(57)【要約】癌はグルホスファミド単独又は他の抗癌剤と組み合わせた投与により治療できる。本発明は癌を処置するための組成物及び方法を提供する。特に本発明はグルホスファミド単独又は癌の処置のための他の抗癌剤と組み合わせた投与に関する。更に又、本発明は以前に化学療法で治療されているものも包含する進行及び／又は転移の悪性疾患の治療のための方法を提供する。第１の特徴において、本発明は癌の処置方法を提供し、方法は治療有効量のグルホスファミドを単独で、又は、ゲムシタビン又は他の抗癌剤と組み合わせて、そのような治療を必要とする対象に投与することを含む。広範な種類の癌、例えば乳癌、結腸直腸癌、卵巣癌、肺癌及び膵臓癌を本方法により治療することができる。
2009509974.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
癌を処置する方法であって、方法が、グルホスファミドを癌患者に対して静脈内注入により１．５〜約６．０ｇ／ｍ２の範囲の量において１〜６時間の範囲の注入時間で投与する工程を包含し、ここで該投与工程は４週毎に少なくとも１回実施し、そして少なくとも１回反復する、方法。
【請求項２】
前記投与工程において投与されるグルホスファミドの該量が４．５ｇ／ｍ２であり、そして該投与工程を３週毎に少なくとも１回実施する請求項１記載の方法。
【請求項３】
前記投与工程において投与されるグルホスファミドの該量が１．５〜３．０ｇ／ｍ２であり、そして該投与工程を少なくとも週１回実施する請求項１記載の方法。
【請求項４】
癌を処置する方法であって、方法が、グルホスファミドを癌患者に対して少なくとも５０マイクログラム／ｍＬの該患者の血漿中のグルホスファミド濃度をもたらすために十分な量を投与する工程を包含する、方法。
【請求項５】
前記グルホスファミド濃度が少なくとも１００マイクログラム／ｍＬである請求項４記載の方法。
【請求項６】
前記グルホスファミド濃度が少なくとも１５０マイクログラム／ｍＬである請求項４記載の方法。
【請求項７】
癌を処置する方法であって、方法が、グルホスファミドを癌患者に対して少なくとも２００マイクログラム−ｈ／ｍＬのグルホスファミドＡＵＣをもたらすために十分な量を投与する工程を包含する、方法。
【請求項８】
前記グルホスファミドＡＵＣが少なくとも５００マイクログラム−ｈ／ｍＬである請求項７記載の方法。
【請求項９】
前記グルホスファミドＡＵＣが少なくとも１０００マイクログラム−ｈ／ｍＬである請求項７記載の方法。
【請求項１０】
癌を処置する方法であって、方法が、グルホスファミド又はイソホスホラミドマスタード（ＩＰＭ）の別のプロドラッグ又はＩＰＭ自体を癌患者に対し少なくとも１マイクログラム／ｍＬの該患者の血漿中のＩＰＭ濃度をもたらすために十分な量を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１１】
前記ＩＰＭ濃度が少なくとも３マイクログラム／ｍＬである請求項７記載の方法。
【請求項１２】
前記ＩＰＭ濃度が少なくとも４マイクログラム／ｍＬである請求項７記載の方法。
【請求項１３】
癌を処置する方法であって、方法が、グルホスファミド又はイソホスホラミドマスタード（ＩＰＭ）の別のプロドラッグ又はＩＰＭ自体を癌患者に対して少なくとも１０マイクログラム−ｈ／ｍＬの該患者の血漿中のＩＰＭ  ＡＵＣをもたらすために十分な量を投与する工程を包含する、方法。
【請求項１４】
前記ＩＰＭ  ＡＵＣが少なくとも２５マイクログラム−ｈ／ｍＬである請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
前記ＩＰＭ  ＡＵＣが少なくとも３５マイクログラム−ｈ／ｍＬである請求項１３記載の方法。
【請求項１６】
ゲムシタビンもまた静脈内注入により約３０〜約１５０分の範囲の注入時間で投与し、そして各ゲムシタビン投与が約１０００ｍｇ／ｍ２〜２２００ｍｇ／ｍ２の範囲の量である請求項１〜１５の何れかに記載の方法。
【請求項１７】
ゲムシタビンもまた静脈内注入により約３０〜約１５０分の範囲の注入時間で投与し、そして各ゲムシタビン投与が少なくとも２０マイクログラム／ｍＬの該患者の血漿中のゲムシタビン濃度をもたらすために十分な量である請求項１〜１５の何れかに記載の方法。
【請求項１８】
ゲムシタビンもまた静脈内注入により約３０〜約１５０分の範囲の注入時間で投与し、そして各ゲムシタビン投与が少なくとも３０マイクログラム／ｍＬの該患者の血漿中のｄＦｄＵ濃度をもたらすために十分な量である請求項１〜１５の何れかに記載の方法。
【請求項１９】
前記癌が、手術、放射線照射又は化学療法により以前に処置されていないか、又は以前に処置されている進行性及び／又は転移性の悪性疾患；乳癌；結腸直腸癌；転移結腸直腸癌；非ホジキンリンパ腫；卵巣癌；膵臓癌；化学療法難治性の膵臓癌；ゲムシタビン難治性の膵臓癌；肉腫；ＰＥＴ陽性肉腫；及び小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）よりなる癌の群から選択される請求項１〜１８の何れかに記載の方法。
【請求項２０】
ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、カルボプラチン、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））、シスプラチン、デカルバジン（ＤＴＩＣ）、２−デオキシグルコース、ドキソルビシン（例えばＤｏｘｉｌ（登録商標）及びＣａｅｌｙｘ（登録商標））、ＥＧＦＲ阻害剤（例えばＩｒｅｓｓａ）、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、エトポシド、エキサテカン、イマチニブメシレート（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、イリノテカン、メトトレキセート、Ｐａｎｖａｃ−ＶＦ（登録商標）、ペメトレキセド（Ａｌｉｍｔａ（登録商標））、リツキシマブ、ルビテカン（Ｏｒａｔｈｅｃｉｎ（登録商標））、タキサン（例えばドセタキセル及びパクリタキセル）、トポテカン、ビンクリスチン及びトラスツマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））よりなる群から選択される抗腫瘍活性を有する薬剤もまた、前記患者に投与される請求項１〜１９の何れかに記載の方法。
【請求項２１】
前記患者が、前記患者の癌の細胞又は組織におけるグルコース輸送体の水準を決定又は推定するために実施される試験に基づいてグルホスファミドによる初回又は継続の処置の対象として選択される請求項１〜２０の何れかに記載の方法。
【請求項２２】
前記試験がＧＬＵＴ１、ＧＬＵＴ２、ＧＬＵＴ３、ＧＬＵＴ４、ＧＬＵＴ７、ＧＬＵＴ８又はＧＬＵＴ１２よりなる群から選択されるグルコース輸送体の水準を測定する請求項２１記載の方法。
【請求項２３】
前記試験がＰＥＴスキャンである請求項２１記載の方法。
【請求項２４】
前記試験が前記患者の癌組織における低酸素の水準を決定又は推定する請求項２１記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願）
本出願は、２００５年９月２３日に出願された米国特許第６０／７１９７８７号および２００６年１月２０日に出願された同第６０／７６０５９９号の利益を主張し、その内容は参考として本明細書中に援用される。
【０００２】
（技術分野）
本発明は癌の処置のための組成物及び方法を提供し、従って、医学及び薬理学の分野に関する。
【背景技術】
【０００３】
（発明の背景）
「癌」とは一般的に近隣の組織又は身体の他の部分に向けて拡張することができる細胞の未制御の異常生育により生じる１００超の疾患の群の１つである。癌細胞は固形腫瘍を形成でき、そこにおいて、癌細胞は集塊化するか、又は、白血病のように分散した細胞として存在する。正常細胞は成熟が達成されるまで、そしてその後は損傷又は死滅した細胞の交換の為に必要に応じてのみ分裂（再生）する。癌細胞はそれらが無限に分裂し、最終的には近傍の細胞に押し入り、身体の他の部分に拡張するため、「悪性」と称される場合が多い。癌細胞がある臓器から別の臓器に、又は、身体のある部分から別の部分に拡張する傾向により、成長する身体の他の臓器又は部分には拡張しない良性の腫瘍細胞から、それらを識別することができる。悪性の癌細胞は最終的には、血流又はリンパ系を介して身体の他の部分に転移して拡張し、そこで増殖し、新しい腫瘍を形成する。この種の腫瘍の進行が癌を致命的な疾患としている。腫瘍の診断及び治療は大きく進歩したものの、多くの人間が毎年癌で死亡しており、そしてその死亡は典型的には転移及び従来の療法に対して抵抗性の癌によるものである。以前に化学療法により治療された進行及び／又は転移の悪性疾患（即ち化学療法難治性癌）の治療のための現在の方法は不十分である。治癒的な療法は化学療法後に再発した進行悪性疾患を有する患者においては殆ど不可能である。
【０００４】
以前に化学療法により治療された進行及び／又は転移の悪性疾患の治療のための進歩した方法が当該分野で必要とされている。本発明はそのような必要性に着目しており、そして癌を治療するための組成物及び方法を提供する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（発明の要旨）
本発明は癌を処置するための組成物及び方法を提供する。特に本発明はグルホスファミド単独又は癌の処置のための他の抗癌剤と組み合わせた投与に関する。更に又、本発明は以前に化学療法で治療されているものも包含する進行及び／又は転移の悪性疾患の治療のための方法を提供する。
【０００６】
第１の特徴において、本発明は癌の処置方法を提供し、方法は治療有効量のグルホスファミドを単独で、又は、ゲムシタビン又は他の抗癌剤と組み合わせて、そのような治療を必要とする対象に投与することを含む。広範な種類の癌、例えば乳癌、結腸直腸癌、卵巣癌、肺癌及び膵臓癌を本方法により治療することができる。
【０００７】
本発明の方法によれば、グルホスファミドの投与を単独で、又はゲムシタビンのような他の抗癌剤と組み合わせて行うかどうかに関わらず、グルホスファミドは少なくとも１、２、３、４、５、６、７、８又は８より多い治療サイクルに関して治療サイクル当たり少なくとも１回投与し、ここで各サイクルは、少なくとも１週間であり、そして３又は４週間、又は７週間もの長期であることができ、そしてグルホスファミドの各投与において、グルホスファミドは１．５〜約６．０ｇ／ｍ２（ｇはグルホスファミドのグラム数であり、そしてｍ２は患者の表面積である）の範囲の量において静脈内注入により癌患者に投与する。１つの実施形態において、投与するグルホスファミドの量は約１．５〜約４．５ｇ／ｍ２の範囲である。１つの実施形態において、投与するグルホスファミドの量は４．５ｇ／ｍ２である。１つの実施形態において、投与するグルホスファミドの量は５．０ｇ／ｍ２である。グルホスファミドの注入は１、２、３、４、５又は６時間の期間に亘り投与できる。１つの実施形態において、グルホスファミドは１、４又は６時間の注入時間に亘り、４．５ｇ／ｍ２の用量で３週毎又は４週毎（治療サイクル時間）に一回投与する。他の実施形態においては、グルホスファミドは（ａ）３週毎に連続３日間（第１、２及び３日）１〜６時間の注入時間に亘り１．５〜約３．０ｇ／ｍ２（場合により２．０〜約３．０ｇ／ｍ２の範囲）の範囲の量で；（ｂ）週当たり１回１〜６時間の注入時間に亘り１．５〜約３．０ｇ／ｍ２（場合により２．０〜約３．０ｇ／ｍ２）；又は（ｃ）４週毎に１回１〜６時間の注入時間に亘り１．５〜約６．０ｇ／ｍ２（場合により４．５〜約６．０ｇ／ｍ２、場合により約５．０ｇ／ｍ２）で投与する。
