(57)【要約】【解決手段】  本開示は、ヒドロキシルアミン及びそのエステル誘導体を含む化合物、及び血管新生及び関連疾患の治療に対する同化合物を使用する方法を提供する。【選択図】      なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
患者における血管新生を阻害する方法であって、
血管新生を阻害するために治療上十分な量のヒドロキシルアミン化合物或いはそのエステル誘導体を前記患者へ投与する工程を有し、前記エステル誘導体は化学式Ｉを有するものであり、
化学式Ｉは以下であって、
【化１】
2009525983.tif 000014
式中、
Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｈ或いはＣ１〜Ｃ３アルキルであり、
Ｒ３及びＲ４は独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、
Ｒ５はＨ、ＯＨ或いはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ６は或いはＣ１〜Ｃ６アルキル、アルケニル、アルキニル、或いは置換アルキル或いはアルケニルであり、
Ｒ７はＣ１〜Ｃ６アルキル、アルケニル、アルキニル、或いは置換アルキル或いはアルケニルであり、
Ｒ１及びＲ２、或いはＲ３及びＲ４が共にシクロアルキルであるか、若しくは両者がシクロアルキルであり、
Ｒ６及びＲ７、或いはＲ５、Ｒ６及びＲ７が共に３〜７員環を有する炭素環或いは複素環を形成するものである、方法。
【請求項２】
請求項１記載の方法において、前記ヒドロキシルアミン化合物は、
【化２】
2009525983.tif 000015
である。
【請求項３】
請求項１記載の方法において、前記ヒドロキシルアミン化合物は、
【化３】
2009525983.tif 000016
である。
【請求項４】
請求項１記載の方法において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４はＣ１〜Ｃ３アルキルである。
【請求項５】
請求項１記載の方法において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４はエチルである。
【請求項６】
請求項１記載の方法において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４はメチルである。
【請求項７】
請求項６記載の方法において、
Ｒ５はＨ或いはメチルであり、
Ｒ６はベンジルオキシ或いはＣ１〜Ｃ６アルコキシで置換されたメチルであり、
Ｒ７はメチルである。
【請求項８】
請求項６記載の方法において、
Ｒ５はＨ或いはメチルであり、
Ｒ６及びＲ７は共にシクロプロピル基である。
【請求項９】
請求項６記載の方法において、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は共にフラニル基である。
【請求項１０】
請求項６記載の方法において、
Ｒ５はＨであり、
Ｒ６及びＲ７は共にテトラヒドロフラニル基である。
【請求項１１】
請求項６記載の方法において、
Ｒ５はＨであり、
Ｒ６及びＲ７は共にシクロプロピル基である。
【請求項１２】
請求項１記載の方法において、前記患者は哺乳類である。
【請求項１３】
請求項１の方法において、前記患者はヒトである。
【請求項１４】
請求項１記載の方法であってさらに、抗酸化剤或いは還元剤の１つ若しくは両方を投与する工程を有するものである。
【請求項１５】
請求項１記載の方法であってさらに、抗腫瘍剤を投与する工程を有するものである。
【請求項１６】
請求項１記載の方法であってさらに、付加的な抗血管新生剤を投与する工程を有するものである。
【請求項１７】
請求項１６記載の方法において、前記抗血管新生剤は、抗酸化剤、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ｂＦＧＦアンタゴニスト、ＮＯＳアンタゴニスト、或いはそれらの組み合わせである。
【請求項１８】
血管新生に関連した病状を患った患者を治療する方法であって、
病的血管新生を阻害するために治療上十分な量のヒドロキシルアミン化合物或いは化学式Ｉを有するそれらの誘導体を前記患者へ投与する工程を有し、
化学式Ｉは以下であり、
【化４】
2009525983.tif 000017
式中、
Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｈ或いはＣ１〜Ｃ３アルキルであり、
Ｒ３及びＲ４は独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、或いはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ６は或いはＣ１〜Ｃ６アルキル、アルケニル、アルキニル、若しくは置換アルキル或いはアルケニルであり、
Ｒ７は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アルケニル、アルキニル、若しくは置換アルキル或いはアルケニルであり、
Ｒ１及びＲ２、或いはＲ３及びＲ４は共に、若しくはいずれもシクロアルキルであり、
Ｒ６及びＲ７、或いはＲ５、Ｒ６及びＲ７は共に、３〜７員環を有する炭素環或いは複素環を形成するものである、方法。
【請求項１９】
請求項１８記載の方法において、前記ヒドロキシルアミン化合物は、
【化５】
2009525983.tif 000018
である。
【請求項２０】
請求項１８記載の方法において、前記ヒドロキシルアミン化合物は、
【化６】
2009525983.tif 000019
である。
【請求項２１】
請求項１記載の方法において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４はＣ１〜Ｃ３アルキルである。
【請求項２２】
請求項１記載の方法において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４はエチルである。
【請求項２３】
請求項１記載の方法において、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４はメチルである。
【請求項２４】
請求項２３記載の方法において、
Ｒ５はＨ或いはメチルであり、
Ｒ６はベンジルオキシ或いはＣ１〜Ｃ６アルコキシで置換されたメチルであり、
Ｒ７はメチルである。
【請求項２５】
請求項２３記載の方法において、
Ｒ５はＨ或いはメチルであり、
Ｒ６及びＲ７は共にシクロプロピル基である。
【請求項２６】
請求項２３記載の方法において、
Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は共にフラニル基である。
【請求項２７】
請求項２３記載の方法において、
Ｒ５はＨであり、
Ｒ６及びＲ７は共にテトラヒドロフラニル基である。
【請求項２８】
請求項２３記載の方法において、
Ｒ５はＨであり、
Ｒ６及びＲ７は共にシクロプロピル基である。
【請求項２９】
請求項１８記載の方法において、前記患者は哺乳類である。
【請求項３０】
請求項１８記載の方法において、前記患者はヒトである。
【請求項３１】
請求項１８記載の方法において、前記病状は腫瘍によって特徴付けされるものである。
【請求項３２】
請求項３１記載の方法において、前記病状は癌である。
【請求項３３】
請求項３２記載の方法において、前記病状は、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨肉腫、軟骨腫、血管肉腫、内皮肉腫（ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、リンパ管肉腫、リンパ管内皮肉腫（ｌｙｍｐｈａｎｇｉｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉｏｓａｒｃｏｍａ）、滑膜腫、中皮腫、ユーイング腫瘍、平滑筋肉腫、横紋筋肉腫、結腸癌、膵臓癌、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、扁平上皮細胞癌、基底細胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳頭癌、乳頭状腺癌、嚢胞腺癌、髄様癌、気管支原性肺癌、腎細胞癌、肝細胞癌、胆管癌、絨毛癌、セミノーマ、胚性癌腫、ウィルムス腫瘍、子宮頸癌、精巣腫瘍、肺癌、小細胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、グリオーマ、髄芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、血管芽腫、聴神経腫、希突起神経膠腫、髄膜炎、メラノーマ、神経芽細胞腫、網膜芽細胞腫、聴神経腫、神経線維腫、トラコーマ、或いは化膿性肉芽腫である。
【請求項３４】
請求項１８記載の方法であって、この方法は、さらに、
抗酸化剤或いは還元剤を投与する工程を有するものである。
【請求項３５】
請求項３１記載の方法であって、この方法は、さらに、
抗腫瘍剤を投与する工程を有するものである。
【請求項３６】
請求項１８記載の方法であって、この方法は、さらに、
付加的な抗血管新生剤を投与する工程を有するものである。
【請求項３７】
請求項３６記載の方法において、前記付加的な抗血管新生剤は、抗酸化剤、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ｂＦＧＦアンタゴニスト、ＮＯＳアンタゴニスト、或いはそれらの組み合わせである。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連文献の相互参照
本明細書は、２００６年２月２日付け出願の米国仮出願第６０／７６４，４３２号に対して優先権を主張した２００７年１月３１日付け出願の米国特許第１１／６６９，８８５号に対して優先権を主張するものであり、これらの開示はこの参照によってその全体が本明細書に組み込まれるものである。
【背景技術】
【０００２】
様々な特許及び他の刊行物は本明細書に参照されている。これら特許及び刊行物のそれぞれの内容は、この参照によってその全体が本明細書に組み込まれるものである。同一出願人による同時係属出願米国公開公報第２００４／０００２４６１号、第２００５／０１３０９０６号及び第２００５／０１３１０２５号の全体の内容は、この参照によって本明細書に組み込まれるものである。
【０００３】
血管新生は、新しい血管発生及び形成の複雑な過程である。血管新生は、特異的なシグナルに対する反応で起こり、血管新生増殖シグナル（シグナル群）に反応した血管内皮細胞による基底膜の浸潤、細胞外マトリックスの分解及びシグナル（シグナル群）源への血管内皮細胞の遊走、及びそれに続く増殖及び毛細管の形成によって特徴付けされる複雑な過程に関連するものである。新たに形成された毛細血管を通る血流は、内皮細胞が既存の毛細血管に接触し連結した後開始される。
【０００４】
