(57)【要約】本発明は骨関連疾患、骨粗鬆症を予防および／または治療するための、さらに骨形成、骨ミネラル濃度を増加させるための薬剤の製造における遊離塩基またはその薬学的に許容しうる塩としての2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルの新規な使用に関する。本発明はさらに、これらの疾患または疾病を予防および／または治療する方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
骨関連疾患または疾病の治療および／または予防に使用される薬剤の製造における遊離塩基またはその薬学的に許容しうる塩としての2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルの使用。
【請求項２】
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・クエン酸塩である請求項１記載の化合物の使用。
【請求項３】
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・メシル酸塩、
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・エシル酸塩、
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・エジシル酸塩、
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・リン酸塩、
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・フマル酸塩、または
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボカルボニトリル・マレイン酸塩
である請求項１記載の化合物の使用。
【請求項４】
薬剤は骨粗鬆症の予防および治療に使用される請求項１〜３の何れかの項記載の化合物の使用。
【請求項５】
哺乳動物の骨形成を増加させるための薬剤の製造における請求項１〜３の何れかの項記載の化合物の使用。
【請求項６】
網状骨の形成および／または新生骨の形成を増加させるための薬剤の製造における請求項１〜３の何れかの項記載の化合物の使用。
【請求項７】
哺乳動物の骨ミネラル濃度を増加させるための薬剤の製造における請求項１〜３の何れかの項記載の化合物の使用。
【請求項８】
哺乳動物の骨折の発生を減少させるための薬剤の製造における請求項１〜３の何れかの項記載の化合物の使用。
【請求項９】
哺乳動物の骨折治癒を促進するための薬剤の製造における請求項１〜３の何れかの項記載の化合物の使用。
【請求項１０】
哺乳動物はヒトである請求項１〜９の何れかの項記載の使用。
【請求項１１】
哺乳動物は動物である請求項１〜９の何れかの項記載の使用。
【請求項１２】
骨関連疾患または疾病を予防および／または治療が必要な哺乳動物に治療的に有効な量の遊離塩基またはその薬学的に許容しうる塩としての2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルを投与することからなる骨関連疾患または疾病を予防および／または治療する方法。
【請求項１３】
骨関連疾患を予防および／または治療が必要な哺乳動物に治療的に有効な量の2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・クエン酸塩を投与することからなる骨関連疾患を予防および／または治療する方法。
【請求項１４】
骨関連疾患を予防および／または治療が必要な哺乳動物に治療的に有効な量の2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル ・メシル酸塩、
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・エシル酸塩、
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・エジシル酸塩、
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・リン酸塩、
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・フマル酸塩または
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボカルボニトリル・マレイン酸塩
を投与することからなる骨関連疾患を予防および／または治療する方法。
【請求項１５】
哺乳動物に治療的に有効な量の請求項１２〜１５の何れかの項記載の化合物を投与することからなる骨粗鬆症を予防および／または治療する方法。
【請求項１６】
哺乳動物に治療的に有効な量の請求項１２〜１５の何れかの項記載の化合物を投与することからなる骨形成を増加させる方法。
【請求項１７】
哺乳動物に治療的に有効な量の請求項１２〜１５の何れかの項記載の化合物を投与することからなる網状骨の形成および／または新生骨の形成を増加させる方法。
【請求項１８】
