(57)【要約】本発明は、超臨界ＣＯ２抽出法によって調製した、桂皮種植物材料の抽出物に関する。１つの局面では、本発明は、図６〜８５のいずれかのＤｉｒｅｃｔ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ（ＤＡＲＴ）質量分析クロマトグラムを有する画分を含む、桂皮種抽出物に関する。さらなる実施形態では、この画分は、桂皮アルデヒド、ベンズアルデヒド、シンナミルアルコール、ｔｒａｎｓ−桂皮酸、酢酸シンナミル、精油、ポリフェノール、多糖類およびこれらの組み合わせからなる群から選択される化合物を含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
図６〜８５のいずれかのＤｉｒｅｃｔ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ（ＤＡＲＴ）質量分析クロマトグラムを有する画分を含む、桂皮種（ｓｐｅｃｉｅｓ）抽出物。
【請求項２】
前記画分が、桂皮アルデヒド、ベンズアルデヒド、シンナミルアルコール、ｔｒａｎｓ−桂皮酸、酢酸シンナミル、精油、ポリフェノール、多糖類およびこれらの組み合わせからなる群から選択される化合物を含む、請求項１に記載の桂皮種抽出物。
【請求項３】
前記画分が、約２重量％を超える量の桂皮アルデヒドを含む、請求項２に記載の桂皮種抽出物。
【請求項４】
前記画分が、約５重量％、約１０重量％、約１５重量％、約２０重量％、約２５重量％、約３０重量％、約３５重量％、約４０重量％、約４５重量％、約５０重量％、約５５重量％、約６０重量％、約６５重量％、約７０重量％、約７５重量％、約８０重量％、約８５重量％、約９０重量％または約９５重量％を超える量の桂皮アルデヒドを含む、請求項２に記載の桂皮種抽出物。
【請求項５】
前記画分が、桂皮アルデヒドを約６５重量％〜約９５重量％含む、請求項２に記載の桂皮種抽出物。
【請求項６】
前記画分が、オイゲノール、２’−ヒドロキシ桂皮アルデヒド、２−メトキシ桂皮アルデヒド、２’−ベンゾキシ桂皮アルデヒド、リナロール、１，８−シネオール、α−ピネン、β−ピネンおよびこれらの組み合わせからなる群から選択される精油を含む、請求項２に記載の桂皮種抽出物。
【請求項７】
前記画分が、精油を約１重量％〜約５重量％含む、請求項２に記載の桂皮種抽出物。
【請求項８】
前記画分が、桂皮アルデヒドと精油とを合わせて約５重量％〜約４０重量％含む、請求項２に記載の桂皮種抽出物。
【請求項９】
前記画分が、フラボノイド、フラボノール配糖体およびこれらの組み合わせからなる群から選択されるポリフェノールを含む、請求項２に記載の桂皮種抽出物。
【請求項１０】
前記画分が、ポリフェノールを約２０重量％〜約７０重量％含む、請求項２に記載の桂皮種抽出物。
【請求項１１】
前記画分が、桂皮アルデヒド約６重量％と、ポリフェノール約７０重量％とを含む、請求項２に記載の桂皮種抽出物。
【請求項１２】
前記画分が、桂皮アルデヒド約４０重量％と、ポリフェノール約２０重量％とを含む、請求項２に記載の桂皮種抽出物。
【請求項１３】
前記画分が、グルコース、アラビノース、ガラクトース、ラムノース、キシロースウロン酸およびこれらの組み合わせからなる群から選択される多糖類を含む、請求項２に記載の桂皮種抽出物。
【請求項１４】
前記画分が、多糖類を約３０重量％含む、請求項２に記載の桂皮種抽出物。
【請求項１５】
前記フラボノイドが、３−（２−ヒドロキシフェニル）−プロピオン酸、３−（２−ヒドロキシフェニル）−Ｏ−配糖体、アントシアニジン、エピカテキン（ｅｐｉｔｃａｔｅｃｈｉｎ）、カテキン、メチルヒドロキシカルコン、カテキンオリゴマー、エピカテキンオリゴマー、オリゴマープロアントシアニジン、ポリマープロアントシアニジンおよびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項９に記載の桂皮種抽出物。
【請求項１６】
前記フラボノール配糖体が、ケンフェリトリン、ケンフェロール  ３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシド、ケンフェロール  ３−Ｏ−β−Ｄ−アピオフラノシル−（１→２）−α−Ｌ−ラムノピラノシド、ケンフェロール  ３−Ｏ−β−Ｄ−アピオフラノシル−（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシドおよびこれらの組み合わせからなる群から選択される、請求項９に記載の桂皮種抽出物。
【請求項１７】
請求項１の桂皮種抽出物を含む食品または医薬。
【請求項１８】
桂皮種植物材料を連続的に抽出し、精油画分、非タンニンポリフェノール画分および多糖類画分を得る工程を含み、該工程が、
（ａ）超臨界二酸化炭素抽出によって桂皮種植物材料を抽出し、該精油画分および第１の残留物を得る工程と、
（ｂ）桂皮種植物材料または工程（ａ）の第１の残留物を約７０℃〜約９０℃の水によって抽出し、多糖類をアルコールで沈殿させ、該多糖類画分と第２の残留物を得る工程と、
（ｃ）桂皮種植物材料、工程（ａ）の第１の残留物および／または工程（ｂ）の第２の残留物を含水アルコール溶液で抽出し、該抽出物をアフィニティー吸着プロセスを用いて精製し、該非タンニンポリフェノール画分を得る工程とによる、桂皮種抽出物の調製方法。
【請求項１９】
工程（ａ）が、
（１）抽出容器に粉砕した桂皮種植物材料を入れる工程と、
（２）超臨界条件で二酸化炭素を加える工程と、
（３）該粉砕した桂皮樹皮と該二酸化炭素とを所定時間接触させる工程と、
（４）精油画分を回収容器に集める工程とを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
超臨界条件が、３５℃〜９０℃、圧力６０ｂａｒ〜８００ｂａｒを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
超臨界条件が、４０℃〜８０℃、圧力６０ｂａｒ〜５００ｂａｒを含む、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
前記所定時間が、３０分〜２．５時間である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２３】
前記所定時間が１時間である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２４】
超臨界二酸化炭素分画分離システムが、前記精油画分を分画、精製およびプロファイリングするために用いられる、請求項１９に記載の方法。
【請求項２５】
工程（ｂ）が、
（１）粉砕した桂皮種植物材料または工程（ａ）の第１の残留物と水とを、多糖類の化学構成物質を抽出するのに十分な時間接触させる工程と、
（２）アルコール沈殿によって溶液から固体多糖類を分離し、精製する工程とを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項２６】
前記水が７０℃〜９０℃である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
前記水が８０℃〜９０℃である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２８】
前記時間が１〜５時間である、請求項２５に記載の方法。
【請求項２９】
前記時間が２〜４時間である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３０】
前記時間が２時間である、請求項２５に記載の方法。
【請求項３１】
前記アルコールがエタノールである、請求項２５に記載の方法。
【請求項３２】
工程（ｃ）が、
（１）桂皮種植物材料、工程（ａ）の第１の残留物および／または工程（ｂ）の第２の残留物と、含水アルコール溶液とを、ポリフェノールの化学構成物質を抽出するのに十分な時間接触させる工程と、
（２）含水アルコール溶媒混合物から抽出したポリフェノールの化学構成物質の濃縮アルコール溶液をアフィニティー吸着樹脂カラムに通す工程であって、該ポリフェノール酸が吸着される、工程と、
（３）該精製した非タンニンポリフェノールの化学構成物質画分を該アフィニティー吸着樹脂から溶出させ、該アフィニティー吸着樹脂にタンニンポリフェノールを吸着させたままにする工程とを含む、請求項１８に記載の方法。
【請求項３３】
前記含水アルコール溶液がエタノールおよび水を含み、該エタノールの濃度が１０〜９５重量％である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記含水アルコール溶液がエタノールおよび水を含み、該エタノールの濃度が２５重量％である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
工程（１）が３０℃〜１００℃で行われる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３６】
工程（１）が６０℃〜１００℃で行われる、請求項３２に記載の方法。
【請求項３７】
前記時間が１〜１０時間である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３８】
前記時間が１〜５時間である、請求項３２に記載の方法。
【請求項３９】
前記時間が２時間である、請求項３２に記載の方法。
【請求項４０】
請求項１８に記載の方法によって調製される桂皮種抽出物。
【請求項４１】
桂皮アルデヒドと、該桂皮アルデヒドの１〜５重量％の桂皮酸と、該桂皮アルデヒドの５〜１５重量％のメチル桂皮酸と、該桂皮アルデヒドの１〜５重量％のシンナミルアルコールと、該桂皮アルデヒドの２０〜３０重量％のβ−グアネレン／ｃｉｓ−γ−ビスアバボレンと、該桂皮アルデヒドの１〜５重量％のピロガロールとを含む、桂皮種抽出物。
【請求項４２】
ピロガロールと、該ピロガロールの８０〜９０重量％の桂皮酸と、該ピロガロールの８５〜９５重量％のメチル桂皮酸と、該ピロガロールの２０〜３０重量％のクマリン酸と、該ピロガロールの１５〜２５重量％のホモバニリン酸と、該ピロガロールの８５〜９５重量％桂皮アルデヒドと、該ピロガロールの１０〜１５重量％の安息香酸ベンジルとを含む、桂皮種抽出物。
【請求項４３】
カテキンと、該カテキンの５〜１５重量％の桂皮酸と、該カテキンの５〜１５重量％のメチル桂皮酸と、該カテキンの５〜１５重量％のクマリン酸と、該カテキンの１〜１０重量％のフェルラ酸と、該カテキンの１〜５重量％の２−メトキシフェノールと、該カテキンの５〜１５重量％のホモバニリン酸と、該カテキンの２０〜３０重量％のバニリン酸と、該カテキンの１〜５重量％のベンズアルデヒドと、該カテキンの３５〜４５重量％の桂皮アルデヒドと、該カテキンの８５〜９５重量％のピロガロールと、該カテキンの１５重量％までのカフェ酸とを含む、桂皮種抽出物。
【請求項４４】
β−グアネレン／ｃｉｓ−γ−ビスアバボレンと、該β−グアネレン／ｃｉｓ−γ−ビスアバボレンの５〜１５重量％の桂皮アルデヒドとを含む、桂皮種抽出物。
【請求項４５】
桂皮アルデヒドと、桂皮アルデヒドの１０〜２０重量％のβ−グアネレン／ｃｉｓ−γ−ビスアバボレンとを含む、桂皮種抽出物。
【請求項４６】
桂皮アルデヒドと、該桂皮アルデヒドの３０〜４０重量％のピロガロールと、桂皮アルデヒドの１〜１０重量％のカテキン／エピカテキンとを含む、桂皮種抽出物。
【請求項４７】
桂皮アルデヒドと、該桂皮アルデヒドの１〜５重量％の桂皮酸と、該桂皮アルデヒドの０．５〜５重量％のメトキシ桂皮アルデヒドと、該桂皮アルデヒドの０．１〜５重量％のオイゲノールと、該桂皮アルデヒドの１〜５重量％のｐ−シメンと、該桂皮アルデヒドの０．１〜５重量％のショウノウと、該桂皮アルデヒドの０．５〜５重量％のカルバクロールと、該桂皮アルデヒドの２５〜３５重量％のカリオフィレン／フムレンと、該桂皮アルデヒドの０．１〜５重量％のピロガロールと、該桂皮アルデヒドの４０〜５０重量％の桂皮酸シンナミルとを含む、桂皮種抽出物。
【請求項４８】
桂皮酸シンナミルと、該桂皮酸シンナミルの０．５〜５重量％のメトキシ桂皮アルデヒドと、該桂皮酸シンナミルの０．１〜５重量％のシンナミルアルコールと、該桂皮酸シンナミルの１〜５重量％のｐ−シメンと、該桂皮酸シンナミルの０．１〜５重量％のリナロールと、該桂皮酸シンナミルの０．１〜５重量％のショウノウと、該桂皮酸シンナミルの０．５〜５重量％のカルバクロールと、該桂皮酸シンナミルの７０〜８０重量％の桂皮アルデヒドと、該桂皮酸シンナミルの４５〜５５重量％のカリオフィレン／フムレンと、該桂皮酸シンナミルの０．１〜５重量％のピロガロールとを含む、桂皮種抽出物。
【請求項４９】
ピロガロールと、該ピロガロールの５〜１０重量％の桂皮酸と、該ピロガロールの６０〜７０重量％のクマリン酸と、該ピロガロールの１〜１０重量％のフェルラ酸と、該ピロガロールの５〜１５重量％の２−メトキシフェノールと、該ピロガロールの１〜１０重量％のバニリン酸と、該ピロガロールの３０〜４０重量％のカテキン／エピカテキンと、該ピロガロールの１〜５重量％のベンズアルデヒドと、該ピロガロールの５〜１５重量％のアフゼレキン／エピアフゼレキンと、該ピロガロールの１〜１０重量％のレスベラトロルと、該ピロガロールの１〜５重量％のバニリンとを含む、桂皮種抽出物。
【請求項５０】
ピロガロールと、該ピロガロールの０．５〜５重量％の桂皮酸と、該ピロガロールの１０〜２０重量％のクマリン酸と、該ピロガロールの０．５〜５重量％のフェルラ酸と、該ピロガロールの１〜５重量％の２−メトキシフェノールと、該ピロガロールの０．５〜５重量％のホモ／イソバニリン酸と、該ピロガロールの１〜１０重量％のバニリン酸と、該ピロガロールの２５〜３５重量％のカテキン／エピカテキンと、該ピロガロールの１〜５重量％のベンズアルデヒドと、該ピロガロールの１〜５重量％の桂皮アルデヒドと、該ピロガロールの０．１〜５重量％のアフゼレキン／エピアフゼレキンと、該ピロガロールの６５〜７５重量％のバニリンとを含む、桂皮種抽出物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
この出願は、２００６年３月２３日に出願された米国仮特許出願第６０／７８５，０１２号および２００６年１２月７日に出願された同第６０／８７３，４７５号（これらは、その全体が参考として本明細書に援用される）への優先権の利益を主張する。
【０００２】
（発明の分野）
本開示は、部分的には、精油の含有量が高く、フェノール酸の含有量が高く、プロアントシアニジンの含有量が高く、および／または多糖類の含有量が高い桂皮種から誘導される抽出物に関し、このような抽出物の調製方法および使用方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
桂皮（Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ  ｚｅｙｌａｎｉｃｕｍまたはｖｅｒｕｍ，Ｃ．ａｒｏｍａｔｉｃｕｍおよびＣ．ｃａｓｓｉａ）は、熱帯の南インドおよびスリランカ原産の高さが１０〜１５ｍの低木常緑樹であり、海面から高度９００ｍまでで生育する。樹皮はでこぼこしていて分厚く、枝は強い。若い茎には緑がかった橙色の斑点がある。葉は有柄葉であり、成長すると固くなり、上側は明るい緑色であり、下側は淡い緑色である。葉はスパイスのような香りがあり、味は辛い。果実は卵形の実であり、ブラックベリーよりも大きく、花托はドングリに似ている。果実は、熟すと、表面に白い斑点を有する青みがかった色の実になり、味はジュニパーに似ており、テレビン（ｔｅｒｅｂｉｎｅ）の香りがする。煮ると油状物質が得られ、これは桂皮スエットと呼ばれる。根と樹皮は桂皮の香りがし、味はショウノウに似ており、これは蒸留によって単離することができる。桂皮種の薬効部分である「桂皮」は、乾燥樹皮からなり、桂皮種のコルク組織およびその下にある若い枝および茎の柔組織から分離される。
【０００４】
桂皮種は、インド洋の島および南アジアから輸入され、現在では、スリランカおよびインド沿岸水域で広く栽培されている。スリランカは主要な生産国であるが、実質的な桂皮の生産は、インド、マレーシア、マダガスカルおよびセイシェル共和国で行われている。桂皮樹皮は、数千年にわたって、従来の東洋医学および西洋医学で使用されてきた。漢方（ＴＣＭ）のエネルギー理論によれば、桂皮は、体内の火を補うように作用し、脾臓および腎臓を温め、整えることによって、胸部痛および腹痛、無力症による下痢および腎臓の機能低下に有効であるとされている。桂皮生薬は、ＴＣＭ、伝統的なギリシャ−ヨーロッパの医薬および伝統的なインドアユルヴェーダ医薬およびウナニ医薬では、駆風薬、消化薬または健胃薬として使用されている。ドイツコミッションＥは、食欲減退および消化不良の愁訴（例えば、胃腸管の軽い痙攣、腫脹および鼓腸）に対する内服使用を承認した。米国およびドイツ国では、桂皮は、薬草化合物の駆風成分および健胃成分として、水性注入液または煎じ液、アルコール液抽出物またはチンキ剤および精油を含む投薬形態で使用されている。桂皮は、複数の薬草を含む咳止め薬、風邪薬および発熱薬の成分でもある。さらに最近では、２型糖尿病（ＮＩＤＤＭ−インスリン非依存性糖尿病）、抗酸化活性、抗血小板凝集活性、抗炎症活性、抗菌活性および抗真菌活性および脳機能の増強への桂皮の使用が、科学的な証拠によって支持された。非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５；非特許文献６；非特許文献７；非特許文献８；非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１；非特許文献１２；非特許文献１３；非特許文献１４；非特許文献１５；非特許文献１６；非特許文献１７；非特許文献１８；非特許文献１９；非特許文献２０；非特許文献２１を参照。
【０００５】
桂皮樹皮の化学構成物質としては、精油（揮発性および非揮発性）、ポリフェノール酸、クマリン、ゴム、ｍｕｓｃｉｌａｇｅ、樹脂、炭化水素（デンプン、多糖類）および灰分が挙げられる（表１）。商業的観点および生物学的観点から，精油（特に、桂皮アルデヒドおよびテルペン）およびポリフェノール酸（特に、フラボノール配糖体−プロアントシアニジンおよびフラボノイド）は、従来から、他の構成物質よりも重要であると考えられてきた。ポリフェノール化合物は、１個以上の芳香環に２個以上のヒドロキシル基（ＯＨ）を含有する。ポリフェノールおよび特定のフラボノイドの物理的性質および化学的性質、分析および生体活性については、何年も研究されている。しかし、他の化学構成物質（例えば多糖類）も、生物学的に重要な有益な効果を有する。あらゆる植物と同様に、桂皮樹皮の化学組成は、種、収穫年、天候、土壌および栽培状態によって変わる。
【０００６】
表１．桂皮樹皮の主要な化学構成物質
化学構成物質                                          乾燥重量％
精油                                                          １〜４％
揮発性油
Ｔｒａｎｓ−桂皮アルデヒド                            （６０〜８０％）
ベンズアルデヒド
２’−ヒドロキシ桂皮アルデヒド
２−メトキシ桂皮アルデヒド
２’−ベンゾキシ桂皮アルデヒド
オイゲノール                                          （１０％まで）
Ｔｒａｎｓ−桂皮酸                                    （５〜１０％）
