(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）（式中、Ｒ1は、−Ｃ（Ｏ）Ｒおよび（ａ）からなる群より選択され、Ｒ6およびＲ7は独立に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールまたはアリールから選択され、そのいずれも場合により置換されていてもよく、Ｇは、Ｈまたはヒドロキシルから選択され、Ｙは、Ｏ、ＮＨまたはＳであり、Ｘは、Ｈ、ハロ、アルキル、シクロアルキル、パーフルオロアルキル、アルコキシ、アルキルチオ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、およびＣＮからなる群より選択され、かつ、ｎは、０、１、２、または３である）の化合物、あるいはそのプロドラッグ、製薬上許容される塩、または薬学的に活性な代謝物に向けられる。本発明はまた、本発明の化合物を含む組成物、ならびに、本発明の化合物およびその組成物の両方を用いる、Ｃ型肝炎ウイルス感染を治療または予防するため、あるいはＣ型肝炎ウイルスの複製を阻害するための方法にも向けられる。
2009519240.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2009519240.tif 000031
（式中、
Ｒ1は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ6および
【化２】
2009519240.tif 000032
からなる群より選択され、
Ｒ6およびＲ7は独立に、Ｈ、Ｃ1−Ｃ12アルキル、Ｃ3−Ｃ12シクロアルキル、Ｃ1−Ｃ11ヘテロシクロアルキル、Ｃ2−Ｃ9ヘテロアリール、またはＣ6−Ｃ12アリールから選択され、そのいずれも場合により置換されていてもよく；
Ｇは、Ｈまたはヒドロキシルから選択され；
Ｙは、Ｏ、ＮＨまたはＳであり；
Ｘは、Ｈ、ハロ、Ｃ1−Ｃ12アルキル、Ｃ3−Ｃ12シクロアルキル、Ｃ1−Ｃ12パーフルオロアルキル、Ｃ1−Ｃ12アルコキシ、Ｃ1−Ｃ12アルキルチオ、アミノ、Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノ、Ｃ2−Ｃ12ジアルキルアミノ、およびＣＮからなる群より選択され；かつ
ｎは、０、１、２、または３である）の化合物；
または、そのプロドラッグ、製薬上許容される塩、もしくは薬学的に活性な代謝物。
【請求項２】
Ｒ6およびＲ7が独立に、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ3−Ｃ12シクロアルキル、Ｃ1−Ｃ11ヘテロシクロアルキル、Ｃ2−Ｃ9ヘテロアリールまたはＣ6−Ｃ12アリールから選択され、そのいずれも場合により置換されていてもよく；
Ｘが、Ｈ、ハロ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ3−Ｃ12シクロアルキル、Ｃ1−Ｃ11ヘテロシクロアルキル、Ｃ1−Ｃ6パーフルオロアルキル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキルチオ、アミノ、Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノ、Ｃ2−Ｃ12ジアルキルアミノ、およびＣＮからなる群より選択され；かつ
任意選択の置換基が、Ｃ1−Ｃ6アルキル、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ6ハロアルキル、Ｃ1−Ｃ6ヒドロキシアルキル、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノ、Ｃ2−Ｃ12ジアルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、Ｃ1−Ｃ6ハロアルコキシ、Ｃ2−Ｃ12アルコキシアルキル、Ｃ2−Ｃ12アルコキシアルコキシ、オキソ、Ｃ1−Ｃ6アルキルチオ、メルカプト、Ｃ1−Ｃ6ハロアルキルチオ、Ｃ6−Ｃ12アリール、Ｃ6−Ｃ12アリールオキシ、Ｃ6−Ｃ12アリールチオ、Ｃ2−Ｃ9ヘテロアリール、Ｃ2−Ｃ9ヘテロアリールオキシ、Ｃ2−Ｃ9ヘテロアリールチオ、Ｃ2−Ｃ7アシル、−ＣＯ2−Ｃ1−Ｃ6アルキル、−ＳＯ3Ｈ、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−Ｃ1−Ｃ6アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）2、−ＣＯ2Ｈ、−ＣＯ2ＮＨ2、−ＣＯ2ＮＨ−Ｃ1−Ｃ6アルキル、および−ＣＯ2Ｎ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）2からなる群より選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｙが、ＯまたはＮＨであり；かつ
Ｘが、Ｈ、ハロ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、およびＣ1−Ｃ4ハロアルキルからなる群より選択される、請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
ｎが０、１、または２であり、ＧがＨである、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ6がＣ1−Ｃ4アルキルであり；
Ｒ7が、存在する場合、Ｃ1−Ｃ4アルキルであり；かつ
ＹがＮＨである、請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
ｎが２であり、Ｘがハロである、請求項５に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ6がＣＨ3であり、存在する場合、Ｒ7がＣＨ3である、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
ＸがＣｌおよびＦから選択される、請求項７に記載の化合物。
【請求項９】
一方のＸがＣｌであり、他方のＸがＦである、請求項８に記載の化合物。
【請求項１０】
式（ＩＩ）
【化３】
2009519240.tif 000033
（式中、
Ｒ1は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ6および
【化４】
2009519240.tif 000034
から選択され、Ｒ6およびＲ7は独立に、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ3−Ｃ12シクロアルキル、Ｃ1−Ｃ11ヘテロシクロアルキル、Ｃ2−Ｃ9ヘテロアリール、またはＣ6−Ｃ12アリールから選択され、そのいずれも場合により置換されていてもよく；
Ｘは、Ｈ、ハロ、１〜４個の炭素原子のアルキル、３〜６個の炭素原子のシクロアルキル、１〜４個の炭素原子のパーフルオロアルキル、１〜４個の炭素原子のアルコキシ、１〜４個の炭素原子のアルキルチオ、アミノ、１〜４個の炭素原子のアルキルアミノ、２〜８個の炭素原子のジアルキルアミノ、およびＣＮからなる群より選択され；かつ
Ｇは、Ｈまたはヒドロキシルから選択される）の化合物；
または、そのプロドラッグ、製薬上許容される塩、もしくは薬学的に活性な代謝物。
【請求項１１】
Ｒ6およびＲ7が、独立に、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ3−Ｃ12シクロアルキル、またはＣ6−Ｃ12アリールから選択され、そのいずれも場合により置換されていてもよい、請求項１０に記載の化合物。
【請求項１２】
ＧがＨである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
化合物が、
２−｛［Ｎ−６−アセチル−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−（｛［Ｎ−［２−アセチル−４−クロロ−５−（メチルチオ）フェニル］グリシル｝アミノ）安息香酸；
２−（｛［Ｎ−［２−アセチル−４−クロロ−５−（ジメチルアミノ）フェニル］グリシル｝アミノ）安息香酸；
２−（｛［Ｎ−［２−アセチル−４−クロロ−５−（メチルアミノ）フェニル］グリシル｝アミノ）安息香酸；
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−５−クロロ−４−（フルオロフェニル）−Ｎ−メチルグリシル］アミノ｝安息香酸；および
２−（｛［Ｎ−［２−アセチル−４−クロロ−５−（メチルスルフィニル）フェニル］グリシル｝アミノ）安息香酸
である、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｘが、Ｈ、ハロ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4パーフルオロアルキルおよびＣ1−Ｃ4アルコキシの群から選択される、請求項１２に記載の化合物。
【請求項１５】
Ｒ6およびＲ7がＣ1−Ｃ4アルキルである、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
化合物が、
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−４−クロロ−５−エトキシフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−４−クロロ−５−メトキシフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−４−フルオロ−５−メチルフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［Ｎ−（２−アセチルフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［Ｎ−（５−クロロ−４−メチル−２−プロピオニルフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−[２−（４，５−ジメチル−２−プロピオニル−フェニルアミノ）−アセチルアミノ］−安息香酸；
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−５−クロロ−４−メチルフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；および
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−４，５−ジメチルフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸
である、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｘが存在する場合、ハロである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１８】
ｎが、０、１、または２である、請求項１７に記載の化合物。
【請求項１９】
化合物が、
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−４−ブロモ−５−クロロ(choloro)フェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［Ｎ−（５−クロロ−４−フルオロ−２−プロピオニルフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−４，５−ジフルオロフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−４−クロロ−５−フルオロフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−４，５−ジクロロフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−５−クロロ−４−フルオロフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［Ｎ−（４−クロロ−２−プロピオニルフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−４−クロロ−５−メチルフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−４−クロロフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；および
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−４−ブロモフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸
である、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
