３−（２−アミノ−エチル）−１−（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキサンカルボニル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸（２−ジエチルアミノ−エチル）アミド（化合物番号４４）のＴＦＡ塩
化合物番号４１の合成と同様の手順で、Ｎ１，Ｎ１−ジメチルエタン−１，２−ジアミンから化合物番号４４を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４８６（Ｍ＋＋１）。
【０１５８】
【化３９】
2009526859.tif 000035
３−（２−アミノ−エチル）−１−（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキサンカルボニル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸エチルアミド（化合物番号４７）のＴＦＡ塩
化合物番号４１の合成と同様の手順で、エチルアミンから化合物番号４７を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４１５（Ｍ＋＋１）。
【０１５９】
【化４０】
2009526859.tif 000036
３−（２−アミノ−エチル）−１−（２−イソプロピル−５−メチルシクロヘキサンカルボニル）−２−オキソ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−カルボン酸ピリジン−３−イルアミド（化合物番号４８）のＴＦＡ塩
化合物番号４１の合成と同様の手順で、ピリジン−３−イルアミンから化合物番号４８を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４６４（Ｍ＋＋１）。
【０１６０】
（実施例４）
式Ｉ−Ｅのさらなるジヒドロベンゾイミダゾール化合物の合成
本実施例は、式Ｉ−ＥのジヒドロベンゾイミダゾールＴｒｐ−ｐ８モジュレーターの合成のための方法を開示する。
【０１６１】
【化４１】
2009526859.tif 000037
［２−（５−メチル−スルファニル−２−ニトロ−フェニルアミノ）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
攪拌棒を備えた１リットルの丸底フラスコ内に、ＤＭＳＯ（２００ｍＬ）、Ｋ２ＣＯ３（１３ｇ、０．１０ｍｏｌ）、および２，４−ジフルオロ−１−ニトロベンゼン（５ｇ、０．０３ｍｏｌ）を投入した。反応混合物をモノ−Ｎ−Ｂｏｃ−１，２−ジアミノエタン（５ｇ、０．３２ｍｏｌ）で処理し、周囲温度で１８時間攪拌した。反応混合物にナトリウムチオメトキシド（２．２４ｇ、０．０３ｍｏｌ）を加え、６０℃で１２時間攪拌した。反応混合物を０℃まで冷却し、水（８００ｍＬ）で粉砕し、形成された黄色の沈殿物を真空ろ過によって収集した。沈殿物を水で数回（５×５００ｍＬ）洗浄し、高真空で４８時間乾燥させて、鮮黄色の固体（８．７ｇ、７１％）として所望の生成物を得た。
【０１６２】
【化４２】
2009526859.tif 000038
［２−（２−アミノ−５−メチル−スルファニル−フェニルアミノ）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
攪拌棒を備えた５００ｍＬの丸底フラッシュ内に、ＭｅＯＨ（２００ｍＬ）、［２−（５−メチル−スルファニル−２−ニトロ−フェニルアミノ）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（５ｇ、０．０２ｍｏｌ）、およびＮｉＣｌ２（１９ｇ、０．０５ｍｏｌ）を投入し、０℃まで冷却した。反応混合物にＮａＢＨ４（１．７ｇ、０．０５ｍｏｌ）を（同量ずつ４回）１時間の期間にわたって加えた。この添加が終了すると、反応混合物をさらに２時間攪拌した。反応混合物にブライン（１００ｍＬ）および酢酸エチル（２００ｍＬ）を加えた。不均一混合物を分液ロートに移し、そこで水相を分離し、酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で再抽出した。有機相を混合し、Ｈ２Ｏ（３×１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して黒色の残留物を得た。粗生成物を１００ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、２つの１００ｍＬ丸（それぞれに５０ｍＬ）内に分け、その両方を減圧下で濃縮し、さらなる精製を行わずに使用した。
【０１６３】
【化４３】
2009526859.tif 000039
３−（２−アミノ−エチル）−１−（２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−５−メチルスルファニル−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン（化合物番号４２）
化合物番号３６の合成と同様の手順で、粗［２−（２−アミノ−５−メチル−スルファニル−フェニルアミノ）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルから化合物番号４２を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３９０．１（Ｍ＋＋１）。
【０１６４】
【化４４】
2009526859.tif 000040
３−２−アミノ−エチル）−１−（２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−５−メチルスルフィニル−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン（化合物番号４３）
１０ｍＬの反応フラスコに、３−（２−アミノ−エチル）−１−（２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−５−メチルスルファニル−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン（化合物番号４２、３００ｍｇ）および１％ＴＦＡ／ＤＭＳＯ（１ｍＬ）を投入した。反応混合物中に酸素を２０分間泡立たせ、封止した。反応混合物を１８時間攪拌し、粗生成物を（０．１％ＴＦＡを含む）４０〜６０％アセトニトリル／Ｈ２Ｏ勾配を使用して分取ＨＰＬＣ（Ｕｌｔｒｏ  １２０（１０μｍ）Ｃ１８Ｑ）によって精製した。純粋留分を混合、濃縮し、凍結乾燥させて軽い綿毛状の無色の固体（２９６ｍｇ  ９４％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４０６（Ｍ＋＋１）
【０１６５】
【化４５】
2009526859.tif 000041
３−２−アミノ−エチル）−１−（２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−５−メチルスルホニル−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン（化合物番号３９）
攪拌棒を備えたｌ０ｍＬの反応容器に、３−（２−アミノ−エチル）−１−（２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−５−メチルスルファニル−１，３−ジヒドロ−ベンゾイミダゾール−２−オン（化合物番号４２）、Ｏｘｏｎｅ（１ｇ）、および２０％メタノール水溶液（５ｍＬ）を投入した。反応混合物を約５ｐＨまで飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）で滴定した。反応混合物を１時間攪拌した。反応混合物をろ過し、濃縮した。粗生成物を３０％アセトニトリル／Ｈ２Ｏに溶解させ、（０．１％ＴＦＡを含む）１５〜５０％アセトニトリル／Ｈ２Ｏ勾配を使用して分取ＨＰＬＣ（Ｕｌｔｒｏ  １２０（１０μｍ）Ｃ１８Ｑ）によって精製した。純粋留分を混合、濃縮し、凍結乾燥させて綿毛状の無色の固体（７９ｇ、９４％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ４２２（Ｍ＋＋１）。
【０１６６】
（実施例５）
式Ｉ−Ｂの化合物の合成
本実施例は、式Ｉ−ＡのジヒドロベンゾイミダゾールＴｒｐ−ｐ８モジュレーターの合成のための方法を開示する。
【０１６７】
【化４６】
2009526859.tif 000042
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸（４−メトキシ−２−ニトロフェニル）−アミド
４−メトキシ−２−ニトロアニリン（５ｇ、０．０１８ｍｏｌ）をピリジン（５０）に溶解させ、塩化メントイル（３．５７ｇ、０．０１８ｍｏｌ）で処理した。反応混合物を５０℃まで加熱し、６時間激しく攪拌した。反応混合物を室温まで冷却し、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）および１Ｎ  ＨＣｌ（１００ｍＬ）の混合物に注いだ）。不均一混合物を分液ロートに移し、そこで水相を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１００ｍＬ）で再抽出した。有機相を混合し、１Ｎ  ＨＣｌ（８×１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１×１００ｍＬ）、１Ｎ  ＮａＯＨ（２×１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して（溶出には２０〜５０％酢酸エチル／ヘキサン）、無色の固体（４．９ｇ、８３％）として標記の化合物を得た。
【０１６８】
【化４７】
2009526859.tif 000043
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸（２−アミノ−４−メトキシフェニル）−アミド
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸（４−メトキシ−２−ニトロフェニル）−アミド（４．９ｇ）を１０％Ｐｄ−Ｃ（５ｇ）およびＴＨＦ（１５０ｍＬ）の懸濁液に溶解させた。反応混合物を２０％Ｐｄ（ＯＨ）２によりバルーンを用いて４８時間水素化した。反応混合物をろ過し濃縮させて、さらなる精製を行うことなく次の反応において使用するのに十分な純度の所望の化合物を得た。
