(57)【要約】  本発明は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体である構造式（Ｉ）2009526850.tif 000069を有するヌクレオシドアリールホスホルアミデートを提供する。前記化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤に対する前駆体であり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療のために有用である。前記化合物は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として、ＨＣＶ複製の阻害剤に対する前駆体として、及び／またはＣ型肝炎感染の治療のために特に有用である。本発明はまた、前記ヌクレオシドアリールホスホルアミデートを単独でまたはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染（特に、ＨＣＶ感染）に対して活性な他の物質と組み合わせて含む医薬組成物も記載している。本発明のヌクレオシドアリールホスホルアミデートを用いるＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼの阻害方法、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害方法及び／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療方法も開示している。
2009526850.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
構造式Ｉ
【化１】
2009526850.tif 000065
［式中、
ｎは０、１または２であり；
Ａｒはフェニル、ナフチル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリル、キノリニルまたはイソキノリニルであり、Ａｒは場合によりハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルカルボニルオキシ及びＣ１−４アルキルオキシカルボニルからなる群から独立して選択される１〜５個の置換基で置換されており；
Ｒ１は水素またはフルオロであり；
Ｒ２はフルオロ、メトキシまたはＯＲ１０であり；
Ｒ３は水素、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、及び構造式
【化２】
2009526850.tif 000066
を有するアミノアシル残基からなる群から選択され；
Ｒ１０は水素、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、及び構造式
【化３】
2009526850.tif 000067
を有するアミノアシル残基からなる群から選択され；或いは
Ｒ３及びＲ１０はこれらが結合している酸素原子と一緒になって、５員環状カーボネートを形成し；
Ｒ４は水素、Ｃ１−５アルキル、フェニルまたはベンジル（前記アルキルは場合によりフッ素、ヒドロキシ、メトキシ、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、グアニジノ、メルカプト、メチルチオ、１Ｈ−イミダゾリル及び１Ｈ−インドル−３−イルからなる群から選択される１個の置換基で置換されており、前記したフェニル及びベンジルは場合によりハロゲン、ヒドロキシ及びメトキシからなる群から独立して選択される１〜２個の置換基で置換されている）であり；
Ｒ５は水素またはメチルであり；或いは
Ｒ４及びＲ５はこれらが結合している炭素原子と一緒になって、３〜６員脂肪族スピロ環式環系を形成し；
Ｒ６は水素、Ｃ１−１６アルキル、Ｃ２−２０アルケニル、（ＣＨ２）ｎＣ３−６シクロアルキル、フェニル、ベンジルまたはアダマンチル（前記したアルキル、アルケニル、シクロアルキル及びアダマンチルは場合によりハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、Ｃ１−４アルコキシから独立して選択される１〜３個の置換で置換基されており、前記したフェニル及びベンジルは場合によりハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−４アルコキシ、トリフルオロメチル及びトリフルオロメトキシから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されている）であり；
Ｒ７は水素、Ｃ１−５アルキルまたはフェニルＣ０−２アルキルであり；
Ｒ８は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アシル、ベンゾイル、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルオキシカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルスルホニルまたはフェニルＣ０−２アルキルスルホニルであり；
Ｒ９は水素、Ｃ１−８アルキルカルボニルまたはＣ１−８アルキルオキシカルボニルである。］
を有する化合物またはその医薬的に許容され得る塩。
【請求項２】
Ｒ１が水素またはフルオロであり、Ｒ２がヒドロキシであり、Ｒ３が水素である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が水素またはフルオロであり、Ｒ２がフルオロであり、Ｒ３が水素である請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ａｒが場合によりハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルカルボニルオキシ及びＣ１−４アルキルオキシカルボニルからなる群から独立して選択される１〜５個の置換基で置換されているフェニルである請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ａｒがハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルカルボニルオキシ及びＣ１−４アルキルオキシカルボニルからなる群から独立して選択される３〜５個の置換基で置換されているフェニルである請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ａｒがハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルカルボニルオキシ及びＣ１−４アルキルオキシカルボニルからなる群から独立して選択される３個の置換基で置換されているフェニルである請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ａｒがインドリルである請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ５が水素であり、Ｒ４が水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、イソブチル、２−メチル−１−プロピル、ヒドロキシメチル、フルオロメチル、メルカプトメチル、カルボキシメチル、カルバモイルメチル、１−ヒドロキシエチル、２−カルボキシエチル、２−カルバモイルエチル、２−メチルチオエチル、４−アミノ−１−ブチル、３−アミノ−１−プロピル、３−グアニジノ−１−プロピル、１Ｈ−イミダゾル−４−イルメチル、フェニル、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル及び１Ｈ−インドル−３−イルメチルからなる群から選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ４がメチルまたはベンジルである請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ４がメチルである請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ６がＣ７−１６アルキルである請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ６がＣ８−１２アルキルである請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ６がＣ８アルキルである請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
Ａｒがそれぞれが場合によりハロゲン及びＣ１−４アルキルから選択される１〜３個の置換基で置換されているフェニルまたはインドリルであり、Ｒ４がメチルであり、Ｒ６がエチルまたはブチルであり、Ｒ５が水素である請求項１に記載の化合物。
【請求項１５】
Ａｒが未置換フェニルであり、Ｒ６がＣ８アルキルである請求項１に記載の化合物。
【請求項１６】
【化４】
2009526850.tif 000068
からなる群から選択される請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容され得る塩。
【請求項１７】
請求項１に記載の化合物及び医薬的に許容され得る担体を含む医薬組成物。
【請求項１８】
哺乳動物におけるＣ型肝炎ウイルス感染を治療するための請求項１に記載の化合物の使用。
【請求項１９】
哺乳動物におけるＣ型肝炎ウイルス感染の治療用薬剤の製造における請求項１に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヌクレオシドアリールホスホルアミデート、その合成、及びＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体としてのその使用に関する。本発明の化合物はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤に対する前駆体であり、従ってＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染を治療するために有用である。本発明の化合物は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤に対する前駆体として、ＨＣＶ複製の阻害剤に対する前駆体として、及びＣ型肝炎感染の治療のために特に有用である。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）感染は、世界の人口の２〜１５％と推定されている感染者の実質数を肝硬変や肝細胞癌のような慢性肝疾患に至らしめる重大な健康問題である。米国疾病管理センターによれば、米国だけでも感染者は４５０万人と推定されている。世界保健機構によれば、世界中での感染者は２億人以上であり、毎年少なくとも３００〜４００万人が感染している。いったん感染すると、感染者の約２０％でウイルスが除去され、残りの感染者は人生の残りの間ＨＣＶを保有している。慢性感染者の１０〜２０％はついには肝臓を壊す肝硬変または癌を発症する。ウイルス疾患は、汚染された血液や血液製剤及び汚染された針により非経口的に、または性的に、感染者または保菌者の母親から子供へと縦に伝播される。ＨＣＶ感染に対する現在の治療は組換えインターフェロン−αを単独でまたはヌクレオシドアナログのリバビリンと併用する免疫治療に限られており、限られた臨床効果しか得られていない。更には、ＨＣＶに対して樹立されたワクチンはない。その結果、慢性ＨＣＶ感染を効果的に根絶させる改良された治療薬が緊急に要望されている。ＨＣＶ感染の治療の技術水準は検討されており、以下の刊行物を参照されたい：Ｂ．Ｄｙｍｏｃｋら，“Ｎｏｖｅｌ  ａｐｐｒｏａｃｈｅｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ”，Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ＆  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ，１１：７９−９６（２０００）；Ｈ．Ｒｏｓｅｎら，“Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ：ｃｕｒｒｅｎｔ  ｕｎｄｅｒｓｔａｎｄｉｎｇ  ａｎｄ  ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ  ｆｏｒ  ｆｕｔｕｒｅ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ”，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  Ｔｏｄａｙ，５：３９３−３９９（１９９９）；Ｄ．Ｍｏｒａｄｐｏｕｒら，“Ｃｕｒｒｅｎｔ  ａｎｄ  ｅｖｏｌｖｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｔｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ”，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ．Ｈｅｐａｔｏｌ．，１１：１１８９−１２０２（１９９９）；Ｒ．Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ，“Ｃａｎｄｉｄａｔｅ  Ｔａｒｇｅｔｓ  ｆｏｒ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ａｎｔｉｖｉｒａｌ  Ｔｈｅｒａｐｙ”，Ｉｎｔｅｒｖｉｒｏｌｏａｇｙ，４０：３７８−３９３（１９９７）；Ｇ．Ｍ．Ｌａｕｅｒ  ａｎｄ  Ｂ．Ｄ．Ｗａｌｋｅｒ，“Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ”，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３４５：４１−５２（２００１）；Ｂ．Ｗ．Ｄｙｍｏｃｋ，“Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ”，Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ，６：１３−４２（２００１）；及びＣ．Ｃｒａｂｂ，“Ｈａｒｄ−Ｗｏｎ  Ａｄｖａｎｃｅｓ  Ｓｐａｒｋ  Ｅｘｃｉｔｅｍｅｎｔ  ａｂｏｕｔ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ”，Ｓｃｉｅｎｃｅ：５０６−５０７（２００１）。これらの内容は全文を参照により本明細書中に含まれるとする。
【０００３】
ＨＣＶ治療に対する別のアプローチも採用されており、その中にはウイルス性セリンプロテイナーゼ（ＮＳ３プロテアーゼ）、ヘリカーゼ及びＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼ（ＮＳ５Ｂ）の阻害並びにワクチンの製造が含まれる。
【０００４】
ＨＣＶビリオンは、約３，０１０アミノ酸のポリタンパク質をコードする約９６００塩基の単一オリゴリボヌクレオチドゲノム配列を有する包膜プラス鎖ウイルスである。ＨＣＶ遺伝子のタンパク質産物は構造タンパク質Ｃ、Ｅ１及びＥ２、並びに非構造タンパク質ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ及びＮＳ４Ｂ、ＮＳ５Ａ及びＮＳ５Ｂから構成されている。非構造（ＮＳ）タンパク質はウイルス複製に対する触媒機構を与えると考えられている。ＮＳ３プロテアーゼはポリタンパク質鎖からＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼであるＮＳ５Ｂを放出させる。ＨＣＶの複製サイクルにおける鋳型として役立つ一本鎖ウイルス性ＲＮＡから二本鎖ＲＮＡを合成するためにはＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼが必要である。従って、ＮＳ５ＢポリメラーゼはＨＣＶ複製コンプレックスにおける必須成分であると考えられている［Ｋ．Ｉｓｈｉら，“Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｏｆ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  ＮＳ５Ｂ  Ｐｒｏｔｅｉｎ：Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｔｓ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ＲＮＡ  Ｂｉｎｄｉｎｇ”，Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ，２９：１２２７−１２３５（１９９９）；及びＶ．Ｌｏｈｍａｎｎら，“Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｋｉｎｅｔｉｃ  Ａｎａｌｙｓｅｓ  ｏｆ  ＮＳ５Ｂ  ＲＮＡ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ”，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，２４９：１０８−１１８（１９９８）参照］。ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼを阻害すると二本鎖ＨＣＶ  ＲＮＡの形成が防止され、よって該阻害はＨＣＶ特異的抗ウイルス治療を開発するための魅力的なアプローチとなる。
【０００５】
ＨＣＶ感染治療の可能性を有するＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤の開発はＭ．Ｐ．Ｗａｌｋｅｒら，“Ｐｒｏｍｉｓｉｎｇ  ｃａｎｄｉｄａｔｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ”，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，１２：１２６９−１２８０（２００３）；及びＰ．Ｈｏｆｆｍａｎｎら，“Ｒｅｃｅｎｔ  ｐａｔｅｎｔｓ  ｏｎ  ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ（１９９９−２００２）”，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ，１３：１７０７−１７２３（２００３）で検討されている。ＨＣＶポリメラーゼに対するプリンリボヌクレオシドの活性はＡ．Ｅ．Ｅｌｄｒｕｐら，“Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ−Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ  ｏｆ  Ｐｕｒｉｎｅ  Ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ  ｆｏｒ  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ＨＣＶ  ＲＮＡ−Ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ＲＮＡ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ”，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４７：２２８３−２２９５（２００４）に報告されている。ＨＣＶ治療に対する治療アプローチとしてのＨＣＶポリメラーゼの阻害剤として構造的に異なるヌクレオシド誘導体が必要とされ続けている。
【０００６】
今回、本発明のヌクレオシドアリールホスホルアミデートがＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製（特に、ＨＣＶ複製）の強力な阻害剤に対する前駆体であることが判明した。ホスホルアミデートはインビボでヌクレオシド５’−ホスフェート（ヌクレオチド）誘導体に変換され、後者はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ（特に、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ）の阻害剤である対応のヌクレオシド５’−トリホスフェート誘導体に変換される。本発明のヌクレオシドホスホルアミデートはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染（特に、ＨＣＶ感染）を治療するために有用である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
従って、本発明の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として（特に、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として）有用なヌクレオシドアリールホスホルアミデートを提供することである。
【０００８】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスの複製の阻害剤に対する前駆体として（特に、Ｃ型肝炎ウイルスの複製の阻害剤に対する前駆体として）有用なヌクレオシドアリールホスホルアミデートを提供することである。
【０００９】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療（特に、ＨＣＶ感染の治療）において有用なヌクレオシドアリールホスホルアミデートを提供することである。
【００１０】
本発明の別の目的は、本発明のヌクレオシドアリールホスホルアミデートを医薬的に許容され得る担体と一緒に含む医薬組成物を提供することである。
【００１１】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として（特に、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として）使用するための本発明のヌクレオシドアリールホスホルアミデートを含む医薬組成物を提供することである。
【００１２】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤に対する前駆体として（特に、ＨＣＶ複製の阻害剤に対する前駆体として）使用するための本発明のヌクレオシドアリールホスホルアミデートを含む医薬組成物を提供することである。
【００１３】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療（特に、ＨＣＶ感染の治療）において使用するための本発明のヌクレオシドアリールホスホルアミデートを含む医薬組成物を提供することである。
【００１４】
本発明の別の目的は、本発明のヌクレオシドアリールホスホルアミデートをＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスに対して（特に、ＨＣＶ）に対して活性な他の物質と一緒に含む医薬組成物を提供することである。
