(57)【要約】密閉用途のための組成物、方法、およびキットを提供する。組成物は第１の交差結合可能な成分を第２の交差結合可能な成分と組み合わせて間隙を有する多孔性のマトリックスを形成すること、および、多孔性のマトリックスをヒドロゲル形成成分と組み合わせて間隙の少なくとも一部を充填することにより生成される。組成物は最小限の膨潤特性を示す。第１の特徴において、本発明は第１の交差結合可能な成分、反応を可能とする条件下で第１の交差結合可能な成分と交差結合する第２の交差結合可能な成分、およびヒドロゲル形成成分を含む組成物を提供する。第１および第２の交差結合可能な成分は交差結合して間隙を有する多孔性マトリックスを形成し、そしてここでヒドロゲル形成成分は水和されて間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成することができる。
2009545405.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記成分：
第１の交差結合可能な成分；
反応を可能とする条件下で第１の交差結合可能な成分と交差結合する第２の交差結合可能な成分；および、
ヒドロゲル形成成分；
を含む組成物であって、ここで第１および第２の交差結合可能な成分は交差結合して間隙を有する多孔性マトリックスを形成し、そしてここでヒドロゲル形成成分は水和されて間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成することができる上記組成物。
【請求項２】
第１の交差結合可能な成分が多数の求核性基を含み、そして第２の交差結合可能な成分が多数の求電子性基を含む請求項１記載の組成物。
【請求項３】
第１の交差結合可能な成分が求核性基ｍ個を有する多求核性ポリアルキレンオキシドを含み、そして第２の交差結合可能な成分が求電子性基ｎ個を有する多求電子性ポリアルキレンオキシドを含み、ここでｍおよびｎは各々２以上であり、そしてｍ＋ｎは５以上である請求項１記載の組成物。
【請求項４】
ｎが２であり、そしてｍが３以上である請求項３記載の組成物。
【請求項５】
多求核性ポリアルキレンオキシドが４官能性的に活性化される請求項４記載の組成物。
【請求項６】
ｍが２であり、そしてｎが３以上である請求項３記載の組成物。
【請求項７】
多求電子性ポリアルキレンオキシドが４官能性的に活性化される請求項６記載の組成物。
【請求項８】
多求核性ポリアルキレンオキシドおよび多求電子性ポリアルキレンオキシドの両方が４官能性的に活性化される請求項３記載の組成物。
【請求項９】
多求核性ポリアルキレンオキシドがさらに−ＮＨ２、−ＳＨ、−Ｈ、−ＰＨ２、および−ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ２よりなる群から選択される求核性基２つ以上を含む請求項３記載の組成物。
【請求項１０】
多求核性ポリアルキレンオキシドがさらに第１級アミノ基２つ以上を含む請求項３記載の組成物。
【請求項１１】
多求核性ポリアルキレンオキシドがさらにチオール基２つ以上を含む請求項３記載の組成物。
【請求項１２】
多求核性ポリアルキレンオキシドがポリエチレングリコールまたはその誘導体である請求項３記載の組成物。
【請求項１３】
ポリエチレングリコールがさらに第１級アミノ基およびチオール基よりなる群から選択される求核性基２つ以上を含む請求項１２記載の組成物。
【請求項１４】
多求電子性ポリアルキレンオキシドがさらに−ＣＯ２Ｎ（ＣＯＣＨ２）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＨＯ、−ＣＨＯＣＨ２、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＳＯ２ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｎ（ＣＯＣＨ）２および−Ｓ−Ｓ−（Ｃ５Ｈ４Ｎ）よりなる群から選択される求電子性基２つ以上を含む請求項３記載の組成物。
【請求項１５】
多求電子性ポリアルキレンオキシドがさらにスクシンイミジル基２つ以上を含む請求項３記載の組成物。
【請求項１６】
多求電子性ポリアルキレンオキシドがさらにマレイミジル基２つ以上を含む請求項３記載の組成物。
【請求項１７】
多求電子性ポリアルキレンオキシドがポリエチレングリコールまたはその誘導体である請求項３記載の組成物。
【請求項１８】
多糖類またはタンパク質をさらに含む請求項３記載の組成物。
【請求項１９】
グルコサミノグリカンである多糖類をさらに含む請求項３記載の組成物。
【請求項２０】
グルコサミノグリカンがヒアルロン酸、キチン、硫酸コンドロイチンＡ、硫酸コンドロイチンＢ、硫酸コンドロイチンＣ、硫酸ケラチン、ケラトスルフェート、ヘパリンおよびこれらの誘導体よりなる群から選択される請求項１９記載の組成物。
【請求項２１】
コラーゲンまたはその誘導体であるタンパク質をさらに含む請求項３記載の組成物。
【請求項２２】
多求核性ポリアルキレンオキシドまたは多求電子性ポリアルキレンオキシド、または多求核性ポリアルキレンオキシドおよび多求電子性ポリアルキレンオキシドの両方がさらに連結基を含む請求項３記載の組成物。
【請求項２３】
多求核性ポリアルキレンオキシドが下記式：
重合体−Ｑ１−Ｘｍ
により与えられ、そして多求電子性ポリアルキレンオキシドが下記式：
重合体−Ｑ２−Ｙｎ
により与えられ、
ここでＸは求電子性基であり、そしてＹは求核性基であり；
ここでｍおよびｎは各々２〜４であり；
ここでｍ＋ｎ≦５であり；
ここでＱ１およびＱ２の各々は−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ’−、−Ｓ−、−（ＣＨ２）ｎ’−、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ’−、−Ｏ２Ｃ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ’−、−Ｏ２Ｃ−（ＣＨ２）ｎ’−、−Ｏ２Ｃ−ＣＲ１Ｈ、および−Ｏ−Ｒ２−ＣＯ−ＮＨ、よりなる群から選択される連結基である；
ここでｎ’＝１〜１０であり；
ここでＲ１＝−Ｈ、−ＣＨ３、または−Ｃ２Ｈ５であり；
ここでＲ２＝−ＣＨ２−または−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２−であり；そして、
ここでＱ１およびＱ２は同じかまたは異なっていてよく、あるいは非存在であってよい、請求項３記載の組成物。
【請求項２４】
Ｙが下記式：
−ＣＯ２Ｎ（ＣＯＣＨ２）２
により与えられる請求項２３記載の組成物。
【請求項２５】
Ｙが下記式：
−Ｎ（ＣＯＣＨ）２
により与えられる請求項２３記載の組成物。
【請求項２６】
多求核性ポリアルキレンオキシドまたは多求電子性ポリアルキレンオキシド、または多求核性ポリアルキレンオキシドおよび多求電子性ポリアルキレンオキシドの両方がさらに生体分解性基を含む請求項３記載の組成物。
【請求項２７】
生体分解性基がラクチド、グリコリド、ε−カプロラクトン、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（アミノ酸）、およびポリ（無水物）よりなる群から選択される請求項２６記載の組成物。
【請求項２８】
ヒドロゲル形成成分が、水和されてゼラチンを含むフラグメント化生体分解性ヒドロゲルを形成することができ、そして湿潤した組織標的部位に送達されると水を吸収し、そして、ヒドロゲルが完全に水和されると約０．０１ｍｍ〜約５ｍｍの範囲の大きさを有するサブユニットを含み、そして約４００％〜約５０００％の範囲の平衡膨潤性を有する請求項１記載の組成物。
【請求項２９】
ヒドロゲルが１年未満のインビボの分解時間を有する請求項２８記載の組成物。
【請求項３０】
ヒドロゲルが活性剤を含む水性媒質により少なくとも部分的に水和される請求項２８および２９記載の組成物。
【請求項３１】
活性剤が凝固剤である請求項３０記載の組成物。
【請求項３２】
凝固剤がトロンビンである請求項３１記載の組成物。
【請求項３３】
患者に活性剤を送達するための方法であって、方法が請求項３０記載の組成物のある量を患者における標的部位に投与することを含む上記方法。
【請求項３４】
患者に密封剤を送達するための方法であって、方法が出血を抑制するために十分な請求項１記載の組成物のある量を出血標的部位に投与することを含む上記方法。
【請求項３５】
患者に活性剤を送達するための方法であって、方法が出血を抑制するために十分な請求項３２記載の組成物のある量を出血標的部位に投与することを含む上記方法。
【請求項３６】
多求核性ポリアルキレンオキシド、多求電子性ポリアルキレンオキシド、およびヒドロゲル形成成分を含む組成物であって、多求核性ポリアルキレンオキシドがさらに第１級アミノ基少なくとも１つおよびチオール基少なくとも１つを含み、そして反応を可能とする条件下で多求核性ポリアルキレンオキシドおよび多求電子性ポリアルキレンオキシドが実質的に即時に交差結合できる上記組成物。
【請求項３７】
多求核性ポリアルキレンオキシド、多求電子性ポリアルキレンオキシド、およびヒドロゲル形成成分を含む組成物であって、多求核性ポリアルキレンオキシドがさらにチオール基２つ以上を含み、そして多求電子性ポリアルキレンオキシドがさらにスクシンイミジル基およびマレイミジル基よりなる群から選択される求電子性基２つ以上を含み、そして反応を可能とする条件下で多求核性ポリアルキレンオキシドおよび多求電子性ポリアルキレンオキシドが実質的に即時に交差結合できる上記組成物。
【請求項３８】
多求核性ポリアルキレンオキシド、多求電子性ポリアルキレンオキシド、およびヒドロゲル形成成分を含む組成物であって、多求核性ポリアルキレンオキシドがさらに第１級アミノ基およびチオール基よりなる群から選択される求核性基２つ以上を含み、そして多求電子性ポリアルキレンオキシドがさらにスクシンイミジル基及２つ以上を含み、そして反応を可能とする条件下で多求核性ポリアルキレンオキシドおよび多求電子性ポリアルキレンオキシドが実質的に即時に交差結合できる上記組成物。
【請求項３９】
チオール基２つ以上を含む第１のポリエチレングリコール、スクシンイミジル基またはマレイミジル基２つ以上を含む第２のポリエチレングリコール、およびヒドロゲル形成成分を含む組成物であって、チオール基およびスクシンイミジル基またはマレイミジル基の合計が少なくとも５つであり、そして反応を可能とする条件下で第１のポリエチレングリコールおよび第２のポリエチレングリコールが実質的に即時に交差結合できる上記組成物。
【請求項４０】
第１のポリエチレングリコールがさらにチオール基４つを含み、そして第２のポリエチレングリコールがさらにスクシンイミジル基４つを含む請求項３９記載の組成物。
【請求項４１】
タンパク質または多糖類をさらに含む請求項３９記載の組成物。
【請求項４２】
グリコサミノグリカンである、多糖類をさらに含む請求項３９記載の組成物。
【請求項４３】
グリコサミノグリカンがヒアルロン酸、キチン、硫酸コンドロイチンＡ、硫酸コンドロイチンＢ、硫酸コンドロイチンＣ、硫酸ケラチン、ケラトスルフェート、ヘパリンおよびこれらの誘導体よりなる群から選択される請求項４２記載の組成物。
【請求項４４】
コラーゲンまたはその誘導体であるタンパク質をさらに含む請求項３９記載の組成物。
【請求項４５】
組織管を密閉するための方法であって、方法が下記成分：
第１の交差結合可能な成分；
反応を可能とする条件下で第１の交差結合可能な成分と交差結合する第２の交差結合可能な成分；および、
ヒドロゲル形成成分；
を含む組成物で組織管を少なくとも部分的に充填することを含み、
ここで第１および第２の交差結合可能な成分は交差結合して間隙を有する多孔性マトリックスを形成し、そしてヒドロゲル形成成分は水和されて間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成することができ、ヒドロゲルは完全に水和されると約０．０５ｍｍ〜約５ｍｍの範囲の大きさを有し、約４００％〜約１３００％の範囲の平衡膨潤性を有し、そして約１〜約１２０日後に組織管内で分解するサブユニットを含む上記方法。
【請求項４６】
第１の交差結合可能な成分が多数の求核性基を含み、そして第２の重合体が多数の求電子性基を含む請求項４５記載の方法。
【請求項４７】
患者の身体内の標的部位における出血を抑制するための方法であって、方法が出血を抑制するために十分な量において標的部位に組成物を送達することを含み、組成物が下記成分：
第１の交差結合可能な成分；
反応を可能とする条件下で第１の交差結合可能な成分と交差結合する第２の交差結合可能な成分；および、
ヒドロゲル形成成分；
を含み、
ここで第１および第２の交差結合可能な成分は交差結合して間隙を有する多孔性マトリックスを形成し、そしてヒドロゲル形成成分は水和されて間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成することができ、ヒドロゲルは完全に水和されると約０．０５ｍｍ〜約５ｍｍの範囲の大きさを有し、約４００％〜約１３００％の範囲の平衡膨潤性を有し、そして約１〜約１２０日後に組織管内で分解するサブユニットを含む上記方法。
【請求項４８】
第１の交差結合可能な成分が多数の求核性基を含み、そして第２の交差結合可能な成分が多数の求電子性基を含む請求項４７記載の方法。
【請求項４９】
患者の身体内の標的部位に生物活性物質を送達するための方法であって、方法が標的部位に生物活性物質と組み合わせて組成物を送達することを含み、組成物が下記成分：
第１の交差結合可能な成分；
反応を可能とする条件下で第１の交差結合可能な成分と交差結合する第２の交差結合可能な成分；および、
ヒドロゲル形成成分；
を含む組成物を含み、
ここで第１および第２の交差結合可能な成分は交差結合して間隙を有する多孔性マトリックスを形成し、そしてヒドロゲル形成成分は水和されて間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成することができ、ヒドロゲルは完全に水和されると約０．０５ｍｍ〜約５ｍｍの範囲の大きさを有し、約４００％〜約１３００％の範囲の平衡膨潤性を有し、そして約１〜約１２０日後に組織管内で分解するサブユニットを含む上記方法。
【請求項５０】
第１の交差結合可能な成分が多数の求核性基を含み、そして第２の交差結合可能な成分が多数の求電子性基を含む請求項４９記載の方法。
【請求項５１】
生物活性物質が止血剤である請求項４９記載の方法。
【請求項５２】
生物活性物質がトロンビンである請求項４９記載の方法。
【請求項５３】
組織における標的部位に膨潤可能な組成物を送達するための方法であって、方法は標的部位に組成物を適用することを含み、組成物は下記成分：
第１の交差結合可能な成分；
反応を可能とする条件下で第１の交差結合可能な成分と交差結合する第２の交差結合可能な成分；および、
ヒドロゲル形成成分；
を含み、
ここで第１および第２の交差結合可能な成分は交差結合して間隙を有する多孔性マトリックスを形成し、そしてヒドロゲル形成成分は水和されて間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成することができ、ヒドロゲルは完全に水和されると約０．０５ｍｍ〜約５ｍｍの範囲の大きさを有し、約４００％〜約１３００％の範囲の平衡膨潤性を有し、そして約１〜約１２０日後に組織管内で分解するサブユニットを含み、組成物は標的部位への適用時にはその平衡膨潤性よりも低値において水和しており、その部位において平衡膨潤値まで膨潤する上記方法。
【請求項５４】
第１の交差結合可能な成分が多数の求核性基を含み、そして第２の交差結合可能な成分が多数の求電子性基を含む請求項５３記載の方法。
【請求項５５】
標的部位が筋肉、皮膚、上皮組織、結合または支持組織、神経組織、眼および他の感覚器官の組織、血管および心臓の組織、胃腸の臓器および組織、胸膜および他の肺の組織、腎臓、内分泌腺、雄性および雌性の生殖器官、脂肪組織、肝臓、膵臓、リンパ、軟骨、骨、口腔組織、および粘膜組織、および脾臓および他の腹部の臓器よりなる群から選択される組織中にある請求項５３記載の方法。
【請求項５６】
標的部位が選択された組織内部の空隙領域である請求項５５記載の方法。
【請求項５７】
空隙領域が組織のくぼみ、組織管、椎骨間空間、および体腔よりなる群から選択される請求項５６記載の方法。
【請求項５８】
ヒドロゲルが平衡膨潤時の水和の５０％〜９５％の範囲の水和度を有する請求項５３記載の方法。
【請求項５９】
ヒドロゲルが可塑剤を含む請求項５３記載の方法。
【請求項６０】
可塑剤がポリエチレングリコール、ソルビトールおよびグリセロールよりなる群から選択される請求項５９記載の方法。
【請求項６１】
可塑剤がヒドロゲル成分の組成物の０．１重量％〜３０重量％において存在する請求項５９記載の方法。
【請求項６２】
ヒドロゲルが交差結合タンパク質ヒドロゲルを含む請求項４５〜６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６３】
タンパク質がゼラチン、可溶性コラーゲン、アルブミン、ヘモグロビン、フィブロジェン、フィブリン、カゼイン、フィブロネクチン、エラスチン、ケラチン、ラミニン、およびこれらの誘導体および組み合わせよりなる群から選択される請求項６２記載の方法。
【請求項６４】
ヒドロゲルが交差結合多糖類を含む請求項４５〜６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６５】
多糖類がグリコサミノグリカン、澱粉誘導体、セルロース誘導体、ヘミセルロース誘導体、キシラン、アガロース、アルギネート、およびキトサンおよびこれらの組み合わせよりなる群から選択される請求項６４記載の方法。
【請求項６６】
ヒドロゲルが交差結合非生物重合体である請求項４５〜６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６７】
交差結合非生物重合体がポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリルアミド、ポリビニル樹脂、ポリアクチド−グリコリド、ポリカプロラクトン、ポリオキシエチレン、およびこれらの組み合わせよりなる群から選択される請求項６６記載の方法。
【請求項６８】
ヒドロゲルが交差結合タンパク質、交差結合多糖類、および交差結合非生物重合体よりなる群から選択される少なくとも２つの成分を含む請求項４５〜６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６９】
ヒドロゲルがヒドロゲル重合体およびヒドロゲル交差結合剤を含み、ここでヒドロゲル重合体およびヒドロゲル交差結合剤はヒドロゲル重合体分子の交差結合をもたらす条件下で反応されている請求項４５〜６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７０】
ヒドロゲルがヒドロゲル重合体分子の交差結合をもたらす条件下の照射により生成されているヒドロゲルの分子交差結合ヒドロゲル重合体を含む請求項４５〜６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７１】
ヒドロゲルがヒドロゲル重合体分子の交差結合をもたらす条件下のモノ不飽和および多不飽和のヒドロゲル単量体の反応により生成されている分子交差結合ヒドロゲルを含む請求項４５〜６１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７２】
下記工程：
求核性基ｍ個を含有する第１の交差結合可能な成分および求電子性基ｎ個を含有する第２の交差結合可能な成分を提供すること、ここで求電子性基は求核性基と反応してそれとの共有結合を形成し、ここでｍおよびｎは各々２以上であり、そしてここでｍ＋ｎは５以上であること；
第１の交差結合可能な成分および第２の交差結合可能な成分を組み合わせること；
第１の交差結合可能な成分および第２の交差結合可能な成分にヒドロゲル形成成分を添加すること；
第１の交差結合可能な成分および第２の交差結合可能な成分を相互に交差結合させて３次元マトリックスを形成すること；
を含む３次元合成重合体マトリックスを形成する方法。
【請求項７３】
第１の組織表面および第２の組織表面を第１の交差結合可能な成分、第２の交差結合可能な成分、およびヒドロゲル形成成分に接触させることをさらに含む請求項７２記載の方法。
【請求項７４】
第２の表面が天然の組織表面である請求項７３記載の方法。
【請求項７５】
第２の表面が非天然の組織表面である請求項７３記載の方法。
【請求項７６】
非天然の組織表面が合成インプラントである請求項７５記載の方法。
【請求項７７】
合成インプラントがドナー角膜、人工血管、心臓弁、人工臓器、結合補綴物、インプラント可能なレンズ核、血管移植片、ステント、およびステント／移植片の組み合わせよりなる群から選択される請求項７６記載の方法。
【請求項７８】
第１の交差結合可能な成分、第２の交差結合可能な成分、およびヒドロゲル形成成分が第１の組織表面において粉末形態において各々適用される請求項７２記載の方法。
【請求項７９】
第１の交差結合可能な成分、第２の交差結合可能な成分、およびヒドロゲル形成成分が第１の組織表面において単一の複合化混合粉末製剤における粉末として各々適用される請求項７２記載の方法。
【請求項８０】
混合粉末製剤がさらにタンパク質または多糖類を含む請求項７９記載の方法。
【請求項８１】
第１の組織表面が硬組織または軟組織の上または中にある請求項７２記載の方法。
【請求項８２】
第１の組織表面が外科的部位を含むか、包囲するか、またはそれに隣接しており、そしてさらに外科的部位を閉鎖する工程を含む請求項７２記載の方法。
【請求項８３】
混合粉末製剤がさらにコラーゲンを含む請求項７２記載の方法。
【請求項８４】
混合粉末製剤がさらに生物活性剤を含む請求項７２記載の方法。
【請求項８５】
下記成分：
多数の求核性基を含む第１の交差結合可能な成分であって、粉末形態の第１の交差結合可能な成分；
多数の求電子性基を含む第２の交差結合可能な成分であって、粉末形態の第２の交差結合可能な成分；および、
粉末形態のヒドロゲル形成成分；
を含む混合粉末組成物であって、ここで反応を可能にする条件下において第１および第２の交差結合可能な成分が実質的に即時に交差結合できる上記組成物。
【請求項８６】
第２の交差結合可能な成分に添加された第１の交差結合可能な成分が複合化された交差結合可能な成分の組成物を与え、そして第１の交差結合可能な成分が複合化された交差結合可能な成分の組成物の約０．５〜約２０重量％の範囲の濃度において存在する請求項８５記載の混合粉末組成物。
【請求項８７】
第２の交差結合可能な成分に添加された第１の交差結合可能な成分が複合化された交差結合可能な成分の組成物を与え、そして第２の交差結合可能な成分が複合化された交差結合可能な成分の組成物の約０．５〜約２０重量％の範囲の濃度において存在する請求項８５記載の混合粉末組成物。
【請求項８８】
第１の交差結合可能な成分の第２の交差結合可能な成分に対する重量比が約４５％〜約５５％の範囲にある請求項８５記載の混合粉末組成物。
【請求項８９】
第１の交差結合可能な成分の第２の交差結合可能な成分に対する重量比が約５０％である請求項８５記載の混合粉末組成物。
【請求項９０】
第１およびの第２の交差結合可能な成分とヒドロゲル形成成分との間の重量比が約２８％ｗ／ｗ〜約４２％ｗ／ｗの範囲内にある請求項８５記載の混合粉末組成物。
【請求項９１】
第１およびの第２の交差結合可能な成分とヒドロゲル形成成分との間の重量比が約２０％ｗ／ｗ〜約３０％ｗ／ｗの範囲内にある請求項８５記載の混合粉末組成物。
【請求項９２】
第２の交差結合可能な成分に添加された第１の交差結合可能な成分が複合化された交差結合可能な成分の組成物を与え、そして第１の交差結合可能な成分が複合化された交差結合可能な成分の組成物の約０．５〜約２０重量％の範囲の濃度において存在する請求項９１記載の混合粉末組成物。
【請求項９３】
第２の交差結合可能な成分に添加された第１の交差結合可能な成分が複合化された交差結合可能な成分の組成物を与え、そして第２の交差結合可能な成分が複合化された交差結合可能な成分の組成物の約０．５〜約２０重量％の範囲の濃度において存在する請求項９１記載の混合粉末組成物。
【請求項９４】
第１の交差結合可能な成分の第２の交差結合可能な成分に対する重量比が約４５％〜約５５％の範囲にある請求項９１記載の混合粉末組成物。
【請求項９５】
第１の交差結合可能な成分の第２の交差結合可能な成分に対する重量比が約５０％である請求項９１記載の混合粉末組成物。
【請求項９６】
下記要素：
容器；および、
容器内に配置された混合粉末組成物であって、組成物が下記成分：
多数の求核性基を含む第１の交差結合可能な成分であって、粉末形態の第１の交差結合可能な成分；
多数の求電子性基を含む第２の交差結合可能な成分であって、粉末形態の第２の交差結合可能な成分；および、
粉末形態のヒドロゲル形成成分；
を含み、ここで反応を可能にする条件下において第１および第２の交差結合可能な成分が実質的に即時に交差結合できる上記組成物；
を含むキット。
【請求項９７】
容器がシリンジ胴部およびシリンジプランジャー部を含む請求項９６記載のキット。
【請求項９８】
患者の出血標的部位に混合粉末組成物を適用するための書面による説明書をさらに含む請求項９６のキット。
【請求項９９】
混合粉末がさらに活性剤を含む請求項９６のキット。
【請求項１００】
活性剤がトロンビンを含む請求項９９記載のキット。
【請求項１０１】
下記要素：
コラーゲンスポンジ；および、
スポンジ表面に固定化された混合粉末組成物を含むキットであって、混合粉末組成物が下記成分：
多数の求核性基を含む第１の交差結合可能な成分であって、粉末形態の第１の交差結合可能な成分；
多数の求電子性基を含む第２の交差結合可能な成分であって、粉末形態の第２の交差結合可能な成分；および、
粉末形態のヒドロゲル形成成分；
を含み、ここで反応を可能にする条件下において第１および第２の交差結合可能な成分が実質的に即時に交差結合できる、キット。
【請求項１０２】
下記成分：
天然のコラーゲン線維を含むコラーゲンスポンジ；および、
スポンジ表面に固定化された混合粉末組成物を含む組成物であって、混合粉末組成物が下記成分：
多数の求核性基を含む第１の交差結合可能な成分であって、粉末形態であり混合粉末の約１０％を含む第１の交差結合可能な成分；
多数の求電子性基を含む第２の交差結合可能な成分であって、粉末形態であり混合粉末の約１０％を含む第２の交差結合可能な成分；および、
粉末形態であり混合粉末の約８０％を含むヒドロゲル形成成分；
を含み、ここで反応を可能にする条件下において第１および第２の交差結合可能な成分は実質的に即時に交差結合することにより間隙を有する多孔性マトリックスを形成することができ、そしてここでヒドロゲル形成成分は水和されて間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成することができる、組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願への相互参照）
［０００１］  本願は、２００６年８月２日に出願された米国特許出願第６０／８２１，１９０号からの優先権の権利を主張する。本願はまた、米国特許第５，８７４，５００号、同第６，０６３，０６１号、同第６，０６６，３２５号、同第６，１６６，１３０号および同第６，４５８，８８９号に関する。これら各出願の内容は、本明細書により参考として援用される。
