(57)【要約】  本発明は、一般にリポソーム医薬組成物および関連方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
（ｉ）疎水性治療薬と、
（ii）第１の成分と、
（iii）第２の成分と
を含む凍結乾燥リポソーム組成物であって、
該組成物を水と接触させると、該第１の成分と該第２の成分とが相互に作用して、該疎水性治療薬の実質的に均質なリポソーム溶液を形成する、凍結乾燥リポソーム組成物。
【請求項２】
約２０重量パーセント〜約４０重量パーセントの前記第１の成分および前記第２の成分を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記第２の成分の前記第１の成分に対する重量パーセント比が約１〜約７である、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記第１の成分のモル数が前記疎水性治療薬のモル数とほぼ同じであり、かつ前記第２の成分のモル数が前記疎水性治療薬のモル数よりも約２〜約１５倍大きい、請求項１に記載の組成物。
【請求項５】
前記第１の成分のモル数が前記疎水性治療薬のモル数よりも約１．５〜約６倍大きく、かつ前記第２の成分のモル数が前記疎水性治療薬のモル数よりも約２〜約１５倍大きい、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記第１の成分および前記第２の成分の前記疎水性治療薬に対する重量パーセント比が約１０〜約５０である、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
前記第１の成分および前記第２の成分のそれぞれが、独立して、天然レシチンまたはリン脂質である、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記第１の成分が卵ホスファチジルグリセロールであり、かつ前記第２の成分が大豆ホスファチジルコリンである、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
約０．０５重量パーセント〜約１０重量パーセントの前記疎水性治療薬を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
凍結防止剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記凍結防止剤が糖である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
前記凍結防止剤がラクトースである、請求項１１に記載の組成物。
【請求項１３】
酸化防止剤をさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１４】
２種の酸化防止剤を含む、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
前記２種の酸化防止剤がＢＨＴおよびアスコルビルパルミテートである、請求項１４に記載の組成物。
【請求項１６】
凍結防止剤と、第１の酸化防止剤と、第２の酸化防止剤とをさらに含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項１７】
【表１】
2009519250.tif 000016
を含む、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
前記凍結防止剤がラクトースであり、第１の酸化防止剤がＢＨＴであり、かつ第２の酸化防止剤がアスコルビルパルミテートである、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１９】
前記疎水性治療薬が約５ｎｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬの水溶解度を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項２０】
前記疎水性治療薬が約１００ダルトン〜約１，０００ダルトンの分子量を有する、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２１】
前記疎水性治療薬がイオン性基を欠く、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２２】
前記疎水性治療薬が約２〜約１１のｐＫａを有する酸性基をさらに含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２３】
前記疎水性治療薬が塩基性基をさらに含み、ここで前記塩基性基の共役酸のｐＫａが約３〜約１２である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２４】
前記疎水性治療薬が両性イオンである、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２５】
前記疎水性治療薬が結晶性固体である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２６】
前記疎水性治療薬が２つの環をさらに含み、ここで各環が、独立して、芳香環または複素芳香環である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２７】
前記疎水性治療薬が、縮合二環系、三環系または多環系をさらに含む、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２８】
前記疎水性治療薬が、不水溶性真菌抗生物質または合成起源、半合成起源、もしくは天然起源の複合大員環である、請求項１９に記載の組成物。
【請求項２９】
前記疎水性治療薬が約１．０〜約５．０のｌｏｇＰ値を有する、請求項１または１９に記載の組成物。
【請求項３０】
前記疎水性治療薬が約２．０〜約５．０のｌｏｇＰ値を有する、請求項１または１９に記載の組成物。
【請求項３１】
前記疎水性治療薬が約３．０〜約５．０のｌｏｇＰ値を有する、請求項１または１９に記載の組成物。
【請求項３２】
前記疎水性治療薬が約４．０〜約５．０のｌｏｇＰ値を有する、請求項１または１９に記載の組成物。
【請求項３３】
請求項１に記載の組成物の調製方法であって、
（ｉ）疎水性治療薬、第１の成分、および第２の成分を有機溶媒中で合して、第１の組合せを形成すること；
（ｉｉ）該第１の組合せを水相と合して、第２の組合せを形成すること；
（ｉｉｉ）該第２の組合せから該有機溶媒を除去し、第３の組合せを形成することと；
（ｉｖ）該第３の組合せを凍結乾燥し、それにより請求項１に記載の組成物を調製することと
を含む、方法。
【請求項３４】
前記有機溶媒がエタノールである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
前記水相が凍結防止剤をさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３６】
前記凍結防止剤がラクトースである、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記第１の組合せが酸化防止剤をさらに含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】
前記第２の組合せがリポソーム溶液である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３９】
前記リポソームの粒径分布を減少させる工程をさらに含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記リポソームの粒径分布を最終粒径分布約５，０００ｎｍ〜約２０ｎｍに減少させる工程をさらに含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記リポソームの粒径分布を約２００ｎｍに減少させる工程をさらに含む、請求項３８に記載の方法。
【請求項４２】
工程（ｉｉｉ）がタンジェンシャルフローフィルトレーションを実施することを含む、請求項３３に記載の方法。
【請求項４３】
前記有機溶媒がエタノールである、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
（ｉ）疎水性治療薬と、
（ｉｉ）第１の成分と、
（ｉｉｉ）第２の成分と、
（ｉｖ）水と
を含む、実質的に均質なリポソーム処方物。
【請求項４５】
少なくとも約８０重量／容量パーセントの水を含む、請求項４４に記載の処方物。
【請求項４６】
凍結防止剤と、第１の酸化防止剤と、第２の酸化防止剤とをさらに含む、請求項４４に記載の処方物。
【請求項４７】
【表２】
2009519250.tif 000017
を含む、請求項４６に記載の処方物。
【請求項４８】
約２ｍｇ／ｍＬの前記疎水性治療薬を含む、請求項４４に記載の処方物。
【請求項４９】
ヒトまたは動物対象への投与のための静脈内処方物または非経口処方物である、請求項４４に記載の処方物。
【請求項５０】
請求項１に記載の凍結乾燥リポソーム組成物を水と接触させることにより調製される、請求項４４に記載の処方物。
【請求項５１】
前記リポソームが最大約５，０００ｎｍの平均粒径分布を有する、請求項４４に記載の処方物。
【請求項５２】
前記リポソームが約５０ｎｍ〜約２００ｎの平均粒径分布を有する、請求項４４に記載の処方物。
【請求項５３】
前記リポソームが約２００ｎｍの平均粒径分布を有する、請求項４４に記載の処方物。
【請求項５４】
前記疎水性治療薬を沈殿させることなく、水で無制限に希釈することが可能である、請求項４４に記載の処方物。
【請求項５５】
インビボ投与すると、血流中に前記疎水性治療薬を迅速に放出して、血液中の赤血球（ＲＢＣ）、リポタンパク質、ＨＳＡまたはＷＢＣと結合する、請求項４４に記載の処方物。
【請求項５６】
前記第１の成分のモル数が前記疎水性治療薬のモル数よりも小さく、かつ前記第２の成分のモル数が前記疎水性治療薬のモル数よりも約２〜約１５倍大きい、請求項１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本願は、引用することによりそのまま本明細書の一部とされる２００５年１２月８日出願の米国仮出願第６０／７４８，６８６号の利益を主張するものである。
技術分野
本発明は、一般にリポソーム医薬組成物および関連方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
背景
ヒトまたは動物の薬物による処置において、時には、薬物を静脈内経路により投与しなければならない場合がある。静脈内投与は、最も迅速で直接の薬物送達手段の１つである。しかしながら、局所静脈内注射部位副作用が、（ａ）静脈血中での薬物の熱力学的に推進される局所的沈降（例えば、局所的静脈血栓症、化学的静脈炎）、（ｂ）薬物の比較的高い局所的蓄積をもたらす、薬物と注射部位組織との選択的結合、または（ｃ）管外遊出につながり、続いて、薬物による露出組織の攻撃を引き起こす可能性がある、注射針による静脈の損傷の結果として起こり得る。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００３】