【０００８】
１つの実施形態において、グルホスファミドは患者の血漿中のグルホスファミド濃度又はＣｍａｘが少なくとも５０マイクログラム／ｍＬ、又は少なくとも１００マイクログラム／ｍＬ、又は少なくとも１５０マイクログラム／ｍＬ、又は少なくとも２５０マイクログラム／ｍＬに到達するように投与する。１つの実施形態において、グルホスファミドのこのような血漿中レベルは１〜４時間の注入時間に亘り約１．５〜約４．５ｇ／ｍ２（場合により２．５〜約４．５ｇ／ｍ２）の範囲の量においてグルホスファミドを投与することにより到達される。１つの実施形態において、投与されるグルホスファミドの量は５．０ｇ／ｍ２である。１つの実施形態において、グルホスファミドはグルホスファミドの濃度時間曲線下面積（ＡＵＣ）が少なくとも２００マイグログラム−ｈ／ｍＬ、又は少なくとも５００マイグログラム−ｈ／ｍＬ、又は少なくとも１０００マイグログラム−ｈ／ｍＬとなるように投与する。１つの実施形態において、グルホスファミドのこのような血漿中レベルは１〜４時間の注入時間に亘り、それぞれ、約１．５〜約４．５ｇ／ｍ２（場合により２．５〜約４．５ｇ／ｍ２）の範囲の量においてグルホスファミドを投与することにより到達される。
【０００９】
グルホスファミドはインビボで活性代謝産物であるイソホスホラミドマスタード（ＩＰＭ）に変換されるプロドラッグであり、そして１つの実施形態において、グルホスファミド又は他のＩＰＭプロドラッグ又はＩＰＭ自体（これは典型的には当該分野で知られる通り有害な副作用を回避するためにＭＥＳＮＡ同時投与される）は、患者の血漿中のＩＰＭ濃度が少なくとも１マイクログラム／ｍＬ、又は少なくとも３マイクログラム／ｍＬ、又は少なくとも４マイクログラム／ｍＬに達するように投与する。１つの実施形態において、ＩＰＭのこのような血漿中レベルは４時間の注入時間に亘り、それぞれ、約１．５〜約４．５ｇ／ｍ２（場合により３．５〜約４．５ｇ／ｍ２）の範囲の量においてグルホスファミドを投与することにより到達される。１つの実施形態において、グルホスファミド又は他のＩＰＭプロドラッグ又はＩＰＭ自体は、ＩＰＭ  ＡＵＣが少なくとも１０マイクログラム−ｈ／ｍＬ、又は少なくとも２５マイクログラム−ｈ／ｍＬ、又は少なくとも３５マイクログラム−ｈ／ｍＬとなるように、投与する。１つの実施形態において、ＩＰＭのこのような血漿中レベルは１〜４時間の注入時間に亘り、それぞれ、約１．５〜約４．５ｇ／ｍ２（場合により２．５〜約４．５ｇ／ｍ２）の範囲の量においてグルホスファミドを投与することにより到達される。１つの実施形態において、ＩＰＭのこのような血漿中レベルはグルホスファミドを５．０ｇ／ｍ２で投与することにより到達される。
【００１０】
１つの実施形態において、グルホスファミドを上記した通り投与し、そして、ゲムシタビンもまた１、２、３、４、５、６、７、８又は８より多い治療サイクルに関して投与し、そして各投与サイクルにおけるゲムシタビンの各投与は約３０〜約１５０分の範囲の注入時間に亘り、約１０００ｍｇ／ｍ２〜約２２００ｍｇ／ｍ２（場合により約１０００ｍｇ／ｍ２〜約１５００ｍｇ／ｍ２；そして場合により約１５００ｍｇ／ｍ２〜約２２００ｍｇ／ｍ２）の範囲の用量におけるゲムシタビンの静脈内注入を含む。グルホスファミドとゲムシタビンを同時投与する１つの実施形態において、ゲムシタビンは１、２、３、４又は４より多い治療サイクルに関して治療サイクルの第１、２、３、４、５、６及び７週において投与し、ここで各サイクルは７週サイクルである。１つの実施形態において、ゲムシタビンは１、２、３、４、５、６又は６より多い治療サイクルに関して治療サイクルの第１、２及び３週において投与し、ここで各サイクルは４週サイクルである。ゲムシタビンはグルホスファミドの投与の前日、翌日、又は同日に本発明の方法に従って投与できる。１つの実施形態において、ゲムシタビンはグルホスファミドの投与と同日において、グルホスファミド投与後約３０分〜約４時間に投与する。
【００１１】
グルホスファミドとゲムシタビンを同時投与する１つの実施形態において、ゲムシタビンは患者の血漿中のゲムシタビン濃度が少なくとも２０マイクログラム／ｍＬに到達するように投与する。１つの実施形態において、ゲムシタビンのこの血漿中レベルは約０．５時間の注入時間に亘り約１ｇ／ｍ２の量においてゲムシタビンを投与することにより到達される。ゲムシタビンはインビボで活性代謝産物ｄＦｄＵに変換されるプロドラッグであり、そして１つの実施形態において、ゲムシタビンは患者の血漿中のｄＦｄＵ濃度が少なくとも３０マイクログラム／ｍＬに到達するように投与する。１つの実施形態において、ｄＵｄＦのこの血漿中レベルは０．５時間の注入時間に亘り約１ｇ／ｍ２の量においてゲムシタビンを投与することにより到達される。
【００１２】
第２の特徴において、本発明は癌を治療する方法を提供し、その方法は化学療法により以前に治療された進行及び／又は転移の悪性疾患の治療の必要な対象にグルホスファミドを投与することを含む。１つの実施形態において、本発明はゲムシタビン難治性の膵臓癌の処置のための方法を提供する。
【００１３】
第３の特徴において、本発明は抗腫瘍活性を有する薬剤、例えばベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、カルボプラチン、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））、シスプラチン、デカルバジン（ＤＴＩＣ）、２−デオキシグルコース、ドキソルビシン（例えばＤｏｘｉｌ（登録商標）及びＣａｅｌｙｘ（登録商標））、ＥＧＦＲ阻害剤（例えばＩｒｅｓｓａ）、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、エトポシド、エキサテカン、イマチニブメシレート（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、イリノテカン、メトトレキセート、Ｐａｎｖａｃ−ＶＦ（登録商標）、ペメトレキセド（Ａｌｉｍｔａ（登録商標））、リツキシマブ、ルビテカン（Ｏｒａｔｈｅｃｉｎ（登録商標））、タキサン（例えばドセタキセル及びパクリタキセル）、トポテカン、ビンクリスチン又はトラスツマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））を、グルホスファミドと組み合わせて、又はグルホスファミド及びゲムシタビンと組み合わせて、又はグルホスファミド、ゲムシタビン及びエルロチニブと組み合わせて、癌の処置の必要な患者に投与することを含むそのような治療のための方法を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１４】
（発明の詳細な説明）
本発明の１つの特徴において、グルホスファミド及び場合によりゲムシタビン及び場合により１つ以上の追加的抗癌剤を治療有効量において癌の処置を必要とする対象に投与する。
【００１５】
抗腫瘍剤グルホスファミド（β−Ｄ−グルコシル−イソホスホラミドマスタード；ｇｌｅ−ＩＰＭ）は癌の処置における使用に関して研究されているアルキル化剤である（参照により本明細書に組み込まれる米国特許５，６２２，９３６及びＮｉｃｕｌｅｓｃｕ−Ｄｕｖａｚ，２００２，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ  ３：１５２７−３２参照）。アルキル化部分（イソホスホラミドマスタード、ＩＰＭ）はβ−Ｄ−グルコースングリコシド結合しており、そしてグルホスファミドの細胞取り込みはナトリウム依存性膜貫通グルコース輸送体蛋白（Ｂｒｉａｓｃｕｌｉｓら、２０００，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １８：３５３５−４４）及び本明細書に記載する他のグルコース輸送体により媒介されると考えられている。第ＩＩ相臨床試験において、グルホスファミドは第１選択肢の治療を受けている膵臓癌患者及び第２選択肢の化学療法を受けている非小細胞肺癌の患者、並びに神経膠芽細胞腫、乳癌及び結腸癌の患者に対してグルホスファミドが投与されている（上出のＮｉｃｕｌｅｓｃｕ−Ｄｕｖａｚ，２００２参照）。グルホスファミドは静脈内投与されており；本発明の実施においては他の投与経路、例えば髄腔内投与、腫瘍内注射、経口投与及び他の経路も使用してよいことを意図している。
【００１６】
本発明の１つの実施形態において、ゲムシタビンはグルホスファミドと同時投与する。ゲムシタビン（２’−デオキシ−２’，２’−ジフルオロ−シチジン、１−（４−アミノ−２−オキソ−１Ｈ−ピリミジン−１−イル）−２−デスオキシ−２，２−ジフルオロリボースとも称される）は細胞複製の過程を途絶させるヌクレオシド類縁体である。各々が参照により本明細書に組み込まれる米国特許４，８０８，６１４及び５，４６４，８２６参照）。ゲムシタビンＨＣｌ（Ｇｅｍｚａｒ（商標）；Ｅｌｉ  Ｌｉｌｌｙ）は非小細胞肺癌及び膵臓癌の患者の治療の為に使用されている。ゲムシタビンＨＣｌは日常的には滅菌溶液として製剤されており、そして静脈内注入により投与される。他の塩の形態、例えばモノリン酸塩、硫酸塩、マロン酸塩、クエン酸塩及びコハク酸塩は容易に製造され、所望により利用できる。他の投与経路、例えば腫瘍内注射、髄腔内投与及び他のものも使用できることを意図している。上記した通り、本発明の特定の実施形態においては、癌患者を治療するためにゲムシタビンをグルホスファミドと同時投与する。
【００１７】
本明細書においては、「対象」又は「患者」とは、癌の処置の必要な哺乳類である。一般的に、対象はヒト癌患者である。本発明の一部の実施形態においては、対象はモデル系において使用される非ヒト哺乳類（例えば医薬品のスクリーニング、特性化及び評価において使用される非ヒト霊長類、マウス又はラット）である。
【００１８】
本明細書において、そして当該分野で良く知られている通り、「治療」とは臨床結果を包含する有益又は所望な医学的結果を得るための方策である。本発明の目的のためには、有益又は所望な臨床結果は、限定しないが、症状１つ以上の軽減又は緩解、疾患の程度の減衰、疾患の安定化された（即ち悪化しない）状態、疾患の拡張の防止、疾患の進行の遅延又は緩徐化、疾患状態の緩解又は緩和、及び沈静化（部分的又は全体的に関わらない）を包含する。「治療」はまた、治療を受けていない場合、又は、異なる治療を受けている場合に予測される余命と比較して余命を延長することも意味することができる。本発明により示す通り、グルホスファミドは単独で、又は他の抗癌剤と組み合わせて投与することにより、癌の効果的な治療を可能にすることができる。
【００１９】
本明細書において、そして当該分野で良く知られている通り、薬品の「治療有効量」は癌を有する対象に投与した場合に、有益又は所望な医学的結果、臨床結果、例えば治療の説明において上記したものを有することになる薬品の量である。完全な治療上の作用は一回の用量により必ずしも起こるものではなく、そして一連の用量の投与の後にのみ起こってよい。即ち、治療有効量は１回以上の投与において投与されてよい。
【００２０】
薬品を同じ治療行程の部分として投与する場合は２種（又は３種以上）の薬品を「組み合わせて」対象に投与する。治療の行程は、この内容においては、何れかの薬剤の組み合わせを単剤投与された場合の投与に関して予測されるよりも、一緒になって相加的、相補的、相乗的又は他の態様において好適な結果をもたらすと考えられる薬品の組み合わせの投与を指す。治療の行程は１日又は数日であることができるが、癌の薬品については、より頻繁には、数週間、そして多数の治療サイクルに延長され、その各々は後述する通り１週間〜１ヶ月、又はそれ以上継続する。
