(57)【要約】  本発明は、ノカルディア・ルブラ細胞壁骨格の使用、特に抗ＨＰＶ薬の調製におけるその新規の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗ＨＰＶ薬の調製におけるノカルディア・ルブラ細胞壁骨格の使用。
【請求項２】
前記抗ＨＰＶ薬が、治療的に有効な量のノカルディア・ルブラ細胞壁骨格および薬学的に許容可能なキャリアを含むことを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
前記キャリアが、賦形剤を含むことを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
前記賦形剤が、デキストランであることを特徴とする、請求項３に記載の使用。
【請求項５】
前記抗ＨＰＶ薬が、局所使用のための製剤に調製されることを特徴とする、請求項１に記載の使用。
【請求項６】
前記局所使用のための製剤が、軟膏、クリーム、膏薬、ゲル、ローション、チンキ、リニメント、油剤、パップ剤およびエアロゾルを包含することを特徴とする、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
前記局所使用のための製剤が、ローションまたはリニメントであることを特徴とする、請求項５に記載の使用。
【請求項８】
１ｍｌまたは１ｍｇの前記抗ＨＰＶ薬が、０．００１〜１ｍｇのノカルディア・ルブラ細胞壁骨格を含むことを特徴とする、請求項２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ノカルディア・ルブラ（Nocardia Rubra）細胞壁骨格の医学的な使用、特に、ヒト乳頭腫ウィルス（ＨＰＶ）に対する薬剤の調製におけるその新規の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒト乳頭腫ウィルス（ＨＰＶ）は皮膚および粘膜の複雑な扁平上皮にだけ宿るＤＮＡウィルスの一種であり、体外での培養は成功していない。ＨＰＶは、皮膚および粘膜の多くの良性の乳頭状腫瘍またはいぼを誘発し、そのいくつかは潜在的な発癌性を有する。
【０００３】
今日では、約１２０種のＨＰＶが同定されている。ウィルスは、その感染した身体の上皮部分に従って皮膚タイプおよび生殖器管タイプに分類することができる。その中で約３５種のＨＰＶは女性の生殖器管に感染し、そしてその中でも約２０種は腫瘍に関連する。様々なＨＰＶのタイプによる腫瘍を誘発する危険度に応じて、ＨＰＶを危険性の高いタイプと危険性の低いタイプに分けることができ、危険性の低いタイプは、例えばＨＰＶ６、１１、４２、４３、４４、ＣＰ８３０４などを含み、これらは、（子宮頸部上皮内新生物）ＣＩＮ−Ｉを含む生殖器管のコンジローマなどの良性病変を誘発する。危険性の高いタイプのＨＰＶは、ＨＰＶ１６、１８、３１、３３、３５、４５、５１、５２、５６、５８、５９、６８などを含み、これらはＣＩＮ−ＩＩ、ＣＩＮ−ＩＩＩおよび子宮頸癌を誘発し、特にＨＰＶ１６および１８についてはこの症例である。
【０００４】
ＨＰＶ感染症は、性交によって伝染しそして性生活に関連する最も一般的な感染症の１つである。当業者には、ＨＰＶ感染症は子宮頸癌の主な要因であると考えられている。ＨＰＶ感染症は人々の健康を著しく損ない、死をもたらすことさえある。
【０００５】
新たな感染症例は、世界中のすべての女性を基準として、毎年約１０％〜１５％であり得る。ＨＰＶ感染症は多くの国で非常に一般的である。頻繁に性交する若い女性の中での発生率が最も高く、感染の最も多い年齢は１８〜２８歳である。女性の大部分については、感染期間は短く、通常は８〜１０ヶ月である。しかしながら、それでも３５歳よりも上の女性の中には持続性感染の傾向がある人が１０％〜１５％存在する。これらの持続性感染の女性は、さらに子宮頸癌に発達する危険性の高い人々である。
【０００６】
