(57)【要約】ＣＮＳ活性に用いられる芳香族シクロプロパン化合物について開示する。これらの化合物は、ＣＮＳ障害の症状を緩和するために用いることができる。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の構造式（１）またはその鏡像異性体を有することを特徴とする化合物。
2009536644.tif 000007
【請求項２】
Ｒ１はメチル基であり、任意に、アミノ窒素は、塩酸塩として存することを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２またはＲ３のいずれか一方は、水素置換基を有することを特徴とする請求項２記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２またはＲ３のいずれか一方は、パラ位及びメタ位に塩素置換基を有することを特徴とする請求項２記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２及びＲ３の両方は、パラ位及びメタ位に塩素置換基を有することを特徴とする請求項２記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ３は、Ｒ３を支えるアリール基の２位及び３位に隣接する環を有し、ナフチル基を形成することを特徴とする請求項１記載の化合物。
【請求項７】
以下の構造式（１）を有する化合物のＳ，ＲまたはＲ，Ｓ鏡像異性体のラセミ混合物であることを特徴とするラセミ混合物。
2009536644.tif 000008
【請求項８】
Ｒ１はメチル基であり、任意に、アミノ窒素は塩酸塩として存することを特徴とする請求項７記載のラセミ混合物。
【請求項９】
Ｒ２またはＲ３のいずれか一方は、パラ位及びメタ位の塩素置換基であることを特徴とする請求項８記載のラセミ混合物。
【請求項１０】
Ｒ２及びＲ３の両方は、パラ位及びメタ位の塩素置換基であることを特徴とする請求項８記載のラセミ混合物。
【請求項１１】
Ｒ３は、Ｒ３を支えるアリール基の２位及び３位に隣接する環を有し、ナフチル基を形成することを特徴とする請求項７記載のラセミ混合物。
【請求項１２】
以下の構造式（２）の構造またはその鏡像異性体を有することを特徴とする化合物。
2009536644.tif 000009
【請求項１３】
前記複素環または縮合環構造は、ピリジン、チオフェン、ピロール、フラン、ベンゾフラン、インドール、ベンゾチオフェン、及びナフチル基からなる群から選択されることを特徴とする請求項１２記載の化合物。
【請求項１４】
前記複素環または縮合環構造は、置換されたまたは置換されていない構造であり、前記置換された複素環または縮合環構造は、アルキル基、アルケニル基、アルコキシ基、ハロ基、ニトロ基、シアノ基、ケト基、アミノ基、カルボン酸塩、またはそれらの組合せからなる群から選択される置換基で、１つ、２つまたは３つ置換されていることを特徴とする請求項１３記載の化合物。
【請求項１５】
ＣＮＳ障害の症状を軽減するために効果的な量の請求項１記載の化合物を備える組成物を患者に投与し、該組成物の投与により該ＣＮＳ障害の症状の１つ以上を緩和する工程を備えることを特徴とする患者のＣＮＳ障害の症状の１つ以上を緩和する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般的な中枢神経系障害に関するものであり、より具体的には、中枢神経系障害の症状を緩和することに関する。
【背景技術】
【０００２】
中枢神経系（ＣＮＳ）障害は、経済的、社会的に多大な損失を与える。例えば、統合失調症は、高い罹患率及び致死率という特徴を有しており、０．６〜１．３％の生涯有病率である世界的な前記障害の主要な原因の一つである。この障害の患者は、競争力を有する被雇用者となり得るのは、ほんの１５％以下だけで、約２０％の人は自立した生活ができない。
