(57)【要約】ＲＮアーゼＬアクチベーターおよびそれを使用する方法を本明細書に開示する。これらのＲＮアーゼＬアクチベーターは、パラインフルエンザウイルス３型（ＨＰＩＶ３）、ピコルナウイルス、および脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）に対する抗ウイルス活性を含めて、抗ウイルス活性を有する。開示されたＲＮアーゼＬアクチベーターは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで平滑筋細胞増殖も抑制し、したがって再狭窄を治療する上で有用である。予想外なことに、開示されたＲＮアーゼアクチベーターは細胞毒性でないことも見出された。これらの発見に基づいて、新規ＲＮアーゼＬアクチベーター、これらのＲＮアーゼＬアクチベーターを含む医薬組成物、およびこれらのＲＮアーゼＬアクチベーターを用いた治療方法を本明細書に開示する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬として許容できる担体または希釈剤、および次の構造式で表される化合物
【化１】
2009536622.tif 000006
［式中、
環Ａおよび環Ｂは、任意選択かつ独立に、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において置換されており；
Ｙは、ＣＨ、Ｎ、またはＮ＋−Ｏ−であり；
Ｚ１およびＺ２は、独立に、ＯまたはＳであり；
Ｚ３はＣＲ１またはＮであり；
Ｒ１は、−Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ３０、またはハロゲン、ヒドロキシル、−ＯＲ２０、ニトロ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ３０、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、および−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２０から選択される１個または複数の基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ５アルキル基であり、あるいはＲ１は、次の構造式で表される基
【化２】
2009536622.tif 000007
であり；
Ｒ２は、−Ｈ、またはハロゲン、ヒドロキシル、−ＯＲ２０、ニトロ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２０、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、または−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２０から選択される１個または複数の基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ５アルキル基であり；
Ｒ２０は、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ１〜Ｃ３ハロアルキルであり；
Ｒ３０は、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、または
【化３】
2009536622.tif 000008
から選択される構造式で表される基である］
またはその医薬として許容できる塩を含む医薬組成物。
【請求項２】
Ｚ１がＯであり、Ｚ２がＳである、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項３】
前記化合物が次の構造式
【化４】
2009536622.tif 000009
で表されるか、またはその医薬として許容できる塩である、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
環Ａが、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２１、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、またはヒドロキシル、−ＯＲ２１、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル基で置換されており、あるいは環Ａが、次の構造式で表される基
【化５】
2009536622.tif 000010
で置換されていてもよく；
環Ｂが、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２１、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、−（ＣＨ２）３Ｒ４０、−ＣＨ２ＯＣＨ２Ｒ４０、−ＯＣＨ２Ｒ４０、またはヒドロキシル、−ＯＲ２１、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル基で置換されており；
Ｒ２１が、それぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ１〜Ｃ３ハロアルキルであり；
Ｒ４０が、−ＣＯＯＨ、−ＰＯ３Ｈ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＰＯ２Ｈ、または−ＳＯ２Ｈである、
請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項５】
環Ｂが、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２１、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、−（ＣＨ２）３Ｒ４０、−ＣＨ２ＯＣＨ２Ｒ４０、またはヒドロキシル、−ＯＲ２１、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル基で置換されており；
Ｒ２１が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ１〜Ｃ３ハロアルキルである、
請求項４に記載の医薬組成物。
【請求項６】
Ｒ２０が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ２１が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ３０が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ２が−Ｈである、請求項４または５に記載の医薬組成物。
【請求項７】
前記化合物が次の構造式
【化６】
2009536622.tif 000011
で表されるか、またはその医薬として許容できる塩である、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項８】
環Ａが、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２１、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、またはヒドロキシル、−ＯＲ２１、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル基、または次の構造式で表される基
【化７】
2009536622.tif 000012
で置換されており；
環Ｂが、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２１、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、−（ＣＨ２）３Ｒ４０、−ＣＨ２ＯＣＨ２Ｒ４０、またはヒドロキシル、−ＯＲ２１、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル基で置換されており；
Ｒ２１は、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ１〜Ｃ３ハロアルキルであり；
Ｒ４０が、−ＣＯＯＨ、−ＰＯ３Ｈ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＰＯ２Ｈ、または−ＳＯ２Ｈである、
請求項７に記載の医薬組成物。
【請求項９】
Ｒ２１が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ２が−Ｈである、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
前記化合物が次の構造式
【化８】
2009536622.tif 000013
で表されるか、またはその医薬として許容できる塩である、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項１１】
環Ａが、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２１、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、またはヒドロキシル、−ＯＲ２１、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル基、あるいは次の構造式で表される基
【化９】
2009536622.tif 000014
で置換されており、
環Ｂが、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２１、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、−（ＣＨ２）３Ｒ４０、−ＣＨ２ＯＣＨ２Ｒ４０、またはヒドロキシル、−ＯＲ２１、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル基で置換されており；
Ｒ２１が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ１〜Ｃ３ハロアルキルであり；
Ｒ４０が、−ＣＯＯＨ、−ＰＯ３Ｈ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＰＯ２Ｈ、または−ＳＯ２Ｈである、
請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
Ｒ２１が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ２が−Ｈである、請求項１１に記載の医薬組成物。
【請求項１３】
前記化合物が
【化１０】
2009536622.tif 000015
から選択される構造式で表されるか、またはその医薬として許容できる塩である、請求項１に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
医薬として許容できる担体または希釈剤、および次の構造式で表される化合物
【化１１】
2009536622.tif 000016
［式中、
Ｚ３およびＺ４は、独立に、ＯまたはＳであり；
環Ｃおよび環Ｄは、任意選択かつ独立に、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において置換されており；
Ｒ３は、−Ｈ、またはハロゲン、ヒドロキシル、−ＯＲ２０、ニトロ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２０、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、および−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２０から選択される１個または複数の基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ５アルキル基であり；
Ｒ２０は、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはハロアルキルである］
またはその医薬として許容できる塩を含む医薬組成物。
【請求項１５】
前記化合物が次の構造式
【化１２】
2009536622.tif 000017
で表されるか、またはその医薬として許容できる塩である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項１６】
環Ｃが、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ハロゲン、＝Ｏ、ヒドロキシル、またはＣ１〜Ｃ３アルコキシで置換されていてもよい、請求項１５に記載の医薬組成物。
