(57)【要約】  本発明はオクラの実の莢から高分子量のペクチン様多糖類を製造する方法に関する。当該高分子ペクチン様多糖類は、緩衝液に溶解すると粘弾性特性を示し、眼科手術、皮膚科および整形外科のような応用面で非常に有用である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）オクラの実の莢を細かく分割し、
ｂ）前記分割した実の莢および水性抽出媒体の水性混合物を調製し、前記混合物は４から１２の範囲内のｐＨを有し、
ｃ）前記分割した実の莢から前記抽出媒体へペクチン様多糖類の抽出が生じるのに十分な時間、前記水性混合物を放置し、
ｄ）前記水性混合物から前記分割した実の莢を分離してペクチン様多糖類の水性抽出物を形成させ、
ｅ）前記抽出物に塩を添加し、
ｆ）ろ過材を通して前記抽出物をろ過し、及び、
ｇ）前記ろ過抽出物から水混和性有機溶媒により前記ペクチン様多糖類を沈殿させてペクチン様多糖類の沈殿物を形成させ、前記沈殿操作は場合により１回以上繰り返す、
ことを含む、オクラの実の莢からペクチン様多糖類を製造する方法。
【請求項２】
工程ａ）からｇ）を連続した順序で実施する、請求項１の方法。
【請求項３】
工程ｄ）の後に、工程ｄ）で分離したオクラの実の莢を用いて工程ｂ）〜ｄ）を１回またはそれ以上繰り返し、工程ｄ）で得た２つまたはそれ以上の水性抽出物を工程ｅ）実施前に混ぜ合わせる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ろ過材は０．５μｍ未満のメッシュサイズを有している、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記ろ過材はセルロース系ろ過材である、請求項１〜４のいずれ１項に記載かの方法。
【請求項６】
前記濾過は≦０．２２μｍのメッシュサイズを有するセルロースろ過材で実施される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記実の莢と前記水性抽出媒体の重量比が１：１から１：８の範囲である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記抽出中において前記水性混合物を少なくとも２ｒｐｍの速度で攪伴する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記沈殿物を有機溶媒中で保存する工程を更に含む、請求項１〜８のいずれかの方法。
【請求項１０】
前記沈殿物を乾燥する工程を更に含む、請求項１〜９のいずれかの方法。
【請求項１１】
前記水性混合物のｐＨが８から１２の範囲内である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記水性混合物のｐＨが１０から１２の範囲内である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記抽出を４〜４８時間実施する、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記抽出中の温度が１５から４０℃の範囲内である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記塩を少なくとも０．５％（ｗ／ｖ）の量で添加する、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記塩がアルカリ金属塩である、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
構造が→２‐α‐Ｌ‐Ｒｈａｉ‐（１→４）‐α‐Ｄ‐ＧａｌＡｉｖ‐（１→２）［β‐Ｄ‐Ｇａｌｖｉ‐（１→４）‐β‐Ｄ‐Ｇａｌｖ‐（１→４）］α‐Ｌ‐Ｒｈａｉｉｉ‐（１→４）‐α‐Ｄ‐ＧａｌＡｉｉ（１→、であるペクチン様多糖類であって、１．５ＥＵ／ｍｌ未満のエンドトキシンのレベルを有するペクチン様多糖類。
【請求項１８】
少なくとも１×１０６Ｄａの平均分子量を有する、請求項１７に記載のペクチン様多糖類。
【請求項１９】
水または生理的緩衝液に溶解すると本質的に透明な溶液を与える、請求項１７または１８に記載のペクチン様多糖類。
【請求項２０】
請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類および水を含んでいる医薬用組成物。
【請求項２１】
請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類および生理的緩衝液を含む医薬用組成物。
【請求項２２】
０．１〜２０％のペクチン様多糖類を含む、請求項２０または２１に記載の医薬用組成物。
【請求項２３】
１．０ｍ３／ｋｇより大きな固有粘度ηを有する、請求項２０〜２２のいずれか１項に記載の医薬用組成物。
【請求項２４】
薬剤として使用する、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類。
【請求項２５】
眼科疾患の手術による治療用の医薬組成物の製造のための、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類の使用。
【請求項２６】
前記眼科疾患が白内障である、請求項２５に記載の使用。
【請求項２７】
整形外科疾患の手術による治療用の医薬組成物の製造のための、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類の使用。
【請求項２８】
皮膚科疾患の手術による治療用の医薬組成物の製造のための、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類の使用。
【請求項２９】
オフサルミックビスコサージカルデバイス（ＯＶＤ）としての、請求項２０〜２３のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項３０】
整形外科手術における、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類の使用。
【請求項３１】
