(57)【要約】  式（Ｉ）の種々の化合物が、与えられている。また、上の化合物を含んでいる複数の医薬組成物が、与えられている。加え、ある１哺乳類におけるマクロファージ転移阻害因子（ＭＩＦ）活性を阻害していくとの複数の方法が、与えられており、ある１哺乳類における炎症を処置していくかもしくは防いでいくとの複数の方法のようである。更に、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）および／または内毒素ショックを持っているある１哺乳類を処置していくとの複数の方法が、与えられている。また、自己免疫疾患を持っているある１哺乳類を処置していくとの複数の方法、および、ある１腫瘍を持っているある１哺乳類を処置していくとの複数の方法が、与えられている。    【化１】2009530401.tif 000008
2009530401.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2009530401.tif 000007
式中：Ｒ１が、ある１アルキル、置換アルキル、ある１シクロアルキル、置換シクロアルキル、複素環基、置換複素環基、ある１アリール、置換アリール、ある１ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヒドロキシ、ある１アルコキシ、ある１アリールオキシ、オキソ、ある１アミノ、ある１ハロゲン、ホルミル、ある１アシル、カルボキシ、ある１カルボキシアルキル、ある１カルボキシアリール、ある１アミド、カルバモイル、グアニジノ、ウレイド、アミジノ、メルカプト、スルフィニル、スルホニル、もしくはスルホンアミドであり；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５が、独立に、ある１ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ2、−ＮＯ2、−ＯＲ６、もしくは−Ｈであり、式中、Ｒ６が、直鎖もしくは分岐Ｃ1〜Ｃ6アルキルである、化合物。
【請求項２】
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５の１つだけが、Ｈでない、請求項１の化合物。
【請求項３】
Ｒ２が、弗素もしくはＨである、請求項２の化合物。
【請求項４】
Ｒ２だけが、Ｈでない、請求項２の化合物。
【請求項５】
Ｒ２が、ハロゲンである、請求項４の化合物。
【請求項６】
Ｒ２が、弗素である、請求項４の化合物。
【請求項７】
Ｒ１が、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｔＢｕ、ＣＯＯＣＨ2Ｐｈ、ＣＯＯＣＨ2ＰｈＯＭｅ、ＣＯＰｈ、ＳＯ2Ｐｈ、Ｍｅ、Ｐｈ、ＰｈＯＭｅ、ＣＯＯｔＢｕ、Ｐｈ、もしくはＰｈＯＭｅであり、式中、Ｍｅが、ＣＨ3であり、Ｐｈが、フェニルであり、そしてＢｕが、ブチルである、請求項１の化合物。
【請求項８】
Ｒ１が、ＣＯＯｔＢｕ、Ｐｈ、もしくはＰｈＯＭｅである、請求項７の化合物。
【請求項９】
前記化合物が、表１および表２の化合物４〜９および化合物１１〜１９のいずれか１種である、請求項１の化合物。
【請求項１０】
前記化合物が、表１の化合物５、６、７、８、９、もしくは１９、または、表２の化合物１３、１４、１５、もしくは１８のいずれか１種である、請求項１の化合物。
【請求項１１】
前記化合物が、表１の化合物５である、請求項１の化合物。
【請求項１２】
前記化合物が、表１の化合物６である、請求項１の化合物。
【請求項１３】
前記化合物が、表１の化合物７である、請求項１の化合物。
【請求項１４】
前記化合物が、表１の化合物８である、請求項１の化合物。
【請求項１５】
前記化合物が、表１の化合物９である、請求項１の化合物。
【請求項１６】
前記化合物が、表１の化合物１９である、請求項１の化合物。
【請求項１７】
前記化合物が、表２の化合物１３である、請求項１の化合物。
【請求項１８】
前記化合物が、表２の化合物１４である、請求項１の化合物。
【請求項１９】
前記化合物が、表２の化合物１５である、請求項１の化合物。
【請求項２０】
前記化合物が、表２の化合物１８である、請求項１の化合物。
【請求項２１】
医薬として許容可能な担体中、請求項１〜２０のいずれか１項の化合物、もしくは、この医薬として許容可能な塩を含む、医薬組成物。
【請求項２２】
哺乳類におけるマクロファージ転移阻害因子（ＭＩＦ）活性を阻害する方法であって、当該哺乳類におけるＭＩＦ活性を阻害するに有効な量における、請求項２１の医薬組成物を当該哺乳類に投与することを含む、方法。
【請求項２３】
前記哺乳類が、ヒトである、請求項２２の方法。
【請求項２４】
前記哺乳類が、ＭＩＦにより少なくとも一部媒介される炎症サイトカインカスケードを含む病状を持つか、もしくは、これに関するリスクにある、請求項２２の方法。
【請求項２５】
前記病状が、増殖脈管疾患、急性呼吸困難症候群、サイトカイン媒介毒性、乾癬、インターロイキン−２毒性、虫垂炎、消化潰瘍、胃潰瘍、および十二指腸潰瘍、腹膜炎、膵炎、潰瘍結腸炎、偽膜結腸炎、急性結腸炎、および虚血結腸炎、憩室炎、喉頭蓋炎、無弛緩症、胆管炎、胆嚢炎、肝炎、炎症腸疾患、クローン病、腸管炎、ホウィップル病、喘息、アレルギー、アナフィラキシーショック、免疫複合病、臓器虚血、再灌流傷害、臓器壊死、枯草熱、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、内毒素ショック、悪液質（カケクシア）、超高熱、好酸肉芽腫、肉芽腫症、類肉腫症、敗血症流産、副睾丸炎、膣炎、前立腺炎、尿道炎、気管支炎、気腫、鼻炎、嚢胞線維症、肺炎、肺胞炎、細気管支炎、咽頭炎、胸膜炎、副鼻腔炎、インフルエンザ、呼吸多核ウィルス感染、ヘルペス感染、ＨＩＶ感染、Ｂ型肝炎ウィルス感染、Ｃ型肝炎ウィルス感染、伝搬菌血、デング熱、カンジダ症、マラリア、糸状虫症、アメーバ症、包虫嚢胞、火傷、皮膚炎、皮膚筋炎、日焼け、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）、疣、蕁麻疹（ｗｈｅａｌｓ）、脈管炎、血管炎、心内膜炎、動脈炎、粥状（アテローム）硬化、血栓静脈炎、心膜炎、心筋炎、心筋虚血、結節性動脈周囲炎、リューマチ熱、アルツハイマー病、腔疾患、鬱血心不全、髄膜炎、脳炎、多発硬化、脳梗塞、脳塞栓、ギランバレー症候群、神経炎、神経痛、脊髄傷害、麻痺、葡萄膜炎、関節炎、関節痛、骨髄炎、筋膜炎、パジェット病、痛風、歯周病、リューマチ関節炎、滑膜炎、重症筋無力症、甲状腺炎、全身狼紅エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、ベーチェット症候群、同種異系移植片拒絶、移植片対宿主病、強直性脊椎炎、バージャー病、１型糖尿、２型糖尿、バージャー病、ルティエ症候群、もしくはホジキン病である、請求項２４の方法。
【請求項２６】
前記病状が、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックである、請求項２４の方法。
【請求項２７】
前記哺乳類が、自己免疫疾患を持つか、もしくは、自己免疫疾患に関するリスクにある、請求項２２の方法。
【請求項２８】
前記自己免疫疾患が、多発硬化、全身紅斑狼瘡（エリテマトーデス）、リューマチ関節炎、移植片対宿主病、自己免疫肺炎、自己免疫脳脊髄炎、ギランバレー症候群、自己免疫甲状腺炎、インシュリン依存糖尿、クローン病、硬皮症、乾癬、シェーグレン症候群、および自己免疫炎症眼病である、請求項２６の方法。
【請求項２９】
前記哺乳類が、腫瘍を持つ、請求項２２の方法。
【請求項３０】
哺乳類における炎症を処置するかもしくは防ぐ方法であって、当該哺乳類における炎症を処置するかもしくは防ぐに有効な量における、請求項２１の医薬組成物を当該哺乳類に投与することを含む、方法。
【請求項３１】
前記哺乳類が、ヒトである、請求項３０の方法。
【請求項３２】
前記哺乳類が、増殖脈管疾患、急性呼吸困難症候群、サイトカイン媒介毒性、乾癬、インターロイキン−２毒性、虫垂炎、消化潰瘍、胃潰瘍、および十二指腸潰瘍、腹膜炎、膵炎、潰瘍結腸炎、偽膜結腸炎、急性結腸炎、および虚血結腸炎、憩室炎、喉頭蓋炎、無弛緩症、胆管炎、胆嚢炎、肝炎、炎症腸疾患、クローン病、腸管炎、ホウィップル病、喘息、アレルギー、アナフィラキシーショック、免疫複合病、臓器虚血、再灌流傷害、臓器壊死、枯草熱、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、内毒素ショック、悪液質（カケクシア）、超高熱、好酸肉芽腫、肉芽腫症、類肉腫症、敗血症流産、副睾丸炎、膣炎、前立腺炎、尿道炎、気管支炎、気腫、鼻炎、嚢胞線維症、肺炎、肺胞炎、細気管支炎、咽頭炎、胸膜炎、副鼻腔炎、インフルエンザ、呼吸多核ウィルス感染、ヘルペス感染、ＨＩＶ感染、Ｂ型肝炎ウィルス感染、Ｃ型肝炎ウィルス感染、伝搬菌血、デング熱、カンジダ症、マラリア、糸状虫症、アメーバ症、包虫嚢胞、火傷、皮膚炎、皮膚筋炎、日焼け、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）、疣、蕁麻疹（ｗｈｅａｌｓ）、脈管炎、血管炎、心内膜炎、動脈炎、粥状（アテローム）硬化、血栓静脈炎、心膜炎、心筋炎、心筋虚血、結節性動脈周囲炎、リューマチ熱、アルツハイマー病、腔疾患、鬱血心不全、髄膜炎、脳炎、多発硬化、脳梗塞、脳塞栓、ギランバレー症候群、神経炎、神経痛、脊髄傷害、麻痺、葡萄膜炎、関節炎、関節痛、骨髄炎、筋膜炎、パジェット病、痛風、歯周病、リューマチ関節炎、滑膜炎、重症筋無力症、甲状腺炎、全身狼紅エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、ベーチェット症候群、同種異系移植片拒絶、移植片対宿主病、強直性脊椎炎、バージャー病、１型糖尿、２型糖尿、バージャー病、ルティエ症候群、もしくはホジキン病を持つ、請求項３０の方法。
【請求項３３】
前記哺乳類が、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックを持つ、請求項３０の方法。
【請求項３４】
前記哺乳類が、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックに関するリスクにある、請求項３０の方法。
【請求項３５】
更に、前記哺乳類に第２の抗炎症剤を投与することを含む、請求項３０の方法。
【請求項３６】
第２の抗炎症剤が、ＮＳＡＩＤ、サリチラート、ＣＯＸ阻害剤、ＣＯＸ−２阻害剤、もしくはステロイドである、請求項３５の方法。
【請求項３７】
前記哺乳類が、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックに関するリスクを持つか、または、リスクにあり、第２の処置が、ムスカリンアゴニスト、アドレノメデュリン、アドレノメデュリン結合蛋白、乳脂球状表皮成長因子ＶＩＩＩ、活性化蛋白Ｃ、もしくはα２Ａ−アドレナリン作動アンタゴニストの投与である、請求項３５の方法。
【請求項３８】
敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックを持つ哺乳類を処置する方法であって、該敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックを処置するに有効な量における、請求項２１の医薬組成物を当該哺乳類に投与することを含む、方法。
【請求項３９】
自己免疫疾患を持つ哺乳類を処置する方法であって、該自己免疫疾患を処置するに有効な量における、請求項２１の医薬組成物を当該哺乳類に投与することを含む、方法。
【請求項４０】
前記自己免疫疾患が、多発硬化、全身紅斑狼瘡（エリテマトーデス）、リューマチ関節炎、移植片対宿主病、自己免疫肺炎、自己免疫脳脊髄炎、ギランバレー症候群、自己免疫甲状腺炎、インシュリン依存糖尿、クローン病、硬皮症、乾癬、シェーグレン症候群、および自己免疫炎症眼病である、請求項３９の方法。
【請求項４１】
腫瘍を持つ哺乳類を処置する方法であって、該腫瘍を処置するに有効な量における、請求項２１の医薬組成物を当該哺乳類に投与することを含む、方法。
【請求項４２】
前記医薬組成物が、経口投与される、請求項２２〜４１のいずれか１項の方法。
【請求項４３】
前記医薬組成物が、非経口投与される、請求項２２〜４１のいずれか１項の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願に対する相互参照
この出願が、２００６年３月２４日出願された米国仮出願第６０／７８５，８３４号の利益を請求する。
【０００２】
（１）本発明分野
本発明が、複数のサイトカイン阻害剤に関する。より具体的には、本発明が、マクロファージ転移阻害因子の幾つかの阻害剤を同定し、特徴化する。
