(57)【要約】分析された血液試料中の血小板を識別かつ定量するための方法は、最初に血液試料を、細胞の屈折率の変化を引き起こすゴースト試薬で希釈する工程を含む。屈折率の変化が原因で、ゴーストとなった赤血球によって散乱される光は、血小板によって散乱される光と比較すると実質的に少なくなるであろう。これにより、正常な赤血球、断片化した赤血球、および小球性赤血球が含まれている領域とは区別できる領域に属する、分析される血液試料の散布図内の血小板の位置が生じる。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
血球試料中の赤血球と血小板を識別する方法であって：
（ａ）赤血球および血小板を含む血球試料をゴースト試薬と混合して、血球試料懸濁液を形成する工程であって、該ゴースト試薬が、血球試料懸濁液中の赤血球の屈折率を変化させるために有効である工程；
（ｂ）該血球試料懸濁液を、機器の粒子センシングゾーンに流す工程；
（ｃ）血球試料懸濁液中に含まれている細胞と交差するように、該粒子センシングゾーンに光線をあてる工程；
（ｄ）粒子センシングゾーンを通過する細胞によって散乱される光を検出する工程；および
（ｅ）細胞によって散乱される光を分析して、血小板と赤血球を識別する工程；
を含む、方法。
【請求項２】
赤血球と識別される血小板を数える工程をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
血球試料は全血を含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
赤血球および血小板を含む血球試料をゴースト試薬と混合して血液試料懸濁液を形成することによって、該赤血球によって散乱される光を該血小板によって散乱される光と異なるようにする、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
散乱光を検出する工程が、入射光から２０度未満の光散乱シグナルを検出する工程を含む、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
ゴースト試薬が赤血球中のヘモグロビンを失わせるために有効である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記赤血球が正常な赤血球および異常な赤血球を含む、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記方法において使用される色素または染料は存在しない、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
細胞によって散乱される光を分析して血小板から赤血球を識別する工程が、センシングゾーンでの細胞の飛行時間に対して散乱される光を分析する工程を含む、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
血小板数から白血球数を減算して補正された血小板数を得る工程をさらに含み、ここで白血球数は血小板数と同じ試料から導かれる、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
該血液試料を含む懸濁液が該自動血液学的分析装置の輸送経路中を流れ、光線を該自動血液学的分析装置の該輸送経路中にあて、それによって光を該自動血液学的分析装置の該輸送経路中を通過する血液試料細胞によって散乱させ、そして、該血液試料の細胞の散布図が、該血液試料細胞によって散乱されかつ散乱光検出器によって検出されるとき該光の特性にしたがって作成される、細胞分析装置によって血液試料を分析する方法において、
該懸濁液が該懸濁液中の該非血小板の屈折率を変化させるために有効である所定の試薬を含み、これにより該非血小板によって散乱される光を該血小板によって散乱される光と異なるようにし、そして、該散布図の中の血小板の位置が、該非血小板を含む範囲と離れかつ容易に区別することができる領域に属する、改善。