哺乳動物に治療的に有効な量の請求項１２〜１５の何れかの項記載の化合物を投与することからなる骨ミネラル濃度を増加させる方法。
【請求項１９】
哺乳動物に治療的に有効な量の請求項１２〜１５の何れかの項記載の化合物を投与することからなる骨折の発生を減少させる方法。
【請求項２０】
哺乳動物に治療的に有効な量の請求項１２〜１５の何れかの項記載の化合物を投与することからなる骨折治癒を促進する方法。
【請求項２１】
哺乳動物はヒトである請求項１２〜２０の何れかの項記載の方法。
【請求項２２】
哺乳動物は動物である請求項１２〜２０の何れかの項記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は骨粗鬆症のような骨関連疾患または疾病を治療および／または予防するための、さらに骨形成および骨ミネラル濃度を増加させるための薬剤の製造における特定のGSK3阻害剤、すなわち2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルの新規な使用に関する。本発明はさらに、これらの疾患または疾病を治療および／または予防する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
グリコーゲンシンターゼキナーゼ３(GSK3)は異なる遺伝子によりコード化されるが、触媒ドメイン内で高度に相同である２種のイソ型(αおよびβ)からなるセリン／スレオニンプロテインキナーゼである。GSK3は中枢および末梢神経系で高度に発現する。GSK3はタウ、β−カテニン、グリコーゲンシンターゼ、ピルビン酸デヒドロゲナーゼおよび伸長開始因子2b(eIF2b)を含む幾つかの基質をリン酸化する。インシュリンおよび成長因子はプロテインキナーゼＢを活性化し、これはセリン９残基でGSK3をリン酸化し、それを不活性化する。
【０００３】
GSK3および骨疾患
骨格のリモデリングは副甲状腺ホルモン(PTH)、局所因子(例えばプロスタグランジンE2)、サイトカインおよび他の生物学的に活性な物質のような全身ホルモンにより調節される連続過程である。２種の細胞型が極めて重要である：骨芽細胞(骨形成に関与する)および破骨細胞(骨吸収に関与する)。RANK、RANKリガンドおよびオステオプロテグリン制御系により、これらの２種の細胞型は相互作用して正常な骨代謝回転を維持する(Bell NHのCurrent Drug Targets−Immune, Endocrine & Metabolic Disorders, 1：93〜102(2001年))。
【０００４】
骨粗鬆症は骨量の低下および骨微細構造の劣化により骨強度が脆弱化して骨折のリスクが高まった骨疾患である。骨粗鬆症を治療するための２つの主要戦略は骨吸収を阻害すること、または骨形成を刺激することである。骨粗鬆症治療市場で現在出回っている多数の薬剤は破骨細胞による骨吸収を阻害することにより骨量を増加させるように作用する。患者の骨折治癒を促進する可能性があるだけでなく骨形成を増加させることもできる薬剤は骨粗鬆症の治療において非常に有用であると認められている。
【０００５】
最近のインビトロ研究は骨芽細胞分化におけるGSK3βの役割を示唆している。第１に、グルココルチコイドは培養下、骨芽細胞分化中に細胞周期の進行を阻害することがわかった。この背後のメカニズムは骨芽細胞におけるGSK3βの活性化であり、c−Mycの下方調節およびG1／S細胞周期移行の妨害をもたらす。 減衰した細胞周期および低下したc−Myc濃度は塩化リチウムを使用してGSK3βを阻害すると正常に戻る(SmithらのJ. Biol. Chem., 277：18191〜18197(2002年))。第２に、多能性間葉細胞系C3H10T1／2におけるGSK3βの阻害は内因性β−カテニンシグナル伝達活性の有意な増加をもたらす。これは次に初期の骨芽細胞分化のマーカーであるアルカリホスファターゼmRNAおよびタンパク質の発現を誘発する(BainらのBiochem. Biophys. Res. Commun., 301：84〜91(2003年))。
【０００６】
骨芽細胞分化に対するGSK3βのインビトロ効果を裏付ける既報の生体データはまだ不足している。しかしながら、本発明者らによる試験はGSK3β阻害剤で処置したラットにおける骨形成の増加をはっきりと示している(下記の実施例参照)。リチウムで治療した患者の骨特異的アルカリホスファターゼ濃度が増加したことにも注目すべきであり、このことはGSK3βの阻害が骨芽細胞の刺激および骨形成の増加をもたらすという考えを間接的に支持している(BroulikらのClinica Chemica Acta, 140：151〜155(1984年))。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は骨関連疾患または疾病の治療および／または予防に使用される薬剤の製造における遊離塩基またはその薬学的に許容しうる塩としての2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル(化合物(Ｉ)
【化１】
2009525325.tif 000002
の使用に関する。