【請求項１７】
環Ｄが、任意の１個以上の置換可能な炭素原子において、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２１、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、またはハロゲン、ヒドロキシル、−ＯＲ２１、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル基で置換されていてもよく、
Ｒ２１が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ１〜Ｃ３ハロアルキルである、
請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
Ｒ３が−Ｈである、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
環Ｃが非置換である、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
前記化合物が
【化１３】
2009536622.tif 000018
から選択される構造式で表されるか、またはその医薬として許容できる塩である、請求項１４に記載の医薬組成物。
【請求項２１】
医薬として許容できる担体または希釈剤、および次の構造式で表される化合物
【化１４】
2009536622.tif 000019
［式中、
Ｚ５およびＺ６は、独立に、ＯまたはＳであり；
環Ｅおよび環Ｆは、任意選択かつ独立に、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において置換されており；
Ｒ６は、−Ｈ、またはハロゲン、ヒドロキシル、−ＯＲ２０、ニトロ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２０、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、および−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２０から選択される１個または複数の基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ５アルキル基であり；
Ｒ７およびＲ８は、独立に、−Ｈ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル基、またはＣ１〜Ｃ５ハロアルキル基であり；
Ｒ２０は、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはハロアルキルである］
またはその医薬として許容できる塩を含む医薬組成物。
【請求項２２】
Ｚ５がＳであり、Ｚ６がＯである、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２３】
環Ｅおよび環Ｆが、任意選択かつ独立に、任意の１個以上の置換可能な炭素原子において、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２１、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、またはハロゲン、ヒドロキシル、−ＯＲ２１、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル基で置換されており；
Ｒ２１が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ１〜Ｃ３ハロアルキルである、
請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
Ｒ６が−Ｈである、請求項２３に記載の医薬組成物。
【請求項２５】
Ｒ７およびＲ８が、独立に、−Ｈまたはメチルである、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
前記化合物が次の構造式
【化１５】
2009536622.tif 000020
で表されるか、またはその医薬として許容できる塩である、請求項２１に記載の医薬組成物。
【請求項２７】
医薬として許容できる担体または希釈剤、および次の構造式で表される化合物
【化１６】
2009536622.tif 000021
［式中、
Ｘ１およびＸ２は、独立に、ＣＨ２、ＮＨ、またはＯであり；
Ｘ３は、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｓ）−、−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｓ）−、または−Ｃ（Ｓ）ＮＨ−であり；
Ｚ８およびＺ９は、独立に、ＳまたはＯであり；
環Ｇは、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において置換されていてもよく；
Ｒ９は、ハロゲン、ヒドロキシル、−ＯＲ２０、ニトロ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２０、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、および−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２０から選択される１個または複数の基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ５アルキル基であり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立に、−Ｈ、またはハロゲン、ヒドロキシル、−ＯＲ２０、ニトロ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２０、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、および−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２０から選択される１個または複数の基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ５アルキル基であり；
Ｒ１２は、−Ｈ；Ｒ２１で表される１個または複数の基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ５アルキル基；任意の１個以上の置換可能な環炭素原子においてＲ２２で表される基で置換されていてもよい単環式芳香族基；あるいは任意の１個以上の置換可能な環炭素原子においてＲ２３で置換されていてもよい単環式Ｃ１〜Ｃ３アラルキル基であり；
Ｒ２０は、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ１〜Ｃ３ハロアルキルであり；
Ｒ２１は、それぞれ独立に、ハロゲン、ヒドロキシル、−ＯＲ２０、ニトロ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２０、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、または−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２０であり；
Ｒ２２およびＲ２３は、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２４、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２４、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２４、またはヒドロキシル、−ＯＲ２４、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２４、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２４で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキルであり、
Ｒ２４は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ１〜Ｃ３ハロアルキルである］
またはその医薬として許容できる塩を含む医薬組成物。
【請求項２８】
Ｒ１２が、−Ｈ；Ｒ２１で表される基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ５アルキル基；Ｒ２２で表される基で置換されていてもよいフェニル基；あるいは任意の１個以上の置換可能な環炭素原子においてＲ２３で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ３フェナルキル基である、
請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
前記化合物が次の構造式
【化１７】
2009536622.tif 000022
で表されるか、またはその医薬として許容できる塩である、請求項２８に記載の医薬組成物。
【請求項３０】
前記化合物が次の構造式
【化１８】
2009536622.tif 000023
で表されるか、またはその医薬として許容できる塩であり、式中、Ｘ３は、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）−である、請求項２９に記載の医薬組成物。
【請求項３１】
前記化合物が次の構造式
【化１９】
2009536622.tif 000024
で表されるか、またはその医薬として許容できる塩である、請求項３０に記載の医薬組成物。
【請求項３２】
環Ｇが、任意の１個以上の環炭素原子において、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２５、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２５、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２５、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２５、またはヒドロキシル、−ＯＲ２５、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２５、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２５で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキルで置換されていてもよく；Ｒ２５が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ１〜Ｃ３ハロアルキルである、請求項３１に記載の医薬組成物。
【請求項３３】
Ｒ９が、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、またはＣ１〜Ｃ３ハロアルコキシで置換されていてもよいＣ１〜Ｃ５アルキル基である、請求項３２に記載の医薬組成物。
【請求項３４】
Ｒ１２が、−Ｈ；Ｒ２１で表される基で置換されていてもよいアルキル基；あるいは任意の１個以上の置換可能な環炭素原子においてＲ２３で置換されていてもよいベンジル基であり；
Ｒ２１が、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、またはＣ１〜Ｃ３ハロアルコキシであり；
Ｒ２３が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２４、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２４、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２４、またはヒドロキシル、−ＯＲ２４、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２４、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、または−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２４で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキルである、
請求項３３に記載の医薬組成物。
【請求項３５】
