(57)【要約】  保護基により向上した水溶性がプロドラッグに付与され、プロドラッグが、抗体などの細胞結合試薬に結合することができるスルフィドまたはジスルフィドなどの部分も有する、フェニルスルホン酸含有カルバメートを含有する開裂可能な保護基を有する抗腫瘍性抗生物質ＣＣ−１０６５の類似体のプロドラッグ。こうしたプロドラッグ結合体の治療的使用も記載されているが、細胞毒性剤のこうしたプロドラッグは、細胞毒性プロドラッグを特異的細胞集団に送達し、標的化された様式において細胞毒への酵素変換をすることができるので、治療的用途を有している。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＣ−１０６５の類似体を含むプロドラッグであり、分子のアルキル化部分のフェノール基は前記プロドラッグの水溶性を増加させる保護基により保護され、ならびに前記プロドラッグはさらに細胞結合剤に前記プロドラッグを共役させることができるリンカーを含み、前記保護基がカルバマートを含有するスルホン酸であることを特徴とする、プロドラッグ。
【請求項２】
ＣＣ−１０６５の類似体が、第一サブユニットのピロール部分の第２級アミノ基から第二サブユニットのＣ−２カルボキシルへのアミド結合を介して、式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（ＩＶ）、（Ｖ）、（ＶＩ）、（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、（ＩＸ）、（Ｘ）、または（ＸＩ）の第二サブユニットに共有結合されている式（Ｉ）の第一サブユニットから形成される類似体、
［式（Ｉ）は以下：
【化１】
2009529030.tif 000014
の通りであり、
式（ＩＩ）−（ＸＩ）は以下：
【化２】
2009529030.tif 000015
2009529030.tif 000016
［式中、Ｙは、ハロゲン化物（フッ化物、塩化物、臭化物、またはヨウ化物）、メタンスルホネート、パラトルエンスルホネート、トリフルオロメタンスルホネート、モノニトロ、またはジニトロフェノレートから選択される脱離基を表し、
Ｒ、Ｒ’、Ｒ１−Ｒ６はそれぞれ独立に、水素、Ｃ１−Ｃ３直鎖アルキル、メトキシ、ヒドロキシル、第１級アミノ、第２級アミノ、第３級アミノもしくはアミド、またはＲ、Ｒ’、Ｒ１−Ｒ６の少なくとも１つがリンカーであるという条件で、プロドラッグの細胞結合剤への連結を可能にするリンカーであり、
ならびにＲ７は、前記スルホン酸含有カルバメート保護基である。］
の通りである。］
または医薬として許容できるこれらの塩、水和物、もしくは水和塩、またはこれらの化合物、または化合物の光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、もしくはエナンチオマーの多形結晶構造体からなる群から選択される、請求項１に記載のプロドラッグ。
【請求項３】
Ｒ７が、一般式ＸＩＩ：
【化３】
2009529030.tif 000017
［式中、Ｒ９は、Ｈであり、または分枝、環状、もしくは直鎖アルキルであり、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は、同じであるか異なっており、少なくとも１つは、−Ｘ−ＳＯ３−Ｍ＋基（Ｍ＋は、Ｈ＋であり、またはＩＡ族の原子由来の陽イオンであり、およびＸは、直接結合であり、またはＣ１からＣ４の直鎖もしくは分枝アルキレン、アルケニル、もしくはアルキニル、−Ｏアルキル−、−Ｓアルキル−、およびアミノアルキルから選択されるスペーサーである。）であり、および他のＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、またはＲ１３は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６の分枝もしくは直鎖アルキル、−Ｏアルキル、−Ｓアルキル、ヒドロキシル、第１級アミノ、第２級アミノ、またはアミド、ハロゲン化物、ニトロ、アジドである。］
のフェニルスルホン酸含有カルバメートである、請求項２のプロドラッグ。
【請求項４】
Ｒ９＝Ｈである、請求項３に記載のプロドラッグ。
【請求項５】
Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３の１つが−Ｘ−ＳＯ３−Ｍ＋であり、および他がＨである、請求項３または４に記載のプロドラッグ。
【請求項６】
Ｒ’、Ｒ１−Ｒ６が水素であり、およびＲがリンカーである、請求項２から５に記載のプロドラッグ。
【請求項７】
前記リンカーが、チオール結合、スルフィド結合、またはジスルフィド結合を含有する置換基を含む、請求項１から６のいずれか一項に記載のプロドラッグ。
【請求項８】
前記リンカーが、式−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎ−（式中、ｎは、１から２０００の整数である。）のポリエチレングリコールを含む、請求項１から７のいずれか一項に記載のプロドラッグ。
【請求項９】
前記リンカー基が、式：
−Ｇ−Ｄ−（Ｚ）ｐ−Ｓ−Ｚ’
［式中、
Ｇは、単結合もしくは二重結合、−Ｏ−、−Ｓ−、または−ＮＴ−であり、
Ｄは、単結合、または−Ｅ−、−Ｅ−ＮＴ−、−Ｅ−ＮＴ−Ｆ−、−Ｅ−Ｏ−、−Ｅ−Ｏ−Ｆ−、−Ｅ−ＮＴ−ＣＯ−、−Ｅ−ＮＴ−ＣＯ−Ｆ−、−Ｅ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｅ−、−Ｅ−ＣＯ−Ｆ、−Ｅ−Ｓ−、−Ｅ−Ｓ−Ｆ−、−Ｅ−ＮＴ−Ｃ−Ｓ−、−Ｅ−ＮＴ−ＣＳ−Ｆ−であり、
（Ｔは、Ｈであり、またはＣ１−Ｃ６の分枝もしくは直鎖アルキルであり、
