(57)【要約】  本発明は、０．１未満の脳Ｃｍａｘ対血漿Ｃｍａｘ比を有する末梢に制限されているカンナビノイドＣＢ１受容体アゴニスト及びオピオイド受容体アゴニストを含む同時使用又は連続使用のための鎮痛薬の組み合わせを含む医薬品剤形、ならびに前記医薬品剤形を使用する、疼痛を治療するための方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
カンナビノイド受容体アゴニストが、０．１未満の脳Ｃｍａｘ対血漿Ｃｍａｘ比を有するように末梢に制限されていることを特徴とする、カンナビノイドＣＢ１受容体アゴニスト及びオピオイド受容体アゴニストを含む、同時使用又は連続使用のための鎮痛薬の組み合わせを含む医薬品剤形。
【請求項２】
末梢に制限されているカンナビノイド受容体アゴニストが、０．０５未満の脳Ｃｍａｘ対血漿Ｃｍａｘ比を有する、請求項１の医薬品剤形。
【請求項３】
オピオイド受容体アゴニストが、アルフェンタニル、アリルプロジン、アルファプロジン、アニレリジン、ベンジルモルヒネ、ベジトラミド、ブプレノルフィン、ブトルファノール、クロニタゼン、コデイン、シクロルファン、デソモルヒネ、デキストロモラミド、デゾシン、ジアモルヒネ、ジアンプロミド、ジヒドロコデイン、ジヒドロモルフィネ、エプタゾシン、エチルモルヒネ、フェンタニル、ヒドロコドン、ヒドロモルホン、ヒドロキシペチジン、レボフェナシルモルファン、レボルファノール、ロフェンタニル、メタドン、メペリジン、メチルモルヒネ、モルヒネ、ナルブフィン、ネコモルヒネ、ノルメタドン、ノルモルヒネ、アヘン、オキシコドン、オキシコンチン、オキシモルフォン、ペンタゾシン、フォルコジン、プロファドール、スフェンタニル及びトラマドールより選択される、請求項１又は２の医薬品剤形。
【請求項４】
オピオイド受容体アゴニストが、モルヒネ、コデイン、フェンタニル、オキシモルヒネ、オキシコドン、ヒドロモルヒネ、メタドン及びトラマドールより選択される、請求項３の医薬品剤形。
【請求項５】
オピオイド受容体アゴニストが、モルヒネ、コデイン、フェンタニル及びトラマドールより選択される、請求項１から４のいずれか１項の医薬品剤形。
【請求項６】
カンナビノイド受容体アゴニストが、オピオイド受容体アゴニストと同時に又は連続して投与される、疼痛の治療のための薬物の調製のための、０．１未満の脳Ｃｍａｘ対血漿Ｃｍａｘ比を有する末梢に制限されているカンナビノイドＣＢ１受容体アゴニストの使用。
【請求項７】
０．１未満の脳Ｃｍａｘ対血漿Ｃｍａｘ比を有する末梢に制限されているカンナビノイドＣＢ１受容体アゴニスト及びオピオイド受容体アゴニストの同時投与又は連続投与を含む、疼痛の治療のための方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、相乗的組み合わせの分野に関し、より具体的には末梢に制限されているカンナビノイド受容体アゴニストとオピオイド受容体アゴニストとの相乗的組み合わせ及び疼痛の治療におけるこの組み合わせの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
疼痛治療はしばしば、現在利用可能な薬物療法の副作用により制限される。中程度から重度の疼痛に関し、オピオイド受容体アゴニスト（オピオイド）が広範に使用されている。この群における最良の公知の化合物は、モルヒネ、コデイン、ペチジン、トラマドール、スフェンタニル及びフェンタニルである。これらの薬物は安価及び効果的であるが、依存（身体的及び心理的の両方）、呼吸抑制、筋硬直、失見当識、鎮静、悪心、嘔吐、便秘、掻痒症及び尿閉を含む重篤な副作用を罹患する。これらの苦痛の多い副作用は、使用できるオピオイドの用量を制限し、そのことは頻繁に、患者が最適以下の疼痛調節を受容するという結果をもたらす。
【０００３】
副作用の重度のために、オピオイド受容体アゴニストと他の鎮痛薬との組み合わせは、オピオイドの用量を低下させるための方法として研究されてきた。この点において考慮されてきた鎮痛薬は、アスピリン、ケトロラク及びイブプロフェンなどの非ステロイド性抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）、メロキシカム及びセレコキシブなどのＣＯＸ−２選択的阻害剤、及びパラセタモールである。オピオイド鎮痛薬の用量における低下は、ＮＳＡＩＤの同時投与により可能であることが、科学文献において報告されてきた。Ｃａｔａｌｄｏ  Ｐ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（Ｓｕｒｇ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｏｂｓｔｅｔ．１７６：４３５−４３８，  １９９３）、Ｐｉｃａｒｄ  Ｐ．ｅｔ  ａｌ．（Ｐａｉｎ  ７３：４０１−４０６，  １９９７）、Ｗ．Ａ．ｅｔ  ａｌ．（Ｊ．Ｕｒｏｌ．１５４：１４２９−１４３２，  １９９５）及び複数の他の文献は、術後疼痛緩和におけるモルヒネ及びケトロラクトロメタモール（トラドール）の組み合わせの効果を報告している。この組み合わせは、癌患者における疼痛治療に効果的であることもわかった（Ｊｏｉｓｈｙ  Ｓ．Ｋ．ａｎｄ  Ｗａｌｓｈ  Ｄ．，  Ｊ．Ｐａｉｎ  Ｓｙｍｐｔｏｍ  Ｍａｎａｇ．１６：３３４−３３９，  １９９８）。Ｇｕｐｔａ  Ａ．Ｅｔ  ａｌ．（Ｒｅｇ．Ａｎｅｓｔｈ．Ｐａｉｎ  Ｍｅｄ．２４：２２５−２３０，  １９９９）は、この組み合わせが相乗的鎮痛効果を有するといわれ得ると示唆するのに対し、Ｓｅｖａｒｉｎｏ  Ｆ．Ｂ．ｅｔ  ａｌ．は、この組み合わせが相加作用を有すると結論付けている。静脈内プロパセタモール（パラセタモールのプロドラッグ）が、術後疼痛におけるモルヒネ節約効果を有することを示唆する、文献における幾つかの証拠がある（Ｂｉｎｈａｓ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，ＢＭＣ  Ａｎｅｓｔｈｅｓｉｏｌｏｇｙ  ４：６，  ２００４；Ａｕｂｒｕｎ  Ｆ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ  Ｊ  Ａｎａｅｓｔｈ．９０：３１４−３１９，  ２００３）が、モルヒネ関連副作用の低下は見られなかった。他の刊行された研究は、静脈内プロパセタモールと偽薬群の間でモルヒネ消費量の有意差を示さなかった（Ｖａｒａｓｓｉ  Ｇ．ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｅｓｔｈ．Ａｎａｌｇ．８８：６１１−６１６，  １９９９；Ｆｌｅｔｃｈｅｒ  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎ．Ｊ．Ａｎａｅｓｔｈ．４４：４７９−４８５，  １９９７；Ｓｉｄｄｉｋ  Ｓ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｇ．Ａｎｅｓｔｈ．Ｐａｉｎ  Ｍｅｄ．２６：３１０−３１５，２００１）。
【０００４】
ＮＳＡＩＤ及びＣＯＸ−２阻害剤は、中程度から重度の疼痛の治療における制限された有効性を有し、及びげっ歯類動物におけるテイルフリック試験などの抗侵害受容の前臨床閾値モデルにおいて活性はない。中枢的に作用するオピオイドなどの強力な鎮痛薬は、テイルフリック試験において強い活性を示す。オピオイド及びＮＳＡＩＤの幾つかの組み合わせの間における、テイルフリック試験での相乗作用に関する前臨床証拠があるが、他の組み合わせではない。例えば、イブプロフェンは、マウステイルフリック試験においてオピオイドアゴニストであるヒドロコドン及びオキシコドンの効果を亢進することが示されてきたのに対し、アスピリンもケトロラクもヒドロコドン作用に影響を及ぼさず、イブプロフェンは、フェンタニル又はモルヒネによる鎮痛を強化しなかった（Ｚｅｌｃｅｒ，Ｓ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．１０４０：１５１−１５６，  ２００５）。ラットテイルフリック試験において、それら自体により不活性であるＮＳＡＩＤインドメタシン及び選択的ＣＯＸ−２阻害剤であるＮＳ−３９８は、本モデルにおいてモルヒネの抗侵害受容性効果を増強しなかった（Ｗｏｎｇ  Ｃ−Ｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ａｎａｅｓｔｈｅｓｉａ  ８５：７４７−７５１，  ２０００）。
