(57)【要約】  本発明は、ＩＬ−１７の抗原決定基に特異性を有する抗体分子、抗体分子の治療的使用、及び前記抗体分子を生成するための方法に関する。
2009540855.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
重鎖を含む、ヒトＩＬ−１７に結合する中和抗体であって、重鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｈ１に対して配列番号１で示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｈ２に対して配列番号２で示される配列を有するＣＤＲ、及びＣＤＲ−Ｈ３に対して配列番号３で示される配列を有するＣＤＲの少なくとも１つを含む、中和抗体。
【請求項２】
重鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｈ１に対して配列番号１で示される配列、ＣＤＲ−Ｈ２に対して配列番号２で示される配列、及びＣＤＲ−Ｈ３に対して配列番号３で示される配列を含む、請求項１に記載の中和抗体。
【請求項３】
軽鎖を含む、ヒトＩＬ−１７に結合する中和抗体であって、軽鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｌ１に対して配列番号４で示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｌ２に対して配列番号５で示される配列を有するＣＤＲ、及びＣＤＲ−Ｌ３に対して配列番号６で示される配列を有するＣＤＲの少なくとも１つを含む、中和抗体。
【請求項４】
軽鎖をさらに含み、軽鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｌ１に対して配列番号４で示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｌ２に対して配列番号５で示される配列を有するＣＤＲ、及びＣＤＲ−Ｌ３に対して配列番号６で示される配列を有するＣＤＲの少なくとも１つを含む、請求項１又は請求項２に記載の中和抗体。
【請求項５】
軽鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｌ１に対して配列番号４で示される配列、ＣＤＲ−Ｌ２に対して配列番号５で示される配列、及びＣＤＲ−Ｌ３に対して配列番号６で示される配列を含む、請求項３又は請求項４に記載の中和抗体。
【請求項６】
重鎖の可変ドメインが３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲＨ−１の配列は配列番号１で示される配列に少なくとも６０％の同一性又は類似性を有し、ＣＤＲＨ−２の配列は配列番号２で示される配列に少なくとも６０％の同一性又は類似性を有し、ＣＤＲＨ−３の配列は配列番号３で示される配列に少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する、ヒトＩＬ−１７に結合する中和抗体。
【請求項７】
軽鎖をさらに含み、軽鎖の可変ドメインが３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲＬ−１の配列は配列番号４で示される配列に少なくとも６０％の同一性又は類似性を有し、ＣＤＲＬ−２の配列は配列番号５で示される配列に少なくとも６０％の同一性又は類似性を有し、ＣＤＲＬ−３の配列は配列番号６で示される配列に少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する、請求項６に記載の中和抗体。
【請求項８】
重鎖が配列番号９で示される配列を含む、請求項１から５までのいずれか一項に記載の抗体。
【請求項９】
軽鎖が配列番号７で示される配列を含む、請求項１から５までのいずれか一項に記載の抗体。
【請求項１０】
配列番号９で示される配列を含む重鎖、及び配列番号７で示される配列を含む軽鎖を有する、ヒトＩＬ−１７に結合する中和抗体。
【請求項１１】
軽鎖の可変ドメインが請求項１０に記載の抗体の軽鎖可変ドメインに少なくとも８０％の同一性又は類似性を有する配列を含み、重鎖の可変ドメインが請求項１０に記載の抗体の重鎖可変ドメインに少なくとも８０％の同一性又は類似性を有する配列を含む、ヒトＩＬ−１７に結合する中和抗体。
【請求項１２】
配列番号１５で示される配列を含む重鎖、及び配列番号１１で示される配列を含む軽鎖を有する、ヒトＩＬ−１７に結合する中和抗体。
【請求項１３】
重鎖及び軽鎖が、請求項１２に記載の対応する抗体の重鎖及び軽鎖に少なくとも８０％同一又は類似である、ヒトＩＬ−１７に結合する中和抗体。
【請求項１４】
１００ｐＭ又はそれより良好な、ヒトＩＬ−１７に対する結合親和性を有する中和抗体。
【請求項１５】
請求項１０に記載の抗体と同じエピトープに結合する、ヒトＩＬ−１７に結合する中和抗体。
【請求項１６】
１００ｐＭ又はそれより良好なヒトＩＬ−１７に対する結合親和性を有し、請求項１０に記載の抗体のヒトＩＬ−１７との結合を交差阻害し、請求項１０に記載の抗体によってヒトＩＬ−１７の結合から交差阻害される、ヒトＩＬ−１７に結合する中和抗体。
【請求項１７】
請求項１０に記載の抗体によって結合されるヒトＩＬ−１７上のエピトープ。
【請求項１８】
２ｎＭ未満の濃度で０．８ｎＭヒトＩＬ−１７の活性を５０％阻害することができ、阻害活性が、ＩＬ−１７が誘導するＨｅｌａ細胞からのＩＬ−６の放出に対して測定される、ヒトＩＬ−１７に結合する中和抗体。
【請求項１９】
請求項１から１８までのいずれか一項に記載の抗体の（複数の）重鎖及び／又は軽鎖をコードする、単離されたＤＮＡ配列。
【請求項２０】
請求項１９に記載のＤＮＡ配列を１つ又は複数含むクローニングベクター又は発現ベクター。
【請求項２１】
ベクターが配列番号１４及び配列番号１８で示される配列を含む、請求項２０に記載のベクター。
【請求項２２】
請求項２０又は請求項２１に記載のクローニングベクター又は発現ベクターを１つ又は複数含む宿主細胞。
【請求項２３】
請求項１から１８までのいずれか一項に記載の抗体を生成するための方法であって、請求項２２に記載の宿主細胞を培養するステップと、抗体を単離するステップとを含む方法。
【請求項２４】
１つ又は複数の薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤、又は担体と組み合わせた、請求項１から１８までのいずれか一項に記載の抗体を含む薬剤組成物。
【請求項２５】
他の有効成分をさらに含む、請求項２４に記載の薬剤組成物。
【請求項２６】
ＩＬ−１７によって媒介され、又はＩＬ−１７のレベルの増大に関連する病理学的障害の治療又は予防で使用するための、請求項１から１８までのいずれか一項に記載の抗体、又は請求項２４若しくは請求項２５に記載の薬剤組成物。
【請求項２７】
ＩＬ−１７によって媒介され、又はＩＬ−１７のレベルの増大に関連する病理学的障害の治療又は予防のための薬剤の製造における、請求項１から１８までのいずれか一項に記載の抗体の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ＩＬ−１７の抗原決定基に特異性を有する抗体分子に関する。本発明は、抗体分子の治療的使用、及び前記抗体分子を生成するための方法にも関する。
【背景技術】
【０００２】
インターロイキン１７（ＩＬ−１７）は、様々な非免疫細胞から広範囲の他のサイトカインの分泌を刺激する炎症誘発性サイトカインである。ＩＬ−１７は、繊維芽細胞、ケラチノサイト、上皮細胞、及び内皮細胞などの接着細胞によるＩＬ−６、ＩＬ−８、ＰＧＥ２、ＭＣＰ−１、及びＧ−ＣＳＦの分泌を誘発することができ、ＩＣＡＭ−１の表面発現、Ｔ細胞の増殖を誘発することもでき、照射された繊維芽細胞の存在下で共培養した場合にＣＤ３４＋ヒト前駆細胞の好中球への成長及び分化を誘発することができる（Ｆｏｓｓｉｅｚら、１９９８年、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６巻、５４１〜５５１頁）。ＩＬ−１７は、活性化されたメモリーＴ細胞によって主に生成され、偏在的に分布する細胞表面受容体（ＩＬ−１７Ｒ）に結合することによって作用する（Ｙａｏら、１９９７年、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ、９巻、７９４〜８００頁）。これはまた、ＩＬ−１７ＲＡとＩＬ−１７ＲＣとの複合体に結合することによって作用することもある（Ｔｏｙら、２００６年、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１７７巻（１１）、３６〜３９頁）。炎症反応を制御する上で、類似且つ独特な役割を有する、数々のＩＬ−１７の相同体が同定されている。ＩＬ−１７サイトカイン／受容体ファミリーの総説については、Ｄｕｍｏｎｔ、２００３年、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ、１３巻、２８７〜３０３頁を参照されたい。
【０００３】
ＩＬ−１７は、関節リウマチ及び気道の炎症などの異常な免疫反応が媒介する数々の疾患、並びに臓器移植拒絶及び抗腫瘍免疫の一因となることがある。ＩＬ−１７活性の阻害薬は、当技術分野ではよく知られており、例えば、マウスＩＬ−１７Ｒ：ヒトＦｃ融合タンパク質、マウス可溶性ＩＬ−１７Ｒ、及び抗ＩＬ−１７モノクローナル抗体は、関節リウマチの様々なモデルにおいてＩＬ−１７の役割を実証するのに用いられている（Ｌｕｂｂｅｒｔｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００１年、１６７巻、１００４〜１０１３頁；Ｃｈａｂａｕｄら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ．、２００１年、３巻、１６８〜１７７頁）。さらに、中和ポリクローナル抗体は、腹膜の癒着の形成を低減するのに用いられている（Ｃｈｕｎｇら、２００２年、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、１９５巻、１４７１〜１４７８頁）。ラット由来抗ヒトＩＬ−１７抗体は、ＷＯ０４／１０６３７７に記載された。約２２０ｐＭの親和性を有するヒト化抗ＩＬ−１７抗体は、ＷＯ２００６／０５４０５９に記載された。約１８８ｎＭの親和性を有するモノクローナル抗ＩＬ−１７完全ヒト抗体は、ＷＯ２００６／０１３１０７に記載された。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
当技術分野では、患者を治療するのに適する改善された抗ＩＬ−１７抗体が依然として必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明者らは、目下、ＩＬ−１７が媒介する、又はＩＬ−１７のレベルの増大に関連する病理学的障害の治療又は予防における使用に適する高親和性中和抗ＩＬ−１７抗体を同定した。
【０００６】
抗体可変ドメインにおける残基は、Ｋａｂａｔらが考案したシステムにしたがって、慣例的に番号付けられている。このシステムは、Ｋａｂａｔら、１９８７年、「免疫学的対象のタンパク質の配列（Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ）」、ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ、ＵＳＡ（以降「Ｋａｂａｔら（上述）」）に述べられている。別段の指摘がある場合以外は、本明細書において、この番号付けのシステムを用いる。
【０００７】
Ｋａｂａｔの残基の呼称は、必ずしもアミノ酸残基の直線上の番号付けに直接対応するわけではない。実際の直線上のアミノ酸配列は、基本の可変ドメイン構造のフレームワークでも、相補性決定領域（ＣＤＲ）でも、構造上の構成要素の短縮又はそれへの挿入に対応する厳密なＫａｂａｔの番号付けよりも少ない又はさらなるアミノ酸を含んでいてよい。残基の正確なＫａｂａｔの番号付けは、「標準の」Ｋａｂａｔの番号付けをした配列を有する抗体の配列において、相同性の残基のアラインメントによって、所与の抗体に対して決定することができる。
【０００８】
重鎖可変ドメインのＣＤＲは、Ｋａｂａｔの番号付けシステムにしたがって、残基３１〜３５（ＣＤＲ−Ｈ１）、残基５０〜６５（ＣＤＲ−Ｈ２）、及び残基９５〜１０２（ＣＤＲ−Ｈ３）に位置する。しかし、Ｃｈｏｔｈｉａによると（Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｃ．及びＬｅｓｋ，Ａ．Ｍ．、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、１９６巻、９０１〜９１７頁（１９８７年））、ＣＤＲ−Ｈ１に等しいループは残基２６から残基３２に伸びている。したがって、本明細書で用いられる「ＣＤＲ−Ｈ１」は、Ｋａｂａｔの番号付けシステムとＣｈｏｔｈｉａのトポロジー的ループの定義の組合せによって記載されるように、残基２６から３５を含む。
