(57)【要約】  【課題】  【解決手段】室温でプロナノディスパージョンであり、比較的粒子の大きさが大きい（少なくとも約１５０ｎｍ）の固体粒子を特徴とし、さらに体温でマイクロディスパージョンである新しいシクロスポリン調合物。【選択図】図２
2009529003.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
希釈液を追加した経口投与に適した調合物であって、
目への投与に適したキャリアと、シクロスポリンとを含むプロナノディスパージョン（pro-nanodispersion）を含むことを特徴とする調合物。
【請求項２】
請求項１に記載の調合物がさらに、好適な希釈液を含み、
前記プロナノディスパージョンが、前記好適な希釈液により希釈したディスパージョンを形成すること特徴とする調合物。
【請求項３】
請求項２に記載の調合物において、前記ディスパージョンが、最大で約５００ｎｍのシクロスポリンを含む粒子を含むことを特徴とする調合物。
【請求項４】
請求項１乃至３のいずれか１項に記載の調合物において、前記キャリアが、
（ａ）固形脂肪と、
（ｂ）エチルラクテートと、
（ｃ）ＨＬＢの低い界面活性剤とＨＬＢの高い界面活性剤とを含む少なくとも２つの界面活性剤であって、前記ＨＬＢの低い界面活性剤と前記ＨＬＢの高い界面活性剤のＨＫＢ値の差が少なくとも約５単位（unit）である界面活性剤と、
（ｄ）エトキシ化脂肪と、を含むことを特徴とする調合物。
【請求項５】
請求項１乃至４のいずれか１項に記載の調合物において、前記シクロスポリンは、希釈化したときに約０．０１から約１．０％（ｗ／ｖ）の量が存在することを特徴とする調合物。
【請求項６】
請求項５に記載の調合物において、前記シクロスポリンは、約０．１％（ｗ／ｖ）の量が存在することを特徴とする調合物。
【請求項７】
請求項４乃至６のいずれか１項に記載の調合物において、前記親水性の界面活性剤が、ポリソルベート２０を含むことを特徴とする調合物。
【請求項８】
請求項７に記載の調合物において、前記ポリソルベート２０が、最終的な調合物の１ｍｌあたりに約０．３から約４ｍｇ含まれることを特徴とする調合物。
【請求項９】
請求項４乃至８のいずれか１項に記載の調合物において、前記ＨＬＢの低い界面活性剤がオレイン酸ソルビタンを含むことを特徴とする調合物。
【請求項１０】
請求項９に記載の調合物において、前記オレイン酸ソルビタンは、最終的な調合物の１ｍｌあたりに約０．３から約４ｍｇの量が存在することを特徴とする調合物。
【請求項１１】
請求項４乃至１０のいずれか１項に記載の調合物において、前記固形脂肪がトリカプリン若しくはエチルステアレート、又はこれらの結合物を含むことを特徴とする調合物。
【請求項１２】
請求項１１に記載の調合物において、前記固形脂肪がトリカプリンを含み、当該トリカプリンは、最終的な調合物の１ｍｌあたりに約０．３から３ｍｇの量が存在することを特徴とする調合物。
【請求項１３】
請求項４乃至１２のいずれか１項に記載の調合物において、前記エトキシ化脂肪が、エトキシ化された水素化ヒマシ油を含むことを特徴とする調合物。
【請求項１４】
請求項１３に記載の調合物において、前記エトキシ化された水素化ヒマシ油は、最終的な調合物の１ｍｌあたりに約０．１から約１０ｍｇの量が存在することを特徴とする調合物。
【請求項１５】
請求項４乃至１４のいずれか１項に記載の調合物がさらにリン脂質を含むことを特徴とする調合物。
【請求項１６】
請求項１５に記載の調合物において、前記リン脂質がレシチンを含むことを特徴とする調合物。
【請求項１７】
請求項１６に記載の調合物において、前記レシチンは、最終的な調合物の１ｍｌあたりに約０．１から約２ｍｇの量が存在することを特徴とする調合物。
【請求項１８】
シクロスポリンの投与を必要とする患者の目にシクロスポリンを投与するための薬剤の製造のための請求項１乃至１７のいずれか１項に記載の調合物の使用。
【請求項１９】
シクロスポリン化合物を投与するための組成物であって、当該組成物が、
（ａ）水溶液と接触させることにより、少なくとも約３０Ｃの温度において約１００ｎｍよりも小さい大きさの粒子を形成可能であることを特徴とするプロナノディスパージョンであって、（ｉ）少なくとも１の界面活性剤と、（ｉｉ）低級アルキルヒドロキシアルカン酸エステルを含む両親媒性溶媒とを含むプロナノディスパージョンと、
（ｂ）薬剤効果を有する量の前記シクロスポリン化合物と、を含むことを特徴とする組成物。
【請求項２０】
請求項１９に記載の組成物において、前記低級アルキルヒドロキシアルカン酸エステルがエチルラクテートを含むことを特徴とする組成物。
【請求項２１】
請求項１９又は２０に記載の組成物において、
前記少なくとも１の界面活性剤が、少なくとも２の界面活性剤の結合物であり、
前記結合物の少なくとも１の界面活性剤は親水性の界面活性剤であり、
及び前記結合物の少なくとも１の界面活性剤が疎水性の界面活性剤であることを特徴とする組成物。
【請求項２２】
請求項２１に記載の組成物において、前記親水性の界面活性剤は、少なくとも約１０のＨＬＢ（親水性／脂溶性バランス）を有することを特徴とする組成物。
【請求項２３】
請求項２２に記載の組成物において、前記親水性の界面活性剤は、少なくとも約１４のＨＬＢを有することを特徴とする組成物。
【請求項２４】
請求項２２に記載の組成物において、前記疎水性の界面活性剤は、約５よりも小さいＨＬＢを有することを特徴とする組成物。
【請求項２５】
請求項２１に記載の組成物において、前記疎水性の界面活性剤は、ソルビタン脂肪酸エステルを含むことを特徴とする組成物。
【請求項２６】
請求項２１に記載の組成物において、前記結合物は、ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレートとソルビタンモノオレエートの結合物であることを特徴とする組成物。
【請求項２７】
請求項２１に記載の組成物がさらに、
（ｃ）エトキシ化脂肪を含むことを特徴とする組成物。
【請求項２８】
請求項２７に記載の組成物において、前記エトキシ化脂肪は、ポリエチレングリコール−水素化ヒマシ油で構成される群から選択されることを特徴とする組成物。
【請求項２９】
請求項２８に記載の組成物において、前記エトキシ化脂肪は、ＣｒｅｍｏｐｈｏｒとＣｒｅｍｏｐｈｏｒＲＨで構成される群から選択されることを特徴とする組成物。
【請求項３０】
請求項２７に記載の組成物がさらに、
（ｄ）リン脂質を含むことを特徴とする組成物。
【請求項３１】
請求項３０に記載の組成物において、前記リン脂質がレシチンを含むことを特徴とする組成物。
【請求項３２】
請求項３１に記載の組成物において、前記リン脂質が、卵のリン脂質（egg phospholipid）、ウシの心臓のリン脂質、及び大豆のリン脂質で構成される群から選択されることを特徴とする組成物。
【請求項３３】
請求項３０に記載の組成物がさらに、
（ｅ）脂肪酸エステルを含むことを特徴とする組成物。
【請求項３４】
請求項３３に記載の組成物において、前記脂肪酸エステルが室温で固体であることを特徴とする組成物。
【請求項３５】
請求項３４に記載の組成物において、前記脂肪酸エステルがトリグリセリドを含むことを特徴とする組成物。
【請求項３６】
請求項１９に記載の組成物において、前記粒子の大きさは、少なくとも約３０Ｃの温度において、約６０ｎｍよりも小さいことを特徴とする組成物。
【請求項３７】
請求項３６に記載の組成物において、前記粒子の大きさが、少なくとも約３０Ｃにおいて、約５ｎｍから約５０ｎｍの範囲内であることを特徴とする組成物。
【請求項３８】
請求項１９に記載の組成物において、前記シクロスポリン化合物がシクロスポリンであることを特徴とする組成物。
【請求項３９】
シクロスポリン化合物を投与するための組成物であって、薬剤効果を有する量の請求項１９に記載の化合物と、前記薬剤効果を有する量の請求項１９に記載の化合物の希釈液としての水溶液と、を含むことを特徴とする組成物。
【請求項４０】
シクロスポリン化合物を投与するための組成物であって、凍結乾燥した組成物を含む組成物において、
前記凍結乾燥した組成物が、薬剤効果を有する量の請求項１９に記載の組成物と、当該薬剤効果を有する量の請求項１９に記載の組成物の希釈液としての水溶液から形成されて、希釈液を形成し、
前記希釈液が凍結乾燥されて、前記凍結乾燥した組成物を形成することを特徴とする組成物。
【請求項４１】
シクロスポリン化合物の治療の必要性のある患者にシクロスポリン化合物を投与するための組成物の使用において、前記組成物が、薬剤効果を有する量の請求項１９乃至４０のいずれか１項に記載の組成物を含むことを特徴とする使用。
【請求項４２】
請求項４１に記載の使用において、前記患者は、自己免疫疾患と炎症状態で構成される群から選択される状態の治療の必要性があり、前記組成物がこれに適合していることを特徴とする使用。
【請求項４３】
請求項４２に記載の使用において、前記患者は、臓器又は組織移植の拒絶反応の治療の必要性があり、前記組成物がこれに適合していることを特徴とする使用。
【請求項４４】
請求項４２に記載の使用において、前記薬剤効果を有する量の請求項１９乃至４０のいずれか１項に記載の組成物が、経口投与により患者に投与され、前記組成物がこれに適合していることを特徴とする使用。
【請求項４５】
請求項４２に記載の使用において、前記薬剤効果を有する量の請求項１９乃至４０のいずれか１項に記載の組成物が、希釈液としての水溶液とともに、分散（dispersion）として投与され、前記組成物がこれに適合していることを特徴とする使用。
【請求項４６】
請求項４２に記載の使用において、前記薬剤効果を有する量の請求項１９乃至４０のいずれか１項に記載の組成物が、局所投与により患者に投与され、前記組成物がこれに適合していることを特徴とする使用。
【請求項４７】
請求項４２に記載の使用において、前記薬剤効果を有する量の請求項１９乃至４０のいずれか１項に記載の組成物が、非経口投与により患者に投与され、前記組成物がこれに適合していることを特徴とする使用。
【請求項４８】
請求項４２に記載の使用において、前記薬剤効果を有する量の請求項１９乃至４０のいずれか１項に記載の組成物が、カプセルとして投与され、前記組成物がこれに適合していることを特徴とする使用。
【請求項４９】
請求項４２に記載の使用において、前記薬剤効果を有する量の請求項１９乃至４０のいずれか１項に記載の組成物が、タブレットとして投与され、前記組成物がこれに適合していることを特徴とする使用。
【請求項５０】
請求項４２に記載の使用において、前記薬剤効果を有する量の請求項１９乃至４０のいずれか１項に記載の組成物が、パウダーとして投与され、前記組成物がこれに適合していることを特徴とする使用。
【請求項５１】
シクロスポリン化合物を含む調合物の保存安定性を判断する方法であって、当該方法が、
請求項１９乃至４０のいずれか１項に記載の組成物の粒子の大きさを分析するステップを具え、前記粒子の大きさが約１００ｎｍよりも小さいに場合、前記組成物が安定していると判断されることを特徴とする方法。
