(57)【要約】  本発明は、少なくとも一部において、式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩（ここで、Ｚ1、Ｚ2、Ｚ3、Ｒ1、ｘ、ｙ、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4a、Ｒ4b、Ｒ5、Ｒ6およびＲ7は本明細書に記載されている）、ならびにそれらの同定方法、それらの製造方法、それらを含有する医薬組成物、治療（例えば癌および他の増殖性障害の治療）におけるオーロラＡキナーゼ阻害剤としてのそれらの使用を提供する。2009545592.tif 000036
2009545592.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2009545592.tif 000031
［式中、
Ｚ1、Ｚ2、およびＺ3は、各々独立して、Ｃ−ＲまたはＮであり、ここで、Ｒは、Ｈ、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、ハロ、ＣＮ、または(Ｃ1〜Ｃ6)アルコキシであり、これらは各々、炭素上にて−ＯＨ、ハロまたは(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルで置換されていてもよく；
Ｒ1は、１、２または３個のＲ6で置換されていてもよい、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルであり；
ｘおよびｙは、各々独立して、０または１であり；
Ｒ2は、水素、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、シアノ、−ＣＯ2Ｈ、−Ｃ(＝Ｏ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−Ｃ(＝Ｎ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＣＯ2(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＣＯＮＨ2、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ2、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)、−Ｃ(＝Ｎ)Ｎ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、−ＣＯＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、ＣＯＮ((Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2であり、これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ6で置換されていてもよく；
Ｒ3は、炭素上にて１、２または３個のＲ6で置換されていてもよい、アリールまたはヘテロアリールであるか；または、ヘテロアリールがＮＨを含有する場合、この窒素は(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルで置換されていてもよく；
Ｒ4aは、水素、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、または(Ｃ3〜Ｃ6)シクロアルキル（炭素上にて１、２または３個のＲ6で置換されていてもよい）であり；
Ｒ4bは、水素、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、(Ｃ2〜Ｃ6)アルケニル、(Ｃ2〜Ｃ6)アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、またはヘテロアラルキルであるか（ここで、これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ6で置換されていてもよい）；または
Ｒ4aおよびＲ4bは、それらが結合している炭素と一緒になって、アリールまたはヘテロアリール基を形成し；
Ｒ5は、水素、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、または(Ｃ3〜Ｃ6)シクロアルキルであり；
Ｒ6は、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、アミノ、−ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−Ｎ((Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、アリール、ヘテロアリール、(Ｃ3〜Ｃ7)シクロアルキル、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、(Ｃ2〜Ｃ6)アルケニル、(Ｃ2〜Ｃ6)アルキニル、(Ｃ1〜Ｃ6)アルコキシ、(Ｃ2〜Ｃ6)アルケニルオキシ、(Ｃ2〜Ｃ6)アルキニルオキシ、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルチオ、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルスルフィニル、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルスルホニル、アミノ、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルアミノ、ジ−[(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル]アミノ、ホルミル、−Ｃ(＝Ｏ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−Ｃ(＝Ｎ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、カルボキシ、−ＣＯ2(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＣＯＮＨ2、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ2、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)、−Ｃ(＝Ｎ)Ｎ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、−ＣＯＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＣＯＮ((Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、−ＯＣ(Ｏ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ2、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ((Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、−ＮＨＣ(Ｏ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−Ｎ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル−Ｃ(Ｏ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)ＮＨ2、−Ｎ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ2、−Ｎ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、Ｎ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、−ＮＨ−(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルスルファモイル、Ｎ,Ｎ−ジ−[(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル]スルファモイル、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルスルホニルアミノ、または−Ｎ−(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル−(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルスルホニルアミノであり（ここで、これらは、炭素上にてＲ7で置換されていてもよい）；および
Ｒ7は、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル 、(Ｃ1〜Ｃ6)アルコキシ、シアノ、ニトロ、またはヒドロキシルである］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項２】
Ｒ1が、炭素上にて１個または２個のハロゲンまたはアルコキシで置換されていてもよい、アラルキルおよびヘテロアラルキルからなる群から選択される、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ5が、水素、メチルおよびシクロヘキシルからなる群から選択される、請求項１〜２いずれか１項記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ6が、クロロ、フルオロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシル、アミノおよびメチルからなる群から選択される、請求項１〜３いずれか１項記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ7が、クロロ、フルオロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、シアノ、ニトロおよびヒドロキシルからなる群から選択される、請求項１〜４いずれか１項記載の化合物。
【請求項６】
式Ｉ−１：
【化２】
2009545592.tif 000032
で示される化合物である請求項１〜５いずれか１項の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項７】
式Ｉ−２：
【化３】
2009545592.tif 000033
で示される化合物である請求項１〜６いずれか１項の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項８】
式Ｉ−３：
【化４】
2009545592.tif 000034
で示される化合物である請求項１〜７いずれか１項の化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項９】
Ｒ2が水素、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＣＯ2Ｈ、−ＣＯ2(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、ＣＯＮ((Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2であり；
Ｒ3がアリールまたはヘテロアリールである
請求項８記載の化合物。
【請求項１０】
【化５】
2009545592.tif 000035
からなる群から選択される化合物またはその医薬上許容される塩。
【請求項１１】
請求項１〜１０いずれか１項記載の化合物および医薬上許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１２】
対象体または生物学的試料中におけるオーロラキナーゼ活性の阻害方法であって、請求項１１記載の組成物を該対象体に投与して、または、生物学的試料に接触させて、結果としてオーロラキナーゼ活性が阻害されることを含む方法。
【請求項１３】
対象体における増殖性障害から選択される状態を有する疾患を治療するかまたはその重篤度を軽減する方法であって、請求項１１記載の組成物の有効量を該対象体に投与して、結果として該増殖性障害が治療されるかまたは該増殖性障害の重篤度が軽減されることを含む方法。
【請求項１４】
対象体における癌の治療方法であって、請求項１１記載の組成物の有効量を対象体に投与して、結果として癌が治療されることを含む方法。
【請求項１５】
癌の治療を必要とする対象体における癌を治療するための薬剤の製造のための請求項１〜１０いずれか１項記載の化合物または請求項１１記載の組成物の使用。
【請求項１６】
患者における癌を治療するための薬剤の製造のための請求項１１記載の組成物の使用。
【請求項１７】
治療における請求項１１記載の組成物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本願は、２００６年７月３１日に出願された米国仮出願番号第６０／８２０,８６９号に関するものであって、その優先権を主張するものであり、その内容は全体としてこの言及をもって本明細書の記載とする。
【背景技術】
【０００２】
プロテインキナーゼは、細胞周期の異なる段階およびチェックポイント間の移行を促進または遅延させるのに重要な役割を果たす。ヒトにおいて、３種類のセリン／スレオニンプロテインキナーゼの最も関連するサブグループ（オーロラキナーゼ）は、細胞周期の分裂期を調節するタンパク質リン酸化事象において重要な役割を果たすと考えられる。オーロラキナーゼは、結腸腫瘍、乳腺腫瘍および他の固形腫瘍のような数種類のヒトの癌細胞において過剰発現される。オーロラＡ遺伝子およびオーロラＢ遺伝子は、乳癌および結腸直腸癌において増幅するが、一方、オーロラＣ遺伝子は、数種類の癌細胞において再編成されるかまたは欠失している領域に位置する。齧歯類線維芽細胞におけるオーロラＡの過剰発現はトランスフォーメーションを誘発し、これは、オーロラＡが発癌性を有することを示している。オーロラＡ ｍＲＮＡ発現は、ヒトの乳癌における染色体不安定性に結び付けられている。かくして、癌および他の増殖性障害の治療においてオーロラキナーゼのいずれかまたは全てを阻害する化合物が必要とされている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００３】
したがって、一の態様では、本発明は、式Ｉ：
【化１】
2009545592.tif 000003
［式中、
Ｚ1、Ｚ2およびＺ3は、各々独立して、Ｃ−ＲまたはＮであり、ここで、Ｒは、Ｈ、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、ハロ、ＣＮ、または(Ｃ1〜Ｃ6)アルコキシであり、これらは各々、炭素上にて−ＯＨ、ハロまたは(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルで置換されていてもよく；