【０００９】
軽鎖可変ドメインのＣＤＲは、Ｋａｂａｔの番号付けシステムにより、残基２４〜３４（ＣＤＲ−Ｌ１）、残基５０〜５６（ＣＤＲ−Ｌ２）、及び残基８９〜９７（ＣＤＲ−Ｌ３）に位置している。
【００１０】
本明細書で用いられる「中和抗体」の語は、例えば、ＩＬ−１７の、１つ又は複数のその受容体との結合を阻止することにより、ＩＬ−１７の生物学的なシグナル伝達活性を中和することができる抗体を示すものである。
【００１１】
本発明で用いるための抗体は、当技術分野で知られているあらゆる適切な方法を用いて得ることができる。ＩＬ−１７ポリペプチド、又はポリペプチドを発現する細胞を用いて、ＩＬ−１７を特異的に認識する抗体を生成することができる。ＩＬ−１７ポリペプチドは、「成熟した」ポリペプチド、又は生物学的に活性なその断片若しくは誘導体であってよい。好ましくは、ＩＬ−１７ポリペプチドは、成熟ヒトポリペプチドである。ＩＬ−１７ポリペプチドは、発現系を含む遺伝子操作された宿主細胞から当技術分野ではよく知られている方法によって調製してもよく、又は天然の生物学的供給源から回収してもよい。当出願における「ポリペプチド」の語は、ペプチド、ポリペプチド、及びタンパク質を含む。これらは別段の指定がない限り、交換可能に用いられる。ＩＬ−１７ポリペプチドは、いくつかの場合において、例えば、親和性タグに融合している融合タンパク質など、より大型のタンパク質の部分であってよい。ＩＬ−１７ポリペプチドに対して産生される抗体を得ることができ、この場合、動物、好ましくは非ヒトの動物に、よく知られているルーチンのプロトコール（例えば、「実験免疫学のハンドブック（Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ）」、Ｄ．Ｍ．Ｗｅｉｒ（編）、４巻、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｏｘｆｏｒｄ、Ｅｎｇｌａｎｄ、１９８６年を参照されたい）を用いてポリペプチドを投与することによって、動物を免疫感作することが必要である。ウサギ、マウス、ラット、ヒツジ、ウシ、又はブタなどの多くの温血動物を免疫感作することができる。しかし、マウス、ウサギ、ブタ、及びラットが一般的には好ましい。
【００１２】
本発明で用いるための抗体には、抗体全体、及び機能的に活性なその断片又は誘導体が含まれ、それだけには限定されないが、モノクローナル抗体、ヒト化抗体、完全ヒト抗体、又はキメラ抗体であってよい。
【００１３】
モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ技術（Ｋｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、１９７５年、Ｎａｔｕｒｅ、２５６巻、４９５〜４９７頁）、トリオーマ技術、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｚｂｏｒら、１９８３年、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ、４巻、７２頁）、及びＥＢＶハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅら、「モノクローナル抗体と癌治療（Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ）」、７７〜９６頁、Ａｌａｎ  Ｒ  Ｌｉｓｓ社、１９８５年）など、当技術分野で知られているあらゆる方法によって調製することができる。
【００１４】
本発明で用いるための抗体は、例えば、Ｂａｂｃｏｏｋ，Ｊ．ら、１９９６年、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、９３巻（１５）、７８４３〜７８４８１頁、ＷＯ９２／０２５５１、ＷＯ２００４／０５１２６８、及び国際特許出願番号ＷＯ２００４／１０６３７７に記載されている方法によって、特異的な抗体を生成するために選択された単一のリンパ球から産生された免疫グロブリン可変領域ｃＤＮＡをクローニング及び発現することによって、単一リンパ球抗体法を用いて産生することもできる。
【００１５】
ヒト化抗体（ＣＤＲグラフト化した抗体を含む）は、非ヒト種からの相補性決定領域（ＣＤＲ）を１つ又は複数、及びヒト免疫グロブリン分子からのフレームワーク領域を有する抗体分子である（例えば、ＵＳ５５８５０８９、ＷＯ９１／０９９６７を参照されたい）。ＣＤＲ全体ではなく、ＣＤＲの特異性決定残基を移すことだけが必要であり得ることが理解されよう（例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉら、２００５年、Ｍｅｔｈｏｄｓ、３６巻、２５〜３４頁を参照されたい）。ヒト化抗体は、ＣＤＲがそれに由来する非ヒト種に由来する１つ又は複数のフレームワーク残基を、任意選択でさらに含むことができる。
【００１６】
キメラ抗体は、軽鎖及び重鎖の遺伝子が異なる種に属する免疫グロブリン遺伝子セグメントからなるように遺伝子操作された免疫グロブリン遺伝子によってコードされる抗体である。
【００１７】
本発明で用いるための抗体は、当技術分野で知られている様々なファージディスプレイ方法を用いて産生することもでき、Ｂｒｉｎｋｍａｎら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１９９５年、１８２巻、４１〜５０頁、Ａｍｅｓら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、１９９５年、１８４巻、１７７〜１８６頁）、Ｋｅｔｔｌｅｂｏｒｏｕｇｈら、（Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９４年、２４巻、９５２〜９５８頁）、Ｐｅｒｓｉｃら、（Ｇｅｎｅ、１９９７年、１８７巻、９〜１８頁）、Ｂｕｒｔｏｎら、（Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９４年、５７巻、１９１〜２８０頁）、及びＷＯ９０／０２８０９、ＷＯ９１／１０７３７、ＷＯ９２／０１０４７、ＷＯ９２／１８６１９、ＷＯ９３／１１２３６、ＷＯ９５／１５９８２、ＷＯ９５／２０４０１、及びＵＳ５６９８４２６、５２２３４０９、５４０３４８４、５５８０７１７、５４２７９０８、５７５０７５３、５８２１０４７、５５７１６９８、５４２７９０８、５５１６６３７、５７８０２２５、５６５８７２７、５７３３７４３、及び５９６９１０８によって開示されているものを含む。
【００１８】
完全ヒト抗体は、重鎖及び軽鎖両方の可変領域及び定常領域（存在する場合は）が、全てヒト起源であり、又はヒト起源の配列に実質的に同一であり、必ずしも同じ抗体起源ではない。完全ヒト抗体の例には、例えば、上記に記載したファージディスプレイ方法によって生成された抗体、並びに、マウス免疫グロブリン可変及び定常領域遺伝子がそれらのヒト対応物によって置き換えられたマウスによって生成される抗体、例えば、ＥＰ０５４６０７３Ｂ１、ＵＳ５５４５８０６、ＵＳ５５６９８２５、ＵＳ５６２５１２６、ＵＳ５６３３４２５、ＵＳ５６６１０１６、ＵＳ５７７０４２９、ＥＰ０４３８４７４Ｂ１、及びＥＰ０４６３１５１Ｂ１における一般項に記載されているものなどが含まれる。
【００１９】
一実施形態では、本発明は、和抗体重鎖を含む、ヒトＩＬ−１７に特異性を有する中和抗体であって、重鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｈ１に対して図１（ｃ）配列番号１で示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｈ２に対して図１（ｃ）配列番号２で示される配列を有するＣＤＲ、及びＣＤＲ−Ｈ３に対して図１（ｃ）配列番号３で示される配列を有するＣＤＲの少なくとも１つを含む中和抗体を提供する。
【００２０】
別の一実施形態では、本発明は、重鎖の可変ドメインのＣＤＲ−Ｈ１、ＣＤＲ−Ｈ２、及びＣＤＲ−Ｈ３の少なくとも２つが以下：ＣＤＲ−Ｈ１に対して配列番号１で示される配列、ＣＤＲ−Ｈ２に対して配列番号２で示される配列、及びＣＤＲ−Ｈ３に対して配列番号３で示される配列から選択される、重鎖を含む、ヒトＩＬ−１７に特異性を有する中和抗体を提供する。例えば、抗体は、ＣＤＲ−Ｈ１が配列番号１で示される配列を有し、ＣＤＲ−Ｈ２が配列番号２で示される配列を有する重鎖を含むことができる。或いは、抗体は、ＣＤＲ−Ｈ１が配列番号１で示される配列を有し、ＣＤＲ−Ｈ３が配列番号３で示される配列を有する重鎖を含むことができ、又は、抗体は、ＣＤＲ−Ｈ２が配列番号２で示される配列を有し、ＣＤＲ−Ｈ３が配列番号３で示される配列を有する重鎖を含むことができる。不確かさを避けるために、並べ換え全てが含まれると理解される。
【００２１】
別の一実施形態では、本発明は、重鎖を含む、ヒトＩＬ−１７に特異性を有する中和抗体であって、重鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｈ１に対して配列番号１で示される配列、ＣＤＲ−Ｈ２に対して配列番号２で示される配列、及びＣＤＲ−Ｈ３に対して配列番号３で示される配列を含む中和抗体を提供する。
【００２２】
一実施形態では、本発明は、軽鎖を含む、ヒトＩＬ−１７に特異性を有する中和抗体であって、軽鎖の可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｌ１に対して図１（ｃ）配列番号４で示される配列を有するＣＤＲ、ＣＤＲ−Ｌ２に対して図１（ｃ）配列番号５で示される配列を有するＣＤＲ、及びＣＤＲ−Ｌ３に対して図１（ｃ）配列番号６で示される配列を有するＣＤＲの少なくとも１つを含む中和抗体を提供する。
【００２３】
別の一実施形態では、本発明は、軽鎖を含む、ヒトＩＬ−１７に特異性を有する中和抗体であって、軽鎖の可変ドメインのＣＤＲ−Ｌ１、ＣＤＲ−Ｌ２、及びＣＤＲ−Ｌ３の少なくとも２つが、ＣＤＲ−Ｌ１に対して配列番号４で示される配列、ＣＤＲ−Ｌ２に対して配列番号５で示される配列、及びＣＤＲ−Ｌ３に対して配列番号６で示される配列から選択される中和抗体を提供する。例えば、抗体は、ＣＤＲ−Ｌ１が配列番号４で示される配列を有し、ＣＤＲ−Ｌ２が配列番号５で示される配列を有する軽鎖を含むことができる。或いは、抗体は、ＣＤＲ−Ｌ１が配列番号４で示される配列を有し、ＣＤＲ−Ｌ３が配列番号６で示される配列を有する軽鎖を含むことができ、又は、抗体は、ＣＤＲ−Ｌ２が配列番号５で示される配列を有し、ＣＤＲ−Ｌ３が配列番号６で示される配列を有する軽鎖を含むことができる。不確かさを避けるために、並べ換え全てが含まれると理解される。
【００２４】
別の一実施形態では、本発明は、軽鎖を含む、ヒトＩＬ−１７に特異性を有する中和抗体であって、可変ドメインが、ＣＤＲ−Ｌ１に対して配列番号４で示される配列、ＣＤＲ−Ｌ２に対して配列番号５で示される配列、及びＣＤＲ−Ｌ３に対して配列番号６で示される配列を含む中和抗体を提供する。
【００２５】
本発明の抗体分子は、それぞれ相補的な軽鎖又は相補的な重鎖を含むことが好ましい。
【００２６】
したがって、一実施形態では、本発明による抗体は重鎖を含み、重鎖の可変ドメインは、ＣＤＲ−Ｈ１に対して配列番号１で示される配列、ＣＤＲ−Ｈ２に対して配列番号２で示される配列、及びＣＤＲ−Ｈ３に対して配列番号３で示される配列を含み、また軽鎖を含み、軽鎖の可変ドメインは、ＣＤＲ−Ｌ１に対して配列番号４で示される配列、ＣＤＲ−Ｌ２に対して配列番号５で示される配列、及びＣＤＲ−Ｌ３に対して配列番号６で示される配列を含む。
【００２７】
１つ又は複数のアミノ酸の置換、付加、及び／又は欠失は、抗体がＩＬ−１７に結合し、ＩＬ−１７の活性を中和する能力を大幅に変更せずに、本発明が提供するＣＤＲに対して行われることがあることが理解されよう。あらゆるアミノ酸の置換、付加、及び／又は欠失の効果は、当業者であれば、例えば、ＩＬ−１７の結合及び中和を決定するための実施例に記載されている方法を用いることによって容易に試験することができる。したがって、本発明は、１つ又は複数のＣＤＲにおける１つ又は複数のアミノ酸が別のアミノ酸で、好ましくは本明細書下記に定義する類似のアミノ酸で置換されている、ＣＤＲＨ−１（配列番号１）、ＣＤＲＨ−２（配列番号２）、ＣＤＲＨ−３（配列番号３）、ＣＤＲＬ−１（配列番号４）、ＣＤＲＬ−２（配列番号５）、及びＣＤＲＬ−３（配列番号６）から選択される１つ又は複数のＣＤＲを含むヒトＩＬ−１７に特異性を有する抗体を提供する。一実施形態では、本発明は、１つ又は複数のＣＤＲにおける１つ又は複数のアミノ酸は別のアミノ酸で、好ましくは本明細書下記に定義する類似のアミノ酸で置換されている、図１（ｃ）に示すＣＤＲＨ−１（配列番号１）、ＣＤＲＨ−２（配列番号２）、ＣＤＲＨ−３（配列番号３）、ＣＤＲＬ−１（配列番号４）、ＣＤＲＬ−２（配列番号５）、及びＣＤＲＬ−３（配列番号６）を含む、ヒトＩＬ−１７に特異性を有する抗体を提供する。