【０００８】
本発明の他の態様は骨関連疾患または疾病の治療および／または予防に使用される薬剤の製造における次の式(Ｉ)の化合物の薬学的に許容しうる塩、すなわち
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・クエン酸塩、
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・メシル酸塩、
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・エシル酸塩、
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・エジシル酸塩、
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・リン酸塩、
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・フマル酸塩および
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボカルボニトリル・マレイン酸塩の使用に関する。
【０００９】
本発明の一態様は骨粗鬆症を治療するための遊離塩基またはその薬学的に許容しうる塩としての式(Ｉ)の化合物の使用に関する。
【００１０】
本発明の一態様は哺乳動物の骨形成を増加および促進させるための遊離塩基またはその薬学的に許容しうる塩としての式(Ｉ)の化合物の使用に関する。
【００１１】
本発明の一態様は哺乳動物の骨ミネラル濃度を増加させるための遊離塩基またはその薬学的に許容しうる塩としての式(Ｉ)の化合物の使用に関する。
【００１２】
本発明の他の態様は哺乳動物の骨折の割合を減少させ、そして／または骨折治癒の割合を増加させるための遊離塩基またはその薬学的に許容しうる塩としての式(Ｉ)の化合物の使用に関する。
【００１３】
本発明の他の態様は哺乳動物の網状骨の形成および／または新生骨の形成を増加させるための遊離塩基またはその薬学的に許容しうる塩としての式(Ｉ)の化合物の使用に関する。
【００１４】
本発明の他の態様はそのような予防および／または治療の必要な哺乳動物に治療的に有効な量の遊離塩基またはその薬学的に許容しうる塩としての式(Ｉ)の化合物を投与することからなる骨関連疾患を予防および／または治療する方法に関する。
【００１５】
本発明の他の態様はそのような予防および／または治療の必要な哺乳動物に治療的に有効な量の遊離塩基またはその薬学的に許容しうる塩としての式(Ｉ)の化合物を投与することからなる骨粗鬆症を予防および／または治療する方法に関する。
【００１６】
本発明の他の態様はそのような治療の必要な哺乳動物に治療的に有効な量の遊離塩基またはその薬学的に許容しうる塩としての式(Ｉ)の化合物を投与することからなる骨形成を増加させる方法に関する。
【００１７】
本発明の他の態様はそのような治療の必要な哺乳動物に治療的に有効な量の遊離塩基またはその薬学的に許容しうる塩としての式(Ｉ)の化合物を投与することからなる骨ミネラル濃度を増加させる方法に関する。
【００１８】
本発明の他の態様はそのような治療の必要な哺乳動物に治療的に有効な量の遊離塩基またはその薬学的に許容しうる塩としての式(Ｉ)の化合物を投与することからなる骨折の発生を減少させる方法に関する。
【００１９】
本発明の他の態様はそのような治療の必要な哺乳動物に治療的に有効な量の遊離塩基またはその薬学的に許容しうる塩としての式(Ｉ)の化合物を投与することからなる骨折治癒を促進する方法に関する。
【００２０】
本発明の他の態様は前記哺乳動物がヒトである前記方法に関する。
【００２１】
本発明の他の態様は前記哺乳動物が動物、好ましくは大型の動物、例えばこれらに限定されないがウマ、ラクダ、ヒトコブラクダである前記方法に関する。
【００２２】
遊離塩基またはその薬学的に許容しうる塩としての2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルはWO03/082853に開示されている。骨の成長における本発明の化合物(Ｉ)の効果は研究されている。このような化合物は骨形成の促進および増加、骨ミネラル濃度の増加、結果として骨粗鬆症のような骨関連疾患の阻害によく適していることがわかった。
【００２３】
GSK3阻害剤、すなわち式(Ｉ)の化合物は原発性および続発性の骨粗鬆症で使用され、原発性骨粗鬆症には閉経後骨粗鬆症や男性および女性の両方の老人性骨粗鬆症があり、続発性骨粗鬆症にはコルチゾン誘発性骨粗鬆症、さらに他のタイプの誘発性骨粗鬆症がある。この他に、これらのGSK3阻害剤は骨髄腫の治療に使用することもできる。これらの疾患を治療するために、GSK3阻害剤は様々な処方レジメンで局所または全身に投与することができる。
【００２４】
骨形成の促進および増加により、式(Ｉ)の化合物は哺乳動物において骨折の発生を減少させるのに、骨折の割合を減少させるのに、そして／または骨折治癒の割合を増加させるのに、さらに網状骨の形成および／または新生骨の形成を増加させるのに適している。
【００２５】
