(57)【要約】  液体と、ナノ構造と、医薬剤とを含む医薬組成物が提供される。そのような組成物を使用する方法もまた提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ａ）有効成分としての少なくとも１つの医薬剤と、
（ｂ）ナノ構造と、液体と
を含み、前記ナノ構造は、前記液体の整列した流体分子によって包まれたナノメートルサイズのコア材料を含み、前記コア材料、および、前記整列した流体分子のエンベロープが定常的な物理的状態にあり、ただし、前記ナノ構造および液体は、前記少なくとも１つの医薬剤のインビボ取り込みを高めるために配合される、医薬組成物。
【請求項２】
請求項１に記載の医薬組成物を個体に投与し、それにより、細胞内への医薬剤のインビボ取り込みを高めることを含む、細胞内への医薬剤のインビボ取り込みを高める方法。
【請求項３】
医薬剤は、治療剤、化粧剤または診断剤である、請求項１または２に記載の医薬組成物または方法。
【請求項４】
前記治療剤は、抗生物剤、蘇生剤、抗痙攣剤、抗新生物剤、抗炎症剤、駆虫剤、抗真菌剤、抗ミコバクテリア剤、抗ウイルス剤、抗ヒスタミン剤、抗凝固剤、放射線治療剤、化学療法剤、細胞毒性剤、神経栄養剤、精神療法剤、抗不安鎮静剤、刺激剤、鎮静剤、鎮痛剤、麻酔剤、血管拡張剤、受胎調節剤、神経伝達物質薬剤、神経伝達物質アナログ、除去剤、受胎能強化剤および抗酸化剤からなる群より選択される、請求項３に記載の医薬組成物または方法。
【請求項５】
前記神経伝達物質薬剤は、アセチルコリン、ドーパミン、ノルエピネフリン、セロトニン、ヒスタミン、エピネフリン、ガンマ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、グリシン、グルタミン酸、アデノシン、イノシンおよびアスパラギン酸からなる群より選択される、請求項４に記載の医薬組成物または方法。
【請求項６】
前記医薬剤は、タンパク質薬剤、核酸薬剤、小分子薬剤、細胞性薬剤およびそれらの組合せからなる群より選択される、請求項１または２に記載の医薬組成物または方法。
【請求項７】
前記タンパク質薬剤はペプチドである、請求項６に記載の医薬組成物または方法。
【請求項８】
前記タンパク質薬剤は、酵素、増殖因子、ホルモンおよび抗体からなる群より選択される、請求項６に記載の医薬組成物または方法。
【請求項９】
前記ペプチドはニューロペプチドである、請求項７に記載の医薬組成物または方法。
【請求項１０】
前記ニューロペプチドは、オキシトシン、バソプレシン、副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン（ＣＲＨ）、成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、ソマトスタチン成長ホルモン放出阻害ホルモン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＴＲＨ）、ニューロキニンα（サブスタンスＫ）、ニューロキニンβ、ニューロペプチドＫ、サブスタンスＰ、β−エンドルフィン、ダイノルフィン、Ｍｅｔ−エンケファリンおよびｌｅｕ−エンケファリン、ニューロペプチドチロシン（ＮＰＹ）、膵臓ポリペプチド、ペプチドチロシン−チロシン（ＰＹＹ）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、ペプチドヒスチジンイソロイシン（ＰＨＩ）、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド（ＰＡＣＡＰ）、血管作用性腸ポリペプチド（ＶＩＰ）、脳性ナトリウム利尿ペプチド、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）（α型およびβ型）、コレシストキニン（ＣＣＫ）、ガラニン、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）、メラニン凝集ホルモン（ＭＣＨ）、ＡＣＴＨ、α−ＭＳＨ、ニューロペプチドＦＦ、ニューロテンシン、副甲状腺ホルモン関連タンパク質、アグーチ遺伝子関連タンパク質（ＡＧＲＰ）、コカイン−アンフェタミン調節転写物（ＣＡＲＴ）／ペプチド、エンドモルフィン−１、エンドモルフィン−２、５−ＨＴ−モジュリン、ヒポクレチン／オレキシン類、ノシセプチン／オルファニンＦＱ、ノシスタチン、プロラクチン放出ペプチド、セクレトニューリンおよびウロコルチンからなる群より選択される、請求項９に記載の医薬組成物または方法。
【請求項１１】
前記細胞性薬剤はウイルスである、請求項６に記載の医薬組成物または方法。
【請求項１２】
前記ウイルスはバクテリオファージである、請求項１１に記載の医薬組成物または方法。
【請求項１３】
前記小分子薬剤は１０００Ｄａ未満の分子量を有する、請求項６に記載の医薬組成物または方法。
【請求項１４】
前記診断剤は造影剤である、請求項３に記載の医薬組成物または方法。
【請求項１５】
前記造影剤は、Ｘ線画像化造影剤、磁気共鳴画像化造影剤および超音波画像化造影剤からなる群より選択される、請求項１４に記載の医薬組成物または方法。
【請求項１６】
前記診断剤は放射線画像化剤または蛍光画像化剤である、請求項３に記載の医薬組成物または方法。
【請求項１７】
前記流体分子の少なくとも一部分はガス状態にある、請求項１または２に記載の医薬組成物または方法。
【請求項１８】
前記ナノ構造の濃度が１０２０個／リットル未満である、請求項１または２に記載の医薬組成物または方法。
【請求項１９】
前記ナノ構造の濃度が１０１５個／リットル未満である、請求項１または２に記載の医薬組成物または方法。
【請求項２０】
前記ナノ構造は、クラスターを形成することができる、請求項１または２に記載の医薬組成物または方法。
【請求項２１】
前記ナノ構造は、ナノ構造間の遠距離相互作用を維持することができる、請求項１または２に記載の医薬組成物または方法。
【請求項２２】
前記ナノ構造および液体は、水に対する高まった超音波速度によって特徴づけられる、請求項１または２に記載の医薬組成物または方法。
【請求項２３】
前記コア材料は、強誘電性物質、強磁性物質および圧電性物質からなる群より選択される、請求項１または２に記載の医薬組成物または方法。
【請求項２４】
前記コア材料は結晶性のコア材料である、請求項１または２に記載の医薬組成物または方法。
【請求項２５】
前記液体は水である、請求項１または２に記載の医薬組成物または方法。
【請求項２６】
前記ナノ構造の各々は、前記液体の比重よりも小さい比重、または、前記液体の比重と等しい比重によって特徴づけられる、請求項１または２に記載の医薬組成物または方法。
【請求項２７】
前記ナノ構造および液体は、水の緩衝能力よりも大きい緩衝能力を含む、請求項１または２に記載の医薬組成物または方法。
【請求項２８】
前記ナノ構造はヒドロキシアパタイトから配合される、請求項１または２に記載の医薬組成物または方法。
【請求項２９】
治療剤は、皮膚の状態を処置するために選択される、請求項３に記載の医薬組成物または方法。
【請求項３０】
前記皮膚の状態は、ざ瘡、乾癬、白斑、ケロイド、火傷、瘢痕、しわ、乾燥症、魚鱗癬、角化症、角皮症、皮膚炎、かゆみ症、湿疹、皮膚癌、痔および皮膚肥厚からなる群より選択される、請求項２９に記載の医薬組成物または方法。
【請求項３１】
局所用組成物で配合される、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
医薬剤は、脳の状態を処置または診断するために選択される、請求項１または２に記載の医薬組成物または方法。
【請求項３３】
前記脳の状態は、脳腫瘍、神経障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンティングトン病、筋萎縮性側索硬化症、運動ニューロン疾患、外傷性神経傷害、多発性硬化症、急性播種性脳脊髄炎、急性壊死性出血性白質脳炎、髄鞘発育不全疾患、ミトコンドリア疾患、片頭痛障害、細菌感染、真菌感染、卒中、老化、認知症、統合失調症、うつ病、躁うつ病、不安、恐慌性障害、対人恐怖症、睡眠障害、注意欠陥、行為障害、多動性、人格障害、薬物乱用、不妊症および頭部傷害からなる群より選択される、請求項３２に記載の医薬組成物または方法。
【請求項３４】
細胞は、哺乳動物細胞、細菌細胞またはウイルス細胞である、請求項２に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医薬剤のための担体組成物に関連する。
【背景技術】
【０００２】
医薬剤の物理化学的性質ならびにその効力は、治療的効力を決定するために合わせて作用する。経口吸収および皮膚吸収については、溶解性および親油性が、全身循環への医薬剤の送達に影響を及ぼす最も重要な物理化学的性質のうちの２つである［Ｃｕｒａｔｏｌｏ  Ｗ．ＰＳＴＴ．、１９９８、１：３８７〜３９３］。
【０００３】
哺乳動物には、器官または組織を末梢における活動から分離するために機能し、これにより、様々な因子の選択的輸送のみを許す４つの血液関門（これらには、血液脳関門（ＢＢＢ）、血液網膜関門、血液精巣関門および血液乳腺関門が含まれる）もまた知られている。これらは、医薬剤をその標的部位に到達させないためのさらなる障害となっている。
【０００４】
溶解性は、吸収のために溶液で利用できる薬物の量に影響を及ぼし、親油性は、化合物が、細胞膜および血液関門を含めて、生体膜の中に、また、生体膜を越えて分配することができることに影響を及ぼす。多くの場合、強い相関がこれら２つの性質の間には存在し、親油性が増大するにつれ、溶解性が一般には低下する。
【０００５】
新たに発見された薬物の約４０％が水溶性をほとんど有しない［Ｃｏｎｎｏｒｓ，Ｒ．Ｄ．およびＥｌｄｅｒ，Ｅ．Ｊ．、Ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ］。このことは、製薬業界において、新しい薬物の成功した開発および商品化に対する重大な課題をもたらしている。医薬剤が特定の分子標的に対していかに活性または潜在的に活性であるとしても、この薬剤が作用部位において溶液で利用できないならば、その治療的効力はごくわずかである。結果として、多くの治療剤の開発が、その潜在的可能性が実現または確認される前に中断される。これは、製薬企業は、十分な薬物動態学的プロフィルを不良な水溶性のために有しない分子に対する厳しい前臨床研究および臨床研究を行う余裕がないからである。
【０００６】
水における溶解性を改善することが、既に販売されているいくつかの医薬剤について当てはまる。１９９５年以降に承認された薬物の９０％以上が、不良な溶解性、不良な透過性、または、それらの両方を有する。販売されている医薬剤の約１６％が、具体的には不良な溶解性および低い生物学的利用能のために、最適でない成績を有することが推定される［Ｃｏｎｎｏｒｓ，Ｒ．Ｄ．およびＥｌｄｅｒ，Ｅ．Ｊ．、Ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ｓｏｌｕｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ］。そのような医薬剤は様々な性能限界（例えば、不完全または一定しない吸収、不良な生物学的利用能、および、作用の遅い開始など）を示すことがある。有効性が患者毎に変化し得るし、また、薬物吸収に対する食物の強い影響が存在し得る。最後に、要求される効力を得るために、溶解性が悪い薬物の服用量を増大させることが必要である場合がある。
【０００７】
水溶性が悪い医薬剤の送達を高めるために様々な取り組みがなされている。例えば、固体分散物は、医薬剤が希釈剤（例えば、ポリエチレングリコールまたはポリビニルピロリドンなど）の存在により非晶質性で、より可溶性の状態にあることを可能にする。しかしながら、それらのより高いエネルギー状態のために、再結晶化の潜在的可能性がある。
【０００８】
マイクロエマルションもまた、医薬剤の送達を、水におけるナノメートルサイズの液滴として、オイル／溶媒に溶解された医薬剤のミセル状分散によって高めることを目的とする。医薬剤を液滴から直接に吸収することができる。しかしながら、高い界面活性剤レベルおよび共溶媒レベルの毒性、ならびに、沈殿化の可能性に関して、いくつかの懸念が存在する。
【０００９】
医薬剤送達に対する別の取り組みが自己乳化システムの使用である。これには、エマルションを投与時に形成する医薬剤、オイル、界面活性剤および共溶媒の混合物が伴う。相反転により、医薬剤の放出がさらに促進され得る。
【００１０】
あるいは、医薬剤を、送達を高めるために「担体」化合物（例えば、シクロデキストリンなど）と可逆的かつ非共有結合的に複合体化することができる。
【００１１】
リポソームの使用が、水溶性が悪い医薬剤の全身循環への送達を高めるために好都合である場合がある。この方法は、リン脂質の単層ベシクルまたは多層ベシクルにおける医薬剤のカプセル化を伴う。リポソームは、例えば、抗体フラグメントを使用することによって特定の部位に標的化することができる。リポソームはまた、ある種の医薬剤を不活性化から保護するように作用する場合がある。
【００１２】
粒子サイズ低下技術および粒子形成技術による医薬剤のナノ構造化粒子の作製もまた、その表面積を増大することによって溶解性を高めることが示されている。
【００１３】
ナノ粒子もまた、医薬剤のための担体として使用されている。ナノ粒子は、医薬剤を、例えば、カプセル化によって取り込むことができ、あるいは、医薬剤を、例えば、米国特許出願公開第２００３０１３８４９０号に教示されるように、ナノ粒子間に存在させることができる。
【００１４】
細胞膜を横断する医薬剤の不良な透過性もまた、薬物輸送における一時的な増大を可能にするための制御された膜破壊によって対処されている［Ｆｉｘ，ＪＡ、Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ、１９９６、８５：１２８２〜１２８５］。しかしながら、これらの技術は、多くの場合、最終的には許容度および安全性の問題を引き起こす、膜に対する無差別的な、抑制不良な作用をもたらす。細胞膜を横断する医薬剤の移行を容易にするための代替戦略またはさらなる戦略が膜輸送因子の使用である［Ｓｕｚｕｋｉ  Ｈ、Ｓｕｇｉｙａｍａ  Ｙ、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ、２０００、１２：３〜１２］。しかしながら、膜輸送因子は一般に非常に特異的であり、特定の医薬剤についてどの膜輸送因子を標的化するかを決定するために、多数の研究が必要とされる。
【００１５】
無数のデバイスもまた、適切な部位への医薬剤送達を助けるために日常的に使用される。
【００１６】
例えば、皮膚を横断するために、内部組織において標的化される医薬剤（すなわち、全身投与）が、多くの場合、経皮的薬物送達システムにより投与される。経皮的薬物送達は、皮膚直下の組織に対して、または、血液循環による体内全身分布のために毛細管に対して標的化することができる。
【００１７】
シリンジおよびニードルまたは他の機械的デバイスを使用して、薬物を皮下空間に注入することができ、従って、表皮層および真皮層を横断することができる。シリンジおよびニードルは効果的な送達デバイスではあるが、汚染されやすく、一方で、その使用には、多くの場合、痛みおよび／または傷化が付随する。加えて、そのようなデバイスの使用には、医療提供者に対して偶発的なニードル傷害の危険性がつきまとう。圧縮ガスに基づく機械的注入デバイスが、シリンジデバイスおよびニードルデバイスの上記の制限を克服するために開発されている。そのようなデバイスでは、典型的には、圧縮ガス（例えば、ヘリウムまたは二酸化炭素など）が、狭い開口部を通して高速度で医薬品を送達するために利用される。
【００１８】
そのようなデバイスはいくつかの上記制限に対抗するが、それらの効率は医薬品依存的であり、また、それらの使用は、痛み、傷化および裂傷を引き起こし得る。
【００１９】
経皮的薬物送達では通常、皮下注射、注入ポンプのための長期間のニードル設置、および、皮膚の角質層を貫く他のニードルは除外される。従って、経皮的薬物送達は、一般には、侵襲性が最小であると見なされる。
【００２０】
一般に、経皮的薬物送達システムでは、患者の皮膚に貼り付けられる薬物添加されたデバイスまたはパッチが用いられる。そのようなパッチは、パッチに含有される医薬剤が皮膚の層を通って患者の血流内に吸収されることを可能にする。経皮的薬物送達では、薬物注入および静脈内薬物投与に伴う痛み、ならびに、これらの技術に伴う感染の危険性が軽減される。経皮的薬物送達ではまた、投与された薬物の胃腸での代謝が回避され、肝臓による薬物の排除が少なくなり、投与された薬物の持続した放出がもたらされる。このタイプの送達ではまた、薬物の投与が比較的容易であること、および、薬物の持続した放出のために、薬物療法に従う患者のコンプライアンスが高められる。
【００２１】
しかしながら、多くの医薬剤は、医薬剤の分子サイズにより、または、薬剤の他の生体付着特性により皮膚を介した吸収が困難であるので、知られている経皮的薬物送達システムによる投与には適していない。これらの場合において、経皮的薬物送達が試みられるとき、薬物は、皮膚の外側表面にたまり、皮膚を通って血流内に浸透しないことが見出されることがある。
【００２２】
一般に、従来の経皮的薬物送達方法は、低分子量および／または親油性の薬物（例えば、狭心症を緩和するためのニトログリセリン、禁煙療法のためのニコチン、および、閉経後の女性におけるエストロゲン補充のためのエストラジオールなど）についてだけ好適であることが見出されている。より大きい医薬剤、例えば、インスリン（糖尿病の処置のためのポリペプチド）、エリスロポイエチン（重篤な貧血を処置するために使用される）およびγ−インターフェロン（免疫系のガン攻撃能を増強するために使用される）などはすべてが、従来の経皮的薬物送達方法とともに使用されたときには通常の場合、効果的でない薬剤である。
【００２３】
従って、上記の制限を有しない、医薬剤の送達を高めることができる担体システムが必要であることが広く認識されており、また、そのような担体システムを有することは非常に好都合であると考えられる。
【発明の開示】
【００２４】
本発明によれば、有効成分としての少なくとも１つの医薬剤と、ナノ構造と、液体とを含む医薬組成物が提供され、この場合、ナノ構造は、前記液体の整列した流体分子によって包まれたナノメートルサイズのコア材料を含み、コア材料、および、整列した流体分子のエンベロープが定常的な物理的状態にあり、ただし、ナノ構造および液体は、前記少なくとも１つの医薬剤のインビボ取り込みを高めるために配合される。
【００２５】
本発明の別の局面によれば、細胞内への医薬剤のインビボ取り込みを高める方法が提供され、この場合、この方法は、有効成分としての少なくとも１つの医薬剤と、ナノ構造と、液体とを含む医薬組成物（この場合、ナノ構造は、前記液体の整列した流体分子によって包まれたナノメートルサイズのコア材料を含み、コア材料、および、整列した流体分子のエンベロープが定常的な物理的状態にあり、ただし、ナノ構造および液体は、前記少なくとも１つの医薬剤のインビボ取り込みを高めるために配合される）を個体に投与し、それにより、細胞内への医薬剤のインビボ取り込みを高めることを含む。
【００２６】
下記に記載される本発明の好ましい実施形態におけるさらなる特徴によれば、医薬剤は、治療剤、化粧剤または診断剤である。
【００２７】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、治療剤は、抗生物剤、蘇生剤、抗痙攣剤、抗新生物剤、抗炎症剤、駆虫剤、抗真菌剤、抗ミコバクテリア剤、抗ウイルス剤、抗ヒスタミン剤、抗凝固剤、放射線治療剤、化学療法剤、細胞毒性剤、神経栄養剤、精神療法剤、抗不安鎮静剤、刺激剤、鎮静剤、鎮痛剤、麻酔剤、血管拡張剤、受胎調節剤、神経伝達物質薬剤、神経伝達物質アナログ、除去剤、受胎能強化剤および抗酸化剤からなる群より選択される。
【００２８】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、神経伝達物質薬剤は、アセチルコリン、ドーパミン、ノルエピネフリン、セロトニン、ヒスタミン、エピネフリン、ガンマ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、グリシン、グルタミン酸、アデノシン、イノシンおよびアスパラギン酸からなる群より選択される。
【００２９】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、医薬剤は、タンパク質薬剤、核酸薬剤、小分子薬剤、細胞性薬剤およびそれらの組合せからなる群より選択される。
【００３０】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、タンパク質薬剤はペプチドである。
【００３１】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、タンパク質薬剤は、酵素、増殖因子、ホルモンおよび抗体からなる群より選択される。
【００３２】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、ペプチドはニューロペプチドである。
【００３３】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、ニューロペプチドは、オキシトシン、バソプレシン、副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン（ＣＲＨ）、成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、ソマトスタチン成長ホルモン放出阻害ホルモン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＴＲＨ）、ニューロキニンα（サブスタンスＫ）、ニューロキニンβ、ニューロペプチドＫ、サブスタンスＰ、β−エンドルフィン、ダイノルフィン、Ｍｅｔ−エンケファリン、ｌｅｕ−エンケファリン、ニューロペプチドチロシン（ＮＰＹ）、膵臓ポリペプチド、ペプチドチロシン−チロシン（ＰＹＹ）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、ペプチドヒスチジンイソロイシン（ＰＨＩ）、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド（ＰＡＣＡＰ）、血管作用性腸ポリペプチド（ＶＩＰ）、脳性ナトリウム利尿ペプチド、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）（α型およびβ型）、コレシストキニン（ＣＣＫ）、ガラニン、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）、メラニン凝集ホルモン（ＭＣＨ）、ＡＣＴＨ、α−ＭＳＨ、ニューロペプチドＦＦ、ニューロテンシン、副甲状腺ホルモン関連タンパク質、アグーチ遺伝子関連タンパク質（ＡＧＲＰ）、コカイン−アンフェタミン調節転写物（ＣＡＲＴ）／ペプチド、エンドモルフィン−１、エンドモルフィン−２、５−ＨＴ−モジュリン、ヒポクレチン／オレキシン類、ノシセプチン／オルファニンＦＱ、ノシスタチン、プロラクチン放出ペプチド、セクレトニューリンおよびウロコルチンからなる群より選択される。