【請求項１２】
前記散布図内の前記血小板の位置が、正常な赤血球、断片化した赤血球、および小球性赤血球を含む範囲と離れかつ容易に区別することができる領域に属する、請求項１１に記載の改善。
【請求項１３】
前記散布図が、センシングゾーンでの細胞の飛行時間に対する血液試料の細胞によって散乱される該光の振幅の分布を含む、請求項１１に記載の改善。
【請求項１４】
前記所定の試薬が、前記懸濁液中の前記非血小板の屈折率を変化させるために有効であり、そして、前記非血小板によって散乱される光が、前記血小板によって散乱される光よりも一般に低い振幅および高い飛行時間を有する、請求項１１に記載の改善。
【請求項１５】
前記非血小板は、正常な赤血球、断片化した赤血球、および小球性赤血球を含む、請求項１４に記載の改善。
【請求項１６】
前記所定の試薬は、完全な細胞膜を保持しながら赤血球中のヘモグロビンを失わせるために有効であるゴースト試薬を含む、請求項１１に記載の改善。
【請求項１７】
前記非血小板は、正常な赤血球、断片化した赤血球、および小球性赤血球を含む、請求項１１に記載の改善。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、赤血球（ｅｒｙｔｈｒｏｃｙｔｅ）または赤血球（ｒｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ）（小赤血球および断片化した赤血球を含む）から、および普通より大きいまたは巨大な血小板、および血小板の凝集物または塊と血小板を識別し、数えるための、蛍光染色技術または材料を利用しない、光散乱技術を利用する方法ならびに機器に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
血液試料の成分を分析するために現在使用されている医療機器は、他の細胞または粒子（例えば、赤血球（正常な赤血球および小球性赤血球を含む）、赤血球の断片、普通より大きい血小板および血小板凝集物）と血小板を識別し、定量するための多種多様の電気的および光学的技術を利用する。
【０００３】
血小板に特異的に結合するモノクローナル抗体を利用する測定は、干渉物質（例えば、血小板の塊、巨大なまたは普通より大きい血小板、小球性赤血球、および赤血球の断片）が存在している場合にもなお、最も正確な方法として広く認識されている。この目的のための試料の調製には、複数回の希釈と、１０分をはるかに上回る範囲であり得るインキュベーション時間とが必要である。この方法によって引き起こされる放射された光学的シグナルを集めるためには、前方光散乱測定に加えて、この方法は、蛍光を集めるための光学的手段と高感度センサー（例えば、ＰＭＴ）が蛍光シグナルを正確に測定するために必要である。このハードウェアに関係する経費は、低コストの設備の妨げとなっている。加えて、長いインキュベーション時間は、高いサンプルのスループットが必要である機器には好ましくない。モノクローナル抗体についてのさらなる欠点は、この試薬が比較的高価であることである。
【０００４】
正確な血小板の数を提供するための認識されている第２の方法は、蛍光色素で血液検体を処理し、そして蛍光測定によって血小板を同定することである。この方法には、通常は、長いインキュベーション時間は必要なく、そして色素試薬は、モノクローナル抗体と比べると比較的安価であるが、この測定を行うためのハードウェアに関してはさらに経費がかかる。さらに、いくつかの色素には、様々な細胞のタイプに対する非特異的な結合が伴う。
【０００５】
厳密な光学的測定方法により血小板を同定する他の複数の方法が存在している。これらの方法には様々な欠点が付随する。第１に、これらの方法には全て複数のセンサーが必要であり、それによってそれらのそれぞれの機器が複雑かつ高価なものとなっている。加えて、これらの方法では、干渉物質の存在下で血小板と赤血球を識別することには限界がある。
【０００６】
