(57)【要約】  本発明は、抗酸化性の高齢者に安全な抗虚血活性を有する、医薬分野に関連し、すなわち新規の生物学的に活性な化合物、特に２，４，６−トリメチル−３−ヒドロキシピリジン誘導体及びその塩（化合物１）に関する。化合物（１）の塩は、等モル量の２，４，６−トリメチル−３−ヒドロキシピリジンとジカルボン酸とを、低級アルコールの溶液中で６０〜１００℃の温度で反応させて、引き続き反応物を、有機溶剤で処理し、そして１０〜１５℃で２〜５時間保持することによって製造される。
2009501712.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗酸化性の高齢者に安全な抗虚血活性を有する、２，４，６−トリメチル−３−ヒドロキシピリジンの低級ジカルボン酸との製剤学的に認容性の塩（化合物Ｉａ〜Ｉｄ）
【化１】
2009501712.tif 000013
［式中、
Ｘは、（化合物Ｉａ、シュウ酸塩、Ｃ8Ｈ11ＮＯ・Ｃ2Ｈ2Ｏ4）、ＣＨ2（化合物Ｉｂ、マロン酸塩、Ｃ8Ｈ11ＮＯ・Ｃ3Ｈ4Ｏ4）、ＣＨ2ＣＨ2（化合物Ｉｃ、コハク酸塩、Ｃ8Ｈ11ＮＯ・Ｃ4Ｈ6Ｏ4）及びＣＨ2ＣＨ（ＯＨ）（化合物Ｉｄ、リンゴ酸塩、Ｃ8Ｈ11ＮＯ・Ｃ4Ｈ6Ｏ5）を含む群から選択される］。
【請求項２】
請求項１に記載の２，４，６−トリメチル−３−ヒドロキシピリジン塩の製造方法において、等モル量の２，４，６−トリメチル−３−ヒドロキシピリジンとジカルボン酸とを、低級アルコールの溶液中で沸点温度で反応させて、引き続き反応物を、有機溶剤で処理し、場合により１０〜１５℃で２〜５時間保持する、２，４，６−トリメチル−３−ヒドロキシピリジン塩の製造方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗酸化性の高齢者に安全な（ｇｅｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ）抗虚血活性を有する、医薬分野に関連し、すなわち新規の生物学的に活性な化合物、特に低級ジカルボン酸との２，４，６−トリメチル−３−ヒドロキシピリジン塩（化合物Ｉａ〜Ｉｄ）に関する。化合物Ｉａ〜Ｉｄは、脂質の過酸化物酸化の過程に関する抗酸化活性を示し、それは全ての３−オキシピリジン誘導体について妥当である。この特性により、化合物Ｉａ〜Ｉｄ並びにそれらの類似体、エモキシピン（塩酸２−メチル−６−エチル−３−ヒドロキシピリジン）及びメキシドール（コハク酸２−メチル−６−エチル−３−ヒドロキシピリジン）を、眼科学における医薬として、すなわち結膜下出血及び眼球出血で眼の任意の部位及び組織への医薬として、種々の病因による血管障害性網膜症、例えば糖尿病性脈絡網膜ジストロフィー、網膜中心静脈血栓症及び静脈枝合併近視、角膜ジストロフィーにおける医薬として、かつ網膜剥離を伴う手術後の高効率の光の作用下での角膜及び網膜の保護及び治療のための医薬として使用できることが想定できる。更に、明確な抗虚血活性を有する化合物Ｉｃは、おそらく、虚血性心疾患及びアテローム性硬化症の治療のために心臓病学において使用されると想定される。
【０００２】
また、化合物Ｉｃは、高齢者の眼から単離される、脂肪褐色素顆粒である"老年性色素斑"によって増感される光誘導型の脂質の過酸化物酸化の活性インヒビターであることが判明しており、それは、化合物Ｉｃが、高齢者に蓄積される脂肪褐色素顆粒の毒素活性を中和することができる、すなわち高齢者に安全な作用を有することを示している。このように、化合物Ｉｃは、脂肪褐色素の毒作用を不活性化するために使用できると想定できる。現在通常認められている脂肪褐色素は、老人性網膜斑変性の発生に導く基本的因子である。老人性網膜斑変性は、６０歳以上の人々に最も蔓延した眼病に属する。統計学的データによれば、全盲に導く前記疾病を、６５歳以上の米国人のほぼ３０％が患い、罹患した人の割合は年齢と共に急増する。
【０００３】