【００２１】
即ち、組み合わせにおける投与の例は、説明のためであって限定しないが、本発明の方法に従って、少なくとも２〜８以上の３週治療サイクルの間に３週毎に１回のグルホスファミド投与であり、ここで、グルホスファミドの初回投与を第１日に開始するものと定義し、それと合わせて、ゲムシタビンの投与を、１回以上の７週サイクルの間、７週サイクルの第１、第２、第３、第５、第６及び第７週に各週１回行い、ここでゲムシタビンの投与は第１日、第−１日（第１日の１日前）又は第２日に開始する。組み合わせ投与の別の例は、２〜８以上の４週サイクルの間４週治療サイクルの第１週（第１日）に開始する４週毎１回グルホスファミドの投与、及び２〜８以上の４週サイクルの間同じ４週治療サイクルの第１、第２及び第３週（第１、第８及び第１５日）におけるゲムシタビン投与である。１つの実施形態において、ゲムシタビンはグルホスファミドと同じ日においてグルホスファミドの投与後約３０分〜約４時間に投与する。
【００２２】
２種以上の薬品を組み合わせて投与する場合、種々の日程を使用できる。１つの場合において、例えば限定しないが、薬品２の投与に先立って薬品１を初回投与し、薬品１による治療は薬品２の投与の行程中を通して継続されるか；或いは、薬品２の療法の開始後に薬品１を初回投与するか；或いは薬品１は他の（薬品２）癌療法の開始と同時に初回投与する。この点に関して使用する場合は、「同時」とは２薬品を同日又は連続日に投与することを意味する。
【００２３】
原則として特定の薬品は同時製剤して組み合わせて送達できるが、組み合わせによる療法では一般的には別個の組成物中に製剤された薬剤の投与を行う。同様に、特定の薬品は同時に投与できるが、より頻繁には（特に静脈内注入により投与される薬品の場合）薬品は同日又は連続日に、又は他の日程に従って異なる時間に投与される。例えば、本発明の１つの実施形態において、グルホスファミドは４週サイクルの第１日に開始して４週毎に１回４時間の注入時間にわたって投与され、そしてゲムシタビンは同じ４週サイクルの第１、第８及び第１５日に３０分の注入時間に亘って投与され、そして両方の薬品の投与は１〜８以上の４週サイクルの間継続される。第１日において、ゲムシタビンはグルホスファミドの投与の３０分後に投与される。
【００２４】
本発明の別の実施形態においては、グルホスファミドは「単剤」として、即ち別の抗腫瘍剤と組み合わせることなく投与される。例えば、グルホスファミドは化学療法により以前に治療されている進行及び／又は転移の悪性疾患を治療するために投与することができ、その方法においては、グルホスファミドは単剤として、以前に使用された薬品１つ以上と組み合わせて、又は、患者の治療にまだ使用されていない他剤と組み合わせて投与することができる。別の実施形態においては、本発明は化学療法により以前に治療されている局所的に進行した切除不可能又は転移の膵臓腺癌の処置方法を提供し、そしてこの実施形態においては、グルホスファミドは単剤として、又は他の抗癌剤と組み合わせて投与してよい。別の実施形態において、本発明はゲムシタビン難治性の転移膵臓腺癌の処置方法を提供し、やはりこの実施形態においては、グルホスファミドは単剤として、又はゲムシタビンと組み合わせて、又は膵臓癌の処置の為に使用される別の薬品と組み合わせて投与してよい。
【００２５】
本発明の方法は、何れかの癌、例えば限定しないが、腺癌；腺腫；基底細胞癌、骨癌、脳の癌、例えば原発脳腫瘍；乳癌；副腎、気管支、結腸、膀胱、頭部及び頚部、腎臓、喉頭、神経組織、副甲状腺、直腸、胃及び甲状腺の癌；頚部形成不全及びインサイチュ癌腫；表皮様癌腫；ユーイング肉腫；巨細胞腫；多形性神経膠芽細胞腫；ヘアリー細胞腫瘍；過形成；過形成性角膜神経腫瘍；腸神経節細胞腫；島細胞癌；平滑筋腫；白血病；肝臓癌；肺癌；急性及び慢性の両方のリンパ球及び顆粒球の腫瘍；リンパ腫；悪性類癌腫；悪性高カルシウム血症；悪性黒色腫；マルファン症候群様体質腫瘍；髄様癌；粘膜神経腫；菌状息肉腫；骨髄腫；神経芽腫；骨肉腫；卵巣の癌及び腫瘍；膵臓癌；褐色細胞腫；真性赤血球増加症；前立腺癌；腎細胞腫瘍；網膜芽細胞腫；肉腫、例えばカポジ肉腫、骨原性及びその他の肉腫、横紋筋肉腫及び軟組織肉腫；精上皮腫；皮膚癌、例えば転移皮膚がん及び局所皮膚疾患；小細胞肺癌；潰瘍性及び乳頭状の両方の扁平上皮細胞癌；ｖｅｔｉｃｕｌｕｍ細胞癌；及びウィルムス腫瘍の治療の為に使用できる。
【００２６】
本発明の方法は特定の癌、例えば乳癌、結腸直腸癌、膀胱癌、非ホジキンリンパ腫、腎臓癌、肝臓癌、肺癌、卵巣癌、膵臓癌、肉腫及び胃癌の処置において特に有効である。
【００２７】
本発明の１つの実施形態において、グルホスファミド治療を行う対象は乳癌を有する。乳癌は一般的には手術、放射線療法、化学療法及びホルモン療法の種々の組み合わせにより治療される。本発明の方法によれば、グルホスファミドを単独で、又はゲムシタビンと組み合わせて、又は乳癌の処置のための他の抗癌剤と組み合わせて投与する。
【００２８】
本発明の１つの実施形態において、グルホスファミドは結腸直腸癌の処置の必要な対象に投与する。特定の実施形態においては、治療を行う患者は結腸直腸癌又は転移の結腸直腸癌を有する。結腸直腸癌又は転移の結腸直腸癌は現在では放射線療法、手術及び／又は化学療法（例えば５−フルオロウラシルの投与）により治療されている。１つの実施形態において、グルホスファミドは結腸直腸癌を治療するために単剤として投与され；別の実施形態においては、グルホスファミドは結腸直腸癌を治療するためにゲムシタビンと同時投与される。別の実施形態においては、グルホスファミド及びベバシズマブを組み合わせて結腸直腸癌の処置の必要な対象に投与し；場合によりゲムシタビン又は５−フルオロウラシルもまた同時投与する。
【００２９】
本発明の１つの実施形態において、グルホスファミドはＣＨＯＰ（シクロホスファミド、アドリアマイシン、ビンクリスチン及びプレドニソン）療法が不成功となった後に非ホジキンリンパ腫のための第２選択肢の療法として投与される。
【００３０】
本発明の１つの実施形態において、グルホスファミドは単剤として、又はゲムシタビンと組み合わせて卵巣癌の処置の必要な対象に投与する。１つの実施形態において、グルホスファミドは、シス／カルボプラチン及び／又はタキサン又は他の第１選択肢の療法が不成功となった後に、場合により認可された第２選択肢の療法と組み合わせて、卵巣癌の処置において第２選択肢の療法として、単剤として、又はゲムシタビンと組み合わせて投与される。別の特徴において、グルホスファミドは単剤として、又はゲムシタビン及び／又はシス／カルボプラチン及び／又はタキサン及び／又は他の第１選択肢の療法と組み合わせて、卵巣癌の処置における第１選択肢の療法として投与される。
【００３１】
本発明の１つの実施形態において、グルホスファミド治療を行う対象は膵臓癌を有する。膵臓癌のうち、化学療法難治性の膵臓癌、例えばゲムシタビンによる治療に対して難治性の膵臓癌（例えばＡｒａｎｃｏら、２００３，Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｖｅｓｔ．２１：４８９−９６；Ｋｏｚｕｃｈら、２００１，Ｔｈｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ  ６：４８８−９５；Ｎｏｂｌｅ  ａｎｄ  Ｇｏａ，１９９７，Ｄｒｕｇｓ  ５４：４４７−７２Ｎ；Ｓｔｅｐｈｅｎｓら、１９９８，Ｏｎｃｏｌ．Ｎｕｒｓ，Ｆｏｒｕｍ  ２５：８７−９３；Ｂｕｒｒｉｓ  ａｎｄ  Ｓｔｏｒｎｉｏｌｏ，１９９７，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ３３：Ｓｕｐｐｌ  １：Ｓ１８−２２；Ｒｏｔｈｅｎｂｅｒｇら、１９９６，Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．７：３４７−５３）を本明細書に開示した方法を用いて、例えばグルホスファミド単独又はゲムシタビンと組み合わせて投与することにより、治療することができる。
【００３２】
本発明の１つの実施形態において、グルホスファミドはＰＥＴ陽性肉腫を治療するために第１又は第２選択肢の療法として投与する。「ＰＥＴ陽性」肉腫とは、陽電子放射断層撮影により検出可能な肉腫である。１つの実施形態において、グルホスファミドはドキソルビシンによる治療不成功、又は別の第１選択肢療法による不成功の後に、単独又は他の認可第２選択肢療法と組み合わせて肉腫の治療における第２選択肢療法として投与される。別の実施形態においては、グルホスファミドはドキソルビシンと組み合わせて、又は他の認可された第１選択肢療法と組み合わせて、肉腫の治療における第１選択肢療法として投与される。
【００３３】
本発明の１つの実施形態において、グルホスファミドはカルボプラチン又はシスプラチン、ＶＰ１６及び／又はタキサンによる第１選択肢の不成功の後に、単独で、又はゲムシタビンと、そして場合により他の認可された第２選択肢療法と組み合わせて、小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）の第２選択肢療法として投与される。別の特徴において、グルホスファミドは場合によりカルボプラチン又はシスプラチン、ＶＰ１６及び／又はタキサン又は他の認可された第１選択肢療法と組み合わせて、ＳＣＬＣの治療における第１選択肢療法として単独又はゲムシタビンと組み合わせて投与される。
【００３４】
前記より明白な通り、本発明の特定の実施形態においては、癌を治療するために別の抗癌剤をグルホスファミドと同時投与する。これ等の実施形態に関して、特に好ましい抗癌剤はベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（登録商標））、カルボプラチン、セツキシマブ（Ｅｒｂｉｔｕｘ（登録商標））、シスプラチン（シス−ジアミンジクロロ白金（ＩＩ）、２価の無機の水溶性白金含有複合体；Ｇｏ  ａｎｄ  Ａｄｊｅｉ，１９９９，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．１７：４０９−２２参照）、デカルバジン（ＤＴＩＣ）、２−デオキシグルコース、ドキソルビシン（例えばＤｏｘｉｌ（登録商標）及びＣａｅｌｙｘ（登録商標））、ＥＧＦＲ阻害剤（例えばＩｒｅｓｓａ）、エルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（登録商標））、エトポシド、エキサテカン、イマチニブメシレート（Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））、イリノテカン、メトトレキセート、Ｐａｎｖａｃ−ＶＦ（登録商標）、ペメトレキセド（Ａｌｉｍｔａ（登録商標））、リツキシマブ、ルビテカン（Ｏｒａｔｈｅｃｉｎ（登録商標））、タキサン（例えばドセタキセル及びパクリタキセル）、トポテカン、ビンクリスチン及びトラスツマブ（Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（登録商標））よりなる群から選択されるものを包含する。本発明の種々の実施形態において、これ等の薬剤の１つ以上をグルホスファミドと組み合わせて、又はグルホスファミド及びゲムシタビンと組み合わせて、癌の処置の必要な対象に投与する。１つの実施形態において、癌は膵臓癌である。１例においては、説明のためであって限定しないが、グルホスファミド及びエルロチニブ（Ｔａｒｃｅｖａ（商標））及び場合によりゲムシタビンを本発明の方法に従って同時投与することにより癌を治療することができる。
【００３５】
