(57)【要約】現在、キナーゼｐ３８の活性上昇に関連する種々の障害の処置における高い治療効果は、ｐ３８？に対する阻害活性も有する強力なｐ３８？キナーゼ阻害剤化合物を使用して達成され得ることが発見されている。さらに、キナーゼｐ３８？の活性を低下させずにキナーゼｐ３８？およびキナーゼｐ３８？の両方の活性を、キナーゼｐ３８の活性上昇に関連する障害を有する被験体に対する投与時に望ましくない副作用が認められる程度にまで低下させることは、修飾によりｐ３８？に対する阻害活性が生じるようにｐ３８？の阻害剤を修飾することによって達成可能であることが発見されている。ｐ３８？およびｐ３８？に対する活性を有する化合物を記載する。また、記載の化合物および組成物を使用して活性化合物を有するストレス活性化プロテインキナーゼ（ＳＡＰＫ）系を調節する方法であって、前記活性化合物がｐ３８？およびｐ３８？  ＭＡＰＫの阻害を示す方法も開示する。
2009517390.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2009517390.tif 000026
の化合物であって、
式中、Ｒが、Ｈ、ハロ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、必要に応じて置換されたＣ１−６アルキル、必要に応じて置換されたＣ３−７シクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ４−１０アルキルシクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ２−６アルケニル、必要に応じて置換されたＣ１−６アルコキシ、必要に応じて置換されたＣ６またはＣ１０アリール、必要に応じて置換されたピリジニル、必要に応じて置換されたピリミジニル、必要に応じて置換されたチエニル、必要に応じて置換されたフラニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたフェノキシ、必要に応じて置換されたチオフェノキシ、必要に応じて置換されたスルホンアミド、必要に応じて置換された尿素、必要に応じて置換されたチオ尿素、必要に応じて置換されたアミド、必要に応じて置換されたケト、必要に応じて置換されたカルボキシル、必要に応じて置換されたカルバミル、必要に応じて置換されたスルフィド、必要に応じて置換されたスルホキシド、必要に応じて置換されたスルホン、必要に応じて置換されたアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアルキルアミノ、必要に応じて置換されたアルキルカルボキシ、必要に応じて置換されたカルボニル、必要に応じて置換されたスピロ環式シクロアルキル、必要に応じて置換されたピラジニル、必要に応じて置換されたピリダジニル、必要に応じて置換されたピロリル、必要に応じて置換されたチオフェニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたイミダゾリル、必要に応じて置換されたイソオキサゾリル、必要に応じて置換されたピラゾリル、必要に応じて置換されたイソチアゾリル、必要に応じて置換されたナフチル、必要に応じて置換されたキノリニル、必要に応じて置換されたイソキノリニル、必要に応じて置換されたキノキサリニル、必要に応じて置換されたベンゾチアゾリル、必要に応じて置換されたベンゾチオフェニル、必要に応じて置換されたベンゾフラニル、必要に応じて置換されたインドリルおよび必要に応じて置換されたベンゾイミダゾリルからなる群から選択される、
化合物。
【請求項２】
式：
【化２】
2009517390.tif 000027
の化合物であって、
式中、Ｒ４が、Ｈ、ハロ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、必要に応じて置換されたＣ１−６アルキル、必要に応じて置換されたＣ３−７シクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ４−１０アルキルシクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ２−６アルケニル、必要に応じて置換されたＣ１−６アルコキシ、必要に応じて置換されたＣ６またはＣ１０アリール、必要に応じて置換されたピリジニル、必要に応じて置換されたピリミジニル、必要に応じて置換されたチエニル、必要に応じて置換されたフラニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたフェノキシ、必要に応じて置換されたチオフェノキシ、必要に応じて置換されたスルホンアミド、必要に応じて置換された尿素、必要に応じて置換されたチオ尿素、必要に応じて置換されたアミド、必要に応じて置換されたケト、必要に応じて置換されたカルボキシル、必要に応じて置換されたカルバミル、必要に応じて置換されたスルフィド、必要に応じて置換されたスルホキシド、必要に応じて置換されたスルホン、必要に応じて置換されたアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアルキルアミノ、必要に応じて置換されたアルキルカルボキシ、必要に応じて置換されたカルボニル、必要に応じて置換されたスピロ環式シクロアルキル、必要に応じて置換されたピラジニル、必要に応じて置換されたピリダジニル、必要に応じて置換されたピロリル、必要に応じて置換されたチオフェニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたイミダゾリル、必要に応じて置換されたイソオキサゾリル、必要に応じて置換されたピラゾリル、必要に応じて置換されたイソチアゾリル、必要に応じて置換されたナフチル、必要に応じて置換されたキノリニル、必要に応じて置換されたイソキノリニル、必要に応じて置換されたキノキサリニル、必要に応じて置換されたベンゾチアゾリル、必要に応じて置換されたベンゾチオフェニル、必要に応じて置換されたベンゾフラニル、必要に応じて置換されたインドリルおよび必要に応じて置換されたベンゾイミダゾリルからなる群から選択される、
化合物。
【請求項３】
式：
【化３】
2009517390.tif 000028
の化合物であって、
式中、Ｒ２およびＲ３が、Ｈ、ハロ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、必要に応じて置換されたＣ１−６アルキル、必要に応じて置換されたＣ３−７シクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ４−１０アルキルシクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ２−６アルケニル、必要に応じて置換されたＣ１−６アルコキシ、必要に応じて置換されたＣ６またはＣ１０アリール、必要に応じて置換されたピリジニル、必要に応じて置換されたピリミジニル、必要に応じて置換されたチエニル、必要に応じて置換されたフラニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたフェノキシ、必要に応じて置換されたチオフェノキシ、必要に応じて置換されたスルホンアミド、必要に応じて置換された尿素、必要に応じて置換されたチオ尿素、必要に応じて置換されたアミド、必要に応じて置換されたケト、必要に応じて置換されたカルボキシル、必要に応じて置換されたカルバミル、必要に応じて置換されたスルフィド、必要に応じて置換されたスルホキシド、必要に応じて置換されたスルホン、必要に応じて置換されたアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアルキルアミノ、必要に応じて置換されたアルキルカルボキシ、必要に応じて置換されたカルボニル、必要に応じて置換されたスピロ環式シクロアルキル、必要に応じて置換されたピラジニル、必要に応じて置換されたピリダジニル、必要に応じて置換されたピロリル、必要に応じて置換されたチオフェニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたイミダゾリル、必要に応じて置換されたイソオキサゾリル、必要に応じて置換されたピラゾリル、必要に応じて置換されたイソチアゾリル、必要に応じて置換されたナフチル、必要に応じて置換されたキノリニル、必要に応じて置換されたイソキノリニル、必要に応じて置換されたキノキサリニル、必要に応じて置換されたベンゾチアゾリル、必要に応じて置換されたベンゾチオフェニル、必要に応じて置換されたベンゾフラニル、必要に応じて置換されたインドリルおよび必要に応じて置換されたベンゾイミダゾリルからなる群からそれぞれ独立して選択され；
該化合物は、１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−３−［４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）ナフタレン−１−イル］尿素（ＢＩＲＢ  ７９６）ではない；
化合物。
【請求項４】
式：
【化４】
2009517390.tif 000029
の化合物であって、
式中、Ｒ５およびＲ６が、Ｈ、ハロ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、必要に応じて置換されたＣ１−６アルキル、必要に応じて置換されたＣ３−７シクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ４−１０アルキルシクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ２−６アルケニル、必要に応じて置換されたＣ１−６アルコキシ、必要に応じて置換されたＣ６またはＣ１０アリール、必要に応じて置換されたピリジニル、必要に応じて置換されたピリミジニル、必要に応じて置換されたチエニル、必要に応じて置換されたフラニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたフェノキシ、必要に応じて置換されたチオフェノキシ、必要に応じて置換されたスルホンアミド、必要に応じて置換された尿素、必要に応じて置換されたチオ尿素、必要に応じて置換されたアミド、必要に応じて置換されたケト、必要に応じて置換されたカルボキシル、必要に応じて置換されたカルバミル、必要に応じて置換されたスルフィド、必要に応じて置換されたスルホキシド、必要に応じて置換されたスルホン、必要に応じて置換されたアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアルキルアミノ、必要に応じて置換されたアルキルカルボキシ、必要に応じて置換されたカルボニル、必要に応じて置換されたスピロ環式シクロアルキル、必要に応じて置換されたピラジニル、必要に応じて置換されたピリダジニル、必要に応じて置換されたピロリル、必要に応じて置換されたチオフェニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたイミダゾリル、必要に応じて置換されたイソオキサゾリル、必要に応じて置換されたピラゾリル、必要に応じて置換されたイソチアゾリル、必要に応じて置換されたナフチル、必要に応じて置換されたキノリニル、必要に応じて置換されたイソキノリニル、必要に応じて置換されたキノキサリニル、必要に応じて置換されたベンゾチアゾリル、必要に応じて置換されたベンゾチオフェニル、必要に応じて置換されたベンゾフラニル、必要に応じて置換されたインドリルおよび必要に応じて置換されたベンゾイミダゾリルからなる群からそれぞれ独立して選択され；
該化合物は、ＸがＮである
【化５】
2009517390.tif 000030
ではない；
化合物。
【請求項５】
式：
【化６】
2009517390.tif 000031
の化合物であって、
式中、ｐ３８γに対する該化合物の結合の際に、Ｒ４が、ｐ３８γ  Ｍｅｔ１０９  スルフヒドリル部分から５Å以上かつ２５Å以下離れて位置する基である、
化合物。
【請求項６】
Ｒ４が、Ｈ、ハロ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、必要に応じて置換されたＣ１−６アルキル、必要に応じて置換されたＣ３−７シクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ４−１０アルキルシクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ２−６アルケニル、必要に応じて置換されたＣ１−６アルコキシ、必要に応じて置換されたＣ６またはＣ１０アリール、必要に応じて置換されたピリジニル、必要に応じて置換されたピリミジニル、必要に応じて置換されたチエニル、必要に応じて置換されたフラニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたフェノキシ、必要に応じて置換されたチオフェノキシ、必要に応じて置換されたスルホンアミド、必要に応じて置換された尿素、必要に応じて置換されたチオ尿素、必要に応じて置換されたアミド、必要に応じて置換されたケト、必要に応じて置換されたカルボキシル、必要に応じて置換されたカルバミル、必要に応じて置換されたスルフィド、必要に応じて置換されたスルホキシド、必要に応じて置換されたスルホン、必要に応じて置換されたアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアルキルアミノ、必要に応じて置換されたアルキルカルボキシ、必要に応じて置換されたカルボニル、必要に応じて置換されたスピロ環式シクロアルキル、必要に応じて置換されたピラジニル、必要に応じて置換されたピリダジニル、必要に応じて置換されたピロリル、必要に応じて置換されたチオフェニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたイミダゾリル、必要に応じて置換されたイソオキサゾリル、必要に応じて置換されたピラゾリル、必要に応じて置換されたイソチアゾリル、必要に応じて置換されたナフチル、必要に応じて置換されたキノリニル、必要に応じて置換されたイソキノリニル、必要に応じて置換されたキノキサリニル、必要に応じて置換されたベンゾチアゾリル、必要に応じて置換されたベンゾチオフェニル、必要に応じて置換されたベンゾフラニル、必要に応じて置換されたインドリルおよび必要に応じて置換されたベンゾイミダゾリルからなる群から選択される、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
個体における炎症性疾患または線維症疾患を処置または予防する方法であって、該方法が、請求項１に記載の化合物の有効量を該個体に投与する工程を含む、方法。
【請求項８】
個体における炎症性疾患または線維症疾患を処置または予防する方法であって、該方法が、請求項２に記載の化合物の有効量を該個体に投与する工程を含む、方法。
【請求項９】
個体における炎症性疾患または線維症疾患を処置または予防する方法であって、該方法が、請求項３に記載の化合物の有効量を該個体に投与する工程を含む、方法。
【請求項１０】
個体における炎症性疾患または線維症疾患を処置または予防する方法であって、該方法が、請求項４に記載の化合物の有効量を該個体に投与する工程を含む、方法。
【請求項１１】
個体における炎症性疾患または線維症疾患を処置または予防する方法であって、該方法が、請求項５に記載の化合物の有効量を該個体に投与する工程を含む、方法。
【請求項１２】
個体における炎症性疾患または線維症疾患を処置または予防する方法であって、該方法が、請求項６に記載の化合物の有効量を該個体に投与する工程を含む、方法。
【請求項１３】
前記炎症性状態または前記線維症状態が、線維症、特発性肺繊維症、慢性閉塞性肺疾患、炎症性肺線維症、関節リウマチ；リウマチ様脊椎炎；変形性関節症；痛風；敗血症；敗血症性ショック；内毒素性ショック；グラム陰性敗血症；トキシックショック症候群；顔面筋疼痛症候群（ＭＰＳ）；細菌性赤痢；喘息；成人呼吸窮迫症候群；炎症性腸疾患；クローン病；乾癬；湿疹；潰瘍性大腸炎；糸球体腎炎；強皮症；慢性甲状腺炎；グレーブス病；オーモンド病；自己免疫性胃炎；重症筋無力症；自己免疫性溶血性貧血；自己免疫性好中球減少症；血小板減少症；膵線維症；慢性活動性肝炎；肝線維症；腎疾患；腎線維症；過敏性大腸症候群；発熱；再狭窄；大脳マラリア；脳卒中および虚血傷害；神経外傷；アルツハイマー病；ハンチントン病；パーキンソン病；急性疼痛および慢性疼痛；アレルギー；心肥大、慢性心不全；急性冠動脈症候群；悪液質；マラリア；ハンセン病；リーシュマニア症；ライム病；ライター症候群；急性滑膜炎；筋肉変性、滑液包炎；腱炎；腱鞘炎；ヘルニア様の、破裂性椎間板症候群または脱出性椎間板症候群；大理石骨病；血栓症；珪肺症；肺サルコイドーシス；骨吸収疾患；癌；多発性硬化症、狼瘡；線維筋痛；ＡＩＤＳ；帯状ヘルペスウイルス感染、単純ヘルペスウイルス感染；インフルエンザウイルス；重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）；サイトメガロウイルス感染；および糖尿病からなる群から選択される、請求項７〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
ストレス活性化プロテインキナーゼ（ＳＡＰＫ）系を調節する方法であって、
化合物にｐ３８マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）を接触させる工程；
を含み、
該化合物が、ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０値を示し；そして
該化合物が示すｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０値が、該ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての該ＩＣ５０値よりも少なくとも２倍高い；
方法。
【請求項１５】
前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０値を示す、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１００ｎＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０値を示す、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
ストレス活性化プロテインキナーゼ（ＳＡＰＫ）系を調節する方法であって、
化合物にｐ３８マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）を接触させる工程；
を含み、
該化合物が、ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０値を示し；そして
該化合物が示すｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０値が、該ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての該ＩＣ５０値よりも少なくとも５倍高い；
方法。
【請求項１８】
前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０値を示す、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１００ｎＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０値を示す、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
ストレス活性化プロテインキナーゼ（ＳＡＰＫ）系を調節する方法であって、
化合物にｐ３８マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）を接触させる工程；
を含み、
該化合物が、ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０値を示し；そして
該化合物が示すｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０値が、該ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての該ＩＣ５０値よりも少なくとも１０倍高い；
方法。
【請求項２１】
前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０値を示す、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１００ｎＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０値を示す、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
ストレス活性化プロテインキナーゼ（ＳＡＰＫ）系を調節する方法であって、
化合物にｐ３８マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）を接触させる工程；
を含み、
該化合物が、ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０値を示し；そして
該化合物が、ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約１５００μＭの範囲のＩＣ５０値を示す；
方法。
【請求項２４】
前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０値を示し；そして
該化合物が、前記ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０値を示す；
請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１００ｎＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０値を示し；そして
該化合物が、前記ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害について約１００ｎＭ〜約１５００μＭの範囲のＩＣ５０値を示す；
請求項２３に記載の方法。
【請求項２６】
前記接触させる工程が、ＳＡＰＫを調節する濃度で実施され、前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約５０ｐＭ〜約１μＭの範囲のＩＣ５０値を示す、請求項１４〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記接触させる工程が、ＳＡＰＫを調節する濃度で実施され、前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約５０ｐＭ〜約２００ｎＭの範囲のＩＣ５０値を示す、請求項１４〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
被験体に前記化合物を投与する工程をさらに含む、請求項１４〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
被験体の疾患状態を処置または予防する方法であって、
炎症性状態または線維症状態の危険性があるかあるいはこのような状態を有する被験体を同定する工程；および
該炎症性状態または該線維症状態を処置または予防するのに有効な量の化合物を該被験体に投与する工程；
を含み、
該化合物が、ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示し；そして
該化合物が示すｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、該ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての該ＩＣ５０よりも少なくとも２倍高い；
方法。
【請求項３０】
前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項２９に記載の方法。
【請求項３１】
前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１００ｎＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項２９に記載の方法。
【請求項３２】
被験体の疾患状態を処置または予防する方法であって、
炎症性状態または線維症状態の危険性があるかあるいはこのような状態を有する被験体を同定する工程；および
該炎症性状態または該線維症状態を処置または予防するのに有効な量の化合物を該被験体に投与する工程；
を含み、
該化合物が、ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示し；そして
該化合物が示すｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、該ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての該ＩＣ５０よりも少なくとも５倍高い；
方法。
【請求項３３】
前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１００ｎＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項３２に記載の方法。
【請求項３５】
被験体の疾患状態を処置または予防する方法であって、
炎症性状態または線維症状態の危険性があるかあるいはこのような状態を有する被験体を同定する工程；および
該炎症性状態または該線維症状態を処置または予防するのに有効な量の化合物を該被験体に投与する工程；
を含み、
該化合物が、ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示し；そして
該化合物が示すｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、該ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての該ＩＣ５０よりも少なくとも１０倍高い；
方法。
【請求項３６】
前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１００ｎＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記投与された化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約５０ｐＭ〜約１μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項２９〜３７のいずれかに記載の方法。
【請求項３９】
前記投与された化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約５０ｐＭ〜約２００ｎＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項２９〜３７のいずれかに記載の方法。
【請求項４０】
薬学的に活性な化合物を同定する方法であって、
化合物のライブラリを提供する工程；
ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害について該ライブラリ由来の複数の化合物をアッセイする工程；および
ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について該ライブラリ由来の複数の化合物をアッセイする工程；および