【０００５】
カンナビノイド受容体アゴニストが、鎮痛薬及び抗炎症薬としての可能性を有するという証拠が集まりつつある。カンナビノイド受容体の２つの種類、すなわち、主として中枢神経系（ＣＮＳ）に局在するが、末梢ニューロン及び他の末梢組織によっても発現されるカンナビノイドＣＢ１受容体、ならびに主に免疫細胞に局在するカンナビノイドＣＢ２受容体が関係する（Ｈｏｗｌｅｔｔ，Ａ．Ｃ．ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｕｎｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ．ＸＸＶＩＩ．Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃａｎｎａｂｉｎｏｉｄ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒｅｖ．５４：１６１−２０２，  ２００２）。末梢性に制限されるカンナビノイド受容体アゴニストは、鎮静及び向精神性効果などのＣＮＳにおけるＣＢ１受容体の活性化と関連した副作用がなく、疼痛の治療において有用であり得る（Ｐｉｏｍｅｌｌｉ  Ｄ．ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ  ３９４：２７７−２８１，  １９９８；Ｋｏ  Ｍ−Ｃ  ａｎｄ  Ｗｏｏｄｓ  Ｊ．Ｈ．，Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １４３：３２２−３２６，  １９９９；Ｆｏｘ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，  Ｐａｉｎ  ９２：９１−１００，  ２００１；Ｊｏｈａｎｅｋ  Ｌ．Ｍ．ａｎｄ  Ｓｉｍｏｎｅ  Ｄ．Ａ．，  Ｐａｉｎ  １０９：４３２−４４２，  ２００４；Ｆｏｘ  Ａ．ａｎｄ  Ｂｅｖａｎ  Ｓ．，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ  １４：６９５−７０３，  ２００５）。しかしながら、ＣＮＳにおけるＣＢ１受容体を活性化する化合物とは対照的に、ＣＮＳにおいてＣＢ１受容体を活性化させるのに十分な脳レベルに至らない用量で投与される、末梢にて制限されたカンナビノイド受容体アゴニストは、テイルフリック試験などの抗侵害受容の閾値モデルにおいて活性がない。それゆえ、これらの薬物は、単独で投与された場合、中程度から重度の疼痛を治療するのに十分な有効性を有し得ない。中枢的に作用するカンナビノイド受容体アゴニストが、脊髄レベル及び脊髄上位レベルでの相互作用を通じ相乗的様式でオピオイド受容体アゴニストと相互作用することが、文献において記載されている（Ｔｈａｍ  Ｓ．Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．１４４：８７５−８８４，  ２００５；Ｃｉｃｈｅｗｉｃｚ  Ｄ．Ｌ．，Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ７４：１３１７−１３２４，  ２００４；Ｐｅｒｔｗｅｅ  Ｒ．Ｇ．，Ｐｒｏｇ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．６３：５６９−６１１，  ２００１；Ｗｅｌｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２７２：３１０−３２１，  １９９５）。オピオイド受容体アゴニストとの組み合わせにおいて研究されてきた、中枢的に作用するカンナビノイド受容体アゴニスト（Ｊ．Ｄ．Ｒｉｃｈａｒｄｓｏｎ，Ｊ．ｏｆ  Ｐａｉｎ  Ｖｏｌ  １，  Ｎｏ．１，  ２−１４，  ２０００）は、全身又は局所的適用における高い脳Ｃｍａｘ対血漿Ｃｍａｘ比により特徴付けられる。カンナビノイドアゴニストであるΔ９−テトラヒドロカンナビノール（Δ９ＴＨＣ）、カンナビノール及びカンナビジオールに関する、ラットにおける脳対血漿比はそれぞれ、０．９６、０．８８及び２．６１であると報告された（Ａｌｏｚｉｅ，Ｓ．Ｏ．ｅｔ  ａｌ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｅｈａｖ．１２：２１７−２２１，  １９８０）のに対し、Ｄｙｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ（Ｐａｉｎ，  １１６：１２９−１３７，  ２００５）は、ラットにおいて、Δ９ＴＨＣに関して１．０、及びアミノアルキリンドールカンナビノイドアゴニストＷＩＮ５５，２１２−２に関して１．３から１．９の脳対血漿比を報告した。
【０００６】
相乗効果は、オピオイド受容体アゴニストと、脳及び脊髄へ浸透する能力の非常に低い末梢に制限されているカンナビノイド受容体アゴニストとの組み合わせに関し、期待されないであろう。
【０００７】
現在利用可能な治療法と比較して副作用の低下した、中程度から重度の疼痛における効果的鎮痛を得られる鎮痛薬又は薬物の組み合わせに関する、満たされていない医学的ニーズが残っている。
【発明の開示】
【０００８】
本研究の目的は、マウスにおいて静脈内投与に関し測定される０．１未満の脳Ｃｍａｘ対血漿Ｃｍａｘ比を有する、末梢に制限されているカンナビノイドＣＢ１受容体アゴニスト及び同時使用又は連続使用のためのオピオイド受容体アゴニストを含む医薬品剤形を提供することである。本発明の医薬品剤形において、末梢に制限されているカンナビノイドＣＢ１受容体アゴニストは、相乗的様式でオピオイド受容体アゴニストの抗侵害受容性効果を亢進し得る。このような剤形によって、投与されるべきオピオイド受容体アゴニストの用量を低下でき、それによりその血漿濃度を低下させる一方で、効果的な疼痛治療をなおも提供する。このことは、オピオイド受容体アゴニストによる一過性又は長期の治療へ供されるとき、患者が経験することがある副作用並びに依存及び耐性を低下させる機会を提供する。
【０００９】
本発明に関し、用語「カンナビノイド受容体」は、ＣＢ１受容体及びＣＢ２受容体を包含するものを意図している。用語「カンナビノイド受容体アゴニスト」は、ＣＢ１受容体アゴニスト及びＣＢ２受容体アゴニストを包含するものを意図し、これにはＣＢ１対ＣＢ２に関して質的に非選択的である化合物、及びＣＢ１受容体又はＣＢ２受容体のいずれかに関する選択性の変動を示す化合物が含まれる。本発明の好ましい態様において、本発明のカンナビノイド受容体アゴニストは、ＣＢ１受容体アゴニストである。
【００１０】
用語「末梢に制限されているカンナビノイドＣＢ１受容体アゴニスト」は、意図される用量において、意図される投与経路により与えられるとき、末梢性ニューロン及び他の末梢組織におけるカンナビノイドＣＢ１受容体を活性化するが、ＣＮＳにおけるカンナビノイドＣＢ１受容体を有意には活性化しないカンナビノイドＣＢ１受容体アゴニストを、包含する。ＣＮＳ中の化合物の最大濃度が、中枢性ＣＢ１受容体の有意な活性化に必要なものより低いように意図される用量で、意図される経路によって投与されるとき、末梢に制限されているカンナビノイド受容体アゴニストは、十分に低い血液脳関門への浸透を有する。
【００１１】
