(57)【要約】  ヒトまたは動物における癌原性に関連するキナーゼを阻害する、式（Ｉ）:【化１】2009507026.tif 000096で示される新規置換ベンズイミダゾール化合物、組成物及び方法を提供する。ある態様では、この化合物と組成物はセリン／トレオニンキナーゼ又は受容体チロシンキナーゼの少なくとも１種の活性の阻害に有効である。この化合物と組成物は単独で、あるいはセリン／トレオニンキナーゼまたは受容体チロシンキナーゼが介在する疾患、たとえば癌の処置のための追加的な薬剤少なくとも１種との組成物中で使用できる。
2009507026.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）：
【化１】
2009507026.tif 000091
［式中、
各Ｒ１は、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、（Ｃ１−６アルキル）スルファニル、（Ｃ１−６アルキル）スルホニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
Ｒ２はＣ１−６アルキルまたはハロ（Ｃ１−６アルキル）であり；
各Ｒ３は、ハロ、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシから独立に選択され；
各Ｒ４は、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ、カルボキシル、（Ｃ１−６アルコキシ）カルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル、カルボニトリル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルカルボニル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、要すればヒドロキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、ハロ（Ｃ１−６アルキル）、Ｃ１−６アルコキシ、およびハロ（Ｃ１−６アルコキシ）から独立に選択される置換基１個またはそれ以上で置換されていてもよい；
ａは１、２、３、４、または５であり；
ｂは０、１、２、または３であり；そして
ｃは１または２である］
で示される化合物、またはその互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、またはそのプロドラッグ、またはその化合物、互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、もしくはプロドラッグの医薬的に許容される塩。
【請求項２】
各Ｒ１がヒドロキシ、クロロ、フルオロ、ブロモ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロエチル、トリフルオロメトキシ、トリフルオロエトキシ、ピペリジニル、Ｃ１−６アルキルピペリジニル、ピペラジニル、Ｃ１−６アルキルピペラジニル、テトラヒドロフラニル、ピリジニルおよびピリミジニルから構成される群から独立に選択される基である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
ａが１または２であり、少なくとも１個のＲ１がハロ（Ｃ１−６アルキル）である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
少なくとも１個のＲ１がトリフルオロメチルである、請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２がＣ１−６アルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２がメチルまたはエチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２がメチルである、請求項４に記載の化合物。
【請求項８】
ｂが０であり、Ｒ３が不在である、請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
ｂが１であり、Ｒ３がＣ１−６アルコキシである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ３がメトキシである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
ｃが１または２であり、少なくとも１個のＲ４がハロ（Ｃ１−６アルキル）である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
少なくとも１個のＲ４がトリフルオロメチルである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
式（ＩＩ）：
【化２】
2009507026.tif 000092
［式中、
各Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ヒドロキシ、ハロ、（Ｃ１−６アルキル）スルファニル、（Ｃ１−６アルキル）スルホニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
各Ｒ３は、ハロ、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシから独立に選択され；
各Ｒ４は、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ、カルボキシル、（Ｃ１−６アルコキシ）カルボニル、アミノカルボニル、カルボニトリル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルカルボニル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、要すればヒドロキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシから独立に選択される置換基１個またはそれ以上で置換されていてもよい；
ａは１、２、３、４、または５であり；
ｂは０、１、２、または３であり；そして
ｃは１または２である］
で示される化合物、またはその互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、またはそのプロドラッグ、またはその化合物、互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、もしくはプロドラッグの医薬的に許容される塩である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
式（ＩＩＩ）：
【化３】
2009507026.tif 000093
［式中、
各Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ヒドロキシ、ハロ、（Ｃ１−６アルキル）スルファニル、（Ｃ１−６アルキル）スルホニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
各Ｒ４は、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ、カルボキシル、（Ｃ１−６アルコキシ）カルボニル、アミノカルボニル、カルボニトリル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルカルボニル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
ここで、Ｒ１およびＲ４は、要すればヒドロキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシから独立に選択される置換基１個またはそれ以上で置換されていてもよい；
ａは１、２、３、４、または５であり；そして
ｃは１または２である］
で示される化合物、またはその互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、またはそのプロドラッグ、またはその化合物、互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、もしくはプロドラッグの医薬的に許容される塩。
【請求項１５】
各Ｒ１が、ヒドロキシ、クロロ、フルオロ、ブロモ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロエチル、トリフルオロメトキシ、トリフルオロエトキシ、ピペリジニル、Ｃ１−６アルキルピペリジニル、ピペラジニル、Ｃ１−６アルキルピペラジニル、テトラヒドロフラニル、ピリジニル、およびピリミジニルから構成される群から独立に選択される、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
ａが１または２であり、少なくとも１個のＲ１がハロ（Ｃ１−６アルキル）である、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
少なくとも１個のＲ１がトリフルオロメチルである、請求項１６に記載の化合物。
【請求項１８】
ａが１である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ１がトリフルオロメチルである、請求項１８に記載の化合物。
【請求項２０】
ｃが１または２であり、少なくとも１個のＲ４がハロ（Ｃ１−６アルキル）である、請求項１４に記載の化合物。
【請求項２１】
少なくとも１個のＲ４がトリフルオロメチルである、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
ｃが１である、請求項２１に記載の化合物。
【請求項２３】
次の化合物から構成される群から選択される化合物：
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチルフェニル）アミン、
（２−フルオロ−５−ピリジン−３−イル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２−フルオロ−５−ピリジン−４−イル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（３−トリフルオロメチル−フェニル）アミン、
（３−エチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（４−クロロ−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（４−エチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イル−オキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメトキシフェニル）アミン、
（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−（１−メチル−５−｛２−［５−メチル−４−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピリジン−４−イルオキシ｝−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）アミン、
（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−（１−メチル−５−｛２−［５−メチル−４−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピリジン−４−イルオキシ｝−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）アミン、
２−｛４−［２−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチルエステル、
（２−｛４−［２−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−メタノール、
２−｛４−［１−メチル−２−（４−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−３Ｈ−イミダゾール−４−カルボニトリル、
（３−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ− ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
｛１−メチル−５−［２−（５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチルスルファニル−フェニル）アミン、
（３−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
［４−フルオロ−３−（テトラヒドロフラン−３−イル）−フェニル］−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（４−ブロモ−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（４−フルオロ−３−イソプロピル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチルスルファニル−フェニル）アミン、
（２−フルオロ−５−イソプロピル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンズイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−フルオロ−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２−フルオロ−５−ピリジン−３−イル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
２−｛４−［２−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−３Ｈ−イミダゾール−４−カルボニトリル、
（２−クロロ−４−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−クロロ−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２−フルオロ−５−ピリジン−４−イル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２−クロロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
｛１−メチル−５−［２−（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝ −（３ −トリフルオロメチル−フェニル）アミン、
（３−エチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（４−ｔｅｒｔ−−ブチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２−クロロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル ｝アミン、
（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−メチル−４−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２−クロロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−メチル−４−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−メチル−４−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
｛１−メチル−５−［２−（５−メチル−４−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝ −（３ −トリフルオロメチル−フェニル）アミン、
（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−フルオロ−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−メチル−４−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ− イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
２−｛４−［２−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−３Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸メチルエステル、
２−｛４−［２−（２−クロロ−５−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチルエステル、
（２−フルオロ−４−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２−クロロ−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２，５−ジメトキシフェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（３，５−ジメトキシフェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（２−トリフルオロメチル−フェニル）アミン、
（２−エチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−（２−｛４−［２−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１− メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−３Ｈ−イミダゾール−４−イル）−メタノン、
２−｛４−［２−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５− イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−３Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、
｛１−エチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）アミン、
（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−｛６−メトキシ−１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
｛６−メトキシ−１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミン、
（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−（２−｛４−［１−メチル−２−（４−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１Ｈ− ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−３Ｈ−イミダゾール−４−イル）−メタノン、
｛１−エチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミン、
２−｛４−［１−メチル−２−（４−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−３Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）−アミド、
２−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルアミノ｝−５−トリフルオロメチル−フェノール、および
３−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルアミノ｝−６−トリフルオロメチル−フェノール；
またはその互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、またはプロドラッグ、またはその化合物、互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、もしくはプロドラッグの医薬的に許容される塩。
【請求項２４】
式：
【化４】
2009507026.tif 000094
で示される化合物であるか、またはその化合物の式：
【化５】
2009507026.tif 000095
で示される互変異性体、またはその互変異性体の医薬的に許容される塩である、請求項２３に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２５】
請求項１または２４に記載の化合物、互変異性体、医薬的に許容される塩、またはその互変異性体の医薬的に許容される塩と医薬的に許容される担体とを含む組成物。
【請求項２６】
請求項１または２４に記載の化合物、互変異性体、医薬的に許容される塩、またはその互変異性体の医薬的に許容される塩を含む組成物をヒトまたは動物対象に投与することを含む、ヒトまたは動物対象における癌疾患の処置法。
【請求項２７】
該組成物がＲａｆキナーゼまたは突然変異体Ｂ−Ｒａｆキナーゼを阻害する、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
さらに癌を処置するための別な薬剤少なくとも１種をヒトまたは動物対象に投与することを含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
癌を処置するための別な薬剤少なくとも１種がイリノテカン、トポテカン、ジェムシタビン、５−フルオロウラシル、ロイコボリン、カルボプラチン、シスプラチン、タキサン類、テザシタビン、シクロホスファミド、ニチニチソウアルカロイド類、イマチニブ、アントラサイクリン類、リツキシマブ、およびトラスツマブから選択される、請求項２８に記載の方法。
【請求項３０】
癌疾患がメラノーマである、請求項２６に記載の方法。
【請求項３１】
癌疾患が乳癌または前立腺癌である、請求項２６に記載の方法。
【請求項３２】
癌を処置するための、請求項１または２４に記載の化合物、互変異性体、医薬的に許容される塩、またはその互変異性体の医薬的に許容される塩の使用。
【請求項３３】
癌の処置のための薬剤の製造における、請求項１または２４に記載の化合物、互変異性体、医薬的に許容される塩、またはその互変異性体の医薬的に許容される塩の使用。
【請求項３４】
請求項１または２４に記載の化合物、互変異性体、医薬的に許容される塩、またはその互変異性体の医薬的に許容される塩を含む組成物を対象に投与することを含む：対象の体内のＭＡＰＫシグナル伝達経路にあるセリン／トレオニンキナーゼ少なくとも１種を阻害する方法、または対象の体内のＭＡＰＫシグナル伝達経路にあるセリン／トレオニンキナーゼが介在する生物学的状況を処置する方法。
【請求項３５】
組成物がＲａｆキナーゼを阻害する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
組成物が突然変異体Ｂ−Ｒａｆキナーゼを阻害する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３７】
生物学的状況がメラノーマ、甲状腺乳頭癌、卵巣癌、大腸癌、膵臓癌、肺癌、および白血病から構成される群から選択する、請求項３４に記載の方法。
【請求項３８】
組成物が｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミンまたはその医薬的に許容される塩、互変異性体、またはその互変異性体の医薬的に許容される塩を含む、請求項３４に記載の方法。
【請求項３９】
請求項１または２４に記載の化合物、互変異性体、医薬的に許容される塩、またはその互変異性体の医薬的に許容される塩を含む組成物を対象に投与することを含む、対象の体内の受容体チロシンキナーゼを阻害する方法、または対象の体内の受容体チロシンキナーゼが介在する生物学的状況を処置する方法であって、その受容体チロシンキナーゼがＶＥＧＦＲ−２、ＦＧＦＲ−３、ｃ−Ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲ−β、およびＣＳＦ−１Ｒから構成される群から選択される方法。
【請求項４０】
生物学的状況が肥満細胞白血病、赤白血病、生殖細胞腫瘍、小細胞肺癌、消化管間質腫瘍、急性骨髄性白血病、神経芽細胞腫、メラノーマ、多発性骨髄腫、卵巣腫瘍、および乳癌から構成される群から選択される、請求項３９に記載の方法。
【請求項４１】
組成物が｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチルフェニル）アミンまたはその医薬的に許容される塩、互変異性体、またはその互変異性体の医薬的に許容される塩を含む、請求項３９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願との相互参照
本出願にはここに全記載を参考のために引用する２００５年８月３０日出願の米国特許仮出願６０／７１２５３９号、２００５年８月３０日出願の米国特許出願６０／７１３１０８号、２００５年１０月２７日出願の米国特許出願６０／７３１５９１号および２００６年２月１７日出願の米国特許出願６０／７７４６８４号に基づく米国特許法１１９条（ｅ）による利益を求める。
【０００２】
本発明が属する技術分野
本発明は新規置換ベンゾイミダゾール化合物、その互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、およびプロドラッグ；この化合物、互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、およびプロドラッグの医薬的に許容される塩；前記態様のいずれかを医薬的に許容される担体と共に含む組成物；および前記態様の単独での、あるいは追加的治療剤少なくとも１種と組み合わせとしての、癌の予防または処置における使用に関する。
【背景技術】
【０００３】
本発明の技術的背景
腫瘍発生に関与することが知られているキナーゼには、Ｒａｆセリン／スレオニンキナーゼおよび受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）が含まれる。
【０００４】
Ｒａｆセリン／スレオニンキナーゼは外因的細胞刺激に応じて起きる複雑な転写プログラムを制御するＲａｓ／分裂促進因子−活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）シグナル伝達モジュ−ルの必須成分である。Ｒａｆ遺伝子は高度に保存的なセリン−スレオニン特異的プロテインキナーゼをコードするが、これはｒａｓ癌遺伝子に結合することが知られている。それらは、受容体チロシンキナーゼ、ｐ２１ｒａｓ、Ｒａｆプロテインキナーゼ、Ｍｅｋｌ（ＥＲＫ活性化剤またはＭＡＰＫＫ）キナーゼおよびＥＲＫ（ＭＡＰＫ）キナーゼからなると考えられているシグナルトランスダクション経路の一部であり、最終的には転写因子をリン酸化する。この経路ではＲａｆキナーゼはＲａｓによって活性化され、分裂促進因子活性化プロテインキナーゼのキナーゼのアイソフォーム２種（Ｍｅｋ１およびＭｅｋ２と呼ばれる二重特異性スレオニン／チロシンキナーゼ）をリン酸化し、活性化する。両Ｍｅｋアイソフォームは分裂促進因子活性化キナーゼ１および２を活性化する（ＭＡＰＫ、細胞外リガンド制御キナーゼ１および２またはＥｒｋｌおよびＥｒｋ２とも呼ばれる）。このＭＡＰＫは転写因子を含む多数の基質をリン酸化し、それにより転写プログラムを構成する。Ｒａｓ／ＭＡＰＫ経路におけるＲａｆキナーゼの関与は多数の細胞機能例えば：増殖、分化、生存、発癌性形質転換およびアポトーシスに影響を与え、制御する。
【０００５】
多数のシグナル伝達経路におけるＲａｆの本質的役割および位置は、いずれも哺乳類細胞における無秩序および主要阻害性Ｒａｆ変異体を使用する研究からならびにモデル生物の生化学的および遺伝子的技術を用いる研究から証明された。多くの場合、細胞チロシンリン酸化を刺激する受容体によるＲａｆの活性化はＲａｓの活性に依存し、ＲａｓがＲａｆの上流で機能することを示す。活性化されると、Ｒａｆ−１はＭｅｋｌをリン酸化して活性化し、ＭＡＰＫ（分裂促進因子活性化プロテインキナーゼ；Crews et al., 1993, Cell 74: 215）のような下流のエフェクターへのシグナルの伝播を起す。Ｒａｆのセリン／スレオニンキナーゼは動物細胞の増殖に含まれる主要なＲａｓエフェクターであると考えられている（Avruch et al., 1994, Trends Biochem. Sci. 19: 279）。
【０００６】
Ｒａｆキナーゼには相異なるアイソフォーム３種、Ｒａｆ−１（ｃ−Ｒａｆ）、Ａ−ＲａｆおよびＢ−Ｒａｆがあり、これらはＲａｓとの相互作用能、ＭＡＰＫキナーゼ経路の活性化能、組織内分布および細胞内局在により特徴付けられる（Marias et al., Biochem. J. 351: 289-305, 2000; Weber et al., Oncogene 19: 169-176, 2000; Pritchard et al., MoI. Cell. Biol. 15: 6430-6442, 1995）。Ｒａｓ遺伝子一種の活性化変異は全腫瘍の約２０％に見られ、またＲａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路は全腫瘍の約３０％で活性化されている（Bos et al., Cancer Res. 49: 4682-4689, 1989; Hoshino et al., Oncogene 18: 813-822, 1999）。最近の研究で皮膚母斑におけるＢ−Ｒａｆ突然変異はメラノサイトの腫瘍形成開始における決定的段階であることが証明された（Pollock et al., Nature Genetics 25: 1-2, 2002）。さらに、最近の研究の多くでＢ−Ｒａｆのキナーゼドメインにおける活性化突然変異はメラノーマの約６６％、大腸癌腫の１２％および肝癌の１４％に見られることが報告された（Davies et al., Nature 417: 949-954, 2002; Yuen et al., Cancer Research 62: 6451-6455, 2002; Brose et al., Cancer Research 62: 6997-7000, 2002）。
【０００７】
メラノーマは、未だ満たされていない医学的ニーズを代表するものであり続けており、特に進行した病状では予後の悪い複雑な多重遺伝子疾患である。Ｂ−Ｒａｆの原癌遺伝子における体細胞の活性化突然変異は、最近、各種悪性腫瘍で発見され、特にメラノーマには最も頻繁に認められている。メラノーマの約７０％は変異し、活性化された型のＢ−Ｒａｆ（Ｖ６００Ｅ）を発現するので、これが薬剤開発の最善の標的になっている。さらに、メラノーマの別な１０−１５％は突然変異Ｎ−Ｒａｓを発現し、メラノーマ細胞の増殖と生存におけるＭＡＰＫ経路の重要性をさらに証明している。
【０００８】
ＲａｆキナーゼのレベルにおけるＲａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ経路の阻害剤は、過剰発現または突然変異受容体チロシンキナーゼ、活性化細胞内チロシンキナーゼを持つ腫瘍、異常発現Ｇｒｂ２（Ｓｏｓ交換因子によるＲａｓの刺激を起すアダプタータンパク質）を持つ腫瘍ならびにＲａｆ自体に活性化突然変異を有する腫瘍に対する治療剤として有効である可能性がある。初期臨床試験では、Ｂ−Ｒａｆも阻害するＲａｆ−１キナーゼの阻害剤は癌治療において有望な治療薬であることが証明された（Crump, Current Pharmaceutical Design 8: 2243-2248, 2002; Sebastien et al., Current Pharmaceutical Design 8: 2249-2253, 2002）。
【０００９】
ＲＮＡアンチセンス技術の適用による細胞株でのＲａｆ発現の途絶は、ＲａｓおよびＲａｆが介在する腫瘍原性の双方を抑制することが証明された（Kolch et al., Nature 349: 416-428, 1991; Monia et al, Nature Medicine 2(6): 668-675, 1996）。Ｒａｆキナーゼに対する不活性化抗体の投与またはＲａｆキナーゼの基質である主要ネガティブＲａｆキナーゼまたは主要ネガティブＭＥＫの共発現が、形質転換細胞の正常増殖発現型への復帰を起すことが証明された（Daum et al., Trends Biochem. Sci 1994, 19: 474-80; Fridman et al. J Biol. Chem. 1994, 269: 30105-8参照）。
【００１０】
数種のＲａｆキナーゼ阻害剤がインビトロまたはインビボ検定で腫瘍細胞増殖阻害に有効性を示すと開示されている（例えば：米国特許第6391636号、第6358932号、第6037136 号、第5717100号、第6458813号、第6204467号、第668391号参照）。他の特許および特許出願は、白血病の処置（例えば：米国特許第6268391号、第6204467、公開米国特許出願第20020137774号、第20020082192号、第20010016194号、第20010006975号参照）、または乳癌の処置（例えば：米国特許第6358932号、第5717100号、第6458813号、第6268391号、第6204467号、公開米国特許第20010014679号参照）へのＲａｆキナーゼ阻害剤の使用を示唆している。
【００１１】
血管形成も癌細胞の増殖には重要な役割を果たしている。癌細胞の病巣が一定サイズ、直径約１〜２ｍｍに達すると、拡散では癌細胞に十分な酸素と栄養とを供給するためには不十分になるので腫瘍がさらに大きくなるためには癌細胞は血液供給を発達させなければならないことが知られている。そこで、血管形成の阻害は癌細胞の増殖を阻害すると期待されている。
【００１２】
受容体チロシンキナーゼ（ＲＴＫ）は、発育細胞の増殖および分化、成熟組織のリモデリングおよび再生を制御する膜貫通ポリペプチドである（Mustonen, T. et al, J Cell Biology 129: 895-898, 1995; van der Geer, P. et al., Ann Rev. Cell Biol. 10: 251-337, 1994）。成長因子またはサイトカインと呼ばれるポリペプチドリガンドはＲＴＫを活性化することが知られている。シグナル伝達ＲＴＫは受容体の外部ドメインにおけるリガンド結合および配座シフトを持ち、二量体化を起す（Lymboussaki, A. "Vascular. Endothelial Growth Factors and their Receptors in Embryos, Adults, and in Tumors" Academic Dissertation, University of Helsinki, Molecular/Cancer Biology Laboratory and Department of Pathology, Haartman Institute, 1999; Ullrich, A. et al., Cell 61: 203-212, 1990）。リガンドのＲＴＫへの結合は特定のチロシン残基での受容体リン酸転移およびそれに続く細胞質基質（Ｉｄ）をリン酸化するための触媒ドメインの活性化を起こす。
【００１３】
ＲＴＫのサブファミリー２種は血管内皮に特異的である。これらは血管内皮成長因子（ＶＥＧＦ）サブファミリーとタイ（Ｔｉｅ）受容体サブファミリーを含む。クラスＶのＲＴＫは、ＶＥＧＦＲ１（ＦＬＴ−１）、ＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲ（ヒト）、Ｆｌｋ−１（マウス））、およびＶＥＧＦＲ３（ＦＬＴ−４）を含む（Shibuya, M. et al., Oncogene 5: 519-525, 1990; Terman, B. et al, Oncogene 6: 1677-1683, 1991; Aprelikova, O. et al., Cancer Res. 52: 746-748, 1992）。ＶＥＧＦサブファミリーのメンバーは血管透過性と内皮細胞増殖を誘導する性能を持ち、さらに血管形成および脈管形成の主たる誘導因子として確認したと報告されている（Ferrara, N. et al., Endocrinol. Rev. 18: 4-25, 1997）。
【００１４】
ＶＥＧＦは、ＦＬＴ−１およびＦｌｋ−１を含むＲＴＫに特異的に結合することが知られている（DeVries, C. et al., Science 255: 989-991, 1992; Quinn, T. et al., Proc. Natl. Acad. Sci 90: 7533-1537, 1993）。ＶＥＧＦは内皮細胞の移動と増殖を刺激し、インビトロおよびインビボで血管形成を誘導する （Connolly, D. et al., J. Biol. Chem. 264: 20017-20024, 1989; Connolly, D. et al., J. Clin. Invest. 84: 1470-1478, 1989; Ferrara, N. et al., Endocrinol. Rev. 18: 4-25, 1997; Leung, D. et al., Science 246: 1306-1309, 1989; Plouet, J. et al., EMBO J 8: 3801-3806, 1989）。