該複数の化合物から少なくとも１種の化合物を選択する工程であって、該化合物が、該ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、工程；
を含み、
該化合物が示す該ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、該ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての該ＩＣ５０よりも少なくとも１０倍高い；
方法。
【請求項４１】
前記少なくとも１種の化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記少なくとも１種の化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１００ｎＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
薬学的に活性な化合物を同定する方法であって、
化合物のライブラリを提供する工程；
ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害について前記ライブラリ由来の複数の化合物をアッセイする工程；および
ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について前記ライブラリ由来の複数の化合物をアッセイする工程；および
該複数の化合物から少なくとも１種の化合物を選択する工程であって、該化合物が、該ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、工程；
を含み、
該化合物が示す該ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、該ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての該ＩＣ５０よりも少なくとも５倍高い；
方法。
【請求項４４】
前記少なくとも１種の化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
前記少なくとも１種の化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１００ｎＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項４３に記載の方法。
【請求項４６】
薬学的に活性な化合物を同定する方法であって、
化合物のライブラリを提供する工程；
ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害について該ライブラリ由来の複数の化合物をアッセイする工程；および
ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について該ライブラリ由来の複数の化合物をアッセイする工程；および
該複数の化合物から少なくとも１種の化合物を選択する工程であって、該化合物が、該ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、工程；
を含み、
該化合物が示す該ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、該ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての該ＩＣ５０よりも少なくとも２倍高い；
方法。
【請求項４７】
前記少なくとも１種の化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記少なくとも１種の化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１００ｎＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
薬学的に活性な化合物を同定する方法であって、
化合物のライブラリを提供する工程；
ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について該ライブラリ由来の複数の化合物をアッセイする工程；および
該複数の化合物から少なくとも１種の化合物を選択する工程であって、該化合物が、該ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、工程；
を含み、
該化合物が示すｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、該ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての該ＩＣ５０よりも少なくとも１０倍高い；
方法。
【請求項５０】
前記少なくとも１種の化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
前記少なくとも１種の化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１００ｎＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項４９に記載の方法。
【請求項５２】
薬学的に活性な化合物を同定する方法であって、
化合物のライブラリを提供する工程；
ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について該ライブラリ由来の複数の化合物をアッセイする工程；および
該複数の化合物から少なくとも１種の化合物を選択する工程であって、該化合物が、該ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、工程；
を含み、
該化合物が示すｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、該ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての該ＩＣ５０よりも少なくとも５倍高い；
方法。
【請求項５３】
前記少なくとも１種の化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記少なくとも１種の化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１００ｎＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項５２に記載の方法。
【請求項５５】
薬学的に活性な化合物を同定する方法であって、
化合物のライブラリを提供する工程；
ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について該ライブラリ由来の複数の化合物をアッセイする工程；および
該複数の化合物から少なくとも１種の化合物を選択する工程であって、該化合物が、該ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、工程；
を含み、
該化合物が示すｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、該ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての該ＩＣ５０よりも少なくとも２倍高い；
方法。
【請求項５６】
前記少なくとも１種の化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
前記少なくとも１種の化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１００ｎＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
薬学的に活性な化合物を同定する方法であって、
化合物のライブラリを提供する工程；
ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害について該ライブラリ由来の複数の化合物をアッセイする工程；および
該複数の化合物から少なくとも１種の化合物を選択する工程であって、該化合物が、該ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約１５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、工程；
を含み、そして、
該化合物が示す該ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０よりも少なくとも１０倍高い；
方法。
【請求項５９】
前記少なくとも１種の化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項５８に記載の方法。
【請求項６０】
前記少なくとも１種の化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１００ｎＭ〜約１５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項５８に記載の方法。
【請求項６１】
薬学的に活性な化合物を同定する方法であって、
化合物のライブラリを提供する工程；
ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害について該ライブラリ由来の複数の化合物をアッセイする工程；および
該複数の化合物から少なくとも１種の化合物を選択する工程であって、該化合物が、該ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約１５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、工程；
を含み、そして、
該化合物が示す該ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０よりも少なくとも５倍高い；
方法。
【請求項６２】
前記少なくとも１種の化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
前記少なくとも１種の化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１００ｎＭ〜約１５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項６１に記載の方法。
【請求項６４】
薬学的に活性な化合物を同定する方法であって、
化合物のライブラリを提供する工程；
ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害について該ライブラリ由来の複数の化合物をアッセイする工程；および
該複数の化合物から少なくとも１種の化合物を選択する工程であって、該化合物が、該ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約１５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、工程；
を含み、そして、
該化合物が示す該ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０よりも少なくとも２倍高い；
方法。
【請求項６５】
前記少なくとも１種の化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項６４に記載の方法。
【請求項６６】
前記少なくとも１種の化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１００ｎＭ〜約１５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、請求項６４に記載の方法。
【請求項６７】
接触させる工程が、ＳＡＰＫを調節する濃度で実施され、接触する化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約５０ｐＭ〜約１μＭの範囲のＩＣ５０値を示す、請求項４０〜６６のいずれかに記載の方法。
【請求項６８】
接触させる工程が、ＳＡＰＫを調節する濃度で実施され、接触する化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約５０ｐＭ〜約２００ｎＭの範囲のＩＣ５０値を示す、請求項４０〜６６のいずれかに記載の方法。
【請求項６９】
前記選択された化合物の哺乳動物毒性を決定する工程をさらに含む、請求項４０〜６８のいずれかに記載の方法。
【請求項７０】
試験被験体に前記選択された化合物を投与する工程をさらに含む、請求項４０〜６９のいずれかに記載の方法。
【請求項７１】
前記試験被験体が、炎症性状態または線維症状態を有するかあるいはこのような状態の危険性がある、請求項７０に記載の方法。
【請求項７２】
前記化合物が、
【化７−１】
2009517390.tif 000032
【化７−２】
2009517390.tif 000033
【化７−３】
2009517390.tif 000034
およびピルフェニドンからなる群から選択されない、請求項１４〜７１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７３】
ａ）請求項１または請求項２または請求項３または請求項４または請求項５または請求項６に記載の化合物；および
ｂ）薬学的に許容されるキャリア；
を含む、薬学的組成物。
【請求項７４】
本明細書に記載の疾患または状態を処置または予防する方法であって、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物の有効量を個体に投与する工程を含む、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、キナーゼｐ３８の活性上昇に関連するものを含めた種々の線維症状態を処置する際に有用な化合物および方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
多くの慢性状態および急性状態は、炎症反応の摂動に関連することが確認されている。ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＴＮＦαを含めた数多くのサイトカインがこの反応に関与すると考えられる。炎症の調節におけるこれらのサイトカインの活性は、細胞シグナル伝達経路における酵素、すなわちｐ３８として一般的に知られ、さらにＳＡＰＫ、ＣＳＢＰおよびＲＫとしても知られるＭＡＰキナーゼファミリーのメンバーの活性化に関連し得ると考えられる。
【０００３】
ＮＰＣ  ３１１６９、ＳＢ２３９０６３、ＳＢ２０３５８０、ＦＲ−１６７６５３およびピルフェニドン（ｐｉｒｆｅｎｉｄｏｎｅ）などのｐ３８のいくつかの阻害剤はインビトロおよび／またはインビボで試験され、そして炎症反応の調節に効果的であることが明らかにされている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
したがって、炎症性肺線維症などの種々の炎症性の状態を処置する安全かつ有効な薬物が依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
一実施形態においては、ストレス活性化プロテインキナーゼ（ＳＡＰＫ）系を調節する方法であって、
化合物にｐ３８マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）を接触させる工程；
を含み、
前記化合物が前記ｐ３８γの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示し；そして
前記化合物が示す前記ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての前記ＩＣ５０よりも少なくとも２倍、５倍または１０倍高い、
方法が提供される。
【０００６】
別の実施形態においては、ストレス活性化プロテインキナーゼ（ＳＡＰＫ）系を調節する方法であって、
化合物にｐ３８マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）を接触させる工程；
を含み、
前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０値を示し；そして
前記化合物が、前記ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約１５００μＭの範囲のＩＣ５０値を示す、
方法が提供される。
【０００７】
別の実施形態においては、被験体の疾患状態を処置または予防する方法であって、
線維症状態の危険性があるかもしくはこのような状態を有する被験体を同定する工程；
前記線維症状態を処置または予防するのに有効な量の化合物を被験体に投与する工程、
を含み、
前記化合物がｐ３８γの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示し；そして
前記化合物が示す前記ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての前記ＩＣ５０よりも少なくとも２倍、５倍または１０倍高い、
方法が提供される。
【０００８】
別の実施形態においては、薬学的に活性な化合物を同定する方法であって、
化合物のライブラリを提供する工程；
ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害について前記ライブラリ由来の複数の化合物をアッセイする工程；および
ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について前記ライブラリ由来の複数の化合物をアッセイする工程；および
前記複数の化合物から少なくとも１種の化合物を選択する工程であって、前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、工程；
を含み、そして
前記化合物が示す前記ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての前記ＩＣ５０よりも少なくとも２倍、５倍または１０倍高い、
方法が提供される。
【０００９】
別の実施形態においては、薬学的に活性な化合物を同定する方法であって、
化合物のライブラリを提供する工程；
ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について前記ライブラリ由来の複数の化合物をアッセイする工程；および
前記複数の化合物から少なくとも１種の化合物を選択する工程であって、前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、工程；
を含み、そして
前記化合物が示す前記ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての前記ＩＣ５０よりも少なくとも２倍、５倍または１０倍高い、
方法が提供される。
【００１０】
別の実施形態においては、薬学的に活性な化合物を同定する方法であって、
化合物のライブラリを提供する工程；
ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害について前記ライブラリ由来の複数の化合物をアッセイする工程；および
前記複数の化合物から少なくとも１種の化合物を選択する工程であって、前記化合物が、前記ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約１５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す、工程；
を含み、そして
前記化合物が示す前記ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての前記ＩＣ５０よりも少なくとも２倍、５倍または１０倍高い、
方法が提供される。
【００１１】
一実施形態においては、ストレス活性化プロテインキナーゼ（ＳＡＰＫ）系を調節する方法であって、
化合物にｐ３８マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）を接触させる工程；
を含み、
前記化合物が前記ｐ３８γの阻害について約１００μＭ〜約１０００μＭの範囲のＩＣ５０値を示し；そして
前記化合物が示す前記ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての前記ＩＣ５０よりも少なくとも２倍高い、
方法が提供される。
【００１２】
別の実施形態においては、被験体の疾患状態を処置または予防する方法であって、
線維症状態の危険性があるかもしくはこのような状態を有する被験体を同定する工程；
前記線維症状態を処置または予防するのに有効な量の化合物を前記被験体に投与する工程；
を含み、
前記化合物がｐ３８γの阻害について約１００μＭ〜約１０００μＭの範囲のＩＣ５０を示し；そして
前記化合物が示す前記ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての前記ＩＣ５０よりも少なくとも１０倍高い、
方法が提供される。
【００１３】
別の実施形態においては、薬学的に活性な化合物を同定する方法であって、
化合物のライブラリを提供する工程；
ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害について前記ライブラリ由来の複数の化合物をアッセイする工程；および
ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について前記ライブラリ由来の複数の化合物をアッセイする工程；および
前記複数の化合物から少なくとも１種の化合物を選択する工程であって、前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示す、工程；
を含み、そして
前記化合物が示す前記ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての前記ＩＣ５０よりも少なくとも１０倍高い、
方法が提供される。
【００１４】
別の実施形態においては、薬学的に活性な化合物を同定する方法であって、
化合物のライブラリを提供する工程；
ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について前記ライブラリ由来の複数の化合物をアッセイする工程；および
前記複数の化合物から少なくとも１種の化合物を選択する工程であって、前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示す、工程；
を含み、そして
前記化合物が示す前記ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての前記ＩＣ５０よりも少なくとも１０倍高い、
方法が提供される。
【００１５】
別の実施形態においては、薬学的に活性な化合物を同定する方法であって、
化合物のライブラリを提供する工程；
ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害について前記ライブラリ由来の複数の化合物をアッセイする工程；および
前記複数の化合物から少なくとも１種の化合物を選択する工程であって、前記化合物が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示す、工程；
を含み、そして
前記化合物が示す前記ｐ３８α  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０が、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についての前記ＩＣ５０よりも少なくとも１０倍高い、
方法が提供される。
【００１６】
上記実施形態の一部において、前記化合物は、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示す。他の実施形態において、前記化合物は、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１００ｎＭ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す。
【００１７】
上記実施形態の一部において、前記化合物は、
【００１８】
【化８−１】
2009517390.tif 000003
【００１９】
【化８−２】
2009517390.tif 000004
【００２０】
【化８−３】
2009517390.tif 000005
およびピルフェニドンからなる群から選択されない。
【００２１】
別の実施形態においては、種類Ｉの式：
【００２２】
【化９】
2009517390.tif 000006
の化合物であって、式中、
Ｒが、Ｈ、ハロ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、必要に応じて置換されたＣ１−６アルキル、必要に応じて置換されたＣ３−７シクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ４−１０アルキルシクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ２−６アルケニル、必要に応じて置換されたＣ１−６アルコキシ、必要に応じて置換されたＣ６またはＣ１０アリール、必要に応じて置換されたピリジニル、必要に応じて置換されたピリミジニル、必要に応じて置換されたチエニル、必要に応じて置換されたフラニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたフェノキシ、必要に応じて置換されたチオフェノキシ、必要に応じて置換されたスルホンアミド、必要に応じて置換された尿素、必要に応じて置換されたチオ尿素、必要に応じて置換されたアミド、必要に応じて置換されたケト、必要に応じて置換されたカルボキシル、必要に応じて置換されたカルバミル、必要に応じて置換されたスルフィド、必要に応じて置換されたスルホキシド、必要に応じて置換されたスルホン、必要に応じて置換されたアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアルキルアミノ、必要に応じて置換されたアルキルカルボキシ、必要に応じて置換されたカルボニル、必要に応じて置換されたスピロ環式シクロアルキル、必要に応じて置換されたピラジニル、必要に応じて置換されたピリダジニル、必要に応じて置換されたピロリル、必要に応じて置換されたチオフェニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたイミダゾリル、必要に応じて置換されたイソオキサゾリル、必要に応じて置換されたピラゾリル、必要に応じて置換されたイソチアゾリル、必要に応じて置換されたナフチル、必要に応じて置換されたキノリニル、必要に応じて置換されたイソキノリニル、必要に応じて置換されたキノキサリニル、必要に応じて置換されたベンゾチアゾリル、必要に応じて置換されたベンゾチオフェニル、必要に応じて置換されたベンゾフラニル、必要に応じて置換されたインドリルおよび必要に応じて置換されたベンゾイミダゾリルからなる群から選択される、
化合物；
あるいは前記化合物の薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物またはプロドラッグが提供される。
【００２３】
一実施形態において、種類Ｉの化合物は、ｐ３８γの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示す。
【００２４】
別の実施形態は、種類ＩＩの式：
【００２５】
【化１０】
2009517390.tif 000007
の化合物であって、式中、