【００１５】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害（特に、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害）方法を提供することである。
【００１６】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害（特に、ＨＣＶ複製の阻害）方法を提供することである。
【００１７】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療（特に、ＨＣＶ感染の治療）方法を提供することである。
【００１８】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスに対して活性な他の物質と組み合わせたＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療（特に、ＨＣＶに対して活性な他の物質と組み合わせたＨＣＶ感染の治療）方法を提供することである。
【００１９】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害のため及び／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療（特に、ＨＣＶ複製の阻害及び／またはＨＣＶ感染の治療）用薬剤として使用するためのヌクレオシドアリールホスホルアミデート及びその医薬組成物を提供することである。
【００２０】
本発明の別の目的は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害及び／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療（特に、ＨＣＶ複製の阻害及び／またはＨＣＶ感染の治療）用薬剤を製造するための本発明のヌクレオシドアリールホスホルアミデート及びその医薬組成物の使用を提供することである。
【００２１】
これらの目的及び他の目的は以下の詳細説明から容易に明らかとなるであろう。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
発明の要旨
本発明は、指定する立体化学配置を有する構造式Ｉ
【００２３】
【化５】
2009526850.tif 000003
［式中、
ｎは０、１または２であり；
Ａｒはフェニル、ナフチル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリル、キノリニルまたはイソキノリニルであり、Ａｒは場合によりハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルカルボニルオキシ及びＣ１−４アルキルオキシカルボニルからなる群から独立して選択される１〜５個の置換基で置換されており；
Ｒ１は水素またはフルオロであり；
Ｒ２はフルオロ、メトキシまたはＯＲ１０であり；
Ｒ３は水素、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、及び構造式
【００２４】
【化６】
2009526850.tif 000004
を有するアミノアシル残基からなる群から選択され；
Ｒ１０は水素、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、及び構造式
【００２５】
【化７】
2009526850.tif 000005
を有するアミノアシル残基からなる群から選択され；或いは
Ｒ３及びＲ１０はこれらが結合している酸素原子と一緒になって、５員環状カーボネートを形成し；
Ｒ４は水素、Ｃ１−５アルキル、フェニルまたはベンジル（前記アルキルは場合によりフッ素、ヒドロキシ、メトキシ、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、グアニジノ、メルカプト、メチルチオ、１Ｈ−イミダゾリル及び１Ｈ−インドル−３−イルからなる群から選択される１個の置換基で置換されており、前記したフェニル及びベンジルは場合によりハロゲン、ヒドロキシ及びメトキシからなる群から独立して選択される１〜２個の置換基で置換されている）であり；
Ｒ５は水素またはメチルであり；或いは
Ｒ４及びＲ５はこれらが結合している炭素原子と一緒になって、３〜６員脂肪族スピロ環式環系を形成し；
Ｒ６は水素、Ｃ１−１６アルキル、Ｃ２−２０アルケニル、（ＣＨ２）ｎＣ３−６シクロアルキル、フェニル、ベンジルまたはアダマンチル（前記したアルキル、アルケニル、シクロアルキル及びアダマンチルは場合によりハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、Ｃ１−４アルコキシから独立して選択される１〜３個の置換で置換基されており、前記したフェニル及びベンジルは場合によりハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−４アルコキシ、トリフルオロメチル及びトリフルオロメトキシから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されている）であり；
Ｒ７は水素、Ｃ１−５アルキルまたはフェニルＣ０−２アルキルであり；
Ｒ８は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アシル、ベンゾイル、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルオキシカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルスルホニルまたはフェニルＣ０−２アルキルスルホニルであり；
Ｒ９は水素、Ｃ１−８アルキルカルボニルまたはＣ１−８アルキルオキシカルボニルである。］
を有する化合物及びその医薬的に許容され得る塩に関する。
【００２６】
式Ｉを有する化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ（特に、ＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ）阻害剤に対する前駆体として有用である。これらの化合物はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製（特に、ＨＣＶ複製）の阻害剤に対する前駆体でもあり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療（特に、ＨＣＶ感染の治療）のために有用である。
【００２７】
作用メカニズムを限定しないが、本発明のアリールホスホルアミデートは対応のヌクレオシド５’−モノホスフェートの前駆体として作用する。内因性キナーゼ酵素は５’−モノホスフェートをＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤である５’−トリホスフェート誘導体に変換する。よって、アリールホスホルアミデートは、ヌクレオシドそれ自体よりもより効率的に標的細胞に浸透し、代謝分解を受けにくくなり、特定組織（例えば、肝臓）を標的する能力を有し得るので、治療指数はより広くなり、抗ウイルス剤の全用量を低下させることができる。
【００２８】
本発明の化合物を単独で、またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス（特に、ＨＣＶ）に対して活性な他の物質と組み合わせて含む医薬組成物、並びにＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害方法及びＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療方法も本発明の範囲に包含される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
発明の詳細な説明
本発明は、指定する立体化学配置を有する構造式Ｉ
【００３０】
【化８】
2009526850.tif 000006
［式中、
ｎは０、１または２であり；
Ａｒはフェニル、ナフチル、ピリジニル、ピリミジニル、ピラジニル、ピリダジニル、インドリル、キノリニルまたはイソキノリニルであり、Ａｒは場合によりハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルカルボニルオキシ及びＣ１−４アルキルオキシカルボニルからなる群から独立して選択される１〜５個の置換基で置換されており；
Ｒ１は水素またはフルオロであり；
Ｒ２はフルオロ、メトキシまたはＯＲ１０であり；
Ｒ３は水素、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、及び構造式
【００３１】
【化９】
2009526850.tif 000007
を有するアミノアシル残基からなる群から選択され；
Ｒ１０は水素、Ｃ１−１６アルキルカルボニル、Ｃ２−１８アルケニルカルボニル、Ｃ１−１０アルキルオキシカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルカルボニル、Ｃ３−６シクロアルキルオキシカルボニル、及び構造式
【００３２】
【化１０】
2009526850.tif 000008
を有するアミノアシル残基からなる群から選択され；或いは
Ｒ３及びＲ１０はこれらが結合している酸素原子と一緒になって、５員環状カーボネートを形成し；
Ｒ４は水素、Ｃ１−５アルキル、フェニルまたはベンジル（前記アルキルは場合によりフッ素、ヒドロキシ、メトキシ、アミノ、カルボキシ、カルバモイル、グアニジノ、メルカプト、メチルチオ、１Ｈ−イミダゾリル及び１Ｈ−インドル−３−イルからなる群から選択される１個の置換基で置換されており、前記したフェニル及びベンジルは場合によりハロゲン、ヒドロキシ及びメトキシからなる群から独立して選択される１〜２個の置換基で置換されている）であり；
Ｒ５は水素またはメチルであり；或いは
Ｒ４及びＲ５はこれらが結合している炭素原子と一緒になって、３〜６員脂肪族スピロ環式環系を形成し；
Ｒ６は水素、Ｃ１−１６アルキル、Ｃ２−２０アルケニル、（ＣＨ２）ｎＣ３−６シクロアルキル、フェニル、ベンジルまたはアダマンチル（前記したアルキル、アルケニル、シクロアルキル及びアダマンチルは場合によりハロゲン、ヒドロキシ、カルボキシ、Ｃ１−４アルコキシから独立して選択される１〜３個の置換で置換基されており、前記したフェニル及びベンジルは場合によりハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ１−４アルコキシ、トリフルオロメチル及びトリフルオロメトキシから独立して選択される１〜３個の置換基で置換されている）であり；
Ｒ７は水素、Ｃ１−５アルキルまたはフェニルＣ０−２アルキルであり；
Ｒ８は水素、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アシル、ベンゾイル、Ｃ１−４アルキルオキシカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルオキシカルボニル、Ｃ１−４アルキルアミノカルボニル、フェニルＣ０−２アルキルアミノカルボニル、Ｃ１−４アルキルスルホニルまたはフェニルＣ０−２アルキルスルホニルであり；
Ｒ９は水素、Ｃ１−８アルキルカルボニルまたはＣ１−８アルキルオキシカルボニルである。］
を有する化合物及びその医薬的に許容され得る塩に関する。
【００３３】
式Ｉを有する化合物は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として有用である。これらの化合物はＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤に対する前駆体でもあり、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染を治療するために有用である。
【００３４】
本発明化合物の１つの実施態様において、Ｒ１は水素またはフルオロであり、Ｒ２はヒドロキシであり、Ｒ３は水素である。この実施態様のクラスにおいて、Ｒ１は水素である。
【００３５】
本発明化合物の第２の実施態様において、Ｒ１は水素またはフルオロであり、Ｒ２はフルオロであり、Ｒ３は水素である。この実施態様のクラスにおいて、Ｒ１は水素である。
【００３６】
本発明化合物の第３の実施態様において、Ａｒは場合によりハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシ、トリフルオロメチル，トリフルオロメトキシ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルカルボニルオキシ及びＣ１−４アルキルオキシカルボニルからなる群から独立して選択される１〜５個の置換基で置換されているフェニルである。この実施態様のクラスにおいて、Ａｒはハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルカルボニルオキシ及びＣ１−４アルキルオキシカルボニルからなる群から独立して選択される３〜５個の置換基で置換されているフェニルである。このクラスのサブクラスにおいて、Ａｒはハロゲン、Ｃ１−４アルキル、Ｃ１−４アルコキシ、Ｃ１−４アルキルチオ、シアノ、ニトロ、アミノ、カルボキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｃ１−４アルキルアミノ、ジ（Ｃ１−４アルキル）アミノ、Ｃ１−４アルキルカルボニル、Ｃ１−４アルキルカルボニルオキシ及びＣ１−４アルキルオキシカルボニルからなる群から独立して選択される３個の置換基で置換されているフェニルである。この第３の実施態様の別のクラスにおいて、Ａｒは未置換フェニルである。
【００３７】
本発明化合物の第４の実施態様において、Ａｒは未置換１−ナフチルである。
【００３８】
本発明化合物の第５の実施態様において、Ａｒはインドリルである。この実施態様のクラスにおいて、Ａｒは１Ｈ−インドル−５−イルである。
【００３９】
本発明化合物の第６の実施態様において、Ｒ５は水素であり、Ｒ４は水素、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、イソブチル、２−メチル−１−プロピル、ヒドロキシメチル、フルオロメチル、メルカプトメチル、カルボキシメチル、カルバモイルメチル、１−ヒドロキシエチル、２−カルボキシエチル、２−カルバモイルエチル、２−メチルチオエチル、４−アミノ−１−ブチル、３−アミノ−１−プロピル、３−グアニジノ−１−プロピル、１Ｈ−イミダゾル−４−イルメチル、フェニル、ベンジル、４−ヒドロキシベンジル及び１Ｈ−インドル−３−イルメチルからなる群から選択される。この実施態様のクラスにおいて、Ｒ４はメチルまたはベンジルである。このクラスのサブクラスにおいて、Ｒ４はメチルである。
【００４０】
本発明化合物の第７の実施態様において、Ｒ６はＣ１−８アルキル、シクロヘキシルまたはシクロペンチルである。この実施態様のクラスにおいて、Ｒ６はエチルまたはブチルである。この実施態様の別のクラスにおいて、Ａｒはインドリルである。
【００４１】
本発明化合物の第８の実施態様において、Ｒ６はＣ７−１６アルキルである。この実施態様のクラスにおいて、Ｒ６はＣ８−１２アルキルである。このクラスのサブクラスにおいて、Ｒ６はＣ８アルキルである。このサブクラスのサブクラスにおいて、Ｒ６は２−ｎ−プロピル−ペンタ−１−イルである。
【００４２】
本発明化合物の第９の実施態様において、Ａｒはそれぞれが場合によりハロゲン及びＣ１−４アルキルから選択される１〜３個の置換基で置換されているフェニルまたはインドリルであり、Ｒ４はメチルであり、Ｒ６はエチルまたはブチルであり、Ｒ５は水素である。この実施態様のクラスにおいて、Ａｒはインドリルである。
【００４３】
本発明化合物の第１０の実施態様において、Ｒ４及びＲ５は共にメチルである。
【００４４】
本発明化合物の第１１の実施態様において、Ａｒは未置換フェニルであり、Ｒ６はＣ８アルキルである。この実施態様のクラスにおいて、Ｒ６は２−ｎ−プロピル−ペンタ−１−イルである。
【００４５】
ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤に対する前駆体として有用である構造式Ｉを有する本発明化合物の非限定的例を以下に示す。
【００４６】
【化１１】
2009526850.tif 000009
2009526850.tif 000010
及びこれらの医薬的に許容され得る塩。
【００４７】
本発明の１つの実施態様において、本発明のヌクレオシドアリールホスホルアミデートはプラスセンス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼの阻害剤、プラスセンス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害剤に対する前駆体として及び／またはプラスセンス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療のために有用である。この実施態様のクラスにおいて、プラスセンス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスはフラビウイルス科ウイルスまたはピコルナウイルス科ウイルスである。このクラスのサブクラスにおいて、ピコルナウイルス科ウイルスはライノウイルス、ポリオウイルスまたはＡ型肝炎ウイルスである。このクラスの第２サブクラスにおいて、フラビウイルス科ウイルスはＣ型肝炎ウイルス、黄熱ウイルス、デング熱ウイルス、西ナイルウイルス、日本脳炎ウイルス、バンジウイルス及びウシ下痢症ウイルス（ＢＶＤＶ）からなる群から選択される。このサブクラスのサブクラスにおいて、フラビウイルス科ウイルスはＣ型肝炎ウイルスである。
【００４８】
本発明の別の態様は、ＲＮＡ依存性ＫＮＡウイルスポリメラーゼの阻害、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害及び／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療を要する哺乳動物に対して治療有効量の構造式Ｉを有する化合物を投与することを含む前記哺乳動物におけるＲＮＡ依存性ＫＮＡウイルスポリメラーゼの阻害方法、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製の阻害方法及び／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染の治療方法に関する。
【００４９】
本発明の上記態様の１つの実施態様において、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼはプラスセンス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼである。この実施態様のクラスにおいて、プラスセンス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼはフラビウイルス科ウイルスポリメラーゼまたはピコルナウイルス科ウイルスポリメラーゼである。このクラスのサブクラスにおいて、ピコルナウイルス科ウイルスポリメラーゼはライノウイルスポリメラーゼ、ポリオウイルスポリメラーゼまたはＡ型肝炎ウイルスポリメラーゼである。このクラスの第２サブクラスにおいて、フラビウイルス科ウイルスポリメラーゼはＣ型肝炎ウイルスポリメラーゼ、黄熱ウイルスポリメラーゼ、デング熱ウイルスポリメラーゼ、西ナイルウイルスポリメラーゼ、日本脳炎ウイルスポリメラーゼ、バンジウイルスポリメラーゼ及びウシ下痢症ウイルス（ＢＶＤＶ）ポリメラーゼからなる群から選択される。このサブクラスのサブクラスにおいて、フラビウイルス科ウイルスポリメラーゼはＣ型肝炎ウイルスポリメラーゼである。
【００５０】
本発明の上記態様の第２の実施態様において、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製はプラスセンス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製である。この実施態様のクラスにおいて、プラスセンス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製はフラビウイルス科ウイルス複製またはピコルナウイルス科ウイルス複製である。このクラスのサブクラスにおいて、ピコルナウイルス科ウイルス複製はライノウイルス複製、ポリオウイルス複製またはＡ型肝炎ウイルス複製である。このクラスの第２サブクラスにおいて、フラビウイルス科ウイルス複製はＣ型肝炎ウイルス複製、黄熱ウイルス複製、デング熱ウイルス複製、西ナイルウイルス複製、日本脳炎ウイルス複製、バンジウイルス複製及びウシ下痢症ウイルス複製からなる群から選択される。このサブクラスのサブクラスにおいて、フラビウイルス科ウイルス複製はＣ型肝炎ウイルス複製である。
【００５１】
本発明の上記態様の第３の実施態様において、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染はプラスセンス一本鎖ＲＮＡ依存性ウイルス感染である。この実施態様のクラスにおいて、プラスセンス一本鎖ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染はフラビウイルス科ウイルス感染またはピコルナウイルス科ウイルス感染である。このクラスのサブクラスにおいて、ピコルナウイルス科ウイルス感染はライノウイルス感染、ポリオウイルス感染またはＡ型肝炎ウイルス感染である。このクラスの第２サブクラスにおいて、フラビウイルス科ウイルス感染はＣ型肝炎ウイルス感染、黄熱ウイルス感染、デング熱ウイルス感染、西ナイルウイルス感染、日本脳炎ウイルス感染、バンジウイルス感染及びウシ下痢症ウイルス感染からなる群から選択される。コノサブクラスのサブクラスにおいて、フラビウイルス科ウイルス感染はＣ型肝炎ウイルス感染である。
【００５２】
本明細書を通して以下の用語は指定した意味を有する。
【００５３】
上に特定したアルキル基は、直鎖または分岐状で指定した長さを有するアルキル基を含むと意図される。アルキル基の例はメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ペンチル、イソペンチル、ヘキシル、イソヘキシル等である。
【００５４】
用語「ナフチル」は、１−ナフチル（α−ナフチル）及び２−ナフチル（β−ナフチル）の両方を包含する。
【００５５】
用語「アダマンチル」は、１−アダマンチル及び２−アダマンチルの両方を包含する。
【００５６】
用語「場合により置換されているベンジル」は、−ＣＨ２フェニル（ここで、フェニル部分は場合により置換されている）を意味する。
【００５７】
用語「アルケニル」は、全部で２〜１２個の炭素原子またはこの範囲内の数の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖アルケン（例えば、エテニル、プロペニル、ブテニル、ペンテニル、オレイル等）を意味する。
【００５８】
用語「シクロアルキル」は、全部で３〜８個の炭素原子またはこの範囲内の数の炭素原子を有するアルカンの環状環（すなわち、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチルまたはシクロオクチル）を意味する。
