(57)【要約】  本発明は、新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン ハイブリッドを提供する。本発明はまた、新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン ハイブリッドの調製のための方法に関する。これらの新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン ハイブリッドは、抗腫瘍薬剤として有用である。特に、それは、以下の化合物についての脂肪族鎖長の変化を含む、7-メトキシ-8-{n-[4-(2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]アルキル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オンおよび7-メトキシ-8-{n-[4-(7-アルコキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]アルキル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オンの調製のための方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式５の新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン：
【化１】
2009515870.tif 000013
式中、R1は、Ｈまたはメトキシ、エトキシおよびプロポキシ基から選択されたアルコキシ基であり、R2はHまたはCH3であり、nは3〜5の異なる整数である。
【請求項２】
次の化合物の群によって表わされる請求項１に記載の化合物：
7-メトキシ-8-{3-[4-(2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5a)、7-メトキシ-8-{4-[4-(2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ブチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5b)、7-メトキシ-8-{5-[4-(2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5c)、7-メトキシ-8-{3-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5d)、7-メトキシ-8-{4-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ブチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5e)、7-メトキシ-8-{5-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5f)、7-メトキシ-8-{3-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5g)、7-メトキシ-8-{4-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ブチル}-オキシ｝-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5h)、7-メトキシ-8-{5-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5i)、7-メトキシ-8-{3-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5j)、7-メトキシ-8-{4-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ブチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5k)、7-メトキシ-8-{5-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5l)。
【請求項３】
白血病、非小細胞肺、結腸、CNS、黒色腫、卵巣、腎臓、前立腺、乳癌からなる群から選択されたタイプの癌に由来するヒト腫瘍細胞系統に対して活性を示す、請求項１に記載の新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン。
【請求項４】
前記化合物の-5〜-8 Log10(mol/L)、-4〜-7 Log10(mol/L)および-3〜-5 Log10(mol/L)の投与が、9つの癌（例えば、白血病、非小細胞肺、結腸、CNS、黒色腫、卵巣、腎臓、前立腺、乳癌）に由来した約60のヒト腫瘍細胞に対して少なくとも48時間にわたって行われる場合、GI50、TGIおよびLC50のそれぞれについてインビトロでの抗腫瘍活性を示す、請求項１に記載の新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン。
【請求項５】
任意的には薬学的に許容可能な担体とともに、新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン、その誘導体、類似体、塩または混合物を含む薬学的組成物。
【請求項６】
前記使用された新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピンハイブリッドが、一般式５の化合物を含んでいる、請求項４に記載の薬学的組成物:
【化２】
2009515870.tif 000014
式中、R1は、Ｈまたはメトキシ、エトキシおよびプロポキシ基から選択されたアルコキシ基であり、R2はHまたはCH3であり、nは3〜5の異なる整数である。
【請求項７】
式５の新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピンの調製のための方法：
【化３】
2009515870.tif 000015
式中、R1は、Ｈまたはメトキシ、エトキシおよびプロポキシ基から選択されたアルコキシ基であり、R2はHまたはCH3であり、nは3〜5の異なる整数である：
前記方法は、以下のａ），ｂ）およびｃ）の工程を含む：
ａ）  塩基の存在中、乾燥有機溶媒中において、還流下で約48時間にわたって、式１の4-ピペラジノ-2H-2-クロメノンまたは7-アルコキシ-8-メチル-4-ピペラジノ-2H-2-クロメノンを、式２の(2S)-N-[4-(n-ブロモアルキル)-オキシ-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル]ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールと反応させ、続いて水中において抽出を行い、既知の方法によって式３の(2S)-N-{4-[4-[n-[4-(2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]アルキル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールまたは(2S)-N-{4-[4-[n-[4-(7-アルキルオキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]アルキル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒド ジエチルチオアセタールの化合物を単離する工程と、
【化４】
2009515870.tif 000016
式中、R1は、Ｈまたはメトキシ、エトキシおよびプロポキシ基から選択されたアルコキシ基であり、R2はHまたはCH3であり、nは3〜5の異なる整数である；
【化５】
2009515870.tif 000017
【化６】
2009515870.tif 000018
式中、R1は、Ｈまたはメトキシ、エトキシおよびプロポキシ基から選択されたアルコキシ基であり、R2はHまたはCH3であり、nは3〜5の異なる整数である；
ｂ）  式３の前記ニトロ化合物を、有機溶媒の存在中、還流下で、１〜２時間の期間にわたって、SnCl2.2H2Oまたは酸触媒で還元させ、続いて、約８のpHで得られた反応混合物を中和し、かつ既知の方法によって式４の(2S)-N-{4-[4-[n-[4-(2-オキソ-2H-2-クロメニル) ピペラジノ]アルキル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒド ジエチルチオアセタール または (2S)-N-{4-[4-[n-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]アルキル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノ ベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒド ジエチルチオアセタール アミノ化合物を単離する工程と、
【化７】
2009515870.tif 000019
式中、R1は、Ｈまたはメトキシ、エトキシおよびプロポキシ基から選択されたアルコキシ基であり、R2はHまたはCH3であり、nは3〜5の異なる整数である；
ｃ）  水性有機溶媒の存在中において、20〜25℃の範囲の温度で、約12時間の期間にわたって、式4の前記アミノ化合物を、脱保護薬剤と反応させ、得られた反応混合物から有機層を分離し、続いて真空下で蒸発させて残渣を取得し、前記残渣をエチルアセテートで稀釈し、続いて飽和重炭酸ナトリウムとゆるやかに混合し、濾過、洗浄および得られた濾液を蒸発させ、続いて既知の方法による精製によって、式５の所望のピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン ハイブリッドを得る工程。
【請求項８】
工程（ａ）において使用した塩基が、K2CO3およびNa2CO3から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
工程（ａ）において使用した有機溶媒が、アセトニトリル、アセトンおよびN,N-ジメチル(demethyl)ホルムアミドから選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
工程（ｂ）において使用した酸触媒が、Sn/HCl、Zn/CH3COOHおよびPd/C-H2からなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
工程（ｂ）において使用した有機溶媒が、メタノール、エタノールおよび酢酸エチルからなる群から選択されるアルコールである、請求項７に記載の方法。
【請求項１２】
工程（ｃ）において使用した脱保護薬剤が、HgCl2/CaCO3、HgO/HgCl2およびBi(OTf)3.xH2Oからなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
工程（ｃ）において使用した有機溶媒が、アセトニトリル、ジクロロメタンおよびクロロホルムからなる群から選択される、請求項７に記載の方法。
【請求項１４】
前記得られた化合物が、以下の化合物の群によって表わされる、請求項７に記載の方法：
7-メトキシ-8-{3-[4-(2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5a)、7-メトキシ-8-{4-[4-(2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ブチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5b)、7-メトキシ-8-{5-[4-(2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5c)、7-メトキシ-8-{3-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5d)、7-メトキシ-8-{4-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ブチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5e)、7-メトキシ-8-{5-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5f)、7-メトキシ-8-{3-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5g)、7-メトキシ-8-{4-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ブチル}-オキシ｝-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5h)、7-メトキシ-8-{5-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5i)、7-メトキシ-8-{3-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5j)、7-メトキシ-8-{4-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ブチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5k)、および7-メトキシ-8-{5-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5l)。