血管新生は、高度に調節されており、様々な血管新生刺激因子及び阻害因子の間のバランスに関連している。正常、成人では新たな血管形成はあまり起こらず、これは血管新生の内因性刺激因子及び阻害因子間の本来のバランスが阻害因子に有意に偏っていることを意味している（Ｒａｓｔｉｎｅｊａｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｃｅｌｌ  ５６、３４５−３５５）。しかしながら、創傷治癒、器官再生、胚発生及び女性の生殖過程など正常生理的条件下で血管新生が生じるいくつかの事例があるが、血管新生は厳密に制御されており、空間的に時間的に区切られている。一方、特徴的な固形腫瘍増殖などの病的血管新生の条件下では、これらの調節制御は損なわれる。
【０００５】
調節制御が損なわれ、未制御血管新生が病的になった場合、多くの腫瘍性及び非腫瘍性疾患の持続的進行を導くことができる。多くの重篤な疾患は、異常血管新生によって支配され、固形腫瘍増殖及び転移、関節炎、いくつかのタイプの眼疾患、及び乾癬を含むものである。例えば、Ｍｏｓｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｔｅｃｈ．９、６３０−６３４、Ｆｏｌｋｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３３３、１７５７−１７６３、Ａｕｅｒｂａｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，１９８５，Ｊ．Ｍｉｃｒｏｖａｓｃ．Ｒｅｓ．２９、４０１−４１１、Ｆｏｌｋｍａｎ，１９８５，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，ｅｄｓ．Ｋｌｅｉｎ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｈｏｕｓｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ｐｐ．１７５−２０３、Ｐａｔｚ，１９８２，Ａｍ．Ｊ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．９４、７１５−７４３、及びＦｏｌｋｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２１、７１９−７２５による総説を参照。健康な組織と同様に、腫瘍は根底の細胞を維持するために血管を必要とする。多くの病的条件において、血管新生の過程はさらに病状に寄与している可能性がある。実際に、一部の研究者は、固形腫瘍の増殖は血管新生に依存していると示唆している（Ｆｏｌｋｍａｎ  ａｎｄ  Ｋｌａｇｓｂｒｕｎ，１９８７，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３５、４４２−４４７）。
【０００６】
スーパーオキシド及び過酸化水素などの活性酸素種（ｒｅａｃｔｉｖｅ  ｏｘｙｇｅｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ：ＲＯＳ）は、恐らく誘導性一酸化窒素合成のアップレギュレーション及び内因性一酸化窒素の産生増加を介して、インビボで血管新生を誘導すると報告されていた（Ｐｏｌｙｔａｒｃｈｏｕ&Ｐａｐａｄｉｍｉｔｒｉｏｕ，２００５，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５１０、３１−３８．）。ＲＯＳはさらに、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）放出を刺激し、ＶＥＧＦに対するＭＡＰキナーゼ（マイトジェン活性化プロテインキナーゼ）シグナル伝達の活性化を仲介するとも報告されていた（Ｋｕｒｏｋｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９８、１６６７−１６７５、Ｃｈｏ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２８０、Ｈ２３５７−Ｈ２３６３．）。
【０００７】
特定の抗酸化剤はさらに、例えば、スーパーオキシドジスムターゼ及び窒素酸化物ＴＥＭＰＯＬ（ＴＥＭＰＯＬの還元産物である、ヒドロキシルアミンＴＥＭＰＯＬ−Ｈではない）などの血管新生阻害活性を有するとも示されていた。他の抗血管新生因子は、ＶＥＧＦアンタゴニスト、ｂＦＧＦアンタゴニスト、或いはＮω−ニトロ−Ｌ−アルギニンメチルエステル（Ｌ−ＮＡＭＥ）及びデキサメタゾンなどの酸化窒素合成酵素（ＮＯＳ）アンタゴニストを含む。
【０００８】
ＴＥＭＰＯＬなどの窒素酸化物は、それらのラジカルスカベンジャー特性、及び酸化ダメージ及び炎症の様々な動物モデル抗炎症効果の発揮のおかげで、非常に注目されていた。Ｎｉｌｓｓｏｎらは国際特許第ＷＯ８８／０５０４４号において、窒素酸化物及びそれらの対応するヒドロキシルアミンは、推測するに抗酸化効果によって、虚血性細胞障害の予防及び治療に有用であると開示した。Ｐａｏｌｉｎｉら（米国特許第５，９８１，５４８号）は、活性酸素から生じる病状の治療における、及び食材及び化粧品添加物としてのＮ−ヒドロキシルピペリジン化合物及びそれらの潜在的な一般利用を開示した。Ｈｓｉａら（米国特許第６，４５８，７５８号、第５，８４０，７０１号、第５，８２４，７８１号、第５，８１７，６３２号、第５，８０７，８３１号、第５，８０４，５６１号、第５，７６７，０８９号、第５，７４１，８９３号、第５，７２５，８３９号及び第５，５９１，７１０号）は、血液及び血液成分におけるフリーラジカル毒性を軽減するための、様々な生体適合性高分子との組み合わせでの安定性窒素酸化物及びヒドロキシルアミン（例えば、ＴＥＭＰＯＬ及びそのヒドロキシルアミン対応物であるＴＥＭＰＯＬ−Ｈ）の使用を開示した。Ｈａｈｎら（１９９８，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｒａｄｉａｔ．Ｏｎｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｈｙｓｉｃｓ  ４２、８３９−８４２、２０００，Ｆｒｅｅ  Ｒａｄ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２８、９５３−９５８）は、インビボ放射線防護、及び安定性フリーラジカル窒素酸化物及び特定のヒドロキシルアミン対応物の血圧に対する影響を報告した。
【０００９】
それらは相対的な毒性が欠如しているために、ヒドロキシルアミンは治療薬として窒素化合物より好ましい。公開米国特許第２００４／０００２４６１号、第２００５／０１３０９０６号及び第２００５／０１３１０２５号においてＭａｔｉｅｒ及びＰａｔｉｌは、ヒドロキシルアミン及び関連化合物、及び酸化障害或いは炎症が関与した様々な眼条件の治療における前記化合物の使用について開示している。そのような化合物は、強い抗炎症及び抗酸化活性、更に一部の事例において眼球透過性などを含む、多数の有利な性質を有している。しかしながらいくつかの窒素酸化物、例えばＴＥＭＰＯＬなどは、ある程度の抗血管新生活性を示していた一方、ヒドロキシルアミンはこれまで抗血管新生活性を有していることは全く報告されていない。
【発明の開示】
【発明の効果】
【００１０】
本開示では、病的血管新生を阻害するのに治療上十分な量におけるヒドロキシルアミン化合物或いはそのエステル誘導体を患者へ投与する工程によって、前記患者における病的血管新生を阻害する方法について詳しく述べる。前記ヒドロキシルアミンのエステル誘導体は、化学式Ｉであり、
【００１１】
【化７】
2009525983.tif 000002
【００１２】
式中、
Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｈ或いはＣ１からＣ３アルキルであり、Ｒ３及びＲ４は独立して、Ｃ１からＣ３アルキルであり、Ｒ１及びＲ２は或いはＲ３及びＲ４は共に、若しくは両者はシクロアルキルであり、Ｒ５はＨ、ＯＨ或いはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｒ６或いはＣ１〜Ｃ６アルキル、アルケニル、アルキニル、或いは置換アルキル或いはアルケニルであり、Ｒ７はＣ１〜Ｃ６アルキル、アルケニル、アルキニル、或いは置換アルキル或いはアルケニルであり、Ｒ６及びＲ７、或いはＲ５、Ｒ６及びＲ７は共に、環内に３〜７個の原子を有する炭素環或いは複素環を形成するものであるる。
【００１３】
さらに、本開示は、病的血管新生を阻害するのに治療上十分な量でヒドロキシルアミン化合物或いはそのエステル誘導体を患者へ投与する工程によって、病的血管新生が関与する病状を持つ患者を治療する方法を提供する。前記ヒドロキシルアミンのエステル誘導体は、化学式Ｉを有する。一部の実施形態において、これらの方法はさらに、抗酸化剤、還元剤、付加的抗血管新生剤、或いは抗悪性腫瘍薬などの付加的薬剤を同時投与する工程を含む。
【００１４】
本発明の他の態様によると、前述のヒドロキシルアミン或いはエステル誘導体を有する薬学的組成物は、血管新生が関与する病状の治療を提供する。
【００１５】
本発明の他の特徴及び利点は、以下の図面、詳細な説明、及び実施例を参照することによって理解されるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
本発明は、病的血管新生が基礎をなす原因因子である多くの疾患及び疾病の治療或いは予防のための方法を提供する。前記方法は、薬学的に許容可能な担体或いは希釈剤、及び１若しくはそれ以上の血管新生関連疾患或いは症状の症候を予防する、それらの発生を遅延させる、若しくは軽減する薬学的に十分な量のヒドロキシルアミン化合物或いはそれのエステル誘導体を有する組成物の投与を有する。
【００１７】
本明細書で用いられる「血管新生」という用語は、組織或いは器官への新しい血管の発生を意味する。正常生理的条件下において、ヒト或いは動物では非常に特異的な制限条件においてのみ血管新生が起こる。例えば、血管新生は正常、創傷治癒、胎児及び胚発生、及び黄体、子宮内膜及び胎盤の形成において観察される。「内皮」という用語は、本明細書では、漿液腔、リンパ管及び血管に並ぶ扁平細胞の薄い層として定義される。これらの細胞は本明細書において「内皮細胞」として定義される。「内皮阻害活性」という用語は、一般に血管新生を阻害する分子の能力を意味する。様々な段階での内皮細胞増殖の阻害も、血管新生の阻害を生じる（Ａｌｂｏ，ｅｔ  ａｌ．，２００４，Ｃｕｒｒ  Ｐｈａｒｍ  Ｄｅｓ．１０（１）、２７−３７）。
【００１８】
多くの疾患或いは有害な状態は、血管新生に関連している。そのような疾患或いは有害な状態の例としては、これに限定されるものではないが（１）乳癌、頭部の癌、直腸癌、胃腸の癌、肺癌、気管支癌、膵臓癌、甲状腺癌、精巣癌或いは卵巣癌、白血病（例えば急性骨髄性白血病）、副鼻腔ナチュラルキラー／Ｔ細胞リンパ腫、悪性メラノーマ、腺様嚢胞癌、血管肉腫、低分化巨細胞性リンパ腫、子宮内膜癌腫、或いは前立腺癌腫などの腫瘍性疾患、（２）例えば乾癬、子宮内膜症、アテローム性動脈硬化、全身性エリテマトーデス、及び前立腺肥大及び脂肪腫などの良性成長疾患などの特定の成長因子に反応して過剰産生した非癌性（すなわち非腫瘍性）細胞などの過剰増殖疾患、（３）単純ヘルペス感染、帯状疱疹感染、原虫感染及びバルトネラ症（南アメリカで発見された細菌感染）、（４）リウマチ性関節炎及び変形性関節炎を含む関節炎、（５）潰瘍性大腸炎及びクローン病を含む慢性炎症性疾患、及び（６）小児疾患、血管腫を含む他の症状、さらにはオスラー・ウェーバー・ランデュ病、或いは遺伝性出血性毛細血管拡張症などの遺伝病、を含む。
【００１９】