【００２８】
一実施形態では、本発明の抗体は重鎖を含み、重鎖の可変ドメインは３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲＨ−１の配列は配列番号１で示される配列に少なくとも６０％の同一性又は類似性を有し、ＣＤＲＨ−２は配列番号２で示される配列に少なくとも６０％の同一性又は類似性を有し、且つ／又はＣＤＲＨ−３は配列番号３で示される配列に少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する。別の一実施形態では、本発明の抗体は重鎖を含み、重鎖の可変ドメインは３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲＨ−１の配列は配列番号１で示される配列に少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、又は９８％の同一性又は類似性を有し、ＣＤＲＨ−２は配列番号２で示される配列に少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、又は９８％の同一性又は類似性を有し、且つ／又はＣＤＲＨ−３は配列番号３で示される配列に少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、又は９８％の同一性又は類似性を有する。
【００２９】
本明細書で用いられる「同一性」は、アラインされた配列におけるあらゆる特定の位置において、アミノ酸残基が配列間で同一であることを示すものである。本明細書で用いられる「類似性」の語は、アラインされた配列におけるあらゆる特定の位置において、アミノ酸残基が配列間で類似のタイプであることを示すものである。例えば、ロイシンが、イソロイシン又はバリンの代わりに置換してあってよい。互いにしばしば置換され得る他のアミノ酸には、それだけには限定されないが、
フェニルアラニン、チロシン、及びトリプトファン（芳香族の側鎖を有するアミノ酸）；
リシン、アルギニン、及びヒスチジン（塩基性の側鎖を有するアミノ酸）；
アスパラギン酸及びグルタミン酸（酸性の側鎖を有するアミノ酸）；
アスパラギン及びグルタミン（アミドの側鎖を有するアミノ酸）；並びに
システイン及びメチオニン（含硫の側鎖を有するアミノ酸）が含まれる。同一性及び類似性の度合いは、容易に計算することができる（「電算分子生物学（Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８８年、「バイオコンピューティングインフォマティックス及びゲノムプロジェクト（Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ．Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ）」、Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９３年、「配列データのコンピュータ分析、パート１（Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  １）」、Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．、及びＧｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．編、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ、１９９４年、「分子生物学における配列分析（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、１９８７年、「配列分析プライマー（Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ）」、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．、及びＤｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，編、Ｍ  Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１年、ＮＣＢＩより入手可能なＢＬＡＳＴ（商標）ソフトウエア（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、１９９０年、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２１５巻、４０３〜４１０頁；Ｇｉｓｈ，Ｗ．＆  Ｓｔａｔｅｓ，Ｄ．Ｊ．、１９９３年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔ．、３巻、２６６〜２７２頁、Ｍａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．ら、１９９６年、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．、２６６巻、１３１〜１４１頁；Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、１９９７年、Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．、２５巻、３３８９〜３４０２頁、Ｚｈａｎｇ，Ｊ．及びＭａｄｄｅｎ，Ｔ．Ｌ．、１９９７年、Ｇｅｎｏｍｅ  Ｒｅｓ．、７巻、６４９〜６５６頁））。
【００３０】
別の一実施形態では、本発明の抗体は軽鎖を含み、軽鎖の可変ドメインは３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲＬ−１の配列は配列番号４で示される配列に少なくとも６０％の同一性又は類似性を有し、ＣＤＲＬ−２は配列番号５で示される配列に少なくとも６０％の同一性又は類似性を有し、且つ／又はＣＤＲＬ−３は配列番号６で示される配列に少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する。別の一実施形態では、本発明の抗体は軽鎖を含み、軽鎖の可変ドメインは３つのＣＤＲを含み、ＣＤＲＬ−１の配列は配列番号４で示される配列に少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、又は９８％の同一性又は類似性を有し、ＣＤＲＬ−２は配列番号５で示される配列に少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、又は９８％の同一性又は類似性を有し、且つ／又はＣＤＲＬ−３は配列番号６で示される配列に少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、又は９８％の同一性又は類似性を有する。
【００３１】
一実施形態では、本発明が提供する抗体はモノクローナル抗体である。
【００３２】
一実施形態では、本発明が提供する抗体はキメラ抗体である。
【００３３】
一実施形態では、本発明が提供する抗体は、配列番号１から６（図１（ｃ））で提供される１つ又は複数のＣＤＲ又はその変異体を含む、ＣＤＲグラフト化抗体分子である。本明細書で用いられる「ＣＤＲグラフト化抗体分子」の語は、重鎖及び／又は軽鎖が、アクセプター抗体（例えば、ヒト抗体）の重鎖及び／又は軽鎖可変領域のフレームワーク中にグラフト化されているドナー抗体（例えば、マウスモノクローナル抗体）からの１つ又は複数のＣＤＲ（所望により１つ又は複数の修飾されているＣＤＲを含む）を含む抗体分子を意味する。総説については、Ｖａｕｇｈａｎら、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１６巻、５３５〜５３９頁、１９９８年を参照されたい。一実施形態ではＣＤＲ全体が移されるのではなく、本明細書上記に記載するあらゆる１つのＣＤＲからの特異性決定残基の１つ又は複数だけが、ヒト抗体フレームワークに移される（例えば、Ｋａｓｈｍｉｒｉら、２００５年、Ｍｅｔｈｏｄｓ、３６巻、２５〜３４頁を参照されたい）。一実施形態では、本明細書上記に記載される１つ又は複数のＣＤＲからの特異性決定残基だけが、ヒト抗体フレームワークに移される。別の一実施形態では、本明細書上記に記載される各ＣＤＲからの特異性決定残基だけが、ヒト抗体フレームワークに移される。
【００３４】
ＣＤＲ又は特異性決定残基をグラフト化する場合、マウス、霊長類、及びヒトのフレームワーク領域を含めた、それにＣＤＲが由来するドナー抗体のクラス／タイプを考慮して、あらゆる好適なアクセプターの可変領域のフレームワーク配列を用いることができる。好ましくは、本発明によるＣＤＲグラフト化抗体は、ヒトアクセプターフレームワーク領域、及び上記に記載したＣＤＲ又は特異性決定残基の１つ又は複数を含む可変ドメインを有する。したがって、一実施形態では、可変ドメインがヒトアクセプターフレームワーク領域及び非ヒトドナーＣＤＲを含む、ＣＤＲグラフト化中和抗体が提供される。
【００３５】
本発明で用いることができるヒトフレームワークの例には、ＫＯＬ、ＮＥＷＭ、ＲＥＩ、ＥＵ、ＴＵＲ、ＴＥＩ、ＬＡＹ、及びＰＯＭ（Ｋａｂａｔら、上述）がある。例えば、ＫＯＬ及びＮＥＷＭは重鎖に用いることができ、ＲＥＩは軽鎖に用いることができ、ＥＵ、ＬＡＹ、及びＰＯＭは重鎖及び軽鎖の両方に用いることができる。或いは、ヒト生殖系列の配列を用いてもよく、これらはｈｔｔｐ：／／ｖｂａｓｅ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／で入手できる。
【００３６】
本発明のＣＤＲグラフト化抗体では、アクセプターの重鎖及び軽鎖は、必ずしも同じ抗体に由来する必要はなく、所望により、異なる鎖に由来するフレームワーク領域を有する複合性の鎖を含んでいてもよい。
【００３７】
本発明のＣＤＲグラフト化抗体の重鎖に好ましいフレームワーク領域は、ヒト亜群ＶＨ３配列１−Ｕ３−１５とＪＨ４に由来する。したがって、重鎖フレームワーク領域がヒト亜群配列１−Ｕ３−１５とＪＨ４に由来する少なくとも１つの非ヒトドナーＣＤＲを含むＣＤＲグラフト化中和抗体が提供される。ヒトＪＨ４の配列は以下の通りである：（ＹＦＤＹ）ＷＧＱＧＴＬＶＴＶＳＳ。ＹＦＤＹモチーフは、ＣＤＲ−Ｈ３の部分であり、フレームワーク４の部分ではない（Ｒａｖｅｔｃｈ，ＪＶ．ら、１９８１年、Ｃｅｌｌ、２７巻、５８３〜５９１頁）。
【００３８】
本発明のＣＤＲグラフト化抗体の軽鎖に好ましいフレームワーク領域は、ヒト生殖系列亜群ＶＫ１配列２−１−（１）Ｌ４とＪＫ１に由来する。したがって、軽鎖フレームワーク領域がヒト亜群配列ＶＫ１  ２−１−（１）Ｌ４とＪＫ１に由来する少なくとも１つの非ヒトドナーＣＤＲを含むＣＤＲグラフト化中和抗体が提供される。ＪＫ１配列は以下の通りである：（ＷＴ）ＦＧＱＧＴＫＶＥＩＫ。ＷＴモチーフは、ＣＤＲ−Ｌ３の部分であり、フレームワーク４の部分ではない（Ｈｉｅｔｅｒ，ＰＡ．、ら、１９８２年、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２５７巻、１５１６〜１５２２頁）。
【００３９】
また、本発明のＣＤＲグラフト化抗体において、フレームワーク領域は、アクセプター抗体のものと厳密に同じ配列を有する必要はない。例えば、普通ではない残基を、そのアクセプター鎖のクラス又はタイプに対してより頻繁に生じる残基に変更してもよい。或いは、アクセプターフレームワーク領域における選択された残基を、それらがドナー抗体における同じ位置に見出される残基に対応するように変更してもよい（Ｒｅｉｃｈｍａｎｎら、１９９８年、Ｎａｔｕｒｅ、３３２巻、３２３〜３２４頁を参照されたい）。このような変更は、ドナー抗体の親和性を回復するのに最小の必要性に保つべきである。変更する必要があり得るアクセプターフレームワーク領域において残基を選択するためのプロトコールは、ＷＯ９１／０９９６７に述べられている。
【００４０】
好ましくは、本発明のＣＤＲグラフト化抗体分子において、アクセプターの重鎖がヒトＶＨ３配列１−Ｕ３−１５とＪＨ４を有する場合は、重鎖のアクセプターフレームワーク領域は、１つ又は複数のドナーＣＤＲの他に、少なくとも４９位にドナー残基を含む（Ｋａｂａｔら（上述）による）。したがって、少なくとも重鎖の可変ドメインの４９位の残基がドナー残基である、ＣＤＲグラフト化抗体が提供される。