【０００２】
（連邦支援研究開発の下に行われた発明の権利に関する陳述書）
［０００２］  適用せず。
【０００３】
（コンパクトディスク上で提出された「配列表」、表、またはコンピュータープログラムを列挙する附録の参照）
［０００３］  適用せず。
【背景技術】
【０００４】
（発明の背景）
［０００４］  Ｒｈｅｅ等に１９９２年１１月１０日に発行された特許文献１はポリエチレングリコールの種々の誘導体のような合成親水性重合体にコラーゲンを共有結合させることにより生成したコラーゲン−合成重合体コンジュゲートを考察している。Ｒｈｅｅ等に１９９４年６月２８日に発行された特許文献２は合成非免疫原性親水性ポリエチレングリコール重合体に共有結合させた種々のインサートの天然に存在する生物学的化合物の重合体（例えば多糖類）を考察している。Ｒｈｅｅ等に１９９４年７月１２日に発行された特許文献３はある範囲の物理的および化学的特性を有するコラーゲン−合成重合体コンジュゲートを生成するために使用できるポリエチレングリコールの種々の活性化型および種々の連結部を考察している。
【０００５】
［０００５］  １９９５年３月１４日に出願された０８／４０３，３５８は疎水性交差結合剤または親水性および疎水性の交差結合剤の混合物を用いて生成される交差結合生物材料組成物を考察している。疎水性交差結合剤はスクシンイミジル基２つ以上を含有するか、または含有するように化学的に誘導体化することができるいずれかの疎水性の重合体を包含できる。
【０００６】
［０００６］  Ｙｅｕｎｇ等に１９９６年１２月３日に発行された特許文献４は基質物質および抗接着結合剤を含む外科的接着の防止において有用な組成物を考察しており、この場合、基質物質は好ましくはコラーゲンを含み、そして結合剤は好ましくは組織反応性官能基少なくとも１つおよび基質反応性官能基少なくとも１つを含む。
【０００７】
［０００７］  Ｒｈｅｅ等に１９９７年３月２５日に発行された特許文献５は多官能性的に活性化された合成の親水性重合体を用いて交差結合されたコラーゲンを含む生物接着組成物、並びに第１の表面と第２の表面の間に接着をもたらすためのそのような組成物の使用方法を考察しており、ここでは第１および第２の表面の少なくとも１つが天然の組織表面であることができる。
【０００８】
［０００８］  特許文献６は１０００〜５０００の範囲の平均分子量を有するポリエチレングリコールと３０，０００〜２００，０００の範囲の平均分子量を有するポリ−Ｎ−ビニルピロリドンの混合物を含む、機械工作装置上に材料を搭載するための支持体上へのレンズ材料の一時的接着のために使用される組成物を考察している。
【０００９】
［０００９］  Ｗｅｓｔ  ａｎｄ  Ｈｕｂｂｅｌｌ，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ（１９９５）１６：１１５３−１１５６は光重合されたポリエチレングリコール−コ乳酸ジアクリレートヒドロゲルおよび物理的に交差結合されたポリエチレングリコール−コプロピレングリコールヒドロゲル、Ｐｏｌｏｘａｍｅｒ４０７（登録商標）を用いた術後接着の防止を考察している。
【００１０】
［００１０］  特許文献７および特許文献８は０．５〜２．０μｍの粒径を有する微粒子微小繊維状コラーゲンを含む創傷包帯を記載している。この組成物は一般的に水相を含み、そして本明細書に記載しているようにヒドロゲルを形成しなくてもよい。米国特許第５，６９８，２１３は吸収性外科用装置および薬物送達ビヒクルとして有用な交差結合脂肪族ポリエステルヒドロゲルを記載している。特許文献９はアクリレートまたはメタクリレート系のヒドロゲル接着剤を記載している。特許文献１０は薬物送達ビヒクルとして有用なポリオキシアルキレン系の熱可逆性ヒドロゲルを記載している。
【００１１】
［００１１］  特許文献１１および特許文献１２は多糖類またはムコ多糖類と交差結合された、そして薬物送達ビヒクルとして有用なタンパク質成分を含むヒドロゲルを記載している。
【００１２】
［００１２］  生体分解性の注射可能な薬物送達重合体は特許文献１３において、そしてＪｅｏｎｇ等（１９９７）“Ｎａｔｕｒｅ，”３８８：８６０−８６２により記載されている。制御放出薬物送達のための生体分解性ヒドロゲルは特許文献１１に記載されている。再吸収可能なコラーゲン系薬物送達系は特許文献１４および特許文献１５に記載されている。薬物送達のためのアミノ多糖類系の生体適合性フィルムは特許文献１６および特許文献１７に記載されている。タキソールの送達のための水溶性担体は特許文献１８に記載されている。
【００１３】
［００１３］  限局性および除放性の放出を行うための治療薬の担体として重合体が使用されている（Ｌａｎｇｅｒ等、Ｒｅｖ．Ｍａｃｒｏ．Ｃｈｅｍ．Ｐｈｙｓ．，Ｃ２３（１），６１，１９８３；Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ，Ｖｏｌ．ＩおよびＩＩ、Ｂｒｕｃｋ、Ｓ．Ｄ．，（編）ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，Ｆｌａ，１９８３；Ｌｅｏｎｇ等、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗ，１：１９９，１９８７）。これらの治療薬送達系は注入を模倣しており、増強された治療効果および低減された全身毒性の潜在性を与える。
【００１４】
［００１４］  制御放出薬物送達のために提案されている合成重合体の他のクラスはポリエステル（Ｐｉｔｔ等、Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ｏｆ  Ｂｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ，Ｒ．Ｂａｋｅｒ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８０）；ポリアミド（Ｓｉｄｍａｎ等、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｍｂｒａｎｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，７：２２７，１９７９）；ポリウレタン（Ｍａｓｅｒ等、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ，６６：２５９，１９７９）；ポリオルトエステル（Ｈｅｌｌｅｒ等、Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，２１：７２７，１９８１）；およびポリ無水物（Ｌｅｏｎｇ等、Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ，７：３６４，１９８６）を包含する。
【００１５】
［００１５］  自身の物理的特性を改変するために機械的に崩壊されているコラーゲン含有組成物が米国特許第５，４２８，０２４；５，３５２，７１５；および５，２０４，３８２に記載されている。これらの特許は一般的に微小繊維性で不溶性のコラーゲンに関する。注射可能なコラーゲン組成物は米国特許第４，８０３，０７５に記載されている。注射可能な骨／軟骨組成物は米国特許第５，５１６，５３２に記載されている。水に懸濁してよく、そして特定の表面電荷密度を有する５μｍ〜８５０μｍの粒径範囲の乾燥粒子を含むコラーゲン系送達マトリックスがＷＯ９６／３９１５９に記載されている。創傷包帯を形成するためのエアロゾルスプレーとして有用な１μｍ〜５０μｍの粒径を有するコラーゲン調製品が米国特許第５，１９６，１８５に記載されている。コラーゲン組成物を記載している他の特許は米国特許第５，６７２，２３６および５，３５６，６１４を包含する。交差結合してシリンジを介して注射してよい重合体非腐食性ヒドロゲルはＷＯ９６／０６８８に記載されている。
【００１６】
［００１６］  本出願の被譲渡者に譲渡された以下の係争中の出願、即ち１９９７年７月３１日に出願された米国特許出願０８／９０３，６７４；１９９７年６月１８日に出願された米国特許出願６０／０５０，４３７；１９９６年８月２７日に出願された米国特許出願０８／７０４，８５２；１９９６年６月１９日に出願された米国特許出願０８／６７３，７１０；１９９６年２月２０日に出願された米国特許出願６０／０１１，８９８；１９９６年１１月７日に出願された米国特許出願６０／００６，３２１；１９９６年１１月７日に出願された米国特許出願６０／００６，３２２；１９９６年１１月７日に出願された米国特許出願６０／００６，３２４；および１９９５年６月７日に出願された米国特許出願０８／４８１，７１２は関連の要件を含んでいる。これらの出願の各々の完全な開示内容は参照により本明細書に組み込まれる。上記引用した各公開物は参照により全体が本明細書に組み込まれる。生物接着材としての使用のため、組織強化のため、外科的接着の防止のため、合成インプラントの表面をコーティングするため、薬物送達マトリックスとして、眼科用途のため等に適している種々の材料が存在する。なお多くの場合においてこれらの材料に関わる硬化時間は最適とは言えず、外科的および他の医療用途のためには急速作用性材料が望ましい場合が多い。他の場合においては現在使用可能な材料は特定の外科的用途のためには望ましくない膨潤特性を示す場合がある。即ち必要とされているものは例えば止血および／または創傷密閉用途のための組織密閉材としての使用のための急速作用性材料である。さらにまた、最小限の膨潤特性を示す材料を提供することも望まれている。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】米国特許第５，１６２，４３０号明細書
【特許文献２】米国特許第５，３２４，７７５号明細書
【特許文献３】米国特許第５，３２８，９５５号明細書
【特許文献４】米国特許第５，５８０，９２３号明細書
【特許文献５】米国特許第５，６１４，５８７号明細書
【特許文献６】特開２００７−０９０２４１号明細書
【特許文献７】米国特許第５，６７２，３３６号明細書
【特許文献８】米国特許第５，１９６，１８５号明細書
【特許文献９】米国特許第５，６７４，２７５号明細書
【特許文献１０】米国特許第５，３０６，５０１号明細書
【特許文献１１】米国特許第４，９２５，６７７号明細書
【特許文献１２】米国特許第５，０４１，２９２号明細書
【特許文献１３】米国特許第５，３８４，３３３号明細書
【特許文献１４】米国特許第４，３４７，２３４号明細書
【特許文献１５】米国特許第４，２９１，０１３号明細書
【特許文献１６】米国特許第５，３００，４９４号明細書
【特許文献１７】米国特許第４，９４６，８７０号明細書
【特許文献１８】米国特許第５，６４８，５０６号明細書
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１８】
発明の簡単な要旨
［００１７］  本発明はインビボの関連において止血または他の体液の封じ込めを達成するための組成物を提供する。本発明の組成物は体液を封じ込めるための脊椎動物への適用に適する組成物中に第１および第２の交差結合可能な成分および少なくとも１つのヒドロゲル形成成分を含む。組成物は例えば止血および／または創傷密閉用途のための組織密閉材としての使用のための急速作用性の材料を包含する。組成物は最小限の膨潤特性を示す。
【００１９】
［００１８］  第１の特徴において、本発明は第１の交差結合可能な成分、反応を可能とする条件下で第１の交差結合可能な成分と交差結合する第２の交差結合可能な成分、およびヒドロゲル形成成分を含む組成物を提供する。第１および第２の交差結合可能な成分は交差結合して間隙を有する多孔性マトリックスを形成し、そしてここでヒドロゲル形成成分は水和されて間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成することができる。一部の特徴においては、ヒドロゲル形成成分は密閉材マトリックスバリアを形成するための反応時間に影響する場合がある。例えば一部の実施形態においてはｐＨ６．７５を有するヒドロゲル形成成分を含む組成物はｐＨ９．５を有するヒドロゲル形成成分を包含する組成物よりも緩徐な反応時間を与える。
【００２０】
［００１９］  第１の交差結合可能な成分が多数の求核性基を包含でき、そして第２の交差結合可能な成分が多数の求電子性基を包含できる。一部の特徴においては、第１の交差結合可能な成分は求核性基ｍ個を有する多求核性（ｍｕｌｔｉ−ｎｕｃｌｅｏｐｈｉｌｉｃ）ポリアルキレンオキシドを包含し、そして第２の交差結合可能な成分は求電子性基ｎ個を有する多求電子性（ｍｕｌｔｉ−ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｉｌｉｃ）ポリアルキレンオキシドを包含し、ここでｍおよびｎは各々２以上であり、そしてｍ＋ｎは５以上である。一部の特徴においては、ｎが２であり、そしてｍが３以上である。多求核性ポリアルキレンオキシドは４官能性的に活性化される。一部の特徴においては、ｍが２であり、そしてｎは３以上である。多求電子性ポリアルキレンオキシドは４官能性的に活性化される。一部の場合においては、多求核性ポリアルキレンオキシドおよび多求電子性ポリアルキレンオキシドは４官能性的に活性化される。多求核性ポリアルキレンオキシドはさらに−ＮＨ２、−ＳＨ、−Ｈ、−ＰＨ２、および−ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ２よりなる群から選択される求核性基２つ以上を包含する。一部の場合においては、多求核性ポリアルキレンオキシドはさらに第１級アミノ基２つ以上を包含する。一部の場合においては、多求核性ポリアルキレンオキシドはさらにチオール基２つ以上を包含する。多求核性ポリアルキレンオキシドはポリエチレングリコールまたはその誘導体である。一部の場合においては、ポリエチレングリコールは求核性基２つ以上を包含し、これは第１級アミノ基および／またはチオール基を包含してよい。多求電子性ポリアルキレンオキシドは２つ以上の求電子性基、例えば−ＣＯ２Ｎ（ＣＯＣＨ２）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＨＯ、−ＣＨＯＣＨ２、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＳＯ２ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｎ（ＣＯＣＨ）２および−Ｓ−Ｓ−（Ｃ５Ｈ４Ｎ）を包含できる。多求電子性ポリアルキレンオキシドはさらにスクシンイミジル基２つ以上を包含する物。多求電子性ポリアルキレンオキシドはさらにマレイミジル基２つ以上を包含する。一部の場合においては、多求電子性ポリアルキレンオキシドはポリエチレングリコールまたはその誘導体であることができる。
【００２１】
［００２０］  一部の特徴においては、多糖類またはタンパク質をさらに包含する。多糖類はグルコサミノグリカン、例えばヒアルロン酸、キチン、硫酸コンドロイチンＡ、硫酸コンドロイチンＢ、硫酸コンドロイチンＣ、硫酸ケラチン、ケラトスルフェート、ヘパリンまたはこれらの誘導体であることができる。タンパク質はコラーゲンまたはその誘導体であることができる。多求核性ポリアルキレンオキシドまたは多求電子性ポリアルキレンオキシド、または多求核性ポリアルキレンオキシドおよび多求電子性ポリアルキレンオキシドの両方は連結基を包含するしてよい。一部の場合においては、求核性ポリアルキレンオキシドは式：重合体−Ｑ１−Ｘｍにより与えられる。多求電子性ポリアルキレンオキシドは式：重合体−Ｑ２−Ｙｎにより与えられる。Ｘは求電子性基であることができ、そしてＹは求核性基であることができ、ｍおよびｎは各々２〜４であり、ｍ＋ｎ≦５であり、Ｑ１およびＱ２の各々は−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ’−、−Ｓ−、−（ＣＨ２）ｎ’−、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ’−、−Ｏ２Ｃ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ’−、−Ｏ２Ｃ−（ＣＨ２）ｎ’−、−Ｏ２Ｃ−ＣＲ１Ｈ、および−Ｏ−Ｒ２−ＣＯ−ＮＨのような連結基であることができる。一部の場合においては、ｎ’は１〜１０であることができ、Ｒ１は−Ｈ、−ＣＨ３、または−Ｃ２Ｈ５であることができ、Ｒ２は−ＣＨ２−または−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２−であることができ、そしてＱ１およびＱ２は同じかまたは異なっていることができ、あるいは非存在であることができる。一部の特徴においては、Ｙは式：−ＣＯ２Ｎ（ＣＯＣＨ２）２または−ＣＯ２Ｎ（ＣＯＣＨ）２であることができる。一部の場合においては、多求核性ポリアルキレンオキシドまたは多求電子性ポリアルキレンオキシド、または多求核性ポリアルキレンオキシドおよび多求電子性ポリアルキレンオキシドの両方はさらに生体分解性基を包含する。生体分解性基はラクチド、グリコリド、ε−カプロラクトン、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（アミノ酸）、およびポリ（無水物）であることができる。一部の特徴においては、ヒドロゲル形成成分は、水和されればゼラチンを包含するフラグメント化生体分解性ヒドロゲルを形成することができ、そして湿潤した組織標的に送達されれば水を吸収するようになることができる。ヒドロゲルは完全に水和されると約０．０１ｍｍ〜約５ｍｍの範囲の大きさおよび約４００％〜約５０００％の範囲の平衡膨潤性を有するサブユニットを包含できる。ヒドロゲルは１年未満のインビボの分解時間を有する。ヒドロゲルは水性媒質により少なくとも部分的に水和され、そして活性剤を包含し、これは凝固剤、例えばがトロンビンを包含してよい。
【００２２】
［００２１］  別の特徴において、本発明の実施形態は患者に活性剤を送達するための方法を提供する。方法は本明細書に記載した組成物のある量を患者における標的部位に投与することを包含することができる。一部の特徴においては、実施形態は患者に密封剤を送達するための方法を包含する。方法は、出血を抑制するために十分な量において本明細書に記載した組成物乗ある量を出血標的部位に投与することを包含することができる。一部の特徴においては、実施形態は患者にトロンビンを送達するための方法を包含する。方法は出血を抑制するために十分な量において本明細書に記載した組成物のある量を出血標的部位に投与することを包含することができる。
【００２３】
［００２２］  さらに別の特徴において、本発明の実施形態は多求核性ポリアルキレンオキシド、多求電子性ポリアルキレンオキシド、およびヒドロゲル形成成分を包含する組成物を包含する。多求核性ポリアルキレンオキシドはさらに第１級アミノ基少なくとも１つおよびチオール基少なくとも１つを包含できる。反応を可能とする条件下において、多求核性ポリアルキレンオキシドおよび多求電子性ポリアルキレンオキシドは実質的に即時に交差結合できる。実施形態は多求核性ポリアルキレンオキシドがチオール基２つ以上を包含し、そして多求電子性ポリアルキレンオキシドがスクシンイミジル基および／またはマレイミジル基のような求電子性基２つ以上を含む組成物を包含する。実施形態はまた多求核性ポリアルキレンオキシドが第１級アミノ基および／またはチオール基のような求電子性基２つ以上を包含する蘇生物を包含する。多求核性ポリアルキレンオキシドはスクシンイミジル基２つ以上を包含できる。一部の場合においては、実施形態はチオール基２つ以上を包含する第１のポリエチレングリコール、スクシンイミジル基またはマレイミジル基２つ以上を包含する第２のポリエチレングリコール、およびヒドロゲル形成成分を包含する組成物を包含する。チオール基およびスクシンイミジル基またはマレイミジル基の合計は少なくとも５つであり、そして反応を可能とする条件下で第１のポリエチレングリコールおよび第２のポリエチレングリコールが実質的に即時に交差結合することができてよい。一部の場合においては、第１のポリエチレングリコールはチオール基４つを包含し、そして第２のポリエチレングリコールはスクシンイミジル基４つを包含する。一部の場合においては、組成物はタンパク質または多糖類を包含する。多糖類はグリコサミノグリカン、例えばヒアルロン酸、キチン、硫酸コンドロイチンＡ、硫酸コンドロイチンＢ、硫酸コンドロイチンＣ、硫酸ケラチン、ケラトスルフェート、ヘパリンまたはこれらの誘導体であることができる。タンパク質はコラーゲンまたはその誘導体であることができる。
【００２４】
［００２３］  別の特徴において、本発明の実施形態は組織管を密閉するための方法を包含する。方法は、第１の交差結合可能な成分、反応を可能とする条件下で第１の交差結合可能な成分と交差結合する第２の交差結合可能な成分、およびヒドロゲル形成成分を包含する組成物で組織管を少なくとも部分的に充填することを包含できる。第１および第２の交差結合可能な成分は交差結合して間隙を有する多孔性マトリックスを形成することができ、そしてヒドロゲル形成成分は水和されて間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成することができる。一部の場合においては、ヒドロゲルは完全に水和されると約０．０５ｍｍ〜約５ｍｍの範囲の大きさを有し、約４００％〜約１３００％の範囲の平衡膨潤性を有し、そして約１〜約１２０日後に組織管内で分解するサブユニットを包含する。一部の場合においては、第１の交差結合可能な成分は多数の求核性基を包含し、そして第２の重合体は多数の求電子性基を包含する。
【００２５】
［００２４］  さらに別の特徴において、本発明の実施形態は患者身体における標的部位における出欠を抑制するための方法を包含する。方法は出血を抑制するために十分な量において標的部位に組成物を送達することを包含することができ、この場合、組成物は第１の交差結合可能な成分、反応を可能とする条件下で第１の交差結合可能な成分と交差結合する第２の交差結合可能な成分、およびヒドロゲル形成成分を包含する。第１および第２の交差結合可能な成分は交差結合して間隙を有する多孔性マトリックスを形成することができ、そしてヒドロゲル形成成分は水和されて間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成することができてよい。ヒドロゲルは完全に水和されると約０．０５ｍｍ〜約５ｍｍの範囲の大きさを有し、約４００％〜約１３００％の範囲の平衡膨潤性を有し、そして約１〜約１２０日後に組織管内で分解するサブユニットを包含することができる。第１の交差結合可能な成分は多数の求核性基を包含でき、そして第２の交差結合可能な成分は多数の求電子性基を包含できる。別の特徴において、本発明の実施形態は患者の身体内の標的部位に生物活性物質を送達するための方法を包含する。方法は標的部位に生物活性物質と組み合わせて組成物を送達することを包含でき、ここで組成物は第１の交差結合可能な成分、反応を可能とする条件下で第１の交差結合可能な成分と交差結合する第２の交差結合可能な成分、およびヒドロゲル形成成分を包含する。第１および第２の交差結合可能な成分は交差結合して間隙を有する多孔性マトリックスを形成することができ、そしてヒドロゲル形成成分は水和されて間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成することができてよい。ヒドロゲルは完全に水和されると約０．０５ｍｍ〜約５ｍｍの範囲の大きさを有するサブユニットを包含することができ、約４００％〜約１３００％の範囲の平衡膨潤性を有することができ、そして約１〜約１２０日後に組織管内で分解することができる。一部の場合においては、第１の交差結合可能な成分は多数の求核性基を包含し、そして第２の交差結合可能な成分は多数の求電子性基を包含する。生物活性物質は止血剤、例えばトロンビンであることができる。
【００２６】
［００２５］  別の特徴において、本発明の実施形態は組織における標的部位に膨潤可能な組成物を送達するための方法を包含する。方法は標的部位に組成物を適用することを包含し、ここで組成物は第１の交差結合可能な成分、反応を可能とする条件下で第１の交差結合可能な成分と交差結合する第２の交差結合可能な成分、およびヒドロゲル形成成分を包含する。第１および第２の交差結合可能な成分は交差結合して間隙を有する多孔性マトリックスを形成し、そしてヒドロゲル形成成分は水和されて間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成することができる。ヒドロゲルは完全に水和されると約０．０５ｍｍ〜約５ｍｍの範囲の大きさを有し、約４００％〜約１３００％の範囲の平衡膨潤性を有し、そして約１〜約１２０日後に組織管内で分解するサブユニットを包含することができる。組成物は標的部位への適用時にはその平衡膨潤性よりも低値において水和しており、その部位において平衡膨潤値まで膨潤してよい。一部の特徴においては、第１の交差結合可能な成分は多数の求核性基を包含し、そして第２の交差結合可能な成分は多数の求電子性基を包含する。一部の特徴においては、標的部位は筋肉、皮膚、上皮組織、平滑筋、骨格筋または心筋、結合または支持組織、神経組織、眼および他の感覚器官の組織、血管および心臓の組織、胃腸の臓器および組織、胸膜および他の肺の組織、腎臓、内分泌腺、雄性および雌性の生殖器官、脂肪組織、肝臓、膵臓、リンパ、軟骨、骨、口腔組織、および粘膜組織、および脾臓および他の腹部の臓器であることができる組織中にある。一部の特徴においては、標的部位は選択された組織内部の空隙領域、例えば組織のくぼみ（ｔｉｓｓｕｅ  ｄｉｖｏｔ）、組織管、椎骨間空間、および体腔を包含する。一部の場合においては、ヒドロゲルは平衡膨潤時の水和の５０％〜９５％の範囲の水和度を有する。一部の場合においては、ヒドロゲルは可塑剤、例えばポリエチレングリコール、ソルビトールおよびグリセロールを包含する。可塑剤はヒドロゲル成分の組成物の０．１重量％〜３０重量％において存在してよい。一部の場合においては、ヒドロゲルは交差結合タンパク質ヒドロゲルを包含する。タンパク質はゼラチン、可溶性コラーゲン、アルブミン、ヘモグロビン、フィブロジェン、フィブリン、カゼイン、フィブロネクチン、エラスチン、ケラチン、ラミニン、およびこれらの誘導体および組み合わせを包含できる。一部の場合においては、ヒドロゲルは交差結合多糖類を包含する。多糖類はグリコサミノグリカン、澱粉誘導体、セルロース誘導体、ヘミセルロース誘導体、キシラン、アガロース、アルギネート、およびキトサンおよびこれらの組み合わせを包含できる。一部の場合においては、ヒドロゲルは交差結合非生物重合体である。交差結合非生物重合体はポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリルアミド、ポリビニル樹脂、ポリアクチド−グリコリド、ポリカプロラクトン、ポリオキシエチレン、およびこれらの組み合わせを包含できる。一部の場合においては、ヒドロゲルは交差結合タンパク質、交差結合多糖類、および交差結合非生物重合体よりなる群から選択される成分少なくとも２つを包含する。ヒドロゲルはヒドロゲル重��体およびヒドロゲル交差結合剤を包含できる。ヒドロゲル重合体およびヒドロゲル交差結合剤はヒドロゲル重合体分子の交差結合をもたらす条件下に反応されていてよい。一部の場合においては、ヒドロゲルがヒドロゲル重合体分子の交差結合をもたらす条件下の照射により生成されているヒドロゲルの分子交差結合ヒドロゲル重合体を包含する。一部の場合においては、ヒドロゲルはヒドロゲル重合体分子の交差結合をもたらす条件下のモノ不飽和（ｍｏｎｏｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ）および多不飽和（ｐｏｌｙｕｎｓａｔｕｒａｔｅｄ）のヒドロゲル単量体の反応により生成されている分子交差結合ヒドロゲル重合体を包含する。
