(57)【要約】Ｃ末端フェニルアラニン残基を側鎖交換または修飾したＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｐｈｅ（ＭＭＡＦ）のオーリスタチンペプチドアナログ単体または種々のリンカーを介してリガンドに結合したものが提供される。関連する複合体は、特定の細胞種を標的化して治療利益を与えることができる。上式の化合物は、患者の障害（例えば、癌、自己免疫疾患または感染症）を処置するのに有用であり、または薬物−リンカー化合物または薬物−リンカー−リガンド複合体（例えば、開裂可能な薬物単位を有する薬物−リンカー−抗体複合体、薬物−リガンド複合体、または薬物−リガンド複合体）を合成するための中間体として有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下式：
【化１】
2009500424.tif 000249
（式中、
Ｒ２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択され；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され；
Ｒ５は、Ｈおよびメチルからなる群から選択されるか；
またはＲ４およびＲ５が結合して炭素環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、
ここで、ＲａおよびＲｂは独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ３〜Ｃ８炭素環からなる群から選択され、ｎは２、３、４、５および６からなる群から選択され；
Ｒ６は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択され；
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され；
各Ｒ８は独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環およびＯ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）からなる群から選択され；
各Ｘ１は独立してＣ１〜Ｃ１０アルキレンであり；
部分−ＮＲ９Ｚ１は、修飾したアミノ酸側鎖を有するフェニルアラニンバイオ等価体である）
を有する化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物。
【請求項２】
下式：
【化２】
2009500424.tif 000250
を有する、請求項１に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物。
【請求項３】
前記フェニルアラニンバイオ等価体部分
【化３】
2009500424.tif 000251
が
【化４−１】
2009500424.tif 000252
からなる群から選択され、
【化４−２】
2009500424.tif 000253
が単結合または二重結合をあらわし；
Ｒ９は、Ｈおよびアミノ保護基からなる群から選択され；
Ｒ１０は、Ｈおよび−（ＣＲ１３Ｒ１４）ＸＲ１５からなる群から選択され；
各Ｒ１１は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、ハロゲン、アリール、アリールＣ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０ハロアルキル、ＯＲ１６およびＮ（Ｒ１６）２からなる群から選択され；
Ｒ１２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、ハロゲン、アリール、アリールＣ１〜Ｃ２０アルキル、アリールＣ２〜Ｃ２０アルケニル、アリールＣ２〜Ｃ２０アルキニル、ＯＲ１６、Ｎ（Ｒ１６）２および−Ｃ（Ｏ）Ｒ１６からなる群から選択され；
各Ｒ１３およびＲ１４は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、ハロゲン、アリールアルキル、Ｃ１〜Ｃ１０ハロアルキル、ＯＲ１６、ＳＲ１６、Ｎ（Ｒ１６）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１６、−Ｎ（Ｒ１６）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、−ＣＯＯＲ１６、−ＣＯＮ（Ｒ１６）２、Ｘ１−ＳＯ３Ｈ、Ｘ１−ＳＯ３−Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｘ１−ＯＳＯ３Ｈ、−Ｘ１−ＯＳＯ３−Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｘ１−ＳＯ２−Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｘ１−ＳＯ−Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１６）２、−ＯＰ（Ｏ）（ＮＲ１６）２、−ＯＰ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６）２ＯＲ１６、−ＯＰ（Ｏ）（Ｒ１６）ＯＲ１６、−ＯＰ（Ｏ）（Ｒ１６）Ｎ（Ｒ１６）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１６）２、−Ｐ（Ｏ）（ＮＲ１６）２、−Ｐ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６）２ＯＲ１６、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アルキル−アリール、Ｘ１−Ｃ３〜Ｃ８炭素環、Ｃ３〜Ｃ２０複素環およびＸ１−Ｃ３〜Ｃ８複素環からなる群から選択されるか；
またはＲ１３とＲ１４とで＝Ｏ、＝Ｎ−ＮＨ−Ｒ１７、＝Ｎ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１７およびＣ３〜Ｃ８炭素環からなる群から選択される基を形成し；
各Ｒ１５は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル−Ｃ３〜Ｃ８炭素環、Ｃ３〜Ｃ２０複素環、Ｘ１−Ｃ３〜Ｃ８複素環、−ＣＯＯＲ１６、−ＣＯＮ（Ｒ１６）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１６およびＹ１（ＣＲ１３Ｒ１４）ｘＲ１８からなる群から選択され；
ここで、該アリール、炭素環および複素環部分は１〜３個のＲ１２基で場合により置換されており；
各Ｒ１６は独立してＨまたはＣ１〜Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ１７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル−Ｃ３〜Ｃ８炭素環、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−Ｃ３〜Ｃ８複素環からなる群から選択され；
各Ｒ１８は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｘ１−Ｃ３〜Ｃ８炭素環、Ｃ３〜Ｃ２０複素環、Ｘ１−Ｃ３〜Ｃ８複素環、−ＣＯＯＲ１６、−ＣＯＮ（Ｒ１６）２および−Ｃ（Ｏ）Ｒ１６からなる群から選択され；
Ｙ１は、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１６、ＳＯ、ＳＯ２またはＳｅであり；
各Ｘ１は独立してＣ１〜Ｃ１０アルキレンであり；
下付き文字ｘは０〜１０の整数であり；
下付き文字ｎ、ｏ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔおよびｕは独立して０〜２の整数であり；
Ｚ２はＣＯＺ３Ｒ１９であり；
Ｚ３は、Ｏ、Ｓ、ＮＨまたはＮＲ２０であり、Ｒ２０はＣ１〜Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１９は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３〜Ｃ８複素環、−（Ｘ１Ｏ）Ｖ−Ｒ２２または−（Ｘ１Ｏ）Ｖ−ＣＨ（Ｒ２３）２から選択され；
ｖは１〜１０００の整数であり；
Ｒ２２はＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり；
各Ｒ２３は独立して、Ｈ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｌ−Ｎ（Ｒ２４）２、−（ＣＨ２）ｌ−ＳＯ３Ｈまたは−（ＣＨ２）ｌ−ＳＯ３−Ｃ１〜Ｃ８アルキルであり；
各Ｒ２４は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたは−（ＣＨ２）ｌＣＯＯＨであり；ここで、ｌは０〜６の整数であり；ただし、ｎおよびｏが０であり、Ｒ１１がＨである場合、Ｒ１０はＣＨ２−アリールまたはＣＨ２−Ｃ３〜Ｃ８複素環以外である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ９が、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、Ｘ１−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８−炭素環）およびＸ１−Ｃ３〜Ｃ８−複素環からなる群から選択される、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ９がＨである、請求項３に記載の化合物。
【請求項６】
前記フェニルアラニンバイオ等価体部分が
【化５】
2009500424.tif 000254
であり、
式中、Ｒ９はＨであり；Ｒ１０はベンジルであり；Ｒ１１はＨであり；Ｚ２はＣＯ２Ｈであり；下付き文字ｎは０〜２の整数であり；下付き文字ｏは０〜１の整数であり、ただし、ｎ＋ｏは少なくとも１である、請求項３に記載の化合物。
【請求項７】
前記フェニルアラニンバイオ等価体部分が
【化６】
2009500424.tif 000255
からなる群から選択される、請求項３に記載の化合物。
【請求項８】
前記フェニルアラニンバイオ等価体部分が
【化７】
2009500424.tif 000256
であり、
式中、
Ｒ９はＨおよびアミノ保護基であり；
Ｒ１０はＨおよび−（ＣＲ１３Ｒ１４）ＸＲ１５であり；
各Ｒ１１は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、ハロゲン、アリール、アリールＣ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０ハロアルキル、ＯＲ１６およびＮ（Ｒ１６）２であり；
Ｒ１２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、ハロゲン、アリール、アリールＣ１〜Ｃ２０アルキル、アリールＣ２〜Ｃ２０アルケニル、アリールＣ２〜Ｃ２０アルキニル、ＯＲ１６、Ｎ（Ｒ１６）２および−Ｃ（Ｏ）Ｒ１６であり；
各Ｒ１３およびＲ１４は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、ハロゲン、アリールアルキル、Ｃ１〜Ｃ１０ハロアルキル、ＯＲ１６、ＳＲ１６、Ｎ（Ｒ１６）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１６、−Ｎ（Ｒ１６）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、−ＣＯＯＲ１６、−ＣＯＮ（Ｒ１６）２、Ｘ１−ＳＯ３Ｈ、Ｘ１−ＳＯ３−Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｘ１−ＯＳＯ３Ｈ、−Ｘ１−ＯＳＯ３−Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｘ１−ＳＯ２−Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｘ１−ＳＯ−Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１６）２、−ＯＰ（Ｏ）（ＮＲ１６）２、−ＯＰ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６）２ＯＲ１６、−ＯＰ（Ｏ）（Ｒ１６）ＯＲ１６、−ＯＰ（Ｏ）（Ｒ１６）Ｎ（Ｒ１６）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１６）２、−Ｐ（Ｏ）（ＮＲ１６）２、−Ｐ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６）２ＯＲ１６、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アルキル−アリール、Ｘ１−Ｃ３〜Ｃ８炭素環、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−Ｃ３〜Ｃ８複素環であるか；
またはＲ１３とＲ１４とで＝Ｏ、＝Ｎ−ＮＨ−Ｒ１７、＝Ｎ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１７およびＣ３〜Ｃ８炭素環基を形成し；
各Ｒ１５は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル−Ｃ３〜Ｃ８炭素環、Ｃ３〜Ｃ８複素環、Ｘ１−Ｃ３〜Ｃ８複素環、−ＣＯＯＲ１６、−ＣＯＮ（Ｒ１６）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１６およびＹ１（ＣＲ１３Ｒ１４）ｘＲ１８であり；
各Ｒ１６は独立してＨまたはＣ１〜Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ１７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル−Ｃ３〜Ｃ８炭素環、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−Ｃ３〜Ｃ８複素環であり；
各Ｒ１８は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｘ１−Ｃ３〜Ｃ８炭素環、Ｃ３〜Ｃ８複素環、Ｘ１−Ｃ３〜Ｃ複素環、−ＣＯＯＲ１６、−ＣＯＮ（Ｒ１６）２および−Ｃ（Ｏ）Ｒ１６からなる群から選択され；
Ｙ１は、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１６、ＳＯ、ＳＯ２またはＳｅであり；
各Ｘ１は独立してＣ１〜Ｃ１０アルキレンであり；
下付き文字ｘは０〜１０の整数であり；
下付き文字ｎ、ｏ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔおよびｕは独立して０〜２の整数であり；
Ｚ２はＣＯＺ３Ｒ１９であり；
Ｚ３は、Ｏ、Ｓ、ＮＨまたはＮＲ２０であり、Ｒ２０はＣ１〜Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１９は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３〜Ｃ８複素環、−（Ｘ１Ｏ）Ｖ−Ｒ２２または−（Ｘ１Ｏ）Ｖ−ＣＨ（Ｒ２３）２から選択され；
ｖは１〜１０００の整数であり；
Ｒ２２はＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり；
各Ｒ２３は独立して、Ｈ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｌ−Ｎ（Ｒ２４）２、−（ＣＨ２）ｌ−ＳＯ３Ｈまたは−（ＣＨ２）ｌ−ＳＯ３−Ｃ１〜Ｃ８アルキルであり；
各Ｒ２４は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたは−（ＣＨ２）ｌＣＯＯＨであり；ここで、ｌは０〜６の整数であり；ただし、ｎおよびｏが０であり、Ｒ１１がＨである場合、Ｒ１０はＣＨ２−アリールまたはＣＨ２−Ｃ３〜Ｃ８複素環以外である、請求項３に記載の化合物。
【請求項９】
前記フェニルアラニンバイオ等価体部分が
【化８】
2009500424.tif 000257
であり、
Ｚ２はＣＯ２Ｈであり；下付き文字ｘは０〜２の整数である、請求項３に記載の化合物。
【請求項１０】
前記フェニルアラニンバイオ等価体部分が
【化９】
2009500424.tif 000258
であり、
Ｒ１０はＣＨ２−Ｃ３〜Ｃ８複素環またはＣＨ２−アリールであり；Ｒ１１はＨである、請求項３に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ１０は
【化１０】
2009500424.tif 000259
からなる群から選択され、
各Ｘ２は独立して、Ｎ、ＮＲ１６、Ｓ、Ｏ、ＣＲ１６およびＣＨＲ１６からなる群から選択され；下付き文字ｚは０〜２の整数である、請求項３に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ１０は
【化１１】
2009500424.tif 000260
からなる群から選択され
２個以下の隣接するＸ２基がＣＲ１６またはＣＨＲ１６以外である、請求項３に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ１０は
【化１２】
2009500424.tif 000261
からなる群から選択され；そして
Ｒ１２は、Ｈ、アルキル、ハロゲン、アミノ、カルボキシ、アミド、カルボエトキシ、ホルミル、フェニル、Ｅ−２−フェニルエテニル、Ｚ−２−フェニルエテニルおよび２−フェニルエチニルからなる群から選択される、請求項３に記載の化合物。
【請求項１４】
前記フェニルアラニンバイオ等価体部分が
【化１３】
2009500424.tif 000262
からなる群から選択される、請求項３に記載の化合物。
【請求項１５】
【化１４】
2009500424.tif 000263
が
【化１５】
2009500424.tif 000264
【化１６】
2009500424.tif 000265
からなる群から選択される基である、請求項３に記載の化合物。
【請求項１６】
前記フェニルアラニンバイオ等価体部分は、
【化１７】
2009500424.tif 000266
【化１８】
2009500424.tif 000267
【化１９】
2009500424.tif 000268
【化２０】
2009500424.tif 000269
【化２１】
2009500424.tif 000270
【化２２】
2009500424.tif 000271
【化２３】
2009500424.tif 000272
【化２４】
2009500424.tif 000273
【化２５】
2009500424.tif 000274
【化２６】
2009500424.tif 000275
【化２７】
2009500424.tif 000276
【化２８】
2009500424.tif 000277
【化２９】
2009500424.tif 000278
【化３０】
2009500424.tif 000279
【化３１】
2009500424.tif 000280
【化３２】
2009500424.tif 000281
【化３３】
2009500424.tif 000282
【化３４】
2009500424.tif 000283
【化３５】
2009500424.tif 000284
【化３６】
2009500424.tif 000285
【化３７】
2009500424.tif 000286
【化３８】
2009500424.tif 000287
【化３９】
2009500424.tif 000288
【化４０】
2009500424.tif 000289
【化４１】
2009500424.tif 000290
からなる群から選択されるα−アミノ酸のアミドである、請求項３に記載の化合物。
【請求項１７】
前記フェニルアラニンバイオ等価体部分は、４−クロロ−フェニルアラニン、４−フルオロ−フェニルアラニン、４−ニトロ−フェニルアラニン、Ｎ−α−メチル（ｎｅｔｈｙｌ）−フェニルアラニン、α−メチル（ｎｅｔｈｙｌ）−フェニルアラニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、トリプトファン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、チロシン、グルタミン、スレオニン、バリン、アスパラギン、フェニルグリシン、Ｏ−ベンジル−セリン、Ｏ−ｔ−ブチル−セリン、Ｏ−ｔ−ブチル−スレオニン、ホモフェニルアラニン、メチオニン−ＤＬ−スルホキシド、メチオニン−スルホン、α−アミノ酪酸、α−アミノイソ酪酸、４−アミノ−１−ピペリジン−４−カルボン酸、４−アミノ−テトラヒドロピラン−４−カルボン酸、アスパラギン酸、ベンゾチアゾール−２−イル−アラニン、α−ｔ−ブチル−グリシン、シクロヘキシルアラニン、ノルロイシン、ノルバリン、Ｓ−アセトアミドメチル−ペニシラミン、β−３−ピペリジン−３−イル−アラニン、ピペリジニル−グリシン、ピロリジニル−アラニン、セレノシステイン、テトラヒドロピラン−４−イル−グリシン、Ｏ−ベンジル−スレオニン、Ｏ−ｔ−ブチル−チロシン、３−（ｐ−アセチルフェニル）アラニン、３−フェニルセリンおよび１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−３−カルボン酸からなる群から選択されるアミノ酸のα−アミノアミドである、請求項３に記載の化合物。
【請求項１８】
前記フェニルアラニンバイオ等価体部分が
【化４２】
2009500424.tif 000291
であり、
Ｚ２はＣＯ２Ｈであり；Ｒ１０はベンジルであり；下付き文字ｑ、ｒおよびｓは独立して０〜１の整数である、請求項３に記載の化合物。
【請求項１９】
前記フェニルアラニンバイオ等価体部分が
【化４３】
2009500424.tif 000292
からなる群から選択される、請求項３に記載の化合物。
【請求項２０】
前記フェニルアラニンバイオ等価体部分が
【化４４】
2009500424.tif 000293
であり、
Ｚ２はＣＯ２Ｈであり；Ｒ１０はベンジルであり；Ｒ１１はＨであり；下付き文字ｔおよびｕは独立して１〜３の整数である、請求項３に記載の化合物。
【請求項２１】
前記フェニルアラニンバイオ等価体部分が
【化４５】
2009500424.tif 000294
からなる群から選択される、請求項３に記載の化合物。
【請求項２２】
前記フェニルアラニンバイオ等価体部分が
【化４６】
2009500424.tif 000295
であり、
Ｚ２はＣＯ２Ｈであり；下付き文字ｑ、ｒおよびｓは独立して１〜３の整数である、請求項３に記載の化合物。
【請求項２３】
前記フェニルアラニンバイオ等価体部分が
【化４７】
2009500424.tif 000296
である、請求項３に記載の化合物。
【請求項２４】
前記フェニルアラニンバイオ等価体部分が
【化４８】
2009500424.tif 000297
であり、
Ｚ２はＣＯ２Ｈである、請求項３に記載の化合物。
【請求項２５】
前記フェニルアラニンバイオ等価体部分が
【化４９】
2009500424.tif 000298
である、請求項３に記載の化合物。
【請求項２６】
前記フェニルアラニンバイオ等価体部分が
【化５０】
2009500424.tif 000299
であり、
Ｚ２はＣＯ２Ｈであり；下付き文字ｑ、ｒおよびｓは独立して１〜３の整数である、請求項３に記載の化合物。
【請求項２７】
前記フェニルアラニンバイオ等価体部分が
【化５１】
2009500424.tif 000300
である、請求項３に記載の化合物。
【請求項２８】
下式：
Ｌ−（（ＬＵ）０〜１−（Ｄ）１〜４）ｐ
（式中、
Ｌ−はリガンド単位であり；
ＬＵはリンカー単位であり；
ｐは１〜約２０の整数であり；
Ｄは式Ｄ：
【化５２】
2009500424.tif 000301
を有する薬物部分であり
（式中、
Ｒ２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択され；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され；
Ｒ５は、Ｈおよびメチルからなる群から選択されるか；
またはＲ４およびＲ５が結合して炭素環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、
ここで、ＲａおよびＲｂは独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ３〜Ｃ８炭素環からなる群から選択され、ｎは２、３、４、５および６からなる群から選択され；
Ｒ６は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択され；
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され；
各Ｒ８は独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環およびＯ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）からなる群から選択され；
各Ｘ１は独立してＣ１〜Ｃ１０アルキレンであり；
部分−ＮＲ９Ｚ１は、請求項１〜２７のいずれか１項に記載のフェニルアラニンバイオ等価体である））
を有する化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物。
【請求項２９】
下式：
Ｌ−ＬＵ−Ｄ
を有する請求項２８に記載の化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物。
【請求項３０】
下式：
ＬＵ−（Ｄ）１〜４
（式中、
ＬＵはリンカー単位であり；
Ｄは式Ｄ
【化５３】
2009500424.tif 000302
を有する薬物部分である）
を有する請求項２８に記載の化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物。
【請求項３１】
前記化合物が、式Ｉａ’：
Ａｂ−（Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−（Ｄ）１〜４）ｐ        Ｉａ’
（式中、
Ａｂは抗体であり、
Ａはストレッチャー単位であり、
ａは０または１であり、
各Ｗは独立してアミノ酸単位であり、
ｗは０〜１２の整数であり、
Ｙはスペーサー単位であり、
ｙは、０、１または２であり、
ｐは１〜２０の整数であり、
Ｄは式Ｄ
【化５４】
2009500424.tif 000303
を有する薬物部分である）
を有する化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物である、請求項２８〜３０のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項３２】
下式
Ａｂ−（Ｄ）ｐ
を有する請求項３１に記載の化合物。
【請求項３３】
前記抗体が該抗体のシステイン残基で前記薬物部分に結合している、請求項３１に記載の化合物。
【請求項３４】
ｐが２〜５である、請求項３３に記載の化合物。
【請求項３５】
ｐが２〜８である、請求項３１に記載の化合物。
【請求項３６】
ｐが２〜５である、請求項３１に記載の化合物。
【請求項３７】
下式：
【化５５】
2009500424.tif 000304
（式中、Ｌは抗体であり、Ｒ１７は、Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８炭素環−、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）−、−アリーレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）−、−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８複素環−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）−、−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−，および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−であり；ｒは１〜１０の整数である）
を有する請求項３１または３３に記載の化合物。
【請求項３８】
下式：
【化５６】
2009500424.tif 000305
（式中、ｗおよびｙはそれぞれ０である）
を有する請求項３７に記載の化合物。
【請求項３９】
Ｄが下式
【化５７】
2009500424.tif 000306
を有する、請求項３７または３８に記載の化合物。
【請求項４０】
下式：
【化５８】
2009500424.tif 000307
を有する請求項３１に記載の化合物
【請求項４１】
下式：
【化５９】
2009500424.tif 000308
を有する請求項３１に記載の化合物。
【請求項４２】
下式：
【化６０】
2009500424.tif 000309
を有する請求項３１に記載の化合物。
【請求項４３】
Ｄが下式：
【化６１】
2009500424.tif 000310
を有する、請求項４０〜４２のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項４４】
下式：
【化６２】
2009500424.tif 000311
を有する請求項３１に記載の化合物。
【請求項４５】
ｗが２〜１２の整数である、請求項３１に記載の化合物。
【請求項４６】
ｗが２である、請求項３１に記載の化合物。
【請求項４７】
Ｗｗが−バリン−シトルリン−である、請求項４６に記載の化合物。
【請求項４８】
Ｗｗは、５−アミノ吉草酸、ホモフェニルアラニンリジン、テトライソキノリンカルボキシレートリジン、シクロヘキシルアラニンリジン、イソネペコチン酸リジン、β−アラニンリジン、グリシンセリンバリングルタミンおよびイソネペコチン酸である、請求項４５に記載の化合物。
【請求項４９】
Ｄが下式：
【化６３】
2009500424.tif 000312
を有する、請求項３１に記載の化合物。
【請求項５０】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項３１に記載の化合物。
【請求項５１】
前記抗体が二重特異性抗体である、請求項３１に記載の化合物。
【請求項５２】
前記抗体がキメラ抗体である、請求項３１に記載の化合物。
【請求項５３】
前記抗体がヒト化抗体である、請求項３１に記載の化合物。
【請求項５４】
前記抗体が抗体フラグメントである、請求項３１に記載の化合物。
【請求項５５】
前記抗体フラグメントがＦａｂフラグメントである、請求項５４に記載の化合物。
【請求項５６】
前記化合物が、該化合物の抗体に特異的な細胞表面レセプターを有する細胞に取り込まれるまでは前記薬物部分の相当量が該抗体から開裂しない、請求項３１に記載の化合物。
【請求項５７】
前記化合物または該化合物の細胞内代謝物の哺乳動物中のバイオアベイラビリティーが、該化合物の薬物部分を含む薬物化合物と比較して改善されている、請求項３１に記載の化合物。
【請求項５８】
前記化合物または該化合物の細胞内代謝物の哺乳動物中のバイオアベイラビリティーが、前記薬物部分を含まない化合物のアナログと比較して改善されている、請求項３１に記載の化合物。
【請求項５９】
前記薬物部分が前記化合物または該化合物の細胞内代謝物の抗体から哺乳動物中で細胞内で開裂される、請求項３１に記載の化合物。
【請求項６０】
下式：
【化６４】
2009500424.tif 000313
（式中、
ｍＡｂはモノクローナル抗体であり、
【化６５】
2009500424.tif 000314
は請求項１〜２７のいずれか１項に定義されるフェニルアラニンバイオ等価体部分である）
を有する化合物。
【請求項６１】
前記抗体は、キメラＢＲ９６、キメラＡＣ１０、ヒト化１Ｆ５、ヒト化Ｍ１９５、ヒト化２Ｆ２、ヒト化Ｓ２Ｃ６またはヒト化１Ｆ６である、請求項６０に記載の化合物。
【請求項６２】
前記リンカー単位（ＬＵ）は、以下：
−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−
（式中、−Ａ−はストレッチャー単位であり、ａは０または１であり、各−Ｗ−は独立してアミノ酸単位であり、ｗは０〜１２の整数であり、−Ｙ−はスペーサー単位であり、ｙは０、１または２である）
を含む、請求項２９に記載の化合物。
【請求項６３】
前記リンカー単位（ＬＵ）は、以下：
−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−
（式中、
−Ａ−はストレッチャー単位であり、
ａは０または１であり、
各−Ｗ−は独立してアミノ酸単位であり、
ｗは０〜１２の整数であり、
−Ｙ−はスペーサー単位であり、
ｙは０、１または２である）
を含む、請求項３０に記載の化合物。
【請求項６４】
下式：
【化６６】
2009500424.tif 000315
（式中、
Ｌ−はリガンド単位であり；
−Ａ−はストレッチャー単位であり：
ａは０または１であり：
各−Ｗ−は独立してアミノ酸単位であり；
ｗは０〜１２の整数であり；
各ｎは独立して０または１であり；
ｐは１〜２０の整数であり；
Ｄはそれぞれ独立して式Ｄ
【化６７】
2009500424.tif 000316
を有する薬物部分であり、
Ｒ２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択され；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され；
Ｒ５は、Ｈおよびメチルからなる群から選択されるか；
またはＲ４およびＲ５が結合して炭素環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、
ここで、ＲａおよびＲｂは独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ３〜Ｃ８炭素環からなる群から選択され、ｎは２、３、４、５および６からなる群から選択され；
Ｒ６は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択され；
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され；
各Ｒ８は独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環およびＯ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）からなる群から選択され；
各Ｘ１は独立してＣ１〜Ｃ１０アルキレンであり；
部分−ＮＲ９Ｚ１は、請求項２８〜２７のいずれか１項に記載のフェニルアラニンバイオ等価体である）
を有する化合物、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物。
【請求項６５】
ｗは２〜１２の整数である、請求項６４に記載の化合物。
【請求項６６】
前記リガンド単位が抗体である、請求項２８〜６５のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物。
【請求項６７】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項６６に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物。
【請求項６８】
前記モノクローナル抗体が、キメラＢＲ９６、キメラＡＣ１０、ヒト化１Ｆ５、ヒト化Ｍ１９５、ヒト化２Ｆ２、ヒト化Ｓ２Ｃ６またはヒト化１Ｆ６である、請求項６７に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物。
【請求項６９】
下式：
【化６８】
2009500424.tif 000317
（式中、該フェニルアラニンバイオ等価体部分
【化６９】
2009500424.tif 000318
は請求項２８〜２７のいずれか１項に定義される）
を有する請求項２８〜６８のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物。
【請求項７０】
単離形態および精製形態である、請求項２８〜６９のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物。
【請求項７１】
前記抗体が、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＢＣＭＡまたはＬｅｗｉｓ  Ｙ抗原に結合する、請求項３１に記載の化合物。
【請求項７２】
Ｗｗが−フェニルアラニン−リジン−である、請求項４６に記載の化合物。
【請求項７３】
Ｗｗが−Ｎ−メチルバリン−シトルリン−である、請求項４６に記載の化合物。
【請求項７４】
請求項１〜７３のいずれか１項に記載の有効量の化合物またはその薬学的に受容可能な塩と、薬学的に受容可能な希釈剤、担体または賦形剤とを含む、薬学的組成物。
【請求項７５】
チューブリン形成阻害剤、トポイソメラーゼ阻害剤およびＤＮＡバインダーから選択される治療的に有効量の化学療法剤をさらに含む、請求項７４に記載の薬学的組成物。
【請求項７６】
腫瘍細胞または癌細胞を殺傷するかまたはその増殖を阻害する方法であって、該腫瘍細胞または癌細胞を殺傷するかまたは増殖を阻害するのに有効な量の請求項１〜７３のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物で腫瘍細胞または癌細胞を処置する工程を含む、方法。
【請求項７７】
癌を処置する方法であって、癌を処置するのに有効な量の請求項１〜７３のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を患者に投与する工程を含む、方法。
【請求項７８】
有効量の追加の抗癌剤、免疫抑制剤または抗感染剤を投与する工程をさらに含む、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
自己免疫疾患を処置する方法であって、該自己免疫疾患を処置するのに有効な量の請求項１〜７３のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を患者に投与する工程を含む方法。
【請求項８０】
感染症を処置する方法であって、該感染症を処置するのに有効な量の請求項１〜７３のいずれか１項に記載の化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を患者に投与する工程を含む、方法。
【請求項８１】
前記化合物が、薬学的に受容可能な希釈剤、担体または賦形剤を含む処方物である、請求項８０に記載の方法。
【請求項８２】
有効量の追加の抗癌剤を投与する工程をさらに含む、請求項８０に記載の方法。
【請求項８３】
治療的に有効量の免疫抑制剤を投与する工程をさらに含む、請求項８０に記載の方法。
【請求項８４】
治療的に有効量の抗感染剤を投与する工程をさらに含む、請求項８０に記載の方法。
【請求項８５】
前記患者に投与される化合物の量が患者の体重あたり約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇである、請求項８０に記載の方法。
【請求項８６】
前記化合物が約３週間の間隔で投与される、請求項８０に記載の方法。
【請求項８７】
前記化合物を非経口投与または静脈内投与する、請求項８０に記載の方法。
【請求項８８】
前記化合物を薬学的に受容可能な非経口ビヒクルとともに処方化する、請求項８０に記載の方法。
【請求項８９】
前記化合物を単位投薬量の注射形態で処方化する、請求項８０に記載の方法。
【請求項９０】
前記患者がヒトである、請求項７６〜８９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９１】
細胞増殖を阻害する方法であって、
細胞培地の哺乳動物細胞を請求項２８〜７３のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体化合物に曝す工程と、
該化合物の細胞毒性を測定する工程と
を含み、それによって該細胞の増殖を阻害する、方法。
【請求項９２】
前記細胞を約６時間〜約５日間培養する工程をさらに含む、請求項９１に記載の方法。
【請求項９３】
前記哺乳動物細胞がＳＫ−ＢＲ−３乳癌細胞である、請求項９１に記載の方法。
【請求項９４】
前記化合物の細胞毒性が、本質的に該化合物の薬物部分からなる薬物化合物の細胞毒性の２倍を超える、請求項９１に記載の方法。
【請求項９５】
癌を処置する方法であって、請求項２８〜７３のいずれか１項に記載の化合物および薬学的に受容可能な希釈剤、担体または賦形剤の処方物を患者に投与する工程を含む方法。
【請求項９６】
前記患者に投与される化合物の量が患者の体重あたり約０．１〜約１０ｍｇ／ｋｇである、請求項９５に記載の方法。
【請求項９７】
前記化合物が約３週間の間隔で投与される、請求項９５に記載の方法。
【請求項９８】
前記化合物を非経口投与する、請求項９５に記載の方法。
【請求項９９】
前記化合物を薬学的に受容可能な非経口ビヒクルとともに処方化する、請求項９８に記載の方法。
【請求項１００】
前記化合物を単位投薬量の注射形態で処方化する、請求項９５に記載の方法。
【請求項１０１】
前記化合物を静脈内投与する、請求項９５に記載の方法。
【請求項１０２】
腫瘍関連抗原を過剰発現する腫瘍細胞の増殖を阻害する方法であって、請求項２８〜７３のいずれか１項に記載の、該腫瘍関連抗原に特異的に結合する抗体薬物複合体化合物および化学療法剤を患者に投与する工程を含み、該抗体薬物複合体化合物および化学療法剤をそれぞれ該患者の腫瘍細胞の増殖を阻害するのに有効量で投与する、方法。
【請求項１０３】
前記抗体薬物複合体化合物が前記化学療法剤に対して前記腫瘍細胞を感作させる、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０４】
前記化合物の抗体は増殖阻害抗体である、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０５】
前記化合物が細胞死を誘発する、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０６】
前記化合物がアポトーシスを誘発する、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０７】
前記癌が、乳癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎臓癌、結腸癌、結腸直腸癌、甲状腺癌、膵臓癌、前立腺癌および膀胱癌からなる群から選択される、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０８】
前記化合物の抗体が抗体フラグメントである、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１０９】
抗体フラグメントがＦａｂフラグメントである、請求項１０２に記載の方法。
【請求項１１０】
癌細胞を検出するためのアッセイであって、
請求項２８〜７３のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体化合物を細胞に曝す工程と、該細胞に対する該化合物の結合の程度を決定する工程とを含むアッセイ。
【請求項１１１】
前記結合の程度を、腫瘍関連抗原をコードする核酸のレベルを蛍光インサイチュハイブリダイゼーション（ＦＩＳＨ）で測定することによって決定する、請求項１１０に記載のアッセイ。
【請求項１１２】
前記結合の程度を免疫組織化学（ＩＨＣ）によって決定する、請求項１１０に記載のアッセイ。
【請求項１１３】
請求項２８〜７３のいずれか１項に記載の抗体薬物複合体化合物と、容器と、該化合物がＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＢＣＭＡまたはＬｅｗｉｓ  Ｙ抗原の少なくとも１つを過剰発現することを特徴とする癌の処置に使用可能であることを示す添付文書またはラベルとを備える製造物品。
【請求項１１４】
下式：
Ｌ−［（ＬＵ）０〜１−（Ｄ）１〜４］ｐ
（式中、Ｌはリガンドであり、ＬＵはリンカー単位であり、各Ｄは薬物単位であり、それぞれ本明細書に記載されるとおりである）
を有する化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連）
本願は、２００５年７月７日に出願された米国仮出願第６０／６９７，７６７号の利益を請求し；米国仮出願第６０／６９７，７６７号の開示は、本明細書中に参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、薬物化合物、薬物−リンカー−リガンド複合体、薬物−リンカー化合物および薬物−リガンド複合体；およびこれらを含む組成物、およびこれらを用いて癌、自己免疫疾患および感染症および他の病的状態を処置する方法に関する。本発明は、抗体−薬物複合体化合物をインビトロ、インサイチュおよびインビボで用いて、哺乳動物細胞、または関連する病的状態を診断または処置する方法にも関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
腫瘍細胞に対して細胞毒性薬剤を選択的に送達するためにモノクローナル抗体（ｍＡｂｓ）を使用することに大きな関心がはらわれている。ＭＭＡＦ（Ｎ−メチルバリン−バリン−ドライソロイシン（ｄｏｌａｉｓｏｌｅｕｉｎｅ）−ドラプロリン（ｄｏｌａｐｒｏｉｎｅ）−フェニルアラニン）は、比較的毒性が低いが、内在するｍＡｂと複合体を形成すると非常に強力な活性を有するオーリスタチン（ａｕｒｉｓｔａｔｉｎ）である。ＭＭＡＦは、荷電Ｃ末端フェニルアラニン残基を有し、この残基は天然の対応物質ＭＭＡＥと比較すると細胞毒性が弱い。この違いは、細胞内への接近が不十分であることが最も大きな原因であると考えられる。しかし、内在する抗体（例えばＡＣ１０または１Ｆ６）とＭＭＡＦとがプロテアーゼ開裂可能なリンカーを介して複合体を形成すると、複合体化していない薬剤と比較して、抗原陽性細胞に対して２０００倍を超える効力を有する複合体が得られる。ｍＡｂを有効に標的化するとＭＭＡＦを細胞内に送達するのが容易になり、いったんＭＭＡＦが複合体から細胞内に薬物を放出しても、細胞膜を通り、細胞内濃度を高め、複合体の効力を高める能力が低いためトラップされてしまうと考えられる。受動的な細胞内吸収が不十分な細胞毒性薬物を用いることにより、ｍＡｂ−薬物複合体の全身毒性が減ると考えられる。実際に、循環でリンカーが非特異的に開裂すると、比較的毒性の低い薬物を放出する。
【０００４】
オーリスタチン系薬物および対応する抗体薬物複合体（ＡＤＣ）の可能性をさらに広げ、性能を改良するために、ＭＭＡＦのＣ末端フェニルアラニン残基の側鎖が修飾されている。この構造修飾により、得られた遊離薬物およびＡＤＣに予測されない性質が付与される。
【０００５】
本願において任意の参考文献を引用しているが、この参考文献が本願の従来技術であることを認めているわけではない。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
（発明の要旨）
１つの態様では、本発明は、一般式
Ｌｖ−（（ＬＵ）０〜１−（Ｄ）１〜４）ｐ
（式中、ＬはＨまたはリガンド単位であり；ＬＵはリンカー単位であり；ｖは０または１であり；ｐは１〜２０の整数であり；Ｄは式Ｄを有する薬物部分であり：
【０００７】
【化７０】
2009500424.tif 000002
（式中、Ｒ２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルから選択され；Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）から選択され；Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）から選択され；Ｒ５は、Ｈおよびメチルから選択されるか；またはＲ４およびＲ５が結合して炭素環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ３〜Ｃ８炭素環から選択され、ｎは２、３、４、５および６から選択され；Ｒ６は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルから選択され；Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）から選択され；各Ｒ８は独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環およびＯ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）から選択され；各Ｘ１はＣ１〜Ｃ１０アルキレンであり；部分−ＮＲ９Ｚ１は、修飾したアミノ酸側鎖を有するフェニルアラニンバイオ等価体（ｂｉｏｉｓｏｓｔｅｒｅ）である。））
によって表される化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物および複合体を提供する。
【０００８】
上式の化合物は、患者の障害（例えば、癌、自己免疫疾患または感染症）を処置するのに有用であり、または薬物−リンカー化合物または薬物−リンカー−リガンド複合体（例えば、開裂可能な薬物単位を有する薬物−リンカー−抗体複合体、薬物−リガンド複合体、または薬物−リガンド複合体）を合成するための中間体として有用である。
【０００９】
別の態様では、有効量の上式の化合物と薬学的に受容可能な担体またはビヒクルとを含む組成物が提供される。
【００１０】
さらに別の態様では、腫瘍細胞または癌細胞を殺傷するか、増加を阻害する方法が提供される。さらに別の態様では、癌を処置する方法が提供される。さらに別の態様では、自己免疫抗体を発現する細胞を殺傷するか、複製を阻害する方法が提供される。さらに別の態様では、自己免疫疾患を処置する方法が提供される。さらに別の態様では、感染症を処置する方法が提供される。さらに別の態様では、腫瘍細胞または癌細胞の増加を予防する方法が提供される。さらに別の態様では、癌を予防する方法が提供される。さらに別の態様では、自己免疫抗体を発現する細胞の増加を予防する方法が提供される。さらに別の態様では、自己免疫疾患を予防する方法が提供される。さらに別の態様では、感染症を予防する方法が提供される。
【００１１】
別の態様では、開裂可能な薬物単位を有する薬物−リンカー化合物を合成するための中間体として使用可能な薬物化合物が提供される。別の態様では、薬物−リンカー−リガンド複合体を合成するための中間体として使用可能な薬物−リンカー化合物が提供される
別の態様では、癌細胞を検出するためのアッセイが提供され、このアッセイは、以下：
（ａ）細胞を抗体薬物複合体化合物に曝す工程；および
（ｂ）細胞に対する抗体薬物複合体化合物の結合の程度を決定する工程；
を含む。
【００１２】
本発明は、以下に示す例示的な実施形態の詳細な記載と、添付の図面、表およびスキームとを参照してよく理解される。以下の説明は、単に説明し、具体的に説明し、例を示すだけのものであり、添付の特許請求の範囲に定義される範囲を限定することを意図したものではない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１３】
（発明の詳細な説明）
定義および省略形
他に言及されない限り、以下の用語および句は、本明細書で使用される場合、以下の意味を有するものとする。本明細書で商品名が使用される場合、この商品名には、本文中で他に言及しない限り、この商品名の製品の製剤製品、ジェネリック薬物および活性薬物成分が含まれる。
【００１４】
用語「抗体」は、本明細書で最も広い意味で使用され、具体的には、所望の生体活性を示すインタクトモノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、単一特異性抗体、少なくとも２つのインタクト抗体から形成される多特異性抗体（例えば、二重特異性抗体）、および抗体フラグメントを含む。インタクト抗体は主に可変領域および定常領域の２つの領域を有する。可変領域は標的抗原と結合し、相互作用する。可変領域には相補性決定領域（ＣＤＲ）があり、この領域は特定の抗原の特異的結合部位を認識し、これに結合する。定常領域は、免疫系と相互作用することによって認識される（例えば、Ｊａｎｅｗａｙら、２００１，Ｉｍｍｕｎｏ．Ｂｉｏｌｏｇｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｇａｒｌａｎｄ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照）。抗体にはいくつかの種類（例えば、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＭ、ＩｇＤおよびＩｇＡ）、クラス（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２）またはサブクラスであり得る。抗体は、任意の適切な種から誘導することができる。しかし、１つの態様では、抗体は、ヒト、マウスまたはウサギ由来である。抗体は、例えば、ヒト、ヒト化またはキメラ、一本鎖抗体、Ｆｖフラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂ発現ライブラリーで作成されるフラグメント、抗イディオタイプの（抗−Ｉｄ）抗体、および標的抗原（例えば、癌細胞抗原、ウイルス抗原または微生物抗原）に免疫特異的に結合する上述のもののいずれかのエピトープ結合フラグメントであってよい。
【００１５】
用語「特異的に結合する」および「特異的な結合」は、所定の抗原に対する抗体の結合を指す。典型的には、抗体は少なくとも約１×１０７Ｍ−１のアフィニティーで結合し、所定の抗原または密接に関連する抗原以外の非特異的抗原（例えば、ＢＳＡ、カゼイン）への結合アフィニティーの少なくとも２倍より大きいアフィニティーで所定の抗原に結合する。
【００１６】
用語「モノクローナル抗体」は、本明細書で使用される場合、実質的に同種の抗体の集合から得られる抗体（すなわち、この集団に含まれる個々の抗体が、天然に少量存在する可能な変異以外は同一である抗体）を指す。モノクローナル抗体は、非常に特異的に１個の抗原部位を対象とする。修飾語句「モノクローナル」は、実質的に同種の抗体の集合から得られる抗体の特徴を示すものであればよく、任意の特定の方法によって産生された抗体である必要があるとは解釈されない。
【００１７】
用語「モノクローナル抗体」は、特定的には「キメラ」抗体を含む。キメラ抗体は、所望の生体活性を示しつつも、重鎖および／または軽鎖の一部分が、特定の種から誘導される抗体または特定のクラスまたはサブクラスに属する抗体の対応する配列と同一であるか、または同種であり、鎖の残りの部分が、別の種から誘導される抗体または別のクラスまたはサブクラスに属する抗体またはこの抗体のフラグメントの対応する配列と同一であるか、または同種である。
【００１８】
「抗体フラグメント」は、インタクト抗体の一部分を含み、好ましくはその抗原結合領域または可変領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖフラグメント、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｉｅｓ）、線形抗体、一本鎖抗体分子、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−Ｆｃ、および抗体フラグメントから作成される多特異性抗体が挙げられる。
【００１９】
「インタクト」抗体は、抗原に結合する可変領域と、軽鎖定常ドメイン（ＣＬ）と、重鎖定常ドメイン（抗体のクラスに適してＣＨ１、ＣＨ２、ＣＨ３およびＣＨ４）とを含むものである。定常ドメインは、天然配列の定常ドメイン（例えば、ヒト天然配列の定常ドメイン）またはそのアミノ酸配列変異体であってよい。
【００２０】
インタクト抗体は、１つ以上の「エフェクター機能」を有してよい。エフェクター機能は、抗体のＦｃ領域（例えば、天然配列のＦｃ領域またはアミノ酸配列変異体のＦｃ領域）に起因する生体活性を指す。抗体のエフェクター機能の例としては、Ｃ１ｑ結合；補体依存性細胞傷害；Ｆｃレセプター結合；抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）；食作用；細胞表面レセプター（例えば、Ｂ細胞レセプター；ＢＣＲ）の下方制御などが挙げられる。
【００２１】
「天然配列」ポリペプチドは、天然から誘導されるポリペプチドと同じアミノ酸配列を有するものである（例えば、腫瘍関連抗原レセプター）。このような天然配列ポリペプチドは、天然物から単離することができるか、または組み換え手段または合成手段によって産生することができる。従って、天然配列ポリペプチドは、天然のヒトポリペプチド、マウスポリペプチド、または任意の他の哺乳動物種由来のポリペプチドのアミノ酸配列を有することができる。
【００２２】
用語「アミノ酸配列変異体」は、天然配列ポリペプチドとはある程度異なるアミノ酸配列を有するポリペプチドを指す。通常、アミノ酸配列変異体は、天然リガンドの少なくとも１つのレセプター結合ドメインまたは天然レセプターの少なくとも１つのリガンド結合ドメイン（例えば腫瘍関連抗原）と少なくとも約７０％の相同性を有する。他の態様では、アミノ酸配列変異体は、このようなレセプターまたはリガンド結合領域と少なくとも約８０％、少なくとも約９０％または少なくとも９５％相同性である。アミノ酸配列変異体は、天然アミノ酸配列のアミノ酸配列の特定の位置に置換、欠失および／または挿入がある。
【００２３】
「配列同一性」は、配列をアライメントし、必要ならば配列同一性が最大になるようにギャップを考慮した後の、同一のアミノ酸配列変異体中の残基の割合として定義される。２つの配列を比較するのに利用する数学アルゴリズムの好ましい非限定例は、ＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ，１９９０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８７：２２６４−２２６８，改良法であるＫａｒｌｉｎおよびＡｌｔｓｃｈｕｌ，１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：５８７３−５８７７のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９０，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０のＮＢＬＡＳＴプログラムおよびＸＢＬＡＳＴプログラムに組み込まれる。スコア＝１００、文字長＝１２のＮＢＬＡＳＴプログラムでＢＬＡＳＴヌクレオチドサーチを行ない、目的のタンパク質をコードする核酸に対するヌクレオチド配列同一性を得ることができる。スコア＝５０、文字長＝３のＸＢＬＡＳＴプログラムでＢＬＡＳＴタンパク質サーチを行ない、目的のタンパク質に対するアミノ酸配列同一性を得ることができる。比較のためのギャップアライメントを得るには、Ａｌｔｓｃｈｕｌら、１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２に記載のＧａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴが利用可能である。または、ＰＳＩ−Ｂｌａｓｔを利用して、分子間の距離関係を検出する反復サーチを行なうことができる（同上）。ＢＬＡＳＴ、Ｇａｐｐｅｄ  ＢＬＡＳＴおよびＰＳＩ−Ｂｌａｓｔプログラムの使用には、それぞれのプログラム（例えばＸＢＬＡＳＴおよびＮＢＬＡＳＴ）のデフォルトパラメータを使用することができる。配列比較のために使用する数学アルゴリズムの別の好ましい非限定例は、ＭｙｅｒｓおよびＭｉｌｌｅｒ，ＣＡＢＩＯＳ（１９８９）のアルゴリズムである。このようなアルゴリズムは、ソフトウェアパッケージのＧＣＧ配列アライメントの一部分であるＡＬＩＧＮプログラム（ｖｅｒｓｉｏｎ  ２．０）に組み込まれる。アミノ酸配列の比較のためにＡＬＩＧＮプログラムを使用する場合、ＰＡＭ１２０重み残基テーブル（ｗｅｉｇｈｔ  ｒｅｓｉｄｕｅ  ｔａｂｌｅ）、ギャップ長ペナルティ１２、およびギャップペナルティ４を使用することができる。配列分析のためのさらなるアルゴリズムが当該技術分野で既知であり、ＴｏｒｅｌｌｉｓおよびＲｏｂｏｔｔｉ，１９９４，Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．１０：３−５に記載のＡＤＶＡＮＣＥおよびＡＤＡＭ、およびＰｅａｒｓｏｎおよびＬｉｐｍａｎ，１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃＬ  ＵＳＡ  ８５：２４４４−８に記載のＡＤＶＡＮＣＥおよびＡＤＡＭが挙げられる。ＦＡＳＴＡでは、ｋｔｕｐは、感度および検索速度を設定する制御オプションである。ｋｔｕｐ＝２の場合、２つの領域の類似領域が比較され、整列した残基の対を見つけることによって判断され、ｋｔｕｐ＝１の場合、１個の整列したアミノ酸を調べる。ｋｔｕｐは、タンパク質配列については２または１に設定することができ、ＤＮＡ配列については１〜６に設定することができる。ｋｔｕｐのデフォルト値は、特定されないが、タンパク質について��、ＤＮＡについて６である。または、Ｈｉｇｇｉｎｓら、１９９６，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２６６：３８３−４０２に記載のＣＬＵＳＴＡＬ  Ｗアルゴリズムを用いてタンパク質配列アライメントを行なってよい。いくつかの実施形態では、適切な場合には配列内でギャップを考慮した後、比較対照の２つの配列は同じ長さである（例えば、比較される配列を超えて伸びるさらなる配列を排除する）。
【００２４】
「抗体依存性細胞媒介性細胞傷害」および「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃレセプター（ＦｃＲ）（例えば、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球およびマクロファージ）を発現する非特異的な細胞傷害性細胞が、標的細胞に結合した抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解をもたらす細胞媒介性反応を指す。ＡＤＣＣ、ＮＫ細胞を媒介するための初代細胞はＦｃγＲＩＩＩのみを発現し、単球は、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩを発現する。造血細胞でのＦｃＲ発現は、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ，１９９１，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−９２の４６４ページの表３にまとめられている。目的分子のＡＤＣＣ活性を評価するために、インビトロでのＡＤＣＣアッセイ（例えば、米国特許第５，５００，３６２号または第５，８２１，３３７号に記載されるもの）を行なってよい。このアッセイに有用なエフェクター細胞としては、末梢血単核球（ＰＢＭＣ）およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられる。代替として、またはこれらに加えて、目的分子のＡＤＣＣ活性を、例えば、Ｃｌｙｎｅｓら、１９９８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｄ．ＵＳＡ  ９５：６５２−６５６で開示されるような動物モデルでインビボで評価してよい。
【００２５】
用語「Ｆｃレセプター」または「ＦｃＲ」を使用して、抗体のＦｃ領域に結合するレセプターを記載する。好ましいＦｃＲは天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲはＩｇＧ抗体（γレセプター）に結合するものであり、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩサブクラスのレセプターが挙げられ、対立遺伝子変異体を含み、またはこれらのレセプターのスプライスされた形態を含む。ＦｃγＲＩＩレセプターとしては、細胞質ドメインが主に異なるが、類似のアミノ酸配列を有するＦｃγＲＩＩＡ（「活性化レセプター」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害レセプター」）が挙げられる。活性化レセプターＦｃγＲＩＩＡは、細胞質ドメインに免疫受容体チロシン活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。阻害レセプターＦｃγＲＩＩＢは、細胞質領域に免疫受容体チロシン阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する（Ｄａｅｕｒｏｎ，１９９７の総括Ｍ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４を参照）。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ，１９９１，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ，９：４５７−９２；Ｃａｐｅｌら、１９９４，Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４（１９９４）；およびｄｅ  Ｈａａｓら、１９９５，Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−４１にまとめられている。他のＦｃＲ（将来的に同定されるものも含む）も本明細書の用語「ＦｃＲ」に包含される。この用語には、母親のＩｇＧを胎児に移動させる新生児レセプターＦｃＲｎも含まれる（例えば、Ｇｕｙｅｒら、１９７６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７；およびＫｉｍら、１９９４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９参照）。
【００２６】
「補体依存性細胞傷害」または「ＣＤＣ」は、分子が相補体存在下で標的を溶解させる性能を指す。相補体活性化経路は、相補体系の第１成分（Ｃ１ｑ）が、同種抗原と複合体化した分子（例えば抗体）に結合することによって開始される。相補体活性化を評価するために、ＣＤＣアッセイ（例えば、Ｇａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、１９９６，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２０２：１６３に記載されるもの）を行なってよい。
【００２７】
用語「可変」は、広範囲に配列が異なっており、特定の抗原に対する特定の抗体それぞれの結合および特異性に使用される抗体の可変ドメインの特定の部分を指す。この可変性は、軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメイン中の「超可変領域」と呼ばれる３セグメントに集中している。可変ドメインの非常に高度に保存された部分はフレームワーク領域（ＦＲ）と呼ばれている。天然の重鎖および軽鎖の可変ドメインはそれぞれ３つの超可変領域に接続する４つのＦＲを含む。
【００２８】