本発明者らは、血管新生、及び血管新生に関連した疾患及び疾病はＴＥＭＰＯＬ−Ｈ（ＴＰＨ、更には加水分解性でありヒドロキシルアミン化合物を形成するそのような化合物のエステル誘導体）などのヒドロキシルアミン化合物の投与を介して回復させることができることを決定した。この決定は、実施例において説明されるプロトコールである血管新生の鶏胚漿尿膜（ｃｈｉｃｋ  ｃｈｏｒｉｏａｌｌａｎｔｏｉｃ  ｍｅｍｂｒａｎｅ：ＣＡＭ）モデルの使用を介して一部なされていた。
【００２０】
窒素酸化物ＴＥＭＰＯＬは過酸化水素誘導性血管新生を阻害することが一部の例において示されている一方、ヒドロキシルアミンの抗血管新生活性は本発明以前には示されていなかった。更に、今までに窒素酸化物或いはヒドロキシルアミンがＶＥＧＦ或いはｂＦＧＦ成長因子誘導性血管新生を阻止できると示唆されたものはなかった。ＴＥＭＰＯＬなどの窒素酸化物のため、ヒドロキシルアミンのそのような活性は予想されず、ＴＥＭＰＯＬ−Ｈなどのそれらのヒドロキシルアミン対応物は、非常に異なる分子構造形、物理的定数及び化学的特徴を所有する。例えば、マウスＶ７９細胞のＴＥＭＰＯＬ−仲介性放射線防護は濃度依存性であるが、ヒドロキシルアミンであるＴＥＭＰＯＬ−Ｈは放射線防護を提供しなかったと報告されている（Ｍｉｔｃｈｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｒａｄｉａｔｉｏｎ，Ｒａｄｉｃａｌｓ，ａｎｄ  Ｉｍａｇｅｓ、Ａｎｎａｌｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  ８９９、２８−４３）。さらに、ＴＥＭＰＯＬ−ＨではなくＴＥＭＰＯＬは、インビトロでの水晶体内皮細胞へのＸ線放射線障害を阻止した（Ｓａｓａｋｉ，ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  Ｖｉｓ  Ｓｃｉ．３９（３）、５４４−５２）。同様に、ＴＥＭＰＯＬはマウスにおける亜セレン酸誘導性白内障を阻止するのに有効ではなかったが、ＴＥＭＰＯＬ−Ｈはそのモデルで有効であったと見いだされた。さらに、ＴＥＭＰＯＬなどの窒素酸化物は毒性を有しており、しばしば抗酸化物の代わりに自動酸化促進物質として作用すると見いだされていた（Ｇｌｅｂｓｋａ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．３５、３１０−３１６）。これら及び他の理由により、Ｈ２Ｏ２誘導性血管新生に対するＴＥＭＰＯＬの抗血管新生効果は、ヒドロキシルアミンがそのような活性を有すると予想するものではない。加えて、上述したように、ＴＥＭＰＯＬ或いはヒドロキシルアミンによる増殖因子誘導性血管新生の阻止に対する前例は存在しない。
【００２１】
本発明における使用に適切なヒドロキシルアミン化合物の種類の好ましい実施例としては、ＴＥＭＰＯＬ−Ｈ（窒素酸化物４−ヒドロキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−イルオキシのヒドロキシルアミン還元型であるＴＰＨ）、ＴＥＭＰＯ−Ｈ（窒素化合物２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−イルオキシのヒドロキシルアミン還元型）、及びＯＸＡＮＯ（２−エチル−２，４，４−トリメチルオキサゾリジン−３−イルオキシ）の還元型であるＯＸＡＮＯ−Ｈ（２−エチル−２，４，４−トリメチル−オキサゾリジン−３−オール）である。本発明における使用に適切な他のヒドロキシルアミン化合物は、これに限定されるものではないが、Ｈａｈｎら（１９９８，Ｓｕｐｒａ、２０００，Ｓｕｐｒａ）、Ｓａｍｕｎｉら（２００１年，ｓｕｐｒａ）、及びＰａｏｌｉｎｉらによる米国特許第５，９８１，５４８号（特定のＮ−ヒドロキシルピペリジンエステル及び文脈における抗酸化剤としてのそれらの使用を開示している）、Ｇｕｐｔａらによる米国特許第４，４０４，３０２号（プラスティック処方における光安定剤としての特定のＮ−ヒドロキシルアミンの使用を開示している）、Ｂｅｈｒｅｎｓらによる米国特許第４，６９１，０１５号（ヒンダードアミン由来ヒドロキシルアミン及びポリオレフィンの安定化に対する特定のそれらの使用を開示している）、Ｈｓｉａらによるいくつかの前述した米国特許に開示されていたヒドロキシルアミン、及びＭｉｔｃｈｅｌｌらによる米国特許第５，４６２，９４６号及び第６，６０５，６１９号に開示された窒素酸化物のヒドロキシルアミン対応物、によって開示されているものであり、すなわち（１）化学式Ｒ３−Ｎ（Ｒ４）（Ｒ５）の化合物であって、式中、Ｒ３は−ＯＨであり、Ｒ４及びＲ５は窒素原子と共に組み合わせて複素環基を形成する、或いはＲ４及びＲ５はそれら自身で置換或いは非置換環状或いは複素環基を有する、化合物、（２）化学式Ｒ３−Ｎ（Ｒ４）（Ｒ５）の金属非依存性ヒドロキシルアミンであって、Ｒ３は−ＯＨであり、Ｒ４及びＲ５は、結合されて、窒素原子と共に５−或いは６−員複素環基を形成し、前記窒素原子に加えて酸素、窒素及び硫黄からなる群から選択される１若しくはそれ以上の複素環を有するものである、若しくは、Ｒ４及びＲ５は独立して置換或いは非置換５−或いは６−員環状基、若しくは酸素、窒素及び硫黄からなる群から選択される１若しくはそれ以上のヘテロ原子を有する置換或いは非置換５−或いは６−員複素環基である、化合物、若しくは（３）以下の化合式のオキサゾリジン化合物であって、
【００２２】
【化８】
2009525983.tif 000003
【００２３】
式中、Ｒ１は−ＣＨ３であり、Ｒ２は−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７、−Ｃ４Ｈ９、−Ｃ５Ｈ１１、−Ｃ６Ｈ１３、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２、−ＣＨＣＨ３Ｃ２Ｈ５或いは−（ＣＨ２）７ＣＨ３であり、Ｒ３は−ＯＨであるか、若しくはＲ１及びＲ２は共に、スピロシクロペンタン、スピロシクロヘキサン、スピロシクロヘプタン、スピロシクロオクタン、５−コレスタン或いはノルボルナンを形成するものである、化合物、及び上記化合物のいずれかの薬学的に許容可能な塩類である。知られている限りにおいて、上述した化合物は今まで血管新生を阻害するために使用されていない。
【００２４】
本発明における使用に適切なヒドロキシルアミンのエステル誘導体は、化学式Ｉの化合物、或いはそれらの薬学的に許容可能な塩類を有し、米国公開公報第２００４／０００３５６１号に詳細それらの例が記載されており、
【００２５】
【化９】
2009525983.tif 000004
【００２６】
式中、
Ｒ１及びＲ２は独立して、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであり、
Ｒ３及びＲ４は独立して、Ｃ１〜Ｃ３アルキルであるか、若しくは、
Ｒ１及びＲ２、或いはＲ３及びＲ４は共に、若しくは両者がシクロアルキルであり、
Ｒ５は、Ｈ、ＯＨ、或いはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ６は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アルケニル、アルキニル、或いは置換アルキル或いはアルケニルであり、
Ｒ７は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アルケニル、アルキニル、置換アルキル、アルケニル、シクロアルキル、或いは複素環であり、
或いは、Ｒ６及びＲ７、或いはＲ５、Ｒ６及びＲ７は共に、環内に３〜７原子を有する炭素環或いは複素環を形成するものである。
【００２７】
本発明の方法はさらに、薬学的に許容可能な担体或いは希釈剤、及び溶解性修飾部位と結合したＮ−ヒドロキシピペリジン部分を持つヒドロキシルアミン化合物から成る組成物も利用し、前記化合物は、２５℃の水において重量で少なくとも約０．２５％の溶解性、及び２５℃で少なくとも訳の水／ｎ−オクタノール分配係数を持つものである。前記組成物は、眼などで見いだされる生物学的組織で見られる条件下で、前記化合物から切断可能なＮ−ヒドロキシピペリジン部分を持つ。前記Ｎ−ヒドロキシピペリジン部分は、酵素的に切断される。前記組成物はさらに、Ｎ−ヒドロキシルピペリジン部分が１−オキシル−４−ヒドロキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジルであるような状態にも存在する。
【００２８】
本発明の意味ではＣ１〜Ｃｎアルキル、アルケニル或いはアルキニルという用語は、１からｎ炭素原子をその中に有するヒドロカルビル基を意味し、ここにおいてｎは１〜約２０、好ましくは１〜約１０、より好ましくは１〜約６、最も好ましくは１〜約３の整数である。従って、この用語はメチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、二級（ｓｅｃ）−ブチル、イソ−ブチル、三級（ｔｅｒｔ）−ブチル、及びペンチル、ヘキシル及びそれらと同等物の様々な異性体型を含む。同様に、この用語は、エチニル、エテニル、エチニル、プロペニル、プロピニル、及びｎ炭素原子までの同様な分岐及び非分岐不飽和炭化水素基を含む。文脈において認められるように、そのような基は１若しくはそれ以上のヒドロキシ、アルコキシ、アルキルチオ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、アリールオキシ、アリールアミノ、ベンジルオキシ、ベンジルアミノ、複素環、或いはＹＣＯ−Ｚ（ここにおいてＹはＯ、Ｎ或いはＳであり、Ｚはアルキル、シクロアルキル、複素環或いはアリール置換基である）を有するように官能基化される。
【００２９】
炭素環という用語は環状構造環を定義し、前記環を形成している全ての原子は炭素である。これらの例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロへプチルなどである。シクロプロピルは、１つの好ましい種である。複素環は、前記環の少なくとも１つの原子が炭素ではない環状構造を定義する。この広範囲の分類の例としては、フラン、ジヒドロフラン、テトラヒドロフラン、ピラン、オキサゾール、オキサゾリン、オキサゾリジン、イミダゾール、及び特に前記環内に酸素原子を有する他のものを含む。前記環内に少なくとも１つの酸素或いは窒素原子を有する５、６及び７員環は好ましい複素環である。フラニル及びテトラヒドロフラニル種は、好ましいものの中に含まれる。
【００３０】
Ｒ１からＲ４のそれぞれが、Ｃ１からＣ３アルキルの低級アルキルであることは特定の実施形態には好ましい。好ましくは、これら基の全ては、合成において便利であり、これらの位置にそのような置換基を持つ部位の有用性が既知であるため、メチルである。しかしながら、他の置換基も同様に使用される。
【００３１】
特定の実施形態において、Ｒ６が少なくともＣ１からＣ６アルコキシ或いはベンジルオキシ基で置換されているＣ１からＣ６アルキルである化合物は使用される。エトキシ或いはベンジルオキシ置換基を持つこれらの化合物は好ましい。好ましい化合物としては、Ｒ１からＲ４のそれぞれはメチルであり、Ｒ５はＨ或いはメチルであり、Ｒ６はベンジルオキシ或いはＣ１からＣ５アルコキシで置換されたメチルであり、Ｒ７はメチルであって、ここにおいてＲ６及びＲ７はシクロプロピル基を形成する化合物、更に同様に、Ｒ１からＲ４のそれぞれはメチルであり、Ｒ５はメチルであり、Ｒ６はエトキシ或いはベンジルオキシメチルであり、Ｒ７はメチルである化合物である。付加的に好ましい化合物は、Ｒ１からＲ４のそれぞれはメチルであり、Ｒ５はメチルであり、Ｒ６はヒドロキシメチルであり、Ｒ７はメチルである化合物である。