Ｒ４が、Ｈ、ハロ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、必要に応じて置換されたＣ１−６アルキル、必要に応じて置換されたＣ３−７シクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ４−１０アルキルシクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ２−６アルケニル、必要に応じて置換されたＣ１−６アルコキシ、必要に応じて置換されたＣ６またはＣ１０アリール、必要に応じて置換されたピリジニル、必要に応じて置換されたピリミジニル、必要に応じて置換されたチエニル、必要に応じて置換されたフラニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたフェノキシ、必要に応じて置換されたチオフェノキシ、必要に応じて置換されたスルホンアミド、必要に応じて置換された尿素、必要に応じて置換されたチオ尿素、必要に応じて置換されたアミド、必要に応じて置換されたケト、必要に応じて置換されたカルボキシル、必要に応じて置換されたカルバミル、必要に応じて置換されたスルフィド、必要に応じて置換されたスルホキシド、必要に応じて置換されたスルホン、必要に応じて置換されたアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアルキルアミノ、必要に応じて置換されたアルキルカルボキシ、必要に応じて置換されたカルボニル、必要に応じて置換されたスピロ環式シクロアルキル、必要に応じて置換されたピラジニル、必要に応じて置換されたピリダジニル、必要に応じて置換されたピロリル、必要に応じて置換されたチオフェニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたイミダゾリル、必要に応じて置換されたイソオキサゾリル、必要に応じて置換されたピラゾリル、必要に応じて置換されたイソチアゾリル、必要に応じて置換されたナフチル、必要に応じて置換されたキノリニル、必要に応じて置換されたイソキノリニル、必要に応じて置換されたキノキサリニル、必要に応じて置換されたベンゾチアゾリル、必要に応じて置換されたベンゾチオフェニル、必要に応じて置換されたベンゾフラニル、必要に応じて置換されたインドリルおよび必要に応じて置換されたベンゾイミダゾリルからなる群から選択される、
化合物；
あるいは前記化合物の薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物またはプロドラッグを提供する。
【００２６】
一実施形態において、種類ＩＩの化合物は、ｐ３８γの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示す。
【００２７】
別の実施形態は、種類ＩＩＩの式：
【００２８】
【化１１】
2009517390.tif 000008
の化合物であって、式中、
Ｒ２が、Ｈ、ハロ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、必要に応じて置換されたＣ１−６アルキル、必要に応じて置換されたＣ３−７シクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ４−１０アルキルシクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ２−６アルケニル、必要に応じて置換されたＣ１−６アルコキシ、必要に応じて置換されたＣ６またはＣ１０アリール、必要に応じて置換されたピリジニル、必要に応じて置換されたピリミジニル、必要に応じて置換されたチエニル、必要に応じて置換されたフラニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたフェノキシ、必要に応じて置換されたチオフェノキシ、必要に応じて置換されたスルホンアミド、必要に応じて置換された尿素、必要に応じて置換されたチオ尿素、必要に応じて置換されたアミド、必要に応じて置換されたケト、必要に応じて置換されたカルボキシル、必要に応じて置換されたカルバミル、必要に応じて置換されたスルフィド、必要に応じて置換されたスルホキシド、必要に応じて置換されたスルホン、必要に応じて置換されたアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアルキルアミノ、必要に応じて置換されたアルキルカルボキシ、必要に応じて置換されたカルボニル、必要に応じて置換されたスピロ環式シクロアルキル、必要に応じて置換されたピラジニル、必要に応じて置換されたピリダジニル、必要に応じて置換されたピロリル、必要に応じて置換されたチオフェニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたイミダゾリル、必要に応じて置換されたイソオキサゾリル、必要に応じて置換されたピラゾリル、必要に応じて置換されたイソチアゾリル、必要に応じて置換されたナフチル、必要に応じて置換されたキノリニル、必要に応じて置換されたイソキノリニル、必要に応じて置換されたキノキサリニル、必要に応じて置換されたベンゾチアゾリル、必要に応じて置換されたベンゾチオフェニル、必要に応じて置換されたベンゾフラニル、必要に応じて置換されたインドリルおよび必要に応じて置換されたベンゾイミダゾリルからなる群から選択され；および
Ｒ３が、Ｈ、ハロ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、必要に応じて置換されたＣ１−６アルキル、必要に応じて置換されたＣ３−７シクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ４−１０アルキルシクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ２−６アルケニル、必要に応じて置換されたＣ１−６アルコキシ、必要に応じて置換されたＣ６またはＣ１０アリール、必要に応じて置換されたピリジニル、必要に応じて置換されたピリミジニル、必要に応じて置換されたチエニル、必要に応じて置換されたフラニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたフェノキシ、必要に応じて置換されたチオフェノキシ、必要に応じて置換されたスルホンアミド、必要に応じて置換された尿素、必要に応じて置換されたチオ尿素、必要に応じて置換されたアミド、必要に応じて置換されたケト、必要に応じて置換されたカルボキシル、必要に応じて置換されたカルバミル、必要に応じて置換されたスルフィド、必要に応じて置換されたスルホキシド、必要に応じて置換されたスルホン、必要に応じて置換されたアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアルキルアミノ、必要に応じて置換されたアルキルカルボキシ、必要に応じて置換されたカルボニル、必要に応じて置換されたスピロ環式シクロアルキル、必要に応じて置換されたピラジニル、必要に応じて置換されたピリダジニル、必要に応じて置換されたピロリル、必要に応じて置換されたチオフェニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたイミダゾリル、必要に応じて置換されたイソオキサゾリル、必要に応じて置換されたピラゾリル、必要に応じて置換されたイソチアゾリル、必要に応じて置換されたナフチル、必要に応じて置換されたキノリニル、必要に応じて置換されたイソキノリニル、必要に応じて置換されたキノキサリニル、必要に応じて置換されたベンゾチアゾリル、必要に応じて置換されたベンゾチオフェニル、必要に応じて置換されたベンゾフラニル、必要に応じて置換されたインドリルおよび必要に応じて置換されたベンゾイミダゾリル、からなる群から選択される、
化合物；
あるいは前記化合物の薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物またはプロドラッグを提供する。
【００２９】
一実施形態において、種類ＩＩＩの化合物は、ｐ３８γの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示す。
【００３０】
一実施形態において、種類ＩＩＩの化合物は、１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−３−［４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）ナフタレン−１−イル］尿素（ＢＩＲＢ  ７９６）ではない。
【００３１】
別の実施形態は、種類ＩＶの式：
【００３２】
【化１２】
2009517390.tif 000009
の化合物であって、式中、
Ｒ５およびＲ６が、Ｈ、ハロ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、必要に応じて置換されたＣ１〜６アルキル、必要に応じて置換されたＣ３〜７シクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ４〜１０アルキルシクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ２〜６アルケニル、必要に応じて置換されたＣ１〜６アルコキシ、必要に応じて置換されたＣ６またはＣ１０アリール、必要に応じて置換されたピリジニル、必要に応じて置換されたピリミジニル、必要に応じて置換されたチエニル、必要に応じて置換されたフラニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたフェノキシ、必要に応じて置換されたチオフェノキシ、必要に応じて置換されたスルホンアミド、必要に応じて置換された尿素、必要に応じて置換されたチオ尿素、必要に応じて置換されたアミド、必要に応じて置換されたケト、必要に応じて置換されたカルボキシル、必要に応じて置換されたカルバミル、必要に応じて置換されたスルフィド、必要に応じて置換されたスルホキシド、必要に応じて置換されたスルホン、必要に応じて置換されたアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアルキルアミノ、必要に応じて置換されたアルキルカルボキシ、必要に応じて置換されたカルボニル、必要に応じて置換されたスピロ環式シクロアルキル、必要に応じて置換されたピラジニル、必要に応じて置換されたピリダジニル、必要に応じて置換されたピロリル、必要に応じて置換されたチオフェニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたイミダゾリル、必要に応じて置換されたイソオキサゾリル、必要に応じて置換されたピラゾリル、必要に応じて置換されたイソチアゾリル、必要に応じて置換されたナフチル、必要に応じて置換されたキノリニル、必要に応じて置換されたイソキノリニル、必要に応じて置換されたキノキサリニル、必要に応じて置換されたベンゾチアゾリル、必要に応じて置換されたベンゾチオフェニル、必要に応じて置換されたベンゾフラニル、必要に応じて置換されたインドリルおよび必要に応じて置換されたベンゾイミダゾリルからなる群からそれぞれ独立して選択される
化合物；
あるいは前記化合物の薬学的に許容される塩、エステル、溶媒和物またはプロドラッグを提供する。
【００３３】
一実施形態において、種類ＩＶの化合物は、ｐ３８γの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示す。
【００３４】
一実施形態において、種類ＩＶの化合物は、ＸがＮである
【００３５】
【化１３】
2009517390.tif 000010
ではない。
【００３６】
これらのおよび他の実施形態については、以下でさらに詳細に記載する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
（好ましい実施形態の詳細な説明）
現在、キナーゼｐ３８の活性上昇に関連する種々の障害の処置における高い治療効果は、ｐ３８αに関する阻害活性も有する強力なｐ３８γキナーゼ阻害剤化合物を使用して達成され得ることが発見されている。さらに、キナーゼｐ３８αの活性を低下させずにキナーゼｐ３８γおよびキナーゼｐ３８αの両方の活性を、キナーゼｐ３８の活性上昇に関連する障害を有する被験体に対する投与時に望ましくない副作用が認められる程度にまで低下させることは、修飾によりｐ３８γに関する阻害活性が生じるようにｐ３８αの阻害剤を修飾することによって達成可能であることが発見されている。
【００３８】
その結果、一実施形態においては、化合物にｐ３８マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）を接触させることによってストレス活性化プロテインキナーゼ（ＳＡＰＫ）系を調節する方法が提供される。好ましい化合物は、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭの範囲のＩＣ５０を示し、好ましくは前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約５０ｐＭ〜約１μＭの範囲のＩＣ５０を示し、より好ましくは前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約５０ｐＭ〜約２００ｎＭの範囲のＩＣ５０を示す。また、好ましい化合物が示すｐ３８αに関するＩＣ５０値は、ｐ３８γに関するＩＣ５０値よりも少なくとも２倍である。
【００３９】
「マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）」は、多くの細胞事象の調節に関与する進化的に保存されたセリン／スレオニンキナーゼである。いくつかのＭＡＰＫ群は、哺乳類細胞において同定されており、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）、ｐ３８およびＳＡＰＫ／ＪＮＫを含む。ＭＡＰＫは、その特異的なＭＡＰＫキナーゼ（ＭＡＰＫＫ）によって：ＥＲＫはＭＥＫ１およびＭＥＫ２によって、ｐ３８はＭＫＫ３およびＭＫＫ６によって、ならびにＳＡＰＫ／ＪＮＫはＳＥＫ１（ＭＫＫ４としても知られる）およびＭＫＫ７（ＳＥＫ２）によって、活性化されると考えられる。これらのＭＡＰＫＫはまた、Ｒａｆ、ＭＬＫ、ＭＥＫＫ１、ＴＡＫ１およびＡＳＫ１などの各種ＭＡＰＫＫキナーゼ（ＭＡＰＫＫＫ）によっても活性化され得る。
【００４０】
細胞ストレス（酸化ストレス、ＤＮＡ損傷、熱または浸透圧ショック、紫外線照射、虚血−再灌流）、外因性薬剤（アニソマイシン、亜ヒ酸ナトリウム、リポポリサッカライド、ＬＰＳ）または炎症誘発性サイトカイン（ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１β）によって活性化される場合に細胞質または核のいずれかの中の転写因子などの他のキナーゼまたは核タンパク質をリン酸化および活性化し得る、少なくとも１２個の、クローン化され、高度に保存されたプロリン誘導セリンスレオニンキナーゼが、ＭＡＰＫネットワークには必要であると考えられる（Ｕｎｄｅｒｗｏｏｄ，ｅｔ  ａｌ．，２００１  Ｐｒｏｇ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｒｅｓ  ３１：３４２−３４５の図１を参照）。
ｐ３８  ＭＡＰＫ
本明細書で使用される「ｐ３８  ＭＡＰＫ」は、ストレス活性化プロテインキナーゼファミリーのメンバーであって、ストレス活性化プロテインキナーゼファミリーには少なくとも４つのアイソフォーム（α、β、γ、δ）があり、その内のいくつかは、炎症反応および組織リモデリングに重大な意味を持つプロセスにおいて重要であると考えられる（Ｌｅｅ，ｅｔ  ａｌ．，２０００  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．４７：１８５−２０１）。単球およびマクロファージ内の主要なキナーゼであるｐ３８αおよびｐ３８βは、ｐ３８γ（骨格筋）またはｐ３８δ（精巣、膵臓、前立腺、小腸、ならびに唾液腺や脳下垂体や副腎の中）よりも幅広く発現すると思われる。ｐ３８ＭＡＰキナーゼの基質はいくつかが同定されおり、これには他のキナーゼ（ＭＡＰＫＡＰ  Ｋ２／３、ＰＲＡＫ、ＭＮＫ  １／２、ＭＳＫ１／ＲＬＰＫ、ＲＳＫ−Ｂ）、転写因子（ＡＴＦ２／６、ミオサイトエンハンサー因子２、核転写因子−β、ＣＨＯＰ／ＧＡＤＤ１５３、ＥｌｋｌおよびＳＡＰ−１Ａ１）およびサイトゾルタンパク質（スタスミン）が含まれ、それらの多くが生理的に重要なものである。
【００４１】
Ｊｉａｎｇ，Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９６  Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ２７１：ｌ７９２０−１７９２６では、ｐ３８−αに密接に関連する３７２−アミノ酸タンパク質としてのｐ３８βの特性評価が報告されている。ｐ３８αおよびｐ３８βはいずれも、炎症誘発性サイトカインおよび環境ストレスによって活性化され、ｐ３８βは、ＭＡＰキナーゼキナーゼ−６（ＭＫＫ６）および選択的に活性化された転写因子２によって選択的に活性化される。Ｋｕｍａｒ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９７  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍ２３５：５３３−５３８；およびＳｔｅｉｎ，Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９７  Ｊ．Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ２７２：１９５０９−１９５１７では、ｐ３８αに対して７３％の同一性を有する３６４のアミノ酸を含むｐ３８βの第２のアイソフォーム、すなわちｐ−３８β２が報告されている。ｐ３８βは炎症誘発性サイトカインおよび環境ストレスによって活性化されると考えられるが、ｐ３８αがより広範な組織に発現するのに対して、報告された第２のｐ３８βアイソフォーム、すなわちｐ３８β２は、中枢神経系（ＣＮＳ）、すなわち心臓および骨格筋で選択的に発現すると思われる。さらに、活性化された転写因子−２（ＡＴＦ−２）は、ｐ３８αよりもｐ３８β２に対して良好な基質であると考えられる。
【００４２】
ｐ３８γの同定は、Ｌｉ，Ｚ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９６  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍ２２８：３３４−３４０において、ならびにｐ３８δの同定は、Ｗａｎｇ，Ｘ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９７  Ｊ  Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ２７２：２３６６８−２３６７４；およびＫｕｍａｒ，Ｓ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９７  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍ２３５：５３３−５３８において報告されている。これらの２つのｐ３８アイソフォーム（γおよびδ）は、それらの組織発現パターン、基質利用、直接的および間接的な刺激に対する反応、ならびにキナーゼ阻害剤に対する感受性に基づいてＭＡＰＫファミリーの固有のサブセットを表す。ｐ３８αおよびβは密接な関連があるものの、より互いに密接に関連するγおよびδとは異なると考えられる。
【００４３】
一般的には、ｐ３８ＭＡＰキナーゼ経路は、同族の受容体に結合する、例えばサイトカイン、ケモカインまたはリポポリサッカライド（ＬＰＳ）などの特異的なリガンドによって活性化された、受容体チロシンキナーゼ、ケモカインまたはＧタンパク質結合受容体などの細胞表面受容体によって直接的または間接的に活性化される。その後、ｐ３８ＭＡＰキナーゼは、残基スレオニン１８０およびチロシン１８２においてリン酸化により活性化される。活性化後、ｐ３８ＭＡＰキナーゼは、炎症反応や細胞接着やタンパク質分解の原因となる炎症誘発性サイトカインや他のタンパク質の発現につながる転写因子をリン酸化および活性化する場合、タンパク質キナーゼを含む他の細胞内タンパク質をリン酸化し得、そして細胞核に転位し得る。例えば、マクロファージおよび単球などの骨髄性系統の細胞において、ＩＬ−１βおよびＴＮＦαの両方は、ｐ３８の活性化に応答して転写される。その後これらおよび他のサイトカインの翻訳および分泌が起こり、それにより、隣接組織内において、そして白血球の浸潤を経て、局所性または全身性の炎症反応が開始する。この反応は細胞ストレスに対する通常の生理反応の一部であるが、急性または慢性の細胞ストレスは、炎症誘発性サイトカインの過度または未調節あるいは過度および未調節の発現につながる。このことは、次に、組織の損傷につながり、これにより、多くの場合、疼痛や衰弱を招く。
【００４４】
肺胞マクロファージ内では、ｐ３８阻害剤、すなわちＳＢ２０３５８０によるｐ３８キナーゼの阻害によりサイトカイン遺伝子産物が減少する。炎症性サイトカイン（ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−４、ＩＬ−５）およびケモカイン（ＩＬ−８、ＲＡＮＴＥＳ、エオタキシン）は慢性気道炎症を調節または支持し得ると考えられる。気道炎症の多くの潜在的メディエーターの産生および作用は、ストレス活性化ＭＡＰキナーゼ系（ＳＡＰＫ）またはｐ３８キナーゼカスケードに依存していると思われる（Ｕｎｄｅｒｗｏｏｄ，ｅｔ  ａｌ．，２００１  Ｐｒｏｇ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｒｅｓ３１：３４２−３４５）。数多くの環境刺激によるｐ３８キナーゼ経路の活性化によって、認識された炎症性メディエーターが生成され、これらの炎症性メディエーターの産生は翻訳により調節されると考えられる。さらに、種々の炎症性メディエーターはｐ３８  ＭＡＰＫを活性化し、次に、ｐ３８  ＭＡＰＫによって、他のキナーゼまたは転写因子を含めたＭＡＰＫ系の下流標的が活性化され得、それにより肺内における炎症プロセスの増幅の可能性が生じる。
【００４５】
（ＭＡＰキナーゼのｐ３８群の下流基質）
ｐ３８αまたはｐ３８βのタンパク質キナーゼ基質：ＭＡＰキナーゼ活性化タンパク質キナーゼ２（ＭＡＰＫＡＰＫ２またはＭ２）、ＭＡＰキナーゼ相互作用性タンパク質キナーゼ（ＭＮＫ１）、ｐ３８調節／活性化キナーゼ（ＰＲＡＫ）、マイトジェンおよびストレス活性化プロテインキナーゼ（ＭＳＫ：ＲＳＫ−ＢまたはＲＬＰＫ）。
【００４６】
ｐ３８によって活性化される転写因子：活性化転写因子（ＡＴＦ）−１、２および６、ＳＲＦ付属タンパク質１（Ｓａｐ１）、ＣＨＯＰ（成長停止およびＤＮＡ損傷誘導性遺伝子１５３またはＧＡＤＤ１５３）、ｐ５３、Ｃ／ＥＢＰβ、ミオサイトエンハンサー因子２Ｃ（ＭＥＦ２Ｃ）、ＭＥＦ２Ａ、ＭＩＴＦ１、ＤＤＩＴ３、ＥＬＫ１、ＮＦＡＴ、および高移動群−ボックスタンパク質（ＨＢＰ１）。
【００４７】
ｐ３８に関する他の基質：ｃＰＬＡ２、Ｎａ＋／Ｈ＋エンハンサーアイソフォーム−１、Ｔａｕ、ケラチン８およびスタスミン。
【００４８】
ｐ３８経路によって調節される遺伝子：ｃ−ｊｕｎ、ｃ−ｆｏｓ、ｊｕｎＢ、ＩＬ−１、ＴＮＦ、ＩＬ６、ＩＬ−８、ＭＣＰ−１、ＶＣＡＭ−１、ｉＮＯＳ、ＰＰＡＲγ、シクロオキシゲナーゼ（ＣＯＸ）−２、コラゲナーゼ−１（ＭＭＰ−１）、コラゲナーゼ−３（ＭＭＰ−１３）、ＨＩＶ−ＬＴＲ、Ｆｇｌ−２、脳ナトリウム排泄増加性ペプチド（ＢＮＰ）、ＣＤ２３、ＣＣＫ、ホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ細胞質ゾル、サイクリンＤ１、ＬＤＬ受容体（Ｏｎｏ，ｅｔ  ａｌ．，２０００  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  １２：１−１３）。
【００４９】
（ｐ３８の活性化の生物学的影響）
ｐ３８および炎症
急性および慢性炎症は、関節リウマチや喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）などの多くの疾患の病因にとって中心的なものであると考えられる。ｐ３８経路の活性化は、（１）ＩＬ−１βやＴＮＦ−αやＩＬ−６などの炎症誘発性サイトカインの産生；（２）病的状態の結合組織リモデリングを制御するＣＯＸ−２などの酵素の誘導；（３）酸化を調節するｉＮＯＳなどの細胞内酵素の発現；（４）ＶＣＡＭ−１などの付着タンパク質や他の多くの炎症関連分子の誘導において中心的な役割を果たし得る。これらに加えて、ｐ３８経路は、免疫系の細胞の増殖および分化において調節的役割を果たし得る。ｐ３８は、ＧＭ−ＣＳＦ、ＣＳＦ、ＥＰＯおよびＣＤ４０誘導細胞の増殖および／または分化に関与し得る。
【００５０】
炎症関連疾患のｐ３８経路の役割は、いくつかの動物モデルにおいて研究された。ＳＢ２０３５８０によるｐ３８の阻害は、エンドトキシン誘導ショックのマウスモデルにおける死亡率を低下させ、そしてマウスコラーゲン誘導関節炎およびラットアジュバント関節炎の発現を阻害した。最近の研究によって、より強力なｐ３８阻害剤であるＳＢ２２００２５により肉芽腫の血管密度の有意な用量依存的減少が引き起こされたことが明らかにされている。これらの結果は、ｐ３８またはｐ３８経路の成分が炎症性疾患のための治療標的であり得ることを示している。
【００５１】
（ｐ３８および線維症）
細胞外マトリックスタンパク質の無制御および／または異所性の沈着は、線維症につながり、そして特発性肺繊維症（ＩＰＦ）、サルコイドーシス、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）および肝硬変などの疾患の病因の基礎をなす。ｐ３８は、ＴＧＦ−β受容体シグナル伝達における役割によるいくつかの線維症誘発性経路の事象に関係付けられている（Ｋａｍｉｎｓｋａ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  Ｐｏｌｏｎｉｃａ５２（２）：３２９−３７）。ＴＧＦ−βは、線維症の基礎をなし、そしてコラーゲン沈着の誘導、線維症誘発性サイトカインの合成、繊維芽細胞増殖、筋線維芽細胞分化、および上皮間葉移行などの事象に関与する（Ｋａｍｉｎｓｋａ，ｅｔ  ａｌ．，Ａｃｔａ  Ｂｉｏｃｈｉｍｉｃａ  Ｐｏｌｏｎｉｃａ５２（２）：３２９−３７；Ｂｏｒｄｅｒ  ａｎｄ  Ｎｏｂｌｅ，  １９９４  ＮＥＪＭ３３１：１２８６−９２）（Ｒ．Ｎｅｗｔｏｎ  ａｎｄ  Ｎ．Ｓ．Ｈｏｌｄｅｎ，Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  Ｔｏｄａｙ：Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ，Ｖｏｌｕｍｅ３，Ｉｓｓｕｅ１，Ｓｐｒｉｎｇ  ２００６，Ｐａｇｅｓ  ５３−６１）。ｐ３８は、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）、インターロイキン−１７（ＩＬ−１７）、上皮細胞成長因子（ＥＧＦ）および血小板由来成長因子（ＰＤＧＦ）など、線維症と関連する可能性があるさらなるサイトカインおよび成長因子によって活性化される。
【００５２】
