(57)【要約】  Ｚｎ−ＤＴＰＡおよびＣａ−ＤＴＰＡから選ばれるＤＴＰＡキレートと、該ＤＴＰＡキレートの空腸摂取を優先的に促進する浸透促進剤とを含んでなる、経口放射性核種キレート化療法のための組成物。該組成物は、哺乳動物に経口投与された場合に該キレートの少なくとも１０％のＤＴＰＡキレートバイオアベイラビリティを有する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
カルシウム−ＤＴＰＡ（Ｃａ−ＤＴＰＡ）および亜鉛−ＤＴＰＡ（Ｚｎ−ＤＴＰＡ）よりなる群から選ばれるＤＴＰＡ（ジエチレントリアミンペンタアセタート）キレートと、
該ＤＴＰＡキレートの空腸摂取を優先的に促進する浸透促進剤とを含んでなり、
哺乳動物に経口投与された場合に該キレートの少なくとも１０％のＤＴＰＡキレートバイオアベイラビリティを有する、経口放射性核種キレート化療法のための組成物。
【請求項２】
該腸浸透促進剤が、中鎖グリセリド、マクロゴールグリセリド、ポリグリコールおよびそれらの混合物よりなる群から選ばれる、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
該腸浸透促進剤が該組成物に対して４０重量％未満含まれる、請求項１記載の組成物。
【請求項４】
該腸浸透促進剤がカプリロカプロイルマクロゴール−８−グリセリドである、請求項１記載の組成物。
【請求項５】
該ＤＴＰＡキレートが該組成物に対して少なくとも２０重量％含まれる、請求項１記載の組成物。
【請求項６】
腸溶コーティングされた単位剤型である、請求項１記載の組成物。
【請求項７】
Ｐ糖タンパク質（Ｐｇｐ）インヒビターを更に含む、請求項１記載の組成物。
【請求項８】
カプセル内に含有された押出ビーズの形態である、請求項１記載の組成物。
【請求項９】
該組成物が、カプセル内に含有された押出ビーズの形態であり、該ビーズが０．１〜１ｍｍの平均直径を有する、請求項１記載の組成物。
【請求項１０】
カプセル内に含有されたチキソトロピー形態である、請求項１記載の組成物。
【請求項１１】
該ＤＴＰＡキレートバイオアベイラビリティが少なくとも２０％である、請求項１記載の組成物。
【請求項１２】
少なくとも２５０ｍｇの該ＤＴＰＡキレートを含む単位剤型である、請求項１記載の組成物。
【請求項１３】
該組成物が、少なくとも２５０ｍｇの該ＤＴＰＡキレートを含む単位剤型であり、該ＤＴＰＡキレートバイオアベイラビリティが少なくとも２５％である、請求項１記載の組成物。
【請求項１４】
哺乳動物において放射性核種をキレート化するための方法であって、請求項１記載の組成物を該哺乳動物に投与することを含んでなる方法。
【請求項１５】
該腸浸透促進剤が、中鎖グリセリド、マクロゴールグリセリド、ポリグリコールおよびそれらの混合物よりなる群から選ばれる、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
該ＤＴＰＡキレートが該組成物に対して少なくとも２０重量％含まれる、請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
該組成物が、腸溶コーティングされた単位剤型である、請求項１４記載の方法。
【請求項１８】
該投与段階の前に、該哺乳動物にＰｇｐインヒビターを投与する、請求項１４記載の方法。
【請求項１９】
請求項１記載の組成物を含んでなるキット。
【請求項２０】
Ｐｇｐインヒビターを更に含む、請求項１７記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の分野は、ジエチレントリアミン五酢酸カルシウム（カルシウムジエチレントリアミンペンタアセタート）（Ｃａ−ＤＴＰＡ）およびジエチレントリアミン五酢酸亜鉛（亜鉛ジエチレントリアミンペンタアセタート）（Ｚｎ−ＤＴＰＡ）による放射性核種汚染の治療である。
【背景技術】
【０００２】
Ｃａ−ＤＴＰＡおよびＺｎ−ＤＴＰＡペンテタートは、プルトニウム、アメリシウムまたはキュリウムのような放射性核種での体内汚染の治療において有効であることが示されている。ＤＴＰＡは、カルシウムまたは亜鉛イオンを超ウラン元素と交換することにより、体内からのこれらの物質の排除の速度を増加させる。超ウラン−ＤＴＰＡ錯体は安定であり、尿中に排泄される。
【０００３】
静脈内投与または噴霧器による吸入のために適したＣａ−ＤＴＰＡおよびＺｎ−ＤＴＰＡの製剤が、超ウラン金属（Ｚ＞９２）のプルトニウム、アメリシウムおよびキュリウムでの既知の又は疑われる体内汚染の排除に関して、２００４年８月にＦＤＡにより承認された。
【０００４】