Ｒ１０が、メチル、ハロメチル、またはヒドロキシメチルである、請求項３４に記載の医薬組成物。
【請求項３６】
Ｒ９がＣ１〜Ｃ５アルキルであり；Ｒ１０が−Ｃ（Ｃｌ）３であり；Ｒ１２がＣ１〜Ｃ５アルキルまたはベンジルである、請求項３５に記載の医薬組成物。
【請求項３７】
前記化合物が
【化２０】
2009536622.tif 000025
から選択される構造式で表されるか、またはその医薬として許容できる塩である、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項３８】
ウイルス感染症を有する対象を治療する方法であって、請求項１から３７のいずれか一項に記載の医薬組成物の有効量を該対象に投与することを含む、方法。
【請求項３９】
前記ウイルス感染症が、一本鎖ＲＮＡゲノムを有するウイルスによって引き起こされる、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記ウイルスが、オルソミクソウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、ＲＳウイルスおよびヒトパラインフルエンザウイルス３型）、ラブドウイルス（例えば、狂犬病ウイルス）、トガウイルス（例えば、風疹ウイルスおよび東部ウマ脳炎ウイルス）、ピコルナウイルス（例えば、ポリオウイルスおよびコクサッキーウイルス）、フラビウイルス（例えば、西ナイルウイルス、デングウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス）、ブンヤウイルス（例えば、ラクロスウイルス、リフトバレー熱ウイルス、およびハンタウイルス）、レトロウイルス（例えば、ガンマレトロウイルスＸＭＲＶ、ならびにレンチウイルスＨＩＶ−１および−２）、フィロウイルス（例えば、エボラウイルス、出血熱ウイルス）、またはＢ型肝炎ウイルス（ゲノムＲＮＡ中間体を有するＤＮＡウイルス）である、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記ウイルス感染症が、ＤＮＡゲノムを有するウイルスによって引き起こされる、請求項３８に記載の方法。
【請求項４２】
前記ウイルスが、ヒトパピローマウイルス、単純ヘルペスウイルス１型および２型、サイトメガロウイルス、またはヒトヘルペスウイルス８型である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４３】
前記ウイルスが、痘瘡ウイルス（天然痘ウイルス）、サル痘ウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、エプスタインバーウイルス、アデノウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトヘルペスウイルス６型、ヒトヘルペスウイルス７型、Ｂ１９パルボウイルス、アデノ随伴ウイルス、ＢＫウイルス、およびＪＣウイルス、ヒトパピローマウイルス、単純ヘルペスウイルス１型および２型、サイトメガロウイルス、またはヒトヘルペスウイルス８型である、請求項４１に記載の方法。
【請求項４４】
癌を有する対象を治療するための方法であって、請求項１から３７のいずれか一項に記載の医薬組成物の有効量を該対象に投与することを含む方法。
【請求項４５】
前記癌が、前立腺癌、卵巣癌、脳癌、または骨癌である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
対象において再狭窄を治療するための方法であって、請求項１から３７のいずれか一項に記載の医薬組成物の有効量を該対象に投与することを含む方法。
【請求項４７】
次の構造式で表される化合物
【化２１】
2009536622.tif 000026
［式中、
環Ａおよび環Ｂは、任意選択かつ独立に、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において置換されており；
Ｙは、ＣＨ、Ｎ、またはＮ＋−Ｏ−であり；
Ｚ１およびＺ２は、独立に、ＯまたはＳであり；
Ｚ３はＣＲ１またはＮであり；
Ｒ１は、−Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ３０、またはハロゲン、ヒドロキシル、−ＯＲ２０、ニトロ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ３０、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、および−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２０から選択される１個または複数の基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ５アルキル基であり、あるいはＲ１は、次の構造式で表される基
【化２２】
2009536622.tif 000027
であり；
Ｒ２は、−Ｈ、またはハロゲン、ヒドロキシル、−ＯＲ２０、ニトロ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２０、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、または−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２０から選択される１個または複数の基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ５アルキル基であり；
Ｒ２０は、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ１〜Ｃ３ハロアルキルであり；
Ｒ３０は、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、または
【化２３】
2009536622.tif 000028
から選択される構造式で表される基であり；
ただし、該化合物は
【化２４】
2009536622.tif 000029
【化２５】
2009536622.tif 000030
から選択される構造式で表されないことを条件とする］
またはその医薬として許容できる塩。
【請求項４８】
Ｚ１がＯであり、Ｚ２がＳである、請求項４７に記載の化合物。
【請求項４９】
前記化合物が次の構造式
【化２６】
2009536622.tif 000031
で表されるか、またはその医薬として許容できる塩である、請求項４８に記載の化合物。
【請求項５０】
環Ａが、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２１、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、またはヒドロキシル、−ＯＲ２１、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル基で置換されており、あるいは環Ａが、次の構造式で表される基
【化２７】
2009536622.tif 000032
で置換されていてもよく、
環Ｂが、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２１、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、−（ＣＨ２）３Ｒ４０、−ＣＨ２ＯＣＨ２Ｒ４０、−ＯＣＨ２Ｒ４０、またはヒドロキシル、−ＯＲ２１、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル基で置換されており；
Ｒ２１が、それぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、またはＣ１〜Ｃ３ハロアルキルであり；
Ｒ４０が、−ＣＯＯＨ、−ＰＯ３Ｈ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＰＯ２Ｈ、または−ＳＯ２Ｈである、
請求項４７に記載の化合物。
【請求項５１】
環Ｂが、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２１、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、−（ＣＨ２）３Ｒ４０、−ＣＨ２ＯＣＨ２Ｒ４０、またはヒドロキシル、−ＯＲ２１、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル基で置換されており；
Ｒ２１が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ１〜Ｃ３ハロアルキルである、
請求項５０に記載の化合物。
【請求項５２】
Ｒ２０が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ２１が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ３０が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ２が−Ｈである、請求項５０または５１に記載の化合物。
【請求項５３】
次の構造式
【化２８】
2009536622.tif 000033
で表されるか、またはその医薬として許容できる塩である、請求項４８に記載の化合物。
【請求項５４】
環Ａが、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２１、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、またはヒドロキシル、−ＯＲ２１、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル基で置換されているか、または次の構造式で表される基
【化２９】
2009536622.tif 000034
で置換されており；
環Ｂが、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２１、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、−（ＣＨ２）３Ｒ４０、−ＣＨ２ＯＣＨ２Ｒ４０、またはヒドロキシル、−ＯＲ２１、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル基で置換されており；
Ｒ２１が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ１〜Ｃ３ハロアルキルであり；
Ｒ４０が、−ＣＯＯＨ、−ＰＯ３Ｈ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＰＯ２Ｈ、または−ＳＯ２Ｈである、
請求項５３に記載の化合物。
【請求項５５】
Ｒ２１が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ２が−Ｈである、請求項５４に記載の化合物。
【請求項５６】
次の構造式
【化３０】
2009536622.tif 000035
で表されるか、またはその医薬として許容できる塩である、請求項４８に記載の化合物。
【請求項５７】
環Ａが、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２１、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、またはヒドロキシル、−ＯＲ２１、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル基で置換されているか、または次の構造式で表される基
【化３１】
2009536622.tif 000036
で置換されており；
環Ｂが、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２１、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、−（ＣＨ２）３Ｒ４０、−ＣＨ２ＯＣＨ２Ｒ４０、またはヒドロキシル、−ＯＲ２１、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル基で置換されており；
Ｒ２１が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ１〜Ｃ３ハロアルキルであり；
Ｒ４０が、−ＣＯＯＨ、−ＰＯ３Ｈ２、−ＳＯ３Ｈ、−ＰＯ２Ｈ、または−ＳＯ２Ｈである、請求項５６に記載の化合物。
【請求項５８】
Ｒ２１が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、Ｒ２が−Ｈである、請求項５７に記載の化合物。