例えば肝臓における線維症は、肝臓内で産生されるマトリックス巨大分子と分解されるマトリックス巨大分子との間の量の不均衡による細胞外マトリックス成分、特にコラーゲンの過剰な沈着により生じる（ＮＩＨ  Ｇｕｉｄｅ  ＰＡ−９９−１１０  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｎ  Ａｌｃｏｈｏｌ  Ａｂｕｓｅ  ａｎｄ  Ａｌｃｏｈｏｌｉｓｍ）。歴史的に、肝線維症は、肝実質のコラーゲンリッチＥＣＭとの進行性置換を伴う不可逆的プロセスであると考えられてきた（Ｍｕｄｄｕ，ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．２００６  Ｏｃｔ  ７）。ヒトにおけるコラーゲン沈着の増加の生化学的根拠は、急性型および慢性型の肺線維症の患者において示されている（Ｌａｕｒｅｎｔ，Ｃｉｂａ  Ｆｏｕｎｄ  Ｓｙｍｐ．１９８５  １１４：２２２−３３）。特発性肺繊維症において、コラーゲン、テネイシンおよびプロテオグリカンなどの細胞外マトリックス分子の過大な産生が起こる（Ｎｏｂｌｅ，ｅｔ  ａｌ．，Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｓｔ  Ｍｅｄ  ２００４  ２５：７４９−７５８）。線維形成（潜在的可逆性反応）から線維症（不可逆性）への過程を制御する機序は、コラーゲンの成熟、石灰化、あるいは架橋タンパク質塊の形成に関連し得る（Ｔｏｘｉｃｏｌ  Ｐａｔｈｏｌ．１９９１；１９（４Ｐｔ１）：５２６−３９）。本明細書に記載され、実施例で示されるように、ＲＮＡ阻害実験によって、ｐ３８γアイソフォームを含むがこれに限定されないｐ３８の阻害が繊維芽細胞などの標的細胞内のコラーゲン産生のレベルに影響を及ぼし得ることが明らかにされている。
【００５３】
ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）は、短い干渉ＲＮＡまたはｓｉＲＮＡとして知られる短い２本鎖ＲＮＡが相補型ＲＮＡ標的の分解を導く細胞機序である。このプロセスは、ＲＮＡ標的のレベルの有意な低下につながり得る。Ｅｌｂａｓｈｉｒら、（２００１  Ｎａｔｕｒｅ  ４１１：４９４−８）は、両端に２つのヌクレオチドオーバーハングを有する１９塩基対２本鎖としての一般的なｓｉＲＮＡの構造的特徴を定義した。その後、研究者は、２つのＲＮＡオリゴヌクレオチドの内の１つが関連遺伝子に相補的である合成ｓｉＲＮＡを設計するためのこのフォーマットを使用した。哺乳類細胞内へのこれらの合成ｓｉＲＮＡの導入は、相補型ｍＲＮＡの分解と、対応するタンパク質産物の対応する低下を促進し得る。ＲＮＡｉ技術を使用することによって、特異的遺伝子の発現の低下により細胞経路または疾患状態におけるその遺伝子の役割を調べる実験が可能になる機能的研究が可能になる。
【００５４】
短いヘアピンＲＮＡ（またはｓｈＲＮＡ）は、Ｅｌｂａｓｈｉｒらによって記載された２１ヌクレオチド２本鎖をヘアピンフ型に変化させた関連研究ツールである。ヘアピン設計により、適切な転写プロモーターからｓｈＲＮＡ発現を導く細胞内への発現カセットの導入が可能になる。ｓｈＲＮＡを使用することによって、特定の細胞型とは困難であり得る合成ｓｉＲＮＡによる細胞の効率的なトランスフェクションの必要がなくなり、従って、ＲＮＡｉに基づいた実験に良好に使用し得る細胞型の数が多くなる。また、ｓｈＲＮＡｓを使用することによっても、ｍＲＮＡ標的の拡張した／安定したノックダウンと、ｓｈＲＮＡ発現カセットで形質導入された細胞集団の単離とが可能になる。
【００５５】
ｓｈＲＮＡ発現カセットの安定導入の１つの様式は、弱毒化されたレンチウイルスである。Ｍｏｆｆａｔらは、感染細胞のゲノム内にＵ６−プロモーターにより駆動されるｓｈＲＮＡ発現カセットを安定して組み込むように設計されている弱毒化されたレンチウイルス粒子のライブラリについて記載している（Ｍｏｆｆａｔ，ｅｔ  ａｌ．，２００６  Ｃｅｌｌ  １２４：１２８３−９８）。この設計されたウイルスの移入されたセグメントは、ピューロマイシン抵抗マーカーもコードするが、このマーカーは、安定して組み込まれたｓｈＲＮＡ発現カセットを有する細胞の選択に使用し得る。
【００５６】
ｐ３８αまたはｐ３８γを標的とする種々のｓｈＲＮＡをコードするコード領域（配列番号１〜８）を含む８種のレンチウイルス粒子が調製され、そして実施例１０で説明される細胞、実施例１１により単離および定量されたｍＲＮＡ、ならびに実施例１２によりアッセイされたコラーゲンレベルに導入された際、その結果として、ｐ３８γｍＲＮＡレベルを低下させる配列が、結果として生じるコラーゲンの蓄積の減少と関連していることが示された。実施例１２の表１を参照されたい。ゆえに、例えばｐ３８γの阻害は、コラーゲン発現のレベルの低下をもたらし得、それにより線維症を阻害することができる。
【００５７】
（ｐ３８およびアポトーシス）
ｐ３８およびアポトーシスの同時活性化は、ＮＧＦの停止およびＦａｓのライゲーションなどの種々の薬剤によって誘導される。システインプロテアーゼ（カスパーゼ）は、アポトーシス経路に中心的であって、不活性チモーゲンとして発現される。そして、カスパーゼ阻害剤は、Ｆａｓ架橋によるｐ３８活性化を遮断することができる。しかしながら、優位な活性ＭＫＫ６ｂの過剰発現もまた、カスパーゼ活性および細胞死を誘導し得る。アポトーシスにおけるｐ３８の役割は、細胞型依存性および刺激依存性である。ｐ３８シグナル伝達は、いくつかの細胞株、すなわち異なる細胞株の細胞死を促進することが示されたが、ｐ３８は、生存、細胞増殖および分化を高めることが示された。
【００５８】
（細胞周期におけるｐ３８）
酵母菌のｐ３８αの過剰発現は増殖の有意な減速につながり、このことは細胞成長におけるｐ３８αの関与を示す。培養哺乳動物細胞にｐ３８α／β阻害剤、すなわちＳＢ２０３５８０を投与すると、細胞の増殖の減速が認められた。
【００５９】
（ｐ３８および心筋細胞肥大）
心筋細胞肥大におけるｐ３８の活性化および機能を研究した。肥大が進行する間に、ｐ３８αおよびｐ３８βの両レベルは増加し、サルコメアの組織化および心房性ナトリウム利尿因子の発現の上昇によって構成的に活性のＭＫＫ３およびＭＫＫ６誘導肥大反応が増強された。また、心臓内のｐ３８のシグナル伝達の低下により、カルシニュリン−ＮＦＡＴシグナル伝達を伴う機序を介してミオサイト分化が促進される。
【００６０】
（ｐ３８および発育）
ｐ３８ノックアウトマウスが生育不能であるにもかかわらず、発育におけるｐ３８の特異的な役割に関する証拠が存在する。いくつかの研究では、ｐ３８が、胎盤の血管形成に関連付けられてきたが、心血管の発育には関連付けられていない。さらにまた、ｐ３８は、赤血球形成における役割を示唆するエリトロポエチン発現にも関連付けられてきた。ＰＲＡＫは、マウスの着床における細胞発育に最近関連付けられている。ＰＲＡＫ  ｍＲＮＡならびにｐ３８アイソフォームは、胚盤胞発育の全体にわたって発現されることが判明している。
【００６１】
（ｐ３８および細胞分化）
ｐ３８αおよび／またはｐ３８βは、いくつかの種々の細胞型の細胞分化において重要な役割を果たすことが判明している。脂肪細胞への３Ｔ３−Ｌ１細胞の分化およびニューロンへのＰＣ１２細胞の分化は、いずれもｐ３８αおよび／またはｐ３８βを必要とする。ｐ３８経路は、ヘモグロビン化細胞（ｈｅｍｏｇｌｏｂｉｎｉｚｅｄ  ｃｅｌｌ）へのＳＫＴ６分化や筋小管におけるＣ２Ｃ１１２分化に必要かつ十分なものであることが判明している。
【００６２】
（老化および腫瘍抑制におけるｐ３８）
ｐ３８には、腫瘍化および老化における役割がある。ＭＫＫ６およびＭＫＫ３の活性化がｐ３８  ＭＡＰＫ活性に依存する老化の表現型につながったという報告がある。また、ｐ３８  ＭＡＰＫ活性は、テロメア短縮、Ｈ２Ｏ２曝露、および慢性的ＲＡＳ腫瘍遺伝子シグナル伝達を受けて老化の原因となることが示されている。腫瘍細胞の共通機能は、老化の喪失であり、ｐ３８は、特定細胞の腫瘍化に関連している。ｐ３８の活性化は腫瘍において低下し、ＭＫＫ３およびＭＫＫ６などのｐ３８経路の成分の喪失によって、これらの研究において使用された細胞株または腫瘍誘導剤に関係なく、腫瘍形成性の変換の増殖や可能性が高まったことが報告された。
【００６３】
（ｐ３８ＭＡＰキナーゼ阻害剤）
「ｐ３８  ＭＡＰＫ阻害剤」は、ｐ３８の活性を阻害する化合物である。ｐ３８の活性に対する化合物の阻害効果は、熟練者によく知られた各種の方法で測定してよい。例えば、阻害効果は、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）刺激によるサイトカイン産生の阻害のレベルを測定することで測定され得る（Ｌｅｅ，ｅｔ  ａｌ．，１９８８  Ｉｎｔ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ  １０：８３５−８４３；Ｌｅｅ，ｅｔ  ａｌ．，１９９３  Ａｎｎ  ＮＹ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ６９６：１４９−１７０；Ｌｅｅ，ｅｔ  ａｌ．，１９９４  Ｎａｔｕｒｅ  ３７２：７３９−７４６；Ｌｅｅ，ｅｔ  ａｌ．，１９９９  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｈｅｒ８２：３８９−３９７）。
【００６４】
ｐ３８  ＭＡＰＫ阻害剤を発現させる取組みは、一般的に効力の増大に集中した。ＳＢ２０３５８０は、ナノモルの範囲のＩＣ５０値の強力ｐ３８キナーゼ阻害剤であることが判明している。例えば、ＳＢ２０３５８０において、ＩＣ５０は４８ｎＭであることが判明している。以下に示すピリジニルイミダゾールＳＫＦ８６００２（Ｐ１）およびＳＢ２０３５８２（Ｐ２）はまた、ｐ３８キナーゼ阻害剤でもある。最近の刊行物（Ｌｅｅ，ｅｔ  ａｌ．，２０００  Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ４７：１８５−２０１）では、以下に示すｐ３８阻害剤（Ｐ３−Ｐ６）が開示されている。化合物Ｐ４（ｐ３８のＩＣ５０＝０．１９ｎＭ）について記載した相対的に高い効力および選択性や、ＳＢ２２００２５（Ｐ６）による、炎症によって駆動される血管形成の阻害は、これらの阻害剤の中で顕著である。このような化合物は、ｐ３８αポリペプチドのＡＴＰポケットにおいて結合すると考えられ、そして補因子ＡＴＰの競合阻害剤である。
【００６５】
特定のピリミジンイミダゾールもまた、ナノモル以下のＩＣ５０値の強力ｐ３８キナーゼ阻害剤であることが判明している（Ｌｉｖｅｒｔｏｎ，ｅｔ  ａｌ．，１９９９  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４２：２１８０−２１９０）。このような化合物は、ｐ３８αポリペプチドのＡＴＰポケットにおいて結合すると考えられ、必須の補因子ＡＴＰの競合阻害剤である。
【００６６】
特定のジアリール尿素、例えばＢＩＲＢ  ７９６もまた、ｐ３８  ＭＡＰＫの強力阻害剤である（Ｐａｒｇｅｌｌｉｓ，ｅｔ  ａｌ．，Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ９：２６８−２７２）。ＢＩＲＢ  ７９６は、１８ｎＭのＴＮＦαに対してＩＣ５０を有する。ジアリール尿素は、ｐ３８のピリジニルイミダゾールやピリミジニルイミダゾール阻害剤とは構造的に異なる。特定のジアリール尿素は、ｐ３８ａのアロステリック阻害剤であると考えられる。ＡＴＰ結合ポケットから空間的に取り除いた部位でｐ３８αに結合すると、アロステリック阻害剤は、ポリペプチドのＡＴＰ結合ポケットの配座変化を誘導し、そしてその配座変化によって、ＡＴＰの効率的な結合と不適合なＡＴＰ結合ポケットとなる。ゆえに、このことが、ｐ３８α阻害剤としての化合物の効力が認められる理由である。
【００６７】
臨床開発中であることが報告されている２種類のｐ３８阻害剤は、ＨＥＰ６８９（Ｐ７）およびＶＸ−７４５（Ｐ８）である。ＶＸ−７４５は、関節リウマチに関する第ＩＩ相試験中であると報告されている。強力な局所的抗炎症作用はＨＲＰ６８９について開示されており、このＨＲＰ６８９は、乾癬および他の皮膚障害の処置のための局所的剤としてのその潜在性を調べる臨床開発が開始されていることが報告されている。
【００６８】
【化１４】
2009517390.tif 000011
各種のｐ３８阻害剤のさらなる考察については、Ｂｏｅｈｍ，ｅｔ  ａｌ．，２０００  Ｅｘｐ  Ｏｐｉｎ  Ｔｈｅｒ  Ｐａｔ１０：２５−３７；Ｓａｌｉｔｕｒｏ，ｅｔ  ａｌ．，１９９９  Ｃｕｒｒ  Ｍｅｄ  Ｃｈｅｍ６：８０７−８２３；およびＦｉｔｚｇｅｒａｌｄ，ｅｔ  ａｌ．，２００３  Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １０：７６４−７６９に記載されている。
【００６９】
ｐ３８のγアイソフォームにはαアイソフォームとの有意な構造的類似性があることが発見されている。しかしながら、重要な残基はアイソフォームの間で保存されるものの、構造変動は、タンパク質のＡＴＰ結合ポケット周辺の領域などで認められる。上述のｐ３８阻害剤のモデリングによって、ｐ３８α阻害剤がｐ３８γアイソフォームと相互作用した際に、エネルギー的に不利な相互作用が認められることが示されている。また、モデリングでは、ｐ３８α阻害剤がｐ３８γアイソフォームと相互作用した際に、他のエネルギー的に有利な相互作用が保持されたことも明らかにされている。
【００７０】
種類ＩＩの特定の化合物は、立体的に不利な相互作用、例えばＦｉｔｚｇｅｒａｌｄ，ｅｔ  ａｌ．，２００３  Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ１０：７６４−７６９に記載されたｐ３８γのＭｅｔ１０９と化合物１のトリフルオロメチルフェニル部分との間の立体的に不利な相互作用を必要とすることが判明しており、さらに、種類ＩＩの特定の化合物は、ｐ３８γと相互作用して正の結合エネルギーを付与する置換基を有することも判明している。トリフルオロメチルフェニル部分の単純な除去には、タンパク質と相互作用を行う置換基を有する化合物の有利な結合エネルギーが必要であることが判明している。従って、いくつかの実施形態において、Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ，ｅｔ  ａｌ．，２００３  Ｎａｔｕｒｅ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ１０：７６４−７６９に記載の化合物１のトリフルオロメチルフェニル置換基は、より小さな分子体積の置換基によって、あるいはより小さな分子体積の、ｐ３８γ残基Ｌｅｕ８９、Ｌｅｕ５８、Ｌｅｕ１０７およびＬｅｕ１０８によって定義される疎水性ポケットとファン・デル・ワールス相互作用を行う置換基によって、あるいはより小さな分子体積の、ｐ３８γのＭｅｔ１０９と水素結合または静電的相互作用を行う置換基によって、あるいはより小さな分子体積の、ｐ３８γ残基Ｌｅｕ８９、Ｌｅｕ５８、Ｌｅｕ１０７およびＬｅｕ１０８によって定義される疎水性ポケットとファン・デル・ワールス相互作用を行い、ｐ３８γのＭｅｔ１０９と水素結合または静電的相互作用を行う置換基によって、置換される。
【００７１】
種類ＩＶの特定の化合物は、立体的に不利な相互作用、例えばｐ３８γのＭｅｔ１０９とＰ２のフルオロフェニル部分との間の立体的に不利な相互作用を必要とすることが判明しており、さらに、種類ＩＶの特定の化合物は、ｐ３８γと相互作用して正の結合エネルギーを付与する置換基を有することも判明している。従って、いくつかの実施形態において、Ｐ２のフルオロメチルフェニル置換基は、より小さな分子体積の置換基によって、あるいはより小さな分子体積の、ｐ３８γ残基Ｌｅｕ８９、Ｌｅｕ５８、Ｌｅｕ１０７およびＬｅｕ１０８によって定義される疎水性ポケットとファン・デル・ワールス相互作用を行う置換基によって、あるいはより小さな分子体積の、ｐ３８γのＭｅｔ１０９と水素結合または静電的相互作用を行う置換基によって、あるいはより小さな分子体積の、ｐ３８γ残基Ｌｅｕ８９、Ｌｅｕ５８、Ｌｅｕ１０７およびＬｅｕ１０８によって定義される疎水性ポケットとファン・デル・ワールス相互作用を行い、またｐ３８γのＭｅｔ１０９と水素結合または静電的相互作用を行う置換基によって、置換される。
【００７２】
種類ＩＩＩの特定の化合物は、立体的に不利な相互作用、例えばｐ３８γのＭｅｔ１０９とＢＩＲＢ  ７９６の置換ナフチレン基部分との間の立体的に不利な相互作用を必要とすることが判明しており、さらに、種類ＩＩＩの特定の化合物は、ｐ３８γと相互作用して正の結合エネルギーを付与する置換基を有することも判明している。従って、いくつかの実施形態において、ＢＩＲＢ  ７９６の置換ナフチレン基部分は、より小さな分子体積の置換基によって、あるいはより小さな分子体積の、ｐ３８γ残基Ｌｅｕ８９、Ｌｅｕ５８、Ｌｅｕ１０７およびＬｅｕ１０８によって定義される疎水性ポケットとファン・デル・ワールス相互作用を行う置換基によって、あるいはより小さな分子体積の、ｐ３８γのＭｅｔ１０９と水素結合または静電的相互作用を行う置換基によって、あるいはより小さな分子体積の、ｐ３８γのＰｈｅ１１１とπ−π相互作用またはπ−カチオン相互作用を行う置換基によって、あるいはより小さな分子体積の、ｐ３８γ残基Ｌｅｕ８９、Ｌｅｕ５８、Ｌｅｕ１０７およびＬｅｕ１０８によって定義される疎水性ポケットとファン・デル・ワールス相互作用を行い、またｐ３８γのＭｅｔ１０９と水素結合または静電的相互作用を行う置換基によって、あるいはより小さな分子体積の、ｐ３８γ残基Ｌｅｕ８９、Ｌｅｕ５８、Ｌｅｕ１０７およびＬｅｕ１０８によって定義される疎水性ポケットとファン・デル・ワールス相互作用を行い、またｐ３８γのＰｈｅ１１１とπ−π相互作用またはπ−カチオン相互作用を行う置換基によって、あるいはより小さな分子体積の、ｐ３８γ残基Ｌｅｕ８９、Ｌｅｕ５８、Ｌｅｕ１０７およびＬｅｕ１０８によって定義される疎水性ポケットとファン・デル・ワールス相互作用を行い、ｐ３８γのＭｅｔ１０９と水素結合または静電的相互作用し、またｐ３８γのＰｈｅ１１１とπ−π相互作用またはπ−カチオン相互作用を行う置換基によって置換される。
【００７３】
本明細書に記載の好ましいｐ３８阻害剤は、ｐ３８γ阻害の相対的に高い効力を示し、このような阻害の結果として相対的に高い治療効果（例えば、ＳＡＰＫ系の調節）を有する２環式オキソピリジン誘導体および類似体である。好ましくは、実施形態のｐ３８阻害剤は、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭ、好ましくは約１０ｐＭ〜約５μＭまたは約１００ｎＭ〜約５００μＭ、好ましくは約５０ｐＭ〜約１μＭ、より好ましくは約５０ｐＭ〜約２００ｎＭの範囲のＩＣ５０を示す。好ましくは、実施形態のｐ３８阻害剤は、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０値よりも少なくとも約２倍高いｐ３８αの阻害についてのＩＣ５０を示す。より好ましくは、実施形態のｐ３８阻害剤は、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０値よりも少なくとも約５倍高いｐ３８αの阻害についてのＩＣ５０を示す。さらにより好ましくは、実施形態のｐ３８阻害剤は、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０値よりも少なくとも約１０倍高いｐ３８αの阻害についてのＩＣ５０値を示す。
【００７４】
本明細書に記載の好ましいｐ３８阻害剤は、ｐ３８γ阻害の相対的に高い効力を示し、このような阻害の結果として相対的に高い治療効果（例えば、ＳＡＰＫ系の調節）を有するピリミジニルイミダゾール誘導体および類似体である。好ましくは、実施形態のｐ３８阻害剤は、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭ、好ましくは約１０ｐＭ〜約５μＭまたは約１００ｎＭ〜約５００μＭ、好ましくは約５０ｐＭ〜約１μＭ、より好ましくは約５０ｐＭ〜約２００ｎＭの範囲のＩＣ５０を示す。好ましくは、実施形態のｐ３８阻害剤は、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０値よりも約２倍高いｐ３８αの阻害についてのＩＣ５０値を示す。より好ましくは、実施形態のｐ３８阻害剤は、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０値よりも少なくとも約５倍高いｐ３８αの阻害についてのＩＣ５０値を示す。さらにより好ましくは、実施形態のｐ３８阻害剤は、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０値よりも少なくとも約１０倍高いｐ３８αの阻害についてのＩＣ５０値を示す。
【００７５】
本明細書に記載の好ましいｐ３８阻害剤は、ｐ３８γ阻害の相対的に高い効力を示し、このような阻害の結果として相対的に高い治療効果（例えば、ＳＡＰＫ系の調節）を有するジアリール尿素誘導体および類似体である。好ましくは、実施形態のｐ３８阻害剤は、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭ、好ましくは約１０ｐＭ〜約５μＭまたは約１００ｎＭ〜約５００μＭ、好ましくは約５０ｐＭ〜約１μＭ、より好ましくは約５０ｐＭ〜約２００ｎＭの範囲のＩＣ５０を示す。好ましくは、実施形態のｐ３８阻害剤は、前記ｐ３８γ  ＭＡＰＫの阻害についてのＩＣ５０値よりも約２倍高いｐ３８αの阻害についてのＩＣ５０値を示す。
【００７６】
本明細書において使用される「アルキル」という用語は、炭素原子数１〜１０の１価の直鎖または分枝鎖のラジカルを指し、これにはメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ヘキシルなどが含まれるが、これらに限定されない。
【００７７】
本明細書において使用される「アルケニル」という用語は、炭素２重結合を含む炭素原子数２〜１０の１価の直鎖または分枝鎖のラジカルを指し、これには１−プロペニル、２−プロペニル、２−メチル−１−プロペニル、１−ブテニル、２−ブテニルなどが含まれるが、これらに限定されない。
【００７８】
本明細書において使用される「ハロ」という用語は、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードを指す。
【００７９】
本明細書において使用される「ハロアルキル」という用語は、アルキルラジカルに付加される１つ以上のハロ基を指す。
【００８０】
本明細書において使用される「ニトロアルキル」という用語は、アルキルラジカルに付加される１つ以上のニトロ基を指す。
【００８１】
本明細書において使用される「チオアルキル」という用語は、アルキルラジカルに付加される１つ以上のチオ基を指す。
【００８２】
本明細書において使用される「ヒドロキシアルキル」という用語は、アルキルラジカルに付加される１つ以上のヒドロキシ基を指す。
【００８３】
本願明細書において使用される「アルコキシ」という用語は、−Ｏ−結合で親分子に共有結合する直鎖または分枝鎖のアルキルラジカルを指す。アルコキシ基の例としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｎ−ブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシ、ｔ−ブトキシなどが含まれるが、これらに限定されない。
【００８４】
本明細書において使用される「アルコキシアルキル」という用語は、アルキルラジカルに付加された１つ以上のアルコキシ基を指す。
【００８５】
本明細書において使用される「カルボキシ」は、−ＣＯＯＨを指す。
【００８６】
「アルコキシカルボニル」という用語は、−（ＣＯ）−Ｏ−アルキルを指す。アルコキシカルボニル基の例としては、メトキシカルボニル基、エトキシカルボニル基、プロポキシカルボニル基などが含まれるが、これらに限定されない。
【００８７】
本明細書で使用されるラジカルは、そのラジカルを含む種が別の種に共有結合し得るように単一の不対電子を有する種を示す。そのため、この文脈においては、ラジカルが必ずしもフリーラジカルであるというわけではない。むしろ、ラジカルは、より大きな分子の特定部分を表す。「ラジカル」という用語は、「基」という用語と交換可能に使用することができる。
【００８８】
本明細書で使用される置換基は、１個以上の水素原子が別の原子または基と交換された非置換の親構造体に由来する。置換基は、置換される場合、一置換アミノ基および二置換アミノ基を含むアルキル、シクロアルキル、アリール、融合アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、シアノ、ハロ、カルボニル、チオカルボニル、アルコキシカルボニル、ニトロ、シリル、トリハロメタンスルホニル、トリフルオロメチルおよびアミノならびにその保護誘導体から個別におよび独立して選択される１個以上の基である。上記の置換基の保護誘導体を形成し得る保護基は、当業者に知られており、Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９９などの参考文献に記載されている。置換基が「必要に応じて置換された」と記載される場合は必ず、その置換基は上記の置換基によって置換され得る。
【００８９】
「精製」という用語は、アッセイの際に測定物質の少なくとも９５％を含むように他の化合物から分離された化合物を指す。
【００９０】
不斉炭素原子は、本明細書に記載の化合物に存在してよい。ジアステレオマーやエナンチオマーなどのすべての異性体は、それらの混合物と共に、列挙された化合物の範囲内に含まれることが意図される。特定の場合において、化合物は互変異性型で存在し得る。すべての互変異性型は、列挙された化合物の範囲内に含まれることが意図される。同様に、化合物がアルケニル基またはアルケニレン基を含む場合、化合物のシスおよびトランス異性体の形態の可能性がある。シスおよびトランス異性体の両方が、シスおよびトランス異性体の混合物と共に考えられる。したがって、文脈が明確に示されない限り、化合物に対する本明細書における参照には、前記異性体の形態のすべてが含まれる。
【００９１】
実施形態には、多形、溶媒和物、水和物、コンフォーマー、塩類およびプロドラッグ誘導体などの各種の形態が含まれる。多形とは、化学式が同じであるが構造が異なる組成物である。溶媒和物とは、溶媒和（溶質の分子またはイオンとの溶媒分子の組み合わせ）によって形成される組成物である。水和物とは、水の組込みによって形成される化合物である。コンフォーマーとは、配座異性体である構造である。立体配座異性とは、構造式が同じであるが回転する結合の周囲の原子の配座（コンフォーマー）が異なる分子の現象である。化合物の塩は、当業者に知られた方法によって調製され得る。例えば、化合物の塩は、適切な塩基または酸と化合物の化学量論的等価物とを反応させることによって調製され得る。プロドラッグとは、その薬理効果を示す前に生体内変化（化学変換）を受ける化合物である。したがって、プロドラッグは、例えば、親分子の望ましくない特性を変更または除去する一時的な方法で使用される特殊化した保護基を含む薬物として考えることができる。したがって、文脈が明確に示されない限り、本明細書における化合物の言及には、前記形態のすべてが包含される。
【００９２】
以下に記載される化合物は、本明細書に記載の方法において有用である。一実施形態において、化合物は、下記のようにｐ３８γの阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭ、好ましくは約１００ｎｍ〜約５００μＭの範囲のＩＣ５０を示す。
【００９３】
一実施形態は、以下の種類（種類Ｉ）：
【００９４】
【化１５】
2009517390.tif 000012
により表わされる化合物であって、