用語「超可変領域」は、本明細書で使用される場合、抗体結合に関与する抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は、一般的に、「相補性決定領域」または「ＣＤＲ」のアミノ酸残基（例えば、軽鎖可変ドメインの残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）、および重鎖可変ドメインの残基３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）および９５〜１０２（Ｈ３）；Ｋａｂａｔら（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，５ｔｈ  Ｅｄ．Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，ＭＤ（１９９１））および／または「超可変ループ」の残基（例えば、軽鎖可変ドメインの残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）および９１〜９６（Ｌ３）、および重鎖可変ドメインの残基２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）および９６〜１０１（Ｈ３）；ＣｈｏｔｈｉａおよびＬｅｓｋ，１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ  １９６：９０１−９１７）を含む。「フレームワーク領域」または「ＦＲ」残基は、本明細書に定義されるような超可変領域残基以外の可変ドメインの残基である。
【００２９】
「一本鎖Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶＨ領域およびＶＬ領域を含み、これらの領域は一本鎖ポリペプチド鎖に存在する。典型的には、Ｆｖポリペプチドは、ｓｃＦｖが抗原に結合するのに望ましい構造を形成可能なポリペプチドリンカーをＶＨドメインとＶＬドメインとの間にさらに含む。ｓｃＦｖの総説は、Ｐｌｕｅｃｋｔｈｕｎ  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ，ｖｏｌ．１１３，ＲｏｓｅｎｂｕｒｇおよびＭｏｏｒｅ編，Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）を参照。
【００３０】
用語「ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）」は、２つの抗原結合部位を有する小さな抗体フラグメントを指し、このフラグメントは、可変重鎖ドメイン（ＶＨ）を含み、この可変重鎖ドメイン（ＶＨ）は同じポリペプチド鎖に可変軽鎖ドメイン（ＶＬ）に接続している。同じ鎖の２個のドメインで対を形成するには短すぎるリンカーを用いることによって、このドメインは別の鎖の相補性ドメインと対を形成し、２つの抗原結合部位を生成する。ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）は、例えば、ＥＰ０４０４０９７；ＷＯ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒら、１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８により詳細に記載される。
【００３１】
非ヒト（例えばげっ歯類）抗体の「ヒト化」形態は、非ヒト免疫グロブリンから誘導される最小限の配列を含有するキメラ抗体である。ほとんどの部分では、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域が非ヒト種（例えば、マウス、ラット、ウサギ、または所望の特異性、アフィニティーおよび能力を有する非ヒト霊長類）の超可変領域（ドナー抗体）の残基と交換されたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。いくつかの場合では、ヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域（ＦＲ）の残基は、対応する非ヒト残基と交換される。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体またはドナー抗体に見られない残基を含んでよい。これらの改変によって抗体性能がさらに高まる。一般的に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインの実質的に全てを含み、非ヒト免疫グロブリンの超可変ループの全てまたは実質的に全て、およびＦＲの全てまたは実質的に全てがヒト免疫グロブリン配列である。ヒト化抗体は、場合により、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）（典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域）の少なくとも一部分も含んでいる。さらに詳細には、Ｊｏｎｅｓら、１９８６，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９；およびＰｒｅｓｔａ，１９９２，Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６を参照。
【００３２】
本明細書で使用される場合、「単離された」は、（ａ）天然の供給源、例えば、植物または動物の細胞または細胞培養物、または（ｂ）有機化学反応で合成した混合物の他の成分から分離されたことを意味する。本明細書で使用される場合、「精製された」は、単離された場合に、単離物の重量あたり化合物（例えば複合体）の含有量が少なくとも９５％、別の態様では少なくとも９８％であることを意味する。
【００３３】
「単離された」抗体は、天然環境の成分から同定し、分離し、および／または回収されたものである。この天然環境の汚染成分は、この抗体の診断または治療での使用を妨害する物質であり、例えば、酵素、ホルモンおよび他のタンパク溶質または非タンパク溶質が挙げられる。好ましい実施形態では、（１）Ｌｏｗｒｙ法で決定される場合、抗体が９５重量％を超え、最も好ましくは９９重量％を超えるまで、（２）スピニングカップシークエネーター（ｓｐｉｎｎｉｎｇ  ｃｕｐ  ｓｅｑｕｅｎａｔｏｒ）を使用してＮ末端または内部アミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るのに十分な程度まで、または（３）クマシーブルーを用いた還元条件または非還元条件下で、好ましくは銀染色を用いてＳＤＳ−ＰＡＧＥによって均一になるまで抗体を精製する。単離された抗体としては、抗体の天然環境の少なくとも１つの成分が存在しないので、組み換え細胞内のインサイチュでの抗体が挙げられる。しかし、通常は、単離された抗体は、少なくとも１つの精製工程によって調製される。
【００３４】
目的抗原に「結合する」抗体は、抗体が抗原を発現する細胞を標的化するのに有用な十分なアフィニティーを有する抗原と結合可能なものである。
【００３５】
「アポトーシスを誘発する」抗体は、アネキシンＶの結合、ＤＮＡのフラグメント化、細胞収縮、小胞体の拡張、細胞のフラグメント化、および／または膜小胞（アポトーシス小体と呼ばれている）の形成によって決定されるようなプログラムされた細胞死を誘発するものである。細胞は、腫瘍細胞、例えば、乳腺細胞、卵巣細胞、胃細胞、子宮内膜細胞、唾液腺細胞、肺細胞、腎臓細胞、直腸細胞、甲状腺細胞、膵臓細胞または膀胱細胞である。アポトーシスに関連する細胞事象を評価するのに種々の細胞が利用可能である。例えば、ホスファチジルセリン（ＰＳ）の転位をアネキシン結合によって測定することができ、ＤＮＡフラグメント化をＤＮＡラダーリングで評価することができ、ＤＮＡフラグメント化に伴う核／クロマチン縮合を低二倍体細胞の増加によって評価することができる。
【００３６】
用語「治療的に有効な量」は、哺乳動物の疾患または障害を処置するのに有効な薬物の量を指す。癌の場合には、治療的に有効な量の薬物は、癌細胞の数を減らし、腫瘍を小さくし、癌細胞が周囲臓器に浸潤するのを阻害し（すなわち、ある程度遅らせ、好ましくは止め）、腫瘍転移を阻害し（すなわち、ある程度遅らせ、好ましくは止め）、腫瘍増殖をある程度まで阻害し、および／または癌に関連する１つ以上の症状をある程度まで軽減することができる。この薬物は、存在する癌細胞の増殖を予防し、および／または存在する癌細胞を殺傷する程度まで、細胞増殖抑制性および／または細胞毒性であってよい。癌治療について、例えば、病気進行までの期間（ＴＴＰ）の評価および／または奏功率（ＲＲ）の決定によって効力を評価することができる。
【００３７】
用語「相当量」は、収集物またはサンプルの集合の大部分（すなわち５０％を超える部分）を指す。
【００３８】
用語「細胞内代謝物」は、細胞内での薬物−リンカー−リガンド複合体（例えば抗体薬物複合体（ＡＤＣ））における代謝プロセスまたは反応から生じる化合物を指す。代謝プロセスまたは反応は、官能基（例えば、ヒドラゾン、エステルまたはアミド）の加水分解による、または薬物−リンカー−リガンド複合体のタンパク質分解（例えば、シスチル−リンカー−薬物フラグメントの放出）による、ＡＤＣのペプチドリンカーのタンパク質の分解的切断などの酵素プロセスであってよい。細胞内代謝物としては、限定されないが、細胞に入り、拡散し、吸収または移動した後に細胞内切断を受けた抗体および遊離薬物が挙げられる。
【００３９】
用語「細胞内で切断された」および「細胞内切断」は、薬物−リガンド複合体、薬物−リンカー−リガンド複合体、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）などの細胞内の代謝プロセスまたは反応を指す。薬物部分（Ｄ）と抗体（Ａｂ）との間の共有結合（例えばリンカー）が切れると、遊離薬物、薬物−リンカー化合物または細胞内で抗体と開裂した複合体の他の代謝物が得られる。薬物−リガンド複合体、薬物−リンカー−リガンド複合体またはＡＤＣの切断部分は細胞内代謝物である。
【００４０】
用語「バイオアベイラビリティー」は、患者に投与された所与の量の薬物の全身的なバイオアベイラビリティー（すなわち、血中／血漿濃度）を指す。バイオアベイラビリティーは、投与された投薬形態から薬物が全身循環に到達する時間（速度）および合計量（程度）の測定値を示す絶対的な用語である。
【００４１】
用語「細胞毒性」は、抗体薬物複合体化合物または抗体薬物複合体化合物の細胞内代謝物の細胞死効果、細胞増殖抑制効果または増殖防止効果を指す。細胞毒性活性は、細胞の半数が生存する単位体積あたりの濃度（モル濃度または重量濃度）であるＩＣ５０値で表してよい。
【００４２】
「障害」は、処置で利益を受ける任意の状態である。障害としては、哺乳動物が問題の障害になりやすい病的状態を含む慢性および急性の障害または疾患が挙げられる。本明細書で処置される障害の非限定例としては、良性および悪性の腫瘍；白血病およびリンパ性悪性疾患、特に、乳腺癌、卵巣癌、胃癌、子宮内膜癌、唾液腺癌、肺癌、腎臓癌、直腸癌、甲状腺癌、膵臓癌、前立腺癌または膀胱癌；ニューロン障害、グリア障害、星状膠細胞障害、視床下部障害および他の腺障害、マクロファージ障害、上皮障害、間質障害および割腔障害；および炎症性障害、血管由来障害および免疫障害が挙げられる。
【００４３】
用語「癌」および「癌性」は、制御できない細胞増殖によって典型的には特徴付けられる哺乳動物の病的状態または障害を指すか、または記載する。「腫瘍」は、１つ以上の癌性細胞を含む。癌の例としては、限定されないが、癌腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫、および白血病またはリンパ性悪性疾患が挙げられる。このような癌のさらに特定的な例としては、扁平上皮細胞癌（例えば上皮の扁平上皮細胞癌）、小細胞肺癌、非小細胞肺癌（「ＮＳＣＬＣ」）、肺の腺癌および肺の扁平上皮癌を含む肺癌、腹膜癌、肝細胞癌、消化管癌を含む胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｏｒ  ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、膵臓癌、グリア芽腫、子宮頸癌、卵巣癌、肝臓癌、膀胱癌、肝癌、乳癌、結腸癌、直腸癌、結腸直腸癌、子宮内膜腺癌または子宮癌、唾液腺癌、腎臓癌（ｋｉｄｎｅｙ  ｏｒ  ｒｅｎａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、前立腺癌、外陰癌、甲状腺癌、肝臓癌、肛門癌、陰茎癌、および頭部および頚部の癌が挙げられる。
【００４４】
用語「細胞毒性剤」は、本明細書で使用される場合、細胞機能を阻害または予防し、および／または細胞を破壊する基質を指す。この用語は、放射性同位体（例えば、２１１Ａｔ、１３１Ｉ、１２５Ｉ、９０Ｙ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、１５３Ｓｍ、２１２Ｂｉ、３２Ｐ、６０Ｃ、およびＬｕの放射性同位体）、化学療法剤、および毒素（例えば、低分子毒素または細菌、真菌、植物または動物由来の酵素活性毒素）およびこの合成アナログおよび誘導体を含むことが意図される。１つの態様では、この用語には放射性同位体を含まない。
【００４５】
用語「サイトカイン」は、１つの細胞の集合によって放出される細胞間メディエーターとして別の細胞に作用するタンパク質の総称である。このようなサイトカインの例は、リンフォカイン、モノカインおよび従来のポリペプチドホルモンである。サイトカインの中には、成長ホルモン、例えば、ヒト成長ホルモン、Ｎ−メチオニルヒト成長ホルモンおよびウシ成長ホルモン；副甲状腺ホルモン；チロキシン；インスリン；プロインスリン；リラキシン；プロリラキシン；糖タンパク質ホルモン、例えば、卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）および黄体形成ホルモン（ＬＨ）；肝臓成長因子；線維芽細胞成長因子；プロラクチン；胎盤性ラクトゲン；腫瘍壊死因子−αおよび−β；ミュラー管抑制物質；マウスゴナドトロピン関連ペプチド；インヒビン；アクチビン；血管内皮成長因子；インテグリン；トロンボポエチン（ＴＰＯ）；神経成長因子、例えばＮＧＦ−β；血小板成長因子；形質転換成長因子（ＴＧＦ）、例えばＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−β；インスリン様成長因子−Ｉおよび−ＩＩ；エリスロポエチン（ＥＰＯ）；骨誘導因子；インターフェロン、例えば、インターフェロン−α、インターフェロン−βおよびインターフェロン−γ；コロニー刺激因子（ＣＳＦ）、例えばマクロファージ−ＣＳＦ（Ｍ−ＣＳＦ）；顆粒球−マクロファージ−ＣＳＦ（ＧＭ−ＣＳＦ）；および顆粒球−ＣＳＦ（Ｇ−ＣＳＦ）；インターロイキン（ＩＬ）、例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−１α、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１およびＢＬ−１２；腫瘍壊死因子、例えば、ＴＮＦ−αまたはＴＮＦ−β；およびＬＩＦおよびキットリガンド（ＫＬ）を含む他のポリペプチド因子がある。本明細書で使用される場合、用語「サイトカイン」は、天然供給源由来のタンパク質、または組み換え細胞培養物由来のタンパク質、および天然配列サイトカインの生体活性等価体を含む。
【００４６】
用語「プロドラッグ」は、本明細書で使用される場合、腫瘍細胞に対する細胞毒性が親薬物と比べて低く、酵素または加水分解によって活性化するか、またはより活性な親形態に変換可能な薬学的に活性な基質の前駆体形態または誘導体形態を指す。例えば、Ｗｉｌｍａｎ，「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ」Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ，１４，ｐｐ．３７５−３８２，６１５ｔｈ  Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ｂｅｌｆａｓｔ（１９８６）およびＳｔｅｌｌａら、「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ：Ａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ  ｔｏ  Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」，Ｄｉｒｅｃｔｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｂｏｒｃｈａｒｄｔら（ｅｄ．），ｐｐ．２４７−２６７，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ（１９８５）を参照。本発明のプロドラッグとしては、限定されないが、ホスフェート含有プロドラッグ、チオホスフェート含有プロドラッグ、サルフェート含有プロドラッグ、ペプチド含有プロドラッグ、Ｄ−アミノ酸修飾されたプロドラッグ、グリコシル化プロドラッグ、β−ラクタム含有プロドラッグ、場合により置換されたフェノキシアセトアミド含有プロドラッグまたは場合により置換されたフェニルアセトアミド含有プロドラッグ、５−フルオロシトシンプロドラッグ、およびより活性な細胞毒性を有さない薬物に変換可能な他の５−フルオロウリジンプロドラッグが挙げられる。本発明で使用するプロドラッグ形態に誘導体化可能な細胞毒性薬物の例としては、限定されないが、上述の化学療法剤が挙げられる。
【００４７】
「リポソーム」は、薬物（例えば、抗−ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＢＣＭＡまたはＬｅｗｉｓ  Ｙ抗体、および場合により化学療法剤）を哺乳動物に送達するのに有用な種々の脂質、リン脂質および／または界面活性剤で構成される小胞である。リポソームの構成要素は、通常は、生体膜の脂質配置と類似した二層構造で配置されている。
【００４８】
用語「添付文書」は、慣習的に治療製品の商業的パッケージに含まれる指示を指すために使用され、この治療製品に関する指示、用法、投薬量、投与、禁忌および／または警告に関する情報を含んでいる。
【００４９】
「単離された」核酸分子は、同定され、通常の核酸の天然供給源に関連する少なくとも１つの汚染核酸分子から分離された核酸分子である。単離された核酸分子は、天然に見いだされる形態または設定以外のものである。従って、単離された核酸分子は、天然細胞に存在する核酸分子とは区別される。しかし、単離された核酸分子には、例えば、核酸を発現する細胞に通常は含まれる核酸分子であるが、核酸分子が天然細胞とは異なる染色体位置にある核酸分子を含む。
【００５０】
表現「制御配列」は、特に、宿主有機体で操作可能に結合したコード配列を発現するのに必要なＤＮＡ配列を指す。原核生物に適した制御配列としては、例えばプロモーター、場合によりオペレーター配列およびリボソーム結合部位が挙げられる。真核細胞は、プロモーター、ポリアデニル化シグナルおよびエンハンサーを利用することが知られている。
【００５１】
核酸は、別の核酸配列と機能的な関係にある場合、「操作可能に結合」する。例えば、プレ配列または分泌リーダーのためのＤＮＡは、ポリペプチドの分泌に関与するプレタンパク質として発現する場合、ポリペプチドをコードするＤＮＡに操作可能に結合し、プロモーターまたはエンハンサーは、例えば、配列の転写に影響を与える場合、コード配列に操作可能に結合するか、またはリボソーム結合部位は、翻訳を容易にする位置に配置される場合、コード配列に操作可能に結合する。一般的に、「操作可能に結合した」は、結合したＤＮＡ配列が連続していることを意味し、分泌リーダーの場合には連続的であり、解読位相（ｒｅａｄｉｎｇ  ｐｈａｓｅ）にあることを意味する。しかし、エンハンサーは連続的である必要はない。簡便な制限部位に連結することによって結合を達成することができる。このような部位が存在しない場合、合成オリゴヌクレオチドアダプターまたはリンカーを従来の実施に従って使用することができる。
【００５２】
本明細書で使用される場合、表現「細胞」「細胞株」および「細胞培養物」は互換可能に使用され、このような名称には全て子孫を含む。従って、語句「形質転換体」および「形質転換細胞」は、初代被検体細胞、および接種数にかかわらずこの初代細胞から誘導された培養物を含む。全ての子孫は、意図的な変異または意図的ではない変異によってＤＮＡの内容が正確に同一でなくてもよいことも理解される。元々の形質転換細胞でスクリーニングされるのと同じ機能または生体活性を有する変異子孫が含まれる。別の名称が意図される場合、内容から明らかである。
【００５３】
「自己免疫疾患」は、本明細書では、個体自身の組織から生じ、個体自身の組織に対する疾患または障害またはその共分離またはその徴候またはこれらから得られた状態である。自己免疫疾患または障害の例としては、限定されないが、以下のものが挙げられる：関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎および強直性脊椎炎）、乾癬、アトピー性皮膚炎を含む皮膚炎；慢性自己免疫性じんましんを含む慢性特発性じんましん、多発筋炎／皮膚筋炎、中毒性表皮剥離症、全身性強皮症および硬化症、炎症性大腸炎（ＩＢＤ）に関連する応答（クローン病、潰瘍性大腸炎）、および壊疽性膿皮症の共分離を伴うＩＢＤ、結節性紅斑、原発性硬化性胆管炎および／または上強膜炎、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）を含む呼吸窮迫症候群、髄膜炎、ＩｇＥによって媒介される疾患、例えば、アナフィラキシーおよびアレルギー性鼻炎、脳炎、例えば、Ｒａｓｍｕｓｓｅｎ脳炎、ブドウ膜炎、結腸炎、例えば、顕微鏡的結腸炎およびコラーゲン蓄積結腸炎、糸球体腎炎（ＧＮ）、例えば、膜性ＧＮ、特発性膜性ＧＮ、Ｉ型およびＩＩ型を含む膜性増殖性ＧＮ（ＭＰＧＮ）、および急速進行性ＧＮ、アレルギー状態、湿疹、ぜんそく、Ｔ細胞の浸潤および慢性炎症性応答が関与する状態、アテローム性動脈硬化症、自己免疫性心筋炎、白血球接着不全症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、例えば、皮膚のＳＬＥ、狼瘡（腎炎、脳炎、小児の狼瘡、腎臓ではない狼瘡、円板上の狼瘡、脱毛症を含む）、若年発症糖尿病、多発性硬化症（ＭＳ）、例えば、ｓｐｉｎｏ−ｏｐｔｉｃａｌ  ＭＳ、アレルギー性脳脊髄炎、サイトカインまたはＴリンパ球によって媒介される急性過敏症および遅延過敏症に関連する免疫応答、結核症、サルコイドーシス、Ｗｅｇｅｎｅｒ肉芽腫症を含む肉芽腫症、無顆粒球症、脈管炎（大血管の脈管炎を含む（リウマチ性多発性筋痛および巨細胞性動脈炎（高安動脈炎）を含む）、中血管の脈管炎（川崎病および結節性多発性動脈炎）、ＣＮＳ脈管炎、およびＡＮＣＡに関連する脈管炎、例えば、Ｃｈｕｒｇ−Ｓｔｒａｕｓｓ脈管炎または症候群（ＣＳＳ））、再生不良性貧血、クームス陽性貧血、Ｄｉａｍｏｎｄ  Ｂｌａｃｋｆａｎ貧血、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）を含む免疫性溶血性貧血、悪性貧血、赤芽球癆（ＰＲＣＡ）、第ＶＩＩＩ因子欠乏、血友病Ａ、自己免疫性好中球減少症、汎血球減少症、白血球減少症、白血球漏出が関与する疾患、ＣＮＳ炎症性障害、多臓器障害症候群、重症筋無力症，抗原−抗体複合体によって媒介される疾患、抗−糸球体基底膜疾患、抗−リン脂質抗体症候群、アレルギー性神経炎、Ｂｅｃｈｅｔ病、Ｃａｓｔｌｅｍａｎ症候群、Ｇｏｏｄｐａｓｔｕｒｅ症候群、Ｌａｍｂｅｒｔ−Ｅａｔｏｎ  Ｍｙａｓｔｈｅｎｉｃ症候群、Ｒｅｙｎａｕｄ症候群、Ｓｊｏｒｇｅｎ症候群、Ｓｔｅｖｅｎｓ−Ｊｏｈｎｓｏｎ症候群、固形臓器移植拒絶（高いパネル反応性（ｐａｎｅｌ  ｒｅａｃｔｉｖｅ）の抗体の滴定のための前処理、組織のＩｇＡ蓄積、および腎移植、肝臓移植、小腸移植、心臓移植から生じる拒絶などを含む）、移植片対宿主拒絶反応（ＧＶＨＤ）、水疱性類天疱瘡、天疱瘡（座瘡（ｖａｌｇａｒｉｓ）、天疱瘡（ｆｏｌｉａｃｅｕｓ���、および天疱瘡粘膜類天疱瘡（ｐｅｍｐｈｉｇｏｉｄ  ｍｕｃｕｓ−ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｅｍｐｈｉｇｏｉｄ）を含む）、自己免疫性多腺性内分泌障害、Ｒｅｉｔｅｒ病、スティフマン症候群、免疫複合体性腎炎、ＩｇＭ多発ニューロパシーまたはＩｇＭによって媒介されるニューロパシー、特発性血小板減少性紫斑病（ＩＴＰ）、血栓性血小板減少性紫斑病（ｔｈｒｏｍｂｏｔｉｃ  ｔｈｒｏｂｏｃｙｔｏｐｅｎｉｃ  ｐｕｒｐｕｒａ）（ＴＴＰ）、血小板減少症（例えば、心筋梗塞の患者で進行するもの、自己免疫性血小板減少症を含む）、睾丸および卵巣の自己免疫疾患（自己免疫性睾丸炎および卵巣炎を含む）、原発性甲状腺機能低下症；自己免疫性内分泌疾患、例えば、自己免疫性甲状腺炎、慢性甲状腺炎（橋本甲状腺炎）、亜急性甲状腺炎、特発性甲状腺機能低下、Ａｄｄｉｓｏｎ病、Ｇｒａｖｅ病、自己免疫性多内分泌腺症候群（または多内分泌腺内分泌障害症候群）、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）とも呼ばれるＩ型糖尿病（小児のＩＤＤＭを含む）およびＳｈｅｅｈａｎ症候群；自己免疫性肝炎、リンパ球性間質性肺炎（ＨＩＶ）、閉塞性細気管支炎（非移植性）対ＮＳＩＰ、Ｇｕｉｌｌａｉｎ−Ｂａｒｒｅ症候群、Ｂｅｒｇｅｒ病（ＩｇＡネフロパシー）、原発性胆汁性肝硬変、セリアック病（グルテン性腸症）、共分離した疱疹状皮膚炎のある難治性スプルー、クリオグロブリン血症、筋萎縮性側索硬化症（ａｍｙｌｏｔｒｏｐｈｉｃ  ｌａｔｅｒａｌ  ｓｃｌｅｒｏｓｉｓ）（ＡＬＳ；Ｌｏｕ  Ｇｅｈｒｉｇ病）、冠動脈疾患、自己免疫性内耳疾患（ＡＩＥＤ）、自己免疫性聴力低下、眼球クローヌスミオクローヌス症候群（ＯＭＳ）、多発性軟骨炎、例えば、難治性多発性軟骨炎、肺胞性タンパク症、アミロイドーシス、巨細胞肝炎、強膜炎、意味未確定／未知のモノクローナル免疫グロブリン異常症（ＭＧＵＳ）、末梢性ニューロパシー、腫瘍随伴症候群、チャネル病、例えば、てんかん、偏頭痛、不整脈、筋肉障害、難聴、失明、周期性四肢麻痺およびＣＮＳのチャネル病；自閉症、炎症性ミオパシーおよび巣状分節状糸球体硬化症（ＦＳＧＳ）。
【００５４】
用語「アルキル」は、示された炭素原子数を有する直鎖または分枝の飽和または不飽和の炭化水素を指す（例えば、「Ｃ１〜Ｃ８アルキル」は、１〜８個の炭素原子を有するアルキル基を指す）。炭素原子の数が示されていない場合、アルキル基は１〜８個の炭素原子を有する。代表的な直鎖の「Ｃ１〜Ｃ８アルキル」基としては、限定されないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−ヘプチルおよびｎ−オクチルが挙げられ、分枝Ｃ１〜Ｃ８アルキルとしては、限定されないが、−イソプロピル、−ｓｅｃ−ブチル、−イソブチル、−ｔｅｒｔ−ブチル、−イソペンチルおよび２−メチルブチルが挙げられ、不飽和Ｃ２〜Ｃ８アルキルとしては、限定されないが、−ビニル、−アリル、−１−ブテニル、−２−ブテニル、−イソブチレニル、−１−ペンテニル、−２−ペンテニル、−３−メチル−１−ブテニル、−２−メチル−２−ブテニル、−２，３−ジメチル−２−ブテニル、１−ヘキシル、２−ヘキシル、３−ヘキシル、−アセチレニル、−プロピニル、−１−ブチニル、−２−ブチニル、−１−ペンチニル、−２−ペンチニルおよび−３−メチル−１−ブチニルが挙げられる。アルキル基は、置換されていなくてよく、または１つ以上の基で置換されていてよい。該基としては、限定されないが、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−ＯＨ−、Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＯ３Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＳＲ’、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮが挙げられる。ここで、各Ｒ’は独立して、Ｈ、置換されていないＣ１〜Ｃ８アルキルおよびアリールから選択される。
【００５５】
「アルケニル」は、不飽和（すなわち、炭素−炭素のｓｐ２二重結合）の少なくとも１つの部位に一級、二級、三級または環状の炭素原子を含有するＣ２〜Ｃ１８炭化水素を指す。例としては、限定されないが、以下のものが挙げられる：エチレンまたはビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、シクロペンテニル（−Ｃ５Ｈ７）および５−ヘキセニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）。
【００５６】
「アルキニル」は、不飽和（すなわち、炭素−炭素のｓｐ三重結合）の少なくとも１つの部位に一級、二級、三級または環状の炭素原子を含有するＣ２〜Ｃ１８炭化水素を指す。例としては、限定されないが、アセチレン基（−Ｃ≡ＣＨ）およびプロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）が挙げられる。
【００５７】
「アルキレン」は、１〜１８個の炭素原子を有し、親アルカンの同じまたは２個の異なる炭素原子から２個の水素原子が除去されて誘導される２個の１価ラジカル中心を有する飽和の分枝または直鎖または環状の炭化水素基を指す。典型的なアルキレンラジカルとしては、限定されないが、以下のものが挙げられる：メチレン（−ＣＨ２−）、１，２−エチル（−ＣＨ２ＣＨ２−）、１，３−プロピル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）、１，４−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２−）など。「Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン」は、式−（ＣＨ２）１〜１０−の直鎖の飽和炭化水素基である。Ｃ１〜Ｃ１０アルキレンの例としては、メチレン、エチレン、プロピレン、ブチレン、ペンチレン、ヘキシレン、ヘプチレン、オクチレン、ノニレンおよびデカレンが挙げられる。
【００５８】
「アルケニレン」は、２〜１８個の炭素原子を有し、親アルケンの同じまたは２個の異なる炭素原子から２個の水素原子が除去されて誘導される２個の１価ラジカル中心を有する不飽和の分枝または直鎖または環状の炭化水素基を指す。典型的なアルケニレンラジカルとしては、限定されないが、１，２−エチレン（−ＣＨ＝ＣＨ−）が挙げられる。
【００５９】
「アルキニレン」は、２〜１８個の炭素原子を有し、親アルキンの同じまたは２個の異なる炭素原子から２個の水素原子が除去されて誘導される２個の１価ラジカル中心を有する不飽和の分枝または直鎖または環状の炭化水素基を指す。典型的なアルキニレンラジカルとしては、限定されないが、アセチレン（−Ｃ≡Ｃ−）、プロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡Ｃ−）および４−ペンチニル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ−）が挙げられる。
【００６０】
「アリール」は、親芳香族環系の１個の炭素原子から１個の水素原子が除去されて誘導される６〜２０個の炭素原子を有する１価の芳香族炭化水素ラジカルを指す。いくつかのアリール基は、「Ａｒ」として例示的な構造中に示されている。典型的なアリール基としては、限定されないが、ベンゼン、置換ベンゼン、ナフタレン、アントラセン、ビフェニルなどから誘導されるラジカルが挙げられる。炭素環芳香族基（アリール）または複素環芳香族基（ヘテロアリール）は置換されていなくてよく、または１つ以上の基で置換されていてもよい。該基としては、限定されないが、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮが挙げられる。ここで、各Ｒ’は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよび置換されていないアリールから選択される。
【００６１】
「アリールアルキル」は、炭素原子（典型的には末端炭素原子またはｓｐ３炭素原子）に結合した水素原子の１つがアリールラジカルと交換された非環状アルキルラジカルを指す。典型的なアリールアルキル基としては、限定されないが、ベンジル、２−フェニルエタン−１−イル、２−フェニルエタン−１−イル、ナフチルメチル、２−ナフチルエタン−１−イル、２−ナフチルエテン−１−イル、ナフトベンジル、２−ナフトフェニルエタン−１−イルなどが挙げられる。アリールアルキル基は６〜２０個の炭素原子（例えば、アルキル部分）を含み、例えば、アリールアルキル基のアルキル部分（例えば、アルカニル、アルケニルまたはアルキニル基）は１〜６個の炭素原子を有し、アリール部分は６〜１４個の炭素原子を有する。
【００６２】
「ヘテロアリールアルキル」は、炭素原子（典型的には末端炭素原子またはｓｐ３炭素原子）に結合した水素原子の１つがヘテロアリールラジカルと交換された非環状アルキル基を指す。典型的なヘテロアリールアルキル基としては、限定されないが、２−ベンズイミダゾリルメチル、２−フリルエチルなどが挙げられる。ヘテロアリールアルキル基は６〜２０個の炭素原子を含み、例えば、ヘテロアリールアルキル基のアルキル部分（例えば、アルカニル、アルケニルまたはアルキニル基）は１〜６個の炭素原子を有し、ヘテロアリール部分は５〜１４個の炭素原子を有し、典型的にはＮ、Ｏ、ＰおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子を有し、残りの部分が炭素原子である。ヘテロアリールアルキル基のヘテロアリール部分は、３〜７個の環原子（２〜６個の炭素原子とＮ、Ｏ、ＰおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）を有する単環であってよく、または７〜１０個の環原子（４〜９個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、ＰおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）を有する二環であってよく、例えば、ビシクロ［４，５］系、［５，５］系、［５，６］系または［６，６］系がある。
【００６３】
「置換アルキル」、「置換アリール」および「置換アリールアルキル」は、１個以上の水素原子がそれぞれ独立して置換基と交換されたアルキル、アリールおよびアリールアルキルをそれぞれ意味する。典型的な置換基としては、限定されないが、−Ｘ、−Ｒ、−Ｏ−、−ＯＲ、−ＳＲ、−Ｓ−、−ＮＲ２、−ＮＲ３、＝ＮＲ、−ＣＸ３、−ＣＮ、−ＯＣＮ、−ＳＣＮ、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＮＣＳ、−ＮＯ、−ＮＯ２、＝Ｎ２、−Ｎ３、−ＮＲＣ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−ＳＯ３−、−ＳＯ３Ｈ、−Ｓ（＝Ｏ）２Ｒ、−ＯＳ（＝Ｏ）２ＯＲ、−Ｓ（＝Ｏ）２ＮＲ、−Ｓ（＝Ｏ）Ｒ、−ＯＰ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＲ）２、−ＰＯ−３、−ＰＯ３Ｈ２、−ＡｓＯ２Ｈ２、−Ｃ（＝Ｏ）Ｒ、−Ｃ（＝Ｏ）Ｘ、−Ｃ（＝Ｓ）Ｒ、−ＣＯ２Ｒ、−ＣＯ２−、−Ｃ（＝Ｓ）ＯＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｓ）ＳＲ、−Ｃ（＝Ｏ）ＮＲ２、−Ｃ（＝Ｓ）ＮＲ２または−Ｃ（＝ＮＲ）ＮＲ２が挙げられ、ここで、各Ｘは独立してハロゲン：Ｆ、Ｃｌ、ＢｒまたはＩであり；各Ｒは独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ６〜Ｃ２０アリール、Ｃ３〜Ｃ１４複素環、保護基またはプロドラッグ部分である。上述のアルキレン、アルケニレンおよびアルキニレン基も同様に置換されていてもよい。
【００６４】
「ヘテロアリール」および「複素環」は、１個以上の環原子がヘテロ原子（例えば、窒素、酸素および硫黄）である環系を指す。複素環ラジカルは１〜２０個の炭素原子とＮ、Ｏ、ＰおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子とを有する。複素環は、３〜７個の環員（２〜６個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、ＰおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）を有する単環であってよく、または７〜１０個の環員（４〜９個の炭素原子ならびにＮ、Ｏ、ＰおよびＳから選択される１〜３個のヘテロ原子）を有する二環であってもよく、例えば、ビシクロ［４，５］系、［５，５］系、［５，６］系または［６，６］系がある。
【００６５】
複素環は、Ｐａｑｕｅｔｔｅ，Ｌｅｏ  Ａ．；「Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ」（Ｗ．Ａ．Ｂｅｎｊａｍｉｎ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９６８）、特に第１章、第３章、第４章、第６章、第７章および第９章；「Ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ａ  ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｇｒａｐｈｓ」（Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９５０年から現在まで）、特に第１３巻、第１４巻、第１６巻、第１９巻および第２８巻；およびＪ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．（１９６０）８２：５５６６に記載されている。
【００６６】
複素環の例としては、例えば、限定されないが、ピリジル、ジヒドロキシ（ｄｉｈｙｄｒｏｙ）ピリジル、テトラヒドロピリジル（ピペリジル）、チアゾリル、テトラヒドロチオフェニル、硫黄酸化されたテトラヒドロチオフェニル、ピリミジニル、フラニル、チエニル、ピロリル、ピラゾリル、イミダゾリル、テトラゾリル、ベンゾフラニル、チアナフタレニル、インドリル、インドレニル、キノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ピペリジニル、４−ピペリドニル、ピロリジニル、２−ピロリドニル、ピロリニル、テトラヒドロフラニル、ビス−テトラヒドロフラニル、テトラヒドロピラニル、ビス−テトラヒドロピラニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、デカヒドロキノリニル、オクタヒドロイソキノリニル、アゾシニル、トリアジニル、６Ｈ−１，２，５−チアジアジニル、２Ｈ，６Ｈ−１，５，２−ジチアジニル、チエニル、チアントレニル、ピラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、キサンテニル、フェノキサチニル、２Ｈ−ピロリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリジニル、イソインドリル、３Ｈ−インドリル、１Ｈ−インダゾリル、プリニル、４Ｈ−キノリジニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、４ａＨ−カルバゾリル、カルバゾリル、β−カルボリニル、フェナントリジニル、アクリジニル、ピリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フラザニル、フェノキサジニル、イソクロマニル、クロマニル、イミダゾリジニル、イミダゾリニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペラジニル、インドリニル、イソインドリニル、キヌクリジニル、モルホリニル、オキサゾリジニル、ベンゾトリアゾリル、ベンゾイソオキサゾリル、オキシインドリル、ベンゾキサゾリニルおよびイサチノイルが挙げられる。
【００６７】
一例として、限定されないが、炭素に結合する複素環は、ピリジンの２、３、４、５または６位で、ピリダジンの３、４、５または６位で、ピリミジンの２、４、５または６位で、ピラジンの２、３、５または６位で、フラン、テトラヒドロフラン、チオフラン、チオフェン、ピロールまたはテトラヒドロピロールの２、３、４または５位で、オキサゾール、イミダゾールまたはチアゾールの２、４または５位で、イソオキサゾール、ピラゾールまたはイソチアゾールの３、４または５位で、アジリジンの２または３位で、アゼチジンの２、３または４位で、キノリンの２、３、４、５、６、７または８位で、またはイソキノリンの１、３、４、５、６、７または８位で結合する。さらに典型的には、炭素に結合する複素環としては、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、５−ピリジル、６−ピリジル、３−ピリダジニル、４−ピリダジニル、５−ピリダジニル、６−ピリダジニル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、６−ピリミジニル、２−ピラジニル、３−ピラジニル、５−ピラジニル、６−ピラジニル、２−チアゾリル、４−チアゾリルまたは５−チアゾリルが挙げられる。
【００６８】
一例として、限定されないが、窒素に結合する複素環は、アジリジン、アゼチジン、ピロール、ピロリジン、２−ピロリン、３−ピロリン、イミダゾール、イミダゾリジン、２−イミダゾリン、３−イミダゾリン、ピラゾール、ピラゾリン、２−ピラゾリン、３−ピラゾリン、ピペリジン、ピペラジン、インドール、インドリン、１Ｈ−インダゾールの１位で、イソインドールまたはイソインドリンの２位で、モルホリンの４位で、カルバゾールまたはβ−カルボリンの９位で結合する。さらに典型的には、窒素に結合する複素環としては、１−アジリジル、１−アゼテジル、１−ピロリル、１−イミダゾリル、１−ピラゾリルおよび１−ピペリジニルが挙げられる。
【００６９】
「Ｃ３〜Ｃ８複素環」は、環炭素原子のうち１〜４個が独立して、Ｏ、ＳおよびＮからなる群から選択されるヘテロ原子と交換された芳香族または非芳香族のＣ３〜Ｃ８炭素環を指す。Ｃ３〜Ｃ８複素環の代表例としては、限定されないが、ベンゾフラニル、ベンゾチオフェン、インドリル、ベンゾピラゾリル、クマリニル、イソキノリニル、ピロリル、チオフェニル、フラニル、チアゾリル、イミダゾリル、ピラゾリル、トリアゾリル、キノリニル、ピリミジニル、ピリジニル、ピリドニル、ピラジニル、ピリダジニル、イソチアゾリル、イソオキサゾリルおよびテトラゾリルが挙げられる。Ｃ３〜Ｃ８複素環は、置換されていなくてよく、または７個までの基で置換されていてよい。該基としては、限定されないが、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮが挙げられる。ここで、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびアリールから選択される。「Ｃ３〜Ｃ８複素環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｏ）」は、上に定義されるような複素環の水素原子の１つが単結合と交換されたＣ３〜Ｃ８複素環基を指す。Ｃ３〜Ｃ８複素環（ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｏ）は、置換されていなくてよく、または６個までの基で置換されていてよい。該基としては、限定されないが、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮが挙げられる。ここで、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびアリールから選択される。
【００７０】
「炭素環」は、単環の場合には３〜７個の炭素原子、二環の場合には７〜１２個の炭素原子を有する飽和または不飽和の環を意味する。単環炭素環は３〜６個の環原子を有し、さらに典型的には５個または６個の環原子を有する。二環炭素環は、例えば、ビシクロ［４，５］系、［５，５］系、［５，６］系または［６，６］系として配置される７〜１２個の環原子を有するか、またはビシクロ［５，６］系または［６，６］系として配置される９個または１０個の環原子を有する。単環炭素環の例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、１−シクロペンタ−１−エニル、１−シクロペンタ−２−エニル、１−シクロペンタ−３−エニル、シクロヘキシル、１−シクロヘキサ−１−エニル、１−シクロヘキサ−２−エニル、１−シクロヘキサ−３−エニル、シクロヘプチルおよびシクロオクチルが挙げられる。「Ｃ３〜Ｃ８炭素環」は、３−、４−、５−、６−、７−または８−員の飽和または不飽和の非芳香族炭素環である。代表的なＣ３〜Ｃ８炭素環としては、限定されないが、−シクロプロピル、−シクロブチル、−シクロペンチル、−シクロペンタジエニル、−シクロヘキシル、−シクロヘキセニル、−１，３−シクロヘキサジエニル、−１，４−シクロヘキサジエニル、−シクロヘプチル、−１，３−シクロヘプタジエニル、−１，３，５−シクロヘプタトリエニル、−シクロオクチルおよび−シクロオクタジエニルが挙げられる。Ｃ３〜Ｃ８炭素環基は置換されていなくてよく、または１つ以上の基で置換されていてよい。該基としては、限定されないが、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮが挙げられる。ここで、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびアリールから選択される。「Ｃ３〜Ｃ８炭素環（ｃａｒｂｏｃｙｃｌｏ）」は、炭素環基の水素原子の１つが単結合と交換されたＣ３〜Ｃ８炭素環基を指す。
【００７１】
「アリーレン」は、２個の共有結合を有し、以下の構造に示されるようにオルト配置、メタ配置またはパラ配置が可能なアリール基である。
【００７２】
【化７１】
2009500424.tif 000003
ここで、フェニル基は、置換されていなくてよく、または４個までの基で置換されていてよい。該基としては、限定されないが、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、アリール、−Ｃ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ’、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＲ’、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ’、−Ｓ（Ｏ）Ｒ’、−ＯＨ、−ハロゲン、−Ｎ３、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｒ’）、−Ｎ（Ｒ’）２および−ＣＮが挙げられる。ここで、各Ｒ’は独立して、Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびアリールから選択される。
【００７３】
用語「キラル」は鏡像体の重ね合わせられない性質を有する分子を指し、用語「アキラル」は、鏡像体と重ね合わせることができる分子を指す。
【００７４】
用語「立体異性体」は、化学構造は同じであるが、原子または基の空間配置が異なる化合物を指す。
【００７５】
「ジアステレオマー」は、２つ以上のキラル中心を有し、分子が互いに鏡像体ではない立体異性体を指す。ジアステレオマーは、異なる物理的性質（例えば、融点、沸点、スペクトル特性および反応性）を有する。ジアステレオマーの混合物は、高分解能の分析手順（例えば、電気泳動およびクロマトグラフィー）で分離してよい。
【００７６】
本明細書で使用する立体化学的定義および用法は、一般的にＳ．Ｐ．Ｐａｒｋｅｒ，Ｅｄ．，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｔｅｒｍｓ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ  Ｂｏｏｋ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９８４）；およびＥｌｉｅｌおよびＷｉｌｅｎ，Ｓｔｅｒｅｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９４）にしたがう。多くの有機化合物は光学的に活性な形態で存在する。すなわち、多くの有機化合物は、平面偏光の面を回転させる能力を有する。光学的に活性な化合物の記載では、接頭文字ＤおよびＬまたはＲおよびＳは、キラル中心に関する分子の絶対構造を示すために使用される。接頭文字ｄおよびｌまたは（＋）および（−）は、化合物の平面偏光の回転方向を示すために使用され、（−）またはｌは、この化合物が左旋性であることを意味する。（＋）またはｄで特定される化合物は右旋性である。所与の化学構造で、これらの立体異性体は、互いに鏡像体であるという以外は同じである。特定の立体異性体はエナンチオマーとも呼ばれ、この異性体の混合物はエナンチオマー混合物と呼ばれることが多い。エナンチオマーの５０：５０混合物はラセミ混合物またはラセミ化合物と呼ばれ、化学反応または化学プロセスではなんら立体選択性または立体特異性を有さないことがある。用語「ラセミ混合物」および「ラセミ化合物」は、光学活性が失われた等モル量の２つのエナンチオマー種の混合物を指す。
【００７７】
「ヒドロキシル保護基」の例としては、限定されないが、メトキシメチルエーテル、２−メトキシエトキシメチルエーテル、テトラヒドロピラニルエーテル、ベンジルエーテル、ｐ−メトキシベンジルエーテル、トリメチルシリルエーテル、トリエチルシリルエーテル、トリイソプロピルシリルエーテル、ｔ−ブチルジメチルシリルエーテル、トリフェニルメチルシリルエーテル、酢酸エステル、置換された酢酸エステル、ピバロエート、ベンゾエート、メタンスルホネートおよびｐ−トルエンスルホネートが挙げられる。
【００７８】
「脱離基」は、別の官能基で置換可能な官能基を指す。このような脱離基は当該技術分野で周知であり、例としては、限定されないが、ハロゲン化物（例えば、クロリド、ブロミド、ヨージド）、メタンスルホニル（メシル）、ｐ−トルエンスルホニル（トシル）、トリフルオロメチルスルホニル（トリフラート）およびトリフルオロメチルスルホネートが挙げられる。
【００７９】
「患者」の例としては、限定されないが、ヒト、ラット、マウス、モルモット、サル、ブタ、ヤギ、ウシ、ウマ、イヌ、ネコ、トリおよび家禽が挙げられる。例示的な実施形態では、患者はヒトである。
【００８０】
句「薬学的に受容可能な塩」は、本明細書で使用される場合、化合物（例えば、薬物、薬物−リンカー化合物または薬物−リンカー−リガンド化合物）の薬学的に受容可能な有機または無機の塩を指す。この化合物は典型的には少なくとも１つのアミノ基を含有し、従って、アミノ基との酸付加塩を合成することができる。例示的な塩としては、限定されないが、硫酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、シュウ酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、硝酸塩、硫化水素酸塩、リン酸塩、過リン酸塩、イソニコチン酸塩、乳酸塩、サリチル酸塩、酸性クエン酸塩、酒石酸塩、オレイン酸塩、タンニン酸塩、パントテン酸塩、酒石酸水素塩、アスコルビン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ゲンチシン酸塩、フマル酸塩、グルコン酸塩、グルクロン酸塩、サッカラート、ギ酸塩、安息香酸塩、グルタミン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびパモ酸塩（すなわち、１，１’−メチレン−ビス−（２−ヒドロキシ−３−ナフトエート））が挙げられる。薬学的に受容可能な塩は、別の分子（例えば、酢酸イオン、コハク酸イオンまたは他の対イオン）の包接物を含んでよい。対イオンは、親化合物の電荷を安定化する任意の有機部分または無機部分であってよい。さらに、薬学的に受容可能な塩は、構造中に２個以上の電荷を有する原子を有してよい。電荷を有する複数の原子が薬学的に受容可能な塩の一部分をなしている場合、複数の対イオンを有することができる。したがって、薬学的に受容可能な塩は、電荷を有する１つ以上の原子および／または１つ以上の対イオンを有することができる。
【００８１】
「薬学的に受容可能な溶媒和物」または「溶媒和物」は、１つ以上の溶媒分子と本発明の化合物とが会合したもの（例えば、例示的な化合物または例示的な複合体）を指す。薬学的に受容可能な溶媒和物を形成する溶媒の例としては、限定されないが、水、イソプロパノール、エタノール、メタノール、ＤＭＳＯ、酢酸エチル、酢酸およびエタノールアミンが挙げられる。
【００８２】
以下の省略語を本明細書で使用し、以下に示される定義を有する：ＡＥはオーリスタチンＥであり、ＢｏｃはＮ−（ｔ−ブトキシカルボニル）であり、ｃｉｔはシトルリンであり、ｄａｐはドラプロリンであり、ＤＣＣは１，３−ジシクロヘキシルカルボジイミドであり、ＤＣＭはジクロロメタンであり、ＤＥＡはジエチルアミンであり、ＤＥＡＤはジエチルアゾジカルボキシレートであり、ＤＥＰＣはジエチルホスホリルシアニデートであり、ＤＩＡＤはジイソプロピルアゾジカルボキシレートであり、ＤＩＥＡはＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンであり、ｄｉｌはドライソロイシンであり、ＤＭＡＰは４−ジメチルアミノピリジンであり、ＤＭＥはエチレングリコールジメチルエーテル（または１，２−ジメトキシエタン）であり、ＤＭＦはＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドであり、ＤＭＳＯはジメチルスルホキシドであり、ｄｏｅはドラフェニン（ｄｏｌａｐｈｅｎｉｎｅ）であり、ｄｏｖはＮ，Ｎ−ジメチルバリンであり、ＤＴΝＢは５，５’−ジチオビス（２−ニトロ安息香酸）であり、ＤＴＰＡはジエチレントリアミン五酢酸であり、ＤＴＴはジチオスレイトールであり、ＥＤＣＩは１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩であり、ＥＥＤＱは２−エトキシ−１−エトキシカルボニル−１，２−ジヒドロキノリンであり、ＥＳ−ＭＳはエレクトロスプレー質量分析であり、ＥｔＯＡｃは酢酸エチルであり、ＦｍｏｃはＮ−（９−フルオレニルメトキシカルボニル）であり、ｇｌｙはグリシンであり、ＨＡＴＵはＯ−（７−アザベンゾトリアゾール−１−イル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェートであり、ＨＯＢｔは１−ヒドロキシベンゾトリアゾールであり、ＨＰＬＣは高速液体クロマトグラフィーであり、ｉｌｅはイソロイシンであり、ｌｙｓはリジンであり、ＭｅＣＮ（ＣＨ３ＣＮ）はアセトニトリルであり、ＭｅＯＨはメタノールであり、Ｍｔｒは４−アニシルジフェニルメチル（または４−メトキシトリチル）であり、ｎｏｒは（１Ｓ，２Ｒ）−（＋）−ノルエフェドリンであり、ＰＡＢはｐ−アミノベンジルであり、ＰＢＳはリン酸緩衝化食塩水（ｐＨ７．４）であり、ＰＥＧはポリエチレングリコールであり、Ｐｈはフェニルであり、Ｐｎｐはｐ−ニトロフェニルであり、ＭＣは６−マレイミドカプロイルであり、ｐｈｅはＬ−フェニルアラニンであり、ＰｙＢｒｏｐはブロモトリス−ピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェートであり、ＳＥＣはサイズ排除クロマトグラフィーであり、Ｓｕはスクシンイミドであり、ＴＢＴＵはＯ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレートであり、ＴＦＡはトリフルオロ酢酸であり、ＴＬＣは薄層クロマトグラフィーであり、ＵＶは紫外線であり、ｖａｌはバリンである。
【００８３】
以下のリンカーの省略語を本明細書で使用し、以下に示される定義を有する：Ｖａｌ  Ｃｉｔまたはｖｃはバリン−シトルリンであり、プロテアーゼ開裂可能なリンカーのジペプチド部位であり；ＰＡＢはｐ−アミノベンジルカルバモイルであり；（Ｍｅ）ｖｃはＮ−メチル−バリンシトルリンであり、ここで、リンカーペプチド結合がカテプシンＢによる開裂を防ぐように修飾されており；ＭＣ（ＰＥＧ）６−ＯＨはマレイミドカプロイル−ポリエチレングリコールであり；ＳＰＰはＮ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルチオ）ペンタノエートであり；ＳＭＣＣはＮ−スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１カルボキシレートである。
【００８４】
用語「処置する」または「処置」は、本文で他に示されていない限り、治療的処置および予防的（ｐｒｏｐｈｙｌａｃｔｉｃ）または予防的（ｐｒｅｖｅｎｔａｔｉｖｅ）な測定を指し、目的は、望ましくない生理学的変化または障害（例えば癌の進行または広がり）を予防またはゆっくりにする（遅らせる）ことである。本発明の目的のために、有益または望ましい臨床的結果としては、限定されないが、検出可能であるか検出不可能であるかにかかわらず、症状の軽減、疾患の程度の減少、疾患状態の安定化（すなわち、悪化しない）、疾患の進行が遅れるかまたはゆっくりになること、疾患状態の改善または緩和、および鎮静（部分的または全体的に）が挙げられる。「処置」は、処置をしない場合に予想される生存期間よりも延命することも意味することもできる。処置の必要なものとしては、この状態または障害を既に有しているもの、およびこの状態または障害になるおそれがあるもの、この状態または障害を予防すべきであるものが挙げられる。
【００８５】
癌に関して、用語「処置する」は、以下のいずれかまたは全てを包含する：腫瘍細胞、癌細胞、または腫瘍の成長を予防すること；腫瘍細胞または癌細胞の複製を予防すること、最終的な腫瘍による負担を減らすこと、または癌性細胞の数を減らすこと、およびこの疾患に関連する１つ以上の症状を軽減すること。
【００８６】
自己免疫疾患に関して、用語「処置する」は、以下のいずれかまたは全てを包含する：自己免疫疾患状態に関連する細胞（例えば、限定されないが、自己免疫性抗体を産生する細胞）の複製を予防すること、自己免疫性抗体による負担を減らすこと、および自己免疫疾患の１つ以上の症状を軽減すること。
【００８７】
感染症に関して、用語「処置する」は、以下のいずれかまたは全てを包含する：感染症を引き起こす病原体の増殖、増加または複製を予防すること、および感染症の１つ以上の症状を軽減すること。
【００８８】
以下の細胞毒性薬物の省略語を本明細書で使用し、以下に示される定義を有する「ＭＭＡＦ」はＮ−メチルバリン−バリン−ドライソロイシン−ドラプロリン−フェニルアラニン（ＭＷ７３１．５）であり；「ＭＭＡＺ」は、Ｃ末端にフェニルアラニンアナログを有するＮ−メチルバリン−バリン−ドライソロイシン−ドラプロリンである。Ｚは−ＮＲ９Ｚ１である。
【００８９】
本発明の実施形態
化合物および複合体
「本発明の概要」で示したように、本発明は、薬物化合物（Ｄ）を含有する一連の化合物および複合体に関する。この薬物化合物は、単独の要素として有用であり、または直接またはリンカー単位（ＬＵ）を介してリガンド（Ｌ、いくつかの実施形態では抗体）と複合体を形成することができる。リンカー単位を操作して、適切にＤを放出するか、またはＤとＬとの間に空間をあけることができる。さらに、いくつかのリンカー単位は、複数の結合した薬物を有することができる（例えば、１〜４個の結合した薬物は−ＬＵ−（Ｄ）１〜４と表すことができる）。
【００９０】
１つの実施形態のグループでは、本発明は、式Ｉ：
Ｌ−（Ｄ）ｐ      （Ｉ）
（式中、Ｌ−はリガンド単位であり；ｐは１〜約２０の整数であり；Ｄは式Ｄを有する薬物部分であり：
【００９１】
【化７２】
2009500424.tif 000004
（式中、Ｒ２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択され；Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され；Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され；Ｒ５は、Ｈおよびメチルからなる群から選択されるか；またはＲ４およびＲ５が結合して炭素環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ３〜Ｃ８炭素環からなる群から選択され、ｎは２、３、４、５および６からなる群から選択され；Ｒ６は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択され；Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され；各Ｒ８は独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環およびＯ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）からなる群から選択され；各Ｘ１は独立してＣ１〜Ｃ１０アルキレンであり；部分−ＮＲ９Ｚ１は、修飾したアミノ酸側鎖を有するフェニルアラニンバイオ等価体である。））
を有する化合物またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を提供する。
【００９２】
一実施形態では、フェニルアラニンバイオ等価体部分
【００９３】
【化７３】
2009500424.tif 000005
は、
【００９４】
【化７４−１】
2009500424.tif 000006
からなる群から選択され、
【００９５】
【化７４−２】
2009500424.tif 000007
は単結合または二重結合をあらわし；
Ｒ９は、Ｈおよびアミノ保護基からなる群から選択され；
Ｒ１０は、Ｈおよび−（ＣＲ１３Ｒ１４）ＸＲ１５からなる群から選択され；
各Ｒ１１は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、ハロゲン、アリール、アリールＣ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０ハロアルキル、ＯＲ１６およびＮ（Ｒ１６）２からなる群から選択され；
Ｒ１２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、ハロゲン、アリール、アリールＣ１〜Ｃ２０アルキル、アリールＣ２〜Ｃ２０アルケニル、アリールＣ２〜Ｃ２０アルキニル、ＯＲ１６、Ｎ（Ｒ１６）２および−Ｃ（Ｏ）Ｒ１６からなる群から選択され；
各Ｒ１３およびＲ１４は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、ハロゲン、アリールアルキル、Ｃ１〜Ｃ１０ハロアルキル、ＯＲ１６、ＳＲ１６、Ｎ（Ｒ１６）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１６、−Ｎ（Ｒ１６）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、−ＣＯＯＲ１６、−ＣＯＮ（Ｒ１６）２、Ｘ１−ＳＯ３Ｈ、Ｘ１−ＳＯ３−Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｘ１−ＯＳＯ３Ｈ、−Ｘ１−ＯＳＯ３−Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｘ１−ＳＯ２−Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｘ１−ＳＯ−Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１６）２、−ＯＰ（Ｏ）（ＮＲ１６）２、−ＯＰ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６）２ＯＲ１６、−ＯＰ（Ｏ）（Ｒ１６）ＯＲ１６、−ＯＰ（Ｏ）（Ｒ１６）Ｎ（Ｒ１６）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１６）２、−Ｐ（Ｏ）（ＮＲ１６）２、−Ｐ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６）２ＯＲ１６、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｘ１−Ｃ３〜Ｃ８炭素環、Ｃ３〜Ｃ２０複素環およびＸ１−Ｃ３〜Ｃ８複素環からなる群から選択されるか；
またはＲ１３とＲ１４とで＝Ｏ、＝Ｎ−ＮＨ−Ｒ１７、＝Ｎ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１７およびＣ３〜Ｃ８炭素環からなる群から選択される基を形成し；
各Ｒ１５は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル−Ｃ３〜Ｃ８炭素環、Ｃ３〜Ｃ２０複素環、Ｘ１−Ｃ３〜Ｃ８複素環、−ＣＯＯＲ１６、−ＣＯＮ（Ｒ１６）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１６およびＹ１（ＣＲ１３Ｒ１４）ｘＲ１８からなる群から選択され；ここで、炭素環、アリールおよび複素環部分は１〜３個のＲ１２基で場合により置換されており；
各Ｒ１６は独立してＨまたはＣ１〜Ｃ２０アルキルであり；
Ｒ１７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル−Ｃ３〜Ｃ８炭素環、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−Ｃ３〜Ｃ８複素環からなる群から選択され；
各Ｒ１８は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｘ１−Ｃ３〜Ｃ８炭素環、Ｃ３〜Ｃ２０複素環、Ｘ１−Ｃ３〜Ｃ８複素環、−ＣＯＯＲ１６、−ＣＯＮ（Ｒ１６）２および−Ｃ（Ｏ）Ｒ１６からなる群から選択され；
Ｙ１は、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１６、ＳＯ、ＳＯ２またはＳｅであり；
各Ｘ１は独立してＣ１〜Ｃ１０アルキレンであり；
下付き文字ｘは０〜１０の整数であり；
下付き文字ｎ、ｏ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔおよびｕは独立して０〜２の整数であり；
Ｚ２はＣＯＺ３Ｒ１９であり；
Ｚ３は、Ｏ、Ｓ、ＮＨまたはＮＲ２０であり、Ｒ２０はＣ１〜Ｃ８アルキルであり；
Ｒ１９は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３〜Ｃ８複素環、−（Ｘ１Ｏ）Ｖ−Ｒ２２または−（Ｘ１Ｏ）Ｖ−ＣＨ（Ｒ２３）２から選択され；
ｖは１〜１０００の整数であり；
Ｒ２２はＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり；
各Ｒ２３は独立して、Ｈ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｌ−Ｎ（Ｒ２４）２、−（ＣＨ２）ｌ−ＳＯ３Ｈまたは−（ＣＨ２）ｌ−ＳＯ３−Ｃ１〜Ｃ８アルキルであり；
各Ｒ２４は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたは−（ＣＨ２）ｌＣＯＯＨであり；ここで、ｌは０〜６の整数であり；ただし、ｎおよびｏが０であり、Ｒ１１がＨである場合、Ｒ１０はＣＨ２−アリールまたはＣＨ２−Ｃ３〜Ｃ８複素環以外である。
【００９６】