【０１６９】
【化４８】
2009526859.tif 000044
（１−｛２−［２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−５−メトキシ−フェニルカルバモイル｝−エチル）カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸（２−アミノ−４−メトキシフェニル）−アミド（５ｇ、０．０１６ｍｏｌ）、ＥＤＣ（４．２ｇ、０．０２２ｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（２．９７ｇ、０．０２２ｍｏｌ）、およびＤＩＥＡ（８．５３ｇ、０．０６６ｍｏｌ）をＤＭＦ（５０ｍＬ）に溶解させ、４５℃で６時間攪拌した。反応混合物を室温まで冷却し、酢酸エチルおよび１Ｎ  ＨＣｌ（１００ｍＬ）の混合物に注いだ。不均一混合物を分液ロートに移し、そこで相を分離した。水相を酢酸エチル（）で再抽出し、有機相を混合し、１Ｎ  ＨＣｌ（５×１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１００ｍＬ）、飽和１Ｎ  ＮａＯＨ（２×１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、乾燥させ（ＭｇＳＯ４）、ろ過、濃縮して、わずかに黄色の固体（７．５ｇ）を得た。粗生成物の一部（１．５ｇ）をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して（ＳｉＯ２、溶出には３０％酢酸エチル／ヘキサン）、無色の固体（１．６ｇ）として所望の生成物を得た。
【０１７０】
【化４９】
2009526859.tif 000045
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸−［２−（２−アミノプロピオニルアミノ）−４−メトキシルフェニル］アミド（化合物番号１）のＴＦＡ塩
（１−｛２−［２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−５−メトキシ−フェニルカルバモイル｝−エチル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１ｇ）を９５％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏに溶解させ、１時間攪拌した。反応混合物を濃縮し、粗生成物を３０％アセトニトリル／Ｈ２Ｏに溶解させ、（０．１％のＴＦＡを含む）４０〜６０％アセトニトリル／Ｈ２Ｏ勾配を使用して分取ＨＰＬＣ（Ｕｌｔｒｏ
１２０（１０μｍ）Ｃ１８Ｑ）によって精製した。純粋留分を混合、濃縮し、凍結乾燥させて軽い綿毛状の無色の固体（８８０ｍｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３７６（Ｍ＋＋１）。
【０１７１】
【化５０】
2009526859.tif 000046
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸性［２−（２−アミノ−エチルアミノ）−４−メチルスルファニル−フェニル］アミド（化合物番号４）のＴＦＡ塩
粗［２−（２−アミノ−５−メチル−スルファニル−フェニルアミノ）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを収容し、攪拌棒を備えた１００ｍｌの丸底フラスコに、ＴＨＦ（５０ｇ）およびＤＭＡＰ（１．８ｇ、０．０２ｍｏｌ）を投入した。反応混合物を０℃まで冷却し、塩化メントイル（１．５ｇ、０．００８ｍｏｌ）を５分間にわたって滴下した。反応混合物を周囲温度まで温め、さらに３０分間攪拌した。粗生成物を最小量のＣＨ２Ｃｌ２に溶解させ、シリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによって精製すると（溶出には１０％のヘキサン／酢酸エチル）、わずかに黄色の固体（１．７６ｇ、６１％）がもたらされた。この精製された材料を２０ｍＬの９５％ＴＦＡ／Ｈ２Ｏに溶解させ、１時間攪拌し濃縮した。粗生成物を３０％アセトニトリル／Ｈ２Ｏに溶解させ、（０．１％ＴＦＡを含む）４０〜６０％アセトニトリル／Ｈ２Ｏ勾配を使用して分取ＨＰＬＣ（Ｕｌｔｒｏ  １２０（ｌ０μｍ）Ｃ１８Ｑ）によって精製した。純粋留分を混合し、濃縮し、凍結乾燥させて軽い綿毛状の無色の固体（１．４１ｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３６４（Ｍ＋＋１）
【０１７２】
【化５１】
2009526859.tif 000047
［２−（４−フルオロ−２−ニトロ−ベンゾイルアミノ）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
攪拌棒を備えた１００ｍＬの丸底フラスコに、アセトニトリル（４０ｍＬ）、ＥＤＣ（１．１２ｇ、５．９ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．７９６ｇ、５．９ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（３．７６ｍＬ、２１．６ｍｍｏｌ）、およびモノ−Ｎ−Ｂｏｃ−１，２−ジアミノエタン（０．８６５ｇ、５．４ｍｍｏｌ）を投入した。反応混合物を約１８時間攪拌し、濃縮した。残留物を酢酸エチル（５０ｍＬ）および１Ｎ  ＨＣｌ（５０ｍＬ）の混合物に溶解させた。不均一混合物を分液ロートに移し、そこで水相を分離し、酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で再抽出した。有機相を混合し、１Ｎ  ＨＣｌ（２×５０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１×５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（３×５０ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して（溶出には３０〜５０％酢酸エチル／ヘキサン）、わずかに紫色の固体（１．１２ｇ、６３％）として標記の化合物を得た。
【０１７３】
【化５２】
2009526859.tif 000048
［２−（５−メチル−スルファニル−２−ニトロ−フェニルアミノ）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
攪拌棒を備えた１０反応容器内に、ＤＭＦ（５ｍＬ）、ＮａＳＭｅ（０．１６２ｇ、２．３ｍｍｏｌ）、および［２−（４−フルオロ−２−ニトロ−ベンゾイルアミノ）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．７５７ｇ、２．３ｍｍｏｌ）を投入した。反応混合物を周囲温度で２時間攪拌し、酢酸エチル（２０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（２５ｍＬ）の混合物に注いだ。不均一混合物を分液ロートに移し、そこで水相を分離し、酢酸エチル（２×１０ｍＬ）で再抽出した。有機相を混合し、１Ｎ  ＨＣｌ（２×１０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１×１０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（２×１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して（溶出には３０％〜５０％酢酸エチル／ヘキサン）、わずかに黄色の固体（５００ｍｇ、６１％）として標記の化合物を得た。
【０１７４】
【化５３】
2009526859.tif 000049
Ｎ−（２−アミノ−エチル−２−［（２−イソプロピル１−５−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ−４−メチルスルファニル−ベンズアミド（化合物番号２）
化合物番号４２の合成と同様の手順で、［２−（５−メチル−スルファニル−２−ニトロ−フェニルアミノ）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルから化合物番号２を調製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３９２（Ｍ＋＋１）。
【０１７５】
（実施例６）
式Ｉ−Ｂの化合物の合成
本実施例は、式Ｉ−ＢのジヒドロベンゾイミダゾールＴｒｐ−ｐ８モジュレーターの合成のための方法を開示する。
【０１７６】
【化５４】
2009526859.tif 000050
スキーム５．
【０１７７】
【化５５】
2009526859.tif 000051
２−（５−アミノ−３−フェニル−ピラゾール−１−イル）−エタノール
ベンゾイルアセトニトリル（２５ｇ、０．１７ｍｏｌ）を１２５ｍＬの試薬用無水アルコールおよび２０ｍＬの氷酢酸の混合物に懸濁させた。３５ｍＬのアルコールに溶解させた２−ヒドロキシエチルヒドラジン（１４．４ｇ、１．１当量）を一度にすべて加えた。混合物を４時間加熱還流させ、冷却し、水を加えて総量５００ｍＬにし、この溶液を冷蔵庫で一晩冷却した。結晶をブフナーロートで冷ろ過し、冷水で洗浄し、高真空で乾燥させて所望の生成物（２７．２ｇ、７９％）を得た。
【０１７８】
【化５６】
2009526859.tif 000052
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸［２−（２−ヒドロキシ−エチル）−５−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−］−アミド
２−（５−アミノ−３−フェニル−ピラゾール−１−イル）−エタノール（８７．３ｇ、０．４３ｍｏｌ）を、ジクロロメタン（５００ｍＬ）およびピリジン（４０ｍＬ）の混合物に懸濁させ、氷浴内で冷却した。塩化メントイル（１００ｇ、１．１５当量）をジクロロメタン（２００ｍＬ）に溶解させ、ＣａＣｌ２乾燥管によって保護された別のロートから滴下した。完全に添加するのに要する４５分の経過後に、氷浴を除去し、３時間攪拌を続けた。１Ｍ  ＨＣｌ（水溶液、２００ｍＬ）を加え、相を分離させた。有機相を１Ｍ  ＨＣｌ（水溶液、１００ｍＬ）で再抽出した。１Ｍ  ＨＣｌを再び加え、ジクロロメタンを減圧下で除去すると、大量の沈殿が生じた。この沈殿物を真空ろ過によって収集し、固体を数回水で洗浄した。固体残留物を４００ｍＬの１：１エーテル／ヘキサンで（２時間急速攪拌し）粉砕した。この固体をブフナーロートでろ過し、ヘキサンで洗浄した。一晩風乾させた後、高真空でさらに２４時間乾燥させると、無色の固体（１４４．４ｇ）が得られた。