薬物送達における、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類の使用。
【請求項３２】
皮膚科での応用のための、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類の使用。
【請求項３３】
化粧品での応用のための、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類の使用。
【請求項３４】
眼科疾患の手術による治療用の、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類。
【請求項３５】
前記眼科疾患が白内障である、請求項３４に記載のペクチン様多糖類。
【請求項３６】
整形外科疾患の手術による治療用の、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類。
【請求項３７】
皮膚科疾患の手術による治療用の、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類。
【請求項３８】
請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類をヒトまたは動物に治療効果量で投与する、眼科疾患の手術による治療用の方法。
【請求項３９】
前記眼科疾患が白内障である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類をヒトまたは動物に治療効果量で投与する、整形外科疾患の手術による治療用の方法。
【請求項４１】
請求項１７〜１９のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類をヒトまたは動物に治療効果量で投与する、皮膚科疾患の手術による治療用の方法。
【請求項４２】
ａ）オクラの実の莢を細かく分割し、
ｂ）前記分割した実の莢の水性混合物を調製し、前記混合物は４から１２の範囲内のｐＨを有し、
ｃ）前記分割した実の莢からペクチン様多糖類の抽出が生じるのに十分な時間、前記水性混合物を放置し、
ｄ）前記水性混合物から前記分割した実の莢を分離してペクチン様多糖類の水性抽出物を形成させ、
ｅ）前記抽出物に塩を添加し、
ｆ）ろ過材を通して前記抽出物をろ過し、
ｇ）水混和性の有機溶媒により前記ろ過抽出物から、前記ペクチン様多糖類を沈殿させてペクチン様多糖類沈殿物を形成させ、前記沈殿操作は場合により１回以上繰り返し、及び、
ｈ）前記ペクチン様多糖類の沈殿物を水および／または生理的緩衝液に溶解して粘性医薬用組成物を形成させる、
ことを含む、粘性医薬用組成物の製造方法。
【請求項４３】
前記粘性医薬用組成物は１．０ｍ３／ｋｇより大きな固有粘度ηを有する、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記粘性医薬用組成物はオフサルミックビスコサージカルデバイスである、請求項４２または４３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（本発明の分野）
本発明は高分子量多糖類を製造する方法に関する。本発明は更に眼科手術、皮膚科および整形外科における前記多糖類の利用に関する。
【背景技術】
【０００２】
（本発明の背景）
ビスコサージャリーは、壊れやすい組織を保護、取扱および分離するための手術用装備または移植片として外科処置を補助するのに粘弾性液（または粘弾性物（ｖｉｓｃｏｅｌａｓｔｉｃｓ））が使用される手術を表すのにしばしば使われる用語である。粘弾性物という用語は非常に幅広く、眼科、皮膚科および整形外科におけるような応用のための物質が含まれる。
【０００３】
オフサルミックビスコサージカルデバイス（ＯＶＤｓ）は通常眼科学で使用される粘弾性液体のための好まれる専門用語である（Ａｒｓｈｉｎｏｆｆ  Ｓ．，“Ｎｅｗ  ｔｅｒｍｉｎｏｌｏｇｙ：Ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｖｉｓｃｏｓｕｒｇｉｃａｌ  ｄｅｖｉｃｅｓ”、Ｊ．Ｃａｔａｒａｃｔ  Ｒｅｆｒａｃｔ  Ｓｕｒｇ（２０００）２６：６２７〜６２８。ＯＶＤｓは通常様々な異なる眼科手術、特に白内障手術および眼球内レンズの移植に使用される。
【０００４】
眼のレンズの混濁は、老人で一般的に進行する白内障を引き起こす。白内障手術は一般的に眼のレンズの除去が含まれる。当該手術にＯＶＤｓを用いる主な目的は深前房を維持し、角膜内皮を保護し、そして手術処置を容易にするのが主な目的である。当該内皮を保護するため、粘弾性デバイスは良好な皮膜性を有せねばならない。更に、当該粘弾性物質は視覚化を妨げないために透明でなければならない。炎症反応を避け、眼球内圧の許されない増加を避けるため、当該物質に毒性がないことが非常に重要なことである。
【０００５】
望ましい粘弾性物質は比較的注入が容易なものである。レオロジー的な性質の疑似塑性は注入の容易さに影響する。疑似塑性材料の粘度はせん断速度が増すに従い減少する。高せん断速度で高粘度でありすぎると、当該粘弾性物質は注入が難しくなる。加えて、当該手術器具は手術においてＯＶＤ中で容易に作動しない。望ましい粘弾性物質は眼の内外で器具の操作、眼球内レンズ（ＩＯＬ）の注入および配置を妨害しない。そこで、最も適した物質は高せん断速度にては低粘度を有する。
【０００６】
手術において、当該粘弾性物は切り込みから漏れ出てはならず、好ましくは当該物質が手術の異なる工程、特に前房が陽圧である場合に保持される。水晶体超音波乳化吸引術の間で保持に影響するパラメーターは凝集性である。凝集性生成物は簡単に吸引されるので、手術の間に眼の中に維持するのはより難しいはずである。分散性生成物はよりよく保持されるが、除去する際には難しさが生じる。望ましいのは、粘弾性物質が簡単に除去されることである（Ｈ．Ｂ．Ｄｉｃｋ，Ｏ．Ｓｃｈｗｅｎｎ“Ｖｉｓｃｏｅｌａｓｔｉｃｓ  ｉｎ  ｏｐｈｔｈａｌｍｉｃ  ｓｕｒｇｅｒｙ”（２０００），Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ  Ｂｅｒｌｉｎ  Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照）。