本発明による末梢性に制限されるカンナビノイドＣＢ１受容体アゴニストは、静脈内投与後のマウスにおいて測定されるように、０．１未満の脳中最大濃度対血漿中最大濃度比から特徴付けられ及び同定され得る。好ましい末梢に制限されているカンナビノイドＣＢ１受容体アゴニストは、０．０５未満の脳Ｃｍａｘ対血漿Ｃｍａｘ比を有する。特に好ましい末梢に制限されているカンナビノイド受容体アゴニストは、０．０２５未満の脳Ｃｍａｘ対血漿Ｃｍａｘ比を有する。
【００１２】
血液脳関門を横切る化合物の能力を予測するためのインシリコのモデルは、文献（Ｃｌａｒｋ  Ｄ．Ｅ．，  ＤＤＴ（２００３）８：９２７−９３３）に記載されている。９２７−９３３）．これらのモデルは、特定のカンナビノイド受容体アゴニストが、その化学構造に基づいて、末梢に制限されそうであるかどうかを決定するのに使用され得る。例えば、極性表面積（ｐｏｌａｒ  ｓｕｒｆａｃｅ  ａｒｅａ；ＰＳＡ）と脳浸透との間の逆の関係は、７０Å２を超えるＰＳＡを有する化合物が、低い脳浸透を有することが多いと考慮されると記載されている（Ｋｅｌｄｅｒ  Ｊ．ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．，  １６：１５１４−１５１９，  １９９９）。ＰＳＡは、分子の水素結合能の尺度であり、酸素原子及び窒素原子、並びに酸素原子及び窒素原子へ結合した水素からの、分子表面積への寄与を合計することにより、通常算出される。
【００１３】
本発明に関し、用語「オピオイド受容体アゴニスト」は、モルヒネ様作用を有する全ての薬物を包含するものを意図している。オピオイドは、中枢に作用する鎮痛薬として主に採用され、及びそれらの特性においてアヘン又はモルヒネ様である、天然及び合成の両方の薬物の群である。オピオイドには、モルヒネ及びモルヒネ様ホモログが含まれ、例えば、多くの他のこのような誘導体のうち、半合成誘導体コデイン（メチルモルヒネ）及びヒドロコドン（ジヒドロコデイノン）が含まれる。モルヒネ及び関連オピオイドは、δ及びκオピオイド受容体と同様、μ−オピオイド受容体において、アゴニスト活性を呈し、鎮痛をもたらす。強力な鎮痛効果に加え、オピオイド受容体アゴニストは、多くの望ましくない効果も生じ得、それには例えば呼吸抑制、吐き気、嘔吐、めまい、傾眠、意識混濁、神経不安、掻痒、便秘、胆道圧上昇、尿閉及び低血圧が含まれる。
【００１４】
本発明に適したオピオイド受容体の例には、アルフェンタニル、アリルプロジン、アルファプロジン、アニレリジン、ベンジルモルヒネ、ベジトラミド、ブプレノルフィン、ブトルファノール、クロニタゼン、コデイン、シクロルファン、デソモルヒネ、デキストロモラミド、デゾシン、ジアンプロミド、ジヒドロコデイン、ジヒドロモルフィネ、エプタゾシン、エチルモルヒネ、フェンタニル、ヒドロコドン、ヒドロモルホン、ヒドロキシペチジン、レボフェナシルモルファン、レボルファノール、ロフェンタニル、メタドン、メペリジン、メチルモルヒネ、モルヒネ、ナルブフィン、ネコモルヒネ、ノルメタドン、ノルモルヒネ、アヘン、オキシコドン、オキシモルフォン、ペンタゾシン、フォルコジン、プロファドール、スフェンタニル及びトラマドールが含まれる。
【００１５】
本発明における使用のための好ましいオピオイド受容体アゴニストは、モルヒネ、コデイン、フェンタニル、オキシモルヒネ、オキシコドン、ヒドロモルヒネ、メタドン及びトラマドールである。本発明の医薬品剤形における使用のための特に好ましいオピオイド受容体アゴニストは、モルヒネ、コデイン、フェンタニル及びトラマドールである。
【００１６】
末梢性に制限されるカンナビノイドＣＢ１受容体アゴニスト及びオピオイド受容体アゴニストは、（いずれかの順序で）連続して又は同時に投与できる。多様な投与形態において両方の薬物を投与することも可能であり、すなわち、いずれか又は両方が、静脈内ボーラス投与又は注入により、皮下的に、筋肉内に、経口的に、直腸的に又は舌下的に投与され得る。好ましい様式において、本発明は、経口投与のための薬学的剤形を提供する。１日あたり体重１ｋｇあたり約０．００５ｍｇから約１００ｍｇまでのカンナビノイド受容体アゴニストの用量レベルが、オピオイド鎮痛薬との組み合わせにおいて治療的に有効であり得る。
【００１７】
本発明の医薬品剤形の組み合わせは、活性成分として、末梢性に制限されるカンナビノイドＣＢ１受容体アゴニスト及び各アゴニストのための個別の剤形又はアゴニストの両方を含む剤形のいずれかにおけるオピオイド受容体アゴニストを含む。
【００１８】
経口投与に関し、本発明の鎮痛薬の組み合わせの活性成分は、錠剤、カプセル、粉末、顆粒、溶液、懸濁液等の別個の単位として提供され得る。
【００１９】
非経口投与に関し、本発明の医薬品剤形の活性成分は、単位用量又は多重用量の容器中に提供され得、例えば、密閉されたバイアル及びアンプル中の、所定の量の注入液であり得、並びに使用前に、滅菌液体担体、例えば水の添加のみを要する凍結乾燥した（凍結乾燥した）条件で保存もされ得る。
【００２０】
例えば、標準的な参考文献Ｇｅｎｎａｒｏ，Ａ．Ｒ．ｅｔ  ａｌ．，  Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ（２０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ．，  Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，  ２０００、特にＰａｒｔ  ５：Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｉｎｇ参照）に記載のような薬学的に許容される補助剤と混合されると、活性成分は、ピル、錠剤などの固体用量単位へと圧縮され得るか、又はカプセル若しくは坐薬へと加工され得る。薬学的に許容される液体により、活性成分は、溶液、懸濁液、乳剤の形態にある液体組成物、例えば注入製剤として、又はスプレー、例えば点鼻スプレーとして適用できる。
【００２１】
固体用量単位を調製するため、充填剤、着色料、ポリマー結合剤等の従来の添加物の使用が意図される。一般的に、活性成分の機能に干渉しない、薬学的に許容される全ての添加物が使用できる。本発明の活性成分が固体組成物として投与され得る適切な担体には、適した量で使用される乳糖、デンプン、セルロース誘導体等、又はそれらの混合物が含まれる。非経口投与のため、プロピレングリコール又はブチレングリコールなどの薬学的に許容される分散剤及び／又は湿潤剤を含有する水性懸濁液、等張性食塩水及び滅菌済み注入可能溶液が使用され得る。
【００２２】
本発明にはさらに、前記組み合わせに適した包装材料と組み合わせた、上述のような鎮痛薬の組み合わせが含まれ、前記包装材料には、上述のような使用のための組み合わせの使用のための説明書が含まれる。
【００２３】
本発明の医薬品剤形は、疼痛の治療に適している。いかなる鎮痛薬治療をも意図しているが、本発明の組成物は、周術期疼痛、腫瘍性患者における疼痛、終末期患者における疼痛、慢性疼痛（背部痛、神経因性疼痛及び関節炎などの炎症性疼痛を含む）、産科疼痛及び月経困難の治療など、オピオイド薬物が通常指示されるであろう中程度から重度の疼痛の治療又は予防において特に有用である。
【００２４】
実験
末梢に制限されているＣＢ１受容体アゴニストの調製
２−（２−ヒドロキシ−エチルカルバモイルオキシメチル）−５，７−ジメチル−３−（２−メチルスルファモイルフェニル）−４−オキソ−３，４−ジヒドロ−キナゾリン−６−カルボン酸エチルエステル（化合物１ａ）を、国際特許出願第ＷＯ２００３０６６６０３号（Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａ  ＧＭＢＨ）に記載のとおり調製した。
【００２５】
【化１】
2009500439.tif 000002
【００２６】
（Ｓ）−７−クロロ−３−［（５−｛［３−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）カルボキサミド］ピペリジン−１−イル｝メチル）−（［１，２，４］−チアジアゾール−３−イル）］−１−（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロチオピラン−４−イル）メチル−１Ｈ−インドール塩酸塩（化合物２）を、下記のとおり調製した。