【００１５】
様々な培養内皮細胞系での研究で、ＶＥＧＦＲ２が血管形成におけるＶＥＧＦの主な下流の効果に介在することが確認された（Wey S. et al., Clinical Advances in Hematology and Oncology, 2: 37-45, 2004）。ＶＥＧＦＲ２が介在する内皮細胞の増殖はＲａｓ／Ｒａｆ／Ｍｅｋ／Ｅｒｋ経路の活性化に関与すると考えられている（Veikkola T. et al., Cancer Res 60: 203-212, 2000）。ＶＥＧＦＲ２の発現は、メラノーマ、乳癌、膀胱癌、肺癌、甲状腺癌、前立腺癌および卵巣癌で観察されている（Wey et al., supra参照）。ＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲ）へのモノクローナル抗体の中和は、腫瘍血管形成の阻害に有効であることが知られている（Kim et al., Nature 362: 841, 1993; Rockwell et al., MoI. Cell Differ. 3: 315, 1995参照）。血管形成は癌の増殖に決定的因子であり、ＶＥＧＦとＶＥＧＦ−ＲＴＫで制御されることが知られているので、血管形成を阻害または抑制し、ＶＥＧＦ−ＲＴＫを阻害する化合物の開発にかなりの努力が払われている。
【００１６】
血小板由来成長因子受容体キナーゼ（ＰＤＧＦＲ）は別な型のＲＴＫである。ＰＤＧＦの発現は、グリア芽腫および骨肉腫から前立腺癌に至る多種の固形腫瘍に見出されている。これら種々の腫瘍型では、ＰＤＧＦシグナル伝達の生物学的役割は、癌細胞増殖の自己分泌刺激から隣接間質および血管形成を含むより希薄な傍分泌相互作用までにわたる。ＰＤＧＦは、チロシンキナーゼ受容体、ＰＤＧＦＲαおよびＰＤＧＦＲβと相互作用する。それ故、低分子でＰＤＧＦＲキナーゼ活性を阻害すれば、腫瘍増殖と血管形成が阻害されると期待される。
【００１７】
繊維芽細胞増殖因子受容体キナーゼ（ＦＧＦＲ）は他の型のＲＴＫである。繊維芽細胞増殖因子はポリペプチド増殖因子のファミリーに属し、分裂誘発、血管形成および創傷治癒を含む様々な活性に関与する。これらは、関連はあるが相互に明白に相違するチロシンキナーゼ受容体を含み、細胞外ドメインと２個または３個のイムノグロブリン（Ｉｇ）様ドメイン、膜貫通ドメインおよび細胞質チロシンキナーゼドメインを含む。確認されている繊維芽細胞増殖因子受容体にはＦＧＦＲ１（Ruta, M et al, Oncogene 3: 9-15, 1988）；ＦＧＦＲ２（Dionne, C et al., Cytogenet. Cell Genet. 60: 34-36, 1992）；ＦＧＦＲ３（Keegan, K et al., Proc. Nat. Acad. Sci., 88: 1095-1099, 1991）；およびＦＧＦＲ４（Partanen, J et al., EMBO J. 10: 1347- 1354, 1991）を含む。
【００１８】
癌における繊維芽細胞増殖因子受容体、特にＦＧＦＲ３の役割は解明されている。イムノグロブリン重鎖（ＩｇＨ）の遺伝子座１４ｑ３２への転座による癌遺伝子の調節異常は、Ｂ細胞腫瘍の発病機序における重要な出来事である。多発性骨髄腫では、ＩｇＨ遺伝子座への転座は、症例の２０〜６０％で起きている。殆どの転座では、パートナー染色体は知られていない；他の例では、多様性のある一連の染色体パートナーが確認されているが、１１ｑ１３は頻繁な関与が認められている唯一の染色体である。Bergsagel et al.は非正統的スイッチ組換え断片（スイッチ領域１個のみからの配列を含むと定義される）を、検出可能な１４ｑ３２転座を含まず、核型系統８個の中の７個を含む、骨髄腫細胞株２１個の中の１５個においてＩｇＨスイッチ領域への転座イベントのマーカー候補であると確認した。この転座の切断点には染色体座６個：４ｐ１６．３；６；８ｑ２４．１３；１１ｑ１３．３；１６ｑ２３．１；および２１ｑ２２．１を含んでいた。（Bergsagel et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 93: 13931-13936, 1996）。Chesi et al.（Nature Genet. 16: 260-264 1997）は核型的にサイレントな転座ｔ（４；１４）（ｐ１６．３；ｑ３２．３）を５個の骨髄腫細胞株に見出し、多発性骨髄腫に関連する原発腫瘍１０個の中の少なくとも３個でＦＧＦＲ３突然変異体の発現と活性化の増強を示すことを見出した。染色体−４の切断点は、ＦＧＦＲ３の７０−ｋｂ領域セントロメアに集中しており、これは無調節癌遺伝子であると思われる。この転座を持つ２種の系統および１種の原発腫瘍は、以前に致死性小人症で確認されている活性化突然変異：ｔｙｒ３７３からｃｙｓ、ｌｙｓ６５０を経てｇｌｕおよびｌｙｓ６５０〜ｍｅｔを含む、ＦＧＦＲ３アレルを選択的に発現する。Ｋ６５０Ｅについて、リガンド不在下におけるＦＧＦＲ３の構成的活性化は、トランスフェクション実験で証明されている。Chesi et al. (1997)は、ｔ（４；１４）転座後、腫瘍進行の間の体細胞突然変異はしばしばＦＧＦＲ３タンパク質が生成するが、これはリガンド不在下に活性であると提唱した。
【００１９】
Rasmussen, T et al.は、多発性骨髄腫におけるｔ（４；１４）転座について頻度３〜２４％を示した（Rasmussen, T et al., Br. J. Haematol. 117: 626-628, 2002）。この転座は意味不明のモノクローナル高免疫グロブリン血症（ＭＧＵＳ）患者では明らかに低い頻度で観察され、ＭＧＵＳから多発性骨髄腫に至る移行における役割を示唆する。このｔ（４；１４）転座は、癌遺伝子の可能性がある２種：ＦＧＦＲ３および多発性骨髄腫ｓｅｔドメイン（ＭＭＳＥＴ）に影響を与える。Rasmussen et al. (2002)は、多発性骨髄腫におけるＦＧＦＲ３調節異常の頻度およびその予後値を研究した。１１０例中１６例（１４．５％）の多発性骨髄腫骨髄標本で、調節異常ＦＧＦＲ３発現が見出された。
【００２０】
これに加えて、複数の癌腫におけるＦＧＦＲ３の発癌性への役割を示す別な証拠が報告された（Cappellen, D. et al., (Letter) Nature Genet. 23: 18-20, 1999）。Cappellen, et al.は構成的に活性化されたＦＧＦＲ３の発現を通常の上皮癌２種、膀胱癌および頚部癌に高い比率で見出した。ＦＧＦＲ３は膀胱癌では最も頻繁に突然変異する癌遺伝子であると見られ、症例の３０％以上で突然変異している。ＦＧＦＲ３は逆向きのシグナルを媒介すると思われ、骨中では負の制御剤として作用し、また数種の腫瘍型では癌遺伝子として作用する。これらの癌に見出されるＦＧＦＲ３のミスセンス体細胞突然変異は全て、致死性形成異常を起す生殖細胞活性化突然変異と同一であった（著者は、この突然変異２個にこの等価性が現れる理由は、上皮細胞に発現するＦＧＦＲ３ｂアイソフォームは骨に発現するＦＧＦＲ３ｃアイソフォームよりもアミノ酸を２個多く含む点にあることに注目した）。上皮腫瘍におけるＦＧＦＲ３の変化について、Ｓ２４９Ｃ突然変異は最も通常のものであって、膀胱癌９例中５例および頚部癌３例中３例で影響を与えた。
【００２１】
また、活性化ＦＧＦＲ３はｃ−Ｃｂｌ介在ユビキチン化によるリソソーム分解を標的とすること、および軟骨形成不全および関連する軟骨異形成の患者に見出される活性化突然変異がこの過程を阻害し、活性化受容体のリサイクルおよびＦＧＦＲ３シグナルの増幅に誘導することを示す証拠が提供された。（Cho et al., Proc. Nat. Acad. Sci. 101: 609-614, 2004）。Cho et al.はこの機序が軟骨形成不全の分子的病理学に寄与し、治療的処置の潜在的標的を示すことを示唆した。リソソーム標的欠損は、軟骨形成不全の病理学を説明するために提案された他の機序に一石を投じるものである。
【００２２】
他の研究結果はＦＧＦＲ２およびＦＧＦＲ３は腫瘍発生における重要な因子であることを示す（Jang JH et al., “Mutations in fibroblast growth factor receptor 2 and fibroblast growth factor receptor 3 genes associated with human gastric and colorectal cancers” Cancer Res. 61(9): 354 1-3, 2001）。多発性骨髄腫、膀胱癌および腫瘍発生における役割に鑑み、繊維芽細胞増殖因子受容体キナーゼの阻害剤、特にＦＧＦＲ２およびＦＧＦＲ３の阻害剤の開発は、癌の治療における重要な役割を担うと思われる。
【００２３】
ｃ−Ｋｉｔは、ＰＤＧＦ受容体ファミリーに属する、別な受容体チロシンキナーゼであり、通常は造血前駆細胞、肥満細胞および生殖細胞に発現する。ｃ−ｋｉｔの発現は肥満細胞白血病、生殖細胞腫瘍、小細胞肺癌、消化管間質腫瘍、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、赤白血病、神経芽細胞腫、メラノーマ、卵巣癌、乳癌を含む各種の癌腫の原因とされている（Heinrieh, M. C. et al; J. Clin. One. 20, 6, 1692-1703, 2002 (review article); Smolich, B. D. et al, Blood, 97, 5; 1413-1421）。
【００２４】
ＣＳＦ−１Ｒ、すなわちコロニー刺激因子−１（ＣＳＦ−１）の受容体、の過剰発現は、乳腺、卵巣、子宮内膜、肺臓、腎臓、膵臓および前立腺の癌腫を含む多数のヒトの癌腫の原因とされている（Sapi, E., Exp. Biol. Med 229: 1-11, 2004）。ＣＳＦ−１Ｒはチロシンキナーゼ受容体であり、そのリガンドＣＳＦ−１で活性化されると細胞の増殖と分化を制御するシグナル変換経路の作動を誘発する。ＣＳＦ−１Ｒは妊娠および授乳の間に乳腺内に発現される。ＣＳＦ−１Ｒの異常な発現は全乳癌の５８％、浸潤性乳癌腫の８５％で関連付けられている（前記Sapi、参照）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２５】
毛細管の増殖を阻害する化合物、腫瘍の増殖を阻害する化合物、癌を処置する化合物、細胞周期休止を調整する化合物、および／またはＲａｓ、Ｒａｆ、突然変異体Ｂ−Ｒａｆ、ＶＥＧＦＲ２（ＫＤＲ、ＦＩｋ−１）、ＦＧＦＲ２／３、ｃ−Ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲβ、ＣＳＦ−１Ｒのような分子１種またはそれ以上を阻害する化合物、そのような化合物を含有する医薬製剤および薬剤には継続的需要が存在する。そのような化合物、医薬的製剤、および薬剤を必要とする患者に投与する方法についても需要が存在する。
【課題を解決するための手段】
【００２６】
本発明の要約
式（Ｉ）：
【化１】
2009507026.tif 000003
［式中、
各Ｒ１は、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、（Ｃ１−６アルキル）スルファニル、（Ｃ１−６アルキル）スルホニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
Ｒ２はＣ１−６アルキルまたはハロ（Ｃ１−６アルキル）であり；
各Ｒ３はハロ、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシから独立に選択され；
各Ｒ４はヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ、ヘテロシクロアルキルカルボニル、カルボキシル、（Ｃ１−６アルコキシ）カルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル、カルボニトリル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４ は、要すればヒドロキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、ハロ（Ｃ１−６アルキル）、Ｃ１−６アルコキシ、およびハロ（Ｃ１−６アルコキシ）から独立に選択される置換基１個またはそれ以上で置換されていてもよい；
ａは１、２、３、４、または５であり；
ｂは０、１、２、または３であり；そして
ｃは１または２である］
で示される新規置換ベンゾイミダゾール化合物、またはその互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、またはそのプロドラッグ、またはその化合物、互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、もしくはプロドラッグの医薬的に許容される塩を提供する。
他の態様では、式（ＩＩ）：
【化２】
2009507026.tif 000004
［式中、
各Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ヒドロキシ、ハロ、（Ｃ１−６アルキル）スルファニル、（Ｃ１−６アルキル）スルホニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
各Ｒ３はハロ、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシから独立に選択され；
各Ｒ４はヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ、カルボキシル、（Ｃ１−６アルコキシ）カルボニル、アミノカルボニル、カルボニトリル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルカルボニル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は要すればヒドロキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシから独立に選択される置換基１個またはそれ以上で置換されていてもよい；
ａは１、２、３、４、または５であり；
ｂは０、１、２、または３であり；そして
ｃは１または２である］
で示される新規置換ベンゾイミダゾール化合物、またはその互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、またはそのプロドラッグ、またはその化合物、互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、もしくはプロドラッグの医薬的に許容される塩を提供する。
【００２７】
他の態様では、式 （ＩＩＩ）：
【化３】
2009507026.tif 000005
［式中、
各Ｒ１はＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ヒドロキシ、ハロ、（Ｃ１−６アルキル）スルファニル、（Ｃ１−６アルキル）スルホニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
各Ｒ４はヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ、カルボキシル、（Ｃ１−６アルコキシ）カルボニル、アミノカルボニル、カルボニトリル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルカルボニル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
ここで、Ｒ１およびＲ４は、要すればヒドロキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシから独立に選択される置換基１個またはそれ以上で置換されていてもよい；
ａは１、２、３、４、または５であり；そして
ｃは１または２である］
で示される新規置換ベンゾイミダゾール化合物、またはその互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、またはそのプロドラッグ、またはその化合物、互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、もしくはプロドラッグの医薬的に許容される塩を提供する。
【００２８】
また、次式（ＩＶ）：
【化４】
2009507026.tif 000006
［式中、
各Ｒ１はＣ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ヒドロキシ、ハロ、（Ｃ１−６アルキル）スルファニル、（Ｃ１−６アルキル）スルホニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
Ｒ２はＣ１−６アルキルまたはハロ（Ｃ１−６アルキル）であり；
各Ｒ３はハロ、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシから独立に選択され；
各Ｒ４はヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ、カルボキシル、（Ｃ１−６アルコキシ）カルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル、カルボニトリル、カルボニトリル（Ｃ１−６アルキル）、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル（Ｃ１−６アルキル）、ヘテロシクロアルキルカルボニル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、要すればヒドロキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシから独立に選択される置換基１個またはそれ以上で置換されていてもよい；
ａは１、２、３、４、または５であり；そして
ｂは０、１、２、または３であり］
で示される化合物、またはその互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、またはそのプロドラッグ、またはその化合物、互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、もしくはプロドラッグの医薬的に許容される塩も開示する。
【００２９】
他の態様では、新規置換ベンゾイミダゾール化合物は式（Ｉ）〜（ＩＶ）で示され、ここで各Ｒ１がヒドロキシ、クロロ、フルオロ、ブロモ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロエチル、トリフルオロメトキシ、トリフルオロエトキシ、トリフルオロメチルスルファニル、ピペリジニル、Ｃ１−６アルキルピペリジニル、ピペラジニル、Ｃ１−６アルキルピペラジニル、テトラヒドロフラニル、ピリジニル、およびピリミジニルから構成される群から独立に選択されるものを提供する。他の態様では、新規置換ベンゾイミダゾール化合物は式（Ｉ）〜（ＩＶ）で示され、ここでａは１または２であり、Ｒ１の少なくとも１個はハロ（Ｃ１−６アルキル）、例えば：トリフルオロメチルであるものを提供する。他の態様では、新規置換ベンゾイミダゾール化合物は式（Ｉ）および（ＩＶ）で示され、ここでＲ２はＣ１−６アルキル、例えば：メチルまたはエチルである。さらに別な態様では、新規置換ベンゾイミダゾール化合物は式（Ｉ）、（ＩＩ）および（ＩＶ）で示されるが、ここでｂは０であるから、Ｒ３は存在しないものを提供する。別な態様では、新規置換ベンゾイミダゾール化合物は式（Ｉ）〜（ＩＶ）で示され、ここでｂは１であり、Ｒ３はＣ１−６アルコキシ、例えば：メトキシであるものを提供する。なお別な態様では、新規置換ベンゾイミダゾール化合物は式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）で示され、ここでｃは１または２であり、Ｒ４の少なくとも１個はハロ（Ｃ１−６アルキル）、例えば：トリフルオロメチルであるものを提供する。
【００３０】
別の局面では、本発明はこの処置を必要とするヒトまたは動物対象におけるＲａｆ関連疾患を処置する方法を提供するが、その方法には式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物またはその医薬的に許容される塩を含む態様を対象中での腫瘍増殖を低下または予防するために有効な量で対象に投与することを含む。
【００３１】
別な局面では、本発明はこの処置を必要とするヒトまたは動物対象におけるＲａｆ関連疾患を処置する方法を提供するが、その方法は式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物またはその医薬的に許容される塩からなる態様のいずれかに別種の追加的癌治療剤少なくとも１種を組み合わせて含み対象中での腫瘍増殖を低下または防止するために有効な量でその対象に投与することを含む。
【００３２】
なお別な局面では、本発明は治療用組成物を提供するが、これは式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物またはその医薬的に許容される塩少なくとも１種と、癌の治療に通常使用されているような別種の追加的癌治療用薬剤１種またはそれ以上とを組み合わせて含む、癌治療用剤である。
【００３３】
本発明の化合物は癌腫（例えば：肺臓、膵臓、卵巣、甲状腺、膀胱、または大腸の癌腫）、メラノーマ、骨髄疾患（例えば：骨髄性白血病、多発性骨髄腫、および赤白血病）、アデノーマ（例えば：絨毛大腸アデノーマ）、および肉腫（例えば：骨肉腫）を含む癌の処置に有用である。
【００３４】
他の局面では、本発明は、対象の体内のＭＡＰＫシグナル伝達経路におけるセリン／スレオニンキナーゼ少なくとも１種を阻害する方法、または式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物またはその医薬的に許容される塩少なくとも１種を含む治療用組成物を、対象の体内のＭＡＰＫシグナル伝達経路を阻害するために有効な量を投与することを含む対象の体内のＭＡＰＫシグナル伝達経路の中のセリン／スレオニンキナーゼが介在する生物学的状態を処置する方法に関する。この治療用組成物は、このような阻害剤を必要とする患者（例えば：異常ＭＡＰＫシグナル伝達が介在する癌患者）を処置するために有用である。態様の一つでは、本発明は、｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチルフェニル）アミン、その互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、またはそのプロドラッグ、またはこの化合物、互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、もしくはプロドラッグの医薬的に許容される塩を含む治療用組成物を投与することを含む対象の体内にあるＲａｆキナーゼを阻害する方法に関する。
【００３５】
他の一局面では、本発明は、対象の体内にあるチロシンキナーゼ受容体を阻害するために有効な、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物またはその医薬的に許容される塩の少なくとも１種を含む治療用組成物を投与することを含む、対象の体内にあるＶＥＧＦＲ−２、ＰＤＧＦＲ−β、ｐＥＲＫ、ｂＦＧＦ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ｃ−Ｋｉｔ、およびＣＳＦ−１Ｒから構成される群から選択するチロシンキナーゼ受容体少なくとも１種を阻害する方法、またはＶＥＧＦＲ−２、ＰＤＧＦＲ−β、ｐＥＲＫ、ｂＦＧＦ、ＦＧＦＲｌ、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ｃ−Ｋｉｔ、およびＣＳＦ−１Ｒの少なくとも一つが介在する生物学的状態を処置する方法に関する。本治療用化合物は、この阻害剤を必要とする患者（例えば：異常チロシンキナーゼ受容体シグナル伝達が介在する癌に罹患した者）を処置するために有用である。態様の一つでは、本発明は、｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミン、またはその互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、またはプロドラッグ、またはこの化合物、互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、もしくはプロドラッグの医薬的に許容される塩を含有する治療用組成物を投与することを含む、対象の体内にあるＶＥＧＦＲ−２、ＰＤＧＦＲ−β、ｐＥＲＫ、ｂＦＧＦ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ｃ−Ｋｉｔ、およびＣＳＦ−１Ｒから構成される群から選択するチロシンキナーゼを阻害する方法に関する。
【００３６】
本発明はさらに、本発明の詳細な説明に記載する組成物、用法、および製法を提供する。
【００３７】
本発明の前記局面およびそれに伴う利点は、下記の詳細な記載を、ここに添付する図面と共に参照すれば理解が容易になろう。ここで：
【００３８】
図１は実施例７８に記載する本発明の化合物で処理したマウスにおけるＡ３７５Ｍヒトメラノーマ腫瘍の腫瘍容積減少の平均値を示すグラフである；
【００３９】
図２Ａおよび２Ｂは実施例７９に記載する本発明の化合物で処理後４時間（図２Ａ）および２４時間（図２Ｂ）のマウスにおけるＡ３７５Ｍヒトメラノーマ腫瘍細胞中のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達の阻害を示すＰＡＧＥスライドである；
【００４０】
図３は実施例８０に記載する本発明の化合物で処理したマウスにおけるＨＴ２９Ｐヒト大腸癌腫の腫瘍容積減少の平均値を示すグラフである；
【００４１】
図４Ａ、４Ｂ、および４Ｃは実施例８１に記載する本発明の化合物で処理後１時間（図４Ａ）、４時間（図４Ｂ）、および２４時間（図４Ｃ）のマウスにおけるＨＴ２９Ｐヒト大腸癌腫細胞中のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達の阻害を示すＰＡＧＥスライドである；
【００４２】
図５はＲａｓ、Ｒａｆ、ＭＥＫ、およびＥＲＫを含むＭＡＰＫシグナル伝達経路、および実施例８２〜８６に記載する実施例１の化合物のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達の阻害点を提示する；
【００４３】
図６Ａ、６Ｂ、および６Ｃは実施例８３に記載する実施例１の化合物を所定濃度範囲で含む培養液中で４時間インキュベーションした後のＡ３７５Ｍ細胞（図６Ａ）、ＳＫ−ＭＥＬ２細胞（図６Ｂ）およびＣＨＬ−１細胞（図６Ｃ）中、Ｒａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達阻害を示すＰＡＧＥスライドである；
【００４４】
図７Ａは実施例８４に記載する実施例１の化合物１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇを経口投与したマウスにおけるＡ３７５Ｍ（Ｂ−Ｒａｆ Ｖ６００Ｅ）ヒトメラノーマ腫瘍の腫瘍容積減少平均値の用量作用曲線を示すグラフである；
【００４５】
図７Ｂは実施例８４に記載する実施例１の化合物で１４回処理後８時間のマウスにおけるＡ３７５Ｍ腫瘍細胞中のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達阻害を示すＰＡＧＥスライドである；
【００４６】
図７Ｃは実施例８４に記載する実施例１の化合物で１４回処理後２４時間のマウスにおけるＡ３７５Ｍ腫瘍細胞中のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達阻害を示すＰＡＧＥスライドである；
【００４７】
図７Ｄは実施例８４に記載する実施例１の化合物で１４回処理後２４時間のＡ３７５Ｍ腫瘍細胞中のＲａｆ キナーゼから下流にあるマーカーの変調を示すＰＡＧＥスライドである；
【００４８】
図８Ａは実施例８５に記載する実施例１の化合物で処理後のマウスにおけるＭＥＸＦ２７６（Ｂ−ＲａｆＶ６００Ｅ）メラノーマ癌腫の腫瘍容積減少平均値を示すグラフである；
【００４９】
図８Ｂは実施例８５に記載する実施例１の化合物で２０回処理後４時間目のマウスにおけるＭＥＸＦ２７６腫瘍細胞中のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達の阻害を示すスライドである；
【００５０】
図８Ｃは実施例８５に記載する実施例１の化合物で２０回処理後４時間のＭＥＸＦ２７６腫瘍細胞中のＲａｆキナーゼから下流にあるマーカーの変調を示すＰＡＧＥスライドである；
【００５１】
図９Ａは実施例８５に記載する実施例１の化合物で処理したマウスにおけるＭＥＸＦ１３４１（Ｎ−Ｒａｓ Ｑ６１Ｋ）メラノーマ癌腫の腫瘍増殖阻害平均値を示すグラフである；
【００５２】
図９Ｂは実施例８５に記載する実施例１の化合物で２０回処理後４時間のマウスにおけるＭＥＸＦ１３４１腫瘍細胞中のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達を示すＰＡＧＥスライドである；
【００５３】
図９Ｃは実施例８５に記載する実施例１の化合物で２０回処理後４時間のＭＥＸＦ１３４１腫瘍細胞中のＲａｆ キナーゼから下流にあるマーカーの変調を示すＰＡＧＥスライドである；
【００５４】
図１０Ａは実施例８６に記載する実施例１の化合物で処理したマウスにおけるＨＣＴ−１１６（Ｋ−Ｒａｓ−Ｇ１３Ｄ）結腸直腸癌腫の腫瘍容積減少平均値を示すグラフである；
【００５５】
図１０Ｂは実施例８６に記載する実施例１の化合物で３回処理後４時間のマウスにおけるＨＣＴ−１１６腫瘍細胞のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達の阻害を示すＰＡＧＥスライドである；
【００５６】
図１０Ｃは実施例８６に記載する実施例１の化合物で３回処理後８時間のマウスにおけるＨＣＴ−１１６腫瘍細胞中のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達の阻害を示すＰＡＧＥスライドである；
【００５７】
図１０Ｄは実施例８６に記載する実施例１の化合物で３回処理後２４時間のマウスにおけるＨＣＴ−１１６腫瘍細胞中のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達の阻害を示すＰＡＧＥスライドである；
【００５８】
図１１は実施例８６に記載する実施例１の化合物で処理したマウスにおけるＨＴ−２９（Ｂ−ＲａｆＶ６００Ｅ）結腸直腸癌腫の腫瘍容積減少平均値を示すグラフである；
【００５９】
図１２Ａは実施例８６に記載する実施例１の化合物で処理したマウスにおけるＭＶ４−１１（ＦＬＴ３ ＩＴＤ）急性単球白血病癌腫の増殖阻害平均値を示すグラフである；
【００６０】
図１２Ｂは実施例８６に記載する実施例１の化合物で３回処理後４時間のマウスにおけるＭＶ４−１１腫瘍細胞中のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達を示すＰＡＧＥスライドである；
【００６１】
図１３は実施例８８に記載する実施例１の化合物１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、および１００ｍｇ／ｋｇで処理した後のＣＨＯ−ＶＥＧＦ−マトリゲルモデルにおけるＶＥＧＦ介在血管形成の阻害を示すグラフである；
【００６２】
図１４Ａはｑ２ｄ、ｑ３ｄ、またはｑ４ｄ投与計画に従って、実施例８９に記載する実施例１の化合物１００ｍｇ／ｋｇで処理したマウスにおけるＡ３７５Ｍメラノーマ腫瘍の腫瘍容積減少平均値を示すグラフである；
【００６３】
図１４Ｂは実施例８９に記載する実施例１の化合物をｑ２ｄ投与計画により５回処理後８時間、２４時間、および４８時間にマウスにおけるＡ３７５Ｍ腫瘍細胞中のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達の阻害を示すＰＡＧＥスライドである；
【００６４】
図１４Ｃは実施例８９に記載する実施例１の化合物をｑ４ｄ投与計画により３回処理後４８時間、７２時間、および９６時間のマウスにおけるＡ３７５Ｍ腫瘍細胞中のＲａｆ キナーゼから下流へのシグナル伝達の阻害を示すＰＡＧＥスライドである；および
【００６５】
図１５は実施例９０に記載する種々の濃度の実施例１の化合物でのＡ３７５Ｍ腫瘍細胞の処理と、その化合物の長時間血中濃度と、標的変調の閾値との間の関係を示すグラフである。
【００６６】
好ましい態様の詳細な記載
本発明の一局面によれば、式（Ｉ）：
【化５】
2009507026.tif 000007
［式中、
各Ｒ１は、ヒドロキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、（Ｃ１−６アルキル）スルファニル、（Ｃ１−６アルキル）スルホニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
Ｒ２は、Ｃ１−６アルキルまたはハロ（Ｃ１−６アルキル）であり；
各Ｒ３は、ハロ、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシから独立に選択され；
各Ｒ４は、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ、カルボキシル、（Ｃ１−６アルコキシ）カルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル、カルボニトリル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルカルボニル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、要すればヒドロキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、ハロ（Ｃ１−６アルキル）、Ｃ１−６アルコキシ、およびハロ（Ｃ１−６アルコキシ）から独立に選択される置換基１個またはそれ以上で置換されていてもよい；
ａは１、２、３、４、または５であり；
ｂは０、１、２、または３であり；そして
ｃは１または２である］
で示される置換ベンゾイミダゾール化合物、またはその互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、またはそのプロドラッグ、またはその化合物、互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、もしくはプロドラッグの医薬的に許容される塩を提供する。
【００６７】
他の態様では、式（ＩＩ）：
【化６】
2009507026.tif 000008
［式中、
各Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ヒドロキシ、ハロ、（Ｃ１−６アルキル）スルファニル、（Ｃ１−６アルキル）スルホニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
各Ｒ３は、ハロ、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシから独立に選択され；
各Ｒ４は、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ、カルボキシル、（Ｃ１−６アルコキシ）カルボニル、アミノカルボニル、カルボニトリル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルカルボニル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、要すればヒドロキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシから独立に選択される置換基１個またはそれ以上で置換されていてもよい；
ａは１、２、３、４、または５であり；
ｂは０、１、２、または３であり；そして
ｃは１または２である］
で示される新規置換ベンゾイミダゾール化合物、またはその互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、またはそのプロドラッグ、またはその化合物、互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物もしくはプロドラッグの医薬的に許容される塩を提供する。
【００６８】
他の態様では、式（ＩＩＩ）：
【化７】
2009507026.tif 000009
［式中、
各Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ヒドロキシ、ハロ、（Ｃ１−６アルキル）スルファニル、（Ｃ１−６アルキル）スルホニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
各Ｒ４は、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ、カルボキシル、（Ｃ１−６アルコキシ）カルボニル、アミノカルボニル、カルボニトリル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキルカルボニル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
ここで、Ｒ１およびＲ４は、要すればヒドロキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシから独立に選択される置換基１個またはそれ以上で置換されていてもよい；
ａは１、２、３、または５であり；そして
ｃは１または２である］