【００２７】
［００２６］  さらに別の特徴において、本発明の実施形態は３次元合成重合体マトリックスを形成する方法を包含する。方法は、求核性基ｍ個を含有する第１の交差結合可能な成分および求電子性基ｎ個を含有する第２の交差結合可能な成分を提供することを包含する。求電子性基は求核性基と反応してそれとの共有結合を形成し、ここでｍおよびｎは各々２以上であり、そしてここでｍ＋ｎは５以上である。方法はさらに、第１の交差結合可能な成分および第２の交差結合可能な成分を組み合わせること、第１の交差結合可能な成分および第２の交差結合可能な成分にヒドロゲル形成成分を添加すること、そして第１の交差結合可能な成分および第２の交差結合可能な成分を相互に交差結合させて３次元マトリックスを形成することを包含する。方法はさらに、第１の組織表面および第２の組織表面を第１の交差結合可能な成分、第２の交差結合可能な成分、およびヒドロゲル形成成分に接触させることを包含することができる。一部の場合においては、第２の表面は天然の組織表面である。一部の場合においては、第２の表面は非天然の組織表面、例えば合成インプラントである。合成インプラントはドナー角膜、人工血管、心臓弁、人工臓器、結合補綴物、インプラント可能なレンズ核、血管移植片、ステント、およびステント／移植片の組み合わせであることができる。一部の場合においては、第１の交差結合可能な成分、第２の交差結合可能な成分、およびヒドロゲル形成成分は第１の組織表面において粉末形態において各々適用される。一部の場合においては、第１の交差結合可能な成分、第２の交差結合可能な成分、およびヒドロゲル形成成分は第１の組織表面において単一の複合化（ｃｏｍｂｉｎｅｄ）混合粉末製剤における粉末として各々適用される。混合粉末製剤はタンパク質および／または多糖類を包含できる。第１の組織表面は硬組織または軟組織の上または中にあってよい。第１の組織表面は外科的部位を包含するか、包囲するか、またはそれに隣接することができる。方法はさらに外科的部位を閉鎖することを包含できる。一部の特徴においては、混合粉末製剤はコラーゲンを包含する。一部の場合においては、混合粉末製剤は生物活性剤を包含する。一部の特徴においては、本発明の実施形態は多数の求核性基を有する粉末形態の第１の交差結合可能な成分、多数の求電子性基を有する粉末形態の第２の交差結合可能な成分、および粉末形態のヒドロゲル形成成分を包含する混合粉末組成物を包含する。反応を可能にする条件下において第１および第２の交差結合可能な成分は実質的に即時に交差結合することができる。
【００２８】
［００２７］  関連する特徴において、第２の交差結合可能な成分に添加された第１の交差結合可能な成分は複合化された（ｃｏｍｂｉｎｅｄ）交差結合可能な成分の組成物を与える。第１の交差結合可能な成分は複合化された交差結合可能な成分の組成物の約０．５〜約２０重量％の範囲の濃度において存在することができる。一部の場合においては、第２の交差結合可能な成分は複合化された交差結合可能な成分の組成物の約０．５〜約２０重量％の範囲の濃度において存在することができる。第１の交差結合可能な成分の第２の交差結合可能な成分に対する重量比は約４５％〜約５５％の範囲にあることができる。関連して、第１の交差結合可能な成分の第２の交差結合可能な成分に対する重量比は約５０％であることができる。一部の場合においては、第１およびの第２の交差結合可能な成分とヒドロゲル形成成分との間の重量比は約２８％〜約４２％の範囲内にあることができる。関連して、第１およびの第２の交差結合可能な成分とヒドロゲル形成成分との間の重量比は約２０％〜約３０％の範囲内にあることができる。一部の特徴においては、第１の交差結合可能な成分は複合化された交差結合可能な成分の組成物の約０．５〜約２０重量％の範囲の濃度において存在することができる。関連して、第２の交差結合可能な成分は複合化された交差結合可能な成分の組成物の約０．５〜約２０重量％の範囲の濃度において存在することができる。第１の交差結合可能な成分の第２の交差結合可能な成分に対する重量比は約４５％〜約５５％の範囲にあることができる。同様に、第１の交差結合可能な成分の第２の交差結合可能な成分に対する重量比は約５０％であることができる。
【００２９】
［００２８］  別の特徴において、本発明の実施形態は密閉材マトリックス組成物キットを提供する。キットは例えば、容器、および容器内に配置された混合粉末組成物を包含できる。組成物は多数の求核性基を有する第１の交差結合可能な成分および多数の求電子性基を有する第２の交差結合可能な成分を包含できる。第１の交差結合可能な成分、第２の交差結合可能な成分、または両方は粉末形態であってよい。キットはまた粉末形態のヒドロゲル形成成分を包含することができる。反応を可能にする条件下において第１および第２の交差結合可能な成分が実質的に即時に交差結合できてよい。一部の場合においては、容器はシリンジ胴部およびシリンジプランジャー部を包含する。キットはまた患者の出血標的部位に混合粉末組成物を適用するための書面による説明書を包含することができる。一部の場合においては、混合粉末は活性剤を包含する。活性剤はトロンビンを包含してよい。
【００３０】
［００２９］  別の特徴において、キットはコラーゲンスポンジまたは他の適当な支持体、およびスポンジまたは支持体の表面に固定化された混合粉末組成物を包含してよい。組成物は、多数の求核性基を有する第１の交差結合可能な成分、および多数の求電子性基を有する第２の交差結合可能な成分を包含できる。第１の交差結合可能な成分、第２の交差結合可能な成分、または両方は粉末形態であってよい。キットはまた粉末形態のヒドロゲル形成成分を包含することができる。反応を可能にする条件下において第１および第２の交差結合可能な成分は実質的に即時に交差結合できるものであってよい。
【００３１】
［００３０］  本発明の性質および利点をより十分理解するために、添付図面と関連して捉えられる以下の詳細な説明を参照しなければならない。
【００３２】
［００３１］  本発明は以下を包含するがこれらに限定されない。
【００３３】
下記成分：
第１の交差結合可能な成分；
反応を可能とする条件下で第１の交差結合可能な成分と交差結合する第２の交差結合可能な成分；および、
ヒドロゲル形成成分；
を含む組成物であって、ここで第１および第２の交差結合可能な成分は交差結合して間隙を有する多孔性マトリックスを形成し、そしてここでヒドロゲル形成成分は水和されて間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成することができる上記組成物。
【００３４】
［００３２］  第１の交差結合可能な成分が多数の求核性基を含み、そして第２の交差結合可能な成分が多数の求電子性基を含む段落［００３１］記載の組成物。
【００３５】
［００３３］  第１の交差結合可能な成分が求核性基ｍ個を有する多求核性ポリアルキレンオキシドを含み、そして第２の交差結合可能な成分が求電子性基ｎ個を有する多求電子性ポリアルキレンオキシドを含み、ここでｍおよびｎは各々２以上であり、そしてｍ＋ｎは５以上である段落［００３１］記載の組成物。
【００３６】
［００３４］  ｎが２であり、そしてｍが３以上である段落［００３３］記載の組成物。
【００３７】
［００３５］  多求核性ポリアルキレンオキシドが４官能性的に活性化される段落［００３４］記載の組成物。
【００３８】
［００３６］  ｍが２であり、そしてｎが３以上である段落［００３３］記載の組成物。
【００３９】
［００３７］  多求電子性ポリアルキレンオキシドが４官能性的に活性化される段落［００３６］記載の組成物。
【００４０】
［００３８］  多求核性ポリアルキレンオキシドおよび多求電子性ポリアルキレンオキシドが４官能性的に活性化される段落［００３３］記載の組成物。
【００４１】
［００３９］  多求核性ポリアルキレンオキシドがさらに−ＮＨ２、−ＳＨ、−Ｈ、−ＰＨ２、および−ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ２よりなる群から選択される求核性基２つ以上を含む段落［００３３］記載の組成物。
【００４２】
［００４０］  多求核性ポリアルキレンオキシドがさらに第１級アミノ基２つ以上を含む段落［００３３］記載の組成物。
【００４３】
［００４１］  多求核性ポリアルキレンオキシドがさらにチオール基２つ以上を含む段落［００３３］記載の組成物。
【００４４】
［００４２］  多求核性ポリアルキレンオキシドがポリエチレングリコールまたはその誘導体である段落［００３３］記載の組成物。
【００４５】
［００４３］  ポリエチレングリコールがさらに第１級アミノ基およびチオール基よりなる群から選択される求核性基２つ以上を含む段落［００４２］記載の組成物。
【００４６】
［００４４］  ポリエチレングリコールがさらに−ＣＯ２Ｎ（ＣＯＣＨ２）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＨＯ、−ＣＨＯＣＨ２、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、−ＳＯ２ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｎ（ＣＯＣＨ）２および−Ｓ−Ｓ−（Ｃ５Ｈ４Ｎ）よりなる群から選択される求電子性基２つ以上を含む段落［００３３］記載の組成物。
【００４７】
［００４５］  多求電子性ポリアルキレンオキシドがさらにスクシンイミジル基２つ以上を含む段落［００３３］記載の組成物。
【００４８】
［００４６］  多求電子性ポリアルキレンオキシドがさらにマレイミジル基２つ以上を含む段落［００３３］記載の組成物。
【００４９】
［００４７］  多求電子性ポリアルキレンオキシドがポリエチレングリコールまたはその誘導体である段落［００３３］記載の組成物。
【００５０】
［００４８］  多糖類またはタンパク質をさらに含む段落［００３３］記載の組成物。
【００５１】
［００４９］  多糖類がグルコサミノグリカンである多糖類をさらに含む段落［００３３］記載の組成物。
【００５２】
［００５０］  グルコサミノグリカンがヒアルロン酸、キチン、硫酸コンドロイチンＡ、硫酸コンドロイチンＢ、硫酸コンドロイチンＣ、硫酸ケラチン、ケラトスルフェート、ヘパリンおよびこれらの誘導体よりなる群から選択される段落［００４９］記載の組成物。
【００５３】
［００５１］  タンパク質がコラーゲンまたはその誘導体であるタンパク質をさらに含む段落［００３３］記載の組成物。
【００５４】
［００５２］  多求核性ポリアルキレンオキシドまたは多求電子性ポリアルキレンオキシド、または多求核性ポリアルキレンオキシドおよび多求電子性ポリアルキレンオキシドの両方がさらに連結基を含む段落［００３３］記載の組成物。
【００５５】
［００５３］  多求核性ポリアルキレンオキシドが下記式：
重合体−Ｑ１−Ｘｍ
により与えられ、そして多求電子性ポリアルキレンオキシドが下記式：
重合体−Ｑ２−Ｙｎ
により与えられ、
ここでＸは求電子性基であり、そしてＹは求核性基であり；
ここでｍおよびｎは各々２〜４であり；
ここでｍ＋ｎ≦５であり；
ここでＱ１およびＱ２の各々は−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ’−、−Ｓ−、−（ＣＨ２）ｎ’−、−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ’−、−Ｏ２Ｃ−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ’−、−Ｏ２Ｃ−（ＣＨ２）ｎ’−、−Ｏ２Ｃ−ＣＲ１Ｈ、および−Ｏ−Ｒ２−ＣＯ−ＮＨ、よりなる群から選択される連結基である；
ここでｎ’＝１〜１０であり；
ここでＲ１＝−Ｈ、−ＣＨ３、または−Ｃ２Ｈ５であり；
ここでＲ２＝−ＣＨ２−または−ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２−であり；そして、
ここでＱ１およびＱ２は同じかまたは異なっていてよく、あるいは非存在であってよい、段落［００３３］記載の組成物。
【００５６】
［００５４］  Ｙが下記式：
−ＣＯ２Ｎ（ＣＯＣＨ２）２
により与えられる段落［００５３］記載の組成物。
【００５７】
［００５５］  Ｙが下記式：
−Ｎ（ＣＯＣＨ）２
により与えられる段落［００５３］記載の組成物。
【００５８】
［００５６］  多求核性ポリアルキレンオキシドまたは多求電子性ポリアルキレンオキシド、または多求核性ポリアルキレンオキシドおよび多求電子性ポリアルキレンオキシドの両方がさらに生体分解性基を含む段落［００３３］記載の組成物。
【００５９】
［００５７］  生体分解性基がラクチド、グリコリド、ε−カプロラクトン、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（アミノ酸）、およびポリ（無水物）よりなる群から選択される段落［００５６］記載の組成物。
【００６０】
［００５８］  ヒドロゲル形成成分が、水和されればゼラチンを含むフラグメント化生体分解性ヒドロゲルを形成することができ、そして湿潤した組織標的に送達されれば水を吸収するようになり、そして、ヒドロゲルが完全に水和されると約０．０１ｍｍ〜約５ｍｍの範囲の大きさを有し、を含み、そして約４００％〜約５０００％の範囲の平衡膨潤性を有するサブユニットを含む段落［００３１］記載の組成物。
【００６１】
［００５９］  ヒドロゲルが１年未満のインビボの分解時間を有する段落［００５８］記載の組成物。
【００６２】
［００６０］  ヒドロゲルが活性剤を含む水性媒質により少なくとも部分的に水和される段落［００５８］および［００５９］記載の組成物。
【００６３】
［００６１］  活性剤が凝固剤である段落［００６０］記載の組成物。
【００６４】
［００６２］  凝固剤がトロンビンである段落［００６１］記載の組成物。
【００６５】
［００６３］  患者に活性剤を送達するための方法であって、方法が段落［００６０］記載の組成物のある量を患者における標的部位に投与することを含む上記方法。
【００６６】
［００６４］  患者に活性剤を送達するための方法であって、方法が出血を抑制するために十分な段落［００３１］記載の組成物のある量を出血標的部位に投与することを含む上記方法。
【００６７】
［００６５］  患者に活性剤を送達するための方法であって、方法が出血を抑制するために十分な段落［００６２］記載の組成物のある量を出血標的部位に投与することを含む上記方法。
【００６８】
［００６６］  多求核性ポリアルキレンオキシド、多求電子性ポリアルキレンオキシド、およびヒドロゲル形成成分を含む組成物であって、多求核性ポリアルキレンオキシドがさらに第１級アミノ基少なくとも１つおよびチオール基少なくとも１つを含み、そして反応を可能とする条件下で多求核性ポリアルキレンオキシドおよび多求電子性ポリアルキレンオキシドが実質的に即時に交差結合できる上記組成物。
【００６９】
［００６７］  多求核性ポリアルキレンオキシド、多求電子性ポリアルキレンオキシド、およびヒドロゲル形成成分を含む組成物であって、多求核性ポリアルキレンオキシドがさらにチオール基２つ以上を含み、そして多求電子性ポリアルキレンオキシドがさらにスクシンイミジル基およびマレイミジル基よりなる群から選択される求電子性基２つ以上を含み、そして反応を可能とする条件下で多求核性ポリアルキレンオキシドおよび多求電子性ポリアルキレンオキシドが実質的に即時に交差結合できる上記組成物。
【００７０】
［００６８］  多求核性ポリアルキレンオキシド、多求電子性ポリアルキレンオキシド、およびヒドロゲル形成成分を含む組成物であって、多求核性ポリアルキレンオキシドがさらに第１級アミノ基およびチオール基よりなる群から選択される求核性基２つ以上を含み、そして多求電子性ポリアルキレンオキシドがさらにスクシンイミジル基及２つ以上を含み、そして反応を可能とする条件下で多求核性ポリアルキレンオキシドおよび多求電子性ポリアルキレンオキシドが実質的に即時に交差結合できる上記組成物。
【００７１】
［００６９］  チオール基２つ以上を含む第１のポリエチレングリコール、スクシンイミジル基またはマレイミジル基２つ以上を含む第２のポリエチレングリコール、およびヒドロゲル形成成分を含む組成物であって、チオール基およびスクシンイミジル基またはマレイミジル基の合計が少なくとも５つであり、そして反応を可能とする条件下で第１のポリエチレングリコールおよび第２のポリエチレングリコールが実質的に即時に交差結合できる上記組成物。
【００７２】
［００７０］  第１のポリエチレングリコールがさらにチオール基４つを含み、そして第２のポリエチレングリコールがさらにスクシンイミジル基４つを含む段落［００６９］記載の組成物。
【００７３】
［００７１］  タンパク質または多糖類をさらに含む段落［００６９］記載の組成物。
【００７４】
［００７２］  多糖類がグリコサミノグリカンである、多糖類をさらに含む段落［００６９］記載の組成物。
【００７５】
［００７３］  グリコサミノグリカンがヒアルロン酸、キチン、硫酸コンドロイチンＡ、硫酸コンドロイチンＢ、硫酸コンドロイチンＣ、硫酸ケラチン、ケラトスルフェート、ヘパリンおよびこれらの誘導体よりなる群から選択される段落［００７２］記載の組成物。
【００７６】
［００７４］  タンパク質がコラーゲンまたはその誘導体であるタンパク質をさらに含む段落［００６９］記載の組成物。
【００７７】
［００７５］  組織管を密閉するための方法であって、方法が下記成分：
第１の交差結合可能な成分；
反応を可能とする条件下で第１の交差結合可能な成分と交差結合する第２の交差結合可能な成分；および、
ヒドロゲル形成成分；
を含む組成物で組織管を少なくとも部分的に充填することを含み、
ここで第１および第２の交差結合可能な成分は交差結合して間隙を有する多孔性マトリックスを形成し、そしてヒドロゲル形成成分は水和されて間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成することができ、ヒドロゲルは完全に水和されると約０．０５ｍｍ〜約５ｍｍの範囲の大きさを有し、約４００％〜約１３００％の範囲の平衡膨潤性を有し、そして約１〜約１２０日後に組織管内で分解するサブユニットを含む上記方法。
【００７８】
［００７６］  第１の交差結合可能な成分が多数の求核性基を含み、そして第２の重合体が多数の求電子性基を含む段落［００７５］記載の方法。
【００７９】
［００７７］  患者の身体内の標的部位における出血を抑制するための方法であって、方法が出血を抑制するために十分な量において標的部位に組成物を送達することを含み、組成物が下記成分：
第１の交差結合可能な成分；
反応を可能とする条件下で第１の交差結合可能な成分と交差結合する第２の交差結合可能な成分；および、
ヒドロゲル形成成分；
を含む組成物で組織管を少なくとも部分的に充填することを含み、
ここで第１および第２の交差結合可能な成分は交差結合して間隙を有する多孔性マトリックスを形成し、そしてヒドロゲル形成成分は水和されて間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成することができ、ヒドロゲルは完全に水和されると約０．０５ｍｍ〜約５ｍｍの範囲の大きさを有し、約４００％〜約１３００％の範囲の平衡膨潤性を有し、そして約１〜約１２０日後に組織管内で分解するサブユニットを含む上記方法。
【００８０】
［００７８］  第１の交差結合可能な成分が多数の求核性基を含み、そして第２の交差結合可能な成分が多数の求電子性基を含む段落［００７７］記載の方法。
【００８１】
［００７９］  患者の身体内の標的部位に生物活性物質を送達するための方法であって、方法が標的部位に生物活性物質と組み合わせて組成物を送達することを含み、組成物が下記成分：
第１の交差結合可能な成分；
反応を可能とする条件下で第１の交差結合可能な成分と交差結合する第２の交差結合可能な成分；および、
ヒドロゲル形成成分；
を含む組成物で組織管を少なくとも部分的に充填することを含み、
ここで第１および第２の交差結合可能な成分は交差結合して間隙を有する多孔性マトリックスを形成し、そしてヒドロゲル形成成分は水和されて間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成することができ、ヒドロゲルは完全に水和されると約０．０５ｍｍ〜約５ｍｍの範囲の大きさを有し、約４００％〜約１３００％の範囲の平衡膨潤性を有し、そして約１〜約１２０日後に組織管内で分解するサブユニットを含む上記方法。
【００８２】
［００８０］  第１の交差結合可能な成分が多数の求核性基を含み、そして第２の交差結合可能な成分が多数の求電子性基を含む段落［００７９］記載の方法。
【００８３】
［００８１］  生物活性物質が止血剤である段落［００７９］記載の方法。
【００８４】
［００８２］  生物活性物質がトロンビンである段落［００７９］記載の方法。
【００８５】
［００８３］  組織における標的部位に膨潤可能な組成物を送達するための方法であって、該方法は標的部位に組成物を適用することを含み、組成物は下記成分：
第１の交差結合可能な成分；
反応を可能とする条件下で第１の交差結合可能な成分と交差結合する第２の交差結合可能な成分；および、
ヒドロゲル形成成分；
を含み、
ここで第１および第２の交差結合可能な成分は交差結合して間隙を有する多孔性マトリックスを形成し、そしてヒドロゲル形成成分は水和されて間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成することができ、ヒドロゲルは完全に水和されると約０．０５ｍｍ〜約５ｍｍの範囲の大きさを有し、約４００％〜約１３００％の範囲の平衡膨潤性を有し、そして約１〜約１２０日後に組織管内で分解するサブユニットを含み、組成物は標的部位への適用時にはその平衡膨潤性よりも低値において水和しており、その部位において平衡膨潤値まで膨潤する上記方法。
【００８６】
［００８４］  第１の交差結合可能な成分が多数の求核性基を含み、そして第２の交差結合可能な成分が多数の求電子性基を含む段落［００８３］記載の方法。
【００８７】
［００８５］  標的部位が筋肉、皮膚、上皮組織、結合または支持組織、神経組織、眼および他の感覚器官の組織、血管および心臓の組織、胃腸の臓器および組織、胸膜および他の肺の組織、腎臓、内分泌腺、雄性および雌性の生殖器官、脂肪組織、肝臓、膵臓、リンパ、軟骨、骨、口腔組織、および粘膜組織、および脾臓および他の腹部の臓器よりなる群から選択される組織中にある段落［００８３］記載の方法。
【００８８】
［００８６］  標的部位が選択された組織内部の空隙領域である段落［００８５］記載の方法。
【００８９】
［００８７］  空隙領域が組織のくぼみ、組織管、椎骨間空間、および体腔よりなる群から選択される段落［００８６］記載の方法。
【００９０】
［００８８］  ヒドロゲルが平衡膨潤時の水和の５０％〜９５％の範囲の水和度を有する段落［００８３］記載の方法。
【００９１】
［００８９］  ヒドロゲルが可塑剤を含む段落［００８３］記載の方法。
【００９２】
［００９０］  可塑剤がポリエチレングリコール、ソルビトールおよびグリセロールよりなる群から選択される段落［００８９］記載の方法。
【００９３】
［００９１］  可塑剤がヒドロゲル成分の組成物の０．１重量％〜３０重量％において存在する段落［００８９］記載の方法。
【００９４】
［００９２］  ヒドロゲルが交差結合タンパク質ヒドロゲルを含む段落［００７５］〜［００９１］のいずれか１項に記載の方法。
【００９５】
［００９３］  タンパク質がゼラチン、可溶性コラーゲン、アルブミン、ヘモグロビン、フィブロジェン、フィブリン、カゼイン、フィブロネクチン、エラスチン、ケラチン、ラミニン、およびこれらの誘導体および組み合わせよりなる群から選択される段落［００９２］記載の方法。
【００９６】
［００９４］  ヒドロゲルが交差結合多糖類を含む段落［００７５］〜［００９１］のいずれか１項に記載の方法。
【００９７】
［００９５］  多糖類がグリコサミノグリカン、澱粉誘導体、セルロース誘導体、ヘミセルロース誘導体、キシラン、アガロース、アルギネート、およびキトサンおよびこれらの組み合わせよりなる群から選択される段落［００９４］記載の方法。
【００９８】
［００９６］  ヒドロゲルが交差結合非生物重合体である段落［００７５］〜［００９１］のいずれか１項に記載の方法。
【００９９】
［００９７］  交差結合非生物重合体がポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリルアミド、ポリビニル樹脂、ポリアクチド−グリコリド、ポリカプロラクトン、ポリオキシエチレン、およびこれらの組み合わせよりなる群から選択される段落［００９６］記載の方法。
【０１００】
［００９８］  ヒドロゲルが交差結合タンパク質、交差結合多糖類、および交差結合非生物重合体よりなる群から選択される少なくとも２つを含む段落［００７５］〜［００９１］のいずれか１項に記載の方法。
【０１０１】
［００９９］  ヒドロゲルがヒドロゲル重合体およびヒドロゲル交差結合剤を含み、ここでヒドロゲル重合体およびヒドロゲル交差結合剤はヒドロゲル重合体分子の交差結合をもたらす条件下に反応されているである段落［００７５］〜［００９１］のいずれか１項に記載の方法。
【０１０２】
［０１００］  ヒドロゲルがヒドロゲル重合体分子の交差結合をもたらす条件下の照射により生成されているヒドロゲルの分子交差結合ヒドロゲル重合体を含む段落［００７５］〜［００９１］のいずれか１項に記載の方法。
【０１０３】
［０１０１］  ヒドロゲルがヒドロゲル重合体分子の交差結合をもたらす条件下のモノ不飽和および多不飽和のヒドロゲル単量体の反応により生成されている分子交差結合ヒドロゲル重合体を含む段落［００７５］〜［００９１］のいずれか１項に記載の方法。
【０１０４】
［０１０２］  下記工程：
求核性基ｍ個を含有する第１の交差結合可能な成分および求電子性基ｎ個を含有する第２の交差結合可能な成分を提供すること、ここで求電子性基は求核性基と反応してそれとの共有結合を形成し、ここでｍおよびｎは各々２以上であり、そしてここでｍ＋ｎは５以上であること；
第１の交差結合可能な成分および第２の交差結合可能な成分を組み合わせること；
第１の交差結合可能な成分および第２の交差結合可能な成分にヒドロゲル形成成分を添加すること；
第１の交差結合可能な成分および第２の交差結合可能な成分を相互に交差結合させて３次元マトリックスを形成すること；
を含む３次元合成重合体マトリックスを形成する方法。
【０１０５】
［０１０３］  第１の組織表面および第２の組織表面を第１の交差結合可能な成分、第２の交差結合可能な成分、およびヒドロゲル形成成分に接触させることをさらに含む段落［０１０２］記載の方法。
【０１０６】
［０１０４］  第２の表面が天然の組織表面である段落［０１０３］記載の方法。
【０１０７】