【請求項５９】
次の構造式で表される化合物
【化３２】
2009536622.tif 000037
［式中、
Ｚ３およびＺ４は、独立に、ＯまたはＳであり；
環Ｃおよび環Ｄは、任意選択かつ独立に、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において置換されており；
Ｒ３は、−Ｈ、またはハロゲン、ヒドロキシル、−ＯＲ２０、ニトロ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２０、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、および−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２０から選択される１個または複数の基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ５アルキル基であり；
Ｒ２０は、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはハロアルキルであり；ただし、該化合物は
【化３３】
2009536622.tif 000038
から選択される構造式で表されないことを条件とする］
またはその医薬として許容できる塩。
【請求項６０】
次の構造式
【化３４】
2009536622.tif 000039
で表されるか、またはその医薬として許容できる塩である、請求項５９に記載の化合物。
【請求項６１】
環Ｃが、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、ハロゲン、＝Ｏ、ヒドロキシル、またはＣ１〜Ｃ３アルコキシで置換されていてもよい、請求項６０に記載の化合物。
【請求項６２】
環Ｄが、任意の１個以上の置換可能な炭素原子において、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２１、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、またはハロゲン、ヒドロキシル、−ＯＲ２１、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル基で置換されていてもよく；
Ｒ２１が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ１〜Ｃ３ハロアルキルである、
請求項６１に記載の化合物。
【請求項６３】
Ｒ３が−Ｈである、請求項６２に記載の化合物。
【請求項６４】
環Ｃが非置換である、請求項６３に記載の化合物。
【請求項６５】
次の構造式で表される化合物
【化３５】
2009536622.tif 000040
［式中、
Ｚ５およびＺ６は、独立に、ＯまたはＳであり；
環Ｅおよび環Ｆは、任意選択かつ独立に、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において置換されており；
Ｒ６は、−Ｈ、またはハロゲン、ヒドロキシル、−ＯＲ２０、ニトロ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２０、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、および−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２０から選択される１個または複数の基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ５アルキル基であり；
Ｒ７およびＲ８は、独立に、−Ｈ、Ｃ１〜Ｃ５アルキル基、またはＣ１〜Ｃ５ハロアルキル基であり；
Ｒ２０は、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはハロアルキルであり；
ただし、該化合物は
【化３６】
2009536622.tif 000041
以外の構造式で表される］
またはその医薬として許容できる塩。
【請求項６６】
Ｚ５がＳであり、Ｚ６がＯである、請求項６５に記載の化合物。
【請求項６７】
環Ｅおよび環Ｆが、任意選択かつ独立に、任意の１個以上の置換可能な炭素原子において、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２１、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２１、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１、またはハロゲン、ヒドロキシル、−ＯＲ２１、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２１、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２１で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキル基で置換されており；
Ｒ２１が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ１〜Ｃ３ハロアルキルである、
請求項６６に記載の化合物。
【請求項６８】
Ｒ６が−Ｈである、請求項６７に記載の化合物。
【請求項６９】
Ｒ７およびＲ８が、独立に、−Ｈまたはメチルである、請求項６８に記載の化合物。
【請求項７０】
次の構造式で表される化合物
【化３７】
2009536622.tif 000042
［式中、
Ｘ１およびＸ２は、独立に、ＣＨ２、ＮＨ、またはＯであり；
Ｘ３は、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−Ｃ（Ｓ）−、−Ｓ−Ｃ（Ｏ）−、−Ｓ−Ｃ（Ｓ）−、−Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｓ）−、−ＣＨ２−、−ＣＨ（ＣＨ３）−、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＮＨＣ（Ｓ）−、または−Ｃ（Ｓ）ＮＨ−であり；
Ｚ８およびＺ９は、独立に、ＳまたはＯであり；
環Ｇは、任意の１個以上の置換可能な環炭素原子において置換されていてもよく；
Ｒ９は、ハロゲン、ヒドロキシル、−ＯＲ２０、ニトロ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２０、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、および−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２０から選択される１個または複数の基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ５アルキル基であり；
Ｒ１０およびＲ１１は、独立に、−Ｈ、またはハロゲン、ヒドロキシル、−ＯＲ２０、ニトロ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２０、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、および−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２０から選択される１個または複数の基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ５アルキル基であり；
Ｒ１２は、−Ｈ；Ｒ２１で表される１個または複数の基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ５アルキル基；任意の１個以上の置換可能な環炭素原子においてＲ２２で表される基で置換されていてもよい単環式芳香族基；あるいは任意の１個以上の置換可能な環炭素原子においてＲ２３で置換されていてもよい単環式Ｃ１〜Ｃ３アラルキル基であり；
Ｒ２０は、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ１〜Ｃ３ハロアルキルであり；
Ｒ２１は、それぞれ独立に、ハロゲン、ヒドロキシル、−ＯＲ２０、ニトロ、シアノ、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２０、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、または−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２０であり；
Ｒ２２およびＲ２３は、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２４、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２４、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２４、またはヒドロキシル、−ＯＲ２４、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２４、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２４で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキルであり、
Ｒ２４は、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ１〜Ｃ３ハロアルキルであり；ただし、該化合物は
【化３８】
2009536622.tif 000043
から選択される構造式で表されないことを条件とする］
またはその医薬として許容できる塩。
【請求項７１】
Ｒ１２が、−Ｈ；Ｒ２１で表される基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ５アルキル基；Ｒ２２で表される基で置換されていてもよいフェニル基；あるいは任意の１個以上の置換可能な環炭素原子においてＲ２３で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ３フェナルキル基である、請求項７０に記載の化合物。
【請求項７２】
次の構造式
【化３９】
2009536622.tif 000044
で表されるか、またはその医薬として許容できる塩である、請求項７１に記載の化合物。
【請求項７３】
次の構造式
【化４０】
2009536622.tif 000045
で表されるか、またはその医薬として許容できる塩であり、式中、Ｘ３は、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−または−Ｃ（Ｏ）−である、請求項７２に記載の化合物。
【請求項７４】
次の構造式
【化４１】
2009536622.tif 000046
で表されるか、またはその医薬として許容できる塩である、請求項７３に記載の化合物。
【請求項７５】
環Ｇが、任意の１個以上の環炭素原子において、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２５、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２５、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２５、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２５、またはヒドロキシル、−ＯＲ２５、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２５、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２５で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキルで置換されていてもよく；
Ｒ２５が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキルまたはＣ１〜Ｃ３ハロアルキルである、請求項７４に記載の化合物。
【請求項７６】
Ｒ９が、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、またはＣ１〜Ｃ３ハロアルコキシで置換されていてもよいＣ１〜Ｃ５アルキル基である、請求項７５に記載の化合物。
【請求項７７】
Ｒ１２が、−Ｈ；Ｒ２１で表される基で置換されていてもよいアルキル基；あるいは任意の１個以上の置換可能な環炭素原子においてＲ２３で置換されていてもよいベンジル基であり；
