(57)【要約】ＶＬＡ−４を結合する化合物を開示する。また、これらの特定の化合物は、白血球接着、特に、ＶＬＡ−４によって媒介される白血球接着を阻害する。このような化合物は、ヒトまたは動物対象の炎症性疾患、例えば、喘息、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化、エイズ認知症、糖尿病、炎症性腸疾患、クローン病、関節リウマチ、組織移植、腫瘍転移および心筋虚血症の治療で有用である。また本化合物は、多発性硬化症などの炎症性脳疾患を治療するために投与することもできる。2009510097.tif 000050
2009510097.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉ：
【化１】
2009510097.tif 000047
（式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、ヘテロアリールおよび−ＮＲ５Ｒ６からなる群から選択され、ここで、Ｒ５およびＲ６は、水素およびＣ１〜Ｃ４アルキルからなる群から独立して選択されるか、Ｒ５およびＲ６は、それらにペンダントしている窒素原子と一緒になって複素環を形成しており；
Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、およびＣ２〜Ｃ４アルキニルからなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ４は、独立してＣ１〜Ｃ３アルキルであるか、Ｒ３およびＲ４は、これらにペンダントしている窒素原子と一緒になって複素環を形成している）
の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグ。
【請求項２】
−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ３Ｒ４基がフェニル環のパラ位にある、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ３およびＲ４がそれらにペンダントしている窒素原子と一緒になって複素環を形成している、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
前記複素環がピロリジニルである、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２がＣ１〜Ｃ４アルキルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２がエチルである、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
式ＩＩ：
【化２】
2009510097.tif 000048
（式中、
Ｒ７は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキルまたはヘテロアリールであり；
Ｒ８は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ９およびＲ１０は、独立してＣ１〜Ｃ３アルキルであるか、Ｒ９およびＲ１０は、これらにペンダントしている窒素原子と一緒になって複素環を形成している）
の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグ。
【請求項８】
−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０基がフェニル環のパラ位にある、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ９およびＲ１０がそれらにペンダントしている窒素原子と一緒になって複素環を形成している、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
前記複素環がピロリジニルである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ８がＣ１〜Ｃ４アルキルである、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ８がエチルである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ７がＣ１〜Ｃ４アルキルである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ７がイソプロピルおよびｔ−ブチルからなる群から選択される、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ７がＣ１〜Ｃ４ハロアルキルである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１６】
Ｒ７がトリフルオロメチルである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ７がヘテロアリールである、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ７がフラン−２−イル、フラン−３−イル、チエン−２−イルおよびチエン−３−イルからなる群から選択される、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
式ＩＩＩ：
【化３】
2009510097.tif 000049
（式中、
Ｒ１１およびＲ１２は、独立してＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、Ｒ１１およびＲ１２は、これらにペンダントしている窒素原子と一緒になって複素環を形成しており；
Ｒ１３は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１４およびＲ１５は、独立してＣ１〜Ｃ３アルキルであるか、Ｒ１４およびＲ１５は、これらにペンダントしている窒素原子と一緒になって複素環を形成している）
の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグ。
【請求項２０】
−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１４Ｒ１５基がフェニル環のパラ位にある、請求項１９に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ１４およびＲ１５がそれらにペンダントしている窒素原子と一緒になって複素環を形成している、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
前記複素環がピロリジニルである、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ１３がＣ１〜Ｃ４アルキルである、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ１３がエチルである、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｒ１１およびＲ１２が独立してＣ１〜Ｃ４アルキルである、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ１１がエチルであり、Ｒ１２がイソプロピルである、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ１１およびＲ１２がそれらにペンダントしている窒素原子と一緒になって複素環を形成している、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２８】
前記複素環がピペリジン−１−イルおよび３−チアピロリジン−１−イルからなる群から選択される、請求項２７に記載の化合物。
【請求項２９】
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（トリフルオロアセチル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（イソ−プロピルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（ｔ−ブチルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（フラン−２−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（ピペリジン−１−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（Ｎ−エチル−Ｎ−イソ−プロピルアミノカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（チエン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（チエン−２−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（フラン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（３−チアピロリジン−１−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（チエン−２−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−トリフルオロメチルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−ｔ−ブチルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル；および
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−フラン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル；
からなる群から選択される化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグ。
【請求項３０】
薬学的に許容可能な担体と、治療有効量の請求項１から２９のいずれか一項に記載の１種または複数の化合物とを含む医薬組成物。
【請求項３１】
ヒトまたは動物対象に請求項３０に記載の医薬組成物を投与することを含む、ヒトまたは動物対象のα４インテグリン媒介性疾患の治療方法。
【請求項３２】
前記α４インテグリンがＶＬＡ−４である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記疾患が、喘息、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化、エイズ認知症、糖尿病、急性若年性糖尿病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、多発性硬化症、関節炎、関節リウマチ、組織移植、腫瘍転移、脳膜炎、脳炎、卒中、脳外傷、腎炎、網膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血症、急性白血球媒介性肺損傷、および成人呼吸窮迫症候群からなる群から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
前記疾患が炎症性疾患である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記炎症性疾患が、結節性紅斑、アレルギー性結膜炎、視神経炎、ブドウ膜炎、アレルギー性鼻炎、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、血管炎、ライター症候群、全身性エリテマトーデス、進行性全身性硬化症、多発性筋炎、皮膚筋炎、ウェグナー肉芽腫症、大動脈炎、サルコイドーシス、リンパ球減少症、側頭動脈炎、心膜炎、心筋炎、鬱血性心不全、結節性多発性動脈炎、過敏性症候群、アレルギー、好酸球増加症候群、チャーグ・ストラウス症候群、慢性閉塞性肺疾患、過敏性肺臓炎、活動性慢性肝炎、間質性膀胱炎、自己免疫内分泌不全、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫再生不良性貧血、慢性持続性肝炎および甲状腺炎からなる群から選択される、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
α４インテグリン媒介性疾患を治療するための薬剤の製造のための、請求項３２に記載の医薬組成物の使用。
【請求項３７】
前記α４インテグリンがＶＬＡ−４である、請求項３８に記載の使用。
【請求項３８】
前記疾患が、喘息、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化、エイズ認知症、糖尿病、急性若年性糖尿病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、クローン病、多発性硬化症、関節炎、関節リウマチ、組織移植、腫瘍転移、脳膜炎、脳炎、卒中、脳外傷、腎炎、網膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血症、急性白血球媒介性肺損傷、および成人呼吸窮迫症候群からなる群から選択される、請求項３８に記載の使用。
【請求項３９】
前記疾患が炎症性疾患である、請求項３８に記載の使用。
【請求項４０】
前記炎症性疾患が、結節性紅斑、アレルギー性結膜炎、視神経炎、ブドウ膜炎、アレルギー性鼻炎、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、血管炎、ライター症候群、全身性エリテマトーデス、進行性全身性硬化症、多発性筋炎、皮膚筋炎、ヴェグナー肉芽腫症、大動脈炎、サルコイドーシス、リンパ球減少症、側頭動脈炎、心膜炎、心筋炎、鬱血性心不全、結節性多発性動脈炎、過敏性症候群、アレルギー、好酸球増加症候群、チャーグ・ストラウス症候群、慢性閉塞性肺疾患、過敏性肺臓炎、活動性慢性肝炎、間質性膀胱炎、自己免疫内分泌不全、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫再生不良性貧血、慢性持続性肝炎、および甲状腺炎からなる群から選択される、請求項４０に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の引用）
本出願は、同時継続中の米国仮特許出願第６０／７２２，３５８号（２００５年９月２９日出願）に対する、米国特許法第１１９条（ｅ）の下の優先権を主張する。この米国出願は、その全体が、本明細書中で参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、白血球接着、特にα４インテグリン（ここで、α４インテグリンは好ましくはＶＬＡ−４である）によって媒介される白血球接着を阻害する化合物に関する。本発明はまた、このような化合物を含む医薬組成物、ならびに、本発明の化合物または医薬組成物を用いる、例えば炎症などの治療方法に関する。
【背景技術】
【０００３】
（参考文献）
以下の刊行物は、上付き数字として本願に引用されている。
１    ＨｅｍｌｅｒおよびＴａｋａｄａ，欧州特許出願公開第３３０，５０６号（１９８９年８月３０日公開）
２    Ｅｌｉｃｅｓ，ら，Ｃｅｌｌ，６０：５７７５８４（１９９０）
３    Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ，３４６：４２５４３４（１９９０）
４    Ｏｓｂｏｒｎ，Ｃｅｌｌ，６２：３６（１９９０）
５    Ｖｅｄｄｅｒ，ら，Ｓｕｒｇｅｒｙ，１０６：５０９（１９８９）
６    Ｐｒｅｔｏｌａｎｉ，ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８０：７９５（１９９４）
７    Ａｂｒａｈａｍ，ら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９３：７７６（１９９４）
８    Ｍｕｌｌｉｇａｎ，ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５０：２４０７（１９９３）
９    Ｃｙｂｕｌｓｋｙ，ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５１：７８８（１９９１）
１０    Ｌｉ，ら，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．，１３：１９７（１９９３）
１１    Ｓａｓｓｅｖｉｌｌｅ，ら，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．，１４４：２７（１９９４）
１２    Ｙａｎｇ，ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉｅｎｃｅ（ＵＳＡ），９０：１０４９４（１９９３）
１３    Ｂｕｒｋｌｙ，ら，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，４３：５２９（１９９４）
１４    Ｂａｒｏｎ，ら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９３：１７００（１９９４）
１５    Ｈａｍａｎｎ，ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５２：３２３８（１９９４）
１６    Ｙｅｄｎｏｃｋ，ら，Ｎａｔｕｒｅ，３５６：６３（１９９２）
１７    Ｂａｒｏｎ，ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７７：５７（１９９３）
１８    ｖａｎＤｉｎｔｈｅｒ−Ｊａｎｓｓｅｎ，ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１４７：４２０７（１９９１）
１９    ｖａｎＤｉｎｔｈｅｒ−Ｊａｎｓｓｅｎ，ら，Ａｎｎａｌｓ．ＲｈｅｕｍａｔｉｃＤｉｓ．，５２：６７２（１９９３）
２０    Ｅｌｉｃｅｓ，ら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９３：４０５（１９９４）
２１    Ｐｏｓｔｉｇｏ，ら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８９：１４４５（１９９１）
２２    Ｐａｕｌ，ら，Ｔｒａｎｓｐｌ．Ｐｒｏｃｅｅｄ．，２５：８１３（１９９３）
２３    Ｏｋａｒｈａｒａ，ら，Ｃａｎ．Ｒｅｓ．，５４：３２３３（１９９４）
２４    Ｐａａｖｏｎｅｎ，ら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎ．，５８：２９８（１９９４）
２５    Ｓｃｈａｄｅｎｄｏｒｆ，ら，Ｊ．Ｐａｔｈ．，１７０：４２９（１９９３）
２６    Ｂａｏ，ら，Ｄｉｆｆ．，５２：２３９（１９９３）
２７    Ｌａｕｒｉ，ら，ＢｒｉｔｉｓｈＪ．Ｃａｎｃｅｒ，６８：８６２（１９９３）
２８    Ｋａｗａｇｕｃｈｉ，ら，ＪａｐａｎｅｓｅＪ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，８３：１３０４（１９９２）
２９    Ｋｏｎｒａｄｉ，ら，ＰＣＴ／ＵＳ００／０１６８６（２０００年１月２１日出願）
上記のすべての刊行物は、それぞれの個々の刊行物の内容が具体的かつ個別にその全体が引用により援用されるよう記載されたのと同じ程度まで、その全体が引用により援用される。
【０００４】
（背景技術）
ＨｅｍｌｅｒおよびＴａｋａｄａ１（特許文献１）によって最初に同定されたＶＬＡ−４（α４β１インテグリンおよびＣＤ４９ｄ／ＣＤ２９とも呼ばれる）は、細胞表面レセプターのβ１インテグリンファミリーのメンバーである。その各々は、２つのサブユニット、α鎖およびβ鎖を含んでいる。ＶＬＡ−４は、α４鎖およびβ１鎖を含有する。少なくとも９つのβ１インテグリンが存在し、これらはすべて同じβ１鎖を共有し、それぞれ異なるα鎖を有する。これらの９つのレセプターはすべて、種々の細胞マトリックス分子の異なる補体（例えば、フィブロネクチン、ラミニン、およびコラーゲン）に結合する。例えば、ＶＬＡ−４は、フィブロネクチンに結合する。ＶＬＡ−４はまた、内皮細胞および他の細胞によって発現される非マトリックス分子にも結合する。これらの非マトリックス分子としてはＶＣＡＭ−１が挙げられるが、これは、培養物中のサイトカイン活性化ヒト臍静脈内皮細胞上で発現される。ＶＬＡ−４の別のエピトープは、フィブロネクチン結合活性およびＶＣＡＭ−１結合活性を担っており、各活性は、独立して阻害されることが明らかになっている２（非特許文献１）。
【０００５】
ＶＬＡ−４および他の細胞表面レセプターによって媒介される細胞間接着は、多くの炎症応答と関連している。傷害または他の炎症性刺激部位において、活性化された血管内皮細胞は、白血球に接着する分子を発現する。白血球が内皮細胞に接着する機構には、一つとして、白血球上の細胞表面レセプターが、内皮細胞上の対応する細胞表面分子を認識し結合することが含まれる。一旦結合すると、その白血球は、血管壁を横切って移動して傷害部位へ入り、化学メディエーターを放出して感染に対抗する。免疫系の接着レセプターの総説については、例えば、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ３（非特許文献２）およびＯｓｂｏｒｎ４（非特許文献３）を参照されたい。
【０００６】
炎症性脳障害、例えば、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、多発性硬化症（ＭＳ）、および髄膜炎などは、内皮／白血球接着機構が、さもなければ健常な脳組織を破壊する中枢神経系障害の例である。これらの炎症性疾患に罹患した対象では、多数の白血球が脳血液関門（ＢＢＢ）を越えて移動する。白血球は、広範囲な組織損傷をもたらす毒性メディエーターを放出し、神経伝達障害および神経麻痺を引き起こす。
【０００７】
他の器官系において、組織損傷は接着機構を介しても起こり、白血球の移動または活性化をもたらす。例えば、心臓組織に対する心筋虚血後の初期障害は、損傷組織へ白血球が侵入することによりさらに複雑化し、さらなる障害を引き起こす可能性があることが知られている（Ｖｅｄｄｅｒら）５（非特許文献４）。接着機構により媒介される他の炎症症状または病的症状としては、例えば、喘息６〜８（非特許文献５〜７）、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化９〜１０（非特許文献８〜９）、エイズ認知症１１（非特許文献１０）、糖尿病１２〜１４（非特許文献１１〜１３）（急性若年性糖尿病を含む）、炎症性腸疾患１５（非特許文献１４）（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）、多発性硬化症１６〜１７（非特許文献１５〜１６）、関節リウマチ１８〜２１（非特許文献１７〜２０）、組織移植２２（非特許文献２１）、腫瘍転移２３〜２８（非特許文献２２〜２７）、髄膜炎、脳炎、卒中、および他の大脳外傷、腎炎、網膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血、および急性白血病媒介性肺損傷（成人呼吸窮迫症候群において生じる肺損傷など）が挙げられる。
【０００８】
一分類としての置換アミノピリミジンは、ＶＬＡ−４のＶＣＡＭ−１への結合を阻害し、したがって、抗炎症特性を示すことが開示されている２９。これらの化合物は、このような結合に対してアンタゴニスト特性を有し、これらの化合物のバイオアベイラビリティが高まるとそれらの効果は増大する。