【００３４】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、細胞性薬剤はウイルスである。
【００３５】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、ウイルスはバクテリオファージである。
【００３６】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、小分子薬剤は１０００Ｄａ未満の分子量を有する。
【００３７】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、診断剤は造影剤である。
【００３８】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、造影剤は、Ｘ線画像化造影剤、磁気共鳴画像化造影剤および超音波画像化造影剤からなる群より選択される。
【００３９】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、診断剤は放射線画像化剤または蛍光画像化剤である。
【００４０】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、流体分子の少なくとも一部分はガス状態にある。
【００４１】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、ナノ構造の濃度が１０２０個／リットル未満である。
【００４２】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、ナノ構造の濃度が１０１５個／リットル未満である。
【００４３】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、ナノ構造はクラスターを形成することができる。
【００４４】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、ナノ構造はナノ構造間の遠距離相互作用を維持することができる。
【００４５】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、ナノ構造および液体は、水に対する高まった超音波速度によって特徴づけられる。
【００４６】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、コア材料は、強誘電性物質、強磁性物質および圧電性物質からなる群より選択される。
【００４７】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、コア材料は結晶性のコア材料である。
【００４８】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、液体は水である。
【００４９】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、ナノ構造は、液体の比重よりも小さい比重、または、液体の比重と等しい比重によって特徴づけられる。
【００５０】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、ナノ構造および液体は、水の緩衝能力よりも大きい緩衝能力を含む。
【００５１】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、ナノ構造はヒドロキシアパタイトから配合される。
【００５２】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、治療剤は、皮膚の状態を処置するために選択される。
【００５３】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、皮膚の状態は、ざ瘡、乾癬、白斑、ケロイド、火傷、瘢痕、しわ、乾燥症、魚鱗癬、角化症、角皮症、皮膚炎、かゆみ症、湿疹、皮膚癌、痔および皮膚肥厚からなる群より選択される。
【００５４】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、医薬組成物は局所用組成物で配合される。
【００５５】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、医薬剤は、脳の状態を処置または診断するために選択される。
【００５６】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、脳の状態は、脳腫瘍、神経障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンティングトン病、筋萎縮性側索硬化症、運動ニューロン疾患、外傷性神経傷害、多発性硬化症、急性播種性脳脊髄炎、急性壊死性出血性白質脳炎、髄鞘発育不全疾患、ミトコンドリア疾患、片頭痛障害、細菌感染、真菌感染、卒中、老化、認知症、統合失調症、うつ病、躁うつ病、不安、恐慌性障害、対人恐怖症、睡眠障害、注意欠陥、行為障害、多動性、人格障害、薬物乱用、不妊症および頭部傷害からなる群より選択される。
【００５７】
前記好ましい実施形態におけるなおさらなる特徴によれば、細胞は、哺乳動物細胞、細菌細胞またはウイルス細胞である。
【００５８】
本発明は、医薬剤のインビボ取り込みを高める担体組成物を提供することによって、現在知られている形態の欠点に対処することに成功している。
【００５９】
別途定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての技術的用語および科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中に記載される方法および材料と類似または同等である方法および材料を本発明の実施または試験において使用することができるが、好適な方法および材料が下記に記載される。本明細書中に言及される全ての刊行物、特許出願、特許、および他の参考文献は、その全体が参照として援用される。矛盾する場合には、定義を含めて、本特許明細書が優先する。さらに、材料、方法および実施例は例示にすぎず、限定であることは意図されない。
【００６０】
図面の簡単な記述
本明細書では本発明を単に例示し図面を参照して説明する。特に詳細に図面を参照して、示されている詳細が例示として本発明の好ましい実施態様を例示考察することだけを目的としており、本発明の原理や概念の側面の最も有用でかつ容易に理解される説明であると考えられるものを提供するために提示していることを強調するものである。この点について、本発明を基本的に理解するのに必要である以上に詳細に本発明の構造の詳細は示さないが、図面について行う説明によって本発明のいくつもの形態を実施する方法は当業者には明らかになるであろう。
【００６１】
図１は、標準的溶液（９０％水、１０％グリセロール）に、または、増大する濃度の担体組成物およびグリセロールに再懸濁された電気的コンピテントなＥ．ｃｏｌｉ細菌のコロニー形成ユニット（ＣＦＵ）の数を表す棒グラフである。その数は、少なくとも３回の独立した実験から得られた平均値＋ＳＴＤを表す。
【００６２】
図２は、ｐＵＣプラスミドＤＮＡにより形質転換され、水または担体組成物のいずれかで１：１０希釈された３つの異なる化学的コンピテントな細菌株の形質転換効率を表す棒グラフである。結果は、担体組成物の平板で得られたＣＦＵと、コントロールのＣＦＵとの比率として示される。
【００６３】
図３Ａ〜Ｂは、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）構築物の初代ヒト細胞へのトランスフェクションの後４８時間での蛍光顕微鏡画像の写真である。図３Ａは、リポフェクタミンを使用するトランスフェクションを示す。図３Ｂは、リポフェクタミンを担体組成物と一緒に使用するトランスフェクションを示す。
【００６４】
図４Ａ〜Ｂは、ファージ株＃６をスポットした後におけるＳ．ａｕｒｅｕｓの細菌叢を含有する寒天平板の写真である。図４Ａは、担体組成物に基づく寒天平板の写真である。図４Ｂは、コントロール平板の写真である。数字（１〜８）はファージＲＴＤの１００倍連続希釈物を表す。矢印は、希釈物＃３におけるプラークの存在（図４Ａ）または非存在（図４Ｂ）を示す。
【００６５】
図５Ａ〜Ｄは、ファージ株＃８３Ａ（図５Ａ〜図５Ｂ）およびファージ株＃６（図５Ｃ〜図５Ｄ）をスポットし、３７℃で３時間インキュベーションした後におけるＳ．ａｕｒｅｕｓの細菌叢を含有する寒天平板の写真である。図５Ａおよび図５Ｃは、担体組成物に基づく寒天平板の写真である。図５Ｂおよび図５Ｄは、コントロール平板の写真である。
【００６６】
図６は、コントロールＬＢ培養液または担体組成物ＬＢ培養液のいずれかにおけるＳ．ａｕｒｅｕｓのファージ株＃６感染およびファージ株＃８３Ａ感染を例示する棒グラフである。細菌−ファージ培養液の光学濃度（ＯＤ）を、溶菌が明らかになったとき（時間０）、および、示されるような異なる時間間隔で測定した。
【００６７】
図７は、ファージλＧＥＭ１１の希釈物をコンピテントな細菌宿主に加えた後で得られたプラーク形成ユニット（ｐｆｕ）の数を例示するグラフである。希釈を、１／１０希釈の連続で、コントロールＳＭ緩衝液または担体組成物に基づくＳＭ緩衝液のいずれかを用いて行った。
【００６８】
図８Ａ〜Ｂは、担体組成物の存在下（図８Ｂ）および非存在下（図８Ａ）で事前に成長させた枯草菌細菌コロニーを含む寒天平板の写真である。
【００６９】
図９Ａ〜Ｃは、担体組成物の存在下（図９Ｃ）および非存在下（図９Ｂ）、ならびに、ＳＰ水（担体組成物の場合と同じ供給源粉末と混合された逆浸透水）の存在下（図９Ａ）で事前に成長させた１０５個の細菌コロニーを含む寒天平板の写真である。
【００７０】
図１０Ａ〜Ｃは、担体組成物の存在下（図１０Ｃ）および非存在下（図１０Ａ〜図１０Ｂ）、ともにストレプトマイシンの存在下（図１０Ｂ〜図１０Ｃ）および非存在下（図１０Ａ）で事前に成長させたＴ株細菌コロニーを含む寒天平板の写真である。
【００７１】
図１１は、蒸留水または担体組成物において成長させたビブリオ・ハーベイ細菌の経時的な濁度を明らかにするプロットグラフである。
【００７２】
図１２は、蒸留水または担体組成物において成長させたビブリオ・ハーベイ細菌の経時的なルミネセンスを明らかにするプロットグラフである。
【００７３】
図１３Ａ〜Ｃは、担体組成物で希釈された皮膚クリームの３日間の処置の後での同一女性の写真、および、女性がその皮膚のマークされた領域に有する発疹の数［赤色の発疹は感染の第１の段階を示し、黄色の発疹は感染の第２のより進行した段階を示す］を示すコンピューター読み取りである。図１３Ａは、１日の処置の後での写真および読み取りである。図１３Ｂは、２日の処置の後での写真および読み取りである。図１３Ｃは、３日の処置の後での写真および読み取りである。
【００７４】
図１４は、観測時間の関数としての本発明の液体組成物における絶対的な超音波速度の等温測定の結果を示す。
【００７５】
図１５は、４つの上部流路と、毛細管流路によりつながれた１つの下部流路とを含むプラスチック装置の写真である。
【００７６】
図１６Ａ〜Ｂは、色素および希釈剤を上部流路に加えた後のプラスチック装置の写真である。図１６Ａは、希釈剤が水であるとき、設置後１５分で、毛細管を介した上部流路から下部流路への移動がないことを示す。図１６Ｂは、希釈剤が本発明の液体組成物であるとき、設置後１５分で、毛細管を介した上部流路から下部流路への移動が認められることを示す。
【００７７】
図１７は、５５７ｎｍでの吸光度によって測定されたときの様々な水組成物の水酸化ナトリウム滴定を例示するグラフである。
【００７８】
図１８Ａ〜Ｃは、ｐＨによって測定されたときの、ナノ構造を含む水の水酸化ナトリウム滴定、および、ＲＯ水の水酸化ナトリウム滴定を例示する、三連で行われた実験のグラフである。
【００７９】
図１９Ａ〜Ｃは、ｐＨによって測定されたときの、ナノ構造を含む水の水酸化ナトリウム滴定、および、ＲＯ水の水酸化ナトリウム滴定を例示するグラフである。それぞれのグラフは３つの三連での実験をまとめる。
【００８０】
図２０Ａ〜Ｃは、ｐＨによって測定されたときの、ナノ構造を含む水の塩酸滴定、および、ＲＯ水の塩酸滴定を例示する、三連で行われた実験のグラフである。
【００８１】
図２１は、ｐＨによって測定されたときの、ナノ構造を含む水の塩酸滴定、および、ＲＯ水の塩酸滴定を例示するグラフである。それぞれのグラフは３つの三連での実験をまとめる。
【００８２】
図２２Ａ〜Ｃは、５５７ｎｍでの吸光度によって測定されたときの、ナノ構造を含む水、および、ＲＯ水の塩酸滴定（図２２Ａ）および水酸化ナトリウム滴定（図２２Ｂ〜図２２Ｃ）を例示するグラフである。
【００８３】
図２３Ａ〜Ｂは、ＲＯの塩酸滴定の後でのキュベットの写真（図２３Ａ）、および、ナノ構造を含む水の塩酸滴定の後でのキュベットの写真（図２３Ｂ）である。それぞれのキュベットは１μｌの塩酸の添加を例示する。
【００８４】
図２４Ａ〜Ｃは、ＲＦ水の塩酸滴定を例示するグラフ（図２４Ａ）、ＲＦ２水の塩酸滴定を例示するグラフ（図２４Ｂ）、および、ＲＯ水の塩酸滴定を例示するグラフ（図２４Ｃ）である。矢印は２回目の照射を示す。
【００８５】
図２５は、ＲＯ水と比較したときの、ＦＲ２水の塩酸滴定を例示するグラフである。実験を３回繰り返した。３回の実験のすべてについての平均値がＲＯ水についてプロットされた。
【００８６】
図２６Ａ〜Ｊは、粉末の分散を３回試みた後、様々な時間間隔での、赤色粉末およびＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）を含む溶液の写真である。図２６Ａ〜図２６Ｅは、実施例１４のパートＡからの、右側：試験チューブＣ（５０％ＥｔＯＨ＋Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標））、および、左側：試験チューブＢ（脱水されたＮｅｏｗａｔｅｒ（商標））を例示する。図２６Ｇ〜図２６Ｊは、赤色粉末の一晩の破砕、および、１００μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）の滴定の後での溶液を例示する。
【００８７】
図２７Ａ〜Ｃは、ナノドロップで測定されたときの、３つの異なる溶液からの２μｌの吸光度の読み取りである。図２７Ａは、一晩の粉砕の後での赤色粉末＋１００μｌのＮｅｏｗａｔｅｒの溶液を表す。図２７Ｂは、１００％の脱水されたＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）を加えた後での赤色粉末の溶液を表し、図２７Ｃは、ＥｔＯＨ＋Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）（５０％−５０％）を加えた後での赤色粉末の溶液を表す。
【００８８】
図２８は、バイアル＃１（ＣＤ−Ｄａｕ＋Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標））、バイアル＃４（ＣＤ−Ｄａｕ＋１０％ＰＥＧ／Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標））およびバイアル＃５（ＣＤ−Ｄａｕ＋５０％アセトン＋５０％Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標））の分光光度計測定のグラフである。
【００８９】
図２９は、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）における溶解物（青色線）、および、微量の溶媒（アセトン）を伴う溶解物（ピンク色線）の分光光度計測定のグラフである。
【００９０】
図３０は、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）における溶解物（青色線）および、アセトンにおける溶解物（ピンク色線）の分光光度計測定のグラフである。淡青色および黄色の線はアセトン蒸発の異なる割合を表し、紫色線はアセトン非含有溶液である。
【００９１】
図３１は、ＣＤ−Ｄａｕの２００ｎｍ〜８００ｎｍにおける分光光度計測定のグラフである。青色線はＲＯにおける溶解物を表し、一方、ピンク色線はＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）における溶解物を表す。
【００９２】
図３２は、ｔ−ｂｏｃの２００ｎｍ〜８００ｎｍにおける分光光度計測定のグラフである。青色線はＲＯにおける溶解物を表し、一方、ピンク色線はＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）における溶解物を表す。
【００９３】
図３３Ａ〜Ｄは、２００ｎｍ〜８００ｎｍにおける分光光度計測定のグラフである。図３３Ａは、エタノールの存在下、および、エタノール蒸発直後のエタノール不在下でのＡＧ−１４Ｂのグラフである。図３３Ｂは、エタノールの存在下、および、エタノール蒸発後２４時間のエタノール不在下でのＡＧ−１４Ｂのグラフである。図３３Ｃは、エタノールの存在下、および、エタノール蒸発直後のエタノール不在下でのＡＧ−１４Ａのグラフである。図３３Ｄは、エタノールの存在下、および、エタノール蒸発後２４時間のエタノール不在下でのＡＧ−１４Ａのグラフである。
【００９４】
図３４は、エタノール蒸発後２４時間でのＡＧ−１４ＡおよびＡＧ１４Ｂの懸濁物の写真である。
【００９５】
図３５Ａ〜Ｇは、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたペプチドの分光光度計測定のグラフである。図３５Ａは、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたペプチドＸのグラフである。図３５Ｂは、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたＸ−５ＦＵのグラフである。図３５Ｃは、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたＮＬＳ−Ｅのグラフである。図３５Ｄは、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたＰａｌｍ−ＰＦＰＳＹＫ（ＣＭＦＵ）のグラフである。図３５Ｅは、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたＰＦＰＳＹＫＬＲＰＧ−ＮＨ２のグラフである。図３５Ｆは、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたＮＬＳ−ｐ２−ＬＨＲＨのグラフである。図３５Ｇは、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたＦ−ＬＨ−ＲＨ−ｐａｌｍ  ｋＧＦＰＳＫのグラフである。
【００９６】
図３６Ａ〜Ｇは、クリスタルバイオレットアッセイにより測定されたときの、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたペプチドの細胞傷害作用を例示する棒グラフである。図３６Ａは、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたペプチドＸの細胞傷害作用のグラフである。図３６Ｂは、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたＸ−５ＦＵの細胞傷害作用のグラフである。図３６Ｃは、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたＮＬＳ−Ｅの細胞傷害作用のグラフである。図３６Ｄは、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたＰａｌｍ−ＰＦＰＳＹＫ（ＣＭＦＵ）の細胞傷害作用のグラフである。図３６Ｅは、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたＰＦＰＳＹＫＬＲＰＧ−ＮＨ２の細胞傷害作用のグラフである。図３６Ｆは、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたＮＬＳ−ｐ２−ＬＨＲＨの細胞傷害作用のグラフである。図３６Ｇは、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたＦ−ＬＨ−ＲＨ−ｐａｌｍ  ｋＧＦＰＳＫの細胞傷害作用のグラフである。
【００９７】
図３７は、エタノールおよびＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）におけるレチノールの吸光度のグラフである。
【００９８】
図３８は、ろ過後の、エタノールおよびＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）におけるレチノールの吸光度のグラフである。
【００９９】
図３９Ａ〜Ｂは、試験チューブ（左側はＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）および物質「Ｘ」を含有し、右側はＤＭＳＯおよび物質「Ｘ」を含有する）の写真である。図３９Ａは、２４時間放置された試験チューブを例示し、図３９Ｂは、４８時間放置された試験チューブを例示する。