【背景技術】
【０００３】
（２）関連技術の記述
マクロファージ転移阻害因子（ＭＩＦ）が、潜在的な原炎症サイトカインであり、決定的に敗血症の病原および他の炎症疾患中、関与した（ＣａｌａｎｄｒａおよびＲｏｇｅｒ、２００３年；Ｒｉｅｄｅｍａｎｎら、２００３年）。敗血症、感染に対する致命的な全身炎症反応が、米国単独における１年当たり２１５，０００人よりも多い人々を死亡させる。現在、その臨床管理に関し、ＦＤＡにより認可されている抗炎症治療剤が、全くない。ＭＩＦが、全身炎症の重要な遅く作用するメディエーターであると実証されてきており、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける齧歯類における内毒素血症および敗血症の致命的な結末を弱めるその活性を阻害している（Ｃａｌａｎｄｒａら、２０００年；Ａｌ−Ａｂｅｄら、２００５年）。
【０００４】
ＭＩＦが、ある１ホモトリマーとして存在し（Ｓｕｇｉｍｏｔｏら、１９９５年；Ｓｕｎら、１９９６年；Ｓｕｚｕｋｉら、１９９６年；Ｔａｙｌｏｒら、１９９９年）、それぞれのインドール誘導体へのＤ−ドーパクロームおよびＬ−ドーパクロームメチルエステルのような非生理学的基質の互変を触媒できる独特な能力を有する（Ｒｏｓｅｎｇｒｅｎら、１９９６年）。この互変活性の生理学的役割が、不確かである一方、Ｄ−およびＬ−ドーパクロームに構造的に似ている化合物が、このＭＩＦの互変化酵素（トートメラーゼ）活性部位に結合し得、これにより、これをブロックし得る（Ａｌ−Ａｂｅｄら、２００５年；Ｃｉｏｓら、２００２年；ＣｈｅｎｇおよびＡｌ−Ａｂｅｄ、２００６年；Ｌｕｂｅｔｓｋｙら、２００２年；Ｓｅｎｔｅｒら、２００２年）。Ｎ−アセチル−ｐ−ベンゾキノンイミン（ＮＡＰＱＩ）が、その活性部位でＭＩＦと共有結合複合体を形成し（図１）、ＭＩＦの生物学的逆効果を不可逆に阻害していくことができる（Ｓｅｎｔｅｒら、２００２年）。しかしながら、ＮＡＰＱＩの毒性が、ＭＩＦの生存可能な臨床阻害剤としてのその使用を予め排除する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
上に基づいたら、ＭＩＦ活性の非毒性小分子阻害剤の開発が、更なる調査を割り引く。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明者が、ＭＩＦ活性を阻害する幾つかの新しい化合物を同定し、特徴化させてきている。
【０００７】
本発明が、これゆえ、式Ｉ：
【０００８】
【化１】
2009530401.tif 000003
【０００９】
の化合物に関しており、式中：
Ｒ１が、ある１アルキル、置換アルキル、ある１シクロアルキル、置換シクロアルキル、複素環基、置換複素環基、ある１アリール、置換アリール、ある１ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヒドロキシ、ある１アルコキシ、ある１アリールオキシ、オキソ、ある１アミノ、ある１ハロゲン、ホルミル、ある１アシル、カルボキシ、ある１カルボキシアルキル、ある１カルボキシアリール、ある１アミド、カルバモイル、グアニジノ、ウレイド、アミジノ、メルカプト、スルフィニル、スルホニル、もしくはスルホンアミドであり；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５が、独立に、ある１ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ2、−ＮＯ2、−ＯＲ６、もしくは−Ｈであり、式中、Ｒ６が、直鎖もしくは分岐Ｃ1〜Ｃ6アルキルである。
【００１０】
本発明が、医薬として許容可能な担体中、上の複数の化合物のいずれか、もしくは、これの医薬として許容可能な塩を含んでいる医薬組成物にも関している。
【００１１】
本発明が、更に、ある１哺乳類におけるマクロファージ転移阻害因子（ＭＩＦ）活性を阻害していくとの複数の方法に関している。これら方法が、当該哺乳類におけるＭＩＦ活性を阻害するに有効な量における上の医薬組成物を当該哺乳類に投与していくことを含む。
【００１２】
更に、本発明が、ある１哺乳類における炎症を処置していくか、もしくは、防いでいくとの複数の方法に関している。これら方法が、当該哺乳類における当該炎症を処置するか、もしくは、防ぐに有効な量における上の医薬組成物を当該哺乳類に投与していくことを含む。
【００１３】
また、本発明が、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックを持っているある１哺乳類を処置していくとの複数の方法に関している。これら方法が、当該敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックを処置するに有効な量における上の医薬組成物を当該哺乳類に投与していくことを含む。
【００１４】
本発明が、更に、自己免疫疾患を持っているある１哺乳類を処置していくとの複数の方法に関している。これら方法が、当該自己免疫疾患を処置するに有効な量における上の医薬組成物を当該哺乳類に投与していくことを含む。
【００１５】
加え、本発明が、ある１腫瘍を持っているある１哺乳類を処置していくとの複数の方法に関しており、本方法が、当該腫瘍を処置するに有効な量における上の医薬組成物を当該哺乳類に投与していくことを含んでいる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明が、ＭＩＦ活性を阻害する幾つかの新しい化合物を与える。実施例参照。
【００１７】
本発明が、これゆえ、式Ｉ：
【００１８】
【化２】
2009530401.tif 000004
【００１９】
の複数の化合物に関しており、式中：
Ｒ１が、ある１アルキル、置換アルキル、ある１シクロアルキル、置換シクロアルキル、複素環基、置換複素環基、ある１アリール、置換アリール、ある１ヘテロアリール、置換ヘテロアリール、ヒドロキシ、ある１アルコキシ、ある１アリールオキシ、オキソ、アミノ、ある１ハロゲン、ホルミル、ある１アシル、カルボキシ、ある１カルボキシアルキル、ある１カルボキシアリール、アミド、カルバモイル、グアニジノ、ウレイド、アミジノ、メルカプト、スルフィニル、スルホニル、もしくはスルホンアミドであり；
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５が、独立に、ある１ハロゲン、−ＯＨ、−ＳＨ、−ＮＨ2、−ＮＯ2、−ＯＲ６、もしくは−Ｈであり、式中、Ｒ６が、直鎖もしくは分岐Ｃ1〜Ｃ6アルキルである。
【００２０】
好ましくは、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、およびＲ５のうちの１種だけが、Ｈでない。また、好ましくは、Ｒ２が、弗素もしくはＨである。より好ましくは、Ｒ２だけが、Ｈでない。更により好ましくは、Ｒ２が、ある１ハロゲンであり、そしてＲ３、Ｒ４、およびＲ５が、全てＨである。最も好ましくは、Ｒ２が、弗素であり、そしてＲ３、Ｒ４、およびＲ５が、全てＨである。
【００２１】
上の複数の化合物のいずれかに関し、Ｒ１が、好ましくは、ＣＯＯＭｅ、ＣＯＯＥｔ、ＣＯＯｔＢｕ、ＣＯＯＣＨ2Ｐｈ、ＣＯＯＣＨ2ＰｈＯＭｅ、ＣＯＰｈ、ＳＯ2Ｐｈ、Ｍｅ、Ｐｈ、ＰｈＯＭｅ、ＣＯＯｔＢｕ、Ｐｈ、もしくはＰｈＯＭｅであり、式中、Ｍｅが、ＣＨ3であり、Ｐｈが、フェニルであり、そしてＢｕが、ブチルである。より好ましくは、Ｒ１が、ＣＯＯｔＢｕ、Ｐｈ、もしくはＰｈＯＭｅである。更により好ましくは、本化合物が、表１および表２の化合物４〜９および化合物１１〜１９のうちのいずれか１種である。最も好ましくは、本化合物が、表１の化合物５、６、７、８、９、もしくは１９、または、表２の１３、１４、１５、もしくは１８のうちのいずれか１種である。ある幾つかの態様中、本化合物が、表１の化合物５である。他の態様中、本化合物が、表１の化合物６である。尚他の態様中、本化合物が、表１の化合物７である。更なる態様中、本化合物が、表１の化合物８である。更なる態様中、本化合物が、表１の化合物９である。また、本化合物が、表１の化合物１９たり得る。本化合物が、表２の化合物１３でもあり得る。加え、本化合物が、表２の化合物１４たり得る。本化合物が、更に、表２の化合物１５たり得る。本化合物が、更に、表２の化合物１８たり得る。
【００２２】
本発明が、医薬として許容可能な担体中、上の複数の化合物のいずれか、もしくは、これの医薬として許容可能な塩を含んでいる複数の医薬組成物にも関している。
【００２３】
＜＜医薬として許容可能な＞＞により、（ｉ）本組成物の他の成分と相容れており、その意図された目的に本組成物を不適にしていくことなく、（ｉｉ）本明細書において与えれたとおりの主題を有する使用に適しており、（毒性、侵襲、およびアレルギー応答のような）不要な悪影響を及ぼす副作用のない、ある１素材が、意味されている。副作用が、＜＜不要＞＞であるのは、そのリスクが、本組成物により与えられた益よりも重い場合である。医薬として許容可能な担体の非限定例が、限定なく、燐酸緩衝化生理食塩水溶液のような標準医薬担体、水、油／水エマルション、微小（ミクロ）エマルションのようなエマルション等のいずれかを包含する。
【００２４】
複数の上記化合物が、過度の実験なく、特定の応用に適するよう、ヒトを包含しているある１哺乳類に対する投与用に製剤され得る。加え、これら組成物の適正な用量が、過度の実験なく、標準用量−応答プロトコルを使用しながら、求められ得る。
【００２５】
従って、経口、舌、舌下、口腔、および口腔内投与用に設計（デザイン）されたこれら組成物が、過度の実験なく、当業界においてよく知られた手段、例えば、不活性稀釈剤を用いてもしくは可食担体を用いて調製され得る。これら組成物が、ゼラチンカプセル中封じられていてもよく、錠剤（タブレット）に圧縮されていてもよい。経口治療投与目的に関し、本発明のこれら医薬組成物が、賦形剤と共に取り込まれていてもよく、タブレット、トローチ、カプセル、エリキシル、サスペンション、シロップ、ウェーハ、チューイングガム、および同様のものの形において使用されていてもよい。
【００２６】
タブレット、ピル、カプセル、トローチ、および同様のものが、バインダー、、崩壊剤、潤滑剤、甘味料、および香料も含有してよい。バインダーのある幾つかの例が、微結晶セルロース、トラガカントガム、もしくはゼラチンを包含する。賦形剤の例が、スターチもしくはラクトースを包含する。崩壊剤のある幾つかの例が、アルギン酸、コーンスターチ、および同様のものを包含する。潤滑剤の例が、ステアリン酸マグネシウムもしくはステアリン酸カリウムを包含する。潤滑剤（ｇｌｉｄａｎｔ）のある１例が、コロイド状二酸化珪素である。甘味料のある幾つかの例が、スクロース、サッカリン、および同様のものを包含する。香料の例が、ペパーミント、サリチル酸メチル、オレンジ香料、および同様のものを包含する。これらの種々の組成物を調製していくことにおいて使用された素材が、医薬として純粋であり、使用された量において非毒性であるべきである。
【００２７】
これら化合物が、容易に、例えば、静脈内、筋内、蜘蛛膜下、もしくは皮下注射によるよう、非経口投与され得る。非経口投与が、これら化合物をある１溶液もしくは懸濁（サスペンション）中に取り込ませていくことにより達成され得る。このような溶液もしくは懸濁が、注射用水、生理食塩水溶液、固定化油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール、もしくは他の合成溶媒のような無菌稀釈剤も包含してよい。非経口製剤が、例えば、ベンジルアルコールもしくはメチルパラベンのような抗菌剤、例えば、アスコルビン酸もしくは重亜硫酸ナトリウムのような抗酸化剤、ならびに、ＥＤＴＡのようなキレート化剤も包含してよい。酢酸塩、クエン酸塩、もしくは燐酸塩のような緩衝剤（バッファー）、ならびに、塩化ナトリウムもしくはデキストロースのような浸透圧調整剤も加えられていてよい。本非経口調製品が、アンプル、使い捨て可能シリンジ、またはガラスもしくはプラスチックから調製された多数回用量バイアル中、封じられ得る。
【００２８】
直腸投与が、直腸もしくは大腸中に医薬組成物中の本化合物を投与していくことを包含する。これが、坐薬もしくは浣腸を使用しながら、達成され得る。坐薬製剤が、容易に、当業界において知られた方法により調製され得る。例えば、坐薬製剤が、グリセリンを約１２０℃に熱していき、本組成物をそのグリセリンに溶かしていき、その熱せられたグリセリンを混ぜていき、その後、精製水が、加えられていてよく、そしてその熱い混合物を坐薬型中に注いでいくことにより調製され得る。
【００２９】