【００５９】
用語「アルコキシ」は、特定の炭素原子数を有する直鎖または分岐鎖アルコキシド（例えば、Ｃ１−４アルコキシ）またはこの範囲内の炭素原子数を有する前記アルコキシド［すなわち、メトキシ（ＭｅＯ−）、エトキシ、イソプロポキシ等］を指す。
【００６０】
用語「アルキルチオ」は、特定の炭素原子数を有する直鎖または分岐鎖アルキルスルフィド（例えば、Ｃ１−４アルキルチオ）またはこの範囲内の炭素原子数を有する前記アルキルスルフィド［すなわち、メチルチオ（ＭｅＳ−）、エチルチオ、イソプロピルチオ等］を指す。
【００６１】
用語「アルキルアミノ」は、特定の炭素原子数を有する直鎖または分岐鎖アルキルアミン（例えば、Ｃ１−４アルキルアミノ）またはこの範囲内の炭素原子数を有する前記アルキルアミン［すなわち、メチルアミノ、エチルアミノ、イソプロピルアミノ、ｔ−ブチルアミノ等］を指す。
【００６２】
用語「アルキルスルホニル」は、特定の炭素原子数を有する直鎖または分岐鎖アルキルスルホン（例えば、Ｃ１−６アルキルスルホニル）またはこの範囲内の炭素原子数を有する前記アルキルスルホン［すなわち、メチルスルホニル（ＭｅＳＯ２−）、エチルスルホニル、イソプロピルスルホニル等］を指す。
【００６３】
用語「アルキルオキシカルボニル」は、特定の炭素原子数を有する本発明の化合物中に存在するカルボン酸またはカルバミン酸基の直鎖または分岐鎖エステル（例えば、Ｃ１−８アルキルオキシカルボニル）またはこの範囲内の炭素原子数を有する前記エステル［すなわち、メチルオキシカルボニル（ＭｅＯＣＯ−）、エチルオキシカルボニルまたはブチルオキシカルボニル］を指す。
【００６４】
用語「アルキルカルボニル」は、特定の炭素原子数を有する直鎖または分岐鎖アルキルアシル基（例えば、Ｃ１−８アルキルカルボニル）またはこの範囲内の炭素原子数を有する前記アルキルアシル基［すなわち、メチルオキシカルボニル（ＭｅＯＣＯ−）、エチルオキシカルボニルまたはブチルオキシカルボニル］を指す。
【００６５】
用語「ハロゲン」は、ハロゲン原子のフッ素、塩素、臭素及びヨウ素を含むと意図される。
【００６６】
用語「ホスホリル」は、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２−を指す。
【００６７】
用語「ジホスホリル」は、構造
【００６８】
【化１２】
2009526850.tif 000011
を有する基を指す。
【００６９】
用語「トリホスホリル」は、構造
【００７０】
【化１３】
2009526850.tif 000012
を有する基を指す。
【００７１】
用語「５員環式カーボネート環」は、Ｃ−２及びＣ−３ヒドロキシルをカルボニル化試薬（例えば、ホスゲン及び１，１’−カルボニルジイミダゾール）でアシル化することによりヌクレオシドのフラノース環のＣ−２及びＣ−３位で形成された以下の環系
【００７２】
【化１４】
2009526850.tif 000013
を指す。
【００７３】
Ｒ３及びＲ１０のアミノアシル残基実施態様中のＲ７が式
【００７４】
【化１５】
2009526850.tif 000014
中の水素原子以外の置換基であるとき、アミノアシル残基は不斉中心を含み、個々のＲ−及びＳ−立体異性体並びにＲＳ−ジアステレオマー混合物を含むと意図される。１つの実施態様において、ステレオジェン炭素での立体化学はＳ−アミノ酸の立体化学、すなわち、式
【００７５】
【化１６】
2009526850.tif 000015
に示すような天然のα−アミノ酸立体化学に相当する。
【００７６】
用語「置換されている」は、記載されている置換基による複数の置換を含むと見なされる。複数の置換基部分が開示または特許請求されている場合、置換されている化合物は独立して１個以上の開示または特許請求されている置換基部分により単独でまたは複数で置換され得る。
【００７７】
用語「５’−トリホスフェート」は、以下の一般構造式ＩＩ
【００７８】
【化１７】
2009526850.tif 000016
（式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ９は上に定義した通りである。）
を有する本発明のヌクレオシド化合物の５’−ヒドロキシル基のトリリン酸エステル誘導体を指す。
【００７９】
医薬組成物中のような用語「組成物」は、活性成分と担体を構成する不活性成分を含む製品、並びに２つ以上の成分の組合せ、複合体化または集合から、１つ以上の成分の解離から、または１つ以上の成分の他のタイプの反応または相互作用から直接または間接的に生ずる製品を包含すると意図される。従って、本発明の医薬組成物は本発明化合物及び医薬的に許容され得る担体を混合することにより作成される組成物を包含する。
【００８０】
用語「化合物の投与」及び「化合物を投与する」は、本発明化合物または本発明化合物のプロドラッグを必要な個人に対して与えることを意味すると理解されるべきである。
【００８１】
本発明の別の態様は、本発明化合物をＨＣＶ感染を治療するために有用な１つ以上の物質と一緒に用いるＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼの阻害、ＨＣＶ複製の阻害またはＨＣＶ感染の治療方法に関する。ＨＣＶに対して活性な物質にはリバビリン、レボビリン、ビラミジン、ニタゾキサニド、チモシンα−１、インターフェロン−β、インターフェロン−α、ペグ化インターフェロン−α（ペグインターフェロン−α）、インターフェロン−αとリバビリンの組合せ、ペグインターフェロン−αとリバビリンの組合せ、インターフェロン−αとレボビリンの組合せ、及びペグインターフェロン−αとレボビリンの組合せが含まれるが、これらに限定されない。インターフェロン−αには組換えインターフェロン−α２ａ（例えば、ニュージャージ州ナットリーに所在のΗｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈから入手可能なＲｏｆｅｒｏｎインターフェロン）、ペグ化インターフェロン−α２ａ（Ｐｅｇａｓｙｓ（商品名））、インターフェロン−α２ｂ（例えば、ニュージャージ州ケニルワースに所在のＳｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．から入手可能なＩｎｔｒｏｎ−Ａインターフェロン）、ペグ化インターフェロン−α２ｂ（ＰｅｇＩｎｔｒｏｎ（商品名））、組換えコンセンサスインターフェロン（例えば、インターフェロンアルファコン−１）及び精製インターフェロン−α製品が含まれるが、これらに限定されない。Ａｍｇｅｎの組換えコンセンサスはＩｎｆｅｒｇｅｎ（登録商標）のブランド名を有する。レボビリンは、リバビリンに類似の免疫調節活性を有するリバビリンのＬ−エナンチオマーである。ビラミジンはＷＯ  ０１／６０３７９（ＩＣＮ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓに譲渡）に開示されているリバビリンのアナログに相当する。本発明の方法に従って、配合剤の各成分は治療中異なる時期に別々に投与してもよく、分割または単一配合剤形態で同時に投与してもよい。従って、本発明は、同時または交互治療のすべてのレジメンを含むと理解され、用語「投与する」はそのように解釈される。本発明化合物とＨＣＶ感染の治療のために有用な他の物質の組合せの範囲には原則としてＨＣＶ感染を治療するための医薬組成物との組合せが含まれる。本発明化合物またはその医薬的に許容され得る塩をＨＣＶに対して活性な第２治療薬と一緒に使用する場合、各化合物の用量は当該化合物を単独で使用するときの用量と同じであっても異なっていてもよい。
【００８２】
ＨＣＶ感染を治療するために、本発明化合物をＨＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼ阻害剤である物質と一緒にも投与され得る。ＨＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼは必須のウイルス酵素であり、ＨＣＶ複製の阻害に対する優れた標的であると記載されている。ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤の基質及び非基質ベースの阻害剤はＷＯ  ９８／２２４９６、ＷＯ  ９８／４６６３０、ＷＯ  ９９／０７７３３、ＷＯ  ９９／０７７３４、ＷＯ  ９９／３８８８８、ＷＯ  ９９／５０２３０、ＷＯ  ９９／６４４４２、ＷＯ  ００／０９５４３、ＷＯ  ００／５９９２９、ＧＢ−２３３７２６２、ＷＯ  ０２／１８３６９、ＷＯ  ０２／０８２４４、ＷＯ  ０２／４８１１６、ＷＯ  ０２／４８１７２、ＷＯ  ０５／０３７２１４及び米国特許６，３２３，１８０に記載されている。ＨＣＶ複製の阻害剤を開発するため及びＨＣＶ感染を治療するための標的としてのＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼは、Ｂ．Ｗ．Ｄｙｍｏｃｋ，“Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  ｔｈｅｒａｐｉｅｓ  ｆｏｒ  ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  ｖｉｒｕｓ  ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ”，Ｅｍｅｒｇｉｎｇ  Ｄｒｕｇｓ，６：１３−４２（２００１）に記載されている。本発明化合物と組み合わされ得る具体的ＨＣＶ  ＮＳ３プロテアーゼ阻害剤にはＢＩＬＮ２０６１、ＶＸ−９５０、ＳＣＨ６、ＳＣＨ７及びＳＣＨ−５０３０３４が含まれる。
【００８３】
リバビリン、レボビリン及びビラミジンは、細胞内酵素イノシンモノホスフェートデヒドロゲナーゼ（ＩＭＰＤＨ）を阻害してグアニンヌクレオチドの細胞内プールをモジュレートすることにより抗ＨＣＶ効果を発揮し得る。ＩＭＰＤＨはデノボグアニンヌクレオチド生合成における生合成ルートに対する律速酵素である。リバビリンは細胞内的に容易にリン酸化され、モノホスフェート誘導体はＩＭＰＤＨの阻害剤の阻害剤である。よって、ＩＭＰＤＨの阻害はＨＣＶ複製の阻害剤を見つけるための別の有用な標的である。従って、本発明化合物はＷＯ  ９７／４１２１１及びＷＯ  ０１／００６２２（Ｖｅｒｔｅｘに譲渡）に開示されているＶＸ−４９７のようなＩＭＰＤＨ阻害剤、ＷＯ  ００／２５７８０（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂに譲渡）に開示されているような別のＩＭＰＤＨ阻害剤、またはミコフェノレートモフェチル［Ａ．Ｃ．Ａｌｌｉｓｏｎ  ａｎｄ  Ｅ．Ｍ．Ｅｕｇｕｉ，Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎ，４４（Ｓｕｐｐｌ．）：１６５（１９９３）参照］と一緒にも投与され得る。
【００８４】
ＨＣＶ感染を治療するために、本発明化合物は抗ウイルス剤のアマンタジン（１−アミノアダマンタン）［この物質についての包括的記載については、Ｊ．Ｋｉｒｓｃｈｂａｕｍ，Ａｎａｌ．Ｐｒｏｆｉｌｅｓ  Ｄｒｕｇ  Ｓｕｂｓ．，１２：１−３６（１９８３）参照］と一緒にも投与され得る。
【００８５】
本発明化合物は、ＨＣＶ感染を治療するためにＲ．Ｅ．Ｈａｒｒｙ−Ｏ’ｋｕｒｕら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６２：１７５４−１７５９（１９９７）、Ｍ．Ｓ．Ｗｏｌｆｅ，ら，Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ．，３６：７６１１−７６１４（１９９５）、米国特許３，４８０，６１３（１９６９年１１月２５日）、米国特許６，７７７，３９５（２００４年８月１７日）、米国特許６，９１４，０５４（２００５年７月５日）、国際特許ＷＯ  ０１／９０１２１（２００１年１１月２９日）、ＷＯ  ０１／９２２８２（２００１年１２月６日）、ＷＯ  ０２／３２９２０（２００２年４月２５日）、ＷＯ  ０２／０５７２８７（２００２年７月２５日）、ＷＯ  ０２／０５７４２５（２００２年７月２５日）、ＷＯ  ０４／００２４２２（２００４年１月８日）、ＷＯ  ０４／００２９９９（２００４年１月８日）、ＷＯ  ０４／００３０００（２００４年１月８日）、ＷＯ  ０４／００２４２２（２００４年１月８日）、米国特許出願２００５／０１０７３１２、ＵＳ  ２００５／００９０４６３、ＵＳ  ２００４／０１４７４６４及びＵＳ  ２００４／００６３６５８に開示されている抗ウイルス性２’−Ｃ−分岐状リボヌクレオシドとも組み合わされ得る。これらの文献の各々は全文を参照により本明細書中に含まれるとする。２’−Ｃ−分岐状リボヌクレオシドには２’−Ｃ−メチルシチジン、２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチルシチジン、２’−Ｃ−メチルシチジン、２’−Ｃ−メチルウリジン、２’−Ｃ−メチルアデノシン、２’−Ｃ−メチルグアノシン及び９−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄリボフラノシル）−２，６−ジアミノプリン；フラノースＣ−２’，Ｃ−３’及びＣ−５’ヒドロキシルの対応アミノ酸エステル（例えば、バロピシタビン二塩酸塩またはＮＭ−２８３とも称される３’−Ｏ−（Ｌ−バリル）−２’−Ｃ−メチルシチジン二塩酸塩、及び３’−Ｏ−（Ｌ−バレリル）−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチルシチジン）、並びに５’−ホスフェート誘導体の対応する場合により置換されている環状１，３−プロパンジオールエステルが含まれるが、これらに限定されない。
【００８６】
本発明化合物は、ＨＣＶ感染を治療するために抗ＨＣＶ性を有する他のヌクレオシド、例えば米国特許６，８６４，２４４（２００５年３月８日）；Ｍｉｔｓｕｂｉｓｈｉ  Ｐｈａｒｍａ  Ｃｏｒｐ．に譲渡されているＷＯ  ０２／５１４２５（２００２年７月４日）；Ｐｈａｒｍａｓｓｅｔ，Ｌｔｄ．に譲渡されているＷＯ  ０１／７９２４６、ＷＯ  ０２／３２９２０及びＷＯ  ０２／４８１６５（２００２年６月２０日）；ＩＣＮ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓに譲渡されているＷＯ  ０１／６８６６３（２００１年９月２０日）；ＷＯ  ９９／４３６９１（１９９９年９月２日）；Ｈｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈｅに譲渡に譲渡されているＷＯ  ０２／１８４０４（２００２年３月７日）；Ｕ．Ｓ．２００２／００１９３６３（２００２年２月１４日）；ＷＯ  ０２／１００４１５（２００２年１２月１９日）；ＷＯ  ０３／０２６５８９（２００３年４月３日）；ＷＯ  ０３／０２６６７５（２００３年４月３日）；ＷＯ  ０３／０９３２９０（２００３年１１月１３日）；ＵＳ  ２００３／０２３６２１６（２００３年１２月２５日）；ＵＳ  ２００４／０００６００７（２００４年１月８日）；ＷＯ  ０４／０１１４７８（２００４年２月５日）；ＷＯ  ０４／０１３３００（２００４年２月１２日）；ＵＳ  ２００４／００６３６５８（２００４年４月１日）；及びＷＯ  ０４／０２８４８１（２００４年４月８日）に開示されているものとも組み合わされ得る。
【００８７】
１つの実施態様では、本発明のヌクレオシド誘導体と組み合わされ得るヌクレオシドＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤は、４’−アジド−シチジン、４−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、４−アミノ−７−（２−Ｃ−ヒドロキシメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、４−アミノ−７−（２−Ｃ−フルオロメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、４−アミノ−５−フルオロ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、２−アミノ−７−（２−Ｃ−メチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４（３Ｈ）−オン、４−アミノ−７−（２−Ｃ，２−Ｏ−ジメチル−β−Ｄ−リボフラノシル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン、並びにその医薬的に許容され得る塩及びプロドラッグから選択される。
【００８８】
本発明化合物は、ＨＣＶ感染を治療するためにＨＣＶポリメラーゼの非ヌクレオシド阻害剤、例えばＴｕｌａｒｉｋ，Ｉｎｃ．に譲渡されているＷＯ  ０１／７７０９１（２００１年１０月１８日）、Ｊａｐａｎ  Ｔｏｂａｃｃｏ，Ｉｎｃ．に譲渡されているＷＯ  ０１／４７８８３（２００１年７月５日）、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍに譲渡されているＷＯ  ０２／０４４２５（２００２年１月１７日）、Ｉｓｔｉｔｕｔｏ  ｄｉ  Ｒｉｃｅｒｃｈｅ  ｄｉ  Ｂｉｏｌｏｇｉａ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｅ  Ｐ．Ａｎｇｅｌｅｔｔｉ  Ｓ．Ｐ．Ａ．に譲渡されているＷＯ  ０２／０６２４６（２００２年１月２４日）、ＷＯ  ０２／２０４９７（２００２年３月３日）、Ｊａｐａｎ  Ｔｏｂａｃｃｏ，Ｉｎｃ．に譲渡されているＷＯ  ２００５／０１６９２７（特にＪＴＫ００３）に開示されているもの、並びにＨＣＶ−７９６（Ｖｉｒｏｐｈａｒｍａ  Ｉｎｃ．）とも組み合わされ得る。前記文献の各々は全文を参照により本明細書中に含まれるとする。
【００８９】
１つの実施態様では、本発明のヌクレオシド誘導体と組み合わされ得る非ヌクレオシドＨＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ阻害剤は、１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−６−（２−モルホリン−４−イルエチル）−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−３−メトキシ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−３−メトキシ−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、（｛［（１４−シクロヘキシル−３−メトキシ−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−イル）カルボニル］アミノ｝スルホニル）酢酸メチル、（｛［（１４−シクロヘキシル−３−メトキシ−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−イル）カルボニル］アミノ｝スルホニル）酢酸、１４−シクロヘキシル−Ｎ−［（ジメチルアミノ）スルホニル］−３−メトキシ−６−メチル−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボキサミド、３−クロロ−１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、Ｎ’−（１１−カルボキシ−１４−シクロヘキシル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−インドロ［１，２−ｅ］［１，５］ベンゾオキサゾシン−７−イル）−Ｎ，Ｎ−ジメチルエタン−１，２−ジアミニウムビス（トリフルオロ酢酸塩）、１４−シクロヘキシル−７，８−ジヒドロ−６Ｈ−インドロ［１，２−ｅ］［１，５］ベンゾオキサゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−６−メチル７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−３−メトキシ−６−メチル−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−３−メトキシ−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−６−［３−（ジメチルアミノ）プロピル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−７−オキソ−６−（２−ピペリジン−１−イルエチル）−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−６−（２−モルホリン−４−イルエチル）−７−オキソ−５，６，７，８−テ���ラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジエチルアミノ）エチル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−６−（１−メチルピペリジン−４−イル）−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−Ｎ−［（ジメチルアミノ）スルホニル］−７−オキソ−６−（２−ピペリジン−１−イルエチル）−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボキサミド、１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−Ｎ−［（ジメチルアミノ）スルホニル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボキサミド、１４−シクロペンチル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−７−オキソ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、６−アリル−１４−シクロヘキシル−３−メトキシ−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロペンチル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１４−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−５，６，７，８−テトラヒドロインドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾシン−１１−カルボン酸、１３−シクロヘキシル−５−メチル−４，５，６，７−テトラヒドロフロ［３’，２’：６，７］［１，４］ジアゾシノ［１，８−ａ］インドール−１０−カルボン酸、１５−シクロヘキシル−６−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−７−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−インドロ［２，１−ａ］［２，６］ベンゾジアゾニン−１２−カルボン酸、１５−シクロヘキシル−８−オキソ−６，７，８，９−テトラヒドロ−５Ｈ−インドロ［２，１−ａ］［２，５］ベンゾジアゾニン−１２−カルボン酸、１３−シクロヘキシル−６−オキソ−６，７−ジヒドロ−５Ｈ−インドロ［１，２−ａ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１０−カルボン酸、並びにその医薬的に許容され得る塩から選択される。