他の製剤（例えば、経口、吸入または経皮用）は注射剤より容易に投与されるであろう。しかし、ＤＴＰＡは、その親水性のため、これらの経路により投与された場合には十分には吸収されない。放射性核種のキレート化のためのＣａ−ＤＴＰＡおよびＺｎ−ＤＴＰＡの経口投与が記載されているが（Ｋｏｓｔｉａｌら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｂｉｏｌ（１９８７）５２：５０１−５０４；ＶｏＩｆら，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｒａｄｉａｔ  Ｂｉｏｌ（１９９９）７５：９２９−４１）；およびＤｕｒｂｉｎら，Ｒａｄｉａｔ  Ｐｒｏｔ  Ｄｏｓｉｍｅｔｒｙ（２００３）１０５：５０３−８）、Ｃａ−ＤＴＰＡまたはＺｎ−ＤＴＰＡの経口バイオアベイラビリティを向上させる製剤は報告されていない。
【０００５】
Ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｄ  ｏｆ  Ａｌｌｅｒｇｙ  ａｎｄ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ（ＮＩＡＩＤ）は、放射線の緊急事態の場合に一般公衆により使用される、全身性超ウラン化合物を分解するのに十分な血漿レベルをもたらす、ＤＴＰＡのプロドラッグ、代替製剤または代替運搬方法の概念証明（プルーフ・オブ・コンセプト）の発見および実証の促進にＮＩＡＩＤが関心を持っていることを示した声明（ＲＦＰ−ＮＩＨ−ＮＩＡＩＤ−ＤＡＩＴ−０５−４６“Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ＤＴＰＡ  ｆｏｒ  Ｒａｄｉｏｎｕｃｌｉｄｅ  Ｃｈｅｌａｔｉｏｎ”，２００５年４月２６日）を発表した。
【発明の開示】
【０００６】
発明の概要
本発明の１つの態様は、Ｚｎ−ＤＴＰＡおよびＣａ−ＤＴＰＡから選ばれるＤＴＰＡキレートと、該ＤＴＰＡキレートの空腸摂取を優先的に促進する浸透促進剤とを含んでなり、哺乳動物に経口投与された場合に該キレートの少なくとも１０％のＤＴＰＡキレートバイオアベイラビリティを有する、経口放射性核種キレート化療法のための組成物である。
【０００７】
特定の実施形態においては、該腸浸透促進剤は、中鎖グリセリド、マクロゴールグリセリド、ポリグリコールおよびそれらの混合物から選ばれ、該組成物に対して４０重量％未満含まれる。好ましい実施形態においては、腸浸透促進剤は、カプリロカプロイルマクロゴール−８−グリセリドを含む。該ＤＴＰＡキレートは、好ましくは、該組成物に対して少なくとも２０重量％含まれる。該組成物は、錠剤またはカプセル剤のような単位剤型であることが可能であり、所望により、腸溶コーティングを有しうる。好ましい実施形態においては、該ＤＴＰＡキレートのバイオアベイラビリティは少なくとも２０％である。特定の実施形態においては、該組成物は少なくとも２５０ｍｇの該ＤＴＰＡキレートを含む単位剤型であり、該ＤＴＰＡキレートのバイオアベイラビリティは少なくとも２５％である。該組成物は更に、Ｐ糖タンパク質（Ｐｇｐ）インヒビターを含みうる。
【０００８】
１つの実施形態においては、該組成物は、カプセル内に含有された押出ビーズの形態である。該ビーズは０．１〜１ｍｍの平均直径を有しうる。もう１つの実施形態においては、該組成物は、カプセル内に含有されたチキソトロピー形態である。
【０００９】
本発明のもう１つの態様は、哺乳動物において放射性核種をキレート化するための方法であって、Ｚｎ−ＤＴＰＡおよびＣａ−ＤＴＰＡから選ばれるＤＴＰＡキレートと、該ＤＴＰＡキレートの空腸摂取を優先的に促進する浸透促進剤とを含み、哺乳動物に経口投与された場合に該キレートの少なくとも１０％のＤＴＰＡキレートバイオアベイラビリティを有する組成物を該哺乳動物に投与することを含んでなる方法である。
【００１０】
本発明のもう１つの態様は、Ｚｎ−ＤＴＰＡおよびＣａ−ＤＴＰＡから選ばれるＤＴＰＡキレートと、該ＤＴＰＡキレートの空腸摂取を優先的に促進する浸透促進剤とを含み、哺乳動物に経口投与された場合に該キレートの少なくとも１０％のＤＴＰＡキレートバイオアベイラビリティを有する組成物を含んでなるキットである。ある実施形態においては、該キットは更に、Ｐｇｐインヒビターを含む。
【００１１】
発明の具体的な実施形態の詳細な説明
本発明は、経口放射性核種キレート化療法のための組成物、キットおよび方法を提供する。該組成物は、ＣａＣ１４Ｈ１８Ｎ３Ｏ１０の分子式を有するジエチレントリアミン五酢酸およびＺｎＣ１４Ｈ１８Ｎ３Ｏ１０の分子式を有するジエチレントリアミン五酢酸亜鉛から選ばれるＤＴＰＡキレートを含む。これらの化合物およびそれらの医薬上許容される塩は、本明細書においては、それぞれＣａ−ＤＴＰＡおよびＺｎ−ＤＴＰＡと称される。本明細書におけるＣａ／Ｚｎ−ＤＴＰＡに対する言及はＣａ−および／またはＺｎ−ＤＴＰＡに対する言及である。
【００１２】