酢酸シンナミル
シンナミルアルコール
リナロール
１，８−シネオール
モノテルペンおよびセスキテルペン                        （１〜３％）
α−ピネン
β−ピネン
ボルネオール
ポリフェノール                                            ５〜１０％
フラボノール配糖体
ケンフェリトリン
ケンフェロール  ３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシド
ケンフェロール  ３−Ｏ−β−Ｄ−アピオフラノシル−（１→２）−α−Ｌ−ラムノピラノシド
ケンフェロール  ３−Ｏ−β−Ｄ−アピオフラノシル−（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシド
フラボノイド
メチルヒドロキシカルコン
カテキン
エピカテキン
アントシアニジン
カテキン／エピカテキンオリゴマー
３−（２−ヒドロキシフェニル）−プロピオン酸
３−（２−ヒドロキシフェニル）−Ｏ−配糖体
プロアントシアニジン
濃縮タンニン
カルシウム−モノテルペン酒石酸塩
ゴム
粘液
樹脂
炭水化物                                                ８０〜９０％
デンプン
多糖類
灰分。
【非特許文献１】Ｋｈａｎ  Ａら，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ（２００３）２６：３２１５−３２１８
【非特許文献２】Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＲＡら，Ｊ  Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ（２００４）５２：６５−７０
【非特許文献３】Ｊａｒｖｉｌｌｅ−Ｔａｙｌｏｒら，Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｎｕｔｒｉ（２００１）２０：３２７−３３６
【非特許文献４】Ｑｉｎ  Ｒら，Ｈｏｒｍ  Ｍｅｔａｂ  Ｒｅｓ（２００４）３６：１１９−１２３
【非特許文献５】Ｖｅｓｐｏｈｌ  ＥＪら，Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ  Ｒｅｓ（２００５）１９：２０３−２０６
【非特許文献６】Ｌｅｅ  ＳＨら，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（２００５）６９：７９１−９
【非特許文献７】Ｃｈｅｒｉｃｏｎｉ  Ｓら，Ｊ  Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ（２００５）５３：４７６２−４７６５
【非特許文献８】Ｌｉｎ  ＣＣら，Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ  Ｒｅｓ（２００３）１７：７２６０７３０
【非特許文献９】Ｊａｙａｐｒａｋａｓｈａ  ＧＫら，Ｊ  Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ（２００３）５１：４３４４−４３４８
【非特許文献１０】Ｈｕｓｓ  Ｕら，Ｊ  Ｎａｔ  Ｐｒｏｄ（２００２）６５：１５１７−２１
【非特許文献１１】Ｎａｇａｉ  Ｈら，Ｊｐｎ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（１９８２）３２：８１３−８２２
【非特許文献１２】Ｓｕ  ＭＪら，Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｓｃｉ（１９９９）６：３７６−３８６
【非特許文献１３】Ｓｈｉｍａｄａ  Ｙら，Ｐｈｙｔｏｍｅｄ（２００４）１１：４０４−４１０
【非特許文献１４】Ｔａｈｅｒ  Ｍら，Ｍｅｄ  Ｊ  Ｍａｌａｙｉａ（２００４）５９Ｂ：９７−９８
【非特許文献１５】Ｋａｍａｔｈ  ＪＶら，Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ  Ｒｅｓ（２００３）１７：９７０−９７２
【非特許文献１６】Ｋｕｒｏｋａｗａ  Ｍら，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ（１９９８）３４８：４５−５１
【非特許文献１７】Ｓｉｍｉｃ  Ａら，Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ  Ｒｅｓ（２００４）１８：７１３−７１７
【非特許文献１８】Ｔａｂａｋ  Ｍら，Ｊ  Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ（１９９９）６７：２６９−２７７
【非特許文献１９】Ｋｏｎｇ  ＬＤら，Ｊ  Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ（２０００）７３：１９９−２０７
【非特許文献２０】Ｋｗｏｎ  ＢＭら，Ａｒｃｈ  Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ（１９９８）２１：１４７−１５２
【非特許文献２１】Ｋａ  Ｈら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ（２００３）１９６：１４３−１５２
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（要旨）
１つの局面では、本発明は、図６〜８５のいずれかのＤｉｒｅｃｔ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ（ＤＡＲＴ）質量分析クロマトグラムを有する画分を含む、桂皮種抽出物に関する。
【０００８】
さらなる実施形態では、前記画分は、桂皮アルデヒド、ベンズアルデヒド、シンナミルアルコール、ｔｒａｎｓ−桂皮酸、酢酸シンナミル、精油、ポリフェノール、多糖類およびこれらの組み合わせからなる群から選択される化合物を含む。
【０００９】
さらなる実施形態では、前記画分は、約２重量％を超える量の桂皮アルデヒドを含む。さらなる実施形態では、前記画分は、約５重量％、約１０重量％、約１５重量％、約２０重量％、約２５重量％、約３０重量％、約３５重量％、約４０重量％、約４５重量％、約５０重量％、約５５重量％、約６０重量％、約６５重量％、約７０重量％、約７５重量％、約８０重量％、約８５重量％、約９０重量％または約９５重量％を超える量の桂皮アルデヒドを含む。さらなる実施形態では、前記画分は、桂皮アルデヒドを約６５重量％〜約９５重量％含む。
【００１０】
さらなる実施形態では、前記画分は、オイゲノール、２’−ヒドロキシ桂皮アルデヒド、２−メトキシ桂皮アルデヒド、２’−ベンゾキシ桂皮アルデヒド、リナロール、１，８−シネオール、α−ピネン、β−ピネンおよびこれらの組み合わせからなる群から選択される精油を含む。さらなる実施形態では、前記画分は、精油を約１重量％〜約５重量％含む。さらなる実施形態では、前記画分は、桂皮アルデヒドと精油とを合わせて約５重量％〜約４０重量％含む。
【００１１】
さらなる実施形態では、前記画分は、フラボノイド、フラボノール配糖体およびこれらの組み合わせからなる群から選択されるポリフェノールを含む。さらなる実施形態では、フラボノイドは、３−（２−ヒドロキシフェニル）−プロピオン酸、３−（２−ヒドロキシフェニル）−Ｏ−配糖体、アントシアニジン、エピカテキン（ｅｐｉｔｃａｔｅｃｈｉｎ）、カテキン、メチルヒドロキシカルコン、カテキンオリゴマー、エピカテキンオリゴマー、オリゴマープロアントシアニジン、ポリマープロアントシアニジンおよびこれらの組み合わせからなる群から選択される。さらなる実施形態では、フラボノール配糖体は、ケンフェリトリン（ｋａｅｍｐｆｅｒｉｔｒｉｎ）、ケンフェロール（ｋａｅｍｐｆｅｒｏｌ）３−Ｏ−β−Ｄ−グルコピラノシル−（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシド、ケンフェロール  ３−Ｏ−β−Ｄ−アピオフラノシル−（１→２）−α−Ｌ−ラムノピラノシド、ケンフェロール  ３−Ｏ−β−Ｄ−アピオフラノシル−（１→４）−α−Ｌ−ラムノピラノシドおよびこれらの組み合わせからなる群から選択される。さらなる実施形態では、前記画分は、ポリフェノールを約２０重量％〜約７０重量％含む。さらなる実施形態では、前記画分は、桂皮アルデヒド約６重量％と、ポリフェノール約７０重量％とを含む。さらなる実施形態では、前記画分は、桂皮アルデヒド約４０重量％と、ポリフェノール約２０重量％とを含む。
【００１２】
さらなる実施形態では、前記画分は、グルコース、アラビノース、ガラクトース、ラムノース、キシロースウロン酸およびこれらの組み合わせからなる群から選択される多糖類を含む。さらなる実施形態では、前記画分は、多糖類を約３０重量％含む。
【００１３】
別の局面では、本発明は、本発明の桂皮種抽出物を含む食品または医薬に関する。
【００１４】
別の局面では、本発明は、桂皮種植物材料を連続的に抽出し、精油画分、非タンニンポリフェノール画分および多糖類画分を得る工程を含み、この工程が、（ａ）超臨界二酸化炭素抽出によって桂皮種植物材料を抽出し、精油画分および第１の残留物を得る工程と、（ｂ）桂皮種植物材料または工程（ａ）の第１の残留物を熱水によって抽出し、多糖類画分と第２の残留物を得る工程と、（ｃ）桂皮種植物材料、工程（ａ）の第１の残留物および／または工程（ｂ）の第２の残留物の物質を含水アルコール（ｈｙｄｒｏ−ａｌｃｏｈｏｌｉｃ）溶液で抽出し、アフィニティー吸着プロセスを用いて精製し、非タンニンポリフェノール画分を得る工程とによる、桂皮種抽出物の調製方法に関する。
【００１５】
さらなる実施形態では、工程（ａ）は、（１）抽出容器に粉砕した桂皮種植物材料を置く工程と、（２）超臨界条件で二酸化炭素を加える工程と、（３）前記粉砕した桂皮樹皮と前記二酸化炭素とを所定時間接触させる工程と、（４）精油画分を回収容器に集める工程とを含む。さらなる実施形態では、前記超臨界条件は、３５℃〜９０℃、圧力６０ｂａｒ〜８００ｂａｒの条件を含む。さらなる実施形態では、前記超臨界条件は、４０℃〜８０℃、圧力６０ｂａｒ〜５００ｂａｒの条件を含む。さらなる実施形態では、前記所定時間は、３０分〜２．５時間である。さらなる実施形態では、前記所定時間は１時間である。さらなる実施形態では、超臨界二酸化炭素分画分離システムは、前記精油画分を分画、精製およびプロファイリングするために用いられる。
【００１６】
さらなる実施形態では、工程（ｂ）は、（１）粉砕した桂皮種植物材料または工程（ａ）の第１の残留物と水溶液とを、多糖類の化学構成物質を抽出するのに十分な時間接触させる工程と、（２）アルコール沈殿によって溶液から固体多糖類を分離し、精製する工程とを含む。さらなる実施形態では、前記水溶液は８０℃〜１００℃である。さらなる実施形態では、前記水溶液は８０℃〜９０℃である。さらなる実施形態では、前記時間は１〜５時間である。さらなる実施形態では、前記時間は２〜４時間である。さらなる実施形態では、前記時間は２時間である。さらなる実施形態では、前記アルコールはエタノールである。
【００１７】
さらなる実施形態では、工程（ｃ）は、（１）桂皮種植物材料、工程（ａ）の第１の残留物および／または工程（ｂ）の第２の残留物と、含水アルコール溶液とを、ポリフェノールの化学構成物質を抽出するのに十分な時間接触させる工程と、（２）含水アルコール溶媒混合物から抽出したポリフェノールの化学構成物質の濃縮アルコール溶液をアフィニティー吸着樹脂カラムに通し、ポリフェノール酸が吸着される工程と、（３）精製した非タンニンポリフェノールの化学構成物質画分をアフィニティー吸着樹脂から溶出させ、アフィニティー吸着樹脂にタンニンポリフェノールを吸着させたままにする工程とを含む。
【００１８】
さらなる実施形態では、前記含水アルコール溶液はエタノールおよび水を含み、エタノールの濃度は１０〜９５重量％である。さらなる実施形態では、前記含水アルコール溶液はエタノールおよび水を含み、エタノールの濃度は２５重量％である。さらなる実施形態では、工程（１）は３０℃〜１００℃で行われる。さらなる実施形態では、工程（１）は６０℃〜１００℃で行われる。さらなる実施形態では、前記時間は１〜１０時間である。さらなる実施形態では、前記時間は１〜５時間である。さらなる実施形態では、前記時間は２時間である。
【００１９】
別の局面では、本発明は、本発明の方法によって調製される桂皮種抽出物に関する。
【００２０】
別の局面では、本発明は、桂皮アルデヒドと、桂皮アルデヒドの１〜５重量％の桂皮酸と、桂皮アルデヒドの５〜１５重量％のメチル桂皮酸と、桂皮アルデヒドの１〜５重量％のシンナミルアルコールと、桂皮アルデヒドの２０〜３０重量％のβ−グアネレン（ｇｕａｌｅｎｅｎ）／ｃｉｓ−γ−ビスアバボレン（ｂｉｓａｂａｂｏｌｅｎｅ）と、桂皮アルデヒドの１〜５重量％のピロガロールとを含む、桂皮種抽出物に関する。
【００２１】
別の局面では、本発明は、ピロガロールと、ピロガロールの８０〜９０重量％の桂皮酸と、ピロガロールの８５〜９５重量％のメチル桂皮酸と、ピロガロールの２０〜３０重量％のクマリン酸と、ピロガロールの１５〜２５重量％のホモバニリン酸と、ピロガロールの８５〜９５重量％桂皮アルデヒドと、ピロガロールの１０〜１５重量％の安息香酸ベンジルとを含む、桂皮種抽出物に関する。
【００２２】
別の局面では、本発明は、カテキンと、カテキンの５〜１５重量％の桂皮酸と、カテキンの５〜１５重量％のメチル桂皮酸と、カテキンの５〜１５重量％のクマリン酸と、カテキンの１〜１０重量％のフェルラ酸と、カテキンの１〜５重量％の２−メトキシフェノールと、カテキンの５〜１５重量％のホモバニリン酸と、カテキンの２０〜３０重量％のバニリン酸と、カテキンの１〜５重量％のベンズアルデヒドと、カテキンの３５〜４５重量％の桂皮アルデヒドと、カテキンの８５〜９５重量％のピロガロールと、カテキンの１５重量％までのカフェ酸とを含む、桂皮種抽出物に関する。
【００２３】
別の局面では、本発明は、β−グアネレン／ｃｉｓ−γ−ビスアバボレンと、β−グアネレン／ｃｉｓ−γ−ビスアバボレンの５〜１５重量％の桂皮アルデヒドとを含む、桂皮種抽出物に関する。
【００２４】
別の局面では、本発明は、桂皮アルデヒドと、桂皮アルデヒドの１０〜２０重量％のβ−グアネレン／ｃｉｓ−γ−ビスアバボレンとを含む、桂皮種抽出物に関する。
【００２５】
別の局面では、本発明は、桂皮アルデヒドと、桂皮アルデヒドの３０〜４０重量％のピロガロールと、桂皮アルデヒドの１〜１０重量％のカテキン／エピカテキンとを含む、桂皮種抽出物に関する。
【００２６】
別の局面では、本発明は、桂皮アルデヒドと、桂皮アルデヒドの１〜５重量％の桂皮酸と、桂皮アルデヒドの０．５〜５重量％のメトキシ桂皮アルデヒドと、桂皮アルデヒドの０．１〜５重量％のオイゲノールと、桂皮アルデヒドの１〜５重量％のｐ−シメンと、桂皮アルデヒドの０．１〜５重量％のショウノウと、桂皮アルデヒドの０．５〜５重量％のカルバクロールと、桂皮アルデヒドの２５〜３５重量％のカリオフィレン／フムレンと、桂皮アルデヒドの０．１〜５重量％のピロガロールと、桂皮アルデヒドの４０〜５０重量％の桂皮酸シンナミルとを含む、桂皮種抽出物に関する。
【００２７】
別の局面では、本発明は、桂皮酸シンナミルと、桂皮酸シンナミルの０．５〜５重量％のメトキシ桂皮アルデヒドと、桂皮酸シンナミルの０．１〜５重量％のシンナミルアルコールと、桂皮酸シンナミルの１〜５重量％のｐ−シメンと、桂皮酸シンナミルの０．１〜５重量％のリナロールと、桂皮酸シンナミルの０．１〜５重量％のショウノウと、桂皮酸シンナミルの０．５〜５重量％のカルバクロールと、桂皮酸シンナミルの７０〜８０重量％の桂皮アルデヒドと、桂皮酸シンナミルの４５〜５５重量％のカリオフィレン／フムレンと、桂皮酸シンナミルの０．１〜５重量％のピロガロールとを含む、桂皮種抽出物に関する。
【００２８】
別の局面では、本発明は、ピロガロールと、ピロガロールの５〜１０重量％の桂皮酸と、ピロガロールの６０〜７０重量％のクマリン酸と、ピロガロールの１〜１０重量％のフェルラ酸と、ピロガロールと、ピロガロールの５〜１５重量％の２−メトキシフェノールと、ピロガロールの１〜１０重量％のバニリン酸と、ピロガロールの３０〜４０重量％のカテキン／エピカテキンと、ピロガロールの１〜５重量％のベンズアルデヒドと、ピロガロールの５〜１５重量％のアフゼレキン（ａｆｚｅｌｅｃｈｉｎ）／エピアフゼレキン（ｅｐｉａｆｚｅｌｅｃｈｉｎ）と、ピロガロールの１〜１０重量％のレスベラトロルと、ピロガロールの１〜５重量％のバニリンとを含む、桂皮種抽出物に関する。
【００２９】
別の局面では、本発明は、ピロガロールと、ピロガロールの０．５〜５重量％の桂皮酸と、ピロガロールの１０〜２０重量％のクマリン酸と、ピロガロールの０．５〜５重量％のフェルラ酸と、ピロガロールの１〜５重量％の２−メトキシフェノールと、ピロガロールの０．５〜５重量％のホモ／イソバニリン酸と、ピロガロールの１〜１０重量％のバニリン酸と、ピロガロールの２５〜３５重量％のカテキン／エピカテキンと、ピロガロールの１〜５重量％のベンズアルデヒドと、ピロガロールの１〜５重量％の桂皮アルデヒドと、ピロガロールの０．１〜５重量％のアフゼレキン（ａｆｚｅｌｅｃｈｉｎ）／エピアフゼレキン（ｅｐｉａｆｚｅｌｅｃｈｉｎ）と、ピロガロールの６５〜７５重量％のバニリンとを含む、桂皮種抽出物に関する。
【００３０】
本開示の抽出物は、限定されないが、抗酸化活性、酸素遊離ラジカル捕捉活性、ニトロソ化阻害活性、抗変異原性活性（癌予防活性）、抗発癌活性（癌治療活性）、皮膚保護活性、老化防止活性、抗心疾患活性、抗卒中疾患活性および治療、脳の保護活性、抗脂質異状症活性、抗歯周病活性、抗骨粗鬆症活性、免疫増強活性、抗ウイルス活性、抗ＨＩＶ活性および抗菌活性、抗真菌活性、抗ウイルス活性、体重コントロールおよび熱産生、抗糖尿病活性および不安の低減、気分高揚および認識促進を含む生理学的効果および薬効を与えるのに有用である。
【００３１】
本開示の実施形態、他の実施形態およびそれらの特徴および特性は、以下の記載、図面および特許請求の範囲から明らかである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３２】
（発明の詳細な説明）
定義
本明細書で使用される場合、桂皮は、Ｃｉｎｎａｍｏｍｕｍ種の植物物質から誘導された樹皮植物材料を指す。用語「桂皮」は、桂皮種と相互交換可能に使用され、桂皮植物、クローン、改変体およびスポーツ（ｓｐｏｒｔ）などに関する。
【００３３】
本明細書で使用される場合、用語「１つ以上の化合物」は、少なくとも１つの化合物を意味し、例えば、限定されないが、ｔｒａｎｓ−桂皮アルデヒド（桂皮種の脂溶性の精油化学構成物質）またはメチルヒドロキシカルコン（桂皮種の水溶性ポリフェノール）または桂皮種の多糖類分子であることが意図されているか、または２つ以上の化合物（例えば、ｔｒａｎｓ−桂皮アルデヒドおよびメチルヒドロキシカルコン）であることが意図されている。
【００３４】
本明細書で使用される場合、用語「画分」は、特定の物理的性質および／または化学的性質によって特徴付けられる特定の化学化合物群を含む抽出物を意味する。
【００３５】
本明細書で使用される場合、用語「精油画分」は、桂皮および関連種から得られるかまたは誘導される、脂溶性で水不溶性の化合物を含む画分を指し、限定されないが、ｔｒａｎｓ−桂皮アルデヒドと分類される化学化合物を含むものが挙げられる。