Ｒ２１が、ハロゲン、ヒドロキシル、Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ、またはＣ１〜Ｃ３ハロアルコキシであり；
Ｒ２３が、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ３アルキル、Ｃ１〜Ｃ３ハロアルキル、ニトロ、シアノ、ヒドロキシ、−ＯＲ２４、−Ｃ（Ｏ）Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ２４、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２４、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２４、またはヒドロキシル、−ＯＲ２４、ケト、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ２４、−ＯＣ（Ｏ）Ｈ、もしくは−ＯＣ（Ｏ）Ｒ２４で置換されているＣ１〜Ｃ３アルキルである、請求項７６に記載の化合物。
【請求項７８】
Ｒ１０が、メチル、ハロメチル、またはヒドロキシメチルである、請求項７７に記載の化合物。
【請求項７９】
Ｒ９がＣ１〜Ｃ５アルキルであり；Ｒ１０が−Ｃ（Ｃｌ）３であり；Ｒ１２がＣ１〜Ｃ５アルキルまたはベンジルである、請求項７８に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（政府の支援）
本発明は、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈからの助成金ＮＩＨ（ＮＣＩ）１Ｒ０１  ＣＡ０４４０５９−２１によって全体または一部で支持された。政府は、本発明に一定の権利を有する。
【０００２】
（関連出願）
本出願は、２００６年４月２５日に出願された米国仮出願第６０／７９５，０６９号（この全体の教示は、参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【背景技術】
【０００３】
インターフェロン（ＩＦＮ）系における抗ウイルス酵素であるＲＮアーゼＬに関する前臨床試験は、ＲＮアーゼＬが癌治療薬および抗ウイルス剤の重要な標的であることを示唆している（非特許文献１）。例えば、遺伝性前立腺癌１（ＨＰＣ１）感受性部位が、最近ＲＮアーゼＬ遺伝子にマッピングされた（Ｃａｒｐｔｅｎ  Ｊ、Ｎｕｐｐｏｎｅｎ  Ｎ、Ｉｓａａｃｓ  Ｓ、Ｓｏｏｄ  Ｒ、Ｒｏｂｂｉｎｓ  Ｃ、Ｘｕ  Ｊ、Ｆａｒｕｑｕｅ  Ｍ、Ｍｏｓｅｓ  Ｔ、Ｅｗｉｎｇ  Ｃ、Ｇｉｌｌａｎｄｅｒｓ  Ｅ、Ｈｕ  Ｐ、Ｂｕｊｎｏｖｓｚｋｙ  Ｐ、Ｍａｋａｌｗｓｋａ  Ｉ、Ｂａｆｆｏｅ−Ｂｏｎｎｉ  Ａ、Ｆａｉｔｈ  Ｄ、Ｓｍｉｔｈ  Ｊ、Ｓｔｅｐａｈ  Ｄ、Ｗｉｌｅｙ  Ｋ、Ｂｒｏｗｎｓｔｅｉｎ  Ｍ、Ｇｉｌｄｅａ  Ｄ、Ｋｅｌｌｙ  Ｂ、Ｊｅｎｋｉｎｓ  Ｒ、Ｈｏｓｔｅｔｔｅｒ  Ｇ、Ｍａｔｉｋａｉｎｅｎ  Ｍ、Ｓｃｈｌｅｕｔｋｅｒ  Ｊ、Ｋｌｉｎｇｅｒ  Ｋ、Ｃｏｎｎｅｒｓ  Ｔ、Ｘｉａｎｇ  Ｙ、Ｗａｎｇ  Ｚ、Ｄｅｍａｒｚｏ  Ａ、Ｐａｐｄｏｐｏｕｌｏｓ  Ｎ、Ｋａｌｌｉｏｎｉｅｍｉ  Ｏ−Ｐ、Ｂｕｒｋ  Ｒ、Ｍｅｙｅｒｓ  Ｄ、Ｇｒｏｎｂｅｒｇ  Ｈ、Ｍｅｌｔｚｅｒ  Ｐ、Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  Ｒ、Ｂａｉｌｅｙ−Ｗｉｌｓｏｎ  Ｊ、Ｗａｌｓｈ  Ｐ、Ｉｓａａｃｓ  Ｗ、Ｔｒｅｎｔ  Ｊ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ、２００２年１月２２日）。また、西ナイルウイルスを含めて、フラビウイルス類に耐性を与える遺伝子が、ＲＮアーゼＬ経路における遺伝子にマッピングされた（ＯＡＳ１ｂ）（非特許文献２）。事実上、ＲＮアーゼＬはインターフェロンの抗ウイルス応答中に、２’，５’−インターヌクレオチド結合を有する小さい独特のオリゴアデニラート類（「２−５Ａ」と呼ばれる）によって活性化される（非特許文献３；非特許文献４）。さらに、ＲＮアーゼＬはＩＦＮの抗細胞増殖活性に関与することがすでに実証されている（非特許文献５）。２−５Ａは、ＲＮアーゼＬを介してリボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）およびメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の分解を誘導し、それによってタンパク質合成レベルは低下する。この特性は、大動脈平滑筋細胞に適用した場合、血管形成後の再狭窄を予防することができる。しかし、２−５Ａには、１）ホスホジエステラーゼ類およびホスファターゼ類の作用のため、血清および細胞中で不安定であり、２）細胞膜を通過しない細胞内メディエーターであるという点で、治療剤には望ましくない特性を有する。したがって、臨床使用向けの新規ＲＮアーゼＬアクチベーターが必要とされている。
【非特許文献１】Ａｄａｈ  ＳＡ、Ｂａｙｌｙ  ＳＦ、Ｃｒａｍｅｒ  Ｈ、Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ＲＨ、Ｔｏｒｒｅｎｃｅ  ＰＦ、Ｃｕｒｒ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ．２００１年８月、８巻（１０号）、１１８９〜２１２頁
【非特許文献２】Ｐｅｒｅｌｙｇｉｎ  ＡＡ、Ｓｃｈｅｒｂｉｋ  ＳＶ、Ｚｈｕｌｉｎ  ＩＢ、Ｓｔｏｃｋｍａｎ  ＢＭ、Ｌｉ  Ｙ、Ｂｒｉｎｔｏｎ  ＭＡ、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、２００２年７月９日、９９巻（１４号）、９３２２〜７頁
【非特許文献３】Ｋｅｒｒ  ＩＭ、Ｂｒｏｗｎ  ＲＥ、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、１９７８年１月、７５巻（１号）、２５６〜６０頁
【非特許文献４】Ｚｈｏｕ  Ａ、Ｈａｓｓｅｌ  ＢＡ、Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ＲＨ、Ｃｅｌｌ、１９９３年３月１２日、７２巻（５号）、７５３〜６５頁
【非特許文献５】Ｈａｓｓｅｌ  ＢＡ、Ｚｈｏｕ  Ａ、Ｓｏｔｏｍａｙｏｒ  Ｃ、Ｍａｒａｎ  Ａ、Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ＲＨ、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１９９３年８月、１２巻（８号）、３２９７〜３０４頁
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
（要旨）
本発明は、ＲＮアーゼＬを活性化するいくつかの化合物の発見に基づく（実施例３を参照のこと）（以下、「開示されたＲＮアーゼＬアクチベーター」）。これらのＲＮアーゼＬアクチベーターは、パラインフルエンザウイルス３型（ＨＰＩＶ３）、ピコルナウイルス、および脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）に対する抗ウイルス活性を含めて、抗ウイルス活性を有する（実施例６を参照のこと）。開示されたＲＮアーゼＬアクチベーターは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで平滑筋細胞増殖も抑制し（実施例７を参照のこと）、したがって再狭窄を治療する上で有用である。予想外なことに、開示されたＲＮアーゼアクチベーターは細胞毒性でないことも見出された（実施例５）。これらの発見に基づいて、新規ＲＮアーゼＬアクチベーター、これらのＲＮアーゼＬアクチベーターを含む医薬組成物、およびこれらのＲＮアーゼＬアクチベーターを用いた治療方法を本明細書に開示する。
【０００５】
開示されたＲＮアーゼアクチベーター、それを含む医薬組成物、およびそれを使用する治療方法を、特許請求の範囲に詳細に記載する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
（発明の詳細な説明）
「対象」は、好ましくはヒトであるが、ウイルス感染、癌、または再狭窄の治療を必要とする飼育動物、家畜動物、または実験動物とすることもできる。
【０００７】
開示されたＲＮアーゼＬアクチベーターで治療することができるウイルス感染には、そのゲノムの一本鎖ＲＮＡを有するウイルスが含まれる。例として、オルソミクソウイルス（例えば、インフルエンザウイルス）、パラミクソウイルス（例えば、ＲＳウイルスおよびヒトパラインフルエンザウイルス３型）、ラブドウイルス（例えば、狂犬病ウイルス）、トガウイルス（例えば、風疹ウイルスおよび東部ウマ脳炎ウイルス）、ピコルナウイルス（例えば、ポリオウイルス＆コクサッキーウイルス）、フラビウイルス（例えば、西ナイルウイルス、デングウイルス、およびＣ型肝炎ウイルス）、ブンヤウイルス（例えば、ラクロスウイルス、リフトバレー熱ウイルス、およびハンタウイルス）、レトロウイルス（例えば、ガンマレトロウイルスＸＭＲＶ、およびレンチウイルスＨＩＶ−１および−２）、フィロウイルス（例えば、エボラウイルス、出血熱ウイルス）、またはＢ型肝炎ウイルス（ゲノムＲＮＡ中間体を有するＤＮＡウイルス）が挙げられる。
【０００８】
開示されたＲＮアーゼＬアクチベーターは、ヒトパピローマウイルス、単純ヘルペスウイルス１型および２型、サイトメガロウイルス、ならびにヒトヘルペスウイルス８型を含めて、いくつかのＤＮＡウイルスによる感染を治療するためにも使用することできる。さらに、開示されたＲＮアーゼＬアクチベーターは、痘瘡ウイルス（天然痘ウイルス）、サル痘ウイルス、伝染性軟属腫ウイルス、エプスタインバーウイルス、アデノウイルス、水痘帯状疱疹ウイルス、ヒトヘルペスウイルス６型、ヒトヘルペスウイルス７型、Ｂ１９パルボウイルス、アデノ随伴ウイルス、ＢＫウイルス、およびＪＣウイルスも含めて、いくつかのＤＮＡウイルスによる感染を治療するためにも使用することできる。
【０００９】
ＰＣ３またはＤＵ１４５細胞への２−５Ａのトランスフェクションによって、アポトーシスが引き起こされる（Ｘｉａｎｇ  Ｙ、Ｗａｎｇ  Ｚ、Ｍｕｒａｋａｍｉ  Ｊ、  Ｐｌｕｍｍｅｒ  Ｓ、Ｋｌｅｉｎ  ＥＡ、Ｃａｒｐｔｅｎ  ＪＤ、Ｔｒｅｎｔ  ＪＭ、Ｉｓａａｃｓ  ＷＢ、Ｃａｓｅｙ  Ｇ、Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ＲＨ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２００３年１０月１５日、６３巻（２０号）、６７９５〜８０１頁）。それぞれ前立腺癌の脳および骨転移症例に由来するＤＵ１４５とＰＣ３の両細胞株は、ＲＮアーゼＬに対して野生型である。さらに、２−５Ａトランスフェクションによって、ミトコンドリア経路を介して、ヒト卵巣癌細胞においてカスパーゼ依存性アポトーシスが引き起こされる（Ｒｕｓｃｈ  Ｌ、Ｚｈｏｕ  Ａ、Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ＲＨ、Ｊ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．、２０００年１２月、２０巻（１２号）、１０９１〜１００頁）。さらに、テロメラーゼＲＮＡに対するアンチセンスと結合している２−５Ａによって、ヌードマウスにおけるＤＵ１４５腫瘍に対してアポトーシスおよび抗腫瘍作用が引き起こされた（Ｋｏｎｄｏ  Ｙ、Ｋｏｇａ  Ｓ、Ｋｏｍａｔａ  Ｔ、Ｋｏｎｄｏ  Ｓ、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ、２０００年４月２７日、１９巻（１８号）、２２０５〜１１頁）。上述に基づいて、開示されたＲＮアーゼＬアクチベーターを使用して、癌を治療することができる。
【００１０】
開示されたＲＮアーゼＬアクチベーターで治療することができる癌の例としては、ヒト肉腫および癌腫、例えば線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、有棘細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、脂腺癌、乳頭癌、乳頭腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支癌、腎細胞癌、肝癌、胆管癌、絨毛癌、精上皮腫、胎児性癌、ウイルムス腫瘍、子宮頚癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、神経膠腫、星状細胞腫、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、脳室上衣腫、松果体腫、血管芽細胞腫、聴神経腫、乏突起膠腫、髄膜腫、黒色腫、神経芽細胞腫、および網膜芽細胞腫が挙げられるが、これらに限定されない。開示されたＲＮアーゼＬアクチベーターは、前立腺癌、卵巣癌、脳癌、または骨癌を治療するためによく使用される。
