(57)【要約】  運動によって誘発されるウマの肺出血の治療における、新規な独立した治療方法としての５型ホスホジエステラーゼ阻害剤の使用が開示されている。この５型ホスホジエステラーゼ阻害剤は、それだけで作用する薬剤として、激しい運動を開始する約３０分〜約７日前に、ウマに静脈内注射される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウマの運動中に起こる肺出血を予防するための方法であって、当該方法が、以下の工程：
ａ）５型ホスホジエステラーゼ阻害剤を準備する工程、
ｂ）運動中の出血を予防するために前記５型ホスホジエステラーゼ阻害剤の生理学的許容量を決定する工程、及び
ｃ）前記５型ホスホジエステラーゼ阻害剤をウマに静脈内注射する工程
を含むことを特徴とするウマの肺出血の予防方法。
【請求項２】
（６Ｒ−トランス）−６−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−ピラジノ［１’，２’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン、４−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジンー１−イル）スルホニル−フェニル］−９−メチル−７−プロピル３，５，６，８−テトラザビシクロ［４，３，０］ノン３，７，９トリエン−２−オン、４−（３−クロロ−４メトキシベンジル）アミノ−１−（４−ヒドロキシピペリジノ）−６−フタラジンカルボニトリルモノヒドロクロリド、（ＮＡ１−（−６−クロロ−４−（３，４−メチレンジオキシベンジル）−アミノキナゾリン−２−イル）−ピペリジン−４−カルボキシレートセスキヒドレート、及びこれらの混合物より成るグループからの前記５型ホスホジエステラーゼ阻害剤を選択することを含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ウマの体重を最初に測定することにより、前記５型ホスホジエステラーゼ阻害剤の生理学的許容量を決定することを含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ウマの体重１キログラム当たり約５μｇ〜約２００μｇの範囲の投与量にて前記５型ホスホジエステラーゼ阻害剤を注射することを含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項５】
運動を開始する約３０分〜約１週間前に、前記５型ホスホジエステラーゼ阻害剤をウマに静脈内注射することを含むことを特徴とする請求項１に記載の方法。
【請求項６】
運動にて誘発され運動中に起こる肺出血を予防するために、ウマの肺に環状３’，５’−モノホスフェートの産出を促す方法であって、当該方法が、以下の工程：
ａ）５型ホスホジエステラーゼ阻害剤を準備する工程、
ｂ）ウマの体重を測定することにより、運動中の出血を予防するための前記５型ホスホジエステラーゼ阻害剤の生理学的許容量を決定する工程、及び
ｃ）前記５型ホスホジエステラーゼ阻害剤をウマに静脈内注射する工程
を含むことを特徴とする、ウマの肺において環状３’，５’−モノホスフェートの産出を促す方法。
【請求項７】
（６Ｒ−トランス）−６−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−ピラジノ［１’，２’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン、４−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジンー１−イル）スルホニル−フェニル］−９−メチル−７−プロピル３，５，６，８−テトラザビシクロ［４，３，０］ノン３，７，９トリエン−２−オン、４−（３−クロロ−４メトキシベンジル）アミノ−１−（４−ヒドロキシピペリジノ）−６−フタラジンカルボニトリルモノヒドロクロリド、（ＮＡ１−（−６−クロロ−４−（３，４−メチレンジオキシベンジル）−アミノキナゾリン−２−イル）−ピペリジン−４−カルボキシレートセスキヒドレート、及びこれらの混合物より成るグループからの前記５型ホスホジエステラーゼ阻害剤を選択することを含むことを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項８】