該組成物は更に、経口投与後の該ＤＴＰＡキレートの摂取及びバイオアベイラビリティを促進する浸透促進剤を含む。空腸におけるＤＴＰＡキレートの吸収を最大にする促進剤が特に好ましい。多数の腸浸透促進剤およびそれらの優先的吸収部位が公知である（Ａｕｎｇｓｔら，Ｊ．Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ（２０００）８９：４２９−４４２を参照されたい）。また、浸透促進剤／薬物の組合せの優先的吸収部位は、チャンバー（ｃｈａｍｂｅｒ）法（例えば、Ｇｏｔｏｈら，Ｊ  Ｂｉｏｍｏｌ  Ｓｃｒｅｅｎ．（２００５）１０：５１７−５２３および後記実施例１を参照されたい）のような通常の方法を用いて決定されうる。好ましい促進剤は、中鎖グリセリド、マクロゴールグリセリド、ポリグリコール、脂肪酸のグリセロールエステル、脂肪酸のペジル化（ｐｅｇｙｌａｔｅｄ）アルコールエステル、グリセリルモノエステル、プロピレングリコールモノエステルおよびそれらの混合物から選ばれる。中鎖グリセリド（ＭＣＧ）は一般に、脂肪酸のモノグリセリドおよびジグリセリドを意味し、より短い又はより長い鎖の脂肪酸のモノグリセリドおよびジグリセリドだけでなく、トリグリセリドをも含みうる。好ましいＭＣＧの具体例には、グリセリルモノオレアート（オレイン酸アシル鎖）およびグリセリルモノリノレアート（リノール酸アシル鎖）が含まれる。好ましいマクロゴールグリセリドの具体例としては、ＧＥＬＵＣＩＲＥ  ４４／１４（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｐａｒａｍｕｓ，ＮＪ）として販売されているラウロイルマクロゴール−３２グリセリドおよびＬＡＢＲＡＳＯＬ（Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｐａｒａｍｕｓ，ＮＪ）として販売されているカプリロカプロイルマクロゴール−８グリセリドが挙げられる。
【００１３】
特定の実施形態、例えば、カプセル内に充填するための実施形態においては、該組成物は、好ましくは、チキソトロピー性である。すなわち、該組成物は、液体としてカプセル内に容易に充填可能であるが、静止中にカプセルから漏出しない組成物である。この実施形態は、チキソトロピー性マクロゴールグリセリドである促進剤を含む。特に好ましいそのような促進剤は、ｄ−α−トコフェリルポリエチレングリコール１０００スクシナート（ＴＰＧＳ）（Ｅａｓｔｍａｎ  Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｅ  ＴＰＧＳ，Ｅａｓｔｍａｎ，Ｋｉｎｇｓｐｏｒｔ，Ｔｅｎｎｅｓｓｅｅ）とカプリロカプロイルマクロゴール−８グリセリドとの混合物である。ＴＰＧＳは、ｄ−アルファ−トコフェリル酸スクシナートをポリエチレングリコール１０００でエステル化することにより製造される。もう１つの好ましい促進剤は、ＴＰＧＳと、脂肪酸でエステル化されたペジル化（ＰＥＧｙｌａｔｅｄ）ソルビタン（ソルビトールの誘導体）から誘導されたポリソルベートとの混合物である。
【００１４】
該組成物中の浸透促進剤は、有効量、好ましくは、最小有効量以上であるがその付近の量、好ましくは、該組成物に対して約８０重量％（ｗｔ．％）未満の量で与えられる。より好ましくは、腸浸透促進剤の量は６０、５０、４０または３０重量％未満である。該ＤＴＰＡキレートは、好ましくは、該組成物の少なくとも２０重量％を構成する。より好ましくは、該組成物の少なくとも３０、４０、５０、６０、７０または８０重量％を構成する。いくつかの実施形態においては、特に液体製剤（例えば、後記実施例５に記載する液体充填カプセル剤）の場合には、該組成物は該浸透促進剤および該ＤＴＰＡキレートより実質的になる。他の実施形態においては、該組成物は、例えば錠剤、ペレット剤、ビーズ（例えば、後記実施例６に記載する多粒子ビーズ）などへの製剤化を促進するための、追加的な賦形剤、結合剤などを含む。
【００１５】
腸上皮細胞は、該細胞から或る化合物を能動的に除去してそれらを血液から内腔への方向へ輸送する輸送系を発現する。本発明者らは、これらの輸送系がＣａ／Ｚｎ−ＤＴＰＡに対して有効であることを見出した。したがって、該組成物は更に、分泌輸送インヒビターを含みうる。特定の実施形態においては、該輸送インヒビターはＰｇｐインヒビター、例えばＴＰＧＳ、キニジン、ジゴキシンおよびベラパミルである。多数の他の適当なＰｇｐインヒビターがよく知られている（例えば、Ａｕｎｇｓｔ，前掲を参照されたい）。Ｐｇｐインヒビターは、ＤＴＰＡの経口用量の投与の前に一定の時間間隔（例えば、５、１０、１５、３０、６０分）で、前投与として液体または固体形態で投与されうる。あるいは、該Ｐｇｐインヒビターは該ＤＴＰＡキレートと共に製剤化されうる。１つのそのような製剤化においては、該Ｐｇｐインヒビター、ＤＴＰＡキレートおよび促進剤は、カプセル内に充填されうる均一混合物または溶液中で一緒にされる。もう１つの実施形態においては、該Ｐｇｐインヒビターは、該ＤＴＰＡキレートと促進剤とを含む固体／液体マトリックス中に固体として含まれる。更にもう１つの製剤においては、該ＤＴＰＡおよび促進剤は、外殻として存在するＰｇｐインヒビターの外鞘を伴うマトリックス中で製剤化される。ついで、ＤＴＰＡ／促進剤の内核およびＰｇｐインヒビターの外層を伴うカプセルを、標的部位への薬物の内核およびＰｇｐインヒビターの外被覆の両方の運搬を促進するために腸溶コーティングによりコーティングすることが可能である。