【０００７】
様々な重合体組成物の粘性物質が動物およびヒトの眼には以前から使用され、前房深を維持する目的に供された。ＭｅｙｅｒとＰａｌｍｅｒは硝子体液からヒアルロン酸を１９３４年に単離した。科学者のＥｎｄｒｅ  Ｂａｌａｚｓはヒアルロン酸が人工的水晶体の開発において理想的な物質であることを見出し、この発見が最終的に前眼部手術においてヒアルロン酸の実装を導いた（上記Ｈ．Ｂ．Ｄｉｃｋ等を参照）。ＯＶＤｓとして使用する異なる粘弾性物質がある。よく通常に使用されているのは、以下の物質である：ヒアルロン酸ナトリウム（ＮａＨａ）およびヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）である。
【０００８】
ヒアルロナンまたはヒアルロン酸とも呼ばれるヒアルロネートは、直線的なポリアニオン性のペクチン様多糖類分子でほぼすべての脊椎動物の結合組織に見いだされる。当該分子はグルクロン酸およびＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンからなる。これはプロトン化した酸の形ではなくほぼ通常的にポリアニオンとして存在するので、ヒアルロネートと呼ばれる。ヒアルロネートは広く脊椎動物中に分布し、ある種の細菌株の細胞壁の成分である。眼の中には高濃度のＮａＨａがある。ＮａＨａは体中で完全に代謝され、前房中に残存する少量も眼科手術後には体中で分解される。ＮａＨａの最も重要な機能は細胞と組織の安定化、衝撃吸収および胚発生における使用である（上記Ｈ．Ｂ．Ｄｉｃｋ等およびＴ．Ｃ．Ｌａｕｒｅｎｔ“Ｔｈｅ  ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｍｅｄｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ”，Ｗｅｎｎｅｒ−Ｇｒｅｎ  ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ｓｅｒｉｅｓ，ｖｏｌ．７２，１９９０参照。現在ヒアルロン酸（ＨＡ）の抽出のための種々な既存の方法および起源がある。
【０００９】
高分子量のヒアルロン酸は現在市販され、通常は鶏のトサカから抽出される。高分子量のヒアルロナンについて動物組織からの他の起源には臍帯、硝子体液および滑液のように幾つかある。研究の結果は異なる起源から単離したＮａＨａは異なる不純物を含有していることを示す。臍帯およびウシ硝子体液からのＮａＨａは鶏のトサカからのＮａＨａより高い核酸およびタンパク質の含量を有する（Ｓｈｉｅｄｌｉｎ等，“Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｈｙａｌｕｒｏｎａｎ  ｆｒｏｍ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ  ｓｏｕｒｃｅｓ：Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｚｏｏｅｐｉｄｅｍｉｃｕｓ、ｒｏｏｓｔｅｒ  ｃｏｍｂ，ｂｏｖｉｎｅ  ｖｉｔｒｅｏｕｓ  ａｎｄ  ｈｕｍａｎ  ｕｍｂｉｌｉｃａｌ  ｃｏｒｄ”，Ｂｉｏｍａｃｒｏｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ２００４  ５（６）：２１２２〜７）。しかしながら、医療的応用における動物由来に関する１つの問題は炎症反応を生じる危険性である。現在、市場は鳥インフルエンザを高い可能性のある脅威であると考えている。更に、動物起源を公然と使用するには倫理的側面で複雑である。
【００１０】
溶血性ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉ  ＡとＢおよびｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｕｓはヒアルロネートを製造するために商業的に使用されている細菌である（ＷＯ  ２００５０９８０１６およびＵＳ  ４１４１９７３参照）。ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｉおよびｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｕｓの発酵によりＮａＨａを製造すると、当該分子量は鶏のトサカからの抽出物と比較して相当低い。更に、核酸およびタンパク質の含量は鶏のトサカから単離したＮａＨａより高い。
【００１１】
ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ＨＰＭＣはヒアルロン酸の代替物である。本来メチルセルロースは例えば綿および木材に広く分布しているが、動物やヒトには存在しない。ヒドロキシプロピルメチルセルロースはメチルセルロースから製造される。ＨＰＭＣはグルコースの長鎖からなり、そのヒドロキシ基はメトキシ−およびヒドロキシプロピル側鎖で置換されている。ＨＰＭＣは動物やヒトには存在していないので、それは生理的なものではないことを意味している。従って、倫理的側面は動物起源が使用されるときと比べて問題でない。しかしながら、ＨＰＭＣが眼科用粘弾性デバイスとして使用される際の一つの問題は前房において完全には代謝されないことである。更に、ＨＰＭＣにおける植物繊維は炎症性反応を生じる可能性がある。加えて、ＨＰＭＣの疑似塑性はヒアルロン酸ナトリウムの生成物の多くにおけるより顕著に低い。概して、せん断速度０における粘度はヒアルロン酸に基づく生成物がＨＰＭＣに基づく生成物より数倍大きい。更に、ヒアルロン酸に基づく生成物の分子量はＨＰＭＣの分子量より顕著に高い。手術後に粘弾性生成物の除去、特にＨＰＭＣを吸引する際に難しさが生じる。
【００１２】
結論として、眼科、皮膚科および整形外科において上記の問題を起こさない代替粘弾性物質についての必要性がある。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
（本発明の概要）
そこで、本発明の目的は粘弾性物質を製造する方法を提供してこの必要性を満足させることである。