【０１７９】
【化５７】
2009526859.tif 000053
メタンスルホン酸−２−｛５−［２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボイル）−アミノ］−３−フェニル−ピラゾール−１−イル｝エチルエステル
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸［２−（２−ヒドロキシ−エチル）−５−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−］−アミド（１４０ｇ、０．３８ｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）に懸濁し、ピリジン（４７ｍＬ、１．５当量）を加え、続いて氷浴温度のメタンスルホニルクロリド（４４ｍＬ、１．５当量）を加えた。この溶液を室温まで温め、さらに１２時間攪拌した。水（５００ｍＬ）を加え、混合物を０．５時間攪拌した。ジクロロメタンを蒸発して除去すると、わずかに黄色の粒状塊の沈殿物が残った。デカンテーションの後にさらに５００ｍＬの水で処理し、再度デカンテーションを行った。最後の５００ｍＬの量の水を使用して、この固体をブフナーロートへ移し、そこで真空乾燥させた（収率は求めていない）。
【０１８０】
【化５８】
2009526859.tif 000054
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸−［２−アジド−エチル）−５−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド
アジ化ナトリウム（３７ｇ、１．５当量）を含むＤＭＳＯ（５００ｍＬ）に粗メシレート（０．３８ｍｏｌ）を溶解させた。混合物を７０℃まで６時間加熱した。冷却すると即座に、水（１Ｌ）および酢酸エチル（５００ｍＬ）を加え、この混合物を分液ロートで振とうした。層を分離し、有機層を２００ｍＬの量の水、飽和ＮａＨＣＯ３、およびブラインによって順次洗浄した。この有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、デカントし、ロトバップにて溶媒を除去した。次のステップへ移行する前に生成物から溶媒を完全には除去できていなかったので、収率は求めなかった。
【０１８１】
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸−［２−アミノ−エチル）−５−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド
粗アジド化合物を５００ｍＬの試薬用無水アルコールに溶解させ、５ｇの活性炭で処理した。これを数時間間攪拌し、セライトでろ過した。約３００ｍＬの溶媒をロトバップにて除去し、新しい溶媒と交換した。１０％Ｐｄ−Ｃ（４．８ｇ、約５０重量％のＨ２Ｏ）を加え、２４時間急速攪拌しながら反応混合物上への水素の安定した流れを維持した。水素の供給を停止し、濃ＨＣｌ（３２ｍＬ）をゆっくり加えた。セライトによるろ過の後、ろ液をロトバップにて濃縮すると、大量の沈殿が得られた。まだ湿った状態で、ジイソプロピルエーテルを残留物に加え、懸濁液を０．５時間急速攪拌した。固体をブフナーロート内へとろ過し、ジエチルエーテルで洗浄した。風乾白色粉体が生成された。収率：１０８．６ｇ（３ステップを経て７１％）。
【０１８２】
【化５９】
2009526859.tif 000055
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸−［２−アミノ−エチル）−５−フェニル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド（化合物番号１６）のＴＦＡ塩
トリフルオロアセタート塩への変換：固体を中和し、５００ｍＬのエーテルおよび１５０ｍＬの２Ｎ  ＮａＯＨと振とうすることによって分液ロート内で分配した。固体が完全に溶解すると、層を分離し、有機相をＮａ２ＣＯ３で乾燥させた。デカンテーション、および２３ｍＬのトリフルオロ酢酸との混合の後に、溶剤を蒸発し、高真空で乾燥させた。フォームを潰し、３００ｍＬのヘキサンで粉砕すると（３時間の急速攪拌）、ろ過後に、大変わずかなエーテルを含む白色の粉体が生成された。６時間８００℃で丸底フラスコ内で加熱することによって、最後には溶媒を完全に除去した。
【０１８３】
【化６０】
2009526859.tif 000056
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸−［２−（２−アミノ−エチル）−５−フラン−２−イル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド（化合物番号１４）のＴＦＡ塩
化合物番号１６の合成と同様の手順で、２−フロイルアセトニトリルおよび２−ヒドロキシエチルヒドラジンから化合物番号１４を調製した。この材料を、（０．１％ＴＦＡを含む）４０〜６０％アセトニトリル／Ｈ２Ｏ勾配を使用して分取ＨＰＬＣ（Ｕｌｔｒｏ  １２０（ｌ０μｍ）Ｃ１８Ｑ）によって精製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３４４（Ｍ＋＋１）。
【０１８４】
【化６１】
2009526859.tif 000057
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸−［２−（２−アミノ−エチル）−５−（１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド（化合物番号１７）のＴＦＡ塩
化合物番号１６の合成と同様の手順で、１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−カルバルデヒドおよび２−ヒドロキシエチルヒドラジンから化合物番号１７を調製した。この材料を、（０．１％ＴＦＡを含む）４０〜６０％アセトニトリル／Ｈ２Ｏ勾配を使用して分取ＨＰＬＣ（Ｕｌｔｒｏ  １２０（ｌ０μｍ）Ｃ１８Ｑ）によって精製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３７２（Ｍ＋＋１）。
【０１８５】
【化６２】
2009526859.tif 000058
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸−［２−（２−アミノ−エチル）−５−（１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド（化合物番号１５）のＴＦＡ塩
化合物番号１６の合成と同様の手順で、２−ベンゾイルアセトニトリルおよび（２−ジアゼニル−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルから化合物番号１５を調製した。この材料を、（０．１％ＴＦＡを含む）４０〜６０％アセトニトリル／Ｈ２Ｏ勾配を使用して分取ＨＰＬＣ（Ｕｌｔｒｏ  １２０（ｌ０μｍ）Ｃ１８Ｑ）によって精製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３８３（Ｍ＋＋１）。
【０１８６】
【化６３】
2009526859.tif 000059
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸−［２−（２−アミノ−エチル）−５−（１−メチル−１Ｈ−ピロール−２−イル）−２Ｈ−ピラゾール−３−イル］−アミド（化合物番号１８）のＴＦＡ塩
化合物番号１６の合成と同様の手順で、２−ベンゾイルアセトニトリルおよび（３−ジアゼニル−プロピル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルから化合物番号１８を調製した。この材料を、（０．１％ＴＦＡを含む）４０〜６０％アセトニトリル／Ｈ２Ｏ勾配を使用して分取ＨＰＬＣ（Ｕｌｔｒｏ  １２０（ｌ０μｍ）Ｃ１８Ｑ）によって精製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３８３（Ｍ＋＋１）。
【０１８７】
（実施例７）
式Ｉ−Ｃの化合物の合成
本実施例は、式Ｉ−ＣのジヒドロベンゾイミダゾールＴｒｐ−ｐ８モジュレーターの合成のための方法を開示する。
【０１８８】
【化６４】
2009526859.tif 000060
スキーム６．
【０１８９】
【化６５】
2009526859.tif 000061
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸（２−ヒドロキシ−２−フェニル−エチル）−アミド
攪拌棒を備えた５００ｍＬの丸底フラスコに、ＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）、ＤＩＥＡ（２８ｇ、０．２１９ｍｏｌ）、および２−アミノ−１−フェニル−エタノール（１０ｇ、０．０７３ｍｏｌ）を投入し、０℃まで冷却した。塩化メントイル（１４．８ｇ、０．０７３ｍｏｌ）を１５分間にわたって滴下した。この添加が終了すると、反応を周囲温度まで温め、２時間攪拌した。反応混合物にＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）および１Ｎ  ＨＣｌ（１００ｍＬ）を加え、さらに２０分間攪拌した。不均一混合物を分液ロートに移し、そこで水相を分離し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×１００ｍＬ）で再抽出した。有機相を混合し、１Ｎ  ＨＣｌ（８×１００ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１×１００ｍＬ）、１Ｎ  ＮａＯＨ（２×１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルプラグに通して溶出させて（溶出には５０％酢酸エチル／ヘキサン）、無色の固体（１８．８ｇ、８５％）として標記の化合物を得た。
【０１９０】
【化６６】
2009526859.tif 000062