Ｒ1は、炭素上にて１、２または３個のＲ6で置換されていてもよい、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルであり；
ｘおよびｙは、各々独立して、０または１であり；
Ｒ2は、水素、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、シアノ、−ＣＯ2Ｈ、−Ｃ(＝Ｏ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−Ｃ(＝Ｎ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＣＯ2(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＣＯＮＨ2、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ2、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)、−Ｃ(＝Ｎ)Ｎ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、−ＣＯＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、ＣＯＮ((Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2であり、これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ6で置換されていてもよく；
Ｒ3は、炭素上にて１、２または３個のＲ6で置換されていてもよい、アリールまたはヘテロアリールであるか；または、ヘテロアリールがＮＨを含有する場合、この窒素は(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルで置換されていてもよく；
Ｒ4aは、水素、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、または(Ｃ3〜Ｃ6)シクロアルキル（炭素上にて１、２または３個のＲ6で置換されていてもよい）であり；
Ｒ4bは、水素、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、(Ｃ2〜Ｃ6)アルケニル、(Ｃ2〜Ｃ6)アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、またはヘテロアラルキルであるか（ここで、これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ6で置換されていてもよい）；または
Ｒ4aおよびＲ4bは、それらが結合している炭素と一緒になって、アリールまたはヘテロアリール基を形成し；
Ｒ5は、水素、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、または(Ｃ3〜Ｃ6)シクロアルキルであり；
Ｒ6は、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、アミノ、−ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−Ｎ((Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、アリール、ヘテロアリール、(Ｃ3〜Ｃ7)シクロアルキル、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、(Ｃ2〜Ｃ6)アルケニル、(Ｃ2〜Ｃ6)アルキニル、(Ｃ1〜Ｃ6)アルコキシ、(Ｃ2〜Ｃ6)アルケニルオキシ、(Ｃ2〜Ｃ6)アルキニルオキシ、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルチオ、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルスルフィニル、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルスルホニル、アミノ、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルアミノ、ジ−[(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル]アミノ、ホルミル、−Ｃ(＝Ｏ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−Ｃ(＝Ｎ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、カルボキシ、−ＣＯ2(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＣＯＮＨ2、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ2、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)、−Ｃ(＝Ｎ)Ｎ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、−ＣＯＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＣＯＮ((Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、−ＯＣ(Ｏ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ2、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ((Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、−ＮＨＣ(Ｏ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−Ｎ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル−Ｃ(Ｏ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)ＮＨ2、−Ｎ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ2、−Ｎ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、Ｎ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、−ＮＨ−(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルスルファモイル、Ｎ,Ｎ−ジ−[(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル]スルファモイル、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルスルホニルアミノ、または−Ｎ−(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル−(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルスルホニルアミノであり（ここで、これらは、炭素上にてＲ7で置換されていてもよい）；
Ｒ7は、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、(Ｃ1〜Ｃ6)アルコキシ、シアノ、ニトロ、またはヒドロキシである］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩を対象とする。
【０００４】
本発明はまた、
【化２】
2009545592.tif 000004
である化合物またはその医薬上許容される塩を対象とする。
【０００５】
いくつかの態様では、本発明また、式Ｉで示される化合物および医薬上許容される担体を含む医薬組成物を対象とする。
【０００６】
いくつかの態様では、本発明は、本明細書に記載の化合物または組成物の治療における使用を対象とする。
【０００７】
いくつかの態様では、本発明はまた、対象体または生物学的試料におけるオーロラキナーゼ活性の阻害方法であって、式Ｉで示される化合物を該対象体に投与するかまたは生物学的試料に接触させて、結果としてオーロラキナーゼ活性が阻害されることを含む方法を対象とする。いくつかの態様では、本発明はまた、対象体におけるオーロラキナーゼ媒介状態の治療方法であって、式Ｉで示される化合物を含む組成物を該対象体に投与して、結果としてオーロラキナーゼ媒介状態が治療されることを含む方法を対象とする。
【０００８】
いくつかの態様では、対象体における増殖性障害から選択される状態を有する疾患を治療するかまたはその重篤度を軽減する方法であって、式Ｉで示される化合物の有効量を該対象体に投与して、結果として該増殖性障害が治療されるかまたは該増殖性障害の重篤度が軽減されることを含む方法を対象とする。
【０００９】
いくつかの態様では、本発明は、対象体における癌の治療方法であって、式Ｉで示される化合物の有効量を対象体に投与して、結果として癌が治療されることを含む方法を対象とする。
【００１０】
いくつかの態様では、本発明はまた、患者におけるオーロラ媒介状態を治療するための薬剤の製造のための式Ｉで示される化合物の使用を対象とする。いくつかの態様では、本発明はまた、患者におけるオーロラ媒介状態を治療するための薬剤の製造のための、式Ｉで示される化合物またはその医薬上許容される塩、および医薬上許容される担体を含む組成物の使用を対象とする。
【００１１】
いくつかの態様では、本発明は、対象体における癌を治療するための薬剤の製造のための式Ｉで示される化合物の使用を対象とする。
【００１２】
いくつかの態様では、本発明はまた、下記スキーム１に示される工程を含む、式Ｉで示される化合物の製造方法を対象とする。
【図面の簡単な説明】
【００１３】
【図１】図１は、（Ａ）化学的エラボレーションのためのＤＮＡ鎖とペンダントアミンとの間の共有結合を示す「ヘッドピース」の化学構造；（Ｂ）ケミカルディスプレイライブラリーの合成スキーム；（Ｃ）ヘッドピース、スペーサー、コード領域およびプライマーの略図；ならびに（Ｄ）ライブラリー分子の空間充填モデルを示す。「小分子」は、全分子量の２％未満を占める。
【図２】図２は、ケミカルディスプレイライブラリーを照合する方法を示す。
【図３】図３は、以下のものを示す。（Ａ）Ｓｐｏｔｆｉｒｅ（登録商標）Ｄｅｃｉｓｉｏｎ Ｓｉｔｅ ８.１.１（Spotfire U.S.、マサチューセッツ州サマービル）を使用して三次元で視たライブラリー集団。立方体の各軸は所定の合成サイクルで使用したシントンを表している９１２個の位置からなっている；その結果として、７,０７７,０８８個の成分の各々が立方体スペースにおける単一の点によって一意的に同定され得る；（Ｂ）ノー・ターゲット（Ｎｏ Ｔａｒｇｅｔ）選択により得られた未選別集団；（Ｃ）発生率が低い分子について選別した後の同集団。ランダムノイズが残っているだけである；（Ｄ）方法Ａを使用したオーロラＡキナーゼに対する選択により得られた未選別集団；（Ｅ）発生率が低い分子について選別した後の同集団。６−アミノキノリン・ファミリーが線で表される（上向き矢印）。７−アザトリプトファン・ファミリーは、同平面を占めている一連の点によって表される（左向きの矢印）；（Ｆ）方法Ａを使用したオーロラＡキナーゼに対する独立的選択により得られた選別集団；（Ｇ）方法Ｂを使用してオーロラＡキナーゼに対して濃縮された集団；（Ｈ）ＶＸ−６８０の存在下でオーロラＡに対する方法Ａ選択により得られた集団；（Ｉ）方法ＡおよびＢを使用した選択の結果を合わせたもの。合成され、試験された分子は、黒っぽく表示されており、数字を付して示されている；（Ｊ）ｐ３８ ＭＡＰキナーゼに対する選択により濃縮された集団。選択された化合物は全て、サイクル１において公知の阻害剤の下部構造を共有する；（Ｋ）オーロラＡキナーゼ（明るいグレー）およびｐ３８ ＭＡＰキナーゼ（暗いグレー）により選択された集団のオーバーレイ。
【図４】図４は、オーロラＡ選択（１〜８）およびｐ３８選択（９〜１２）により得られた代表的な化合物の化学構造を示す。表は、２つのキナーゼに対する化合物のＩＣ50値を示す。プロットは、オーロラＡキナーゼに対する化合物１〜８の阻害曲線を示す。
【図５】図５Ａ〜Ｂは、本発明の代表的な実施態様の主要ピークのＵＶトレースおよびマススペクトルを示すグラフである。
【図６】図６は、本発明の一の実施態様の精製ライブラリーのＵＶトレースである。
【図７】図７は、本発明の一の実施態様のライブラリーの生マススペクトログラムである。
【図８】図８は、本発明の一の実施態様のライブラリーのデコンボリュートされた質量である。
【図９】図９は、本発明の代表的な組成物の阻害パーセント対濃度を示すグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
（発明の詳細な説明）
定義
他に特記しない限り、以下の定義を使用する。
【００１５】
「ハロゲン」または「ハロ」は、フルオロ（Ｆ）、クロロ（Ｃｌ）、ブロモ（Ｂｒ）、またはヨード（Ｉ）を意味する。
【００１６】
単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「炭化水素」なる用語は、炭素原子１４個までの炭素原子および水素原子だけを含む構造をいう。
【００１７】
単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「炭化水素基」または「ヒドロカルビル」なる用語は、炭化水素から１個またはそれ以上の水素を取り除いた結果としての構造をいう。
【００１８】
単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「アルキル」なる用語は、１〜約１２個の炭素原子を含む一価の直鎖または分枝鎖炭化水素基をいう。
【００１９】
単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「アルキレン」なる用語は、２つの構造を一緒に連結する役割を果たす、１〜約１２個の炭素原子を含む二価の直鎖または分枝鎖炭化水素基をいう。
【００２０】
単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「シクロアルキル」なる用語は、少なくとも３個であって約１２個までの炭素原子を含む飽和もしくは部分不飽和の一価の環含有炭化水素基をいう。
【００２１】
単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「アリール」なる用語は、芳香族性を有する１個またはそれ以上の多不飽和炭素環を有しており、５個〜約１４個までの炭素原子を含む一価の炭化水素基をいう。