【特許文献１】欧州特許出願公開第３３０，５０６号明細書
【非特許文献１】Ｅｌｉｃｅｓ，ら，Ｃｅｌｌ，６０：５７７５８４（１９９０）
【非特許文献２】Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，Ｎａｔｕｒｅ，３４６：４２５４３４（１９９０）
【非特許文献３】Ｏｓｂｏｒｎ，Ｃｅｌｌ，６２：３６（１９９０）
【非特許文献４】Ｖｅｄｄｅｒ，ら，Ｓｕｒｇｅｒｙ，１０６：５０９（１９８９）
【非特許文献５】Ｐｒｅｔｏｌａｎｉ，ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８０：７９５（１９９４）
【非特許文献６】Ａｂｒａｈａｍ，ら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９３：７７６（１９９４）
【非特許文献７】Ｍｕｌｌｉｇａｎ，ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５０：２４０７（１９９３）
【非特許文献８】Ｃｙｂｕｌｓｋｙ，ら，Ｓｃｉｅｎｃｅ，２５１：７８８（１９９１）
【非特許文献９】Ｌｉ，ら，Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．Ｔｈｒｏｍｂ．，１３：１９７（１９９３）
【非特許文献１０】Ｓａｓｓｅｖｉｌｌｅ，ら，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈ．，１４４：２７（１９９４）
【非特許文献１１】Ｙａｎｇ，ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉｅｎｃｅ（ＵＳＡ），９０：１０４９４（１９９３）
【非特許文献１２】Ｂｕｒｋｌｙ，ら，Ｄｉａｂｅｔｅｓ，４３：５２９（１９９４）
【非特許文献１３】Ｂａｒｏｎ，ら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９３：１７００（１９９４）
【非特許文献１４】Ｈａｍａｎｎ，ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１５２：３２３８（１９９４）
【非特許文献１５】Ｙｅｄｎｏｃｋ，ら，Ｎａｔｕｒｅ，３５６：６３（１９９２）
【非特許文献１６】Ｂａｒｏｎ，ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１７７：５７（１９９３）
【非特許文献１７】ｖａｎＤｉｎｔｈｅｒ−Ｊａｎｓｓｅｎ，ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１４７：４２０７（１９９１）
【非特許文献１８】ｖａｎＤｉｎｔｈｅｒ−Ｊａｎｓｓｅｎ，ら，Ａｎｎａｌｓ．ＲｈｅｕｍａｔｉｃＤｉｓ．，５２：６７２（１９９３）
【非特許文献１９】Ｅｌｉｃｅｓ，ら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，９３：４０５（１９９４）
【非特許文献２０】Ｐｏｓｔｉｇｏ，ら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８９：１４４５（１９９１）
【非特許文献２１】Ｐａｕｌ，ら，Ｔｒａｎｓｐｌ．Ｐｒｏｃｅｅｄ．，２５：８１３（１９９３）
【非特許文献２２】Ｏｋａｒｈａｒａ，ら，Ｃａｎ．Ｒｅｓ．，５４：３２３３（１９９４）
【非特許文献２３】Ｐａａｖｏｎｅｎ，ら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎ．，５８：２９８（１９９４）
【非特許文献２４】Ｓｃｈａｄｅｎｄｏｒｆ，ら，Ｊ．Ｐａｔｈ．，１７０：４２９（１９９３）
【非特許文献２５】Ｂａｏ，ら，Ｄｉｆｆ．，５２：２３９（１９９３）
【非特許文献２６】Ｌａｕｒｉ，ら，ＢｒｉｔｉｓｈＪ．Ｃａｎｃｅｒ，６８：８６２（１９９３）
【非特許文献２７】Ｋａｗａｇｕｃｈｉ，ら，ＪａｐａｎｅｓｅＪ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，８３：１３０４（１９９２）
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００９】
（発明の要旨）
本発明は、ＶＬＡ−４媒介性疾患を治療するための化合物、その薬学的に許容可能な塩、その組成物、その合成、および方法を提供する。
【００１０】
一実施形態では、本発明は、式Ｉ：
【００１１】
【化４】
2009510097.tif 000003
（式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、ヘテロアリールおよび−Ｎ（Ｒ５）（Ｒ６）からなる群から選択され、ここで、Ｒ５およびＲ６は、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルからなる群から独立して選択されるか、Ｒ５およびＲ６は、それらにペンダントしている窒素原子と一緒になって複素環を形成しており；
Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、およびＣ２〜Ｃ４アルキニルからなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ４は、独立してＣ１〜Ｃ３アルキルであるか、Ｒ３およびＲ４は、これらにペンダントしている窒素原子と一緒になって複素環を形成している）
の化合物；またはその薬学的に許容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグを提供する。
【００１２】
別の実施形態では、本発明は、式ＩＩ：
【００１３】
【化５】
2009510097.tif 000004
（式中、
Ｒ７は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキルまたはヘテロアリールであり；
Ｒ８は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ９およびＲ１０は、独立してＣ１〜Ｃ３アルキルであるか、Ｒ９およびＲ１０は、これらにペンダントしている窒素原子と一緒になって複素環を形成している）
の化合物、またはその薬学的に許容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグを提供する。
【００１４】
別の実施形態では、本発明は、式ＩＩＩ：
【００１５】
【化６】
2009510097.tif 000005
（式中、
Ｒ１１およびＲ１２は、独立してＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、Ｒ１１およびＲ１２は、これらにペンダントしている窒素原子と一緒になって複素環を形成しており；
Ｒ１３は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１４およびＲ１５は、独立してＣ１〜Ｃ３アルキルであるか、Ｒ１４およびＲ１５は、これらにペンダントしている窒素原子と一緒になって複素環を形成している）
の化合物；またはその薬学的に許容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグを提供する。
【００１６】
本発明はまた、表４の化合物を提供する。
【００１７】
【表４−１】
2009510097.tif 000006
【００１８】
【表４−２】
2009510097.tif 000007
【００１９】
【表４−３】
2009510097.tif 000008
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
（発明の詳細な説明）
上記のように、本発明は、白血球接着、特に、少なくとも部分的にα４インテグリン（好ましくは、ＶＬＡ−４）により媒介される白血球接着を阻害する化合物に関する。しかし、本発明をさらに詳細に記述する前に、まず、以下の用語を定義する。
【００２１】
（定義）
特に明記しない限り、本明細書および請求項で用いている以下の用語は、以下に示す意味を有する：
本明細書中で使用する「アルキル」とは、特に定義しない限り、好ましくは１個〜４個の炭素原子、より好ましくは１〜３個の炭素原子を有する直鎖、分枝鎖および環式のアルキル基を意味する。この用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔ−ブチル、シクロプロピル、シクロブチルおよびメチレン−シクロプロピルなどの基が例として挙げられる。
【００２２】
「アルケニル」は、２〜４個の炭素原子、好ましくは２〜３個の炭素原子と、少なくとも１か所、好ましくは１か所のアルケニル不飽和を有する直鎖および分枝鎖のアルケニル基を意味する。このようなアルケニル基の例としては、ビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、ｎ−プロペン−１−イル（−ＣＨ＝ＣＨＣＨ３）、ｎ−ブテン−２−イル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ３）などが挙げられる。シスおよびトランス異性体、またはこれらの異性体の混合物はこの用語に含まれる。
【００２３】
「アルキニル」は、２〜４個の炭素原子、好ましくは２〜３個の炭素原子と、少なくとも１か所、好ましく１か所のアルキニル不飽和を有する直鎖および分枝鎖のアルキニル基を意味する。このようなアルキニル基の例としては、アセチレニル（−Ｃ≡ＣＨ）、プロパルギル（−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ）、ｎ−プロピン−１−イル（−ＣＨ≡ＣＨＣＨ３）などが挙げられる。
【００２４】
「アリール」または「Ａｒ」は、単一の環（例えば、フェニル）または複数の縮合環（例えば、ナフチルまたはアントリル）を有する６〜１４個の炭素原子からなる１価の芳香族炭素環式基を意味し、この場合、縮合環は芳香族であってもなくてもよいが（例えば、２−ベンゾオキサゾリノン、２Ｈ−１，４−ベンゾオキサジン−３（４Ｈ）−オン−７−イルなど）、ただし、結合点は、芳香族環原子において存在する。好ましいアリールとしては、フェニルおよびナフチルが挙げられる。
【００２５】
「置換アリール」は、ヒドロキシ、アシル、アシルアミノ、アシルオキシ、アルキル、置換アルキル、アルコキシ、置換アルコキシ、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アミノ、置換アミノ、アミノアシル、アリール、置換アリール、アリールオキシ、置換アリールオキシ、カルボキシル、カルボキシルエステル、シアノ、チオール、チオアルキル、置換チオアルキル、チオアリール、置換チオアリール、チオへテロアリール、置換チオへテロアリール、チオシクロアルキル、置換チオシクロアルキル、チオ複素環、置換チオ複素環、シクロアルキル、置換シクロアルキル、ハロ、ニトロ、ヘテロアリール、置換へテロアリール、複素環、置換複素環、ヘテロアリールオキシ、置換へテロアリールオキシ、ヘテロシクリルオキシ、置換ヘテロシクリルオキシ、アミノスルホニル（ＮＨ２−ＳＯ２−）、および置換アミノスルホニルからなる群から選択される、１〜３個、好ましくは１〜２個の置換基で置換されているアリール基を意味する。
【００２６】
「ハロ」または「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを意味し、好ましくは、フルオロまたはクロロのいずれかである。
【００２７】
「ハロアルキル」は、１〜５個のハロ基を有するアルキル基を意味する。好ましくは、このような基は、１〜３個のハロ基と１〜２個の炭素原子を有する。特に好ましいハロアルキル基としては、トリハロメチル（例えばトリフルオロメチル）およびトリハロエチル（例えば２，２，２−トリフルオロエタ−１−イル）が挙げられる。
【００２８】
「ヘテロアリール」は、環内の２〜１０個の炭素原子と酸素、窒素および硫黄から選択される１〜４個のヘテロ原子との芳香族炭素環式基を意味する。このようなヘテロアリール基は、単一の環（例えば、ピリジルもしくはフリル）または複数の縮合環を有していてもよく、この場合、縮合環はアリールまたはヘテロアリールであってもよい。このようなヘテロアリールの例としては、例えば、フラン−２−イル、フラン−３−イル、チエン−２−イル、チエン−３−イル、ピロール−２−イル、ピロール−３−イル、ピリジル（２−、３−、および４−ピリジル）などが挙げられる。一実施形態では、ヘテロアリールの硫黄および／また窒素原子は、酸化されていてもよい（すなわち、−Ｓ（Ｏ）−もしくは−Ｓ（Ｏ）２−、および／またはＮ−オキシド）。
【００２９】
「複素環」または「複素環式」は、その環内に１〜１０個の炭素原子と窒素、硫黄または酸素から選択される１〜４個のヘテロ原子のある、単一の環または複数の縮合環を有する飽和または不飽和の基を意味し、この場合、縮合環系では、１個または複数の環は、アリールまたはへテロアリールであってもよい。一実施形態では、複素環の硫黄および／または窒素原子は酸化されていてもよい（すなわち、−Ｓ（Ｏ）−もしくは−Ｓ（Ｏ）２−、および／またはＮ−オキシド）。
【００３０】
「薬学的に許容可能な担体」とは、一般に、安全かつ非毒性であり、生物学的にまたはそれ以外でも不適切ではない、医薬組成物を調製する際に有用な担体を意味し、これには、ヒトの医薬品用途だけでなく獣医学の用途にも許容可能な担体が含まれる。本明細書および請求項で使用される「薬学的に許容可能な担体」には、１種および複数のこのような担体が含まれる。
【００３１】
「プロドラッグ」は、対象に投与したときに、本発明の化合物またはその活性代謝体または残留物を直接的または間接的に提供することができる、本発明の化合物のすべての薬学的に許容可能な誘導体を意味する。特に好ましい誘導体およびプロドラッグは、（例えば、より簡単に血液中に吸収されるように化合物を経口投与することによって）このような化合物を対象に投与した場合に、本発明の化合物のバイオアベイラビリティを高めるものであるか、生体上の区域（例えば、脳またはリンパ系）への親化合物の送達が親の種よりも強化されたものである。プロドラッグには、本発明の化合物のエステル型が含まれる。エステルプロドラッグの例としては、ギ酸誘導体、酢酸誘導体、プロピオン酸誘導体、酪酸誘導体、アクリル酸誘導体、およびエチルコハク酸誘導体が挙げられる。プロドラッグの一般的な総説は、Ｔ．ＨｉｇｕｃｈｉおよびＶ．Ｓｔｅｌｌａ、「Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」、Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓの１４巻、ならびにＥｄｗａｒｄ  Ｂ．Ｒｏｃｈｅ編、Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、１９８７年（これらは両方とも引用により本明細書に援用するものとする）に記載されている。
【００３２】
「薬学的に許容可能な塩」は、本発明の化合物の生物学的有効性および特性を保有しており、生物学的にまたはその他の点で不適切ではない塩を意味する。多くの場合、本発明の化合物は、アミノ基および／またはカルボキシル基あるいはそれに類似の基の存在により、酸および／または塩基の塩を形成することができる。
【００３３】
薬学的に許容可能な塩基付加塩は、無機および有機塩基から調製することができる。無機塩基から誘導される塩としては、ほんの一例として、ナトリウム塩、カリウム塩、リチウム塩、アンモニウム塩、カルシウム塩およびマグネシウム塩が挙げられる。有機塩基から誘導される塩は、これらに限定されるものではないが、第一級アミン、第二級アミンおよび第三級アミンの塩、例えば、アルキルアミン、ジアルキルアミン、トリアルキルアミン、置換アルキルアミン、ジ（置換アルキル）アミン、トリ（置換アルキル）アミン、アルケニルアミン、ジアルケニルアミン、トリアルケニルアミン、置換アルケニルアミン、ジ（置換アルケニル）アミン、トリ（置換アルケニル）アミン、シクロアルキルアミン、ジ（シクロアルキル）アミン、トリ（シクロアルキル）アミン、置換シクロアルキルアミン、ジ置換シクロアルキルアミン、トリ置換シクロアルキルアミン、シクロアルケニルアミン、ジ（シクロアルケニル）アミン、トリ（シクロアルケニル）アミン、置換シクロアルケニルアミン、ジ置換シクロアルケニルアミン、トリ置換シクロアルケニルアミン、アリールアミン、ジアリールアミン、トリアリールアミン、ヘテロアリールアミン、ジヘテロアリールアミン、トリヘテロアリールアミン、複素環アミン、ジ複素環アミン、トリ複素環アミン、ジアミンとトリアミンとの混合物の塩であって、アミンの置換基の少なくとも２つが異なっており、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、複素環などが挙げられる。また、２個または３個の置換基がアミノ窒素と一緒になって、複素環基またはヘテロアリール基を形成しているアミンも含まれる。
【００３４】
適当なアミンの例としては、ほんの一例として、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリ（イソプロピル）アミン、トリ（ｎ−プロピル）アミン、エタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、トロメタミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、Ｎ−アルキルグルカミン、テオブロミン、プリン、ピペラジン、ピペリジン、モルホリン、Ｎ−エチルピペリジンなどが挙げられる。また、他のカルボン酸誘導体、例えば、カルボキサミド、低級アルキルカルボキサミド、ジアルキルカルボキサミドなどを含むカルボン酸アミドも本発明の実施において有用であり得ることを理解されたい。
【００３５】
薬学的に許容可能な酸付加塩は、無機および有機酸から調製することができる。無機酸から誘導される塩としては、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などのものが挙げられる。有機酸から誘導される塩としては、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などのものが挙げられる。
【００３６】
「薬学的に許容可能なカチオン」という用語は、薬学的に許容可能な塩のカチオンを意味する。
【００３７】
本明細書で定義したすべての置換基において、定義の置換基でそれらの置換基自体にさらなる置換基を伴って得られるポリマー（例えば、置換アリール基でそれ自体が置換されている、置換基として置換アリール基を有する置換アリールなど）が、本明細書には包含されることは意図されないことは理解されよう。このような場合、かかる置換基の最大数は３個である。すなわち、上記のそれぞれの定義は限定による制約があり、例えば、置換アリール基は、−置換アリール−（置換アリール）−（置換アリール）に限定される。
【００３８】
疾患を「治療する」または「治療」とは、以下が挙げられる：
（１）その疾患を予防すること、すなわち、その疾患に曝され得るか感染し易いが、未だその疾患の症状を経験しないか示さない哺乳動物において、その疾患の臨床症状を発症させないようにすること；
（２）その疾患を阻止すること、すなわち、その疾患またはその臨床症状の発症を抑えるか少なくすること；または
（３）その疾患を軽減すること、すなわち、その疾患またはその臨床症状の退縮を起こすこと。
【００３９】
「治療有効量」とは、疾患を治療するために哺乳動物に投与したときに、その疾患に対してかかる治療を達成するのに十分な化合物の量を意味する。この「治療有効量」は、その化合物、疾患およびその重症度、および治療する哺乳動物の年齢、体重などに応じて変わる。
【００４０】
「薬学的に許容可能な塩」とは、当該分野で周知の種々の有機対イオンおよび無機対イオンから塩が誘導される式Ｉの化合物の薬学的に許容可能な塩を意味し、これには、単なる例ではあるが、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アンモニウム、テトラアルキルアンモニウムなどが挙げられる；その分子が塩基性官能基を含有する場合、有機酸または無機酸の塩、例えば、塩酸、臭化水素酸、酒石酸、メシル酸、酢酸、マレイン酸、シュウ酸などの塩である。
【００４１】
インテグリンは、相同膜貫通リンカータンパク質の大型ファミリーであり、これらは、ほとんどの細胞外マトリックスタンパク質（例えば、コラーゲン、フィブロネクチンおよびラミニン）を結合するための動物細胞上の主要レセプターである。これらのインテグリンは、α鎖およびβ鎖からなるヘテロダイマーである。現在まで、９種類の異なるαサブユニットと１４種類の異なるβサブユニットからなる異なる２０種類のインテグリンヘテロダイマーが同定されている。「α４インテグリン」という用語は、任意のβサブユニットと対になったα４サブユニットを含有する酵素結合細胞表面レセプターであるヘテロダイマーのクラスを意味する。ＶＬＡ−４は、α４インテグリンの一例であり、α４サブユニットおよびβ１サブユニットのヘテロダイマーであって、α４β１インテグリンとも呼ばれている。
【００４２】
本発明は、ＶＬＡ−４媒介性疾患を治療するための化合物、その薬学的に許容可能な塩、その組成物、その合成、および方法を提供する。
【００４３】
一実施形態では、本発明は、式Ｉ：
【００４４】
【化７】
2009510097.tif 000009
（式中、
Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキル、ヘテロアリールおよび−Ｎ（Ｒ５）（Ｒ６）からなる群から選択され、ここで、Ｒ５およびＲ６は、水素、Ｃ１〜Ｃ４アルキルからなる群から独立して選択されるか、Ｒ５およびＲ６は、それらにペンダントしている窒素と一緒になって複素環を形成しており；
Ｒ２は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、およびＣ２〜Ｃ４アルキニルからなる群から選択され；
Ｒ３およびＲ４は、独立してＣ１〜Ｃ３アルキルであるか、Ｒ３およびＲ４は、これらにペンダントしている窒素原子と一緒になって複素環を形成している）
の化合物；またはその薬学的に許容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグを提供する。
【００４５】
一部の実施形態では、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ３Ｒ４基は、フェニル環のパラ位にある。
【００４６】
一部の実施形態では、Ｒ３およびＲ４は、結合して複素環を形成している。別の実施形態では、Ｒ３およびＲ４は、結合してピロリジニル環を形成している。
【００４７】
一部の実施形態では、Ｒ２はＣ１〜Ｃ４アルキルである。別の実施形態では、Ｒ２はエチルである。
【００４８】
さらに別の実施形態では、Ｒ３およびＲ４は結合して複素環を形成しており、Ｒ２はＣ１〜Ｃ４アルキルである。さらに別の実施形態では、Ｒ３およびＲ４は結合してピロリジニル環を形成しており、Ｒ２はエチルである。
【００４９】
本発明の化合物の例としては、表１に示したＲ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４基を有するものが挙げられる。
【００５０】
【表１】
2009510097.tif 000010
別の実施形態では、本発明は、式ＩＩ：
【００５１】
【化８】
2009510097.tif 000011
（式中、