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸［２−（２−アミノ−４−エトキシ）−２−フェニル−エチル］−アミド（化合物番号３０）のＴＦＡ塩
攪拌棒を備えた５００ｍＬの丸底フラスコに、無水ＴＨＦ（２００ｍＬ）および２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸（２−ヒドロキシ−２−フェニル−エチル）−アミド（１０ｇ、０．０３ｍｏｌ）を投入した。ＮａＨ（０．８７ｇ、０．０４ｍｏｌ）を一度に加え、（Ｈ２の生成が停止するまで）１０分間攪拌した。反応混合物に、１−ブロモメチル−２−アミン臭化水素（６．７４ｇ、０．０３３ｍｏｌ）、およびＮａＨ（０．８７ｇ、０．０３６ｍｏｌ）を加え、２時間攪拌した。さらに等量のＮａＨ（０．８７ｇ、０．０３６ｍｏｌ）を加え、さらに２時間攪拌した。反応混合物を氷上に注ぐことによって過剰のＮａＨをクエンチした。エチルアセテート（２００ｍＬ）およびＨ２Ｏを加え、２０分間攪拌した。不均一混合物を分液ロートに移し、そこで水相を分離し、酢酸エチル（２×１００ｍＬ）で再抽出した。有機相を混合し、Ｈ２Ｏ（１×１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。粗生成物を（０．１％ＴＦＡを含む）３０〜６０％アセトニトリル／Ｈ２Ｏ勾配を使用して分取ＨＰＬＣ（Ｕｌｔｒｏ  １２０（ｌ０μｍ）Ｃ１８Ｑ）によって精製した。純粋留分を混合、濃縮し、凍結乾燥させて、軽い綿毛状の無色の固体（９．４ｇ、６２％）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３４７（Ｍ＋＋１）。
【０１９１】
【化６７】
2009526859.tif 000063
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸［２−（３−アミノ−４−プロポキシ）−２−フェニル−エチル］−アミド（化合物番号３１）のＴＦＡ塩
化合物番号３０の合成と同様の手順で、２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸（２−ヒドロキシ−２−フェニル−エチル）−アミドおよび１−ブロモプロピル−３−アミン臭化水素から化合物番号３１を調製した。この材料を、（０．１％ＴＦＡを含む）４０〜６０％アセトニトリル／Ｈ２Ｏ勾配を使用して分取ＨＰＬＣ（Ｕｌｔｒｏ  １２０（ｌ０μｍ）Ｃ１８Ｑ）によって精製した。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３６１（Ｍ＋＋１）。
【０１９２】
（実施例８）
式Ｉ−Ｄのさらなるジヒドロベンゾイミダゾール化合物の合成
本実施例は、式Ｉ−ＤのジヒドロベンゾイミダゾールＴｒｐ−ｐ８モジュレーターの合成のための方法を開示する。
【０１９３】
【化６８】
2009526859.tif 000064
スキーム７．
【０１９４】
【化６９】
2009526859.tif 000065
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸［２−（２−ブロモ−フェニル）−エチル］−アミド
攪拌棒を備えた１００ｍＬの丸底フラスコに、ＣＨ２Ｃｌ２（３０ｍＬ）、２−ブロモ−フェネチルアミン（１．０ｇ、５．００ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（６８４μｌ、５．０５ｍｍｏｌ）を投入した。反応溶液を、塩化メントイル（１．０２ｇ、５．０５ｍｍｏｌ）で一度に処理し、周囲温度で３０分間攪拌した。反応をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈し、水で洗浄した（３×１００ｍＬ）。有機層を無水硫酸ナトリウムで乾燥させ、減圧下で濃縮して濃い油（１．８ｇ）を得た。生成物は、精製を行うことなく次のステップに使用した。
【０１９５】
【化７０】
2009526859.tif 000066
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸｛２−［２−（２−アミノ−エチルアミノ）−フェニル］−エチル｝−アミド（化合物番号３３）のＴＦＡ塩
攪拌棒を備えた２５ｍＬのマイクロ波反応容器に、非希釈のジアミノエタン（１０ｍＬ）、２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸［２−（２−ブロモ−フェニル）−エチル］−アミド（１．５ｇ、４．１ｍｍｏｌ）、およびＣｕ粉（３９０ｍｇ、６．１４７ｍｍｏｌ、１．５当量）を投入した。反応容器にマイクロ波を１８０℃で４０分間当てた。反応混合物を丸底フラスコへ移し、濃縮した。残留物を（０．１％ＴＦＡを含む）１０〜４０％アセトニトリル／Ｈ２Ｏ勾配を使用して分取ＨＰＬＣ（Ｕｌｔｒｏ  １２０（ｌ０μｍ）Ｃ１８Ｑ）によって精製した。純粋留分を混合、濃縮し、凍結乾燥させて無色の固体（１ｇ、５２％）を得た。（ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３４６（Ｍ＋＋１）。
【０１９６】
【化７１】
2009526859.tif 000067
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸［２−（２−シアノ−フェニル）−エチル］−アミド
攪拌棒を備えた２０ｍＬのマイクロ波反応容器に、２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸［２−（２−ブロモ−フェニル）−エチル］−アミド（１．５４ｇ、４．２ｍｍｏｌ）、ＣｕＣＮ（０．６０ｇ、６．４ｍｍｏｌ）、およびＮＭＰ（１０ｍＬ）を投入した。反応容器にマイクロ波を１８０℃で４０分間当てた。反応混合物を丸底フラスコへ移し、濃縮した。残留物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して（溶出には１０％酢酸エチル／ヘキサン）、無色の固体（１．２５ｇ、８１％）を得た。
【０１９７】
【化７２】
2009526859.tif 000068
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸［２−２−アミノメチル−フェニル）−エチル］−アミド（化合物番号３４）
攪拌棒を備えた１００ｍＬの丸底フラスコに、２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸［２−（２−シアノ−フェニル）−エチル］−アミド（１．２５ｇ、４．０ｍｍｏｌ）およびメタノール（５０ｍＬ）を投入した。ＮｉＣｌ２（１．１４ｇ、８．８ｍｍｏｌ）およびＮａＢＨ４（０．６４ｇ、１６．８ｍｍｏｌ）。ＮａＢＨ４を３０分間にわたって少しずつ加え、１時間攪拌した。ＮａＢＨ４（０．２０ｇ）を加え、反応混合物をさらに２０分攪拌した。セライトのケーキに反応混合物を通過させ、減圧下で濃縮した。黒色残留物を最小量のアセトニトリルに溶解させ、Ｃ１８シリカゲルカートリッジを通過させ、（０．１％ＴＦＡを含む）１０〜４０％アセトニトリル／Ｈ２Ｏ勾配を使用して分取ＨＰＬＣ（Ｕｌｔｒｏ  １２０（ｌ０μｍ）Ｃ１８Ｑ）によって精製した。純粋留分を混合、濃縮し、凍結乾燥させて無色の固体（１．１ｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３１７（Ｍ＋＋１）。
【０１９８】
（実施例９）
式Ｉ−Ｃのさらなる化合物の合成
本実施例は、式Ｉ−ＣのＴｒｐ−ｐ８モジュレーターの合成のための方法を開示する。
【０１９９】
【化７３】
2009526859.tif 000069
スキーム７．
【０２００】
【化７４】
2009526859.tif 000070
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸（２−オキソ−２−フェニル−エチル）−アミド
攪拌棒を備えた２０ｍＬの丸底フラスコに、２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸（２−ヒドロキシ−２−フェニル−エチル）−アミド（１００ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）および酢酸（１ｍＬ）を投入した。酢酸（５００μｌ）および水（１００μｌ）中のＣｒＯ３（３６ｍｇ、０．３６３ｍｍｏｌ、１．１当量）の溶液を反応混合物にゆっくり加えた。反応混合物を周囲温度で１５分間攪拌し、酢酸エチル（３０ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）（３０ｍＬ）で希釈した。不均一混合物を分液ロートに移し、そこで水相を分離し、酢酸エチル（２×１０ｍＬ）で再抽出した。有機相を混合し、ＮａＨＣＯ３（３×１０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して（溶出には３０％〜５０％酢酸エチル／ヘキサン）、白色の固体（９２ｇ、９３％）として標記の化合物を得た。
【０２０１】
【化７５】
2009526859.tif 000071
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸（２−アミノ−２−フェニル−エチル）−アミド
攪拌棒を備えた２５ｍＬのマイクロ波反応容器に、２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸（２−オキソ−２−フェニル−エチル）−アミド（８０ｍｇ）およびアンモニア（メタノール中１．５ｍＬ、７Ｍ）を投入した。１滴の酢酸およびＮａＣＮＢＨ３（２０ｍｇ）を反応混合物に加え、８０℃で８０分間マイクロ波に当てた。残留物を酢酸エチル（３０ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ３（水溶液）（３０ｍＬ）に溶解させた。不均一混合物を分液ロートに移し、そこで水相を分離し、酢酸エチル（２×１０ｍＬ）で再抽出した。有機相を混合し、飽和ＮａＨＣＯ３（３×１０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮して固体（７５ｍｇ）を得た。
【０２０２】
【化７６】
2009526859.tif 000072
（１−｛２−［（２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−１−フェニル−エチルカルバモイル｝−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