白血球の同定のための光散乱を利用することについては、いくつかの方法が当業者に知られている。さらに、特許文献１には、ゴースト試薬（ｇｈｏｓｔｉｎｇ  ｒｅａｇｅｎｔ）と、好ましくは、ＲＮＡ沈殿色素とを、光散乱測定と共に使用することによって、血液試料中の網状赤血球を決定する方法が教示されている。
【０００７】
Ｈａｎｓｅｎの特許文献２には、希釈された血液検体中の赤血球と血小板を識別するために、低角光散乱測定とパルス幅とを利用する方法が開示されている。この方法に固有であるのは、血液試料が希釈されても、赤血球および血小板はそれらのそれぞれの容積を維持すること、そして測定はそれらの光学的特性に基づいていることである。言い換えると、希釈された試料中の細胞はそれらの自然な状態を維持する。この方法により、光散乱測定およびパルス幅についての光散乱シグナルから導かれる電気的測定のための１つの光学センサーの利点が提供される。干渉物質が含まれていない正常な試料については比較的正確かつ精密な血小板の数がもたらされるが、干渉物質（例えば、血小板の塊）の存在下では、血小板と赤血球を識別するには限界がある。
【０００８】
最近の技術の進歩は、パルス幅の測定、または飛行時間の測定における改善を示した。この方法により、広角前方光散乱シグナルが集められ、そして希釈された血液検体からそれぞれの血球事象についての飛行時間の値が計算される。緩衝溶液によって赤血球および血小板が、それらの自然な状態で維持される。図１の散布図（ｓｃａｔｔｅｒｐｌｏｔ）に示すように、この方法は、干渉物質が含まれていない正常な試料についての正確かつ精密な血小板の数（範囲１１）を与える。範囲１２は、ＲＢＣ集団に対応し、そして範囲１３はＲＢＣ同時計測（ＲＢＣ  ｃｏｉｎｃｉｄｅｎｃｅ）に対応する。しかし、この方法には、図３の範囲３１（巨大な血小板または普通より大きい血小板）、図５の範囲５１（血小板の塊または凝集物）、および図７の範囲７１（ＲＢＣの破片）などの干渉物質の存在下ではなおも課題が残る。
【０００９】
例えば、いくつかの場合には、血小板の塊および普通より大きい血小板の容積は、正常な赤血球の集団の容積に近づく傾向がある。結果として、それらの光散乱シグナルは、多くの場合には、赤血球の集団の一部と重複し、それにより、図２の散布図の範囲２１および図４の散布図の範囲４１に示されるように、血小板の適正な同定を妨げる。（図３の散布図は、範囲３１から取り出された赤血球を用いた図２の散布図に対応し、一方、図５の散布図は、範囲５１から取り出された赤血球を用いた図４の散布図に対応する。）この条件は、多くの場合、計測下血小板の集団を生じる。
【００１０】
逆に、小球性赤血球および赤血球の断片の容積は、正常な血小板の容積に近づく傾向があり得、それによって、図６の散布図において範囲６１に示されるような、それらの散乱シグナルの血小板のシグナルとの重複が引き起こされる。（図７は、範囲７１から取り出された血小板を用いた、図６の散布図に対応する。）血小板とは区別されず、これらの赤血球は血小板としてカウントされ、血小板の集団が過剰な数となってしまう。
【００１１】
異常な赤血球および血小板の集団による干渉の可能性に加えて、正常な白血球もまた、赤血球のものと同じであるかまたは類似する光散乱、およびパルス幅の測定結果を示す傾向があり得る。正常な試料では、白血球に対する赤血球の割合は、通常は約１対１０００である。結果として、赤血球と白血球との間での重複は、赤血球または血小板の数に対してはわずかな影響しか与えない。しかし、特定の医学的状況（例えば、重症の感染または白血病）は、白血球の高いレベルを引き起こす。さらに、貧血または出血多量などの症状によっては、赤血球のレベルの実質的な低下が起こる。これらのタイプの症状のいずれか、またはこれらのタイプの症状の組み合わせによっては、赤血球数の不正確な評価が生じ、これは次いで、血小板数の不正確な評価を生じる。
【特許文献１】米国特許第５，６１６，５０１号明細書
【特許文献２】米国特許第４，５７７，９６４号明細書