ＥおよびＦは、同じであるか異なっており、および独立に、直鎖または分枝−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−アルキル−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉシクロアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ複素環（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉヘテロアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉシクロアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ複素環（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉヘテロアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−シクロアルキル−アルキル−、−アルキル−シクロアルキル−、−複素環−アルキル−、−アルキル−複素環−、アルキル−アリール−、−アリール−アルキル−、−アルキル−ヘテロアリール−、−ヘテロアリール−アルキル−から選択され、
ここで、ｉおよびｊは、同じであるか異なっており、整数であり、および独立に、０、１から２０００から選択される。）
Ｚは、直鎖または分枝−アルキル−であり、
ｐは、０または１であり、
Ｚ’は、Ｈ、ＣＯＲなどのチオール保護基、Ｒ２０、またはＳＲ２０（Ｒ２０は、Ｈ、メチル、アルキル、場合により置換されているシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、または複素環を表す。）を表す。］
を有する、請求項１から８のいずれか一項に記載のプロドラッグ。
【請求項１０】
Ｇが、単結合または−ＮＴ−である、請求項９に記載のプロドラッグ。
【請求項１１】
Ｇが−ＮＴ−である、請求項９または１０に記載のプロドラッグ。
【請求項１２】
Ｄが−ＣＯ−Ｅ−である、請求項９、１０、または１１に記載のプロドラッグ。
【請求項１３】
Ｅが、直鎖または分枝−アルキル−である、請求項９から１２のいずれか一項に記載のプロドラッグ。
【請求項１４】
ｐが０である、請求項９から１３のいずれか一項に記載のプロドラッグ。
【請求項１５】
Ｚ’が、ＨまたはＳＲ２０（Ｒ２０は、アルキルまたはヘテロアリールを表す。）である、請求項９から１４のいずれか一項に記載のプロドラッグ。
【請求項１６】
前記リンカーが、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｍＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍＳＺ、（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｍＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｍ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍ  （ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＳＺ、（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｍ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｍＣＨ（Ｍｅ）ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍＣＨ（Ｍｅ）ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｍＣＨ（Ｍｅ）ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｍ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＣＨ（Ｍｅ）ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＣＨ（Ｍｅ）ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｍ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＣＨ（Ｍｅ）ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｍＣ（Ｍｅ）２ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍＣ（Ｍｅ）２ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｍＣ（Ｍｅ）２ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｍ  （ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＣ（Ｍｅ）２ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＣ（Ｍｅ）２ＳＺ、（ＣＨ２）ｐ  Ｏ（ＣＨ２）ｍ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＣ（Ｍｅ２）ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍＳＺ、（ＣＨ２）ｐＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍＣＨ（Ｍｅ）ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＣＨＭｅＳＺ、（ＣＨ２）ｐＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍＣＭｅ２ＳＺ、または（ＣＨ２）ｐＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＣ（Ｍｅ）２ＳＺ（Ｚは、Ｈ、Ａｃなどのチオール保護基、Ｒ８、またはＳＲ８（Ｒ８は、メチル、直鎖アルキル、分枝アルキル、環状アルキル、単純または置換アリール、または複素環を表す。）