攪拌棒を備えた１５ｍＬの反応容器に、ＴＨＦ（１５ｍＬ）、Ｂｏｃ−（Ｒ）−アラニン（５２ｍｇ、０．２７３ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３７．８７ｍｇ、０．２７３ｍｍｏｌ）、ＥＤＣＩ（５３ｍｇ、０．２７３ｍｍｏｌ）、およびＴＥＡ（３７μｌ、０．２７３ｍｍｏｌ）を投入した。反応混合物を１５分間攪拌し、そこに２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸（２−アミノ−２−フェニル−エチル）−アミド（７５ｍｇ、０．２４８ｍｍｏｌ）を加え、さらに３時間攪拌した。酢酸エチル（１０ｍＬ）およびＨ２Ｏ（１０ｍＬ）をこの反応混合物に加えた。不均一混合物を分液ロートに移し、そこで水相を分離し、酢酸エチル（２×１０ｍＬ）で再抽出した。有機相を混合し、１Ｎ  ＨＣｌ（２×１０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（１×１０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３（３×１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、ろ過し、減圧下で濃縮した。残留物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーによって精製して（溶出には２０％酢酸エチル／ヘキサン）、無色の固体（３０ｍｇ）として標記の化合物を得た。
【０２０３】
【化７７】
2009526859.tif 000073
２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボン酸［２−（２−アミノ−プロピオニルアミノ）−２−フェニル−エチル］−アミド（化合物番号２８）のＴＦＡ塩。
【０２０４】
攪拌棒を備えた５ｍＬの丸底フラスコに、１０％ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２および（１−｛２−［（２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサンカルボニル）−アミノ］−１−フェニル−エチルカルバモイル｝−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３０ｍｇ）を投入し、１時間攪拌した。ＴＦＡを減圧下で除去し、残留物を３０％アセトニトリル／Ｈ２Ｏに溶解させ、（０．１％ＴＦＡを含む）１０〜４０％アセトニトリル／Ｈ２Ｏ勾配を使用して分取ＨＰＬＣ（Ｕｌｔｒｏ  １２０（１０μｍ）Ｃ１８Ｑ）によって精製した。純粋留分を混合、濃縮し、凍結乾燥させて無色の固体（１７．７ｍｇ）を得た。ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｚ３７４（Ｍ＋＋１）。
【０２０５】
（実施例１０）
ＣＨＯ細胞でのＴｒｐ−ｐ８の発現
ヒトＴｒｐ−ｐ８をトランスフェクションしたＣＨＯ細胞（本明細書ではＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８と呼ぶ）を作製し、本発明の実験に使用した。このトランスフェクタントでのＴｒｐ−ｐ８のポリペプチドの発現、およびトランスフェクションしていないＣＨＯでのあらゆる内因性の発現の欠如を、Ｔｒｐ−ｐ８特異的抗体を使用するウェスタンブロットおよび免疫蛍光法（ＧＳ２．２０）ならびにイシリン（１−［２−ヒドロキシフェニル］−４−［３−ニトロフェニル］−１，２，３，６−テトラヒドロピリミジン−２−オン）およびメントール（２−イソプロピル−５−メチル−シクロヘキサノール）を用いるカルシウムフラックスアッセイによって確認した。トランスフェクションしていないＣＨＯ細胞を使って、ＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８で観測された化合物の効果の特異性を確立した。
【０２０６】
（実施例１１）
候補Ｔｒｐ−ｐ８アゴニスト化合物にＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞を３７℃で曝露した後の、細胞生存度のＴｒｐ−ｐ８を介した減少
本実施例は、効果的なＴｒｐ−ｐ８アゴニストに対するスクリーニングに適したＡＴＰ生存性アッセイを開示する。本明細書に記載のＡＴＰ生存性アッセイは、外因性のＴｒｐ−ｐ８のｃＤＮＡを発現するＣＨＯ細胞を使用する。本実施例は、さらに、本発明のＴｒｐ−ｐ８アゴニストが、Ｔｒｐ−ｐ８を発現する細胞の生存性を減少させる際に有効であることを確立する。
【０２０７】
代謝的に活性な細胞がネクローシスおよび／またはアポトーシスを受ける場合、分子内ＡＴＰの濃度は、非常に急激に低下する。このＡＴＰ濃度、したがって相対的細胞生存率は、市販の試薬を使う確立された方法によって測定され得る。本明細書で開示したアゴニストスクリーニング方法では、ＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞の生存性を特異的に減少させる化合物をアゴニストと呼ぶ。
【０２０８】
アゴニストに対する効力および特異性についての一次スクリーニングとして、トランスフェクションしていないＣＨＯ細胞とＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞の両方を、９６ウェルの黒色壁で、黒色底の細胞培養処理プレート中で、１％ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中の１または１０μＭの試験化合物または１％ＤＭＳＯ（コントロール）に曝露した。ＤＭＳＯは、試験した化合物すべてに対する溶媒であった。３７℃で２４〜２６時間後に、これらの細胞を溶解し、ＡＴＰ濃度を化学発光アッセイにより、市販の試薬キット（Ｃｅｌｌ  Ｔｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（Ｐｒｏｍｅｇａ；Ｍａｄｉｓｏｎ、ＷＩ））を使用して求めた。ＤＭＳＯのみで処理した細胞中のＡＴＰレベルのパーセントとして表される、化合物で処理された細胞中のＡＴＰレベルとして表される相対的生存率（％）は、候補化合物のアゴニスト活性の尺度であった。すなわち、生存率％が小さいほど、そのＴｒｐ−ｐ８アゴニストはより強力である。８〜１０アゴニスト濃度で生存率を測定することによって、３７℃で最も活性な候補Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストに対し、ＥＣ５０値を決定した。（本明細書ではＥＣ５０は、相対的細胞生存率に５０％の減少があるアゴニスト濃度として定義される）。
【０２０９】
ＡＴＰ生存性アッセイにおいて有効であった式Ｉ、式Ｉ−Ａ、式Ｉ−Ｂ、式Ｉ−Ｃ、式Ｉ−Ｄ、および式Ｉ−Ｅの例示的なＴｒｐ−ｐ８アゴニストを本明細書において表１〜表５に示す。ＥＣ５０データを以下の通りに示す：Ａ＝＜０．０２０μＭ；Ｂ＝０．０２１〜０．０５０μＭ；Ｃ＝０．０５１〜０．１０μＭ。
【０２１０】
表１〜表５では、以下の形態の化学構造が提供される：
【０２１１】
【化７８】
2009526859.tif 000074
上記化学構造において、Ｘおよび／またはＹに対して化学名が与えられている。Ｘ／Ｙに名称が与えられる場合、その名称には窒素基が含まれる。
【０２１２】
例示的なＴｒｐ−ｐ８アゴニストで処理した後のＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞の生存率を図１に示す。
【０２１３】
表１
式Ｉ−Ａの例示的な化合物
【０２１４】
【表１−１】
2009526859.tif 000075
【０２１５】
【表１−２】
2009526859.tif 000076
【０２１６】
【表１−３】
2009526859.tif 000077
表２
式Ｉ−Ｂの例示的な化合物
【０２１７】
【表２−１】
2009526859.tif 000078
【０２１８】
【表２−２】
2009526859.tif 000079
【０２１９】
【表２−３】
2009526859.tif 000080
【０２２０】
【表２−４】
2009526859.tif 000081
表３
式Ｉ−Ｃの例示的な化合物
【０２２１】
【表３−１】
2009526859.tif 000082
【０２２２】
【表３−２】
2009526859.tif 000083
表４
式Ｉ−Ｄの例示的な化合物
化合物番号
【０２２３】
【表４−１】
2009526859.tif 000084
【０２２４】
【表４−２】
2009526859.tif 000085
表５
式Ｉ−Ｅの例示的な化合物
【０２２５】
【表５−１】
2009526859.tif 000086
【０２２６】
【表５−２】
2009526859.tif 000087
【０２２７】
【表５−３】
2009526859.tif 000088
【０２２８】
【表５−４】
2009526859.tif 000089
【０２２９】
【表５−５】
2009526859.tif 000090
【０２３０】
【表５−６】
2009526859.tif 000091
【０２３１】
【表５−７】
2009526859.tif 000092
【０２３２】
【表５−８】
2009526859.tif 000093
（実施例１２）
３７℃におけるＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞中へのカルシウム流入を測定することによるＴｒｐ−ｐ８アゴニスト化合物のスクリーニングおよび特徴付け
本実施例は、本発明の候補Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストの活性をさらに評価するために使用されるＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８をベースにしたカルシウム流入アッセイを開示する。
【０２３３】