【００１４】
本発明の他の目的は、粘弾性組成物を提供することである。
【００１５】
本発明の他の目的は眼科、皮膚科および整形外科で使用する粘弾性組成物を提供することである。
【００１６】
本発明のこれらおよび他の目的は添付請求項にて請求するような本発明の態様を満足させることである。そこで、最初の態様では、本発明はオクラの実の莢からペクチン様多糖類を製造する方法を提供するが、これは：
ａ）オクラの実の莢を細かく分割し、
ｂ）分割した実の莢および水性抽出媒体の混合物を調製し、前記混合物は４から１２の範囲内のｐＨを有し、
ｃ）当該分割した実の莢から当該抽出媒体へペクチン様多糖類の抽出が生じるのに十分な時間、当該水性混合物を放置させ、
ｄ）当該水性混合物から当該分割した実の莢を分離してペクチン様多糖類の水性抽出物を形成させ、
ｅ）当該抽出物に塩を添加し、
ｆ）ろ過材を通して当該抽出物をろ過し、及び、
ｇ）当該ろ過抽出物から水混和性有機溶媒によりペクチン様多糖類を沈殿させてペクチン様多糖類の沈殿を形成させ、前記沈殿操作は場合により１回以上の繰り返す、
ことを含んでいる。
【００１７】
当該方法は工程をいずれの順番で行ってもよい。好ましくは、当該方法はａ）からｇ）を連続的順番で実施する。
【００１８】
当該方法が連続的に行う場合、工程ｄ）の後に工程ｄ）で分離したオクラの実の莢を用いて１回以上工程ｂ）〜ｄ）を繰り返してもよく、工程ｄ）で得られた２つ以上の水性抽出物は工程ｅ）の前で混合することができる。
【００１９】
オクラからのペクチン様多糖類の抽出と精製用には異なる方法が存在する。例えば、ＵＳ  ４１５４８２２は植物組織からの多糖類材料の抽出、精製および沈殿についての方法を記載しており、均一化、数工程の遠心分離、透析および段階的沈殿操作を含んでいる。ＵＳ  ６１２４２４８では、分類学上のＭａｌｖａｃｅａｅ科からの種のような粘液質植物からの粘液を抽出する方法が記載されている。当該粘液は潤滑剤および／または冷却剤として使用する。当該方法は数回の抽出循環に基づき、更なる沈殿の工程はない。しかしながら、これらの方法は本発明による方法よりは面倒である。更に、それらはより経費がかかり、収率がより低くなる。加えて、高速度および５００℃のような高温での遠心分離工程を含むこれまでの方法は粘弾性特性の面を失う危険性が含まれる。本発明による方法はこれらの問題を解決する。
【００２０】
本発明の他の態様によれば、ペクチン様多糖類の構造→２−α−Ｌ−Ｒｈａｉ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｉｖ−（１→２）［β−Ｄ−Ｇａｌｖｉ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇａｌｖ−（１→４）］α−Ｌ−Ｒｈａｉｉｉ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｉｉ−（１→で、１．５ＥＵ／ｍｌ未満のエンドトキシンのレベルを有するペクチン様多糖類が提供される。
【００２１】
オクラは普通名詞Ａｂｅｌｍｏｓｃｈｕｓ  Ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｓ（Ｈｉｂｉｓｃｕｓ  Ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｓと同義語）である。他の普通名詞はレディーズフィンガー、オクラまたはビンディである。オクラはＭａｌｖａｃｅａｅ科に属する。当該植物の花はハイビスカス様で、開花したあと食用になる莢が形成される。オクラの実は５角形、小さく、円筒状莢、２〜１２インチで粘性物質を含有する。その粘液は通常料理において増粘剤として使用される。オクラの料理での使用は医療分野とともに長い歴史がある。
【００２２】
オクラの実の莢の粘液から単離したペクチン様多糖類は生理的緩衝液に溶かすと粘弾性物質として使用するのに適した粘弾性特性を有することを、本発明者は見出した。
【００２３】
用語「生理的緩衝液」は緩衝溶液または少量の酸または塩基の添加あるいは希釈におけるヒドロニウムイオンおよび水酸化物イオン濃度（および結局はｐＨ）の変化に抵抗する溶液に関する。当該緩衝溶液には、これに限らないが、リン酸緩衝液、カリウム緩衝液、酢酸およびカルシウム緩衝液が含まれる。
【００２４】
本発明の中で生理的緩衝液として使用できる幾つかの溶液は、当技術分野の当事者であれば知っている。
【００２５】
更に、本発明の発明者は生理的緩衝液に溶解したオクラからのペクチン様多糖類のレオロジー的特性はＨＰＭＣよりもヒアルロン酸のレオロジー的特性を呈することを見出した。
【００２６】
更に他の態様によれば、上で言及した構造のペクチン様多糖類および水および／または生理的緩衝液を含む医薬用組成物提供する。
【００２７】
本発明のペクチン様多糖類は薬剤としても使用可能である。
【００２８】
本発明は、白内障のような眼科の疾患、整形外科の疾患および皮膚科の疾患の手術による治療用の医薬組成物製造のための前記ペクチン様多糖類の使用にも関する。
【００２９】
更に、本発明は上記疾患の治療方法に関する。
【００３０】
「治療」は疾患の症状を軽減、または例えば粘弾性生成物の手術への使用において手術を容易にするいずれの治療も意味する。
【００３１】
本発明のペクチン様多糖類は整形外科手術、皮膚科または薬物送達にも使用できる。
【００３２】
本発明はまた化粧品、即ち非医療目的での応用におけるペクチン様多糖類の使用に関する。
【００３３】
更に他の態様では、本発明は粘性医薬用組成物の製造のための方法に関する。
【００３４】
当該粘弾性は主に当生成物の高分子量によってきまる。当該粘弾性特性が溶解したペクチン様多糖類を、例えば眼科、整形外科および皮膚科で使用するのに適したものにする。望ましい粘弾性特性を得るために当該分子量は少なくとも１×１０６Ｄａでなければならない。本発明のペクチン様多糖類はこの基準を満足させる。
【００３５】
本発明の将来的および他の態様は以下の詳細な説明から明らかとなる。
【課題を解決するための手段】
【００３６】
（本発明の詳細な説明）