一実施形態では、Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、Ｘ１−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８−炭素環）およびＸ１−Ｃ３〜Ｃ８−複素環からなる群から選択される。別の実施形態では、Ｒ９はＨである。
【００９７】
一実施形態では、フェニルアラニンバイオ等価体部分は
【００９８】
【化７５】
2009500424.tif 000008
であり、式中、Ｒ９はＨであり；Ｒ１０はベンジルであり；Ｒ１１はＨであり；Ｚ２はＣＯ２Ｈであり；下付き文字ｎは０〜２の整数であり；下付き文字ｏは０〜１の整数であり、ただし、ｎ＋ｏは少なくとも１である。
【００９９】
一実施形態では、フェニルアラニンバイオ等価体部分は
【０１００】
【化７６】
2009500424.tif 000009
からなる群から選択される。
【０１０１】
一実施形態では、フェニルアラニンバイオ等価体部分は
【０１０２】
【化７７】
2009500424.tif 000010
であり、式中、Ｒ９はＨおよびアミノ保護基であり；Ｒ１０はＨおよび−（ＣＲ１３Ｒ１４）ＸＲ１５であり；各Ｒ１１は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、ハロゲン、アリール、アリールＣ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ１〜Ｃ１０ハロアルキル、ＯＲ１６およびＮ（Ｒ１６）２であり；Ｒ１２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、ハロゲン、アリール、アリールＣ１〜Ｃ２０アルキル、アリールＣ２〜Ｃ２０アルケニル、アリールＣ２〜Ｃ２０アルキニル、ＯＲ１６、Ｎ（Ｒ１６）２および−Ｃ（Ｏ）Ｒ１６であり；各Ｒ１３およびＲ１４は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、ハロゲン、アリールアルキル、Ｃ１〜Ｃ１０ハロアルキル、ＯＲ１６、ＳＲ１６、Ｎ（Ｒ１６）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１６、−Ｎ（Ｒ１６）Ｃ（Ｏ）Ｒ１６、−ＣＯＯＲ１６、−ＣＯＮ（Ｒ１６）２、Ｘ１−ＳＯ３Ｈ、Ｘ１−ＳＯ３−Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｘ１−ＯＳＯ３Ｈ、−Ｘ１−ＯＳＯ３−Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｘ１−ＳＯ２−Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｘ１−ＳＯ−Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１６）２、−ＯＰ（Ｏ）（ＮＲ１６）２、−ＯＰ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６）２ＯＲ１６、−ＯＰ（Ｏ）（Ｒ１６）ＯＲ１６、−ＯＰ（Ｏ）（Ｒ１６）Ｎ（Ｒ１６）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１６）２、−Ｐ（Ｏ）（ＮＲ１６）２、−Ｐ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１６）２ＯＲ１６、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、−Ｘ１−アルキル−アリール、−Ｘ１−Ｃ３〜Ｃ８炭素環、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−Ｃ３〜Ｃ８複素環であるか；またはＲ１３とＲ１４とで＝Ｏ、＝Ｎ−ＮＨ−Ｒ１７、＝Ｎ−ＮＨ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１７およびＣ３〜Ｃ８炭素環からなる群から選択される基を形成し；各Ｒ１５は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル−Ｃ３〜Ｃ８炭素環、Ｃ３〜Ｃ８複素環、−Ｘ１−Ｃ３〜Ｃ８複素環、−ＣＯＯＲ１６、−ＣＯＮ（Ｒ１６）２、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１６およびＹ１（ＣＲ１３Ｒ１４）ｘＲ１８であり；ここで、炭素環、アリールおよび複素環部分は１〜３個のＲ１２基で場合により置換されており；各Ｒ１６は独立してＨまたはＣ１〜Ｃ２０アルキルであり；Ｒ１７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル−Ｃ３〜Ｃ８炭素環、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−Ｃ３〜Ｃ８複素環であり；各Ｒ１８は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｘ１−Ｃ３〜Ｃ８炭素環、Ｃ３〜Ｃ８複素環、Ｘ１−Ｃ３〜Ｃ複素環、−ＣＯＯＲ１６、−ＣＯＮ（Ｒ１６）２および−Ｃ（Ｏ）Ｒ１６であり；Ｙ１は、Ｏ、Ｓ、ＮＲ１６、ＳＯ、ＳＯ２またはＳｅであり；各Ｘ１は独立してＣ１〜Ｃ１０アルキレンであり；下付き文字ｘは０〜１０の整数であり；下付き文字ｎ、ｏ、ｑ、ｒ、ｓ、ｔおよびｕは独立して０〜２の整数であり；ただし、ｎ＋ｏは少なくとも１であり；Ｚ２はＣＯＺ３Ｒ１９であり；Ｚ３は、Ｏ、Ｓ、ＮＨまたはＮＲ２０であり、Ｒ２０はＣ１〜Ｃ８アルキルであり；Ｒ１９は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ２０アルキル、アリール、Ｃ３〜Ｃ８複素環、−（Ｘ１Ｏ）Ｖ−Ｒ２２または−（Ｘ１Ｏ）Ｖ−ＣＨ（Ｒ２３）２から選択され；ｖは１〜１０００の整数であり；Ｒ２２はＨまたはＣ１〜Ｃ８アルキルであり；各Ｒ２３は独立して、Ｈ、ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）ｌ−Ｎ（Ｒ２４）２、−（ＣＨ２）ｌ−ＳＯ３Ｈまたは−（ＣＨ２）ｌ−ＳＯ３−Ｃ１〜Ｃ８アルキルであり；各Ｒ２４は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルまたは−（ＣＨ２）ｌＣＯＯＨであり；ここで、ｌは０〜６の整数であり；ただし、ｎおよびｏが０であり、Ｒ１１がＨである場合、Ｒ１０はＣＨ２−アリールまたはＣＨ２−Ｃ３〜Ｃ８複素環以外である。
【０１０３】
一実施形態では、フェニルアラニンバイオ等価体部分は
【０１０４】
【化７８】
2009500424.tif 000011
であり、
式中、Ｒ１２およびＲ１４は上述のとおりであり；Ｚ２はＣＯ２Ｈであり；下付き文字ｘは０〜２の整数である。
【０１０５】
一実施形態では、フェニルアラニンバイオ等価体部分は
【０１０６】
【化７９】
2009500424.tif 000012
であり、
Ｒ１０はＣＨ２−Ｃ３〜Ｃ８複素環またはＣＨ２−アリールであり；Ｒ１１はＨであり；Ｚ２は上述のとおりである。いくつかの実施形態では、Ｒ１０は
【０１０７】
【化８０】
2009500424.tif 000013
からなる群から選択され、Ｒ１２は上述のとおりであり；各Ｘ２は独立して、Ｎ、ＮＲ１６、Ｓ、Ｏ、ＣＲ１６およびＣＨＲ１６からなる群から選択され；下付き文字ｚは０〜２の整数である。他の実施形態では、Ｒ１０は
【０１０８】
【化８１】
2009500424.tif 000014
からなる群から選択され、Ｒ１２は上述のとおりであり；各Ｘ２は独立して、Ｎ、ＮＲ１６、Ｓ、Ｏ、ＣＲ１６およびＣＨＲ１６からなる群から選択され；下付き文字ｚは０〜２の整数であり；２個以下の隣接するＸ２基はＣＲ１６またはＣＨＲ１６以外である。さらに他の実施形態では、Ｒ１０は
【０１０９】
【化８２】
2009500424.tif 000015
からなる群から選択され、Ｒ１２は、Ｈ、アルキル、ハロゲン、アミノ、カルボキシ、アミド、カルボエトキシ、ホルミル、フェニル、Ｅ−２−フェニルエテニル、Ｚ−２−フェニルエテニルおよび２−フェニルエチニルからなる群から選択される。
【０１１０】
１つの実施形態のグループでは、フェニルアラニンバイオ等価体部分は、
【０１１１】
【化８３】
2009500424.tif 000016
からなる群から選択される。
【０１１２】
一実施形態では、フェニルアラニンバイオ等価体部分は、
【０１１３】
【化８４】
2009500424.tif 000017
【０１１４】
【化８５】
2009500424.tif 000018
からなる群から選択される。
【０１１５】
一実施形態では、フェニルアラニンバイオ等価体部分は、
【０１１６】
【化８６】
2009500424.tif 000019
【０１１７】
【化８７】
2009500424.tif 000020
【０１１８】
【化８８】
2009500424.tif 000021
【０１１９】
【化８９】
2009500424.tif 000022
【０１２０】
【化９０】
2009500424.tif 000023
【０１２１】
【化９１】
2009500424.tif 000024
【０１２２】
【化９２】
2009500424.tif 000025
【０１２３】
【化９３】
2009500424.tif 000026
【０１２４】
【化９４】
2009500424.tif 000027
【０１２５】
【化９５】
2009500424.tif 000028
【０１２６】
【化９６】
2009500424.tif 000029
【０１２７】
【化９７】
2009500424.tif 000030
【０１２８】
【化９８】
2009500424.tif 000031
【０１２９】
【化９９】
2009500424.tif 000032
【０１３０】
【化１００】
2009500424.tif 000033
【０１３１】
【化１０１】
2009500424.tif 000034
【０１３２】
【化１０２】
2009500424.tif 000035
【０１３３】
【化１０３】
2009500424.tif 000036
【０１３４】
【化１０４】
2009500424.tif 000037
【０１３５】
【化１０５】
2009500424.tif 000038
【０１３６】
【化１０６】
2009500424.tif 000039
【０１３７】
【化１０７】
2009500424.tif 000040
【０１３８】
【化１０８】
2009500424.tif 000041
【０１３９】
【化１０９】
2009500424.tif 000042
【０１４０】
【化１１０】
2009500424.tif 000043
【０１４１】
【化１１１】
2009500424.tif 000044
からなる群から選択されるα−アミノ酸アミドである。
【０１４２】
一実施形態では、フェニルアラニンバイオ等価体部分は、４−クロロ−フェニルアラニン、４−フルオロ−フェニルアラニン、４−ニトロ−フェニルアラニン、Ｎ−α−メチル−フェニルアラニン、α−メチル−フェニルアラニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、トリプトファン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、チロシン、グルタミン、スレオニン、バリン、アスパラギン、フェニルグリシン、Ｏ−ベンジル−セリン、Ｏ−ｔ−ブチル−セリン、Ｏ−ｔ−ブチル−スレオニン、ホモフェニルアラニン、メチオニン−ＤＬ−スルホキシド、メチオニン−スルホン、α−アミノ酪酸、α−アミノイソ酪酸、４−アミノ−１−ピペリジン−４−カルボン酸、４−アミノ−テトラヒドロピラン−４−カルボン酸、アスパラギン酸、ベンゾチアゾール−２−イル−アラニン、α−ｔ−ブチル−グリシン、シクロヘキシルアラニン、ノルロイシン、ノルバリン、Ｓ−アセトアミドメチル−ペニシラミン、β−３−ピペリジン−３−イル−アラニン、ピペリジニル−グリシン、ピロリジニル−アラニン、セレノシステイン、テトラヒドロピラン−４−イル−グリシン、Ｏ−ベンジル−スレオニン、Ｏ−ｔ−ブチル−チロシン、３−（ｐ−アセチルフェニル）アラニン、３−フェニルセリンおよび１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−３−カルボン酸からなる群から選択されるアミノ酸のα−アミノアミドである。
【０１４３】
一実施形態では、フェニルアラニンバイオ等価体部分は
【０１４４】
【化１１２】
2009500424.tif 000045
であり、Ｚ２はＣＯ２Ｈであり；Ｒ１０はベンジルであり；下付き文字ｑ、ｒおよびｓは独立して０〜１の整数である。
【０１４５】
一実施形態では、フェニルアラニンバイオ等価体部分は
【０１４６】
【化１１３】
2009500424.tif 000046
からなる群から選択される。
【０１４７】
一実施形態では、フェニルアラニンバイオ等価体部分は
【０１４８】
【化１１４】
2009500424.tif 000047
であり、Ｚ２はＣＯ２Ｈであり；Ｒ１０はベンジルであり；Ｒ１１はＨであり；下付き文字ｔおよびｕは独立して１〜３の整数である。
【０１４９】
一実施形態では、フェニルアラニンバイオ等価体部分は
【０１５０】
【化１１５】
2009500424.tif 000048
からなる群から選択される。
【０１５１】
一実施形態では、フェニルアラニンバイオ等価体部分は
【０１５２】
【化１１６】
2009500424.tif 000049
であり、Ｚ２はＣＯ２Ｈであり；Ｒ１２は上述のとおりであり；下付き文字ｑ、ｒおよびｓは独立して１〜３の整数である。
【０１５３】
一実施形態では、フェニルアラニンバイオ等価体部分は
【０１５４】
【化１１７】
2009500424.tif 000050
である。
【０１５５】
一実施形態では、フェニルアラニンバイオ等価体部分は
【０１５６】
【化１１８】
2009500424.tif 000051
であり、Ｚ２はＣＯ２Ｈであり；Ｒ１０はベンジルであり；Ｒ１２は上述のとおりである。
【０１５７】
一実施形態では、フェニルアラニンバイオ等価体部分は
【０１５８】
【化１１９】
2009500424.tif 000052
である。
【０１５９】
一実施形態では、フェニルアラニンバイオ等価体部分は
【０１６０】
【化１２０】
2009500424.tif 000053
であり、Ｚ２はＣＯ２Ｈであり；Ｒ１２は上述のとおりであり；下付き文字ｑ、ｒおよびｓは独立して１〜３の整数である。
【０１６１】
一実施形態では、フェニルアラニンバイオ等価体部分は
【０１６２】
【化１２１】
2009500424.tif 000054
である。
【０１６３】
関連する態様では、本発明は、化合物がリンカー単位（ＬＵ）も含み、下式：
Ｌ−（ＬＵ−（Ｄ）１〜４）ｐ
（式中、Ｌはリガンド単位であり；−ＬＵ−はリンカー単位であり；Ｄは本明細書に記載の薬物単位である。）を有する複合体またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を提供する。
【０１６４】
別の関連する態様では、本発明は、下式
ＬＵ−（Ｄ）１〜４
（式中、−ＬＵ−はリンカー単位であり；Ｄは式Ｄを有する上述の実施形態のいずれかの薬物部分である。）
【０１６５】
【化１２２】
2009500424.tif 000055
を有する複合体またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物を提供する。
【０１６６】
一実施形態では、式Ｉａ：
【０１６７】
【化１２３】
2009500424.tif 000056
（式中、Ｌ−はリガンド単位であり；−Ａａ−Ｗｗ−Ｙｙ−はリンカー単位（ＬＵ）であり、−Ａ−はストレッチャー単位であり、下付き文字ａは０または１であり、各−Ｗ−は独立してアミノ酸単位であり、ｗは０〜１２の整数であり、−Ｙ−はスペーサー単位であり、ｙは０、１または２であり；ｐは１〜約２０の整数であり；Ｄは式Ｄを有する薬物単位であり、
【０１６８】
【化１２４】
2009500424.tif 000057
式中、Ｒ２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択され；Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され；Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）から選択され；Ｒ５は、Ｈおよびメチルからなる群から選択されるか；またはＲ４およびＲ５が結合して炭素環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ３〜Ｃ８炭素環からなる群から選択され、ｎは２、３、４、５および６からなる群から選択され；Ｒ６は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択され；Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され；各Ｒ８は独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環およびＯ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）からなる群から選択され；各Ｘ１は独立してＣ１〜Ｃ１０アルキレンであり；部分−ＮＲ９Ｚ１は、上述の実施形態のいずれかのフェニルアラニンバイオ等価体である。）
を有する薬物−リンカー−リガンド複合体またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物が提供される。
【０１６９】
本発明の別の態様は、式Ｉｂを有する薬物化合物である。これらの薬物化合物は、波線が水素原子によって置換された上述の化合物である。特定的には、この化合物は以下
【０１７０】
【化１２５】
2009500424.tif 000058
（式中、Ｒ２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルから選択され；Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＣ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）から選択され；Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＣ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）から選択され；Ｒ５は、Ｈおよびメチルから選択されるか；またはＲ４およびＲ５が結合して炭素環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ３〜Ｃ８炭素環から選択され、ｎは２、３、４、５および６から選択され；Ｒ６は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルから選択され；Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＣ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）から選択され；各Ｒ８は独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環およびＯ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）からなる群から選択され；部分−ＮＲ９Ｚ１は、上述の実施形態のいずれかのフェニルアラニンバイオ等価体である。）のように表されるか、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物である。
【０１７１】
一実施形態では、Ｒ３、Ｒ４およびＲ７は独立して、イソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ５は−Ｈである。例示的な実施形態では、Ｒ３およびＲ４はそれぞれイソプロピルであり、Ｒ５は−Ｈであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルである。
【０１７２】
別の実施形態では、Ｒ２およびＲ６はそれぞれメチルであり、Ｒ９は−Ｈである。
【０１７３】
さらに別の実施形態では、それぞれの場合にＲ８は−ＯＣＨ３である。
【０１７４】
例示的な実施形態では、Ｒ３およびＲ４はそれぞれイソプロピルであり、Ｒ２およびＲ６はそれぞれメチルであり、Ｒ５は−Ｈであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルであり、それぞれの場合にＲ８は−ＯＣＨ３であり、Ｒ９は−Ｈである。
【０１７５】
ＡＤＣの薬物部分（Ｄ）として使用可能な式（Ｉｂ）の具体的な化合物としては、以下      
【０１７６】
【化１２６】
2009500424.tif 000059
の構造を有する化合物およびその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物が挙げられる。
【０１７７】
さらに別の態様では、リガンドが抗体である薬物−リンカー−リガンド複合体が提供される。この態様では、複合体は式Ｉａ’：
【０１７８】
【化１２７】
2009500424.tif 000060
（式中、Ａｂは抗体であり、Ａはストレッチャー単位であり、ａは０または１であり、各Ｗは独立してアミノ酸単位であり、ｗは０〜１２の整数であり、Ｙはスペーサー単位であり、ｙは、０、１または２であり、ｐは１〜約２０の整数であり、Ｄは式Ｄを有する薬物部分であり：
【０１７９】
【化１２８】
2009500424.tif 000061
（式中、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、各Ｒ８および−Ｎ（Ｒ９）Ｚ１は上述の意味を有する。））
で表されるか、またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物である。
【０１８０】
抗体Ａｂは、１つ以上の薬物単位に共有結合する任意の抗体であり得る。例えば、Ａｂは、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＢＣＭＡまたはＬｅｗｉｓ  Ｙ抗原に特異的に結合する抗体であり得る。
【０１８１】
一実施形態では、−Ｗｗ−は−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−である。
【０１８２】
別の実施形態では、Ｒ３、Ｒ４およびＲ７は独立してイソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ５は−Ｈである。例示的な実施形態では、Ｒ３およびＲ４はそれぞれイソプロピルであり、Ｒ５は−Ｈであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルである。さらに別の実施形態では、Ｒ２およびＲ６はそれぞれメチルであり、Ｒ９は−Ｈである。
【０１８３】
さらに別の実施形態では、それぞれの場合にＲ８は−ＯＣＨ３である。
【０１８４】
例示的な実施形態では、Ｒ３およびＲ４はそれぞれイソプロピルであり、Ｒ２およびＲ６はそれぞれメチルであり、Ｒ５は−Ｈであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルであり、それぞれの場合にＲ８は−ＯＣＨ３であり、Ｒ９は−Ｈである。
【０１８５】
１つの態様では、抗体Ａｂは、キメラＡＣ１０、キメラＢＲ９６、キメラＳ２Ｃ６、キメラ１Ｆ６、キメラ２Ｆ２、ヒト化ＡＣ１０、ヒト化ＢＲ９６、ヒト化Ｓ２Ｃ６、ヒト化１Ｆ６、Ｍ１９５、ヒト化Ｍ１９５またはヒト化２Ｆ２である。
【０１８６】
式Ｉａ’の例示的な実施形態は以下
【０１８７】
【化１２９】
2009500424.tif 000062
【０１８８】
【化１３０】
2009500424.tif 000063
の構造を有する。
【０１８９】
組み込まれた薬物の量は、（例えば式Ｉ、Ｉａ、Ｉａ’）のリガンド（例えば抗体）あたりの薬物分子の平均的な数ｐで表される。組み込まれた薬物の量は、リガンド（例えばＡｂまたはｍＡｂ）あたり１〜２０薬物単位（Ｄ）の範囲であってよい。薬物単位は、直接的または間接的に（例えばリンカー単位を介して）リガンド単位と複合体を形成してよい。式Ｉａおよび式Ｉａ’の組成物は、１〜２０個の薬物と複合体を形成した抗体の集合を含む。
【０１９０】
いくつかの実施形態では、ｐは、リガンド単位１個あたり薬物単位約１〜約８個である。いくつかの実施形態では、ｐは、リガンド単位１個あたり薬物単位約２〜約８個である。いくつかの実施形態では、ｐは、リガンド単位１個あたり薬物単位約２〜約６個であるか、または約２〜約４個である。いくつかの実施形態では、ｐは、リガンド単位１個あたり薬物単位約２個、約４個、約６個または約８個である。
【０１９１】
複合体反応の調製物中のリガンド単位あたりの薬物単位の平均的な数は、従来の手段（例えば、質量分析法、ＥＬＩＳＡアッセイおよびＨＰＬＣ）によって特性決定されてよい。ｐの観点でリガンド−薬物−複合体の定量分布を決定してよい。いくつかの場合では、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動などの手段によって特定のｐ値を有する均一なリガンド−薬物−複合体を他の組み込まれた薬物の量が異なるリガンド−薬物−複合体と分離し、精製し、特性決定してよい。
【０１９２】
１個以上の薬物単位（部分）に共有結合する抗体を含む複合体である式Ｉａ’に話を戻すと、Ａ、ａ、Ｗ、ｗ、Ｙおよびｙは上述のとおりである。抗体薬物複合体化合物には、その薬学的に受容可能な塩または溶媒和物も含まれる。
【０１９３】
組み込まれた薬物の量は、式Ｉの分子の抗体あたりの薬物分子の平均的な数ｐであらわされる。組み込まれた薬物の量は、薬物単位（Ｄ）は抗体（例えばＡｂまたはｍＡｂ）あたり１〜２０の範囲であってよい。薬物単位は、直接的または間接的に（例えばリンカー単位を介して）リガンド単位と複合体を形成してよい。式ＩｃのＡＤＳ組成物は、１〜２０個の薬物と複合体を形成した抗体の集合を含む。いくつかの実施形態では、ｐは、リガンド単位１個あたり薬物単位約１〜約８個である。いくつかの実施形態では、ｐは、リガンド単位１個あたり薬物単位約２〜約８個である。いくつかの実施形態では、ｐは、リガンド単位１個あたり薬物単位約２〜約６個であるか、または約２〜約４個である。いくつかの実施形態では、ｐは、リガンド単位１個あたり薬物単位約２個、約４個、約６個または約８個である。
【０１９４】
複合体反応からＡＤＣを調製する際の抗体単位あたりの薬物の平均的な数は、従来の手段（例えば、ＵＶ／可視光分光法、質量分析法、ＥＬＩＳＡアッセイおよびＨＰＬＣ）によって特性決定されてよい。ｐの観点でＡＤＣの定量分布を決定してよい。いくつかの場合では、逆相ＨＰＬＣまたは電気泳動などの手段によって特定のｐ値を有する均一なＡＤＣを他の組み込まれた薬物の量が異なるＡＤＣと分離し、精製し、特性決定してよい。
【０１９５】
いくつかの抗体薬物複合体について、ｐは抗体上にある結合部位の数に限定されてよい。例えば、この結合が上述の例示的な実施形態のようにシステインチオールである場合、抗体は、たった１個または数個のシステインチオール基を有してよく、またはリンカーを介して結合可能なたった１個または数個の十分に反応性のチオール基を有してよい。
【０１９６】
典型的には、理論的な最大数の薬物部分よりも少ない薬物部分が複合体反応中に抗体と複合体を形成する。抗体は、例えば、薬物−リンカー中間体またはリンカー試薬と反応しない多くのリジン残基を含有してよい。最も反応性の高いリジン基しかアミン反応性リンカー試薬と反応しないこともある。一般的に、抗体は、もしあったとしても薬物部分と結合可能な遊離および反応性のシステインチオール基をそれほど多くは含有しない。抗体中のほとんどのシステインチオール残基はジスルフィド架橋として存在し、還元剤（例えばジチオスレイトール（ＤＴＴ））を用いて還元しなければならない。さらに、抗体を変性条件で処理し、リジンまたはシステインなどの反応性求核基を露出させなければならない。ＡＤＣの組み込み量（薬物／抗体比）をいくつかの異なる様式で制御することができ、この様式としては、以下のものが挙げられる。（ｉ）抗体に対して過剰モル量の薬物−リンカー中間体またはリンカー試薬に限定すること、（ｉｉ）複合体反応時間または温度を限定すること、および（ｉｉｉ）システインチオール修飾の部分還元または還元条件を限定すること。
【０１９７】
２個以上の求核基が薬物−リンカー中間体またはリンカー試薬と反応し、次いで薬物部分の試薬と反応すると、得られた生成物は、１つ以上の薬物部分に抗体が結合し、結合数の分布を有するＡＤＣ化合物の混合物である。抗体あたりの薬物の平均数は、抗体に特異的で薬物に特異的な二重ＥＬＩＳＡ抗体アッセイから算出してもよい。混合物中で個々のＡＤＣ分子を質量分析計によって同定し、ＨＰＬＣ（例えば、疎水性相互作用クロマトグラフィー）で分離してよい（「Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｄｒｕｇ  ｌｏａｄｉｎｇ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ａｎ  ａｎｔｉ−ＣＤ３０  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ」，Ｈａｍｂｌｅｔｔ，ＫＪ．ら、Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．６２４，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ；Ｈａｍｂｌｅｔｔら、２００４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １０：７０６３；２００４  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ  ２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ  ４５，Ｍａｒｃｈ  ２００４；「Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｌｏｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｄｒｕｇ  Ａｔｔａｃｈｍｅｎｔ  ｉｎ  ａｎｔｉｂｏｄｙ−ｄｒｕｇ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅ」，Ａｌｌｅｙ，Ｓ．Ｃ．ら、Ａｂｓｔｒａｃｔ  Ｎｏ．６２７，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ；２００４  Ａｎｎｕａｌ  Ｍｅｅｔｉｎｇ，Ｍａｒｃｈ  ２７−３１，２００４，Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＡＡＣＲ，Ｖｏｌｕｍｅ  ４５，Ｍａｒｃｈ  ２００４）。従って、電気泳動またはクロマトグラフィーによって単一の組み込み値を有する均一なＡＤＣを複合体混合物から単離してよい。
【０１９８】
リンカー単位（ＬＵ）
「リンカー単位」（ＬＵ）は、薬物単位およびリガンド単位を結合して薬物−リンカー−リガンド複合体を合成するのに使用可能であるか、または腫瘍関連抗原を標的とする免疫複合体の合成に有用な二官能化合物である。このような免疫複合体は、毒性の薬物を腫瘍細胞に選択的に送達することができる。
【０１９９】
一実施形態では、薬物−リンカー化合物および薬物−リンカー−リガンド複合体のリンカー単位は下式
【０２００】
【化１３１】
2009500424.tif 000064
（式中、−Ａ−はストレッチャー単位であり、ａは０または１であり、各−Ｗ−は独立してアミノ酸単位であり、ｗは独立して０〜１２の整数であり、−Ｙ−はスペーサー単位であり、ｙは０、１または２である）を有する。
【０２０１】
薬物−リンカー−リガンド複合体では、リンカーは、薬物部分およびリガンド単位に接続する役割を有する。
【０２０２】
ストレッチャー単位
ストレッチャー単位（−Ａ−）は、存在する場合には、リガンド単位をアミノ酸単位（−Ｗ−）に接続することができる。この観点で、リガンド（Ｌ）は、ストレッチャーの官能基と結合可能な官能基を有する。リガンドに存在可能な有用な官能基は、天然のものまたは化学操作によるものがあり、限定されないが、スルフヒドリル（−ＳＨ）、アミノ、ヒドロキシル、カルボキシ、炭水化物のアノマーヒドロキシル基およびカルボキシルが挙げられる。１つの態様では、リガンドの官能基はスルフヒドリルおよびアミノである。スルフヒドリル基は、リガンドの分子内ジスルフィド結合を還元することによって合成することができる。または、スルフヒドリル基は、２−イミノチオラン（Ｔｒａｕｔ試薬）または別のスルフヒドリル合成試薬を用いてリガンドのリジン部分のアミノ基を反応させることによって合成することができる。
【０２０３】
一実施形態では、ストレッチャー単位は、リガンド単位の硫黄原子と結合する。硫黄原子は、リガンドのスルフヒドリル基から誘導することができる。この実施形態の代表的なストレッチャー単位は、式ＩＩＩａおよびＩＩＩｂの角括弧内に示されており、式中、Ｌ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは上に定義されるとおりであり、Ｒ１７は、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８炭素環−、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）−、−アリーレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）−、−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８複素環−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）−、−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−，および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−から選択され；ｒは１〜１０の整数である。式Ｉａの全ての例示的な実施形態（例えばＩＩＩ〜ＶＩ）から、明らかに示されていなくても、１〜２０個の薬物部分がリガンドに結合している（ｐ＝１〜２０）ことが理解される。
【０２０４】
【化１３２】
2009500424.tif 000065
具体的なストレッチャー単位は、Ｒ１７が−（ＣＨ２）５−である式ＩＩＩａの単位である。
【０２０５】
【化１３３】
2009500424.tif 000066
別の具体的なストレッチャー単位は、Ｒ１７が−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｌ−ＣＨ２−であり、ｒが２である式ＩＩＩａの単位である。
【０２０６】
【化１３４】
2009500424.tif 000067
さらに別の具体的なストレッチャー単位は、Ｒ１７が（ＣＨ２）５−である式ＩＩＩｂの単位である。
【０２０７】
【化１３５】
2009500424.tif 000068
別の実施形態では、ストレッチャー単位は、リガンド単位の硫黄原子とストレッチャー単位の硫黄原子との間のジスルフィド結合を介してリガンド単位に結合する。この実施形態の代表的なストレッチャー単位は式ＩＶの角括弧内に示されており、Ｒ１７、Ｌ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは上に定義されるとおりである。
【０２０８】
【化１３６】
2009500424.tif 000069
さらに別の実施形態では、ストレッチャーの反応性基は、リガンドの一級アミノ基または二級アミノ基と結合を形成可能な反応性部位を含有する。これらの反応性部位の例としては、限定されないが、活性化エステル、例えば、スクシンイミドエステル、４−ニトロフェニルエステル、ペンタフルオロフェニルエステル、テトラフルオロフェニルエステル、酸無水物、酸塩化物、塩化スルホニル、イソシアネートおよびイソチオシアネートが挙げられる。この実施形態の代表的なストレッチャー単位は式Ｖａ〜Ｖｃの角括弧内に示されており、Ｒ１７、Ｌ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは上に定義されるとおりである。
【０２０９】
【化１３７】
2009500424.tif 000070
【０２１０】
【化１３８】
2009500424.tif 000071
さらに別の態様では、ストレッチャーの反応性基は、リガンドに存在可能な修飾された炭水化物の（−ＣＨＯ）基と反応性の反応性部位を含有する。例えば、炭水化物を試薬（例えば過ヨウ素酸ナトリウム）を用いて穏やかに酸化し、この酸化した炭水化物の得られた（−ＣＨＯ）単位を、Ｋａｎｅｋｏ，Ｔ．ら（１９９１）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ  ２：１３３−４１に記載されるようなヒドラジド、オキシム、一級アミンまたは二級アミン、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレートおよびアリールヒドラジドなどの官能基を有するストレッチャーと縮合させることができる。この実施形態の代表的なストレッチャー単位は式ＶＩａ、ＶＩｂおよびＶＩｃの角括弧内に示されており、−Ｒ１７−、Ｌ−、−Ｗ−、−Ｙ−、−Ｄ、ｗおよびｙは上に定義されるとおりである。
【０２１１】
【化１３９】
2009500424.tif 000072
アミノ酸単位
アミノ酸単位（−Ｗ−）は、存在する場合、スペーサー単位が存在する場合にはストレッチャー単位をスペーサー単位に結合し、スペーサー単位が存在しない場合にはストレッチャー単位を薬物部分に結合し、ストレッチャー単位およびスペーサー単位が存在しない場合にはリガンド単位を薬物単位に結合する。
【０２１２】
Ｗｗ−は、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチド、ペンタペプチド、ヘキサペプチド、ヘプタペプチド、オクタペプチド、ノナペプチド、デカペプチド、ウンデカペプチドまたはドデカペプチド単位である。各−Ｗ−単位は独立して、以下
【０２１３】
【化１４０】
2009500424.tif 000073
（式中、Ｒ１９０は、水素、メチル、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ベンジル、ｐ−ヒドロキシベンジル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ３、−ＣＨ２ＣＨ２ＳＣＨ３、−ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＯＯＨ、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨ２、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ２）４ＮＨＣ（＝ＮＨ）ＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＣＨ３、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＨＯ、−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２、−（ＣＨ２）４ＮＨＣＯＮＨ２、−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ２ＮＨ２、２−ピリジルメチル−、３−ピリジルメチル−、４−ピリジルメチル−、フェニル、シクロヘキシル、
【０２１４】
【化１４１】
2009500424.tif 000074
である。）
の角括弧内に示される式を有し、ｗは独立して０〜１２である。
【０２１５】
アミノ酸単位を１つ以上の酵素によって酵素開裂させることができる。この１つ以上の酵素としては、薬物単位（−Ｄ）を放出する（一実施形態では、インビボで薬物（Ｄ）を放出する）腫瘍関連プロテアーゼが挙げられる。
【０２１６】
代表的なＷｗ単位は、式（ＶＩＩ）〜（ＩＸ）
【０２１７】
【化１４２】
2009500424.tif 000075
（式中、Ｒ２００およびＲ２０１は以下
【０２１８】
【化１４３】
2009500424.tif 000076
式中、Ｒ２００、Ｒ２０１およびＲ２０２は以下のとおりである。
【０２１９】
【化１４４】
2009500424.tif 000077
式中、Ｒ２００、Ｒ２０１、Ｒ２０２およびＲ２０３は以下のとおりである。
【０２２０】
【化１４５】
2009500424.tif 000078
例示的なアミノ酸単位としては、限定されないが、式（ＶＩＩ）の単位が挙げられ、Ｒ２００はベンジルであり、Ｒ２０１は−（ＣＨ２）４ＮＨ２であり；Ｒ２００はイソプロピルであり、Ｒ２０１は−（ＣＨ２）４ＮＨ２であり；Ｒ２００はイソプロピルであり、Ｒ２０１は−（ＣＨ２）３ＮＨＣＯＮＨ２である。別の例示的なアミノ酸単位は式（ＶＩＩＩ）の単位であり、Ｒ２００はベンジルであり、Ｒ２０１はベンジルであり、Ｒ２０２は−（ＣＨ２）４ＮＨ２である。
【０２２１】
有用な−Ｗｗ−単位は、特定の酵素（例えば腫瘍関連プロテアーゼ）による開裂によって選択的に設計し、最適化することができる。一実施形態では、−Ｗｗ−単位の開裂は、カテプシンＢ、ＣおよびＤ、またはプラスミンプロテアーゼによって触媒される。
【０２２２】
一実施形態では、−Ｗｗ−は、ジペプチド、トリペプチド、テトラペプチドまたはペンタペプチドである。
【０２２３】
Ｒ１９０、Ｒ２００、Ｒ２０１、Ｒ２０２またはＲ２０３が水素以外である場合、Ｒ１９０、Ｒ２００、Ｒ２０１、Ｒ２０２またはＲ２０３に対する炭素原子の結合はキラルである。
【０２２４】
Ｒ１９０、Ｒ２００、Ｒ２０１、Ｒ２０２またはＲ２０３に対する炭素原子の結合はそれぞれ独立して（Ｓ）配置または（Ｒ）配置である。
【０２２５】
アミノ酸単位の１つの態様では、アミノ酸単位はバリン−シトルリンである。別の態様では、アミノ酸単位はフェニルアラニン−リジン（すなわちｆｋ）である。アミノ酸単位のさらに別の態様では、アミノ酸単位はＮ−メチルバリン−シトルリンである。さらに別の態様では、アミノ酸単位は、５−アミノ吉草酸、ホモフェニルアラニンリジン、テトライソキノリンカルボキシレートリジン、シクロヘキシルアラニンリジン、イソネペコチン酸（ｉｓｏｎｅｐｅｃｏｔｉｃ  ａｃｉｄ）リジン、β−アラニンリジン、グリシンセリンバリングルタミンまたはイソネペコチン酸である。
【０２２６】
特定の実施形態では、アミノ酸単位は天然アミノ酸を含むことができる。他の実施形態では、アミノ酸単位は非天然アミノ酸を含むことができる。
【０２２７】
スペーサー単位
スペーサー単位（−Ｙ−）が存在する場合には、アミノ酸単位が存在する場合にはスペーサー単位がアミノ酸単位を薬物部分に結合する。または、アミノ酸単位が存在しない場合にはスペーサー単位はストレッチャー単位を薬物部分に結合する。アミノ酸単位およびストレッチャー単位が存在しない場合にはスペーサー単位は薬物部分をリガンド単位に結合する。
【０２２８】
スペーサー単位には、自己犠牲型（ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）および非自己犠牲型（ｎｏｎ  ｓｅｌｆ−ｉｍｍｏｌａｔｉｖｅ）の２つの一般的な種類がある。非自己犠牲型のスペーサー単位は、スペーサー単位の一部分または全てが開裂後、特に薬物−リンカー−リガンド複合体または薬物−リンカー化合物からアミノ酸単位を酵素開裂した後にも薬物部分に結合したままである。非自己犠牲型のスペーサー単位の例としては、限定されないが、（グリシン−グリシン）スペーサー単位およびグリシンスペーサー単位（両方スキーム１に示されている）（以下）が挙げられる。グリシン−グリシンスペーサー単位またはグリシンスペーサー単位を含有する例示的な化合物が、腫瘍細胞関連プロテアーゼ、癌細胞関連プロテアーゼまたはリンパ球関連プロテアーゼを介する酵素開裂を受ける場合、グリシン−グリシン−薬物部分またはグリシン−薬物部分はＬ−Ａａ−Ｗｗ−から開裂する。一実施形態では、標的細胞で独立した加水分解反応が起こり、グリシン−薬物部分の結合が開裂し、薬物が放出する。
【０２２９】
スキーム１
【０２３０】
【化１４６】
2009500424.tif 000079
一実施形態では、非自己犠牲型のスペーサー単位（−Ｙ−）は−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−である。別の実施形態では、非自己犠牲型のスペーサー単位（−Ｙ−）は−Ｇｌｙ−である。
【０２３１】
別の実施形態では、−Ｙｙ−はｐ−アミノベンジルアルコール（ＰＡＢ）単位であり（以下のスキーム２および３を参照）、フェニレン部分がＱｍで置換されており、Ｑは、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり、ｍは０〜４の整数である。
【０２３２】
一実施形態では、スペーサー単位が存在しない（ｙ＝０）薬物−リンカー化合物または薬物−リンカーリガンド複合体またはその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物が提供される。
【０２３３】
または、自己犠牲型のスペーサー単位を含有する例示的な化合物は、別個の加水分解工程を必要とせずに−Ｄを放出することができる。この実施形態では、−Ｙ−は、ＰＡＢ基のアミノ窒素原子を介して−Ｗｗ−に結合し、カルボネート基、カルバメート基またはエーテル基を介して−Ｄに直接つながっているＰＡＢ基である。任意の特定の理論または機構に束縛されないが、スキーム２は、Ｔｏｋｉら、２００２，Ｊ  Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６７：１８６６−１８７２に記載のカルバメート基またはカルボネート基を介して−Ｄに直接結合したＰＡＢ基の可能な薬物放出機構を示す。
【０２３４】
スキーム２
【０２３５】
【化１４７】
2009500424.tif 000080
（式中、Ｑは、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；ｍは０〜４の整数であり；ｐは１〜２０の整数である。）
任意の特定の理論または機構に束縛されないが、スキーム３は、エーテル結合またはアミン結合を介して−Ｄに直接結合したＰＡＢ基の可能な薬物放出機構を示す。
【０２３６】
スキーム３
【０２３７】
【化１４８】
2009500424.tif 000081
（式中、Ｑは、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；ｍは０〜４の整数であり；ｐは１〜約２０の整数である。）
自己犠牲型のスペーサーの他の例としては、限定されないが、ＰＡＢ基に電気的に類似の芳香族化合物（例えば２−アミノイミダゾール−５−メタノール誘導体）（例えば、Ｈａｙら、１９９９，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２３７参照）およびオルト−アミノベンジルアセタールまたはパラ−アミノベンジルアセタールが挙げられる。アミド結合の加水分解の際に環化を受けるスペーサー、例えば、置換および非置換の４−アミノ酪酸アミド（例えば、Ｒｏｄｒｉｇｕｅｓら、１９９５，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ２：２２３）、適切に置換されたビシクロ［２．２．１］およびビシクロ［２．２．２］環系（例えば、Ｓｔｏｒｍら，１９７２，Ｊ．Ａｍｅｒ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．９４：５８１５）および２−アミノフェニルプロピオン酸アミド（例えば、Ａｍｓｂｅｒｒｙら、１９９０，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．５５：５８６７）を使用することができる。グリシンのα位で置換されたアミン含有薬物の脱離（例えば、Ｋｉｎｇｓｂｕｒｙら、１９８４，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２７：１４４７）は、例示的な化合物に有用な自己犠牲型スペーサーの例である。
【０２３８】
一実施形態では、スペーサー単位は、スキーム４に示されるような分枝ビス（ヒドロキシメチル）スチレン（ＢＨＭＳ）単位であり、複数の薬物を組み込み、放出させるために使用することができる。
【０２３９】
スキーム４
【０２４０】
【化１４９】
2009500424.tif 000082
（式中、Ｑは、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；ｍは０〜４の整数であり；ｐは１〜約２０の整数である。）
一実施形態では、−Ｄ部分は同じである。さらに別の実施形態では、−Ｄ部分は異なっている。
【０２４１】
１つの態様では、スペーサー単位（−Ｙｙ−）は式（Ｘ）〜（ＸＩＩ）
【０２４２】
【化１５０】
2009500424.tif 000083
（式中、Ｑは、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；ｍは０〜４の整数である）
【０２４３】
【化１５１】
2009500424.tif 000084
で表される。
【０２４４】
式Ｉａ’の抗体−薬物複合体化合物の実施形態としては、
【０２４５】
【化１５２】
2009500424.tif 000085
【０２４６】
【化１５３】
2009500424.tif 000086
が挙げられ、ｗおよびｙはそれぞれ０であり、
【０２４７】
【化１５４】
2009500424.tif 000087
が挙げられる。
【０２４８】
薬物部分（Ｄ）は、ドラスタチン（ｄｏｌａｓｔａｔｉｎ）／オーリスタチン型であり（例えば、米国特許第５，６３５，４８３号；および第５，７８０，５８８号参照）、微小管動態、ＧＴＰ加水分解および核分裂および細胞分裂を妨害することが示されており（Ｗｏｙｋｅら、２００１，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｈ．Ａｇｅｎｔｓ  ｍｉｄ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４５（１２）：３５８０−３５８４）、抗癌活性を有することが示されている（例えば、米国特許第５，６６３，１４９号）。ドラスチン（ｄｏｌａｓｔｉｎ）の中には抗真菌活性を有する（例えば、Ｐｅｔｔｉｔら、１９９８，Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ．Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．４２：２９６１−２９６５を参照）。
【０２４９】
上述のように、Ｄは、ｙ＝１または２の場合スペーサー単位との結合を形成可能な、ｙ＝０の場合アミノ酸単位のＣ末端カルボキシル基との結合を形成可能な、ｗおよびｙが０の場合ストレッチャー単位との結合を形成可能な、ａ、ｗおよびｙが０の場合リガンド単位の反応性部位との結合を形成可能な窒素原子または他の原子を有する薬物単位（部分）を指す。用語「薬物単位」および「薬物部分」は同義語であり、本明細書で互換可能に使用されることが理解される。
【０２５０】
一実施形態では、−Ｄは式Ｄであり、
【０２５１】
【化１５５】
2009500424.tif 000088
式中、それぞれの位置で、
Ｒ２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択され；
Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され；
Ｒ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｃ１〜Ｃ８アルキル−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され；
Ｒ５は、Ｈおよびメチルからなる群から選択されるか；
またはＲ４およびＲ５が結合して炭素環を形成し、式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ３〜Ｃ８炭素環からなる群から選択され、ｎは２、３、４、５および６からなる群から選択され；
Ｒ６は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルからなる群から選択され；
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）からなる群から選択され；
各Ｒ８は独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環およびＯ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）からなる群から選択され；
各Ｘ１は独立してＣ１〜Ｃ１０アルキレンであり；
部分−ＮＲ９Ｚ１は、上述の実施形態のいずれかのフェニルアラニンバイオ等価体である。
【０２５２】
一実施形態では、Ｒ３、Ｒ４およびＲ７は独立して、イソプロピルまたはｓｅｃ−ブチルであり、Ｒ５は−Ｈである。例示的な実施形態では、Ｒ３およびＲ４はそれぞれイソプロピルであり、Ｒ５は−Ｈであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルである。
【０２５３】
別の実施形態では、Ｒ２およびＲ６はそれぞれメチルであり、Ｒ９は−Ｈである。
【０２５４】
さらに別の実施形態では、それぞれの場合にＲ８は−ＯＣＨ３である。
【０２５５】
例示的な実施形態では、Ｒ３およびＲ４はそれぞれイソプロピルであり、Ｒ２およびＲ６はそれぞれメチルであり、Ｒ５は−Ｈであり、Ｒ７はｓｅｃ−ブチルであり、それぞれの場合にＲ８は−ＯＣＨ３であり、Ｒ９は−Ｈである。
【０２５６】
具体的な薬物単位（−Ｄ）としては、以下
【０２５７】
【化１５６】
2009500424.tif 000089
の構造を有する薬物単位およびその薬学的に受容可能な塩または溶媒和物が挙げられ、Ｒ１０およびＺ２は上に提供される意味を有する。
【０２５８】
１つの態様では、親水性基（例えば、限定されないが、メチレングリコールエステル（ＴＥＧ））は、薬物単位に結合することができる。理論によって束縛されないが、親水性基によって薬物単位の内在化しやすく、凝集しにくくなる。
【０２５９】
リガンド単位（Ｌ）
リガンド単位（Ｌ−）には、レセプター、抗原または所与の標的細胞の集合に関連する他の受容部分に結合するか、または反応的に会合するか、または複合体を形成する任意のリガンド（Ｌ）単位が含まれる。リガンド単位は、治療的に、または生物学的に改変された細胞集合のレセプター、抗原または他の受容部分に結合し、これらと複合体を形成するか、またはこれらと反応する分子である。１つの態様では、リガンド単位は、リガンド単位と相互作用する特定の細胞集合に薬物単位を送達するように作用する。このようなリガンドとしては、限定されないが、高分子量のタンパク質、例えば、全長抗体、抗体フラグメント、低分子量のタンパク質、ポリペプチドまたはペプチド、レクチン、糖タンパク質、非ペプチド、ビタミン、栄養輸送分子（例えば、限定されないがトランスフェリン）、または任意の他の細胞結合分子または物質が挙げられる。
【０２６０】
リガンド単位は、ストレッチャー単位、アミノ酸単位、スペーサー単位、または薬物単位に対する結合を形成することができる。リガンド単位は、リガンドのヘテロ原子を介してリンカー単位に対する結合を形成することができる。リガンド単位に存在可能なヘテロ原子としては、硫黄（一実施形態では、リガンドのスルフヒドリル基からの硫黄）、酸素（一実施形態では、リガンドのカルボニル基、カルボキシル基またはヒドロキシル基からの酸素）および窒素（一実施形態では、リガンドの一級アミノ基または二級アミノ基からの窒素）が挙げられる。これらのヘテロ原子は、リガンドの天然状態でリガンドに存在することができる（例えば、天然の抗体）か、または化学修飾を介してリガンドに導入することができる。
【０２６１】
一実施形態では、リガンドはスルフヒドリル基を有し、リガンドはスルフヒドリル基の硫黄原子を介してリンカー単位に結合する。
【０２６２】
別の実施形態では、リガンドは、リンカーの活性化エステル（このようなエステルとしては、限定されないが、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド、ペンタフルオロフェニルおよびｐ−ニトロフェニルエステルが挙げられる）と反応可能であり、リガンドの窒素原子およびリンカーのＣ＝Ｏ原子からなるアミド結合を形成可能なリジン残基を有する。
【０２６３】
さらに別の態様では、リガンドは、化学修飾して１つ以上のスルフヒドリル基を導入可能な１つ以上のリジン残基を有する。リガンド単位は、スルフヒドリル基の硫黄原子を介してリンカー単位に結合する。リジンを修飾するのに使用可能な試薬としては、限定されないが、Ｎ−スクシンイミジルＳ−アセチルチオアセテート（ＳＡＴＡ）および塩酸２−イミノチオラン（Ｔｒａｕｔ試薬）が挙げられる。
【０２６４】
別の実施形態では、リガンドは、化学修飾して１つ以上のスルフヒドリル基を有することが可能な１つ以上の炭水化物基を有することができる。リガンド単位は、スルフヒドリル基の硫黄原子を介してリンカー単位（例えばストレッチャー単位）に結合する。
【０２６５】
さらに別の実施形態では、リガンドは、酸化してアルデヒド（−ＣＨＯ）基を得ることが可能な１つ以上の炭水化物基を有することができる（例えば、Ｌａｇｕｚｚａら、１９８９，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３２（３）：５４８−５５を参照）。対応するアルデヒドは、ストレッチャーの反応性部位と結合を形成することができる。リガンドのカルボニル基と反応可能なストレッチャーの反応性部位としては、限定されないが、ヒドラジンおよびヒドロキシルアミンが挙げられる。薬物単位と結合または会合するためにタンパク質を修飾するための他のプロトコルは、Ｃｏｌｉｇａｎら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，ｖｏｌ．２，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ（２００２）（本明細書に参考として組み込まれる）に記載されている。
【０２６６】
有用な非免疫反応性タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドリガンドとしては、限定されないが、トランスフェリン、表皮成長因子（「ＥＧＦ」）、ボンベシン、ガストリン、ガストリン放出ペプチド、血小板由来成長因子、ＩＬ−２、ＩＬ−６、形質転換成長因子（「ＴＧＦ」）（例えばＴＧＦ−αおよびＴＧＦ−β）、ワクシニア成長因子（「ＶＧＦ」）、インスリンおよびインスリン様成長因子ＩおよびＩＩ、ソマトスタチン、レクチンおよび低密度リポタンパク質由来のアポタンパク質が挙げられる。
【０２６７】
有用なポリクローナル抗体は、免疫動物の血清由来の異種の抗体分子の集合である。有用なモノクローナル抗体は、特定の抗原決定因子（例えば、癌細胞抗原、ウイルス抗原、微生物抗原、タンパク質、ペプチド、炭水化物、化学物質、核酸またはそのフラグメント）に対して同種の抗体の集合である。目的の抗原に対するモノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、培養物中の連続的な細胞株によって抗体分子を産生する当該技術分野で既知の任意の技術を用いて調製することができる。
【０２６８】
有用なモノクローナル抗体としては、限定されないが、ヒトモノクローナル抗体、ヒト化モノクローナル抗体、抗体フラグメントまたはキメラヒト−マウス（または他の種の）モノクローナル抗体が挙げられる。ヒトモノクローナル抗体は、当該技術分野で既知の多くの技術のいずれかによって製造してよい（例えば、Ｔｅｎｇら、１９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ．８０：７３０８−７３１２；Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２−７９；およびＯｌｓｓｏｎら、１９８２，Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．９２：３−１６）。
【０２６９】
抗体は二重特異性抗体であってもよい。二重特異性抗体を作製する方法は当該技術分野で既知であり、上に議論されている。
【０２７０】
抗体は、機能的に活性なフラグメント、標的細胞（例えば、癌細胞抗原、ウイルス抗原または微生物抗原）に免疫特異的に結合する抗体の誘導体またはアナログ、または腫瘍細胞またはマトリックスに結合する他の抗体であることができる。この観点で、「機能的に活性な」とは、このフラグメント、誘導体またはアナログが、抗原を認識する抗−抗−イディオタイプの抗体を誘発可能であり、この抗体からこのフラグメント、誘導体またはアナログが誘導され、認識されることを意味する。具体的には、例示的な実施形態では、免疫グロブリン分子のイディオタイプの抗原性は、抗原を特異的に認識するＣＤＲ配列に対してＣ末端にあるフレームワークおよびＣＤＲ配列の欠失によって高めることができる。ＣＤＲ配列が抗原に結合することを決定するために、ＣＤＲ配列を含有する合成ペプチドを当該技術分野で既知の任意の結合アッセイ法によって抗原を用いた結合アッセイで使用することができる（例えば、ＢＩＡコアアッセイ）（例えば、Ｋａｂａｔら、１９９１，Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ，Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ，Ｂｅｔｈｅｓｄａ，Ｍｄ；Ｋａｂａｔ  Ｅら、１９８０，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １２５（３）：９６１−９６９を参照）。
【０２７１】
他の有用な抗体としては、抗体フラグメント、例えば、限定されないが、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆｖ、一本鎖抗体、ダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）、トリアボディ（ｔｒｉｂｏｄｉｅｓ）、テトラボディ（ｔｅｔｒａｂｏｄｉｅｓ）、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−ＦＶ、または抗体と同じ特異性を有する任意の他の分子が挙げられる。
【０２７２】
さらに、標準的な組み換えＤＮＡ技術で使用するために製造可能なヒト部分および非ヒト部分の両方を含む組み換え抗体（例えば、キメラおよびヒト化モノクローナル抗体）は有用な抗体である。キメラ抗体は、異なる部分が異なる動物種から誘導されている分子（例えば、マウスモノクローナル由来の可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する分子）である（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；および米国特許第４，８１６，３９７号を参照、これらはその全体が本明細書中に参考により組み込まれる）。ヒト化抗体は、非ヒト種由来の１つ以上の相補性決定領域（ＣＤＲ）とヒト免疫グロブリン分子のフレームワーク領域とを有する非ヒト種由来の抗体分子である（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号、その全体が本明細書中に参考により組み込まれる）。このようなキメラおよびヒト化モノクローナル抗体は、当該技術分野で既知の組み換えＤＮＡ技術、例えば、国際特許出願第ＷＯ８７／０２６７１号；欧州特許公報第０１８４１８７号；欧州特許公報第０１７１４９６号；欧州特許公報第０１７３４９４号；国際特許出願第ＷＯ８６／０１５３３号；米国特許第４，８１６，５６７号；欧州特許公報第０１２０２３号；Ｂｅｒｔｅｒら、１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４０：１０４１−１０４３；Ｌｉｕら、１９８７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：３４３９−３４４３；Ｌｉｕら、１９８７，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：３５２１−３５２６；Ｓｕｎら、１９８７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８４：２１４−２１８；Ｎｉｓｈｉｍｕｒａら、１９８７，Ｃａｎｃｅｒ．Ｒｅｓ．４７：９９９−１００５；Ｗｏｏｄら、１９８５，Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４４６−４４９；およびＳｈａｗら、１９８８，Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．８０：１５５３−１５５９；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ，１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−１２０７；Ｏｉら、１９８６，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４；米国特許第５，２２５，５３９号；Ｊｏｎｅｓら、１９８６，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５５２−５２５；Ｖｅｒｈｏｅｙａｎら、１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４；およびＢｅｉｄｌｅｒら、１９８８，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４１：４０５３−４０６０（これらはそれぞれ全体が本明細書中に参考により組み込まれる）に記載の方法を用いて調製することができる。
【０２７３】
完全ヒト抗体は特に望ましく、内因性の免疫グロブリン重鎖および軽鎖遺伝子を発現できないが、ヒト重鎖および軽鎖遺伝子を発現できるトランスジェニックマウスを用いて産生することができる。トランスジェニックマウスは、例えば、本発明のポリペプチドの全部または一部分を所定の抗原を用いて通常の様式で免疫化される。抗原に対して指向するモノクローナル抗体を、従来のハイブリドーマ技術を用いて得ることができる。トランスジェニックマウスが有するヒト免疫グロブリントランス遺伝子をＢ細胞分化中に再配置させ、クラススイッチおよび体細胞変異を行なう。従って、このような技術を用いて、治療的に有効なＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＭおよびＩｇＥ抗体を産生することができる。ヒト抗体を産生する技術の概説としては、ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ，１９９５，Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３：６５−９３を参照。ヒト抗体およびヒトモノクローナル抗体を産生する技術およびこのような抗体を産生するプロトコルの詳細については、例えば、米国特許第５，６２５，１２６号；同第５，６３３，４２５号；同第５，５６９，８２５号；同第５，６６１，０１６号；同第５，５４５，８０６号を参照（その全体がそれぞれ本明細書中に参考により組み込まれる）。他のヒト抗体を例えば、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（現在はＡｍｇｅｎ，Ｆｒｅｅｍｏｎｔ，ＣＡ）およびＭｅｄａｒｅｘ（Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）から商業的に得ることができる。