関連の報告によると、ＨＰＶ感染者は世界中で毎年６億３千万人である。そのうち２千万人はアメリカ合衆国内にいる。さらに、毎年アメリカ国内で５５０万人よりも多くの人が新たにＨＰＶ感染症と診断されており、１００万を超えるものが生殖器のいぼであるものと示される。ＨＰＶ感染症は公衆衛生問題となっている。
【０００７】
ＷＨＯにより作成された統計資料によると、子宮頸癌による死亡は、世界の女性の癌による死亡の中で第２位であり、いくつかの発展途上国では実に第１位である。毎年５０万を超える子宮頸癌の症例が生じており、約２０万の人々が子宮頸癌で死亡しており、そのうち８０％が発展途上国におけるものである。子宮頸癌は、発展途上国では女性の悪性腫瘍の２４％を占め、先進国では７％を占める。２１世紀、子宮頸癌は世界中の女性の健康を損なう最も深刻な疾患の１つになっている。
【０００８】
不十分な統計資料によると、中国では子宮頸癌を患っている女性が約１３万８千人おり、毎年、約５万人の女性が子宮頸癌で死亡しており、これは世界中で生じている子宮頸癌の症例の総数を基準として２５％である。しかしながら、医師にとって苦痛であるのは、早期のスクリーニング法が不完全であり、そしてさらに子宮頸癌を新たに患っている患者が若年化しているため、貴重な早期の治療期間が見逃された場合に、多くの患者を遅い時期にしか診断できないことである。
【０００９】
［ＨＰＶ感染症の予防および治療］
この疾患を予防するための特別な方法は存在しない。通常、ＨＰＶの伝染タイプに応じて伝染方法を遮断することが有効である。
【００１０】
ＨＰＶによって誘発される小さいいぼは自然に鎮静し得るので、治療は必要とされない。
【００１１】
しかしながら、尖圭コンジローマを治療するためには、その損傷の規模が大きいので手術を行うことが必要である。一方、この方法は通常再発率が高い。電気焼灼法またはレーザー療法などのような理学療法が適用されてもよい。
【００１２】
１つの側面では、ＨＰＶ感染症を治すための有効な方法は存在せず、子宮頸癌を治すための有効な薬剤も存在しないが、他の側面では、子宮頸癌はその病因が既知であり、そのスクリーニング法が完全である最初の癌である。従って、一般的なスクリーニングによって早期の診断および早期の治療を実現する可能性が極めて高い。子宮頸癌は人類によって治される最初の癌になるかもしれない。
【００１３】
さらに、多くの国では、子宮頸癌を予防および治療するために主として「ワクチン」が適用される。ワクチンを用いることによって、特に、体の強い免疫反応を刺激するための特別の組み合わせの免疫ワクチンを用いることによって、手術後に残存するＨＰＶ感染および癌細胞を除去することが可能である。
【００１４】
今日では、世界中でＨＰＶウィルスを治療または予防するために使用されるワクチンは、以下のことを含む。
【００１５】
１．予防ワクチンは、ＨＰＶの主要なカプシドタンパク質Ｌ１および微量のタンパク質Ｌ２であるＨＰＶ予防ワクチンの標的抗原として使用されるウィルス様顆粒ワクチンである。Ｌ１およびＬ２の発現タンパク質は自己組織化して、ＨＰＶのＤＮＡを含有することなく特別な構造およびエピトープにおいて天然ウィルス顆粒と類似のウィルス様顆粒を形成することができるので、多数の動物実験を実行することによって良好な免疫効果が達成されている。臨床試験Ｉ／ＩＩは承認されており、本出願人はヨーロッパにおいて試験ＩＩＩ／ＩＶを実施する計画をしている。
【００１６】
２．予防および治療活性を有するワクチンはキメラウィルス様顆粒であり、Ｌ１カプシドタンパク質およびＥ７ポリペプチドによって作成された予防および治療活性を有するＥ７キメラウィルス顆粒である。キメラウィルス顆粒は中和抗体の産生を刺激するだけでなく、体内でより強力なＥ７特異性ＣＴＬ反応および抗腫瘍活性を誘発することもできる。現在、ＨＰＶ１６型Ｌ１、Ｌ２およびＥ７標的抗原を含むキメラウィルス顆粒ワクチンの１つの種類は、臨床ファージＩ試験において試験され得る。