Ｒ７は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキルまたはヘテロアリールであり；
Ｒ８は、Ｃ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ９およびＲ１０は、独立してＣ１〜Ｃ３アルキルであるか、Ｒ９およびＲ１０は、これらにペンダントしている窒素原子と一緒になって複素環を形成している）
の化合物；またはその薬学的に許容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグを提供する。
【００５２】
一部の実施形態では、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ１０基は、フェニル環のパラ位にある。
【００５３】
一部の実施形態では、Ｒ９およびＲ１０は、結合して複素環を形成している。別の実施形態では、Ｒ９およびＲ１０は、結合してピロリジニル環を形成している。
【００５４】
一部の実施形態では、Ｒ８はＣ１〜Ｃ４アルキルである。別の実施形態では、Ｒ８はエチルである。
【００５５】
一部の実施形態では、Ｒ７はＣ１〜Ｃ４アルキルである。別の実施形態では、Ｒ７はイソプロピルおよびｔ−ブチルからなる群から選択される。
【００５６】
一部の実施形態では、Ｒ７はＣ１〜Ｃ４ハロアルキルである。別の実施形態では、Ｒ７はトリフルオロメチルである。
【００５７】
一部の実施形態では、Ｒ７はヘテロアリールである。別の実施形態では、Ｒ７はフラン−２−イル、フラン−３−イル、チエン−２−イルおよびチエン−３−イルからなる群から選択される。
【００５８】
一部の実施形態では、Ｒ９およびＲ１０は結合して複素環を形成しており、Ｒ８はＣ１〜Ｃ４アルキルであり、Ｒ７はヘテロアリールである。別の実施形態では、Ｒ９およびＲ１０はペンダントの窒素と一緒にピロリジン環を形成しており、Ｒ８はエチルであり、Ｒ７はヘテロアリールである。
【００５９】
一部の実施形態では、Ｒ９およびＲ１０は結合して複素環を形成しており、Ｒ８はＣ１〜Ｃ４アルキルであり、Ｒ７はアルキルである。別の実施形態では、Ｒ９およびＲ１０はペンダントの窒素と一緒にピロリジン環を形成しており、Ｒ８はエチルであり、Ｒ７はアルキルである。
【００６０】
本発明は、表２に示したＲ７、Ｒ８、Ｒ９およびＲ１０基を有する式ＩＩの化合物をさらに提供する。
【００６１】
【表２】
2009510097.tif 000012
別の実施形態では、本発明は、式ＩＩＩ：
【００６２】
【化９】
2009510097.tif 000013
（式中、
Ｒ１１およびＲ１２は、独立してＣ１〜Ｃ４アルキルであるか、Ｒ１１およびＲ１２は、それにペンダントしている窒素原子と一緒になって複素環を形成しており；
Ｒ１３はＣ１〜Ｃ４アルキルであり；
Ｒ１４およびＲ１５は、独立してＣ１〜Ｃ３アルキルであるか、Ｒ１４およびＲ１５は、それにペンダントしている窒素原子と一緒になって複素環を形成している）
の化合物；またはその薬学的に許容可能な塩、エステルもしくはプロドラッグを提供する。
【００６３】
一部の実施形態では、−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ１４Ｒ１５基は、フェニル環のパラ位にある。
【００６４】
一部の実施形態では、Ｒ１４およびＲ１５は、結合して複素環を形成している。別の実施形態では、Ｒ１４およびＲ１５は、結合してピロリジニル環を形成している。
【００６５】
一部の実施形態では、Ｒ１３はＣ１〜Ｃ４アルキルである。別の実施形態では、Ｒ１３はエチルである。
【００６６】
一部の実施形態では、Ｒ１１およびＲ１２は、独立してＣ１〜Ｃ４アルキルである。別の実施形態では、Ｒ１１はエチルであり、Ｒ１２はイソプロピルである。
【００６７】
一部の実施形態では、Ｒ１１およびＲ１２は、これらにペンダントしている窒素原子と一緒になって複素環を形成している。別の実施形態では、複素環は、ピペリジン−１−イルおよび３−チアピロリジン−１−イルからなる群から選択される。
【００６８】
さらに別の実施形態では、Ｒ１４およびＲ１５は結合して複素環を形成しており、Ｒ１３はＣ１〜Ｃ４アルキルであり、Ｒ１１およびＲ１２は、これらにペンダントしている窒素原子と一緒になって複素環を形成している。
【００６９】
本発明は、表３に示したＲ１１、Ｒ１２、Ｒ１３、Ｒ１４およびＲ１５基を有する式ＩＩＩの化合物をさらに提供する。
【００７０】
【表３】
2009510097.tif 000014
一部の実施形態では、本発明は、それぞれの式においてパラ位でフェニル環に結合している以下のカルバミル置換基：
【００７１】
【化１０】
2009510097.tif 000015
を有する式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの化合物を提供する。さらに別の実施形態では、表１、２および３に記載の化合物は、パラ位で結合しているカルバミル置換基を有する。
【００７２】
一部の実施形態では、本発明はまた、オルト位またはメタ位で結合しているカルバミル置換基を有する、式Ｉ、ＩＩおよびＩＩＩの化合物（表１、２および３に記載のものを含む）を提供する。
【００７３】
本発明はまた、表４に記載の化合物も提供する。
【００７４】
【表４−４】
2009510097.tif 000016
【００７５】
【表４−５】
2009510097.tif 000017
【００７６】
【表４−６】
2009510097.tif 000018
別の態様では、本発明は、薬学的に許容可能な担体と、治療有効量の本明細書で定義した１種または複数の化合物とを含む医薬組成物を提供する。
【００７７】
その方法の一態様では、本発明は、薬学的に許容可能な担体と、治療有効量の本発明の１種または複数の化合物とを含む医薬組成物を投与するステップを含む、患者の少なくとも部分的にα４インテグリン（好ましくはＶＬＡ−４）が媒介している疾患を治療するための方法に関する。別の態様では、本発明は、α４インテグリン媒介性疾患を治療するための薬剤の製造における本発明の化合物を含む医薬組成物の使用に関する。
【００７８】
本発明の化合物および医薬組成物は、少なくとも部分的にα４インテグリン（ここで、α４インテグリンは好ましくはＶＬＡ−４である）または白血球接着が媒介している疾患の治療に有用である。これらの疾患症状としては、例として、喘息、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化、エイズ認知症、糖尿病（急性若年性糖尿病を含む）、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）、多発性硬化症、関節リウマチ、組織移植、腫瘍転移、髄膜炎、脳炎、卒中、および他の大脳外傷、腎炎、網膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血、および急性白血球媒介性肺損傷（例えば、成人呼吸窮迫症候群において生じるもの）が挙げられる。
【００７９】
他の疾患症状としては、炎症症状、例えば、結節性紅斑、アレルギー性結膜炎、視神経炎、ブドウ膜炎、アレルギー性鼻炎、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、血管炎、ライター症候群、全身性エリテマトーデス、進行性全身性硬化症、多発性筋炎、皮膚筋炎、ヴェグナー肉芽腫症、大動脈炎、サルコイドーシス、リンパ球減少症、側頭動脈炎、心膜炎、心筋炎、鬱血性心不全、結節性多発性動脈炎、過敏性症候群、アレルギー、好酸球増加症候群、チャーグ・ストラウス症候群、慢性閉塞性肺疾患、過敏性肺臓炎、活動性慢性肝炎、間質性膀胱炎、自己免疫内分泌不全、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫再生不良性貧血、慢性持続性肝炎、および甲状腺炎が挙げられるが、これらに限定されるものではない。
【００８０】
好ましい実施態様では、このα４インテグリンによって媒介される疾患症状は炎症疾患である。
【００８１】
本発明の化合物は、例として、下記のもの：
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（トリフルオロアセチル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（イソ−プロピルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（ｔ−ブチルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（フラン−２−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（ピペリジン−１−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（Ｎ−エチル−Ｎ−イソ−プロピルアミノカルボニル）アミノ｝−ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（チエン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（チエン−２−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（フラン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（３−チアピロリジン−１−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（チエン−２−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−トリフルオロメチルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−ｔ−ブチルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル；および
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−フラン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル；
または薬学的に許容可能なその塩、エステルもしくはプロドラッグを含んでいる。
【００８２】
化合物の調製
本発明の化合物は、以下の一般法および手順を使用して、容易に入手できる出発物質から調製できる。典型的または好ましい工程の条件（すなわち、反応温度、回数、反応成分のモル比、溶媒、圧力など）が記載されている場合、特段の記載がない限り、別の工程条件も使用可能であることは理解されよう。最適な反応条件は、使用する特定の反応成分または溶媒によって変動し得るが、当業者であれば、慣用の最適化手順により、このような条件は決定することができる。
【００８３】
加えて、当業者には明らかなように、一定の官能基が望ましくない反応を受けるのを防ぐために、慣用の保護基が必要であることがある。様々な官能基に適した保護基、ならびに特定の官能基を保護および脱保護するのに適した条件は、当技術分野ではよく知られている。例えば、Ｔ．Ｗ．ＧｒｅｅｎｅおよびＧ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ、第２版、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１年、およびそこに引用されている参考文献に数多くの保護基が記載されている。
【００８４】
さらに、本発明の化合物は、通常、１個または複数の不斉中心を含む。したがって、所望の場合、このような化合物は、純粋な立体異性体として、すなわち、個々のエナンチオマーもしくはジアステレオマーとして、または立体異性体に富んだ混合物として調製または単離することができる。このような立体異性体（およびそれに富んだ混合物）はすべて、他に記載のない限り、本発明の範囲に含まれる。例えば、当技術分野でよく知られている光学的に活性な出発物質または立体選択的試薬を使用して、純粋な立体異性体（またはそれに富んだ混合物）を調製することができる。もしくは、例えば、キラルカラムクロマトグラフィー、キラル分離剤などを使用して、このような化合物のラセミ混合物を分離することができる。
【００８５】
一実施形態では、本発明の化合物は、スキーム１で下記に記載したように調製することができる：
【００８６】
【化１１】
2009510097.tif 000019
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、上で定義した通りであり、Ｐｇは、ベンジル、ｔ−ブチルなどのカルボキシル保護基である。
【００８７】
スキーム１では、出発の５−アミノピリミジン中間体（化合物１．１）は、国際公開第０３／０９９８０９号に詳細に記載されており、単に例示目的で記載するだけであるが、このスキームでは４−置換フェニルアラニン誘導体として示している。言うまでもなく、２−および３−置換フェニルアラニン誘導体が同様の反応経路をたどることは理解されよう。
【００８８】
具体的には、スキーム１では、５−アミノ−２−ジエチルアミノ−４−置換ピリミジン（化合物１．１）（対応する５−ニトロ−ピリミジンから５重量％のＰｄ／Ｃまたは５重量％のＰｔＯ２との反応により調製される）は、従来法によって、対応するトリフルオロアセトアミド（化合物１．２）に変換される。例えば、少量過剰のトリフルオロ酢酸無水物は、テトラヒドロフラン、塩化メチレン、ピリジンなどの好適な不活性希釈剤中で化合物１．１と結合する。この反応は、反応が本質的に完了するまで（これは、通常、約０．５〜２４時間内に起こる）、約０℃〜約３０℃で維持する。反応が終わると、化合物１．２は、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などをはじめとする従来法により回収するか、精製および／または単離を行わずに次の工程で使用する。
【００８９】
化合物１．２の対応するＮ（Ｒ２），Ｎ−トリフルオロアセトアミドピリミジン（化合物１．３）への変換は、再度、従来技術により進める。例えば、過剰のハロゲン化物（Ｒ２−Ｉ）は、ＤＭＦなどの好適な不活性希釈剤中、過剰の好適な塩基（炭酸カリウムなど）の存在下で化合物１．２と結合する。好ましい実施形態では、約２当量のＲ２−Ｉおよび炭酸カリウムを使用する。この反応は、密封容器中で周囲条件下で維持し、反応物が本質的に完了するまで（これは典型的には２０〜７２時間内に起こる）継続する。反応が終わると、化合物１．３は、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などをはじめとする従来法により回収するか、精製および／または単離を行わずに次の工程で使用する。
【００９０】
化合物１．３のカルボキシル保護基は、従来の条件により除去して式Ｉの化合物を得ることができる（示さず）。一実施形態では、ｔ−ブチル保護基はギ酸と接触させることによって除去することができる。別の実施形態では、ベンジル保護基は、高圧水素下で典型的にはメタノールなどのプロトン性溶媒中でパラジウム／炭素触媒の存在下において水素と接触させることによって除去することができる。
【００９１】
あるいは、トリフルオロアセチル基を除去して対応するアミン（化合物１．４）を得ることができる。この実施形態では、トリフルオロアセチル基はアミン保護基として作用する。上記のように、この反応は、例えば、水およびプロトン性溶媒（メタノールなど）の混合物中で、化合物１．３を過剰の炭酸カリウムなどの好適な塩基と接触させることによって従来通り進められる。この反応は、例えば４０℃〜６０℃などの高温で行い、反応が本質的に完了するまで継続する。反応が終わると、化合物１．４は、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などをはじめとする従来法により回収するか、精製および／または単離を行わずに次の工程で使用する。
【００９２】
スキーム１では、化合物１．４は、尿素誘導体（式中、Ｒ１は−ＮＲ５Ｒ６である）またはアシルアミノ誘導体（式中、Ｒ１は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ１〜Ｃ４ハロアルキルまたはヘテロアリール（窒素原子を介してそれ以外のカルボニル基に結合している）である）のいずれかを調製するために用いることができる。最初の実施形態では、尿素誘導体は、従来法により、例えばまずアミドクロリド（化合物１．７）を調製することにより調製される。この化合物は、炭酸カリウム、重炭酸カリウム、炭酸ナトリウムなどの好適な塩基の存在下で、化合物１．４を過剰のホスゲンと接触させることにより調製される。反応が終わると、化合物１．７は、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などをはじめとする従来法により回収するが、好ましくは、精製および／または単離を行わずに次の工程で使用する。
【００９３】
次いで、アミドクロリド（化合物１．７）は、従来の条件下で好適なアミン（Ｒ５Ｒ６ＮＨ）と反応させることにより対応する尿素誘導体（化合物１．８）に変換される。好ましくは、この反応は、等モル量または過剰量のアミンを好適な溶媒（テトラヒドロフラン、ジオキサン、クロロホルムなど）中で化合物１．７と接触させることで行う。反応が終わると、化合物１．８は、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などをはじめとする従来法により回収するか、精製および／または単離を行わずに次の工程で使用する。
【００９４】
化合物１．８のカルボキシル保護基は従来の条件により除去され、化合物１．９（式Ｉの化合物）が得られる。一実施形態では、ｔ−ブチル保護基は、ギ酸と接触させることにより除去することができる。別の実施形態では、ベンジル保護基は、高圧水素下で典型的にはメタノールなどのプロトン性溶媒中でパラジウム／炭素触媒の存在下において水素と接触させることによって除去することができる。反応が終わると、化合物１．９は、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などをはじめとする従来法により回収する。
【００９５】
第２の実施形態では、アシルアミノ誘導体（化合物１．５）は、生成された酸を除去するため、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなどの好適な塩基の存在下で、化合物１．４を少量過剰のハロゲン化アシルと接触させることにより調製される。この反応は、好ましくは、テトラヒドロフラン、ジオキサン、クロロホルムなどの好適な不活性溶媒中で行う。この反応は、好ましくは約０℃〜３０℃で行い、反応が本質的に完了するまで（これは典型的には２〜４８時間内に起こる）継続する。反応が終わると、化合物１．５は、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などをはじめとする従来法により回収するか、精製および／または単離を行わずに次の工程で使用する。
【００９６】
化合物１．５のカルボキシル保護基は従来の条件により除去され、化合物１．６（式Ｉの化合物）が得られる。一実施形態では、ｔ−ブチル保護基はギ酸との接触によって除去することができる。別の実施形態では、ベンジル保護基は、高圧水素下で典型的にはメタノールなどのプロトン性溶媒中でパラジウム／炭素触媒の存在下において水素と接触させることによって除去することができる。反応が終わると、化合物１．６は、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などをはじめとする従来法により回収する。
【００９７】
製剤
医薬品として使用する場合、本発明の化合物は、通常、医薬組成物の形態で投与される。これらの組成物は、種々の経路（経口経路、直腸経路、経皮経路、皮下経路、静脈内経路、筋肉内経路および鼻内経路を含む）により投与することができる。これらの化合物は、注射用組成物および経口用組成物として有効である。このような組成物は、医薬品分野で周知の方法で調製され、また少なくとも１種の活性化合物を含有する。
【００９８】
本発明はまた、その活性成分として、薬学的に許容可能な担体と共に、上記式Ｉ〜ＩＩＩの１種または複数の化合物を含有する医薬組成物を包含する。本発明の組成物を製造する際には、この活性成分は、通常、賦形剤と混合されるか、賦形剤で希釈されるか、カプセル、サシェ、紙または他の容器の形状であってもよいかかる担体内に封入される。使用する賦形剤は、典型的には、ヒト対象または他の動物に投与するのに適当な賦形剤である。この賦形剤は、希釈剤として働く場合、固体、半固体または液体物質であり得、それは、活性成分用のビヒクル、担体または媒体として作用する。それゆえ、これらの組成物は、錠剤、丸剤、散剤、ロゼンジ剤、サシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁液、乳濁液、溶液、シロップ剤、エアロゾル（固形物として、または液状媒体中で）、軟膏（これは、例えば、１０重量％までの活性化合物を含有する）、軟質ゼラチンカプセルおよび硬質ゼラチンカプセル剤、坐剤、無菌注射用溶液、および無菌包装散剤の剤形であり得る。
【００９９】
製剤を調製する際に、他の成分と配合する前に、この活性化合物を粉砕して適当な粒径にする必要があり得る。この活性化合物が実質的に不溶であるならば、通常、それを２００メッシュ未満の粒径まで粉砕する。この活性化合物が実質的に水溶性であるならば、その粒径は、通常、その製剤で実質的に均一な分布（例えば、約４０メッシュ）が得られるように粉砕することにより調節する。
【０１００】
適当な賦形剤の一部の例としては、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アラビアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、微結晶性セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、およびメチルセルロースが挙げられる。これらの製剤は、さらに、以下のものを含有する：滑沢剤（例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウムおよび鉱油）；湿潤剤；乳化剤および懸濁剤；保存料（例えば、メチル安息香酸およびプロピルヒドロキシ安息香酸）；甘味料；および香味料。本発明の組成物は、当技術分野で公知の手順を用いることによって、患者に投与した後、その活性成分の迅速放出、持続放出または遅延放出が生じるように製剤することができる。
【０１０１】
静脈内投与製剤による治療薬の投与は医薬品分野において周知である。静脈内投与製剤は、その治療薬が可溶性である組成物であることの他に、特定の性質を有していなければならない。例えば、その製剤は、活性成分の全体的な安定性を促進すべきであり、さらに、製剤の製造は、コスト的に有効でなければならない。これらの要因のすべてが、静脈内投与製剤の全体的な成功および有用性を最終的に決定する。
【０１０２】
本発明の化合物の製剤中に含有され得る他の補助的添加剤は、次のものである：溶剤：エタノール、グリセリン、プロピレングリコール；安定剤：エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸；抗菌防腐剤：ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン；緩衝剤：クエン酸／クエン酸ナトリウム、酒石酸水素カリウム、酒石酸水素ナトリウム、酢酸／酢酸ナトリウム、マレイン酸／マレイン酸ナトリウム、フタル酸水素ナトリウム、リン酸／リン酸水素カリウム、リン酸／リン酸水素二ナトリウム；および張性調節剤：塩化ナトリウム、マンニトール、デキストロース。