【０２７４】
所定のエピトープを認識する完全ヒト抗体を、「ｇｕｉｄｅｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｏｎ」と称される技術を用いて作製することができる。このアプローチでは、所定の非ヒトモノクローナル抗体（例えばマウス抗体）を使用して、同じエピトープを認識する完全なヒト抗体を選択することができる（例えば、Ｊｅｓｐｅｒｓら、１９９４，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １２：８９９−９０３を参照）。ファージディスプレイライブラリを含む当該技術分野で既知の種々の技術を用いてヒト抗体を産生することもできる（例えば、ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ，１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：３８１；Ｍａｒｋｓら、１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１；ＱｕａｎおよびＣａｒｔｅｒ，２００２，Ｔｈｅ  ｒｉｓｅ  ｏｆ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｓ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎ  Ａｎｔｉ−ＩｇＥ  ａｎｄ  Ａｌｌｅｒｇｉｃ  Ｄｉｓｅａｓｅ，ＪａｒｄｉｅｕおよびＦｉｃｋ編，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ２０，ｐｐ．４２７−４６９参照）。
【０２７５】
他の実施形態では、抗体は、抗体の融合タンパク質またはその機能的に活性なフラグメント、例えば、抗体が抗体由来ではない別のタンパク質のアミノ酸配列（またはその一部分、好ましくはタンパク質の少なくとも１０、２０または５０アミノ酸部分）にＮ末端またはＣ末端のいずれかで共有結合（例えばペプチド結合）を介して融合したものである。好ましくは、抗体またはそのフラグメントは、定常ドメインのＮ末端で他のタンパク質に共有結合している。
【０２７６】
抗体としては、すなわち、任意の種類の分子の共有結合によって改変されているが、この共有結合がその抗原結合の免疫特異性を保持しているアナログおよび誘導体が挙げられる。例えば、限定されないが、抗体の誘導体およびアナログとしては、例えば、グリコシル化、アセチル化、ペグ化、ホスホリル化、アミド化、既知の保護／ブロック基による誘導体化、タンパク質分解的切断、細胞抗体単位または他のタンパク質に対する結合などによってさらに改変されたものが挙げられる。多くの化学修飾のうち任意のものを既知の技術によって行なうことができる。この既知の技術としては、限定されないが、特異的な化学開裂、アセチル化、ホルミル化、ツニカマイシン存在下での代謝合成などが挙げられる。さらに、アナログまたは誘導体は１つ以上の非天然アミノ酸を含有することができる。
【０２７７】
抗体は、Ｆｃレセプターと相互作用するアミノ酸残基で修飾（例えば、置換、欠失または付加）することができる。特に、抗体は、抗−ＦｃドメインとＦｃＲｎレセプターとの間の相互作用に関与すると同定されているアミノ酸残基で修飾することができる（例えば、国際特許出願第ＷＯ９７／３４６３１（その全体が本明細書中に参考により組み込まれる）を参照）。
【０２７８】
癌細胞抗原に免疫特異的な抗体は、商業的に得られるか、または当業者に既知の任意の方法（例えば、化学合成または組み換え発現技術）によって製造することができる。例えば、ＧｅｎＢａｎｋデータベースまたは類似のデータベース、文献刊行物、または通常のクローニングおよびシーケンシングから癌細胞抗原に免疫特異的な抗体をコードするヌクレオチド配列を得ることができる。
【０２７９】
特定の実施形態では、癌を処置または予防するための既知の抗体を使用することができる。癌細胞抗原に免疫特異的な抗体は、商業的に得られるか、または当業者に既知の任意の方法（例えば組み換え発現技術）によって製造することができる。例えば、ＧｅｎＢａｎｋデータベースまたは類似のデータベース、文献刊行物、または通常のクローニングおよびシーケンシングから癌細胞抗原に免疫特異的な抗体コーディングヌクレオチド配列を得ることができる。癌の処理に利用可能な抗体の例としては、限定されないが、非ホジキンリンパ腫の患者を処置するためのキメラ抗−ＣＤ２０モノクローナル抗体であるＲＩＴＵＸＡＮ（登録商標）（リツキシマブ；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）；卵巣癌を処置するためのマウス抗体であるＯＶＡＲＥＸ；結腸直腸癌を処置するためのマウスＩｇＧ２ａ抗体であるＰＡＮＯＲＥＸ（Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ，ＮＣ）；表皮成長因子陽性の癌（例えば、頭部および頚部の癌）を処置するための抗−ＥＧＦＲ  ＩｇＧキメラ抗体であるＣｅｔｕｘｉｍａｂ  ＥＲＲＩＴＵＸ（Ｉｍｃｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．，ＮＹ）；肉腫を処置するためのヒト化抗体であるＶｉｔａｘｉｎ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ，Ｉｎｃ．，ＭＤ）；慢性リンパ球性白血病（ＣＬＬ）を処置するためのヒト化ＩｇＧ１抗体であるＣＡＭＰＡＴＨ  Ｉ／Ｈ（Ｌｅｕｋｏｓｉｔｅ，ＭＡ）；急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）を処置するためのヒト化抗−ＣＤ３３  ＩｇＧ抗体であるＳＭＡＲＴ  ＭＩ９５（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）およびＳＧＮ−３３（Ｓｅａｔｔｌｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．，ＷＡ）；非ホジキンリンパ腫を処置するためのヒト化抗−ＣＤ２２ＩｇＧ抗体であるＬＹＭＰＨＯＣＩＤＥ（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．，ＮＪ）；非ホジキンリンパ腫を処置するためのヒト化抗−ＨＬＡ−ＤＲ抗体であるＳＭＡＲＴ  ＩＤ１０（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）；非ホジキンリンパ腫を処置するための放射能標識されたマウス抗−ＨＬＡ−Ｄｒ１０抗体であるＯＮＣＯＬＹＭ（Ｔｅｃｈｎｉｃｌｏｎｅ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）；ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫を処置するためのヒト化抗−ＣＤ２ｍＡｂであるＡＬＬＯＭＵＮＥ（ＢｉｏＴｒａｎｓｐｌａｎｔ，ＣＡ）；肺癌および結腸直腸癌を処置するための抗−ＶＥＧＦヒト化抗体であるＡＶＡＳＴＢＳＩＮ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）；非ホジキンリンパ腫を処置するための抗−ＣＤ２２抗体であるＥＰＲＡＴＵＺＡＭＡＢ（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，Ｉｎｃ．，ＮＪおよびＡｍｇｅｎ，ＣＡ）；および結腸直腸癌を処置するためのヒト化抗−ＣＥＡ抗体であるＣＥＡＣＩＤＥ（Ｉｍｍｕｎｏｍｅｄｉｃｓ，ＮＪ）が挙げられる。
【０２８０】
癌の処置に有用な他の抗体としては、限定されないが、以下の抗原に対する抗体が挙げられる（ここで、抗体で処置可能な例示的な癌を括弧内に示す）：ＣＡ１２５（卵巣）、ＣＡ１５−３（癌腫）、ＣＡ１９−９（癌腫）、Ｌ６（癌腫）、Ｌｅｗｉｓ  Ｙ（癌腫）、Ｌｅｗｉｓ  Ｘ（癌腫）、αフェトタンパク質（癌腫）、ＣＡ２４２（結腸直腸）、胎盤アルカリホスファターゼ（癌腫）、前立腺に特異的な抗原（前立腺）、前立腺に特異的な膜抗原（前立腺）、前立腺酸性フォスファターゼ（前立腺）、表皮成長因子（癌腫）、ＭＡＧＥ−１（癌腫）、ＭＡＧＥ−２（癌腫）、ＭＡＧＥ−３（癌腫）、ＭＡＧＥ−４（癌腫）、抗−トランスフェリンレセプター（癌腫）、ｐ９７（黒色腫）、ＭＵＣｌ−ＫＬＨ（乳癌）、ＣＥＡ（結腸直腸）、ｇｐ１００（黒色腫）、ＭＡＲＴ１（黒色腫）、ＩＬ−２レセプター（Ｔ細胞白血病およびリンパ腫）、ＣＤ２０（非ホジキンリンパ腫）、ＣＤ５２（白血病）、ＣＤ３３（白血病）、ＣＤ２２（リンパ腫）、ヒト絨毛性ゴナドトロピン（癌腫）、ＣＤ３８（多発性骨髄腫）、ＣＤ４０（リンパ腫）、ムチン（癌腫）、Ｐ２１（癌腫）、ＭＰＧ（黒色腫）およびＮｅｕ癌遺伝子産物（癌腫）。いくつかの特異的で有用な抗体としては、限定されないが、ＢＲ９６ｍＡｂ（Ｔｒａｉｌら、１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６１：２１２−２１５）、ＢＲ６４（Ｔｒａｉｌら、１９９７，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５７：１００−１０５）、ＣＤ４０抗原に対するｍＡｂ、例えばＳ２Ｃ６ｍＡｂ（Ｆｒａｎｃｉｓｃｏら、２０００，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：３２２５−３２３１）、ＣＤ７０抗原に対するｍＡｂ、例えば１Ｆ６ｍＡｂ、ヒト化１Ｆ６ｍＡｂ、２Ｆ２ｍＡｂおよびヒト化２Ｆ２ｍＡｂ（例えば、国際特許出願番号第ＷＯ０４／０７３６５６号および米国特許出願第２００６−００８３７３６号参照）およびＣＤ３０抗原に対するｍＡｂ、例えばＡＣ１０（Ｂｏｗｅｎら、１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：５８９６−５９０６；Ｗａｈｌら、２００２  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２（１３）：３７３６−４２）およびＭＤＸ−０６０が挙げられる。腫瘍関連抗原に結合する多くの他の内在性抗体を使用することができ、総説が出されている（例えば、Ｆｒａｎｋｅら、２０００，Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｔｈｅｒ．Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍ．１５，４５９−７６；Ｍｕｒｒａｙ，２０００，Ｓｅｍｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２７：６４−７０；ＢｒｅｉｔｌｉｎｇおよびＤｕｂｅｌ，Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ，およびＳｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９８を参照）。
【０２８１】
別の特定の実施形態では、本発明の組成物および方法に従って自己免疫疾患を処置または予防するために抗体が使用される。自己免疫抗体の産生に関与する細胞の抗原に免疫特異的な抗体を任意の組織から得ることができ（例えば、大学の科学者または企業）、または当業者に既知の任意の方法（例えば、化学合成または組み換え発現技術）によって製造することができる。別の実施形態では、自己免疫疾患を処置するための免疫特異的な有用な抗体としては、限定されないが、以下の抗−核抗体が挙げられる；抗−ｄｓＤＮＡ；抗−ｓｓＤＮＡ、抗−カルジオリピン抗体ＩｇＭ、ＩｇＧ；抗−リン脂質抗体ＩｇＭ、ＩｇＧ；抗−ＳＭ抗体；抗−ミトコンドリア抗体；甲状腺抗体；ミクロソーム抗体；サイログロブリン抗体；抗−ＳＣＬ−７０抗体；抗−Ｊｏ抗体；抗−Ｕ１ＲＮＰ抗体；抗−Ｌａ／ＳＳＢ抗体；抗−ＳＳＡ；抗−ＳＳＢ抗体；抗−壁細胞（ｐｅｒｉｔａｌ  ｃｅｌｌ）抗体；抗−ヒストン抗体；抗−ＲＮＰ抗体；Ｃ−ＡＮＣＡ抗体；Ｐ−ＡＮＣＡ抗体；抗−セントロメア抗体；抗−Ｆｉｂｒｉｌｌａｒｉｎ抗体および抗−ＧＢＭ抗体が挙げられる。
【０２８２】
特定の実施形態では、有用な抗体は、活性化したリンパ球で発現するレセプターまたはレセプター複合体に結合することができる。レセプターまたはレセプター複合体は、免疫グロブリン遺伝子スーパーファミリーメンバー、ＴＮＦレセプタースーパーファミリーメンバー、インテグリン、サイトカインレセプター、ケモカインレセプター、主要組織適合性タンパク質、レクチンまたは相補的な制御タンパク質を含むことができる。適切な免疫グロブリンスーパーファミリーメンバーの非限定例は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、ＣＤ２２、ＣＤ２８、ＣＤ７９、ＣＤ９０、ＣＤ１５２／ＣＴＬＡ−４、ＰＤ−ＩおよびＩＣＯＳである。適切なＴＮＦレセプタースーパーファミリーメンバーの非限定例は、ＣＤ２７、ＣＤ４０、ＣＤ９５／Ｆａｓ、ＣＤ１３４／ＯＸ４０、ＣＤ１３７／４−１ＢＢ、ＴＮＦ−Ｒ１、ＴＮＦＲ−２、ＲＡＮＫ、ＴＡＣＩ、ＢＣＭＡ、オステオプロテグリン、Ａｐｏ２／ＴＲＡＩＬ−Ｒ１、ＴＲＡＩＬ−Ｒ２、ＴＲＡＩＬ−Ｒ３、ＴＲＡＩＬ−Ｒ４およびＡＰＯ−３である。適切なインテグリンの非限定例は、ＣＤ１１ａ、ＣＤ１１ｂ、ＣＤ１１ｃ、ＣＤ１８、ＣＤ２９、ＣＤ４１、ＣＤ４９ａ、ＣＤ４９ｂ、ＣＤ４９ｃ、ＣＤ４９ｄ、ＣＤ４９ｅ、ＣＤ４９ｆ、ＣＤ１０３およびＣＤ１０４である。適切なレクチンの非限定例は、Ｃ−型、Ｓ−型およびＩ−型レクチンである。
【０２８３】
一実施形態では、リガンド単位は、自己免疫疾患に関連する活性化したリンパ球に結合する。
【０２８４】
別の特定の実施形態では、ウイルス抗原または微生物抗原に免疫特異的な有用なリガンドはモノクローナル抗体である。抗体は、キメラ抗体、ヒト化抗体またはヒトモノクローナル抗体であってよい。本明細書で使用される場合、用語「ウイルス抗原」としては、限定されないが、任意のウイルスペプチド、免疫応答を誘発可能なポリペプチドタンパク質（例えば、ＨＩＶ  ｇｐ１２０、ＨＴＶ  ｎｅｆ、ＲＳＶ  Ｆ糖タンパク質、インフルエンザウイルスノイラミニダーゼ、インフルエンザウイルス血球凝集素、ＨＴＬＶ  ｔａｘ、単純ヘルペスウイルス糖タンパク質（例えば、ｇＢ、ｇＣ、ｇＤおよびｇＥ）およびＢ型肝炎表面抗原）が挙げられる。本明細書で使用される場合、用語「微生物抗原」としては、限定されないが、免疫応答を誘発可能な任意の微生物ペプチド、ポリペプチド、タンパク質、単糖類、多糖類または脂質分子（例えば、微生物、真菌、病原性原生動物または酵母のポリペプチド（例えば、ＬＰＳおよび莢膜多糖類５／８を含む））が挙げられる。
【０２８５】
ウイルス抗原または微生物抗原に免疫特異的な抗体は、商業的に得られるか（例えば、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ，ＣＡ）、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（Ｔｅｍｅｃｕｌａ，ＣＡ）またはＶｅｃｔｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ，ＣＡ）から）、または当業者に既知の任意の方法（例えば、化学合成または組み換え発現技術）によって製造することができる。例えば、ＧｅｎＢａｎｋデータベースまたは類似のデータベース、文献刊行物、または通常のクローニングおよびシークエンシングからウイルス抗原または微生物抗原に免疫特異的な抗体コーディングヌクレオチド配列を得ることができる。
【０２８６】
特定の実施形態では、有用なリガンドは、本明細書に開示される方法に従ってウイルス感染または微生物感染を処置または予防するのに有用なものである。ウイルス感染または微生物感染を処置するのに有用な利用可能な抗体の例としては、限定されないが、呼吸器合胞体ウイルス（ＲＳＶ）感染患者を処置するのに有用なヒト化抗−ＲＳＶモノクローナル抗体であるＳＹＮＡＧＩＳ（ＭｅｄＩｍｍｕｎｅ，Ｉｎｃ．，ＭＤ）；ＨＩＶ感染の処置に有用なＣＤ４融合抗体であるＰＲＯ５４２（Ｐｒｏｇｅｎｉｅｓ）；Ｂ型肝炎ウイルスの処置に有用なヒト抗体であるＯＳＴＡＶＩＲ（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）；サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）の処置に有用なヒトＩｇＧ１抗体であるＰＲＯＴＯＶＩＲ（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ，Ｉｎｃ．，ＣＡ）；および抗−ＬＰＳ抗体が挙げられる。
【０２８７】
感染症の処置に有用な他の抗体としては、限定されないが、微生物の病原株（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｅａｅ、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ、Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ、Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ、Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｏｚａｅｎａｓ、Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｒｈｉｎｏｓｃｌｅｒｏｍｏｔｉｓ、Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ  ａｕｒｅｕｓ、Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｏｌｅｒａｅ、Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ（Ｖｉｂｒｉｏ）  ｆｅｔｕｓ、Ａｅｒｏｍｏｎａｓ  ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ、Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｃｅｒｅｕｓ、Ｅｄｗａｒｄｓｉｅｌｌａ  ｔａｒｄａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ、Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｓｅｕｄｏｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｆｌｅｘｎｅｒｉ、Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｏｎｎｅｉ、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐｅｒｔｅｎｕｅ、Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｃａｒａｔｅｎｅｕｍ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｖｉｎｃｅｎｔｉｉ、Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ、Ｌｅｐｔｏｓｐｉｒａ  ｉｃｔｅｒｏｈｅｍｏｒｒｈａｇｉａｅ、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ、Ｆｒａｎｃｉｓｅｌｌａ  ｔｕｌａｒｅｎｓｉｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ａｂｏｒｔｕｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｓｕｉｓ、Ｂｒｕｃｅｌｌａ  ｍｅｌｉｔｅｎｓｉｓ、Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｓｐｐ．、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｐｒｏｗａｚｅｋｉ、Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｔｓｕｔｓｕｇｕｍｕｓｈｉおよびＣｈｌａｍｙｄｉａ  ｓｐｐ．）由来の抗原に対する抗体；病原性真菌（Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ、Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓおよびＨｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）由来の抗原に対する抗体；原虫（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ、Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｔｅｎａｓ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｈｏｍｉｎｉｓ、Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ、Ｔｒｙｏａｎｏｓｏｍａ  ｇａｍｂｉｅｎｓｅ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｒｈｏｄｅｓｉｅｎｓｅ、Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｄｏｎｏｖａｎｉ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｔｒｏｐｉｃａ、Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ  ｂｒａｚｉｌｉｅｎｓｉｓ、Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｖｉｖａｘ、Ｐｌａｓｍ��ｄｉｕｍ  ｆａｌｃｉｐａｒｕｍ、Ｐｌａｓｍｏｄｉｕｍ  ｍａｌａｒｉａ）由来の抗原に対する抗体；またはＨｅｌｍｉｎｉｔｈ（Ｅｎｔｅｒｏｂｉｕｓ  ｖｅｒｍｉｃｕｌａｒｉｓ、Ｔｒｉｃｈｕｒｉｓ  ｔｒｉｃｈｉｕｒａ、Ａｓｃａｒｉｓ  ｌｕｍｂｒｉｃｏｉｄｅｓ、Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ  ｓｐｉｒａｌｉｓ、Ｓｔｒｏｎｇｙｌｏｉｄｅｓ  ｓｔｅｒｃｏｒａｌｉｓ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｊａｐｏｎｉｃｕｍ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｍａｎｓｏｎｉ、Ｓｃｈｉｓｔｏｓｏｍａ  ｈａｅｍａｔｏｂｉｕｍ，およびｈｏｏｋｗｏｒｍｓ）由来の抗原に対する抗体が挙げられる。
【０２８８】
ウイルス疾患を処置するために本発明で有用な他の抗体としては、限定されないが、病原性ウイルスに対する抗原に対する抗体が挙げられ、限定されないが、以下の例が挙げられる：Ｐｏｘｖｉｒｉｄａｅ、Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ、単純ヘルペスウイルス１型、単純ヘルペスウイルス２型、Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ、Ｅｎｔｅｒｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ、インフルエンザウイルス、パラインフルエンザウイルス、おたふく風邪、麻疹、呼吸器合胞体ウイルス、風疹、Ａｒｂｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ、Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ、Ａ型肝炎ウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｅ型肝炎ウイルス、非−Ａ／非−Ｂ型肝炎ウイルス、Ｒｈｉｎｏｖｉｒｉｄａｅ、Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ、ＲｏｔｏｖｉｒｉｄａｅおよびＨｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ  Ｖｉｒｕｓ。
【０２８９】
癌の診断、治療のための有効な細胞標的を開発する試みでは、研究者は、１つ以上の通常の癌性細胞ではない細胞と比較して１つ以上の特定の癌細胞種の表面で特異的に発現する膜貫通または別の腫瘍関連ポリペプチドを同定しようとしてきた。このような腫瘍関連ポリペプチドは、癌性細胞ではない細胞の表面と比較して癌細胞の表面で豊富に発現することが多い。このような腫瘍関連細胞の表面にある抗原ポリペプチドの同定は、抗体に基づく治療によって破壊するために癌細胞を特異的に標的化する能力を高める。
【０２９０】
例示的な実施形態では、リガンド−リンカー−薬物複合体は式ＩＩＩａを有し、ここで、リガンドは、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＢＣＭＡおよびＬｅｗｉｓ  Ｙ抗原の少なくとも１つに結合する抗体Ａｂであり、ｗ＝０、ｙ＝０であり、Ｄは式Ｉｂを有する。式ＩＩＩａの例示的な複合体としては、Ｒ１７が−（ＣＨ２）５−であるものが挙げられる。リガンド単位あたり約２〜約８、または約２〜約６の薬物部分を含有する式ＩＩＩａのこのような複合体（すなわち、ｐが約２〜８、例えば約２〜６の式Ｉａの複合体）も含まれる。この章に記載される構造的特徴の組み合わせを含有する複合体も本発明の化合物の範囲内であると想定される。
【０２９１】
別の実施形態では、リガンド−リンカー−薬物複合体は式ＩＩＩａを有し、ここで、リガンドは、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＢＣＭＡおよびＬｅｗｉｓ  Ｙ抗原の少なくとも１つに結合する抗体Ａｂであり、ｗ＝１、ｙ＝０であり、Ｄは式Ｉｂを有する。Ｒ１７が−（ＣＨ２）５−である式ＩＩＩａの複合体が挙げられる。リガンド単位あたり約２〜約８、または約２〜約６の薬物部分を含有する式ＩＩＩａのこのような複合体（すなわち、ｐが約２〜８、例えば約２〜６の式Ｉａの複合体）も含まれる。この章に記載される構造的特徴の組み合わせを含有する複合体も本発明の化合物の範囲内であると想定される。
【０２９２】
別の実施形態では、リガンド−リンカー−薬物複合体は式ＩＩＩａを有し、ここで、リガンドは、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＢＣＭＡおよびＬｅｗｉｓ  Ｙ抗原の少なくとも１つに結合する抗体Ａｂであり、ｗ＝１、ｙ＝１であり、Ｄは式Ｉｂを有する。Ｒ１７が−（ＣＨ２）５−である式ＩＩＩａの複合体が挙げられる。この章に記載される構造的特徴の組み合わせを含有する複合体も本発明の化合物の範囲内であると想定される。
【０２９３】
組み換え抗体の産生
本発明の抗体は、抗体の合成に有用な当業者に既知の任意の方法（特に化学合成または組み換え発現技術）によって製造することができる。
【０２９４】
抗体、そのフラグメント、誘導体またはアナログの組み換え発現は、抗体をコードする核酸の構築物を必要とする。抗体のヌクレオチド配列が知られている場合、抗体コーディング核酸は、（例えば、Ｋｕｔｍｅｉｅｒら、１９９４，ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  １７：２４２に記載されるように）化学合成されたオリゴヌクレオチドから組み立てられてよく、抗体コーディング配列の一部分を含有する重複オリゴヌクレオチドの合成、オリゴヌクレオチドのアニーリングおよび連結反応、次いで連結したオリゴヌクレオチドの増幅（例えばＰＣＲによる）を含む。
【０２９５】
または、抗体をコードする核酸分子を適切な供給源から作製することができる。特定の抗体をコードする核酸を含有するクローンが入手できないが、抗体の配列は知られている場合、例えば、配列の３’末端および５’末端にハイブリダイズ可能な合成プライマーを用いたＰＣＲ増幅によって、または特定の遺伝子配列に特異的なオリゴヌクレオチドプローブを用いたクローニングによってこの抗体コーディング核酸を適切な供給源（例えば、抗体ｃＤＮＡライブラリまたは免疫グロブリンを発現する任意の組織または細胞から作製されるｃＤＮＡライブラリ）から得ることができる。
【０２９６】
特定の抗原を特異的に認識する抗体（またはこのような免疫グロブリンコーディング核酸をクローニングするためのｃＤＮＡライブラリの供給源）が商業的に利用可能ではない場合、特定の抗原に特異的な抗体は、例えば、非ヒト動物、すなわち適切な動物（例えばウサギまたはマウス）を免疫化してポリクローナル抗体を作製することによって、より好ましくは、モノクローナル抗体を作製することによって、例えばＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７）またはＫｏｚｂｏｒら（１９８３，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２）またはＣｏｌｅら（１９８５  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，ｐｐ．７７−９６）に記載されるように、当該技術分野で既知の任意の方法によって作製することができる。または、抗体のＦａｂ部分を少なくともコードするクローンは、特定の抗原に結合するＦａｂフラグメントのクローンについてＦａｂ発現ライブラリをスクリーニングすることによって（例えば、Ｈｕｓｅら、１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１に記載されるように）、または抗体ライブラリをスクリーニングすることによって（例えば、Ｃｌａｃｋｓｏｎら、１９９１，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４；Ｈａｎｅら、１９９７，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：４９３７を参照）得ることができる。
【０２９７】
抗体の可変ドメインを少なくともコードする核酸配列が得られたら、抗体の定常領域をコードするヌクレオチド配列を含有するベクターに導入することができる（例えば、国際特許出願第ＷＯ８６／０５８０７号；第ＷＯ８９／０１０３６号；および米国特許第５，１２２，４６４号を参照）。完全な抗体分子を発現可能な完全な軽鎖または重鎖を含有するベクターを利用することができる。抗体コーディング核酸を使用して、スルフヒドリル基を含有しないアミノ酸残基を有する鎖内ジスルフィド結合に関与する１つ以上の可変領域システイン残基を置換（または欠失）することが必要なヌクレオチド置換または欠失を導入することができる。ヌクレオチド配列に特定の変異または欠失を導入するための当該技術分野で既知の任意の方法、例えば、限定されないが、化学的突然変異誘発およびインビトロでの部位特異的突然変異誘発法（Ｈｕｔｃｈｉｎｓｏｎら、１９７８，Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．２５３：６５５１）によってこのような修飾を行なうことができる。
【０２９８】
加えて、適切な抗原特異性を有するマウス抗体分子と適切な生態活性を有するヒト抗体分子とをスプライシングすることによって「キメラ抗体」を産生するために開発された技術（例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：８５１−８５５；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒら、１９８４，Ｎａｔｕｒｅ  ３１２：６０４−６０８；Ｔａｋｅｄａら、１９８５，Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４５２−４５４）を使用することができる。キメラ抗体は、異なる部分が異なる動物種から誘導されている分子（例えば、マウスモノクローナル由来の可変領域およびヒト免疫グロブリン定常領域を有する分子）、例えばヒト化抗体である。
【０２９９】
または、一本鎖抗体の産生について記載された技術（米国特許第４，６９４，７７８号；Ｂｉｒｄ，１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２；Ｈｕｓｔｏｎら、１９８８，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３；およびＷａｒｄら、１９８９，Ｎａｔｕｒｅ  ３３４：５４４−５４）を適用して一本鎖抗体を製造することができる。一本鎖抗体は、アミノ酸架橋を介してＦｖ領域の重鎖および軽鎖フラグメントを結合することによって作製され、一本鎖ポリペプチドが得られる。Ｅ．ｃｏｌｉ中の機能性Ｆｖフラグメントのアセンブリのための技術を使用してもよい（Ｓｋｅｒｒａら、１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：１０３８−１０４１）。
【０３００】
特定のエピトープを認識する抗体フラグメントを既知の技術によって作製することができる。例えば、このようなフラグメントとしては、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆａｂフラグメント、Ｆｖフラグメント、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、一本鎖抗体、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−Ｆｃなどが挙げられる。
【０３０１】
抗体コーディング核酸配列が得られたら、抗体を産生するためのベクターを当該技術分野で周知の技術を用いた組み換えＤＮＡ技術によって作製することができる。当業者に周知の方法を使用して、抗体をコードする配列および適切な転写シグナルおよび翻訳制御シグナルを含有する発現ベクターを構築することができる。これらの方法としては、例えば、インビトロ組み換えＤＮＡ技術、合成技術、およびインビボ遺伝子組み換えが挙げられる。例えば、Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９９０，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，２ｎｄ  Ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ；２００１；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，３ｒｄ  ｅｄ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｕｂｌｉｓｈ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎ．Ｙ．）およびＡｕｓｕｂｅｌら編，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｓｅｒｉｅｓ  ｏｆ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ  ｍａｎｕａｌｓ，１９８７−１９９９，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，（著作権）１９９４−１９９  Ｊｏｈｎ  ＷｉｌｅｙおよびＳｏｎｓ，Ｉｎｃ．）に記載の技術を参照。
【０３０２】
抗体のヌクレオチド配列を含む発現ベクターまたは抗体のヌクレオチド配列を従来の技術（例えば、エレクトロポレーション、リポソームのトランスフェクションおよびリン酸カルシウム沈殿）によって宿主細胞に移すことができ、トランスフェクトされた細胞を従来の技術で培養して抗体を得る。特定の実施形態では、抗体の発現は、構成的プロモーター、誘導プロモーターまたは組織特異的なプロモーターで制御される。
【０３０３】
組み換え抗体を発現させるのに使用する宿主細胞は、細菌性細胞（例えばＥｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）または真核細胞のいずれか、特に全組み換え免疫グロブリン分子を発現するものであってよい。特に、哺乳動物細胞（例えばチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ））をベクター（例えば、ヒトサイトメガロウイルス由来の主要な中初期遺伝子プロモーターエレメント）と組み合わせるのが免疫グロブリンの有効な発現系である（Ｆｏｅｃｋｉｎｇら、１９８，Ｇｅｎｅ  ４５：１０１；Ｃｏｃｋｅｔｔら、１９９０，ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ８：２）。
【０３０４】
種々の宿主発現ベクター系を利用して免疫グロブリン抗体を発現させることができる。このような宿主発現系は、抗体のコード配列が産生され、次いで精製されるビヒクルを表すだけではなく、適切なヌクレオチドコード配列を用いて形質転換またはトランスフェクトされるとインサイチュで抗体の免疫グロブリン分子を発言する細胞を表す。これらの例としては、限定されないが、微生物、例えば、免疫グロブリンコード配列を含有する組み換えバクテリオファージＤＮＡ、プラスミドＤＮＡまたはコスミドＤＮＡ発現ベクターで形質転換された細菌（例えば、Ｅ．ｃｏｌｉおよびＢ．ｓｕｂｔｉｌｉｓ）；免疫グロブリンコード配列を含有する組み換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母（例えばＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  Ｐｉｃｈｉａ）；免疫グロブリンコード配列を含有する組み換えウイルス発現ベクター（例えばバキュロウイルス）に感染した昆虫細胞系；組み換えウイルス発現ベクター（例えばカリフラワーモザイクウイルス（ＣａＭＶ）およびタバコモザイクウイルス（ＴＭＶ））に感染したか、または免疫グロブリンコード配列を含有する組み換えプラスミド発現ベクター（例えばＴｉプラスミド）に感染した植物細胞系；または哺乳動物細胞のゲノムから誘導されたプロモーター（例えばメタロチオネインプロモーター）または哺乳動物ウイルスから誘導されたプロモーター（例えば、アデノウイルス後期プロモーター；ワクシニアウイルス７．５Ｋプロモーター）を含有する組み換え発現構築物を有する哺乳動物細胞系（例えば、ＣＯＳ、ＣＨＯ、ＢＨ、２９３、２９３Ｔまたは３Ｔ３細胞）が挙げられる。
【０３０５】
細菌系では、発現する抗体のための意図される用途に基づいて多くの発現ベクターを有利に選択することができる。例えば、このようなタンパク質を大量に産生したい場合、容易に精製される高レベルの融合タンパク質産物の発現を目的としたベクターが望ましいことがある。このようなベクターとしては、限定されないが、Ｅ．ｃｏｌｉ発現ベクターｐＵＲ２７８（Ｒｕｔｈｅｒら、１９８３，ＥＭＢＯ  Ｊ．２：１７９１）が挙げられ、ここで、抗体コーディング配列をフレーム単位でｌａｃ  Ｚコード領域を用いてベクターに個々に連結し、融合タンパク質を産生してよい；ｐＩＮベクター（Ｉｎｏｕｙｅ＆Ｉｎｏｕｙｅ，１９８５，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１３：３１０１−３１０９；Ｖａｎ  Ｈｅｅｋｅ＆Ｓｃｈｕｓｔｅｒ，１９８９，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２４：５５０３−５５０９）など。ｐＧＥＸベクターを使用してグルタチオンＳ−トランスフェラーゼ（ＧＳＴ）を用いて融合タンパク質として外来ポリペプチドを発現させることもできる。一般的に、このような融合タンパク質は可溶性であり、マトリックスグルタチオン−寒天ビーズに吸着および結合させ、遊離グルタチオン存在下で溶出させることによって溶解細胞から容易に精製することができる。ｐＧＥＸベクターをトロンビンまたは因子Ｘａプロテアーゼ開裂部位を含むように設計し、クローン化された標的遺伝子産物をＧＳＴ部分から放出させることができる。
【０３０６】
昆虫系では、Ａｕｔｏｇｒａｐｈａ  ｃａｌｉｆｏｒｎｉｃａ核多角体病ウイルス（ＡｃＮＰＶ）またはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａ  Ｍｅｌａｎｏｇａｓｔｅｒ由来の類似のウイルスをベクターとして使用し、外来遺伝子を発現させることができる。このウイルスをＳｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｒｕｇｉｐｅｒｄａ細胞で成長させる。抗体コーディング配列を個々にウイルスの必須ではない領域（例えば、ポリヘドリン遺伝子）にクローン化することができ、ＡｃＮＰＶプロモーター（例えばポリヘドリンプロモーター）の制御下に置くことができる。
【０３０７】
哺乳動物の宿主細胞では、多くのウイルスに基づく発現系を利用することができる。アデノウイルスを発現ベクターとして使用する場合、目的の抗体コーディング配列をアデノウィルスの転写／翻訳制御複合体、例えば後期プロモーターおよび三分節系リーダー配列（ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ  ｌｅａｄｅｒ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）に連結することができる。このキメラ遺伝子を次いでインビトロまたはインビボでの組換えによってアデノウイルスのゲノムに挿入することができる。ウィルスゲノムの必須でない領域（例えば領域Ｅ１またはＥ３）への挿入により、感染した宿主中で生存可能であり、免疫グロブリン分子を発現し得る組換えウイルスを生じる（例えば、Ｌｏｇａｎ＆Ｓｈｅｎｋ，１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：３５５−３５９参照）。挿入された抗体コーディング配列の効率よい翻訳のためには特異的な開始シグナルも必要とされることがある。これらのシグナルは開始コドンＡＴＧおよび近傍の配列を含む。さらに、全挿入部の翻訳を確実にするためには、開始コドンは所望のコーディング配列と同調していなければならない。これらの外来性の翻訳制御シグナルおよび開始コドンは天然および合成のさまざまな由来のものを用いることができる。発現の効率は、適当な転写エンハンサー要素、転写終結要素などを含めることによって高めることができる（例えば、Ｂｉｔｔｎｅｒら、１９８７，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１５３：５１−５４４参照）。いくつかの実施形態では、ＣＨＥＦ系を用いて抗体を発現させることができる（例えば、米国特許第５，８８８，８０９号；この開示内容は本明細書に参考により組み込まれる）。
【０３０８】
さらに、挿入された配列の発現を調節し、または遺伝子産物を望ましい特定の様式で修飾および加工するような宿主細胞を選択することができる。タンパク産物のそのような修飾（たとえばグリコシル化）およびプロセシング（たとえば切断）は、タンパクの機能にとって重要であり得る。異なる宿主細胞はタンパク質および遺伝子産物の翻訳後のプロセシングおよび修飾のための特徴的で固有の機構を備えている。発現した外来性タンパク質の正しい修飾とプロセシングを確実にするために、適切な細胞株または宿主系を選択することができる。この目的のために、一次転写産物の適切なプロセシング、遺伝子産物のグリコシル化、リン酸化の細胞内機構をもった、真核細胞の宿主細胞を用いることができる。このような哺乳動物細胞としては、限定されないが、ＣＨＯ（例えばＤＧ４４）、ＶＥＲＹ、ＢＨ、ＨｅＬａ、ＣＯＳ、ＭＤＣＫ、２９３、２９３Ｔ、３Ｔ３，ＷＩ３８、ＢＴ４８３、Ｈｓ５７８Ｔ、ＨＴＢ２、ＢＴ２０およびＴ４７Ｄ、ＣＲＬ７０３０およびＨｓ５７８Ｂｓｔが挙げられる。
【０３０９】
組換えタンパク質の長期にわたる大量の生産のためには、典型的には安定した発現が用いられる。例えば、抗体を安定して発現する細胞株を遺伝子操作することができる。ウイルスの複製起点を含む発現ベクターを用いるのではなく、宿主細胞は適当な発現制御要素（例えば、プロモーター、エンハンサー、配列、転写終結要素、ポリアデニル化部位等）によって制御されるＤＮＡおよび選択マーカーによって形質転換させることができる。外来ＤＮＡの導入に続いて、遺伝子操作した細胞を栄養を補強した培地内で１〜２日間生育させ、次いで選択培地に切り替える。組換えプラスミド中の選択マーカーは選択条件に対して耐性を付与し、細胞がプラスミドを安定して染色体中に組込み、増殖してフォーカスを形成し、これにつづくクローン化および細胞株の樹立を助ける。この方法は抗体を発現するような細胞株を遺伝子操作するために用いるのに好都合であり得る。このような遺伝子操作した細胞株は抗体と直接的または間接的に相互作用する腫瘍抗原のスクリーニングおよび評価に特に有益であり得る。
【０３１０】
数多くの選択系は、ヘルペスシンプレックスウィルスチミジンキナーゼ（Ｗｉｇｌｅｒら、１９７７，Ｃｅｌｌ  １１：２２３）、ピホキサンチン−グアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｓｚｙｂａｌｓｋａ＆Ｓｚｙｂａｌｓｋｉ，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ４８：２０２）およびアデニンホスホリボシルトランスフェラーゼ（Ｌｏｗｙら、１９８０，Ｃｅｌｌ  ２２：８１７）遺伝子を、それぞれｔｋ−、ｈｇｐｒｔ−またはａｐｒｔ−細胞で使用できることを含むが、これらに限定されない。さらに、代謝拮抗物質耐性を、以下の遺伝子の選択に基づいて使用することができる：メトトレキセートに対する耐性を与えるＤＨＦＲ（Ｗｉｇｌｒｅら、１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＵＳＡ  ７７：３５７；Ｏ’Ｈａｒｅら、１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８：１５２７）；マイコフェノール酸に対する耐性を与えるｇｐｔ（Ｍｕｌｌｉｇａｎ＆Ｂｅｒｇ，１９８１，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７８：２０７２）；アミノグリコシドＧ−４１８に耐性を与えるｎｅｏ（Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｙ  １２：４８８−５０５；ＷｕおよびＷｕ，１９９１，Ｂｉｏｔｈｅｒａｐｙ  ３：８７−９５；Ｔｏｌｓｔｏｓｈｅｖ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．３２：５７３−５９６；Ｍｕｌｌｉｇａｎ，１９９３，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６０：９２６−９３２；およびＭｏｒｇａｎおよびＡｎｄｅｒｓｏｎ，１９９３，Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６２：１９１−２１７；Ｍａｙ，１９９３，ＴＩＢ  ＴＥＣＨ  １１（５）：１５５−２１５）、およびハイグロマイシンに耐性を与えるｈｙｇｒｏ（Ｓａｎｔｅｒｒｅら、１９８４，Ｇｅｎｅ  ３０：１４７）。組み換えＤＮＡ技術の分野で一般的に知られた使用可能な方法は、Ａｕｓｕｂｅｌら（前出；Ｋｒｉｅｇｌｅｒ，１９９０，Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｎｄ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，ＮＹ；および第１２章および第１３章，Ｄｒａｃｏｐｏｌｉら（編），１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ＮＹ．；Ｃｏｌｂｅｒｒｅ−Ｇａｒａｐｉｎら，１９８１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１５０：１）に記載されている。
【０３１１】
抗体分子の発現レベルは、ベクター増幅によって増加させることができる（総説としては、ＢｅｂｂｉｎｇｔｏｎおよびＨｅｎｔｓｃｈｅｌ，Ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｇｅｎｅ  ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  ｃｌｏｎｅｄ  ｇｅｎｅｓ  ｉｎ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｃｅｌｌｓ  ｉｎ  ＤＮＡ  ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌ．３．（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）を参照）。抗体を発現するベクター系中のマーカーが増幅可能であるとき、宿主細胞の培養物中に存在するインヒビターのレベルの増加は、マーカー遺伝子の複製数を増加させる。増幅された領域は抗体のヌクレオチド配列と関連するので、抗体の産生も増加する（Ｃｒｏｕｓｅら、１９８３，Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．３：２５７を参照）。
【０３１２】
宿主細胞は、２つの発現ベクター（重鎖由来のポリペプチドをコードする第１のベクター、および軽鎖由来のポリペプチドをコードする第２のベクター）で同時トランスフェクトすることができる。これら２つのベクターは同一の選択マーカーを含有することができ、これによって重鎖および軽鎖ポリペプチドの等しい発現を可能にする。あるいは、単一のベクターを使用して重鎖ポリペプチドおよび軽鎖ポリペプチドの両方をコードすることができる。このような状況では、軽鎖は、典型的には、毒性のない重鎖が過剰になるのを避けるために、重鎖の前に配置される（例えば、Ｐｒｏｕｄｆｏｏｔ，１９８６，Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：５２；Ｋｏｈｌｅｒ，１９８０，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ７７：２１９７を参照）。重鎖および軽鎖のためのコード配列は、ｃＤＮＡまたはゲノムＤＮＡを含んでよい。
【０３１３】
抗体分子が組換えにより発現されると、抗体精製分野で既知の任意の方法（例えば、クロマトグラフィー（例えば、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー、特にプロテインＡ後の特異的抗原に対するアフィニティークロマトグラフィー、およびサイズ排除カラムクロマトグラフィー）、遠心分離、差示的溶解度、またはタンパク質の精製のための任意の他の標準的な技術を用いて精製することができる。
【０３１４】
さらに別の例示的な実施形態では、抗体はモノクローナル抗体である。
【０３１５】
抗体の産生
抗−ＣＤ３０抗体を参照して抗体の産生を示すが、当業者には他の標的に対する抗体（例えばＴＮＦレセプターファミリーのメンバー）も同様の様式で産生し、改変することができることは明らかである。抗体を産生するためのＣＤ３０の使用は、単なる例示であり、限定することを意図したものではない。
【０３１６】
抗体の産生のために使用されるＣＤ３０抗原は、例えば、所望のエピトープを含有するＣＤ３０の細胞外領域またはその一部分の可溶性形態であってよい。または、ＣＤ３０を細胞表面で発現する細胞（例えば、Ｌ５４０（Ｔ細胞表現型を有するホジキンリンパ腫から誘導された細胞株）およびＬ４２８（Ｂ細胞表現型を有するホジキンリンパ腫から誘導された細胞株））を使用して抗体を作成することができる。抗体の作成に有用な他のＣＤ３０種は、当業者には明らかである。
【０３１７】
（ｉ）ポリクローナル抗体
ポリクローナル抗体は、好ましくは、関連する抗原およびアジュバントを複数回動物に皮下（ｓｃ）注射または腹腔内（ｉｐ）注射することによって動物中に生じる。二官能薬剤または誘導体化剤（例えば、マレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介して複合体形成）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リジン残基を介して）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（ＲおよびＲ１は異なるアルキル基である））を用いて免疫化されるべき種に免疫原性の関連するタンパク質（例えば、キーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシサイログロブリンまたは大豆トリプシンインヒビター）と抗原との複合体を形成することが有用であり得る。
【０３１８】
例えば、１００μｇまたは５μｇのタンパク質または複合体（それぞれウサギまたはマウスの場合）と３体積部のＦｒｅｕｎｄ完全アジュバントとを混合し、この溶液を複数回経皮注射することによって、動物を抗原、免疫原性複合体または誘導体に対して免疫化する。１ヵ月後、Ｆｒｅｕｎｄ完全アジュバント中にもともとのペプチドまたは複合体の量の１／５〜１／１０含んだものを動物に複数回皮下注射してブーストする。７〜１４日後、この動物を出血させ、抗体力価について血清をアッセイする。抗体力価が一定値になるまで動物をブーストする。典型的には、同じ抗原の複合体を用いて動物をブーストするが、異なるタンパク質と複合体形成し、および／または異なる架橋試薬を介して複合体形成する。タンパク質融合物として組み換え細胞培養物中で複合体を製造することもできる。また、凝集剤（例えばミョウバン）を適切に使用して免疫応答を高める。
【０３１９】
（ｉｉ）モノクローナル抗体
モノクローナル抗体は、実質的に同種の抗体の集合から得られる（すなわち、この集団に含まれる個々の抗体が、天然に少量存在する可能な変異以外は同一である抗体である）。従って、修飾語句「モノクローナル」は、別個の抗体の混合物ではないため、その抗体の特徴を示す。
【０３２０】
例えば、モノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら、１９７５，Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５に最初に記載されたようなハイブリドーマ法を用いて製造してよく、または組み換えＤＮＡ法によって製造してよい（米国特許第４，８１６，５６７号）。
【０３２１】
ハイブリドーマ法では、マウスまたは他の適当な宿主動物（例えばハムスター）を上述と同様に免疫化し、免疫化に使用した蛋白質に対して特異的に結合する抗体を産生するか、または、産生できるリンパ球を誘導する。また、インビトロにおいてリンパ球を免疫化してよい。その後、リンパ球をポリエチレングリコール等の適当な融合剤を用いてミエローマ細胞と融合させハイブリドーマ細胞を形成させる（Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐａｌｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９０−１０３，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，（１９８６）を参照）。
【０３２２】
このようにして製造されたハイブリドーマ細胞を、好ましくは、未融合の親ミエローマ細胞の生育または成長を阻害する１つ以上の基質物質を含む適当な培地に植え、生育する。例えば、もし親ミエローマ細胞がヒポキサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ酵素（ＨＧＰＲＴまたはＨＰＲＴ）を欠く場合、そのハイブリドーマのための培地には、典型的には、ＨＧＲＰＴ欠損細胞の生育を阻止する物質ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンが含まれる（ＨＡＴ培地）。
【０３２３】
好ましいミエローマ細胞は、効率的に融合し、選択された抗体産生細胞によって安定で高いレベルで抗体を産生し、ＨＡＴ培地等の培地に対して感受性の細胞である。これらの中で好ましいミエローマ細胞株は、Ｓａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ  （Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ  ＵＳＡ）から入手可能なＭＯＰＣ−２１およびＭＰＣ−１１マウス腫瘍由来の細胞、およびＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，Ｍａｒｙｌａｎｄ  ＵＳＡ）から入手可能なＳＰ−２またはＸ６３−Ａｇ８−６５３細胞等のマウスミエローマ株である。ヒトミエローマ細胞株およびマウス−ヒトへテロミエローマ細胞株もヒトモノクローナル抗体を産生することが記載されている（例えば、Ｋｏｚｂａｒ，１９８４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３３：３００１；Ｂｒｏｄｅｕｒら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｐｐ．５１−６３（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８７）を参照）。
【０３２４】
ハイブリドーマ細胞が生育する培地を、抗原に対するモノクローナル抗体の産生についてアッセイする。好ましくは、ハイブリドーマ細胞により産生されるモノクローナル抗体の結合特異性を、免疫沈降またはインビトロ結合アッセイ（例えば放射免疫分析（ＲＩＡ）または酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ））により測定する。モノクローナル抗体の結合アフィニティーは、例えば、Ｍｕｎｓｏｎら、１９８０，Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１０７：２２０のＳｃａｔｃｈａｒｄ分析によって決定することができる。
【０３２５】
所望の特異性、アフィニティーおよび／または活性を有する抗体を産生するハイブリドーマ細胞を同定した後、クローンを限定的希釈法によりサブクローニングし、標準的な方法により生育する（Ｇｏｄｉｎｇ，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐａｌｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，ｐｐ．５９−１０３，（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６））。この目的に適した培地は、例えば、Ｄ−ＭＥＭまたはＲＰＩＭ−１６４０培地である。さらに、ハイブリドーマ細胞は、インビボで動物中の腹水腫瘍として生育させてよい。
【０３２６】
サブクローンにより分泌されるモノクローナル抗体は、好適には培地、腹水液、または血清から、従来の免疫グロブリン精製方法（例えば、プロテインＡ−セファロース、ハイドロキシアパタイトクロマトグラフィー、ゲル電気泳動、透析またはアフィニティークロマトグラフィー）により分離される。
【０３２７】
モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の方法（例えば、マウス抗体の重鎖および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを用いる方法）により容易に単離し、配列決定できる。ハイブリドーマ細胞はこのようなＤＮＡの好ましい出発材料である。単離したら、ＤＮＡを発現ベクターに挿入し、Ｅ．ｃｏｌｉ細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞またはトランスフェクトされなければ抗体タンパク質を産生しないミエローマ細胞などの宿主細胞にトランスフェクトし、組換え宿主細胞からモノクローナル抗体を産生させる。抗体をコードするＤＮＡを有する微生物中での組み換え発現の総説としては、Ｓｋｅｒｒａら、１９９３，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２５６−２６２およびＰｌｕｅｃｋｔｈｕｎ，１９９２，Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１−１８８が挙げられる。
【０３２８】
さらなる実施形態では、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、１９９０，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４により記載された技術を用いて製造された抗体ファージライブラリーからモノクローナル抗体または抗体フラグメントを単離することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、１９９１，Ｎａｔｕｒｅ，３５２：６２４−６２８およびＭａｒｋｓら、１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７には、それぞれファージライブラリーを用いたマウス抗体およびヒト抗体の単離について記載されている。その後の文献では、高アフィニティー（ｎＭ範囲の）ヒト抗体のチェーンシャッフリングによる産生が記載されており（Ｍａｒｋｓら、１９９２，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１０：７７９−７８３）、巨大なファージライブラリーを構築するための方法論としてのコンビナトリアル感染およびインビボでの組換えが記載されている（例えば、Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら、１９９３，Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ．Ｒｅｓ．，２１：２２６５−２２６６を参照）。これらの技術も、モノクローナル抗体の単離のために従来のモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術に代えて利用することができる。
【０３２９】
例えば、同種のマウス配列の代わりにヒト重鎖および軽鎖の定常ドメインのコード配列に変えることによってＤＮＡを改変してもよく（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；およびＭｏｒｒｉｓｏｎら、１９８４，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：６８５１を参照）、または非免疫グロブリンポリペプチドのコード配列の全てまたは一部分を免疫グロブリンコード配列に共有結合させることによって改変してもよい。
【０３３０】
典型的には、このような非免疫グロブリンポリペプチドは抗体の定常ドメインと置換されるか、または抗体の１つの抗原結合部位の可変ドメインと置換され、ある抗原に特異性を有する１つの抗原結合部位と、異なる抗原に特異性を有する別の抗原結合部位とを有するキメラ二価抗体を生成する。
【０３３１】
（ｉｉｉ）ヒト化抗体
ヒト化抗体は、非ヒト供給源からこの抗体へ導入された１つ以上のアミノ酸残基を有してよい。これらの非ヒトアミノ酸残基は、しばしば、「輸入」残基と称され、これは、典型的には、「輸入」可変ドメインの残基である。ヒト化は、本質的に、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者の方法に従って（例えば、Ｊｏｎｅｓら、１９８６，Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、１９８８，Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、１９８８，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６を参照）、ヒト抗体の対応する配列を超可変領域の配列に置換することによって行なうことができる。従って、このような「ヒト化」抗体はキメラ抗体であり（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号参照）、インタクトなヒト可変ドメインよりも実質的に少ない部分が非ヒト種由来の対応する配列で置換されている。実際、ヒト化抗体は、典型的には、いくつかの超可変領域の残基と可能ないくらかのＦＲ残基とがげっ歯類抗体中の類似の部位由来の残基で置換されているヒト抗体である。
【０３３２】
ヒト化抗体を作成するのに使用されるヒト可変ドメイン（軽鎖および重鎖）の選択は、抗原性を減らすために重要である。いわゆる「ベストフィット（ｂｅｓｔ−ｆｉｔ）」法にしたがって、げっ歯類抗体の可変ドメインの配列を既知のヒト可変ドメインの配列のライブラリー全体に対してスクリーニングする。次いで、げっ歯類の配列に最も近いヒト配列をヒト化抗体用のヒトフレームワーク領域（ＦＲ）として受け入れる（Ｓｉｍｓら、１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２２９６；Ｃｈｏｔｈｉａら、１９８７，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１）。別の方法は、軽鎖または重鎖の特定のサブグループの全てのヒト抗体のコンセンサス配列から誘導された特定のフレームワーク領域を使用する。いくつかの異なるヒト抗体のために同じフレームワークを使用してよい（例えば、Ｃａｒｔｅｒら、１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８９：４２８５；Ｐｒｅｓｔａら、１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：２６２３参照）。
【０３３３】
別の実施形態では、抗体は、抗原に対する高いアフィニティーおよび他の有益な生物学的性質を保持した状態でヒト化されてよい。ヒト化抗体は、親配列と、親配列およびヒト化配列の三次元モデルを用いた種々の概念的なヒト化産物との分析プロセスによって調製してよい。三次元免疫グロブリンモデルは市販されており、当業者にはよく知られている。コンピュータプログラムが入手可能であり、選択された候補免疫グロブリン配列の可能な三次元構造を示す。これらの表示結果によって、候補免疫グロブリン配列の機能における残基の同様の役割を分析することができる。すなわち、候補免疫グロブリンが抗原に結合する能力に影響を与える残基を分析することができる。この様式で、ＦＲ残基を選択することができ、レシピエントの配列と輸入配列とを組み合わせ、所望の抗体の特徴（例えば、標的抗原に対するアフィニティーの増加）が達成される。一般的に、超可変領域の残基は、抗原の結合に直接関与するか、ほとんど実質的に関与する。
【０３３４】
ヒト化抗体の種々の形態が考慮される。例えば、ヒト化抗体は、抗体フラグメント、例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、一本鎖抗体、ｓｃＦｖ、ｓｃＦｖ−Ｆｃなどであってよい。または、ヒト化抗体は、インタクト抗体（例えばインタクトＩｇＧ１抗体）であってよい。
【０３３５】
（ｉｖ）ヒト抗体