【００９０】
「医薬的に許容され得る」は、担体、希釈剤または賦形剤が製剤の他の成分と相容性でなければならず、そのレシピエントにとって有害でないことを意味する。
【００９１】
本発明の範囲には、本発明のヌクレオシドアリールホスホルアミデートを医薬的に許容され得る担体と一緒に含む医薬組成物も含まれる。本発明の別の例は、上記した化合物を医薬的に許容され得る担体と組み合わせることにより製造される医薬組成物である。本発明の別の例は、上記した化合物を医薬的に許容され得る担体と組み合わせることを含む医薬組成物の製造方法である。
【００９２】
本発明の範囲には、有効量の本発明化合物及び医薬的に許容され得る担体を含むＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ（特に、ΗＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ）を阻害するために有用な医薬組成物も含まれる。ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染（特に、ΗＣＶ感染）を治療するために有用な医薬組成物、並びにＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスポリメラーゼ（特に、ΗＣＶ  ＮＳ５Ｂポリメラーゼ）の阻害方法及びＲＮＡ依存性ウイルス複製（特に、ΗＣＶ複製）の治療方法も本発明に包含される。更に、本発明は、治療有効量の本発明化合物を治療有効量のＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス（特に、ΗＣＶ）に対して活性な別の物質と一緒に含む医薬組成物に関する。ΗＣＶに対して活性な物質にはリバビリン、レボビリン、ビラミジン、チモシンα−１、ΗＣＶ  ＮＳ３セリンプロテアーゼ阻害剤、インターフェロン−α、ペグ化インターフェロン−α（ペグインターフェロン−α）、インターフェロン−αとリバビリンの組合せ、及びペグインターフェロン−αとリバビリンの組合せ、インターフェロン−αとレボビリンの組合せ、及びペグインターフェロン−αとレボビリンの組合せが含まれるが、これらに限定されない。インターフェロン−αには組換えインターフェロン−α２ａ（例えば、ニュージャージ州ナットリーに所在のΗｏｆｆｍａｎｎ−ＬａＲｏｃｈから入手可能なＲｏｆｅｒｏｎインターフェロン）、インターフェロン−α２ｂ（例えば、ニュージャージ州ケニルワースに所在のＳｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．から入手可能なＩｎｔｒｏｎ−Ａインターフェロン）、コンセンサスインターフェロ及び精製インターフェロン−α製品が含まれるが、これらに限定されない。リバビリン及びそのΗＣＶに対する活性を検討するためには、Ｊ．Ｏ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  ａｎｄ  Ｓ．Ａ．Ｒａｙｂｕｃｋ，“Ｉｎｏｓｉｎｅ  Ｍｏｎｏｐｈｏｓｐｈａｔｅ  Ｄｅｈｙｄｒｏｇｅｎａｓｅ：Ｃｏｎｓｉｄｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｋｉｎｅｔｉｃｓ，ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ”，Ａｎｎ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３５：２０１−２１０（２０００）を参照されたい。
【００９３】
本発明の別の態様は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製（特に、ΗＣＶ複製）の阻害及び／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染（特に、ΗＣＶ感染）の治療のための薬剤を製造するためのヌクレオシドアリールホスホルアミデート及びその医薬組成物の使用を提供する。本発明の更なる態様は、ＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス複製（特に、ＨＣＶ複製）を阻害するため及び／またはＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルス感染（特に、ＨＣＶ感染）を治療するための薬剤として使用するヌクレオシドアリールホスホルアミデート及びその医薬組成物を提供する。
【００９４】
本発明の医薬組成物は、活性成分として構造式Ｉを有する化合物またはその医薬的に許容され得る塩を含み、医薬的に許容され得る担体及び場合により他の治療成分をも含み得る。
【００９５】
前記組成物には経口、直腸内、局所、非経口（皮下、筋肉内及び静脈内を含む）、眼内（眼用）、経肺（鼻腔内または口腔内吸入）、または鼻腔内投与に適した組成物が含まれるが、いずれの場合も最も適当なルートは治療対象の状態の種類及び重症度、活性成分の種類に依存する。組成物を単位投与形態で提供することが便利であり、製薬業界で公知の方法により製造され得る。
【００９６】
実際の使用に際し、構造式Ｉを有する化合物は活性成分として慣用の医薬混合技術に従って医薬用担体と均密混合した状態で組み合わされ得る。担体は投与したい製剤、例えば経口または非経口（静脈内を含む）のために所望される製剤の形態に依存して広範囲の形態をとり得る。経口剤形の組成物を製造する際、一般的な医薬媒体、例えば懸濁液剤、エリキシル剤や溶液剤のような経口液体製剤の場合には水、グリコール、油、アルコール、着香料、保存剤、着色料等；散剤、硬及び軟カプセル剤や錠剤のような経口固体製剤の場合にはデンプン、糖、結晶セルロース、希釈剤、顆粒化剤、滑沢剤、結合剤、崩壊剤等のような担体が使用され得る。固体経口剤形が液体製剤よりも好ましい。
【００９７】
投与が容易であるので、明らかに固体医薬用担体が使用されている錠剤及びカプセル剤が最も有利な経口投与単位形態に相当する。所望により、錠剤に標準の水性または非水性技術によりコーティングを被せてもよい。組成物及び製剤は少なくとも０．１％の活性化合物を含んでいなければならない。前記組成物中の活性化合物の％は勿論変更可能であり、有利には単位の重量の約２〜約０％の範囲であり得る。治療上有用な組成物中の活性化合物の量は有効な用量が得られる量である。活性化合物は例えば液体滴剤またはスプレーとして鼻内にも投与され得る。
【００９８】
錠剤、ピル剤、カプセル剤等は結合剤、例えばトラガカントガム、アカシア、トウモロコシデンプンまたはゼラチン；賦形剤、例えばリン酸ジカルシウム；崩壊剤、例えばトウモロコシデンプン、ジャガイモデンプン、アルギン酸；滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム；及び甘味料、例えばスクロース、ラクトースまたはサッカリンをも含み得る。投与単位形態がカプセル剤のときには、上記したタイプの材料に加えて液体担体、例えば脂肪油を含み得る。
【００９９】
コーティングとして、または投与単位の物理的形態を修飾するために各種の他の材料を存在させてもよい。例えば、錠剤にシェラック及び／または糖をコーティングしてもよい。シロップ剤またはエリキシル剤は活性成分に加えて、甘味料としてスクロース、保存剤としてメチル及びプロピルパラベン、染料及び着香料（チェリーまたはオレンジフレーバー）を含み得る。
【０１００】
構造式Ｉを有する化合物は非経口的にも投与され得る。活性化合物の溶液剤または懸濁液剤は、界面活性剤（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース）と適当に混合した水中で製造され得る。分散液剤は油中のグリセロール、液体ポリエチレングリコール及びその混合物を用いても製造され得る。通常の貯蔵及び使用条件下で、製剤は微生物の増殖を予防するために保存剤を含む。
【０１０１】
注射用に適した医薬形態には滅菌水性溶液または分散液、滅菌の注射用液体または分散液を即時調合するための滅菌粉末が含まれる。いずれの場合も、製剤は無菌でなければならず、容易に注射し得る程度に流動性でなければならない。製剤は製造及び貯蔵条件下で安定でなければならず、微生物（例えば、細菌及び真菌）の汚染作用から保護されなければならない。担体は、例えば水、エタノール、ポリオール（例：グリセロール、プロピレングリコール及び液体ポリエレングリコール）、その適当な混合物及び植物油を含有する溶媒または分散媒体であり得る。
【０１０２】
適当な投与ルートが哺乳動物、特にヒトに対して有効量の本発明化合物を与えるために使用され得る。例えば、経口、直腸内、局所、非経口、眼内、肺内、鼻腔内等が使用され得る。剤形には錠剤、トローチ剤、分散液剤、懸濁液剤、溶液剤、カプセル剤、クリーム剤、軟膏剤、エアゾール剤等が含まれる。構造式Ｉを有する化合物を経口投与することが好ましい。
【０１０３】
ヒトに対して経口投与する場合、用量範囲は分割量で０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重である。１つの実施態様では、用量範囲は分割量で０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重である。別の実施態様では、用量範囲は分割量で０．５〜２０ｍｇ／ｋｇ体重である。経口投与の場合、組成物を１．０〜１０００ｍｇの活性成分、特に治療対象の患者に対する用量を症状に合わせて調節するために１、５、１０、１５、２０、２５、５０、７５、１００、１５０、２００、２５０、３００、４００、５００、６００、７５０、８００、９００及び１０００ｍｇの活性成分を含有する錠剤またはカプセル剤の形態で提供することが好ましい。
【０１０４】
使用する活性成分の有効用量は使用する特定化合物、投与モード、治療しようとする状態及び治療しようとする状態の重症度に応じて変更され得る。用量は当業者により容易に確認され得る。この投与レジメンは最適の治療応答が得られるように調節され得る。
【０１０５】
本発明化合物は１個以上の不斉中心を含み、よってラセミ化合物及びラセミ混合物、単一エナンチオマー、ジアステレオマー混合物及び個々のジアステレオマーとして存在し得る。Ｒ５が水素であり、構造式Ｉ中のリン原子に結合しているアミノアシル残基中のＲ４が式
【０１０６】
【化１８】
2009526850.tif 000017
中の水素以外の置換基である場合、アミノ酸残基は不斉中心を含み、個々のＲ−及びＳ−立体異性体並びにＲＳ−立体異性体混合物が含まれると意図される。１つの実施態様では、ステレオジェン炭素での立体化学はＳ−アミノ酸の立体化学、すなわち下記式に示されているように天然に存在するα−アミノ酸の立体化学に相当する。
【０１０７】
【化１９】
2009526850.tif 000018
【０１０８】
構造式Ｉを有する化合物中のテトラ置換リンは別の不斉中心を構成し、本発明化合物はリン原子での両方の立体化学配置を含むと意図される。
【０１０９】
本発明は、以下の構造式
【０１１０】
【化２０】
2009526850.tif 000019
に示すように５員フラノース環についてβ−Ｄ立体化学配置を有するヌクレオシドアリールホスホルアミデート、すなわち５員フラノース環のＣ−１及びＣ−４の置換基がβ−立体化学配置（“上向き”配向は太線で示す）を有するヌクレオシドアリールホスホルアミデートを含むと意味する。
【０１１１】
本明細書中に記載されている化合物の幾つかはオレフィン二重結合を含み、別段の記載がない限りＥ及びＺ幾何異性体の両方を含むと意味する。
【０１１２】
本明細書中に記載されている化合物の幾つかはケト−エノール互変異性体のような互変異性体として存在し得る。個々の互変異性体及びその混合物が構造式Ｉを有する化合物に包含される。本発明化合物の範囲に包含されると意図されるケト−エノール互変異性体の例を以下に示す。
【０１１３】
【化２１】
2009526850.tif 000020
【０１１４】
構造式Ｉを有する化合物は、例えば適当な溶媒（例えば、メタノール、酢酸エチルまたはその混合物）からの分別結晶、または光学活性な固定相を用いるキラルクロマトグラフィーにより個々のジアステレオマーに分離され得る。
【０１１５】
或いは、構造式Ｉを有する化合物の立体異性体は、公知の立体配置を有する光学的に純粋な出発物質または試薬を用いて立体特異的合成により得られ得る。
【０１１６】
本発明化合物は医薬的に許容され得る塩の形態で投与され得る。用語「医薬的に許容され得る塩」は、無機または有機塩基及び無機または有機酸を含めた医薬的に許容され得る非毒性塩基または酸から製造される塩を指す。用語「医薬的に許容され得る塩」の範囲に包含される塩基性化合物の塩は、通常遊離塩基を適当な有機または無機酸と反応させることにより製造される本発明化合物の非毒性塩を指す。本発明の塩基性化合物の代表的な塩には酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、安息香酸塩、炭酸水素酸塩、硫酸水素酸塩、重酒石酸塩、ホウ酸塩、臭化物、カムシル酸塩、炭酸塩、塩化物、クラブラン酸塩、クエン酸塩、二塩酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストール酸塩、エシル酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニル酸塩、ヘキシルレゾルシネート、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物、イソチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、ラウリン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、メチル臭化物、メチル硝酸塩、メチル硫酸塩、粘液酸塩、ナプシル酸塩、硝酸塩、Ｎ−メチルグルカミンアンモニウム塩、オレイン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩（エンボレート）、パルミチン酸塩、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、硫酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩、テオクレート、トシル酸塩、トリエチオジド及び吉草酸塩が含まれるが、これらに限定されない。更に、本発明化合物が酸性部分を有している場合、その適当な医薬的に許容され得る塩にはアルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅、第一鉄、第二鉄、リチウム、マグネシウム、第一マンガン、第二マンガン、カリウム、ナトリウム、亜鉛等を含めた無機塩基から誘導される塩が含まれるが、これらに限定されない。アンモニウム塩、カルシウム塩、マグネシウム塩、カリウム塩及びナトリウム塩が特に好ましい。医薬的に許容され得る有機非毒性塩基から誘導される塩には第１級、第２級及び第３級アミン、環状アミン及び塩基性イオン交換樹脂（例えば、アルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ，Ｎ−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リシン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミン等）の塩が含まれる。
【０１１７】
また、本発明化合物中にカルボン酸（−ＣＯＯＨ）またはヒドロキシル基が存在する場合、カルボン酸誘導体の医薬的に許容され得るプロドラッグエステル、例えばメチル、エチルまたはピバロイルオキシメチルエステル；またはリボースＣ−２’、Ｃ−３’及びＣ−５’ヒドロキシルのプロドラッグアシル誘導体、例えばＯ−アセチル、Ｏ−ピバロイル、Ｏ−ベンゾイル及びＯ−アミノアシルが使用され得る。徐放性またはプロドラッグ製剤として使用すべくバイオアベイラビリティー、組織分布、溶解性及び加水分解性を修飾するために当業界で公知のエステル及びアシル基が含まれる。考えられる誘導体はインビボで容易に所要化合物に変換され得る。よって、本発明の治療方法において、用語「投与する」及び「投与」は、記載されているウイルス感染を具体的に開示されている化合物または具体的に開示されていないかもしれないがヒト患者を含めた哺乳動物に対して投与した後インビボで具体的化合物に変換される化合物で治療することを包含することを意味する。適当なプロドラッグ誘導体を選択及び製造するための一般的方法は、例えば参照により全文を本明細書に含まれるとする“Ｄｅｓｉｇｎ  ｏｆ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ”，Ｈ．Ｂｕｎｄｇａａｒｄ編，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，１９８５に記載されている。
【０１１８】
本発明のヌクレオシドアリールホスホルアミデートの製造
２’−Ｃ−メチルシチジンはＣ．Ｐｉｅｒｒａら，Ｎｕｃｌｅｏｓｉｄｅｓ，Ｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ，２４：７６７（２００５）またはＪ．Ａ．Ｐｉｃｃｉｒｉｌｌｉら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，６４：７４７（１９９９）の文献に記載されているように製造した。２’−デオキシ−２’−フルオロ−２’−Ｃ−メチルシチジンはＪ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，４８：５５０４−５５０８（２００５）に記載されているように製造する。ホスホリル化反応のためのアリールホスホロクロリデートは全文を参照により本明細書中に含まれるとする米国特許６，４５５，５１３に記載されている方法に従って製造した。本発明のアリールホスホルアミデートを生成するためのホスホリル化反応は米国特許６，４５５，５１３及びＣ．ＭｃＧｕｉｇａｎら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，３６：１０４８（１９９３）に記載されている方法に従って実施した。例えば、フェノールまたは１−ナフトールをオキシ塩化リンと反応させ、次いで別のアミノ酸塩とカップリングさせて、フェノキシまたは１−ナフチルオキシホスホロクロリデートを得る。これは通常フラッシュクロマトグラフィーより精製した後、適当な塩基（例えば、ｔ−ブチルマグネシウムクロリド）の存在下でヌクレオシドとカップリングさせる（Ｍ．Ｕｃｈｉｙａｍａら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，５８：３７３（１９９３）及びスキーム１参照）。
【０１１９】
一般的手順
溶媒はすべて市販業者から入手し、更に精製することなく使用した。反応は窒素雰囲気下、オーブン乾燥した（１１０℃）ガラス器具中で実施した。有機抽出物を硫酸ナトリウム（Ｎａ２ＳＯ４）で乾燥し、（乾燥剤を濾過した後）減圧下で操作する回転蒸発器を用いて濃縮した。フラッシュクロマトグラフィーはシリカゲルを用いて公開されている手順（Ｗ．Ｃ．Ｓｔｉｌｌら，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．，４３：２９２３（１９７８））に従って、または予め充填されているカラムを用いて市販のフラッシュクロマトグラフィーシステム（Ｂｉｏｔａｇｅ  ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｊｏｎｅｓ  Ｆｌａｓｈｍａｓｔｅｒ  ＩＩ）を用いて実施した。
【０１２０】
試薬は通常市販業者から直接入手し（および、供給されたまま使用し）、または科学文献に報告されているかまたは当業者に公知のルーチンな合成ステップを用いて容易に入手できる。
【０１２１】
１Ｈ及び３１Ｐ  ＮＭＲスペクトルは（報告されている）３００〜６００ＭＨｚの周波数で操作するＢｒｕｋｅｒ  ＡＭシリーズ分光計で記録した。交換不能なプロトン（及び、目に見えるならば交換可能なプロトン）に相当するシグナルの化学シフト（δ）はテトラメチルシランに対する１００万部の部（ｐｐｍ）で記録し、基準として残留溶媒ピークを用いて測定した。シグナルは、多重性（ｓ，一重項；ｄ，二重項；ｔ，三重項；ｑ，四重項；ｍ，多重項；ｂ，幅広及びその組合せ）；ヘルツ（Ｈｚ）で示すカップリング定数（ｓ）；プロトンの数の順に示す。質量スペクトル（ＭＳ）データは陰（ＥＳ−）または陽（ＥＳ＋）イオン化モードで操作するＰｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＡＰＩ  １００またはＷａｔｅｒｓ  ＭｉｃｒｏＭａｓｓ  ＺＱを用いて入手し、結果は親イオンのみについて質量／電荷の比（ｍ／ｚ）として報告する。分取規模ＨＰＬＣ分離は、２４８７二重吸光デテクタを備えたＷａｔｅｒｓ  ２５２５ポンプ、ＵＶ１０００吸光モジュールを備えているＴＳＰ  ＳｐｅｃｔｒａシステムＰ４００、または２５２５ポンプモジュール、Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＭＤデテクタ及び２５２５収集モジュールを有する自動化質量トリガーＷａｔｅｒｓ  Ｍｉｃｒｏｍａｓｓシステムを用いて実施した。化合物をいずれも０．１％  トリフルオロ酢酸またはギ酸を含有する水及びＭｅＣＮの線形勾配で１０〜４０ｍＬ／分の流速で溶離させた。固定相としてＳｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ１８カラム（７μＭ，１９×３００ｍｍ）を使用した。
【０１２２】
実施例、スキーム及び表において以下の略号を使用する。ａｑ．：水性、Ａｒ：アリール、ａｔｍ：雰囲気、ＣＣｌ４：四塩化炭素、ＤＣＭ：ジクロロメタン、ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド、ｅｑ．：当量、Ｅｔ３Ｎ：トリエチルアミン、ＥｔＯＡｃ：酢酸エチル、Ｅｔ２Ｏ：ジエチルエーテル、ｈ：時、Ｍｅ：メチル、ＭｅＣＮ：アセトニトリル；ＭｅＯＨ：メタノール、ｍｉｎ：分、ＭＳ：質量スペクトル、Ｎ，Ｎ−ＤＭＡ：Ｎ，Ｎ，−ジメチルアセトアミド、ＰＥ：石油エーテル、Ｐｙ：ピリジン、ｑｕａｎｔ．：定量的、ＲＰ−ＨＰＬＣ：逆相高速液体クロマトグラフィー、ＲＴ：室温、ｓｅｃ：秒、ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸、及びＴＨＦ：テトラヒドロフラン。
【０１２３】
以下の実施例は本発明化合物を製造するために使用される条件を例示する。これらの実施例は本発明の範囲を限定するものと決して意図されず、そのように解釈されるべきでない。ヌクレオシド及びヌクレオチド合成の当業者は以下の製造手順の条件及び方法の公知の変更が本発明のこれら化合物及び他の化合物を製造するために使用され得ることを容易に認識している。温度は別段の記載がない限り℃である。
【０１２４】
【化２２】
2009526850.tif 000021
【０１２５】
実施例１