［０１０５］  第２の表面が非天然の組織表面である段落［０１０３］記載の方法。
【０１０８】
［０１０６］  非天然の組織表面が合成インプラントである段落［０１０５］記載の方法。
【０１０９】
［０１０７］  合成インプラントがドナー角膜、人工血管、心臓弁、人工臓器、結合補綴物、インプラント可能なレンズ核、血管移植片、ステント、およびステント／移植片の組み合わせよりなる群から選択される段落［０１０６］記載の方法。
【０１１０】
［０１０８］  第１の交差結合可能な成分、第２の交差結合可能な成分、およびヒドロゲル形成成分が第１の組織表面において粉末形態において各々適用される段落［０１０２］記載の方法。
【０１１１】
［０１０９］  第１の交差結合可能な成分、第２の交差結合可能な成分、およびヒドロゲル形成成分が第１の組織表面において単一の複合化混合粉末製剤における粉末として各々適用される段落［０１０２］記載の方法。
【０１１２】
［０１１０］  混合粉末製剤がさらにタンパク質または多糖類を含む段落［０１０９］記載の方法。
【０１１３】
［０１１１］  第１の組織表面が硬組織または軟組織の上または中にある段落［０１０２］記載の方法。
【０１１４】
［０１１２］  第１の組織表面が外科的部位を含むか、包囲するか、またはそれに隣接しており、そして方法がさらに外科的部位を閉鎖する工程を含む段落［０１０２］記載の方法。
【０１１５】
［０１１３］  混合粉末製剤がさらにコラーゲンを含む段落［０１０２］記載の方法。
【０１１６】
［０１１４］  混合粉末製剤がさらに生物活性剤を含む段落［０１０２］記載の方法。
【０１１７】
［０１１５］  下記成分：
多数の求核性基を含む第１の交差結合可能な成分であって、粉末形態の第１の交差結合可能な成分；
多数の求電子性基を含む第２の交差結合可能な成分であって、粉末形態の第２の交差結合可能な成分；および、
粉末形態のヒドロゲル形成成分；
を含む混合粉末組成物であって、ここで反応を可能にする条件下において第１および第２の交差結合可能な成分が実質的に即時に交差結合できる上記組成物。
【０１１８】
［０１１６］  第２の交差結合可能な成分に添加された第１の交差結合可能な成分が複合化された交差結合可能な成分の組成物を与え、そして第１の交差結合可能な成分が複合化された交差結合可能な成分の組成物の約０．５〜約２０重量％の範囲の濃度において存在する段落［０１１５］記載の混合粉末組成物。
【０１１９】
［０１１７］  第２の交差結合可能な成分に添加された第１の交差結合可能な成分が複合化された交差結合可能な成分の組成物を与え、そして第２の交差結合可能な成分が複合化された交差結合可能な成分の組成物の約０．５〜約２０重量％の範囲の濃度において存在する段落［０１１５］記載の混合粉末組成物。
【０１２０】
［０１１８］  第１の交差結合可能な成分の第２の交差結合可能な成分に対する重量比が約４５％〜約５５％の範囲にある段落［０１１５］記載の混合粉末組成物。
【０１２１】
［０１１９］  第１の交差結合可能な成分の第２の交差結合可能な成分に対する重量比が約５０％である段落［０１１５］記載の混合粉末組成物。
【０１２２】
［０１２０］  第１およびの第２の交差結合可能な成分とヒドロゲル形成成分との間の重量比が約２８％〜約４２％の範囲内にある段落［０１１５］記載の混合粉末組成物。
【０１２３】
［０１２１］  第１およびの第２の交差結合可能な成分とヒドロゲル形成成分との間の重量比が約２０％〜約３０％の範囲内にある段落［０１１５］記載の混合粉末組成物。
【０１２４】
［０１２２］  第２の交差結合可能な成分に添加された第１の交差結合可能な成分が複合化された交差結合可能な成分の組成物を与え、そして第１の交差結合可能な成分が複合化された交差結合可能な成分の組成物の約０．５〜約２０重量％の範囲の濃度において存在する段落［０１２１］記載の混合粉末組成物。
【０１２５】
［０１２３］  第２の交差結合可能な成分に添加された第１の交差結合可能な成分が複合化された交差結合可能な成分の組成物を与え、そして第２の交差結合可能な成分が複合化された交差結合可能な成分の組成物の約０．５〜約２０重量％の範囲の濃度において存在する段落［０１２１］記載の混合粉末組成物。
【０１２６】
［０１２４］  第１の交差結合可能な成分の第２の交差結合可能な成分に対する重量比が約４５％〜約５５％の範囲にある段落［０１２１］記載の混合粉末組成物。
【０１２７】
［０１２５］  第１の交差結合可能な成分の第２の交差結合可能な成分に対する重量比が約５０％である段落［０１２１］記載の混合粉末組成物。
【０１２８】
［０１２６］  下記要素：
容器；および、
容器内に配置された混合粉末組成物であって、組成物が下記成分：
多数の求核性基を含む第１の交差結合可能な成分であって、粉末形態の第１の交差結合可能な成分；
多数の求電子性基を含む第２の交差結合可能な成分であって、粉末形態の第２の交差結合可能な成分；および、
粉末形態のヒドロゲル形成成分；
を含み、ここで反応を可能にする条件下において第１および第２の交差結合可能な成分が実質的に即時に交差結合できる上記組成物；
を含むキット。
【０１２９】
［０１２７］  容器がシリンジ胴部およびシリンジプランジャー部を含む段落［０１２６］記載のキット。
【０１３０】
［０１２８］  患者の出血標的部位に混合粉末組成物を適用するための書面による説明書をさらに含む段落［０１２６］のキット。
【０１３１】
［０１２９］  混合粉末がさらに活性剤を含む段落［０１２６］のキット。
【０１３２】
［０１３０］  活性剤がトロンビンを含む段落［０１２９］記載のキット。
【０１３３】
［０１３１］  下記要素：
コラーゲンスポンジ；および、
スポンジ表面に固定化された混合粉末組成物であって、混合粉末組成物が下記成分：
多数の求核性基を含む第１の交差結合可能な成分であって、粉末形態の第１の交差結合可能な成分；
多数の求電子性基を含む第２の交差結合可能な成分であって、粉末形態の第２の交差結合可能な成分；および、
粉末形態のヒドロゲル形成成分；
を含み、ここで反応を可能にする条件下において第１および第２の交差結合可能な成分が実質的に即時に交差結合できる上記組成物；
を含むキット。
【０１３４】
［０１３２］  下記成分：
第１の交差結合可能な成分；
反応を可能とする条件下で第１の交差結合可能な成分と交差結合する第２の交差結合可能な成分；および、
ヒドロゲル形成成分；
を含む医薬の生成のための組成物であって、ここで第１および第２の交差結合可能な成分は交差結合して間隙を有する多孔性マトリックスを形成し、そしてここでヒドロゲル形成成分は水和されて間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成することができる上記組成物。
【０１３５】
［０１３３］  第１の交差結合可能な成分が多数の求核性基を含み、そして第２の交差結合可能な成分が多数の求電子性基を含む段落［０１３２］記載の組成物。
【０１３６】
［０１３４］  第１の交差結合可能な成分が求核性基ｍ個を有する多求核性ポリアルキレンオキシドを含み、そして第２の交差結合可能な成分が求電子性基ｎ個を有する多求電子性ポリアルキレンオキシドを含み、ここでｍおよびｎは各々２以上であり、そしてｍ＋ｎは５以上である段落［０１３３］記載の組成物。
【０１３７】
［０１３５］  ｎが２であり、そしてｍが３以上である段落［０１３４］記載の組成物。
【０１３８】
［０１３６］  多求核性ポリアルキレンオキシドが４官能性的に活性化される段落［０１３５］記載の組成物。
【０１３９】
［０１３７］  ｍが２であり、そしてｎが３以上である段落［０１３４］記載の組成物。
【０１４０】
［０１３８］  多求電子性ポリアルキレンオキシドが４官能性的に活性化される段落［０１３７］記載の組成物。
【０１４１】
［０１３９］  多求核性ポリアルキレンオキシドおよび多求電子性ポリアルキレンオキシドが４官能性的に活性化される段落［０１３４］記載の組成物。
【０１４２】
［０１４０］  多求核性ポリアルキレンオキシドがさらに−ＮＨ２、−ＳＨ、−Ｈ、−ＰＨ２、および−ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ２よりなる群から選択される求核性基２つ以上を含む段落［０１３４］記載の組成物。
【０１４３】
［０１４１］  多求核性ポリアルキレンオキシドがさらに第１級アミノ基２つ以上を含む段落［０１３４］記載の組成物。
【０１４４】
［０１４２］  下記成分：
天然のコラーゲン線維を含むコラーゲンスポンジ；および、
スポンジ表面に固定化された混合粉末組成物であって、混合粉末組成物が下記成分：
多数の求核性基を含む第１の交差結合可能な成分であって、粉末形態であり混合粉末の約１０％を含む第１の交差結合可能な成分；
多数の求電子性基を含む第２の交差結合可能な成分であって、粉末形態であり混合粉末の約１０％を含む第２の交差結合可能な成分；および、
粉末形態であり混合粉末の約８０％を含むヒドロゲル形成成分；
を含み、ここで反応を可能にする条件下において第１および第２の交差結合可能な成分は実質的に即時に交差結合することにより間隙を有する多孔性マトリックスを形成することができ、そしてここでヒドロゲル形成成分は水和されて間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成することができる上記組成物；
を含む組成物。
【図面の簡単な説明】
【０１４５】
図面の簡単な説明
【図１】［０１４３］  図１は本発明の一部の実施形態による第１の交差結合可能な成分を示す。
【図２】［０１４４］  図２は本発明の一部の実施形態による第２の交差結合可能な成分を示す。
【図３】［０１４５］  図３は本発明の一部の実施形態による親水性重合体からの交差結合可能なマトリックス組成物の形成を示す。
【図４】［０１４６］  図４は本発明の一部の実施形態による疎水性重合体からの交差結合可能なマトリックス組成物の形成を示す。
【図５】［０１４７］  図５は本発明の一部の実施形態によるヒドロゲル形成成分サブユニットを示す。
【図６】［０１４８］  図６は本発明の一部の実施形態による密閉材組成物中のヒドロゲル形成成分として有用なフラグメント化交差結合重合体ゲルのパーセント膨潤性とパーセント固体の間の相関を示す。
【図７Ａ】［０１４９］  図７Ａ〜Ｅは本発明の実施形態による脾動脈穿刺を治療するための密閉材マトリックス組成物の適用を示す。
【図７Ｂ】［０１４９］  図７Ａ〜Ｅは本発明の実施形態による脾動脈穿刺を治療するための密閉材マトリックス組成物の適用を示す。
【図７Ｃ】［０１４９］  図７Ａ〜Ｅは本発明の実施形態による脾動脈穿刺を治療するための密閉材マトリックス組成物の適用を示す。
【図７Ｄ】［０１４９］  図７Ａ〜Ｅは本発明の実施形態による脾動脈穿刺を治療するための密閉材マトリックス組成物の適用を示す。
【図７Ｅ】［０１４９］  図７Ａ〜Ｅは本発明の実施形態による脾動脈穿刺を治療するための密閉材マトリックス組成物の適用を示す。
【図８Ａ】［０１５０］  図８Ａ〜Ｅは本発明の実施形態による肝切除を治療するための密閉材マトリックス組成物の適用を示す。
【図８Ｂ】［０１５０］  図８Ａ〜Ｅは本発明の実施形態による肝切除を治療するための密閉材マトリックス組成物の適用を示す。
【図８Ｃ】［０１５０］  図８Ａ〜Ｅは本発明の実施形態による肝切除を治療するための密閉材マトリックス組成物の適用を示す。
【図８Ｄ】［０１５０］  図８Ａ〜Ｅは本発明の実施形態による肝切除を治療するための密閉材マトリックス組成物の適用を示す。
【図８Ｅ】［０１５０］  図８Ａ〜Ｅは本発明の実施形態による肝切除を治療するための密閉材マトリックス組成物の適用を示す。
【図９】［０１５１］  図９は本発明の実施形態による密閉材マトリックス組成物のプロセシングおよびパッケージングを示す。
【図１０】［０１５２］  図１０は本発明の実施形態による密閉材マトリックス組成物のプロセシングおよびパッケージングを示す。
【図１１】［０１５３］  図１１は本発明の実施形態によるゲル強度に対するＰＥＧ濃度の作用を示す。
【図１２】［０１５４］  図１２は本発明の実施形態による膨潤比に対するＰＥＧ濃度の作用を示す。
【図１３】［０１５５］  図１３は本発明の実施形態による膨潤比に対するＰＥＧ濃度の作用を示す。
【図１４】［０１５６］  図１４は本発明の実施形態による膨潤比に対するＰＥＧ濃度の作用を示す。
【発明を実施するための形態】
【０１４６】
発明の詳細な説明
［０１５７］  一部の実施形態によれば、本発明は組織の裂溝または欠陥を密閉することによりインビボの関連において止血または他の体液封じ込めを達成するための乾燥した密閉材マトリックス組成物を提供する。本発明の一部の実施形態の組成物は体液の封じ込めを促進するために脊椎動物の組織に適用する場合に適している乾燥組成物中に第１および第２の交差結合可能な成分および少なくとも１つのヒドロゲル形成成分を含む。本発明の組成物中の第１および第２の成分はインビボの条件下で反応することにより交差結合したマトリックスを形成するが、組織裂溝を通過して侵入してくる、並びに生じた物理的密閉材マトリックスバリアを第１および第２の成分が交差結合するに従って強化する生物学的流体をヒドロゲル形成成分が急速に吸収する。本出願において記載する場合、「密閉材マトリックス組成物」とは、インビボの組織部位への適用の前の本発明の組成物を指す場合があり、そして「密閉材マトリックスバリア」とは本発明の組成物が生物学的流体に接触して第１および第２の成分が交差結合し、ヒドロゲルを含有する多孔性の交差結合したマトリックスを形成した後に結果として生じているマトリックスバリアを指す場合がある。密閉材マトリックス組成物は粉末、ケーキ状物、パッド状物等を包含する種々のフォーマットにおいて生成してよい。ケーキ状物の実施形態は凝集塊を形成するように加熱または焼成されている密閉材マトリックス組成物の粉末試料を包含する。パッド状物はコラーゲンスポンジのようなスポンジ状物または他の支持体の上に配置された密閉材マトリックス組成物の粉末試料を包含し、これは次に焼成されてスポンジまたは支持体に融着する固化された粉末を形成する。
【０１４７】
［０１５８］  本発明は非血液生物学的流体（例えばリンパまたは髄液）を封じ込めるために使用してよいが、本発明の一部の実施形態の組成物により形成される密閉材マトリックスはまた、本明細書に記載した主要な用途であることから「止血マトリックス」とも称される。
【０１４８】
［０１５９］  急速な止血および包囲する組織への高度な接着による障壁を与えること以外に、本発明の一部の実施形態の密閉材マトリックスは止血を達成するために使用されている以前より開示されている材料を超えた幾つかの利点を有している。第１に、本発明の一部の実施形態の密閉材マトリックスは組織裂溝が極めて湿潤している場合の条件下において使用してよい（例えば急速に滲出または噴出している動脈血、例えば内臓に至る剥離性または鋭利な外傷）。比較すれば、止血用に現在販売されている多くの組成物は組成物の適切な接着および止血の維持のためには比較的乾燥した部位を要している。例えば一部の場合においては、特定のＰＥＧ混合物を急速出血部位に設置する場合があるが、しかしながらそれらは洗い出されてしまう可能性が高い。同様に、一部の場合においてはゼラチン組成物を急速出血部位において水和させるがそれらはその部位に残存することが困難である可能性が高い。好都合なことに、第１の交差結合可能な成分、第２の交差結合可能な成分、およびヒドロゲル形成成分を包含する調製品は、かなりの出血を伴う場合であっても、反応可能条件においては固定化された状態で残存することにより出血を遮蔽する機械的に安定な血塊様の物質を形成する材料を与えることができることを発見した。第２に本発明の一部の実施形態の密閉材マトリックスは脊椎動物の如何なる内因性の凝固能力にも依存することなく、組織裂溝を物理的に密閉することにより機能する。即ち、密閉材マトリックスは脊椎動物に対し、その血液中で低フィブリノーゲン濃度において、あるいはフィブリノーゲンを含有しない血液代替物と共に、使用することができる。例えば、第１および第２の交差結合可能な成分をヒドロゲル形成成分と組み合わせて出血面に適用する場合、交差結合可能な成分とヒドロゲル形成成分との間の相乗作用的な相互作用が起こる場合がある。一部の実施形態によれば、第１および第２の交差結合可能な成分は、ヒドロゲル形成成分の存在下において、出血標的部位で反応して交差結合することにより、比較的剛性のフレームワークを形成することができる。これに関連して、ヒドロゲル形成成分は比較的剛性のフレームワーク内を充填して物理的な密閉部の形成を媒介することができる。
【０１４９】
［０１６０］  本発明の一部の実施形態によれば、密閉材マトリックス組成物は第１および第２の交差結合可能な成分が交差結合しない条件下（即ち水分、適切なｐＨ、温度等の不在下）において第１の交差結合可能な成分を第２の交差結合可能な成分およびヒドロゲル形成成分と混合しながら生成することができる。生物学的流体との接触時において、または他の反応を可能にする条件において、交差結合可能な第１および第２の成分は交差結合して間隙を有する多孔性のマトリックスを形成し、そしてヒドロゲル形成成分は水和して間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成する。場合により、交差結合可能な成分はまた、ヒドロゲル形成成分および／または包囲する組織と交差結合してもよい。
【０１５０】
１．密閉材マトリックスの交差結合可能な成分
［０１６１］  頻繁には第１の交差結合可能な成分は求核性基２つ以上を含有し、そして第２の交差結合可能な成分は第１の交差結合可能な成分上の求核性基と共有結合できる求電子性基２つ以上を含有する。第１および第２の成分は交差結合して多孔性のマトリックスを形成することができる。例示される第１および第２の成分および多孔性のマトリックスは米国特許５，８７４，５００；６，１６６，１３０；６，３１２，７２５；６，３２８，２２９；および６，４５８，８８９に記載されており；これらの内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０１５１】
［０１６２］  第１および第２の成分は典型的には非免疫原性となるように選択され、従って、治療開始前に「皮膚試験」を必要としない。さらにまた、これらの成分およびヒドロゲル形成成分はマトリックスメタロプロテイナーゼ（例えばコラゲナーゼ）による酵素的分解に抵抗するように選択してよく、これにより現在使用可能なコラーゲン組成物よりもインビボにおいてより長期間の存続が可能となる。あるいは、第１および第２の成分およびヒドロゲル形成成分は
創傷治癒の間に排除または再吸収されるように選択してよく、これによりインビボの密閉材マトリックスの周囲の繊維状組織の形成を回避することができる。
【０１５２】
［０１６３］  １つの実施形態において、第１の成分は、以下に示すような共有結合重合体ネットワークをもたらす多数の求電子性基（「Ｙ」として下記に示す）を含有する第２の成分である合成重合体と反応することができる多数の求核性基（「Ｘ」として下記に示す）を含有する合成重合体であってよい。
重合体−Ｘｍ＋重合体−Ｙｎ→重合体−Ｚ−重合体
（式中、ｍ≧２、ｎ≧２、およびｍ＋ｎ≧５であり；
Ｘ＝−ＮＨ２、−ＳＨ、−ＯＨ、−ＰＨ２、および−ＣＯ−ＮＨ−ＮＨ２等であり、そして同じかまたは異なっていてよく；
Ｙ＝−ＣＯ２Ｎ（ＣＯＣＨ２）２、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＨＯ、−ＣＨＯＣＨ２、−Ｎ＝Ｃ＝Ｏ、ＳＯ２ＣＨ＝ＣＨ２、−Ｎ（ＣＯＣＨ）２および−Ｓ−Ｓ−（Ｃ５Ｈ４Ｎ）等であり、そして同じかまたは異なっていてよく；
Ｚ＝求核性基（Ｘ）および求電子性基（Ｙ）の統合から形成される官能基である）。
【０１５３】
［０１６４］  上記した通り、ＸおよびＹは同じかまたは異なっていてよく、即ち、第１の成分は２つの異なる求核性基を有してよく、および／または、第２の成分は２つの異なる求電子性基を有してよい。例示される第１成分重合体または第２の交差結合可能な成分を図１に示す。例示される第２成分重合体または第２の交差結合可能な成分を図２に示す。
【０１５４】
［０１６５］  第１および第２成分重合体の骨格はアルキレンオキシド、特にエチレンオキシド、プロピレンオキシド、およびこれらの混合物であることができる。２官能性アルキレンオキシドの例は下記：
Ｘ−重合体−Ｘ  Ｙ−重合体−Ｙ
［式中、ＸおよびＹは上記の通り定義され、そして「重合体」という用語は−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−または−（ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２Ｏ）ｎ−または−（ＣＨ２ＣＨ２Ｏ）ｎ−（ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２Ｏ）ｎ−を示す］により表すことができる。
【０１５５】
［０１６６］  官能基ＸまたはＹは連結基（下記において「Ｑ」として示す）により重合体骨格に共通してカップリングされ、その大部分は既知または可能である。本発明の組成物は２つ以上の官能基を有するが、以下に示す例は簡便のため、１つの官能基のみ、および結果として生じる交差結合を示している。種々の官能性付与された重合体を生成する多くの方法が存在し、その一部を以下に記載する。
重合体−Ｑ１−Ｘ＋重合体−Ｑ２−Ｙ→重合体−Ｑ１−Ｚ−Ｑ２−重合体
【０１５６】
【化１】
2009545405.tif 000003
式中、
ｎ＝各々の場合１〜１０；
Ｒ１＝Ｈ、ＣＨ３、Ｃ２Ｈ５、・・・ＣｐＨ２ｐ＋１；
Ｒ２＝ＣＨ２、ＣＯ−ＮＨ−ＣＨ２ＣＨ２である。
Ｑ１とＱ２は同じかまたは異なっていてよい。
【０１５７】
［０１６７］  例えばＱ２が−ＯＣＨ２ＣＨ２であり（この場合はＱ１は非存在）；Ｙ＝−ＣＯ２Ｎ（ＣＯＣＨ２）２であり；そしてＸ＝−ＮＨ２、−ＳＨ、または−ＯＨである場合、結果として生じる反応およびＺ基は以下の通りとなる。
重合体−ＮＨ２＋重合体−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２−Ｎ（ＣＯＣＨ２）２→−ＮＨ−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−重合体（アミド）
重合体−ＳＨ＋重合体−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２−Ｎ（ＣＯＣＨ２）２→−Ｓ−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−重合体（チオエステル）
重合体−ＯＨ＋重合体−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯ２−Ｎ（ＣＯＣＨ２）２→−Ｏ−ＯＣＨ２ＣＨ２ＣＯ−重合体（エステル）
。
【０１５８】
［０１６８］  下記において「Ｄ」として示す別の基は、例えば薬物送達用途における使用を目的として、インビボの交差結合重合体組成物の分解を増大させるために重合体と連結基の間に挿入することができる。
重合体−Ｄ−Ｑ−Ｘ＋重合体−Ｄ−Ｑ−Ｙ→重合体−Ｄ−Ｑ−Ｚ−Ｑ−Ｄ−重合体−
。
【０１５９】
［０１６９］  一部の有用な生体分解性の基「Ｄ」はラクチド、グリコリド、ε−カプロラクトン、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（アミノ酸）、ポリ（無水物）、および種々のジ−またはトリペプチドを包含する。
【０１６０】
Ａ．重合体骨格を有する第１および第２の組成物
［０１７０］  上記した通り、本発明の組成物を生成するためには、第１級アミノ基またはチオール基のよう求核性基２つ以上を含有する第１成分重合体、および、第１成分重合体上の求核性基と共有結合できる求電子性基２つ以上を含有する第２成分重合体を与えることが有用である。第１および第２成分重合体は合成のものであることができる。
【０１６１】
［０１７１］  第１および第２成分重合体に関して使用する場合、「重合体」という用語は特にポリアルキル類；ジ−、トリ−、オリゴ−、およびポリアミノ酸；およびトリ−、オリゴ−、または多糖類を指す。
【０１６２】
［０１７２］  第１および第２成分重合体に関して使用する場合、「合成の重合体」という用語は天然には存在せず、そして化学合成を介して生成される重合体を包含する。即ち天然に存在するタンパク質、例えばコラーゲンおよび天然に存在する多糖類、例えばヒアルロン酸は除外される。合成のコラーゲン、および合成のヒアルロン酸およびその誘導体は包含される。求核性または求電子性の基のいずれかを含有する合成重合体は「多官能性的に活性化された合成重合体」を包含する。「多官能性的に活性化された」（または単純に「活性化された」）という用語は、求核性または求電子性の基２つ以上を有するか、有するように化学修飾されており、それらが相互に反応（即ち求核性基が求電子性基と反応）して共有結合を形成することができるようにされている合成重合体を指すことができる。多官能性的に活性化されている合成重合体の型は２官能性的に活性化されている、４官能性的に活性化されている、および星状分枝鎖型の重合体を包含する。
【０１６３】
［０１７３］  本発明における使用のための多官能性的に活性化されている合成重合体は頻繁には、多数の求核性基を含有する合成重合体（即ち「多求核性重合体」）と３次元の交差結合ネットワークを形成するためには少なくとも２つ、または少なくとも３つの官能基を含有する。換言すれば、それらは典型的には少なくとも２官能性的に活性化、または３官能性的に、または４官能性的に活性化されている。第１の合成重合体が２官能性的に活性化された合成重合体である場合、第２の合成重合体は典型的には、３次元交差結合ネットワークを得るためには３つ以上の官能基を含有する。第１および第２成分重合体の両方が少なくとも３つの官能基を含有してよい。
【０１６４】
Ｂ．第１成分重合体
［０１７４］  多数の求核性基を含有する第１成分重合体はまた一般的に本明細書においては「多求核性重合体」と称する。本発明において使用するためには、多求核性重合体は頻繁には少なくとも２つ、または少なくとも３つの求核性基を含有する。２つのみの求核性基を含有する合成重合体を使用する場合は、３次元交差結合ネットワークを得るためには３つ以上の親電子基を含有する合成重合体が頻繁には使用されることになる。
【０１６５】
［０１７５］  本発明の組成物および方法における使用のための多求核性重合体は第１級アミノ基およびチオール基のような多求核性基を含有するか、含有するように修飾されている合成重合体を包含する。そのような多求核性重合体は（ｉ）第１級アミノ基またはチオール基２つ以上を含有するように合成されている合成ポリペプチド；および（ｉｉ）第１級アミノ基またはチオール基２つ以上を含有するように修飾されているポリエチレングリコールを包含できる。一般的に求電子性基とのチオール基の反応は求電子性基との第１級アミノ基の反応よりも緩徐に進行する傾向がある。
【０１６６】