ヒト化の代替例として、ヒト抗体を作成することができる。例えば、免疫化すると、内因性の免疫グロブリンを産生しないヒト抗体の完全なレパートリーを産生することが可能なトランスジェニック動物（例えばマウス）を産生することが可能である。例えば、内因性抗体の産生を完全に阻害するキメラおよび生殖細胞系変異マウス中の抗体重鎖結合領域（ＪＨ）の遺伝子のホモ接合体欠失が記載されている。このような生殖細胞系変異マウス中のヒト生殖細胞系免疫グロブリン遺伝子アレイの移動によって、抗原チャレンジ中にヒト抗体を産生する。例えば、Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９０：２５５１；Ｊａｋｏｂｏｖｉｔｓら、１９９３，Ｎａｔｕｒｅ  ３６２：２５５−２５８；Ｂｒｕｇｇｅｒｍａｎｎら、１９９３，Ｙｅａｒ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏ．７：３３；および米国特許第５，５９１，６６９号、同第５，５８９，３６９号および同第５，５４５，８０７号を参照。
【０３３６】
または、ファージディスプレイ技術（例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、１９９０，Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５３）を使用して、免疫化していないドナー由来の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメインの遺伝子のレパートリーからヒト抗体および抗体フラグメントをインビトロで産生することができる。この技術によれば、抗体Ｖドメイン遺伝子をフィラメント状バクテリオファージ（例えばＭ１３またはｆｄ）の主要または主要ではないコートタンパク質のいずれかにフレーム単位でクローン化し、ファージ粒子の表面に機能性抗体フラグメントとして提示する。フィラメント状粒子がファージゲノムの１本鎖ＤＮＡの複製を含有するため、抗体の機能性に基づく選択によって、これらの性質を示す抗体をコードする遺伝子を選択する。このように、ファージはＢ細胞の性質のいくつかを模倣する。ファージディスプレイを種々のフォーマットで行なうことができ、総説としては、例えば、ＪｏｈｎｓｏｎおよびＣｈｉｓｗｅｌｌ，１９９３，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３：５６４−５７１を参照。Ｖ遺伝子セグメントのいくつかの供給源をファージディスプレイのために使用することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら、１９９１，Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８は、免疫化したマウスの脾臓から誘導したＶ遺伝子の小さなランダムコンビナトリアルライブラリーから多様な種類の抗−オキサゾロン抗体を単離した。免疫化していないヒトドナー由来のＶ遺伝子のレパートリーを構築することができ、多様な種類の抗原に対する抗体（自己抗原を含む）をＭａｒｋｓら、１９９１，Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７）またはＧｒｉｆｆｉｔｈら、１９９３，ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５−７３４に記載されるような技術に本質的にしたがって単離することができる。また、米国特許第５，５６５，３３２号および同第５，５７３，９０５号を参照。上述のように、ヒト抗体をインビトロで活性化されたＢ細胞によって作成してもよい（例えば、米国特許第５，５６７，６１０号および同第５，２２９，２７５号を参照）。ヒト抗−ＣＤ３０抗体は、米国特許出願第２００４−０００６２１５に記載されている。
【０３３７】
（ｖ）抗体フラグメント
抗体フラグメントを産生するための種々の技術が開発されている。従来、インタクト抗体をタンパク分解消化してこれらのフラグメントを誘導してきた（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら、１９９２，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌおよびＢｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１１７；およびＢｒｅｎｎａｎら、１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１を参照）。しかし、今はこれらのフラグメントを組み換え宿主細胞によって直接産生することができる。例えば、抗体フラグメントを上述の抗体ファージライブラリーから単離することができる。または、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントをＥ．ｃｏｌｉから直接回収することができ、化学的にカップリングしてＦ（ａｂ’）２フラグメントを合成することができる（例えば、Ｃａｒｔｅｒら、１９９２，Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７を参照）。別のアプローチによれば、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、組み換え宿主細胞培養物から直接単離することができる。抗体フラグメントを産生するための他の技術は当業者にとって明らかである。他の実施形態では、好まれる抗体は一本鎖Ｆｖフラグメント（ｓｃＦｖ）である。ＷＯ９３／１６１８５；米国特許第５，５７１，８９４号；および米国特許第５，５８７，４５８号を参照。抗体フラグメントは、例えば米国特許第５，６４１，８７０号に記載されるような「線形抗体」であってもよい。このような線形抗体フラグメントは単一特異性または二重特異性であってよい。
【０３３８】
（ｖｉ）二重特異性抗体
二重特異性抗体は、少なくとも２つの異なるエピトープに対する結合特異性を有する抗体である。例示的な二重特異性抗体は、標的タンパク質の２つの異なるエピトープに結合してよい。または、抗体のアームは、標的を発現する細胞に対する細胞防御機構で集中的に作用するようにＩｇＧ（ＦｃγＲ）に対するＦｃレセプター（例えば、ＦｃγＲＩ（ＣＤ６４）、ＦｃγＲＩＩ（ＣＤ３２）およびＦｃγＲＩＩＩ（ＣＤ１６））に結合するアームと結合してよい。二重特異性抗体を使用して細胞毒性薬剤を標的を発現する細胞に局在化させてもよい。
【０３３９】
全長二重特異性抗体の従来の産生は２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対の同時発現に基づいており、この２つの鎖は異なる特異性を有している（例えば、Ｍｉｌｌｓｔｅｉｎら、１９８３，Ｎａｔｕｒｅ  ３０５：５３７−５３９を参照）。免疫グロブリン重鎖および軽鎖の任意の組み合わせのために、これらのハイブリドーマ（クアドローマ）は、１０個の異なる抗体分子の潜在的な混合物を産生し、このうちのたった１個だけが正しい二重特異性構造を有している。正しい分子の精製は、通常はアフィニティークロマトグラフィー工程で行われるがかなり面倒であり、生成物の収量は低い。同様の手順はＷＯ９３／０８８２９におよびＴｒａｕｎｅｃｋｅｒら、１９９１，ＥＭＢＯ  Ｊ．１０：３６５５−３６５９に開示されている。異なるアプローチによれば、所望の結合特異性（抗体−抗原結合部位）を有する抗体可変ドメインを免疫グロブリン定常ドメインの配列に融合する。この融合は好ましくは免疫グロブリン重鎖定常ドメインを用い、この領域はヒンジ、ＣＨ２領域およびＣＨ３領域の少なくとも一部分を含む。軽鎖結合に必要な部位を含有する第１の重鎖定常領域（ＣＨ１）が融合物の少なくとも１つに存在することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合物および所望な場合に免疫グロブリン軽鎖をコードするＤＮＡを別個の発現ベクターに挿入し、適切な宿主有機体に同時トランスフェクトする。これにより、構築物で比率が同じではない３つのポリペプチド鎖が使用される実施形態では、３つのポリペプチドフラグメントの共通部分の調整に大きな柔軟性ができ、収率が最適化される。しかし、比率が同じ少なくとも２つのポリペプチド鎖が高い収率で発現する場合、または比率が何ら特定の優位性を有さない場合には、１つの発現ベクターに２つのポリペプチド鎖または３つ全てのポリペプチド鎖に対するコード配列を挿入することが可能である。
【０３４０】
このアプローチの一実施形態では、二重特異性抗体は、１つのアームに第１の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖と、他のアームにハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（第２の結合特異性を与える）とで構成される。二重特異性分子の半分のたった１つのアームのみに免疫グロブリン軽鎖が存在すると分離しやすいため、この非対称構造によって望ましくない免疫グロブリン鎖の組み合わせから所望の二重特異性化合物を容易に分離できることがわかった。このアプローチはＷＯ９４／０４６９０に開示されている。さらに詳細な二重特異性抗体の作成については、例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、１９８６，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０を参照。
【０３４１】
米国特許第５，７３１，１６８号に記載される別のアプローチによれば、抗体分子対の界面を操作し、組み換え細胞培養物から回収されるヘテロダイマーの割合を最適化することができる。好ましい界面は、抗体定常領域のＣＨ３ドメインの少なくとも一部分を備えている。この方法では、第１の抗体分子の界面由来の１つ以上の小さなアミノ酸側鎖をこれより大きな側鎖（例えばチロシンまたはトリプトファン）と交換する。大きなアミノ酸側鎖を小さなアミノ酸側鎖（例えばアラニンまたはスレオニン）と交換することによって、大きな側鎖と同じまたは似た大きさの相補的な「空洞」を第２の抗体分子の界面に作成する。これにより、他の望ましくない最終生成物（例えばホモダイマー）よりもヘテロダイマーの収率を高めるための機構が提供される。
【０３４２】
抗体フラグメントから二重特異性抗体を作成するための技術も文献に記載されている。例えば、二重特異性抗体を化学結合を用いて調製することができる。Ｂｒｅｎｎａｎら、１９８５，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２２９：８１には、インタクト抗体をタンパク分解により開裂し、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを得る手順が記載されている。これらのフラグメントは、ジチオール錯化剤であるヒ酸ナトリウム存在下で還元され、隣接ジチオールを安定化し、分子間ジスルフィド形成を予防する。次いで、得られたＦａｂ’フラグメントをチオニトロベンゾエート（ＴＮＢ）誘導体に変換する。次いで、Ｆａｂ’−ＴＮＢ誘導体の１つをメルカプトエチルアミンで還元することによって再びＦａｂ’−チオールに変換し、等量の他のＦａｂ’−ＴＮＢ誘導体と混合して二重特異性抗体を得る。得られた二重特異性抗体を酵素を選択的に免疫化するための薬剤として使用することができる。
【０３４３】
最近の開発によりＥ．ｃｏｌｉからのＦａｂ’−ＳＨフラグメントの直接回収が容易になり、化学的にカップリングして二重特異性抗体を得ることができる。Ｓｈａｌａｂｙら、１９９２，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：２１７−２２５は、完全なヒト化二重特異性抗体Ｆ（ａｂ’）２分子の産生を記載している。各Ｆａｂ’フラグメントは、Ｅ．ｃｏｌｉから別個に分泌され、インビトロで直接的に化学カップリングして二重特異性抗体を得る。
【０３４４】
組み換え細胞培養物から直接的に二重特異性抗体フラグメントを製造し、単離する種々の技術も記載されている。例えば、二重特異性抗体はロイシンジッパーを用いて製造されている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、１９９２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８（５）：１５４７−１５５３。Ｆｏｓタンパク質およびＪｕｎタンパク質由来のロイシンジッパーペプチドを、遺伝子融合によって２つの異なる抗体のＦａｂ’部分に結合させた。抗体ホモダイマーをヒンジ領域で還元してモノマーを得て、次いで、再び酸化して抗体ヘテロダイマーを得る。抗体ホモダイマーの産生にこの方法を利用することもできる。Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒら、１９９３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８に記載されている「ダイアボディ」技術は、二重特異性抗体フラグメントを製造するための代替的な機構を提供している。フラグメントは、リンカーによって軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に接続した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含み、同じ鎖にある２つのドメインの間の対形成はリンカーが短すぎるため不可能である。従って、１つのフラグメントのＶＨおよびＶＬドメインは、強制的に別のフラグメントの相補的なＶＨおよびＶＬドメインと対を形成し、２つの抗原結合部位を形成する。一本鎖Ｆｖ（ｓＦｖ）ダイマーを用いることによって二重特異性抗体フラグメントを製造するための別の方法論も報告されている。Ｇｒｕｂｅｒら、１９９４，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５２：５３６８を参照。
【０３４５】
３以上の価数を有する抗体が想定される。例えば、三重特異性抗体を調製することができる。Ｔｕｔｔら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：６０（１９９１）。
【０３４６】
（ｖｉｉ）他のアミノ酸配列の修飾
本明細書に記載の抗体のアミノ酸配列の修飾が想定される。例えば、抗体の結合アフィニティーおよび／または他の生体特性を改良することが望ましい場合がある。抗体核酸に適切なヌクレオチド変化を導入することによって、またはペプチド合成によって抗体のアミノ酸配列変異体を調製する。このような修飾としては、例えば、抗体のアミノ酸配列内の残基の欠失、および／または挿入および／または置換が挙げられる。最終的な構築物が望ましい特徴を有しているような条件で、最終的な構築物を得るために欠失、挿入および置換が任意に組み合わせて行なわれる。アミノ酸の変化は、抗体の翻訳後プロセスを変えることもできる（例えば、グリコシル化部位の数または位置の変更）。
【０３４７】
突然変異誘発にとって好ましい位置である抗体の特定の残基または領域を同定するのに有用な方法は、ＣｕｎｎｉｎｇｈａｍおよびＷｅｌｌｓ，１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４４：１０８１−１０８５によって記載されているように、「アラニンスキャニング突然変異誘発（ａｌａｎｉｎｅ  ｓｃａｎｎｉｎｇ  ｍｕｔａｇｅｎｅｓｉｓ）」と称される。ここでは、残基または標的残基のグループを同定し（たとえば、ａｒｇ、ａｓｐ、ｈｉｓ、ｌｙｓおよびｇｌｕなどの荷電残基）、アミノ酸と抗原との相互反応に影響を与えるため中性または陰性に荷電したアミノ酸（最も好ましくはアラニンまたはポリアラニン）で置換する。ついで、このような置換に対して機能的感受性を示したアミノ酸の位置を、置換の部位にてまたはこの部位に対してさらなるまたは他の置換を導入することにより洗練する。そのため、アミノ酸配列変化を導入する部位は前もって決定するが、変異それ自体の性質は前もって決定する必要はない。例えば、所定部位での突然変異の性能を分析するため、Ａｌａスキャニングまたはランダム突然変異誘発を標的コドンまたは領域で行い、発現された抗体の変種を所望の活性についてスクリーニングする。
【０３４８】
アミノ酸配列挿入としては、長さが１残基から１００以上の残基を含有するポリペプチドまでのアミノ−および／またはカルボキシル−末端融合、並びに単一または複数のアミノ酸残基の配列内挿入が挙げられる。末端挿入の例としては、Ｎ末端メチオニル残基を有する抗体または細胞毒性ポリペプチドに融合した抗体が挙げられる。抗体分子の他の挿入変種としては、抗体の血清半減期を高める酵素（例えば、ＡＤＥＰＴ）またはポリペプチドに対する抗体のＮ末端またはＣ末端への融合が挙げられる。
【０３４９】
他の変種は、アミノ酸置換変種である。これらの変種は、異なる残基で交換された少なくとも１つのアミノ酸残基を抗体分子に有する。置換突然変異誘発のために最も重要な部位は超可変領域を含むが、ＦＲ改変も想定される。
【０３５０】
抗体の生体特性の実質的な改変は、（ａ）置換領域のポリペプチド骨格の構造、例えば、シート状またはらせん状の構造、（ｂ）標的部位での分子の変化または疎水性、または（ｃ）側鎖のかさ高さを維持することに対する効果を顕著に変える置換を選択することによって達成される。天然に存在する残基を共通の側鎖の性質に基づいて以下のグループに分けることができる。
【０３５１】
（１）疎水性：ノルロイシン、ｍｅｔ、ａｌａ、ｖａｌ、ｌｅｕ、ｉｌｅ；
（２）中性で親水性：ｃｙｓ、ｓｅｒ、ｔｈｒ；
（３）酸性：ａｓｐ、ｇｌｕ；
（４）塩基性：ａｓｎ、ｇｉｎ、ｈｉｓ、ｌｙｓ、ａｒｇ；
（５）鎖の配向に影響を与える残基：ｇｌｙ、ｐｒｏ；および
（６）芳香族：ｔｒｐ、ｔｙｒ、ｐｈｅ
同類置換ではない置換は、あるグループのアミノ酸を別のグループのアミノ酸に交換することを必要とする。
【０３５２】
特に好ましい種類の置換変異体は、親抗体（例えば、ヒト化抗体またはヒト抗体）の１つ以上の超可変領域の残基を置換することを必要とする。一般的に、さらなる開発のために選択され得られた変異体は、これを作り出した親抗体よりも優れた生体特性を有する。このような置換変異体を作成するための簡便な様式は、ファージディスプレイを用いたアフィニティー特別変異を含む。簡単に説明すると、いくつかの超可変領域部位（例えば、６〜７部位）を突然変異させて、各部位に可能なあらゆるアミノ酸置換を作成する。このようにして作成した抗体変異体を、各粒子内に封入されたＭ１３の遺伝子ＩＩＩ産物に対する融合物としてフィラメント状ファージ粒子から１価の様式で提示する。次いで、ファージディスプレイされた変異体を本明細書に開示されるように生体活性（例えば、結合アフィニティー）についてスクリーニングする。改変のための候補となる超可変領域部位を同定するために、アラニンスキャニング突然変異誘発を行なって、抗原結合に顕著に関与する超可変領域の残基を同定することができる。代替的に、またはこれに加えて、抗原−抗体複合体の結晶構造を分析し、抗体と抗原との接触点を同定することが有益である場合がある。このような接触残基および隣接残基は、本明細書に詳細に述べられた技術による置換の候補である。このような変異体を作成したら、変異体のパネルを用いて本明細書に記載されるようにスクリーニングし、１つ以上の関連アッセイで優れた性質を有する抗体をさらなる開発のために選択してよい。
【０３５３】
抗体の抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）および／または補体依存性細胞傷害（ＣＤＣ）を高めるために、エフェクター機能に関して本発明の抗体を改変することが望ましいことがある。このことは、抗体のＦｃ領域に１つ以上のアミノ酸置換を導入することによって達成されてよい。代替的に、またはそれに加えて、システイン残基をＦｃ領域に導入し、この領域の鎖間ジスルフィド結合を形成させてよい。このようにして作成したホモダイマー抗体は、改良された内在化能力および／または高められた相補体により媒介される細胞死および抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を有する。Ｃａｒｏｎら、１９９２，Ｊ．Ｅｘｐ  Ｍｅｄ．１７６：１１９１−１１９５およびＳｈｏｐｅｓ，１９９２，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：２９１８−２９２２を参照。抗腫瘍活性が高められたホモダイマー抗体は、Ｗｏｌｆｆら、１９９３，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５３：２５６０−２５６５に記載されるようなヘテロ二官能架橋リンカーを用いて調製されてもよい。または、抗体は、二重Ｆｃ領域を有するように操作され、相補体の溶解およびＡＤＣＣ能が高められてもよい。Ｓｔｅｖｅｎｓｏｎら、１９８９，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  ３：２１９−２３０を参照。
【０３５４】
抗体の血清半減期を高めるために、例えば米国特許第５，７３９，２７７号に記載されるように、サルベージレセプター（ｓａｌｖａｇｅ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ）結合エピトープを抗体（特に抗体フラグメント）に組み込んでよい。本明細書で使用される場合、用語「サルベージレセプター結合エピトープ」は、ＩｇＧ分子のインビボでの血清半減期を高めるのに関与するＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す。
【０３５５】
（ｖｉｉｉ）グリコシル化変異体
本発明のＡＤＣ中の抗体は、定常領域の保存位置でグリコシル化されてもよい（例えば、ＪｅｆｆｅｒｉｓおよびＬｕｎｄ，１９９７，Ｃｈｅｍ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ６５：１１１−１２８；ＷｒｉｇｈｔおよびＭｏｒｒｉｓｏｎ，１９９７，ＴｉｂＴＥＣＨ  １５：２６−３２参照）。免疫グロブリンのオリゴ糖の側鎖は、タンパク質の機能に影響を与え（例えば、Ｂｏｙｄら、１９９６，Ｍｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：１３１１−１３１８；ＷｉｔｔｗｅおよびＨｏｗａｒｄ，１９９０，Ｂｉｏｃｈｅｍ．２９：４１７５−４１８０参照）、立体配座に影響を与え得る糖タンパク質の間の分子内相互作用および糖タンパク質の三次元表面に影響を与える（ＨｅｆｆｅｒｉｓおよびＬｕｎｄ（前出）；ＷｙｓｓおよびＷａｇｎｅｒ，１９９６，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈ．７：４０９−４１６を参照）。オリゴ糖は、特定の認識構造に基づいて特定の分子に対して所与の糖タンパク質を標的にするのに役立ち得る。例えば、ガラクトース欠損ＩｇＧにおいて、オリゴ糖部分がＣＨ２の間の空間から「フリップ」し、末端Ｎ−アセチルグルコサミン残基がマンノースに結合するタンパク質と結合することができるようになることが報告されている。（Ｍａｌｈｏｔｒａら、１９９５，Ｎａｔｕｒｅ  Ｍｅｄ．１：２３７−２４３）。チャイニーズハムスター（ＣＨＯ）細胞で産生したＣＡＭＰＡＴＨ−１Ｈ（ヒトリンパ球のＣＤｗ５２抗原を認識する組み換えヒト化マウスモノクローナルＩｇＧ１抗体）からオリゴ糖の糖ペプチダーゼを除去すると、補体によって媒介される溶解（ＣＭＣＬ）が完全に減少し（Ｂｏｙｄら、１９９６，Ｍｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３２：１３１１−１３１８）、ノイラミニダーゼを用いてシアル酸残基を選択的に除去すると、ＤＭＣＬは失われない。抗体のグリコシル化が抗体依存性細胞媒介性細胞傷害（ＡＤＣＣ）に影響を与えることも報告されている。特に、β（１，４）−Ｎ−アセチルグルコサミニルトランスフェラーゼＩＩＩ（ＧｎＴＩＩＩ）の発現がテトラサイクリンによって制御され、ｂｉｓｅｃｔｉｎｇ  ＧＩｃＮＡｃをグリコシルトランスフェラーゼ触媒により形成するＣＨＯ細胞が、ＡＤＣＣ活性を高めることが報告されている（Ｕｍａｎａら、１９９９，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１７：１７６−１８０）。
【０３５６】
抗体のグリコシル化は、典型的には、Ｎに結合するか、またはＯに結合するかのいずれかである。Ｎに結合するとは、アスパラギン残基の側鎖に対して炭水化物部分が結合することを指す。トリペプチド配列のアスパラギン−Ｘ−セリンおよびアスパラギン−Ｘ−スレオニン（ここで、Ｘはプロリン以外の任意のアミノ酸である）は、アスパラギン側鎖に対する炭水化物部分の酵素による結合の認識配列である。従って、ポリペプチド中にこれらのトリペプチド配列のいずれかが存在すると、グリコシル化部位を生成する可能性がある。Ｏに結合したグリコシル化は、ヒドロキシルアミノ酸（最も一般的にはセリンまたはスレオニン）に対して糖のＮ−アセチルガラクトサミン、ガラクトースまたはキシロースの１つが結合することを指すが、５−ヒドロキシプロリンまたは５−ヒドロキシリジンを使用してもよい。
【０３５７】
抗体のグリコシル化変異体は、抗体のグリコシル化パターンが変更された変異体である。変更とは、抗体中に存在する１つ以上の炭水化物部分を欠失しているか、抗体に１つ以上の炭水化物部分が付加されているか、グリコシル化の組成（グリコシル化パターン）、グリコシル化度などが変わっていることを意味する。
【０３５８】
抗体にグリコシル化部位を付加することは、上述のトリペプチド配列の１つ以上を含有するようにアミノ酸配列を変えることによって簡便に達成される（Ｎに結合したグリコシル化部位の場合）。元々の抗体の配列に対して１つ以上のセリン残基またはスレオニン残基を付加するか、または置換することによっても改変される（Ｏに結合したグリコシル化部位の場合）。同様に、グリコシル化部位の除去は、抗体の天然のグリコシル化部位の内部のアミノ酸を変えることによって達成することができる。
【０３５９】
アミノ酸配列は、通常は、その下にある核酸配列を変える事によって変えられる。これらの方法としては、限定されないが、天然供給源からの単離（天然に存在するアミノ酸配列変異体の場合）またはオリゴヌクレオチドにより媒介される（または部位指向性の）突然変異による調製、ＰＣＲ突然変異および以前に調製された変異体または抗体の変異していないバージョンのカセット変異導入法が挙げられる。
【０３６０】
抗体のグリコシル化（グリコシル化パターンを含む）は、アミノ酸配列またはその下にあるヌクレオチド配列を変えることなく変えられてもよい。グリコシル化は、主に抗体を発現するために使用される宿主細胞に依存する。組み換え糖タンパク質を発現するために潜在的な治療薬として使用される細胞種（例えば抗体）が天然の細胞であることはほとんどないため、抗体のグリコシル化パターンの顕著な変形が予想される。例えば、Ｈｓｅら、１９９７，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２：９０６２−９０７０参照。宿主細胞の選択に加えて、抗体の組み換え産生時のグリコシル化に影響を与える因子としては、成長モード、培地の処方、培養物の密度、酸化、ｐＨ、精製スキームなどが挙げられる。オリゴ糖産生に関与する特定の酵素を導入または過剰発現させることを含む、特定の宿主有機体で達成されるグリコシル化パターンを変えるための種々の方法が提案されている（米国特許第５，０４７，３３５号；同第５，５１０，２６１号；および同第５，２７８，２９９号）。グリコシル化、または特定の種類のグリコシル化は、糖タンパク質から酵素（例えばエンドグリコシダーゼＨ（Ｅｎｄｏ  Ｈ））によって除去することができる。それに加えて、組み換え宿主細胞を遺伝子組み換えする（例えば、特定の多糖類を処理しないようにする）こともできる。これらの技術および類似技術は当該技術分野で周知である。
【０３６１】
抗体のグリコシル化構造は、従来の炭水化物分析技術（レクチンクロマトグラフィー、ＮＭＲ、質量分析法、ＨＰＬＣ、ＧＰＣ、単糖類組成分析、連続酵素消化法、および電荷に基づいてオリゴ糖を分離するための高ｐＨアニオン交換クロマトグラフィーを使用するＨＰＡＥＣ−ＰＡＤを含む）によって容易に分析することができる。分析のためにオリゴ糖を放出させる方法も既知であり、限定されないが、酵素による処理（通常はペプチド−Ｎ−グリコシダーゼ  Ｆ／エンド−β−ガラクトシダーゼを用いる）、主にＯに結合した構造を放出させるための強アルカリ環境を用いた脱離、および無水ヒドラジンを用いてＮおよびＯに結合したオリゴ糖を放出させるための化学的方法が挙げられる。
【０３６２】
リガンド−リンカー−薬物複合体のスクリーニング
トランスジェニック動物および細胞株は、標的タンパク質（例えば、ＣＤ２０、ＣＤ３０、ＣＤ３３、ＣＤ４０、ＣＤ７０、ＢＣＭＡおよびＬｅｗｉｓ  Ｙ）の過剰発現に関与する疾患または障害を予防または治療するための薬物−リンカー−リガンド複合体（例えば抗体薬物複合体（ＡＤＣ））をスクリーニングするのに特に有用である。薬物−リンカー−リガンド複合体をＡＤＣとしてスクリーニングする方法を本明細書に例示する。
【０３６３】
トランスジェニック動物および細胞株は、抗体薬物複合体（ＡＤＣ）をスクリーニングするのに特に有用である。有用なＡＤＣのスクリーニングは、候補ＡＤＣを広範囲の投薬量でトランスジェニック動物に投与する工程と、評価対象の疾患または障害に対するＡＤＣの効果を種々の時間点でアッセイする工程とを含んでもよい。代替的に、またはそれに加えて、適用可能な場合には、疾患の誘発剤に曝す前または同時に薬物を投与することができる。候補ＡＤＣを連続的または個々にスクリーニングしてもよく、または培地または高スループットスクリーニングフォーマットで並行してスクリーニングしてもよい。疾患または障害の予防または治療に対する有用性についてＡＤＣがスクリーニングされる速度は、合成またはスクリーニング法（データの検出／測定／分析を含む）の速度によってのみ制限される。
【０３６４】
一実施形態は、（ａ）安定な腎細胞癌細胞株由来の細胞を非ヒト動物に移植する工程と、（ｂ）ＡＤＣ候補薬物をこの非ヒト動物に投与する工程と、（ｃ）この候補物が移植した細胞株からの腫瘍形成を阻害する能力を決定する工程とを含むスクリーニング方法である。
【０３６５】
別の実施形態は、（ａ）安定なホジキン病細胞株由来の細胞とＡＤＣ候補薬物とを接触させる工程と、（ｂ）このＡＤＣ候補物がＣＤ４０のリガンド活性化を遮蔽する能力を評価する工程とを含むスクリーニング方法である。
【０３６６】
別の実施形態は、（ａ）安定なホジキン病細胞株由来の細胞とＡＤＣ候補薬物とを接触させる工程と、（ｂ）このＡＤＣ候補物が細胞死を誘発する能力を評価する工程とを含むスクリーニング方法である。一実施形態では、ＡＤＣ候補物がアポトーシスを誘発する能力が評価される。
【０３６７】
一実施形態は、（ａ）安定な癌細胞株由来の細胞を非ヒト動物に移植する工程と、（ｂ）ＡＤＣ候補薬物をこの非ヒト動物に投与する工程と、（ｃ）この候補物が移植した細胞株からの腫瘍形成を阻害する能力を決定する工程とを含むスクリーニング方法である。
【０３６８】
別の実施形態は、（ａ）安定な癌細胞株由来の細胞とＡＤＣ候補薬物とを接触させる工程と、（ｂ）このＡＤＣ候補物が細胞死を誘発する能力を評価する工程とを含むスクリーニング方法である。一実施形態では、ＡＤＣ候補物がアポトーシスを誘発する能力が評価される。
【０３６９】
一実施形態では、候補ＡＤＣは、広範囲の投薬量にわたってトランスジェニック動物に投与し、この化合物に対するこの動物の生理学的応答を経時的に評価することによってスクリーニングされる。投与は、評価される化合物の化学的性質に依存して、経口投与、または適切な注射によってであってよい。いくつかの場合には、化合物の効力を高める共因子と組み合わせて化合物を投与することが適している場合がある。被検体のトランスジェニック動物から誘導された細胞株を使用して種々の障害を処置するのに有用な化合物をスクリーニングする場合、試験化合物を適切な時間に細胞培地に添加し、化合物に対する細胞の応答を適切な生化学アッセイおよび／または組織学的アッセイを用いて経時的に評価する。いくつかの場合には、化合物の効力を高める共因子と組み合わせて目的の化合物を培地に適用することが適している場合がある。
【０３７０】
したがって、異常な細胞機能と相関関係にあり、腫瘍の成長と因果関係がある細胞増殖および／または分化の原因である標的タンパク質を特異的に標的とし、標的タンパク質に結合する薬物−リンカー−リガンド複合体（例えばＡＤＣ）を同定するためのアッセイが本明細書で提供される。
【０３７１】
目的の抗原を特異的に標的とする成長阻害化合物を同定するために、トランスジェニック動物から誘導された目的の抗原を過剰発現する癌細胞の成長を阻害する化合物をスクリーニングしてもよく、米国特許第５，６７７，１７１号に記載のアッセイを行なうことができる。このアッセイによれば、目的の抗原を過剰発現する癌細胞を、１０％ウシ胎児血清、グルタミンおよびペニシリンストレプトマイシンを追加したＦ１２およびＤＭＥＭ培地の１：１混合物中で成長させる。３５ｍｍ細胞培地皿（２ｍｌ／３５ｍｍの皿）に細胞を２０，０００細胞接種し、試験化合物を種々の濃度で添加する。６日後、細胞の数を未処理の細胞と比較し、電子機器のＣＯＵＬＴＥＲ（商標）セルカウンターを用いて計測する。細胞の成長を約２０〜１００％または約５０〜１００％阻害する化合物は、成長阻害化合物として選択してよい。
【０３７２】
細胞死を誘発する化合物を選択するために、例えば、ＰＩ、トリパンブルーまたは７ＡＡＤ吸収によって示されるような膜の完全性の喪失をコントロールと比較して評価してよい。ＰＩ吸収アッセイは、トランスジェニック動物の目的の腫瘍組織から単離した細胞を使用する。このアッセイによれば、Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ（Ｄ−ＭＥＭ）：Ｈａｍ’ｓ  Ｆ−１２（５０：５０）に１０％加熱不活化ＦＢＳ（Ｈｙｃｌｏｎｅ）および２ｍＭ  Ｌ−グルタミンを追加した培地で細胞を培養する。従って、このアッセイを相補体および免疫エフェクター細胞の不在下で行なう。１００×２０ｍｍ皿に３×１０６／皿の密度で細胞を接種し、一晩接続させた。次いで、培地を除去し、新しい培地単独か、または種々の濃度の化合物を含有する培地と交換する。細胞を３日間インキュベートする。各処理に続き、単一層をＰＢＳで洗浄し、トリプシン化によって分離させる。次いで、細胞を４℃で１２００ｒｐｍで５分間遠心分離し、冷たいＣａ２＋結合バッファー（１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ、ｐＨ７．４、１４０ｍＭ  ＮａＣｌ、２．５ｍＭ  ＣａＣｌ２）３ｍｌにペレットを再懸濁させ、３５ｍｍのストレーナーをかぶせた１２×７５ｍｍ管（１ｍｌ／管、処置群ごとに３つの管）に分け、細胞の塊を除去する。次いで、管にＰＩ（１０μｇ／ｍｌ）を入れる。ＦＡＣＳＣＡＮ（商標）フローサイトメータおよびＦＡＣＳＣＯＮＶＥＲＴ（商標）ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いてサンプルを分析してよい。ＰＩ吸収によって決定されるような細胞死を統計学的に有意なレベルまで誘発する化合物は、細胞死誘発化合物として選択してよい。
【０３７３】
アポトーシスを誘発する化合物を選択するために、トランスジェニック動物の目的の腫瘍組織から確立された細胞を用いたアネキシン結合アッセイを行なう。上の章に記載されているように細胞を培養し、皿に接種する。次いで、培地を除去し、新しい培地単独か、または抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を１０μｇ／ｍｌ含有する培地と交換する。３日間インキュベートした後、単一層をＰＢＳで洗浄し、トリプシン化によって分離させる。次いで、細胞死アッセイについて上述のように細胞を遠心分離し、冷たいＣａ２＋結合バッファーで再懸濁させ、管に分ける。次いで、管に標識化したアネキシン（例えば、アネキシンＶ−ＦＩＴＣ）（１μｇ／ｍｌ）を入れる。ＦＡＣＳＣＡＮ（商標）フローサイトメータおよびＦＡＣＳＣＯＮＶＥＲＴ（商標）ＣｅｌｌＱｕｅｓｔソフトウェア（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いてサンプルを分析してよい。コントロールに対してアネキシン結合を統計学的に有意なレベルまで誘発する化合物は、アポトーシス誘発化合物として選択される。
【０３７４】
インビトロでの細胞増殖アッセイ
一般的に、薬物−リンカー−リガンド複合体（例えば抗体薬物複合体（ＡＤＣ））の細胞毒性活性または細胞増殖抑制活性を以下のように測定する：細胞倍地中でレセプタータンパク質を有する哺乳動物細胞を複合体の抗体にさらし、この細胞を約６時間〜約５日の期間培養し、細胞生存率を測定する。セルベースのインビトロアッセイを用いて、薬物−リンカー−リガンド複合体による生存率（増殖）、細胞毒性およびアポトーシスの誘発（カスパーゼ活性）を測定する。ＡＤＣとしての薬物−リンカー−リガンド複合体のスクリーニングを本明細書に例示する。
【０３７５】
抗体薬物複合体のインビトロでの効力を細胞増殖アッセイで測定する（実施例参照）。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）Ｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  Ｃｅｌｌ  Ｖｉａｂｉｌｉｔｙ  Ａｓｓａｙは市販されており（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）、Ｃｏｌｅｏｐｔｅｒａルシフェラーゼの組み換え発現に基づく均一系アッセイ法である（米国特許第５，５８３，０２４号；同第５，６７４，７１３号および同第５，７００，６７０号）。この細胞増殖アッセイは、存在するＡＴＰ（代謝的に活性な細胞の指標である）を定量することによって培養物中の生存可能な細胞の数を決定する（Ｃｒｏｕｃｈら、１９９３，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈ．１６０：８１−８８、米国特許第６，６０２，６７７号）。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイを９６ウェルフォーマットで行ない、自動化高スループットスクリーニング（ＨＴＳ）に修正する（Ｃｒｅｅら（１９９５）Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇｓ  ６：３９８−４０４）。均一系アッセイの手順は、単一の試薬（ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）試薬）を血清を追加した培地で培養した細胞に直接添加する工程を含む。細胞の洗浄、培地の除去および複数回のピペットを用いた工程は必要ない。この系では、試薬を添加し、混合した１０分後に３８４ウェルフォーマットでわずか１５細胞／ウェルを検出する。細胞をＡＤＣで連続的に処理するか、またはＡＤＣで処理し、ＡＤＣと分離してよい。一般的に、細胞を短時間（すなわち３時間）処理すると、連続的に処理した細胞と同じ効力を示す。
【０３７６】
均一系の「添加−混合−測定」フォーマットによって細胞溶解物が得られ、存在するＡＴＰの量に比例する発光シグナルが生成する。ＡＴＰの量は、培養物中に存在する細胞の数に直接比例する。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ（登録商標）アッセイは、ルシフェラーゼ反応によって得られる「白熱型（ｇｌｏｗ−ｔｙｐｅ）」の発光シグナルを発し、このシグナルは、細胞の種類および使用される培地に依存して、一般的に５時間よりも長い半減期を有する。生存可能な細胞は、相対発光単位（ＲＬＵ）に反映される。基質である甲虫ルシフェリンは、組み換えホタルルシフェラーゼによって酸化的に脱カルボン酸し、同時にＡＴＰをＡＭＰに変換し、光子を発生する。半減期が長くなると、試薬の注入器を使用する必要がなくなり、複数のプレートを連続的またはバッチモードで加工するのに柔軟性が得られる。この細胞増殖アッセイを種々のマルチウェルフォーマット（例えば９６ウェルまたは３８４ウェルのフォーマット）で使用することができる。照度計またはＣＣＤカメラ撮像装置でデータを記録することができる。発光の出力値は、相対光単位（ＲＬＵ）で経時的にあらわされる。
【０３７７】
【化１５７】
2009500424.tif 000090
抗体薬物複合体の抗増殖効果を、細胞増殖、異なる乳癌細胞株に対する上述のインビトロ細胞死アッセイによって測定することができる。
【０３７８】
インビボでの血漿クリアランスおよび安定性
薬物−リンカー−リガンド複合体（例えばＡＤＣ）の薬物動態的血漿クリアランスおよび安定性を、ラットおよびカニクイザルで経時的に観察することができる。ＡＤＣとしての薬物−リンカー−リガンド複合体のスクリーニングを本明細書に例示する。
【０３７９】
げっ歯類の毒性
抗体薬物複合体およびＡＤＣを含まないコントロールである「ビヒクル」を急性毒性ラットモデルで評価する。雄雌Ｓｐｒａｇｕｅ−ＤａｗｌｅｙラットをＡＤＣで処置し、種々の臓器に対する影響を観察し、分析することによってＡＤＣの毒性を観察する。全体的な観察としては、体重の変化、病変および出血の徴候が挙げられる。臨床病理学パラメータ（血清化学および血液学）、組織病理および剖検を投薬した動物で行なう。ＡＤＣを投薬した後の動物で、ビヒクルのみを投薬した動物と比較して体重減少または体重変化は全身毒性または局所毒性の全体的かつ総合的な指標である。
【０３８０】
肝毒性は、肝臓の酵素の増加、有糸分裂数およびアポトーシスの数の増加および肝細胞壊死数の増加によって測定される。血液リンパ毒性は、白血球の減少、主要な顆粒球（好中球）の減少および／または血小板の減少、およびリンパ器官の関与、すなわち、萎縮またはアポトーシス活性によって観察される。毒性は、胃腸管の病変（例えば、有糸分裂数およびアポトーシスの数の増加および変性腸炎）によっても示される。
【０３８１】
試験される肝臓の損傷の指標となる酵素としては、以下のものがある：
ＡＳＴ（アスパルテートアミノトランスフェラーゼ）
−局在化：細胞質；肝臓、心臓、骨格筋、腎臓
−肝臓：血漿比率は７０００：１
−Ｔ１／２：１７時間
ＡＬＴ（アラニンアミノトランスフェラーゼ）
−局在化：細胞質；肝臓、腎臓、心臓、骨格筋
−肝臓：血漿比率は３０００：１
−Ｔ１／２：４２時間；日周変動
ＧＧＴ（ｇ−グルタミルトランスフェラーゼ）
−局在化：高い分泌能力または吸収能力を有する細胞の血漿膜；肝臓、腎臓、腸
−肝臓の損傷の予測は困難；通常は胆管の障害で上昇
カニクイザルの毒性／安全性
ラットの毒性／安全性試験と同様に、カニクイザルをＡＤＣで処置し、肝臓の酵素を測定し、種々の臓器に対する影響を観察し、分析する。全体的な観察としては、体重の変化、病変および出血の徴候が挙げられる。臨床病理学パラメータ（血清化学および血液学）、組織病理および剖検を投薬した動物で行なう。
【０３８２】
化合物の合成
以下のスキーム５〜１６に概略が記載された合成手順を用いて例示的な化合物および例示的な複合体を製造することができる。以下に詳細に記載されるように、薬物およびリガンドに対する結合のための反応部位を有するリンカーを用いて例示的な化合物または例示的な複合体を簡便に調製することができる。１つの態様では、リンカーは、リガンド（例えば限定されないが抗体）に存在する求核基に対して反応性の求電子基を有する反応部位を有する。抗体上の有用な求核基としては、限定されないが、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基およびアミノ基が挙げられる。抗体の求核基のヘテロ原子はリンカー上の求電子基に対して反応性であり、リンカー単位と共有結合を形成する。有用な求電子基としては、限定されないが、マレイミド基およびハロアセトアミド基が挙げられる。求電子基は、抗体結合のための簡便な部位を提供する。
【０３８３】
別の実施形態では、リンカーは、抗体に存在する求電子基に対して反応性の求核基を有する反応部位を有する。抗体上の有用な求電子基としては、限定されないが、アルデヒドおよびケトンのカルボニル基が挙げられる。リンカーの求核基のヘテロ原子は、抗体上の求電子基と反応し、抗体単位と共有結合を形成することができる。リンカー上の有用な求核基としては、限定されないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレートおよびアリールヒドラジドが挙げられる。抗体上の求電子基は、リンカーに結合するための簡便な部位を提供する。
【０３８４】
カルボン酸官能基およびクロロホルメート官能基は、薬物の第２のアミノ基と反応してアミノ結合を形成可能なため、リンカーとの有用な反応部位でもある。さらに、反応部位として有用なのは、薬物のアミノ基（限定されないがＮ−メチルバリン）と反応してカルバメート結合を形成可能なリンカー上のカルボネート官能基（例えば、限定されないが、ｐ−ニトロフェニルカルボネート）である。典型的には、２つ以上のアミノ酸および／またはペプチドフラグメントとの間のペプチド結合を形成することによってペプチド系薬物を調製することができる。このようなペプチド結合は、例えば、ペプチド合成の分野で周知の液相合成法に従って調製することができる（ＳｃｈｒｏｅｄｅｒおよびＬｕｅｂｋｅ，「Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐｐ７６−１３６，１９６５，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓを参照）。
【０３８５】
求電子性マレイミド基を有する具体的なストレッチャーの合成を以下のスキーム８〜９に示す。リンカーを合成するのに有用な一般的な合成法をスキーム１０に記載する。スキーム１１は、ｖａｌ−ｃｉｔ基、求電子性マレイミド基およびＰＡＢ自己犠牲型スペーサー基を有するリンカー単位の構築を示す。スキーム１２は、ｐｈｅ−ｌｙｓ基、求電子性マレイミド基を有し、ＰＡＢ自己犠牲型スペーサー基を有するものと有さないもののリンカーの合成を示す。スキーム１３は、薬物−リンカー化合物を合成するための一般的な概略をあらわし、スキーム１４は、薬物−リンカー化合物を調製する代替経路をあらわす。スキーム１５は、ＢＨＭＳ基を含有する分枝リンカーの合成を示す。スキーム１６は、抗体を薬物−リンカー化合物に結合して薬物−リンカー−抗体複合体を形成させる概略を示し、スキーム１４は、例えば、限定されないが抗体あたり２つまたは４つの薬物を有する薬物−リンカー−抗体複合体の合成を示す。
【０３８６】
以下に詳細に記載されるように、例示的な複合体は、薬物およびリガンドに結合する２つ以上の反応部位を有するリンカーを用いて簡便に調製される。１つの態様では、リンカーは、リガンド（例えば抗体）に存在する求核基に対して反応性の求電子基を有する反応部位を有する。抗体上の有用な求核基としては、限定されないが、スルフヒドリル基、ヒドロキシル基およびアミノ基が挙げられる。抗体の求核基のヘテロ原子はリンカー上の求電子基に対して反応性であり、リンカー単位と共有結合を形成する。有用な求電子基としては、限定されないが、マレイミド基およびハロアセトアミド基が挙げられる。求電子基は、抗体結合のための簡便な部位を提供する。
【０３８７】
別の実施形態では、リンカーは、リガンド（例えば抗体）に存在する求核基に対して反応性の求電子基を有する反応部位を有する。抗体上の有用な求電子基としては、限定されないが、アルデヒドおよびケトンのカルボニル基が挙げられる。リンカーの求核基のヘテロ原子は、抗体上の求電子基と反応し、抗体単位と共有結合を形成することができる。リンカー上の有用な求核基としては、限定されないが、ヒドラジド、オキシム、アミノ、ヒドラジン、チオセミカルバゾン、ヒドラジンカルボキシレートおよびアリールヒドラジドが挙げられる。抗体上の求電子基は、リンカーに結合するための簡便な部位を提供する。
【０３８８】
さらに別の実施形態では、薬物を含有する芳香族ヒ素酸化物は、近位にジチオールを含有するリガンド単位に直接結合し、安定なヒ素−ジチオール環状構造を形成することができる。
【０３８９】
薬物部分の合成
典型的には、２つ以上のアミノ酸および／またはペプチドフラグメントとの間のペプチド結合を形成することによってペプチド系薬物を調製することができる。このようなペプチド結合は、例えば、ペプチド合成の分野で周知の液相合成法に従って調製することができる（Ｅ．ＳｃｈｒｏｅｄｅｒおよびＫ．Ｌｕｅｂｋｅ，「Ｔｈｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅｓ」，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐｐ７６−１３６，１９６５，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ参照）。
【０３９０】
オーリスタチン／ドラスタチン薬物部分を以下の一般的な方法に従って調製してよい：米国特許第５，６３５，４８３号；米国特許第５，７８０，５８８号；Ｐｅｔｔｉｔら、１９８９，Ｊ．Ａｍ．Ｃｈａｎ．Ｓｏｃ．１１１：５４６３−５４６５；Ｐｅｔｔｉｔら、１９９８，Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  １３：２４３−２７７；およびＰｅｔｔｉｔら、１９９６，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓ．１５：８５９−８６３。
【０３９１】
一実施形態では、薬物は、ほぼ化学量論量のジペプチドおよびトリペプチドを好ましくはワンポット反応で適切な縮合条件下で混合することによって調製される。このアプローチを以下のスキーム５〜７に示す。
【０３９２】
スキーム５は、Ｎ末端トリペプチド単位Ｆの合成を示す。このＮ末端トリペプチド単位Ｆは、式Ｉｂの薬物化合物を合成するための有用な中間体である。
【０３９３】
スキーム５
【０３９４】
【化１５８】
2009500424.tif 000091
スキーム５に示されるように、保護されたアミノ酸Ａ（ＰＧがアミン保護基を表す場合、Ｒ４は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−アリール、Ｘ１−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）から選択され、Ｒ５は、Ｈおよびメチルから選択されるか；またはＲ４およびＲ５はこれらが結合している炭素原子と環を形成して式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ここで、ＲａおよびＲｂは独立して、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよびＣ３〜Ｃ８炭素環から選択され、ｎは２、３、４、５および６から選択される）をｔ−ブチルエステルＢ（Ｒ６は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルから選択され；Ｒ７は、水素、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、アリール、Ｘ１−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）から選択される）に適切なカップリング条件下（例えばＰｙＢｒｏｐおよびジイソプロピルエチルアミン存在下またはＤＣＣを用いる）でカップリングさせる（例えば、Ｍｉｙａｚａｋｉら、１９９５，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．４３（１０）：１７０６−１７１８を参照）。
【０３９５】
適切な保護基ＰＧおよび保護基を用いてアミノ基を保護する適切な合成方法は当該技術分野で周知である。例えば、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ参照。例示的な保護されたアミノ酸ＡはＰＧ−Ｉｌｅであり、好ましくはＰＧ−Ｖａｌであり、他の適切な保護されたアミノ酸としては、限定されないが、ＰＧ−シクロヘキシルグリシン、ＰＧ−シクロヘキシルアラニン、ＰＧ−アミノシクロプロパン−１−カルボン酸、ＰＧ−アミノイソ酪酸、ＰＧ−フェニルアラニン、ＰＧ−フェニルグリシンおよびＰＧ−ｔｅｒｔ−ブチルグリシンが挙げられる。Ｚは例示的な保護基である。Ｆｍｏｃは別の例示的な保護基である。例示的なｔ−ブチルエステルＢはドライソロイシンｔ−ブチルエステルである。
【０３９６】
ジペプチドＣは、例えば、クロマトグラフィーを用いて精製することができ、次いで、例えば、ＰＧがベンジルオキシカルボニルである場合にＨ２およびエタノール中の１０％  Ｐｄ−Ｃを用いて、またはＦｍｏｃ保護基を除去するにはジエチルアミンを用いて脱保護することができる。得られたアミンＤは、容易にアミノ酸ＢＢ（Ｒ１は、−Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよび−Ｃ３〜Ｃ８炭素環から選択され；Ｒ２は、ＨおよびＣ１〜Ｃ８アルキルから選択されるか；またはＲ１およびＲ２はこれらが結合している窒素原子と環を形成して式−（ＣＲａＲｂ）ｎ−を有し、ＲａおよびＲｂは独立して、−Ｈ、−Ｃ１〜Ｃ８アルキルおよび−Ｃ３〜Ｃ８炭素環から選択され、ｎは２、３、４、５および６から選択され、；Ｒ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ３〜Ｃ８炭素環、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、アリール、Ｘ１−アリール、Ｘ１−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）、Ｃ３〜Ｃ８複素環およびＸ１−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）から選択される）とペプチド結合を形成する。Ｎ，Ｎ−ジアルキルアミノ酸はＢＢの例示的なアミノ酸であり、例えば市販のＮ，Ｎ−ジメチルバリンである。他のＮ，Ｎ−ジアルキルアミノ酸は、既知の手順を用いた還元的ビス−アルキル化によって調製することができる（例えば、Ｂｏｗｍａｎら、１９５０，Ｊ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１３４２−１３４０参照）。Ｆｍｏｃ−Ｍｅ−Ｌ−ＶａｌおよびＦｍｏｃ−Ｍｅ−Ｌ−グリシンは、Ｎ−モノアルキル誘導体を合成するのに有用な２つの例示的なアミノ酸ＢＢである。アミンＤおよびアミノ酸ＢＢは、塩基としてトリエチルアミンを用いてカップリング試薬ＤＥＰＣと反応させるとトリペプチドＥが得られる。次いで、ＥのＣ末端保護基をＨＣｌを用いて脱保護し、式Ｆのトリペプチド化合物が得られる。
【０３９７】
スキーム５に示される具体的なＤＥＰＣカップリング方法論およびＰｙＢｒｏｐカップリング方法論について、それぞれ以下の一般的な手順Ａおよび一般的な手順Ｂで概略を説明する。触媒的水素化によってＣＢＺ保護されたアミンを脱保護するための代表的な方法論について以下の一般的な手順Ｃで概略を説明する。
【０３９８】
一般的な手順Ａ：ＤＥＰＣを用いたペプチド合成
Ｎ保護されているかまたはＮ，Ｎ−二置換されたアミノ酸またはペプチドＤ（１．０ｅｑ．）およびアミンＢＢ（１．１ｅｑ．）を非プロトン性有機溶媒（例えば、ジクロロメタン（０．１〜０．５Ｍ））で希釈する。次いで、有機塩基（例えば、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン（１．５ｅｑ．））を添加し、次いでＤＥＰＣ（１．１ｅｑ．）を添加する。得られた溶液をＨＰＬＣまたはＴＬＣでモニタリングしながら、好ましくはアルゴン下で１２時間まで攪拌する。溶媒を室温で減圧下で除去し、例えば、ＨＰＬＣまたはフラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカゲルカラム）で粗生成物を精製する。関連するフラクションを合わせ、減圧下で濃縮してトリペプチドＥを得て、これを減圧下で一晩乾燥する。
【０３９９】
一般的な手順Ｂ：ＰｙＢｒｏｐを用いたペプチド合成
アミノ酸Ｂ（１．０ｅｑ．）（場合によりカルボキシル保護基を有する）を非プロトン性有機溶媒（例えば、ジクロロメタンまたはＤＭＥ）で希釈し、０．５〜１．０ｍＭの濃度の溶液を得て、次いでジイソプロピルエチルアミン（１．５ｅｑ．）を添加する。Ｆｍｏｃ−またはＣＢＺ−保護されたアミノ酸Ａ（１．１ｅｑ．）を固体として一度に添加し、次いで得られた混合物にＰｙＢｒｏｐ（１．２ｅｑ．）を添加する。ＴＬＣまたはＨＰＬＣで反応をモニタリングし、一般的な手順Ａに記載されるのと同様の作業手順を行なう。
【０４００】
一般的な手順Ｃ：触媒的水素化によるＺ−除去
ＣＢＺ保護されたアミノ酸またはペプチドＣを適切な容器（例えば厚肉丸底フラスコ）中でエタノールで希釈し、０．５〜１．０ｍＭの濃度の溶液を得る。１０％  Ｐｄ／Ｃ（５〜１０％  ｗ／ｗ）を添加し、反応混合物を水素雰囲気下に置く。ＨＰＬＣを用いて反応の進行をモニタリングし、一般的に１〜２時間以内に反応は終了する。反応混合物を前洗浄したセライトパッドでろ過し、ろ過後にセライトを再び極性有機溶媒（例えばメタノール）で洗浄する。溶出溶液を減圧下で濃縮して残渣を得て、これを有機溶媒（好ましくはトルエン）で希釈する。次いで、有機溶媒を減圧下で除去し、脱保護されたアミンＣを得る。
【０４０１】
スキーム６は、式ＫのＣ末端ジペプチドを製造するのに有用な方法および式Ｋのジペプチドと式Ｆのトリペプチドとをカップリングして式Ｉｂの薬物化合物を製造する方法を示す。この方法は、酸に不安定なカルボキシル保護基（好ましくはジメトキシベンジル基）を有するフェニルアラニン交換部分Ｈに適用可能である。
【０４０２】
スキーム６
【０４０３】
【化１５９】
2009500424.tif 000092
スキーム５および６に示されるように、ペプチド化学のために周知の縮合薬剤（例えばＤＥＰＣ）を用いて、トリエチルアミン存在下、Ｎ保護された修飾アミノ酸ＰＧ−ドラプロリン（Ｇ）と式Ｈのアミンとを縮合させることによってジペプチドＫを容易に調製することができる。ドラプロリンの適切なＮ保護された基としては、限定されないが、Ｆｍｏｃ−保護基が挙げられる。
【０４０４】
次いで、一般的な手順Ｄを用いて式Ｋのジペプチドを式Ｆのトリペプチドとカップリングして式ＬのＦｍｏｃ保護された薬物化合物を製造することができ、これを一般的な手順Ｅを用いて脱保護し、式（Ｉｂ）の薬物化合物を得ることができる。
【０４０５】
一般的な手順Ｄ：薬物合成
ジペプチドＫ（１．０ｅｑ．）およびトリペプチドＦ（１ｅｑ．）の混合物を非プロトン性有機溶媒（例えばジクロロメタン）で希釈して０．１Ｍ溶液を形成し、次いで強酸（例えばトリフルオロ酢酸）（１／２  ｖ／ｖ）を添加し、得られた混合物を窒素雰囲気下０℃で２時間攪拌する。ＴＬＣまたは好ましくはＨＰＬＣを用いて反応をモニタリングすることができる。溶媒を減圧下で除去し、得られた残渣を好ましくはトルエンを用いて２回共沸させて乾燥させる。得られた残渣を高減圧下で１２時間乾燥し、非プロトン性有機溶媒（例えばジクロロメタン）で希釈する。次いで、有機塩基（例えばトリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミン（１．５ｅｑ．））を添加し、残基の化学官能性に依存してＰｙＢｒｏｐ（１．２ｅｑ．）またはＤＥＰＣ（１．２ｅｑ．）のいずれかを添加する。ＴＬＣまたはＨＰＬＣのいずれかで反応混合物をモニタリングし、反応が終了したら、一般的な手順Ａに記載されるのと類似または同じ操作手順で反応を行う。
【０４０６】
一般的な手順Ｅ：ジエチルアミンを用いたＦｍｏｃ除去
Ｆｍｏｃ保護された薬物Ｌを非プロトン性有機溶媒（例えばジクロロメタン）で希釈し、得られた溶液にジエチルアミン（１／２  ｖ／ｖ）を添加する。ＴＬＣまたはＨＰＬＣで反応の進行をモニタリングし、典型的には２時間以内に反応は終了する。反応混合物を減圧下で濃縮し、得られた残渣を好ましくはトルエンを用いて共沸させて乾燥し、次いで高減圧下で乾燥して、脱保護されたアミノ基を有する薬物Ｉｂを得る。このように、上述の方法は、本発明で使用可能な薬物を製造するのに有用である。
【０４０７】
または、薬物化合物は、スキーム６ａ（以下に示す）に示されるような当該技術分野で周知の標準的なＦｍｏｃ化学を用いた固相ペプチド合成によって簡便に調製することができる（例えば、Ｎｏｖａｂｉｏｃｈｅｍ（登録商標）ｃａｔａｌｏｇｕｅ  ２００６／２００７，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｎｏｔｅｓを参照）。例えば、十分に確立された手順でＦｍｏｃ−ＯＳｕを用いて保護されていないアミノ酸からＦｍｏｃ保護されたアミノ酸を調製することができる（例えば、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ｐ．５０６）。
【０４０８】
スキーム６ａ．固相合成経路
【０４０９】
【化１６０】
2009500424.tif 000093
酸に不安定な適切な樹脂（好ましくは２−クロロトリチル樹脂）にあらかじめ組み込まれた市販ではないアミノ酸は、一般的な手順ＳＰ（ａ）に記載されたような２−クロロトリチルクロリド樹脂に組み込むことができる。組み込まれた量は、分光学的Ｆｍｏｃ定量アッセイで算出することができる。クロロトリチル樹脂にあらかじめ組み込まれた市販のアミノ酸の組み込まれた濃度（ｍｍｏｌ／ｇ）は、一般的なＳＰ（ｂ）に記載されるように算出することができる。次いで、適切なカップリング剤（好ましくはＨＡＴＵ／ＤＩＥＡ）を用いてＦｍｏｃ−ドラプロリンをカップリングさせ、Ｆｍｏｃ脱保護し、その後、Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌトリペプチドとカップリングすることによって、第１のアミノ酸が組み込まれた樹脂にペプチドを組み込むことができる。固相カップリング経路は当該技術分野で十分に確立されており、一般的な手順ＳＰ（ｃ）に記載されている。ペプチドを最終的に脱保護し、樹脂からの開裂を一般的な手順ＳＰ（ｄ）に従って容易に行なうことができる。
【０４１０】
一般的な手順ＳＰ（ａ）。樹脂に組み込まれた量
Ｆｍｏｃ−アミノ酸（０．８４ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）およびＤＩＥＡ（５８５μＬ、３．３６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）に懸濁させる。得られた混合物を２−クロロトリチルクロリド樹脂（５００ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ、１．４ｍｍｏｌ／ｇ）を含有する１０ｍＬシリンジに添加する。混合物を室温で６時間混ぜる。次いで、この樹脂をろ過し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＥＡ（１７：２：１；４×５ｍＬ）、ＭｅＯＨ（１×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（２×５ｍＬ）、エチルエーテル（４×５ｍＬ）で洗浄し、減圧下で２時間乾燥させる。次いで、この樹脂を減圧下で一晩放置し、樹脂ＳＰ１を得る。
【０４１１】
組み込まれた量をＦｍｏｃ定量法によって算出する。既知量（４．４ｍｇ）のＳＰ１樹脂を１０ｍＬ容量フラスコに秤量する。このフラスコに２０％ピペリジン／ＤＭＦ（２ｍＬ）を移す。混合物を手で時々混ぜながら１時間開裂させる。このフラスコにＤＭＦ（８ｍＬ）を移し、全量を１０ｍＬにする。２０％ピペリジン／ＤＭＦ１０ｍＬを１０ｍＬ容量フラスコに入れ、ブランク溶液を調製する。ブランク溶液で分光光度計をゼロに設定する。吸光度を３０１ｎｍで測定し、組み込まれた濃度を以下の式によって得る。
【０４１２】
組み込まれた量（ｍｍｏｌ／ｇ）＝Ａ３０１×１０ｍＬ／７８００×ｗｔ
Ａ３０１は３０１ｎｍでの吸光度であり、７８００はピペリジン（ｐｉｐｅｒｄｉｎｅ）−フルオレノン付加物の吸光係数であり、ｗｔは使用した樹脂の重量（ｍｇ）である。Ｆｍｏｃ定量は、一般的に２ッ組で行なわれる。
【０４１３】
一般的な手順ＳＰ（ｂ）。市販のあらかじめ組み込まれた樹脂のＦｍｏｃ定量法
Ｆｍｏｃ−Ｃｌ（２５９ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）に溶解し、０．５Ｍ希釈溶液を作製する。この溶液をアミノ酸−２−クロロトリチル樹脂（０．８６ｍｍｏｌ／ｇ、０．０２１５ｍｍｏｌ）を含有する３ｍＬのプラスチックシリンジに移す。この混合物を２時間混ぜる。この樹脂をろ過し、ＤＭＦ（２×５ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２（２×５ｍＬ）およびエチルエーテル（２×５ｍＬ）で洗浄し、減圧下で２時間乾燥させる。この樹脂をＫａｉｓｅｒアミン試験に付す。陰性の結果が得られた（遊離アミンが完全に保護されている）場合、一般的な手順ＳＰ（ａ）で記載されるようにＦｍｏｃ定量法を行なって組み込まれた濃度を得る。
【０４１４】
一般的な手順ＳＰ（ｃ）。ＨＡＴＵを用いた固相ペプチドカップリング
２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液（５ｍＬ）をＳＰ１樹脂を含有するシリンジに入れ、混合物を２時間混ぜる。樹脂をろ過し、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）およびエチルエーテル（４×５ｍＬ）で洗浄し、減圧下で２時間乾燥させる。
【０４１５】
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ（２７８ｍｇ、０．６８０ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２５９ｍｇ、０．６８０ｍｍｏｌ、２ｅｑ．）を無水ＤＭＦ（５ｍＬ）およびＤＩＥＡ（２３７μＬ、１．３６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）に溶解する。得られた混合物をＨ−アミノ酸−２−クロロトリチル樹脂（５５５．６ｍｇ、０．３４０ｍｍｏｌ）を含有する１０ｍＬプラスチックシリンジに移す。混合物を室温で一晩混ぜる。Ｋａｉｓｅｒアミン試験および少量の樹脂が開裂した材料のＬＣＭＳ分析（２％ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２を用いた）で反応の終了を判断する。樹脂をろ過し、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）およびエチルエーテル（４×５ｍＬ）で洗浄し、減圧下で２時間乾燥させる。
【０４１６】
２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液（５ｍＬ）をＦｍｏｃ−Ｄａｐ−アミノ酸−２−クロロトリチル樹脂を含有するシリンジに添加し、混合物を２時間混ぜる。この樹脂をろ過し、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）およびエチルエーテル（４×５ｍＬ）で洗浄し、減圧下で２時間乾燥させる。
【０４１７】
Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−ＯＨ（５１０ｍｇ、０．６８０ｍｍｏｌ、２ｅｑ．）およびＨＡＴＵ（２５９ｍｇ、０．６８０ｍｍｏｌ、２ｅｑ．）を無水ＤＭＦ（５ｍＬ）およびＤＩＥＡ（２３７μＬ、１．７０ｍｍｏｌ、５ｅｑ．）に懸濁させる。得られた混合物をＨ−Ｄａｐ−アミノ酸−２−クロロトリチル樹脂を含有する１０ｍＬプラスチックシリンジに移す。混合物を６時間混ぜる。少量の樹脂が開裂した材料のＬＣＭＳ分析（２％ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２を用いた）で反応の終了を判断する。この樹脂をろ過し、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）およびエチルエーテル（４×５ｍＬ）で洗浄し、減圧下で２時間乾燥させる。