【０１０３】
約４〜約８の範囲、さらに好ましくは約４〜約６の範囲に水性ｐＨを維持するためには、緩衝剤が存在することが必要である。緩衝剤系は、通常、弱酸とその可溶性塩との混合物、例えば、クエン酸ナトリウム／クエン酸；または二塩基酸のモノカチオンまたはジカチオン、例えば、酒石酸水素カリウム；酒石酸水素ナトリウム、リン酸／リン酸水素カリウムおよびリン酸／リン酸水素二ナトリウムである。
【０１０４】
使用する緩衝剤系の量は、（１）所望のｐＨ；（２）薬剤の量によって決まる。通常、使用する緩衝剤の量は、ｐＨを４〜８の範囲に維持するためには、製剤の緩衝剤：薬剤のモル比は０．５：１から５０：１であり（ここで、緩衝剤のモルは、複数の緩衝剤成分（例えばクエン酸ナトリウムおよびクエン酸）の混合モルとする）、通常、緩衝剤（混合されたもの）と存在する薬剤とのモル比は１：１から１０：１で使用される。
【０１０５】
本発明で有用な緩衝剤の一つは、組成物の水性ｐＨを４〜６に維持するに十分な、１ｍｌ当たりクエン酸ナトリウム５〜５０ｍｇに対して１ｍｌ当たりクエン酸１〜１５ｍｇの範囲のクエン酸ナトリウム／クエン酸である。
【０１０６】
ガラス容器またはゴム栓から浸出するか、通常の水道水に存在し得る溶解金属イオン、例えば、Ｃａ、Ｍｇ、Ｆｅ、Ａｌ、Ｂａとの可溶性金属錯体形成による医薬品の沈殿を防ぐために、緩衝剤が存在してもよい。この薬剤は、医薬品との競合錯化剤として作用し、不適切な粒子を存在させる可溶性金属錯体を生じる。
【０１０７】
さらに、静脈内投与製剤を投与した場合に、赤血球が膨張または収縮して、悪心または下痢などの不適切な副作用、ならびに関連する血液障害が起こることを回避するために、張性をヒトの血液と同じ値に調節する、約１〜８ｍｇ／ｍｌの量の薬剤、例えば、塩化ナトリウムが存在することが必要であることもある。通常、製剤の張性は、ヒトの血液の張性に一致し、これは、２８２〜２８８ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲であり、通常、２８５ｍＯｓｍ／ｋｇであり、塩化ナトリウム０．９％溶液に対応する浸透圧に等しい。
【０１０８】
静脈内投与製剤は、直接的な静脈注射、静脈内ボーラスにより投与することもできるし、あるいは０．９％塩化ナトリウム注射または他の適切な注射溶液などの適切な注入溶液に加えることにより注入投与することもできる。
【０１０９】
これらの組成物は、好ましくは、単位剤形で製剤され、各投与量は、約５〜約１００ｍｇ、さらに通常では、約１０〜約３０ｍｇの活性成分を含有する。「単位剤形」という用語は、ヒト対象および他の哺乳動物に対する単一の投与量として適当な、物理的に個別の単位を意味し、各単位は、適当な医薬賦形剤と合わせて、所望の治療効果が得られるように計算された所定量の活性物質を含有する。
【０１１０】
この活性化合物は、広い投与量範囲にわたって有効であり、一般に、薬学的に有効な量で投与される。しかしながら、実際に投与される化合物の量は、関連した状況（治療する疾患、選択した投与経路、実際に投与する化合物、個々の患者の年齢、体重および応答、患者の症状の重症度などを含む）に照らして医師により決定されることは理解されよう。
【０１１１】
固形組成物（例えば、錠剤）の調製については、主要な活性成分は、医薬賦形剤と混合して、固形プレ製剤組成物（これは、本発明の化合物の均一混合物を含有する）を形成する。これらのプレ製剤組成物が均一なものとして用いられる場合、それは、この組成物が同等に有効な単位剤形（例えば、錠剤、丸薬およびカプセル剤）に容易に細分され得るように、活性成分が組成物全体にわたって一様に分散されていることを意味する。次いで、この固形プレ製剤は、上記種類の単位剤形（これは、例えば、０．１〜約５００ｍｇの本発明の活性成分を含有する）に細分される。
【０１１２】
本発明の錠剤または丸剤は、被覆するか、そうでなければ調合して、持続性作用の利点のある剤形を得ることができる。例えば、この錠剤または丸剤は、内部投与成分および外部投与成分を含んでいてもよく、後者の成分は、前者の成分の上を覆うエンベロープの形態である。これらの２種の成分は、胃内で崩壊しないように作用し、その内部成分が損なわれることなく十二指腸の中に入れるか、放出を遅らせる腸溶層により分離させることができる。このような腸溶層または被覆には種々の物質が使用でき、かかる物質としては、多数の高分子酸、および高分子酸と、セラック、セチルアルコールおよび酢酸セルロースなどの物質との混合物が挙げられる。
【０１１３】
本発明の新規組成物を経口投与または注射による投与で組み合わせることができる液体剤形には、水溶液、適当に風味を加えたシロップ、水性または油性懸濁液、および食用油（例えば、綿実油、ゴマ油、やし油または落花生油）で風味を加えた乳濁液、ならびに、エリキシル剤および類似の医薬用ビヒクルが挙げられる。
【０１１４】
吸入またはガス注入用の組成物としては、薬学的に許容可能な水性溶媒または有機溶媒中の溶液および懸濁液、またはそれらの混合物、および粉末が挙げられる。これらの液体または固体組成物は、上記の適当な薬学的に許容可能な賦形剤を含有し得る。好ましくは、これらの組成物は、局所効果または全身効果を得るための経口または鼻腔呼吸経路により投与される。好ましくは薬学的に許容可能な溶媒中の組成物は、不活性ガスを使用することにより霧状にすることができる。霧状にした溶液は、噴霧器から直接的に吸入することができるか、噴霧器は、フェースマスクテントまたは断続性陽圧呼吸装置に装着することができる。溶液、懸濁液または粉末の組成物は、好ましくは、この製剤を適当な方法で送達する器具から経口または鼻腔経由で投与することができる。
【０１１５】
以下の製剤実施例は、本発明の医薬組成物を例示するものである。
【０１１６】
（製剤実施例１）
以下の成分を含有する硬質ゼラチンカプセル剤を調製する：
成分                      量（ｍｇ／カプセル）
活性成分                  ３０．０
デンプン                  ３０５．０
ステアリン酸マグネシウム  ５．０
上記成分を混合し、３４０ｍｇの量で硬質ゼラチンカプセルに充填する。
【０１１７】
（製剤実施例２）
以下の成分を使用して、錠剤製剤を調製する：
成分                      量（ｍｇ／錠剤）
活性成分                  ２５．０
微結晶セルロース          ２００．０
コロイド状二酸化ケイ素    １０．０
ステアリン酸              ５．０
これらの成分をブレンドし、圧縮して錠剤（各々、２４０ｍｇ重量）を形成する。
【０１１８】
（製剤実施例３）
以下の成分を含有する乾燥粉末吸入剤製剤を調製する：
成分                      重量％
活性成分                  ５
ラクトース                ９５
活性成分をラクトースと混合し、混合物を乾燥粉末吸入器に加える。
【０１１９】
（製剤実施例４）
以下のようにして、錠剤（各々、３０ｍｇの活性成分を含有する）を調製する：
成分                      量（ｍｇ／錠剤）
活性成分                  ３０．０ｍｇ
デンプン                  ４５．０ｍｇ
微結晶セルロース          ３５．０ｍｇ
ポリビニルピロリドン      ４．０ｍｇ（滅菌水中１０％水溶液として）
カルボキシメチルデンプンナトリウム  ４．５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム  ０．５ｍｇ
タルク                    １．０ｍｇ
活性成分、デンプンおよびセルロースをＮｏ．２０メッシュＵ．Ｓ．篩に通し、十分に混合する。得られた粉末にポリビニルピロリドンの溶液を混合し、次いで、これを１６メッシュＵ．Ｓ．篩に通す。このように製造した顆粒を５０〜６０℃で乾燥し、１６メッシュＵ．Ｓ．篩に通す。次いで、この顆粒に、Ｎｏ．３０メッシュＵ．Ｓ．篩に予め通したカルボキシメチルデンプンナトリウム、ステアリン酸マグネシウムおよびタルクを加え、これらを混合後、錠剤機で圧縮して錠剤（各々、１２０ｍｇ重量）を得る。
【０１２０】
（製剤実施例５）
以下のようにして、カプセル剤（各々、４０ｍｇの薬剤を含有）を作製する：
成分                      量（ｍｇ／カプセル）
活性成分                  ４０．０ｍｇ
デンプン                  １０９．０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム  １．０ｍｇ
全量                      １５０．０ｍｇ
活性成分、デンプンおよびステアリン酸マグネシウムをブレンドし、Ｎｏ．２０メッシュＵ．Ｓ．篩に通し、１５０ｍｇの量で硬質ゼラチンカプセルに充填する。
【０１２１】
（製剤実施例６）
以下のようにして、坐剤（各々、２５ｍｇの活性成分を含有）を製造する：
成分                      量
活性成分                  ２５ｍｇ
飽和脂肪酸グリセリド      ２，０００ｍｇ
活性成分をＮｏ．６０メッシュＵ．Ｓ．篩に通し、飽和脂肪酸グリセリド（これは、必要最低限の熱を使用して、予め融解しておいた）に懸濁させる。次いで、この混合物を、名目容量２．０ｇの坐剤金型に注ぎ、冷却させる。
【０１２２】
（製剤実施例７）
以下のようにして、懸濁液（各々、５．０ｍｌ用量当たり、５０ｍｇの薬剤を含有）を製造する：
成分                      量
活性成分                  ５０．０ｍｇ
キサンタンガム            ４．０ｍｇ
カルボキシメチルセルロース
ナトリウム（１１％）
微結晶セルロース（８９％）５０．０ｍｇ
スクロース                １．７５ｇ
安息香酸ナトリウム        １０．０ｍｇ
香料および着色料          ｑ．ｖ．
精製水                    ５．０ｍｌまで
活性成分、スクロースおよびキサンタンガムをブレンドし、Ｎｏ．１０メッシュＵ．Ｓ．篩に通し、次いで、微結晶セルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウムの予め製造しておいた水溶液と混合する。安息香酸ナトリウム、香料および着色料を一部の水で希釈し、撹拌しながら加える。次いで、十分な水を加えて、必要な容量を製造する。
【０１２３】
（製剤実施例８）
成分                      量（ｍｇ／カプセル）
活性成分                  １５．０ｍｇ
デンプン                  ４０７．０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム  ３．０ｍｇ
全量                      ４２５．０ｍｇ
活性成分、デンプンおよびステアリン酸マグネシウムをブレンドし、Ｎｏ．２０メッシュＵ．Ｓ．篩に通し、４２５ｍｇの量で硬質ゼラチンに充填する。
【０１２４】
（製剤実施例９）
以下のようにして、皮下製剤を調製することができる：
成分                      量
活性成分                  ５．０ｍｇ
トウモロコシ油            １．０ｍＬ
（製剤実施例１０）
以下のようにして、局所製剤を調製することができる：
成分                      量
活性成分                  １〜１０ｇ
乳化ワックス              ３０ｇ
液状パラフィン            ２０ｇ
白色軟質パラフィン        １００ｇまで
白色軟質パラフィンを溶融するまで加熱する。この液状パラフィンおよび乳化ワックスを混合し、溶解するまで撹拌する。活性成分を加え、分散するまで撹拌を継続する。次いで、混合物を固化するまで冷却する。
【０１２５】
（製剤実施例１１）
以下のようにして、静脈内投与製剤を調製することができる：
成分                      量
活性成分                  ２５０ｍｇ
等張性生理食塩水          １０００ｍＬ
本発明の方法で使用される他の好ましい製剤は、経皮送達器具（「パッチ」）を使用する。このような経皮パッチは、本発明の化合物を制御した量で連続または不連続的に注入するために使用することができる。薬剤を送達するための経皮パッチの構造および使用については、当技術分野で周知である。例えば、米国特許第５，０２３，２５２号（１９９１年６月１１日発行、その内容は、引用により本明細書に援用するものとする）を参照されたい。このようなパッチは、薬剤を連続送達、脈動送達またはオンデマンド送達するように構成することができる。
【０１２６】
直接的または間接的に医薬組成物を脳に導入するのが望ましい場合または必要な場合が多い。直接技術には、通常、血液脳関門を迂回するために、ホストの脳室系に薬剤送達カテーテルを配置することが含まれる。体の特定の解剖学的領域に生体因子を輸送するのに用いられるこのような移植可能送達系の一つは、米国特許第５，０１１，４７２号に記述されている（その内容は、引用により本明細書に援用するものとする）。
【０１２７】
一般に好ましいとされる間接技術は、通常、親水性薬剤を脂質溶解性薬剤に変換することにより薬剤潜在化（ｄｒｕｇ  ｌａｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ）を付与するように組成物を処方することを含んでいる。潜在化は、一般に、その薬剤に存在しているヒドロキシル基、カルボニル基、スルフェート基および第一級アミン基をブロックして、その薬剤をさらに脂質溶解性にするか、血液脳関門を横切る輸送ができるようにすることにより達成される。あるいは、親水性薬剤の輸送は、高張液（これは、血液脳関門を一時的に開くことができる）を動脈内注入することにより高めることができる。
【０１２８】
本発明で使用するのに適した他の製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ、第１７版（１９８５年）で確認することができる。
【０１２９】
上述のように、本明細書に記載の化合物は、上記の様々な薬剤送達系で使用するに適している。さらに、投与した化合物のインビボにおける血清半減期を延ばすために、化合物をカプセル包埋するか、リポソームの内腔に導入するか、コロイドとして調製することもできるし、あるいは化合物の血清半減期を延ばす他の慣用の技術を使用することもできる。例えば、Ｓｚｏｋａら、米国特許第４，２３５，８７１号、同第４，５０１，７２８号および第４，８３７，０２８号（これらはそれぞれ、引用により本明細書に援用するものとする）に記載されているように、様々な方法をリポソームの調製に使用することができる。
【０１３０】
本発明の共役体はＶＬＡ−４アンタゴニストであり、非共役化合物と比べてインビボにおける保持力を強化するために検討されている。生体内での共役体の保持がこのように改善されると、必要とされる薬剤の量が少なくなり、これによって次に、副作用が減少し、毒性の可能性が低減される。さらに、患者への製剤の投与の頻度が減らされると同時に、同様のまたは改善された治療効果を得ることができる。
【０１３１】
本発明の共役体は、ＶＬ４−Ａが媒介しているインビボにおける内皮細胞への白血球の付着をＶＬＡ−４に競合結合することにより阻止することが期待される。好ましくは、本発明の化合物は、ＶＬＡ−４または白血球接着が媒介している疾患を治療するための静脈内投与製剤で使用できる。これらの疾患には、哺乳動物患者における炎症疾患、例えば、喘息、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化、エイズ認知症、糖尿病（急性若年性糖尿病を含む）、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎およびクローン病を含む）、多発性硬化症、関節リウマチ、組織移植、腫瘍転移、髄膜炎、脳炎、卒中および他の大脳外傷、腎炎、網膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血および急性白血球媒介性肺傷害（例えば、成人呼吸窮迫症候群において生じるもの）が挙げられる。本発明の製剤は、多発性硬化症および関節リウマチの治療で特に有用である。
【０１３２】
炎症疾患の治療での有効性を証明するための適当なインビボモデルには、マウス、ラット、モルモットまたは霊長動物のＥＡＥ（実験的自己免疫脳脊髄炎）、ならびに他のα４インテグリン依存性炎症モデルがある。
【０１３３】
炎症性腸疾患は、クローン病および潰瘍性大腸炎と呼ばれる２種類の類似疾患の総称である。クローン病は、肉芽腫性炎症性反応による腸壁の全層の境界の明瞭な、一般的に貫壁性疾患を特徴とする特発性の慢性潰瘍収縮性炎症疾患である。この疾患は、最も一般的には末端回腸および／または結腸を冒すが、口から肛門までの胃腸管のあらゆる部分に及ぶ可能性がある。潰瘍性大腸炎は、主として結腸粘膜および粘膜下に限定される炎症性反応である。リンパ球およびマクロファージは、炎症性腸疾患の病変部に多数存在し、炎症性損傷の一因となっている可能性がある。
【０１３４】
喘息は、気管支気道の発作性収縮を増強する様々な刺激に対する気管気管支樹の反応性の亢進を特徴とする疾患である。刺激は、ヒスタミン、好酸球性および好中球性走化因子、ロイコトリエン、プロスタグランジンおよび血小板活性化因子などをはじめとするＩｇＥ被覆マスト細胞から炎症の様々なメディエーターを放出させる。これらの因子が放出されると、炎症性損傷を引き起こす好塩基球、好酸球および好中球が補強される。
【０１３５】
アテローム性動脈硬化は、動脈（例えば、冠動脈、頚動脈、大動脈および腸骨動脈）の疾患である。基礎病変であるアテロームは、脂質のコアを有し線維性被膜を被覆している内膜内の隆起した限局性プラークからなる。アテロームは、動脈血流障害をもたらし、罹患した動脈を弱くする。心筋梗塞および脳梗塞は、この疾患の主たる結果である。マクロファージおよび白血球がアテロームに補強され、炎症性損傷の一因となる。
【０１３６】
関節リウマチは、主として関節が障害および破壊される慢性再発性炎症性疾患である。関節リウマチは、通常、最初に手および足の小関節を冒すが、その後、手首、肘、くるぶしおよび膝に及ぶことがある。関節炎は、滑膜細胞と循環から関節の滑膜裏層中に浸潤する白血球との相互作用に起因する。例えば、Ｐａｕｌ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（第３版、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、１９９３年）を参照されたい。
【０１３７】
本発明の化合物に関する別の適用は、ＶＬＡ−４が媒介している臓器または移植片拒絶の治療においてである。近年、皮膚、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓および骨髄などの組織および臓器を移植する外科手術法の有効性において著しい改善があった。恐らく、主要な問題は、移植した同種移植片または臓器に対する被移植者の免疫耐性を誘導する十分な薬剤が欠如していることである。同種細胞または臓器を宿主に移植する場合（すなわち、提供者と被提供者が同じ種の異なる個体である）、宿主免疫系が移植における外来抗原に対する免疫応答（宿主対移植片病）を引き起こし、移植組織が破壊される可能性がある。ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４細胞および単球はすべて移植組織の拒絶に関与する。α４インテグリンに結合する本発明の化合物は、とりわけ、被提供者における同種抗原誘発免疫応答を遮断し、それにより、そのような細胞が移植組織または臓器の破壊に関与することを防止するのに有用である。例えば、Ｐａｕｌら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ９巻、４２０〜４２５頁（１９９６年）、Ｇｅｏｒｃｚｙｎｓｋｉら、Ｉｍｍｕｎｏｌ．８７巻、５７３〜５８０頁（１９９６年）、Ｇｅｏｒｃｚｙｎｓｋｉら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．３巻、５５〜６１頁（１９９５年）、Ｙａｎｇら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６０巻、７１〜７６頁（１９９５年）、Ａｎｄｅｒｓｏｎら、ＡＰＭＩＳ  １０２巻、２３〜２７頁（１９９４年）を参照されたい。
【０１３８】
ＶＬＡ−４に結合する本発明の化合物に関する関連の使用は、「宿主対移植片」病（ＧＶＨＤ）に関連する免疫応答の変調においてである。例えば、Ｓｃｈｌｅｇｅｌら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５５巻、３８５６〜３８６５頁（１９９５年）を参照されたい。ＧＶＨＤは、免疫適格細胞が同種被移植者に移行した場合に起こる潜在的に致命的な疾患である。このような状況では、提供者の免疫適格細胞が被移植者の組織を攻撃する可能性がある。皮膚、腸上皮および肝臓の組織はしばしば標的となり、ＧＶＨＤの経過中に破壊される可能性がある。この疾患は、骨髄移植におけるように、免疫組織が移植されている場合に特に重大な問題であるが、心臓および肝臓移植などを含む他の症例の場合には、さほど重大でないＧＶＨＤも報告されている。本発明の治療薬は、とりわけ、提供者のＴ細胞の活性化を阻害し、それにより、宿主における標的細胞を溶解するそれらの能力を妨げるのに用いられる。
【０１３９】
本発明の化合物のさらなる使用は、腫瘍転移を阻害することである。いくつかの腫瘍細胞がＶＬＡ−４を発現すると報告されており、また、ＶＬＡ−４を結合する化合物が内皮細胞へのかかる細胞の接着を阻害することが報告されている。Ｓｔｅｉｎｂａｃｋら、Ｕｒｏｌ．Ｒｅｓ．２３巻、１７５〜８３頁（１９９５年）、Ｏｒｏｓｚら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ、６０巻、８６７〜７１頁（１９９５年）、Ｆｒｅｅｄｍａｎら、Ｌｅｕｋ．Ｌｙｍｐｈｏｍａ、１３巻、４７〜５２頁（１９９４年）、Ｏｋａｈａｒａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５４巻、３２３３〜６頁（１９９４年）。
【０１４０】
所望の生物活性を有する化合物は、必要に応じて改変して、改良された薬理学的特性（例えば、インビボにおける安定性、バイオアベイラビリティ）などの所望の特性、または診断分野で検出され得る能力を提供することができる。安定性は、ペプチダーゼまたはヒト血漿もしくは血清と共にインキュベートする間にタンパク質の半減期を測定することによるなど、多様な方法でアッセイすることができる。このようなタンパク質安定性アッセイの多くはすでに記載されている（例えば、Ｖｅｒｈｏｅｆら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．、１９９０年、１５巻（２号）：８３〜９３頁を参照されたい）。
【０１４１】
本発明の化合物のさらなる使用は、多発性硬化症の治療においてである。多発性硬化症は、米国において２５０，０００〜３５０，０００人が罹患していると推定される進行性の神経学的自己免疫疾患である。多発性硬化症は、特定の白血球が神経線維を覆う絶縁鞘であるミエリンを攻撃し、その破壊を開始する、特異的自己免疫反応の結果であると考えられる。多発性硬化症の動物モデルにおいて、ＶＬＡ−４に対するマウスモノクローナル抗体は、内皮に対する白血球接着を阻害し、それにより、動物における中枢神経系の炎症とその後の麻痺を予防することが明らかになっている１６。
【０１４２】