【請求項５２】
目に局所投与するための調合物であって、
（ａ）（ｉ）固形脂肪と、（ｉｉ）両親媒性の溶媒と、（ｉｉｉ）少なくとも１の親水性の界面活性剤と、を含むプロナノディスパージョンと、
（ｂ）薬剤効果を有する量のシクロスポリン化合物とを含み、
成分が目の投与に適合していることを特徴とする調合物。
【請求項５３】
請求項５２に記載の調合物において、前記シクロスポリンは、約０．０１から約１．０％（ｗ／ｖ）の量が存在することを特徴とする調合物。
【請求項５４】
請求項５３に記載の調合物において、前記シクロスポリンは、約０．１％（ｗ／ｖ）の量が存在することを特徴とする調合物。
【請求項５５】
請求項５２乃至５４のいずれか１項に記載の調合物において、前記親水性の界面活性剤がポリソルベート２０を含むことを特徴とする調合物。
【請求項５６】
請求項５５に記載の調合物において、前記ポリソルベート２０が、最終的な調合物の１ｍｌあたりに約０．３から約４ｍｇの量が存在することを特徴とする調合物。
【請求項５７】
請求項５２乃至５６のいずれか１項に記載の調合物がさらに、ＨＬＢの低い界面活性剤を含み、前記ＨＬＢの低い界面活性剤と前記親水性の界面活性剤のＨＬＢ値の差が、少なくとも約５単位（unit）であることを特徴とする調合物。
【請求項５８】
請求項５７に記載の調合物において、前記ＨＬＢの低い界面活性剤がオレイン酸ソルビタンを含むことを特徴とする調合物。
【請求項５９】
請求項５８に記載の調合物において、前記オレイン酸ソルビタンは、最終的な調合物の１ｍｌあたりに約０．３から約４ｍｇの量が存在することを特徴とする調合物。
【請求項６０】
請求項５２乃至５９のいずれか１項に記載の調合物において、前記固形脂肪が、トリカプリン若しくはエチルステアレート、又はこれらの結合物を含むことを特徴とする調合物。
【請求項６１】
請求項６０に記載の調合物において、前記固形脂肪がトリカプリンを含むことを特徴とする調合物。
【請求項６２】
請求項６１に記載の調合物において、前記トリカプリンは、最終的な調合物の１ｍｌあたりに約０．３から約３ｍｇの量が存在することを特徴とする調合物。
【請求項６３】
請求項５２乃至６２のいずれか１項に記載の調合物において、前記界面活性剤がさらに、エトキシ化脂肪を含むことを特徴とする調合物。
【請求項６４】
請求項５２乃至６３のいずれか１項に記載の調合物において、前記エトキシ化脂肪が、エトキシ化された水素化ヒマシ油を含むことを特徴とする調合物。
【請求項６５】
請求項６４に記載の調合物において、前記エトキシ化された水素化ヒマシ油は、最終的な調合物の１ｍｌあたりに約０．１から約２ｍｇの量が存在することを特徴とする調合物。
【請求項６６】
請求項５２乃至６５のいずれか１項に記載の調合物において、前記溶媒がエチルラクテートを含むことを特徴とする調合物。
【請求項６７】
請求項５２乃至６５のいずれか１項に記載の調合物において、前記溶媒がＮ−メチルピロリドンを含むことを特徴とする調合物。
【請求項６８】
請求項５２乃至６７のいずれか１項に記載の調合物がさらに、リン脂質を含むことを特徴とする調合物。
【請求項６９】
請求項６８に記載の調合物において、前記リン脂質がレシチンを含むことを特徴とする調合物。
【請求項７０】
請求項６９に記載の調合物において、前記レシチンは、最終的な調合物の１ｍｌあたりに約０．１から約２ｍｇの量が存在することを特徴とする調合物。
【請求項７１】
請求項５２乃至７０のいずれか１項に記載の調合物がさらに、好適な希釈液を含むことを特徴とする調合物。
【請求項７２】
目の病気を治療するための請求項５１乃至７１のいずれか１項に記載する調合物の使用。
【請求項７３】
請求項７２に記載の使用において、前記好適な希釈液が、活性成分を含む調合物と別に保存され、前記調合物を投与する前に、前記好適な希釈液が前記調合物と混合されることを特徴とする使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、シクロスポリン（cyclosporin）を送達するためのプロナノディスパージョン（pro-nanodispersion）の調整に関し、特に、シクロスポリンや、例えば眼病の投与に関する関連物質の高いバイオアベイラビリティを有する送達システムを提供するプロナノディスパージョンの調整に関する。
【背景技術】
【０００２】
現在、多くのディスパレージョンシステムが、物質のキャリア、具体的には生物活性化合物として利用され、あるいはキャリアとしての利用について研究されている。これらのシステムは、送達時に物質を周囲の環境から保護し、且つターゲット領域に対する物質の放出を制御するように設計されている。このような事例では、ディスパレージョンを用いて体内の特定の部位を対象とすることが目的である。他の事例では、注入部位における貯蔵器として機能するドラッグキャリアシステムを用意することが目的である。
【０００３】
調合薬及び美容整形のために用いられるディスパレージョンシステムは、懸濁液（suspension）又はエマルジョンのいずれかとして分類できる。懸濁液は、大きさが数ナノメートルから最大で数百ミクロンの範囲の固体粒子として定義され、懸濁化剤を用いて水媒体又は非水媒体に拡散する。固体粒子は、ミクロスフェア、マイクロカプセル、及びナノスフェアを含む。
【０００４】
一方、エマルジョンは一の液体の拡散として定義され、界面活性剤や脂質などの乳化剤の界面薄膜により安定する。エマルジョンの長い歴史にもかかわらず、エマルジョンは、内在する不安定性により、今日では他の多くの投薬形態に比べて使われることは少ない。エマルジョン形成（emulsion formulation）は、油中水型乳剤及び水中油型乳剤、多重水／油／水乳剤、マイクロエマルジョン、微液滴、及びリポソームを含む。
【０００５】
マイクロエマルジョンの化合物が接触するときに自然に又はほぼ自然に形成されたマイクロエマルジョンは、透明またはほぼ透明である。
【０００６】
マイクロエマルジョンは、熱力学的に安定しており、約２００ｎｍよりも小さい拡散した粒子や飛沫を含んでいる。通常のマクロエマルジョンは、約１５０ｎｍよりも小さい平均直径を有する飛沫や粒子を特徴とする。これらの粒子は、薄膜状、六角形、又は等方性で対称的な液晶などの他の構造が可能であるが、球状でもよい。通常、マイクロエマルジョンは、２４時間以上安定している。
【０００７】
マイクロエマルジョンは、例えば、希釈化された水、あるいは経口適用後の胃液などの水媒体中で自然にマイクロエマルジョンを形成する化合物である「マイクロエマルジョン前濃縮物（preconcentrate）」として利用できる。水中でのマイクロエマルジョンの希釈は、例えば、約１：１から約１：１０の希釈とすることができる。
【０００８】
前述したように、エマルージョンによる送達システムは特定の応用例で有用である一方、送達ベシクル（vesicle）は、液体／膜／液体構造の繊細な特性のため狂喜（rapture）の影響を受け易い。また、エマルジョンによる送達システムは放出時間が比較的短い。さらに、後の再構成のための貯蔵に利用される水媒体からエマルジョンベースのベシクルを分離するのは困難である。
【０００９】
これらの困難にもかかわらず、マイクロエマルジョンは、特定の種類の調合薬、具体的には、環状オリゴペプチドであるシクロスポリン類のメンバなどの特定の化合物のための唯一の成功した送達システムである。シクロスポリン類は、例えば、本技術分野で周知の免疫抑制剤、抗寄生虫剤、多剤耐性の反対の薬剤などの調合薬の効用を有する物質を含む。このようなシクロスポリンの例は、シクロスポリンＡ（「シクロスポリン（Ciclosporin）」として知られており、ここではそのように称する）、シクロスポリンＧ、［０−（２−ヒドロキシエチル）−（Ｄ）セリン（Ser）］２−シクロスポリン、及び［３’−ジヒドロキシ（deshydroxy）−３’−ケトン（ket）−ＭｅＢｍｔ］’−［バリン（Val）］２−シクロスポリンを含むがこれに限定されるものではない。
【００１０】
分離される第１のシクロスポリンは、自然発生の菌代謝シクロスポリン（fungal metabolite Ciclosporin）であった。シクロスポリンは、調合物（formula）（１）のシクロスポリンであり、
2009529003.tif 000003
ここで、ＭｅＢｍｔは、調合物（ＩＩ）のＮ−メチル−（４Ｒ）−４ｂｕｔ−２Ｅ−ｅｎ−ｌ−ｙ  １−４−メチル−（Ｌ）スレオニル（threonyl）残留物（residue）を意味し、
2009529003.tif 000004
ここでは、ｘ−ｙはＣＨ＝ＣＨ−（トランス）である。さらに、シクロスポリンは、自己免疫疾患や炎症性疾患の治療のために研究されている。
【００１１】
シクロスポリンの最初の発見により、様々な自然発生のシクロスポリンが分離され、Ｔ特定されている。さらに、多くの非自然のシクロスポリンは、完全合成（total-synthetic）又は半合成手段により、あるいは改良された培養技術を利用することにより用意される。現在、シクロスポリンを含む類（class）は、例えば、自然発生のシクロスポリンＡからＺ［Traber等のHelv. C'hir. Acta.60:1247-1255.1977、Traber等のHel v. Chim Acto. 65:1655-1667.1982、Kobe等のEurop.. J. App. Microbio. and Biotech.,14:273-240(1982)、及びvon Wartburg等のProgress in Allergy, 38:28-45(1986)を参照］と、様々な非自然のシクロスポリン誘導体（derivative）及び人工又は合成のシクロスポリンを含み、これらは、上記の調合物（ＩＩ）の−ＭｅＢｍｔ−残留物のｘ−ｙ部分が−ＣＨ２−ＣＨ２−のｘ−ｙを与えいるために飽和しているいわゆるジヒドロシクロスポリン、誘導体化されたシクロスポリン（例えば、さらなる置換基が、シクロスポリン分子の３つの位置において、サルコシンの残留物（sarcosyl residue）の炭素原子で導入される）、−ＭｅＢｍｔ−残留物が異性体で存在するシクロスポリン（例えば、−ＭｅＢｍｔ−残留物の６’及び７’の位置における構造がトランスではなくシスである）、及びアミノ酸変異体がペプチド配列の特定の位置で組み込まれるシクロスポリンを含む。シクロスポリン類のこれらのメンバの多くは、シクロスポリンの効果と比較可能な調合薬の効果を示している。
【００１２】
残念ながら、シクロスポリン類のメンバの特性に固有と思われるシクロスポリンの問題の効果的な投与は、多くの困難に直面している。シクロスポリンは、特徴として高度の疎水性を有しており、したがって親油性キャリアを必要とする。特に、好適なキャリアの選択は、これらの化合物のバイオアベイラビリティが、キャリアの特性に応じて高度に利用可能であることが本技術分野で知られているため、シクロスポリンの投与にとって重要である。さらに、これらの化合物は、個人によって大きく変化するバイオアベイラビリティを有することが知られている。このような変化は、腎臓毒性などのシクロスポリンの副作用を考えると特に危険である。したがって、好適なキャリアは、個人でほぼ一定のシクロスポリンの優れたバイオアベイラビリティを提供すべきである。