【００２２】
単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「ヘテロサイクル」なる用語は、環構造の一部としてＮ、ＯおよびＳから独立して選択される１個またはそれ以上の多価ヘテロ原子を有しており、環中に少なくとも３個であって約２０個までの原子を含む環含有構造または分子をいう。ヘテロサイクルは、飽和であっても、１個またはそれ以上の二重結合を含有する不飽和であってもよく、また、ヘテロサイクルは、２個以上の環を含有していてもよい。ヘテロサイクルが２個以上の環を含有する場合、これらの環は、縮合されていても、縮合されていなくてもよい。縮合環とは、一般的に、それらの間で２個の原子を共有する少なくとも２個の環をいう。ヘテロサイクルは、芳香族性を有していても、有していなくてもよい。
【００２３】
単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「ヘテロサイクリック基」、「ヘテロサイクリック部分」、「ヘテロサイクリック」または「ヘテロシクロ」なる用語は、１個またはそれ以上の水素を取り除くことによりヘテロサイクルから誘導された基をいう。
【００２４】
単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「ヘテロサイクリル」なる用語は、１個の水素を取り除くことによりヘテロサイクルから誘導された一価の基をいう。
【００２５】
単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「ヘテロアリール」なる用語は、芳香族性を有するヘテロサイクリルをいう。
【００２６】
ヘテロサイクルは、例えば、単環式ヘテロサイクル、例えば、アジリジン、オキシラン、チイラン、アゼチジン、オキセタン、チエタン、ピロリジン、ピロリン、イミダゾリジン、ピラゾリジン、ピラゾリン、ジオキソラン、スルホラン、２,３−ジヒドロフラン、２,５−ジヒドロフラン、テトラヒドロフラン、チオファン、ピペリジン、１,２,３,６−テトラヒドロ−ピリジン、ピペラジン、モルホリン、チオモルホリン、ピラン、チオピラン、２,３−ジヒドロピラン、テトラヒドロピラン、１,４−ジヒドロピリジン、１,４−ジオキサン、１,３−ジオキサン、ジオキサン、ホモピペリジン、２,３,４,７−テトラヒドロ−１Ｈ−アゼピン、ホモピペラジン、１,３−ジオキセパン、４,７−ジヒドロ−１,３−ジオキセピン、およびヘキサメチレンオキシドを包含する。
【００２７】
さらに、ヘテロサイクルは、芳香族ヘテロサイクル（ヘテロアリール基）、例えば、ピリジン、ピラジン、ピリミジン、ピリダジン、チオフェン、フラン、フラザン、ピロール、イミダゾール、チアゾール、オキサゾール、ピラゾール、イソチアゾール、イソオキサゾール、１,２,３−トリアゾール、テトラゾール、１,２,３−チアジアゾール、１,２,３−オキサジアゾール、１,２,４−トリアゾール、１,２,４−チアジアゾール、１,２,４−オキサジアゾール、１,３,４−トリアゾール、１,３,４−チアジアゾール、および１,３,４−オキサジアゾールを包含する。
【００２８】
さらに、ヘテロサイクルは、多環式ヘテロサイクル、例えば、インドール、インドリン、イソインドリン、キノリン、テトラヒドロキノリン、イソキノリン、テトラヒドロイソキノリン、１,４−ベンゾジオキサン、クマリン、ジヒドロクマリン、ベンゾフラン、２,３−ジヒドロベンゾフラン、イソベンゾフラン、クロメン、クロマン、イソクロマン、キサンテン、フェノキサチイン、チアントレン、インドリジン、イソインドール、インダゾール、プリン、フタラジン、ナフチリジン、キノキサリン、キナゾリン、シンノリン、プテリジン、フェナントリジン、ペリミジン、フェナントロリン、フェナジン、フェノチアジン、フェノキサジン、１,２−ベンゾイソオキサゾール、ベンゾチオフェン、ベンゾオキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾイミダゾール、ベンゾトリアゾール、チオキサンチン、カルバゾール、カルボリン、アクリジン、ピロリジジン、およびキノリジジンを包含する。
【００２９】
上記多環式ヘテロサイクルに加えて、ヘテロサイクルは、２個またはそれ以上の環の間の環縮合が両方の環に共通している２つ以上の結合および両方の環に共通している３個以上の原子を含む多環式ヘテロサイクルを含む。かかる架橋ヘテロサイクルの例としては、キヌクリジン、ジアザビシクロ[２.２.１]ヘプタンおよび７−オキサビシクロ[２.２.１]ヘプタンが挙げられる。
【００３０】
ヘテロサイクリルは、例えば、単環式ヘテロサイクリル、例えば、アジリジニル、オキシラニル、チイラニル、アゼチジニル、オキセタニル、チエタニル、ピロリジニル、ピロリニル、イミダゾリジニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ジオキソラニル、スルホラニル、２,３−ジヒドロフラニル、２,５−ジヒドロフラニル、テトラヒドロフラニル、チオファニル、ピペリジニル、１,２,３,６−テトラヒドロ−ピリジニル、ピペラジニル、モルホリニル、チオモルホリニル、ピラニル、チオピラニル、２,３−ジヒドロピラニル、テトラヒドロピラニル、１,４−ジヒドロピリジニル、１,４−ジオキサニル、１,３−ジオキサニル、ジオキサニル、ホモピペリジニル、２,３,４,７−テトラヒドロ−１Ｈ−アゼピニル、ホモピペラジニル、１,３−ジオキセパニル、４,７−ジヒドロ−１,３−ジオキセピニル、およびヘキサメチレンオキシジルを包含する。
【００３１】
さらに、ヘテロサイクリルは、芳香族ヘテロサイクリルまたはヘテロアリール、例えば、ピリジニル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、チエニル、フリル、フラザニル、ピロリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、１,２,３−トリアゾリル、テトラゾリル、１,２,３−チアジアゾリル、１,２,３−オキサジアゾリル、１,２,４−トリアゾリル、１,２,４−チアジアゾリル、１,２,４−オキサジアゾリル、１,３,４−トリアゾリル、１,３,４−チアジアゾリル、および１,３,４−オキサジアゾリルを包含する。
【００３２】
さらに、ヘテロサイクリルは、多環式ヘテロサイクリル（芳香族または非芳香族の両方を含む）、例えば、インドリル、インドリニル、イソインドリニル、キノリニル、テトラヒドロキノリニル、イソキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、１,４−ベンゾジオキサニル、クマリニル、ジヒドロクマリニル、ベンゾフラニル、２,３−ジヒドロベンゾフラニル、イソベンゾフラニル、クロメニル、クロマニル、イソクロマニル、キサンテニル、フェノキサチイニル、チアントレニル、インドリジニル、イソインドリル、インダゾリル、プリニル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリニル、キナゾリニル、シンノリニル、プテリジニル、フェナントリジニル、ペリミジニル、フェナントロリニル、フェナジニル、フェノチアジニル、フェノキサジニル、１,２−ベンゾイソオキサゾリル、ベンゾチオフェニル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾイミダゾリル、ベンゾトリアゾリル、チオキサンチニル、カルバゾリル、カルボリニル、アクリジニル、ピロリジジニル、およびキノリジジニルを包含する。
【００３３】
上記多環式ヘテロサイクリルに加えて、ヘテロサイクリルは、２個またはそれ以上の環の間の環縮合が両方の環に共通している２つ以上の結合および両方の環に共通している３個以上の原子を含む多環式ヘテロサイクリルを包含する。かかる架橋ヘテロサイクルの例としては、キヌクリジニル、ジアザビシクロ[２.２.１]ヘプチル；および７−オキサビシクロ[２.２.１]ヘプチルが挙げられる。
【００３４】
接頭辞として使用される「６員」なる用語は、６個の環原子を含有する環を有する基をいう。
【００３５】
接頭辞として使用される「５員」なる用語は、５個の環原子を含有する環を有する基をいう。
【００３６】
５員ヘテロアリール環は、５個の環原子（ここで、１、２または３個の環原子は、独立して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される）を有する環を有するヘテロアリールである。代表的な５員環ヘテロアリールは、チエニル、フリル、ピロリル、イミダゾリル、チアゾリル、オキサゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、イソオキサゾリル、１,２,３−トリアゾリル、テトラゾリル、１,２,３−チアジアゾリル、１,２,３−オキサジアゾリル、１,２,４−トリアゾリル、１,２,４−チアジアゾリル、１,２,４−オキサジアゾリル、１,３,４−トリアゾリル、１,３,４−チアジアゾリル、および１,３,４−オキサジアゾリルである。
【００３７】
６員環ヘテロアリールは、６個の環原子（ここで、１、２または３個の環原子は、独立して、Ｎ、ＯおよびＳから選択される）を有する環を有するヘテロアリールである。代表的な６員環ヘテロアリールは、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、トリアジニルおよびピリダジニルである。
【００３８】
「アラルキル」なる用語は、アリール基で置換されているアルキル基をいう。
【００３９】
「ヘテロアラルキル」なる用語は、ヘテロアリール基で置換されているアルキル基をいう。
【００４０】
他に特記しない限り、「置換されている」なる用語は、接頭辞として用いられる場合には、１個またはそれ以上の水素が１個またはそれ以上のアルキル基、またはＮ、Ｏ、Ｓ、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｉ、およびＰから選択される１個またはそれ以上のヘテロ原子を含有する１個またはそれ以上の化学基と置き換わっている、構造、分子または基をいう。１個またはそれ以上のヘテロ原子を含有する代表的な化学基としては、ヘテロサイクリル、−ＮＯ2、−Ｏ−アルキル、ハロ、−ＣＦ3、−ＣＯ2Ｈ、−ＣＯ2Ｒ、−ＮＨ2、−ＳＨ、−ＮＨＲ、−ＮＲ2、−ＳＲ、−ＳＯ3Ｈ、−ＳＯ2Ｒ、−−Ｓ(Ｏ)Ｒ、−ＣＮ、−ＯＨ、−Ｃ(Ｏ)ＮＲ2、−−ＮＲＣ(Ｏ)Ｒ、オキソ（＝Ｏ）、イミノ（＝ＮＲ）、チオ（＝Ｓ）、および オキシイミノ（＝Ｎ−ＯＲ）（ここで、各「Ｒ」は、上記で定義したアルキルである）が挙げられる。例えば、置換フェニルは、ニトロフェニル、ピリジルフェニル、メトキシフェニル、クロロフェニル、アミノフェニルなどをいうことができる（ここで、該ニトロ、ピリジル、メトキシ、クロロ、およびアミノ基は、フェニル環上の適当な水素と置き換わることができる）。
【００４１】
単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「アルコキシ」なる用語は、一般的な−Ｏ−アルキルで示される基をいう。代表的なアルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｔ−ブトキシ、イソブトキシ、シクロプロピルメトキシ、アリルオキシ、およびプロパルギルオキシが挙げられる。
【００４２】
単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「アミン」または「アミノ」なる用語は、−ＮＨ2をいう
【００４３】
単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「アルキルアミノ」なる用語は、-ＮＨ(アルキル)をいう。
【００４４】
単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「ジアルキルアミノ」なる用語は、−ＮＨ(アルキル)2をいう。
【００４５】
単独でまたは接尾辞もしくは接頭辞として使用される「アシル」は、−Ｃ(Ｏ)−Ｒ（ここで、Ｒは、水素、ヒドロキシル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、またはアルコキシであり、これらは、上記「置換されている」の定義によって規定されているように置換されていてもよい）を意味する。アシル基としては、例えば、アセチル、プロピオニル、ベンゾイル、フェニルアセチル、カルボエトキシ、およびジメチルカルバモイルが挙げられる。
【００４６】
本発明の化合物には、エナンチオマー、ジアステレオマーおよび幾何異性体を包含する立体異性体として存在するものがある。(Ｒ)、(Ｓ)、エピマー、ジアステレオマー、シス、トランス、syn、anti、溶媒和物（水和物を含む）、互変異性体、およびその混合物を包含するこれらの形態はすべて、本発明の化合物において意図される。
【００４７】
本発明はまた、本発明の化合物の塩、特に、医薬上許容される塩に関する。「医薬上許容される塩」は、親化合物の所望の生物学的活性を保持し、かつ、望ましくない毒物学的効果をもたらさない塩である。該塩は、例えば、塩酸、臭化水素酸、硫酸、リン酸、硝酸および同類のもの；酢酸、シュウ酸、酒石酸、コハク酸、リンゴ酸、安息香酸、パモン酸、アルギン酸、メタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸および同類のもののような適当な酸との塩であり得る。また、アンモニウム、ナトリウム、カリウム、リチウム、亜鉛、銅、バリウム、ビスマス、カルシウムおよび同類のもののような陽イオンの塩；またはテトラアルキルアンモニウム陽イオンおよびトリアルキルアンモニウム陽イオンのような有機陽イオンの塩が挙げられる。
【００４８】
上記の塩の組合せもまた有用である。トリフルオロ酢酸、クロロ酢酸、およびトリクロロ酢酸との塩のような他の酸および／または陽イオンの塩もまた包含される。
【００４９】
本発明はまた、本発明の化合物の種々の結晶形態、水和物、および溶媒和物にも関する。
【００５０】
本発明の化合物
一の態様では、本発明は、式Ｉ：
【化３】
2009545592.tif 000005
［式中、
Ｚ1、Ｚ2、およびＺ3は、各々独立して、Ｃ−ＲまたはＮであり、ここで、Ｒは、Ｈ、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、ハロ、ＣＮ、または(Ｃ1〜Ｃ6)アルコキシであり、これらは各々、炭素上にて−ＯＨ、ハロ、または(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルで置換されていてもよく；
Ｒ1は、炭素上にて１、２または３個のＲ6で置換されていてもよい、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、ヘテロアラルキルであり；
ｘおよびｙは、各々独立して、０または１であり；