本発明の薬剤組成物は、様々な薬物送達系で使用するために適している。本発明での使用に適している製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｍａｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ、第１７版（１９８５年）で確認することができる。
【０１４３】
患者に投与する量は、投与するもの、投与目的（例えば、予防または治療）、患者の状態、投与方法などによって変わる。治療用途では、組成物は、すでに疾患に罹患している患者に、その疾患およびその合併症の症状を治癒するか、少なくとも部分的に阻止するのに十分な量で投与される。これを達成するのに十分な量は、「治療有効量」として定義する。この用途での有効量は、治療する疾患状態、ならびに担当医の判断によって決まり、その判断は、炎症の重症度、患者の年齢、体重および一般的な状態などの要因による。本明細書で提示したような、適当な動物モデルデータを参照のこと。このようなデータに基づいてヒトに対する投与量を適切に評価する方法は、当技術分野で周知である（例えば、Ｗａｇｎｅｒ、Ｊ．Ｇ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ．ＴＥＣＨＮＯＭＩＣ，ＩＮＣ．，ＬＡＮＣＡＳＴＥＲ，ＰＡ  １９９３年を参照されたい）。
【０１４４】
患者に投与する組成物は、上記医薬組成物の形態である。これらの組成物は、通常の滅菌技術により滅菌され得るか、滅菌濾過され得る。得られた水溶液は、使用のためにそのまま包装され得るか、凍結乾燥することができる。凍結乾燥した調製物は、投与前に、無菌水性担体と配合する。
【０１４５】
本発明の化合物の治療投与量は、例えば、その治療を行う特定の用途、その化合物の投与方法、患者の健康状態、および製剤医の判断によって変わる。例えば、静脈内投与の場合、その用量は、典型的には、約２０μｇ〜約２０００μｇ／体重１ｋｇ、好ましくは約２０μｇ〜約５００μｇ／体重１ｋｇ、より好ましくは約１００μｇ〜約３００μｇ／体重１ｋｇの範囲である。鼻腔内投与に適当な投与量範囲は、一般に、約０．１ｐｇ〜１ｍｇ／体重１ｋｇである。有効用量は、インビトロまたは動物モデル試験系から導いた用量応答曲線から推定できる。
【０１４６】
本発明の化合物はまた、（本発明においてはα４β１およびα９β１が好ましいが）α６β１、α９β１、α４β７、αｄβ２、αｅβ７インテグリンに結合し得るか、その作用をアンタゴナイズし得る。したがって、本発明の化合物はまた、これらのインテグリンがそのそれぞれのリガンドに結合することによって生じる、症状、障害または疾患を予防または反転させるために有用である。
【０１４７】
例えば、国際公開第ＷＯ９８／５３８１７号（１９９８年１２月３日公開、その開示は、本明細書において引用によりその全体を援用するものとする）およびそこで引用されている参考文献は、α４β７が媒介している疾患を記載している。この参考文献はまた、ＶＣＡＭ−Ｉｇ融合タンパク質へのα４β７依存性結合の拮抗を決定するためのアッセイも記載している。
【０１４８】
さらに、αｄβ２およびαｅβ７インテグリンを結合する化合物は、喘息および関連する肺疾患の治療に特に有用である。例えば、Ｍ．Ｈ．Ｇｒａｙｓｏｎら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９８年、１８８巻（１１号）２１８７〜２１９１頁を参照のこと。αｅβ７インテグリンを結合する化合物はまた、全身性エリテマトーデス（例えば、Ｍ．Ｐａｎｇら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．１９９８年、４１巻（８号）、１４５６〜１４６３頁を参照のこと）；クローン病、潰瘍性大腸炎および炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（例えば、Ｄ．Ｅｌｅｗａｕｔら、Ｓｃａｎｄ  Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  １９９８年、３３巻（７号）７４３〜７４８頁を参照のこと）；シェーグレン症候群（例えば、Ｕ．Ｋｒｏｎｅｌｄら、Ｓｃａｎｄ  Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  １９９８年、２７巻（３号）、２１５〜２１８頁を参照のこと）；および関節リウマチ（例えば、Ｓｃａｎｄ  Ｊ．Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  １９９６年、４４巻（３号）、２９３〜２９８頁を参照のこと）の治療において有用である。また、α６β１を結合する化合物は、受精の阻止において有用であり得る（例えば、Ｈ．Ｃｈｅｎら、Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．１９９９年、６巻、１〜１０頁を参照のこと）。
【０１４９】
本発明の別の態様では、本明細書に記載の化合物および組成物は、血流から、例えば多発性硬化症の場合には中枢神経系への、あるいはミエリンの炎症誘発破壊をもたらす部分への免疫細胞移動を阻害するために用いることができる。好ましくは、これらの薬剤は、脱髄化を阻害し、さらに再有髄化を促進し得るように、免疫細胞移動を阻害する。これらの薬剤はまた、浸潤性免疫細胞が主にＣＮＳ中のミエリン鞘の展開に影響を及ぼす先天性代謝障害での中枢神経系の脱髄化を予防し、再有髄化を促進することができる。これらの薬剤は、脱髄疾患または状態により誘発される麻痺のある対象に投与すると、好ましくは麻痺を低減する。
【０１５０】
本明細書に記載した組成物、化合物および方法による治療に含まれる炎症性疾患には、通常、脱髄化に関連する状態が含まれる。組織学的には、ミエリン異常は、脱髄化または髄鞘発育不全化である。脱髄化は、ミエリンの破壊を伴う。髄鞘発育不全化は、乏突起神経膠細胞の機能障害により生じる不完全なミエリン形成または維持に関する。好ましくは、本明細書に記載の組成物および方法は、脱髄化に関する疾患および状態を治療し、再有髄化を促進することと考えられる。治療で考えられるさらなる疾患または状態には、髄膜炎、脳炎および脊髄損傷、および一般には炎症応答の結果として脱髄化を惹起する状態が含まれる。
【０１５１】
本明細書に記載の組成物、化合物および混合物は、脱髄化を伴う状態および疾患の治療における使用が考えられる。脱髄化を伴う疾患および状態には、これらに限定されるものではないが、多発性硬化症、先天性代謝障害（例えば、フェニルケトン尿症、テイ−サックス病、ニーマン−ピック病、ゴーシェ病、ハーラー症候群、クラッベ病および他の白質萎縮症）、異常な有髄化を伴う神経障害（例えば、ギランバレー、慢性免疫脱髄多発性神経障害（ＣＩＤＰ）、多病巣性ＣＩＤＰ、抗ＭＡＧ症候群、ＧＡＬＯＰ症候群、抗スルファチド抗体症候群、抗ＧＭ２抗体症候群、ＰＯＥＭＳ症候群、神経周囲炎、ＩｇＭ抗ＧＤ１ｂ抗体症候群）、薬物関連脱髄化（例えば、クロロキン、ＦＫ５０６、ペルヘキシリン、プロカインアミドおよびジメルジンにより誘発されるもの）、他の遺伝性脱髄状態（例えば、糖質欠如糖タンパク質、コケーン症候群、先天性ミエリン形成減少、先天性筋ジストロフィー、ファーバー病、マリネスコ−シェーグレン症候群、異染色性脳白質ジストロフィー、ペリツェウス−メルツバッヘル病、レフサム病、プリオン関連疾患、およびサラ病）、および他の脱髄症状（例えば、髄膜炎、脳炎または脊髄損傷）または疾患が含まれる。
【０１５２】
これらの疾患をインビボで研究するために使用可能な様々な疾患モデルが存在する。例えば、動物モデルには、これらに限定されるものではないが、以下のものが挙げられる：
【０１５３】
【表４−７】
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多発性硬化症
最も一般的な脱髄疾患は多発性硬化症であるが、多くの他の代謝障害および炎症障害も、不完全または異常な有髄化をもたらす。ＭＳは慢性の神経疾患であり、これは、成人期の初期に現れ、多くの症例では著しい障害まで進行する。米国だけでも、ＭＳは約３５０，０００症例存在する。外傷を除いて、ＭＳは、成人期の初期から中期における神経障害の最も多い原因である。
【０１５４】
ＭＳの原因は、まだ決定されてはいない。ＭＳは、慢性的な炎症、脱髄化およびグリオーシス（瘢痕化）を特徴とする。脱髄化は、軸索伝導に対してマイナスまたはプラスの効果をもたらし得る。プラスの伝導異常には、遅い軸索伝導、インパルスの高く、低くはない連続周波数の存在で生じる可変的な伝導ブロックまたは完全な伝導ブロックが含まれる。プラスの伝導異常には、異所性インパルスの発生、自発的または続く機械的ストレス、および脱髄化エキソン間の異常「クロストーク」が含まれる。
【０１５５】
ミエリンタンパク質に対して反応性のあるＴ細胞、ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）またはミエリンプロテオリピッドタンパク質（ＰＬＰ）は、実験用アレルギー性脳脊髄炎でＣＮＳ炎症を媒介することが確認されている。患者は、高いＣＮＳ免疫グロブリン（Ｉｇ）レベルを有することも観察された。さらに、ＭＳで観察された一部の組織損傷は、活性化Ｔ細胞、マクロファージまたは星状膠細胞のサイトカイン産物により媒介される可能性がある。
【０１５６】
今日では、ＭＳがあると診断された患者の８０％は、疾患の発症後２０年は生存している。ＭＳを管理する治療には、（１）急性悪化の治療を含む疾患経過の変更を目的とし、疾患の長期抑制を対象とする治療；（２）ＭＳの症状の治療；（３）医学的合併症の予防および治療、ならびに（４）二次的な個人的および社会的問題の管理が含まれる。
【０１５７】
ＭＳの発症は劇的であるか、患者が医学的注意を払わないような穏やかなものである。ほとんどの一般的な症状としては、四肢の１本または複数の衰弱、視神経炎による視覚的ぶれ、感覚障害、二重視および運動失調が挙げられる。疾患経過は、３種の一般的なカテゴリーに分類することができる：（１）再発性ＭＳ、（２）慢性進行性ＭＳ、および（３）非活動性ＭＳ。再発性ＭＳは、神経性機能障害の再発性発作を特徴とする。ＭＳ発作は、通常、数日から数週間にわたって展開し、続いて、完全か、部分的な回復があるか、回復はみられない。発作からの回復は、通常、症状のピークから数週間から数カ月以内にみられるが、稀には回復は、２年以上にわたって続くことがある。
【０１５８】
慢性進行性ＭＳは、安定または寛解期間を伴わず、徐々に進行して悪化する。この形態は、再発性ＭＳの先行病歴のある患者で発症するが、患者のうちの２０％では、再発は取り消される可能性はない。急性の再発も、進行性経過の間に起こることがある。
【０１５９】
第３の形態は、非活動性ＭＳである。非活動性ＭＳは、様々な程度の固定された神経欠損を特徴とする。非活動性ＭＳのある大部分の患者は、再発性ＭＳの早期病歴を有する。
【０１６０】
疾患経過は、患者の年齢によっても左右される。例えば、順調な予後因子には、初期発症（小児期を除く）、再発性経過および発症後５年でほとんど存在しない残存障害が含まれる。これに反して、不良な予後は、老年での発症（すなわち、４０歳以上）および進行性経過を伴う。これらの変動性は、相互に依存している。その理由は、慢性進行性ＭＳが、再発性ＭＳよりも遅い年齢で発症する傾向があるためである。慢性進行性ＭＳによる障害は通常、患者の進行性対麻痺または四肢麻痺（麻痺）による。本発明の一態様では、患者がこの疾患の再発段階よりも寛解段階にある場合に、患者を治療することが好ましい。
【０１６１】
副腎皮質ホルモンまたは経口コルチコステロイド（例えば、経口プレドニゾンまたは静脈内メチルプレドニゾロン）の短期使用が、ＭＳの急性の悪化がある患者を治療するための唯一の特定治療手段である。
【０１６２】
ＭＳのための比較的新しい治療としては、インターフェロンβ−１ｂ、インターフェロンβ−１ａおよびＣｏｐａｘｏｎｅ（登録商標）（以前はコポリマー１として知られていたもの）を使用する患者の治療が挙げられる。これら３種の薬剤は、疾患の再発速度を有意に遅くすることが確認されている。これらの薬剤は、筋肉内または皮下で自己投与される。
【０１６３】
しかし、現在の治療方法はいずれも、脱髄化を抑制せず、勿論、自発的に再有髄化を促進または可能にすることはないか、麻痺を低減することはない。本発明の一態様は、単独で、または他の標準的な治療方法と組み合わせて、本明細書に記載の薬剤で治療することを検討している。
【０１６４】
先天性代謝障害
先天性代謝障害には、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）および他のアミノ酸尿症、テイ−サックス病、ニーマン−ピック病、ゴーシェ病、ハーラー症候群、クラッベ病、および下記でさらに詳述するように発達中の鞘に強い影響を及ぼす他の白質萎縮症が含まれる。
【０１６５】
ＰＫＵは、酵素フェニルアラニンヒドロキシラーゼの欠乏により起こる代謝の遺伝的エラーである。この酵素が欠損すると、精神遅滞、臓器損傷、異常態度が生じ、母体ＰＫＵの場合には、妊娠がかなり危うくなり得る。ＰＫＵを研究するためのモデルは、マウスで発見されている。好ましくは、ＰＫＵと同定された乳児を、フェニルアラニン不含または低減食で育てる。本発明の態様は、かかる食事と本明細書に記載の化合物および組成物を組み合わせて、脱髄化を予防し、ＰＫＵにより損傷を受けた細胞を再有髄化することである。
【０１６６】
典型的なテイ−サックス病は、約６カ月齢の対象に現れ、結局は、５歳までには対象は死亡する。この疾患は、脳および神経細胞中の一定の脂肪物質の分解に必要な酵素ヘキソアミニダーゼＡ（ｈｅｘ  Ａ）の欠損による。この酵素が存在しないと、その物質が蓄積し、神経細胞の破壊が生じる。ｈｅｘ  Ａ酵素欠乏の他の形態は、さらに遅い年齢で起こり、ｈｅｘ  Ａ欠乏の若年性慢性および成人発症形態と呼ばれる。症状は、典型的なテイ−サックス病を特徴とする症状と同様である。さらに、酵素欠乏の成人発症形態もある。現在では、疾患／欠乏の療法または治療は存在せず、疾患に関して胎児を子宮内診断する予防的手段しかない。したがって、本明細書に記載の化合物および組成物は、このような患者における神経細胞の破壊を改善または予防するのに有用である。
【０１６７】
ニーマン−ピック病は、３つのカテゴリーに該当する：急性乳児形態があり、Ｂ型は、一般的でなく、慢性の非神経性形態であり、Ｃ型は、疾患の生化学的および遺伝的に明瞭な形態である。正常な個体では、細胞コレステロールは、処理のためにリソソームに移入され、その後、放出される。ニーマン−ピック病の罹患対象から採取された細胞は、リソソームからのコレステロールの放出が不完全であることが確認されている。これにより、リソソーム内部でのコレステロールの過剰な堆積が生じ、プロセッシングエラーが起こる。ＮＰＣ１は、他のタンパク質中のものと同様に既知のステロールセンシング領域を有することが発見されている。このことは、これが、コレステロール輸送を調節する際に役割を果たしていることを示唆している。ニーマン−ピックのＡ型およびＣ型については、有効な治療は同定されていない。Ｃ型では、患者は、低コレステロール食に従うように勧められる。したがって、本明細書に記載の化合物および組成物は、細胞の分解を改善または予防する際に有用である。
【０１６８】
ゴーシェ病は、遺伝子突然変異により起こる遺伝性疾患である。通常は、この遺伝子は、脂肪のグルコセレブロシドを分解するために身体が必要とするグルコセレブロシダーゼと呼ばれる酵素に関与している。ゴーシェ病の罹患患者は、身体がこの酵素を正確に産生することができず、脂肪を分解することができない。テイ−サックス病と同様に、ゴーシェ病は、東欧出身のユダヤ人の子孫（アシュケナージ）にかなり多いが、いかなる人種群の個人も冒される可能性がある。アシュケナージユダヤ人群において、ゴーシェ病は最も一般的な遺伝疾患であり、ほぼ４５０人に１人の発生率である。一般社会では、ゴーシェ病は、ほぼ１００，０００人に１人が罹患している。
【０１６９】
１９９１年に、ゴーシェ病に関する最初の有効な治療として、酵素代替療法が利用できるようになった。この治療は、静脈内投与されるグルコセレブロシダーゼ酵素の改変形態からなる。本明細書に記載の組成物および化合物を単独で、さらに好ましくはグリコセレブロシダーゼ投与と組み合わせて使用して、罹患対象の疾患を治療することができるものと考えられる。
【０１７０】
ムコ多糖症Ｉ型としても知られているハーラー症候群は、重複疾患のクラスである。これらの遺伝子疾患は、一般に、線維芽細胞中にムコ多糖類の細胞蓄積がある。これらの疾患は遺伝的に識別することができる。線維芽細胞および骨髄移植は有効ではないように思われるので、疾患の重度および進行を改善するのに有用な化合物および組成物が必要とされている。本明細書に記載の化合物および組成物を対象に投与して、疾患の進行および／または重度を改善することができる。
【０１７１】
クラッベ病（グロボイド細胞性ロイコジストロフィーとしても知られている）は、ミエリンの主要脂質成分を異化するリソソーム酵素であるガラクトシルセラミダーゼ（またはガラクトセレブロシダーゼ）欠損によって生じる常染色体劣勢疾患である。フランスでの発生率は、１５０，０００誕生数に対して１人と推定されている。この疾患は、中枢および末梢神経系の脱髄化をもたらす。発症は、通常、生後１年目の間に起こり、症状は速やかに進行するが、さらに変動的な進行速度の若年性、青年期または成人発症形態も報告されている。診断は、酵素アッセイから確定される（ガラクトシルセラミダーゼ欠損）。いくつかの天然動物モデルが存在する（マウス、イヌ、サル）。クラッベ病では、すべての白質ジストロフィーと同様に、治癒または有効な治療は知られていない。本発明の一実施形態は、クラッベ病および他の白質ジストロフィーを治療または改善するための本明細書に記載の組成物および化合物の使用である。
【０１７２】
白質ジストロフィーは、脳、脊髄および末梢神経を冒す、遺伝的に決定される進行性疾患群である。これらには、アドレノロイコシズトロフィー（ＡＬＤ）、副腎脊髄神経障害（ＡＭＮ）、エカルディ−ゴウチエ症候群、アレキサンダー病、ＣＡＣＨ（すなわち、中枢神経系ミエリン形成減少を伴う小児運動失調またはバニシング白質疾患）、ＣＡＤＡＳＩＬ（すなわち、皮質下梗塞および白質脳症を伴う脳常染色体優勢動脈症）、カナバン病（海綿状変性）、脳腱黄色腫症（ＣＴＸ）、クラッベ病（上述）、異染性白質ジストロフィー（ＭＬＤ）、新生児アドレノロイコジストロフィー、卵巣白質ジストロフィー（ｏｖａｒｉｏｌｅｕｋｏｄｙｓｔｒｏｐｈｙ）症候群、ペリツェウス−メルツバッヘル病（Ｘ連鎖痙性対麻痺）、レフサム病、ファン・デル・クナップ症候群（皮質下シストを伴う血管化（ｖａｃｕｌａｔｉｎｇ）白質ジストロフィー）、およびツェルウェガー症候群が含まれる。いずれの疾患も、有効な治療は勿論、治癒もない。したがって、本明細書に記載の組成物および化合物を使用することなどにより、これらの疾患の症状を治療または改善する手段が必要とされている。
【０１７３】
異常な有髄化を伴う神経障害
患者に脱髄化をもたらす様々な慢性免疫多発性神経障害が存在する。この症状を発症する年齢は、症状によって変わる。これらの疾患に対する標準的治療は存在し、本明細書に記載の組成物および化合物と組み合わせることができる。あるいは、本明細書に記載の組成物および化合物を単独で使用することもできる。既存の標準的治療としては、以下のものが挙げられる：
【０１７４】
【表５】
2009510097.tif 000021
薬剤および放射線誘発性脱髄化
一定の薬剤および放射線は、対象に脱髄化を誘発し得る。脱髄化の原因である薬剤は、これらに限定されるものではないが、クロロキン、ＦＫ５０６、ペルヘキシリン、プロカインアミドおよびジメルジンが挙げられる。
【０１７５】
放射線も、脱髄化を誘発し得る。放射線による中枢神経系（ＣＮＳ）毒性は、（１）血管構造に対するダメージ、（２）乏突起神経膠細胞−２星状膠細胞前駆体および成熟乏突起神経膠細胞の欠失、（３）海馬、小脳および皮質の神経幹細胞群の欠失およびサイトカイン発現の一般的変更により起こると考えられる。ほとんどの放射線ダメージは、特定のがん治療の際に行われる放射線療法により起こる。総説に関しては、Ｂｅｌｋａら、２００１年、Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ８５巻：１２３３〜９頁を参照されたい。しかし、放射線曝露は、宇宙飛行士に関する問題（Ｈｏｐｅｗｅｌｌ、１９９４年、Ａｄｖ．Ｓｐａｃｅ  Ｒｅｓ．１４巻：４３３〜４２頁）、ならびに放射性物質に曝露される事象での問題でもある。
【０１７６】
薬剤を受けたか、事故で、または意図的に放射線に曝露された患者に本明細書に記載の化合物または組成物のいずれかを投与することにより、脱髄化を予防するか、再有髄化を促進する有効性を享受する。
【０１７７】
脱髄に関する症状
脱髄化をもたらすさらなる遺伝性症候群／疾患としては、コケーン症候群、先天性ミエリン形成減少、ファーバー病、異染色性脳白質ジストロフィー、ペリツェウス−メルツバッヘル病、レフサム病、プリオン関連疾患およびサラ病が挙げられる。
【０１７８】
コケーン症候群（ＣＳ）は珍しい遺伝性疾患であり、それに罹患したヒトは、日光に過敏で、身長が低く、早発性老化が現れる。コケーン症候群の典型的な形態（Ｉ型）では、症状は進行性で、通常、１歳を過ぎると明らかになる。コケーン症候群の早期発症または先天性形態（ＩＩ型）は、誕生時に判明する。興味深いことに、他のＤＮＡ修復疾患とは異なり、コケーン症候群は、がんとの関連性はない。ＣＳは、体細胞および脳の重大な成長不良と、進行性悪液質、網膜、蝸牛および神経変性の両方と共に、がんの増加を伴うことなく、白質ジストロフィーおよび脱髄神経障害を起こす多重系疾患である。ＵＶ（例えば、日光）に曝露された後、コケーン症候群罹患対象は、転写カップリング修復をもはや行うことができない。コケーン症候群で欠失している２個の遺伝子のＣＳＡおよびＣＳＢは、これまでにすでに同定されている。ＣＳＡ遺伝子は染色体５に位置している。いずれの遺伝子も、転写機構の成分と、またＤＮＡ修復タンパク質と相互作用するタンパク質をコードする。
【０１７９】
これまでに、これらの疾患に罹患している患者に対する療法も、有効な治療も同定されていない。したがって、本発明の一態様は、本明細書に記載の化合物および組成物を用いるこの疾患の治療である。
【０１８０】
先天性ミエリン形成減少は、先天性脱髄神経障害、先天性ミエリン形成減少多発性神経障害、先天性ミエリン形成減少（オニオンバルブ）多発性神経障害、先天性ミエリン形成減少神経障害、ミエリン形成減少誘発性先天性神経障害、ミエリン形成減少神経障害、およびＣＨＮを含む複数の名称を有する。遺伝性末梢神経障害は、ヒトの大部分の一般的な遺伝性疾患のなかでも、複雑で、臨床的および遺伝的に異質な疾患群であり、これらは、末梢神経の進行性悪化をもたらす。先天性ミエリン形成減少は、疾患群の一つである。この群には、圧迫性麻痺に対する不安定性のある遺伝性神経障害、シャルコー−マリー−ツース病、デジェリーヌ−ソッタ病および先天性ミエリン形成減少神経障害が含まれる。これらのいずれの疾患に対する治癒または有効な治療法は知られていない。
【０１８１】
ファーバー病は、ファーバー脂肪肉芽腫症、セラミダーゼ欠乏症、酸性セラミダーゼ欠乏症、ＡＣ欠乏症、Ｎ−ラウリルスフィンゴシンデアシラーゼ欠乏症およびＮ−アシルスフィンゴシンアミドヒドロラーゼを含む複数の名称を有する。一定の名称からも明らかなように、この疾患は、酸性セラミダーゼ（Ｎ−アシルスフィンゴシンアミドヒドロラーゼ、ＡＳＡＨとしても知られている）の欠損により生じる。この酵素が欠損すると、ニューロンおよびグリア細胞中に非スルホン化酸性ムコ多糖類が蓄積する。この疾患の罹患患者は、通常、２歳前に死亡する。
【０１８２】