ゲムシタビン、ベバシズマブ、イリノテカン、エキサテカン、ペメトレキセド、シスプラチン及びエルロチニブ並びに本明細書に記載した他の抗癌剤は、治療的に有効である何れかの用量において、例えば臨床上日常的に使用されているものに匹敵するか同一である用量において投与できる。既知であり認可された抗新生物剤に関する特定の用量用法（例えば推奨有効用量）は医師の知る通りであり、そして例えばＰＨＹＳＩＣＩＡＮＳ’  ＤＥＳＫ  ＲＥＦＥＲＥＮＣＥ，２００３，５７ｔｈ  Ｅｄ．，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｉｎｃ．，Ｏｒａｄｅｌｌ，Ｎ．Ｊ；Ｇｏｏｄｍａｎ＆Ｇｉｌｍａｎ’ｓ  ＴＨＥ  ＰＨＡＲＭＡＣＯＬＯＧＩＣＡＬ  ＢＡＳＩＳ  ＯＦ  ＴＨＥＲＡＰＥＵＴＩＣＳ”２００１，１０ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに記載されている製品説明において示されており、及び／又は、Ｆｅｄｅｒａｌ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｉｏｎより入手可能であり、及び／又は医学文献において考察されている。これ等の他の抗癌剤の特定のものの簡単な説明を以下に記載する。
【００３６】
ベバシズマブ（Ａｖａｓｔｉｎ（商標）；Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）は本発明において使用する場合は、他の目的の為に臨床上日常的に使用されているものに匹敵する用量において投与できる（例えばＹａｎｇ，２００３，Ｎ．Ｅｎｇ．Ｊ．Ｍｅｄ．，３４９：４１９−２１及びＣｏｂｌｅｉｇｈら、２００３，Ｓｅｍｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．３０（５Ｓｕｐｐｌ１６）：１１７−２４参照）。ベバシズマブは結腸直腸癌、非小細胞肺癌、乳癌及び他の固形腫瘍のような癌の処置のための抗血管形成剤として開発された抗血管内皮細胞成長因子（ＶＥＧＦ）モノクローナル抗体である。Ｓａｌｇａｌｌｅｒ，２００３，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｍｏｌ  Ｔｈｅｒ，５：６５７−６７及びＰＣＴ出願ＷＯ９６／３００４６及びＷＯ９８／４５３３１を参照できる。本発明の１つの実施形態において、このような癌を治療するためにグルホスファミドと組み合わせたベバシズマブを投与する。
【００３７】
エルロチニブは本発明において使用する場合は約２５ｍｇ〜約２００ｍｇの範囲の用量で投与できる。１つの実施形態において、エルロチニブは約１００ｍｇ〜約２００ｍｇの範囲の用量で投与する。１つの実施形態において、グルホスファミドと組み合わせて投与するエルロチニブの用量は約１５０ｍｇである。エルロチニブは典型的には食後少なくとも１時間に投与する。
【００３８】
エキサテカンメシレート（ＤＸ−８９５１ｆ；Ｄａｉｉｃｈｉ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏ．）はトポイソメラーゼＩを阻害する植物アルカロイドのカンプトテシンの水溶性類縁体である。エキサテカンメシレートは非小細胞肺癌、卵巣、卵管又は腹膜の癌及び乳癌の処置のための治療薬として開発されている。癌の処置のためのエキサテカンメシレートの種々の用量及び投薬について報告されている。例えばＶｅｒｓｃｈｒａｅｇｅｎら、２００４，Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｍｏｔｈｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．５３：１−７；Ｅｓｔｅｖａら、２００３，Ｃａｎｃｅｒ  ９８：９００−７；Ｂｒａｙｂｒｏｏｋｅ  ら、２００３，Ｌｉｖｉｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ，４１：２１５−９；Ｒｏｙｃｅら、２００４，Ｉｎｖｅｓｔ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇｓ．２２：５３−６１を参照できる。本発明の１つの実施形態において、非小細胞肺癌、卵巣、卵管又は腹膜の癌及び乳癌のような癌を治療するためにグルホスファミドと組み合わせたエキサテカンメシレートを投与する。
【００３９】
イリノテカン（ＣＰＴ−１１，Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標）；Ｐｈａｒｍａｃｉａ＆Ｕｐｊｏｈｎ）はトポイソメラーゼＩを阻害する植物アルカロイドのカンプトテシンの半合成誘導体である。結腸直腸癌の処置のための抗癌剤として開発されている。本発明の目的のためには、イリノテカンは臨床上日常的に使用されているものに匹敵する用量で投与できる。例えば、そして限定しないが、患者は３週毎に１回９０分の注入においてＣａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標）の投与を受けることができる。大部分の患者に対する開始用量は３５０ｇ／ｍ２であることができるが、用量は７０歳以上の患者に対しては３００ｇ／ｍ２まで低減してよい。Ｃａｍｐｔｏｓａｒ（登録商標）はまた１２５ｇ／ｍ２で開始する毎週投与日程に従って投与できる。用量は約２〜４週間与えることができ、療法の各行程は７週毎に反復する。Ｒｏｔｈｅｎｂｅｒｇら、１９９６，Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．１４：１１２８−３５を参照できる。
【００４０】
ペメトレキセド（Ａｌｉｍｔａ（商標））はチミジレートシンターゼ、ジヒドロホレートレダクターゼ、グリシンアミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼ及びアミノイミダゾールカルボキサミドリボヌクレオチドホルミルトランスフェラーゼを阻害する抗ホレートである。ペメトレキセドはインビトロの膵臓癌細胞系統に対して活性であり、そして進行した膵臓癌を有する患者において活性を示している。Ｋｉｎｄｌｅｒ，２００２，Ｓｅｍｉｎ  Ｏｎｃｏｌ．２９：４９−５３及びＡｄｊｅｉ，２００３，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．３：１４５−５６を参照できる。本発明の１つの実施形態において、グルホスファミドは膵臓癌を治療するためにペメトレキセド及び場合によりゲムシタビンと組み合わせて投与する。
【００４１】
別の特徴において、本発明は治療に有効であることがわかっている（「治療的に有効な」）用量において、そしてそのような日程又は投与用法に従って、グルホスファミドを単独又は他の抗癌剤と組み合わせて投与する治療方法を提供する。癌に対する化学療法では典型的には１つ以上の薬品の投与の多数の「ラウンド」又は「治療サイクル」を行い、その場合、各サイクルは特定の日程に従った１つ以上の回数の１つ以上の薬品の投与を含む。サイクルは一般的に（必ずしもではない）週数で測られ、そして例えば持続期間として１、２、３、４、５、６、７又は８週間であることができる。本発明の一部の実施形態においては、例えば治療サイクルは３週サイクル、４週サイクル又は７週サイクルである。各治療サイクルにおいて、薬品は少なくとも１回、そして特定の日程に従って、例えば毎日；週１回；連続日又は非連続日において週複数回；サイクル毎に１回；サイクル毎に複数回、例えば３連続日を３週サイクル毎に１回等において投与する。１剤より多く（例えば２剤）を対象に投与する場合、各々は上記した通りそれ自体の日程（例えば毎週；３週毎に１回等）に従って投与できる。２剤以上の投与は、それらが異なる周期で投与される場合であっても、患者及び治療担当医の都合のよいように、両方の薬品が同じ日に投与される（少なくとも部分的に）ように、又は、薬品が連続日に投与される（少なくとも部分的に）ように調節することができる。
【００４２】
グルホスファミド及びゲムシタビン（又は他の薬品）を組み合わせて投与する本発明の治療用法において、それらは何れかの順序で投与できる。特定の実施形態においては、グルホスファミドをゲムシタビン（又は他の薬品）の投与の前日、翌日又は同日に投与する。特定の実施形態においては、ゲムシタビン（又は他の薬品）をグルホスファミドと同日に投与し、そしてゲムシタビン（又は他の薬品）の投与はグルホスファミドの投与の前、同時又は後に開始する。特定の実施形態においては、ゲムシタビン（又は他の薬品）はグルホスファミドの投与後約３０分〜約４時間に投与する（即ち投与開始する）。他の投与日程も本明細書に一般的に記載する通り使用でき、より特定の場合は医師が決定する。
【００４３】
化学療法薬品は典型的には１〜８治療サイクルの間、又はより長いサイクルの間（例えば持続的治療から追加的治療効果が実現できなくなるまで）投与する。本発明の種々の実施形態においては、グルホスファミドは１、２、３、４、５、６、７、８又は８より多い治療サイクルの間、癌の処置の必要な患者に対し静脈内注入により投与され、各サイクルは下記の範囲：
ａ）３又は４週毎に１回１、２、３、４、５又は６時間の注入時間に亘り約１．５〜４．５〜５．０〜６．０〜約８．０ｇ／ｍ２（患者の表面積当たりのグルホスファミドのグラム数）；又は、
ｂ）３又は４週毎に１〜３連続日（第１、第２及び第３日）の間１、２、３、４、５又は６時間の注入時間に亘り約１．５〜２．０〜約３．０ｇ／ｍ２；又は
ｃ）週１回１、２、３、４、５又は６時間の注入時間に亘り約０．５〜１．５〜１．６６〜２．０〜２．５〜約４．０ｇ／ｍ２；
におけるグルホスファミドの注入を含む。
【００４４】
本発明の方法によれば、そしてグルホスファミドを単独又は他の抗癌剤と組み合わせて投与するかどうかに関わらず、グルホスファミドは１、２、３、４、５、６、７、８又は８より多い治療サイクルの間、治療サイクルあたり少なくとも１回投与され、そしてグルホスファミドの各投与において、グルホスファミドは１．５〜約６．０ｇ／ｍ２の範囲の量において静脈内注入により癌患者に投与される。１つの実施形態においては、投与されるグルホスファミドの量は約１．５〜約４．５ｇ／ｍ２の範囲である。１つの実施形態においては、投与されるグルホスファミドの量は４．５ｇ／ｍ２である。１つの実施形態においては、投与されるグルホスファミドの量は４．５ｇ／ｍ２である。グルホスファミドの注入は１、２、３、４、５又は６時間の期間に亘り投与できる。１つの実施形態において、グルホスファミドは１、４又は６時間の注入時間に亘り４．５ｇ／ｍ２の用量において３又は４週毎（治療サイクル時間）に１回投与される。
【００４５】
１つの実施形態において、グルホスファミドは患者の血漿中のグルホスファミド濃度又はＣｍａｘが少なくとも５０マイクログラム／ｍＬ、又は少なくとも１００マイクログラム／ｍＬ、又は少なくとも１５０マイクログラム／ｍＬ、又は少なくとも２５０マイクログラム／ｍＬに到達するように投与する。１つの実施形態において、グルホスファミドのこのような血漿中レベルは１〜４時間の注入時間に亘り約１．５〜２．５〜約４．５ｇ／ｍ２の範囲の量においてグルホスファミドを投与することにより到達される。１つの実施形態において、グルホスファミドはグルホスファミドのＡＵＣが少なくとも２００マイグログラム−ｈ／ｍＬ、又は少なくとも５００マイグログラム−ｈ／ｍＬ、又は少なくとも１０００マイグログラム−ｈ／ｍＬとなるように投与する。１つの実施形態において、グルホスファミドのこのような血漿中レベルは１〜４時間の注入時間に亘り、それぞれ、約１．５〜２．５〜約４．５ｇ／ｍ２の範囲の量においてグルホスファミドを投与することにより到達される。