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１２】
（発明の要旨）
本発明は、血球試料において赤血球と血小板を識別する方法に関し、この方法は、（ａ）赤血球および血小板を含む血球試料をゴースト試薬と混合して、血球試料懸濁液を形成する工程であって、このゴースト試薬は血球試料懸濁液中の赤血球の屈折率を変化させるために有効である工程；（ｂ）この血球試料懸濁液を、機器の粒子センシングゾーンに流す工程；（ｃ）血球試料懸濁液中に含まれている細胞と交差するように、この粒子センシングゾーンに光線をあてる工程；（ｄ）粒子センシングゾーンを通過する細胞によって散乱される光を検出する工程；および（ｅ）細胞によって散乱される光を分析して、血小板から赤血球を識別する工程を含む。好ましい実施形態においては、この方法はさらに、赤血球と識別された血小板を数える工程を含む。上に記載された方法のいずれの実施形態においても、血球試料は白血球を含む。
【００１３】
さらなる実施形態においては、本発明は、細胞分析装置により血液試料を分析する方法の改良を含み、この血液試料を含む懸濁液が自動血液学的分析装置の輸送経路中を流れ、そして光線を上記自動血液学的分析装置の上記輸送経路にあてて、それによって自動血液学液分析装置の輸送経路中を通過する血液試料の細胞によって光の散乱を引き起こし、そして、上記血液試料の細胞の散布図は、上記血液試料の細胞によって散乱され、そして散乱光検出器によって検出されたこの光の特性にしたがって作成され、その改良は、上記懸濁液中の上記非血小板の屈折率を変化させるために有効である記載される試薬を懸濁液に添加することを含み、これにより該非血小板によって散乱される光を該血小板によって散乱される光と異なるようにし、その結果、上記散布図での血小板の位置が、非血小板を含む位置とは離れた、容易に区別することができる範囲となる。
【００１４】
さらなる態様においては、散布図は、センシングゾーンでの細胞の飛行時間に関する、血液試料の細胞によって散乱される光の振幅の分布を含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
（詳細な説明）
本発明によれば、分析される血液試料中の血小板を区別かつ定量するための従来技術の欠点が、上記の欠点も含めて、赤血球の屈折率の変化を引き起こすゴースト試薬を用いて分析される血球試料を前処理する（希釈する）ことによって、効果的に未然に除去される。赤血球の屈折率のこの変化の結果として、赤血球から散乱される光は、血小板から散乱される光と大きく異なる（比較して減少する）であろう。処理された赤血球および血小板の光散乱特性の差は、分析される血球試料の散布図内の正常な血小板の位置を生じ、正常な赤血球および異常な赤血球（断片化した赤血球および小球性赤血球）、ならびに普通より大きい血小板および血小板の凝集物を含む範囲と離れた、容易に区別できる領域内に属する。
【００１６】
上記のように、ゴーストとなった赤血球の集団の位置のシフトは、通常、普通より大きい血小板および血小板凝集物と重複する範囲から離れている。これによって、正常な血小板の集団の上端と、普通より大きい血小板および血小板凝集物の集団との間にギャップを効果的に残す。普通より大きい血小板および血小板凝集物の集団は、赤血球に対して高い散乱強度を示す傾向があり、それによって赤血球の集団の範囲を、赤血球の集団の範囲よりもはるかに上の別の範囲に移動させることに留意されたい。加えて、普通より大きい血小板および血小板凝集物の集団は、血小板の分布範囲の上および右に移動するようであり、ＲＢＣ集団からの血小板の集団のゲーティングを容易にする。
【００１７】
しかし、図９の範囲９３のＷＢＣ集団は、普通より大きい血小板および血小板凝集物の存在下で干渉を引き起こし得る。ＷＢＣ／血小板の干渉が存在する場合、全てのＷＢＣ事象が血小板の数の一部として含まれ得る。そのような場合、血小板の数は、血液学的機器システムにおいて分析された同じ試料の絶対的なＷＢＣ数を引き算することによって補正される。