【００４１】
好ましくは、本発明によるＣＤＲグラフト化抗体分子において、アクセプターの軽鎖がヒト亜群ＶＫ１配列２−１−（１）Ｌ４とＪＫ１を有する場合は、ドナー残基は移されず、すなわち、ＣＤＲだけが移される。したがって、ＣＤＲだけがドナーのフレームワークに移されたＣＤＲグラフト化抗体が提供される。
【００４２】
ドナー残基は、ドナー抗体、すなわち、それにＣＤＲがもともと由来する抗体からの残基である。
【００４３】
一実施形態では、本発明の抗体は重鎖を含み、重鎖の可変ドメインは図１（ｂ）配列番号９で示される配列を含む。
【００４４】
１つ又は複数のアミノ酸の置換、付加、及び／又は欠失を、抗体がＩＬ−１７に結合し、ＩＬ−１７の活性を中和する能力を大幅に変更せずに、本発明が提供する抗体の可変ドメインに対して行うことができることが理解されよう。あらゆるアミノ酸の置換、付加、及び／又は欠失は、例えば、ＩＬ−１７の結合及び中和を決定するための実施例に記載されている方法を用いることによって、当業者であれば容易に試験することができる。
【００４５】
別の一実施形態では、本発明の抗体は重鎖を含み、重鎖の可変ドメインは、配列番号９で示される配列に少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含む。一実施形態では、本発明の抗体は重鎖を含み、重鎖の可変ドメインは、配列番号９で示される配列に少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含む。
【００４６】
一実施形態では、本発明の抗体は軽鎖を含み、軽鎖の可変ドメインは、図１（ａ）配列番号７で示される配列を含む。
【００４７】
別の一実施形態では、本発明の抗体は軽鎖を含み、軽鎖の可変ドメインは、配列番号７で示される配列に少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含む。一実施形態では、本発明の抗体は軽鎖を含み、軽鎖の可変ドメインは、配列番号７で示される配列に少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含む。
【００４８】
一実施形態では、本発明の抗体は重鎖を含み、重鎖の可変ドメインは配列番号９で示される配列を含み、また軽鎖を含み、重鎖の可変ドメインは配列番号７で示される配列を含む。
【００４９】
本発明の別の一実施形態では、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、重鎖の可変ドメインは配列番号９で示される配列に少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含み、軽鎖の可変ドメインは配列番号７で示される配列に少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含む。好ましくは、抗体は重鎖を含み、重鎖の可変ドメインは、配列番号９で示される配列に少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含み、また軽鎖を含み、軽鎖の可変ドメインは、配列番号７で示される配列に少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含む。
【００５０】
本発明の抗体分子は、全長の重鎖及び軽鎖を有する完全な抗体分子又はその断片を含むことができ、それだけには限定されないが、Ｆａｂ、修飾されているＦａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、単一ドメイン抗体、ｓｃＦｖ、２価、３価、又は４価の抗体、Ｂｉｓ−ｓｃＦｖ、ダイアボディ、トリアボディ、テトラボディ、及び上記の任意のもののエピトープ結合性断片であってよい（例えば、Ｈｏｌｌｉｇｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｄｓｏｎ、２００５年、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、２３巻（９）、１１２６〜１１３６頁；Ａｄａｉｒ  ａｎｄ  Ｌａｗｓｏｎ、２００５年、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｒｅｖｉｅｗｓ−Ｏｎｌｉｎｅ２（３）、２０９〜２１７頁を参照されたい）。これらの抗体断片を創作し、製造するための方法は、当技術分野ではよく知られている（例えば、Ｖｅｒｍａら、１９９８年、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ、２１６巻、１６５〜１８１頁を参照されたい）。本発明で用いるための他の抗体断片には、国際特許出願ＷＯ２００５／００３１６９、ＷＯ２００５／００３１７０、及びＷＯ２００５／００３１７１に記載されているＦａｂ及びＦａｂ’断片が含まれる。多価抗体は、複数の特異性を含んでもよく、又は単一特異性でもよい（例えば、ＷＯ９２／２２８５３及びＷＯ０５／１１３６０５を参照されたい）。
【００５１】
本発明の抗体分子の定常領域ドメインが存在する場合は、提唱される抗体分子の機能、特に必要とされ得るエフェクター機能を考慮して選択することができる。例えば、定常領域ドメインは、ヒトＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、又はＩｇＭドメインであってよい。特に、抗体分子が治療用の使用を企図しており、抗体のエフェクター機能が必要とされる場合は、特にＩｇＧ１及びＩｇＧ３のアイソタイプの、ヒトＩｇＧ定常領域ドメインを用いることができる。或いは、抗体分子が治療上の目的を企図し、抗体のエフェクター機能が必要とされない場合、例えば、ＩＬ−１７活性を単に阻止するためには、ＩｇＧ２及びＩｇＧ４のアイソタイプを用いることができる。これらの定常領域ドメインの配列変異体を用いることもできることが理解されよう。例えば、Ａｎｇａｌら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、１９９３年、３０巻（１）、１０５〜１０８頁に記載されているように、２４１位のセリンがプロリンに変更されているＩｇＧ４分子を用いることができる。この変更を含むＩｇＧ４定常ドメインが特に好ましい。当業者であれば、抗体が様々な翻訳後修飾を受け得ることも理解されよう。これらの修飾のタイプ及び程度は、抗体を発現するために用いられる宿主細胞系、及び培養条件に依存することが多い。このような修飾には、グリコシル化、メチオニンの酸化、ジケトピペラジンの形成、アスパラギン酸の異性化、及びアスパラギンの脱アミドにおける変異が含まれ得る。頻度の高い修飾は、カルボキシペプチダーゼの作用による、カルボキシ末端の塩基性残基（リシン又はアルギニンなど）の喪失である（Ｈａｒｒｉｓ，ＲＪ．、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ、７０５巻、１２９〜１３４頁、１９９５年に記載されている通り）。したがって、図１（ｆ）、配列番号１５で与えられる抗体重鎖のＣ末端のリシンは、存在しなくてもよい。
【００５２】
一実施形態では、抗体重鎖はＣＨ１ドメインを含み、抗体軽鎖はκ又はλいずれかのＣＬドメインを含む。
【００５３】
好ましい一実施形態では、本発明が提供する抗体は、Ａｎｇａｌら、上述に記載されているように、重鎖定常領域が２４１位のセリンがプロリンによって置換されているヒトＩｇＧ４定常領域を含む、ヒトＩＬ−１７に特異性を有する中和抗体である。したがって、本発明は、重鎖が、図１（ｆ）配列番号１５で示される配列を含み、又はそれからなる抗体を提供する。
【００５４】
１つ又は複数のアミノ酸の置換、付加、及び／又は欠失は、抗体がＩＬ−１７に結合し、ＩＬ−１７活性を中和する能力を大幅に変更せずに、本発明が提供する抗体の可変及び／又は定常ドメインに対して行うことができることが理解されよう。あらゆるアミノ酸の置換、付加、及び／又は欠失は、当業者であれば、例えば、ＩＬ−１７の結合及び中和を決定するための実施例に記載されている方法を用いることによって容易に試験することができる。
【００５５】
本発明の一実施形態では、抗体は重鎖を含み、重鎖は、配列番号１５で示される配列に少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含む。好ましくは、抗体は重鎖を含み、重鎖は、配列番号１５で示される配列に少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含む。
【００５６】
一実施形態では、本発明による抗体分子は、図１（ｄ）、配列番号１１で示される配列を含む軽鎖を含む。
【００５７】
本発明の一実施形態では、抗体は軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号１１で示される配列に少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含む。好ましくは、抗体は軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号１１で示される配列に少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含む。
【００５８】
一実施形態では、本発明は、重鎖が配列番号１５で示される配列を含み、又はそれからなり、軽鎖が配列番号１１で示される配列を含み、又はそれからなる抗体を提供する。
【００５９】
本発明の一実施形態では、抗体は重鎖及び軽鎖を含み、重鎖は、配列番号１５で示される配列に少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含み、軽鎖は、配列番号１１で示される配列に少なくとも６０％の同一性又は類似性を有する配列を含む。好ましくは、抗体は重鎖を含み、重鎖は、配列番号１５で示される配列に少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含み、また、軽鎖を含み、軽鎖は、配列番号１１で示される配列に少なくとも７０％、８０％、９０％、９５％、又は９８％の同一性又は類似性を有する配列を含む。
【００６０】
また、本発明が提供するのは、本発明が提供する抗体、特に重鎖配列ｇＨ４（配列番号９）及び／又は軽鎖配列ｇＬ２（配列番号７）を含む抗体が結合しているヒトＩＬ−１７の特異的な領域又はエピトープである。
【００６１】
ヒトＩＬ−１７ポリペプチドの特異的な領域又はエピトープは、本発明が提供する抗体のいずれか1つと組み合わせて、当技術分野で知られているあらゆる適切なエピトープマッピング法によって同定することができる。このような方法の例には、抗体によって認識されるエピトープの配列を含む抗体に特異的に結合することができる最も小型の断片を有する本発明の抗体との結合に関して、ＩＬ−１７に由来する様々な長さのペプチドをスクリーニングすることが含まれる。ＩＬ−１７ペプチドは、合成的に生成してもよく、又はＩＬ−１７ポリペプチドのタンパク質分解性の消化によって生成してもよい。抗体に結合するペプチドは、例えば質量分析によって同定することができる。別の一例では、ＮＭＲ分光法を用いて本発明の抗体が結合するエピトープを同定することができる。同定した後は、本発明の抗体に結合するエピトープの断片を、必要であれば、同じエピトープに結合するさらなる中和抗体を得るための免疫原として用いることができる。
【００６２】
特に本発明による抗体の結合を交差阻害する抗体である、重鎖配列ｇＨ４（配列番号９）、及び軽鎖配列ｇＬ２（配列番号７）を含む抗体は、ＩＬ−１７活性を中和するのに、同様に有用であり得る。したがって、本発明は、ヒトＩＬ−１７に特異性を有する中和抗体も提供し、この中和抗体はヒトＩＬ−１７に対して上記に記載した抗体のいずれか1つの結合を交差阻害し、且つ／又はこれらの抗体のいずれか１つによってＩＬ−１７との結合から交差阻害される。一実施形態では、このような抗体は、本明細書の上記に記載する抗体と同じエピトープに結合する。別の一実施形態では、交差阻害性中和抗体は、本明細書の上記に記載する抗体が結合するエピトープと隣接及び／又は重複するエピトープに結合する。別の一実施形態では、本発明のこの態様の交差阻害性中和抗体は、本発明の抗体と同じエピトープ、或いは前記エピトープと隣接及び／又は重複するエピトープに結合しない。
【００６３】
交差阻害性抗体は、当技術分野におけるあらゆる適切な方法を用いて、例えば、交差阻害性抗体のヒトＩＬ−１７との結合が本発明の抗体の結合を妨げる場合、又はその逆の場合に、競合ＥＬＩＳＡ又はＢＩＡｃｏｒｅを用いることによって同定することができる。
【００６４】