で示される新規置換ベンゾイミダゾール化合物、またはその互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、またはそのプロドラッグ、またはその化合物、互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、もしくはプロドラッグの医薬的に許容される塩を提供する。
【００６９】
また、下記式（ＩＶ）：
【化８】
2009507026.tif 000010
［式中、
各Ｒ１は、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ヒドロキシ、ハロ、（Ｃ１−６アルキル）スルファニル、（Ｃ１−６アルキル）スルホニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
Ｒ２は、Ｃ１−６アルキルまたはハロ（Ｃ１−６アルキル）であり；
各Ｒ３は、ハロ、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシから独立に選択され；
各Ｒ４は、ヒドロキシ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ、カルボキシル、（Ｃ１−６アルコキシ）カルボニル、アミノカルボニル、Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル、カルボニトリル、カルボニトリル（Ｃ１−６アルキル）、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル（Ｃ１−６アルキル）、ヘテロシクロアルキルカルボニル、フェニル、およびヘテロアリールから独立に選択され；
ここで、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、要すればヒドロキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、およびＣ１−６アルコキシから独立に選択される置換基１個またはそれ以上で置換されていてもよい；
ａは１、２、３、４、または５であり；そして
ｂは０、１、２、または３である；
で示される化合物、またはその互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、またはそのプロドラッグ、またはその化合物、互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、もしくはプロドラッグの医薬的に許容される塩も開示する。
【００７０】
他の態様では、式（Ｉ）〜（ＩＶ）で示される新規置換ベンゾイミダゾール化合物を提供するが、ここで 各Ｒ１は、ヒドロキシ、クロロ、フルオロ、ブロモ、メチル、エチル、プロピル、ブチル、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、ブトキシ、トリフルオロメチル、トリフルオロエチル、トリフルオロメトキシ、トリフルオロエトキシ、トリフルオロメチルスルファニル、ピペリジニル、Ｃ１−６アルキルピペリジニル、ピペラジニル、Ｃ１−６アルキルピペラジニル、テトラヒドロフラニル、ピリジニル、およびピリミジニルから構成される群から独立に選択される。他の態様では、式（Ｉ）〜（ＩＶ）で示される新規置換ベンゾイミダゾール化合物を提供するが、ここでａは１または２であり、Ｒ１の少なくとも１個はハロ（Ｃ１−６アルキル）、例えば：トリフルオロメチルである。他の態様では、式（Ｉ）および（ＩＶ）で示される新規置換ベンゾイミダゾール化合物を提供するが、ここでＲ２はＣ１−６アルキル、例えば：メチルまたはエチルである。さらなる態様では、式（Ｉ）、（ＩＩ）、および（ＩＶ）で示される新規置換ベンゾイミダゾール化合物を提供するが、ここでｂは ０であるから、Ｒ３は不在である。他の態様では、式（Ｉ）〜（ＩＶ）で示される新規置換ベンゾイミダゾール化合物を提供するが、ここでｂは１であり、Ｒ３はＣ１−６アルコキシ、例えば：メトキシである。さらに別の態様では、式（Ｉ）〜（ＩＩＩ）で示される新規置換ベンゾイミダゾール化合物を提供するが、ここでｃは１または２であり、Ｒ４の少なくとも１個はハロ（Ｃ１−６アルキル）、例えば：トリフルオロメチルである。
【００７１】
ある態様では、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、要すればヒドロキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、ハロ（Ｃ１−６アルキル）、Ｃ１−６アルコキシ、およびハロ（Ｃ１−６アルコキシ）から独立に選択される置換基１個〜５個で置換されていてもよい。
【００７２】
ある態様ではＲ１、Ｒ２、Ｒ３、およびＲ４は、要すればヒドロキシ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、ハロ（Ｃ１−６アルキル）、Ｃ１−６アルコキシ、およびハロ（Ｃ１−６アルコキシ）から独立に選択される置換基１個〜３個で置換されていてもよい。
【００７３】
ある態様では、Ｒ１は、ハロ、Ｃ１−６アルコキシ、ハロ（Ｃ１−６アルキル）、ヒドロキシ、ハロ（Ｃ１−６アルコキシ）、ハロ（Ｃ１−６アルキル）スルホニル、ヘテロアリール、ハロ（Ｃ１−６アルキル）スルファニル、ヘテロシクロアルキル、および（Ｃ１−６アルキル）ヘテロシクロアルキルから構成される群から独立に選択される。このようなある態様では、ａは１であり、Ｒ１は、２−クロロ、２−エチル、２−トリフルオロメチル、３−トリフルオロメチル、４−トリフルオロメチル、３−ｔｅｒｔ−ブチル、４−ｔｅｒｔ−ブチル、３−エチル、４−エチル、４−クロロ、４−ブロモ、４−トリフルオロメトキシ、４−トリフルオロメチルスルファニル、４−トリフルオロメチルスルホニル、および４−（４−メチルピペラジニル）から構成される群から独立に選択される。なお別な態様では、ａは２であり、各Ｒ１は、２−フルオロ、２−クロロ、２−ヒドロキシ、２−メトキシ、３−メトキシ、５−メトキシ、４−クロロ、４−フルオロ、３−トリフルオロメチル、４−トリフルオロメチル、５−トリフルオロメチル、５−ピリジニル、５−ピリジニル−３−イル、５−ピリジニル−４−イル、３−テトラヒドロフラン−３−イル、３−イソプロピル、５−イソプロピル、および５−ｔｅｒｔ−ブチルから構成される群から独立に選択される。
【００７４】
ある態様では、Ｒ４はＣ１−６アルキル、ヒドロキシ（Ｃ１−６アルキル）、ハロ（Ｃ１−６アルキル）、ハロ（Ｃ１−６アルキル）スルファニル、（Ｃ１−６アルコキシ）カルボニル、（Ｃ１−６アルキル）ヘテロシクロアルキル、カルボニトリル、フェニル、ハロ（Ｃ１−６アルキル）フェニル、（Ｃ１−６アルキル）ヘテロシクロアルキルカルボニル、およびヒドロキシ（Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル）から構成される群から選択する。このようなある態様では、ｃは１であり、およびＲ４はトリフルオロメチル、カルボニトリル、フェニル、トリフルオロメチルスルファニル、メトキシカルボニル、４−エチルピペラジニル、４−エチルピペラジニル−１−カルボニル、または２−ヒドロキシエチルアミノカルボニルから構成される群から選択する。なお別な態様では、ｃは２であり、各Ｒ４は、メチル、３−トリフルオロメチルフェニル、４−トリフルオロメチルフェニル、トリフルオロメチル、エトキシカルボニル、ヒドロキシメチル、およびフェニルから構成される群から独立に選択される。
【００７５】
他の態様では化合物一つまたはその医薬的に許容される塩を提供するが、その化合物は次式：
【化９】
2009507026.tif 000011
で示されるか、またはその化合物の互変異性体、またはその互変異性体の医薬的に許容される塩であって、その互変異性体は次式：
【化１０】
2009507026.tif 000012
で示される。
【００７６】
別の局面では、本発明は対象の体内にある腫瘍の増殖を低下または予防するために有効な量の式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物を対象に投与することを含む、この処置を必要とするヒトまたは動物対象におけるＲａｆ関連疾患を処置する方法を提供する。
【００７７】
さらに別の局面では、本発明は対象の体内にある腫瘍の増殖を低下または予防するに有効な量の式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）または（ＩＶ）で示される化合物を別な癌治療剤少なくとも１種と組み合わせて対象に投与することを含む、この処置を必要とするヒトまたは動物対象におけるＲａｆ関連疾患を処置する方法を提供する。
【００７８】
さらに別の局面では、本発明は、対象の体内にある腫瘍増殖を低下または予防するために有効な量の式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物を癌治療用薬剤少なくとも１種を追加的に組み合わせて対象に投与することを含む、この処置を必要とするヒトまたは動物対象におけるＲａｆ関連疾患を処置する方法を提供する。併用療法剤としての使用に適する抗癌剤多数が本発明方法での使用に意図されている。事実、本発明にはこれに限定するものではないが、多数の抗癌剤、例えば：アポトーシスを誘導する薬剤；ポリヌクレオチド（例えば：リボチーム）；ポリペプチド（例えば：酵素）；医薬；生物学的類似体；アルカロイド；アルキル化剤；抗腫瘍抗生物質；抗代謝物；ホルモン；白金化合物；抗癌薬と複合したモノクローナル抗体、トキシン、および／または放射性核種；生物学的反応調節剤（例えば：インターフェロン［例えば：ＩＦＮ−α、など］およびインターロイキン［例えば：ＩＬ−２、など］、など）；適応免疫療法剤；造血増殖因子；腫瘍細胞分化誘導薬剤（例えば：全トランス−レチノイン酸など）；遺伝子治療剤；アンチセンス治療剤およびヌクレオチド；腫瘍ワクチン；血管形成阻害剤、のようなものの投与が意図されている。ここに開示する式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物との併用に適する化学療法化合物および抗癌療法剤多数が当業者に既知である。
【００７９】
好ましい態様では、本発明の化合物と組み合わせて使用される抗癌剤にはアポトーシスを誘導または刺激する薬剤を含む。アポトーシスを誘導する薬剤はこれに限定するものではないが、次のものを含む：放射線；キナーゼ阻害剤（例えば：表皮成長因子受容体キナーゼ阻害剤［ＥＧＦＲ］、脈管増殖因子受容体［ＶＧＦＲ］キナーゼ阻害剤、繊維芽細胞増殖因子受容体［ＦＧＦＲ］キナーゼ阻害剤、血小板由来増殖因子受容体［ＰＧＦＲ］Ｉキナーゼ阻害剤およびＢｃｒ−Ａｂｌキナーゼ阻害剤、例えば：ＳＴＩ−５７１、グリベックおよびグリベック］）；アンチセンス分子；抗体［例えば：ハーセプチンおよびリツキサン］；抗エストロゲン剤［例えば：ラロキシフェンおよびタモキシフェン］；抗アンドロゲン剤［例えば：フルタミド、ビカルタミド、フィナセリド、アミノグルテタミド、ケトコナゾールおよびコルチコステロイド］；シクロオキシゲナーゼ２（ＣＯＸ−２）阻害剤［例えば：セレコキシブ、メロキシカム、ＮＳ−３９８および非ステロイド消炎剤（ＮＳＡＩＤ）］；および癌化学療法剤［例えば：イリノテカン（カンプトサール）、ＣＰＴ−１１、フルダラビン（フルダラ）、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）、デキサメタゾン、ミトキサントロン、ミロタルグ、ＶＰ−１６、シスプラチン、５−ＦＵ、ドキシルビシン、タキソテールまたはタキソール］；細胞シグナル伝達分子； セラミドおよびサイトカイン；およびスタウロスプリン、その他。
【００８０】
別の局面では、本発明は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物または医薬的に許容される塩少なくとも１種をヒトまたは動物対象への投与に適する医薬的に許容される担体単独または他種の抗癌剤と共に含む医薬組成物を提供する。
【００８１】
別の局面では、本発明は本明細書に記載する式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物の製法を提供する。
【００８２】
さらに別の局面では、本発明は、酵素Ｒａｆキナーゼの阻害剤である化合物を提供する。この酵素はｐ２１ｒａｓの下流のエフェクターなので、本阻害剤は、Ｒａｆキナーゼ経路の阻害が指示処方される、例えば：Ｒａｆキナーゼが介在する腫瘍および／または癌性細胞増殖の処置において、ヒトまたは脊椎動物で使用するための医薬組成物として有用である。特に、ヒトまたは動物、例えば：マウスにおいて、癌の増殖がＲａｓタンパク質シグナル伝達カスケードに依存し、それ故、Ｒａｆキナーゼ活性の阻害によるカスケードの妨害によって処置できるので、本化合物は癌の処置に有用である。従って、本発明の化合物は固形癌、例えば：癌腫（例えば：肺臓、膵臓、甲状腺、膀胱または大腸の癌）、骨髄疾患（例えば：骨髄性白血病、多発性骨髄腫および赤白血病）、アデノーマ（例えば：絨毛大腸アデノーマ）、または肉腫（例えば： 骨肉腫）の処置に有用である。
【００８３】
「Ｒａｆ阻害剤」は、本明細書では、本明細書に一般的に記載するＲａｆ／Ｍｅｋ濾過検定法で測定したＩＣ５０が約１００μＭまたはそれ以下、典型的には約５０μＭまたはそれ以下のＲａｆキナーゼ活性を示す化合物を示す。本発明の化合物が阻害を示すであろうＲａｆキナーゼの好ましいアイソフォームは、Ａ−Ｒａｆ、Ｂ−Ｒａｆ、およびＣ−Ｒａｆ（Ｒａｆ−１）である。「ＩＣ５０」は、酵素（例えば：Ｒａｆキナーゼ）の活性を最大値の半分の値まで低下させる阻害剤濃度である。本発明の代表的化合物は、Ｒａｆ阻害活性を示すことが見出された。本発明の化合物は、本明細書に記載するＲａｆキナーゼ検定法で測定した場合、好ましくはＲａｆについてＩＣ５０約１０μＭまたはそれ以下、より好ましくは約５μＭまたはそれ以下、さらに好ましくは約１μＭまたはそれ以下、および最も好ましくは、約２００ｎＭまたはそれ以下を示す。
【００８４】
本明細書で使用する語、「ＭＡＰＫシグナル伝達経路」は、Ｒａｓ−Ｒａｆ−ＭＥＫｌ−ＥＲＫシグナル伝達分子からなるモジュール内の、分裂促進剤で活性化されたプロテインキナーゼシグナル伝達経路を示す略称である。
【００８５】
「アルキル」は、ヘテロ原子を含まない飽和ヒドロカルビル基を示し、直鎖アルキル基例えば：メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、ヘキシル、ヘプチル、オクチル、ノニル、デシル、ウンデシル、ドデシル、などを含む。アルキルはまた、直鎖アルキル基の分枝鎖異性体を含み、これに限定するものではないが、単なる例示として次のものを含む：-CH(CH3)2、-CH(CH3)(CH2CH3)、-CH(CH2CH3)2、-C(CH3)3、-C(CH2CH3)3、-CH2CH(CH3)2、-CH2CH(CH3)-(CH2CH3)、-CH2CH(CH2CH3)2、-CH2C(CH3)3、-CH2C(CH2CH3)3、-CH(CH3)-CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH2CH(CH3)2、-CH2CH2CH(CH3)(CH2CH3)、-CH2CH2-CH(CH2CH3)2、-CH2CH2C(CH3)3、-CH2CH2C(CH2CH3)3、-CH(CH3)CH2CH(CH3)2、-CH(CH3)CH(CH3)CH(CH3)2、-CH(CH2CH3)- CH(CH3)CH(CH3)(CH2CH3)、その他。そこで、アルキル基は１級アルキル基、２級アルキル基、および３級アルキル基を含む。用語「Ｃ１−１２アルキル」は炭素原子１個から１２個を有するアルキル基を示す。用語「Ｃ１−６アルキル」は、炭素原子１個から６個を有するアルキル基を示す。
【００８６】
「アルケニル」は、炭素原子２〜６個、好ましくは２〜４個を持ち、少なくとも１個、好ましくは１〜２個のビニル性不飽和部位（＞Ｃ＝Ｃ＜）を持つ直鎖または分枝鎖のヒドロカルビル基を示す。この基は、例えば、ビニル、アリル、およびブタン−３−エン−１−イルで例示される。この用語にはシスおよびトランス異性体またはこの異性体の混合物も含まれる。
【００８７】
「アルコキシ」はＲＯ−基を示すが、ここでＲはアルキル基である。本明細書では用語「Ｃ１−６アルコキシ」はＲＯ−基を示すが、ここでＲはＣ１−６アルキル基である。Ｃ１−６アルコキシ基の代表例はメトキシ、エトキシ、ｔ−ブトキシなどである。
【００８８】
「（Ｃ１−６アルコキシ）カルボニル」はエステル−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＲ基を示すが、ここでＲはＣ１−６アルキルである。
【００８９】
「アミジノ」は−Ｃ（＝ＮＨ）ＮＨ２基を示す。「アミジン」はこの基を含む化合物である。
「アミノカルボニル」は本明細書では−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２基を示す。
【００９０】
「Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル」は−Ｃ（Ｏ）−ＮＲＲ１基を示すが、ここでＲはＣ１−６アルキルであり、Ｒ１は水素およびＣ１−６アルキルから選択される。
「カルボニル」は二価の基−Ｃ（Ｏ）−を示す。
【００９１】
「カルボキシル」は−Ｃ（＝Ｏ）−ＯＨを示す。
【００９２】
「シアノ」、「カルボニトリル」、または「ニトリル」は−ＣＮを示す。
【００９３】
「カルボニトリル（Ｃ１−６アルキル）」は−ＣＮで置換されたＣ１−６アルキル基を示す。
【００９４】
「シクロアルキル」は単環または多環のアルキル置換基を示す。典型的なシクロアルキル基は炭素環原子３〜８個を有する。代表的シクロアルキル基はシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、およびシクロオクチルである。
【００９５】
「ハロゲン」または「ハロ」はクロロ、ブロモ、フルオロ、およびヨード基を示す。
【００９６】
「ハロ（Ｃ１−６アルキル）」は、ハロゲン原子１個またはそれ以上、好ましくは１個〜５個のハロゲン原子で置換されたＣ１−６アルキル残基を示す。より好ましいハロ（Ｃ１−６アルキル）基はトリフルオロメチルである。
【００９７】
「ハロ（Ｃ１−６アルキル）フェニル」はハロ（Ｃ１−６アルキル）基で置換されたフェニル基を示す。
【００９８】
「ハロ（Ｃ１−６アルコキシ）」は、ハロゲン原子１個またはそれ以上、好ましくはハロゲン原子１個〜５個で置換されたアルコキシ残基を示す。より好ましいハロ（Ｃ１−６アルコキシ）基はトリフルオロメトキシである。
【００９９】
「ハロ（Ｃ１−６アルキル）スルホニル」および「ハロ（Ｃ１−６アルキル）スルファニル」は、ハロ（Ｃ１−６アルキル）基で置換されたスルホニルおよびスルファニル基を示すが、ここでスルホニルおよびスルファニルは本明細書に定義する。
【０１００】
「ヘテロアリール」は、環原子としてヘテロ原子１個〜４個、および残余は炭素原子を有する芳香族基を示す。本発明の化合物に用いられる適切なヘテロ原子は、窒素、酸素、および硫黄であるが、ここで窒素および硫黄原子はオキシド化されていてもよい。例示的なヘテロアリール基は環原子５個〜１４個を持ち、例えば次のものを含む：ベンズイミダゾリル、ベンゾチアゾリル、ベンズオキサゾリル、ジアゼピニル、フラニル、ピラジニル、ピラゾリル、ピリジル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピロリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、イミダゾリル、インドリル、インダゾリル、キノリニル、イソキノリニル、キナゾリニル、キノキサリニル、チアゾリル、チエニル、およびトリアゾリル。
【０１０１】
本明細書では「ヘテロシクロアルキル」は、その環構造にヘテロ原子１個〜５個、より典型的には１個〜２個を有するシクロアルキル置換基示す。本発明の化合物に用いる適切なヘテロ原子は窒素、酸素および硫黄であって、ここで窒素および硫黄原子は要すればオキシド化されていてもよい。代表的なヘテロシクロアルキル部分には次のものを含む：例えば、モルフォリノ、ピペラジニル、ピペリジニル、その他。
【０１０２】
「（Ｃ１−６アルキル）ヘテロシクロアルキル」はＣ１−６アルキル基で置換されたヘテロシクロアルキル基を示す。
【０１０３】
「ヘテロシクロアルキル（Ｃ１−６アルキル）」はヘテロシクロアルキルで置換されたＣ１−６アルキルを示す。
【０１０４】
「ヘテロシクロアルキルカルボニル」は、本明細書では基−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１０を示すが、ここで、Ｒ１０はヘテロシクロアルキルである。
【０１０５】
「（Ｃ１−６アルキル）ヘテロシクロアルキルカルボニル」は基−Ｃ（Ｏ）−Ｒ１１を示すが、ここでＲ１１は（Ｃ１−６アルキル）ヘテロシクロアルキルである。
【０１０６】
「ヒドロキシ」は−ＯＨを示す。
「ヒドロキシ（Ｃ１−６アルキル）」は、ヒドロキシで置換されたＣ１−６アルキル基を示す。
【０１０７】
「ヒドロキシ（Ｃ１−６アルキルアミノカルボニル）」は、ヒドロキシで置換されたＣ１−６アルキルアミノカルボニル基を示す。
【０１０８】
「イミデート」または「イミデートエステル」は基−Ｃ（＝ＮＨ）Ｏ−またはこの基を有する化合物を示す。イミデートエステルは例えば：イミデートのメチルエステル−Ｃ（＝ＮＨ）ＯＣＨ３を含む。
【０１０９】
「ニトロ」は−ＮＯ２を示す。
【０１１０】
「スルホニル」は本明細書では、−ＳＯ２−を示す。
【０１１１】
「スルファニル」は本明細書では、基−Ｓ−を示す。「アルキルスルホニル」は、構造−ＳＯ２Ｒ１２で示される置換スルホニルを示し、ここでＲ１２はアルキルである。「アルキルスルファニル」は、構造−ＳＲ１２を持つ置換スルファニルであるが、ここでＲ１２はアルキルである。本発明の化合物に用いられるアルキルスルホニルおよびアルキルスルファニル基は、（Ｃ１−６アルキル）スルホニルおよび（Ｃ１−６アルキル）スルファニルを含む。そこで、典型的な基は次のものを含む：例えば、メチルスルホニルおよびメチルスルファニル（すなわち、Ｒ１２はメチルである）、エチルスルホニルおよびエチルスルファニル（すなわち、Ｒ１２はエチルである）、プロピルスルホニルおよびプロピルスルファニル（すなわち、Ｒ１２はプロピルである）、その他。
【０１１２】
「ヒドロキシ保護基」は、ＯＨ基の保護基を示す。この用語は本明細書では酸ＣＯＯＨのＯＨ基の保護にも用いる。適当なヒドロキシ保護基ならびにその基の保護および脱保護の適当な条件は当業者には良く知られている。例えば、多数の保護基がT. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protecting Groups in Organic Synthesis, Third Edition, Wiley, New York, 1999に記載されている。そのようなヒドロキシ保護基は、Ｃ１−６アルキルエーテル、ベンジルエーテル、ｐ−メトキシベンジルエーテル、シリルエーテルなどを含む。
【０１１３】
用語「多形体」は、ある化合物の異なる結晶型を示す。多形体は相互に様々な物理学的性質、例えば：Ｘ線回折パターン、赤外線吸収パターン、融点、安定性、または溶解度に相違を示す。
【０１１４】
「代謝物」は、親化合物の投与後対象の体内で産生される誘導体を示す。この誘導体は親化合物から対象の体内での様々な生化学的変換、例えば：酸化、還元、加水分解、または抱合によって産生される例えば、オキシドおよび脱メチル化誘導体、その他であろう。そのような誘導体に対応する代謝物は、合成法によって、またはインビトロ法で製造することもできる。ある態様では、式（Ｉ）〜（ＩＶ）で示される化合物の代謝物はオキシドである。ある局面では、オキシドは式（Ｉ）〜（ＩＶ）で示される化合物を酸化剤で合成的に処理して製造されるＮ−オキシドである。ある局面では、酸化剤はＮ−メチルモルホリンＮ−オキシドまたは過酸化水素のようなヒドロペルオキシドである。ある態様では、式（Ｉ）〜（ＩＶ）で示される化合物とグルクロン酸とを抱合させて代謝物を製造する。他の一局面では、次の構造：
【化１１】
2009507026.tif 000013
を持つ代謝物、互変異性体、またはその立体異性体を提供する。
【０１１５】
「要すれば置換されていてもよい」または「置換された」は、１価または２価の残基による水素原子１個またはそれ以上への置換を示す。
【０１１６】
置換した置換基が直鎖基を含む時は、その置換は鎖の内部に存在してもよく（例えば：２−ヒドロキシプロピル、２−アミノブチル、など）、または鎖末端に存在してもよい（例えば：２−ヒドロキシエチル、３−シアノプロピル、など）。置換した置換基は、共有結合で結合する炭素またはヘテロ原子の直鎖、分枝鎖または環状の骨格であってもよい。
【０１１７】
前記の各定義は、不可能な置換パターン（例えば：フルオロ基５個で置換されたメチルまたはハロゲン原子で置換された他のハロゲン原子）を含めることは意図していないものと理解される。このような不可能な置換のパターンは当業者に既知である。
【０１１８】
式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物またはその立体異性体および多形体、ならびに医薬的に許容される塩、エステル、代謝物およびそれらの任意のプロドラッグを含む本発明の化合物は、互変異性体化を起すことがあり、そこで様々な互変異性体の形で存在するが、それらでは分子のプロトンが他の原子に移動し、分子の化学結合がそれに従って移動することは当業者にはいずれも明らかである。例えば：March, Advanced Organic Chemistry: Reactions, Mechanisms and Structures, Fourth Edition, John Wiley & Sons, pages 69-74 (1992)参照。本明細書で使用する、用語「互変異性体」は、プロトンシフトで生成する化合物を示すが、互変異性体が存在するならば、全て本発明の範囲内に含まれると理解すべきである。例えば、下記の式（Ｉａ）で示される化合物の互変異性体はｃが１である式（Ｉ）で示され、式（Ｉｂ）で示される化合物となる。同様に、式（ＩＶｃ）で示される化合物の互変異性体は、式（ＩＶｄ）または（ＩＶｅ）で示される化合物である。
（Ｉａ）（Ｉｂ）（ＩＶｃ）（ＩＶｄ）（ＩＶｅ）;
【化１２】
2009507026.tif 000014
【０１１９】
式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物を含む本発明の化合物またはその互変異性体および多形体、ならびにその医薬的に許容される塩、エステル、代謝物およびそれらの任意のプロドラッグは不斉的に置換された炭素原子を含むことがある。このような不斉的に置換された炭素原子は、絶対的立体化学、例えば（Ｒ）型または（Ｓ）型の観点から定義されるエナンチオマー、ジアステレオマー、およびその他の立体異性体型の本発明の化合物を与える。その結果、本発明の化合物、その異性体全て、光学的に純粋な形の個々の立体異性体、その混合物、ラセミ混合物（または「ラセメート」）、ジアステレオマー混合物、ならびに単一ジアステレオマーは本発明に含まれる。本明細書で使用する用語「Ｓ」および「Ｒ」配置は、IUPAC 1974 RECOMMENDATIONS FOR SECTION E, FUNDAMENTAL STEREOCHEMISTRY, Pure Appl. Chem. 45: 13-30 (1976)に定義されているものである。用語αおよびβは環状化合物の環上の位置について使用する。参照平面のα側は好ましい置換基が数字の小さい位置に存在する側である。参照平面の逆側にある置換基は、β記述子で記載する。この使用法はここで「α」が平面の下を意味し、絶対配置で記載する環状基本構造でのものとは異なることに注目すべきである。本明細書で用いる用語αおよびβ配置は、CHEMICAL ABSTRACTS INDEX GUIDE-APPENDIX IV (1987) paragraph 203に定義されているものである。
【０１２０】
式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物を含む本発明の化合物、またはその立体異性体および互変異性体、ならびに医薬的に許容される塩、エステル、代謝物、およびそれらの任意のプロドラッグのいずれかは、物理的性質の異なる様々な結晶形（または「多形体」）で存在できることは当業者には明らかである。本発明の化合物（その代謝物、プロドラッグ、立体異性体、および互変異性体、およびそれらの任意の医薬的に許容される塩を含む）の全ての多形体は、存在できる限り、単離型もその混合物も本発明に含まれることは理解すべきである。
【０１２１】
本明細書で使用する、用語「医薬的に許容される塩」は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物、その互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、またはプロドラッグの非毒性の酸またはアルカリ土類金属塩を示す。これらの塩は式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物の最終的分離および精製の処理液中でも製造でき、または別に塩基官能基または酸官能基と適当な有機酸または無機酸または塩基とを反応させて製造することもできる。代表的な塩は、これに限定するものではないが、以下のものも含む：酢酸塩、アジピン酸塩、アルギン酸塩、クエン酸塩、アスパラギン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、重硫酸塩、ブタン酸塩、カンファー酸塩、カンファースルホン酸塩、ジグルコン酸塩、シクロペンタンスルホン酸塩、ドデシル硫酸塩、エタンスルホン酸塩、グルコヘプタン酸塩、グリセロリン酸塩、ヘミ硫酸塩、ヘプタン酸塩、ヘキサン酸塩、フマル酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、ヨウ化水素酸塩、２−ヒドロキシエタンスルホン酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、ニコチン酸塩、２−ナフタレンスルホン酸塩、シュウ酸塩、パモ酸塩、ペクチン酸塩、過硫酸塩、３−フェニルプロピオン酸塩、ピクリン酸塩、ピバリン酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、酒石酸塩、チオシアン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩およびウンデカン酸塩。また、塩基性窒素含有基は、次のような試薬で４級化できる：例えば、低級アルキルハライド、例えばメチル、エチル、プロピル、およびブチルのクロリド、ブロミドおよびヨーダイド；ジアルキル硫酸エステル、たとえジメチル、ジエチル、ジブチル、およびジアミル−硫酸、長鎖ハライド、例えば：デシル、ラウリル、ミリスチルおよびステアリルのクロリド、ブロミドおよびヨ−ダイド、フェニルアルキルハライド：例えばベンジル−およびフェネチル−ブロミド、その他。こうして水または油中、溶解性または分散性の生成物を得る。
【０１２２】
医薬的に許容しうる酸付加塩を形成するために用いる酸の例は次のものを含む：無機酸、例えば塩酸、硫酸、およびリン酸；および有機酸、例えばシュウ酸、マレイン酸、メタンスルホン酸、コハク酸およびクエン酸。塩基性付加塩は式（Ｉ）で示される化合物の最終的分離および精製の間に処理液中に生成するが、別にカルボン酸部分を適当な塩基：例えば、医薬的に許容される金属カチオンのヒドロキシドまたは炭酸塩または重炭酸塩、またはアンモニアまたは有機の１級、２級または３級アミン、と反応させても製造できる。医薬的に許容される塩は、これに限定するものではないが、例えばアルカリおよびアルカリ土類金属に基づくカチオン：例えばナトリウム、リチウム、カリウム、カルシウム、マグネシウム、アルミニウム塩、その他の塩を含み、ならびにこれに限定するものではないが、非毒性のアンモニウム、４級アンモニウム、およびアミンカチオン：例えば、これに限定するものではないが、アンモニウム、テトラメチルアンモニウム、テトラエチルアンモニウム、メチルアミン、ジメチルアミン、トリメチルアミン、トリエチルアミン、エチルアミン、その他を含む。塩基付加塩の形成に有用なその他の代表的有機アミンは次のものを含む：ジエチルアミン、エチレンジアミン、エタノールアミン、ジエタノールアミン、ピペラジン、その他。
【０１２３】
本発明化合物の塩および製剤は、いずれもここに全体を参考のために引用する２００６年７月２１日出願の「ベンゾイミダゾールピリジルエーテルの製剤」と題する仮出願に開示された（US出願番号60／832715；代理人包袋番号PP028237.0001）および２００６年８月３０日出願の「ベンズイミダゾリルピリジルエーテルの塩およびその製剤」（代理人包袋番号PP028258.0001）にも記載されている。
【０１２４】
本明細書で使用する用語「医薬的に許容されるエステル」は、インビボで加水分解されるエステルを示し、人体内で容易に分解されて親化合物またはその塩を与えるものを含む。適当なエステル基は次のものを含む：例えば、医薬的に許容される脂肪族カルボン酸、特にアルカン酸、アルケン酸、シクロアルカン酸およびアルカンジ酸由来のものであって各アルキルまたはアルケニル部分は炭素数６またはそれ以下のものが有利である。特定的エステルの例は次のものを含む：ホルメート、アセテート、プロピオネート、ブチレート、アクリレートおよびエチルサクシネート。
【０１２５】
本明細書で使用する用語「医薬的に許容されるプロドラッグ」は、本発明化合物のプロドラッグを示し、それらは健全な医学的判断の範囲内でヒトおよびより下等な動物の組織と接触する使用に適し、過度の毒性、刺激、アレルギー反応、その他を持たず、ふさわしい合理的な利益／危険度比で、所期の使用目的に有効であり、ならびに可能ならば両性イオン形である本発明化合物である。用語「プロドラッグ」は、インビボで、例えば血中での加水分解によって迅速に変換されて前記式の親化合物を与える、化合物を示す。徹底的な検討は次の文献に記載されている：T. Higuchi and V. Stella, Pro-drugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14 of the A.C.S. Symposium Series, and in Edward B. Roche, ed., Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987、両文献は参考のために本明細書に引用する。
【０１２６】
式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物、またはその互変異性体、プロドラッグ、立体異性体、および多形体、ならびにそれらの医薬的に許容される塩、エステルおよびそれらの任意のプロドラッグを含む本発明の化合物が、インビボで変化してヒトまたは動物体内または細胞内での代謝によって阻害剤としての活性を保持する医薬的に活性な代謝物を与えるであろうことは当業者には自明となろう。本発明化合物の活性代謝物は当技術分野で既知の常用の技術を用いて確認できよう。例えば： Bertolini, G. et al., J. Med. Chem. 40: 2011- 2016 (1997); Shan, D. et al., J Pharm. Sci. 86(7): 765-767; Bagshawe K., Drug Dev. Res. 34: 220-230 (1995); Bodor, N., Advances in Drug Res. 13: 224-331 (1984); Bundgaard, H., Design of Prodrugs (Elsevier Press 1985); and Larsen, I. K., Design and Application of Prodrugs, Drug Design and Development (Krogsgaard-Larsen et al., eds., Harwood Academic Publishers, 1991参照）。本発明化合物の活性代謝物である個々の化合物は、本発明に含まれることを理解すべきである。
【０１２７】
用語「癌」は、キナーゼ、特にＲａｆキナーゼの阻害で有効に処置できる癌疾患を示し、次のものを含む：例えば、固形癌、例えば癌腫（例えば：肺臓、膵臓、甲状腺、卵巣、膀胱、乳腺、前立腺、または大腸の癌腫）、メラノーマ、骨髄性疾患（例えば：骨髄性白血病、多発性骨髄腫、および赤白血病）、アデノーマ（例えば：絨毛大腸アデノーマ）、および肉腫（例えば：骨肉腫）。
【０１２８】
本発明の代表的態様では、本発明の化合物は次のものを含む、例えば：
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチルフェニル）アミン、
（２−フルオロ−５−ピリジン−３−イル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２−フルオロ−５−ピリジン−４−イル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン− ４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（３−トリフルオロメチル−フェニル）アミン、
（３−エチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（４−クロロ−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（４−エチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
【０１２９】