【００１３】
シクロスポリンの吸収と代謝は、様々な患者にとって利用可能性が高い。経口投与の後に、シクロスポリンの排出は第１に胆汁であり、１回分（親薬物及び代謝産物）のたった６％が尿に排出される。経口投与した薬を血液から除去することは通常、５から１８時間の間の最終的な半減期を有する二相である。投与された一回分と障害とのシクロスポリンの関係は、投与量の範囲で線形になる。
【００１４】
経口投与の後、１．５から２．０時間のＴｍａｘ範囲と食物の摂取は、ＡＵＣとＣｍａｘで僅かに減少することが知られている。
【００１５】
薬は、肝臓に存在するシトクロムＰ４５０−３Ａにより、または腸や肝臓のＣＹＰ−３Ａによっても多量に新陳代謝される。また、薬はＰ糖タンパク質（ＰＧＰ）のための基質である。少なくとも２５の代謝産物が、人間の胆汁、便、血液、及び尿で確認されている。免疫抑制活性は、主に親薬物が原因である（Physician Desk Reference 59th edition. Thomson NJ, 2005;2436-2353）。
【００１６】
前述したように、シクロスポリンは、マイクロエマルジョンキャリアを用いて投与される。本技術分野で知られているこのようなキャリアの調合物によると、キャリアは通常、液体ＰＥＧ２００−６００エチレン又はプロピレングリコル、エタノール又はプロパノール、グリセリン、スクロースの水溶性の脂肪酸Ｃ６−Ｃ１８エステル、ジメチルイソソルビド(dimethylisosorbide)、酢酸エチル、グリコフロール（環状ポリオールの脂肪酸誘導体）、トコフェロールのＰＥＧ誘導体、又はＰＥＧ脂肪酸エステルなどの親水性の溶媒と、Ｔｗｅｅｎ２０、様々なＰＥＧ（ポリエチレングリコール）誘導体又はリン脂質などの界面活性剤と、コーンオイル及び植物の他の油並びに油の混合物などの不水溶性の油と、両親媒性の溶媒、乳化剤、界面活性剤等として利用されるキャスターオイル又は他の脂肪のＣｒｅｍｏｐｈｏｒ及び同様のＰＥＧ誘導体とを含む。残念ながら、これらの背景技術の調合物は、シクロスポリンの高いバイオアベイラビリティを提供しない。
【００１７】
現在商業的に利用可能な調合物が、Sandoz A. G.の米国特許第５，３４２，６２５に開示されている。この調合物は、親水性の相（phase）、脂溶性の相、及び界面活性剤を含む。親水性の相は、例えば、Ｃ１ー５アルキルジ−又はモノ又はポリ−オキシ−Ｃ２  ２アルカニジオル（2alkanediol）の部分的エーテルでもよい。
【００１８】
SandozのＰＣＴ出願第ＷＯ９６／１３２７３は、シクロスポリンや、ラパマイシンなどの他のマクロライド薬の化合物を示しており、これは、ジメチルイソソルビド及び／又は低アルキルアルカンエステルを含む親水性の相と、油溶性の相と、界面活性剤とを含む。拡散後の粒子の大きさは２００ｎｍとすることができるが、好適には１００ｎｍ以下である。親水性の相は、ＰＥＧ、プロピレングリコール、及びグリコフロール又はジメチルイソソルビド（二環状エーテル）である。シクロスポリン及びキャリアを含む化合物のバイオアベイラビリティは開示されていない。
【００１９】
また、SandozのＰＣＴ出願第ＷＯ９７／１９６９２は、ＰＥＧヒドロキシステアリン酸や、エタノールなどの低アルコール、又はプロピレングリコールなどの飽和ヒドロキシ脂肪酸のＰＥＧ誘導体に基づく化合物を開示している。さらに、このような化合物のバイオアベイラビリティは開示されていない。NovartisのＰＣＴ出願第ＷＯ９８／３３５１２は、油を含まないシクロスポリンの経口投与のための化合物が開示されている。代わりに、これらの化合物は、ＨＬＢが１０以上で、ポリエチレングリコール及び／又は低アルコール（１２％以下）である親水性の相を有する界面活性剤を含んでいる。調合物は、大きさが１０ｎｍから１５０ｎｍの粒子の拡散時に供給するプレコンセントレート（preconcentrate）である。開示されているこれらの化合物の利点は、硬カプセル内で安定する能力を有することである。しかしながら、この化合物を有するシクロスポリンのバイオアベイラビリティに関連する特定のデータが開示されていない。前述したように、シクロスポリンのバイオアベイラビリティは、カテーテルによって、高度に利用可能であることが知られている。
【００２０】
POLI IndustriaのＰＣＴ出願第ＷＯ９７／０４７９５は、一のポリマー、線形又は架橋ＰＥＧ及びポリ（アクリル）又はこれらの混合物及び短アルコール（short alcohol）を有する脂肪酸のモノエステルを含む化合物が記されてる。さらに、このような化合物のバイオアベイラビリティは開示されていない。
【００２１】
Hanmi Phamの米国特許第５，６０３，９５１及び５，６３９，４７４は、cosurfactantと第一級アルコール、中鎖脂肪酸トリグリセリド、及び軟質のゼラチンカプセル内で調合されるＴｗｅｅｎ２０などのＨＬＢ値が１０から１７の界面活性剤などのジメチルイソソルビドの化合物が記されている。粒子の大きさは約１００ｎｍである。さらに、このような化合物のバイオアベイラビリティは開示されていない。
【００２２】
Biogelの米国特許第５，５８３，１０５は、トコフェロールのＰＥＧエステルと脂溶性溶媒、両親媒性溶媒、及びエタノールからなるシクロスポリンの調合物が記されている。これもまた、このような化合物のバイオアベイラビリティは開示されていない。
【００２３】
Dr. Rentschler GmbHの米国特許第５，６１４，４９１は、乳化剤としてのＰＥＧ脂肪酸モノエステルと、溶媒としてのポリオールの調合物が記されている。Shermanの米国特許第５，７９８，３３３は、トコフェルソラン（Tocophersolan）と多価アルコールで構成される調合物が記されている。トコフェルソランは、７：１の割合でシクロスポリンのみを溶解する水溶性の界面活性剤である。Sangstatの米国特許第５，８２７，８２２は、アルコールと、大きさが２００ｎｍから４００ｎｍの粒子を形成するＰＥＧ界面活性剤の調合物である。
【００２４】
Ciplaの欧州特許出願第ＥＰ０７０２３７Ａ１は、植物油のトリグリセリド（ヒマシ油、ピーナッツ油、又はココナッツ油）、ホスホリピド、界面活性剤（Ｔｗｅｅｎ２０、ポリオキシ−４０−水素化されたヒマシ油（hydrogenated castor oil））、及び親水性溶媒であるプロピレングリコールを含む化合物が記されている。
【００２５】
ミズシマユタカの日本の特許出願第６１−２４９９１８は、点眼薬を特徴とするシクロスポリンの調合物が記されている。この目薬は、大豆油、綿実油、ゴマ油、ひまわり油、コーンオイルなどの油、スクアレン、エイコサペンタエン酸とそのエステル、アゾンを使用している。開示されている溶媒は、グリセロール及び水である。
【００２６】
スイスの特許第６４１３５６は、ポリアルキレングリコールを有するトリグリセドのエステル交換の生成物を特徴とするシクロスポリンの調合物が記されている。これらの生成物は、コーンオイル、アーモンドオイル、ピーナッツ油、オリーブオイル及び／又はパーム油などの天然油のトリグリセリド又は植物油のトリグリセドの２つのモル分率のエステル交換の生成物である。
【００２７】
さらに、このような化合物と共に投与されるシクロスポリンのバイオアベイラビリティは開示されていない。
【００２８】
これらの開示された背景技術のキャリアの調合物はいずれも、ヒドロキシアルカン酸の低級アルキルエステルである有機溶媒を特徴としていない。また、これらの開示されている背景技術のキャリアの調合物はいずれも、高いＨＬＢを有する界面活性剤と低いＨＬＢを有する界面活性剤の結合物（combination）を特徴としていない。さらに、これらの背景技術のキャリアの調合物はいずれも、高いバイオアベイラビリティを有するものとして開示されていない。さらに、これらの背景技術のキャリアの調合物はいずれも、室温で水溶媒で混合した場合に拡散で生じる中心の成分としての固形脂肪を有するものとして開示されていない。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００２９】
したがって、シクロスポリンの投与のため、特に経口投与のために、高いバイオアベイラビリティを有し、好適にはヒドロキシアルカン酸の低級アルキルエステルである有機溶媒と、好適には高いＨＬＢを有する界面活性剤と低いＨＬＢを有する界面活性剤の結合物である界面活性剤とを含む化合物であって、固形脂肪を含んでもよい化合物の満たされていない必要性があり、これを有することは有用である。
【００３０】
本発明は、シクロスポリンを投与するための新しい調合物を提供することによりこれらの背景技術の問題を解決する。
【００３１】
発明者は、予想外に新しい調合物を発見し、この調合物は、室温でのプロナノディスパージョンであり、以下に詳細に記載するように比較的粒子のサイズが大きい固形粒子を特徴としており、体温で微粒拡散になる。さらに驚くことに、発明者は、調合物が室温で軟質のゼラチンに格納したときに２年以上安定しており、同じ化合物と粒子サイズを維持することを発見した。さらに、新しい調合物は、以下に詳細に説明するような優れたバイオアベイラビリティ特性を提供する。
【００３２】
本発明に係る調合物は、ヒドロキシアルカン酸の低級アルキルエステルにより特徴付けられる両親媒性の両親媒性の溶媒と、好適には高いＨＬＢ（親水性／脂溶性バランス）を有する界面活性剤と低いＨＬＢを有する界面活性剤との結合物と、任意及び好適には固形脂肪を含むことを特徴とする。この固形脂肪は、室温で固体であるが、好適には少なくとも約３０度で溶け、好適には体温で溶ける脂肪酸エステルなどの脂肪である。固形脂肪は、トリカプリン（tricaprin）などのトリグリセドを含むことが好適である。好適な固形脂肪のその他の非限定的な例は、トリラウリン、１０以上の炭素の脂肪酸と脂肪アルコール、室温で固体であり、且つ少なくとも約３０度で溶け、好適には体温で溶けるエチルステアレートや水素化トリグリセリドなどの脂肪酸のエステルを含む。
【００３３】
任意及び好適には、ＨＬＢが低い界面活性剤のＨＬＢとＨＬＢが高い界面活性剤のＨＬＢとの差は大きく、低いＨＬＢ界面活性剤は、約６以下のＨＬＢを有するのが好適である一方、高いＨＬＢ界面活性剤は、約１０以上のＨＬＢを有することが好適である。具体的には、低いＨＬＢ界面活性剤は、約４以下のＨＬＢを有する一方、高いＨＬＢ界面活性剤は、約１４以上のＨＬＢを有する。高いＨＬＢ界面活性剤は、ポリソルベート２０（例えば、Ｔｗｅｅｎ２０）を含むことが好適であり、低いＨＬＢ界面活性剤は、オレイン酸ソルビタン（例えば、Ｓｐａｎ８０）を含むことが好適である。ポリソルベート２０は、１６．７のＨＬＢを有する一方、オレイン酸ソルビタンは、４．３のＨＬＢを有する。
【００３４】
また、調合物は、ポリエチレングリコールとポリプロピレングリコールのブロック共重合体であるＣｒｅｍｏｐｈｏｒ又はＰｏｌｏｘａｍｅｒなどのリン脂質とエトキシ化脂肪を特徴とする。