Ｒ2は、水素、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、シアノ、−ＣＯ2Ｈ、−Ｃ(＝Ｏ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−Ｃ(＝Ｎ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＣＯ2(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＣＯＮＨ2、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ2、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)、−Ｃ(＝Ｎ)Ｎ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、−ＣＯＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、ＣＯＮ((Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2であり、これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ6で置換されていてもよく；
Ｒ3は、炭素上にて１、２または３個のＲ6で置換されていてもよい、アリールまたはヘテロアリールであるか；またはヘテロアリールがＮＨを含有する場合には、この窒素が(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルで置換されていてもよく；
Ｒ4aは、水素、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、または(Ｃ3〜Ｃ6)シクロアルキルであり（ここで、炭素上にて１、２または３個のＲ6で置換されていてもよい）
Ｒ4bは、水素、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、(Ｃ2〜Ｃ6)アルケニル、(Ｃ2〜Ｃ6)アルキニル、アリール、ヘテロアリール、アラルキルまたはヘテロアラルキルであるか（これらは、炭素上にて１、２または３個のＲ6で置換されていてもよい）；または
Ｒ4aおよびＲ4bは、それらが結合している炭素と一緒になって、アリールまたはヘテロアリール基を形成し；
Ｒ5は、水素、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、または(Ｃ3〜Ｃ6)シクロアルキルであり；
Ｒ6は、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、シアノ、ニトロ、ヒドロキシ、アミノ、−ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−Ｎ((Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、アリール、ヘテロアリール、(Ｃ3〜Ｃ7)シクロアルキル、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、(Ｃ2〜Ｃ6)アルケニル、(Ｃ2〜Ｃ6)アルキニル、(Ｃ1〜Ｃ6)アルコキシ、(Ｃ2〜Ｃ6)アルケニルオキシ、(Ｃ2〜Ｃ6)アルキニルオキシ、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルチオ、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルスルフィニル、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルスルホニル、アミノ、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルアミノ、ジ−[(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル]アミノ、ホルミル、−Ｃ(＝Ｏ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−Ｃ(＝Ｎ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、カルボキシ、−ＣＯ2(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＣＯＮＨ2、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ2、−Ｃ(＝Ｎ)ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)、−Ｃ(＝Ｎ)Ｎ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、−ＣＯＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＣＯＮ((Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、−ＯＣ(Ｏ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ2、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＯＣ(Ｏ)ＮＨ((Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、−ＮＨＣ(Ｏ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−Ｎ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル−Ｃ(Ｏ)(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)ＮＨ2、−Ｎ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ2、−Ｎ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、Ｎ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、−ＮＨ−Ｃ(Ｏ)ＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2、−ＮＨ−(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルスルファモイル、Ｎ,Ｎ−ジ−[(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル]スルファモイル、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルスルホニルアミノ、または−Ｎ−(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル−(Ｃ1〜Ｃ6)アルキルスルホニルアミノであり（ここで、炭素上にてＲ7で置換されていてもよい）；および
Ｒ7は、ハロゲン、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、(Ｃ1〜Ｃ6)アルコキシ、シアノ、ニトロ、またはヒドロキシである］
で示される化合物またはその医薬上許容される塩を対象とする。
【００５１】
いくつかの実施態様では、Ｚ1はＮである。いくつかの実施態様では、Ｚ1はＣ−Ｈである。いくつかの実施態様では、Ｚ2はＮである。いくつかの実施態様では、Ｚ2はＣ−Ｈである。いくつかの実施態様では、Ｚ3はＮである。いくつかの実施態様では、Ｚ3はＣ−Ｈである。
【００５２】
いくつかの実施態様では、Ｒ1は、
【化４】
2009545592.tif 000006
であり、ここで、
【化５】
2009545592.tif 000007
は、結合点を示す。いくつかの実施態様では、Ｒ1は、
【化６】
2009545592.tif 000008
である。いくつかの実施態様では、Ｒ1は、
【化７】
2009545592.tif 000009
である。いくつかの実施態様では、Ｒ1は、
【化８】
2009545592.tif 000010
である。いくつかの実施態様では、Ｒ1は、
【化９】
2009545592.tif 000011
である。
【００５３】
いくつかの実施態様では、ｘは０である。いくつかの実施態様では、ｘは１である。
【００５４】
いくつかの実施態様では、ｙは０である。いくつかの実施態様では、ｙは１である。
【００５５】
いくつかの実施態様では、Ｒ2は水素である。いくつかの実施態様では、Ｒ2はＣＯ2Ｈである。いくつかの実施態様では、Ｒ2はＣＯ2Ｍｅである。いくつかの実施態様では、Ｒ2はＣＯ2Ｅｔである。いくつかの実施態様では、Ｒ2はＣＯＮＨ2である。
【００５６】
いくつかの実施態様では、Ｒ3は、
【化１０】
2009545592.tif 000012
である。いくつかの実施態様では、Ｒ3は、
【化１１】
2009545592.tif 000013
である。
【００５７】
いくつかの実施態様では、Ｒ4aは水素である。いくつかの実施態様では、Ｒ4aはメチルである。いくつかの実施態様では、Ｒ4bは水素である。いくつかの実施態様では、Ｒ4bは、ｎ−プロピルおよびイソプロピルを含むプロピルである。いくつかの実施態様では、Ｒ4bはエテニルである。いくつかの実施態様では、Ｒ4bはフェニルである。いくつかの実施態様では、Ｒ4aおよびＲ4bは、それらが結合している炭素と一緒になって、フェニルである。いくつかの実施態様では、Ｒ4aおよびＲ4bは、それらが結合している炭素と一緒になって、
【化１２】
2009545592.tif 000014
である。いくつかの実施態様では、Ｒ4aおよびＲ4bは、それらが結合している炭素と一緒になって、
【化１３】
2009545592.tif 000015
である。
【００５８】
Ｒ5についての特定の意味は水素である。Ｒ5についての別の特定の意味はメチルである。Ｒ5についての別の特定の意味は、シクロヘキシルである。
【００５９】
Ｒ6についての特定の意味はクロロである。Ｒ6についての別の特定の意味はフルオロである。Ｒ6についての別の特定の意味はトリフルオロメチルである。Ｒ6についての別の特定の意味はトリフルオロメトキシである。Ｒ6についての別の特定の意味はシアノである。Ｒ6についての別の特定の意味はニトロである。Ｒ6についての別の特定の意味はヒドロキシルである。Ｒ6についての別の特定の意味はアミノである。Ｒ6についての別の特定の意味はメチルである。
【００６０】
Ｒ7についての特定の意味はクロロである。Ｒ7についての別の特定の意味はフルオロである。Ｒ7についての別の特定の意味はトリフルオロメチルである。Ｒ7についての別の特定の意味はトリフルオロメトキシである。Ｒ7についての別の特定の意味はシアノである。Ｒ7についての別の特定の意味はニトロである。Ｒ7についての別の特定の意味はヒドロキシルである。
【００６１】
本発明の化合物の特定の群は、式Ｉ−１：
【化１４】
2009545592.tif 000016
で示される化合物である。
【００６２】
本発明の化合物の別の特定の群は、式Ｉ−２：
【化１５】
2009545592.tif 000017
で示される化合物である。
【００６３】
本発明の化合物の別の特定の群は、式Ｉ−３：
【化１６】
2009545592.tif 000018
で示される化合物である。
【００６４】
本発明の化合物の別の特定の群は、
Ｒ2が水素、(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＣＯ2Ｈ、−ＣＯ2(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、−ＣＯＮＨ2、−ＣＯＮＨ(Ｃ1〜Ｃ6)アルキル、ＣＯＮ((Ｃ1〜Ｃ6)アルキル)2であり；
Ｒ3がアリールまたはヘテロアリールである
式Ｉ−３で示される化合物である。
【００６５】
本発明の化合物の別の特定の群は、式Ｉ−４：
【化１７】
2009545592.tif 000019
で示される化合物である。
【００６６】
本発明の化合物の別の特定の群は、式Ｉ−５：
【化１８】
2009545592.tif 000020
で示される化合物である。
【００６７】
いくつかの態様では、本発明は、以下の化合物：
【化１９】
2009545592.tif 000021
またはその医薬上許容される塩を対象とする。
【００６８】
本発明の化合物の同定および製造
７,０００,０００を超えるメンバーを含むＤＮＡコード化小分子ライブラリーから本発明の化合物を同定した。概括的な注釈として、極めて大規模な小分子のライブラリーを創造しスクリーンする能力は、新しい化合物の同定に関する念願の目標であった。この構想を達成する方法として、１９８０年代および１９９０年代初期にコンビナトリアル・ケミストリーが開発され受け入れられたが、小さい混合物からでさえ活性成分を同定するのに利用可能な無益な方法が大いに起因して支持が減った（P. Landers, “Drug Industry's Big Push Into Technology Falls Short,” Wall Street Journal, Feb. 24, 2004）。一方、同じ時代に、ペプチドおよびタンパク質に由来する療法の発見へのロバストでかつ有益な取り組みとしてコンビナトリアル生物学的方法が現れた（N. Scheinfeld, J. Drugs Dermatol. 2, 375 (2003)；J.-H. Lee, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 102, 18902 (2005)）。これらの生化学的技術の成功は、複雑な混合物をデコンボリュートするための核酸ベースのコード化スキームの顕著な使用が大いに起因した。
【００６９】
コンビナトリアル・ケミストリーに関するデコンボリューション問題に取り組むために、ペプチドライブラリーに関するいくつかのグループによって、核酸をベースとする標識法が開発された（S. Brenner, R. A. Lerner, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89, 5381 (1992)；S. E. Cwirla, E. A. Peters, R. W. Barrett, W. J. Dower, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87, 6378 (1990)；D. R. Halpin, J. A. Lee, S. J, Wrenn, P. B. Harbury, PLoS Biology, 2, 1031 (2004)；S. Wilson, A. D. Keefe, J. W. Szostak, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 98, 3750 (2001)；A. Frankel, S. Li, S. R. Starck, R. W. Roberts, Curr. Opin. Struct. Biol. 13, 506 (2003)）。最近では、化学反応を駆動するための鋳型としてＤＮＡを利用する方法が開発されており、その結果、ＤＮＡで標識される小分子ライブラリーを生成することができるようになった（X. Li, D. R. Liu, Angew. Chem. Int. Ed. 43, 4848 (2004)）。これらの進歩にもかかわらず、核酸標識化を使用して大規模な小分子のライブラリーを創造し、スクリーンし、デコンボリュートする能力は制限されていた。