ウマの体重１キログラム当たり約５μｇ〜約２００μｇの範囲の投与量にて前記５型ホスホジエステラーゼ阻害剤を注射することを含むことを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項９】
運動を開始する約３０分〜約１週間前に、前記５型ホスホジエステラーゼ阻害剤をウマに静脈内注射することを含むことを特徴とする請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
運動にて誘発されるウマの肺出血を予防するための方法であって、当該方法が、以下の工程：
ａ）５型ホスホジエステラーゼ阻害剤として、（ＮＡ１−（−６−クロロ−４−（３，４−メチレンジオキシベンジル）−アミノキナゾリン−２−イル）−ピペリジン−４−カルボキシレートセスキヒドレートを準備する工程、
ｂ）運動中の出血を予防するために前記５型ホスホジエステラーゼ阻害剤の生理学的許容量を決定する工程、及び
ｃ）前記５型ホスホジエステラーゼ阻害剤をウマに静脈内注射する工程
を含むことを特徴とするウマの肺出血の予防方法。
【請求項１１】
ウマの体重を最初に測定することにより、前記５型ホスホジエステラーゼ阻害剤の生理学的許容量を決定することを含むことを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
ウマの体重１キログラム当たり約１０μｇ〜約１００μｇの範囲の投与量にて前記５型ホスホジエステラーゼ阻害剤を注射することを含むことを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
運動を開始する約１時間前に、前記５型ホスホジエステラーゼ阻害剤をウマに静脈内注射することを含むことを特徴とする請求項１０に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、２００６年５月１日に出願された米国特許仮出願６０／７９６，２６３に基づく優先権主張を伴うものである。
【背景技術】
【０００２】
１．発明の分野
本発明は、ウマの肺の血行動態に関するものである。さらに特に、本発明は、肺の毛細血管ストレス障害を減少させ、その結果、競争馬における運動に起因する肺出血（ＥＩＰＨ）を減らすための５型ホスホジエステラーゼ阻害剤（ＰＤＩｓ）の使用に関する。
【０００３】
２．従来技術
ＥＩＰＨに罹ったことのあるウマは、出血性素因馬（ｂｌｅｅｄｅｒｓ）としても知られており、競馬産業において深刻な問題となっている。訓練中の馬や、競馬場での競走中の馬の調査から、走った後には馬の約７０％〜１００％がＥＩＰＨを経験していることが示されてきている。このことは、内視鏡的にも（Ｐａｓｃｏｅ等、１９８１年；Ｓｗｅｅｎｅｙ，１９９１年）、気管を通しての洗浄（Ｗｈｉｔｗｅｌｌ及びＧｒｅｅｔ、１９８４年）からも示されてきている。重傷を負ったウマは、運動量を減らしたり、競技歴を短縮させたりすることがあり、このため、ＥＩＰＨは、競馬産業が直面している非常に深刻な獣医学上の問題の一つである。
【０００４】
数多くの仮説が提供されてきているが、肺の毛細血管ストレス障害は、競争馬における運動に誘発された肺出血の偶然決定因であるということが、科学界によって一般的に受け入れられている。この推論は、肺の毛細血管レベルにおける過度の肺動脈圧力とストレス障害が、ウマが激しい運動をする間の増加した血管内外圧力によるものであることを示した研究者の中で、特にＭ．Ｍａｎｏｈａｒ（Ａｍ  Ｊ．Ｖｅｔ．Ｒｅｓ，１９９３年，５４巻：１４２−１４６頁）及び、Ｗｅｓｔ等（Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，１９９１年，７１巻：５７３−５８２頁及びＪ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ，１９９３年，７５巻：１０９７−１１０９頁）の研究に基づくものである。更にウマは、高い強さの運動を行なう間、酸素摂取を容易にするために、比較的薄い肺の血液‐気体バリアを有していることが知られている。運動を行なう間、肺の血流は、ウマの酸素必要量を満足させる８倍と同程度にまで増加する。ウマ以外の哺乳動物における基礎代償機構は、肺の毛細血管床の機能的回復を含んでいる。