化合物が、２−｛［Ｎ−（２−アセチル−５−クロロ−４−フルオロフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸である、請求項１５に記載の化合物。
【請求項２１】
化合物が、２−（２−（[５−クロロ−４−フルオロ−２−（１−メトキシイミノ−エチル）−フェニルアミノ］アセチルアミノ｝安息香酸である、請求項１５に記載の化合物。
【請求項２２】
式（ＩＩＩ）
【化５】
2009519240.tif 000035
（式中、
Ｒ1は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ6および
【化６】
2009519240.tif 000036
から選択され、Ｒ6およびＲ7は独立に、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ3−Ｃ12シクロアルキル、Ｃ1−Ｃ11ヘテロシクロアルキル、Ｃ2−Ｃ9ヘテロアリールまたはＣ6−Ｃ12アリールから選択され、そのいずれも場合により置換されていてもよく；
Ｘは、Ｈ、ハロ、１〜４個の炭素原子のアルキル、３〜６個の炭素原子のシクロアルキル、１〜４個の炭素原子のＣパーフルオロアルキル、１〜４個の炭素原子のアルコキシ、１〜６個の炭素原子のアルキルチオ、アミノ、１〜６個の炭素原子のアルキルアミノ、２〜１２個の炭素原子のジアルキルアミノ、およびＣＮからなる群より選択され；かつ
Ｇは、Ｈまたはヒドロキシルから選択される）の化合物；
または、そのプロドラッグ、製薬上許容される塩、もしくは薬学的に活性な代謝物。
【請求項２３】
Ｒ6およびＲ7が独立に、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ3−Ｃ12シクロアルキルおよびＣ6−Ｃ12アリールから選択され、そのいずれも場合により置換されていてもよい、請求項２２に記載の化合物。
【請求項２４】
ＧがＨである、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２５】
化合物が、２−｛［（２−アセチル−５−メチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸である、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｘが、Ｈ、ハロ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4パーフルオロアルキルおよびＣ1−Ｃ4アルコキシからなる群より選択される、請求項２４に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ6およびＲ7がＣ1−Ｃ4アルキルである、請求項２６に記載の化合物。
【請求項２８】
化合物が、
２−｛［（２−アセチル−５−エチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（４，５−ジメチル−２−ペンタノイフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（２−ブチリル−４，５−ジメチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（４，５−ジメチル−２−プロピオニフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−（｛［４，５−ジメチル−２−（トリフルオロアセチル）フェノキシ］アセチル｝アミノ｝安息香酸；
２−｛［（２−アセチル−４，５−ジメトキシフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（２−アセチル−５−メチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（２−アセチル−４−エチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（２−アセチル−４−メチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（２−アセチル−５−メトキシフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（２−ベンゾイル４−メチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（２−アセチル−４，５−ジメチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝−５−ヒドロキシ安息香酸；
２−｛［（２−アセチル−４，５−ジメチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；および
２−｛［（２−イソブチリル−４，５−ジメチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸
である、請求項２７に記載の化合物。
【請求項２９】
ｎが、１、２、または３であり、少なくとも１つのＸが、ハロである、請求項２７に記載の化合物。
【請求項３０】
ｎが、１または２である、請求項２９に記載の化合物。
【請求項３１】
化合物が、
２−｛［（２−アセチル−４−クロロ−５−フルオロフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（２−アセチル−５−クロロ−４−フルオロフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（２−アセチル−４−フルオロ−５−メチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（２−アセチル−４，５−ジフルオロフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（４−クロロ−２−プロピオニルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（２−アセチル−４−クロロ−５−メチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（２−アセチル−５−フルオロフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（２−アセチル−５−クロロフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（２−アセチル−４−フルオロフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；および
２−｛［（２−アセチル−４−クロロフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸
である、請求項３０に記載の化合物。
【請求項３２】
Ｃ型肝炎ウイルスを、有効量の請求項１、１０または２２のいずれか一項に記載の少なくとも１つの化合物と接触させる段階を含む、Ｃ型肝炎ウイルスの複製を阻害する方法。
【請求項３３】
Ｃ型肝炎ウイルスを、インターフェロン、ペグ化インターフェロン、リバビリン、プロテアーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、低分子干渉ＲＮＡ化合物、アンチセンス化合物、ヌクレオチド類似体、ヌクレオシド類似体、免疫グロブリン、免疫調節薬、肝保護剤、抗炎症薬、抗生物質、抗ウイルス薬、および抗感染症化合物からなる群より選択される少なくとも１種類の生理活性物質と接触させる段階をさらに含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
哺乳類に、有効量の請求項１、１０または２２のいずれか一項に記載の少なくとも１つの化合物を供給する段階を含む、哺乳類においてＣ型肝炎ウイルス感染を治療または予防する方法。
【請求項３５】
哺乳類に、インターフェロン、ペグ化インターフェロン、リバビリン、プロテアーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、低分子干渉ＲＮＡ化合物、アンチセンス化合物、ヌクレオチド類似体、ヌクレオシド類似体、免疫グロブリン、免疫調節薬、肝保護剤、抗炎症薬、抗生物質、抗ウイルス薬、および抗感染症化合物からなる群より選択される少なくとも１種類の生理活性物質を供給する段階をさらに含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
細胞を有効量の請求項１に記載の化合物と接触させてＮＳ５Ｂ機能を低下または阻止する段階を含む、Ｃ型肝炎のＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼＮＳ５Ｂを阻害する方法。
【請求項３７】
請求項１、１０または２２のいずれか一項に記載の化合物、および製薬上許容される担体を含む、医薬組成物。
【請求項３８】
哺乳類に、有効量の少なくとも１種類の請求項３７に記載の医薬組成物を供給する段階を含む、哺乳類においてＣ型肝炎ウイルス感染を治療または予防する方法。
【請求項３９】
哺乳類に、有効量の、インターフェロン、ペグ化インターフェロン、リバビリン、プロテアーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、低分子干渉ＲＮＡ化合物、アンチセンス化合物、ヌクレオチド類似体、ヌクレオシド類似体、免疫グロブリン、免疫調節薬、肝保護剤、抗炎症薬、抗生物質、抗ウイルス薬、および抗感染症化合物からなる群より選択される少なくとも１種類の生理活性物質を供給する段階をさらに含む、請求項３８に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、Ｃ型肝炎ウイルス感染の治療に有用な一連のアントラニル酸化合物に向けられる。
【背景技術】
【０００２】
Ｃ型肝炎は、慢性肝炎、硬変、肝不全、および肝細胞癌を引き起こし得る一般的なウイルス感染である。Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）の感染は、症例の少なくとも８５％で慢性肝炎を引き起こし、肝臓移植の主要な原因であり、米国においては毎年少なくとも１０，０００件の死亡例の原因である（Hepatology, 1997, 26 (Suppl. 1), 2S-10S）。
【０００３】
Ｃ型肝炎ウイルスはフラビウイルスファミリーのメンバーであり、ＨＣＶのゲノムはプラスセンスの一本鎖線状ＲＮＡである（Hepatology, 1997, 26 (Suppl. 1), 11S-14S）。ＨＣＶは広範な遺伝子異質性を示す；少なくとも６つの遺伝子型と５０を超えるサブタイプが同定されている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ＨＣＶ感染症を防ぐための有効なワクチンは存在しない。現在利用できる唯一の治療法は、インターフェロン−α（ＩＮＦ−α）を用いる治療、またはＩＮＦ−αとヌクレオシド類似体リバビリンとの併用療法である（Antiviral Chemistry and Chemotherapy, 1997, 8, 281-301）。しかし、治療を受けた患者の約４０％しか持続的な応答を示さない、従ってより効果的な抗ＨＣＶ治療薬に対する必要性がある。
【０００５】
ＨＣＶゲノム、多数の非構造タンパク質：ＮＳ２、ＮＳ３、ＮＳ４Ａ、ＮＳ４Ｂ、ＮＳ５ＡおよびＮＳ５Ｂを含有する（J. General Virology, 2000, 81, 1631-1648）。ＮＳ５Ｂは、ウイルス複製に必須のＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼであり、従って、ＮＳ５Ｂの阻害は、治療薬の開発に適した標的である。
【０００６】
米国特許第５，７４１，９２６号では、下式のアントラニル酸を含むアニリン誘導体が主張され、これらの化合物は抗高血糖活性を有することが記載されている。
【化７】
2009519240.tif 000003
（式中、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4およびＲ5は独立に、水素、ハロゲン、ＯＲ11、ＣＸ3、Ｃ1−Ｃ6アルキル基、（ＣＨ2）nＣＨ2ＯＨ、（ＣＨ2）nＣＯ2Ｒ12および（ＣＨ2）n−５−テトラゾリルからなる群より選択され、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4またはＲ5の１個以下が、（ＣＨ2）nＣＯ2Ｒ12および（ＣＨ2）n−５−テトラゾリルからなる群より選択される；Ｒ11およびＲ12は独立に水素およびＣ1−Ｃ6アルキル基からなる群より選択され；Ｘは、ハロゲンであり；ｎは、０または１であり；Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9およびＲ10は独立に水素、ハロゲン、ＯＲ13、ＳＲ14、Ｃ（Ｙ）3、Ｃ1−Ｃ6アルキル基およびフェニルからなる群より選択され；Ｙは、ハロゲンであり；Ａは、Ｃ＝Ｏであり；かつ、Ｂは、ＮＨ、酸素および硫黄からなる群より選択される）。この参照文献は、これらの化合物がＣ型肝炎ウイルス感染を治療または予防するために用いられ得ることを教示または示唆するものではない。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は、式（Ｉ）