【０１００】
図４０Ａ〜Ｃは、加熱および振とう処置を行った直後における、物質「Ｘ」を溶媒１および溶媒２とともに含有する試験チューブ（図４０Ａ）、物質「Ｘ」を溶媒３および溶媒４とともに含有する試験チューブ（図４０Ｂ）、ならびに、物質「Ｘ」を溶媒５および溶媒６とともに含有する試験チューブ（図４０Ｃ）の写真である。
【０１０１】
図４１Ａ〜Ｃは、加熱および振とう処置を行った後６０分における、物質「Ｘ」を溶媒１および溶媒２とともに含有する試験チューブ（図４１Ａ）、物質「Ｘ」を溶媒３および溶媒４とともに含有する試験チューブ（図４１Ｂ）、ならびに、物質「Ｘ」を溶媒５および溶媒６とともに含有する試験チューブ（図４１Ｃ）の写真である。
【０１０２】
図４２Ａ〜Ｃは、加熱および振とう処置を行った後１２０分における、物質「Ｘ」を溶媒１および溶媒２とともに含有する試験チューブ（図４２Ａ）、物質「Ｘ」を溶媒３および溶媒４とともに含有する試験チューブ（図４２Ｂ）、ならびに、物質「Ｘ」を溶媒５および溶媒６とともに含有する試験チューブ（図４２Ｃ）の写真である。
【０１０３】
図４３Ａ〜Ｃは、加熱および振とう処置を行った後２４時間における、物質「Ｘ」を溶媒１および溶媒２とともに含有する試験チューブ（図４３Ａ）、物質「Ｘ」を溶媒３および溶媒４とともに含有する試験チューブ（図４３Ｂ）、ならびに、物質「Ｘ」を溶媒５および溶媒６とともに含有する試験チューブ（図４３Ｃ）の写真である。
【０１０４】
図４４Ａ〜Ｄは、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）および低下した濃度のＤＭＳＯを含む溶媒に物質「Ｘ」を含むガラス製ボトルの振とう直後の写真（図４４Ａ）、振とう後３０分の写真（図４４Ｂ）、振とう後６０分の写真（図４４Ｃ）および振とう後１２０分の写真（図４４Ｄ）である。
【０１０５】
図４５は、分光光度計によって測定されたときの、ボルテックス後６時間のＲＯ／Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）における物質「Ｘ」の吸収特徴を例示するグラフである。
【０１０６】
図４６Ａ〜Ｂは、分光光度計によって測定されたときの、エタノールにおけるＳＰＬ２１０１の吸収特徴を例示するグラフ（図４６Ａ）、および、アセトンにおけるＳＰＬ５２１７の吸収特徴を例示するグラフ（図４６Ｂ）である。
【０１０７】
図４７Ａ〜Ｂは、分光光度計によって測定されたときの、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）におけるＳＰＬ２１０１の吸収特徴を例示するグラフ（図４７Ａ）、および、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）におけるＳＰＬ５２１７の吸収特徴を例示するグラフ（図４７Ｂ）である。
【０１０８】
図４８Ａ〜Ｂは、分光光度計によって測定されたときの、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）におけるタキソールの吸収特徴を例示するグラフ（図４８Ａ）、および、ＤＭＳＯにおけるタキソールの吸収特徴を例示するグラフ（図４８Ｂ）である。
【０１０９】
図４９は、２９３Ｔ細胞に対する異なる溶剤におけるタキソールの細胞傷害作用を例示する棒グラフである。コントロールＲＯ＝ＲＯ水により構成される培地；コントロールＮｅｏ＝Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）により構成される培地；コントロールＤＭＳＯ  ＲＯ＝ＲＯ水＋１０μｌのＤＭＳＯにより構成される培地；コントロールＮｅｏ  ＲＯ＝ＲＯ水＋１０μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）により構成される培地；タキソールＤＭＳＯ  ＲＯ＝ＲＯ水と、ＤＭＳＯに溶解されたタキソールとにより構成される培地；タキソールＤＭＳＯ  Ｎｅｏ＝Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）と、ＤＭＳＯに溶解されたタキソールとにより構成される培地；タキソールＮＷ  ＲＯ＝ＲＯ水と、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたタキソールとにより構成される培地；タキソールＮＷ  Ｎｅｏ＝Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）と、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたタキソールとにより構成される培地。
【０１１０】
図５０Ａ〜Ｂは、２つの異なるＴａｑポリメラーゼを使用する実施例２２に記載されるプロトコルに従って加熱した後、ナノ構造を含む液体組成物の存在下および不在下で得られたＰＣＲ生成物を例示する、臭化エチジウムにより染色されたＤＮＡゲルの写真である。
【０１１１】
図５１は、２つの異なるＴａｑポリメラーゼを使用する実施例２３に記載されるプロトコルに従って加熱した後、ナノ構造を含む液体組成物の存在下および不在下で得られたＰＣＲ生成物を例示する、臭化エチジウムにより染色されたＤＮＡゲルの写真である。
【発明を実施するための最良の形態】
【０１１２】
本発明は、医薬剤のインビボ取り込みを高めることができる担体組成物の発明である。
【０１１３】
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳しく説明する前に、本発明は、その適用において、下記の記載において示されるか、または、実施例において例示される細部に限定されないことを理解しなければならない。本発明は他の実施形態が可能であり、または、様々な方法で実施することができ、または、様々な方法で実施される。また、本明細書中で用いられる表現法および用語法は記述のためであって、限定するものとして見なすべきでないことを理解しなければならない。
【０１１４】
生物学的利用能が低い医薬剤（例えば、ペプチド、タンパク質および核酸など）が多く開発されることにより、そのような高分子をそれらの適切な細胞標的に送達する効果的な新しい方法を開発する必要性が生じている。特定のポリペプチド増殖因子の使用、あるいは、欠けた遺伝子または欠陥遺伝子を置換するか、または補うための特定の遺伝子の使用のいずれかに基づく治療剤は、そのような新しい送達システムを必要とする治療剤の例である。オリゴヌクレオチドがＤＮＡと相互作用して、遺伝子の発現を調節するようにオリゴヌクレオチドを伴う治療剤もまた、細胞膜を横断するインビボ取り込みを強化することができる送達システムを必要とし得る。そのような治療法の臨床適用は、新しい送達システムの信頼性および効率だけでなく、それらの安全性にも、また、これらのシステムの基礎となっている技術が、治療配合物の大規模な薬学的製造、貯蔵および配送のために適合化され得る容易さにも依存する。
【０１１５】
ナノ粒子技術は、様々な領域において適用が見出されているが、薬理学および薬物送達ではほんのわずかな適用があるだけである。様々なナノ粒子が抗癌剤および他の薬物の担体として提案されている［Ｃｏｕｖｒｅｕｒ他（１９８２）、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、７１：７９０〜９２］。他の試みでは、特定の障害を処置するためのナノ粒子の使用が推し進められている［Ｌａｂｈａｓｅｔｗａｒ他（１９９７）、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．、２４：６３〜８５］。典型的には、ナノ粒子が医薬剤とともに負荷される。
【０１１６】
ナノ粒子は、薬物送達システムのための有用なツールとして有望であることが示されているが、多くの問題が依然として存在する。いくつかの未解決の問題は、粒子を治療剤とともに負荷することに関連する。加えて、ナノ粒子は細網内皮系（ＲＥＳ）の細胞によって取り込まれるので、負荷されたナノ粒子の生物学的利用能が低下する。従って、上記の制限を有しないナノ粒子送達システムを有することは非常に好都合であると考えられる。
【０１１７】
本発明を実施する際に、本発明者は、ナノ構造（例えば、米国特許出願第６０／５４５９５５号および同第１０／８６５９５５号ならびに国際特許出願公開ＷＯ２００５／０７９１５３に記載されるナノ構造など）を含む担体組成物が、医薬剤のインビボ細胞取り込みを効率的に高めるために使用され得ることを発見した。
【０１１８】
本明細書中下記において、また、下記の実施例の節において例示されるように、本発明者は、上記のナノ構造および液体が、細胞膜を介した治療剤のインビボ浸透を高め得ることを明らかにした。例えば、ナノ構造および液体を含む担体組成物は、皮膚を介した治療剤の浸透を高めることが示された（図１３Ａ〜図１３Ｃ）。加えて、担体組成物は、細菌細胞内への抗生物剤の取り込みを高め、それにより、その生物学的利用能を増大させることが示された（図１０Ａ〜図１０Ｃ）。
【０１１９】
さらに、本発明者らは、本発明の担体組成物が、水に容易に溶解することができない薬剤の溶解および分散の両方をもたらす高い能力を含むことを明らかにした（図２６〜図４９）。加えて、本発明者らは、本発明の担体組成物が緩衝能力を含み（図１７〜図２５）、また、ペプチド薬剤を安定化できることを示した。これらの属性のすべてが、インビボ取り込みを高める本発明の組成物の能力に寄与する。
【０１２０】
従って、本発明の１つの局面によれば、有効成分としての少なくとも１つの医薬剤と、ナノ構造と、液体とを含む医薬組成物が提供される。ナノ構造は、液体の整列した流体分子によって包まれるナノメートルサイズのコア材料を含み、コア材料、および、整列した流体分子のエンベロープは定常的な物理的状態にある。ナノ構造および液体は、そのような少なくとも１つの医薬剤のインビボ取り込みを高めるように配合される（すなわち、担体）。
【０１２１】
本明細書中で使用される表現「有効成分としての医薬剤」は、医薬組成物の生物学的作用を説明することができる治療剤、化粧剤または診断剤を示す。
【０１２２】
本明細書中で使用される「医薬組成物」は、そのような有効成分の１つまたは複数と、担体組成物との調製物を示す（ともに本明細書中に記載される）。
【０１２３】
本明細書中で使用される用語「ナノ構造（ｎａｎｏｓｔｒｕｃｔｕｒｅ）」は、一つ以上の粒子を含むサブマイクロメートルスケールの構造を指し、それらの粒子の各々はナノメートルまたはサブナノメートルスケールであり、一般に「ナノ粒子」と略される。構造の異なる要素（例えばナノ粒子、分子）の間の距離は、数十ピコメートルまたはそれ未満のオーダであることができ、または数百ピコメートルから数百ナノメートルのオーダであることができる。従って、本実施態様のナノ構造は、ナノ粒子、ナノ粒子の配置、または一つ以上のナノ粒子および一つ以上の分子のいかなる配置も含むことができる。
【０１２４】
上記組成物の液体は水性液体、例えば水であることが好ましい。
【０１２５】
本発明のこの態様によれば、本発明の医薬組成物のナノ構造は、整列した流体分子によって包囲されたナノメートルサイズのコア材料を含み、整列した流体分子は互いに定常的な物理的状態にある。
【０１２６】
コア材料の例は、限定されないが、強誘電性物質、強磁性物質および圧電性物質を含む。強誘電性物質は、電場を加えることによって逆転または再配向させることができる永続的な電気的分極をある温度範囲にわたって維持する物質である。強磁性物質は、磁場を加えることによって逆転できる永続的な磁化を維持する物質である。好ましくは、ナノ構造は、コア材料の強誘電性または強磁性を保持し、それによってマクロスケールの物理的特性がナノスケール環境にもたらされる特別な特徴を有する。
【０１２７】
コア材料はまた、結晶構造を持ってもよい。            
【０１２８】
本明細書中で使用される用語「整列した流体分子」は、相互関係を有する、例えば流体分子間の相関を有する流体分子の組織化された配置を示す。例えば、一つの流体分子の即座の変位は、コア材料を包囲する一つ以上の他の流体分子の即座の変位と相互に関係されることができる。
【０１２９】
本明細書中で使用される用語「定常的な物理状態」は、物体または分子が、少なくとも局所的な最小値を有する何らかのポテンシャルによって結びついている状況を示す。そのようなポテンシャルについての代表的な例には、限定されないが、ファンデルワールスポテンシャル、湯川ポテンシャル、およびレナード・ジョーンズポテンシャルなどが含まれる。他の形態のポテンシャルもまた、考えられる。
【０１３０】
好ましくは、エンベロープの流体分子は担体組成物の液体分子と同一である。エンベロープの流体分子は、担体組成物の液体分子と同一でない追加の流体を含んでもよく、従ってエンベロープは不均一流体組成物を含んでもよい。
【０１３１】
整列した流体分子のエンベロープの形成のため、本実施態様のナノ構造は、液体の比重より低いかまたはそれに等しい比重を有することが好ましい。
【０１３２】
流体分子は液体状態またはガス状状態またはそれらの二つの混合状態のいずれかであってもよい。
【０１３３】
本発明のこの局面によれば、ナノ構造および液体は、医薬剤のインビボ取り込みを高めるように配合される。理論にとらわれることはないが、ナノ粒子間の遠距離相互作用により、本発明の医薬組成物の特異な特徴がもたらされることが考えられる。１つのそのような特徴が、本発明の担体組成物は、実施例９において明らかにされるように疎水性であり、従って、細胞膜を介した活性な薬剤の浸透を高めることができることである。例えば、実施例１、実施例２および実施例３において明らかにされるように、本発明の担体組成物は細胞内へのヌクレオチドの取り込みを高める（図１、図２および図３Ａ〜図３Ｂ）。加えて、本発明の担体組成物は細菌細胞内へのファージの取り込み（図４Ａ〜４Ｂ、図５Ａ〜図５Ｄ、図６および図７）および抗生物質の取り込み（図１０Ａ〜図１０Ｃ）を高める。
【０１３４】
本発明の担体組成物はまた、医薬剤のインビボ取り込みを、その溶解性および／または分散を増大させることによって高めることができる（図２６〜図４９）。加えて、または、代替として、本発明の担体組成物は、医薬剤のインビボ取り込みを、医薬剤に安定化環境を提供することによって高めることができる。例えば、本発明の担体組成物はタンパク質を安定化することができることが示されている（図５０Ａ〜図５０Ｂおよび図５１）。
【０１３５】
さらに、本発明者らは、本発明の組成物が水の緩衝能力よりも大きい緩衝能力を含むことを示している（図１７〜図２５）。
【０１３６】
本明細書中で使用される表現「緩衝能力」は、酸または塩基が加えられるとき、一定のｐＨを維持する組成物の能力を示す。
【０１３７】
従って、ナノ構造および液体は、任意の生物学的バリア（例えば、細胞膜、オルガネラ膜、血液関門または組織など）を介した浸透を高めるように配合することができる。例えば、ナノ構造および液体は、皮膚を浸透するように配合することができる（実施例７−図１３Ａ〜図１３Ｃ）。
【０１３８】
ナノ構造の好ましい濃度は１リットルあたり１０２０個未満のナノ構造、より好ましくは１リットルあたり１０１５個未満のナノ構造である。ナノ構造の濃度は好ましくは、本明細書中において以下に記載されるような意図される用途に従って選択される。
【０１３９】
好ましくは、液体中のナノ構造は、それらの間で引きつける静電力によってクラスター形成することができる。好ましくは、ナノ構造間の距離がクラスター形成を防止するとき（約０．５〜１０μｍ）であっても、ナノ構造は長距離の相互作用を維持することができる。
【０１４０】
ナノ構造の長距離の相互作用は本発明者によって証明されている（後述する実施例の欄中の実施例７参照）。本実施態様の担体組成物は温度変化を受け、超音波速度に対する温度変化の影響が調査された。当業者によって認識されているように、超音波速度は組成物中のナノ構造間の相互作用に関係される。後述する実施例の欄において示されているように、本発明の担体組成物は、水に対して増強された超音波速度によって特徴づけられる。
【０１４１】
本発明のこの態様に従ったナノ構造の製造は、「トップダウン」プロセスを使用して行うことができる。このプロセスは、固体粉末（例えば、鉱物、セラミック粉末、ガラス粉末、金属粉末または合成ポリマー）が、十分に高い温度に、好ましくは約７００℃を越えて加熱される下記の方法工程を含む。意図される固体粉末の例には、ＢａＴｉＯ３、ＷＯ３およびＢａ２Ｆ９Ｏ１２が含まれるが、これらに限定されない。
【０１４２】
驚いたことに、本発明者はまた、ハイドロキシアパタイト（ＨＡ）もまた本発明の液体組成物を生成するために加熱されてもよいことを示した。
【０１４３】
ハイドロキシアパタイトは、それが非毒性によって特徴づけられ、一般に人の治療のためにＦＤＡ承認されているので、特に好ましい。
【０１４４】
多くのハイドロキシアパタイト粉末がＳｉｇｍａ，ＡｌｄｒｉｃｈおよびＣｌａｒｉｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（例えばカタログＮｏ．１３０６−０６−５）のような多数の製造業者から入手可能であることが認識されるだろう。
【０１４５】
表２に示されるように、ＨＡに基づく液体組成物は全て、水と比較すると高い緩衝能力を持つ。
【０１４６】
加熱された粉末は次いで、冷たい液体に、その密度異常温度以下で、例えば３℃または２℃で浸漬される。同時に、冷たい液体および粉末は、電磁ＲＦ放射線、好ましくは５００ＭＨｚ以上のものによって照射され、それは連続波ＲＦ放射線または変調ＲＦ放射線のいずれであってもよい。
【０１４７】
述べられたように、医薬剤は、治療剤、化粧剤または診断剤であり得る。
【０１４８】
治療剤の構造的種類の例には、無機化合物または有機化合物；小さい分子（すなわち、１０００ダルトン未満）または大きい分子（すなわち、１０００ダルトンを越える）；生体分子（例えば、タンパク質性分子、これには、タンパク質（例えば、酵素またはホルモン）、ペプチド、ポリペプチド、翻訳後修飾タンパク質、抗体などが含まれる）、または、核酸分子（例えば、二本鎖ＤＮＡ、一本鎖ＤＮＡ、二本鎖ＲＮＡ、一本鎖ＲＮＡ、または、三重らせん核酸分子）、または化学物質が含まれるが、これらに限定されない。治療剤は、任意の知られている生物（動物、植物、細菌、真菌、原生生物またはウイルスが含まれるが、これらに限定されない）に由来する細胞性薬剤であり得るか、または、合成分子のライブラリーに由来する。ウイルスの治療的細胞性薬剤の一例がバクテリオファージである。下記の実施例の実施例４において、また、図４Ａ〜図４Ｂ、図５Ａ〜図５Ｄ、図６および図７において説明されるように、本発明の担体組成物は細菌内への増大したバクテリオファージの取り込みを可能にした。
【０１４９】
脳の状態の処置において特に有用でありうる治療剤の例として、抗生物剤、抗新生物剤、抗炎症剤、駆虫剤、抗真菌剤、抗ミコバクテリア剤、抗ウイルス剤、抗凝固剤、放射線治療剤、化学療法剤、細胞毒性剤、血管拡張剤、抗酸化剤、蘇生剤、抗痙攣剤、抗ヒスタミン剤、神経栄養剤、精神療法剤、抗不安鎮静剤、刺激剤、鎮静剤、鎮痛剤、麻酔剤、受胎調節剤、神経伝達物質薬剤、神経伝達物質アナログ、除去剤および受胎能強化剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５０】
本発明に従って使用されうる神経伝達物質薬剤の例として、アセチルコリン、ドーパミン、ノルエピネフリン、セロトニン、ヒスタミン、エピネフリン、ガンマ−アミノ酪酸（ＧＡＢＡ）、グリシン、グルタミン酸、アデノシン、イノシンおよびアスパラギン酸が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５１】
神経伝達物質アナログ薬剤には、神経伝達物質のアゴニストおよびアンタゴニストが含まれる。本発明において使用することができる神経伝達物質アゴニストの例として、アルモトリプタン、アニラセタム、アトモキセチン、ベンセラジド、ブロモクリプチン、ブプロピオン、カベルゴリン、シタロプラム、クロミプラミン、デシプラミン、ジアゼパム、ジヒドロエルゴタミン、ドキセピン、デュロキセチン、エレトリプタン、エスシタロプラム、フルボキサミン、ガバペンチン、イミプラミン、モクロベミド、ナラトリプタン、ネファゾドン、ネフィラセタムアカンプロサート、ニセルゴリン、ノルトリプチリン、パロキセチン、ペルゴリド、プラミペキソール、リザトリプタン、ロピニロール、セルトラリン、シブトラミン、スマトリプタン、チアガビン、トラゾドン、ベンラファキシンおよびゾルミトリプタンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５２】
本発明において使用することができる神経伝達物質アンタゴニスト薬剤の例として、６−ヒドロキシドーパミン、フェントラミン、ラウオルフィアアルカロイド、エチクロプリド、スルピリド、アトロピン、プロマジン、スコポタミン、ガラニン、クロルフェニラミン、シプロヘプタジン、ジフェニルヒドラミン、メチルセルギド、オランザピン、シタロプラム、フルオキシチン、フルオキサミン、ケタンセリン、オリダンゼトロン、ｐ−クロロフェニルアラニン、パロキセチン、セルトラリン、およびベンラファキシンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５３】
本発明において特に有用なものは、身体において特異的な作用を有するが、通常の条件のもとでは細胞膜または血液関門を良好に浸透しない治療剤（例えば、ペプチド（例えば、ニューロペプチド）など）である。加えて、細菌（例えば、グラム陰性細菌）は、その細胞膜をより透過性にしないことによって抗生物質（例えば、アミノグリコシド系、β−ラクタム系およびキノロン系など）に対する抵抗性を構築することがある。本発明の担体組成物を加えることは、これらの細菌の中へのインビボ取り込みを増大させることができ、それにより、抗生物質治療剤の有効性を高めることができる。本発明の担体組成物が特に有用であり得る別の一例が、高血圧、心不全およびアテローム性動脈硬化を処置するためのキレート化剤（例えば、ＥＤＴＡなど）と一緒の場合である。キレート化剤は、カルシウムを動脈斑から除くことにかかわる。しかしながら、動脈の細胞膜はキレート化剤に対して比較的不浸透性である。従って、本発明の担体組成物をキレート化剤と一緒に配合することによって、それらの生物学的利用能が大きく高められると考えられる。