【００３５】
生成される調合物の粒子の好適な平均直径は、室温（２５Ｃ）で約１５０ｎｍ以上であることが好適であるが、約１００ｎｍ以下であることが好適であり、約６０ｎｍ以下であることがより好適であり、少なくとも３３Ｃで約５ｎｍから約５０ｎｍであることが最適であり、この粒子の大きさは体温で実現される。以下では、「プロナノディスパージョン」の語は、平均直径が約１５０ｎｍ以下であり、水媒体、例えば、希釈化された水、又は経口摂取後の胃液中でナノディスパージョン又はマイクロディスパージョンを自然に形成する飛沫又は粒子を特徴とする化合物を含む。水中のプロナノディスパージョンの希釈化は、例えば、約１：１の希釈（fold dilution）から約１：１０００の希釈とすることができる。以下では、「ナノディスパージョン」の語は、体温で１００ナノメートル以下の粒子又はベシクル（vesicle）の水溶媒中のディスパージョン（拡散）を意味する。
【００３６】
本発明は、添付図面を参照して例示により本明細書で説明される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３７】
本発明は、シクロスポリンの投与のための新しい調合物に関する。
【００３８】
この調合物は、ヒドロキシアルカン酸の低級アルキルエステルを特徴とする両親媒性の溶媒と、好適には高いＨＬＢ（親水性／脂肪親和性バランス）を有する界面活性剤と低いＨＬＢを有する界面活性剤との結合物である界面活性剤とを特徴とする。任意及び好適には、調合物はさらに、室温で固体であるが、３０°Ｃ以上で溶けるのが好適な固形脂肪を特徴とする。高いＨＬＢの界面活性剤はポリソルベート２０（例えばＴｗｅｅｎ２０）を含むことが好適であり、低いＨＬＢの界面活性剤はソルビタン（例えばＳｐａｎ８０）を含むことが好適である。両親媒性の溶媒は乳酸エチルであることが好適である。乳酸エチルは、オクタノール／水係数が０．００６であることを特徴とする両親媒性の溶媒である。固形脂肪は、脂肪酸エステルであることが好適であり、トリグリセリドであることがさらに好適である。
【００３９】
任意及び好適には、調合物はリン脂質を含む。任意及び好適には、調合物は、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ又は別の同様の物質などのエトキシ化された脂肪を含む。
【００４０】
以下、「固形脂肪」及び「液体脂肪」の語はそれぞれ、室温で固体又は液体である脂肪を意味する。本発明の化合物は、エタノールなどのアルキルアルコールを含まないことが好適である。
【００４１】
少なくとも約３０Ｃで結果として生じる調合物の好適な粒子の大きさは約１００ｎｍ以下であり、さらに好適には約６０ｎｍ以下であり、約５ｎｍから約５０ｎｍであることが最適である。実際には、以下に詳細に説明するように、結果として生じる調合物は、体温で約１００ｎｍ以下の大きさの粒子を有しており、シクロスポリンの投与に好適である。驚くことに、調合物が固体のマイクロディスパージョンを形成するときの室温における本発明の調合物の粒子の大きさは約１５０ｎｍ以下であり、従来技術とは対照的に、患者への投与において好適な粒子の大きさを実現できることを発見した。
【００４２】
さらに驚くことに、発明者は、室温における粒子の大きさが、背景技術の教示とは対照的にバイオアベイラビリティを制御しないことを発見した。バイオアベイラビリティが低い室温の教示された粒子の大きさを有する調合物を有することが可能である一方、他の調合物（本発明の調合物など）は、背景技術が教示するよりも大きい粒子を有し、しかしながら優れたバイオアベイラビリティを有する。また、背景技術の教示とは反対に、プロナノディスパージョンは、熱を加えることなく所望の大きさの粒子の水で希釈されたマイクロディスパージョンを自然に形成しない（すなわち、体温が約３７°Ｃのときに、１００ナノメートル以下の大きさの粒子を取得するための患者の体内の存在）。
【００４３】
以下により詳細に説明するように、これらの化合物の結合物は、予想外に、シクロスポリンの調合物が事前に示したよりも高いバイオアベイラビリティを提供することを示している。さらに、本発明の調合物は、優れた安定特性を得るための酸化防止剤などの安定剤を必要としない利点がある。単一のメカニズムに限定することを願うことなく、本発明の調合物の優れた安定性は、以下により詳細に説明するようにエチルラクテートなどの溶媒の使用による。
【００４４】
エチルラクテートや、この溶媒の属のメンバは、予想外に本発明の調合物のような調合物のためのよい特性を有している。例えば、エチルラクテートは、エタノールよりも疎水性があるため、有機溶媒や水性溶媒に混和できる。エチルラクテートは、エタノールよりも安定性が高い。エタノールは、対応する貯蔵安定性が低い揮発性の高い溶媒であり、現在利用可能な背景技術の調合物でのエタノールの使用は、これらの調合物の明らかな不利益を有する。
【００４５】
さらに、これらの背景技術の調合物は、アルコールを安定化するためにエタノールとプロピレングリコールとの結合物を必要とし、これは、エタノールを調合物に組み込むことの別の不利益であり、本発明の調合物により解決される不利益である。
【００４６】
本発明は、以下の例を参照してより容易に理解できるであろう。一般に「シクロスポリン」への言及は、薬剤効果を有するシクロスポリン類のメンバを示すことに留意すべきである。シクロスポリン類の特定の好適なメンバは、シクロスポリン（シクロスポリンＡ）である。本発明のプロナノディスパレージョン組成の調合は、初めに以下の概略的な説明を参照し、次に以下に非限定的な本発明の化合物の調合と投与の例を参照することにより説明される。
【００４７】
両親媒性の溶媒
初めに、前述したように、好適な有機溶媒が選択される。溶媒は、ヒドロキシアルカン酸の低級アルキルエステル群から選択されることが好適である。以下では、「低級アルキル」の語は、Ｃ１からＣ４、例えばエチルを含む。本発明の好適な両親性の溶媒は、Ｃ１−４アルキルヒドロキシアルカン酸エステルである。両親性の溶媒は、エチルラクテートを含むことがさらに好適である。
【００４８】
エチルラクテート（２−ヒドロキシプロパン酸エチルエステル）は、水、アルコール及びエーテルと混和可能な無色の液体である。エチルラクテートは、経口量においてマウスの５ｇ／ｋｇよりも高いＬＤ５０を有する人間の投与に好適であると考えられるが、驚くことに、エチルラクテートは、医薬化合物に好適な成分として予め教示されていなかった。
【００４９】
エチルラクテートは両親媒性であり、したがって多くの特徴を有する。例えば、有機溶媒から水へのエチルラクテートの拡散は、エタノール又はプロパノールなどの親水性の高い溶媒と比較してゆっくりであり、且つ制御される。これは、水媒体に触れたときに急速な拡散が急速な沈殿を生じる一方、ゆっくり拡散する溶媒が、形成されるドロップが自然に形成されないように所望の大きさの粒子を形成しないような重要な特徴である。
【００５０】
単一の仮説により限定することを要求することなく、本発明の調合の動作の一の重要なパラメータは、拡散率がプロナノディスパージョンの粒子の大きさと化合物を決定するため、プロナノディスパージョンの疎水性の混合物からの溶媒の拡散率である。さらに単一の仮説に限定されることなく、急速な拡散率は、水媒体から大きな粒子が沈殿させる一方、プロナノディスパージョンから胃液へのゆっくりの拡散率は、不適切な粒子の組成と大きな粒子の沈殿を生成し、あるいはシクロスポリンが、この組成の固形脂肪のキャリア内で不完全に統合される。また、これは、粒子の形成処理を阻害する１以上の成分を胃液内で生成する。したがって、油滴から水媒体への拡散率は、急速でもなく遅くもないため、非常に重要な特徴である。拡散率は分配係数に関連する。
【００５１】
エチルラクテートの分配係数は、疎水性と親水性とのちょうど境界上であり、値が０．０６であり、これは、溶媒の５０％がオクタノールの疎水性相であり、５０％が水位相である。したがって、拡散率はゆっくりでもなく急速でもないが、実際にはちょうど中間である。
【００５２】
化学の観点では、エチルラクテートは、アルコールとエステルの特性を組み合わせており、エステル群が疎水性を提供する一方、ヒドロキシル基が親水性と、水と結合する水素を形成する能力を提供する。
【００５３】
界面活性剤
第２に、好適な界面活性剤は、選択されることが好適であり、少なくとも約１０の高いＨＬＢ（親水性／脂肪親和性バランス）の界面活性剤と、約６以下の低いＨＬＢの界面活性剤との結合物が好適である。「ＨＬＢ」の語は、界面活性剤の親水性／脂肪親和性バランスを意味する。ＨＬＢの高い界面活性剤は親水性である一方、ＨＬＢの低い界面活性剤は疎水性である。
【００５４】
したがって、ＨＬＢの高い界面活性剤とＨＬＢの低い界面活性剤の結合物は、本発明の化合物に好適であるため、実際には、親水性の界面活性剤と疎水性の界面活性剤の結合物である。この結合物は、シクロスポリンの薬剤キャリアに好適であるように背景技術では教示又は示唆されていない。界面活性剤のＨＬＢが背景技術で指定される場合、８から２０の範囲で与えられ、これは、本明細書で教示する界面活性剤の結合物とは異なる。したがって、本発明の化合物は、低いＨＬＢの界面活性剤と高いＨＬＢの界面活性剤の好適な結合物を基にして、背景技術で教示されるものとは明らかに異なる。
【００５５】
これらの界面活性剤の特に好適な結合物は、ＨＬＢの低い界面活性剤とＨＬＢの高い界面活性剤との間の大きな違いを特徴とする。ＨＬＢの高い界面活性剤は、ポリソルベート２０（例えばＴｗｅｅｎ２０）を含み、ＨＬＢの低い界面活性剤はソルビタンオレイン酸塩（例えばＳｐａｎ８０）を含むことが好適である。もちろん、他のこのような結合物も利用してもよい。
【００５６】
Ｓｐａｎ疎水性の界面活性剤は、ソルビタンモノオレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレート、ソルビタントリステアレート（tristearate）、ソルビタンモノオレレート、ソルビタントリオレレート、及びソルビタンモノラウレートなどのソルビタン脂肪酸エステルの群である（Fiedler, H.P., "Lexikon der Hilfsstoffe fur Pjarmazie, Kosmetic und Angrezende Gebiete", Editio Cantor, D-7960 Aulendorf, 3rd edition, 1989, page 1139-1140）。Ｓｐａｎ８０は、ＨＬＢが４．３のＨＬＢが低い界面活性剤の例であり、ソルビタンモノオレレートである。これらは、様々な生産者から商業的に利用可能であり、当該生産者には、様々な会社名では、Capital City Products、Croda Chem、ICI、Lippo Chem及びAtlas、ArlacelTM、Armotan、Crill、Emsorb、Liposorb、Protachem及びSorbester TMを含むが、これらに限られない。ＨＬＢ値が括弧内に記されたこの群の好適な界面活性剤の例は以下である：Ｓｐａｎ６０（２．１）、Ｓｐａｎ８０（４．３）、Ｓｐａｎ８５（１．８）、Ａｒｌａｃｅｌ８３（３．７）、Ａｒｌａｃｅｌ８５（１．８）、Ａｒｌａｃｅｌ８０（４．３）、及びＡｒｌａｃｅｌ６０（４．７）である。通常、これらの分子は油に溶ける。これらはまた、ほとんど有機溶媒に溶ける。これらは通常、水に溶けないが拡散する。他のＨＬＢの低い界面活性剤は、ＰＥＧ−６グリセリルモノオリレート（ＨＬＢが約３又は４）と、プロピレングリコールラウリン酸塩（ＨＬＢが４）を含むが、これに限定されない。