【化８】
2009519240.tif 000004
（式中、Ｒ1は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ6および
【化９】
2009519240.tif 000005
からなる群より選択され、
Ｒ6およびＲ7は独立に、Ｈ、Ｃ1−Ｃ12アルキル、Ｃ3−Ｃ12シクロアルキル、Ｃ1−Ｃ11ヘテロシクロアルキル、Ｃ2−Ｃ9ヘテロアリールまたはＣ6−Ｃ12アリールから選択され、そのいずれも場合により置換されていてもよく、Ｇは、Ｈまたはヒドロキシルから選択され、Ｙは、Ｏ、ＮＨまたはＳであり、ＸはＨ、ハロ、Ｃ1−Ｃ12アルキル、Ｃ3−Ｃ12シクロアルキル、Ｃ1−Ｃ12パーフルオロアルキル、Ｃ1−Ｃ12アルコキシ、Ｃ1−Ｃ12アルキルチオ、アミノ、Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノ、Ｃ2−Ｃ12ジアルキルアミノ、およびＣＮからなる群より選択され、かつ、ｎは、０、１、２または３である）の化合物、あるいは、そのプロドラッグ、製薬上許容される塩、または薬学的に活性な代謝物に向けられる。
【０００８】
本発明はまた、式（ＩＩ）
【化１０】
2009519240.tif 000006
（式中、
Ｒ1は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ6および
【化１１】
2009519240.tif 000007
から選択され、Ｒ6およびＲ7は独立に、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ3−Ｃ12シクロアルキル、Ｃ1−Ｃ11ヘテロシクロアルキル、Ｃ2−Ｃ9ヘテロアリールまたはＣ6−Ｃ12アリールから選択され、そのいずれも場合により置換されていてもよく、Ｘは、Ｈ、ハロ、１〜４個の炭素原子のアルキル、３〜６個の炭素原子のシクロアルキル、１〜４個の炭素原子のパーフルオロアルキル、１〜４個の炭素原子のアルコキシ、１〜６個の炭素原子のアルキルチオ、アミノ、１〜４個の炭素原子のアルキルアミノ、２〜８個の炭素原子のジアルキルアミノ、およびＣＮからなる群より選択され、かつ、Ｇは、Ｈまたはヒドロキシルから選択される）の化合物、あるいは、そのプロドラッグ、製薬上許容される塩、または薬学的に活性な代謝物も含む。
【０００９】
本発明はまた、式（ＩＩＩ）
【化１２】
2009519240.tif 000008
（式中、
Ｒ1は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ6および
【化１３】
2009519240.tif 000009
から選択され、Ｒ6およびＲ7は独立に、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ3−Ｃ12シクロアルキル、Ｃ1−Ｃ11ヘテロシクロアルキル、Ｃ2−Ｃ9ヘテロアリールまたはＣ6−Ｃ12アリールから選択され、そのいずれも場合により置換されていてもよく、Ｘは、Ｈ、ハロ、１〜４個の炭素原子のアルキル、３〜６個の炭素原子のシクロアルキル、１〜４個の炭素原子のパーフルオロアルキル、１〜４個の炭素原子のアルコキシ、１〜６個の炭素原子のアルキルチオ、アミノ、１〜６個の炭素原子のアルキルアミノ、２〜１２個の炭素原子のジアルキルアミノ、およびＣＮからなる群より選択され、かつ、Ｇは、Ｈまたはヒドロキシルから選択される）の化合物、あるいは、そのプロドラッグ、製薬上許容される塩、または薬学的に活性な代謝物に向けられる。
【００１０】
本発明はまた、式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物を含む組成物、ならびに、Ｃ型肝炎ウイルス感染を治療または予防するため、あるいはＣ型肝炎ウイルスの複製を阻害するために、これらの化合物およびその組成物を用いる方法を含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明の目的において、用語「アルキル」には、１２個もの炭素原子を含有することのできる、直線状および分枝状の両方のアルキル部分が含まれる。アルキル部分は１〜６個の炭素原子を含有することが好ましいが、１〜４個の炭素原子を含有することがより好ましい。用語「シクロアルキル」とは、３〜１２個の炭素原子を有する脂環式炭化水素基を指すが、より好ましくは３〜６個の炭素原子を含有し、限定されるものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、ノルボルニル、またはアダマンチルが含まれる。これらの部分はさらに置換されていてもよい。
【００１２】
本発明の目的において、用語「ヘテロシクロアルキル」とは、その部分がＳ、Ｎ、およびＯからなる群より選択される１〜４個のヘテロ原子を含有する非芳香族複素環系（単環式または二環式）を指し、それには、限定されるものではないが、ピロリジン、ピロリン、１，３−ジオキソラン、イミダゾリン、イミダゾリジン、ピラゾリン、ピラゾリジン、ピラン、ピペリジン、ジオキサン、モルホリン、ジチオキサン(dithioxane)、チオモルホリン、ピペラジン、アゼチジニル、ヘキサヒドロアゼピニル、ジヒドロベンズイミダゾリル、ジヒドロベンゾフラニル、ジヒドロベンゾチエニル、ジヒドロベンゾオキサゾリル、ジヒドロフラニル、ジヒドロイミダゾリル、ジヒドロインドリル、ジヒドロイソオキサゾリル、ジヒドロイソチアゾリル、ジヒドロオキサジアゾリル、ジヒドロオキサゾリル、ジヒドロピラジニル(dihydropyrrazinyl)、ジヒドロピラゾリル、ジヒドロピリジニル、ジヒドロピリミジニル、ジヒドロピロリル、ジヒドロキノリニル、ジヒドロテトラゾリル、ジヒドロチアジアゾリル、ジヒドロチアゾリル、ジヒドロチエニル、ジヒドロトリアゾリル、ジヒドロアゼチジニル、ジヒドロ−１，４−ジオキサニル、テトラヒドロフラニル、テトラヒドロチエニル、テトラヒドロキノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、およびインドリンが挙げられる。ヘテロシクロアルキル部分は、１〜１１個の炭素原子を含有することが好ましい。これらの部分は、さらに置換されていてもよい。
【００１３】
本発明の目的において、用語「アリール」は、芳香族炭化水素部分と定義され、置換されていても非置換であってもよい。アリール基は、６〜１２個の炭素原子を含有することが好ましく、限定されるものではないが、フェニル、α−ナフチル、β−ナフチル、ビフェニル、アントリル、テトラヒドロナフチル、フェナントリル、フルオレニル、インダニル、ビフェニレニル、アセナフテニル、アセナフチレニル、またはフェナントレニル基の群から選択されてよい。アリール基は、場合により、限定されるものではないが、アルキル、アシル、アルコキシカルボニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシアルコキシ、アリールアルキル、アルキルアリール、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、トリフルオロプロピル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルキルチオ、−ＳＯ3Ｈ、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨアルキル、−ＳＯ2Ｎ（アルキル）2、−ＣＯ2Ｈ、ＣＯ2ＮＨ2、ＣＯ2ＮＨアルキル、および−ＣＯ2Ｎ（アルキル）2からなる群より選択される置換基でモノ−、ジ−、トリ−またはテトラ置換されてよい。アリール部分に好ましい置換基としては、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリフルオロメチル、およびトリフルオロメトキシが挙げられる。
【００１４】
本発明の目的において、用語「ヘテロアリール」は、ヘテロアリール部分がＳ、Ｎ、およびＯからなる群より選択される１〜４個のヘテロ原子を含有する５員または６員環である芳香族複素環系（単環式または二環式）と定義され、それには、限定されるものではないが、（１）フラン、チオフェン、インドール、アザインドール、オキサゾール、チアゾール、イソキサゾール、イソチアゾール、イミダゾール、Ｎ−メチルイミダゾール、ピリジン、ピリミジン、ピラジン、ピロール、Ｎ−メチルピロール、ピラゾール、Ｎ−メチルピラゾール、１，３，４−オキサジアゾール、１，２，４−トリアゾール、１−メチル−１，２，４−トリアゾール、１Ｈ−テトラゾール、１−メチルテトラゾール、ベンゾオキサゾール、ベンゾチアゾール、ベンゾフラン、ベンズイソキサゾール、ベンズイミダゾール、Ｎ−メチルベンズイミダゾール、アザベンズイミダゾール、インダゾール、キナゾリン、キノリン、ピロリジニル；（２）フェニル、ピリジン、ピリミジンまたはピリジジン環が、（ｉ）１個の窒素原子を有する６員の芳香族（不飽和）複素環と縮合している；（ｉｉ）２個の窒素原子を有する５員または６員の芳香族（不飽和）複素環と縮合している；（ｉｉｉ）１個の窒素原子を１個の酸素原子または１個の硫黄原子のいずれかとともに有する５員の芳香族（不飽和）複素環と縮合している；または（ｉｖ）Ｏ、Ｎ、またはＳから選択される１個のヘテロ原子を有する５員の芳香族（不飽和）複素環と縮合している、二環式の芳香族複素環が挙げられる。複素環は２〜９個の炭素原子を含有することが好ましい。これらの部分は、アルキル、アシル、アルコキシカルボニル、アルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシアルコキシ、アリールアルキル、アルキルアリール、アリール、ヘテロアリール、ヘテロアリールアルキル、シアノ、ハロゲン、ヒドロキシ、ニトロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、トリフルオロプロピル、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、ジアルキルアミノアルキル、ヒドロキシアルキル、アルコキシアルキル、アルキルチオ、−ＳＯ3Ｈ、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨアルキル、−ＳＯ2Ｎ（アルキル）2、−ＣＯ2Ｈ、ＣＯ2ＮＨ2、ＣＯ2ＮＨアルキル、および−ＣＯ2Ｎ（アルキル）2からなる群より選択される置換基でさらに置換されていてもよい。ヘテロアリール部分に好ましい置換基としては、アルキル、アルコキシ、ハロゲン、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、トリフルオロメチル、およびトリフルオロメトキシが挙げられる。ヘテロアリール部分は１〜９個の炭素原子を含有することが好ましい。
【００１５】
本発明の目的において、用語「アルコキシ」は、Ｃ1−Ｃ6−アルキル−Ｏ−と定義される；用語「アリールオキシ」は、アリール−Ｏ−と定義される；用語「ヘテロアリールオキシ」は、ヘテロアリール−Ｏ−と定義される；アルキル、アリール、およびヘテロアリールは上に定義されるとおりである。
【００１６】
本発明の目的において、用語「アリールアルキル」は、アリール−Ｃ1−Ｃ6−アルキル−と定義される；アリールアルキル部分としては、ベンジル、１−フェニルエチル、２−フェニルエチル、３−フェニルプロピル、２−フェニルプロピルなどが挙げられる。
【００１７】
本発明の目的において、用語「アルキルアリール」は、Ｃ1−Ｃ6−アルキル−アリール、例えばトリル基などと定義される。
【００１８】
本発明の目的において、用語「アルキルチオ」は、Ｃ1−Ｃ6−アルキル−Ｓ−と定義される。本発明の目的において、用語「チオ」およびメルカプト」とは、−ＳＨ基を指す。
【００１９】
本発明の目的において、「アルキルチオアルキル」、および「アルキルオキシアルキル」は、上記定義のアルコキシまたはアルキルチオでさらに置換されている上記定義のアルキル基を意味する。
【００２０】
本発明の目的において、「アリールチオ」および「ヘテロアリールチオ」は、上記定義のアリールまたはヘテロアリール基でさらに置換されているチオ基を意味する。
【００２１】
用語「アルキルアミノ」および「ジアルキルアミノ」とは、１または２個のアルキル基を含む部分を指し、アルキル鎖は１〜６個の炭素または１〜４個の炭素であり、該基は同じであっても異なっていてもよい。用語「アミノアルキル」とは、アミノ基でさらに置換されている、本明細書に定義されるアルキル基を指す。用語「モノアルキルアミノアルキル」および「ジアルキルアミノアルキル」とは、１〜６個の炭素原子のアルキル基と結合している窒素原子と結合されている（同一または異なる）１または２のアルキル基を含む、モノアルキルアミノおよびジアルキルアミノ部分を指す。