【０４１８】
一般的な手順ＳＰ（ｄ）。樹脂の最終的な脱保護および開裂
２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液（５ｍＬ）をＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−アミノ酸−２−クロロトリチル樹脂を含有するシリンジに入れ、混合物を２時間混ぜる。この樹脂をろ過し、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）およびエチルエーテル（４×５ｍＬ）で洗浄し、減圧下で２時間乾燥させる。必要な場合には、樹脂を減圧下に一晩放置してさらに乾燥させることができる。
【０４１９】
２％ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）溶液をＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−アミノ酸−２−クロロトリチル樹脂を含有する１０ｍＬプラスチックシリンジに移し、混合物を室温で５分間混ぜる。ろ液を１００ｍＬ丸底フラスコに集める。このプロセスを３回繰り返す。ろ液を蒸発させると、白色固体が残る。ペプチドＩｂを分取ＨＰＬＣで単離することができる。
【０４２０】
薬物−リンカー合成
本発明の薬物−リンカー化合物を調製するために、薬物をリンカーの反応部位と反応させる。一般的に、リンカーは、スペーサー単位（−Ｙ−）およびストレッチャー単位（−Ａ−）の両方が存在する構造を有することができる。
【０４２１】
【化１６１】
2009500424.tif 000094
または、リンカーは、スペーサー単位（−Ｙ−）が存在しない構造を有することができる。
【０４２２】
【化１６２】
2009500424.tif 000095
リンカーは、ストレッチャー単位（−Ａ−）およびスペーサー単位（−Ｙ−）が両方とも存在しない構造を有することもできる。
【０４２３】
【化１６３】
2009500424.tif 000096
リンカーは、アミノ酸単位（Ｗ）およびスペーサー単位（−Ｙ−）が両方とも存在しない構造を有することもできる。
【０４２４】
【化１６４】
2009500424.tif 000097
一般的に、適切なリンカーは、場合によりストレッチャー単位に結合し、場合によりスペーサー単位に結合したアミノ酸単位を有する。反応部位１はスペーサーの末端に存在し、反応部位２はストレッチャーの末端に存在する。スペーサー単位が存在しない場合、反応部位１はアミノ酸単位のＣ末端に存在する。
【０４２５】
例示的な実施形態では、反応部位１は薬物の窒素原子と反応性であり、反応部位２はリガンドのスルフヒドリル基と反応性である。反応部位１および２は異なる官能基と反応性であり得る。
【０４２６】
別の例示的な実施形態では、反応部位２はリガンドのリジンのアミノ基と反応性である。
【０４２７】
本発明の１つの態様では、反応部位１は
【０４２８】
【化１６５】
2009500424.tif 000098
である。
【０４２９】
別の態様では、反応部位１は
【０４３０】
【化１６６】
2009500424.tif 000099
である。
【０４３１】
さらに別の態様では、反応部位１は、下式
【０４３２】
【化１６７】
2009500424.tif 000100
を有するｐ−ニトロフェニルカルボネートである。
【０４３３】
１つの態様では、反応部位２はチオール受容基（ｔｈｉｏｌ−ａｃｃｅｐｔｉｎｇ  ｇｒｏｕｐ）である。適切なチオール受容基としては、下式
【０４３４】
【化１６８】
2009500424.tif 000101
（式中、Ｘは脱離基をあらわし、好ましくは、Ｏ−メシル、Ｏ−トシル、−Ｃｌ、−Ｂｒまたは−Ｉを表すか；または下式
【０４３５】
【化１６９】
2009500424.tif 000102
を有するマレイミド基を表す。）
を有するハロアセトアミドが挙げられる。
【０４３６】
有用なリンカーは、商業的な供給業者（例えば、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｉｎｃ．（Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ））から入手することができるか、または以下のスキーム８〜１０でまとめたように調製することができる。
【０４３７】
スキーム８
【０４３８】
【化１７０】
2009500424.tif 000103
（式中、Ｘは−ＣＨ２−または−ＣＨ２ＯＣＨ２−であり；Ｘが−ＣＨ２−の場合にｎは０〜１０の整数であるか、またはＸが−ＣＨ２ＯＣＨ２−の場合にｎは１〜１０の整数である。）
スキーム９に示される方法では、Ｍｉｔｓｕｎｏｂｕ条件下でマレイミドとグリコールとを混合し、ポリエチレングリコールマレイミドストレッチャーを製造し（例えば、Ｗａｌｋｅｒ，１９９５，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６０，５３５２−５参照）、その後、ｐ−ニトロフェニルカルボネート反応部位基を組み込む。
【０４３９】
スキーム９
【０４４０】
【化１７１】
2009500424.tif 000104
（式中、Ｅは−ＣＨ２−または−ＣＨ２ＯＣＨ２−であり；ｅは０〜８の整数である。）
または、ＰＥＧ−マレイミドおよびＰＥＧ−ハロアセトアミドストレッチャーは、Ｆｒｉｓｃｈら、１９９６，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．７：１８０−１８６によって記載されるように調製することができる。
【０４４１】
スキーム１０は、マレイミドストレッチャー基を含有し、場合によりｐ−アミノベンジルエーテル自己犠牲型スペーサーを含有するリンカー単位の一般的な合成を示す。
【０４４２】
スキーム１０
【０４４３】
【化１７２】
2009500424.tif 000105
（式中、Ｑは、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；ｍは０〜４の整数であり；ｎは０〜１０の整数である。）
既知の有機合成技術を利用して以下に記載されるようにＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｂｏｕｌｄｅｒ，ＣＯ）から市販の中間体を用いて有用なストレッチャーをリンカーに組み込んでよい。
【０４４４】
スキーム１１および１２に記載されるように以下の中間体とアミノ酸単位のＮ末端とを反応させることによって式（ＩＩＩａ）
【０４４５】
【化１７３】
2009500424.tif 000106
（式中、ｎは１〜１０の整数であり、Ｔは−Ｈまたは−ＳＯ３Ｎａである）
【０４４６】
【化１７４】
2009500424.tif 000107
（式中、ｎは０〜３の整数である）
【０４４７】
【化１７５】
2009500424.tif 000108
のストレッチャーをリンカーに組み込むことができる。
【０４４８】
以下の中間体とアミノ酸単位のＮ末端とを反応させることによって式（ＩＩＩｂ）
【０４４９】
【化１７６】
2009500424.tif 000109
（式中、Ｘは−Ｂｒまたは−Ｉである）；および
【０４５０】
【化１７７】
2009500424.tif 000110
のストレッチャー単位をリンカーに導入することができる。
【０４５１】
以下の中間体とアミノ酸単位のＮ末端とを反応させることによって式（ＩＶ）
【０４５２】
【化１７８】
2009500424.tif 000111
のストレッチャー単位をリンカーに導入することができる。
【０４５３】
以下の中間体とアミノ酸単位のＮ末端とを反応させることによって式（Ｖａ）
【０４５４】
【化１７９】
2009500424.tif 000112
のストレッチャー単位をリンカーに導入することができる。
【０４５５】
他の有用なストレッチャーを既知の手順にしたがって合成してよい。以下の式に示されるアミノオキシストレッチャーをＪｏｎｅｓら、２０００，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４１（１０）：１５３１−１５３３；およびＧｉｌｏｎら、１９６７，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ２３（１１）：４４４１−４４４７に記載の手順にしたがってハロゲン化アルキルをＮ−Ｂｏｃ−ヒドロキシルアミンで処理することによって調製することができる。
【０４５６】
【化１８０】
2009500424.tif 000113
（式中、−Ｒ１７−は、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８炭素環−、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）−、−アリーレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−アリーレン−、−アリーレン−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）−、−（Ｃ３〜Ｃ８炭素環）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−Ｃ３〜Ｃ８複素環−、−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）−、−（Ｃ３〜Ｃ８複素環）−Ｃ１〜Ｃ１０アルキレン−、−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−，および−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｒ−ＣＨ２−から選択され；ｒは１〜１０の整数である。）
以下の式に示されるイソチオシアネートストレッチャーをＡｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍ．，８７（１４）：５１７（１９７５）に記載されるようにイソチオシアネートカルボン酸クロリドから調製してよい。
【０４５７】
【化１８２】
2009500424.tif 000114
（式中、−Ｒ１７−は本明細書に記載されるとおりである）
スキーム１１は、マレイミドストレッチャーを有し、場合によりｐ−アミノベンジル自己犠牲型スペーサーを有するｖａｌ−ｃｉｔジペプチドリンカーを得る方法を示す。
【０４５８】
スキーム１１
【０４５９】
【化１８２】
2009500424.tif 000115
（式中、Ｑは、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；ｍは０〜４の整数である。）
スキーム１２は、マレイミドストレッチャー単位およびｐ−アミノベンジル自己犠牲型スペーサー単位を有するｐｈｅ−ｌｙｓ（Ｍｔｒ）ジペプチドリンカー単位の合成を示す。出発物質ＡＤ（ｌｙｓ（Ｍｔｒ））は市販されている（Ｂａｃｈｅｍ，Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ）か、またはＤｕｂｏｗｃｈｉｋら、１９９７  Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ３８：５２５７−６０によって調製することができる。
【０４６０】
スキーム１２
【０４６１】
【化１８３】
2009500424.tif 000116
（式中、Ｑは、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；ｍは０〜４の整数である。）
スキーム１３に示されるように、リンカーを式（Ｉｂ）の薬物化合物のアミノ基と反応させ、アミノ基またはカルバメート基を含有し、薬物単位がリンカー単位に結合した薬物−リンカー化合物を合成することができる。反応部位１がカルボン酸基である場合、リンカーＡＪの場合と同様に、ＨＡＴＵまたはＰｙＢｒｏｐと適切なアミン塩基とを用いてカップリング反応を行い、薬物単位とリンカー単位との間にアミド結合を含有する薬物−リンカー化合物ＡＫを得ることができる。反応部位１がカルボネートである場合、リンカーＡＬの場合と同様に、ＤＭＦ／ピリジン混合物中のＨＯＢｔを用いてリンカーを薬物にカップリングさせ、薬物単位とリンカー単位との間にカルバメート結合を含有する薬物−リンカー化合物ＡＭを得ることができる。
【０４６２】
または、反応部位１が良好な脱離基（例えばリンカーＡＮのように）である場合、リンカーを求核置換プロセスで薬物のアミン基とカップリングさせ、薬物単位とリンカー単位との間にアミン結合（ＡＯ）を含有する薬物−リンカー化合物を得ることができる。
【０４６３】
薬物をリガンドに結合して薬物−リンカー化合物を合成するのに有用な具体的な方法をスキーム１３に示し、概略を一般的な手順Ｇ〜Ｈに記載する。
【０４６４】
スキーム１３
【０４６５】
【化１８４】
2009500424.tif 000117
一般的な手順Ｇ：ＨＡＴＵを用いたアミド形成
薬物（Ｉｂ）（１．０ｅｑ．）およびカルボン酸反応部位を含有するＮ保護されたリンカー（１．０ｅｑ．）を適切な有機溶媒（例えばジクロロメタン）で希釈し、得られた溶液をＨＡＴＵ（１．５ｅｑ．）および有機塩基（好ましくはピリジン）（１．５ｅｑ．）で処理する。反応混合物を不活性雰囲気下、好ましくはアルゴン雰囲気下で６時間攪拌し、ＨＰＬＣを用いて反応混合物をモニタリングする。反応混合物を濃縮し、得られた残渣をＨＰＬＣで精製し、式ＡＫのアミドを得る。
【０４６６】
手順Ｈ：ＨＯＢｔを用いたカルバメート形成
ｐ−ニトロフェニルカルボネート反応部位（１．１ｅｑ．）を有するリンカーＡＬおよび薬物（Ｉｂ）（１．０ｅｑ．）の混合物を非プロトン性有機溶媒（例えばＤＭＦ）で希釈し、濃度５０〜１００ｍＭの溶液を得て、この得られた溶液をＨＯＢｔ（０．２ｅｑ．）で処理し、不活性雰囲気下（好ましくはアルゴン雰囲気下）に置く。反応混合物を１５分間攪拌し、次いで有機塩基（例えばピリジン（１／４ｖ／ｖ））を添加し、反応プロセスをＨＰＬＣでモニタリングする。典型的には、リンカーは１６時間以内に消費される。次いで、反応混合物を減圧下で濃縮し、得られた残渣を例えばＨＰＬＣで精製し、カルバメートＡＭを得る。
【０４６７】
一般的な手順Ｓ：リンカーと薬物との間のアミド結合形成
カルボン酸を含有するリンカー（３０ｍｇ）および無水ＤＭＦ（１０μｌ）を不活性雰囲気下（好ましくはアルゴン雰囲気下）に置き、ドライアイスで約５分間冷却する。この混合物に、塩化オキサリル（１ｍＬ）をシリンジで滴下した。典型的には数分後、この混合物を室温まで加温し、時々手で攪拌しながら３０分間放置する。揮発物を減圧下で除去する。残渣を無水ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）に再懸濁させ、溶媒を減圧下で除去する。残渣を減圧ポンプで一晩乾燥させリンカーＡＮを得る。
【０４６８】
塩化アシルＡＮを無水ＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）に懸濁させる。薬物Ｉｂ（０．００６ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４μｌ、約４ｅｑ．）を無水ＣＨ２Ｃｌ２（１００μｌ）に懸濁させ、混合物を氷浴で典型的には約１０分間冷却する。この混合物に、ＣＨ２Ｃｌ２中の塩化アシル１５０μｌ（約１．１ｅｑ．）をシリンジで添加する。氷上で１５分間経過後、反応混合物を室温まで加温し、攪拌をさらに約２時間続ける。ＲＰ−ＨＰＬＣで反応の進行をモニタリングすることができる。次いで、溶媒を減圧下で除去する。残渣をＤＭＳＯ（０．５ｍＬ）に懸濁させる。水（１００μｌ）を添加し、０．５時間後、混合物を例えば分取ＨＰＬＣで精製して薬物−リンカーＡＯを得る。
【０４６９】
一般的な手順Ｔ：Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルリンカー−薬物の調製
スキーム１３ａは、薬物単位とリンカーとの間のアミド結合形成を介するＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを含有するリンカー−薬物化合物ＡＡ２の調製例を示す。この手順は、遊離カルボン酸基を含有しない薬物単位にとって、または酸に不安定なエステル（好ましくはジメトキシベンジルエステル）として保護されたカルボン酸基を有する薬物にとって特に有用である。
【０４７０】
スキーム１３ａ
【０４７１】
【化１８５】
2009500424.tif 000118
薬物（Ｉｂ）（１．０ｅｑ．）および適切な環状無水物（好ましくはグルタル酸無水物）（１．０ｅｑ．）を適切な有機溶媒（例えばジクロロメタン）で希釈し、得られた溶液を有機塩基（好ましくはＤＩＥＡ）（３ｅｑ．）で処理する。反応混合物を不活性雰囲気下、好ましくはアルゴン雰囲気下で２４時間攪拌し、ＨＰＬＣを用いて反応混合物をモニタリングする。反応生成物ＡＡ１をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーを用いて単離する。減圧乾燥した物質ＡＡ１およびＮ，Ｎ’−ジスクシンイミジルカルボネート（３ｅｑ．）を適切な有機溶媒（例えばジクロロメタン）で希釈し、得られた溶液を有機塩基（好ましくはＤＩＥＡ）（３ｅｑ．）で処理する。反応混合物を不活性雰囲気下、好ましくはアルゴン雰囲気下で２４時間攪拌し、ＨＰＬＣを用いて反応混合物をモニタリングする。反応生成物ＡＡ２をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーを用いて単離する。必要な場合、薬物−リンカーＡＡ２の酸保護基を適切な処理によって（好ましくはジメトキシベンジルエステルについてはジクロロメタン中の１％ＴＦＡを用いて）除去することができる。
【０４７２】
薬物−リンカー化合物を調製する代替方法の概要をスキーム１４に示す。スキーム１４の方法を用いて、ストレッチャー単位が接続していない部分的なリンカー単位（例えばＺＡ）に薬物を接続する。これにより、Ｆｍｏｃ保護されたＮ末端を有するアミノ酸単位を有する中間体ＡＰが得られる。次いで、Ｆｍｏｃ基を除去し、得られたアミン中間体ＡＱをＰｙＢｒｏｐまたはＤＥＰＣを触媒として用いたカップリング反応によってストレッチャー単位に接続する。ブロモアセトアミドストレッチャーＡＲまたはＰＥＧマレイミドストレッチャーＡＳのいずれかを含有する薬物−リンカー化合物の構築をスキーム１４に示す。
【０４７３】
スキーム１４
【０４７４】
【化１８６】
2009500424.tif 000119
（式中、Ｑは、−Ｃ１〜Ｃ８アルキル、−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ８アルキル）、−ハロゲン、−ニトロまたは−シアノであり；ｍは０〜４の整数である。）
リジン反応性のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルリンカー−薬物を調製するための一般的な方法論の適用例をスキーム１４ａに示す。
【０４７５】
スキーム１４ａ
【０４７６】
【化１８７】
2009500424.tif 000120
Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルリンカー−薬物の代替的な調製法
中間体ＡＱ（１ｅｑ．）をピリジンに懸濁し、ジスクシンイミジルスベレート（５ｅｑ）のピリジン懸濁物にこの混合物を滴下する。次いで、反応混合物を不活性雰囲気下、好ましくはアルゴン雰囲気下で４時間攪拌し、ＨＰＬＣを用いて反応混合物をモニタリングする。次いで、ピリジンを減圧下で除去し、残渣を適切な有機溶媒（例えばジクロロメタン）に懸濁させ、薬物−リンカーＡＱ１をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーを用いて単離する。必要な場合、薬物のカルボキシル保護基を適切な処理によって（好ましくはジメトキシベンジルエステルについてはジクロロメタン中の１％ＴＦＡを用いて）除去することができる。
【０４７７】
分枝スペーサーを含有するリンカー単位を調製するのに有用な方法論をスキーム１５に示す。
【０４７８】
スキーム１５
【０４７９】
【化１８８】
2009500424.tif 000121
スキーム１５は、マレイミドストレッチャー単位およびビス（４−ヒドロキシメチル）スチレン（ＢＨＭＳ）単位を有するｖａｌ−ｃｉｔジペプチドリンカーの合成を示す。ＢＨＭＳ中間体（ＡＷ）の合成は、従来の手順から改良されており（例えば、国際特許出願第ＷＯ９８／１３０５９号（Ｆｉｒｅｓｔｏｎｅら）およびＣｒｏｚｅｔら、１９８５，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．２６：５１３３−５１３４を参照）、出発物質として市販のジエチル（４−ニトロベンジル）ホスホネート（ＡＴ）および市販の２，２−ジメチル−１，３−ジオキサン−５−オン（ＡＵ）を用いる。リンカーＡＹおよびＢＡをスキーム９に記載される方法論を用いて中間体ＡＷから調製することができる。
【０４８０】
樹枝状リンカー（ｄｅｎｔｒｉｔｉｃ  ｌｉｎｋｅｒ）
リンカーは、分枝する多官能リンカー部分を介して２個以上の薬物部分をリガンド（例えば、限定されないが抗体）に共有結合するために樹枝型リンカーであってよい（例えば、Ｓｕｎら、２００２，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  １２：２２１３−２２１５；Ｓｕｎら、２００３，Ｂｉｏｏｒｇａｎｉｃ＆Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １１：１７６１−１７６８を参照）。樹枝状リンカーは、抗体に対する薬物のモル比（すなわち、組み込まれた量）を大きくすることができ、これは薬物−リンカー−リガンド複合体の効力に関連する。したがって、システインが改変された抗体は反応性システインチオール基をたった１個しか有さない場合でも、複数の薬物部分が樹枝状リンカーを介して接続していてよい。
【０４８１】
樹枝状リンカー試薬の以下の例示的な実施形態によれば、９つまでの求核薬物部分試薬をクロロエチルナイトロジェンマスタード官能基と反応させることによって複合体を形成することができる。
【０４８２】
【化１８９】
2009500424.tif 000122
抗体に対する薬物部分の複合体形成
スキーム１６は、抗体あたり約２〜約４個の薬物を有する薬物−リンカー−リガンド複合体を製造するのに有用な方法論を示す。抗体を還元剤（例えばジチオスレイトール（ＤＴＴ））で処理し、システインジスルフィド残基のいくらかまたは全てを還元し、非常に求核性のシステインチオール基（−ＣＨ２ＳＨ）を得る。このようにして部分的に還元した抗体を、Ｋｌｕｓｓｍａｎら、２００４，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  １５（４）：７６５−７７３の７６６ページの複合体形成法に従って薬物−リンカー化合物と反応させるか、または求電子官能基（例えばマレイミドまたはα−ハロカルボニル）を有するリンカー試薬と反応させる。
【０４８３】
スキーム１６
【化１９０】
2009500424.tif 000123
例えば、抗体（例えばＡＣ１０）を５００ｍＭ  ホウ酸ナトリウムおよび５００ｍＭ  塩化ナトリウムにｐＨ８．０で溶解し、過剰量の１００ｍＭ  ジチオスレイトール（ＤＴＴ）で処理する。３７℃で約３０分間インキュベートした後、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５樹脂で溶出し、１ｍＭ  ＤＴＰＡを含むＰＢＳで溶出することによってバッファーを交換する。この溶液の２８０ｎｍの吸光度から還元した抗体濃度を算出し、ＤＴＮＢ（Ａｌｄｒｉｃｈ，Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）と反応させ、４１２ｎｍの吸光度を算出することによってチオール濃度を算出することによってチオール／Ａｂ値を確認する。還元した抗体をＰＢＳに溶解したものを氷で冷す。薬物リンカー（例えばＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺ）をＤＭＳＯに溶解し、アセトニトリルおよび水に既知の濃度で希釈し、還元した抗体をＰＢＳに溶解して冷したものにこれを添加する。約１時間後、過剰量のマレイミドを添加して反応を停止させ、未反応の抗体チオール基にキャップをする。反応混合物を遠心分離によって濃縮し、ＡＤＣ（例えばＡＣ１０−ＭＣ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺを精製し、ＰＢＳを用いたＧ２５樹脂で溶出して脱塩し、滅菌状態の０．２μｍフィルターでろ過し、凍結保存する。
【０４８４】
種々の抗体薬物複合体（ＡＤＣ）を実施例のプロトコルにしたがって種々のリンカーおよび薬物部分、ＭＭＡＺで調製し、ＨＰＬＣおよび組み込まれた量のアッセイによって特性決定する。
【０４８５】
組成物および投与方法
他の実施形態では、有効量の例示的な化合物および／または例示的な複合体と、薬学的に受容可能な担体またはビヒクルとを含む組成物が記載される。簡便のために、薬物単位および薬物−リンカー化合物は例示的な化合物と呼ぶことができ、薬物−リガンド複合体および薬物−リンカー−リガンド複合体は例示的な複合体と呼ぶことができる。この組成物は、動物またはヒトに投与するのに適している。
【０４８６】
本発明の組成物は、この組成物を患者に投与可能な任意の形態であることができる。例えば、この組成物は、固体、液体または気体（エアロゾル）の形態であることができる。典型的な投与経路としては、限定されないが、経口投与、局所投与、非経口投与、舌下投与、直腸投与、膣内投与、眼球投与、腫瘍内投与および経鼻投与が挙げられる。非経口投与としては、皮下注射、静脈注射、筋肉内注射、胸骨内注射または注入技術が挙げられる。１つの態様では、この組成物は非経口投与される。さらに別の態様では、例示的な化合物および／または例示的な複合体または組成物は静脈内投与される。
【０４８７】
薬学的組成物は、組成物が患者に投与されると例示的な化合物および／または例示的な複合体が生体利用可能になるように処方化することができる。組成物は１つ以上の投薬単位の形態にすることができ、例えば、錠剤は単回投薬単位であることができ、エアロゾル形態の例示的な化合物および／または例示的な複合体の容器には複数の投薬単位が保持されていてよい。
【０４８８】
薬学的組成物を調製するのに使用される物質は、使用量で非毒性であり得る。薬学的組成物の活性成分の最適投薬量が種々の因子に依存することは当業者には明らかである。関連する因子としては、限定されないが、動物の種類（例えばヒト）、例示的な化合物または例示的な複合体の特定の形態、投与様式および使用される組成が挙げられる。
【０４８９】
薬学的に受容可能な担体またはビヒクルは粒子であってよく、その結果、組成物は例えば錠剤または粉末の形態である。担体は液体であってよく、例えば、組成物は経口シロップまたは注射可能な液体である。加えて、担体は、例えば吸入投与に有用なエアロゾル組成物を提供するように気体または粒子であってよい。
【０４９０】
経口投与が意図されている場合、組成物は好ましくは固体形態または液体形態であり、半固体、半液体、懸濁物およびゲルの形態は、固体または液体のいずれかとして本明細書で考慮される形態に含まれる。
【０４９１】
経口投与のための固体組成物として、組成物は、粉末、顆粒、圧縮錠剤、丸薬、カプセル、チューイングガム、ウェハなどの形態に処方化することができる。このような固体組成物は、典型的には１つ以上の不活性希釈剤を含有する。加えて、１つ以上の以下のものが存在してよい：バインダー、例えば、カルボキシメチルセルロース、エチルセルロース、微晶質セルロースまたはゼラチン；賦形剤、例えば、デンプン、ラクトースまたはデキストリン、崩壊剤、例えば、アルギン酸、アルギン酸ナトリウム、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、コーンスターチなど；滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウムまたはＳｔｅｒｏｔｅｘ；流動促進剤、例えば、コロイド状二酸化ケイ素；甘味剤、例えば、ショ糖またはサッカリン、香味剤、例えば、ペパーミント、サリチル酸メチルまたはオレンジ香料および着色剤。
【０４９２】
組成物がカプセル（例えばゼラチンカプセル）の形態である場合、上述の物質に加えて、液体担体、例えば、ポリエチレングリコール、シクロデキストリンまたは脂肪油を含有してよい。
【０４９３】
組成物は、液体（例えば、エリキシル、シロップ、溶液または懸濁物）の形態であってよい。液体は経口投与または注射による送達に有用であり得る。経口投与が意図されている場合、組成物は、甘味剤、防腐剤、染料／着色剤および香味向上剤のうち１つ以上を含んでよい。注射によって投与するための組成物では、界面活性剤、防腐剤、湿潤剤、分散剤、懸濁剤、バッファー、安定化剤および等張剤のうち１つ以上を含んでもよい。
【０４９４】
液体組成物は、溶液、懸濁物または他の類似の形態のいずれであるかにかかわらず、以下の１つ以上を含んでもよい：滅菌希釈剤、例えば、注射用水、食塩水、好ましくは生理食塩水、Ｒｉｎｇｅｒ溶液、等張性塩化ナトリウム、固定油、例えば、溶媒または懸濁媒体として役立ち得る合成モノグリセリドまたはジグリセリド、ポリエチレングリコール、グリセリン、シクロデキストリン、プロピレングリコールまたは他の溶媒；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；酸化防止剤、例えば、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート化剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸；バッファー、例えば、アセテート、シトラートまたはホスフェート、および等張性を調整するための薬剤、例えば、塩化ナトリウムまたはデキストロース。非経口組成物は、ガラス製、プラスチック製または他の材料製のアンプル、使い捨てシリンジまたは複数回投与バイアルを包含することができる。生理食塩水は、例示的なアジュバントである。注射可能な組成物は好ましくは滅菌されている。
【０４９５】
特定の障害または状態を処置するのに有効な例示的な化合物および／または例示的な複合体の量は、障害または状態の性質に依存し、標準的な臨床技術によって決定することができる。それに加えて、場合によってインビトロアッセイまたはインビボアッセイを利用すると、最適な投薬範囲を同定するのに役立つことがある。組成物中で使用される正確な投薬量は、投与経路、および疾患または障害の重篤度にも依存し、実施者の判断および各患者の置かれた環境にしたがって決定されるべきである。
【０４９６】
この組成物は、適切な投薬量が得られる有効量の例示的な化合物および／または例示的な複合体を含む。典型的には、例示的な化合物および／または例示的な複合体の量は、組成物の少なくとも約０．０１重量％である。経口投与が意図されている場合、この量は、組成物の約０．１重量％〜約８０重量％の範囲で変えることができる。１つの態様では、経口組成物は、組成物の約４重量％〜約５０重量％の例示的な化合物および／または例示的な複合体を含むことができる。さらに別の態様では、本発明の組成物は、非経口投薬単位に例示的な化合物および／または例示的な複合体を約０．０１重量％〜約２重量％含有するように調製される。
【０４９７】
静脈内投与では、組成物は動物の体重１ｋｇあたり例示的な化合物および／または例示的な複合体を約０．０１〜約１００ｍｇ含むことができる。１つの態様では、組成物は動物の体重１ｋｇあたり例示的な化合物および／または例示的な複合体を約１〜約１００ｍｇ含むことができる。別の態様では、投与される量は、例示的な化合物および／または例示的な複合体を約０．１〜約２５ｍｇ／ｋｇの範囲である。
【０４９８】
一般的に、患者に投与される例示的な化合物および／または例示的な複合体の投薬量は、典型的には、動物の体重あたり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約２０００ｍｇ／ｋｇである。１つの態様では、患者に投与される投薬量は動物の体重あたり約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇであり、別の態様では、患者に投与される投薬量は動物の体重あたり約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２５０ｍｇ／ｋｇであり、さらに別の態様では、患者に投与される投薬量は動物の体重あたり約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇであり、さらに別の態様では、患者に投与される投薬量は動物の体重あたり約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇであり、さらに別の態様では、患者に投与される投薬量は動物の体重あたり約１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇである。
【０４９９】
例示的な化合物および／または例示的な複合体または組成物は、任意の簡便な経路で、例えば、注入またはボーラス注射によって、上皮または皮膚粘膜の内側（例えば、口腔粘膜、直腸粘膜および腸粘膜など）を介した吸収によって投与することができる。投与は全身投与または局所投与であることができる。種々の送達経路（例えば、リポソームでカプセル化したもの、微粒子、マイクロカプセル、カプセルなど）が知られており、例示的な化合物および／または例示的な複合体または組成物を投与することができる。特定の実施形態では、２つ以上の例示的な化合物および／または例示的な複合体または組成物を患者に投与する。
【０５００】
特定の実施形態では、１つ以上の例示的な化合物および／または例示的な複合体または組成物を処置が必要な領域に局所的に投与することが望ましいことがある。これは、例えば、限定されないが、手術中の局所的な注入；局所的な適用、例えば、術後の創傷被覆材と組み合わせて適用；注射による方法；カテーテルを用いる方法；座剤を用いる方法；またはインプラントを用いる方法で達成することができる。インプラントは、多孔性物質、非多孔性物質またはゲル状物質であり、膜（例えばシアラスティック（ｓｉａｌａｓｔｉｃ）膜）または繊維が挙げられる。一実施形態では、癌、腫瘍または新生物組織または前癌組織の部位（または前にある部位）に直接注射することによって投与することができる。別の実施形態では、自己免疫疾患の徴候がある部位（または前にある部位）に直接注射することによって投与することができる。
【０５０１】
特定の実施形態では、任意の適切な経路（脳室内注射および髄腔内注射を含む）によって１つ以上の例示的な化合物および／または例示的な複合体または組成物を中枢神経系に導入することが望ましいことがある。脳室内注射は、例えば、槽（例えばオマヤ槽）に接続した脳室内カテーテルによって容易に行なうことができる。
【０５０２】
例えば、吸入器または噴霧器を用いてエアロゾル化剤を用いた処方物を肺に投与することもでき、またはフルオロカーボンまたは合成肺用界面活性剤を灌流させて肺に投与することができる。
【０５０３】
さらに別の実施形態では、例示的な化合物および／または例示的な複合体または組成物を放出制御系で送達することができる。例えば、限定されないが、ポンプまたは種々のポリマー材料を使用することができる。さらに別の実施形態では、放出制御系を例示的な化合物および／または例示的な複合体または組成物の標的（例えば脳）の近くに配置することができ、これにより必要量は全身投薬の何分の一になる（例えば、Ｇｏｏｄｓｏｎ，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ（前出），ｖｏｌ．２，ｐｐ．１１５−１３８（１９８４）参照）。他の放出制御系は、Ｌａｎｇｅｒ（Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−１５３３（１９９０））による総説で議論されている。
【０５０４】
用語「担体」は、例示的な化合物および／または例示的な複合体とともに投与される希釈剤、アジュバントまたは賦形剤を指す。このような薬学的な担体は、液体、例えば水および油であることができ、例えば、石油、動物油、植物油または合成油、例えば、ピーナッツ油、大豆油、鉱物油、ゴマ油などが挙げられる。担体は、食塩水、アカシアガム、ゼラチン、デンプンペースト、タルク、ケラチン、コロイド状シリカ、尿素などであってよい。それに加えて、補助剤、安定化剤、増粘剤、滑沢剤および着色剤を使用することができる。一実施形態では、患者に投与される場合、例示的な化合物および／または例示的な複合体と薬学的に受容可能な担体とは滅菌である。例示的な化合物および／または例示的な複合体が静脈内投与される場合、水は例示的な担体である。食塩水溶液およびデキストロース水溶液およびグリセロール溶液を、特に注射用溶液の液体担体として使用することもできる。適切な薬学的な担体としては、賦形剤、例えば、デンプン、グルコース、ラクトース、ショ糖、ゼラチン、モルト、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸ナトリウム、モノステオアリン酸グリセロール、タルク、塩化ナトリウム、乾燥スキムミルク、グリセロール、プロピレン、グリコール、水、エタノールなどを挙げることもできる。本発明の組成物は、所望な場合、少量の湿潤剤または乳化剤、またはｐＨ緩衝化剤を含有することもできる。
【０５０５】
本発明の組成物は、溶液、懸濁物、エマルション、錠剤、丸薬、ペレット、カプセル、液体を含有するカプセル、粉末、持続放出性処方物、座剤、エマルション、エアロゾル、スプレー、懸濁物または用途に適した任意の他の形態にすることができる。適切な薬学的担体の他の例は、Ｅ．Ｗ．ＭａｒｔｉｎによるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」に記載されている。
【０５０６】
一実施形態では、例示的な化合物および／または例示的な複合体は、動物（特にヒト）に静脈内投与するために設計された薬学的組成物として通常の手順にしたがって処方化される。典型的には、静脈内投与のための担体またはビヒクルは、滅菌等張性バッファー溶液である。必要な場合、この組成物は、可溶化剤を含むこともできる。静脈内投与のための組成物は、場合により、注射時の痛みをやわらげるために局所麻酔薬（例えばリグノカイン）を含むことができる。一般的に、例えば、活性薬剤の量を示す密閉容器（例えばアンプルまたはサシェ（ｓａｃｈｅｔｔｅ））中の凍結乾燥した粉末または無水濃縮物などの単位投薬形態で各成分を別個または混合して供給する。例示的な化合物および／または例示的な複合体を注入によって投与したい場合、例えば、滅菌の医薬グレードの水または食塩水を含有する注入瓶で分注することができる。例示的な化合物および／または例示的な複合体を注射によって投与したい場合、注射用の滅菌水アンプルまたは食塩水を用いて投与前に成分を混合することができる。
【０５０７】
経口送達のための組成物は、例えば、錠剤、トローチ剤、水性懸濁物または油性懸濁物、顆粒、粉末、エマルション、カプセル、シロップまたはエリキシルの形態であることができる。経口投与される組成物は、１つ以上の任意の薬剤（例えば、甘味剤、例えば、フルクトース、アスパルテームまたはサッカリン；香味剤、例えば、ペパーミント、冬緑油またはチェリー；着色剤；および防腐剤）を含有し、薬学的に口当たりのよい調製物を得ることができる。さらに、錠剤または丸薬の形態では、組成物は、崩壊を遅らせ、胃腸管で吸収されるようにコーティングすることができる。これにより、長時間にわたって持続的に作用させることができる。浸透圧により活性化して作用する化合物を包む選択的な透過膜は、経口投与される化合物にも適している。これらの最近の基本骨格では、カプセル周囲の環境からこの化合物が作用することによって流体を吸収し、薬剤または薬剤組成物が開口部を介して移動することによって膨潤する。これらの送達基本骨格は、すぐに放出する処方物の急速に増加するプロフィールとは対照的に、本質的にゼロオーダーの送達プロフィールを提供することができる。遅延性物質（例えばモノステアリン酸グリセロールまたはステアリン酸グリセロール）を使用することもできる。
【０５０８】
この組成物は、局所投与を意図することもでき、この場合には、担体は、溶液、エマルション、軟膏またはゲルベースの形態であってよい。経皮投与が意図される場合、この組成物は、経皮貼布またはイオン導入デバイスの形態であることができる。局所的な処方物は、例示的な化合物および／または例示的な複合体を組成物の約０．０５％〜約５０％  ｗ／ｖ（組成物の体積あたりの重量）の濃度で含むことができ、別の態様では、０．１％〜１０％  ｗ／ｖ含むことができる。
【０５０９】
この組成物は、例えば、直腸で例示的な化合物および／または例示的な複合体が融解し、放出する形態で直腸投与を意図することができる。
【０５１０】
この組成物は、固体または液体の投薬単位の物理的形態を改変する種々の物質を含むことができる。例えば、この組成物は、活性成分の周囲にコーティングシェルを形成する物質を含むことができる。コーティングシェルを形成する物質は、典型的には不活性であり、例えば、糖、セラックおよび他の腸溶性コーティング剤から選択することができる。または、活性成分をゼラチンカプセルで包むことができる。
【０５１１】
この組成物は、気体投薬単位からなることができる。例えば、エアロゾルの形態であることができる。用語エアロゾルを使用して、コロイド状の天然物から加圧パッケージからなる系の範囲にわたる種々の系を示す。液化ガスまたは圧縮ガスによって、または活性成分を分注する適切なポンプ系によって送達することができる。
【０５１２】
形態が固体、液体または気体のいずれであっても、本発明の組成物は、癌、自己免疫疾患または感染症の処置に使用される薬理学的薬剤を含むことができる。
【０５１３】
例示的な複合体の治療への使用
例示的な化合物および／または例示的な複合体は、患者の癌、自己免疫疾患または感染症を処置するのに有用である。
【０５１４】
癌の処置
例示的な化合物および／または例示的な複合体は、腫瘍細胞または癌細胞の増加を阻害し、腫瘍または癌細胞のアポトーシスを生じさせ、または患者の癌を処置するのに有用である。例示的な化合物および／または例示的な複合体を動物の癌を処置するための種々の設定に従って使用することができる。薬物−リンカー−リガンド複合体を使用して腫瘍細胞または癌細胞に対する薬物または薬物単位を送達することができる。理論によって束縛されないが、一実施形態では、例示的な複合体のリガンド単位は、癌細胞または腫瘍細胞に関連する抗原に結合するか、または会合し、例示的な複合体をレセプター媒介性エンドサイトーシスを介して腫瘍細胞または癌細胞内部に入れる（取り込む）ことができる。抗原を腫瘍細胞または癌細胞に結合することができるか、または抗原は、腫瘍細胞または癌細胞と関連する細胞外マトリックスタンパク質であることができる。いったん細胞内に入ると、リンカー単位内の１つ以上の特異的なペプチド配列は、１つ以上の腫瘍細胞または癌細胞に関連するプロテアーゼによって加水分解されて開裂し、薬物または薬物−リンカー化合物が生じる。次いで、放出された薬物または薬物−リンカー化合物は、細胞内に自由に移動し、細胞毒性活性または細胞増殖抑制活性を誘発する。薬物−リンカー−リガンド複合体は、細胞内プロテアーゼによって開裂して薬物部分、薬物−リンカー化合物および／または薬物−リンカー−リガンド複合体の活性フラグメント（例えば、シトシル−リンカー−薬物）を放出することもできる。代替的な実施形態では、薬物または薬物単位は、腫瘍細胞または癌細胞の外側で例示的な複合体から開裂し、次いで薬物または薬物−リンカー化合物が細胞に浸透する。代替的な実施形態では、薬物または薬物単位は、腫瘍細胞または癌細胞の外側で例示的な複合体から開裂し、次いで薬物または薬物−リンカー化合物が細胞に浸透する。
【０５１５】
一実施形態では、リガンド単位は腫瘍細胞または癌細胞に結合する。
【０５１６】
別の実施形態では、リガンド単位は、腫瘍細胞または癌細胞の表面にある腫瘍細胞抗原または癌細胞抗原に結合する。
【０５１７】
別の実施形態では、リガンド単位は、腫瘍細胞または癌細胞に関連する細胞外マトリックスタンパク質である腫瘍細胞抗原または癌細胞抗原に結合する。
【０５１８】
特定の腫瘍細胞または癌細胞に対するリガンド単位の特異性は、最も有効に処置される腫瘍または癌を決定するのに重要である場合がある。例えば、ＢＲ９６リガンド単位を有する例示的な複合体は、抗原陽性の癌腫（肺癌、乳癌、直腸癌、卵巣癌および膵臓癌を含む）を処置するのに有用であり得る。抗−ＣＤ３０または抗−ＣＤ４０リガンド単位を有する例示的な複合体は、悪性血液疾患を処置するのに有用であり得る。
【０５１９】
例示的な複合体で処置可能な他の特定の種類の癌としては、限定されないが、表１に開示されるものが挙げられる。
【０５２０】
表１
固体腫瘍、限定されないが、以下のものが挙げられる：
線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨性肉腫、骨原性肉種、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑液腫瘍、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、直腸癌、結腸直腸癌、腎臓癌、膵癌、骨癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、食道癌（ｅｓｏｐｈｏｇｅａｌ  ｃａｎｃｅｒ）、胃癌、口腔癌、鼻癌、喉頭癌、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、膀胱腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌腫、肝癌、胆管癌、絨毛膜癌腫、精上皮腫、胎生期癌、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、子宮癌、精巣癌、小細胞肺癌腫、膀胱癌、肺癌、上皮癌、神経膠腫、多形性膠芽腫、星状細胞腫、髄芽細胞腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起細胞腫、髄膜腫、皮膚癌、黒色腫、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫
血液感染性の癌、限定されないが、以下のものが挙げられる：
急性リンパ性白血病「ＡＬＬ」、急性リンパ性Ｂ細胞白血病、急性リンパ性Ｔ細胞白血病、急性骨髄芽球性白血病「ＡＭＬ」、急性前骨髄性白血病「ＡＰＬ」、急性単芽球性白血病、急性赤白血病、急性巨核芽球性白血病、急性骨髄単球性白血病、急性非リンパ性白血病（ａｃｕｔｅ  ｎｏｎｌｙｍｐｈｏｃｙｃｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、急性未分化白血病、慢性骨髄性白血病「ＣＭＬ」、慢性リンパ球性白血病「ＣＬＬ」、ヘアリー細胞白血病、多発性骨髄腫
急性白血病および慢性白血病：
リンパ芽細胞白血病、骨髄性（ｍｙｅｌｏｇｅｎｏｕｓ）白血病、リンパ球性白血病、骨髄性（ｍｙｅｌｏｃｙｔｉｃ）白血病
リンパ腫：
ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、ヴァルデンストレームマクログロブリン血症、重鎖病、真性赤血球増加症
例示的な複合体は、腫瘍または癌を特異的に標的とする複合を提供し、これによってこれらの毒性の全身毒性が減少する。リンカー単位は血中で例示的な複合体を安定化し、細胞内で腫瘍特異的なプロテアーゼによって開裂して薬物を放出することができる。
【０５２１】
癌に対する複数の治療様式
例示的な複合体および／または例示的な化合物を投与することによって、癌（限定されないが、腫瘍、転移が挙げられる）または制御されない細胞増殖によって特徴付けられる他の疾患または障害を処置または予防することができる。
【０５２２】
他の実施形態では、必要な患者に有効量の例示的な複合体および化学療法剤を投与する工程を含む、癌を処置または予防するための方法が提供される。一実施形態では、化学療法剤は、難治性であることがわかっていない癌を処置するものである。別の実施形態では、化学療法剤は、難治性であることがわかっている癌を処置するものである。癌の処置として手術も受ける患者に例示的な複合体を投与することができる。
【０５２３】
いくつかの実施形態では、患者は、さらなる治療（例えば、放射線治療）も受ける。特定の実施形態では、例示的な複合体は、化学療法剤または放射線治療と同時に投与される。別の特定的な実施形態では、化学療法剤または放射線治療は、例示的な複合体の投与前または投与後に投与され、１つの態様では、例示的な複合体の投与の少なくとも１時間、５時間、１２時間、１日、１週間、１ヵ月前または後、さらなる態様では、数ヶ月（例えば、３ヶ月まで）に投与される。
【０５２４】
化学療法剤を一連の期間にわたって投与することができる。表４に列挙される化学療法剤の任意の１つまたは組み合わせを投与することができる。放射線に関しては、処置される癌の種類に依存して任意の放射線治療プロトコルを用いることができる。例えば、限定されないが、ｘ線を照射することができ、特に、深部の腫瘍には高エネルギー超高圧（１ＭｅＶエネルギーより大きな放射線）を用いることができ、皮膚癌には電子線および常用電圧のｘ線照射も利用することができる。γ線を発光する放射線同位体（例えば、ラジウム、コバルトおよび他の元素の放射線同位元素）を投与することもできる。
【０５２５】
さらに、化学療法または放射線治療が処置される被検体にとって毒性が高すぎる場合（例えば、受け入れがたいかまたは耐えられない副作用が生じる場合）に、化学療法または放射線治療の代替法として、例示的な化合物および／または例示的な複合体を用いて癌を処置する方法が提供される。処置される動物は、場合によって、その処置が受け入れられるかまたは耐えられるかに依存して、手術、放射線治療または化学療法などの別の癌処置法によって処置することができる。
【０５２６】
例えば、特定の癌を処置するために、例示的な化合物および／または例示的な複合体をインビトロまたはエキソビボの態様で使用することもできる。この特定の癌としては、限定されないが、白血病およびリンパ腫が挙げられ、このような処置は、自己幹細胞の移植を伴う。この処置は、複数段階のプロセスを伴うことができる。このプロセスでは、その動物の自己造血幹細胞が集められ、全ての癌細胞にパージされ、次いで、その動物の残りの骨髄細胞の集合に例示的な化合物および／または例示的な複合体を高用量の放射線治療と組み合わせて、または組み合わせずに投与して全滅させ、幹細胞片を動物に注入して戻す。骨髄の機能が元に戻り、動物が回復するまでの間、対症療法を施す。
【０５２７】
癌に対する複数の薬物治療
癌を処置する方法は、必要な患者に有効量の例示的な複合体および抗癌剤である別の治療薬剤を投与する工程を含む。「抗癌剤」または「化学療法剤」は、癌の処置に有用な化学化合物である。
【０５２８】
適切な抗癌剤としては、限定されないが、メトトレキサート、タキソール、Ｌ−アスパラギナーゼ、メルカプトプリン、チオグアニン、ヒドロキシウレア、シタラビン、シクロホスファミド、イホスファミド、ニトロソウレア、シスプラチン、カルボプラチン、マイトマイシン、ダカルバジン、プロカルバジン（ｐｒｏｃａｒｂｉｚｉｎｅ）、トポテカン、ナイトロジェンマスタード、サイトキサン（ｃｙｔｏｘａｎ）、エトポシド、５−フルオロウラシル、ＢＣＮＵ、イリノテカン、カンプトセシン、ブレオマイシン、ドキソルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ダクチノマイシン、プリカマイシン、ミトキサントロン、アスパラギナーゼ、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ビノレルビン、パクリタキセルおよびドセタキセルが挙げられる。
【０５２９】
化学療法剤の例には、チオテパおよびＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標）シクロホスファミドなどのアルキル化剤；ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファンおよびトレオスルファンなどのアルキルスルホン酸；ベンゾドーパ（ｂｅｎｚｏｄｏｐａ）、カルボコン、メツレドーパ（ｍｅｔｕｒｅｄｏｐａ）およびウレドーパ（ｕｒｅｄｏｐａ）などのアジリジン類；アルトレートアミン（ａｌｔｒｅｔａｍｉｎｅ）、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド（ｔｒｉｅｔｈｉｙｌｅｎｅｔｈｉｏｐｈｏｓｐｈｏｒａｍｉｄｅ）およびトリメチローロメラミン（ｔｒｉｍｅｔｈｙｌｏｌｏｍｅｌａｍｉｎｅ）を含むエチレンイミン類およびメチラメラミン類；ＴＬＫ２８６（ＴＥＬＣＹＴＡ（商標））；アセトゲニン（特にブラタシンおよびブラタシノン）；δ−９−テトラヒドロカンナビノール（ドロナビノール、ＭＡＲＴＮＯＬ（登録商標））；β−ラパコン；ラパコール；コルヒチン；ベツリン酸；カンプトセシン（合成類似体トポテカン（ＨＹＣＡＭＴ１Ｎ（登録商標））、ＣＰＴ−１１（イリノテカン、ＣＡＭＰＴＯＳ  ＡＲ（登録商標））、アセチルカンプトセシン、スコポレクチン（ｓｃｏｐｏｌｅｃｔｉｎ）、クリスナトール（ｃｒｉｓｎａｔｏｌ）；および９−アミノカンプトセシンを含む）；ブリオスタチン；カリスタチン（ｃａｌｌｙｓｔａｔｉｎ）；ＣＣ−１０６５（そのアドゼレシン、カルゼレシンおよびビゼレシン合成類似体を含む）；ポドフィロトキシン；ポドフィリン酸（ｐｏｄｏｐｈｙｌｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ）；テニポシド；クリプトフィシン類（特にクリプトフィシン１およびクリプトフィシン８）；ドラスタチン；ズオカルマイシン（合成類似体、ＫＷ−２１８９およびＣＢ１−ＴＭ１を含む）；エレウテロビン；パンクラチスタチン；サルコジクチン（ｓａｒｃｏｄｉｃｔｙｉｎ）；スポンジスタチン；ナイトロジェンマスタード、例えばクロランブシル、クロロナファジン（ｃｈｌｏｒｎａｐｈａｚｉｎｅ）、コロホスファミド（ｃｈｏｌｏｐｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、塩酸メクロレタミンオキシド、メルファラン、ノベンビチン（ｎｏｖｅｍｂｉｃｈｉｎ）、フェネステリン（ｐｈｅｎｅｓｔｅｒｉｎｅ）、プレドニムスチン（ｐｒｅｄｎｉｍｕｓｔｉｎｅ）、トロフォスファミド（ｔｒｏｆｏｓｆａｍｉｄｅ）、ウラシルマスタード；ニトロソウレア（ｎｉｔｒｏｓｕｒｅａｓ）、例えばカルムスチン（ＢＣＮＵ）、クロロゾトシン（ｃｈｌｏｒｏｚｏｔｏｃｉｎ）、フォテムスチン（ｆｏｔｅｍｕｓｔｉｎｅ）、ロムスチン、ニムスチン、およびラニムスチン；トリアジン、例えば、デカルバジン；ビスホスホネート、例えばクロドロネート；抗生物質、例えばエネジイン抗生物質（例えば、カリケアマイシン（ｃａｌｉｃｈｅａｍｉｃｉｎ）、特にカリケアマイシンγ１ＩおよびカリケアマイシンωＩ１（例えばＡｇｎｅｗ，１９９４，Ｃｈｅｍ  Ｉｎｔｌ．Ｅｄ．Ｅｎｇｌ．３３：１８３−１８６を参照）；およびアントラサイクリン、例えば、アンナマイシン（ａｎｎａｍｙｃｉｎ）、ＡＤ３２、アルカルビシン（ａｌｃａｒｕｂｉｃｉｎ）、ダウノルビシン、デクスラゾキ���ン、ＤＸ−５２−１、エピルビシン、ＧＰＸ−１００、イダルビシン、ピラルビシン、ゾルビシン、ムトキサントロン（ｍｔｏｘａｎｔｒｏｎｅ）、ＫＲＮ５５００、メノガリル、ダイネマイシン（ｄｙｎｅｍｉｃｉｎ）Ａを含むダイネマイシン、エスペラマイシン；ネオカルチノスタチン発色団および関連する色素蛋白エネジイン抗生物質発色団、アクラシノマイシン（ａｃｌａｃｉｎｏｍｙｓｉｎ）、アクチノマイシン、オースラマイシン（ａｕｔｈｒａｍｙｃｉｎ）、アザセリン、ブレオマイシン（例えばＡ２またはＢ２）、カクチノマイシン（ｃａｃｔｉｎｏｍｙｃｉｎ）、カラビシン（ｃａｒａｂｉｃｉｎ）、カルミノマイシン、カルジノフィリン（ｃａｒｚｉｎｏｐｈｉｌｉｎ）、クロモマイシン類、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、デトルビシン（ｄｅｔｏｒｂｉｃｉｎ）、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、アドリアマイシン（ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ）（登録商標）ドキソルビシン（モルホリノ−ドキソルビシン、シアノモルホリノ−ドキソルビシン、２−ピロリノ−ドキソルビシン、リポソームドキソルビシンおよびデオキシドキソルビシンを含む）、ＥＩＣＡＲ、エソルビシン、マーセロマイシン（ｍａｒｃｅｌｌｏｍｙｃｉｎ）、マイトマイシンＣなどのマイトマイシン、マイコフェノール酸（ｍｙｃｏｐｈｅｎｏｌｉｃ  ａｃｉｄ）、ノガラマイシン（ｎｏｇａｌａｍｙｃｉｎ）、オリボマイシン（ｏｌｉｖｏｍｙｃｉｎｓ）、ペプロマイシン、ポトフィロマイシン（ｐｏｔｆｉｒｏｍｙｃｉｎ）、ピューロマイシン、ケラマイシン（ｑｕｅｌａｍｙｃｉｎ）、リバビリン、ロドルビシン（ｒｏｄｏｒｕｂｉｃｉｎ）、ストレプトニグリン、ストレプトゾシン、チアゾフリン、ツベルシジン（ｔｕｂｅｒｃｉｄｉｎ）、ウベニメクス、ジノスタチン（ｚｉｎｏｓｔａｔｉｎ）およびゾルビシン（ｚｏｒｕｂｉｃｉｎ）；葉酸類似体、例えばデノプテリン（ｄｅｎｏｐｔｅｒｉｎ）、プテロプテリン（ｐｔｅｒｏｐｔｅｒｉｎ）およびトリメトレキセート（ｔｒｉｍｅｔｒｅｘａｔｅ）；プリン類似体、例えばフルダラビン（ｆｌｕｄａｒａｂｉｎｅ）、６−メルカプトプリン、チアミプリンおよびチオグアニン；ピリミジン類似体、例えばアンシタビン、アザシチジン（ａｚａｃｉｔｉｄｉｎｅ）、６−アザウリジン（ａｚａｕｒｉｄｉｎｅ）、カルモフール、シタラビン、ジデオキシウリジン、ドキシフルリジン、エノシタビン（ｅｎｏｃｉｔａｂｉｎｅ）、フロキシウリジン（ｆｌｏｘｕｒｉｄｉｎｅ）およびフルダラビン；アンドロゲン類、例えばカルステロン（ｃａｌｕｓｔｅｒｏｎｅ）、プロピオン酸ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタンおよびテストラクトン（ｔｅｓｔｏｌａｃｔｏｎｅ）；抗副腎剤、例えばアミノグルテチミド、ミトタンおよびトリロスタン；葉酸リプレニッシャー（ｒｅｐｌｅｎｉｓｈｅｒ）、例えばフォリン酸（ロイコボリン）；アセグラトン；抗葉酸抗新生物剤、例えば、ＡＬＩＭＴ  Ａ（登録商標）、ＬＹ２３１５１４ペメトレキセド、ジヒドロ葉酸還元酵素インヒビター、例えば、メトトレキサートおよびトリメトレキサート、代謝拮抗物質、例えば、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）およびそのプロドラッグ、例えば、ＵＦＴ、Ｓ−１およびカペシタビン、およびチミジル酸シンターゼインヒビターおよびグリシンアミドリボヌクレオチドトランスホルミラーゼインヒビター、例えば、ラルチトレキセド（ＴＯＭＵＤＥＸ（商標）、ＴＤＸ）；ジヒドロピリミジンデヒドロゲナーゼのインヒビター、例えば、エニルウラシル；アルドホスファミドグリコシド；アミノレブリン酸；アムサクリン（ａｍｓａｃｒｉｎｅ）；ベストラブシル（ｂｅｓｔｒａｂｕｃｉｌ）；ビサントレン（ｂｉｓａｎｔｒｅｎｅ）；エダトラキセート（ｅｄａｔｒａｘａｔｅ）；デフォファミン（ｄｅｆｏｆａｍｉｎｅ）；デメコルシン（ｄｅｍｅｃｏｌｃｉｎｅ）；ジアジコン（ｄｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；エルフォルニチン（ｅｌｆｏｒｎｉｔｈｉｎｅ）；酢酸エリプチニウム（ｅｌｌｉｐｔｉｎｉｕｍ）；エポチロン（ｅｐｏｔｈｉｌｏｎｅ）；エトグルシド（ｅｔｏｇｌｕｃｉｄ）；硝酸ガリウム；ヒドロキシウレア；デフェレオキサミン（ｄｅｆｅｒｅｏｘａｍｉｎｅ）；レンチナン；ロニダミン（ｌｏｎｉｄａｍｉｎｅ）；メイタンシノイド（ｍａｙｔａｎｓｉｎｏｉｄ）類、例えばメイタンシン（ｍａｙｔａｎｓｉｎｅ）およびアンサミトシン（ａｎｓａｍｉｔｏｃｉｎｅ）；ミトグアゾン（ｍｉｔｏｇｕａｚｏｎｅ）；ミトキサントロン；モピダンモール（ｍｏｐｉｄａｎｍｏｌ）；ニトラエリン（ｎｉｔｒａｅｒｉｎｅ）；ペントスタチン；フェナメット（ｐｈｅｎａｍｅｔ）；ピラルビシン；ロソキサントロン（ｌｏｓｏｘａｎｔｒｏｎｅ）；２−エチルヒドラジド；プロカルバジン；ＰＳＫ（登録商標）多糖類複合体（ＪＨＳ  Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）；ラゾキサン（ｒａｚｏｘａｎｅ）；リゾキシン；シゾフィラン；スピロゲルマニウム（ｓｐｉｒｏｇｅｒｍａｎｉｕｍ）；テニュアゾン酸（ｔｅｎｕａｚｏｎｉｃ  ａｃｉｄ）；トリアジコン（ｔｒｉａｚｉｑｕｏｎｅ）；２，２’，２”−トリクロロトリエチルアミン；トリコテセン類（特にＴ−２毒素、ベラクリン（ｖｅｒｒａｃｕｒｉｎ）Ａ、ロリジン（ｒｏｒｉｄｉｎｅ）Ａおよびアングイジン（ａｎｇｕｉｄｉｎｅ））；ウレタン；ビンデシン（ＥＬＤＩＳＩＮＥ（登録商標）、ＦＩＬＤＥＳＩＮ（登録商標））；ダカルバジン；マンノムスチン（ｍａｎｎｏｍｕｓｔｉｎｅ）；ミトブロニトール；ミトラクトール（ｍｉｔｏｌａｃｔｏｌ）；ピポブロマン（ｐｉｐｏｂｒｏｍａｎ）；ガシトシン（ｇａｃｙｔｏｓｉｎｅ）；アラビノシド（「Ａｒａ−Ｃ」）；シクロホスファミド；チオテパ；タキソイド類、例えばＴＡＸＯＬ（登録商標）パクリタキセル（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｐｒｉｎｃｅｔｏｎ，ＮＪ）、ＡＢＲＡＸＡＮＥ（商標）、パクリタキセルのＣｒｅｍｏｐｈｏｒ無添加アルブミン改変ナノ粒子製剤（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐａｒｔｎｅｒｓ，Ｓｃｈａｕｍｂｅｒｇ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ）、およびＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標）ドキセタキセル（Ｒｈｏｎｅ−Ｐｏｕｌｅｎｃ  Ｒｏｒｅｒ，Ａｎｔｏｎｙ，Ｆｒａｎｃｅ）；クロランブシル；ゲムシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）ＧＥＭＺＡＲ（登録商標）；６−チオグアニン；メルカプトプリン；白金；白金類似体ま��は白金系類似体、例えばシスプラチン、オキサリプラチンおよびカルボプラチン；ビンブラスチン（ＶＥＬＢＡＮ（登録商標））；エトポシド（ＶＰ−１６）；イホスファミド；マイトキサントロン；ビンクリスチン（ＯＮＣＯＶＩＮ（登録商標））；ビンブラスチン；ビンデシン；ビノレルビン；ビンカアルカノイド（ｖｉｎｃａ  ａｌｋａｎｏｉｄ）；ビノレルビン（ＮＡＶＥＬＢＩＮＥ（登録商標））；ノバントロン（ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ）；エダトレキセート（ｅｄａｔｒｅｘａｔｅ）；ダウノマイシン；アミノプテリン；キセローダ（ｘｅｌｏｄａ）；イバンドロナート（ｉｂａｎｄｒｏｎａｔｅ）；トポイソメラーゼインヒビターＲＦＳ２０００；ジフルオロメチロールニチン（ＤＭＦＯ）；ベラパミルなどのＭＤＲインヒビター；レチノイン酸のようなレチノイド類；細胞周期阻害剤、例えば、スタウロスポリン；ロバスタチン；ＲＥＶＬＩＭＩＤ（レナリドマイド（ｌｅｎａｌｉｄｏｍｉｄｅ））；ＴＨＡＬＡＭＩＤ（サリドマイド）；ＶＥＬＡＤＥ（ボルテゾミブ）；上述のいずれかの薬学的に受容可能な塩、酸または誘導体；および上述のものの２つ以上の組み合わせ、例えば、ＣＨＯＰ（シクロホスファミド、ドキソルビシン、ビンクリスチンおよびプレドニゾロンの組み合わせ治療の省略語）およびＦＯＬＦＯＸ（オキサリプラチン（ＥＬＯＸＡＴＩＮ（商標））と５−ＦＵおよびロイコボリンとの組み合わせ治療法の省略語）が挙げられる。
【０５３０】
またこの定義に含まれるのは、腫瘍に対するホルモン作用を調節または抑制するように作用する抗ホルモン剤、例えばタモキシフェン（ＮＯＬＶＡＤＥＸ（登録商標）タモキシフェンを含む）、ラロキシフェン（ｒａｌｏｘｉｆｅｎｅ）、ドロロキシフェン（ｄｒｏｌｏｘｉｆｅｎｅ）、４−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン（ｔｒｉｏｘｉｆｅｎｅ）、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ１１７０１８、オナプリストン（ｏｎａｐｒｉｓｔｏｎｅ）およびＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標）トレミフェンを含む抗エストロゲンおよび選択的エストロゲン受容体調節物質（ＳＥＲＭ）；および副腎中でのエストロゲン産生を調節するアロマターゼ酵素を抑制するアロマターゼ阻害剤、例えば４（５）−イミダゾール類、アミノグルテチミド、メゲストロール、ＭＥＧＡＳＥ（登録商標）酢酸メゲストロール、ＡＲＯＭＡＳＩＮ（登録商標）エキセメスタン、フォルメスタン、ファドロゾール、ＲＩＶＩＳＯＲ（登録商標）ボロゾール、ＦＥＭＡＲＡ（登録商標）レトロゾールおよびＡＲＩＭＩＤＥＸ（登録商標）アナストロゾール；および抗アンドロゲン、例えばフルタミド（ｆｌｕｔａｍｉｄｅ）、ニルタミド（ｎｉｌｕｔａｍｉｄｅ）、ビカルタミド、ロイプロリド（例えば酢酸ロイプロリド）およびゴセレリン；並びにトロキサシタビン（ｔｒｏｘａｃｉｔａｂｉｎｅ）（１，３−ジオキソランヌクレオシドシトシン類似体）；アンチセンスオリゴヌクレオチド、特に付着細胞の増殖に結びつくシグナル伝達経路における遺伝子の発現を阻害するもの、例えばＰＫＣ−α、Ｒａｌｆ、Ｈ−Ｒａｓおよび内皮成長因子レセプター（ＥＧＦ−Ｒ）；遺伝子治療ワクチン等のワクチン、例えばＡＬＬＯＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、ＬＥＵＶＥＣＴＩＮ（登録商標）ワクチン、およびＶＡＸＩＤ（登録商標）ワクチン；ＰＲＯＬＥＵＫＩＮ（登録商標）ｒＩＬ−２；ＬＵＲＴＯＴＥＣＡＮ（登録商標）トポイソメラーゼ１インヒビター；ＡＢＡＲＥＬＩＸ（登録商標）ｒｍＲＨ；および上述の任意のものの薬学的に受容可能な塩類、酸または誘導体である。
【０５３１】
この定義には、ビタミンＤ３アナログ、例えば、ＥＢ１０８９、ＣＢ１０９３およびＫＨ１０６０；および光線力学療法、例えば、ベルトポルフィン（ｖｅｒｔｏｐｏｒｆｉｎ）（ＢＰＤ−ＭＡ）、フタロシアニン、光増感剤Ｐｃ４、デメトキシ−ヒポクレリンＡ（ｄｅｍｅｔｈｏｘｙ−ｈｙｐｏｃｒｅｌｌｉｎ  Ａ）および２ＢＡ−２−ＤＭＨＡも含まれる。
【０５３２】
自己免疫性疾患の処置
例示的な複合体は、自己免疫疾患を引き起こす細胞を殺傷するか、複製を阻害するか、または自己免疫疾患を処置するのに有用である。患者の自己免疫疾患を処置するために種々の設定にしたがって例示的な複合体を使用することができる。薬物−リンカー−リガンド複合体を使用して薬物を標的細胞に送達することができる。理論によって束縛されないが、一実施形態では、薬物−リンカー−リガンド複合体は標的細胞の表面にある抗原と会合し、次いで、例示的な複合体をレセプター媒介性エンドサイトーシスを介して標的細胞内部に入れる。細胞内に入ると、リンカー単位内の１つ以上の特異的なペプチド配列が酵素または加水分解によって開裂し、薬物を放出する。次いで、放出された薬物は細胞質ゾル内に自由に移動し、細胞毒性活性または細胞増殖抑制活性を誘発する。薬物−リンカー−リガンド複合体は、細胞内プロテアーゼによって開裂して薬物部分、薬物−リンカー化合物および／または薬物−リンカー−リガンド複合体の活性フラグメント（例えば、シトシル−リンカー−薬物）を放出することもできる。代替的な実施形態では、薬物は標的細胞の外側で例示的な複合体から開裂し、次いで薬物が細胞に浸透する。
【０５３３】