新生骨の形成を促進および増加させるための使用は手術に関連して行なうことができる。本発明の化合物を手術中に使用することができ、担当の外科医は適当な製剤の本発明の化合物を不完全な骨空洞および／または体腔の付近に局所的に適用する。骨が折れている場合、本明細書で開示されたような本発明の化合物は開放骨折の修復中に骨折部分の中またはその近辺に適用される。骨片が欠落している場合(例えば腫瘍の摘出または激しい事故の後)、本明細書で開示されたような本発明の化合物は構成的な骨の手術部位付近に適用される。
【００２６】
本発明において有用な十分に塩基性である化合物の適当な薬学的に許容しうる塩は例えば酸付加塩、例えば無機または有機酸の付加塩である。さらに、十分に酸性である本発明の化合物の適当な薬学的に許容しうる塩はアルカリ金属塩、アルカリ土類金属塩、または生理学的に許容しうるカチオンを与える有機塩基との塩である。
【００２７】
式(Ｉ)の化合物またはその塩はWO03/082853に記載のようにして製造することができ、それは参照により本明細書に加入される。
【００２８】
式(Ｉ)の化合物の所望の塩、2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・クエン酸塩、メシル酸塩、エシル酸塩、エジシル酸塩、リン酸塩、フマル酸塩またはマレイン酸塩は2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルを溶媒の存在下で適当な酸と混合することにより製造することができる。適当な酸の当量は0.5〜１モル当量の範囲である。反応は溶媒中で行なうことができ、適当な溶媒は1,4−ジオキサン、ジエチルエーテルのようなエーテル；メタノール、エタノール、プロパノールのようなアルコール；アセトン、イソブチルメチルケトンのようなケトン；酢酸エチル、酢酸ブチルのような酢酸エステル；酢酸のような有機酸；または水、あるいはそれらの混合物である。使用される溶媒の全容量は出発物質の質量あたり１(v／w)〜100(v／w)容量部、好ましくは出発物質の質量あたり10(v／w)〜45(v／w)容量部の範囲である。反応温度は−30〜＋150℃、好ましくは−５℃〜＋100℃である。
【００２９】
式(Ｉ)の純粋な化合物、2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・クエン酸塩、メシル酸塩、エシル酸塩、エジシル酸塩、リン酸塩、フマル酸塩またはマレイン酸塩は場合により添加剤を使用して適当な溶媒中で結晶化させて約95％、好ましくは約98％の純度を有する結晶性固体とすることにより得られる。
【００３０】
医薬組成物
本発明で使用される組成物は経口投与に適した形態、例えば錠剤、丸剤、シロップ剤、粉末、顆粒剤またはカプセル剤であり、注射(静脈内、皮下、筋肉内、血管内または注入を含む)の場合は例えば無菌の液剤、懸濁剤または乳剤であり、局所投与の場合は例えば軟膏剤、パッチ剤またはクリーム剤であり、経腸投与の場合は例えば坐剤であり、さらに体腔または骨空洞への局所投与に適した形態である。
【００３１】
ヒトを含む哺乳動物の治療において使用される式(Ｉ)の化合物の適当な１日量は経口投与では約0.01〜250mg／kg体重であり、非経口投与では約0.001〜250mg／kg体重である。活性成分の典型的な１日量は広い範囲内で変動し、関連する適応症、投与経路、患者の年齢、体重および性別のような様々な要因に応じて決まり、医師により決定され得る。
【００３２】
遊離塩基またはその薬学的に許容しうる塩、例えばクエン酸塩、メシル酸塩(mesylate)、エシル酸塩(esylate)、エジシル酸塩(edisylate)、リン酸塩、フマル酸塩またはマレイン酸塩としての式(Ｉ)の化合物、2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルを含有する典型的な薬用投与形態はWO03/082853に記載されており、それらの投与形態は参照により本明細書に加入される。
【００３３】
動物に使用する場合、各成分の量、投与形態および薬剤の投与量は様々な要因、例えば治療される動物の個々の要求に応じて変動する。
【００３４】
上記式(Ｉ)の化合物の使用により骨形成および骨ミネラル濃度を増加できることがわかった。本明細書において、特にそれに反する断りがなければ、「治療」なる用語は「予防」もまた包含する。「治療的」および「治療的に」なる用語はそれに応じて解釈される。
【実施例】
【００３５】
次の実施例１〜７により本発明の一態様である化合物(Ｉ)の特定の塩の製造を詳しく説明する。
【００３６】
〔実施例１〕
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・クエン酸塩