【００１７】
３．治療ワクチンの１つの種類は、ヒト天然痘を殺すためのワクシニアウィルスとして使用され、ヒトによって適用された長く大規模な接種の歴史がある最も一般的なウィルスキャリアであるワクシニアキャリアワクチンである。子宮頸癌治療についての臨床試験Ｉは、組換えたワクシニアキャリアワクチンおよびＨＰＶ１６およびＨＰＶ１８を発現するＥ６、Ｅ７タンパク質を用いることによって英国で実行された。悪影響はまったく観察されていない。何人かの試験患者において特別な抗体を検出することができ、互いに異なるＣＴＬ反応およびサイトカインは癌のファージに関連し得る。欠点は、再免疫化の阻害である。
【００１８】
４．ポリペプチドワクチンも治療ワクチンの一種である。抗原についての研究において、ＣＴＬによって認識されるエピトープが決定され、これはポリペプチドワクチンを開発するための機会を提供する。そのため、免疫者に対してＨＰＶ１６型Ｅ６またはＥ７ポリペプチドを用いることによって腫瘍特異性ＣＴＬの産生を高めることが可能である。ＨＰＶ関連腫瘍に抵抗するためにＨＰＶ１６型Ｅ７ポリペプチドワクチンを用いる臨床実験は臨床試験Ｉ／ＩＩにおけるものであり、明らかな悪影響はまったく観察されていない。異なる遺伝背景を有する人は、ＨＬＡと一致する、異なるポリペプチドワクチンを使用するべきである。
【００１９】
５．ＤＮＡワクチンも治療ワクチンの一種である。ＤＮＡワクチンの機能は目的の遺伝子を有する発現プラスミドを体内に導くことであり、生体内で抗原を発現することによって特別な免疫反応を引き起こす。現在のところ、ＨＰＶを治療するためのＤＮＡワクチンの遺伝子は、ＨＰＶ１６型Ｅ７遺伝子である。筋肉注射によるこの種類のワクチンの作用は、臨床Ｉ／ＩＩ相試験におけるものである。体内におけるＤＮＡワクチンの弱い免疫活性および安全性の問題は注意されるべきである。
【００２０】
中国におけるＨＰＶワクチンについての研究のために、予防ワクチンの面では、人々は、昆虫細胞で発現されたＨＰＶ１６型Ｌ１およびＬ１／Ｌ２組換え桿状ウィルス菌株の構築と、電子顕微鏡の下でのウィルス顆粒の形成の観察と、Ｌ１／Ｌ２発現による組換えコピーおよび非コピー型ポックスウィルスワクチン菌株の成功した構築とを終えた。治療ワクチン研究の面では、人々は、ＨＰＶ１６Ｅ６／Ｅ７タンパク質を発現する組換えコピー型および非コピー型ポックスウィルスワクチン菌株を構築した。
【００２１】
一言で言うと、ワクチンによるＨＰＶ感染症および子宮頸癌の治療が所望されており、そして有望である。しかしながら、臨床的な使用により適用されるには長期間を要するであろう。子宮頸癌を引き起こすＨＰＶウィルスには多くのタイプが含まれるが、現在の研究はＨＰＶ１６型のみに集中している。使用にはさらにいくらかの制限があり、接種は患者の年齢によって制限される。従って、疾患を治すために、より優れたより安全な薬剤を調製することと、よりすぐれた治療方法とが求められている。
【００２２】
ノカルディア・ルブラ細胞壁骨格剤は、当該技術分野においてよく知られた薬剤である。従来技術では、ノカルディア・ルブラ細胞壁骨格剤は、カンジダ・アルビカンス（Candida albicans）によって引き起こされる感染症の治療などの抗真菌治療のために使用されている。あるいは、子宮頸部侵食の治療において、そして抗単純ヘルペスおよび抗帯状疱疹などのためにも使用されている。しかしながら、ＨＰＶ感染症の治療においてこの薬剤を使用することについての報告は全く存在しない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
本発明の目的は、ＨＰＶ感染症を治療するためのノカルディア・ルブラ細胞壁骨格および薬学的に許容可能なキャリアを含む薬剤の一種を提供することである。特に、本発明は、ＨＰＶ感染症に対する薬剤の調製におけるノカルディア・ルブラ細胞壁骨格の使用を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２４】