【００３６】
本明細書で使用される場合、用語「精油副次画分」は、桂皮および関連種から得られるかまたは誘導される、脂溶性で水不溶性の化合物を含む画分を指し、限定されないが、桂皮種の精油中に見られる特定の化合物の濃度が高められた、ｔｒａｎｓ−桂皮アルデヒドに分類される化学化合物を含むものが挙げられる。
【００３７】
本明細書で使用される場合、用語「ポリフェノール画分」は、桂皮および関連種から得られるかまたは誘導される、水溶性でエタノール可溶性のポリフェノール酸化合物を含み、限定されないが、メチルヒドロキシカルコンおよびカテキンおよびエピカテキンオリゴマーのような化合物をさらに含む画分を指す。
【００３８】
本明細書で使用される場合、用語「多糖類画分」は、桂皮および関連種から得られるかまたは誘導される、可溶性でエタノール不溶性の多糖類化合物を含む画分を指す。
【００３９】
桂皮の他の化学構成物質が、上述の抽出画分中に存在してもよい。
【００４０】
本明細書で使用される場合、用語「精製された」画分は、特定の物理化学的性質または物理的性質または化学的性質によって特徴付けられる特定の化合物群を、前記画分の化学構成物質の２０％を超える濃度で含む画分に関する。言い換えると、精製された画分は、この画分を規定する特定の物理化学的性質または物理的性質または化学的性質によって特徴付けられない化学構成物質化合物の含有量が８０％未満である。
【００４１】
本明細書で使用される場合、用語「プロフィール」は、抽出画分または副次画分に含まれる化学化合物の重量％比、または最終的な桂皮抽出物中の３種の桂皮画分の化学構成物質それぞれの重量％比を指す。
【００４２】
本明細書で使用される場合、「原料」は、一般的に、植物全体を単独で含むか、または葉、根（限定されないが、主根、根の先端部分（ｔａｉｌ  ｒｏｏｔ）および根繊維を含む）、茎、樹皮、葉、種子および花を含む植物の１つ以上の構成物質部分の組み合わせを含む未加工の植物材料を指し、植物または構成物質部分は、生の材料、乾燥した材料、蒸した材料、加熱または他の物理的プロセスで加工し、加工しやすくした材料を含んでもよく、これらは、さらに、原形のままの原料、切り刻んだ原料、さいの目状に切った原料、製粉した原料、粉砕した原料、または植物材料の大きさおよび物理的一体性に影響を与える他の方法で加工した材料をさらに含んでもよい。時に、用語「原料」は、さらなる抽出プロセスの供給源として使用する抽出生成物を特定するために使用されてもよい。
【００４３】
本明細書で使用される場合、用語「桂皮構成物質」は、桂皮種で見られる化学化合物を意味し、上に定義されたあらゆる化学化合物ならびに桂皮種で見られる他の化合物（限定されないが、精油化学構成物質、ポリフェノール酸および多糖類が挙げられる）を含む。
【００４４】
桂皮の化学構成物質は、広範囲にわたって治療的な価値がある。近年の科学研究および臨床試験によって、以下の桂皮の種々の化学化合物、化学画分および抽出物全体について、以下に示す治療効果が示されている：ＮＩＤＤＭ−２型糖尿病（プロアントシアニジン、メチルヒドロキシカルコン、カテキンおよびエピカテキンオリゴマー、フラボノイド、水溶性抽出物）；低密度リポタンパク質の減少を含むコレステロール代謝の向上（プロアントシアニジン、メチルヒドロキシカルコン、カテキン、エピカテキンオリゴマー、フラボノイドを含むフェノール酸、水溶性抽出物）；動脈損傷を引き起こす遊離ラジカルへの耐性および微小血管の機能向上（精油、桂皮アルデヒド、２’−ヒドロキシ桂皮アルデヒド、２’−メトキシ桂皮アルデヒド、フェノール酸、フラボノイド配糖体、プロアントシアニジン、フラボノイド、カテキン、エピカテキンオリゴマー、抽出物）；抗血栓および抗血小板凝集（精油、桂皮アルデヒド）；抗炎症活性（精油、桂皮アルデヒド、オイゲノール、１，８−シネオール、α−ピネン、β−ピネン、ボルネオール、フラボノール配糖体、抽出物）；抗酸化（フェノール酸、フラボノール配糖体、プロアントシアニジン、フラボノイド、水溶性抽出物）；抗アレルギー（フェノール酸、フラボノール配糖体、プロアントシアニジン、フラボノイド、水溶性抽出物）；神経保護剤（水溶性抽出物）；心臓結果保護剤（精油、水溶性抽出物）；脳機能の増強（精油、特に揮発性油）；駆風薬、食欲減退および消化不良の愁訴、嘔吐抑制、膨満および鼓脹の防止、腸運動の促進、体重減少の促進（フラボノイド、３−（２−ヒドロキシフェニル）−プロピオン酸、３−（２−ヒドロキシフェニル）−Ｏ−配糖体、水溶性抽出物）；咳止め薬、風邪薬および発熱薬（精油、酢酸シンナミル）；抗菌活性および抗真菌活性（精油、桂皮アルデヒド、オイゲノール、１，８−シネオール、β−ピネン、ボルネオール）；脂肪分解および創傷治癒の促進（エタノール抽出物）；および抗癌および抗通風（精油、桂皮アルデヒド、２’−ヒドロキシ桂皮アルデヒド、２’−ベンゾキシ桂皮アルデヒド、メタノール抽出物）；Ｋｈａｎ  Ａら，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ  ２６：３２１５−３２１８，２００３；Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＲＡら，Ｊ  Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ  ５２：６５−７０，２００４；Ｊａｒｖｉｌｌｅ−Ｔａｙｌｏｒら，Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｎｕｔｒｉ  ２０：３２７−３３６，２００１；Ｑｉｎ  Ｒら，Ｈｏｒｍ  Ｍｅｔａｂ  Ｒｅｓ  ３６：１１９−１２３，２００４；Ｖｅｓｐｏｈｌ  ＥＪら，Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ  Ｒｅｓ  １９：２０３−２０６，２００５；Ｌｅｅ  ＳＨら，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ６９：７９１−９，２００５；Ｃｈｅｒｉｃｏｎｉ  Ｓら，Ｊ  Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ  ５３：４７６２−４７６５，２００５；Ｌｉｎ  ＣＣら，Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ  Ｒｅｓ  １７：７２６０７３０，２００３；Ｊａｙａｐｒａｋａｓｈａ  ＧＫら，Ｊ  Ａｇｒｉｃ  Ｆｏｏｄ  Ｃｈｅｍ  ５１：４３４４−４３４８，２００３；Ｈｕｓｓ  Ｕら，Ｊ  Ｎａｔ  Ｐｒｏｄ  ６５：１５１７−２１，２００２；Ｎａｇａｉ  Ｈら，Ｊｐｎ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ３２：８１３−８２２���１９８２；Ｓｕ  ＭＪら，Ｊ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｓｃｉ  ６：３７６−３８６，１９９９；Ｓｈｉｍａｄａ  Ｙら，Ｐｈｙｔｏｍｅｄ  １１：４０４−４１０，２００４；Ｔａｈｅｒ  Ｍら，Ｍｅｄ  Ｊ  Ｍａｌａｙｉａ  ５９Ｂ：９７−９８，２００４；Ｋａｍａｔｈ  ＪＶら，Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ  Ｒｅｓ  １７：９７０−９７２，２００３；Ｋｕｒｏｋａｗａ  Ｍら，Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ３４８：４５−５１，１９９８；Ｓｉｍｉｃ  Ａら，Ｐｈｙｔｏｔｈｅｒ  Ｒｅｓ  １８：７１３−７１７，２００４；Ｔａｂａｋ  Ｍら，Ｊ  Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  ６７：２６９−２７７，１９９９；Ｋｏｎｇ  ＬＤら，Ｊ  Ｅｔｈｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  ７３：１９９−２０７，２０００；Ｋｗｏｎ  ＢＭら，Ａｒｃｈ  Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ  ２１：１４７−１５２，１９９８；Ｋａ  Ｈら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ  １９６：１４３−１５２，２００３らを参照。
【００４５】
アントシアニンは、多くの果物、野菜、穀物および花の赤色、紫色および青色のもととなる天然に存在する特定のフラボノイド化合物群である。例えば、果物（例えば、ブルーベリー、ビルベリー、ストロベリー、ラズベリー、ボイセンベリー、マリオンベリー、クランベリー、エルダーベリーなど）の色は、多くの異なるアントシアニンによるものである。近年、食用酸化防止剤としての健康効果のため、アントシアニン顔料に対する関心が高まってきている。例えば、ビルベリー（Ｖａｃｃｉｎｉｕｍ  ｍｙｒｔｉｌｌｕｓ）のアントシアニン顔料は、視力の向上、循環障害の治療に長い間使用されてきた。特定のアントシアニンおよび他のフラボノイドが抗炎症性を有するという実験による証拠が得られている。さらに、経口投与されたアントシアニンが、糖尿病および潰瘍の治療に有益であり、抗菌活性を有することが報告されている。フラボノイドがこのような望ましい性質を有することは、化学的にはこの物質の酸化防止能に関係があると考えられている。従って、ベリーおよび他の果実および野菜に関連する酸化防止特性は、そのアントシアニン含有量に起因する。
【００４６】
プロアントシアニジンは、「オリゴマープロアントシアニジン」、「ＯＰＣ」または「プロシアニジン」とも呼ばれ、果物、野菜、殻果、種子、花および樹皮から広く入手可能な天然に存在する別のフラボノイド化合物群である。プロアントシアニジンは、縮合タンニンとして知られるカテゴリーに属する。これらは、果物および野菜に含まれる最も一般的な種類のタンニンであり、種子および皮に大量に存在する。実際に、異なるプロアントシアニジンの混合物は、個々の単位から多くの結合した単位を有する複雑な分子（オリゴマーまたはポリマー）までが一般的に一緒に存在する。ポリマープロアントシアニジンの一般的な化学構造は、共通のＣ（４）−Ｃ（６）および／またはＣ（４）−Ｃ（８）結合で結合したフラボノイド  ３−オール単位の直鎖を含む。プロアントシアニジンは、Ｃ４−Ｃ８結合および／またはＣ４−Ｃ６結合で結合したカテキン単位および／またはエピカテキン単位を含有するオリゴマーおよびポリマーの混合物である。これらのフラバン−３−オールは、Ｃ４−Ｃ８結合と、Ｃ７−Ｃ２間のさらなるエーテル結合とで二重に結合していてもよい。１３Ｃ  ＮＭＲは、ポリマープロアントシアニジンの構造を同定するのに有用であり、最近の研究では、プロアントシアニジンダイマー、トリマーおよびテトラマーの化学が解明されている。フラボノイド  ３−オール単位を有するさらに分子量の大きいオリゴマーは、ほとんどの植物で主要成分であり、平均分子量が２，０００ダルトンを超え、６個以上のモノマー単位を有するものが発見されている（Ｎｅｗｍａｎら，Ｍａｇ．Ｒｅｓ．Ｃｈｅｍ．，２５：１１８（１９８７））。かなり最近の研究では、当初は酸化防止活性が主に知られていたプロアントシアニジンの治療用途が研究されている。しかし、これらの化合物は、抗菌性、抗ウイルス性、抗発癌性、抗炎症性、抗アレルギー性および血管拡張作用を有することも報告されている。さらに、これらの化合物は、脂質の過酸化、血小板凝集、毛細血管の透過性および脆弱性を阻害し、ホスホリパーゼＡ２、シクロオキシダーゼおよびリポキシダーゼを含む酵素系に影響を与えることがわかった。例えば、プロアントシアニジンモノマー（すなわち、アントシアニン）およびダイマーは、毛細血管の脆弱化と関連する疾患の治療に使用されており、動物で抗炎症効果を有することも示されている（Ｂｅｌａｄｉ，Ｉ．ら，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，２８４：３５８（１９７７））。これらの報告されている知見に基づくと、オリゴマープロアントシアニジン（ＯＰＣ）は、多くの状態の治療に有用な成分であると思われる（Ｆｉｎｅ，Ａ．Ｍ．，Ａｌｔｅｒｎ．Ｍｅｄ．Ｒｅｖ．５（２）：１４４−１５１（２０００））。
【００４７】
プロアントシアニジンは、ウイルスに対する防御効果もあると考えられる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ試験では、マンサク（Ｈａｍａｍｅｌｉｓ  ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ）由来プロアントシアニジンが、１型単純ヘルペス（ＨＳＶ−１）ウイルスを死滅させた（Ｅｒｄｅｌｍｅｉｅｒ，Ｃ．Ａ．，Ｃｉｎａｔｌ，Ｊ．，Ｐｌａｎｔ  Ｍｅｄ．Ｊｕｎｅ：６２（３）：２４１−５（１９９６）；ＤｅＢｒｕｙｎｅ，Ｔ．，Ｐｉｅｔｅｒｓ，Ｌ．，Ｊ．Ｎａｔ．Ｐｒｏｄ．Ｊｕｌ：６２（７）：９５４−８（１９９９））。種々のタンニンの抗ウイルス活性について、構造と活性との関連を決定付けるために、別の試験が行われた。化学構造の縮合度が高いほど、抗ウイルス効果が高いことがわかった（Ｔａｋｅｃｈｉ，Ｍ．ら，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２４：２２４５−５０（１９８５））。別の試験では、プロアントシアニジンは、抗単純ヘルペス活性を有することが示され、この試験では、単純ヘルペスのプラーク形成を減らすのに必要な５０％有効投薬量は、５０％細胞傷害投薬量よりも桁が２桁〜３桁少なかった（Ｆｕｋｕｃｈｉ，Ｋ．ら，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｒｅｓ．，１１：２８５−２９８（１９８９））。
【００４８】
シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ−１、ＣＯＸ−２）またはプロスタグランジンエンドペルオキシドＨシンターゼ（ＰＧＨＳ−１，ＰＧＨＳ−２）酵素は、植物産物の抗炎症効果を測定するために広く使用されている（Ｂａｙｅｒ，Ｔ．ら，Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２８：２３７３−２３７８（１９８９）；およびＧｏｄａ，Ｙ．ら，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，４０：２４５２−２４５７（１９９２））。ＣＯＸ酵素は、非ステロイド系抗炎症薬物の薬理学的な標的物質である（Ｈｕｍｅｓ，Ｊ．Ｌ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，７８：２０５３−２０５６（１９８１）；およびＲｏｍｅ，Ｌ．Ｈ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，７２：４８６３−４８６５（１９７５））。プロスタグランジン合成に関与するシクロオキシゲナーゼの２つのアイソザイムには、シクロオキシゲナーゼ−１（ＣＯＸ−１）とシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）がある（Ｈｅｍｌｅｒ，Ｍ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２５：２５１，５５７５−５５７９（１９７６））。選択的なＣＯＸ−２阻害剤は、主に抗炎症活性に影響を与えると考えられている（Ｍａｓｆｅｒｒｅｒ，Ｊ．Ｌ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．，９１：３２２８−３２３２（１９９４））。フラボノイドは、現在、抗炎症基質として研究されており、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）阻害活性の構造的特徴について研究されている。
【００４９】
桂皮は、一般的に高用量でも安全で毒性はないが、桂皮またはＰｅｒｕｖｉａｎ  ｂａｌｓａに高感度の個体ではアレルギー反応を誘発することがある。妊娠中および授乳中には勧められない。他の薬物との相互作用は知られていない。
【００５０】
精製された精油、精製されたポリフェノールと、高濃度のフラボノール配糖体およびフラボノイド、および多糖類化学構成物質画分とを組み合わせて相乗的に作用し、生理学的および医学的に有益な、標準化された信頼性の高い量の桂皮化学構成物質を生産可能な、再現可能な新規桂皮抽出物が必要とされている。Ｗｉｌｌｉａｍｓｏｎ  ＥＭ．Ｐｈｔｏｍｅｄｉｃｉｎｅ  ８：４０１−４０９，２００１。
【００５１】
（抽出物）
（精油画分）
桂皮樹皮は、精油を豊富に含み、使用する植物の部位に依存して、種々の油を与える。桂皮樹皮に精油が１〜２重量％存在していると報告されている。桂皮樹皮油の主成分は、芳香族アルデヒド−３−フェニル−２（Ｅ）−プロペナール（桂皮アルデヒドとも呼ばれる）である（精油中、約６０重量％）。
【００５２】
最近の研究で、原料として桂皮樹皮を使用した。超臨界二酸化炭素抽出および分画の技術は、脂溶性化学物質を処理するのに有益なことは周知であるため、抽出に選択した。この抽出の有用性は、液体溶媒よりも大きな拡散係数を有し、気体に似た物質移動性と液体に似た可溶性をあわせもつことによるものである。抽出された精油構成物質は、ガスクロマトグラフィー−質量分析計で評価した。超臨界ＣＯ２によって抽出した桂皮樹皮油から、合計７１の化合物を同定した。主要な桂皮アルデヒド同族体（例えば、ベンズアルデヒド（Ｐ１）、桂皮アルデヒド（Ｐ１０およびＰ１４）、シンナミルアルコール（Ｐ１６）、ｔｒａｎｓ−桂皮酸（Ｐ２３）、酢酸シンナミル（Ｐ２５））以外に、他の少量化合物（４種類のモノテルペン、１６種類のセスキテルペン、９種類の脂肪酸および誘導体、および６種類のステロイド（Ｐ６４およびＰ６７-Ｐ７１）も同定された。脂肪酸およびステロイドは、桂皮油で以前報告されていないものである。
【００５３】
超臨界ＣＯ２は、精油画分を精製し、プロファイリングするのに優れたツールであることがわかった。これらの画分の抽出収率は、プロセス温度、圧力および溶媒／供給比によって変動する。最も高い抽出収率は、温度８０℃、圧力１００〜５００ｂａｒ、溶媒／供給比１１４の場合で、１．７６重量％であった。抽出された桂皮樹皮の粗精油では、桂皮アルデヒドが、精製された画分の５８重量％〜６９重量％を占める。抽出物画分中の抽出物のステロイド化合物のうち２０％までは、約４０℃の低温でのみ抽出可能であることがわかった。高純度の（９０％を超える）桂皮アルデヒド同族体は、６０〜９０℃の高温、約１００ｂａｒの低圧で得ることができる。脂肪酸化合物を処理するには高圧高温がよく、純度は、最も高い条件だと抽出画分の約１０％まで高めることができる。
【００５４】
抽出した桂皮樹皮粗精油は、一定温度で処理圧力を徐々に上げた複数段階のプロセスによって分画することもできる。結果を表２に示す。主要化合物である桂皮アルデヒド同族体は、６７．１〜９３．１％の範囲に入ることがわかった。他の少量化合物（例えば、セスキテルペン）は、画分の１．１〜２．７％であり、脂肪酸は０．９〜９．９％であり、ステロイドは、４０℃でのみ抽出可能であり、０．０〜２０．３重量％であった（相対量）。桂皮アルデヒドは、最も純度が高い場合には９１．１３％であり、この量は、桂皮樹皮原料の７６倍の量である。