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１−Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメトキシ−フェニル）アミン、
（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−（１−メチル−５−｛２−［５−メチル−４−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピリジン−４−イルオキシ｝−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）アミン、
（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−（１−メチル−５−｛２−［５−メチル−４−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピリジン−４−イルオキシ｝−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）アミン、
２−｛４−［２−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチルエステル、
（２−｛４−［２−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−メタノール、
２−｛４−［１−メチル−２−（４−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−３Ｈ−イミダゾール］−４−カルボニトリル、
（３−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
｛１−メチル−５−［２−（５−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチルスルファニルフェニル）アミン、
（３−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン− ４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
【０１３０】
［４−フルオロ−３−（テトラヒドロフラン−３−イル）−フェニル］−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（４−ブロモ−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４− イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（４−フルオロ−３−イソプロピル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−スルファニルフェニル）アミン、
（２−フルオロ−５−イソプロピル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−フルオロ−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）− ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
【０１３１】
（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−メチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２−クロロ−４−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
２−｛４−［２−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−３Ｈ−イミダゾール−４−カルボニトリル、
（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−クロロフェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２−クロロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
｛１−メチル−５−［２−（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（３−トリフルオロメチル−フェニル）アミン、
【０１３２】
（３−エチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（４−フェニル−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２−クロロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−メチル−４−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２−クロロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−メチル−４−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−メチル−４−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
【０１３３】
｛１−メチル−５−［２−（５−メチル−４−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ− ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（３−トリフルオロメチルフェニル）アミン、
（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−フルオロ−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−メチル−４−フェニル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
［４−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−フェニル］−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
２−｛４−［２−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−３Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸メチルエステル、
２−｛４−［２−（２−クロロ−５−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチルエステル、
（２−フルオロ−４−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２−クロロ−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（２，５−ジメトキシフェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
【０１３４】
（３，５−ジメトキシフェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（２−トリフルオロメチルフェニル）アミン、
（２−エチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イル−オキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−（２−｛４−［２−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−３Ｈ−イミダゾール−４−イル）−メタノン、
２−｛４−［２−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−３Ｈ− イミダゾール−４−カルボン酸（２−ヒドロキシ−エチル）アミド、
｛１−エチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）アミン、
（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−｛６−メトキシ−１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン、
【０１３５】
｛６−メトキシ−１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミン、
（４−エチル−ピペラジン−１−イル）−（２−｛４−［１−メチル−２−（４−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−３Ｈ−イミダゾール−４−イル）−メタノン、
｛１−エチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミン、
２−｛４−［１−メチル−２−（４−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−３Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸（２−ヒドロキシエチル）−アミド、
２−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルアミノ｝−５−トリフルオロメチル−フェノール、および
３−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イルアミノ｝−６−トリフルオロメチル−フェノール；
またはその互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、またはそのプロドラッグ、またはその化合物、互変異性体、立体異性体、多形体、エステル、代謝物、またはプロドラッグの医薬的に許容される塩。
【０１３６】
別の局面では、本発明は式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物の製法およびこの製法に有用な合成中間体に関する。
【０１３７】
本発明はまた以下に記載する本発明の化合物を製造する方法およびこの製法に有用な合成中間体に関する。
【０１３８】
合成法
スキーム１は本発明化合物中央のビアリールエーテル部分の構築を例示する。化合物１．１を化合物１．２と反応させてエーテル１．３を得る。ここで、Ｌ１またはＬ２の一方はハロであり、他方はＯＨである。この結合反応は有機溶媒、例えば：アセトニトリルまたはジメチルスルホキシド中、塩基存在下に実施してもよく、昇温または還流温度で実施してもよい。適当な塩基は次のものを含む：Ｋ２ＣＯ３、ＣａＣＯ３、ＫＯＨ、ＮａＯＨまたはＫＦ−Ａｌ２Ｏ３（Journal of Organic Chemistry, Vol. 63, No. 18, 1998 pgs. 6338-6343）。化合物１．１の基ＱはＮＨ２または次のようなアミノ前駆体、例えば：ＮＯ２または保護アミノ基であって、後に還元またはアミノ前駆体の脱保護によってアミンに変換できるもの、であってもよい。化合物１．２のＺ基は、Ｒ４基１個または２個で置換されたイミダゾリル基であるか、またはそのようなイミダゾリル基を形成するために使用される官能基であってもよい。適当な官能基は次のものを含む：アルデヒドまたはアルデヒド前駆体、例えば：エステルまたはカルボニトリルであって、後にアルデヒドに変換できるもの。エステル基およびカルボニトリル基は還元剤、例えば：水素化ジイソブチルアルミニウム、を用いてアルデヒドに還元できる。Ｚは−ＣＨ２ＯＲ５であってもよく、ここでＲ５はヒドロキシ保護基である。アルデヒドは、後の段階でＲ５基の脱保護および生成するアルコールの酸化によってアルデヒドとする反応で遮蔽を外すこともできる。このアルデヒドから置換イミダゾリル基への変換は、スキーム３に示す。置換イミダゾリル基を形成するための、他の方法はスキーム６に示す。
スキーム１：
【化１３】
2009507026.tif 000015
【０１３９】
スキーム２は、あるビアリールエーテルの合成例を示す。説明する目的のために、スキーム２では次の置換パターン：ＱはＮＯ２である、Ｌ１はＯＨ、Ｌ２はＣｌ、およびＺはｔ−ブチルエステル基であるものを用いていると理解する。アルデヒド２．７（ここで、Ｒ２はメチルであり、ｂは０である）の合成例を実施例１に示す。アミン２．１は多数の公知方法のどれかでアルキルアミン２．２に変換してもよい。局面の一つでは、アミン２．１を無水酢酸および蟻酸で処理して対応するホルムアミドを形成し、これを還元してアルキルアミン２.２とする。適当な還元剤はＢＦ３（ＯＣＨ２ＣＨ３）２存在下のＮａＢＨ４である。あるいは、アルキルアミン２．２は、アミン２．１とトリフルオロ酢酸無水物とを反応させ、対応するアミドをアルキル化剤、例えば：ハロゲン化アルキルを用いてアルキル化し、および塩基、例えば：ＮａＯＨで処理してトリフルオロアセトアミド保護基を除去して合成してもよい。
【０１４０】
塩化物２．５は、ピコリン酸２．３を過剰な塩化チオニルで処理して酸クロリド２．４とし、これをジ炭酸ジ−ｔ−ブチルおよびピリジンで処理して塩化物２．５を得ることで製造できる。塩基性条件下でのアルキルアミン２．２のアルコールと塩化物２．５との結合反応はエーテル２．６を与え、これを直接的な水素化ジイソブチルアルミニウムによる還元またはエステル２．６のアルコールへの還元とそれに続くアルデヒドへの酸化の２段階法によってアルデヒド２．７に変換できる。
スキーム２：
【化１４】
2009507026.tif 000016
【０１４１】
スキーム３は、イミダゾール環の形成を例示する。アルデヒド２．７は化合物３．１（ここで、Ｘｂは＝Ｏまたは＝ＮＨＯＨであり、Ｒ４ｐおよびＲ４ｑは独立にＨまたはＲ４であるが、ここでＲ４は前記定義の通りである。但し、Ｒ４ｐおよびＲ４ｑの少なくとも１個はＲ４であるものとする）と反応できる。この反応は極性溶媒、例えば：酢酸エチル／エタノール混合物、中でＮＨ４ＯＨの存在下に実施して、化合物３．２を得てもよい。化合物３．２のニトロ基は、還元剤例えば：ジチオン酸ナトリウム（Ｎａ２Ｓ２Ｏ４）で処理してアミン３．３まで還元できる。
スキーム３：
【化１５】
2009507026.tif 000017
【０１４２】
スキーム４は、ベンゾイミダゾール環の形成を例示する。ジアミン３．３とチオイソシアネート４．１とを反応させてチオ尿素４．２を得る。４．２の脱硫化試薬で処理して式（Ｉ）で示される化合物を得る。用語「脱硫化試薬」は、閉環反応に適する試薬、例えば：ＦｅＣｌ３、２−クロロ−１−メチルピリジニウムヨーダイド（向山試薬）、２−クロロ−１、３−ジメチルイミダゾリウムクロリド、ＰＯＣｌ３、またはハロゲン化アルキル、例えば：メチルヨーダイド、を示す。修飾された向山試薬（Journal of Organic Chemistry, Vol. 70, No. 7, 2005 pgs. 2835-2838）を使用してもよい。
スキーム４：
【化１６】
2009507026.tif 000018
【０１４３】
あるいは、本発明の化合物は、結合反応の順序を変更して合成してもよい。スキーム５は、５．１と５．２との間にエーテル結合を形成する結合反応および５．３と３．１とでイミダゾール環を形成する結合反応を、完全に結合した５環骨格を形成するための最終直前の工程として例示する。中間体５．１および５．２では、Ｌ３またはＬ４の一方はハロであり、Ｌ３またはＬ４の他方はＯＨである。これらの中間体は、前記スキームに従って適当な出発原料および／または保護基を用いることによって、適当な反応順序で製造してもよい。このようなファクターは当業者の熟練の範囲内にある。アルデヒド５．３は、例えば、対応するカルボニトリル（その合成は実施例６０に示す）の水素化ジイソブチルアルミニウムを用いる還元反応で製造してもよい。前記スキーム３によるアルデヒド５．３とケトン３．１との反応は式（Ｉ）で示される化合物を与える。
スキーム５：
【化１７】
2009507026.tif 000019
【０１４４】
末端にトリアゾール基を持つ本発明の化合物は、スキーム６に示すようにして化合物６．１（ここでＺはカルボニトリルである）とヒドラジド６．２とを反応させて製造してもよい。化合物６．３の合成を実施例６０に例示する。
スキーム６：
【化１８】
2009507026.tif 000020
【０１４５】
結合反応に用いるイミダゾール中間体は、他の合成経路を用いて製造できることは明らかである。そのような方法の一つをスキーム７に示す。化合物１．３（ここでＺはＣＮである）を、Ｚがアミジノ基である化合物に変換する。この変換は次のようにして行う：１．３とアルコキシド、例えば：メトキシドとを反応させてカルボニトリルからイミデートエステルに変換し、次にこれとアンモニウム試薬、例えば：酢酸アンモニウムまたは安息香酸アンモニウム、とを反応させてアミジンを形成する。このアミジンと化合物（Ｖａ）（ここでＸａは脱離基である）との反応は、アルキル化された環状化合物７．２またはその互変異性体を提供する。化合物７．２の加熱で水の脱離（脱水）が起き、中間体７．３が形成する。その他の脱水条件には７．２の酸、有機酸、例えば：酢酸、メタンスルホン酸、カンファースルホン酸、トリフルオロメタンスルホン酸、およびトリフルオロ酢酸、ならびに無機酸、例えば：塩酸および硫酸、による処理を含む。この４個の反応、すなわち−イミデートエステルの形成、アミジンの形成、アルキル化／環化、および脱水−は、典型的には一容器中で連続反応として行う。
スキーム７：
【化１９】
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【０１４６】
本発明の化合物は、インビトロまたはインビボで癌細胞の増殖を阻害するのに有用である。この化合物は、単独でまたは医薬的に許容される担体または添加剤との組成物中で使用してもよい。適当な医薬的に許容される担体または添加剤は、次のものを含む：例えば、薬剤製造用剤および薬剤送達調整剤および強化剤、例えば：リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、単糖類、二糖類、澱粉、ゼラチン、セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム、デキストロース、ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリン、ポリビニルピロリドン、低融点ワックス、イオン交換樹脂、など、ならびにこれらの２種またはそれ以上の組合せ。その他の適当な医薬的に許容される添加剤は、本明細書に参考のために引用する“Remington's Pharmaceutical Sciences,” Mack Pub. Co., New Jersey (1991)に記述されている。
【０１４７】
本発明の化合物の有効量は一般に、本明細書に記載する検定のいずれかによって、公知のまたは当業者が容易に確認できる他のＲａｆキナーゼ活性検定によって、または癌の兆候の阻害または緩解を検出することによって、Ｒａｆ活性を十分に検出可能に阻害する量のいずれかを含む。
【０１４８】
単一成分投与用の製剤を製造するための担体物質と混合していてもよい活性成分の量は、処置する対象および投与形態に依存して変化する。しかしながら、特定の患者のための用量は使用する特定化合物の活性、年齢、体重、健康状態、性、食餌、投与時刻、投与経路、排泄速度、薬剤の組合せ、および治療する疾患の重篤度を含む種々の因子に依存することは理解できよう。特定的状況での治療的有効量は常用の実験によって容易に決定でき、臨床医の熟練と判断の範囲内である。
【０１４９】
本発明の目的では、治療的有効量は一般に、患者に毎日単回または複数回に分けて投与される全日用量であって、例えば０．００１〜１０００ｍｇ／ｋｇ体重および１．０〜３０ｍｇ／ｋｇ体重である。用量単位組成物は、毎日の用量とするためにその約数の量を含んでいてもよい。
【０１５０】
本発明の化合物は、所望のここに記載する常用的な非毒性の医薬的に許容される担体、アジュバント、および賦形剤を含む単位用量剤中で経口的に、非経口的に、口腔内（舌下）に、エアロゾル化または吸入スプレーを用いて、経直腸的に、または局所的に投与できる。局所的投与は、経皮投与：例えば経皮パッチまたはイオノフォレシス装置の使用を含むこともある。本明細書で使用する用語「非経口」は、皮下注射、脈管内、筋肉内、胸骨注射、または点滴技術を含む。
【０１５１】
注射用製剤、例えば無菌注射用水溶液または油性懸濁液は公知の技術に従って適当な分散または湿潤剤および懸濁剤を用いて製剤化できる。無菌の注射用剤は、非毒性非経口投与的に許容される希釈剤または溶媒：例えば、１、３−プロパンジオール溶液としての、無菌注射溶液または懸濁液であってもよい。使用できる賦形剤および溶解剤および溶媒には、水、リンゲル液、等張塩化ナトリウム溶液がある。これに加えて、無菌の固定油は、溶媒または分散媒体として常用的に使用できる。この目的のために、合成の単糖類または二糖類を含む、無菌固定油のいずれかを使用してもよい。これに加えて、脂肪酸、例えば：オレイン酸、も注射剤での使用が見出される。
【０１５２】
薬剤の経直腸投与のための坐剤は、薬剤と適当な非刺激的添加剤、例えば：カカオ脂およびポリエチレングリコール、など常温では固体であるが、直腸の温度では液体であって、直腸で融解して薬剤を放出するものを混合して製造できる。
【０１５３】
経口投与用の固体用量剤は、カプセル剤、錠剤、ピル剤、粉剤、および顆粒を含むであろう。そのような固体用量剤では、活性化合物と不活性な希釈剤、例えば：蔗糖、乳糖、または澱粉などの少なくとも１種と混合してもよい。そのような用量剤は、常法に従って、不活性希釈剤以外のもの、例えば：潤滑剤例えばステアリン酸マグネシウムを含めることができる。カプセル剤、錠剤、およびピル剤の場合、その用量剤型は緩衝剤を含むかもしれない。錠剤およびピル剤は、さらに腸溶コーティングするかもしれない。
【０１５４】
経口投与用の液剤用量剤型は、当業界で通常使用される不活性な希釈剤：例えば水、も含有する医薬的に許容される乳剤、溶液剤、懸濁液剤、シロップ剤、およびエリキシール剤を含むことができる。この組成物は、アジュバント、例えば：湿潤剤、乳化剤および懸濁剤、シクロデキストリン、および甘味剤、調味料、および芳香剤を含むことができる。
【０１５５】
本発明の化合物は、リポソームの形で投与することもできる。当技術分野で既知であるように、リポソームは一般に燐脂質その他の脂質から誘導する。リポソームは、水性媒体に分散した単層または多層の水和した液晶から形成される。リポソームを形成できる非毒性の、生理学的に許容され、代謝可能な脂質を使用できる。リポソーム型の本組成物は、本発明の化合物に加えて、安定化剤、保存剤、賦形剤などを含むことができる。好ましい脂質は、天然または合成の燐脂質とホスファチジルコリン（レシチン）である。リポソームの生成法は当業界で既知である。例えば、Prescott, Ed., Methods in Cell Biology, Volume XIV, Academic Press, New York, N. W., p. 33 et seq. (1976) 参照。
【０１５６】
本発明の化合物は単一の活性医薬成分として投与できる一方で、癌の処置に使用される他の薬剤と組み合わせて使用することもできる。本発明の化合物は、また公知の治療剤および抗癌剤との組合せにおいても有用であり、本明細書に開示する化合物と他種抗癌剤または化学療法剤との組合せは本発明の範囲内にある。そのような薬剤の例はCancer Principles and Practice of Oncology, V. T. Devita and S. Hellman (editors), 6th edition (Feb. 15, 2001), Lippincott Williams & Wilkins Publishersに記載されている。この分野における通常の熟練者は薬剤と癌の特性に基づいてどの薬剤の組合せが有用であるかを識別できる。その抗癌剤は、これに限定するものではないが、次のものを含む：エストロゲン受容体調節剤、アンドロゲン受容体調節剤、レチノイド受容体調節剤、細胞毒性薬／細胞増殖抑制剤、抗増殖剤、プレニルタンパク質転換酵素阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、血管形成阻害剤、細胞増殖および生存シグナル伝達の阻害剤、アポトーシス誘発剤、および細胞周期チェックポイントを阻害する薬剤。本発明の化合物はまた放射線療法と併用も有用である。
【０１５７】
それ故、本発明の一態様では、本発明の化合物はまた公知の抗癌剤、例えば：エストロゲン受容体調節剤、アンドロゲン受容体調節剤、レチノイド受容体調節剤、細胞毒性薬、抗増殖剤、プレニル−タンパク質転移酵素阻害剤、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤、ＨＩＶプロテアーゼ阻害剤、逆転写酵素阻害剤、その他の血管形成阻害剤との組合せで使用される。
【０１５８】
エストロゲン受容体調節剤は、機序に拘らずエストロゲンの受容体への結合を妨害または阻害する化合物である。エストロゲン受容体調節剤の例は、これに限定するものではないが、次のものを含む：タモキシフェン、ラロキシフェン、イドキシフェン、ＬＹ３５３３８１、ＬＹ１１７０８１、トレミフェン、フルベストラント、４−［７−（２，２−ジメチル−１−オキソプロポキシ−４−メチル−２−［４−［２−（１−ピペリジニル）エトキシ］フェニル］−２Ｈ−１−ベンゾピラン−３−イル］−フェニル−２，２−ジメチルプロパノエート、４，４'−ジヒドロキシベンゾフェノン−２，４−ジニトロフェニルヒドラゾン、およびＳＨ−６４６。
【０１５９】
アンドロゲン受容体調節剤は、アンドロゲンのアンドロゲン受容体への結合を妨害または阻害する化合物である。アンドロゲン受容体調節剤の代表例は、次のものを含む：フィナステリドその他の５α−レダクターゼ阻害剤、ニルタミド、フルタミド、ビカルタミド、リアロゾール、および酢酸アビラテロン。レチノイド受容体調節剤は、レチノイドのレチノイド受容体への結合を妨害または阻害する化合物である。レチノイド受容体調節剤の例は、次のものを含む：ベキサロテン、トレチノイン、１３−シス−レチノイン酸、９−シス−レチノイン酸、α−ジフルオロメチルオルニチン、ＬＸ２３−７５５３、トランス−Ｎ−（４'−ヒドロキシフェニル）レチンアミド、およびＮ４−カルボキシフェニルレチンアミド。
【０１６０】
細胞毒性および／または細胞増殖抑制剤は、基本的に直接的な細胞機能の阻害または有糸分裂阻害によって細胞死または細胞増殖阻害を起す化合物であり、次のものを含む：アルキル化剤、腫瘍壊死因子、挿入剤、低酸素症活性化化合物、微小管阻害剤／微小管安定化剤、有糸分裂キネシンの阻害剤、有糸分裂進行に関与するキナーゼの阻害剤、抗代謝物；生物学的反応調整剤；ホルモン性／抗ホルモン性治療剤、造血増殖因子、モノクローナル抗体標的治療剤、トポイソメラーゼ阻害剤、プロテアソーム阻害剤、およびユビキチンリガーゼ阻害剤。細胞毒性剤の例は、これに限定するものではないが、次のものを含む：セルテネフ、カケクチン、イフォスファミド、タソネルミン、ロニダミン、カルボプラチン、アルトレタミン、プレドニムスチン、ジブロモズルシトール、ラニムスチン、フォテムスチン、ネダプラチン、オキサリプラチン、テモゾロミド、ヘプタプラチン、エストラムスチン、イムプロスルファン・トシレート、トロホスファミド、ニムスチン、ジブロスピジウム・クロリド、プミテパ、ロバプラチン、サトラプラチン、プロフィロマイシン、シスプラチン、イロフルベン、デキシホスファミド、シス−アミンジクロロ（２−メチルピリジン）プラチナム、ベンジルグアニン、グルフォスファミド、ＧＰＸ１００、（トランス、トランス、トランス）−ビス−ｍｕ−（ヘキサン−１，６−ジアミン）−ｍｕ−［ジアミン−白金（ＩＩ）］ビス［ジアミン（クロロ）白金（ＩＩ）］テトラクロリド、ジアリジジニルスペルミン、三酸化砒素、１−（１１−ドデシルアミノ−１０−ヒドロキシウンデシル）−３，７−ジメチルキサンチン、ゾルビシン、イダルビシン、ダウノルビシン、ビスアントレン、ミトキサントロン、ピラルビシン、ピナフィド、バルルビシン、アムルビシン、アンチネオプラストン、３'−デアミノ−３'−モルホリノ−１３−デオキソ−１０−ヒドロキシ−カルミノマイシン、アンナマイシン、ガラルビシン、エリナフィド、ＭＥＮ１０７５５、および４−デメトキシ−３−デアミノ−３−アチリジニル−４−メチルスルホニル−ダウノルビシン（ＷＯ００／５００３２参照）。低酸素症活性化化合物の代表例はチラパザミンである。プロテアソーム阻害剤は、これに限定するものではないが、ラクタシスチンおよびドルテゾミブを含む。微小管阻害剤／微小管安定化剤の例は、次のものを含む：パクリタキセル、硫酸ビンデシン、３'，４'−ジデヒドロ−４'−デオキシ−８'−ノルビンカロイコブラスチン、ドセタキソール、リゾキシン、ドラスタチン、ミボブリン・イセチオネート、アウリスタチン、セマドチン、ＲＰＲｌ０９８８１、ＢＭＳ１８４４７６、ビンフルニン、クリプトフィシン、２，３，４，５，６−ペンタフルオロ−Ｎ−（３−フルオロ−４−メトキシフェニル）ベンゼンスルホンアミド、アンヒドロビンブラスチン、Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｌ−バリル−Ｌ−バリル−Ｎ−メチル−Ｌ−バリル−Ｌ−プロリル−Ｌ−プロリン−ｔ−ブチルアミド、ＴＤＸ２５８、エポチロン類（例えば米国特許第6284781号、および第6288237号参照）およびＢＭＳ１８８７９７。
【０１６１】
トポイソメラーゼ阻害剤の代表例は、次のものを含む：トポテカン、ヒカプタミン、イリノテカン、ルビテカン、６−エトキシプロピオニル−３'，４'−Ｏ−ｅｘｏ−ベンジリデン−チャルトロイシン、９−メトキシ−Ｎ，Ｎ−ジメチル−５−ニトロピラゾロ［３，４，５−ｋｌ］アクリジン−２−（６Ｈ）−プロパンアミン、１−アミノ−９−エチル−５−フルオロ−２，３−ジヒドロ−９−ヒドロキシ−４−メチル−１Ｈ，１２Ｈ−ベンゾ［ｄｅ］ピラノ［３'，４'：ｂ，７］−インドリジノ［１，２ｂ］キノリン−１０,１３（９Ｈ，１５Ｈ）ジオン、ルルトテカン、７−［２−（Ｎ−イソプロピルアミノ）エチル］−（２０Ｓ）カンプトテシン、ＢＮＰ１３５０、ＢＮＰＩ１１００、ＢＮ８０９１５、ＢＮ８０９４２、リン酸エトポシド、テニポシド、ソブゾキサン、２'−ジメチルアミノ−２'−デオキシエトポシド、ＧＬ３３１、Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−９−ヒドロキシ−５，６−ジメチル−６Ｈ−ピリド［４，３−ｂ］カルバゾール−１−カルボキサミド、アスラクリン、（５ａ，５ａＢ，８ａａ，９ｂ）−９−［２−［Ｎ−［２−（ジメチルアミノ）エチル］−Ｎ−メチルアミノ］エチル］−５−［４−ヒドロキシ−３，５−ジメトキシフェニル］−５，５ａ，６，８，８ａ，９−ヘキサヒドロフロ（３'，４'：６，７）ナフト−（２，３−ｄ）− １，３−ジオキソロ−６−オン、２，３−（メチレンジオキシ）−５−メチル−７−ヒドロキシ−８−メトキシベンゾ［ｃ］フェナントリジニウム、６，９−ビス［（２−アミノエチル）アミノ］ベンゾ［ｇ］イソキノリン−５，１０−ジオン、５−（３−アミノプロピルアミノ）−７，１０−ジヒドロキシ−２−（２−ヒドロキシエチルアミノメチル）−６Ｈ−ピラゾロ［４，５，１'−ｄｅ］アクリジン−６−オン、Ｎ−［１−［２−（ジエチルアミノ）−エチルアミノ］−７−メトキシ−９−オキソ−９Ｈ−チオキサンテン−４−イルメチル］ホルムアミド、Ｎ−（２−（ジメチルアミノ）エチル）アクリジン−４−カルボキシアミド、６−［［２−（ジメチルアミノ）エチル］アミノ］−３−ヒドロキシ−７Ｈ−インデノ［２，１−ｃ］キノリン−７−オン、およびジメスナ。有糸分裂キネシン、例えばヒトの有糸分裂の阻害剤の例、キネシンＫＳＰの例は、PCT公開WO01/30768およびWO01/98278、WO03/050064(2003年6月19日)、WO03/050122(2003年6月19日)、WO03/049527(2003年6月19日)、WO03/049679(2003年6月19日)、WO03/049678(2003年6月19日)およびWO03/39460(2003年5月15日)ならびに審理中PCT出願番号US03/06403(2003年3月4日に出願)、US03/15861(2003年5月19日に出願)、US03/15810(2003年5月19日に出願)、US03/18482(2003年6月12日に出願)およびUS03/18694(2003年6月12日に出願)に記載されている。有糸分裂キネシンの阻害剤の一態様では、これに限定するものではないが、次のものを含む：ＫＳＰの阻害剤、ＭＫＬＰｌの阻害剤、ＣＥＮＰ−Ｅの阻害剤、ＭＣＡＫの阻害剤、Ｋｉｆｌ４の阻害剤、Ｍｐｈｏｓｐｈｌの阻害剤、およびＲａｂ６−ＫＩＦＬの阻害剤。
【０１６２】
有糸分裂進行に関与するキナーゼの阻害剤は、これに限定するものではないが、次のものを含む：アウロラキナーゼの阻害剤、ポロ様キナーゼ（ＰＬＫ）の阻害剤（例えば：ＰＬＫ−１の阻害剤）、ｂｕｂ−１の阻害剤およびｂｕｂ−Ｒ１の阻害剤。抗増殖剤は次のものを含む：アンチセンスＲＮＡおよびＤＮＡオリゴヌクレオチド、例えばＧ３１３９、ＯＤＮ６９８、ＲＶＡＳＫＲＡＳ、ＧＥＭ２３１、およびＩＮＸ３００１、および抗代謝物、例えば：エノシタビン、カルモフル、テガフル、ペントスタチン、ドキシフルリジン、トリメトレキセート、フルダラビン、カペシタビン、ガロシタビン、シタラビンオクホスフェート、ホステアビンナトリウムヒドレート、ラルチトレキセド、パルチトレキシド、エミテフル、チアゾフリン、デシタビン、ノラトレキセド、ペメトレキセド、ネルザラビン、２'−デオキシ−２'−メチリデンシチジン、２'−フルオロメチレン−２'−デオキシシチジン、Ｎ−［５−（２，３−ジヒドロベンゾフリル）スルホニル］−Ｎ‘−（３，４−ジクロロフェニル）尿素、Ｎ６−［４−デオキシ−４−［Ｎ２−［２（Ｅ），４（Ｅ）−テトラデカジエノイル］−グリシルアミノ］−Ｌ−グリセロ−Ｂ−Ｌ−マンノ−ヘプトピラノシル］アデニン、アプリジン、エクテイナスシジン、トロキサシタビン、４−［２−アミノ−４−オキソ−４，６，７，８−テトラヒドロ−３Ｈ−ピリミジノ［５，４−ｂ］［１，４］チアジン−６−イル−（Ｓ）−エチル］−２，５−チエノイル−Ｌ−グルタミン酸、アミノプテリン、５−フルオロウラシル、アラノシン、１１−アセチル−８−（カルバモイルオキシメチル）−４−ホルミル−６−メトキシ−１４−オキサ−１，１−ジアザテトラシクロ（７．４．１．０．０）−テトラデカ−２，４，６−トリエン−９−イル酢酸エステル、スウェインソニン、ロメトレキソール、デクスラゾキサン、メチオニナーゼ、２'−シアノ−２'−デオキシ−Ｎ４−パルミトイル−１−Ｂ−Ｄ−アラビノフラノシルシトシン、および３−アミノピリジン−２−カルボキシアルデヒドチオセミカルバゾン。モノクローナル抗体標的治療剤の例は細胞毒性剤または癌細胞に特異的なまたは標的細胞に特異的なモノクローナル抗体に結合した放射性同位元素を含む治療剤を包含する。その例はベキサール（Bexxar）を含む。ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤は３−ヒドロキシ−３−メチルグルタリル−ＣｏＡ還元酵素の阻害剤である。ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素の阻害活性を持つ化合物は、米国特許第4231938号、WO84/02131に記載または引用されているもののような当業者に既知である検定法を使用して容易に確認できる。使用できるＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤の例は、これに限定するものではないが、次のものを含む：ロバスタチン（ＭＥＶＡＣＯＲ（登録商標）；米国特許第4231938号、第4294926号、第4319039号参照）、シンバスタチン（ＺＯＣＯＲ（登録商標）；米国特許第4444784号、第4820850号、第4916239号参照）、プラバスタチン（ＰＲＡＶＡＣＨＯＬ（登録商標）；米国特許第4346227号、第4537859号、第4410629号、第5030447号、第5180589号参照）、フルバスタチン（ＬＥＳＣＯＬ（登録商標）；米国特許第5354772号、第4911165号、第4929437号、第5189164号、第5118853号、第5290946号、第5356896号参照）および���トルバスタチン（LIPITOR（登録商標）；米国特許第5273995号、第4681893号、第5489691号、第5342952号参照）。本方法で使用してもよいこれらのＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤およびその他のＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤の構造式は、M. Yalpani, "Cholesterol Lowering Drugs", Chemistry ＆ Industry, pp. 85-89 (1996年2月5日)、米国特許第4782084号および第4885314号の８７頁に記載されている。態様の一つでは、ＨＭＧ−ＣｏＡ還元酵素阻害剤は、ロバスタチンおよびシンバスタチンから選択する。
【０１６３】