一実施形態では、リガンド単位は自己免疫性抗原に結合する。１つの態様では、この抗原は、自己免疫性状態に関与する細胞の表面にある。
【０５３４】
別の実施形態では、リガンド単位は、細胞の表面にある自己免疫性抗原に結合する。
【０５３５】
一実施形態では、リガンドは、自己免疫疾患状態に関連する活性化したリンパ球に結合する。
【０５３６】
さらなる実施形態では、例示的な複合体は、特定の自己免疫疾患に関連する自己免疫性抗体を産生する細胞を殺傷するか、または増加を阻害する。
【０５３７】
例示的な複合体で処置可能な他の特定の種類の自己免疫疾患としては、限定されないが、Ｔｈ２リンパ球に関連する障害（例えば、アトピー性皮膚炎、アトピー性ぜんそく、鼻結膜炎、アレルギー性鼻炎、Ｏｍｅｎｎ症候群、全身性硬化症および移植片対宿主病）；Ｔｈ１リンパ球に関連する障害（例えば、慢性関節リウマチ、多発性硬化症、乾癬、Ｓｊｏｒｇｒｅｎ症候群、橋本病、Ｇｒａｖｅ病、原発性胆汁性肝硬変、Ｗｅｇｅｎｅｒ肉芽腫症および結核）；活性化したＢリンパ球に関連する障害（例えば、全身エリテマトーデス、グッドパスチャー症候群、慢性関節リウマチおよびＩ型糖尿病）；および表３に開示されているものが挙げられる。
【０５３８】
表３
活動性慢性肝炎、Ａｄｄｉｓｏｎ病、アレルギー性肺胞炎、アレルギー反応、アレルギー性鼻炎、Ａｌｐｏｒｔ症候群、アナフィラキシー（Ａｎａｐｈｌａｘｉｓ）、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、関節炎、回虫症、アスペルギルス症、アトピー性アレルギー、アトピー性皮膚炎、アトピー性鼻炎、Ｂｅｈｃｅｔ病、鳥飼育者肺、気管支ぜんそく、Ｃａｐｌａｎ症候群、心筋ミオパシー、セリアック病、Ｃｈａｇａｓ病、慢性糸球体腎炎、Ｃｏｇａｎ症候群、寒冷凝集素症、先天性風疹感染、ＣＲＥＳＴ症候群、クローン病、クリオグロブリン血症、Ｃｕｓｈｉｎｇ症候群、皮膚筋炎、円板状狼瘡、Ｄｒｅｓｓｉｅｒ症候群、Ｅａｔｏｎ−Ｌａｍｂｅｒｔ症候群、エコーウイルス感染、脳脊髄炎、内分泌眼症、エプスタインバーウイルス感染、ウマの吐き気（Ｅｑｕｉｎｅ  Ｈｅａｖｅｓ）、エリテマトーデス、Ｅｖａｎ症候群、Ｆｅｌｔｙ症候群、線維筋痛、Ｆｕｃｈ毛様体炎、胃の萎縮症、消化管アレルギー、巨細胞動脈炎、糸球体腎炎、Ｇｏｏｄｐａｓｔｕｒｅ症候群、移植片対宿主病、Ｇｒａｖｅｓ病、Ｇｕｉｌｌａｉｎ−Ｂａｒｒｅ病、橋本甲状腺炎、溶血性貧血、ヘノッホシェーンライン紫斑病、特発性副腎萎縮、特発性肺繊維症、ＩｇＡネフロパシー、炎症性大腸炎、インスリン依存性糖尿病、若年性関節炎、若年性糖尿病（Ｉ型）、Ｌａｍｂｅｒｔ−Ｅａｔｏｎ症候群、蹄葉炎、扁平苔癬、ルポイド肝炎、狼瘡、リンパ球減少症、Ｍｅｎｉｅｒｅ病、混合結合組織病、多発性硬化症、重症筋無力症、悪性貧血、多内分泌腺症候群、初老期認知症、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、乾癬性関節炎、レイノー現象、反復流産、Ｒｅｉｔｅｒ症候群、リウマチ熱、関節リウマチ、Ｓａｍｐｔｅｒ症候群、住血吸虫症、Ｓｃｈｍｉｄｔ症候群、強皮症、Ｓｈｕｌｍａｎ症候群、Ｓｊｏｒｇｅｎ症候群、Ｓｔｉｆｆ−Ｍａｎ症候群、交感性眼炎、全身性狼瘡エリテマトーデス、高安動脈炎、側頭動脈炎、甲状腺炎、血小板減少症、甲状腺機能亢進症、中毒性表皮剥離症、Ｂ型インスリン耐性、Ｉ型糖尿病、潰瘍性大腸炎、ブドウ膜炎、白斑、Ｗａｌｄｅｎｓｔｒｏｍマクログロブリン血症、Ｗｅｇｅｎｅｒ肉芽腫症
自己免疫性疾患の複数の薬物治療
必要な患者に有効量の例示的な複合体および自己免疫疾患を処置するための既知の別の治療薬剤を投与する工程を含む、自己免疫疾患を処置する方法も開示される。一実施形態では、抗自己免疫疾患薬剤としては、限定されないが、表４に列挙された薬剤が挙げられる。
【０５３９】
表４
シクロスポリン、シクロスポリンＡ、ミコフェノール酸モフェチル、シロリムス、タクロリムス、エナネルセプト（ｅｎａｎｅｒｃｅｐｔ）、プレドニゾン、アザチオプリン、メトトレキサート、シクロホスファミド、プレドニゾン、アミノカプロン酸、クロロキン、ヒドロキシクロロキン、ヒドロコルチゾン、デキサメタゾン、クロラムブシル、ＤＨＥＡ、ダナゾル、ブロモクリプチン、メロキシカム、インフリキシマブ
感染症の処置
例示的な複合体は、感染症を引き起こす細胞を殺傷するか、増加を阻害するか、または感染症を処置するのに有用である。患者の感染症を処置するために種々の設定にしたがって例示的な複合体を使用することができる。薬物−リンカー−リガンド複合体を使用して薬物を標的細胞に送達することができる。一実施形態では、リガンド単位は感染症の細胞に結合する。
【０５４０】
一実施形態では、この複合体は、特定の感染症を引き起こす細胞を殺傷するか、または増加を阻害する。
【０５４１】
例示的な複合体で処置可能な他の特定の種類の感染症としては、限定されないが、表５に開示されたものが挙げられる。
【０５４２】
表５
細菌性疾患：
ジフテリア、百日咳、潜在性菌血、尿路感染症、胃腸炎、蜂巣炎、喉頭蓋炎、気管炎、腺肥大、咽後膿瘍、膿痂疹、膿瘡、肺炎、心内膜炎、敗血症性関節炎、肺炎球菌症、腹膜炎、菌血症、髄膜炎、急性化膿性髄膜炎、尿道炎、子宮頸管炎、直腸炎、咽頭炎、卵管炎、副睾丸炎、淋疾、梅毒、リステリア症、炭疽菌、ノカルジア症、サルモネラ属、腸チフス、赤痢、結膜炎、副鼻腔炎、ブルセラ病、ツラレミア（Ｔｕｌｌａｒｅｍｉａ）、コレラ、腺ペスト、破傷風、壊死性腸炎、放線菌症、混合嫌気性感染症、梅毒、回帰熱、レプトスピラ病、ライム病、ネズミ咬合熱、結核、リンパ節炎、ハンセン病、クラミジア、Ｃｈｌａｍｙｄｉａｌ肺炎、トラコーマ、封入体結膜炎
全身性真菌症：
ヒストプラスマ症、コクシジオイデス症、分芽菌症、スポロトリクム症、クリプトコックス症、全身性カンジダ症、アスペルギルス症、ムコール菌症、菌腫、クロモミコーシス
リケッチア病：
チフス、ロッキー山紅斑熱、エーリキア症、東部地方のダニ媒介性リケッチア症（Ｅａｓｔｅｒｎ  Ｔｉｃｋ−Ｂｏｒｎｅ  Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｏｓｅｓ）、リケッチア痘瘡、Ｑ熱、バルトネラ症
寄生虫病：
マラリア、バベシア症、アフリカ眠り病、シャガス病、リーシュマニア症、ダムダム熱、トキソプラズマ症、髄膜脳炎、角膜炎、アメーバ症、ジアルジア鞭毛虫症、クリプトスポリジウム症、等胞子症、シクロスポリア症、微胞子虫症、回虫症、鞭虫感染症、鉤虫感染症、蟯虫感染症、眼幼虫移行症、旋毛虫病、メジナチュウ病、リンパ管フィラリア症、ロア糸状虫症、糸状虫症、イヌ糸状虫症、住血吸虫症、沼地皮膚症、肺吸虫症、肝吸虫、肝蛭症、肥大吸虫症、オピストルキス症、条虫感染症、水胞体疾患、多包虫症
ウイルス性疾患：
麻疹、亜急性硬化性全脳炎、風邪、おたふく風邪、風疹、バラ疹、第５病、水痘、呼吸器合胞体ウイルス感染、クループ、細気管支炎、感染性単核球症、ポリオ、ヘルパンギナ、手足口病、Ｂｏｒｎｈｏｌｍ病、性器ヘルペス、陰部疣贅、無菌性髄膜炎、心筋炎、心膜炎、胃腸炎、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、Ｒｅｙｅ症候群、川崎症候群、インフルエンザ、気管支炎、ウイルス性の「歩く」肺炎、急性熱性呼吸器疾患、急性咽頭結膜熱、流行性角結膜炎、単純ヘルペスウイルス１型（ＨＳＶ−１）、単純ヘルペスウイルス２型（ＨＳＶ−２）、帯状疱疹、巨細胞封入体症、狂犬病、進行性多病巣性白質脳障害、クル、致死性家族性不眠症、クロイツフェルトヤコブ病、Ｇｅｒｓｔｍａｎｎ−Ｓｔｒａｕｓｓｌｅｒ−Ｓｃｈｅｉｎｋｅｒ病、熱帯性痙性不全対麻痺、西部ウマ脳炎、カリフォルニア脳炎、セントルイス脳炎、黄熱病、デング熱、リンパ球性脈絡髄膜炎、ラッサ熱、出血熱、ハンタウイルス肺症候群、マールブルグウイルス感染、エボラウイルス感染、天然痘
感染症の複数の薬物治療
必要な患者に例示的な複合体および抗感染症薬剤である別の治療薬剤を投与する工程を含む、感染症を処置する方法が開示される。一実施形態では、抗感染症薬剤は、限定されないが、表６に列挙される薬剤である。
【０５４３】
表６
β−ラクタム抗生物質：
ペニシリンＧ、ペニシリンＶ、クロキサシリン（Ｃｌｏｘａｃｉｌｌｉｉｎ）、ジクロキサシリン、メチシリン、ナフシリン、オキサシリン、アンピシリン、アモキシシリン、バカンピシリン、アゾシリン、カルベニシリン、メズロシリン、ピペラシリン、チカルシリン
アミノグリコシド：
アミカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシン
マクロライド：
アジスロマイシン、クラリスロマイシン、エリスロマイシン、リンコマイシン、クリンダマイシン
テトラサイクリン：
デメクロサイクリン、ドキシサイクリン、ミノサイクリン、オキシテトラサイクリン、テトラサイクリン
キノロン類：
シノキサシン、ナリジキシン酸
フルオロキノロン
シプロフロキサシン、エノキサシン、グレパフロキサシン、レボフロキサシン、ロメフロキサシン、ノルフロキサシン、オフロキサシン、スパルフロキサシン、トロバフロキシシン（Ｔｒｏｖａｆｌｏｘｉｃｉｎ）
ポリペプチド：
バシトラシン、コリスチン、ポリミキシンＢ
スルフォンアミド：
スルフィソクサゾール、スルファメトキサゾール、サルファダイアジン、スルファメチゾール、スルファセタミド
雑多な抗菌剤：
トリメトプリム、スルファメタゾール（Ｓｕｌｆａｍｅｔｈａｚｏｌｅ）、クロラムフェニコール、バンコマイシン、メトロニダゾール、キヌプリスチン、ダルフォプリスチン、リファンビン、スペクチノマイシン、ニトロフラントイン
抗ウイルス剤：
一般の抗ウイルス剤：
イドクスラジン（Ｉｄｏｘｕｒａｄｉｎｅ）、ビダラビン、トリフルリジン、アシクロビル、ファムシシクロビル（Ｆａｍｃｉｃｙｃｌｏｖｉｒ）、ペンシシクロビル（Ｐｅｎｃｉｃｙｃｌｏｖｉｒ）、バラシクロビル、ガンシシクロビル（Ｇａｎｃｉｃｙｃｌｏｖｉｒ）、フォスカーネット、リバビリン、アマンタジン、リマンタジン、シドホビル、アンチセンスオリゴヌクレオチド、免疫グロブリン、インターフェロン
ＨＩＶ感染用薬物：
テノホビル、エムトリシタビン、ジドブジン、ジダノシン、ザルシタビン、スタブジン、ラミブジン、ネビラピン、デラビルジン、サキナビル、リトナビル、インディナビル、ネルフィナビル
【実施例】
【０５４４】
実施例１−化合物ＡＢの調製
【０５４５】
【化１９１】
2009500424.tif 000124
Ｆｍｏｃ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ（１４．６１ｇ、２４．３ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．；例えば、Ｆｉｒｅｓｔｏｎｅらに対する米国特許第６，２１４，３４５号を参照）をＤＭＦ（１２０ｍＬ、０．２Ｍ）で希釈し、この溶液にジエチルアミン（６０ｍＬ）を添加した。ＨＰＬＣによって反応をモニタリングすると２時間で反応が終了していることがわかった。反応混合物を濃縮し、得られた残渣を超音波を１０分間かけながら酢酸エチル（約１００ｍＬ）を用いて沈殿させた。エーテル（２００ｍＬ）を添加し、沈殿をさらに５分間超音波処理した。溶液を攪拌せずに３０分間放置し、次いでろ過し、減圧下で乾燥させてＶａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨを得て、これを精製せずに次の工程で使用した。収量：８．８４ｇ（９６％）。Ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ（８．０ｇ、２１ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１１０ｍＬ）で希釈し、得られた溶液をＭＣ−ＯＳｕ（Ｗｉｌｌｎｅｒら、
１９９３，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．４：５２１；６．５ｇ、２１ｍｍｏｌ、１．０ｅｑ．）で処理した。ＨＰＬＣによれば２時間後に反応が終了していた。反応混合物を濃縮し、得られた油状物を酢酸エチル（５０ｍＬ）を用いて沈殿させた。１５分間超音波処理した後、エーテル（４００ｍＬ）を添加し、すべての大きな粒子が破壊されるまで混合物をさらに超音波処理した。次いで、溶液をろ過し、固体を乾燥させてオフホワイト色固体の中間体を得た。収量：１１．６３ｇ（９６％）；ＥＳ−ＭＳ  ｍ／ｚ  ７５７．９［Ｍ−Ｈ］。
【０５４６】
このオフホワイト色固体の中間体（８．０ｇ、１４．０ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１２０ｍＬ、０．１２Ｍ）で希釈し、得られた溶液にビス（４−ニトロフェニル）カルボネート（８．５ｇ、２８．０ｍｍｏｌ、２．０ｅｑ．）およびＤＩＥＡ（３．６６ｍＬ、２１．０ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ．）を添加した。ＨＰＬＣによれば反応は１時間で終了していた。反応混合物を濃縮して油状物を得て、これをＥｔＯＡｃで沈殿させ、ＥｔＯＡｃ（約２５ｍＬ）で磨砕した。溶質をエーテル（約２００ｍＬ）でさらに沈殿させ、１５分間磨砕した。固体をろ過し、高減圧下で乾燥させ、化合物ＡＢを得た。この化合物ＡＢはＨＰＬＣによれば純度９３％であり、精製せずに次の工程で使用した。収量：９．７ｇ（９４％）。
【０５４７】
実施例２−固相合成による化合物ＭＭＡＺの調製
【０５４８】
【化１９２】
2009500424.tif 000125
Ｆｍｏｃ−アミノ酸−２−クロロトリチル樹脂（ＳＰ１）を以下の一般的な手順ＳＰ（ａ）によって調製した。以下の実施例には特定の樹脂の調製を示す。
【０５４９】
Ｆｍｏｃ−２−クロロ−Ｐｈｅ−２−クロロトリチル樹脂（ＳＰ１−ｚ）
Ｆｍｏｃ−２−クロロ−Ｌ−フェニルアラニン（３５４ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２（４ｍＬ）およびＤＩＥＡ（５８５μＬ、３．３６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）に溶解した。得られた溶液を２−クロロトリチルクロリド樹脂（５００ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ、１．４ｍｍｏｌ／ｇ）を含有する１０ｍＬシリンジに入れた。混合物を室温で６時間混ぜた。樹脂をろ過し、ＤＣＭ／ＭｅＯＨ／ＤＩＥＡ（１７：２：１；４×５ｍＬ）、ＭｅＯＨ（１×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（２×５ｍＬ）およびエチルエーテル（４×５ｍＬ）で洗浄し、減圧下で２時間乾燥させた。次いで、樹脂を減圧下で一晩放置した。Ｆｍｏｃ定量法によって組み込まれた量を決定した。既知量（４．４ｍｇ）の２−クロロ−Ｐｈｅ−２−クロロトリチル樹脂を１０ｍＬ容量フラスコに秤量した。このフラスコに２０％ピペリジン／ＤＭＦ（２ｍＬ）を移した。混合物を手で時々混ぜながら１時間開裂させた。このフラスコにＤＭＦ（８ｍＬ）を移し、全量を１０ｍＬにした。２０％ピペリジン／ＤＭＦ１０ｍＬを１０ｍＬ容量フラスコに入れ、ブランク溶液を調製した。ブランク溶液で分光光度計をゼロに設定した。吸光度を３０１ｎｍで測定し、組み込まれた濃度を以下の式によって得た。
【０５５０】
組み込まれた量（ｍｍｏｌ／ｇ）＝Ａ３０１×１０ｍＬ／７８００×ｗｔ
Ａ３０１は３０１ｎｍでの吸光度であり、７８００はピペリジン（ｐｉｐｅｒｄｉｎｅ）−フルオレノン付加物の吸光係数であり、ｗｔは使用した樹脂の重量（ｍｇ）である。Ｆｍｏｃ定量は、一般的に２ッ組で行なわれる。Ｆｍｏｃ−２−クロロ−Ｐｈｅ−２−クロロトリチル樹脂の組み込まれた濃度は０．６１２ｍｍｏｌ／ｇであると算出された。
【０５５１】
Ｆｍｏｃ−Ｍｅ−Ｐｈｅ−２−クロロトリチル樹脂（ＳＰ１−ｂ）
Ｆｍｏｃ−Ｍｅ−Ｌ−フェニルアラニン（３３７ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を一般的な手順ＳＰ（ａ）に記載されるように２−クロロトリチルクロリド樹脂に組み込んだ。Ｆｍｏｃ−Ｍｅ−Ｌ−Ｐｈｅ−２−クロロトリチル樹脂の組み込まれた濃度は０．４９０８ｍｍｏｌ／ｇであると算出された。
【０５５２】
Ｆｍｏｃ−Ｔｉｃ−２−クロロトリチル樹脂（ＳＰ１−ｃ）
Ｆｍｏｃ−Ｔｉｃ−ＯＨ（３３５ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を一般的な手順ＳＰ（ａ）に記載されるように２−クロロトリチルクロリド樹脂に組み込んだ。Ｆｍｏｃ−Ｔｉｃ−２−クロロトリチル樹脂の組み込まれた濃度は０．６３８ｍｍｏｌ／ｇであると算出された。
【０５５３】
Ｆｍｏｃ−Ｌ−β−ホモフェニルアラニン−２−クロロトリチル樹脂（ＳＰ１−ｄ）
Ｆｍｏｃ−Ｌ−β−ホモフェニルアラニン（３３７ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）を一般的な手順ＳＰ（ａ）に記載されるように２−クロロトリチルクロリド樹脂に組み込んだ。Ｆｍｏｃ−Ｌ−β−ホモフェニルアラニン−２−クロロトリチル樹脂の組み込まれた濃度は０．５７９ｍｍｏｌ／ｇであると算出された。
【０５５４】
Ｂｏｃ−ｐ−アミノ−Ｐｈｅ（Ｆｍｏｃ）−２−クロロトリチル樹脂（ＳＰ１−ｅ）
Ｂｏｃ−ｐ−アミノ−Ｐｈｅ（Ｆｍｏｃ）−ＯＨ（７０４ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）を一般的な手順ＳＰ（ａ）に記載されるように２−クロロトリチルクロリド樹脂に組み込んだ。Ｂｏｃ−ｐ−アミノ−Ｐｈｅ（Ｆｍｏｃ）−２−クロロトリチル樹脂の組み込まれた濃度は０．６５０ｍｍｏｌ／ｇであると算出された。
【０５５５】
Ｆｍｏｃ−３−シクロヘキシル−Ｌ−Ａｌａ−２−クロロトリチル樹脂（ＳＰ１−ｆ）
Ｆｍｏｃ−３−シクロヘキシル−Ｌ−アラニン（５５０ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）を一般的な手順ＳＰ（ａ）に記載されるように２−クロロトリチルクロリド樹脂に組み込んだ。Ｆｍｏｃ−３−シクロヘキシル−Ｌ−Ａｌａ−２−クロロトリチル樹脂の組み込まれた濃度は０．６６０ｍｍｏｌ／ｇであると算出された。
【０５５６】
Ｆｍｏｃ−Ｌ−４−チアゾリルアラニン−２−クロロトリチル樹脂（ＳＰ１−ｇ）
Ｆｍｏｃ−Ｌ−４−チアゾリルアラニン（５５２ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）を一般的な手順ＳＰ（ａ）に記載されるように２−クロロトリチルクロリド樹脂に組み込んだ。Ｆｍｏｃ−Ｌ−４−チアゾリルアラニン−２−クロロトリチル樹脂の組み込まれた濃度は０．７９０ｍｍｏｌ／ｇであると算出された。
【０５５７】
Ｆｍｏｃ−３−（３−ピリジル）−Ｌ−Ａｌａ−２−クロロトリチル樹脂（ＳＰ１−ｈ）
Ｆｍｏｃ−３−（３−ピリジル）−Ｌ−アラニン（５４３ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）を一般的な手順ＳＰ（ａ）に記載されるように２−クロロトリチルクロリド樹脂に組み込んだ。Ｆｍｏｃ−３−（３−ピリジル）−Ｌ−Ａｌａ−２−クロロトリチル樹脂の組み込まれた濃度は０．７９０ｍｍｏｌ／ｇであると算出された。
【０５５８】
商業的に利用可能なあらかじめ組み込まれた樹脂のＦｍｏｃ定量法は、一般的な手順ＳＰ（ｂ）に従って行なった。
【０５５９】
Ｈ−Ｌｅｕ−２−クロロトリチル樹脂（ＳＰ１−ｉ）
Ｆｍｏｃ−Ｃｌ（２５９ｍｇ、１ｍｍｏｌ）を無水ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）に溶解し、０．５Ｍ希釈溶液を作製した。この溶液をＨ−Ｌｅｕ−２−クロロトリチル樹脂（２５ｍｇ、０．８６ｍｍｏｌ／ｇ、０．０２１５ｍｍｏｌ）を含有する３ｍＬのプラスチックシリンジに移した。この混合物を２時間混ぜた。この樹脂をろ過し、ＤＭＦ（２×５ｍＬ）、ＣＨ２Ｃｌ２（２×５ｍＬ）およびエチルエーテル（２×５ｍＬ）で洗浄し、減圧下で２時間乾燥させた。この樹脂をＫａｉｓｅｒアミン試験で試験した。陰性の結果が得られた（遊離アミンが完全に保護されている）場合、一般的な手順ＳＰ（ａ）で記載されるようにＦｍｏｃ定量法を行なって組み込まれた濃度を得た。Ｈ−Ｌｅｕ−２−クロロトリチル樹脂の組み込まれた濃度は０．８５ｍｍｏｌ／ｇであると算出された。
【０５６０】
Ｈ−Ｍｅｔ−２−クロロトリチル樹脂（ＳＰ１−ｊ）
Ｈ−Ｍｅｔ−２−クロロトリチル樹脂（２５ｍｇ、０．６４ｍｍｏｌ／ｇ、０．０１６ｍｍｏｌ）を一般的な手順ＳＰ（ｂ）に記載されるように過剰のＦｍｏｃ−Ｃｌ（２５９ｍｇ、１ｍｍｏｌ）でアシル化した。Ｈ−Ｍｅｔ−２−クロロトリチル樹脂の組み込まれた濃度は０．２７ｍｍｏｌ／ｇであると算出された。
【０５６１】
Ｈ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−２−クロロトリチル樹脂（ＳＰ１−ｋ）
Ｈ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−２−クロロトリチル樹脂（２５ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ／ｇ、０．０３３ｍｍｏｌ）を一般的な手順ＳＰ（ｂ）に記載されるように過剰のＦｍｏｃ−Ｃｌ（２５９ｍｇ、１ｍｍｏｌ）でアシル化した。Ｈ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−２−クロロトリチル樹脂の組み込まれた濃度は０．７０ｍｍｏｌ／ｇであると算出された。
【０５６２】
Ｈ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−２−クロロトリチル樹脂（ＳＰ１−ｌ）
Ｈ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−２−クロロトリチル樹脂（２５ｍｇ、０．９０ｍｍｏｌ／ｇ、０．０２２ｍｍｏｌ）を一般的な手順ＳＰ（ｂ）に記載されるように過剰のＦｍｏｃ−Ｃｌ（２５９ｍｇ、１ｍｍｏｌ）でアシル化した。Ｈ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−２−クロロトリチル樹脂の組み込まれた濃度は０．８８ｍｍｏｌ／ｇであると算出された。
【０５６３】
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−２−クロロ−Ｐｈｅ−２−クロロトリチル樹脂
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−２−クロロ−Ｐｈｅ−２−クロロトリチル樹脂を一般的な手順ＳＰ（ｃ）に従って調製した。簡単に言うと、２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液（５ｍＬ）をＦｍｏｃ−２−クロロ−Ｐｈｅ−２−クロロトリチル樹脂を含有するシリンジに入れ、混合物を２時間混ぜた。樹脂をろ過し、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）およびエチルエーテル（４×５ｍＬ）で洗浄し、減圧下で２時間乾燥させた。
【０５６４】
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ（２７８ｍｇ、０．６８０ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（２５９ｍｇ、０．６８０ｍｍｏｌ、２ｅｑ．）を無水ＤＭＦ（５ｍＬ）およびＤＩＥＡ（２３７μＬ、１．３６ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）に溶解した。得られた溶液をＨ−２−クロロ−Ｐｈｅ−２−クロロトリチル樹脂（５５５．６ｍｇ、０．３４０ｍｍｏｌ）を含有する１０ｍＬプラスチックシリンジに移した。混合物を室温で一晩混ぜた。Ｋａｉｓｅｒアミン試験および少量の樹脂が開裂した材料のＬＣＭＳ分析（２％ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２を用いた）で反応の終了を判断した。樹脂をろ過し、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）およびエチルエーテル（４×５ｍＬ）で洗浄し、減圧下で２時間乾燥させた。
【０５６５】
２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液（５ｍＬ）をＦｍｏｃ−Ｄａｐ−２−クロロ−Ｐｈｅ−２−クロロトリチル樹脂を含有するシリンジに添加し、混合物を２時間混ぜた。この樹脂をろ過し、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）およびエチルエーテル（４×５ｍＬ）で洗浄し、減圧下で２時間乾燥させた。
【０５６６】
Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−ＯＨ（５１０ｍｇ、０．６８０ｍｍｏｌ、２ｅｑ．）およびＨＡＴＵ（２５９ｍｇ、０．６８０ｍｍｏｌ、２ｅｑ．）を無水ＤＭＦ（５ｍＬ）およびＤＩＥＡ（２３７μＬ、１．７０ｍｍｏｌ、５ｅｑ．）に溶解した。得られた溶液をＨ−Ｄａｐ−２−クロロ−Ｐｈｅ−２−クロロトリチル樹脂を含有する１０ｍＬプラスチックシリンジに移した。混合物を６時間混ぜた。少量の樹脂が開裂した材料のＬＣＭＳ分析（２％ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２を用いた）で反応の終了を判断した。この樹脂をろ過し、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）およびエチルエーテル（４×５ｍＬ）で洗浄し、減圧下で２時間乾燥させた。
【０５６７】
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−２−クロロ−Ｐｈｅ−ＯＨ（ＳＰ２−ａ）
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−２−クロロ−Ｐｈｅを以下の一般的な手順ＳＰ（ｄ）に従って調製した。簡単に言うと、２０％ピペリジンのＤＭＦ溶液（５ｍＬ）をＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−２−クロロ−Ｐｈｅ−２−クロロトリチル樹脂を含有するシリンジに入れ、混合物を２時間混ぜた。この樹脂をろ過し、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）、ＤＭＦ（４×５ｍＬ）、ＤＣＭ（４×５ｍＬ）およびエチルエーテル（４×５ｍＬ）で洗浄し、減圧下で２時間乾燥させた。樹脂を減圧下に一晩放置してさらに乾燥させた。
【０５６８】
２％ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２（５ｍＬ）溶液をＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−２−クロロ−Ｐｈｅ−２−クロロトリチル樹脂を含有する１０ｍＬプラスチックシリンジに移し、混合物を室温で５分間混ぜた。ろ液を１００ｍＬ丸底フラスコに集めた。このプロセスを３回繰り返した。ろ液を蒸発させると、白色固体が残った。分取ＨＰＬＣで精製し、白色固体２００ｍｇ（６７％ＴＦＡ塩）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９６％、６．７２分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ３９Ｈ６４ＣｌＮ５Ｏ８として計算値７６５．４４；実測値７６７．０６３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５６９】
Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｍｅ−Ｐｈｅ−２−クロロトリチル樹脂
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｃ）に記載されるようにそれぞれＨ−Ｍｅ−Ｌ−Ｐｈｅ−２−クロロトリチル樹脂とカップリングさせた。
【０５７０】
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｍｅ−Ｐｈｅ−ＯＨ（ＳＰ２−ｂ）
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｍｅ−Ｐｈｅ−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｄ）に記載されるように樹脂から開裂させた。ろ液を蒸発させると白色固体が残った。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体６２．３ｍｇ（２６％ＴＦＡ塩）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９８％、６．８８分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ４０Ｈ６７Ｎ５Ｏ８として計算値７４５．５；実測値７４６．９０８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５７１】
Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｔｉｃ−２−クロロトリチル樹脂
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｃ）に記載されるようにそれぞれＨ−Ｔｉｃ−２−クロロトリチル樹脂とカップリングさせた。
【０５７２】
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｔｉｃ−ＯＨ（ＳＰ２−ｃ）
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｔｉｃ−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｄ）に記載されるように樹脂から開裂させた。ろ液を蒸発させると白色固体が残った。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体１７８．４０ｍｇ（５５％ＴＦＡ塩）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９８％、６．７４分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ４０Ｈ６５Ｎ５Ｏ８として計算値７４３．４８；実測値７４４．８３９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５７３】
Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｌ−β−ホモフェニルアラニン−２−クロロトリチル樹脂
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｃ）に記載されるようにそれぞれＨ−Ｌ−β−ホモフェニルアラニン−２−クロロトリチル樹脂とカップリングさせた。
【０５７４】
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｌ−β−ホモフェニルアラニン−ＯＨ（ＳＰ２−ｄ）
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｌ−β−ホモフェニルアラニン−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｄ）に記載されるように樹脂から開裂させた。ろ液を蒸発させると白色固体が残った。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体２８２．９ｍｇ（９９％ＴＦＡ塩）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９８％、６．６５分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ４０Ｈ６７Ｎ５Ｏ８として計算値７４５．５；実測値７４６．８６９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５７５】
Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｂｏｃ−ｐ−アミノ−Ｐｈｅ−２−クロロトリチル樹脂
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｃ）に記載されるようにそれぞれＢｏｃ−ｐ−アミノ−Ｐｈｅ−２−クロロトリチル樹脂とカップリングさせた。
【０５７６】
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｂｏｃ−ｐ−アミノ−Ｐｈｅ−ＯＨ（ＳＰ２−ｅ）
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｂｏｃ−ｐ−アミノ−Ｐｈｅ−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｄ）に記載されるように樹脂から開裂させた。ろ液を蒸発させると白色固体が残った。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体２１０．６ｍｇ（４８％ＴＦＡ塩）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９８％、６．９分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ４４Ｈ７４Ｎ６Ｏ１０として計算値８４６．５５；実測値８４７．４５９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５７７】
Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−３−シクロヘキシル−Ｌ−Ａｌａ−２−クロロトリチル樹脂
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｃ）に記載されるようにそれぞれＨ−３−シクロヘキシル−Ｌ−Ａｌａ−２−クロロトリチル樹脂とカップリングさせた。
【０５７８】
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−３−シクロヘキシル−Ｌ−Ａｌａ−ＯＨ（ＳＰ２−ｆ）
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−３−シクロヘキシル−Ｌ−ＡＩａ−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｄ）に記載されるように樹脂から開裂させた。ろ液を蒸発させると白色固体が残った。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体３４３．４ｍｇ（９９％ＴＦＡ塩）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９８％、６．８７分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ３９Ｈ７１Ｎ５Ｏ８として計算値７３７．５３；実測値７３８．９７４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５７９】
Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｌ−４−チアゾリルアラニン−２−クロロトリチル樹脂
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｃ）に記載されるようにそれぞれＨ−Ｌ−４−チアゾリルアラニン−２−クロロトリチル樹脂とカップリングさせた。
【０５８０】
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｌ−４−チアゾリルアラニン（ＳＰ２−ｇ）
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｌ−４−チアゾリルアラニンを一般的な手順ＳＰ（ｄ）に記載されるように樹脂から開裂させた。ろ液を蒸発させると白色固体が残った。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体３５７ｍｇ（８７％ＴＦＡ塩）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９８％、６．２３分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ３９Ｈ６２Ｎ６Ｏ８Ｓとして計算値７３８．４３；実測値７３９．８８９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５８１】
Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−３−（３−ピリジル）−Ｌ−Ａｌａ−２−クロロトリチル樹脂
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｃ）に記載されるようにそれぞれＨ−３−（３−ピリジル）−Ｌ−Ａｌａ−２−クロロトリチル樹脂とカップリングさせた。
【０５８２】
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−３−（３−ピリジル）−Ｌ−Ａｌａ−ＯＨ（ＳＰ２−ｈ）
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−３−（３−ピリジル）−Ｌ−ＡＩａ−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｄ）に記載されるように樹脂から開裂させた。ろ液を蒸発させると白色固体が残った。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体３８８．６ｍｇ（９４％ＴＦＡ塩）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９８％、６．１３分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ３８Ｈ６４Ｎ６Ｏ８として計算値７３２．４８；実測値７３３．８４２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５８３】
Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｌｅｕ−２−クロロトリチル樹脂
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｃ）に記載されるようにそれぞれＨ−Ｌｅｕ−２−クロロトリチル樹脂とカップリングさせた。
【０５８４】
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｌｅｕ−ＯＨ（ＳＰ２−ｉ）
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｌｅｕ−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｄ）に記載されるように樹脂から開裂させた。ろ液を蒸発させると白色固体が残った。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体２１７．４ｍｇ（６２％ＴＦＡ塩）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９８％、６．４３分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ３６Ｈ６７Ｎ６Ｏ８として計算値６９７．５；実測値６９８．９９９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５８５】
Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｍｅｔ−２−クロロトリチル樹脂
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｃ）に記載されるようにそれぞれＨ−Ｍｅｔ−２−クロロトリチル樹脂とカップリングさせた。
【０５８６】
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｍｅｔ−ＯＨ（ＳＰ２−ｊ）
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｍｅｔ−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｄ）に記載されるように樹脂から開裂させた。ろ液を蒸発させると白色固体が残った。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体９０．７ｍｇ（８２％ＴＦＡ塩）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９８％、６．３９分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ３５Ｈ６５Ｎ５Ｏ８Ｓとして計算値７１５．４６；実測値７１６．３９９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５８７】
Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−２−クロロトリチル樹脂
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｃ）に記載されるようにそれぞれＨ−Ｔｒｐ−（Ｂｏｃ）−２−クロロトリチル樹脂とカップリングさせた。
【０５８８】
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（ＳＰ２−ｋ）
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｄ）に記載されるように樹脂から開裂させた。ろ液を蒸発させると白色固体が残った。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体１５１．７ｍｇ（４２％ＴＦＡ塩）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９８％、７．３９分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ４６Ｈ７４Ｎ６Ｏ１０として計算値８７０．５５；実測値８７１．６４５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５８９】
Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−２−クロロトリチル樹脂
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ−ＯＨおよびＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｃ）に記載されるようにそれぞれＨ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−２−クロロトリチル樹脂とカップリングさせた。
【０５９０】
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（ＳＰ２−ｌ）
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨを一般的な手順ＳＰ（ｄ）に記載されるように樹脂から開裂させた。ろ液を蒸発させると白色固体が残った。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体２１９．４ｍｇ（５５％ＴＦＡ塩）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９８％、６．６７分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ３９Ｈ７１Ｎ５Ｏ１０として計算値７６９．５２；実測値７７０．９８９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５９１】
実施例３．ＭＣ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺの調製
【０５９２】
【化１９３】
2009500424.tif 000126
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−２−クロロ−Ｐｈｅ−ＯＨ（ＳＰ３−ａ）
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＣＯｐＮＰを一般的な手順Ｈに記載されるようにＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−２−クロロ−Ｐｈｅ−ＯＨに接続した。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体１３．５０ｍｇ（１４％）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９６％、７．２３分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ６８Ｈ１０２ＣｌＮ１１Ｏ１６として計算値１３６３．７２；実測値１３６４．７６６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５９３】
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｍｅ−Ｐｈｅ−ＯＨ（ＳＰ３−ｂ）
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＣＯｐＮＰを一般的な手順Ｈに記載されるようにＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｍｅ−Ｐｈｅ−ＯＨに接続した。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体１７．１ｍｇ（１３％）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９６％、７．２４分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ６９Ｈ１１０Ｎ１１Ｏ１６として計算値１３４３．７７；実測値ｍ／ｚ  １３４４．８３５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５９４】
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＥ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｔｉｃ−ＯＨ（ＳＰ３−ｃ）
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＣＯｐＮＰを一般的な手順Ｈに記載されるようにＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｔｉｃ−ＯＨに接続した。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体２．７ｍｇ（２％）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９５％、７．２１分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ６９Ｈ１０３Ｎ１１Ｏ１６として計算値１３４１．７６；実測値ｍ／ｚ  １３４２．８４４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５９５】
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｌ−β−ホモフェニルアラニン−ＯＨ（ＳＰ３−ｄ）
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＣＯｐＮＰを一般的な手順Ｈに記載されるようにＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｌ−β−ホモフェニルアラニン−ＯＨに接続した。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体３．１ｍｇ（１．５％）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９５％、７．２６分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ６９Ｈ１０５Ｎ１１Ｏ１６として計算値１３４３．７７；実測値ｍ／ｚ  １３４４．７８８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５９６】
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−ｐ−アミノ−Ｐｈｅ−ＯＨ（ＳＰ３−ｅ）
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＣＯｐＮＰを一般的な手順Ｈに記載されるようにＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｂｏｃ−ｐ−アミノ−Ｐｈｅ−ＯＨに接続した。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体４．４ｍｇ（２．５％）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９５％、７．５４分。ＬＣＭＳ  Ｃ７３Ｈ１１２Ｎ１２Ｏ１８として計算値（ＭＨ）＋１４４４．８２；実測値ｍ／ｚ  １４４５．９７２。ＴＦＡ／ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）の５０％溶液をマレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢＣ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｂｏｃ−ｐ−アミノ−Ｐｈｅ−ＯＨ（３．０ｍｇ、０．００２６３ｍｍｏｌ）に移した。３時間後にＢｏｃ基の脱保護が終了した。溶媒を除去すると白色固体が残った。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体２．３ｍｇ（８２％）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９６％、７．５４分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ６８Ｈ１０４Ｎ１２Ｏ１６として計算値１３４４．７７；実測値１３４５．５３９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５９７】
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−３−シクロヘキシル−Ｌ−Ａｌａ−ＯＨ（ＳＰ３−ｆ）
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＣＯｐＮＰを一般的な手順Ｈに記載されるようにＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−３−シクロヘキシル−Ｌ−Ａｌａ−ＯＨに接続した。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体１．５ｍｇ（１％）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９５％、７．２８分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ６８Ｈ１０９Ｎ１１Ｏ１６として計算値１３３６．６６；実測値１３３７．１６６（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５９８】
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｌ−４−チアゾリルアラニン（ＳＰ３−ｇ）
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＣＯｐＮＰを一般的な手順Ｈに記載されるようにＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｌ−４−チアゾリルアラニンに接続した。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体０．５ｍｇ（０．２％）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９６％、６．９１分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ６５Ｈ１００Ｎ１２Ｏ１６Ｓとして計算値１３３６．７１；実測値１３３７．８６７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０５９９】
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｓ−Ｇ−ピリジルＶＬ−Ａｌａ−ＯＨ（ＳＰ３−ｈ）
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＣＯｐＮＰを一般的な手順Ｈに記載されるようにＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−３−（３−ピリジル）−Ｌ−Ａｌａ−ＯＨに接続した。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体４．４ｍｇ（１．６％）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９８％、６．９４分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ６７Ｈ１０２Ｎ１２Ｏ１６として計算値１３３０．７５；実測値１３３１．６８２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６００】
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｌｅｕ−ＯＨ（ＳＰ３−ｉ）
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＣＯｐＮＰを一般的な手順Ｈに記載されるようにＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｌｅｕ−ＯＨに接続した。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体１０．３ｍｇ（４．１％）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９８％、７．１６分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ６５Ｈ１０５Ｎ１１Ｏ１６として計算値１２９５．７７；実測値１２９６．５２４（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６０１】
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｍｅｔ−ＯＨ（ＳＰ３−ｊ）
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＣＯｐＮＰを一般的な手順Ｈに記載されるようにＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｍｅｔ−ＯＨに接続した。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体７．２ｍｇ（６％）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９８％、７．０６分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ６４Ｈ１０３Ｎ１１Ｏ１６Ｓとして計算値１３１３．７３；実測値１３１４．７２９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６０２】
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨ（ＳＰ３−ｋ）
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＣＯｐＮＰを一般的な手順Ｈに記載されるようにＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｔｒｐ（Ｂｏｃ）−ＯＨに接続した。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体７．４ｍｇ（１２％）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９８％、７．６２分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ７５Ｈ１１２Ｎ１２Ｏ１８として計算値１４６８．８２；実測値１４６９．４７１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６０３】
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｇｌｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨ（ＳＰ３−ｌ）
マレイミドカプロイル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＣＯｐＮＰを一般的な手順Ｈに記載されるようにＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−ＧＩｕ（ＯｔＢｕ）−ＯＨに接続した。分取ＨＰＬＣ精製によって白色固体２．９ｍｇ（１．６％）を得た。逆相ＨＰＬＣ分析：９５％、７．４７分。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）Ｃ６８Ｈ１０９Ｎ１１Ｏ１８として計算値１３６７．８；実測値１３６８．４５２（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０６０４】
実施例４．ＭＭＡＺ（１）の液相調製
【０６０５】
【化１９４】
2009500424.tif 000127
ＭＭＡＺの合成をスキーム５および６に記載する。Ｆｍｏｃ保護されたアミノ酸を例えば、十分に確立された手順でＦｍｏｃ−ＯＳｕを用いて保護されていないアミノ酸から調製することができる。（例えば、ＧｒｅｅｎｅおよびＷｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，ｐ．５０６参照）。
【０６０６】
Ｆｍｏｃ−ドラプロリン（Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ）の調製
Ｂｏｃ−ドラプロリン（５８．８ｇ、０．２０５ｍｏｌ）を１，４−ジオキサン（２５６ｍＬ、１．０２ｍｏｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）中の４Ｎ  ＨＣｌに懸濁させた。１．５時間攪拌した後、ＴＬＣ分析（１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）によって反応が終了していることを示し、混合物をほぼ乾燥するまで濃縮した。さらに１，４−ジオキサン（５０ｍＬ）を入れ、混合物を乾燥するまで濃縮し、減圧下で一晩乾燥させた。得られた白色固体をＨ２Ｏ（４００ｍＬ）に溶解し、メカニカルスターラーおよび温度プローブを取り付けた３Ｌの３ッ口丸底フラスコに移した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２１４．３ｍＬ、１．２３ｍｏｌ、Ａｃｒｏｓ）を１分間かけて添加すると、発熱して２０．５℃から２８．２℃になった（内温）。混合物を氷浴で冷却し、１，４−ジオキサン（４００ｍＬ）を添加した。反応温度を９℃未満に維持しつつ、Ｆｍｏｃ−ＯＳｕ（８９．９０ｇ、０．２６７ｍｏｌ、Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈ）の１，４−ジオキサン（４００ｍＬ）溶液を滴下漏斗から１５分かけて添加した。混合物を室温まで加温し、１９時間攪拌し、その後に混合物をロータリーエバポレーションで濃縮し、スラリー水溶液（３９０ｇ）を得た。この懸濁物をＨ２Ｏ（７５０ｍＬ）およびＥｔ２Ｏ（７５０ｍＬ）で希釈した。層分離し、有機層にいくらか固体が存在していた。水層を濃ＨＣｌ（３０ｍＬ）で酸性にし、ＥｔＯＡｃ（３×５００ｍＬ）で抽出した。抽出物を合わせたものをＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、濃縮した。Ｅｔ２Ｏ抽出物を飽和ＮａＨＣＯ３（２００ｍＬ）で１回抽出し、水層にいくらか固体が存在していた。水性懸濁物を濃ＨＣｌ（５０ｍＬ）で酸性にし、Ｅｔ２Ｏ（５０ｍＬ）で抽出し、有機層にいくらか固体が存在していた。有機層をろ過し、濃縮した。この２つの生成物を合わせ、シリカゲルによるフラッシュクロマトグラフィーでＣＨ２Ｃｌ２（３．５Ｌ）、次いで３％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（９Ｌ）で溶出させ精製し、Ｆｍｏｃ−ドラプロリン６８．２３ｇを白色泡状物として得た（８１％、ＨＰＬＣ（ＡＵＣ）による純度９７．５％）。
【０６０７】
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ−Ｚの調製
フェニルアラニンバイオ等価体（３ｍｍｏｌ）の塩および／または保護された形態、Ｎ−Ｂｏｃ−ドラプロリン（６６８ｍｇ、１ｅｑ．）、ＤＥＰＣ（８２０μＬ、１．５ｅｑ．）およびＤＩＥＡ（１．２ｍＬ）をジクロロメタン（３ｍＬ）で希釈した。室温（約２８℃）で２時間後、反応混合物をジクロロメタン（２０ｍＬ）で希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×１０ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ水溶液（２×１０ｍＬ）で続けて洗浄した。有機層を分離し、濃縮した。得られた残渣を酢酸エチルに再び懸濁させ、酢酸エチル中のフラッシュクロマトグラフィーで精製した。関連するフラクションを集め、濃縮してジペプチドを得た。当業者に既知の方法で保護基を開裂させた。
【０６０８】
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ−Ｚの代替的な調製
カルボキシ基で保護されたアミノ酸Ｚ（４８．３ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１０５ｍＬ、Ａｃｒｏｓ）に５分間懸濁させ、Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ（１９．８０ｇ、４８．３ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を氷浴で冷却し、ＴＢＴＵ（１７．０８ｇ、５３．２０ｍｍｏｌ、Ｍａｔｒｉｘ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ）を添加した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２５．３ｍＬ、１４５．０ｍｍｏｌ、Ａｃｒｏｓ）をシリンジで３分間かけて添加した。１時間後、氷浴をはずし、混合物を３０分間かけて加温した。この混合物を水（１Ｌ）に注ぎ、酢酸エチル（３００ｍＬ）で抽出した。分離した後、水層を酢酸エチル（２×１５０ｍＬ）で再び抽出した。有機層を合わせたものを食塩水（１５０ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、ろ過し（ろ紙）、不溶解物（無機物およびいくらかのジベンゾフルベン）を除去した。濃縮後、残渣をシリカ（４１ｇ）に吸着させ、クロマトグラフィー（２２ｃｍ×８ｃｍカラム；６５％ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（２．５Ｌ）；３３％ヘプタン／ＥｔＯＡｃ（３．８Ｌ））で精製して生成物を得た。
【０６０９】
Ｄａｐ−Ｚの調製
１Ｌ丸底フラスコにＦｍｏｃ−Ｄａｐ−Ｚ、ＣＨ２Ｃｌ２（１２２ｍＬ）およびジエチルアミン（６１ｍＬ、Ａｃｒｏｓ）を入れた。この溶液を室温で攪拌し、ＨＰＬＣで反応終了をモニタリングした。７時間後、混合物を濃縮した（浴温＜３０℃）。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（３００ｍＬ）に懸濁させ、濃縮した。この操作を２回繰り返した。残渣にＭｅＯＨ（２０ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（３００ｍＬ）を添加し、溶液を濃縮した。残渣をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）およびトルエン（４００ｍＬ）で懸濁させ、濃縮し、残った残渣を減圧下に一晩置き、生成物を得た。
【０６１０】
Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｚの調製
トリペプチドＦｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−Ｏ−ｔ−Ｂｕ（ＷＯ０２／０８８１７２、名称「Ｐｅｎｔａｐｅｐｔｉｄｅ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｔｈｅｒｅｔｏ」に記載されるように調製；０．７３ｍｍｏｌ）をＴＦＡ（３ｍＬ）およびジクロロメタン（３ｍＬ）で室温で２時間処理した。この混合物を乾燥するまで濃縮した。残渣をトルエン（３×２０ｍＬ）で共沸させ、減圧下で一晩乾燥させた。残渣をジクロロメタン（５ｍＬ）で希釈し、脱保護したジペプチド（２８７ｍｇ、０．７３ｍｍｏｌ）を添加し、次いでＤＩＥＡ（５５０μＬ、４ｅｑ．）およびＤＥＰＣ（２０１μＬ、１．１ｅｑ．）を添加した。室温で２時間後、反応混合物を酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈し、１０％クエン酸水溶液（２×２０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（２×１０ｍＬ）および飽和ＮａＣｌ水溶液（１０ｍＬ）で続けて洗浄した。有機層を分離し、濃縮した。得られた残渣を酢酸エチルで再び懸濁させ、酢酸エチルを用いたフラッシュクロマトグラフィーで精製した。関連するフラクションを集め、濃縮してＦｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−ｄａｐ−Ｚを得た。
【０６１１】
Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｚの代替的な調製