【発明の詳細な説明】
【本発明の分野】
【０００１】
本発明は、新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン ハイブリッドに関する。本発明はまた、新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン ハイブリッドの調製のためのプロセスに関する。これらの新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン ハイブリッドは、抗腫瘍薬剤として有用である。特に、それは、以下の化合物についての脂肪族鎖長の変化を含む、7-メトキシ-8-{n-[4-(2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]アルキル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オンおよび7-メトキシ-8-{n-[4-(7-アルコキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]アルキル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オンの調製のための方法に関する。これらの新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピンの構造式が以下に与えられる。
【化１】
2009515870.tif 000002
【０００２】
式中、R1は、Ｈまたはメトキシ、エトキシおよびプロポキシ基から選択されたアルコキシ基であり、R2はHまたはCH3であり、nは3〜5の異なる整数である。
【発明の背景】
【０００３】
ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン抗腫瘍性抗生物質は、アントラマイシン種の化合物として一般に知られている。ここ数年、新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン(ＰＢＤ)の開発中において大きな関心が示された。これらの抗生物質は、DNAと共有結合的に反応し、N10-C11位での求電子イミンに対する酸不安定な動物結合を介してDNA二重鎖の小さな溝に位置するN2グアニン付加物を形成する (Kunimoto, S.; Masuda, T.; Kanbayashi, N.; Hamada, M.; Naganawa, H.; Miyamoto, M.; Takeuchi, T.; Unezawa, H. J. Antibiot., 1980, 33, 665.; Kohn, K. W. and Speous, C. L. J. Mol. Biol., 1970, 51, 551.; Hurley, L. H.; Gairpla, C. and Zmijewski, M. Biochem. Biophys. Acta., 1977, 475, 521.; Kaplan, D. J. and Hurley, L. H. Biochemistry, 1981, 20, 7572)。分子は、右利きのねじれを有するので、これらが3つの塩基対にまたがるB型の二重らせん構造をとるDNAの小さな溝の曲りに従うことを可能にする。最近の開発は、それらのC-8位を通した２つのＰＢＤ単位の連結であり、DNAを架橋することができる2官能性のアルキル化剤を与える (Thurston, D. E.; Bose, D. S.; Thomson, A. S.; Howard, P. W.; Leoni, A.; Croker, S. J.; Jenkins, T. C.; Neidle, S. and Hurley, L. H. J. Org. Chem. 1996, 61, 8141)。
【化２】
2009515870.tif 000003
【０００４】
最近、不活性なプロパンジオキシ リンカーを介してそれらのC-8位置を通して拘束された、2つのC2-エキソ-メチレン 置換DC-81サブユニットを含むＰＢＤ二量体が開発されている (Gregson, S. J.; Howard, P. W.; Hartely, J. A.; Brooks, N. A.; Adams, L. J.; Jenkins, T. C.; Kelland, L. R. and Thurston, D. E. J. Med. Chem. 2001, 44, 737)。最近、非架橋-連結混合型のイミン-アミドＰＢＤ二量体が、顕著なDNA結合能および有力な抗腫瘍活性を有するように合成されている (Kamal, A.; Ramesh, G. Laxman, N.; Ramulu, P.; Srinivas, O.; Neelima, K.; Kondapi, A. K.; Srinu, V. B.; Nagarajaram, H. M. J. Med. Chem. 2002, 45, 4679)。
【０００５】
天然に存在するピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピンは、ストレプトマイセス種に由来した抗腫瘍性抗生物質の一群に属する。最近、これらがDNAの特定の配列を認識し結合することができることから、ＰＢＤについての大きな勢いとなっている。天然に存在するＰＢＤの例は、アントラマイシン、DC-81、トマイマイシン、シビロマイシンおよびネオトラマイシンを含む。
【０００６】
しかしながら、これらの抗生物質の臨床効果は、不十分な水可溶性、心臓毒性、薬物耐性の発達および代謝の不活性化のようないくつかの制限によって妨害される。
【発明の目的】
【０００７】
本発明の主な目的は、新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン ハイブリッドを与えることである。
【０００８】
しかし、他の目的は、新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン ハイブリッドの調製のためのプロセスを提供することにある。
【発明の概要】
【０００９】
従って、本発明は、式5の新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン（pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine）を提供する。
【化３】
2009515870.tif 000004
【００１０】
式中、R1は、Ｈまたはメトキシ、エトキシおよびプロポキシ基から選択されたアルコキシ基であり、R2はHまたはCH3であり、nは3〜5の異なる整数である。
【００１１】
本発明の実施態様において、得られた化合物は、7-メトキシ-8-{3-[4-(2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5a)、7-メトキシ-8-{4-[4-(2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ブチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5b)、7-メトキシ-8-{5-[4-(2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5c)、7-メトキシ-8-{3-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5d)、7-メトキシ-8-{4-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ブチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5e)、7-メトキシ-8-{5-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5f)、7-メトキシ-8-{3-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5g)、7-メトキシ-8-{4-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ブチル}-オキシ｝-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5h)、7-メトキシ-8-{5-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5i)、7-メトキシ-8-{3-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5j)、7-メトキシ-8-{4-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ブチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5k)、および7-メトキシ-8-{5-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5l)からなる群から選択される。
【００１２】
さらに他の実施態様において、ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン化合物は、白血病、非小細胞肺、結腸、CNS、黒色腫、卵巣、腎臓、前立腺、乳癌からなる群から選択されたタイプの癌から誘導されたヒト腫瘍細胞系に対して活性がある。
【００１３】
さらに他の実施態様において、前記化合物の-5〜-8 Log10(mol/L)、-4〜-7 Log10(mol/L)および-3〜-5 Log10(mol/L)の投与が、9つの癌（例えば、白血病、非小細胞肺、結腸、CNS、黒色腫、卵巣、腎臓、前立腺、乳癌）に由来した約60のヒト腫瘍細胞に対して少なくとも48時間にわたって行われる場合、新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン化合物は、GI50、TGIおよびLC50のそれぞれについてインビトロでの抗腫瘍活性を示す。
【００１４】
本発明はさらに、薬学的に許容可能な担体を任意的に含む、新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン、その誘導体、類似体、塩または混合物を含む薬学的組成物を提供する。
【００１５】
さらに他の実施態様において、使用される新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン ハイブリッドは、一般式５の化合物を含んでいる。
【化４】
2009515870.tif 000005
【００１６】
式中、R1は、Ｈまたはメトキシ、エトキシおよびプロポキシ基から選択されたアルコキシ基であり、R2はHまたはCH3であり、nは3〜5の異なる整数である。
【００１７】
本発明はさらに、式５の新規なピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピンの調製のためのプロセスを提供する。
【化５】
2009515870.tif 000006
【００１８】
式中、R1は、Ｈまたはメトキシ、エトキシおよびプロポキシ基から選択されたアルコキシ基であり、R2はHまたはCH3であり、nは3〜5の異なる整数である。
【００１９】
前記プロセスは、以下のａ），ｂ）およびｃ）の工程を含む：
ａ）  塩基の存在中、乾燥有機溶媒中において、還流下で約48時間にわたって、式１の4-ピペラジノ-2H-2-クロメノンまたは7-アルコキシ-8-メチル-4-ピペラジノ-2H-2-クロメノンを、式２の(2S)-N-[4-(n-ブロモアルキル)-オキシ-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル]ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールと反応させ、続いて水中において抽出を行い、既知の方法によって式３の(2S)-N-{4-[4-[n-[4-(2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]アルキル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタールまたは(2S)-N-{4-[4-[n-[4-(7-アルキルオキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]アルキル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒド ジエチルチオアセタールの化合物を単離する工程と、