眼の透光体と組織の抗酸化保護のための医薬であって、吸水性の可塑性添加剤と、薬剤としてエモキシピンと塩酸ピロキシジンとを含有する生体可溶性ポリマーである医薬は知られている（ＲＵ２０７００１０，１９９３）。
【０００４】
活性剤として、２−（２，６−ジメチル−３，５−ジエトキシカルボニル−１，４−ジヒドロピリジン−４−カルボキサミド）ペンタン二酸の塩を含有する、とりわけ高齢者に安全な活性を有する生体活性の食品添加剤、"グルタピロン"は知られている（ＲＵ９５１１６４０３，１９９５）。
【０００５】
Ｎ−（３−クロロ−１，４−ナフトキノニル）−２−グルタミン酸の二カリウム塩を、とりわけ抗虚血活性を示す剤として用いる使用も知られている。
【０００６】
本発明に関する最も近い先行技術は、抗酸化作用と膜保護作用とを有する、コハク酸２−メチル−６−エチル−３−ヒドロキシピリジン（メキシドール）（Ｍ．Ｄ．Ｍａｓｈｋｏｖｓｋｙ，"Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ"，ｐａｒｔ ＩＩ，１９９３，Ｍｏｓｃｏｗ，Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，ｐａｇｅ ２１６）を表し、その際、前記物質は、２−メチル−６−エチル−３−ヒドロキシピリジンのアルコール性溶液をコハク酸と一緒に１時間にわたり加熱することによって製造される（ＳＵ５０９０４７，１９７３）。
【０００７】
本発明の課題は、抗酸化性の高齢者に安全な抗虚血活性を有するが、眼の組織に刺激作用を示さない、３−ヒドロキシピリジンのファミリーの誘導体である新規の物質を提供することである。
【０００８】
本発明の本質は、抗酸化性の高齢者に安全な抗虚血活性を有する、一般式Ｉａ〜Ｉｄ：
【化１】
2009501712.tif 000003
［式中、
Ｘは、単結合である（化合物Ｉａ、シュウ酸塩、Ｃ8Ｈ11ＮＯ・Ｃ2Ｈ2Ｏ4）；
Ｘは、ＣＨ2である（化合物Ｉｂ、マロン酸塩、Ｃ8Ｈ11ＮＯ・Ｃ3Ｈ4Ｏ4）；
Ｘは、ＣＨ2ＣＨ2である（化合物Ｉｃ、コハク酸塩、Ｃ8Ｈ11ＮＯ・Ｃ4Ｈ6Ｏ4）；
Ｘは、基ＣＨ2ＣＨ（ＯＨ）である（化合物Ｉｄ、リンゴ酸塩、Ｃ8Ｈ11ＮＯ・Ｃ4Ｈ6Ｏ5）］で示される、２，４，６−トリメチル−３−ヒドロキシピリジンと低級ジカルボン酸との製剤学的に認容性の塩を表す新規の化合物にある。
【０００９】
本発明のもう一つの課題は、抗酸化性の高齢者に安全な抗虚血活性を有する、２，４，６−トリメチル−３−ヒドロキシピリジン塩を製造するための方法において、等モルの量の２，４，６−トリメチル−３−ヒドロキシピリジンとジカルボン酸とを低級アルコールの溶液中で６０〜１００℃の温度で反応させ、引き続きその反応物を有機溶剤で処理し、そして１０〜１５℃で２〜５時間にわたり保持する、２，４，６−トリメチル−３−ヒドロキシピリジン塩の製造方法を提供することである。
【００１０】
実施例１．  ２，４，６−トリメチル−３−オキシピリジンの有機塩の製造
Ａ）．  ２，４，６−トリメチル−３−オキシピリジン シュウ酸塩（Ｉａ）の製造。
【００１１】
０．８ｇ（０．００５８３モル）の２，４，６−トリメチル−３−オキシピリジン塩基、０．５２５ｇ（０．００５８３モル）の無水フタル酸、及び１０ｍｌのメタノールを、磁気撹拌機と還流凝縮器とを備えたフラスコに供給する。撹拌しながら、該反応混合物を沸騰するまで加熱し、そして沸騰を０．５時間にわたり保つ。引き続き、加熱を止め、溶剤を真空中で取り除き、そして５ｍｌのアセトンを、その反応混合物に添加し、該混合物をガラス棒で５〜１０分間にわたり擦る。得られた結晶性の残留物を濾過によって分離し、そしてアセトンを用いてフィルタ上で洗浄し、そして真空中で乾燥させる。
【００１２】
１．１ｇ（理論値の８３％）の塩が得られる。溶融温度は、１４０〜１４２℃である。実測値％：Ｃ５３．４、Ｈ５．９。計算値％：Ｃ５２．９、Ｈ５．８。
【００１３】
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【００１４】