【００５７】
Ｔｗｅｅｎ親水性の界面活性剤（ポリソルベート）は、ＰＥＧソルビタンエステル（ポリオキシエチレン−ソルビタン−脂肪酸エステル）の群であり、例えば、商標名Ｔｗｅｅｎで知られ商業的に利用可能な種類のモノ及びトリラウリル基、パルミチル、ステアリル、及びオレイルエステルである（Fielder, H. P., "Lexikon der Hilfsstoffe fur Pharmazie, Kosmetic und Angrezende Gebiete", Editio Cantor. D-7960 Aulendorf. 3rd edition, 1989, apge 1300-1304）。Ｔｗｅｅｎ２０（ポリオキシエチレン（２０）ソルビタンモノラウレート）は、ＨＬＢが１６．７である。Ｔｗｅｅｎ界面活性剤の他の種類は、本発明の化合物にとって有用である。
【００５８】
Ｔｗｅｅｎ界面活性剤は水に溶けるが油には溶けない。界面活性剤のこの族の化学構造は、エステル結合によりソルビタンに結合される一般に約５から２０のエチレングリコールユニットである１，２又は３の短いＰＥＧ連鎖を特徴とする。これらの界面活性剤は、様々な企業（Croda, ICI, Sandoz, Mazer, Atlas）により製造され、Ｔｗｅｅｎの他に様々な商標、ＳｏｒｌａｔｅＴ””、ＭｏｎｉｔａｎＴＭ、ＣｒｉｌｌｅｔＴ”で見かけるだろう。ポリソルベート２０，２１，０，６０，６１，６５，８０及び８５であるこの族のメンバは、１１から１６．７のＨＬＢを有しており、したがって、ＨＬＢの高い界面活性剤のような本発明に好適である。
【００５９】
他の好適なＨＬＢの高い界面活性剤は、Ｇａｔｔｅｆｏｓｓｅ社などの製造業者から入手されるが、サッカロースモノパルミテート（ＨＬＢが１５）及びサッカロースモノステアレート（ＨＬＢが１１）などのサッカロース脂肪酸エステルや、ＰＥＧ−３２グリセリルラウレート（ＨＬＢが１４）を含むが、これらに限られない。好適なＨＬＢの高い非イオン界面活性剤は、ＨＬＢの範囲が１２．４から１６．９のＢｒｉｊ及び９９などのＢｒｉｊ族のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）ナルカノル（nalkanol）エステルである。Ｂｒｉｊ５６は、ポリオキシエチレン［１０］セチルエーテルであり、Ｔｗｅｅｎ２０の代わりとなり得るこのようなＨＬＢの高い界面活性剤の例である。Ｂｒｉｊ５６は、ＨＬＢが１２．９である。
【００６０】
リン脂質
本発明の好適な実施例によると、調合物はさらにリン脂質を含む。リン脂質はリン酸化ジアシルグリセロール分子又はその誘導体である。親構造は、リン酸ジアシルグリセロール、又はホスファチジン酸である。ホスファチジルコリン（レシチン）は、リン酸化ジアシルグリセロールのコリンエステルである。アシル鎖長が４から１９の炭素の合成レシチンが入手できる。生物学的応用の好適なレシチンは、生物学範囲（biological range）におけるアルキル鎖長を有する（１０から１８の炭素）。自然に生じるレシチンは、卵、ウシ属の心臓又は大豆などの様々な供給源から取得できる。不飽和レシチン（ジオレオイル（dioleoyl）、ジリノレオイル（dilinoleoyl）、アルファパルミトイル、ベータオレオイル、アルファパルミトイル、ベータリノレオイル、及びアルファオレオイル、ベータパルミトイル）、dianachidonylレシチン（高度に飽和していないプロスタグランジン先駆物質（precursor））、アルファパルミトベータミリストイルレシチンが利用可能である。
【００６１】
特定のリン脂質は、ホスファチジン酸、ホスファチジンセリン、ホスファチジルイノシトール、カルジオリピン（diphosphatidyl glycerol）、及びホスファチジルグリコールなどのセラム内のカルシウムと反応でき、細胞膜へのlipospheresの集合体及び結合を生じる。
【００６２】
これらの好ましくない反応は、ホスファチジルコリンなどの非カルシウムリン脂質結合を利用してこれらのリン脂質を結合させることにより最小化できる。ホスファチジン酸は、卵から分離でき、または合成的に準備できる（dimyristoyl、ジパルミトイル及びdistearoyl誘導体はＣａｌｂｉｏｃｈｅｍで利用できる）。また、ウシ属のホスファチジルセリンは、商業的に利用可能である（ミズーリ州のセントルイス所在のＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌ社）。ホスファチジルイノシトールは、植物又はウシ属の供給源から分離できる。カルジオリピンは、ウシ属又は細菌源から精製できる。ホスファチジルグリセロールもまた、細菌発酵から精製できる。
【００６３】
固形脂肪
さらに別の任意の成分は、固形脂肪、好適にはトリグリセリドなどの脂肪酸エステルである。このようなトリグリセリドの非限定的な例はトリカプリン（tricaprin）である。トリカプリンは、グリセロール及びカプロン酸の疎水性のトリエステルである。トリカプリンは水に溶けないため、水溶液中で拡散した後に、拡散したシクロスポリンを含む粒子の成分として残る。トリカプリンは、親水性−疎水性の分散剤により拡散する脂肪媒体中のシクロスポリンを可溶性にする。トリカプリンの交換に適したこのような他の脂肪成分は、脂肪酸の純粋かつ混合したアルキルエステルと、これの混合物を含むが、これらに限られない。例には、エチルステアレートなどの脂肪酸のエチルエステル、トリラウリンなどのエチルパルミテート、及び固形脂肪酸エステルの混合物が含まれるが、これらに限定されない。脂肪の混合物は硬化植物油を含む。好適な油は、２５から３７Ｃの溶解点でシクロスポリンを可溶性にする油であり、生じるプロナノディスパージョンの調合物は、体温でマイクロディスパージョンに溶ける固体粒子のマイクロディスパージョンを形成する。
【００６４】
以下の特定の例は、本発明の様々な態様を示しており、決して限定を意図するものではない。以下に記載する総ての実験では、特に明記しない限り、プロナノディスパージョンの粒子の大きさは、サブミクロンの粒子の大きさを測定するのに適したＮ４−コールター粒径分析器を用いて測定された。５ミリリットルの水に３滴のプロナノディスパージョンが加えられた。プロナノディスパージョンの粒子の大きさは、プロナノディスパージョンが５ミリリットルのＨＣＩ溶液に拡散したときに変化しなかった。以下に説明する実験で使用されたシクロスポリン類のメンバは、シクロスポリン（シクロスポリンＡ）である。
【００６５】
例１
好適な調合物
この例は、本発明の好適で例示的な調合物を示している。調合物は、活性成分（active ingredient）のようなシクロスポリンを特徴とする（この例は、１００ｍｇの活性成分を含むが、ここに説明するように、他の調剤を任意で提供してもよい）。溶媒はエチルラクテートを含む。この好適な実施例では、調合物は、本例ではトリグリセリド（例えば、トリカプリンなど）である固形脂肪を特徴とする。この調合物はまた、ここに説明するようなＨＬＢの低い溶媒とＨＫＢの高い溶媒の結合物を特徴とし、この例では、この結合物は、ポリソルベート２０とオレイン酸ソルビタンの結合物を含む。調合物は、リン脂質を特徴とする（この例では、レシチンが好適である）。また、調合物は、例えばＣｒｅｍｏｐｈｏｒなどのエトキシ化脂肪を特徴とすることが好適である。
2009529003.tif 000005
【００６６】
この調合物の場合、１ｍｌのプロナノディスパージョンと１０ｍｌの水を体温で混合したときの粒子の大きさは３０ｎｍであった。水のｐＨを約２から約１０に変更しても影響はなかった。
【００６７】
例２
粒子の大きさにおける溶媒の影響
シクロスポリン、溶媒、ＴＲＣ（トリカプリン）、卵リン脂質（egg phospholipid）（Ａｖａｎｔｉ、米国）、Ｔｗｅｅｎ２０、Ｓｐａｎ２０及びＣｒｅｍｏｐｈｏｒを含む例示的な化合物は、表１に示すように（総ての成分の量はミリグラムで示されている）、エチルラクテートの増加量により準備した。これらの成分の増加量を本発明の組成物に追加することによる粒子の大きさ（平均）に対する影響が、表２に示されている。簡潔に言えば、エチルラクテートを含む総ての組成物は、３７°Ｃの温度で粒子の大きさが１００ｎｍよりも小さかった。エチルラクテートの量が増加するにともない、粒子の大きさは減少した。
表２：粒子の大きさにおける溶媒の影響
2009529003.tif 000006
【００６８】
例３
粒子の大きさにおける界面活性剤の影響
シクロスポリン、卵リン脂質（米国Ａｖａｎｔｉの純度が９５％）、溶媒としてのエチルラクテート、Ｔｗｅｅｎ２０及びＣｒｅｍｏｐｈｏｒを含む例示的な組成物は、表３に示すように、Ｓｐａｎ８０の増加量により準備された。Ｓｐａｎ８０の増加量を本発明の組成物に追加することによる粒子の大きさ（平均）に対する影響が表３に示されている。簡潔に言えば、組成物は液体溶媒を提供した。３７°Ｃの脱イオン化した水に拡散するときに、Ｓｐａｎ８０を含む組成物は、粒子の大きさが１００ｎｍであった。粒子の大きさは、Ｓｐａｎ８０の量が増加するにともない減少した。
表３：粒子の大きさに対する界面活性剤の影響
2009529003.tif 000007
【００６９】
例４
粒子の大きさにおける他の成分の影響
シクロスポリンを含む様々な組成物が表４に示されている（総ての成分の量はミリグラムで示されている）。３７°Ｃの温水中で拡散するときのプロナノディスパージョン溶媒の粒子の大きさに対するこれらの成分の影響が表４に示されている。簡潔に言えば、ＨＬＢの低い界面活性剤とＨＬＢの高い界面活性剤の双方を有する組成物（Ｔｗｅｅｎ及びＳｐａｎ）は、この温度（体温）における粒子の大きさが１００ｎｍよりも小さい。Ｔｗｅｅｎ及びＣｒｅｍｏｐｈｏｒは、ＨＬＢの高い溶媒（ＨＬＢ＞１０）のように高いに置換でき、いずれかの界面活性剤の特定の量は、他の成分の量に応じて好適な粒子の大きさを得る必要がある。Ｔｗｅｅｎ２０とＣｒｅｍｏｐｈｏｒの結合物は、以下に説明するように、各成分の減少した量を使用することを可能にする。さらに、エチルラクテートなどの溶媒の存在が必要である。また、トリカプリンなどの固形脂肪は任意である。また、リン脂質の存在は、３０ｎｍの範囲の粒子の大きさを得るのに好適であるが、調合物３のようなリン脂質がない場合、粒子の大きさは、１００ｎｍより小さいままであり、リン脂質が追加されなかったが、粒子の大きさは３７°Ｃで９５ｎｍであった。
表４：粒子の大きさに対する他の成分の影響