一実施形態では、ヒトＩＬ−１７に特異性を有する中和抗体が提供され、この中和抗体は、その重鎖が配列ｇＨ４（配列番号９）を含み、その軽鎖が配列ｇＬ２（配列番号７）を含む抗体の、ヒトＩＬ−１７との結合を交差阻害する。一実施形態では、本発明が提供する交差阻害性抗体は、重鎖配列ｇＨ４（配列番号９）及び軽鎖配列ｇＬ２（配列番号７）を含む抗体の結合を、８０％を超えて、好ましくは８５％を超えて、より好ましくは９０％を超えて、さらにより好ましくは９５％を超えて阻害する。
【００６５】
或いは、又は更に、本発明のこの態様による中和抗体は、重鎖配列ｇＨ４（配列番号９）及び軽鎖配列ｇＬ２（配列番号７）を含む抗体によって、ヒトＩＬ−１７との結合から交差阻害され得る。したがって、重鎖配列ｇＨ４（配列番号９）及び軽鎖配列ｇＬ２（配列番号７）を含む抗体によって、ヒトＩＬ−１７との結合から交差阻害されるヒトＩＬ−１７に特異性を有する中和抗体分子も提供される。一実施形態では、本発明のこの態様によって提供される中和抗体は、重鎖配列ｇＨ４（配列番号９）及び軽鎖配列ｇＬ２（配列番号７）を含む抗体によってヒトＩＬ−１７との結合から、８０％を超えて、好ましくは８５％を超えて、より好ましくは９０％を超えて、さらにより好ましくは９５％を超えて阻害される。
【００６６】
一実施形態では、本発明が提供する交差阻害性抗体は完全ヒト抗体である。一実施形態では、本発明が提供する交差阻害性抗体はヒト化抗体である。一実施形態では、本発明が提供する交差阻害性抗体は、ヒトＩＬ−１７に１００ｐＭ又はそれを超える親和性を有する。
【００６７】
本発明の抗体分子は、好ましくはピコモルの、高い結合親和性を有することが好ましい。親和性は、天然又は組換えのＩＬ−１７を用いた本明細書の実施例に記載するようなＢＩＡｃｏｒｅを含めた、当技術分野で知られているあらゆる適切な方法を用いて測定することができる。好ましくは、親和性を、本明細書実施例に記載するように、組換えヒトＩＬ−１７を用いて測定する。好ましくは、本発明の抗体分子は、約２００ｐＭ又はそれより良好な結合親和性を有する。一実施形態では、本発明の抗体分子は、約１００ｐＭ又はそれより良好な結合親和性を有する。一実施形態では、本発明の抗体分子は、約５０ｐＭ又はそれより良好な結合親和性を有する。一実施形態では、本発明の抗体分子は、約２０ｐＭ又はそれより良好な結合親和性を有する。一実施形態では、本発明の抗体分子は、約１０ｐＭ又はそれより良好な結合親和性を有する。一実施形態では、本発明の抗体分子は完全ヒト抗体又はヒト化抗体であり、約１００ｐＭ又はそれより良好な結合親和性を有する。本発明が提供する抗体の親和性を、当技術分野で知られているあらゆる適切な方法を用いて変更することができることを理解されよう。したがって、本発明は、ＩＬ−１７に対する親和性の改善された本発明の抗体分子の変異体にも関する。このような変異体は、ＣＤＲの変異導入（Ｙａｎｇら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２５４巻、３９２〜４０３頁、１９９５年）、チェーンシャッフリング（ｃｈａｉｎ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０巻、７７９〜７８３頁、１９９２年）、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のミューテーター（ｍｕｔａｔｏｒ）株の使用（Ｌｏｗら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２５０巻、３５９〜３６８頁、１９９６年）、ＤＮＡシャッフリング（Ｐａｔｔｅｎら、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．、８巻、７２４〜７３３頁、１９９７年）、ファージディスプレイ（Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２５６巻、７７〜８８頁、１９９６年）、及びセクシャル（ｓｅｘｕａｌ）ＰＣＲ（Ｃｒａｍｅｒｉら、Ｎａｔｕｒｅ、３９１巻、２８８〜２９１頁、１９９８年）を含めた数々の親和性成熟のプロトコールによって得ることができる。Ｖａｕｇｈａｎら（上述）は、親和性成熟のこれらの方法を論じている。
【００６８】
一実施形態では、本発明の抗体分子は、例えば、実施例に記載するｉｎ  ｖｉｔｒｏのアッセイにおいてＩＬ−１７活性を中和する。一実施形態では、本発明は、２ｎＭ未満の濃度で０．８ｎＭヒトＩＬ−１７の活性を５０％阻害することができ、阻害活性が、ＩＬ−１７が誘導するＨｅｌａ細胞からのＩＬ−６の放出に対して測定される、ヒトＩＬ−１７に特異性を有する中和抗体を提供する。一実施形態では、ＩＬ−１７を５０％阻害する抗体の濃度は１ｎＭ未満である。一実施形態では、０．５ｎＭ未満である。一実施形態では、アッセイで用いるヒトＩＬ−１７は、天然ヒトＩＬ−１７である。一実施形態では、アッセイで用いるヒトＩＬ−１７は、組換えヒトＩＬ−１７である。一実施形態では、中和抗体は、ヒト化抗体又は完全ヒト抗体である。
【００６９】
所望により、本発明で用いるための抗体は、１つ又は複数のエフェクター分子にコンジュゲートしていてもよい。エフェクター分子が、単一のエフェクター分子、又は２つ若しくはそれを超える、本発明の抗体に付着することができる単一の部分を形成するように連結しているそのような分子を含み得ることが理解されよう。エフェクター分子に連結している抗体の断片を得るのが望まれる場合は、これを抗体断片が直接又はカップリング剤のいずれかによってエフェクター分子に連結している、標準の化学的な、又は組換えＤＮＡ手順により調製することができる。このようなエフェクター分子を抗体にコンジュゲートするための技術は、当技術分野ではよく知られている（Ｈｅｌｌｓｔｒｏｍら、「薬物送達の制御（Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ）」、第２版、Ｒｏｂｉｎｓｏｎら編、１９８７年、６２３〜５３頁；Ｔｈｏｒｐｅら、１９８２年、ｌｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖ．、６２巻、１１９〜５８頁；及びＤｕｂｏｗｃｈｉｋら、１９９９年、Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ、８３巻、６７〜１２３頁を参照されたい）。特定の化学的手順には、例えば、ＷＯ９３／０６２３１、ＷＯ９２／２２５８３、ＷＯ８９／００１９５、ＷＯ８９／０１４７６、及びＷＯ０３０３１５８１に記載されているものが含まれる。或いは、エフェクター分子がタンパク質又はポリペプチドの場合は、例えば、ＷＯ８６／０１５３３及びＥＰ０３９２７４５に記載されているように組換えＤＮＡの手順を用いて、連結を達成することができる。
【００７０】
本明細書に用いられるエフェクター分子の語には、例えば、抗悪性腫瘍薬、薬物、毒素、生物学的に活性なタンパク質、例えば酵素、他の抗体又は抗体断片、合成又は天然に存在するポリマー、核酸並びにその断片、例えばＤＮＡ、ＲＮＡ、及びそれらの断片、放射性核種、特に放射性ヨウ素、放射性同位元素、キレート化金属、ナノ粒子、並びにレポーターグループ、例えば、蛍光化合物、又はＮＭＲ若しくはＥＳＲ分光法によって検出することができる化合物が含まれる。
【００７１】
エフェクター分子の例には、細胞に有害な（例えば、死滅させる）あらゆる物質を含めた、細胞毒、又は細胞毒性物質が含まれ得る。例として、コンブレスタチン、ドラスタチン、エポチロン、スタウロスポリン、メイタンシノイド、スポンジスタチン、リゾキシン、ハリコンドリン、ロリジン（ｒｏｒｉｄｉｎ）、ヘミアスターリン（ｈｅｍｉａｓｔｅｒｌｉｎ）、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロマイド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン、ドキソルビシン、ダウノルビシン、ジヒドロキシアントラシンジオン、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、及びピューロマイシン、並びにこれらの類似体又は相同体が含まれる。
【００７２】
エフェクター分子には、また、それだけには限定されないが、代謝拮抗薬（例えば、メトトレキセート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパクロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）、及びロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロフォスファミド、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、及びｃｉｓ−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）シスプラチン）、アントラサイクリン（例えば、ダウノルビシン（以前のダウノマイシン）及びドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（以前のアクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、アンスラマイシン（ＡＭＣ）、カリケアマイシン、又はデュオカルマイシン）並びに有糸分裂阻害剤（例えば、ビンクリスチン、及びビンブラスチン）が含まれる。
【００７３】
他のエフェクター分子には、キレート化放射性核種、例えば、１１１Ｉｎ及び９０Ｙ、Ｌｕ１７７、ビスマス２１３、カリフォニウム２５２、イリジウム１９２、及びタングステン１８８／レニウム１８８；又は、それだけには限定されないが、アルキルホスホコリン、トポイソメラーゼＩ阻害薬、タキソイド、及びスラミンなどの薬物が含まれ得る。
【００７４】
他のエフェクター分子には、タンパク質、ペプチド、及び酵素が含まれる。対象の酵素には、それだけには限定されないが、タンパク質分解酵素、加水分解酵素、リアーゼ、イソメラーゼ、トランスフェラーゼが含まれる。対象のタンパク質、ポリペプチド、及びペプチドには、それだけには限定されないが、免疫グロブリン、アブリンなどの毒素、リシンＡ、シュードモナスの外毒素、又はジフテリア毒素、インスリンなどのタンパク質、腫瘍壊死因子、α−インターフェロン、β−インターフェロン、神経成長因子、血小板由来成長因子又は組織プラスミノーゲンアクチベーター、血栓剤又は血管新生阻害剤、例えばアンジオスタチン若しくはエンドスタチン、又は生物学的応答調節物質、例えば、リンホカイン、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、又は他の成長因子及び免疫グロブリンが含まれる。
【００７５】
他のエフェクター分子には、例えば診断において有用な検出可能な物質が含まれ得る。検出可能な物質の例には、様々な酵素、補欠分子族、蛍光物質、発光物質、生物発光物質、放射性核種、（ポジトロン放出断層撮影で使用するための）ポジトロン放出性金属、及び非放射性の常磁性の金属イオンが含まれる。診断として使用するための抗体とコンジュゲートすることができる金属イオンについては、一般に、米国特許第４７４１９００号を参照されたい。適切な酵素には、西洋ワサビのペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、又はアセチルコリンエステラーゼが含まれ、適切な補欠分子族には、ストレプトアビジン、アビジン、及びビオチンが含まれ、適切な蛍光物質には、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロライド、及びフィコエリスリンが含まれ、適切な発光物質には、ルミノールが含まれ、適切な生物発光物質には、ルシフェラーゼ、ルシフェリン、及びエクオリンが含まれ、適切な放射性核種には１２５Ｉ、１３１Ｉ、１１１Ｉｎ、及び９９Ｔｃが含まれる。
【００７６】
別の一例では、エフェクター分子は、ｉｎ  ｖｉｖｏで抗体の半減期を増大することができ、且つ／又は抗体の免疫原性を低減することができ、且つ／又は上皮のバリアを横切った抗体の免疫系への送達を増強することができる。このタイプの適切なエフェクター分子の例には、ポリマー、アルブミン、アルブミン結合性タンパク質、又はアルブミン結合性化合物、例えば、ＷＯ０５／１１７９８４に記載されているものなどが含まれる。
【００７７】
エフェクター分子がポリマーである場合は、これは一般的に合成であってもよく、又は天然に存在するポリマー、例えば、場合により置換されている直鎖又は分枝鎖のポリアルキレン、ポリアルケニレン、又はポリオキシアルキレンポリマー、或いは分枝又は非分枝の多糖、例えば、ホモ−又はヘテロ−多糖であってよい。
【００７８】
上記に記載した合成ポリマー上に存在することができる特定の任意選択の置換基には、１つ又は複数のヒドロキシ、メチル、又はメトキシ基が含まれる。