カルシウム流入をフレクステーションミクロプレート蛍光プレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ；Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、ＣＡ）を使用して測定した。カルシウムフラックスのための典型的なアッセイを、以下のようにして行った。ＤＭＥＭ／Ｈａｍ’ｓ  Ｆ−１２をベースとした培地中の細胞を、典型的には３０，０００細胞／ウェル／１００μｌの濃度で、９６ウェルの黒壁の、透明底の組織培養プレート（Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｂｉｏ−ｏｎｅ）に播種し、３７℃で１６〜２０時間培養した。Ｆｕｒａ２−ＡＭ蛍光色素／Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−２７混合物（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ；Ｅｕｇｅｎｅ、Ｏｒｅｇｏｎ）と共に、各ウェル中の細胞を３７℃で１時間培養し、プロベネシドを含む培地に溶解させた。典型的な最終濃度は、Ｆｕｒａ２−ＡＭが５〜８μＭ、Ｐｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ−２７が０．０１％、プロベネシド（細胞内からの加水分解した色素の輸送を減少させ、それにより実験中の色素の損失を最小限にする陰イオン交換阻害剤）が２．５ｍＭであった。１時間後、ｐＨが７．４で、２．５ｍＭの最終濃度でプロベネシドを含む緩衝溶液（２０ｍＭのＨＥＰＥＳおよび１．２６ｍＭのＣａＣｌ２を含むＨａｎｋｓ平衡塩溶液）で細胞を洗浄し、３７℃のアッセイ温度で少なくとも３０分間予備インキュベートした。
【０２３４】
典型的には、追加のカルシウムを含まないか、濃度を２ｍＭに増加するカルシウムを含む上記ＨＥＰＥＳ／ＨＢＳＳベースの緩衝液、および各種濃度の化合物（最終濃度の５倍で）を、自動のマルチチャネルピペットを使用して各ウェルに加えた。これらの化合物は、アッセイ（３７℃）を行う前に、３７℃で少なくとも３０分間予備インキュベートした。シグナルを、３４０ｎｍおよび３８０ｎｍの二重励起波長、ならびに５１０ｎｍの発光波長で、４９５ｎｍの遮断フィルターを使って読み取った。そのシグナルを３８０ｎｍで励起したときの放射に対する３４０ｎｍで励起したときの放射の比として報告した［相対的蛍光単位（ＲＦＵ）］。イオノマイシンを正のコントロールとして慣用的に使用した。
【０２３５】
アゴニストアッセイの場合、異なった濃度の化合物を、（上述したように）色素を導入した細胞に加えた。ＲＦＵの増加は、アゴニストとしての化合物の作用強度の尺度であった。例示的な結果を図２に示す。
【０２３６】
（実施例１３）
ＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞をＴｒｐ−ｐ８アゴニスト化合物に３７℃で曝露した後のアポトーシスの増加
本実施例は、Ｔｒｐ−ｐ８を発現する細胞中でアポトーシスを誘導する際のＴｒｐ−ｐ８アゴニスト化合物の効力を開示する。
【０２３７】
アネキシンＶ／ヨウ化プロピジウム（ＰＩ）フローサイトメトリーアッセイを使用して、Ｔｒｐ−ｐ８アゴニスト化合物によって誘導される細胞死の機構に対してさらに理解を深めた。アネキシンＶ染色は、ホスファチジルセリンが原形質膜の外部層に転移するのを検知し、これはアポトーシスに特徴的な事象である一方、ＰＩ染色は易感染性膜を有する死亡細胞を示す。
【０２３８】
細胞を、３７℃で２４〜２６時間、１％ＤＭＳＯ中の化合物、または１％ＤＭＳＯ（コントロール）で処理した。それらの細胞を、制御条件下で短時間トリプシン処理し、供給者（例えば、Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ；Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ、Ａｌａｂａｍａ）によって提供された方法に従って、アネキシンＶ／ＰＩ試薬キットで染色した。例示的な結果を図３に示す。
【０２３９】
（実施例１４）
Ｔｒｐ−ｐ８発現細胞を毒性のアゴニスト化合物から保護することに基づいた、Ｔｒｐ−ｐ８アンタゴニスト化合物についての細胞生存性アッセイを使用するインビトロスクリーニング
本実施例は、候補Ｔｒｐ−ｐ８アンタゴニスト化合物を同定および特徴付けるためのアッセイ系を開示する。
【０２４０】
以下の修正を伴って、３７℃でのＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞に対する細胞生存性アッセイ（実施例１１を参照）を使用することによって、Ｔｒｐ−ｐ８アンタゴニストを同定した。本発明の場合は、ＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞をコントロールアゴニストの毒性効果から保護し、それによりＴｒｐ−ｐ８アゴニストに曝露したＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞の生存性を維持する化合物をアンタゴニストと定義する。アンタゴニストに対する一次スクリーニングとして、１％のジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中の１０μＭの試験化合物、または毒性濃度のコントロールアゴニストを含む１％ＤＭＳＯにＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞を曝露した。実施例１１で記述したように求めた１０μＭでの相対的生存率は、Ｔｒｐ−ｐ８アンタゴニストとしてのこの化合物の潜在能力の尺度であった。すなわち、生存率が高いほど、そのアンタゴニストはより強力である。例示的な結果を図４に示す。
【０２４１】
（実施例１５）
ＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞中のＴｒｐ−ｐ８アゴニストによって誘導されたカルシウム流入を抑圧するＴｒｐ−ｐ８アンタゴニスト化合物の能力に基づいた、Ｔｒｐ−ｐ８アンタゴニスト化合物のためのカルシウムフラックスアッセイを使用するインビトロスクリーニング
本実施例は、候補Ｔｒｐ−ｐ８アンタゴニストをさらにスクリーニングし、特徴付けするのに使用されるインビトロアッセイ系を開示する。
【０２４２】
実施例１２に記述したような３７℃でのカルシウムフラックスアッセイを使用して、以下の２つの区別をして、Ｔｒｐ−ｐ８アンタゴニストに対してさらにスクリーニングおよび特徴付けを行った。２つの区別とは、（１）化合物をコントロールアゴニストと予備混合する、またはコントロールアゴニストのみを細胞に加え、アゴニストに対する応答の抑制をその化合物のアンタゴニストとしての作用強度の尺度とすること、および（２）化合物を、異なった濃度で細胞に加え、その後２〜３分後にコントロールアゴニストをその細胞に加え、アゴニストによって誘導された応答の抑制をアンタゴニストとしてのその化合物の作用強度の尺度としたこと、であった。例示的な結果を図５に示す。
【０２４３】
（実施例１６）
癌の処置のための候補Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストおよび候補Ｔｒｐ−ｐ８アンタゴニストのインビボ効力をアッセイするための動物モデル系
本実施例は、アゴニストとアンタゴニストの両方を含む候補Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターのインビボ効力を決定するのに適した動物モデル系を提供する。
【０２４４】
Ｔｒｐ−ｐ８を発現するヒト前立腺癌の異種移植片（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  ＷａｓｈｉｎｇｔｏｎのＤｒ．Ｒｏｂｅｒｔ  Ｖｅｓｓｅｌｌａの実験室からのＬｕＣａＰ。タンパク質に特異的なウサギポリクローナル抗体であるＴ−９０４を使用するインサイチュハイブリダイゼーション、定量的ポリメラーゼ連鎖反応、および免疫組織化学により評価される）、ならびにＣＨＯ（チャイニーズハムスター卵巣）細胞株およびＥＬ−４（マウスの胸腺腫）細胞株を含む、Ｔｒｐ−ｐ８を発現するように操作される細胞株を使用して、マウスで腫瘍モデルを樹立した。これらのトランスフェクタントでのＴｒｐ−ｐ８発現を、ウェスタンブロットおよびＴｒｐ−ｐ８に特異的な抗体（ＧＳ２．２０）を使用する免疫蛍光検査、ならびにカルシウム流入の機能的なアッセイにおいて知られているアゴニストに対する応答によって確認した。さらに、（本明細書において実施例１１および実施例１３で記述されているように）これらのトランスフェクションされた細胞株は、ＡＴＰ生存性およびアポトーシスアッセイから明らかなように、Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストによる殺傷を受けやすかった。
【０２４５】
マウスにおける腫瘍モデルを、ＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞をＳＣＩＤマウスに皮下注入することによって樹立した。これらのマウスから摘出した腫瘍中のＴｒｐ−ｐ８発現をＲＴ−ＰＣＲ、免疫組織化学、およびウェスタンブロット分析によって確認した。無胸腺のヌードマウスまたはＳＣＩＤマウスで上述したヒト前立腺癌の異種移植片を使用することによって、かつ正常マウス中のＥＬ４／Ｔｒｐ−ｐ８トランスフェクタントを使用することによって、さらなる腫瘍モデル開発を行う。Ｔｒｐ−ｐ８を発現するように操作され得る、他の供給源由来の前立腺異種移植片および他の細胞株も、さらなるモデル系を作るための潜在的な候補である。
【０２４６】
インビトロ評価およびインビボ評価からの結果に基づいて、一組のＴｒｐ−ｐ８アゴニストを、マウス中の効力を決定するために選択する。インビトロ評価としては、細胞殺傷アッセイにおける強度、水への溶解度、血漿結合研究、および代謝安定性（肝細胞および／またはマウスのミクロソームを使用して決定されるような、化合物が肝臓によって新陳代謝される能力）が挙げられる。インビボ評価には、薬動学および毒性研究が含まれる。選択した化合物を、異なった経路（経口、静脈内、腹膜内、皮下、筋肉内）によって、Ｔｒｐ−ｐ８を発現する腫瘍を有するマウスに投与する。腫瘍の減少およびこれらのマウスの生存を、これらの化合物の様々な服用量で評価する。腫瘍と闘う際に最も効果的な化合物を、さらなる研究のために選択する。
【０２４７】
（実施例１７）
いくつかの例示的な化合物の実験による特徴付け
本実施例は、化合物Ｉ、ＩＩ、ＩＩＩ、およびＩＶとして示した式Ｉのいくつかの例示的な低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターの実験による特徴付けとその結果を開示する。これらの式および分子量を表６にまとめた。