【００２７】
【化２】
2009500439.tif 000003
【００２８】
段階Ａ：テトラヒドロチオピラン−４−カルボニトリル
ジメトキシエタン（２．５Ｌ）中のテトラヒドロチオピラン−４−オン（７５ｇ、６４６ｍｍｏｌ）及びトルエンスルホニルメチルイソシアニド（１３８．６ｇ、７１０ｍｍｏｌ）の混合物を０℃に冷却し、ｔｅｒｔ−ブタノール（１．３Ｌ）中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシド（１４５ｇ、１．２９ｍｏｌ）の溶液を、滴下して添加した。次に、該混合物を室温へ加温し、３時間撹拌した後、ジエチルエーテル（３Ｌ）で希釈し、飽和炭酸水素ナトリウム（２×１．５Ｌ）で洗浄し、硫酸マグネシウム上で乾燥した。真空での溶媒の除去により、テトラヒドロチオピラン−４−カルボニトリルを、淡褐色の油として得た（８８．３ｇ、６４６ｍｍｏｌ）。
【００２９】
段階Ｂ：テトラヒドロチオピラン−４−カルボン酸
エタノール（６００ｍＬ）中のテトラヒドロチオピラン−４−カルボニトリル（６４６ｍｍｏｌ）の溶液を、水（１．１Ｌ）中の水酸化ナトリウム（２５８．４ｇ、６．４６ｍｏｌ）の高速撹拌の混合物へ、一部添加した。次に、該混合物を９０℃へ２時間加熱し、０℃に冷却し、濃塩酸溶液でｐＨを２に調整した。次に、エタノールを真空除去し、懸濁液をジクロロメタン（３×１Ｌ）へ抽出した。次に、組み合わせた有機抽出物を硫酸マグネシウム上で乾燥し、真空蒸発させ、テトラヒドロチオピラン−４−カルボン酸を褐色の固体（９６ｇ、６４６ｍｍｏｌ）として得た。
【００３０】
段階Ｃ：（テトラヒドロチオピラン−４−イル）−メタノール
無水テトラヒドロフラン（１．５Ｌ）中のボランジメチルスルフィド複合体の溶液（７３．５ｍＬ、７７５ｍｍｏｌ）を、無水テトラヒドロフラン（３００ｍＬ）中のテトラヒドロチオピラン−４−カルボン酸（６４６ｍｍｏｌ）の溶液で１５分間かけて滴下して処理した。次に、混合物を７０℃へ２時間加熱し、室温に冷却し、発泡が停止するまで水の滴下による添加によって反応を停止した。次に、水のさらなる部分（５００ｍＬ）を添加し、テトラヒドロフランを真空除去した。次に、残渣を希塩酸溶液により酸性化し、ジクロロメタン（３×５００ｍＬ）中に抽出した。次に、合わせた有機層を硫酸マグネシウム上で乾燥し、溶媒を真空除去して、（テトラヒドロチオピラン−４−イル）−メタノールを褐色油（９０．１８ｇ、６４６ｍｍｏｌ）として得た。
【００３１】
段階Ｄ：（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロ−１−チオピラン−４−イル）−メタノール
水（３Ｌ）中の過ヨウ素酸ナトリウム（３０４ｇ、１．４２ｍｏｌ）の溶液を、メタノール（１．７Ｌ）中の（テトラヒドロチオピラン−４−イル）−メタノール（６４６ｍｍｏｌ）の溶液で処理し、混合物を６０℃へ３時間加熱した。次に、過ヨウ素酸ナトリウム（１０ｇ）を添加し、さらに１時間加熱し続けた後、全ての揮発物を真空除去した。次に、得られた顆粒状残渣を、ジエチルエーテル（２×５００ｍＬ）、ジクロロメタン（２×５００ｍＬ）及びメタノール（２×５００ｍＬ）中の５０％（ｖ／ｖ）ジクロロメタンを分けて、連続してともに振盪した。次に、残存する残渣を、ジクロロメタンを使用して１８時間の連続抽出し、より初期の溶媒抽出物と組み合わせた溶媒を、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空蒸発させ、（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロ−１−チオピラン−４−イル）−メタノールを、静置で結晶化するオレンジ色の油として得た。
【００３２】
段階Ｅ：トルエン−４−スルホン酸１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロ−１−チオピラン−４−イルメチルエステル
クロロホルム（１．５Ｌ）中の（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロ−１−チオピラン−４−イル）−メタノール（１０５ｇ、６４０ｍｍｏｌ）、ピリジン（１５５ｍＬ、１．９２ｍｏｌ）及び４−ジメチルアミノピリジン（２．５ｇ、２０．５ｍｍｏｌ）の溶液を、塩化ｐ−トルエンスルホニル（２４４ｇ、１．２８ｍｏｌ）で１５分かけて少量ずつ処理した。混合物を７２時間撹拌し、水（２×１Ｌ）、飽和塩化ナトリウム溶液（１Ｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した。有機溶媒を真空除去し、油性残渣を酢酸エチル中の６０％（ｖ／ｖ）ヘプタンとともに振盪して、ろ過により褐色固体を得た。これを最小ジクロロメタン中に溶解し、酢酸エチル（４Ｌ）により溶出してセライトパッドを通過させた。次に、溶液容積が７５０ｍＬになるまで溶媒を真空除去し、ヘプタン（１．５Ｌ）を添加した。次に、得られた懸濁液をろ過し、表題化合物を砂状有色固体（１３０ｇ、４０８ｍｍｏｌ）として得た。
【００３３】
段階Ｆ：７−クロロ−１−［（１，１−ジオキソヘキサヒドロチオピラン−４−イル）メチル］−１Ｈ−インドール
ジメチルホルムアミド（４５０ｍＬ）中の７−クロロインドール（４５ｇ、２９６ｍｍｏｌ）の溶液を、水素化ナトリウム（鉱油中の６０％分散物；１７．８ｇ、４４４ｍｍｏｌ）により少量ずつ処理した。混合物を室温で３０分間撹拌した。次に、トルエン−４−スルホン酸１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロ−１−チオピラン−４−イルメチルエステル（９５．４５ｇ、３００ｍｍｏｌ）を、１５分かけて少量ずつ添加し、該混合物を室温で７２時間撹拌した。反応物を、水（２Ｌ）で反応停止し、沈殿物をろ過し、水（３×３００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、表題化合物を無色の固体（７９ｇ、２６６ｍｍｏｌ）として得た。
【００３４】
段階Ｇ：７−クロロ−１−［（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロチオピラン−４−イル）メチル］−１Ｈ−インドール−３−カルボン酸
ジメチルホルムアミド（８００ｍＬ）中の１−［（１，１−ジオキソヘキサヒドロチオピラン−４イル）メチル］−７−クロロ−１Ｈ−インドール（７９ｇ、２６６ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素下、アセトン／氷槽中で冷却し、無水トリフルオロ酢酸（７４．３ｍＬ、５３２ｍｍｏｌ）を滴下して添加し、温度を５℃未満に維持した。該混合物を、撹拌しながら２時間かけて室温へ加温した後、水（３Ｌ）で反応停止した。得られた７−クロロ−１−［（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロチオピラン−４−イル）メチル］−３−［（トリフルオロメチル）−カルボニル］−１Ｈ−インドール沈殿物をろ過し、水（３×７００ｍＬ）で洗浄した。湿った固体をエタノール（５００ｍＬ）中で懸濁し、４Ｍ水酸化ナトリウム水溶液（５００ｍＬ）を添加し、撹拌しながら混合物を２時間還流加熱した。混合物を冷却し、エタノールを真空除去した。水（５００ｍＬ）及びヘプタン（２００ｍＬ）を添加し、５Ｍ塩酸水溶液により混合物をｐＨ２へ酸性化した。懸濁液をろ過し、水（３×５００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、表題化合物を明褐色の固体（７０ｇ、２０５ｍｍｏｌ）として得た。
【００３５】