【００１１】
再狭窄は、ＰＴＣＡバルーンカテーテルを用いた冠動脈治療または末梢動脈治療（例えば、経皮経管的血管形成術）を施した血管において発症する恐れがある病態である。再狭窄は、この治療を行って約３〜６カ月後に起こる瘢痕組織の形成であり、血管の狭窄を生じる。再狭窄は、平滑筋の過剰増殖を引き起こす。開示されたＲＮアーゼＬアクチベーターは平滑筋増殖を抑制するので、これらの化合物を使用して、再狭窄を抑制、治療、および／または予防することができると考えられる。
【００１２】
本明細書では、用語「アルキル」は、飽和直鎖または分枝状炭化水素を意味する。「ハロアルキル」は、１個または複数のハロゲンで置換されているアルキルである。用語「ハロゲン」は、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、またはＩを意味する。ハロアルキルまたはハロアルコキシのハロゲンは、Ｆであることが好ましい。
【００１３】
単独でまたは「アラルキル」のようにより大きい部分の一部として使用される用語「芳香族基」としては、炭素環式芳香族環およびヘテロアリール環が挙げられる。用語「芳香族基」は、用語「アリール」、「アリール環」、「芳香族環」、「アリール基」、および「芳香族基」と同義で使用することができる。「アラルキル」は、芳香族基で置換されているアルキル基である。「フェナルキル（phenalkyl）」は、フェニル基で置換されているアルキル基である。
【００１４】
「単環式芳香族基」は、環を１個のみ含む芳香族基である。
【００１５】
炭素環式芳香族環基は炭素環原子しか含まない。炭素環式芳香族環基としては、フェニルなどの単環式芳香族環が挙げられる。
【００１６】
単独でまたは「ヘテロアラルキル」もしくは「ヘテロアリールアルコキシ」のようにより大きい部分の一部として使用される用語「ヘテロアリール」、「ヘテロ芳香族」、「ヘテロアリール環」、「ヘテロアリール基」、および「ヘテロ芳香族基」は、１個または複数のヘテロ原子、具体的には窒素、硫黄、または酸素を環原子として含む芳香族基を意味する。単環式ヘテロアリール基は、５員または６員であり、１個または複数の環ヘテロ原子、具体的には窒素、酸素、および硫黄を含む。単環式ヘテロアリール基としては例えば、２−フラニル、３−フラニル、Ｎ−イミダゾリル、２−イミダゾリル、４−イミダゾリル、５−イミダゾリル、３−イソオキサゾリル、４−イソオキサゾリル、５−イソオキサゾリル、２−オキサジアゾリル、５−オキサジアゾリル、２−オキサゾリル、４−オキサゾリル、５−オキサゾリル、３−ピラゾリル、４−ピラゾリル、１−ピロリル、２−ピロリル、３−ピロリル、２−ピリジル、３−ピリジル、４−ピリジル、２−ピリミジニル、４−ピリミジニル、５−ピリミジニル、３−ピリダジニル、２−チアゾリル、４−チアゾリル、５−チアゾリル、２−トリアゾリル、５−トリアゾリル、テトラゾリル、２−チエニル、および３−チエニルが挙げられる。
【００１７】
芳香族基の「置換可能な環炭素原子」は、水素原子に結合している環炭素原子である。この水素は、適切な置換基で場合によっては置換することができる。したがって、用語「置換可能な環炭素原子」は、２つの環が縮合している場合に共有されている環炭素原子を包含しない。さらに、「置換可能な環炭素原子」は、環炭素原子がすでに水素以外の部分に結合していることがその構造によって示されている場合にそれらの環炭素原子を包含しない。
【００１８】
アリール（例えば、フェニル）基の置換可能な環炭素原子上の適切な置換基としては例えば、ハロゲン、Ｒ０、−ＯＲ０、−Ｏ（ハロアルキル）、−ＳＲ０、トリアルキルシリル、ボロナート、アルキルボロナート、ジアルキルボロナート、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＲ’ＣＯ２Ｒ０、−ＮＲ’Ｃ（Ｏ）Ｒ０、−ＮＲ’ＮＲ’Ｃ（Ｏ）Ｒ０、−Ｎ（Ｒ’）Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＲ’ＮＲ’Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＲ’ＮＲ’ＣＯ２Ｒ０、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ０、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ０、−ＣＯ２Ｒ０、−Ｃ（Ｏ）Ｒ０、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ０）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ０、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ０）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ０、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ’）２、−Ｓ（Ｏ）Ｒ０、−ＮＲ’ＳＯ２Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＲ’ＳＯ２Ｒ０、−Ｃ（＝Ｓ）Ｎ（Ｒ’）２、−ＮＲ’−Ｃ（＝ＮＨ）−Ｎ（Ｒ’）２、および−Ｃ（＝ＮＨ）−Ｎ（Ｒ’）２が挙げられ、あるいは２つの隣接する環炭素原子は、１，２−メチレン−ジオキシまたは１，２−エチレン−ジオキシで置換されていてもよい。
【００１９】
Ｒ０は、それぞれ独立に、水素またはアルキル基である。
【００２０】
Ｒ’は、それぞれ独立に、水素またはアルキル基である。
【００２１】
アラルキル基はある数の炭素原子を有すると指定するとき、指定されているのはアラルキルのアルキル部分の炭素原子数であると理解されるべきである。例えば、Ｃ１〜Ｃ２アラルキル基は、アルキル部分に１個または２個の炭素原子を有する。
【００２２】
医薬として許容できる塩としては、アミンまたは他の塩基性基を含有する開示されたＲＮアーゼＬアクチベーターの酸塩が挙げられ、本化合物と適切な有機酸または無機酸、具体的には塩化水素、臭化水素、酢酸、過塩素酸などを反応させることによって得ることができる。このような塩の他の例としては、硫酸塩、メタンスルホン酸塩、硝酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩［例えば、（＋）−酒石酸塩、（−）−酒石酸塩、またはラセミ混合物を含めて、それらの混合物］、コハク酸塩、安息香酸塩、およびグルタミン酸などのアミノ酸との塩が挙げられる。
【００２３】
カルボン酸または他の酸性官能基を含有する開示されたＲＮアーゼＬアクチベーターの塩は、適切な塩基と反応させることによって調製することができる。このような医薬として許容できる塩は、医薬として許容できるカチオンを生成する塩基を用いて作製することができる。この塩としては、アルカリ金属塩（特に、ナトリウムおよびカリウム）、アルカリ土類金属塩（特に、カルシウムおよびマグネシウム）、アルミニウム塩、およびアンモニウム塩、ならびに生理的に許容できる有機塩基、具体的にはトリメチルアミン、トリエチルアミン、モルホリン、ピリジン、ピペリジン、ピコリン、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、２−ヒドロキシエチルアミン、ビス−（２−ヒドロキシエチル）アミン、トリ−（２−ヒドロキシエチル）アミン、プロカイン、ジベンジルピペリジン、Ｎ−ベンジル−β−フェネチルアミン、デヒドロアビエチルアミン、Ｎ，Ｎ’−ビスデヒドロアビエチルアミン、グルカミン、Ｎ−メチルグルカミン、コリジン、キニーネ、キノリン、および塩基性アミノ酸、具体的にはリシンおよびアルギニンから作製された塩が挙げられる。
【００２４】
「処置」または「処置している」は、治療的処置と予防的処置とを意味する。
【００２５】
「有効量」は、治療を必要とする対象に開示されたＲＮアーゼＬアクチベーターを投与するとき有益な臨床転帰（予防的または治療的）が実現されるこの化合物の量である。ウイルス感染症の治療の場合、「有益な臨床転帰」としては、治療を行わない場合と比べて、該疾患に伴う症状（例えば、発熱）の重症度の低下、該疾患の期間の短縮、および／または該疾患に伴う症状の発症の遅延が挙げられる。癌の治療の場合、有益な臨床転帰としては、治療を行わない場合と比べて、腫瘍塊の低減、腫瘍増殖速度の低下、転移の低減、癌に伴う症状の重症度の低下、および／または対象の寿命の増大が挙げられる。再狭窄の場合、「有益な臨床転帰」としては、血管形成術を施した血管の狭窄の遅延または低減が挙げられる。開示されたＲＮアーゼＬアクチベーターの対象への正確な投与量は、疾患または病態のタイプおよび重症度、ならびに対象の特徴、具体的には全身的健康状態、年齢、性別、体重、および薬物耐性に依存する。また、疾患もしくは病態の程度、重症度、およびタイプにも依存する。当業者は、上記その他の要因に依存する適切な用量を決定することができる。開示されたＲＮアーゼＬアクチベーターの有効量は、通常は約０．１ｍｇ／体重（ｋｇ）／日〜約１０００ｍｇ／体重（ｋｇ）／日、好ましくは１ｍｇ／体重（ｋｇ）／日〜１００ｍｇ／体重（ｋｇ）／日である。
【００２６】
開示されたＲＮアーゼＬアクチベーター、ならびにその医薬として許容できる塩、溶媒和物、および水和物を、医薬として許容できる担体または希釈剤と組み合わせて医薬品製剤中で使用することができる。適切な医薬として許容できる担体としては、不活性固体充填剤または希釈剤、および無菌の水性または有機溶液が挙げられる。開示されたＲＮアーゼＬアクチベーターは、本明細書に記載する範囲の所望の投与量を提供するのに十分な量でこのような医薬組成物中に存在する。本発明の化合物の製剤および投与の技法は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：  ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第１９版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ（１９９５年）で見ることができる。
【００２７】
経口投与の場合、開示されたＲＮアーゼＬアクチベーターまたはその塩を適切な固体または液体の担体または希釈剤と組み合わせて、カプセル剤、錠剤、丸剤、散剤、シロップ剤、液剤、懸濁剤などを生成することができる。
【００２８】
錠剤、丸剤、カプセル剤などは、約１〜約９９重量パーセントの活性成分、および結合剤、具体的にはトラガカントゴム、アカシア、トウモロコシデンプン、またはゼラチン；賦形剤、具体的には第二リン酸カルシウム；崩壊剤、具体的にはトウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸；滑沢剤、具体的にはステアリン酸マグネシウム；および甘味剤、具体的にはスクロース、ラクトース、またはサッカリンを含有する。投与単位形態がカプセル剤である場合、上記のタイプの材料に加えて、脂肪油などの液体担体を含有することができる。
【００２９】
様々な他の材料は、コーティングとして、または投与単位の物理的形態を改変するために存在することができる。例えば、錠剤をシェラック、糖、または両方でコーティングすることができる。シロップ剤またはエリキシル剤は、活性成分に加えて、甘味剤としてスクロース、保存剤としてメチルパラベンおよびプロピルパラベン、色素、ならびにチェリーまたはオレンジフレーバーなどの矯味剤を含有することができる。
【００３０】
非経口投与の場合、開示されたＲＮアーゼＬアクチベーターまたはその塩を無菌の水性または有機媒体と組み合わせて、注射可能な液剤または懸濁剤を生成することができる。例えば、本化合物の医薬として許容できる水溶性塩の水溶液だけでなく、ゴマ油または落花生油、水性プロピレングリコールなどに溶かした液剤も使用することができる。グリセロール、液状ポリエチレングリコール、および油中のそれらの混合物中で、分散剤を調製することもできる。通常の貯蔵および使用条件下で、これらの調製物は、微生物の増殖を防止するための保存剤を含有する。
【００３１】
前述の製剤に加えて、開示されたＲＮアーゼＬアクチベーターを、埋め込み調製物などの長時間作用性製剤としても製剤することができる。このような長時間作用性製剤を移植投与、または例えば筋肉内注射によって皮下投与することができる。