【００７０】
核酸コード化スキームを使用して、７,０７７,８８８個の成分からなる小分子ライブラリーが開発された（以下、「ケミカルディスプレイライブラリー」と呼ぶ）。該ライブラリーは、化学的合成法と酵素的合成法を組み合わせて使用して構築されており、図２に示すように、アフィニティーに基づく捕獲を使用して、オーロラＡキナーゼおよびｐ３８ ＭＡＰキナーゼ（医薬的に重要なターゲット）に対してスクリーンされた。該アフィニティー工程の後に、結合分子をコードする核酸をＰＣＲにより増幅した。ウルトラハイスループットＤＮＡ配列決定法を用いてデコンボリューションが行われた。配列決定データの解析および翻訳は、ターゲット酵素と結合した推定構造体のファミリーを同定した。これらの分子は、ＤＮＡ標識を用いずに合成され、慣用の生化学的および細胞ベースの方法を使用して試験された。これらの研究は、ケミカルディスプレイライブラリーが２つのキナーゼの新規な阻害剤を同定する能力を立証した。特に、該ライブラリースクリーンから直接、構造活性相関（ＳＡＲ）が得られた。
【００７１】
ケミカルディスプレイライブラリーの構築
ケミカルディスプレイライブラリーの作成のためのスキームを図２に示す。ライブラリー合成のための前駆体（「ヘッドピース」と称される）は、短い共有結合ＤＮＡ二本鎖であった（アイオワ州コーラルビルのIDT, Inc.から購入）（ここで、共有結合性リンカーは、スペーサー鎖にぶら下がっている第一級アミンを含んでいた）。相補ＤＮＡ鎖間の共有結合は、鎖交換を伴わずにライブラリー合成の間に用いられる高温化学反応を可能にするように特異的に選択された。ヘッドピースは、６組の塩基対および二塩基不対３'オーバーハングを含有していた。該オーバーハングは、さらなるＤＮＡコード種のライゲーションのための基質を提供する（Y. Kinoshita K. Nishigaki. Nucleic Acids Symposium Series No. 34, Oxford University Press, 1995, pp 201-202）。ＤＮＡから距離を置いて化学合成の位置を定めるために、さらなる１６原子スペーサー鎖をもって該ヘッドピースを付加した。さらに、ライブラリー合成の前に、ＰＣＲのためのプライマー配列としての役割を果たすために２０ｂｐ配列を該ヘッドピースにライゲートした。
【００７２】
該ライブラリーの作成に用いたＤＮＡ標識は、合成、選択および配列決定の間に最適な特性を有するように設計された。該標識は、一定のＧ／Ｃ含量を含有しており、その結果、全てのライブラリーメンバーは、同様の融解温度を有した。オーバーハング配列は、各サイクルに特有のものであって、その結果、各標識セットは、先行サイクルからのセットとだけライゲートすることができ、切断配列とはライゲートすることができなかった。
【００７３】
該ライブラリーの化学的多様性要素（本明細書では、「シントン」という）は、いくつかの基準を念頭に置いて選択された。サイクル１で使用されるＦｍｏｃ−アミノ酸ならびにサイクル２および３で使用されるアミンは、全て、商業的に入手可能であり、ニトロ基のような毒性または変異原性官能基を含まなかった。該ライブラリーにおいては、高収率で反応することが立証されたシントンだけが許された。各潜在的シントンを１種類またはそれ以上の代表的な反応で試験し、実施例のセクションに示されるように８０％またはそれ以上の変換をもたらしたものだけが含まれた。４００種類を超えるＦｍｏｃ−アミノ酸を求電子試薬および求核試薬として試験して、サイクル１で１９２個のシントンを得た。１０００種類を超えるアミンを試験して、サイクル２およびサイクル３のアミンセットを得た。ｐ３８ ＭＡＰキナーゼの阻害剤がライブラリー中に存在する可能性を増加させるために、サイクル２では３−アミノ−４−メチル−Ｎ−メトキシベンズアミドを含んだ（K. Leftheris, et. al. J. Med. Chem. 47, 6283 (2004)）。
【００７４】
該合成を行うためにスプリット・アンド・プール法の溶液変種を用いた。かくして、合成の第一サイクルを以下のとおり行った：修飾ヘッドピース２０μｍｏｌをライゲーション・バッファーに溶解し、４つの９６ウェルプレート中に整列させた。各ウェルに３８４個の特有の二本鎖ＤＮＡ標識の１つを移した（各々、出発二本鎖に対して相補的な二塩基３'オーバーハング、および次の標識とアニール化するための別の３'オーバーハングを含有していた）。各標識をヘッドピースの２倍過剰で加えた。酵素的ライゲーションを行い、ゲル電気泳動法によって確認した。次いで、伸長したＤＮＡをエタノールの添加によって沈殿させた。遠心分離後、整列したＤＮＡペレットを反応バッファー（ｐＨ９.５、１５ｍＭボラート）に溶解した。次いで、各ウェルに５０倍過剰の１９２種類のＦｍｏｃ保護アミノ酸の１つ（１つのシントンにつき２つのウェル）およびカップリング試薬を添加した。逆相ＨＰＬＣ／エレクトロスプレー質量分析法により、該化学反応をモニターした（Y. Kinoshita K. Nishigaki. Nucleic Acids Symposium Series No. 34, Oxford University Press, 1995, pp 201-202；M. Hail, B. Elliot, K. Anderson, Amer. Biotech. Laboratory, January 2004, p.12）。
【００７５】
完了後、ウェルをプールし、逆相液体クロマトグラフィーによりライブリーを精製した。この方法で、コード化標識配列とシントンとの間で特有の一致が確立された。各シントンは、２つの標識配列によってコードされた；かかる二重標識化は、その後のＰＣＲバイアスをモニターする一手段として用いられた。その後の２回の合成サイクルは、異なる合成化学を用いるが、操作的には最初の合成サイクルと同様であった。該合成の注目すべき一の態様は、サイクル３の反応が８０℃で行われたことである。実施例に示すように、比較的厳しい反応条件下でもＤＮＡ損傷は観察されなかった。
【００７６】
図１Ｂにまとめて記載するように、合成の各サイクルで１９２個のシントンを使用し、最終収量３.９μｍｏｌ（１９％）を得た（２６０ｎｍで光学密度により測定した）。７,０７７,８８８成分ライブラリーにおいて得られた小分子は、各々、特有の５３ｂｐＤＮＡ二本鎖に結合していた。アフィニティー選択の前に、該ライブラリーのアリコートを密接なプライマー配列とライゲートした。該プライマーは、縮重領域を含有しており、その後の増幅および配列決定の間にＰＣＲ複製を評価するために用いられた。
【００７７】
オーロラキナーゼに対するアフィニティー選択
ケミカルディスプレイライブラリーにオーロラＡキナーゼに対するアフィニティー選択を行った（E. Harrington, et. al., Nature Med. 10, 262 (2004)）。選択条件を実証するために、オーロラＡの公知の阻害剤であるＶＸ−６８０の誘導体を合成し、特異的標識化ＤＮＡ二本鎖と結合させた（J.-D. Charrier, F. Mazzei, D. Kay, A. Miller、ＷＯ ２００４／０００８３）。コード化したポジティブコントロール分子は、ターゲットキナーゼに対するアフィニティーを保持することが立証され（データは示さない）、他の７００万個の分子の濃度と同等の濃度にてケミカルディスプレイライブラリーで希釈された。
【００７８】
２つのアフィニティー選択法を調べた。方法Ａでは、ライブラリーのアリコート（５ｎｍｏｌの全ライブラリー、またはライブラリーメンバー１つにつき７００ａｍｏｌ、ポジティブコントロールを含む）を選択バッファー６０μＬ中にて６Ｈｉｓ標識化オーロラＡキナーゼタンパク質（３０ｐｍｏｌ）と一緒にインキュベートした。該ＤＮＡのターゲーットとの非特異的会合を最小限にするために、該バッファー中には遮断薬（剪断されたサケ精子ＤＮＡ、ウシ血清アルブミン）が含まれていた。次いで、ターゲットおよびターゲット結合ライブラリーメンバーを磁気ＩＭＡＣ（固定化金属アフィニティークロマトグラフィー）ビーズ上で捕獲した。方法Ｂでは、まず、該タンパク質を飽和濃度（理論値約９００ｐｍｏｌ）でＩＭＡＣピペットチップ（５μＬ、Phynexus, Inc.）上に固定化した。次いで、捕獲されたターゲットを選択バッファー中にてライブラリーと一緒にインキュベートした。両方の方法では、洗浄により非結合ライブラリーメンバーを取り除き、結合した集団をタンパク質ターゲットの熱変性によって回収した。次いで、回収した集団に対してさらに２回のアフィニティー選択のサイクルを行った。アフィニティー選択のサイクルの回数は、ＰＣＲおよび配列決定のための分子の産出量、ならびに潜在的ＳＡＲ分析のための低および高アフィニティー分子を保持するという要求に基づいて経験的に決定した。対照として、対応する選択をオーロラＡキナーゼの存在無しで行った（ノー・ターゲット・コントロール）。最終的な濃縮集団にＰＣＲを行い、増幅したアウトプットを配列決定した（M. Margulies, et. al., Nature 437, 326(2005)）。
【００７９】
３回のアフィニティー選択サイクルの後に得られた濃縮ライブラリー集団は、典型的には、選択のストリンジェンシーに依存して、１０4〜１０6個のメンバーからなっていた。慣用の配列決定技術は、かかる多量のＤＮＡ配列を調査することはできない。したがって、ウルトラハイスループット配列決定技術を使用した；選択試料１つにつき約５０,０００個の独立した配列を評価した。
【００８０】
未選択ライブラリーとオーロラＡ選択による増幅したアウトプットとの比較により、方法Ａを用いて選択を３回行った後、ポジティブコントロールの１００,０００倍の濃縮が明らかになった。ポジティブコントロールは１：７×１０6の割合でスパイクされた。選択を３回行った後、ポジティブコントロールは、６６,２０１個の配列中に９７１回、または１：７０の割合で観察された。これは、１００,０００倍の濃縮に想到する。この結果は、酵素が選択の間にその活性コンフォメーションを保持していることを示した；その結果として、次に、濃縮ライブラリー集団を試験した。
【００８１】
これらの実験からそれらのコード化分子への配列の翻訳は、多くの濃縮分子が構造的に関連しており、しばしば１または２個のシントン（図３におけるグラフにて面または線として表されている）を享有することを示した。図３Ｅおよび３Ｆは、方法Ａを用いる２つの独立した選択の後のライブラリー集団を示す。選択された集団の分析は、ノー・ターゲット・コントロールと比べて高い頻度で生じた分子のファミリーを明らかにした。２つの実験の間に良好な再現性があり、選択された分子の６３％が両方の集団において生じた。方法Ｂを用いて得られた濃縮集団が図３Ｇに示される。図３Ｅおよび３Ｆに示されるものと構造的に酷似しているものがある化合物のファミリーを再び選択した。別の実験では、ＶＸ−６８０（１０〜５０μＭ、ＤＮＡと共有結合していない）の存在下でオーロラキナーゼと一緒にアフィニティー選択を繰り返した（方法Ａを使用）。この集団のＰＣＲ、配列決定およびデータ解析は、濃縮ファミリーが識別できなかったことを示した（図３Ｈ）。この実験は、選択されたファミリーの構造がＶＸ−６８０としてオーロラキナーゼの同様の部位と結合することができることを示した。
【００８２】
オーロラキナーゼ阻害剤とＰ３８阻害剤との比較
本明細書に記載したオーロラキナーゼ阻害剤は、公知のオーロラＡキナーゼ阻害剤（A. A. Mortlock, et. al., Curr. Top. Med. Chem. 5, 807 (2005)）と構造的に全く異なる。両方のアフィニティー選択法によって強く選択された１つのファミリーは、サイクル２シントンとしての６−アミノキノリンの存在によって定義された（サイクル３においてはいくつかのアミンが好ましく、サイクル１においては観察できる優先がない）。興味深いことに、６−アミノキノリン面内で垂直な線の異なる部分によって立証されるように、異なるサイクル３アミンは、方法Ｂを用いるよりも方法Ａを用いるほうが好ましかった。他のファミリーは、サイクル１における７−アザトリプトファンの存在下によって定義された（サイクル２および３では種々のアミンが許容される）。このファミリーは、両方の方法によって選択されるが、方法Ａを使用するのが最も明らかである。
【００８３】
選択された分子の代表的なセットを合成した（図４）。小分子合成の目的のために、サイクル１のアミノ酸は、しばしば、それらのデスカルボキシアナログと交換された：かくして、７−アザトリプトファンが７−アザトリプトアミンと交換された。アッセイデータは、結合しているカルボキシアミドの欠失が阻害能にマイナスの影響を与えなかったことを示した（化合物１および２を参照）。精製後、該分子に対して種々の生化学アッセイを行った。化合物がターゲット酵素と結合していることを明らかにするために、表面プラズモン共鳴法（ＳＰＲ）を用いた。放射測定キナーゼアッセイを用いて阻害活性を調べた。阻害定数は、４５０ｎＭ〜７.６μＭの範囲であった。この範囲の効力は、企業によるスクリーニング収集の標準的ＨＴＳから得られたものに匹敵する（S. J. Teague, A. M. Davis, P. D. Leeson, T. Oprea, Angew. Chem. Int. Ed. 38, 3743 (1999)）。加えて、ヒト癌細胞株を用いて細胞増殖アッセイを行った。
【００８４】
酵素アッセイにおいて活性な化合物のいくつかは、増殖アッセイにおいても同様に活性であった。例えば、化合物１は、細胞増殖アッセイにおいてＥＣ50＝３.６μＭを有しており、一方、化合物２、３および７は、それぞれ、３.６μＭ、１０μＭ、および１０μＭのＥＣ50値を有した。この結果は、選択された分子が細胞透過性であり、リード最適化のための良好な出発点であり得ることを示している。
【００８５】
本明細書に記載のケミカルディスプレイライブラリー法を用いて、ｐ３８ ＭＡＰキナーゼの阻害剤も同定した。トリアジン骨格に基づくｐ３８ ＭＡＰキナーゼの阻害剤は記載されている（K. Leftheris, et. al. J. Med. Chem. 47, 6283 (2004)）。６Ｈｉｓ標識ｐ３８ ＭＡＰキナーゼに対するライブラリーの選択、次いで、ＰＣＲおよびＤＮＡ配列決定によって、ファミリー内の存在する数千個の分子を同定した（図３Ｊ）。該方法を使用して同定されたＰ３８ ＭＡＰキナーゼ阻害剤は、スキーム１に記載の化合物を包含していた。
【００８６】
【化２０】
2009545592.tif 000022
【００８７】