異染色性脳白質ジストロフィー（ＭＬＤ）は、酵素のアリールスルファターゼＡの欠損により起こる遺伝疾患である。これは、ミエリン鞘の成長に影響を及ぼす白質ジストロフィーと呼ばれる遺伝疾患群のなかの１種である。ＭＬＤの形態は３種ある：晩期乳児期、若年期および成人。最も一般的である晩期乳児期形態では、症状の発症は、６カ月から２歳の間に始まる。乳児は、通常、誕生時には正常であるが、場合によっては、予め得ている能力を喪失している。症状には、低血圧（低筋緊張）、言語異常、精神的能力の喪失、盲目、硬直（すなわち、制御できない筋肉の硬さ）、痙攣、嚥下障害、麻痺および認知症が含まれる。若年形態の症状は、４から１４歳の間に始まり、学校成績の障害、精神的な悪化、運動失調、発作および認知症が含まれる。成人形態では、１６歳以降に始まる症状には、集中障害、うつ病、精神医学的障害、運動失調、振戦および認知症が含まれ得る。発作は、成人形態で起こることがあるが、他の形態に比べると一般的ではない。３つの形態すべてで、精神的悪化が通常、最初の徴候である。
【０１８３】
ペリツェウス−メルツバッヘル病（周産期スダン好性白質ジストロフィーとしても知られている）は、プロテオリピッドタンパク質の異常をもたらすＸ連鎖遺伝障害である。この異常により、一般的には、１歳前に乳児が死亡する。この疾患に対する治療または治癒は知られていない。
【０１８４】
レフサム病（フィタン酸オキシダーゼ欠乏症、遺伝性多発神経炎性失調または遺伝性運動および感覚神経障害ＩＶ、ＨＭＳＮ  ＩＶとも呼ばれる）は、フィタノイル−ＣｏＡヒドロキシラーゼ（ＰＡＨＸまたはＰＨＹＨ）をコードする遺伝子の突然変異により起こる。主な臨床形態は、色素性網膜炎、慢性多発性神経障害および小脳徴候である。フィタン酸、異常な分枝鎖脂肪酸（３，７，１１，１５−テトラメチル−ヘキサデカン酸）が、この疾患の罹患患者の組織および体液中に蓄積し、ＰＡＨＸの欠損により代謝することができない。月に１回または２回行われる血漿交換により、身体からこの酸を有効に除去し、フィタン酸摂取を限定する食事制限から自由になる。
【０１８５】
プリオン関連疾患には、ゲルストマン−ストラウスラー病（ＧＳＤ）、クロイツフェルト−ヤコブ病（ＣＪＤ）、家族性致命的不眠症が含まれ、プリオンタンパク質の異常なアイソホームがこれらの疾患、さらに、クールーおよびスクレピー（ヒツジで発見された疾患）での感染性作用因子（ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  ａｇｅｎｔ）として作用し得る。プリオンという用語は、「タンパク質感染性作用因子」に由来する（Ｐｒｕｓｉｎｅｒ、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２１６巻：１３６〜４４頁、１９８２年）。不溶性筋原繊維に重合するアミロイド原性ペプチドをもたらすプリオン関連タンパク質（ＰＲＰ）のタンパク質分解がある。
【０１８６】
サラ病およびシアルリアス（ｓｉａｌｕｒｉａｓ）の他のタイプは、シアル酸貯蔵の問題に関与する疾患である。これらは、重度の乳児形態（すなわち、ＩＳＳＤ）またはフィンランドで流行している徐々に進行する成人形態（すなわち、サラ病）として現れ得る常染色体性劣性神経変性である。主な症状は、低血圧、小脳性運動失調および精神的遅延である。これらの症状および疾患もまた、一時的治療または改善治療について検討されている。
【０１８７】
脱髄化が生じる他の症状としては、感染後脳炎（急性散在性脳脊髄炎、ＡＤＥＭとしても知られている）、髄膜炎および脊髄損傷が挙げられる。本明細書に記載の組成物および化合物は、これら他の脱髄化疾患の治療で使用することも考えられる。
【０１８８】
以下の合成および生物学上の実施例は本発明を例示するために提供されており、いずれの場合にも、本発明の範囲を限定するものと解釈するものではない。特に明記しない限り、温度はすべて摂氏である。
【実施例】
【０１８９】
以下の実施例において、以下の略号は以下の意味を有する。略号が定義されていない場合、それは、一般的に認められている意味を有する。
Å＝オングストローム
ｂｒ  ｓ＝ブロード１重項
ＢＳＡ＝ウシ血清アルブミン
ｄ＝２重項
ｄｄ＝２重項の２重項
ｄｑ＝４重項の２重項
ｄｓｅｘｔｅｔ＝６重項の２重項
ＤＭＦ＝ジメチルホルムアミド
ＥＤＴＡ＝エチレンジアミン四酢酸
ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル
ＥＭ＝発光波長（ｎｍ）
ＥＸ＝励起波長（ｎｍ）
ｇ＝グラム
ＨＢＳＳ＝ハンクス平衡塩類溶液
ＨＥＰＥＳ＝４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸
ＨＰＬＣ＝高速液体クロマトグラフィー
ｈｒｓまたはｈ＝時間
ｉｎ．＝インチ
ｉ−ＰｒＯＨ＝イソプロパノール
ｋｇ＝キログラム
Ｌ＝リットル
ＬＣ／ＭＳ＝液体クロマトグラフィー／質量分光法
ｍ＝多重項
ｍ２＝平方メートル
Ｍ＝モル
ｍｂａｒ＝ミリバール
ｍｇ＝ミリグラム
ＭＨｚ＝メガヘルツ
ｍｉｎ．＝分
ｍＬ＝ミリリットル
ｍｍ＝ミリメートル
ｍＭ＝ミリモル
ｍｍｏｌ＝ミリモル
ｍＯｓｍ＝ミリオスモル
ｍ／ｚ＝質量対電荷比
Ｎ＝正常
ｎｇ＝ナノグラム
ｎｍ＝ナノメーター
ＮＭＲ＝核磁気共鳴
ＰＢＳ＝リン酸緩衝生理食塩水
ＰＢＳ＋＋＝カルシウムとマグネシウムを含むＰＢＳ
ｐｐｍ＝百万分率
ｐｓｉ＝１平方インチ当たりのポンド
ｑ＝４重項
Ｒｆ＝保持係数（物質から移動した距離／溶媒前端から移動した距離の比）
ｒｐｍ＝１分当たりの回転数
ｒｔ＝室温
ｓ＝１重項
ｔ＝３重項
ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン
ＴＬＣ＝薄層クロマトグラフィー
ＵＶ＝紫外線
ｗｔ／ｗｔ＝重量／重量の比
ｗ／ｖ＝重量／容積の比
μｇ＝マイクログラム
μｍ＝ミクロン
μＭ＝マイクロモル
一般法。フラッシュクロマトグラフィーは、８００ｇのＫＰ−Ｓｉｌシリカカートリッジを使用し、Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｆｌａｓｈ  ７５Ｌを用いて行った（３２〜６３μＭ、６０Å、５００〜５５０ｍ２／ｇ）。Ｒｆは、ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ  ６０  Ｆ（２５４）、順相用の２５０μＭ厚プレートを使用した分析用ＴＬＣについての報告である。ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ  Ｇｅｍｉｎｉ  ３００  ＭＨｚスペクトロメーター上に記録した（１Ｈスペクトルに関しては３００ＭＨｚ、１３Ｃのスペクトルに関しては７５ＭＨｚ）。分析用ＨＰＬＣは、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ、３μｍ、Ｃ−１８、３０×４．６ｍｍカラムを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｓｅｒｉｅｓ  ＨＰＬＣ上で行った。検出器は２１０ｎｍＵＶであった。溶媒は、水に溶解の０．１％ＴＦＡおよびアセトニトリルに溶解の０．１％ＴＦＡであった。標準流速は１．５ｍＬ／分であった。また、標準分析法では、２．３３分かけて２０％のＣＨ３ＣＮから７０％のＣＨ３ＣＮに溶媒勾配を変えた。第２の別法の流速は２ｍＬ／分であり、勾配は、１．７５分かけて２０％のＣＨ３ＣＮから７０％のＣＨ３ＣＮに変えた。第３の方法の流速は１．５ｍｌ／分であり、溶媒の組成は１０分かけて２０％のＣＨ３ＣＮから７０％のＣＨ３ＣＮに変化させ、２分間７０％で保持し、次いで１分間かけて９５％までランピングし、２分間９５％で保持した。ＬＣ／ＭＳは、（化学イオン化として他に特に示さない限り）エレクトロスプレーイオン化法を行う、Ｓｅｒｉｅｓ  １１００  ＭＳＤを備えたＡｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｓｅｒｉｅｓ  ＨＰＬＣで行った。カラムおよび条件は、フリースタンディングＨＰＬＣに合わせた。アミド類の１Ｈ  ＮＭＲは、一般的には回転異性体を示し、いくつかのピークの積分値はフラクショナルプロトン値で報告している。
【０１９０】
（実施例１）
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（フラン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンの調製。
【０１９１】
【化１２】
2009510097.tif 000022
ステップ１：Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステル２の調製。
【０１９２】
【化１３】
2009510097.tif 000023
ニトロピリミジン−カーバメート１（１６０．２５ｇ、０．３０３５ｍｏｌ；国際公開第０３／０９９８０９に記載のようにして調製）および５％のＰｄ／Ｃ（１５ｇ、Ｈ２Ｏと５０／５０ｗｔ／ｗｔ、Ｄｅｇｕｓｓａ  Ｅ  １０１  Ｒ／Ｗ）をＴＨＦ水溶液（１ＬのＴＨＦおよび５０ｍＬのＨ２Ｏ）に溶解した混合物を、室温で６０ｐｓｉの水素下で撹拌した。２２時間後、ＴＬＣ（シリカゲル上５０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサン）は生成物への１００％の変換を示した。この反応混合物をセライト充填材（２００ｍＬ）により濾過した。水素添加フラスコとセライト充填材を新しい無水ＴＨＦ（５００ｍＬ）ですすいだところ、緑色の濾液が得られた。濾液を真空で濃縮し、緑色〜黒色の粘着性油状物として粗生成物を得た。ロータリーエバボレーターをＮ２下で脱気し、新しい無水ＴＨＦ（６００ｍＬ）を加えた。溶液を真空で濃縮し、窒素下で脱気した。（新しい無水ＴＨＦに溶解する工程および濃縮工程は２回以上繰り返し、共沸的に残留水を除去した。）この物質は、見かけの空気感受性によりステップ２で直ちに用いる。所望の生成物に関する［Ｍ＋１］＋についてはｍ／ｚ＝４９９．５。
【０１９３】
ステップ２：Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−トリフルオロアセチルアミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステル３の調製。
【０１９４】
【化１４】
2009510097.tif 000024
ステップ１の粗製アミノピリミジンカーバメート２を６００ｍＬの無水ＴＨＦに溶解した。この溶液を窒素下で０℃まで冷却した。トリフルオロ酢酸無水物（４５．５ｍＬ、１．５１ｇ／ｍＬ、３２７．３ｍｍｏｌ）を４５分間かけてシリンジポンプを通し、その冷却したアミン溶液にゆっくりと加えた。溶液を室温まで加温し、一晩撹拌した。ＴＬＣ（ヘキサン中４０％ＥｔＯＡｃ、シリカゲル）が、反応が本質的に完了していることを示した。ＬＣ／ＭＳ分析により反応が確認され、また出発物質は全く示さなかった。酢酸エチル（１．４Ｌ）で反応物を希釈し、水（４００ｍＬ）と飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（７００ｍＬ、０℃）の混合物で洗浄した。有機溶液をブライン（７００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４（１０５ｇ）で乾燥したところ、黄褐色の溶液が得られた。乾燥した溶液をシリカゲル（４００ｍＬ）充填材により濾過し、緑色〜灰色の溶液を得た。（黄褐色の有色不純物がシリカゲル上に残った。）シリカゲルをＥｔＯＡｃ（４００ｍＬ）ですすいだ。濾液溶液を真空で濃縮し、窒素下でフラスコを脱気し、酸素への曝露を最小限にした。無水トルエン（６００ｍＬ）を加えた。溶液を真空で濃縮し、無水トルエン（４００ｍＬ）から２回共沸したところ、緑色〜黒色の粘着性油状物が得られた。フラスコをＮ２下で脱気した。［Ｍ＋１］＋に関してｍ／ｚ＝５９５．５であるこの粗生成物は、ステップ３に用いた。
【０１９５】
ステップ３：Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−トリフルオロアセチルアミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステル４の調製。
【０１９６】
【化１５】
2009510097.tif 000025
ステップ２の粗製トリフルオロアセトアミドピリミジンカーバメート３をＤＭＦ（３５０ｍＬ）に溶解した。固体の無水炭酸カリウム（７９．６ｇ、５７５．７ｍｍｏｌ；乳鉢および乳棒で微粉末に粉砕化し、次いで、一晩かけて２８ｉｎ．のＨｇ真空下で１１０℃の真空オーブンに入れたもの）を加えた。ヨウ化エチル（４６．５ｍＬ、８９．８ｇ、５７５．７ｍｍｏｌ）を室温で素早く加えた。反応フラスコにキャップをきつく締め、スラリーを激しく撹拌した。室温で２０時間撹拌した後、反応物をサンプリングした（ＴＬＣ、ＬＣ／ＭＳ）。完全に反応させるため、さらに１８時間その反応物を撹拌した。再度その反応物をサンプリングし、簡単な一連の検査を行った。ＴＬＣ分析は、出発物質が消費されたことを示した。反応物を２．７Ｌの酢酸エチルで希釈し、激しく撹拌した。スラリーをワットマン＃１の濾紙により濾過し、固体Ｋ２ＣＯ３を除去した。この有機溶液を６Ｌ容の分液漏斗に入れた。水（２．５Ｌ）を加え、激しく混合した。これらの層は時間をかけて分離し、次いで、ブライン（２００ｍＬ）を加え、エマルジョンを壊した。有機層を別の１Ｌの水、次いで２Ｌのブラインで洗浄した。
【０１９７】
有機層をＭｇＳＯ４（５０ｇ）およびＮａ２ＳＯ４（２００ｇ）で乾燥した。乾燥した有機溶液をシリカゲル（７００ｍＬ）のプラグを通して濾過したところ、濃黄緑色〜黄褐色の曇った色の溶液が得られた。（紫／赤色のベースライン不純物は除去した。）シリカゲルをＥｔＯＡｃ（８００ｍＬ）ですすいだ。有機溶液を濃縮したところ、濃黄緑色の固体を得た（１９４．３ｇ、１０３％粗製）。ヘキサン（３００ｍＬ）を加えた。フラスコの側面を金属スパチュラでこすり取り固体生成物をはずし、そのフラスコに磁気撹拌棒を加えた。混合物は、固体状の塊が分解するまで３０分間ゆっくりと撹拌し、次いで微細スラリーが生じるまで３０分間素早く撹拌した。スラリーをワットマン＃１濾紙により濾過し、ヘキサン（１．２Ｌ）で沈殿物をすすぎ、白色固体を得た（１４１ｇ、７４％収率、ＬＣ／ＭＳにおいて純度９２％）。この濾液を濃縮したところ、緑色〜黄褐色のゴム状物（３３．３ｇ）が得られ、これをＴＬＣ分析すると一部の所望の生成物が含まれていた。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：７．８０（見かけｄ，１Ｈ），７．１８（見かけｄ，ＡＡ’ＸＸ’，２Ｈ），７．０３（見かけｄｄ，ＡＡ’ＸＸ’，２Ｈ），５．００（見かけｄ，１Ｈ），４．８０（見かけｄｑ，１Ｈ），３．９５（見かけｄ六重線，１Ｈ），３．４−３．７（ｍ，８．５Ｈ），３．０−３．３（ｍ，３Ｈ），２．７８（六重線，０．７Ｈ），１．９３（ＡＡ’ＢＢ’，４Ｈ），１．３８（見かけｄ，９Ｈ），１．２４−１．０５（ｍ，９Ｈ）．１Ｈ  ＮＭＲは、ほとんどのピークのダブリングにより明らかなように回転異性体を示す。
１３ＣＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，７５ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１６６．５，１６６．３，１５５．６，１５２．７，１５０．９，１４６．０，１４５．９，１２８．７，１２８．３，１２５．４４，１２５．３９，１１７．１８，７７．６６，（７２．８２，７２．２８，７１．９７−ＣＤＣｌ３），５０．２３，４９．７４，４１．７２，４１．６４，４０．１６，３９．９０，３７．２８，３２．６０，３２．４４，２３．２４，２３．１７，２１．０５，２０．２３，８．５０，８．４７，７．３２。
【０１９８】
ステップ４：Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチルアミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステル５の調製。
【０１９９】
【化１６】
2009510097.tif 000026
トリフルオロアセトアミド４（１４０ｇ）をメタノール（１．６Ｌ）中に懸濁／溶解した。炭酸カリウム（７％  Ｋ２ＣＯ３）（４８０ｍＬ）の水溶液を加えた。（トリフルオロアセトアミドが部分的に沈殿しゲル形成した。）反応フラスコを５５℃の水浴中へ下げた。その溶液をＴＬＣでモニターしながら５５℃で９時間かけて混合した。１．２Ｌのメタノールが回収されるまで、この反応物を真空で十分に注意しながら濃縮した。この溶液を水（２００ｍＬ）およびブライン（６００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃ（２Ｌ）で抽出し、オレンジ色の溶液を得た。ＥｔＯＡｃ層を水（１Ｌ）で、次にブライン（４００ｍＬ）で洗浄した。水層／洗浄水の３つの各部分を単一のＥｔＯＡｃ（１Ｌ）で連続する順番で逆抽出し、鮮やかな黄色の溶液を得た。この有機抽出物を合わせ、ＭｇＳＯ４（１２６ｇ）で乾燥した。乾燥した有機溶液を塩基性アルミナ（３００ｍＬ）の充填材により濾過し、真空で濃縮し、茶色のゴム状物を得た。６００ｍＬのトルエンから共沸した後に、赤みがかった固体（１１７．１ｇ）が得られた。
【０２００】
ステップ５：Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（フラン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステル６の調製。
【０２０１】
【化１７】
2009510097.tif 000027
アミノ−ピリミジン５（１１７．１ｇ、２２２．２ｍｍｏｌ）を無水ＴＨＦ（１．５Ｌ）に溶解した。ヒューニッヒ塩基、ジイソプロピルエチルアミン（１１５ｍＬ、３当量、６６６．６ｍｍｏｌ）を加えた。溶液をＮ２下で０℃に冷却した。反応フラスコに均圧添加漏斗を取り付け、その添加漏斗をＴＨＦ（９０ｍＬ）に溶解した３−フロイルクロリドの溶液で満たした（３２ｇ；Ｙａｍａｍｏｔｏ  ＆  Ｍａｒｕｏｋａ；Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．、１９８１年、１０３巻、６１３３〜６１３６頁）。塩化フロイル溶液を２時間かけて冷却したアミン溶液にゆっくりと加えた。反応物をゆっくりと室温まで戻し、３６時間撹拌した。反応物をＥｔＯＡｃ（２Ｌ）で希釈し、０．２Ｎのクエン酸で２回（１．２Ｌおよび１．０Ｌ）、ブラインで１回（１．８Ｌ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液で１回（１．３Ｌ）洗浄した。鮮やかなオレンジ〜ピンク色の有機溶液をＮａ２ＳＯ４（２５０ｇ）およびＭｇＳＯ４（５１ｇ）で乾燥した。その溶液をシリカゲル（１Ｌ）充填材により濾過し、フラスコおよびシリカをＥｔＯＡｃ（１Ｌ）ですすいだ。その溶液を真空で濃縮した。蒸発工程中に、白色固体が結晶化した。溶液が完全に濃縮されたとき、オレンジ色、ピンク色および白色の固体が得られた。エーテル（４００ｍＬ）およびヘキサン（５００ｍＬ）を加えた。スラリーを完全に混合し、ワットマン＃１濾紙で濾過したところ、桃色〜ピンク色の固体と鮮やかな赤色の濾液が得られた。沈殿物をヘキサン（５００ｍＬ）、エーテル（８００ｍＬ）、再度ヘキサン（４００ｍＬ）ですすぎ、薄い桃色〜オレンジ色の固体を得た。濾液および洗浄液を合わせ、濃縮し、後で使用するために取り置いた。固体を２８  ｉｎ．のＨｇの真空（４９Ｔｏｒｒ）下で２日間６０℃にて真空オーブン中で乾燥させたところ、１００．０ｇが得られた。ＬＣ／ＭＳでは、固体の純度は９２％であった。この粗製エステル６を、３ＬのＣＨ２Ｃｌ２を充填したスラリー状の２Ｌ（１ｋｇ）のシリカゲルクロマトグラフィーにかけた。桃色の生成物エステルがＣＨ２Ｃｌ２（２００ｍＬ）中に溶解され、２Ｌのシリカカラムにアプライした。カラムをＣＨ２Ｃｌ２（３Ｌ）、ヘキサンに溶解した５０％のＥｔＯＡｃ（４Ｌ）、ヘキサンに溶解した７５％のＥｔＯＡｃ（４Ｌ）で溶出した。数分以内に、所望の生成物エステルが複数のＥｔＯＡｃ−ヘキサン分画から結晶化し始めた。ＴＬＣにより純粋であることが明らかであった分画を濃縮したところ、白色固体が得られた（８２．５ｇ、純度＞９９％（ＬＣ／ＭＳによる））。この純粋な物質は、最終の脱保護工程に用いた。ＴＬＣにより混入されていることが明らかであった分画は、オリジナルの濾液／ヘキサンおよびエーテル洗浄液から得た残渣と合わせた。この物質を上述の方法と同様にしてフラッシュクロマトグラフィーにかけたところ、わずかに桃色の固体が得られた（１３．２ｇ；［Ｍ＋１］＋に関してｍ／ｚ＝６２１．５）。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：７．５８（見かけｄ，１Ｈ），７．３５−６．９０（見かけＡＢＡＢＸと重複，６Ｈ），６．４５（見かけｄ，１Ｈ），５．２５（見かけｄ，１Ｈ），４．８５（見かけｄｑ，１Ｈ），４．０５（見かけ八重線，１Ｈ），３．７−３．４（ｍ，８Ｈ），３．０−３．３（ｍ，２．５Ｈ），２．９０（六重線，０．５Ｈ），１．９３（ＡＡ’ＢＢ’，４Ｈ），１．３８（見かけｄ，９Ｈ），１．２４−１．０５（ｍ，９Ｈ）．１Ｈ  ＮＭＲは、ほとんどのピークの合わせによって明らかなように、回転異性体を示す。
【０２０２】
ステップ６：Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（フラン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンの調製。
【０２０３】
ステップ５のｔ−ブチルエステル６（８２．５ｇ、１３２．７ｍｍｏｌ）に、ギ酸（２Ｌ）を添加した。得られた溶液を一晩５０℃に加熱した。ＴＬＣによる分析で反応が完全であることが確認され、その溶液を真空で濃縮した。水（約２００ｍＬ）を粗生成物に加え、混合物を濃縮乾固した。さらに水を１５０ｍＬ加え、粗生成物を再び真空で濃縮した。粗製白色固体生成物をｉＰｒＯＨから濃縮し、無水ＴＨＦから２回濃縮し、次いで、４５℃、３５〜４０ｍｂａｒ（２６〜３０Ｔｏｒｒ）のロータリーエバポレーターで一晩乾燥させ、９０ｇの白色固体を得た。ＬＣ／ＭＳでは、粗生成物の純度が９７．７％であった。
１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，３００ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：７．６５（ｓ，０．５５Ｈ），７．４５（ｓ，０．４５Ｈ），７．３８（ｍ，２Ｈ），７．２５（ｄ，１．３Ｈ），７．１８（ｄ，１Ｈ），７．０５（ｄ，１．２Ｈ），６．９０（ｄ，１Ｈ），６．５５（ｓ，０．５５Ｈ），６．２２（広幅ｓ，０．４５Ｈ），４．９−４．８残存溶媒ピークが試料と重なっている，４．１０（見かけ七重線，１．１Ｈ），３．７（ｍ，３．３Ｈ），３．５８（ｍ，７Ｈ），３．４５−２．９（ｍ，６Ｈ），２．７８（見かけ六重線，０．７Ｈ），１．９０（ＡＡ’ＢＢ’，４．５Ｈ），１．８５（ｍ，３．１６Ｈ），１．２３−１．０（ｍ，１０．３Ｈ）。
１３ＣＮＭＲ（ＣＤ３ＯＤ，７５ＭＨｚ）δ，ｐｐｍ：１６９．６，１６９．２，１６０．８，１５３．９，１５３．６１４８．８，１４５．８，１４５．２，１４５．１，１４０．７，１４０．５，１３８．０，１３７．９，１３０．３，１３０．２，１２４．７，１２４．６，１１６．５，１１６．４，１１６．２，１１６．１，１０６．９，１０６．６，１０５．１，１０５．０，６２．４，５０．７，５０．１，４１．０，３７．９，３７．２，３０．５，２０．２，２０．０，１９．４，６．９，６．８，６．１，５．９。
【０２０４】
以下の実施例２〜７は、実施例１と同様に調製した。
【０２０５】
（実施例２）