【００１８】
一方、小球性赤血球および赤血球の断片は、正常な赤血球と比較して少ない光の散乱を示す。そのような減少した大きさの赤血球成分の分布は、範囲９１によって示されるように、ゴーストとなった赤血球の集団の底にあり、血小板の集団の範囲９２からは十分に離れている。範囲９４はＲＢＣ同時計測に対応する。
【００１９】
先に記載されるように、血液試料をゴースト試薬と混合すると、ゴースト試薬は赤血球と相互作用して、赤血球の光学的特性に実質的な変化を引き起こす。さらに具体的には、血球試料中の赤血球の屈折率が変化し、その結果、ゴーストとなった赤血球から測定される光散乱の振幅は、ゴーストされていない細胞およびほとんどの血小板のものとは実質的に異なる（低い）であろう。赤血球の屈折率の変化の原因はヘモグロビンが失われることであり、一般に赤血球の「ゴースト」とよばれる作用である。しかし、ゴースト試薬は、同じ方法では血小板に影響を与えることはなく、そして血小板はゴーストを形成しない。これにより、分析される血液試料の散布図内の赤血球の位置を生じ、血小板を含む範囲から離れた区別できる領域内に属する。
【００２０】
血小板を識別し、そして数えるために利用することができるゴースト試薬の例として、チオシアン酸カリウムおよび硫酸が挙げられる。このタイプのゴースト試薬は、Ｃｏｕｌｔｅｒ  Ｒｅｔｉｃ  ＰａｋＴＭ  Ｐ／Ｎ８５４７１１５の試薬Ｂとして知られている市販されている製品として入手することができる。当業者に公知である他のゴースト試薬を本発明において使用することができる。
【００２１】
典型的には、ゴースト試薬は、赤血球を、破裂させることなく球形になるように効果的に膨張させ、そして赤血球からヘモグロビンを漏出させるために十分な量である。
【００２２】
この方法においては、屈折率を得るために使用される色素または染料が存在しない。さらに具体的には、色素または染料は、細胞と血小板との間に屈折率の差をもたらすために必要ではない；しかし、別の実施形態においては、細胞と血小板との間の屈折率の差を大きくするために、さらに色素を使用することができる。そのような色素は、ゴースト試薬と混合された赤血球および血小板から形成された血球試料懸濁液との混合から４５秒以内に細胞に取り込まれることが当業者に公知である。
【００２３】
ゴーストプロセスは、温度に影響されることが分かっている。さらに具体的には、５５°Ｆ未満の温度ではゴーストプロセスは遅くなることが明らかであり、ゴーストプロセスを起こさせるにはより長い時間が必要であることが分かっている。結果として、血球試料は、およそ５５°Ｆからおよそ１０６°Ｆの温度で、およそ３０秒間、ゴースト試薬と混合されることが好ましい。１０６°Ｆ（４１℃）が最も短いゴースト時間をもたらすことが分かっている。
【００２４】
ゴースト試薬のｐＨは、およそ１．０から３．０、好ましくは、１．０から２．０であることが必要である。加えて、酸性のゴースト試薬はヘモグロビンを可溶化させ、そして、血球からの除去を容易にすることが明らかである。チオシアン酸カリウムを利用する場合は、硫酸が併用される好ましい酸であることに留意されたい。さらに具体的には、硫酸と同様に作用しない他の酸として、塩酸および硝酸が挙げられる。チオシアン酸カリウムの好ましい濃度は、およそ１．０から６．０グラム／リットルであり、硫酸についての好ましい濃度は、およそ０．７から３．０グラム／リットルである。
【００２５】
ゴースト試薬の浸透圧は、赤血球の迅速であるが制御された膨張が生じるように制御されるはずである。ゴースト試薬の浸透圧は、７５から１１０ミリオスモルの範囲、好ましくは、８２から１０５ミリオスモルの範囲であろう。浸透圧によって赤血球の膨張を引き起こし、ゴースト試薬との混合から３０秒以内にヘモグロビンを放出させる。浸透圧が７５ミリオスモル未満である場合、赤血球は完全な細胞膜を維持することができず、溶解してしまうであろう。さらに具体的には、低い浸透圧によって損傷した赤血球を生じさせ、血小板と赤血球との間での識別に影響を及ぼすであろう。浸透圧が所望の範囲にない場合、赤血球はヘモグロビンを保持したままであり、血小板の識別および計数をあいまいにするであろう。さらに、血小板の数は、典型的には、ＲＢＣ  Ｒａｔｉｏ法として報告される。結果として、赤血球の保存が好ましい。