トリアジン上における３−アミノベンズアミド誘導体での置換は、阻害にとって非常に重大であることは従前に分かっており、実際に、選択された集団は、サイクル２におけるシントン、３−アミノ−４−メチル−Ｎ−メトキシベンズアミドに支配されていた。加えて、トリアジン上での第２の置換基としては短い分枝アルキルアミンが好ましく、第３の置換基としてはジアミンが好ましいことが分かった。このファミリーのいくつかのメンバーの合成によって、ｐ３８ ＭＡＰキナーゼの強力な阻害剤であり（ＩＣ50＝４〜１０ｎＭ、図４）、ＬＰＳ刺激ヒト単球からのＴＮＦ−αの分泌を阻害した化合物が得られた。例えば、化合物９は３３ｎＭのＥＣ50を有しており、一方、化合物１０、１１および１２は、それぞれ、２２ｎＭ、１１ｎＭおよび１２２ｎＭのＥＣ50値を有していた。ライブラリー選択によって定義されたＳＡＲは、概して先の報告と一致した。加えて、選択された化合物の効力は、慣用的な医薬化学法によって得られたものと比べて遜色がなかった（K. Leftheris, et. al. J. Med. Chem. 47, 6283 (2004)）。
【００８８】
ｐ３８ ＭＡＰおよびオーロラＡキナーゼの両方に対するケミカルディスプレイライブラリーの選択による結果は、図３Ｋに重ねて示される。これらのデータは、各キナーゼに関して選択されたファミリーが重複しなかったことを示しており、選択性についての可能性を示唆している。各ファミリーのメンバーについてのキナーゼ阻害能を表１に示しており、アッセイの濃度範囲内では、阻害活性の重複がないことが明らかである。ｐ３８阻害剤は、オーロラＡの阻害を示さず（＞１０,０００の選択性比）、オーロラ阻害剤は、ｐ３８を阻害しない（少なくとも１０〜２００の選択性比）。
【００８９】
医薬製剤
本発明のさらなる態様によると、式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩を医薬上許容される希釈剤または担体と一緒に含む医薬組成物が提供される。
【００９０】
本発明の組成物は、経口使用に適した剤形（例えば、錠剤、ロゼンジ剤、ハードもしくはソフトカプセル剤、水性もしくは油性懸濁剤、乳剤、分散可能な散剤もしくは顆粒剤、シロップ剤、またはエリキシル剤）、局所使用に適した剤形（例えば、クリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、または水性もしくは油性液剤もしくは懸濁剤）、吸入による投与に適した製剤（例えば、微粉または液体エアゾール剤）、インサフレーションによる投与に適した剤形（例えば、微粉）または非経口投与に適した剤形（例えば、静脈内投与、皮下投与、筋肉内投与もしくは筋肉内投与用の滅菌水性もしくは油性液剤、または直腸投与用の坐剤）であり得る。
【００９１】
本発明の組成物は、当該技術分野で周知の慣用の医薬賦形剤を使用して慣用の方法によって得ることができる。かくして、経口使用のための組成物は、例えば、１種類またはそれ以上の着色剤、甘味剤、香味剤、および／または保存剤を含有することができる。
【００９２】
錠剤のための適当な医薬上許容される賦形剤としては、例えば、ラクトース、炭酸ナトリウム、リン酸カルシウムまたは炭酸カルシウムのような不活性希釈剤；コーンスターチまたはアルギン酸のような顆粒化剤および崩壊剤；デンプンのような結合剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸またはタルクのような滑沢剤；ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルもしくはプロピルのような保存剤；およびアスコルビン酸のような抗酸化剤が挙げられる。錠剤は、被覆されていなくてもよいか、または、消化器官内でのそれらの崩壊および活性成分の次なる吸収を改変するために、または、それらの安定性および／または外観を改良するために、どちらの場合にも当該技術分野で周知の慣用的なコーティング剤およびコーティング方法を使用して被覆されていてもよい。
【００９３】
経口使用のための組成物は、活性成分を不活性固体希釈剤（例えば、炭酸カルシウム、リン酸カルシウムまたはカオリン）と混合したハードゼラチンカプセル剤の剤形であり得るか、または、活性成分を水または油（例えば、落花生油、流動パラフィン、大豆油、ヤシ油、または好ましくはオリーブ油）または他の許容されるビヒクルと混合したソフトゼラチンカプセル剤としてであり得る。
【００９４】
水性懸濁剤は、一般的に、微粉形態の活性成分を、１種類またはそれ以上の懸濁化剤、例えば、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、ポリビニル−ピロリドン、トラガカントガムおよびアカシアガム；分散剤または湿潤剤、例えば、レシチン、またはアルキレンオキシドと脂肪酸との縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンステアレート）、エチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールから誘導した部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート）、またはエチレンオキシドと長鎖脂肪族アルコールとの縮合生成物（例えば、ヘプタデカエチレンオキシセタノール）、またはエチレンオキシドと脂肪酸およびヘキシトールから誘導した部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリオキシエチレンソルビトールモノオレエート）、またはエチレンオキシドと脂肪酸および無水ヘキシトールから誘導した部分エステルとの縮合生成物（例えば、ポリエチレンソルビタンモノオレエート）と一緒に含有する。該水性懸濁剤はまた、１種類またはそれ以上の保存剤（例えば、ｐ−ヒドロキシ安息香酸エチルまたはプロピル）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸）、着色剤、香味剤、および／または甘味剤（例えば、シュークロース、サッカリンまたはアスパルテーム）を含有することもできる。
【００９５】
油性懸濁剤は、植物油（例えば、アラキス油、オリーブ油、ゴマ油またはヤシ油）または鉱油（例えば、流動パラフィン）に活性成分を懸濁することによって製剤化することができる。該油性懸濁剤はまた、蜜蝋、固形パラフィンまたはセチルアルコールのような増粘剤を含有することもできる。上記したような甘味剤、および香味剤を加えて美味な経口製剤を提供することができる。これらの組成物は、アスコルビン酸のような抗酸化剤の添加によって保存され得る。
【００９６】
水の添加による水性懸濁剤または液剤の製剤化に適した分散可能なまたは凍結乾燥した粉末および顆粒剤は、一般的に、分散剤または湿潤剤、懸濁化剤および１種類またはそれ以上の保存剤と一緒に活性成分を含有する。適当な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤は、上記したものによって例示される。甘味剤、香味剤および着色剤のようなさらなる賦形剤が存在してもよい。
【００９７】
本発明の医薬組成物は、水中油滴型エマルションの形態であってもよい。油性相は、植物油、例えば、オリーブ油またはアラキス油、または鉱油、例えば、流動パラフィンまたはこれらの混合物であり得る。適当な乳化剤は、例えば、天然ガム、例えば、アカシアガムまたはトラガカントガム、天然リン脂質、例えば、大豆、レシチン、脂肪酸および無水ヘキシトールから誘導したエステルまたは部分エステル（例えば、ソルビタンモノオレエート）および該部分エステルとエチレンオキシドとの縮合生成物、例えば、ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエートであり得る。該乳剤はまた、甘味剤、香味剤および保存剤を含有することもできる。
【００９８】
シロップ剤およびエリキシル剤は、グリセロール、プロピレングリコール、ソルビトール、アスパルテームまたはシュークロースのような甘味剤を用いて製剤化することができ、粘滑薬、保存剤、香味剤および／または着色剤を含有することもできる。
【００９９】
該医薬組成物はまた、滅菌注射用水性または油性懸濁剤、液剤、乳剤または特定の系の剤形であり得、上記した１種類またはそれ以上の適当な分散剤または湿潤剤および懸濁化剤を使用して公知の方法に従って製剤化され得る。滅菌注射用製剤はまた、無毒性の非経口的に許容される希釈剤または溶媒中の滅菌注射用溶液または懸濁液、例えば、ポリエチレングリコール中溶液であり得る。
【０１００】
坐剤製剤は、活性成分を、常温で固体であるが直腸温度で液体であり、したがって、直腸で融解して薬物を放出するであろう適当な非刺激性賦形剤と混合することによって調製することができる。適当な賦形剤としては、例えば、カカオ脂およびポリエチレングリコールが挙げられる。
【０１０１】
クリーム剤、軟膏剤、ゲル剤および水性または油性液剤または懸濁剤のような局所製剤は、一般的に、当該技術分野に周知の慣用の方法を用いて慣用の局所的に許容されるビヒクルまたは希釈剤で活性成分を製剤化することによって得られる。
【０１０２】
インサフレーションによる投与のための組成物は、活性成分を単独でまたは１種類またはそれ以上の生理学的に許容される担体（例えば、ラクトース）で希釈して含む微粉の形態であり得る。次いで、インサフレーション用の粉末は、好都合には、例えば、公知の剤であるクロモグリク酸ナトリウムのインサフレーションのために使用されるようなターボ吸入装置と一緒に用いるために活性成分１〜５０ｍｇを含有するカプセル中に保持される。
【０１０３】
吸入による投与のための組成物は、微細な固体または液滴を含有するエアゾールとして活性成分を投薬するようにアレンジされた慣用の加圧式エアゾールの剤形であり得る。揮発性フッ化炭化水素または炭化水素のような慣用のエアゾール噴射剤を使用することができ、エアゾール装置は、好都合には、定量した量の活性成分を投薬するようにアレンジされている。
【０１０４】
製剤についてさらなる情報について、読者は、Comprehensive Medicinal Chemistry (Corwin Hansch; Chairman of Editorial Board), Pergamon Press 1990の第５巻の第２５.２章を参照する。
【０１０５】
したがって、本発明のさらなる態様では、治療において用いるための式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩が提供される。
【０１０６】
用途
また、薬剤として用いるための式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩が提供される。本発明の別の態様は、癌、特に、結腸直腸癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、膀胱癌、腎癌もしくは膵癌、または白血病またはリンパ腫のような過剰増殖疾患の治療のための薬剤として用いるための式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩を提供する。
【０１０７】
さらに、式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩は、治療によるヒトのような温血動物の治療方法において用いるために提供される。本発明の別の態様は、癌、特に、結腸直腸癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、膀胱癌、腎癌もしくは膵癌、または白血病またはリンパ腫のような過剰増殖疾患の治療方法において用いるための式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩を提供する。
【０１０８】
本発明の別の態様では、１種類またはそれ以上のオーロラキナーゼの阻害が有益である疾患の治療のための薬剤の製造における式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩の使用が提供される。
【０１０９】
本発明の別の態様では、癌、特に、結腸直腸癌、乳癌、肺癌、前立腺癌、膀胱癌、腎癌もしくは膵癌、または白血病またはリンパ腫のような過剰増殖疾患の治療のための薬剤の製造における式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩の使用が提供される。
【０１１０】
さらに別の態様によると、１種類またはそれ以上のオーロラキナーゼの阻害が有益である疾患に罹患しているヒトの治療方法であって、該治療を必要とするヒトに式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩の治療上有効量を投与する工程を含む方法において用いるための式（Ｉ）で示される化合物またはその医薬上許容される塩が提供される。特に、オーロラＡキナーゼおよび／またはオーロラＢキナーゼの阻害が有益であり得ると考えられる。
【０１１１】
上記治療用途のために、投与量は、用いられる化合物、投与形態、望ましい治療、所定の障害、ならびに動物または患者の年齢および性別に応じて異なるであろう。かくして、投薬のサイズは、周知の医薬原理に従って算出されるであろう。
【０１１２】
本明細書で定義した治療は、単独の療法として施されてもよいか、または、本発明の化合物に加えて、慣用の外科手術または放射線療法もしくは化学療法を含むことができる。かかる化学療法は、以下の抗腫瘍剤カテゴリーの１つまたはそれ以上を含むことができる。
【０１１３】
治療薬におけるそれらの用途に加えて、式（Ｉ）で示される化合物およびその医薬上許容される塩はまた、新しい治療薬の探索の一環としての、ネコ、イヌ、ウサギ、サル、ラットおよびマウスのような研究動物における細胞周期活性の阻害剤の効果の評価のためのインビトロおよびインビボ試験システムの開発および標準化における薬理学的ツールとして有用である。上記の他の医薬組成物、プロセス、方法、使用および薬剤製造特性には、本明細書に記載した本発明の化合物の別の好ましい実施態様もまた当てはまる。
【０１１４】
本発明の化合物は、オーロラキナーゼ（特に、オーロラＡキナーゼ）のセリン−スレオニンキナーゼ活性を阻害し、かくして、細胞周期および細胞増殖を阻害する。これらの特性は、例えば、以下に記載する方法の１つまたはそれ以上を使用して評価することができる。
【０１１５】
参照による援用
本願の全体にわたって引用される全て文献、特許および特許出願の内容は、参照することにより本明細書に組み込まれる。
【実施例】
【０１１６】
本発明の化合物およびそれらの製造は、これらの化合物が製造または使用される方法のいくつかを例示する実施例によってさらに理解され得る。しかしながら、当然のことながら、これらの実施例は本発明を限定するものではない。現在知られているかまたはこれから生じる本発明の変更は、本明細書および特許請求の範囲に記載されるように本発明の範囲内となるとみなされる。
【０１１７】
本明細書に記載のスキームは、本発明の化合物を合成することができるいくつかの方法の単なる例示であり、これらのスキームの対する様々な変更を行うことができると解すべきである。