段階Ｈ：７−クロロ−１−［（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロチオピラン−４−イル）メチル］−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド
テトラヒドロフラン（７５０ｍＬ）中の７−クロロ−１−［（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロチオピラン−４イル）メチル］−１Ｈ−インドール−３−カルボン酸（７０ｇ、２０５ｍｍｏｌ）の溶液を、窒素下、０℃に冷却し、塩化オキサリル（２３ｍＬ、２６６ｍｍｏｌ）を滴下して添加した。該混合物を室温で１６時間撹拌し、揮発成分を真空蒸発させ、残渣をジクロロメタン中に懸濁した。得られた混合物を、水酸化アンモニウム（３３％水溶液、７５０ｍＬ）及び炭酸カリウム（５６．５ｇ、４１０ｍｍｏｌ）の冷却した（０℃）混合物に（３分かけて）ゆっくり添加した。得られた二相性懸濁液を１時間撹拌した。次に、ジクロロメタンを真空除去し、塩酸水溶液によりｐＨを８から９に調整した。次に、懸濁液をろ過し、水（２×３００ｍＬ）、ヘプタン（２×３００ｍＬ）及びジエチルエーテル（２×３００ｍＬ）で洗浄し、乾燥し、表題化合物を砂状有色固体（６６．５ｇ、１９５ｍｍｏｌ）として得た。
【００３６】
段階Ｉ：７−クロロ−１−［（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロチオピラン−４−イル）メチル］−３−（［１，３，４］−オキサチアゾール−２−オン−５−イル）−１Ｈ−インドール
テトラヒドロフラン（１５０ｍＬ）中の７−クロロ−１−［（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロチオピラン−４−イル）メチル］−１Ｈ−インドール−３−カルボキサミド（１０．０ｇ、２９．３ｍｍｏｌ）及びクロロカルボニルスルフェニルクロリド（５．０５ｍＬ、６０．９ｍｍｏｌ）の混合物を、窒素下、３時間撹拌しながら穏やかに還流した。反応混合物を真空濃縮し、冷却し、固体をろ過した。固体をアセトン中に採取し、混合物を真空濃縮し、冷却し、得られた淡黄褐色の固体をろ過して乾燥し、表題化合物（８．７ｇ、２１．８ｍｍｏｌ）を得た。
【００３７】
段階Ｊ：７−クロロ−１−［（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロチオピラン−４−イル）メチル］−３−［（５−エチルカルボキシル）−（［１，２，４］チアジアゾール−３−イル）］−１Ｈ−インドール；７−クロロ−３−シアノ−１−［（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロチオピラン−４−イル）メチル］−１Ｈ−インドールとの約１：１の混合物
混合したキシレン（２００ｍＬ）中の７−クロロ−１−［（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロチオピラン−４−イル）メチル］−３−（［１，３，４］−オキサチアゾール−２−オン−５−イル）−１Ｈ−インドール（８．３ｇ、２０．８ｍｍｏｌ）及びエチルシアノギ酸塩（２０ｍＬ、２０２ｍｍｏｌ）の混合物を、３時間激しく還流しながら加熱した。得られた溶液を真空濃縮し、冷却し、さらなる沈殿が生じなくなるまでヘプタンで希釈した。得られた固体をろ過し、ヘプタンで洗浄し、乾燥し、表題混合物を淡黄褐色の固体として得た（８．２ｇ）。
【００３８】
段階Ｋ：７−クロロ−１−［（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロチオピラン−４−イル）メチル］−３−［（５−ヒドロキシメチル）−（［１，２，４］チアジアゾール−３−イル）］−１Ｈ−インドール
ジクロロメタン／メタノール（１：１；２４０ｍＬ）中の７−クロロ−１−［（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロチオピラン−４−イル）メチル］−３−［（５−エチルカルボキシル）−（［１，２，４］チアジアゾール−３−イル）］−１Ｈ−インドール及び７−クロロ−３−シアノ−１−［（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロチオピラン−４−イル）メチル］−１Ｈ−インドール（８．０ｇ）の上述の混合物の溶液へ、水素化ホウ素ナトリウム（１．３４ｇ、３５．４ｍｍｏｌ）を室温で少量ずつ５分かけて添加した。反応物を１５分間撹拌した。次に、アセトン（２０ｍＬ）を添加し、混合物をさらに５分間撹拌した。該混合物を低容積まで真空濃縮し、さらなる沈殿が生じなくなるまで水で希釈した。沈殿をろ過し、水で洗浄し、空気乾燥した。固体をジクロロメタン（２００ｍＬ）中に溶解し、水（１００ｍＬ）、塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。溶液を真空濃縮した。表題化合物を静置で結晶化し、ろ過した（４．５ｇ、１０．９ｍｍｏｌ）。ろ液のさらなる濃縮は、先行段階７−クロロ−３−シアノ−１−［（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロチオピラン−４−イル）メチル］−１Ｈ−インドールを通じて実施したニトリルの結晶化をもたらした（１．７ｇ）。
【００３９】
段階Ｌ：７−クロロ−１−［（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロチオピラン−４−イル）メチル］−３−｛５−［（メタン−スルホニルオキシ）メチル］−（［１，２，４］−チアジアゾール−３−イル）］−１Ｈ−インドール
ジクロロメタン（２００ｍＬ）中の７−クロロ−１−［（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロチオピラン−４−イル）メチル］−３−［（５−ヒドロキシメチル）−（［１，２，４］チアジアゾール−３−イル）］−１Ｈ−インドール（４．５ｇ、１０．９ｍｍｏｌ）の懸濁液へ、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（３．７ｍＬ、２１．４ｍｍｏｌ）を添加した後、塩化メタンスルホニル（１．０１ｍＬ、１３．１ｍｍｏｌ）を２から３分かけて滴下して添加した。反応物を１５分間撹拌し、次に氷冷水で反応を停止し、さらに１０分間撹拌した。層を分離し、有機相を水（１００ｍＬ）、塩水（１００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、ろ過した。溶媒を真空除去し、残渣をアセトンから再結晶化し、表題化合物をピンク色の固体（４．２ｇ、８．６ｍｍｏｌ）として得た。
【００４０】
段階Ｍ：（Ｓ）−７−クロロ−３−［（５−｛［３−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）カルボキサミド］ピペリジン−１−イル｝メチル）−（［１，２，４］−チアジアゾール−３−イル）］−１−（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロチオピラン−４−イル）メチル−１Ｈ−インドール塩酸塩