2009529003.tif 000008
【００７０】
例５
好適な調合物の貯蔵安定性
例１の組成物は、２つの異なる総量で準備され、第２の量は、各成分の１０大きい量（10-fold larger amount）を特徴とする。組成物双方は、マイルドな加熱（約４０°Ｃ）でかき混ぜて総ての成分を溶液に溶かすことにより容易に準備された。好適には、初めに、リン脂質をエチルラクテートに溶かして、次に、他の総ての成分を、最後に追加されたシクロスポリンは別として、連続的に混ぜることにより追加された。組成物の平均の粒子の大きさは、３７°Ｃの脱イオン水（deionized water）の組成物の様々な量の拡散の後に、Ｎ４−コールター粒径分析器により光散乱技術を用いて測定された。大量の組成物双方は、好適な３０ｎｍの範囲の大きさの粒子を有する。この組成物は、以下にさらに詳細に説明するように人間の研究のために使用された。
【００７１】
組成物の安定性は、５０ｍｇのシクロスポリンを硬質のゼラチンカプセル（サイズ００）又はガラス容器に入れ、組成物を室温（２５°Ｃ）又は冷蔵庫（４°Ｃ）で保管することにより試験された。粒子の大きさとシクロスポリンの内容が、保管して３月及び６月後に測定された。総てのサンプルは、３７°Ｃの温度で測定したときに、任意のディスパージョン範囲（５ｍｌ毎に３から２０滴）において１７．２から３２．６の範囲の大きさの粒子を有することが分かった。ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフ）で分析した後のピークサイズから算出するように、保管された総ての調合物のシクロスポリンの内容は、室温での保管の２年後には、初めの濃度の９５から１０５％の所要の限度の範囲であった。
【００７２】
例６
Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ  Ｎｅｏｒａｌと当該調合物との比較
本発明の調合物とシクロスポリンの標準的な商業利用可能な調合物（Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｚ社）を比較する実験が行われた。
【００７３】
本発明の調合物は、以下にさらに詳細に説明するように優れた放出特性を有する。さらに、Ｎｅｏｒａｌの調合物と本発明の調合物を比較する構造分析が行われた。これらの分析は、驚くことに、水中で拡散するときの本発明の調合物の構造及び反応が、Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）の調合物と全くことなることを示した。
【００７４】
２つの系を比較するために、以下の手段が取られた。本発明の調合物は、室温で固体のマイクロディスパージョンを形成する一方、Ｓａｎｄｉｍｍｕｎｅ（登録商標）Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）は水中油型乳剤を形成し、ここで、油成分は水相の液滴として拡散する。単一の仮説により限定することを要求することなく、この異なる反応は、組成物の違いに関係すると信じられており、特に、本発明の調合物は、粒子の疎水性コア成分としてトリカプリン（３２°Ｃの溶解点を有する固形脂肪）を利用する一方、Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）調合物は、粒子のコア成分としてコーンオイル（室温で液体）を使用することが好適であると信じられている。
【００７５】
これらの違いを調べるために、以下の実験が行われた。濃縮された調合物双方は、振ることで２５°Ｃの水で拡散し、生成されたディスパージョンが、以下の方法、すなわち、ディスパージョン粒子の視覚化のための共焦点顕微鏡法（ＺｉｅｓｓＭｏｄｅｌ４１０の共焦点走査顕微鏡）、コールター粒径分析器によるディスパージョンの粒子の大きさの分析、拡散した粒子の分離、及び分離した粒子の溶解点を測定するためのＤＳＣによる分析により分析された。これらそれぞれについて以下により詳細に説明する。
【００７６】
共焦点顕微鏡法
例１の調合物は、疎水性の蛍光マーカとして２ｍｇのＮｉｌｅ  Ｒｅｄを追加することにより準備された。対照標準（control）として、ナノエマルジョン調合物は、１２００ｍｇの調合物を準備するために、Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）（商業的に利用可能）調合物の成分を用いて２ｍｇのＮｉｌｅ  Ｒｅｄを追加することにより準備された。調合物は好適なスライド上に配置され、室温で共焦点顕微鏡で実験された。共焦点顕微鏡（レンズ＃２０）の映像は、本発明の調合物のための、０．２から１ミクロンの範囲の様々な大きさの粒子を示した。対照的に、Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）はいずれの粒子も示さなかったが、ナノエマルジョンの存在を示す連続的な視界を示した。
【００７７】
粒子の大きさの分析
試料調整：０．５ｍｌの調合物双方が、液体又は「油状」の状態である温度で、２ｍｌの再蒸留水（２５°Ｃ）に加えられ、混合液が均一になるまで数秒間手で振られた。Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）調合物は、透明な溶液を形成する一方、本発明の調合物は、乳白色のディスパージョンを形成した。第２の実験では、油状の調合物が温水（３７°Ｃ）内で拡散し、ディスパージョンが顕微鏡により観測された。調合物双方が、感度が低いために共焦点顕微鏡で粒子を示さないほぼ透明の溶液を形成した。２５°Ｃと３７°Ｃで拡散した調合物の粒子の大きさは、コールターＮ４粒径分析器を用いて測定された。
【００７８】
実験的：２ｍｌのＮｅｏｒａｌ（登録商標）の軟質のゼラチンカプセルから取得されたシクロスポリンオイル調合物又は発明した調合物が、５ｍｌの再蒸留水に２５°Ｃ又は３７°Ｃで加えられ、手で振られて均一な拡散を形成する。この拡散は、その粒子の大きさが分析される。本発明の分散が、２５°Ｃの水に拡散したときに粒子の大部分が０．２から０．８ミクロンの範囲の０．５ミクロンの平均の粒子の大きさを示す一方、Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）の調合物は３０．２ナノメートルの粒子の大きさを示した。調合物は、３７°Ｃでは、本発明の調合物の粒子の大きさは３３．６ナノメートルであり、Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）の調合物の粒子の大きさが３２．６ナノメートルであった。
【００７９】
拡散の超遠心分離法及び沈殿物のＤＳＣ分析
実験的：２５°Ｃの脱イオン水に拡散した後の調合物双方（優しく振った２ｍｌの水中の０．５ｍｌ）が、２０，０００ｒｐｍの遠心分離を用いて、２０°で２０分間遠心分離機にかけられた。Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）の調合物は透明で均一のままである一方、本発明の調合物は、２層、すなわち固体層と濁った溶液に分離した。固体の沈殿物はデカンテーションにより分離され、２回目の遠心分離が、以下の条件で行われた：４５，０００ｒｐｍ、３０分間及び２０°。沈殿物が取られ、溶液が透明になった。Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）エマルジョンもまた、同じ条件で２回遠心分離機にかけられ、透明で均質であり、沈殿物がなかった。このＮｅｏｒａｌ（登録商標）エマルジョンはさらに、２０°Ｃで３０分間１００，０００ｒｐｍで遠心分離機にかけられ、エマルジョンはまた均一で透明のままであった。
【００８０】
発明した調合物の沈殿物は、一晩室内の空気で乾燥され、沈殿物は溶融点のために示差走査熱量計（ＤＳＣ溶解装置）を用いて分析された。沈殿物の溶融点は３０．４°Ｃであり、これは、溶融点以下の温度では分散は固体粒子の浮遊物であることを示している。
【００８１】
本発明のシクロスポリンの調合物は、室温（２５°Ｃ）で水中に分散したときにマイクロディスパージョンを形成する。形成された固体粒子は、粒子の大きさが０．２ミクロン以上であり、３０°Ｃの溶融点の最大で約０．５ミクロンの範囲の粒子が含まれる。対照的に、Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）調合物は、室温で３０ｎｍの大きさの油滴の本当のナノエマルジョンを形成する。
【００８２】
試験管内放出（In Vitro Release）
対照薬放出レートは、ＵＳＰ−２４方法により溶解装置試験を用いて評価された。双方の調合物は、１５分以内で９０％以上の試験管内放出レートを達成した。方法と結果は以下にさらに説明する。
【００８３】
方法
シクロスポリン１００ｍｇのカプセル（Ｄｅｘｃｅｌ、イスラエル）とＳａｎｄｉｍｍｅｎｅ（登録商標）Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）カプセル（Ｎｏｖａｔｒｉｓ、スウェーデン）の溶解特性の比較が、以下の条件で行われた。溶解装置は、２つのパドル装置であり、０．１Ｎ  ＨＣＬを含み、溶解溶媒として１ｍｌにつき４ｍｇのラウリルジメチルアミン−Ｎ−酸化物を含む。カプセルは、３７°Ｃの温度、かつ７５ｒｐｍの回転速度で、１リットルの溶解媒体中で溶けた。様々な時点（０分、１５分、３０分、及び６０分）で、サンプルが溶解装置から引き出され、ＨＰＬＣ装置で測定され、サンプル内のシクロスポリンのレベルを測定した。５０ｍｇのシクロスポリンを３０ｍｌのエタノールに加え、次に生成された１０ｍｌの溶液を４０ｍｌの溶解媒体で希釈することにより用意された標準が、ＨＰＬＣの結果を測定するために用いられた。移動相は、体積対体積の比が５９：４１の０．００５Ｍのリン酸及びテトラヒドロフランを特徴とする。
【００８４】
結果
表６は、様々な時点で各調合物から放出されたシクロスポリンの量を示している。
表６−放出レートの比較
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【００８５】
表６と同様に、図１は、ＵＳＰ２４手段を用いた、テスト（Ｄｅｘｃｅｌ社）（□）と参照Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）１００ｍｇ（■）の時間に対する放出される薬（ＣｓＡ）の平均パーセントを示している。テスト及び参照の生成物双方は、非常に似た溶解特性を示した。双方の調合物は、非常に早い放出レートを示し、薬の９０％以上が放出され、１５分以内に溶けた（図１）。双方の調合物の放出レートは、重ね合わせることができた。
【００８６】
例７
好適な調合物の分析−試験管内活動（In Vitro Activity）
例５の組成物は、４００ｍｇのシクロスポリンのために５回独立して準備された。粒子の大きさ、シクロスポリンの内容、形成した粒子の形態、及び粒子の融点が測定された。Ｔ細胞上のシクロスポリンの調合物のバイオアクティビティもまた測定された。