【０００３】
統合失調症は、一般的に、陽性症状（妄想、幻覚、解体された行動など）、陰性症状（アネルギー等）、感情症状（抑うつなど）、または認知障害によって分類される。
【０００４】
このような障害の典型的な治療は、モナニン受容体系に作用する薬物を用いるものである。例えば、第１世代抗精神病薬の主要な効果は、ドーパミン（Ｄ２受容体）の遮断である。これらの薬は、統合失調症の陽性症状の治療に効果的ではあるものの、陰性症状及び認知障害についてはわずかな効果しか発揮しない。統合失調症のようなＣＮＳ障害の治療にいくつかの薬は有効であるが、ＣＮＳ障害を治療するための方法及び化合物は、改良するべき多くの問題を有している。
【特許文献１】米国特許第５７６３４５５号明細書
【非特許文献１】Remington’s Pharmaceutical Sciences (18th Edition, A. R. Gennaro et al. Eds., Mack Publishing Co., Easton, Pa., 1990)
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
本発明は、芳香族シクロプロパン化合物を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明の化合物は、一般式（１）で表される構造、またはその鏡像異性体（式中、アミノ含有基を支えるシクロプロパン炭素は、Ｒ配置（式（１）におけるＳ配置とは反対）であり、アリール基に結合している他方のプロパン炭素は、Ｓ配置（式（１）におけるＲ配置とは反対）である。）またはそれら両鏡像異性体のラセミ混合物である。
2009536644.tif 000002
【０００７】
Ｒ１は、炭素数が３個以下のアルカン基からなる群から選択され、任意に、アミノ窒素は、例えば、塩酸塩のような塩として存在する。Ｒ２およびＲ３は、水素、ハロゲン、炭素数が３個以下のアルカン、または、例えば、多重環、共役基からなるＲを支える環のような隣接する環からなる群から選択される少なくとも１つ以上の置換基である。
【０００８】
また、ＣＮＳ障害の症状を緩和するシクロプロパン化合物を用いるための方法を提供する。前記方法は、前記ＣＮＳ障害の症状を軽減するために効果的な量のシクロプロパン化合物を患者に投与する工程を備える。このような障害は、広域スペクトル精神病に限らず、双極性障害、抑うつ症、気分障害、薬物嗜癖、認知障害、及び、例えば、アルツハイマー病及びパーキンソン病のような神経変性疾患を含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００９】
本発明は、ＣＮＳ障害に対する治療薬として、また、薬物を常用することができる新規化合物を提供することを目的とする。前記化合物は、下記に詳しく説明するように芳香族シクロプロパン化合物を含む。
【００１０】
［１，２−ジアリールシクロプロピルメチルアミン］
モノアミントランスポータ阻害剤は、優れた治療効果を示している。選択的セロトニントランスポータ（ＳＥＲＴ）阻害剤は、最も広く用いられている抗うつ薬のいくつかである。ノルエピネフリントランスポータ（ＮＥＴ）と同様に、ＳＥＲＴに結合している非選択的リガンドは、抗うつ薬としても用いられ始めている。ドーパミントランスポータ（ＤＡＴ）阻害剤は、注意力欠如障害の治療に用いられるが、コカインのように乱用される虞がある。セロトニン受容体は、いくつかのサブタイプに分けられ、これらのサブタイプに対する選択的リガンドの多くは、治療薬として有用である。５−ＨＴ２Ａ拮抗剤は、抗うつ薬として、また、他のＣＮＳ障害のための有益な治療可能性を示している。近年、コカイン中毒者のための治療薬として、５−ＨＴ２Ａ拮抗剤の使用における有望な結果が発見された。