ＨＰＶ感染症に対する前記薬剤は、活性剤としてのノカルディア・ルブラ細胞壁骨格と、薬学的に許容可能なキャリアとを含む。
【００２５】
キャリアは、賦形剤、好ましくはデキストランを含む。
【００２６】
本発明の薬剤は、軟膏、クリーム、膏薬、ゲル、ローション、チンキ、リニメント、油剤、パップ剤およびエアロゾルを含む局所製剤である。ローション、チンキおよびリニメントが好ましい。
【００２７】
１ｍｌまたは１ｍｇの薬剤は、０．００１〜１ｍｇのノカルディア・ルブラ細胞壁骨格を含む。
【００２８】
ＨＰＶ感染症を治療するためのノカルディア・ルブラ製剤の薬理学的な機構は科学的である。それは、ウィルスの病因を目標とするだけでなく、ノカルディア・ルブラ製剤の免疫調節特性にも適切である。そのため、ノカルディア・ルブラ製剤はＨＰＶ感染を除去する活性を有する。
【００２９】
ＨＰＶに感染した患者の中で、患者のほとんどは特定の時間が経つと自己免疫能力によってＨＰＶ感染症を克服することができる。しかしながら中にはその自己免疫能力のために感染症を克服できない患者もおり、従ってこうした患者はさらに深刻な疾患に発達し得る長期間のＨＰＶ感染症を患っている。明らかに、弱いまたは強い自己免疫能力が重要な要因である。あるいは、言い換えると、人が免疫能力を調節できるか否かがＨＰＶを克服するための鍵である。
【００３０】
長年の研究によると、ノカルディア・ルブラ細胞壁骨格製剤は、特に皮膚および粘膜系において明らかに増強された免疫活性を有する非特異的な免疫調節剤であることが証明されている。
【００３１】
ノカルディア・ルブラ細胞壁骨格製剤は、病変に適用された後、体の免疫系を急速に活性化して、多量のマクロファージおよびＮＫ細胞を損傷領域に集め、さらにマクロファージおよびＮＫ細胞が病的な状態にある細胞を殺して除去する能力を増強することができる。さらに、製剤は、ウィルスに感染した細胞を特異的に殺して除去することができるＣＴＬおよび多くのサイトカインの産生、ならびに体液の免疫能力の明らかな増強を誘発することもできる。
【００３２】
ＣＴＬの有効な活性化は、ＨＰＶ感染の除去およびＨＰＶ感染症によって引き起こされる扁平上皮傷害の治療において非常に重要な役割を果たすことが研究されている。
【００３３】
ＣＩＮの変性は、コピーされたＨＰＶ再感染細胞を阻害し、ウィルス負荷を低減し、さらにＨＰＶ関連の子宮頸部病変によって生じた損傷の発達を阻害することができる抗ＨＰＶ１６中和抗体の存在に直接関連する。
【００３４】
いくつかの研究報告から、子宮頸癌の約８７％は移行帯において生じる。陰性になったＨＰＶ患者におけるランゲルハンス細胞の量は、ＨＰＶ陽性患者よりも多い。従って、移行帯におけるランゲルハンス細胞の量はＨＰＶ感染症の程度に影響を及ぼし、ノカルディア・ルブラ細胞壁骨格は、ランゲルハンス細胞の増大および活性化に効果的である。
【００３５】
ノカルディア・ルブラ細胞壁骨格は、ウィルスを単独で直接殺して除去する活性を有さないが、ウィルスを殺して除去するための免疫力を増強するその機能は正確および科学的である。このような間接的な免疫調節によって誘発される作用機構は、さらに、ノカルディア・ルブラ製剤の安全性を示す。
【００３６】
本発明において使用される方法のように、ＨＰＶウィルスに対するノカルディア・ルブラ細胞壁骨格の効果が決定される。
【００３７】
この分野におけるＨＰＶの検出方法は、一般に、以下の通りであることが分かっている。
【００３８】
１．細胞診スメア検出
この方法はＰａｐ染色検出またはスメアリング検出とも呼ばれ、子宮頸部の分泌物を採取し、それをガラス上になすりつけ、そして顕微鏡下で観察して、空胞細胞または角質化細胞を発見することを含み、検出可能率は７０〜７６％である。
【００３９】
２．Ｔｈｉｎｐｒｅｐの細胞診検出（ＴＣＴ）