【００２２】
「アシル」は、式−（Ｃ＝Ｏ）−アルキルまたは−（Ｃ＝Ｏ）−パーフルオロアルキルのラジカルであり、アルキルラジカルまたはパーフルオロアルキルラジカルは１〜６個の炭素原子である；好ましい例としては、限定されるものではないが、アセチル、プロピオニル、ブチリル、およびトリフルオロアセチルが挙げられる。
【００２３】
本発明の目的において、用語「アルキルスルフィニル」は、Ｒ’が１〜６個の炭素原子のアルキルラジカルであるＲ’ＳＯ−ラジカルと定義される。アルキルスルホニルはＲ’ＳＯ2−ラジカルであり、Ｒ’は、１〜６個の炭素原子のアルキルラジカルである。
【００２４】
本発明の目的において、用語「ハロアルキル」は、少なくとも１個のハロゲン原子で置換されている、本明細書に定義されるアルキル基と定義される。この部分はまた、例えばトリフルオロメチル基のように、ハロゲン原子で完全に置換されていてもよい。
【００２５】
本発明の目的において、用語「パーフルオロアルキル」は、フッ素原子で完全に置換されている、本明細書に定義されるアルキル基と定義され、従って、式−ＣnＦ2n+1により定義される。例としては、−ＣＦ3および−ＣＦ2ＣＦ3が挙げられる。
【００２６】
本発明の目的において、用語「ヒドロキシアルキル」は、少なくとも１つのヒドロキシ基で置換されている、本明細書に定義されるアルキル基と定義される。
【００２７】
本発明の目的において、用語「ハロアルコキシ」および「ハロアルキルチオ」は、少なくとも１つのハロ原子でさらに置換されている、本明細書に定義されるアルコキシまたはアルキルチオ基と定義される。
【００２８】
本発明の目的において、用語「アルコキシアルコキシ」および「アルキルチオアルコキシ」は、別のアルコキシ基、例えばＣＨ3−Ｏ−ＣＨ2ＣＨ2−Ｏ−、またはアルキルチオ基でさらに置換されているアルコキシ基と定義される。本発明の目的において、用語「アルコキシアルキルチオ」および「アルキルチオアルキルチオ」は、別のアルコキシ基またはアルキルチオ基でさらに置換されているアルキルチオ基と定義される。
【００２９】
本発明の目的において、用語「オキソ」は、カルボニル基（すなわち、Ｃ＝Ｏ）と定義される。
【００３０】
用語「置換基」は、本明細書において、分子上の水素ラジカルを置換する原子ラジカル、官能基ラジカルまたは部分ラジカルを指すために用いられる。明確に別のものが記載されている場合を除いて、本明細書に記載されるいずれの部分も、当然、場合により、アルキル、アルケニル、アルキニル、ハロゲン、ハロアルキル、ヒドロキシアルキル、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ、シアノ、アミノアルキル、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、モノアルキルアミノアルキル、ジアルキルアミノアルキル、アルコキシ、ハロアルコキシ、アルコキシアルキル、アルコキシアルコキシ、アルキルチオアルコキシ、アルコキシアルキルチオ、アルキルチオアルキルチオ、オキソ、アルキルチオ、−ＳＨ、ハロアルキルチオ、アリール、アリールオキシ、アリールチオ、ヘテロアリール、ヘテロアリールオキシ、ヘテロアリールチオ、アシル、−ＣＯ2−アルキル、−ＳＯ3Ｈ、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−（アルキル）2、−ＣＯ2Ｈ、−ＣＯ2ＮＨ2、−ＣＯ2ＮＨ−アルキル、および−ＣＯ2Ｎ−（アルキル）2から選択される１またはそれ以上の基で置換され得ると考えられる。
【００３１】
本発明の目的において、用語「置換された」とは、分子上の水素ラジカルが別の原子ラジカル、官能基ラジカルまたは部分ラジカルで置換されていることを指す；これらのラジカルは一般に「置換基」と称される。
【００３２】
本発明の化合物は、不斉炭素原子を含有してよく、従って立体異性体、例えば鏡像異性体およびジアステレオマーを生じ得る。本発明の立体異性体は、カーン・インゴルド・プレローグ順位則に従って命名されている。式（■）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）において
立体化学を考慮せずに示されているが、本発明は、あらゆる個別の可能性のある立体異性体を含む；ならびにラセミ混合物およびその他のＲおよびＳ立体異性体の混合物（同等でない量の鏡像異性体の混合物であるスケールミック(scalemic)混合物）、およびそのプロドラッグ、製薬上許容される塩および薬学的に活性な代謝物を含む。注目すべきは、キラル中心で同一の相対配置を有する本発明の立体異性体が、それでもなお、示されたキラル中心での置換に応じて、異なるＲおよびＳの呼称(designation)を有し得ることである。
【００３３】
本発明の実施形態は、式（Ｉ）の化合物が、独立にＨ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ3−Ｃ12シクロアルキル、Ｃ1−Ｃ11ヘテロシクロアルキル、Ｃ2−Ｃ9ヘテロアリールまたはＣ6−Ｃ12アリールから選択されるＲ6およびＲ7により定義される形態であり、そのいずれも場合により置換されていてもよく、Ｘは、Ｈ、ハロ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ3−Ｃ12シクロアルキル、Ｃ1−Ｃ11ヘテロシクロアルキル、Ｃ1−Ｃ6パーフルオロアルキル、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、Ｃ1−Ｃ6アルキルチオ、アミノ、Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノ、Ｃ2−Ｃ12ジアルキルアミノ、およびＣＮからなる群より選択され、さらに、任意選択の置換基は、Ｃ1−Ｃ6アルキル、ハロゲン、Ｃ1−Ｃ6ハロアルキル、Ｃ1−Ｃ6ヒドロキシアルキル、ニトロ、アミノ、ヒドロキシ、シアノ、Ｃ1−Ｃ6アルキルアミノ、Ｃ2−Ｃ12ジアルキルアミノ、Ｃ1−Ｃ6アルコキシ、Ｃ1−Ｃ6ハロアルコキシ、Ｃ2−Ｃ12アルコキシアルキル、Ｃ2−Ｃ12アルコキシアルコキシ、オキソ、Ｃ1−Ｃ6アルキルチオ、メルカプト、Ｃ1−Ｃ6ハロアルキルチオ、Ｃ6−Ｃ12アリール、Ｃ6−Ｃ12アリールオキシ、Ｃ6−Ｃ12アリールチオ、Ｃ2−Ｃ9ヘテロアリール、Ｃ2−Ｃ9ヘテロアリールオキシ、Ｃ2−Ｃ9ヘテロアリールチオ、アシル、−ＣＯ2−Ｃ1−Ｃ6アルキル、−ＳＯ3Ｈ、−ＳＯ2ＮＨ2、−ＳＯ2ＮＨ−Ｃ1−Ｃ6アルキル、−ＳＯ2ＮＨ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）2、−ＣＯ2Ｈ、−ＣＯ2ＮＨ2、−ＣＯ2ＮＨ−Ｃ1−Ｃ6アルキル、および−ＣＯ2Ｎ−（Ｃ1−Ｃ6アルキル）2からなる群より選択される。
【００３４】
式（Ｉ）の化合物の別の実施形態は、Ｙが、ＯまたはＮＨであり、Ｘが、Ｈ、ハロ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4アルコキシ、およびＣ1−Ｃ4ハロアルキルからなる群より選択される形態である。
【００３５】
式（Ｉ）の化合物のより具体的な実施形態は、ｎが、０、１、または２であり、ＧがＨである形態である。別の具体的な実施形態は、Ｒ6およびＲ7が（存在する場合）Ｃ1−Ｃ4アルキルであり、メチルが好ましく、ＹがＮＨである形態である。別のより具体的な実施形態は、ｎが２であり、Ｘが、ハロ、好ましくは、ＣｌまたはＦである形態である。特により好ましいものは、一方のＸがＣｌであり、他方のＸがＦである形態である。
【００３６】
式（ＩＩ）の化合物の実施形態は、Ｒ6およびＲ7が独立に、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ3-Ｃ12シクロアルキル、またはＣ6−Ｃ12アリールから選択され、そのいずれも場合により置換されていてもよい形態であるが、Ｒ6またはＲ7がＣ1−Ｃ4アルキルであることがより好ましい。
【００３７】
式（ＩＩ）の化合物の別の実施形態は、ＧがＨである形態である。式（ＩＩ）の化合物の別の実施形態は、Ｘが、Ｈ、ハロ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4パーフルオロアルキルおよびＣ1−Ｃ4アルコキシの群から選択される形態であり、Ｘはハロであることが最も好ましい。より具体的な実施形態は、ｎが、０、１、または２であり、最も具体的な実施形態は、式（ＩＩ）の化合物が、−｛［Ｎ−（２−アセチル−５−クロロ−４−フルオロフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸または２−（２−（[５−クロロ−４−フルオロ−２−（１−メトキシイミノ−エチル）−フェニルアミノ］アセチルアミノ｝安息香酸である形態である。
【００３８】
式（ＩＩＩ）の化合物の実施形態は、Ｒ6およびＲ7が独立に、Ｈ、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ3−Ｃ12シクロアルキル、またはＣ6−Ｃ12アリールから選択され、そのいずれも場合により置換されていてもよい形態であるが、Ｒ6またはＲ7がＣ1−Ｃ4アルキルであることがより好ましい。
【００３９】
式（ＩＩＩ）の化合物のより具体的な実施形態は、ＧがＨである形態である。式（ＩＩＩ）の化合物の別の実施形態は、Ｘが、Ｈ、ハロ、Ｃ1−Ｃ4アルキル、Ｃ1−Ｃ4パーフルオロアルキルおよびＣ1−Ｃ4アルコキシの群から選択される形態であり、Ｘはハロであることが最も好ましい。より具体的な実施形態は、ｎが、１、２、または３であり、少なくとも１つのＸが、ハロである形態であるが、ｎが１または２であることがより好ましい。
【００４０】
本発明の好ましい化合物は、
２−｛［Ｎ−（６−アセチル−１，３−ベンゾジオキソール−５−イル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−（｛［Ｎ−［２−アセチル−４−クロロ−５−（メチルチオ）フェニル］グリシル｝アミノ）安息香酸;
２−（｛［Ｎ−［２−アセチル−４−クロロ−５−（ジメチルアミノ）フェニル］グリシル｝アミノ）安息香酸;
２−（｛［Ｎ−［２−アセチル−４−クロロ−５−（メチルアミノ）フェニル］グリシル｝アミノ）安息香酸;
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−５−クロロ−４−フルオロフェニル−Ｎ−メチルグリシル］アミノ｝安息香酸；
２−（｛［Ｎ−［２−アセチル−４−クロロ−５−（メチルスルフィニル）フェニル］グリシル｝アミノ）安息香酸；
２−｛［Ｎ−（２−アセチルフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸;
２−｛［Ｎ−（５−クロロ−４−メチル−２−プロピオニルフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−４，５−ジメチルフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−４−ブロモ−５−クロロフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸;
２−｛［Ｎ−（５−クロロ−４−フルオロ−２−プロピオニルフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−４，５−ジフルオロフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸;
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−４−クロロ−５−エトキシフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−４−クロロ−５−フルオロフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−４，５−ジクロロフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛[Ｎ−（２−アセチル−４−クロロ−５−メトキシフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛[Ｎ−（２−アセチル−４−フルオロ−５−メチルフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−５−クロロ−４−フルオロフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛[Ｎ−（４−クロロ−２−プロピオニルフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；