経皮投与が、皮膚を通る本組成物の経皮吸収を包含する。経皮製剤が、パッチ（よく知られたニコチンパッチのような）、外用薬、クリーム、ジェル、軟膏、および同様のものを包含する。
【００３０】
これら化合物が、鼻投与用にも調製され得る。本明細書中、使用されたとおり、鼻投与が、その患者の鼻道もしくは鼻腔の粘膜に本化合物を投与していくことを包含する。本化合物の鼻投与用医薬組成物が、例えば、鼻スプレー、鼻ドロップ、懸濁、ジェル、外用薬、クリーム、もしくは粉末として投与されているよく知られた方法により調製された本化合物の治療有効量を包含する。本化合物の投与が、鼻タンポンもしくは鼻スポンジを使用しながら、行われてもよい。
【００３１】
本発明のこれら化合物が、これら自体投与されていてもよく（原液、ニート）、医薬として許容可能な塩の形にあってもよい。医学において使用された場合、これら塩が、薬理学的におよび医薬として両方許容可能であるべきであるが、医薬として許容不可能な塩が、便利に、使用されていてよく、遊離の活性化合物もしくはこの医薬として許容可能な複数の塩を調製する。薬理学的におよび医薬として許容可能な複数の塩が、以降の酸：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、燐酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、蟻酸、マロン酸、琥珀酸、ナフタレン−２−スルホン酸、およびベンゼンスルホン酸から調製されたものを包含するが、これらに限られていない。また、医薬として許容可能な複数の塩が、そのカルボン酸基のナトリウム塩、カリウム塩、もしくはカルシウム塩のようなアルカリ金属塩もしくはアルカリ土類塩として調製され得る。
【００３２】
本発明が、更に、ある１哺乳類におけるマクロファージ転移阻害因子（ＭＩＦ）活性を阻害していくとの複数の方法に関している。これら方法が、当該哺乳類におけるＭＩＦ活性を阻害するに有効な量における複数の上の医薬組成物のいずれかを当該哺乳類に投与していくことを含む。
【００３３】
これらの方法が、如何なる哺乳類上でも使用され得る。好ましくは、本哺乳類が、ヒトである。本哺乳類が、ＭＩＦにより少なくとも一部媒介されている炎症サイトカインカスケードを含むある１病状を持つか、または、これに関するリスクにあることも好ましい。このような病状の非限定例が、増殖脈管疾患、急性呼吸困難症候群、サイトカイン媒介毒性、乾癬、インターロイキン−２毒性、虫垂炎、消化潰瘍、胃潰瘍、および十二指腸潰瘍、腹膜炎、膵炎、潰瘍結腸炎、偽膜結腸炎、急性結腸炎、および虚血結腸炎、憩室炎、喉頭蓋炎、無弛緩症、胆管炎、胆嚢炎、肝炎、炎症腸疾患、クローン病、腸管炎、ホウィップル病、喘息、アレルギー、アナフィラキシーショック、免疫複合病、臓器虚血、再灌流傷害、臓器壊死、枯草熱、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、内毒素ショック、悪液質（カケクシア）、超高熱、好酸肉芽腫、肉芽腫症、類肉腫症、敗血症流産、副睾丸炎、膣炎、前立腺炎、尿道炎、気管支炎、気腫、鼻炎、嚢胞線維症、肺炎、肺胞炎、細気管支炎、咽頭炎、胸膜炎、副鼻腔炎、インフルエンザ、呼吸多核ウィルス感染、ヘルペス感染、ＨＩＶ感染、Ｂ型肝炎ウィルス感染、Ｃ型肝炎ウィルス感染、伝搬菌血、デング熱、カンジダ症、マラリア、糸状虫症、アメーバ症、包虫嚢胞、火傷、皮膚炎、皮膚筋炎、日焼け、蕁麻疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）、疣、蕁麻疹（ｗｈｅａｌｓ）、脈管炎、血管炎、心内膜炎、動脈炎、粥状（アテローム）硬化、血栓静脈炎、心膜炎、心筋炎、心筋虚血、結節性動脈周囲炎、リューマチ熱、アルツハイマー病、腔疾患、鬱血心不全、髄膜炎、脳炎、多発硬化、脳梗塞、脳塞栓、ギランバレー症候群、神経炎、神経痛、脊髄傷害、麻痺、葡萄膜炎、関節炎、関節痛、骨髄炎、筋膜炎、パジェット病、痛風、歯周病、リューマチ関節炎、滑膜炎、重症筋無力症、甲状腺炎、全身狼紅エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、ベーチェット症候群、同種異系移植片拒絶、移植片対宿主病、強直性脊椎炎、バージャー病、１型糖尿、２型糖尿、バージャー病、ルティエ症候群、およびホジキン病を包含する。好ましいこのような病状が、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）および／または内毒素ショックである。
【００３４】
ＭＩＦが、自己免疫疾患における重要な役を演じると示されてきている。例えば、Ｃｖｅｔｊｏｖｉｃら、２００５年参照。これら本方法が、これゆえ、自己免疫疾患処置中、有用であると思われる。これゆえ、これらの方法のある態様中、本哺乳類が、自己免疫疾患を持つか、もしくは、これに関するリスクにある。このような自己免疫疾患の非限定例が、多発硬化、全身狼紅エリテマトーデス、リューマチ関節炎、移植片対宿主病、自己免疫肺炎、自己免疫脳脊髄炎、ギランバレー症候群、自己免疫甲状腺炎、インシュリン依存糖尿、クローン病、硬皮症、乾癬、シェーグレン症候群、および自己免疫炎症眼病である。
【００３５】
ＭＩＦも、腫瘍の侵襲および転移を促進させると知られている。例えば、Ｓｕｎら、２００５年参照。これら本方法が、これゆえ、ある１腫瘍を持つある１哺乳類の処置に有用であると思われる。
【００３６】
本発明が、ある１哺乳類における炎症を処置していくかもしくは防いでいくとの方法にも関している。これら方法が、当該哺乳類における炎症を処置するかもしくは防ぐに有効な量における上の医薬組成物を当該哺乳類に投与していくことを含む。
【００３７】
これらの方法に関し、本哺乳類が、好ましくは、ヒトである。本哺乳類が、炎症、例えば、増殖脈管疾患、急性呼吸困難症候群、サイトカイン媒介毒性、乾癬、インターロイキン−２毒性、虫垂炎、消化潰瘍、胃潰瘍、および十二指腸潰瘍、腹膜炎、膵炎、潰瘍結腸炎、偽膜結腸炎、急性結腸炎、および虚血結腸炎、憩室炎、喉頭蓋炎、無弛緩症、胆管炎、胆嚢炎、肝炎、炎症腸疾患、クローン病、腸管炎、ホウィップル病、喘息、アレルギー、アナフィラキシーショック、免疫複合病、臓器虚血、再灌流傷害、臓器壊死、枯草熱、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、内毒素ショック、悪液質（カケクシア）、超高熱、好酸肉芽腫、肉芽腫症、類肉腫症、敗血症流産、副睾丸炎、膣炎、前立腺炎、尿道炎、気管支炎、気腫、鼻炎、嚢胞線維症、肺炎、肺胞炎、細気管支炎、咽頭炎、胸膜炎、副鼻腔炎、インフルエンザ、呼吸多核ウィルス感染、ヘルペス感染、ＨＩＶ感染、Ｂ型肝炎ウィルス感染、Ｃ型肝炎ウィルス感染、伝搬菌血、デング熱、カンジダ症、マラリア、糸状虫症、アメーバ症、包虫嚢胞、火傷、皮膚炎、皮膚筋炎、日焼け、蕁麻疹、疣、蕁麻疹、脈管炎、血管炎、心内膜炎、動脈炎、粥状（アテローム）硬化、血栓静脈炎、心膜炎、心筋炎、心筋虚血、結節性動脈周囲炎、リューマチ熱、アルツハイマー病、腔疾患、鬱血心不全、髄膜炎、脳炎、多発硬化、脳梗塞、脳塞栓、ギランバレー症候群、神経炎、神経痛、脊髄傷害、麻痺、葡萄膜炎、関節炎、関節痛、骨髄炎、筋膜炎、パジェット病、痛風、歯周病、リューマチ関節炎、滑膜炎、重症筋無力症、甲状腺炎、全身狼紅エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、ベーチェット症候群、同種異系移植片拒絶、移植片対宿主病、強直性脊椎炎、バージャー病、１型糖尿、２型糖尿、バージャー病、ルティエ症候群、もしくはホジキン病に関与している病を持ち得るか、もしくは、これらの病に関するリスクにあり得る。好ましくは、本哺乳類が、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックを持つか、あるいは、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックに関するリスクにある。
【００３８】
これらの方法が、本哺乳類に対する第２の抗炎症剤の投与を包含し得る。このような第２の抗炎症剤の例が、ＮＳＡＩＤｓ、サリチラート、ＣＯＸ阻害剤、ＣＯＸ−２阻害剤、およびステロイドである。好ましくは、本哺乳類が、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックを持つか、または、これらに関するリスクにあり、第２の処置が、ムスカリンアゴニスト、アドレノメデュリン、アドレノメデュリン結合蛋白、乳脂球状表皮成長因子ＶＩＩＩ、活性化蛋白Ｃ、もしくはα２Ａ−アドレナリン作動アンタゴニストの投与である。
【００３９】
本発明が、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックを持っている哺乳類を処置していくとの複数の方法にも関している。これら方法が、敗血症（ｓｅｐｓｉｓ、ｓｅｐｔｉｃｅｍｉａ）、および／または内毒素ショックを処置するに有効な量において当該哺乳類に上の医薬組成物を投与していくことを含む。
【００４０】
本発明が、更に、自己免疫疾患を持っている哺乳類を処置していくとの複数の方法に関している。これら方法が、当該自己免疫疾患を処置するに有効な量において当該哺乳類に上の医薬組成物を投与していくことを含む。このような自己免疫疾患の例が、多発硬化、全身狼瘡エリテマトーデス、リューマチ関節炎、移植対宿主疾患、自己免疫肺炎、自己免疫脳脊髄炎、ギラン−バレー症候群、自己免疫甲状腺炎、インシュリン依存糖尿病、クローン病、硬皮症、乾癬、シェーグレン症候群、および自己免疫炎症眼病を包含する。
【００４１】
加え、本発明が、腫瘍を持っている哺乳類を処置していくとの方法に関しており、本方法が、当該腫瘍を処置するに有効な量において当該哺乳類に上の医薬組成物を投与していくことを含んでいる。
【００４２】
下の実施例２において樹立されたとおり、これらの化合物が、有効に経口投与されると期待され得る。これゆえ、上の方法のいずれにおいても本医薬組成物が、経口投与され得る。あるいは、本医薬組成物が、非経口投与され得る。
【００４３】
本発明の好ましい実施形態が、以降の実施例中、記載されている。本明細書中の請求項の範囲内の他の実施形態が、本明細書の考慮、もしくは、本明細書中、開示されたとおりの本発明の実際から当業者に明らかとなる。本明細書が、これら実施例と一緒に例えとしてだけ考慮され、本発明の範囲および精神が、これら請求項により指し示されていることが、意図されており、これら実施例に伴う。
【実施例】
【００４４】
実施例１．フェノールヒドラゾンが、マクロファージ転移阻害因子原炎症活性の潜在的な阻害剤であり、敗血症における生存率向上剤である
実施例の要約
一連のフェノールヒドラゾンが、合成され、これらのＭＩＦ活性阻害に関し、評価された。化合物７が、１３０ｎＭのＩＣ50を有する潜在的なＭＩＦ互変化酵素（トートメラーゼ）阻害剤として浮上した。化合物７が、用量依存的に、リポ多糖（リポポリサッカライド、ＬＰＳ）刺激マクロファージからのＴＮＦα分泌を抑えた。化合物７によるＭＩＦ阻害の治療の重要さが、敗血症の致死性からの有意な保護により実証されており、該化合物の投与が、臨床的に関連している時間枠中、開始された場合である。
【００４５】
はじめに
合理的な設計（デザイン）のアプローチが、使用されたが、より潜在的なＭＩＦ小分子阻害剤を産生させる。ＭＩＦ互変化酵素（トートメラーゼ）触媒のインドール中間体が、潜在的なＭＩＦ阻害剤の開発に適するテンプレートとしてそれ自体を提示した。そのフェニルイミンスキャッフォールドの周りでデザインされた化合物が、潜在的なＭＩＦアンタゴニストとして作用し得ると思われることが、理由付けられた。実際、この合理的なデザインから、ＭＩＦ互変化酵素（トートメラーゼ）阻害剤としてのこれらアミノ酸シッフ塩基（シッフベース）およびこれらイソキサゾリン化合物が、開発された（Ｄｉｏｓら、２００２年；Ｌｕｂｅｔｓｋｙら、２００２年）。ＭＩＦ互変化酵素（トートメラーゼ）活性を阻害できる能力に関しテストされたこれらアミノ酸シッフベースの間で、化合物１が、最も潜在的であったことが、見出された（図１、表１）。最近、ある１ＭＩＦイソキサゾリン阻害剤＜＜ＩＳＯ−１＞＞（化合物２、図１）が、報告されたが、トートメラーゼ部位をブロックし、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける抗炎症糖質（グルコ）コルチコイド活性を克服できるＭＩＦの能力を阻害し、実験敗血症動物モデルにおける生存率を向上させる（Ｌｕｂｅｔｓｋｙら、２００２年）。
【００４６】