【００３２】
好ましい開示されたＲＮアーゼＬアクチベーター、またはこれらの化合物を含有する医薬製剤は、哺乳動物に投与するための単位剤形である。該単位剤形は、例えばカプセル剤、静脈内注射バッグ、錠剤、またはバイアルを含めて、当技術分野で知られている単位剤形のいずれでもよい。組成物の単位用量中の開示されたＲＮアーゼＬアクチベーターの量は有効量であり、関与する特定の治療に応じて変更することができる。患者の年齢および病態に応じて、用量に変更をルーチンで行う必要があり得ることは理解できる。用量は、経口、エアゾール、経直腸、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、腹腔内、および鼻腔内経路を含めて、様々な経路とすることができる投与経路にも依存する。
【００３３】
合成戦略：
一般化式ＩＩＩの化合物は、ＦａｕｌｌおよびＨｕｌｌによって記載された手順に従って合成される［ＦａｕｌｌおよびＨｕｌｌ、「Ｓｏｍｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  Ｅｔｈｙｌ  ２−Ａｎｉｌｉｎｏ−４ｏｘｏ−４，５−ｄｉｈｙｄｒｏｔｈｉｏｐｈｅｎ−３ｃａｒｂｏｘｙｌａｔｅ」、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｔｒａｎｓａｃｔｉｏｎｓ  １、１９８１年、１０７８〜１０８２頁］。式ＩのＺ２は、Ｓ（イソチオシアナート）またはＯ（イソシアナート）である。置換ベンズアルデヒドとの縮合によって、式ＩＶに示す構造の化合物が生成される。環Ａの修飾は、置換アルデヒドの選択によって実現される。環Ｂの修飾はスキーム３および４に示す。
【００３４】
スキーム１：
【００３５】
【化４２】
2009536622.tif 000002
このスキームにそのまま従って、化合物Ｉを合成する。イソチオシアナトベンゼン（Ｖ）を、ＦａｕｌｌおよびＨｕｌｌの条件下で４−クロロ−３−オキソブタン酸エチル（ＶＩ）とカップリングさせる。２，３−ジヒドロチオフェン中間体（ＶＩＩ）と３−ヒドロキシベンズアルデヒドとの縮合によって、化合物Ｉが得られる。
【００３６】
スキーム２：
【００３７】
【化４３】
2009536622.tif 000003
環Ｂの置換基の修飾は、スキーム１に示すＦａｕｌｌ−Ｈｕｌｌ合成の前に実施される。化合物ＸＩＩを生成するための代表的な合成戦略をスキーム３に示す。容易に入手可能な（Ｅ）−メチル３−（３−ニトロフェニル）アクリラート（ＶＩＩＩ）を対応するアミン（ＩＸ）に接触還元することができる。ＤＣＣの存在下アミンと二硫化炭素とのカップリングにより、イソチオシアナート（Ｘ）が生成することによって、スキーム１のＩに類似の出発反応物質が得られる。後続のＦａｕｌｌ−Ｈｕｌｌ合成手順に従って、化合物ＸＩＩを生成する。
【００３８】
スキーム３：
【００３９】
【化４４】
2009536622.tif 000004
ホスホナート化合物ＸＶＩＩＩは、スキーム４に示すように調製される。市販の３−アミノフェノール（ＸＩＩＩ）を、標準方法によってジオキサン／Ｈ２Ｏ（１：１）中ＮａＯＨまたはＥｔ３Ｎを用いて、二炭酸ジベンジルで保護して、ＸＩＶを得る。保護されたアミノフェノールを水素化ナトリウムで脱プロトン化し、ＤＭＦ中、前述のｐ−トルエンスルホニルオキシメタンホスホナートとカップリングさせて、化合物ＸＶを得、続いて水素移動によってベンジルオキシカルボニル保護基を除去して、化合物ＸＶＩを得る。該遊離アミンをイソチオシアナートに変換し、４−クロロ−３−オキソブタン酸エチルと縮合して、チオフェン環を生成するのは、化合物ＸＩＩの合成に類似している。チオフェン環と３−ヒドロキシベンズアルデヒドをカップリングさせた後、次いで水性ピリジンを用いて、該ホスホン酸ジメチルエステル（ＸＶＩＩ）の選択的脱保護を実施して、化合物ＸＶＩＩＩを生成する。
【００４０】
スキーム４：
【００４１】
【化４５】
2009536622.tif 000005
下記の実施例によって、本発明を説明するが、これらの実施例は、決して限定するものではない。
【実施例】
【００４２】
（実施例１）
ＲＮアーゼＬを活性化する作用剤を同定するアッセイ
このアッセイは蛍光共鳴エネルギー移動法（ＦＲＥＴ）に基づく。この方法は、バキュロウイルスベクターにより昆虫細胞で産生され、ＦＰＬＣで精製された組換え型ヒトＲＮアーゼＬを含む（Ｔｈａｋｕｒ  ＣＳ、Ｘｕ  Ｚ、Ｗａｎｇ  Ｚ、Ｎｏｖｉｎｃｅ  Ｚ、Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ＲＨ、Ａ  ｃｏｎｖｅｎｉｅｎｔ  ａｎｄ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｅ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅ  ｒｅｓｏｎａｎｃｅ  ｅｎｅｒｇｙ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ＲＮａｓｅ  Ｌ  ａｎｄ  ２’，５’  ｏｌｉｇｏａｄｅｎｙｌａｔｅｓ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｍｏｌ  Ｍｅｄ、２００５年、１１６巻、１０３〜１３頁）。この切断可能なＲＮＡ基質は、５’末端にフルオロフォア（６−カルボキシフルオレセイン、ＦＡＭ）、および３’末端にクエンチャー（ブラックホールクエンチャー１、ＢＨＱ１）を有する３６ヌクレオチド合成オリゴリボヌクレオチドである。ＲＮＡ配列は、パラミクソウイルスであるＲＳウイルス（ＲＳＶ）ゲノムＲＮＡの遺伝子間領域に由来する。ＲＳＶ配列は、切断に最適の状況においてＲＮアーゼＬのための切断部位（ＵＵまたはＵＡ）を複数含むので選択した。アッセイの有効性を実証するために、ＲＮアーゼＬ、切断可能なＦＲＥＴ  ＲＮＡ基質、および２−５Ａを含有する９６ウェルブラックマイクロタイタープレート中でＲＮＡ切断反応を行った。真正の三量体２−５Ａ［ｐ３Ａ（２’ｐ５’Ａ）２］をＲＮアーゼＬアクチベーターとして用いて、０．３ｎＭのＥＣ５０（最大活性化の５０％を与えるアクチベーター濃度）がルーチンで得られる（図１Ａ）。脱リン酸化三量体Ａ（２’ｐ５’Ａ）２はＲＮアーゼＬを活性化することはできず、先の知見に一致した（図１ＡおよびＤ）。Ｄｏｎｇ  Ｂ、Ｘｕ  Ｌ、Ｚｈｏｕ  Ａ、Ｈａｓｓｅｌ  ＢＡ、Ｌｅｅ  Ｘ、Ｔｏｒｒｅｎｃｅ  ＰＦ、Ｓｉｌｖｅｒｍａｎ  ＲＨ、Ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ２−５Ａ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＲＮａｓｅ、Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ、１９９４年、２６９巻（１９号）、１４１５３〜８頁。不活性脱リン酸化２−５Ａ分子は、「コア２−５Ａ」と呼ばれる。信号雑音比は約１０：１であり、アッセイは非常に左右されなかった。ＲＮＡを含有するがＲＮアーゼＬまたは２−５Ａを含まない反応においては、信号の経時的増大はなかった。
【００４３】
（実施例２）
ＲＮアーゼＬ阻害剤の同定
低分子３４，０００個のＣｈｅｍＢｒｉｄｇｅ  ＤＩＶＥＲｓｅｔ（ＣｈｅｍＢｒｉｄｇｅ  Ｃｏ．、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）を用いて、ハイスループットスクリーニングを実施例１に記載のように行った。バックグラウンドに対して少なくとも４倍の信号を呈する化合物を、再試験で潜在的に陽性であるものとして選択した。
【００４４】
７つの「ヒット」が得られた（図２、化合物１〜７）。これらのヒットは、分子量が２９８〜４７０Ｄａであり、ＲＮアーゼＬをミクロモルの範囲で活性化することができた（ＥＣ５０は２２〜９９〜Ｍ）（図１および２）。ＦＲＥＴアッセイにおけるＲＮＡ切断の動態特性について、ｐｐｐＡ（２’ｐ５’Ａ）２は１５分で最大に近い活性化を示し、化合物１および２はＲＮＡ分解の最大レベルを実現するのに６０〜９０分を要した（図１Ｄ〜Ｆ）。
【００４５】
検索可能なデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｈｉｔ２ｌｅａｄ．ｃｏｍ）を使用して、これらのアクチベーターに構造上関連する他の化合物をＣｈｅｍＢｒｉｄｇｅレポジトリで同定した。化合物１に構造上関連する２種類の化合物は、活性（化合物８〜１１）または不活性（化合物１２）であった（図２）。
【００４６】
（実施例３）
化合物１および２は、標識基質を用いたリボヌクレアーゼアッセイにおいてＲＮアーゼＬを活性化する。
【００４７】
これらの化合物は、実際にＲＮアーゼＬを活性化することができることを検証するために、異なる２つの３２Ｐ標識ＲＮＡ基質を用いて、通常の選択的リボヌクレアーゼアッセイを行った（図３ＡおよびＢ）。これらのアッセイでは、２５μＭの化合物１（図３Ａ、レーン３および４）、および２５μＭの化合物２（図３Ａ、レーン５および６）を、精製ヒトＲＮアーゼＬの存在下および非存在下で合成ＲＮＡ基質ＧＧＡＣＵＵＵＵＵＵＵＣＣＣＵＵＵＵＵＵＵＣＣ−［３２Ｐ］ｐＣｐ（配列番号１）を用いてインキュベートした。２−５Ａまたは化合物１もしくは２によって活性化されたＲＮアーゼＬは、ＵＵジヌクレオチド配列の３’末端側で基質を切断し、ＦＲＥＴアッセイの知見に一致した。
【００４８】
主要な化合物１および２によるＲＮアーゼＬ活性化はさらに、配列特異的基質Ｃ７Ｕ２Ｃ１２（図３Ｂ）（配列番号２）を用いて裏付けられた。化合物１（２５μＭ）（レーン４および５）および化合物２（２５μＭ）（レーン６および７）を別々に、ＲＮアーゼＬの存在下および非存在下で放射標識ＲＮＡ基質を用いてインキュベートした。２−５Ａまたは化合物１もしくは２によって活性化されたＲＮアーゼＬは、ＵＵジヌクレオチド配列の３’末端側で基質を切断した。アクチベーターが存在していない場合は、産物バンドは検出されなかった。
【００４９】
ＲＮアーゼＬ二量体形成は、ヌクレアーゼ活性化に必須のものである。ＲＮアーゼＬ二量体形成を監視するために、タンパク質架橋アッセイを行った（図３Ｃ）。ＲＮアーゼＬのオリゴマー状態を、ＲＮアーゼＬに対するモノクローナル抗体を用いて探索したウエスタンブロットで判定した。単量体ＲＮアーゼＬは、２−５Ａ、化合物１、または化合物２の存在下で二量体に変換した（図３Ｃ）。これらのデータから、ミクロモルレベルの化合物１および２はＲＮアーゼＬを活性化し、その酵素を二量体形成させることが明らかである。
【００５０】
（実施例４）
化合物１および２は、ＲＮアーゼＬの２−５Ａ類似体結合ドメインと相互に作用する。
【００５１】
Ｂｉａｃｏｒｅモデル３０００（商標）で表面プラズモン共鳴法による２−５Ａ競合結合アッセイを行って、アクチベーターがＲＮアーゼＬの２−５Ａ結合ドメインと相互に作用するかどうかを判定した。Ｄｒ．  Ｈ．  Ｓａｗａｉ（群馬大学、日本）によるこれらの試みのために、これらのアッセイで使用する２−５Ａ類似体［その２’，３’末端のリボースを介してビオチンに結合しているｐ５’（Ａ２’ｐ）３Ａ］を十分に準備した。ストレプトアビジンチップ（Ｂｉａｃｏｒｅ  Ｉｎｃ．）を２−５Ａ−ビオチンでプレコーティングした。ＲＮアーゼＬ（１０ｎＭ）および様々な濃度の化合物１もしくは化合物２の混合物、またはＲＮアーゼＬ単独をチップ上に流した。
【００５２】
Ｂｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎ（商標）ソフトウェアを使用して、センソグラムを記録し、平衡状態における最大共鳴単位（Ｒｍａｘ）を化合物濃度の関数としてプロットした（図４）。化合物１または２では、共鳴応答が用量依存的に低減した。データから、これらの化合物は２−５ＡとＲＮアーゼＬ結合について競合することが示される。データの解析によって、化合物１および２の結合定数（Ｋｄ）は、それぞれ１８μＭおよび１２μＭであることが示された。
【００５３】
（実施例５）
化合物１および２は、テトラゾリウム変換アッセイに基づいて細胞毒性でない。
【００５４】
化合物１および２の細胞毒性をＭＴＳ（テトラゾリウム）変換アッセイ（Ｐｒｏｍｅｇａ）で評価した。５０〜Ｍの化合物１で３日間処理すると、ＤＵ１４５細胞およびＨｅＬａ細胞についてそれぞれ、細胞生存率が対照（無処置）レベルの７６．３％および９８．２％に低減した。化合物２で処理（やはり５０〜Ｍで３日間）すると、ＤＵ１４５細胞およびＨｅＬａ細胞についてそれぞれ、細胞生存率が無処置細胞の百分率として９５．２％および８６．５％に低減した。ＤＵ１４５細胞の結果を図５に示し、Ｍ期のＨｅｌａ細胞の結果を図６に示す。結果からわかるように、これらの化合物には著しい細胞毒性がない。
【００５５】