アセトン（１０ｍＬ）中の７−クロロ−１−［（１，１−ジオキソ−ヘキサヒドロチオピラン−４−イル）メチル］−３−｛５−［（メタン−スルホニルオキシ）メチル］−（［１，２，４］−チアジアゾール−３−イル）｝−１Ｈ−インドール（２４５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）、［市販の（Ｓ）−Ｂｏｃ−ニペコ酸及びエタノールアミンの標準的なアミド結合から調製される］（Ｓ）−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ニペコタミド（１０３ｍｇ、０．６ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（１０３ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）の混合物を、５時間還流加熱した。反応が不完全であるため、さらなる（Ｓ）−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ニペコタミド（４０ｍｇ）を添加し、さらに２時間還流し続けた。無機物をろ過した後、溶媒を真空除去し、残渣をジクロロメタンと水の間に分配した。次に、５ｇのＳｔｒａｔａ（商標）ＳＣＸギガチューブを通じて、粗生成物をろ過した。チューブをメタノールで洗浄し、次にメタノール中の２Ｍアンモニアにより溶出した。メタノール性アンモニア溶液を真空濃縮し、得られた残渣を、ジクロロメタン中の４から６％（ｖ／ｖ）エタノールで溶出するカラムクロマトグラフィーにより、精製し、表題化合物の遊離塩基を得た。ジクロロメタン（５ｍＬ）中の遊離塩基の溶液への、塩化水素（ジエチルエーテル中の１Ｍ溶液）の添加後の、エーテルによるジクロロメタン＋微量メタノールからの２回の沈殿によって、塩酸塩２２５ｍｇ（０．３７ｍｍｏｌ）を非結晶性固体として得た。ＥｓＩＭＳ：ｍ／ｚ  ５６６．５［Ｍ＋Ｈ］＋。［α］Ｄ−３．３７ｏ、ＭｅＯＨ中の１．７８ｍｇ／ｍＬ。
【実施例】
【００４１】
実験１
ＣＨＯ細胞で発現したヒトＣＢ１受容体における有効性及び作用強度のインビトロでの測定
ヒトＣＢ１受容体及びルシフェラーゼリポーター遺伝子を発現するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を、フェノールレッドを有さない、ペニシリン／ストレプトマイシン（５０Ｕ／５０μｇ／ｍＬ）及びフンギゾン（１μｇ／ｍＬ）を含有するＤＭＥＭ／Ｆ１２  Ｎｕｔ  Ｍｉｘ中に懸濁した。１ウェル（１００μＬ最終容積）あたり３×１０４個の細胞の密度で、白色壁、白色底の９６穴プレート中へ細胞を播種し、一晩温置した（３７℃で約１８時間、空気中の５％ＣＯ２）後、アッセイした。試験化合物（ＤＭＳＯ中の１０ｍＭ溶液）を、３％ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有する（フェノールレッドを有さない）ＤＭＥＭ／Ｆ１２  Ｎｕｔ  Ｍｉｘ中に希釈し、０．１ｍＭから１ｎＭの濃度範囲が得られた。各希釈１０μＬを細胞プレート中の関連ウェルへ添加し、１０μＭから０．１ｎＭの最終濃度範囲が得られた。プレートを３７℃で５時間温置した後、１００μLのＬｕｃＬｉｔｅ試薬を各ウェルへ添加した（製造者の説明書のとおり再溶解した）。プレートをトップシールで密閉し、Ｐａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔ（単一光子計数、０．０１分計数時間、計数遅延なし）で計数した。曲線適合及び最小平方和法を使用して、データを分析し、ＥＣ５０値を得た。ＣＰ５５９４０により得られた最大反応（１００％）に相対的な百分率として、最大反応（有効性）を表した。
【００４２】
化合物１ａのＥＣ５０値は、６７％の有効性で９４ｎＭであった。
【００４３】
化合物２のＥＣ５０値は、４２％の有効性で２３ｎＭであった。
【００４４】
実験２
ＣＨＯ細胞で発現したヒトＣＢ２受容体における有効性及び作用強度のインビトロでの測定
ヒトＣＢ２受容体を発現するチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞を、１ｍＭの３−イソブチル−１−メチルキサンチン（ＩＢＭＸ）を含有するＨＡＭＳ  Ｆ−１２中に懸濁し、ウェル（２０μＬ最終容積）あたり２×１０４個の細胞の密度で白色壁、白色底の９６穴プレート中へ播種し、直後にアッセイした。試験化合物（ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中の１０ｍＭ溶液）をまずＤＭＳＯ中に１００倍希釈し０．１ｍＭのストック濃度を得て、次にリン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）中でさらに希釈し、１μＭから０．０１ｎＭの最終濃度範囲が得られた。化合物をＣＢ２細胞の存在下で３７℃で３０分間温置した後、１μＭフォルスコリン（最終濃度）で３０分間温置した。製造者の説明書に従い、ＤｉｓｃｏｖｅＲｘ  ｃＡＭＰ  ＸＳ  ＥＦＣアッセイキットを使用して、ｃＡＭＰ測定を実施した。プレートをＰａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔ（単一光子計数、０．０１分計数時間、計数遅延なし）で計数した。曲線適合及び最小平方和法を使用して、データを分析し、ＥＣ５０値を得た。ＣＰ５５９４０により得られた最大反応（１００％）に相対的な百分率として、最大反応（有効性）を表した。
【００４５】
化合物１ａのＥＣ５０値は、１０７％の有効性で３．５ｎＭであった。
【００４６】
実験３
静脈内投与後のマウスにおける薬物動態及び脳浸透
マウスにおける脳対血漿の濃度比は、血液脳関門を横切る化合物の能力を示す。カンナビノイド受容体アゴニストの静脈内投与後の総脳中濃度及び血漿濃度を、下記のとおり測定した。
【００４７】
材料及び方法
試験化合物１ａをＭｉｌｌｉ−Ｑ水中に溶解し、０．６μｍｏｌ／ｍＬ投与溶液を得た。尾静脈を介して静脈内ボーラス投与（５ｍＬ／ｋｇ；３μｍｏｌ／ｋｇ）を投与した。
【００４８】
各群４匹の動物の８群中の雄ＩＣＲマウス（Ｈａｒｌａｎ、ＵＫ）に上述のとおり投与し、１、５、１５、３０、６０、１２０、２４０及び３６０分後に終了した。
【００４９】
試験化合物２を２．６％グリセロール水溶液中に溶解し、０．６μｍｏｌ／ｍＬの投与溶液を得た。尾静脈を介して静脈内ボーラス投与（５ｍＬ／ｋｇ；３μｍｏｌ／ｋｇ）を投与した。
【００５０】
各群３匹の動物の３群中の雄ＩＣＲマウス（Ｈａｒｌａｎ、ＵＫ）に上述のとおり投与し、５、１５及び６０分後に終了した。
【００５１】
終了後、心臓穿刺により血液をＥＤＴＡ含有チューブ中に採取した。血漿を遠心分離（３２００×ｒｃｆ、４℃、１０分）により回収し、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによる試料分析まで−２０℃で保存した。脳をＰＢＳ中で３回すすぎ、各時点からプールした脳を、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによる試料分析まで−２０℃で保存した。
【００５２】
血漿標準曲線（１から１０００ｎｇ／ｍＬ）及び研究試料を、Ｔｅｃａｎ  Ｇｅｎｅｓｉｓロボットを使用して調製した。手短に、血漿５０μＬ（試料及び標準物質）を、適切な内部標準物質の公知の濃度を含有する１５０μＬアセトニトリルへ添加した。次に、試料を遠心分離し（３２００×ｒｃｆ、４℃）、上清をＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより分析した。
【００５３】
ＩＣＲマウス脳標準曲線（化合物１ａに関し１０から１００００ｎｇ／ｇ及び化合物２に関し１から１０００ｎｇ／ｇ）及び試料を、手作業で調製した。対照及びプールしたＩＣＲ脳試料を、氷冷ＰＢＳ３容積（ｗ／ｖ）中でホモジナイズした。脳ホモジネート（試料及び標準物質）２００μＬへ、適切な内部標準物質の公知の濃度を含有する６００μＬアセトニトリルを添加した。次に、試料を遠心分離し（３２００×ｒｃｆ、４℃、１０分）、上清をＬＣ／ＭＳ／ＭＳにより分析した。
【００５４】
Ｌｕｎａ  Ｃ１８（３０×２ｍｍ）ｈｐｌｃカラムを使用するＰＥ  Ｓｃｉｅｘ３０００質量分析計を使用して、血漿及び脳試料を分析した。薬物動態情報は、ＷｉｎＮｏｎＬｉｎ（商標）ソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ、ＵＳＡ）を使用して試験化合物の血漿濃度から得た。全てのデータ分析は、定量可能な範囲内の濃度データに基づいている。
【００５５】
結果