【０１５４】
本明細書中で使用される用語「ニューロペプチド」は、ペプチドホルモン、ペプチド増殖因子および他のペプチドを含む。本発明に従って使用されることができるニューロペプチドの例としては、オキシトシン、バソプレシン、副腎皮質刺激ホルモン放出ホルモン（ＣＲＨ）、成長ホルモン放出ホルモン（ＧＨＲＨ）、黄体形成ホルモン放出ホルモン（ＬＨＲＨ）、ソマトスタチン成長ホルモン放出阻害ホルモン、甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン（ＴＲＨ）、ニューロキニンα（サブスタンスＫ）、ニューロキニンβ、ニューロペプチドＫ、サブスタンスＰ、β−エンドルフィン、ダイノルフィン、Ｍｅｔ−エンケファリン、ｌｅｕ−エンケファリン、ニューロペプチドチロシン（ＮＰＹ）、膵臓ポリペプチド、ペプチドチロシン−チロシン（ＰＹＹ）、グルカゴン様ペプチド−１（ＧＬＰ−１）、ペプチドヒスチジンイソロイシン（ＰＨＩ）、下垂体アデニル酸シクラーゼ活性化ペプチド（ＰＡＣＡＰ）、血管作用性腸ポリペプチド（ＶＩＰ）、脳性ナトリウム利尿ペプチド、カルシトニン遺伝子関連ペプチド（ＣＧＲＰ）（α型およびβ型）、コレシストキニン（ＣＣＫ）、ガラニン、膵島アミロイドポリペプチド（ＩＡＰＰ）、メラニン凝集ホルモン（ＭＣＨ）、メラノコルチン（ＡＣＴＨ、α−ＭＳＨなど）、ニューロペプチドＦＦ、ニューロテンシン、副甲状腺ホルモン関連タンパク質、アグーチ遺伝子関連タンパク質（ＡＧＲＰ）、コカインおよびアンフェタミン調節転写物（ＣＡＲＴ）／ペプチド、エンドモルフィン−１、エンドモルフィン−２、５−ＨＴ−モジュリン、ヒポクレチン／オレキシン類、ノシセプチン／オルファニンＦＱ、ノシスタチン、プロラクチン放出ペプチド、セクレトニューリンおよびウロコルチンが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５５】
前記のように本発明は、診断剤のインビボ送達を高めるために使用することができる。本発明に従って使用することができる診断剤の例には、Ｘ線画像化剤、蛍光画像化剤および造影剤が含まれる。Ｘ線画像化剤の例として、ＷＩＮ−８８８３（３，５−ジアセトアミド−２，４，６−トリヨード安息香酸エチル）（これはまた、ジアトラゾ酸（ｄｉａｔｒａｚｏｉｃ  ａｃｉｄ）のエチルエステル（ＥＥＤＡ）としても知られている）、ＷＩＮ６７７２２、すなわち、（６−エトキシ−６−オキソヘキシル−３，５−ビス（アセトアミド）−２，４，６−トリヨードベンゾアート；２−（３，５−ビス（アセトアミド）−２，４，６−トリヨードベンゾイルオキシ）酪酸エチル（ＷＩＮ１６３１８）；ジアトリゾキシ酢酸エチル（ＷＩＮ１２９０１）；２−（３，５−ビス（アセトアミド）−２，４，６−トリヨードベンゾイルオキシ）プロピオン酸エチル（ＷＩＮ１６９２３）；Ｎ−エチル−２−（３，５−ビス（アセトアミド）−２，４，６−トリヨードベンゾイルオキシ）アセトアミド（ＷＩＮ６５３１２）；イソプロピル−２−（３，５−ビス（アセトアミド）−２，４，６−トリヨードベンゾイルオキシ）アセトアミド（ＷＩＮ１２８５５）；２−（３，５−ビス（アセトアミド）−２，４，６−トリヨードベンゾイルオキシ）マロン酸ジエチル（ＷＩＮ６７７２１）；２−（３，５−ビス（アセトアミド）−２，４，６−トリヨードベンゾイルオキシ）フェニル酢酸エチル（ＷＩＮ６７５８５）；プロパン二酸，［［３，５−ビス（アセチルアミノ）−２，４，５−トリヨードベンゾイル］オキシ］ビス（１−メチル）エステル（ＷＩＮ６８１６５）；および、安息香酸，３，５−ビス（アセチルアミノ）−２，４，６−トリヨード−４−（３−エトキシ−２−ブテン酸エチル）エステル（ＷＩＮ６８２０９）が挙げられる。他の造影剤には、磁気共鳴画像化補助剤、例えば、ガドリニウムキレートまたは他の常磁性造影剤などが含まれるが、これらに限定されない。そのような化合物の例には、ガドペンテタートジメグルミン（Ｍａｇｎｅｖｉｓｔ（登録商標））およびガドテリドール（Ｐｒｏｈａｎｃｅ（登録商標））がある。米国特許出願公開第２００１０００１２７９号は、超音波造影剤として使用することができる微小泡を含むリポソームを記載する。従って、診断用造影剤はまた、脳の超音波画像化を助けるために本発明と共同して使用することができる。
【０１５６】
標識された抗体もまた、本発明のこの局面に従った診断剤として使用することができる。標識された抗体の使用は、特定のタンパク質（例えば、β−アミロイドタンパク質）の存在が疾患を示す場合、アルツハイマー病などの疾患を診断するために特に重要である。
【０１５７】
治療剤および診断剤の種類の記載、ならびに、それぞれの種類に含まれる種の列挙が、Ｍａｒｔｉｎｄａｌｅ、Ｔｈｅ  Ｅｘｔｒａ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ（第２９版、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｓｓ、Ｌｏｎｄｏｎ、１９８９）（これは本明細書により参考として組み込まれ、本明細書の一部を構成する）に見出され得る。そのような治療剤および診断剤は市販されており、および／または、この分野で知られている技術によって調製することができる。
【０１５８】
上記で述べられたように、担体組成物はまた、化粧剤の浸透を高めるために使用することができる。本発明の化粧剤は、例えば、しわ取り剤、ニキビ防止剤、ビタミン剤、表皮剥離剤、毛包刺激剤または毛包抑制剤が可能である。化粧剤の例として、レチノイン酸およびその誘導体、サリチル酸およびその誘導体、イオウを含有するＤ型およびＬ型のアミノ酸ならびにそれらの誘導体および塩（特に、Ｎ−アセチル誘導体）、α−ヒドロキシ酸（例えば、グリコール酸および乳酸など）、フィチン酸、リポ酸、コラーゲン、また、この分野で知られている多くの他の薬剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５９】
本発明の医薬剤は、任意の病状または状態を処置または診断するために選択することができる。本発明の医薬組成物は、物理的バリアによって保護されるそのような組織に対して特に好都合であり得る。例えば、皮膚は表皮の外側の層によって保護される。これは、脂質ドメインによって隔てられる緻密な角化した細胞残存物の複雑な構造体（タンパク質に基づく強靱な構造体）である。口または胃の粘膜と比較した場合、角質層は、身体に対して外部または内部のいずれかであっても、分子に対する透過性がはるかに小さい。
【０１６０】
本発明の医薬組成物によって処置または診断することができる皮膚病変の例として、ざ瘡、乾癬、白斑、ケロイド、火傷、瘢痕、しわ、乾燥症、魚鱗癬、角化症、角皮症、皮膚炎、かゆみ症、湿疹、皮膚ガン、痔および皮膚肥厚が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６１】
本発明の医薬剤は、血液関門によって保護される組織（例えば、脳）を処置するために選択することができる。本発明の薬剤によって処置または診断することができる脳の状態の例として、脳腫瘍、神経障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、ハンティングトン病、筋萎縮性側索硬化症、運動ニューロン疾患、外傷性神経傷害、多発性硬化症、急性播種性脳脊髄炎、急性壊死性出血性白質脳炎、髄鞘発育不全疾患、ミトコンドリア疾患、片頭痛障害、細菌感染、真菌感染、卒中、老化、認知症、統合失調症、うつ病、躁うつ病、不安、恐慌性障害、対人恐怖症、睡眠障害、注意欠陥、行為障害、多動性、人格障害、薬物乱用、不妊症および頭部傷害が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６２】
本発明の医薬組成物はまた、個体に対する化合物の投与を改善する他の生理学的に許容され得る担体（すなわち、上記の担体組成物に加えて）および賦形剤を含むことができる。
【０１６３】
以降、交換可能に使用されうる表現「医薬的に許容され得る担体」および表現「生理学的に許容され得る担体」は、生物に対する著しい刺激を生じさせず、投与された化合物の生物学的な活性および性質を阻害しない担体または希釈剤を示す。アジュバントはこれらの表現に含まれる。
【０１６４】
本明細書中において、用語「賦形剤」は、有効成分の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加される不活性な物質を示す。賦形剤の非限定的な例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖およびデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油およびポリエチレングリコールが含まれる。
【０１６５】
薬物の配合および投与のための様々な技術が「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、最新版）に見出され得る（これは参考として本明細書中に組み込まれる）。
【０１６６】
本発明の医薬組成物は、種々の投与経路を使用して個体（例えば、ヒトのような哺乳動物）に投与されることができる。投与経路の例は、経口送達、直腸送達、経粘膜送達、特に経鼻送達、腸管送達または非経口送達（これには、筋肉内注射、皮下注射および髄内注射、ならびに、クモ膜下注射、直接的な脳室内注射、静脈内注射、腹腔内注射、鼻内注射または眼内注射が含まれる）が含まれ得る。
【０１６７】
あるいは、例えば、患者の身体の特定部位に直接的に調製物の注射をすることによって、全身的な方法よりも局所的に調製物を投与しうる。
【０１６８】
本発明の医薬組成物は、この分野で十分に知られている様々なプロセスによって、例えば、混合、溶解、造粒、糖衣錠作製、研和、乳化、カプセル化、包括化または凍結乾燥の従来のプロセスによって製造することができる。ナノ構造および液体の製造は、本明細書中の上に記載される。
【０１６９】
本発明に従って使用される医薬組成物は、医薬品として使用され得る調製物への有効成分の加工を容易にする賦形剤および補助剤を含む他の生理学的に許容され得る担体の存在下または非存在下で本発明の担体組成物を使用して従来の様式で配合することできる。適正な配合は、選ばれた投与経路に依存する。
【０１７０】
注射の場合、医薬組成物の有効成分は、本発明の担体組成物において、好ましくは生理学的に適合し得る緩衝液（例えば、ハンクス溶液、リンゲル溶液、または生理学的な生理的食塩緩衝液など）において配合されることができる。経粘膜投与の場合、浸透されるバリアに対して適切な浸透剤が配合において使用される。そのような浸透剤はこの分野では一般に知られている。
【０１７１】
経口投与の場合、医薬組成物は、活性化合物を本発明の担体組成物と組み合わせることによって容易に配合され得る。担体組成物は、医薬組成物が、患者によって経口摂取される錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル、液剤、ゲル、シロップ、スラリー剤および懸濁物などとして配合されることを可能にする。経口使用される薬理学的調製物を、固体の賦形剤を使用し、得られた混合物を場合により粉砕し錠剤または糖衣錠コアを得るために、所望する場合には好適な補助剤を添加した後、顆粒の混合物を加工して作製することができる。好適な賦形剤には、特に、ラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトールを含む糖などの充填剤；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボメチルセルロースなど；および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの生理学的に許容され得るポリマーがある。所望する場合には、架橋されたポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩（例えば、アルギン酸ナトリウムなど）などの崩壊剤を加えることができる。
【０１７２】
糖衣錠コアには、好適なコーティングが施される。この目的のために、高濃度の糖溶液を使用することができ、この場合、糖溶液は、場合により、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー溶液および好適な有機溶媒または溶媒混合物を含有し得る。色素または顔料を、活性化合物の量を明らかにするために、または活性化合物の量の種々の組合せを特徴づけるために、錠剤または糖衣錠コーティングに加えることができる。
【０１７３】
経口使用され得る医薬組成物には、ゼラチンから作製されたプッシュ・フィット型カプセル、ならびに、ゼラチンおよび可塑剤（例えば、グリセロールまたはソルビトールなど）から作製された軟いシールされたカプセルが含まれる。プッシュ・フィット型カプセルは、充填剤（例えば、ラクトースなど）、結合剤（例えば、デンプンなど）、滑剤（例えば、タルクまたはステアリン酸マグネシウムなど）および場合により安定化剤との混合で有効成分を含有することができる。軟カプセルでは、有効成分を好適な液体（例えば、脂肪油、流動パラフィンまたは液状のポリエチレングリコールなど）に溶解または懸濁させることができる。また、安定化剤を加えることができる。経口投与される配合物はすべて、選ばれた投与経路について好適な投薬形態でなければならない。
【０１７４】
口内投与の場合、組成物は、従来の様式で配合された錠剤またはトローチの形態を取ることができる。
【０１７５】
鼻吸入による投与の場合、本発明による使用のための有効成分は、好適な噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタンまたは二酸化炭素）の使用により加圧パックまたはネブライザーからのエアロゾルスプレー提示物の形態で都合よく送達される。加圧されたエアロゾルの場合、投薬量単位が、計量された量を送達するためのバルブを備えることによって決定され得る。ディスペンサーにおいて使用される、例えば、ゼラチン製のカプセルおよびカートリッジで、化合物および好適な粉末基剤（例えば、ラクトースまたはデンプンなど）の粉末混合物を含有するカプセルおよびカートリッジを配合することができる。
【０１７６】
本明細書中に記載される医薬組成物は、例えば、ボーラス注射または連続注入による非経口投与のために配合することができる。注射用配合物は、場合により保存剤が添加された、例えば、アンプルまたは多回用量容器における単位投薬形態で提供され得る。組成物は、油性ビヒクルまたは水性ビヒクルにおける懸濁物または溶液剤またはエマルションにすることができ、また、懸濁化剤、安定化剤および／または分散化剤などの配合剤を含有することができる。
【０１７７】
非経口投与の場合、有効成分は、他の溶媒の存在下または非存在下で本発明の担体組成物と組合せられることができる。水性の注射用懸濁物は、懸濁物の粘度を増大させる物質、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトールまたはデキストランなどを含有することができる。場合により、懸濁物はまた、高濃度溶液の調製を可能にするために有効成分の溶解性を増大させる好適な安定化剤または薬剤を含有することができる。
【０１７８】
本発明の医薬組成物は、局所投与のために配合されることができる。局所配合物の例には、クリーム、軟膏、ペースト、ローション、乳状物、懸濁物、エアロゾル、スプレー、フォームおよび漿液が含まれるが、これらに限定されない。
【０１７９】
あるいは、有効成分は、使用前に本発明の担体組成物と共に構成するために粉末形態であってもよい。
【０１８０】
本発明の医薬組成物はまた、例えば、カカオバターまたは他のグリセリドなどの従来の坐薬基剤を使用して、坐薬または停留浣腸剤などの直腸用組成物に配合することができる。
【０１８１】
本発明の文脈で使用される好適な医薬組成物には、有効成分が、意図された目的を達成するために効果的な量で含有される組成物が含まれる。より具体的には、治療効果的な量は、処置されている対象の疾患の症状（例えば、虚血）を予防または緩和または改善するために効果的であるか、あるいは、処置されている対象の生存を延ばすために効果的である、有効成分（核酸構築物）の量を意味する。
【０１８２】
治療効果的な量の決定は、特に本明細書中に提供される詳細な開示に照らして、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０１８３】
本発明の方法において使用される任意の調製物について、治療効果的な量または用量は、最初はインビトロでのアッセイおよび細胞培養アッセイから推定することができる。例えば、用量は所望の濃度または滴定量を得るために動物モデルにおいて配合することが可能である。そのような情報は、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定するために使用することができる。
【０１８４】
本明細書中に記載される有効成分の毒性および治療効力は、インビトロ、細胞培養、および実験動物における標準的な薬学的手法によって決定されることができる。これらのインビトロでのアッセイおよび細胞培養アッセイ、および動物研究から得られたデータは、ヒトにおいて使用される投薬量範囲を定める際に使用することができる。投薬量は、用いられる投薬形態および利用される投与経路に依存して変化し得る。正確な配合、投与経路および投薬量は、患者の状態を考慮して個々の医師により選ぶことができる（例えば、Ｆｉｎｇｌ他、１９７５、「Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」、第１章、１頁を参照のこと）。
【０１８５】
投薬量および投薬間隔は、生物学的効果を誘導または抑制するために十分な、有効成分の血漿レベルまたは脳レベル（これは最小有効濃度（ＭＥＣ）と呼ばれる）をもたらすために個々に調節することができる。ＭＥＣは、それぞれの調製物について変化するが、場合により、インビトロのデータから推定することができる。ＭＥＣを達成するために必要な投薬量は個体の特性および投与経路に依存する。検出アッセイを使用して、血漿中濃度を測定することができる。
【０１８６】
処置される状態の重篤度および応答性に依存して、投薬は、単回または複数回投与であり得る。この場合、処置の経過は、数日から数週間まで、または、治癒が達成されるまで、もしくは、疾患状態の軽減が達成されるまで続く。
【０１８７】
投与される組成物の量は、当然のことではあるが、処置されている被験者、苦痛の重篤度、投与様式、処方医の判断などに依存する。
【０１８８】
本発明の組成物は、所望される場合には、有効成分を含有する１つ以上の単位投薬形態物を含有し得る、ＦＤＡ承認キットなどのパックまたはディスペンサーデバイスで提供され得る。パックは、例えば、金属箔またはプラスチック箔を含むことができ、例えば、ブリスターパックなどである。パックまたはディスペンサーデバイスには、投与のための説明書が添付され得る。パックまたはディスペンサーデバイスにはまた、医薬品の製造、使用または販売を規制する政府当局により定められた形式で容器に付けられた通知が伴い得る。この場合、そのような通知は、組成物の形態またはヒトもしくは動物への投与の当局による承認を反映する。そのような通知は、例えば、処方薬物に対する米国食品医薬品局により承認されたラベル書きであり得るか、または承認された製品添付文書であり得る。適合し得る医薬用担体に配合された本発明の有効成分を含む組成物はまた、適応状態を処置するために、調製され、適切な容器に入れられ、かつ表示され得る。
【０１８９】
本発明のさらなる目的、利点および新規な特徴が、限定であることが意図されない下記の実施例を検討したとき、当業者には明らかになるだろう。加えて、本明細書中上記に描かれるような、また、請求項の節において特許請求されるような本発明の様々な実施形態および態様のそれぞれは、実験的裏付けが下記の実施例において見出される。
【実施例】
【０１９０】
次に下記の実施例が参照されるが、下記の実施例は、上記の説明と一緒に、本発明を非限定様式で例示する。
【０１９１】