［０１７６］  多求核性ポリペプチドは第１級アミノ基を含有するアミノ酸（例えばリジン）および／またはチオール基を含有するアミノ酸（例えばシステイン）を取り込むように合成されている合成ポリペプチドであることができる。例えば第１成分重合体はジリジン、トリリジン、クワトラリジン、またはジシステイン、トリシステイン、クワトラシステイン、ペンタシステイン、またはリジンまたはシステイン２つ以上および他のアミノ酸（例えばグリシン、アラニン）、好ましくは非疎水性アミノ酸を含むオリゴペプチドまたはポリペプチドであることができる。ポリ（リジン）、即ちアミノ酸リジンの合成的に生成された重合体（１４５ＭＷ）が頻繁には使用される。ポリ（リジン）は、約８７０〜約５８０，０００の分子量に相当する６〜約４，０００第１級アミノ基のいずれかを有する者として生成されている。種々の分子量のポリ（リジン）がＰｅｎｉｎｓｕｌａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．（Ｂｅｌｍｏｎｔ，Ｃａｌｉｆ．）より販売されている。
【０１６７】
［０１７７］  ポリエチレングリコールは例えばＰｏｌｙ（ｅｔｈｙｌｅｎｅＧｌｙｃｏｌ）Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ：Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，Ｊ．Ｍｉｌｔｏｎ  Ｈａｒｒｉｓ，ｅｄ．，Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎ．Ｙ．（１９９２）の第２２章に記載されている方法に従って多数の第１級アミノまたはチオール基を含有するように化学的に修飾できる。第１級アミノ基２つ以上を含有するように修飾されているポリエチレングリコールは本明細書においては、「多アミノＰＥＧ」と称する。チオール基２つ以上を含有するように修飾されているポリエチレングリコールは本明細書においては、「多チオールＰＥＧ」と称する。本明細書においては、「ポリエチレングリコール」という用語は修飾された、または誘導体化されたポリエチレングリコールを包含する。
【０１６８】
［０１７８］  多アミノＰＥＧの種々の型がＳｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ（Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，Ａｌａ．）より、そしてＴｅｘａｃｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ（Ｈｏｕｓｔｏｎ，Ｔｅｘ．）より、「Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ」の名称で販売されている。本発明において有用な多アミノＰＥＧはＴｅｘａｃｏのＪｅｆｆａｍｉｎｅジアミン（「Ｄ」シリーズ）およびトリアミン（「Ｔ」シリーズ）を包含し、これらは分子当たりそれぞれ２つおよび３つの第１級アミノ基を含有している。
【０１６９】
［０１７９］  ポリアミン類、例えばエチレンジアミン（Ｈ２Ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−ＮＨ２）、テトラメチレンジアミン（Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）４−ＮＨ２）、ペンタメチレンジアミン（カダベリン）（Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）５−ＮＨ２）、ヘキサメチレンジアミン（Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）６−ＮＨ２）、ビス（２−ヒドロキシエチル）アミン（ＨＮ−（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）２）、ビス（２）アミノエチル）アミン（ＨＮ−（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）２）、およびトリス（２−アミノエチル）アミン（Ｎ−（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）３）もまた、多数の求核性基を含有する第１成分合成重合体として使用してよい。
【０１７０】
Ｃ．第２成分重合体
［０１８０］  多数の求電子性基を含有する第２成分重合体はまた本明細書においては、「多求電子性重合体」と称する。本発明において使用するためには、多求電子性重合体は頻繁には、多求核性重合体と３次元交差結合ネットワークを形成するためには少なくとも２つ、または少なくとも３つの求電子性基を含有する。
【０１７１】
［０１８１］  本発明の組成物および方法における使用のための多求電子性重合体は他の分子の上の求核性基と共有結合を形成することができるスクシンイミジル基２つ以上を含有する重合体であることができる。スクシンイミジル基は多アミノＰＥＧ、ポリ（リジン）、またはコラーゲンのような第１級アミノ（−ＮＨ２）基を含有する物質に対して高度に反応性である。スクシンイミジル基はチオール（−ＳＨ）基を含有する物質、例えば多チオールＰＥＧまたは多数のシステイン残基を含有する合成のポリペプチドとは僅かに低反応性である。
【０１７２】
［０１８２］  本明細書においては、「２つ以上のスクシンイミジル基を含有する」という用語は、２つ以上のスクシンイミジル基を含有する市販の重合体、並びに、２つ以上のスクシンイミジル基を含有するように化学的に誘導体化されているものを包含する意味を有する。本明細書においては、「スクシンイミジル基」という用語はスルホスクシンイミジル基および「包括的な」スクシンイミジル基の他のこのような変異例を包含することを意図している。スルホスクシンイミジル基上の亜硫酸ナトリウム部分の存在は重合体の溶解性を上昇させる作用を有する。
【０１７３】
Ｄ．第１および第２成分骨格として使用するための親水性重合体
［０１８３］  親水性重合体、および特に種々のポリエチレングリコールは本発明の一部の実施形態による第１および第２成分重合体の骨格において使用できる。本明細書においては、「ＰＥＧ」という用語は反復構造（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎを有する重合体を包含する。
【０１７４】
［０１８４］  ＰＥＧの４官能性的に活性化された構造は、多アミノＰＥＧに４官能性的に活性化されたＰＥＧを反応させることにより得られる一般化された反応産物の場合と同様、図３に示す。図に示す通り、スクシンイミジル基は−Ｎ（ＣＯＣＨ２）２として示される５員環構造である。図３においては、符号＾＾＾は開放された連結を示す。
【０１７５】
［０１８５］  実施形態は本明細書においてはＳＧ−ＰＥＧと表記する４官能性的に活性化されたＰＥＧスクシンイミジルグルタレートの多アミノＰＥＧとの反応およびそれにより得られる反応生成物を包含する。ＰＥＧの別の活性化された形態はＰＥＧスクシンイミジルプロピオネート（ＳＥ−ＰＥＧ）と称する。実施形態は４官能性的に活性化されたＳＥ−ＰＥＧおよびそれを多アミノＰＥＧと反応させることにより得られる反応生成物を包含する。一部の実施形態においては、ＰＥＧのいずれかの側鎖の上に３つの反復ＣＨ２基が存在する。別の実施形態は加水分解に付されにくい「エーテル」連結部を包含するコンジュゲートを包含する。これはエステル連結部が与えられている図３に示すコンジュゲートとは異なる。エステル連結部は生理学的条件下において加水分解に付される。ポリエチレングリコールの他の官能性的に活性化された形態は、多アミノＰＥＧに４官能性的に活性化されたＰＥＧを反応させることにより形成されるコンジュゲートの場合と同様、本発明の実施形態により意図される。一部の実施形態においては、コンジュゲートはエーテルおよびアミド連結部の両方を包含する。これらの連結部は生理学的条件下において安定である。
【０１７６】
［０１８６］  ＰＥＧの別の官能性的に活性化された形態はＰＥＧスクシンイミジルスクシンアミド（ＳＳＡ−ＰＥＧ）と称される。実施形態はこの化合物の４官能性的に活性化された形態およびこれを多アミノＰＥＧと反応させることにより得られる反応生成物を包含する。これらおよび関連の化合物は本発明の実施形態による組成物中において使用してよい。実施形態はまた、前述のエーテル連結部と同様、加水分解に付されにくく、そのためエステル連結部よりも安定である「アミド」連結部を包含するコンジュゲートも包含する。ＰＥＧのさらに別の活性化された形態は、ＰＥＧスクシンイミジルカーボネート（ＳＣ−ＰＥＧ）と称される化合物実施形態において与えられる。実施形態は４官能性的に活性化されたＳＣ−ＰＥＧおよびそれを多アミノＰＥＧと反応させることにより形成されるコンジュゲートを包含する。
【０１７７】
［０１８７］  上記において考察した通り、本発明の実施形態における使用のための活性化されたポリエチレングリコールは反応基としてスクシンイミジル基を含有できる。しかしながら、異なる活性化基をＰＥＧ分子の長さに沿った部位において結合することができる。例えばＰＥＧは官能性的に活性化されたＰＥＧプロピオンアルデヒド（Ａ−ＰＥＧ）を形成するように誘導体化できる。実施形態は４官能性的に活性化された形態並びにＡ−ＰＥＧの多アミノＰＥＧとの反応により形成されるコンジュゲートを包含する。連結部は−（ＣＨ２）ｍ−ＮＨ−連結部と表記してよく、ここでｍ＝１〜１０である。
【０１７８】
［０１８８］  活性化ポリエチレングリコールのさらに別の形態は官能性的に活性化されたＰＥＧグリシジルエーテル（Ｅ−ＰＥＧ）である。実施形態は４官能性的に活性化された化合物、並びにそれを多アミノＰＥＧと反応させることにより形成されるコンジュゲートを包含する。ポリエチレングリコールの別の活性化誘導体は官能性的に活性化されたＰＥＧ−イソシアネート（Ｉ−ＰＥＧ）である。実施形態はこれを多アミノＰＥＧと反応させることにより形成されるコンジュゲートを包含する。ポリエチレングリコールの別の活性化誘導体は官能性的に活性化されたＰＥＧ−ビニルスルホン（Ｖ−ＰＥＧ）である。実施形態はこれを多アミノＰＥＧと反応させることにより形成されるコンジュゲートを包含する。
【０１７９】
［０１８９］  本発明の組成物および他の実施形態における使用のための多官能性的に活性化されたポリエチレングリコールは３官能性的に、または４官能性的に活性化された形態であることができるＳＧ−ＰＥＧおよびＳＥ−ＰＥＧのようなスクシンイミジル基を含有するポリエチレングリコールを包含することができる。上記したポリエチレングリコールの活性化型の多くは現在Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，Ａｌａ．およびＵｎｉｏｎ  Ｃａｒｂｏｄｅ，Ｓｏｕｔｈ  Ｃｈａｒｌｅｓｔｏｎ，Ｗ．Ｖａから販売されている。
【０１８０】
Ｅ．官能基を含有するように第１および第２の成分重合体を誘導体化すること
［０１９０］  特定の重合体、例えばポリ酸はスクシンイミジル基のような官能基２つ以上を含有するように誘導体化することができる。本発明における使用のためのポリ酸は限定しないがトリメチロールプロパン系のトリカルボン酸、ジ（トリメチロールプロパン）系のテトラカルボン酸、ヘプタンジ酸、オクタンジ酸（ズベリン酸）、およびヘキサデカンジ酸（タプシン酸）を包含する。これらのポリ酸の多くがＤｕＰｏｎｔ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙより販売されている。
【０１８１】
［０１９１］  一般的な方法によれば、ポリ酸はＮ，Ｎ’−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）の存在下のＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）の適切なモル量との反応によりスクシンイミジル基２つ以上を含有するように化学的に誘導体化することができる。
【０１８２】
［０１９２］  ポリアルコール、例えばトリメチロールプロパンおよびジ（トリメチロールプロパン）は種々の方法を用いながらカルボン酸形態に変換することができ、そして次に、米国特許出願０８／４０３，３５８に記載されている通り、ＤＣＣ存在下のＮＨＳとの反応によりさらに誘導体化することにより、それぞれ３官能性的に、または４官能性的に活性化された重合体を生成することができる。ヘプタンジ酸（ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）２−ＣＯＯＨ）、オクタンジ酸（ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）２−ＣＯＯＨ）、およびヘキサデカンジ酸（ＨＯＯＣ−（ＣＨ２）１４−ＣＯＯＨ）のようなポリ酸はスクシンイミジル基の付加により誘導体化することにより２官能性的に活性化された重合体を生成する。
【０１８３】
［０１９３］  ポリアミン類、例えばエチレンジアミン（Ｈ２Ｎ−ＣＨ２ＣＨ２−ＮＨ２）、テトラメチレンジアミン（Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）４−ＮＨ２）、ペンタメチレンジアミン（カダベリン）（Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）５−ＮＨ２）、ヘキサメチレンジアミン（Ｈ２Ｎ−（ＣＨ２）６−ＮＨ２）、ビス（２−ヒドロキシエチル）アミン（ＨＮ−（ＣＨ２ＣＨ２ＯＨ）２）、ビス（２）アミノエチル）アミン（ＨＮ−（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）２）、およびトリス（２−アミノエチル）アミン（Ｎ−（ＣＨ２ＣＨ２ＮＨ２）３）を化学的に誘導体化することによりポリ酸とすることができ、次にこれを、米国特許出願０８／４０３，３５８に記載されている通り、ＤＣＣ存在下のＮ−ヒドロキシスクシンイミドの適切なモル量との反応によりスクシンイミジル基２つ以上を含有するように誘導体化することができる。これらのポリアミンの多くはＤｕＰｏｎｔ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙから販売されている。
【０１８４】
［０１９４］  一部の実施形態においては、第１の交差結合可能な成分（例えば多アミノＰＥＧ）は交差結合可能な成分の組成物全体の約０．５〜約２０重量％の範囲の濃度において存在し、そして第２の交差結合可能な成分は交差結合可能な成分の組成物全体の約０．５〜約２０重量％の範囲の濃度において存在する。例えば、総重量１グラム（１０００ミリグラム）を有する最終的な交差結合可能な成分の組成物は、第１の交差結合可能な成分（例えば多アミノＰＥＧ）約５〜約２００ミリグラム、および第２の交差結合可能な成分約５〜約２００ミリグラムを含有することができる。
【０１８５】
［０１９５］  一部の実施形態においては、第１の交差結合可能な成分の第２の交差結合可能な成分に対する重量比は約２０％〜約８０％の範囲にある。関連する実施形態において、この比は約４５％〜約５５％の範囲にある。一部の場合においては、比は約５０％である。重量比はゲル強度試験に基づいて測定する。第１の交差結合可能な成分および第２の交差結合可能な成分は同じ分子量を有してよい。
【０１８６】
ＩＩ．密閉材マトリックス組成物における使用のためのヒドロゲル形成成分
［０１９６］  本発明による使用のためのヒドロゲル形成成分は参照により本明細書に組み込まれる米国特許４，６４０，８３４；５，２０９，７７６；５，２９２，３６２；５，７１４，３７０；６，０６３，０６１；および６，０６６，３２５において考察されている通り、再吸収可能な生体適合性の分子状の交差結合ゲルおよびヒドロゲルを包含できる。これらの特許に記載されている手法により生成される材料は、止血剤としての使用のためのトロンビン溶液との混合物に関わるキットとしてＢａｘｔｅｒ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ  ＣｏｒｐｏｒａｔｉｏｎよりＦＬＯＳＥＡＬ商標の下に販売されている。あるいは、いずれかの水和可能な交差結合重合体を本発明におけるヒドロゲル形成成分として使用してよい。例えばアルギネート、アガロース、ゼラチン（例えばＳＵＲＧＩＦＯＡＭＴＭ粉末）または他の合成の炭水化物またはタンパク質系の水和可能な交差結合重合体を使用してよい。有用なヒドロゲル形成成分の主要な特性は生体適合性、迅速な吸収、および流体貯留である。即ち、ポリアクリルアミドを本発明のヒドロゲル形成成分として使用してよいが、多くの体内適用におけるその不良な生体適合性に起因して好適度は低い。頻繁には、ヒドロゲル形成成分としての使用のための水和可能な交差結合重合体は約７０〜約３００ミクロンの粒径、および、約６．８〜約９．５のｐＨを有する。ヒドロゲル形成成分は、特に密閉材マトリックスが力、圧力、または希釈に付された場合に、第１および第２の交差結合可能な成分に機械的安定性を付与することができる。
【０１８７】
［０１９７］  一部の実施形態においては、第１および第２の交差結合可能な成分とヒドロゲル形成成分との間の重量比は約２８％ｗ／ｗ〜約４２％ｗ／ｗの範囲にある。一部の場合においては、組成物は、組成物の総質量の約５％〜約７５％である組み合わせとしての第１および第２の交差結合可能な成分の濃度、および、組成物の総質量の約９５％〜約２５％であるヒドロゲル形成成分の濃度を有してよい。関連して、組成物は、組成物の総質量の約５％〜約４０％である組み合わせとしての第１および第２の交差結合可能な成分の濃度、および、組成物の総質量の約９５％〜約６０％であるヒドロゲル形成成分の濃度を有してよい。同様に、組成物は、組成物の総質量の約１０％〜約３０％である組み合わせとしての第１および第２の交差結合可能な成分の濃度、および、組成物の総質量の約９０％〜約７０％であるヒドロゲル形成成分の濃度を有してよい。例えば、組成物は約２０％の組み合わせとしての第１および第２の交差結合可能な成分、および、約８０％のヒドロゲル形成成分を含有してよい。一部の実施形態においては、組み合わせとしての第１および第２の交差結合可能な成分の組成物は５０：５０％の固定された重量比を有することができ、そして組み合わせとしての第１および第２の交差結合可能な成分の組成物のヒドロゲル形成成分に対するｗ／ｗ比は約２０％〜約３０％の範囲であることができる。組み合わせとしての第１および第２の交差結合可能な成分の組成物のヒドロゲル形成成分に対するｗ／ｗ比はゲル強度／接着試験に基づいて選択できる。ヒドロゲル形成成分は吸収材として作用することにより第１および第２の交差結合可能な成分が重合するための半乾燥状態の表面を与えることができる。本発明の実施形態はこのような比に従った量において交差結合可能な成分およびヒドロゲル形成成分を包含する乾燥密閉材マトリックス組成物キットを包含する。
【０１８８】
［０１９８］  一部の実施形態によれば、「生体適合性の」という用語は国際標準化機構（ＮＡＭＳＡ、Ｎｏｒｔｈｗｏｏｄ，Ｏｈｉｏ）により発布されている標準＃ＩＳＯ１０９９３−１における基準を満足する材料を指す。一部の実施形態によれば、「再吸収可能な」という用語は１年未満の期間、通常は１〜１２０日間に渡って、患者身体の標的部位ないに直接置かれた場合（そして乳房インプラントのようなインプラント装置内で保護されない場合）に分解または可溶化する組成物を指す。再吸収および分解を計測するためのプロトコルは知られている。一部の実施形態によれば、「分子状交差結合」という用語は、元素、基または化合物のいずれかよりなる架橋部位により結合した重合体分子（即ち個々の鎖）を含む材料を指し、その場合、重合体分子の骨格原子は第１化学結合により連結される。交差結合は後に詳述する通り種々の状態において行ってよい。
【０１８９】
［０１９９］  一部の実施形態によれば、「ヒドロゲル」という用語は後に詳述する通り生物学的、または非生物学的な重合体が水または水性緩衝液を吸収する単相の水性コロイドを包含する組成物を包含する。ヒドロゲルは多数のサブネットワークを含むことができ、その場合、各サブネットワークは、水和の程度に応じて決まり、そして上記した範囲内にある寸法を有する分子状交差結合ヒドロゲルである。頻繁にはヒドロゲルは水を殆どまたは全く有さないものとなり、即ち、単純な濾過によりヒドロゲルから水を除去することはできない。
【０１９０】
［０２００］  「パーセント膨潤」とは乾燥重量を湿潤重量から差し引き、乾燥重量で割り、そして１００を掛けたものとして定義することができ、ここで湿潤重量は例えば濾過により材料の外部から可能な限り完全に湿潤剤を除去し終えた後に計測されるものであり、そして、乾燥重量は湿潤剤を蒸発させるために十分な時間上昇温度、例えば２時間１２０℃に曝露した後に計測される。
【０１９１】
［０２０１］  「平衡膨潤性」とは水和可能な交差結合重合体材料を含水量が一定になるために十分な時間、典型的には１８〜２４時間、湿潤剤中に浸積させておいた後の平衡時におけるパーセント膨潤として定義できる。
【０１９２】
［０２０２］  「標的部位」とは、典型的には、密閉材マトリックス組成物を送達すべき位置、通常は組織裂溝または欠陥部である。頻繁には、標的部位は目的の組織位置となるが、一部の場合においては、例えば材料をインサイチュで膨潤させることにより目的位置を被覆する場合には、密閉材マトリックスを目的の位置の近傍の位置に投与または施工してよい。
【０１９３】
［０２０３］  本発明の少なくとも一部の実施形態におけるヒドロゲル形成成分としての使用のための水和可能な交差結合重合体は生物学的および非生物学的な重合体から形成してよい。適当な生物学的重合体は、タンパク質、例えばゼラチン、可溶性コラーゲン、アルブミン、ヘモグロビン、カゼイン、フィブリノーゲン、フィブリン、フィブロネクチン、エラスチン、ケラチン、ラミニン、およびこれらの誘導体および組み合わせを包含する。可溶性の非微小繊維状コラーゲンも同様に適している。例示されるゼラチン製剤は後に記載する通りである。他の適当な生物学的重合体は多糖類、例えばグリコサミノグリカン（例えばヒアルロン酸および硫酸コンドロイチン）、澱粉誘導体、キシラン、セルロース誘導体、ヘミセルロース誘導体、アガロース、アルギネート、キトサン、およびこれらの誘導体および組み合わせを包含する。適当な非生物学的重合体は２つの機序、即ち（１）重合体骨格の分解、または（２）水溶性をもたらす側鎖の分解のいずれかにより分解可能となるように選択できる。例示される非生物学的重合体は合成物質、例えばポリアクリレート、ポリメタクリレート、ポリアクリルアミド、ポリビニル樹脂、ポリアクチド−グリコリド、ポリカプロラクトン、ポリオキシエチレン、およびこれらの誘導体および組み合わせを包含する。
【０１９４】
［０２０４］  ヒドロゲル形成成分としての使用のための水和可能な交差結合重合体分子は水性のヒドロゲルを形成するために適するいずれかの態様において交差結合してよい。例えばこれらの重合体分子は重合体分子鎖２つ以上に共有結合する２官能性または多官能性の交差結合剤を用いて交差結合してよい。例示される２官能性の交差結合剤はアルデヒド、エポキシド、スクシンイミド、カルボジイミド、マレイミド、アジド、カーボネート、イソシアネート、ジビニルスルホン、アルコール、アミン、イミデート、無水物、ハライド、シラン、ジアゾアセテート、アジリジン等を包含する。あるいは、交差結合は、重合体上の側鎖または部分を活性化する酸化剤および過ヨウ素酸塩のような別の試薬を用いながら他の側鎖または部分にそれらを反応させて交差結合部を形成させることにより、達成してよい。交差結合の別の方法は重合体を放射線照射、例えばガンマ線照射に曝露することにより側鎖重合体を活性化して交差結合反応を起こさせることを含む。ジヒドロサーマル交差結合法もまた適している。ゼラチンのジヒドロサーマル交差結合はそれを上昇した温度、典型的には１２０℃に少なくとも８時間の期間保持することにより達成できる。平衡時のパーセント膨潤の低下として顕在化する交差結合の範囲の増大は、保持温度を上昇させること、保持時間の持続を延長すること、または両方の組み合わせにより達成できる。減圧下の作業は交差結合反応を加速することができる。ゼラチン分子を交差結合させるための好ましい方法は後述する通りである。
【０１９５】
［０２０５］  ヒドロゲルはヒドロゲルの展性、可撓性および分解速度を増大させるために可塑剤を包含してよい。可塑剤はアルコール、例えばポリエチレングリコール、ソルビトール、またはグリセロールであってよい。頻繁には可塑剤は約２００〜１０００Ｄの範囲の分子量を有するか、または約４００Ｄの分子量を有するポリエチレングリコールとなる。可塑剤は重合体組成物の約０．１重量％〜約３０重量％、好ましくは１重量％〜５重量％においてヒドロゲル中に存在できる。可塑剤は高い固形物含有量、典型的には組成物（可塑剤を除く）の１０重量％超を有するヒドロゲルとともに使用する場合に特に有利となる。
【０１９６】
［０２０６］  分子状交差結合ゼラチンを生成するための例示される方法は以下の通りである。ゼラチンを入手し、水性緩衝液中に入れ、典型的には約１〜約７０重量％、または約３〜約１０重量％の固形物含有量を有する非交差結合ゲルを形成させる。ゼラチンは典型的にはグルタルアルデヒド（例えば０．０１〜０．０５％ｗ／ｗ、一夜０〜１５℃、水性緩衝液中）、過ヨウ素酸ナトリウム（例えば０．０５Ｍ、０℃〜８℃に４８時間保持）、または１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）（例えば０．５〜１．５％ｗ／ｗ、一夜室温）のいずれかに曝露することにより、あるいは、約０．３〜３メガラッドのガンマ線または電子線の照射に曝露することにより、交差結合させる。あるいは、ゼラチン粒子を約１〜約７０重量％、または約３〜約１０重量％の固形物含有量でメチルアルコールまたはエチルアルコールのようなアルコール中に懸濁し、そして交差結合剤、典型的にはグルタルアルデヒドに曝露（例えば０．０１〜０．１％ｗ／ｗ、一夜室温）することにより交差結合させることができる。アルデヒドの場合はｐＨは典型的には約６〜約１１、または約７〜約１０に保持する。グルタルアルデヒドと交差結合する場合は、交差結合はシッフ塩基を介して形成され、これは後の還元により、例えばナトリウムボロハイドライドで処理することにより、安定化させてよい。交差結合の後、生じた顆粒を水中で洗浄し、場合によりアルコールですすぎ、乾燥し、そして所望の緩衝性およびｐＨを有する水性媒質中に所望の水和度となるように再懸濁してよい。生じたヒドロゲルは次に、後に詳述する本発明のアプリケーターにロードしてよい。あるいは、やはり後に詳述する通り交差結合の前、または後にヒドロゲルを機械的に崩壊させてよい。
【０１９７】
［０２０７］  約４００％〜約１３００％、または約６００％〜約９５０％の範囲の平衡時パーセント膨潤性を有する分子状交差結合ゼラチン組成物を生成するための例示される方法は以下の通りである。ゼラチンを入手し、溶液中に交差結合剤（頻繁にはグルタルアルデヒド、典型的には０．０１〜０．１％ｗ／ｗの濃度）を含有する水性緩衝液（典型的には約６〜約１７のｐＨ、または約７〜約１０のｐＨ）中に入れることにより、典型的には１〜７０重量％、通常は３〜１０重量％の固形分含有量を有するゲルを形成する。ゲルを十分混合し、交差結合を進行させながら０℃〜１５℃において一夜保持する。次にこれを脱イオン水で３回、アルコール（好ましくはメチルアルコール、エチルアルコールまたはイソプロピルアルコール）で２回洗浄し、そして室温で乾燥させる。場合によりゲルをナトリウムボロハイドライドで処理することにより交差結合をさらに安定化させてよい。一部の場合においては、ヒドロゲル形成成分は例えば多数のグリシン残基（例えば整列した３残基毎に１つ）、プロリン残基、および４−ヒドロキシプロリン残基を有するゼラチンを包含できる。例示されるゼラチンサブユニットを図５に示す。ゼラチン実施形態はアミノ酸組成：グリシン２１％、プロチン１２％、ヒドロキシプロリン１２％、グルタミン酸１０％、アラニン９％、アルギニン８％、アスパラギン酸６％、リジン４％、セリン４％、ロイシン３％、バリン２％、フェニルアラニン２％、スレオニン２％、イソロイシン１％、ヒドロキシリジン１％、メチオニンおよびヒスチジン＜１％、およびチロシン＜０．５％を有する分子を包含する。図６は密閉材組成物中のヒドロゲル形成成分として有用であるフラグメント化交差結合重合体ゲル実施形態のパーセント膨潤とパーセント固体の間の相関を示す。