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル(5.14kg、15.4モル)を室温においてエタノール(54L)中で懸濁した。懸濁液を70℃の内部温度に加熱し、内部温度を65℃以上に維持しながら水(103L)中におけるクエン酸(3.424kg、17.82モル)の溶液を加えた。混合物を加熱還流した。この後、得られた溶液を活性炭(0.412kg)と混合し、還流を3.5時間続けてから反応混合物を83℃でクリアろ過し、20時間にわたって室温まで冷却した。ろ過した後、沈殿物をエタノール／水(6.9L／13.7L)の冷混合物で２回洗浄した。真空下、50℃で乾燥して少なくとも98％の純度を有する6.648kgの2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)−ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・クエン酸塩を収率82.2％で得た。パラジウム含量は1ppm未満であり、亜鉛含量は10ppm以下であった。1H NMR (d6−DMSO, 400MHz) δ14.8 (br s, 1H), 10.98 (s, 1H), 8.1 (s, 1H), 7.55 (m, 3H), 7.31 (d, 1H), 7.02 (d, 1H), 3.6 (s, 4H), 3.45 (m, 2H), 2.75 (ap d, 2H), 2.65 (ap d, 2H), 2.47 (s, 4H) ppm；13C NMR (d6−DMSO, 400MHz) δ174.9, 171.3, 168.7, 148.4, 142.1, 137.1, 136.4, 125.2, 124.1, 121.1, 121.0, 118.8, 118.4, 101.4, 84.6, 72.3, 65.7, 58.0, 52.5, 42.9ppm；MS (ES) m／z [M+＋1] 335。
【００３７】
結晶をＸ−線粉末解析(XRPD)により分析した。形態Ａの回折図形は次のd−値(オングストローム)および相対強度を示す：12.7(vs), 7.6(w), 6.8(vs), 6.3(s), 5,9(w), 5.7(m), 5.1(m), 4.87(w), 4.57(m), 4.38(s), 4.23(s), 4.16(w), 4.07(m), 3.80(w), 3.69(m), 3.65(w), 3.41(m), 3.37(w), 3.32(m), 3.17(m), 3.12(m), 2.88(w), 2.86(m), 2.78(w), 2.65(w), 2.50(w), 2.45(w)。
【００３８】
有意なd−値(オングストローム)および相対強度は12.7(vs), 6.8(vs), 6.3(s), 4.38(s), 4.23(s), 3.41(m)である。
【００３９】
相対強度は信頼性が低く、数値の代りに次の定義が使用される：
vs (非常に強い)：   ＞60％の相対強度
s (強い)：          23〜60％の相対強度
m (中程度)：        ９〜23％の相対強度
w (弱い)：          ４〜９％の相対強度
vw (非常に弱い)：   ＜４％の相対強度
【００４０】
〔実施例２〕
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・メシル酸塩
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル(0.6145ｇ)をエタノール(6.1ml)およびメタンスルホン酸(0.11ml)中で懸濁した。溶液を40℃に14時間加熱し、次に２時間で室温まで冷却した。結晶をろ過し、エタノール(２ml)で洗浄し、40℃で47時間真空乾燥した。乾燥後、0.6690ｇの2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・メシル酸塩を得た。1H (500MHz, DMSO−d6)：14.75 (1H, br s), 10.97 (1H, s), 9.92 (1H, br s), 8.25 (1H, s), 8.00 (1H, s), 7.89 (2H, br m), 7.33 (1H, dd), 7.03 (1H, d), 4.30 (2H, br s), 3.98 (2H, br s), 3.66 (2H, br s), 3.37 (2H, br s), 3.12 (2H, br s), 2.38 (3H, s)。
【００４１】
結晶をＸ−線粉末解析(XRPD)により分析した。回折図形は次のd−値(オングストローム)および相対強度を示す：12.7(vs), 9.0(w), 7.3(vw), 6.4(s), 5.8(vw), 5.7(vw), 5.3(w), 4.93(w), 4.80(m), 4.72(m), 4,53(m), 4.46(m), 4.31(m), 4.24(m), 4.09(s), 3.96(m), 3.79(m), 3.33(s), 3.21(m), 2.94(w), 2.73(w), 2.47(w) Å。
【００４２】
有意なd−値(オングストローム)および相対強度は12.7(vs), 6.4(s), 4.53(m), 4.09(s), 3.33(s) Åである。
【００４３】
相対強度(％)は信頼性が低く、数値の代りに次の定義が使用される：
vs (非常に強い)：＞83
s (強い)：60〜83
m (中程度)：17〜60
w (弱い)：７〜17
vw (非常に弱い)：＜７
【００４４】
〔実施例３〕