プレニル−タンパク質転移酵素阻害剤は、プレニル−タンパク質転移酵素の組合せのいずれかを阻害する化合物であって、次のものを含む：ファルネシル−タンパク質転移酵素（FPTase）、Ｉ型ゲラニルゲラニル−タンパク質転移酵素（GGPTase−I）、およびＩＩ型ゲラニルゲラニル−タンパク質転移酵素（GGPTase-II、別称Rab GGPTase）。プレニル−タンパク質転移酵素阻害性化合物の例は、次のものを含む：（±）−６−［アミノ（４− クロロフェニル）（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−（３−クロロフェニル）−１−メチル−２（１Ｈ）−キノリノン、（−）−６−［アミノ（４−クロロフェニル）（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−（３−クロロフェニル）−１−メチル−２（１Ｈ）−キノリノン、（＋）−６−［アミノ（４−クロロフェニル）（１−メチル−１Ｈ−イミダゾール−５−イル）メチル］−４−（３−クロロフェニル）−１−メチル−２（１Ｈ）−キノリノン、５（Ｓ）−ｎ−ブチル−１−（２，３−ジメチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）−５−イミダゾリルメチル−２−ピペラジノン、（Ｓ）−１−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）−５−イミダゾリルメチル］−５−［２−（エタンスルホニル）メチル）−２−ピペラジノン、５（Ｓ）−ｎ−ブチル−１−（２−メチルフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）−５−イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン、１−（３−クロロフェニル）−４−［１−（４−シアノベンジル）−２−メチル−５−イミダゾリルメチル］−２−ピペラジノン、１−（２，２−ジフェニルエチル）−３−［Ｎ−（１−（４−シアノベンジル）−１Ｈ−イミダゾール−５−イルエチル）カルバモイル］ピペリジン、４−｛−［４−ヒドロキシメチル−４−（４−クロロ−ピリジン−２−イルメチル）ピペリジン−１−イルメチル］−２−メチルイミダゾール−１−イルメチル｝−ベンゾニトリル、４−｛−５−［４−ヒドロキシメチル−４−（３−クロロベンジル）−ピペリジン−１−イルメチル］−２−メチルイミダゾール−１−イルメチル｝−ベンゾニトリル、４−｛３−［４−（２−オキソ−２Ｈ−ピリジン−１−イル）ベンジル］−３Ｈ−イミダゾール−４−イルメチル｝ベンゾニトリル、４−｛３−［４−（５−クロロ−２−オキソ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジン−５’−イルメチル］−３Ｈ−イミダゾール−４−イル−メチル｝ベンゾニトリル、４−｛３−［４−（２−オキソ−２Ｈ−［１，２’］ビピリジン−５’−イルメチル］−３Ｈ−イミダゾール４−イル−メチル｝ベンゾニトリル、４−［３−（２−オキソ−１−フェニル−１，２−ジヒドロピリジン−４−イルメチル）−３Ｈ−イミダゾール−４−イルメチル｝ベンゾニトリル、１８，１９−ジヒドロ−１９−オキソ−５Ｈ，１７Ｈ− ６，１０：１２，１６−ジメテノ−１Ｈ−イミダゾ［４，３−ｃ］［１，１１，４］ジオキサ−アザシクロノナデシン−９−カルボニトリル、（±）−１９，２０−ジヒドロ−１９−オキソ−５Ｈ−１８，２１−エタノ−１２，１４−エテノ−６，１０−メテノ−２２Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾ［４，３−ｋ］−［１，６，９，１２］オキサトリアザ−シクロオ���タデシン−９−カルボニトリル、１９，２０−ジヒドロ−１９−オキソ−５Ｈ，１７Ｈ−１８，２１−エタノ−６，１０：１２，１６−ジメテノ−２２Ｈ−イミダゾ［３，４−ｈ］［１，８，１１，１４］オキサトリアザシクロエイコシン−９−カルボニトリル、および（＋−）−１９，２０−ジヒドロ−３−メチル−１９−オキソ−５Ｈ−１８，２１−エタノ−１２，１４−エテノ−６，１０−メテノ−２２Ｈ−ベンゾ［ｄ］イミダゾ［４，３−ｋ］［１，６，９，１２］オキサ−トリアザシクロオクタデシン−９−カルボニトリル。プレニル−タンパク質転移酵素阻害剤の他の例は次の報告および特許に記載されている：WO96/30343、WO97/18813、WO97/21701、WO97/23478、WO97/38665、WO98/28980、WO98/29119、WO95/32987、米国特許第5420245号、米国特許第5523430号、米国特許第5532359号、米国特許第5510510号、米国特許第5589485号、米国特許第5602098号、欧州特許公開0618221、欧州特許公開0675112、欧州特許公開0604181、欧州特許公開0696593、WO 94/19357、WO 95/08542、WO95/11917、WO95/12612、WO95/12572、WO95/10514、米国特許第5、661、152号、WO95/10515、WO95/10516、WO95/24612、WO95/34535、WO95/25086、WO96/05529、WO96/06138、WO 96/ 06193、WO96/16443、WO96/21701、WO96/21456、WO96/22278、WO96/24611、WO 96/24612、WO96/05168、WO96/05169、WO96/00736、米国特許第571792号、WO96/17861、WO96/33159、WO96/34850、WO96/34851、WO96/30017、WO96/30018、WO96/30362、WO96/30363、WO96/31111、WO96/31477、WO96/31478、WO96/31501、WO97/00252、WO97/03047、WO97/03050、WO97/04785、WO97/02920、WO97/17070、WO97/23478、WO97/26246、WO97/30053、WO97/44350、WO98/02436、および米国特許第5532359号。血管形成に関するプレニル−タンパク質転移酵素阻害剤の役割は例えばEuropean J. of Cancer 35(9): 1394-1401 (1999)に記載されている。
【０１６４】
血管形成阻害剤は、機序に拘らず、新しい血管の形成を阻害する化合物を示す。血管形成阻害剤の例は、これに限定するものではないが次のものを含む：チロシンキナーゼ阻害剤、例えばチロシンキナーゼ受容体Ｆｌｔ−１（ＶＥＧＦＲ１）およびＦｌｋ−１／ＫＤＲ（ＶＥＧＦＲ２）の阻害剤、上皮由来、繊維芽細胞由来、または血小板由来の増殖因子、ＭＭＰ（マトリックスメタロプロテアーゼ）阻害剤、インテグリン遮断剤、インターフェロン−α、インターロイキン−１２、ペントーザンポリサルフェート、シクロオキシゲナーゼの阻害剤、例えば：非ステロイド消炎剤（ＮＳＡＩＤ）、アスピリンおよびイブプロフェンならびに選択的シクロオキシゲナーゼ−２の阻害剤例えば：セレコキシブおよびロフェコキシブ（PNAS 89: 7384 (1992); JNCI 69: 475 (1982); Arch. Ophthalmol. 108: 573 (1990); Anat. Rec. (238): 68 (1994); FEBS Letters 372: 83 (1995); Clin. Orthop. 313: 76 (1995); J MoI Endocrinol. 16: 107 (1996); Jpn. J. Pharmacol. 75: 105 (1997); Cancer Res. 57: 1625 (1997); Cell 93: 705 (1998); Intl. J. MoI. Med. 2: 715 (1998); J Biol. Chem. 274: 9116 (1999))）、ステロイド消炎剤（例えば：コルチコステロイド、ミネラロコルチコイド、デキサメタゾン、プレドニソン、プレドニソロン、メチルプレド、ベタメタゾン）、カルボキシアミドトリアゾール、コンブレタスタチンＡ４、スクアラミン、６−Ｏ−クロロアセチルカルボニル）フマギロール、サリドミド、アンギオスタチン、トロポニン−１、アンギオテンシンＩＩ拮抗剤（Fernandez et al., J Lab. Clin. Med. 105: 141-145 (1985)参照）、およびＶＥＧＦに対する抗体（Nature Biotechnology, 17: 963-968 (October 1999); Kim et al., Nature, 362: 841-844 (1993); WO00/44777;およびWO00/61186参照）。血管形成を調節または阻害し、本発明の化合物と組み合わせて使用してもよい他の治療剤は、凝血または繊維素溶解系を調節または阻害する薬剤を含む（総説Clin. Chem. La. Med. 38: 679-692 (2000)参照）。凝血および繊維素溶解経路を変調または阻害する薬剤の例は、これに限定するものではないが、次のものを含む：ヘパリン（Thromb. Haemost. 80: 10-23 (1998)参照）、低分子量ヘパリンおよびカルボキシペプチダーゼＵ阻害剤（別称、活性トロンビン活性化繊維素溶解阻害剤の阻害剤［ＴＡＦＩａ］）（Thrombosis Res. 101: 329-354 (2001)参照）。ＴＡＦＩａ阻害剤はPCT公開WO03/013526、米国仮出願番号第60/349925号(2002年1月18日に出願) に記載されている。本発明はまた、本発明の化合物と、ＮＳＡＩＤであって、選択的ＣＯＸ−２阻害剤（一般的に、細胞またはミクロソームでの検定で評価したＣＯＸ−２のＩＣ５０とＣＯＸ−１のＩＣ５０との比率から算出した場合にＣＯＸ−２阻害特異性がＣＯＸ−１に対するよりも少なくとも１００倍の値を持つものと定義される）であるものとの合剤も包含する。このような化合物は、これに限定するものではないが、ここに参考のために引用する以下の文献に記載されている：米国特許第5474995号(1995年12月12日に発行)、米国特許第5861419号(1999年1月19日に発行)、米国特許第6001843号(1999年12月14日に発行)、米国特許第6020343号(2000年2月1日に発行)、米国特許第5409944号(1995年4月25日に発行)、米国特許第5436265号(1995年7月25日に発行)、米国特許第5536752号(1996年7月16日に発行)、米国特許第5550142号(1996年8月27日に発行)、米国特許第5604260号(1997年2月18日に発行)、米国特許第5698584号(1997年12月16��に発行)、米国特許第5710140 号(1998年1月20日に発行)、WO94/15932(1994年7月21日に公開)、米国特許第5344991号(1994年6月6日に発行)、米国特許第5134142号(1992年7月28日に発行)、米国特許第5380738号(1995年1月10日に発行)、米国特許第5393790 号(1995年2月20日に発行)、米国特許第5466823号(1995年11月14日に発行)、米国特許第5633272号(1997年5月27日に発行)、米国特許第5932598号(1999年8月3日に発行)。本発明方法に有用なＣＯＸ−２の阻害剤の代表的なものは、次のものを含む：３−フェニル−４−（４−（メチルスルホニル）フェニル）−２−（５Ｈ）−フラノン；および５−クロロ−３−（４−メチルスルホニル）−フェニル−２−（２−メチル−５−ピリジニル）ピリジン。それ故、ＣＯＸ−２の特異的阻害剤として報告されている化合物は、本発明に有用であり、その製法はここに参考のために引用する下記の特許、係属中の特許出願および公開公報に見られる：WO94/15932(1994年7月21日に発行)、米国特許第5344991号(1994年6月6日に発行)、米国特許第5134142号(1992年7月28日に発行)、米国特許第5380738号(1995年1月10日に発行)、米国特許第5393790号(1995年2月20日に発行)、米国特許第5466823 号(1995年11月14日に発行)、米国特許第5633272号(1997年5月27日に発行)、米国特許第5932598号(1999年8月3日に発行)、米国特許第5474995号(1995年12月12日に発行)、米国特許第5861419号(1999年1月19日に発行)、米国特許第6001843号(1999年12月14日に発行)、米国特許第6020343号(2000年2月１日に発行)、米国特許第5409944号(1995年4月25日に発行)、米国特許第5436265号(1995年7月25日に発行)、米国特許第5536752号(1996年7月16日に発行)、米国特許第5550142号(1996年8月27日に発行)、米国特許第5604260号(1997年2月18日に発行)、米国特許第5698584号(1997年12月16日に発行)、米国特許第5710140 号(1998年1月20日に発行)。血管形成阻害剤の他の例は、これに限定するものではないが、次のものを含む：エンドスタチン、ウクライン、ランピルナーゼ、ＩＭ８６２、５−メトキシ−４−［２−メチル−３−（３−メチル−２−ブテニル）オキシラニル］−１−オキサスピロ［２，５］オクタン−６−イル（クロロアセチル）カルバメート、アセチルジナナリン、５−アミノ−１−［［３，５−ジクロロ−４−（４−クロロベンゾイル）フェニル］メチル］−１Ｈ−１，２，３−トリアゾール−４−カルボキサミド、ＣＭ１０１、スクアラミン、コンブレタスタチン ＲＰＩ４６１０、ＮＸ３１８３８、硫酸化リン酸マンノペンタオース、７，７−（カルボニル−ビス［イミノ−Ｎ−メチル−４，２−ピロロカルボニルイミノ［Ｎ−メチル−４，２−ピロール］− カルボニルイミノ］−ビス−（１，３−ナフタレンジスルホネート）、および３−［（２，４−ジメチルピロール−５−イル）−メチレン］−２−インドリノン（ＳＵ５４１６）。
【０１６５】
細胞周期チェックポイントを妨害する薬剤は、細胞周期チェックポイントのシグナルを伝達するプロテインキナーゼを阻害して、癌細胞をＤＮＡ損傷剤に対して感受性にする化合物である。そのような薬剤は次のようなものを含む：ＡＴＲ、ＡＴＭ、Ｃｈｋ１およびＣｈｋ２キナーゼの阻害剤およびｃｄｋおよびｃｄｃキナーゼの阻害剤；また、特定的には次のもので例示される：７−ヒドロキシスタウロスポリン、フラボピリドール、ＣＹＣ２０２（シクラセル）およびＢＭＳ−３８７０３２。
【０１６６】
細胞増殖および生存シグナル伝達経路の阻害剤は、細胞表面受容体およびこの表面受容体の下流にあるシグナル伝達カスケードを阻害する薬剤である。このような薬剤は、次のものを包含する：ＥＧＦＲ阻害剤の阻害剤（例えば：ゲフィチニブおよびエルロチニブ）、ＲＢ−２の阻害剤（例えばトラスツズマブ）、ＩＧＦＲの阻害剤、サイトカイン受容体の阻害剤、ＭＥＴの阻害剤、ＰＩ３Ｋの阻害剤（例えばＬＹ２９４００２）、セリン／スレオニンキナーゼ（これに限定するものではないが、例えば：WO02/083064、WO02/083139、WO02/083140、WO02/083138に記載のＡｋｔの阻害剤）、Ｒａｆキナーゼの阻害剤（例えばＢＡＹ−４３−９００６）、ＭＥＫの阻害剤（例えばＣＩ−１０４０およびＰＤ−０９８０５９）およびｍＴＯＲの阻害剤（例えばＷｙｅｔｈ ＣＣＩ−７７９）。このような薬剤は、低分子阻害剤化合物と抗体拮抗剤とを含む。
【０１６７】
アポトーシス誘導剤は、ＴＮＦ受容体ファミリーのメンバーを活性化する薬剤（ＴＲＡＩＬ受容体を含む）を含む。
【０１６８】
本発明の癌を処置するために現在好ましい態様では、本発明の化合物との組合わせに有用な代表的薬剤は次のものを含む、例えば：イリノテカン、トポテカン、ゲムシタビン、５−フルオロウラシル、ロイコボリン、カルボプラチン、シスプラチン、タキサン、テザシタビン、シクロホスファミド、ビンカアルカロイド、イマチニブ（グリベック）、アントラサイクリン、リツキシマブ、トラスツズマブならびにその他の癌化学療法剤。
本発明の化合物と組合わせて使用する前記化合物はここに参考のために引用するthe Physicians' Desk Reference (PDR) 第47版 (1993)に記載のような治療的用量または当業者に知られている治療的有効量で用いるものである。
【０１６９】
本発明の化合物とその他の抗癌剤は、推奨される臨床的最大量またはそれ以下の用量で投与できる。本発明の組成物内にある活性化合物の用量水準は、所望の治療的応答を得るために投与経路、疾患の重症度および患者の応答に依存して変化するであろう。この組合わせは、別々の組成物として、または両薬剤を含有する単一な用量剤形として投与できる。組み合わせてとして投与する時には、その治療剤は同時にまたは違う時間に投与する別々の組成物として、または単一組成物として投与する治療剤としても製剤化できる。
【０１７０】
抗エストロゲン、例えばタモキシフェンは、乳癌の増殖を細胞周期阻害剤ｐ２７Ｋｉｐの作用を必要とする、細胞周期休止を誘導して阻害する。最近、Ｒａｓ−Ｒａｆ−ＭＡＰキナーゼ経路の活性化がｐ２７Ｋｉｐのリン酸化状態を変更し、細胞周期の休止についての阻害活性が低減し、そこで抗エストロゲン耐性に寄与することが報告された（Donovan et al., J Biol. Chem. 276: 40888, 2001)。Donovan et al.が報告するように、ＭＥＫ阻害剤での処理によるＭＡＰＫシグナル伝達の阻害はホルモン抵抗性乳癌細胞株ではｐ２７のリン酸化状態を変化させ、ホルモン感受性を回復する。従って、一局面では、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物、またはその互変異性体、医薬的に許容される塩、またはその互変異性体の医薬的に許容される塩の態様は、ホルモン依存性の癌、例えば乳癌および前立腺癌の処置に使用でき、こうしてこれらの癌に通常の抗癌剤で通常見られるホルモン耐性を逆転する。
【０１７１】
造血器の癌、例えば慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）では、染色体転座が構成的に活性化されたＢＣＲ−ＡＢ１チロシンキナーゼを与える。罹患した患者は、Ａｂ１キナーゼ活性が阻害されるために低分子チロシンキナーゼ阻害剤であるグリベックに応答する。しかしながら、病状が進行した段階の患者の多くは、最初はグリベックに応答するが、後にＡｂ１キナーゼドメインにおける耐性を与える突然変異のために逆戻りする。インビトロでの研究で、ＢＣＲ−Ａｖ１はその効果を誘導するためにＲａｆキナーゼ経路を用いることが証明された。これに加えて、同じ経路内の複数のキナーゼを阻害すると、耐性を与える突然変異からの追加的な保護が提供される。従って、本発明の他の一局面では、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物、またはその互変異性体、医薬的に許容される塩、またはその互変異性体の医薬的に許容される塩のいずれかの態様は、少なくとも１種の付加的薬剤、例えばグリベックとの組合わせて、造血器癌、例えば慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）の処置にその付加的薬剤少なくとも１種に対する耐性を逆転または予防するために使用される。
【０１７２】
他の一局面では、本発明は、対象の体内にあるＭＡＰＫ シグナル伝達経路の中にあるセリン／スレオニンキナーゼの少なくとも１種の活性を阻害するために有効な式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物、またはその互変異性体、医薬的に許容される塩、またはその互変異性体の医薬的に許容される塩を含む治療用組成物を投与することを含む、対象の体内のＭＡＰＫシグナル伝達経路にあるセリン／スレオニンキナーゼの少なくとも一つを阻害する方法、または対象の体内のＭＡＰＫシグナル伝達経路にあるセリン／スレオニンキナーゼが介在する生物学的状態を処置する方法に関する。
【０１７３】
本発明のこの局面による治療用組成物は、この阻害剤を必要とする患者（例えば：異常ＭＡＰＫシグナル伝達が介在する癌に罹患した者）を処置するために有用である。異常ＭＡＰＫシグナル伝達が介在する癌の型には次のものを含む：例えば、メラノーマ、乳頭腺腫、甲状腺癌、卵巣癌、大腸癌、膵臓癌、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）、急性リンパ芽球白血病（ＡＬＬ）、および急性骨髄性白血病。異常ＭＡＰＫシグナル伝達は、野生型または突然変異体型のＲａｓ、Ｒａｆ、ＭＥＫまたはＥＲＫを阻害する化合物を投与することによって阻害される。
【０１７４】
態様の一つでは、本発明は、Ｒａｓ（野生型または突然変異型Ｒａｓ）を阻害する方法を提供する。この方法は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物、またはその互変異性体、医薬的に許容される塩、またはその互変異性体の医薬的に許容される塩のいずれかの態様の有効量を、必要とする対象に投与することを含む。
【０１７５】
態様の一つでは、本発明はＲａｆ（野生型または突然変異体型Ｂ−Ｒａｆ）の阻害法を提供する。この方法は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物またはその互変異性体、医薬的に許容される塩、またはその互変異性体の医薬的に許容される塩のいずれかの態様の有効量を、必要とする対象に投与することを含む。
【０１７６】
態様の一つでは、本発明はＭＥＫの阻害法を提供する。本方法は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物、またはその互変異性体、医薬的に許容される塩、またはその互変異性体の医薬的に許容される塩のいずれかの態様の有効量を、必要とする対象に投与することを含む。
態様の一つでは、本発明は、ＥＲＫの阻害法を提供する。本方法は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物、またはその互変異性体、医薬的に許容される塩、またはその互変異性体の医薬的に許容される塩のいずれかの態様の有効量を、必要とする対象に投与することを含む。
【０１７７】
本発明のこの局面の方法で使用する化合物の例である１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチルフェニル）アミンは、実施例８２〜８６および８９〜９０および図６〜１２Ｂ；１４Ａ〜Ｃおよび１５に示すようにＭＡＰＫシグナル伝達経路を強力に阻害した。この化合物は、実施例８２に示すように生化学的検定でＢ−Ｒａｆ、ｃ−Ｒａｆ、突然変異体Ｂ−Ｒａｆおよび突然変異体Ｒａｓの強力な阻害剤であって、突然変異体Ｂ−Ｒａｆ活性の阻害（ＩＣ５００.００５３μＭ）、Ｂ−Ｒａｆ活性の阻害（ＩＣ５００.０６８μＭ）、ｃ−Ｒａｆ活性の阻害（ＩＣ５００.００４μＭ）を示す。この化合物での処理は、表７および実施例８４、８５、および８６に示すように試験した全３種の突然変異体Ｂ−Ｒａｆ異種移植モデル（Ａ３７５Ｍ、ＭＥＸＦ２７６およびＨＴ２９）で腫瘍の退化およびＫ−ＲａｓとＮ−Ｒａｓが駆動する異種移植モデルでの腫瘍増殖の阻害を示した。
【０１７８】
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチルフェニル）アミン処理後の腫瘍細胞Ａ３７５Ｍ、ＭＥＸＦ２７６およびＨＣＴ−１１６における標的変調の分析は、図７Ｂ、８Ｂおよび１０Ｃに示すように、ＭＥＫのリン酸化が用量依存的および時間依存的に阻害されることを示した。これに加えて、腫瘍細胞Ａ３７５Ｍ、ＭＥＸＦ２７６およびＨＣＴ−１１６のこの化合物での処理は、図７Ｄ、８Ｃおよび９Ｃに示すように、ＢＩＭ、サイクリンＤ１、ｐ２７ＫｉｐおよびｐＡＫＴを含むＲａｆから下流のマーカーを変調した。これらの前臨床モデルでの検定は｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−４−トリフルオロメチルフェニル）アミンが用量依存的におよび時間依存的にＭＥＫ標的リン酸化およびＭＡＰＫ 経路内にあるＲａｆから下流のシグナル伝達分子を阻害することを示した。
【０１７９】
他の一局面では、本発明は、対象内のＶＥＧＦＲ−２、ＰＤＧＦＲ−β、ｐＥＲＫ、ｂＦＧＦ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ｃ−ＫｉｔおよびＣＳＦ−１Ｒから構成される群から選択するチロシンキナーゼ受容体少なくとも１種を阻害する方法；またはＶＥＧＦＲ−２、ＰＤＧＦＲ−β、ｐＥＲＫ、ｂＦＧＦ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ｃ−ＫｉｔおよびＣＳＦ−１Ｒの少なくとも１種が介在する生物学的状態を処置する方法；に関し、これらの方法は式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物またはその医薬的に許容される塩少なくとも１種を含む対象内にあるチロシンキナーゼ受容体を阻害するに有効な治療用組成物を投与することを含む。
【０１８０】
本発明のこの局面における治療用化合物は、この阻害剤を必要とする患者（例えば：異常なチロシンキナーゼ受容体シグナル伝達が介在する癌の患者）を処置するために有用である。異常なチロシンキナーゼ受容体シグナル伝達が介在する癌には次のものを含む：例えば、メラノーマ、乳癌、膀胱癌、肺癌、甲状腺癌、前立腺癌、卵巣癌、肥満細胞白血病、生殖細胞腫瘍、小細胞肺癌腫、消化器間質細胞腫瘍、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、神経芽細胞腫、および膵臓癌。
【０１８１】
態様の一つでは、本発明はＶＥＧＦＲ−２の阻害法を提供する。この方法は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物またはその医薬的に許容される塩のいずれかの態様の有効量を、必要とする対象に投与することを含む。この方法は、血管形成を阻害することによって固形腫瘍を処置するために有用であろう。
【０１８２】
態様の一つでは、本発明はＰＤＧＦＲ−βの阻害法を提供する。この方法は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物またはその医薬的に許容される塩のいずれかの態様の有効量を、必要とする対象に投与することを含む。
【０１８３】
態様の一つでは、本発明は、ｃ−Ｋｉｔの阻害法を提供する。この方法は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物またはその医薬的に許容される塩のいずれかの態様の有効量を、必要とする対象に投与することを含む。
【０１８４】
態様の一つでは、本発明は、ＣＳＦ−１Ｒの阻害法を提供する。この方法は、式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、または（ＩＶ）で示される化合物またはその医薬的に許容される塩のいずれかの態様の有効量を、必要とする対象に投与することを含む。
【０１８５】
本発明のこの局面の方法に使用する化合物の例は、｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミンは、生化学検定で、ＶＥＧＦＲ−２、ＰＤＧＦＲ−β、ｐＥＲＫ、ｂＦＧＦ、ＦＧＦＲ１、ＦＧＦＲ２、ＦＧＦＲ３、ｃ−ＫｉｔおよびＣＳＦ−１Ｒなどチロシンキナーゼ受容体の強力な阻害剤である。この化合物は、実施例８７に記載するようにＶＥＧＦＲ−２活性の阻害（ＩＣ５００．０７μＭ）、ＰＤＧＦＲ−βの阻害（ＩＣ５００．００３２μＭ）、ｃ−Ｋｉｔの阻害（ＩＣ５００．０２μＭ）、およびＣＳＦ−１Ｒの阻害（ＩＣ５００．２０μＭ）を示す。これに加えて、この化合物は図１３および実施例８８に示すように、インビボマトリゲルモデルで血管形成の阻害を誘導した。
【０１８６】
本発明は、以下の実施例を参照すればさらに容易に理解できよう。この実施例は説明のためのものであって、それで本発明を限定する意図はない。
【０１８７】
以下の実施例でならびに本明細書を通して、次の略号は以下の意味を持つ。定義されていないものは、一般的に認識されている意味を持つ。
ＡＰＣＩ            常圧化学イオン化質量スぺクトル
ａｑ                水性
ａｔｍ              気圧
ｃｍ                センチメートル
℃                  摂氏の度
ＤＩＰＥＡ          ジイソプロピルエチルアミン
ＤＭＣ              ２−クロロ−１，３−ジメチルイミダゾリニウム・クロリド
ＤＭＳＯ            ジメチルスルホキシド
ｅｑ                当量
ＥｔＯＡｃ          酢酸エチル
ＥｔＯＨ            エタノール
ｇ又はまたはｇｍ    グラム
ｈ ／ｈｒ           時間
ＨＰＬＣ            高速液体クロマトグラフィー
ＩＰＡ              イソプロピルアルコール
Ｌ                  リットル
ＬＣＡＰ            液体クロマトグラム面積百分率
ＬＣ／ＭＳ          液体クロマトグラフィー／質量スぺクトル
Ｍ                  モル
ＭｅＣＮ            アセトニトリル
ｍＬ                ミリリットル
ＮａＯＭｅ          ナトリウム・メトキシド
１−ＰｒＯＨ        １−プロパノール
ＴＥＡ              トリエチルアミン
ＴＦＡＡ            トリフルオロ酢酸無水物
ＴＨＦ              テトラヒドロフラン
【０１８８】
下記実施例の化合物に使用するための代表的側鎖は一般的に次の操作で製造できる：
【実施例】
【０１８９】
実施例１
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミンの製造
【化２０】
2009507026.tif 000022
【０１９０】
工程１
【化２１】
2009507026.tif 000023
５００ｍＬ三頚フラスコに攪拌機を装着し、Ｋ２ＣＯ３（４．１５ｇ、３０ミリモル）を入れた。容器を密封し、減圧し、直火乾燥した。装置を室温に冷却し、アルゴンを吹き込んだ。反応フラスコに４−アミノ−３−ニトロフェノール１ａ（３．０８ｇ、２０ミリモル）、４−クロロピリジン−２−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル１ｂ（５．２ｇ、２４ミリモル）および乾燥ＤＭＳＯ（３０ｍＬ）を加えた。得られる混合物を激しく攪拌し、１００℃に〜１４時間加熱した。反応物を氷冷リン酸緩衝液（ｐＨ＝７）上に注ぎ、反応フラスコをＭＴＢＥ（メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル）と水で洗浄した。二層混合物を集め、セライト（＞２ｃｍ床）で濾過した。両層を分液し、水層をＭＴＢＥ（３×１００ｍＬ）で抽出した。有機層を集め、水（５×１００ｍＬ）で洗い、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発した。粗製の残渣をＳｉＯ２に吸着させ、フラッシュクロマトグラフィー（４：１、２：１、１：１ヘキサン−ＥｔＯＡｃ（酢酸エチル））で精製して１ｃ（４．９２ｇ、１４．９ミリモル、収率７４％）を黄褐色固体として得た。
1H-NMR (300 MHz, CDCl3)δ 8.58 (d, J＝ 5.8 Hz, 1H), 7.90 (d, J＝ 2.8 Hz, 1H), 7.56 (d, J＝ 2.5 Hz, 1H), 7.17 (dd, J＝ 2.8, 8.8 Hz, 1H), 6.94 (dd, J＝ 2.8, 5.8, Hz, 1H), 6.91 (d, J＝ 9.1Hz, 1H), 6.15 (brs, 2 H), 1.62 (s, 9H); 13C-NMR (75 MHz, CDCl3)δ 165.8, 164.0, 151.8, 151.5, 143.4, 143.2, 131.5, 129.8, 121.0, 118.0, 114.2, 113.1, 83.0, 28.4; mp 163-166℃。
【０１９１】
工程２
【化２２】
2009507026.tif 000024
ニトロアニリン１ｃ（５．６２ｇ、１７ミリモル）のＣＨ２Ｃｌ２（８５ｍＬ）溶液に０℃でＴＦＡＡ（２．４ｍＬ、３．６ｇ、１７ミリモル）を加えた。次に冷浴を去り、反応物を室温に２ｈｒ保持した。反応物を０℃に冷却し、ＴＢＡＣｌ（塩化テトラブチルアンモニウム、２．５ｇ、８．５ミリモル）、Ｍｅ２ＳＯ４（硫酸ジメチル３．２ｍＬ、４．３ｇ、３４ミリモル）、および１０％ＮａＯＨ（３４ｍＬ）を加えた。得られる混合物を室温で４ｈｒ激しく攪拌した。反応物を水で希釈し、得られる両層を分液した。水層をＣＨ２Ｃｌ２（３×１００ｍＬ）で抽出し、有機層を集めて食塩水（２×１００ｍＬ）で洗い、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、蒸発した。粗製の残渣をシリカゲルに吸着させ、フラッシュクロマトグラフィー（４：１、２：１、１：１、１：２ヘキサン／ＥｔＯＡｃ）で精製して１ｄ（４．５ｇ、１３．０ミリモル、７６％）を黄橙色固体として得た。
1H-NMR (300 MHz, CDCl3)δ 8.54 (d, J＝ 5.5 Hz, 1H), 8.04 (br d, J＝ 4.7 Hz, 1H), 7.93 (d, J＝ 2.8 Hz, 1H), 7.53 (d, J＝ 2.5 Hz, 1H), 7.25 (app dd, J＝ 2.8, 9.1Hz, 1H), 6.91 (m, 2 H), 3.04 (d, J＝ 4.9 Hz, 3 H), 1.59 (s, 9 H); 13C-NMR (75 MHz, CDCl3)δ 165.9, 164.1, 151.5, 144.7, 142.1, 130.4, 118.8, 115.5, 114.1, 112.9, 82.9, 30.4, 28.5; mp 187-189℃。
【０１９２】
工程３
【化２３】
2009507026.tif 000025
直火乾燥５００ｍＬ三頚丸底フラスコにＮ２を吹き込み、ＬＡＨ（水素化リチウムアルミニウム、３．０ｇ、７５ミリモル）と乾燥ＴＨＦ（２４０ｍＬ）を入れた。得られる懸濁液を０℃に冷却し、ｔ−ブチルエステル１ｄ（２０．７ｇ、６０ミリモル）を内部反応温度５℃以下に保持しながら徐々に加えた。反応混合物を０℃で２ｈｒ攪拌し、続いて一夜室温で攪拌した。ＮａＢＨ４（２．２７ｇ、６０ミリモル）を加え、反応混合物を室温でさらに１ｈｒ攪拌した。反応完了後、反応混合物に水（３ｍＬ）、１５％ＮａＯＨ（３ｍＬ）、および水（９ｍＬ）を順次に滴加した。得られた混合物をセライトで濾過し、残留する固体をＥｔＯＡｃとメタノールで洗った。有機物を集めて蒸発し、得られた粗製の残渣をＳｉＯ２に吸着させ、フラッシュクロマトグラフィー（９７：３ＣＨ２Ｃｌ２−ＭｅＯＨ）で精製して１ｅ（７．６３ｇ、２７．７ミリモル、４６％）を赤橙色固体として得た。
1H-NMR (300 MHz, CDCl3)δ 8.40 (d, J＝ 5.5 Hz, 1H), 8.05 (br s, IH), 7.96 (d, J＝ 2.75 Hz, 1H),  7.29 (d, J＝ 2.75 Hz, 1H), 6.92 (d, J ＝ 9.35 Hz, 1H), 6.75 (m, 2 H), 4.68 (s, 2 H), 3.07 (d, J＝ 5.23, Hz, 3 H)。
【０１９３】
工程４
【化２４】
2009507026.tif 000026
１００ｍＬ丸底フラスコに、ベンジルアルコール１ｅ（１．３８ｇ、５．０ミリモル）、ＭｎＯ２（６．５２ｇ、７５ミリモル）およびＣＨＣｌ３（２０ｍＬ）を入れた。得られる懸濁液を室温（ｒｔ）で２日間攪拌した。反応混合物をセライトで濾過し、残留する固体をＣＨＣｌ３とＥｔＯＨで順次洗浄した。有機物を集めて蒸発し、シリカゲルに吸着させ、フラッシュクロマトグラフィー（９８：２ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）で精製して１ｆ（７９０ｍｇ、２．８９ミリモル、５８％）を橙色固体として得た。
1H-NMR (300 MHz, CDCl3)δ 10.01 (s, 1H), 8.64 (d, J＝ 5.5 Hz, 1H), 8.09 (br s, 1H),  7.96 (d, J＝ 2.75 Hz, 1H), 7.37 (d, J＝ 2.48 Hz, 1H), 7.29 (d, J ＝ 2.75 Hz, 1H), 7.08 (dd, J＝ 2.47, 5.5 Hz, 1H), 6.94 (d, J＝ 9.35 Hz, 1H), 3.08 (d, J＝ 5.23 Hz, 3 H)。
【０１９４】
工程５
【化２５】
2009507026.tif 000027
イミダゾール環形成（Baldwin, J. J.; Engelhardt, E. L.; Hirschmann, R.; Lundell, G. F.; Ponti- cello, G. S. J. Med. Chem 1979, 22, 687）：化合物１ｇ（Lancaster （Windham, NH）、２５．７５ｍＬ、１３６．５ミリモル）をＮａＯＡｃ（２２．４ｇ、２７３ミリモル）のＨ２Ｏ（６０ｍＬ）溶液に加え、得られる溶液を１００℃に４０分加熱した。室温に冷却後、１ｈの溶液を１ｆ（２５ｇ、９１ミリモル）のＮＨ４ＯＨ（１５０ｍＬ）およびメタノール（４５０ｍＬ）中の懸濁液に加えた。得られる混合物を室温で一夜攪拌した。ＴＬＣ（薄層クロマトグラフィー、９５：５ＣＨ２Ｃｌ２／ＭｅＯＨ）は１ｆの完全な消費を示した。粗製の生成物を水性スラリーになるまで濃縮し、飽和Ｎａ２ＣＯ３とＣＨ２Ｃｌ２との間に分配した。水層をＣＨ２Ｃｌ２で３回抽出し、有機層を集めて食塩水で洗い、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濃縮して１ｉ（３１.６ｇ、８３ミリモル）を橙色固体（収率９１％）として得た。これ以上の精製は不要であった。
【０１９５】
置換イミダゾール製造用の他の中間体は同様にして製造できる。例えば、中間体１ｉ２は工程５に従って、１ｈの代わりに３，３，３−トリフルオロ−１−フェニルプロパン−１，２−ジオン水和物を用いて、以下に示すようにして合成した（ＭｅＯＨ＝メタノール、ＲＴ＝室温、ｏ／ｎ＝一夜、ｍｉｎ＝分）：
【化２６】
2009507026.tif 000028
【０１９６】
中間体１ｉ３は工程５に従って、１−フェニル−１，２−プロパンジオンを１ｈの代わりに用いて以下に示すようにして合成した：
【化２７】
2009507026.tif 000029
【０１９７】