より潜在的なＭＩＦ阻害剤を見出すに当たり、該フェニルイミンスキャッフォールドが、再訪され、窒素を加えていくことにより修飾されたが、ヒドラゾン型（タイプ）化合物を与える（図１）。これらアミノ酸シッフベースおよび化合物２上での以前の研究が、パラ（ｐ−）ヒドロキシル基が、フェノール部分により例示されたとおり、鍵の構造の特徴であり、活性に必要とされていることを解き明かした。フェニル−もしくはハロゲン（ハライド）−置換フェニル基またはｐ−メトキシフェニル基を用いて１および２のフェノール部分を置き換えていくと結果的に、ＭＩＦ互変化酵素（トートメラーゼ）活性を阻害できるそれらの能力の低下もしくは完全な損失となった（Ｄｉｏｓら、２００２年；Ｌｕｂｅｔｓｋｙら、２００２年）。この結果と調和し、新しいファーマコフォアの化学構造が、フェノール環を含有しなければならない（図１）。この鍵の構造の特徴ならびにＭＩＦと複合体化された１および２の観察を利用しながら、フェノールヒドラゾン３〜１９（表１および表２）が、潜在的なＭＩＦ阻害剤として合成された。
【００４７】
表１．フェノールヒドラゾン、および、ＭＩＦ互変化酵素（トートメラーゼ）活性阻害に関するＩＣ50値。
【００４８】
【表１】
2009530401.tif 000005
a化合物が、1Ｈ、13Ｃ  ＮＭＲ、およびＭＳにより特徴付けられた。bＬ−ドーパクロームメチルエステル（実験の部参照）に関するＭＩＦ互変化酵素（トートメラーゼ）活性分光解析。c６〜９の合成に向かっての一般的手順に関する実験の部参照。
【００４９】
表２．フェノールヒドラゾンカルバメート、および、ＭＩＦ互変化酵素（トートメラーゼ）活性阻害に関するＩＣ50値。
【００５０】
【表２】
2009530401.tif 000006
a化合物が、1Ｈ、13Ｃ  ＮＭＲ、およびＭＳにより特徴付けられた（補足情報参照）。bＬ−ドーパクロームメチルエステルに関するＭＩＦ互変化酵素（トートメラーゼ）活性分光解析。
【００５１】
この研究において調製されたヒドラゾンの全て、化合物３〜１９が、１種の共通の鍵の構造的特徴を持ち、これらが、全て、４−ヒドロキシフェニルの形での＜＜フェノール頭部＞＞を保有することにおいてである。このフェノール環が、ＭＩＦ活性部位内で、その疎水性表面のアミノ酸残基アスパラギン−９７Ｃとの間の鍵の水素結合相互作用を形成することが、示されてきている（Ｄｉｏｓら、２００２年；Ｌｕｂｅｔｓｋｙら、２００２年；Ｏｒｉｔａら、２００１年）。この重要な水素結合相互作用に加え、疎水性相互作用があり、このフェノールの芳香環と、この疎水性ポケットのアミノ酸残基たる、Ｐｒｏ−１、Ｍｅｔ−２、Ｉｌｅ−６４、Ｔｙｒ−９５、Ｖａｌ−１０６、およびＰｈｅ−１１３の側鎖との間に存在し、更に、本阻害剤の結合に寄与する（Ｏｒｉｔａら、２００１年）。このヒドロキシル官能基と、このアミノ酸残基アスパラギン−９７Ｃとの間の鍵の相互作用に関する裏付けの証拠が、１）この位置を修飾していき、２）他の官能基を用いてこのヒドロキシル基を置き換えていくことにより、得られた。このヒドロキシル基の位置が、これらヒドラゾンの決定的な特徴であり、パラ（ｐ−、ＩＣ50２．５μＭ）からメタ（ｍ−、ＩＣ50１５０μＭ）にこの位置を変更していくと、結果、ＭＩＦ互変化酵素（トートメラーゼ）活性を阻害できるその能力の劇的な消失となったことにおいてである。輪をかけて、水素、フルオロ、アミノ、メトキシ、およびニトロ官能基を用いてこのヒドロキシル基を置き換えていくと、ヒドラゾンを与えたが、不活性であった（データーは、示さなかった）。これらフェノールヒドラゾンと、ＭＩＦとの間の構造−活性相関を展開していくと、ヒドラゾン３〜６が、その（対応する）簡単なヒドラジンたる、メチルヒドラジン、フェニルヒドラジン、およびｐ−メトキシフェニルヒドラジンから合成された。我々のフェノールヒドラゾンの活性に向かっての１種の更なる前提が、これらが、疎水性尾部を必要とすることである。これが、化合物３から明らかである（ＩＣ50＝＞５００μＭ）。この化合物におけるヒドラゾンの水素置換が、如何なる疎水性相互作用をも提供せず、ある１結果として、ＭＩＦ互変化酵素（トートメラーゼ）活性の非常に乏しい阻害剤である（表１）。メチル基を用いてこの水素を置き換えていくと、ＭＩＦ互変化（トートメラーゼ）活性を阻害できるメチルヒドラゾン４の能力における知らしめられた向上（ＩＣ50＝４３μＭ）が、観察された。これが、このメチル基と、ＭＩＦ表面との間の疎水性相互作用があることを示唆する。このより疎水性のフェニル環を用いて４のメチル基を置き換えていくと、ヒドラゾン５を与え（ＩＣ50＝２．６μＭ）、１６倍潜在的である。５の芳香環上でのパラ（ｐ−）メトキシ基のインストールが、ヒドラゾン６を与え、その親化合物よりもある１阻害剤として５倍潜在的である。このｐ−メトキシフェニルヒドラゾンのこの増加した結合が、そのエーテル酸素と、それら既知のアミノ酸残基との間の水素結合相互作用、ならびに、このｐ−メトキシフェニル環と、ＭＩＦ活性部位の第２の疎水性領域との間のπ−πスタッキング（電子雲の重なり）および／またはファンデルワールス（ｖａｎ  ｄｅｒ  Ｗａ��ｌｓ）相互作用の可能性により、説明されていることがある。これらアミノ酸、Ｐｒｏ−３３、Ｔｙｒ−３６、Ｐｈｅ−４９、Ｔｒｐ−１０８、およびＰｈｅ−１１３が、ＭＩＦ活性部位の縁での第２の疎水性表面を作り上げることが、報告されてきている（Ｄｉｏｓら、２００２年；Ｏｒｉｔａら、２００１年）。これらの残基が、このファーマコフォアと、ＭＩＦ活性部位との間の疎水性相互作用および水素結合相互作用に更に寄与する（Ｏｒｉｔａら、２００１年）。これらの相互作用の更なる裏付けにおいて、その（対応する）Ｌ−アミノ酸シッフ塩基（ベース）の阻害効果が、それぞれ、Ｌ−フェニルアラニン（ＩＣ50＝５０μＭ）からＬ−チロシン（ＩＣ50＝１０μＭ）に当該アミノ酸残基を変更していくと、５倍向上したことが、以前、示された。これが、この増加した潜在力が、ＭＩＦの縁での残基内の水素結合相互作用に帰因されたことを示唆する（Ｄｉｏｓら、２００２年）。ヒドラゾン６が、Ｌ−トリプトファンシッフ塩基（ベース）１よりも１２倍潜在的な阻害剤であり、文献において記載された最も潜在的なＭＩＦ阻害剤を遙かに凌ぐ（Ａｌ−Ａｂｅｄら、２００５年；Ｄｉｏｓら、２００２年；ＣｈｅｎｇおよびＡｌ−Ａｂｅｄ、２００６年；Ｏｒｉｔａら、２００１年；Ｏｒｉｔａら、２００２年）。最近、２のモノ弗素化が、ＭＩＦ活性阻害を向上させたことが、発見された（ＣｈｅｎｇおよびＡｌ−Ａｂｅｄ、２００６年）。（ある１）帰結として、我々は、このより潜在的なヒドラゾン、つまり、ｐ−メトキシフェニルヒドラゾン（６）の、３−フルオロ、３−クロロ、および３−ブロモ−４−ヒドロキシフェニル誘導体を合成した。これらモノハロゲン化ヒドラゾン誘導体合成が、塩酸４−メトキシフェニルヒドラジンおよび３−ハロゲン化−４−ヒドロキシベンズアルデヒドの水酸化ナトリウム水＋メタノール懸濁の処理に関与した（表１）。ＭＩＦ互変化酵素（トートメラーゼ）活性阻害における一般的な増加が、これら３−ハロゲン化−４−ヒドロキシフェニルヒドラゾン誘導体７〜９に関して観察された（表１）。これらのヒドラゾンの間で、化合物７が、１３０ｎＭのＩＣ50値を有する最も潜在的な阻害を示した一方、８および９が、それぞれ、２２０ｎＭおよび３３０ｎＭの値を与えた。これらのハロゲン化ヒドラゾン７〜９の阻害効果における有意な向上が、（σ結合を伝う）誘導効果により、説明されていることがあり、ヒドロキシル部分の分極における変化に至ることがあり、これにより、これをより強い水素結合供与体（ドナー）／受容体（アクセプター）としていく。
【００５２】
活性が、窒素上での二置換により影響を受けるかどうか求めるに当たり、化合物１０が、合成された（図２）。沃化メチルおよびナトリウムアミドを用いたフェニルヒドラジン（５）のメチル化が、Ｎ−メチル−Ｎ−フェニルヒドラジンを与えた。典型的な条件下でのヒドラゾン形成が、８６％収率において１０を与えた。化合物１０が、ＭＩＦ活性の非常に弱い阻害剤であったが、３００μＭのＩＣ50値を表示している。この観察が、増加した立体障害により、または、二置換ヒドラゾン誘導体１０と、ＭＩＦ活性部位との間の減少した数の水素結合相互作用により、考えられ得る。
【００５３】
これらヒドラゾンと、ＭＩＦとの間の構造−活性相関を更に調べるに当たり、もう１種別のある分類（クラス）の化合物たる、フェノールヒドラゾンカルバメートが、評価された。これらフェノールヒドラゾンカルバメート１１〜１５および１８が、選ばれたのは、これらが、アミノ酸シッフ塩基（ベース）１および２のものに似た鍵となる官能基を表示したからである（表２）。これらの官能基が、ヒドロキシル基、フェニル環、およびカルボン酸部分である。２次的な水素結合相互作用が、２のカルボン酸部分と、ＭＩＦ活性部位のリジン−３２Ａとの間に存在することが、報告されてきている（Ｄｉｏｓら、２００２年）。およそ１０倍のＭＩＦ互変化酵素（トートメラーゼ）活性の阻害における向上が、より親脂性のｔ−ブチル部分１３（ＩＣ50＝５．５μＭ）に１１（ＩＣ50＝５５μＭ）のメチル基を変更していくと、観察された。フェニル環が、ＭＩＦ活性阻害を向上させるかどうか求めるに当たり、そのｔ−ブチルカルバメートが、ベンジルカルバメート１４およびｐ−メトキシベンジルカルバメート１５を用いて置き換えられた。嵩高いアルキル１３から芳香族基１４〜１５（ＩＣ50＝１０，８μＭ）に至るこの変更が、結果、阻害効果における僅かな減少を与えた。
【００５４】
生物活性。
細胞内ＭＩＦが、リポ多糖（リポポリサッカライド、ＬＰＳ）内毒素により活性化された経路に対する細胞応答を媒介していくことにおける決定的な役を占め（Ｒｏｇｅｒら、２００１年）、ＭＩＦ不全細胞が、内毒素に対し、低応答である（Ｂｏｚｚａら、１９９９年）。ＭＩＦなしマクロファージが、野生型に比べたら、５０〜６０％少ないＴＮＦを産生し得る（Ａｌ−Ａｂｅｄら、２００５年；Ｍｉｔｃｈｅｌｌら、２００２年）。加え、抗ＭＩＦ抗体（１０μｇ／ｍＬ）が、ＬＰＳ処理マクロファージからのＴＮＦ放出の５０％を阻害する（Ａｌ−Ａｂｅｄら、２００５年）。化合物２（ＩＳＯ−１）が、野生型からのＬＰＳ誘導ＴＮＦ放出を用量依存的に阻害するが、ＭＩＦなしマクロファージからのは、そうでなく、ＭＩＦ化学阻害剤が、特異的であることを示唆している。従って、ＭＩＦに結合している化合物７が、マクロファージにおけるＬＰＳ応答を抑圧すると思われることが、理由付けられた。化合物７が、ＬＰＳ誘導ＴＮＦ放出を用量依存的に正に阻害した（図３）。これゆえ、化合物７が、これらＭＩＦ不全マクロファージの表現型を反復させ、ＬＰＳに対する応答におけるＴＮＦ産生の減少と関連している。
【００５５】
敗血症における分子治療標的としてのＭＩＦの重要さが、抗ＭＩＦ抗体もしくは化合物２を用いた処理が、複数の敗血症マウスにおける生存率を有意に向上させるとの最近の観察により、確認されてきている（Ａｌ−Ａｂｅｄら、２００５年）。更に、血清ＭＩＦレベルが、ＣＬＰ２４時間後内で、最大レベルの７０％にまで増加したが、３６時間においてピークを打った（Ａｌ−Ａｂｅｄら、２００５年）。これが、敗血症における後発メディエーターとしてＭＩＦを同定したが、臨床関連時間枠においてＭＩＦを阻害していくという治療潜在力を指し示した。これゆえ、化合物７を用いた遅延処理が、ＭＩＦ放出の速度論と整合して、上手く応用され得ると思われ、敗血症における生存率を向上させることが、理由付けられた。敗血症の広く使用された前臨床モデルたる盲腸結紮および穿刺（ＣＬＰ）誘導腹腔炎における生存率を向上させられる化合物７の能力が、テストされた。７（４ｍｇ／ｋｇ）の腹腔内処理が、ＣＬＰ外科手術２４時間後、開始され、３日間、継続され、結果、コントロール（ビヒクル処理）群における２８％に比べたら、６５％の生存率（ｐ＜０．０１）を与えた（図４）。これゆえ、化合物７を用いた処理が、敗血症致死率に対する有意な保護を与え、抗ＭＩＦ抗体および化合物２の効果に比肩できる（Ａｌ−Ａｂｅｄら、２００５年）。顕著に、化合物７の用量が、２よりも１０倍少なかったが（１／１０）、似た保護を達成した。この知見が、ＭＩＦ互変化酵素（トートメラーゼ）活性部位を阻害していくことにおける化合物７の潜在力と、実験敗血症における生存率を向上させていくというその有益な効果との間の関係を指し示す。
【００５６】
要約すると、フェノールヒドラゾンが、非毒性潜在ＭＩＦアンタゴニストとして設計（デザイン）され、合成された。その構造−活性相関研究が、これらヒドラゾンの官能基化における小変更（マイナーチェンジ）が、ＭＩＦ互変化酵素（トートメラーゼ）活性部位に対するこれらの化合物の結合に影響を及ぼすことを示唆する。特記すべきは、化合物７が、テストされた全化合物の最大活性を呈し、文献において記載されたＭＩＦの最も潜在的な阻害剤を遙かに凌いでいる（Ａｌ−Ａｂｅｄら、２００５年；Ｄｉｏｓら、２００２年；ＣｈｅｎｇおよびＡｌ−Ａｂｅｄ、２００６年；Ｏｒｉｔａら、２００１年；Ｏｒｉｔａら、２００２年）。
【００５７】