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチル−２，２，２−トリフルオロアセトアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボキシロイルオキシ）フェニル）プロパン酸の調製
【０２０６】
【化１８】
2009510097.tif 000028
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ１．０３（１．５Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），１．１０−１．２８（７．５Ｈ，ｍ），１．９８（４Ｈ，ｍ），２．６７−２．８５（０．５Ｈ，ｍ），２．９０−３．０５（０．５Ｈ，ｍ），３．０５−３．３８（２Ｈ，ｍ，ＣＤ３ＯＤと重複），３．４１（２Ｈ，ｍ），３．５８（６Ｈ，ｍ），３．９０−４．１１（１Ｈ，ｍ），４．８５−４．９０（１Ｈ，ＣＤ３ＯＤと重複），７．０２（２Ｈ，ｍ），７．２６（２Ｈ，ｍ），７．６６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．７Ｈｚ）
ＨＰＬＣ／ＭＳ：ＭＨ＋＝５６７．１。
【０２０７】
（実施例３）
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（チエン−２−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンの調製
ステップ１：
【０２０８】
【化１９】
2009510097.tif 000029
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．０９−１．１７（３Ｈ，ｍ），１．２３−１．２６（３Ｈ，ｍ），１．４７（１２Ｈ，ｍ），１．８７−１．９９（４Ｈ，ｍ），２．８０（０．４Ｈ，ｂｒｓ），３．１０（１．６Ｈ，ｍ），３．２０（１Ｈ，ｍ），３．４４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．５４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ），３．８８−４．１５（３Ｈ，ｍ），４．８０−４．８５（１Ｈ，ｍ），６．４８（０．６Ｈ，ｂｒｓ），６．７５（０．４Ｈ，ｓ），６．６９−７．０８（５Ｈ，ｍ），７．４１（１Ｈ，ｓ），７．５０（１Ｈ，ｓ），７．７８（０．４Ｈ，ｂｒｓ），７．８５（０．６Ｈ，ｂｒｓ）
ＨＰＬＣ／ＭＳ：ＭＨ＋＝６３７．２。
【０２０９】
ステップ２：
【０２１０】
【化２０】
2009510097.tif 000030
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．９０（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．９Ｈｚ），１．１０−１．３０（６Ｈ，ｍ），１．８５−１．９４（４Ｈ，ｍ），２．８５−３．２４（２．４Ｈ，ｍ），３．３５（８．６Ｈ，ｍ），４．００−４．１５（１Ｈ，ｍ），４．５５（０．４Ｈ，ｂｒｓ），４．７３（０．６Ｈ，ｂｒｓ），５．８５（０．６Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．７Ｈｚ），５．８７（０．４Ｈ，ｂｒｓ），６．６０−７．１２（５．４Ｈ，ｍ），７．３９（１Ｈ，ｍ），７．６０−７．６８（１．６Ｈ，ｍ）
ＨＰＬＣ／ＭＳ：ＭＨ＋＝５８１．２。
【０２１１】
（実施例４）
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（チエン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンの調製
ステップ１：
【０２１２】
【化２１】
2009510097.tif 000031
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．０７−１．２７（９Ｈ，ｍ），１．４０（９Ｈ，ｓ），１．９０（４Ｈ，ｍ），３．０５−３．２４（３Ｈ，ｍ），３．４３−３．６４（８Ｈ，ｍ），４．７３−４．９５（１Ｈ，ｍ），５．２２（１Ｈ，ｍ），６．９５−７．１４（７Ｈ，ｍ），７．４１（０．４Ｈ，ｓ），７．５０（０．６Ｈ，ｓ）
ＨＰＬＣ／ＭＳ：ＭＨ＋＝６３７．２。
【０２１３】
ステップ２：
【０２１４】
【化２２】
2009510097.tif 000032
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３），δ０．７０−１．４（９Ｈ，ｍ），１．８１−２．０８（４Ｈ，ｍ），２．６２−４．１０（１２Ｈ，ｍ），４．９５（１Ｈ，ｂｒｓ），６．９０−８．０７（８Ｈ，ｍ）
ＨＰＬＣ／ＭＳ：ＭＨ＋＝５８１．２。
【０２１５】
（実施例５）
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（フラン−２−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンの調製
ステップ１：
【０２１６】
【化２３】
2009510097.tif 000033
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．１５−１．２８（９Ｈ，ｍ），１．３７（３．６Ｈ，ｓ），１．４２（５．４Ｈ，ｓ），１．９３−２．０５（４Ｈ，ｍ），２．８５−３．１５（２Ｈ，ｍ），３．１９−３．３５（１Ｈ，ｍ），３．４５−３．７５（８Ｈ，ｍ），３．９０−４．１５（１Ｈ，ｍ），４．７６−４．８５（０．４Ｈ，ｍ），４．９０−５．００（０．６Ｈ，ｍ），５．１５−５．２２（１Ｈ，ｍ），６．２０−６．４０（２Ｈ，ｍ），６．９１−７．１８（４Ｈ，ｍ），７．３９（１Ｈ，ｓ），７．５８（０．４Ｈ，ｓ），７．６５（０．６Ｈ，ｓ）
ＨＰＬＣ／ＭＳ：ＭＨ＋＝６２１．３。
【０２１７】
ステップ２：
【０２１８】
【化２４】
2009510097.tif 000034
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ０．８４−１．２５（９Ｈ，ｍ），１．８５−１．９２（４Ｈ，ｍ），２．７０−２．８１（０．５Ｈ，ｍ），２．９２−３．３０（２．５Ｈ，ｍ，ＣＤ３ＯＤと重複），３．３０−３．３８（２Ｈ，ｍ），３．４５−３．５９（６Ｈ，ｍ），４．０４−４．１２（１Ｈ，ｍ），４．８０−４．８９（１Ｈ，ＣＤ３ＯＤと重複），６．１８（１Ｈ，ｍ），６．５８（０．５Ｈ，ｂｒｓ），６．７８（０．５Ｈ，ｂｒｓ），６．８３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），６．９２（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．０６（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．１９（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．１Ｈｚ），７．３８（０．５Ｈ，ｂｒｓ），７．４４（０．５Ｈ，ｓ），７．４７（０．５Ｈ，ｂｒｓ），７．４８（０．５Ｈ，ｓ）
ＨＰＬＣ／ＭＳ：ＭＨ＋＝５６５．２。
【０２１９】
（実施例６）
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（ｔ−ブチルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンの調製
ステップ１：
【０２２０】
【化２５】
2009510097.tif 000035
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．０４−１．１１（１８Ｈ，ｍ），１．４０（４．５Ｈ，ｓ），１．４２（４．５Ｈ，ｓ），１．９６（４Ｈ，ｍ），２．４６−２．５９（０．５Ｈ，ｍ），２．７２−２．８５（０．５Ｈ，ｍ），３．００−３．３２（２Ｈ，ｍ），３．４５−３．６２（８Ｈ，ｍ），３．８２−４．１５（１Ｈ，ｍ），４．８２−４．９３（１Ｈ，ｍ），５．０５（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），５．１５（０．５Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．０８−７．１８（４Ｈ，ｍ），７．６７（１Ｈ，ｓ）
ＨＰＬＣ／ＭＳ：ＭＨ＋＝６１１．３。
【０２２１】
ステップ２：
【０２２２】
【化２６】
2009510097.tif 000036
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ０．８６−１．２０（１８Ｈ，ｍ），１．８７（４Ｈ，ｍ），２．３２−２．４５（０．５Ｈ，ｍ），２．５６−２．６８（０．６Ｈ，ｍ），３．０５−３．２０（２Ｈ，ｍ），３．２９−３．３８（２Ｈ，ｍ），３．４３−３．５２（６Ｈ，ｍ），３．８−３．９９（１Ｈ，ｍ），４．７５−４．８２（１Ｈ，ＣＤ３ＯＤと重複），６．９０（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．１５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝９．０Ｈｚ），７．４３（１Ｈ，ｓ）
ＨＰＬＣ／ＭＳ：ＭＨ＋＝５５５．２。
【０２２３】
（実施例７）
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（イソ−プロピルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンの調製
ステップ１：
【０２２４】
【化２７】
2009510097.tif 000037
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ０．９０−１．２１（１５Ｈ，ｍ），１．３８（９Ｈ，ｓ），１．９２（４Ｈ，ｍ），２．２８−２．５０（１Ｈ，ｍ），２．８０−３．１６（３Ｈ，ｍ），３．４１−３．７０（８Ｈ，ｍ），３．８０−３．９５（１Ｈ，ｍ），４．７１−４．８５（１Ｈ，ｍ），５．０５−５．１１（１Ｈ，ｍ），７．００−７．０８（２Ｈ，ｍ），７．０８−７．１６（２Ｈ，ｍ），７．６５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ）
ＨＰＬＣ／ＭＳ：ＭＨ＋＝５９７．３。
【０２２５】
ステップ２：
【０２２６】
【化２８】
2009510097.tif 000038
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）δ０．８０−０．９８（９Ｈ，ｍ），１．１５−１．１９（６Ｈ，ｍ），１．８８（４Ｈ，ｍ），２．２０−２．４２（１Ｈ，ｍ），２．６５−２．８３（１Ｈ，ｍ），３．０８−３．２５（２Ｈ，ｍ），３．２６−３．５９（８Ｈ，ｍ），３．８８−３．９７（１Ｈ，ｍ），４．７０−５．０５（１Ｈ，ＣＤ３ＯＤと重複），６．９２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），７．１７（２Ｈ，ｍ），７．６３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．０Ｈｚ）
ＨＰＬＣ／ＭＳ：ＭＨ＋＝５４１．３。
【０２２７】
（実施例８）
ピリミジニル尿素を調製するための一般法。
【０２２８】
ステップ１：
【０２２９】
【化２９】
2009510097.tif 000039
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチルアミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．４３６ｇ、０．８３ｍｍｏｌ）をＣＨ２Ｃｌ２（０．３５ｍＬ）および飽和ＮａＨＣＯ３（０．７ｍＬ）に溶解した。溶液を０度まで冷却し、１０分間激しく撹拌した。１０分後、撹拌を止め、非混和層を分離させた。ホスゲン（０．５２ｍＬ、４．９７ｍｍｏｌ）を、シリンジを通して底部層に加えた。反応混合物を３時間Ｎ２下で撹拌した。終了後、有機層を分離し、室温で真空にて濃縮した。これをＥｔＯＡｃに再溶解し、脱イオン水で洗浄し、２回逆抽出した。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、真空で濃縮した。この粗製油状物は、精製を行うことなく次工程に用いた。
ＨＰＬＣ／ＭＳ：ＭＨ＋＝５８９．０。
【０２３０】
ステップ２：
【０２３１】
【化３０】
2009510097.tif 000040
粗製塩化カルバミル（１当量）およびアミン（５当量）をＴＨＦ（０．２Ｍ）に溶解し、Ｎ２下で一晩撹拌した。反応混合物を真空で濃縮し、酢酸エチル中で再溶解した。有機層を水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、真空で濃縮した。生成物をＨＰＬＣにより精製した。生成物は、４０℃にて溶媒としてのＨＣＯＯＨで一晩処理した。減圧下で溶媒を除去し、生成物を得た。
【０２３２】
実施例９〜１１は、実施例８に従って調製した。
【０２３３】
（実施例９）
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（ピペリジン−１−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンの調製
【０２３４】
【化３１】
2009510097.tif 000041
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．０１（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），１．２２（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝７Ｈｚ），１．３６（４Ｈ，ｍ），１．４９（２Ｈ，ｍ），１．９５（４Ｈ，ｍ），３．１０−３．６６（１６Ｈ，ｍ），４．８６−４．９２（１Ｈ，ｍ），６．７５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），７．２５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．１４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．６４（１Ｈ，ｓ）。
ＨＰＬＣ／ＭＳ：ＭＨ＋＝５８２．３。
【０２３５】
（実施例１０）
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（Ｎ−エチル−Ｎ−イソ−プロピルアミノカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンの調製
【０２３６】
【化３２】
2009510097.tif 000042
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．０１（９Ｈ，ｂｒｓ），１．２１（９Ｈ，ｍ），１．９０−１．９９（４Ｈ，ｍ），２．９８（２Ｈ，ｍ），３．１５（３Ｈ，ｍ），３．３３（１Ｈ，ｍ），３．４５（２Ｈ，ｍ），３．５２−３．６０（６Ｈ，ｍ），３．７６（１Ｈ，ｍ），４．９１−４．９７（１Ｈ，ｂｒｓ），６．６４（１Ｈ，ｂｒｓ），７．０４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．１４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．６６（１Ｈ，ｓ）。
ＨＰＬＣ／ＭＳ：ＭＨ＋＝５８４．４。
【０２３７】
（実施例１１）
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（３−チアピロリジン−１−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニンの調製
【０２３８】
【化３３】
2009510097.tif 000043
１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ１．０３（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．２１（６Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．６Ｈｚ），１．９０−１．９９（４Ｈ，ｍ），２．８４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６Ｈｚ），３．０９−３．６３（１４Ｈ，ｍ），４．０６−４．１４（２Ｈ，ｑ，Ｊ＝７．８Ｈｚ），４．９１−４．９７（１Ｈ，ｍ），６．６４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝７Ｈｚ），７．０４（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．１３（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ），７．７５（１Ｈ，ｓ）。
ＨＰＬＣ／ＭＳ：ＭＨ＋＝５８６．２。
【０２３９】
（実施例Ａ）
α４β１インテグリン接着アッセイ：ヒト血漿フィブロネクチンに対するＪｕｒｋａｔ（商標）細胞接着
手順
９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔａｒ  ３５９０  ＥＩＡプレート）を、１０μｇ／ｍＬの濃度で４℃のヒトフィブロネクチン（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ、カタログ番号３３０１６−０２３）で一晩コートした。次いで、このプレートを、生理食塩水中のウシ血清アルブミン（ＢＳＡ；０．３％）の溶液でブロックした。Ｊｕｒｋａｔ（商標）細胞（対数期増殖で維持したもの）を、製造業者の指示書に従ってＣａｌｃｅｉｎ  ＡＭで標識し、Ｈｅｐｅｓ／生理食塩水／ＢＳＡ中で２×１０６細胞／ｍＬの濃度に懸濁した。次いで、細胞を、室温で３０分間、試験化合物およびコントロール化合物に曝露し、その後、フィブロネクチン被覆プレートの個々のウェルに移した。接着は３７℃で３５分間行った。次いで、ウェルを、新鮮な生理食塩水を用いて穏やかに吸引およびピペッティングすることによって洗浄した。残存接着細胞に関する蛍光を、ＥＸ４８５／ＥＭ５３０で蛍光プレートリーダーを使用して定量した。
【０２４０】
細胞培養物を、定常期のＪｕｒｋａｔ（商標）細胞を、１日目に１：１０にまず分割し、２日目に１：２に分割することによって調製して、３日目にアッセイを実施した。１日目に１：１０に分割した細胞を、４日目のアッセイ用に、３日目に１：４に分割した。
【０２４１】
アッセイプレートを、ＰＢＳ＋＋中にＧｉｂｃｏ／ＢＲＬヒトフィブロネクチン（カタログ番号３３０１６−０２３）の作業溶液を１０μｇ／ｍＬでまず作製することによって、調製した。
【０２４２】
次いで、Ｃｏｓｔａｒ  ３５９０  ＥＩＡプレートを、室温で２時間、５０μＬ／ウェルでコートした（しかし、これはまた、４℃で一晩放置することができる）。最終的に、プレートを、ｒｔで１時間、Ｈｅｐｅｓ／生理食塩水緩衝液（１００μＬ／ウェル）を用いて吸引およびブロックし、その後、１５０μＬのＰＢＳ＋＋で３回洗浄した。
【０２４３】
化合物の希釈を、以下のように、化合物の１：３連続希釈物を調製することにより行った。各プレート（４化合物／プレート）について、６００μＬを、Ｔｉｔｅｒｔｕｂｅラック中の４本のＢｉｏ−Ｒａｄ  Ｔｉｔｅｒｔｕｂｅに添加した。十分な化合物を、それぞれ適切なチューブに添加し、当分野で周知の技術を使用して２×濃度にした。Ｆａｌｃｏｎ  Ｆｌｅｘｉｐｌａｔｅを使用して、１００μＬのＨｅｐｅｓ／生理食塩水緩衝液またはヒト血清を、列Ｂ〜Ｇに添加した。１８０μＬに設定されたマルチチャネルピペッターを、４つのチップが等しく間隔を空けられたピペッターと共に使用した。各４つのチューブのセットを、５回混合し、１８０μＬの２×化合物を、列Ｂ中の各化合物の希釈物の第１の行に移し、列Ａを空のままにした。１８０μＬを、列Ａの他のウェルに添加した。５０μＬを次の希釈物に移し、５回混合し、混合のたびにチップを交換することによりプレートに対して連続希釈を行った。希釈を、列Ｆで停止した。列Ｇには、化合物は入れなかった。
【０２４４】
Ｈｅｐｅｓ／生理食塩水緩衝液またはヒト血清中の２１／６抗体の２０μｇ／ｍＬ溶液はポジティブコントロールであり、細胞懸濁液プレートに添加するために試薬槽に取っておいた。
【０２４５】
細胞染色は、まず、５０ｍＬチューブで遠心分離（１１００ｒｐｍ、５分間）し、対数期のＪｕｒｋａｔ（商標）細胞を回収することによって行った。細胞を、５０ｍＬ  ＰＢＳ＋＋中に再懸濁し、遠心分離し、２０ｍＬ  ＰＢＳ＋＋中に再懸濁した。細胞を、ＲＴで３０分間、２０μＬのＣａｌｃｅｉｎ  ＡＭを添加して染色した。容量をＨｅｐｅｓ／生理食塩水緩衝液で５０ｍＬまでとし、細胞を計数し、遠心分離し、Ｈｅｐｅｓ／生理食塩水緩衝液またはヒト血清中に２×１０６細胞／ｍＬまで再懸濁した。
【０２４６】
化合物を以下の手順を用いてインキュベートした。新規のフレキシプレートにおいて、６５μＬの染色細胞を列Ｂ〜Ｈに添加した。次いで、６５μＬの２×化合物を、プレートの設定の後の適切な列に添加し、３回混合した。６５μＬの２×−２１／６抗体を、列Ｈに添加し、３回混合した。最後に、プレートを室温で３０分間インキュベートした。
【０２４７】
フィブロネクチン接着を、以下のワークアップ手順後に、ＥＸ  ４８５／ＥＭ  ５３０で蛍光プレートリーダーを使用して測定した。インキュベーション後、細胞を３回混合し、１００μＬを、フィブロネクチン被覆プレートに移し、３７℃にて約３５分インキュベートした。各プレートを、１００μＬのＲＴ  ＰＢＳ＋＋をウェルの側面から穏やかにピペッティングし、プレートを９０度回転させて吸引することにより一列ずつ洗浄した。この手順を、合計３回の洗浄につき繰り返した。壁の側面からピペッティングすることにより洗浄した後、各ウェルに１００μＬを満たした。
【０２４８】
ＩＣ５０値を、ヒト血清の存在下およびヒト血清の非存在下の両方において、各化合物について計算した。ＩＣ５０は、増殖または活性が５０％まで阻害される濃度である。このフィブロネクチンアッセイに従って本明細書に記載の化合物を試験したところ、それらのすべてのＩＣ５０値が１０μＭ未満であることがわかった。
【０２４９】
（実施例Ｂ）
ヒト血漿フィブロネクチンへの細胞接着。候補化合物のα４β１への結合を決定するためのインビトロ飽和アッセイ
以下は、実験的自己免疫脳脊髄炎（「ＥＡＥ」）モデル（次の実施例に記する）または他のインビボモデルにおいて化合物が活性であるために必要とされる血漿レベルを決定するためのインビトロアッセイを記載する。
【０２５０】
対数増殖期のＪｕｒｋａｔ（商標）細胞を洗浄し、正常な動物血漿（２０μｇ／ｍＬの１５／７抗体（Ｙｅｄｎｏｃｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、（１９９５年）２７０巻（４８号）：２８７４０頁）を含む）中に再懸濁する。
【０２５１】
そのＪｕｒｋａｔ（商標）細胞を、６６μＭ〜０．０１μＭの範囲の種々の濃度（標準曲線のために、標準的な１２点の連続希釈を使用する）の既知の候補化合物量を含む正常な血漿サンプル、または候補化合物で治療した動物の末梢血から得た血漿サンプルのいずれかへ２倍希釈する。
【０２５２】
次いで、細胞を室温にて３０分インキュベートし、２％のウシ胎仔血清および塩化カルシウムおよび塩化マグネシウムを各々１ｍＭを含むリン酸緩衝化生理食塩水（「ＰＢＳ」）（アッセイ培地）で２回洗浄して、非結合１５／７抗体を除去する。
【０２５３】