概要
本発明は、一般に、１種以上の疎水性治療薬（例えば、薬物）を含有するリポソーム形成医薬組成物、およびその水性処方物に関する。そのような処方物は、好ましくは、前記疎水性治療薬と混和性である補助溶媒（例えば、有機溶媒）を含まない水性ビヒクル中で対象に（例えば、それを必要とする対象）に投与する（例えば、静脈内投与する）ときに疎水性治療薬の送達前および後の（例えば、注射前および後の）可溶化を実現するために用いることができる。
【課題を解決するための手段】
【０００４】
一態様では、本発明は、（ｉ）疎水性治療薬と、（ｉｉ）第１の成分と、（ｉｉｉ）第２の成分とを含む凍結乾燥リポソーム組成物であって、該組成物を水と接触させたときに、該第１の成分と該第２の成分とが相互に作用して、該疎水性治療薬の実質的に均質なリポソーム溶液を形成する、凍結乾燥リポソーム組成物に関する。
【０００５】
別の態様では、本発明は、凍結乾燥リポソーム組成物を調製するための方法であって、（ｉ）第１の組合せを作るために有機溶媒中で疎水性治療薬、第１の成分、および第２の成分を組み合わせることと、（ｉｉ）第２の組合せを作るために該第１の組合せを水相と組み合わせることと、（ｉｉｉ）第３の組合せを作るために該第２の組合せから該有機溶媒を除去すること（例えば、一部もしくは実質的に全ての該有機溶媒を、例えば、蒸留、減圧（例えば、吸引器圧もしくは低真空、例えば、約１ｍｍＨｇ〜約５０ｍｍＨｇ）下での蒸発、またはタンジェンシャルフローフィルトレーションにより除去すること）と、（ｉｖ）該第３の組合せを凍結乾燥し、それにより該凍結乾燥リポソーム組成物を調製することとを含む方法に関する。実施形態では、これらの方法は、疎水性薬物（例えば、滅菌疎水性薬物）の大規模製造に用いることができ、滅菌リポソーム医薬製剤の製造のための比較的簡単な「ワンポット」法を提供することができる。
【０００６】
さらなる態様において、本発明は、凍結乾燥リポソーム組成物を調製するための方法であって、（ｉ）第１の組合せを作るために有機溶媒中で疎水性治療薬、第１の成分、および第２の成分を組み合わせることと、（ｉｉ）第２の組合せを作るために該第１の組合せから該有機溶媒を除去すること（例えば、薄膜などを形成するために一部もしくは実質的に全ての該有機溶媒を除去すること）と、（ｉｉｉ）第３の組合せを作るために該第２の組合せを水相と組み合わせることと、（ｉｖ）該第３の組合せを凍結乾燥し、それにより該凍結乾燥リポソーム組成物を調製することとを含む方法に関する。
【０００７】
一態様では本発明は、（ｉ）疎水性治療薬と、（ｉｉ）第１の成分と、（ｉｉｉ）第２の成分と、（ｉｖ）水とを含む実質的に均質なリポソーム処方物に関する。
【０００８】
実施形態は次の特徴の１つ以上を含み得る。
【０００９】
前記疎水性治療薬は、約１．０〜約５．０（例えば、約２．０〜約５．０、約３．０〜約５．０、約４．０〜約５．０）のｌｏｇＰ値を有し得る。
【００１０】
前記組成物は、約２０重量パーセント〜約４０重量パーセントの前記第１の成分および前記第２の成分を含み得る。
【００１１】
前記第２の成分の前記第１の成分に対する重量パーセント比は、約１〜約７（例えば、約１〜約５、約２〜約５、約１〜約３、約２〜約３）であり得る。前記第２の成分の前記第１の成分に対する重量パーセント比は、約２．２〜約２．７であり得る。前記第２の成分の前記第１の成分に対する重量パーセント比は、約４〜約５（例えば、約４．２〜約４．８、例えば、４．５）であり得る。
【００１２】
前記第１の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数よりも小さくあり得る。例えば、前記（前記第１の成分の比率）：疎水性治療薬は、（約０．１０〜約０．９５）：ｌ、例えば、（約０．５０〜約０．９５）：１、例えば、約（０．７５）：１であり得る。
【００１３】
前記第１の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数とほぼ同じであり得る。
【００１４】
前記第１の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数よりも約１．５〜約６倍大きくあり得る。
【００１５】
前記第２の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数よりも約２〜約１５倍大きくあり得る。
【００１６】
前記第１の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数よりも小さくあり得、かつ前記第２の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数よりも約２〜約１５倍大きくあり得る。
【００１７】
前記第１の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数とほぼ同じであり得、かつ前記第２の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数よりも約２〜約１５倍大きくあり得る。
【００１８】
前記第１の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数よりも約１．５〜約６倍大きくあり得、かつ前記第２の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数よりも約２〜約１５倍大きくあり得る。
【００１９】
例えば、前記疎水性治療薬：前記第１の成分：前記第２の成分のモル比は、約
【表１】
2009519250.tif 000002
であり得る。
【００２０】
前記第１の成分および前記第２の成分の前記疎水性治療薬に対する重量パーセント比は、約２〜約５０（例えば、約１０〜約５０）であり得る。
【００２１】
前記第１の成分および前記第２の成分の前記疎水性治療薬に対する重量パーセント比は、約１５〜約２５であり得る。
【００２２】
前記第１の成分および前記第２の成分のそれぞれは、独立に、天然レシチンまたはリン脂質（例えば、卵、大豆、もしくは植物性リン脂質または合成リン脂質由来）であり得る。
【００２３】
前記第１の成分はホスファチジルグリセロールであり得、かつ前記第２の成分はホスファチジルコリン（例えば、卵、大豆、もしくは植物性リン脂質または合成リン脂質由来）であり得る。例えば、前記第１の成分は卵ホスファチジルグリセロールであり得、かつ前記第２の成分は大豆ホスファチジルコリンであり得る。
【００２４】
前記組成物は、約０．０５重量パーセント〜約１０重量パーセントの前記疎水性治療薬を含み得る。
【００２５】
前記組成物は凍結防止剤（例えば、糖、例えば、ラクトース）をさらに含み得る。
【００２６】
前記組成物は酸化防止剤をさらに含み得る。ある特定の実施形態では、前記組成物は２種の酸化防止剤（例えば、ＢＨＴおよびアスコルビルパルミテート）を含み得る。ある特定の実施形態では、前記組成物は３種以上の酸化防止剤を含み得る。
【００２７】
前記組成物は、凍結防止剤と、第１の酸化防止剤と、第２の酸化防止剤とをさらに含み得る。
【００２８】
前記凍結防止剤はラクトースであり得、第１の酸化防止剤はＢＨＴであり得、かつ第２の酸化防止剤はアスコルビルパルミテートであり得る。
【００２９】
前記疎水性治療薬は、約５ｎｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬ（例えば、約５ｎｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬ）の水溶解度を有し得る。
【００３０】
前記疎水性治療薬は、約１００ダルトン〜約１，０００ダルトンの分子量を有し得る。
【００３１】
前記疎水性治療薬はイオン性基を欠き得る。
【００３２】
前記疎水性治療薬は、約２〜約１１のｐＫａを有する酸性基をさらに含み得る。
【００３３】
前記疎水性治療薬は塩基性基をさらに含み得、この際、その塩基性基の共役酸のｐＫａは約３〜約１２であり得る。
【００３４】
前記疎水性治療薬は、約２〜約１１のｐＫａを有する１つ以上の酸性基と、塩基性基の共役酸のｐＫａが約３〜約１２である１つ以上の塩基性基とをさらに含み得る。例えば、前記疎水性治療薬は両性イオンであり得る。
【００３５】
前記疎水性治療薬は結晶性固体であり得る。
【００３６】
前記疎水性治療薬は疎水性液体（例えば、油）であり得る。
【００３７】
前記疎水性治療薬は２つの環をさらに含み得、この際、各環は、独立に、芳香環または複素芳香環であり得る。
【００３８】
前記疎水性治療薬は、縮合二環系、三環系または多環系（例えば、合成起源または天然起源のもの）をさらに含み得る。
【００３９】
前記疎水性治療薬は、不水溶性真菌抗生物質または合成起源、半合成起源、もしくは天然起源の複合大員環であり得る。
【００４０】
前記有機溶媒はエタノールであり得る。
【００４１】
前記水相は凍結防止剤（例えば、ラクトース）をさらに含み得る。
【００４２】
前記第１の組合せは酸化防止剤をさらに含み得る。
【００４３】
前記第２の組合せはリポソーム溶液であり得る。
【００４４】
前記方法は、前記リポソームの平均粒径分布を減少させる工程をさらに含み得る。例えば、前記方法は、前記（例えば、粗）リポソームの粒径分布を最終粒径分布  約５，０００ｎｍ〜約２０ｎｍ、例えば、約５，０００ｎｍ〜約５０に減少させる工程（すなわち、この粒径減少工程実施後のリポソームの粒径分布は、例えば、約５，０００ｎｍ〜約２０ｎｍである）をさらに含み得る。例えば、前記方法は、前記リポソームの粒径分布を約２００ナノメートル（ｎｍ）以下（例えば、最大限でも約２００ｎｍ、２００ｎｍ未満）に減少させる工程をさらに含み得る。例えば、前記方法は、前記リポソームの粒径分布を約２００ｎｍ〜約２０ｎｍ、例えば、約２００ｎｍ〜約５０ｎｍに減少させる工程（すなわち、この粒径減少工程実施後のリポソームの粒径分布は、例えば、約２００ｎｍ〜約２０ｎｍである）をさらに含み得る。
【００４５】
工程（ｉｉｉ）はタンジェンシャルフローフィルトレーションを実施することを含み得る。前記有機溶媒はエタノールであり得る。
【００４６】
前記処方物は少なくとも約８０重量／容量パーセントの水を含み得る。
【００４７】
前記処方物は、凍結防止剤と、第１の酸化防止剤と、第２の酸化防止剤とをさらに含み得る。
【００４８】
前記処方物は、約２ｍｇ／ｍＬ〜約１０ｍｇ／ｍＬ（例えば、約２ｍｇ／ｍＬ〜約８ｍｇ／ｍＬ、例えば、約２ｍｇ／ｍＬ）の前記疎水性治療薬を含み得る。
【００４９】
前記処方物は、ヒトまたは動物対象への投与のための静脈内処方物または非経口処方物であり得る。
【００５０】
前記処方物は、本明細書に記載の凍結乾燥リポソーム組成物を水と接触させることにより調製され得る。
【００５１】
前記リポソームは、最大限でも約５，０００ｎｍの平均粒径分布を有し得る。
【００５２】
前記リポソームは、約２０ｎｍ〜約３００ｎｍ、例えば、約５０ｎｍ〜約３００（例えば、約２００ｎｍ）の平均粒径分布を有し得る。