この方法は、特別なブラシを用いて子宮頸部からサンプルを採取し、次に細胞保存溶液を用いてサンプルから不純物を分離し、ＨＰＶウィルスおよびその型を決定するために極端に薄くて透明なスメアを形成することを含む。この方法はＴＣＴとも呼ばれ、検出可能率は７０〜９５％である。
【００４０】
３．免疫組織化学検出
ＨＰＶ免疫化動物において、人々は、ウィルス抗原を証明するためのウィルスタンパク質のＰＡＰ法においてポリクローナル抗体に従ってＨＰＶ抗原を発見することを望む。ＨＰＶタンパク質が陽性の場合、上皮細胞において弱い陽性反応を見ることができ、空胞細胞核内に見られる茶色の顆粒は陽性を意味する。しかしながら、検出率は４０〜６０％と低く、感度も低く、型を検出することができない。
【００４１】
４．ＤＮＡによるＨＰＶウィルスの検出
（１）ポリメラーゼ連鎖反応ＰＣＲ
子宮頸部からの分泌物は、スクレーパーまたはＮＳを浸したコットンスティックを用いて得られ、次に遠心分離および洗浄ステップの後にＨＰＶのＤＮＡが得られる。次に、ＰＣＲ増幅およびゲル電気泳動法が行われて、結果を得て、これをサンプルと比較して診断を行う。この方法は簡単ではあるが、ウィルスが死んでいるか否かが分からないとオリエンテーションのために使用することができない。
【００４２】
（２）ＤＮＡハイブリダイゼーションＰＣＫ
これは、ＨＰＶ−ＤＮＡハイブリダイゼーション、ＣＰ−１４免疫ハイブリダイゼーション法である。３つよりも多い陽性の蛍光体ドットが４００倍蛍光顕微鏡下で観察される。核酸ハイブリダイゼーションは、ＨＰＶ−ＤＮＡの配列を決定するために使用することができ、ＰＣＲは特異的なＨＰＶ−ＤＮＡ増幅ゾーンを決定するために使用することができる。しかしながら、この方法は複雑で高価であり、特別な装置および条件を必要とする。
【００４３】
本発明は、外用、注射および上皮注射によってＨＰＶ感染症を治療するためにノカルディア・ルブラ細胞壁骨格製剤を適用する。様々な病状に対して様々な治療期間が適用され、良好な結果が得られる。主要な実験の後で、薬剤は危険性の高いＨＰＶ感染症および危険性の低いＨＰＶ感染症の両方に対して有効である。
【００４４】
承認されているように、ノカルディア・ルブラ細胞壁骨格製剤は、ＨＰＶ感染症を有効に治療するため、さらに子宮頸癌を予防するために使用することができる。本発明は、ＨＰＶウィルスによって誘発される性病を治療するための新規の方法を提供し、子宮頸癌を患っている人々に希望をもたらす。
【００４５】
本発明は、ＨＰＶ感染症が子宮頸癌を誘発する重要な要因であるという観点に基づく。ＨＰＶウィルスに抵抗するためにノカルディア・ルブラ細胞壁骨格製剤を用いて多くの実験が実行され、抗ＨＰＶ感染症のために一連の治療方法が良好な結果と共に決定され、従って抗ＨＰＶ感染症の新しい方法が得られる。
【００４６】
抗ＨＰＶ感染症のためにノカルディア・ルブラ細胞壁骨格製剤を用いることの利点としては、以下のものが挙げられる。
【００４７】
１．良好な安全性：治療の間、悪影響は観察されず、不快感も報告されていない。
【００４８】
２．良好な適合性：局所用途は、体の全身反応を回避するように局所的な病気に向けたものである。
【００４９】
３．強力な妥当性：病変は皮膚および粘膜において生じ、これらの領域に適用されると薬剤は良好な免疫賦活薬であり、従って薬剤は強力な妥当性を示す。
【００５０】
４．非特異性：本発明の方法を用いて全ての型のＨＰＶ感染症を治療することによって、良好な活性が観察される。
【００５１】
５．良好な効率：ＨＰＶ感染症の有効率は７２．７％であり、治癒率は４５．５％である。
【００５２】
６．使用および普及が容易であること：治療において使い捨ての医療器具だけが必要とされる。
【００５３】
７．できるだけ早く治療すること：方法は早期発見および早期治療という子宮頸癌治療の原則に従う。
【００５４】
８．予防：抗ＨＰＶ感染症は最初にすべきことであり、予防が治療よりも重要であるという原則を反映する。