式中、Ｒが、Ｈ、ハロ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、必要に応じて置換されたＣ１−６アルキル、必要に応じて置換されたＣ３−７シクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ４−１０アルキルシクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ２−６アルケニル、必要に応じて置換されたＣ１−６アルコキシ、必要に応じて置換されたＣ６またはＣ１０アリール、必要に応じて置換されたピリジニル、必要に応じて置換されたピリミジニル、必要に応じて置換されたチエニル、必要に応じて置換されたフラニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたフェノキシ、必要に応じて置換されたチオフェノキシ、必要に応じて置換されたスルホンアミド、必要に応じて置換された尿素、必要に応じて置換されたチオ尿素、必要に応じて置換されたアミド、必要に応じて置換されたケト、必要に応じて置換されたカルボキシル、必要に応じて置換されたカルバミル、必要に応じて置換されたスルフィド、必要に応じて置換されたスルホキシド、必要に応じて置換されたスルホン、必要に応じて置換されたアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアルキルアミノ、必要に応じて置換されたアルキルカルボキシ、必要に応じて置換されたカルボニル、必要に応じて置換されたスピロ環式シクロアルキル、必要に応じて置換されたピラジニル、必要に応じて置換されたピリダジニル、必要に応じて置換されたピロリル、必要に応じて置換されたチオフェニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたイミダゾリル、必要に応じて置換されたイソオキサゾリル、必要に応じて置換されたピラゾリル、必要に応じて置換されたイソチアゾリル、必要に応じて置換されたナフチル、必要に応じて置換されたキノリニル、必要に応じて置換されたイソキノリニル、必要に応じて置換されたキノキサリニル、必要に応じて置換されたベンゾチアゾリル、必要に応じて置換されたベンゾチオフェニル、必要に応じて置換されたベンゾフラニル、必要に応じて置換されたインドリルおよび必要に応じて置換されたベンゾイミダゾリルからなる群から選択される、
化合物のファミリーを提供する。
【００９５】
別の実施形態は、以下の種類（種類ＩＩ）：
【００９６】
【化１６】
2009517390.tif 000013
により表わされる化合物であって、
式中、Ｒ４が、Ｈ、ハロ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、必要に応じて置換されたＣ１−６アルキル、必要に応じて置換されたＣ３−７シクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ４−１０アルキルシクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ２−６アルケニル、必要に応じて置換されたＣ１−６アルコキシ、必要に応じて置換されたＣ６またはＣ１０アリール、必要に応じて置換されたピリジニル、必要に応じて置換されたピリミジニル、必要に応じて置換されたチエニル、必要に応じて置換されたフラニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたフェノキシ、必要に応じて置換されたチオフェノキシ、必要に応じて置換されたスルホンアミド、必要に応じて置換された尿素、必要に応じて置換されたチオ尿素、必要に応じて置換されたアミド、必要に応じて置換されたケト、必要に応じて置換されたカルボキシル、必要に応じて置換されたカルバミル、必要に応じて置換されたスルフィド、必要に応じて置換されたスルホキシド、必要に応じて置換されたスルホン、必要に応じて置換されたアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアルキルアミノ、必要に応じて置換されたアルキルカルボキシ、必要に応じて置換されたカルボニル、必要に応じて置換されたスピロ環式シクロアルキル、必要に応じて置換されたピラジニル、必要に応じて置換されたピリダジニル、必要に応じて置換されたピロリル、必要に応じて置換されたチオフェニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたイミダゾリル、必要に応じて置換されたイソオキサゾリル、必要に応じて置換されたピラゾリル、必要に応じて置換されたイソチアゾリル、必要に応じて置換されたナフチル、必要に応じて置換されたキノリニル、必要に応じて置換されたイソキノリニル、必要に応じて置換されたキノキサリニル、必要に応じて置換されたベンゾチアゾリル、必要に応じて置換されたベンゾチオフェニル、必要に応じて置換されたベンゾフラニル、必要に応じて置換されたインドリルおよび必要に応じて置換されたベンゾイミダゾリルからなる群から選択される、
化合物のファミリーを提供する。
【００９７】
別の実施形態は、以下の種類（種類ＩＩＩ）：
【００９８】
【化１７】
2009517390.tif 000014
により表わされる化合物であって、式中、
Ｒ２およびＲ３が、Ｈ、ハロ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、必要に応じて置換されたＣ１−６アルキル、必要に応じて置換されたＣ３−７シクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ４−１０アルキルシクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ２−６アルケニル、必要に応じて置換されたＣ１−６アルコキシ、必要に応じて置換されたＣ６またはＣ１０アリール、必要に応じて置換されたピリジニル、必要に応じて置換されたピリミジニル、必要に応じて置換されたチエニル、必要に応じて置換されたフラニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたフェノキシ、必要に応じて置換されたチオフェノキシ、必要に応じて置換されたスルホンアミド、必要に応じて置換された尿素、必要に応じて置換されたチオ尿素、必要に応じて置換されたアミド、必要に応じて置換されたケト、必要に応じて置換されたカルボキシル、必要に応じて置換されたカルバミル、必要に応じて置換されたスルフィド、必要に応じて置換されたスルホキシド、必要に応じて置換されたスルホン、必要に応じて置換されたアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアルキルアミノ、必要に応じて置換されたアルキルカルボキシ、必要に応じて置換されたカルボニル、必要に応じて置換されたスピロ環式シクロアルキル、必要に応じて置換されたピラジニル、必要に応じて置換されたピリダジニル、必要に応じて置換されたピロリル、必要に応じて置換されたチオフェニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたイミダゾリル、必要に応じて置換されたイソオキサゾリル、必要に応じて置換されたピラゾリル、必要に応じて置換されたイソチアゾリル、必要に応じて置換されたナフチル、必要に応じて置換されたキノリニル、必要に応じて置換されたイソキノリニル、必要に応じて置換されたキノキサリニル、必要に応じて置換されたベンゾチアゾリル、必要に応じて置換されたベンゾチオフェニル、必要に応じて置換されたベンゾフラニル、必要に応じて置換されたインドリルおよび必要に応じて置換されたベンゾイミダゾリルからなる群からそれぞれ独立して選択される、
化合物のファミリーを提供する。
【００９９】
一実施形態において、種類ＩＩＩの化合物は、１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾール−３−イル）−３−［４−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）ナフタレン−１−イル］尿素（ＢＩＲＢ  ７９６）ではない。
【０１００】
別の実施形態は、以下の種類（種類ＩＶ）：
【０１０１】
【化１８】
2009517390.tif 000015
により表わされる化合物であって、式中、
Ｒ５およびＲ６が、Ｈ、ハロ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、必要に応じて置換されたＣ１−６アルキル、必要に応じて置換されたＣ３−７シクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ４−１０アルキルシクロアルキル、必要に応じて置換されたＣ２−６アルケニル、必要に応じて置換されたＣ１−６アルコキシ、必要に応じて置換されたＣ６またはＣ１０アリール、必要に応じて置換されたピリジニル、必要に応じて置換されたピリミジニル、必要に応じて置換されたチエニル、必要に応じて置換されたフラニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたフェノキシ、必要に応じて置換されたチオフェノキシ、必要に応じて置換されたスルホンアミド、必要に応じて置換された尿素、必要に応じて置換されたチオ尿素、必要に応じて置換されたアミド、必要に応じて置換されたケト、必要に応じて置換されたカルボキシル、必要に応じて置換されたカルバミル、必要に応じて置換されたスルフィド、必要に応じて置換されたスルホキシド、必要に応じて置換されたスルホン、必要に応じて置換されたアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシアミノ、必要に応じて置換されたアルコキシヘテロシクリル、必要に応じて置換されたアルキルアミノ、必要に応じて置換されたアルキルカルボキシ、必要に応じて置換されたカルボニル、必要に応じて置換されたスピロ環式シクロアルキル、必要に応じて置換されたピラジニル、必要に応じて置換されたピリダジニル、必要に応じて置換されたピロリル、必要に応じて置換されたチオフェニル、必要に応じて置換されたチアゾリル、必要に応じて置換されたオキサゾリル、必要に応じて置換されたイミダゾリル、必要に応じて置換されたイソオキサゾリル、必要に応じて置換されたピラゾリル、必要に応じて置換されたイソチアゾリル、必要に応じて置換されたナフチル、必要に応じて置換されたキノリニル、必要に応じて置換されたイソキノリニル、必要に応じて置換されたキノキサリニル、必要に応じて置換されたベンゾチアゾリル、必要に応じて置換されたベンゾチオフェニル、必要に応じて置換されたベンゾフラニル、必要に応じて置換されたインドリルおよび必要に応じて置換されたベンゾイミダゾリルからなる群からそれぞれ独立して選択される、
化合物のファミリーを提供する。
【０１０２】
一実施形態において、種類ＩＶの化合物は、ＸがＮである
【０１０３】
【化１９】
2009517390.tif 000016
ではない。
【０１０４】
本明細書に記載の特定の化合物が上記の各種の属の内の２種以上のメンバーであってよいことは認識されるであろう。本明細書に記載の化合物は、ストレス活性化プロテインキナーゼ（ＳＡＰＫ）系の調節に有用である。
【０１０５】
別の実施形態は、種類Ｉ〜ＩＶで表される精製化合物を対象とする。純度の程度は、上記の通りの割合で発現させてよい。好ましい実施形態において、種類Ｉ〜ＩＶで表される精製化合物は、精製化合物を含む組成物の全重量に基づいて約９６重量％以上、より好ましくは９８重量％以上の純度を有する。
【０１０６】
種類Ｉ〜ＩＶの化合物は、当該技術分野で既知の各種の従来の反応を使用して合成してよい。合成の例としては、実施例６、７、８および９に示す合成スキームが含まれる。
【０１０７】
２環式オキソピリジン誘導体として、種類Ｉの化合物もまた、実施例６で与えられるものなどの２環式オキソピリジンの既知の合成スキームに基づくものなど、当該技術分野で既知のいずれかの従来反応によって合成され得る。
【０１０８】
ピリミジニルイミダゾール誘導体として、種類ＩＩおよびＩＶの化合物もまた、例えば実施例７および９にて図示したものなどのピリミジニルイミダゾールの既知の合成スキームに基づくものなど、当該技術分野で既知のいずれかの従来反応によって合成され得る。
【０１０９】
ジアリール尿素誘導体として、種類ＩＩＩの化合物もまた、例えば実施例８にて図示したものなどのジアリール尿素の既知の合成スキームに基づくものなど、当該技術分野で既知のいずれかの従来反応によっても合成され得る。
【０１１０】
本明細書に記載の出発材料は、商業的に入手可能であるか、既知であるか、もしくは当該技術分野で既知の方法によって調製され得る。さらに、本明細書において記載されない出発材料は、商業的に入手可能であるか、既知であるか、もしくは当該技術分野で既知の方法によって調製され得る。
【０１１１】
出発材料は適切な置換基を有し、対応する置換基を有する所望の産物を最終的に産出し得る。あるいは、置換基は合成の任意の位置に付加され、対応する置換基を有する所望の産物を最終的に産出し得る。
【０１１２】
実施例６で表される合成スキームは、種類Ｉの化合物を調製するために使用してよい方法を示す。実施例７および９に示す合成スキームは、種類ＩＩおよびＩＶの化合物を調製するために使用してよい方法を示す。実施例８に示す合成スキームは、種類ＩＩＩの化合物を調製するために使用してよい方法を示す。当業者であれば、種類Ｉ〜ＩＶの化合物を合成するために多くの種々の合成反応スキームが使用され得ることを理解するであろう。さらに、当業者であれば、多くの種々の溶媒や、カップリング剤や、反応条件が、類似の結果をもたらす合成反応において使用され得ることを理解するであろう。
【０１１３】
当業者であれば、種類Ｉ〜ＩＶの化合物を作製するために上記のプロセスにおいて適切に使用され得る、示された、さもなければ知られた類似の反応からの配列の変異、さらには、適切な反応条件の変異を理解するであろう。
【０１１４】
種類Ｉ〜ＩＶの化合物の化合物の調製のための本明細書に記載のプロセスにおいて、保護基の使用は、有機化学における当業者によって一般的に広く認識されており、従って、適切な保護基の使用は、このような基が特に図示され得ないにもかかわらず、場合によっては本明細書におけるスキームのプロセスに含意される。このような適切な保護基の導入および除去は、有機化学の当該技術分野で周知である；例えば、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ，「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」，Ｗｉｌｅｙ（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），１９９９を参照されたい。本明細書に記載の反応の産物は、抽出や蒸留やクロマトグラフィなどの従来の手段によって単離され得る。
【０１１５】
種類Ｉ〜ＩＶの化合物の塩、例えば薬学的に許容される塩は、適切な塩基または酸を化合物の化学量論的等価物と反応させることによって調製され得る。同様に、種類Ｉ〜ＩＶの化合物の薬学的に許容される誘導体（例えば、エステル）代謝物、水和物、溶媒和物およびプロドラッグは、当業者に周知の方法によって調製され得る。したがって、別の実施形態は、活性化合物のプロドラッグである化合物を提供する。一般的に、プロドラッグは、インビボで代謝されて（例えば、脱アミノ化、脱アルキル化、脱エステル化などの代謝変換によって）活性化合物が得られる化合物である。「薬学的に許容されるプロドラッグ」とは、適切な医学判断の範囲内で、過度の毒性、刺激、アレルギー応答などのない患者における薬学的使用に適切な化合物であって、可能な場合、実施形態の化合物の双性イオン形態だけでなく薬学的に許容されるエステルなどの使用目的に効果的な化合物である。薬学的に許容されるプロドラッグの種類の例については、いずれも参考として本明細書で援用される、Ｔ．Ｈｉｇｕｃｈｉ  ａｎｄ  Ｖ．Ｓｔｅｌｌａ，Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｖｏｌ．１４，Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ；ならびにＥｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ，ｅｄ．，Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７に記載されている。
【０１１６】
本明細書に記載の化合物および組成物にはまた、代謝物も包含されてよい。本明細書で使用する「代謝物」という用語は、実施形態の化合物にインビトロまたはインビボで同様の活性を示す実施形態の化合物の代謝の産物あるいはその薬学的に許容される塩、類似体または誘導体を意味する。また、本明細書に記載の化合物および組成物として、水和物や溶媒和物を挙げてよい。本明細書で使用する「溶媒和物」という用語は、溶質（本明細書では種類Ｉ〜ＩＶの化合物）および溶媒によって形成される複合体を意味する。実施形態のためのこのような溶媒は、好ましくは溶質の生物活性を妨げてはならない。溶媒は、例証として、水、エタノールまたは酢酸であってよい。前述から鑑みて、化合物の内の特定の化合物または種類への本明細書における参照は、薬学的に許容される塩、エステル、プロドラッグ、代謝物およびその溶媒和物などの上記の各種の形態を包含すると理解されるであろう。
ｐ３８γ選択的阻害剤のための化合物のライブラリのスクリーニング
別の態様においては、例えば、化合物が、例えば線維症状態（ｐ３８関連またはサイトカイン関連の状態など）の予防または処置のための治療剤として潜在的に有用かどうかを決定するための薬学的に活性な化合物を同定する方法が提供される。前記方法は、ｐ３８γの阻害について複数の化合物をアッセイすること、ｐ３８γの阻害について相対的に高い効力を示す化合物を選択すること、さらにｐ３８αの阻害について選択された化合物を試験し、ｐ３８αの阻害について相対的に高い効力を示す化合物を選択することを含む。前記方法はまた、ｐ３８γの阻害について複数の化合物をアッセイすること、ならびにｐ３８γの阻害について相対的に高い効力を示しかつｐ３８αの阻害についても相対的に高い効力を示す化合物を選択することも含む。前記方法はまた、ｐ３８αの阻害について複数の化合物をアッセイすること、ｐ３８αの阻害について相対的に高い効力を示しかつｐ３８αの阻害についても相対的に高い効力を示す化合物を選択することも含む。好ましくは、このような高い効力のｐ３８γおよびｐ３８α阻害剤化合物のＩＣ５０は、ｐ３８γの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲、好ましくは約１０ｐＭ〜約５μＭまたは約１００ｎＭ〜約５００μＭ、より好ましくは約５００ｐＭ〜約１μＭ、さらにより好ましくは約５００ｐＭ〜約１μＭである。好ましくは、このような高い効力のｐ３８γおよびｐ３８α阻害剤化合物のｐ３８αに関するＩＣ５０値は、ｐ３８γに関するそのＩＣ５０値の２倍を超える。より好ましくは、このような高い効力のｐ３８γおよびｐ３８α阻害剤化合物のｐ３８αに関するＩＣ５０値は、ｐ３８γに関するそのＩＣ５０値の５倍を超える。さらにより好ましくは、このような高い効力のｐ３８γおよびｐ３８α阻害剤化合物のｐ３８αに関するＩＣ５０値は、ｐ３８γに関するそのＩＣ５０値の１０倍を超える。アッセイされる複数の化合物は、好ましくは潜在的化合物のライブラリから選択される。ライブラリからの複数の化合物のアッセイは、各種方法で実施してよい。例えば、いくつかの実施形態において、前記方法は、複数の化合物をｐ３８  ＭＡＰＫに接触させること、および前記化合物がサイトカインの活性を阻害するかどうかを決定することを含む。ｐ３８  ＭＡＰＫは、好ましくはｐ３８αおよびｐ３８γからなる群から選択される。好ましい実施形態において、前記接触手順はインビトロで行うものであって；特定の好ましい実施形態において、前記接触手順は、ｐ３８  ＭＡＰＫを含む細胞に前記化合物を接触させることを含む。
【０１１７】
さらに別の実施形態においては、インビトロまたはインビボで細胞内のｐ３８  ＭＡＰＫの活性を阻害する方法が提供される。一般的に、このような方法は、細胞におけるｐ３８活性が阻害されるような条件下で、ｐ３８  ＭＡＰＫを含む細胞に、ｐ３８阻害に有効な量の化合物（例えば、種類Ｉ〜ＩＶの化合物）を接触させることを含む。このような方法の例は、以下の実施例の項において提供される。前記化合物は、好ましくはｐ３８γの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭ、好ましくは約１０ｐＭ〜約５μＭまたは約１００ｎＭ〜約５００μＭ、より好ましくは約５００ｐＭ〜約１μＭ、さらにより好ましくは約５００ｐＭ〜約１μＭの範囲のＩＣ５０値を示す。好ましくは、前記化合物のｐ３８αに関するＩＣ５０値は、ｐ３８γに関するそのＩＣ５０値の２倍を超える。
【０１１８】
インビボの方法は、例えば、各種の濃度の関心のある化合物（例えば、種類Ｉ〜ＩＶの化合物）を経口的にまたは注射によって一群の動物に導入することを含む。化合物の導入後、リポポリサッカライドが静脈内投与される。血清ＴＮＦαレベルが測定され、対照動物と比較される。好ましい化合物はＴＮＦαの放出を阻害し、しかるにこれにより、試験された動物の血液試料のＴＮＦαレベルが低下する。化合物は、ＴＮＦαの放出の阻害について、好ましくは約１０ｐＭ〜約５μＭ、より好ましくは約５００ｐＭ〜約１μＭ、さらにより好ましくは約５００ｐＭ〜約１μＭの範囲のＥＣ５０を示す。
【０１１９】
薬学的に活性な化合物を同定する方法は、選択された化合物の哺乳動物毒性を決定することをさらに含んでよい。このような方法は、当業者に周知である。薬学的に活性な化合物を同定する方法はまた、哺乳動物毒性の決定に関連してまたは他の理由のためのいずれかにおいて、被験体に選択された化合物を投与することを含んでよい。一実施形態において、被験体は、炎症性の状態を有するか、もしくはこのような病体の危険性がある。好ましくは、被験体は哺乳類であり、そしてヒトであってよい。
【０１２０】
（ｐ３８ＭＡＰキナーゼを阻害する方法）
一実施形態において、インビトロまたはインビボでＳＡＰＫ系を調節する方法が提供される。化合物によるｐ３８  ＭＡＰＫの阻害について相対的に高い阻止濃度に対応するｐ３８γの阻害について相対的に高い効力を化合物が有する場合、前記方法は、ｐ３８  ＭＡＰＫを、ＳＡＰＫを調節する濃度の化合物に接触させること（例えば、ｐ３８  ＭＡＰＫを含む細胞または組織を化合物に接触させることによる）を含む。
【０１２１】
阻止濃度（ＩＣ）は、用量反応曲線上の特定の率（例えば、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％）のｐ３８  ＭＡＰＫの活性の低下をもたらす濃度である。例えば、ＩＣ５０、ＩＣ４０、ＩＣ３０、ＩＣ２０、ＩＣ１０は、用量反応曲線上のそれぞれ５０％、４０％、３０％、２０％、１０％のｐ３８  ＭＡＰＫの活性の低下をもたらす濃度として決定される。ＳＡＰＫ系調節化合物のＩＣ５０は、ｐ３８γの阻害について好ましくは約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲、好ましくは約１０ｐＭ〜約５μＭまたは約１００ｎＭ〜約５００μＭ、より好ましくは約５０ｐＭ〜約１μＭ、さらにより好ましくは約５０ｐＭ〜約１μＭである。
【０１２２】
「細胞に接触させること」とは、化合物または他の組成物が細胞または組織に直接接触している、あるいは細胞または組織における所望の生体影響を誘導するのに十分に近い状態を指す。例えば、ｐ３８  ＭＡＰＫを含む細胞または組織に化合物を接触させることは、細胞における所望の生体影響をもたらすｐ３８  ＭＡＰＫと化合物との間の相互作用を可能にする任意の方法で実施され得る。細胞または組織に接触させることは、例えば、化合物（種類Ｉ〜ＩＶの化合物；および／または塩、エステル、プロドラッグおよび／またはその中間体、および／または上記の内の１つ以上を含む薬学的組成物など）の混合または投与により達成され得る。
【０１２３】
あるいは、細胞または組織に接触させることは、化合物がｐ３８  ＭＡＰＫを含む細胞または組織を直接的または間接的に標的とするような方法で化合物を導入することにより達成され得る。細胞または組織に接触させることは、化合物がｐ３８  ＭＡＰＫと結合する条件下で達成され得る。このような条件としては、化合物およびｐ３８含有細胞または組織の近接度、ｐＨ、温度、あるいはｐ３８  ＭＡＰＫへの化合物の結合に影響を及ぼす任意の条件が含まれる。
【０１２４】
特定の実施形態において、細胞はインビトロで化合物と接触させ；他の実施形態において、細胞はインビボで化合物と接触させる。
【０１２５】
細胞をインビボで接触させる場合、有効濃度（ＥＣ）は、ｐ３８  ＭＡＰＫの活性の低下に依存する特異的な生理反応で測定されるような特定の率（例えば、５０％、４０％、３０％、２０％、１０％）のｐ３８  ＭＡＰＫの活性の低下をもたらす濃度である。このような生理反応は、例えば、ＴＮＦαの血液または他の体液の濃度の低下であってよい。例えば、ＥＣ５０、ＥＣ４０、ＥＣ３０、ＥＣ２０、ＥＣ１０は、用量反応曲線上のそれぞれ５０％、４０％、３０％、２０％、１０％のＴＮＦα濃度の低下によって測定されるようなｐ３８  ＭＡＰＫの活性の低下をもたらす濃度として決定される。ＳＡＰＫ系調節化合物のＥＣ５０は、ｐ３８γの阻害について好ましくは約１０ｐＭ〜約５００μＭの範囲、好ましくは約１０ｐＭ〜約５μＭまたは約１００ｎＭ〜約５００μＭ、より好ましくは約５００ｐＭ〜約１μＭ、さらにより好ましくは約５００ｐＭ〜約１μＭである。
【０１２６】
特定の実施形態において、化合物は、薬学的に許容されるキャリアと共に薬学的組成物の形態で提供される。
処置および／または予防の方法
別の実施形態は、疾患状態、例えば線維症状態を処置または予防する方法を提供する。前記方法は、線維症状態の危険性があるかもしくはこのような状態を有する被験体を同定すること、および線維症状態を処置または予防するのに有効な量の化合物を被験体に投与することを含む。好ましい実施形態において、化合物は、ｐ３８γの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭ、好ましくは約１０ｐＭ〜約５μＭまたは約１００ｎＭ〜約５００μＭ、より好ましくは約５００ｐＭ〜約１μＭ、さらにより好ましくは約５００ｐＭ〜約１μＭの範囲のＩＣ５０を示す。好ましい実施形態において、化合物のｐ３８αに関するＩＣ５０値は、ｐ３８γに関するＩＣ５０値の２倍を超える。好ましい実施形態において、有効量は、化合物によるｐ３８γの阻害についてＩＣ５０またはＩＣ４０またはＩＣ３０またはＩＣ２０またはＩＣ１０以下の血液または血清または別の体液の濃度をもたらし、さらに有効量は、化合物によるｐ３８αの阻害についてＩＣ５０またはＩＣ４０またはＩＣ３０またはＩＣ２０またはＩＣ１０以下の血液または血清または別の体液の濃度をもたらす。好ましい実施形態において、化合物は、ＴＮＦα分泌の阻害について約１０ｐＭ〜約５μＭ、より好ましくは約５００ｐＭ〜約１μＭ、さらにより好ましくは約５００ｐＭ〜約１μＭの範囲のＥＣ５０を示す。他の好ましい実施形態において、有効量は、化合物による体液内のＬＰＳ刺激ＴＮＦα放出の阻害についてＥＣ５０またはＥＣ４０またはＥＣ３０またはＥＣ２０またはＥＣ１０以下の血液または血清または別の体液の濃度をもたらす。有効量は、例えば傾眠状態、消化器不調および光線過敏性発疹などが含まれるがこれらに限定されない被験体における望ましくない副作用の原因となる量の好ましくは約７０％以下、より好ましくは約５０％未満である。処置または予防に使用される化合物は、好ましくは種類Ｉ〜ＩＶの化合物である。
【０１２７】
線維症状態の危険性があるかもしくはこのような状態を有する被験体を同定する方法は、当業者に既知である。本明細書に記載の方法によって処置または予防され得る線維症状態の例としては、ｐ−３８関連状態、例えば、改変サイトカイン活性に関連する状態、ＳＡＰＫ系の調節に関連する状態、自己免疫疾患、および線維症に関連した疾患などが含まれる。サイトカインは、好ましくはＩＬ−１β、ＩＬ−６、ＩＬ−８およびＴＮＦαからなるがこれらに限定されない群から選択される。一実施形態において、炎症性の状態の処置または予防に使用する化合物は、ＳＡＰＫシグナル伝達経路のキナーゼを阻害する化合物である。好ましい化合物の例としては、種類Ｉ〜ＩＶの化合物などが含まれる。
【０１２８】