【００５５】
【表２】
2009531331.tif 000002
（フェノール酸画分）
桂皮の抗酸化活性は、フェノール酸化学構成物質の含有量に関係がある。桂皮で同定されている酸化防止性能を有する特定の植物化学物質としては、以下のフェノール酸が挙げられる。エピカテキン、カンフェン、エンゲノール、γ−テルピネン、フェノール、サリチル酸およびタンニン。さらに最近では、米国農務省は、フラボノイドの一種であり、インスリンの効果によく似た水で抽出されるＡ型プロシアニジンを発見した。この化合物は、単離された脂肪細胞で高いインスリン作用を有する。ｉｎ−ｖｉｖｏ試験でも、桂皮水抽出物が、グルコース吸収量を高め、部分的には骨格筋のインスリンシグナル伝達経路を高めることによってインスリン作用を高めることが示された。本発明のこの章の目的は、タンニン酸を除去することによってフェノール酸を精製することである。目的とするフェノール酸は、低血糖活性を有するプロアントシアニジンである。プロアントシアニジンは、（＋）−カテキン単位および／または（−）−エピカテキン単位がＣ４−Ｃ８結合および／またはＣ４−Ｃ６結合で結合したオリゴマーおよびポリマー（Ｂ型）の混合物である。これらのフラバン−３−オールも、Ｃ４−Ｃ８結合と、Ｃ７−Ｃ２間のさらなるエーテル結合とで二重に結合していてもよい（Ａ型）。市販のＨＰＬＣ参照標準が無いため、Ｆｏｌｉｎ−Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ法を用いて合計フェノール酸含有量を分析し、タンパク質沈殿フェノール法を用いて合計タンニン酸含有量を分析した。Ｄｉｒｅｃｔ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｒｅａｌ−ｔｉｍｅ（ＤＡＲＴ）質量分析によって、フェノール酸全体から個々のフェノール酸を同定し、半定量した。
【００５６】
桂皮樹皮原料では、フェノール酸は合計で約４．８７％存在し、このうち約２．２７％が非タンニンフェノール酸であり、約２．６１％がタンニン酸である。フェノール酸全体の抽出条件は、異なる溶媒、温度、ｐＨ値および複数段階プロセスの影響を試験することによって最適化した。含水エタノール（２５〜７５％エタノール）が最適な抽出溶媒であることがわかった。抽出溶媒として２５％エタノールを用い、温度４０℃で二段階プロセスを用い、溶媒供給比がそれぞれ１０および５の場合に、約１７．６％と最も高い抽出収率が得られることがわかった。プロセス中にｐＨ値を変える必要はなかった。
【００５７】
Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０デキストランビーズは、非タンニンフェノール酸をタンニン酸と分離するのに優れた媒体であることがわかった。結果を表３に示す。タンニン酸は、顕著に除去され、非タンニンフェノール酸が１００％まで精製されることがわかった（原料の４４倍）。
【００５８】
【表３】
2009531331.tif 000003
（多糖類画分）
桂皮多糖類−糖タンパク質画分を、水で抽出し、８０％エタノールで沈殿させることによって得た。精製された桂皮多糖類−糖タンパク質画分の収率は、約３．５％であった。桂皮多糖類の純度は、０．２９〜０．４７ｇデキストラン当量／ｇ多糖類であった（桂皮多糖類の標準物質は入手できないため、デキストランを参照標準として用いた）。桂皮多糖類の平均分子量は約２５００ＫＤａであった。この場合もＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量分析を使用して桂皮多糖類の特性を決定し、結果を図６および７に示している。
【００５９】
（天然桂皮種と抽出物との比較）
本開示は、１つ以上の桂皮種から単離され精製された精油（または精油副次画分）、ポリフェノール酸および多糖類の画分の抽出物を含む。これらの個々の画分を特定の比率（プロフィール）で組み合わせて有益な組み合わせを得てもよく、現時点で知られている抽出生成物では達成できない程度に信頼性が高いか、または再現性のある抽出生成物を得ることができる。例えば、ある種由来の精油画分または精油副次画分を、同じ種または異なる種由来の精油画分または精油副次画分と、または同じ種または異なる種由来のポリフェノール酸画分と組み合わせてもよく、この組み合わせを、同じ桂皮種または異なる種由来の多糖類画分と組み合わせてもよいし、組み合わせなくてもよい。
【００６０】
本開示の抽出物を、天然桂皮種に対する濃度という観点で規定してもよい。実施形態は、前記画分（精油、ポリフェノール酸または多糖類を含む）の１つ以上が、天然桂皮種植物材料よりも濃度が高い抽出物を含む。実施形態は、前記画分（精油、ポリフェノール酸または多糖類を含む）の１つ以上が、天然桂皮種植物材料よりも濃度が低い抽出物も含む。桂皮種の生体活性がある化学構成物質画分の既知の量（表１）を本開示の一例として使用する。例えば、この開示の抽出物は、精油の濃度が天然桂皮種の０．００１〜５０倍である画分を含み、および／または所望のポリフェノール酸濃度が天然桂皮種の０．００１〜５０倍である組成物を含み、および／または水溶性でエタノール不溶性の多糖類の濃度が天然桂皮種の０．００１〜２０倍の組成物を含む。
【００６１】
本開示の抽出物は、精油の濃度が天然桂皮種の０．０１〜５０倍である画分を含み、および／または所望のポリフェノール酸濃度が天然桂皮種の０．０１〜５０倍である組成物を含み、および／または多糖類の濃度が天然桂皮種の０．０１〜２０倍の組成物を含む。さらに、本開示の抽出物は、天然植物材料の精油に存在する少なくとも１つ以上の化学化合物を、天然の桂皮植物材料の精油化学構成物質中に存在するよりも多い量または少ない量で含む精油化学構成物質の副次画分を含む。例えば、化学化合物であるｔｒａｎｓ−桂皮アルデヒドは、天然桂皮植物材料では精油化学構成物質の合計重量の６０重量％であるが、精油副次画分中で、副次画分の８０重量％まで濃度が高められていてもよい。対照的に、ｔｒａｎｓ−桂皮アルデヒドは、天然桂皮植物材料では精油化学構成物質の合計重量の６０重量％であるが、精油副次画分中で、副次画分の６重量％まで濃度が下げられていてもよい（濃度が１０分の１に下げられている）。本開示の抽出物は、新規な精油副次画分中の特定の化学化合物の濃度が、天然桂皮製油の化学構成物質の濃度の約１．１〜約１０倍まで高められている画分、または約０．１〜約１０倍まで低められている画分を含む。
【００６２】
さらなる実施形態は、桂皮種の化学構成物質のプロフィール（比の分布）が、天然植物材料または現時点で入手可能な桂皮種抽出生成物とは異なる抽出物を含む。例えば、精油画分は、ポリフェノール酸濃度および／または多糖類濃度が高くても低くてもよい。同様に、ポリフェノール酸または多糖類は、新規な構成物質化学プロフィールを有する抽出物が特定の生体効果を発揮するように、他の抽出物構成物質画分と比べて多くても少なくてもよい。精油、ポリフェノールおよび／または多糖類のうち１つ以上の単離され精製された画分を組み合わせることによって、新規な精油の組み合わせを提供する抽出物を作ってもよい。
【００６３】
本開示の方法は、ヒトの障害を治療し、予防するための新規桂皮抽出物を提供することを含む。例えば、２型糖尿病を治療するための新規桂皮種抽出物は、桂皮種天然植物材料または従来の既知の抽出生成物よりも、画分のポリフェノールの重量％濃度が高く、精油および多糖類の重量％濃度が低くてもよい。酸化を抑制し、血管損傷を抑制し、虚血性心血管疾患のための新規桂皮種抽出物は、天然の桂皮種天然植物材料または従来の既知の抽出生成物よりも、画分の精油およびポリフェノール酸の重量％濃度が高く、多糖類の重量％濃度が低くてもよい。新規桂皮種抽出物の別の例は、アレルギー障害を治療するためのものであり、天然の桂皮種天然植物材料または従来の既知の抽出生成物よりも、画分のポリフェノールの重量％濃度が高く、多糖類の重量％濃度が高く、精油の重量％濃度が低い。
【００６４】
（抽出方法）
以下の方法を、教示されるように個々に用いてもよいし、開示される方法または当業者に既知の方法と組み合わせてもよい。抽出用の出発材料は、１つ以上の桂皮種由来の植物材料である。植物材料は、植物の任意の部位であってよいが、樹皮が最も好ましい出発材料である。
【００６５】
桂皮種植物材料を抽出前工程で処理し、材料を任意の特定の形態にしてもよく、抽出に有用な任意の特定の形態がこの開示で考慮される。このような抽出前工程としては、限定されないが、材料を切り刻み、細かく刻み、みじん切りにし、粉砕し、粉末化し、切断するかまたは裂く工程が挙げられ、出発材料は、抽出前工程の前に、乾燥状態または新鮮な植物材料である。好ましい抽出前工程は、桂皮種の樹皮材料を微細粉末に粉砕および／または粉末化する工程である。出発材料または抽出前工程後の材料を乾燥させてもよいし、または水分を加えてもよい。桂皮種植物材料が抽出用の形態になれば、抽出方法は、本開示で考慮される。
【００６６】
本開示の抽出方法は、本明細書に開示されるプロセスを含む。一般的に、本開示の方法は、部分的に、桂皮種植物材料が、二酸化炭素を溶媒として用いた（ＳＣＣＯ２）超臨界液体抽出（ＳＦＥ）で抽出され、その後に１つ以上の溶媒（例えば、限定されないが、水、含水アルコール）で抽出する工程およびアフィニティーポリマー吸着抽出プロセスに進む方法を含む。本開示で考えられるさらなる他の方法は、他の有機溶媒、冷蔵化学物質、圧縮性気体、超音波、加圧液体抽出、高速向流クロマトグラフィー、分子インプリントポリマー、および他の既知の抽出方法を用いて桂皮種植物材料を抽出する方法を含む。このような技術は、当業者には知られている。１つの局面では、本開示の抽出物は、図１〜５に模式的に示される工程を含む方法によって調製されてもよい。
【００６７】
本開示は、ＳＣＣＯ２技術を用いて、桂皮植物材料から精油および他の脂溶性化合物を濃縮（精製）し、プロファイリングするプロセスを含む。本開示は、桂皮の脂溶性化学構成物質を、例えば、高純度の精油画分（精油化学構成物質の濃度が高い）に分画することを含む。さらに、本開示は、抽出画分中の個々の化学構成物質の化学構成物質比またはプロフィールを変え得るＳＣＣＯ２プロセスを含む。例えば、精油画分内の化学構成物質のＳＣＣＯ２分画分離によって、特定の精油化合物を他の精油化合物よりも優先的に抽出し、特定の化合物の濃度が他の化合物の濃度よりも高い精油抽出副次画分を作ることができる。桂皮種の精油化学構成物質をＳＣＣＯ２で抽出することにより、本開示で教示されるように、毒性のある有機溶媒を使用せず、抽出物を同時に分画することができる。二酸化炭素は天然にある安全な生体産物であり、多くの食品および飲料の成分である。
【００６８】
上述の抽出法を実施すると、元々の桂皮種の乾燥桂皮樹皮原料で、純度９５％を超える精油化学構成物質を、８０％より大きな収率でＳＣＣＯ２抽出精油画分に抽出することができることがわかった（工程１Ａ）。工程１Ｂに教示される方法（ＳＣＣＯ２抽出分画プロセス）を用いると、精油化学構成物質を非常に純度の高い（＞９０％）精油副次画分に分画するため、精油の収率は低下した。さらに、本開示に教示されるようなＳＣＣＯ２抽出および分画のプロセスによって、個々の化学化合物を含む精油化学構成物質画分の比率（プロフィール）を変え、固有の精油副次画分のプロフィールを特定の医学目的のために作ることができる。例えば、ステロイド精油化学構成物質の濃度を高め、同時に脂肪酸化合物の濃度を下げることができ、この逆も可能である。
【００６９】
本開示の工程２に教示される方法を用いると、元々の桂皮種原料から水溶性画分が４．８重量％で得られ、合計フェノール酸濃度は２６．０％であり、天然桂皮樹皮原料中に存在するフェノール酸化学構成物質の約１０重量％が得られる。しかし、この水溶媒による抽出物は、高価値の水可溶性でエタノール不溶性の多糖類化学構成物質を含む。さらに、この抽出工程では、天然桂皮種植物材料に存在する水溶性でエタノール不溶性の多糖類を約１００％得ることができる。この水溶性抽出画分の多糖類濃度は、水溶性抽出物画分の乾燥重量の約２７重量％である。この水で溶出した抽出物から、９５％エタノールを用いて多糖類を沈殿させ、精製された多糖類画分を集めてもよい。多糖類画分の収率は、桂皮根茎原料の重量に基づいて約１．３重量％である。参照物質としてデキストランを用いた比色分析法によれば、純度が９５％を超える桂皮多糖類化合物を得ることができる。
【００７０】
本開示の工程３に教示される方法を用いると、含水アルコール溶出による画分によって、元々の桂皮種原料から収率１７．６％が得られ、フェノール酸の濃度は６４％であり、フェノール酸の３分の１が生体活性のないタンニンである。さらに、この値から、天然桂皮種植物材料に存在するフェノール酸関連化学構成物質の約９０％が得られていることになる。
【００７１】
本開示の工程４に教示される方法（アフィニティー吸着抽出プロセスまたはプロセスクロマトグラフィー）を用いると、抽出画分の乾燥重量の９５％を超える純度を有し、タンニンが乾燥重量の０．１％未満のポリフェノール酸画分を得ることができる。含水アルコール溶出による抽出原料から、非タンニンポリフェノール酸の約７７％を抽出することができる。この値から、天然桂皮種植物材料に存在するポリフェノール酸化学構成物質の６９％が得られていることになる。平均重合度によれば、精製されたポリフェノール画分は、主に生体活性のあるポリフェノールオリゴマーで構成されている。
【００７２】
さらに、精製されたポリフェノール画分のポリフェノール化学構成物質をプロファイリングすることができる。例えば、高濃度のポリフェノールトリマーまたはテトラマーを含有する精製されたポリフェノール副次画分を得てもよい。このような新規な精製されたポリフェノール副次画分は、特定の医学状態に大きな価値を有することがある。
【００７３】
最後に、本開示で教示される方法によれば、精油画分の所望の化学構成物質が９９重量％、およびポリフェノールフェノール画分が９７重量％、および多糖類画分が９８重量％の桂皮種精油の化学構成物質画分、新規ポリフェノール画分または副次画分および新規多糖類画分を精製（濃縮）することができる。使用する特定の抽出環境、抽出速度、溶媒および抽出技術は、供給源となる材料の最初の化学構成物質プロフィールと、最終抽出生成物で望ましい精製度とに依存する。本開示に教示される特定の方法は、特定の属性を有する生産材料に加工される出発材料の属性中のサンプル変数によって説明されるプロセスを調整するために、典型的な通常の実験より過度の実験を行うことなく、当業者が容易に決定することができる。例えば、特定のロットの桂皮種植物材料において、精油化学物質、ポリフェノール酸および多糖類の初期濃度を、本開示に教示されるような当業者に既知の方法を用いて決定する。当業者は、精油化学構成物質の初期濃度から、本明細書に開示されるような抽出方法を用いて、最終的な桂皮種抽出生成物の所望の濃度および／または化学物質プロフィールを得るために、最終抽出精製物の精油化学構成物質の所定の量または分布（プロフィール）への変化量を決定することができる。
【００７４】
桂皮の生体活性を有する化学構成物質の抽出方法の模式図を図１〜５に示す。抽出プロセスは、典型的には、限定されないが４工程である。
【００７５】
（工程１：超臨界液体二酸化炭素による桂皮精油の抽出）
精油が疎水性であるため、非極性溶媒（限定されないが、ＳＣＣＯ２、ヘキサン、石油エーテルおよび酢酸エチル）をこの抽出プロセスで用いてもよい。精油成分のなかには揮発性のものもあるため、蒸気蒸留を抽出プロセスとして使用してもよい。
【００７６】
桂皮種の樹皮からＳＣＣＯ２を用いて精油化学構成物質を抽出する一般的な記載を図２の工程２Ａおよび２Ｂに図示している。原料１０は、乾燥させた粉砕桂皮樹皮（約１４０メッシュ）である。抽出溶媒２１０は純粋な二酸化炭素である。エタノールを共溶媒として使用してもよい。原料をＳＦＥ抽出容器２０に入れる。パージテストおよびリークテストをした後、このプロセスは、保存容器から冷却器を通ってＣＯ２ポンプに液化ＣＯ２を流す工程を含む。ＣＯ２は所望の圧力に圧縮されており、抽出容器中で原料に流され、圧力および温度は所定の値に維持される。抽出圧力は約６０ｂａｒ〜８００ｂａｒであり、温度は約３５℃〜約９０℃である。本明細書で教示されるＳＣＣＯ２抽出は、好ましくは、圧力が少なくとも１００ｂａｒ、温度が少なくとも３５℃、さらに好ましくは圧力が約６０ｂａｒ〜５００ｂａｒ、温度が約４０℃〜約８０℃で行われる。１段階の抽出にかかる抽出時間は、約３０分〜約２．５時間、約３０分〜約１時間である。溶媒対供給比は、それぞれのＳＣＣＯ２抽出あたり、典型的には約６０対１である。ＣＯ２は回収する。抽出され、精製され、プロファイリングされた精油化学構成物質３０を収集器または分離器に集め、遮光ガラス瓶に保存し、４℃の暗い冷蔵庫で保存する。桂皮原料１０の物質を１段階プロセスで抽出してもよく（図２の工程２Ａ）、抽出され、精製された桂皮精油画分３０を１個の収集ＳＦＥまたはＳＣＣＯ２システム２０に集めてもよく、または複数段階で抽出してもよく（図２の工程２Ｂ）、抽出され、精製され、プロファイリングされた桂皮精油副次画分５０、６０、７０、８０を１個の収集ＳＦＥシステム２０で別個に順に集めてもよい。あるいは、分画ＳＦＥシステムのように、ＳＣＣＯ２抽出された桂皮原料材料を収集容器（分離器）に分離し、それぞれの収集器内に、それぞれに異なる割合の精油化学構成物質画分（プロフィール）を有する精製された精油副次画分を集めてもよい。残留物（残り）４０を集め、保存し、さらなるプロセスに使用して、桂皮種のフェノール酸および多糖類を精製した画分を得てもよい。本開示の実施形態は、多段階ＳＣＣＯ２抽出を用いて、圧力６０ｂａｒ〜５００ｂａｒ、温度３５℃〜９０℃で桂皮種原料材料を抽出し、抽出した桂皮材料をそれぞれの段階後に集めることを含む。本開示の第２の実施形態は、分画ＳＣＣＯ２抽出を用いて、圧力６０ｂａｒ〜５００ｂａｒ、温度３５℃〜９０℃で桂皮種原料材料を抽出し、所定の条件（圧力、温度および密度）で所定の間隔（時間）で、抽出した桂皮材料を異なる容器に集めることを含む。多段階の抽出器から、または異なる収集容器（分画系）から得られた、抽出され精製された桂皮の精油副次画分を取り出し、独立して使用するか、または組み合わせて、天然の植物材料または従来の桂皮抽出生成物よりも高い濃度または低い濃度の所定の精油化学構成物質濃度を含む１つ以上の桂皮精油画分を作ることができる。典型的には、桂皮種由来の精油画分の合計収率は、１段階のＳＣＣＯ２抽出では、最大値が約０．４重量％〜約１．８重量％（精油化学構成物質の８５％を超える）であり、抽出物の精油化学構成物質の純度は９５重量％を超える。このような抽出プロセスの結果を以下および表４に示す。手順は実施例１に記載している。
【００７７】
【表４】
2009531331.tif 000004
これらの結果は、抽出速度に対する圧力の影響を示している。抽出圧力が高いと、消費物ＣＯ２量が少ない状態で、短時間で系が平衡に達する。抽出圧力が高くなると、密度が圧力にともなって大きくなるため、合計抽出収率が増える。興味深いことに、低圧（例えば１００〜３００ｂａｒ）では、温度が低いほど、密度が高いことに関連して収率が高くなる。高圧（例えば３００〜５００ｂａｒ）では、温度は抽出収率にあまり影響を与えない。２００ｂａｒを超える圧力では、抽出収率が高く、効率もよいが、３００ｂａｒ未満の圧力で温度が約４０〜８０℃の場合に、精油化学構成物質の純度９５％が達成できる。
【００７８】