【００７９】
合成ポリマーの詳しい例には、場合により置換されている直鎖又は分枝鎖のポリ（エチレングリコール）、ポリ（プロピレングリコール）、ポリ（ビニルアルコール）、又はこれらの誘導体、特に場合により置換されているポリ（エチレングリコール）、例えばメトキシポリ（エチレングリコール）又はその誘導体が含まれる。
【００８０】
天然に存在する詳しいポリマーには、ラクトース、アミロース、デキストラン、グリコーゲン、又はそれらの誘導体が含まれる。
【００８１】
本明細書で用いられる「誘導体」には、反応性の誘導体、例えば、チオール選択性の反応性基、例えば、マレイミドなどが含まれることが企図される。反応性基は、直接、又はリンカーセグメントによってポリマーに連結していてよい。このような基の残基は、ある場合には、抗体断片とポリマーとの間の連結基として生成物の部分を形成することが理解されよう。
【００８２】
ポリマーサイズは所望により変化してよいが、一般的には、５００Ｄａから５００００Ｄａまでの、好ましくは５０００から４００００Ｄａの、より好ましくは２００００から４００００Ｄａの範囲の平均分子量にある。特にポリマーサイズは、腫瘍などのある組織に局在する能力、又は意図された循環半減期など、生成物の意図された使用をもとに選択することができる（総説については、Ｃｈａｐｍａｎ、２００２年、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、５４巻、５３１〜５４５頁を参照されたい）。したがって、例えば生成物が循環を離れ、組織に浸透することが企図される場合、例えば腫瘍の治療に使用するためには、低分子量のポリマー、例えば約５０００Ｄａの分子量のポリマーを使用すると有利であり得る。生成物が循環に留まる適用に対しては、例えば、２００００Ｄａから４００００Ｄａまでの範囲の分子量を有する、より高分子量のポリマーを用いるのが有利であり得る。
【００８３】
特に好ましいポリマーには、ポリアルキレンポリマー、例えば、ポリ（エチレングリコール）、又は、特に、メトキシポリ（エチレングリコール）若しくはその誘導体、特に分子量が約１５０００Ｄａから約４００００Ｄａまでの範囲であるものが含まれる。
【００８４】
一例では、本発明で用いるための抗体は、ポリ（エチレングリコール）（ＰＥＧ）部分に付着している。詳しい一例では、抗体は抗体断片であり、ＰＥＧ分子が、抗体断片において位置するあらゆる利用可能なアミノ酸側鎖又は末端アミノ酸官能基、例えば、あらゆる遊離のアミノ、イミノ、チオール、ヒドロキシル、又はカルボキシル基によって付着していてよい。このようなアミノ酸は抗体断片中に天然に存在していてもよく、又は組換えＤＮＡ法を用いて断片中に操作して入れてもよい（例えば、ＵＳ５２１９９９６、ＵＳ５６６７４２５、ＷＯ９８／２５９７１を参照されたい）。一例では、本発明の抗体分子は修飾されているＦａｂ断片であり、修飾は、エフェクター分子の付着を可能にするための、その重鎖の１つ又は複数のアミノ酸のＣ末端終端への付加である。好ましくは、付加のアミノ酸は、それに対してエフェクター分子が付着していてよい、１つ又は複数のシステイン残基を含む修飾されているヒンジ領域を形成する。２つ又はそれを超えるＰＥＧ分子を付着するのに、複数の部位を用いることができる。
【００８５】
ＰＥＧ分子が、抗体断片において位置する少なくとも１つのシステイン残基のチオール基によって共有結合していることが好ましい。修飾されている抗体断片に付着している各ポリマー分子は、断片に位置するシステイン残基のイオウ原子に共有結合していてよい。共有結合は、一般的にはジスルフィド結合、又は特に、イオウ−炭素結合である。チオール基を、好適に活性化されているエフェクター分子の付着点として用いる場合、例えば、チオール選択性の誘導体、例えば、マレイミド及びシステイン誘導体を用いることができる。上記に記載したポリマー修飾されている抗体断片の調製における開始物質として、活性化されたポリマーを用いることができる。活性化されたポリマーは、チオール反応性基、例えば、α−ハロカルボキシル酸又はエステル（例えば、ヨードアセトアミド）、イミド（例えば、マレイミド）、ビニルスルホン、又はジスルフィドを含むあらゆるポリマーであってよい。このような開始物質は、市場で入手することができ（例えば、Ｎｅｋｔａｒ、以前のＳｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  Ｉｎｃ．、Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ、ＡＬ、ＵＳＡから）、又は市販の開始物質から従来の化学的手順を用いて調製することができる。特定のＰＥＧ分子には、２０Ｋメトキシ−ＰＥＧ−アミン（Ｎｅｋｔａｒ、以前のＳｈｅａｒｗａｔｅｒ；Ｒａｐｐ  Ｐｏｌｙｍｅｒｅ及びＳｕｎＢｉｏから入手可能）、並びにＭ−ＰＥＧ−ＳＰＡ（Ｎｅｋｔａｒ、以前のＳｈｅａｒｗａｔｅｒから入手可能）が含まれる。
【００８６】
一実施形態では、抗体は修飾されているＦａｂ断片、又はＰＥＧ化されているｄｉＦａｂ、即ち、例えばＥＰ０９４８５４４又はＥＰ１０９００３７に開示されている方法にしたがって、それに共有結合しているＰＥＧ（ポリ（エチレングリコール））を有する。［「ポリ（エチレングリコール）の化学、生物工学及び生物学的応用（Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」、１９９２年、Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ  Ｈａｒｒｉｓ（編）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ、「ポリ（エチレングリコール）の化学及び生物学的応用（Ｐｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅｇｌｙｃｏｌ）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ）」、１９９７年、Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ  Ｈａｒｒｉｓ  ａｎｄ  Ｓ．Ｚａｌｉｐｓｋｙ（編）、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ、Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  ＤＣ、並びに「生物医科学のためのバイオコンジュゲーションタンパク質カップリング技術（Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」、１９９８年、Ｍ．Ａｓｌａｍ及びＡ．Ｄｅｎｔ，Ｇｒｏｖｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ；Ｃｈａｐｍａｎ，Ａ．、２００２年、Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ、２００２年、５４巻、５３１〜５４５頁も参照されたい］。一例では、ＰＥＧは、ヒンジ領域でシステインに付着している。一例では、ＰＥＧが修飾しているＦａｂ断片は、修飾されているヒンジ領域で単一のチオール基に共有結合しているマレイミド基を有している。リシン残基は、マレイミド基に共有結合することができ、分子量約２００００Ｄａを有するメトキシポリ（エチレングリコール）ポリマーは、リシン残基の各アミン基に付着することができる。Ｆａｂ断片に付着しているＰＥＧの全体の分子量は、したがって、約４００００Ｄａであってよい。
【００８７】
一実施形態では、本発明は、ヒトＩＬ−１７に特異性を有する中和抗体分子を提供し、これは、配列番号９で示される配列を含む重鎖、及び配列番号７で示される配列を含む軽鎖を有し、その重鎖のＣ末端終端に、エフェクター分子が付着する少なくとも１つのシステイン残基を含む修飾されているヒンジ領域を有する、修飾されているＦａｂ断片である。好ましくは、エフェクター分子はＰＥＧであり、（ＷＯ９８／２５９７１及びＷＯ２００４０７２１１６）に記載されている方法を用いて付着しており、その方法によって重鎖のＣ末端終端でリシル−マレイミド基がシステイン残基に付着しており、リシル残基の各アミノ基が、分子量約２００００Ｄａを有するメトキシポリ（エチレングリコール）残基に共有結合している。抗体に付着しているＰＥＧの総分子量は、したがって、約４００００Ｄａである。
【００８８】
別の一例では、エフェクター分子は、国際特許出願ＷＯ２００５／００３１６９、ＷＯ２００５／００３１７０、及びＷＯ２００５／００３１７１に記載されている方法を用いて抗体断片に付着していてよい。
【００８９】
本発明は、本発明の抗体分子の（複数の）重鎖及び／又は軽鎖をコードする単離されたＤＮＡ配列も提供する。ＤＮＡ配列が、本発明の抗体分子の重鎖又は軽鎖をコードすることが好ましい。本発明のＤＮＡ配列は、例えば、化学的プロセシング、ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、又はこれらのあらゆる組合せによって生成される、合成のＤＮＡを含むことができる。
【００９０】
本発明の抗体分子をコードするＤＮＡ配列は、当業者によく知られている方法によって得ることができる。例えば、抗体の重鎖及び軽鎖の部分又は全部をコードするＤＮＡ配列を、決定されたＤＮＡ配列から、又は対応するアミノ酸配列をもとに所望により合成することができる。
【００９１】
アクセプターフレームワーク配列をコードするＤＮＡは、当業者には広く入手可能であり、これらの知られているアミノ酸配列をもとに容易に合成することができる。
【００９２】
分子生物学の標準の技術を用いて、本発明の抗体分子をコードするＤＮＡ配列を調製することができる。望ましいＤＮＡ配列を、オリゴヌクレオチドの合成技術を用いて、完全に又は部分的に合成することができる。部位特異的突然変異誘発、及びポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）技術を、適宜用いることができる。
【００９３】
適切な配列の例を、図１（ｈ）配列番号８、図１（ｉ）配列番号１０、図１（ｊ）配列番号１３、図１（ｋ）配列番号１４、図１（ｌ）配列番号１７、及び図１（ｍ）配列番号１８に提供する。配列番号１８におけるヌクレオチド１〜５７、及び配列番号１４における１〜６０は、マウス抗体Ｂ７２．３からのシグナルペプチド配列をコードしており（Ｗｈｉｔｔｌｅら、１９８７年、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．、１巻（６）、４９９〜５０５頁）、これを切断して本発明の中和抗体分子を得る（シグナルペプチドはそれぞれ図１（ｇ）配列番号１６におけるアミノ酸残基１〜１９、及び図１（ｅ）配列番号１２における１〜２０に対応する）。本発明は、配列番号１７又は配列番号１８を含む本発明の抗体の重鎖をコードする単離されたＤＮＡ配列も提供する。本発明は、配列番号１３又は配列番号１４を含む本発明の抗体の軽鎖をコードする単離されたＤＮＡ配列も提供する。
【００９４】
本発明は、本発明のＤＮＡ配列を１つ又は複数含むクローニングベクター又は発現ベクターにも関する。したがって、本発明の抗体をコードする１つ又は複数のＤＮＡ配列を含むクローニングベクター又は発現ベクターが提供される。クローニングベクター又は発現ベクターが、それぞれ本発明の抗体分子の軽鎖及び重鎖をコードする２つのＤＮＡ配列を含むことが好ましい。本発明によるベクターが、配列番号１４及び配列番号１８で示される配列を含むことが好ましい。配列番号１８におけるヌクレオチド１〜５７、及び配列番号１４における１〜６０は、マウス抗体Ｂ７２．３からのシグナルペプチド配列をコードしており（それぞれ、配列番号１６における残基１〜１９、及び配列番号１２における１〜２０）、これを切断して本発明の中和抗体分子を得るのが最も好ましい。
【００９５】
それによってベクターを構築することができる一般的な方法である、トランスフェクション法及び培養法は、当業者によく知られている。これに関しては、「分子生物学の最新プロトコール（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ）」、１９９９年、Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌ（編）、Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、及びＣｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ製作の「マニアティスマニュアル（ｔｈｅ  Ｍａｎｉａｔｉｓ  Ｍａｎｕａｌ）」を参照されたい。
【００９６】