【化６】
2009515870.tif 000007
【００２０】
式中、R1は、Ｈまたはメトキシ、エトキシおよびプロポキシ基から選択されたアルコキシ基であり、R2はHまたはCH3であり、nは3〜5の異なる整数である。
【化７】
2009515870.tif 000008
【化８】
2009515870.tif 000009
【００２１】
式中、R1は、Ｈまたはメトキシ、エトキシおよびプロポキシ基から選択されたアルコキシ基であり、R2はHまたはCH3であり、nは3〜5の異なる整数である。
【００２２】
ｂ）  式３の前記ニトロ化合物を、有機溶媒の存在中、還流下で、１〜２時間の期間にわたって、SnCl2.2H2Oまたは酸触媒で還元させ、続いて、約８のpHで得られた反応混合物を中和し、かつ既知の方法によって式４の(2S)-N-{4-[4-[n-[4-(2-オキソ-2H-2-クロメニル) ピペラジノ]アルキル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒド ジエチルチオアセタール または (2S)-N-{4-[4-[n-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]アルキル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノ ベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒド ジエチルチオアセタール アミノ化合物を単離する工程と、
【化９】
2009515870.tif 000010
【００２３】
式中、R1は、Ｈまたはメトキシ、エトキシおよびプロポキシ基から選択されたアルコキシ基であり、R2はHまたはCH3であり、nは3〜5の異なる整数である。
【００２４】
ｃ）  水性有機溶媒の存在中において、20〜25℃の範囲の温度で、約12時間の期間にわたって、式4の前記アミノ化合物を、脱保護薬剤と反応させ、得られた反応混合物から有機層を分離し、続いて真空下で蒸発させて残渣を取得し、前記残渣をエチルアセテートで稀釈し、続いて飽和重炭酸ナトリウムとゆるやかに混合し、濾過、洗浄および得られた濾液を蒸発させ、続いて既知の方法による精製によって、式５の所望のピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン ハイブリッドを得る工程。
【００２５】
さらに他の実施態様において、工程（ａ）において使用した化合物 塩基は、K2CO3およびNa2CO3から選択される。
【００２６】
さらに他の実施態様において、工程（ａ）において使用した化合物 有機溶媒は、アセトニトリル、アセトンおよびN,N-ジメチル(demethyl)ホルムアミドから選択される。
【００２７】
さらに他の実施態様において、工程（ｂ）において使用した化合物 酸触媒は、Sn/HCl、Zn/CH3COOHおよびPd/C-H2からなる群から選択される。
【００２８】
さらに他の実施態様において、工程（ｂ）において使用した有機溶媒は、メタノール、エタノールおよび酢酸エチルから選択される。
【００２９】
さらに他の実施態様において、工程（ｃ）において使用した化合物 脱保護薬剤は、HgCl2/CaCO3、HgO/HgCl2およびBi(OTf)3.xH2Oからなる群から選択される。
【００３０】
さらに他の実施態様において、工程（ｃ）において使用した有機溶媒は、アセトニトリル、ジクロロメタンおよびクロロホルムから選択される。
【００３１】
さらに他の実施態様において、前記プロセスから得られた化合物は、以下の化合物の群によって表わされる：
7-メトキシ-8-{3-[4-(2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5a)、7-メトキシ-8-{4-[4-(2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ブチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5b)、7-メトキシ-8-{5-[4-(2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5c)、7-メトキシ-8-{3-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5d)、7-メトキシ-8-{4-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ブチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5e)、7-メトキシ-8-{5-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5f)、7-メトキシ-8-{3-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5g)、7-メトキシ-8-{4-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ブチル}-オキシ｝-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5h)、7-メトキシ-8-{5-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5i)、7-メトキシ-8-{3-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5j)、7-メトキシ-8-{4-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ブチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5k)、および7-メトキシ-8-{5-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン(5l)。
【発明の詳細な説明】
【００３２】
C-8位で連結したピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン ハイブリッドのこれらの新規な類似体は、様々な細胞系において、有望なDNA結合活性および効率的な抗癌活性を示した。合成された分子は、潜在的な配列選択的なDNA結合性質を有する大きな生物学的意義を有する。これは、図１のスキーム１に例証されるような新規な同属種のデザインおよび合成をもたらす。これは以下のものを含む：
１．DC-81のC-8位のエーテル結合が、4-ピペラジノ-2H-2-クロメノン/7-アルコキシ-8-メチル-4-ピペラジノ-2H-2-クロメノン基を仲介する。
【００３３】
２．48時間にわたって反応混合物を還流させる。
【００３４】
３．C-8位で結合したＰＢＤ抗腫瘍抗生物質ハイブリッドイミンの合成。
【００３５】
４．酢酸エチル、ヘキサン、ジクロロメタンおよびメタノールのような異なる溶媒を使用するカラム クロマトグラフィによる精製。
【００３６】
以下の例は、一例として挙げられるものであり、したがって、本発明の範囲を制限するものとして解釈されるべきではない。
【００３７】
例１
式１の(2S)-N-[4-(3-ブロモプロピル)-オキシ-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル]ピロリジン-2-カルボキアルデヒドジエチルチオアセタール (521mg、1.0 mmol)の溶液に、式２の4-ピペラジノ-2H-2-クロメノン (230mg、1.0 mmol)およびK2CO3 (414mg、3.0 mmol)を、乾燥したアセトニトリル(40ml)中において、48時間にわたって還流した。TLC、EtOAc:ヘキサン(1:1)によって示された反応の完了後、反応混合物を水に注ぎ、その後に酢酸エチルで抽出した。これは減圧条件下で濃縮され、粗生成物を与えた。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製され、EtOAc:ヘキサン(3:7)で溶出し、純粋な(2S)-N-{4-[4-[3-[4-(2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]プロピル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール3を得た。
【００３８】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.20-1.40 (m, 8H), 1.70-2.40 (m, 4H), 2.50-2.85 (m, 6H), 3.15-3.30 (m, 6H), 3.40-3.80 (m, 4H), 3.95 (s, 3H), 4.0-4.15 (t, 2H, J = 6.04 Hz), 4.60-4.70 (m, 1H), 4.80-4.85 (m, 1H), 5.70 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 7.15-7.25 (t, 1H, J = 7.55 Hz), 7.28-7.45 (d, 1H, J = 7.55 Hz), 7.40-7.50 (t, 1H, J = 7.55 Hz), 7.52-7.56 (d, 1H, J = 7.55 Hz), 7.65 (s, 1H) 
MS (FAB) 671 [M+H]+
式３の(2S)-N-{4-[4-[3-[4-(2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]プロピル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(670mg、1.0mmol)を、メタノール(10mL)中に溶解し、これにSnCl2.2H2O(1.125g、5 mmol)を加え、1.5時間にわたって還流を行った。反応混合物を、NaHCO3溶液でpH 8に中和し、その後に、酢酸エチル(3×20 ml)で抽出した。混合性の有機相をNa2SO4で乾燥させ、減圧下で蒸発させ、粗製の(2S)-N-{4-[4-[3-[4-(2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]プロピル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール4 を得た。
【００３９】
式４の(2S)-N-{4-[4-[3-[4-(2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]プロピル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(640mg、1mmol)の溶液に、CH3CN/H2O(4:1)中のHgCl2(613mg、2.26 mmol)およびCaCO3(246mg、2.46 mmol)を、TLC(EtOAc)によって示された反応の完了まで室温で12時間にわたって撹拌した。有機層を真空下で蒸発させ、残渣をEtOAcで稀釈する。これに飽和したNaHCO3を室温でゆるやかに加え、混合液をセライト床を通してろ過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を真空下で蒸発させ、粗製の7-メトキシ-8-{3-[4-(2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4] ベンゾジアゼピン-5-オン 5を得た。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製された。最初は酢酸エチルで溶出して微量の第二水銀塩を除去し、その後にCHCl3:メタノール(9:1)で溶出した。
【００４０】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.80-1.90 (m, 2H), 2.20-2.60 (m, 4H), 2.80-2.90 (m, 4H), 3.25-3.40 (m, 4H), 3.45-3.85 (m, 4H), 3.90 (s, 3H), 4.15-4.30 (m, 3H), 5.70 (s, 1H), 6.85 (s, 1H), 7.15-7.20 (t, 1H, J = 6.69 Hz), 7.30-7.38 (d, 1H, J = 8.18 Hz), 7.44-7.50 (d, 1H, J = 8.18 Hz), 7.55-7.59 (t, 1H, J = 7.43 Hz), 7.62 (s, 1H), 7.64-7.68 (d, 1H, J = 3.72 Hz);MS (FAB) 517 [M+H]+