観察した実験範囲では、温度と密度とに競争効果があることが明らかに示されている。このことは、文献に十分に規定されており、記載されており、圧力が大きくなると、一定温度では、超臨界流体および近臨界流体の溶解力が大きくなるため、収率が上がる。温度を上げると、抽出に好ましい化合物の蒸気圧が高くなりやすい。さらに、温度が上がるにつれて、拡散係数が大きくなり、溶媒粘度が下がることによって、薬草の多孔性マトリックスから化合物が抽出されやすくなる。一方、温度が上がると、系の圧力が一定な場合、溶媒密度が下がる。
【００７９】
桂皮樹皮精油の７１個の化合物をＧＣ−ＭＳ分析を用いて分離し、同定した。サンプルの質量スペクトルデータを科学文献のデータと比較して、桂皮アルデヒド、クマリンおよび酢酸シンナミルを同定した（表３および４）。桂皮アルデヒドおよびその同族体（例えば、ベンズアルデヒド（Ｐ１）、桂皮アルデヒド（Ｐ１０およびＰ１４）、シンナミルアルコール（Ｐ１６）、ｔｒａｎｓ−桂皮酸（Ｐ２３）および酢酸シンナミル（Ｐ２５））に加え、４種のモノテルペン（Ｐ６、Ｐ８およびＰ９）、１６種のセスキテルペン（Ｐ２０〜２２、Ｐ２６、Ｐ２９、Ｐ３１〜２、Ｐ３５〜４２およびＰ４６）および９種の脂肪酸および脂肪酸誘導体を同定した。他の少量の芳香族および脂肪族化合物も存在していた。同定した化合物の中で、ＳＦＥによって、桂皮精油で以前に同定されていない脂肪酸およびステロイド化合物を抽出することができた。これらの化合物は、精油化学構成物質約９０重量％を構成している。桂皮アルデヒドは、桂皮精油の主要な化学構成物質であり、約７０〜９１重量％であった。４０℃および１２０ｂａｒの条件下では多数の化合物が抽出物から同定され、これより高温および高圧条件のＳＦＥ抽出物よりも純度が約１００％と高かった。温度６０℃および１００ｂａｒのＳＦＥで、桂皮アルデヒドの純度が９０重量％を超え、ステロイド化合物は失われ、脂肪酸およびセスキテルペンの純度は低かった。ステロイド化合物は、４０℃の低温でのみ抽出可能である。温度４０℃および８０ｂａｒのＳＦＥでは、ステロイド化合物化学構成物質の純度は、２０重量％であった。対照的に、高温（６０〜８０℃）および高圧（５００ｂａｒ）のＳＦＥでは、脂肪酸化合物が抽出されやすい。これらのデータから、ＳＣＣＯ２は、桂皮精油の化学構成物質をプロファイリングすることができることが示された。
【００８０】
【表５−１】
2009531331.tif 000005
【００８１】
【表５−２】
2009531331.tif 000006
【００８２】
【表５−３】
2009531331.tif 000007
【００８３】
【表５−４】
2009531331.tif 000008
【００８４】
【表５−５】
2009531331.tif 000009
【００８５】
【表６−１】
2009531331.tif 000010
【００８６】
【表６−２】
2009531331.tif 000011
注：重量％は、以下のように算出した。
【００８７】
重量％＝（各化合物の重量／抽出物の合計重量）×１００
式中、各化合物の重量＝ピーク面積率×抽出物の合計重量。
【００８８】
（工程２．水溶出プロセスおよび多糖類沈殿）
桂皮種の化学構成物質の多糖類抽出画分は、「水溶性でエタノール不溶性の抽出画分」であると科学文献に定義されている。水溶媒によって溶出させ、エタノールで沈殿させるプロセスを用いた、桂皮種抽出物からの多糖類画分の抽出に関する一般的な記載を、図３の工程２に図示している。原料１０または４０は、天然の粉砕した桂皮種植物材料であるか、または工程１のＳＦＥ抽出プロセスから得た固体残留物である。この原料を、２段階溶出によって抽出する。溶媒は蒸留水２２０である。この方法では、桂皮種原料１０または４０と、抽出溶媒２２０とを抽出容器１００、１１０に入れ、加熱し、攪拌する。１００℃まで加熱してもよいし、約８０℃まで、または約８０〜９０℃まで加熱してもよい。抽出を約１〜５時間、約２〜４時間、または約２時間行う。２段階の抽出溶液３００＋３２０を合わせ、スラリーを濾過し（１２０）、遠心分離処理し（１３０）、上清を集め、蒸発させ（１４０）、溶液３３０の化学物質の濃度が約８倍になるまで水を除去させる。次いで、無水エタノール２３０を用いて溶液の容積を元の容積まで戻し、最終エタノール濃度を９５％にする。大きな沈殿１５０が見られる。溶液を遠心分離処理し（１６０）、デカンテーションし（１７０）、上清の残留物３４０をさらなる処理のために保存しておいてもよい。沈殿生成物３５０は、精製された多糖類画分であり、分子量５，０００〜４１０，０００のデキストランを参照標準に用いる比色分析法によって、多糖類を分析してもよい。実際の手順を実施例３に記載する。抽出された多糖類画分の純度は、３種の異なる分子量のデキストラン標準を用いて、それぞれ約２９％、約３５％および約４７％であり、合計収率は、元々の天然桂皮樹皮原料の１．３重量％であった。３種類のデキストラン標準の純度測定値を合わせると、純度は９５％よりも大きく、きわめて高純度である。さらに、ＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量分析（実験の章を参照）を用い、精製された多糖類画分を含む化合物の分子量をさらにプロファイリングした。実際の手順は実験の章に記載している。
【００８９】
（工程３．粗ポリフェノール酸画分を抽出するための含水アルコール溶出プロセス）
１つの局面では、本開示は、生体活性を有するポリフェノール酸化学構成物質の抽出および濃縮を含む。この工程の一般的な記載を図４の工程３に図示している。この工程２の抽出プロセスは、溶媒溶出プロセスである。この抽出用の原料は、桂皮種を粉砕した乾燥樹皮材料１０、または精油化学構成物質の工程１のＳＣＣＯ２抽出から得た残留物４０または工程２の多糖類抽出−沈殿から得た残留物３３０＋３４０である。抽出溶媒２４０は含水エタノールである。抽出溶媒は、１０〜９５％含水アルコールであってもよいが、２５％含水エタノールが好ましい。この方法では、桂皮原料の物質と、抽出溶媒とを抽出容器４００に入れ、加熱し、攪拌する。１００℃まで加熱してもよいし、約９０℃まで、約８０℃まで、約７０℃まで、約６０℃まで、または約３０〜５０℃まで加熱してもよい。抽出を約１〜１０時間、約１〜５時間、または約２時間行う。得られた抽出溶液を濾過し（４１０）、遠心分離処理する（４２０）。濾液（上清）５００、５２０、５４０を生成物として集め、容積を測定し、溶媒を蒸発させた後、固体乾燥重量を測定する。抽出残留材料５３０を保持し、さらなる処理のために保存しておいてもよいし、廃棄してもよい。必要な場合または望ましい場合には、抽出を数回繰り返してもよい。２回以上、３回以上、４回以上などの回数繰り返してもよい。例えば、図１の工程２は、３段階プロセスを示しており、第２段階および第３段階は、同じ方法および条件を使用している。
【００９０】
興味深いことに、残った桂皮アルデヒドは、この含水アルコール溶出による抽出で抽出され、このことは、精油化学構成物質の全てが、上述ＳＦＥ条件を用いた比較的徹底した抽出法によって抽出されるわけではないことを示す。さらに、顕著な量のタンニンが、抽出生成物の２０％を越える量抽出された。さらに、２段階の含水アルコール溶出プロセスは、ポリフェノールの抽出収率を高めるのに好ましい（生の原材料の約１８重量％）。このとき、合計フェノール酸濃度は約６４重量％であり、タンニン酸濃度は約２０重量％である。高濃度の生体活性を有するポリフェノールを含有する精製されたポリフェノール画分を得るためには、工程３の粗ポリフェノール画分からタンニンを除去するために、さらなる処理工程（工程４）が必要である。
【００９１】
（工程４．アフィニティー吸着によるポリフェノール抽出および精製のプロセス）
有益な生体活性を有するポリフェノール酸は、プロアントシアニジンである。プロアントシアニジンは、縮合タンニンとして知られている。これらの物質は、普遍的な物質であり、リグニンに次いで２番目の豊富な天然の植物性ポリフェノールである。Ｄｕｂｏｉｓ  Ｍら，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｃｈｅｍ  ２８：３５０−３５６，１９５６。プロアントシアニジンは、Ｃ４−Ｃ８結合および／またはＣ４−Ｃ６結合で結合した（＋）−カテキン単位および／または（−）−エピカテキン単位からなるオリゴマーおよびポリマー（Ｂ型）の混合物である。これらのフラバン−３−オールも、Ｃ４−Ｃ８結合と、Ｏ７−Ｃ２間のさらなるエーテル結合とで二重に結合していてもよい（Ａ型）。プロアントシアニジンの分子量は、重合度（ＤＰｎ）であらわされ、最も重要な性質の１つである。科学文献で定義されているように、ＤＰ１はモノマーであり、ＤＰ２〜１０はオリゴマーであり、ＤＰ＞１０はポリマーである。
【００９２】
桂皮ポリフェノールに関するバイオメディカル文献（上述のものを参照）では、ＤＰ４〜５（オリゴマー）は、医学的に有益な生体活性を示す。従って、工程４のプロセスでは、タンニン除去およびプロアントシアニジン抽出および精製を、各工程の合計フェノール酸濃度およびＤＰｎを追跡することによって調べた。
【００９３】
本明細書で教示されているように、含水アルコール抽出物に含まれるポリフェノール酸がアフィニティー吸着剤に吸着されるように、桂皮原料の含水アルコール抽出物と、固体アフィニティーポリマー吸着樹脂とを接触させることによって、桂皮および関連種から精製されたポリフェノール酸画分抽出物を得てもよい。次いで、結合した化学構成物質を、本明細書に教示される方法によって溶出させる。ポリフェノール酸画分化学構成物質を溶出させる前に、所望の化学構成物質が吸着したアフィニティー吸着剤を、任意の従来の様式で、抽出物の残りの成分と分離してもよい。好ましくは、吸着剤と接触させ、水性抽出物を抽出カラムまたは吸着材料床に通すことによって分離する。
【００９４】
桂皮種のフェノール酸化学構成物質を精製するために、種々のアフィニティー吸着剤を利用することができる。例えば、限定されないが、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．）、「Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＸＡＤ−２」（Ｒｏｈｍ  ＆  Ｈａｓｓ）、「Ｄｕｏｌｉｔｅ  Ｓ−３０」（Ｄｉａｍｏｎｄ  Ａｌｋａｉ  Ｃｏ．）、「ＳＰ２０７」（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）、ＡＤＳ−５（Ｎａｎｋａｉ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ，Ｃｈｉｎａ）、ＡＤＳ−１７（Ｎａｎｋａｉ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔｉａｎｊｉｎ，Ｃｈｉｎａ）、Ｄｉａｌｏｎ  ＨＰ  ２０（Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ，Ｊａｐａｎ）およびＡｍｂｅｒｌｉｔｅ  ＸＡＤ７  ＨＰ（Ｒｏｈｍ  ＆  Ｈａｓｓ）が挙げられる。
【００９５】
Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ０２０は、好ましくは、ポリフェノール酸化学構成物質に高いアフィニティーを有し、およびタンニンポリフェノールと非タンニンポリフェノールとを分離する能力があるため、クロマトグラフィープロセスで使用される。タンニンポリフェノールは、アルコール中でＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０に吸着する。対照的に、非タンニンポリフェノールは、アルコールを用いると樹脂ビーズから溶出し、タンニンはビーズに吸着されたままである。次いで、含水アセトンを用いると、タンニンを溶出させることができる。この方法によれば、桂皮のタンニンポリフェノールと、所望な非タンニンポリフェノールとを分けることができる。従って、ポリフェノール化合物を分離し、非タンニン生体活性を有する桂皮ポリフェノールを精製するために、異なる溶出溶媒を使用することができる。Ｆｏｌｉｎ−Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ法およびタンパク質沈殿フェノール法を用い、粗抽出画分および溶出画分中のタンニンおよび非タンニンポリフェノールの濃度を測定することができる。
【００９６】
タンニンポリフェノール酸化学構成物質を吸着剤から回収するために種々の溶出剤を利用することができるが、本開示の一局面では、溶出剤は、低分子量アルコールを含み、低分子量アルコールとしては、限定されないが、メタノール、エタノールまたはプロパノールが挙げられる。第２の局面では、溶出剤は、低分子量アルコールと水の混合物を含む。別の局面では、溶出剤は、低分子量アルコール、第２の有機溶媒および水を含む。
【００９７】
非タンニンポリフェノール酸化学構成物質を吸着剤から回収するために種々の溶出剤を利用することができるが、本開示の一局面では、溶出剤は、含水アセトンを含む。
【００９８】
好ましくは、桂皮種原料は、１つ以上の準備精製プロセスを受ける。このプロセスとしては、限定されないが、水性フェノール酸化学構成物質を含有する抽出物とアフィニティー吸着材料とを接触させる前の、工程１および３に記載のプロセスが挙げられる。
【００９９】
本開示で教示されるようなアフィニティー吸着剤を用いると、桂皮種の非常に精製された生体活性を有するポリフェノールオリゴマー（ＤＰ２−１０）酸化学構成物質が得られ、この物質には、天然の植物材料または市販の抽出生成物に通常存在している他の化学構成物質が顕著に存在しない。例えば、本開示で教示されるプロセスによって、９５重量％を超える合計フェノール酸化学構成物質を含有し、タンニンポリフェノールが痕跡量しか存在しない、精製されたポリフェノール酸抽出物を得ることができる。
【０１００】
ポリマーアフィニティー吸着樹脂ビーズを用いて、生体活性を有するポリフェノールを桂皮種樹皮から抽出し、精製する方法を図１の工程４に図示している。この抽出プロセスの原料は、工程３の含水アルコール溶出抽出物５００＋／−５２０＋／−５４０から得たフェノール酸を含有する含水エタノール溶液であってもよい。吸着樹脂ビーズの適切な重量（吸着樹脂１ｇあたりポリフェノール酸２２ｍｇ）を４〜５ＢＶの９５％エタノール２５０で洗浄し（浸し）た後、カラムに充填する（６２０）。ポリフェノール酸を含有する水溶液５００＋５２０を、元々の容積の１％になるまで、エバポレーションによって濃縮する。次いで、濃縮サンプルの容積が２０倍になるまで、無水エタノール２６０を加え、ポリフェノールを９５％エタノール溶液に溶解させる。この溶液を遠心分離処理し（６４０）、任意の不溶性物質を除去し、上清をローディングサンプル５５０として集める。ローディングサンプル５５０をカラムに置く（６５０）。カラムに完全に入れたら、カラムを９５％エタノール２７０を用いて流速２〜３ＢＶ／時間で溶出させ（６６０）、生体活性を有する非タンニンポリフェノールを、定組成様式でアフィニティー吸着カラムから溶出させる。溶出液７００を１ＢＶ画分で集める。ポリフェノール画分は、画分サンプルで吸収が検出されなくなるまで、それぞれＵＶ分光器で２８０ｎｍ（ポリフェノール酸の波長吸収）で測定し、検出されなくなった時点で溶出を終了する。一般的に、カラムから非タンニンポリフェノールを溶出させるのに、９５％エタノール７〜１０ＢＶが必要である（約３〜４時間）。溶出したカラム６７０を、７０％含水アセトン（２８０）３ＢＶで流速５ＢＶ／時間（３時間）で洗浄し（６８０）、樹脂ビーズに吸着したタンニンポリフェノールを溶出させる。溶出したタンニンポリフェノールを洗浄し（７１０）、廃棄する（７３０）。次いで、洗浄したカラム７３０を、９５％エタノール２５０で流速５ＢＶ／時間で４〜５回洗浄し、残りの化学物質を除去し、さらなるクロマトグラフィープロセス７４０のために、洗浄したカラムを準備する。洗浄液７２０を廃棄する（７３０）。溶出画分の容積７００は、約１ＢＶ毎に集め、これらのサンプルを、合計ポリフェノール（Ｆｏｌｉｎ−Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ法）、タンニンポリフェノール（タンパク質沈殿法）、ＤＰｎ（チオール分解ＨＰＬＣ）について分析し、固体含有量および純度を調べる。
【０１０１】
プロアントシアニジンポリフェノール化合物のオリゴマーおよびポリマーは、広範囲の保持時間で溶出し（保持時間１２〜３０分）、ベースラインが変動し、カテキンおよびエピカテキンの濃度を算出する場合、クロマトグラフィーのピーク積分を正確に行うことができない。このＨＰＬＣ挙動は、科学文献のほとんどのプロアントシアニジンで確認されている。しかし、チオール分解すると、ＨＰＬＣクロマトグラムの解像度が明らかに向上するという証拠が示されている。チオール分解すると、プロアントシアニジンは、ＨＰＬＣクロマトグラムで十分な解像度を有するピークを得るモノマーに変換される。ベンジルチオエーテルは、科学文献によれば、プロアントシアニジン構造の伸張部分から得られる（Ｇｕｙｏｔ  ２００１参照）。ＤＰｎは、Ｐ１、Ｐ２、Ｐ３およびＰ４の合計面積およびカテキンおよびエピカテキンの合計面積から算出することができる。
【０１０２】
Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０は、桂皮含水アルコール抽出物に含まれるタンニンを非タンニンポリフェノール化合物と分離するのに有効なアフィニティー吸着剤であることが示されている。溶出画分Ｆ２〜Ｆ８をあわせると、約７７．４％の非タンニンポリフェノール化学構成物質を回収することができ、この合わせた抽出画分から、タンニンは０．２％しか回収されない。溶出画分Ｆ２〜Ｆ８を合わせた収率は、ローディング溶液の２１．５重量％であり、生の桂皮原料の３．７８重量％である。非タンニンポリフェノールの純度は６５重量％であり、この値は、工程３の粗ポリフェノール抽出生成物の３倍である。さらに、Ｆ６〜Ｆ８の溶出画分を合わせたものでは、９５％よりも大きな純度を得ることができる。
【０１０３】
平均重合度（ＤＰｎ）は、各溶出画分中のポリフェノールオリゴマーの大きさを示す。粗抽出物（ローディング溶液）では、大きなタンニンポリフェノールポリマーが存在するため、重合度は６．９であった。ポリフェノール溶出画分では、本質的にタンニンポリフェノールは存在しなかった。従って、精製されたポリフェノール溶出画分は、主にポリフェノールオリゴマーで構成され、ダイマー−ＤＰｎ＝２；トリマー−ＤＰｎ＝３；テトラマー−ＤＰｎ＝４などの混合物である。表５で示されるように、溶出画分Ｆ３〜Ｆ５ではトリマーが多く溶出し、画分Ｆ６〜Ｆ８ではテトラマーが多く溶出した。溶出画分のＤＰｎの範囲は２．７〜４．２であり、このことは、これらの画分が、有益な生体活性を有する桂皮のプロアントシアニジンポリフェノール構成物質を非常に高純度で含有することを示すものである。さらに、異なる溶出画分を組み合わせると、表７および８に示されるように、非タンニンポリフェノールの収率および純度が異なる抽出精製物を得ることができる。
【０１０４】
【表７】
2009531331.tif 000012
＊溶出物１には化学構成物質が存在せず、溶媒のみであったため、表から除外した。
【０１０５】
【表８】
2009531331.tif 000013
＊これらの画分の組み合わせでは、合計フェノール酸には、測定可能なタンニン酸が含まれていない。
【０１０６】