中間体１ｉ４は工程５に従って、１−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−１，２−プロパンジオンまたは１−（４−トリフルオロメチルフェニル）−１，２−プロパンジオンを１ｈの代わりに用いて以下に示すようにして合成した：
【化２８】
2009507026.tif 000030
【０１９８】
中間体１ｉ５は、工程５および米国特許第５３７４６１５号の記載に従って、１ｈの代わりに４，４，４−トリフルオロ−３−オキソブタン酸エチルから製造した（２Ｚ）−４，４，４−トリフルオロ−２−（ヒドロキシイミノ）−３−オキソブタン酸エチルを用いて以下に示すようにして合成した（ＮＭＡ＝Ｎ−メチルアセトアミド）：
【化２９】
2009507026.tif 000031
【０１９９】
工程６
【化３０】
2009507026.tif 000032
ニトロアニリン１ｉ（４５．７６ｇ、１２０ミリモル）のＭｅＯＨ（２２０ｍＬ）およびＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）混液中のスラリーに、Ｎ２を２０分吹き込み、これに１０％Ｐｄ／Ｃ（１２．７７ｇ、１２０ミリモル）のＭｅＯＨ（６０ｍＬ）懸濁液を入れた。反応物にＨ２を吹き込み、Ｈ２雰囲気中に２日間保持した。反応物をセライト床で濾過し、得られる固体をＭｅＯＨとＥｔＯＡｃで順次洗浄した。有機性濾液を集めて蒸発し、得られる固体をＣＨ２Ｃｌ２と共沸させ、次に一夜真空乾燥して１ｊ（４０．１７ｇ、１１５ミリモル）を褐色粉末（収率９６％）として得た。
LC/MS m/z 336.1 (MH+), tR＝1.81 分。
【０２００】
工程７
【化３１】
2009507026.tif 000033
ジアミン１ｊ（４０．１７ｇ、１１５ミリモル）のＭｅＯＨ（４６０ｍＬ）溶液を室温で攪拌しつつ、これに４−トリフルオロメチルフェニルイソチオシアネート（２３．３７ｇ、１１５ミリモル）を加えた。反応物を室温に１６ｈｒ維持した。反応終了後、反応物にＦｅＣｌ３（２０．５２ｇ、１２６．５ミリモル）のＭｅＯＨ（５０ｍＬ）溶液を加え、得られる混合物を室温で一夜攪拌した。粗製の反応混合物をＥｔＯＡｃ（７５０ｍＬ）と水（７５０ｍＬ）を入れた３Ｌ分液漏斗に加えた。両層を分離し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した（水層は保存した）。有機層を集め、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液、水および食塩水で洗い、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濃縮した。保存した水層には飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液を加えて塩基性（ｐＨ ＝１０）とし、得られるスラリーをＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）入りの３Ｌ分液漏斗に加えた。混合物を攪拌し、得られるエマルジョンを濾紙で濾過し、次に各層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（２×５００ｍＬ）で抽出した。有機層を集め、食塩水で洗い、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、前記の抽出した物質に加え、濃縮した。生成物を集め、ＣＨ２Ｃｌ２（５００ｍＬ）中で粉砕し、ＳｉＯ２に吸着させ、フラッシュクロマトグラフィーで精製した。最後にこの物質をＣＨ２Ｃｌ２中で最後の粉砕をして得た物質は、｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミンの純粋な白色固体であった。
LC/MS m/z 519.1 (MH+); 1H-NMR (300 MHz, CDCl3)δ 8.44 (d, J ＝ 5.5 Hz, 1H), 7.75 (d, J＝ 8.8 Hz, 2H), 7.61 (dd, J＝ 2.2, 8.5 Hz, 1H), 7.59 (d, J＝ 8.8 Hz, 2 H), 7.56 (d, J＝ 2.5 Hz, 1H), 7.38 (app d, J＝ 8.5 Hz, 1H), 7.23 (d, J＝ 1.9 Hz, 1H), 6.96 (dd, J＝ 2.2, 8.5 Hz, 1H), 6.93 (dd, J＝ 2.5, 5.5 Hz, 1H), 3.76 (s, 3 H); LC/MS m/z ＝ 519.0, Rt ＝ 2.57 分 (MH+); Anal, calc'd for C24H16F6N6O: C 55.6, H 3.11, N 16.21; Found: C 55.81, H 3.43, N 16.42; mp: 217 − 220℃。
【０２０１】
実施例２
（２−フルオロ−５−ピリジン−３−イル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミンの製造
【化３２】
2009507026.tif 000034
（２−フルオロ−５−ピリジン−３−イル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミンは、実施例１の工程７記載のようにして３−（４−フルオロ−３−イソチオシアナト−フェニル）−ピリジンを用いて合成した。
LC/MS m/z 546.1 (MH+), Rt 1.82 分。
【０２０２】
実施例３
（２−フルオロ−５−ピリジン−４−イル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミンの製造
【化３３】
2009507026.tif 000035
（２−フルオロ−５−ピリジン−４−イル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミンは、実施例１の工程７記載のようにして４−（４−フルオロ−３−イソチオシアナト−フェニル）−ピリジンを用いて合成した。
LC/MS m/z 546.5 (MH+), Rt 1.83 分。
【０２０３】
実施例４
（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミンの製造
【化３４】
2009507026.tif 000036
（４−ｔｅｒｔ−ブチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミンは、実施例１の工程７記載のようにして４−ｔｅｒｔ−ブチルフェニルイソチオシアネートを用いて合成した。
LC/MS m/z 425.4 (MH+), Rt 2.56 分。
【０２０４】
実施例５
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（３−トリフルオロメチル−フェニル）アミンの製造
【化３５】
2009507026.tif 000037
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（３−トリフルオロメチル−フェニル）アミンは、実施例１の工程７記載のようにして３−（トリフルオロメチル）フェニルイソチオシアネートを用いて合成した。
LC/MS m/z 519.4 (MH+), Rt 2.36 分。
【０２０５】
実施例６
（３−エチルフェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミンの製造
【化３６】
2009507026.tif 000038
（３−エチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミンは、実施例１の工程７記載のようにして３−エチルフェニルイソチオシアネートを用いて合成した。
LC/MS m/z 479.4 (MH+), Rt 2.32 分。
【０２０６】
実施例７
（４−クロロ−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミンの製造
【化３７】
2009507026.tif 000039
（４−クロロ−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミンは、実施例１の工程７記載のようにして４−クロロフェニルイソチオシアネートを用いて合成した。
LC/MS m/z 485.4 (MH+), Rt 2.23 分。
【０２０７】
実施例８
（４−エチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミンの製造
【化３８】
2009507026.tif 000040
（４−エチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミンは、実施例１の工程７記載のようにして４−エチルフェニルイソチオシアネートを用いて合成した。
LC/MS m/z 479.5 (MH+), Rt 2.31 分。
【０２０８】
実施例９
（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミンの製造
【化３９】
2009507026.tif 000041
（４−クロロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミンは、実施例１の工程７記載のようにして４−クロロ−３−（トリフルオロメチル）フェニルイソチオシアネートを用いて合成した。
LC/MS m/z 553.4 (MH+), Rt 2.51 分。
【０２０９】
実施例１０
（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミンの製造
【化４０】
2009507026.tif 000042
（４−フルオロ−３−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミンは、実施例１の工程７記載のようにして４−フルオロ−３−（トリフルオロメチル）フェニルイソチオシアネートを用いて合成した。
LC/MS m/z 537.4 (MH+), Rt 2.40 分。
【０２１０】
実施例１１
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメトキシ−フェニル）アミンの製造
【化４１】
2009507026.tif 000043
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメトキシ−フェニル）アミンは、実施例１の工程７記載のようにして４−（トリフルオロメトキシ）フェニルイソチオシアネートを用いて合成した。
LC/MS m/z 535.4 (MH+), Rt 2.24 分。
【０２１１】
実施例１２
（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−（１−メチル−５−｛２−［５−メチル−４−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピリジン−４−イルオキシ ｝−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）アミンの製造
【化４２】
2009507026.tif 000044
（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−（１−メチル−５−｛２−［５−メチル−４−（３−トリフルオロメチル−フェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピリジン−４−イルオキシ｝−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）アミンは、実施例１に記載するようにして２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）フェニルイソチオシアネートを用いて合成した。
LC/MS m/z 627.5 (MH+), Rt 2.79 分。
【０２１２】
実施例１３
（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−（１−メチル−５−｛２−［５−メチル−４−（４−トリフルオロメチルフェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピリジン−４−イルオキシ｝−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）アミンの製造
【化４３】
2009507026.tif 000045
（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−（１−メチル−５−｛２−［５−メチル−４−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル］−ピリジン−４−イルオキシ｝−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル）アミンは、実施例１に記載するようにして２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）フェニルイソチオシアネートを用いて合成した。
LC/MS m/z 627.5 (MH+), Rt 2.79 分。
【０２１３】
実施例１４
２−｛４−［２−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチルエステルの製造
【化４４】
2009507026.tif 000046
２−｛４−［２−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝− ５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチルエステルは、実施例１に記載するようにして２−フルオロ−５−（トリフルオロメチル）フェニル イソチオシアネートを用いて合成した。
LC/MS m/z 609.5 (MH+)。
【０２１４】
実施例１５
（２−｛４−［２−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−メタノールの製造
【化４５】
2009507026.tif 000047
Ｒｅｄ−Ａｌ（水素化ビス（２−メトキシエトキシ）アルミニウムナトリウムの６５重量％トルエン溶液、０．１ｍＬ）を２−｛４−［２−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−４−カルボン酸エチルエステル（０．０１０４ｇ、０．０１７ミリモル）のトルエン溶液に滴加した。発泡が起き、２０分後、Ｈ２Ｏ、ＮａＯＨを加えて反応を停止させ、ＥｔＯＡｃで抽出した。有機層をＨ２Ｏで洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、濃縮して粗製の（２−｛４−［２−（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−４−イル）−メタノール５．９ｍｇを得、これをさらにＲＰ ＨＰＬＣ（逆相ＨＰＬＣ）で精製して純化合物１．１ｍｇを得た（純度９８％）。
LC/MS m/z 567.1 (MH+), Rt 2.40 分。
【０２１５】
実施例１６
２−｛４−［１−メチル−２−（４−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−イル｝−３Ｈ−イミダゾール−４−カルボニトリルの製造
【化４６】
2009507026.tif 000048
実施例１に従って｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミン（１．８３ｇ、３．４ミリモル）のスラリーを作成し、２８％ＮＨ４ＯＨ（２３ｍＬ）のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）溶液と封管中に封入し１４０℃に３ｈｒ加熱した。ＬＣ／ＭＳで反応終了を確認後、粗製の反応混合物を分液漏斗に入れ、ＥｔＯＡｃ（５０）と水（５０ｍＬ）とで分配した。両層を分離後、水層をＥｔＯＡｃ（２×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を集め、食塩水で洗い、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濃縮した。粗製の生成物をＳｉＯ２に吸着させ、フラッシュクロマトグラフィーで精製して２−｛４−［１−メチル−２−（４−トリフルオロメチル−フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］ピリジン−２−イル｝−３Ｈ−イミダゾール−４−カルボニトリルを白色固体として得た。
LC/MS m/z 476.1 (MH+)。
【０２１６】
実施例１７〜５９ａ
下記表１（実施例１７〜５９ａ）に記載する化合物は、実施例１〜１６に記載された操作に従って製造した。この化合物の合成に用いる様々な出発原料は当業者には自明となろう（例えば： Tordeux, M.; Langlois, B.; Wakselman, C. J Chem Soc. Perkin Trans 1 1990, 2293）。
【表１】
2009507026.tif 000049
【表２】
2009507026.tif 000050
【表３】
2009507026.tif 000051
【表４】
2009507026.tif 000052
【表５】
2009507026.tif 000053
【表６】
2009507026.tif 000054
【表７】
2009507026.tif 000055
【表８】
2009507026.tif 000056
【表９】
2009507026.tif 000057
【０２１７】
実施例６０
（２−フルオロ−５−トリフルオロメチル−フェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−ピリジン−２−イル−２Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミンの製造
【化４７】
2009507026.tif 000058
【０２１８】
４−［２−（２−フルオロ−５−トリフルオロ−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−カルボニトリルの製造
【化４８】
2009507026.tif 000059
【０２１９】
工程１．
４−（４−アミノ−３−ニトロ−フェノキシ）ピリジン−２−カルボニトリルの合成：
【化４９】
2009507026.tif 000060
炭酸カリウム（９ｇ）を減圧下に加熱して乾燥し、窒素中で室温まで冷却した。４−アミノ−３−ニトロフェノール（３．４ｇ）、４−クロロ−２−シアノピリジン（３．０ｇ）およびジメチルスルホキシド（３０ｍＬ、無水）を加えた。この系を窒素中で攪拌しつつ１０３℃まで加熱し、この温度に１ｈｒ維持した。反応物をＲＴまで冷却し、氷／Ｈ２Ｏ（５００ｍＬ）上に注ぎ、沈殿を集め、洗浄（Ｈ２Ｏ）し、溶解（ＥｔＯＡｃ）し、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、濃縮して固体とした。これを懸濁（Ｅｔ２Ｏ）し、採取し、風乾して４．１ｇ（７３．５％）を得、さらに第二生成物を得た（０．５５ｇ、１０％）。
m/z＝257 (M+l)。
【０２２０】
工程２．
Ｎ−［４−（２−シアノ−ピリジン−４−イルオキシ）−２−ニトロフェニル］−２，２，２−トリフルオロ− Ｎ−メチル−アセトアミドの合成：
【化５０】
2009507026.tif 000061
炭酸カリウム（１．６ｇ）を真空下に加熱乾燥し、室温まで冷却し、窒素中で４−（４−アミノ−３−ニトロ−フェノキシ）ピリジン−２−カルボニトリル（２．０ｇ）と共にジクロロメタン（３０ｍＬ）に懸濁した。これを０℃に冷却し、ニートのトリフルオロ酢酸無水物（２．２ｍＬ）を加えた。この添加につれて出発原料は急速に溶解した。０℃で１０分後、混合物をジクロロメタンで希釈し、洗浄（Ｈ２Ｏ、ＮａＣｌ水）し、乾燥（Ｋ２ＣＯ３）し、濾過し、濃縮して黄色泡状物とした。ｍ／ｚ＝３５３（Ｍ＋１）。この生成物は精製せずに使用した。窒素中で、炭酸カリウム（１．８５８ｇ）のジメチルホルムアミド（ＤＭＦ、３０ｍＬ、化合物２、〜７．８ミリモル含有）懸濁液にヨードメタン（０．５３ｍＬ）を加えた。懸濁液を室温で一夜攪拌し、次にＨ２Ｏ（３００ｍＬ）に注入し、抽出（Ｅｔ２Ｏ、３×１５０ｍＬ）し、抽出物を集め、洗浄（Ｈ２Ｏ、ＮａＣｌ水）し、乾燥（炭酸カリウム）し、濾過し、濃縮して橙色油状物（７．４９２２ｇ）を得た。
m/z ＝ 367 (M+1)。
【０２２１】
工程３．
４−（４−メチルアミノ−３−ニトロフェノキシ）−ピリジン−２−カルボニトリルの合成：
【化５１】
2009507026.tif 000062
ＮａＯＨ（１ｍＬ、１Ｎ水溶液）を室温でＮ−［４−（２−シアノ−ピリジン−４−イルオキシ）−２−ニトロ−フェニル］−２，２，２−トリフルオロ−Ｎ−メチル−アセトアミド（３、３４４０ｍｇ）のエタノール（６ｍＬ）溶液に滴下した。４０分後、混合物をＨ２Ｏ（２０ｍＬ）で希釈し、０℃に冷却した。明橙色結晶を集め、洗浄（Ｈ２Ｏ）し、風乾して３１１．１ｍｇ（９４％）を得た。
m/z＝271 (M+1)。
【０２２２】
工程４．
４−［２−（２−フルオロ−５−トリフルオロ−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−カルボニトリルの合成：
【化５２】
2009507026.tif 000063
パラジウム炭（４６ｍｇ、１０重量％）をＭｅＯＨ（２ｍＬ）に窒素中で懸濁した。得られる懸濁液を、窒素中で４−（４−メチルアミノ−３−ニトロフェノキシ）−ピリジン−２−カルボニトリル（３１１ｍｇ）のＭｅＯＨ（３ｍＬ）懸濁液に室温で加えた。気相を水素に置換し、この系を１気圧の水素下に１ｈｒ激しく攪拌した。気相を窒素に置換し、混合物を濾過（セライト）し、濾液をさらに精製せずに次の反応に用いた。
m/z ＝242(M+1)。
２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニルイソチオシアネート（２５０ｍｇ）を化合物５のＭｅＯＨ（１０ｍＬ）溶液に加えた。この溶液を還流温度で２ｈｒ攪拌した。反応完了後、無水のＦｅＣｌ３（１．３ｅｑ、２４４ｍｇ）を反応物に加え、得られる混合物を室温で一夜攪拌した。粗製反応混合物をＥｔＯＡｃと水を入れた分液漏斗に加えた。両層を分離し、水層はＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を集め、飽和Ｎａ２ＣＯ３水溶液、水および食塩水で洗い、乾燥（ＭｇＳＯ４）し、濃縮した。この物質をクロマトグラフ（勾配：０〜５％のＭｅＯＨ／ジクロロメタン／シリカゲル）して所望の化合物を単離した。化合物４からの収率：２８％。
m/z＝ 428 (M+1)。
【０２２３】
工程５．
（２−フルオロ−５−トリフルオロメチルフェニル）−｛１−メチル−５−［２−（５−ピリジン−２−イル−２Ｈ−［１、２、４］−トリアゾール−３−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝アミン
【化５３】
2009507026.tif 000064
【０２２４】
工程６．
４−［２−（４−フルオロ−フェニルアミノ）−１−メチル−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］−ピリジン−２−カルボニトリルをＥｔＯＨ（０．１Ｍ）に溶解し、ＮａＯＥｔ（１ｅｑ、０．５Ｍ／ＥｔＯＨ）、続いてピコリニルヒドラジド（１ｅｑ）を加え、溶液をマイクロウエーブで２０００秒間１４０℃に加熱した。次に反応混合物を濃縮し、逆相ＨＰＬＣで精製して所期の生成物を得た。
m/z ＝ 547 (M+1)。
【０２２５】
実施例６１〜６４
表２（実施例６１〜６４）に示す化合物は実施例６０に記載した操作に従って製造した。
【表１０】
2009507026.tif 000065
【０２２６】
実施例６５
Ｎ−（４−ヒドロキシ−２−ニトロフェニル）−ホルムアミドの製造
【化５４】
2009507026.tif 000066
Ｎ−（４−ヒドロキシ−２−ニトロフェニル）ホルムアミドは次の操作で製造できる：
１  ３Ｌ五頚反応フラスコに内部温度検出器、温度調節器、加熱マントル、凝縮器、攪拌機、１Ｌ滴下漏斗および窒素導入口を装着する。この反応器に５分間窒素を流す。
２  フラスコに無水酢酸（２４５ｍＬ）を入れる。窒素中で攪拌する。
３  蟻酸（１２５ｍＬ）を一度に加える（混合のためおよび無水酢酸と蟻酸との反応のために発熱する）。
４  内部温度（ＩＴ） を６０℃ に設定して加熱を開始する。ＩＴ６０℃に到達後、２時間維持攪拌する。
５  氷浴で内容物を冷却する。
６  ＩＴが常温｛約２０℃）に到達後、ＩＴが４０℃を超えないようにして４−アミノ− ３−ニトロフェノール（１６０ｇ）の無水ＴＨＦ（テトラヒドロフラン、７００ｍＬ）溶液を１Ｌ滴下漏斗から加える。生成物は黄色固体として沈殿し始める。
７  添加完了後、氷浴を加熱マントルに代える。ＩＴを６０℃に設定して加熱を始める。
８  反応進行をＨＰＬＣで監視する。反応時間は通常１ｈｒ以下である。
９  出発原料が＜１面積％以下になったら、水５００ｍＬを加える。氷浴で室温とする。
１０  生成物を真空濾過で集める。フィルターケーキを水３x２００ｍＬで洗う。風乾し、さらに緩やかな空気または窒素気流中、５０℃の２７ｉｎＨｇ真空オーブンで所期重量まで乾燥する。
【０２２７】
実施例６６
４−メチルアミノ−３−ニトロフェノールの製造
【化５５】
2009507026.tif 000067
４−メチルアミノ−３−ニトロフェノールは次の操作で製造できる：
１  ５００ｍＬ三頚反応フラスコに内部温度検出器および窒素導入口を装着する。この反応器に５分間窒素を流す。
２  Ｎ−（４−ヒドロキシ−２−ニトロフェニル）ホルムアミド（５ｇ）と無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）を反応器に入れる。Ｎ２下に攪拌して黄色のスラリーを得る。
３  ＢＦ３ジエチルエーテレート（３．８３ｍＬ）を注射器から徐々に加える。
４  反応混合物を室温で３０分攪拌する。
５  水素化ホウ素ナトリウム（１．０４ｇ）を滴下漏斗で少量づつ加える。
６  反応物を１ｈｒ攪拌し、その後反応をＨＰＬＣで１ｈｒ毎に監視する（反応は典型的には３ｈｒを要する）。
７  ＨＰＬＣ標本で出発原料が１．０％以下になったら１Ｍ−ＨＣｌ（４０ｍＬ）を注射器から１０分間にわたって徐々に添加する。
８  ６０分攪拌する。
９  ｐＨを７±０．５にするために、注射器から必要量の１Ｍ−ＮａＯＨを加える。
１０  反応混合物を５００ｍＬ丸底フラスコに入れ、減圧濃縮（２０ｍｍＨｇ、２５℃）して透明な液体１００ｍＬを除去する。
１１  水（１００ｍＬ）を反応容器に加え、攪拌下０±２℃に冷却する。生成物は赤色固体として沈殿する。
１２  真空濾過で生成物を粗い焼結フィルターで集める。フィルターケーキを水（２×２０ｍＬ）で洗う。風乾後、５０℃／２７ｉｎ．Ｈｇオーブンで所期重量まで乾燥する。標本を分析に出す。
【０２２８】
実施例６７
４−クロロピリジン−２−カルボニルクロリドの製造
【化５６】
2009507026.tif 000068
４−クロロピリジン−２−カルボニルクロリドは次の操作で製造できる：
１.内部温度（ＩＴ）検出装置、温度制御器、加熱マントル、凝縮器、攪拌機、窒素導入口、を装着した５Ｌ五頚反応フラスコを用意し、その凝縮器上部のガス導出口は２Ｌ、二頚液体トラップに連結させ、このトラップはさらにマグネチックスターラーで攪拌できる約６Ｌの８Ｍ−ＮａＯＨ溶液を入れた１２Ｌスクラバに連結する。反応器に窒素を５分通し、次に窒素気流を遮断する。
２.穏やかに攪拌（約２００ｒｐｍ）しながら、反応器に塩化チオニル（１．１８Ｌ）、続いて臭化カリウム（３８．４ｇ）を入れる。
３.反応器にピコリン酸（３９７ｇ）を入れる。
４.ＩＴを８０℃に設定して、加熱を開始する。
５.標本を採取して反応進行をＨＰＬＣで監視する。反応完了には通常約１４ｈを要する。加熱を継続するとジクロル化が多くなる。
６.反応完了（反応混合物のピコリン酸量が１％以下）後、加熱を停止する。加熱マントルを除く。
７.ＩＴ３０℃以下になったら液体を３Ｌ反応フラスコに移す。５Ｌ反応器をトルエン７００ｍＬで洗う。この洗液は３Ｌフラスコに移す。過剰のＳＯＣｌ２とトルエンを減圧除去する。トルエン７００ｍＬ処理を２回反復する。全溶媒を除去して黄橙色固体を得る。トルエン（４００ｍＬ）を反応混合物に加え、得られる混合物を次の工程に移行させる。
【０２２９】
実施例６８
４−クロロピリジン−２−カルボン酸ｔ−ブチルエステルの製造
【化５７】
2009507026.tif 000069
４−クロロピリジン−２−カルボン酸ｔ−ブチルエステルは次の操作で製造できる：
１.１２Ｌ丸底フラスコ（四頚）に攪拌機と温度計を装着する。
２.反応器にトルエン（１Ｌ）、ピリジン（９７７．７ｇ）、およびジ炭酸ジ−ｔ−ブチル（Ｂｏｃ）２Ｏ（８５５．５ｇ）を入れる。
３.反応器を冷却して、内部温度０℃とする。
４.反応物の内部温度を５℃以下に維持する速度で、４−クロロピリジン−２−カルボニルクロリド（６８６ｇ）を反応器に加える。
５.反応物を徐々に室温（〜２０℃）とし、１６ｈｒ攪拌する。
６.反応完了（ＨＰＬＣ、出発原料面積＜０．５％）後、反応物を水（２×４Ｌ）、続いて１Ｍ−ＨＣｌ溶液（２×２Ｌ）で洗う。
７.反応混合物を減圧濃縮してトルエンと残留ピリジンを除去する。
８.トルエン（５００ｍＬ）を加え、反応混合物を減圧濃縮して所期の生成物を得る。
【０２３０】
実施例６９
４−（４−メチルアミノ−３−ニトロフェノキシ）ピリジン−２−カルボン酸ｔ−ブチルエステルの製造
【化５８】
2009507026.tif 000070
４−（４−メチルアミノ−３−ニトロフェノキシ）ピリジン−２−カルボン酸ｔ−ブチルエステルは次の操作で製造できる：
１.３Ｌ丸底フラスコに攪拌機、温度計および窒素入口を装着する。
２.反応器にＫ２ＣＯ３（１２３ｇ）を加える。
３.反応器を不活性雰囲気にする。
４.反応器に４−メチルアミノ−３−ニトロフェノール（１００ｇ）、４−クロロピリジン−２−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（１２７ｇ）および乾燥ＤＭＳＯ（１Ｌ）を加える。
５.反応物を激しく攪拌し、１００℃に加熱する。
６.ＨＰＬＣ（＜０．５面積％４−クロロピリジン−２−カルボン酸ｔ−ブチルエステル）から見て反応完了後、冷水３Ｌ容を攪拌しつつ、これに熱い反応混合物を注入する。
７.所望の化合物を、橙色〜橙褐色固体として濾取する。
８.分離した固体を水（２×２００ｍＬ）、次にヘプタン（２×２００ｍＬ）で洗う。
９.物質を真空オーブン＠４５〜５０℃中で定常重量まで乾燥する。
【０２３１】
実施例７０
４−（４−（メチルアミノ）−３−ニトロフェノキシ）ピリジン−２−アルデヒドの製造
【化５９】
2009507026.tif 000071
４−（４−（メチルアミノ）−３−ニトロフェノキシ）ピリジン−２−カルボアルデヒドは次の操作で製造できる：
１.１０００ｍＬ丸底フラスコに窒素導入口、攪拌機および温度計を装着する。
２.反応器に４−（４−メチルアミノ−３−ニトロフェノキシ）−ピリジン−２−カルボン酸ｔ−ブチルエステル（１０ｇ）を粉末漏斗で入れる。
３.２−メチルＴＨＦ（１００ｍＬ）を粉末漏斗で加える。
４.反応器を内部温度−２５℃まで冷却する。
５.ＤＩＢＡＬ（水素ジイソ化ブチルアルミニウム）の１．５Ｍ−トルエン溶液（７２ｍＬ）を器内温度を−１５℃以下に維持しながら滴下漏斗で加える。
６.反応をＨＰＬＣまたはＧＣ（ガスクロマトグラフィー）でエステルの消失を検出して分析する。
７.１時間毎に監視しながら、反応物を−２０℃で攪拌する。
８.反応が２時間進行しなければ、ＤＩＢＡＬ（水素化ジイソブチルアルミニウム）０．５当量を追加して反応を監視する。エステル全部が消費されるまでこの工程を反復する。
９.反応が完了したら、ＭｅＯＨ（１０ｍＬ）で徐々に反応を止める。
１０.酒石酸ナトリウムカリウム（４０ｇ）を水２００ｍＬに加え、攪拌溶解する。
１１.この水溶液を反応混合物に加え、ＲＴまで温める。
１２.２−メチルＴＨＦ（１００ｍＬ）を反応容器に加える。
１３.反応物を攪拌しながら５０℃に１ｈｒ温める。
１４.両層を分離させる。
１５.水層を除く。
１６.有機層をセライトのプラグで濾過する。
１７.セライトを２−メチルＴＨＦ（２×５０ｍＬ）で洗う。
１８.反応混合物を５００ｍＬ丸底フラスコに入れる。
１９.反応混合物を蒸留して〜５０ｍＬまで濃縮する。
２０.攪拌下に反応混合物を０℃に冷却する。
２１.反応混合物を０℃で１ｈｒ攪拌する。
２２.反応混合物を粗い焼結フィルターで濾過する。
２３.フィルター上で固体を３０分〜１ｈｒ乾燥する。
２４.この固体をＧＣとＮＭＲで分析してアルコール％を測定し、アルコール性不純物を除去するためにメタノール中３０℃で１ｈｒスラリー化（化合物１ｇ当りメタノール５ ｍＬ）する。
【０２３２】
実施例７１
４−（２−（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ）−Ｎ−メチル−２−ニトロベンゼンアミンの製造
【化６０】
2009507026.tif 000072
４−（２−（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリジン−４−イルオキシ）−Ｎ−メチル−２−ニトロベンゼンアミンは次の操作で製造できる：
１.２Ｌ丸底フラスコ（三頚）に攪拌機、内部温度検出器、温度制御器および凝縮器を装着する。
２.反応器に粉末漏斗で水（５９０ ｍＬ）を入れる。
３.混合物の攪拌を開始し、反応器に酢酸ナトリウム（２４０ｇ）を入れる。
４.酢酸ナトリウム添加に用いたフラスコを水（３０ｍＬ）で洗う。
５.反応物を５０℃に加温する。
６.反応物の内部温度＜１００℃で３，３−ジブロモ−１，１，１−トリフルオロプロパン−２−オン（３９５ｇ）を５０℃で少しづつ加える。
７.反応物を内部温度１００℃まで加熱する。
８.反応物を１００℃で１ｈｒ攪拌後、分析用標本を採取する。
９.反応物の１００℃での攪拌を出発原料が ＜１．５％になるまで継続する。
１０.反応完了後、反応混合物を＜６５℃に冷却する。
１１.反応物を冷却中に５Ｌ丸底フラスコ（四頚、ジャケット付）に内部温度検出器、温度調節器、還流凝縮器および攪拌器を装着する。
１２.５Ｌ反応器に酢酸エチル（５００ｍＬ）を粉末漏斗から入れて攪拌を開始する。
１３.５Ｌ反応器に４−（４−（メチルアミノ）−３−ニトロフェノキシ）ピリジン−２−カルボアルデヒド（２００ｇ）を粉末漏斗で入れる。
１４.粉末漏斗を酢酸エチル（２００ｍＬ）で洗い、５Ｌ反応器に入れる。
１５.５Ｌ反応器に９５％エタノール（１．３Ｌ）を入れる。
１６.ピルビンアルデヒド反応混合物を２Ｌ反応器から５Ｌ反応器に移す。この時の混合物温度は〜３５℃である。
１７.温度を監視しながら濃ＮＨ４ＯＨ（１．３Ｌ）を徐々に加える。反応物は発熱するので最初の５００ｍＬは内部温度を５０℃以下に維持しながら少しずつ加える。全添加時間は〜２５分である。温度が上がると最終生成物の赤色が濃くなる。
１８.５Ｌ反応器を５０℃に加熱する。
１９.反応混合物を５０℃で攪拌する。ここでの溶液は通常赤橙色である。
２０.反応完了まで反応を１時間ごとに監視する。
２１.反応完了後、反応混合物を０℃に２ｈｒ冷却する。
２２.粗い焼結ガラスフィルターで生成物を濾取する。
２３.反応器を冷エタノール（１５０ｍＬ）で洗う。洗液をフィルターに移す。
２４.５Ｌ反応器に水（２Ｌ）を入れる。
２５.反応器を攪拌下に１０℃に冷却する。
２６.湿ったケーキをフィルターから５Ｌ反応器に移す。
２７.１０℃で６０分攪拌する。
２８.生成物で粗い焼結グラスフィルターで濾過する。
２９.反応器を水（２５０ｍＬ）で洗う。洗液をフィルターに移す。
３０.湿ったケーキをフィルター上で１ｈｒ乾燥する。
３１.生成物を２Ｌ丸底フラスコ（一頚）に移し、浴温４５℃でロータリーエバポレータを用いて定量になるまで回転乾燥する。
【０２３３】
実施例７２
４−（２−（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリジン−４−イルオキシ）−Ｎ１−メチルベンゼン−１，２−ジアミンの製造
【化６１】
2009507026.tif 000073
４−（２−（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリジン−４−イルオキシ）−Ｎ１−メチルベンゼン−１，２−ジアミンは次の操作で製造できる：
１.２Ｌ丸底フラスコ（四頚）に攪拌機、内部温度検出器、温度制御器、窒素導入口および還流凝縮器を装着する。
２.反応器に粉末漏斗からＥｔＯＨ（１２５ｍＬ）を入れる。急速な攪拌を始める。
３.反応器に粉末漏斗から４−（２−（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリジン−４−イルオキシ）−Ｎ−メチル−２−ニトロベンゼンアミン（５０ｇ）を入れる。
４.反応物を５０℃に加熱する。
５.反応物を加熱中に、２５０ｍＬエルレンマイヤーに粉末漏斗から水（７５ｍＬ）を入れ、急速な攪拌を始める。
６.２５０ｍＬエルレンマイヤーに粉末漏斗から３．０当量の炭酸ナトリウム（４１．９２ｇ）を入れる。
７.固体が全て溶解するまで混合物を攪拌する。
８.懸濁液が５０℃になったら、炭酸ナトリウム混合物を２５０ｍＬエルレンマイヤーから粉末漏斗で反応混合物に移す。
９.２５０ｍＬエルレンマイヤーに粉末漏斗で水（７５ｍＬ）を入れる。急速な攪拌を始める。
１０.ジチオン酸ナトリウム（１．０当量、２２．９５ｇ）を反応フラスコに入れる前に粉末漏斗で２５０ｍＬエルレンマイヤーに入れる。
１１.固体が殆ど消失するまで急速に攪拌する。
１２.ジチオン酸ナトリウム混合物を２５０ｍＬエルレンマイヤーから反応混合物に粉末漏斗で迅速に移す。
１３.反応物を５０℃で３０分攪拌する。
１４.２５０ｍＬエルレンマイヤーに粉末漏斗で水（７５ｍＬ）を入れ、急速に攪拌する。