【００１６】
好ましい実施形態においては、該組成物は錠剤またはカプセル剤のような単位剤型として製剤化される。該剤型は腸溶コーティングされうる。腸溶コーティング製剤および方法は当技術分野でよく知られており、具体的な製剤および方法は実施例５および６に記載されている。各単位剤型は、典型的には、該組成物の１日量の一部分を含む。適当な投与量は、一般に、Ｃａ／Ｚｎ−ＤＴＰＡ静脈内製剤に関してＦＤＡにより承認された投与量に対応する。成人および青年のヒトの場合、１日量は生物利用可能（ｂｉｏａｖａｉｌａｂｌｅ）なＣａ／Ｚｎ−ＤＴＰＡ約１ｇｍである。１２歳未満の小児の場合、１日量は約１４ｍｇ／ｋｇ／日〜１ｇｍ／日である。一例として、該組成物が約３５％のＤＴＰＡキレートバイオアベイラビリティを有するよう製剤化された２７５ｍｇのＣａ／Ｚｎ−ＤＴＰＡを含有するカプセル剤は、成人に対する該組成物の１日量の約１０分の１を含む。好ましくは、単位剤型は、少なくとも２００、２２５、２５０、２７５、３００、３２５、３５０、３７５、４００、４５０または５００ｍｇのＣａ／Ｚｎ−ＤＴＰＡを含み、該剤型の残部は該促進剤および任意の追加的成分（例えば、賦形剤、Ｐｇｐインヒビターなど）を含み、ここで、該組成物は少なくとも１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％または４０％のＤＴＰＡキレートバイオアベイラビリティを有する。
【００１７】
好ましい実施形態においては、該組成物は、カプセル内に充填されうる押出ビーズとして製剤化される。浸透促進剤およびＤＴＰＡキレートに加えて、これらの組成物は、増粘剤、例えばシリカ（例えば、Ｃａｂｏｓｉｌ，Ｃａｂｏｔ  Ｃｏｒｐ．，Ｂｏｓｔｏｎ，ＭＡ）および／または重合体増粘剤（例えば、Ｍｅｔｈｏｃｅｌ，Ｄｏｗ  Ｃｏｒｐ，Ｍｉｄｌａｎｄ，ＭＩ）を含有する。押出ビーズの形態の医薬組成物の製造方法はよく知られている。典型的な製剤および方法は実施例６に記載されている。該ビーズは、典型的には０．１〜１．５ｍｍ、好ましくは約０．５〜１ｍｍの平均直径を有する。
【００１８】
該組成物は、哺乳動物に経口投与された場合の該ＤＴＰＡキレートのバイオアベイラビリティが少なくとも１０％、好ましくは少なくとも１５、２０、２５、３０または３５％となるよう製剤化される。経口バイオアベイラビリティは、ビーグル犬または同等のモデルを使用して評価され、この場合、計算式：ＢＡ＝ＡＵＣＰＯ×用量ｉｖ／ＡＵＣｉｖ×用量ＰＯ（式中、ＢＡ＝バイオアベイラビリティ、およびＡＵＣ＝血漿濃度−時間曲線下面積）を用いて、経口投与された組成物からの血漿Ｃａ／Ｚｎ−ＤＴＰＡのレベルを、静脈内（ｉ．ｖ．）投与後に得られたレベルと比較する。バイオアベイラビリティの研究は後記実施例２に詳細に記載されている。
【００１９】
前記組成物は、放射性核種汚染に曝露された哺乳動物に経口投与される。特定の実施形態においては、該哺乳動物はヒトである。他の実施形態においては、該哺乳動物は家畜動物（ウマ、ウシ、ブタなど）または同伴動物（例えば、イヌ、ネコなど）でありうる。ヒトの場合、有効な放射性核種キレート化のための吸収されるＣａ／Ｚｎ−ＤＴＰＡの１日量は約１ｇである。
【００２０】
ある実施形態においては、別個に製剤化されたＰｇｐインヒビターを該ＤＴＰＡキレート組成物の前またはそれと共に投与する。該組成物は、適切な投与に関する説明書が付属したキットとして提供されうる。例えば、該組成物はブリスター包装キットとして提供されることが可能であり、この場合、１以上の単位剤型がブリスター内に含まれる。該ブリスター包装は、１つのブリスターの隣または複数のブリスターの行もしくは列に、適切な投与の時機を示す書面を含有しうる。該キットは更に、別個に製剤化されたＰｇｐインヒビターを含有しうる。
【実施例１】
【００２１】
腸吸収のための浸透促進剤と他の添加剤との有効な組合せの決定