【００３２】
他の有用な化合物は、Ｒ１からＲ４のそれぞれはメチルであり、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７はフラニル基を形成する化合物、若しくはＲ６及びＲ７はテトラヒドロフラニル基を形成する化合物である。Ｒ１からＲ４はメチルであり、Ｒ５はＨであり、Ｒ６及びＲ７はシクロプロピル環を形成する前記化合物は、更に好ましい。本発明の方法において有用な化合物の例としては、これに限定されるものではないが、米国公開公報第２００４／０００２４６１Ａ１に開示された化合物を含み、これは例えば、
１−オキシル−４−（３’−エトキシ−２’，２’−ジメチル）プロパンカルボニルオキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン、１−ヒドロキシ−４−（３’−エトキシ−２’，２’−ジメチル）プロパンカルボニルオキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン塩酸塩、１−オキシ−４−シクロプロパンカルボニルオキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン、１−ヒドロキシ−４−シクロプロパンカルボニルオキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン塩酸塩、１−オキシル−４−（３’−ベンジルオキシ−２’，２’−ジメチル）プロパンカルボニルオキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン、１−ヒドロキシ−４−（３’−ベンジルオキシ−２’，２’−ジメチル）プロパンカルボニルオキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン塩酸塩、１−ヒドロキシ−４−（３’−ヒドロキシ−２’，２’−ジメチル）プロパンカルボニルオキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン塩酸塩、１−オキシル−４−（１−メチル−シクロプロパン）カルボニルオキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン、１−ヒドロキシ−４−（１−メチル−シクロプロパン）カルボニルオキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン塩酸塩、１−オキシル−４−（２−フラン）カルボニルオキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン、１−ヒドロキシ−４−（２’−フラン）カルボニルオキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン塩酸塩、１−オキシル−４−（３’−テトラヒドロフラン）カルボニルオキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン、１−ヒドロキシ−４−（３’−テトラヒドロフラン）カルボニルオキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン塩酸塩などである。化合物Ｉとして本明細書で参照されている、１−ヒドロキシ−４−シクロプロパンカルボニルオキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン塩酸塩は、特に好ましい。
【００３３】
理論に縛られることなく、出願者らは、化合物Ｉ（化学式１の化合物であって、ここにおいてＲ１、Ｒ２、Ｒ３及びＲ４はメチルであり、Ｒ５はＨであり、Ｒ６及びＲ７はまとめてシクロプロパン環を形成するものである）及び化学式Ｉの他の化合物がそれらの抗血管新生及び他の治療上有効性を２つの方法で発揮すると考えられていると信じている。第一に、前記エステル化合物は、ｉｎ  ｓｉｔｕで加水分解され、治療上活性を発揮するヒドロキシルアミン成分を形成する。第二に、前記エステル型化合物それ自身は、抗酸化活性を有しており、従って抗血管新生活性を所有し、それにより前記化合物を有する薬学的処方の治療上有効性を支持するものである。
【００３４】
化学式Ｉの前記化合物の活性に対する第一の根拠、すなわち、切断しヒドロキシルアミン成分を遊離することと関連して、多数のエステラーゼは、体の様々な組織及び臓器、特に眼組織、特に角膜において存在することが知られている。本発明のエステルを切断する特異的なエステラーゼ（群）は、本発明で実施するために同定される必要はない。エステル群の切断は素早く生じ、ウサギの眼へ前記化合物を投与することが基本的には全てである。これは、局所投薬後に検査した全時間（３０、６０、９０及び１２０分）で水性体液におけるＴＥＭＰＯＬ−Ｈの存在によって示されるものである。対照的に、前記エステル群は、そのようなエステラーゼが存在しない場合、水性溶液において安定である。前記エステル群の切断はさらに、様々な動物種の血漿においても示されていた。実施例５に記載されたように、ラット、ウサギ、イヌ及びヒト血漿におけるＴＥＭＰＯＬ−Ｈ（ＴＰＨ）のエステル誘導体のインビトロ半減期を測定した。前記誘導体の消失は、ＴＥＭＰＯＬ−Ｈの形成によってモルベースで定量的に説明された。
【００３５】
本発明の方法に従った組成物は、処方され、標的組織に抗血管新生効果を発揮するのに有効な投薬量を適用して投与された。ヒドロキシルアミン或いは誘導体の諒は、処方における容積で約０．１重量％から約２５重量％の範囲、或いは重量で対応する量であり得る。いくつかの実施形態において、活性薬剤濃度は０．２５％から約２５％であることが好ましい。前記ヒドロキシルアミン成分の濃度は、好ましくは組織及び液体において約０．１μＭから約１０ｍＭの範囲となるであろう。いくつかの実施形態において、前記範囲は１μＭから５μＭであり、他の実施形態においては、前記範囲は約１０μＭから２．５ｍＭである。他の実施形態において、前記範囲は約５０μＭから１ｍＭである。最も好ましいヒドロキシルアミン濃度の範囲は、１から１００μＭであろう。処方内に或いは別々に投与される場合でも還元剤を含む実施形態において、前記還元剤の濃度は、組織及び液体において１μＭから５ｍＭ、好ましくは１０μＭから２ｍＭの範囲であろう。前記組成物の成分の濃度は、標準的な薬物動態及び希釈計算によって投与経路に対して適切に調節され、そのような局所的濃度を達成する。
【００３６】
本発明の方法に従って利用される組成物は、１以上のヒドロキシルアミン化合物を含む。いくつかの実施形態において、２若しくはそれ以上のヒドロキシルアミンは同時に投与される。他の実施形態において、それらは連続して投与される。
【００３７】
更に、本発明の方法は、併用療法を含む。本発明のいくつかの実施形態において、ヒドロキシルアミン或いは誘導体は、本分野では既知であり病的血管新生に関連した疾患或いは疾病を治療するのに有用な別の化合物と共に投与される。本分野で既知である前記他の化合物（群）は、ヒドロキシルアミン化合物と同時に投与される、若しくは連続に投与される。
【００３８】
例えば、ヒドロキシルアミン化合物は、１若しくはそれ以上の付加的抗血管新生剤との組み合わせで投与される。一般的に、抗血管新生剤は、血管新生因子のあらゆる既知阻害剤或いはダウンレギュレーター、若しくはこれに限定されるものではないが、軟骨由来因子、血管新生抑制ステロイド、血管新生抑制ビタミンＤ誘導体、アンジオスタチン、エンドスタチン及びベロスタチン（ｖｅｒｏｓｔａｔｉｎ）を含む、血管新生因子によって促進される細胞シグナル伝達経路の阻害剤であり得る。特異的血管新生因子、例えば血管新生因子アンジオゲニンなどに対して効果を有すると考えられるいくつかの抗血管新生剤が存在する。アンジオゲニンに特異的な抗血管新生剤は、アンジオゲニン、ヒト胎盤リボヌクレアーゼ阻害剤、アクチン、及びアンジオゲニンのＣ末端領域に対応した合成ペプチドに結合するモノクローナル抗体を含む。細菌由来の抗血管新生剤も本明細書では検討される。そのような薬剤は、アントラサイクリン、１５−デオキシスペルグアリン（ｄｅｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）、Ｄ−ペニシラミン、エポネマイシン（ｅｐｏｎｅｍｙｃｉｎ）、フマギリン、ハービマイシンＡ、ラパマイシン及びネオマイシンを含む。「ネオマイシン」という用語は、ネオマイシンＡ、Ｂ及びＣから成る抗生物質複合体を意味し、これらはまとめてマイシフラジン（Ｍｙｃｉｆｒａｄｉｎ）、マイアクン（Ｍｙａｃｎｅ）、フラジオマイシン（Ｆｒａｄｉｏｍｙｃｉｎ）、ネオミン（Ｎｅｏｍｉｎ）、ネオレート（Ｎｅｏｌａｔｅ）、ネオマス（Ｎｅｏｍａｓ）、ニベマイシン（Ｎｉｖｅｍｙｃｉｎ）、ピマベコート（Ｐｉｍａｖｅｃｏｒｔ）、ボナマイシン粉末Ｖ（Ｖｏｎａｍｙｃｉｎ  Ｐｏｗｄｅｒ  Ｖ）及びそれらの類縁体としても知られている。
【００３９】
前記組成物はさらに１若しくはそれ以上の抗酸化剤を含む。例示的な還元剤は、メルカプロプロピオニルグリシン、Ｎ−アセチルシステイン、β−メルカプトエチルアミン、グルタチオン、アスコルビン酸及びその塩類、亜硫酸塩或いはメタ重亜硫酸塩、若しくは類似種を含む。加えて、抗酸化剤には、ビタミンＥ、Ｃ、ルテイン（ｌｅｕｔｅｉｎ）、キサンチン、ベータカロテン、及び亜鉛やセレニウムなどのミネラルなどの天然抗酸化剤も含まれる。
【００４０】
本発明の薬学的組成物は、任意に１若しくはそれ以上の抗腫瘍剤を有し、これはこれに限定されるものではないが、ドセタキセル、エトポシド、トランテカン、パクリタキセル、テニポシド、ビンブラスチン、ビンクリスチン及びビンデシンなどのアルカロイド、ブスルファン、インプロスルファン、ピポスルファン、アジリジン、ベンゾデパ、カルボコン、メツレデパ、ウレデパ、アルトレタミン、トリエチレンメラミン、トリエチレンホスホラミド、トリエチレンチオホスホラミド、クロラムブシル、クロラファジン、シクロホスファミド、エストラムスチン、イホスファミド、メクロレタミン、メクロレタミン酸化塩酸塩、メルファラン、ノベムビチン、ペルホスファミド、フェネステリン、プレドニムスチン、トロホスファミド、ウラシルマスタード、カルムスチン、クロロゾトシン、ホテムスチン、ロムスチン、ニムスチン、ラニムスチン、ダカルバジン、マンノムスチン、ミトブロニトール、ミトラクトール、ピポブロマン、テモゾロミドなどのアルキル化剤、抗生物質、及びアクラシノマイシン、アクチノマイシンＦ１、アントラマイシン、アザセリン、ブレオマイシン、カクチノマイシン、カルビシン、カルジノフィリン、クロモマイシン、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、６−ジアゾ−５−オキソ−Ｌ−ノルロイシン、ドキソルビシン、エピルビシン、イダルビシン、メノガリル、ミトマイシン、ミコフェノール酸、ノガラマイシン、オリボマイシン、ペプロマイシン、ピラルビシン、プリカマイシン、ポルフィロマイシン、ピューロマイシン、ストレプトオニグリン、ストレプトゾシン、ツベルシジン、ジノスタチン、ゾルビシンなどの類縁体、デノプテリン、エダトレキサート、メトトレキサート、ピリトレキシム、プテロプテリン、トミュデックス（登録商標）、トリメトレキサート、クラドリビン、フルダラビン、６−メルカプトプリン、チアミプリン、チオグアニン、アンシタビン、アザシチジン、６−アザウリジン、カルノフール（ｃａｒｎｏｆｕｒ）、シタラビン、ドキシフルリジン、エミテフール、エノシタビン、フロクスウリジン、フルオロウラシル、ゲムシタビン、テガフールなどの代謝拮抗剤、Ｌ−アスパラギナーゼ、インターフェロン−アルファ、インターフェロン−ベータ、インターフェロン−ガンマ、インターロイン−２、レンチナン、プロパゲルマニウム、ＰＳＫ、ロキニメックス、シゾフィカン（ｓｉｚｏｆｉｃａｎ）、ウベニメクスなどの免疫調節剤、カルボプラチン、シスプラチン、ミボプラチン、オキサリプラチンなどの白金複合体、アセグラトン、アムサクリン、ビスアントレン、デホスファミド、デメコルチン、ジアジコン、エフロールニチン、酢酸エリプチニウム、エトグルシド、フェンレチニド、硝酸ガリウム、ヒドロキシ尿素、ロニダミン、ミルテホシン、ミトグアゾン、ミトキサントロン、モピダモール、ニトラクリン、ペントスタチン、フェナメット、ポドフィリン酸２−エチル−ヒドラジド、プロカルバジン、ラゾキサン、ソブゾキサン、スピロゲルマニウム、テヌアゾン酸、トリアジコン、２，２’，２’’トリクロロトリエチルアミン、ウレタン、抗腫瘍ホルモン、或いはカルステロン、ドロモスタノロン、エピチオスタノール、メピチオスタン、アミノグルテチミド、ミトタン、トリロスタン、ビカルタミド、フルタミド、ニルタミド、ドロロキシフェン、タモキシフェン、トレミフェン、アミノグルテチミド、アナストロゾール、ファドロゾール、ホルメスタン、レトロゾール、ホスフェストロール、ヘキセストロール、リン酸ポリエストラジオール、ブセレリン、ゴセレリン、リュープロリド、トリプトレリン、酢酸クロルマジノン、メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、メレンゲストロールなどの類縁体、ポルフィマーナトリウム、バチマスタット、及びフォリン酸、を含む。本発明の薬学的組成物を有するこれら及び他の抗腫瘍剤の記載のために、Ｔｈｅ  Ｍｅｒｃｋ  Ｉｎｄｅｘ  第１２版を参照。
【００４１】
病的血管新生或いは内皮細胞の増殖は、上に詳細に記載したような、過剰増殖及び腫瘍性疾患及び炎症疾患及び疾病を含む、多くの疾患或いは疾病に関連していた。本発明の方法は、血管新生が原因因子であるあらゆる症状の治療に適用される。組成物は、薬剤投与に従来使用されるあらゆる経路によって投与され得る。そのような経路は、これに限定されるものではないが、経口、局所非経口及び吸入による、を含む。非経口送達は、腹腔内、静脈内、口周囲、皮下、筋肉内、動脈内などである。開示された組成物は、本分野で既知の手順に従って、標準的な薬学的に許容可能な担体との組み合わせによって調合された従来の投薬形態で投与され得る。そのような組み合わせは、適切な成分を混合、顆粒化、圧縮及び溶解するなどの手順を含む。
【００４２】
薬学的に許容可能な担体の形態及び性質は、組み合わされる活性成分の量、投与経路、及び他の既知の変数によって調節される。前記活性成分は、本発明の化合物、すなわちヒドロキシルアミン或いはそれのエステル誘導体の１つである。本明細書で用いられたように、「担体」という用語は、薬学的組成物の混合物を調合する際に使用される希釈剤、賦形剤及びそれらと同等のものを意味する。「薬学的に許容可能な」という用語は、連邦政府或いは州政府の管理機関によって承認されている、若しくは、動物及びより特にヒトにおける使用に対して米国薬局方或いは他の一般的に認識された薬局方においてリストアップされていることを意味する。そのような薬学的に許容可能な担体或いは希釈剤、及び調合するための方法は、本分野において既知である（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍｅａｄｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｌ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，ｌａｔｅｓｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ、ｔｈｅ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｅｘｃｉｐｉｅｎｔｓ，ＡＰｈＡ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ，１９８６を参照のこと）。
【００４３】
薬学的に許容可能な担体は、例えば液体或いは固体である。液体担体は、これらに限定されるものではないが、水、生理食塩水、緩衝生理食塩水、ブドウ糖溶液、好ましくは、ハンクス液或いはリンガー液などの生理学的適合性緩衝液、生理学的生理食塩水、生理食塩水及びグルコースから成る混合物、及びヘパリン化ナトリウム−クエン酸−クエン酸−ブドウ糖溶液、及びそれらと同等のもの（これらは好ましくは無菌形態における）を含む。例示的な固体担体は、寒天、アラビアゴム、ゼラチン、ラクトース、ステアリン酸マグネシウム、ペクチン、タルク及びそれらと同等のものを含む。
【００４４】
一部の実施形態において、前記組成物は経口的に投与することが可能である。そのような投与に対して、前記薬学的組成物は例えば溶液、シロップ或いは懸濁液などの液体形態である、若しくは使用前に水或いは他の適切な媒体と再構成するための薬剤産物として存在するものである。そのような液体調合は、懸濁剤（例えばソルビトールシロップ、セルロース誘導体或いは水素化食用脂肪或いはオイルなど）、乳化剤（例えば、レシチン或いはアラビアゴム）、非水性媒体（例えば、アーモンドオイル、油状エステル或いは分画ベジタブルオイル）、及び防腐剤（例えば、メチル或いはプロピル−ｐ−ヒドロキシ安息香酸、若しくはソルビン酸）などの薬学的に許容可能な添加物との従来の手段によって調合される。前記薬学的組成物は、結合剤（例えば、アルファ化トウモロコシスターチ、ポリビニルピロリドン或いはヒドロキシプロピルメチルセルロース）、賦形剤（例えば、ラクトース、微結晶性セルロース或いはリン酸水素カルシウム）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク或いはシリカ）、崩壊剤（例えば、ポテトスターチ或いはスターチグリコール酸ナトリウム）、或いは湿潤剤（例えば、ラウリル硫酸ナトリウム）などの薬学的に許容可能などと共に従来の手段によって調合される、例えば錠剤、カプセル或いはペレットなどの形態をとる。前記錠剤は、本分野で既知の方法によってコーティングされる。
【００４５】
頬側投与に対して、前記組成物は、従来のやり方で処方される錠剤、トローチ或いは薬用キャンディーの形態をとる。経口或いは頬側投与に対する組成物は、前記活性化合物の徐放性を与えるように処方される。そのような処方は、グリセリルモノ−ステアリン酸、グリセリルジステアリン酸及びワックスなどの本分野では既知である１若しくはそれ以上の徐放剤を含む。
【００４６】
組成物は局所的に適用される。そのような投与は、表皮、口腔、眼、耳及び鼻へ前記組成物を外部的に適用する工程を含む。これは、経口、静脈内、腹腔内及び筋肉内送達によって達成される全身性投与とは対照的である。
【００４７】
局所的な投与において使用するための組成物は、例えば、クリーム、リニメント剤、ローション、軟膏或いはペーストなどの皮膚を介した浸透に適した液体或いはゲル調合、若しくは眼、耳或いは鼻への送達に適切な液滴を含む。
【００４８】
一部の実施形態において、本発明の組成物は、クリーム、液滴、リニメント剤、ローション、軟膏及びペーストを含み、これらは外部適用のための液体或いは半流動性組成物である。そのような組成物は、単独、若しくは溶液或いはグリース状或いはグリース状ベースの水性或いは非水性液体での懸濁液粉末状形態において、前記活性成分（類）を混合する工程によって調合される。前記ベースは、グリセロール、様々な形態のパラフィン、蜜蝋などの複合体炭化水素、粘液、ミネラル或いは食用オイル若しくは脂肪酸、或いはマクロゴールを有する。そのような組成物は、界面活性剤などの適切な表面活性剤、及び寒天、ベジタブルガム、セルロース誘導体などの懸濁剤、及び防腐剤、抗酸化剤及びそれらと同等のものなどの他の成分を付加的に有する。
【００４９】
更に、本発明の組成物は、経鼻的に或いは吸引によって投与され得る。経鼻或いは吸引投与に対して、前記組成物は、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素或いは他の適切なガスなどの適切な噴霧剤の使用と共に、加圧パック或いは噴霧器からのエアロゾルスプレーの形態で便利に送達される。加圧エアロゾルの場合において、投薬ユニットは定量を送達するためのバルブを提供することによって決定される。インヘラー或いは吸入器における使用に対する、例えばゼラチンのカプセル及びカートリッジは、前記化合物及びラクトース或いはスターチなどの適切な粉末ベースの粉末混合物を含有して処方される。
【００５０】
本発明の一部の組成物は、デポー製剤（持続性製剤）として処方することが可能である。そのような長時間作用性処方は、移植（例えば、皮下或いは筋肉内に）によって、或いは筋肉内注射によって投与される。従って、例えば、前記化合物は、適切なポリマー或いは疎水性物質（例えば、許容可能なオイルにおける乳化液）で、或いは交換樹脂で、若しくは例えば難容性塩としてなど難容性誘導体として処方される。リポソーム及び乳化液は、親水性薬剤に対する送達媒体或いは担体のよく知られた例である。
【００５１】
上述した組成物を投与するための技術及び処方は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍｅａｄｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｌ．，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．最新版に記載されている。
【００５２】
血管新生を阻害する場合の前述のヒドロキシルアミン及びそれの類縁体のあらゆる有効性は、本分野では既知であるいくつかの承認生物学的アッセイの１つによって決定される。１つの好ましい方法は、鶏胚漿尿膜（ＣＡＭ）アッセイである。ＣＡＭバイオアッセイにおいて、受精鶏胚をペトリ皿において培養した。発生６日目に、テストサンプル或いは適切なコントロール物質を浸透させたメチルセルロースなどの放出ポリマーのディスクを、その進行端で血管膜へ置いた。発生８日目に、インプラント周辺の領域を観察し、評価した。テストインプラント周辺の血管がない領域は、胚血管新生の阻害剤の存在を意味している（Ｍｏｓｅｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２４８、１４０８−１４１０及びＴａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８２，Ｎａｔｕｒｅ，２９７、３０７−３１２）。ＣＡＭアッセイにおいて単独でテストされた以前記載された血管新生阻害剤に対して報告された用量は、５０μｇのプロタミン（Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８２））、２００μｇのウシ硝子体抽出物（Ｌｕｔｔｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．２４、５３−５６）、及び１０μｇの血小板因子ＩＶ（Ｔａｙｌｏｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８２））である。組み合わせで有効な血管新生阻害剤の最も低く報告された用量は、ヘパリン（５０μｇ）及びヒドロコルチゾン（６０μｇ）、及びＢ−シクロデキストリンテトラデカ硫酸塩（１４μｇ）及びヒドロコルチゾン（６０μｇ）を含み、これはＦｏｌｋｍａｎら（１９８９，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４３、１４９０）によって報告されたものである。