【０１１８】
シントン検証
ライブラリー様条件を使用して９６ウェルプレートにて全てのシントンを検証した。分析は、ＨＰＬＣ／ＥＳＭＳ（陰イオン）を使用して行った。一例として、単一ウェル分析法を下記スキーム２に示す：
【０１１９】
【化２１】
2009545592.tif 000023
【０１２０】
反応後、該溶液のアリコートを逆相クロマトグラフィーカラム（Ｔａｒｇａ Ｃ１８、５μ、２.１×４０ｍｍ）上に注入し、２６０ｎｍでモニターしながら溶離した（７分間にわたって１５〜７０％溶媒Ｂ、流速０.３６ｍＬ／分；溶媒Ａ：脱イオン水中の０.７５％ヘキサフルオロイソプロパノール（ＨＦＩＰ)／０.３８％トリエチルアンモニウムアセテート（ＴＥＡＡ）／１０μＭ ＥＤＴＡ；溶媒Ｂ：メタノール／水（９０／１０）中の０.７５％ＨＦＩＰ／０.３８％ＴＥＡＡ／１０μＭ ＥＤＴＡ）。流出液を陰イオンモードでのアトバンテージ・エレクトロスプレー質量分析計にて分析した。ＵＶトレースを図５Ａに示し、主要ピークの質量スペクトログラフを図５Ｂに示す。出発物質に相当する観察可能な質量は観察されなかった。
【０１２１】
ライブラリー合成
材料
全ての化学的構成要素（Ｆｍｏｃ保護アミノ酸；アミン）は商業的供給源から入手した。ＤＮＡヘッドピースおよび様々なＤＮＡ標識は、アイオワ州コーラルビルのIDT, Inc.から入手した。Ｔ４ ＤＮＡ Ｌｉｇａｓｅは、Fermentasから入手した（３０ｕ／ｕｌまたは５０００ｕ／管）。ライブラリー合成前に、ＤＮＡヘッドピースを、標識長ピースのＤＮＡとのライゲーションによって伸長した。この目的は、最終的３サイクル生成物の長さを４サイクル・ライブラリーを用いて得られたものと同一に保持するためであった。
【０１２２】
ＤＮＡ「ヘッドピース」：
配列：  ５'−／５Ｐｈｏｓ／ＧＡＧＴＣＡ／ｉＳｐ９／ｉＵｎｉＡｍＭ／ｉＳｐ９／ＴＧＡＣＴＣＣＣ−３'
【０１２３】
塩基対の観点から：
【化２２】
2009545592.tif 000024
【０１２４】
化学構造：
【化２３】
2009545592.tif 000025
【０１２５】
化学的スペーサーの設置
ヘッドピースＤＮＡの１ｍＭ溶液（４３μｍｏｌ、４３ｍＬ）を、４０当量のＦｍｏｃ−１５アミノ−４,７,１０,１３−テトラオキサペンタデカン酸（２００ｍＭ ＤＭＦ溶液８.６ｍＬ）、次いで、４０当量の４−(４,６−ジメトキシ−１,３,５−トリアジン−２−イル)−４−メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴ−ＭＭ、Acros）（２００ｍＭ水溶液８.６ｍＬ）でアシル化した。該アシル化反応は、室温で１８時間行った。完了後、該反応物をエタノールで沈殿させた。次いで、凍結乾燥ペレットを水中１０％ピペリジン２０ｍＬに暴露することにより脱保護した。脱保護生成物をエタノール中にて沈殿させ、逆相ＨＰＬＣにより精製して、下記化合物を得た。
【０１２６】
【化２４】
2009545592.tif 000026
【０１２７】
プレライブラリー・プライマー・ライゲーション
ヘッドピース（２０μｍｏｌ）を水１８ｍＬに溶解した。伸長配列を加え（水中１ｍＭ溶液２８ｍＬ、１.４当量）、次いで、水（２５ｍＬ）および１０Ｘライゲーションバッファー（８ｍＬ、２ｍＭ ＡＴＰを含有）を添加した。該溶液を１分間９５℃に加熱し、次いで、１０分間にわたって１６℃に冷却した。次いで、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼの溶液（８００μＬ、３０Ｕ／μＬ）を添加し、該ライゲーションを１６℃で１６時間インキュベートした。ＤＮＡ生成物をエタノールで沈殿させ、さらなる精製は行わずにライブラリー合成の第１サイクルに用いた。
【０１２８】
伸長配列の配列：
【化２５】
2009545592.tif 000027
【０１２９】
伸長したヘッドピースの配列：
【化２６】
2009545592.tif 000028
【０１３０】
標識
標識は、２つの２塩基３'オーバーハングが両側にある７塩基対コード領域を含有していた：
【化２７】
2009545592.tif 000029
【０１３１】
５'末端はすべてリン酸化された。標識配列は、一定のＧ／Ｃ含量を有し、パリンドロームを有さず、ホモポリマーストレッチを有しないように設計された。
【０１３２】
化学的構成要素
全ての化学的構成要素を貯蔵溶液として調製した（Ｆｍｏｃ−アミノ酸に対してＤＭＦ、アミンに対してＭｅＣＮ）。貯蔵溶液をバーコード付追跡管（ペンシルベニア州マクマレーのMicronic North America, LLC）中にて−２０℃で貯蔵した。
【０１３３】
サイクル１
伸長ヘッドピースＤＮＡの１ｍＭ溶液（１９.２μｍｏｌ、１９.２ｍＬ）を３８４個のウェルに分けた（５０ｎｍｏｌ／ウェル）。次いで、各ウェルに１０×ライゲーションバッファー（Roche）２０μＬ、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼ（Ｒoche）２.０μＬ、および水２５μＬを添加した。３８４個の標識溶液のうち１個のアリコート（水中１ｍＭ貯蔵溶液１００μＬ）を各ウェルに添加し、１６℃で１６時間ライゲーションを行った。ライゲーション後、各容器に５Ｍ ＮａＣｌ（１０容量％）および冷エタノール２.５容量を添加して、ＤＮＡを沈殿させた。遠心分離後に回収したＤＮＡペレットを各々ｐＨ９.５の１５０ｍＭホウ酸バッファー５０μＬに溶解した。該プレートを４℃に冷却し、各ウェルに、１９２個のＦｍｏｃ保護アミノ酸のうち１個の４０当量（１５０ｍＭ ＤＭＦ溶液１２.６μＬ）、次いで、４０当量の４−(４,６−ジメトキシ−１,３,５−トリアジン−２−イル)−４−メチルモルホリニウムクロリド（ＤＭＴ−ＭＭ、Acros）（２５０ｍＭ水溶液７.６μＬ）を添加した。該アシル化反応を４℃で１８時間行った。完了後、該反応物をプールし、エタノールで沈殿させ、逆相ＨＰＬＣにより精製した。次いで、凍結乾燥した生成物を水中１０％ピペリジン２０ｍＬに暴露させることにより脱保護した。脱保護生成物を沈殿させた。１９２個の化学的構成要素が存在したが３８４個の標識が使用されたので、各成分は、２つの別個のウェルに設置され、かくして、２種類の標識によってコードされた。
【０１３４】
サイクル２
サイクル１の生成物（７.４μｍｏｌ）を水７.４ｍＬに溶解し、３８４個のウェルに分けた（１９.２μＬ／ウェル）。次いで、各ウェルに１０Ｘライゲーションバッファー７.８μＬ、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼ０.７７μＬ、および水１０.９μＬを添加した。次いで、ＤＮＡ標識（水中１ｍＭ貯蔵液３８.４μＬ）を添加し、ライゲーションを１６℃で１６時間行った。ＤＮＡを上記に従って沈殿させ、ペレットをウェルごとにｐＨ９.５の１５０ｍＭホウ酸バッファー１９.２μＬに溶解した。ライブラリーを４℃に冷却した。各ウェルに１０当量の塩化シアヌル（アセトニトリル中２００ｍＭ貯蔵液１μＬ）を添加した。１時間後、各ウェルに５０当量のアミン（アセトニトリルまたはジメチルアセトアミド中２００ｍＭ貯蔵液４.８μＬ）を添加した。合計１９２個のアミノ酸を用い、その結果、各々、２種類のＤＮＡ標識と対応した。置換を４℃で１６時間行った。次いで、該ライブラリーをプールし、沈殿させた。
【０１３５】
サイクル３
サイクル２の生成物（７.４μｍｏｌ）を水７.４ｍＬに溶解し、１９２個のウェルに分けた（３８.４μＬ／ウェル）。次いで、各ウェルに１０Ｘライゲーションバッファー１５μＬ、Ｔ４ ＤＮＡリガーゼ１.５μＬ、および水２１μＬを添加した。次いで、ＤＮＡ標識（水中１ｍＭ貯蔵液９５μＬ、２.５当量の標識）を添加し、ライゲーションを１６℃で１６時間行った。ＤＮＡを上記に従って沈殿させ、ウェルごとにｐＨ９.５の１５０ｍＭホウ酸バッファー３８.４μＬに溶解した。各ウェルに４５当量のアミン（アセトニトリルまたはジメチルアセトアミド中２００ｍＭ貯蔵液９μＬ）を添加した。合計１９２個のアミンを使用した。置換を８０℃で６時間行った。次いで、ライブラリーをプールし、沈殿させ、精製して、３.９μｍｏｌの生成物を得た（最終収率１９％）。
【０１３６】
ライブラリーの分析
精製したライブラリーのＵＶトレース、ライブラリーの正味のマススペクトログラムおよびライブラリーのデコンボリュートされた質量は、それぞれ、図６、７および８に見ることができる。観察された平均質量は、３４,８３５ダルトンであり、予想された平均質量は、３４,７９５ダルトンであった。
【０１３７】
ポストライブラリー・プライマー・ライゲーション
プライマーライゲーションを、通常の条件を使用して１００ｎｍｏｌのアリコートに対して行った。
【０１３８】
ポジティブコントロール合成
【化２８】
2009545592.tif 000030
【０１３９】
最後の工程を除いて文献に従ってポジティブコントロールＶＸ−６８０を合成した（例えば、J.-D. Charrier, F. Mazzei, D. Kay, A. Miller、ＷＯ ２００４／０００８３を参照）。かくして、シクロプロパンカルボン酸｛４−[４−クロロ−６−(５−メチル−２Ｈ−ピラゾール−３−イルアミノ)−ピリミジン−２−イルスルファニル]−フェニル｝アミド（２０ｍｇ）および２−(ピペラジン−１−イル)酢酸ｔ−ブチル（１００ｍｇ）をＤＭＦ（１ｍｌ）と混合した。該混合物にジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）（０.４ｍｌ）を添加した。反応混合物を１１０℃で１時間加熱した後、ＬＣ−ＭＳは、反応が完了したことを示した。溶媒を蒸発させて、粗生成物を得、さらに、ＲＰ−ＨＰＬＣで精製して、所望の生成物を得た。
【０１４０】
上記生成物を、ＴＩＰＳ（１４μｌ）の存在下、ジクロロメタン中５０％トリフルオロ酢酸（２ｍｌ）で室温にて４時間処理した。溶媒を蒸発させ、生成物をＲＰ−ＨＰＬＣで精製して、純粋な生成物を得た。
【０１４１】
ｐＨ９.４のリン酸バッファー中ヘッドピース溶液（１ｍＭ、１００μl、１００ｎｍｏｌ）にＤＭＦ（２０μl）中の小分子阻害剤（２ｍｇ、４μｍｏｌ、４０当量）を添加した。該溶液を０℃に冷却し、水（２０μl）中ＤＭＴ−ＭＭ（１.２ｍｇ、４μｍｏｌ、４０当量）を添加した。反応混合物を４℃で一夜撹拌した。エタノールクラッシュにより粗生成物を得、ＲＰ−ＨＰＬＣでさらに精製して、所望の生成物を得た。ＭＳ：(Ｍ−３)／３＝１８８９.９１（計算値１８９０.３）、(Ｍ−４)／４＝１４１７.４５（計算値１４１７.５）、(Ｍ−５)／５＝１１３３.９３（計算値１１３３.８）、(Ｍ−６)／６＝９４４.８７（計算値９４４.７）。
【０１４２】
アフィニティー選択
オーロラＡキナーゼ選択実験（方法Ａ）
適当な選択バッファー［５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７.５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０.１％ ｔｗｅｅｎ−２０、１ｍｇ／ｍＬ断片化サケ精子ＤＮＡ（Ambion）、１ｍｇ／ｍＬウシ血清アルブミン（Ambion）および１０ｍＭβＭＥ］中にて室温で１時間、ＤＮＡ上で１つのライブラリーメンバーの濃度と同等のライブラリーを１μＭのＨｉｓ標識オーロラＡタンパク質（Upstate）および１１.７ｐＭのＶＸ−６８０と一緒にインキュベートした。ＶＸ−６８０を競争相手として使用した場合の選択では、それは、１回目には１０μＭの濃度で、２回目および３回目には５０μＭの濃度で選択バッファーに添加した。次いで、該溶液を２０μＬ Ｄｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）ＴＡＬＯＮTMビーズ（約２６０ｐｍｏｌのＨｉｓ標識タンパク質結合能；Dynal Biotech）と一緒に３０分間インキュベートした。このインキュベーションの後、ビーズを捕獲し、選択バッファー２００μＬで８回洗浄した。タンパク質／結合ライブラリー分子をビーズから溶離するために、ビーズを選択バッファー３０μＬに再懸濁し、７２℃で５分間加熱した。溶出液をビーズから分取し、新鮮なＴＡＬＯＮTMビーズ２０μＬに添加し、室温で１５分間インキュベートして、変性タンパク質を除去した。新鮮なビーズを用いてこの２回目を繰り返し行った。次いで、この回に得られた溶出液を２回目の選択において選択バッファー中５００ｎＭ Ｈｉｓ標識オーロラＡタンパク質（Upstate）と一緒にインキュベートし、次いで、上記のＤｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）ＴＡＬＯＮTMビーズ（ビーズ１０μＬ）インキュベーション、洗浄および溶離工程を行った。３回目については、２回目の溶出液を選択バッファー中５０ｎＭ、２００ｎＭまたは５００ｎＭのＨｉｓ標識オーロラＡタンパク質（Upstate）と一緒にインキュベートし、再度、次いで、上記のＤｙｎａｂｅａｄｓ（登録商標）ＴＡＬＯＮTMビーズ（ビーズ１０μＬ）インキュベーション、洗浄および溶離工程を行った。最後の溶出液を選択分子のＤＮＡコードのＰＣＲ増幅のための鋳型として使用した。
【０１４３】
オーロラキナーゼ選択実験（方法Ｂ）
９００ｐｍｏｌのＨｉｓ標識オーロラキナーゼＡ（Upstate）をＩＭＡＣ樹脂（＞２０ｎｍｏｌのＨｉｓ標識タンパク質結合能；Phynexus）５μＬに固定した。選択バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７.５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０.１％ ｔｗｅｅｎ−２０、１ｍｇ／ｍＬ断片化サケ精子ＤＮＡ（Ambion）、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ（Ambion）、および１０ｍＭ βＭＥ）中のＤＥＬライブラリー（７.２ｐＭ濃度の各ライブラリー分子）を固定化オーロラキナーゼと一緒に室温で１時間インキュベートし、次いで、選択バッファー１００μＬで１０回洗浄した。タンパク質／結合ライブラリー分子を溶離するために、該樹脂をイミダゾール溶離バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７.５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０.１％ ｔｗｅｅｎ−２０、１ｍｇ／ｍＬ断片化サケ精子ＤＮＡ（Ambion）、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ（Ambion）、１０ｍＭ βＭＥ、および１００ｍＭイミダゾール）６０μＬと一緒に５分間インキュベートした。溶出液を７２℃で５分間加熱して、オーロラキナーゼタンパク質を変性させた。ＩＭＡＣ樹脂上で変性タンパク質を再捕獲するために、該溶出液を選択バッファーで１０倍希釈して、イミダゾール濃度を１０ｍＭに低下させた。次いで、希釈した溶出液をＩＭＡＣ樹脂（Phynexus）と一緒に１５分間インキュベートして、ＩＭＡＣ樹脂に結合した変性タンパク質およびライブラリー分子を取り出した。後の回の選択は、先行の回からの溶出液を固定化オーロラキナーゼ（Upstate）と一緒にインキュベートし、次いで、上記の洗浄および溶離工程を行った。