【００２６】
図８に示すように、本発明の自動血液学的機器システムの主要な構成要素は、従来の機能的配置で提供され、本発明の構造、機能、および操作をより容易に理解することができよう。
【００２７】
図８に示すように、機器システムは、照射光源１０（例えば、ＨｅＮｅレーザー）を含み、照射開口部またはフローセル２０のウインドウ２１に向けられた（すなわち、焦点が定められた）光線出力を生じるように操作することができ、これを通じて、分析される血液試料を含むキャリアまたはシースを流体力学的に供給する。上記のように、本発明にしたがって、フローセル２０に供給された血液試料は、ゴースト試薬と混合されたものである。
【００２８】
図８に示すように、個々の角範囲の散乱光（例えば、前方角光散乱、側方散乱（直交）および後方散乱であるが、これらに限定はされない）を集めるように操作することができる１つ以上の光電子センサー２５（例えば、光ダイオード）が、フローセル２０の照射開口部に対して空間的に配置されている。
【００２９】
非限定な例を提供する目的で、シースの流体内でフローセルを通過する粒子または細胞からの前方散乱を検出するようにセンサー２５が配置されることが示される。光散乱シグナルは、０度から１８０度の間の入射光線に対する様々な角度で、光センサーによって検出することができる。本発明においては、検出される光散乱シグナルは、入射光から２０度未満であり、好ましくは１から１９度であり、そして最も好ましくは２から１６度である。
【００３０】
図８にさらに示すように、光センサー２５の電気出力は、連結された電子増幅器２７に繋がれており、これによって、パルスの形態で出力シグナルを生じる。その増幅は、（前方）散乱光の強さに比例し、そしてその幅（または飛行時間）は、キャリアまたはシースの流体内の粒子／細胞がフローセルの照射ウインドウを横断するときに散乱光を生じさせる細胞または粒子の代表的な寸法長さである。
【００３１】
パルス振幅およびパルス幅の検出された値に基づいて、前方散乱対飛行時間またはこのシステムによって分析されたそれぞれの粒子のパルス幅の二次元散布図が作成される。そのような散布図の一例を図９に示す。具体的には、図９は、赤血球の屈折率を変化させる目的で、上に記載されたゴースト試薬でゴーストとなった血液試料の前方散乱対飛行時間の散布図である。図９に示すように、この作用によって、血小板の集団９２の下および右に存在する、範囲９１によって示される赤血球の集団が生じる。ゴースト試薬の導入の結果としての赤血球の集団の位置のシフトは、図１、２、４、６、および７に示すように、上記ゴースト試薬で処理されていない血球試料の赤血球の集団の位置に対して著しく異なることを示す。
【００３２】
また、この装置はさらに、フローセルを通じて試料混合物を定量的に送達する、容積移送式ポンプを含む。これによって、計数時間の期間の間に細胞の総数を得ることができる。吸引された血液試料の容積と使用された試薬の容積とに基づいて、血液試料の血小板の総数を得ることができ、これから絶対的な血小板数（ｎ×１０３細胞／μＬ）を得る。
【００３３】
フローセルを介して試料混合物を定量的に測定する能力を有していない分析装置は、ＲＢＣ−Ｒａｔｉｏ法を使用することによって血小板数の値を計算する。ＲＢＣ−Ｒａｔｉｏ法は、ＲＢＣ事象の数で血小板事象の数を割り、そしてその結果を血液学的システムで分析される同じ試料からの絶対ＲＢＣ数で掛けることによって血小板数をもたらし、絶対的な血小板数を得る（ｎ×１０３細胞／μＬ）。
【００３４】