を表し、ならびにｍは０から１０の整数を表し、ｎは０から２０００の整数を表し、ｐは０から１０の整数を表す。）から選択される、請求項１から１５のいずれか一項に記載のプロドラッグ。
【請求項１７】
前記リンカーが、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＳＨ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）２Ｃ（Ｍｅ）２ＳＨ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＳＳＣＨ３、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＳＨ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＣ（Ｍｅ）２ＳＳＣＨ３、および（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＳＳＭｅから選択される、請求項１から１６のいずれか一項に記載のプロドラッグ。
【請求項１８】
式：
【化４】
2009529030.tif 000018
（式中、Ｙ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲは、請求項２から１７において定義した通りであり、ならびにＲは、請求項７から１７において定義した通りのリンカーである。）
または医薬として許容できるこれらの塩、水和物、もしくは水和塩、またはこれらの化合物、または化合物の光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、もしくはエナンチオマーの多形結晶構造体からなる、請求項１から１７のいずれか一項に記載のプロドラッグ。
【請求項１９】
（Ｓ）−Ｎ−［２−｛（１−クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−５−［（３−ヒドロキシスルホニフェニル）アミノカルボニルオキシ］−３Ｈ−ベンズ（ｅ）インドール−３−イル｝カルボニル］−１Ｈ−インドール−５−イル］−５−［（３−メチルジチオプロパノイル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド、
（Ｓ）−Ｎ−［２−｛（１−クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−５−［（３−ヒドロキシスルホニフェニル）−アミノカルボニルオキシ］−３Ｈ−ベンズ（ｅ）インドール−３−イル｝カルボニル］−１Ｈ−インドール−５−イル］−５−［（３−メルカプトプロパノイル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド
（Ｓ）−Ｎ−［２−｛（１−クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−５−［（３−ヒドロキシスルホニルメチルフェニル）アミノカルボニルオキシ］−３Ｈ−ベンズ（ｅ）インドール−３−イル｝カルボニル］−１Ｈ−インドール−５−イル］−５−｛［３−（２−ピリジルジチオ）−プロパノイル］−アミノ｝−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド、
（Ｓ）−Ｎ−［２−｛（１−クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−５−［（３−ヒドロキシスルホニルメチルフェニル）アミノカルボニル−オキシ］−３Ｈ−ベンズ（ｅ）インドール−３−イル｝カルボニル］−１Ｈ−インドール−５−イル］−５−［（３−メルカプトプロパノイル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド、
（Ｓ）−Ｎ−［２−｛（１−クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−５−［（３−ヒドロキシスルホニルメチルフェニル）アミノカルボニルオキシ］−３Ｈ−ベンズ（ｅ）インドール−３−イル｝カルボニル］−１Ｈ−インドール−５−イル］−５−［（３−メルカプトプロパノイル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド、
または医薬として許容できるこれらの塩、水和物、もしくは水和塩、またはこれらの化合物、または化合物の光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、もしくはエナンチオマーの多形結晶構造体である、請求項１から１８のいずれか一項に記載のプロドラッグ。
【請求項２０】
式：
【化５】
2009529030.tif 000019
（式中、Ｙ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲは、請求項２から１７において定義した通りであり、ならびにＲは、請求項７から１７において定義した通りのリンカーである。）、