【００１１】
本発明の化合物は、一般式（１）で表される構造、またはその鏡像異性体（式中、アミノ含有基を支えているシクロプロパン炭素は、Ｒ配置（式（１）におけるＳ配置とは反対）であり、アリール基に結合している他方のプロパン炭素は、Ｓ配置（式（１）におけるＲ配置とは反対）である。）またはそれら両鏡像異性体のラセミ混合物である。
2009536644.tif 000003
【００１２】
Ｒ１は、炭素数が３個以下のアルカン基からなる群から選択され、任意に、アミノ窒素は、例えば、塩酸塩のような塩として存在する。Ｒ２およびＲ３は、水素、ハロゲン、炭素数が３個以下のアルカン、または、例えば、多重環、共役基を備えるＲを支える環のような隣接する環からなる群から選択される少なくとも１つ以上の置換基である。
【００１３】
好ましくは、Ｒ１はメチル基であり、Ｒ２またはＲ３は、１）水素、または２）メタ位及びパラ位の塩素置換であり、または、Ｒ３は、ナフチル基を備えるＲ３を有するアリール環のようなＲ３を支えるアリール環の２位及び３位に隣接する環である。
【００１４】
また、上記構造に示された１つまたは両方の芳香族環の代わりに、複素環／化合物／縮合環構造を包含することを除いて、本発明の化合物は上述した化合物に含まれる。このような構造として、例えば、ピリジン、チオフェン、ピロール、フラン、ベンゾフラン、インドール、ベンゾチオフェンなどを挙げることができる。
【００１５】
前記芳香族環／複素環／縮合環構造は、置換されていてもよい。例えば、アルキル基、アルケニル基、アルコキシ基、ハロ基、ニトロ基、シアノ基、ケト基、アミノ基、カルボン酸塩、またはそれらの組合せからなる置換基によって、１つ、２つまたは３つ置換された置換体である。
【００１６】
本発明はまた、前述のＲ，Ｓ鏡像異性体またはＳ，Ｒ鏡像異性体のどちらか一方からなる鏡像異性的に純粋な化合物を含む。上述で説明したように、所要の鏡像異性体の製造は、下記の反応式１における環形成反応において、触媒Ｒｈ２（ＤＯＳＰ）４を適当な鏡像異性体に用いることで達成することができる。本発明は、前記Ｒ，Ｓ鏡像異性体及びＳ，Ｒ鏡像異性体のラセミ混合物もまた含む。このような混合物は、単に所望の割合で前記鏡像異性体を混合するのと同様に、触媒−鏡像異性体の混合物を用いることで製造することができる。
【００１７】
具体例として、本発明は、ＣＮＳ障害に対する治療薬として用いられるシス−１，２−ジアリールシクロプロパンメチルアミンを提供する。前記モノアミントランスポータへの選択的に結合によって結合される前記５−ＨＴ２ａへの結合は、この種の化合物のある部位において得ることができる。その生物活性は、前記シクロプロパンメチルアミンの２つの芳香族環の官能性及びどの鏡像異性体（鏡像）を用いるかに関連する。
2009536644.tif 000004
【００１８】
［化学反応］
前記シクロペンタンの合成に用いられる基本体系を、１−フェニル−２−ナフチル誘導体５として示す（反応式１）。第１段階は、フェニルジアゾ酢酸塩２とビニルナフタレン１とのロジウム触媒反応である。シクロプロパン３のいずれの鏡像異性体も、触媒Ｒｈ２（ＤＯＳＰ）４のいずれの鏡像異性体が用いられるかに依存して形成される。シクロプロパン３のシクロプロパンメチルアミン５への変換は、アルコールに還元し、アルデヒドに酸化し、その後還元的アミノ化を行うことによって達成される。前記体系は、アリールジアゾ酢酸塩及びビニル置換された領域の範囲が用いられるため、非常に順応性を有する。さらに、第１及び第２アミンの範囲は、還元的アミン化工程において導入される。