【０１９８】
［０２０８］  分子状交差結合ヒドロゲルは好ましくはヒドロゲル形成成分として使用する前にバッチプロセスにおいて機械的に崩壊させる。この機械的な崩壊の工程の主要な目的は自身が送達される空間を充填充満させる能力を増強する大きさを有するヒドロゲルの多数のサブユニットを生じさせることである。機械的崩壊を行わない場合、分子状交差結合ヒドロゲルは治療すべき不規則な形状の標的空間に合致して充填する際に困難を伴うことになる。ヒドロゲルをより小型のサブユニットにまで分解することにより、交差結合したヒドロゲルの機械的一体性および存続性を保持しつつそのような空間を遙かに効率的に充填できるようになるのである。
【０１９９】
［０２０９］  ヒドロゲルの重合体鎖の分子状交差結合はその機械的崩壊の前または後に実施できる。ヒドロゲルは、ヒドロゲル組成物が上記した０．０１ｍｍ〜５．０ｍｍの範囲の大きさを有するサブユニットにまで分解される限り、バッチ作業中、例えば混合中に機械的に崩壊してよい。他のバッチ式の機械的崩壊のプロセスはホモゲナイザーまたはミキサーを通して、またはヒドロゲルの破壊降伏応力を超過するレベルにまでヒドロゲルを圧縮、伸展または剪断するポンプを通して送液することを包含する。一部の場合においては、重合体組成物の押し出しにより、ヒドロゲルは実質的に連続したネットワーク、即ち元のヒドロゲル塊の寸法に渡るネットワークから、サブネットワークまたは上記した範囲の寸法を有するサブユニットの集合物に変換される。
【０２００】
［０２１０］  現時点で好ましい実施形態においては、水和可能な交差結合重合体をまず生成（例えば噴霧乾燥による）および／または機械的に崩壊し、その後交差結合、通常頻繁にはその後水和させることによりヒドロゲルを形成する。水和可能な交差結合重合体は微細分割または粉末化された乾燥固体として提供してよく、これはさらに細分化することにより崩壊してよく、これにより、通常は狭い範囲内に制約された所望の大きさを有する粒子を得る。その他の大きさの選択および修飾の工程、例えば分篩、サイクロン分類等もまた実施してよい。後に記載する例示されるゼラチン材料に関しては、乾燥粒径は好ましくは、約０．０１ｍｍ〜約１．５ｍｍ、より好ましくは約０．０５ｍｍ〜約１．０ｍｍの範囲にある。例示される粒径分布は粒子の約９５重量％超が約０．０５ｍｍ〜約０．７ｍｍの範囲内となるようなものとなる。重合体出発物質を細分化するための方法はホモゲナイズ、粉砕、コアセルベーション、ミリング、ジェットミリング等を包含する。粉末化された重合体出発物質はまた噴霧乾燥により形成してもよい。粒径分布は従来の手法、例えば分篩、凝集、別の粉砕等によりさらに制御および上質化してよい。
【０２０１】
［０２１１］  次に乾燥粉末化固体を本明細書に別途記載する通り水性緩衝液中に懸濁し、そして交差結合する。他の場合においては水和可能な交差結合重合体を水性緩衝液に懸濁し、交差結合し、次に乾燥してよい。交差結合した乾燥重合体を次に崩壊させ、そして崩壊した材料をその後水性緩衝液に再懸濁してよい。全ての場合において、得られた材料は上記した寸法を有する個別のサブネットワークを有する交差結合したヒドロゲルを含む。
【０２０２】
［０２１２］  機械的崩壊ののちのヒドロゲル形成成分として有用な水和可能な交差結合した重合体は典型的には再吸収可能であり、即ち、それらはそれらの初回適用ののち１年未満の期間内、通常は１〜１２０日、好ましくは１〜９０日、より好ましくは２〜３０日間内に、患者身体内で生体分解されることになる。再吸収のために必要な時間の長さを計測するための手法は知られている。
【０２０３】
ＩＩＩ．密閉材マトリックス組成物の実施形態の１つのグループの生成および使用：多孔性マトリックスと水和可能な交差結合した重合体の組み合わせ
［０２１３］  本発明による組成物は、水和することにより間隙の少なくとも一部を充填するヒドロゲルを形成できる水和可能な交差結合した重合体と組み合わせられた、交差結合して間隙を有する多孔性のマトリックスを形成できる第２の交差結合可能な成分と組み合わせて、第１の交差結合可能な成分を含む。当然ながら、本発明の組成物は（１）第１および第２の成分（即ち多孔性マトリックス）；および（２）水和可能な交差結合した重合体を改変することを検討しながら、上記考察した用途の各々を含む種々の生物医薬用途のために使用することができる。例えばそのような組成物は血液に対する急速な物理的バリアを形成することにより出血を停止または抑制するための機械的密閉材として機能できる。従って、本発明の一部の実施形態は直接の「止血」作用（例えば凝固カスケードに対する生化学的作用；例えば凝固開始剤）を伴うことなく結果をもたらすことができる。
【０２０４】
［０２１４］  ヒドロゲル形成成分は吸収材として作用できる（例えば血液および他の体液および組織に対して）。血液を吸収することにより、ヒドロゲル形成成分は、第１および第２の交差結合可能な成分のより高濃度を治療部位において維持することを確保することができ、そして、半乾燥状態の表面を第１および第２の交差結合可能な成分に対して与えることにより相互および包囲組織に対する交差結合が行われることを確保することができる。一部の実施形態においては、第１および第１の成分はヒドロゲル形成成分が血液を吸収している時と同時に交差結合できる。この吸収および交差結合は数秒間以内に起こることができ、そして結果として生じる密閉材マトリックスバリアは３０分〜１時間で最高強度に達することができる。
【０２０５】
［０２１５］  一般的に、密閉材マトリックス組成物は「乾燥」しているが、一部最小限の水分含有量は例えばヒドロゲル形成成分中に存在してもよい。一部の場合においては、適用前に水和可能な交差結合重合体を部分的に予備水和することは、生理学的ｐＨより高値のｐＨにおいて、あるいは標的部位における適用の前に第１および第２の成分が交差結合することを防止する条件下においてはそれを行うことが必要となる場合があるが、可能なことである。頻繁には密閉材マトリックス組成物は粉末化された、または溶融ケーキ状の形態となる。
【０２０６】
［０２１６］  密閉材マトリックス組成物を生成するために使用される第１の成分および第２の成分の濃度は多くの要因、例えば使用する特定の交差結合可能な成分の型および分子量および所望の最終用途に応じて変動してよい。一部の実施形態においては、第１および第２の成分のヒドロゲル形成成分に対する重量比は１０〜５０％ｗ／ｗ、１５〜４５％ｗ／ｗ、２０〜４２％ｗ／ｗ、３０〜４０％ｗ／ｗ、および２８〜約４２％ｗ／ｗの範囲となる。一部の実施形態においては、第１および第２の歩の粒径は約５０〜約９０ミクロンの範囲となることができる。一部の実施形態においては、水和可能な交差結合重合体の粒径は約２５０〜約４００ミクロンの範囲となることができる。
【０２０７】
［０２１７］  一部の実施形態においては、第１および第２の成分は乾燥粒子または粉末の形態として提供してよい。この形態においては、第１および第２の成分を共に混合し、そしてやはり乾燥粒子または粉末の形態のヒドロゲル形成成分と混合してよい。成分の混合はミリングブレード混合のようないずれかの機械的天下混合手段により達成してよい。得られた乾燥粉末密閉材マトリックス組成物を次に種々の容器、例えばカートン、エンベロープ、ジャー等に封入しておい。添加混合および充填は無菌条件下に行ってよく、あるいは、密閉材マトリックス組成物は例えばガンマ線照射により封入後に滅菌してよい。この時点で本発明の乾燥粉末の実施形態は使用可能状態となる。第１および第２の交差結合可能な重合体は生理学的条件下（例えば血液ｐＨ）でリアすることにより交差結合し、そしてこれにより本発明の３成分密閉材マトリックス組成物は、十分な水和用の体液が存在すれば、乾燥形態で所望の部位に直接適用して組織欠陥を密閉してよい。即ち、粉末密閉材マトリックス組成物を組織欠陥標的部位の上部および内部に向けて単に注ぎ込み、そして密閉材マトリックスバリアが形成するまでその位置に保持すればよい（例えばガーゼパッドまたは外科処置用手袋を使用する）。これは、種々の組織欠陥の大きさに対して使用することができる即時使用可の製品が望まれる外傷の状況において（例えば救命救急室または戦地において）特に有用かつ好都合なものとなる。
【０２０８】
［０２１８］  他の実施形態においては、第１および第２の成分およびヒドロゲル形成成分を支持体、または裏装上に固定化し、「密閉材マトリックスパッド」を形成してよい。これらの実施形態においては、支持体、例えばコラーゲンスポンジを提供し、そして次に密閉材マトリックス組成物を支持体上に固定化して使用に付す。密閉材マトリックス組成物は組織、有機材料、および合成材料に容易に結着するため、これらの実施形態は、より容易に取り扱いできる支持体を密閉材マトリックス組成物の適用のために使用してよいという点において、好都合である。効果的な密閉材マトリックスバリアを生じさせるために比較的少量の密閉材マトリックス組成物を必要とするという事実のために、比較的薄い層の密閉材マトリックス組成物を支持体に固定化すればよい。例えば、後述する実施例においては、表面上に固定化された密閉材マトリックス組成物僅か約０．５〜１．０ｇで極めて良好な止血特性を有する３ｃｍｘ３ｃｍのパッドが形成された。外科分野の当業者の知る通り、これらの実施形態は、組織血管の大きさが予測される状況において、そして粉末と比較して向上した取り扱い特性が望まれる場合に、望ましいものとなる。乾燥粉末の実施形態と同様、密閉材マトリックス組成物の密閉材マトリックスパッドの実施形態は、さらに提供を施すことなく、交差結合可能な組成物が交差結合してしまうまで組織欠陥に対してパッドの密閉材マトリックス組成物の側を押し付けることにより組織欠陥に直接適用してよい。
【０２０９】
［０２１９］  本発明の密閉材マトリックスパッドの実施形態のための支持体はいずれかの生体適合性の材料であってよい。コラーゲン支持体を本明細書においては詳述するが、他の支持体材料も使用してよい。例えば、生体適合性である他のタンパク質または多糖類の支持体材料も使用してよい。これらの支持体材料は密閉材マトリックスバリアとほぼ同じ速度でインビボで分解してよく、あるいは、密閉材マトリックスバリアとは異なる速度で分解してもよい。コラーゲンスポンジおよびその生成は外科の当該分野で良く知られており、そしてコラーゲンの生成および取り扱いは後に詳述する通りである。同様に、フィブリンから生成したスポンジも使用してよい。外科分野の当業者の知る通りスポンジ以外の形態も本発明の密閉材マトリックスパッド実施形態における支持体のために使用してよい。例えば、コラーゲンまたは他の材料のシートまたはフィルムを使用してよい。さらにまた、支持体は組織欠陥の形状により緊密に近似するパッドとするために、いずれかの有用な形状、例えば円錐、半球、棒状、楔形等を取ってよい。例えば支持体としての円錐の形状を有するコラーゲンスポンジを利用した密閉材マトリックスパッドは銃創を治療する場合に有用である場合がある。
【０２１０】
［０２２０］  典型的には、そのような支持体は構造的または機械的な成分として機能することになる。支持体は血液または他の液体が支持体内に浸透し、そして組成物との高度な接触が得られるようにある程度の多孔性を有してよい。そのような構造は約１．３Ｘ〜約１．５Ｘの膨潤ファクターを有する場合があり、従って外科用途に理想的である。例えば、スポンジ支持の組成物は、過剰な膨潤が脳に対して望ましくない圧力を与える可能性がある場合に、硬膜を密閉するために神経外科的処置において使用できる。一般的に市自体は典型的な組織欠陥に合致するために十分可撓性でなければならず、そして外科的な状況において良好な取り扱い特性を有さなければならない。
【０２１１】
［０２２１］  密閉材マトリックス組成物は種々の手段により支持体上に固定化してよい。後述する一部の実施形態においては、４アームのＰＥＧである第１および第２の成分、および交差結合したゼラチンのヒドロゲル形成成分を含有する粉末化された密閉材マトリックス組成物を固定化するためには穏やかな加熱で十分である。これらの実施形態においては、粉末化された密閉材マトリックス組成物をコラーゲンスポンジ上に添加し、そして約１〜２分間６０〜７０℃に加熱した。この熱において乾燥粉末マトリックスは僅かに溶融し、コラーゲンスポンジの表面に融着した。あるいは、密閉材マトリックス組成物は医薬品分野で知られている結合剤または他の賦形剤を用いて支持体に固定してよい。一般的に支持体に密閉材マトリックス組成物を固定するために使用される手法は密閉材マトリックスの第１および第２の成分およびヒドロゲル形成成分に応じたものとなる。支持体に密閉材マトリックスを固定化するために使用される方法は生理学的状態に曝露された場合に交差結合する第１および第２の成分の能力、または、生物学的流体を吸収するヒドロゲル形成成分の能力を無視できない程度に低下させてはならない。
【０２１２】
［０２２２］  他の実施形態において、密閉材マトリックス組成物は支持体を伴っていないシートまたはフィルムに形成してもよい。密閉材マトリックス組成物のそのような形成は密閉材マトリックスパッドの実施形態のための支持体に密閉材マトリックス組成物を固定化するための上記方法を用いて達成してよい。
【０２１３】
ＩＶ．密閉材マトリックス組成物中の追加的成分の付加
［０２２３］  本発明の追加的実施形態において、第１および第２の交差結合可能な成分およびヒドロゲル形成成分以外の成分を本発明の密閉材マトリックス組成物に添加してよい。一般的にこれらの追加的成分は第２および第２およびヒドロゲル形成成分と乾燥形態において添加混合してよい。追加的成分は追加的な機械的強度を付与するか、あるいは、特定の用途のための本発明の密閉材マトリックス組成物の性能を別様に向上させてよい。例えば、不透明であり、そして非微小繊維コラーゲンよりも粘着性が低いため、微小繊維コラーゲンは場合により生物接着剤尿組成物における使用のためには好適度が低い場合がある。しかしながら米国特許５，６１４，５８７に開示されている通り、微小繊維コラーゲンまたは非微小繊維および微小繊維コラーゲンの混合物は、インビボの長期の持続性を意図した接着剤組成物における使用のためには好適である場合がある。種々の脱アセチル化および／または脱スルフェート化されたグリコサミノグリカン誘導体をコラーゲンに関して上記下物と同様の態様において組成物に配合することができる。
【０２１４】
［０２２４］  コラーゲンのような天然に存在するタンパク質、およびグリコサミノグリカンのような種々の天然に存在する多糖類の誘導体を、本発明の第１および第２の成分が生理学的条件下で反応して交差結合する場合に、密閉材マトリックスバリア内に配合できる。これらの他の成分もまた合成重合体上の官能基と反応することになる官能基を含有している場合には、標的部位における第１および第２の成分の交差結合の間のその存在は交差結合した合成重合体−天然に存在する重合体のマトリックスの形成をもたらすことになる、特に天然に存在する重合体（タンパク質または多糖類）が第１級アミノ基のような求核性基を同様に含有する場合、第２の交差結合可能な成分上の求電子性基はこれらの成分上の第１級アミノ基、並びに、第１の交差結合可能な成分上の求核性基と反応することになり、これにより、これらの他の成分が密閉材マトリックスバリアの部分となる。
【０２１５】
［０２２５］  一般的に、グリコサミノグリカンは典型的には、第２の交差結合可能な成分上の求電子性基との反応のために使用できる第１級アミノ基を含有するために、脱アセチル化、脱スルフェート化または両方により化学的に誘導体化される。上記した方法のいずれかまたは両方により誘導体化することができるグリコサミノグリカンは以下のもの、即ち：ヒアルロン酸、硫酸コンドロイチンＡ、硫酸コンドロイチンＢ（デルマタンスルフェート）、硫酸コンドロイチンＣ、キチン（キトサンに誘導体化できる）、硫酸ケラチン、ケラトスルフェートおよびヘパリンを包含する。脱アセチル化および／または脱スルフェート化によるグリコサミノグリカンの誘導体化、および、結果として生じたグリコサミノグリカン誘導体の合成親水性重合体との共有結合は共通譲渡され許可されている米国特許５，５１０，４１８にさらに詳細に説明されており、その内容は参照により本明細書に組み込まれる。
【０２１６】
［０２２６］  同様に、第２の交差結合可能な成分上の求電子性基は特定の天然に存在するタンパク質のリジン残基上の第１級アミノ基またはシステイン残基上のチオール基とリアしてよい。リジンリッチのタンパク質、例えばコラーゲンおよびその誘導体は合成重合体上の求電子性基に対して特に反応性である。本明細書においては、「コラーゲン」という用語は、いずれかの原料に由来するいずれかの型のコラーゲン、例えば限定しないが、組織から抽出された、または組み換え生成されたコラーゲン、コラーゲン類縁体、コラーゲン誘導体、修飾されたコラーゲン、および変成されたコラーゲン、例えばゼラチンを包含することを意図している。合成親水性重合体へのコラーゲンの共有結合は同時譲渡されたＲｈｅｅ等への１９９２年１１月１０日発行の米国特許５，１６２，４３０に詳述されている。
【０２１７】
［０２２７］  一般的に、いずれかの原料に由来するコラーゲンを本発明の組成物中に使用してよく；例えばコラーゲンはヒトまたは他の哺乳類の材料、例えばウシまたはブタの真皮およびヒトの胎盤から抽出または精製してよく、あるいは組み換えにより、または別様に生成してよい。ウシ皮膚からの溶液としての精製された、実質的に非抗原性のコラーゲンの生成は当該分野で良く知られている。Ｐａｌｅｆｓｋｙ等への１９９５年６月２７日発行の米国特許５，４２８，０２２はヒト胎盤由来のコラーゲンを抽出および精製する方法を開示している。米国特許５，６６７，８３９はトランスジェニックの乳牛を包含するトランスジェニックの動物の乳汁中で組み換えヒトコラーゲンを生成する方法を開示している。「コラーゲン」または「コラーゲン材料」という用語は本明細書においては、プロセシングされている、または別様に修飾されているものを包含するコラーゲンのすべての形態を指す。
【０２１８】
［０２２８］  何れの型のコラーゲン、例えば限定しないがＩ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ型またはこれらの何れの組み合わせも本発明の組成物中に使用してよいが、Ｉ型が好ましい場合が多い。アテロペプチドまたはテロペプチドを含有するコラーゲンの何れも使用してよいが；外因性の原料由来のコラーゲン、例えばウシコラーゲンを使用する場合は、アテロペプチドが好ましい場合が多く、その理由はそれがテロペプチド含有コラーゲンと比較して低減された免疫原性を有するためである。
【０２１９】
［０２２９］  熱、放射線照射、または化学交差結合剤のような方法により予め交差結合されていないコラーゲンを本発明の組成物中で使用することができ、そして予め交差結合されているコラーゲンも同様に使用してよい。非交差結合アテロペプチド微小繊維コラーゲンはそれぞれＺｙｄｅｒｍ（登録商標）ＩコラーゲンおよびＺｙｄｅｒｍＩＩコラーゲンの商標の下に３５ｍｇ／ｍｌおよび６５ｍｇ／ｍｌのコラーゲン濃度のものがＣｏｌｌａｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ，Ｃａｌｉｆ．）から販売されている。グルタルアルデヒド交差結合アテロペプチド微小繊維コラーゲンはＺｙｐｌａｓｔ（登録商標）コラーゲンの商標の下に３５ｍｇ／ｍｌのコラーゲン濃度のものがＣｏｌｌａｇｅｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎから販売されている。本発明における使用のためのコラーゲンは一般的に乾燥した凍結乾燥粉末形態である。
【０２２０】
［０２３０］  自身の粘着性のコンシステンシーのために、非微小繊維コラーゲンは典型的には生物接着剤としての使用を意図している本発明の組成物中で使用される。「非微小繊維コラーゲン」という用語はコラーゲンの水性懸濁液の光学的清澄度により示した場合に、ｐＨ７において実質的に非微小繊維形態にあるいずれかの修飾されたまたは非修飾のコラーゲン材料を包含する。
【０２２１】
［０２３１］  既に非微小繊維形態にあるコラーゲンは本発明の組成物中で使用してよい。本明細書においては、「非微小繊維コラーゲン」という用語は天然の形態において非微小繊維であるコラーゲンの型、並びに、中性またはその近傍のｐＨにおいて非微小繊維形態にあるように化学的に修飾されているコラーゲンを包含することを意図している。天然の形態において非微小繊維（またはマイクロ微小繊維）であるコラーゲンの型はＩＶ、ＶＩおよびＶＩＩ型を包含する。
【０２２２】
［０２３２］  中性ｐＨにおいて非微小繊維形態である化学修飾されたコラーゲンは、スクシニル化焦げおよびメチル化コラーゲンを包含し、これらの両方とも参照により全体が本明細書に組み込まれるＭｉｙａｔａ等への１９７９年８月１４日発行の米国特許４，１６４，５５９に記載された方法により生成できる。自身の固有の粘着性のため、メチル化コラーゲンは典型的には米国特許５，６１４，５８７に開示されている通り生物接着剤組成物中で使用される。
【０２２３】
［０２３３］  本発明の密閉材マトリックス組成物中の使用のためのコラーゲンは微小繊維形態で発生し、次に繊維分解剤１つ以上を添加することにより非微小繊維とされてよい。繊維分解剤は典型的には上記した通りｐＨ７においてコラーゲンを実質的に非微小繊維とするために十分な量で存在する。本発明における使用のための繊維分解剤は、例えば限定しないが種々の生体適合性のアルコール、アミノ酸、無機の塩、および炭水化物を包含し、生体適合性のアルコールが特に好ましい。好ましい生体適合性アルコールはグリセロールおよびポリエチレングリコールを包含する。一部の場合においては、非生体適合性のアルコール、例えばエタノール、メタノールおよびイソプロパノールは、それらを投与される患者の身体に対しするそれらの潜在的な有害作用のために、本発明の第１および第２の重合体における使用のためには望ましくない場合がある。アミノ酸の例はアルギニンを包含する。無機の塩の例は塩化ナトリウムおよび塩化カリウムを包含する。スクロースを包含する種々の糖類のような炭水化物を本発明の実施において使用してよいが、それらはインビボで細胞毒性作用を示す場合があるため、繊維分解剤の他の型ほどは好適ではない。
【０２２４】
［０２３４］  密閉に加えて組織接着における使用のためには、細胞接着を促進するために密閉材マトリックス組成物中にアルブミン、フィブリンまたはフィブリノーゲンのようなタンパク質を配合することが望ましい場合がある。さらにまた、カルボキシメチルセルロースのようなヒドロコロイドの導入が組織接着および／または膨潤可能性を促進する場合がある。
【０２２５】
［０２３５］  本発明の密閉材マトリックス組成物はまた追加的な生物活性剤または化合物１つ以上を含んでよい。１つの実施形態において、タキソール誘導体のような生物活性剤を密閉材マトリックス組成物に添加することにより組織欠陥部位における接着を防止してよい。他の実施形態においては、生物活性剤、例えば抗生物質または抗微生物剤を、例えば病原性生物が組織欠陥部位または創傷に侵入する可能性がある外傷誘導創傷状況（例えばナイフまたは銃弾による創傷）における使用のための密閉材マトリックスに添加してよい。他の実施形態においては成長因子のような生物活性剤組成物から局所組織部位に送達することにより組織の治癒および再生を促進してよい。別の実施形態においては、トロンビンのような血液凝固剤を添加して凝固カスケードを活性化することにより、密閉および組織の再生をさらに向上させてよい。例示される生物活性成分は限定しないがタンパク質、炭水化物、核酸、および無機および有機の生物活性分子、例えば酵素、抗生物質、抗新生物剤、細菌増殖抑制剤、抗接着形成剤（例えばタキソール誘導体）、殺菌剤、抗ウィルス剤、止血剤、局所麻酔剤、抗炎症剤、ホルモン、抗血管形成剤、抗体、神経伝達物質、精神活性剤、生殖器に影響する薬剤およびオリゴヌクレオチド、例えばアンチセンスオリゴヌクレオチドを包含する。「生物活性剤」または「活性剤」とは本明細書においてはインビボで生物学的作用を呈する有機または無機の分子を包含する。活性剤の例は限定しないが、酵素、受容体拮抗剤またはアゴニスト、ホルモン、成長因子、自己由来骨髄、抗生物質、抗接着形成剤、抗微生物剤、他の薬剤、および抗体を包含する。「活性剤」という用語はまた、上記において定義した活性剤２つ以上の組み合わせまたは混合物を包含することも意図している。
【０２２６】
［０２３６］  そのような生物活性成分は典型的には比較的低い濃度において、典型的には組成物の１０重量％未満において、通常は５重量％未満、頻繁には１重量％未満において存在することになる。そのような活性剤２つ以上は単一の組成物中において組み合わせてよく、および／または、異なる活性成分が送達部位において相互作用する場合にはそのような成分を送達するために組成物２つ以上を使用してよい。例示される止血剤はトロンビン、フィブリノーゲンおよび凝固因子を包含する。トロンビンのような止血剤は例えばヒドロゲルｍｌ当たり約５０〜約１０，０００単位のトロンビン、またはヒドロゲルｍｌ当たり約１００〜約１０００単位のトロンビンの範囲の濃度において添加してよい。
【０２２７】
［０２３７］  交差結合した第１および第２の重合体の組成物はまた、Ｘ線または１９Ｆ−ＭＲＩによる投与後の組成物の可視化を支援するためにそれぞれヨウ素またはバリウム、またはフッ素のような種々の画像化剤を含有するように生成できる。
【０２２８】
［０２３８］  本発明の組成物における使用のための好ましい活性剤は、成長因子、例えば形質転換成長因子（ＴＧＦ）、線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、血小板誘導成長因子（ＰＤＧＦ）、表皮成長因子（ＥＧＦ）、結合組織活性化ペプチド（ＣＴＡＰ）、骨形成因子、およびこれらの成長因子の生物学的に活性な類縁体、フラグメント、および誘導体を包含する。多機能性調節タンパク質である形質転換成長因子（ＴＧＦ）スーパー遺伝子ファミリーのメンバーが特に好ましい。ＴＧＦスーパー遺伝子ファミリーのメンバーはベータ形質転換成長因子（例えばＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３）；骨形態形成タンパク質（例えばＢＭＰ−１、ＢＭＰ−２、ＢＭＰ−３、ＢＭＰ−４、ＢＭＰ−５、ＢＭＰ−６、ＢＭＰ−７、ＢＭＰ−８、ＢＭＰ−９）；ヘパリン結合成長因子（例えば線維芽細胞成長因子（ＦＧＦ）、表皮成長因子（ＥＧＦ）、血小板誘導成長因子（ＰＤＧＦ）、インスリン様成長因子（ＩＧＦ）；インヒビン（例えばインヒビンＡ、インヒビンＢ）；生育分化因子（例えばＧＤＦ−１）；およびアクチビン（例えばアクチビンＡ、アクチビンＢ、アクチビンＡＢ）を包含する。
【０２２９】