５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−２−ｎ−ブトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］（１−ナフタレニルオキシ）ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
ステップ１：１−ナフチルジクロロホスフェート
【０１２６】
【化２３】
2009526850.tif 000022
【０１２７】
Ｅｔ２Ｏ中の１−ナフトール（０．２３Ｍ）にオキシ塩化リン（１．０当量）を添加し、溶液を−７８℃まで冷却した。ニートなＥｔ３Ｎ（１．０当量）を添加し、生じた溶液を一晩で室温まで加温した。白色スラリーを不活性雰囲気下で濾過し、すべての揮発物を除去して、標記化合物を無色液体として得た。これを更に精製することなく次ステップで使用した。
【０１２８】
３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：３．９３ｐｐｍ。
【０１２９】
ステップ２：ｎ−ブチルＮ−［クロロ（１−ナフチルオキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニナート
【０１３０】
【化２４】
2009526850.tif 000023
【０１３１】
ＤＣＭ中の１−ナフチルジクロロホスフェート（０．０８６Ｍ）に（２Ｓ）−１−ブトキシ−１−オキソプロパン−２−アミニウムクロリド（１．０当量）を添加した。−７８℃まで冷却したら、ニートなＥｔ３Ｎ（２．０当量）を添加し、反応物を一晩で室温まで加温した。すべての揮発物を除去し、生じた白色固体をＥｔ２Ｏで洗浄し、濾過し、真空中で蒸発させて、無色油状物をジアステレオマーの１：１混合物として得た。
【０１３２】
３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：８．３９及び８．１１ｐｐｍ。
【０１３３】
ステップ３：５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−２−ｎ−ブトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］（１−ナフタレニルオキシ）ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
【０１３４】
【化２５】
2009526850.tif 000024
【０１３５】
２’−Ｃ−メチルシチジンをＴＨＦで希釈した（０．０９７Ｍ）。生じたスラリーを−７８℃まで冷却した後、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液として、２．２当量）を添加した。混合物を直ちに０℃まで加温し、３０分間撹拌し、再び−７８℃まで冷却し、次いでブチルＮ−［クロロ（１−ナフチルオキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニナート（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液として、２．２当量）を１滴ずつ添加した。反応物を一晩で室温まで加温した後、水を添加してクエンチした。水性相をＥｔＯＡｃで３回抽出し、合わせた有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。粗な生成物をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（９０：１０→８０：２０のＤＣＭ／ＭｅＯＨ勾配）により精製し、生じたオフホワイト色固体をＤＭＳＯ中に溶解し、ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製した。純粋なジアステレオマーを含有するフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標記化合物を白色ＴＦＡ塩として得た。
【０１３６】
最初に溶離したジアステレオマー：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．２４−８．２２（ｍ，１Ｈ），８．００（ｄ，Ｊ＝８．０９Ｈｚ，１Ｈ），７．９５−７．９３（ｍ，１Ｈ），７．７６（ｄ，Ｊ＝８．０９Ｈｚ，１Ｈ），７．６１−７．５６（ｍ，２Ｈ），７．５２（ｄ，Ｊ＝７．８４Ｈｚ，１Ｈ），７．４８（ｔ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ，１Ｈ），６．０１（ｓ，１Ｈ），５．９１（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ），４．６８（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．７５，５．０５，１．８９Ｈｚ，１Ｈ），４．５７（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．８８，６．０７，３．２８Ｈｚ，１Ｈ），４．２２（ｄｄ，Ｊ＝９．１，２．２７Ｈｚ，１Ｈ），４．１２−４．０３（ｍ，３Ｈ），３．８４（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ），１．６３−１．５６（ｍ，２Ｈ），１．４２−１．３３（ｍ，５Ｈ），１．１８（ｓ，３Ｈ），０．９３（ｔ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，３Ｈ），ＮＨ２，ＮＨ，２×ＯＨは観察できなかった。３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：２．７７。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５９１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３７】
２番目に溶離したジアステレオマー：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．２８−８．２２（ｍ，１Ｈ），７．９９−７．９２（ｍ，２Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．６５−７．６９（ｍ，２Ｈ），７．５９−７．５５（ｍ，１Ｈ），７．５０（ｔ，Ｊ＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），６．００（ｓ，１Ｈ），５．８６（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ），４．６５（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．７Ｈｚ，Ｊ＝６．３Ｈｚ，Ｊ＝１．６Ｈｚ，１Ｈ），４．５３−４．４６（ｍ，１Ｈ），４．２４−４．１７（ｍ，１Ｈ），４．１０−４．００（ｍ，３Ｈ），３．８３（ｄ，Ｊ＝９．３Ｈｚ，１Ｈ），１．６２−１．５３（ｍ，２Ｈ），１．４１−１．３２（ｍ，５Ｈ），１．１７（ｓ，３Ｈ），０．９３（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，３Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：４．３３。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５９１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１３８】
実施例２
５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−２−エトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］（１−ナフタレニルオキシ）ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
ステップ２：エチルＮ−［クロロ（１−ナフチルオキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニナート
【０１３９】
【化２６】
2009526850.tif 000025
【０１４０】
実施例１のステップ２に記載されている手順に従って、１−ナフチルジクロロホスフェートをＤＣＭ中に含む溶液（０．１４４Ｍ）をＬ−アラニンエチルエステル塩酸塩（１．０当量）及びＥｔ３Ｎ（２．０当量）で処理して、標記化合物を無色油状物として、ジアステレオマーの１：１．１＊混合物として得た。
【０１４１】
３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：９．４７及び９．１４＊。
【０１４２】
ステップ３：５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−２−エトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］（１−ナフタレニルオキシ）ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジンン
【０１４３】
【化２７】
2009526850.tif 000026
【０１４４】
実施例１のステップ３に記載されている手順に従って、ＴＨＦ中の２’−Ｃ−メチルシチジン（０．０９７Ｍ）を−７８℃まで冷却した後、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液として、２．２当量）を添加し、次いでエチルＮ−［クロロ（１−ナフチルオキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニナート（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液として、２．２当量）を添加した。粗な生成物をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９２：８）により精製した。生じた固体をＤＭＳＯ中に溶解し、ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製して、標記化合物を白色ＴＦＡ塩として得た。
【０１４５】
２番目に溶離したジアステレオマー：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．２７−８．２２（ｍ，１Ｈ），７．９８−７．９４（ｍ，１Ｈ），７．９２（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ），７．６５−７．５５（ｍ，３Ｈ），７．５０（ｔ，Ｊ＝７．９５Ｈｚ，１Ｈ），６．０１（ｓ，１Ｈ），５．８５（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ），４．６５（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．８１Ｈｚ，Ｊ＝６．１２Ｈｚ，Ｊ＝１．８３Ｈｚ，１Ｈ），４．４９（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．８７Ｈｚ，Ｊ＝５．８１Ｈｚ，Ｊ＝３．５３Ｈｚ，１Ｈ），４．２３−４．１７（ｍ，１Ｈ），４．１１（ｑ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，２Ｈ），４．０７−３．９９（ｍ，１Ｈ），３．８４（ｄ，Ｊ＝９．０９Ｈｚ，１Ｈ），１．３６（ｄｄ，Ｊ＝６．６９Ｈｚ，Ｊ＝０．３７Ｈｚ，３Ｈ），１．２２（ｔ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，３Ｈ），１．１７（ｓ，３Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：４．３５。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５６３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１４６】
実施例３
５’−Ｏ−［［４−クロロ−５−メチル−２−（１−メチルエチル）フェノキシ］［［（１Ｓ）−２−エトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
ステップ１：４−クロロ−２−イソプロピル−５−メチルフェニルジクロロホスフェート
【０１４７】
【化２８】
2009526850.tif 000027
【０１４８】
実施例１のステップ１に記載されている手順に従って、４−クロロ−２−イソプロピル−５−メチル−フェノールをＥｔ２Ｏ中に含む溶液（０．１７４Ｍ）をオキシ塩化リン（１．０当量）及びＥｔ３Ｎ（１．０当量）で処理して、標記化合物を無色油状物として得た。
【０１４９】
３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：４．５４。
【０１５０】
ステップ２：エチルＮ−［クロロ（４−クロロ−２−イソプロピル−５−メチルフェノキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニナート
【０１５１】
【化２９】
2009526850.tif 000028
実施例１のステップ２に記載されている手順に従って、４−クロロ−２−イソプロピル−５−メチルフェニルジクロロホスフェートをＤＣＭ中に含む溶液（０．０９８Ｍ）をＬ−アラニンエチルエステル塩酸塩（１．０当量）及びＥｔ３Ｎ（２．０当量）で処理して、標記化合物を無色油状物として、ジアステレオマーの１：１．３５＊混合物として得た。
【０１５２】
３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．５及び８．８＊。
【０１５３】
ステップ３：５’−Ｏ−［［４−クロロ−５−メチル−２−（１−メチルエチル）フェノキシ］［［（１Ｓ）−２−エトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
【０１５４】
【化３０】
2009526850.tif 000029
【０１５５】
実施例１のステップ３に記載されている手順に従って、ＴＨＦ中の２’−Ｃ−メチルシチジン（０．０９７Ｍ）を−７８℃まで冷却した後、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液として、２．２当量）を添加し、次いでエチルＮ−［クロロ（４−クロロ−２−イソプロピル−５−メチルフェノキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニナート（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液として、２．２当量）を添加した。粗な生成物をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（９０：１０→８０：２０のＤＣＭ：ＭｅＯＨ勾配）により精製し、生じた固体をＤＭＳＯ中に再溶解し、ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製して、標記化合物を白色ＴＦＡ塩として得た。
【０１５６】
最初に溶離したジエステレオマー：１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．０３（ｄ，Ｊ＝７．９６Ｈｚ，１Ｈ），７．３１（ｓ，２Ｈ），６．０７（ｄ，Ｊ＝７．９６Ｈｚ，１Ｈ），６．０１（ｓ，１Ｈ），４．６１（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．６６，５．２，１．５４Ｈｚ，１Ｈ），４．４９（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．７２，５．８６，３．７６Ｈｚ，１Ｈ），４．２４−４．１６（ｍ，３Ｈ），４．０１（ｄｔ，Ｊ＝１６．１４，７．３Ｈｚ，１Ｈ），３．８３（ｄ，Ｊ＝９．２８Ｈｚ，１Ｈ），２．３３（ｓ，３Ｈ），１．４３（ｄ，Ｊ＝７．０８Ｈｚ，３Ｈ），１．３１−１．２３（ｍ，１２Ｈ），ＮＨ２，ＮＨ，２×ＯＨは観察できなかった。３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：５．０３。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ６２５及び６２７（Ｍ＋Ｎａ＋）。
【０１５７】
２番目に溶離したジアステレオマー：１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：７．９６（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ），７．３７（ｓ，１Ｈ），７．３３（ｓ，１Ｈ），６．０２（ｓ，１Ｈ），６．００（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ），４．５７（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．８８，６．４５，１．７７Ｈｚ，１Ｈ），４．４１（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．８１，６．４５，４．０４Ｈｚ，１Ｈ），４．２０−４．１４（ｍ，３Ｈ），４．００（ｄｔ，Ｊ＝１７．１８，７．３３Ｈｚ，１Ｈ），３．８０（ｄ，Ｊ＝９．３４Ｈｚ，１Ｈ），２．３４（ｓ，３Ｈ），１．４３（ｄ，Ｊ＝７．０８Ｈｚ，３Ｈ），１．２９−１．２５（ｍ，９Ｈ），１．２０（ｓ，３Ｈ），ＮＨ２，ＮＨ，２×ＯＨは観察できなかった。３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：５．０２６。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ６２５及び６２７（Ｍ＋Ｎａ＋）。
【０１５８】
実施例４
５’−Ｏ−［（４−クロロフェノキシ）［［（１Ｓ）−１−メチル−２−［（９Ｚ）−９−オクタデセニルオキシ］−２−オキソエチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
ステップ２：Ｎ−［クロロ（４−クロロフェノキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニナート（９Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イル
【０１５９】
【化３１】
2009526850.tif 000030
【０１６０】
実施例１のステップ２に記載されている手順に従って、（９Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルＮ−［クロロ（４−クロロフェノキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニナートをＤＣＭ中に含む溶液（０．１１６Ｍ）を４−クロロフェニルジクロロホスフェート（１．０当量）及びＥｔ３Ｎ（２．０当量）で処理して、標記化合物を無色油状物として、ジアステレオマーの１．２＊：１混合物として得た。
【０１６１】
３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：８．３１＊及び７．９７。
【０１６２】
ステップ３：５’−Ｏ−［（４−クロロフェノキシ）［［（１Ｓ）−１−メチル−２−［（９Ｚ）−９−オクタデセニルオキシ］−２−オキソエチル］アミノ］ホスフィニル］］−２’−Ｃ−メチルシチジン
【０１６３】
【化３２】
2009526850.tif 000031
【０１６４】
実施例１のステップ３に記載されている手順に従って、ＴＨＦ中の２’−Ｃ−メチルシチジン（０．０９７Ｍ）を−７８℃まで冷却した後、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液として、２．２当量）を添加し、次いで（９Ｚ）−オクタデカ−９−エン−１−イルＮ−［クロロ（４−クロロフェノキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニナートを添加した。粗な混合物をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（９０：１０→８０：２０のＤＣＭ：ＭｅＯＨ勾配）により精製し、生じた固体をＤＭＳＯ中に再溶解し、ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製して、標記化合物を白色粉末として得た。リンでのジアステレオマーの１：１．４＊混合物が１Ｈ  ＮＭＲにより観察された。
【０１６５】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．０３及び８．０２＊（ｄ，Ｊ＝７．７４Ｈｚ及びＪ＊＝７．９６Ｈｚ，１Ｈ），７．４３−７．３９（ｍ，２Ｈ），７．３２−７．２６（ｍ，２Ｈ），６．１１及び６．０９＊（ｄ，Ｊ＝７．３Ｈｚ及びＪ＊＝７．５２Ｈｚ，１Ｈ），６．０２及び６．０１＊（ｓ，１Ｈ），５．４３−５．３３（ｍ，２Ｈ），４．６５−４．５４（ｍ，１Ｈ），４．５１−４．３９（ｍ，１Ｈ），４．２２−４．０７（ｍ，２Ｈ），４．０５−３．９５（ｍ，１Ｈ），３．８３及び３．８２＊（ｄ，Ｊ＝９．０７Ｈｚ及びＪ＊＝９．０７Ｈｚ，１Ｈ），２．０７−２．００（ｍ，４Ｈ），１．６６−１．６２（ｍ，２Ｈ），１．４２−１．３３（ｍ，２６Ｈ），１．２２（ｓ，３Ｈ），０．９４（ｔ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，３Ｈ），ＮＨ２，ＮＨ，２×ＯＨは観察できなかった。３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：５．１５及び５．１２＊（ｓ，１Ｐ）。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ７６９及び７７１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１６６】
実施例５
５’−Ｏ−［（４−クロロフェノキシ）［［（１Ｓ）−２−エトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
ステップ２：エチルＮ−［クロロ（４−クロロフェノキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニナート
【０１６７】
【化３３】
2009526850.tif 000032
【０１６８】
実施例１のステップ２に記載されている手順に従って、４−クロロフェニルジクロロホスフェートをＤＣＭ中に含む溶液（０．０９０Ｍ）をＬ−アラニンエチルエステル塩酸塩（１．０当量）及びＥｔ３Ｎ（２．０当量）で処理して、標記化合物を無色油状物として、ジアステレオマーの１：１＊混合物として得た。
【０１６９】
３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：９．４３及び９．１１＊。
【０１７０】