2009536644.tif 000005
【００１９】
本発明のもう１つの態様では、ＣＮＳ障害の症状を緩和するための方法を提供する。前記方法は、前記ＣＮＳ障害の症状を軽減するために効果的な量の芳香族シクロプロパンからなる組成物を患者に投与することからなる。
【００２０】
本発明の方法は、ＣＮＳ障害の様々な症状の１つ以上を緩和するために適切である。ＣＮＳ障害の患者は、しばしば特定の障害に特徴的な１つ以上の症状を示す。また、同一の患者における複数のＣＮＳ障害による症状群は、本方法によって緩和されうる。この点に関して、現行の方法による治療の間またはその後に、ＣＮＳ障害による症状の認識、及び前記症状の緩和を確定することは、当業者にとってよく行われていることの範囲であり、適切な臨床技術、診断技術、観察技術または他の技術を用いて行われることができる。例えば、統合失調症の症状は、これに限定するものではないが、妄想、幻覚、緊張病性行動を含む。本発明の方法を行うことによって生じるこれら特定の症状の減少は、前記症状の緩和であると考えられる。本発明によって緩和するのに適した症状を示す特定のＣＮＳ障害は、これに限るものではないが、例えば、双極性障害のような広域スペクトル精神病、抑うつ症、気分障害、薬物嗜癖、認知障害、及び、例えば、アルツハイマー病及びパーキンソン病のような神経変性疾患、及びそれらの組合せである。これらの障害の各症状については、よく知られている。これら特定の障害のいずれかの症状軽減を認識し、確定することは、当業者によって容易に行われる。
【００２１】
有効量の化合物からなる組成物は、従来の経路で投与される。前記投与は、これに限るものではないが、経口投与、非経口投与、筋注投与、静注投与、及び粘膜投与を挙げることができる。本発明の第１の態様では、経口投与が用いられる。
【００２２】
前記化合物投与の用量・用法は、当業者によく知られている範囲である。服用レベルは、例えば、体重１ｋｇ当たり４μｇ〜５０ｍｇの範囲であってよい。他の例として、服用レベルは、体重１ｋｇあたり２０μｇ〜１５ｍｇの範囲であってよい。このような服用パラメータは、患者の体重に加えて、該患者の年齢、障害の段階を考慮され、従来の工程を考慮して決定することができると認識される。
【００２３】
前記化合物は、本発明の方法に用いるために、他の成分と結合して製剤を形成してもよい。このような構成要素は、とりわけ、これに限定するものではないが、投薬形態、患者特有の必要性、及び製造方法などの要因に応じて選択することができる。前記構成要素として、例えば、これに限定するものではないが、結合材、潤滑油、充填剤、香味料、防腐剤、着色料、希釈剤などを含む。本発明の方法に用いるための医薬品組成物成分に関する付加的情報が知られている（例えば、非特許文献１参照）。従って、本発明の組成物と共に用いる特定の物質の選択及びその互換性は、当業者であれば容易に確認することができる。また、付加的な詳細についても、知られている（例えば、特許文献１参照）。
【００２４】
次に、本発明について以下の実施例を用いて説明するが、これは例示的に説明するためのものであり、いかなる形であれ本発明を制限するものではない。
【実施例１】
【００２５】
本実施例では、本発明の化合物を生成するための代表的な技術を提供する。
【００２６】
［（１Ｓ，２Ｒ）−メチル２−（ナフタレン−２−イル）−フェニルシクロプロパンカルボン酸塩］