［０２３９］  成長因子は哺乳類細胞由来のような天然または自然の原料から単離することができ、あるいは、組み換えＤＮＡ手法によるか、または種々の化学的プロセスにより合成的に生成できる。さらにまた、これらの因子の類縁体、フラグメント、または誘導体も、それらが天然分子の生物活性の少なくとも一部分を呈する限り、使用できる。例えば類縁体は部位特異的突然変異誘発または他の遺伝子操作手法により改変された遺伝子の発現により生成できる。
【０２３０】
［０２４０］  生物活性剤は密閉材マトリックス組成物に添加混合することにより配合してよい。１つの実施形態において、活性剤は乾燥または凍結乾燥形態において粉末化密閉材マトリックス組成物に混合してよい。別の実施形態においては、この添加混合は密閉材マトリックス組成物に関して上記した通りコラーゲンのような固体支持体上に固定化してよい。他の実施形態においては、薬剤は第１および第２成分の合成重合体上の官能基とこれらの薬剤を結合させることにより、上記した通り密閉材マトリックス組成物内に配合してよい。官能性的に活性化されたポリエチレングリコールを用いた成長因子のような生物学的に活性な薬剤を共有結合するためのプロセスは共通譲渡されているＲｈｅｅ等に１９９２年１１月１０日に発行された米国特許５，１６２，４３０に記載されている。そのような組成物は好ましくは、例えば酵素的分解の結果として容易に生体分解されることができ、これにより活性剤を標的組織に放出させ、そこにおいてその所望の治療効果を発揮させることになる連結部を包含する。
【０２３１】
［０２４１］  交差結合した重合体組成物内への求核性基含有生物活性剤の配合のための簡単な方法では、活性剤を第１成分、第２成分、およびヒドロゲル形成成分と混合した後に、乾燥状態において投与する。組織結果への密閉材マトリックス組成物の適用および生物学的流体との接触により、生物活性剤は第２の成分と反応して交差結合することになり、これにより、ヒドロゲル形成成分が生物学的流体を吸収するに従って、第１および第２の成分の多孔性の交差結合マトリックスとなる。この操作法は形成された密閉材マトリックスバリアの交差結合した成分の重合体マトリックスの部分への活性剤の共有結合をもたらし、これにより、高度に効果的な除放性組成物が生成することになる。
【０２３２】
［０２４２］  使用される活性剤の型および量は、他の要因の中でも、治療すべき特定の部位および状態、および、選択された活性剤の生物活性および薬物動態に依存することになる。
【０２３３】
Ｖ．生物接着剤としての密閉材マトリックス組成物の使用
［０２４３］  本発明の密閉材マトリックス組成物は一般的に接着性であり、そして、標的部位の組織内のコラーゲンの求核性基に第２の交差結合可能な成分の求電子性基が反応すると、協力に組織に結合する。本発明の一部の多孔性マトリックス組成物は非常に高値の粘着性を有することができる。即ち、止血のためのバリアマトリックスとしての使用に加えて、本発明の密閉材マトリックス組成物は生理学的条件下に含水または湿潤した組織に結合する生物接着剤として有用である。本明細書においては、「生物接着剤」、「生物学的接着材」および「外科用接着剤」という用語は互換的に使用してよく、２つの天然組織の表面の間、または、天然組織表面と非天然組織表面または合成インプラント表面との間に一時的または永久的な結合をもたらすことができる生体適合性組成物を包含する。
【０２３４】
［０２４４］  第１の表面の第２の表面への結合を起こすための一般的な方法においては、密閉材マトリックス組成物（例えば乾燥粉末またはシート形態における）を第１の表面に適用する。次に第１の表面を第２の表面に好ましくは即座に接触させることにより、２つの面の間の接着を起こさせる。第１および第２の表面の少なくとも１つは好ましくは天然組織表面である。実施例において使用した交差結合ゼラチンのような機械的に安定なヒドロゲル形成成分を組成物中に使用する場合、結果として生じる多孔性マトリックスは第１および第２の交差結合可能な成分のみを含有する組成物とは反対に、増大した機械的強度を呈する。即ち２つの組織の表面の間の接着の強度は、組織間の多孔性マトリックスの層が生理学的な機械的応力下に内部で分離する可能性が低下するため、増大することになる。
【０２３５】
［０２４５］  ２つの表面は、交差結合反応が終了まで進行する間、手動により、あるいは他の適切な手段を用いながら共に保持してよい。交差結合は典型的には密閉材マトリックス組成物適用後５〜６０分以内に終了する。しかしながら完全な交差結合が起こるために必要な時間は多くの要因、例えば第１および第２の交差結合可能な成分の型および分子量、そして最も特定すれば、標的部位における２成分の有効濃度に依存している（即ちより高い濃度はより速い交差結合時間をもたらす）。
【０２３６】
［０２４６］  第１および第２の表面の少なくとも１つは好ましくは天然の組織表面である。本明細書においては、「天然の組織」という用語は治療すべき特定の患者の身体にとって天然である生物学的組織を包含する。本明細書においては、「天然の組織」という用語はある患者の身体の別の部分への移植のために同患者の身体の一部分から隆起または取り出されている生物学的組織を包含する（例えば骨の自家移植片、皮膚弁の自家移植片等）。例えば、本発明の一部の実施形態の組成物は熱傷負傷者の場合のように、患者の身体のある部分に由来する皮膚片を身体の別の部分に接着するために使用できる。
【０２３７】
［０２４７］  他の表面は天然の組織表面、非天然の組織表面、または合成インプラントの表面であってよい。本明細書においては、「非天然の組織」という用語はレシピエント患者の身体内への移植のためにドナー患者（レシピエント患者と同じ種または異なる種のものであってよい）の身体から取り出されている生物学的組織を包含する（例えば組織および臓器の移植物）。例えば本発明の交差結合した重合体組成物は患者の心臓内部に異種移植片の心臓弁を固定し、そして心臓弁の周囲を密閉して漏出を防止するために為に使用できる。
【０２３８】
［０２４８］  本明細書においては、「合成インプラント」という用語は天然の組織および非天然の組織に関わる上記定義により包含されない患者の身体内への移植を意図しているいずれかの生体適合性の材料を包含する。合成のインプラントは、例えば人工血管、心臓弁、人工臓器、骨補綴物、インプラント可能なレンズ核、血管移植片、ステント、およびステント／移植片の組み合わせ等を包含する。
【０２３９】
ＶＩ．接着防止のための密閉材マトリックス組成物の使用
［０２４９］  本発明の密閉材組成物の別の用途は内部の組織または臓器に至る外科処置または傷害の後の接着部の形成を防止するために組織を被覆することである。外科処置後の接着部の形成を防止するために組織をコーティングするための一般的な方法においては、第１および第２の合成重合体を水和可能な交差結合重合体と混合するか予備混合し、次に反応混合物の薄層を外科処置部位を含む、包囲する、および／またはこれに隣接する組織に適用し、その後、実質的な交差結合を第１の合成重合体上の求核性基と第２の合成重合体上の求電子性基との間で生じさせる。反応混合物の組織部位への適用は粉末組成物に関しては押し出し、散布、ブラシング、噴霧（上記）により、組織への密閉材マトリックス組成物の薄層またはフィルムの設置により、または、いずれかの他の好都合な手段により行ってよい。
【０２４０】
［０２５０］  外科処置部位への反応混合物の適用の後、交差結合をインサイチュで継続した後に、外科処置切開部を閉鎖する。交差結合が平衡に達すれば、コーティングされた組織と接触させられる組織はコーティングされた組織には粘着しないことになる。この時点において、外科処置部位を従来の手段（縫合等）により閉鎖することができる。
【０２４１】
［０２５１］  一般的に比較的短時間（即ち第１の合成重合体と第２の合成重合体の混合後５〜１５分）以内に完全な交差結合を達成する組成物は、外科的捜査の終了後比較的早期に外科処置部位を閉鎖してよいように、外科処置部接着の防止における使用に適している場合がある。さらにまた、実施例において使用される交差結合ゼラチンのような比較的高い機械的強度を有する水和可能な交差結合重合体を組成物中で使用することによりコーティングの機械的安定性を上昇させることが好ましい。
【０２４２】
［０２５２］  以下の実施例は密閉材マトリックス組成物を形成するために第２の交差結合可能な成分およびヒドロゲル形成成分と組わせた第１の交差結合可能な成分の生成および特性化を説明しており、そしてコンジュゲート、組成物および装置の好ましい実施形態をどのようにして製作するかに関する完全な開示および説明を当業者に提示するために示したものであり、そして本発明がその発明とみなすものの範囲を限定する意図はない。使用した数（例えば量、温度、分子量等）に関しては正確さが確保されるように努力したが、一部の実験誤差や偏差は考慮されなければならない。特段の記載が無い限り、部は重量部であり、分子量は重量平均分子量であり、温度は摂氏であり、そして圧力は大気圧近傍である。
【実施例】
【０２４３】
ＶＩＩ．実施例
実施例１：密閉材マトリックスにおける使用のための第１および第２の成分の組成物：交差結合した多アミノＰＥＧ組成物の生成
［０２５３］  種々のジアミノＰＥＧの以下の保存溶液を生成した：Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ  ＥＤ−２００１（Ｔｅｘａｃｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，Ｔｅｘ．より入手）１０グラムを水９ｍｌに溶解した。Ｊｅｆｆａｍｉｎｅ  ＥＤ−４０００（やはりＴｅｘａｃｏ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙより入手）１０グラムを水９ｍｌに溶解した。ジアミノＰＥＧ（３４００ＭＷ、Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，Ａｌａ．から入手）０．１グラムを水３００μｌに溶解した。上記生成した３種のジアミノＰＥＧ溶液の各々を以下の表１に示す通り、３官能性的に活性化されたＳＣ−ＰＥＧ（ＴＳＣ−ＰＥＧ、５０００ＭＷ、やはりＳｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓより入手）の水溶液と混合した。
【０２４４】
【表１】
2009545405.tif 000004
［０２５４］  ジアミノＰＥＧおよびＴＳＣ−ＰＥＧの溶液をシリンジトゥーシリンジの混合を用いて混合した。材料の各々をシリンジから押し出し、そして３７℃で１時間硬化させた。材料の一部はゲルを形成した。一般的にゲルは含水量の増大に従って軟化し；彗星溶媒（水またはＰＢＳ）の最少量を含有するゲルが最も堅固であった。
【０２４５】
実施例２：密閉材マトリックスにおける使用のための第１および第２の成分の組成物：交差結合したポリ（リジン）組成物の生成
［０２５５］  リン酸塩緩衝液（０．２Ｍ、ｐＨ＝６．６）０．１ｍｌ中の臭化水素酸ポリ−Ｌ−リジン（８，０００ＭＷ、Ｐｅｎｉｎｓｕｌａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｂｅｌｍｏｎｔ，Ｃａｌｉｆ．より入手）１０ミリグラムを０．１ｍｌＰＢＳ中の４官能性的に活性化されたＳＥ−ＰＥＧ（１０，０００ＭＷ、Ｓｈｅａｒｗａｔｅｒ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｈｕｎｔｓｖｉｌｌｅ，Ａｌａ．より入手）１０ｇと混合した。組成物はほぼ即座に軟質のゲルを形成した。
【０２４６】
実施例３：密閉材マトリックスにおける使用のための第１および第２の成分の組成物：テトラアミノＰＥＧ／テトラＳＥ−ＰＥＧ製剤のゲル形成に対するｐＨの影響
［０２５６］  ｐＨ６、７および８において種々の濃度のテトラアミノＰＥＧおよびテトラＳＥ−ＰＥＧを含むゲルをペトリ皿中に生成した。テトラアミノＰＥＧおよびテトラＳＥ−ＰＥＧの混合ののち、ディッシュを繰り返し傾け；製剤が流動を停止した時点をゲル化時間とみなした。室温における種々のテトラアミノＰＥＧ／テトラＳＥ−ＰＥＧを製剤のゲル化時間に対するｐＨの影響を以下の表２に示す。
【０２４７】
【表２】
2009545405.tif 000005
［０２５７］  ゲル形成に必要な時間は、ｐＨの上昇およびテトラアミノＰＥＧおよびテトラＳＥ−ＰＥＧ濃度の上昇とともに低下した。
【０２４８】
実施例４：ヒドロゲル形成成分材料の評価および交差結合およびパーセント膨潤測定の方法
［０２５８］  ゼラチン粒子を交差結合剤（例えばグルタルアルデヒド０．００５〜０．５重量％）を含有する水性緩衝液（例えば０．２Ｍリン酸ナトリウム、ｐＨ９．２）中で膨潤させた。反応混合物を一夜冷蔵庫に保持し、次に脱イオン水で３回、エチルアルコールで２回洗浄し、周囲温度で乾燥させた。乾燥した交差結合ゼラチンを固定された時間、周囲温度で低固形分濃度（２〜３％）において水性緩衝液中に再懸濁した。緩衝液は平衡膨潤のために必要な濃度を実質的に超過するものとし；そして２相（ヒドロゲル相および緩衝液）が生じた。次に湿潤したヒドロゲルを含有する懸濁液を、０．８μｍの名目カットオフのフィルターメンブレン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，Ｍａｓｓ．）上で真空を適用することにより濾過した。過剰な緩衝液を除去した後、保持されている湿潤したヒドロゲルおよび湿潤したフィルターメンブレンの合わせた重量を記録した。次にヒドロゲルおよびメンブレンを少なくとも２時間約１２０℃で乾燥し、そして乾燥したヒドロゲル残渣および乾燥したフィルターメンブレンの合わせた重量を記録した。ヒドロゲル残渣を伴わない湿潤したフィルターメンブレンおよびヒドロゲルを伴わない乾燥したフィルターメンブレンの試料の計測を数回行い、そして湿潤ヒドロゲルおよび乾燥ヒドロゲルの実質重量を推定するために使用した。次に「パーセント膨潤」を以下の通り計算した。
パーセント膨潤＝１００ｘ  ［（ヒドロゲル湿潤重量−ヒドロゲル乾燥重量）／ヒドロゲル乾燥重量］。
【０２４９】
［０２５９］  膨潤性の計測は少なくとも３連で実施し、そしてゼラチンの所定試料に関して平均した。湿潤重量の計測前１８〜２４時間緩衝液中に再懸濁した試料に関するパーセント膨潤の値は「平衡膨潤性」として定義した。
【０２５０】
［０２６０］  得られた交差結合ゼラチン材料は４００％〜１３００％の範囲の平衡膨潤性の値を示した。平衡膨潤性の程度は交差結合の方法および進行度に依存していた。
【０２５１】
実施例５：密閉材マトリックスにおける使用のためのヒドロゲル形成成分：ＥＤＣを用いて交差結合したゼラチンよりなるフラグメント化した水和可能な交差結合重合体生成物
［０２６１］  ゼラチン（Ａｔｌａｎｔｉｃ  Ｇｅｌａｔｉｎ，Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｆｏｏｄｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｗｏｂｕｒｎ，Ｍａｓｓ．）を７０℃で１〜１０％固形分（ｗ／ｗ）（より好ましくは８％）となるように蒸留水中希釈した。次に０．２％〜３．５％（または０．２％〜０．３％）において１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）を添加した。攪拌することにより形成したヒドロゲルを１時間室温で放置した。ヒドロゲルはＦｒｅｅｚｏｎｅ１２凍結乾燥システム（Ｌａｂｃｏｎｃｏ，Ｍｏ．）を用いて乾燥し、そしてＷａｒｉｎｇ  Ｂｌｅｎｄｅｒの３１ＢＣ９１型（ＶＷＲ，Ｗｉｌｌａｒｄ，Ｏｈｉｏ）を用いて微細に粉砕した。次に乾燥した重合体組成物をシリンジ内に投入し、緩衝液で平衡化した。平衡膨潤性は少なくとも１０００％であることがわかった。結果を表３に示す。
【０２５２】
【表３】
2009545405.tif 000006
実施例６：密閉材マトリックスにおける使用のためのヒドロゲル形成成分：ＥＤＣを用いて交差結合したゼラチンおよびポリ（Ｌ）グルタミン酸よりなるフラグメント化した水和可能な交差結合重合体生成物
［０２６２］  ゼラチン（Ａｔｌａｎｔｉｃ  Ｇｅｌａｔｉｎ，Ｇｅｎｅｒａｌ  Ｆｏｏｄｓ  Ｃｏｒｐ．，Ｗｏｂｕｒｎ，Ｍａｓｓ．）を７０℃で１〜１０％固形分（ｗ／ｗ）（より好ましくは８％）となるように蒸留水中希釈した。次にポリ（Ｌ）グルタミン酸（ＰＬＧＡ）（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）１０％（ｗ／ｗ）（より好ましくは２〜５％）および０．２％〜３．５％（または０．２％〜０．４％）で１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド（ＥＤＣ）（Ｓｉｇｍａ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，Ｍｏ．）を添加した。攪拌することにより形成したヒドロゲルを１時間室温で放置した。ヒドロゲルは固定された時間（例えば２０時間）過剰な食塩水中で膨潤させた。次にヒドロゲルをフィルターメンブレン（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ，Ｂｅｄｆｏｒｄ，Ｍａｓｓ．）上で真空を適用することにより濾過した。平衡膨潤性は少なくとも１５００％であることがわかった。結果を表４に示す。
【０２５３】
【表４】
2009545405.tif 000007
実施例７：密閉材マトリックスにおける使用のためのヒドロゲル形成成分：フラグメント化した水和可能な交差結合重合体ヒドロゲルの生成
［０２６３］  ウシ真皮（Ｓｐｅａｒｓ  Ｃｏ．，ＰＡ）を２℃〜３０℃（好ましくは２２℃〜３０℃）の温度で１〜１８時間（または１〜４時間）に渡り、水酸化ナトリウム（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，ＣＡ）の水溶液（０．１Ｍ〜１．５Ｍ、または０．４Ｍ〜１．２Ｍ）中で振とうした。次に真皮のスラリーを無機酸、例えば塩酸、リン酸または硫酸（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，ＣＡ）を用いて中和し、そして、中和された液体を次に分篩濾過により不溶性真皮から分離した。次に真皮を発熱物質非含有水およびアルコール、例えばイソプロピルアルコール（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，ＣＡ）を用いて洗浄した。３〜１２回洗浄後、真皮を発熱物質非含有水に懸濁し、そして真皮の水スラリーを次に５０℃〜９０℃、好ましくは６０℃〜８０℃にまで加熱することにより真皮を熱的にゼラチン化した。ゼラチン化サイクルの間、真皮水スラリーのｐＨはｐＨ３〜ｐＨ１１、またはｐＨ７〜ｐＨ９に調節制御した。さらにまた、スラリー中の不溶性真皮は振とうおよび／またはホモゲナイズにより崩壊してもよい。崩壊は熱ゼラチン化サイクルの前または後に行うことができる。熱ゼラチン化は１〜６時間行った。ゼラチン化ののち、スラリーを濾過により清澄化した。ゼラチンスラリーは１５℃〜４０℃、好ましくは２０℃〜３５℃で風乾することにより脱水した。水分含有量が２０重量％未満であることを乾燥しているとみなした場合の乾燥ゼラチンを、次に粉砕により崩壊させた。
【０２５４】
［０２６４］  乾燥ゼラチンを０．００２５〜０．０７５重量％でグルタルアルデヒド（Ａｍｒｅｓｃｏ  Ｉｎｃ．，ＯＨ．）を含有し、そしてｐＨが７〜１０である冷却（５℃〜１５℃）の水溶液に添加した。この溶液のゼラチン濃度は１〜１０重量％であった。グルタルアルデヒドを１〜１８時間の期間に渡りゼラチン顆粒を交差結合させた後、ゼラチンを濾過または沈降により水相から分離させた。次にゼラチン粒子をナトリウムボロハイドライド（Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．，ＣＡ．）０．００８３３〜０．０６６７重量％を含有する水溶液に添加し、その際ゼラチン濃度は再度１〜１０重量％とし、そしてｐＨは７〜１２、または７〜９とした。１〜６時間の後、交差結合ゼラチンを濾過または沈降により水相から分離させた。次にゼラチンをゼラチン濃度１〜１０重量％としながら発熱物質非含有水に再懸濁することにより残存した交差結合剤および還元剤を除去した後、濾過または沈降により水相から分離した。交差結合したゼラチンの最終的な収集はフィルターメッシュまたは分篩材の上で行い、そして発熱物質非含有の水で最終的にゼラチンを洗浄した。次に湿潤した交差結合ゼラチンを１５℃〜４０℃の乾燥チャンバーないに入れた。乾燥した交差結合ゼラチン（即ち水分含有量２０重量％未満の交差結合ゼラチン）を乾燥チャンバーから取り出し、次に機械的な粉砕ミルを用いて粉砕することにより０．０２０ｍｍ〜２．０００ｍｍの典型的な粒径分布を有する粉末を得た。
【０２５５】
実施例８：急速作用性の乾燥止血密閉材粉末
［０２６５］  急速作用性の乾燥止血密閉材粉末を、第１の交差結合可能な成分、第２の交差結合可能な成分、およびヒドロゲル形成成分を組み合わせることにより生成した。第１の交差結合可能な重合体（ＰＥＧ−Ａ）はＰＥＧ−スクシンイミジル粉末であり、第２の交差結合可能な重合体（ＰＥＧ−Ｂ）はＰＥＧ−チオール粉末であり、そしてヒドロゲル形成成分は交差結合したゼラチン粉末とした。
【０２５６】
実施例９：急速作用性の乾燥密閉材パッド
［０２６６］  急速作用性の乾燥密閉材パッドを、第１の交差結合可能な成分、第２の交差結合可能な成分、およびヒドロゲル形成成分を組み合わせることにより生成した。得られた組成物、粉末密閉材マトリックス組成物を凍結乾燥したコラーゲンスポンジ上に搭載し、そして１〜２分間６０〜７０℃に加熱した。乾燥粉末マトリックスはこの熱で僅かに溶融し、自身をコラーゲンスポンジの表面に固定させ、これにより密閉材マトリックスパッドを形成した。あるいは密閉材マトリックス組成物を結合剤または医薬品分野で知られた他の賦形剤を用いて支持体上に固定化してもよい。一般的に支持体に密閉材マトリックス組成物を固定化するために使用される手法は密閉材マトリックス組成物の第１および第２の成分およびヒドロゲル形成成分により変動してよい。本発明の密閉材マトリックスパッド実施形態は、密閉材マトリックス組成物をスポンジまたは他の適当な支持体手段を介して取り扱いながら外科処置部位に送達することができる好都合なフォーマットを提供する。
【０２５７】
実施例１０：脾動脈穿刺を治療するための密閉材粉末
［０２６７］  図７Ａ〜Ｅは本発明の実施形態による脾動脈穿刺を治療するための密閉材マトリックス組成物の適用を説明している。ブタを約３Ｘベースラインまでヘパリン処理した。図７Ａに示す通り、樋動脈穿刺は１８Ｇ針７００を用いてブタにおいて外科的に誘導した。穿刺の後、過剰な出血７０５が動脈７１０から観察された。図７Ｂおよび７Ｃに示す通り、密閉材粉末マトリックス組成物７２０約７００ｍｇをシリンジ７３０を介して穿刺部位に適用し、そして手袋を装着した指７４０を用いて２分間その部位に穏やかに圧着または定置させた。密閉材粉末は凝集体７５０を形成し、これは出血を十分停止させているように観察された。部位を図７Ｄに示す通り灌流装置７６０を用いて適用後５分に灌流し、過剰な粉末組成物を洗浄除去した。凝集体をピンセットで掴んだところ、それは組織に対して極めて良好に接着しており、そして優良な一体性を示していた。図７Ｅに示す通り、凝集体７５０はピンセット７７０で剥離することにより適用後４４分に除去し、そして再開出血７１５が観察された。
【０２５８】
実施例１１：肝切開を治療するための密閉材粉末
［０２６８］  図８Ａ〜Ｅは本発明の実施形態による肝切開を治療するための密閉材マトリックス組成物の適用を説明している。ブタを約３Ｘベースラインまでヘパリン処理した。図８Ａに示す通り、ブタの肝臓８０５の中葉の先端８００即ち端部を、鋏８１０を用いて切開した。切開の後、過剰な出血８１５が部位から観察された。図８Ｂに示す通り、密閉材マトリックス組成物８２０約６ｍｌ（２ｇ）を部位に適用し、そして２分間シリンジ８２５の先端で定置に保持した。図８Ｃに示す通り、手袋を装着した指を用いて患部に対し粉末を圧着または保持した。密閉材粉末は凝集体８３５を形成し、これは出血を十分停止させているように観察された。部位を図８Ｄに示す通り灌流装置８４０を用いて適用後８分に灌流した。凝集体をピンセットで掴んだところ、それは組織に対して極めて良好に接着しており、そして優良な一体性を示していた。凝集体８３５はピンセット８４５で剥離することにより適用後２８分に除去し、そして再開出血８５０が観察された。
【０２５９】
実施例１２：脾臓患部を治療するための密閉材粉末
［０２６９］  脾臓の患部は６ｍｍの生検組織パンチを用いて外科的にブタにおいて誘導した。ブタは約２．５Ｘベースラインとなるまでヘパリン処理した。組織パンチの後、過剰な出血が脾臓から観察された。密閉材マトリックス組成物粉末約７００ｍｇ（２ｍｌ）を１２ｍｌシリンジの端部を用いて穿刺部に適用した。材料を定置に保持するために圧力はかけなかった。密閉材粉末は凝集体を形成し、それは十分出血を停止しているように観察された。部位を適用後４分に灌流した。凝集体をピンセットで掴んだところ、それは組織に対して極めて良好に接着しており、そして優良な一体性を示していた。凝集体は剥離することにより適用後２５分に除去し、そして再開出血が観察された。
【０２６０】
実施例１３：機械的応力試験
［０２７０］  プラスチック鋳型中においてブタ血漿１ｍｌを密閉材マトリックス組成物粉末０．６０〜０．６５ｇを反応させることにより密閉材マトリックスバリアを生成した。混合物を約３０分間室温で硬化させた。３ｘ１ｘ０．３ｃｍのゲルブロックの両端をシアノアクリレート糊剤でテーピングすることにより引き離し作業のためのグリッピング空間を形成した（１ｘ１ｃｍ）。テープの端部を予め搭載されたグリップを用いてグリッピングした。Ｃｈａｔｉｌｌｏｎ  ＴＣＤ２０００テスターを用いて長方形のゲル形状が壊れるまで通常の応力試験を行うことにより、引っ張り強度を求めた。ピーク力（Ｎ）および最大負荷時の歪み（ｍｍ）を計測することによりゲルを破断するまで伸展させた。ゲルの有効表面積は１ｘ０．３ｃｍであり、元の有効ゲル長は１ｃｍであった。密閉材ゲルの引っ張り強度は約１５．３Ｎ／ｃｍ２であった。ヒドロゲル形成成分非存在下で第１の交差結合可能な成分および第２の交差結合可能な成分を包含するゲル組成物に対して同様の試験を実施したところ、観察された引っ張り強度は約５．１Ｎ／ｃｍ２であった。
【０２６１】
実施例１４：剥離強度試験
［０２７１］  一部の実施形態においては、混合粉末は第１および第２の交差結合可能な成分およびヒドロゲル形成成分を包含し、そして自身が血液または他の体液のような生理学的液体中で溶解する際に自己重合する。材料は共有結合により堅固に組織または他の適用部位に接着することができる。組織接着の機械的強度は皮膚のような組織から密閉材マトリックスを引っ張るための機械的工作品器具を用いることにより調べることができる。本実施例においては、多数の引っ張り試験を以下の通り、密閉材マトリックスバリアの形成後に実施した。第１の交差結合可能な成分（ペンタエリスリトールポリ（エチレングリコール）エーテルテトラ−スクシンイミジルグルタレート）および第２の交差結合可能な成分（ペンタエリスリトールポリ（エチレングリコール）エーテルテトラ−チオール）および交差結合したゼラチン（ＦｌｏＳｅａｌＴＭ）を含有する３成分粉末のシリーズは、交差結合可能な成分を交差結合ゼラチンと３種の異なる濃度（交差結合可能な成分の１０％、２０％および３０％）で混合することにより生成した。３成分粉末約０．４０ｇ〜約０．４５ｇをニワトリ皮膚試料の上部に配置した３ｘ１ｘ０．３ｃｍのプラスチック鋳型内のブタ血漿約０．６ｍｌに添加し、約６０分間室温で硬化させた。密閉材マトリックスバリアが形成し、皮膚に堅固に接着していた。形成した密閉材マトリックスバリアをＣｈａｔｉｌｌｏｎ  ＴＣＤ２０００テスターにクランプしたプレートに糊付けした。皮膚を密閉材マトリックスバリアから引っ張りながら最大ピーク力（Ｎ）を計測した。接着強度の増大はＰＥＧ混合物（第１および第２の交差結合可能な成分）の濃度の上昇とほぼ直線的に相関しているように観察された。結果を表４Ａに示す。