「ｐ３８関連状態」という用語は、直接的であるにせよ間接的であるにせよ、ｐ３８ＭＡＰキナーゼシグナル伝達経路が関係する疾患または他の有害な状態を意味する。ｐ３８関連状態の例としては、ｐ３８活性のレベルの維持、持続、増大または上昇から生じるＩＬ−１β、ＴＮＦα、ＩＬ−６またはＩＬ−８調節異常あるいは過剰発現が含まれる。このような状態としては、炎症性疾患、自己免疫疾患、線維症疾患、破壊性骨障害、増殖性障害、感染症、神経変性疾患、アレルギー、卒中における再灌流虚血、心臓発作、血管新生障害、臓器の低酸素症状態、血管の過形成、心肥大、トロンビン誘導血小板凝集、ならびにプロスタグランジン経路またはシクロオキシゲナーゼ経路に関連する状態（例えば、プロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼに関わる状態）が含まれるが、これらに限定されない。ｐ３８関連状態は、ｐ３８のアイソフォームに関連またはそれを介したいずれの状態も包含し得る。
【０１２９】
「線維症状態」、「繊維増殖性状態」、「線維症疾患」、「繊維増殖性疾患」、「線維症障害」および「繊維増殖性障害」は、繊維芽細胞の無調節な増殖または活性、および／または膠原組織の病的または過剰な蓄積を特徴とする状態、疾患または障害を意味するために交換可能に使用される。一般的に、いずれの疾患、障害または状態も、本明細書に記載の化合物の投与による処置の対象となる。線維症の障害としては、特発性肺繊維症（ＩＰＦ）や既知の病因による肺線維症を含めた肺線維症、肝線維症および腎線維症が含まれるが、これらに限定されない。他の例示的な線維症状態としては、筋骨格系線維症、心臓の線維症、術後癒着、強皮症、緑内障および皮膚病変（ケロイドなど）が含まれる。
【０１３０】
「ＳＡＰＫ系の調節」という用語は、インビトロであろうとインビボであろうと、例えばｐ３８活性を阻害することによって、ストレス活性化プロテインキナーゼ系の活性を増減させることを意味する。特定の実施形態において、細胞におけるｐ３８活性が未投与の対照細胞のｐ３８活性よりも約５０％、約４０％、約３０％、約２０％または約１０％阻害される場合、ＳＡＰＫ系は調節される。
【０１３１】
本明細書で使用される改変されたサイトカイン活性に関連する状態とは、サイトカイン活性が非疾患状態と比較して改変される状態を指す。これには、ｐ３８活性に関連し得るサイトカイン活性のレベルの維持、持続、増大または上昇をもたらすＩＬ−１β、ＴＮＦα、ＩＬ−６またはＩＬ−８過剰産生または調節異常に起因する状態が含まれるが、これらに限定されない。このような状態としては、炎症性疾患、自己免疫疾患、線維症疾患、破壊性骨障害、増殖性障害、感染症、神経変性疾患、アレルギー、卒中における再灌流／虚血、心臓発作、血管新生障害、臓器の低酸素症状態、血管の過形成、心肥大、トロンビン誘導血小板凝集、ならびにシクロオキシゲナーゼ経路およびリポキシゲナーゼシグナル伝達経路に関連する状態（例えば、プロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼに関わる状態）が含まれるが、これらに限定されない。サイトカイン関連状態は、ＩＬ−１（特にＩＬ−１β）、ＴＮＦα、ＩＬ−６またはＩＬ−８、あるいはｐ３８によって調節され得る他の任意のサイトカインに関連またはそれを介したいずれの状態も包含し得る。好ましい実施形態において、サイトカイン関連状態は、ＴＮＦαに関連する状態である。
【０１３２】
本明細書に記載の方法はまた、自己免疫疾患ならびに急性および慢性炎症に関連する疾患を処置するために使用することもできる。これらの疾患としては、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、炎症性肺線維症（ＩＰＦ）、関節リウマチ；リウマチ様脊椎炎；変形性関節症；痛風、他の関節炎状態；敗血症；敗血症性ショック；内毒素性ショック；グラム陰性敗血症；トキシックショック症候群；顔面筋疼痛症候群（ＭＰＳ）；細菌性赤痢；喘息；成人呼吸窮迫症候群；炎症性腸疾患；クローン病；乾癬；湿疹；潰瘍性大腸炎；糸球体腎炎；強皮症；慢性甲状腺炎；グレーブス病；オーモンド病；自己免疫性胃炎；重症筋無力症；自己免疫性溶血性貧血；自己免疫性好中球減少症；血小板減少症；膵線維症；肝線維症を含む慢性活動性肝炎；急性および慢性腎疾患；腎線維症；過敏性大腸症候群；発熱（ｐｙｒｅｓｉｓ）；再狭窄；大脳マラリア；脳卒中および虚血傷害；神経外傷；アルツハイマー病；ハンチントン病；パーキンソン病；急性疼痛および慢性疼痛；アレルギー性鼻炎およびアレルギー性結膜炎を含むアレルギー；心肥大、慢性心不全；急性冠動脈症候群；悪液質；マラリア；ハンセン病；リーシュマニア症；ライム病；ライター症候群；急性滑膜炎；筋肉変性、滑液包炎；腱炎；腱鞘炎；ヘルニア様の、破裂性椎間板症候群または脱出性椎間板症候群；大理石骨病；血栓症；珪肺症；肺サルコイドーシス（ｐｕｌｍｏｎａｒｙ  ｓａｒｃｏｓｉｓ）；骨粗鬆症や多発性骨髄腫関連骨障害などの骨吸収疾患；癌（転移性乳癌、直腸結腸癌悪性黒色腫、胃癌および非小細胞肺癌を含むがこれらに限定されない）；対宿主移植片反応；および多発性硬化症や狼瘡や線維筋痛などの自己免疫疾患；ＡＩＤＳおよび他のウイルス性疾患（帯状疱疹、単純ヘルペスＩ型またはＩＩ型、インフルエンザウイルス、重症急性呼吸器症候群（ＳＡＲＳ）およびサイトメガロウイルスなど）；および糖尿病が含まれるが、これらに限定されない。さらに、実施形態の方法は、急性骨髄性白血病や慢性骨髄性白血病やカポシ肉腫や多発性骨髄腫や乳癌（転移性乳癌を含む）を含めた増殖性障害（良性および悪性の過形成を含む）；直腸結腸癌；骨転移など；神経筋疼痛や頭痛や癌疼痛や歯痛や関節炎痛を含めた疼痛性障害；固形腫瘍の血管新生や、眼血管新生や、幼児性血管腫を含めた血管新生障害；プロスタグランジンエンドペルオキシドシンターゼ−２に関連する状態（浮腫、発熱、痛覚消失および疼痛など）を含めたシクロオキシゲナーゼおよびリポキシゲナーゼシグナル伝達経路に関連する状態；臓器の低酸素状態；トロンビン誘導血小板凝集、を処置するために使用することができる。さらに、本明細書に記載の方法は、哺乳類を含めた動物の原虫症の処置に有用であり得る。
【０１３３】
被験体は、１つ以上の細胞または組織、または有機体を含んでよい。好ましい被験体は哺乳類である。哺乳類はいずれの哺乳類も包含し得る。非限定例として、好ましい哺乳類には、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ラクダ、バッファロー、ネコ、イヌ、ラット、マウスおよびヒトが含まれる。非常に好ましい被験体哺乳類は、ヒトである。化合物は、当該技術分野で既知の任意の薬物送達経路を介して被験体に投与され得る。特定の例示的な投与経路としては、経口、経眼、直腸、口腔内、局所、鼻噴、眼、皮下、筋肉内、静脈内（ボーラス投与および点滴）、脳内、経皮および肺内が含まれる。
【０１３４】
本明細書で使用される「治療上有効量」および「予防上有効量」の文脈において使用される「有効量」という用語は、同定された疾患または状態の処置、軽減または予防に十分な化合物の量、あるいは検出可能な治療効果、予防効果または阻害効果を示すのに十分な化合物の量を指す。例えば、前記効果は、以下の実施例では開示されるアッセイによって検出され得る。被験体の正確な有効量は、被験体の体重、サイズおよび健康；状態の性質および程度；および投与のために選択される治療法または治療法の組み合わせにより変動する。所定の状況のための治療上および予防上有効量は、臨床医の技術および判断の範囲内のルーチン試験によって決定され得る。好ましくは、実施形態の化合物の有効量により、３８ＭＡＰキナーゼの阻害についてのＩＣ５０、ＩＣ４０、ＩＣ３０、ＩＣ２０またはＩＣ１０未満の血液または血清または別の体液の濃度が生じる。好ましくは、実施形態の化合物の有効量により、全血からのＴＮＦα分泌を１０％、１５％、２０％、３０％，４０％または５０％変えるのに効果的な血液または血清または別の体液の濃度が生じる。
【０１３５】
いずれの化合物においても、治療上または予防上有効量は、細胞培養アッセイ（例えば新生細胞）または動物モデル（通常、ラット、マウス、ウサギ、イヌまたはブタ）のいずれかで最初に推定され得る。動物モデルはまた、適切な濃度域および投与経路を決定するために使用することもできる。そして、このような情報は、ヒトにおける投与に有用な用量および経路を決定するために使用することができる。
【０１３６】
治療上／予防上の有効性および毒性は、細胞培養または実験動物における標準的薬学的手法、例えばＥＤ５０（集団の５０％に治療上有効な用量）やＬＤ５０（集団の５０％に致死的な用量）。治療効果と毒性効果との間の用量比が治療指数であり、それは比率ＥＤ５０／ＬＤ５０で表される。高い治療指数を示す薬学的組成物が好ましい。しかし、狭い治療指数を示す薬学的組成物もまた、実施形態の適用範囲内で含まれる。細胞培養アッセイおよび動物実験から得られるデータは、ヒト使用における投与量の範囲を定式化する際に使用してよい。このような組成物における投与量は、好ましくはほとんど毒性のないＥＤ５０を含む血中濃度の範囲内に含まれる。投与量は、使用される剤形、患者の感受性および投与経路に基づく範囲内で変化させてよい。
【０１３７】
正確な投与量は、処置を必要とする被験体に関する因子を考慮して施術者によって決定されるであろう。用法・用量を調整して活性薬剤の十分なレベルがもたらされ、所望の効果が維持される。考慮され得る因子としては、疾患状態の重症度、被験体の健康状態、被験体の年齢および体重および性別、食事、投与の時間および頻度、薬剤併用、反応感受性、ならびに処置に対する忍容性／反応が含まれる。長時間作用性の薬学的組成物は、特定の製剤の半減期およびクリアランス率によって３〜４日毎、週毎または２週間に１回投与してよい。
【０１３８】
本明細書に記載の処置には、疾患を予防すること、徴候を軽減すること、疾患進行を緩慢化すること、損傷を逆転させること、または疾患を治癒させることが含まれることが理解されるであろう。
【０１３９】
一態様においては、線維症状態の処置により、未処置の被験体の集団と比較して、処置された被験体の集団の平均生存期間の増加がもたらされる。好ましくは、平均生存期間は、約３０日超；好ましくは約６０日超；より好ましくは約９０日超；およびさらにより好ましくは約１２０日超増加する。集団の生存期間の増加は、任意の再現可能な手段で測定され得る。また、好ましい態様において、集団の平均生存期間の増加は、例えば活性化合物の投与開始後の集団における生存の平均長さを算定することにより測定され得る。また、別の好ましい態様において、集団の平均生存期間の増加は、例えば活性化合物の投与の第１のラウンドの完了後の集団における生存の平均長さを算定することにより測定され得る。
【０１４０】
別の態様においては、線維症状態の処置により、キャリアを単独で投与される被験体の集団と比較して、処置された被験体の集団の死亡率の低下がもたらされる。別の態様においては、線維症状態の処置により、未処置の被験体の集団と比較して、処置された被験体の集団の死亡率の低下がもたらされる。さらなる態様において、線維症状態の処置により、実施形態の化合物やその薬学的に許容される塩、代謝物、類似体および誘導体ではない薬物の単剤療法を受ける集団と比較して、処置された被験体の集団の死亡率の低下がもたらされる。好ましくは、死亡率は、約２％超；より好ましくは約５％超；より好ましくは約１０％超；および最も好ましくは約２５％超低下する。好ましい態様において、処置された被験体の集団の死亡率の低下は、任意の再現可能な手段で測定され得る。別の好ましい態様において、集団の死亡率の低下は、例えば活性化合物の投与開始後の集団における単位期間当たりの平均の疾患関連死亡数を算定することにより測定され得る。また、別の好ましい態様において、集団の死亡率の低下は、例えば活性化合物の投与の第１のラウンドの完了後の開始後の集団における単位期間当たりの平均の疾患関連死亡数を算定することにより測定され得る。
【０１４１】
別の態様においては、線維症状態の処置により、腫瘍の増殖率の低下がもたらされる。好ましくは、処置後、腫瘍増殖率は、処置前に比べて少なくとも約５％低下し；より好ましくは、腫瘍増殖率は少なくとも約１０％低下し；より好ましくは少なくとも約２０％低下し；より好ましくは少なくとも約３０％低下し；より好ましくは少なくとも約４０％低下し；より好ましくは少なくとも約５０％低下し；さらにより好ましくは少なくとも６０％低下し；および最も好ましくは少なくとも約７５％減少する。腫瘍増殖率は、任意の再現可能な測定手段で測定してよい。好ましい態様において、腫瘍増殖率は、単位期間当たりの腫瘍の直径の変化により測定される。
【０１４２】
別の態様において、線維症状態の処置により、細胞増殖率の低下がもたらされる。好ましくは、処置後、細胞増殖率は、少なくとも約５％；より好ましくは少なくとも約１０％；より好ましくは少なくとも約２０％；より好ましくは少なくとも約３０％；より好ましくは少なくとも約４０％；より好ましくは少なくとも約５０％；さらにより好ましくは少なくとも約６０％；および最も好ましくは少なくとも約７５％低下する。細胞増殖率は、任意の再現可能な測定手段で測定してよい。好ましい態様において、細胞増殖率は、例えば単位期間当たりの組織試料の分裂細胞の数を測定することによって測定される。
【０１４３】
別の態様において、線維症状態の処置により、増殖性細胞の比率の低下がもたらされる。好ましくは、処置後、増殖性細胞の比率は、少なくとも約５％；より好ましくは少なくとも約１０％；より好ましくは少なくとも約２０％；より好ましくは少なくとも約３０％；より好ましくは少なくとも約４０％；より好ましくは少なくとも約５０％；さらにより好ましくは少なくとも約６０％；および最も好ましくは少なくとも約７５％低下する。増殖性細胞の比率は、任意の再現可能な測定手段で測定してよい。好ましい態様において、増殖性細胞の比率は、例えば組織試料の非分裂細胞の数と比べて分裂細胞の数を定量化することによって測定される。別の好ましい態様において、増殖性細胞の比率は分裂指数に相当する。
【０１４４】
別の態様において、線維症状態の処置により、細胞増殖の領域または帯域のサイズの減少がもたらされる。好ましくは、処置後、細胞増殖の領域または帯域のサイズは、処置前のそのサイズと比べて少なくとも５％減少し；より好ましくは少なくとも約１０％減少し；より好ましくは少なくとも約２０％減少し；より好ましくは少なくとも約３０％減少し；より好ましくは少なくとも約４０％減少し；より好ましくは少なくとも約５０％減少し；さらにより好ましくは少なくとも約６０％減少し；および最も好ましくは少なくとも約７５％減少する。細胞増殖の領域または帯域のサイズは、任意の再現可能な測定手段で測定してよい。好ましい態様において、細胞増殖の領域または帯域のサイズは、細胞増殖の領域または帯域の直径または幅として測定され得る。
【０１４５】
本明細書に記載の方法は、処置を必要とする被験体を同定することを含んでよい。好ましい実施形態において、前記方法は、処置を必要とする哺乳類を同定することを含む。非常に好ましい実施形態において、前記方法は、処置を必要とするヒトを同定することを含む。処置を必要とする被験体を同定することは、処置から利益を受け得る被験体を示す任意の手段によって達成され得る。例えば、処置を必要とする被験体の同定は、当業者に既知の臨床診断、臨床検査または任意の他の手段によって行ってよく、それらには、同定のための手段のいずれの組み合わせも含まれる。
【０１４６】
本明細書の他で記載される通り、本明細書に記載の化合物は、薬学的組成物において調製され、所望により、疾患または状態の処置が可能となる任意の経路によって投与され得る。好ましい投与経路は経口投与である。投与は単回投与の形態をとり得るか、もしくは実施形態の化合物を、分割投与あるいは連続放出型調製または投与の方法（例えば、ポンプ）で一定時間投与することができる。いかに実施形態の化合物を被験体に投与しようと、投与される化合物の量、および選択される投与経路は、疾患状態の効果的な処置が可能となるように選択されなければならない。
【０１４７】
実施形態の方法はまた、疾患状態の処置ための１つ以上のさらなる治療剤と共に本明細書に記載の化合物または化合物を使用することも含む。したがって、例えば、活性成分の組み合わせは：（１）複合製剤において同時に共調製（ｃｏ−ｆｏｒｍｕｌａｔｅｄ）および投与または送達され得る；（２）交互または同時に別々の製剤として送達され得る；あるいは（３）当該技術分野で既知の他の併用投与方式によるものであり得る。代替治療で送達される場合、本明細書に記載の方法は、例えば別個の溶液、乳剤、懸濁液、錠剤、丸剤またはカプセル剤、あるいは別個の注射器における種々の注射によって、逐次的に活性成分を投与または送達することを含んでよい。一般的に、代替治療の間は各活性成分の有効薬量は逐次的、すなわち連続して投与されるが、同時の治療においては２種以上の活性成分の有効薬量が一緒に投与される。また、各種の順序の間欠的な併用投与も使用してよい。
【０１４８】
診断検査は、本明細書に記載の方法の一部であると考えられる。例えば、組織生検試料は、線維症状態、例えばｐ３８関連またはサイトカイン関連状態を患う被験体から採取してよい。生検試料は、試料におけるｐ３８活性のレベル（またはサイトカインレベル）を決定するために試験され；そして試料に実施形態の選択された化合物を接触させ、そしてｐ３８活性（またはサイトカインレベル）を測定して化合物が所望の効果（例えば、ｐ３８γの阻害について約１０ｐＭ〜約５００μＭ、好ましくは約１０ｐＭ〜約５μＭまたは約１００ｎＭ〜約５００μＭ、より好ましくは約５０ｐＭ〜約１μＭ、さらにより好ましくは約５０ｐＭ〜約１μＭの範囲のＩＣ５０値、ならびにｐ３８γの阻害についてのＩＣ５０値の少なくとも２倍のｐ３８αに関するＩＣ５０値のｐ３８またはサイトカイン活性の阻害）を有するどうかが決定される。このような試験は、このような化合物の投与がその被験体に効果があると見込まれるのかどうかを決定するために使用してよい。あるいは、試料に標式化合物（例えば、蛍光標識化合物または放射能標識化合物）を接触させてよく、そして次に試料を検査し、蛍光または放射性シグナルを検出して組織試料のｐ３８の分布を決定する。また、治療の経過中に採取を繰り返した生検試料を使用して治療の有効性を検討してもよい。本明細書に記載の化合物を使用する他の診断検査は、本明細書の教示に鑑みて当業者に明らかであろう。
【０１４９】
従って、例えば、一実施形態は、細胞または組織試料におけるｐ３８タンパク質の存在、位置および／または量を決定する方法を提供する。前記方法は、ａ）化合物がｐ３８  ＭＡＰＫに結合し得る条件下で細胞または組織試料に実施形態の化合物を接触させること；およびｂ）細胞または組織試料内の化合物の存在、位置および／または量を決定し、それにより細胞または組織試料内のｐ３８  ＭＡＰＫの存在、位置および／または量を決定することを含む。細胞または組織試料内の化合物の存在、位置および／または量の決定は、細胞または組織試料内の化合物の存在、位置および／または量を明らかにする任意の手段によって実施してよい。例えば、上記したように、放射能標識または蛍光標識の方法を使用してよい。細胞または組織試料内の化合物の存在、位置および／または量を決定するさらなる方法は、当業者にとって明らかであろう。
【０１５０】
別の実施形態は、（１）化合物が炎症性の状態を患う被験体の処置に有用な治療剤であるのかどうか、または（２）疾患の重症度、または（３）疾患修飾剤の投与中の疾患経過、を決定する方法を提供する。前記方法は、ａ）本明細書に記載の化合物または疾患修飾剤の投与の終了前、終了中および終了後の被験体からの細胞または組織試料を得ること；ｂ）化合物を試料に接触させること；およびｃ）化合物によるｐ３８  ＭＡＰＫに対する結合が試料内のｐ３８  ＭＡＰＫの量に関連するものである試料と結合する化合物の量を決定することを含む。
【０１５１】
（本明細書に記載の化合物および方法により処置されることが企図される疾患の具体例）
ＣＯＰＤ
慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）は、（１）気管および実質の炎症細胞（好中球、マクロファージおよびＳＤ８＋Ｔ細胞）の数の増加、（２）炎症性サイトカインおよびケモカイン発現の増加、および（３）プロテアーゼ（エラスターゼ、カテプシンおよびマトリックスメタロプロテアーゼ（ＭＭＰ））の数の増加が含まれる肺の慢性的炎症プロセスを特徴とする。気道炎症の多くの潜在的メディエーターの産生および作用は、ストレス誘発性ＭＡＰＫまたはｐ３８キナーゼカスケードにより変動すると考えられる。肺の事象の多血症：肺の微小血管内皮細胞におけるＬＰＳ−およびＴＮＦ−α−誘導細胞間接着分子−１の発現、ＭＭＰ−９活性化、肺の動脈細胞の低酸素誘導性刺激、気管支上皮細胞の高浸透圧性誘導ＩＬ−８発現、ならびに好酸球輸送および生存の上昇、にｐ３８キナーゼ活性化が関連することが、いくつかの報告により支持される。
【０１５２】
Ｔｒｉｆｉｌｉｅｆｆら（２００５  Ｂｒｉｔ  Ｊ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  １４４：１００２−１０）は、ＣＧＨ２４６６、組み合わせたアデノシン受容体拮抗薬、ｐ３８  ＭＡＰＫおよびホスホジエステラーゼ４型阻害剤が、喘息およびＣＯＰＤなどの疾患においてインビトロおよびインビボで効力のある抗炎症作用を示したことを報告した。Ｕｎｄｅｒｗｏｏｄら（２０００  Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２７９：Ｌ８９５−Ｌ９０２）は、効力がありかつ選択的なｐ３８  ＭＡＰＫ阻害剤、すなわちＳＢ２３９０６３が、肺における好中球輸送および活性化の低下につながる繊維芽細胞増殖およびマトリックス産生を調節する能力のため気管線維症に関連付けられてきたＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、ＩＬ−６およびＩＬ−８を含めた炎症誘発性サイトカインの産生を低下させたことを示した。その前には、その同じ化合物が、ブレオマイシンによって誘導される慢性的線維症と関連する反応を変更させ得ることが明らかにされている。この阻害活性は、ｐ３８のαおよびβアイソフォームに対して選択的であった。本明細書に記載の化合物および方法は、ＣＯＰＤの処置において有用である。
【０１５３】
肺線維症
肺線維症とは、特発性肺繊維症（ＩＰＦ）、びまん性間質性肺線維症、炎症性肺線維症または線維化性肺胞隔炎とも呼称され、炎症性肺障害、ならびに線維症が生しる肺胞中隔内への炎症性細胞浸潤を含む肺胞炎に起因する肺胞間の線維組織の異常形成を特徴とする状態の混成群である。ＩＰＦの作用は、慢性的で、進行性であり、そして多くの場合致命的である。ｐ３８  ＭＡＰＫ活性化は、肺線維症患者の肺において示されてきた。肺線維症についての多くの研究は、肺におけるいくつかのサイトカインの発現の持続および増大は、後に肺構造のリモデリングが続く炎症細胞の漸増および細胞外マトリックス成分の蓄積に関連する。特に、ＴＮＦ−αやインターロイキンＩＬ−１βなどの炎症誘発性サイトカインは、肺臓炎および肺線維症の形成において主要な役割を果たすことが示された。さらに、ＴＧＦ−βやＣＴＧＦなどの線維症誘発性サイトカインもまた、肺線維症の病因において重要な役割を果たす。Ｍａｔｓｕｏｋａら（２００２；Ａｍ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ２８３：Ｌ１０３−Ｌ１１２）は、ｐ３８阻害剤（ＦＲ−１６７６５３）がマウスのブレオマイシン誘導肺線維症を軽減することを示した。さらに、ピルフェニドン（５−メチル−１−フェニル−２−（１Ｈ）−ピリドン）、すなわち抗炎症、抗酸化および抗線維化効果とが組み合わされた化合物は、肺線維症の実験モデルならびに臨床試験で効果的であることが明らかにされている（Ｒａｇｈｕ，ｅｔ  ａｌ．，１９９９  Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １５９：１０６１−１０６９；Ｎａｇａｉ，ｅｔ  ａｌ．，２００２  Ｉｎｔｅｒｎ  Ｍｅｄ  ４１：１１１８−１１２３；Ｇａｈｌ，ｅｔ  ａｌ．，２００２  Ｍｏｌ  Ｇｅｎｅｔ  Ｍｅｔａｂ  ７６：２３４−２４２；Ａｚｕｍａ，ｅｔ  ａｌ．，２００２  Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １６５：Ａ７２９）。本明細書に記載の化合物および方法は、ＩＰＦなどの肺線維症の処置に有用である。
【０１５４】
腎線維症
最初の発作の内容に関わらず、腎線維症は、腎臓疾患が末期腎不全へと進行する一般的最終経路であると考えられる。Ｓｔａｍｂｅら（２００４；Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ  １５：３７０−３７９）は、腎線維症のラットモデルでＳｃｉｏｓ（米国カリフォルニア州サンフランシスコ）によって開発されたｐ３８（ＮＰＣ３１１６９）の活性（リン酸化）形態の阻害剤を試験し、間隙容量、ＩＶ型コラーゲン沈着および結合組織成長ｍＲＮＡレベルによる評価で腎線維症の有意な低下を報告した。本明細書に記載の化合物および方法は、腎線維症の処置に有用である。
【０１５５】
平滑筋腫
子宮平滑筋腫または子宮類線維腫は、利用できる長期に有効な薬物療法が知られていない女性における最も一般的な骨盤腫瘍である。平滑筋腫は、細胞増殖の増大および組織線維症を特徴とする。ピルフェニドンが、培養された子宮筋および平滑筋腫の平滑筋細胞において細胞増殖およびコラーゲン発現に関して試験され、子宮筋および平滑筋腫細胞増殖における有効な阻害剤であることが判明している（Ｌｅｅ，ｅｔ  ａｌ．，１９９８  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  ８３：２１９−２２３）。本明細書に記載の化合物および方法は、平滑筋腫の処置に有用である。
【０１５６】
心内膜心筋線維症
心内膜心筋線維症（ＥＭＦ）とは、収縮性心筋症が認められることを特徴とする障害である。ＥＭＦは、レフラー心内膜炎（非熱帯性好酸球増加性心内膜心筋線維症または好酸球増加症を伴う線維形成性壁心内膜炎）を含む単一の疾患プロセスの範囲の一部であると考えられる場合がある。ＥＭＦにおいては、心内膜心筋表面がさらに一般的に関与する場合、基礎をなすプロセスによって心臓の心内膜表面に斑状の線維症が生じ、これは服薬遵守の低下、そして最終的には生理機能の制約につながる。心内膜の線維症は、主に左右の心室の流入路を巻き込み、そして房室弁に影響を及ぼし、これが三尖弁逆流および僧帽弁逆流につながり得る。ＭＡＰＫ活性化は、ＥＭＦにおける不斉脈惹起性の心房の構造的リモデリングに寄与することが示された。本明細書に記載の化合物および方法は、心内膜心筋線維症の処置および／または予防に有用である。
【０１５７】
他の炎症性疾患
多くの自己免疫疾患ならびに慢性炎症および急性反応に関連する疾患は、ｐ３８ＭＡＰキナーゼの活性化ならびに炎症性サイトカインの過剰発現または調節異常に関連付けられてきた。これらの疾患としては、関節リウマチ；リウマチ様脊椎炎；変形性関節症；痛風、他の関節炎状態；敗血症；敗血症性ショック；内毒素性ショック；グラム陰性敗血症；トキシックショック症候群；喘息；成人呼吸窮迫症候群；慢性閉塞性肺疾患；慢性肺炎症；炎症性腸疾患；クローン病；乾癬；湿疹；潰瘍性大腸炎；膵線維症；肝線維症；急性および慢性腎疾患；過敏性大腸症候群；発熱；再狭窄；大脳マラリア；脳卒中および虚血傷害；神経外傷；アルツハイマー病；ハンチントン病；パーキンソン病；急性疼痛および慢性疼痛；アレルギー性鼻炎；アレルギー性結膜炎；慢性心不全；急性冠動脈症候群；悪液質；マラリア；ハンセン病；リーシュマニア症；ライム病；ライター症候群；急性滑膜炎；筋肉変性、滑液包炎；腱炎；腱鞘炎；ヘルニア様の、破裂性椎間板症候群または脱出性椎間板症候群；大理石骨病；血栓症；癌；再狭窄；珪肺症；肺サルコイドーシス；骨粗鬆症などの骨吸収疾患；対宿主移植片反応；および多発性硬化症や狼瘡や線維筋痛などの自己免疫疾患；ＡＩＤＳおよび他のウイルス性疾患（帯状疱疹、単純ヘルペスＩ型またはＩＩ型、インフルエンザウイルス、およびサイトメガロウイルスなど）；および糖尿病が含まれるが、これらに限定されない。