【００８７】
３７°Ｃで脱イオン水又は０．１ＮのＨＣＬ溶液に分散したときの総ての調合物の粒子の大きさは、１８から２９ｎｍであった。粒子は、高倍率で透過型電子顕微鏡（ＴＥＭ）を用いて観測した。３０ｎｍの範囲で分散した小さな大きさの球状の粒子が観測された。粒子の溶解点は示差走査熱量計（ＤＳＣ）により測定され、温度範囲が３０から３５Ｃであることが分かった。組成物は、Ｔ細胞の活動を抑制することに対して非常に効果的であった。この結果は、明らかに好適な調合物の優れた安定性、再現性及び有効性を示している。
【００８８】
例８
薬物動態の人間研究
ランダムのパイロット薬物動態研究（randomized pilot pharmacokinetic study）が、シクロスポリン（Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）、Ｎｏｖａｒｔｉｓ社）の商業的に利用可能な標準の調合物と比較して、本発明の組成物の薬物動態性能を調べるために行われた。
【００８９】
この調査は、２４人の健康的な絶食中の男性のボランティアに対する、ランダムで、非盲検（open-labeled）で、２つの機関、２つの治療の重複研究（crossover study）として計画された。患者は、いずれかの調合物の単一の１回分の２００ｍｇのシクロスポリン（ＣｓＡ）が投与された。試験された本発明による調合物は、例１に示されている。
【００９０】
連続した静脈血のサンプルは、血液内のシクロスポリン濃度を測定するために、各投与の後２４時間以上をかけて取得された。双方の治療に対して、約１２００ｎｇ／ｍｌの平均最高血中濃度（Ｃｍａｘ）が、投与後の約１．６時間（ｔｍａｘ）で取得され、濃度曲線下面積（ＡＵＣ）は、平均で４９００ｎｇ×ｈｒ／ｍｌであった。
【００９１】
これらの結果の要約として、生物学的等価性は、２つの治療におけるＣｓＡ吸収のレート（Ｃｍａｘ及びｔｍａｘ）と内容（ＡＵＣ）双方のために結論的に示された。
【００９２】
推定値及びその９０％の信頼区間は、薬物動態パラメータの個別の等価範囲内であり、低い治療薬物係数（therapeutic drugs index）の範囲内に含まれた。
【００９３】
方法及び結果は、以下にさらに詳細に説明する。
【００９４】
方法：
生体内の生物学的等価性の研究
この研究は、全員が研究を開始及び終了した２４人の健康的な男性のボランティアに対して実施された。
【００９５】
研究規約は、２つの研究期間の間の１週間の洗い出し段階を有するランダムで、２つの治療、２つの期間の重複調査であった。治療は、２４０ｍｌの水とともに単一の２００ｍｇの経口量（２×１００ｍｇの軟質のゼラチンカプセル）で構成された。
【００９６】
患者は、各薬の投与前の１０から１２時間、投与後の２４時間が経過するまで研究センタ内に監禁された。薬を投与する日では、患者は、投与前の１２時間、投与後の４時間が経過するまで断食した。したがって、患者は、投与の両日において同一の標準的で計画的な食事が与えられた。薬物摂取の時刻は、投与毎に所定の患者において同じであった。水分摂取もまた標準的であり、監禁期間中はアルコール又はキサンチンが許されなかった。研究の参加者は、初めの投与の前の少なくとも２週間と、研究の全期間において、市販薬を含む総ての薬物の使用を控えることを求められた。各投与の後、血液全体のシクロスポリンを測定するための静脈血のサンプルは、服用前と、服用後の０．２５、０．５、０．７５、１、１．５、２、２．５、３、３．５、４、４．５、５、６、９、１２、１５及び２４時間で取得された。サンプルは、ＥＤＴＡを含むチューブ内で収集され、数回逆さにされた。２つの総ての血液の分割量は、即座に−３６°Ｃで凍結された。
【００９７】
以下の生物分析的な方法を用いて、血液サンプル内のシクロスポリンのレベルを分析した。血液分析は、５０ｎｇ／ｍｌのＬＯＱを有する血漿薬物濃度を測定するために、ＴＤｘ、ＴＤｘ／ＴＤｘＦＬｘシクロスポリン単クローン抗体全血分析キット（アボットラボラトリーズ）を用いて、蛍光偏光免疫測定法の事前の有効な方法により実施された。この分析は、製造業者の指示にしたがって行われた。
【００９８】
静的な分析
パラメータの一般線形モデル手段は、生体内の生物学的等価性の研究で導出される薬物動態データの分析に推奨される、分散分析（ＡＮＯＶＡ）が、対数変換の後に、ＳＡＳプログラムの一般線形モデル（ＧＬＭ）手段を用いて薬物動態パラメータＡＵＣ及びＣｍａｘに対して実施された。生物学的等価性の研究の計画に関する適切な統計モデルが用いられた。
【００９９】
有意水準が５％の２つの片側仮説が、テストと参照平均との間の比率の９０％の信頼区間を構成することにより、ＡＵＣ及びＣｍａｘのためにテストされた。生態学的等価性の結論を出す範囲（ＡＵＣ、Ｃｍａｘ）は、対数変換されたデータを用いて８０％から１２５％に設定され、メジアンの差異は総て、ＥＵ及びＦＤＡガイドラインに基づいて算出されるため、Ｔｍａｘはノンパラメトリック分析を用いて評価された。
【０１００】
総ての統計的計量は、米国、ノースカロライナ州カリーのＳＡＳソフトウェアバージョン８．０により行われた。
【０１０１】
結果及び考察
図２は、軟質のゼラチンカプセルテスト（□）（Ｄｅｘｃｅｌ社）と対照薬剤（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）（■）として２４人の健康的なボランティアに与えられた２００ｍｇの薬の１回の経口投与後の平均ＣｓＡ濃度−時間特性を示している。
【０１０２】
重ね合わせ可能な血液ＣｓＡ濃度特性（superimposable blood CsA concentraion）が得られ、Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）の調合物と比較したＤｅｘｃｅｌの調合物の平均相対バイオアベイラビリティは１０１％であった。
【０１０３】
主要な薬物動態の測定値と関連する計算情報が、以下の表７に要約されている。
表７：生物動態パラメータ
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※パーセント（％）で表される提示された割合は、テスト及び参照パラメータ間で個別の割合の幾何学的な手段である。対数変換を有する線型モデルに基づくパラメトリック推定量及び９０％のパラメトリック信頼区間が用いられる。
【０１０４】
したがって、これらの経口ＣｓＡ調合物は生物学的等価性である。
【０１０５】
この人体研究は、最も商業的に利用可能な調合物と比較した本発明の調合物の有効性を明確に示している。Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ  Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ社）。
【０１０６】
例９
眼病用局所シクロスポリン調合物
目に対するシクロスポリンＡの効果的な局所投与は、治療される病気の位置に位置に活動を限定することにより、全身性副作用をかなり低減あるいは取り除く。シクロスポリンの局所送達のいくつかの調合物が、例えば、米国特許第４，６４９，０４７と米国特許第６，５８２，７１８に記載されているように報告されている。しかしながら、目の疾病及び病気の治療におけるシクロスポリンＡの有用性及び効果は、現在まで目の敏感な性質に適合する好適な目薬がなかったため阻害されてきた。目薬は患者に不快感を起こさせるべきでなく、頻繁な投与を必要としない一方、適切な製剤原料を目の外側及び内側領域に送達することにより、有用な投与計画を可能にすべきである。さらなる問題は、水中のシクロスポリンＡの極度の難溶性であり、これはしばしば、水性目薬からシクロスポリンＡの沈殿物を生じさせ、目の主な炎症を引き起こす。例えば、商業的に利用可能な調合物、Ｒｅｓｔａｓｉｓ（登録商標）（Ａｌｌｅｒｇａｎにより生産される）は、多くの患者に投与によるひりひりする感覚に対する不満を引き起こす。
【０１０７】
したがって、目の炎症を引き起こしにくく、シクロスポリンＡを目に均一に分布させるのにより適し、シクロスポリンの沈殿を引き起こさない局所的な眼病用の調合物を開発する緊急の必要性がある。また、保管時に無水物の形態のままである一方、投与直前に微粒子の調合物に分散可能なシクロスポリンの安定した調合物が好適である。このような調合物は水で混合でき、数週間の治療の間安定しているマイクロディスパージョンを形成する。
【０１０８】
これに関する好適な実施例では、本発明の調合物は、目薬に好適な滅菌した水媒体で混合することができ、活性薬剤として０．０１から１０ｍｇ／ｍｌのシクロスポリンを特徴とする分散を形成する。これらの透明な希釈された分散は、従来の目薬を用いて任意で目に投与できる。この調合物は、任意及び好適に、初めの治療のときにボトル内にナノディスパージョンとして保管され、プロナノディスパージョン調合物は、等浸透圧の無菌の溶液で希釈され、約１ｍｇ／ｍｌから約０．０１ｍｇ／ｍｌの濃度を形成する。これらの分散は、調合物が使用直前に好適に水と混合されるため、防腐剤をほとんどあるいは全く必要としない。これはまた、薬の安定性を増加させる。
【０１０９】
代替的に、プロナノディスパージョンは、任意で緩衝液により事前に混合され、たとえは、任意で防腐剤としてベンジルアルコール又はクロラムフェニコールを含む単一の使用ベシクル（use vesicle）又は複数投与ボトル（multidose bottle）に詰め込まれる。好適で例示的な量を有する他の例示的な防腐剤の非限定的な例は、０．００４から０．０１％の塩化ベンザルコニウム、０．０２から０．０５％のエデト酸ナトリウム、０．００２％の酢酸フェニル水銀又は硝酸フェニル水銀、及び／又は０．５％のクロロブタノール及びベンジルアルコールを含む（溶液のｐＨは５．０から５．５に中和することが好適である）。
【０１１０】
本発明の好適な実施例によると、好適な調合物は、眼病用の溶液として許可されたポリソルベート２０及びポリオキシル４０水素化ヒマシ油を含むプロナノディスパージョン系のシクロスポリンを特徴とする。モノオレイン酸ソルビタンは、目の調合物にとって安全であると考えられている一方（"Handbook of Pharmaceutical Excipients", 4th edition, 2003）、レシチン及び固体のトリグリセリドは、目の調合物の使用にとって安全であると考えられている。乳酸エチル溶媒は、未だに目の調合物として使用されていないが、乳酸エチルが食品添加物であるため安全だと考えられている。
【０１１１】
本発明の好適な実施例によると、眼病用の組成物は、プロナノディスパージョンとして調合されるのが好適であり、目薬の調合物として好適なサリンを混合することにより、マイクロディスパージョンを形成する。これらの眼病用の組成物を用いることにより、例えば、約０．０１から約１．０％（ｗ／ｖ）の範囲、好適には約０．１％（ｗ／ｖ）の低濃度のシクロスポリンが存在する場合であっても、非常によい治療結果が得られる。
【０１１２】