Ｂ）．  ２，４，６−トリメチル−３−オキシピリジン マロン酸塩（Ｉｂ）の製造。
【００１５】
０．８ｇ（０．００５８３モル）の２，４，６−トリメチル−３−オキシピリジン塩基、０．６０７ｇ（０．００５８３モル）のマロン酸、及び１０ｍｌのメタノールを、磁気撹拌機と還流凝縮器とを備えたフラスコに供給する。撹拌しながら、該反応混合物を沸騰するまで加熱し、そして沸騰を０．５時間にわたり保つ。引き続き、加熱を止め、溶剤を真空中で取り除き、そして５ｍｌのアセトンを、その反応混合物に添加し、該混合物を１０〜１５℃で３時間にわたり保持する。得られた結晶性の残留物を擦り、濾過によって分離し、そしてアセトンを用いてフィルタ上で洗浄し、そして真空中で乾燥させる。１．２ｇ（理論値の８５．３％）の塩が得られる。溶融温度は、１１８〜１２０℃である。実測値％：Ｃ５５．０、Ｈ６．５。計算値％：Ｃ５４．８、Ｈ６．３。
【００１６】
2009501712.tif 000005
【００１７】
Ｃ）．  ２，４，６−トリメチル−３−オキシピリジン コハク酸塩（Ｉｃ）の製造。
【００１８】
３．４ｇ（０．０２５モル）の２，４，６−トリメチル−３−オキシピリジン塩基、２．９３ｇ（０．０２５モル）のコハク酸、及び５０ｍｌのイソプロパノールを、磁気撹拌機と還流凝縮器とを備えたフラスコに供給する。撹拌しながら、該反応混合物を沸騰するまで加熱し、そして沸騰を０．５時間にわたり保つ。引き続き、加熱を止め、そして該反応物に３０ｍｌのアセトンを段階的に添加し、その際、該材料を、１０〜１５℃で３時間保持する。得られた結晶性の残留物を、濾過によって分離し、そしてアセトンを用いてフィルタ上で洗浄し、そして真空中で乾燥させる。５．６ｇ（理論値の８８．５％）の塩が得られる。溶融温度は、１２８〜１２９℃である。
【００１９】
実測値％：Ｃ５６．５、Ｈ６．９。計算値％：Ｃ５６．５、Ｈ６．７。
【００２０】
2009501712.tif 000006
【００２１】
Ｄ）．  ２，４，６−トリメチル−３−オキシピリジン リンゴ酸塩（Ｉｄ）の製造。
【００２２】
０．８ｇ（０．００５８３モル）の２，４，６−トリメチル−３−オキシピリジン塩基、０．７８２ｇ（０．００５８３モル）のヒドロキシブタン二酸、及び１０ｍｌのメタノールを、磁気撹拌機と還流凝縮器とを備えたフラスコに供給する。撹拌しながら、該反応混合物を沸騰するまで加熱し、そして沸騰を０．５時間にわたり保つ。引き続き、溶剤を真空中で除去する。油状残留物を、撹拌しながらアセトンで２回洗浄し、そして溶剤をデカンテーションによって除去する。得られたものを真空に置き、０．５ｍｍＨｇの残留圧力で１時間にわたり保持する。引き続き、それを４８〜７２時間にわたり保持して、結晶化させる。溶融温度７０〜７５℃を有する白色の固体化合物が得られる。
【００２３】
その収量は、１．１２ｇ（理論値の７０．８％）である。実測値％：Ｃ５３．５、Ｈ６．４。計算値％：Ｃ５３．１、Ｈ６．３。
【００２４】
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【００２５】
実施例２．  光誘導型のヒト脂肪褐色素顆粒のリポソーム過酸化の阻害の例による、化合物１の高齢者安全性作用
リポソームを、カルジオリピン（初期濃度：５ｍｇ／ｍｌ）のメタノール溶液から、メタノールを蒸発させ、カルジオリピンをリン酸緩衝液に溶解させることによって製造する。リポソームの懸濁液と、ヒトの眼の網膜色素上皮組織から単離された脂肪褐色素顆粒とを含有する混合物を、一定の撹拌下で、強力な青色光での照射に供する。脂質過酸化産物（ＴＢＫ活性産物）の濃度を、２０分後、４０分後、６０分後、及び９０分後に測定する。実験サンプルは、２ｍＭの化合物Ｉｃの溶液、又は２ｍＭのメキシドールの溶液を含有していた。実験結果を、第１表に列記する。
【００２６】
第１表．  脂肪褐色素に誘発されるカルジオリピンの光過酸化に関する、化合物Ｉｃの阻害効果（メキシドールとの比較）