（実施例６）
化合物２は、パラインフルエンザウイルス３型、ピコルナウイルス、および脳心筋炎ウイルスに対して抗ウイルス活性を示す。
【００５６】
抗ウイルス活性を確定するために、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）ｃＤＮＡをＰ遺伝子とＭ遺伝子の間に挿入した組換え型ヒトパラインフルエンザウイルス３型（ＨＰＩＶ３）（共同研究者Ａ．  Ｂａｎｅｒｊｅｅにより提供）に細胞を感染させた（図７）。使用する細胞系は、ＲＮアーゼＬが欠損しているＭ期のＨｅＬａ細胞、あるいは野生型ＲＮアーゼＬまたはヌクレアーゼを失活させた変異（Ｒ６６７Ａ）ＲＮアーゼＬ（ベクターｐｃＤＮＡｎｅｏ中のＣＭＶプロモーターに由来）を安定に発現するＭ期のＨｅＬａ細胞である。無血清培地（ＤＭＥＭ）中、細胞をＭＯＩ（感染効率）０．１でＨＰＩＶ３／ＧＦＰに１時間感染させた。培地を除去し、細胞をＰＢＳで洗浄し、５０〜Ｍの化合物２の非存在または存在下で１０％ＦＢＳを含む完全培地を添加した。感染後２４時間に、細胞を倒立型蛍光顕微鏡下で検査した。ベクター単独または変異（Ｒ６６７Ａ）ＲＮアーゼＬを発現するＲＮアーゼＬ欠損Ｍ期のＨｅＬａ細胞は処置および無処置共に、ＨＰＩＶ３／ＧＦＰ感染で、特徴的な合胞体（緑色）が観察されたことは明らかである。対照的に、野生型ＲＮアーゼＬを発現する細胞において化合物２は、ウイルス増殖を明確に抑制し、合胞体の形成を抑制した。蛍光測定から、化合物２は、野生型ＲＮアーゼＬ発現細胞においてウイルス増殖を８倍低減したが、他の２つの細胞系においてはウイルス増殖の低減が１．２倍でしかなかったことが示された。類似の実験では、化合物１も抗ウイルス活性を示した。化合物２は、脳心筋炎ウイルス（図８を参照のこと）およびピコルナウイルス（データを示さず）に対しても抗ウイルス活性を示した。したがって、毒性が低いこれらの化合物は、一般抗ウイルス活性を有する可能性があり、候補抗ウイルス薬である。
【００５７】
（実施例７）
開示されたＲＮアーゼＬアクチベーターは、平滑筋細胞増殖を抑制する。
【００５８】
記載する比色ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ）を用いて、クローン細胞系Ａ１０（ＤＢ１Ｘ胚性ラットの胸部大動脈に由来し、平滑筋細胞の特徴である特性の多くを有する）の増殖を確定した。この方法では、テトラゾリウム化合物［３−（４，５−ジメチルチアゾル−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルホフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム、ＭＴＳ］、および電子カップリング試薬であるフェナジンメトスルファート（ＰＭＳ）を使用する。細胞を９６ウェル培養プレートに播種し（３×１０４細胞／ウェル）、異なる濃度の化合物で２４時間処置した。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６（登録商標）ＡＱｕｅｏｕｓ試薬（ＰＢＳに３０体積／体積％希釈）５０Φｌを各ウェルに添加した。プレートを３７Ｅ  Ｃで２時間インキュベートし、４９０ｎｍの吸光度を９６ウェルプレートリーダー（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、モデルＳｐｅｃｔｒａ  Ｍａｘ  ３４０）で測定した。結果は円滑な細胞増殖が抑制されたことを示し、したがってこれらの化合物は再狭窄予防のための新しいクラスの治療剤として機能できることが示唆される。化合物１を試験した。
【００５９】
（実施例８）
化合物２は、ポックスウイルスファミリーのＤＮＡウイルスであるワクシニアウイルス（Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓｅｒｖｅ（ＷＲ）株）に対して抗ウイルス活性を示す。
【００６０】
実験プロトコル：
ウイルス株：Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓｅｒｖｅ（ＷＲ）
細胞：不死化マウス胚性線維芽細胞（ＭＥＦ）を１０％ＦＢＳおよびｐ／ｓを補充したＲＰＭＩで増殖させた。ベビーハムスター腎細胞（ＢＨＫ２１）およびアフリカミドリザル腎臓細胞（ＢＳＣ４０）を、１０％ウシ胎仔血清、ｐ／ｓ、およびｌ−ｇｌｕを補充したダルベッコ変法イーグル培地で増殖させた。
【００６１】
力価：プラークアッセイ用のＢＨＫ２１（ベビーハムスター腎細胞）
ＭＯＩ：感染のために血清媒地を使用しないワクシニアウイルス（Ｗｅｓｔｅｒｎ  Ｒｅｓｅｒｖｅ）５ＰＦＵ（ウイルスストック：１×１０９ＰＦＵ／ｍｌ）
化合物：０、２５、および５０μＭの化合物２で３回反復測定。
【００６２】
感染：感染して２４時間後、各試料から試料を回収した。
【００６３】
方法：ＭＥＦ（ＲＮアーゼＬ）ＲＬ＋／＋細胞、ＭＥＦ（ＲＮアーゼＬ）ＲＬ−／−細胞、およびＢＳＣ４０細胞を６ウェルプレートに入れ、血清を含まない培地を使用して、８０〜８５％コンフルエントな状態の細胞をワクシニアウイルス（ＷＲ）に５ＰＦＵ／ｍｌで感染させた。４５分後、細胞をＰＢＳで洗浄し、細胞に化合物２を含む新鮮培地を再び加えた。
【００６４】
感染して２４時間後、媒地を除去し、細胞をＰＢＳで掻き出し、２回凍結融解した後、ウイルスの力価を、指標細胞系であるＢＨＫ２１細胞で確定した。
【００６５】
プラークアッセイ：ＢＨＫ２１細胞を１２ウェルプレートに入れ、血清を含まない培地を使用して、細胞の完全な単層を異なる希釈のウイルスに感染させた。感染して４５分後、媒体を除去し、細胞をＰＢＳで２回洗浄し、寒天培地［２％アガロース＋（２×ＭＥＭ＋２０％ＦＢＳ）のミックス］で置換し、２日後、寒天培地の第２層を、プラークを計数するための０．０５％のニュートラルレッドと共に加えた。
【００６６】
その結果を図９、１０、１１、および１２に示し、図面の簡単な説明のセクションに記載する。
【００６７】
本発明を、その好ましい実施形態を参照して具体的に示し、説明してきたが、形態および詳細において様々な変更を、添付の特許請求の範囲に包含される本発明の範囲から逸脱することなくその中で実施できることを当業者なら理解するであろう。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１−１】図１Ａ〜１Ｆは、ＲＮアーゼＬ活性対２−５Ａまたは低分子アクチベーターの濃度（単位：〜Ｍ）（図１Ａ〜１Ｃ）または対時間（単位：分）（図１Ｄ〜１Ｅ）の用量反応および動態を示すグラフである。アッセイはＲＮアーゼＬ  ＦＲＥＴ方法により、２２℃で行われた。（Ａ、Ｄ）ｐｐｐ（Ａ２’ｐ５’Ａ）２；（Ｂ、Ｅ）化合物１；および（Ｃ、Ｆ）化合物２。
【図１−２】図１Ａ〜１Ｆは、ＲＮアーゼＬ活性対２−５Ａまたは低分子アクチベーターの濃度（単位：〜Ｍ）（図１Ａ〜１Ｃ）または対時間（単位：分）（図１Ｄ〜１Ｅ）の用量反応および動態を示すグラフである。アッセイはＲＮアーゼＬ  ＦＲＥＴ方法により、２２℃で行われた。（Ａ、Ｄ）ｐｐｐ（Ａ２’ｐ５’Ａ）２；（Ｂ、Ｅ）化合物１；および（Ｃ、Ｆ）化合物２。
【図２】ＲＮアーゼＬの低分子アクチベーター（化合物１〜１２）の構造、およびＲＮＡ  ＦＲＥＴプローブで５０％分解に必要とされたそのＥＣ５０濃度を示す図である。ＮＡは活性がないことを意味する。
【図３】２−５Ａ、化合物１（Ｃ−１）、および化合物２（Ｃ−２）の（Ａ、Ｂ）選択的リボヌクレアーゼアッセイおよび（Ｃ）ＲＮアーゼＬ二量体形成アッセイを示す図である。（Ａ）２５ｎＭの三量体２−５Ａ（レーン１、２）、２５〜ＭのＣ−１（レーン３、４）、２５〜ＭのＣ−２（レーン５、６）を、２５ｎＭのＲＮアーゼＬと共にまたはそれなしに、ＲＮＡ基質ＧＧＡＣＵＵＵＵＵＵＵＣＣＣＵＵＵＵＵＵＵＣＣ［３２Ｐ］ｐＣｐの存在下、２２℃で３０分間。（Ｂ）２５ｎＭの三量体２−５Ａ（レーン２、３）、２５〜ＭのＣ−１（レーン４、５）、２５〜ＭのＣ−２（レーン６、７）を、２５ｎＭのＲＮアーゼＬおよびＲＮＡ、Ｃ７Ｕ２Ｃ１２−［３２Ｐ］ｐＣｐと共にまたはそれなしに、２２℃で３０分間インキュベートした。切断されたＲＮＡを２０％アクリルアミド／７Ｍ尿素／ＴＢＥ配列決定用ゲルで分離した。（Ｃ）ＲＮアーゼＬのスベルイミノ酸ジメチル（ＤＭＳ）による共有結合架橋。ＤＭＳをＲＮアーゼＬ、および三量体２−５Ａ（レーン２〜５）、Ｃ−１（レーン６〜９）、またはＣ−２（レーン１０〜１３）と共にインキュベートした。ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル電気泳動した後、タンパク質をニトロセルロースに移し、ＲＮアーゼＬに対するモノクローナル抗体でプローブした。
【図４】図４Ａおよび４Ｂは、表面プラズモン共鳴法によって確定された、ＲＮアーゼＬと結合する２−５Ａ−ビオチンの化合物１および２による置換を示すグラフである。ビオチン化２−５Ａをストレプトアビジンバイオセンサーチップ（Ｂｉａｃｏｒｅ）に固定化した。様々な濃度の化合物１（Ａ）または化合物２（Ｂ）の存在下にＲＮアーゼＬ（１０ｎＭ）を、２０μｌ／分の速度でチップに５分間流した。Ｂｉａｅｖａｌｕａｔｉｏｎ（商標）ソフトウェアを使用して、センソグラムを記録し、解析した。それぞれの場合のＲｍａｘを、増大する化合物濃度（単位：〜Ｍ）に対してプロットした。
【図５】図５Ａ〜５Ｃは、ＭＴＳ転換アッセイにおいて、化合物１および２のＤＵ１２５細胞に対する細胞毒性を示すグラフである。細胞毒性は、４９０ナノメートルにおける吸光度対１日（図５Ａ）、２日（図５Ｂ）、および３日（図５Ｃ）における濃度（単位：〜Ｍ）によって測定する。化合物１の結果を青色で表し、化合物２の結果を赤色で表す。
【図６】図６Ａ〜６Ｂは、ＭＴＳ転換アッセイにおいて、化合物１および２のＭ期のＨｅｌａ細胞に対する細胞毒性を示すグラフである。細胞毒性は、４９０ナノメートルにおける吸光度対１日における濃度（単位：〜Ｍ）によって測定する。化合物１の結果を青色で表し、化合物２の結果を赤色で表す。図６Ａは、ＲＮアーゼＬを発現するＭ期のＨｅｌａ細胞の結果を示し、図６Ｂは、ヌクレアーゼを失活させたＲＮアーゼＬ変異体を発現するＭ期のＨｅｌａ細胞の結果を示す。
【図７】化合物２がＨＰＩＶ３／ＧＦＰの複製を抑制することを示す倒立型蛍光顕微鏡写真である。ＲＮアーゼＬが欠損しているＭ期のＨｅＬａ細胞を、空のベクター対照細胞、野生型ＲＮアーゼＬを発現する細胞、またはヌクレアーゼを失活させた変異（Ｒ６６７Ａ）ＲＮアーゼＬを発現する細胞として使用した。倒立型蛍光顕微鏡を使用して像を得た。
【図８】プラーク数×１０−７によって測定して、様々な濃度（単位：〜Ｍ）の化合物２の脳心筋炎ウイルス（ＥＭＣＶ）に対する抗ウイルス効果を示す棒グラフである。
【図９】０、２５、および５０μＭの化合物２を用いて増殖させたＭＥＦ  ＲＬ＋／＋細胞の増殖を示す棒グラフを含む。この棒グラフは、対照（０μＭの化合物２、１００％＝２．５×１０４ＰＦＵ／ｍＬ）に対して得られたウイルスプラークの百分率を示す。化合物２の濃度を増大させると、プラークアッセイで確定されたウイルス産生の出現が減少した。化合物２の各濃度の真下にあるのは、ニュートラルレッドで染色した対応する寒天板である。これらの寒天板によっても、化合物２の濃度の増大と共に、プラークアッセイで確定されたウイルス産生がやはり減少することが示される。
【図１０】化合物２の非存在下または存在下で増殖させたＭＥＦ  ＲＬ＋／＋、ＢＳＣ４０、およびＭＥＦ  ＲＬ−／−細胞で得られたウイルスプラークの百分率を示す棒グラフである。化合物２は、ＭＥＦ  ＲＬ＋／＋およびＢＳＣ４０細胞のウイルス価を抑制した。ＲＮアーゼＬ遺伝子を欠いている細胞は、化合物２に抵抗性を示した。（無処置対照（０μＭの化合物２を添加）（単位：ＰＦＵ／ｍＬ）は、１００％において：ＭＥＦ  ＲＬ＋／＋：２．５×１０４；ＢＳＣ４０：２．５×１０４；およびＭＥＦ  ＲＬ−／−：３．５×１０４）。
【図１１】ニュートラルレッドで染色した寒天板上の処置（５０μＭの化合物２）および無処置（０μＭの化合物２を添加）ＭＥＦ  ＲＬ＋／＋細胞の写真である。化合物２の存在によって、ウイルスプラーク数が減少した。
【図１２】ＭＥＦ  ＲＬ＋／＋細胞とＭＥＦ  ＲＬ−／−細胞の両方について、プラークアッセイで確定した実際のウイルスプラーク数を含む表である。ＭＥＦ  ＲＬ＋／＋細胞におけるウイルス産生は、化合物２の存在下で減少した。化合物２は、ＭＥＦ  ＲＬ−／−細胞においてウイルス産生を低減させなかった。ウイルス希釈は、ウイルスの１０倍希釈によって、ウイルスプラーク数の減少が１０倍であったことを示す。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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