本明細書中で使用される用語と、本発明で利用される実験方法には、分子、生化学、微生物学および組み換えＤＮＡの技法が広く含まれている。これらの技法は文献に詳細に説明されている。例えば以下の諸文献を参照されたい：「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」Ｓａｍｂｒｏｏｋ他（１９８９）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｍ．編「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」Ｉ〜ＩＩＩ巻（１９９４）；Ａｕｓｕｂｅｌ他著「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，米国メリーランド州バルチモア（１９８９）；Ｐｅｒｂａｌ著「Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ」Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，米国ニューヨーク（１９８８）；Ｗａｔｓｏｎ他、「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ」Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｏｋｓ、米国ニューヨーク；Ｂｉｒｒｅｎ他編「Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ」１〜４巻、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、米国ニューヨーク（１９９８）；米国特許の４６６６８２８号、４６８３２０２号、４８０１５３１号、５１９２６５９号および５２７２０５７号に記載される方法；Ｃｅｌｌｉｓ，Ｊ．Ｅ．編「Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ」Ｉ〜ＩＩＩ巻（１９９４）；Ｃｏｌｉｇａｎ，Ｊ．Ｅ．編「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」Ｉ〜ＩＩＩ巻（１９９４）；Ｓｔｉｔｅｓ他編「Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（第８版）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ、米国コネティカット州ノーウォーク（１９９４）；ＭｉｓｈｅｌｌとＳｈｉｉｇｉ編「Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｗ．Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．、米国ニューヨーク（１９８０）；また利用可能な免疫検定法は、例えば以下の特許と科学文献に広範囲にわたって記載されている：米国特許の３７９１９３２号、３８３９１５３号、３８５０７５２号、３８５０５７８号、３８５３９８７号、３８６７５１７号、３８７９２６２号、３９０１６５４号、３９３５０７４号、３９８４５３３号、３９９６３４５号、４０３４０７４号、４０９８８７６号、４８７９２１９号、５０１１７７１号および５２８１５２１号；Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．編「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（１９８４）；Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．およびＨｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．Ｊ．編「Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ」（１９８５）；Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．およびＨｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．Ｊ．編「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ」（１９８４）；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ．Ｉ．編「Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ」（１９８６）；「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ」ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９８６）；「Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ」Ｐｅｒｂａｌ，Ｂ．著（１９８４）および「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」１〜３１７巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；「ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、米国カリフォルニア州サンディエゴ（１９９０）；Ｍａｒｓｈａｋ他、「Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ」、ＣＳＨＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）；なお、これらの文献類は、あたかも本願に完全に記載されているように援用するものである。その他の一般的な文献は、本明細書を通じて提供される。それらの文献に記載の方法は、当業技術界で周知であると考えられ、読者の便宜のために提供される。それらの文献に含まれるすべての情報は本願に援用するものである。
【０１９２】
実施例１
エレクトロコンピテントな細胞における形質転換効率に対する担体組成物の影響
材料および方法
エレクトロコンピテントな細胞の調製：エレクトロコンピテントな細胞を、水成分（Ｈ２Ｏ）が、種々の工程において、また、種々の組合せで担体組成物（Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）；Ｄｏ−Ｃｏｏｐ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、イスラエル）により置き換えられた標準的なプロトコルに従って調製した。Ｅ．ｃｏｌｉ細胞を対数期まで富栄養培地で成長させ、その後、遠心分離によって集めた。この富栄養培地は、アミノ酸、ビタミン、無機ミネラルおよび微量ミネラルをＬＢ培養液のレベルよりも高いレベルで提供する富栄養基剤を有する。培地は、ｐＨにおける低下を防止するために、また、リン酸源を提供するために、リン酸カルシウムによりｐＨ７．２±０．２で緩衝化される。これらの改変は、ＬＢを用いて達成され得るよりも大きい細胞収量を可能にする。ペレットを標準的な冷水で３回洗浄し、１０％のグリセロールを含有する水（標準的）、あるいは、２％、５％または１０％のグリセロールを含有する担体組成物のいずれかで再懸濁し、−８０℃で凍結した。エレクトロポレーションを、水で希釈されたｐＵＣプラスミドＤＮＡを使用して標準的な条件のもとで行い、細菌を、コロニー計数のために抗生物質を含むＬＢ平板に置床した。翌日コロニーを計数し、形質転換効率を求めた。
【０１９３】
結果
図１に例示されるように、担体組成物のすべての希釈物におけるエレクトロコンピテントな細菌の再懸濁はすべての場合において形質転換効率を（１０倍〜１７倍）増大させる。
【０１９４】
実施例２
化学的コンピテントな細胞におけるＤＮＡ取り込みに対する液体およびナノ構造の影響
種々の化学的コンピテントな細胞によるＤＮＡ取り込みに対する担体組成物の影響を調べた。
【０１９５】
方法
細菌株：ＸＬ１−Ｂｌｕｅ
ｐＵＣプラスミドＤＮＡを水または担体組成物（Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）；Ｄｏ−Ｃｏｏｐ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、イスラエル）のいずれかで１：１０希釈し、熱ショック法を使用して３つの細菌株の形質転換のために使用した。本質的には、氷上で１０分間インキュベーションした後、ＤＮＡならびに細菌を４２℃で３０分間インキュベーションし、コロニー計数のために抗生物質を含むＬＢ平板に置床した。翌日コロニーを翌計数し、形質転換効率を求めた。
【０１９６】
結果
図２に示されるように、担体組成物におけるＤＮＡの希釈は、コンピテントな細胞によるＤＮＡ取り込みを、細菌株によって異なるが、３０％〜１５０％、著しく改善した。
【０１９７】
実施例３
初代ヒト細胞培養物におけるＤＮＡ取り込みに対する担体組成物の影響
材料および方法
細胞培養：ヒト骨髄の初代細胞をＭｅｍ−α／２０％ウシ胎児血清において成長させ、細胞が細胞培養前の２４時間で８０％のコンフルエンシーであるように置床した。
【０１９８】
トランスフェクション：細胞を、製造者のプロトコルに従って標準的なＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（商標））トランスフェクション手順を使用して緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）構築物によりトランスフェクションした。トランスフェクションを、担体組成物（Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）；Ｄｏ−Ｃｏｏｐ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、イスラエル）と、コントロール実験で使用されたＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００の量の１２．５％とのミックスを使用して繰り返した。
【０１９９】
結果
図３Ａ〜図３Ｂから認められ得るように、担体組成物をＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００と一緒に使用したとき、初代細胞におけるトランスフェクション効率が増大した。
【０２００】
実施例４
ファージ−細菌の相互作用に対する担体組成物の影響
方法
ファージの型決定：黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）の２つの特定の国際ファージ株（＃６および＃８３Ａ）、および、すべての培養培地を、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｃｏｌｉｎｄａｌｅ、英国）から得た。アッセイ条件およびアッセイ手順を標準的なプロトコルに従って行った。それぞれのバクテリオファージを１および１００のＲＴＤ（通常検査希釈）で試験し、水または担体組成物（Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）；Ｄｏ−Ｃｏｏｐ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、イスラエル）に基づく（２つの異なるロットの）寒天平板で並行して増殖させた。ＳＰＳＳを使用する二元配置ＡＮＯＶＡを使用することによって統計学的分析を行った。
【０２０１】
ファージによる宿主細菌株の感染：コンピテントなＥ．ｃｏｌｉ  ＸＬ１Ｂｌｕｅ  ＭＲＡ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ）細胞を、標準的なプロトコルを使用して調製した。ファージλＧＥＭ１１（Ｐｒｏｍｅｇａ）の懸濁物を、担体組成物またはｄｄＨ２Ｏのいずれかに基づく１／１０希釈の連続でファージストックからＳＭ緩衝液で調製した。それぞれの希釈物の１μｌを２００μｌのコンピテントな細菌宿主Ｅ．ｃｏｌｉ  ＸＬ１  Ｂｌｕｅ  ＭＲＡとインキュベーションした。混合物を、バクテリオファージがそのＤＮＡを宿主細菌に注入することを可能にするために３７℃で１５分間インキュベーションした。インキュベーション後、高温の（４５℃〜５０℃）上層寒天を加え、懸濁物をＬＢ平板に分散させた。それぞれの希釈物および処理の９個の複製物を調製した。ＰＦＵ（プラーク形成ユニット）を一晩のインキュベーション後に計数した。
【０２０２】
結果
ファージ感染能：ファージ感染能に対する担体組成物の影響を、細菌にＲＴＤの限界希釈（１００ｘ）で特定のファージ株を感染させ、担体組成物の寒天平板またはコントロールの寒天平板のいずれかでのプラーク形成を調べることによって試験した。図４Ａ〜図４Ｂに示されるように、プラークが最初の２つの連続希釈物で形成された。しかしながら、希釈物＃３では、プラークが担体組成物の平板に存在するが、コントロール対応物には存在しなかった。このことは、感染能における１００倍の増大を表す。
【０２０３】
プラーク形成の時間およびプラークサイズ：細菌−バクテリオファージの反応の速度論を測定した。特定のファージ株を、コントロールの軟寒天平板または担体組成物の軟寒天平板のいずれかに１または１００のＲＴＤで置床され、３７℃でインキュベーションされたＳ．ａｕｒｅｕｓの感染のために使用した。インキュベーションの１時間以内に、プラークが担体組成物では認められたが、コントロールの平板では認められなかった。３時間後、プラークがコントロールの平板でも視認されたが（図５Ａ〜図５Ｄ）、担体組成物の平板で認められたプラークよりも依然として著しく小さかった（二元配置ＡＮＯＶＡによってｐ＝０．０１４）。
【０２０４】
細菌の溶解：図６に例示されるように、溶菌が、コントロールと比較して、担体組成物に基づく増殖培地では（３０％を越えて）著しく改善され（二元配置ＡＮＯＶＡによってｐ＝０．００１）、５時間を超えても、依然としてそのような状態のままであった。培養において２２時間後、第２の溶菌バーストが担体組成物の増殖培地では認められ、一方、コントロールでは、細菌が増殖しすぎたために、培養液は濁った。
【０２０５】
Ｅ．ｃｏｌｉ  ＸＬ１  Ｂｌｕｅ細菌におけるファージλＧＥＭ１１のＰＦＵ：ファージ（λＧＥＭ１１）の懸濁物を１／１０希釈の連続でコントロールのＳＭ緩衝液または担体組成物に基づくＳＭ緩衝液のいずれかでファージストックから調製し、コンピテントな細菌宿主と混合し、１０−３または１０−４のいずれかのファージ希釈度で寒天平板に置床した。ＰＦＵを一晩のインキュベーション後に計数した。図７に示されるように、ファージ力価における著しい増大が、１０−４のファージ希釈度において、担体組成物により希釈されたファージサンプルにおいて認められた（２倍；ｐ＝０．０１）。より低い希釈度（すなわち、より高濃度のファージ懸濁物）での影響はより低く、統計学的に有意ではなかった。それぞれの希釈物および処理の９個の複製物を調製した。ｐｆｕを１０−４のファージ希釈度での一晩のインキュベーション後に計数した。
【０２０６】
結論
担体組成物は、（１００倍までの）ＲＴＤにおける著しい低下、および、より良好なファージ感染能、ならびに、さらなる溶菌サイクルが液体培養において２２時間後に生じることを容易にする。
【０２０７】
ファージ−宿主の相互作用の速度論が、コントロールの培地と比較して、加速されたバースト時間およびより大きいプラークサイズによって認められるように、担体組成物を含有する増殖培地では著しく高められる。
【０２０８】
低いファージ濃度において、担体組成物は、標準的な溶液を上回ってＰＦＵ力価を増大させる。
【０２０９】
まとめると、担体組成物は、ほとんどの場合、細菌によるより良好なＤＮＡ取り込みを可能にし、従って、形質導入効率を増大させる効果が吸収段階において著しいことが示唆され得る。
【０２１０】
実施例５
抗生物質のコロニー取り込みに対する担体組成物の影響
細菌コロニーを抗生物質の存在下および非存在下でのペプトン／寒天平板において成長させた。抗生物質のコロニー取り込みに対する担体組成物の影響が確認された。
【０２１１】
材料および方法
コロニー成長：枯草菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｕｂｔｉｌｉｓ）の細菌コロニーを担体組成物（Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）；Ｄｏ−Ｃｏｏｐ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、イスラエル）の存在下および非存在下で事前に成長させ、続いて、１０ｇ／ｌのペプトンを含む０．５％寒天に置床した。１０５個の細菌コロニーを、担体組成物（Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）；Ｄｏ−Ｃｏｏｐ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、イスラエル）の存在下および非存在下、ならびに、ＳＰ水（Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）の場合と同じ供給源粉末と混合された逆浸透水）で事前に成長させ、続いて、１０ｇ／ｌのペプトンを含む０．５％寒天に置床した。Ｔ株細菌コロニーを担体組成物（Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）；Ｄｏ−Ｃｏｏｐ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、イスラエル）の存在下および非存在下で事前に成長させ、続いて、同じ最小阻止濃度（ＭＩＣ）でのストレプトマイシンの存在下および非存在下の両方で、５ｇ／ｌのペプトンを含む１．７５％寒天（本発明の液体組成物を使用して調製された）に置床した。
【０２１２】
結果
図８Ａおよび図８Ｂに例示されるように、細菌コロニーは担体組成物の存在下での方が大きかった。コロニーはまた、担体組成物の存在下では異なるパターンを示し、枝分かれが、コントロールの平板と比較して、より離れていた。
【０２１３】
図９Ａ〜図９Ｃに例示されるように、担体組成物は、逆浸透水と比較して、より速い細菌の成長をもたらし、一方、ＳＰ水はより遅い成長を示す。
【０２１４】
基体へのストレプトマイシン抗生物質の添加の後では、コロニーは小さくなっていた（図１０Ａおよび図１０Ｂ）。ストレプトマイシンおよび担体組成物の両方が基体に加えられたとき、コロニーのパターンが変化し、コロニーのサイズがかなり低下した（図１０Ｃ）。
【０２１５】
実施例６
細菌の成長およびフォトルミネセンスに対する担体組成物の影響
方法
生物発光性のビブリオ・ハーベイ（Ｖｉｂｒｉｏ  Ｈａｒｖｅｙｉ）細菌（ＢＢ１２０株）を、担体組成物（Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）；Ｄｏ−Ｃｏｏｐ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、イスラエル）を含む培地、または、蒸留水を含む培地のいずれかで成長させた。ルミネセンスの測定を、規定された間隔でＥＬＩＳＡリーダー（Ｍｏｄｅｌ：Ｓｐｅｃｔｒａｆｌｕｏｒ＋、ＭＦＲ：Ｔｅｃａｎ）を使用して行った。濁度を同じ装置によって測定した。
【０２１６】
結果
１５時間目の時間から得られた濁度値は、担体組成物を含む培地で事前に成長させた細菌における平均成長が、蒸留水の培地で事前に成長させた細菌の平均成長よりも６．５％±２．７５大きいことを示している（図１１）。
【０２１７】
図１２に例示されるように、１５時間目の時間から得られたルミネセンス値は、担体組成物を含む培地で事前に成長させた細菌における平均ルミネセンスが、蒸留水の培地で事前に成長させた細菌の平均ルミネセンスよりも９．９７％±２．２７大きいことを例示する。
【０２１８】
結論
これらの結果は、担体組成物がビブリオ細菌の成長を増大させ、また、ルミネセンス遺伝子の発現もまた増大させることを示している。
【０２１９】
実施例７
インビボでの市販皮膚クリームの取り込みに対する担体組成物の影響
ざ瘡に悩む患者に、市販の皮膚クリームが担体組成物（Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）；Ｄｏ−Ｃｏｏｐ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、イスラエル）の存在下および非存在下で局所投与された。皮膚クリームに対する担体組成物の治療的利益をＵＶ光Ｆａｃｉａｌ  Ｓｔａｇｅ（Ｍｏｒｉｔｅｘ、日本）によって測定した。
【０２２０】
材料および方法
皮膚クリーム：市販の皮膚クリームＣｌｅａｒａｓｉｌ（Ａｌｌｅｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）を１：１の希釈度での担体組成物の存在下で調製した。
患者の基準：顔面ざ瘡の重篤事例。
処置様式：皮膚クリームを３日間にわたって１日に１回塗った。
皮膚改善の測定：皮膚の改善をＵＶ光Ｆａｃｉａｌ  Ｓｔａｇｅ（Ｍｏｒｉｔｅｘ、日本）によって測定した。
【０２２１】
結果
図１３Ａ〜図１３Ｃに例示されるように、患者の発疹の数が、担体組成物の存在下での市販皮膚クリームによる処置の後では、３日間かけて（２２９個の発疹から１８個の発疹に）急速に低下した。担体組成物の非存在下では、発疹の数が２２９個から１８個に低下した。
【０２２２】
実施例８
超音波試験
本発明の担体組成物を超音波共振器における一連の超音波試験に供した。
【０２２３】
材料および方法
本発明の担体組成物（本実施例ではＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）として示される）および２回蒸留水における超音波速度の測定を、ＲｅｓｏＳｃａｎ（登録商標）研究システム（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、ドイツ）を使用して行った。
【０２２４】
校正：ＲｅｓｏＳｃａｎ（登録商標）研究システムの両方のセルを、０．００５％のＴｗｅｅｎ２０が補充された標準水（脱塩水、Ｒｏｔｈ．Ａｒｔ．３１７５．２、Ｃｈａｒｇｅ：０３５６９０３６）で満たし、２０℃での等温測定の期間中に測定した。両方のセルの間における超音波速度の差を、本明細書中下記でさらに詳述されるような等温測定におけるゼロ値として使用した。
【０２２５】
等温測定：ＲｅｓｏＳｃａｎ（登録商標）研究システムのセル１を参照として使用し、蒸留水（Ｒｏｔｈ  Ａｒｔ．３４７８１、ロット＃４８３６２０７７）で満たした。セル２を本発明の担体組成物で満たした。絶対値の超音波速度を２０℃で測定した。実験値の比較を可能にするために、超音波速度を２０．０００℃に補正した。
【０２２６】
結果
図１４は、２０．０５１℃で測定されたときの、観測時間の関数としての絶対値の超音波速度Ｕを本発明の担体組成物（Ｕ２）および蒸留水（Ｕ１）について示す。両方のサンプルが観測の時間枠（３５分）において安定な等温速度を示した。
【０２２７】
下記の表１には、測定された超音波速度（Ｕ１、Ｕ２）および２０℃へのそれらの補正をまとめる。補正を、蒸留水については１℃あたり３ｍ／ｓの温度−速度補正を使用して計算した。
2009526754.tif 000002
【０２２８】
図１４および表１に示されるように、蒸留水と、本発明の担体組成物との間における差が等温測定によって認められた。差ΔＵ＝Ｕ２−Ｕ１が、２０．０５１℃の温度では１５．６８ｃｍ／ｓであり、２０℃の温度では１３．６１ｃｍ／ｓであった。ΔＵの値は、ＲｅｓｏＳｃａｎ（登録商標）システムのどのノイズシグナルよりも著しく大きい。結果が第２のＲｅｓｏＳｃａｎ（登録商標）研究システムで１回繰り返された。
【０２２９】
実施例９
本発明の担体組成物の疎水的特性
本発明の担体組成物を、本発明の担体組成物が疎水的特性を含むかを明らかにするために一連の試験に供した。
【０２３０】
材料および実験方法
材料：Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）（Ｄｏ−Ｃｏｏｐ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、イスラエル）；着色剤、フェノールブロミドブルー（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）。