本発明の抗体をコードするＤＮＡ配列を１つ又は複数含む、クローニングベクター又は発現ベクターを1つ又は複数含む宿主細胞も提供される。本発明の抗体分子をコードするＤＮＡ配列を発現するために、あらゆる適切な宿主細胞／ベクター系を用いることができる。大腸菌などの細菌の、及び他の微生物系を用いることができ、又は哺乳動物などの真核細胞の宿主細胞の発現系も用いることができる。適切な哺乳動物の宿主細胞には、ＣＨＯ、ミエローマ、又はハイブリドーマの細胞が含まれる。
【００９７】
本発明は、本発明による抗体分子を生成するための方法であって、本発明の抗体分子をコードするＤＮＡからタンパク質の発現を導くのに適する条件下で本発明のベクターを含む宿主細胞を培養するステップと、抗体分子を単離するステップとを含む方法も提供する。
【００９８】
抗体分子は、重鎖又は軽鎖のポリペプチドだけを含むことができ、その場合、重鎖又は軽鎖のポリペプチドをコードする配列だけを、宿主細胞にトランスフェクトするのに用いる必要がある。重鎖及び軽鎖両方を含む生成物を生成するためには、第１のベクターが軽鎖ポリペプチドをコードし、第２のベクターが重鎖ポリペプチドをコードする、２つのベクターを細胞系にトランスフェクトすることができる。或いは、単一のベクターを用いることができ、ベクターは軽鎖及び重鎖のポリペプチドをコードする配列を含む。
【００９９】
本発明の抗体は病理学的状態の治療及び／又は予防に有用であるので、本発明は、１つ又は複数の薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤、又は担体と組み合わせた、本発明の抗体分子を含む薬剤組成物又は診断用組成物も提供する。したがって、薬物を製造するための本発明の抗体の使用が提供される。組成物は、通常薬学的に許容できる担体を含む、滅菌の薬剤組成物の部分として提供されるのが普通である。本発明の薬剤組成物は、薬学的に許容できる補助剤をさらに含むことができる。
【０１００】
本発明は、薬剤組成物又は診断用組成物を調製するための方法であって、本発明の抗体分子を、１つ又は複数の薬学的に許容できる賦形剤、希釈剤、又は担体と一緒に加え、混合するステップを含む方法も提供する。
【０１０１】
抗体分子は、薬剤組成物又は診断用組成物における唯一の有効成分であってもよく、或いは、抗−ＴＮＦ、抗−ＩＬ−１β、抗−Ｔ細胞、抗−ＩＦＮγ、若しくは抗−ＬＰＳ抗体などの他の抗体成分、又はキサンチンなどの非抗体成分を含めた他の有効成分を伴ってもよい。他の適切な有効成分には、耐性を誘発することができる抗体、例えば、抗−ＣＤ３、又は抗−ＣＤ４抗体が含まれる。
【０１０２】
薬剤組成物は、治療有効量の本発明の抗体を含むことが好ましい。本明細書で用いられる「治療有効量」の語は、標的とする疾患又は状態を治療し、回復させ、若しくは防止するのに、又は検出可能な治療の若しくは防止の効果を表すのに必要とされる治療用物質の量を意味する。あらゆる抗体に対して、治療有効量は、細胞培養アッセイ、又は、通常齧歯類、ウサギ、イヌ、ブタ、若しくは霊長類における動物モデルにおけるいずれかで、最初に概算することができる。動物モデルを用いて、好適な濃度範囲、及び投与経路を決定することもできる。次いで、このような情報を用いて、ヒトにおいて投与するのに有用な投与量及び経路を決定することができる。
【０１０３】
ヒト対象に対する正確な治療有効量は、疾患状態の重症度、対象の全体的な健康状態、対象の年齢、体重、及び性別、食事、投与時間及び頻度、薬物の組合せ、反応の感度、並びに治療に対する耐容性／反応に依存する。この量は、ルーチンの実験によって決定することができ、医師の判断の範囲内である。一般的には、治療有効量は、０．０１ｍｇ／ｋｇから５０ｍｇ／ｋｇまで、好ましくは０．１ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇまでである。薬剤組成物は、１投与量当たり本発明の有効物質の予め決定された量を含む単位投与量形態で提示すると便利であり得る。
【０１０４】
組成物を、患者に個々に投与してもよく、又は他の物質、薬物、若しくはホルモンと組み合わせて（例えば、同時に、逐次に、若しくは別々に）投与してもよい。
【０１０５】
本発明の抗体分子を投与する投与量は、治療すべき状態の性質、存在する炎症の程度、及び、抗体分子を予防的に用いるのか、又は現存する状態を治療するために用いるのかに依存する。
【０１０６】
投与の頻度は、抗体分子の半減期、及びその効果の持続に依存する。抗体分子の半減期が短い場合は（例えば、２から１０時間）、１日当たり１回又は複数回投与する必要があり得る。或いは、抗体分子の半減期が長い場合は（例えば、２から１５日）、１日当たり１回のみ、１週間当たり１回、又は１若しくは２ヶ月毎に１回投与することが単に必要となり得る。
【０１０７】
薬学的に許容できる担体は、それ自体、組成物を投与する個体に有害な抗体の生成を誘発してはならず、毒性であってはならない。適切な担体は、大型で、ゆっくり代謝される巨大分子、例えば、タンパク質、ポリペプチド、リポソーム、多糖、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、高分子アミノ酸、アミノ酸共重合体、及び非活性のウイルス粒子であってよい。
【０１０８】
鉱酸の塩（例えば、塩酸塩、臭化水素塩、リン酸塩、及び硫酸塩）、又は有機酸の塩（例えば、酢酸塩、プロピオン酸塩、マロン酸塩、及び安息香酸塩）などの薬学的に許容できる塩を用いることができる。
【０１０９】
治療用組成物における薬学的に許容できる担体は、水、食塩水、グリセロール、及びエタノールなどの液体をさらに含むことができる。また、補助的な物質、例えば、湿潤剤若しくは乳化剤、又はｐＨ緩衝物質が、このような組成物に存在してもよい。このような担体により、薬剤組成物は、患者が経口摂取するための、錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー及び懸濁剤として調合できるようになる。
【０１１０】
投与に好ましい形態には、注射剤又は注入剤など（例えば、ボーラス注射又は連続注入による）の非経口投与に適する形態が含まれる。生成物が注射剤又は注入剤用である場合は、油性若しくは水性のビヒクルにおける、懸濁液、溶液、又は乳濁液の形態をとることができ、懸濁化剤、保存剤、安定化剤、及び／又は分散剤などの製剤用物質を含むことができる。或いは、抗体分子は、使用前に好適な滅菌の液体で再構成するための乾燥形態であってもよい。
【０１１１】
調合した後、本発明の組成物を対象に直接投与することができる。治療すべき対象は動物であってもよい。しかし、組成物がヒト対象に投与するのに適合されていることが好ましい。
【０１１２】
本発明の薬剤組成物を、それだけには限定されないが、経口、静脈内、筋肉内、動脈内、髄内、くも膜下腔内、脳室内、経皮（ｔｒａｎｓｄｅｒｍａｌ）、経皮（ｔｒａｎｓｃｕｔａｎｅｏｕｓ）（例えば、ＷＯ９８／２０７３４を参照されたい）、皮下、腹腔内、経鼻、腸内、局所、舌下、膣内、又は直腸の経路を含めたあらゆる数々の経路によって投与することができる。また、皮下噴射機を用いて、本発明の薬剤組成物を投与してもよい。典型的には、治療用組成物を、液体の溶液又は懸濁液のいずれかとして、注入可能として調製してもよい。注射前に液体ビヒクルにおける溶液又は懸濁液に適する固体の形態も調製することができる。
【０１１３】
組成物の直接的な送達を、一般的には、皮下の、腹腔内の、静脈内の、若しくは筋肉内の注射によって実現し、又は組織の間質空間に送達する。組成物を病変内に投与することもできる。投与治療は、単一投与量のスケジュールであってもよく、又は複数投与量のスケジュールであってもよい。
【０１１４】
組成物における有効成分は、抗体分子であることが理解されよう。抗体分子はそれ自体、胃腸管において分解を受けやすい。したがって、組成物を、胃腸管を用いた経路によって投与しようとする場合は、組成物は、抗体を分解から保護するが、胃腸管から吸収された後は抗体を放出する物質を含む必要がある。
【０１１５】
薬学的に許容できる担体の徹底した論考は、「レミントンの薬剤科学（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）」（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｎ．Ｊ．、１９９１年）で入手可能である。
【０１１６】
本発明の抗体を、遺伝子治療の使用によって投与することも想定される。これを実現するためには、好適なＤＮＡの構成成分の制御下で抗体分子の重鎖及び軽鎖をコードするＤＮＡ配列を、ＤＮＡ配列から抗体鎖が発現され、ｉｎ  ｓｉｔｕで構築されるように患者に導入する。
【０１１７】
本発明は、炎症性疾患の制御で使用するための抗体分子も提供する。抗体分子を用いて炎症過程を低減し、又は炎症過程を防止することができることが好ましい。
【０１１８】
本発明は、ＩＬ−１７によって媒介され、又はＩＬ−１７のレベルの増大に関連する病理学的疾患の治療又は予防で使用するための本発明の抗体分子も提供する。好ましくは、病理学的状態は、炎症（ウイルス性、細菌性、真菌性、及び寄生虫性）、炎症に付随する内毒素ショック、関節炎、関節リウマチ、喘息、骨盤内炎症性疾患、アルツハイマー病、クローン病、ペーロニー病、セリアック病、胆嚢疾患、毛巣嚢病、腹膜病、乾癬、血管炎、外科手術後癒着、脳卒中、Ｉ型糖尿病、ライム関節炎、髄膜脳炎、中枢神経系及び末梢神経系の免疫が媒介する炎症性障害（例えば、多発性硬化症、及びギランバレー症候群）、他の自己免疫障害、膵炎、外傷（外科手術）、移植片対宿主病、移植片拒絶、癌（メラノーマ、肝芽腫、肉腫、扁平上皮癌、移行上皮癌、卵巣癌などの固形腫瘍、及び血液学的悪性腫瘍の両方、特に、急性骨髄性白血病、慢性骨髄性白血病、胃癌、及び直腸癌）、心筋梗塞などの虚血性疾患及びアテローム性動脈硬化症を含む心臓疾患、血管内凝固、骨吸収、骨粗しょう症、骨関節炎、歯周病、並びに低塩酸症からなる群から選択される。
【０１１９】
本発明は、疼痛の治療又は予防で使用するための本発明による抗体分子も提供する。
【０１２０】
本発明は、ＩＬ−１７によって媒介され、又はＩＬ−１７のレベルの増大に関連する病理学的障害の治療又は予防のための薬剤の製造における、本発明による抗体分子の使用をさらに提供する。病理学的障害が、関節リウマチ又は多発性硬化症であることが好ましい。
【０１２１】
本発明は、疼痛の治療又は予防のための薬剤の製造における、本発明による抗体分子の使用をさらに提供する。
【０１２２】
本発明の抗体分子を、ヒト又は動物の身体においてＩＬ−１７の効果を低減するのが望ましい場合に、あらゆる治療において利用することができる。ＩＬ−１７は、体内を循環していてもよく、又は身体における特定の部位、例えば、炎症の部位に望ましくなく高レベルで局在して存在していてもよい。
【０１２３】
本発明の抗体分子を、炎症性疾患の制御に使用することが好ましい。
【０１２４】
本発明は、ＩＬ−１７によって媒介される障害に罹患しており、又はその危険性のある、ヒト又は動物の対象を治療する方法であって、対象に、本発明の抗体分子を有効量投与するステップを含む方法も提供する。
【０１２５】
本発明の抗体分子を、診断、例えば、ＩＬ−１７に関与する疾患状態のｉｎ  ｖｉｖｏの診断及び画像化に用いてもよい。
【０１２６】
本発明を、以下の実施例において、例示のみの目的によってさらに記載し、実施例は添付の図に言及するものである。
【図面の簡単な説明】
【０１２７】
【図１−１】ａ）抗体ＣＡ０４８＿４９７．ｇ２（２７７ｇＬ２ｇＨ４）の軽鎖Ｖ領域（配列番号７）ｂ）抗体ＣＡ０４８＿４９７．ｇ２（２７７ｇＬ２ｇＨ４）の重鎖Ｖ領域（配列番号９）ｃ）抗体ＣＡ０４８＿４９７．ｇ２（２７７ｇＬ２ｇＨ４）のＣＤＲＨ１（配列番号１）、ＣＤＲＨ２（配列番号２）、ＣＤＲＨ３（配列番号３）、ＣＤＲＬ１（配列番号４）、ＣＤＲＬ２（配列番号５）、ＣＤＲＬ３（配列番号６）ｄ）抗体ＣＡ０４８＿４９７．ｇ２の軽鎖（配列番号１１）ｅ）シグナル配列（下線付）を含む抗体ＣＡ０４８＿４９７．ｇ２の軽鎖（配列番号１２）
【図１−２】ｆ）抗体ＣＡ０４８＿４９７．ｇ２の重鎖（配列番号１５）ｇ）シグナル配列（下線付）を含む抗体ＣＡ０４８＿４９７．ｇ２の重鎖（配列番号１６）ｈ）抗体ＣＡ０４８＿４９７．ｇ２の軽鎖可変領域をコードするＤＮＡ（配列番号８）
【図１−３】ｉ）抗体ＣＡ０４８＿４９７．ｇ２の重鎖可変領域をコードするＤＮＡ（配列番号１０）ｊ）抗体ＣＡ０４８＿４９７．ｇ２の軽鎖をコードするＤＮＡ（配列番号１３）ｋ）シグナル配列を含む抗体ＣＡ０４８＿４９７．ｇ２の軽鎖をコードするＤＮＡ（配列番号１４）
【図１−４】ｌ）抗体ＣＡ０４８＿４９７．ｇ２の重鎖をコードするＤＮＡ（配列番号１７）
【図１−５】ｍ）シグナル配列を含む抗体ＣＡ０４８＿４９７．ｇ２の重鎖をコードするＤＮＡ（配列番号１８）を示す図である。
【図２】組換えヒトＩＬ−１７で刺激したＨｅｌａ細胞における、抗体ＣＡ０４８＿４９７．ｇ２によるＩＬ−６生成の阻害を示す図である。