【００５３】
前記処方物は、前記疎水性治療薬を沈殿させることなく、水で無制限に希釈することが可能であり得る。
【００５４】
前記処方物は急速崩壊し得る。実施形態では、前記処方物（リポソーム）は、インビボ投与によると、血流中に前記疎水性治療薬を迅速に放出して、血液中の例えば、赤血球（ＲＢＣ）、リポタンパク質、ＨＳＡまたはＷＢＣと結合し得る。これは前記疎水性治療薬が肝臓などの非標的組織に蓄積される可能性を低くすると考えられており、そうでなければ、その非標的組織では従来のリポソームが集中する傾向にある。学説に捉われることなく、本明細書に記載のリポソーム組成物および処方物のリポソームの「急速崩壊」性は、前記疎水性治療薬が前記リポソームの脂質二重層と結合する様式によるものであり得ると考えられている。
【００５５】
本明細書において、用語「疎水性治療薬」とは、対象（例えば、ヒトまたは動物対象）に約０．０１ｍｇ／Ｋｇ〜約１０００ｍｇ／Ｋｇ、（例えば、約０．０１ｍｇ／Ｋｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／Ｋｇ〜約２５０ｍｇ／Ｋｇ、約１ｍｇ／Ｋｇ〜約１００ｍｇ／Ｋｇ、約１ｍｇ／Ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ）の量で投与するときに治療を受けた対象に治療的、生物学的、または薬理学的効果を与える（例えば、１種以上の疾患、障害、またはその状態もしくは症状を治療する、制御する、改善する、予防する、それらの発症を遅延する、またはそれらを発病する危険性を低減する）、水にやや溶けにくい、わずかしか溶けない、極めてわずかしか溶けない、ほとんど溶けない、または溶けない生物活性部分を指す。治療的効果は他覚的（すなわち、何かの試験またはマーカーによって測定可能）であっても自覚的（すなわち、対象が効果の兆候を示すかまたは効果を感じる）であってもよく、局所的または全身的であり得る。
【００５６】
本明細書において、用語「やや溶けにくい、わずかしか溶けない、極めてわずかしか溶けない、ほとんど溶けない、または溶けない」とは、意味上、近似溶解度表現のための米国薬局方(the United States Pharmacopeia)（ＵＳＰ）一般用語に対応する（例えば、DeLuca and Boylan in Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, vol. 1, Avis, K. E., Lachman, L. and Lieberman, H.A., eds、 Marcel Dekkar: 1084, pages 141-142参照:
【表２】
2009519250.tif 000003
【００５７】
一例として、やや溶けにくい疎水性治療薬は、約１分量の前記疎水性治療薬を溶かすのに約３０〜約１００分量の水を必要とするものである。同様に、わずかしか溶けない疎水性治療薬は、約１分量の前記疎水性治療薬を溶かすのに約１００〜約１，０００分量の水を必要とするものであり、極めてわずかしか溶けない疎水性治療薬は、約１分量の前記疎水性治療薬を溶かすのに約１，０００〜約１０，０００分量の水を必要とするものであり、そしてほとんど溶けない、または溶けない疎水性治療薬は約１分量の前記疎水性治療薬を溶かすのに約１０，０００分量より多い水を必要とするものである。
【００５８】
「生物活性部分」には、例えば、監督官庁（例えば、米国（ＵＳ）食品医薬品局(Food and Drug Administration)、農務省（Department of Agriculture）、またはＵＳ以外の同等な機関）によって認可されている薬物、監督官庁によって検討中の薬物候補（例えば、フェーズ０、１、２、または３薬物候補、例えば臨床試験中の薬物候補）、あるいは公的研究団体または民間研究団体によって従来のスクリーニング法またはインビトロもしくはインビボアッセイの結果に基づいてリード化合物として確認された化合物が含まれ得る。用語「疎水性治療薬」とは、例えば、米国特許第６，０７４，６６６号および同第６，８９０，５５５号および同第７，１３５，１９３Ｂ２号に記載されているポルフィリン光増感剤（例えば、ベンゾポルフィリン誘導体（ＢＰＤ）、例えば、ＢＰＤ一酸（ＢＰＤＭＡ）を除外する。
【００５９】
本明細書において、用語「リポソーム」とは、乾燥したリン脂質膜（例えば、本明細書に記載のように回転蒸発によって得られる）またはリン脂質溶液（例えば、本明細書に記載のようにタンジェンシャルフローフィルトレーションによって得られる）に水溶液を加えるとすぐに自発的に形成される、内部に水相を備えた完全に閉鎖された脂質二分子膜を指す。リポソームには、単一膜二重層を有する単層小胞または多重膜二重層を有する多層小胞（各層は水層によって隣の層と分離されている）が含まれる。この二重層は、疎水性「尾部」領域および親水性「頭部」領域を有する２つの脂質単分子層を含む。学説に捉われることなく、膜二重層の構造は、脂質単分子層の疎水性（非極性）「尾部」が二重層の中央に向いており、一方、親水性「頭部」が水相に向いているといったものである。
【００６０】
本明細書において、用語「リポソーム溶液」とは、一般に、任意の平均粒径分布の疎水性治療薬封入リポソームの水性または水性／有機溶媒分散液を指す。
【００６１】
本明細書において、用語「前記疎水性治療薬の実質的に均質なリポソーム溶液」または「前記疎水性治療薬の実質的に均質なリポソーム処方物」とは、疎水性治療薬封入リポソームの均質な水性分散液を指し、この場合のリポソームは約２０ｎｍ〜約５，０００ｎｍ（例えば、約５０ｎｍ〜約５，０００ｎｍ、例えば、最大限でも約２００ｎｍ、２００ｎｍ未満）の平均粒径分布を有する。本明細書に記載のリポソーム溶液の平均粒径分布は、当技術分野における従来法（例えば、光散乱、例えば、動的レーザー光散乱（例えば、Nicomp社またはMalvern社から入手可能なもののようなサブミクロン粒子測定システムを使用））によって決定することができる。
【００６２】
本明細書において、用語「対象」とは、マウス、ラット、ウシ、ヒツジ、ブタ、ウサギ、ヤギ、およびウマ、サル、イヌ、ネコ、そして好ましくはヒトを含む生物を指す。
【００６３】
本発明の１以上の実施形態の詳細を以下の説明において記載する。本発明の他の特徴および利点はその説明からも特許請求の範囲からも明らかになるであろう。
【発明を実施するための最良の形態】
【００６４】
詳細な説明
いくつかの実施形態では、凍結乾燥リポソーム組成物は、１種以上の疎水性治療薬と、第１の成分と、第２の成分と、凍結防止剤と、第１の酸化防止剤と、第２の酸化防止剤とを含み得る。
【００６５】
疎水性治療薬
好ましい疎水性治療薬は、次の物質的、構造的または立体化学的もしくは化学的特質の１つ以上を有し得る。
【００６６】
（１）前記疎水性治療薬は、約１．０〜約５．０（例えば、１．０、１．１、１．２、１．３、１．４、１．５、１．６、１．７、１．８、１．９、２．０、２．１、２．２、２．３、２．４、２．５、２．６、２．７、２．８、２．９、３．０、３．１、３．２、３．３、３．４、３．５、３．６、３．７、３．８、３．９、４．０、４．１、４．２、４．３、４．４、４．５、４．６、４．７、４．８、４．９、５．０）のオクタノール／水分配係数（ｌｏｇＰ）値を有し得る。
【００６７】
説明を簡単にするために、範囲（例えば、約１．０〜５．０のｌｏｇＰ）または特定範囲（例えば、約１．０〜１．５のｌｏｇＰ）の部分的な範囲の列挙は、明示的に、列挙された範囲の上下限を含む、列挙された範囲内に入る個々の値のそれぞれを包含することは理解される。
【００６８】
ある特定の実施形態では、前記疎水性治療薬は、約１．０〜約５．０（例えば、約１．０〜約４．５、約１．０〜約４．０、約１．０〜約３．５、約１．０〜約３．０、約１．０〜約２．５、約１．０〜約２．０、約１．０〜約１．５）のｌｏｇＰを有し得る。
【００６９】
ある特定の実施形態では、前記疎水性治療薬は、約２．０〜約５．０（例えば、約２．０〜約４．５、約２．０〜約４．０、約２．０〜約３．５、約２．０〜約３．０、約２．０〜約２．５）のｌｏｇＰを有し得る。
【００７０】
ある特定の実施形態では、前記疎水性治療薬は、約２．５〜約５．０（例えば、約２．５〜約４．５、約２．５〜約４．０、約２．５〜約３．５、約２．５〜約３．０）のｌｏｇＰを有し得る。
【００７１】
ある特定の実施形態では、前記疎水性治療薬は、約３．０〜約５．０（例えば、約３．０〜約４．５、約３．０〜約４．０、約３．０〜約３．５）のｌｏｇＰを有し得る。
【００７２】
ある特定の実施形態では、前記疎水性治療薬は、約３．５〜約５．０（例えば、約３．５〜約４．５、約３．５〜約４．０）のｌｏｇＰを有し得る。
【００７３】
ある特定の実施形態では、前記疎水性治療薬は、約４．０〜約５．０（例えば、約４．０〜約４．５）のｌｏｇＰを有し得る。
【００７４】
ある特定の実施形態では、前記疎水性治療薬は、約４．５〜約５．０のｌｏｇＰを有し得る。
【００７５】
（２）前記疎水性治療薬は、約５ｎｇ／ｍＬ〜約５ｍｇ／ｍＬ（例えば、約５ｎｇ／ｍＬ〜約４ｍｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ〜約３ｍｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ〜約１ｍｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ〜約０．５ｍｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ〜約０．２５ｍｇ／ｍＬ、約５ｎｇ／ｍＬ〜約０．１ｍｇ／ｍＬ）の水溶解度を有し得る。ある特定の実施形態では、前記疎水性治療薬は、約５ｎｇ／ｍＬ〜約２ｍｇ／ｍＬの水溶解度を有し得る。
【００７６】
（３）前記疎水性治療薬は、約１００ダルトン（Ｄ）〜約２０００Ｄ（例えば、約１００Ｄ〜約１５００Ｄ、約１００Ｄ〜約１０００Ｄ、約２００Ｄ〜約８００Ｄ）の分子量を有し得る。
【００７７】
（４）前記疎水性治療薬は酸性基（すなわち１つ以上の解離性プロトンを含有する部分）を含み得、この場合、その（それらの）解離性プロトンのｐＫａ（水に対する）は約２〜約１１（例えば、約２〜約１０、約２〜約７、約４〜約１１、約４〜約１０、約４〜約７）ｐＫａ単位である。
【００７８】
（５）前記疎水性治療薬は塩基性基を含み得、この場合、その塩基性基の共役酸のｐＫａ（水に対する）は約１．５〜約１２（例えば、約３〜約１２、約５〜約１２）である。
【００７９】
（６）前記疎水性治療薬は、全ての解離性プロトンのｐＫａ（水に対する）が約１１より大きい酸性基および／または塩基性基の共役酸のｐＫａ（水に対する）が約１．５より小さい塩基性基を含み得る。
【００８０】
（７）前記疎水性治療薬は、（４）、（５）、および（６）に明確に述べた基の任意の組合せまたは数を含み得る。例えば、前記疎水性治療薬は、本明細書に記載のような１つ以上の酸性基と、本明細書に記載のような１つ以上の塩基性基とを含み得る。いくつかの実施形態では、前記疎水性治療薬は、両性イオンまたは双極子イオン（逆電荷をもつ部分を有する中性分子、例えば、同じ分子上に存在する酸性基（例えば、−ＣＯＯＨ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２、または−ＳＯ３Ｈ）、塩基性基（例えば、−ＮＨ２、第２級または第３級アミノ）との間の反応（プロトン交換）の生成物である部分）、および両性イオン基（例えばアミノ酸、ペプチドおよびタンパク質）であり得る。