【００４６】
グルホスファミドはインビボで活性代謝産物であるイソホスホラミドマスタード（ＩＰＭ）に変換されるプロドラッグであり、そして１つの実施形態において、グルホスファミド又は他のＩＰＭプロドラッグ又はＩＰＭ自体は、患者の血漿中のＩＰＭ濃度が少なくとも１マイクログラム／ｍＬ、又は少なくとも３マイクログラム／ｍＬ、又は少なくとも４マイクログラム／ｍＬに達するように投与する。１つの実施形態において、ＩＰＭのこのような血漿中レベルは４時間の注入時間に亘り、それぞれ、約１．５〜３．５〜約４．５ｇ／ｍ２の範囲の量においてグルホスファミドを投与することにより到達される。１つの実施形態において、グルホスファミド又は他のＩＰＭプロドラッグ又はＩＰＭ自体は、ＩＰＭ  ＡＵＣが少なくとも１０マイクログラム−ｈ／ｍＬ、又は少なくとも２５マイクログラム−ｈ／ｍＬ、又は少なくとも３５マイクログラム−ｈ／ｍＬとなるように、投与する。１つの実施形態において、ＩＰＭのこのような血漿中レベルは１〜４時間の注入時間に亘り、それぞれ、約１．５〜２．５〜約４．５ｇ／ｍ２の範囲の量においてグルホスファミドを投与することにより到達される。
【００４７】
１つの実施形態において、グルホスファミドを上記した通り投与し、そして、ゲムシタビンもまた１、２、３、４、５、６、７、８又は８より多い治療サイクルに関して投与し、そして各治療サイクルにおけるゲムシタビンの各投与は約３０〜約１５０分の範囲の注入時間に亘り、約１０００ｍｇ／ｍ２〜約１５００ｍｇ／ｍ２〜約２２００ｍｇ／ｍ２の範囲の用量におけるゲムシタビンの静脈内注入を含む。
【００４８】
グルホスファミドとゲムシタビンを同時投与する１つの実施形態において、ゲムシタビンは１、２、３、４又は４より多い治療サイクルに関して７週治療サイクルの第１、２、３、４、５、６及び７週において投与し、そしてグルホスファミドは上記した量及び頻度で投与する。１つの実施形態において、ゲムシタビンは１、２、３、４、５、６又は６より多い治療サイクルに関して治療サイクルの第１、２及び３週において投与し、ここで各サイクルは４週間のサイクルであり、そしてグルホスファミドは上記した量及び頻度で投与する。例えば、そして限定しないが、ゲムシタビンはグルホスファミドの投与の前日、翌日、又は同日に本発明の方法に従って投与できる。１つの実施形態において、ゲムシタビンはグルホスファミドの投与と同日において、グルホスファミド投与後約３０分〜約４時間に投与する。
【００４９】
グルホスファミドとゲムシタビンを同時投与する１つの実施形態において、ゲムシタビンは患者の血漿中のゲムシタビン濃度が少なくとも２０マイクログラム／ｍＬに到達するように投与する。１つの実施形態において、ゲムシタビンのこの血漿中レベルは約０．５時間の注入時間に亘り約１ｇ／ｍ２の量においてゲムシタビンを投与することにより到達される。ゲムシタビンはインビボで活性代謝産物ｄＦｄＵに変換されるプロドラッグであり、そして１つの実施形態において、ゲムシタビンは患者の血漿中のｄＦｄＵ濃度が少なくとも３０マイクログラム／ｍＬに到達するように投与する。１つの実施形態において、ｄＵｄＦのこの血漿中レベルは０．５時間の注入時間に亘り約１ｇ／ｍ２の量においてゲムシタビンを投与することにより到達される。
【００５０】
当該分野で知られる通り、癌治療薬による治療は、本発明の範囲を外れることなく、毒性が観察された場合、又は、患者の都合により、中断し、その後再開することができる。
【００５１】
１つの実施形態において、グルホスファミドの投与は血清中のグルコース濃度を低下させるための工程がとられた後に開始する。本発明のこの方法は、グルホスファミドとグルコースが癌細胞上で同じグルコース輸送体に対して競合するため、血中のグルコース濃度が低いほどより多くのグルホスファミドが癌細胞に進入できるという点で有益である。血中グルコース濃度は例えば限定しないが、グルホスファミドの投与前のある期間、例えば８〜１２〜１６時間患者の食品及びグルコース含有栄養の摂取を禁止することにより、及び／又はインスリン及び血中グルコースレベルを低下させる別の薬剤を投与することにより、低下できる。
【００５２】
本発明の別の特徴においては、癌におけるグルコース輸送体のレベルをグルホスファミド投与前に測定することによりグルホスファミド投与に癌が好都合に応答する（治療される）可能性を調べることができる。グルコース輸送体はグルホスファミドを癌細胞内に輸送すると考えられているため、グルホスファミドを輸送するグルコース輸送体のレベル上昇は癌細胞をグルホスファミド療法に対してより感受性とすることになる。
【００５３】
本発明のこの特徴において、患者又は患者腫瘍試料を試験することによりグルコース輸送体のマーカーとして機能する生物学的薬剤の存在又はレベルを検出する。グルコース輸送体レベルを測定するための方法は参照により本明細書に組み込まれるＰＣＴ特許出願２００４／０８１１８１に記載されている。一般的にグルコース輸送体のレベルが高値であるほど、癌がグルホスファミド療法に良好に応答する可能性が高値となる。本発明の１つの実施形態において、測定されるグルコース輸送体のレベルはＧＬＵＴ７、ＧＬＵＴ８又はＧＬＵＴ１２のレベルである。これ等の輸送体を典型的に高レベルで有する癌は、鼻咽頭癌、卵巣癌、扁平上皮及び腺の肺癌、小細胞癌、神経膠芽腫、軟骨肉腫、食道癌、生殖細胞腫瘍及び多発性骨髄腫を包含する。即ち、１つの実施形態において、本発明は患者における癌を治療するための方法を提供し、その方法は先ず患者における癌が比較的高レベルのグルコース輸送体、例えば限定しないが、ＧＬＵＴ７、ＧＬＵＴ８又はＧＬＵＴ１２を発現していることを測定することを含む。１つの実施形態において、ＧＬＵＴ１、ＧＬＵＴ２、ＧＬＵＴ３及び／又はＧＬＵＴ４のレベルをＧＬＵＴ７、ＧＬＵＴ８又はＧＬＵＴ１２のレベルの代わりに、又はそれに追加して測定する。
【００５４】
腫瘍におけるグルコース輸送体レベルを測定するためには、種々の試験、例えば輸送体ＲＮＡレベルを測定する試験（例えば定量的ＰＣＲによる）及び直接グルコース輸送体蛋白を測定する抗体試験を使用できる。これ等の試験並びに後述するＰＥＴスキャン（これも同様にグルコース輸送体レベルの尺度を与える）はまたグルホスファミド投与の治療効果をモニタリングするために使用できる。
【００５５】
本発明の１つの実施形態において、ＰＥＴスキャンを用いて治療すべき癌が単独又は他剤と組み合わせたグルホスファミド療法に応答する可能性があるか調べる。この実施形態においては、ＰＥＴスキャンを用いて癌細胞がＰＥＴスキャン剤２−フルオロ−デオキシグルコースを旺盛に取り込むかどうかを調べ、そしてそうである場合に医師は、その癌がその薬剤の取り込みの旺盛度がより低い癌よりもグルホスファミド療法に対して良好に応答する可能性が高いことを決定する。
【００５６】
他のマーカーを本発明の方法に従って使用することにより患者がグルホスファミド療法に良好に応答する可能性があるか、又は応答しているかを調べることができる。例えば腫瘍における低酸素、即ち低い酸素濃度は典型的にはグルコース輸送体レベルをアップレギュレートする。オステオポンチンは例えば低酸素細胞の存在を示す血清マーカーである。
【００５７】
別の例として、血清中炭水化物抗原１９−９は膵臓癌におけるゲムシタビン療法への応答を評価するための有用なマーカーであると報告されている（Ｚｉｓｋｅら、２００３，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ８９：１４１３−１７）。１つの実施形態において、グルホスファミドを単剤として又は他の抗癌剤と組み合わせて投与する癌に対するグルホスファミド療法への応答は、治療の間の対象の血清中炭水化物抗原１９−９レベルを測定することにより、特性化される。
【００５８】
別の例として、癌抗原−１２５（ＣＡ−１２５）のレベルを卵巣癌のモニタリングの為に使用できる。１つの実施形態において、グルホスファミドを単剤として又は他の抗癌剤と組み合わせて投与する卵巣癌に対するグルホスファミド療法への応答は、治療の間の対象のＣＡ−１２５レベルを測定することによりモニタリングされ、そしてＣＡ−１２５の低下は治療効果を示している。
【００５９】
即ち、本発明は癌の処置のための種々の方法を提供する。１つの実施形態において、４週毎に１回１〜４時間の注入時間に亘り４．５ｇ／ｍ２の用量においてグルホスファミドを静脈内投与し、そしてこの投与を１回以上反復し、これに組み合わせて０．５〜１時間の注入時間に亘り、１ｇ／ｍ２の用量において各４週治療サイクルの３週間に週１回ゲムシタビンを静脈内投与することにより癌を治療し；この実施形態は例えば限定しないが、膵臓癌、卵巣癌及び乳癌を治療するために使用できる。別の実施形態において、３週毎に１回１〜４時間の注入時間に亘り４．５ｇ／ｍ２の用量においてグルホスファミドを静脈内投与し、そしてこの投与を１回以上反復することにより癌を治療し；この実施形態は例えば限定しないが、小細胞肺癌、卵巣癌及び軟組織肉腫を治療するために使用できる。別の実施形態においては、週１回１〜４時間の注入時間に亘り１．６６〜２．５ｇ／ｍ２の用量においてグルホスファミドを静脈内投与し、そしてこの投与を１回以上反復することにより癌を治療し；この実施形態は例えば限定しないが、卵巣癌及び軟組織肉腫を治療するために使用できる。
【００６０】
別の実施形態においては、患者の血漿中のグルホスファミド濃度が少なくとも５０マイクログラム／ｍＬ又は１００マイクログラム／ｍＬ又は１５０マイクログラム／ｍＬに到達するようにグルホスファミドを投与し、そしてこの投与を４週毎に１回１回以上反復し、これに組み合わせて患者の血漿中のゲムシタビンの濃度が少なくとも２０マイクログラム／ｍＬに到達するような量でゲムシタビンを投与し、そしてこの投与を各４週治療サイクル中３週間週１回反復することにより癌を治療し；この実施形態は例えば限定しないが、膵臓癌、卵巣癌及び乳癌を治療するために使用できる。別の実施形態においては、３週毎に１回、患者の血漿中のグルホスファミド濃度が少なくとも５０マイクログラム／ｍＬ又は１００マイクログラム／ｍＬ又は１５０マイクログラム／ｍＬに到達するようにグルホスファミドを投与し、そしてこの投与を１回以上反復することにより癌を治療し；この実施形態は例えば限定しないが、小細胞肺癌、卵巣癌及び軟組織肉腫を治療するために使用できる。別の実施形態においては、週１回、患者の血漿中のグルホスファミド濃度が少なくとも１５０マイクログラム／ｍＬ又は２５０マイクログラム／ｍＬに到達するようにグルホスファミドを投与し、そしてこの投与を１回以上反復することにより癌を治療し；この実施形態は例えば限定しないが、卵巣癌及び軟組織肉腫を治療するために使用できる。
【００６１】
別の実施形態においては、グルホスファミドのＡＵＣが少なくとも２００マイグログラム−ｈ／ｍＬ、又は少なくとも５００マイグログラム−ｈ／ｍＬ、又は少なくとも１０００マイグログラム−ｈ／ｍＬとなるようにグルホスファミドを投与し、そしてこの投与を４週毎に１回１回以上反復し、これに組み合わせて患者の血漿中のゲムシタビンの濃度が少なくとも２０マイクログラム／ｍＬに到達するような量でゲムシタビンを投与し、そしてこの投与を各４週治療サイクル中３週間週１回反復することにより癌を治療し；この実施形態は例えば限定しないが、膵臓癌、卵巣癌及び乳癌を治療するために使用できる。別の実施形態においては、３週毎に１回、グルホスファミドのＡＵＣが少なくとも２００マイグログラム−ｈ／ｍＬ、又は少なくとも５００マイグログラム−ｈ／ｍＬ、又は少なくとも１０００マイグログラム−ｈ／ｍＬとなるようにグルホスファミドを投与し、そしてこの投与を１回以上反復することにより癌を治療し；この実施形態は例えば限定しないが、小細胞肺癌、卵巣癌及び軟組織肉腫を治療するために使用できる。別の実施形態においては、週１回、患者の血漿中のグルホスファミド濃度が少なくとも５００マイクログラム−ｈ／ｍＬ又は少なくとも１０００マイクログラム−ｈ／ｍＬに到達するようにグルホスファミドを投与し、そしてこの投与を１回以上反復することにより癌を治療し；この実施形態は例えば限定しないが、卵巣癌及び軟組織肉腫を治療するために使用できる。