２−｛[Ｎ−（２−アセチル−４−クロロフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸;
２−（２−（[５−クロロ−４−フルオロ−２−（１−メトキシイミノ−エチル）−フェニルアミノ］−アセチルアミノ｝−安息香酸；
２−（｛［４，５−ジメチル−２−（トリフルオロアセチル）フェノキシ］アセチル｝アミノ｝安息香酸;
２−｛［（２−アセチル−４，５−ジメトキシフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸;
２−[２−（２−アセチル−５−メチルフェノキシ）アセチルアミノ］−安息香酸;
２−｛［（２−アセチル−４−エチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸;
２−｛［（２−アセチル−４−メチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸;
２−｛［（２−アセチル−５−フルオロフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸;
２−｛［（２−アセチル−５−メトキシフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸;
２−｛［（２−アセチル−５−クロロフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸;
２−｛［（２−ベンゾイル４−メチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸;
２−｛［（２−アセチル−４，５−ジメチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝−５−ヒドロキシ安息香酸;
２−｛［（２−アセチル−４，５−ジメチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（２−イソブチリル−４，５−ジメチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（２−アセチル−５−エチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（４，５−ジメチル−２−ペンタノイフェノキシ(pentanoyphenoxy)）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（２−ブチリル−４，５−ジメチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（４，５−ジメチル−２−プロピオニフェノキシ（propionyphenoxy））アセチル］アミノ｝安息香酸;
２−｛［（２−アセチル−４−クロロ−５−フルオロフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸；
２−｛［（２−アセチル−５−クロロ−４−フルオロフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸;
２−｛［（２−アセチル−４−フルオロ−５−メチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸;
２−｛［（２−アセチル−４，５−ジフルオロフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸;
２−｛［（４−クロロ−２−プロピオニルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸
２−｛［（２−アセチル−４−クロロ−５−メチルフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸
２−｛［（２−アセチル−４−フルオロフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸;
２−｛［（２−アセチル−４−クロロフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸;
２−｛［Ｎ−（２−アセチル−４−ブロモフェニル）グリシル］アミノ｝安息香酸；および
２−｛［（２−アセチル−４−エチル-３−ヒドロキシフェノキシ）アセチル］アミノ｝安息香酸
である。
【００４１】
本発明の化合物は酸であり、所望の塩は、無機または有機塩基、例えば（一級、二級、または三級）アミン；アルカリ金属またはアルカリ土類金属水酸化物などによる遊離酸の処理を含む、当分野に公知の任意の適した方法により調製してよい。適した塩の例証的な例としては、アミノ酸（例えば、グリシンおよびアルギニンなど）；アンモニア；一級、二級、および三級アミン；および環状アミン（例えば、ピペリジン、モルホリン、およびピペラジンなど）に由来する有機塩；ならびに、ナトリウム、カルシウム、カリウム、マグネシウム、マンガン、鉄、銅、亜鉛、アルミニウム、およびリチウムに由来する無機塩が挙げられる。
【００４２】
本発明の化合物が塩基である場合、所望の塩は、無機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸などによる遊離塩基の処理、あるいは、有機酸、例えば酢酸、マレイン酸、コハク酸、マンデル酸、フマル酸、マロン酸、ピルビン酸、シュウ酸、グリコール酸、サリチル酸、ピラノシジル酸(pyranosidyl acid)（グルクロン酸またはガラクツロン酸など）、α−ヒドロキシ酸（クエン酸または酒石酸など）、アミノ酸（アスパラギン酸またはグルタミン酸など）、芳香族酸（安息香酸または桂皮酸など）、スルホン酸（ｐ−トルエンスルホン酸またはエタンスルホン酸など）などによる遊離塩基の処理を含む、当分野で公知の任意の適した方法により調製してよい。
【００４３】
「プロドラッグ」は、生理的条件下で、または加溶媒分解により、または代謝によって、薬学的に活性な特定の化合物へ変換される化合物を意味することを意図する。プロドラッグは、生理的条件下で、または加溶媒分解により切断され得る部分、例えば−ＣＯ2Ｒ、−ＰＯ（ＯＲ）2または−Ｃ＝ＮＲなどを含有する、本発明の化合物の一形態の誘導体であってよい。製薬上許容される加溶媒分解または切断産物をもたらす任意の適したＲ置換基を用いてよい。そのような部分を含有するプロドラッグは、例えば、アミド、カルボン酸、またはヒドロキシル部分を含有する本発明の化合物を、適した試薬で処理することによる従来手順に従って調製してよい。「薬学的に活性な代謝物」は、特定の化合物の身体での代謝により生じた、薬理学的に活性な化合物を意味することを意図する。上記の式の本発明の化合物のプロドラッグおよび活性代謝物は、例えば、代謝研究による、当分野で公知の技法を用いて決定してよい。例えば、「Design of Prodrugs」, (Bundgaard, ed.), 1985, Elsevier Publishers B. V., Amsterdam, The Netherlands参照。「製薬上許容される塩」は、特定の化合物の遊離酸および塩基の生物学的効果を保持し、生物学的にまたはほかの点で有害でない塩を意味することを意図する。製薬上許容される塩の例としては、硫酸塩、ピロ硫酸塩、重硫酸塩、亜硫酸塩、重亜硫酸塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、メタリン酸塩、ピロリン酸塩、塩化物、臭化物、ヨウ化物、酢酸塩、プロピオン酸塩、デカン酸塩、カプリル酸塩、アクリル酸塩、蟻酸塩、イソ酪酸塩、カプロン酸塩、ヘプタン酸塩、プロピオル酸塩、シュウ酸塩、マロン酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、セバシン酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、ブチン−１，４−ジオアート、ヘキシン−１，６−ジオアート、安息香酸塩、クロロ安息香酸塩、メチル安息香酸塩、ジニトロ安息香酸塩、ヒドロキシ安息香酸塩、メトキシ安息香酸塩、フタル酸塩、スルホン酸塩、キシレンスルホン酸塩、フェニル酢酸塩、フェニルプロピオン酸塩、フェニル酪酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、γ−ヒドロキシ酪酸塩、グリコール酸塩、酒石酸塩、メタン−スルホン酸塩（メシル酸塩）、プロパンスルホン酸塩、ナフタレン−１−スルホナート、ナフタレン−２−スルホナート、およびマンデル酸塩が挙げられる。化合物または塩が固体である場合、本発明の化合物または塩が異なる結晶形態で存在し得ることは当業者に理解され、その全ては本発明および指定された式の範囲内にあることが意図される。
【００４４】
一実施形態では、本発明は、Ｃ型肝炎のＲＮＡ依存性ＲＮＡポリメラーゼＮＳ５Ｂを阻害する方法も提供する。この方法は、ＮＳ５Ｂ機能を低下または阻止するのに効果的な式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の化合物の量と細胞を接触させることを含む。細胞は、哺乳類細胞、より具体的には、ヒト細胞であってよい。細胞はまた、細菌細胞、例えば大腸菌などであってもよい。細胞としては、限定されるものではないが、神経細胞、内皮細胞、グリア細胞、ミクログリア細胞、平滑筋細胞、体細胞、骨髄細胞、肝細胞、腸細胞、生殖細胞、筋細胞、単核食細胞、内皮細胞、腫瘍細胞、リンパ球細胞、メサンギウム細胞、網膜上皮細胞、網膜血管細胞、神経節細胞または幹細胞が挙げられる。細胞は正常細胞、活性化細胞、新生細胞、罹患細胞、または感染細胞であってよい。
【００４５】
本発明は、Ｃ型肝炎感染を治療または予防するための活性治療物質としての使用のための本発明の化合物をさらに提供する。式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＩＩ）の化合物は、Ｃ型肝炎ウイルスの感染の治療または予防に特に役立つ。
【００４６】
本発明の方法の好ましい実施形態は、哺乳類に少なくとも１種類の式（Ｉ）、（ＩＩ）または（ＩＩＩ）の化合物の有効量を供給することを含む、哺乳類においてＣ型肝炎ウイルス感染を治療または予防することを含む。この実施形態は、少なくとも１種類の生物学的に活性な薬剤を哺乳類に供給することをさらに含んでよく、その薬剤は、インターフェロン、ペグ化インターフェロン、リバビリン、プロテアーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、低分子干渉ＲＮＡ化合物、アンチセンス化合物、ヌクレオチド類似体、ヌクレオシド類似体、免疫グロブリン、免疫調節薬、肝保護剤、抗炎症薬、抗生物質、抗ウイルス薬、および抗感染症化合物からなる群より選択され得る。このリストは単なる例を提供するものであり、完全に網羅することを意図しない。
【００４７】
本発明の方法のもう１つの実施形態では、Ｃ型肝炎ウイルスを有効量の少なくとも１つの式（Ｉ）、（ＩＩ）、または（ＩＩＩ）の化合物と接触させることを含む、Ｃ型肝炎ウイルスの複製を阻害することが含まれる。この実施形態は、哺乳類に少なくとも１種類の生物学的に活性な薬剤を供給することをさらに含んでよく、その薬剤は、インターフェロン、ペグ化インターフェロン、リバビリン、プロテアーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、低分子干渉ＲＮＡ化合物、アンチセンス化合物、ヌクレオチド類似体、ヌクレオシド類似体、免疫グロブリン、免疫調節薬、肝保護剤、抗炎症薬、抗生物質、抗ウイルス薬、および抗感染症化合物からなる群より選択され得る。このリストは単なる例を提供するものであり、完全に網羅することを意図しない。
【００４８】
本発明の化合物、あるいはそのプロドラッグ、薬学的に活性な代謝物または製薬上許容される塩、および医薬組成物は、好ましくは、経口的にまたは皮下に供給される。化合物は、病巣内、腹腔内、筋肉内または静脈内注射；注入；リポソーム媒介送達；局所、鼻腔、肛門、膣、舌下、尿道、経皮、くも膜下腔内、眼または耳送達により供給され得る。本発明の化合物を供給する際に一貫性を得るために、本発明の化合物は単位用量の形態であることが好ましい。適した単位用量形としては、錠剤、カプセル剤および小袋またはバイアル中の粉剤が挙げられる。このような単位用量形は０．１〜１００ｍｇの本発明の化合物、好ましくは、２〜５０ｍｇを含有してもよい。さらに一層好ましい単位投与形は、５〜２５ｍｇの本発明の化合物を含有する。本発明の化合物は、経口的に、約０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇの用量範囲で、好ましくは、０．１〜１０ｍｇ／ｋｇ用量範囲で投与してよい。このような化合物は、１日に１〜６回、より通例には１日に１〜４回投与してよい。効果的な量は、当業者には分かる；それはまた、化合物の形態によっても決まる。当業者であれば、生物検定において化合物の生物活性を測定するための経験的な活性試験を日常的に行うことができ、従って投与する投薬量を決定することができる。