通常の調合物では、シクロスポリンは活性成分として好適である（この例は、１０．００ｍｇの活性成分を含むが、ここに説明するように、他の投薬を任意で提供してもよい）。溶媒はエチルラクテートを含むことが好適であるが、任意でＮ−Ｃｌ−４アルキルピロリドン含んでもよく、任意及び好適には、エチルラクテートと同じ量で使用されるＮ−メチルピロリドンを含んでもよい。調合物は、任意及び好適には、この例では、固体のトリグリセリド（例えば、トリカプリン又はトリラウリンなど）である固形脂肪を含んでもよい。調合物はまた、ここで説明したようなＨＬＢの低い溶媒とＨＬＢの高い溶媒の組み合わせであることが好適であり、例えば、結合物はポリソルベート２０とオレイン酸ソルビタンを含むことが好適である。調合物はリン脂質を特徴とすることが好ましい（この例では、レシチンが好適である）。また、調合物は、例えばＣｒｅｍｏｐｈｏｒなどのエトキシレート脂肪を特徴とすることが好適である。また、本明細書で前述した成分の様々な例は、成分が目に使用するために特別に調合される限り、任意で目の調合物として使用してもよい（及び／又は目に使用するために許可される）。
【０１１３】
異なる物質の量の例示的な範囲が以下の表８に、１０ｍｌの調合物に対するミリグラムの物質で示されている（括弧内の量は、ｍｌの調合物に対するｍｇである）。
表８：眼病用の調合物の成分の範囲
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【０１１４】
各成分の量は、他の成分の量に基づいて決定するのが好適である。例えば、水素化界面活性剤（ポリソルベート２０）の量を減らすことは、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒの量を増加させることを要する。
【０１１５】
表９は、本発明による例示的かつ最適な調合物を示している。
表９
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【０１１６】
この例示的で非限定的な調合物の場合、体温において１００ｍｇのプロナノディスパージョンを１０ｍｌの水でかき混ぜたときの粒子の大きさは、２００ｎｍよりも小さいことが分かった。このプロナノディスパージョンの調合物は、室温で密閉されたガラス製の薬瓶内で保管した場合、１年以上安定している。使用する前に、ボトルが開かれ、目薬用の１０ｍｌのサリンが加えられ、優しく振られ、目の炎症を引き起こさない半透明の分散を即座に形成する。
【０１１７】
実験例Ｉ
表９に示す調合物の０．１ｍｇ／ｍｌの希釈された調合物が、ウサギの目に３０分毎に４時間にわたって点眼された。目は副作用がないか検査された。副作用は、即座に又は治療後の一週間現われなかった。
【０１１８】
調合物の追加の実験
本発明に係る目に投与するための例証となる調合物の追加の例が、以下の表１０に示されている（例示的な成分は、説明することを目的としており、決して限定することを意図していない）。
表１０
2009529003.tif 000013
【０１１９】
多くの調合物が試験され、非常に最低限の分散を有する４０から５０ｎｍの大きさの粒子を生成した。前述した成分のうち好適な成分は、界面活性剤−Ｔｗｅｅｎ、ＳＰＡＮ、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ、及びポリオキシエチレンヒマシ油と、トリグリセリド−トリカプリン、トリラウリンと、溶媒−プロピレングリコールである。最適にはグリセリンである浸透圧モル濃度メインテナ（osmolarity maintainer）が含まれることが好適である。
【０１２０】
表１１は、例示的で説明目的の好適な調合物を示している。１７０回の希釈前後の各成分のパーセンテージが示されている。
表１１
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【０１２１】
動物実験
例示的な調合物がウサギで試された。各ウサギに対して、一方の目が試験され、他方の目は対照標準（control）として機能した。上記の表１１に示すような本発明に係る調合物は、商業的に利用可能な調合物、Ｒｅｓｔａｓｉｓと比べて、目に炎症が生じているか試された。実験は２匹のウサギに対して行われた（１の組成物につき１匹）。本発明に係る調合物は、明らかに炎症が少なかった（Ｒｅｓｔａｓｉｓの場合、１分間に６から８回の瞬きに対して、創作性のある調合物は、２から４回であった）。対照標準としてのＰＢＳ（リン酸緩衝食塩水のみ）は、１分間に１から２回の瞬きを引き起こした。したがって、本発明に係る調合物は、明らかに商業的に利用可能な調合物よりも炎症が少なかった。
【０１２２】
例１０
シクロスポリンの投与方法
Ｃｉｃｌｏｓｐｏｒｉｎなどのシクロスポリンは、本技術分野で周知なように、多くの方法により患者に投与することができる。これ以降「患者」の語は、シクロスポリンが投与された人間又は下等動物を意味する。例えば投与は、例えば静脈内滴注、又は直腸内、皮下、若しくは筋肉内注射により、局所的に（経眼的（ophtalmically）、経膣的、経直腸的、鼻腔内を含む）、経口で、又は非経口で行ってもよい。
【０１２３】
局所投与のための調合物は、ローション、軟膏、ゲル、クリーム、坐薬、点眼薬、液体、スプレー、及びパウダーを含んでもよいが、これらに限られない。
【０１２４】
経口投与のための組成物は、水若しくは非水媒体、小袋、カプセル又はタブレット中のパウダー又は細粒、懸濁（suspension）又は溶解（solution）を含んでもよい。シックナー、希釈液、調味料、分散剤（dispersing aid）、乳化剤、又は結合剤が好ましい。経口投与のための組成物は、軟質又は硬質のゼラチンカプセルを含むことが好ましい。
【０１２５】
非経口投与用の調合物は、緩衝剤、希釈液、及び他の好適な混合剤を含む滅菌した水溶液を含んでもよいが、これに限られない。
【０１２６】
本発明の調合物は、任意で水溶液中のプロナノディスパージョン又はマイクロディスパージョンとして投与してもよい。代替的に、水溶液中のマイクロディスパージョンの組成の後に凍結乾燥（乾燥）してもよい。また、凍結乾燥（乾燥）した分散は、任意で患者に投与してもよい。投与の好適な経路は経口投与である。
【０１２７】
服用は症状の深刻さやシクロスポリンに対する患者の反応に依存する。当業者は、最適な投薬量、投薬方法及び繰り返し率を容易に判断できる。
【０１２８】
例１１
シクロスポリンによる治療方法
シクロスポリンは特に、臓器又は組織移植の拒絶反応の治療及び予防、自己免疫疾患及び炎症状態の治療及び予防、及び多剤耐性（ＭＤＲ）の治療で知られている。
【０１２９】
臓器又は組織移植の拒絶反応の治療に関し、シクロスポリンを含む本発明の組成物は、例えば、心臓、肺、心臓及び肺の組み合わせ、肝臓、腎臓、膵臓、骨髄、皮膚又は角膜移植、特に同種移植の移植者の治療に有用である。さらに、本発明の組成物は、時折骨髄移植に伴う移植片対宿主拒絶反応の予防に有用である。
【０１３０】
自己免疫疾患及び炎症状態の治療及び予防に関し、シクロスポリンを含む本発明の組成物は、自己免疫血液疾患（溶血性貧血、再生不良性貧血、赤芽球貧血、及び特発性血小板減少症を含む）、全身性エリテマトーデス、多発性軟骨炎、強皮症、ウェーゲナー肉芽腫症（Wegener granulamatosis）、皮膚筋炎、慢性活動性肝炎、重症筋無力症、乾癬、スティーブンスジョンソン症候群、特発性スプルー、自己免疫炎症性大腸炎（潰瘍性大腸炎及びクローン病など）、内分泌眼病（endocrine opthalmopathy）、グレーブス病、サルコイドーシス、多発性硬化症、原発性胆汁性肝硬変、若年性糖尿病（1型糖尿病）、ブドウ膜炎（前後方向）、乾性角結膜炎及び春季カタル、間質性肺線維症、乾癬性関節炎、及び糸球体腎炎（特発性ネフローゼ症候群又は微少変化ネフロパシーなどのネフローゼ症候群を伴う、あるいは伴わない）に有用である。
【０１３１】
さらに、これらの組成物は特に、関節炎（例えば、リウマチ性関節炎、慢性関節炎プログレディエンテ（progrediente）、及び変形性関節炎）やリウマチ性疾患などの自己免疫成分を含む病因を有する炎症状態に有用である。
【０１３２】
多剤耐性（ＭＤＲ）に関し、シクロスポリンを含む本発明の組成物は、腫瘍等内の抗腫瘍薬耐性を後退あるいは無効にするのに有用である。以下の例は、シクロスポリンを含む本発明の組成物を用いたこれらの疾患を治療する方法を説明する目的のためであり、限定を意図するものではない。この方法は、前述したように、好適には、患者の疾患の症状がなくなるなどの所定の終点に達するまで（可能であれば）、シクロスポリンを含む本発明の組成物を治療すべき患者に投与するステップを含む。臓器又は組織移植の拒絶反応などの他の疾患の場合、本発明の組成物は、終点なく継続的に投与する必要がある。
【０１３３】
これ以降、「治療（treatment）」の語は、病的な状態が生じる前の事前治療と、状態が生じた後の治療双方を含む。「治療する（treating）」の語は、病的な状態が生じた後に患者に治療することと、病的な状態の進行を阻止すること双方を含む。
【０１３４】
明確にするために別々の実施例の内容で説明した本発明の特定の特徴は、単一の実施例における組み合わせ（コンビネーション）により提供してもよいと理解できるであろう。反対に、簡潔にするために単一の実施例の内容で説明した本発明の様々な特徴は、別々に、又は好適なサブコンビネーション
【０１３５】
本発明は特定の実施例に関連して説明されているが、多くの代替例、変更例、及び修正例は、当業者にとって容易であることは明らかであろう。したがって、添付の請求項の精神及び広範な範囲に含まれるこのような代替例、変更例、及び修正例総てを含むことを意図している。本明細書で言及した特許及び特許出願は、個々の出願、特許又は特許出願が参照によりここに組み込まれることを明確及び個々に示唆されているように、参照によりその全体がここに組み込まれている。さらに、本出願の参照の引用又は確認は、このような参照が本発明の前に利用可能であることの承認と解釈すべきでない。
【図面の簡単な説明】
【０１３６】
【図１】図１は、ＵＳＰ２４手段を用いた、テスト（Ｄｅｘｃｅｌ社）（□）とＮｏｖａｒｔｉｓの参照Ｎｅｏｒａｌ（登録商標）１００ｍｇ（■）の時間に対する放出される薬（ＣｓＡ）の平均パーセントを示している。テスト及び参照の結果双方は、非常に似た溶解像（dissolution profile）示した。
【図２】図２は、軟質のゼラチンカプセルテスト（□）（Ｄｅｘｃｅｌ社）と既知の対照薬剤（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）（■）として２４人の健康的なボランティアに与えられた２００ｍｇの薬の１回の経口投与後の平均ＣｓＡ濃度−時間特性を示している。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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