粗Ｄａｐ−Ｚ（３９．１ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１３５ｍＬ、Ａｃｒｏｓ）に５分間懸濁させ、Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−ＯＨ（２４．９４ｇ、３９．１ｍｍｏｌ、調製のための実施例２を参照）を添加した。この混合物を氷浴で冷却し、ＴＢＴＵ（１３．８１ｇ、４３．０ｍｍｏｌ、Ｍａｔｒｉｘ  Ｉｎｎｏｖａｔｉｏｎｓ）を添加した。Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２０．５ｍＬ、１１７．３ｍｍｏｌ、Ａｃｒｏｓ）をシリンジで２分間かけて添加した。１時間後、氷浴をはずし、混合物を３０分間かけて加温した。この混合物を水（１．５Ｌ）に注ぎ、酢酸エチル（４８０ｍＬ）で希釈した。１５分間放置した後、層を分離し、水層を酢酸エチル（３００ｍＬ）で抽出した。有機層を合わせたものを食塩水（２００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、ろ過し（ろ紙）、不溶解物（無機物およびいくらかのジベンゾフルベン）を除去した。濃縮後、残渣（４９ｇ）をフラスコからかきとり、シリカ（４９ｇ）に吸着させ、クロマトグラフィーで精製し（１５ｃｍ×１０ｃｍ径のカラム；２：１ＥｔＯＡｃ／ヘプタン（３Ｌ）、ＥｔＯＡｃ（５Ｌ）；２５０ｍＬフラクション）、Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｚを得た。
【０６１２】
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｚの調製
生成物（０．２ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（３ｍＬ）、ジエチルアミン（１ｍＬ）で希釈した。反応混合物を室温で一晩攪拌した。溶媒を除去すると油状物が得られ、これをフラッシュシリカゲルクロマトグラフィーでジクロロメタン中０−１０％ＭｅＯＨの段階的な勾配で精製し、化合物１を得た。
【０６１３】
上の手順を用いて、以下の式の化合物を調製した。
【０６１４】
【化１９５】
2009500424.tif 000128
実施例５−ＭＭＡＺ化合物の合成
この合成は、
【０６１５】
【化１９６−１】
2009500424.tif 000129
が
【０６１６】
【化１９６−２】
2009500424.tif 000130
であるＭＭＡＺ化合物の調製を記載する。
【０６１７】
３−フェニルセリンはＡｌｄｒｉｃｈから入手できる。
【０６１８】
ジメチルバリン−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−フェニルセリンの合成
【０６１９】
【化１９７】
2009500424.tif 000131
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ（１．２ｇ、２．９３ｍｍｏｌｅ）の無水ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）の懸濁物に、Ｎ，Ｎ’−ジスクシンイミジルカルボネート（９０１ｍｇ、１．２ｅｑ）を添加し、次いでＤＩＥＡ（１．２８ｍＬ、２．５ｅｑ）を添加した。反応混合物を室温で一晩攪拌した。追加量のＮ．Ｎ’−ジスクシンイミジルカルボネート（９０１ｍｇ、１．２ｅｑ）を入れ、次いでＤＩＥＡ（１．２８ｍＬ、２．５ｅｑ）を入れ、１８時間以上攪拌を続けた。この反応混合物をＥｔＯＡｃで希釈し、有機層を０．１Ｍ  ＨＣｌ水溶液で２回洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、ろ過し、減圧下で濃縮した。ＣＨ２Ｃｌ２中ＭｅＯＨを０％から５％の段階的な勾配でのシリカゲルカラムクロマトグラフィーによって、Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ−ＯＳｕ  １．１２ｇ（収率７５％）をオフホワイト色泡状物として得た。
【０６２０】
Ｆｍｏｃ−Ｄａｐ−ＯＳｕ（０．６１５ｇ、１．２１ｍｍｏｌ）を乾燥ＤＭＳＯ（６ｍＬ）に懸濁させた。Ｄ，Ｌ−トレオ−３−フェニルセリン（０．２ｇ、１．１ｍｍｏｌ）を添加し、反応混合物を室温で一晩攪拌した。この混合物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣに直接入れ、０．１％ＴＦＡ水溶液中ＭｅＣＮを１０％から９０％の直線的な勾配で生成物を単離した。得られたＦｍｏｃ−Ｄａｐ−フェニルセリン２８０ｍｇ（収率４４％）を乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）に懸濁させ、ジメチルアミン（２ｍＬ）で室温で４時間処理した。揮発性物を減圧下で除去した。残渣をＥｔ３Ｎ／ＣＨ２Ｃｌ２で３回共沸させ、可能な限り多くのジエチルアミンを除去し、減圧下で一晩攪拌した。残渣をエーテルで磨砕し、ＤＢＦを除去した。Ｄａｐ−フェニルセリンを乾燥し、精製することなく使用した。
【０６２１】
ジメチルＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−ＣＯＯＨ（１３０ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ、１ｅｑ）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（３９ｍｇ、０．３ｍｍｏｌ、１ｅｑ）およびＤＣＣ（９３ｍｇ、１．５ｅｑ）を乾燥ＣＨ２Ｃｌ２（１．５ｍＬ）に懸濁させた。これに、ＤＭＡＰ（１ｍｇ、触媒）を添加し、反応混合物を室温で一晩攪拌した。沈殿をろ別した。このようにして調製したジメチルＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−ＯＳｕをＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）に懸濁させ、この混合物をＤａｐ−フェニルセリンに添加し、次いでＤＭＳＯ（４ｍＬ）およびＤＩＥＡ（１００ｕＬ）を添加した。反応物を室温で一晩攪拌した。沈殿をろ別した。ＣＨ２Ｃｌ２をＤＭＳＯと交換し、生成物を分取ＲＰ−ＨＰＬＣ（０．００５％ＴＦＡ水溶液中ＭｅＣＮを１０％から９０％の直線的な勾配）で２つのジアステレオ異性体として単離した。異性体Ａ：８４ｍｇ、白色泡状物。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）７６２．６７（Ｍ＋Ｈ）＋、１０．５８分。異性体Ｂ：６２ｍｇ、白色固体。ＬＣ−ＭＳ  ｍ／ｚ（ＥＳ＋）７６２．５４（Ｍ＋Ｈ）＋、１０．６７分。
【０６２２】
Ｎ−メチルバリン−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−フェニルセリンの合成
【０６２３】
【化１９８】
2009500424.tif 000132
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−フェニルセリンをＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌトリペプチドを用いて上述のように調製することができる。その後、Ｆｍｏｃは、一般的な手順Ｅに従って最終薬物から開裂させることができる。
【０６２４】
適切に保護された３−フェニルセリンを酸化条件下（例えば、クロロクロム酸ピリジニウム（ＰＣＣ）／ピリジン（例えば、Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，１９８２，２４５，８８１，総説））にさらし、対応するケトンを得ることができる。このケトンを、例えば、Ｋａｎｅｋｏら、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９９１，２（３），１３３−１４１に記載されるように種々のヒドラゾン（ヒドラゾン、アシルヒドラゾン、セミカルバゾン、チオセミカルバゾンなど）にさらに変換することができる。または、アミノ保護された３−フェニルセリンおよびカルボキシレート保護された３−フェニルセリンのヒドロキシル基をＤＣＣ／ＤＭＡＰ化学を用いて種々の酸と容易に縮合させ、エステルを得ることができる（Ｌａｒｏｃｋ，Ｒ．Ｃ．，Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ，１９９９，ｐ．１９３７）。
【０６２５】
メチルホスホン酸ジイミダゾリド（Ａｌｄｒｉｃｈから市販のメチルホスホン酸ジクロリド）と保護された３−フェニルセリンとを反応させ、次いで水によって加水分解させて作成することによって３−フェニルセリンのメチルホスホネートエステルを作成することができる。
【０６２６】
【化１９９】
2009500424.tif 000133
同じ手順でオキシ塩化リン（Ａｌｄｒｉｃｈ）から３−フェニルセリンホスフェートエステルを作成することができる。上述のものと同様の化学をセリンおよびスレオニンの種々の誘導体を調製するのに使用することができる。
【０６２７】
上のフェニルアラニンアナログを用い、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−Ｏ−ｔ−Ｂｕと複合体を形成させ、実施例４の手順に従うことによってＭＭＡＺを調製する。
【０６２８】
実施例６−ＭＭＡＺ化合物の合成
この合成は、
【０６２９】
【化２００−１】
2009500424.tif 000134
が
【０６３０】
【化２００−２】
2009500424.tif 000135
であるＭＭＡＺ化合物の調製を記載する。
【０６３１】
Ｈａｌがハロゲンである以下に示される鏡像異性体的に純粋なジアミノ酸を、Ｚｈｏｕら、１９９９，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ：Ａｓｙｍｍｅｔｒｙ  １０（５）：８５５−８６２に記載されるように簡便に調製することができる。
【０６３２】
【化２０１】
2009500424.tif 000136
上のフェニルアラニンアナログを用い、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−Ｏ−ｔ−Ｂｕと複合体を形成させ、実施例４の手順に従うことによってＭＭＡＺを調製する。
【０６３３】
実施例７−ＭＭＡＺ化合物の合成
この合成は、
【０６３４】
【化２０２−１】
2009500424.tif 000137
が
【０６３５】
【化２０２−２】
2009500424.tif 000138
であるＭＭＡＺ化合物の調製を記載する。
【０６３６】
３−アリール−グルタミン酸および他の３−置換されたピログルタミン酸およびグルタミン酸をＴｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ９（２）：２１７−２２９（２００２）またはＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ６６（４）：１３３９−１３５０（２００１）に記載されるように調製することができる。
【０６３７】
上のフェニルアラニンアナログを用い、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−Ｏ−ｔ−Ｂｕと複合体を形成させ、実施例４の手順に従うことによってＭＭＡＺを調製する。
【０６３８】
実施例８−ＭＭＡＺ化合物の合成
この合成は、
【０６３９】
【化２０３−１】
2009500424.tif 000139
が
【０６４０】
【化２０３−２】
2009500424.tif 000140
であるＭＭＡＺ化合物の調製を記載する。
【０６４１】
３−フェニルシステインをＬａｇｏら、１９９２，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ５７（１２）：３４９３−６に記載されるように調製することができる。
【０６４２】
上のフェニルアラニンアナログを用い、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−Ｏ−ｔ−Ｂｕと複合体を形成させ、実施例４の手順に従うことによってＭＭＡＺを調製する。
【０６４３】
実施例９−ＭＭＡＺ化合物の合成
この合成は、
【０６４４】
【化２０４−１】
2009500424.tif 000141
が
【０６４５】
【化２０４−２】
2009500424.tif 000142
であるＭＭＡＺ化合物の調製を記載する。
【０６４６】
２−ブロモ−フェニルアラニンをＲｉｇｈｉら、１９９６，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ３７（３８）：６８９３−６８９６に記載されるように合成することができる。
【０６４７】
上のフェニルアラニンアナログを用い、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−Ｏ−ｔ−Ｂｕと複合体を形成させ、実施例４の手順に従うことによってＭＭＡＺを調製する。
【０６４８】
実施例１０−ＭＭＡＺ化合物の合成
この合成は、
【０６４９】
【化２０５−１】
2009500424.tif 000143
が
【０６５０】
【化２０５−２】
2009500424.tif 000144
であるＭＭＡＺ化合物の調製を記載する。
【０６５１】
Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｏｆ  Ｊａｐａｎ，１９８２，５５（９）：３０４９−５０に記載されるように、上述のβ−アルコキシ−アミノ酸（Ｒ＝アルキル、シクロヘキシル、フェニル、ベンジルなど）を合成することができる。
【０６５２】
上のフェニルアラニンアナログを用い、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−Ｏ−ｔ−Ｂｕと複合体を形成させ、実施例４の手順に従うことによってＭＭＡＺを調製する。
【０６５３】
実施例１１−ＭＭＡＺ化合物の合成
この合成は、
【０６５４】
【化２０６−１】
2009500424.tif 000145
が
【０６５５】
【化２０６−２】
2009500424.tif 000146
であるＭＭＡＺ化合物の調製を記載する。
【０６５６】
フェニルアラニンアナログを以下に記載されるように合成する。アジリジン（Ａｚｉ）（前出）（Ｚ＝ＰｈＣＨ２Ｏ２Ｃ；Ｒ＝ＨまたはＭｅ、Ｒ１＝ＰｈＣＨ２またはＭｅ）をＢＦ３・Ｅｔ２Ｏ存在下でアルコールＲ２ＯＨ（Ｒ２＝Ｍｅ、Ｍｅ２ＣＨ、ＥｔＣＨＭｅ、Ｍｅ３Ｃ、シクロヘキシル、ＰｈＣＨ２、Ｐｈなど）によって開裂させ、光学的に純粋なセリンおよびスレオニン誘導体Ｒ２ＯＣＨＲＣＨ（ＮＨＺ）ＣＯ２Ｒ１を得た。これを水素化分解し、けん化して対応するＲ２ＯＣＨＲＣＨ（ＮＨ２）ＣＯ２Ｈを得た。
【０６５７】
【化２０７】
2009500424.tif 000147
上のフェニルアラニンアナログを用い、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−Ｏ−ｔ−Ｂｕと複合体を形成させ、実施例４の手順に従うことによってＭＭＡＺを調製する。
【０６５８】
実施例１２−ＭＭＡＺ化合物の調製
この合成は、
【０６５９】
【化２０８−１】
2009500424.tif 000148
が
【０６６０】
【化２０８−２】
2009500424.tif 000149
であるＭＭＡＺ化合物の調製を記載する。
【０６６１】
デヒドロフェニルアラニンおよび他のデヒドロアミノ酸をＭａｔｈｕｒら、２００４，Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ７６（２）：１５０−１６１に記載されるように合成する。
【０６６２】
上のフェニルアラニンアナログを用い、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−Ｏ−ｔ−Ｂｕと複合体を形成させ、実施例４の手順に従うことによってＭＭＡＺを調製する。
【０６６３】
実施例１１−ＭＭＡＺ化合物の合成
この合成は、
【０６６４】
【化２０９−１】
2009500424.tif 000150
が
【０６６５】
【化２０９−２】
2009500424.tif 000151
であるＭＭＡＺ化合物の調製を記載する。
【０６６６】
β，β−ジメチル−フェニルアラニンおよびβ，β−ジメチル−チロシンをＪｏｎｓｓｏｎおよびＭｉｋｉｖｅｒ，１９７６，Ａｃｔａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａ  Ｓｕｅｃｉｃａ  １３（１）：７５−８に記載されるように合成することができる。ＰｈＣＭｅ２ＣＨ（ＣＮ）ＣＯ２ＥｔとＮ２Ｈ４とをＭｅＯＨ中で還流させると、ヒドラジドが９３％得られ、ピラゾリジン副生成物が収率３．５％で得られた。ジアゾ化、Ｃｕｒｔｉｕｓ分解および加水分解を連続して行い、ＰｈＣＭｅ２ＣＨ（ＮＨ２）ＣＯ２Ｈを７４％得た。β，β−ジメチルチロシンを同様に調製することができる。
【０６６７】
上のフェニルアラニンアナログを用い、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−Ｏ−ｔ−Ｂｕと複合体を形成させ、実施例４の手順に従うことによってＭＭＡＺを調製する。
【０６６８】
実施例１４−ＭＭＡＺ化合物の合成
この合成は、
【０６６９】
【化２１０−１】
2009500424.tif 000152
が
【０６７０】
【化２１０−２】
2009500424.tif 000153
であるＭＭＡＺ化合物の調製を記載する。
【０６７１】
４−（１−アミノ−２−フェニルエチル）−安息香酸をＪｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ３８（１０）：１６００−７（１９９５）に記載されるように調製することができる。
【０６７２】
上のフェニルアラニンアナログを用い、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−Ｏ−ｔ−Ｂｕと複合体を形成させ、実施例４の手順に従うことによってＭＭＡＺを調製する。
【０６７３】
実施例１５−ＭＭＡＺ化合物の合成
この合成は、
【０６７４】
【化２１１−１】
2009500424.tif 000154
が
【０６７５】
【化２１１−２】
2009500424.tif 000155
であるＭＭＡＺ化合物の調製を記載する。
【０６７６】
Ｔｏｔｈら、２００４，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  １２６（３４）：１０５３８−１０５３９に記載される手順に従ってフェニルアラニンアナログを合成する。
【０６７７】
上のフェニルアラニンアナログを用い、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−Ｏ−ｔ−Ｂｕと複合体を形成させ、実施例４の手順に従うことによってＭＭＡＺを調製する。
【０６７８】
実施例１６−ＭＭＡＺ化合物の合成
この合成は、
【０６７９】
【化２１２−１】
2009500424.tif 000156
が
【０６８０】
【化２１２−２】
2009500424.tif 000157
であるＭＭＡＺ化合物の調製を記載する。
【０６８１】
α−オキソ−β−フェニルプロピオン酸およびフェニルアラニンのβ，β−ジフルオロアナログをＳｃｈｌｏｓｓｅｒら、２００４，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ６０（３５）：７７３１−７７４２およびＲｏｆｆら、２００４，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  １２６（１３）：４０９８−４０９９に記載の手順に従って以下に示されるように合成する。単純な３工程の手順によって容易に入手可能な（２−ブロモ−１，１−ジフルオロエチル）アレーンをα−アリール−α，α−ジフルオロアセトアルデヒドに変換する。ヒドロシアノ化、加水分解、酸化を続けて行い、さらに加水分解してβ−アリール−β，β−ジフルオロ−α−オキソプロピオン酸を得る。還元的アミノ化によって、オキソ酸をα−ヒドロキシ酸およびラセミ体のβ，β−ジフルオロ−β−フェニルアラニン誘導体の分割可能な混合物に変換する。α，α−ジフルオロ−α−フェニルアセトアルデヒドをホモキラル１−フェニルエチルアミンと縮合させ、得られたイミンにシアン化水素を添加し、このようにして得られたジアステレオ異性体混合物をカルボキサミドに加水分解し、これを分別晶出またはクロマトグラフィーによって分割することによって鏡像異性体的に純粋なβ，β−ジフルオロフェニルアラニンを得る。
【０６８２】
実施例１７−ＭＭＡＺ化合物の合成
この合成は、
【０６８３】
【化２１３−１】
2009500424.tif 000158
が
【０６８４】
【化２１３−２】
2009500424.tif 000159
であるＭＭＡＺ化合物の調製を記載する。
【０６８５】
一連のジアステレオ異性体（（２Ｒ，３Ｓ）−，（２Ｓ，３Ｒ）−，（２Ｓ，３Ｓ）−および（２Ｒ，３Ｒ））のβ−メチル−β−アリールアラニンアナログを、化学触媒および生体触媒の組み合わせを用いて鏡像異性体的に純粋な形態で調製することができる。Ｍｅ  Ｌ−スレオニネートから出発して、広範囲のβ，β−二置換ジデヒドロアミノ酸を（Ｚ）−異性体として得る。［Ｒｈ（Ｒ，Ｒ）−Ｅｔ−ＤｕＰｈｏｓ（ＣＯＤ）］ＢＦ４または［Ｒｈ（Ｓ，Ｓ）−Ｅｔ−ＤｕＰｈｏｓ（ＣＯＤ）］ＢＦ４のいずれかを触媒として用いて不斉水素化し、次いで加水分解して（２Ｒ，３Ｓ）−異性体および（２Ｓ，３Ｒ）−異性体をそれぞれ得る。次いで、Ｄ−アミノ酸オキシダーゼを用いた（２Ｒ，３Ｓ）異性体の酵素による立体反転およびＬ−アミノ酸オキシダーゼとＮＨ３−ＢＨ３とを用いた（２Ｓ，３Ｒ）異性体の立体反転によって、それぞれ残りの（２Ｓ，３Ｓ）−異性体および（２Ｒ，３Ｒ）−異性体を得る。
【０６８６】
実施例１８−ＭＭＡＺ化合物の合成
この合成は、
【０６８７】
【化２１４−１】
2009500424.tif 000160
が
【０６８８】
【化２１４−２】
2009500424.tif 000161
であるＭＭＡＺ化合物の調製を記載する。
【０６８９】
２−アミノ−４−ホスホノブタン酸の合成
上述の２−アミノ−４−ホスホノブタン酸（Ａｒ＝フェニル、３−ピリジルおよび２−チエニル）をＲｕｉｚら、２００３，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ６８（２０）：７６３４−７６４５に記載されるように合成する。
【０６９０】
上のフェニルアラニンアナログを用い、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−Ｏ−ｔ−Ｂｕと複合体を形成させ、実施例４の手順に従うことによってＭＭＡＺを調製する。
【０６９１】
実施例１９−上式のＭＭＡＺの合成
シクロ［Ｇｌｙ−Ｖａｌ］およびシクロ［Ａｌａ−Ｖａｌ］から誘導されるリチオ化ビスラクチムエーテルの、α−、β−またはα，β−置換されたビニルホスホネートへの複合体付加により、種々の３−または４−モノ置換された２−アミノ−４−ホスホノブタン酸および２，３−、２，４−または３，４−二置換された２−アミノ−４−ホスホノブタン酸（ＡＰ４誘導体）を鏡像異性体的に純粋な形態で直接的に立体選択的に得ることができる。相対立体化学は、１，２−オキサホスホリナン誘導体のｘ線回折分析またはＮＭＲ試験によって決定できる。競争的な８員の「コンパクト」で「ゆったりした」遷移状態構造を考えれば複合体付加の立体化学的結果を合理的に説明することができる。
【０６９２】
実施例２０−ＭＭＡＺ化合物の合成
この合成は、
【０６９３】
【化２１５−１】
2009500424.tif 000162
が
【０６９４】
【化２１５−２】
2009500424.tif 000163
であるＭＭＡＺ化合物の調製を記載する。
【０６９５】
β−置換されたヒスチジンの合成は、Ｗａｎｇら、２０００，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔｅｒｓ  ４１（９）：１３０７−１３１０に記載される。
【０６９６】
上のフェニルアラニンアナログを用い、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−Ｏ−ｔ−Ｂｕと複合体を形成させ、実施例４の手順に従うことによってＭＭＡＺを調製する。
【０６９７】
実施例２１−ＭＭＡＺ化合物の合成
この合成は、
【０６９８】
【化２１６−１】
2009500424.tif 000164
が
【０６９９】
【化２１６−２】
2009500424.tif 000165
であるＭＭＡＺ化合物の調製を記載する。
【０７００】
β−フルオロアミノ酸は、Ｄａｖｉｓら、１９９９，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ６４（１８）：６９３１−６９３４に記載されるように合成される。
【０７０１】
上のフェニルアラニンアナログを用い、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−Ｏ−ｔ−Ｂｕと複合体を形成させ、実施例４の手順に従うことによってＭＭＡＺを調製する。
【０７０２】
実施例２２−ＭＭＡＺ化合物の合成
この合成は、
【０７０３】
【化２１７−１】
2009500424.tif 000166
が
【０７０４】
【化２１７−２】
2009500424.tif 000167
であるＭＭＡＺ化合物の調製を記載する。
【０７０５】
β−置換されたグルタミン酸（上述のようなもの）を、Ｅｚｑｕｅｒｒａら、１９９９，Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ６４（１８）：６５５４−６５６５に記載されるように合成することができる。アキラルなＮ−保護されたグリシンエステルのリチウムエノレートとキラルアルコキシアルケニルカルベンのクロミウム錯体とを反応させることにより、窒素保護基の性質に依存して高いａｎｔｉまたはｓｙｎ選択性を有し、（−）−８−フェニルメンチルオキシ基を含有するカルベン錯体を使用すると高いジアステレオ選択性を有する対応するＭｉｃｈａｅｌ付加物が得られる。金属−カルベン部分を酸化し、次いでアミン基を脱保護し、両方のカルボン酸エステルを加水分解すると、天然および非天然の立体化学を有する鏡像異性体が豊富に含まれる３−置換グルタミン酸が得られる。例えば、カルベン錯体をグリシンリチウムエノレートと反応させてＭｉｃｈａｅｌ付加物を得て、これを酸化して、立体化学が何ら失われずに保護されたグルタメートを得ることができる。グルタメートを２段階で脱保護し、（２Ｒ，３Ｓ）−３−（３−フリル）グルタミン酸を塩酸塩として得る。または、酸化前に脱保護工程を行なう場合、環状アミノカルベン錯体が生成し、光学的に活性な３−置換ピログルタミン酸が導かれる。
【０７０６】
上のフェニルアラニンアナログを用い、Ｆｍｏｃ−Ｍｅｖａｌ−ｖａｌ−ｄｉｌ−Ｏ−ｔ−Ｂｕと複合体を形成させ、実施例３の手順に従うことによってＭＭＡＺを調製する。
【０７０７】
実施例２３−他のＭＭＡＺ化合物の合成
上述の液相合成または固相合成に組み込まれた保護されているかまたは保護されていないアミノ酸として以下の市販のフェニルアラニンアナログを用いてＭＭＡＺ化合物を調製することもできる。
【０７０８】
【化２１８】
2009500424.tif 000168
（Ｔｙｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｉｎｃ．Ｅｗｉｎｇ，ＮＪから市販）；
【０７０９】
【化２１９】
2009500424.tif 000169
（Ａｃｒｏｓ  Ｏｒｇａｎｉｃｓから市販）；
【０７１０】
【化２２０】
2009500424.tif 000170
（Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈから市販）；
【０７１１】
【化２２１】
2009500424.tif 000171
（Ａｃｒｏｓから市販）；
【０７１２】
【化２２２】
2009500424.tif 000172
（Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈから市販）；
【０７１３】
【化２２３】
2009500424.tif 000173
（Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈから市販）；
【０７１４】
【化２２４】
2009500424.tif 000174
（Ｐｈａｒｍａｃｏｒｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓから市販）；
【０７１５】
【化２２５】
2009500424.tif 000175
（Ｆｌｕｋａから市販）；
【０７１６】
【化２２６】
2009500424.tif 000176
（Ｐｅｐｔｅｃｈから市販）；
【０７１７】
【化２２７】
2009500424.tif 000177
（Ｂａｃｈｅｍから市販）；
【０７１８】
【化２２８】
2009500424.tif 000178
（ＣｈｅｍＳｔｅｐから市販）；
【０７１９】
【化２２９】
2009500424.tif 000179
（Ｃｈｅｍ  ＩＭＰＸから市販）；
【０７２０】
【化２３０】
2009500424.tif 000180
（Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈから市販）；
【０７２１】
【化２３１】
2009500424.tif 000181
【０７２２】
【化２３２】
2009500424.tif 000182
【０７２３】
【化２３３】
2009500424.tif 000183
【０７２４】
【化２３４】
2009500424.tif 000184
（Ｃｈｅｍｓｔｅｐから市販）；
【０７２５】
【化２３５】
2009500424.tif 000185
（Ａｌｄｒｉｃｈから市販）；
【０７２６】
【化２３６】
2009500424.tif 000186
【０７２７】
【化２３７】
2009500424.tif 000187
（Ｓｉｇｍａから市販）；
【０７２８】
【化２３８】
2009500424.tif 000188
【０７２９】
【化２３９】
2009500424.tif 000189
【０７３０】
【化２４０】
2009500424.tif 000190
（Ａｐｏｌｌｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｌｔｄ．から市販）；
【０７３１】
【化２４１】
2009500424.tif 000191
（ＤＳＬ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ（Ｓｈａｎｇｈａｉ）Ｃｏ．，Ｌｔｄ．．から市販）；
【０７３２】
【化２４２−１】
2009500424.tif 000192
（Ｓａｌｏｒから市販）；
【０７３３】
【化２４２−２】
2009500424.tif 000193
（Ｓｙｎｃｈｅｍ  ＯＨＧから市販）；
【０７３４】
【化２４３】
2009500424.tif 000194
（Ｓｅｑｕｏｉａ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  Ｌｔｄ．から市販）；
【０７３５】
【化２４４】
2009500424.tif 000195
（ＭｉｃｒｏＣｈｅｍｉｓｔｒｙ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋｓから市販）；
【０７３６】
【化２４５】
2009500424.tif 000196
（Ｌａｎｃａｎｓｔｅｒから市販）；
【０７３７】
【化２４６】
2009500424.tif 000197
（Ａｍｂｉｎｔｅｒ，Ｐａｒｉｓ，Ｆｒａｎｃｅから市販）；
【０７３８】
【化２４７】
2009500424.tif 000198
【０７３９】
【化２４８】
2009500424.tif 000199
【０７４０】
【化２４９】
2009500424.tif 000200
【０７４１】
【化２５０】
2009500424.tif 000201
【０７４２】
【化２５１】
2009500424.tif 000202
（Ｂｉｏｍｏｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｓから市販）；
【０７４３】
【化２５２】
2009500424.tif 000203
（ＡｓｔａＴｅｃｈから市販）；
【０７４４】
【化２５３】
2009500424.tif 000204
（ＣｈｅｍＢｒｉｄｇｅ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｌｉｂｒａｒｙから市販）；
【０７４５】
【化２５４】
2009500424.tif 000205
（ＬａｂｏＴｅｓｔから市販）；
【０７４６】
【化２５５】
2009500424.tif 000206
【０７４７】
【化２５６】
2009500424.tif 000207
（ＪＲＤ  Ｆｌｕｏｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｓから市販）；
【０７４８】
【化２５７】
2009500424.tif 000208
（Ｆｌｕｋａから市販）；
【０７４９】
【化２５８】
2009500424.tif 000209
【０７５０】
【化２５９】
2009500424.tif 000210
【０７５１】
【化２６０】
2009500424.tif 000211
（Ｓｅｎｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ＡＧから市販）；
【０７５２】
【化２６１】
2009500424.tif 000212
（Ａｄｖａｎｃｅｄ  ＣｈｅｍＴｅｃｈから市販）；
【０７５３】
【化２６２】
2009500424.tif 000213
（Ｔｙｇｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから市販）；
【０７５４】
【化２６３】
2009500424.tif 000214
（ＡＭＲＩ  Ｆｉｎｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから市販）；
【０７５５】
【化２６４】
2009500424.tif 000215
（Ｓｙｎｔｈｅｔｅｃｈから市販）；
【０７５６】
【化２６５】
2009500424.tif 000216
（Ａｐｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓから市販）；
【０７５７】
【化２６６】
2009500424.tif 000217
（ＢｉｏＣａｔａｌｙｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．から市販）；
【０７５８】
【化２６７】
2009500424.tif 000218
（ＡＧ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから市販）；
【０７５９】
【化２６８】
2009500424.tif 000219
（Ｓｙｎｔｈｅｌｅｃから市販）；
【０７６０】
【化２６９】
2009500424.tif 000220
（ＴｉｍＴｅｃ  Ｓｔｏｃｋ  Ｌｉｂｒａｒｙから市販）；
【０７６１】
【化２７０】
2009500424.tif 000221
（ＣＳＰＳから市販）；
【０７６２】
【化２７１】
2009500424.tif 000222
【０７６３】
【化２７２】
2009500424.tif 000223
（Ｑｖｅｎｔａｓから市販）；
【０７６４】
【化２７３】
2009500424.tif 000224
（Ｅｎｃｙｃｌｏｐｅｄｉａ  ｏｆ  Ａｍｉｎｏ  Ａｃｉｄ  Ａｎａｌｏｇｓ  ａｎｄ  Ｃｈｉｒａｌ  Ｂｕｉｌｄｉｎｇ  Ｂｌｏｃｋｓから市販）；
【０７６５】
【化２７４】
2009500424.tif 000225
（Ｂａｃｈｅｍから市販）；
【０７６６】
【化２７５】
2009500424.tif 000226
【０７６７】
【化２７６】
2009500424.tif 000227
【０７６８】
【化２７７】
2009500424.tif 000228
（Ｍａｔｒｉｘ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃから市販）；
【０７６９】
【化２７８】
2009500424.tif 000229
【０７７０】
【化２７９】
2009500424.tif 000230
（ＴＣＩ  Ａｍｅｒｉｃａから市販）；
【０７７１】
【化２８０】
2009500424.tif 000231
（Ａｃｒｏｓから市販）；
【０７７２】
【化２８１】
2009500424.tif 000232
（Ｏｒｇａｎｉｃｓから市販）；
【０７７３】
【化２８２】
2009500424.tif 000233
（ＣｈｅｍＰａｃｉｆｉｃから市販）；
【０７７４】
【化２８３】
2009500424.tif 000234
（Ｒａｒｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ＧｍｂＨから市販）；
【０７７５】
【化２８４】
2009500424.tif 000235
（ＡｓｔａＴｅｃｈから市販）；
【０７７６】
【化２８５】
2009500424.tif 000236
（Ａｕｓｔｉｎから市販）；
【０７７７】
【化２８６】
2009500424.tif 000237
（Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ａｓｙｍｍｅｔｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．から市販）；
【０７７８】
【化２８７】
2009500424.tif 000238
（Ｔｏｃｒｉｓ  Ｃｏｏｋｓｏｎ  Ｉｎｃ．から市販）；
【０７７９】
【化２８８】
2009500424.tif 000239
（Ｃｈｅｍ  Ｓｅｒｖｉｃｅ，Ｉｎｃ．から市販）；
【０７８０】
【化２８９】
2009500424.tif 000240
（Ｓｙｎｃｈｅｍ  ＯＨＧ，Ｇｅｒｍａｎｙから市販）。
【０７８１】
実施例２４−ＭＭＡＺ化合物の合成
上述の液相合成または固相合成に組み込まれた保護されているかまたは保護されていないアミノ酸として以下の市販のフェニルアラニンアナログを用いてＭＭＡＺ化合物を調製することもできる。４−クロロ−フェニルアラニン、４−フルオロ−フェニルアラニン、４−ニトロ−フェニルアラニン、Ｎ−α−メチル（ｎｅｔｈｙｌ）−フェニルアラニン、α−メチル（ｎｅｔｈｙｌ）−フェニルアラニン、グルタミン酸、アスパラギン酸、トリプトファン、イソロイシン、ロイシン、メチオニン、チロシン、グルタミン、スレオニン、バリン、アスパラギン、フェニルグリシン、Ｏ−ベンジル−セリン、Ｏ−ｔ−ブチル−セリン、Ｏ−ｔ−ブチル−スレオニン、ホモフェニルアラニン、メチオニン−ＤＬ−スルホキシド、メチオニン−スルホン、α−アミノ酪酸、α−アミノイソ酪酸、４−アミノ−１−ピペリジン−４−カルボン酸、４−アミノ−テトラヒドロピラン−４−カルボン酸、アスパラギン酸、ベンゾチアゾール−２−イル−アラニン、α−ｔ−ブチル−グリシン、シクロヘキシルアラニン、ノルロイシン、ノルバリン、Ｓ−アセトアミドメチル−ペニシラミン、β−３−ピペリジン−３−イル−アラニン、ピペリジニル−グリシン、ピロリジニル−アラニン、セレノシステイン、テトラヒドロピラン−４−イル−グリシン、Ｏ−ベンジル−スレオニン、Ｏ−ｔ−ブチル−チロシン、３−（ｐ−アセチルフェニル）アラニン、３−フェニルセリンおよび１，２，３，４−テトラヒドロ−イソキノリン−３−カルボン酸。
【０７８２】
実施例２５−ＭＣ−ＭＭＡＺの合成
マレイミドカプロイル−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｚを一般的な手順Ｓに従って調製することができる。
【０７８３】
簡単に言うと、マレイミドカプロン酸（３０ｍｇ、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）および無水ＤＭＦ（１０μｌ）をＡｒ（風船）下、１０ｍＬガラス製フラスコに入れ、これをドライアイスで５分間冷却した。この混合物に塩化オキサリル（１ｍＬ）をシリンジで添加した（激しく反応し、圧力が上昇した）。５分後、混合物を室温まで加温し、時々手で攪拌しながら３０分間放置した。揮発物をＲｏｔａｖａｐで除去し、残渣を無水ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）で共沸させ、減圧ポンプで一晩乾燥させた。生成物は最初に白色固体として生成し、徐々にオフホワイト色から褐色がかった固体に変化した。
【０７８４】
【化２９０】
2009500424.tif 000241
加水分解した物質は２．３５ｐｐｍの三重線で検出できる。２．４２ｐｐｍの三重線の積分値が３．４６ｐｐｍの三重線の２０％を超えない場合、この生成物を使用する。
【０７８５】
マレイミドカプロイルクロリドを上述のように調製し、無水ＣＨ２Ｃｌ２（３ｍＬ）に溶解することができる。
【０７８６】
磁気攪拌棒およびゴムキャップを取り付けたガラスフラスコ中でＭＭＡＺ（１ｅｑ．）およびジイソプロピルエチルアミン（約４ｅｑ．）を無水ＣＨ２Ｃｌ２に溶解した。反応混合物を氷浴で１０分間冷却し、マレイミドカプロイルクロリド溶液（約１．１ｅｑ．）をシリンジで添加した。氷上で１５分経過後、反応混合物を室温まで加温し、さらに２時間攪拌を続けた。次いで、溶媒を減圧下で除去した。残渣をＤＭＳＯ（０．５ｍＬ）に懸濁させた。次いで、水（１００μｌ）を添加し、０．５時間後、混合物を分取ＨＰＬＣカラムに入れて分離した：Ｃ１２  Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｓｙｎｅｒｇｉ  ＭＡＸ−ＲＰカラム、４μ、２５０×１０ｍｍ、８０Ａ。２１５ｎｍでモニタリングした。生成物を含有するフラクションをＲｏｔａｖａｐで濃縮し、アセトニトリル（２×５ｍＬ）で共沸させ、ＣＨ２Ｃｌ２およびヘキサンの混合物で共沸させ、最終物質を得た。
【０７８７】
実施例２６−ＭＣ−ＭＭＡＺアナログの合成
ＭＣ−ＭＭＡＺアナログを以下に示すように合成する。
【０７８８】
【化２９１】
2009500424.tif 000242
ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｚ−ＰＧ（化合物１、０．０４４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（０．２５０ｍＬ）に懸濁させた。４−（２，５−ジオキソ−２，５−ジヒドロ−ピロール−１−イル）−安息香酸（１１ｍｇ、０．０４９ｍｍｏｌ）およびＨＡＴＵ（１７ｍｇ、０．０４４ｍｍｏｌ）を添加し、ＤＩＥＡ（０．０３１ｍＬ、０．１７ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を２．０時間攪拌した。ＨＰＬＣ分析によって出発化合物１が完全に消費されていることを示した。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ１２  Ｓｙｎｅｒｇｉ  Ｍａｘ−ＲＰ  ８０Å  Ｃｏｌｕｍｎ（２５０×２１．２０ｍｍ）を用いて分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって生成物を単離した。溶出は、ＭｅＣＮを１０％から８０％／０．０５％ＴＦＡ（水溶液）の直線的な勾配を８分間、次いで８０％  ＭｅＣＮ／０．０５％  ＴＦＡ（水溶液）の定組成で１２分間であった。ＭＢ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｚ−ＰＧ（０．０３８５ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）およびＴＦＡ（１ｍＬ）で懸濁させた。混合物を２時間で攪拌し、次いで揮発性有機物を減圧下で蒸発させた。生成物（ＭＢ−ＭｅＶａｌ−Ｖａｌ−Ｄｉｌ−Ｄａｐ−Ｚ）をＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ１２  Ｓｙｎｅｒｇｉ  Ｍａｘ−ＲＰ  ８０Å  Ｃｏｌｕｍｎ（２５０×２１．２０ｍｍ）を用いた分取ＲＰ−ＨＰＬＣで精製した。溶出は、ＭｅＣＮを１０％から８０％／０．０５％ＴＦＡ（水溶液）の直線的な勾配を８分間、次いで８０％  ＭｅＣＮ／０．０５％  ＴＦＡ（水溶液）の定組成で１２分間であった。
【０７８９】
実施例２７−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺ（９）の調製
【０７９０】
【化２９２】
2009500424.tif 000243
化合物１（０．１１ｍｍｏｌ）、化合物ＡＢ（８５ｍｇ、０．１２ｍｍｏｌ、１．１ｅｑ．）およびＨＯＢｔ（２．８ｍｇ、２１μｍｏｌ、０．２ｅｑ．）をアルゴン下で乾燥ＤＭＦ（１．５ｍＬ）およびピリジン（０．３ｍＬ）に入れた。３０時間後、ＨＰＬＣによって反応が本質的に終了していることがわかった。混合物を蒸発させ、少量のＤＭＳＯに取り、分取−ＨＰＬＣ（Ｃ１２−ＲＰカラム、５μ、１００Å、水（０．１％ＴＦＡを含有する）中ＭｅＣＮを１０％から１００％の直線的な勾配を４０分、次いで１００％で２０分、流速２５ｍＬ／分）で精製して化合物９を得た。
【０７９１】
化合物８（３２μｍｏｌ）を塩化メチレン（６ｍＬ）に懸濁させ、ＴＦＡ（３ｍＬ）を添加した。得られた溶液を２時間放置した。反応混合物を減圧下で濃縮し、分取−ＨＰＬＣ（Ｃ１２−ＲＰカラム、５μ、１００Å、水（０．１％ＴＦＡを含有する）中ＭｅＣＮを１０％から１００％の直線的な勾配を４０分、次いで１００％で２０分、流速２５ｍＬ／分）で精製した。所望のフラクションを濃縮し、マレイミドカプロイル−バリン−シトルリン−ｐ−ヒドロキシメチルアミノベンゼン−ＭＭＡＺ（ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺ）９を得た。
【０７９２】
実施例２８−抗体とＭＣ−ＭＭＡＺとの複合体を形成することによるＡＣ１０−ＭＣ−ＭＭＡＺの調製
抗体（例えば、ＡＣ１０または１Ｆ６）を５００ｍＭ  ホウ酸ナトリウムおよび５００ｍＭ  塩化ナトリウムにｐＨ８．０で溶解し、過剰量の１００ｍＭ  ジチオスレイトール（ＤＴＴ）で処理した。３７℃で約３０分間インキュベートした後、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ２５樹脂で溶出し、１ｍＭ  ＤＴＰＡを含むＰＢＳで溶出することによってバッファーを交換した。この溶液の２８０ｎｍの吸光度から還元した抗体濃度を算出し、ＤＴＮＢ（Ａｌｄｒｉｃｈ，  Ｍｉｌｗａｕｋｅｅ，ＷＩ）と反応させ、４１２ｎｍの吸光度を算出することによってチオール濃度を算出することによってチオール／Ａｂ値を確認した。還元した抗体をＰＢＳに溶解したものを氷で冷した。
【０７９３】
薬物リンカー試薬であるマレイミドカプロイル−モノメチルオーリスタチンＺ（すなわちＭＣ−ＭＭＡＺ）をＤＭＳＯに溶解し、アセトニトリルおよび水に既知の濃度で希釈し、還元した抗体をＰＢＳに溶解して冷したものにこれを添加した。約１時間後、過剰量のマレイミドを添加して反応を停止させ、未反応の抗体チオール基にキャップをした。反応混合物を遠心分離によって濃縮し、抗体−ＭＣ−ＭＭＡＺを精製し、ＰＢＳを用いたＧ２５樹脂で溶出して脱塩し、滅菌状態の０．２μｍフィルターでろ過し、凍結保存した。
【０７９４】
実施例２９−抗体とＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺ（ＳＰ３，９）との複合体を形成することによる抗体−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺの調製
抗体−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺ（例えば、ＡＣ１０−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺまたは１Ｆ６−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺ）を実施例２８の手順に従って抗体とＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺ（ＳＰ３，９）との複合体を形成することによって調製する。
【０７９５】
実施例３０−ＭＣ−ＭｅＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺの調製
【０７９６】
【化２９３】
2009500424.tif 000244
Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−ＯＨ（３．０３ｇ、８．５７ｍｍｏｌ）およびＮ，Ｎ’−ジスクシイミジルカルボネート（３．２９ｇ、１２．８６ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（８０ｍＬ）懸濁物に室温でＤＩＥＡ（４．４８ｍＬ、２５．７１ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を３時間攪拌し、次いで分液漏斗に注ぎ、有機混合物を０．１Ｍ  ＨＣｌ（水溶液）で抽出した。粗有機残渣を減圧下で濃縮し、生成物をシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィーで２０−１００％酢酸エチル／ヘキサンの直線的な勾配を用いて単離した（例えば、純粋なＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−ＯＳｕ（４．８０ｍｍｏｌｅ、収率５６％）を全量で２．１８ｇ回収することができた）。
【０７９７】
Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−ＯＳｕ（２．１８ｇ、４．８４ｍｍｏｌ）のＤＭＥ（１３ｍＬ）およびＴＨＦ（６．５ｍＬ）中の懸濁物に、室温でＬ−シトルリン（０．８５ｇ、４．８４ｍｍｏｌ）およびＮａＨＣＯ３（０．４１ｇ、４．８４ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ（１３ｍＬ）溶液を添加した。この懸濁物を室温で１６時間攪拌し、次いで、ｔｅｒｔ−ＢｕＯＨ／ＣＨＣｌ３／Ｈ２Ｏで抽出し、１Ｍ  ＨＣｌでｐＨ＝２〜３になるまで酸性化した。有機層を分離し、乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をジエチルエーテルで磨砕し、Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｃｉｔ−ＣＯＯＨ（例えば２．０１ｇ）を得て、これを精製することなく使用した。
【０７９８】
粗Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｃｉｔ−ＣＯＯＨを２：１  ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ（１００ｍＬ）に懸濁させ、これにｐ−アミノベンジルアルコール（０．９７ｇ、７．９ｍｍｏｌ）およびＥＥＤＱ（１．９５ｇ、７．９ｍｍｏｌ）を添加した。この懸濁物を１２５時間攪拌し、次いで揮発性有機物を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーで１０％  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を用いて精製した。純粋なＦｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ（例えば、０．５５ｇ、０．８９６ｍｍｏｌ、収率１８．５％）を回収した。
【０７９９】
Ｆｍｏｃ−ＭｅＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ（０．５５ｇ、０．８９６ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（４０ｍＬ）懸濁物にＳＴＲＡＴＯＳＰＨＥＲＥＳ（商標）（ピペリジン−樹脂が結合したもの）（＞５ｍｍｏｌ／ｇ、１５０ｍｇ）を添加した。室温で１６時間攪拌した後、混合物をセライト（ＭｅＯＨで前洗浄したもの）でろ過し、減圧下で濃縮した。残渣をジエチルエーテルおよびヘキサンで磨砕した。得られた固体物質ＭｅＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨをＣＨ２Ｃｌ２（２０ｍＬ）に懸濁させ、これにＭＣ−ＯＳｕ（０．２８ｇ、０．８９６ｍｍｏｌ）、ＤＩＥＡ（０．１７ｍＬ、０．９９ｍｍｏｌ）およびＤＭＦ（１５ｍＬ）を添加した。この懸濁物を１６時間攪拌した。反応混合物をＨＰＬＣ分析し、反応が終了していないことがわかったら、この懸濁物を減圧下で６ｍＬの体積になるまで濃縮し、１０％  ＮａＨＣＯ３（水）溶液を添加し、懸濁物をさらに１６時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去し、残渣をシリカゲルのフラッシュカラムクロマトグラフィーで０−１０％  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２の勾配を用いて精製し、ＭＣ−ＭｅＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨを得た（例えば、４２ｍｇ（０．０７２ｍｍｏｌ、収率８％））。
【０８００】
ＭＣ−ＭｅＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＨ（２．３７ｇ、４．０４ｍｍｏｌ）およびビス（ニトロフェニル）カルボネート（２．５９ｇ、８．５２ｍｍｏｌ）のＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）懸濁物にＤＩＥＡ（１．０６ｍＬ、６．０６ｍｍｏｌ）を添加した。この懸濁物を５．５時間攪拌し、減圧下で濃縮し、ジエチルエーテルで磨砕して精製した。ＭＣ−ＭｅＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＯＣＯ−ｐＮＰ（１４７ｍｇ、０．１９６ｍｍｏｌ）を１：５  ピリジン／ＤＭＦ溶液（３ｍＬ）で懸濁し、これにＨＯＢｔ（５ｍｇ、０．０３９ｍｍｏｌ）、ＤｌＥＡ（０．１７ｍＬ、０．９７８ｍｍｏｌ）およびＭＭＡＺ（０．２０５ｍｍｏｌ）を添加した。この反応混合物を室温で１６時間攪拌し、次いでＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｃ１２  Ｓｙｎｅｒｇｉ  Ｍａｘ−ＲＰ  ８０Å  Ｃｏｌｕｍｎ（２５０×２１．２０ｍｍ）を用いて分取ＲＰ−ＨＰＬＣによって生成物を単離した（３回）。溶出は、ＭｅＣＮを１０％から９０％／０．０５％ＴＦＡ（水溶液）の直線的な勾配で３０分間、次いで定組成の９０％  ＭｅＣＮ／０．０５％  ＴＦＡ（水溶液）でさらに２０分間であった。ＭＣ−ＭｅＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺを得た。
【０８０１】
実施例３１−スベリル−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺのスクシンイミドエステルの調製
【０８０２】
【化２９４】
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化合物１（０．３８ｍｍｏｌ）、Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ｐＮＰ（４３６ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ、１．５ｅｑ．）を無水ピリジン５ｍＬに懸濁させた。ＨＯＢｔ（１０ｍｇ、０．０７６ｍｍｏｌ、０．２ｅｑ．）を添加し、次いでＤＩＥＡ（１９９μｌ、１．１４ｍｍｏｌ、３ｅｑ．）を添加した。この反応混合物を１０分間超音波処理し、室温で一晩攪拌した。ピリジンを減圧下で除去し、残渣をＣＨ２Ｃｌ２で再懸濁させた。この混合物をシリカゲルフラッシュクロマトグラフィーでＣＨ２Ｃｌ２中のＭｅＯＨを０から１０％の段階的な勾配で分離した。生成物を含有するフラクションを集め、濃縮し、減圧下で一晩攪拌してＦｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺを得た。
【０８０３】
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺをＣＨ２Ｃｌ２（２ｍＬ）、ジエチルアミン（２ｍＬ）およびＤＭＦ（２ｍＬ）に懸濁した。この混合物を室温で２時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をピリジン（２ｍＬ）で共沸し、トルエン（２×５ｍＬ）で共沸し、減圧下で乾燥させた。Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺを得た。
【０８０４】
Ｆｍｏｃ−Ｖａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺから調製した全てのＶａｌ−Ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺをピリジン（２ｍＬ）に懸濁し、ジスクシンイミジルスベレート（７４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ、４ｅｑ．）のピリジン（１ｍＬ）溶液に添加した。この反応混合物を室温で攪拌した。３時間後、エーテル（２０ｍＬ）を添加した。沈殿を集め、さらなる量のエーテルで洗浄した。赤色がかった固体を３０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２に懸濁させ、３０％  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２を溶出液として用いてシリカゲルパッドでろ過した。
【０８０５】
実施例３２−選択された化合物の細胞毒性の決定
ＭＭＡＺおよび抗体−薬物複合体の細胞毒性をＣＤ７０＋陽性細胞株（例えば、Ｃａｋｉ−１、腎細胞癌腫；Ｌ４２８、ホジキン病；Ｕ２５１、グリア芽腫）で評価した。化合物の細胞毒性を評価するために、細胞を培地１５０μｌに約５〜１０，０００／ウェルで接種し、アッセイ開始時に４ッ組の段階的な用量の化合物で処理した。細胞毒性アッセイは、通常は試験化合物の添加９６時間後に行なった。培養終了時に生存細胞を評価するために、インキュベーション後半の４〜６時間にレザズリン染料５０μｌを各ウェルに添加してよい。染料の減少量を励起波長５３５ｎｍおよび発光波長５９０ｎｍを用いて蛍光分光分析法によって決定することができる。分析のために、処理した細胞による過剰量のレザズリンの減少量を未処理のコントロール細胞の結果と比較することができる。
【０８０６】
実施例３３−一般的なインビトロ細胞毒性決定
複合体の細胞毒性を評価するために、細胞を培地１５０μｌに約５〜１０，０００／ウェルで接種し、アッセイ開始時に４ッ組の段階的な用量の化合物で処理した。細胞毒性アッセイは、試験化合物の添加９６時間後に行なった。培養終了時に生存細胞を評価するために、インキュベーション後半の４〜６時間にレザズリン染料５０μｌを各ウェルに添加する。染料の減少量を励起波長５３５ｎｍおよび発光波長５９０ｎｍを用いて蛍光分光分析法によって決定することができる。分析のために、処理した細胞による過剰量のレザズリンの減少量を未処理のコントロール細胞の結果と比較することができる。
【０８０７】
実施例３４−インビトロ細胞増殖アッセイ
ＡＤＣの効力を、以下のプロトコルを使用する細胞増殖アッセイによって測定することができる（Ｐｒｏｍｅｇａ  Ｃｏｒｐ．Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ  ＴＢ２８８；Ｍｅｎｄｏｚａら、２００２，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６２：５４８５−５４８８）：
１．培地に約１０４の細胞（例えば、ＳＫＢＲ−３、ＢＴ４７４、ＭＣＦ７またはＭＤＡ−ＭＢ−４６８）を含有する細胞培養物１００μｌのアリコートを９６ウェルの不透明なプレートの各ウェルに堆積させる。
【０８０８】
２．培地を含有し、細胞を含有しないコントロールウェルを調製する。
【０８０９】
３．ＡＤＣを実験ウェルに添加し、３〜５日間インキュベートする。
【０８１０】
４．このプレートを室温で約３０分間平衡化させる。
【０８１１】
５．各ウェルに存在する細胞培地の体積と等しい体積のＣｅｌｌＴｉｔｅｒ−Ｇｌｏ  Ｒｅａｇｅｎｔを添加する。
【０８１２】
６．オービタルシェーカーで内容物を２分間混合し、細胞溶解物を作成する。
【０８１３】
７．プレートを室温で１０分間インキュベートし、発光シグナルを安定化させる。
【０８１４】
８．発光を記録し、ＲＬＵ＝相対発光単位でグラフ化して報告する。
【０８１５】
表７は、ＣＤ７０＋（Ｕ２５１、Ｌ４２８およびＣａｋｉ−１）細胞株に対するｈ１Ｆ６−抗体−ＭＭＡＺ（ｈ１Ｆ６−ｍｃ−ｖｃ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺ）複合体のインビトロ活性を示す。複合体は、抗体あたり約４個の薬物を含有する。
【０８１６】
表７．
ＣＤ７０＋細胞株に対するｈ１Ｆ６−ＭＣ−ｖａｌ−ｃｉｔ−ＰＡＢ−ＭＭＡＺ複合体のＩＣ５０（ｎｇ／ｍＬ）
【０８１７】
【化２９５】
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【０８１８】
【化２９６】
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【０８１９】
【化２９７】
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実施例３５−ラットでの血漿クリアランス
抗体薬物複合体および全抗体の血漿クリアランス薬物動態解析をＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，それぞれ２５０〜２７５ｇ）で試験する。動物の尾に静脈注射することによってボーラス投与する（ＩＶ  Ｐｕｓｈ）。全血約３００μｌを以下の各時間点で頚部カニューレまたはテールスティック（ｔａｉｌ  ｓｔｉｃｋ）でリチウム／ヘパリン凝固防止容器に集める：０分（投与前）、投与から１０分後および３０分後；１時間後、２時間後、４時間後、８時間後、２４時間後および３６時間後；および２日後、３日後、４日後、７日後、１４日後、２１日後および２８日後。全抗体をＥＬＩＳＡ−ＥＣＤ／ＧｘｈｕＦｃ−ＨＲＰで測定する。抗体薬物複合体をＥＬＩＳＡ−ＭＭＡＺ／ＥＣＤ−Ｂｉｏ／ＳＡ−ＨＲＰで測定する。
【０８２０】
実施例３６−サルでの血漿クリアランス
上述の手順と同様の手順を用いて抗体薬物複合体および全抗体の血漿クリアランス薬物動態解析をカニクイザルで試験する。
【０８２１】
実施例３７−トランスジェニック実験マウスの腫瘍体積に対するインビボでの効力
トランスジェニック実験に適した動物を標準的な商業的供給業者（例えば、Ｔａｃｏｎｉｃ（Ｇｅｒｍａｎｔｏｗｎ，Ｎ．Ｙ．））から得ることができる。多くの株が適しているが、腫瘍形成に対して高い感受性を有するため、ＦＶＢ雌マウスが好ましい。交配のためにＦＶＢ雄を使用することができ、精管切除術を行なったＣＤ．１雄を用いて刺激し、偽妊娠状態にする。精管切除術を行なったマウスは任意の商業的供給業者から得ることができる。初代をＦＶＢマウスまたは１２９／ＢＬ６×ＦＶＢ  ｐ５３ヘテロ接合マウスを用いて誕生させることができる。ｐ５３対立遺伝子でヘテロ接合性を有するマウスを用いて腫瘍形成の可能性を高めることができる。Ｆ１腫瘍の中には混合株も存在する。初代腫瘍はＦＶＢのみであり得る。
【０８２２】
腫瘍を有する動物（Ｆｏ５ｍｍｔｖトランスジェニックマウスから同種移植で繁殖した）にＡＤＣをＩＶ注射によって単回投与または複数回投与することによって処置することができる。腫瘍体積を、注射後の種々の時間点で評価することができる。
【０８２３】
実施例３８−ｍｃＭＭＡＺ抗体−薬物複合体のインビボ効力
ｃＡＣ１０−ｍｃＭＭＡＺの効力をＫａｒｐａｓ−２９９  ＡＬＣＬ異種移植によって評価することができる。抗体あたり平均４つの薬物部分を有するキメラＡＣ１０−ｍｃＭＭＡＺ（ｃＡＣ１０−ｍｃＦ４）を使用する。Ｋａｒｐａｓ−２９９ヒトＡＬＣＬ細胞を免疫不全Ｃ．Ｂ−１７  ＳＣＩＤマウスに皮下移植する（マウスあたり５×１０６細胞）。腫瘍体積を式（０．５×Ｌ×Ｗ２）を用いて算出する。式中、ＬおよびＷは２方向の測定結果の長い方および短い方である。
【０８２４】
Ｌ２９８７  ＮＳＣＬＣ異種移植におけるｃＢＲ９６−ｍｃＭＭＡＺの効力
ｃＢＲ９６はＬｅＹ抗原を認識するキメラ抗体である。抗体あたり４つの薬物を有するｃＢＲ９６−ｍｃＭＭＡＺ（ｃＢＲ９６−ｍｃＦ４）の効力をインビボで評価するために、Ｌ２９８７非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）腫瘍フラグメントを無胸腺ヌードマウスに移植する。腫瘍が平均約１００ｍｍ３になったら、マウスを未処置群および２つの処置群の３つの群に分ける。抗体薬物複合体の効力を上述のように評価する。
【０８２５】
ＡＴＣＣ寄託
特許手続きのための微生物寄託の国際認識に関するブダペスト条約の条件に沿ってモノクローナル抗体Ｓ２Ｃ６のＡＴＣＣ寄託を１９９９年５月２５日に行なった。このＡＴＣＣ寄託による寄託番号はＰＴＡ−１１０であった。
【０８２６】
特許手続きのための微生物寄託の国際認識に関するブダペスト条約の条件に沿ってマウスモノクローナル抗体ＡＣ１０のＡＴＣＣ寄託を２００５年４月２６日に行なった。このＡＴＣＣ寄託による寄託番号はＰＴＡ−６６７９であった。
【０８２７】
特許手続きのための微生物寄託の国際認識に関するブダペスト条約の条件に沿ってモノクローナル抗体ヒト化ＡＣ１０のＡＴＣＣ寄託を２００５年８月２３日に行なった。このＡＴＣＣ寄託による寄託番号はＰＴＡ−６９５１であった。
【０８２８】
ＡＴＣＣは、１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎａ  ２０１１０−２２０９，ＵＳＡにある。当業者にとって簡便なように任意の寄託が行なわれ、寄託が特許法第１１２条の下で必要であることを承認したわけではない。本明細書に記載されるものは、寄託される抗体に範囲が限定されるものではない。寄託された実施形態は、本発明の特定の態様を単に代表するものであることが意図されており、機能的に等価な任意の抗体は、本発明の範囲内にあるからである。本明細書に記載の物質の寄託は、本明細書に含まれる記載が本発明の任意の態様（ベストモードを含む）を実施可能にするのに不十分であることを認めるものではなく、示されている特定の代表例に特許請求の範囲を限定するものと解釈されるべきでもない。実際に、本明細書に図示され、記載された例に加えて本発明の種々の改変は上の記載から当業者に明らかであり、添付の特許請求の範囲内にある。
【０８２９】
本発明は、実施例に開示された特定の実施形態に発明の範囲を限定すべきではない。これらの実施形態は、本発明のいくつかの態様の代表例であり、機能的に等価な任意の実施形態が本発明の範囲内にあることを意図している。実際に、本明細書に図示され、記載された例に加えて本発明の種々の改変は上の記載から当業者に明らかであり、添付の特許請求の範囲内にある。
【０８３０】
本明細書に引用された全ての引用文献は、それぞれの個々の刊行物または特許または特許明細書が特定的かつ個々にあらゆる目的のためにその内容全体が参考により組み込まれているのと同程度まで、あらゆる目的のためにその内容全体が本明細書に参考により組み込まれる。
【国際調査報告】
2009500424.tif 000319