【００８１】
（８）前記疎水性治療薬は（４）に明確に述べた１つ以上の基だけを含み得る。
【００８２】
（９）前記疎水性治療薬は１つ以上の不斉中心を含み得、そのため、前記疎水性治療薬は、本明細書に記載の組成物および処方物中に前記疎水性治療薬の１種以上の異性体とともに存在し得る。そのようなものとして、本明細書に記載の組成物および処方物は、疎水性治療薬のラセミ化合物およびラセミ混合物、単一エナンチオマー、個別ジアステレオマーおよびジアステレオマー混合物を含み得る。同様に、前記疎水性治療薬はまた、結合（例えば、炭素−炭素結合、炭素−窒素結合（アミド結合など））も含み得、この際、結合回転はその特定の結合に制限され、例えば制限は環または二重結合が存在することによって生じる。よって、本明細書に記載の組成物および処方物は、前記疎水性治療薬のシス／トランスおよびＥ／Ｚ異性体ならびに／または回転異性体混合物を含み得る。本明細書に記載の組成物および処方物はまた、前記疎水性治療薬の互変異性体混合物も含み得る。
【００８３】
（１０）前記疎水性治療薬の物理的形状は、所望により（例えば、安定性の考察または単離および取り扱いの容易さに基づいて）選択することができる。例えば、前記疎水性治療薬は、結晶性固体、多形体、非晶質固体、または疎水性液体（例えば、油）であり得る。
【００８４】
（１１）前記疎水性治療薬は、当技術分野において化学化合物に疎水性を与えることが分かっている１つ以上の部分（例えば、Ｃ１−２０（例えば、Ｃ５−１８）アルキル、Ｃ２−２０（例えば、Ｃ５−１８）アルケニル、もしくはＣ２−Ｃ２０（例えば、Ｃ５−１８）アルキニル直鎖もしくは分枝鎖、またはＣ３−Ｃ２０飽和もしくは部分飽和炭素環、または５〜１８個の原子を含有する芳香族もしくは複素芳香環）を含み得る。ある特定の実施形態では、前記疎水性治療薬は、２つの環を含み得、それらの環のそれぞれは、互いに独立に、芳香環または複素芳香環であり得る。それらの２つの環は、一重結合による連結を通じてあるいは縮合（融合）二環系、三環系または多環系（例えば、合成起源または天然起源のもの）の一部を形成することによって互いに結合していてよい。
【００８５】
疎水性治療薬としては、限定されるものではないが、Ｓｒｃキナーゼ阻害薬、心筋細胞ギャップ結合修飾薬、抗炎症薬（例えば、ステロイド性および非ステロイド性）、抗菌薬、抗原虫薬、抗真菌薬、冠血管拡張薬、カルシウムチャネル遮断薬、気管支拡張薬、酵素阻害薬（コラゲナーゼ阻害薬、プロテアーゼ阻害薬、エラスターゼ阻害薬、リポキシゲナーゼ阻害薬、およびアンジオテンシン変換酵素阻害薬など）、他の抗高血圧薬、ロイコトリエン拮抗薬、抗潰瘍薬（Ｈ２拮抗薬など）、ステロイド性ホルモン、抗ウイルス薬および／または免疫調節薬、局所麻酔薬、強心薬、鎮咳薬、抗ヒスタミン薬、麻薬性鎮痛薬、ペプチドホルモン、性ホルモン、心臓作用性製品（アトリオペプチド(atriopeptides)など）、タンパク質性製品、制吐剤(antinauseants)、抗痙攣薬、免疫抑制薬、精神治療薬、鎮静薬、抗凝固薬、鎮痛薬、片頭痛治療薬、抗不整脈薬、鎮吐薬(antiemetics)、抗癌薬、神経薬（抗不安薬など）、止血薬、抗肥満薬、抗微生物薬、セロトニン経路モジュレーター、環状ヌクレオチド経路薬、カテコールアミンモジュレーター、エンドセリン受容体拮抗薬、酸化窒素供与体／放出分子、ＡＴII−受容体拮抗薬、血小板粘着阻害薬、血小板凝集阻害薬、凝固経路モジュレーター、シクロオキシゲナーゼ経路阻害薬、リポキシゲナーゼ経路阻害薬、Ｅ−およびＰ−セレクチン拮抗薬、ＶＣＡＭ−１およびＩＣＡＭ−１相互作用阻害薬、プロスタグランジンおよびその類似体、マクロファージ活性化予防薬、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼ阻害薬、様々な増殖因子に作用する薬剤（ＦＧＦ経路薬、ＰＤＧＦ受容体拮抗薬、ＩＧＦ経路薬、ＴＧＦ−β経路薬、ＥＧＦ経路薬、ＴＮＦ−α経路薬、トロンボキサンＡ２［ＴＸＡ２］経路モジュレーター、およびプロテインチロシンキナーゼ阻害薬を含む）、ＭＭＰ経路阻害薬、細胞運動阻害薬、抗炎症薬、抗増殖／抗悪性腫瘍薬、マトリックス沈着／組織化経路阻害薬、内皮化ファシリテイター(endothelialization facilitators)、血液レオロジーモジュレーター、ならびにインテグリン、ケモカイン、サイトカインおよび増殖因子が含まれ得る。
【００８６】
好ましい治療薬としては、例えば、不水溶性真菌抗生物質および植物起源、海洋起源または動物起源由来の天然、合成、または半合成複合大員環（例えば、パクリタキセル、ドセタキセル、ラパマイシン）が挙げられる。好ましい治療薬には、陸源から得られるもの例えば粘土、泥、土壌、または地（例えば、地球の表面層、鉱山、乾燥した河、湖、沼床から）が含まれ得る。
【００８７】
また、疎水性治療薬には、遺伝子治療薬およびタンパク質、例えばリボザイム、アンチセンスポリヌクレオチドおよびゲノムＤＮＡ、ｃＤＮＡ、またはＲＮＡなどの特定の産物をコードするポリヌクレオチド（組換え核酸を含む）も含まれる。このようなポリヌクレオチドは、「裸の」形態でまたはポリヌクレオチドの取り込みおよび発現を高めるベクター系と連結して、提供することができる。これらは、ＤＮＡ凝縮薬(DNA compacting agents)、非感染性ベクターおよびウイルスベクター例えばウイルスおよびウイルス様粒子（すなわちウイルスのような働きをするように作られた合成粒子）を含み得る。このようなベクターは、フェリータンパク質(ferry proteins)をコードする遺伝子配列例えば膜輸送配列（「ＭＴＳ」）および単純ヘルペスウイルス−１（「ＶＰ２２」）を含むペプチドターゲッティング配列、アンチセンス核酸、およびＤＮＡキメラをさらに付けていてよい。
【００８８】
一般に、凍結乾燥リポソーム組成物は、約０．０５重量パーセント〜約１０重量パーセント（該組成物の総重量に対して）（例えば、約０．５００重量パーセント〜約２．５００重量パーセント、約１．０００重量パーセント〜約２．０００重量パーセント）の前記疎水性治療薬を含み得る。
【００８９】
成分
前記第１および第２の成分は、前記凍結乾燥リポソーム組成物を水と接触させたときに、リポソーム脂質二重層を形成するように相互に作用する部分である。
【００９０】
一般に、高い結晶格子エネルギーは、高融点および低水溶解度につながり得る。結晶格子エネルギーは、例えば、π−スタッキング相互作用（例えば、芳香環のスタッキング）によって増加され得る。この分子間スタッキングは、相互補完的である、分子の異なる領域における極性の非対称性から生じると考えられており、これが複数のπ系を有する一部の疎水性治療薬（ＨＴＡ）の水不溶性の一員と考えられている。学説に捉われることなく、このπ−π電子的相互作用が、陰イオン性頭部基および疎水性尾部を有する分子を挿入することによって低減され得るならば、格子エネルギー寄与は低減され得、ＨＴＡの水溶解度は増加され得ると考えられている。さらに、疎水性治療薬（例えば、複数のπ系を有する疎水性治療薬または高い関連結晶格子エネルギーを有するいずれもの疎水性治療薬）を、１種以上の低融点疎水性リン脂質（例えば、中間長の脂肪酸鎖および／もしくは１以上の不飽和を含有する脂肪酸鎖を有するもの）と、ならびに／または陰イオン電荷もしくは電子供与能を有するポリマーと相互作用（例えば、複合体形成）させることにより、例えば、複合体中の疎水性治療薬の融点を低下させ得ると考えられている。例えば、疎水性治療薬：脂質複合体が水に曝されると、疎水性相互作用と静電相互作用のバランスによってリポソームまたはミセルなどの有機集合体が形成され得る。結果として、使用できる水溶解度が達成され得る。
【００９１】
よって、いくつかの実施形態では、前記第１および第２の成分は、それぞれ、独立に、中鎖長および／または１以上の不飽和度を有する１つ以上の脂肪酸鎖を含み得る。学説に捉われることなく、これらの特性の一方または両方を有する脂肪酸は融点を低下させ得、本明細書に記載のリポソーム組成物および処方物の前記成分中にそれらが存在することで親油性または疎水性材料の二重層への取り込み度を増加し得ると考えられている。また、前記成分にそのような脂肪酸鎖が存在することで、結果として得られるリポソームの二重層流動性も増加し得、その結果として得られるリポソームの血液タンパク質による浸透を可能にし得る。
【００９２】
いくつかの実施形態では、前記第１および第２の成分は、それぞれ、独立に、前記成分上（それゆえその結果として得られるリポソーム）上に正味電荷が存在することを含み得る。この構造的特徴は静電反発力を通じてリポソームの安定性を提供し得、そのことにより次には多層リポソームの凝集または形成の可能性が減少され得るため、より大きな粒径のリポソームがもたらされ得る。例えば、陰イオン性リン脂質は静電反発力によりリポソームの凝集を防ぎ、高い保存性を提供し得る。しかしながら、Ｉ．Ｖ．投与によると、陰イオン性脂質は、血液の成分によって取り出され得る。これは次にはリポソームの崩壊、そして事前に封入された疎水性治療薬の血液コンパートメントへの送達につながり得る。血液コンパートメントなどは細網内皮系（ＲＥＳ）によって認識されないため、ＲＥＳ回避がなされ得る。本明細書に記載のインビボ急速崩壊型リポソーム組成物および処方物において形成されるリポソームは、前記疎水性治療薬の、血液中の赤血球（ＲＢＣ）、リポタンパク質、ＨＳＡまたはＷＢＣへの移行程度および速度を、前記疎水性治療薬のＲＥＳ中への移行程度および速度に対して増強（例えば、増加）し得ると考えられている。
【００９３】
いくつかの実施形態では、前記第１および第２の成分は、それぞれ、独立に、中鎖長を有する脂肪酸鎖、１以上の不飽和度を有する脂肪酸鎖、および正味電荷を含み得る。
【００９４】
いくつかの実施形態では、前記第１および第２の成分が存在することによって、前記疎水性治療薬のＤＭＳＯまたは補助溶媒溶液と同様に挙動し得るリポソーム処方物をもたらし得る。
【００９５】
前記第１および第２の成分のような成分には、限定されるものではないが、天然レシチンまたはリン脂質（例えば、任意の植物起源、動物起源、または細菌起源由来、例えば、卵または大豆起源由来の、卵または大豆ホスファチド、例えば、卵レシチン、卵ホスファチジルエタノールアミン、卵ホスファチジルグリセロール、卵ホスファチジルコリン、大豆ホスファチジルコリン、ホスファチジン酸、植物モノガラクトシルジグリセリド（水素化）または植物ジガラクトシルジグリセリド（水素化）と呼ばれるリン脂質）、あるいは合成レシチン（例えば、ジヘキサノイル−Ｌ−α−レシチン、ジオクタノイル−Ｌ−α−レシチン、ジデカノイル−Ｌ−α−レシチン、ジドデカノイル−Ｌ−α−レシチン、ジテトラデカノイル−Ｌ−α−レシチン、ジヘキサデカノイル−Ｌ−α−レシチン、ジオクタデカノイル−Ｌ−α−レシチン、ジオレオイル−Ｌ−α−レシチン、ジリノレオイル−Ｌ−α−レシチン、α−パルミト，β−オレオイル−Ｌ−α−レシチン、Ｌ−α−グリセロホスホリルコリン）が含まれ得る。他の好適なリン脂質としては、ジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、ホスファチジルコリン（ＰＣ）、ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）、またはジステアロイルホスファチジルコリン（ＤＳＰＣ）、ジミリストイルホスファチジルグリセロール（ＤＭＰＧ）ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリンおよびホスファチジルイノシトールが挙げられる。