【０２６２】
【表４Ａ】
2009545405.tif 000008
実施例１５：溶融パッドのスポンジ裏装のための微小繊維コラーゲンの生成
［０２７２］  第１の微小繊維コラーゲン試料を以下の通り生成した。ＮａＯＨ４０ｇを２５℃の温度で水４５０ｃｃに溶解した。スライスしたウシ真皮約５０ｇをＮａＯＨ溶液に添加した。真皮を８０分間攪拌した。ＮａＯＨ溶液を傾瀉し、真皮を水で洗浄した。真皮を２ＭＨＣｌに溶解し、ｐＨを２．３〜２．４の範囲とした。攪拌を１８時間継続した。濃厚なコラーゲン溶液（ＣＩＳ）１２５０ｍｌを１８℃において１ＭＮａＯＨでｐＨ７．２５となるまで滴定した。コラーゲン繊維を１０時間かけて形成させ、濾過した。２４０ｍｌをｐＨ７．４で沈殿させ、２３時間８℃において２５％グルタルアルデヒド（ＧＡ）溶液３３μｌで交差結合させた。微小繊維コラーゲンはＶｉｒｔｉｓ凍結乾燥器を用いながら所定のサイクルにより凍結乾燥させた。
【０２６３】
［０２７３］  第２の微小繊維コラーゲン試料を以下の通り生成した。微小繊維コラーゲンは粘稠な溶液（例えばＣＩＳ）２４０ｇを用いながら交差結合した。水６０ｃｃを添加することにより溶液を希釈した。ｐＨは２ＭのＮａＯＨ約１．８ｃｃを添加することにより９．２に上昇させた。溶液の温度を８℃に調節し、２５％ＧＡ３３μｌを添加した。２３時間溶液を攪拌し、沈殿した線維約５４ｇを得た。微小繊維コラーゲンはＶｉｒｔｉｓ凍結乾燥器を用いながら所定のサイクルにより凍結乾燥させた。
【０２６４】
実施例１６：ヒドロゲル形成成分の脱緩衝
［０２７４］  一部の実施形態においては、ＦｌｏＳｅａｌＴＭのようなヒドロゲル形成成分からホスフェート塩を除去することによりヒドロゲル形成成分のｐＨが周囲の液体による影響を容易に受けることができるようすることが望ましい場合がある。ヒドロゲル形成成分のインサイチュの交差結合は密閉材マトリックス組成物が適用後に組織に接着することを支援することができる。一部の場合においては、接着は特定のｐＨ値においてより効果的となる場合がある。例えば一部のゼラチン系材料は６または７未満のｐＨ値においてより容易に接着を起こす場合がある。ＦｌｏＳｅａｌＴＭを１：５０の比において水で洗浄し、スラリーを０．０１ＭＨＣｌまたは０．０１ＭＮａＯＨを用いてｐＨ２〜７にｐＨ調節または酸性化した。湿潤したゼラチンケーキを濾過し、１２〜２０時間３２℃で強制空気オーブン中で乾燥させ、そして乳鉢で穏やかに粉砕した。乾燥したゼラチン粉末を混合ＰＥＧ溶液に添加し、インサイチュの交差結合に付した。スラリーを３０秒間混合し、その直後にｐＨ７．４のリン酸塩緩衝液２５ｍＭで完全に飽和させた計量紙の表面に適用した。重合時間を記録し、結果を表５に示した。
【０２６５】
【表５】
2009545405.tif 000009
実施例１７：ＰＥＧケーキの生成
［０２７５］  １つの実施形態において、ＰＥＧ−スクシンイミド粉末０．８ｇおよびＰＥＧ−チオール粉末０．８ｇを振とうにより十分混合し、Ｎ２を完全に充填した１００ｍｌ容の丸底フラスコに入れた。混合した粉末を３０分間穏やかに手動で攪拌しながら４０℃〜５０℃のオイルバス中で溶融させ、そして冷却させた。固体フィルムはスパーテルを用いてフラスコから取り出した。別の実施形態においては、ＰＥＧ−スクシンイミドおよびＰＥＧ−チオールの混合粉末をコラーゲン（例えば０．３％）およびゼラチン（例えば０．２％）の酸性溶液中に溶解し、そして凍結乾燥した。微小繊維コラーゲンまたはゼラチンはマトリックスの弛緩に寄与し、そしてＰＥＧケーキの取り扱い性を向上させると考えられる。
【０２６６】
［０２７６］  比較組成物において、コラーゲン繊維１．２ｇを１００ｃｃのｐＨ２のＨＣｌに溶解し、１〜２時間３５℃のウォーターバス中で加温し、そしてｐＨ２のＨＣｌで希釈することにより０．３％ＣＩＳを生成した。０．２ｇのＰＥＧ−スクシンイミドおよび０．２ｇのＰＥＧ−チオールを０．３％ＣＩＳ２ｃｃに溶解した。得られた混合物をトレーに注ぎ込み、２２時間のサイクルを経て凍結乾燥し、ＰＥＧケーキを生成した。さらに別の実施形態においては、ゼラチン２ｇを３５℃のウォーターバス中１００ｃｃのｐＨ２のＨＣｌに溶解した。２成分ＰＥＧ粉末混合物４ｇをゼラチン溶液２ｃｃに溶解し、凍結乾燥してＰＥＧケーキとした。
【０２６７】
［０２７７］  関連する実施形態において、ＰＥＧケーキはｐＨ２．０において、ＰＥＧ−ＳＧ、ＰＥＧ−ＳＨおよびコラーゲンの混合溶液を凍結乾燥することにより生成した。動物実験はヘパリン処理したブタモデルにおいて、擦過した肝被膜に対して実施した。０．２Ｍリン酸潮緩衝液（ｐＨ９．０）２滴を緩徐に出血している肝臓表面に添加した。ケーキ１片を圧力を加えることなく部位上に静置した。５分および１０分において、部位へのＰＥＧケーキの各々の接着を試験した。ＰＥＧ−ＳＧの活性は生成過程において低減されていないこと、および、ＰＥＧケーキは共有結合により擦過肝臓組織に接着していることが観察された。組成物および試験した試料のインビボの性能を表６に総括した。
【０２６８】
【表６】
2009545405.tif 000010
実施例１８：粉体化ＰＥＧケーキの生成
［０２７８］  ４００ｍｇの予備混合したＣｏＳｅａｌＴＭ、１ｇのＦｌｏＳｅａｌＴＭ、（例えばｐＨ７．１〜９．５；粒子の直径７０〜４００μｍ）、および２〜３ｃｃの水を合わせて混合ペーストとし、２２時間サイクル下に凍結乾燥し、ケーキ状物を形成した。図９に示す通り、次にケーキ状物９００に亀裂９１０を生じさせて粉砕し、そして破壊された粉末携帯９２０とし、そしてシリンジ９３０に入れた（例えば５ｃｃ〜１０ｃｃのシリンジ）。シリンジの胴部の先端９４０をブレードで除去し、粉末化された混合物９２０を傷害部位９５０に適用し、そして密閉材活性をインサイチュで観察した。例示される結果は実施例１０〜１２において考察している。別の実施形態においては、ケーキ状物を表７に示す３成分スラリーから生成した。
【０２６９】
【表７】
2009545405.tif 000011
［０２７９］  一部の実施形態による例示される製剤に関する試験結果は表８に示す以下の特性を明らかにした。
【０２７０】
【表８】
2009545405.tif 000012
実施例１９：密閉材マトリックス組成物融着パッドの生成
［０２８０］  ＰＥＧパッドを溶融ＣｏＳｅａｌＴＭ予備混合物を用いて生成した。３成分粉末は種々の重量比により、異なるｐＨ値のＦｌｏＳｅａｌＴＭ粉末および予備混合したＣｏＳｅａｌＴＭ（例えば両方のＰＥＧ成分が粉末形態）を混合することにより生成した。凍結乾燥したコラーゲンスポンジをバックアップ支持体として使用することにより溶融した３成分混合物を搭載した。１つの実施形態において、図１０に示す通り、０．５〜１ｇの密閉材マトリックス組成物１０００をスポンジ１０１０の３Ｘ３ｃｍ２切片の上面に静置した。スポンジおよび密閉材マトリックスを１〜２分間６０〜７０℃でオーブン中で焼成し、そしてデシケーター中で冷却することにより空気との接触を最小限とするかまたは防止した。密閉材マトリックス粉末は粗放なフィルムを形成し、そしてスポンジに結合して溶融パッド１０２０を形成したように観察された。関連の実施形態においては、各々が３Ｘ３Ｘ０．３ｃｍ３の寸法を有する数種のスポンジを生成した。一部のスポンジは第１および第２の交差結合可能な成分およびヒドロゲル形成成分の３成分混合物でコーティングした。一部のスポンジは第１および第２の交差結合可能な成分の２成分混合物のみでコーティングした。全溶融パッドを肝臓患部においてインサイチュで試験した。結果を表９に示す。
【０２７１】
【表９】
2009545405.tif 000013
［０２８１］  関連する実施形態において、数種の粉末化組成物を生成した。一部の組成物は第１および第２の交差結合可能な成分およびヒドロゲル形成成分の３成分混合物を包含した。一部の組成物は第１および第２の交差結合可能な成分の２成分混合物のみを包含した。全ての組成物を肝臓患部においてインサイチュで試験した。結果を表１０に示す。
【０２７２】
【表１０】
2009545405.tif 000014
実施例２０：インビボの性能に対するガンマ線照射の作用
［０２８２］  粉末化密閉材マトリックス組成物およびスポンジ搭載密閉材マトリックス組成物を生成し、そして一部をガンマ線照射に付すことによりインビボの性能に対するガンマ線の作用を調べた。表１１に示す通り作用は観察されなかった。
【０２７３】
【表１１】
2009545405.tif 000015
実施例２１：インビボの性能に対するｐＨの作用
［０２８３］  インサイチュの交差結合に対するヒドロゲル形成成分のｐＨ値の作用および手動による適用方法の作用を評価するためにインビボの試験を実施した。第１の密閉材組成物中のｐＨ６．７５のＦｌｏＳｅａｌＴＭおよび第２の密閉材組成物中のｐＨ９．５のＦｌｏＳｅａｌＴＭを比較した。一部の場合においては、密閉材マトリックス組成物を手動により患部に押し当てて保持し、そして別の場合においては密閉材マトリックス組成物は保持することなく患部上に適用または静置した。ｐＨ６．７５のＦｌｏＳｅａｌＴＭを有する組成物はｐＨ９．５のＦｌｏＳｅａｌＴＭを有する組成物よりも約１０〜３０秒より緩徐な反応時間をもたらしたように観察された。例示される試験結果は表１２に示す通りである。ヒドロゲル形成成分のｐＨが交差結合反応の早期の段階において役割を果たしていると考えられる。ヒドロゲル形成成分のｐＨは湿潤環境（例えば出血が既に起こっている場合）におけるゲル形成の速度に影響する場合がある。一部の場合においては、交差結合が十分迅速に起こらない場合は、密閉材組成物は患部から押し出される場合がある。
【０２７４】
【表１２】
2009545405.tif 000016
実施例２２：ヒドロゲル形成成分としてのＳＵＲＧＩＦＯＡＭＴＭの使用
［０２８４］  粉末化ＣＯＨ１０２（ペンタエリスリトールテトラキス−  ［１−（１’−オキソ−５’−スクシニルペンテート）−２−ポリ（オキシエチレン）グリコール］エーテル）、粉末化ＣＯＨ２０６（ペンタエリスリトールテトラキス−［メルカプトエチル−ポリ（オキシエチレン）グリコール］エーテル）、およびＳＵＲＧＩＦＯＡＭＴＭ吸収性ゼラチン粉末（Ｅｔｈｉｃｏｎ，Ｓｏｍｅｒｖｉｌｌｅ，ＮＪ）の混合物を重量で１：１：２、１：１：４および１：１：８の比でブレンドし、そして改良型の５ｍＬ容のシリンジに充填した。得られた混合物は実質的に乾燥した自由流動性の粉末であった。各組成物につき、ブタ肝臓上の外科処置で形成した患部（約１ｃｍｘ１ｃｍｘ０．３ｃｍ深度）に対して穏やかな圧力により２ｇを適用した。組成物の各々につき、圧力は１分後に解放した。各組成物中のＣＯＨ１０２およびＣＯＨ２０６は患部の湿潤した環境において相互に反応し、ＳＵＲＧＩＦＯＡＭＴＭ粉末を配合した交差結合ヒドロゲルを生じ、そして患部を物理的に密閉した。組成物で治療した部位のいずれからも出血は観察されなかった。適用後５分間食塩水で治療患部を灌流した後には出血は観察されなかった。２時間後に治療部位を検査した際にも出血は観察されなかった。
【０２７５】
実施例２３：凝固剤を伴った密閉材マトリックス組成物のインビボの性能
［０２８５］  ４：１の重量比でＦｌｏＳｅａｌＴＭおよびＣｏＳｅａｌＴＭ（予備混合）を含有する密閉材マトリックス組成物粉末を生成した。一部の実施形態においては、この比は化学重合および組織への組成物の接着の所望のレベルを達成するために有効な交差結合の程度を与える。トロンビン粉末を種々の濃度において密閉材マトリックス組成物粉末に添加した。得られた混合物は、肝臓正方部における出血評点を計測し、そして得られた混合物の止血効率をトロンビンを含有しない密閉材マトリックス組成物と比較する動物試験において検討した。
【０２７６】
［０２８６］  被験材料にはペンタエリスリトールテトラキス［メルカプトエチルポリ（オキシエチレン）グリコール］エーテル０．１ｇ、ペンタエリスリトールテトラキス−［１−（１’−オキソ−５’−スクシンイミジルペンタノエート）−２−ポリ（オキシエチレン）グリコール］エーテル０．１ｇ、交差結合ゼラチン粒子（ＦｌｏＳｅａｌＴＭ）０．８ｇおよび種々の濃度（５ｋ、２．５ｋ、１．２５ｋ、および０．６２５ｋｕ／ｌ）のトロンビンを含有させた。混合実験において、得られた混合物の４成分を回転混合器を用いて混合した。再建実験においては、トロンビン溶液（１２５０ｕ／ｍｌ）４ｍｌをＦｌｏＳｅａｌ０．８ｇと混合し、次に２２時間凍結乾燥した。次に乾燥混合物を回転混合器を用いてＣｏＳｅａｌＴＭ粉末と混合した。如何なる特定の理論にも制約されないが、再建されたトロンビン製剤は、止血薬効を増強するために密閉材マトリックスバリア内にトロンビンが残存するようにＦｌｏＳｅａｌＴＭのマトリックス内に浸透しているトロンビン分子を含有していると考えられる。パッド実験においては、得られた４成分混合物（密閉材マトリックス組成物＋トロンビン）をＧｅｌｆｏａｍスポンジの情面に搭載し、混合物を溶融させ、そしてそれを冷却固化させることによりパッドを作成した。オーブン温度は約１分間約６０℃〜約６５℃に設定した。
【０２７７】
［０２８７］  インビボ試験においては、動物をヘパリン処理することにより凝固時間を活性化してベースラインより３〜５倍高値とした。製剤はブタ肝臓に対して外科処置により作成した肝臓正方部（１ｃｍｘ１ｃｍｘ０．２ｃｍ）の出血空間に対して検査した。患部は５分間の読み取り時間の後、即座に灌流することにより過剰な粉末を除去した。治療患部は１、５、１０および３０分に採点した。材料は血液との接触により重合し、次に堅固に患部に接着した。密閉材マトリックスバリアは出血区域を機械的に密閉し、組織に決着することにより機械的密閉材として機能した。インビトロの試験においては、トロンビンは５分間約６０℃で加熱したところ、完全に活性であることがわかった。作成したＧｅｌｆｏａｍパッドにおいて、トロンビンの活性は消失していることがわかった。
【０２７８】
［０２８８］  急性期のインビボの評価の結果を表１３に示す。患部からの出血は無出血の「０」から重度出血の「４」まで採点した。ここで観察された出血評点に基づけば、試験した全ての試料は出血を呈さなかった。密閉材マトリックス組成物へのトロンビンの添加に由来する有意な利点は観察されなかった。トロンビンの使用は、二次的な止血／血塊形成および創傷治癒を増強したものの、一次的な止血においては如何なる利益も示さなかった。
【０２７９】
【表１３】
2009545405.tif 000017
実施例２４：ゲル強度に対するＰＥＧ濃度の作用
［０２８９］  ゲル強度に対するＰＥＧ濃度の作用を本発明の１つの実施形態に従って表１４および図１１に示す。引っ張り試験をゲル形成後に実施した。ゲルはプラスチック鋳型（３ｘ１ｘ０．３ｃｍ）において３成分粉末（例えば第１および第２の交差結合可能な成分およびヒドロゲル形成成分を包含する密閉材マトリックス組成物）の反応を行うことにより生成した。ブタ血漿（１ｍｌ、Ｂａｘｔｅｒ動物番号Ｓ−２６４）を密閉材マトリックス組成物粉末（０．６０〜０．６５ｇ）に添加することによりゲル形成を開始し、次に約３０分間室温で硬化させた。ゲルの両端をシアノアクリレート糊剤を用いながらスコッチテープでテーピングすることにより引き離し作業のためのグリッピング空間を形成した（１ｘ１ｃｍ）。引っ張り試験によればピーク力（Ｎ）および最大負荷時の歪み（ｍｍ）を計測することによりゲルを破断するまで伸展させた。有効表面積は１ｘ０．３ｃｍであった。元の有効ゲル長は１．０ｃｍであった。ＣｈａｔｉｌｌｏｎＴＣＤ２０００テスターを用いて長方形のゲル形状が壊れるまで通常の応力を適用することを引っ張り強度の決定因子とした。試験の結果は、より高値の重合体の濃度が密閉材マトリックス組成物ゲルの強度を増大できることを示していた。
【０２８０】
【表１４】
2009545405.tif 000018
実施例２５：膨潤率に対するＰＥＧ濃度の作用
［０２９０］  膨潤率に対するＰＥＧ濃度の作用を本発明の１つの実施形態に従って図１２、１３および１４に示す。膨潤試験は密閉材マトリックス組成物ゲルの特性化に関して実施した。水性環境に接触した場合に、親水性重合体は膨潤してヒドロゲルを形成する。一旦ゲルが形成されれば、水分子は膨潤ＦｌｏＳｅａｌＴＭ粒子により形成されるむしろ弛緩したネットワークを通過して自由に拡散する。水をさらに添加すれば、ＣＯＨ１０２−ＣＯＨ２０６の接触が破壊され、個々の重合体分子は水に溶解する。密閉材マトリックス組成物ゲルは、重合体の４段階の異なる濃度（５％、１０％、２０％および３０％ｗ／ｗ）においてＣｏＳｅａｌＴＭおよびＦｌｏＳｅａｌＴＭを混合することにより、そして同じ量のブタ血漿（１．７ｍｌ／ｇ粉末）と反応させることにより生成した。ゲルを３０分間硬化させ、次に室温で食塩水中膨潤させた。周期的に緩衝液を排出し、残存ゲルの重量を測定した。ゲル重量の変化をモニタリングした。膨潤率Ｑは以下の式から計算した。
【０２８１】
Ｑ＝Ｗ＊／Ｗ
式中、Ｗ＊は湿潤重量であり、そしてＷは元の重量である。膨潤率は重合体濃度の上昇に従って上昇した。如何なる特定の理論にも制約されないが膨潤率の見かけの低下は、ゲルが緩徐に侵食されるに従ってゲル材料が損失することと解釈できると考えられる。実験の終点はゲルが崩壊して数個の小片になるか、または弛緩して脆弱となりすぎたためにゲルから遊離の緩衝液を傾瀉できなくなった時点として採点した。水はコア部に向けて継続的に浸透し、そして最終的にはゲルはＰＥＧとゼラチン粒子の粘稠な溶液に変換される。前材料が分断されるまで約２〜３週間を要した（図１４）。密閉材マトリックス組成物粉末中のパーセントＣｏＳｅａｌＴＭは密閉材マトリックス組成物ゲルの安定性に大きく影響する場合があると考えられる。密閉材マトリックス組成物ゲルの溶解速度は重合体の交差結合度に応じて変動する。結果によれば、より高濃度のＣｏＳｅａｌＴＭはより強力なゲル安定性をもたらすことができ、そして、より高度な膨潤ももたらすことができる。そのようなゲルのインビトロにおける相対的持続性はインビボにおけるものと同様であると期待してよい。
【０２８２】
［０２９１］  上記した実施例は本発明による組成物が有効な密閉材であり得ることを十分説明している。組成物は生理学的な液体または血液によりインサイチュで重合することができ、極めて堅固に組織を密閉またはそれに接着することができる。
【０２８３】
［０２９２］  上記した本発明は説明および例示により理解の明確化を目的として一部詳細に説明してきたが、当然ながら特定の変化および変更を添付請求項の範囲内で実施してよい。本明細書において考察したすべての特許、公開物、文献、書籍および他の参考資料は全ての目的のために参照により本明細書に組み込まれる。
【０２８４】
［０２９３］  実施例２６：特定の製剤の動物モデルにおける止血特性の評価
［０２９４］  製剤＃３３４−７７
［０２９５］  ＰＥＧ−Ａ粉末（ペンタエリスリトールテトラキス［メルカプトエチルポリオキシエチレン］エーテル、ＭＷ１０，０００）１ｇ、ＰＥＧ−Ｂ粉末（ペンタエリスリトールテトラキス−［１−１’−オキソ−５’−スクシンイミジルペンタノエート−２−ポリ−オキシエチレングリコール］エーテル、ＭＷ１０，０００）１ｇ、およびＦｌｏＳｅａｌＴＭ８ｇを混合ビン（５０ｍｌ容）に入れ、Ｉｎｖｅｒｓｉｎａタンブラーミキサー内に投入して混合した。３成分混合物を完全に混合されるまで１０分間ブレンドした。６シリンジ（５ｍｌ容）に混合物約１．５ｇを充填した。
【０２８５】
［０２９６］  製剤＃３３４−７７−１
［０２９７］  製剤＃３３４−７７の１．５ｇ試料をＧｅｌｆｏａｍ（３ｘ４ｃｍ２、圧縮Ｇｅｌｆｏａｍ、Ｕｐｊｏｈｎ製、ＮＤＣ０００９−０３５３−０１）の一片上に搭載した。上面に試料を搭載したＧｅｌｆｏａｍを試料が溶融し始めるまで１分間６０〜６５℃の真空オーブン中で焼成した。次に材料を冷却固化させた。Ｇｅｌｆｏｒｍ上に生じたケーキ状物２片を乾燥剤の入ったパウチに入れ、密閉した。
【０２８６】
［０２９８］  製剤＃３３４−７７−４
［０２９９］  製剤＃３３４−７７の試料をコラーゲンスポンジ１片上に置き、焼成した。スポンジはグルタルアルデヒド溶液（５ｋｐｐｍ）でコラーゲン繊維を軽度に交差結合することにより、そして、ＶｉｒＴｉｓ  Ｇｅｎｅｓｉｓフリーズドライヤーを用いてコラーゲン溶液（１．０％）を凍結乾燥することにより生成した。コラーゲンパッド（３ｘ４ｃｍ２）を製剤＃３３４−７７の１．５ｇ試料と慎重に積層し、次に試料が溶融し始めるまで１分間６０〜６５℃の真空オーブン中で加熱した。次に材料を冷却固化させた。得られたコラーゲンパッド各々を乾燥剤の入ったパウチに入れ、密閉した。
【０２８７】
［０３００］  方法
［０３０１］  外科処置操作
［０３０２］  動物（ＮＺＷウサギ、雌性、体重約３ｋｇ）を麻酔し、部分的肝切除の３０分前に４，０００ＩＵ／ｋｇの用量において静脈内ヘパリン処置した。
【０２８８】
［０３０３］  肝切除モデル
［０３０４］  正中開腹術を行い、肝臓の左葉を露出させ、クランプした。左側方肝葉の部分を切開した。滲出は被験品の適用により制御した。適用および硬化の時間は３００秒を超過しないように標準化した。止血クランプは一次止血が達成されたと予測された５分後に除去した。
【０２８９】
［０３０５］  肝臓擦過モデル
［０３０６］  正中開腹術を行い、肝臓の左葉を露出させた。直径２ｃｍおよび深度２ｍｍの表面環状患部を表面に擦過形成した。これは研磨ディスク装着部を有する切削機（穿孔研磨機ＰＲＯＸＸＯＮＦＢＳ２３０／Ｅ；グリッドサイズＰ４０、回転速度５０００／分）を用いて達成した。このようにして起こした得られた小血管または毛細血管の出血または滲出を製剤の１つを用いて治療した。
【０２９０】
［０３０７］  １５分間の観察時間を設けた後、左肝葉を腹腔におけるその元の位置に戻した。止血が達成されれば、腹部を閉鎖し、そして腹膜網を切開した（Ｓｙｎｔｈｏｆｉｌ（登録商標）２／０）。筋肉および皮膚の切開部は２段階方式の断続縫合としてＳｙｎｔｈｏｆｉｌ（登録商標）２／０をもちいて別個に縫合することになる。
【０２９１】
［０３０８］  ２４時間後、ペントバルビタールナトリウム（約３２０ｍｇｉｖ／匹）の過剰用量により麻酔中に屠殺した。安楽死の後、剖検を実施した。腹部は再出血に起因する血液および／または血塊の存在に関して目視により検査した。存在する場合は、血液および／または血塊を予備計量した外科用スワブで拭き取り、重量を測定した。止血が達成されていなければ動物をペントバルビタールナトリウム（約３２０ｍｇｉｖ／匹）の過剰用量により屠殺し、一次終点のみを評価した。
【０２９２】
［０３０９］  結果
［０３１０］  本試験は製剤＃３３４−７７、３３４−７７−１および３３４−７７−４の止血特性を評価することを目的とした。２種の極めて過酷な止血モデル、即ち高度にヘパリン処理したウサギにおける（１）肝臓切除、および（２）肝臓表面モデルを使用した。
【０２９３】
［０３１１］  製剤＃３３４−７７粉末を出血創傷上に適用した後、止血を達成するためには創傷表面に対して製剤を圧着することが有益であることがわかった。この圧力を乾燥した外科用ラテックスの手袋を用いて達成することは、粉末が創傷よりも手袋に対してより接着性であったため、困難であった。しかしながら、湿潤した手袋を用いた圧力の適用はより容易であった。製剤はそれが血液の水分と接触した後は堅固な膜を形成した。適用後、それは本実施例において使用した過酷なモデルにおいてさえも、多くの場合において、止血をもたらしている。初回適用後に止血が完全に達成されず、そして形成された層の下部で滲出出血があった場合は、さらに製剤＃３３４−７７を単に適用するだけでは出血を十分停止することは困難であった。十分注意しなければ粉末化された製剤が腹腔内に落下して腹腔に接着するため、出血を停止する必要がある場所のみに製剤の適用を限定することは困難であると考えられる。従って製剤＃３４４−７７の適切な適用が有用である。
【０２９４】
［０３１２］  これとは対照的に、製剤＃３４４−７７は組織の広い面積に渡って一定の厚みの層として、そして、止血を得るために十分な圧力において、容易に適用することができた。天然のコラーゲンパッドの裏装を有する製剤＃３４４−７７は適用後肝葉に接着して残存し、そして止血剤およびパッドを創傷および肝被膜上に糊付けする糊剤として機能していた。そのような生体分解性の裏装は止血を達成する場合に粉末成分に対してさらに薬効を付加することができる。生体分解性裏装はまた製剤に可撓性を与えることができ、これにより適用中に切開端部に渡って製剤を屈曲させることができる。この製剤で２匹を治療し、１匹は表面モデル、１は切開モデルとした。両方の動物において急性期の止血が達成された。表面モデルにおいて治療した動物のみが２４時間術後出血を呈することなく生存した。コラーゲンの毛羽は２４時間後もなお適用部位にあった。切開モデルにおいて治療した動物は一夜出血して死亡し、毛羽は脱落した。２つの実験の間の相違は、１つ目では毛羽が乾燥状態で創傷上に圧着されていたのに対し、２つ目では湿潤ガーゼスワブによる圧力を使用した点である。観察結果を表１５に示す。
【０２９５】
【表１５−１】
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【０２９６】
【表１５−２】
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【０２９７】
【表１５−３】
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【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図７Ｃ】
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【図７Ｄ】
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【図７Ｅ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図８Ｃ】
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【図８Ｄ】
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【図８Ｅ】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【手続補正書】
【提出日】平成21年4月3日(2009.4.3)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
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【国際調査報告】
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2009545405.tif 000045
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