【０００５】
Ｍｉｌｌｓ等（Ｂｒ．Ｖｅｔ．Ｊ．，１９９６年，１９５２巻：１１９−１２２頁）は、Ｎ−ニトロ−Ｌ−アルギニンメチルエステル（Ｌ−Ｎａｍｅ）を肺動脈の中に直接導入することによって、高速トレッドミル試験を受けたウマにおける一酸化窒素（ＮＯ）の合成を研究した。この化合物は、多くの種における休止肺血管を正常な状態に調節することが知られているＮＯの体内産出を阻害することが示されている。運動の間、肺中のＮＯの減少されたレベルは、肺動脈圧力の著しい増加をもたらした。これとは逆に、運動しているウマの肺動脈の中への、Ｌ−Ｎａｍｅの類似化合物であるＬ−アルギニンの導入が、その後の肺動脈圧力の有利な減少を伴う、ＮＯの制限された産出を一変させるために、Ｗｅｓｔ等によって示された。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
たとえ、Ｌ−アルギニンの投与がウマの肺におけるＮＯの産出を改善し、その結果、出血が少なくなったとしても、ウマの激しい運動の間に肺動脈圧力をより一層減少させる必要性が未だ存在する。本発明は、ウマの運動に起因する肺出血の治療における新規な独立した治療方法として、５型ホスホジエステラーゼ阻害剤の使用によって、このような要求を満足させるものである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
発明の要約
体内ＮＯは、哺乳動物の肺を含む種々の組織系を通して継続的に産出される。これは、アミノ酸であるＬ−アルギニンを用いて開始され、Ｌ−アルギニンは一酸化窒素シンターゼを経て、Ｌ−シトルリンと一酸化窒素に変換される。一酸化窒素は、グアニジレートシクラーゼを活性化して、ｃＧＭＰ（環状３’５’グアニンモノホスフェート）を生成し、この化合物は、スムースな筋肉弛緩を経て、選択的な（肺にだけ作用する）肺の血管拡張をもたらす。この化合物ｃＧＭＰは、約３０秒以下という比較的短い半減期を有し、触媒である５型ホスホジエステラーゼによって素早く分解される。しかしながら、肺の毛細血管ストレス障害を予防するために、ｃＧＭＰは、スムースな筋肉弛緩を持続するために、運動を行なっている間中、維持させる必要がある。本発明によれば、これは、激しい運動を行なう前の特定時期に、予め決められた投与量にて幾つかの５型ホスホジエステラーゼ阻害剤のうちのいずれか１種を静脈内注射することによって達成される。
【０００８】
本発明の、前述の追加の課題、利点、及び特徴点は、添付の図面と一緒に、以下の詳細な説明を読むことで、より一層明らかになるであろう。
【発明の効果】
【０００９】
本発明は、ウマの運動に起因する肺出血の治療における新規な独立した治療方法として、５型ホスホジエステラーゼ阻害剤の使用によって、このような要求を満足させるものである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
好ましい具体例の詳細な説明  
本発明によれば、５型ホスホジエステラーゼ阻害剤、好ましくは（ＮＡ１−（−６−クロロ−４−（３，４−メチレンジオキシベンジル）−アミノキナゾリン−２−イル）−ピペリジン−４−カルボキシレートセスキヒドレート（Ｅ４０２１）は、明確に決められた濃度にて単一の薬剤としてウマに投与される。５型ホスホジエステラーゼ阻害剤化合物は、最大の運動を行なっている間、２時間以上もの間、肺の動脈圧力の望ましい減少を維持させる。このような方法は、約１００ｍｍＨｇ〜約１３０ｍｍＨｇの非常に高い肺の血管圧力という前提を受け入れることに基づいている。このような高い肺の血管圧力は、運動しているウマに特有のもので、しかも、毛細血管ストレス障害、即ち、約９０ｍｍＨｇ以上の圧力を生じさせ、その後にウマの肺出血をもたらす、異常な肺の血管内外圧力の主な引き金になっているものである。異常な肺の血管内外圧力は、一般に、ウマにおけるＥＩＰＨを誘導する基礎的な機構であると認められている。