化合物７が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける潜在的な抗炎症活性を呈したが、ＬＰＳ誘導マクロファージ活性化の抑圧により実証されたとおりである（図３）。更に、相対的に低濃度のこの小分子ＭＩＦ阻害剤が、敗血症における生存率を向上させたが、処理が、この疾患の発症２４時間後、開始された場合である。
【００５８】
敗血症が、複雑な炎症疾患であり、この臨床管理（マネージメント）が、チャレンジングな健康問題である。これゆえ、化合物７が、この疾患の発症２４時間後、有効であるとの知見が、考慮され得る臨床での関心たり得ると思われる。加え、齧歯類敗血症モデルにおける効率を示す抗サイトカイン剤が、リューマチ関節炎およびクローン病のような、種々のヒト炎症疾患および自己免疫疾患用の価値ある治療剤であるとされてきている。
【００５９】
実験の部
一般的な実験。
全ての化学物質が、商業供給元から得られたが、更なる精製なく、使用された。２５４ｎｍ蛍光指示器を有するアルミニウム焼成シリカゲル６０ＴＬＣ板（プレート）が、使用された。展開されたＴＬＣ板（プレート）が、短波長ＵＶ灯（ランプ）下、視覚化され、Ｉ2−ＳｉＯ2混合物を用いて染色された。フラッシュカラムクロマトグラフィー（ＦＣＣ）が、フラッシュ用シリカゲル（３２〜６３μｍ）を使用しながら、実施され、通常、段階的（ステップワイズ）溶媒極性勾配を用いたが、ＴＬＣ移動度と相関した。融点（Ｍ．ｐ．）が、開口毛管（キャピラリー）中、Ｇａｌｌｅｎｋａｍｐ融点装置中、求められたが、較正されていない。ＩＲスペクトルが、Ｔｈｅｒｍｏ  Ｎｉｃｏｌｅｔ  ＩＲ  １００  ＦＴ−ＩＲ分光器上、得られた。全ての1Ｈスペクトルが、２７０ＭＨｚもしくは３００ＭＨｚでのＪｅｏｌ分光器もしくはＧＥ  ＱＥ  ３００分光器上、記録された。13Ｃスペクトルが、７５ＭＨｚでのＧＥ  ＱＥ  ３００分光器上、記録された。化学シフト（ケミカルシフト）が、重水素化溶媒のピークに相対しており、ｐｐｍ単位である。カップリング定数（Ｊ）が、ヘルツ（Ｈｚ）単位で測定されている。1Ｈシグナルが、シングレット（ｓ）、ダブレット（ｄ）、トリプレット（ｔ）、カルテット（ｑ）、マルチプレット（ｍ）、およびブロードシングレット（ｂｒ  ｓ）として記載されている。低および高分解能質量スペクトルが、Ｕｒｂａｎａ−Ｃｈａｍｐａｉｇｎイリノイ大学質量スペクトル施設において完遂された。
【００６０】
化合物３〜５および化合物１０〜１９に関する一般的な実験。
４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１２２ミリグラム（ｍｇ）、１ミリモル）もしくは３−フルオロ−４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１４０ミリグラム（ｍｇ）、１ミリモル）と、ヒドラジド（２ミリモル）とが、エタノール（１０ミリリットル（ｍＬ））に溶解された。これに酢酸（１ミリモル）が、加えられ、この反応が、室温において終夜、攪拌された。真空中でのこのエタノールの除去が、油っぽい残渣を与えた。この残渣が、酢酸エチルを用いて拾い上げられ、水洗された。この有機層が、分離され、無水硫酸ナトリウム（Ｎａ2ＳＯ4）を用いて乾燥された。真空中での濃縮が、残渣を与えたが、引き続き、溶出液としてヘキサンおよび酢酸エチル（４：１）を使用しながら、ＦＣＣにより精製されたが、化合物３〜５および化合物１０〜１５を与える。
【００６１】
化合物６〜９に関する一般的な手順。
４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１２２ミリグラム（ｍｇ）、１ミリモル）もしくは３−フルオロ−４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１４０ミリグラム（ｍｇ）、１ミリモル）もしくは３−クロロ−４−ヒドロキシベンズアルデヒド（１５６ミリグラム（ｍｇ）、１ミリモル）もしくは３−ブロモ−４−ヒドロキシベンズアルデヒド（２０１ミリグラム（ｍｇ）、１ミリモル）と、塩酸４−メトキシフェニルヒドラジン（３５０ミリグラム（ｍｇ）、２ミリモル）とが、メタノール（１０ミリリットル（ｍＬ））に懸濁された。この懸濁に水酸化ナトリウム（６０ミリグラム（ｍｇ）、１．５ミリモル）の２Ｍ水溶液が、加えられ、この反応が、室温において終夜、攪拌された。この反応の完結の際、この溶液が、次いで、１Ｍの塩酸（ＨＣｌ）の添加により、ｐＨ４にまで、酸性化された。真空中でのこのメタノールの除去が、油っぽい残渣を与えた。この残渣が、酢酸エチルを用いて拾い上げられ、水洗された。この有機層が、分離され、無水硫酸ナトリウム（Ｎａ2ＳＯ4）を用いて乾燥された。真空中での濃縮が、残渣を与えたが、引き続き、溶出液としてヘキサンおよび酢酸エチル（４：１）を使用しながら、ＦＣＣにより精製されたが、化合物６〜９を与える。
【００６２】
酵素活性を求める分光アッセイ。
Ｌ−ドーパクロームメチルエステルの保管（ストック）したての溶液（２．４ｎＭ）が、過沃素酸ナトリウムを用いたＬ−３，４−ジヒドロキシフェニルアラニンメチルエステルの酸化により、発生されたが、橙（オレンジ）色溶液を生成させている。活性が、ｐＨ６、５０ｍＭ燐酸カリウム緩衝液（バッファー）中、ＭＩＦ溶液（８５０ナノグラム（ｎｇ）／ミリリットル（ｍＬ））１μＬを含有しているセルにドーパクロームメチルエステル（０．３ミリリットル（ｍＬ））を加えていくことにより、室温において求められたが、分光器で、４７５ナノメートル（ｎｍ）での２〜２０秒の吸光における減少を測定している。これら阻害剤３〜１５が、種々の濃度（０．１〜１００μＭ）においてＤＭＳＯに溶解され、１マイクロリットル（μＬ）が、このドーパクロームの添加前にＭＩＦを有するこのセルに加えられた。
【００６３】
細胞アッセイ。
化合物７が、ＬＰＳ処理マクロファージからのＴＮＦ分泌を阻害する。ＲＡＷ２６７．４マクロファージ（１０5個）が、ＬＰＳ添加３０分前に種々の濃度のヒドラゾン７（０．０１〜１００μＭ）を用いて処理された。インキュベート１６時間後、細胞培養上澄み（上清）が、ＥＬＩＳＡによるＴＮＦ濃度決定用に回収された。データーが、平均±Ｓ．Ｄ．として提示されている（ｎ＝３、＊、ｐ＜０．０１）。
【００６４】
動物研究。
全動物実験が、北海岸−ロングアイランドユダヤ研究所の動物愛護および使用委員会により、認められた。８週齢の複数の雄Ｂａｌｂ／Ｃマウスが、盲腸結紮および穿刺（ＣＬＰ）に付された。ＣＬＰ手順の詳細が、以降のとおり完遂されてきている：麻酔された（ケタミン１００ｍｇ／ｋｇおよびキシラジン８ｍｇ／ｋｇが、筋内投与された）複数の雄Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおいて盲腸が、結紮され、単回穿刺を与えられた。腹からのアクセスが、中線切開経由で、得られた。腹からの接近（アクセス）が、得られた。盲腸が、単離され、回盲弁の下、６−０絹（シルク）結紮糸を用いて結紮され、盲腸が、２２Ｇ針を用いて一旦穿刺され、糞（およそ１ｍ）が、この穴から押し出され、盲腸が、腹の空洞中に戻して入れられた。腹が、２層の６−０Ｅｔｈｉｌｏｎ縫合糸を用いて閉じられた。抗生物質（プレマキシン０．５ミリグラム（ｍｇ）／キログラム（ｋｇ）、皮下、合計量０．５ミリリットル（ｍｌ）／マウスで）が、ＣＬＰ直後、投与され、単回用量の蘇生流動体（通常の食塩水、２０ミリリットル（ｍｌ）／キログラム（ｋｇ）体重）が、ＣＬＰ外科手術直後、皮下投与された（Ｗａｎｇら、１９９９年）。複数のマウス（ｎ＝１３、＊＊Ｐ＜０．０１）が、ＣＬＰ２４時間後、４ミリグラム（ｍｇ）／キログラム（ｋｇ）もしくはビヒクルを用いて腹腔内注射された。更なる２回の注射が、２日目および３日目、与えられた。ビヒクル（２０％ＤＭＳＯ水）処理もしくは化合物７（４ミリグラム（ｍｇ）／キログラム（ｋｇ）；腹腔内）処理が、敗血症誘導２４時間後、始められたが、２日目および３日目、日に２回、繰り返された。動物生存率が、１４日間、モニターされた。
【００６５】
ＮＭＲデーター
化合物３：黄色固体（９０％）。融点２４８〜２５０℃。ＩＲ（ヌジョールムル）νｃｍ-1：３２２０、３３１５、１６５０、１６０３、１５６８、１５０６。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤ3ＯＤ）δ６．９９（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、Ｈ３、Ｈ５）、７．９４（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、Ｈ２、Ｈ６）、８．８７（ｓ、１Ｈ、Ｈ７）。13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、ＣＤ3ＯＤ）δ１１７．９（Ｃ３、Ｃ５）、１２１．７（Ｃ１）、１３４．７（Ｃ４、Ｃ６）、１６３．２（Ｃ７）、１６６．１（Ｃ４）。ＭＳ（ＥＳＩ）１３７．１（Ｍ＋１、２５）。ＥＳＩＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  Ｃ7Ｈ9Ｎ2Ｏに関し、計算１３７．０７１５、実測１３７．０７１９。
化合物４：赤色固体（８５％）。融点５８〜６０℃。ＩＲ（ヌジョールムル）νｃｍ-1：３３６１、１６７１、１６０４、１５１３。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ２．８１（ｄ、３Ｈ、Ｊ＝３．３Ｈｚ、Ｍｅ）、６．８７（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、Ｈ３、Ｈ５）、７．４２（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、Ｈ２、Ｈ６）、７．９５（ｓ、１Ｈ、Ｈ７）、８．３５（ｂｒ  ｓ、２Ｈ、ＯＨ、ＮＨ、Ｄ2Ｏ交換可能）。13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ３６．１（Ｍｅ）、１１６．５（Ｃ３、Ｃ５）、１２７．９（Ｃ１）、１２９．６（Ｃ２、Ｃ６）、１５１．２（Ｃ７）、１５７．８（Ｃ４）。ＭＳ（ＥＳＩ）１５１．１（Ｍ＋１、１００）、１５２．１（Ｍ＋２、８）。ＥＳＩＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  Ｃ8Ｈ11Ｎ2Ｏに関し、計算１５１．０８７１、実測１５１．０８７４。
化合物５：褐色固体（８８％）。融点１５４〜１５６℃。ＩＲ（ヌジョールムル）νｃｍ-1：３４０６、３２９１、１５９９、１５０８。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ６．７０（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝７．５、１．２Ｈｚ、Ｈ４’）、６．８２（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、Ｈ３、Ｈ５）、７．０７（ｄｄ、２Ｈ、Ｊ＝７．５、１．２Ｈｚ、Ｈ２’、Ｈ６’）、７．１６（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝７．５Ｈｚ、Ｈ３’、Ｈ５’）、７．５０（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、Ｈ２、Ｈ６）、７．７７（ｓ、１Ｈ、Ｈ７）、８．５０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、Ｄ2Ｏ交換可能）、９．１５（ｓ、１Ｈ、Ｄ2Ｏ交換可能）。13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ１１３．１（Ｃ２’、Ｃ６’）、１１６．４（Ｃ３、Ｃ５）、１１９．５（Ｃ４’）、１２８．２（Ｃ３’、Ｃ５’）、１２８．８（Ｃ１）、１２９．８（Ｃ２、Ｃ６）、１３８．２（Ｃ７）、１４６．９（Ｃ１’）、１５８．６（Ｃ４）。ＭＳ（ＥＳＩ）２１３．１（Ｍ＋１、８５）、２１４．１（Ｍ＋２、１０）。ＥＳＩＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  Ｃ13Ｈ13Ｎ2Ｏに関し、計算２１３．１０２８、実測２１３．１０３０。