【００６２】
別の実施形態においては、患者の血漿中のＩＰＭ濃度が少なくとも１マイクログラム／ｍＬ又は少なくとも３マイクログラム／ｍＬ又は少なくとも４マイクログラム／ｍＬに到達するようにグルホスファミド又は他のＩＰＭプロドラッグ又はＩＰＭ自体を投与し、そしてこの投与を４週毎に１回１回以上反復し、これに組み合わせて患者の血漿中のｄＦｄＵの濃度が少なくとも３０マイクログラム／ｍＬに到達するような量でゲムシタビン又は他のｄＦｄＵプロドラッグを投与し、そしてこの投与を各４週治療サイクル中３週間週１回反復することにより癌を治療し；この実施形態は例えば限定しないが、膵臓癌、卵巣癌及び乳癌を治療するために使用できる。別の実施形態においては、３週毎に１回、患者の血漿中のＩＰＭ濃度が少なくとも１マイクログラム／ｍＬ又は少なくとも３マイクログラム／ｍＬ又は少なくとも４マイクログラム／ｍＬに到達するようにグルホスファミド又は他のＩＰＭプロドラッグ又はＩＰＭ自体を投与し、そしてこの投与を１回以上反復することにより癌を治療し；この実施形態は例えば限定しないが、小細胞肺癌、卵巣癌及び軟組織肉腫を治療するために使用できる。別の実施形態においては、週１回、患者の血漿中のＩＰＭ濃度が少なくとも３〜４マイクログラム／ｍＬに到達するようにグルホスファミド又は他のＩＰＭプロドラッグ又はＩＰＭ自体を投与し、そしてこの投与を１回以上反復することにより癌を治療し；この実施形態は例えば限定しないが、卵巣癌及び軟組織肉腫を治療するために使用できる。
【００６３】
別の実施形態においては、ＩＰＭ  ＡＵＣが少なくとも１０マイクログラム−ｈ／ｍＬ又は少なくとも２５マイクログラム−ｈ／ｍＬ又は少なくとも３５マイクログラム−ｈ／ｍＬに到達するようにグルホスファミド又は他のＩＰＭプロドラッグ又はＩＰＭ自体を投与し、そしてこの投与を４週毎に１回１回以上反復し、これに組み合わせて患者の血漿中のｄＦｄＵの濃度が少なくとも３０マイクログラム−ｈ／ｍＬに到達するような量でゲムシタビン又は他のｄＦｄＵプロドラッグを投与し、そしてこの投与を各４週治療サイクル中３週間週１回１回以上反復することにより癌を治療し；この実施形態は例えば限定しないが、膵臓癌、卵巣癌及び乳癌を治療するために使用できる。別の実施形態においては、３週毎に１回、ＩＰＭ  ＡＵＣが少なくとも１０マイクログラム−ｈ／ｍＬ又は少なくとも２５マイクログラム−ｈ／ｍＬ又は少なくとも３５マイクログラム−ｈ／ｍＬに到達するようにグルホスファミド又は他のＩＰＭプロドラッグ又はＩＰＭ自体を投与し、そしてこの投与を１回以上反復することにより癌を治療し；この実施形態は例えば限定しないが、小細胞肺癌、卵巣癌及び軟組織肉腫を治療するために使用できる。別の実施形態においては、週１回、患者の血漿中のＩＰＭ  ＡＵＣが少なくとも２５マイクログラム−ｈ／ｍＬ又は少なくとも３５マイクログラム−ｈ／ｍＬに到達するようにグルホスファミド又は他のＩＰＭプロドラッグ又はＩＰＭ自体を投与し、そしてこの投与を１回以上反復することにより癌を治療し；この実施形態は例えば限定しないが、卵巣癌及び軟組織肉腫を治療するために使用できる。
【００６４】
本発明を以上のセクションにおいて詳細に説明したが、以下の実施例は本発明の特定の特徴を明らかにするために提示するものであって限定するものではない。
【実施例】
【００６５】
（実施例１）
（細胞増殖試験）
Ｍｉａ−ＰａＣａ−２、ＡｓＰＣ−１及びＨ７６６ｔ細胞系統はＡｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ，Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ，ＭＤ）より入手した。全細胞系統を１０％ウシ胎児血清、ピルビン酸ナトリウム、非必須アミノ酸、Ｌ−グルタミン、ビタミン類及び抗生物質を添加したＤｕｌｂｅｃｃｏ変性Ｅａｇｌｅ培地中で培養した。細胞は３７℃において１０％ＣＯ２含有湿潤インキュベーター中で維持した。特段の記載が無い限り全化学試薬をＳｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から購入した。ゲムシタビンはＥｌｉ  Ｌｉｌｌｙ  Ｃｏ．より購入し、滅菌リン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）中に希釈再調製し、インビボ試験用には室温で、そしてインビトロ試験用には２０℃で小分量ずつ保存した。グルホスファミドは米国特許５，６２２，９３６及びドイツ国特許ＤＥ１９５３４３６６中に記載の通り製造し、そして各試験用に新しくＰＢＳ中に希釈再調製した。抗増殖細胞核抗原（ＰＣＮＡ）及び抗ＣＤ３１モノクローナル抗体はＤａｋｏｃｙｔｏｍａｔｉｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ（Ｃａｒｐｉｎｔｅｒｉａ，ＣＡ）より入手した。細胞を指数生育培地から採取した。細胞数は血球計中で直接計数することにより、そして、細胞の生存性はトリパンブルー排出により測定した。細胞生育曲線に関しては、１×１０６個の細胞を各用量レベルに付き３連でプレーティングした。２４時間後、培地を除去しゲムシタビン１μｇ／ｍｌ、グルホスファミド１０μｇ／ｍｌ又は両方と混合した新しい培地と交換した。これ等の濃度は予備的試験に基づいて選択しており、そして概ね５０％抑制濃度となっている。３日間毎日、生存接着細胞を血球計で直接計数した。
【００６６】
予備的実験に基づいて、ゲムシタビン１μｇ／ｍｌの濃度をその生育抑制作用を調べるために選択した。この濃度において、ゲムシタビンはＭｉａＰａＣａ−２及びＨ７６６ｔ細胞の成育は抑制したが、ＡｓＰＣ−１細胞の成育に対しては中等度の作用しか示さなかった（図１）。１０μｇ／ｍｌの濃度のグルホスファミドはゲムシタビンより低作用であった。しかしながら、グルホスファミドをゲムシタビンに添加したところ、ＭｉａＰａＣａ−２及びＨ７６６ｔ細胞の細胞成育の追加的抑制は観察されたが、ＡｓＰＣ−１細胞では観察されなかった。
【００６７】
（実施例２）
（蛍光活性化細胞分類（ＦＡＣＳ）分析によるＤＮＡフラグメント化の測定）
ＤＮＡフラグメント化（アポトーシス）の定量はＮｉｃｏｌｅｔｔｉら（１９９１）の方法に基づいて実施した。１×１０６個の細胞をベヒクル、ゲムシタビン（１ｕｇ／ｍｌ）、グルホスファミド（１０ｕｇ／ｍｌ）又はゲムシタビンとグルホスファミドの両方の組み合わせ（それぞれ１及び１０μｇ／ｍｌ）と共に２４時間インキュベートした。次に穏やかにトリプシン処理することにより細胞を収集し、ＰＢＳで洗浄し、そして遠心分離によりペレット化した。細胞を５０μｇ／ｍｌヨウ化プロピジウム、０．１％ＴｒｉｔｏｎＸ−１００及び０．１％クエン酸ナトリウムを含有するＰＢＳ中に再懸濁した。次に試料を１６時間４℃で保存し、回転混合した後にＦＡＣＳ分析に付した。次にＧ１以前の領域にある細胞の相対的パーセンテージを定量し、そしてアポトーシスを起こしている細胞の推定値として使用した。ＦＡＣＳチャンネルはレファレンス分析に基づき、実験中一定に維持した。
【００６８】
細胞毒性試験によりグルホスファミド及びゲムシタビンの治療はＭｉａＰａＣａ−２細胞に対して最も有効であることが示されているため、ＭｉａＰａＣａ−２細胞のＤＮＡフラグメント化のＦＡＣＳ分析を実施することによりこの組み合わせによりアポトーシスが誘導されるかどうか調べた。グルホスファミド１０μｇ／ｍｌ又はゲムシタビン１μｇ／ｍｌによるＭｉａＰａＣａ−２細胞の処理は、アポトーシス増大により測定される通りアポトーシスの誘導をもたらした（Ｇ１前画分；図２）が、ゲムシタビンの作用が高値であった。両方の薬剤による処理では性質上相加分を超える増強されたアポトーシスがもたらされた。
【００６９】
（実施例３）  
（動物モデル試験）
以前に記載されている通り（Ｋａｔｚら、２００３，Ｊ．Ｓｕｒｇ．Ｒｅｓ．１１３：１５１−６０）安定に赤色蛍光蛋白（ＲＦＰ）を発現するようにトランスフェクトされているＭｉａＰａＣａ−２細胞を用いて同所性の腫瘍を形成した。腫瘍の保存株はＭｉａＰａＣａ−２ＲＦＰ細胞を５×１０６個／２００μＬの濃度でヌードマウスの体側に皮下注射することにより作成した。腫瘍組織を無菌的に摘出し、そして肉眼により壊死しているか壊死が疑われるか又は非ＲＦＰ腫瘍の任意の組織を除去した。残存する健常な腫瘍組織はその後、約１ｍｍ３の大きさに断片化した。レシピエントマウスはイソフルラン麻酔し、手術区域はヨウ素及びアルコールで滅菌した。手術用ハサミを用いてヌードマウスの左上腹部を長さ約１．５ｃｍ切開した。膵臓を露出させ、次に、移植部位の被膜を剥離した後に８−０手術用縫合糸（ナイロン）を用いてマウスの膵臓にＭｉａＰａＣａ−２−ＲＦＰ腫瘍断片２点を移植した。腹部を６−０手術用縫合糸（絹）で閉鎖した。操作の全手順をＨＥＰＡフィルター処理層流フード下において７倍顕微鏡（Ｏｌｙｍｐｕｓ）を用いて実施した。
【００７０】
試験の行程中、各動物の原発腫瘍サイズを毎週観察した。原発腫瘍サイズはスライディングカリパスを用いながら直行する短寸法（Ｗ）及び長寸法（Ｌ）を測定することにより推定した。概数値としての腫瘍体積を式（Ｗ２×Ｌ）×１／２により計算した。試験終了時、原発腫瘍負荷を確認し、主要臓器への転移は以前に記載されている通り全身画像化により評価した。要約すれば、４９０ｎｍの繊維光学光源を装着した蛍光ボックス（Ｌｉｇｈｔｏｏｌｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｅｎｃｉｎｉｔａｓ，ＣＡ）内にマウスをいれ、そして水銀灯及び５０Ｗ電源を装着したＬｅｉｃａ蛍光立体顕微鏡モデルＬＺ１２で画像を取得した。赤色蛍光蛋白（ＲＦＰ）の選択的励起はＤ４２５／６０バンドパスフィルター及び４７０ＤＣＸＲ二色ミラーを介して行った。放射された蛍光はロングパスフィルターＧＧ４７５（Ｃｈｒｏｍａ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｂｒａｔｔｌｅｂｏｒｏ，ＶＴ）を介してＨａｍａｍａｔｓｕＣ５８１０型の３チップクールドカラー（３  ｃｈｉｐ  ｃｏｏｌｅｄ  ｃｏｌｏｒ）電荷結合デバイスカメラ（Ｈａｍａｍａｔｓｕ  Ｐｈｏｔｏｎｉｃｓ，Ｂｒｉｄｇｅｗａｔｅｒ，ＮＪ）上に収集した。画像はコントラストと明度について処理し、Ｉｍａｇｅ  Ｐｒｏ  Ｐｌｕｓ  ３．１ソフトウエア（Ｍｅｄｉａ  Ｃｙｂｅｒｎｅｔｉｃｓ，Ｓｉｌｅｒ  Ｓｐｒｉｎｇ，Ｍａｒｙｌａｎｄ）を用いて分析した。１０２４×７２４ピクセルの高解像度の画像をＩＢＭＰＣ上に直接、又は高解像度Ｓｏｎｙ  ＶＣＲ（ＳＬＶ−Ｒ１０００型；Ｓｏｎｙ，Ｔｏｋｙｏ）上に画像出力を介して連続的にキャプチャーした。
【００７１】