以降はペクチン様多糖類と称する本物質は、天然に生じる高分子のペクチン様多糖類でガラクトースとラムノースからなる。ペクチン様多糖類はオクラの実の莢中に見いだされる。当該物質は実の組織から抽出され、精製される。当該物質は安定で生理的食塩水に容易に溶解する。当該ペクチン様多糖類の分子量は１０６Ｄａ程度であると報告されている（心拍出量の亢進用の多糖類、ＵＳ  ４１５４８２２）。以下に記載する方法によれば、少なくとも１×１０６Ｄａ、好ましくは１．５×１０６〜６．５×１０６Ｄａの分子量が水抽出でオクラの実の莢から得られる。
【００３７】
抽出媒体のｐＨはペクチン様多糖類の収率に影響する。アルカリ条件側のｐＨがより高い収率を生じる。あまりに高いｐＨではペクチン様多糖類を分解するので、生成物の分子量にも影響を与える。抽出の媒体のｐＨは４〜１２の間隔にすべきである。好ましくは、当該ｐＨは６〜１２または８〜１２あるいは１０〜１２の間である。当該抽出媒体のアルカリ性は種々のアルカリ性物質、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム、水酸化アンモニウム、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムのような無機アルカリ類または有機塩基が含まれる。アルカリ性物質の混合物であっても使用できる。
【００３８】
抽出の温度は抽出の時間に影響する。抽出の温度範囲は１５〜４０℃内である。１９〜２１℃が抽出に好ましい温度範囲である。
【００３９】
当該抽出を実施するのに必要な時間はｐＨ、温度、時間および実の莢組織の性質などの因子に依存する。オクラの薄片からのペクチン様多糖類の拡散が制限因子と思われる。そこで当該実の莢組織の大きさと厚さが決定的に重要である。抽出前のオクラ実の莢の薄片化が相当重要である。薄片が厚いほど抽出の時間が長くなる。オクラ実の薄片の抽出の時間は４〜４８時間、好ましくは６〜２４時間の範囲が良い。オクラ１〜３ｍｍ厚さである実薄片の抽出の好ましい時間は２４時間である。しかしながら、６時間のような短時間でも非常に良好な結果を生じた。
【００４０】
抽出の効率はｐＨ、時間、実の材料と抽出媒体の比、攪拌力および液体と組織の比のような幾つかの因子に依存する。１回または２回抽出の工程を繰り返すことにより、できる限りの高い収率を得ることが可能である。好ましくは、当該抽出は少なくとも１回繰り返す。更に、抽出中はゆっくりとした混合が好ましい。
【００４１】
攪拌の速度は好ましくは少なくとも２ｒｐｍである。
【００４２】
抽出液体の実組織との比の選択に関して、含まれる幾つかの重要な態様がある。抽出液の量は実の莢の全ての薄片を覆わなければならない。液体の量はペクチン様多糖類が低濃度になるのであまり多くてもいけない。抽出物低濃度では沈殿させるのに多くの溶液量が必要となる。
【００４３】
そこで、オクラの実の莢と水系抽出媒体の間の比は１：１〜１：８の範囲内がよい。
【００４４】
当該抽出物はろ過材を通過させて精製する。好ましくはセルロース系ろ過材を通してろ過して行う。当該ろ過材は好ましくは０．５ミクロン、好ましくは０．２２ミクロン以下の網目サイズを有する。これが低いエンドトキシンを伴う発明のペクチン様多糖類を提供する。更に、当該多糖類組成物は澄んだ透明な溶液を与え、眼科手術で使用するのに適している。
【００４５】
当該ペクチン様多糖類の沈殿は水に可溶な溶媒で、アセトン、エタノール、イソプロパノールなどのようなもので行われる。沈殿は酢酸、塩酸、硫酸などのような酸、塩化ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化カリウムなどのような塩の存在で行うことができる。当該塩を少なくとも０．５％（ｗ／ｖ）の量で添加する。ペクチン様多糖類およびその塩の沈殿物は通常繊維形または粉末である。当該生成物を洗浄するには沈殿で使用したのと同じ溶媒が使用できる。当該生成物を溶解しない他の溶媒は洗浄に使用することができる。
【００４６】
洗浄後、当該生成物はエタノール、アセトンなどのような有機溶媒中に保存できる。当該洗浄した生成物は、例えば真空乾燥機またはデシケーター中で乾燥もできる。
【００４７】
本発明による多糖類は水または生理的緩衝液中に溶解すると本質的に透明な溶液を提供する。これは当該多糖類をＯＶＤとして使用するときに、眼中の手術において何が起きるか医者が目で見ながら行うことが必要なので非常に重要である。
【００４８】
ペクチン様多糖類および水を含んでいる医薬用組成物は容易に調製できる。それは生理緩衝液も含有することができる。
【００４９】
更に、当該医薬用組成物は０．１〜２０％のペクチン様多糖類を含むことができる。それは１．０ｍ３／ｋｇ（１．０×１０６Ｄａの分子量に相当する）より大きな固有粘度ηを有するであろう。
【００５０】
加えて、上で説明したペクチン様多糖類はいかなる眼科疾患の手術による治療にも使用できるであろう。当該眼科疾患は白内障であってもよい。
【００５１】
当該医薬用組成物はオフサルミックビスコサージカルデバイス（ＯＶＤ）として使用もできる。ペクチン様多糖類の高粘度および高純度は、当該ペクチン様多糖類が動物起源ではないことおよびそれにより患者において炎症性反応を起こしにくいことと組合さって、ペクチン様多糖類がＯＶＤとして使用するのに適することになる。
【００５２】
更に、当該ペクチン様多糖類は整形外科の手術或いは薬物送達において使用することもできる。上で述べたペクチン様多糖類が高粘度と高純度なので、当該発明の多糖類が当該使用に適するようになるが、それは実施例にてより詳細に説明する。
【００５３】
当該ペクチン様多糖類または当該医薬用組成物は、皮膚科疾患の手術での治療のような皮膚科での応用で使用することができる。
【００５４】
当該ペクチン多糖類は、例えばシワの軽減およびシワをのばす目的の化粧品への応用にても使用することができる。当該応用は非医療分野である。
【００５５】
当該ペクチン様多糖類を化粧品への応用で使用すると、化粧品処方または製品の形では、例えばフェイシャルローションの形をとる。
【００５６】
また当該ペクチン様多糖類は、例えば注射器を用いた投与のように皮下投与用に処方される。
【００５７】