ステップ３：５’−Ｏ−［（４−クロロフェノキシ）［［（１Ｓ）−２−エトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
【０１７１】
【化３４】
2009526850.tif 000033
【０１７２】
実施例１のステップ３に記載されている手順に従って、ＴＨＦ中の２’−Ｃ−メチルシチジン（０．０９７Ｍ）を−７８℃まで冷却した後、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液として、２．２当量）を添加し、次いでエチルＮ−［クロロ（４−クロロフェノキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニナート（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液として、２．２当量）を添加した。粗な生成物をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９２：８）により精製し、生じた固体をＤＭＳＯ中に再溶解し、ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製して、標記化合物を白色ＴＦＡ塩として得た。
【０１７３】
２番目に溶離したジアステレオマー：１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．０１（ｄ，Ｊ＝７．７４Ｈｚ，１Ｈ），７．４３（ｄ，Ｊ＝８．８５Ｈｚ，２Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．８５Ｈｚ，２Ｈ），６．０６（ｄ，Ｊ＝７．７４Ｈｚ，１Ｈ），６．０２（ｓ，１Ｈ），４．５８（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．８９Ｈｚ，Ｊ＝６．２５Ｈｚ，Ｊ＝１．８２Ｈｚ，１Ｈ），４．４７−４．３８（ｍ，１Ｈ），４．２４−４．１２（ｍ，３Ｈ），４．０６−３．９２（ｍ，１Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝９．２８Ｈｚ，１Ｈ），１．４１（ｄ，Ｊ＝６．８５Ｈｚ，３Ｈ），１．２７（ｔ，Ｊ＝７．１８Ｈｚ，３Ｈ），１．２１（ｓ，３Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：５．１０。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５４７（Ｍ−ＫＨ）＋。
【０１７４】
実施例６
５’−Ｏ−［（４−クロロフェノキシ）［［（１Ｓ）−１−メチル−２−（１−メチルエトキシ）−２−オキソエチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
ステップ２：イソプロピルＮ−［クロロ（４−クロロフェノキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニナート
【０１７５】
【化３５】
2009526850.tif 000034
【０１７６】
実施例１のステップ２に記載されている手順に従って、標記化合物を黄色油状物として、リンでの２つのジアステレオマーの混合物として単離した。
【０１７７】
３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：９．６１，９．３５。
【０１７８】
ステップ３：５’−Ｏ−［（４−クロロフェノキシ）［［（１Ｓ）−１−メチル−２−（１−メチルエトキシ）−２−オキソエチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
【０１７９】
【化３６】
2009526850.tif 000035
【０１８０】
実施例１のステップ３に記載されている手順に従って、標記化合物をリンでの単一ジアステレオマーとして、そのＴＦＡ塩として単離した。
【０１８１】
２番目に溶離したジアステレオマー：１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．０（ｄ，Ｊ＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），７．４１（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），７．３（ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ，２Ｈ），６．０５（ｄ，Ｊ＝７．９６Ｈｚ，１Ｈ），６．０（ｓ，１Ｈ），５．０２−４．９４（ｍ，１Ｈ），４．５６（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．７，６．４，１．７Ｈｚ，１Ｈ），４．４１（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．８，６．３５，３．７Ｈｚ，１Ｈ），４．２１−４．１４（ｍ，１Ｈ），３．９９−３．８９（ｍ，１Ｈ），３．８０（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），１．３９（ｄ，Ｊ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），１．２５（ｄ，Ｊ＝６．２Ｈｚ，６Ｈ），１．２０（ｓ，３Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：５．１３。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５６１（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１８２】
実施例７
５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−２−ｎ−ブトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］（４−クロロフェノキシ）ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
【０１８３】
ステップ２：Ｎ−［クロロ（４−クロロフェノキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニナートｎ−ブチル
【０１８４】
【化３７】
2009526850.tif 000036
【０１８５】
実施例１のステップ２に記載されている手順に従って、市販されている４−クロロフェニルジクロロホスフェートをＤＣＭ中に含む溶液（０．０９０Ｍ）をＬ−アラニンエチルエステル塩酸塩（１．０当量）及びＥｔ３Ｎ（２．０当量）で処理して、標記化合物を無色油状物として、ジアステレオマーの１．１：１＊混合物として得た。
【０１８６】
３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：９．５２及び９．２８＊。
【０１８７】
ステップ３：５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−２−ｎ−ブトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］（４−クロロフェノキシ）ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
【０１８８】
【化３８】
2009526850.tif 000037
【０１８９】
実施例１のステップ３に記載されている手順に従って、ＴＨＦ中の２’−Ｃ−メチルシチジン（０．０９７Ｍ）を−７８℃まで冷却した後、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液として、２．２当量）を添加し、次いでブチルＮ−［クロロ（４−クロロフェノキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニナート（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液として、２．２当量）を添加した。粗な生成物をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９２：８）により精製し、生じた固体をＤＭＳＯ中に再溶解し、ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製して、標記化合物を白色ＴＦＡ−塩として得た。
【０１９０】
２番目に溶離したジアステレオマー：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．０１（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ），７．４２（ｄ，Ｊ＝８．８４Ｈｚ，２Ｈ），７．３１（ｄ，Ｊ＝８．０８Ｈｚ，２Ｈ），６．０６（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ），６．０１（ｓ，１Ｈ），４．５７（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．６８Ｈｚ，Ｊ＝６．２５Ｈｚ，Ｊ＝１．７１Ｈｚ，１Ｈ），４．４７−４．３９（ｍ，１Ｈ），４．２１−４．０６（ｍ，３Ｈ），４．０５−３．９５（ｍ，１Ｈ），３．８１（ｄ，Ｊ＝９．３５Ｈｚ，１Ｈ），１．６８−１．５８（ｍ，２Ｈ），１．４９−１．３４（ｍ，５Ｈ），１．２１（ｓ，３Ｈ），０．９７（ｔ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，３Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：３．９７。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５７５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９１】
実施例８
５’−Ｏ−［［（２−ｎ−ブトキシ−２−オキソエチル）アミノ］（１−ナフタレニルオキシ）ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
ステップ２：ブチルＮ−［クロロ（１−ナフチルオキシ）ホスホリル］グリシナート
【０１９２】
【化３９】
2009526850.tif 000038
【０１９３】
１−ナフチルジクロロホスフェートをＤＣＭ中に含む溶液（０．０７７Ｍ）をグリシンブチルエステル塩酸塩（１．０当量）及びＥｔ３Ｎ（２．０当量）で処理して、標記化合物を無色油状物として得た。
【０１９４】
３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：９．２８。
【０１９５】
ステップ３：５’−Ｏ−［［（２−ｎ−ブトキシ−２−オキソエチル）アミノ］（１−ナフタレニルオキシ）ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
【０１９６】
【化４０】
2009526850.tif 000039
【０１９７】
実施例１のステップ３に記載されている手順に従って、ＴＨＦ中の２’−Ｃ−メチルシチジン（０．０９７Ｍ）を−７８℃まで冷却した後、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液として、２．２当量）を添加し、次いでＮ−［クロロ（１−ナフチルオキシ）ホスホリル］ブチルグリシナート（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液として、２．２当量）を添加した。粗な混合物をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９２：８）により精製し、生じた固体をＤＭＳＯ中に再溶解し、ＲＰ−ＨＰＬＣにより精製して、標記化合物をＴＦＡ塩の形態のジアステレオマー混合物として得た。
【０１９８】
ジアステレオマーの混合物：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．２９−８．２０（ｍ，１Ｈ），８．０２（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ），７．９９−７．９２（ｍ，１Ｈ），７．７９（ｄ，Ｊ＝８．０４Ｈｚ，１Ｈ），７．６７−７．５４（ｍ，３Ｈ），７．５０（ｔ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ），５．９９及び５．９８＊（ｓ，１Ｈ），５．８９（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ，１Ｈ），４．６９（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．８７Ｈｚ，Ｊ＝５．５６Ｈｚ，Ｊ＝１．７７Ｈｚ，１Ｈ），４．５７（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．８１Ｈｚ，Ｊ＝６．１２Ｈｚ，Ｊ＝３．３４Ｈｚ，１Ｈ），４．２５−４．１８（ｍ，１Ｈ），４．１２（ｔ，Ｊ＝６．４４Ｈｚ，２Ｈ），３．９２−３．７１（ｍ，３Ｈ），１．６６−１．５６（ｍ，２Ｈ），１．４５−１．３３（ｍ，２Ｈ），１．１７（ｓ，３Ｈ），０．９５（ｔ，Ｊ＝７．７１Ｈｚ，３Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ）δ：５．７９及び５．４４＊。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５７７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０１９９】
実施例９
５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−２−（２−エチルブトキシ）−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］フェノキシホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
【０２００】
【化４１】
2009526850.tif 000040
【０２０１】
標記化合物を、（フェニルジクロロホスフェート及びＬ−アラニナート２−エチルブチル塩酸塩から出発して）実施例１に記載されている手順に従い、シリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９２：８）及びＲＰ−ＨＰＬＣ（固定相：カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２），５μｍ，２１．２×２５０ｍｍ；移動相：アセトニトリル／ＮＨ４ＨＣＯ３  ５ｍＭで緩衝したＨ２Ｏ）により精製して製造した。２つの純粋なジアステレオマーを各々含有するフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標記化合物を白色粉末として得た。
【０２０２】
最初に溶離したジアステレオマー：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：７．７３（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４１−７．３７（ｍ，２Ｈ），７．２８−７．２５（ｍ，２Ｈ），７．２２（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），６．０８（ｓ，１Ｈ），５．８５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），４．５８（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．７，４．８，２．０Ｈｚ，１Ｈ），４．４３（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．７，５．４，２．９Ｈｚ，１Ｈ），４．１３−３．９５（ｍ，４Ｈ），３．７５（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），１．５６−１．５０（ｍ，１Ｈ），１．４２−１．３５（ｍ，７Ｈ），１．１０（ｓ，３Ｈ），０．９１（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，６Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：３．９６。  ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５６９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２０３】
２番目に溶離したジアステレオマー：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：７．７０（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），７．４１−７．３７（ｍ，２Ｈ），７．３０−７．２８（ｍ，２Ｈ），７．２２（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，１Ｈ），６．０６（ｓ，１Ｈ），５．８５（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ），４．５２（ｄｄ，Ｊ＝１０．３，５．７Ｈｚ，１Ｈ），４．３９（ｄｄ，Ｊ＝９．５，５．３Ｈｚ，１Ｈ），４．１２−３．９５（ｍ，４Ｈ），３．７４（ｄ，Ｊ＝９．２Ｈｚ，１Ｈ），１．５４−１．４８（ｍ，１Ｈ），１．３９−１．３３（ｍ，７Ｈ），１．１２（ｓ，３Ｈ），０．９０（ｔ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，６Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：３．７９。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５６９（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２０４】
実施例１０
５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−２−（２，２−ジメチルプロポキシ）−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］フェノキシホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
【０２０５】
【化４２】
2009526850.tif 000041
【０２０６】
（フェニルジクロロホスフェート及びＬ−アラニナート２，２−ジメチルプロピルエステル塩酸塩から出発して）実施例１に記載されている手順に従い、シリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（９０／１０→８０／２０のＤＣＭ／ＭｅＯＨ勾配）により精製して、生じた固体をＤＭＳＯ中に再溶解し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（固定相：カラムＳｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ１８，７μμｍ，１９×３００ｍｍ；移動相：アセトニトリル／０．１％  ＴＦＡで緩衝させたＨ２Ｏ）により精製した。純粋な化合物を含有するフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標記化合物を白色粉末として、ＴＦＡ塩として、（ＮＭＲによると）７．１：１＊混合物（最初の溶離物：２番目の溶離物）として得た。
【０２０７】
ジアステレオマーの混合物：１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：８．０１及び７．９７＊（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ及びＪ＊＝８．１Ｈｚ，１Ｈ），７．４１−７．３７（ｍ，２Ｈ），７．３０−７．２０（ｍ，３Ｈ），６．０３及び６．００＊（ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ及びＪ＊＝７．７Ｈｚ，１Ｈ），５．９９及び５．９８＊（ｓ，１Ｈ），４．６０及び４．５６＊−４．５２＊（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．７，４．８，２．０Ｈｚ及びｍ＊；１Ｈ），４．４５及び４．４２＊−４．３６＊（ｄｄｄ，Ｊ＝１１．８，５．８，３．０Ｈｚ及びｍ＊，１Ｈ），４．１８−４．１５（ｍ，１Ｈ），４．０５−３．９７（ｍ，１Ｈ），３．８８−３．７８（ｍ，３Ｈ），１．４０＊及び１．３７（ｄ，Ｊ＊＝７．８Ｈｚ及びＪ＝７．１Ｈｚ，３Ｈ），１．２２（ｂｒ  ｓ，３Ｈ），０．９６及び０．９５＊（ｓ，９Ｈ），ＮＨ２，ＮＨ，２×ＯＨは観察されなかった。３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：５．０９及び４．９６＊。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５５５（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２０８】
実施例１１
ステップ３：５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−２−（オクチルオキシ）−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］フェノキシホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
【０２０９】
【化４３】
2009526850.tif 000042
【０２１０】
実施例１のステップ２（フェニルジクロロホスフェート及びＬ−アラニンオクチル酸塩酸塩から出発）及びステップ３に記載されている手順に従って、粗な生成物を得た。これをシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ：ＭｅＯＨ＝９２：８）により精製し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（固定相：カラムＳｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ１８，７μｍ，１９×３００ｍｍ；移動相：アセトニトリル／０．１％  ＴＦＡで緩衝したＨ２Ｏ）により精製した。純粋な化合物を含有するフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標記化合物をそのＴＦＡ塩として得た（白色粉末；１：１＊のリン上でのジアステレオマー；第１溶離：第２溶離＊）。
【０２１１】