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・エシル酸塩
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル(0.5006ｇ)をエタノール(５ml)およびエタンスルホン酸(0.12ml)中で懸濁した。溶液を40℃に14時間加熱し、次に２時間で室温まで冷却した。結晶をろ過し、エタノール(２ml)で洗浄し、40℃で47時間真空乾燥した。乾燥後、0.5487ｇの2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・エシル酸塩を得た。1H (500MHz, DMSO−d6)：14.72 (1H, br s), 10.98 (1H, s), 9.85 (1H, br s), 8.25 (1H, s), 8.00 (1H, s), 7.88 (2H, dd), 7.34 (1H, d), 7.03 (1H, d), 4.32 (2H, br s), 4.00 (2H, br d), 3.64 (2H, br t), 3.37 (2H, br s), 3.13 (2H, bd s), 2.40 (2H, q), 1.07 (3H, t)。
【００４５】
結晶をＸ−線粉末解析(XRPD)により分析した。回折図形は次のd−値(オングストローム)および相対強度を示す：15.3(m), 12.6(s), 9.1(m), 7.6(vw), 7.4(m), 6.3(m), 5.9(w), 5.5(w), 5.2(vw), 5.0(w), 4.87(m), 4.74(m), 4.47(m), 4.32(m), 4.16(s), 4.12(s),
4.04(m), 3.85(m), 3.41(s), 3.19(m), 2.92(vw), 2.72(w) Å。
【００４６】
有意なd−値(オングストローム)および相対強度は12.6(s), 6.3(m), 4.47(m), 4.16(s), 4.12(s), 3.41(s) Åである。
【００４７】
相対強度(％)は信頼性が低く、数値の代りに次の定義が使用される：
s (強い)：＞50
m (中程度)：12〜50
w (弱い)：８〜12
vw (非常に弱い)：＜８
【００４８】
〔実施例４〕
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・エジシル酸塩
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル(0.6568ｇ)をエタノール(6.55ml)および1,2−エタンジスルホン酸(0.3471ｇ)中で懸濁した。溶液を40℃に14時間加熱し、次に２時間で室温まで冷却した。結晶をろ過し、エタノール(２ml)で洗浄し、40℃で47時間真空乾燥した。乾燥後、0.7797ｇの2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・エジシル酸塩を得た。1H (500MHz, DMSO−d6)：14.74 (1H, br s), 10.98 (1H, s), 9.87 (1H, br s), 8.27 (1H, s), 8.00 (1H, d), 7.89 (2H, br m), 7.33 (1H, dd), 7.03 (1H, d), 4.33 (2H, s), 4.00 (2H, d), 3.65 (2H, t), 3.39 (2H, d), 3.14 (2H, br q), 2.74 (4H, s)。
【００４９】
結晶をＸ−線粉末解析(XRPD)により分析した。回折図形は次のd−値(オングストローム)および相対強度を示す：19.9(m), 18.1(w), 15.3(s), 13.2(vw), 11.3(m), 9.0(vw), 8.2(w), 8.0(w), 7.6(w), 7.4(w), 6.8(w), 6.6(m), 6.3(m), 6.0(w), 5.6(s), 5.4(m), 5.2(m), 5.1(m), 5.0(m), 4.85(m), 4.32(s), 4.24(m), 4.17(w), 4,12(s), 4.08(s), 3.90(w), 3.82(w), 3.66(w), 3.53(m), 3.35(m), 3.27(m), 3.00(vw) Å。
【００５０】
有意なd−値(オングストローム)および相対強度は15.3(s), 11.3(m), 5.6(s), 4.32(s), 4.12(s), 4.08(s) Åである。
【００５１】
相対強度(％)は信頼性が低く、数値の代りに次の定義が使用される：
s (強い)：＞55
m (中程度)：24〜55
w (弱い)：13〜24
vw (非常に弱い)：＜13
【００５２】
〔実施例５〕
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・リン酸塩