当該組成物またはペクチン様多糖類は関節を侵す疾患の治療用の方法において、当該治療が必要なヒトまたは動物に当該ペクチン様多糖類、または医薬用組成物を治療的効果ある量で投与して使用することができる。治療効果ある量とは、患者を治療し、前記疾患や病気の患者の症候群を軽減するのに十分な量を意味する。
【００５８】
当該組成物またはペクチン様多糖類は、皮膚科学的または外見上の傷害の治療における方法でも、当該治療を必要とするヒトまたは動物にペクチン様多糖類を治療上効果的な量で投与する方法で用いることもできる。治療的に効果量とは患者を治療する、または前記疾患の患者症候群を軽減することを意味する。
【００５９】
更に、当該ペクチン様多糖類は治療を必要とするヒトまたは動物に治療上効果的な量でペクチン様多糖類を投与して白内障を治療するための方法において使用できる。治療的に効果量とは患者を治療し、または前記疾患の患者症候群を軽減するのに十分な量を意味する。
【００６０】
本発明によれば、粘性のある医薬用組成物を製造するための方法も提供するが、これには：
ａ）オクラの実の莢を細かく分割し、
ｂ）当該分割した実の莢の水性混合物を調製し、前記混合物は４から１２の範囲内のｐＨを有し、
ｃ）当該分割した実の莢からペクチン様多糖類の抽出が生じるのに十分な時間、当該水性混合物を放置し、
ｄ）当該水性混合物から当該分割した実の莢を分離してペクチン様多糖類の水性抽出物を形成させ、
ｅ）当該抽出物に塩を添加し、
ｆ）ろ過材を通して当該抽出物をろ過し、
ｇ）当該ろ過抽出物から水混和性有機溶媒により前記ペクチン様多糖類を沈殿させてペクチン様多糖類の沈殿物を形成させ、前記沈殿操作は場合により１回以上繰り返し、及び、
ｈ）前記ペクチン様多糖類の沈殿物を水および／または生理的緩衝液に溶解して粘性医薬用組成物を形成させる、
ことが含まれる。
【００６１】
オクラの実の莢からペクチン様多糖類を製造するための方法と同じ条件、例えば、当該混合物のｐＨは好ましくは６から１２、より好ましくは８から１２、及び、かなり好ましくは１０から１２の範囲内のｐＨである、を上の方法に応用する。
【００６２】
当該粘性の医薬用組成物は１．０ｍ３／ｋｇより大きな固有粘度、ηを有するのが良い。
【００６３】
一つの実施態様によれば、上記方法において当該粘性医薬用組成物はオフサルミックビスコサージカルデバイスである。
【００６４】
ＮＭＲ（１Ｄおよび２Ｄ）、元素分析およびＨＰＬＣによる糖分析により当該物質を同定した。
【００６５】
ペクチン様多糖類は、ＫｉｎｂｅｒｌｅｙとＢｕｃｈａｎａｎ−Ｓｍｉｔｈ（Ｋｉｍｂｅｒｌｅｙ  ａｎｄ  Ｂｕｃｈａｎａｎ−Ｓｍｉｔｈ，“Ａ  ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｑｕａｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｕｒｏｎｉｃ  Ａｃｉｄｓ  ａｎｄ  ａ  Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  Ｇａｌａｃｔｕｒｏｎｉｃ  ａｃｉｄ”，Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２０１，１９０−１９６（１９９２）に記載されているカルバゾール定量法で測定される。
【００６６】
当該タンパク質含量はＬｏｗｒｙのフェノール試薬法で定量される。
【００６７】
無菌性はＥｕｒｏｐｅａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｅｉａ中の方法２．６．１で管理される。当該エンドトキシン値は同じように測定される。
【００６８】
弾性係数Ｇ’および粘性係数Ｇ’’の測定によりレオロジー特性化が行われる。
【００６９】
固有粘度は従来方法で測定される。
【００７０】
精製した繊維は例えば生理食塩緩衝液の中に溶解する。当該物質は０．１％〜２０％（ｖ／ｖ）の間の濃度で容易に溶解する。
【００７１】
以下の実施例はオクラの実の莢からペクチン様多糖類を調製する好ましい方法および当該多糖類の応用について説明する。
【実施例】
【００７２】
（例１）
オクラの実の莢を約２ｍｍに薄く切る。純水中０．５Ｍ  ＮａＯＨを５リットル加える。当該混合物を室温（２０℃）でｐＨ１１にて２４時間ゆっくりと攪伴する。残存実の組織はナイロン網を通すろ過により当該抽出物から分離する。当該抽出物は冷却室に４〜８℃の温度で保存する。
【００７３】
当該ペクチン様多糖類含量は５６．２３％、タンパク質含量は０．０１６％および固有粘度は３．４０ｍ３／ｋｇである。
【００７４】
二回目の抽出は同じオクラ実材料を用いて実施する。当該実組織に３リットルの精製水を加え、ｐＨは１１である。当該抽出時間は室温で緩やかに攪伴しながら２４時間である。当該形成した抽出物は最初の抽出物と同じに処理する。当該ペクチン様多糖類含量は５１．６８％、タンパク質含量は＜０．０１０ｍｇ／ｍｇおよび当該固有粘度は４．２６ｍ３／ｋｇである。
【００７５】
三回目の抽出は二回目と同じに行う。当該ペクチン様多糖類含量は４７．５６％、タンパク質含量＜０．０１０ｍｇ／ｍｇおよび当該固有粘度は４．０１ｍ３／ｋｇである。
【００７６】
かくして得た三回の抽出物を一つの液にして、０．５８％食塩を添加する。当該溶液は０．２μｍセルロースろ過材を通してろ過する。
【００７７】
当該ペクチン様多糖類をエタノールで沈殿させ、それにより白色糸状繊維質物質が生じる。そののち、当該繊維をエタノールおよびアセトンで洗浄する。
【００７８】
当該繊維を真空乾燥機で４８〜７２時間乾燥する。
【００７９】
当該乾燥繊維の全乾燥重量は１０．７２ｇである。最終的に当該繊維を分析すると、ペクチン様多糖類含量は５８％で、固有粘度は４．４２ｍ３／ｋｇである。当該タンパク質含量は＜０．１０ｍｇ／ｍｌである。
【００８０】
（例２）
例２は、抽出中におけるｐＨの点を除き例１で記述した方法に従って行う。当該ｐＨは酢酸で４〜５に調節する。
【００８１】
当該繊維の全乾燥重量は９．７７３ｇである。最終的に当該繊維を分析するとペクチン様多糖類含量は５７．０５％で、タンパク質の含量は０．３６ｍｇ／ｇおよび当該固有粘度は３．４０ｍ３／ｋｇである。
【００８２】
（例３）