３μｍｏｌ／ｋｇの静脈内投与後、化合物１ａの測定された最大濃度は、血漿ホモジネート及び脳ホモジネートにおいてそれぞれ２５１５ｎｇ／ｍＬ及び４３ｎｇ／ｇであった。化合物１ａの脳対血漿比は、測定されたＣｍａｘ濃度に基づいて０．０２であった。
【００５６】
３μｍｏｌ／ｋｇの静脈内投与後、化合物２の測定された最大濃度は、血漿ホモジネート及び脳ホモジネートにおいてそれぞれ５２８ｎｇ／ｍＬ及び１８ｎｇ／ｇであった。化合物２の脳対血漿比は、測定されたＣｍａｘ濃度に基づいて０．０３であった。
【００５７】
実験４
静脈内投与後のマウスにおけるテイルフリック潜時：化合物１ａ
マウステイルフリック（ｔａｉｌ  ｆｌｉｃｋ）試験は、抗侵害受容の閾値モデルである。本アッセイにおいて、マウスをテイルフリック装置へ配置し、その尾部を放射熱が集中したビームへ暴露した。マウスは、その尾部を熱源から離して振ることにより、有害な熱刺激に反応する。この有害刺激に反応する潜時の増大は、抗侵害受容反応として解釈できる。
【００５８】
本研究の目的は、オピオイド受容体アゴニストと末梢に制限されているＣＢ１受容体アゴニストとの同時投与から得られる正味の抗侵害受容が、オピオイド受容体アゴニスト単独で得られ得るものよりも大きいかどうかを決定することであった。本研究において、テイルフリック試験において単独で投与されたときに効果のなかった化合物１ａの用量を、約５０％効果をもたらすオピオイド受容体アゴニストの用量と組み合わせ、オピオイドの効果が増強できるかどうかを決定した。
【００５９】
材料及び方法
体重２２から３２ｇの雄ＩＣＲマウスを計量し、処理群へ無作為に割り当てた。マウスをテイルフリック装置（Ｕｇｏ  Ｂａｓｉｌｅ、Ｉｔａｌｙ）に、常に動かずにいるようあらかじめ訓練する一方、テイルフリック潜時を測定した。尾部を、先から約２．５ｃｍの点で、放射熱が集中したビームへ暴露した。テイルフリック潜時は、熱刺激の適用と尾部の引っ込めの間の間隔として定義した。組織損傷を防止するため、１２秒の中断を採用した。
【００６０】
実験４ａ：ＣＢ１受容体アゴニストである化合物１ａ単独の効果
８匹のマウスの４群を、静脈内投与される媒体、又は化合物１ａの３用量のうちの１つで処理した（媒体：食塩水９ｇ／Ｌ中の１０％トゥイーン８０；注入容積１０ｍＬ／ｋｇ）。媒体又は試験化合物（３．０、１０．０及び３０．０μｍｏｌ・ｋｇ−１）の静脈内投与前及び化合物投与２０、４０及び６０分後に、テイルフリック潜時を測定した。
【００６１】
実験４ｂ：化合物１ａと組み合わせたμオピオイド受容体アゴニストであるモルヒネの効果
最大可能効果（ＭＰＥ）と比較してテイルフリック潜時の約５０％増大をもたらす用量でのモルヒネ（１．５６μｍｏｌ・ｋｇ−１）を、テイルフリック試験において単独で抗侵害受容でない化合物１ａ（０．１、０．３及び１．０μｍｏｌ・ｋｇ−１）の用量と組み合わせた。検査に必要な最終濃度の２倍で、化合物を調製した。化合物の等容積を混合し、１０ｍＬ・ｋｇ−１の最終容積として得た。
【００６２】
実験４ｃ：化合物１ａと組み合わせたμオピオイド受容体アゴニストであるフェンタニルの効果
ＭＰＥと比較してテイルフリック潜時の約５０％増大をもたらす用量でのフェンタニル（０．０５μｍｏｌ・ｋｇ−１）を、テイルフリック試験において単独で抗侵害受容ではない化合物１ａ（０．１、０．３及び１．０μｍｏｌ・ｋｇ−１）の用量と組み合わせた。検査に必要な最終濃度の２倍で、化合物を調製した。化合物の等容積を混合し、１０ｍＬ・ｋｇ−１の最終容積として得た。
【００６３】
実験４ｄ：化合物１ａと組み合わせたμオピオイド受容体アゴニストであるコデインの効果
ＭＰＥと比較してテイルフリック潜時の約５０％増大をもたらす用量でのコデイン（２５．５μｍｏｌ・ｋｇ−１）を、テイルフリック試験において単独で抗侵害受容でない化合物１ａ（０．１、０．３及び１．０μｍｏｌ・ｋｇ−１）の用量と組み合わせた。検査に必要な最終濃度の２倍で、化合物を調製した。化合物の等容積を混合し、１０ｍＬ・ｋｇ−１の最終容積として得た。
【００６４】
マウスのさらなる群を化合物１ａ（１．０μｍｏｌ・ｋｇ−１）で処理し、この用量は単独で与えられるとき何ら効果を有さないことを確認した。
【００６５】
検査した化合物の用量、群の数及びＴｍａｘにおいて算出した平均テイルフリック潜時＋平均値の標準誤差を、表１に示す。
【００６６】
データ分析
データを平均±平均値の標準誤差としてプロットした。２つの上限用量群における各マウスに関する最大効果の時間を測定し、これらの値を平均して、最大効果の平均時間を算出した。分析目的のため、この平均値に最も近い点としてＴｍａｘを定義した。統計比較のために、Ｔｍａｘデータを使用した。
【００６７】
用量反応実験のため、ノンパラメトリックな統計検定であるＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓの一元配置分散分析法を使用して、Ｔｍａｘデータを群間比較した。統計的有意（Ｐ＜０．０５）が観察される場合、ノンパラメトリックなｐｏｓｔ−ｈｏｃ検定であるＤｕｎｎの検定を使用して、媒体群及び、処理群の各々を比較した（Ｕｎｉｓｔａｔ  ５．０ソフトウェア）。
【００６８】
相互作用実験に関し、化合物で処理した各群に関するＴｍａｘデータを、Ｋｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓの一元配置分散分析法を使用して比較した。統計的有意（Ｐ＜０．０５）が観察された場合、オピオイドプラス媒体群、及び組み合わせ処理群の各々を、ノンパラメトリックなｐｏｓｔ−ｈｏｃ検定であるＤｕｎｎの検定を使用して比較した（Ｕｎｉｓｔａｔ  ５．０ソフトウェア）。
【００６９】
１．０μｍｏｌ・ｋｇ−１における化合物１ａの単一用量がテイルフリック潜時に効果を及ぼすかどうかを決定するため、因子が時間であるＫｒｕｓｋａｌ−Ｗａｌｌｉｓの一元配置分散分析法を実施した。
【００７０】
Ｔｍａｘにおけるテイルフリック潜時を、下記％最大可能効果（％ＭＰＥ）として表した。
【００７１】
【数１】
2009500439.tif 000004
であった。
【００７２】
モルヒネ、フェンタニル及びコデインを全て、Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ  ＵＫから購入し、食塩水中に溶解した。化合物１ａを食塩水中の１０％トゥイーン８０中に溶解した。
【００７３】
結果（表１）
３μｍｏｌ／ｋｇ−１の用量において静脈内投与した化合物１ａは、テイルフリック潜時に何ら効果がなかった。化合物１ａのより多い用量によって、用量依存的様式でテイルフリック潜時が増大し、最大効果は注入４０分後に生じた。化合物１ａの３０μｍｏｌ／ｋｇ−１の投与後、テイルフリック潜時は７．１５±０．８８秒であり、これを媒体処理後の３．３１秒±０．２２秒のテイルフリック潜時と比較した。化合物１ａのこの効果は、媒体処理とは有意に異別であった（Ｄｕｎｎの検定、Ｐ＜０．０５）。用量反応実験において、３μｍｏｌ・ｋｇ−１の用量は、テイルフリック潜時に何ら効果がなかった。さらに、検査時に、化合物１ａの１．０μｍｏｌ／ｋｇ−１の用量は、テイルフリック潜時を増大させなかった。０．１、０．３及び１．０μｍｏｌ・ｋｇ−１の用量を、組み合わせ実験のために選択した。
【００７４】
モルヒネ（１．５６μｍｏｌ・ｋｇ−１）、フェンタニル（０．０５μｍｏｌ・ｋｇ−１）又はコデイン（２５．５μｍｏｌ・ｋｇ−１）と一緒に静脈内同時投与した０．１、０．３及び１．０μｍｏｌ・ｋｇ−１の化合物１ａは、用量依存的様式でテイルフリック潜時を増大させ、モルヒネに関して注入４０分後、フェンタニル及びコデインに関して注入２０分後にそれぞれＴｍａｘが生じた。
【００７５】
化合物１ａ（１．０μｍｏｌ・ｋｇ−１）の上限用量及びモルヒネ、フェンタニル又はコデインの組み合わせの効果は、オピオイド単独の投与後に記録されるテイルフリック潜時とは有意に異別であった。
【００７６】
結論