【００４９】
本発明の化合物、あるいはそのプロドラッグ、薬学的に活性な代謝物または製薬上許容される塩、および医薬組成物は、従来の賦形剤、例えば増量剤、崩壊剤、結合剤、滑沢剤、香味料、着色添加物、または担体とともに処方されてよい。担体は、例えば、希釈液、エアロゾル、局所用担体、水溶液、非水溶液または固体担体であってよい。担体は、ポリマーまたは練り歯磨き粉であってもよい。本発明において担体は、任意の標準的な製薬上許容された担体、例えば、リン酸緩衝生理食塩水溶液、酢酸緩衝生理食塩水溶液、水、エマルジョン（油／水エマルジョンまたはトリグリセリドエマルジョンなど）、様々な種類の湿潤剤、錠剤、コーティング錠およびカプセル剤を包含する。
【００５０】
経口的にまたは局所的に供給される場合、このような化合物は様々な担体における送達により被験体に供給される。一般に、このような担体は、賦形剤、例えばデンプン、乳、糖、特定の種類の粘土、ゼラチン、ステアリン酸、タルク、植物性脂肪または植物油、ゴム類、またはグリコール類を含有する。特定の担体は、所望の送達方法に応じて選択される必要がある。例えば、リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）は静脈内または全身の送達に用いることができ、植物性脂肪、クリーム、軟膏(salves)、軟膏(ointments)、またはゲルは局所送達に用いてよい。
【００５１】
本発明の化合物、あるいはそのプロドラッグ、薬学的に活性な代謝物または製薬上許容される塩、および医薬組成物は、Ｃ型肝炎ウイルス感染の治療または予防に有用な、適した希釈剤、防腐剤、可溶化剤、乳化剤、アジュバントおよび／または担体とともに送達することができる。このような組成物は液体または凍結乾燥したまた別の方法で乾燥した処方物であり、様々なバッファー内容の希釈剤（例えば、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、酢酸塩、リン酸塩）、ｐＨおよびイオン強度、表面への吸収を妨げる添加剤（アルブミン類またはゼラチンなど）、界面活性剤（例えば、ＴＷＥＥＮ  ２０、ＴＷＥＥＮ  ８０、プルロニックＦ６８、胆汁酸塩類）、可溶化剤（例えば、グリセロール、ポリエチレングリセロール）、抗酸化剤（例えば、アスコルビン酸、メタ重亜硫酸ナトリウム）、防腐剤（例えば、チメロサール、ベンジルアルコール、パラベン類）、充填剤または張力調節剤（例えば、ラクトース、マンニトール）、ポリマーの共有結合（ポリエチレングリコールなど）、金属イオンとの錯体、あるいは、ヒドロゲルもしくはリポソームからなる粒状製剤、マイクロエマルジョン、ミセル、単層もしくは多層小胞、赤血球ゴースト、またはスフェロプラスト中またはその上への化合物の組み込みが含まれる。このような組成物は、化合物または組成物の物理的状態、溶解度、安定性、インビボ放出速度、およびインビボクリアランス速度に影響を及ぼす。組成物の選択は、Ｃ型肝炎ウイルス感染を治療または予防する能力のある化合物の物理的特性および化学的特性によって決まる。
【００５２】
本発明の化合物、あるいはそのプロドラッグ、薬学的に活性な代謝物または製薬上許容される塩、および医薬組成物は、一定の時間をかけて化合物を持続放出させるカプセル剤を介して局所的に送達され得る。制御放出または持続放出組成物としては、親油性デポー（例えば、脂肪酸、ワックス、オイル）中の製剤が挙げられる。
【００５３】
本発明は、組成物が送達系に組み込まれている、本医薬組成物のための制御放出の治療用投薬形態をさらに提供する。この投薬形態は、血液中の組成物の有効濃度が長期間にわたって維持され得るような方法で医薬組成物の放出を制御するが、組成物の放出はまた、血液中の濃度が長期間にわたり比較的一定であって治療結果を改善する、かつ／または副作用を最小限に抑えるものでなければならない。さらに、制御放出系は医薬組成物の血漿レベルの最小ピーク対トラフ変動に影響を及ぼし得る。
【００５４】
本発明は、感染した個体に本発明の有効量の化合物または医薬組成物を投与することを含む、ヒトにおいてＣ型肝炎感染を治療する方法をさらに提供する。
【００５５】
本発明はまた、式（Ｉ）
【化１４】
2009519240.tif 000010
（式中、Ｒ1は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ6および
【化１５】
2009519240.tif 000011
からなる群より選択され、Ｒ6およびＲ7は独立に、Ｈ、アルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリールまたはアリールから選択され、そのいずれも場合により置換されていてもよく、Ｇは、Ｈ、またはヒドロキシルから選択され、Ｙは、Ｏ、ＮＨ、またはＳであり、Ｘは、Ｈ、ハロ、アルキル、シクロアルキル、パーフルオロアルキル、アルコキシ、アルキルチオ、アミノ、アルキルアミノ、ジアルキルアミノ、およびＣＮからなる群より選択され、かつｎは、０、１、２、または３である）の化合物、または、そのプロドラッグ、製薬上許容される塩、もしくは薬学的に活性な代謝物と、製薬上許容される担体とを含む医薬組成物に向けられる。
【００５６】
本発明はまた、式（ＩＩ）
【化１６】
2009519240.tif 000012
（式中、Ｒ1は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ6および
【化１７】
2009519240.tif 000013
から選択され、Ｒ6およびＲ7は独立に、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ3−Ｃ12シクロアルキル、Ｃ1−Ｃ11ヘテロシクロアルキル、Ｃ2−Ｃ9ヘテロアリール、またはＣ6−Ｃ12アリールから選択され、そのいずれも場合により置換されていてもよく、Ｘは、Ｈ、ハロ、１〜４個の炭素原子のアルキル、３〜６個の炭素原子のシクロアルキル、パーフルオロアルキル、１〜４個の炭素原子のアルコキシ、１〜６個の炭素原子のアルキルチオ、アミノ、１〜４個の炭素原子のアルキルアミノ、２〜８個の炭素原子のジアルキルアミノ、およびＣＮからなる群より選択され、かつ、Ｇは、Ｈ、またはヒドロキシルから選択される）の化合物、または、そのプロドラッグ、製薬上許容される塩、もしくは薬学的に活性な代謝物と、製薬上許容される担体とを含む医薬組成物に向けられる。
【００５７】
本発明はまた、式（ＩＩＩ）
【化１８】
2009519240.tif 000014
（式中、Ｒ1は、−Ｃ（Ｏ）Ｒ6および
【化１９】
2009519240.tif 000015
から選択され、Ｒ6およびＲ7は独立に、Ｃ1−Ｃ6アルキル、Ｃ3−Ｃ12シクロアルキル、Ｃ1−Ｃ11ヘテロシクロアルキル、Ｃ2−Ｃ9ヘテロアリール、またはＣ6−Ｃ12アリールから選択され、そのいずれも場合により置換されていてもよく、Ｘは、Ｈ、ハロ、１〜４個の炭素原子のアルキル、３〜６個の炭素原子のシクロアルキル、パーフルオロアルキル、１〜４個の炭素原子のアルコキシ、１〜６個の炭素原子のアルキルチオ、アミノ、１〜６個の炭素原子のアルキルアミノ、２〜１２個の炭素原子のジアルキルアミノ、およびＣＮからなる群より選択され、かつ、Ｇは、Ｈ、またはヒドロキシルから選択される）の化合物、またはそのプロドラッグ、製薬上許容される塩、もしくは薬学的に活性な代謝物と、製薬上許容される担体とを含む医薬組成物に向けられる。
【００５８】
本発明は、有効量の少なくとも１種類の医薬組成物を哺乳類に供給することを含む、哺乳類においてＣ型肝炎ウイルス感染を治療または予防する方法を提供し、その少なくとも１種類の医薬組成物は式（Ｉ）、（ＩＩ）、または（ＩＩＩ）の化合物を含む。
【００５９】
本発明の方法は、有効量の少なくとも１種類の生理活性物質を哺乳類に供給することをさらに含む。本発明の方法の一実施形態において、少なくとも１種類の生理活性物質は、少なくとも１種類の医薬組成物より前に、少なくとも１種類の医薬組成物と同時に、または少なくとも１種類の医薬組成物の後に供給され、該生理活性物質は、インターフェロン、ペグ化インターフェロン、リバビリン、プロテアーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、低分子干渉ＲＮＡ化合物、アンチセンス化合物、ヌクレオチド類似体、ヌクレオシド類似体、免疫グロブリン、免疫調節薬、肝保護剤、抗炎症薬、抗生物質、抗ウイルス薬、および抗感染症化合物からなる群より選択される。
【００６０】
本発明の化合物、またはそのプロドラッグ、薬学的に活性な代謝物、もしくは製薬上許容される塩、またはその異性体はまた、互いに組合せて用いられる（すなわち、この化合物またはそのプロドラッグもしくは製薬上許容される塩を含む医薬組成物が、それぞれ同時に、またはどちらの順序でも順次投与される）場合に、ウイルス感染症、特にＣ型肝炎感染症、および生きている宿主の疾患の治療および予防に有用である。本明細書で提供される化合物の組合せは、それぞれの医薬組成物の形で、他の生理活性物質と同時に、または連続して、被験体にさらに供給されてよく、それには、限定されるものではないが、インターフェロン、ペグ化インターフェロン、リバビリン、プロテアーゼ阻害剤、ポリメラーゼ阻害剤、低分子干渉ＲＮＡ化合物、アンチセンス化合物、ヌクレオチド類似体、ヌクレオシド類似体、免疫グロブリン、免疫調節薬、肝保護剤、抗炎症薬、抗生物質、抗ウイルス薬、および抗感染症化合物からなる群が含まれる。本発明は、１またはそれ以上のアントラニル酸誘導体との併用療法、すなわち、少なくとも２つの医薬組成物（それぞれが本発明の異なる化合物またはそのプロドラッグもしくは製薬上許容される塩を含む）が、治療を必要とする被験体に互いに同時にまたは連続して供給される併用療法をさらに提供し、このような治療法は、アシクロビル、ファミシクロビル、バルガンシクロビルおよび関連化合物、リバビリンおよび関連化合物、アマンタジンおよび関連化合物、様々なインターフェロン（例えばインターフェロン−α、インターフェロン−β、インターフェロン−γなど）、ならびにインターフェロンの他の形態（ペグ化インターフェロンなど）などの、他の薬剤または増強剤を同時に、または連続して供給することをさらに含んでよい。さらに、例えばリバビリンおよびインターフェロンの組合せを、少なくとも１種類の本発明の化合物との多剤併用療法のためのさらなる組合せとして投与してもよい。
【００６１】
上記の生理活性物質のいずれかを用いる併用療法はまた、連続的なものであってよい。つまり、本発明の化合物またはそのプロドラッグもしくは製薬上許容される塩を含む第１の医薬組成物での治療の後に続いて本発明の第２の化合物を含む第２の医薬組成物での治療が行われてよく、第２の化合物は第１の化合物とは異なる；あるいは、治療は２種類両方またはそれ以上の医薬組成物を用いてよく、それぞれの医薬組成物は、本発明の異なる化合物またはそのプロドラッグもしくは製薬上許容される塩を同時に含む。この連続治療は、医薬組成物を用いる第１の治療の完了後、妥当な時間内に行ってよい。各々本発明の異なる化合物またはそのプロドラッグもしくは製薬上許容される塩を同時に含む個々の医薬組成物での治療は、同じ日用量で、または別の用量で提供されてよい。併用療法はまた、本発明の少なくとも１つの化合物またはそのプロドラッグもしくは製薬上許容される塩を含む医薬組成物が、少なくとも１種類の生理活性物質をさらに含む組成物の形で、すなわち単一用量として投与される場合にも提供され得る。同時および連続併用療法の両方のための（本発明の少なくとも２種類の化合物またはそのプロドラッグもしくは製薬上許容される塩を含む、混合された医薬組成物、あるいは、本発明の少なくとも１種類の化合物またはそのプロドラッグもしくは製薬上許容される塩と少なくとも１種類の生理活性物質を含む組成物のための）用量は、医薬組成物の成分の吸収、分布、代謝および排出速度、ならびに当業者に公知の他の因子によって決まる。医薬組成物の用量値はまた、軽減される予定の疾患の重篤度によっても変動する。さらに、任意の特定の被験体に関して、個別の投与計画およびスケジュールは、個体が必要とするもの、および医薬組成物の投与または投与の管理を行う人物の専門的判断に従って、時間をかけて調節されてよいことは当然理解される。
【００６２】
さらなる実施形態では、本発明の化合物は、ＨＣＶポリメラーゼのその他の阻害剤との併用療法の様式でヒトにおけるＨＣＶの治療に用いることができる。
【００６３】
なおさらなる実施形態では、本発明の化合物またはそのプロドラッグ、薬学的に活性な代謝物もしくはその製薬上許容される塩は、ＨＣＶ生活環の他の阻害剤（例えば、ＨＣＶ細胞の付着またはウイルス侵入、ＨＣＶの翻訳、ＨＣＶのＲＮＡ転写もしくは複製、ＨＣＶの成熟、集合もしくはウイルス放出の阻害剤、あるいはＨＣＶ酵素活性、例えばＨＣＶヌクレオチジルトランスフェラーゼ、ヘリカーゼ、プロテアーゼまたはポリメラーゼの阻害剤など）と共に、併用療法の様式で、ヒトにおけるＨＣＶの治療に用いることができる。