これらのインビトロ研究の主要目的は、腸の粘膜から漿膜側へのＤＴＰＡの最大輸送を達成する浸透促進剤／他の添加剤を含有する製剤を決定することであった。ＥａｓｙＭｏｕｎｔ  Ｕｓｓｉｎｇ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．，ＣＡ，Ｉｔｅｍ  ＃ＥＭ−ＣＳＹＳ−８）を使用して、ＤＴＰＡ（亜鉛／カルシウム）の粘膜から漿膜への吸収を、回収したラット腸部分および結腸越えに、インビトロで測定した。Ｕｓｓｉｎｇチャンバーは、２つの拡散チャンバー、温度制御のための加熱ブロック、気流調節およびガスリフト攪拌のためのニードル弁、ならびに経上皮電圧および通過電流を測定するためのＡｇ／ＡｇＣｌ電圧および電流よりなる。回収したラット小腸部分（空腸、十二指腸および回腸）およびラット結腸の代表的断片を、該チャンバーの間に配置されたスライダー上にマウントし、それらの断片を横切るＤＴＰＡ（亜鉛／カルシウム）輸送をモニターした。サンプル溶液のアリコートを３０分間隔で「漿膜」側から取り出し、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により分析した。種々の浸透促進剤の存在下のＤＴＰＡ（亜鉛／カルシウム）の粘膜から漿膜への輸送の変化を測定した。
【００２２】
Ｚｎ−ＤＴＰＡおよびＣａ−ＤＴＰＡを、予め決められた薬物濃度で、添加剤を伴って又は伴わないで、ＨＥＰＥＳバッファー（ＶＷＲ，Ｂｒｉｓｂａｎｅ，ＣＡ）に溶解した。粘膜および漿膜の基礎流体として、ＨＥＰＥＳバッファーを使用した。該実験を開始する前に、５ｍｌのＨＥＰＥＳバッファーをそれらの２つのチャンバー（粘膜および漿膜）のそれぞれに加え、２０分間平衡化させた。つぎに該粘膜バッファーを適当な被検製剤により置換し、該実験を開始した。アリコート（０．５ｍｌ）を漿膜側から集め、等量の新鮮なＨＥＰＥＳバッファー（生理的温度で維持されているもの）で置換した。漿膜側からのアリコート化サンプルをＨＰＬＣにより分析した。
【００２３】
インビトロ条件および回収したラット腸部分における予想されるばらつきのため、実験条件当たりに５回の重複実験を行った。種々の実験から得られたデータを比較するために、見掛け透過性係数（Ｐａｐｐ）を、
【００２４】
【数１】
2009526853.tif 000002
（式中、ｄＱ／ｄｔは受容区画における質量の線形出現速度であり、Ｃｏは供与区画における初期溶質濃度であり、Ａは表面積である）に従い計算した。Ｚｎ−ＤＴＰＡおよびＣａ−ＤＴＰＡの輸送に関するＰａｐｐ値を表１に示す。Ｐａｐｐ値が高くなればなるほど、透過特性は良くなる。Ｐａｐｐ値の類似性は２つのＤＴＰＡ化合物に関する類似挙動を示す。
【００２５】
【表１】
2009526853.tif 000003
【００２６】
ついで本発明者らは、Ｌａｂｒａｓｏｌ（ラブラゾール）の存在下および非存在下での空腸部分を通るＺｎ−ＤＴＰＡおよびＣａ−ＤＴＰＡの輸送を評価した。結果を表２に示す。
【００２７】
【表２】
2009526853.tif 000004
【００２８】
本発明者らのデータは、一定の促進剤レベルでの薬物量の増加が粘膜から漿膜へのＤＴＰＡの輸送を増加させたことを示している。
【００２９】
ついで、添加された促進剤の存在下および非存在下の、空腸部分を横切るＨＥＰＥＳバッファー中の１００ｍｇ／ｍｌ  ＤＴＰＡの輸送を試験した。結果を表３に示す。
【００３０】
【表３】
2009526853.tif 000005
【００３１】
表３に挙げた値に基づけば、最良の候補製剤は、２０％  Ｌａｂｒａｓｏｌ、５％  Ｔｗｅｅｎ  ８０＋５％  Ｌａｂｒａｓｏｌ、５％  ＴＰＧＳ＋５％  Ｌａｂｒａｓｏｌおよび２０％  胆汁塩を含有するＨＥＰＥＳバッファーであった。しかし、Ｔｗｅｅｎ  ８０は、その毒性のため、非常に低い濃度（１％未満）で使用される。胆汁塩は、浸透促進剤としては、より低い承認評価を有する。したがって、２０％  Ｌａｂｒａｓｏｌまたは５％  ＴＰＧＳ＋５％  Ｌａｂｒａｓｏｌを更なる研究のために選択した。
【実施例２】
【００３２】
雄および雌ビーグル犬における放射能標識ＤＴＰＡ（１４Ｃ）の単一用量投与後のバイオアベイラビリティ研究（ＳＲＩ研究番号Ｂ２２１−０６  ＆  Ｂ２２１Ｂ−０６）
この研究の目的は、単一用量の静脈内および経口投与後の雄および雌ビーグル犬における放射能標識ＤＴＰＡ（１４Ｃ）のバイオアベイラビリティを測定することであった。血漿における曝露を経時的に定量するためのトレーサーとして１４Ｃ−ＤＴＰＡを使用して、４頭のビーグル犬に〜１０ｍｇ／ｋｇ  Ｃａ−ＤＴＰＡを投与した。２頭の犬（雄１、雌１）には該薬物を静脈内経路により投与し、残りの２頭の犬（雄１、雌１）には、カプセル内に液体として充填された促進剤混合物中のＤＴＰＡを投与した。血液を採取し、血漿へと加工した。血漿中の全放射能を液体シンチレーション計数により測定した。
【００３３】
薬物動態学的パラメーターを表Ｘに示す。ここで、Ｃ０は時間０における血漿中濃度であり、Ｃｍａｘは最大血漿中濃度であり、ＡＵＣは血漿濃度対時間曲線下面積であり、Ｃｌは全クリアランスであり、ｔ１／２は排出相半減期であり、Ｆは経口バイオアベイラビリティである。
【００３４】
【表４】
2009526853.tif 000006
【００３５】