【００９６】
模範的な第１および第２の成分としては、炭素数１４の飽和炭素鎖であるジミリストイルホスファチジルコリン（ＤＭＰＣ）、両性イオン性頭部基、脂肪酸の混合物である卵ホスファチジルコリン（ＥＰＣ、卵ＰＣ）、両性イオン性頭部基約４２％が飽和し、約５７％が不飽和である炭素数１６〜１８の炭素鎖、脂肪酸の混合物である大豆ホスファチジルコリン（ＳＰＣ）、両性イオン性頭部基約１７％が飽和し、約８１％が不飽和である炭素数１６〜１８の炭素鎖、またはＥＰＣと本質的に同じ混合物を含むが、頭部基が正味の負電荷を含む卵ホスファチジルグリセロール（ＥＰＧ、卵ＰＧ）が挙げられる。
【００９７】
ある特定の実施形態では、前記第１の成分および前記第２の成分のそれぞれは、互いに独立に、天然レシチンまたはリン脂質であり得る。例えば、前記第１の成分は卵ホスファチジルグリセロールであり得、かつ前記第２の成分は大豆ホスファチジルコリンであり得る。別の例として、前記第１の成分は、卵ホスファチジルグリセロールであり得、かつ前記第２の成分は、ＤＭＰＣであり得る。
【００９８】
他の実施形態では、前記第１の成分および前記第２の成分の一方または両方は、リン脂質以外の脂質を有する合成脂肪酸鎖であり得る。例えば、陽イオン性部分としての第四級アンモニウムイオンおよび陰イオン性部分としての硫酸基を有する合成脂肪酸鎖。
【００９９】
一般に、凍結乾燥リポソーム組成物は、約１０重量パーセント〜約９０重量パーセント（該組成物の総重量に対して）（例えば、約１０重量パーセント〜約５０重量パーセント、約２０重量パーセント〜約４０重量パーセント）の前記第１の成分および前記第２の成分を含み得る。
【０１００】
いくつかの実施形態では、前記第２の成分の前記第１の成分に対する重量パーセント比は、約１〜約７（例えば、約１〜約５、約２〜約５、約１〜約３、約２〜約３、約４〜約５）であり得る。前記第２の成分の前記第１の成分に対する重量パーセント比は、約２．２〜約２．７であり得る。前記第２の成分の前記第１の成分に対する重量パーセント比は、約４．２〜約４．８（例えば、４．５）であり得る。
【０１０１】
いくつかの実施形態では、前記第１の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数よりも小さくあり得る。例えば、前記（前記第１の成分の比率）：疎水性治療薬は、（約０．１０〜約０．９５）：１、例えば、（約０．５０〜約０．９５）：１、例えば、約（０．７５）：１であり得る。
【０１０２】
いくつかの実施形態では、前記第１の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数とほぼ同じであり得る。
【０１０３】
いくつかの実施形態では、前記第１の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数よりも約１．５〜約６倍大きく（例えば、約２〜約５倍大きく、約３〜約４倍大きく）あり得る。
【０１０４】
いくつかの実施形態では、前記第２の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数よりも約２〜約１５倍大きく（例えば、約２〜約１２倍大きく、約２〜約４倍大きく、約４〜約６倍大きく、約６〜約１２倍大きく、例えば、約３倍大きく、約５倍大きく、例えば、約７倍大きく、例えば、約１１倍大きく）あり得る。
【０１０５】
いくつかの実施形態では、前記第１の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数よりも小さくあり得（例えば、前記（前記第１の成分の比率）：疎水性治療薬は、（約０．１０〜約０．９５）：ｌ、例えば、（約０．５０〜約０．９５）：ｌ、例えば、約（０．７５）：ｌであり得）、かつ前記第２の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数よりも約２〜約１５倍大きく（例えば、約２〜約１２倍大きく、約２〜約４倍大きく、約４〜約６倍大きく、約６〜約１２倍大きく、例えば、約３倍大きく、約５倍大きく、例えば、約７倍大きく、例えば、約１１倍大きく）あり得る。例えば、前記第１の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数よりも小さくあり得（例えば、前記（前記第１の成分の比率）：疎水性治療薬は、（約０．５０〜約０．９５）：ｌ、例えば、約（０．７５）：ｌであり得）、かつ前記第２の成分のモル数は、約２〜約４倍大きく（例えば、約３倍大きく）であり得る。
【０１０６】
いくつかの実施形態では、前記第１の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数とほぼ同じであり得、かつ前記第２の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数よりも約２〜約１５倍大きく（例えば、約２〜約１２倍大きく、約２〜約４倍大きく、約４〜約６倍大きく、約６〜約１２倍大きく、例えば、約３倍大きく、約５倍大きく、例えば、約７倍大きく、例えば、約１１倍大きく）あり得る。例えば、前記第１の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数とほぼ同じであり得、かつ前記第２の成分のモル数は、約４〜約６倍大きく（例えば、約５倍大きく）あり得る。
【０１０７】
いくつかの実施形態では、前記第１の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数よりも約１．５〜約６倍大きく（例えば、約２〜約５倍大きく、約３〜約４倍大きく）あり得、かつ前記第２の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数よりも約２〜約１５倍大きく（例えば、約２〜約１２倍大きく、約２〜約４倍大きく、約４〜約６倍大きく、約６〜約１２倍大きく、例えば、約３倍大きく、約５倍大きく、例えば、約７倍大きく、例えば、約１１倍大きく）あり得る。例えば、前記第１の成分のモル数は、前記疎水性治療薬のモル数よりも約２〜約５倍大きく（例えば、約３倍または約４倍大きく）あり得、かつ前記第２の成分のモル数は、約６〜約１２倍大きく（例えば、約７倍または約１１倍大きく）あり得る。
【０１０８】
実施形態では、前記疎水性治療薬：前記第１の成分：前記第２の成分のモル比は、
【表３】
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であり得る。
【０１０９】
いくつかの実施形態では、前記第１の成分および前記第２の成分の前記疎水性治療薬に対する重量パーセント比は、約２〜約５０（例えば、約１０〜約５０、約１５〜約２５）であり得る。
【０１１０】
凍結防止剤
凍結防止剤により（例えば、保存中に）前記水性処方物の凍結からの保護を講じる。好適な凍結防止剤としては、グリシン、グリセロール、糖類（例えば、単糖類、二糖類、または多糖類、例えば、グルコース、フルクトース、ラクトース、トレハロース、マルトース、マルトトリオース、パラチノース、ラクツロースもしくはスクロース）、あるいはポリヒドロキシアルコール（例えば、マンニトール、ソルビトール）が挙げられる。一般に、凍結乾燥リポソーム組成物は、約５０重量パーセント〜約７５重量パーセント（該組成物の総重量に対して）の凍結防止剤を含み得る。いくつかの実施形態では、前記凍結防止剤の前記第１の成分および前記第２の成分に対する重量パーセント比は、約１．５〜約５（例えば、約２〜約３）であり得る。
【０１１１】
いくつかの実施形態では、前記凍結防止剤は単糖類、二糖類または多糖類（例えば、グルコース、フルクトース、ラクトースもしくはトレハロース）である。ある特定の実施形態では、前記リポソーム処方物中に単糖類、二糖類または多糖類が存在することで比較的小さく狭い粒径分布（例えば、約１３０ｎｍ〜約２００ｎｍ未満）を有するリポソームが生じ得、この場合、前記疎水性治療薬は、そのリポソーム中に比較的効率的に（例えば、約８０％以上、例えば、約９０％以上、例えば、約９５％以上の封入効率で）安定に封入され得る。
【０１１２】
一般に、封入効率は次のとおり評価することができる：（１）既知量の疎水性治療薬を含有するリポソーム溶液を、例えば、本明細書に記載の方法を用いて、調製し、（２）そのリポソーム溶液中の疎水性治療薬の濃度を測定し、（３）得られたリポソーム溶液を０．２２μフィルターで濾過し、その後、濾過したリポソーム溶液中にはおよそナノメートル粒径分布のリポソームが保持され、（４）その濾過したリポソーム溶液中の疎水性治療薬の濃度を測定し、そして（５）工程（４）で得られた疎水性治療薬の濃度を工程（２）で得られた疎水性治療薬の濃度で除すことによって封入効率を決定する。
【０１１３】
酸化防止剤、追加成分、および模範的な凍結乾燥組成物
いくつかの実施形態では、前記第１の酸化防止剤および前記第２の酸化防止剤のそれぞれは、互いに独立に、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、ブチル化ヒドロキシルアニソール（ＢＨＡ）、α−トコフェロールもしくはそのアシルエステル、ペグ化ビタミンＥ（例えば、ＴＰＧＳ）、またはアスコルビルパルミテートであり得る。好ましい実施形態では、前記酸化防止剤は疎水性酸化防止剤（例えば、ＢＨＴ、ＢＨＡ、α−トコフェロール、またはアスコルビルパルミテート）である。他の実施形態では、前記凍結乾燥リポソーム組成物は３種以上の酸化防止剤（３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、または１０種の酸化防止剤）を含み得る。
【０１１４】
いくつかの実施形態では、凍結乾燥リポソーム組成物は、１種以上の界面活性剤（例えば、様々な鎖長のペグ化（ＰＥＧ）ビタミンＥ、チロキソポール(tyloxopol)およびそのペグ化（ＰＥＧ）誘導体、または５〜１５個の炭素の脂肪鎖を有する単糖類）をさらに含み得る。
【０１１５】
模範的な凍結乾燥リポソーム組成物には、表１に明確に述べたものが含まれる。
【表４】
2009519250.tif 000005
【０１１６】
実質的に均質なリポソーム溶液