【０１５８】
多くの研究により、ｐ３８ＭＡＰキナーゼの活性を低下（その上流活性化因子またはその下流エフェクター）が、遺伝子的または化学的手段のいずれかによって炎症反応を弱め、組織の損傷を予防または最小化することが明らかにされている（例えば、Ｅｎｇｌｉｓｈ，ｅｔ  ａｌ．，２００２  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｓｃｉ  ２３：４０−４５；およびＤｏｎｇ，ｅｔ  ａｌ．，２００２  Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ２０：５５−７２を参照）。従って、ｐ３８活性の阻害剤は、余分または未調節のサイトカイン産生も阻害し、単一の炎症誘発性サイトカインより多くのものを阻害し得るものであって、抗炎症の剤や治療法として有用であり得る。さらに、ｐ３８ＭＡＰキナーゼ関連炎症反応に関連する多数の疾患は、これらの状態を処置するための効果的な方法の必要性があることを示している。
【０１５９】
心臓血管疾患：炎症および白血球の活性化／浸潤は、アテローム性動脈硬化症や心不全が含まれる心臓血管疾患の開始および進行に主な役割を果たす。急性ｐ３８マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）経路の阻害により、心筋虚血／再灌流障害における組織損傷および白血球蓄積が抑制される。本明細書に記載の化合物および方法は、心臓血管疾患の処置に有用である。
【０１６０】
多発性硬化症：中枢神経系の炎症は、多発性硬化症などの疾患において認められ、軸索の機能障害および破壊につながる。インビトロおよびインビボの両所見により、介在性の炎症性軸索障害における一酸化窒素（ＮＯ）の重要な役割が明らかにされている。ＮＯ曝露によりｐ３８ＭＡＰキナーゼは活性化され、ｐ３８シグナル伝達の阻害がニューロンおよび軸索の生存作用につながることが明らかにされている。ＯＣＭおよびＩＧＦ−１は、ＮＯ曝露された皮質ニューロンにおいてｐ３８活性化を低下させ、ＮＯに曝露される培養物における軸索の生存、すなわちマイトジェン活性化プロテインキナーゼ／細胞外シグナル関連キナーゼシグナル伝達に依存するプロセスを改善した。本明細書に記載の化合物および方法は、多発性硬化症の処置に有用である。
【０１６１】
初期移植片機能不全：非特異的な炎症は、初期移植片機能不全（ＰＮＦ）と関連している。炎症性膵島障害には、常在性膵島マクロファージによって産生されるインターロイキン−１β（１Ｌ−１β）や腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）などの炎症誘発性サイトカインが少なくとも部分的に介在している。ｐ３８経路は、単球マクロファージ系統の細胞におけるサイトカイン産生に関与することが知られている。化学的ｐ３８阻害剤（ＳＢ２０３５８０）によるｐ３８経路の阻害により、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）および／または炎症性サイトカインに曝露されるヒト膵島におけるＩＬ−１βおよびＴＮＦ−αの産生が抑制される。ＩＬ−１βは、大部分が常在性マクロファージによって産生されるが、導管細胞および膵島血管内皮細胞は、単離したヒト膵島におけるＩＬ−１βの別の細胞源であることが明らかにされている。ＳＢ２０３５８０もまた、投与された膵島の誘導性一酸化窒素シンターゼ（ｉＮＯＳ）およびシクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）の発現を阻害した。さらに、移植前にＳＢ２０３５８０を１時間投与したヒト膵島については、移植片の機能の有意な改善が認められた。本明細書に記載の化合物および方法は、臨床的な膵島移植における移植片生存の改善に有用である。
【０１６２】
急性腎損傷：シスプラチンは重要な化学療法剤であるが、急性腎損傷を引き起こす可能性がある。この急性腎損傷の一部は、腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）が介在している。シスプラチンは、ｐ３８  ＭＡＰＫを活性化し、癌細胞のアポトーシスを誘導する。ｐ３８  ＭＡＰＫの活性化は、虚血傷害およびマクロファージにおけるＴＮＦ−αの産生の増加につながる。インビトロにおいて、シスプラチンは、近位尿細管細胞におけるｐ３８  ＭＡＰＫの用量依存的活性化を引き起こした。ｐ３８  ＭＡＰＫの活性化の阻害は、ＴＮＦ−α産生の阻害につながった。インビボにおいて、シスプラチンの単回投与を受けたマウスは、腎臓のｐ３８  ＭＡＰＫ活性の増加および白血球の浸潤の増大を伴う重度の腎機能障害を発現した。しかし、シスプラチンと共にｐ３８  ＭＡＰＫ阻害剤ＳＫＦ８６００２を投与された動物は、シスプラチン＋ビヒクル投与の動物と比べて、腎機能障害の低下、組織学的障害の重症度の低下、および白血球の減少を示した。本明細書に記載の化合物および方法は、急性腎損傷の予防に有用である。
【０１６３】
歯周炎：炎症誘発性メディエーターであるブラジキニン（ＢＫ）は、インビトロでヒト歯肉線維芽細胞のインターロイキン８（ＩＬ−８）産生を促進し、歯周炎などの各種炎症性疾患の病因において重要な役割を果たす。特異的ｐ３８マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）阻害剤ＳＢ２０３５８０は、ＢＫおよびＩＬ−１βの組み合わせにより促進されるＩＬ−８産生ならびにＩＬ−１β促進ＩＬ−８産生を低下させた。本明細書に記載の化合物および方法は、歯周炎の処置または予防に有用である。
【０１６４】
いくつかの実施形態において、上記の使用のいずれかにおけるｐ３８阻害剤は、
【０１６５】
【化２０−１】
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【０１６６】
【化２０−２】
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【０１６７】
【化２０−３】
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およびピルフェニドンからなる群から選択されない。
【０１６８】
（薬学的組成物）
本明細書に記載の化合物は単独で投与することが可能であるが、薬学的組成物として化合物を調製することが好ましい場合がある。従って、さらに別の態様においては、本発明の方法において有用な薬学的組成物が提供される。さらに具体的には、本明細書に記載の薬学的組成物は、とりわけ、炎症性の状態、例えばｐ３８活性またはサイトカイン活性またはそのあらゆる組み合わせに関連する状態の処置または予防に有用であり得る。薬学的組成物は、状態を処置または軽減するためにインビトロまたはインビボまたは両方で被験体に投与され得るいずれかの組成物である。好ましい実施形態において、薬学的組成物は、インビボで投与され得る。被験体は、１つ以上の細胞または組織または有機体を含み得る。好ましい被験体は、哺乳類である。非限定的な例として、哺乳類には、ウシ、ブタ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、ラクダ、バッファロー、ネコ、イヌ、ラット、マウスおよびヒトなどのいずれの哺乳類も含まれる。非常に好ましい被験体哺乳類は、ヒトである。
【０１６９】
一実施形態において、薬学的組成物は、特定の投与様式や剤形によって、キャリア、溶媒、安定剤、アジュバント、希釈剤などの薬学的に許容される賦形剤により調製され得る。薬学的組成物は一般的に、生理的に適合するｐＨを達成するように調製しなければならず、剤形および投与経路によって約３のｐＨ〜約１１のｐＨ、好ましくは約ｐＨ３〜約ｐＨ７の範囲であってよい。別の実施形態においては、ｐＨを約ｐＨ５．０〜約ｐＨ８の範囲に調整することが好ましい場合がある。さらに具体的に、薬学的組成物は、１つ以上の薬学的に許容される賦形剤と共に、治療的または予防的に有効な量の本明細書に記載の少なくとも１つの化合物を含むことができる。場合により、薬学的組成物は、本細書に記載される化合物の組み合わせを含むこともできれば、あるいは細菌感染症の処置または予防に有用な第２の活性成分（例えば、抗バクテリア剤または抗菌剤）を含むこともできる。
【０１７０】
例えば非経口または経口投与用の製剤は、最も一般的には固体、液体溶液、乳剤または懸濁液であるが、肺内投与用の吸入可能な製剤は、一般的に好まれている粉末製剤を含めて一般的に液体または粉末である。好ましい薬学的組成物はまた、投与前に生理的に適合した溶媒と再構成された凍結乾燥固体として調製され得る。別の薬学的組成物は、シロップ剤、クリーム、軟膏、錠剤などとして調製され得る。
【０１７１】
「薬学的に許容される賦形剤」という用語は、本明細書に記載の化合物などの医薬品の投与のための賦形剤を指す。本用語は、過度の毒性なしで投与され得るいずれかの薬学的賦形剤を指す。
【０１７２】
薬学的に許容される賦形剤は、部分的には、投与される特定の組成物ならびに組成物の投与に使用する特定の方法によって決定される。従って、薬学的組成物の多種多様で適切な製剤が存在する（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓを参照）。
【０１７３】
適切な賦形剤は、タンパク質、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、アミノ酸ポリマー、アミノ酸コポリマーおよび不活性ウイルス粒子などの大きくて遅く代謝する巨大分子を含めたキャリア分子であってよい。他の例示的な賦形剤としては、アスコルビン酸などの抗酸化剤；ＥＤＴＡなどのキレート剤；デキストリン、ヒドロキシアルキルセルロース、ヒドロキシアルキルメチルセルロース、ステアリン酸などの炭水化物；油、水、生理食塩水、グリセロールおよびエタノールなどの液体；湿潤剤または乳化剤；ｐＨ緩衝物質などが含まれる。リポソームもまた、薬学的に許容される賦形剤の定義の中に含まれる。
【０１７４】
本明細書に記載の薬学的組成物は、所期の投与方法に適切な任意の形態で調製してよい。例えば経口的使用を意図する場合は、錠剤、トローチ、口内錠、水性または油性懸濁液、非水溶液、分散性の粉末または顆粒（微粒状粒子またはナノ粒子を含む）、乳剤、硬カプセル剤または軟カプセル、シロップまたはエリキシルを調製し得る。経口的使用を意図した組成物は、薬学的組成物を製造する当該技術分野で既知の任意の方法によって調製され得、このような組成物は、味のよい製剤を提供するために、甘味剤、着香剤、着色剤および保存剤を含む１つ以上の剤を含有し得る。
【０１７５】
錠剤と組み合わせた使用に特に適している薬学的に許容される賦形剤としては、例えば、セルロース、カルシウムまたは炭酸ナトリウム、ラクトース、カルシウムまたはリン酸ナトリウムなどの不活性希釈剤；架橋ポビドン、トウモロコシ澱粉またはアルギン酸などの崩壊剤；ポビドン、デンプン、ゼラチンまたはアカシアなどの結着剤；ならびにステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクンなどの滑沢剤が含まれる。
【０１７６】
錠剤はコーティングしなくてもよければ、あるいは胃腸管における崩壊および吸着を遅延させ、それにより長期間に亘る持続作用をもたらすマイクロカプセル化を含めた既知の手法によってコーティングしてよい。例えば、モノステアリン酸グリセリンまたはジステアリン酸グリセリルの単独あるいは蝋剤との併用などの時間遅延材料を使用してよい。
【０１７７】
経口使用のための製剤はまた、活性成分と不活性固体希釈剤（セルロース、ラクトース、リン酸カルシウムまたはカオリンなど）とを混合した硬ゼラチンカプセルとするか、もしくは活性成分と非水媒質または油性媒質（グリセリン、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、落花生油、流動パラフィンまたはオリーブ油など）とを混合した軟ゼラチンカプセルとすることができる。
【０１７８】
別の実施形態において、薬学的組成物は、懸濁液の製造に適切な少なくとも１つの薬学的に許容される賦形剤と混合して実施形態の化合物を含む懸濁液として調製され得る。
【０１７９】
さらに別の実施形態において、薬学的組成物は、適切な賦形剤の添加によって懸濁液の調製に適切な分散性の粉末および顆粒として調製され得る。
【０１８０】
懸濁液と組み合わせた使用に適している賦形剤としては、懸濁化剤（カルボキシメチルセルロース、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、トラガカントゴム、アラビアゴムなど）、分散剤または湿潤剤（天然由来のリン脂質（例えばレシチン）など）、酸化アルキレンと脂肪酸との縮合物（例えばポリオキシエチレンステアレート）、酸化エチレンと長鎖脂肪族アルコールとの縮合物（例えばヘプタデカエチレンオキシセタノール）、酸化エチレンと、脂肪酸および無水ヘキシトールから誘導された部分エステルとの縮合物（例えばポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート）、ならびに増粘剤（カルボマ、蜜蝋、固形パラフィンまたはセチルアルコールなど）が含まれる。懸濁液は、１種以上の保存剤（酢酸、メチルおよび／またはｎ−プロピル  ｐ−ヒドロキシ−ベンゾアート）；１種以上の着色剤；１種以上の着香剤；および１種以上の甘味剤（スクロースまたはサッカリンなど）を含んでよい。
【０１８１】
薬学的組成物はまた、水中油乳剤の形態であってもよい。油性相は、植物油（オリーブ油または落花生油など）、鉱油（流動パラフィンなど）、あるいはそれらの混合物であってよい。適切な乳化剤としては、天然ゴム（アラビアゴムまたはトラガカントゴムなど）；天然由来のリン脂質（大豆レシチンあるいは脂肪酸から誘導されるエステルまたは部分エステルなど）；無水ヘキシトール（ソルビタンモノオレエートなど）；およびこれらの部分エステルと酸化エチレンとの縮合物（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートなど）が含まれる。乳化剤は、甘味剤および着香剤を含んでもよい。シロップおよびエリキシルは、グリセロール、ソルビトールまたはスクロースなどの甘味剤と共に調製してよい。このような製剤はまた、粘滑薬、保存剤、香料または着色剤を含んでもよい。
【０１８２】
さらに、薬学的組成物は、無菌注射用水性乳剤または油性懸濁液などの無菌注射用製剤の形態であってよい。この乳剤または懸濁液は、前述のそれらの適切な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して既知の技術によって調製され得る。無菌注射用製剤はまた、非経口的に許容し得る無毒性の希釈剤または溶媒中の無菌注射用溶液または懸濁液（１，２−プロパンジオール中の溶液など）であってよい。
【０１８３】
無菌注射用製剤はまた、凍結乾燥粉末としても調製され得る。水、リンゲル液および等張食塩液は、使用してよい許容し得るビヒクルおよび溶媒の中の一部である。さらに、無菌の不揮発性油を溶媒または懸濁媒として使用してよい。この目的のために、合成のモノグリセリドまたはジグリセリドを含めた無刺激の不揮発性油を使用してよい。さらに、オレイン酸などの脂肪酸は、同様に注射剤の調製に使用してよい。
【０１８４】
薬学的組成物の安定した水溶性の剤形を得るために、本明細書に記載の化合物の薬学的に許容される塩は、コハク酸の０．３Ｍ溶液またはより好ましくはクエン酸などの有機酸または無機酸の水溶液に溶解され得る。可溶塩の形態が利用できない場合、化合物は、適切な共溶媒または共溶媒の組み合わせに溶解してよい。適切な共溶媒の例としては、全容量の約０〜約６０％の範囲の濃度のアルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール３００、ポリソルベート８０、グリセリンなどが含まれる。一実施形態において、活性化合物は、ＤＭＳＯに溶解され、そして水で希釈される。
【０１８５】
薬学的組成物は、水または等張食塩水またはデキストロース溶液などの適切な水性ビヒクル中の活性成分の塩形態の溶液の形態であってよい。例えばエステル化、グリコシル化、ＰＥＧ化などによって、送達においてより適切なものとなる（例えば、溶解性、生理活性、美味性の増大、有害反応の減少など）化学的または生化学的部分の置換または付加によって修飾された化合物もまた企図される。
【０１８６】
好ましい実施形態において、本明細書に記載の化合物は、難溶解性化合物に適切な脂質系製剤において経口投与用に調製され得る。脂質系製剤は、このような化合物の経口バイオアベイラビリティを一般的に高めることができる。
【０１８７】
従って、好ましい薬学的組成物は、中間鎖脂肪酸またはそのプロピレングリコールエステル（例えば、カプリルおよびカプリン脂肪酸などの食用脂肪酸のプロピレングリコールエステル）ならびにポリオキシル４０硬化ヒマシ油などの薬学的に許容される界面活性剤からなる群から選択される少なくとも１種の薬学的に許容される賦形剤と共に、治療的または予防的に有効な量の本明細書に記載の化合物を含む。
【０１８８】
別の好ましい実施形態において、シクロデキストリンは、水溶解度向上剤（ａｑｕｅｏｕｓ  ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ  ｅｎｈａｎｃｅｒ）として添加され得る。好ましいシクロデキストリンとしては、α−、β−およびγ−シクロデキストリンのヒドロキシプロピル誘導体、ヒドロキシエチル誘導体、グルコシル誘導体、マルトシル誘導体、およびマリトトリオシル誘導体が含まれる。特に好ましいシクロデキストリン溶解度向上剤（ｃｙｃｌｏｄｅｘｔｒｉｎ  ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ  ｅｎｈａｎｃｅｒ）はヒドロキシプロピル−ο−シクロデキストリン（ＢＰＢＣ）であり、これは上記組成物のいずれかに添加して実施形態の化合物の水溶解度特性をさらに向上させ得るものである。一実施形態において、前記組成物は、約０．１％〜約２０％のヒドロキシプロピル−ο−シクロデキストリン、より好ましくは、約１％〜約１５％のヒドロキシプロピル−ο−シクロデキストリン、およびさらにより好ましくは約２．５％〜約１０％のヒドロキシプロピル−ο−シクロデキストリンを含む。使用される溶解度向上剤（ｓｏｌｕｂｉｌｉｔｙ  ｅｎｈａｎｃｅｒ）の量は、前記組成物中の実施形態の化合物の量により変動する。
【０１８９】
薬学的組成物は、所期の治療効果を達成するのに十分な総量の活性成分を含む。さらに具体的には、いくつかの実施形態において、薬学的組成物は、治療上有効量（例えば、炎症性疾患または状態の徴候の予防または処置に効果的なＳＡＰＫ調節化合物の量であって、前記化合物が、ｐ３８  ＭＡＰＫの阻害について約１００μＭ〜約１０００μＭ、好ましくは約２００μＭ〜約８００μＭの範囲のＩＣ５０を示すもの）を含む。単位剤形を生成するキャリア材料と結合し得る前記化合物の総量は、処置される宿主および特定の投与様式によって変化する。好ましくは、前記組成物は、０．０１〜１００ｍｇ／体重ｋｇ／日の間の用量のＳＡＰＫ調節化合物が前記組成物の投与を受ける患者に投与されるように調製される。
【実施例】
【０１９０】
（実施例１）
インビトロでｐ３８ＭＡＰキナーゼによってＡＴＦ２のリン酸化を阻害する能力に関して化合物をスクリーニングする。このインビトロアッセイにおけるＡＴＦ２のリン酸化を阻害する化合物の能力は、インビボにおけるｐ３８ＭＡＰキナーゼの阻害およびＴＮＦαの発現と相関しており、そのため、潜在的なインビボの治療活性の指標である（Ｒａｉｎｇｅａｕｄ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９５  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：７４２０−７４２６；Ｂｒｉｎｋｍａｎ，Ｍ．Ｎ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９９  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：３０８８２−３０８８６；およびＦｕｃｈｓ，Ｓ．Ｙ．，ｅｔ  ａｌ．，２０００  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：１２５６０−１２５６４）。
【０１９１】
すべてのキナーゼおよび基質ＡＴＦ２は、Ｕｐｓｔａｔｅ（米国バージニア州シャーロットビル）から入手される。ｐ３８ＭＡＰキナーゼは、大腸菌内で発現しかつ大腸菌から精製されるアミノ末端ＧＳＴ融合の組換えヒト完全長タンパク質である。ＡＴＦ２は、大腸菌内で発現したヒトＡＴＦ２のアミノ酸１９〜９６を含むＧＳＴ融合タンパク質である。すべてのタンパク質を等分し、そして−８０℃にて保存する。
【０１９２】
６ｎｇのｐ３８αタンパク質、１２ｎｇのｐ３８βタンパク質、１．５ｎｇのｐ３８γまたは０．４ｎｇのＪＮＫ２α２と共に２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  ＤＴＴ、２０ｍＭ  β−グリセロリン酸、０．１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４、４０μＭのＡＴＰおよび１．２５μＭのＡＴＦ２を含むアッセイ緩衝液を使用して、ｐ３８ＭＡＰキナーゼアッセイを実施する。化合物をＤＭＳＯに連続して希釈し、各濃度の２μＬの試験化合物を使用する。ビヒクル対照には、ＤＭＳＯのみを投与する。
【０１９３】
キナーゼ緩衝液（２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．５、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  ＤＴＴ、２０ｍＭ  β−グリセロリン酸、および０．１ｍＭ  Ｎａ３ＶＯ４）中で２０μＬの酵素により、室温にて１５分間試験化合物をプレインキュベートする。３０μＬの基質溶液の添加によって反応を開始して、キナーゼ緩衝液中で終濃度が４０μＭのＡＴＰおよび１．２５μＭのＡＴＦ２を生成する。前記反応物を３０分間３７℃にてインキュベートし、そして１８μＬの２００ｍＭ  ＥＤＴＡを添加して中止する。ＥＬＩＳＡ法を使用してＴｈｒ６９におけるＡＴＦ２のリン酸化を測定する。高結合９６ウェルプレートに、３７℃にて１時間、５０μＬのキナーゼ反応物をコーティングする。コーティングしたプレートを２００μＬの洗浄緩衝液（２５ｍＭトリスＨＣｌ、ｐＨ８．３、１９２ｍＭグリシン、０．１％ＳＤＳおよび０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）で３回洗浄する。次に前記プレートをＳｕｐｅｒＢｌｏｃｋ  ｉｎ  ＴＢＳ（Ｐｉｅｒｃｅ、３７５３５）で３回洗浄する。遮断後、プレートを５０μＬのウサギ抗−ホスホ−ＡＴＦ２抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、９２２１Ｌ、１：５００）により３７℃にて３０分間インキュベートする。
【０１９４】
プレートを洗浄緩衝液で３回洗浄した後、５０μＬのＨＲＰ−共役ヤギ抗ウサギ抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、７０７４、１：５００）により３７℃にて３０分間インキュベートする。次にプレートを洗浄緩衝液で３回洗浄した後、５０μＬのＵｌｔｒａ  ＴＭＢ−ＥＬＩＳＡ（Ｐｉｅｒｃｅ、３４０２８）により室温にて８分間インキュベートする。最後に、５０μＬのリン酸（１Ｍ）を添加して反応を停止し、そして４５０ｎｍにおけるプレートの吸光度をＳｐｅｃｔｒａＭａｘ２５０プレートリーダーで読み取る。
【０１９５】
前記化合物は、このインビトロアッセイにおいてＡＴＦ２のリン酸化を阻害する。好ましい化合物は、約１００μＭ未満、好ましくは約１μＭ未満のＩＣ５０値を示す。
【０１９６】
（実施例２）
インビボでリポポリサッカライド（ＬＰＳ）によって刺激されるＴＨＰ−１細胞からのＴＮＦα放出を阻害する能力に関して化合物をスクリーニングする。このインビトロアッセイにおいてＴＮＦα放出を阻害する化合物の能力は、ｐ３８活性およびＴＮＦαの阻害と相関しており、そのため潜在的なインビボの治療活性の指標である（Ｌｅｅ  Ｊ．Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９３  Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．６９６：１４９−１７０；および１９９４  Ｎａｔｕｒｅ  ３７２：７３９−７４６）。
【０１９７】
１０％ウシ胎児血清と１％ペニシリン／ストレプトマイシンと５０μＭ  β−メルカプトエタノールとを補充した４．５ｇ／Ｌのグルコースを含有するＲＰＭＩ１６４０培地（ＭｅｄｉａＴｅｃｈ［米国バージニア州ハーンドン］）中で、ＡＴＣＣ（ＴＴＢ２０２）製のＴＨＰ−Ｉ細胞を３７℃、５％ＣＯ２で維持する。
【０１９８】
最初に１％のＤＭＳＯ（ｖ／ｖ）を含むＲＰＭＩ培地に試験化合物を溶解する。次に、後のすべての希釈剤用に化合物をＲＰＭＩ培地に連続して希釈する。アッセイを無菌条件下で実施する。細胞が６〜８×１０５個／ｍＬの培養密度のＴＨＰ−１細胞を採集して、細胞が１０６個／ｍＬのＲＰＭＩ培地中で再懸濁する。１００μＬの試験化合物を含む１００μＬの再懸濁された細胞を各ウェルに添加する。試験化合物を２倍の終濃度で調製する。ＤＭＳＯ終濃度は０．５％（ｖ／ｖ）に過ぎない。３７℃、５％ＣＯ２で６０分間化合物により細胞をプレインキュベートした後、リポポリサッカライド（ＬＰＳ）（Ｓｉｇｍａ  Ｌ−２８８０、４ｍｇ／ｍＬのＰＢＳ中のストック）で刺激する。各ウェルのＬＰＳ終濃度は、ＴＮＦαおよびＩＬ−１β放出についてそれぞれ１０または３０μｇ／ｍＬである。刺激さない対照細胞懸濁液には、ＰＢＳビヒクルのみを投与する。ＴＮＦαおよびＩＬ−１β放出について、それぞれ細胞混合物を１８または４８時間インキュベートする。１５０μＬの上澄液を採取して新品のプレートへ移し、さらなる分析まで−２０℃にて保存する。ＴＮＦαおよびＩＬ−１βのレベルを、ＥＬＩＳＡキットを使用して測定する。ルミネセンスをプレートリーダーとして使用する。分析を非線形回帰によって実施し、用量応答曲線を作成する。算出されたＩＣ５０値は、ＴＮＦαまたはＩＬ−１βのレベルを５０％低下させる試験化合物の濃度である。
【０１９９】
化合物は、このインビトロアッセイにおいてＴＮＦα、ＩＬ−１βまたはＴＮＦαとＩＬ−１βの両方の放出を阻害する。好ましい化合物は、約１００μＭ未満、好ましくは約１μＭ未満のＴＮＦαおよび／またはＩＬ−１βのＩＣ５０値を示す。
【０２００】
（実施例３）
インビボでリポポリサッカライド（ＬＰＳ）によって刺激される一次的なヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）からのＴＮＦα放出を阻害する能力に関して化合物をスクリーニングする。このインビトロアッセイにおいてＴＮＦα放出を阻害する化合物の能力は、ｐ３８活性の阻害と相関しており、そのため潜在的なインビボの治療活性の指標である（２００２  Ｏｓｔｅｏａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｃａｒｔｉｌａｇｅ  １０：９６１−９６７；およびＬａｕｆｅｒ，Ｓ．Ａ．  ａｎｄ  Ｗａｇｎｅｒ，Ｇ．Ｋ．２００２  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４５：２７３３−２７４０）。
【０２０１】