【図３】天然ヒトＩＬ−１７で刺激したＨｅｌａ細胞における、抗体ＣＡ０４８＿４９７．ｇ２によるＩＬ−６生成の阻害を示す図である。
【０１２８】
ＤＮＡ操作及び一般的方法
形質転換及びルーチンの培養増殖用に、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）株ＩＮＶαＦ’（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を用いた。ＤＮＡ制限酵素及び修飾酵素は、Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  Ｌｔｄ．、及びＮｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｂｉｏｌａｂｓから入手した。プラスミドの調製は、Ｍａｘｉ  Ｐｌａｓｍｉｄ精製キット（ＱＩＡＧＥＮ、カタログ番号１２１６５）を用いて行った。ＤＮＡシークエンシング反応を、ＡＢＩ  Ｐｒｉｓｍ  Ｂｉｇ  Ｄｙｅターミネーターシークエンシングキット（カタログ番号４３０４１４９）を用いて行い、ＡＢＩ３１００自動化シークエンサー（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）上で泳動した。データは、プログラムＡｕｔｏ  Ａｓｓｅｍｂｌｅｒ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて分析した。オリゴヌクレオチドはＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎから入手した。最初のＶ領域の配列をコードする遺伝子をデザインし、Ｅｎｔｅｌｅｃｈｏｎ  ＧｍｂＨによる自動化合成のアプローチによって構築し、オリゴヌクレオチド定方向突然変異誘発によってグラフト化型を産生するように修飾した。ＩｇＧの濃度を、ＩｇＧアセンブリ（ＩｇＧ  ａｓｓｅｍｂｌｙ）ＥＬＩＳＡを用いて決定した。
【実施例】
【０１２９】
（実施例１）
中和抗−ＩＬ−１７抗体（抗体ＣＡ０４８＿４９７．ｇ２（２７７ｇＬ２ｇＨ４））の生成
Ｓｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｙメスラットを、組換えヒトＩＬ−１７で免疫感作した（Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓより購入）。ラットに、Ｆｒｅｕｎｄアジュバント１００μｌ中２０μｇのＩＬ−１７で４回免疫感作した。ヒトＩＬ−１７に結合する抗体２７７を、ＷＯ０４／０５１２６８に記載した方法を用いて単離した。抗体２７７の重鎖可変ドメイン（ＶＨ）、及び軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に対する遺伝子を単離し、配列決定し、その後、逆転写ＰＣＲによりクローニングした。
【０１３０】
ヒトＶ領域アクセプターフレームワークを用い、フレームワーク領域におけるドナー残基の数を変化させることによって、一連のヒト化ＶＬ及びＶＨ領域をデザインした。２つのグラフト化ＶＬ領域（ｇＬ１及び２）並びに７つのグラフト化ＶＨ領域（ｇＨ１〜７）をデザインし、遺伝子をオリゴヌクレオチドアセンブリ及びＰＣＲ突然変異誘発によって構築した。軽鎖のグラフト化配列を、ヒトＣ−κ定常領域をコードするＤＮＡを含むヒト軽鎖発現ベクターｐＫＨ１０．１中にサブクローニングした（Ｋｍ３アロタイプ）。重鎖のグラフト化配列を、ヒンジ安定化突然変異Ｓ２４１Ｐを含むヒトγ−４定常領域をコードするＤＮＡを含むヒトγ−４発現ベクターｐＶｈｇ４Ｐ  ＦＬ中にサブクローニングした（Ａｎｇａｌら、上述）。プラスミドをＣＨＯ中に同時トランスフェクションし、生成した抗体を、ＩＬ−１７結合における活性、及び中和アッセイに対してスクリーニングした（例えば、Ｙａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９５年、１５５巻、５４８３〜５４８６頁に記載されている方法に基づく、３Ｔ３−ＮＩＨ細胞系におけるＩＬ−１７が誘発するＩＬ−６の生成）。Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ（商標）２０００の手順を用いて製造業者の説明書にしたがってＣＨＯ細胞のトランスフェクションを行った（ＩｎＶｉｔｒｏｇｅｎ、カタログ番号１１６６８）。
【０１３１】
ＩＬ−１７の中和に最も強力であり、ＣＨＯ細胞における最高の発現レベルを有するグラフト（ｇＬ２ｇＨ４）を選択した。Ｖ領域の配列を、軽鎖（ｇＬ２）及び重鎖（ｇＨ４）に関して、それぞれ図１（ａ）及び（ｂ）、並びに配列番号７及び９に示す。この抗体をＣＡ０２８＿４９７．ｇ２と命名した。この抗体のＣＤＲを図１（ｃ）に示す。全長の軽鎖及び重鎖を、それぞれ図１（ｄ）及び（ｆ）に示す。軽鎖及び重鎖をコードするＤＮＡ配列を、それぞれ図１（ｋ）及び（ｍ）に示す。
【０１３２】
重鎖アクセプターフレームワークは、ヒト生殖系列配列ＶＨ３  １−Ｕ３−１５であり、フレームワーク４はヒトＪＨ領域生殖系列ＪＨ４のこの部分に由来する。軽鎖アクセプターフレームワークは、ヒト生殖系列配列ＶＫ１  ２−１−（１）Ｌ４であり、フレームワーク４はヒトＪＫ領域生殖系列ＪＫ１のこの部分に由来する。配列番号９の重鎖における４９位のアミノ酸は、良好なＣＨＯ細胞の発現及びＩＬ−１７に対する親和性に不可欠であることが見出されたドナー残基である。
【０１３３】
（実施例２）
ＣＡ０２８  ４９７．ｇ２のＩＬ−１７に対する親和性の評価
ＢＩＡｃｏｒｅ技術は、生体分子間の結合をリアルタイムで、標識を必要とせずにモニターする。反応体の１つはリガンドと呼ばれ、直接固定化され、又は固定化された表面上に捕獲され、他方は分析物と呼ばれ、捕獲された表面上にわたる溶液中を流れる。分析物がリガンドに結合して表面上に複合体を形成すると、センサーが質量における変化を検出する。これは、会合過程に対応する。分析物がバッファーによって置き換わるとき、解離の過程をモニターする。ＢＩＡｃｏｒｅアッセイにおけるＣＡ０２８＿４９７．ｇ２のＩＬ−１７に対する親和性を、リガンドとしてＣＡ０２８＿４９７．ｇ２、及び分析物としてＩＬ−１７で評価する。
【０１３４】
リガンドとしてＣＡ０２８＿４９７．ｇ２を用いた異なる種からのＩＬ−１７に対するＣＡ０２８＿４９７．ｇ２の親和性の測定
センサーチップ上に固定化した抗ヒトＩｇＧ  Ｆｃによって、ＣＡ０２８＿４９７．ｇ２を捕獲し、引き続き、捕獲した表面上にわたってヒトＩＬ−１７又は他種からのＩＬ−１７を滴定した。手順の一例を以下に示す。
【０１３５】
ＢＩＡｃｏｒｅ３０００（ＢＩＡｃｏｒｅＡＢ）を用いて、ＢＩＡ（Ｂｉａｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  Ａｎａｌｙｓｉｓ）を行った。ＡｆｆｉｎｉｐｕｒｅＦ（ａｂ’）２断片ヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃ（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ）を、アミンカップリング化学により約８０００応答単位（ＲＵ）の捕獲レベルまで、ＣＭ５センサーチップ上に固定化した。ＨＢＳ−ＥＰバッファー（１０ｍＭ  ＨＥＰＥＳｐＨ７．４、０．１５Ｍ  ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．００５％界面活性剤Ｐ２０、ＢＩＡｃｏｒｅＡＢ）を泳動バッファーとして流速１０μＬ／分で用いた。ＣＡ０２８＿４９７．ｇ２の１０μＬの注入を、固定化した抗ヒトＩｇＧ−Ｆ（ａｂ）２によって捕獲するのに用いた。ＩＬ−１７を、捕獲したＣＡ０２８＿４９７．ｇ２上にわたって、流速３０μＬ／分で様々な濃度で滴定した。表面を、４０ｍＭ  ＨＣｌを３０μＬ注入し、その後５ｍＭ  ＮａＯＨを１０μＬ注入することによって再生した。
【０１３６】
バックグラウンドを差し引いた結合曲線を、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウエア（バージョン３．２）を用いて標準の手順にしたがって分析した。動力学のパラメータを、フィッティングアルゴリズムから決定した。
【０１３７】
一過性に発現された様々な非ヒトの霊長類（ＮＨＰ）種からのＩＬ−１７の濃度を、ヒトＩＬ−１７に関して評価し、次いで、これらの濃度を用いて、ＩＬ−１７の親和性を決定した。親和性を、ＩＬ−１７濃度２５ｎＭ又はそれ未満で測定した。ＣＡ０２８＿４９７．ｇ２に対して決定した親和性の値は、ヒトに対しては６．３ｐＭ、カニクイザルＩＬ−１７に対しては１０．７ｐＭ、及びマーモセットＩＬ−１７に対しては１２．９ｐＭであった（表１）。
一過性のカニクイザルＩＬ−１７及び一過性のマーモセットＩＬ−１７の濃度を、同等のヒトＩＬ−１７結合をもとに概算した。
表１：ＣＡ０２８＿４９７．ｇ２に対するＩＬ−１７の親和性
【表１】
2009540855.tif 000003
【０１３８】
（実施例３）
ヒト細胞上のヒトＩＬ−１７の中和
ＩＬ−１７がヒトＨｅｌａ細胞からＩＬ−６の生成を誘発する能力を用いて、ヒト組換えＩＬ−１７及び哺乳動物細胞（ＣＨＯ）由来ヒトＩＬ−１７（「天然」ＩＬ−１７と呼ぶ）に対するＣＡ０２８＿４９７．ｇ２の中和能力を測定した。Ｈｅｌａ細胞をＡＴＣＣ細胞バンクから入手した（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ−２）。細胞を、１０％ウシ胎児血清、ペニシリン、ゲンタマイシン、及びグルタミンを補充したダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）で増殖させた。９６ウェル平底組織培養プレート中に細胞１×１０４個を播いた。細胞を一夜インキュベートし、アッセイバッファーで１回洗浄した。ヒト組換えＩＬ−１７（２５ｎｇ  ｍｌ−１）又は「天然」ＩＬ−１７（２５ｎｇ  ｍｌ−１）のいずれかを、固定濃度のヒトＴＮＦ−αの存在下でインキュベートし、この混合物をＣＡ０２８＿４９７．ｇ２とプレインキュベートした。次いで、サイトカイン＋抗体をＨｅｌａ細胞に加え、一夜インキュベートした。細胞培養上清におけるＩＬ−６の生成は、細胞に加えたＩＬ−１７の量に比例した。ＩＬ−６放出のレベルを、Ｍｅｓｏ  Ｓｃａｌｅ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ９６−Ｗｅｌｌ  Ｍｕｌｔｉ−Ｓｐｏｔ  ＩＬ−６ヒトサイトカインアッセイを用いて細胞上清において決定した。このアッセイは本質的にサンドイッチ免疫アッセイであり、予めコーティングした抗ヒトＩＬ−６捕獲抗体が細胞上清又はキャリブレーター溶液においてＩＬ−６に結合し、ＩＬ−６に特異的な検出抗体を用いてレベルを定量する。
【０１３９】
ＣＡ０２８＿４９７．ｇ２は、ヒト組換えＩＬ−１７、及び哺乳動物細胞由来ヒトＩＬ−１７を強力に中和した（図２及び３）。これらの実験からのデータは、ＣＡ０２８＿４９７ｇ．２のＩＣ５０は、ヒト組換えＩＬ−１７に対しては５１ｎｇ／ｍＬ±３ｎｇ／ｍＬ（０．３４ｎＭ）であり、哺乳動物細胞由来ＩＬ−１７に対しては１０３±７ｎｇ／ｍＬ（０．７ｎＭ）であったことを示している。
【０１４０】
本発明を例示のみによって記載してきたが、本発明は決して限定的なものを意味するものではなく、この後の特許請求の範囲内で細部にわたる修飾を行うことができることが、当然理解されよう。本発明の各実施形態の好ましい特徴は、他の実施形態の各々に関して必要な変更を加えたものである。本明細書に引用した、それだけには限定されないが、特許及び特許出願を含めた全ての出版物は、それぞれ個々の出版物が、具体的に且つ個々に、完全に述べるように本明細書に参照として組み込まれることが示されるように、本明細書に参照として組み入れられる。
【図１−１】
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【図１−２】
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【図１−３】
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【図１−４】
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【図１−５】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
2009540855.tif 000011
2009540855.tif 000012
2009540855.tif 000013
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