【００６４】
医薬組成物の併用療法には、その組合せが本発明群の化合物の抗ウイルス活性または医薬組成物自体の抗ウイルス活性を排除しない限り、本発明群の化合物またはそのプロドラッグもしくは製薬上許容される塩と、本発明群のその他の化合物またはそのプロドラッグもしくは製薬上許容される塩、または本発明群を除くその他の化合物との、任意の化学的に適合性のある組合せが含まれることが意図される。
【００６５】
本明細書において使用される用語「インターフェロン−α」とは、ウイルス複製および細胞増殖を阻害し、免疫応答を調節する、高度に相同な種特異的タンパク質のファミリーを意味する。典型的な適したインターフェロン−αとしては、限定されるものではないが、組換え型インターフェロンα−２ｂ、例えばＳｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｋｅｎｉｌｗｏｒｔｈ，ＮＪから入手可能なＩＮＴＲＯＮ−Ａ  ＩＮＴＥＲＦＥＲＯＮ、組換え型インターフェロンα−２ａ、例えばＨｏｆｍａｎ−Ｌａ  Ｒｏｃｈｅ，Ｎｕｔｌｅｙ，ＮＪから入手可能なＲｏｆｅｒｏｎインターフェロン、組換え型インターフェロンα−２Ｃ、例えばＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ，Ｉｎｃ．，Ｒｉｄｇｅｆｉｅｌｄ，Ｃｏｎｎ．から入手可能なＢＥＲＯＦＯＲ  ＡＬＰＨＡ  ２  ＩＮＴＥＲＦＥＲＯＮ、天然αインターフェロンの精製混合物であるインターフェロンα−ｎ１、例えば住友（日本）から入手可能なＳＵＭＩＦＥＲＯＮ、またはＧｌａｘｏ−Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  Ｌｔｄ．，Ｌｏｎｄｏｎ，Ｇｒｅａｔ  Ｂｒｉｔａｉｎから入手可能なＷｅｌｌｆｅｒｏｎインターフェロンα−ｎ１（ＩＮＳ）、あるいはコンセンサスαインターフェロン、例えば米国特許第４，８９７，４７１号および同第４，６９５，６２３号（参照によりその全文が本明細書に組み込まれる、詳細には、その実施例７、８または９）に記載のものおよびＡｍｇｅｎ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗｂｕｒｙ  Ｐａｒｋ、Ｃａｌｉｆ．から入手可能な特定の製品、またはＩｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓにより製造され、ＡＬＦＥＲＯＮという商標でＰｕｒｄｕｅ  Ｆｒｅｄｅｒｉｃｋ  Ｃｏ．，Ｎｏｒｗａｌｋ，Ｃｏｎｎ．から入手可能な天然インターフェロンの混合物であるインターフェロンα−ｎ３などが挙げられる。インターフェロンα−２ａまたはα２ｂの使用が好ましい。全てのインターフェロンの中でも、インターフェロンα２ｂは、慢性Ｃ型肝炎感染症の治療について世界中で最も広く認められているので最も好ましい。インターフェロンα２ｂの製造は米国特許第４，５０３，９０１号に記載されている。
【００６６】
本明細書において使用される用語「ペグ化インターフェロン」とは、インターフェロン、好ましくは、インターフェロンα−２ａおよびα−２ｂのポリエチレングリコール修飾複合体を意味する。好ましいポリエチレン−グリコール−インターフェロンα−２ｂ複合体は、ＰＥＧ．ｓｕｂ．１２０００−インターフェロンα２ｂである。本明細書において使用される「ＰＥＧ．ｓｕｂ．１２０００−ＩＦＮα」という語句は、国際出願第ＷＯ９５／１３０９０号の方法に従って調製され、インターフェロンα−２ａまたはα−２ｂアミノ基と平均分子量１２０００のポリエチレングリコールの間にウレタン結合を含有する複合体を意味する。
【００６７】
以下の実験の詳細は、本発明の理解を助けるために示されるものであり、後述の請求項に示される本発明を何らかの形で制限することを意図するものではなく、またそのように解釈されるべきではない。
【００６８】
本発明の化合物は、以下の反応スキームまたはその変法に従って容易に調製することができる。
【００６９】
Ｒ1がカルボニル含有部分である本発明の化合物は、以下のスキーム（スキーム１および２）に記載される通り合成することができる。その後に、これらの化合物は、下のスキーム３〜６に記載された方法により、または当業者に公知の他の方法により、Ｒ1が
【化２０】
2009519240.tif 000016
である、対応するオキシムに変換することができる。
【化２１】
2009519240.tif 000017
【化２２】
2009519240.tif 000018
【００７０】
本発明のフェニルアミン誘導体は、スキーム１に記載されるように、方法１により調製される。従って、メチルアントラニラート誘導体は式Ｌ1−ＣＨ2Ｃ（Ｏ）Ｌ2の試薬を用いてアシル化されて化合物２を生じ、Ｌ1は脱離基、例えばハロ、Ｏ−メシル、Ｏ−トリル、またはＯ−トリフラートであり、Ｌ2は脱離基、例えばハロである。好ましくは、該試薬はブロモアセチルブロミドである。化合物３のオルトアシル化は、スガサワの方法に従って（Sugasawa, Tsuotomu, Toyoda, Tatsuo, Adachi, Makoto; Sasakura, Kazuyuki. Aminohaloborane in Organic Synthesis. 1. Specific Ortho Substitution Reaction of Anilines. J. Am. Chem. Soc. (1978), 100(15), 4842-52）、化合物をルイス酸、またはルイス酸の組合せ、例えばボロントリブロミド、アルミニウムトリクロリド、および相当するニトリルを用いて処理し、それに続いて酸加水分解してアミノケトン４を生じることにより達成される。塩基、好ましくは三級アミン塩基、例えばＮ、Ｎ−ジエチルイソプロピルアミン、トリエチルアミンおよびピリジンなどの存在下でのメチルＮ−アセチルアントラニラート２とアミノケトン４の反応により、アルキル化生成物５が得られる。当業者であれば、このアルキル化を達成するために用いられ得るその他の塩基に精通している。標準条件下でのエステルの加水分解から、最終生成物１が得られる。これらの化合物は、さらに誘導体化して対応するオキシム（スキーム３および４を参照）を形成することができる。
【００７１】
本発明のフェノキシおよびチオフェニル誘導体は、スキーム２に示されるように、方法２により調製される。従って、オルト−アシルフェノールまたはオルト−アシルチオフェノール誘導体７は、対応する酸塩化物およびルイス酸と置換フェノールまたはチオフェノール６を反応させることにより調製される。この方法論は、ミューショーらにより記載されている(Mewshaw, R.E.; Marquis, K.L.; Shi, X.; McGaughey, G.; Stack, G.; et al.; Tetrahedron; EN; 54; 25; 1998; 7081-7108)。式Ｒ’ＯＣ（Ｏ）Ｌ2の試薬を用いるアルキル化により（Ｒ’はアルキルまたはアリールから選択され、Ｌ2はハロである）、エステル８が得られる。好ましくは、該試薬はエチルヨードアセタートである。次に、エステル８は塩基性加水分解により、酸９へと変換される。次に、化合物９を、標準的なペプチド結合法を用いてアントラニル酸誘導体と結合させ、最終生成物１０を得る。標準的な結合法の例としては、化合物９を対応する酸ハロゲン化物に変換し、次に、非反応性溶媒中でアントラニル酸誘導体と反応させる方法である。この変換は、オキサリルクロリド、チオニルクロリド、リン酸トリクロリド、リン酸ペンタクロリド、Ｐｈ3ＰＢｒ2、Ｐｈ3Ｐ／ＣＢｒＣｌ3、Ｐｈ3Ｐ／ＣＣｌ4などの試薬を用いて達成され得る。当業者であれば、カルボン酸から酸ハロゲン化物を形成するために用いることのできるその他の類似の試薬も承知している。次に、これらの化合物は、対応するオキシムを形成するために、スキーム５および６に示されるように、さらに誘導体化することもできる。
【化２３】
2009519240.tif 000019
【化２４】
2009519240.tif 000020
【化２５】
2009519240.tif 000021
【化２６】
2009519240.tif 000022
【化２７】
2009519240.tif 000023
【００７２】
スキーム３は、対応するアミノケトン４から出発するオキシム誘導体１３を調製する一般法を図示する。アミノケトン４は、ヒドロキシルアミン、またはその誘導体、例えばアルコキシアミン（すなわち、ＣＨ3ＯＮＨ2）、Ｈ2ＮＯＳＯ3ＨまたはＨＯＮ（ＳＯ3Ｎａ）と、酸または塩基の存在下で反応させるとオキシム１１が得られる。酸、例えばＨＣｌの使用が好ましい。次に、オキシムをベンジルエステル２と、既に本明細書に記載されるように、塩基性条件下で反応させるとオキシムエステル１２を形成し、それを次に鹸化すると最終生成物１３が得られる。
【００７３】
スキーム４は、スキーム１に記載される合成の異なるポイントでオキシム官能基を導入することにより最終生成物１３を得る別の方法を示す。従って、エステル５を、最初に、本明細書に記載されるヒドロキシルアミン、またはその誘導体と反応させてオキシムを形成することができ、それを次に鹸化させて最終化合物１３を得ることができる。あるいは、酸化合物１（スキーム１に示される最終生成物であったもの）を、本明細書に記載されるヒドロキシルアミン、またはその誘導体と反応させて、オキシム最終生成物を形成してよい。
【００７４】
スキーム５は、本発明のフェノールまたはチオフェノール誘導体の対応するオキシムを調製する方法を示す。２−アシルフェノールまたは２−アシルチオフェノール７を、ヒドロキシルアミン、またはその誘導体、例えばアルコキシアミン（すなわちＣＨ3ＯＮＨ2）、Ｈ2ＮＯＳＯ3ＨまたはＨＯＮ（ＳＯ3Ｎａ）と、酸または塩基の存在下で反応させ、次に、既に本明細書に記載されるルイス酸の存在下で適当な酸ハロゲン化物と反応させてオキシム１４を得る。酸、例えばＨＣｌの使用が好ましい。次に、オキシムを、既に本明細書に記載されるように塩基性条件下で加水分解してオキシム酸１５を得、次にそれを、本明細書に記載される標準的なペプチド結合法を用いてアントラニル酸誘導体と結合させて最終生成物１６を得る。
【００７５】
スキーム６は、対応する酸１０（スキーム２の最終生成物であったもの）から、それをヒドロキシルアミン、またはその誘導体、例えばアルコキシアミン、Ｈ2ＮＯＳＯ3ＨまたはＨＯＮ（ＳＯ3ＮＡ）と、酸または塩基の存在下で反応させることにより、オキシム１６を調製する方法を図示する。酸、例えばＨＣｌの使用が好ましい。
【００７６】
スキーム７は、スキーム１に説明される一般的な方法を用いる、２−｛［Ｎ−（２−アセチル−５−クロロ−４−フルオロフェニル）グリシル(glycl)］アミノ｝安息香酸の具体的な合成を示す。
【００７７】
以下は、本発明の化合物の実施例である。これらの実施例は本発明の範囲全体を包含することを意図するものではなく、本発明の範囲の制限とみなされるべきではない。
【表１】
2009519240.tif 000024
【表２】
2009519240.tif 000025
【表３】
2009519240.tif 000026
【００７８】
生物学
本発明の化合物がＣ型肝炎ポリメラーゼを阻害する能力は、以下の試験手順により立証された。
【００７９】
ＢＫ株に由来するＮＳ５Ｂ（遺伝子型１ｂ）を、大腸菌で２１個のＣ末端アミノ酸が短いリンカーとヘキサヒスチジンタグ（ＧＳＨＨＨＨＨＨ；配列番号１）に置き換えられているタンパク質として発現させる。精製タンパク質を放射性ヌクレオチドと混合し、内在性の短いヘアピンにより刺激された、ヘテロポリマーＲＮＡ基質を複製させ、結果としておよそ７６０ｎｔの産物を得た。放射性生成物を膜で捕獲し、組み込まれなかったヌクレオチドを除去した後に定量する。
試薬：
１０ｍＭ ウリジン５’−トリホスファート（ＵＴＰ）（Ｐｒｏｍｅｇａ  ＃ｐ１１６Ｂ）
１０ｍＭ アデニン５’−トリホスファート（ＡＴＰ）（Ｐｒｏｍｅｇａ  ＃ｐ１１３Ｂ）
１０ｍＭ シチジン５’−トリホスファート（ＣＴＰ）（Ｐｒｏｍｅｇａ  ＃ｐ１１４Ｂ）
１０ｍＭ グアニン５’−トリホスファート（ＧＴＰ）（Ｐｒｏｍｅｇａ  ＃ｐ１１５Ｂ）
ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）１０ｍｇ／ｍｌ  ＮＥＢ（１０ｍｇ／ｍｌにて１００Ｘ）＃００７−ＢＳＡ
ＲＮａｓｅｉｎ（Ｐｒｏｍｅｇａ  ＃Ｎ２５１Ｘ）４０Ｕ／μl
Ａ−［３３Ｐ］−ＧＴＰ（ＮＥＮ−ｅａｓｙｔｉｄｅｓ  ＮＥＧ／６０６Ｈ  ３０００  Ｃｉ／ｍｍｏｌ、３７０ＭＢｑ／ｍｌ、１０ｍＣｉ／ｍｌ）
Ｆａｌｃｏｎポリプロピレン９６ウェルプレート（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ♯３５１１９０）
Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社マルチスクリーンアッセイシステム−９６ウェル−濾過プレート  ＃ＭＡＤＥ  ＮＯＢ  ５０