【００４１】
例２
式１の(2S)-N-[4-(4-ブロモブチル)-オキシ-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル]ピロリジン-2-カルボキアルデヒドジエチルチオアセタール (535mg、1.0 mmol)の溶液に、式２の4-ピペラジノ-2H-2-クロメノン (230mg、1.0 mmol)およびK2CO3 (414mg、3.0 mmol)を、乾燥したアセトニトリル(40ml)中において、48時間にわたって還流した。TLC、EtOAc:ヘキサン(1:1)によって示された反応の完了後、反応混合物を水に注ぎ、その後に酢酸エチルで抽出した。これは減圧条件下で濃縮され、粗生成物を与えた。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製され、EtOAc:ヘキサン(3:7)で溶出し、純粋な(2S)-N-{4-[4-[4-[4-(2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ブチル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール3を得た。
【００４２】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.20-1.40 (m, 6H), 1.65-2.35 (m, 8H), 2.60-2.85 (m, 6H), 3.15-3.30 (m, 6H), 3.40-3.80 (m, 4H), 3.95 (s, 3H), 4.0-4.15 (t, 2H, J = 6.04 Hz), 4.60-4.70 (m, 1H), 4.80-4.85 (m, 1H), 5.65 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 7.18-7.20 (t, 1H, J = 7.55 Hz), 7.25-7.35 (d, 1H, J = 8.68 Hz), 7.40-7.50 (t, 1H, J =  6.93 Hz), 7.55-7.60 (d, 1H, J = 7.93 Hz), 7.61 (s, 1H) 
MS (FAB) 685 [M+H]+
式３の(2S)-N-{4-[4-[4-[4-(2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ブチル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(684mg、1.0mmol)を、メタノール(10mL)中に溶解し、これにSnCl2.2H2O(1.125g、5 mmol)を加え、1.5時間にわたって還流を行った。反応混合物を、NaHCO3溶液でpH 8に中和し、その後に、酢酸エチル(3×20 ml)で抽出した。混合性の有機相をNa2SO4で乾燥させ、減圧下で蒸発させ、粗製の(2S)-N-{4-[4-[4-[4-(2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ブチル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール4 を得た。
【００４３】
式４の(2S)-N-{4-[4-[4-[4-(2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ブチル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(654mg、1mmol)の溶液に、CH3CN/H2O(4:1)中のHgCl2(613mg、2.26 mmol)およびCaCO3(246mg、2.46 mmol)を、TLC(EtOAc)によって示された反応の完了まで室温で12時間にわたって撹拌した。有機層を真空下で蒸発させ、残渣をEtOAcで稀釈する。これに飽和したNaHCO3を室温でゆるやかに加え、混合液をセライト床を通してろ過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を真空下で蒸発させ、粗製の7-メトキシ-8-{4-[4-(2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ブチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4] ベンゾジアゼピン-5-オン 5を得た。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製された。最初は酢酸エチルで溶出して微量の第二水銀塩を除去し、その後にCHCl3:メタノール(9:1)で溶出した。
【００４４】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.80-2.00 (m, 4H), 2.20-2.60 (m, 4H), 2.70-2.90 (m, 4H), 3.25-3.40 (m, 4H), 3.60-3.85 (m, 4H), 3.90 (s, 3H), 4.15-4.30 (m, 3H), 5.70 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 7.15-7.20 (t, 1H, J = 6.69 Hz), 7.30-7.38 (d, 1H, J = 8.18 Hz), 7.44-7.50 (d, 1H, J = 8.18 Hz), 7.55-7.59 (t, 1H, J = 7.43 Hz), 7.62 (s, 1H), 7.64-7.68 (d, 1H, J = 3.72 Hz);MS (FAB) 531 [M+H]+
【００４５】
例３
式１の(2S)-N-[4-(5-ブロモペンチル)-オキシ-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル]ピロリジン-2-カルボキアルデヒドジエチルチオアセタール (549mg、1.0 mmol)の溶液に、式２の4-ピペラジノ-2H-2-クロメノン (230mg、1.0 mmol)およびK2CO3 (414mg、3.0 mmol)を、乾燥したアセトニトリル(40ml)中において、48時間にわたって還流した。TLC、EtOAc:ヘキサン(1:1)によって示された反応の完了後、反応混合物を水に注ぎ、その後に酢酸エチルで抽出した。これは減圧条件下で濃縮され、粗生成物を与えた。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製され、EtOAc:ヘキサン(3:7)で溶出し、純粋な(2S)-N-{4-[4-[5-[4-(2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール3を得た。
【００４６】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.20-1.40 (m, 8H), 1.70-2.40 (m, 6H), 2.60-2.85 (m, 8H), 3.15-3.35 (m, 6H), 3.40-3.80 (m, 4H), 3.95 (s, 3H), 4.10-4.25 (t, 2H, J = 6.04 Hz), 4.60-4.70 (m, 1H), 4.80-4.85 (m, 1H), 5.70 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 7.18-7.20 (t, 1H, J = 7.55 Hz), 7.25-7.35 (d, 1H, J = 8.68 Hz), 7.40-7.50 (t, 1H, J =  6.93 Hz), 7.55-7.60 (d, 1H, J = 7.93 Hz), 7.61 (s, 1H) 
MS (FAB) 699 [M+H]+
式３の(2S)-N-{4-[4-[5-[4-(2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(698mg、1.0mmol)を、メタノール(10mL)中に溶解し、これにSnCl2.2H2O(1.125g、5 mmol)を加え、1.5時間にわたって還流を行った。反応混合物を、NaHCO3溶液でpH 8に中和し、その後に、酢酸エチル(3×20 ml)で抽出した。混合性の有機相をNa2SO4で乾燥させ、減圧下で蒸発させ、粗製の(2S)-N-{4-[4-[5-[4-(2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール4 を得た。
【００４７】
式４の(2S)-N-{4-[4-[5-[4-(2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(668mg、1mmol)の溶液に、CH3CN/H2O(4:1)中のHgCl2(613mg、2.26 mmol)およびCaCO3(246mg、2.46 mmol)を、TLC(EtOAc)によって示された反応の完了まで室温で12時間にわたって撹拌した。有機層を真空下で蒸発させ、残渣をEtOAcで稀釈する。これに飽和したNaHCO3を室温でゆるやかに加え、混合液をセライト床を通してろ過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を真空下で蒸発させ、粗製の7-メトキシ-8-{5-[4-(2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4] ベンゾジアゼピン-5-オン 5を得た。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製された。最初は酢酸エチルで溶出して微量の第二水銀塩を除去し、その後にCHCl3:メタノール(9:1)で溶出した。
【００４８】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ2.08-2.20 (m, 6H), 2.22-2.60 (m, 4H), 2.63-2.82 (m, 4H), 3.25-3.40 (m, 4H), 3.45-3.85 (m, 4H), 3.90 (s, 3H), 4.15-4.25 (m, 3H), 5.68 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 7.15-7.20 (t, 1H, J = 6.69 Hz), 7.30-7.38 (d, 1H, J = 8.18 Hz), 7.44-7.50 (d, 1H, J = 8.18 Hz), 7.55-7.59 (t, 1H, J = 7.43 Hz), 7.62 (s, 1H), 7.64-7.68 (d, 1H, J = 3.72 Hz) 
MS (FAB) 545 [M+H]+
【００４９】
例４
式１の(2S)-N-[4-(3-ブロモプロピル)-オキシ-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル]ピロリジン-2-カルボキアルデヒドジエチルチオアセタール (521mg、1.0 mmol)の溶液に、式２の7-メトキシ-8-メチル-4-ピペラジノ-2H-2-クロメノン(274mg、1.0 mmol)およびK2CO3 (414mg、3.0 mmol)を、乾燥したアセトニトリル(40ml)中において、48時間にわたって還流した。TLC、EtOAc:ヘキサン(1:1)によって示された反応の完了後、反応混合物を水に注ぎ、その後に酢酸エチルで抽出した。これは減圧条件下で濃縮され、粗生成物を与えた。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製され、EtOAc:ヘキサン(3:7)で溶出し、純粋な(2S)-N-{4-[4-[3-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]プロピル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール3を得た。