【００５３】
以下の実施例は、本発明をより詳細に記載するために提供される。これらは、説明を意図したものであり本発明を限定することを意図するものではない。
【実施例１】
【００５４】
血管新生研究のための鶏胚漿尿膜（ＣＡＭ）モデル
血管新生は、以前に記載された方法（実施例５の最後の引用文献を参照のこと）によって検討した。１０日齢受精鶏卵は、５５％相対湿度の３７℃でインキュベーションした。検査ランプの助けを借り暗室において、皮下針を用いて、気嚢を覆っている殻に小さな穴を開けた。胚膜の血管がない領域上の卵の広域側に第二の穴を開けた。小さなゴム圧迫バルブを用いて、第一の穴へ弱い減圧を適用することによって、前記第二の穴の下に人工気嚢を作った。前記減圧によって、前記殻から漿尿膜（ＣＡＭ）の分離を生じた。ミニドリルを用いて脱落ＣＡＭの上に約１．０ｃｍ２の窓を殻に切り取った。下にあるＣＡＭへはこの小さな窓を通じて接近した。
【００５５】
小さなパンチャーを用いて、フィルターペーパー＃１（Ｗｈａｔｍａｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，英国）からフィルターディスクを開けた。フィルターディスクは、３ｍｇ／ｍｌ酢酸コルチゾン溶液（９５％エタノール及び水）に浸し、無菌条件下で風乾させた。血管新生を誘導するために、無菌フィルターディスクはｂＦＧＦ（１μｇ／ｍｌ）或いは他の血管新生促進性因子で飽和させ、コントロールディスクは、カルシウム及びマグネシウムを含まないＰＢＳで飽和させた。
【００５６】
無菌鉗子を用いて、１つのフィルター／ＣＡＭを前記窓から置いた。前記窓は、Ｈｉｇｈｌａｎｄブランド透明テープでシールした。２４時間後、１０から２５μｌのテスト因子（阻害剤）を静脈内に注射した、若しくはＣＡＭｓを刺激するｂＦＧＦ或いは他の血管新生促進性因子をＣＡＭ膜へと局所的に添加した。コントロールフィルターディスクは、カルシウム及びマグネシウムを含まないＰＢＳを添加された。４８時間後、フィルターディスクの直下のＣＡＭ組織を回収し、３５ｍｍペトリ皿へ置いた。８から１０個の卵／処理群を使用した。
【００５７】
血管新生促進性因子（以下の実施例を参照のこと）を添加し、１０歳齢胚状に新しい血管を誘導した。＃１フィルターペーパー（Ｗｈａｔｍａｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，英国）の無菌ディスクは、３ｍｇ／ｍｌ酢酸コルチゾンでプレ処理し、無菌条件下で風乾させた。前記ディスクは次にＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水）に懸濁させ、成長中のＣＡＭｓに置いた。ＴＰＨ（ＴＥＭＰＯＬ−Ｈ）或いはＴＥＭＰＯＬ、及び／若しくはＨ２Ｏ２或いはＴＰＨ及び／若しくはｂＦＧＦ或いはＶＥＧＦで処理したフィルターは、３日インキュベーションの第１日目に置いた。
【００５８】
ＣＡＭ切片のデジタル画像及び顕微鏡解析、ペトリ皿からのＣＡＭ切片は、ＳＶ６実体顕微鏡（Ｋａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ）を用いて５０Ｘ拡大率で検査した。デジタル画像は、３−ＣＣＤカラービデオカメラシステム（Ｔｏｓｈｉｂａ  Ａｍｒｔｉｃａ，ニューヨーク、ニューヨーク州）を用いて記録した。これらの画像は、イメージ−プロプラスソフトウェア（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ）を用いて解析した。フィルターディスクの領域と重ね合わされた円形領域内の血管の分岐点の数を各切片で数えた。５５％相対湿度の３７℃で３日間インキュベーションした後、各フィルターディスク直下の前記ＣＡＭ組織は、コントロールから切除され、ＣＡＭサンプルで処理した。組織はＰＢＳで３回洗浄した。切片は３５ｍｍペトリ皿（Ｎａｌｇｅ  Ｎｕｎｃ、ロチェスター、ニューヨーク州）に置き、ＳＶ６実体顕微鏡（Ｋａｒｌ  Ｚｅｉｓｓ）を用いて５０Ｘ拡大率で検査した。フィルターに隣接するＣＡＭ切片のデジタル画像は、３−ＣＣＤカラービデオカメラシステム（Ｔｏｓｈｉｂａ  Ａｍｒｔｉｃａ，ニューヨーク、ニューヨーク州）を用いて回収し、イメージ−プロプラスソフトウェア（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ、シルバースプリング、メリーランド州）で解析した。フィルターディスクの領域と一致する円形領域に含まれる血管分岐点の数を各切片で数えた。阻害パーセントデータは、ポジティブコントロール値とネガティブコントロール値との間の差異で割った実験値−ネガティブコントロール値の商として示された。１つの画像は各ＣＡＭ標本において計算し、８つのＣＡＭ標本からの所見を各処理条件で解析した。加えて、各実験は３回行った。結果生じた血管新生指標は、各セットの処理における新しい分岐点の平均値±ＳＥＭ（平均値の標準誤差）である。
【００５９】
統計解析、血管分岐パターンの統計解析は、対応するコントロール群と実験的に比較した分散の１−ｗａｙ解析（ＡＮＯＶＡ）によって行った。統計有意差は、０．０５以下のＰ値で評価した。
【実施例２】
【００６０】
Ｈ２Ｏ２によって誘導された血管新生に対するＴＰＨ及びＴｅｍｐｏｌの影響
ＴＰＨ（ＴＥＭＰＯＬ−Ｈ、窒素酸化物４−ヒドロキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−１−イルオキシ）或いはＴＥＭＰＯＬ（４−ヒドロキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−Ｎ−オキシルラジカル（遊離基））を前記ＣＡＭアッセイに適用し、実施例１において提供された物質及び方法に従って、その各抗血管新生効果を決定した。Ｈ２Ｏ２はＣＡＭモデルにおいて血管新生を誘導するために使用した。前記ＣＡＭモデル研究によって、表１Ａ及び１Ｂに示された結果を得た。
【００６１】
表１Ａ：ＣＡＭモデルにおけるＨ２Ｏ２誘導性血管新生に対する１００から２００μｇでのＴＰＨ対ＴＥＭＰＯＬの抗血管新生効果
【表１】
2009525983.tif 000005
データは平均値±ＳＤ、１群当たりｎ＝８、＊Ｐ<０．０５（Ｈ２Ｏ２と比較した場合）で示す。
【００６２】
表１Ｂ：ＣＡＭモデルにおけるＨ２Ｏ２誘導性血管新生に対する４００から８００μｇでのＴＰＨ対ＴＥＭＰＯＬの抗血管新生効果
【表２】
2009525983.tif 000006
データは平均値±ＳＤ、１群当たりｎ＝８、＊Ｐ<０．０５及び＊＊ｐ<０．０１（Ｈ２Ｏ２と比較した場合）で示す。
【００６３】
表から分かるように、ＴＰＨ或いはＴＥＭＰＯＬはＣＡＭモデルにおいて、超最大濃度のＨ２Ｏ２で誘導された血管新生を効果的に阻害した。
【実施例３】
【００６４】
ｂＦＧＦ誘導性血管新生に対するＴＰＨの影響
ＴＰＨを前記ＣＡＭアッセイに適用し、実施例１において提供された物質及び方法に従って、その各抗血管新生効果を決定した。塩基性線維芽細胞成長因子は、前記ＣＡＭモデルにおいて血管新生を誘導するために使用した。前記ＣＡＭモデル研究によって、表２に示された結果を得た。
【００６５】
表２：ＣＡＭモデルにおける、ｂＦＧＦ誘導性血管新生の阻害におけるＴＰＨの抗血管新生効果
【表３】
2009525983.tif 000007
データは平均値±ＳＤ、１群当たりｎ＝８、＊Ｐ<０．０５及び＊＊ｐ<０．０１（ｂＦＧＦと比較した場合）で示す。
【００６６】
ＴＰＨは、ＣＡＭモデルにおいてｂＦＧＦ誘導性血管新生の用量依存性阻害（１００から４００μｇ）を生じた（表２）。
【実施例４】
【００６７】
ＶＥＧＦ誘導性血管新生に対するＴＰＨの効果
ＴＰＨを前記ＣＡＭアッセイに適用し、実施例１において提供された物質及び方法に従って、その各抗血管新生効果を決定した。ＶＥＧＦは、前記ＣＡＭモデルにおいて血管新生を誘導するために使用した。結果は表３に示した。
【００６８】
表３：ＣＡＭモデルにおける、ＶＥＧＦ誘導性血管新生の阻害におけるＴＰＨの抗血管新生効果
【表４】
2009525983.tif 000008
データは平均値±ＳＤ、１群当たりｎ＝８、＊＊ｐ<０．０１（ＶＥＧＦと比較した場合）で示す。
【００６９】
ＴＰＨは、ＣＡＭモデルにおいてＶＥＧＦ誘導性血管新生の用量依存性阻害を示した（表３）。ＴＰＨの抗血管新生効果は、ｂＦＧＦに対して観察されたもの（表２及び表３）と比較して、ＶＥＧＦ誘導性血管新生に対してより有意であった。
【実施例５】
【００７０】
ｂＦＧＦ刺激性ＣＡＭモデルにおける注入化合物１（シクロプロパンカルボキシル酸１−ヒドロキシ−２，２，６，６−テトラメチル−ピペリジン−４−イルエステル）の影響
化合物１は、前記ＣＡＭモデルへ注入を介して導入し、実施例１において提供された物質及び方法に従って、その各抗血管新生効果を決定した。ｂＦＧＦはＣＡＭモデルにおいて血管新生を誘導するために使用した。結果は表４に示した。
【００７１】
【表５】
2009525983.tif 000009
【００７２】
実施例１から５の引用文献：
１．Ｐｏｗｅｌｌ，Ｊ．Ａ．，Ｍｏｈａｍｅｄ，Ｓ．，Ｋｅｒｒ，Ｊ．，Ｍｏｕｓａ，Ｓ．Ａ．：Ｊ．Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ８０：１０４−１１４；２０００．
２．Ａｕｅｒｂａｃｈ  Ｒ，Ｋｕｂａｉ  Ｌ，Ｋｎｉｇｈｔｏｎ  Ｄ，Ｆｏｌｋｍａｎ  Ｊ．Ｄｅｖ  Ｂｉｏｌ．１９７４；４１：３９１−３９４．
３．Ｍａｒｃｉｎｋｉｅｗｉｃｚ  Ｃ，Ｗｅｉｎｒｅｂ，ＰＨ，Ｃａｌｖｅｔｅ，ＪＪ，Ｋｉｓｉｅｌ，ＤＧ，Ｍｏｕｓａ，ＳＡ，Ｔｕｓｚｙｎｓｋｉ，ＧＰ，Ｌｏｂｂ，ＲＲ．Ｏｂｔｕｓｔａｔｉｎ：Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６３（９）：２０２０−２０２３；２００３．
４．Ｃｏｌｍａｎ，ＲＷ，Ｐｉｘｌｅｙ，ＲＡ，Ｓａｉｎｚ，ＩＭ，Ｓｏｎｇ，ＪＳ，Ｉｓｏｒｄｉａ−Ｓａｌａｓ，Ｍｏｈａｍｅｄ  Ｓ，Ｐｏｗｅｌｌ，Ｊ，Ｍｏｕｓａ，ＳＡ：Ｊ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ１（１）；１６４−１７３；２００３．
５．Ｄｕｐｏｎｔ  Ｅ，Ｆａｌａｒｄｅａｕ  Ｐ，Ｍｏｕｓａ  ＳＡ，Ｄｉｍｉｔｒｉａｄｏｕ  Ｖ，Ｐｅｐｉｎ  ＭＣ，Ｗａｎｇ  Ｔ，Ａｌａｏｕｉ−Ｊａｍａｌｉ  ＭＡ．    Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ．２００２；１９：１４５−１５３．
６．Ｋｉｍ  Ｓ，Ｂｅｌｌ  Ｋ，Ｍｏｕｓａ  ＳＡ，Ｖａｒｎｅｒ  ＪＡ  Ａｍ  Ｊ  Ｐａｔｈ．２０００；１５６：１３４５−１３６２．