いくつかの実施形態では、実質的に均質なリポソーム溶液または実質的に均質なリポソーム処方物は、１種以上の疎水性治療薬と、第１の成分と、第２の成分と、凍結防止剤と、第１の酸化防止剤と、第２の酸化防止剤と、水とを含み得る。特定の疎水性治療薬、第１の成分、第２の成分、凍結防止剤、第１の酸化防止剤、および第２の酸化防止剤は、他の場所に記載したように選択することができる。
【０１１７】
いくつかの実施形態では、前記実質的に均質なリポソーム処方物は、少なくとも約７０重量／容量パーセント（例えば、少なくとも約７５重量／容量パーセント、少なくとも約８０重量／容量パーセント、少なくとも約８５重量／容量パーセント、少なくとも約９０重量／容量パーセント、少なくとも約９５重量／容量パーセント）の水を含み得る。
【０１１８】
一般に、前記実質的に均質なリポソーム処方物中の前記疎水性治療薬の濃度は、、例えば、前記疎水性治療薬の性質に依存し得る。いくつかの実施形態では、前記処方物は、約０．０５０重量／容量（ｗ／ｖ）パーセント〜約０．５００％重量／容量（ｗ／ｖ）パーセントの前記疎水性治療薬を含み得、それにより約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約１０．０ｍｇ／ｍｌ（例えば、約０．５ｍｇ／ｍｌ〜約８．０ｍｇ／ｍｌ、例えば、２ｍｇ／ｍｌ）の前記疎水性治療薬を有するリポソーム溶液が提供される。
【０１１９】
全ての実施形態では、前記処方物は、前記疎水性治療薬を沈殿させることなく、水で無制限に希釈することが可能である
【０１２０】
一般に、ナノメートル平均粒径分布のリポソームを含有するリポソーム溶液は、澄んだ半透明溶液（例えば、実質的に均質なリポソーム溶液または実質的に均質なリポソーム処方物）になる。そのため、前記疎水性治療薬の沈殿は、定性的手法、例えば、攪拌リポソーム溶液の、例えば、濁ったまたは乳状の分散液の形成についての視覚的モニタリングを利用してモニタリングすることができる。また、前記疎水性治療薬の沈殿は、本明細書に記載の定量的手法を利用しても（また定性的手法と併用しても）モニタリングすることができる。例えば、濾過し、濾過されていないリポソーム溶液の濃度の実質的な変化により前記疎水性治療薬の沈殿を示すことができる。
【０１２１】
模範的な処方物には、表２に明確に述べたものが含まれる。
【表５】
2009519250.tif 000006
【０１２２】
いくつかの実施形態では、前記凍結乾燥リポソーム組成物、前記実質的に均質なリポソーム溶液または前記実質的に均質なリポソーム処方物中に存在する第１の成分、第２の成分、凍結防止剤、第１の酸化防止剤、および第２の酸化防止剤ならびに他の添加剤の一部または全ては、米国特許第４，８１６，２４７号および米国特許第６，８９０，５５５号、および米国特許第７，１３５，１９３Ｂ２号に記載のものからも選択することができ、それらの全ては引用することにより本明細書の一部とされる。
【０１２３】
全ての実施形態では、前記リポソームは、肺毛細血管を閉鎖する可能性を最小にするように、約５，０００ｎｍ未満の平均粒径分布を有する。一般に、前記リポソームは、約３０ｎｍ〜約５００ｎｍ（例えば、約５０ｎｍ〜約３００ｎｍ、例えば、約２００ｎｍ、約３０ｎｍ〜最大限でも約２００ｎｍ、約２００ｎｍ未満）の平均粒径分布を有する。
【０１２４】
一般に、従来のリポソーム処方物は、肝臓および脾臓などの細網内皮系（ＲＥＳ）器官に優先的に取り込まれる。場合によっては、薬物の１０〜２０％だけは体循環中で利用可能である。粒径が増加すると、従来の処方物の正常な時間効果の結果として、ＲＥＳ取り込みの可能性はさらに増加する。
【０１２５】
前記リポソームのＲＥＳ取り込みが起こると、封入されている疎水性治療薬の大部分はＲＥＳに集中しているため、標的組織では利用され得ない。実施形態では、前記新規リポソーム処方物は「急速崩壊型」であり得るが、これは前記疎水性治療薬−リポソーム組合せはインビトロで安定であるが、インビボ投与すると、前記疎水性治療薬は血流中に迅速に放出され、そこでその疎水性治療薬は血清リポタンパク質、赤血球、およびヒト血清アルブミンと結合するという点からである。いくつかの実施形態では、前記リポソーム処方物（リポソーム）は、インビボ投与によると、急速崩壊し、前記疎水性治療薬を血流中に迅速に放出して、血液中の、例えば、赤血球（ＲＢＣ）、リポタンパク質、ＨＳＡまたはＷＢＣと結合し得る。学説に捉われることなく、この迅速放出により前記疎水性治療薬を肝臓、脾臓、または骨髄などの非標的組織に蓄積させないようにすることができ、そうでなければ、その非標的組織ではリポソームが集中する傾向にあると考えられている。好ましいリポソームの「急速崩壊」性は、前記疎水性治療薬が本明細書に記載の処方物中に形成されているリポソームの脂質二重層と相互作用する様式とも関連し得る。
【０１２６】
本明細書に記載の組成物および処方物は、前記疎水性治療薬自体だけでなく、妥当な場合には、それらの塩およびそれらのプロドラッグも含み得る。塩は、例えば、陰イオンと本明細書に記載の化合物の正電荷置換基（例えば、アミノ）の間で形成され得る。好適な陰イオンとしては、クロリド、ブロミド、ヨージド、スルフェート、ニトレート、ホスフェート、シトレート、メタンスルホネート、トリフルオロアセテート、およびアセテートが挙げられる。。同様に、塩は、陽イオンと本明細書に記載の化合物の負電荷置換基（例えば、カルボキシレート）の間でも形成され得る。好適な陽イオンとしては、ナトリウムイオン、カリウムイオン、マグネシウムイオン、カルシウムイオン、およびアンモニウム陽イオン（テトラメチルアンモニウムイオンなど）が挙げられる。プロドラッグの例としては、対象への投与により活性な化合物を提供可能であるエステルおよび他の医薬上許容される誘導体が挙げられる。
【０１２７】
医薬上許容される塩には、医薬上許容される無機および有機酸および塩基から誘導されるものが含まれる。好適な酸性塩の例としては、アセテート、アジペート、アルギネート、アスパルテート、ベンゾエート、ベンゼンスルホネート、ビスルフェート、ブチレート、シトレート、カンホレート、カンファースルホネート、ジグルコネート、ドデシルスルフェート、エタンスルホネート、ホルメート、フマレート、グルコヘプタノエート、グリコレート、ヘミスルフェート、ヘプタノエート、ヘキサノエート、ヒドロクロリド、ヒドロブロミド、ヒドロヨージド、２−ヒドロキシエタンスルホネート、ラクテート、マレエート、マロネート、メタンスルホネート、２−ナフタレンスルホネート、ニコチネート、ニトレート、パルモエート、ペクチネート、ペルスルフェート、３−フェニルプロピオネート、ホスフェート、ピクレート、ピバレート、プロピオネート、サリチレート、スクシネート、スルフェート、タルトレート、チオシアネート、トシレートおよびウンデカノエートが挙げられる。シュウ酸などの他の酸は、本来医薬上許容されないが、本発明の化合物およびそれらの医薬上許容される酸付加塩を得る際に中間体として有用な塩の調製に使用してよい。適当な塩基から誘導される塩としては、アルカリ金属（例えば、ナトリウム）、アルカリ土類金属（例えば、マグネシウム）、アンモニウムおよびＮ−（アルキル）４＋塩が挙げられる。また、本発明では、本明細書に開示される化合物の任意の塩基性窒素含有基の四級化も想定する。そのような四級化によって、水または油溶性または分散性生成物を得てよい。本明細書におけるいかなる処方の化合物の塩形態も、カルボキシ基のアミノ酸塩（例えばＬ−アルギニン、−リジン、−ヒスチジン塩）であり得る。
【０１２８】
いくつかの実施形態では、凍結乾燥リポソーム組成物は、
（ｉ）第１の組合せを作るために有機溶媒中で疎水性治療薬、第１の成分、および第２の成分を組み合わせることと、
（ｉｉ）第２の組合せ（例えば、リポソーム溶液）を作るために該第１の組合せを水相と組み合わせることと、
（ｉｉｉ）第３の組合せを作るために該第２の組合せから該有機溶媒を除去することと、
（ｉｖ）該第３の組合せを凍結乾燥すること（例えば、フリ−ズドライすること）と
を含む方法によって調製することができる。
【０１２９】
好ましい有機溶媒としては、蒸発減圧下（例えば、吸引器圧または低真空、例えば、約１ｍｍＨｇ〜約５０ｍｍＨｇ）によって比較的容易にかつ実用的に除去することができるものが挙げられる。模範的な有機溶媒としては、例えば、Ｃ１−６直鎖および分枝アルコール（例えば、エタノールまたはイソプロパノールまたはｔ−ブタノール）、Ｃ１−６直鎖および分枝ハロアルカン（例えば、塩素化アルカン、例えば、クロロホルムまたは塩化メチレン）、Ｃ１−６直鎖および分枝アルキルエステル（例えば、エチルアセテート）が挙げられる。
【０１３０】
いくつかの実施形態では、前記第１の組合せは１種以上の酸化防止剤（例えば、２種の酸化防止剤）を含み得る。
【０１３１】
いくつかの実施形態では、前記水相は凍結防止剤（例えば、ラクトース）を含み得る。
【０１３２】
いくつかの実施形態では、前記第２の組合せはリポソーム溶液であり得、かつ前記方法は前記リポソームの粒径分布を減少させる（例えば、「前記疎水性治療薬の実質的に均質なリポソーム溶液」または「前記疎水性治療薬の実質的に均質なリポソーム処方物」を作るために、例えば、前記リポソームの平均粒径分布を約５０ｎｍ〜約５００ｎｍ（例えば、約５０ｎｍ〜約３００ｎｍ、例えば、（〜最大限でも約２００ｎｍ、２００ｎｍ未満）に減少させる）工程をさらに含み得る。
【０１３３】
いくつかの実施形態では、工程（ｉｉｉ）は、一部もしくは実質的に全ての前記有機溶媒を、例えば、蒸留、減圧（例えば、吸引器圧もしくは低真空、例えば、約１ｍｍＨｇ〜約５０ｍｍＨｇ）下での蒸発、またはタンジェンシャルフローフィルトレーションにより除去することを含み得る。
【０１３４】
ある特定の実施形態では、工程（ｉｉｉ）はタンジェンシャルフローフィルトレーション（ＴＦＦ）を実施することを含み得る。好ましい実施形態では、前記有機溶媒は好ましくは水混和性有機溶媒（例えば、エタノール、ｉｓｏ−プロパノール、ｎ−プロパノール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール）である。一般に、最初の溶媒は、フィルター膜に約５〜１０（例えば、５〜６）回通した後にリポソーム溶液から除去することができる。
【０１３５】
本明細書に記載の方法においてＴＦＦを用いることには、次の利点の１つ以上があり得る。例えば、ＴＦＦは一般に拡張可能であり、除去する有機溶媒に対して柔軟性がある。ＴＦＦは、一般に、本質的に任意の低分子量の水混和性有機溶媒を、約１００ｍＬ〜約１０，０００リットル（Ｌ）（例えば、約１００ｍＬ〜約１，０００ｍＬ（例えば、１〜３Ｌ、３０〜５０Ｌ）の総容量を有するリポソーム溶液から除去するのに用いることができる。また、ＴＦＦ法自体は溶媒蒸発工程を含まない。そのため、ＴＦＦを用いることによって本明細書に記載の方法の実施に伴う作業コストが下がる可能性があり得る（例えば、タンジェンシャルフローフィルトレーションがあり得るが、それは特別に設計されたコストのかかる施設（例えば、防爆施設）の範囲内で実施する必要はなく、そのような施設は真空系、加熱マントル、縮合塔などの溶媒除去装置を適応させるのに一般に必要とされる（要求されることがある）。さらなる例として、タンジェンシャルフローフィルトレーションを用いることによって本明細書に記載の方法を本質的にワンポット操作として実施することができるようになり、それにより該方法の中間段階におけるリポソーム溶液のバルク輸送の可能性を最小にする。
