(57)【要約】  神経損傷の架橋に使用されるシルクフィブロイン含有医療用人工移植体及びその調製方法。また、容器から構成されるか又は容器と繊維基部から構成され、容器と繊維基部のうちの少なくとも１つが、シルクフィブロインの成分を含有し、容器の壁が、多数の微細開口部を備えた三次元構造を有する医療用人工移植体に関する。調製方法は、以下の工程：シルクを使用してシルク繊維を調製する工程；シルクフィブロイン繊維を使用してシルクフィブロイン含有容器又は繊維基部を調製する工程；及び繊維基部を容器と組み合わせる、すなわち、繊維基部を容器の中に嵌入する工程などを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
容器又は該容器及び繊維基部を含み、
前記容器及び前記繊維基部のうちの少なくとも１つがシルクフィブロインの成分を含有する、
シルクフィブロイン含有医療用人工神経移植体。
【請求項２】
前記容器は、シルクフィブロイン成分を含有する、
請求項１に記載のシルクフィブロイン含有医療用人工神経移植体。
【請求項３】
前記容器は、キトサンを含有する、
請求項２に記載のシルクフィブロイン含有医療用人工神経移植体。
【請求項４】
前記繊維基部は、シルクフィブロイン繊維である、
請求項１に記載のシルクフィブロイン含有医療用人工神経移植体。
【請求項５】
請求項１に記載のシルクフィブロイン含有医療用人工神経移植体を調整する方法であって、
（１）シルクをシルクフィブロイン繊維に調製するステップと、
（２）シルクフィブロイン繊維をシルクフィブロイン含有容器に調製するステップと、
を含む調整方法。
【請求項６】
請求項５に記載のシクロフィブロイン含有医療用人工神経移植体の調整方法であって、
前記ステップ（２）は、該ステップ（２）に更にキトサンを加えるステップであり、
調整された前記シルクフィブロイン含有容器は、キトサンを含有してもよい、
調整方法。
【請求項７】
前記調製された容器は、前記繊維基部とも組み合わされる、すなわち、前記繊維基部が前記シルクフィブロイン含有容器の中にはめ込まれる、
請求項５又は６に記載のシルクフィブロイン含有医療用人工神経移植体の調製方法。
【請求項８】
前記繊維基部は、シルクフィブロイン繊維である、
請求項７に記載のシルクフィブロイン含有医療用人工神経移植体の調製方法。
【請求項９】
請求項１記載のシルクフィブロイン含有医療用人工神経移植体の調製方法であって、
（１）シルクを使用してシルクフィブロイン繊維を調製し、シルクフィブロイン繊維基部を得るステップと、
（２）前記シルクフィブロイン繊維基部をＰＧＡ、ＰＬＡ、キトサン又はキチン含有容器の中にはめ込むステップと、
を含む調整方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、神経損傷を架橋するために使用される医療用人工神経移植体及びその調製方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
臨床的には、外傷（又は外科手術）の結果としてもたらされる末梢神経欠損が頻繁に見られる。しかし、長い間隔の神経欠損を端々縫合の方法により補うことができない場合、架橋するために移植体を使用する必要がある。より適切な移植体の探求及び研究が百年以上も行われてきたが、自己神経が神経欠損を架橋する移植体の第一候補となった以外は、臨床において最も認識され、広く使用されうる理想的な神経移植体を見つけることに、人々は依然として失敗してきた。自己神経移植体は、限定された神経移植体供給源、組織構造及び大きさを適合することの困難さ、移植領域における長期除神経のために広範囲な臨床適用において失敗している。
【０００３】
組織工学の出現及び開発は、自己神経移植体を構築する新たな経路を提供する。最近の２０年間にわたって、人々は、末梢神経組織工学において幾つかの生分解性材料、通常、ポリグリコール酸（ＰＧＡ）、ポリ乳酸（ＰＬＡ）、キトサン、ゼラチン、シリカゲルなどのような、１０種類を越えるそのコポリマー及び誘導体を含む幾つかの高級ポリマーの使用を試みてきた（例えば、特許文献１など）。しかし、これらは実践的な適用において異なる欠点を有する。
【特許文献１】中華人民共和国  特許第１１２６５１５Ｃ号
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明の目的は、良好な効果、人体に対する良好な生体適合性及び優れた生分解性を有するシルクフィブロイン含有医療用人工神経移植体、並びにその調製方法を提供することである。
【０００５】
本発明の技術的提案は以下である。
【０００６】
シルクフィブロイン含有医療用人工神経移植体は、容器又は該容器及び繊維基部を含み、前記容器及び前記繊維基部のうちの少なくとも１つはシルクフィブロインの成分を含有する。