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル(0.5919ｇ)をエタノール(5.9ml)およびｏ−亜リン酸(0.1ml)中で懸濁した。溶液を40℃に14時間加熱し、次に２時間で室温まで冷却した。結晶をろ過し、エタノール(２ml)で洗浄し、40℃で47時間真空乾燥した。乾燥後、0.6666ｇの2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・リン酸塩を得た。1H (500MHz, DMSO−d6)：14.78 (1H, br s), 10.90 (1H, s), 8.12 (1H, s), 7.91 (1H, s), 7.85 (1H, br d), 7.81 (1H, dd), 7.29 (1H, dd), 7.01 (1H, d), 3.60 (4H, br t), 3.46 (2H, s), 2.45 (4H, br s)。
【００５３】
結晶をＸ−線粉末解析(XRPD)により分析した。回折図形は次のd−値(オングストローム)および相対強度を示す：15.2(m), 7.6(w), 5.1(w), 4.12(vw), 2.29(vw) Å。
【００５４】
有意なd−値(オングストローム)および相対強度は15.2(m), 7.6(w), 5.1(w), 4.12(vw)
Åである。
【００５５】
相対強度(％)は信頼性が低く、数値の代りに次の定義が使用される：
m (中程度)：＞50
w (弱い)：15〜50
vw (非常に弱い)：＜15
【００５６】
〔実施例６〕
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・フマル酸塩
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル(0.5765ｇ)をエタノール(5.7ml)およびフマル酸塩(0.1893ｇ)中で懸濁した。溶液を40℃に14時間加熱し、次に２時間で室温まで冷却した。結晶をろ過し、エタノール(２ml)で洗浄し、40℃で47時間真空乾燥した。乾燥後、0.6316ｇの2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・フマル酸塩を得た。1H (500MHz, DMSO−d6)：14.78 (1H, br s), 10.89 (1H, s), 8.11 (1H, br s), 7.91 (1H, br s), 7.85 (1H, br d), 7.80 (1H, br dd), 7.28 (1H, dd), 7.00 (1H, d), 6.63 (2H, s), 3.59 (4H, br t), 3.42 (2H, s), 2.42 (4H, br s)。
【００５７】
結晶をＸ−線粉末解析(XRPD)により分析した。回折図形は次のd−値(オングストローム)および相対強度を示す：19.8(w), 16.5(m), 15.3(w), 13.1(m), 12.7(m), 12.0(w), 10.5(w), 9.1(w), 7.6(w), 6.8(m), 6.5(w), 6.3(w), 6.2(w), 6.0(m), 5.6(w), 5.5(w), 5.2(w), 5.1(w), 4.94(w), 4.86(m), 4.71(w), 4.63(w), 4.55(m), 4.38(m), 4.23(w), 4.12(w), 3.58(m), 3.40(m), 3.26(s), 3.12(m) Å。
【００５８】
有意なd−値(オングストローム)および相対強度は16.5(m), 13.1(m), 12.7(m), 6.8(m), 3.26(s) Åである。
【００５９】
相対強度(％)は信頼性が低く、数値の代りに次の定義が使用される：
s (強い)：＞75
m (中程度)：33〜75
w (弱い)：＜33
【００６０】
〔実施例７〕
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・マレイン酸塩
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル(0.5473ｇ)をエタノール(5.47ml)およびマレイン酸(0.1719ｇ)中で懸濁した。溶液を40℃で14時間加熱し、次に２時間で室温まで冷却した。結晶をろ過し、エタノール(２ml)で洗浄し、40℃で47時間真空乾燥した。乾燥後、0.5902ｇの2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・マレイン酸塩を得た。1H (500MHz, DMSO−d6)：14.75 (1H, br s), 10.94 (1H, s), 8.19 (1H, s), 7.96 (1H, s), 7.88 (1H, br d), 7.83 (1H, dd), 7.32 (1H, dd), 7.02 (1H, d), 6.11 (2H, s), 3.93 (2H, br s), 3.72 (4H, br s), 2.89 (4H, br s)。
【００６１】
結晶をＸ−線粉末解析(XRPD)により分析した。回折図形は次のd−値(オングストローム)および相対強度を示す：20.1(w), 18.5(m), 15.3(w), 12.7(s), 10.3(m), 10.0(m), 9.0(m), 7.9(vw), 7.6(w), 7.4(w), 6.8(s), 6.5(w), 6.3(m), 6.1(m), 5.6(w), 5.3(w), 5.2(w), 4.78(m), 4.67(m), 4.58(s), 4.46(m), 4.36(m), 4.23(m), 3.98(w), 3.79(m), 3.14(w), 3.05(m), 2.94(w) Å。