【０１４４】
ｐ３８選択実験
選択バッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７.５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０.１％ ｔｗｅｅｎ−２０、１ｍｇ／ｍＬ断片化サケ精子ＤＮＡ（Ambion）、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ（Ambion）、and １ｍＭ βＭＥ）中にて室温で１時間、ＤＥＬライブラリー（１１.７ｐＭ濃度の各ライブラリー分子）を５００ｎＭ Ｈｉｓ標識ｐ３８αタンパク質（Roche）と一緒にインキュベートした。該溶液をＩＭＡＣ樹脂（＞２０ｎｍｏｌのＨｉｓ標識タンパク質結合能；Phynexus）５μＬと一緒に５分間インキュベートし、次いで、選択バッファー１００μＬで１０回洗浄した。タンパク質／結合ライブラリー分子を溶離するために、該樹脂をイミダゾールバッファー（５０ｍＭ Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７.５、１５０ｍＭ ＮａＣｌ、０.１％ ｔｗｅｅｎ−２０、１ｍｇ／ｍＬ断片化サケ精子ＤＮＡ（Ambion）、１ｍｇ／ｍＬ ＢＳＡ（Ambion）、１ｍＭ βＭＥ、および１００ｍＭイミダゾール）６０μＬと一緒に５分間インキュベートした。該溶出液を７２℃で５分間加熱して、ｐ３８αタンパク質を変性させた。ＩＭＡＣ樹脂上に変性タンパク質を再捕獲するために、溶出液を選択バッファーで１０倍希釈して、イミダゾール濃度を１０ｍＭに低下させた。次いで、希釈溶出液をＩＭＡＣ樹脂（Phynexus）と一緒に１５分間インキュベートして、ＩＭＡＣ樹脂に結合した変性タンパク質およびライブラリー分子を取り出した。後の回の選択は、先行の回からの溶出液を、２回目の選択については選択バッファー中２００ｎＭ Ｈｉｓ標識ｐ３８αタンパク質（Roche）と一緒に、そして、３回目の選択については選択バッファー中０.２ｎＭ〜２００ｎＭ（１０倍間隔で）のＨｉｓ標識ｐ３８αタンパク質（Roche）と一緒にインキュベートし、次いで、上記の洗浄および溶離工程を行うことにより行った。溶出した分子を、選択分子のＤＮＡコードのＰＣＲ増幅のための鋳型として使用した。
【０１４５】
解読
選択後、プライマー５'Ｏ（５'−ＧＣＣＴＴＧＣＣＡＧＣＣＣＧＣＴＣＡＧＴＧＡＣＴＣＣＣＡＡＡＴＣＧＡＴＧＴＧ−３'；４００ｎＭ；ＩＤＴ）および３'Ｏ（５'ＧＣＣＴＣＣＣＴＣＧＣＧＣＣＡＴＣＡＧＧＣＡＧＧＴＧＡＡＧＣＴＴＧＴＣＴＧ−３'；４００ｎＭ；ＩＤＴ）を使用して、ＰＣＲ（９５℃で５分間、次いで、９２℃で３０秒間；５５℃で１５秒間；７２℃で１５秒間のサイクルを２０回、次いで、７２℃で１０分間）によってライブラリー分子を増幅した。ＰＣＲ生成物を精製して、プライマーおよびヌクレオチド（Qiagen）を除去し、配列決定した（４５４ Ｌｉｆｅ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）。
【０１４６】
化合物の合成
小分子の一般的な合成方法
注意：一般に、化合物合成の目的のためにサイクル１のアミノ酸をそれらのデス−カルボキシ類似体と交換した。例えば、分子が最初のポジションでフェニルアラニンを用いてライブラリーから選択された場合、それは、フェネチルアミンを使用して合成された。まれに、連結しているカルボキシアミドは、活性について重要であることが観察された。
【０１４７】
１回目の置換
アセトニトリル：水性バッファー（２５０ｍＭボラート、ｐＨ９.４）（１：１）中にて塩化シアヌルおよびアミン＃１の８０ｍＭ貯蔵溶液を新しく調製した。氷上で冷却した後、等量の２つの貯蔵溶液を合わせた。混合するとすぐにモノ付加物が沈殿した。得られたコロイド溶液を室温に加温した。
【０１４８】
２回目の置換
１０ｍＬ容器中にて上記モノ付加物溶液（１００μｍｏｌ）１.２５ｍＬ、１当量のアミン＃２、アセトニトリル５ｍＬ、およびＫ2ＣＯ3（過剰）５０ｍｇを合わせた。該混合物を１時間撹拌した。
【０１４９】
３回目の置換
粗ジ付加物反応混合物にアミン＃３（５当量）５００μｍｏｌを添加した。該反応混合物を室温で一夜放置した。次いで、該溶液を濃縮し、１０％アセトニトリル（水溶液）５ｍＬ中にて復元し、逆相ＨＰＬＣにより精製して、生成物１８.１８ｍｇ（３８％）を得た。
【０１５０】
生化学アッセイ
オーロラキナーゼアッセイ
ｐ３８キナーゼアッセイと同様の９６ウェルプレート放射測定キナーゼアッセイを使用して、オーロラキナーゼ活性の阻害について化合物をアッセイした。２ｎＭ活性ｐ３８キナーゼ（R&D Systems）を含有するアッセイバッファー（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ７.４、１０ｍＭ ＭｇＣｌ2、２５ｍＭ β−ＧＰ、１ｍＭ ＤＴＴ、０.１ｍｇ／ｍｌ ＭＢＰ）でオーロラキナーゼ（Upstate）を予備希釈し、ウェルに添加し、次いで、１０％ＤＭＳＯを含むアッセイバッファー（アッセイにおけるＤＭＳＯの最終濃度１％）で予備希釈した化合物を添加した。化合物をキナーゼと一緒に室温で２０分間予備インキュベートした後、１０μＭ ＡＴＰ／０.０２μＣｉ／μｌ[γ−３３Ｐ]ＡＴＰの添加により反応を開始させた。反応プレートを３０℃で４時間インキュベートした。２００ｍＭリン酸の添加により反応を停止させ、９６ウェルＭｉｌｌｉｐｏｒｅホスホセルロース・フィルタープレートに移した。該フィルタープレートを１００ｍＭリン酸で繰り返し洗浄して、過剰の[γ−３３Ｐ]ＡＴＰを除去し、次いで、該フィルターを乾燥させ、各ウェルにシンチレーション液（Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ ４０）２０μｌを添加した。該フィルタープレートをＴｏｐＣｏｕｎｔ−ＮＸＴシンチレーションカウンターで計数し、Ｐｒｉｓｍ曲線適合ソフトウエアを使用して該データを処理した。
【０１５１】
Ｐ３８キナーゼアッセイ
９６ウェルプレート放射測定キナーゼアッセイを用いてｐ３８キナーゼ活性の阻害について化合物をアッセイした。２ｎＭ活性ｐ３８キナーゼ（R&D Systems）を含有するアッセイバッファー（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ ７.４、１０ｍＭ ＭｇＣｌ2、２５ｍＭ β−ＧＰ、１ｍＭ ＤＴＴ、０.１ｍｇ／ｍｌ ＭＢＰ）をウェルに添加し、次いで、１０％ＤＭＳＯを含むアッセイバッファー（アッセイにおけるＤＭＳＯの最終濃度１％）で予備希釈した化合物を添加した。化合物をキナーゼと一緒に室温で２０分間予備インキュベートした後、１０μＭ ＡＴＰ／０.０２μＣｉ／μｌ[γ−３３Ｐ]ＡＴＰの添加により反応を開始させた。反応プレートを３０℃で４時間インキュベートした。２００ｍＭリン酸の添加により反応を停止させ、９６ウェルＭｉｌｌｉｐｏｒｅホスホセルロース・フィルタープレートに移した。該フィルタープレートを１００ｍＭリン酸で繰り返し洗浄して、過剰の[γ−３３Ｐ]ＡＴＰを除去し、次いで、該フィルターを乾燥させ、各ウェルにシンチレーション液（Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ ４０）２０μｌを添加した。該フィルタープレートをＴｏｐＣｏｕｎｔ−ＮＸＴシンチレーションカウンターで計数し、Ｐｒｉｓｍ曲線適合ソフトウエアを使用して該データを処理した。濃度対阻害パーセントのグラフを図９に示す。
【０１５２】
Ｐ３８ビアコア・アッセイ
ビアコアＣＭ５チップを使用して、１０μＭ ＳＢ２０３５８０の存在下で、Casper（Analytical Biochem. 2004, 325: 126-136）によって記載されるような標準的なアミンカップリングによりｐ３８ａ表面を調製し、次いで、続く洗浄工程で除去した。公表されたプロトコールに対して行われた唯一の変更は、活性ｐ３８を使用し、１０ｍＭ酢酸ナトリウム、ｐＨ５.０を含有するバッファーを用いて固定化したことであった。固定化レベルは、３０００〜５０００共鳴単位（ＲＵ）の範囲であった。非誘導化フローセルは、参照表面としての役割を果たした。速度定数および解離定数は、データをＬａｎｇｍｕｉｒ結合モデルに適合させることによって算出した。使用した異なるチップの各々を、最初に、ＳＢ２０３５８０の非リン酸化ｐ３８への結合について報告された１１ｎＭの数値（Casper）と同様に本願の系ではＫｄ＝５ｎＭを有したＳＢ２０３５８０を使用してアッセイした。
【０１５３】
細胞アッセイ
ＨＣＴ−１１６ Ｃｅｌｌ Ｌｉｎｅ ＨＣＴ１１６（ヒト結腸直腸癌細胞）を用いるオーロラＡ化合物についての細胞増殖アッセイをＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎから入手した（Ｃａｔ. Ｎｏ. ＣＣＬ−２４７、メリーランド州ロックビル）。３７℃で９５％空気および５％ＣＯ2の加湿インキュベーター中にて、１０％ウシ胎仔血清（ＦＢＳ；Omega Scientific、カリフォルニア州ターザナ）、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、５０ＩＵ／ｍｌペニシリンおよび５０μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Gibco/Invitrogen、カリフォルニア州カールズバッド）を補充したＭｃＣｏｙ'ｓ ５Ａ中の単層培養物中に細胞を保持した。
【０１５４】
トリプシン化により単一細胞懸濁液を調製して、それらの各培養培地中にて１ｍＬ当たり１.２５Ｅ４細胞を得た。９６ウェルプレートに２００μｌ／ウェルの細胞懸濁液を播種して、初期播種密度２５００細胞／ウェルを得た。該プレートを組織培養インキュベーター（５％ＣＯ2、３７℃）中に一夜置いて、細胞を付着させた。
【０１５５】
試験化合物の段階希釈液を１０ｍＭ貯蔵溶液から培養培地中にて最終濃度で調製し、三重にアッセイした。試験化合物を有するウェル中のＤＭＳＯの濃度に相当する０.１％ｖ／ｖＤＭＳＯに培養培地を調整することによってビヒクルを調製した。次いで、試験プレートを３日間組織培養インキュベーター（５％ＣＯ2、３７℃）中に置いた後、ＭＴＴアッセイを行った。
【０１５６】
ＭＴＴアッセイは、生成物を分光光度法で測定するＭＴＴにおけるテトラゾリウム環の細胞デヒドロゲナーゼ酵素開裂に基づく細胞生存率の測定である。ＰＢＳ中にて調製した５ｍｇ／ｍＬ ＭＴＴ（３'[４,５−ジメチルチアゾール−２−イル]−２,５−ジフェニル−テトラゾリウムブロミド、Ｓｉｇｍａ Ｃａｔ. Ｎｏ. Ｍ２１２８）の２５μＬアリコートをウェルに直接添加した。該プレートを３７℃で２時間インキュベートし、ＭＴＴ溶液を除去し、イソプロパノール１５０μＬを各ウェルに添加し、プレートを室温で１０分間振動させた。Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ Ｍｕｌｔｉｓｋａｎプレート分光光度計で５７０ｎｍにてウェルの光学密度を定量化した。二重の測定値の平均値を求めた。結果は、対照からのＯＤシグナルのパーセントとして表される。
【０１５７】
ヒトＴＨＰ−１細胞株におけるＬＰＳ誘発性ＴＮＦα生産
ＴＨＰ−１（ヒト、単球）細胞株をＡｍｅｒｉｃａｎ Ｔｙｐｅ Ｃｕｌｔｕｒｅ Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、Ｃａｔ. Ｎｏ. ＴＩＢ ２０２）から購入した。３７℃で９５％空気および５％ＣＯ2の加湿インキュベーター中にて、１０％熱失活ウシ胎仔血清（ＦＢＳ；Omega Scientific、カルフォルニア州ターザナ）、２ｍＭ Ｌ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（Gibco/Invitrogen、カリフォルニア州カールズバッド）を補充したＲＰＭＩ １６４０（GIBCO）中にて１週間に３回、細胞を継代した。
【０１５８】
該アッセイのために、ＴＨＰ−１細胞を収穫し、計数し、培養培地中にて１ｍｌ当たり１Ｅ６細胞で懸濁した。細胞懸濁液２００μｌを９６ウェルプレートにて各ウェルに添加して、１ウェルにつき２×１０5細胞の密度を得た。１０ｍＭ貯蔵溶液から培養培地中にて最終濃度でＰ３８化合物の段階希釈液を調製し、三重にアッセイした。試験化合物を有するウェル中のＤＭＳＯの濃度に相当する０.１％ｖ／ｖＤＭＳＯに培養培地を調整することによってビヒクルを調製した。
【０１５９】
Ｐ３８阻害物質の存在下で３０分間、細胞をインキュベートした。その後、５％ＣＯ2−インキュベーター中にて３７℃で４時間、細胞をＬＰＳ（イー・コリ（E.coli） ０２６：Ｂ６、１μg／ｍｌ）で刺激した。試料を氷上に置き、４℃にて１５００×ｇで１０分間遠心分離することによって反応を停止させた。細胞上清を収穫し、製造者の指示に従ってＥＬＩＳＡ（BD Pharmingen、カリフォルニア州サンディエゴ、Ｃａｔ. Ｎｏ. ５５５２１２）によってＴＮＦの濃度を測定した。分光光度ＥＬＩＳＡプレートリーダー（Ｌａｂｓｙｓｔｅｍｓ Ｍｕｌｔｉｓｋａｎ ＭＣＣ／３４０）にて４５０ｎｍで吸光度を測定および分析した。二重の測定値の平均値を求めた。結果を対照からのＯＤシグナルのパーセントとして表す。
【０１６０】
均等物
当業者は、単に慣用の実験を用いて、本明細書に記載された本発明の特定の実施態様の多くの等価物を認識するかまたは確認できる。このような等価物は、以下の特許請求の範囲に含まれることを意図される。
【図１−１】
2009545592.tif 000037
【図１−２】
2009545592.tif 000038
【図１−３】
2009545592.tif 000039
【図２】
2009545592.tif 000040
【図３−１】
2009545592.tif 000041
【図３−２】
2009545592.tif 000042
【図３−３】
2009545592.tif 000043
【図３−４】
2009545592.tif 000044
【図３−５】
2009545592.tif 000045
【図４】
2009545592.tif 000046
【図５】
2009545592.tif 000047
【図６】
2009545592.tif 000048
【図７】
2009545592.tif 000049
【図８】
2009545592.tif 000050
【図９】
2009545592.tif 000051
【手続補正書】
【提出日】平成21年4月16日(2009.4.16)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2009545592000001.app
【国際調査報告】
2009545592.tif 000052
2009545592.tif 000053
2009545592.tif 000054
2009545592.tif 000055