２−ビニルナフタレン１．０５ｇ（６．８２ｍｍｏｌ）、メチル２−ジアゾ−２−ナフチル酢酸塩１．０１ｇ（５．７１ｍｍｏｌ）、及びＲｈ２（ＤＯＳＰ）４  ０．０７５ｇ（０．０４０ｍｍｏｌ）を出発物質として、エステル２６を白色固体の化合物として得た。収量は、１．２８ｇ（４．２３ｍｍｍｏｌ、７４％）であった。前記化合物をヘキサンを用いて再結晶し、＞９９％の鏡像異性体過剰率の該化合物を得た。Ｒｆ：０．１５（９：１  ヘキサン／エチルエーテル）、１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δ  ７．７８−７．９１（ｍ，２Ｈ），７．７１（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），７．５０−７．６１（ｍ，３Ｈ），７．２４−７．３７（ｍ，５Ｈ），７．０４（ｄｄ，Ｊ＝８．５，１．１Ｈｚ，１Ｈ），３．８５（ｓ，３Ｈ），３．５６（ｄｄ，Ｊ＝ ８．８，７．７Ｈｚ，１Ｈ），２．４８（ｄｄ，Ｊ＝４．９，９．３Ｈｚ，１Ｈ），２．４６（ｄｄ，Ｊ＝７．１，５．２Ｈｚ，１Ｈ）、１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）  δ  １７４．０（Ｃ），１３４．５（Ｃ），１３３．９（Ｃ），１３１．７（ＣＨ），１２７．５（ＣＨ），１２７．３（ＣＨ），１２６．９（ＣＨ），１２５．８（ＣＨ），１２５．６（ＣＨ），１２５．１（ＣＨ），５２．３（ＣＨ３），３７．４（Ｃ），３３．１（ＣＨ），２０．６（ＣＨ２）、ＩＲ（ｎｅａｔ）  ｃｍ−１  ３０６４，３０２７，１７１４，１２５７，７２９，６９９、［α］２５Ｄ＝−２５．５°（ｃ０．６５，ＣＨＣｌ３）、ＨＰＬＣＲＲ−Ｗｈｅｌｋ，５％ｉ−ＰｒＯＨ／ヘキサン，１ｍｌ／分  ｔＲ＝９．３分（ｍｉｎｏｒ），１０．７分（ｍａｊｏｒ）、ｍｐ８４−８７℃、Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２１Ｈ１８Ｏ２：Ｃ，８３．４２、Ｈ，６．００．Ｆｏｕｎｄ  Ｃ，８３．２９、Ｈ，５．９４。
【００２７】
［（１Ｓ，２Ｒ）−２−（ナフタレン−２−イル）−１−フェニルシクロプロパンカルボン酸塩］
試料であるエステル２６  ０．６５ｇ（２．２ｍｍｏｌ）及びＬｉＡｌＨ４  ２．２ｍｍｏｌから、無色油であるアルコールを得た。収量は０．５８ｇ（２．１ｍｍｏｌ、９７％）であった。Ｒｆ：０．１２（４：１  ヘキサン／エチル酢酸）、１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δ  ７．５８−７．７３（ｍ，２Ｈ），７．２０−７．４０（ｍ，２Ｈ），７．０７−７．１９（ｍ，  ５Ｈ），  ６．８２（ｄｄ，Ｊ＝８．５，１．７Ｈｚ，１Ｈ），３．９５（ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，１Ｈ），３．６８（ｄ，Ｊ＝１１Ｈｚ，１Ｈ），２．５５（ｄｄ，Ｊ＝８．８，６．０Ｈｚ，１Ｈ），１．６３（ｄｄ  Ｊ＝１１，５．８Ｈｚ，１Ｈ），１．５５（ｍ，２Ｈ）、ＩＲ（ｎｅａｔ）  ｃｍ−１３３５０（ｂｒ）。
【００２８】
得られた粗アルコールを、スワーン酸化し、白色固体であるアルデヒドを得た。収量は０．４９ｇ（１．８ｍｍｏｌ、９５％）であった。Ｒｆ：０．３８（４：１  ヘキサン／エチル酢酸）、１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δ  ９．７（ｓ，１Ｈ），７．６０−７．７０（ｍ，２Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ），  ７．４０−７．４３（ｍ，３Ｈ），７．１３−７．１９（ｍ，４Ｈ）６．９（ｄ，Ｊ＝８．５Ｈｚ，２Ｈ），３．２（ｄｄ，Ｊ＝８．５，８．５Ｈｚ，１Ｈ），２．２０−２．３０（ｍ，２Ｈ）、１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）  δ  ２００．６（ＣＨ），１３３．８（Ｃ），１３３．１（Ｃ），１３２．９（Ｃ），１３２．１（Ｃ），１３１．２（ＣＨ），１２８．３（ＣＨ），１２７．５（ＣＨ），１２７．４（ＣＨ）１２７．３（ＣＨ），１２７．９（ＣＨ），１２５．９（ＣＨ）１２５．８（ＣＨ），１２５．５（ＣＨ），４６．５（Ｃ），３５．８（ＣＨ），２０．０（ＣＨ２）。