ジアステレオマーの混合物：１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：９．６５（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），８．７２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．９６及び７．９５＊（ｄ，Ｊ＝７．６Ｈｚ及びＪ＊＝７．９Ｈｚ，１Ｈ），７．４４−７．３７（ｍ，２Ｈ），７．２８−７．２０（ｍ，３Ｈ），６．２０−６．０（ｍ，２Ｈ），５．８６及び５．８５（ｓ，１Ｈ），４．５５−４．２５（ｍ，２Ｈ），４．１６−３．９７（ｍ，３Ｈ），３．９５−３．８０（ｍ，１Ｈ），３．６３（ｄ，９．２Ｈｚ，１Ｈ），１．６１−１．４５（ｍ，２Ｈ），１．２７（ｂｒ  ｓ，１３Ｈ），１．０７（ｓ，３Ｈ），０．９１−０．８６（ｍ，３Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：３．８２及び３．６７＊。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５９８（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２１２】
実施例１２
５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−［（プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］フェノキシホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
【０２１３】
【化４４】
2009526850.tif 000043
【０２１４】
ステップ２：Ｌ−アラニン，Ｎ−（クロロフェノキシホスフィニル）−，２−プロピルペンチルエステル
【０２１５】
【化４５】
2009526850.tif 000044
【０２１６】
ＤＣＭ中のフェニルジクロロホスフェート（０．０８６Ｍ）に（２Ｓ）−１−プロピルペンチルオキシ−１−オキソプロパン−２−アミニウムクロリド（１．０当量）を添加した。−７８℃まで冷却した後、ニートなＥｔ３Ｎ（２．０当量）を添加し、反応物を一晩で室温まで加温した。すべての揮発物を除去し、生じた白色固体をＥｔ２Ｏで洗浄し、濾過した。濾液を真空中で蒸発させて、無色油状物を１：１のジアステレオマー混合物として得た。
【０２１７】
３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：８．２２及び７．９３ｐｐｍ。
【０２１８】
ステップ３：５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−１−メチル−２−オキソ−２−［（プロピルペンチル）オキシ］エチル］アミノ］フェノキシホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
【０２１９】
【化４６】
2009526850.tif 000045
【０２２０】
２’−Ｃ−メチルシチジンをＴＨＦ（０．０９７Ｍ）で希釈した。生じたスラリーを−７８℃まで冷却した後、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液として、２．２当量）を添加した。混合物を直ちに０℃まで加温し、３０分間撹拌し、再び−７８℃まで冷却した後、プロピルペンチルＮ−［クロロ（フェニルオキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニナート（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液として、２．２当量）を１滴ずつ添加した。反応物を一晩で室温に戻した後、水を添加することによりクエンチした。水性相をＥｔＯＡｃで３回抽出し、合わせた有機相をＮａ２ＳＯ４で乾燥した。粗な生成物をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（ＤＣＭ／ＭｅＯＨ＝９２：８）により精製し、生じたオフホワイト色固体をＤＭＳＯ中に溶解し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（固定相：カラムＳｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ１８，７μｍ，１９×３００ｍｍ；移動相：アセトニトリル／Ｈ２Ｏ，５ｍＭ  ＡＭＢＩＣで緩衝させた水）により精製した。純粋なジアステレオマーを含有するフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標記化合物を白色固体として得た。
【０２２１】
最初に溶離したジアステレオマー：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：７．７０（ｄ，Ｊ＝７．４６Ｈｚ，１Ｈ），７．４５−７．３０（ｍ，２Ｈ），７．３０−７．１３（ｍ，３Ｈ），６．０６（ｓ，１Ｈ），５．８３（ｄ，Ｊ＝７．４６Ｈｚ，１Ｈ），４．６３−４．５１（ｍ，１Ｈ），４．４８−４．３５（ｍ，１Ｈ），４．１７−３．８７（ｍ，４Ｈ），３．７３（ｄ，Ｊ＝９．１Ｈｚ，１Ｈ），１．６７（ｂｓ，１Ｈ），１．４７−１．１７（ｍ，１１Ｈ），１．０８（ｓ，３Ｈ），０．８９（ｂｓ，６Ｈ）。ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：３．９５。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５９７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２２２】
２番目に溶離したジアステレオマー：１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：７．６８（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），７．４３−７．３２（ｍ，２Ｈ），７．３１−７．１６（ｍ，３Ｈ），６．０４（ｓ，１Ｈ），５．８３（ｄ，Ｊ＝７．３３Ｈｚ，１Ｈ），４．５５−４．４５（ｍ，１Ｈ），４．４２−４．３１（ｍ，１Ｈ），４．１４−３．９０（ｍ，４Ｈ），３．７２（ｄ，Ｊ＝９．０９Ｈｚ，１Ｈ），１．７２−１．５９（ｍ，１Ｈ），１．４３−１．２０（ｍ，１１Ｈ），１．０９（ｓ，３Ｈ），０．８９（ｔ，Ｊ＝６．３２Ｈｚ，６Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：３．７９。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５９７（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２２３】
実施例１３
５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−２−［２−（ヘキシルオキシ）エトキシ］−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］フェノキシホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
【０２２４】
【化４７】
2009526850.tif 000046
【０２２５】
ステップ２：Ｎ−［クロロ（フェノキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニナート２−（ヘキシルオキシ）エチル
【０２２６】
【化４８】
2009526850.tif 000047
【０２２７】
（２Ｓ）−１−［２−（ヘキシルオキシ）エトキシ］−１−オキソプロパン−２−アミニウムクロリドのＤＣＭ（０．１１６Ｍ）溶液をフェニルジクロロホスフェート（１．０当量）、トリエチルアミン（２．０当量）で処理して、標記化合物をジアステレオマーの１：１混合物として得た。
【０２２８】
３１Ｐ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，３００Ｋ）δ：８．０３及び７．６７。
【０２２９】
ステップ３：５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−２−［２−（ヘキシルオキシ）エトキシ］−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］フェノキシホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
【０２３０】
【化４９】
2009526850.tif 000048
【０２３１】
ＴＨＦ中の（トルエンから２回蒸発させた）２’−Ｃ−メチルシチジン（０．０９７Ｍ）を−７８℃まで冷却し、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液として、２．２当量）を添加した後、（ヘキシルオキシ）エチルＮ−［クロロ（フェノキシ）ホスホリル］−Ｌ−アラニナート２−を添加した。粗な生成物をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（９０／１０→８０／２０のＤＣＭ／ＭｅＯＨ勾配）により精製し、生じたオフホワイト色固体をＤＭＳＯ中に溶解し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（固定相：カラムＳｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ１８，７μｍ，１９×３００ｍｍ；移動相：アセトニトリル／０．１％  ＴＦＡで緩衝させたＨ２Ｏ）により精製した。純粋な化合物を含有するフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標記化合物を白色粉末として得た。３１Ｐ  ＮＭＲにより１：１．８＊混合物と判明した。
【０２３２】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：７．８５及び７．８２＊（ｄ，Ｊ＝７．９２Ｈｚ及びＪ＊＝７．９２Ｈｚ，１Ｈ），７．２４−７．１８（ｍ，２Ｈ），７．１１−７．０２（ｍ，３Ｈ），５．８７及び５．８３＊（ｄ，Ｊ＝７．８３Ｈｚ及びＪ＊＝７．９２Ｈｚ，１Ｈ），５．８１及び５．８０＊（ｓ，１Ｈ），４．４５−４．３３（ｍ，１Ｈ），４．３０−４．１８（ｍ，１Ｈ），４．１１−３．９４（ｍ，３Ｈ），３．８７−３．７６（ｍ，１Ｈ），３．６２及び３．５９＊（ｄ，Ｊ＝８．３４Ｈｚ及びＪ＊＝９．３０Ｈｚ，１Ｈ），３．４６（ｑｔ，Ｊ＝４．５３Ｈｚ，２Ｈ），３．２８（ｔ，Ｊ＝６．６０Ｈｚ，２Ｈ），１．４１−１．３２（ｍ，２Ｈ），１．２０−１．１３（ｍ，９Ｈ），０．９９（ｓ，３Ｈ），０．７４−０．７０（ｍ，３Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ：３．８６及び３．６３＊（ｓ，１Ｐ）。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ６１３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２３３】
【化５０】
2009526850.tif 000049
【０２３４】
実施例１４
５’−Ｏ−［［［１−（１，１−ジメチルエトキシ）カルボニル］−１Ｈ−インドル−５−イル］オキシ］［［（１Ｓ）−２−エトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
【０２３５】
【化５１】
2009526850.tif 000050
【０２３６】
ステップ１：５−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−１Ｈ−インドール
【０２３７】
【化５２】
2009526850.tif 000051
【０２３８】
５−ヒドロキシインドールをＤＣＭ中に含む溶液（０．３Ｍ）を撹拌し、ここにイミダゾール（２．０当量）を添加した。混合物を０℃まで冷却し、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（１．０当量）で処理した。生じた混合物を室温で１２時間撹拌し、ＤＣＭで希釈し、Ｈ２Ｏ、次いで１Ｎ  ＨＣｌ（水性）、最後にブラインで洗浄した。合わせた有機フランションをＮａ２ＳＯ４で乾燥した。粗な生成物をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：ジエチルエーテル＝９０／１０）により精製して、標記化合物を白色固体として得た。
【０２３９】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１０．９２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．２９（ｔ，Ｊ＝３．１５Ｈｚ，１Ｈ），７．２６（ｄ，Ｊ＝８．７６Ｈｚ，１Ｈ），６．９６（ｄ，Ｊ＝２．２５Ｈｚ，１Ｈ），６．６５（ｄｄ，Ｊ＝２．２５及び８．７６Ｈｚ，１Ｈ），６．３４−６．２７（ｍ，１Ｈ），０．９８（ｓ，９Ｈ），０．１８（ｓ，６Ｈ）。
【０２４０】
ステップ２：５−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−１Ｈ−インドール−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【０２４１】
【化５３】
2009526850.tif 000052
【０２４２】
５−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−１Ｈ−インドールをＤＣＭ中に含む溶液（０．４Ｍ）を室温でＤＭＡＰ（０．２当量）及びＴＥＡ（１．２当量）で処理した。Ｂｏｃ２Ｏ（１．０当量）を添加し、混合物を室温で１２時間撹拌した。反応物をＤＣＭで希釈し、１Ｎ  ＨＣｌ（水性）、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。粗な生成物をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：ジエチルエーテル＝９８／２）により精製して、標記化合物を白色固体（５０％）として得た。
【０２４３】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：７．４８（ｄ，Ｊ＝８．８５Ｈｚ，１Ｈ），７．６４（ｄ，Ｊ＝３．６０Ｈｚ，１Ｈ），７．０７（ｄ，Ｊ＝２．２２Ｈｚ，１Ｈ），６．８６（ｄｄ，Ｊ＝２．２２及び８．８５Ｈｚ，１Ｈ），６．６３（ｄ，Ｊ＝３．６０Ｈｚ，１Ｈ），１．６３（ｓ，９Ｈ），０．９８（ｓ，９Ｈ），０．２０（ｓ，６Ｈ）。
【０２４４】
ステップ３：５−ヒドロキシ−１Ｈ−インドール−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル
【０２４５】
【化５４】
2009526850.tif 000053
【０２４６】
５−｛［ｔｅｒｔ−ブチル（ジメチル）シリル］オキシ｝−１Ｈ−インドール−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルをＴΗＦ中に含む溶液（０．１８Ｍ）を０℃でＴＢＡＦ（１．１当量）で処理した。混合物をこの温度で１０分間撹拌し、室温まで戻した。飽和水性ＮＨ４Ｃｌ溶液を添加することにより反応物をクエンチし、酢酸エチルで抽出した。有機層をＨ２Ｏ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した。粗な生成物をシリカゲルを用いるカラムクロマトグラフィー（石油エーテル：ＥｔＯＡｃ＝９２／８）により精製して、標記化合物を無色油状物として得た。
【０２４７】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：９．２０（ｓ，１Ｈ），７．８７（ｄ，Ｊ＝８．８５Ｈｚ，１Ｈ），７．５９（ｄ，Ｊ＝３．６３Ｈｚ，１Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝２．１３Ｈｚ，１Ｈ），６．８１（ｄｄ，Ｊ＝２．１３及び８．８５Ｈｚ，１Ｈ），６．５８（ｄ，Ｊ＝３．６３Ｈｚ，１Ｈ），１．６５（ｓ，９Ｈ）。
【０２４８】
ステップ４：１Ｈ−インドール−１−カルボン酸５−［（ジクロロホスフィニル）オキシ］−１，１−ジメチルエチルエステル
【０２４９】
【化５５】
2009526850.tif 000054
【０２５０】
Ｅｔ２Ｏ中の５−ヒドロキシ−１Ｈ−インドール−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（０．１１Ｍ）にＴＥＡ（１．０当量）を添加し、この溶液を−７８℃まで冷却した後、ニートなオキシ塩化リン（１．０当量）をこの温度で添加し、生じた溶液を一晩で室温まで加温した。白色スラリーをＮ２の不活性雰囲気下で濾過し、すべての揮発物を除去して、標記化合物を無色液体として得た。これをそのまま次ステップのために使用した。
【０２５１】
３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３，３００Ｋ）δ：４．２３。
【０２５２】
ステップ５：１Ｈ−インドール−１−カルボン酸５−［［クロロ［［（１Ｓ）−２−エトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］ホスフィニル］オキシ］−１，１−ジメチルエチルエステル
【０２５３】
【化５６】
2009526850.tif 000055
【０２５４】
ＤＣＭ中の１Ｈ−インドール−１−カルボン酸５−［（ジクロロホスフィニル）オキシ］−１，１−ジメチルエチルエステル（０．１８Ｍ）にＬ−アラニンエチルエステル塩酸塩（１．０当量）を添加した。ニートなトリエチルアミン（２．０当量）を−７８℃で添加し、反応物を一晩で室温まで加温した。すべての揮発物を除去し、生じた白色固体をＥｔ２Ｏで洗浄した。懸濁液を濾過し、真空中で蒸発させて、白色固体をジアステレオマーの１：１．０４＊混合物として得た。
【０２５５】
３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：−８．２５＊及び−８．９９。
【０２５６】
ステップ６：５’−Ｏ−［［［１−［（１，１−ジメチルエトキシ）カルボニル］−１Ｈ−インドル−５−イル］オキシ］［［（１Ｓ）−２−エトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
【０２５７】
【化５７】
2009526850.tif 000056
【０２５８】
（トルエンから２回蒸発させた）２’−Ｃ−メチルシチジンをＴＨＦで希釈した（０．０９７Ｍ）。生じたスラリーを−７８℃まで冷却した後、ｔｅｒｔ−ブチルマグネシウムクロリド（ＴＨＦ中１．０Ｍ溶液として、２．２当量）を添加した。混合物を直ちに０℃まで加温し、３０分間撹拌し、再び−７８℃まで冷却した後、１Ｈ−インドール−１−カルボン酸５−［［クロロ［［（１Ｓ）−２−エトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］ホスフィニル］オキシ］−１，１−ジメチルエチルエステル（ＴＨＦ中１．０  Ｍ溶液として、１．６当量）を１滴ずつ添加した。反応物を一晩で室温に戻し、水を添加することによりクエンチした。水性相をＥｔＯＡｃで３回抽出し、合わせた有機相をブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥した、粗な生成物をＤＭＳＯ中に溶解し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（固定相：カラムＰｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  Ｃ１８（２），５μｍ，２５０×２１．２０ｍｍ；移動相：アセトニトリル／５ｍＭ  ＡＭＢＩＣで緩衝したＨ２Ｏ）により精製した。純粋な化合物を含有するフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標記化合物を白色粉末として得た。
【０２５９】
最初に溶離したジアステレオマー：１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：８．０２（ｄ，Ｊ＝８．９１Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝３．６３Ｈｚ，１Ｈ），７．５６（ｄ，Ｊ＝７．４５Ｈｚ，１Ｈ），７．４５（ｓ，１Ｈ），７．１７（ｄ，Ｊ＝９．０６Ｈｚ，１Ｈ），７．１６（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．１０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝３．６０Ｈｚ，１Ｈ），６．０７（ｄｄ，Ｊ＝１０．１７及び１２．６６Ｈｚ，１Ｈ），５．９５（ｓ，１Ｈ），５．７０（ｄ，Ｊ＝７．４４Ｈｚ，１Ｈ），５．２８（ｄ，Ｊ＝６．９３Ｈｚ，１Ｈ），５．０８（ｓ，１Ｈ），４．４７−４．３５（ｍ，１Ｈ），４．３２−４．２１（ｍ，１Ｈ），４．１３−３．９６（ｍ，３Ｈ），３．８９−３．７５（ｍ，１Ｈ），３．５８（ｔ，Ｊ＝６．９６Ｈｚ，１Ｈ），１．６４（ｓ，９Ｈ），１．２３（ｄ，Ｊ＝６．９６Ｈｚ，３Ｈ），１．１３（ｔ，Ｊ＝７．０５Ｈｚ，３Ｈ），０．９２（ｓ，３Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：４．０５。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ６５３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２６０】
２番目に溶離したジアステレオマー：１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：８．０２（ｄ，Ｊ＝８．９１Ｈｚ，１Ｈ），７．７２（ｄ，Ｊ＝３．６３Ｈｚ，１Ｈ），７．５７（ｄ，Ｊ＝７．５４Ｈｚ，１Ｈ），７．４９（ｓ，１Ｈ），７．２０（ｄ，Ｊ＝７．６０Ｈｚ，１Ｈ），７．１８（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．１０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），６．７１（ｄ，Ｊ＝３．６３Ｈｚ，１Ｈ），６．００（ｄｄ，Ｊ＝１０．４２及び１２．３４Ｈｚ，１Ｈ），５．９４（ｓ，１Ｈ），５．７０（ｄ，Ｊ＝７．４４Ｈｚ，１Ｈ），５．２３（ｄ，Ｊ＝７．０５Ｈｚ，１Ｈ），５．０９（ｓ，１Ｈ），４．４３−４．３２（ｍ，１Ｈ），４．３０−４．１８（ｍ，１Ｈ），４．１３−３．９３（ｍ，３Ｈ），３．９２−３．８０（ｍ，１Ｈ），３．６２（ｔ，Ｊ＝７．０２Ｈｚ，１Ｈ），１．６５（ｓ，９Ｈ），１．２５（ｄ，Ｊ＝７．０２Ｈｚ，３Ｈ），１．１３（ｔ，Ｊ＝７．１１Ｈｚ，３Ｈ），０．９６（ｓ，３Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：４．１６。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ６５３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２６１】
実施例１５