【０１３６】
いくつかの実施形態では、前記方法は無菌濾過の工程をさらに含み得る。
【０１３７】
いくつかの実施形態では、前記方法は、より大きな粒子を分離するために濾過したり、または狭い分布の粒径分布を得る他の機械的方法を利用したりしないで前記リポソーム処方物を製造することができるように、十分に小さく狭い平均粒径分布（例えば、約２００ナノメートル（ｎｍ）未満）を有するリポソームを提供することができる。
【０１３８】
他の実施形態では、凍結乾燥リポソーム組成物は、
（ｉ）第１の組合せを作るために有機溶媒中で疎水性治療薬、第１の成分、および第２の成分を組み合わせることと、
（ｉｉ）第２の組合せを作るために該第１の組合せから該有機溶媒を除去すること（例えば、薄膜などを形成するために一部もしくは実質的に全ての該有機溶媒を除去すること）と、
（ｉｉｉ）第３の組合せを作るために該第２の組合せを水相と組み合わせることと、
（ｉｖ）該第３の組合せを凍結乾燥し、それにより該凍結乾燥リポソーム組成物を調製することと
を含む方法によって調製することができる。
【０１３９】
一般に、前記凍結乾燥組成物は、約２℃〜約３７℃（例えば、約２℃〜約８℃）で約２年以上の間保存することができる。前記凍結乾燥組成物はまた、より低い温度、例えば、約−２０℃〜−７０℃でも保存することができる。
【０１４０】
加えて、本明細書に記載の方法は、１種以上の疎水性治療薬を有するエマルジョン、ベシクル、または高分子量集合体を調製するのに用いることができる。
【０１４１】
一般に、実質的に均質なリポソーム水性処方物または溶液は、本明細書に記載の当該凍結乾燥リポソーム組成物を水性ビヒクルで復元することにより調製することができる。復元された組成物は、水で無制限に希釈することができ、一般に室温にて約１週間にわたって物質的にも化学的にも安定している。
【０１４２】
前記リポソーム水性処方物は一般に非経口投与される。注射は、静脈内、皮下、筋肉内、くも膜下腔内、あるいは腹腔内であり得る。前記リポソーム処方物は、経皮、舌下、経口、眼、膣および結腸経路によって適用され得る。ある特定の実施形態では、前記リポソーム水性処方物は、鼻腔内にエアゾールにより、気管支内に、肺胞内に(intraalvelorly)、または肺内に投与され得る。前記組成物は、注射前に滅菌水で復元するためにバイアル中にパッケージングし得、そのバイアルには少量の無毒の補助剤例えばｐＨ緩衝剤、防腐剤、キレート化剤、酸化防止剤、浸透圧調整剤なども含まれ得る。
【０１４３】
投薬量は、０．５〜１２０時間おきに、または特定の薬剤の用件に従って、約０．０１ｍｇ／Ｋｇ〜約１０００ｍｇ／Ｋｇ、（例えば、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／Ｋｇ、約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／Ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約１０ｍｇ／ｋｇ）の範囲に及び得る。動物とヒトについての投薬量の相互関係（体表面１平方メートル当たりのミリグラム数に基づく）については、Freireich et al., Cancer Chemother. Rep. 50, 219 (1966)によって記載されている。体表面積は、患者の身長と体重から近似的に決めてよい。例えば、Scientific Tables, Geigy Pharmaceuticals, Ardsley, New York, 537 (1970)参照。本明細書における方法は、所望の効果または記述した効果を得るのに有効な量の疎水性治療薬の投与を意図している。一般に、本明細書に記載の処方物は１日１〜６回、あるいは、持続注入として投与される。ある特定の実施形態では、リポソーム水性処方物はボーラス（例えば、約１分にわたって投与される）またはスローボーラス（例えば、約１５分〜約２０分にわたって投与される）として投与され得る。そのような投与は慢性または急性治療として用いることができる。
【０１４４】
上に挙げた用量より低いまたは高い用量が必要な場合がある。いかなる特定の患者についての具体的な投薬量および処置計画も、使用する具体的な化合物の活性、年齢、体重、一般的な健康状態、性別、食習慣、投与時期、排泄速度、薬物の組合せ、疾患、状態または症状の重篤度および経過、疾患、状態または症状に対する患者の素因、ならびに治療する医師の判断を含む種々の因子によって決まる。
【０１４５】
患者の状態の改善があれば、必要に応じて、本明細書に記載の処方物の維持量を投与してよい。引き続いて、症状が所望のレベルまで緩和されたときには、改善された状態が維持されるレベルまで、症状の関数として投与の投薬量または頻度、あるいは両方を減じてよい。しかしながら、患者は、疾患の症状の再発についての長期的な間欠的処置を必要とし得る。
【０１４６】
本発明の組成物および処方物は、任意の従来の無毒の医薬上許容される担体、希釈液またはアジュバントを含有してよい（例えば、該組成物および処方物は、医薬組成物形態として調製することができ、医薬組成物形態として保存することができ、または医薬組成物形態で投与することができる）。一部の例では、、前記処方物のｐＨを医薬上許容される酸、塩基またはバッファーで調整して、処方された化合物またはその送達形態の安定性を高めてよい。
【０１４７】
いくつかの実施形態では、本明細書に記載の処方物は１種以上の他の治療薬と同時投与され得る。ある特定の実施形態では、前記追加の薬剤は、複数回投与計画の一部として、本発明の化合物とは別個に（例えば、逐次的に、例えば、本明細書に記載の処方物の投与と重なる異なるスケジュールで）投与され得る。あるいは、これらの薬剤は、単一組成物中で前記疎水性治療薬と一緒に混合されている単回投与形の一部であり得る。さらにもう１つの実施形態では、これらの薬剤は、本明細書に記載の処方物が投与されるのとほぼ同時に（例えば、本明細書に記載の処方物の投与と同時に）投与される別の用量として与えられ得る。
【０１４８】
次の実施例において本発明をさらに記載する。これらの実施例は本発明を単に例示するためのものであり、いかなる方法によっても本発明を限定するものと解釈すべきではないということを理解すべきである。
【０１４９】
実施例
候補疎水性治療薬
化合物１：（５−フルオロ−２−メチル−Ｎ−［４−（５Ｈ−ピロロ［２，１−ｃ］［１，４］ベンゾジアゼピン−１０（１１Ｈ）−カルボニル）−３−クロロフェニル］ベンズアミド、分子式−Ｃ２７Ｈ２１ＣｌＦＮ３Ｏ２、分子量  ４７３．９、融点は１８０℃〜１８４℃である。
【０１５０】
化合物１は非ペプチド性バソプレシン受容体拮抗薬であり、生理学的ｐＨ範囲（１．２〜７．５）間の水溶液には溶けない。この化合物１の、医薬上許容される親水性および親油性溶媒の部分的水性溶媒に対する溶解度は限られている。化合物１の種々の製剤系に対する２５℃での溶解度を表１に示している。
【表６】
2009519250.tif 000007
【０１５１】
表３では、化合物１のＰＥＧ４００、ＰＥＧ３００、ベンジルアルコール、ベンジルベンゾエート、トリアセチンおよびエタノールに対する溶解度（ｍｇ／ｍｌ）は、それぞれ、２６．３、１４．８６、２１．０３、３．４１、２．７０および１．８９であり、一方、ＰＥＧ３００とエタノールの５０：５０の組合せでは溶解度が８．７５ｍｇ／ｍｌまで低下していることが分かる。ＰＥＧ３００／エタノール／水（４０：３０：３０）組成物を得るために水を加えることで、溶解度は０．２８ｍｇ／ｍｌまで低下する。
【０１５２】
補助溶媒系としての、ＰＥＧ４００または３００、ベンジルアルコール、エタノールおよび少量の胆汁酸塩（例えばナトリウムデオキシタウロコレート(Sodium Deoxytauro Cholate)）のさらなる組合せでは、水を３０％レベルに加えると、最終的な水性有機混合物において化合物１が沈殿した。
【０１５３】
化合物２：ブタ−２−イン酸［４−（３−ブロモ−フェニルアミノ）−キナゾリン−６−イル］−アミドメシレート、式：Ｃ１８Ｈ１３ＢｒＮ４Ｏ．ＣＨ４Ｏ３Ｓ
【０１５４】
実施例１
凍結乾燥リポソーム組成物を調製するための基本タンジェンシャルフローフィルトレーション手順。
基本手順：疎水性治療薬、リン脂質、および酸化防止剤を無水アルコールに溶かして、疎水性治療薬−リン脂質複合体を作る。そのアルコール溶液をラクトース水溶液により希釈すると、アルコールを含むリポソーム溶液が生成する。そのアルコールをタンジェンシャルフローフィルトレーション装置（ＴＦＦ）による反復分子ふるい操作によって除去する。得られたリポソーム水溶液を高圧ホモジナイザ−に通して、粒径分布をサブミクロン範囲に減少させ、０．２２μｍフィルターで無菌濾過し、バイアルに充填する。化学的安定性を得るためにバイアル内容物を凍結乾燥する。
【０１５５】
凍結乾燥前に、ＴＦＦ法を用いたスケールアップバッチを５０リットル規模のバルクリポソーム溶液で製造した。薬物：卵ＰＧ：ＤＭＰＣのモル比組成物（１：４：１１）を含む化合物１のリポソーム凍結乾燥処方物の代表的なデータを示している。本明細書に記載のもの以外のモル比組成物を含む組成物および処方物は、ＴＦＦ処理により製造することができる。
【０１５６】
凍結乾燥リポソーム化合物１（１５ｍｇ／バイアル）を得るためのタンジェンシャルフローフィルトレーション処理の概要（代表例）
１）．アルコール溶液、４ｍｇ／ｍｌ  化合物１およびリン脂質を調製する。
２）．１）に注射用水（ＷＦＩ）を、１）のアルコール溶液の３倍の量でゆっくりと加え、混合して、水性アルコール性リポソーム溶液  １．０ｍｇ／ｍｌ  化合物１を準備する。
３）．２）の水性アルコール性リポソーム溶液についてタンジェンシャルフローフィルトレーション（ＴＦＦ）を、ＷＦＩを少なくとも６〜８回交換することにより（アルコールの工程内試験を用いて）実施して、リポソーム水溶液  １．０ｍｇ／ｍｌ  化合物１を準備する。
４）．３）のリポソーム水溶液をＴＦＦにより最初の量の４５％まで濃縮して、リポソーム水溶液  ２．２ｍｇ／ｍｌ  化合物１を準備する。
５）４）のリポソーム水溶液  ２．２ｍｇ／ｍｌ  化合物１に固体ラクトース＆ＷＦＩを加え、活性を１．８ｍｇ／ｍｌ  化合物１に調整し、高圧ホモジナイゼーションを実施して、ラクトース含有リポソーム水溶液、１．８ｍｇ／ｍｌ  化合物１を準備する。
６．５）のラクトース含有リポソーム水溶液、１．８ｍｇ／ｍｌ  化合物１を０．４５μフィルターおよび０．２２μフィルターで濾過して、濾過済ラクトース含有リポソーム溶液、１．８ｍｇ／ｍｌ  化合物１を準備する。
７．６）の濾過済ラクトース含有リポソーム溶液、１．８ｍｇ／ｍｌ  化合物１について工程内ＨＰＬＣ活性測定を実施し、２５％ラクトース溶液＆ＷＦＩを加えることによって活性を１．５８ｍｇ／ｍｌ  化合物１に調整する。０．２２μに通して無菌区域内に再度濾過して、滅菌ラクトース含有リポソーム溶液、１．５８ｍｇ／ｍｌ  化合物１を準備する。
８．７）の滅菌ラクトース含有リポソーム溶液、１．５８ｍｇ／ｍｌ  化合物１を１０．５ｍｌ／バイアルで充填する。凍結乾燥して、凍結乾燥リポソーム化合物１のバイアルを準備する。