【００５０】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.20-1.40 (m, 8H), 1.90-2.19 (m, 4H), 2.21 (s , 3H), 2.31-2.40 (t, 2H, J = 7.85 Hz), 2.60-2.82 (m, 8H), 3.18-3.30 (m, 4H), 3.35-3.40 (t, 2H, J = 7.07 Hz), 3.90 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 4.15-4.20 (m, 2H), 4.60-4.80 (m, 1H), 4.80-4.90 (m, 1H), 5.51 (s, 1H), 6.68-6.72 (d, 1H, J = 8.64 Hz), 6.79 (s, 1H), 7.31-7.38 (d, 1H, J = 9.43 Hz), 7.64 (s, 1H); MS (FAB) 715 [M+H]+
式３の(2S)-N-{4-[4-[3-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]プロピル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(714mg、1.0mmol)を、メタノール(10mL)中に溶解し、これにSnCl2.2H2O(1.125g、5 mmol)を加え、1.5時間にわたって還流を行った。反応混合物を、NaHCO3溶液でpH 8に中和し、その後に、酢酸エチル(3×20 ml)で抽出した。混合性の有機相をNa2SO4で乾燥させ、減圧下で蒸発させ、粗製の(2S)-N-{4-[4-[3-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]プロピル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール4 を得た。
【００５１】
式４の(2S)-N-{4-[4-[3-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]プロピル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(714mg、1mmol)の溶液に、CH3CN/H2O(4:1)中のHgCl2(613mg、2.26 mmol)およびCaCO3(246mg、2.46 mmol)を、TLC(EtOAc)によって示された反応の完了まで室温で12時間にわたって撹拌した。有機層を真空下で蒸発させ、残渣をEtOAcで稀釈する。これに飽和したNaHCO3を室温でゆるやかに加え、混合液をセライト床を通してろ過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を真空下で蒸発させ、粗製の7-メトキシ-8-{3-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4] ベンゾジアゼピン-5-オン 5を得た。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製された。最初は酢酸エチルで溶出して微量の第二水銀塩を除去し、その後にCHCl3:メタノール(9:1)で溶出した。
【００５２】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ2.00-2.20 (m, 2H), 2.22-2.40 (m, 7H), 2.60-2.80 (m, 4H), 3.20-3.35 (m, 4H), 3.45-3.80 (m, 4H), 3.90 (s, 3H), 3.92 (s, 3H), 4.15-4.25 (m, 3H), 5.60 (s, 1H), 6.74-6.78 (d, 1H, J = 8.91 Hz)), 6.84 (s, 1H), 7.38-7.42 (d, 1H, J = 8.91 Hz), 7.50 (s, 1H), 7.64-7.68 (d, 1H, J = 3.72 Hz); MS (FAB) 561 [M+H]+
【００５３】
例５
式１の(2S)-N-[4-(4-ブロモブチル)-オキシ-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル]ピロリジン-2-カルボキアルデヒドジエチルチオアセタール (535mg、1.0 mmol)の溶液に、式２の7-メトキシ-8-メチル-4-ピペラジノ-2H-2-クロメノン(274mg、1.0 mmol)およびK2CO3 (414mg、3.0 mmol)を、乾燥したアセトニトリル(40ml)中において、48時間にわたって還流した。TLC、EtOAc:ヘキサン(1:1)によって示された反応の完了後、反応混合物を水に注ぎ、その後に酢酸エチルで抽出した。これは減圧条件下で濃縮され、粗生成物を与えた。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製され、EtOAc:ヘキサン(3:7)で溶出し、純粋な(2S)-N-{4-[4-[4-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ブチル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール3を得た。
【００５４】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.20-1.40 (m, 10H), 1.60-2.18 (m, 8H), 2.21 (s, 3H), 2.60-2.80 (m, 8H), 3.18-3.30 (m, 4H), 3.84 (s, 3H), 3.90 (s, 3H), 4.14-4.20 (m, 2H),  4.60-4.71 (m, 1H), 4.78-4.84 (m, 1H), 5.55 (s, 1H), 6.71-6.75 (d, 1H, J = 8.92 Hz), 6.78 (s, 1H), 7.34-7.38 (d, 1H, J = 8.18 Hz), 7.62 (s, 1H ) 
MS (FAB) 729 [M+H]+
式３の(2S)-N-{4-[4-[4-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ブチル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(728mg、1mmol)を、メタノール(10mL)中に溶解し、これにSnCl2.2H2O(1.125g、5 mmol)を加え、1.5時間にわたって還流を行った。反応混合物を、NaHCO3溶液でpH 8に中和し、その後に、酢酸エチル(3×20 ml)で抽出した。混合性の有機相をNa2SO4で乾燥させ、減圧下で蒸発させ、粗製の(2S)-N-{4-[4-[4-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ブチル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール4 を得た。
【００５５】
式４の(2S)-N-{4-[4-[4-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ブチル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(698mg、1mmol)の溶液に、CH3CN/H2O(4:1)中のHgCl2(613mg、2.26 mmol)およびCaCO3(246mg、2.46 mmol)を、TLC(EtOAc)によって示された反応の完了まで室温で12時間にわたって撹拌した。有機層を真空下で蒸発させ、残渣をEtOAcで稀釈する。これに飽和したNaHCO3を室温でゆるやかに加え、混合液をセライト床を通してろ過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を真空下で蒸発させ、粗製の7-メトキシ-8-{4-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ブチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4] ベンゾジアゼピン-5-オン 5を得た。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製された。最初は酢酸エチルで溶出して微量の第二水銀塩を除去し、その後にCHCl3:メタノール(9:1)で溶出した。
【００５６】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.90-2.10 (m, 4H), 2.20-2.40 (m, 7H), 2.60-2.80 (m, 4H), 3.20-3.35 (m, 4H), 3.45-3.80 (m, 4H), 3.90 (s, 3H), 3.92 (s, 3H), 4.15-4.25 (m, 3H), 5.60 (s, 1H), 6.74-6.78 (d, 1H, J = 8.91 Hz)), 6.84 (s, 1H), 7.38-7.42 (d, 1H, J = 8.91 Hz), 7.50 (s, 1H), 7.64-7.68 (d, 1H, J = 3.72 Hz); MS (FAB) 575 [M+H]+
【００５７】
例６
式１の(2S)-N-[4-(5-ブロモペンチル)-オキシ-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル]ピロリジン-2-カルボキアルデヒドジエチルチオアセタール (549mg、1.0 mmol)の溶液に、式２の7-メトキシ-8-メチル-4-ピペラジノ-2H-2-クロメノン(274mg、1.0 mmol)およびK2CO3 (414mg、3.0 mmol)を、乾燥したアセトニトリル(40ml)中において、48時間にわたって還流した。TLC、EtOAc:ヘキサン(1:1)によって示された反応の完了後、反応混合物を水に注ぎ、その後に酢酸エチルで抽出した。これは減圧条件下で濃縮され、粗生成物を与えた。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製され、EtOAc:ヘキサン(3:7)で溶出し、純粋な(2S)-N-{4-[4-[5-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール3を得た。
【００５８】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.20-1.40 (m, 8H), 1.40-1.70 (m, 4H),1.82-2.18 (m, 4H), 2.21 (s , 3H), 2.47-2.55 (t, 2H, J = 7.55 Hz), 2.62-2.82 (m, 8H), 3.20-3.30 (m, 4H), 3.32-3.42 (m, 2H), 3.90 (s, 3H), 3.95 (s, 3H), 4.05-4.13 (t, 2H, J = 6.04 Hz), 4.62-4.70 (m, 1H), 4.80-4.84 (m, 1H), 5.50 (s, 1H), 6.68-6.78 (d, 1H, J = 9.07 Hz), 6.80 (s, 1H), 7.32-7.40 (d, 1H, J = 9.07 Hz), 7.65 (s, 1H) 
MS (FAB) 743 [M+H]+
式４の(2S)-N-{4-[4-[5-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(742mg、1mmol)を、メタノール(10mL)中に溶解し、これにSnCl2.2H2O(1.125g、5 mmol)を加え、1.5時間にわたって還流を行った。反応混合物を、NaHCO3溶液でpH 8に中和し、その後に、酢酸エチル(3×20 ml)で抽出した。混合性の有機相をNa2SO4で乾燥させ、減圧下で蒸発させ、粗製の(2S)-N-{4-[4-[5-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール4 を得た。
【００５９】
式４の(2S)-N-{4-[4-[5-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(712mg、1mmol)の溶液に、CH3CN/H2O(4:1)中のHgCl2(613mg、2.26 mmol)およびCaCO3(246mg、2.46 mmol)、HgCl2(mmol)およびCaCO3(mmol)を、TLC(EtOAc)によって示された反応の完了まで室温で12時間にわたって撹拌した。有機層を真空下で蒸発させ、残渣をEtOAcで稀釈する。これに飽和したNaHCO3を室温でゆるやかに加え、混合液をセライト床を通してろ過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を真空下で蒸発させ、粗製の7-メトキシ-8-{5-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4] ベンゾジアゼピン-5-オン 5を得た。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製された。最初は酢酸エチルで溶出して微量の第二水銀塩を除去し、その後にCHCl3:メタノール(9:1)で溶出した。