溶液からアルコールを除去する多くの方法が当該技術分野で知られている。アルコールを回収することが望ましい場合、抽出後に、大気圧または減圧下で、蒸留によって溶液からアルコールを除去することができる。アルコールを再利用することができる。さらに、水溶液またはアルコールを除去した溶液から水を除去する多くの方法も当該技術分野で知られている。このような方法としては、限定されないが、水溶液を適切なキャリア（限定されないが、炭酸マグネシウムまたはマルトデキストリン）上でスプレー乾燥する方法が挙げられる。または、凍結乾燥または屈折性ウィンドウ（ｒｅｆｒａｃｔｉｖｅ  ｗｉｎｄｏｗ）で乾燥させることによって、液体を乾燥させることができる。
【０１０７】
（食品および医薬）
本発明の食品の形態として、例えば、顆粒状態、粒状態、ペースト状態、ゲル状態、固体状態または液体状態といった任意の形態に配合してもよい。これらの形態では、場合により、当業者には食品に添加できることが従来から知られている種々の基質、例えば、バインダー、崩壊剤、増粘剤、分散剤、再吸収促進剤、味覚調整剤（ｔａｓｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、バッファー、界面活性剤、可溶化補助剤、防腐剤、乳化剤、等張化剤、安定化剤またはｐＨ調整剤などを含有してもよい。食品に添加されるエルダーベリー抽出物の量は、特に制限はないが、例えば、体重約６０ｋｇの成人の１日の摂取量として、約１０ｍｇ〜５ｇ、好ましくは、５０ｍｇ〜２ｇであってもよい。
【０１０８】
特に、健康維持のための食品、機能性食品などに使用する場合には、本発明の有効成分を、本発明の所定の効果が十分に示される量で含有することが好ましい。
【０１０９】
本発明の医薬は、場合により、従来の既知の方法によって、例えば、固体薬剤（例えば、錠剤、顆粒、粉末、カプセルなど）または液体薬剤（例えば注射液など）として調製することができる。これらの医薬には、一般的に使用される任意の材料（例えば、バインダー、崩壊剤、増粘剤、分散剤、再吸収促進剤、味覚調整剤、バッファー、界面活性剤、可溶化補助剤、防腐剤、乳化剤、等張化剤、安定化剤またはｐＨ調整剤など）が配合されてもよい。
【０１１０】
医薬における有効成分（桂皮抽出物）の投与量は、患者の種類、薬剤の形態、年齢、体重または適用される症状などによって変わってもよく、例えば、経口投与される場合、体重約６０ｋｇの成人では、１日に１回または数回投与され、１日に約１０ｍｇ〜５ｇ、好ましくは、１日に約５０ｍｇ〜２ｇ投与される。有効成分は、桂皮抽出物の１つまたはいくつかの成分であってもよい。
【０１１１】
この方法は、このような組成物を、１日に２回以上、１日に３回以上、１日に４回以上、１日に１〜１５回の範囲で投与する工程も含む。このような投与は、数日間、数週間、数ヶ月、数年にわたって毎日のように連続的であってもよく、または特定の状態を治療または予防するために、特定の時間間隔に行ってもよい。例えば、ヒトに、精神集中、認知および記憶を高めるために、または２型糖尿病を処置し、予防するために、または心血管疾患の卒中を予防するために、または胃腸管障害を治療するために、または炎症性障害および関節炎（通風を含む）を治療するために、または風邪、細菌感染および真菌感染を治療するために、桂皮種抽出物を数年間、少なくとも１日に１回投与してもよい。
【０１１２】
上の記載は、本開示を実施する現時点で最良と考えられる態様を含む。この記載は、本開示の一般的な原理を示す目的でなされたものであり、限定する意図はないと解釈されるべきである。本開示には、さらに以下の実施例を示すが、本発明の範囲をいかなる様式にも限定するものと解釈されるべきではない。対照的に、本明細書の記載を読めば、本開示の精神に逸脱しない限り、種々の実施形態、その改変および等価物について当業者に示唆があると明らかに理解されるべきである。
【０１１３】
本明細書で使用されるあらゆる用語は、当業者が日常的に使用している意味に解釈されると考える。本明細書で引用した特許および特許明細書または参考文献は、その全体が本明細書に参考として組み込まれる。
【実施例】
【０１１４】
（材料）
アセトン（６７−６４−１），≧９９．５％，ＡＣＳ試薬（１７９１２４）；アセトニトリル（７５−０５−８），ＨＰＬＣ用，勾配グレード  ≧９９．９％（ＧＣ）（０００６８７）；ヘキサン（１１０−５４−３），９５＋％，分光測定用グレード（２４８８７８）；酢酸エチル（１４１−７８−６），９９．５＋％，ＡＣＳグレード（３１９９０２）；エタノール，４．８％イソプロパノールで変性（０２８５３）；エタノール（６４−１７−５），無水（０２８８３）；メタノール（６７−５６−１），９９．９３％，ＡＣＳ  ＨＰＬＣグレード（４３９１９９３）；および水（７７３２−１８−５），ＨＰＬＣグレード，（９５３０４）。すべてＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。
【０１１５】
ギ酸（６４−１８−６），５０％溶液（０９６７６）；酢酸（６４−１９−７），９９．７＋％，ＡＣＳ試薬（３２００９９）；塩酸（７６４７−０１−０），容量測定用標準  １．０Ｎ水溶液（３１８９４９）；水酸化カルシウム（７７８９−７８−８），粉末，ＣＡ  ０〜２ｍｍ，９０〜９５％（２１３２６８）；無水塩化第二鉄（７７０５−０８−０），９７％，試薬グレード（１５７７４０）；Ｆｏｌｉｎ−Ｃｌｏｃａｌｔｅｕフェノール試薬（２Ｎ）（４７６４１）；フェノール（１０８−９５−２）（Ｐ３６５３）；硫酸（７６６４−９３−９），ＡＣＳ試薬，９５〜９７％（４４７１９）；トリエタノールアミン（１０２−７１−６），トリエタノールアミン遊離塩基（Ｔ１３７７）；ドデシル硫酸ナトリウム（１５１−２１−３），最少で９８．５％  ＧＣ（Ｌ４５０９）。すべてＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから購入した。炭酸ナトリウム（Ｓ２６３−１，Ｌｏｔ番号：０３７４０６）はＦｉｓｈｅｒ  Ｃｏ．から購入した。
【０１１６】
血清アルブミン（９０４８−４６−８），アルブミンウシ画分Ｖ粉末  細胞培養試験済（Ａ９４１８）；（＋）−カテキン水和物（８８１９１−４８−４），純度≧９８％（Ｃ１２５１）；没食子酸（１４９−９１−７），ＡＣＳ試薬，≧９８％（ＨＰＬＣ）；ベンジルチオール（１００−５３−８），９９％（Ｂ２５４０１）；Ｔｒａｎｓ−桂皮アルデヒド（１４３７１−１０−９），純度９９＋％；タンニン酸（１４０１−５５−４），粉末（Ｔ０１２５）。すべてＳｉｇｍａ−Ａｄｒｉｃｈから購入した。（−）−エピカテキン９３．６％（０５１２５−５５０，ＣＡＳ番号４９０−４６−０）はＣｈｒｏｍａｄｅｘから購入した。ＤＩＮに沿うデキストラン標準５０００（００２６９）、５０，０００（００８９１）および４１０，０００（００８９５）は、Ｆｌｕｋａから購入した。本開示で使用した化学参照標準の構造を以下に示す。
【０１１７】
【化１】
2009531331.tif 000014
Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０：ＳｅｐｈａｄｅｘＴＭ  ＬＨ−２０（Ｌｏｔ番号：３０８８２２，パック１６７６００，製造番号：１７−００９０−０１）は、Ａｍｂｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ＡＢ  Ｕｐｐｓａｌａ  Ｓｗｅｄｅｎから購入した。ｓｅｐｈａｄｅｘ  Ｇ−２５をヒドロキシプロピル化したものであり、ビーズを形成するデキストラン媒体によって調製され、有機溶媒中の天然物（例えば、ステロイド、テルペノイド、脂質および低分子量ペプチド）のゲル濾過用に特別に開発されたものである。
【０１１８】
（ＨＰＬＣ法）
クロマトグラフィーシステム：ＬＣ１０ＡＤＶＰポンプ、ＳＰＤ−Ｍ  １０ＡＶＰ発光ダイオードアレイ検出器を備えたＳｈｉｍａｄｚｕ製高速液体クロマトグラフィーＬＣ−１０ＡＶＰシステム。得られた抽出生成物を逆相Ｊｕｐｉｔｅｒ  Ｃ１８カラム（２５０×４．６ｍｍ  Ｉ．Ｄ．，５μ，３００Å）（Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ，部品番号：００Ｇ−４０５３−Ｅ０，シリアル番号：２２１７５２０−３，バッチ番号：５２４３−１７）で測定した。注入容積は１０μｌであり、移動相の流速は１ｍｌ／分であった。カラム温度は５０℃であった。移動相は、Ａ（０．５％ギ酸水溶液（ｖ／ｖ））およびＢ（アセトニトリル）であった。勾配は、以下のようにプログラミングした：最初の６分間は、Ａを１００％で維持し、６〜１０分は、溶媒Ｂを０％から１２％まで直線的に増加させ、１０〜３５分は、Ｂを１２％から２１％まで直線的に増加させ、３５〜４０分は、Ｂを２１％から２５％まで直線的に増加させ、４０〜５０分は、Ｂを１００％まで直線的に増加させる。
【０１１９】
３種類の参照標準（カテキン、エピカテキンおよびｔｒａｎｓ−桂皮アルデヒド）メタノールストック溶液を、標準化合物を秤量し、１ｍｇ／ｍｌでメタノールに溶解することによって調製した。参照標準溶液を混合し、段階的に希釈し、最終濃度がそれぞれ０．７５、０．５、０．１、０．０５ｍｇ／ｍｌの一連の溶液を得た。全てのストック溶液および作業溶液は７日以内に使用し、＋４℃の冷蔵庫で保存し、使用前に室温に戻した。この溶液を使用し、桂皮中の化合物を同定し、定量した。（＋）−カテキン（Ｃ）、（−）−エピカテキン（ＥＣ）およびｔｒａｎｓ−桂皮アルデヒド（ＣＡＮ）の保持時間は、それぞれ１４．０２分、１５．２２分および３４．００分であった。０．０１〜１０μｇの範囲で線形に沿った。回帰式および相関係数は、以下のとおりであった：（＋）−カテキン：ピーク面積＝４６５３０３×Ｃ（μｇ）−５７０１．４，Ｒ２＝０．９９９６（Ｎ＝６）；（−）−エピカテキン：ピーク面積＝１２４９６４×Ｃ（μｇ）−２１５．８８，Ｒ２＝０．９９９８（Ｎ＝６）；ｔｒａｎｓ−桂皮アルデヒド：ピーク面積／１００＝６９６５７×Ｃ（μｇ）−１１６２．１，Ｒ２＝０．９９９７（Ｎ＝６）。ＨＰＬＣの結果を表９に示す。各サンプル中の参照標準の含有量は、ピーク面積に基づいて、対応する検量線から内挿によって算出した。
【０１２０】
【表９】
2009531331.tif 000015
１理論段数は、以下のように算出した：Ｎ＝１６×（ｔＲ／ｗ）２。ｔＲは保持時間であり、ｗはピーク幅である。ｈｔｔｐｓ：／／ｗｗｗ．ｍｎ−ｎｅｔ．ｃｏｍ／ｗｅｂ％５ＣＭＮ−ＷＥＢ−ＨＰＬＣＫａｔａｌｏｇ．ｎｓｆ／ＷｅｂＥ／ＧＲＵＮＤＬＡＧＥＮ。
【０１２１】
（ＧＣ−ＭＳ分析）
ＧＣ−ＭＳ分析は、Ｓｈｉｍａｄｚｕ製ＧＣＭＳ−ＱＰ２０１０システムを用いて行った。このシステムには、高速ガスクロマトグラフ、直接接続したＧＣ／ＭＳインターフェース、独立した温度コントローラがついた電子衝撃（ＥＩ）イオン源、四重極マスフィルターなどが備わっている。このシステムは、データ収集および実行後の分析についてはＧＣＭＳ  ｓｏｌｕｔｉｏｎ  Ｖｅｒ．２ソフトウェアで制御されている。分離は、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｊ＆Ｗ  ＤＢ−５石英ガラスキャピラリーカラム（３０ｍ×０．２５ｍｍ  ｉ．ｄ．，膜厚０．２５μｍ）（カタログ：１２２５０３２，シリアル番号：ＵＳ５２８５７７４Ｈ）を用い、以下の温度プログラムを用いて行った。初期温度は６０℃であり、この温度で２分間維持し、４℃／分で１２０℃まで上昇させ、この温度で１５分間維持し、４℃／分で２４０℃まで上昇させ、この温度で１５分間維持し、全実行時間は７７分間であった。サンプル注入温度は２５０℃であった。スプリットレスモードで、１分間にサンプル１μｌをオートインジェクターで注入した。キャリアガスはヘリウムであり、流速は圧力６０ＫＰａで制御した。このような加圧下で、流速は１．０３ｍｌ／分であり、線速度は３７．１ｃｍ／分であった。ＭＳイオン源の温度は２３０℃であり、ＧＣ／ＭＳインターフェース温度は２５０℃であった。ＭＳ検出器は、走査速度１０００ＡＭＵ／秒でｍ／ｚ５０〜５００を走査した。溶媒のカットオフ温度は３．５分であった。
【０１２２】
（合計フェノール酸のためのＦｏｌｉｎ−Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ法（Ｍａｒｋａｒ  １９９３））
Ｓｈｉｍａｚｕ製ＵＶ−Ｖｉｓ分光光度計（ＵＶプローブ付ＵＶ１７００：Ｓ／Ｎ：Ａ１１０２４２１９８２ＬＰ）を使用した。
【０１２３】
標準：
ストック没食子酸／水溶液を濃度１ｍｇ／ｍｌで作成する。試験管に適切な量の没食子酸溶液を入れ、蒸留水で容積を０．５ｍｌにし、Ｆｏｌｉｎ  Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ試薬０．２５ｍｌを加え、次いで２０重量％炭酸ナトリウム溶液１．２５ｍｌを加える。管を４０分間十分に攪拌し（超音波浴で）、吸光度を７２５ｎｍで記録する。データを表１０に示す。
【０１２４】
【表１０】
2009531331.tif 000016
＊没食子酸溶液の量は、吸光度の情報によるものである。
【０１２５】
（多糖類分析のための、Ｄｉｒｅｃｔ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｒｅａｌ  Ｔｉｍｅ（ＤＡＲＴ）質量分析）
装置：ＪＯＥＬ  ＡｃｃｕＴＯＦ  ＤＡＲＴ  ＬＣ飛行時間型質量分析計（Ｊｏｅｌ  ＵＳＡ，Ｉｎｃ．，Ｐｅａｂｏｄｙ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ＵＳＡ）。この飛行時間型（ＴＯＦ）質量分析技術は、サンプル調製を必要とせず、質量は０．００００１質量単位まで正確に測定できる。
【０１２６】
方法：画分を捕捉し、分析するのに使用する装置の設定を以下に示す：陽イオンモードでは、ＤＡＲＴ針の電圧は３０００Ｖであり、元素は２５０℃で加熱し、電極１は１００Ｖ、電極２は２５０Ｖであり、ヘリウムガスの流速は７．４５リットル／分（Ｌ／分）である。質量分析計の場合、オリフィス１は１０Ｖであり、リングレンズは５Ｖであり、オリフィス２は３Ｖである。適切な６０ｍ／ｚで始まる解像力を得て、大きな質量範囲でも十分な解像度を得るために、ピーク電圧を６００Ｖに設定する。マイクロチャンネルプレート検出器（ＭＣＰ）の電圧を２４５０Ｖに設定する。サンプル導入前に、０．５Ｍカフェイン溶液標準（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｏ．，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＵＳＡ）を用いて毎朝較正を行う。較正許容値は≦５ｍｍｕである。
【０１２７】
滅菌ハサミでＤＡＲＴヘリウムプラズマにサンプルを導入し、サンプル表面が最大限ヘリウムプラズマビームを受けるようにする。サンプルをビームに導入するために、走査作業を行う。この作業により、サンプルは、約０．５秒／走査の間、前後に繰り返し動き、サンプルの熱分解を防ぐことができる。適切な合計イオン流（ＴＩＣ）の信号が検出器で観測されるまで、この動作が繰り返され、サンプルが取り除いて、ベースライン／バックグラウンドを正規化する。
【０１２８】
陰イオンモードの場合、ＤＡＲＴおよびＡｃｃｕＴＯＦ  ＭＳを陰イオンモードのものに取り替える。針の電圧は３０００Ｖであり、元素は２５０℃で加熱し、電極１は１００Ｖ、電極２は２５０Ｖであり、ヘリウムガスの流速は７．４５Ｌ／分である。質量分析計の場合、オリフィス１は−２０Ｖであり、リングレンズは−１３Ｖであり、オリフィス２は−５Ｖである。ピーク電圧は２００Ｖである。ＭＣＰ電圧を２４５０Ｖに設定する。サンプルを、陽イオンモードの場合と同じ様式で導入する。全データ分析は、装置とともに提供されたＭａｓｓＣｅｎｔｅｒＭａｉｎ  Ｓｕｉｔｅソフトウェアを用いて行なう。
【０１２９】
（実施例１）
（工程１Ａの実施例：１段階ＳＦＥによる、桂皮精油の最大抽出および精製）
（精油）
全てのＳＦＥ抽出は、圧力６９０ｂａｒまで、温度２００℃までに耐え得るように設計されたＳＦＴ  ２５０（Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｆｌｕｉｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗａｒｋ，Ｄｅｌａｗａｒｅ，ＵＳＡ）で行った。この装置は、動的状態または静的状態のいずれでも操作できる柔軟性を有しており、超臨界条件で簡単に効率よく抽出することができる。この装置は、主にオーブン、ポンプおよびコントローラ、および収集モジュールの３つのモジュールからなる。オーブンは、１個のプレヒートカラムと、１個の１００ｍｌ抽出容器とを備えている。ポンプモジュールは、３００ｍｌ／分の一定流速能力を有する圧縮空気ポンプを備えている。収集モジュールは４０ｍｌガラスバイアルであり、抽出生成物を回収するために、キャップおよびセプタムで密閉されている。この装置には、マイクロメーターバルブと流速測定器とが備わっている。抽出容器の圧力および温度が監視されており、±３ｂａｒおよび±１℃に維持される。
【０１３０】
典型的な実施例では、１４０メッシュのふるいにかけ、１０５μｍより大きな粒径を有する桂皮樹皮粉末３０ｇを、実験毎に抽出容器１００ｍｌに入れる。ガラスウールをカラムの両端に置き、固体物質が外に出ないようにする。オーブンを所望の温度まであらかじめ加熱しておき、その後に充填した容器を置いた。容器をオーブンに接続した後、抽出システムをＣＯ２（約８５０ｐｓｉｇ）で加圧し、漏れ試験を行ない、パージした。システムを閉じ、空気圧型液体ポンプを用いて所望の抽出圧力まで加圧した。このシステムを約３分間放置し、平衡状態にした。サンプリングバイアル（４０ｍｌ）を秤量し、サンプリングポートに接続した。ＣＯ２を速度約１０ＳＬＰＭ（１９ｇ／分）で流し、抽出を開始した。ＣＯ２の速度は絞り弁で制御する。溶媒／供給比（中に入れた原材料の重量に対する、使用した合計ＣＯ２の重量比であると定義される）を算出した。抽出プロセス中、抽出されたサンプルを５分毎に秤量した。２回の測定間で、サンプルの重量の変化量が５％未満になったら、抽出が終了したものとした。収率は、抽出容器に入れた原材料の最初の合計重量に対する、抽出された精油の重量比であると定義した。全因子を考えた抽出法の設計は、８０〜５００ｂａｒに対して温度４０〜８０℃で変えて行った。
【０１３１】
この実験例では、温度範囲４０〜８０℃、圧力範囲８０〜５００ｂａｒで抽出条件を設定した。ＣＯ２流速は１９ｇ／分であった。結果を表１１に示す。
【０１３２】
【表１１】
2009531331.tif 000017
（実施例２）
（工程１Ｂの実施例：桂皮精油の多段階ＳＣＣＯ２分画）
多段階ＳＣＣＯ２抽出／分画をＳＦＴ  ２５０（Ｓｕｐｅｒｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｆｌｕｉｄ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗａｒｋ，Ｄｅｌａｗａｒｅ，ＵＳＡ）で行った。典型的な多段階抽出では、粉砕した桂皮樹皮３０ｇ（粒径は１０５μｍより大きい）を、内容積１００ｍｌの抽出容器に入れた。抽出溶液を、抽出容器出口に取り付けた４０ｍｌの収集容器に集めた。ＣＯ２の流速を１９ｇ／分に設定した。第１の抽出工程は、圧力８０ｂａｒおよび温度４０℃（ＣＯ２密度＝０．２９ｇ／ｍｌ）で行った。この抽出工程を１時間行った。第２の抽出工程は、圧力１００ｂａｒおよび温度４０℃（ＣＯ２密度＝０．６４ｇ／ｍｌ）で行った。第２の抽出工程を１時間続けた。第３の抽出物工程は、圧力１２０ｂａｒおよび温度４０℃で１時間行った（ＣＯ２密度＝０．７２ｇ／ｍｌ）。第４の抽出段階は、温度４０℃および圧力３００ｂａｒ（ＣＯ２密度＝０．９２ｇ／ｍｌ）で１時間行った。６０℃および８０℃でも、３段階の多段階抽出を行った。これを含む分析結果を表１２に示しており、この表では、粗抽出物と多段階ＧＣ−ＭＳデータとを同じＳＦＥ条件下で比較することができる。