【０１５７】
表４では、化合物１のリポソーム溶液を得るためのパイロットバッチ（ＴＦＦ操作の結果）（ＴＦＦ通過の関数としてのエタノール除去効率）を示している。
【表７】
2009519250.tif 000008
【０１５８】
透過物が１２〜１３リットル流出し終えた時点で＋透過物サンプルを集める。
【０１５９】
ＴＦＦ法による凍結乾燥リポソーム化合物１バイアルの処理パラメーターの概要
●最初のアルコール性−Ｈ２Ｏ  リポソーム溶液の量＝１６，０００ｍｌ
●アルコールが減少したリポソーム濃縮溶液の最終量＝８，６００ｍｌ
●最終調整量（固体ラクトース＋ＷＦＩ添加後＝１０，０００ｍｌ
●総ＴＦＦ操作時間＝３時間
●外観
−最初のアルコール性−Ｈ２Ｏ  リポソーム溶液＝乳様
−最終リポソーム溶液（ＴＦＦ＋濃縮＋ラクトース＋Ｈ２Ｏ）＝澄明な半透明
●フィルタラビリティ(filterability)
−マイクロフルイダイゼーション(Microfluidization)前＝０．４５μで４０ｍｌおよび０．４５／０．２２μで２０ｍｌ
−マイクロフルイダイゼーション後（１８，５００ｐｓｉで２回実施）＝０．４５μで＞＞４０ｍｌおよび０．４５／０．２２μで３０ｍｌ
●最終リポソームバルク溶液の活性値
−濾過されていない溶液＝１．５２３ｍｇ／ｍｌ
−０．２２μ  Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ  ２００で濾過されたもの＝１．５１３ｍｇ／ｍｌ
●凍結乾燥のためのバイアル充填量＝１０．５ｍｌ
●製造効率＝９３％（開始時に用いたＶＰＡ−９８５総量とバイアル中に得られた総量に基づく）
●フリーズドライ
●Ｎ２により真空破壊し、栓をし、密閉し、それらのバイアルを２〜８℃で保存する
●フリーズドライしたバイアルの評価
−ケークの外観：黄色がかった白色ケーク
−水分−３．９９％
−アルコール−０．１％
−構成能(Constitutability)：１５秒で澄明な溶液となり、その溶液では少なくとも４日の観察期間の間は沈殿物が観察されなかった
−構成された溶液：−ｐＨ＝５．５４および２９７ｍｏｓｍ  浸透圧
−粒径分布（Nicompによる）
二峰性分布
８９ｎｍ  ６９容量％
１１ｎｍ  ３１容量％
●バイアルベースでの化合物１活性＝１５．９１ｍｇ／バイアル
●製造した総バイアル数＝９５０バイアル
【０１６０】
ＴＦＦによって調製された代表的な組成物：表５および表６では、ＴＦＦ法によって調製された、化合物１および化合物２それぞれを含有する代表的な凍結乾燥リポソーム組成物を示している。
【表８】
2009519250.tif 000009
＊水を加えることによって復元した際のリポソーム溶液の組成
【０１６１】
【表９】
2009519250.tif 000010
＊水を加えることによって復元した際のリポソーム溶液の組成
【０１６２】
実施例２
リポソーム処方物を調製するための基本手順（ロータリーエバポレーターによる薄膜技術）。
ＩＶ処方物は、１バイアル当たり２０ｍｇの化合物１に相当する滅菌凍結乾燥リポソーム粉末を入れたバイアルとして与えられる。化合物１の水不溶性および他の物理化学的特性に基づいて、該薬物のＩＶ投与のためのリポソーム処方物を選択した。１０ｍＬの注射用水を加えることによって、２ｍｇ／ｍｌの化合物１を含む水様のリポソーム溶液（約２００ｎｍ平均サイズのリポソームを含む）が得られる。プロトタイプＡ（１：３：７  モル比）およびプロトタイプＢ（１：４：１１  モル比）の組成物を表７に示している。それらの組成物は以下に記載する薄膜ロータリーエバポレーター法によって製造した。代表的なバッチの安定性データを表８に示している。リポソームの粒径分布に関する復元性パラメーターも示している。
【０１６３】
疎水性治療薬の代表的な凍結乾燥リポソーム組成物（薄膜ロータリーエバポレーター手順）：
【表１０】
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【０１６４】
リポソームの製造（ロータリーエバポレーターによる薄膜技術）：代表的な工程：
１．溶解：疎水性治療薬（ＨＴＡ）リン脂質を有機溶媒中へ（プロセス制御：〜低溶解Ｏ２レベル、〜混合速度および温度、〜溶媒曝露）。
２．溶媒除去およびＨＴＡ−脂質複合体の薄膜としての蒸着（プロセス制御：〜蒸発速度、〜残留溶媒レベルを確認する、〜膜の厚さおよび多孔性）。
３．制御水和および粗リポソーム形成（プロセス制御：〜膜湿潤速度、〜水和溶媒温度、〜混合）。
４．粒径減少（プロセス制御：〜チャンバー圧、〜入口、チャンバーおよび出口の温度：〜パス回数）。
５．粗濾過（粗いフィルター）および分散していない薬物の除去（プロセス制御：〜濾過圧力、〜速度および温度）。
６．無菌濾過（プロセス制御：〜フィルタラビリティ試験、〜濾過圧力および速度、〜活性分析）。
７．バイアル充填（プロセス制御：〜バルク溶液温度および均質性、〜重量制御）。
８．凍結乾燥（プロセス制御：第１、第２、第３の乾燥工程をカスタマイズする、〜水分分析）。
９．放出についての物理および化学試験（プロセス制御：〜モノグラフ試験、〜粒径再現性）。
【０１６５】
注射＃（１５ｍｇ／バイアル）凍結乾燥処方（１：４：１１  モル比）に関する化合物１についての形式的安定性データ：
【表１１】
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＃モル比＋薬物：ＥＰＧ：ＤＭＰＣ  １：４：１１
＊リポソームの安定性データは以下のバッチのものである：
膜は２〜８℃で１Ｍ間保存した
凍結乾燥したバッチは室温で保存し、１Ｍ後に形式的に安定した
よって、サンプルができてからの実際の経過時間は形式的保存時点＋２ヶ月である
【０１６６】
リポソーム溶液の復元および粒径パラメーター：
凍結乾燥リポソームケークは、ＷＦＩの添加および混合から３０秒以内に澄明〜半透明の溶液に復元された。泡が存在した場合でもそれは１０分で消えた。溶液のｐＨは６．０〜６．２間であった。粒径分布は、動的光散乱法を利用してNicomp社製サブミクロン粒径計測器(Submicron Particle Size Analyzer)により測定した。その処方物では、代表的なNicompプロットは微細なリポソームの単峰性サイズ分布を示す。
【０１６７】
プロットから以下のことが分かった：
平均径：３９ｎｍ
標準偏差：１９ｎｍ
変動係数：０．４９９
カイ二乗値：２３
累積結果：
７５％の粒子＜４６ｎｍ
９９％の粒子＜１０５ｎｍ
【０１６８】
実施例４
リン脂質混合物のモル組成を定義するための研究
初期実験では、ＥＰＧ（陰イオン性リン脂質）とＤＭＦ（半合成飽和炭化水素鎖両性イオン性リン脂質）とを組み合わせることによって化合物１の可溶化が実現するようになることが示された。許容される薬物添加量と、化学的および物質的安定性と、製造可能性とを提供する最適なモル比  薬物：ＥＰＧ：ＤＭＰＣを定義するためにさらなる実験を行った。安定に製造できる１．５〜２．０ｍｇ／ｍｌを封入したリポソームについての他の、陰イオン性リン脂質と両性イオン性リン脂質との組合せの例を表９に示している。
【表１２】
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【０１６９】
実施例５
リポソームの細網内皮系（Ｒｅｓ）回避設計のための生物学的証拠
典型的な従来の薬物担体リポソームをＩＶ経路によって投与すると、一般に薬物の約８０〜９０％は細網内皮系器官（すなわち肝臓、脾臓、骨髄など）によって捕捉されるが、微量の薬物は体循環中で利用可能である。標的がＲＥＳではない場合には、このことが治療の目的にそぐわない可能性がある。
【０１７０】
化合物１のリポソームの設計では、リポソームがインビトロでまたは棚上で安定しており、かつ、崩壊し、循環薬物貯蔵器となる血液の１または複数の成分へと薬物を送達し、その結果として、投与形が用量の大部分をＲＥＳ器官ではなく体循環に提供する単純溶液のように挙動するように、リン脂質分子タイプと組成を選択した。
【０１７１】
投与形の比較薬理学的有効性研究（尿量試験）
化合物１に関する測定可能な薬理学的有効性指標の１つは尿排出量の増加である。異なる処方物の化合物１の有効性に関するこの試験は、ラットで試験を実施することによって広く利用されている。
【０１７２】
１：５：７および１：３：７  化合物１：ＥＰＧ：ＤＭＰＣ比の２つのリポソーム処方物（表１０）の補助溶媒処方物との直接比較研究を、対照としてＤＭＳＯ：ＰＥＧ２００（５０：５０）化合物１溶液を用いてラットで実施した。新規リポソーム処方物は７０〜９０％の尿排出量をもたらし、ＤＭＳＯ：ＰＥＧ２００対照と比べて厳密なＲＳＤ値を示した。ＤＭＳＯを含む対照処方物は、一般には静脈内製剤として許容されない。補助溶媒処方物は、プロピレングリコール、ＰＥＧ４００、エタノール、ベンジルアルコールおよび酸化防止剤の混合物であり、この補助溶媒処方物では尿排出量に関して対照値の５０％しかもたらされなかった。
【表１３】
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【０１７３】
補助溶媒とリポソーム投与形を比較する薬物動態研究：
化合物１の補助溶媒処方物と１：３：７リポソーム処方物とを比較する薬物動態研究の結果の概要を表１１に示している。これらのデータは、リポソームが、ＨＴＡを体循環中に送達する溶液により一層類似するように挙動することを示している。
【０１７４】
比較静脈内用量決定試験は雄イヌにて漸増用量（投与当たり３日）で行った。各処方物を２匹のイヌに各用量レベル（０．５ｍｇ／ｋｇ／日、２．５ｍｇ／ｋｇ／日、および５．０ｍｇ／ｋｇ／日）で３日間投与し、化合物１の分析のために３日目、６日目、および９日目に血液サンプルを採取した。
（１）両処方物における化合物１の薬物動態パラメーターは、用量の増加とともに大きくなり、比例用量よりもやや高いかもしれない。
（２）０．５ｍｇ／ｋｇおよび２．５ｍｇ／ｋｇ用量でのＣｍａｘ値については、２つの処方物間では差がないように思われる。５．０ｍｇ／ｋｇ／日では、リポソーム処方物のＣｍａｘ値は補助溶媒処方物の値よりも高いように思われる。より高い用量では薬物が補助溶媒から沈殿する可能性があるために利用できないという要因があると考えられる。
（３）補助溶媒群における平均ＡＵＣ０−２４値はリポソーム群における値よりもやや高いが、サンプルサイズが小さいため決定的な評価としてはならない。
【０１７５】
ラットでの尿排出量による薬理学的効果予備試験およびイヌでの薬物動態研究は、記載した新規化合物１リポソーム処方物は、従来のリポソームとは異なり、薬物の有機溶媒溶液により一層類似するように作用し、肝臓に到達する前に疎水性薬を血液の１以上のコンパートメントに高い確実性で送達し、そしてそれらの血液のコンパートメントが細網内皮系には認識されない循環薬物担体になるということを示している。
【表１４】
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【国際調査報告】
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