【０２３１】
プラスチック装置：疎水性プラスチック樹脂（商標登録された樹脂、Ｍｉｃｒｏ  ＷｅｂＦａｂ（ドイツ）による製造）から作製された上部チャンバーおよび下部チャンバーを含む装置を組み立てた。上部チャンバーおよび下部チャンバーは、疎水性の毛細管流路として作用する非常に狭い流路が４つの上部チャンバーを１つだけの下部チャンバーと相互につなぐように成形された。これらの疎水性の毛細管流路は典型的な膜または他の生体バリアを模擬する（図１５）。
【０２３２】
方法：カラーミックスを本発明の液体組成物または水により１：１の希釈度で希釈した。本発明の液体組成物の１０マイクロリットルの液滴＋カラー組成物を第１のプラスチック装置の４つの上部チャンバーに入れ、一方、並行して、本発明の液体組成物の５００マイクロリットルの液滴を上部チャンバーの真上の下部チャンバーに入れた。同様に、水の１０マイクロリットルの液滴＋カラー組成物を第２のプラスチック装置の４つの上部チャンバーに入れ、一方、並行して、水の５００マイクロリットルの液滴を上部チャンバーの真上の下部チャンバーに入れた。それぞれのプラスチック装置における色素の場所を、液滴を入れた後１５分で分析した。
【０２３３】
結果
水およびカラーミックスを含むプラスチック装置の下部チャンバーは透明であり（図１６Ａ）、一方、本発明の液体組成物およびカラーミックスを含むプラスチック装置の下部チャンバーは明るい青色を示す（図１６Ｂ）。
【０２３４】
結論
本発明の液体組成物は、疎水性の毛細管の中を流れることができるので、疎水的性質を有する。
【０２３５】
実施例１０
ナノ構造を含む担体組成物の緩衝能力
緩衝能力に対する、ナノ構造を含む担体組成物の影響を調べた。
【０２３６】
材料および方法
フェノールレッド溶液（２０ｍｇ／２５ｍｌ）を調製した。２９０μｌを、１３ｍｌのＲＯ水、または、ナノ構造を含む水（Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）、Ｄｏ−Ｃｏｏｐ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、イスラエル）の様々なバッチに加えた。それぞれの水が、フェノールレッド溶液が加えられた後でのそれらの黄色または明るいオレンジ色により、それらのすべてが酸性であったが、異なる開始ｐＨを有したことが認められた。２．５ｍｌのそれぞれの水＋フェノールレッド溶液をキュベットに加えた。水酸化ナトリウムの増大する体積をそれぞれのキュベットに加え、吸収スペクトルを分光光度計で読み取った。酸性溶液はピークを４３０ｎｍにおいて与え、アルカリ性溶液はピークを５５７ｎｍにおいて与える。波長の範囲は２００ｎｍ〜８００ｎｍであるが、０．０２Ｍ水酸化ナトリウムの添加に関連しては、グラフは５５７ｎｍの波長だけを示す。
【０２３７】
結果
表２には、水酸化ナトリウム滴定の後でのそれぞれの水の溶液の５５７ｎｍにおける吸光度がまとめられる。
2009526754.tif 000003
【０２３８】
図１７および表２に例示されるように、ＲＯ水は、水酸化ナトリウムを加えたとき、ｐＨにおけるより大きい変化を示す。ＲＯ水はわずかな緩衝作用を有するが、吸光度が０．０９Ａに達したとき、緩衝作用が「破れ」、ｐＨ変化が、より多くの水酸化ナトリウムを加えた後ではより大きくなる。ＨＡ−９９水はＲＯと類似している。ＮＭ（＃１５０９０５−１０６）（Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標））、ＡＢ水Ａｌｅｘａｎｄｅｒ（ＡＢ１−２２−１  ＨＡ  Ａｌｅｘａｎｄｅｒ）は若干の緩衝作用を有する。ＨＡＰおよびＨＡ−１８はＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）よりも一層大きい緩衝作用を示す。
【０２３９】
まとめると、この実験から、ＨＡ−９９−Ｘを除いて、試験されたナノ構造を含むすべての新しい水タイプ（ＨＡＰ、ＡＢ１−２−３、ＨＡ−１８、Ａｌｅｘａｎｄｅｒ）が、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）と類似した特性を示す。
【０２４０】
実施例１１
ナノ構造を含む担体の緩衝能力
緩衝能力に対する、ナノ構造を含む担体組成物の影響を調べた。
【０２４１】
材料および方法
水酸化ナトリウムおよび塩酸を、５０ｍｌのＲＯ水、または、ナノ構造を含む水（Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）、Ｄｏ−Ｃｏｏｐ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、イスラエル）に加え、ｐＨを測定した。実験を三連で行った。すべてにおいて、３回の実験を行った。
水酸化ナトリウム滴定：１μｌ〜１５μｌの１Ｍ水酸化ナトリウムを加えた。
塩酸滴定：１μｌ〜１５μｌの１Ｍ塩酸を加えた。
【０２４２】
結果
水酸化ナトリウム滴定についての結果を図１８Ａ〜Ｃおよび図１９Ａ〜Ｃに示す。塩酸滴定についての結果を図２０Ａ〜Ｃおよび図２１に示す。
【０２４３】
ナノ構造を含む水は、ＲＯ水について必要とされる同じｐＨレベルに到達するためにより多量の水酸化ナトリウムを要求するので、ナノ構造を含む水は緩衝能力を有する。この特徴は７．６〜１０．５のｐＨ範囲においてより著しい。加えて、ナノ構造を含む水は、ＲＯ水について必要とされる同じｐＨレベルに到達するためにより多量の塩酸を必要とする。この作用は、アルカリ範囲よりも、酸性ｐＨ範囲での方が大きい。例えば、１０μｌの水酸化ナトリウム（１Ｍ）を（総和で）加えたとき、ＲＯのｐＨが７．５６から１０．３に増大した。ナノ構造を含む水のｐＨは７．６２から９．３３に増大した。１０μｌの塩酸（０．５Ｍ）を（総和で）加えたとき、ＲＯのｐＨが７．５２から４．３１に低下し、これに対して、ナノ構造を含む水のｐＨは７．７１から６．６５に低下した。この特徴は７．７〜３のｐＨ範囲においてより著しい。
【０２４４】
実施例１２
ナノ構造を含む担体の緩衝能力
緩衝能力に対する、ナノ構造を含む担体組成物の影響を調べた。
【０２４５】
材料および方法
フェノールレッド溶液（２０ｍｇ／２５ｍｌ）を調製した。１ｍｌを、４５ｍｌのＲＯ水、または、ナノ構造を含む水（Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）、Ｄｏ−Ｃｏｏｐ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、イスラエル）に加えた。ｐＨを測定し、必要ならば、滴定した。３ｍｌのそれぞれの水＋フェノールレッド溶液をキュベットに加えた。水酸化ナトリウムまたは塩酸の増大する体積をそれぞれのキュベットに加え、吸収スペクトルを分光光度計で読み取った。酸性溶液はピークを４３０ｎｍにおいて与え、アルカリ性溶液はピークを５５７ｎｍにおいて与える。波長の範囲は２００ｎｍ〜８００ｎｍであるが、０．０２Ｍ水酸化ナトリウムの添加に関連しては、グラフは５５７ｎｍの波長だけを示す。
【０２４６】
塩酸滴定：
ＲＯ：４５ｍｌ  ｐＨ５．８
１ｍｌのフェノールレッドおよび５μｌの水酸化ナトリウム（１Ｍ）を加えた。新しいｐＨ＝７．８５
Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）（＃１５０９０５−１０６）：４５ｍｌ  ｐＨ６．３
１ｍｌのフェノールレッドおよび４μｌの水酸化ナトリウム（１Ｍ）を加えた。新しいｐＨ＝７．１９
【０２４７】
水酸化ナトリウム滴定：
Ｉ．ＲＯ：４５ｍｌ  ｐＨ５．７８
１ｍｌのフェノールレッド、６μｌの塩酸（０．２５Ｍ）および４μｌの水酸化ナトリウム（０．５Ｍ）を加えた。新しいｐＨ＝４．４３
Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）（＃１５０６０４−１０９）：４５ｍｌ  ｐＨ８．８
１ｍｌのフェノールレッドおよび４５μｌの塩酸（０．２５Ｍ）を加えた。新しいｐＨ＝４．４３
ＩＩ．ＲＯ：４５ｍｌ  ｐＨ５．７８
１ｍｌのフェノールレッドおよび５μｌの水酸化ナトリウム（０．５Ｍ）を加えた。新しいｐＨ＝６．４６
Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）（＃１２０１０４−１０７）：４５ｍｌ  ｐＨ８．６８
１ｍｌのフェノールレッドおよび５μｌの塩酸（０．５Ｍ）を加えた。新しいｐＨ＝６．９１
【０２４８】
結果
図２２Ａ〜Ｃおよび図２３Ａ〜Ｂに例示されるように、ナノ構造を含む水の緩衝能力はＲＯ水の緩衝能力よりも大きかった。
【０２４９】
実施例１３
ＲＦ水の緩衝能力
緩衝能力に対するＲＦ水の影響を調べた。
【０２５０】
材料および方法
水酸化ナトリウム（１Ｍ）の数μｌの液滴を加えて、１５０ｍｌのＲＯ水のｐＨ（ｐＨ＝５．８）を上げた。この水の５０ｍｌを３つのボトルに等分した。３つの処理を行った：
ボトル１：非処理（ＲＯ水）
ボトル２：３０Ｗにより３０分間照射されたＲＯ水。このボトルは、滴定を開始する前に実験台に１０分間放置された（ＲＦ水）。
ボトル３：ｐＨが５に達したとき、２回目の照射に供されたＲＦ水。照射後、このボトルは、滴定を開始する前に実験台に１０分間放置された。
【０２５１】
１μｌの０．５Ｍ塩酸を５０ｍｌの水に加えることによって滴定を行った。ｐＨ値が４．２未満に達したときに滴定を終えた。
【０２５２】
実験を三連で行った。
【０２５３】
結果
図２４Ａ〜Ｃおよび図２５から理解され得るように、ＲＦ水およびＲＦ２水は、ナノ構造を含む担体組成物の緩衝特性と類似する緩衝特性を含む。
【０２５４】
実施例１４
ナノ構造を含む担体の溶媒能力
下記の実験を、ナノ構造を含む担体組成物が、１ｍｇ／ｍｌの濃度で水に溶解しないことがともに知られている２つの材料を溶解することができたかどうかを確認するために行った。
【０２５５】
Ａ．エタノール／Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）（Ｄｏ−Ｃｏｏｐ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、イスラエル）型溶液における溶解
材料および方法
５回の試みを、粉末を様々な組成で溶解することを目指して行った。
組成は下記の通りであった：
Ａ．１０ｍｇの粉末（赤色／白色）＋９９０μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）。
Ｂ．１０ｍｇの粉末（赤色／白色）＋９９０μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）（９０分間脱水されたもの）。
Ｃ．１０ｍｇの粉末（赤色／白色）＋４９５μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）＋４９５μｌのＥｔＯＨ（５０％−５０％）。
Ｄ．１０ｍｇの粉末（赤色／白色）＋９００μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）＋９０μｌのＥｔＯＨ（９０％−１０％）。
Ｅ．１０ｍｇの粉末（赤色／白色）＋８２０μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）＋１７０μｌのＥｔＯＨ（８０％−２０％）。
【０２５６】
これらのチューブをボルテックスし、６０℃に１時間加熱した。
【０２５７】
結果
１．白色粉末は５個すべての試験チューブにおいて溶解しなかった。
２．赤色粉末は溶解したが、しばらくして沈降した。
色がわずかに黄色に変化したので、試験チューブＣは粉末をより良好に溶解したかのようであった。
【０２５８】
Ｂ．粉砕後の、エタノール／Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）（Ｄｏ−Ｃｏｏｐ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、イスラエル）型溶液における溶解
材料および方法
粉砕後、赤色粉末を４つの組成で溶解した：
Ａ．１／２ｍｇの赤色粉末＋４９．５μｌのＲＯ。
Ｂ．１／２ｍｇの赤色粉末＋４９．５μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）。
Ｃ．１／２ｍｇの赤色粉末＋９．９μｌのＥｔＯＨ→３９．６５μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）（２０％−８０％）。
Ｄ．１／２ｍｇの赤色粉末＋２４．７５μｌのＥｔＯＨ→２４．７５μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）（５０％−５０％）。
総反応体積：５０μｌ。
【０２５９】
これらのチューブをボルテックスし、６０℃に１時間加熱した。
【０２６０】
結果
粉砕後、赤色粉末を溶解するために、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）との組合せにおいて、わずかに２０％のエタノールだけが必要であった。
【０２６１】
Ｃ．徹底的な粉砕の後における、エタノール／Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）（Ｄｏ−Ｃｏｏｐ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、イスラエル）型溶液における溶解
材料および方法
２つの粉砕プロトコルを行った。第１は粉末単独に対してであり（バイアル１）、第２は、１００μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）（１％）に分散された粉末に対してあった（バイアル２）。
【０２６２】
これら２つの組成物を２つのバイアルに入れ、攪拌機上に置いて、材料を一晩粉砕した：
１５時間後、１００μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）を数分毎に１０μｌの滴定によって１ｍｇの赤色粉末（バイアル１）に加えた。
【０２６３】
変化を、試験チューブの写真を０時間〜２４時間の間で撮影することによってモニタリングした（図２６Ｆ〜Ｊ）。
【０２６４】
比較として、２つのチューブを観察した。２つのうちの一方が、９９０μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）（９０分間脱水されたもの）に分散された赤色粉末（１％溶液）を含み、他方が、５０％エタノール／５０％Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）を含む溶液に分散された赤色粉末（１％溶液）を含んだ。チューブを６０℃で１時間加熱した。これらのチューブが図２６Ａ〜Ｅに例示される。２４時間の期間の後、それぞれの溶液からの２μｌを採取し、その吸光度をｎａｎｏｄｒｏｐで測定した（図２７Ａ〜Ｃ）。
【０２６５】
結果
図２６Ａ〜Ｊは、徹底的な粉砕の後では、赤色材料が２４時間にわたって安定であり続け、沈下しないように、赤色材料を溶解することが可能であることを例示する。しかしながら、図２６Ａ〜Ｅは、時間が経過するとき、該材料は色が変化すること（安定でないこと）を示す。
【０２６６】
バイアル１はほとんど吸収しなかった（図２７Ａ）；溶液Ｂの吸光度ピークは、左側（２２０ｎｍ）への変化を伴って２２０ｎｍ〜２７０ｎｍの間にあり（図２７Ｂ）、溶液Ｃの吸光度ピークは２５０ｎｍ〜３３０ｎｍの間にあった（図２７Ｃ）。
【０２６７】
結論
赤色材料を粉砕することにより、該材料をＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）に分散させることがもたらされた。この分散物は２４時間にわたって持続した。該材料をガラス製バイアルにおいて維持することにより、溶液は、１００％の脱水Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）およびＥｔＯＨ−Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）の両方において、その後７２時間安定に保たれた。
【０２６８】
実施例１５
ダイゼイン、ダウノルビシンおよびｔ−ｂｏｃ誘導体を溶解する、ナノ構造を含む担体の能力
ナノ構造を含む担体組成物が３つの材料（ダイゼイン−ダウノマイシンコンジュゲート（ＣＤ−Ｄａｕ）；ダウノルビシン（セルビジン塩酸塩）；ダイゼインのｔ−ｂｏｃ誘導体（ｔｂｏｃ−Ｄａｉｄ）、これらのすべてが、水に溶解しないことが知られている）を溶解することができたかどうかを確認するために、下記の実験を行った。
【０２６９】
材料および方法
Ａ．ＣＤ−Ｄａｕの可溶化−パート１：
要求濃度：３ｍｇ／ｍｌ（Ｎｅｏｗａｔｅｒ）
属性：この材料を、ＤＭＳＯ、アセトン、アセトニトリルに溶解した。
属性：この材料をＥｔＯＨに溶解した。
【０２７０】
５個の異なるガラス製バイアルを調製した：
１．５ｍｇのＣＤ−Ｄａｕ＋１．２ｍｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）。
２．１．８ｍｇのＣＤ−Ｄａｕ＋６００μｌのアセトン。
３．１．８ｍｇのＣＤ−Ｄａｕ＋１５０μｌのアセトン＋４５０μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）（２５％アセトン）。
４．１．８ｍｇのＣＤ−Ｄａｕ＋６００μｌの１０％＊ＰＥＧ（ポリエチレングリコール）。
５．１．８ｍｇのＣＤ−Ｄａｕ＋６００μｌのアセトン＋６００μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）。
【０２７１】
これらのサンプルをボルテックスし、分光光度計での測定を、バイアル＃１、バイアル＃４およびバイアル＃５に対して行った。
【０２７２】
バイアルを、アセトンを蒸発させるために開けたままにした（バイアル＃２、バイアル＃３およびバイアル＃５）。
【０２７３】
結果
バイアル＃１（１００％のＮｅｏｗａｔｅｒ）：ＣＤ−Ｄａｕが数時間後に沈降した。
バイアル＃２（１００％のアセトン）：ＣＤ−Ｄａｕがアセトン内に懸濁されたが、４８時間後には、アセトンが材料を溶解したので、材料が部分的に沈降した。
バイアル＃３（２５％のアセトン）：ＣＤ−Ｄａｕがあまり良好に溶解せず、材料が溶液内部に漂った（溶液は濁っているようであった）。
バイアル＃４（１０％ＰＥＧ＋Ｎｅｏｗａｔｅｒ）：ＣＤ−Ｄａｕが、バイアル＃１におけるＣＤ−Ｄａｕよりも良好に溶解したが、ＣＤ−Ｄａｕは、１００％アセトンとの混合物の場合ほど良好に溶解しなかった。
バイアル＃５：ＣＤ−Ｄａｕが最初、アセトン内に懸濁され、ＣＤ−Ｄａｕが完全に溶解した後で、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）を、アセトンを交換するために加えた。最初、アセトンは、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）の存在にもかかわらず、この材料を溶解した。しかしながら、アセトンが蒸発するにつれ、材料は一部がバイアルの底に沈降した。しかしながら、材料は懸濁されたままであった。
【０２７４】
分光光度計での測定（図２８）は、アセトンの存在下および不在下の両方における材料の挙動を例示する。アセトンがある場合、水または１０％ＰＥＧにより懸濁される材料（両方の場合に、これらは１つだけのピークを示すだけである）との比較において、２つのピークが存在する。
【０２７５】
Ｂ．ＣＤ−Ｄａｕの可溶化−パート２：
アセトンが、溶液＃２、溶液＃４および溶液＃５から蒸発するとすぐに、材料はわずかに沈降した。さらなる量のアセトンをこれらのバイアルに加えた。このプロトコルは、材料をアセトンおよびＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）の存在下で溶解することを可能にし、一方で、同時に、その後の、溶液からのアセトンの蒸発を可能にする（この処置を２回行った）。２回目のサイクルの後で、液相をバイアルから取り出し、さらなる量のアセトンを沈降した材料に加えた。沈降した材料が溶解すると、それを以前に取り出された液相と一緒にした。一緒にした溶液を再び蒸発させた。材料が全く溶解しなかったので、バイアル＃１からの溶液を取り出し、代わりに、１．２ｍｌのアセトンを沈降物に加えて、材料を溶解した。その後、１．２ｍｌの１０％ＰＥＧ＋Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）もまた加え、しばらくした後で、アセトンを溶液から蒸発させた。これらの処置を終了したとき、これらのバイアルを一緒にして１つのバイアルにした（３ｍｌの総体積）。この最終的な体積の上に、３ｍｌのアセトンを、材料を溶解し且つ透明な液化溶液を収容するために加え、その後、この溶液を５０℃で再び蒸発させた。溶液は平衡に達しなかった。これは、そのような状態に一旦達すると、溶液は分離してしまうであろうという事実のためである。平衡を避けることによって、材料の水和状態が維持され、液体として保たれた。溶媒を蒸発させた後、材料を清浄なバイアルに移し、真空条件下で閉じた。
【０２７６】
Ｃ．ＣＤ−Ｄａｕの可溶化−パート３：
別の３ｍｌの材料（６ｍｌの総体積）を、２ｍｌのアセトン溶解材料と、以前の実験から残った１ｍｌの残留材料とを加えることにより作製した。
【０２７７】
１．９ｍｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）を、アセトンを含有するバイアルに加えた。
【０２７８】
１００μｌのアセトン＋１００μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）を残留材料に加えた。
【０２７９】
蒸発を、５０℃に調節されたホットプレート上で行った。
【０２８０】
この処置を、溶液が安定になるまで３回繰り返した（アセトンの添加およびその蒸発）。
【０２８１】
これら２つのバイアルをまとめて一緒にした。
【０２８２】
これら２つの溶液を一緒にした後、材料がわずかに沈降した。アセトンを加え、溶媒の蒸発を繰り返した。
【０２８３】