または医薬として許容できるこれらの塩、水和物、もしくは水和塩、またはこれらの化合物、または化合物の光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、もしくはエナンチオマーの多形結晶構造体からなる、請求項１から１７のいずれか一項に記載のプロドラッグ。
【請求項２１】
（Ｓ）−３−（（１−（クロロメチル）−３−（５−（３−メルカプトプロパンアミド）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イルオキシ）カルボニルアミノ）ベンゼンスルホン酸、
（Ｓ）−３−（（１−（クロロメチル）−３−（５−（３−（メチルジスルファニル）プロパンアミド）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イルオキシ）カルボニルアミノ）ベンゼンスルホン酸、
または医薬として許容できるこれらの塩、水和物、もしくは水和塩、またはこれらの化合物、または化合物の光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、もしくはエナンチオマーの多形結晶構造体である、請求項１から１７、２０のいずれか一項に記載のプロドラッグ。
【請求項２２】
請求項１から２１のいずれか一項に記載のプロドラッグの１つ以上に、連結基を介して連結している細胞結合剤を含むプロドラッグ結合体。
【請求項２３】
前記細胞結合剤が、抗体およびこの断片、インターフェロン、リンフォカイン、ビタミン、ホルモン、ならびに成長因子から選択される、請求項２２に記載のプロドラッグ結合体。
【請求項２４】
前記細胞結合剤が、抗体またはこの断片である、請求項２２または２３に記載のプロドラッグ結合体。
【請求項２５】
連結基が、チオール、スルフィド、またはジスルフィドに対して反応性のある官能基に連結しているリンカーを含む、請求項２２、２３、または２４に記載のプロドラッグ結合体。
【請求項２６】
請求項１から２１のいずれか一項に記載のプロドラッグ、および医薬として許容できる担体を含む医薬組成物。
【請求項２７】
請求項２２から２５のいずれか一項に記載の結合体、および医薬として許容できる担体を含む医薬組成物。
【請求項２８】
癌を治療する薬物の調製のための、請求項１から２１のいずれか一項に記載のプロドラッグの使用。
【請求項２９】
癌を治療する薬物の調製のための、請求項２２から２５のいずれか一項に記載の結合体の使用。
【請求項３０】
スルホン酸含有カルバメート官能基により、対応するＣＣ−１０６５の類似体のアルキル化部分のフェノール基を保護するステップを含む、請求項１から２１のいずれか一項に記載の化合物の調製方法。
【請求項３１】
該反応が、ＣＤＩ／ＤＭＡ（カルボニルジイミダゾール／ジメチルアミン）、および式：
【化６】
2009529030.tif 000020
（式中、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は、請求項３において定義した通りである。）
の対応するアミノ−フェニルスルホネート誘導体を用いて行われる、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
得られる生成物を加水分解するステップをさらに含む、請求項３０または３１に記載の調製方法。
【請求項３３】
所望の生成物を単離するステップをさらに含む、請求項３０から３２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３４】
スルフィド基、ジスルフィド基、またはチオール基を含む、請求項１から２１のいずれか一項において定義した通りのＣＣ−１０６５の類似体を、スルフィド、ジスルフィド、またはチオールに対して反応性のある官能基を含む細胞結合剤と反応させ、スルフィドまたはジスルフィドの共有結合を介して、類似体と細胞結合剤を連結させるステップを含む、請求項２２から２５のいずれか一項に記載の結合体の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、細胞毒性剤の新規プロドラッグ、およびこれらの治療的使用に関する。より詳細には、本発明は、ＣＣ−１０６５の類似体であり、細胞結合剤へ化学的に連結する部分、およびｉｎ  ｖｉｖｏで開裂する保護基の両方を含む細胞毒性剤の新規プロドラッグに関する。該プロドラッグは、化学的に細胞結合剤に連結して、治療剤をｉｎ  ｖｉｖｏで活性化および放出し、ならびに標的方法において特異的細胞集団に送達することを可能にすることができる。
【背景技術】
【０００２】
単クローン抗体−薬物結合体を用いて腫瘍細胞を標的にすることを対象とする報告が数多く示されている（Ｓｅｌａ  ｅｔ  ａｌ、Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ、ｐｐ．１８９−２１６（Ｃ．Ｖｏｇｅｌ、ｅｄ．１９８７）；Ｇｈｏｓｅ  ｅｔ  ａｌ、Ｔａｒｇｅｔｅｄ  Ｄｒｕｇｓ、ｐｐ．１−２２（Ｅ．Ｇｏｌｄｂｅｒｇ、ｅｄ．１９８３）；Ｄｉｅｎｅｒ  ｅｔ  ａｌ、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ｐｐ．１−２３（Ｊ．Ｒｏｄｗｅｌｌ、ｅｄ．１９８８）；Ｐｉｅｔｅｒｓｚ  ｅｔ  ａｌ、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ｐｐ．２５−５３（Ｊ．Ｒｏｄｗｅｌｌ、ｅｄ．１９８８）；Ｂｕｍｏｌ  ｅｔ  ａｌ、Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｍｅｄｉａｔｅｄ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ｐｐ．