予備的実験において、群当たりマウス６匹を用いてグルホスファミドを１４日間３〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の用量でＩＶ注射した。対照マウスには食塩水を投与した。この試験の結果に基づけば、１０及び３０ｍｇ／ｋｇ／日の用量を第２の試験の為に選択した。全ての群の転移頻度をフィッシャーの正確確率検定を用いて分析した。各投与群と未投与対照の間の動物生存期間の比較は対数順位分析を用いて分析した。腫瘍サイズの比較はクルスカル・ワリス検定とその後の対数順位分析により調べた。全ての値はＰ＜０．０５の場合に有意と見なした。図３Ａは１４日間０、３、１０、３０及び１００ｍｇ／ｋｇＩＶで投与したグルホスファミド、並びに３週間週１回３００ｍｇ／ｋｇＩＰのゲムシタビン（Ｇｅｍ）に関する剖検時に記録された最終腫瘍体積を示す。治療は腫瘍が１００〜１５０ｍｍ３に達した時点で開始した。グルホスファミド治療は腫瘍体積の用量関連減少をもたらし、１００ｍｇ／ｋｇの用量は効果においてゲムシタビンと同様であった。更に又、３０ｍｇ／ｋｇ以上の用量においては、５０％生存に到る時間の有意な延長、即ちゲムシタビンで観察されたものと有意差が無い作用が観察された（図３Ｂ）。
【００７２】
（実施例４）
グルホスファミド及びゲムシタビンの複合療法
グルホスファミドとゲムシタビンの組み合わせをＨ７６６−Ｔ又はＡｓ−ＰＣ−１ヒト膵臓癌細胞から誘導した腫瘍を担体していた雌性ＮＭＲＩｎｕ／ｎｕマウスに７日間毎日投与した。マウスにはベヒクル対照（０．９％塩化ナトリウム溶液、ｉｖ）、ゲムシタビン（ｉｐ）、グルホスファミド（ｉｖ）又はゲムシタビン／グルホスファミドの組み合わせを１日１回７連続日の間に投与した。試験中を通じてゲムシタビンの標準用量としては１．２５ｍｇ／ｋｇを使用した。
【００７３】
ＨＳ７６６−Ｔ腫瘍モデルにおいて、１０ｍｇ／ｋｇグルホスファミド投与はゲムシタビン単独又は溶媒対照群と比較して腫瘍生育の開始において劇的な遅延をもたらした。ゲムシタビン治療単独では腫瘍の進行に対しては境界的な抑制作用のみ生じた。１０ｍｇ／ｋｇグルホスファミド及び１．２５ｍｇ／ｋｇゲムシタビンの複合投与はグルホスファミド単独治療と比較して試験期間終了時（第４２日）に被験動物の腫瘍サイズの統計学的に有意な（Ｐ＝０．００９）減少をもたらした。Ａｓ−ＰＣ−１腫瘍モデルにおいては、単独又は組み合わせの何れかによるグルホスファミド及びゲムシタビンの用量用法は、腫瘍生育に対して明確な抑制作用を有していなかった。これ等の結果はＨＳ７６６−Ｔ腫瘍モデルがグルホスファミドとゲムシタビンの複合投与に対して感受性であることを示している。
【００７４】
（実施例５）
（グルホスファミド及びゲムシタビンの複合療法）
グルホスファミドとゲムシタビンの組み合わせをＭｉＰａｃａ２型ヒト膵臓癌細胞から誘導した腫瘍を担持するヌードマウスに投与した。マウスは下記の表１に示す通りベヒクル対照、ゲムシタビン、グルホスファミド又はゲムシタビン／グルホスファミド組み合わせを投薬した（１０匹／群）。グルホスファミドは１４日間毎日ｉｖ投与した（群２〜４及び７〜１２）。ゲムシタビンは３週間週１回３００ｍｇ／ｋｇｉｐで投与した（群６及び１０〜１２）。ゲムシタビンは３週間週２回１５０ｍｇ／ｋｇｉｐで投与した（群５及び７〜９）。
【００７５】
【表１】
2009509974.tif 000003
群３及び４は中等度の腫瘍サイズ減少を示した。腫瘍サイズの約５０％減少が群６において観察された。群１０は群６と同等であった。群１１及び１２は群６と比較してより大きい腫瘍サイズ減少を示した（群１２は毒性と考えられた）。この実験においては、１５０ｍｇ／ｋｇにおけるゲムシタビン投与（群５及び７〜９）は動物の急速な死亡をもたらした。グルホスファミド３０ｍｇ／ｋｇとゲムシタビンの組み合わせ（群１１）はゲムシタビン単独（群６）より有意に高値の有効性を示した。図４はグルホスファミドの存在下又は非存在下にゲムシタビン３００ｍｇ／ｋｇを投与した群に関する週毎の原発腫瘍体積を示す。結果によれば、グルホスファミドとゲムシタビンの組み合わせを投与した動物における腫瘍の縮小はゲムシタビン単独の場合よりも有意に高値の有効性を示している。治療の同じ組み合わせはまた生存の有意な向上ももたらした。
【００７６】
（実施例６）
（膵臓腫瘍の免疫組織化学的特徴）
別の実験において、イソフルラン麻酔下及び無菌条件下において正中切開して開腹した後、１×１０６個のＭｉａ−ＰａＣａ−２細胞の膵臓内注射によりヌードマウス５匹の群において腫瘍を樹立した。腫瘍サイズが約１５０ｍｍ３となった時点で１４日間グルホスファミドＩＶ３０ｍｇ／ｋｇ／日、２週間週１回ゲムシタビンＩＰ３００ｍｇ／ｋｇ／日（治療の第１及び８日）又は両方の薬剤により治療を開始した。ＰＢＳをベヒクル対照として使用した。最終グルホスファミド投薬の翌日、腫瘍を採取して分析時まで凍結した。
【００７７】
凍結した組織の切片を固定し、パラフィン包埋した５μｍ切片を作成し、市販のキット（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩ）を用いながら製造元の説明書に従って末端デオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼ（Ｔｄｔ）媒介ニック末端標識（ＴＵＮＥＬ）の試験に付した。バックグラウンド反応性はＴｄｔの非存在下（陰性対照）においてスライドを処理することにより求めた。核は１０分間ヨウ化プロピジウムで染色した。増強試薬（Ｐｒｏｌｏｎｇ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ，ＯＲ）で蛍光ブリーチングを最小限とした。免疫蛍光顕微鏡観察は狭小なバンドパスの励起フィルターを装着した蛍光顕微鏡で実施した。画像はＮｉｋｏｎカメラ（Ｐｈｏｔｏｍｅｔｒｉｃｓ，Ｔｕｃｓｏｎ，ＡＺ）を用いてキャプチャーした。ＤＮＡフラグメント化はアポトーシス細胞の核内の局在化した緑色蛍光により検出した。総ＴＵＮＥＬ発現の定量の為に、アポトーシス事象の数を倍率×１００において１０個の無作為の０．１５９ｍｍ２の視野において計数した。
【００７８】
免疫組織化学的にＰＣＮＡ及びＣＤ３１を検出するために、パラフィン包埋した組織を正荷電Ｓｕｐｅｒｆｒｏｓｔスライド（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｈｏｕｓｔｏｎ，ＴＸ）上にマウントし、一夜乾燥した。切片をキシレン中で脱パラフィン処理し、その後、一連の段階的アルコール［１００％、９５％および８０％エタノール／再蒸留水（ｖ／ｖ）］処理を行い、そしてＰＢＳ（ｐＨ７．５）中に再水和した。抗原回復を増強するために、切片を５分間マイクロウエーブ処理した。ＣＤ３１の検出の為に、パラフィン包埋組織を３７℃で１５分間ペプシン（Ｂｉｏｍｅｄａ）処理し、ＰＢＳで洗浄した。抗ＰＣＮＡ又は抗ＣＤ３１抗体に曝露し、ＰＢＳで洗浄した後、スライドを安定な３，３−ジアミノベンジジンと共に１０〜２０分間インキュベートすることにより陽性反応を可視化した。切片は蒸留水で洗浄し、Ｇｉｌｌのヘマトキシリンで３０秒間逆染色し、そしてＵｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｍｏｕｎｔ（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ）を用いてマウントした。二次抗体単独に曝露した対照試料は特異的染色を示さなかった。ＭＶＤの定量の為に、倍率×１００において１０個の無作為の０．１５９ｍｍ２の視野を各腫瘍に付きキャプチャーし、そして以前に記載されている方法に従って微小血管を定量した（２６，２７）。ＰＣＮＡ発現の定量のためには陽性細胞の数を倍率×１００において１０個の無作為の０．１５９ｍｍ２の視野において計数した。
【００７９】
図５は食塩水、グルホスファミド（３０ｍｇ／ｋｇＩＶ毎日２週間）、ゲムシタビン（３００ｍｇ／ｋｇ週１回２週間）又は両方の薬剤で治療したマウスに由来する腫瘍のＴＵＮＥＬ及びＰＣＮＡ染色した切片から誘導したアポトーシス及び増殖指数を示す。アポトーシスは対照マウスにおいては低レベルで生じたが、グルホスファミドにより有意に、そしてゲムシタビンにより更に高い程度まで増大した。複合治療は何れかの薬剤単独の場合よりも有意に高値であるアポトーシスのレベルをもたらした。ＰＣＮＡ染色はゲムシタビン及びグルホスファミドの両方において対照より有意に高値であり、有意な抗増殖作用を示していた。複合治療は何れかの治療単独と比較して有意に高値のＰＣＮＡ染色をもたらした。ＣＤ３１染色は何れかの治療の単独又は複合療法の何れの作用も明らかにできなかった。
【００８０】
（実施例７）
（進行固形腫瘍及び膵臓腺癌を有する患者におけるグルホスファミド及びゲムシタビンの複合療法）
以下の実施例はグルホスファミド及びゲムシタビンの複合療法による癌の処置を説明するために提示する。臨床試験を実施することによりゲムシタビンと組み合わせたグルホスファミドの安全性を評価し、そして有効性を明確化する。グルホスファミド（活性な代謝産物であるイソホスホラミドマスタード、即ちＩＰＭも包含する）及びゲムシタビン（活性代謝産物ｄＦｄＵも包含する）を組み合わせて投与した場合の薬物動態パラメーターもまた評価する。
【００８１】
多施設試験を実施し、その対象を２群、即ち（ｉ）以前に治療されているか、使用できる有効な標準的治療が無い局所的進行及び／又は転移固形腫瘍を有する対象（群Ｉ）；及び（ｉｉ）化学療法により以前に治療されていない進行／転移の膵臓腺癌を有する対象（群ＩＩ）に分割する。対象はコホートに割り付ける。
【００８２】
各対象に対する試験の総継続時間は、投薬前３週間（スクリーニング期間）を含む２７週間までとする。治療サイクルは４週間であり、グルホスファミドは各４週サイクルの第１日に投与し、そしてゲムシタビンは各４週サイクルの第１、８及び１５週に投与する。グルホスファミド（１５００，２５００、３５００及び４５００ｇ／ｍ２−各用量レベルで１コホート）は４週毎に１回各サイクルの第１日に４時間かけて静脈内投与する。用量の４分の１を最初の３０分間に亘り投与する。用量の残余４分の３はその後の３．５時間に亘って投与する。ゲムシタビン（１０００ｇ／ｍ２）は毎週、各４週サイクルの第１、８及び１５日に３０分かけて静脈内投与する。ゲムシタビン注入は、各サイクルの第１日に、グルホスファミド注入終了後３０分に開始する。２サイクル後に安定な疾患又は完全又は部分的な応答を有する対象においては、治療は場合により追加的４週サイクル４回以上までの期間、延長する。この投薬日程を以下の表２に示す。
【００８３】
【表２】
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バイタルサイン、心電図、臨床検査結果及び有害事象を安全性評価の為に使用する。腫瘍の評価、例えばコンピューター断層撮影（ＣＴ）スキャンはベースライン及び対象が試験中の８週毎に実施する。薬物動態パラメーターは投与後所定の時間間隔で得られたグルホスファミド及びゲムシタビンの血漿中濃度から求める。連続血液試料はグルホスファミド及びその代謝産物であるイソホスホラミド（ＩＰＭ）（サイクル１及び２の第１日のグルホスファミド注入開始後０，０．２５、０．５、１、１．５、２、３、４、４．２５、４．５、５、６、８、１２、１６及び２４時間）及びゲムシタビン及びその代謝産物ｄＦｄＵ（サイクル１及び２の第１日のゲムシタビン注入開始後０、１５、３０、４０、５０分及び１、１．５、３．５、７．５、１１．５及び１９．５時間）の血漿中濃度の測定の為に各対象から収集する。血液試料はグルホスファミド／ＩＰＭ及びゲムシタビン／ｄＦｄＵレベルに関して分析する。有効性及び安全性のデータの分析の為に私用した全ての統計学的試験は両側であり、そして０．０５有意水準で実施し、そして９５％信頼区間を計算する。
【００８４】