【表１】
2009501712.tif 000008
【００２７】
それらの結果は、ヒトの眼の老人性色素、脂肪褐色素顆粒の光毒性作用に関する、化合物１の保護作用を示している。これらの条件下で、メキシドールは、事実上、阻害効果を示さなかった。
【００２８】
実施例３．  ブタの眼の光受容細胞のアスコルビン酸塩に誘発される過酸化に関する、化合物Ｉｃの抗酸化作用
光受容細胞の外節（ｅｘｔｅｒｎａｌ ｓｅｇｍｅｎｔ）を、ブタの網膜から標準的な方法に従って、サッカロース密度勾配における遠心分画法を使用して得る。リン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７．３）、１０8個の節／ｍｌの光受容細胞の外節、０．５ｍＭのアスコルビン酸、１７ｍＭの化合物Ｉｃを含有する混合物を、暗所で、一定の撹拌をしながら、１５分及び３０分にわたってインキュベートした。引き続き、その工程を、１５％のトリクロロ酢酸によて停止させ、そしてＴＢＫ活性産物の濃度を測定した。化合物Ｉｃを含まないサンプルを、コントロールとして使用した。得られた結果を、第２ａ表に示す。
【００２９】
第２ａ表．  光受容細胞の外節のアスコルビン酸塩に誘発される過酸化に関する、化合物Ｉｃの阻害効果
【表２】
2009501712.tif 000009
【００３０】
化合物Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ及びＩｄの光酸化活性の比較を、第２ｂ表に示す。これらの実験において、ブタの眼の光受容細胞の外節のアスコルビン酸塩に誘発される過酸化の速度の比較を実施し、その際、前記比較は、種々の化合物Ｉの塩の存在下での、ＴＢＫ活性産物の蓄積に関して測定される。
【００３１】
第２ｂ表．  光受容細胞の外節のアスコルビン酸塩に誘発される過酸化に関する、化合物Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ｉｄの阻害効果の比較
【表３】
2009501712.tif 000010
【００３２】
それらの結果は、全ての化合物Ｉの塩が、眼の光受容細胞の暗所過酸化に関する、顕著な光酸化活性を示すことを指摘している。
【００３３】
実施例４．  メキシドールとの比較における、化合物Ｉｃのアンチラジカル活性の測定
フリーラジカル反応のインヒビターとしての３−ヒドロキシピリジン誘導体の効力を、ヘミルミネッセント法（ｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ ｍｅｔｈｏｄ）によって、エチル−ベンゼンｋ7ペルオキシドラジカルとのそれらの反応の速度定数の測定によって測定した。
【００３４】
化学発光（ＨＬ）の強度の測定は、ＩＨＦ ＲＡＮ ＵＳＳＲによって設計及び作製された装置ＣＮＫ−７で実施した。光電子増倍管ＦＡＵ−３８を、光学受容器として使用する。イソプロピルトルエン（クモール）の酸化の間のラジカルの固定濃度は、アゾビス−イソブチロニトリルである開始剤によって制御する。
【００３５】
ＨＬ発光の増大のために、活性化キレートＥｕ（ユーロピウム トリステノイル トリフルオロアセトネートと１，１０−フェナトロリン）を使用することで、遅いラジカル開始速度値（Ｗ1＝１０-8〜１０-9モル／ｌ．ｓ．）で測定を実施することが可能となり、従って添加されるサンプルが少量で実施可能となった。研究用のサンプルの秤量分を、好適な溶剤（クロロベンゼン又はアセトニトリル）中に希釈し、そして少量の調製された溶液（０．１〜０．２５ｍｌ）を、反応混合物（５〜６ｍｌ）に添加し、ＨＬ装置の温度制御された反応容器に配置した。発光強度の変化を記録した。得られた結果を、第３表に示す。
【００３６】
第３表．  エチルベンゼンペルオキシドラジカルに関する、窒素複素環のｐ−オキシ誘導体のアンチラジカル活性
【表４】
2009501712.tif 000011
【００３７】