ステップ７：５’−Ｏ−［［［（１Ｓ）−２−エトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］（１Ｈ−インドル−５−イルオキシ）ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン
【０２６２】
【化５８】
2009526850.tif 000057
【０２６３】
ＤＣＭ中の実施例１３のステップ６からの最初に溶離した５’−Ｏ−［［［１−（１，１−ジメチルエトキシ）カルボニル］−１Ｈ−インドル−５−イル］オキシ］［［（１Ｓ）−２−エトキシ−１−メチル−２−オキソエチル］アミノ］ホスフィニル］−２’−Ｃ−メチルシチジン（０．０１Ｍ）を０℃でＴＦＡ（０．５ｍＬ）で処理し、室温で２時間撹拌した。反応物をＨ２Ｏ（０．１ｍＬ）で処理し、３５℃で２時間撹拌した。粗な生成物をＤＭＳＯ中に溶解し、ＲＰ−ＨＰＬＣ（固定相：カラムＳｙｍｍｅｔｒｙ  Ｃ１８，７μｍ，１９×３００ｍｍ；移動相：アセトニトリル／０．１％  ＴＦＡで緩衝させたＨ２Ｏ）により精製した。純粋な化合物を含有するフラクションを合わせ、凍結乾燥して、標記化合物を白色粉末として得た。
【０２６４】
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：１１．１２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），８．９４（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），８．１２（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），７．８８（ｄ，Ｊ＝７．４９Ｈｚ，１Ｈ），７．４４−７．３１（ｍ，３Ｈ），６．９５（ｄ，Ｊ＝９．６４Ｈｚ，１Ｈ），６．４０（ｓ，１Ｈ），６．０３−５．９１（ｍ，２Ｈ），５．８７（ｓ，１Ｈ），５．４３（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），５．３０（ｂｒ  ｓ，１Ｈ），４．４７−４．３８（ｍ，１Ｈ），４．３８−４．２２（ｍ，１Ｈ），４．１４−４．０１（ｍ，３Ｈ），３．９１−３．７４（ｍ，１Ｈ），３．６７−３．５８（ｍ，１Ｈ），１．２２（ｄ，Ｊ＝６．９９Ｈｚ，３Ｈ），１．１７（ｔ，Ｊ＝７．１７Ｈｚ，３Ｈ），１．００（ｓ，３Ｈ）。３１Ｐ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ：４．２７。ＭＳ（ＥＳ＋）  ｍ／ｚ  ５５３（Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２６５】
表１及び２に挙げられている追加実施例をスキーム１に示し、実施例１〜１５に記載されている手順に従って製造し、いずれもリンステレオジェン中心でのジアステレオマーの混合物として、または単一ジアステレオマーとして得た。
【０２６６】
【表１】
2009526850.tif 000058
2009526850.tif 000059
2009526850.tif 000060
2009526850.tif 000061
2009526850.tif 000062
【０２６７】
【表２】
2009526850.tif 000063
2009526850.tif 000064
【０２６８】
生物学的アッセイ
ＨＣＶ複製の阻害を調べるために使用したアッセイを以下に記載する。
【０２６９】
Ａ．ＨＣＶ  ＲＮＡ複製の阻害に関するアッセイ
本発明化合物を、サブゲノムＨＣＶレプリコンを含有している培養肝細胞癌（ＨｕＨ−７）細胞においてＣ型肝炎ウイルスＲＮＡの複製に影響を及ぼす能力について評価する。アッセイの詳細を以下に記載する。このレプリコンは、Ｖ．Ｌｏｈｍａｎｎ，Ｆ．Ｋｏｒｎｅｒ，Ｊ−Ｏ．Ｋｏｃｈ，Ｕ．Ｈｅｒｉａｎ，Ｌ．Ｔｈｅｉｌｍａｎｎ，ａｎｄ  Ｒ．Ｂａｒｔｅｎｓｃｈｌａｇｅｒ，“Ｒｅｐｌｉｃａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｓｕｂ−ｇｅｎｏｍｉｃ  Ｈｅｐａｔｉｔｉｓ  Ｃ  Ｖｉｒｕｓ  ＲＮＡｓ  ｉｎ  ａ  Ｈｅｐａｔｏｍａ  ｃｅｌｌ  Ｌｉｎｅ”，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２８５：１１０（１９９９）に記載されているアッセイの修飾である。
【０２７０】
プロトコル：
本アッセイは、ｉｎ  ｓｉｔｕリボヌクレアーゼ保護、シンチレーション近接をベースとするプレートアッセイ（ＳＰＡ）である。１０，０００〜４０，０００個の細胞を９６ウェルのｃｙｔｏｓｔａｒプレート（Ａｍｅｒｓｈａｍ）において１００〜２００μＬの０．８ｍｇ／ｍＬ  Ｇ４１８含有培地中で平板培養する。化合物を１％  ＤＭＳＯ中１００μＭまでの各種濃度で０〜１８時に細胞に添加した後、２４〜９６時間培養する。細胞を固定し（２０分間，１０％  ホルマリン）、透過化処理し（２０分間，０．２５％  トリトンＸ−１００／ＰＢＳ）、ＲＮＡウイルスゲノム中に含まれている（＋）鎖ＮＳ５Ｂ（または、他の遺伝子）に相補的な一本鎖３３Ｐ  ＲＮＡプローブとハイブリド形成させる（一晩５０℃）。細胞を洗浄し、ＲＮＡｓｅで処理し、洗浄し、６５℃に加熱し、Ｔｏｐ−Ｃｏｕｎｔでカウントする。複製の阻害をカウント／分（ｃｐｍ）の減少として表す。
【０２７１】
サブゲノムレプリコンを含有するように選択されるヒトＨｕＨ−７肝細胞癌細胞は、ＨＣＶ  ５’非翻訳領域（ＮＴＲ）、ネオマイシン選択マーカー、ＥＭＣＶ  ＩＲＥＳ（内部リボソーム侵入部位）及びＨＣＶ非構造タンパク質ＮＳ３〜ＮＳ５Ｂから構成される細胞質ＲＮＡ、その後に３’ＮＴＲを有している。
【０２７２】
複製アッセイで調べた代表的化合物は１００μＭ未満のＥＣ５Ｄを示す。
【０２７３】
Ｂ．細胞内代謝に関するアッセイ
本発明化合物を、ヒト肝細胞癌細胞株に侵入し、細胞内的に対応のヌクレオシド５’−モノ−、ジ−及びトリホスフェートに変換される能力についても評価する。
【０２７４】
本発明化合物の細胞内代謝研究のために２つの細胞株、すなわちＨｕＨ−７及びＨＢＩ１０Ａを使用する。ＨｕＨ−７はヒト肝細胞癌細胞株であり、ＨＢＩ１０ＡはＨＣＶビシストロンレプリコンを含んでいるＨｕＨ−７細胞に由来するクローン細胞株を指す。ＨｕＨ−７細胞は１０％  ウシ胎児血清を含有する完全ダルベッコ修飾イーグル培地において平板培養し、ＨＢＩ１０Ａ細胞は該細胞が化合物の添加時に８０％集密度であるようにＧ４１８（０．８ｍｇ／ｍＬ）を含有する同一培地において１．５×１０６細胞／６０ｍｍ皿で平板培養する。トリチウム化化合物を２μＭで細胞培地において３または２３時間温置する。細胞を収集し、リン酸緩衝生理食塩液で洗浄し、カウントする。次いで、細胞を７０％  メタノール、２０ｍＭ  ＥＤＴＡ、２０ｍＭ  ＥＧＴＡで抽出し、遠心する。ライゼートを乾燥し、放射標識したヌクレオチドをインラインβ−ＲＡＭシンチレーション検出器（ＩＮ／ＵＳ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）に接続させたＷａｔｅｒｓ  Ｍｉｌｌｅｎｉｕｍシステムでイオン対逆相（Ｃ−１８）ＨＰＬＣを用いて分析する。ＨＰＬＣ移動相は、（ａ）１０ｍＭ  リン酸カリウム＋２ｍＭ  水酸化テトラブチルアンモニウム、及び（ｂ）１０ｍＭ  リン酸カリウム＋２ｍＭ  水酸化テトラブチルアンモニウムを含有する５０％  メタノールから構成する。標準に対する保持時間を比較することによりピークを同定する。活性を１０６個のＨｕＨ−７またはＨＢＩ１０Ａ細胞中で検出したヌクレオチドのピコモルとして表示する。
【０２７５】
本発明のヌクレオシドアリールホスホルアミデートを下記するカウンタースクリーニングにおいて細胞毒性及び抗ウイルス特異性についても評価する。
【０２７６】
Ｃ．カウンタースクリーニング
本発明のヌクレオシドアリールホスホルアミデートのヒトＤＮＡポリメラーゼを阻害する能力を以下のアッセイで調べる。
【０２７７】
ａ．ヒトＤＮＡポリメラーゼα及びβの阻害
（反応条件）
５０μＬの反応容量
（反応緩衝液成分）
２０ｍＭ  トリスＨＣｌ（ｐＨ７．５）
２００μｇ／ｍＬ  ウシ血清アルブミン
１００ｍＭ  ＫＣｌ
２ｍＭ  β−メルカプトエタノール
１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２
１．６μＭ  ｄＡ，ｄＧ，ｄＣ，ｄＴＴＰ
α−３３Ｐ−ｄＡＴＰ
（酵素及びテンプレート）
０．０５ｍｇ／ｍＬ  ギャップ魚精子ＤＮＡテンプレート
０．０１Ｕ／μＬ  ＤＮＡポリメラーゼαまたはβ
（ギャップ魚精子ＤＮＡテンプレートの作成）
５００μＬの活性化魚精子ＤＮＡ（ＵＳＢ  ７００７６）に５μＬの１Ｍ  ＭｇＣｌ２を添加する；
３７℃に加温し、３０μＬの６５Ｕ／μＬ  エキソヌクレアーゼ（ＧｉｂｃｏＢＲＬ  １８０１３−０１１）を添加する；
３７℃で５分間温置する；
６５℃に１０分間加熱することにより反応を停止させる；
５０〜１００μＬのアリコートを２０ｍＭ  トリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）で平衡化したＢｉｏ−ｓｐｉｎ  ６クロマトグラフィーカラム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  ７３２−６００２）に充填する；
１，０００×ｇで４分間遠心することにより溶離させる；
溶離液をプールし、２６０ｎｍでの吸光度を測定して、濃度を調べる。
【０２７８】
ＤＮＡテンプレートを適当な容量の２０ｍＭ  トリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）中に希釈し、酵素を適当な容量の２ｍＭ  β−メルカプトエタノール及び１００ｍＭ  ＫＣｌを含有する２０ｍＭ  トリス−ＨＣｌで希釈する。テンプレート及び酵素を微量遠心管または９６ウェルプレートにピペットで移す。酵素を除くブランク反応及び試験化合物を除く対照反応もそれぞれ酵素希釈緩衝液及び試験化合物溶媒を用いて作成する。上にリストした成分を含む反応緩衝液を用いて反応を開始する。反応物を３７℃で１時間温置する。２０μＬの０．５Ｍ  ＥＤＴＡを添加することにより反応物をクエンチする。５０μＬのクエンチした反応物をＷｈａｔｍａｎ  ＤＥ８１フィルターディスク上にスポットし、風乾する。１ｍＬの洗浄液が＜１００ｃｐｍになるまでフィルターディスクを１５０ｍＬの０．３Ｍ  ギ酸アンモニウム（ｐＨ８）で繰り返し洗浄する。ディスクを１５０ｍＬの無水エタノールで２回、１５０ｍＬの無水エーテルで１回洗浄し、乾燥し、５ｍＬのシンチレーション流体中でカウントする。
【０２７９】
阻害％は以下の式に従って算出する：
阻害％＝［１−（試験反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）／（対照反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）］×１００
【０２８０】
ｂ．ヒトＤＮＡポリメラーゼγの阻害
ヒトＤＮＡポリメラーゼγの阻害の可能性を、２０ｍＭ  トリス（ｐＨ８）、２ｍＭ  β−メルカプトエタノール、５０ｍＭ  ＫＣｌ、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２及び０．１μｇ／μＬ  ＢＳＡを含有する緩衝液中に０．５ｎｇ／μＬの酵素、１０μＭのｄＡＴＰ，ｄＧＴＰ，ｄＣＴＰ及びＴＴＰ、２μＣｉ／反応物の［α−３３Ｐ］−ｄＡＴＰ及び０．４μｇ／μＬの活性化ウシ精子ＤＮＡ（ＵＳ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌから購入）を含む反応物において調べる。反応を３７℃で１時間進行させ、０．５Ｍ  ＥＤＴＡを１４２ｍＭの最終濃度まで添加することによりクエンチする。産物の形成をアニオン交換フィルター結合及びシンチレーションカウントにより定量する。化合物を最高５０μＭで試験する。
【０２８１】
阻害％は以下の式に従って算出する：
阻害％＝［１−（試験反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）／（対照反応でのｃｐｍ−ブランクでのｃｐｍ）］×１００
【０２８２】
本発明のヌクレオシドアリールホスホルアミデートのＨＩＶの感染性及びＨＩＶ蔓延を阻害する能力を以下のアッセイで調べる。
【０２８３】
ｃ．ＨＩＶ感染性アッセイ
アッセイは、低バックグラウンドβ−ガラクトシダーゼ（β−ｇａｌ）発現のために選択したＣＸＣＲ４及びＣＣＲ５の両方を発現するＨｅＬａ  Ｍａｇｉ細胞の変異体を用いて実施する。細胞を４８時間感染させ、結合ＨＩＶ−１  ＬＴＲプロモーターからのβ−ｇａｌ産生を化学発光基質（マサチューセッツ州ベッドフォードに所在のＴｒｏｐｉｘ社のＧａｌａｃｔｏｌｉｇｈｔ  Ｐｌｕｓ）を用いて定量する。阻害剤を１００μＭから出発する２倍連続希釈で滴定する。各濃度での阻害％を対照感染に比べて計算する。
【０２８４】
ｄ．ＨＩＶ蔓延の阻害
本発明化合物のヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の蔓延を阻害する能力を、全文を参照により本明細書中に含まれるとする米国特許５，４１３，９９９（１９９５年５月９日）及びＪ．Ｐ．Ｖａｃｃａら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９１：４０９６−４１００（１９９４）に記載されている方法により調べる。
【０２８５】
本発明のヌクレオシドアリールホスホルアミデートを、以下のアッセイに記載されているＭＴＳ細胞ベースアッセイにおいてサブゲノムＨＣＶレプリコンを含有する培養肝細胞癌（ＨｕＨ−７）細胞に対する細胞毒性についてもスクリーニングする。ＨｕＨ−７細胞株はＨ．Ｎａｋａｂａｙａｓｈｉら，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，４２：３８５８（１９８２）に記載されている。
【０２８６】
ｅ．細胞毒性アッセイ
細胞培養物を適当な培地において３日間温置での懸濁培養物に対しては約１．５×１０５細胞／ｍＬ、３日間温置での接着培養物に対しては５．０×１０４細胞／ｍＬで作成する。９９μＬの細胞培養物を９６ウェルの組織培養処理プレートのウェルに移し、１μＬの１００倍最終濃度のＤＭＳＯ中試験化合物を添加する。プレートを３７℃、５％  ＣＯ２で特定期間温置する。温置した後、２０μＬのＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｏｎｅ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ細胞増殖アッセイ試薬（ＭＴＳ）（Ｐｒｏｍｅｇａ）を各ウェルに添加し、プレートを３７℃、５％  ＣＯ２で最長３時間までの追加期間温置する。プレートを十分に混合するために撹拌し、４９０ｎｍでの吸光度をプレートリーダーを用いて測定する。懸濁培養細胞の標準曲線をＭＴＳ試薬の添加直前に公知の細胞数で作成する。代謝的に活性な細胞はＭＴＳをホルマザンに還元する。ホルマザンは４９０ｎｍで光を吸収する。化合物の存在下での４９０ｎｍでの吸光度を化合物が添加されていない細胞での吸光度と比較する。
【０２８７】
参考文献：Ｃｏｒｙ，Ａ．Ｈ．ら，“Ｕｓｅ  ｏｆ  ａｎ  ａｑｕｅｏｕｓ  ｓｏｌｕｂｌｅ  ｔｅｔｒａｚｏｌｉｕｍ／ｆｏｒｍａｚａｎ  ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  ｃｅｌｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ａｓｓａｙ  ｉｎ  ｃｕｌｔｕｒｅ”，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｏｍｍｕｎ．，３：２０７（１９９１）。
【０２８８】
以下のアッセイを使用して、本発明化合物の他のＲＮＡ依存性ＲＮＡウイルスに対する活性を調べる。
【０２８９】
ａ．ライノウイルスに対する化合物のインビトロ抗ウイルス活性の測定（細胞変性効果阻害アッセイ）
アッセイ条件はＳｉｄｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｈｕｆｆｍａｎ，“Ｕｓｅ  ｏｆ  ｄｉｓｐｏｓａｂｌｅ  ｍｉｃｒｏｔｉｓｓｕｅ  ｃｕｌｔｕｒｅ  ｐｌａｔｅｓ  ｆｏｒ  ａｎｔｉｖｉｒａｌ  ａｎｄ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｓｔｕｄｉｅｓ”，Ａｐｐｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，２２：７９７−８０１（１９７１）の文献に記載されている。
【０２９０】
（ウイルス）
Ｓｉｄｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｈｕｆｆｍａｎ参考文献に記載されているようにライノウイルスタイプ２（ＲＶ−２）菌株ＨＧＰをＫＢ細胞及び培地（０．１％  ＮａＨＣＯ３，抗生物質なし）と一緒に使用する。ＡＴＣＣから入手したウイルスは軽度の急性発熱性上気道疾患を有している男性成人の喉スワブ由来のものである。ライノウイルスタイプ９（ＲＶ−９）菌株２１１及びライノウイルスタイプ１４（ＲＶ−１４）菌株Ｔｏｗもメリーランド州ロックビルに所在のＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手する。ＲＶ−９はヒト喉うがい液に由来し、ＲＶ−１４は上気道疾患を有している若い成人の喉スワブ由来である。これらの両ウイルスを、ヒト子宮頸部類上皮癌細胞であるＨｅＬａ  Ｏｈｉｏ−１細胞（ＶＡの大学のＦｒｅｄ  Ｈａｙｄｅｎ博士）と一緒に使用する。５％  ウシ胎児血清（ＦＢＳ）及び０．１％  ＮａＨＣＯ３を含むＭＥＭ（イーグル最小必須培地）を増殖培地として使用する。
【０２９１】
３つすべてのウイルスタイプの抗ウイルス試験培地は５％  ＦＢＳ、０．１％  ＮａＨＣＯ３、５０μｇ  ゲンタマイシン／ｍＬ及び１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２を含むＭＥＭであった。
【０２９２】
２０００μｇ／ｍＬが本発明の化合物をアッセイするために使用した最高濃度である。試験化合物から約５分後にウイルスをアッセイプレートに添加する。適切な対照も流す。アッセイプレートを３７℃で湿潤空気及び５％  ＣＯ２で温置する。対照細胞において細胞毒性を形態学的変化について顕微鏡を用いてモニターする。ウイルスＣＰＥデータ及び毒性対照データの回帰分析によりＥＤ５０（５０％の有効用量）及びＣＣ５０（５０％の細胞毒性濃度）を得る。選択指数（ＳＩ）は、式ＳＩ＝ＣＣ５０÷ＥＤ５０により算出する。
【０２９３】
ｂ．化合物のデング熱、バンジ及び黄熱に対するインビトロ抗ウイルス活性の測定（ＣＰＥ阻害アッセイ）
アッセイの詳細は上掲したＳｉｄｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｈｕｆｆｍａｎ文献に記載されている。
【０２９４】
（ウイルス）
デング熱ウイルスタイプ２のＮｅｗ  Ｇｕｉｎｅａ菌株は疾病管理センターから入手する。ウイルス（Ｖｅｒｏ）を培養し、抗ウイルス試験（ＭＡ−１０４）を実施するために２系統のアフリカミドリザル腎細胞を使用する。両方の黄熱ウイルス、すなわち感染させたマウス脳から作成した１７Ｄ菌株及び南アフリカの発熱少年の血清から単離したバンジウイルスＨ３３６菌株はＡＴＣＣから入手する。これらのウイルス及びアッセイのためにベロ細胞を使用する。
【０２９５】
（細胞及び培地）
ＭＡ−１０４細胞（メリーランド州ウォーカーズビルに所在のＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ．Ｉｎｃ．）及びベロ細胞（ＡＴＣＣ）を抗生物質を含まずに５％  ＦＢＳ及び０．１％  ＮａＨＣＯ３を含有する培地１９９中で使用する。
【０２９６】
デング熱、黄熱及びバンジウイルスに対するアッセイ培地はＭＥＭ、２％  ＦＢＳ、０．１８％  ＮａＨＣＯ３及び５０μｇ  ゲンタマイシン／ｍＬである。
【０２９７】
本発明化合物の抗ウイルス試験は、Ｓｉｄｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｈｕｆｆｍａｎ文献に従って、上記ライノウイルス試験と同様にして実施する。これらの各ウィルスについて５〜６日後に十分な細胞変性効果（ＣＰＥ）が見られる。
【０２９８】
ｃ．化合物の西ナイルウイルスに対するインビトロ抗ウイルス活性の測定（ＣＰＥ阻害アッセイ）
アッセイの詳細は上掲したＳｉｄｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｈｕｆｆｍａｎ文献に記載されている。西ナイルウイルスのカラスの脳由来のニューヨーク単離物は疾病管理センターから入手する。ベロ細胞を上記したように増殖させ、使用する。試験培地はＭＥＭ、１％  ＦＢＳ、０．１％  ＮａＨＣＯ３及び５０μｇのゲンタマイシン／ｍＬである。
【０２９９】
本発明化合物の抗ウイルス試験は、ライノウイルス活性をアッセイするために使用したものに類似しているＳｉｄｗｅｌｌ  ａｎｄ  Ｈｕｆｆｍａｎの方法に従って実施する。５〜６日後に十分な細胞変性効果（ＣＰＥ）が見られる。
【０３００】
ｄ．化合物のライノ、黄熱、デング熱、バンジ及び西ナイルウイルスに対するインビトロ抗ウイルス活性の測定（ニュートラルレッド摂取アッセイ）
上記ＣＰＥ阻害アッセイを実施した後、“Ｍｉｃｒｏｌｉｔｅｒ  Ａｓｓａｙ  ｆｏｒ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ：Ｍｉｃｒｏｓｐｅｃｔｒｏｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｃｙｔｏｐａｔｈｉｃ  Ｅｆｆｅｃｔ”，Ａｐｐｌ．Ｅｎｖｉｒｏｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．，３１：３５−３８（１９７６）に記載されている追加の細胞変性検出方法を使用する。アッセイプレートを調べるためにモデルＥＬ３０９マイクロプレートリーダー（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．）を使用する。ＥＤ５０及びＣＤ５０は上記したように算出する。
【０３０１】
医薬組成物の実施例
本発明化合物の経口組成物の具体的実施態様として、５０ｍｇの実施例１または実施例２の化合物を十分に微細なラクトースと処方して全量５８０〜５９０ｍｇとし、サイズＯの硬ゼラチンカプセルに充填する。
【０３０２】
本発明を具体的実施態様を参照して記載し、例示してきたが、当業者は本発明の趣旨及び範囲を逸脱することなく各種の変化、修飾及び置換を加え得ることを当業者は認識している。例えば上記した好ましい用量以外の有効用量はＨＣＶ感染の重症度に対する治療対象のヒトの応答性の変化の結果として適用可能であり得る。また、観察される薬理学的応答は選択した特定の活性化合物または医薬用担体が存在しているか否か、使用する製剤のタイプ及び投与方法に従って、応じて変更され得、結果の予想される変化または差は本発明の目的及び実施に従って考えられる。従って、本発明は請求の範囲によってのみ限定され、請求の範囲は合理的に広く解釈されると意図される。
【国際調査報告】
2009526850.tif 000070