１５.反応フラスコに加える前にジチオン酸ナトリウム（１．０当量、２２．９５ｇ）を粉末漏斗で２５０ｍＬエルレンマイヤーに入れる。
１６.固体が殆ど消失するまで急速に攪拌する。
１７.ジチオン酸ナトリウム混合物を２５０ｍＬエルレンマイヤーから粉末漏斗で反応混合物に迅速に移す。
１８.反応物を５０℃で３０分攪拌する。
１９.２５０ｍＬエルレンマイヤーに粉末漏斗で水（１５０ｍＬ）を入れる。
２０.反応フラスコに加える前にジチオン酸ナトリウム（２．０当量、４５．９０ｇ）を粉末漏斗で２５０ｍＬエルレンマイヤーに入れる。
２１.固体が殆ど消失するまで急速に攪拌する。
２２.ジチオン酸ナトリウム混合物を２５０ｍＬエルレンマイヤーから粉末漏斗で反応混合物に迅速に移す。
２３.反応物を５０℃で６０分攪拌する。
２４.反応完了を検証するために標本を採取する。
２５.反応が＞９８％完了すれば工程３６に移行する。未完了なら工程２６に続ける。
２６.２Ｌ反応フラスコに粉末漏斗でジチオン酸ナトリウム（１．０当量、２２．９５ｇ）を入れる。
２７.反応混合物を５０℃で６０分急速に攪拌する。
２８.反応完了を検証するために標本を採取する。
２９.反応が＞９８％完了すれば工程３６に移行する。未完了なら工程３０に続ける。
３０.２Ｌ反応フラスコに粉末漏斗から炭酸ナトリウム（１．０当量、１３．９７ｇ）を入れる。
３１.反応混合物を５０℃で１５分急速に攪拌する。
３２.２Ｌ反応フラスコに粉末漏斗から１．０当量、ジチオン酸ナトリウム（２２．９５ｇ）を加える。
３３.反応混合物を５０℃で６０分急速に攪拌する。
３４.反応完了を検証するために標本を採取する。
３５.反応が＞９８％完了すれば工程３６に移行する。
３６.反応完了後、２Ｌ反応フラスコに粉末漏斗で水（１２５ｍＬ）を入れる。
３７.反応混合物を１０℃に冷却し、１ｈｒ攪拌する。
３８.生成物を粗い焼結ガラスフィルター濾過で単離する。
３９.反応器を水（５０ｍＬ）で洗う。洗液をフィルターに移す。
４０.湿ケーキをフィルター上で滴り落ちなくなるまで乾燥する。
４１.２Ｌ反応フラスコに粉末漏斗から水（５００ｍＬ）を入れる。
４２.ケーキを反応フラスコに粉末漏斗で戻す。
４３.物質を室温で６０分攪拌する。
４４.生成物を粗い焼結ガラスフィルターで濾過して単離する。
４５.反応器を水（２５ｍＬ）で洗う。洗液をフィルターに移す。
４６.湿ケーキをフィルター上で約１ｈｒ乾燥する。
４７.生成物を２Ｌ丸底フラスコ（一頚）に移し、浴温５０℃のロータリーエバポレータを用いて定量になるまで徐々にゆっくり回転乾燥する。
【０２３４】
実施例７３
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ− ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミンの製造
【化６２】
2009507026.tif 000074
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミンは、次の操作で製造できる：
１.２Ｌ四頚丸底フラスコに攪拌機、内部温度検出器、温度制御器、窒素導入口および凝縮器を装着する。
２.反応器に粉末漏斗で４−（２−（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリジン−４−イルオキシ）−Ｎ１−メチルベンゼン−１，２−ジアミン（２００ｇ）を入れる。
３.反応器に粉末漏斗からアセトニトリル（１Ｌ）を入れる。
４.混合物を窒素雰囲気中、常温で攪拌を開始する。
５.２０±５分後、反応器に４−トリフルオロメチルフェニルイソチオシアネート（１０４ｇ）を入れる。
６.反応完了を検証するためにイソチオシアネート添加後３０分に標本を採取する。
７.反応が完了していれば、混合物を粗い焼結ガラスフィルターで濾過する。
８.反応器をＭｅＣＮ（２００ｍＬ）で洗う。洗液をフィルターに移す。
９.得られた固体をＭｅＣＮ（２００ｍＬ）で洗う。
１０.攪拌機、内部温度検出器、温度制御器、窒素導入口および凝縮器を装着した３Ｌ四頚丸底フラスコに濾液を移す。
１１.反応器に粉末漏斗からＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを入れる。
１２.２−クロロ−１，３−ジメチルイミダゾリニウムクロリドを四等分し、１０分毎に（全添加時間３０分）粉末漏斗で反応器に入れる。最終添加後、反応混合物をさらに１０分攪拌する。
１３.反応物を５０℃±５℃に加熱する。
１４.反応完了を検証するために混合物を加熱後３０分に標本を採取する。
１５.反応完了後、反応混合物を直列０．２μｍカプセルフィルターで工程１０のように装備した３Ｌ丸底フラスコに移す。
１６.粉末漏斗から水を加える。
１７.反応物を５０℃±５℃に加熱する。
１８.２ｈｒ加熱後、反応混合物を２０〜２５℃に冷却し、さらに１ｈｒ攪拌する。
１９.生成物を粗さが中等度の焼結ガラスフィルター濾過で単離する。
２０.反応器を２：１ＭｅＣＮ／水（３００ｍＬ）で洗い、洗液をフィルターに移す。
２１.フィルターケーキを２：１ＭｅＣＮ／水（３００ｍＬ）で洗う。
２２.湿ケーキをフィルター上で約１ｈｒ乾燥する。
２３.生成物を乾燥皿に移し、物質を７０±５℃の真空オーブン中、弱い窒素気流中でＭｅＣＮ（アセトニトリル）残量が４１０ｐｐｍ以下になるまで乾燥する。
２４.再結晶のために、生成物をＥｔＯＨ１５容（重量／容積）と攪拌機、内部温度検出器 温度制御器、窒素導入口および凝縮器を装着した反応器の中で加熱還流する。
２５.混合物を３０分還流し、蒸留ヘッドを凝縮器に置き換える。
２６.ＥｔＯＨを４容が残るまで留去する。加熱を停止し、水１容を加える。
２７.混合物を０〜５℃まで冷却する。
２８.生成物を粗さが中等度の焼結ガラスフィルター濾過で単離する。
２９.反応器を４：１ＥｔＯＨ／水（１容）で洗う。洗液をフィルターに移す。
３０.フィルターケーキを水（１容）で洗う。
３１.湿ケーキをフィルター上で約１ｈｒ乾燥する。
３２.生成物を乾燥皿に移し、物質を５０℃±℃の真空オーブンで弱い窒素気流中で定量になるまで乾燥する。
【０２３５】
実施例７４
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミンの製造
４−トリフルオロメチルフェニル イソチオシアネート（２００ｍｇ、１ミリモル）を４−（２−（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリジン−４−イルオキシ）−Ｎ１−メチルベンゼン−１，２−ジアミン（３５０ｍｇ、１ミリモル）のアセトニトリル３ｍＬ混合物に加えた。常温で２０分攪拌後、ＨＰＬＣ分析は完全な変換を示した。トリエチルアミン（０．３ｍＬ、２．２ミリモル）とそれに続いて２−クロロ−１−メチルピリジニウムヨーダイド（２７０ｍｇ、１．０５ミリモル）を加えた。反応混合物を５０℃に５ｈｒ加熱した。加熱を止め、水１．５ｍＬを加えた。混合物を２ｈｒ攪拌後、固体を濾取し、２：１アセトニトリル／水（３×１ｍＬ）で洗って標記化合物３１７ｍｇ（６１％）を得た。
【０２３６】
実施例７４ａ
４−（２−（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリジン− ４−イルオキシ）−Ｎ−メチル−２−ニトロベンゼンアミンの製造
【化６３】
2009507026.tif 000075
ＮａＯＭｅ（１．５ｍＬ、６．３ミリモル、２５ｗｔ％ＭｅＯＨ中）を４−（４−（メチルアミノ）−３−ニトロフェノキシ）ピリジン−２−カルボニトリル（１．７２ｇ、６．３ミリモル）と１−ＰｒＯＨ（１０ｍＬ）の混合物に加える。混合物を５０℃（内部温度）に加熱する。１ｈｒ加熱後、ＨＰＬＣ分析は出発原料の完全な変換を示した。ＮＨ４ＯＡｃ（１．４６g、１８．９ミリモル）を加え、混合物を７０℃に加熱した。７０℃で１ｈｒ後、混合物を８５℃に加熱した。同時に、３−ブロモ−１，１，１−トリフルオロアセトン（０．８ｍＬ、７．５６ミリモル）を３０ 分毎に４×０．２ｍＬずつ加えた。混合物を８５ ℃に２０ ｈｒ加熱した。混合物を常温まで冷却し、水（１０ｍＬ）を加えた。数時間攪拌後、混合物を氷／水浴で冷却した。氷／水浴で１ｈ後、固体を濾取し、１：１ ／１−ＰｒＯＨ：水（２×７ｍＬ）で洗った。固体を５０℃の真空オーブンで約１６ｈｒ乾燥して標記化合物０．９８２ ｇ（４１％）を得た。
【０２３７】
実施例７４ｂ
４−クロロ−２−（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリジンの製造
【化６４】
2009507026.tif 000076
ＮａＯＭｅ（０．４６ｍＬ、２ミリモル、２５ｗｇｔ％ＭｅＯＨ）を４−クロロ−２−シアノ− ピリジン（２７７ｍｇ、２ミリモル）と１−ＰｒＯＨ（３ｍＬ）の混合物に加えた。混合物を５０℃（反応ブロック温度）に加熱した。１ｈｒ加熱後、ＨＰＬＣ分析は出発原料の完全な変換を示した。混合物を７０℃に加熱し、ＮＨ４ＯＡｃ（４６２ｍｇ、６ミリモル）を加えた。７０℃で１ｈｒ後、混合物を８５℃に加熱した。同時に、３−ブロモ１，１，１−トリフルオロアセトン（０．２５ｍＬ、２．４ミリモル）を３０分毎に４×０．０６３ｍＬに分けて加えた。混合物を約２０ｈｒ８５℃に加熱した。粗製の生成物はＨＰＬＣ分析で７２．４％（ＬＣＡＰ）を示し、ＬＣ−ＭＳ分析で確認した。
【０２３８】
実施例７４ｃ
４−クロロ−２−シアノピリジン
【化６５】
2009507026.tif 000077
４−クロロ−２−ピリジンカルボキサミド（９３．９ｇ、０．６モル）とＴＥＡ（１２５ｍＬ、０．９モル）をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）中、外部冷却装置で０．２℃に冷却した。ＴＦＡＡ（９２ｍＬ、０．６６モル）を４０分にわたって滴下漏斗から加えた。内部温度は滴下中に１０℃に上昇した。滴下終了時の温度は０．０℃であった。添加後、冷却器を止めた。さらに３０分後、ＨＰＬＣ分析は出発原料４．３％（ＬＣＡＰ）を示した。ＴＦＡＡ８．３ｍＬ（０．０６モル）を追加した。反応混合物をさらに２０分攪拌後、ＨＰＬＣ分析は完全な変換を示した。１０％水性Ｋ２ＣＯ３（ｗ／ｖ５００ｍＬ）を加えた。内部温度は１３．７℃から２２．０℃に上昇した。２０分攪拌後、混合物を分液漏斗に移した。両層を分離し、水層をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）で抽出した。有機層を集め、１０％水性クエン酸（ｗ／ｖ、３００ｍＬ）で洗い、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、濃縮した。粗製の生成物を５０℃の真空オーブンで１６ｈｒ乾燥して標記化合物７２．８５g（８７％）とした。
1H-NMR (400 MHz, CDCl3)δ 8.6 (m, 1H), 7.7 (m, 1H), 7.5 (m, 1H); 13C-NMR (100 MHz, CDCl3)δ 151.8, 145.3, 134.9, 128.7, 127.4, 116.1; HPLC >99% (LCAP)。
【０２３９】
実施例７４ｄ
４−（４−メチルアミノ−３−ニトロ−フェノキシ）ピリジン−２−カルボニトリル
【化６６】
2009507026.tif 000078
４−クロロ−２−シアノ−ピリジン（６．９ｇ、０．０５モル）、４−メチルアミノ−３−ニトロフェノール（８．４ｇ、０．０５モル）、およびＫ２ＣＯ３（１０．４ｇ、０．０７５モル）の混合物をＤＭＳＯ（８０ｍＬ）中で６０℃に加熱した。１１．５ｈｒ後、ＨＰＬＣ分析は両出発原料の完全な変換を示した。２０℃に冷却後、水（２４０ｍＬ）を反応混合物に加えた。温度は４０℃に上昇後、常温に戻った。固体を濾取し、水（２×４０ｍＬ）で洗った。固体はヘプタン（４０ｍＬ）中にスラリー化した。固体を濾取してヘプタン（４０ｍＬ）で洗った。粗製の生成物を５０℃の真空オーブンで１６ｈｒ乾燥して標記化合物１０．３３ｇ（７６％）を得た。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 8.5 (m, 1H), 8.2 (m, 1H), 7.9 (m, 1H), 7.7 (rn, 1H), 7.5 (m, 1H), 7.2 (m, 1H), 7.1 (m, 1H), 3.0 (s, 3 H); 13C-NMR (100 MHz, DMSO-d6)δ 165.1, 152.9, 144.4, 140.6, 134.1, 130.4, 130.1, 117.9, 117.I, 117.0, 116.5, 114.9, 29.8; APCI MS [M + H]+ ＝ 271 ; HPLC >99% (LCAP)。
【０２４０】
実施例７４ｅ
４−（４−メチルアミノ−３−アミノ−フェノキシ）ピリジン−２−カルボニトリル
【化６７】
2009507026.tif 000079
４−（４−メチルアミノ−３−ニトロ−フェノキシ）−ピリジン−２−カルボニトリル（５．０ｇ、０．０１９モル）のＥｔＯＨ（１５ｍＬ）溶液を４０℃に加熱した。Ｎａ２ＣＯ３（４．７ｇ、０．０４４モル）とＨ２Ｏ（８．４ｍＬ）を加えた。Ｎａ２Ｓ２Ｏ４（３．３ｇ、０．０１９モル）を加え、次にＨ２Ｏ（１０ｍＬ）を加えた。温度は４１．７℃から４９．５℃に上昇した。４１．７℃に冷却後、Ｎａ２Ｓ２Ｏ４（３．３ｇ、０．０１９モル）とＨ２Ｏ（１０ｍＬ）を加えた。温度は４４．５℃に上昇した。３６．７℃に冷却後、Ｎａ２Ｓ２Ｏ４ （６．６ｇ、０．０３８モル）を加え、Ｈ２Ｏ（２０ｍＬ）を加えた。温度は４４．０ ℃上昇した。ＨＰＬＣ分析は４．１％（ＬＣＡＰ）の出発原料を示した。Ｎａ２Ｓ２Ｏ４（３．３ｇ、０．０１９モル）を追加した。さらに１５分攪拌後、加熱を止めてＨ２Ｏ（１２．５ｍＬ）を加えた。２５℃で、Ｎａ２ＣＯ３（１．３ｇ、０．０１２モル）を追加し、混合物を氷／水浴で冷却した。５℃以下で混合物を３０分（最終温度１．５℃）放置した。固体を濾取し、Ｈ２Ｏ（１０ｍＬ次に５ｍＬ）で洗った。固体をフィルター上で３０分乾燥し、次に反応フラスコに移し、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）を加えた。混合物を４５分攪拌した。固体を濾取し、Ｈ２Ｏ（２×１０ Ｌ）で洗った。粗製の生成物を５０℃の真空オーブンで１６ｈｒ乾燥して標記化合物３．５０ｇ（７６％）を得た。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 8.5 (m, 1H), 7.5 (m, 1H), 7.1 (m, 1H), 6.4 (m, 1H), 6.3 (m, 2 H), 4.8 (s, 2 H), 4.7 (s, 1H), 2.7 (s, 3 H); APCI MS [M + H]+ ＝ 241; HPLC >99% (LCAP)。
【０２４１】
実施例７４ｆ
４−［１−メチル−２−（４−（トリフルオロメチル）フェニルアミノ）−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−５−イルオキシ］ピリジン−２−カルボニトリル。
【化６８】
2009507026.tif 000080
４−（トリフルオロメチル）フェニルイソチオシアネート（９．６５ｇ、０．０４７５モル）を４−（４−メチルアミノ−３−アミノ−フェノキシ）−ピリジン−２−カルボニトリル（１２．０ｇ、０．０５モル）のＭｅＣＮ（６０ｍＬ）溶液に加えた。４０分後にＨＰＬＣ分析はアミンの完全な変換を示した。混合物を濾過し、除去した固体をＭｅＣＮ（２×１２ｍＬ）で洗った。ＤＩＰＥＡ（１７．５ｍＬ、０．１モル）を濾液に加えた。２−クロロ−１，３−ジメチルイミダゾリニウムクロリド（ＤＭＣ）（８．４４ｇ、０．０５モル）を４×２．１１ｇ部分に分けて１０分毎に加えた。最終添加後、混合物をさらに１０分攪拌すると、ＨＰＬＣ分析は完全な変換を示した。混合物を５０℃（内部温度）に加熱した。５０℃で、４５分後、ＨＰＬＣ分析は生成物への完全な変換を示した。混合物を常温に冷却し、Ｈ２Ｏ（４５ｍＬ）を加えた。反応混合物は、最初は均質であるが、後に混合物から化合物が沈殿し始めた。２ｈｒ攪拌後、固体を濾取し、２：１ ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ（２×２０ｍＬ）で洗った。粗製の生成物を５０℃の真空オーブンで１６ｈｒ乾燥して標記化合物１６．１０ｇ（７８％）を得た。
1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6)δ 9.5 (m, 1H), 8.5 (m, 1H), 8.0 (m, 2 H), 7.7 (m, 2 H), 7.6 (m, 1H), 7.4 (m, 1H), 7.3 (m, 1H), 7.1 (m, 1H), 6.9 (m, 1H), 3.7 (m, 3 H); APCI MS [M + H]+ ＝ 410; HPLC >99% (LCAP)。
【０２４２】
実施例７４ｇ
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミン
【化６９】
2009507026.tif 000081
ＮａＯＭｅ（０．２３ｍＬ、１ミリモル、２５ｗｔ％／ＭｅＯＨ）をＭｅＯＨ（４ｍＬ）中の実施例７４ｆの混合物（４０９ｍｇ、１ミリモル）に加えた。常温で１ｈｒ後、ＨＰＬＣ分析は出発原料４６．２％（ＬＣＡＰ）を示した。混合物を５０℃（反応ブロック温度）に加熱した。１ｈｒ加熱後、ＨＰＬＣ分析は残留出発原料４．１％（ＬＣＡＰ）を示した。ＮＨ４ＯＡｃ（２３１ｍｇ、３ミリモル）を加え、次に３−ブロモ−１，１，１−トリフルオロアセトン（０．１３ｍＬ、１．２ミリモル）を加えた。混合物を５０℃に約２０ｈｒ加熱した。３−ブロモ−１，１，１−トリフルオロアセトン（０．０６ｍＬ、０．５８ミリモル）を追加し、混合物６０℃に加熱した。６０℃で２４ｈｒ後、混合物を常温に冷却した。水（４ｍＬ）を加え、ＥｔＯＡｃ（４ ｍＬ）を加えた。両層を分離し、水層をＥｔＯＡｃで抽出した。有機層を集め、乾燥（Ｎａ２ＳＯ４）し、濾過し、濃縮した。粗製の生成物をＩＰＡ（４ｍＬ）に溶解した。このＩＰＡ溶液１ｍＬにメタンスルホン酸（０．０２０ｍＬ）を加えた。混合物を８０℃に一夜加熱した。混合物を常温に冷却し、濃縮して標記化合物を得た。
APCI MS [M + H]+ ＝ 519。
【０２４３】
実施例７４ｈ
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミン
【化７０】
2009507026.tif 000082
ＮａＯＭｅ（０．２３ｍＬ、１ミリモル、２５ｗｔ％／ＭｅＯＨ）を実施例７４ｆの混合物（４０９ｍｇ、１ミリモル）と１−ＰｒＯＨ溶液（２ｍＬ）との混合物に加えた。混合物を５０℃（反応ブロック温度）に加熱した。１ｈｒ加熱後、ＨＰＬＣ分析は出発原料の完全な変換を示した。混合物を７０℃に加熱し、ＮＨ４ＯＡｃ（２３１ｍｇ、３ミリモル）を加えた。７０℃で１ｈｒ後、混合物を８５℃に加熱した。同時に、３−ブロモ−１，１，１−トリフルオロアセトン（０．１３ｍＬ、１．２ミリモル）を４×０．０３３ｍＬに分けて３０分毎に加えた。混合物を８５℃に約２０ｈｒ加熱した。混合物を常温まで冷却し、水（２ｍＬ）を加えた。数時間攪拌後、固体を濾取し、１：１＝１−ＰｒＯＨ：水（２×３ｍＬ）で洗った。固体を５０℃の真空オーブンで約１６ｈｒ乾燥して、標記化合物０．１１ｇ（２１％）を得た。
【０２４４】
実施例７５
｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミンの製造
４−トリフルオロメチルフェニルイソチオシアネート（２００ｍｇ、１ミリモル）を４−（２−（５−（トリフルオロメチル）−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）ピリジン−４−イルオキシ）−Ｎ１−メチルベンゼン−１，２−ジアミン（３５０ｍｇ、１ミリモル）とアセトニトリル３ｍＬの混合物に加えた。常温で２０分攪拌後、ＨＰＬＣ分析は完全な変換を示した。チオ尿素（５５３ｍｇ、１ミリモル）とＰＯＣｌ３（３ｍＬ）との混合物を常温で攪拌した。４ｈｒ後、混合物を約５０℃に加熱した。２ｈｒ加熱後、ＨＰＬＣ分析は反応の完了を示した。
【０２４５】
実施例７６
Ｒａｆ／Ｍｅｋ濾過検定
緩衝液：
検定緩衝液：  ５０ｍＭ−Ｔｒｉｓ・ｐＨ７.５、１５ｍＭ−ＭｇＣｌ２、０.１ｍＭ−ＥＤＴＡ、１ｍＭ−ＤＴＴ。
洗浄緩衝液：  ２５ｍＭ−Ｈｅｐｅｓ・ｐＨ７．４、５０ｍＭ−ピロリン酸ナトリウム、５００ｍＭ−ＮａＣｌ。
停止試薬：    ３０ｍＭ−ＥＤＴＡ。
材料：
Ｒａｆ、活性：            Upstate Biotech ♯14-352
Ｍｅｋ、不活性：          Upstate Biotech ♯14-205
３３Ｐ−ＡＴＰ：            NEN Perkin Elmer ♯NEG：602 h
９６ウェル検定プレート：  Falcon U−bottom polypropylene plates ＃35-1190
濾過装置：                Millipore ♯MAVM 096 OR
９６ウェル濾過プレート：  Millipore Immobilon 1 ♯MAIP NOB
シンチレーション液：      Wallac OptiPhase "SuperMix" ♯1200-439
検定条件：
Ｒａｆ：          約１２０ｐＭ
Ｍｅｋ：          約６０ｎＭ
３３Ｐ−ＡＴＰ：    １００ｎＭ
反応時間：        室温で４５〜６０分
検定プロトコル：
ＲａｆとＭｅｋを２×最終濃度に検定緩衝液（５０ｍＭ−Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）、１５ｍＭ−ＭｇＣｌ２、０．１ｍＭ−ＥＤＴＡおよび１ｍＭ−ＤＴＴ）中で混合し、１５μＬ／ウェルでポリプロピレン検定プレート（Falcon U−bottom polypropylene 96 well plates ＃35-1190）に分注した。Ｒａｆ不含のＭｅｋとＤＭＳＯのウェルでバックグラウンドレベルを測定する。
Ｒａｆ／Ｍｅｋを入れたウェルに１０×Ｒａｆキナーゼ阻害剤被検化合物の１００％ＤＭＳＯ溶液３μＬを入れた。検定緩衝液で希釈した２．５×３３Ｐ−ＡＴＰ１２μＬ／ウェルを加えてＲａｆキナーゼ活性反応を開始した。４５〜６０分後に停止試薬（３０ｍＭ−ＥＤＴＡ）７０μＬを加えて反応を停止した。濾過プレートを７０％エタノールで５分間予め湿らせ、次に洗浄緩衝液で濾過して洗浄した。反応ウェルからの試料（９０μＬ）を濾過プレートに移す。ミリポア濾過装置を用いて濾過プレートを洗浄緩衝液で６回洗った。プレートを乾燥し、シンチレーション液（Wallac OptiPhase "SuperMix" ♯1200-439）ウェル当たり１００μＬを加えた。ＣＰＭはWallac Microbeta 1450 readerを用いて測定する。
【０２４６】
実施例７７
検定２：ビオチン化Ｒａｆスクリーニング
インビトロＲａｆスクリーニング：
Ｒａｆセリン／スレオニンキナーゼの様々なアイソフォームの活性はＡＴＰ、ＭＥＫ基質を取り、ＭＥＫ部分へのリン酸部分の移動を検定して測定できる。Ｒａｆの組み換えアイソフォームはヒトＲａｆ組み換えバキュロウイルス発現ベクターに感染したｓｆ９昆虫細胞から精製して得られた。組換えキナーゼ不活性ＭＥＫをＥ．ｃｏｌｉ中で発現し、精製後にビオチンで標識した。各検定では、被検化合物をＤＭＳＯで段階的に希釈し、Ｒａｆ（０．５０ｎＭ）、キナーゼ不活性ビオチン−ＭＥＫ（５０ｎＭ）、反応緩衝液プラスＡＴＰ（１μＭ）と混合した。反応物を次に２時間室温でインキュベーションし、０．５Ｍ−ＥＤＴＡを加えて反応を止めた。停止した反応混合物をニュートラビン−被覆プレート（Pierce）に移し、１ｈｒインキュベーションした。リン酸化生成物は、一次抗体としてウサギ抗−ｐ−ＭＥＫ（Cell Signaling）を、および二次抗体としてユーロピウム標識抗ウサギ抗体を用いて、DELFIA時間分解蛍光系（Wallac）で測定した。時間分解蛍光をWallac 1232 DELFIA 蛍光計で測定した。各化合物の５０％阻害（ＩＣ５０）濃度をXL Fitデータ分析ソフトウエアを用いる非線形回帰で計算した。
実施例７６または７７の操作で測定すると、実施例１〜６４の化合物は、５μＭ以下のＲａｆキナーゼ阻害活性ＩＣ５０を示した。
【０２４７】
実施例７８
メラノーマ腫瘍増殖の阻害
Ａ３７５Ｍヒトメラノーマ細胞３×１０６個を体重約２４ｇの１０〜１２週齢雌性Ｎｕ／Ｎｕマウスの右脇腹皮下に移植した。平均腫瘍容積が約１５０ｍｍ３に達した時（移植後１７日）、マウスを腫瘍容積によって一群９匹の４群に無作為化し、本発明の化合物を用いる処理を開始した。マウスに強制経口投与で１４日間毎日各０．２ｍＬ中のビヒクルのみを、または実施例２５の化合物１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇを投与した。腫瘍容積は週二回デジタルカリパスで測定した。平均腫瘍容積を図１に示す。
【０２４８】
実施例７９
メラノーマ細胞におけるＲａｆキナーゼシグナル伝達の阻害
実施例７８のように、３×１０６個のＡ３７５Ｍヒトメラノーマ細胞を体重約２４ｇの１０〜１２週齢雌性Ｎｕ／Ｎｕマウスの右脇腹皮下に移植した。平均腫瘍容積が約１５０ｍｍ３に達した時（移植後１７日）、マウスを腫瘍容積によって４群に無作為化し、強制経口投与で５日間毎日各０．２ｍＬ中のビヒクルのみを、または実施例２５の化合物１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇを投与した。投与後４時間および２４時間にマウスを安楽死させ、腫瘍を採取し、急速凍結した。
【０２４９】
凍結した腫瘍を氷上で解凍して秤量し、Roche Complete、Mini EDTA不含プロテアーゼ阻害剤カクテル錠剤（緩衝液２５ｍＬ当たり錠）、１ｍＭ−フッ化フェニルメチルスルホニル（ＰＭＳＦ）および１×Sigmaホスファターゼ阻害剤カクテルIIを添加したRIPA緩衝液中でRoche Magna-lyser（４℃で６５００ｒｐｍ、２×１分周期）を用いてホモジナイズした。腫瘍組織１００ｍｇ当たり、RIPA 溶解バッファー１ｍＬを加えた。ホモジネートをmicrofuge中、１４ｋＲＰＭ、４℃で２０分間遠心分離し、続いてさらにQiagen Qiashredders（９ｋ ＲＰＭ、４℃で２分間）を用いてホモジナイズした。タンパク質濃度をPierce BCA protein assayを用いて測定し、次に各ウェルに各試料２０μｇを４〜２０％トリス−グリシンＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルに入れて加えた。ＰＡＧＥの後、タンパク質をニトロセルロース膜に移し、室温で１時間ブロック（ＴＢＳＴ中、５％非脂肪ミルク粉）し、次にウサギポリクローナル抗−ホスホ−ＥＲＫ１／２抗体（Cell Signalling ♯9101）、ウサギポリクローナル抗−ホスホ−ＭＥＫ抗体（Cell Signaling ♯9121）、ウサギポリクローナル抗−ＥＲＫ１／２抗体（Cell Signalling ♯9102）またはウサギポリクローナル抗ＭＥＫ抗体（Cell Signalling ♯9122）の１：１０００希釈液（ブロック緩衝液中）を用いて一夜４℃で処理した。膜を室温でＴＢＳＴを用いて５回（各５分間）洗浄し、ＨＲＰ標識ヤギ−抗−ウサギ抗体を各ブロットに１：５０００希釈（ブロック緩衝液）で加え、室温で１ｈｒインキュベーションした。膜をＴＢＳＴで５回（各５分間）洗浄し、膜をPierce Super- Signalを用いて４分間インキュベーションし、続いて接触時間１秒から２０分間フィルムに露光させた。処理から４時間後および２４時間後の試料での結果を各々図２Ａおよび図２Ｂに示す。
【０２５０】
実施例８０
大腸癌腫瘍増殖の阻害
２×１０６個のＨＴ２９Ｐヒト大腸癌細胞を体重約２４ｇの１０〜１２週齢雌性Ｎｕ／Ｎｕマウスの右脇腹皮下に移植した。平均腫瘍容積が約２５０ｍｍ３に達した時（移植後１４日）、マウスを腫瘍容積によって一群１０匹の４群に無作為化し、本発明の化合物による処理を開始した。マウスに強制経口投与で１４日間毎日各０．２ｍＬ中のビヒクルのみを、または実施例２５の化合物１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇを投与した。腫瘍容積は週二回デジタルカリパスで測定した。平均腫瘍容積を図３に示す。
【０２５１】
実施例８１
大腸癌細胞におけるＲａｆキナーゼシグナル伝達の阻害
ＨＴ２９Ｐヒト大腸癌細胞３×１０６個を体重約２４ｇの１０〜１２週齢雌性Ｎｕ／Ｎｕマウスの右脇腹皮下に移植した。平均腫瘍容積が約１５０ｍｍ３に達した時（移植後１７日）、マウスを腫瘍容積によって４群に無作為化し、本発明の化合物による処理を開始した。マウスに強制経口投与で５日間毎日各０．２ｍＬ中のビヒクルのみを、または実施例２５の化合物１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇを投与した。投与後１、４、および２４時間に、マウスを安楽死させ、腫瘍を採取し、急速凍結した。凍結した腫瘍は、実施例７９の操作に従って処理した。処理後１時間、４時間、および２４時間の試料は各々図４Ａ、図４Ｂ、および図２Ｃの結果を示した。
【０２５２】
実施例８２
インビトロ生化学検定で示される、Ｒａｆキナーゼシグナル伝達の実施例１の化合物による阻害
インビトロＲａｆ活性：
実施例１の化合物：｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミンが、野生型Ｂ−Ｒａｆ、野生型ｃ−Ｒａｆおよび突然変異体Ｂ−Ｒａｆ（Ｖ６００Ｅ）に及ぼす阻害効果を下記のビオチン化検定を用いて決定した。Ｒａｆセリン／スレオニンキナーゼの各種アイソフォームのキナーゼ活性は、ＡＴＰ、組み換えキナーゼ不活性ＭＥＫ基質を用意し、ＭＥＫ残基へのリン酸部分の移動を検定することによって測定した。不活性化Ｋ９７Ｒ ＡＴＰ結合部位突然変異（そこをキナーゼ不活性にする）を持つ組み換え全長ＭＥＫをＥ．ｃｏｌｉで発現させ、精製後にビオチンで標識した。ＭＥＫ ｃＤＮＡをＮ−末端（ｈｉｓ）６タグでサブクローニングし、Ｅ．ｃｏｌｉで発現し、組み換えＭＥＫ基質をＥ．ｃｏｌｉ溶菌物からニッケル親和性クロマトグラフィー、続いてアニオン交換によって精製した。最終ＭＥＫ基質製品をビオチン化（Pierce EZ-Link Sulfo-NHS- LC-Biotin）し、１１．２５μＭまで濃縮した。組み換えＢ−Ｒａｆ、ｃ−Ｒａｆ、および突然変異Ｂ−Ｒａｆは、対応するヒトＲａｆ組み換え発現ベクターが感染したｓｆ９昆虫細胞から精製して得られた。この組み換えＲａｆアイソフォームは、ＧＬｕ抗体相互作用または金属イオンクロマトグラフィーによって精製した。
【０２５３】
各検定では、実施例１の化合物をＤＭＳＯで段階的に希釈し、次にＢ−Ｒａｆ、ｃ−Ｒａｆまたは突然変異Ｂ−Ｒａｆ（各０．５０ｎＭ）と混合した。キナーゼ不活性ビオチン−ＭＥＫ基質（５０ｎＭ）を反応緩衝液プラスＡＴＰ（１μＭ）に加えた。反応緩衝液は、３０ｍＭ―Ｔｒｉｓ−ＨＣＬ２・ｐＨ７．５、１０ｍＭ−ＭｇＣｌ２、２ｍＭ−ＤＴＴ、４ｍＭ−ＥＤＴＡ、２５ｍＭ−ベータ−グリセロリン酸、５ｍＭ−ＭｎＣｌ２、および０．０１％ ＢＳＡ／ＰＢＳを含有していた。反応物を次に室温で２時間インキュベーションし、０．５Ｍ−ＥＤＴＡを加えて反応停止させた。停止した反応混合物をニュートラダビン−被覆プレート（Pierce）に移し、１ｈｒインキュベーションした。リン酸化生成物は、一次抗体としてウサギ抗−ｐ−ＭＥＫ（Cell Signaling）、および二次抗体としてユーロピウム標識抗ウサギを使用して、DELFIA時間分解蛍光システム（Wallac）で測定した。時間分解蛍光はWallac 1232 DELFIA 蛍光計で測定した。実施例１の化合物の５０％阻害濃度（ＩＣ５０）は、ＸＬＦＩＴデータ分析ソフトウエアを用いる非線形回帰分析によって算出した。
【０２５４】
結果：
実施例１の化合物は下記表３に示すように、Ｂ−Ｒａｆ、ｃ−Ｒａｆ、および突然変異体Ｂ−Ｒａｆ（Ｖ６００Ｅ）の活性を強力に阻害（ＩＣ５０＜０．１μＭ）する。
Raf活性に対する実施例１の化合物のインビトロ力価
【表１１】
2009507026.tif 000083
表３に示すように、実施例１の化合物は野生型アイソフォームＢ−Ｒａｆ、野生型アイソフォームｃ−Ｒａｆ、および突然変異体Ｂ−Ｒａｆ（Ｖ６００Ｅ）Ｒａｆキナーゼに対して強力な阻害活性を示す。図５に示すように、Ｒａｆキナーゼは、ＭＡＰＫ（Ｒａｓ／Ｒａｆ／ＭＥＫ／ＥＲＫ）シグナル伝達経路にある第一次Ｒａｓエフェクターであると考えられる。このＲａｆキナーゼはＲａｓで活性化され、Ｍｅｋ１とＭｅｋ２とをリン酸化して活性化し、これがＭＡＰＫ経路の分裂促進性活性化キナーゼ１および２（ＭＡＰＫ）を活性化する。Ｒａｆキナーゼは、細胞の増殖、分化、生存、癌化およびアポトーシスに影響を与え、制御することが知られている。Ｂ−Ｒａｆアイソフォームはシグナル伝達に関与するＲａｆの最も活性な型であり、Ｒａｓシグナル伝達のキーであることが証明されている。
【０２５５】
表４に示すように、ＭＡＰＫシグナル伝達経路はヒトの癌多数の原因とされている。Ｒａｓ突然変異（活性化）はヒトの癌全ての１５％に見出される。ＥＲＫ突然変異（ハイパー−活性化）はヒトの癌全ての３０％に見出される。癌に関連する癌遺伝子突然変異は、この経路の数ヶ所に共通であり、例えば突然変異体Ｂ−Ｒａｆ（Ｖ６００Ｅ）はメラノーマの約７０％および大腸癌腫の約１２％に存在する（上記のDavies et al.;上記のYuen et al.および上記のBrose et al.）。
ＭＡＰＫ経路内にある突然変異シグナル伝達分子と臨床的難治性との間の関連
【表１２】
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Sebolt-Leopole and Herrera, Nature Reviews Cancer (4): 937 (2004)参照。
【０２５６】
表４に示すように、Ｂ−Ｒａｆ（Ｖ６００Ｅ）の突然変異形であって、活性化されたものは、癌処置の重要な標的である。その理由は、その発現が貧弱な予後の指標であること、それが本質的に活性であること、およびそれがメラノーマ、甲状腺乳頭癌、卵巣癌および大腸癌を含む数種の腫瘍を駆動するからである。突然変異Ｂ−Ｒａｆも阻害する野生型Ｒａｆキナーゼの阻害剤は癌治療における治療剤としての見込みがあることは以前に証明されている。例えば、メラノーマ細胞株ではｓｉＲＮＡによる突然変異Ｂ−Ｒａｆ欠損がＥＲＫシグナル伝達および増殖を障害することが知られている（Dibb, NJ. et al., Nature Reviews Cancer (4): 718, 2004）。それ故、突然変異Ｂ−Ｒａｆは実施例１の化合物により野生型Ｂ−Ｒａｆよりも強力に阻害されるので、メラノーマ、卵巣癌、甲状腺乳頭癌および大腸癌を含むＲａｆ介在疾患の処置におけるＲａｆ阻害性化合物の有用性を示すことは明白である。
【０２５７】
実施例８３
細胞ベースの検定法で示される、実施例１の化合物による突然変異体Ｂ−Ｒａｆキナーゼシグナル伝達の阻害
１．ＥＲＫリン酸化の阻害
方法：
メラノーマ細胞株２種、Ａ３７５Ｍ（突然変異体Ｂ−Ｒａｆ・Ｖ６００Ｅ）およびＳＫＭＥＬ−２８（突然変異体Ｂ−Ｒａｆ・Ｖ６００Ｅ）を用いて実施例１の化合物の阻害効果を細胞ベース検定で測定した。ＥＲＫリン酸化は、ＳＫＭＥＬ−２８細胞およびＡ３７５Ｍ細胞における実施例１の化合物：｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミンの段階希釈で処理後に分析した。ＥＣ５０値はデータを４パラメータ曲線に適合させて決定した。
結果：
表５に示す通り、実施例１の化合物はホスホ−ＥＲＫ減少によって測定するとＳＫＭＥＬ−２８細胞およびＡ３７５Ｍ細胞における突然変異体Ｂ−Ｒａｆ（Ｖ６００Ｅ）キナーゼ活性を阻害する。
突然変異体Ｒａｆ−Ｂ発現メラノーマ細胞株における実施例１の化合物の阻害効果
【表１３】
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【０２５８】
２．ＭＥＫリン酸化の阻害
方法：
メラノーマ細胞株３種、Ａ３７５Ｍ（突然変異体Ｂ−ＲａｆＶ６００Ｅ）、ＳＫＭＥＬ−２（野生型Ｒａｆ、突然変異体Ｎ−Ｒａｓ）、およびＣＨＬ−１（野生型Ｒａｆ、野生型Ｒａｓ）を用いて実施例１の化合物の阻害効果を細胞ベース検定法で測定した。この３種の細胞株を３７℃で０．１％ウシ胎児血清中実施例１の化合物濃度０．１μＭ、０．５μＭ、１μＭ、５μＭおよび１０μＭと共にインキュベーションした。４ｈｒインキュベーション後、ＭＥＫリン酸化をウェスタンブロット分析で分析した。
結果：
この結果を図６Ａ、６Ｂ、および６Ｃに示す。図６Ａに示すように、実施例１の化合物は０．１μＭ〜１０μＭの濃度範囲で、Ａ３７５Ｍ細胞（図６Ａ）、ＳＫＭＥＬ−２細胞（図６Ｂ）およびＣＨＬ−１細胞（図６Ｃ）においてはＲａｆ下流シグナル伝達の強力な阻害剤である。
【０２５９】
３．足場非依存性細胞増殖の阻害
Ｒａｆの阻害が抗増殖活性に翻訳されることを検証するために、表６に列挙するように実施例１の化合物をソフトアガー中で培養した各種の細胞株およびヒト腫瘍分離株に対して試験した。
ソフトアガー増殖検定：表６に示す各細胞株について、５００細胞／１００μＬをCorning９６ウェル平底Ultra Low Attachment Micro plates（Corning ♯3474）に接種した。１％seakem ＧＴＧアガロース（５０μＬ／ウェル）を完全培地に加え、固化させ、次に完全培地１００μＬを各ウェルに加えた。実施例１の化合物：｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミンの段階希釈を最終濃度５％のＤＭＳＯ血清不含培地で行い、希釈した化合物２５μＬを各ウェルに加えた（最終ＤＭＳＯ濃度：０．５％）。対照ウェルとして化合物不含０．５％ＤＭＳＯも検定に加えた。７日間各細胞を化合物とインキュベーションした後、Alamar Blue（Trek Diagnostic Systems ♯00-100）２５μＬを各ウェルに加え、３７℃で４時間インキュベーションした。プレートを励起光５３０ｎｍ、放射光５９０ｎｍの蛍光プレートリーダーで測定した。データを４パラメータ曲線に適合させてＥＣ５０値を決定した。