【０００７】
前記容器は、シルクフィブロイン成分を含有する。前記容器は、キトサンも含有する。前記繊維基部は、シルクフィブロイン繊維である。
【０００８】
シルクフィブロイン含有医療用人工神経移植体の調製方法であって、
（１）シルクをシルクフィブロイン繊維に調製するステップと、
（２）シルクフィブロイン繊維をシルクフィブロイン含有容器に調製するステップと、
を含む調整方法。
【０００９】
前記ステップ（２）は、該ステップ（２）に更にキトサンを加えるステップであり、
調整された前記シルクフィブロイン含有容器は、キトサンを含有してもよい。
【００１０】
前記調製された容器は、繊維基部とも組み合わされる、すなわち、前記繊維基部がシルクフィブロイン含有容器の中にはめ込まれてもよい。前記繊維基部は、シルクフィブロイン繊維であってもよい。
【００１１】
シルクフィブロイン含有医療用人工神経移植体の調製方法であって、
（１）シルクを使用してシルクフィブロイン繊維を調製し、シルクフィブロイン繊維基部を得るステップと、
（２）シルクフィブロイン繊維基部をＰＧＡ、ＰＬＡ、キトサン又はキチン含有容器の中にはめ込むステップと、
を含む調整方法。
【００１２】
天然のシルクフィブロインは、中国では伝統的な飼料生成物である。また、フィブロイン繊維における主要な種である。フィブロインは、シルク重量の７０％〜８０％を占める。フィブロインは、人々が使用する必須の材料である。フィブロインは１８種のアミノ酸を含む。研究者たちの実験的研究は、それが、良好な生体親和性、非毒性、非汚染性、生分解性を有することを示す。調製された人工神経移植体はより良好な効果を有する。文献検索によると、シルクフィブロインから調製された人工神経移植体で、国内及び海外において神経損傷を治療することが見出されたものはない。本発明の生成物の材料は、高純度のシルクフィブロインである。これは天然分解性材料であり、人体に対する良好な生体適合性を有する。調製された生成物は、調製技術に起因する毒性又は副作用を有する外来性物質を含有しない。容器の壁は、多数の微細孔を備えた豊富な次元構造を有する。神経細胞増殖プロセスに必要とされる栄養の移動ために必要な経路を提供し、良好な効果が得られる。神経細胞の増殖にとって必須の誘導及び必要な増殖の空間を提供する。
【００１３】
研究者たちは、調製された生成物をインビトロで神経組織細胞と共に同時培養した。生成物は、形態学的観察、酸代謝活性の決定、神経増殖因子発現の決定の後、良好な組織適合性を有することが見出された。生成物は、インビボで、ラットの坐骨神経における３cmの欠損を修復するために使用された。神経再生及び損傷した神経機能の回復のために有益であることが見出された。同時に、生成物は良好な生体適合性を有した。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
本発明を以下のように詳細な実施態様により更に説明する。
【００１５】
（実施態様１）
（１）シルクフィブロイン繊維の調製（公知の方法により調製するか、若しくはシルクフィブロイン繊維の最終生成物を購入する）又は以下の方法による調製：５０〜１００℃の温度を使用して、シルクを弱アルカリ性溶液（０．１〜１０％炭酸ナトリウム又は０．１〜１０％炭酸カリウム）中で熱処理する。次に、処理した繊維を蒸留水で洗浄し、シルクフィブロイン繊維を得て、繊維の一部をステップ（２）に使用し、他を繊維基部としてステップ（３）に使用する。
（２）シルクフィブロイン容器の調製：調製したシルクフィブロイン繊維の一部を塩化カルシウム−アルコール−水の三成分溶液（塩化カルシウム−アルコール−水のモル比は１：２：８である）に、２５〜８０℃（例えば、２５℃、５０℃及び８０℃）で０．５〜６時間（例えば０．５時間、３時間及び６時間）溶解する。溶解した混合物溶液をセルロース膜のバッグに充填し、蒸留水で透析する。透析したフィブロイン溶液を成形型に注入し、乾燥した後、成形ステップを実行する。次に、予備成形フィブロイン容器を、メタノールと水酸化ナトリウム（１mol/L）の５０：５０（V:V）の溶液の中に特定の時間（５分間〜２時間）入れ、次に、水酸化ナトリウム（１mol/L）、５０mmol/Lのリン酸緩衝溶液、蒸留水の順番で洗浄して、シルクフィブロイン繊維容器を得る。
（３）組み合わせ：得られたシルクフィブロイン容器を、シルクフィブロイン含有容器の中にはめ込み、シルクフィブロイン含有医療用人工神経移植体と組み合わせる。
【００１６】
（実施態様２）
シルクフィブロイン含有医療用人工神経移植体の調製方法であって、以下のステップを含む：
（１）シルクフィブロイン容器の調製：実施態様１と同様にしてシルクフィブロイン容器を得る。