【００６０】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.82-2.15 (m, 6H), 2.20-2.60 (m, 7H), 2.62-2.80 (m, 4H), 3.20-3.40 (m, 4H), 3.45-3.80 (m, 4H), 3.90 (s, 3H), 3.92 (s, 3H), 4.10-4.20 (m, 3H), 5.60 (s, 1H), 6.75-6.78 (d, 1H, J = 9.43 Hz)), 6.80 (s, 1H), 7.38-7.42 (d, 1H, J = 8.64 Hz), 7.50 (s, 1H), 7.64-7.68 (d, 1H, J = 4.71 Hz); MS (FAB) 589 [M+H]+
【００６１】
例７
式１の(2S)-N-[4-(3-ブロモプロピル)-オキシ-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル]ピロリジン-2-カルボキアルデヒドジエチルチオアセタール (521mg、1.0 mmol)の溶液に、式２の7-エトキシ-8-メチル-4-ピペラジノ-2H-2-クロメノン(288mg、1.0 mmol)およびK2CO3 (414mg、3.0 mmol)を、乾燥したアセトニトリル(40ml)中において、48時間にわたって還流した。TLC、EtOAc:ヘキサン(1:1)によって示された反応の完了後、反応混合物を水に注ぎ、その後に酢酸エチルで抽出した。これは減圧条件下で濃縮され、粗生成物を与えた。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製され、EtOAc:ヘキサン(3:7)で溶出し、純粋な(2S)-N-{4-[4-[3-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]プロピル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール3を得た。
【００６２】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.20-1.40 (m, 8H), 1.44-1.50 ( t, 3H, J = 6.80 Hz), 1.50-2-00 (m, 4H), 2.30-2.40 (m , 5H), 2.60-3.00 (m, 8H), 3.18-3.40 (m, 6H), 3.90 (s, 3H), 4.02-4.20 (m, 4H), 4.60-4.70 (m, 1H), 4.80-4.82 (m, 1H), 5.60 (s, 1H), 6.68-6.75 (d, 1H, J = 9.07 Hz), 6.80 (s, 1H), 7.28-7.38 (d, 1H, J = 9.07 Hz), 7.62 (s, 1H); MS (FAB) 729 [M+H]+
式３の(2S)-N-{4-[4-[3-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]プロピル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(728mg、1mmol)を、メタノール(10mL)中に溶解し、これにSnCl2.2H2O(1.125g、5 mmol)を加え、1.5時間にわたって還流を行った。反応混合物を、NaHCO3溶液でpH 8に中和し、その後に、酢酸エチル(3×20 ml)で抽出した。混合性の有機相をNa2SO4で乾燥させ、減圧下で蒸発させ、粗製の(2S)-N-{4-[4-[3-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]プロピル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール4 を得た。
【００６３】
式４の(2S)-N-{4-[4-[3-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]プロピル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(698mg、1mmol)の溶液に、CH3CN/H2O(4:1)中のHgCl2(613mg、2.26 mmol)およびCaCO3(246mg、2.46 mmol)、HgCl2(mmol)およびCaCO3(mmol)を、TLC(EtOAc)によって示された反応の完了まで室温で12時間にわたって撹拌した。有機層を真空下で蒸発させ、残渣をEtOAcで稀釈する。これに飽和したNaHCO3を室温でゆるやかに加え、混合液をセライト床を通してろ過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を真空下で蒸発させ、粗製の7-メトキシ-8-{3-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4] ベンゾジアゼピン-5-オン 5を得た。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製された。最初は酢酸エチルで溶出して微量の第二水銀塩を除去し、その後にCHCl3:メタノール(9:1)で溶出した。
【００６４】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.40-1.50 (t, 3H, J = 6.65 Hz), 1.80-2.00 (m, 2H), 2.15 (s, 3H), 2.50-2.80 (m , 4H), 2.80-3.00 (m, 4H), 3.15-3.50 (m, 4H), 3.60-3.80 (m, 4H), 3.95 (s, 3H), 4.15-4.20 (m, 5H), 5.60 (s, 1H), 6.70-6.78 (d, 1H, J = 8.34 Hz), 6.80 (s, 1H), 7.28-7.38 (d, 1H, J = 8.34 Hz), 7.45 (s, 1H), 7.64-7.68 (d, 1H, J = 3.74 Hz); MS (FAB) 575 [M+H]+
【００６５】
例８
式１の(2S)-N-[4-(4-ブロモブチル)-オキシ-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル]ピロリジン-2-カルボキアルデヒドジエチルチオアセタール (535mg、1.0 mmol)の溶液に、式２の7-エトキシ-8-メチル-4-ピペラジノ-2H-2-クロメノン(288mg、1.0 mmol)およびK2CO3 (414mg、3.0 mmol)を、乾燥したアセトニトリル(40ml)中において、48時間にわたって還流した。TLC、EtOAc:ヘキサン(1:1)によって示された反応の完了後、反応混合物を水に注ぎ、その後に酢酸エチルで抽出した。これは減圧条件下で濃縮され、粗生成物を与えた。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製され、EtOAc:ヘキサン(3:7)で溶出し、純粋な(2S)-N-{4-[4-[4-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ブチル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール3を得た。
【００６６】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.20-1.40 (m, 10H), 1.44-1.50 (t, 3H, J = 6.80 Hz), 1.50-2.00 (m, 4H), 2.30-2.40 (m , 5H), 2.60-3.00 (m, 8H), 3.18-3.40 (m, 6H), 3.90 (s, 3H), 4.02-4.20 (m, 4H), 4.60-4.70 (m, 1H), 4.80-4.82 (m, 1H), 5.60 (s, 1H), 6.68-6.75 (d, 1H, J = 9.07 Hz), 6.80 (s, 1H), 7.28-7.38 (d, 1H, J = 9.07 Hz), 7.62 (s, 1H)
MS (FAB) 743 [M+H]+
式３の(2S)-N-{4-[4-[4-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ブチル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(742mg、1mmol)を、メタノール(10mL)中に溶解し、これにSnCl2.2H2O(1.125g、5 mmol)を加え、1.5時間にわたって還流を行った。反応混合物を、NaHCO3溶液でpH 8に中和し、その後に、酢酸エチル(3×20 ml)で抽出した。混合性の有機相をNa2SO4で乾燥させ、減圧下で蒸発させ、粗製の(2S)-N-{4-[4-[4-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ブチル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール4 を得た。
【００６７】
式４の(2S)-N-{4-[4-[4-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ブチル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(712mg、1mmol)の溶液に、CH3CN/H2O(4:1)中のHgCl2(613mg、2.26 mmol)およびCaCO3(246mg、2.46 mmol)、HgCl2(mmol)およびCaCO3(mmol)を、TLC(EtOAc)によって示された反応の完了まで室温で12時間にわたって撹拌した。有機層を真空下で蒸発させ、残渣をEtOAcで稀釈する。これに飽和したNaHCO3を室温でゆるやかに加え、混合液をセライト床を通してろ過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を真空下で蒸発させ、粗製の7-メトキシ-8-{4-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ブチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4] ベンゾジアゼピン-5-オン 5を得た。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製された。最初は酢酸エチルで溶出して微量の第二水銀塩を除去し、その後にCHCl3:メタノール(9:1)で溶出した。
【００６８】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.50-1.52 (t, 3H, J = 7.04 Hz), 1.60-2.00 (m, 4H), 2.15 (s, 3H), 2.20-2.40 (m , 4H), 2.60-2.80 (m, 4H), 3.20-3.35 (m, 4H), 3.60-3.89 (m, 4H), 3.95 (s, 3H), 4.10-4.20 (m, 5H), 5.60 (s, 1H), 6.70-6.78 (d, 1H, J = 8.64 Hz), 6.80 (s, 1H), 7.35-7.38 (d, 1H, J = 8.64 Hz), 7.50 (s, 1H), 7.64-7.68 (d, 1H, J = 3.93 Hz); MS (FAB) 589 [M+H]+
【００６９】
例９
式１の(2S)-N-[4-(5-ブロモペンチル)-オキシ-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル]ピロリジン-2-カルボキアルデヒドジエチルチオアセタール (549mg、1.0 mmol)の溶液に、式２の7-エトキシ-8-メチル-4-ピペラジノ-2H-2-クロメノン(288mg、1.0 mmol)およびK2CO3 (414mg、3.0 mmol)を、乾燥したアセトニトリル(40ml)中において、48時間にわたって還流した。TLC、EtOAc:ヘキサン(1:1)によって示された反応の完了後、反応混合物を水に注ぎ、その後に酢酸エチルで抽出した。これは減圧条件下で濃縮され、粗生成物を与えた。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製され、EtOAc:ヘキサン(3:7)で溶出し、純粋な(2S)-N-{4-[4-[5-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール3を得た。