【０２４８】
表６
式および分子量
【０２４９】
【表６】
2009526859.tif 000094
インビトロ活性
表８にまとめたように、これらの化合物は、Ｔｒｐ−ｐ８を発現する細胞の殺傷に対して高度の作用強度および特異性を示した。典型的には、Ｔｒｐ−ｐ８を発現する細胞と比較して、Ｔｒｐ−ｐ８のない細胞を殺傷するには、＞１０００倍高濃度の化合物が必要であった。このアッセイで、化合物ＩＩ、ＩＩＩ、およびＩＶは同様の活性を示し、化合物Ｉはそれらよりも約３倍強力であった。
【０２５０】
表８
いくつかの好ましい化合物に対するＡＴＰ生存性アッセイの結果
【０２５１】
【表８】
2009526859.tif 000095
インビボ活性
図９Ａおよび図９Ｂに示したように、化合物Ｉ、ＩＩ、およびＩＩＩは、齧歯動物（図９Ａ）およびビーグル犬（図９Ｂ）の両方に単回経口投与した後で持続性曝露を生じた。マウスと比較して、ラットは同等の曝露を達成するのに（体重に基づき）約２倍の経口投与量を必要とし、イヌには１／３未満が必要である。維持された血漿レベル（ｔｌ／２〜９時間）と一致して、単回経口投与によってＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８異種移植モデルに長期にわたる持続的な反応がもたらされる。
【０２５２】
図１０Ａおよび１０Ｂに示したように、これらの化合物の経口投与によって、ＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８異種移植モデルに持続的な反応がもたらされた。腫瘍増殖の大幅な抑制は、１０ｍｇ／ｋｇのわずかな単回投与の後で見られ、有意な毒性は１００ｍｇ／ｋｇで明白にならなかった；＞１０倍の治療窓。
【０２５３】
図７に示したように、式Ｉの化合物は、単回腹腔内注射によって、経口投与と比較して大幅に短い曝露を生じた。図８Ａおよび図８Ｂに示したように、これらの化合物をマウスへ腹腔内注射すると、ＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８異種移植モデルにおける反応がより短くなり、ＩＰ投与の停止後には持続性の低下が見られる。
【０２５４】
有効性にはＴｒｐ−ｐ８が媒介していることを例証するために、図１１は、適合したＣＨＯ（Ｔｒｐ−ｐ８−）モデル内の化合物Ｉの評価を示している。提案された作用機序と一致して、このモデルにおいて化合物Ｉは１００ｍｇ／ｋｇで有意な有効性を示さなかった；類似のＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８モデルにおける有効投与量の１０倍の投与量。
【０２５５】
図１２に示したように、ＬｕＣａＰモデルは、ＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８モデルと同等の反応またはそれよりも良好であるといえる反応を示した。ＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８は増殖の早い腫瘍である；化合物Ｉを用いた処置は、増殖を弱めたが後退させることはなかった。対照的に、ＬｕＣａＰは増殖の遅い腫瘍である；処置は、増殖阻止と同様に統計的に有意な後退を生じさせた。この場合、マウスから切除した腫瘍組織を免疫組織化学で評価すると、ＬｕＣＡＰ異種移植モデルはＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８モデルと同等のＴｒｐ−ｐ８レベルを示した。
【０２５６】
マウスに経口投与した最も高い投与量１００ｍｇ／ｋｇは、これらの化合物のいずれに対しても有意な毒性を生じさせなかった。化合物Ｉの１０ｍｇ／ｋｇの単回経口投与がＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８異種移植モデルにおいて大きな効力を生じさせたので、＞１０の治療窓は式Ｉの化合物で達成可能である。これをラットの毒性試験によって発展させた。試験においては、より高い投与量で化合物を投与することができた。ラットで実施された毒性試験では、２５０ｍｇ／ｋｇの経口投与は、観察可能な毒性効果を誘導しなかった。５００ｍｇ／ｋｇおよび１０００ｍｇ／ｋｇの単回投与は、軽度から中度の毒性を生じさせたが、ＭＴＤには達しなかった。式Ｉの化合物によって達成可能な最小の治療窓を表すこれらのデータを表７にまとめた。
【０２５７】
表７
【０２５８】
【表７】
2009526859.tif 000096
理解を明確にするために、図示および例によって本発明をある程度詳細に説明してきたが、添付の特許請求の範囲によってのみ限定されることが意図される本発明の範囲を逸脱することなく、変更および修正を行うことができる。
【図面の簡単な説明】
【０２５９】
【図１Ａ】図１Ａは、本発明の低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターを試験し特徴付けるのに適した例示的なＡＴＰ生存性アッセイを示すグラフである。予備アッセイ（図１Ａ）では、化合物を１μＭで試験し、Ｔｒｐ−ｐ８を発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８）の特異的殺傷を３７℃で測定した。追跡アッセイ（図１Ｂ）では、化合物を様々な濃度で試験し、Ｔｒｐ−ｐ８を発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８）の殺傷を３７℃で測定した。ＥＣ５０値は、濃度の関数として細胞生存性のプロットから得られた。
【図１Ｂ】図１Ｂは、本発明の低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターを試験し特徴付けるのに適した例示的なＡＴＰ生存性アッセイを示すグラフである。予備アッセイ（図１Ａ）では、化合物を１μＭで試験し、Ｔｒｐ−ｐ８を発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８）の特異的殺傷を３７℃で測定した。追跡アッセイ（図１Ｂ）では、化合物を様々な濃度で試験し、Ｔｒｐ−ｐ８を発現するＣＨＯ細胞（ＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８）の殺傷を３７℃で測定した。ＥＣ５０値は、濃度の関数として細胞生存性のプロットから得られた。
【図２Ａ】図２Ａは、Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターにより誘導された、３７℃で実施したカルシウムフラックスアッセイにより決定した細胞内カルシウムの増加を示すグラフである。図２Ａは、ＣＨＯ細胞およびＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞が、３７℃でのカルシウムフラックスアッセイで２μＭイオノマイシンと同様に応答することを例証する陽性コントロールである。図２Ｂは、内因性または外因性のＴｒｐ−ｐ８を発現しない親のＣＨＯ細胞が１０μＭの濃度でＴｒｐ−ｐ８アゴニストに応答しないことを例証する陰性コントロールである。図２Ｃは、Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストが、３７℃でＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞において特異的な濃度依存応答を誘導したことを例証している。
【図２Ｂ】図２Ｂは、Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターにより誘導された、３７℃で実施したカルシウムフラックスアッセイにより決定した細胞内カルシウムの増加を示すグラフである。図２Ａは、ＣＨＯ細胞およびＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞が、３７℃でのカルシウムフラックスアッセイで２μＭイオノマイシンと同様に応答することを例証する陽性コントロールである。図２Ｂは、内因性または外因性のＴｒｐ−ｐ８を発現しない親のＣＨＯ細胞が１０μＭの濃度でＴｒｐ−ｐ８アゴニストに応答しないことを例証する陰性コントロールである。図２Ｃは、Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストが、３７℃でＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞において特異的な濃度依存応答を誘導したことを例証している。
【図２Ｃ】図２Ｃは、Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターにより誘導された、３７℃で実施したカルシウムフラックスアッセイにより決定した細胞内カルシウムの増加を示すグラフである。図２Ａは、ＣＨＯ細胞およびＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞が、３７℃でのカルシウムフラックスアッセイで２μＭイオノマイシンと同様に応答することを例証する陽性コントロールである。図２Ｂは、内因性または外因性のＴｒｐ−ｐ８を発現しない親のＣＨＯ細胞が１０μＭの濃度でＴｒｐ−ｐ８アゴニストに応答しないことを例証する陰性コントロールである。図２Ｃは、Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストが、３７℃でＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞において特異的な濃度依存応答を誘導したことを例証している。
【図３】図３は、Ｔｒｐ−ｐ８アゴニストが、３７℃でＴｒｐ−ｐ８を発現するＣＨＯ細胞において用量依存的に特異的にアポトーシスを誘導できることを例証しているフローサイトメトリーデータのプロットである。
【図４】図４は、３７℃でＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞を用いる、本明細書で説明するＡＴＰ生存性アッセイを使用するＴｒｐ−ｐ８アンタゴニストに対する一次スクリーニングからの例示的結果を示すグラフである。ＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞を、１％ＤＭＳＯまたは毒性濃度のＴｒｐ−ｐ８アゴニストと組み合わせた１％ＤＭＳＯ中で異なった濃度の化合物に曝露した。細胞の生存性を、２４〜２６時間後に３７℃でＡＴＰアッセイを使って分析した。細胞をＴｒｐ−ｐ８アゴニストの毒性効果から保護した化合物は、Ｔｒｐ−ｐ８アンタゴニストとして分類される（化合物Ａ〜Ｂ）。不活性化合物（化合物Ｃ）は保護効果を有さず、ここでは、上記アッセイの例証目的で示されている。