【００２９】
［Ｎ−メチル（（１Ｒ，２Ｓ）−２−（ナフタレン−２−イル）−１−フェニルシクロプロピル）メタンアミン（５）］
過剰メチルアミンで還元的アミン化したアルデヒド０．４９ｇ（１．８ｍｍｏｌ）を出発物質として、淡黄色油であるアミン５を得た。収量は０．２３ｇ（０．８８ｍｍｏｌ，４４％）であった。Ｒｆ：０．３０（９：１  エチルエーテル／トリエチルアミン）、１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δ  ７．６−７．７（ｍ，１Ｈ）、７．５５−７．５７（ｍ，１Ｈ）７．４７（ｄ，Ｊ＝８．５，１Ｈ），７．２０−７．３０（ｍ，３Ｈ），７．００−７．１０（ｍ，４Ｈ），６．７６（ｄｄ，Ｊ＝８．５，１．３Ｈｚ，１Ｈ），２．３９−２．４３（ｍ，４Ｈ），１．６５（ｄｄ，Ｊ＝１１．５Ｈｚ，１Ｈ），１．４７（ｄｄ，Ｊ＝８．８，５．５Ｈｚ，１Ｈ）、１３Ｃ  ＮＭＲ（７５ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）  δ  １３８．７（ＣＨ），１２８．０（ＣＨ），１２４．８（ＣＨ），６３．０（ＣＨ），３６．４（ＣＨ３），３６．０（Ｃ），２８．５（ＣＨ），１８．２（ＣＨ２）。
【００３０】
試料である前記アミン０．２０ｇ（０．７３ｍｍｏｌ）を、エーテル中、ＨＣｌで塩酸塩に変換した。このようにして得られた黄色固体を酢酸エチル／メタノールを用いて再結晶し、白色プリズムである塩を得た。収量は０．０９０ｇ（０．２８ｍｍｏｌ，３９％）であった。Ｒｆ：１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）  δ  ７．３６−７．５９（ｍ，３Ｈ），６．９５−７．２７（ｍ，８Ｈ），６．８４（ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ，１Ｈ），３．７３（ｄ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ，１Ｈ），３．３２−３．５５（ｍ，２Ｈ），２．９６（ｄ，Ｊ＝１２．９Ｈｚ，１Ｈ），２．６２（ｄｄ，Ｊ＝７．５，７．５Ｈｚ，４Ｈ），２．５４（ｓ，３Ｈ），１．９１（ｄｄ，Ｊ＝６．０，６．０Ｈｚ，１Ｈ），１．５６（ｄｄ，Ｊ＝６．８，６．８Ｈｚ，１Ｈ）、Ａｎａｌ．ｃａｌｃｄ  ｆｏｒ  Ｃ２１Ｈ２２ＣｌＮ：Ｃ，７７．８８、Ｈ，６．８５、Ｎ，４．３２。Ｆｏｕｎｄ：Ｃ，７７．７４、Ｈ，７．００、Ｎ，４．３３。
【実施例２】
【００３１】
本実施例では、神経性受容体に対する本発明の実施形態の効果の実証を提供する。
【００３２】
［モノアミン再取り込み結合法］
未知物質を計量し、ＤＭＳＯに溶解し、１０ｍＭの原液を作成した。結合のため試験緩衝液中に５０μＭになるように、または水中に１ｍＭになるように初期希釈された。次に、ＤＭＳＯが補充された試験緩衝液で希釈し、最終濃度を０．１％ＤＭＳＯに維持した。ピペット操作は、Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００  ｒｏｂｏｔｉｃ  ｗｏｒｋｓｔａｔｉｏｎを用いて行った。
【００３３】
［Ｃｏｌｏｎｌａ細胞中における［１２５Ｉ］ＲＴＩ−５５のｈＤＡＴ，ｈＳＥＲＴまたはｈＮＥＴへの放射性リガンド結合の阻害］