【００７０】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.20-1.40 (m, 12H), 1.40-1.50 (t, 3H, J = 6.80 Hz),  1.62-2.18 (m, 8H), 2.21 (s , 3H), 2.45-2.82 (m, 8H), 3.18-3.30 (m, 4H), 3.90 (s, 3H), 4.02-4.20 (m, 4H), 4.60-4.70 (m, 1H), 4.78-4.82 (m, 1H), 5.59 (s, 1H), 6.68-6.72 (d, 1H, J = 9.07 Hz), 6.80 (s, 1H), 7.28-7.38 (d, 1H, J = 9.07 Hz), 7.62 (s, 1H)
MS (FAB) 757 [M+H]+
式IIIの(2S)-N-{4-[4-[5-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(756mg、1mmol)を、メタノール(10mL)中に溶解し、これにSnCl2.2H2O(1.125g、5 mmol)を加え、1.5時間にわたって還流を行った。反応混合物を、NaHCO3溶液でpH 8に中和し、その後に、酢酸エチル(3×20 ml)で抽出した。混合性の有機相をNa2SO4で乾燥させ、減圧下で蒸発させ、粗製の(2S)-N-{4-[4-[5-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール4 を得た。
【００７１】
式４の(2S)-N-{4-[4-[5-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(726mg、1mmol)の溶液に、CH3CN/H2O(4:1)中のHgCl2(613mg、2.26 mmol)およびCaCO3(246mg、2.46 mmol)、HgCl2(mmol)およびCaCO3(mmol)を、TLC(EtOAc)によって示された反応の完了まで室温で12時間にわたって撹拌した。有機層を真空下で蒸発させ、残渣をEtOAcで稀釈する。これに飽和したNaHCO3を室温でゆるやかに加え、混合液をセライト床を通してろ過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を真空下で蒸発させ、粗製の7-メトキシ-8-{5-[4-(7-エトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4] ベンゾジアゼピン-5-オン 5を得た。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製された。最初は酢酸エチルで溶出して微量の第二水銀塩を除去し、その後にCHCl3:メタノール(9:1)で溶出した。
【００７２】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.40-1.50 (t, 3H, J = 6.75 Hz), 1.70-2.00 (m, 6H), 2.10 (s, 3H), 2.60-2.90 (m, 4H), 3.00-3.15 (m, 4H), 3.40-3.52 (m, 4H), 3.70-3.90 (m, 4H), 3.95 (s, 3H), 4.15-4.20 (m, 5H), 5.60 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.80-6.82 (d, 1H, J = 9.03 Hz), 7.32-7.45 (d, 1H, J = 9.03 Hz), 7.52 (s, 1H), 7.65-7.85 (d, 1H, J = 4.50 Hz); MS (FAB) 603 [M+H]+
【００７３】
例１０
式１の(2S)-N-[4-(3-ブロモプロピル)-オキシ-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル]ピロリジン-2-カルボキアルデヒドジエチルチオアセタール (521mg、1.0 mmol)の溶液に、式２の7-イソプロポキシ-8-メチル-4-ピペラジノ-2H-2-クロメノン(302mg、1.0 mmol)およびK2CO3 (414mg、3.0 mmol)を、乾燥したアセトニトリル(40ml)中において、48時間にわたって還流した。TLC、EtOAc:ヘキサン(1:1)によって示された反応の完了後、反応混合物を水に注ぎ、その後に酢酸エチルで抽出した。これは減圧条件下で濃縮され、粗生成物を与えた。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製され、EtOAc:ヘキサン(3:7)で溶出し、純粋な(2S)-N-{4-[4-[3-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]プロピル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール3を得た。
【００７４】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.20-1.40 (m, 12H), 1.50-2.00 (m, 6H), 2.10-2.40 (m, 5H), 2.60-3.10 (m, 8H), 3.25-3.40 (m, 6H), 3.95 (s, 3H), 4.0-4.2 (m, 2H), 4.25-4.30 (m, 1H), 4.60-4.68 (m, 1H), 4.78-4.80 (m, 1H), 5.65 (s, 1H), 6.68-6.70 (d, 1H, J = 9.15 Hz), 6.78 (s, 1H), 7.25-7.35 (d, 1H, J = 8.31 Hz), 7.62 (s, 1H)
MS (FAB) 743 [M+H]+
式３の(2S)-N-{4-[4-[3-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]プロピル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(742mg、1mmol)を、メタノール(10mL)中に溶解し、これにSnCl2.2H2O(1.125g、5 mmol)を加え、1.5時間にわたって還流を行った。反応混合物を、NaHCO3溶液でpH 8に中和し、その後に、酢酸エチル(3×20 ml)で抽出した。混合性の有機相をNa2SO4で乾燥させ、減圧下で蒸発させ、粗製の(2S)-N-{4-[4-[3-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]プロピル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール4 を得た。
【００７５】
式４の(2S)-N-{4-[4-[3-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]プロピル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(712mg、1mmol)の溶液に、CH3CN/H2O(4:1)中のHgCl2(613mg、2.26 mmol)およびCaCO3(246mg、2.46 mmol)、HgCl2(mmol)およびCaCO3(mmol)を、TLC(EtOAc)によって示された反応の完了まで室温で12時間にわたって撹拌した。有機層を真空下で蒸発させ、残渣をEtOAcで稀釈する。これに飽和したNaHCO3を室温でゆるやかに加え、混合液をセライト床を通してろ過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を真空下で蒸発させ、粗製の7-メトキシ-8-{3-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4] ベンゾジアゼピン-5-オン 5を得た。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製された。最初は酢酸エチルで溶出して微量の第二水銀塩を除去し、その後にCHCl3:メタノール(9:1)で溶出した。
【００７６】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.40-1.50 (d, 6H, J = 7.61 Hz), 1.65-2.10 (m, 4H), 2.15 (s, 3H), 2.61-2.80 (m, 4H), 3.0-3.15 (m, 4H), 3.40-3.55 (m, 4H), 3.95 (s, 3H), 4.0-4.2 (m, 6H), 5.65 (s, 1H), 6.68-6.70 (d, 1H, J = 9.15 Hz), 6.78 (s, 1H), 7.25-7.35 (d, 1H, J = 8.31 Hz), 7.62 (s, 1H), 7.64-7.74 (d, 1H, J = 3.70 Hz)
MS (FAB) 589 [M+H]+
【００７７】
例１１
式１の(2S)-N-[4-(4-ブロモブチル)-オキシ-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル]ピロリジン-2-カルボキアルデヒドジエチルチオアセタール (535mg、1.0 mmol)の溶液に、式２の7-イソプロポキシ-8-メチル-4-ピペラジノ-2H-2-クロメノン(302mg、1.0 mmol)およびK2CO3 (414mg、3.0 mmol)を、乾燥したアセトニトリル(40ml)中において、48時間にわたって還流した。TLC、EtOAc:ヘキサン(1:1)によって示された反応の完了後、反応混合物を水に注ぎ、その後に酢酸エチルで抽出した。これは減圧条件下で濃縮され、粗生成物を与えた。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製され、EtOAc:ヘキサン(3:7)で溶出し、純粋な(2S)-N-{4-[4-[4-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ブチル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール3を得た。
【００７８】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.20-1.40 (m, 12H), 1.50-2.00 (m, 8H), 2.10-2.40 (m, 5H), 2.60-3.10 (m, 8H), 3.25-3.40 (m, 6H), 3.95 (s, 3H), 4.0-4.2 (m, 2H), 4.25-4.30 (m, 1H), 4.60-4.68 (m, 1H), 4.78-4.80 (m, 1H), 5.65 (s, 1H), 6.68-6.70 (d, 1H, J = 9.15 Hz), 6.78 (s, 1H), 7.25-7.35 (d, 1H, J = 8.31 Hz), 7.62 (s, 1H)
MS (FAB) 757 [M+H]+
式３の(2S)-N-{4-[4-[4-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ブチル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(756mg、1mmol)を、メタノール(10mL)中に溶解し、これにSnCl2.2H2O(1.125g、5 mmol)を加え、1.5時間にわたって還流を行った。反応混合物を、NaHCO3溶液でpH 8に中和し、その後に、酢酸エチル(3×20 ml)で抽出した。混合性の有機相をNa2SO4で乾燥させ、減圧下で蒸発させ、粗製の(2S)-N-{4-[4-[4-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ブチル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール4 を得た。
【００７９】
式４の(2S)-N-{4-[4-[4-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ブチル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(726mg、1mmol)の溶液に、CH3CN/H2O(4:1)中のHgCl2(613mg、2.26 mmol)およびCaCO3(246mg、2.46 mmol)、HgCl2(mmol)およびCaCO3(mmol)を、TLC(EtOAc)によって示された反応の完了まで室温で12時間にわたって撹拌した。有機層を真空下で蒸発させ、残渣をEtOAcで稀釈する。これに飽和したNaHCO3を室温でゆるやかに加え、混合液をセライト床を通してろ過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を真空下で蒸発させ、粗製の7-メトキシ-8-{4-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ブチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4] ベンゾジアゼピン-5-オン 5を得た。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製された。最初は酢酸エチルで溶出して微量の第二水銀塩を除去し、その後にCHCl3:メタノール(9:1)で溶出した。