【０１３３】
【表１２】
2009531331.tif 000018
多段階抽出の合計収率は、それぞれ原材料の重量に基づいて、各段階の収率を合計すると、４０℃で約１．６重量％、６０℃で約１．３重量％、８０℃で約１．８重量％であった。これらの収率は、多段階プロセスで使用した溶媒−供給比が高かったため、１段階の粗抽出の収率よりも高かった。それ以外のデータには整合性がある。データから明らかなように、化学構成物質の化学化合物（例えばｔｒａｎｓ−桂皮アルデヒド）の濃度は、これらの副次画分抽出生成物で変わってもよく、このことはＳＦＥが桂皮精油の化学構成物質をプロファイリングすることができる能力を示している。
【０１３４】
【表１３】
2009531331.tif 000019
（実施例３）
（工程２の実施例  多糖類画分の抽出）
桂皮種に含まれる、水溶性でエタノール不溶性の精製された多糖類画分の溶媒抽出および化学構成成分の沈殿の典型的な実験例は以下のとおりである。６０℃および３００ｂａｒでのＳＦＥ抽出から得た固体残留物２０ｇを、蒸留水４００ｍｌを用いて、８５℃で２時間、２段階で抽出した。２つの抽出溶液を合わせ、Ｆｉｓｈｅｒｂｒａｎｄ  Ｐ４濾紙（孔径４〜８μｍ）でスラリーを濾過し、２，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離処理した。上清を集めた。Ｒｏｔａｒｙ  ｅｖａｐｏｒａｔｉｏｎを用い、透明な上清抽出溶液８００ｍｌを８０ｍｌになるまで濃縮した。次いで、無水エタノール１５２０ｍｌを加え、最終エタノール濃度を９５％にした。溶液を３０分間放置すると、沈殿が見られた。抽出溶液を２，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離処理し、上清をデカンテーションし、さらなる処理のために保存するか、または廃棄した。沈殿前および沈殿後の物質収支を出し、多糖類の収率を算出した。沈殿を集め、５０℃のオーブンで１２時間乾燥させた。乾燥した多糖類画分の重量を測定し、水に溶解し、参照標準としてデキストランを用いた比色法で多糖類の純度を分析した。さらに、ＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量分析を用いて、多糖類画分の特性を決定した。結果を図６および図７および表１４および表１５に示す。
【０１３５】
【表１４】
2009531331.tif 000020
【０１３６】
【表１５−１】
2009531331.tif 000021
【０１３７】
【表１５−２】
2009531331.tif 000022
【０１３８】
【表１５−３】
2009531331.tif 000023
桂皮多糖類の収率は、元々の桂皮樹皮原料の１．３重量％であった。多糖類画分の純度は、２９０〜４７０ｍｇ／ｇデキストラン標準当量であり、このことは、この画分の桂皮多糖類化学構成物質の純度が９５％を超えていることを示す。沈殿前と沈殿後で、溶液中の合計フェノール酸の分析値を比較すると、沈殿はフェノール酸になんら影響を与えていないようであった。多数および多種類の実験アプローチに基づいて、収率１．３％は、天然桂皮原料に含まれる水溶性でエタノール不溶性の多糖類のほぼ１００％であると結論付けるのがきわめて妥当である。
【０１３９】
（実施例４）
（工程３の実施例：含水アルコール溶出による抽出）
桂皮種のフェノール酸化学構成物質の３段階溶媒抽出の典型的な実施例は、以下に示すとおりである。原料は、工程１の精油のＳＣＣＯ２（４０℃、３００ｂａｒ）抽出から得た、粉砕した桂皮樹皮ＳＦＥ残留物２ｇであった。溶媒は、２５％含水エタノール４０ｍｌであった。この方法では、原材料と、含水エタノール４０ｍｌとを、別々に１００ｍｌ抽出容器に入れ、４０℃の水浴で４時間混合した。粒子保持サイズ４〜８μｍのＦｉｓｈｅｒｂｒａｎｄ  Ｐ４濾紙で抽出溶液を濾過し、２０００ｒｐｍで２０分間遠心分離処理し、さらなる抽出のために粒子状残留物を使用した。収率の計算と、ＨＰＬＣ分析のために、濾液（上清）を集めた。段階１の残留物を２時間抽出し（段階２）、段階２の残留物を上述の方法を用いて２時間抽出した。物質収支、抽出物の桂皮アルデヒド（ＣＮＤ）、カテキン（Ｃ）およびエピカテキン（ＥＣ）ＨＰＬＣ分析のために上清を集めた。合計フェノール酸濃度（純度）を測定するためにＦｏｌｉｎ−Ｃｉｏｃａｌｔｅｕアッセイを用い、タンニン酸純度を測定するためにタンパク質沈殿法を用いた。結果を表１６に示す。
【０１４０】
【表１６】
2009531331.tif 000024
注：
１．ＣＮＤ＝ｔｒａｎｓ−桂皮アルデヒド；Ｃ＝（＋）−カテキン；ＥＣ＝（−）−エピカテキン；ＴＰＡ＝合計フェノール酸；ＴＡ＝タンニン酸。
【０１４１】
２．ＣＮＤ、Ｃ、ＥＣをＨＰＬＣで分析し、ＴＰＡを、Ｆｏｌｉｎ−Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ法で没食子酸を標準として用いて分析し、ＴＡをタンパク質沈殿法で分析した。
【０１４２】
Ｆｏｌｉｎ−Ｃｉｏｃａｌｔｅｕ法を検証するために、既知のフェノール酸、ケムフェロール（ｋａｅｍｐｈｅｒｏｌ）、カフェ酸、カテキンを濃度１ｍｇ／ｍｌで試験した。ケムフェロールおよびカテキンを測定する際の実験誤差は２〜４％であり、カフェ酸の場合は約１０％であった。それに加えて、ある参考文献（Ｓｉｎｄｈｕ  ２００６）では、合計フェノール酸を彼らの方法で抽出し、その結果は２８９±２．２ｍｇ没食子酸／ｇ抽出物であり、本件の結果とかなり近い。
【０１４３】
（実施例５）
（工程４の実施例  精製されたポリフェノール酸画分のアフィニティー吸着による抽出）
典型的な実験では、作業溶液は、桂皮種を工程３の含水エタノール溶出した抽出物の透明含水アルコール溶液であった。アフィニティー吸着ポリマー樹脂はＳｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０であった。アフィニティー吸着剤６ｇは、内径１．５ｃｍ、長さ１００ｃｍのカラムに充填する前に、９５％エタノール（４〜５ＢＶ）であらかじめ洗浄しておいた。充填したカラムの容積は２５ｍｌであった。桂皮の２５％エタノール段階Ｉ抽出物１００ｍｌ＋段階ＩＩ抽出物の溶液（サンプル溶液２．４ｍｇ／ｍｌ）をロータリーエバポレーターで１ｍｌになるまで濃縮し、溶媒を除去した。次いで、この濃縮した溶液に無水エタノール１９ｍｌを加え、化学構成物質を溶解させた。この溶液を２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離処理し、上清を集め、最終的なポリフェノールローディング溶液（１１ｍｇ／ｍｌ）とした。ローディング溶液１２ｍｌをカラムに入れた。ローディング溶液を入れたカラムを９５％エタノール２４０ｍｌで流速２．４ＢＶ／時間（１ｍｌ／分）で溶出時間１００分間溶出させた。溶出中、８個の非タンニンポリフェノール画分（溶出画分Ｆ１〜Ｆ８と称する）を３０ｍｌ溶出するごとに集めた。集めた画分で吸光が検出されなくなるまで、ＵＶ分光光度計で２８０ｎｍで各画分を試験した。カラムを７０％含水アセトン７０ｍｌで洗浄し、アフィニティー吸着剤に吸着したタンニンポリフェノールを流速５ＢＶ／時間（２．１ｍｌ／分）で集めた。タンニン洗浄溶液を破棄した。最後に、カラムを９５％エタノール４〜５ＢＶで洗浄し、さらなる処理を行うカラムを準備するために、任意の残った化学不純物を除去した。各ポリフェノール溶出画分を集め、分析し、結果を表１７に示す。
【０１４４】
【表１７】
2009531331.tif 000025
＊溶出物１には化学構成物質が存在せず、溶媒のみであったため、表から除外した。
【０１４５】
（実施例６）
以下の成分を以下の配合で混合する。
【０１４６】

Ｃ．ｃａｓｓｉａ樹皮の抽出物                                    １５０．０ｍｇ
精油画分（１０ｍｇ、乾燥重量６．６％）
ポリフェノール画分（１００ｍｇ、乾燥重量６６．７％）
多糖類（４０ｍｇ、乾燥重量２６．６％）
ステビオシド（Ｓｔｅｖｉａ抽出物）                              １２．５ｍｇ
カルボキシメチルセルロースラクトース                            ３５．５ｍｇ
ラクトース                                                      ７７．０ｍｇ

合計                                                            ２７５．０ｍｇ。
【０１４７】
桂皮種の新規抽出物は、精油画分、フェノール酸−精油画分および多糖類画分を含み、これらの重量％は天然根茎材料または従来の抽出生成物よりも大きい。任意の経口投薬形態で配合物を作ることができ、所望な生理学的効果および心理学的効果（脳機能の増強および鎮痛作用）および医学的効果（インスリン非依存性糖尿病、抗血小板凝集および抗血栓、心血管および脳血管の疾患予防および治療、抗アテローム性動脈硬化症、抗高コレステロール血症、心臓の保護、神経系の保護、抗炎症、抗アレルギー、抗関節炎、抗リウマチ症、抗通風、胃腸管障害、咳、風邪、発熱、脂肪分解、創傷治癒の促進、抗細菌、抗真菌および抗癌）のために必要な場合、１日１回または１日に１５回まで投与することができる。
【０１４８】
（実施例７）
以下の成分を以下の配合で混合する。
【０１４９】

Ｃ．ｃａｓｓｉａ樹皮の抽出物                                    １５０．０ｍｇ
精油画分（６０ｍｇ、乾燥重量４０％）
ポリフェノール画分（３０ｍｇ、乾燥重量２０％）
多糖類（６０．０ｍｇ、乾燥重量４０％）
ビタミンＣ                                                      １５．０ｍｇ
スクラロース                                                    ３５．０ｍｇ
緑豆粉末１０：１                                                ５０．０ｍｇ
モカフレーバー                                                  ４０．０ｍｇ
チョコレートフレーバー                                          １０．０ｍｇ

合計                                                            ３００．０ｍｇ。
【０１５０】
ｃｉｎｎａｍｏｎ  ｃｈｕａｎｇｘｉｏｎｇの新規抽出物は、精油画分、フェノール酸−精油画分および多糖類化学構成物質を含み、これらの重量％は天然根茎材料または従来の抽出生成物よりも大きい。任意の経口投薬形態で配合物を作ることができ、所望な生理学的効果、心理学的効果および医学的効果（上の実施例１を参照）のために必要な場合、毎日または１日に１５回まで投与することができる。
【０１５１】
参考文献
【０１５２】
【化２】
2009531331.tif 000026
【０１５３】
【化３】
2009531331.tif 000027
【図面の簡単な説明】
【０１５４】
【図１】図１は、桂皮抽出プロセスの例示的な模式図を示す。
【図２】図２は、精油画分を調製する例示的な方法を示す。
【図３】図３は、多糖類画分を調製する例示的な方法を示す。
【図４】図４は、溶媒溶出による抽出の例示的な方法を示す。
【図５】図５は、精製ポリフェノール画分の例示的な調製方法を示す。
【図６】図６は、桂皮多糖類のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図７】図７は、桂皮多糖類のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図８】図８は、桂皮樹皮のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図９】図９は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いたカラムクロマトグラフィーによって分離した桂皮樹皮の粗抽出物のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図１０】図１０は、７５％ＥｔＯＨ抽出溶媒を用いた桂皮樹皮ＨＳ＃１４７の粗抽出物のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図１１】図１１は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いたカラムクロマトグラフィーによって分離した画分Ｆ３のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図１２】図１２は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いたカラムクロマトグラフィーによって分離した画分Ｆ４のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図１３】図１３は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いたカラムクロマトグラフィーによって分離した画分Ｆ５のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図１４】図１４は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いたカラムクロマトグラフィーによって分離した画分Ｆ６のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図１５】図１５は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いたカラムクロマトグラフィーによって分離した画分Ｆ７のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図１６】図１６は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いたカラムクロマトグラフィーによって分離した画分Ｆ８のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図１７】図１７は、桂皮樹皮のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図１８】図１８は、７５％ＥｔＯＨ抽出溶媒を用いた桂皮樹皮ＨＳ＃１４７の粗抽出物のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図１９】図１９は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いたカラムクロマトグラフィーによって分離した桂皮樹皮の粗抽出物のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図２０】図２０は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いたカラムクロマトグラフィーによって分離した画分Ｆ３のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図２１】図２１は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いたカラムクロマトグラフィーによって分離した画分Ｆ４のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図２２】図２２は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いたカラムクロマトグラフィーによって分離した画分Ｆ５のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図２３】図２３は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いたカラムクロマトグラフィーによって分離した画分Ｆ６のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図２４】図２４は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いたカラムクロマトグラフィーによって分離した画分Ｆ７のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図２５】図２５は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いたカラムクロマトグラフィーによって分離した画分Ｆ８のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図２６】図２６は、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｒｏｓｅ  Ｈｅｒｂｓから商業的に購入した桂皮スティックのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図２７】図２７は、４０℃、１００ｂａｒでＳＣＣＯ２法によって抽出した桂皮精油のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図２８】図２８は、４０℃、３００ｂａｒでＳＣＣＯ２法によって抽出した桂皮精油のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図２９】図２９は、４０℃、５００ｂａｒでＳＣＣＯ２法によって抽出した桂皮精油のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図３０】図３０は、６０℃、１００ｂａｒでＳＣＣＯ２法によって抽出した桂皮精油のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図３１】図３１は、６０℃、３００ｂａｒでＳＣＣＯ２法によって抽出した桂皮精油のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図３２】図３２は、６０℃、５００ｂａｒでＳＣＣＯ２法によって抽出した桂皮精油のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図３３】図３３は、８０℃、１００ｂａｒでＳＣＣＯ２法によって抽出した桂皮精油のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図３４】図３４は、８０℃、３００ｂａｒでＳＣＣＯ２法によって抽出した桂皮精油のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図３５】図３５は、８０℃、５００ｂａｒでＳＣＣＯ２法によって抽出した桂皮精油のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図３６】図３６は、粗桂皮を８０％ＥｔＯＨで溶出した抽出物のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図３７】図３７は、粗桂皮のＳＣＣＯ２抽出物から得た残留物を８０％ＥｔＯＨで溶出した抽出物のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図３８】図３８は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いた、ＨＳ１１４  