次いで、その細胞を、フィコエリトリン結合体化ヤギＦ（ａｂ’）２抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ，Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ，ＭＥ）（これは、研究している動物種に由来する５％血清と１：２００で同時インキュベートすることによって、任意の非特異的交差反応性を吸着させたもの）に曝露し、４℃で３０分間暗所にてインキュベートした。
【０２５４】
細胞をアッセイ培地で２回洗浄し、このアッセイ培地に再懸濁する。次いで、これらを、Ｙｅｄｎｏｃｋら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、１９９５年、２７０巻：２８７４０頁に記載されるように、標準的な蛍光活性化セルソーター（「ＦＡＣＳ」）分析により分析する。
【０２５５】
次いで、このデータを、例えば、規定用量応答様式で、用量に対する蛍光としてグラフ化する。曲線の上のプラトーをもたらす用量レベルは、インビボモデルにおいて効力を得るために必要とされるレベルを表す。
【０２５６】
またこのアッセイを用いて、他のインテグリン（例えば、α４β１に最も近縁のインテグリンであるα９β１インテグリン（Ｐａｌｍｅｒら、１９９３年、Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏ．、１２３巻：１２８９頁）の結合部位を飽和するために必要とされる血漿レベルを決定することができる。このような結合は、α９β１インテグリンが媒介している炎症疾患（例えば、慢性喘息に伴って生じる気道の過剰応答および閉塞、アテローム性動脈硬化における平滑筋細胞増殖、血管形成術後の脈管閉塞、腎臓病の結果起こる線維症および糸球体瘢痕、大動脈狭窄、関節リウマチにおける滑膜の肥大、ならびに潰瘍性大腸炎およびクローン病の進行に伴って生じる炎症および瘢痕が挙げられる）に対するインビボ有用性の予測である。
【０２５７】
したがって、上記のアッセイは、α９β１インテグリンの結合を測定するために、Ｊｕｒｋａｔ細胞の代わりに、α９インテグリン（Ｙｏｋｏｓａｋｉら、１９９４年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６９巻：２６６９１頁）をコードするｃＤＮＡでトランスフェクトしたヒト結腸癌細胞株ＳＷ  ４８０（ＡＴＴＣ番号ＣＣＬ２２８）を用いて実施することができる。コントロールとしては、他のαサブユニットおよびβ１サブユニットを発現するＳＷ  ４８０細胞を用いることができる。
【０２５８】
したがって、本発明の別の局面は、哺乳動物患者における疾患を治療するための方法に関し、その疾患は、α９β１が媒介しており、またその方法は、この患者に、治療有効量の本発明の化合物を投与するステップを含む。このような化合物は、好ましくは、本明細書に記載の上記の薬学的組成物で投与される。有効な毎日の投与は、患者の年齢、体重、症状によって決まるが、これらの要因は、担当医によって容易に確認され得る。しかし、好ましい実施形態では、これらの化合物は、１日当たり約２０μｇ／ｋｇ〜約５００μｇ／ｋｇで投与される。
【０２５９】
（実施例Ｃ）
バイオアベイラビリティを決定するためのカセット投薬および血清分析
経口バイオアベイラビリティを、ラットにカセット（すなわち、投薬溶液当たり６種の化合物の混合物）を投薬することによりスクリーニングした。このカセットは、合計用量１０ｍｇ／ｋｇにつき５種の試験物質および標準化合物を含んでいる。各化合物／試験物質を、等モル量の１Ｎ  ＮａＯＨでナトリウム塩に変換し、２ｍｇ／ｍＬにて水に溶解する。そのカセットを、等容量のそれぞれ６つの溶液を混合することによって調製する。カセット投薬溶液を十分に混合し、次いで、そのｐＨを７．５〜９に調節する。その投薬溶液を、研究の前日に調製し、室温にて一晩撹拌する。
【０２６０】
６〜８週齡の雄性Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓから入手）をこのスクリーニングに使用した。少なくとも１日、ラットを隔離し、飼料および水を連続して与える。カセットの投与前の夜に、そのラットを約１６時間絶食させる。
【０２６１】
４匹のＳＤラットを、各カセットに割り当てる。単一用量の投薬溶液を、各ラットに経口投与する。投薬容量（５ｍＬ／ｋｇ）および時間を記録し、投薬の２時間後に、ラットに給餌した。
【０２６２】
血液サンプルを、４時間、８時間および１２時間の時点で心臓穿刺によって回収する。血液回収直前に、１０〜２０秒以内で、ＣＯ２気体でラットを麻酔した。１２時間のサンプルを回収した後、ラットをＣＯ２窒息により安楽死させ、その後、頚椎脱臼をする。
【０２６３】
血液サンプルを、処理するまで、周囲より低い温度（４℃）下でヘパリン添加した微量試験管（ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ  ｔｕｂｅ）中に維持した。血液サンプルを遠心分離し（１００００ｒｐｍで５分間）、血漿サンプルを取り出し、薬物レベルについて分析するまで、−２０℃の冷凍庫中で保存する。血漿中の薬物レベルは、直接血漿沈殿に関する以下のプロトコルを使用して分析する。
【０２６４】
そのインビボ血漿サンプルを、１００μＬの試験血漿、１５０μＬのメタノールの順に添加し、その後、１０〜２０秒間ボルテックスすることによって、１．５ｍＬの９６ウェルプレート中に調製した。１５０μＬのアセトニトリル中の内部標準０．０５ｎｇ／μＬを添加し、３０秒間ボルテックスした。
【０２６５】
標準曲線サンプルを、順に、１００μＬのコントロールマウス血清、続いて１５０μＬのメタノールを添加し、１０〜２０秒間ボルテックスすることによって１．５ｍＬの９６ウェルプレート中に調製した。１５０μＬのアセトニトリル中の内部標準０．０５ｎｇ／μＬを添加し、３０秒間ボルテックスした。そのサンプルを、５０％メタノール中の目的の化合物０〜２００ｎｇ（１０種類の濃度）でスパイクして、０．５ｎｇ／ｍＬ〜２，０００ｎｇ／ｍＬの範囲の標準曲線を得た。再び、そのサンプルを３０秒間ボルテックスする。
【０２６６】
次いで、サンプルを、エッペンドルフ微量遠心チューブ中で２０〜３０秒間、３０００ｒｐｍで遠心分離し、その後、８０〜９０％の上清を、清浄な９６ウェルプレート中に移す。次いで、サンプルが乾燥するまで、有機溶媒をエバポレートする（Ｎ２下で、４０℃／３０〜６０分（ＺｙｍａｒｋＴｕｒｂｏｖａｐ））。
【０２６７】
次いで、その残渣を、２００〜６００Ｌの移動相（５０％ＣＨ３ＯＨ／０．１％ＴＦＡ）中に溶解した。次いで、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳは、ＰＥ−Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ−３０００三連四重極型質量分析機（ＳＮ０７４９７０７）、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ，Ｓｅｒｉｅｓ２００自動サンプラー、および島津１０Ａポンプを使用して実施した。獲得を、ＰＥ−Ｓｃｉｅｘ  Ａｎａｌｙｓｔ（ｖ１．１）で行い、データ分析および定量をＰＥ−Ｓｃｉｅｘ  Ａｎａｌｙｓｔ（ｖ１．１）を使用して達成した。５〜５０μｌのサンプル容量を、２５％ＣＨ３ＯＨ、０．１％ＴＦＡ〜１００％ＣＨ３ＯＨ、０．１％ＴＦＡの移動相を使用して、逆相ＴｈｅｒｍｏＨｙｐｅｒｓｉｌ  ＤＡＳＨ−１８カラム（Ｋｅｙｓｔｏｎｅ  ２．０×２０ｍｍ、５μｍ、ＰＮ：８８２３０２５−７０１）に注入した。実施時間は、約３００μＬ／分の流速で約８分であった。
【０２６８】
曲線下面積（ＡＵＣ）を、ｔ＝０から最後のサンプリング時間ｔｘまで、線形の台形公式を使用して計算した（Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ、Ｗｏｌｆｇａｎｇ  Ａ．ＲｉｔｓｃｈｅｌおよびＧｒｅｇｏｒｙ  Ｌ．Ｋｅａｒｎｓ、第５版、１９９９年を参照のこと）。
【０２６９】
【化３４】
2009510097.tif 000044
カセット投薬パラダイム（血管外投薬の４時間後、８時間後および１２時間後のサンプル）の場合、そのＡＵＣをｔ＝０〜ｔ＝１２時間で計算した。
【０２７０】
（実施例Ｄ）
喘息モデル
α４β１インテグリンによって媒介される炎症疾患としては、例えば、好酸球流入、気道過剰応答および慢性喘息と一緒に起こる閉塞が挙げられる。以下は、喘息の治療において使用するための本発明の化合物のインビボ効果の研究に使用した喘息の動物モデルを記載する。
【０２７１】
ラット喘息モデル
これは、Ｃｈａｐｍａｎら、Ａｍ  Ｊ．Ｒｅｓｐ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ、１５３〜４頁、Ａ２１９（１９９６年）およびＣｈａｐｍａｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐ．Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ、１５５巻、４号、Ａ８８１（１９９７年）（これは両方とも引用によりその全体を本明細書に援用するものとする）により記載されている手順に従う。
【０２７２】
オボアルブミン（ＯＡ；１０μｇ／ｍＬ）を水酸化アルミニウム（１０ｍｇ／ｍＬ）と混合し、０日目にＢｒｏｗｎ  Ｎｏｒｗａｙラットに注射する（ｉ．ｐ．）。アジュバントと一緒のＯＡの注射を７日目および１４日目に繰り返す。２１日目に、感作した動物をプラスチックチューブに再拘束し、鼻のみ露出するシステムで、ＯＡ（１０ｍｇ／ｋｇ）のエアロゾルに曝露する（６０分）。動物をペントバルビタール（２５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）を用いて７２時間後に屠殺する。肺を、３つのアリコート（４ｍＬ）のハンクス溶液（ＨＢＳＳ×１０、１００ｍｌ；ＥＤＴＡ  １００ｍＭ、１００ｍＬ；ＨＥＰＥＳ  １Ｍ、２５ｍＬ；Ｈ２Ｏで１Ｌとした）を使用して、気管カニューレにより洗浄し；回収した細胞をプールし、回収した流体の総容量を、ハンクス溶液を添加することにより１２ｍＬに調節する。総細胞を計数し（ＳｙｓｍｅｘマイクロセルカウンターＦ−５００、ＴＯＡ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ  Ｏｔｄ．、Ｊａｐａｎ）、スメアを、回収した流体を希釈し（約１０６細胞／ｍＬに）、遠心管（Ｃｙｔｏｓｐｉｎ、Ｓｈａｎｄｏｎ、Ｕ．Ｋ．）中でアリコート（１００μＬ）をピペッティングすることにより作製する。スメアを風乾し、メタノール中のファストグリーン溶液（２ｍｇ／ｍＬ）を用いて５秒間固定し、好酸球、好中球、マクロファージおよびリンパ球を区別するために、エオシンＧ（５秒）およびチアジン（５秒）（Ｄｉｆｆ−Ｑｕｉｃｋ、Ｂｒｏｗｎｅ  Ｌｔｄ．Ｕ．Ｋ．）で染色する。１スメア当たり計５００細胞を、油浸下で光学顕微鏡により計数する（×１００）。本発明の化合物を、０．５％カルボキシメチルセルロースおよび２％Ｔｗｅｅｎ８０懸濁液中に処方し、アレルゲンのオボアルブミンに感作させたラットに経口投与する。能動的に感作したＢｒｏｗｎ  Ｎｏｒｗａｙラットの気道におけるアレルゲン誘導性白血球蓄積を阻害した化合物を、このモデルにおいて活性があるものとみなした。
【０２７３】
マウス喘息モデル
化合物をまた、Ｋｕｎｇら、Ａｍ  Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１３巻：３６０〜３６５頁、（１９９５年）およびＳｃｈｎｅｉｄｅｒら、（１９９９年）、Ａｍ  Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０巻：４４８〜４５７頁、（１９９９年）（これらはそれぞれ、引用にによりその全体を本明細書に援用するものとする）により記載されている手順の後に、急性肺炎症のマウスモデルにおいて評価する。雌性Ｂｌａｃｋ／６マウス（８〜１２週齡）を、２０μｇのｏｖａ（Ｇｒａｄｅ  ４、Ｓｉｇｍａ）および２ｍｇの注射用ミョウバン（Ｐｉｅｒｃｅ）を含む０．２ｍＬ  ｏｖａ／ミョウバン混合物の腹腔内注射（ｉ．ｐ．）により１日目に感作させる。追加免疫注射を１４日目に投与する。２８日目および２９日目に、２０分間、エアロゾル化１％ｏｖａ（０．９％生理食塩水中）でマウスにチャレンジする。マウスを安楽死させ、気管支洗浄液サンプル（３ｍＬ）を３０日目（最初のチャレンジの４８時間後）に回収する。好酸球を、ＦＡＣｓ／ＦＩＴＣ染色法により定量する。本発明の化合物を、０．５％カルボキシメチルセルロースおよび２％Ｔｗｅｅｎ８０懸濁液に処方し、アレルゲンであるオボアルブミンに感作させたマウスに経口投与する。能動的に感作したＣ５７ＢＬ／６マウスの気道におけるアレルゲン誘導性白血球蓄積を阻害した化合物を、このモデルにおいて活性があるものとみなした。
【０２７４】
ヒツジ喘息モデル
このモデルは、Ａｂｒａｈａｍら、Ｊ．Ｃｌｉｎ，Ｉｎｖｅｓｔ、９３巻：７７６〜７８７頁（１９９４年）およびＡｂｒａｈａｍら、Ａｍ  Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ、１５６巻：６９６〜７０３頁（１９９７年）（これらは両方とも、引用によりその全体を本明細書に援用するものとする）により記載されている手順に従う。本発明の化合物を、Ａｓｃａｒｉｓ  ｓｕｕｍ抗原に過敏性のヒツジへ静脈内投与（生理食塩水溶液）、経口投与（２％Ｔｗｅｅｎ８０、０．５％カルボキシメチルセルロース）、およびエアロゾル投与することにより評価する。早期の抗原誘導性気管支応答を減少させ、かつ／または遅延相の気道応答をブロックする（例えば、抗原誘導性後期応答および気道過剰応答（「ＡＨＲ」）に対する防御効果を有する）化合物を、このモデルにおいて活性があるものとみなす。
【０２７５】
吸入したＡｓｃａｒｉｓ  ｓｕｕｍ抗原に対して早期および後期両方の気管支応答を発生することを示すアレルギーのヒツジを使用して、候補化合物の気道に対する効果を研究する。２％リドカインを用いた鼻腔経路の局所麻酔後に、バルーンカテーテルを一方の鼻孔を通して下部食道へと進めた。次いで、その動物を、もう一方の鼻孔を通して、ガイドとして可撓性光ファイバー気管支鏡を用いて、カフを漬けた気管内チューブと共にインキュベートする。
【０２７６】
Ａｂｒａｈａｍ（１９９４年）に従って肺の圧力を予測する。エアロゾル（以下の製剤を参照のこと）を、Ａｎｄｅｒｓｅｎカスケードインパクターで決定されるように、３．２μｍの集団中央値空気力学的直径を有するエアロゾルを提供する使い捨て医療用噴霧器を使用して生成する。その噴霧器を、ソレノイドバルブおよび圧縮空気（２０ｐｓｉ）の供給源からなる線量計システムに接続する。噴霧器の出力を、プラスチックＴ字型部品（Ｔ−ｐｉｅｃｅ）に向ける。このＴ字型部品の一方の端部は、ピストン型人工呼吸装置の吸息ポートに接続する。そのソレノイドバルブを、人工呼吸装置の吸息サイクルの初めに１秒間作動させる。エアロゾルを、５００ｍＬのＶＴおよび２０回呼吸／分の速度で送達する。コントロールとしては、０．５％重炭酸水素ナトリウム溶液のみを用いる。
【０２７７】
気管支応答性を評価するために、カルバコールに対する累積濃度応答曲線を、Ａｂｒａｈａｍ（１９９４年）に従って作成する。治療開始の前および後、および抗原チャレンジの２４時間後に、気管支生検を行う。気管支生検はＡｂｒａｈａｍ（１９９４年）に従って行った。
【０２７８】
肺胞のマクロファージのインビトロ接着研究もまた、Ａｂｒａｈａｍ（１９９４年）に従って行い、接着細胞の百分率を計算した。
【０２７９】
エアロゾル製剤
３０．０ｍｇ／ｍＬの濃度で０．５％重炭酸ナトリウム／生理食塩水（ｗ／ｖ）に溶解した候補化合物の溶液を以下の手順を用いて調製する：
Ａ．０．５％重炭酸ナトリウム／生理食塩水保存溶液の調製：１００．０ｍＬ
【０２８０】
【表６】
2009510097.tif 000045
手順：
１．０．５ｇの重炭酸ナトリウムを１００ｍＬ容量のメスフラスコに加える。
２．約９０．０ｍＬの生理食塩水を加え、溶解するまで超音波処理する。
３．生理食塩水で１００．０ｍＬまで満たし、完全に混合する。
【０２８１】
Ｂ．３０．０ｍｇ／ｍＬ候補化合物の調製：１０．０ｍＬ
【０２８２】
【表７】
2009510097.tif 000046
手順：
１．０．３００ｇの候補化合物を１０．０ｍＬ容量のメスフラスコに加える。
２．約９．７ｍＬの０．５％重炭酸ナトリウム／生理食塩水保存溶液を加える。
３．候補化合物が完全に溶解するまで超音波処理する。
４．０．５％重炭酸ナトリウム／生理食塩水保存溶液で１０．０ｍＬまで満たし、完全に混合する。
【０２８３】
（実施例Ｅ）
Ｃ５７Ｂ６マウスにおける１０日間の毒性試験
１０日間の試験を、雌Ｃ５７Ｂ６マウスに対して本発明の化合物の毒性を評価するために行う。この化合物を、５段階の投薬レベル（０（ビヒクルコントロール）、１０、３０、１００、３００および１０００ｍｇ／ｋｇ（ｍｐｋ））にて、各々の投薬レベルで５匹のマウスを用いて胃管栄養法によって投与する。すべてのレベルについての投与容量は１０ｍＬ／ｋｇであった。投薬溶液または懸濁液を、０．５％カルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）中２％Ｔｗｅｅｎ８０で調製し、新しい投薬溶液または懸濁液を、２〜３日おきに調製する。生態観察には、体重（試験日：１、２、３、５、７、８および１１日目）、毎日のケージの外からの臨床的観察（１〜２回／日）ならびに周期的（試験日：１、２および９日目）機能的観察バッテリーを含む。
【０２８４】
終了時に、血液サンプルを、臨床的病理（血液学および臨床化学）および薬物レベル用に心臓穿刺により回収する。ＥＤＴＡ血液サンプルを、総白血球数、赤血球数、ヘモグロビン、ヘマトクリット、赤血球指数（ＭＣＶ、ＭＣＨ、ＭＣＨＣ）、血小板およびＷＢＣの５部分の識別（好中球、リンパ球、単球、好酸球および好塩基性球）に関して分析する。ヘパリン処理した血漿サンプルを、アラニントランスアミナーゼ、アスパラギン酸トランスアミナーゼ、アルカリホスファターゼ、総ビリルビン、アルブミン、タンパク質、カルシウム、グルコース、尿素窒素、クレアチニン、コレステロールおよびトリグリセリドに関して分析する。
【０２８５】
血液回収後、死体を剖検し、器官（肝臓、脾臓、腎臓、心臓および胸腺）を秤量する。組織サンプル（脳、唾液腺、胸腺、心臓、肺、肝臓、腎臓、副腎脾臓、胃、十二指腸、回腸、結腸および子宮／卵巣）を回収し、ホルマリン固定する。ビヒクルコントロールならびに３００ｍｐｋ群および１０００ｍｐｋ群の動物由来の組織をＨ＆Ｅ染色ガラススライドに処理し、組織病理学的病変について評価する。
【０２８６】
体重変化、絶対的器官重量および相対的器官重量ならびに臨床的病状の結果を、Ｐｒｉｓｍソフトウェアを用いるＤｕｎｎｅｔの複数比較検定によってビヒクルコントロールと比較して統計上の有意差について分析する。機能的観察バッテリーの結果を、ＳＡＳソフトウェアを用いるＣｏｃｈｒａｎ−Ｍａｎｔｅｌ−Ｈａｅｎｓｚｅｌ相関検定によって、Ｄｕｎｎｅｔ、Ｆｉｓｈｅｒの正確確率検定および投薬傾向効果を用いて差異について分析する。
【０２８７】
従来の経口製剤を用いると、本発明の化合物はこのモデルにおいて活性がある。
【０２８８】
（実施例Ｆ）
ラットにおけるアジュバント誘導性関節炎
アジュバント誘導性関節炎（「ＡＩＡ」）は、関節リウマチ（ＲＡ）の研究において有用な動物モデルであるが、これは、Ｌｅｗｉｓラットの尾の基部において結核菌（Ｍ．ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）を注入することにより誘導される。注射の後１０日間〜１５日間の間、動物には重篤な進行性のリウマチが発症する。
【０２８９】
一般に、化合物は、ラットにおけるアジュバンド誘導水腫由来の後足腫脹および骨損傷を変化させる能力について試験する。ＡＩＡによって起こる後足腫脹の阻害を定量化するために、炎症の２つの相を定義した：（１）第１次の注射済み後足および第２次の注射済み後足、ならびに（２）第２次の未注射の後足、これは一般に注射済みの足における炎症の誘導から１１日頃に発症し始める。後者のタイプの炎症の軽減は、免疫抑制性活性の指標である。Ｃｈａｎｇ、Ａｒｔｈ．Ｒｈｅｕｍ．、２０巻、１１３５〜１１４１頁（１９７７年）を参照されたい。
【０２９０】
ＡＩＡなどのＲＡの動物モデルを使用することによって、疾患の初期段階に関与する細胞事象を研究することができる。マクロファージおよびリンパ球におけるＣＤ４４発現が、アジュバント関節炎の初期発症期間中にアップレギュレーションされ、一方、ＬＦＡ−１発現は、疾患の発症後期にアップレギュレーションされる。アジュバント関節炎の最も初期段階での接着分子と内皮の間の相互作用を理解することが、ＲＡ治療で用いられる方法に有意な進歩をもたらし得る。
【０２９１】
以下の化合物は、フィブロネクチンアッセイ実施例Ａによって試験したときにＩＣ５０が約１０μＭ未満であることがすべて確認された：
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（トリフルオロアセチル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（イソ−プロピルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（ｔ−ブチルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（フラン−２−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（ピペリジン−１−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（Ｎ−エチル−Ｎ−イソ−プロピルアミノカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（チエン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（チエン−２−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（フラン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（３−チアピロリジン−１−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝フェニルアラニン；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−（チエン−２−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−トリフルオロメチルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル；
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−ｔ−ブチルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル；および
Ｎ−［２−ジエチルアミノ−５−｛Ｎ−エチル−Ｎ−フラン−３−イルカルボニル）アミノ｝ピリミジン−４−イル］−Ｌ−４’−｛（ピロリジン−１−イル）カルボニルオキシ｝−フェニルアラニンｔ−ブチルエステル。
【０２９２】
本発明の好ましい実施形態を説明し記載したが、本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく、様々な変更を本内容に行うことができることは理解されよう。
【国際調査報告】
2009510097.tif 000051
2009510097.tif 000052
2009510097.tif 000053