バイアル（３ｍｌ＋２ｍｌ）を混合する前に、本明細書中上記のパート２に記載されるような実験で調製された第１の溶液を９℃で一晩インキュベーションして、その結果、溶液が平衡に達し、平衡を維持することを確実にした。そうすることによって、既に溶解している材料は沈降しないはずである。翌朝、溶液の吸収を明らかにし、差グラフを得た（図２９）。これら２つのバイアルを一緒にした後、材料がわずかに沈降するので、吸収測定を再び行った。一部の沈降の結果として、溶液をアセトン（５ｍｌ）の添加によって１：１で希釈し、続いて、溶液の蒸発をホットプレートにて５０℃で行った。蒸発処置を行いながらでの溶液の分光光度計での読み取りはアセトンの存在のために変化した（図３０）。これらの実験から、微量のアセトンが存在するとき、アセトンは、もたらされる吸収読み取りに影響を及ぼし得ることが暗示される。
【０２８４】
Ｂ．ダウノルビシン（セルビジン塩酸塩）の可溶化
要求濃度：２ｍｇ／ｍｌ
【０２８５】
材料および方法
２ｍｇのダウノルビシン＋１ｍｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）を１つのバイアルにおいて調製し、２ｍｇのダウノルビシン＋１ｍｌのＲＯを第２のバイアルにおいて調製した。
【０２８６】
結果
この材料は、分光光度計での測定（図３１）によって例示されるように、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）および水の両方において容易に溶解した。
【０２８７】
結論
ダウノルビシンは難なくＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）および水に溶解する。
【０２８８】
Ｃ．ｔ−ｂｏｃの可溶化
要求濃度：４ｍｇ／ｍｌ
【０２８９】
材料および方法
１．１４ｍｌのＥｔＯＨを、１８．５ｍｇのｔ−ｂｏｃ（油状材料）を含有する１つのガラス製バイアルに加えた。その後、これを２つのバイアルに分け、１．７４ｍｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）またはＲＯ水を、溶液が２５％のＥｔＯＨを含むようにバイアルに加えた。分光光度計での測定の後、溶媒を溶液から蒸発させ、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）を両方のバイアルに加えてそれぞれのバイアルにおいて２．３１ｍｌの最終体積にした。これら２つのバイアルにおける溶液を１つの清浄なバイアルに一緒にし、真空条件下での輸送のためにパッケージングした。
【０２９０】
結果
分光光度計での測定が図３２に例示される。この材料はエタノールに溶解した。Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）を加え、その後、溶媒を熱（５０℃）により蒸発させた後、この材料はＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解することができた。
【０２９１】
結論
材料を溶解するための最適な方法は、最初、材料を溶媒（アセトン、酢酸またはエタノール）とともに溶解し、その後、親水性流体（Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標））を加え、続いて、その溶媒を、溶液を加熱し、溶媒を蒸発させることによって除くことである。
【０２９２】
実施例１６
ＡＧ−１４ａおよびＡＧ−１４ｂを溶解する、ナノ構造を含む担体の能力
ナノ構造を含む担体組成物が２つの薬草材料（ＡＧ−１４ＡおよびＡＧ−１４Ｂ、これらはともに、２５ｍｇ／ｍｌの濃度で水に溶解しないことが知られている）を溶解することができたかどうかを確認するために、下記の実験を行った。
【０２９３】
パート１
材料および方法
２．５ｍｇのそれぞれの材料（ＡＧ−１４ＡおよびＡＧ−１４Ｂ）を、４つのチューブのそれぞれにおける粉末の最終濃度が２．５ｍｇ／ｍｌであるように、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）単独、または、７５％のＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）および２５％のエタノールを含む溶液のいずれかで希釈した。これらのチューブをボルテックスし、５０℃に加熱して、エタノールを蒸発させるようにした。
【０２９４】
結果
エタノールの存在下および不在下でのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）における２つの薬草材料の分光光学的測定を図８１Ａ〜Ｄに示す。
【０２９５】
結論
ＲＯにおける懸濁はＡＧ−１４Ｂを溶解しなかった。Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）におけるＡＧ−１４Ｂの懸濁は凝集せず、これに対して、ＲＯでは、ＡＧ−１４Ｂが凝集した。
【０２９６】
ＡＧ−１４ＡおよびＡＧ−１４ＢはＮｅｏｗａｔｅｒ／ＲＯに溶解しなかった。
【０２９７】
パート２
材料および方法
５ｍｇのＡＧ−１４ＡおよびＡＧ−１４Ｂを６２．５μｌのＥｔＯＨ＋１８７．５μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）で希釈した。さらに６２．５μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）を加えた。これらのチューブをボルテックスし、５０℃に加熱して、エタノールを蒸発させるようにした。
【０２９８】
結果
Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）を加える前でのＥｔＯＨにおける溶解、その後、ＥｔＯＨの蒸発により、ＡＧ−１４ＡおよびＡＧ−１４Ｂが溶解した。
【０２９９】
図３４に示されるように、ＡＧ−１４ＡおよびＡＧ−１４Ｂは、４８時間を超えて懸濁状態で安定なままであった。
【０３００】
実施例１７
ペプチドを溶解する、ナノ構造を含む担体の能力
ナノ構造を含む担体組成物が７つの細胞傷害性ペプチド（これらのすべてが、水に溶解しないことが知られている）を溶解することができたかどうかを確認するために、下記の実験を行った。加えて、Ｓｋｏｖ−３細胞に対するこれらのペプチドの影響を、ナノ構造を含む担体組成物がペプチドの細胞傷害活性に影響を及ぼしたかどうかを確認するために測定した。
【０３０１】
材料および方法
可溶化：７個すべてのペプチド（ペプチドＸ、Ｘ−５ＦＵ、ＮＬＳ−Ｅ、Ｐａｌｍ−ＰＦＰＳＹＫ（ＣＭＦＵ）、ＰＦＰＳＹＫＬＲＰＧ−ＮＨ２、ＮＬＳ−ｐ２−ＬＨＲＨおよびＦ−ＬＨ−ＲＨ−ｐａｌｍ  ｋＧＦＰＳＫ）を０．５ｍＭでＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解した。分光光学的測定を行った。
【０３０２】
インビトロ実験：Ｓｋｏｖ−３細胞を９６ウエルプレートにおいてマッコイ５Ａ培地で成長させ、１５００細胞／ウエルの濃度に希釈した。２４時間後、２μｌ（０．５ｍＭ、０．０５ｍＭおよび０．００５ｍＭ）のペプチド溶液を、１０−６Ｍ、１０−７Ｍおよび１０−８Ｍの最終濃度のために１ｍｌのマッコイ５Ａ培地でそれぞれ希釈した。９個の反復物をそれぞれの処理のために作製した。それぞれのプレートは、３つの濃度での２つのペプチド、および、コントロール処理の６つのウエルを含有した。９０μｌのマッコイ５Ａ培地＋ペプチドを細胞に加えた。１時間後、１０μｌのＦＢＳを（競合を防止するために）加えた。細胞を、クリスタルバイオレットに基づく生存性アッセイで２４時間後および４８時間後に定量した。このアッセイにおける色素はＤＮＡを染色する。可溶化したとき、単層により取り込まれた色素の量をプレート読取り機で定量した。
【０３０３】
結果
Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）で希釈された７個のペプチドの分光光学的測定を図３５Ａ〜Ｇに示す。図３６Ａ〜Ｇに示されるように、溶解されたペプチドのすべてが細胞傷害活性を含んでいた。
【０３０４】
実施例１８
レチノールを溶解する、ナノ構造を含む担体の能力
ナノ構造を含む担体組成物がレチノールを溶解することができたかどうかを確認するために、下記の実験を行った。
【０３０５】
材料および方法
レチノール（ビタミンＡ）をＳｉｇｍａ（Ｆｌｕｋａ、９９％ＨＰＬＣ）から購入した。レチノールを下記の条件下でＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）において可溶化した。
ＥｔＯＨおよびＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）における１％レチノール（１ｍｌに０．０１ｇｒ）。
ＥｔＯＨおよびＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）における０．５％レチノール（１ｍｌに０．００５ｇｒ）。
ＥｔＯＨおよびＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）における０．５％レチノール（２５ｍｌに０．１２５ｇｒ）。
ＥｔＯＨおよびＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）における０．２５％レチノール（２５ｍｌに０．０６２５ｇｒ）。最終的なＥｔＯＨ濃度：１．５％
【０３０６】
ＥｔＯＨにおけるレチノールの吸光度スペクトル：レチノール溶液を、校正用グラフを作製するために、種々のレチノール濃度とともに無水ＥｔＯＨにおいて作製した。吸光度スペクトルを分光光度計で検出した。
【０３０７】
Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）における０．２５％および０．５％のレチノールを有し、ＥｔＯＨの濃度が不明である２つの溶液を分光光度計で検出した。数滴の油滴が水に溶解されないので、レチノールの実際の濃度もまた不明である。
【０３０８】
ろ過：Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）における０．２５％のレチノールを有し、ＥｔＯＨの最終濃度が１．５％である２つの溶液を調製した。これらの溶液を０．４４μｌおよび０．２μｌのフィルターでろ過した。
【０３０９】
結果
レチノールは、アルカリ性のＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）において、酸性のＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）よりも容易に可溶化した。溶液の色は黄色であり、この色は時間とともに退色した。吸光度実験において、０．５％のレチノールは、０．１２５％のレチノールと類似するパターンを示し、０．２５％のレチノールは、０．０３１２５％のレチノールと類似するパターンを示した（図３７を参照のこと）。レチノールは熱において不安定であるので、（その融点は６３℃であり）、レチノールはオートクレーブ処理することができない。ろ過は、レチノールが（ＥｔＯＨに）完全に溶解されたときに可能であった。図３８に示されるように、ろ過後の溶液におけるレチノールは０．０３１２５％未満である。両方のろ液は、類似した結果を与えた。
【０３１０】
実施例１９
材料Ｘを溶解する、ナノ構造を含む担体の能力
ナノ構造を含む担体組成物が材料Ｘを４０ｍｇ／ｍｌの最終濃度で溶解することができたかどうかを確認するために、下記の実験を行った。
【０３１１】
パート１−水およびＤＭＳＯにおける溶解性
材料および方法
第１の試験チューブにおいて、２５μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）を１ｍｇの材料「Ｘ」に加えた。第２の試験チューブにおいて、２５μｌのＤＭＳＯを１ｍｇの材料「Ｘ」に加えた。両方の試験チューブをボルテックスし、６０℃に加熱し、振とう機で１時間振とうした。
【０３１２】
結果
この材料はＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）に全く溶解しなかった（試験チューブ１）。この材料はＤＭＳＯに溶解し、黄褐色の色を与えた。これらの溶液を２４時間〜４８時間放置し、それらの安定性を経時的に分析した（図３９Ａ〜Ｂ）。
【０３１３】
結論
Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）は材料「Ｘ」を溶解せず、材料が沈降し、これに対して、ＤＭＳＯは材料「Ｘ」をほぼ完全に溶解した。
【０３１４】
パート２−ＤＭＳＯの削減および異なる溶媒における材料の安定性／速度論の経時的な試験
材料および方法
それぞれが２５μｌの総反応体積を含有する６個の異なる試験チューブを分析した：
１．１ｍｇの「Ｘ」＋２５μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）（１００％）。
２．１ｍｇの「Ｘ」＋１２．５μｌのＤＭＳＯ→１２．５μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）（５０％）。
３．１ｍｇの「Ｘ」＋１２．５μｌのＤＭＳＯ＋１２．５μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）（５０％）。
４．１ｍｇの「Ｘ」＋６．２５μｌのＤＭＳＯ＋１８．７５μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）（２５％）。
５．１ｍｇの「Ｘ」＋２５μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）＋スクロース＊（１０％）。
６．１ｍｇの「Ｘ」＋１２．５μｌのＤＭＳＯ＋１２．５μｌの脱水Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）＊＊（５０％）。
＊０．１ｇのスクロース＋１ｍｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）＝１０％Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）＋スクロース
＊＊脱水Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）は、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）を６０℃で９０分間脱水することによって得た。
【０３１５】
すべての試験チューブをボルテックスし、６０℃に加熱し、１時間振とうした。
【０３１６】
結果
６つの溶媒および材料Ｘを含む、時間０での試験チューブを図４０Ａ〜Ｃに示す。６つの溶媒および材料Ｘを含む、可溶化後６０分での試験チューブを図４１Ａ〜Ｃに示す。６つの溶媒および材料Ｘを含む、可溶化後１２０分での試験チューブを図４２Ａ〜Ｃに示す。６つの溶媒および材料Ｘを含む、可溶化後２４時間での試験チューブを図４３Ａ〜Ｃに示す。
【０３１７】
結論
すべての試験チューブにおいて、材料が２４時間後に沈降したので、材料「Ｘ」は期間中を通して安定なままではなかった。
【０３１８】
試験チューブ２の溶媒と、試験チューブ６の溶媒との間には、同じ割合の溶媒を含有するにしても、違いが認められる。これは、試験チューブ６が、非脱水のＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）より疎水性である脱水Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）を含有するためである。
【０３１９】
パート３  ＤＭＳＯのさらなる削減および異なる溶媒における材料の安定性／速度論の経時的な試験
材料および方法
１ｍｇの材料「Ｘ」＋５０μｌのＤＭＳＯをガラス製チューブに入れた。５０μｌのＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）をチューブに少しずつ加え（数秒毎に、５μｌ）、その後、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）の溶液（９％ＤＭＳＯ＋９１％Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標））５００μｌを加えた。
【０３２０】
第２のガラス製チューブにおいて、１ｍｇの材料「Ｘ」＋５０μｌのＤＭＳＯを加えた。５０μｌのＲＯをチューブに少しずつ加え（数秒毎に、５μｌ）、その後、ＲＯの溶液（９％ＤＭＳＯ＋９１％ＲＯ）５００μｌを加えた。
【０３２１】
結果
図４４Ａ〜Ｄに例示されるように、材料「Ｘ」は、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）を含む溶液に分散されたままであったが、ＲＯ水を含む溶液では、チューブの底に沈降した。図４５は、ボルテックス後６時間での、ＲＯ／Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）およびアセトンに分散された材料の吸収特徴を示す。
【０３２２】
結論
材料「Ｘ」が、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）と比較したとき、ＲＯに異なって溶解すること、および、材料「Ｘ」は、ＲＯと比較したとき、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）においてより安定であることが明らかである。分光光度計での測定（図４５）からは、グラフ下面積がＲＯの場合よりも大きいので、材料「Ｘ」が、５時間後でさえ、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）にはより良好に溶解していたことが明らかである。Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）は材料「Ｘ」を水和することが明らかである。ＤＭＳＯの量を２０％〜８０％減らすことができ、また、材料「Ｘ」を水和し、材料「Ｘ」をＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）に分散する、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に基づく溶液を得ることができる。
【０３２３】
実施例２０
ＳＰＬ２１０１およびＳＰＬ５２１７を溶解する、ナノ構造を含む担体の能力
ナノ構造を含む担体組成物が材料ＳＰＬ２１０１およびＳＰＬ５２１７を３０ｍｇ／ｍｌの最終濃度で溶解することができたかどうかを確認するために、下記の実験を行った。
【０３２４】
材料および方法
ＳＰＬ２１０１をその最適な溶媒（エタノール）に溶解し（図４６Ａ）、ＳＰＬ５２１７をその最適な溶媒（アセトン）に溶解した（図４６Ｂ）。これら２つの化合物をガラス製バイアルに入れ、冷暗所環境で保った。微量の溶媒が全く認められなくなるまで、溶媒の蒸発をデシケータにおいて長時間行い、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）を溶液に加えた。
【０３２５】
結果
ＳＰＬ２１０１およびＳＰＬ５２１７は、図４７Ａ〜Ｂにおける分光光度計データによって示されるように、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解した。
【０３２６】
実施例２１
タキソールを溶解する、ナノ構造を含む担体の能力
ナノ構造を含む担体組成物が材料タキソール（パクリタキセル）を０．５ｍＭの最終濃度で溶解することができたかどうかを確認するために、下記の実験を行った。
【０３２７】
材料および方法
可溶化：０．５ｍＭのタキソール溶液を、ＤＭＳＯ、または、１７％のＥｔＯＨを伴うＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）のいずれかで調製した（４ｍｌにおいて０．００１７ｇｒ）。吸光度を分光光度計により検出した。
細胞生存性アッセイ：１５００００個の２９３Ｔ細胞を３ｍｌのＤＭＥＭ培地とともに６ウエルプレートに播種した。それぞれの処理物を、ＲＯまたはＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）に基づくＤＭＥＭ培地で成長させた。タキソール（Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）またはＤＭＳＯに溶解されたもの）を１．６６６μＭの最終濃度に加えた（３ｍｌの培地中１０μｌの０．５ｍＭタキソール）。細胞をタキソールによる２４時間処理の後で集め、死細胞を検出するためのトリパンブルー溶液を使用して計数した。
【０３２８】
結果
タキソールは、図４８Ａ〜Ｂに示されるように、ＤＭＳＯおよびＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）の両方に溶解した。タキソールの様々な溶液の後での２９３Ｔ細胞の生存性を図４９に示す。
【０３２９】
結論
タキソールは、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）における溶液の後で細胞傷害作用を含んでいた。
【０３３０】
実施例２２
ナノ構造を含む担体の安定化作用
ナノ構造を含む担体組成物がタンパク質の安定性をもたらしたかを確認するために、下記の実験を行った。
【０３３１】
材料および方法
２つの市販のＴａｑポリメラーゼ酵素（Ｐｅｑ−ｌａｂおよびＢｉｏ−ｌａｂ）を、ｄｄＨ２Ｏ（ＲＯ）におけるそれらの活性、および、ナノ構造を含む担体（Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）、Ｄｏ−Ｃｏｏｐ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、イスラエル）におけるそれらの活性を求めるために、ＰＣＲ反応において調べた。酵素を１時間〜２．５時間までの種々の期間にわたって９５℃に加熱した。２つのタイプの反応液を作製した：
水のみ−酵素および水のみを煮沸した。
中味すべて−反応成分のすべてを煮沸した（酵素、水、緩衝液、ｄＮＴＰ類、ゲノムＤＮＡおよびプライマー）。
【０３３２】
煮沸後、必要とされる任意のさらなる反応成分をＰＣＲチューブに加え、通常のＰＣＲプログラムを３０サイクルに設定した。