ＳＣＣＯ２残留物の桂皮エタノール溶出画分Ｆ４のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図３９】図３９は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いた、ＨＳ１１４  ＳＣＣＯ２残留物の桂皮エタノール溶出画分Ｆ５のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図４０】図４０は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いた、ＨＳ１１４  ＳＣＣＯ２残留物の桂皮エタノール溶出画分Ｆ６のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図４１】図４１は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いた、ＨＳ１１４  ＳＣＣＯ２残留物の桂皮エタノール溶出画分Ｆ７のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図４２】図４２は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いた、ＨＳ１１４  ＳＣＣＯ２残留物の桂皮エタノール溶出画分Ｆ８のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図４３】図４３は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いた、ＨＳ１１４  ＳＣＣＯ２残留物の桂皮エタノール溶出画分Ｆ９のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図４４】図４４は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いた、ＨＳ１１４  ＳＣＣＯ２残留物の桂皮エタノール溶出画分Ｆ１０のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図４５】図４５は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いた、ＨＳ１１４  ＳＣＣＯ２残留物の桂皮エタノール溶出画分Ｆ１１のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図４６】図４６は、ＨＳ１１４から得た桂皮粗抽出物のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図４７】図４７は、ＨＳ１１４（ＳＣＣＯ２）から得た桂皮粗抽出物のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図４８】図４８は、Ｓｅｐａｄｅｘ  ＬＨ−２０から得た、チオール分解した後の桂皮エタノール溶出画分Ｆ４のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図４９】図４９は、Ｓｅｐａｄｅｘ  ＬＨ−２０から得た、チオール分解した後の桂皮エタノール溶出画分Ｆ５のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図５０】図５０は、Ｓｅｐａｄｅｘ  ＬＨ−２０から得た、チオール分解した後の桂皮エタノール溶出画分Ｆ６のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図５１】図５１は、Ｓｅｐａｄｅｘ  ＬＨ−２０から得た、チオール分解した後の桂皮エタノール溶出画分Ｆ７のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図５２】図５２は、Ｓｅｐａｄｅｘ  ＬＨ−２０から得た、チオール分解した後の桂皮エタノール溶出画分Ｆ８のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図５３】図５３は、Ｓｅｐａｄｅｘ  ＬＨ−２０から得た、チオール分解した後の桂皮エタノール溶出画分Ｆ９のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図５４】図５４は、Ｓｅｐａｄｅｘ  ＬＨ−２０から得た、チオール分解した後の桂皮エタノール溶出画分Ｆ１０のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図５５】図５５は、Ｓｅｐａｄｅｘ  ＬＨ−２０から得た、チオール分解した後の桂皮エタノール溶出画分Ｆ１１のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陽イオンモード）を示す。
【図５６】図５６は、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｒｏｓｅ  Ｈｅｒｂｓから商業的に購入した桂皮スティックのＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図５７】図５７は、４０℃、１００ｂａｒでＳＣＣＯ２法によって抽出した桂皮精油のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図５８】図５８は、４０℃、３００ｂａｒでＳＣＣＯ２法によって抽出した桂皮精油のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図５９】図５９は、４０℃、５００ｂａｒでＳＣＣＯ２法によって抽出した桂皮精油のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図６０】図６０は、６０℃、１００ｂａｒでＳＣＣＯ２法によって抽出した桂皮精油のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図６１】図６１は、６０℃、３００ｂａｒでＳＣＣＯ２法によって抽出した桂皮精油のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図６２】図６２は、６０℃、５００ｂａｒでＳＣＣＯ２法によって抽出した桂皮精油のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図６３】図６３は、８０℃、１００ｂａｒでＳＣＣＯ２法によって抽出した桂皮精油のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図６４】図６４は、８０℃、３００ｂａｒでＳＣＣＯ２法によって抽出した桂皮精油のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図６５】図６５は、８０℃、５００ｂａｒでＳＣＣＯ２法によって抽出した桂皮精油のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図６６】図６６は、粗桂皮を８０％ＥｔＯＨで溶出した抽出物のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図６７】図６７は、粗桂皮のＳＣＣＯ２抽出物から得た残留物を８０％ＥｔＯＨで溶出した抽出物のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図６８】図６８は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いた、ＨＳ１１４  ＳＣＣＯ２残留物の桂皮エタノール溶出画分Ｆ４のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図６９】図６９は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いた、ＨＳ１１４  ＳＣＣＯ２残留物の桂皮エタノール溶出画分Ｆ５のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図７０】図７０は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いた、ＨＳ１１４  ＳＣＣＯ２残留物の桂皮エタノール溶出画分Ｆ６のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図７１】図７１は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いた、ＨＳ１１４  ＳＣＣＯ２残留物の桂皮エタノール溶出画分Ｆ７のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図７２】図７２は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いた、ＨＳ１１４  ＳＣＣＯ２残留物の桂皮エタノール溶出画分Ｆ８のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図７３】図７３は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いた、ＨＳ１１４  ＳＣＣＯ２残留物の桂皮エタノール溶出画分Ｆ９のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図７４】図７４は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いた、ＨＳ１１４  ＳＣＣＯ２残留物の桂皮エタノール溶出画分Ｆ１０のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図７５】図７５は、Ｓｅｐｈａｄｅｘ  ＬＨ−２０充填材料を用いた、ＨＳ１１４  ＳＣＣＯ２残留物の桂皮エタノール溶出画分Ｆ１１のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図７６】図７６は、ＨＳ１１４から得た桂皮粗抽出物のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図７７】図７７は、ＨＳ１１４（ＳＣＣＯ２）から得た桂皮粗抽出物のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図７８】図７８は、Ｓｅｐａｄｅｘ  ＬＨ−２０から得た、チオール分解した後の桂皮エタノール溶出画分Ｆ４のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図７９】図７９は、Ｓｅｐａｄｅｘ  ＬＨ−２０から得た、チオール分解した後の桂皮エタノール溶出画分Ｆ５のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図８０】図８０は、Ｓｅｐａｄｅｘ  ＬＨ−２０から得た、チオール分解した後の桂皮エタノール溶出画分Ｆ６のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図８１】図８１は、Ｓｅｐａｄｅｘ  ＬＨ−２０から得た、チオール分解した後の桂皮エタノール溶出画分Ｆ７のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図８２】図８２は、Ｓｅｐａｄｅｘ  ＬＨ−２０から得た、チオール分解した後の桂皮エタノール溶出画分Ｆ８のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図８３】図８３は、Ｓｅｐａｄｅｘ  ＬＨ−２０から得た、チオール分解した後の桂皮エタノール溶出画分Ｆ９のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図８４】図８４は、Ｓｅｐａｄｅｘ  ＬＨ−２０から得た、チオール分解した後の桂皮エタノール溶出画分Ｆ１０のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図８５】図８５は、Ｓｅｐａｄｅｘ  ＬＨ−２０から得た、チオール分解した後の桂皮エタノール溶出画分Ｆ１１のＡｃｃｕＴＯＦ−ＤＡＲＴ質量スペクトル（陰イオンモード）を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
2009531331.tif 000034
【図８】
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【図９】
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【図１０】
2009531331.tif 000037
【図１１】
2009531331.tif 000038
【図１２】
2009531331.tif 000039
【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
2009531331.tif 000061
【図３５】
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【図３６】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０】
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【図４１】
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【図４２】
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【図４３】
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【図４４】
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【図４５】
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【図４６】
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【図４７】
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【図４８】
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【図４９】
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【図５０】
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【図５１】
2009531331.tif 000078
【図５２】
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【図５３】
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【図５４】
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【図５５】
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【図５６】
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【図５７】
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【図５８】
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【図５９】
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【図６０】
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【図６１】
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【図６２】
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【図６３】
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【図６４】
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【図６５】
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【図６６】
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【図６７】
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【図６８】
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【図６９】
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【図７０】
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【図７１】
2009531331.tif 000098
【図７２】
2009531331.tif 000099
【図７３】
2009531331.tif 000100
【図７４】
2009531331.tif 000101
【図７５】
2009531331.tif 000102
【図７６】
2009531331.tif 000103
【図７７】
2009531331.tif 000104
【図７８】
2009531331.tif 000105
【図７９】
2009531331.tif 000106
【図８０】
2009531331.tif 000107
【図８１】
2009531331.tif 000108
【図８２】
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【図８３】
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【図８４】
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【図８５】
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【国際調査報告】
2009531331.tif 000113