【００８０】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.40-1.50 (d, 6H, J = 6.10 Hz), 1.65-2.10 (m, 6H), 2.15 (s, 3H), 2.61-2.80 (m, 4H), 3. 0-3.15 (m, 4H), 3.40-3.55 (m, 4H), 3.95 (s, 3H), 4.0-4.2 (m, 6H), 5.65 (s, 1H), 6.68-6.70 (d, 1H, J = 9.15 Hz), 6.78 (s, 1H), 7.25-7.35 (d, 1H, J = 8.31 Hz), 7.62 (s, 1H), 7.64-7.74 (d, 1H, J = 3.70 Hz);MS (FAB) 603 [M+H]+
【００８１】
例１２
式１の(2S)-N-[4-(5-ブロモペンチル)-オキシ-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル]ピロリジン-2-カルボキアルデヒドジエチルチオアセタール (549mg、1.0 mmol)の溶液に、式２の7-イソプロポキシ-8-メチル-4-ピペラジノ-2H-2-クロメノン(302mg、1.0 mmol)およびK2CO3 (414mg、3.0 mmol)を、乾燥したアセトニトリル(40ml)中において、48時間にわたって還流した。TLC、EtOAc:ヘキサン(1:1)によって示された反応の完了後、反応混合物を水に注ぎ、その後に酢酸エチルで抽出した。これは減圧条件下で濃縮され、粗生成物を与えた。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製され、EtOAc:ヘキサン(3:7)で溶出し、純粋な(2S)-N-{4-[4-[5-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール3を得た。
【００８２】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ 1.20-1.40 (m, 14H), 1.50-2.00 (m, 8H), 2.10-2.40 (m, 5H), 2.61-3.10 (m, 8H), 3.20-3.40 (m, 6H), 3.95 (s, 3H), 4.0-4.2 (m, 2H), 4.25-4.30 (m, 1H), 4.60-4.70 (m, 1H), 4.80-4.83 (m, 1H), 5.65 (s, 1H), 6.68-6.70 (d, 1H, J = 9.15 Hz), 6.78 (s, 1H), 7.25-7.35 (d, 1H, J = 8.31 Hz), 7.62 (s, 1H)
MS (FAB) 771 [M+H]+
式３の(2S)-N-{4-[4-[5-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル]オキシ]-5-メトキシ-2-ニトロベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(770mg、1mmol)を、メタノール(10mL)中に溶解し、これにSnCl2.2H2O(1.125g、5 mmol)を加え、1.5時間にわたって還流を行った。反応混合物を、NaHCO3溶液でpH 8に中和し、その後に、酢酸エチル(3×20 ml)で抽出した。混合性の有機相をNa2SO4で乾燥させ、減圧下で蒸発させ、粗製の(2S)-N-{4-[4-[5-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール4 を得た。
【００８３】
式４の(2S)-N-{4-[4-[5-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-2-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル]オキシ]-5-メトキシ-2-アミノベンゾイル}ピロリジン-2-カルボキシアルデヒドジエチルチオアセタール(740mg、1mmol)の溶液に、CH3CN/H2O(4:1)中のHgCl2(613mg、2.26 mmol)およびCaCO3(246mg、2.46 mmol)、HgCl2(mmol)およびCaCO3(mmol)を、TLC(EtOAc)によって示された反応の完了まで室温で12時間にわたって撹拌した。有機層を真空下で蒸発させ、残渣をEtOAcで稀釈する。これに飽和したNaHCO3を室温でゆるやかに加え、混合液をセライト床を通してろ過し、酢酸エチルで洗浄した。濾液を真空下で蒸発させ、粗製の7-メトキシ-8-{5-[4-(7-イソプロポキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4] ベンゾジアゼピン-5-オン 5を得た。粗生成物はさらに、シリカゲル上のカラム・クロマトグラフィによって精製された。最初は酢酸エチルで溶出して微量の第二水銀塩を除去し、その後にCHCl3:メタノール(9:1)で溶出した。
【００８４】
H1 NMR (CDCl3, 200 MHz)：δ1.40-1.50 (d, 6H, J = 6.53 Hz), 1.65-2.10 (m, 8H), 2.15 (s, 3H), 2.61-2.80 (m, 4H), 3.0-3.15 (m, 4H), 3.40-3.55 (m, 4H), 3.95 (s, 3H), 4.0-4.2 (m, 6H), 5.65 (s, 1H), 6.68-6.70 (d, 1H, J = 9.15 Hz), 6.78 (s, 1H), 7.25-7.35 (d, 1H, J = 8.31 Hz), 7.62 (s, 1H), 7.64-7.74 (d, 1H, J = 3.70 Hz)
MS (FAB) 617 [M+H]+
【００８５】
生物学的活性：インビトロでの生物学的活性の研究が、国立癌研究所(USA)で行なわれた。
【００８６】
細胞毒性：7-メトキシ-8-{5-[4-(2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ] ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン、7-メトキシ-8-{3-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン および 7-メトキシ-8-{5-[4-(7-メトキシ -8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン 化合物を、9つの癌のタイプ（白血病、非小細胞肺、結腸、CNS、黒色腫、卵巣、前立腺、乳癌）に由来した約60のヒト腫瘍細胞に対して、インビトロでの抗癌活性について評価した（表２）。各化合物について、各細胞系統についての投与反応曲線は、10倍稀釈で５つの濃度の最小値で測定した。48時間の連続的な薬剤曝露のプロトコルを使用し、かつ、スルホルホダミンB (SRB) タンパク質アッセイを用いて、細胞の生存能または増殖能を評価した。対照と比較した50%の細胞増殖阻害(GI50)、全細胞の増殖阻害(TGI 0%増殖)および50%の細胞死(LC50、-50%増殖)を引き起こす濃度が計算された。5c、5dおよび5fについてのlog10 TGIおよびlog10 LC50およびlog10 GI50の平均グラフ中間点の値は、表１にリストしている。平均グラフパターンによって実証されたように、5cの化合物は、様々な細胞株についての活性および選択性の興味深いプロファイルを示す。log10 TGI および log10 LC50の平均のグラフ中間点は、log10 GI50平均グラフ中間点と類似のパターン示した。
【表１】
2009515870.tif 000011
【表２】
2009515870.tif 000012
【図面の簡単な説明】
【００８７】
【図１】スキーム１に例証されるような新規な同属種のデザインおよび合成を示す図
【図１】
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【手続補正書】
【提出日】平成21年1月22日(2009.1.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】請求項９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【請求項９】
工程（ａ）において使用した有機溶媒が、アセトニトリル、アセトンおよびN,N-ジメチルホルムアミドから選択される、請求項７に記載の方法。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２５
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２５】
さらに他の実施態様において、工程（ａ）において使用した塩基は、K2CO3およびNa2CO3から選択される。
【手続補正３】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２６】
さらに他の実施態様において、工程（ａ）において使用した有機溶媒は、アセトニトリル、アセトンおよびN,N-ジメチルホルムアミドから選択される。
【手続補正４】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００２７
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００２７】
さらに他の実施態様において、工程（ｂ）において使用した酸触媒は、Sn/HCl、Zn/CH3COOHおよびPd/C-H2からなる群から選択される。
【手続補正５】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８６
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８６】
細胞毒性：7-メトキシ-8-{5-[4-(2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ] ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン、7-メトキシ-8-{3-[4-(7-メトキシ-8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]プロピル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン および 7-メトキシ-8-{5-[4-(7-メトキシ -8-メチル-2-オキソ-2H-4-クロメニル)ピペラジノ]ペンチル}-オキシ-(11aS)-1,2,3,11a-5H-ピロロ[2,1-c][1,4]ベンゾジアゼピン-5-オン 化合物を、9つの癌のタイプ（白血病、非小細胞肺、結腸、CNS、黒色腫、卵巣、前立腺、乳癌）に由来した約60のヒト腫瘍細胞に対して、インビトロでの抗癌活性について評価した（表２）。各化合物について、各細胞系統についての投与反応曲線は、10倍稀釈で５つの濃度の最小値で測定した。48時間の連続的な薬剤曝露のプロトコルを使用し、かつ、スルホルホダミンB (SRB) タンパク質アッセイを用いて、細胞の生存能または増殖能を評価した。対照と比較した50%の細胞増殖阻害(GI50)、全細胞の増殖阻害(TGI 0%増殖)および50%の細胞死(LC50、-50%増殖)を引き起こす濃度が計算された。5c、5dおよび5fについてのlog10 TGIおよびlog10 LC50およびlog10 GI50の平均グラフ中間点の値は、表１にリストしている。平均グラフパターンによって実証されたように、5cの化合物は、様々な細胞株についての活性および選択性の興味深いプロファイルを示す。log10 TGI および log10 LC50の平均のグラフ中間点は、log10 GI50平均グラフ中間点と類似のパターン示した。
【表１】
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【表２】
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【国際調査報告】
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