細胞の準備：ｈＤＡＴ，ｈＳＥＲＴまたはｈＮＥＴが挿入され、発現するＨＥＫ２９３細胞を１５０ｍｍ直径の組織培養皿に８０％コンフルエントにし、組織源として用いた。細胞膜を、以下の通りに準備した。前記培養皿から培地を捨て、該培養皿をカルシウム及びマグネシウムを含まないリン酸緩衝食塩水を用いて洗浄した。次に、前記洗浄された培養皿に、溶解緩衝液（１ｍＭ  ＥＤＴＡを含む２ｍＭ  ＨＥＰＥＳ）を１０ｍｌ添加した。前記添加の１０分後、前記培養皿中の細胞をかき集め、遠心管に注ぎ、３０，００ｘｇで２０分間遠心分離した。次に、上澄み液を取り除き、沈渣に１２〜３２ｍｌの範囲の量の０．３２Ｍショ糖溶液を加え、Ｐｏｌｙｔｒｏｎを７〜１０秒間作動させて再懸濁した。再懸濁量は、細胞株中における結合部位の密度に依存し、総放射能活性に対して１０％以下の結合を反映するように決定される。
【００３４】
試験条件：各試験管に、膜画分５０μｌ（タンパク量として約１０〜１５μｇ）と、非特異的結合を規定するための未知化合物または緩衝液（Ｋｒｅｂｓ−ＨＥＰＥＳ，ｐＨ７．４、１２２ｍＭ  ＮａＣｌ、２．５ｍＭ  ＣａＣｌ２，１．２ｍＭ  ＭｇＳＯ４、１０μＭ  パーギリン、１００μＭ  トロポロン、０．２％グルコースおよび０．２％アスコルビン酸、２５ｍＭ  ＨＥＰＥＳを有する緩衝液）２５μｌと、［１２５Ｉ］ＲＴＩ−５５（最終濃度４０〜８０ｐＭ）を２５μｌとを収容し、緩衝液を加えて最終体積を２５０μｌとした。前記膜は、［１２５Ｉ］ＲＴＩ−５５を添加する前に、１０分間未知物質と共に予め温置した。前記試験管は、２５℃に９０分間温置した。結合は、Ｔｏｍｔｅｃ−９６穴（well）用細胞ハーベスタを用いて、ＧＦ／Ｆフィルタで濾過することによって終了させた。次に、前記フィルタを氷冷食塩水で６秒間洗浄した。シンチレーション（scintillation）流体を方形セル（square）に加え、前記フィルタに残存する放射活性をＷａｌｌａｃ  μ−またはベータプレートリーダ（beta plate reader）を用いて計測した。特異的結合は、５μＭ  マジンドール（ＨＥＫ−ｈＤＡＴ及びＨＥＫ−ｈＮＥＴ）または５Ｍ  イミプラミン（ＨＥＫ−ｈＳＥＲＴ）の有無により観察される結合の相違として確認される。２つまたは３つの独立競合実験は二重反復測定によって行われる。取得されたデータは、ＧｒａｐｈＰＡＤ  Ｐｒｉｓｍにより分析し、Ｃｈｅｎｇ−Ｐｒｕｓｏｆｆ式（Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋（［１２５Ｉ］ＲＴＩ−５５／ＫｄＲＴＩ５５）））からＩＣ５０値をＫｉ値に変換した。
【００３５】
［受容体結合試験方法］
５−ＨＴ１Ａ受容体
ＨＡ７細胞（ヒト受容体）を１０％ウシ胎児血清（ＦＢＳ）、０．０５％ペニシリン−ストレプトマイシン（ｐｅｎ−ｓｔｒｅｐ）及び４００μｇ／ｍｌのジェネティシン（Ｇ４１８）を含むＤＭＥＭ中で１００×２０ｍｍプレートにおいてコンフルエント（confluence）にした。前記細胞は該プレートからかき集められ、５００ｘｇで５分間遠心分離した。前記遠心分離により得られた沈渣は、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．７）中で、ポリトロンを用いて均一化処理し、次に、２７，０００ｘｇで遠心分離した後、該Ｔｒｉｓ−ＨＣｌで１ｍｌ中のタンパク量が１０ｍｇとなるように再懸濁した。前記再懸濁で得られた均等質を、その後１ｍｌずつに分注し、−７０℃で保存した。
【００３６】