（２）シルクフィブロイン含有容器を神経再生に直接使用するか、又はそれに他の物質を充填した後で、神経再生に使用する。或いは、調製したシルクフィブロイン容器を、他の材料（例えば、ＰＧＡ、ＰＬＡ、キトサン、キチン）で作製された繊維基部にはめ込み、次にそれを神経再生に使用する。ＰＧＡ、ＰＬＡ、キトサンによる繊維基部調製方法については、中国特許ＣＮ１１２６５１５Ｃ号の内容を参照すること。キチンから調製される繊維基部についての方法は、以下に示す。キトサンを、酢酸又はリン酸、クエン酸、乳酸のような弱酸性溶液に２〜１５％（例えば、２％、８％及び１５％）の濃度で溶解する。次に、湿式紡糸を使用して溶液をキトサン繊維に加工し、キトサン繊維を得る。得られたキトサン繊維を、無水酢酸含有アルコール性溶液の中に入れて、０〜６０℃（例えば、０℃、３０℃及び６０℃）で０．５〜６時間（例えば０．５時間、２時間、４時間及び６時間）アセチル化反応を有する。無水酢酸含有アルコール性溶液では、無水酢酸の濃度は、１〜５０％（例えば、１％、２０％、４０％及び５０％）である。アルコール性溶液はメタノール（又はアルコール）である。アセチル化反応の後、水で洗浄し、１mol/Lの水酸化ナトリウム又は水酸化カリウムの中に２４時間入れる。水で洗浄し、乾燥した後、キチン繊維（すなわち、繊維基部）を得る。
【００１７】
（実施態様３）
シルクフィブロイン含有医療用人工神経移植体の調製方法であって、以下の工程を含む：
（１）シルクフィブロイン容器の調製：実施態様１と同様にして得られたシルクフィブロイン繊維を塩化カルシウム−アルコール−水の三成分溶液（塩化カルシウム−アルコール−水のモル比は１：２：８である）に、２５〜８０℃（例えば、２５℃、５０℃及び８０℃）で０．５〜６時間（例えば０．５時間、２時間及び６時間）溶解する。溶解した混合物溶液をセルロース膜のバッグに充填し、蒸留水で透析し、シルクフィブロイン溶液を得る。
【００１８】
キトサンを、酢酸又はリン酸、クエン酸、乳酸のような弱酸性溶液に２〜１５％（例えば、２％、８％及び１５％）の濃度で溶解する。次にキトサン溶液をシルクフィブロイン溶液と特定の重量比（例えば、１：２、１：１及び２：１）で混合する。次に上記の混合物溶液を成形型に注入し、凍結乾燥の後、成形ステップを実行する。次に、予備成形フィブロイン容器を、メタノールと水酸化ナトリウム（１mol/L）の５０：５０（V:V）の溶液の中に特定の時間（５分間〜２時間）入れ、次に、水酸化ナトリウム（１mol/L）、５０mmol/Lのリン酸緩衝溶液、蒸留水の順番で洗浄して、シルクフィブロイン含有複合容器を得る。
（２）シルクフィブロイン含有容器を神経再生に直接使用するか、又はそれに他の物質を充填した後で、神経再生に使用する。或いは、調製したシルクフィブロイン容器を、他の材料（例えば、ＰＧＡ、ＰＬＡ、キトサン、キチン）で作製された繊維基部にはめ込み、次にそれを神経再生に使用する。
【００１９】
（実施態様４）
シルクフィブロイン含有医療用人工神経移植体の調製方法であって、以下の工程を含む：
（１）シルクフィブロイン繊維（すなわち、繊維基部）を実施態様１と同様にして得る。（２）調製したシルクフィブロイン容器を、他の材料（例えば、ＰＧＡ、ＰＬＡ、キトサン、キチン）で作製された繊維基部にはめ込み、次にそれを神経再生に使用する。ＰＧＡ、ＰＬＡ、キトサンによる容器調製方法については、中国特許ＣＮ１１２６５１５Ｃ号の内容を参照すること。キチンから調製される容器は、以下のようにして作成する。
【００２０】
まず、キトサンを、酢酸又はリン酸、クエン酸、乳酸のような弱酸性溶液に２〜１５％（例えば、２％、８％及び１５％）の濃度で溶解する。次に溶液を筒状成形型の中を通し、８〜２０％の水酸化ナトリウム（又は８〜２０％の水酸化カリウム、又は８〜２０％の炭酸ナトリウム、及び５〜３０％のアルコールを含有することもできる）を含有する溶液のようなアルカリ性凝固溶液の中で成形する。成形した後、溶液を水で洗浄して、キトサン容器を得る。次に得られたキトサン容器を、無水酢酸含有アルコール性溶液の中に入れて、０〜６０℃（例えば、０℃、３０℃及び６０℃）で０．５〜６時間（例えば０．５時間、２時間、４時間及び６時間）アセチル化反応を行う。反応時間及び温度は、キチンのアセチル化度に影響を与える場合がある。反応時間が長く反応温度が高いほど、より高いアセチル化度を有するキチンを得る。逆の場合は、より低いアセチル化度を有するキチンを得る。異なるアセチル化度を有するキチンを、必要に応じて得ることができる。アルコール性溶液中の無水酢酸の濃度は、１〜５０％（例えば、１％、２０％、４０％及び５０％）である。アルコール性溶液はメタノール（又はアルコール）である。アセチル化反応の後、水で洗浄し、１mol/Lの水酸化ナトリウム又は水酸化カリウムの中に２４時間入れる。水で洗浄し、乾燥した後、キチン繊維基部を得る。
【国際調査報告】
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