７．Ｍｏｕｓａ  ＳＡ，Ｍｏｕｓａ  ＡＳ．Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｅｓｉｇｎ  ２００４；１０（１）：１−９．
８．Ｐｏｌｙｔａｒｃｈｏｕ  Ｃ  ａｎｄ  Ｐａｐａｄｉｍｉｔｒｉｏｕ  Ｅ：Ｆｒｅｅ  Ｒａｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ３８  （５）：５０１−５０８．
９．Ｍｏｕｓａ  ＳＡ，  Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ  Ｌ，Ｄａｖｉｓ  ＦＢ，Ｄａｖｉｓ  ＰＪ．Ｐｒｏａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｔｈｙｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ａｎａｌｏｇ  ３，５−ｄｉｉｏｄｏｔｈｙｒｏｐｒｏｐｉｏｎｉｃ  ａｃｉｄ  （ＤＩＴＰＡ）  ｉｓ  ｉｎｉｔｉａｔｅｄ  ａｔ  ｔｈｅ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ａｎｄ  ｉｓ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ｍｅｄｉａｔｅｄ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ．２００６；１４７（４）：１６０２−７．
１０．Ｍｏｕｓａ  ＳＡ：  Ａｌｐｈａ  ｖ  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ａｆｆｉｎｉｔｙ／ｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙ  ａｎｄ  ａｎｔｉ−ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ａ  ｎｏｖｅｌ  ｔｅｔｒａａｚａ  ｃｙｃｌｉｃ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅ，  ＳＵ０１５，  ｉｎ  ｖａｒｉｏｕｓ  ｓｐｅｃｉｅｓ．Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２００５；４５（５）：４６２−４６７．
１１．Ｄａｖｉｓ  ＦＢ，Ｍｏｕｓａ  ＳＡ，  Ｏ’Ｃｏｎｎｏｒ  Ｌ，Ｍｏｈａｍｅｄ  Ｓ，Ｌｉｎ  ＨＹ，Ｃａｏ  ＨＪ，Ｄａｖｉｓ  ＰＪ．Ｐｒｏａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｙｒｏｉｄ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｉｓ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ａｎｄ  ｉｓ  ｉｎｉｔｉａｔｅｄ  ａｔ  ｔｈｅ  ｃｅｌｌ  ｓｕｒｆａｃｅ．Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ２００４；９４（１１）：１５００−１５０６．
１２．Ｍｏｕｓａ  ＳＡ，Ｍｏｈａｍｅｄ  Ｓ，Ｗｅｘｌｅｒ  ＥＪ，  Ｋｅｒｒ  ＪＳ．Ａｎｔｉ−ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ｅｆｆｉｃａｃｙ  ｏｆ  ＴＡ１３８，ａ  ｎｏｖｅｌ  ａｌｐｈａｖｂｅｔａ３  ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ．  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２００５；２５（１Ａ）：１９７−２０６．
１３．Ｃｅｚａｒｙ  Ｍａｒｃｉｎｋｉｅｗｉｃｚ，  Ｐａｕｌ  Ｈ．Ｗｅｉｎｒｅｂ，  Ｊｕａｎ  Ｊ．Ｃａｌｖｅｔｅ，Ｄａｒｉｕｓｚ  Ｇ．Ｋｉｓｉｅｌ，Ｓｈａｋｅｒ  Ａ．  Ｍｏｕｓａ，Ｇｅｏｒｇｅ  Ｐ．Ｔｕｓｚｙｎｓｋｉ，Ｒｏｙ  Ｒ．ＬｏｂｂＬ：Ｏｂｔｕｓｔａｔｉｎ，ａ  ｐｏｔｅｎｔ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ  ｏｆ  ａｌｐｈａ１／Ｂｅｔａ１  ｉｎｔｅｇｒｉｎ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６３：２０２０−２０２３，２００３．
１４．Ｃｏｌｍａｎ，Ｒ．Ｗ．，Ｐｉｘｌｅｙ，Ｒ．Ａ．，Ｓａｉｎｚ，Ｉ．Ｍ．，Ｓｏｎｇ，Ｊ．Ｓ．，Ｉｓｏｒｄｉａ−Ｓａｌａｓ，Ｍｏｈａｍｅｄ  Ｓ．，Ｐｏｗｅｌｌ，Ｊ．，Ｍｏｕｓａ，Ｓ．Ａ．：Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｂｙ  ａｎｔｉｂｏｄｙ  ｂｌｏｃｋｉｎｇ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｒｏａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  ｈｉｇｈ−ｍｏｌｅｃｕｌａｒ−ｗｅｉｇｈｔ  ｋｉｎｉｎｏｇｅｎ．Ｊ  Ｔｈｒｏｍｂｏｓｉｓ  Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ１（１）；１６４−１７３，２００３．
１５．Ｄｕｐｏｎｔ，Ｅ．，Ｆａｌａｒｄｅａｕ，Ｐ．，Ｍｏｕｓａ，Ｓ．Ａ．，Ｄｉｍｉｔｒｉａｄｏｕ，Ｖ．，Ｐｅｐｉｎ，Ｍ．Ｃ．，Ｗａｎｇ，Ｔ．，Ａｌａｏｕｉ−Ｊａｍａｌｉ，Ｍ．Ａ．：Ａｎｔｉａｎｇｉｏｇｅｎｉｃ  ａｎｄ  ａｎｔｉｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ  ｏｆ  Ｎｅｏｖａｓｔａｔ（ＡＥ−９４１），ａｎ  ｏｒａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ｅｘｔｒａｃｔ．Ｃｌｉｎ  Ｅｘｐ  Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ  １９（２）：１４５−１５３，２００２．
【実施例６】
【００７３】
ラット、ウサギ、イヌ及びヒト血漿における化合物１のインビトロ安定性解析
化合物１（シクロプロパンカルボキシル酸１−ヒドロキシ−２，２，６，６−テトラメチル−ピペリジン−４−イルエステル）の活性代謝物はＴＰＨである。この解析の目的は、標準インキュベーション条件下でのラット、ウサギ、イヌ及びヒト血漿における化合物１のインビトロ半減期を決定することである。
【００７４】
化合物１は、標準インキュベーション条件下で、様々な時間、貯蔵ラット、ウサギ、イヌ及びヒト血漿と共にインキュベーションした。ラット、ウサギ、イヌ及びヒトからの貯蔵血漿を含む事前に標識化したチューブは、震盪３７℃水槽においてプレインキュベーションした。化合物１溶液を１０００ｎｇ／ｍＬの最終濃度で前記チューブへ添加した。０時間サンプル（ｎ＝５）をすぐに取り除き、安定化溶液（ＤＴＰＡ、アセチルシステイン及びアスコルビン酸）、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳアッセイ内部標準及びメタノールを含有するチューブへ移した。前記安定化溶液は、ラット、ウサギ、イヌ及びヒトからの血漿の存在下で化合物１を安定化することが示されていた。前記チューブをボルテックスし、氷上へ置き、遠心分離に供した。１００μＬ一定量の上清をＨＰＬＣサンプルバイアルへ移した。付加的チューブ（各時間でｎ＝５）は、３７℃で５、１０、２０、３０、６０、１２０及び２４０分間インキュベーションし、その後処理した。各インキュベーションサンプルにおける化合物１及びＴＰＨの量は、検証ＬＣ／ＭＳ／ＭＳアッセイを用いて定量化した。
【００７５】
ラット、ウサギ、イヌ及びヒト血漿とのインキュベーション時間の機能としての化合物１の消失及びＴＰＨの出現は、それぞれ表５及び６にまとめ、それぞれ図１及び２に示した。図３から６は、ラット、ウサギ、イヌ及びヒト血漿における化合物１の消失及びＴＰＨの出現の間の時間的環系を示したものである。
【００７６】
表５：標準インキュベーション条件下のインキュベーションの機能としての、ラット、ウサギ、イヌ及びヒト血漿における化合物１ａの濃度（ｎｇ／ｍＬ）
【表６】
2009525983.tif 000010
データは、平均値±ＳＤ（ｎ＝５）として示した。
【００７７】
ａ）シクロプロパンカルボキシル酸１−ヒドロキシ−２，２，６，６−テトラメチル−ピペリジン−４−イルエステル
【００７８】
表６：標準インキュベーション条件下でのＯＴ−５５１インキュベーション時間の機能としての、ラット、ウサギ、イヌ及びヒト血漿におけるＴＰＨの濃度（ｎｇ／ｍＬ）
【表７】
2009525983.tif 000011
データは、平均値±ＳＤ（ｎ＝５）として示した。
【００７９】
化合物１（シクロプロパンカルボキシル酸１−ヒドロキシ−２，２，６，６−テトラメチル−ピペリジン−４−イルエステル）の加水分解率は、種によって異なった。化合物１は、平均４時間のインビトロ半減期を有し、イヌ血漿においてかなり安定であった。対照的に、前記化合物は、たった１分のインビトロ半減期を有し、ウサギ血漿において素早く加水分解された。ヒト及びラット血漿におけるエステラーゼは、活性では中間であった。化合物１のインビトロ半減期は、ヒト及びラット血漿においてそれぞれ平均２８分及び７０分であった。
【００８０】
化合物１の消失は、ＴＰＨの形成と一致していた。実験的限界範囲内で、インキュベーション混合物における化合物１の消失は、ＴＰＨの形成によってモルベースで説明され得る。これらの結果は、標準化インキュベーション条件下で、ＴＰＨを形成する化合物１における前記エステル機能性の加水分解は、化合物１代謝の一次経路であり、ＴＰＨは２４０分インキュベーション期間安定であった。
【実施例７】
【００８１】
化合物１ＨＣＬの単一用量静脈内毒性解析
スプラーグドーリーラットへの投与
この解析の目的は、スプラーグドーリーラットにおける化合物１の単一１０分静脈注射毒性解析の一部として、化合物１及び活性代謝物であるＴＰＨの毒物動態学パラメータを決定することであった。
【００８２】
化合物１は、０（生理食塩水）、１０、３０、１００或いは２００ｍｇ／ｋｇ（３０ｍＬ／ｋｇ、１０分間以上）の用量レベルで側尾静脈への静脈内注射を介して各動物へ一度投与した。毒物動態学評価のための血液は、注射中及び後の予め決定した時点で回収した。血漿サンプルは、検証ＬＣ／ＭＳ／ＭＳアッセイを用いて化合物１及びＴＰＨに対して解析した。
【００８３】
記述毒物動態学パラメータは、血漿濃度−時間データに基づいた標準モデル独立法（Ｇｉｌｂａｌｄｉ  ａｎｄ  Ｐｅｒｒｉｅｒ，１９８２）によって決定した。全ての薬物動態学解析は、Ｋｉｎｅｔｉｃａ（登録商標）ｖｅｒｓｉｏｎ４．２（Ｉｎｎａｐｈａｓｅ，フィラデルフィア、ペンシルバニア州）を用いて実行した、
Ｃｍａｘは観察最大血漿濃度である
ＴｍａｘはＣｍａｘに到達した時間である
ＡＵＣ（０−４．１６７ｈｒ）は１０分注射の開始から注射終了後４時間の血漿濃度−時間曲線下の領域である
ＡＵＣは１０分注射の開始から時間無限大の血漿濃度−時間曲線の領域である。