【００６２】
有意なd−値(オングストローム)および相対強度は12.7(s), 6.8(s), 6.1(m), 4.58(s),
3.05(m) Åである。
【００６３】
相対強度(％)は信頼性が低く、数値の代りに次の定義が使用される：
s (強い)：＞50
m (中程度)：14〜50
w (弱い)：４〜14
vw (非常に弱い)：＜４
【００６４】
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルのクエン酸塩、エシル酸塩、エシル酸塩、エジシル酸塩、リン酸塩、フマル酸塩またはマレイン酸塩の結晶化度は下記のようにＸ−線粉末解析(XRPD)を使用して分析した：
Bragg式から計算したd−値および相対強度で同定されたピークをクエン酸塩結晶の回折図形から抽出した。最も特徴的で、有意な、区別できる、そして／または再現性のある主要なピークだけを集めたが、慣用の方法を使用して他のピークを回折図形から抽出することができる。再現性があり、誤差範囲内のこれらの主要なピークの存在は殆んどの状況において前記結晶性塩の存在を確定するのに十分である。
【００６５】
Ｘ−線回折分析はPANalytical X'Pert Pro MPD回折計において場合により内部標準基準を使用して64分間、１〜40°２θで行なった。角度２θを標準値に関して補正し、その後d−値(距離値)に計算した。d−値は所与の最終小数位において±２の範囲内で変動する。試料の作成は標準法に従って、例えばGiacovazzo, C.らのFundamentals of Crystallography, Oxford University Press(1995年)；Jenkins, R.およびSnyder, R. L.のIntroduction to X−Ray Powder Diffractometry, John Wiley & Sons, New York(1996年)；Bunn, C. W.のChemical Crystallography, Clarendon Press, London(1948年)；またはKlug, H. P.およびAlexander, L. E.のX−Ray Diffraction Procedures, John Wiley and Sons, New York(1974年)に記載のようにして行なった。
【００６６】
骨形成の増加を示す次の実施例により本発明を詳しく説明する：
〔実施例８〕
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルで処置したラットの骨形成の増加
化合物2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル・クエン酸塩を0.3〜５％(w／v)ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンおよび0.5％(w／v)アスコルビン酸を加えて水溶液として調製した。雄および雌のHan Wistarラットに15、55または100μモル／kg／日の投与量で４週間、強制経口投与し、ビヒクル対照と比較した。完全解剖を行ない、組織を10％ホルマリン中で保存した。大腿部、大腿脛骨および胸骨を脱灰し、パラフィンに包埋し、５μmの厚さに切断し、そしてヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。光学顕微鏡検査法により、100μモル／kgの投与量で肥厚した骨梁、肥厚した皮質骨、骨膜性過骨症および骨芽細胞の増加数の形態で骨形成の増加が評価される(図１ｂ)。
【００６７】
図１ａはビヒクルで処置した対照ラットの大腿部の正常な骨梁および骨髄(骨端)を示す。図１ｂは100μモル／kgの2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルで４週間処置したラットの同じ領域の大腿部における類骨形成の著しい増加および骨芽細胞の増加数を示す(倍率：100倍)。
【図面の簡単な説明】
【００６８】
【図１】１ａはビヒクルで処置した対照ラットの大腿部の正常な骨梁および骨髄(骨端)を示す。１ｂは100μモル／kgの2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルで４週間処置したラットの同じ領域の大腿部における類骨形成の著しい増加および骨芽細胞の増加数を示す(倍率：100倍)。
【図１ａ】
2009525325.tif 000003
【図１ｂ】
2009525325.tif 000004
【国際調査報告】
2009525325.tif 000005
2009525325.tif 000006
2009525325.tif 000007
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