次に、前記細胞を融解した後、一度洗浄し、１０μＭ  ニアラミド中、１００μＭ  アスコルビン酸を含む２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４で、１０ｍｇタンパク質／８０ｍｌとなるように再懸濁した。前記アッセイは、９６穴プレートで３重に（triplicate）行った。１００μlの試験化合物または緩衝液、及び、細胞均等質（homogenate）０．８０ｍｌ（０．１０ｍｇタンパク質／穴）を［３Ｈ］８−ＯＨ−ＤＰＡＴ１０μｌに添加した（最終濃度０．５ｎＭ）。非特異的結合は、１０ｍＭジヒドロエルゴタミンにより決定した。前記プレートを、２５℃で６０分間温置し、その後、Ｔｏｍｔｅｃ細胞ハーベスタを用い、ガラス繊維濾紙により濾過した。前記濾紙を、冷やした５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．７）で４回洗浄した後、一晩乾燥させ、シンチレーションカクテル１０ｍｌを加えた後、Ｗａｌｌａｃベータプレート１２０５液体シンチレーターセンターで２分間計測した。
【００３７】
［５−ＨＴ２Ａ受容体］
ＮＩＨ−３Ｔ３-ＧＦ６細胞（ラット受容体）を、前記ＨＡ７細胞と同様に成長させた。前記細胞を融解し、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌに再懸濁して、２７，０００ｘｇで１２分間遠心分離した。前記遠心分離により得られた沈渣を、その後、２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ（ｐＨ７．７）で１ｍｇタンパク質／８０ｍｌとなるように再懸濁し、得られた細胞均等質（０．０１ｍｇタンパク質／穴）０．８０ｍｌを、前記試験化合物または緩衝液１００μｌと、［３Ｈ］ケタンセリン（最終濃度０．４ｎＭ）１００μｌとを含む穴中に加えた。前記プレートを、２５℃で６０分間温置した。非特異的結合は、１．０μＭケタンセリンにより決定された。
【００３８】
［５−ＨＴ２Ｃ受容体］
ＮＩＨ−３Ｔ３-Ｐφ細胞（ラット受容体）を、前記ＨＡ７細胞と同様に成長させた。最終沈渣を、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ（ｐＨ７．７）、４ｍＭ  ＣａＣｌ２、１０μＭパーギリン及び０．１％アスコルビン酸により３ｍｇタンパク質／８０ｍｌとなるように再懸濁した。試験化合物または緩衝液１００μｌ、［３Ｈ］メスレルギン（最終濃度０．４０ｎＭ）１００μｌ、及び、細胞均等質（０．０３ｍｇタンパク質／穴）を含む穴を、２５℃で６０分間温置した。非得的結合は、１０μＭメスレルギンにより決定された。
【００３９】
［生物活性］
本実施形態で上述したように検定されたジアリールシクロプロパンメチルアミン再懸濁液の生物学的データを、表１に示す。表１は、鏡像異性体の対で構成され、各々に対する選択性の相違を示す。これは、第１項目、第２項目でみることができる。（１Ｓ，２Ｒ）鏡像異性体は、ＳＥＲＴ，ＮＥＴ及び５−ＨＴ２ａに適度な有効性で結合する一方で、（１Ｒ，２Ｓ）鏡像異性体は、ＳＥＴに対して選択的である。１-アリール基は、前記モノアミントランスポータ親和性に計り知れない影響を有する。非常に高い親和性を、前記１-アリール基が３，４-ジクロルフェニル基及び２-ナフチル基である場合に得ることができる。前記１，２-ジアリールシクロプロパンメチルアミンがＣＮＳ障害の治療薬として有益である薬剤群であることを、前記生物学的データは示している。
［表１］
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【００４０】
上述した特定の実施形態は、本発明を説明することを目的としたものであり、これに限定して解釈されるものではない。本発明の教示から、当業者によって認識される多様な改良及び改変は、本発明の思想から逸脱するものではない。
【国際調査報告】
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