化合物１とメキシドールのアンチラジカル活性の比較評価は、化合物１が、２倍も高いアンチラジカル活性を示すことが実証された。
【００３８】
実施例５．  急性心筋虚血の場合における、虚血壊死領域のサイズに対する、化合物Ｉｃの影響の研究
その実験は、体重２５０〜３００ｇを有する雑種の雄ラットに、ペントバルビタールナトリウム（４０ｍｇ／ｋｇで腹腔内）で麻酔をして行う。それらの動物について、制御呼吸に移行し、左冠状動脈の下行枝を心耳の下端のレベルで結紮することによって、心筋梗塞のモデル化を行った。
【００３９】
壊死領域と虚血領域のサイズを、冠状動脈の咬合後４時間以内に識別指示薬法（ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｉｎｄｉｃａｔｏｒ ｍｅｔｈｏｄ）によって測定した。その原理は、エバンスブルー（虚血領域の指示薬）と赤色ホルマザン（壊死領域の指示薬）との別々の定量的な測定を基礎とする。
【００４０】
第４表．  他の３−オキシピリジン誘導体と比較した、化合物Ｉｃの抗虚血活性（ラットの冠状動脈の咬合後４時間以内）
【表５】
2009501712.tif 000012
【００４１】
理解できるように、化合物Ｉｃは、他の３−オキシピリジン類よりもかなり高い抗虚血活性を示している。
【００４２】
実施例６．  化合物Ｉｃが眼の組織にもたらす局所的刺激作用の研究
実験測定は、６匹のウサギで実施する。すべての動物に、右目に化合物１の１％溶液の単独の点眼を、そして左目にエモキシピンの１％溶液の単独の点眼を行った。眼の前部を、点眼後１分以内に２０Ｄレンズで斜照法によって制御する。その結果、以下のことが示される：
瞼の結膜と眼球又は角膜の反応は、それらの動物の右目では検出されない；
眼球の顕著な結膜充血と下瞼の結膜の肥大が、４匹の動物の左目に観察される。他の２匹の動物は、中程度の眼の結膜充血を示す。
【００４３】
従って、その結果は、本発明による化合物Ｉｃ及びそれらの塩が、抗酸化性の高齢者に安全な抗虚血活性を有し、かつ眼の組織に局所的な刺激作用を示さないことを裏付けている。
【００４４】
化合物Ｉｃと、医業で広く使用されるメキシドール及びエモキシピンとの抗酸化性のアンチラジカル性の高齢者に安全な抗虚血特性の比較評価により、本発明の剤の実質的により高い効力とより低い毒性が示され、また眼科学及び心臓学の実務と他の医学分野における前記剤の使用の見込みを示している。
【手続補正書】
【提出日】平成20年3月12日(2008.3.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
抗酸化性の高齢者に安全な抗虚血活性を有する、２，４，６−トリメチル−３−ヒドロキシピリジンの低級ジカルボン酸との製剤学的に認容性の塩（化合物Ｉａ〜Ｉｄ）
【化１】
2009501712.tif 000014
［式中、
Ｘは、単結合（化合物Ｉａ、シュウ酸塩、Ｃ8Ｈ11ＮＯ・Ｃ2Ｈ2Ｏ4）、ＣＨ2（化合物Ｉｂ、マロン酸塩、Ｃ8Ｈ11ＮＯ・Ｃ3Ｈ4Ｏ4）、ＣＨ2ＣＨ2（化合物Ｉｃ、コハク酸塩、Ｃ8Ｈ11ＮＯ・Ｃ4Ｈ6Ｏ4）及びＣＨ2ＣＨ（ＯＨ）（化合物Ｉｄ、リンゴ酸塩、Ｃ8Ｈ11ＮＯ・Ｃ4Ｈ6Ｏ5）を含む群から選択される］。
【請求項２】
請求項１に記載の２，４，６−トリメチル−３−ヒドロキシピリジン塩の製造方法において、等モル量の２，４，６−トリメチル−３−ヒドロキシピリジンとジカルボン酸とを、低級アルコールの溶液中で沸点温度で反応させて、引き続き反応物を、有機溶剤で処理し、場合により１０〜１５℃で２〜５時間保持する、２，４，６−トリメチル−３−ヒドロキシピリジン塩の製造方法。
【国際調査報告】
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2009501712.tif 000016
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