実施例１の化合物は軟寒天（Oncotest, GmbH, Freiburg, Germany）に増殖させた一群のヒト腫瘍分離株についても試験した。各腫瘍は患者から採取し、次に腫瘍片として免疫力低下マウスに移し、前記方法で検定した。
結果：
実施例１の化合物は表６に示すように、突然変異体Ｂ−Ｒａｆ、突然変異体Ｋ−Ｒａｓおよび突然変異体Ｎ−Ｒａｓを発現する細胞株およびヒト腫瘍分離株に対して強力な抗増殖効果を示す。
軟寒天増殖検定：実施例１の化合物による阻害
【表１４】
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【０２６０】
表６に示す一群の広範囲な細胞株およびヒト腫瘍分離株に対する実施例１の化合物の阻害活性は、突然変異体Ｂ−Ｒａｆを発現する腫瘍細胞における本化合物の強力な抗増殖活性を示す。本化合物は突然変異体Ｂ−Ｒａｆメラノーマ細胞に対して＜０．００９８〜０．０７μＭの範囲の強力な阻害を示した。本化合物は突然変異体Ｂ−Ｒａｆ結腸直腸細胞株に対して０．０２６μＭ〜０．１３μＭの範囲で同程度の阻害を示した。本化合物はまた、突然変異体Ｋ−Ｒａｓを発現する結腸直腸腫瘍細胞の試験した２例で強力な抗増殖活性（０．０７μＭ〜０．０１６μＭ）を示して、Ｂ−Ｒａｆ／ｃ−Ｒａｆの阻害が上流のＫ−Ｒａｓ突然変異との関連で抗増殖活性を導くことを確証する。
【０２６１】
前記各細胞株からの結果と符合して、実施例１の化合物は、突然変異体Ｂ−Ｒａｆメラノーマ（ＥＣ５０＝０．０５５μＭおよび０．２０μＭ）、続いてＮ−Ｒａｓ突然変異体メラノーマ（ＥＣ５０＝０．５７μＭ）と、ヒト腫瘍分離株に対して最強力な阻害を示した。膵臓腫瘍１例と結腸直腸腫瘍１例は、１μＭ範囲のＥＣ５０であった。その他の腫瘍はＥＣ５０１μＭ以上であった。患者から採取したヒト腫瘍は患者から採取されたものなので、また腫瘍片として免疫力低下マウスに移行させたものなので、この疾患に関する各細胞株よりも正確な疾患モデルを示すと考えられる。それ故、その標本はプラスチック上での増殖は選択せずに原発腫瘍の構造を維持させた。
【０２６２】
実施例１の化合物が腎臓癌分離株では１μＭ以上の範囲の阻害活性を示すことは興味深い。この特定腫瘍の遺伝子型は未定であるが、腎臓癌は典型的には突然変異体Ｒａｓまたは突然変異体 Ｂ−Ｒａｆを発現しないことが知られている。それ故、実施例１の化合物はＭＡＰＫ経路のシグナル伝達分子、特にＲａｆおよびＲａｓ キナーゼ分子を特異的に阻害していると思われる。
【０２６３】
実施例８４
Ａ３７５Ｍ（Ｂ−Ｒａｆ Ｖ６００Ｅ）ヒトメラノーマ異種移植モデルにおいて、実施例１の化合物を用いる処理は腫瘍退行を起す
方法：
Ａ３７５Ｍヒトメラノーマ細胞３×１０６個を体重約２４ｇの１０〜１２週齢雌性Ｎｕ／Ｎｕマウスの右脇腹皮下に移植した。平均腫瘍容積が約１５０ｍｍ３に達した時（移植後１７日）、マウスを腫瘍容積によって各群９匹の４群に無作為化し、実施例１の化合物による処理を開始した。マウスに強制経口投与で１４日間毎日、０．１ｍＬ中のビヒクルのみを、または実施例１の化合物１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇを投与した。実施例１の化合物：１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミンは１００％ＰＥＧで製剤化した。腫瘍容積は週二回デジタルカリパスで測定した。
【０２６４】
ウェスタンブロット分析：
１４回目の投与後８時間および２４時間目に、マウスを安楽死させ、腫瘍を採取し、急速冷凍した。凍結した腫瘍を氷上で解凍し、秤量し、次にＲＩＰＡ緩衝液中でRoche Complete,Mini EDTA不含プロテアーゼ阻害剤カクテル錠剤（緩衝液２５ｍＬ毎に２錠）、１ｍＭ−フェニルメチルスルホニル・フルオリド（ＰＭＳＦ）および1×Sigmaホスファターゼ阻害剤カクテルIIと共にRoche Magna-lyser（４℃で２×１分周期、６５００ｒｐｍ）を用いてホモジナイズした。腫瘍組織１００ｍｇ毎にRIPA 溶解バッファー１ｍＬを加えた。ホモジネートはマイクロフュージを用いて４℃で２０分間、１４Ｋｒｐｍで遠心分離し、続いてさらにQiagen Qiashredders（９ＫＲＰＭ、２分間、４℃）を用いてホモジナイズした。タンパク質濃度をPierce BCAタンパク質検定を用いて決定し、次に各ウェル当たり２０μｇの各試料を４〜２０％トリス−グリシンＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲルに負荷した。ＰＡＧＥの後、タンパク質をニトロセルロース膜に移し、室温で１時間ブロック（５％非脂肪ミルク粉末、ＴＢＳＴ中）し、次にウサギポリクローナル抗ホスホ−ＥＲＫ１／２抗体（Cell Signalling ♯9101）、ウサギポリクローナル抗ホスホ−ＭＥＫ抗体（Cell Signaling #9121）、ウサギポリクローナル抗ＥＲＫ１／２抗体（Cell Signalling ♯9102）またはウサギポリクローナル抗ＭＥＫ抗体（Cell Signalling ♯9122）の１：１０００希釈（ブロック緩衝液中）を用いて一夜４℃で処理した。下流マーカーの変調を抗Ｂｉｍ抗体（Chemicon, ♯AB 17003）、抗Ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１抗体クローン５Ｄ４（Upstate, ♯05-263）、抗ｐ２７Ｋｉｐ−１（１８２−１９８）抗体（Calbiochem, ♯506127）、抗ホスホ−ＡＫＴ（Ｓ４７３）抗体（Cell Signaling, ♯9271）、抗ホスホ−Ａｋｔ（Ｔ３０８）抗体（Cell Signaling ♯9275）、および抗ホスホ−全Ａｋｔ抗体（Cell Signaling ♯9272）の１：１０００希釈を用いて分析した。
次に膜をＴＢＳＴで５回（各５分）、室温で洗浄し、ＨＲＰ−標識ヤギ抗ウサギ抗体を１：５０００（ブロック緩衝液中）希釈で全ブロットに加え、室温で１時間インキュベーションした。次に膜をＴＢＳＴで５回（各５分）洗浄し、膜をPierce Super-Signalと共に４分間インキュベーションし、続いて１秒〜２０分の時間範囲にわたってフィルムに露出した。
結果：
図７Ａは、実施例１の化合物１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇ用量を経口投与したマウスにおけるＡ３７５Ｍ（Ｂ−ＲａｆＶ６００Ｅ）ヒトメラノーマ腫瘍の腫瘍容積減少平均値の用量−反応を示すグラフである。図７Ａに示すように、実施例１の化合物は経口用量依存性の様式で強力な抗腫瘍活性を示す。
化合物１００ｍｇ／ｋｇの経口用量で、試験したマウスの９匹中９匹で腫瘍予防が認められた。実施例１の化合物１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇを１４回目投与後８ｈｒおよび２４ｈｒのウェスタンブロット分析の結果を図７Ｂおよび図７Ｃに示す。図７Ｃに示すように、ウェスタンブロットデータはこの化合物はＭＥＫリン酸化を１００ｍｇ／ｋｇ用量（腫瘍退行を誘導する）で阻害し、ＭＥＫ阻害は最終投与後２４時間以上持続することを示す。
図７Ｄに示すように、１４回目の投与後２４時間の腫瘍溶解物中の下流バイオマーカー変調の解析はＢＩＭ（アポトーシスのマーカー）およびｐ２７Ｋｉｐ（細胞周期休止のマーカー）の増加およびＣｙｃｌｉｎＤ（細胞周期阻害）の減少を示す。これらの結果は、実施例１の化合物はＭＡＰＫ経路のＲａｆシグナル伝達を阻害することを確認する。
【０２６５】
実施例８５
実施例１の化合物での処理によるメラノーマ腫瘍増殖の阻害
実施例１の化合物の阻害活性をメラノーマ腫瘍モデルＭＥＸＦ２７６（突然変異体Ｂ−ＲａｆＶ６００Ｅ）およびメラノーマ腫瘍モデルＭＥＸＦ１３４１の野生型Ｂ−Ｒａｆ、突然変異体Ｎ−Ｒａｓ（Ｑ６１Ｋ）で試験した。
方法：
段階的に継代培養したヒトメラノーマＭＥＸＦ２７６（突然変異体Ｂ−ＲａｆＶ６００Ｅ）腫瘍細胞を１０〜１２週齢雌性Ｎｕ／Ｎｕマウスの後脇腹皮下に移植した。平均腫瘍容積が約６５ｍｍ３に達した時、マウスを腫瘍容積によって無作為化し、実施例１の化合物｛１−メチル−５−［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミンによる処理を開始した。ＭＥＸＦ２７６モデルはやや悪液質であって、非処理対照マウスでもいくらかの毒性が予期されることが知られているので、薬剤処理群でも著しい体重減少を予防するために下記のような間欠的な投与計画を用いた。強制経口投与によって各マウスにビヒクル単独、または用量：０、２、４、６、１４、１６、および２０日目に１０ｍｇ／ｋｇ；０、２、１４、１６、および２０日目に３０ｍｇ／ｋｇ；および０、２、１４、１６、および２０日目に１００ｍｇ／ｋｇの実施例１の化合物を投与した。ＭＥＸＦ１３４１モデルでは、連続継代培養ヒトメラノーマＭＥＸＦ１３４１ 腫瘍細胞を雌性Ｎｕ／Ｎｕマウスの後脇腹皮下に移植した。平均腫瘍容積が約７８ｍｍ３に達した時に、マウスを腫瘍容積によって無作為化し、実施例１の化合物を用いる処理を開始した。強制経口投与によってマウスにビヒクル単独または実施例１の化合物を次の用量で投与した：すなわち０、２、４、６、１０、１２、１８、および２０日に１０ｍｇ／ｋｇ；０、２、４、６、１０、１２、１８、および２０日に３０ｍｇ／ｋｇ；および０、２、４、６、１０、１２、および２０日に１００ｍｇ／ｋｇ。
最終用量投与後４ｈｒに、ＭＥＸＦ２７６およびＭＥＸＦ１３４１モデルからのマウスを安楽死させ、腫瘍を採取して急速冷凍した。この腫瘍の溶解物は次に実施例８４記載のようにして標的変調（ｐＭＥＫ）および下流マーカーの変調（ＢＩＭ、ｐ２７ＫｉｐおよびｐＡＫＴ）のためのウェスタンブロットによって分析した。
結果：
図８Ａは実施例１の化合物で処理したマウスにおけるＭＥＸＦ２７６（Ｂ−Ｒａｆ Ｖ６００Ｅ）メラノーマ癌腫の腫瘍容積減少平均値を示すグラフである。図８Ａに示す結果は実施例１の化合物がＭＥＸＦ２７６分離株では用量１０ｍｇ／ｋｇで明白な腫瘍増殖阻害を示し、および３０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇではマウス８匹中８匹が５０％またはそれ以上の腫瘍退行を示すことを指摘する。ｐＭＥＫリン酸化（図８Ｂ）および腫瘍溶解物における下流バイオマーカー変調（図８Ｃ）の分析は突然変異体Ｂ−Ｒａｆ活性が、図８Ｂにおけるホスホ−ＭＥＫ減少に示されるようにＭＥＸＦ２７６腫瘍では阻害されていることを確証する。図８Ｃに示すように、ＢＩＭ（アポトーシスのマーカー）およびｐ２７Ｋｉｐ（細胞周期休止）の増加、およびホスホ−ＡＫＴ（生存経路シグナル伝達）の減少が観察され、ＭＡＰＫ経路におけるＲａｆキナーゼ活性の阻害が確かめられる。
【０２６６】
図９Ａは実施例１の化合物で処理したマウスにおけるＭＥＸＦ１３４１（Ｎ−ＲａｓＱ６１Ｋ）メラノーマ癌腫の腫瘍増殖阻害平均値を示すグラフである。図９Ａに示す結果は、実施例１の化合物は３０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇ用量ではＭＥＸＦ１３４１突然変異体Ｎ−Ｒａｓ（Ｎ−ＲａｓＱ６１Ｋ）メラノーマ腫瘍モデルに明白な腫瘍増殖阻害（７０％までの阻害）を起したが、腫瘍退行は起さなかったことを示す。図９Ｂに示すように、本化合物１００ｍｇ／ｋｇでの処理２０日後のホスホ−ＭＥＫの分析では、ＭＥＸＦ２７６（突然変異体Ｂ−Ｒａｆ）モデルでの結果とは対照的にホスホ−ＭＥＫの減少は観察されなかった。これに加えて、ＭＥＸＦ１３４１モデルではＭＡＰＫ経路にあるＲａｆの下流のシグナル伝達分子が影響を受けている証拠はある一方で、その効果はＭＥＸＦ２７６モデルで観察される効果と比較すると顕著ではない。例えば、図９Ｃに示すように、ｐ２７Ｋｉｐレベル（細胞周期休止）は３０ｍｇ／ｋｇ群と１００ｍｇ／ｋｇ群では増加して増殖休止を示すが、アポトーシスマーカーＢＩＭの増加は僅かであった。それ故、実施例１の化合物は、ＭＥＸＦ２７６（突然変異体Ｂ−Ｒａｆ）異種移植モデルでは強力な活性を示して腫瘍退行を起すが、ＭＥＸＦ１３４１（野生型Ｂ−Ｒａｆ、突然変異体Ｎ−Ｒａｓ）異種移植モデルでは明白ではあるが、活性はやや強力な程度で腫瘍増殖阻害を起すと見られる。
【０２６７】
実施例８６
実施例１の化合物を用いる処理はヒト結腸直腸癌腫増殖を阻害する
実施例１の化合物を阻害活性について結腸直腸癌腫異種移植モデルＨＣＴ−１１６（突然変異体Ｋ−Ｒａｓ Ｇ１３Ｄ）、ＨＴ−２９（Ｂ−Ｒａｆ Ｖ６００Ｅ）および急性白血病異種移植モデルＭＶ４−１１（ＦＬＴ３ ＩＴＤ）で試験した。
方法：
ＨＣＴ−１１６（突然変異体 Ｋ−Ｒａｓ Ｇ１３Ｄ）ヒト結腸直腸癌腫細胞５×１０６個を体重約２４ｇの１０〜１２週齢雌性Ｎｕ／Ｎｕマウスの後脇腹皮下に移植した。平均腫瘍容積が約２１２ｍｍ３に達した時にマウスに強制経口投与で第１日および２日に１回（ｑ２ｄ）合計２８日間、ビヒクルのみを、または実施例１の化合物１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇを投与した。第３回投与後４ｈｒ、８ｈｒおよび２４ｈｒにサテライトマウスを安楽死させ、腫瘍を採取した。次にこの腫瘍からの溶解物を実施例８４記載のように標的変調（ｐＭＥＫ）についてウェスタンブロットで分析した。
第二のヒト結腸直腸癌腫モデル、ＨＴ−２９（Ｂ−Ｒａｆ Ｖ６００Ｅ）は、次のように試験した。ＨＴ−２６細胞２×１０６個を体重約２４ｇの１０〜１２週齢雌性Ｎｕ／Ｎｕマウスの後脇腹皮下に移植した。平均腫瘍容積が約１６７ｍｍ３に達した時にマウスに強制経口投与で第１日および２日に１回（ｑ２ｄ）合計２８日間、ビヒクルのみを、または実施例１の化合物１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇを投与した。
ヒト急性単球白血病異種移植モデル、ＭＶ４−１１（ＦＬＴ３・ＩＴＤ）は以下のようにして分析した：ＭＶ４−１１細胞５×１０６個を体重約２４ｇの１０〜１２週齢雌性Ｎｕ／Ｎｕマウスの後脇腹皮下に移植した。平均腫瘍容積が約１９０ｍｍ３に達した時にマウスに強制経口投与で第１日および２日に１回（ｑ２ｄ）合計１６日間、ビヒクルのみを、または実施例１の化合物１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇを投与した。第３回投与後４ｈｒにサテライトマウスを安楽死させ、腫瘍を採取した。次にこの腫瘍からの溶解物を実施例８４記載のように標的変調（ｐＭＥＫ）についてウェスタンブロットで分析した。
結果：
ＨＣＴ−１１６の研究結果を図１０Ａ〜Ｄに示す。図１０Ａは実施例１の化合物１００ｍｇ／ｋｇで処理したマウスにおけるＨＣＴ−１１６（Ｋ−Ｒａｓ Ｇ１３Ｄ）結腸直腸癌腫の腫瘍容積減少平均値を示すグラフである。図１０Ｂ〜１０Ｄに示すように、第三回投与後４ｈｒ（図１０Ｂ）、８ｈｒ（図１０Ｃ）および２４ｈｒ（図１０Ｄ）におけるホスホ−ＭＥＫの分析でホスホ−ＭＥＫの減少が観察された。
図１１は実施例１の化合物で処理したマウスにおけるＨＴ−２９（Ｂ−Ｒａｆ Ｖ６００Ｅ）結腸直腸癌腫容積減少平均値を示すグラフである。図１１に示すように、腫瘍退行は３０ｍｇ／ｋｇおよび１００ｍｇ／ｋｇで観察された。ＭＶ４−１１の研究結果は図１２Ａ〜Ｂに示す。図１２Ａは実施例１の化合物で処理したマウスにおけるＭＶ４−１１急性単球白血病癌腫の腫瘍増殖阻害の平均値を示すグラフである。ＭＶ４−１１腫瘍細胞は突然変異体受容体チロシンキナーゼ（ＭＶ４；１１、ＦＬＴ３・ＩＴＤ）が駆動する。記載のように実施例１の化合物はＭＶ−１１モデルでは顕著な腫瘍増殖阻害を示すが、腫瘍退行はなく（図１２Ａ）、ＭＥＫシグナル伝達阻害も観察されていない（図１２Ｂ）。理論に拘泥するものではないが、ＭＶ４−１１モデルでは腫瘍増殖阻害効果は実施例８７〜８８に記載するようにＶＥＧＦＲ−２の一次的阻害を経るこの化合物の抗血管形成活性の結果らしい。
前記メラノーマ、結腸直腸癌腫および白血病の異種移植モデルでの実施例１の化合物の効果の評価から得られるデータの概要を表７に示す。
各種異種移植モデルにおける実施例１の化合物の活性の概要
【表１５】
2009507026.tif 000087
表７に要約し、図６〜１２に示し、実施例８２〜８６に記載するデータから、実施例１の化合物は、Ｂ−Ｒａｆが突然変異している各異種移植モデルで有効であり、試験したモデル３種（Ａ３７５Ｍ、ＭＥＸＦ２７６、およびＨＴ２９）の全てで腫瘍の退行と標的の変調を起した。
【０２６８】
実施例８７
チロシンキナーゼ阻害の検定
１．生化学検定：
多数のタンパク質チロシンキナーゼのキナーゼ活性は、ＡＴＰとリン酸化できるチロシンアミノ酸残基を含む適当なペプチドまたはタンパク質とを取り、チロシン残基へのリン酸基の移動を検定することによって測定した。ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲβ、ＣＳＦ−１Ｒおよびｃ−Ｋｉｔの細胞質ドメインに対応する組み換えタンパク質は、対応するヒト ＶＥＧＦＲ２、ＰＤＧＦＲβ、ＣＳＦ−１Ｒおよびｃ−Ｋｉｔ組み換えバキュロウイルス発現ベクターに感染したＳｆ９昆虫細胞から精製して得られる。各検定では、実施例１の化合物｛１−メチル−５− ［２−（５−トリフルオロメチル−１Ｈ−イミダゾール−２−イル）−ピリジン−４−イルオキシ］−１Ｈ−ベンゾイミダゾール−２−イル｝−（４−トリフルオロメチル−フェニル）アミン、をＤＭＳＯに段階的に希釈し、次に適当なキナーゼ反応緩衝液プラスＡＴＰと混合した（使用するＡＴＰ濃度は各Ｋｍ値またはその僅かに下とした）。キナーゼタンパク質と適当なビオチン化ペプチド基質を混合して最終容積５０−１００μＬとした。反応物は室温で１〜３ｈｒインキュベーションし、次に４５ｍＭ−ＥＤＴＡ、５０ｍＭ−Ｈｅｐｅｓ・ｐＨ ７．５を２５〜５０μＬ加えて停止させた。停止した反応混合物（７５μＬ）をストレプトアビジン被覆マイクロタイタープレート（Boehringer Mannheim）に移し、１時間インキュベーションした。リン酸化ペプチド生成物はユーロピウム標識抗ホスホチロシン抗体ＰＴ６６を用いて、抗体希釈には１ｍＭ−ＭｇＣｌ２を添加する修正を行ったDELFIA検定緩衝液を用い、DELFIA時間分解蛍光システム（WallacまたはPE Biosciences）で測定した。時間分解蛍光はWallac 1232 DELFIA蛍光光度計またはPE Victor II multiple signal readerで測定した。各化合物の５０％阻害濃度（ＩＣ５０）は、XL Fitデータ分析ソフトウエアを用いて非線形回帰を採用して算出した。
ＶＥＧＦＲ２ キナーゼ（０．０５μｇ／ｍＬ）は５０ｍＭ−Ｈｅｐｅｓ・ｐＨ７．０、２ｍＭ−ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ−ＭｎＣｌ２、１ｍＭ−ＮａＦ、１ｍＭ−ジチオスレイトール（ＤＴＴ）、１ｍｇ／ｍＬウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）、１〜３０μＭ−ＡＴＰ、および０．２５μＭ−ビオチン化ペプチド基質「GGGGQDGKDYIVLPI」（配列番号：１）中で検定した。
ＰＤＧＦＲキナーゼ検定のために、酵素１２０μｇ／ｍＬと前記と同じ緩衝条件を用いたが、ＡＴＰとペプチド基質の濃度は１．４μＭ−ＡＴＰと０．２５μＭ−ビオチン化ペプチド基質「GGGGQDGKDYIVLPI」（配列番号：１）に変更した。
ＣＳＦ−１Ｒのキナーゼ活性は、検定緩衝液（５０ｍＭ−ＨＥＰＥＳ・ｐＨ７．０、５ｍＭ−ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ−ＭｎＣｌ２、０．１％ＢＳＡ、１ｍＭ−ＤＴＴ０．０１％Ｔｗｅｅｎ、最終ｐＨ７．５）、１μＭ−ＡＴＰおよび５０ｎＭ−ビオチン化ペプチド基質「EEEEAYGWLNF」（配列番号：２）で検定した。
ｃ−Ｋｉｔのキナーゼ活性は、ＡＴＰと、ｃ−Ｋｉｔ受容体の細胞質ドメインに対応する組み換えタンパク質（Proquinaseから入手）とを用いて測定した。ｃ−Ｋｉｔキナーゼタンパク質（２ｎＭ）とビオチン化ペプチド基質（１μＭ）「GGLFDDPSWNVQNL」（配列番号：３）とを反応緩衝液プラスＡＴＰ（８μＭ）に加えて最終容量１００μＬとした。ｃ−Ｋｉｔのための反応緩衝液は、５０ｍＭ−ＨＥＰＥＳ・ｐＨ ７．５、１ｍＭ−ＮａＦ、２ｍＭ−ＭｇＣｌ２、１０ｍＭ−ＭｎＣｌ２および１ｍｇ／ｍＬ−ＢＳＡであった。反応物は室温で２ｈｒインキュベーションし、４５ｍＭ−ＥＤＴＡ、５０ｍＭ−ＨＥＰＥＳ・ｐＨ７．５を５０μＬ加えて反応を止めた。反応混合物（７５μＬ）をストレプトアビジン被覆マイクロタイタープレート（Boehringer Mannheim）に移し、１ｈｒインキュベーションした。リン酸化ペプチド生成物はDELPHIA時間分解蛍光システム（Wallac or PE Biosciences）で、ユーロピウム標識抗ホスホチロシン抗体、ＰＴ６６を用いて測定したが、この抗体検出法ではDELFIA検定緩衝液に１ｍＭ−ＭｇＣｌ２を添加する条件修正を行った。時間分解蛍光値はWallac 1232 DELFIA蛍光光度計またはPE Victor II multiple signal readerで測定した。５０％ 阻害するための実施例１の化合物の濃度（ＩＣ５０）はXL Fitデータ分析ソフトウエアを用いて非線形回帰法で算出した。
結果：
表８に示すように、実施例１の化合物はＶＥＧＦＲ−２、ｃ−Ｋｉｔ、ＰＤＧＦＲ−βおよびＣＳＦ−１Ｒの強力な阻害剤である。
実施例１の化合物によるチロシンキナーゼの阻害
【表１６】
2009507026.tif 000088
細胞レベルの検定を用いて、以下に記載するように、表８に示す標的分子に対する実施例１の化合物の活性も測定した。
実施例１の化合物で処理した後のＨＭＶＥＣ細胞での標的変調は、ウェスタンブロット（提示せず）によってホスホ−ＶＥＧＦＲ減少で測定すると、ＥＣ５００．０３μＭと、ＶＥＧＦ介在ＶＥＧＦＲ−２リン酸化の阻害を示した。
実施例１の化合物で処理した後のＭｏ７ｅ細胞でのｃ−Ｋｉｔ阻害の分析は、ＥＬＩＳＡによるホスホ−ｃ−Ｋｉｔの減少で測定するとＥＣ５０１．１μＭとｃ−Ｋｉｔリン酸化の阻害を示した。
実施例１の化合物で処理した後のＭＧ６３細胞でのＰＤＧＦＲ−β阻害の分析はＥＬＩＳＡによるホスホ−ＰＤＧＦＲ−βの減少で測定するとＥＣ５００．７μＭと、ホスホ−ＰＤＧＦＲ−βの阻害を示した。
【０２６９】
実施例８８
血管形成の阻害
実施例１の化合物のＶＥＧＦＲ−２に対する効果をさらに研究するために、この化合物をＣＨＯ−ＶＥＧＦマトリゲル血管形成モデルで評価した。
方法：
研究開始前に１１０Ｎｕ／Ｎｕマウス（ｎ＝１０／群）を１週間馴化した。第１日に、マトリゲル０．５ｍＬ中のＶＥＧＦ−ＣＨＯ細胞５×１０６個をマウスの腹部の上部に皮下注射した。第１日に、マウスにｑｄｘ５でビヒクル、実施例１の化合物１０ｍｇ／ｋｇ、実施例１の化合物３０ｍｇ／ｋｇまたは実施例１の化合物１００ｍｇ／ｋｇを経口投与した。５日後、マウスからマトリゲルのプラグを摘出し、含有するヘモグロビン濃度を定量した。
結果：
図１３は、実施例１の化合物１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、および１００ｍｇ／ｋｇで処理後のＣＨＯ−ＶＥＧＦマトリゲルモデルにおけるＶＥＧＦ介在−血管形成の阻害を示すグラフである。図１３に示すように、５日間にわたる本化合物の投与はＶＥＧＦ−介在血管形成を明瞭に阻害した。
【０２７０】
実施例８９
投与計画の効果
実施例１の化合物の投与スケジュールに関する研究は、Ａ３７５Ｍヒトメラノーマ異種移植モデルで、突然変異体Ｂ−Ｒａｆの阻害、腫瘍の応答、および血漿中の化合物濃度との間の関係を評価して行った。
Ａ３７５Ｍモデルでは図７Ａに示すように、実施例１の化合物との間に明白な用量−応答関係が確認された。図７Ａのデータは実施例１の化合物が毎日１００ｍｇ／ｋｇ経口投与で腫瘍退行を誘発し、腫瘍退行は突然変異体Ｂ−Ｒａｆの持続的阻害（図７Ｂのホスホ−ＭＥＫ減少に示される）と関連することを示す。しかし、この投与計画で、マウスの体重は１４日後には開始時点から平均１０％低下するので、実施例１の化合物の３０ｍｇ／ｋｇ および１００ｍｇ／ｋｇ用量レベルを耐容できていない。それ故、最も有効な用量１００ｍｇ／ｋｇを下記方法でさらに評価した：
方法：
実施例８４に示すようにして、Ａ３７５Ｍヒトメラノーマ細胞３×１０６個を体重約２４ｇの１０〜１２週齢雌性Ｎｕ／Ｎｕマウスの右脇腹に皮下投与した。平均腫瘍容積が約２００ｍｍ３に達した時、マウスを腫瘍容積によって一群９匹の４群に無作為化して、実施例１の化合物を用いる処理を開始した。マウスに強制経口投与によって３２日間ビヒクル単独または実施例１の化合物１００ｍｇ／ｋｇを ｑ２ｄ、ｑ３ｄまたはｑ４ｄのスケジュールで２８日間にわたって投与した。
この研究では、担腫瘍マウスのサテライト群には腫瘍の標的変調を監視するために薬剤投与を行った。マウスからｑ２ｄ群では５回投与から、ｑ４ｄ群では３回投与からの様々な時点で腫瘍と血液とを採取した。腫瘍について実施例８４に記載するホスホ−ＭＥＫ濃度のウェスタンブロット分析を行った。血液は薬剤濃度測定に用いた。
結果：
図１４Ａはｑ２ｄ、ｑ３ｄ、またはｑ４ｄ投与計画に従って実施例１の化合物１００ｍｇ／ｋｇで処理したマウスにおけるＡ３７５Ｍメラノーマ腫瘍の腫瘍容積減少平均値を示すグラフである。図１４Ａに示す通り、実施例１の化合物１００ｍｇ／ｋｇをｑ２ｄ、ｑ３ｄまたはｑ４ｄスケジュールで経口投与すると明白な効果を示した。図１４Ｂに示すウェスタンブロット分析は、化合物で処理したマウスの腫瘍ではホスホ−ＭＥＫ濃度がビヒクル処理対照に比較してｑ２ｄ 試料では投与後４８ｈｒまで減少することを示す。ｑ４ｄ試料では、７２ｈｒ頃には腫瘍３種の中で１種のみでホスホ−ＭＥＫ濃度が低下しており、９６ｈｒ頃には化合物処理腫瘍の全てでビヒクル処理腫瘍に近いホスホ−ＭＥＫ濃度を示した。この結果は図７Ｂに示すｑ２ｄスケジュールで得た結果と符合する。
表９に示すように、体重低下から見るとｑ３ｄおよびｑ４ｄスケジュールは被検マウスによりよく耐容される。
Ａ３７５Ｍ異種移植での実施例１の化合物１００ｍｇ／ｍＬの投与実験
【表１７】
2009507026.tif 000089
結論として、標的変調データと効果のデータの両方を考慮すればｑ２ｄまたはｑ３ｄスケジュールは最も効率的な腫瘍退行と最大の耐容をもたらすと思われる。
【０２７１】
実施例９０
標的の血漿濃度研究
実施例８９に記載するように、実施例１の化合物で処理したマウスから血液試料を採取した。その血液試料から薬剤濃度を測定し、その結果を図１５に化合物濃度対時間のグラフで示す。標的変調の閾値薬剤濃度は、図１４Ａと図１４Ｂに示す標的変調データを考慮すれば図１５から推測できる。図１４Ｂに示すように、投与後４８ｈｒまでの全ての時点で、ホスホ−ＭＥＫ濃度は化合物処理腫瘍ではビヒクル処理腫瘍よりも低く、それ故、対応する薬剤濃度はこの閾値よりも高いに違いない。図１４Ｃに示すように、投与後７２および９６ｈｒでは標的変調がなく、それ故、対応する薬剤濃度はこの閾値よりも低いに違いない。結論として、化合物の閾値は、約５００００ｎｇ／ｍＬ〜８００００ｎｇ／ｍＬの範囲内、例えば約７００００ｎｇ／ｍＬ（１３５μＭ）であると推測される。
前記マウス異種移植実験において、標的血漿濃度はインビトロではＡ３７５Ｍ細胞における標的変調のＥＣ５０（．１６μＭ）よりも約１０００倍高いことは注目に値する（表５参照）。実施例１の化合物は血漿中で結合する９９．９％タンパク質よりも大きいから、この相違は概して血漿タンパク質結合で説明されるかもしれない。このことを考慮すれば、遊離薬剤濃度のおおまかな推定値は約０．１３５μＭであり、この値はＡ３７５Ｍ細胞の標的変調から測定されたインビトロ ＥＣ５０値０．１６μＭに近い。
血漿タンパク質結合が実施例１の化合物の活性に及ぼす影響をさらに解明するために、一連のインビトロ実験を行い、本化合物をマウス、ラット、イヌ、サルまたはヒトの５０％血清中でプレ−インキュベーションした後にＡ３７５Ｍ細胞またはＭｏ７ｅ細胞に適用した。ホスホ−ＭＥＫおよびホスホ−ＥＲＫ濃度はＡ３７５Ｍ細胞で測定（突然変異体Ｂ−Ｒａｆ阻害の検定用）後、一夜インキュベーションした。ホスホ−ｃ−Ｋｉｔ濃度はＭｏ７ｅ細胞で測定（ｃ−Ｋｉｔ阻害の検定用）後、４ｈｒインキュベーションした。この検定の結果を表１０に要約する。
各種動物の血清が実施例１の化合物の活性に及ぼす影響
【表１８】
2009507026.tif 000090
表１０のデータは実施例１の化合物と様々な動物種からの血漿タンパク質との相対的結合を評価するために使用でき、またマウスから得た標的血漿濃度をその他の動物種に外挿するための補正因子の根拠として使用できる。例えば、このデータに基づけば、ラットでの標的血漿濃度はマウスより約５倍低く、ヒトでの標的血漿濃度はマウスより約１０倍低いと推測されよう。
【０２７２】
以上に本発明の好ましい態様を説明し、記載したが、本発明の本質と範囲から逸脱せずに様々な変化が可能なことは認識されると思われる。
【図面の簡単な説明】
【０２７３】
【図１】実施例７８に記載する本発明の化合物で処理したマウスにおけるＡ３７５Ｍヒトメラノーマ腫瘍の腫瘍容積減少の平均値を示すグラフである；
【図２】実施例７９に記載する本発明の化合物で処理後４時間（図２Ａ）および２４時間（図２Ｂ）のマウスにおけるＡ３７５Ｍヒトメラノーマ腫瘍細胞中のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達の阻害を示すＰＡＧＥスライドである；
【図３】実施例８０に記載する本発明の化合物で処理したマウスにおけるＨＴ２９Ｐヒト大腸癌腫の腫瘍容積減少の平均値を示すグラフである；
【図４】実施例８１に記載する本発明の化合物で処理後１時間（図４Ａ）、４時間（図４Ｂ）、および２４時間（図４Ｃ）のマウスにおけるＨＴ２９Ｐヒト大腸癌腫細胞中のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達の阻害を示すＰＡＧＥスライドである；
【図５】Ｒａｓ、Ｒａｆ、ＭＥＫ、およびＥＲＫを含むＭＡＰＫシグナル伝達経路、および実施例８２〜８６に記載する実施例１の化合物のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達の阻害点を提示する；
【図６】実施例８３に記載する実施例１の化合物を所定濃度範囲で含む培養液中で４時間インキュベーションした後のＡ３７５Ｍ細胞（図６Ａ）、ＳＫ−ＭＥＬ２細胞（図６Ｂ）およびＣＨＬ−１細胞（図６Ｃ）中、Ｒａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達阻害を示すＰＡＧＥスライドである；
【図７Ａ】実施例８４に記載する実施例１の化合物１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇまたは１００ｍｇ／ｋｇを経口投与したマウスにおけるＡ３７５Ｍ（Ｂ−Ｒａｆ Ｖ６００Ｅ）ヒトメラノーマ腫瘍の腫瘍容積減少平均値の用量作用曲線を示すグラフである；
【図７Ｂ】実施例８４に記載する実施例１の化合物で１４回処理後８時間のマウスにおけるＡ３７５Ｍ腫瘍細胞中のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達阻害を示すＰＡＧＥスライドである；
【図７Ｃ】実施例８４に記載する実施例１の化合物で１４回処理後２４時間のマウスにおけるＡ３７５Ｍ腫瘍細胞中のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達阻害を示すＰＡＧＥスライドである；
【図７Ｄ】実施例８４に記載する実施例１の化合物で１４回処理後２４時間のＡ３７５Ｍ腫瘍細胞中のＲａｆ キナーゼから下流にあるマーカーの変調を示すＰＡＧＥスライドである；
【図８Ａ】実施例８５に記載する実施例１の化合物で処理後のマウスにおけるＭＥＸＦ２７６（Ｂ−ＲａｆＶ６００Ｅ）メラノーマ癌腫の腫瘍容積減少平均値を示すグラフである；
【図８Ｂ】実施例８５に記載する実施例１の化合物で２０回処理後４時間目のマウスにおけるＭＥＸＦ２７６腫瘍細胞中のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達の阻害を示すスライドである；
【図８Ｃ】実施例８５に記載する実施例１の化合物で２０回処理後４時間のＭＥＸＦ２７６腫瘍細胞中のＲａｆキナーゼから下流にあるマーカーの変調を示すＰＡＧＥスライドである；
【図９Ａ】実施例８５に記載する実施例１の化合物で処理したマウスにおけるＭＥＸＦ１３４１（Ｎ−Ｒａｓ Ｑ６１Ｋ）メラノーマ癌腫の腫瘍増殖阻害平均値を示すグラフである；
【図９Ｂ】実施例８５に記載する実施例１の化合物で２０回処理後４時間のマウスにおけるＭＥＸＦ１３４１腫瘍細胞中のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達を示すＰＡＧＥスライドである；
【図９Ｃ】実施例８５に記載する実施例１の化合物で２０回処理後４時間のＭＥＸＦ１３４１腫瘍細胞中のＲａｆ キナーゼから下流にあるマーカーの変調を示すＰＡＧＥスライドである；
【図１０Ａ】実施例８６に記載する実施例１の化合物で処理したマウスにおけるＨＣＴ−１１６（Ｋ−Ｒａｓ−Ｇ１３Ｄ）結腸直腸癌腫の腫瘍容積減少平均値を示すグラフである；
【図１０Ｂ】実施例８６に記載する実施例１の化合物で３回処理後４時間のマウスにおけるＨＣＴ−１１６腫瘍細胞のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達の阻害を示すＰＡＧＥスライドである；
【図１０Ｃ】実施例８６に記載する実施例１の化合物で３回処理後８時間のマウスにおけるＨＣＴ−１１６腫瘍細胞中のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達の阻害を示すＰＡＧＥスライドである；
【図１０Ｄ】実施例８６に記載する実施例１の化合物で３回処理後２４時間のマウスにおけるＨＣＴ−１１６腫瘍細胞中のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達の阻害を示すＰＡＧＥスライドである；
【図１１】実施例８６に記載する実施例１の化合物で処理したマウスにおけるＨＴ−２９（Ｂ−ＲａｆＶ６００Ｅ）結腸直腸癌腫の腫瘍容積減少平均値を示すグラフである；
【図１２Ａ】実施例８６に記載する実施例１の化合物で処理したマウスにおけるＭＶ４−１１（ＦＬＴ３ ＩＴＤ）急性単球白血病癌腫の増殖阻害平均値を示すグラフである；
【図１２Ｂ】実施例８６に記載する実施例１の化合物で３回処理後４時間のマウスにおけるＭＶ４−１１腫瘍細胞中のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達を示すＰＡＧＥスライドである；
【図１３】実施例８８に記載する実施例１の化合物１０ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、および１００ｍｇ／ｋｇで処理した後のＣＨＯ−ＶＥＧＦ−マトリゲルモデルにおけるＶＥＧＦ介在血管形成の阻害を示すグラフである；
【図１４Ａ】ｑ２ｄ、ｑ３ｄ、またはｑ４ｄ投与計画に従って、実施例８９に記載する実施例１の化合物１００ｍｇ／ｋｇで処理したマウスにおけるＡ３７５Ｍメラノーマ腫瘍の腫瘍容積減少平均値を示すグラフである；
【図１４Ｂ】実施例８９に記載する実施例１の化合物をｑ２ｄ投与計画により５回処理後８時間、２４時間、および４８時間にマウスにおけるＡ３７５Ｍ腫瘍細胞中のＲａｆキナーゼから下流へのシグナル伝達の阻害を示すＰＡＧＥスライドである；
【図１４Ｃ】実施例８９に記載する実施例１の化合物をｑ４ｄ投与計画により３回処理後４８時間、７２時間、および９６時間のマウスにおけるＡ３７５Ｍ腫瘍細胞中のＲａｆ キナーゼから下流へのシグナル伝達の阻害を示すＰＡＧＥスライドである；および
【図１５】実施例９０に記載する種々の濃度の実施例１の化合物でのＡ３７５Ｍ腫瘍細胞の処理と、その化合物の長時間血中濃度と、標的変調の閾値と、の間の関係を示すグラフである。
【図１】
2009507026.tif 000097
【図２Ａ】
2009507026.tif 000098
【図２Ｂ】
2009507026.tif 000099
【図３】
2009507026.tif 000100
【図４Ａ】
2009507026.tif 000101
【図４Ｂ】
2009507026.tif 000102
【図４Ｃ】
2009507026.tif 000103
【図５】
2009507026.tif 000104
【図６】
2009507026.tif 000105
【図７Ａ】
2009507026.tif 000106
【図７Ｂ】
2009507026.tif 000107
【図７Ｃ】
2009507026.tif 000108
【図７Ｄ】
2009507026.tif 000109
【図８Ａ】
2009507026.tif 000110
【図８Ｂ】
2009507026.tif 000111
【図８Ｃ】
2009507026.tif 000112
【図９Ａ】
2009507026.tif 000113
【図９Ｂ】
2009507026.tif 000114
【図９Ｃ】
2009507026.tif 000115
【図１０Ａ】
2009507026.tif 000116
【図１０Ｂ】
2009507026.tif 000117
【図１０Ｃ】
2009507026.tif 000118
【図１０Ｄ】
2009507026.tif 000119
【図１１】
2009507026.tif 000120
【図１２Ａ】
2009507026.tif 000121
【図１２Ｂ】
2009507026.tif 000122
【図１３】
2009507026.tif 000123
【図１４Ａ】
2009507026.tif 000124
【図１４Ｂ】
2009507026.tif 000125
【図１４Ｃ】
2009507026.tif 000126
【図１５】
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【国際調査報告】
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