化合物６：褐色残渣（８４％）。ＩＲ（ヌジョールムル）νｃｍ-1：３４１９、１６８１、１６７０、１６５０、１６３５、１６０３、１５０７。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ３．６５（ｓ、３Ｈ、ＯＭｅ）、６．７８（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、Ｈ３’、Ｈ５’）、６．８０（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、Ｈ３、Ｈ５）、７．０１（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．７Ｈｚ、Ｈ２’、Ｈ６’）、７．４７（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、Ｈ２、Ｈ６）、７．７２（ｓ、１Ｈ、Ｈ７）、８．４０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、Ｄ2Ｏ交換可能）、８．９１（ｓ、１Ｈ、Ｄ2Ｏ交換可能）。13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ５５．９（ＯＭｅ）、１１４．７（Ｃ３’、Ｃ５’）、１１５．４（Ｃ２’、Ｃ６’）、１１６．６（Ｃ３、Ｃ５）、１２８．４（Ｃ１）、１３０．２（Ｃ２、Ｃ６）、１３７．２（Ｃ７）、１４１．２（Ｃ１’）、１５１．２（Ｃ４’）、１６３．９（Ｃ４）。ＭＳ（ＥＳＩ）２４１．１（Ｍ−１、６５）。ＥＳＩＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  Ｃ14Ｈ13Ｎ2Ｏ2に関し、計算２４１．０９７７、実測２４１．０９８１。
化合物７：褐色固体（８９％）。融点１２０〜１２１℃。ＩＲ（ヌジョールムル）νｃｍ-1：３３１９、３３０２、１６１９、１５１４。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ３．６９（ｓ、３Ｈ、ＯＭｅ）、６．８０（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、Ｈ３’、Ｈ５’）、６．９５（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、Ｈ５）、７．０４（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、Ｈ２’、Ｈ６’）、７．２１（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、Ｈ６）、７．４２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝１０．６、１．８Ｈｚ、Ｈ２）、７．７０（ｓ、１Ｈ、Ｈ７）、８．７８（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、Ｄ2Ｏ交換可能）、９．１１（ｓ、１Ｈ、Ｄ2Ｏ交換可能）。13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ５６．０（ＯＭｅ）、１１３．３（ＪCCF＝１９．５Ｈｚ、Ｃ２）、１１４．３（Ｃ３’、Ｃ５’）、１１５．５（Ｃ２’、Ｃ６’）、１１８．７（Ｃ５）、１２３．４（Ｃ６）、１３０．２（ＪCCCF＝４．９Ｈｚ、Ｃ１）、１３５．９（Ｃ７）、１４０．７（Ｃ１’）、１４５．６（ＪCCF＝１３．７Ｈｚ、Ｃ４）、１５２．６（ＪCF＝２３９．２Ｈｚ、Ｃ３）、１５４．４（Ｃ４’）。ＭＳ（ＥＳＩ）２６１．１（Ｍ＋１、３０）、２６２．１（Ｍ＋２、６）。ＥＳＩＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  Ｃ14Ｈ14Ｎ2Ｏ2Ｆに関し、計算２６１．１０３９、実測２６１．１０４８。
化合物８：褐色固体（８９％）。融点１０８〜１１０℃。ＩＲ（ヌジョールムル）νｃｍ-1：１６０１、１５５７、１５０１。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ３．６９（ｓ、３Ｈ、ＯＭｅ）、６．８０（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、Ｈ３’、Ｈ５’）、７．０３（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、Ｈ２’、Ｈ６’）、７．１３（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、Ｈ５）、７．３２（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．６、１．８Ｈｚ、Ｈ６）、７．５４（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．８Ｈｚ、Ｈ２）、７．６７（ｓ、１Ｈ、Ｈ７）、８．８０（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、Ｄ2Ｏ交換可能）、９．１２（ｓ、１Ｈ、Ｄ2Ｏ交換可能）。13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ５５．９（ＯＭｅ）、１１４．３（Ｃ３’、Ｃ５’）、１１５．５（Ｃ２’、Ｃ６’）、１１７．８（Ｃ５）、１２１．６（Ｃ３）、１２６．４（Ｃ６）、１２７．６（Ｃ２）、１３０．６（Ｃ１）、１３５．５（Ｃ７）、１４０．６（Ｃ１’）、１５３．５（Ｃ４）、１５４．４（Ｃ４’）。ＭＳ（ＥＳＩ）２７７．１（ＭＣｌ35＋１、６０）、２７９．１（ＭＣｌ37＋１、２５）。ＥＳＩＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  Ｃ14Ｈ13Ｎ2Ｏ2Ｃｌに関し、計算２７７．０７４４、実測２７７．０７３９。
化合物９：褐色固体（９０％）。融点１３５〜１３７℃。ＩＲ（ヌジョールムル）νｃｍ-1：３４５３、３３０５、１５９７。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ３．６９（ｓ、３Ｈ、ＯＭｅ）、６．８０（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、Ｈ３’、Ｈ５’）、６．９７（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、Ｈ５）、７．０３（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、Ｈ２’、Ｈ６’）、７．４５（ｄｄ、１Ｈ、Ｊ＝６．２、２．２Ｈｚ、Ｈ６）、７．６９（ｓ、１Ｈ、Ｈ７）、７．７８（ｄ、１Ｈ、Ｊ＝１．８Ｈｚ、Ｈ２）、８．８５（ｓ、１Ｈ、Ｄ2Ｏ交換可能）、９．１５（ｓ、１Ｈ、Ｄ2Ｏ交換可能）。13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ５５．９（ＯＭｅ）、１１０．８（Ｃ３）、１１４．２（Ｃ３’、Ｃ５’）、１１５．５（Ｃ２’、Ｃ６’）、１１７．４（Ｃ５）、１２７．１（Ｃ６）、１３０．８（Ｃ２）、１３１．０（Ｃ１）、１３５．３（Ｃ７）、１４０．６（Ｃ１’）、１５４．４（Ｃ４’）、１５４．５（Ｃ４）。ＭＳ（ＥＳＩ）３２１．０（ＭＢｒ79＋１、１００）、３２３．０（ＭＢｒ81＋１、８０）。ＥＳＩＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  Ｃ14Ｈ13Ｎ2Ｏ2Ｂｒに関し、計算３２１．０２３９、実測３２１．０２４０。
化合物１０：白色固体（８６％）。融点９３〜９５℃。ＩＲ（ヌジョールムル）νｃｍ-1：３３００、１６００、１５０６。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ３．３８（ｓ、３Ｈ、Ｍｅ）、６．８１（ｔ、１Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、Ｈ４’）、６．８３（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、Ｈ３、Ｈ５）、７．２４（ｔ、２Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、Ｈ３’、Ｈ５’）、７．３７（ｄｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．１、１．１Ｈｚ、Ｈ２’、Ｈ６’）、７．５７（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、Ｈ２、Ｈ６）、７．６０（ｓ、１Ｈ、Ｈ７）、８．４３（ｓ、１Ｈ、ＯＨ、Ｄ2Ｏ交換可能）。13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ３３．１（Ｍｅ）、１１５．５（Ｃ２’、Ｃ６’）、１１６．３（Ｃ３、Ｃ５）、１２０．５（Ｃ４’）、１２８．３（Ｃ３’、Ｃ５’）、１２９．６（Ｃ２、Ｃ６）、１２９．８（Ｃ１）、１３３．５（Ｃ７）、１４９．２（Ｃ１’）、１５８．３（Ｃ４）。ＭＳ（ＥＳＩ）２２７．１（Ｍ＋１、１００）、２２８．１（Ｍ＋２、２０）。ＥＳＩＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  Ｃ14Ｈ15Ｎ2Ｏに関し、計算２２７．１１８４、実測２２７．１１７４。
化合物１１：白色固体（９０％）。融点１６５〜１６７℃。ＩＲ（ヌジョールムル）νｃｍ-1：３２５３、１６５１、１６３５、１６０６、１５５６、１５１４。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ３．７８（ｓ、３Ｈ、ＯＭｅ）、６．９３（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、Ｈ３、Ｈ５）、７．６０（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、Ｈ２、Ｈ６）、８．０８（ｓ、１Ｈ、Ｈ７）、８．７８（ｓ、１Ｈ、Ｄ2Ｏ交換可能）、９．８５（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、Ｄ2Ｏ交換可能）。13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ５２．４（ＯＭｅ）、１１６．４（Ｃ３、Ｃ５）、１２７．４（Ｃ１）、１２９．３（Ｃ２、Ｃ６）、１４４．９（Ｃ７）、１５４．９（Ｃ４）、１５９．８（Ｃ＝Ｏ）。ＭＳ（ＥＳＩ）１９５．１（Ｍ＋１、１００）、１９６．１（Ｍ＋２、１０）。ＥＳＩＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  Ｃ9Ｈ11Ｎ2Ｏ3に関し、計算１９５．０７７０、実測１９５．０７７６。
化合物１２：白色固体（８９％）。融点１８９〜１９０℃。ＩＲ（ヌジョールムル）νｃｍ-1：３３３８、３２０２、１６７８、１６０７、１５８１、１５５８、１５１３。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ１．２１（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、ＯＣＨ2ＣＨ3）、４．１３（ｑ、２Ｈ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、ＯＣＨ2ＣＨ3）、６．８４（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、Ｈ３、Ｈ５）、７．５０（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、Ｈ２、Ｈ６）、８．００（ｓ、１Ｈ、Ｈ７）、８．７３（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、Ｄ2Ｏ交換可能）、９．７４（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、Ｄ2Ｏ交換可能）。13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ１５．１（ＯＣＨ2ＣＨ3）、６１．５（ＯＣＨ2ＣＨ3）、１１６．４（Ｃ３、Ｃ５）、１２７．５（Ｃ１）、１２９．３（Ｃ２、Ｃ６）、１４４．８（Ｃ７）、１５４．４（Ｃ４）、１５９．８（Ｃ＝Ｏ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２０９．１（Ｍ＋１、１００）、２１０．１（Ｍ＋２、１０）。ＥＳＩＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  Ｃ10Ｈ13Ｎ2Ｏ3に関し、計算２０９．０９２６、実測２０９．０９３２。