【００１１】
肺の毛細血管ストレス障害及びＥＩＰＨを治療するための、５型ホスホジエステラーゼ阻害剤を使用した以前の試みでは、添加剤として吸引一酸化窒素ガスも使用された。このことは、Ｐｅｒｒｙによる米国特許第５，７６５，５４８号に記載されている。同様に、共にＺａｐｏｌによる米国特許第５，８２３，１８０号及び第５，５７０，６８３号には、ウマを含む多くの哺乳動物における種々の肺疾患を治療するための方法として、吸引一酸化窒素ガス基質を５型ホスホジエステラーゼ阻害剤と組み合わせて使用することが提案されている。
【００１２】
しかしながら、本発明は、５型ホスホジエステラーゼ阻害剤、好ましくはＥ４０２１が単一の活性剤として投薬される際、これら阻害剤が、激しく運動しているウマの肺動脈圧力を約８０ｍｍＨｇ以下にまで選択的に減少させることを証明している。このことは、ウマ又はウマ科の動物における運動により誘発される肺出血をもたらす基礎的な機構としての、過剰な高い血管内外肺動脈圧力から生じた毛細血管ストレス障害の発生に基づくものである。肺の毛細血管ストレス障害は、肺／気管支樹枝状分岐の中へ潜在的な出血を生じさせる。このような出血は、鼻孔及び口を通っての明らかな出血によって証明されるようにして症状が現れたり、その状態が内視鏡で観察することにより検知されるように無症状であることもある。
【００１３】
解決法として、ウマに調整された投薬量での５型ホスホジエステラーゼ阻害剤の投与は、肺の毛細血管ストレス障害における付随した減少を伴いながら、過剰な肺動脈圧力を緩和させるのに有益である。この５型ホスホジエステラーゼ阻害剤は、運動を開始させる前に静脈内注射によって投与される。本発明によれば、５型ホスホジエステラーゼ阻害剤（ＰＤＩｓ）は、選択的な単独型の肺血管拡張剤である。言い換えると、投与された５型ホスホジエステラーゼ阻害剤に対する、添加剤としての一酸化窒素ガスは一切必要ない。適した５型ホスホジエステラーゼ阻害剤としては、以下のものが挙げられる。
タダラフィル（Ｃ２２Ｈ１９Ｎ３Ｏ４）−（シアリス（登録商標））、（６Ｒ−トランス）−６−（１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）−２，３，６，７，１２，１２ａ−ヘキサヒドロ−２−メチル−ピラジノ［１’，２’：１，６］ピリド［３，４−ｂ］インドール−１，４−ジオン。
バルデナフィル（Ｃ２３Ｈ３２Ｎ６Ｏ４Ｓ）−（レビトラ（登録商標））、４−［２−エトキシ−５−（４−エチルピペラジンー１−イル）スルホニル−フェニル］−９−メチル−７−プロピル３，５，６，８−テトラザビシクロ［４，３，０］ノン３，７，９トリエン−２−オン。
Ｅ４０１０−  ４−（３−クロロ−４メトキシベンジル）アミノ−１−（４−ヒドロキシピペリジノ）−６−フタラジンカルボニトリルモノヒドロクロリド。
Ｅ４０２１−  （ＮＡ１−（−６−クロロ−４−（３，４−メチレンジオキシベンジル）−アミノキナゾリン−２−イル）−ピペリジン−４−カルボキシレートセスキヒドレート。最後の化合物が好ましい。
【００１４】
最大レベルの訓練を受けているウマにおける肺の毛細血管ストレス障害を減少させる目的で、上記の５型ホスホジエステラーゼ阻害剤のうちのいずれか１種、及びこれらの混合物は、運動を開始する約３０分〜約１週間前、好ましくは約１時間前に、静脈内注射にてウマに投与される。好ましくは、この化合物は、運動を行なう約１時間前に、ウマの体重１キログラム当たり約５μｇ〜約２００μｇの範囲、好ましくはウマの体重１キログラム当たり約１０μｇ〜約１００μｇの範囲の投与量にて投与される。
【００１５】
以下の実施例は、ウマの運動に誘発される肺出血の治療における、本発明の新規な独立した治療方法としての、５型ホスホジエステラーゼ阻害剤の使用を示すものであり、発明者等が意図している本発明を実施するための最良の形態を示しているが、限定を意味するものとして解釈されるべきではない。
【実施例】
【００１６】