５５−７９（Ｊ．Ｒｏｄｗｅｌｌ、ｅｄ．１９８８）；Ｇ．Ａ．Ｐｉｅｔｅｒｓｚ＆Ｋ．Ｋｒａｕｅｒ、２  Ｊ．Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ、１８３−２１５（１９９４）；Ｒ．Ｖ．Ｊ．Ｃｈａｒｉ、３１  Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｓ．、８９−１０４（１９９８）；Ｗ．Ａ．Ｂｌａｔｔｌｅｒ＆Ｒ．Ｖ．Ｊ．Ｃｈａｒｉ、Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ａｇｅｎｔｓ、Ｆｒｏｎｔｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ、３１７−３３８、ＡＣＳ  Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  Ｓｅｒｉｅｓ  ７９６；およびＩ．Ｏｊｉｍａ  ａｔ  ａｌ  ｅｄｓ、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ  ２００１）。メトトレキセート、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ビンクリスチン、ビンブラスチン、メルファラン、マイトマイシンＣ、クロランブシル、カリケアマイシン、およびメイタンシノイドなどの細胞毒性薬は、様々なマウスの単クローン抗体に結合されてきた。一部の例では、薬物分子は、血清アルブミン（Ｇａｒｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ、４６Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２４０７−２４１２（１９８６）；Ｏｈｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ、２３  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．ｌｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．８１−８６（１９８６）；Ｅｎｄｏ  ｅｔ  ａｌ、４７  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１０７６−１０８０（１９８０））、デキストラン（Ｈｕｒｗｉｔｚ  ｅｔ  ａｔ、２  Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２５−３５（１９８０）；Ｍａｎａｂｉ  ｅｔ  ａｌ、３４  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．２８９−２９１（１９８５）；Ｄｉｌｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ、４６  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４８８６−４８９１（１９８６）；およびＳｈｏｖａｌ  ｅｔ  ａｌ、８５  Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２７６−８２８０（１９８８））、またはポリグルタミン酸（Ｔｓｕｋａｄａ  ｅｔ  ａｌ、７３  Ｊ．Ｎａｔｌ．Ｃａｎｃ．Ｉｎｓｔ．７２１−７２９（１９８４）；Ｋａｔｏ  ｅｔ  ａｌ、２７  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．１６０２−１６０７（１９８４）；Ｔｓｕｋａｄａ  ｅｔ  ａｌ、５２  Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  １１１−１１６（１９８５））など、中間の担体分子を介して抗体分子に連結した。
【０００３】
開裂可能および開裂不可能な両リンカーを含め、多様なリンカーが、現在、こうした免疫結合体の調製に使用可能である。しかし、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞毒性試験により、抗体−薬物の結合体は、結合されていない遊離型薬物と同様の細胞毒の効力をもたらすことは稀であることが明らかになった。これにより、薬物分子が結合抗体から放出される機序は非常に非効率的であることが示唆された。免疫毒素の分野における初期の研究により、ジスルフィド架橋を介して単クローン抗体と触媒活性タンパク毒との間に形成される結合体は、他のリンカーを含有する結合体よりも細胞毒性であることが示された（Ｌａｍｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ、２６０  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．１２０３５−１２０４１（１９８５）；Ｌａｍｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ、Ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎｓ  １７５−２０９（Ａ．Ｆｒａｎｋｅｌ、ｅｄ．１９８８）；Ｇｈｅｔｉｅ  ｅｔ  ａｌ、４８  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．２６１０−２６１７（１９８８））。改良されたこの細胞毒性は、抗体分子と該毒素との間のジスルフィド結合の効率的な開裂に寄与する還元グルタチオンの細胞内の高濃度に起因していた。