例３は、抽出中におけるｐＨの点を除き例１で記述した方法に従って行う。当該ｐＨは酢酸で７〜８に調節する。
【００８３】
当該繊維の全乾燥重量は５．０７０ｇである。最終的に当該繊維を分析するとペクチン様多糖類含量は４８．１０％で、タンパク質の含量は０．０８４ｍｇ／ｇおよび当該固有粘度は０．９８ｍ３／ｋｇである。
【００８４】
【表１】
2009536232.tif 000002
【００８５】
表１では、ｐＨ１１で最も高い分子量を与えることが明らかに見ることができる。
【００８６】
要約すると、当該新方法はオクラ実の莢から高分子量のペクチン様多糖類を高収率で抽出および精製するための簡単で、改良された工程である。
【産業上の利用可能性】
【００８７】
（応用分野）
【００８８】
（例４）
（眼科手術における粘弾性物質の利用）
眼科手術における粘弾性体の主な機能は前房を保持し、機械的負担から内皮を保護することである。理論的に、粘度が高ければ高いほど安静時の前房深度の維持がより良好である。オクラから抽出した物質は生理的な緩衝液に溶解すれば粘弾性組成物となる。眼科手術において、当該粘弾性組成物を必要とする病気のヒトまたは動物の深前房に注入する。当該溶液の効果量は通常０．５５ｍｌと０．８５ｍｌの間である。炎症反応を避けるために当該物質が無菌で無発熱物質であることは非常に重要である。そこで、当該組成物のエンドトキシンのレベルは１．５ＥＵ／ｍｌ未満である。
【００８９】
（例５）
（皮膚科）
Ｈｉｂｉｓｃｕｓ  Ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｓからの抽出物は化粧品処方に応用されるとヒアルロン酸合成に対する促進剤として作用することが示された（ＪＰ２００４０５１５３３  Ｈｙａｌｕｒｏｎｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  Ｐｒｏｍｏｔｅｒ）。ヒアルロン酸と同じように、オクラから抽出される粘弾性物質は皮膚科で応用できる。オクラの医薬組成物は抗シワの注射可能なゲルとして使用することができる。そこで当該組成物を患者の顔の皮下に効果量で注射して、目に見えるシワを低減させる。
【００９０】
（例６）
（形成外科）
Ｈｉｂｉｓｃｕｓ  Ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｓから抽出した物質の粘弾性特性は当該治療を必要とする病気のヒトまたは動物に関する膝、腰または肩などの変形性関節炎の関節を滑らかにするために使用できた。生理的緩衝液に溶解して医薬組成物を形成させたオクラからのペクチン様多糖類を患者の侵襲された関節に注入する。当該組成物の膝に注入する量は約２ｍｌである。
【００９１】
（例７）
（薬物送達）
交差結合したヒアルロン酸は特に除放性薬物伝達である薬物伝達について使用される。当該活性薬剤は分子網中に捕らわれており、そこから処置したヒトまたは動物の体内にゆっくりと放出される。オクラから抽出されたペクチン様多糖類物質は分子網として活性薬剤をゆっくりと放出する機能が期待される。使用されるペクチン様多糖類の量は当技術分野の当事者であれば場合により決定できる。
【手続補正書】
【提出日】平成19年12月21日(2007.12.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ａ）オクラの実の莢を細かく分割し、
ｂ）分割した実の莢および水性抽出媒体の水性混合物を調製し、前記混合物は８から１２の範囲内のｐＨを有し、
ｃ）前記分割した実の莢から前記抽出媒体へペクチン様多糖類の抽出が生じるのに十分な時間、前記水性混合物を放置し、
ｄ）前記水性混合物から前記分割した実の莢を分離してペクチン様多糖類の水性抽出物を形成させ、
ｅ）前記抽出物に塩を添加し、
ｆ）ろ過材を通して前記抽出物をろ過し、及び、
ｇ）前記ろ過抽出物から水混和性有機溶媒により前記ペクチン様多糖類を沈殿させてペクチン様多糖類の沈殿物を形成させ、前記沈殿操作は場合により１回以上繰り返す、
ことを含む、オクラの実の莢からペクチン様多糖類を製造する方法。
【請求項２】
工程ａ）からｇ）を連続した順序で実施する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
工程ｄ）の後に、工程ｄ）で分離したオクラの実の莢を用いて工程ｂ）〜ｄ）を１回またはそれ以上繰り返し、そして工程ｄ）で得た２つ以上の水性抽出物を工程ｅ）実施前に混ぜ合わせる、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記ろ過材は０．５μｍ未満のメッシュサイズを有している、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
前記ろ過材はセルロース系ろ過材である、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
前記ろ過は≦０．２２μｍのメッシュサイズを有するセルロースろ過材で実施される、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
前記実の莢と前記水性抽出媒体の重量比が１：１から１：８の範囲内である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記抽出中において前記水性混合物を少なくとも２ｒｐｍの速度で攪伴する、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記沈殿物を有機溶媒中で保存する工程を更に含む、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記沈殿物を乾燥する工程を更に含む、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記水性混合物のｐＨが１０から１２の範囲内である、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記抽出を４〜４８時間実施する、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