化合物１３：白色固体（８９％）。融点１５５〜１５６℃。ＩＲ（ヌジョールムル）νｃｍ-1：３３４６、３２４３、１６６０、１６０８、１５７８、１５３４、１５１０。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ１．４８（ｓ、９Ｈ、Ｃ（ＣＨ3）3）、６．８７（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、Ｈ３、Ｈ５）、７．５３（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、Ｈ２、Ｈ６）、８．０１（ｓ、１Ｈ、Ｈ７）、８．６９（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、Ｄ2Ｏ交換可能）、９．５８（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、Ｄ2Ｏ交換可能）。13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ２８．７（Ｃ（ＣＨ3）3）、８０．２（Ｃ（ＣＨ3）3）、１１６．４（Ｃ３、Ｃ５）、１２７．７（Ｃ１）、１２９．２（Ｃ２、Ｃ６）、１４４．２（Ｃ７）、１５３．４（Ｃ４）、１５９．６（Ｃ＝Ｏ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２３７．１（Ｍ＋１、３０）、２３８．１（Ｍ＋２、５）。ＥＳＩＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  Ｃ12Ｈ17Ｎ2Ｏ3に関し、計算２３７．１２３９、実測２３７．１２４９。
化合物１４：白色固体（９０％）。融点１５９〜１６０℃。ＩＲ（ヌジョールムル）νｃｍ-1：３３９７、１６６８、１６０６、１５５６、１５０６。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ５．１６（ｓ、２Ｈ、ＯＣＨ2）、６．８４（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、Ｈ３、Ｈ５）、７．２６〜７．３５（ｍ、３Ｈ、ＡｒＣＨ）、７．３６（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、ＡｒＣＨ）、７．５１（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、Ｈ２、Ｈ６）、８．００（ｓ、１Ｈ、Ｈ７）、８．７１（ｓ、１Ｈ、Ｄ2Ｏ交換可能）、９．９１（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、Ｄ2Ｏ交換可能）。13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ６７．１（ＯＣＨ2Ａｒ）、１１６．４（Ｃ３、Ｃ５）、１２７．４（Ｃ１）、１２８．８（ＣＨ）、１２９．２（Ｃ２、Ｃ６）、１２９．３（ＣＨ）、１３７．９（ＣＣＨ）、１４５．２（Ｃ７）、１５４．３（Ｃ４）、１５９．８（Ｃ＝Ｏ）。ＭＳ（ＥＳＩ）２７１．１（Ｍ＋１、１００）、２７２．１（Ｍ＋２、１０）。ＥＳＩＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  Ｃ15Ｈ15Ｎ2Ｏ3に関し、計算２７１．１０８３、実測２７１．１０８９。
化合物１５：白色固体（８９％）。融点１４７〜１４８℃。ＩＲ（ヌジョールムル）νｃｍ-1：３４１２、３２７０、１６８３、１６０２、１５４３、１５１４。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ３．７６（ｓ、３Ｈ、ＯＭｅ）、５．０８（ｓ、２Ｈ、ＯＣＨ2）、６．８３（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、Ｈ３、Ｈ５）、６．８９（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、ＣＨＣＯＭｅ）、７．３３（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、ＣＨＣＣＯＭｅ）、７．５１（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、Ｈ２、Ｈ６）、８．００（ｓ、１Ｈ、Ｈ７）、８．７０（ｓ、１Ｈ、Ｄ2Ｏ交換可能）、９．８２（ｂｒ  ｓ、１Ｈ、Ｄ2Ｏ交換可能）。13Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ５５．６（ＯＭｅ）、６６．９（ＯＣＨ2）、１１４．６（Ｃ３、Ｃ５）、１１６．４（ＣＣＯＭｅ）、１２７．４（Ｃ１）、１２９．３（Ｃ２、Ｃ６）、１２９．８（ＣＣＣＣＯＭｅ）、１３０．７（ＣＣＣＯＭｅ）、１４５．０（Ｃ７）、１５４．３（Ｃ４）、１５９．８（Ｃ＝Ｏ）、１６０．６（ＣＯＭｅ）。ＭＳ（ＥＳＩ）３０１．１（Ｍ＋１、２５）、３０２．１（Ｍ＋２、５）。ＥＳＩＨＲＭＳ  ｍ／ｚ  Ｃ16Ｈ17Ｎ2Ｏ4に関し、計算３０１．１１８８、実測３０１．１２００。
化合物１６：白色固体（８６％）。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ３．７６（ｓ、３Ｈ）、５．０８（ｓ、２Ｈ）、６．８２（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、６．８７（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．３１（ｄ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、２Ｈ）、７．４９（ｄ、Ｊ＝８．８Ｈｚ、２Ｈ）、７．９９（ｓ、１Ｈ）、８．７０（ｓ、１Ｈ）。ＭＳ  ｍ／ｚ  ２９９．５（Ｍ−Ｈ）。
化合物１７：白色固体（８７％）。1Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ６．８９（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、２Ｈ）、７．５４（ｍ、５Ｈ）、７．９４（ｄ、Ｊ＝７．９Ｈｚ、２Ｈ）、８．４０（ｓ、１Ｈ）、８．８５（ｓ、１Ｈ）。ＭＳ  ｍ／ｚ  ２３９．３（Ｍ−Ｈ）。
化合物１８：白色固体（８９％）。1Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ１．４４（ｓ、９Ｈ）、６．９８（ｄｄ、Ｊ＝２．５、８．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．２７（ｄ、Ｊ＝８．０Ｈｚ、１Ｈ）、７．４１（ｄｄ、Ｊ＝２．２、１２．１Ｈｚ、１Ｈ）、７．９７（ｓ、１Ｈ）、８．９８（ｓ、１Ｈ）。ＭＳ  ｍ／ｚ  ２５３．３（Ｍ−Ｈ）。
化合物１９：褐色固体（８７％）。1Ｈ  ＮＭＲ（２７０ＭＨｚ、（ＣＤ3）2ＣＯ）δ６．７７（ｔ、Ｊ＝６．９Ｈｚ、１Ｈ）、７．０１（ｔ、Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．１２〜７．２９（ｍ、４Ｈ）、７．４８（ｄｄ、Ｊ＝１．７、１０．４Ｈｚ、１Ｈ）、７．７７（ｓ、１Ｈ）。ＭＳ  ｍ／ｚ  ２２９．７（Ｍ−Ｈ）。
【００６６】
酵素活性を求める分光アッセイ。
Ｌ−ドーパクロームメチルエステルの保管（ストック）したての溶液（２．４ｎＭ）が、過沃素酸ナトリウムを用いたＬ−３，４−ジヒドロキシフェニルアラニンメチルエステルの酸化により、発生されたが、橙（オレンジ）色溶液を生成させている。活性が、ｐＨ６、５０ｍＭ燐酸カリウム緩衝液（バッファー）中、ＭＩＦ溶液（８５０ナノグラム（ｎｇ）／ミリリットル（ｍＬ））１μＬを含有しているセルにドーパクロームメチルエステル（０．３ミリリットル（ｍＬ））を加えていくことにより、室温において求められたが、分光器で、４７５ナノメートル（ｎｍ）での２〜２０秒の吸光における減少を測定している。これら阻害剤３〜１５が、種々の濃度（０．１〜１００ｍＭ）においてＤＭＳＯに溶解され、１マイクロリットル（μＬ）が、このドーパクロームの添加前にＭＩＦを有するこのセルに加えられた。
【００６７】
動物研究。
化合物７が、処置が、ＣＬＰモデル（図４）において２４時間後、開始された場合でさえ、保護的である。複数のマウスが、ＣＬＰ２４時間後、３．５ｍｇ／ｋｇ（ｎ＝１３、＊＊Ｐ＜０．０１）もしくはビヒクルを用いて腹腔内注射された（ｎ＝１３）。２回の更なる注射が、２日目および３日目、与えられた。ＣＬＰの手順の詳細が、以降のとおり、完遂されている：麻酔された（ケタミン１００ｍｇ／ｋｇおよびキシラジン８ｍｇ／ｋｇが、筋内投与された）複数の雄Ｂａｌｂ／Ｃマウスにおいて盲腸が、結紮され、単回穿刺を与えられた。腹からのアクセスが、中線切開経由で、得られた。腹からの接近（アクセス）が、得られた。盲腸が、単離され、回盲弁の下、６−０絹（シルク）結紮糸を用いて結紮され、盲腸が、２２Ｇ針を用いて一旦穿刺され、糞（およそ１ｍ）が、この穴から押し出され、盲腸が、腹の空洞中に戻して入れられた。腹が、２層の６−０Ｅｔｈｉｌｏｎ縫合糸を用いて閉じられた。抗生物質（プレマキシン０．５ミリグラム（ｍｇ）／キログラム（ｋｇ）、皮下、合計量０．５ミリリットル（ｍｌ）／マウスで）が、ＣＬＰ直後、投与され、単回用量の蘇生流動体（通常の食塩水、２０ミリリットル（ｍｌ）／キログラム（ｋｇ）体重）が、ＣＬＰ外科手術直後、皮下投与された（Ｗａｎｇら、１９９９年）。
【００６８】
実施例２．急性炎症に対する応答における白血球の動員への化合物７の効果。
空気（エア）パウチが、０日目（６ｍＬ）および３日目（３ｍＬ）、無菌空気（エア）を皮下注射していくことにより、複数のスイスウェブスター（Ｓｗｉｓｓ  Ｗｅｂｓｔｅｒ）雄マウス（２５〜３０ｇ）上、標準手順（Ｇａｒｃｉａ−Ｒａｍａｌｌｏら、２００２年）に従いながら、調製された。６日目、複数の動物が、指し示されたとおり、腹腔内（ｉ．ｐ．）もしくは栄養（経口）のビヒクル（３５０μＬ２０％ＤＭＳＯ）もしくは化合物７（７ｍｇ／ｋｇ）を用いて処置された。１５分後、これら動物が、該空気（エア）パウチの空洞中に１ｍＬＰＢＳ中１％カラゲナンを注射していくことにより、挑まれた。カラゲナン注射５時間後、これら動物が、屠られ、これらパウチが、ＰＢＳ洗浄され、滲出物が、回収され、そして浸潤細胞合計数が、定量された。プロットが、ビヒクル単独（ｖｅｈ．）を用いて見られたものに対して規格化された細胞数を示す。
【００６９】
結果が、図５中、示されている。化合物７を用いた腹腔内（ｉ．ｐ．）処置および経口処置両方が、空気（エア）パウチの空洞中へのカラゲナン処置により引き起こされた炎症に対する応答における白血球の動員における有意な低減を示した。
【００７０】
もう１種別の実験中、空気（エア）パウチが、上のとおり調製された。６日目、複数の動物が、屠っていき、細胞を回収していく前に、指し示された複数の時刻においてビヒクル（３５０μＬ２０％ＤＭＳＯ）もしくは化合物７（７ｍｇ／ｋｇ、栄養）を用いて処置された。全ての場合（ケース）中、１％カラゲナンが、屠っていく５時間前、空気（エア）パウチの空洞中に注入された。
【００７１】
結果が、図６中、示されている。プロットが、ビヒクル単独（ｖｅｈ．）を用いて見られたものに対して規格化された細胞数を示す。これらマウスが、定量用空気（エア）パウチ細胞を回収していく５．２５時間および７時間前（しかし９時間前でない）、化合物７を用いて経口処置された場合、白血球の動員における有意な低減が、観察された。これが、経口投与を用いると、化合物７が、７〜９時間の明らかな生物学的半減寿命を持つことを指し示す。
【００７２】
実施例３．化合物７が、致命的な内毒素血症からマイスを保護する。
内毒素血症が、ＬＰＳ（１６ｍｇ／ｋｇ、頂、もしくは、１９ｍｇ／ｋｇ、底）注射により、複数のＢａｌｂ／Ｃマウスにおいて誘導された。複数のマウスが、ＬＰＳ点滴２時間前、および、ＬＰＳ点滴２４時間後、ビヒクル（３５０μＬ２０％ＤＭＳＯ）もしくは化合物７（７ｍｇ／ｋｇ）を用いて腹腔内（ｉ．ｐ．）処置された。これらマウスの生存率が、モニターされていた。
【００７３】
結果が、図７中、示されている。化合物７が、さもなければ致命的なＬＰＳ被曝からのこれらマウスに対する保護を与えた。
【００７４】
参照
Al-Abed, Y.; Dabideen, D.; Aljabari, B.; Valster, A.; Messmer, D. et al. ISO-I binding to the tautomerase active site of MIF inhibits its pro-inflammatory activity and increases survival in severse sepsis. J. Biol Chem. 2005, 280, 36541-35644.