各対象に付き、グルホスファミド／ＩＰＭ及びゲムシタビン／ｄＦｄＵに関する以下の薬物動態、即ち、最大濃度までの時間（Ｔｍａｘ）；最大ピーク観察濃度（Ｃｍａｘ）；終末相の間の対数濃度ｖｓ時間のプロファイルの直線回帰の傾きの大きさ（Ｋｅｌ）；ｌｎ（２）・Ｋｅｌとして計算した半減期（Ｔ１／２）；０時から最後の定量可能な濃度の時間（ＬＱＣＴ）までの濃度時間曲線下面積（ＡＵＣｌａｓｔ）、ここでＬＱＴＣは定量可能な濃度を有する最後の試料が採取された時間；ＡＵＣｌａｓｔ＋ＣＬＱＣＴ／Ｋｅｌとしての直線台形規則を用いて計算される０から無限までの濃度時間曲線下面積（ＡＵＣ）；ＡＵＣで割った用量として計算されるクリアランス（Ｃｌ）（グルホスファミド及びゲムシタビンのみ）；クリアランス（Ｃｌ）と｛［ＡＵＭＣ／ＡＵＣ２］−［Ｔ１／２］｝の積として計算される見かけの定常状態分布体積（Ｖｓｓ）、ここでＡＵＭＣは血漿中濃度時間曲線の第１積率下の面積（グルホスファミド及びゲムシタビンのみ）であり、そしてＴＩは注入時間；終末排除速度定数Ｋｅｌに対するＣｌの比として計算される分布後相における見かけの分布体積（Ｖβ）（グルホスファミド及びゲムシタビンのみ）を計算する。用量調節ＡＵＣ及びＣｍａｘは用量でＡＵＣ及びＣｍａｘを割ることにより各対象に付いて計算する。有効性の結果は、膵臓癌患者の応答率、応答持続時間、無進行の生存及び全体的生存により求められるものとして評価する（６及び１２ヶ月生存及び血清中炭水化物１９−９の変化）。
【００８５】
膵臓（８）、膀胱（４）及び卵巣（１）、乳房（１）、肝臓（１）、胃／十二指腸（２）、腎臓（１）の癌及び肉腫（１）を有する患者１９人を参加させた。２種のＤＬＴ（用量制限毒性）、即ち２５００ｇ／ｍ２における等級３の疲労及び４５００ｇ／ｍ２における等級４の血小板減少症が起こってる。両方のコホートが拡大した。１５００及び３５００ｇ／ｍ２コホートのいずれにおいてもＤＬＴは起こらなかった。第１相のデータによれば、４５００ｇ／ｍ２の用量におけるグルホスファミドはゲムシタビンと組み合わせて安全に投与できることを示している。患者５人が６サイクル全てを終了し、もう１人の患者は試験継続中である。中断の理由は進行性の疾患（１１）、臨床悪化（１）、有害事象（ＡＥ）（１）及び死亡（１）であった。３／４等級の好中球減少症が患者７人（サイクル１の間５）及び３／４等級の血小板減少症が患者５人（サイクル１の間２）で生じた。ＣｒＣＬは１患者において６０ｍＬ／分まで低下した。１例の未確認の部分的応答が報告され；８週において応答評価した評価可能患者１７人中９人（５３％）が安定疾患（ＳＤ）を有し、うち１患者は療法８サイクルを終了した卵巣癌患者であり；１人は療法１０サイクルを終了した乳癌患者であり；そして４人は少なくとも７サイクルの療法を終了した膵臓癌患者であった。
【００８６】
薬物動態分析によればグルホスファミドとゲムシタビンの間には相互作用は示唆されていない。図６及び７に示す通り、グルホスファミド及びＩＰＭは１５００〜４５００ｇ／ｍ２で直線的な薬物動態を示しており、半減期は約２〜３時間であり；グルホスファミド及びＩＰＭの薬物動態はサイクル非依存性である。グルホスファミドは大きいＶｄｓｓ（約９〜１５Ｌ／ｍ２）及び低クリアランス（８０〜９０ｍＬ／ｍｉｎ／ｍ２）を有している。更に又、図８及び９に示される通り、グルホスファミドはゲムシタビン及びｄＦｄＵの薬物動態に影響しない。図８及び９はサイクル１及び２の第１日（即ち全用量におけるグルホスファミドの存在下）及び第８日（グルホスファミド非存在下）のゲムシタビン及びｄＦｄＵの血漿中濃度ｖｓ時間のプロファイルを示している。第１及び８日の間で血漿中濃度のプロファイルに有意差がないことは、グルホスファミドの作用がないことを示している（全用量のグルホスファミドデータをプールしたため全用量において）。
【００８７】
（実施例８）
（ゲムシタビン難治性転移膵臓腺癌に対するグルホスファミド療法）
以下の実施例はグルホスファミド療法によるゲムシタビン難治性転移膵臓腺癌の処置を説明するために提示する。多施設無作為化オープンラベル試験を実施することにより最良支援介護と比較した場合の全体的生存を尺度とした場合のゲムシタビン難治性転移膵臓腺癌を有する対象におけるグルホスファミドの安全性及び有効性を評価する。
【００８８】
対象は投与群当たり１５０対象の２群、即ち（ｉ）グルホスファミド治療群（群Ｉ）及び（ｉｉ）最良支援介護（ＢＳＣ、群ＩＩ）に分割する。群Ｉの対象には５１週間までの期間グルホスファミドを投与する。グルホスファミドは１７投薬まで４５００ｇ／ｍ２で３週毎に１回６時間に亘り静脈内投与する。用量の４分の１を３０分に亘って、そして残余をその後の５．５時間に亘って注入する。対象は緩和的放射線療法を受けてよいが、グルホスファミド投与±４８時間以内を除く。グルホスファミド治療の有効性を評価するために、群ＩＩの対象には抗腫瘍作用を有する如何なる薬物療法も、例えば化学療法又は他の全身細胞毒性／細胞増殖抑制剤媒介療法等を受けさせない。他の適切な支援手段及び抗腫瘍作用を有さない併用薬物療法、例えば鎮痛剤、抗生物質、輸液、造血系コロニー刺激因子（予防的ではなく療法として）、エリスロポエチン、食欲促進のための酢酸メゲストロール等は適宜投与する。群Ｉの対象にはまた最良支援介護を供する。この投薬日程を下記の表３に示す。
【００８９】
【表３】
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腫瘍評価はベースライン時及び最初の２４週間は６週毎、そしてその後は疾患の進行が報告されるまで９週毎に実施する。薬物動態試料はサイクル１及び２の間に群Ｉの対象から採取する。グルホスファミド／ＩＰＭの血漿中濃度用の血液試料は後述する時間において、サイクル１及び２の第１日に群Ｉの対象から以下の時点、即ち投与前及びグルホスファミド注入終了直前に収集する。追加的な薬物動態パラメーターは群Ｉの２４対象のサブセットに関して測定する（グルホスファミド／ＩＰＭに関するＡＵＣ、Ｃｍａｘ及びＴ１／２）。血液試料はこれ等のサブセットからサイクル１及び２の第１日に、以下の時間、即ち投与前、グルホスファミド注入開始後０．５（注入速度変更直前）、１、３、６（グルホスファミド注入終了直前）、６．２５，６．５、７、８、１０、１６、２４時間に収集する。
【００９０】
グルホスファミド／ＩＰＭに関する薬物動態パラメーター（上記実施例７に記載）（サイクル１及び２の第１日）を２４対象サブセットの各対象に付き計算する。有効性の結果は、最良支援介護と比較した場合の、応答率（完全応答及び部分的応答）、応答持続時間、無進行の生存、６ヶ月及び１２ヶ月生存、ＶＡＳ疼痛スコアの変化、及び、血清中炭水化物１９−９応答に基づいて評価する。試験により検討された原発有効性の仮説は、ゲムシタビン難治性転移膵臓腺癌を有するグルホスファミド治療された対象は最良支援介護と比較した場合に向上した全体的生存性を有していることである。
【００９１】
（実施例９）
（小細胞肺癌（ＳＣＬＣ）；広範再発感受性ＳＣＬＣ；卵巣癌；軟組織肉腫及び進行軟組織肉腫のためのグルホスファミド療法）
卵巣癌、小細胞肺癌、広範再発感受性ＳＣＬＣ、軟組織肉腫及び進行軟組織肉腫を３週毎に１回投与する４５００ｇ／ｍ２の用量又は５０００ｇ／ｍ２の用量における１時間の注入時間に亘るグルホスファミドの静脈内投与により本発明の方法に従って治療する。
【００９２】
１つの実施形態において、患者は小細胞肺癌を有しており、そして以前にＩＣＥ（イフォスファミド／カルボプラチン／エトポシド）又はＩＣＥ−Ｖ（イフォスファミド／カルボプラチン／エトポシド／ビンクリスチン）療法を受けている。１つの実施形態において、患者は小細胞肺癌を有しており、ＩＣＥ又はＩＣＥ−Ｖ療法と同時に（即ち組み合わせて）グルホスファミドで治療される。
【００９３】
場合により、卵巣癌患者は週１回投与する１６００ｇ／ｍ２、２５００ｇ／ｍ２及び５０００ｇ／ｍ２の用量における１時間の注入時間に亘るグルホスファミドの静脈内投与により治療する。
【００９４】
本発明はその特定の実施形態を参照しながら説明してきたが、当業者の知る通り、本発明の範囲を外れることなく種々の変更を行うことができ、そして、等価物を代替とすることができる。更に又本発明の範囲を外れることなく本発明により与えられる利益を達成するために特定の状況、材料、物質組成、プロセス、プロセス工程を適合させるために多くの改変が可能である。このような改変は本明細書に添付する請求項の範囲内であることを意図している。
【００９５】
本明細書において引用した全ての公開物及び特許文書はそれらの公開物又は文書が特定的個別的に参照により本明細書に組み込まれるように示されるが如く参照により本明細書に組み込まれる。公開物及び特許文書の引用は、何れのそのような文書も関連従来技術であることの教示として意図するものではなく、またその内容又は日付に関して如何なる受諾を構成するものでもない。
【図面の簡単な説明】
【００９６】
【図１】図１は増殖試験におけるグルホスファミド及びゲムシタビンの作用を示す。ＭｉａＰａＣａ−２（Ａ）、Ｈｓｔ−７６６（Ｂ）及びＡｓＰＣ−１（Ｃ）膵臓細胞を実施例に記載の通り３日間培地上で生育させた。グルホスファミド及びゲムシタビンを表記の濃度において単独又は共に培地に添加し、そして細胞数を血球計を用いて毎日測定した。
【図２】図２はＦＡＣＳによるＤＮＡフラグメント化の分析を示す。１×１０６個の細胞をベヒクル（Ａ）、ゲムシタビン（Ｂ）、グルホスファミド（Ｃ）又は両方の薬剤の組み合わせ（Ｄ）と共に１０μｇ／ｍｌにおいて２４時間、ヨウ化プロピジウムを添加しながらインキュベートした。
【図３】図３はＭｉａＰａＣａ−２−ＲＦＰ膵臓癌モデルにおいて記録された最終腫瘍体積（Ａ）および５０％生存（Ｂ）を示す。グルホスファミドは１４日間毎日ＩＶ投与した。＊は対照と比較してＰ＜０．０５を意味する。
【図４】図４はＭｉａＰａＣａ−２−ＲＦＰ膵臓癌モデルにおいて記録された原発腫瘍体積を示す。ゲムシタビン（ＩＰ、週１回３週間）及びグルホスファミド（ＩＶ毎日１４日間）は各々、第２６日測定の腫瘍体積を有意に減少させたが、３０ｍｇ／ｋｇとゲムシタビンの組み合わせは有意に高値の減少をもたらした。＊は対照と比較してＰ＜０．０５を意味し；＊＊は対照と比較してＰ＜０．０１を意味し；＃はゲムシタビン単独と比較してＰ＜０．０５を意味する。する。
【図５】図５はＴＵＮＥＬ及びＰＣＮＡ染色により測定したアポトーシス指数及び増殖指数を示す。腫瘍は治療終了時に摘出し、ＩＨＣ用に処理した。＊は対照と比較してＰ＜０．０５を意味し；＊＊は対照と比較してＰ＜０．０１を意味し；＊＊＊は対照と比較してＰ＜０．００１を意味し；＃はゲムシタビンと比較してＰ＜０．０５を意味する。
【図６】図６はグルホスファミドの種々の用量（１５００、２５００、３５００及び４５００ｍｇ／ｍ２）における治療サイクルの第１日のグルホスファミド注入開始後０、４、８、１２、１６、２０及び２４時間におけるグルホスファミドの血漿中濃度（μｇ／ｍＬ）を示す。
【図７】図７はグルホスファミドの種々の用量（１５００、２５００、３５００及び４５００ｍｇ／ｍ２）における治療サイクルの第１日のグルホスファミド注入開始後０、４、８、１２、１６、２０及び２４時間におけるグルホスファミドの代謝産物であるイソホスホラミドマスタード（ＩＰＭ）の血漿中濃度（μｇ／ｍＬ）を示す。
【図８】図８はゲムシタビン１０００ｍｇ／ｍ２における治療サイクルの第１及び８日のゲムシタビン注入開始後０、０．５、１．０、１．５、２．０、２．５、３．０及び３．５時間におけるゲムシタビンの血漿中濃度（μｇ／ｍＬ）を示す。
【図９】図９はゲムシタビン１０００ｍｇ／ｍ２における治療サイクルの第１及び８日のゲムシタビン注入開始後０、４、８、１２、１６、２０及び２４時間におけるゲムシタビンの代謝産物であるｄＦｄＵの血漿中濃度（μｇ／ｍＬ）を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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