この研究において評価したカプセル剤に関する経口バイオアベイラビリティ（Ｆ）は１９．３％（雄犬）および１８．０％（雌犬）であった。排出の半減期は静脈内投与群における０．８時間から経口投与群における約１１時間まで及んだ。
【００３６】
経口バイオアベイラビリティに対する該製剤における修飾の効果を判定するために、雄および雌ビーグル犬において、Ｃａ−ＤＴＰＡの２つの追加的な経口製剤を研究した（ＳＲＩ研究Ｂ２２１Ｂ−０６）。投与した用量は１０ｍｇ／ｋｇ＋〜１００μＣｉ／ｋｇであった。１頭の雄および１頭の雌の犬に、４２．２２％  ＤＴＰＡ、２５．３３％  Ｌａｂｒａｓｏｌ（登録商標）、８．４４％  ＣＡＢ−Ｏ−ＳＩＬ  ＥＨ５、２４．０％  ＨＰＭＣ  Ｋ１１０Ｍおよび１７．１７％  水よりなるビーズ製剤中の該薬物を投与し、残りの雄および雌の犬に、２０％  Ｌａｂｒａｓｏｌ（登録商標）よりなる液体製剤中のＤＴＰＡを投与した。どちらの投与群においても、該製剤化薬物をサイズ「０」カプセルに加え、ついで密封し、投与まで保存した。
【００３７】
第１犬研究と比べて、経口投与後に血漿中薬物濃度が増加した。経口バイオアベイラビリティを含む、この研究において測定した薬物動態学的パラメーターを表５に要約する。該経口バイオアベイラビリティは、ビーズカプセル剤を使用した場合には２８．６％（雄）および３８．２％（雌）、ならびに液体カプセル剤では３０．３％（雄）および３８．３％（雌）であると示された。この研究においては、排出の半減期も、ビーズカプセル剤群においては約２２〜２７時間、そして液体カプセル群においては１６〜１８時間に延長した。
【００３８】
【表５】
2009526853.tif 000007
【００３９】
用量投与後２６４時間までに該用量の約９５〜９６％が排泄物中に回収された（データ非表示）。どちらの治療群においても、２４時間までに該用量の約７３〜７４％が糞便中に排泄され、この量は主に未吸収薬物を表している可能性がある。
【００４０】
これらの知見は、Ｌａｂｒａｓｏｌ（登録商標）を含有する製剤中のＤＴＰＡの経口バイオアベイラビリティが２５％を上回ることを証明している。
【実施例３】
【００４１】
雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける放射能標識ＤＴＰＡ（１４Ｃ）の液体用量投与後のバイオアベイラビリティ研究（ＳＲＩ研究番号Ｂ２３０−０６）
この研究の目的は、いくつかの異なる製剤の経口投与後の雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットにおける検出のために放射性１４Ｃ−ＤＴＰＡトレーサーを使用して、Ｃａ−ＤＴＰＡの経口アベイラビリティを測定することであった。該研究の結果を表６に示す。無菌水中のＣａ−ＤＴＰＡまたはＤＴＰＡ（遊離酸）の経口ガバージュの後、ＤＴＰＡの経口バイオアベイラビリティは、これらの２つの治療群においては約７％であると推定される。２０％  Ｌａｂｒａｓｏｌを伴う群において、最高の曲線下面積（ＡＵＣｏｒａｌ）および算出経口バイオアベイラビリティが得られた。例えば、群４は〜１２％のＤＴＰＡ経口バイオアベイラビリティを有していた。同様に２０％  Ｌａｂｒａｓｏｌ（＋キニジン前処理）中のＤＴＰＡを投与した群７では、平均バイオアベイラビリティは１０％であったが、この群は、その他の治療群で見られたものより大きな個体間変動を有していた。１匹のラット（＃１９）は、該研究における他のいずれよりも高い経口ＡＵＣを有していて、１９％のＤＴＰＡバイオアベイラビリティを示し、このことは、キニジンがＤＴＰＡの流出輸送の抑制において活性であったことを示している。
【００４２】
これらの液体製剤はラットの胃を通過したため、バイオアベイラビリティ測定値は、犬において既に得られているものより低かった。これらのインビボのデータは本発明者らのインビトロの結果と良く相関した。
【００４３】
【表６】
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【実施例４】
【００４４】
雄および雌ビーグル犬におけるＤＴＰＡの反復投与後の鉄の排泄（最終報告、ｐ．２７から）
この研究の目的は、鉄負荷犬からの尿中への鉄の排泄を促進する、ＤＴＰＡの経口製剤の効力を評価することであった。この研究においては、超ウラン元素による汚染に関する代替モデルとして鉄負荷犬を使用した。
【００４５】