【図５】図５は、３７℃で行ったカルシウムフラックスアッセイによる、Ｔｒｐ−ｐ８アンタゴニストのスクリーニングおよび特徴付けを示すグラフである。ＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞にカルシウム指標色素であるＦｕｒａ−２を導入し、化合物に応答した分子内カルシウムの増加を蛍光の増加によって決定した。Ｆｕｒａ−２色素を導入したＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞を、１％ＤＭＳＯ中の異なった濃度で、３７℃で１％ＤＭＳＯまたはアンタゴニストに曝露した。３分後に、この細胞にアゴニストを加えた。細胞を有効濃度のアンタゴニストに曝露すると、そのアゴニストに応答する細胞の能力は有意に減少されたか、または完全に消失した。
【図６Ａ】図６Ａは、本発明の低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターを試験し、特徴付けるのに適した例示的な動物モデルからの結果を示すグラフである。マウスの皮下にＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞を注射すると、それにより固形腫瘍が形成された。各腫瘍の長さ（最長寸法）および幅（長さと同じ平面において、それに対して垂直な寸法）をノギスで測定し、腫瘍体積を楕円の体積に関する式０．５２＊Ｌ＊Ｗ２によって近似させた。平均腫瘍体積が約１００ｍｍ３に達したときに、マウスを無作為にグループ分けした。図６Ａでは、水性配合物としての試験化合物またはビヒクル単独のいずれかをマウスに単回強制経口投与した。図６Ｂでは、水性配合物としての試験化合物またはビヒクル単独のいずれかをマウスに繰返し強制経口投与した。その後、示された日に腫瘍を測定した。データは、平均腫瘍体積±平均値の標準誤差として示される。
【図６Ｂ】図６Ｂは、本発明の低分子Ｔｒｐ−ｐ８モジュレーターを試験し、特徴付けるのに適した例示的な動物モデルからの結果を示すグラフである。マウスの皮下にＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞を注射すると、それにより固形腫瘍が形成された。各腫瘍の長さ（最長寸法）および幅（長さと同じ平面において、それに対して垂直な寸法）をノギスで測定し、腫瘍体積を楕円の体積に関する式０．５２＊Ｌ＊Ｗ２によって近似させた。平均腫瘍体積が約１００ｍｍ３に達したときに、マウスを無作為にグループ分けした。図６Ａでは、水性配合物としての試験化合物またはビヒクル単独のいずれかをマウスに単回強制経口投与した。図６Ｂでは、水性配合物としての試験化合物またはビヒクル単独のいずれかをマウスに繰返し強制経口投与した。その後、示された日に腫瘍を測定した。データは、平均腫瘍体積±平均値の標準誤差として示される。
【図７】図７は、単回腹腔内注射による投与後のマウスにおける、時間および投与量の関数としてのいくつかの化合物の血漿濃度を示すグラフである。各化合物を水性配合物中にすべて溶解させ、比較投与量で投与した。示された時点で血液を採取し、薬物濃度を分析した。
【図８Ａ】図８Ａは、Ｔｒｐ−ｐ８を発現するマウス腫瘍異種移植モデルにおいていくつかの化合物が例証する有効性を示すグラフである。マウスの皮下にＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞を注射すると、それにより固形腫瘍が形成された。各腫瘍の長さ（Ｌ；最長寸法）および幅（Ｗ；長さと同じ平面において、それに対して垂直な寸法）をノギスで測定し、腫瘍体積を楕円の体積に関する式０．５２＊Ｌ＊Ｗ２によって近似させた。平均腫瘍体積が約１００ｍｍ３に達したときに、マウスを無作為にグループ分けし、水性配合物としての化合物またはビヒクル単独のいずれかを、示された日にマウスに腹腔内注射によって投与した。すべての化合物を比較投与量で投与した。その後、示された日に腫瘍を測定した。データは、平均腫瘍体積±平均値の標準誤差として示される。
【図８Ｂ】図８Ｂは、Ｔｒｐ−ｐ８を発現するマウス腫瘍異種移植モデルにおいていくつかの化合物が例証する有効性を示すグラフである。マウスの皮下にＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞を注射すると、それにより固形腫瘍が形成された。各腫瘍の長さ（Ｌ；最長寸法）および幅（Ｗ；長さと同じ平面において、それに対して垂直な寸法）をノギスで測定し、腫瘍体積を楕円の体積に関する式０．５２＊Ｌ＊Ｗ２によって近似させた。平均腫瘍体積が約１００ｍｍ３に達したときに、マウスを無作為にグループ分けし、水性配合物としての化合物またはビヒクル単独のいずれかを、示された日にマウスに腹腔内注射によって投与した。すべての化合物を比較投与量で投与した。その後、示された日に腫瘍を測定した。データは、平均腫瘍体積±平均値の標準誤差として示される。
【図９Ａ】図９Ａは、単回経口投与後のラット（図９Ａ）およびイヌ（図９Ｂ）における、時間および投与量の関数としてのいくつかの化合物の血漿濃度を示すグラフである。各化合物を水性配合物中にすべて溶解させ、比較投与量で強制経口投与した。示された時点で血液を採取し、薬物濃度を分析した。
【図９Ｂ】図９Ｂは、単回経口投与後のラット（図９Ａ）およびイヌ（図９Ｂ）における、時間および投与量の関数としてのいくつかの化合物の血漿濃度を示すグラフである。各化合物を水性配合物中にすべて溶解させ、比較投与量で強制経口投与した。示された時点で血液を採取し、薬物濃度を分析した。
【図１０Ａ】図１０Ａは、Ｔｒｐ−ｐ８を発現するマウス腫瘍異種移植モデルにおいていくつかの化合物が例証する有効性を示すグラフである。マウスの皮下にＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞を注射すると、それにより固形腫瘍が形成された。各腫瘍の長さ（Ｌ；最長寸法）および幅（Ｗ；長さと同じ平面において、それに対して垂直な寸法）をノギスで測定し、腫瘍体積を楕円の体積に関する式０．５２＊Ｌ＊Ｗ２によって近似させた。平均腫瘍体積が約１００ｍｍ３に達したときに、マウスを無作為にグループ分けし、水性配合物としての化合物またはビヒクル単独のいずれかを、マウスに単回強制経口投与した。その後、示された日に腫瘍を測定した。データは、平均腫瘍体積±平均値の標準誤差として示される。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、Ｔｒｐ−ｐ８を発現するマウス腫瘍異種移植モデルにおいていくつかの化合物が例証する有効性を示すグラフである。マウスの皮下にＣＨＯ／Ｔｒｐ−ｐ８細胞を注射すると、それにより固形腫瘍が形成された。各腫瘍の長さ（Ｌ；最長寸法）および幅（Ｗ；長さと同じ平面において、それに対して垂直な寸法）をノギスで測定し、腫瘍体積を楕円の体積に関する式０．５２＊Ｌ＊Ｗ２によって近似させた。平均腫瘍体積が約１００ｍｍ３に達したときに、マウスを無作為にグループ分けし、水性配合物としての化合物またはビヒクル単独のいずれかを、マウスに単回強制経口投与した。その後、示された日に腫瘍を測定した。データは、平均腫瘍体積±平均値の標準誤差として示される。
【図１１】図１１は、Ｔｒｐ−ｐ８発現のないマウス腫瘍異種移植モデルにおいて例示的な化合物が例証する有効性の欠如を示すグラフである。マウスの皮下にＴｒｐ−ｐ８のないＣＨＯ−Ｋ１を注射すると、それにより固形腫瘍が形成された。各腫瘍の長さ（Ｌ；最長寸法）および幅（Ｗ；長さと同じ平面において、それに対して垂直な寸法）をノギスで測定し、腫瘍体積を楕円の体積に関する式０．５２＊Ｌ＊Ｗ２によって近似させた。平均腫瘍体積が約５０ｍｍ３に達したときに、マウスを無作為にグループ分けし、水性配合物としての単回投与量の化合物またはビヒクルのいずれかを、マウスに強制経口投与した。その後、示された日に腫瘍を測定した。データは、平均腫瘍体積±平均値の標準誤差として示される。
【図１２】図１２は、Ｔｒｐ−ｐ８を発現するマウス腫瘍異種移植モデルにおいて例示的な化合物が例証する有効性を示すグラフである。ＬｕＣａＰ腫瘍モデルは、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｓｃｈｏｏｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅの泌尿器科学教授Ｒｏｂｅｒｔ  Ｌ．  Ｖａｓｓｅｌｌａ，  Ｐｈ．Ｄ．から入手した。各腫瘍の長さ（Ｌ；最長寸法）および幅（Ｗ；長さと同じ平面において、それに対して垂直な寸法）をノギスで測定し、腫瘍体積を楕円の体積に関する式０．５２＊Ｌ＊Ｗ２によって近似させた。平均腫瘍体積が約１５０ｍｍ３に達したときに、水性配合物としての化合物を、マウスに腹腔内注射によって１日１回、５日間投与した。その後、示された日に腫瘍を測定した。データは、平均腫瘍体積±平均値の標準誤差として示される。
【図１Ａ】
2009526859.tif 000103
【図１Ｂ】
2009526859.tif 000104
【図２Ａ】
2009526859.tif 000105
【図２Ｂ】
2009526859.tif 000106
【図２Ｃ】
2009526859.tif 000107
【図３】
2009526859.tif 000108
【図４】
2009526859.tif 000109
【図５】
2009526859.tif 000110
【図６Ａ】
2009526859.tif 000111
【図６Ｂ】
2009526859.tif 000112
【図７】
2009526859.tif 000113
【図８Ａ】
2009526859.tif 000114
【図８Ｂ】
2009526859.tif 000115
【図９Ａ】
2009526859.tif 000116
【図９Ｂ】
2009526859.tif 000117
【図１０Ａ】
2009526859.tif 000118
【図１０Ｂ】
2009526859.tif 000119
【図１１】
2009526859.tif 000120
【図１２】
2009526859.tif 000121
【国際調査報告】
2009526859.tif 000122
2009526859.tif 000123
2009526859.tif 000124