【００８４】
Ｔ１／２は消失半減期である。
【００８５】
前記血漿濃度は、計算前ｎｇ／ｍＬの１０分の１近くに四捨五入された。数量化できるアッセイ限界（化合物１に対しては<５０ｎｇ／ｍＬ、ＴＰＨに対しては<２０ｎｇ／ｍＬ）以下の濃度の血漿サンプルは、薬物動態学解析、及び平均値及びＳＤの算出に対してゼロの値を割り当てた。名目上の時点は、全ての計算に対して使用した。
【００８６】
化合物１及びＴＰＨの血漿濃度における性差は見られなかったので、各サンプリング時点での雄及び雌ラットに対するデータを蓄積した。１０分静脈内注射の最後、及び注射後のいくつかの時点での化合物１及びＴＰＨの平均濃度は、それぞれ表７及び８にまとめた。図７及び８は、それぞれ化合物１及びＴＰＨの血漿濃度−時間プロファイルを示したものである。
【００８７】
表７：化合物１の単一１０分静脈内注射後の、スプラーグドーリーラット（ｎ＝５から６）における化合物１の平均値±ＳＤ血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ）及び毒物動態学パラメータ
【表８】
2009525983.tif 000012
ａ：静脈内注射の開始に対する時間、ｂ：ｎ＝５、ＮＳ：サンプルなし
【００８８】
表８：化合物１の単一１０分静脈内注射後の、スプラーグドーリーラット（ｎ＝５から６）におけるＴＰＨの平均値±ＳＤ血漿濃度（ｎｇ／ｍＬ）及び毒物動態学パラメータ
【表９】
2009525983.tif 000013
ａ：静脈内注射の開始に対する時間、ｂ：ｎ＝５、ＮＳ：サンプルなし、ＮＡ：該当なし
【００８９】
化合物１の血漿レベルにおける用量依存的増加は、１０から２００ｍｇ／ｋｇの用量範囲以上で、１０分注射の終了後すぐに観察された。前記注射の最後でのピーク濃度は、１０、３０、１００及び２００ｍｇ／ｋｇ後、それぞれ平均９８０．５、３４８７．１、２９０２０．０及び８９７４０．８ｎｇ／ｍＬであった。化合物１は、１０ｍｇ／ｋｇの後、注入の終了後１時間で数値化不可能となった。３０から２００ｍｇ／ｋｇの最も高い３つの用量で、注射の終了後４時間で回収したサンプルにおける化合物１の血漿レベルは数量化できなかった。化合物１の消失半減期は、利用可能なデータに基づいて決定できなかったが、結果により、ラットにおける化合物１のクリアランスは非常に速かったことが示唆された。
【００９０】
ＴＰＨの血漿レベルにおける用量−関連増加も、化合物１の１０分注射の終了後すぐに観察された。ピーク濃度は、化合物１注射の最後で観察され、１０、３０、１００及び２００ｍｇ／ｋｇの後それぞれ平均２４８１．７、８３３７．７、２９０２０．８及び６０８０２．１ｎｇ／ｍＬであった。化合物１と同様に、ＴＰＨの血漿レベルは、化合物１の注射の最後で素早く減少したが、１０ｍｇ／ｋｇ用量の注射後４時間でもまだ数量化可能である。１０ｍｇ／ｋｇ用量後のＴＰＨの末梢消失半減期は、０．４時間になると予想された。３０、１００及び２００ｍｇ／ｋｇ後のＴＰＨ消失半減期は、利用可能なデータに基づいて決定できなかったが、最も高い３つの用量の化合物１の注射が終了した後４時間で回収された血漿サンプルは、化合物１の注射が終了した後すぐに観察された濃度の１％未満であった。
【実施例８】
【００９１】
ヒト内皮３次元出芽モデルにおけるＴＰＨの抗血管新生有効性及びメカニズム
以下に説明されるプロトコールは、ヒト内皮細胞（微小血管、網膜及び脈絡叢内皮細胞）を用いた３次元出芽アッセイにおけるＴＰＨの抗血管新生有効性を決定するために、更に酸化的ストレス、ｂ−ＦＧＦ、ＶＥＧＦ、ＴＮＦ−アルファ、単球及びリポ多糖（ＬＰＳ）に対する反応における抗血管新生有効性を決定するために実行した。
【００９２】
実験デザイン
３次元血管新生アッセイ、フィブリンコーティングしたミクロ担体ビーズ上に培養したヒト皮膚微小血管内皮細胞（ＨＤＭＥＣ）のインビトロ３次元出芽血管新生、コンフルエントＨＤＭＥＣ（継代５から１０）は、１ビーズ当たり４０細胞の割合でゼラチンコーティングサイトデックス（Ｃｙｔｏｄｅｘ）−３ビーズと混合した。細胞及びビーズ（２５ウェルプレートのウェル当たり１５０から２００ビーズ）は、５ｍｌ内皮基礎培養液（ＥＢＭ）＋１５％正常ヒト血清（ＨＳ）と懸濁し、最初の４時間は毎時間穏やかに混合し、次に一晩ＣＯ２インキュベーターに培養するために放置した。翌日、１０ｍｌの新鮮ＦＢＭ＋５％ＨＳを添加し、混合物は更に３時間培養した。実験前、ＥＣ−ビーズの培養をチェックし、次に５００μｌのリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）を２４ウェルプレートの１ウェルへ添加し、１００μｌのＥＣ−ビーズ培養溶液をＰＢＳへ添加した。ビーズの数を計測し、ＥＣ／ビーズの濃度を計算した。
【００９３】
血管新生因子或いはテスト因子を有する或いは有さない、ＥＢＭ培養液におけるフィブリノーゲン溶液（１ｍｇ／ｍｌ）を調合した。ポジティブコントロールとして、３０ｎｇ／ｍｌ  ＶＥＧＦ＋２５ｎｇ／ｍｌ  ＦＧＦ２を使用した。ＥＣ−ビーズは、ＥＢＭ培養液で２回洗浄し、ＥＣ−ビーズをフィブリノーゲン溶液へ添加した。実験は各条件に対して三つ組で行った。ＥＣ−ビーズはフィブリノーゲン溶液において穏やかに混合し、２．５μｌヒトトロンビン（０．０５Ｕ／μｌ）を１ｍｌフィブリノーゲン溶液に添加し、３００μｌはすぐ２４ウェルプレートの各ウェルへ移した。フィブリノーゲン溶液は、５から１０分重合化させ、２０分後、ＥＢＭ＋２０％正常ヒト血清＋１０μｇ／ｍｌアプロチニンを添加し、前記プレートはＣＯ２インキュベーターにおいてインキュベーションした。ＨＤＭＥＣがフィブリンゲルへ浸潤し管腔を形成するのには約２４から４８時間かかった。
【００９４】
ウシフィブリンゲルにおけるウシ肺動脈内皮細胞血管新生挙動を研究するために以前設計されたミクロ担体インビトロ血管新生アッセイ（Ｎｅｈｌｓ&Ｄｒｅｎｋｈａｈｎ，１９９５，Ｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５０、３１１−３２２、Ｎｅｈｌｓ&Ｄｒｅｎｋｈａｈｎ，１９９５，Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．&Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．１０４、４５９−４６６）は、３次元ＥＣＭ（細胞外マトリックス）環境におけるヒト微小血管内皮細胞血管新生の研究用に修飾された。簡潔には、以前記載された（Ｆｅｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１３、９１３−９１９、Ｍｏｕｓａ  ｅｔ  ａｌ．，２００５，Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  Ｄｅｃ．２９，２００５、１３９０）ように単離されたヒトフィブリンは、１ｍｇ／ｍｌ（ｐＨ７．４）の濃度でＭ１９９培養液に溶解し、０．２２ミクロンフィルターを通す濾過によって滅菌した。等張１．５ｍｇ／ｍｌコラーゲン溶液は、５ＸＭ１９９培養液及び蒸留水において滅菌ビトロジェン１００を混合することによって調合した。ｐＨは１Ｎ  ＮａＯＨによって７．４に調節した。特定の実施形態において、成長因子及びＥＣＭタンパク質（ＶＥＧＦ、ｂＦＧＦ、ＰＤＧＦ（血小板由来増殖因子）、血清、ゼラチン及びフィブロネクチンなど）をフィブリノーゲン或いはコラーゲン溶液へ添加した。約５００ＥＣ−ビーズを次に１ｍｇ／ｍｌフィブリノーゲン或いは１．５ｍｇ／ｍｌコラーゲン溶液へ添加した。その後、ＥＣ−ビーズ−コラーゲン或いはＥＣ−ビーズ−フィブリノーゲン懸濁液（５００ＥＣ−ビーズ／ｍｌ）は３００μｌ／ウェルで２４ウェルプレートへプレーティングした。ＥＣ−ビーズ−コラーゲン培養は、ゲルを形成するまで３７℃でインキュベーションした。ＥＣ−ビーズ−フィブリン培養のゲル化は、０．５Ｕ／ｍｌの最終濃度までトロンビンを添加した後、室温で３分以内に生じた。ゲル化後、１ｍｌの新鮮アッセイ培養液（ＨＤＭＥＣ用に２０％正常ヒト血清を添加されたＥＢＭ、或いはＢＡＥＣ（ウシ大動脈内皮細胞）用に１０％ウシ胎児血清を添加されたＥＢＭ）を各ウェルへ添加した。血管新生反応は、視覚的にモニタリングし、ビデオ画像収録によって記録した。特に、毛細血管出芽形成を観察し、Ｎｉｋｏｎ  ＮＰ−２サーモスタット及びＳｈｅｌｄｏｎ＃２００４二酸化炭素流動撹拌器を収容するインキュベーターを備えているＮｉｋｏｎ−Ｄｉａｐｈｏｔ−ＴＭＤ反転顕微鏡（Ｎｉｋｏｎ  Ｉｎｃ．、ニューヨーク州メルビル）で記録した。顕微鏡は、マッキントッシュＧ３コンピューターと連結したＤａｇｅ−ＭＴＩ  ＣＣＤ−７２Ｓビデオカメラ及びＳｏｎｙ  １２’’ＰＶＭ−１２２ビデオモニターからなるビデオシステムに直接連結（インターフェース）していた。画像は、Ａｄｏｂｅ  Ｐｈｏｔｏｃｈｏｐを用いて様々な倍率で収録した。出芽血管新生に対する血管新生因子の効果は、毛細血管出芽を有するＥＣ−ビーズの数及びパーセントを決定することによって視覚的に定量化した。各三つ組ウェルにおける１００ビーズ（５から６ランダム低出力領域）は、各実験条件に対して計算した。全ての実験は、少なくとも３回繰り返した。統計学的解析は、それぞれのコントロー��群と実験的に比較した分散の１−ｗａｙ解析によって実行し、統計学的有意差は、Ｐ<０．０５を元にして計算した。
【００９５】
本発明は、現在好ましい実施形態を参照にしながら示し記載したが、本発明は本明細書で特に開示され例示された実施例に限定されるものではないことは理解される。多数の変更及び修飾は、添付の請求項に説明されたように本発明の範囲及び観点から逸脱せずに、本発明の好ましい実施形態に対してなされるものである
【図面の簡単な説明】
【００９６】
【図１】図１は、標準化インキュベーション条件下におけるインキュベーション時間の機能としての、ラット、ウサギ、イヌ及びヒト血漿における化合物１（シクロプロパンカルボン酸１−ヒドロキシ−２，２，６，６−テトラメチル−ピペリジン−４−イルエステル）の消失を示したものである。
【図２】図２は、標準化インキュベーション条件下における化合物１インキュベーション時間の機能としての、ラット、ウサギ、イヌ及びヒト血漿におけるＴＰＨの出現を示したものである。
【図３】図３は、インキュベーション時間の機能としての、ラット血漿における化合物１の消失及びＴＰＨの出現を示したものである。
【図４】図４は、インキュベーション時間の機能としての、ウサギ血漿における化合物１の消失及びＴＰＨの出現を示したものである。
【図５】図５は、インキュベーション時間の機能としての、イヌ血漿における化合物１の消失及びＴＰＨの出現を示したものである。
【図６】図６は、インキュベーション時間の機能としての、ヒト血漿における化合物１の消失及びＴＰＨの出現を示したものである。
【図７】図７は、化合物１の単一１０分静脈内注入後の、スプラーグドーリーラット（ｎ＝５から６）における時間の機能としての、化合物１の平均±ＳＤ血漿濃度を示したものである。
【図８】図８は、化合物１の単一１０分静脈内注入後の、スプラーグドーリーラット（ｎ＝５から６）における時間の機能としての、ＴＰＨの平均±ＳＤ血漿濃度を示したものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【国際調査報告】
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