１頭の雄および１頭の雌の犬よりなる２つの治療群を比較した。無菌塩類液中のＣａ−ＤＴＰＡの１０ｍｇ／ｋｇを静脈内経路により第１日に投与し、ついでＺｎ−ＤＴＰＡ（１０ｍｇ／ｋｇ、毎日）での４日間の治療を行った。該経口治療群には、第１日のＣａ−ＤＴＰＡおよび第２〜５日のＺｎ−ＤＴＰＡと共に、カプセル内の２０％  Ｌａｂｒａｓｏｌ（登録商標）中の１０ｍｇ／ｋｇをも投与した。以下の時点で、各犬から血液を採取した：投与前、ならびに第１日の投与の１、４、８および２４時間後、ならびに第２〜５日の投与の２４時間後。犬を該研究のために代謝檻（ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｃａｇｅ）内に維持し、第１日の投与の４、８および２４時間後ならびに第２〜５日の投与のそれぞれ２４時間後に尿を集めた。集めたサンプルをＰｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ  ＩＣＰ（Ｉｎｄｕｃｔｉｖｅｌｙ  Ｃｏｕｐｌｅｄ  Ｐｌａｓｍａ）ユニットにより鉄、カルシウムおよび亜鉛に関して分析した。
【００４６】
カルシウム（Ｃａ）、鉄（Ｆｅ）および亜鉛（Ｚｎ）に関して血漿の分析を行った。Ｚｎは該血漿サンプルのいずれにおいても検出されなかった。ＣａおよびＦｅは検出されたものの、ＤＴＰＡでの治療に関連していると思われる傾向を何ら示さなかった。
【００４７】
尿中のＣａレベルは該研究を通じて比較的高く、第１日のＣａ−ＤＴＰＡの投与との相関性を示さなかった。尿中のＺｎの排泄も研究第２〜５日のＺｎ−ＤＴＰＡの投与に相関していないようであった。ＣａおよびＺｎのどちらに関しても、４頭中３頭（１〜３）の犬は、類似した量を尿中に排泄したが、該経口治療群における雌である４番目の犬はＣａおよびＺｎの、より低い総排泄を示した。この４番目の犬はまた、より少量の尿を排泄し、このことは、それがその他の３頭の犬ほどは多く飲食していなかった可能性があることを示唆している。
【００４８】
これとは対照的に、尿中のＦｅの排泄はそれらの４頭の犬の間で著しく異なった。表７は、各採尿時点で、Ｆｅの排泄が、ＤＴＰＡを静脈内経路で投与した動物において、より高い傾向にあったことを示している。雄犬１（静脈内投与群）および雌犬４（経口投与群）では、尿中のＦｅの最高排泄の時点は４８時間であり、残りの２頭の犬における最高排泄は９６時間の時点で生じた。Ｆｅの総排泄は、雄犬においては、雌犬の場合より高く、静脈内経路により治療された動物においては、経口経路によるものと比べて高かった。それでも、ＤＴＰＡを経口投与された犬によるＦｅの排泄は、静脈内治療された動物により排泄された量の４０％（雄）および３４％（雌）において有意であった。
【００４９】
【表７】
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【実施例５】
【００５０】
Ｃａ／Ｚｎ−ＤＴＰＡ液体充填カプセル剤
この製剤においては、表８に示す量の薬物ＤＴＰＡおよびＬａｂｒａｓｏｌ（登録商標）を清潔なガラス瓶内で磁気攪拌装置で１５分間にわたり均一に混合し、ついで容積式ピペットを使用して、サイズ「０」Ｌｉｃａｐｓ（液体製剤用に設計された硬ゼラチンカプセル）内に移した。該製剤を連続的に攪拌しながら、６００ｍｇ±２０ｍｇの該製剤を各カプセル内に手動で移した。該製剤を加えた後、該カプセルを、コーティングするまでＺｉｐｌｏｃバッグ内で室温で保存した。
【００５１】
ついで、腸溶コーティングの前に、腸溶重合体の接着を最適化するために、Ｋｌｕｃｅｌ  ＥＦを使用して該薬物充填カプセルを基礎コーティングした。ヒドロキシプロピルセルロース（ＨＰＣ），Ｋｌｕｃｅｌ  ＥＦ等級を基礎コーティング剤として使用した。Ｅｒｗｅｋａパンコーターを使用した。９．０％  ｗ／ｗの量のＫｌｕｃｅｌ  ＥＦを秤量し、３分の２の水に加え、５０℃以上に加熱し、磁気攪拌装置を使用して６０分間混合した。ついで、残りの水を加え、該混合物を室温に冷却した。この溶液は、使用の２４時間前に調製した。該パンコーターにおける噴霧のために該コーティング溶液を準備したら、コーティングすべきカプセルを該パン内に充填し、最適化されたコーティングパラメーターに従いコーティングした。
【００５２】
該カプセルを予備コーティングまたは基礎コーティングした後、最適化されたパンコーティング法を用いて腸溶コーティング（腸溶重合体であるＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ  ３０Ｄ−５５）を施した。腸溶コーティング溶液を得るために、計算量のＥｕｄｒａｇｉｔ  Ｌ  ３０Ｄ−５５を水で希釈した。ついで３３％水溶液としてのクエン酸トリエチルおよびポリソルベート８０を、該混合物を磁気攪拌装置で攪拌しながら加えた。この分散液は、使用の２４時間前に調製した。該パンコーターにおける噴霧のために該コーティング溶液を準備したら、コーティングすべきカプセルを該パン内に充填し、最適化されたコーティングパラメーターに従いコーティングした。
【００５３】
【表８】
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【実施例６】
【００５４】
Ｃａ／Ｚｎ−ＤＴＰＡ多粒子ビーズ充填カプセル剤