Bozza, M.; Satoskar, A. R.; Lin, G.; Lu, B.; Humbles, A. A. et al. Targeted disruption of migration inhibitory factor gene reveals its critical role in sepsis. J. Exp. Med. 1999, 189, 341-346.
Calandra, T.; Echtenacher, B.; Roy, D. L.; Pugin, J.; Metz, C. N.; Hultner, L.; Heumann, D.; Mannel, D.; Bucala, R.; Glauser, M. P. Protection from septic shock by neutralization of macrophage migration inhibitory factor. Nat. Med. 2000, 6, 164-170.
Calandra, T.; Roger, T. Macrophage migration inhibitory factor: a regulator of innate immunity. Nat. Rev. Immunol. 2003, 3, 791-800.
Cvetkovic, L; Al-Abed, Y. et al. Critical role of macrophage migration inhibitory factor activity in experimental autoimmune diabetes. Endocrinol. 2005, 146, 2942-2951.
Cheng, K. F.; Al-Abed, Y. Critical modifications of the ISO-I scaffold improve its potent inhibition of macrophage migration inhibitory factor (MIF) tautomerase activity. Bioorg. Med. Chem. Lett. 2006, 16, 3376-9.
Dios, A.; Mitchell, R. A.; Aljabari, B.; Lubetsky, J.; O'Connor, K. A.; Liao, H.; Senter, P. D.; Manogue, K. R.; Lolis, E.; Metz, C; Bucala, R.; Callaway, D. J. E.; Al-Abed, Y. Inhibition of MIF bioactivity by rational design of pharmacological inhibitors of MIF tautomerase activity. J. Med Chem. 2002, 45, 2410-2416.
Garcia-Ramallo E.; Marques, T. et al. Resident cell chemokine expression serves as the major mechanism for leukocyte recruitment during local inflammation. J. Immunol. 2002, 169, 6467-6473.
Lubetsky, J. B.; Dios, A.; Han, J.; Aljabari, B.; Ruzsicska, B.; Mitchell, R.; Lolis, E.; Al-Abed, Y. The tautomerase active site of macrophage migration inhibitory factor is a potential target for discovery of novel anti-inflammatory agents. J. Biol. Chem. 2002, 277, 24976-24982.
Mitchell, R. A.; Liao, H.; Chesney, J.; Fingerle-Rowson, G.; Baugh, J. et al. Macrophage migration inhibitory factor (MIF) sustains macrophage pro-inflammatory function by inhibiting p53: regulatory role in the innate immune response. Proc Natl Acad Sci USA 2002, 99, 345-350.
Orita, M.; Yamamoto, S.; Katayama, N.; Aoki, M.; Takayama, K.; Yamagiwa, Y.; Seki, N.; Suzuki, H.; Kurihara, H.; Sakashita, H.; Takeuchi, M.; Fujita, S.; Yamada, T.; Tanaka, A. Coumarin and chromen-4-one analogues as tautomerase inhibitors of macrophage migration inhibitory factor: Discovery and X-ray crystallography. J. Med. Chem. 2001, 44, 540-547.
Orita, M.; Yamamoto, S.; Katayama, N.; Fujita, S. Macrophage migration inhibitory factor and the discovery of tautomerase inhibitors. Curr. Pharm. Des. 2002, 8, 1297-1317.
Riedemann, N. C.; Guo, R. F.; Ward, P.A. Novel strategies for the treatment of sepsis. Nat. Med. 2003, 9, 517-524.
Roger, T.; David, J.; Glauser, M. P.; Calandra, T. MIF regulates innate immune responses through modulation of Toll-like receptor 4. Nature 2001, 414, 920-924.
Rosengren, E.; Bucala, R.; Aman, P.; Jacobsson, L.; Odh, G. et al. The immuno-regulatory mediator macrophage migration inhibitory factor (MIF) catalyzes a tautomerization reaction. Mol. Med. 1996, 2, 143-149.
Senter, P. D.; Al-Abed, Y.; Metz, C. N.; Benigni, F.; Mitchell, R. A. et al. Inhibition of macrophage migration inhibitory factor (MIF) tautomerase and biological activities by acetaminophen metabolites. Proc Natl Acad Sci USA 2002, 99, 144-149.
Sugimoto, H.; Suzuki, M.; Nakagawa, A.; Tanaka, I.; Fujinaga, M. et al. Crystallization of rat liver macrophage migration inhibitory factor for MAD analysis. J. Struct. Biol. 1995, 115, 331-334.
Sun, B.; Nishihira, J. et al. Macrophage migration inhibitory factor promotes tumor invasion and metastasis via the Rho-dependent pathway. Clin. Cancer Res. 2005, 11, 1050-1058.
Sun, H. W.; Bernhagen, J.; Bucala, R.; Lolis, E. Crystal structure at 2.6-A resolution of human macrophage migration inhibitory factor. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1996, 93, 5191-5196.
Suzuki, M.; Sugimoto, H.; Nakagawa, A.; Tanaka, I.; Nishihira, J. et al. Crystal structure of the macrophage migration inhibitory factor from rat liver. Nat. Struct. Biol. 1996, 3, 259-266.
Taylor, A. B.; Johnson, W. H., Jr.; Czerwinski, R. M.; Li, H. S.; Hackert, M. L. et al. Crystal structure of macrophage migration inhibitory factor complexed with (E)-2-fluoro-p-hydroxycinnamate at 1.8 A resolution: implications for enzymatic catalysis and inhibition. Biochemistry 1999, 38, 7444-7452.
Wang, H.; Bloom, O.; Zhang, M.; Vishnubhakat, J. M.; Ombrellino, M. et al. HMG-1 as a late mediator of endotoxin lethality in mice. Science 1999, 285, 248-251.
【００７５】
上の観点中、本発明の幾つかの利点が、達成されており、他の利点が、達成されたことが、分かる。
【００７６】
種々の変更が、本発明範囲から逸脱していくことなく、上の方法および組成物中、なされ得るので、上の記載中、含有された、添付図面中、示された全事項が、例示として解釈されているべきであり、限定していく感覚中でないと意図されている。
【００７７】
この明細書中、引用された全参照が、本明細書により援用されている。本明細書中のこれら参照の議論が、単に、その著者らによりなされた主張を要約すると意図されており、如何なる参照も先行技術を構成すると全く認められていない。出願人どもが、これら引用参照の正確さおよび適切さに挑むに当たっての権利を保留する。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１】複数のＭＩＦ阻害剤の合理的設計（デザイン）に関するある１スキームを示しているある１ダイヤグラムである。
【図２】二置換ヒドラゾンたる化合物１０に関する化学式である。
【図３】化合物７が、複数のＬＰＳ処理マクロファージからのＴＮＦ分泌を阻害することを示している複数の実験結果のある１グラフである。ＲＡＷ２６７．４マクロファージ（１０5個）が、ＬＰＳ、もしくは、抗ＭＩＦ（ＸＩＶ．１５．５；α−ＭＩＦ）マウスモノクローナル抗体１０μｇ／ｍＬ添加３０分前に種々の濃度の化合物７（０．０１〜１００μＭ）を用いて処置された。１６時間のインキュベート後、細胞培養上清が、ＥＬＩＳＡによるＴＮＦα濃度の決定用に回収された。データーが、平均±Ｓ．Ｄ．（ｎ＝３、＊、ｐ＜０．０１）として表示されている。
【図４】ヒドラゾン化合物７が、ＣＬＰモデルにおける２４時間の遅い処置後、保護的であることを示している複数の実験結果のある１グラフである。複数のマウスが、ＣＬＰ２４時間後、化合物７（＜＜ヒドラゾン＞＞）（４ｍｇ／ｋｇ）（ｎ＝１３、ｐ＜０．０１）もしくはビヒクルと共に腹腔内注射された（ｎ＝１３）。単回注射が、２０％ＤＭＳＯ：８０％生理食塩水溶液２００μＬ中、化合物７（１００μｇ、４ｍｇ／ｋｇに等価）から構成された。化合物７の更なる投与（日に２回）が、２日目および３日目、与えられた。
【図５】化合物７が、経口もしくは腹腔内（Ｉ．Ｐ．）投与されたが、急性炎症の樹立されたモデルにおける白血球の動員を阻害することを示している複数の実験結果のある１グラフである。ビヒクル単独に相対し、＊ｐ＜０．０５（ｎ＝５）；＊＊ｐ＜０．００６（ｎ＝２０）。
【図６】化合物７が、カラゲナンと共に挑まれた空気（エア）パウチモデルにおける白血球の浸潤の阻害により査定されたとおり、７〜９時間の明らかな生物学的半減期を持つことを示している複数の実験結果のある１グラフである。ビヒクル単独に相対し、＊＊ｐ＜０．００６（ｎ＝２０）。
【図７】化合物７が、内毒素血症動物モデルにおける保護剤であることを示している複数の実験結果のある１グラフである。
【図１】
2009530401.tif 000009
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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