３．０μｍｏｌ・ｋｇ−１を下回る用量で投与された化合物１ａは、テイルフリック潜時に何ら効果がなかった（図１参照）。オピオイド受容体アゴニストの各々は、テイルフリック潜時を増大した。オピオイド受容体アゴニストであるモルヒネ（図２）、フェンタニル（図３）及びコデイン（図４）の各々と組み合わせて、０．１、０．３及び１．０μｍｏｌ・ｋｇ−１の用量で化合物１ａが投与されたとき、この効果の用量依存的増強を観察した。
【００７７】
【表１】
2009500439.tif 000005
【００７８】
実験５
選択的ＣＢ１受容体アンタゴニストによるマウステイルフリック潜時増強の反転
本研究の目的は、末梢性に制限されるＣＢ１受容体アゴニストである化合物１ａとモルヒネとの同時投与がもたらす抗侵害受容の増強が、選択的ＣＢ１受容体アンタゴニストであるＳＲ１４１７１６Ａ（Ｂａｒｔｈ，Ｆ  ｅｔ  ａｌ．，欧州特許出願第００６５６３５４号、１９９５；Ｒｉｎａｌｄｉ−Ｃａｒｍｏｎａ  Ｍ．ｅｔ  ａｌ．，  ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．  ３５０：２４０−２４４，  １９９４）による前処理によって反転され得るかどうかを決定することであった。
【００７９】
検査の組み合わせの静脈内投与２０分前に、皮下投与される媒体（食塩水中の５％ムルゴフェン）又はＳＲ１４１７１６Ａ（３．０μｍｏｌ・ｋｇ−１；注入容積１０ｍＬ・ｋｇ−１）を用いて１群８匹のマウス５群を前処理した。静脈内投与のために、化合物の等容積を混合し、１０ｍＬ・ｋｇ−１の最終容積とした：食塩水中の１０％トゥイーン８０（５ｍＬ・ｋｇ−１）又は化合物１ａ（食塩水中の１０％トゥイーン８０中の１．０μｍｏｌ・ｋｇ−１；５ｍＬ・ｋｇ−１）のいずれかと組み合わせた食塩水（５ｍＬ・ｋｇ−１）又はモルヒネ（食塩水中の１．５１μｍｏｌ・ｋｇ−１；５ｍＬ・ｋｇ−１）。化合物投与前及び化合物の静脈内投与２０、４０、６０及び９０分後に、テイルフリック潜時を測定した。
【００８０】
検査した化合物の用量、群の数及びＴｍａｘで算出した平均テイルフリック潜時＋平均値の標準誤差を、表２に示す。
【００８１】
実験４に関して記載のとおり、データ分析を実施した。
【００８２】
結果（表２）
静脈内投与後のモルヒネは、媒体で（皮下的に）前処理したマウスにおいて、テイルフリック潜時を３．５３±０．１３秒から６．７８±０．２７秒まで増大させた。１．０μｍｏｌ・ｋｇ−１の化合物１ａ及び１．５１μｍｏｌ・ｋｇ−１のモルヒネの組み合わせは、テイルフリック潜時を１１．３３±０．３６秒まで増大させた。この効果は、媒体と組み合わせたモルヒネの投与後に観察されるものとは有意に異なっていた（Ｄｕｎｎの検定Ｐ＜０．０１）。この増強は、選択的ＣＢ１受容体アンタゴニストであるＳＲ１４１７１６Ａによる（皮下）前処理により遮断された。ＳＲ１４１７１６Ａ後に化合物１ａと組み合わせたモルヒネを受容した動物において、テイルフリック潜時は６．７５±０．７７秒であった。ＳＲ１４１７１６Ａ単独では、テイルフリック潜時に何ら効果はなかった。
【００８３】
結論
化合物１ａによるマウステイルフリック試験におけるモルヒネの効果の増強は、選択的ＣＢ１受容体アンタゴニストであるＳＲ１４１７１６Ａによる前処理により完全に反転した（図５）。この結果は、観察された増強が、薬物動態学的相互作用よりもむしろ薬力学的相互作用の結果であり、効果がＣＢ１受容体によって仲介されることを示す。
【００８４】
【表２】
2009500439.tif 000006
【００８５】
実験６
静脈内投与後のマウスにおけるテイルフリック潜時：化合物２
本研究の目的は、オピオイド受容体アゴニストと末梢性に制限されるＣＢ１受容体アゴニスト化合物２との同時投与がもたらす正味の抗侵害受容が、オピオイド受容体アゴニスト単独で得られ得るものよりも大きいかどうかを決定することであった。本研究において、テイルフリック試験において単独で投与されたときに効果のなかった化合物２の用量を、約５０％の効果をもたらすオピオイド受容体アゴニストの用量と組み合わせ、オピオイドの効果が増強され得るかどうかを決定した。
【００８６】
材料及び方法
実験４のとおり。
【００８７】
実験６ａ：ＣＢ１受容体アゴニストである化合物２単独の効果
８匹のマウスの４群を、静脈内投与される媒体、又は化合物２の３用量のうちの１つを用いて処理した（媒体：食塩水９ｇ／Ｌ中の１０％トゥイーン８０；注入容積１０ｍＬ／ｋｇ）。媒体又は試験化合物（１０．０、３０．０及び６０．０μｍｏｌ・ｋｇ−１）の静脈内投与前及び化合物投与２０、４０及び６０分後に、テイルフリック潜時を測定した。
【００８８】
実験６ｂ：化合物２と組み合わせたμオピオイド受容体アゴニストであるモルヒネの効果
最大可能効果（ＭＰＥ）と比較してテイルフリック潜時の約５０％増大をもたらす用量でのモルヒネ（１．５６μｍｏｌ・ｋｇ−１）を、テイルフリック試験において単独で抗侵害受容ではない化合物２（３．０、１０．０及び３０．０μｍｏｌ・ｋｇ−１）の用量と組み合わせた。検査に必要な最終濃度の２倍で、化合物を調製した。化合物の等容量を混合し、１０ｍＬ・ｋｇ−１の最終容積として得た。マウスのさらなる群を化合物２（３０μｍｏｌ・ｋｇ−１）で処理し、単独で与えられたとき、この用量が何ら効果を有さないことを確認した。
【００８９】
検査した化合物の用量、群の数及びＴｍａｘにおいて算出した平均テイルフリック潜時＋平均値の標準誤差を、表３に示す。
【００９０】
データ分析
実験４のとおり。
【００９１】
結果（表３）
３０μｍｏｌ／ｋｇ−１の用量で静脈内投与した化合物２は、テイルフリック潜時に何ら効果がなかった（図６）。６０μｍｏｌ・ｋｇ−１の用量は、テイルフリック潜時を有意に増大し（Ｄｕｎｎの検定、Ｐ＜０．０５）、最大効果は注入２０分後に生じた。モルヒネ（１．５６μｍｏｌ・ｋｇ−１）と一緒に静脈内同時投与した３．０、１０．０及び３０．０μｍｏｌ・ｋｇ−１の化合物２は、用量依存的様式でテイルフリック潜時を増大し、Ｔｍａｘは注入４０分後に生じた（図７）。
【００９２】
化合物２（３０．０μｍｏｌ・ｋｇ−１）の上限用量及びモルヒネの組み合わせの効果は、オピオイド単独の投与後に記録されたテイルフリック潜時とは有意に異なっていた。さらに、化合物２の３０．０μｍｏｌ・ｋｇ−１用量が、本実験に包含され、テイルフリック潜時を増大させなかった。
【００９３】
結論
３０．０μｍｏｌ・ｋｇ−１の用量で投与した化合物２は、テイルフリック潜時に何ら効果がなかった。テイルフリック潜時に及ぼすモルヒネの効果の用量依存的増強は、化合物２が、モルヒネと組み合わせて３．０、１０．０及び３０．０μｍｏｌ・ｋｇ−１の用量で投与されたときに観察された。
【００９４】
【表３】
2009500439.tif 000007
【図面の簡単な説明】
【００９５】
【図１】図１は、化合物１ａをマウスに静脈内投与したときのテイルフリック潜時に及ぼす影響を調べた結果を示す。
【図２】図２は、化合物１ａおよびモルヒネをマウスに一緒に静脈内投与したときのテイルフリック潜時に及ぼす影響を調べた結果を示す。
【図３】図３は、化合物１ａおよびフェンタニルをマウスに一緒に静脈内投与したときのテイルフリック潜時に及ぼす影響を調べた結果を示す。
【図４】図４は、化合物１ａおよびコデインをマウスに一緒に静脈内投与したときのテイルフリック潜時に及ぼす影響を調べた結果を示す。
【図５】図５は、化合物１ａおよびモルヒネを、選択的ＣＢ１アゴニストＳＲ１４１７１６Ａにより前処理されたマウスに一緒に静脈内投与したときのテイルフリック潜時に及ぼす影響を調べた結果を示す。
【図６】図６は、化合物２をマウスに静脈内投与したときのテイルフリック潜時に及ぼす影響を調べた結果を示す。
【図７】図７は、化合物２およびモルヒネをマウスに一緒に静脈内投与したときのテイルフリック潜時に及ぼす影響を調べた結果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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