Ｏｐｔｉｐｈａｓｅ  Ｓｕｐｅｒｍｉｘ（Ｗａｌｌａｃ）Ｆｉｓｈｅｒ処方
Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ１４５０−１０６カセットで用いるためのＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍｕｌｔｉｓｃｒｅｅｎライナー[（Ｗａｌｌａｃ）Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＃１４５０−４３３］
１Ｍ （Ｎ−［２−ヒドロキシエチル］ピペラジン−Ｎ’−[２−エタンスルホン酸］）（ＨＥＰＥＳ）、ｐＨ７．３  Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃ社（ＵＳ１６９２４−５００ｍｌ）
１Ｍ ＭｇＣｌ2（ＳＩＧＭＡ  ＃Ｍ１０２８）
ジチオトレイトール（ＤＴＴ）（固体）（ＳＩＧＭＡ  ＃Ｄ９７７９）
ＲＮａｓｅフリー水（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ  ＃１０９７７−０２３）
ジメチルスルホキシド（Ａｌｄｒｉｃｈ  ＃２７６８５−５）
Ｂａｓｉｌｅｎ  Ｂｌｕｅ（Ｓｉｇｍａ、Ｂ５５２０）
０．５Ｍ エチレンジアミンテトラ酢酸（ＥＤＴＡ）、ｐＨ８（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ  ＃１５５７５−０２０）
第２リン酸ナトリウム（７水和物）（Ｎａ2ＨＰＯ4．７Ｈ2Ｏ；Ｂａｋｅｒ  ＃３８２４−０７）
リン酸（Ｂａｋｅｒ、＃０２６２．０２）
【００８０】
さらなる試薬調製：
−０．５Ｍ リン酸ナトリウムバッファー。１リットル当たり、１３４ｇｍのＮａ2ＨＰＯ4．７Ｈ2Ｏを秤量、９００ｍｌまで水を添加。ｐＨをリン酸で７．０に調整。１Ｌになるまで水を添加。
−ＲＮａｓｅフリー水中にヌクレオチドを１：１０００で希釈して１０μＭとする（ＧＴＰおよびＣＴＰ）。または１：１００で希釈して１００μＭとする（ＡＴＰおよびＵＴＰ）。
【００８１】
手順：
（１）１５％ ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）中１０μｇ／ｍｌの化合物１０μｌ
【００８２】
１％ ＤＭＳＯ中１００μｇ／ｍｌの化合物ストックから出発する場合：
１ウェルあたり５μｌの３０％ ＤＭＳＯを分注する
１ウェルあたり５μｌの化合物（１００μｇ／ｍｌ）を分注する。
【００８３】
１５％ ＤＭＳＯ中５０μｇ／ｍｌの化合物ストックから出発する場合：
１ウェルあたり１０μｌの化合物を添加する。
（２）酵素ミックス：
【表４】
2009519240.tif 000027
【００８４】
２０μｌの酵素ミックスをアッセイプレートの各ウェルに添加する。化合物および酵素を室温にて１５分間インキュベートする。
（３）鋳型ミックス−事前に準備
【００８５】
ＲＮＡの管（７５％ エタノールおよび０．３Ｍ 酢酸ナトリウム中に保存したもの５μｇ／管）を、微量遠心機中で２０分間４℃にて遠沈する。１本の管は１〜１．５プレートに対して十分な量である。管を反転させることにより、管からできる限り多くのエタノールを除去する。ペレットＲＮＡが管に付着しないように、穏やかに行う。ＲＮＡを真空乾燥する。１ｍｌのＤＥＰＣ水を添加してＲＮＡを再懸濁し、管のキャップを固く締める。ＲＮＡを溶解するため、ＲＮＡ溶液を氷上で約６０分間インキュベートし、穏やかにボルテックスする。短時間回転させて、キャップを開ける前に確実に全てのＲＮＡ溶液が管の底に下りているようにする。ＲＮＡ溶液を５ｍｌまたはそれよりも大きな管に穏やかに移す。別の３ｍｌのＤＥＰＣ水を添加する（合計容積４ｍｌ）。
【００８６】
以下の容積の試薬を添加する。
【表５】
2009519240.tif 000028
【００８７】
１回の反応あたり２０μｌの鋳型ミックスを添加する（すなわち、１回の反応あたり２０ｎｇのｐＯＦまたは約３ｎＭ）
（４）反応物を室温（２２〜２５℃）にて２時間インキュベートする。
（５）５０μｌの１７０ｍＭ ＥＤＴＡを添加することにより反応を停止させる。
ＥＤＴＡの終濃度は８５ｍＭである。
（６）Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ社マルチスクリーンアッセイプレートのフィルターを、２００μｌの０．５Ｍ リン酸ナトリウムバッファー、ｐＨ７．０を各ウェルに添加することにより予め湿らせる。室温にて２〜３分間そのままにしておく。
（７）マルチスクリーンフィルタープレートをＭｉｌｌｉｐｏｒｅ  Ｍａｎｉｆｏｌｄ上に置き、真空をオンにしてバッファーを貫流させる。真空をオフにする。８０μｌの反応生成物をフィルタープレートの各ウェルに移す。２〜３分間そのままにしておく。真空をオンにして反応生成物を濾過する。
（８）真空をオフにする。２００μｌの０．５Ｍ リン酸ナトリウムバッファー、ｐＨ７．０を各ウェルに添加してフィルターを洗浄する。真空をオンにする。
（８）の段階をさらに３回繰り返す。
（９）ポリプロピレン底を取り出す。ペーパータオルで底のフィルターをスポットドライさせる。フィルタープレートをベンチで１時間風乾する。４０μｌのＳｕｐｅｒ  Ｍｉｘシンチラントを添加する。プレートの上部をテープで密封する。プレートをＰａｃｋａｒｄキャリヤーまたはｍｉｃｒｏｂｅｔａキャリヤーに置く。
（１０）Ｐａｃｋａｒｄ  Ｔｏｐｃｏｕｎｔまたはｍｉｃｒｏ−ｂｅｔａカウンターを用いてプレートを計数する。Ｔｏｐ  ｃｏｕｎｔまたはｍｉｃｒｏｂｅｔａの33Ｐプログラムで33Ｐについて（例えばＰｒｏｇｒａｍ  １０を用いて）計数する。
【００８８】
阻害率は、バックグラウンドを差し引いた後、陽性対照（陰性対照を除くプレートの平均値）に対する活性の減少率として計算される。一次スクリーニングのヒットには７５％以上の阻害を示すものが選択された。
【００８９】
Ferrari et al. 1999. J. Virology 73： 1649-1654：「Characterization of soluble Hepatitis C virus RNA-dependent RNA polymerase expressed in E. coli およびTakamizawa et al 1991」 および J. Virology 65：1105−1113：「Structure and characterization of the Hepatitis C virus genome isolated from human carriers」を参照、両参照文献は参照により本明細書に組み込まれる。
【００９０】
本発明の化合物は、表ＩＩに要約されるようにＣ型肝炎ポリメラーゼを阻害した。
【表６】
2009519240.tif 000029
【表７】
2009519240.tif 000030
【００９１】
本発明の化合物が、ヒト肝細胞株に構成的に発現したＣ型肝炎ウイルスレプリコンを阻害する能力は、以下の試験手順により立証された。
【００９２】
クローンＡ細胞（Ａｐａｔｈ，ＬＬＣよりライセンス認可）はＨｕｈ−７細胞（ヒト肝癌細胞株）から誘導され、ＨＣＶレプリコン（１ｂ）ゲノムを同時増幅しながらＨＣＶ複製タンパク質を構成的に発現する。細胞をＤＭＥＭ／１０％ ＦＣＳ／１ｍｇ／ｍｌ Ｇ４１８（Ｇｉｂｃｏ社製Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ  ＃１１８１１−０２３；その他の培地の成分は、以下の「ｅｌｉｓａ培地」で説明されている通りである）中で維持し、継代する。３〜４日毎に１：３または１：４の継代によって、細胞単層をサブコンフルエントの状態に維持するよう注意を払わなければならない。レプリコンは細胞の代謝／増殖状態に極めて敏感であり、コンフルエントな単層（静止細胞）ではレプリコンのコピー数が急速に減少する。理想的な条件下では、各細胞は平均して１０００コピーのＨＣＶレプリコンゲノムを有する。
【００９３】
試薬：
Ｅｌｉｓａ培地：
ダルベッコ改変イーグル培地（ＤＭＥＭ）（Ｇｉｂｃｏ  ＃１２４３０−０４７）
２％ウシ胎児血清（ＦＣＳ）（ＨｙＣｌｏｎｅ  ＃ＳＨ３００７０．０３）
１Ｘ  ｐｅｎ／ｓｔｒｅｐ（Ｇｉｂｃｏ  ＃１５１４０−１２２）
１Ｘ  非必須アミノ酸（ＮＥＡＡ）（Ｇｉｂｃｏ  ＃１１１４０−０５０）
Ｇ４１８なし
グルタルアルデヒド（Ｆｉｓｈｅｒ  ＃０２９５７−４）
ＴＷＥＥＮ−２０、１０％（Ｒｏｃｈｅ  ＃１３３２４６５）
ＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｔ−８７８７）
リン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）中のＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋ（Ｐｉｅｒｃｅ  ＃３７５１５）
ＮＳ５ａモノクローナル抗体（Ｖｉｒｏｓｔａｔ  ＃１８７３）
ヤギ抗マウス−ＨＲＰモノクローナル抗体（ＢｉｏＲａｄ  ＃１７２−１０１１）
３，３’，５，５’テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）基質（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｔ−０４４０）
【００９４】
化合物の希釈／細胞のプレート装填：
薬剤プレート調製（母プレート）
１０μｌの化合物（ＤＭＳＯ中）を母プレートのカラム３に添加する。５μｌのＤＭＳＯを残りのカラムに添加する。母プレートは、連続希釈を行う準備ができるまでおいておく。
【００９５】
対照薬物
薬物および細胞の添加：
それぞれのプレートに対する方法は、以下を含む。
細胞プレート（娘プレート）を、５２μｌのＥｌｉｓａ培地を各ウェルに加えることにより準備する。
母プレートにおいて、５０μｌ／ウェルをカラム３からカラム１２まで連続的に移す。
８μｌを母プレートから娘プレートへ移す（全て９６ウェル）。
細胞が準備されるまで娘プレートをインキュベーター中に置く。
クローンＡ細胞を回収し、娘プレートに０．７×１０5細胞／ｍｌ、１００μｌ／ウェル直接でプレート装填する。
全てのプレートを３７℃、５％ ＣＯ2中で３日間インキュベートする。
【００９６】
Ｅｌｉｓａアッセイ：
培地を、シンクに振り出すことにより９６ウェルプレートから除去する（細胞は約８０％コンフルエントでなければならない）。
１３０μｌ／ウェルの１Ｘ  ＰＢＳ＋０．０５％のグルタルアルデヒドを添加する。
３７℃にて１時間インキュベートする。
シンクに振り出すことにより除去する。
３００μｌ／ウェルのＰＢＳで３回洗浄し、各洗浄について５分間振盪する。シンクに振り出すことにより除去する。
１３０μｌ／ウェルのＰＢＳ＋０．０５％のＴＷＥＥＮ−２０＋０．１％のＴＲＩＴＯＮ  Ｘ−１００を加える。
３７℃にて１０分間インキュベートする。
シンクに振り出すことにより除去する。
ＰＢＳ中３００μｌ／ウェルのＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋを加える。
３７℃にて１時間インキュベートする。
シンクに振り出すことにより除去する。
３００μｌ／ウェルのＰＢＳで３回洗浄し、各洗浄について５分間振盪する。シンクに振り出すことにより除去する。
最後の洗浄の間に、ＮＳ５ａモノクローナル抗体（Ｍａｂ）をＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋ＋０．０２％のＴＷＥＥＮ−２０中に１：１００希釈する。
最後の洗浄の後、５０μｌ／ウェルの希釈Ｍａｂを添加する。
３７℃にて１時間インキュベートする。
シンクに振り出すことにより除去する。
３００μｌ／ウェルのＰＢＳ＋０．０２％のＴＷＥＥＮ−２０で３回洗浄し、各洗浄について５分間振盪する。
シンクに振り出すことにより除去する。
最後の洗浄の間に、ヤギ抗マウス−ＨＲＰ  ＭａｂをＳｕｐｅｒｂｌｏｃｋ＋０．０２％のＴＷＥＥＮ−２０中に１：５００希釈する。
最後の洗浄の後、５０μｌ／ウェルの希釈Ｍａｂを添加する。
３７℃にて１時間インキュベートする。
シンクに振り出すことにより除去する。
３００μｌ／ウェルのＰＢＳ＋０．０２％のＴＷＥＥＮ−２０で５回洗浄し、各洗浄について５分間振盪する。シンクに振り出すことにより除去する。
３００μｌ／ウェルのＰＢＳで３回、各洗浄について５分間振盪して洗浄する。シンクに振り出すことにより除去する。
最後の洗浄の後、１３０μｌ／ウェルの室温のＴＭＢ基質を添加する。
青色が発色するまでインキュベートする。
１３０μｌ／ウェルの１Ｎ ＨＣｌを添加して反応を停止させる（色は青色から黄色に変わる）。
プレートを光学濃度（Ｏ．Ｄ．）４５０のフィルターで読み取る。
結果の分析：ＩＣ50（μＭ）；ＩＣ50（μｇ／ｍｌ）；阻害％
対照化合物：インターフェロン−ａ2；４〜３０Ｕ／ｍｌのＩＣ５０
【配列表】
2009519240000001.app
【国際調査報告】
2009519240.tif 000037
2009519240.tif 000038