【０３３３】
結果
図５０Ａ〜Ｂに示されるように、ナノ構造を含む担体組成物は、成分のすべてが熱ストレスに供された条件、および、酵素のみが熱ストレスに供された条件の両方の下で、酵素を加熱から保護した。対照的に、ＲＯ水は、成分のすべてが熱ストレスに供された条件下で、酵素を加熱から保護しただけであった。
【０３３４】
実施例２３
ナノ構造を含む担体の安定化作用のさらなる例示
ナノ構造を含む担体組成物が２つの市販のＴａｑポリメラーゼ酵素（Ｐｅｑ−ｌａｂおよびＢｉｏ−ｌａｂ）の安定性をもたらしたかを確認するために、下記の実験を行った。
【０３３５】
材料および方法
ＰＣＲ反応を下記のように設定した：
Ｐｅｑ−ｌａｂサンプル：ナノ構造を含む担体組成物（Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）、Ｄｏ−Ｃｏｏｐ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、イスラエル）、または、蒸留水（逆浸透＝ＲＯ）のいずれか２０．４μｌ。
０．１μｌのＴａｑポリメラーゼ（Ｐｅｑ−ｌａｂ、Ｔａｑ  ＤＮＡポリメラーゼ、５Ｕ／μｌ）
【０３３６】
３つのサンプルを設定し、９５℃の一定温度でのＰＣＲ装置に入れた。インキュベーション時間は、６０分、７５分および９０分であった。
【０３３７】
Ｔａｑ酵素の煮沸の後、下記の成分を加えた：
２．５μｌの１０Ｘ反応緩衝液Ｙ（Ｐｅｑ−ｌａｂ）
０．５μｌのｄＮＴＰ類（１０ｍＭ）（Ｂｉｏ−ｌａｂ）
１μｌのプライマー  ＧＡＰＤＨミックス  １０ｐｍｏｌ／μｌ
０．５μｌのゲノムＤＮＡ  ３５μｇ／μｌ
【０３３８】
Ｂｉｏｌａｂサンプル
ナノ構造を含む担体（Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）、Ｄｏ−Ｃｏｏｐ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、イスラエル）、または、蒸留水（逆浸透＝ＲＯ）のいずれか１８．９μｌ。
０．１μｌのＴａｑポリメラーゼ（Ｂｉｏ−ｌａｂ、Ｔａｑポリメラーゼ、５Ｕ／μｌ）
【０３３９】
５つのサンプルを設定し、９５℃の一定温度でのＰＣＲ装置に入れた。インキュベーション時間は、６０分、７５分、９０分、１２０分および１５０分であった。
【０３４０】
Ｔａｑ酵素の煮沸の後、下記の成分を加えた：
２．５μｌのＴＡＱ  １０Ｘ緩衝液（Ｍｇ非含有）（Ｂｉｏ−ｌａｂ）
１．５μｌのＭｇＣｌ２（２５ｍＭ）（Ｂｉｏ−ｌａｂ）
０．５μｌのｄＮＴＰ類（１０ｍＭ）（Ｂｉｏ−ｌａｂ）
１μｌのプライマー  ＧＡＰＤＨミックス（１０ｐｍｏｌ／μｌ）
０．５μｌのゲノムＤＮＡ（３５μｇ／μｌ）
【０３４１】
それぞれの処理（ＮｅｏｗａｔｅｒまたはＲＯ）のために、陽性コントロールおよび陰性コントロールを作製した。陽性コントロールは、酵素を煮沸することを伴わないものであった。陰性コントロールは、酵素を煮沸することを伴わず、かつ、ＤＮＡを反応において伴わないものであった。ＰＣＲミックスを、煮沸ｔａｑアッセイ、ならびに、コントロール反応のために作製した。
【０３４２】
サンプルをＰＣＲ装置に入れ、下記のように操作した：
ＰＣＲプログラム：
１．９４℃で２分間の変性
２．９４℃で３０秒間の変性
３．６０℃で３０秒間のアニーリング
４．７２℃で３０秒間の伸長
工程２〜４を３０回繰り返す
５．７２℃で１０分間の伸長
【０３４３】
結果
図５１に示されるように、ナノ構造を含む担体組成物は、１．５時間までの期間、両方の酵素を熱ストレスから保護した。
【０３４４】
明確にするため別個の実施態様で説明されている本発明の特定の特徴は単一の実施態様に組み合わせて提供することもできることは分かるであろう。逆に、簡潔にするため単一の実施態様で説明されている本発明の各種の特徴は別個にまたは適切なサブコンビネーションで提供することもできる。
【０３４５】
本発明はその特定の実施態様によって説明してきたが、多くの別法、変更および変形があることは当業者には明らかであることは明白である。従って、本発明は、本願の請求項の精神と広い範囲の中に入るこのような別法、変更および変形すべてを包含するものである。本願で挙げた刊行物、特許および特許願はすべて、個々の刊行物、特許および特許願が各々あたかも具体的にかつ個々に引用提示されているのと同程度に、全体を本明細書に援用するものである。さらに、本願で引用または確認したことは本発明の先行技術として利用できるという自白とみなすべきではない。
【図面の簡単な説明】
【０３４６】
【図１】標準的溶液（９０％水、１０％グリセロール）に、または、増大する濃度の担体組成物およびグリセロールに再懸濁された電気的コンピテントなＥ．ｃｏｌｉ細菌のコロニー形成ユニット（ＣＦＵ）の数を表す棒グラフである。
【図２】ｐＵＣプラスミドＤＮＡにより形質転換され、水または担体組成物のいずれかで１：１０希釈された３つの異なる化学的コンピテントな細菌株の形質転換効率を表す棒グラフである。
【図３】緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）構築物の初代ヒト細胞へのトランスフェクションの後４８時間での蛍光顕微鏡画像の写真である。
【図４】ファージ株＃６をスポットした後におけるＳ．ａｕｒｅｕｓの細菌叢を含有する寒天平板の写真である。
【図５】ファージ株＃８３Ａ（図５Ａ〜図５Ｂ）およびファージ株＃６（図５Ｃ〜図５Ｄ）をスポットし、３７℃で３時間インキュベーションした後におけるＳ．ａｕｒｅｕｓの細菌叢を含有する寒天平板の写真である。
【図６】コントロールＬＢ培養液または担体組成物ＬＢ培養液のいずれかにおけるＳ．ａｕｒｅｕｓのファージ株＃６感染およびファージ株＃８３Ａ感染を例示する棒グラフである。
【図７】ファージλＧＥＭ１１の希釈物をコンピテントな細菌宿主に加えた後で得られたプラーク形成ユニット（ｐｆｕ）の数を例示するグラフである。
【図８】担体組成物の存在下（図８Ｂ）および非存在下（図８Ａ）で事前に成長させた枯草菌細菌コロニーを含む寒天平板の写真である。
【図９】担体組成物の存在下（図９Ｃ）および非存在下（図９Ｂ）、ならびに、ＳＰ水（担体組成物の場合と同じ供給源粉末と混合された逆浸透水）の存在下（図９Ａ）で事前に成長させた１０５個の細菌コロニーを含む寒天平板の写真である。
【図１０】担体組成物の存在下（図１０Ｃ）および非存在下（図１０Ａ〜図１０Ｂ）、ともにストレプトマイシンの存在下（図１０Ｂ〜図１０Ｃ）および非存在下（図１０Ａ）で事前に成長させたＴ株細菌コロニーを含む寒天平板の写真である。
【図１１】蒸留水または担体組成物において成長させたビブリオ・ハーベイ細菌の経時的な濁度を明らかにするプロットグラフである。
【図１２】蒸留水または担体組成物において成長させたビブリオ・ハーベイ細菌の経時的なルミネセンスを明らかにするプロットグラフである。
【図１３Ａ】担体組成物で希釈された皮膚クリームの３日間の処置の後での同一女性の写真、および、女性がその皮膚のマークされた領域に有する発疹の数［赤色の発疹は感染の第１の段階を示し、黄色の発疹は感染の第２のより進行した段階を示す］を示すコンピューター読み取りである（図１３Ａは１日の処置の後での写真および読み取りである）。
【図１３Ｂ】担体組成物で希釈された皮膚クリームの３日間の処置の後での同一女性の写真、および、女性がその皮膚のマークされた領域に有する発疹の数［赤色の発疹は感染の第１の段階を示し、黄色の発疹は感染の第２のより進行した段階を示す］を示すコンピューター読み取りである（図１３Ｂは２日の処置の後での写真および読み取りである）。
【図１３Ｃ】担体組成物で希釈された皮膚クリームの３日間の処置の後での同一女性の写真、および、女性がその皮膚のマークされた領域に有する発疹の数［赤色の発疹は感染の第１の段階を示し、黄色の発疹は感染の第２のより進行した段階を示す］を示すコンピューター読み取りである（図１３Ｃは３日の処置の後での写真および読み取りである）。
【図１４】観測時間の関数としての本発明の液体組成物における絶対的な超音波速度の等温測定の結果を示す。
【図１５】４つの上部流路と、毛細管流路によりつながれた１つの下部流路とを含むプラスチック装置の写真である。
【図１６】色素および希釈剤を上部流路に加えた後のプラスチック装置の写真である。
【図１７】５５７ｎｍでの吸光度によって測定されたときの様々な水組成物の水酸化ナトリウム滴定を例示するグラフである。
【図１８】ｐＨによって測定されたときの、ナノ構造を含む水の水酸化ナトリウム滴定、および、ＲＯ水の水酸化ナトリウム滴定を例示する、三連で行われた実験のグラフである（図１８ａ〜図１８ｃ）。
【図１９】ｐＨによって測定されたときの、ナノ構造を含む水の水酸化ナトリウム滴定、および、ＲＯ水の水酸化ナトリウム滴定を例示するグラフである。それぞれのグラフは３つの三連での実験をまとめる（図１９ａ〜図１９ｃ）。
【図２０】ｐＨによって測定されたときの、ナノ構造を含む水の塩酸滴定、および、ＲＯ水の塩酸滴定を例示する、三連で行われた実験のグラフである（図２０ａ〜図２０ｃ）。
【図２１】ｐＨによって測定されたときの、ナノ構造を含む水の塩酸滴定、および、ＲＯ水の塩酸滴定を例示するグラフである。それぞれのグラフは３つの三連での実験をまとめる。
【図２２】５５７ｎｍでの吸光度によって測定されたときの、ナノ構造を含む水、および、ＲＯ水の塩酸滴定（図２２ａ）および水酸化ナトリウム滴定（図２２ｂ〜図２２ｃ）を例示するグラフである。
【図２３】ＲＯの塩酸滴定の後でのキュベットの写真（図２３ａ）、および、ナノ構造を含む水の塩酸滴定の後でのキュベットの写真（図２３ｂ）である。それぞれのキュベットは１μｌの塩酸の添加を例示する。
【図２４】ＲＦ水の塩酸滴定を例示するグラフ（図２４ａ）、ＲＦ２水の塩酸滴定を例示するグラフ（図２４ｂ）、および、ＲＯ水の塩酸滴定を例示するグラフ（図２４ｃ）である。矢印は２回目の照射を示す。
【図２５】ＲＯ水と比較したときの、ＦＲ２水の塩酸滴定を例示するグラフである。実験を３回繰り返した。３回の実験のすべてについての平均値がＲＯ水についてプロットされた。
【図２６ａ．ｂ．ｆ．ｇ】粉末の分散を３回試みた後、様々な時間間隔での、赤色粉末およびＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）を含む溶液の写真である。
【図２６Ｃ．Ｄ．Ｈ．Ｉ】粉末の分散を３回試みた後、様々な時間間隔での、赤色粉末およびＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）を含む溶液の写真である。
【図２６Ｅ．Ｊ】粉末の分散を３回試みた後、様々な時間間隔での、赤色粉末およびＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）を含む溶液の写真である。
【図２７ａ】ナノドロップで測定されたときの、一晩の粉砕の後での赤色粉末＋１００μｌのＮｅｏｗａｔｅｒの溶液からの２μｌの吸光度の読み取りである。
【図２７ｂ】ナノドロップで測定されたときの、１００％の脱水されたＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）を加えた後での赤色粉末の溶液からの２μｌの吸光度の読み取りである。
【図２７ｃ】ナノドロップで測定されたときの、ＥｔＯＨ＋Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）（５０％−５０％）を加えた後での赤色粉末の溶液からの２μｌの吸光度の読み取りである。
【図２８】バイアル＃１（ＣＤ−Ｄａｕ＋Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標））、バイアル＃４（ＣＤ−Ｄａｕ＋１０％ＰＥＧ／Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標））およびバイアル＃５（ＣＤ−Ｄａｕ＋５０％アセトン＋５０％Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標））の分光光度計測定のグラフである。
【図２９】Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）における溶解物（青色線）、および、微量の溶媒（アセトン）を伴う溶解物（ピンク色線）の分光光度計測定のグラフである。
【図３０】Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）における溶解物（青色線）および、アセトンにおける溶解物（ピンク色線）の分光光度計測定のグラフである。淡青色および黄色の線はアセトン蒸発の異なる割合を表し、紫色線はアセトン非含有溶液である。
【図３１】ＣＤ−Ｄａｕの２００ｎｍ〜８００ｎｍにおける分光光度計測定のグラフである。青色線はＲＯにおける溶解物を表し、一方、ピンク色線はＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）における溶解物を表す。
【図３２】ｔ−ｂｏｃの２００ｎｍ〜８００ｎｍにおける分光光度計測定のグラフである。青色線はＲＯにおける溶解物を表し、一方、ピンク色線はＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）における溶解物を表す。
【図３３】２００ｎｍ〜８００ｎｍにおける分光光度計測定のグラフである。
【図３４】エタノール蒸発後２４時間でのＡＧ−１４ＡおよびＡＧ１４Ｂの懸濁物の写真である。
【図３５Ａ−Ｄ】Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたペプチドの分光光度計測定のグラフである。
【図３５Ｅ−Ｇ】Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたペプチドの分光光度計測定のグラフである。
【図３６Ａ−Ｄ】クリスタルバイオレットアッセイにより測定されたときの、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたペプチドの細胞傷害作用を例示する棒グラフである。
【図３６Ｅ−Ｇ】クリスタルバイオレットアッセイにより測定されたときの、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）に溶解されたペプチドの細胞傷害作用を例示する棒グラフである。
【図３７】エタノールおよびＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）におけるレチノールの吸光度のグラフである。
【図３８】ろ過後の、エタノールおよびＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）におけるレチノールの吸光度のグラフである。
【図３９】試験チューブ（左側はＮｅｏｗａｔｅｒ（商標）および物質「Ｘ」を含有し、右側はＤＭＳＯおよび物質「Ｘ」を含有する）の写真である。
【図４０】加熱および振とう処置を行った直後における、物質「Ｘ」を溶媒１および溶媒２とともに含有する試験チューブ（図４０Ａ）、物質「Ｘ」を溶媒３および溶媒４とともに含有する試験チューブ（図４０Ｂ）、ならびに、物質「Ｘ」を溶媒５および溶媒６とともに含有する試験チューブ（図４０Ｃ）の写真である。
【図４１】加熱および振とう処置を行った後６０分における、物質「Ｘ」を溶媒１および溶媒２とともに含有する試験チューブ（図４１Ａ）、物質「Ｘ」を溶媒３および溶媒４とともに含有する試験チューブ（図４１Ｂ）、ならびに、物質「Ｘ」を溶媒５および溶媒６とともに含有する試験チューブ（図４１Ｃ）の写真である。
【図４２】加熱および振とう処置を行った後１２０分における、物質「Ｘ」を溶媒１および溶媒２とともに含有する試験チューブ（図４２Ａ）、物質「Ｘ」を溶媒３および溶媒４とともに含有する試験チューブ（図４２Ｂ）、ならびに、物質「Ｘ」を溶媒５および溶媒６とともに含有する試験チューブ（図４２Ｃ）の写真である。
【図４３】加熱および振とう処置を行った後２４時間における、物質「Ｘ」を溶媒１および溶媒２とともに含有する試験チューブ（図４３Ａ）、物質「Ｘ」を溶媒３および溶媒４とともに含有する試験チューブ（図４３Ｂ）、ならびに、物質「Ｘ」を溶媒５および溶媒６とともに含有する試験チューブ（図４３Ｃ）の写真である。
【図４４】Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）および低下した濃度のＤＭＳＯを含む溶媒に物質「Ｘ」を含むガラス製ボトルの振とう直後の写真（図４４Ａ）、振とう後３０分の写真（図４４Ｂ）、振とう後６０分の写真（図４４Ｃ）および振とう後１２０分の写真（図４４Ｄ）である。
【図４５】分光光度計によって測定されたときの、ボルテックス後６時間のＲＯ／Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）における物質「Ｘ」の吸収特徴を例示するグラフである。
【図４６】分光光度計によって測定されたときの、エタノールにおけるＳＰＬ２１０１の吸収特徴を例示するグラフ（図４６ａ）、および、アセトンにおけるＳＰＬ５２１７の吸収特徴を例示するグラフ（図４６ｂ）である。
【図４７】分光光度計によって測定されたときの、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）におけるＳＰＬ２１０１の吸収特徴を例示するグラフ（図４７Ａ）、および、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）におけるＳＰＬ５２１７の吸収特徴を例示するグラフ（図４７Ｂ）である。
【図４８】分光光度計によって測定されたときの、Ｎｅｏｗａｔｅｒ（商標）におけるタキソールの吸収特徴を例示するグラフ（図４８Ａ）、および、ＤＭＳＯにおけるタキソールの吸収特徴を例示するグラフ（図４８Ｂ）である。
【図４９】２９３Ｔ細胞に対する異なる溶剤におけるタキソールの細胞傷害作用を例示する棒グラフである。
【図５０】２つの異なるＴａｑポリメラーゼを使用する実施例２２に記載されるプロトコルに従って加熱した後、ナノ構造を含む液体組成物の存在下および不在下で得られたＰＣＲ生成物を例示する、臭化エチジウムにより染色されたＤＮＡゲルの写真である（図５０Ａ〜図５０Ｂ）。
【図５１】２つの異なるＴａｑポリメラーゼを使用する実施例２３に記載されるプロトコルに従って加熱した後、ナノ構造を含む液体組成物の存在下および不在下で得られたＰＣＲ生成物を例示する、臭化エチジウムにより染色されたＤＮＡゲルの写真である。
【図１】
2009526754.tif 000004
【図２】
2009526754.tif 000005
【図３】
2009526754.tif 000006
【図４】
2009526754.tif 000007
【図５】
2009526754.tif 000008
【図６】
2009526754.tif 000009
【図７】
2009526754.tif 000010
【図８】
2009526754.tif 000011
【図９】
2009526754.tif 000012
【図１０】
2009526754.tif 000013
【図１１】
2009526754.tif 000014
【図１２】
2009526754.tif 000015
【図１３Ａ】
2009526754.tif 000016
【図１３Ｂ】
2009526754.tif 000017
【図１３Ｃ】
2009526754.tif 000018
【図１４】
2009526754.tif 000019
【図１５】
2009526754.tif 000020
【図１６】
2009526754.tif 000021
【図１７】
2009526754.tif 000022
【図１８】
2009526754.tif 000023
【図１９】
2009526754.tif 000024
【図２０】
2009526754.tif 000025
【図２１】
2009526754.tif 000026
【図２２】
2009526754.tif 000027
【図２３】
2009526754.tif 000028
【図２４】
2009526754.tif 000029
【図２５】
2009526754.tif 000030
【図２６ａ．ｂ．ｆ．ｇ】
2009526754.tif 000031
【図２６Ｃ．Ｄ．Ｈ．Ｉ】
2009526754.tif 000032
【図２６Ｅ．Ｊ】
2009526754.tif 000033
【図２７ａ】
2009526754.tif 000034
【図２７ｂ】
2009526754.tif 000035
【図２７ｃ】
2009526754.tif 000036
【図２８】
2009526754.tif 000037
【図２９】
2009526754.tif 000038
【図３０】
2009526754.tif 000039
【図３１】
2009526754.tif 000040
【図３２】
2009526754.tif 000041
【図３３】
2009526754.tif 000042
【図３４】
2009526754.tif 000043
【図３５Ａ−Ｄ】
2009526754.tif 000044
【図３５Ｅ−Ｇ】
2009526754.tif 000045
【図３６Ａ−Ｄ】
2009526754.tif 000046
【図３６Ｅ−Ｇ】
2009526754.tif 000047
【図３７】
2009526754.tif 000048
【図３８】
2009526754.tif 000049
【図３９】
2009526754.tif 000050
【図４０】
2009526754.tif 000051
【図４１】
2009526754.tif 000052
【図４２】
2009526754.tif 000053
【図４３】
2009526754.tif 000054
【図４４】
2009526754.tif 000055
【図４５】
2009526754.tif 000056
【図４６】
2009526754.tif 000057
【図４７】
2009526754.tif 000058
【図４８】
2009526754.tif 000059
【図４９】
2009526754.tif 000060
【図５０】
2009526754.tif 000061
【図５１】
2009526754.tif 000062
【国際調査報告】
2009526754.tif 000063