代表的には、本方法は合成の粒子または天然の粒子を含まないであろう。しかし、血小板数の定量的測定を得るための別の方法は、合成の粒子または天然の粒子（例えば、ラテックスビーズ）を使用することである。さらに具体的には、この方法は、細胞検体の容積あたりの細胞の総数を決定する工程を含み、以下：（ａ）第１の光散乱シグナルを有する既知の量の粒子を、第１の光散乱シグナルと異なる第２の光散乱シグナルを有する既知の量の細胞検体と混合して、検体容積あたりの粒子の濃度を有する懸濁液を得る工程、（ｂ）上記細胞懸濁液の未知の容積部分に、上記粒子および細胞のそれぞれを通過させ、次に、光線を通じて、粒子および細胞のそれぞれが少なくとも１つの前方光散乱シグナルを生じる工程、（ｃ）フローサイトメーターを使用することによって上記懸濁液の前記未知の容積部分の細胞数および粒子数を数える工程、ならびに、（ｄ）光散乱測定を使用して、上記細胞検体に加えられる既知の量の粒子に対して、この懸濁液の部分の粒子および細胞の数を補正することによって、検体の容積あたりの細胞の総数を決定する工程を含む。
【００３５】
本発明は、具体的な好ましい実施形態に関して記載されている。しかし、様々な変更を、本発明の精神から逸脱することなく行うことができ、そしてそのような変更は、添付の特許請求の範囲の範囲内に入るように意図される。本発明は詳細に記載され、そして添付の図面において絵で示されるが、これらは、本発明の範囲の限定として解釈されるべきではなく、むしろ、その好ましい実施形態の例示と解釈されるべきである。しかし、様々な改良および変更を、上に記載され、そして添付の特許請求の範囲およびそれらの法的等価物において定義される本発明の精神および範囲内で行うことができることは明らかであろう。本明細書で引用される全ての特許および他の刊行物は、参照により明確に組み入れられる。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】図１は、干渉物質を含まない、分析された正常な血液試料の血小板および赤血球の集団の分布を示す前方散乱対飛行時間の散布図である。
【図２】図２は、赤血球の集団の範囲と重複する普通より大きい血小板を含む、分析された血液試料の血小板および赤血球の集団の分布を示す前方散乱対飛行時間の散布図である。
【図３】図３は、図２に示す分析された、しかし、グリコホリンＡ（Ｇｌｙｃｏｐｈｏｒｉｎ  Ａ）モノクローナル抗体を使用する全てのＲＢＣポジティブ事象のゲーテリングによって赤血球が除去された血液試料の血小板および赤血球の集団の分布を示す前方散乱対飛行時間の散布図である。
【図４】図４は、赤血球の集団の範囲と重複する血小板凝集物を含む、分析された血液試料の血小板および赤血球の集団の分布を示す前方散乱対飛行時間の散布図である。
【図５】図５は、図４に示す分析された、しかし、グリコホリンＡモノクローナル抗体を使用した全てのＲＢＣポジティブ事象のゲーティングによって赤血球が除去された血液試料の血小板および赤血球の集団の分布を示す前方散乱対飛行時間の散布図である。
【図６】図６は、分析された血液試料の血小板および赤血球の集団の分布を示す前方散乱対飛行時間の散布図であり、小球性赤血球および赤血球の断片の数が正常な血小板の数に近づき、それによって血小板の集団と重複するそれらの散乱集団を生じる。
【図７】図７は、図６に示す分析された、しかし、ＣＤ４１／６１モノクローナル抗体を使用する全ての血小板ポジティブ事象のゲーティングによって赤血球が除去された血液試料の血小板および赤血球の集団の分布を示す前方散乱対飛行時間の散布図である。
【図８】図８は、血液試料を分析するために本発明によって使用された自動光学血液学的システムの全体構造のブロック図である。
【図９】図９は、本発明にしたがってゴースト試薬で希釈され、それによって赤血球の屈折率の変化が生じた、分析された血液試料の前方散乱対飛行時間の散布図であり、血小板の集団は、赤血球、小球性赤血球、および赤血球の断片と容易に識別することができる。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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