押出球体化（Ｅｘｔｒｕｓｉｏｎ  Ｓｐｈｅｒｏｎｉｚａｔｉｏｎ）技術を用いることによりＤＴＰＡビーズ製剤を製造する、多粒子剤型を開発した。典型的な押出および球体化法は、ミキサー内で有効成分と賦形剤とを混合して顆粒化（造粒）することを含む。ついで該湿式造粒物質を押出して、小さな稠密ペレットを得る。該ペレットを、チャンバーの底の回転板よりなるスフェロナイザー（ｓｐｈｅｒｏｎｉｚｅｒ）内に移した。回転板上の該ペレットの回転運動はそれらを球体に変換する。ついでそれらを乾燥させる。この過程は、球体で耐久性のあるビーズ／顆粒を与える。
【００５５】
各成分の量およびプロセスパラメーターを表９に示す。該方法は、薬物とＣＡＢ−Ｏ−ＳＩＬ  ＥＨ５とを混合することを含むものであった。該薬物−ＣＡＢ−Ｏ−ＳＩＬ  ＥＨ５混合物に計算量のＬａｂｒａｓｏｌ（登録商標）を加え、大きな凝集物が該混合物中に残留しないことが保証されるよう５分ごとに１５分間混合しながら、吸着させた。ついでＨＰＭＣ  Ｋ１００Ｍを該薬物−Ｌａｂｒａｓｏｌ（登録商標）混合物に加え、実験規模の遊星形ミキサーで混合した。該押出球体化法のために、結合剤として水を使用した。実験規模の遊星形ミキサーを使用して、該薬物賦形剤混合物を水と均一に混合した。該混合物を、Ｍｕｌｔｉ  Ｇｒａｎｕｌａｔｏｒ  Ｍｏｄｅｌ  ＭＧ−５５（Ｅｘｔｒｕｄｅｒ，ＬＣＩ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ＮＣ）を使用して押出し、ついでＭａｒｕｍｅｒｉｚｅｒ  Ｍｏｄｅｌ  ＱＪ−２３０Ｔ（Ｓｐｈｅｒｏｎｉｚｅｒ，ＬＣＩ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，ＮＣ）を使用して球体化させて、薬物充填ビーズを得た。これらのビーズを熱風オーブン内で６０℃で乾燥させた。ついで該ビーズを、医薬篩を使用して篩別し、篩＃１８上に保持されたビーズを、半自動カプセル充填機を使用して不透明白色のサイズ「０」硬ゼラチンカプセル内に充填した。約４２０ｍｇ±２０ｍｇの該ビーズを各カプセル内に加えた。ついで該カプセルを、前記実施例に記載されている方法を用いてコーティングして保存した。
【００５６】
【表９】
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【実施例７】
【００５７】
促進安定性および溶解研究
前記実施例に記載されている液体およびビーズ製剤を安定性チャンバー内に配置し、外観、アッセイ、純度および溶解に関して、特定の時間間隔で分析した。
【００５８】
胃から腸へ移動する際に該経口薬物が遭遇する生理的条件を厳密に模倣するために、酸段階およびそれに続くバッファー段階の２段階で溶解を行った。溶解は、ＵＳＰ条件（温度：３７℃およびパドル速度１００ＲＰＭ）に従いパドルを使用することを含む標準的な方法を用いて行った。外部ヒーター（ＶａｎＫｅｌ  ＶＫ７５０Ｄ）を備えたＤｉｓｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｔｅｓｔｅｒ  Ｓｔａｔｉｏｎ，６容器ユニット（ＶａｎＫｅｌ  ７０００）を使用した。手動サンプル採取を行った。体積７５０ｍｌの溶解媒体（０．１Ｍ  塩酸）を該容器のそれぞれに加えた。カプセルに針金の錘を取り付け、該容器のそれぞれの中に１個のカプセルを落とした。１．５ｍｌのアリコートを特定の時点で取り出し、ＨＰＬＣにより分析した。２時間の終了時に、２５０ｍｌの０．２Ｍ  ＨＥＰＥＳ［４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸］バッファーを該容器のそれぞれに加えることにより、該酸溶解媒体溶液を、より高いｐＨのバッファー組成物と交換した。１．５Ｍ  水酸化ナトリウムを使用して、ｐＨを６．８に調節した。ｐＨ６．８での溶解を更に６時間継続した。合計８時間の溶解を該製剤のそれぞれに関して観察した。
【００５９】
該製剤の全ては、２時間続く「酸段階」溶解相において、それらの完全性を維持することが判明した。この分析は、腸溶コーティングが十分に達成され、最初の２時間の酸段階の全体にわたってカプセル殻の崩壊に耐えることを実証した。バッファー段階における溶解は「液体混合製剤」に関しては１００％完全であったが、「ビーズ混合物」製剤に関しては平均して約８０％完全であった。
【００６０】
「液体充填」カプセルは、４０℃±２℃／７５％相対湿度（ＲＨ）±５％ＲＨで２週間の保存の後に互いに固着し始めた。しかし、これらのカプセルは該酸段階において崩壊しなかったため、この相互固着は腸溶コーティングに影響を及ぼさなかった。「ビーズ充填」カプセルは固着を全く示さず、保存のために用いた条件に耐えた。該ビーズ製剤は商業的開発に最も有望であることが判明した。該製剤は冷凍を要さず、備蓄に最適である。
【国際調査報告】
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