以前にＥＩＰＨの徴候のあった８頭のウマを、研究を行なうのに登録した。テストを受けるウマは、同一対照法としての機能も果たし、プロトコルの開始の前には、１週間の（最大の運動種目のない）予め決められた休息期間を順守した。テストの開始時には、最大運動を行なう前に、実験対象のウマは、体重１ｋｇ当たり１０μｇの投与量のＥ４０２１か、偽薬の投与を受けた。８頭のウマは、１０００メートル以上の最大強度で訓練／模擬競争状態にて運動を行ない、運動を行なった後、約６０〜９０分、内視鏡検査／評価を続けて行なった。即ち、運動を行なった後、最大運動後、約６０〜９０分、ビデオ内視鏡検査を用いて気管支の出血の徴候についてウマを検査した。内視鏡は、気管分岐部（カリーナ）の水平部を通し、画像をビデオテープに録画した。テストを受けたウマは、テストとテストの間に１週間の最小休息期間を設けるか、あるいは、共同研究を行なっている獣医及び／又はトレーナーの指示による休息期間を設けて、２回目のテストを行なった。
【００１７】
ＥＩＰＨが出現しているか否か、もし出現している場合にはその重大性を示すために、客観的評価システム（Ｐａｓｃｏｅ等、１９８５年）を用いた。ゼロは、ＥＩＰＨが無いことを示しており、１〜４は、気管に内視鏡的に観察された血液の増加量を示している。評価は、試験を指導した獣医によってなされ、その後、記録された結果を用いて別の個人により評価を行なった。試験を指導した獣医は、必然的にこのプロジェクトの中に直接入り込んでいるので、治療状態を知らない個人によって第２の評価を行なった。
【００１８】
Ｅ４０２１は、３０ｍｌ中に５０ｍｇのＥ４０２１を含有した水薬瓶から投薬した。偽薬は、０．９％Ｎ生理食塩水を含む３０ｍｌの水薬瓶から投薬した。ベースライン事前補正評点は、Ｅ４０２１又は偽薬のいずれかの最初の治療を投薬する前のウマの評点を表している。Ｐ１評点は、偽薬介入後のものであり、ポストＴｘ評点は、Ｅ４０２１の投与後に記録したものである。その後、ウマは、第２の運動テストを行なう前に、激しい運動を行なわずに、少なくとも１週間の間、休ませた。最初にＥ４０２１の投与を受けたウマは、その後、偽薬を投与し、その逆を行なった。
これらの実験結果が、以下の表１に示されている。
【００１９】
［表１］
対象（年齢）    ベースライン事前補正    Ｐ１    ポストＴｘ
ウマ１（７）            ３＋            ３＋         ３
ウマ２（５）            ３              ３＋         １
ウマ３（５）           Ｎ／Ａ           ４＋         ２
ウマ４（９）            ４              ４           ０
ウマ５（１４）          ４＋            ３＋         ３＋
ウマ６（３）            １              ２           ０
ウマ７（５）            １＋            １           ０
ウマ８（５）            ４              ２           ２＋
【００２０】
実験対象物は、いかなる都合の悪い影響も経験することはなかった。全身的な血液動態（例えば、心拍出量、血圧）は、対照から変化せずにそのままであり、正常範囲内であった。
【００２１】
５型ホスホジエステラーゼ阻害剤、特にＥ４０２１の使用が、肺細胞ｃＧＭＰ（環状３’５’グアニンモノホスフェート）を持続させ、その結果、競争馬における運動によって誘発される肺出血の苦しさを減少させるための実現性のある単独で効果のある治療薬であると結論付けられる。このような方法は、毛細血管ストレス障害や肺出血を生じさせる異常な肺血管内外圧力の主要な原因の一つが、極端に高い肺血管圧力であるという前提を容認することに基づいている。実験結果は、競争馬におけるＥＩＰＨをもたらす根本的なメカニズムとして、このような結論を支持している。
【００２２】
ここに記載されている発明概念についての様々な改良は、添付の請求の範囲により規定された本発明の精神及び範囲から離れることなく、当業者には明らかであるに違いないことが理解される。
【国際調査報告】
2009535404.tif 000002