前記抽出中の温度が１５から４０℃の範囲内である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
前記塩を少なくとも０．５％（ｗ／ｖ）の量で添加する、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記塩がアルカリ金属塩である、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
構造が→２−α−Ｌ−Ｒｈａｉ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｉｖ−（１→２）［β−Ｄ−Ｇａｌｖｉ−（１→４）−β−Ｄ−Ｇａｌｖ−（１→４）］α−Ｌ−Ｒｈａｉｉｉ−（１→４）−α−Ｄ−ＧａｌＡｉｉ（１→、であるペクチン様多糖類であって１．５ＥＵ／ｍｌ未満のエンドトキシンのレベルを有するペクチン様多糖類。
【請求項１７】
少なくとも１×１０６Ｄａの平均分子量を有する、請求項１６に記載のペクチン様多糖類。
【請求項１８】
水または生理的緩衝液に溶解すると本質的に透明な溶液を与える、請求項１６または１７に記載のペクチン様多糖類。
【請求項１９】
請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類および水を含んでいる医薬用組成物。
【請求項２０】
請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類および生理的緩衝液を含む医薬用組成物。
【請求項２１】
０．１〜２０％のペクチン様多糖類を含む、請求項１９または２０に記載の医薬用組成物。
【請求項２２】
１．０ｍ３／ｋｇより大きな固有粘度ηを有する請求項１９〜２１のいずれか１項に記載の医薬用組成物。
【請求項２３】
薬剤として使用する、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類。
【請求項２４】
眼科疾患の手術による治療用の医薬組成物の製造のための、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類の使用。
【請求項２５】
前記眼科疾患が白内障である、請求項２４の使用。
【請求項２６】
整形外科疾患の手術による治療用の医薬組成物の製造のための、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類の使用。
【請求項２７】
皮膚科疾患の手術による治療用の医薬組成物の製造のための、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類の使用。
【請求項２８】
オフサルミックビスコサージカルデバイス（ＯＶＤ）としての、請求項１９〜２２のいずれか１項に記載の組成物の使用。
【請求項２９】
整形外科手術における、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類の使用。
【請求項３０】
薬物送達における、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類の使用。
【請求項３１】
皮膚科での応用のための、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類の使用。
【請求項３２】
化粧品での応用のための、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類の使用。
【請求項３３】
眼科疾患の手術による治療用の、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類。
【請求項３４】
前記眼科疾患が白内障である、請求項３３に記載のペクチン様多糖類。
【請求項３５】
整形外科疾患の手術による治療用の、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類。
【請求項３６】
皮膚科疾患の手術による治療用の、請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類。
【請求項３７】
請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類をヒトまたは動物に治療効果量で投与する、眼科疾患の手術による治療用の方法。
【請求項３８】
前記眼科疾患が白内障である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類をヒトまたは動物に治療効果量で投与する、整形外科疾患の手術による治療用の方法。
【請求項４０】
請求項１６〜１８のいずれか１項に記載のペクチン様多糖類をヒトまたは動物に治療効果量で投与する、皮膚科疾患の手術による治療用の方法。
【請求項４１】
ａ）オクラの実の莢を細かく分割し、
ｂ）前記分割した実の莢の水性混合物を調製し、前記混合物は４から１２の範囲内のｐＨを有し、
ｃ）前記分割した実の莢からペクチン様多糖類の抽出が生じるのに十分な時間、前記水性混合物を放置し、
ｄ）前記水性混合物から前記分割した実の莢を分離してペクチン様多糖類の水性抽出物を形成させ、
ｅ）前記抽出物に塩を添加し、
ｆ）ろ過材を通して前記抽出物をろ過し、
ｇ）前記ろ過抽出物から水混和性有機溶媒により前記ペクチン様多糖類を沈殿させてペクチン様多糖類沈殿物を形成させ、前記沈殿操作は場合により１回以上繰り返し、及び、
ｈ）前記ペクチン様多糖類の沈殿物を水および／または生理的緩衝液に溶解して粘性医薬用組成物を形成させる、
ことを含む、粘性医薬用組成物の製造方法。
【請求項４２】
前記粘性医薬用組成物は１．０ｍ３／ｋｇより大きな固有粘度ηを有する、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記粘性医薬用組成物はオフサルミックビスコサージカルデバイスである、請求項４１または４２に記載の方法。
【国際調査報告】
2009536232.tif 000003
2009536232.tif 000004
2009536232.tif 000005
2009536232.tif 000006