３〜８人の個々の供血者のプール血清からのＦｉｃｏｌｌ−ＨｙＰａｑｕｅ密度勾配による分画遠心分離によって、ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）を分離する。分離したＰＢＭＣは、約１０％のＣＤ−１４陽性単球、９０％のリンパ球および１％未満の顆粒球および血小板を含有する。ＰＢＭＣ（１０６／ｍＬ）は、ポリスチレンプレートで培養され、ＧＩＢＣＯ（登録商標）無血清ＲＰＭ１培地（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ［米国カリフォルニア州カールズバッド］）中３７℃にて２４時間、繰り返し、連続希釈で試験化合物の存在および非存在下においてリポポリサッカライド（ＬＰＳ；５０ｎｇ／ｍＬ；Ｓｉｇｍａ［米国ミズーリ州セントルイス］）により刺激される。細胞の上澄液のＴＮＦαレベルを、商業的に入手可能なキット（ＭＤＳ  Ｐａｎｌａｂｓ  ＃３０９７００）を使用してＥＬＩＳＡによって測定する。
【０２０２】
好ましい化合物は、約１００μＭ未満、好ましくは約１μＭ未満のＩＣ５０値でこのアッセイにおけるＴＮＦαの放出を阻害する。
【０２０３】
（実施例４）
インビボ動物モデルにおけるＴＮＦαの放出を阻害する能力に関して化合物をスクリーニングする（例えば、Ｇｒｉｓｗｏｌｄ  Ｄ．Ｅ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９３  Ｄｒｕｇｓ  Ｅｘｐ．Ｃｌｉｎ．Ｒｅｓ．１９：２４３−２４８；Ｂａｄｇｅｒ，Ａ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９６  Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．２７９：１４５３−１４６１；Ｄｏｎｇ，Ｃ．，ｅｔ  ａｌ．，２００２  Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２０：５５−７２（およびその中の引用文献）；Ｏｎｏ，Ｋ．  ａｎｄ  Ｈａｎ，Ｊ．，ｅｔ  ａｌ．，２０００  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ  １２：１−１３（およびその中の引用文献）；およびＧｒｉｆｆｉｔｈｓ，Ｊ．Ｂ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９９  Ｃｕｒｒ．Ｒｈｅｕｔｍａｔｏｌ．Ｒｅｐ．１：１３９−１４８を参照）。
【０２０４】
いかなる特定の理論にも拘束されることなく、このモデルにおけるＴＮＦαの阻害は、前記化合物によるｐ３８ＭＡＰキナーゼの抑制に起因すると考えられる。
【０２０５】
雄性のＳｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（０．２〜０．３５ｋｇ）を無作為に６群以上に分け、点滴または大量瞬時注射によって静脈内投与するか、もしくは各場合において適切な剤形における試験化合物を経口投与する。点滴または大量瞬時注射の終了の３０分後、および経口投与の１〜２時間後、リポポリサッカライド大腸菌／０１２７：Ｂ８（０．８ｍｇ／ｋｇ）を静脈内投与する。ＬＰＳの投与の１．５時間後、血液試料を採集する。血清ＴＮＦαのレベルを、Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ（ＫＲＣ３０１１Ｃ）製のＥＬＩＳＡキットを使用して測定し、ビヒクル投与対照と比較する。
【０２０６】
好ましい化合物は、このインビボアッセイのＴＮＦαの放出を阻害する。好ましい化合物は、５００ｍｇ／ｋｇ未満、好ましくは４００ｍｇ／ｋｇ未満、好ましくは２００ｍｇ／ｋｇ未満、好ましくは１００ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは５０ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは４０ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは３０ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは２０ｍｇ／ｋｇ未満、より好ましくは１０ｍｇ／ｋｇ未満のＥＤ５０の値を示す。
【０２０７】
化合物によってｐ３８の阻害のＩＣ５０を決定する方法には、上記のｐ３８  ＭＡＰＫの下流基質のいずれかの定量的検出を可能にする当該技術分野で既知のいかなる方法も含まれる。そのため、これらの方法としては、別々または遺伝子アレイのいずれかでｐ３８によって調節されることが知られている遺伝子の発現の検出が含まれるが、これに限定されない。
【０２０８】
（実施例５）
キナーゼアッセイ
Ｐ３８キナーゼアイソフォームＰ３８γおよびＰ３８αの活性は、３２Ｐ−γ−ＡＴＰの存在下におけるＡＴＦ−２のリン酸化によって決定される。阻害剤の有無におけるＡＴＦ−２への３２Ｐの組込みが決定される。この生化学アッセイにおいてＰ３８γおよびＰ３８αキナーゼ活性を阻害することに関して、本明細書に記載の化合物を試験する。水またはＤＭＳＯに前記化合物を可溶化し、希釈剤用およびビヒクル対照として適切な溶媒を使用して０〜１０ｍＭの種々の濃度で試験する。酵素Ｐ３８γおよびＰ３８αは、活性化および精製された組換えタンパク質として得られる（Ｕｐｓｔａｔｅ［米国バージニア州シャーロットビル］）。最終反応で活性化酵素を２４．８ｎＭで使用する。前記酵素を希釈した後、以下の緩衝液中で反応させる（１Ｍ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、５００ｍＭ  ＤＴＴ、１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００および１０ｍｇ／ｍＬ  ＢＳＡ）。２倍の原液として調製される以下の溶液中で反応を行い（１Ｍ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、５００ｍＭ  ＤＴＴおよび１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００）、前記反応に非放射性ＡＴＰを６．２５μＭ  ＡＴＰ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、［米国マサチューセッツ州ビバリー］）で供する。ＡＴＦ−２のリン酸化を判定するために、７．５μＭの濃度で３０００Ｃｉ／ｍｍｏｌの３２Ｐ−γ−ＡＴＰを各反応物に添加する。キナーゼ基質として、ＡＴＦ−２（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ［米国マサチューセッツ州ビバリー］）を３μＭで使用する。酵素反応を起こす際の第一段階として、活性化されたキナーゼおよび阻害剤または適切なビヒクル対照を反応緩衝液に添加し、室温にて３０分間インキュベートする。キナーゼ反応は、ＡＴＦ−２およびＡＴＰ混合物の添加によって開始される。各反応の最終容量は２０μＬであり、そして室温にて３０分間実施する。３０分間インキュベートした後、８０μＬのレムリバッファー（Ｌａｅｍｍｌｉｅ  ｂｕｆｆｅｒ）を添加する。その後、還元条件下でＳＤＳ−Ｐａｇｅ（ＢｉｏＲａｄ［米国カリフォルニア州ハーキュリーズ］）上で前記反応物の２０％を分離する。前記電気泳動法の後、ゲルを一晩中室温にて３２Ｐ−増感スクリーンに曝露させ、そしてホスホイメージャー（ｐｈｏｓｐｈｏｉｍａｇｅｒ）（Ｓｔｏｒｍ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ［米国ニュージャージー州ピスカタウェイ］）を使用して解析する。バックグラウンド補正後、得られるシグナルを定量化し、０％阻害としてビヒクル対照と共に阻害されないキナーゼ活性を使用して阻害率として算出する。種々の阻害剤濃度がある場合には、キナーゼ活性をＫａｌｅｉｄａｇｒａｐｈ（Ｓｙｎｅｒｇｙ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ［米国ペンシルベニア州レディング］）を使用してプロットし、化合物および試験されたＰ３８キナーゼ毎にＥＣ５０を決定する。
【０２０９】
ＴＮＦα誘導の阻害
ＡＴＣＣによって推奨される通りの標準的な組織培養条件下でＴＨＰ−１（ＡＴＣＣ［米国メリーランド州ロックビル］）を発育させる。実験の１８時間前に１ウェル当たり５０万個の細胞の密度で、１％血清と０．２５ｍＬ培養容量とを含む標準的な培地において、９６ウェルフォーマットで細胞を平板培養した。化合物を各ウェルに３回ずつ添加し、そして適切な溶媒対照を各アッセイに使用する。１μＭ／ｍＬのＰ３８阻害剤ＳＢ２０３８５０（Ｕｐｓｔａｔｅ［米国マサチューセッツ州ウォルサム］）を各アッセイにおける陽性対照として使用する。ＴＮＦαの発現の誘導のために、化合物添加３０分後に１μｇ／ｍＬのＬＰＳを各ウェルに添加する。組織培養条件下で４時間インキュベートした後、遠心分離（１０分、１０００ｒｐｍ、ベックマン卓上型遠心機）細胞を沈殿させ、細胞のない上澄液の一部を採集して、ＴＮＦα特異的ＥＬＩＳＡ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ［米国ミネソタ州ミネアポリス］）において定量化するための１０倍の希釈剤に使用する。ＴＮＦαＥＬＩＳＡについては、製造業者によって定められる使用法に従って実施する。ＴＮＦαは、ｐｇ／ｍＬにおいて検出され、溶媒対照におけるＴＮＦα発現に対して標準化される部分的な活性としてプロットされる。
【０２１０】
細胞に基づくアッセイにおける化合物毒性試験
細胞膜の崩壊の結果としてのＬＤＨの放出は、細胞毒性の基準として適用される。ＬＤＨは、商業的に入手可能な診断キット（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、カタログ番号１６４４７９３）を使用してその酵素活性によって検出される。ＴＨＰ−１細胞は、その前の実験で誘導されたＴＮＦα発現との一貫性を保つ細胞毒性の決定に使用される。ＴＮＦα誘導の阻害の試験について先述したように、１％血清および標準的組織培養の条件下で９６ウェルフォーマットにおいて細胞を培養する。３回ずつ種々の濃度で化合物を添加する。適切な溶媒対照を各アッセイにおいて使用する。化合物添加後、標準的組織培養条件下で１８時間細胞を培養する。このインキュベーション期間後、Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００（２％ｖ／ｖ）を未投与の細胞に添加することによって陽性対照を入れ、そして完全に細胞を溶解するためにさらに１０分間インキュベートする。その後、遠心分離によって細胞を沈殿させ、上澄液の一部を抽出して、製造業者の説明書に従ってＬＤＨ酵素活性に関して解析する。１００％細胞毒性としてのＴｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００溶解細胞に対して標準化されたパーセント細胞毒性としてデータを示す。
【０２１１】
（実施例６）
【０２１２】
【化２１】
2009517390.tif 000020
式（１）の化合物を直前に示す通りに合成する。市販の原料から得られるかもしくは既知の手法を介して調製されるＲ−置換３−アシルピリジン（化合物２）をメルカプト酢酸エチルのアニオンで反応させ、チエノ［２，３−ｂ］ピリジン誘導体（化合物３）を形成する。化合物３をＮ−オキサイド（化合物４）に酸化し、それを無水酢酸による処理でピリジノン（化合物５）に変化させた後、加水分解を行う。酢酸銅の存在下において４−クロロフェニルボロン酸を使用する模式図１で示されるものなどの既知の手法を使用して化合物５をＮ−アリール化する。化合物１は、種類Ｉの化合物の例である。種類Ｉの他の化合物も同様に合成され得る。
【０２１３】
（実施例７）
【０２１４】
【化２２】
2009517390.tif 000021
式（９）の化合物を直前に示す通りに合成する。リチウムジイソプロピルアミドによる２−チオメチル−４−メチルピリミジンの脱プロトン化の後、適切なＮ，Ｏ−ジメチルヒドロキシアミド（化合物１）による処理を行うことにより、対応するケトン（化合物２）が得られる。後者は、酢酸中の亜硝酸ナトリウムによる反応によってα−オキシモケトン（ｏｘｉｍｏｋｅｔｏｎｅ）（化合物３）に変化する。Ｎ−ベンジルオキシカルボニル（Ｃｂｚ）−保護ピペリジン−４−カルバルデヒドによる化合物３の縮合によって、Ｎ−ヒドロキシイミダゾール（化合物４）が得られ、それを還元によりＮ−メチル−イミダゾール（化合物６）に形質転換して通常の条件下でイミダゾール中間体（化合物５）を形成した後、メチル化を行う。酸化を行ってスルホン（化合物７）を形成した後、メチルスルホニル基をアミンで置換してアミノピリミジン誘導体（化合物８）を提供する。酢酸中のＨＢｒなどの標準条件下のピペリジン窒素の最終的脱保護によって、標的置換イミダゾール（化合物９）を提供する。化合物９は、種類ＩＩの化合物の例である。種類ＩＩの他の化合物も同様に合成され得る。
【０２１５】
（実施例８）
【０２１６】
【化２３】
2009517390.tif 000022
式（４）の化合物を、既知の方法によって直前に示す通りに合成する（Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６２，１７，５９０８−５９１９を参照）。ピナコロンのアニオンをシュウ酸エチルと反応させて５，５−ジメチル−２，４−ジオキソヘキサン酸（化合物１）のエチルエステルを得る。適切に置換されたヒドラジンによる化合物１の反応によって、ピラゾール（化合物２）が得られ、これは通常の手法によって標的化合物４に変化する。化合物４は、種類ＩＩＩの化合物の例である。種類ＩＩＩの他の化合物も同様に合成され得る。
【０２１７】
（実施例９）
【０２１８】
【化２４】
2009517390.tif 000023
式（４）の化合物を直前に示す通りに合成する。エタノールアンモニアによるエチル４−メチルチオメチルベンゾエートの処理によって調製されるベンズアミジン（化合物１）をα−クロロケトン（化合物２）と反応させて、イミダゾール（化合物３）を提供する。例えば図示されるような過硫酸カリウムによって標準条件下で中間体３を酸化した後に標的化合物４を得る。化合物４は、種類ＩＶの化合物の例である。種類ＩＶの他の化合物も同様に合成され得る。
【０２１９】
（実施例１０）
ｐ３８αまたはｐ３８γを標的とする短いヘアピンＲＮＡ（ｓｈＲＮＡ）の培養細胞への導入：ＭＩＳＳＩＯＮＴＭ  ＴＲＣ  ｓｈＲＮＡレンチウイルス粒子をＳｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ（米国ミズーリ州セントルイス）から得た。これらの自己不活性化の複製能力のないウイルス粒子を、Ｕ６プロモーターからｓｈＲＮＡを発現して感染細胞のピューロマイシン選択を可能にするように設計する。この研究において使用するｓｈＲＮＡは、ヒトｐ３８γ（配列番号１〜４のコード領域を含むレンチウイルス粒子）、ヒトｐ３８α（配列番号５〜８のコード領域を含むレンチウイルス粒子）を標的とするように設計される。第１の対照レンチウイルス粒子は、すべての既知のヒトおよびマウスの遺伝子に対して少なくとも５つの不適合を有し、いかなる既知のヒトやマウスの遺伝子を標的にしないｓｈＲＮＡをコードする。第２の対照レンチウイルス粒子は、ｓｈＲＮＡを発現しない。緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）を発現するように設計された第３の対照レンチウイルス粒子を使用して感染状態を最も効果的にした。
【０２２０】
Ｌグルタミン酸塩と１０％ウシ胎仔血清と重炭酸ナトリウム（１．５ｇ／Ｌ）とペニシリン／ストレプトマイシンとが補充されたＦ１２Ｋ培地（ＭｅｄｉａＴｅｃｈ［米国バージニア州ハーンドン］）中で３７℃および５％ＣＯ２でＨＦＬ１細胞（ＡＴＣＣ［米国メリーランド州ロックビル］）を維持した。感染１日前に細胞を２４ウェルプレートで平板培養し、感染時には約２／３の集密であった。感染のため、培地を除去し、０〜１２μｇ／ｍＬの臭化ヘキサジメトリン（Ｓｉｇｍａ  Ａｌｄｒｉｃｈ［米国ミズーリ州セントルイス］）を含む新しい培地と取り替えた後、１〜５の感染多重度（ＭＯＩ）でレンチウイルス粒子を添加した。２４時間後、感染培地を除去し、新しい培地と取り替えた。感染後のすべての手順において、細胞は必要に応じて継代を行って５と完全な集密との間のストックを維持した。１〜３日間で感染後細胞を、非感染細胞のピューロマイシン感受性に基づいて定められた０．２５〜１μｇ／ｍＬの終濃度のピューロマイシン選択下で配置した。選択を５〜１０日間維持し、非感染細胞の生育力の喪失だけでなくＧＦＰを発現するように設計されたレンチウイルスでトランスフェクトされた細胞を観察することによって選択の経過を評価した。ＨＦＬ１細胞を模擬感染（非ウイルス）させるか、あるいはピューロマイシン抵抗を与えて以下の内の１つを発現するように設計されたレンチウイルスで感染させた：ｓｈＲＮＡ標的ヒトｐ３８α（配列番号５〜８）、ｓｈＲＮＡ標的ヒトｐ３８γ（配列番号１〜４）、既知のヒトまたはマウスの遺伝子を標的にしないｓｈＲＮＡ、何も発現しない（対照ウイルス）または緑色蛍光タンパク質。
【０２２１】
Ｌグルタミン酸塩と１０％ウシ胎仔血清と重炭酸ナトリウム（１．５ｇ／Ｌ）とペニシリン／ストレプトマイシンとが補充されたＤＭＥＭ培地（ＭｅｄｉａＴｅｃｈ［米国バージニア州ハーンドン］）中でＮＩＨ３Ｔ３細胞（ＡＴＣＣ［米国メリーランド州ロックビル］）を維持した。細胞を感染させ、上記の通りにピューロマイシン選択に供した。ＮＩＨ３Ｔ３細胞を模擬感染（非ウイルス）させるか、もしくはピューロマイシン抵抗を与えて以下の内の１つを発現するように設計されたレンチウイルスで感染させた：ｓｈＲＮＡ標的マウスｐ３８α（配列番号５〜８）、ｓｈＲＮＡ標的マウスｐ３８γ（配列番号１〜４）、既知のヒトまたはマウスの遺伝子を標的にしないｓｈＲＮＡ、何も発現しない（対照ウイルス）または緑色蛍光タンパク質。
【０２２２】
（実施例１１）
ｍＲＮＡの単離、ならびに定量的ＰＣＲを使用したｍＲＮＡレベルの測定：製造業者の説明書に従ってＲＮａｑｕｅｏｕｓ  ９６  ＲＮＡ単離キット（Ａｍｂｉｏｎ［米国テキサス州オースティン］）を使用して、約１万５千〜１５万個の細胞からＲＮＡを得た。また、製造業者の説明書に従って、ランダム六量体プライマーを使用したＴａｑＭａｎ（登録商標）逆転写試薬（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ［米国ニュージャージー州ブランチバーグ］）を使用して、ＲＮＡをｃＤＮＡに変化させた。上で得られたｃＤＮＡを使用するＡｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ  ７９００  ＨＴ配列検出システム（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ［米国ニュージャージー州ブランチバーグ］）、商業的に入手可能なプローブ・プライマーセット（ＴａｑＭａｎ（登録商標）遺伝子発現アレイ、Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）およびＴａｑＭａｎ（登録商標）  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  ＰＣＲ  Ｍａｓｔｅｒ  Ｍｉｘ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ［米国ニュージャージー州ブランチバーグ］）により、製造業者の説明書に従って、定量的ＰＣＲ反応を３回ずつ実施した。ヒトグリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ；内在性コントロール）、ヒトｐ３８αおよびヒトｐ３８γを増幅するように設計されたプローブ／プライマーセットを使用して３枚のプレートをＨＦＬ１細胞について供した。マウスグリセルアルデヒド−３−リン酸脱水素酵素（ＧＡＰＤＨ；内在性コントロール）、マウスｐ３８αおよびマウスｐ３８γを増幅するように設計されたプローブ／プライマーセットを使用して３枚のプレートをＮＩＨ３Ｔ３細胞について供した。データは、内在性コントロールとしてグリセルアルデヒド−３−リン酸デヒドロゲナーゼを使用して入力ＲＮＡレベルを標準化するΔΔＣｔ法を使用して解析された。サイクル閾値（Ｃｔ）を増幅プロットの幾何学的位相から得た。遺伝子発現の相対レベルは、以下の方程式を使用して決定された。
【０２２３】
ΔΔＣｔ＝（平均Ｃｔａｎａｌｙｔｅ  ＧＡＰＤＨ−平均Ｃｔｃｏｎｔｒｏｌ  ＧＡＰＤＨ）−（平均Ｃｔａｎａｌｙｔｅ  Ｐ３８−平均Ｃｔｃｏｎｔｒｏｌ  ｐ３８）
（式中、
平均Ｃｔａｎａｌｙｔｅ  ＧＡＰＤＨは、ＧＡＰＤＨプローブ・プライマーセットによる被検体（レンチウイルス投与）細胞株に関する平均Ｃｔ値であり、
平均Ｃｔｃｏｎｔｒｏｌ  ＧＡＰＤＨは、ＧＡＰＤＨプローブ・プライマーセットによる対照細胞（未投与）に関する平均Ｃｔ値であり、
平均Ｃｔａｎａｌｙｔｅ  Ｐ３８は、ｐ３８（αまたはγ）プローブ・プライマーセットによる被検体（レンチウイルス投与）細胞株に関する平均Ｃｔ値であり、
平均Ｃｔｃｏｎｔｒｏｌ  ｐ３８とは、ｐ３８プローブ・プライマーセットによる対照細胞（未投与）に関する平均Ｃｔ値である）
ＧＡＰＤＨ内在性対照を使用して入力ＲＮＡレベルを補正する際の未投与細胞と比較したレンチウイルス投与細胞の相対的ｐ３８ｍＲＮＡレベルとして、データを報告する。選択されたｓｈＲＮＡの構成要素に関する観測されたｐ３８ｍＲＮＡレベルを、以下の実施例１２の表１に示す。
【０２２４】
（実施例１２）
コラーゲンレベルアッセイ：Ｌグルタミン酸塩と１０％ウシ胎仔血清と重炭酸ナトリウム（１．５ｇ／Ｌ）とペニシリン／ストレプトマイシンとが補充されたＦ１２Ｋ培地（ＭｅｄｉａＴｅｃｈ［米国バージニア州ハーンドン］）中で標準的ＨＦＬ１細胞あるいはレンチウイルスに感染およびピューロマイシンで選択された細胞を３７℃、５％ＣＯ２で発育させて集密させた。コラーゲンアッセイのために、２ｍＬ／ウェルの飢餓培地（Ｌグルタミン酸塩と１０％ウシ胎仔血清と重炭酸ナトリウム（１．５ｇ／Ｌ）とペニシリン／ストレプトマイシンとが補充されたＦ１２Ｋ培地）において１ウェルにつき約６×１０５個の細胞の密度で細胞を６ウェルプレートに平板培養した。１６〜２０時間後、培地を除去し、２０μｇ／ｍＬのアスコルビン酸（ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅ［米国ニュージャージー州ギブスタウン］）および１０μＭのＬ−プロリン（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ［米国カリフォルニア州ラホーヤ］）で補充された新しい飢餓培地と取り替える。この培地変更の１時間後、５ｎｇ／ｍＬ（１０ｎｇ／ウェル）のトランスフォーミング成長因子−β１（ＴＧＦ−β；Ｃｈｅｍｉｃｏｎ／Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ［米国マサチューセッツ州ビルリカ］またはＳｉｇｍａ［米国ミズーリ州セントルイス］）を細胞に投与した。ＴＧＦ−βを添加して４０〜４８時間後、細胞培地を除去し、１．２５％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（Ｆｉｓｈｅｒ［米国ニュージャージー州フェアローン］）および完全プロテイナーゼ阻害剤カクテル（Ｒｏｃｈｅ［ドイツ  マンハイム］）で補充した２５０μＬのリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中に細胞を溶解した。細胞スクレーパーまたはピペットチップを使用して細胞をプレートから剥がし、溶解物を−２０℃にて凍結させた。
【０２２５】
ＮＩＨ３Ｔ３細胞ならびにレンチウイルスに感染しかつピューロマイシンで選択されたＮＩＨ３Ｔ３細胞について、Ｆ１２Ｋ培地をＤＭＥＭ（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ［米国バージニア州ハーンドン］）に置き換えた以外は、同様の方法で投与した。ＤＭＥＭ培地には、上記のＦ１２Ｋと同様にさらなる成分が補充された。
【０２２６】
得られた細胞を解凍して氷に移した。１．７ｍＬのマイクロチューブ内で２００μＬの試料を等容量の０．５Ｍ酢酸と混合した。コラーゲン濃度については、製造業者のプロトコルの変形を使用して、Ｓｉｒｃｏｌ  Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｃｏｌｌａｇｅｎ  Ａｓｓａｙ（Ｂｉｏｃｏｌｏｒ［英国北アイルランド  ニュートンアビー］）を使用して測定された。簡単に説明すると、１ミリリットルのＳｉｒｃｏｌ染料試薬を添加し、試料を３０〜６０分間振り混ぜた（時間の長さは実験におけるすべての試料について不変であった）。次に、卓上型小型遠心機で、約１０，０００×ｇで３０分間前記試料を遠心分離した。ペレットから、ピペットチップで、ペレットの乱れを避けるよう注意して非結合性染料を除去した。前記試料をさらに４分間遠心分離し、ピペットチップでペレットから残留非結合性染料を慎重に除去した。次に２００μＬの製造業者のアルカリ試薬を添加し、析出物が溶解するまで前記試料を振り混ぜた。上記プロトコルにおけるコラーゲン標準（Ｂｉｏｃｏｌｏｒ［米国北アイルランド  ニュートンアビー］）の既知量を使用して標準曲線を作成した。１００μＬの標準または試料をクリア９６ウェルプレートに添加し、μＱｕａｎｔスペクトロフォトメータ（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ［米国バーモント州ウィヌースキ］）を使用して５４０ｎｍにおける試料吸光度（ａｂｏｒｂａｎｃｅ）を測定した。
【０２２７】
以下の表１ならびに図１および２から分かる通り、ｐ３８αまたはｐ３８γの発現の低下はコラーゲンのレベルの低下をもたらし、ｐ３８αおよびｐ３８γのレベルの上昇はコラーゲンのレベルの上昇をもたらした。したがって、これらのデータから、例えばｐ３８γの阻害は、コラーゲンのレベルの低下をもたらし、そのため線維症の抑制をもたらし得ることが確認される。
【０２２８】
【表１】
2009517390.tif 000024
（実施例１３）
いくつかの化合物をｐ３８αおよびｐ３８γのＭＡＰＫアイソフォームの阻害について評価した。全体が参考として本明細書で援用される国際公開第２００６／１２２１５４号の実施例５に記載されるアッセイを使用して、ＩＣ５０値を決定した。結果を表２に記載する。
【０２２９】
【表２】
2009517390.tif 000025
１  ２−ピリドン窒素に結合したアリール基は、Ｎ−メチルピリジニウム部分である。
２  ブロモアリール基は、２−ピリドン環の５および６位に融合する。ＮＣ（算出されず）とは、定量化の上限を越え、そのため確実に割り当てるには余りに大きな値を指す。
【０２３０】
以上において本発明を明確にし、理解するため多少詳細に説明してきたが、本発明の真の適用範囲から逸脱することなく、形態および詳細の種々の変更が行われ得ることが、当業者に理解されるであろう。上で参照したすべての図、表、添付物、特許、特許出願および刊行物は、参考として本明細書で援用される。
【図面の簡単な説明】
【０２３１】
【図１】図１は、非誘導細胞内のコラーゲンの値を、その細胞に投与されるｓｈＲＮＡをコードする各種レンチウイルス粒子を含めた種々のレンチウイルス粒子の関数として示す。
【図２】図２は、ＴＧＦ−βによって誘導される細胞内のコラーゲンの値を、その細胞に投与されるｓｈＲＮＡをコードする各種レンチウイルス粒子を含めた種々のレンチウイルス粒子の関数として示す。
【図１】
2009517390.tif 000035
【図２】
2009517390.tif 000036
【配列表】
2009517390000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成20年11月7日(2008.11.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2009517390000001.app
【国際調査報告】
2009517390.tif 000039
2009517390.tif 000040
2009517390.tif 000041
2009517390.tif 000042