【実施例】
【００５５】
以下の実施例において、ＨＰＶ感染症を決定するために上記で教示した方法による患者の診断が行われ、次に、「ナイクジャー（Nikejar）」と呼ばれるノカルディア・ルブラ細胞壁骨格製剤の市販の製品は、直接病変に外部塗布することによってＨＰＶに感染した被験者に適用されるか、または損傷部分に注射されるか、または標的部分へ上皮注射され、少量の製剤による多数の部分の注射も可能である。「ナイクジャー」は、ノカルディア・ルブラ細胞壁骨格剤または製剤である（シェンヤン  サン  ベル  コム  バイオファーマスティカル  カンパニー  リミテッドにより製造）。
【００５６】
２０日間の総合的な治療が１回の治療サイクルと考えられる。月経中の女性は薬剤を使用すべきでない。通常、軽度の感染症は１回の治療サイクル後に治癒され、中程度の感染症は２回の治療サイクル後に陰性になり、重度の感染症は３回の治療サイクルの後に治癒され得る。非常に重症の患者については、必要な場合には、薬剤と組み合わせて手術も必要とされる。
【００５７】
ＨＰＶ感染症についての臨床実験は以下の通りである。被験者は、危険性の低いＨＰＶ感染症または危険性の高いＨＰＶ感染症を患っている２６〜４６歳のＨＰＶ感染女性である。この年齢期の全ての被験者または患者は感染している危険性が高く、特に、３０歳よりも上の被験者は自分で回復するのは困難である。試験グループの投与時間および間隔時間は少し異なる。通常、最初の投与は月経が終了したときに開始され、患者は２回目の月経が終了したときに再検査される。治療中の性生活は必要とされず、あるいは不可避である場合には、性交の相手はコンドームを使用すべきである。対照グループは観察および検出以外には何も治療されない。試験グループの中の１１人の患者は治療の終了まで続け、対照グループの中の５つの症例は終了まで続ける。結果は、以下の通りである。
【００５８】
試験グループ：
（１）ＨＰＶ感染症を治療するために本発明の薬剤を使用した１１の症例の中で、５つの症例は陰性になり、３つの症例は型Ｉの感染症を低減し、そして３つの症例は変化しなかった。
【００５９】
（２）試験グループの変化のなかった３つの症例については、感染が深刻であり、適用時間が短く、そして投与時間が少なかったことが理由かもしれない。薬剤の使用を継続すれば、効果は良好であろう。
【００６０】
（３）試験グループについての統計資料：
治癒率：４５．５％、有効率：７２．７％、ＨＰＶ６、１１、１６、３１、５６、５８および５９を含む７つの型が陰性になった。危険性の高い患者は５症例、グループの患者全体を基準として７１．４％であり、危険性の低い患者は２症例、グループの患者全体を基準として２８．６％であった。
【００６１】
（４）Ｎｏ．００３の症例で発見された新しいウィルスは新型の感染症であり得る。
【００６２】
対照グループ：
（１）対照グループに関しては、観察および記録以外には何も行われなかった。
【００６３】
（２）対照グループの検出方法は、試験グループの方法と同じであった。
【００６４】
（３）対照グループの患者の年齢は、試験グループの年齢と同じであり、いくらか年上の患者も含んでいた。
【００６５】
（４）治療期間中、対照グループから選択した５症例についてＨＰＶ陽性は変化しなかった。
【００６６】
試験グループの患者を治療するため、および対照グループの患者を治療するための「ナイクジャー」についての試験結果は、それぞれ表１および表２に示される。
【００６７】
【表１】
2009508883.tif 000002
【００６８】
【表２】
2009508883.tif 000003
【国際調査報告】
2009508883.tif 000004
2009508883.tif 000005
2009508883.tif 000006
2009508883.tif 000007
2009508883.tif 000008
2009508883.tif 000009