メイタンシノイドおよびカリケアマイシンは、ジスルフィド結合を介して単クローン抗体に連結した、高細胞毒性薬物の最初の例であった。これらの薬物の抗体結合体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける高い効力、およびマウスにおけるヒト腫瘍の異種移植モデルにおいて例外的な抗腫瘍活性を有することが示された（Ｒ．Ｖ．Ｊ．Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．、５２  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、１２７−１３１（１９９２）；Ｃ．Ｌｉｕ  ｅｔ  ａｌ．、９３、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、８６１８−８６２３（１９９６）；Ｌ．Ｍ．Ｈｉｎｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．、５３、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、３５３６−３５４２（１９９３）；およびＰ．Ｒ．Ｈａｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ、１３、ＢｉｏＣｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．、４０−４６（２００２））。
【０００４】
こうした細胞毒性結合体の調製のための魅力的な候補はＣＣ−１０６５であり、ＣＣ−１０６５はストレプトマイセス・ゼレンシス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ  ｚｅｌｅｎｓｉｓ）の培養ブロスから単離される、効力ある抗腫瘍性抗生物質である。ＣＣ−１０６５は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの効力が、ドキソルビシン、メトトレキセート、およびビンクリスチンなど一般に使用される抗癌薬の約１０００倍である（Ｂ．Ｋ．Ｂｈｕｙａｎ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、４２、３５３２−３５３７（１９８２））。
【０００５】
ＣＣ−１０６５（化合物１、図１Ａ）の構造は、Ｘ線結晶学により決定された（Ｍａｒｔｉｎ、Ｄ．Ｇ．ｅｔ  ａｌ、３３  Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ  ９０２−９０３（１９８０）、およびＣｈｉｄｅｓｔｅｒ、Ｃ．Ｇ．、ｅｔ  ａｌ、１０３  Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．７６２９−７６３５（１９８１））。ＣＣ−１０６５分子は、アミド結合により連結された３つの置換ピロロインドール部分からなる。サブユニット「Ａ」は、分子において不斉炭素のみを含有するシクロプロピル環を有している。これらの炭素の相対配置だけがＸ線データから入手可能であって、絶対配置は、キラル試薬としてＤＮＡを用いることにより、３ｂ−Ｒ、４ａ−Ｓと推測された（Ｈｕｒｌｅｙ、Ｌ．Ｈ．ｅｔ  ａｌ、２２６  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ８４３−８４４（１９８４））。ＣＣ−１０６５のサブユニット「Ｂ」および「Ｃ」は、同一のピロロインドール部分である。
【０００６】
ＣＣ−１０６５の細胞毒の効力は、このアルキル化活性、およびこのＤＮＡ結合活性またはＤＮＡ挿入活性と相関している。これらの２つの活性は分子の別の部分に存在する。したがって、アルキル化活性はシクロプロパピロロインドール（ＣＰＩ）サブユニットに含有されており、ＤＮＡ結合活性は２つのピロロインドールサブユニットに存在している（図１Ａ）。
【０００７】
しかし、ＣＣ−１０６５は、細胞毒性剤として特定の魅力的な特徴を有しているが、治療的使用において限界がある。マウスへのＣＣ−１０６５の投与により遅延性肝毒性が引き起こされ、静脈内の単回投与１２．５μｇ／ｋｇの後５０日目に致死に至った（Ｖ．Ｌ．Ｒｅｙｎｏｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ、ＸＸＩＸ、３１９−３３４（１９８６））。これにより遅延性毒性を引き起こすことがない類似体を開発する努力に拍車がかかり、ＣＣ−１０６５をモデルにした、より単純な類似体の合成が記載された（Ｍ．Ａ．Ｗａｒｐｅｈｏｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、３１、５９０−６０３（１９８８））。別の系列の類似体において、ＣＰＩ部分はシクロプロパベンゾインドール（ＣＢＩ）部分に置き換えられた（Ｄ．Ｌ．Ｂｏｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、５５、５８２３−５８３３、（１９９０）、Ｄ．Ｌ．Ｂｏｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、ＢｉｏＯｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．、１、１１５−１２０（１９９１））。これらの化合物は、マウスにおいて遅延性毒性を引き起こすことなく、親薬物のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの高い効力を維持する。ＣＣ−１０６５と同様に、これらの化合物は、共有結合的な方法においてＤＮＡの副溝に結合して細胞死を引き起こすアルキル化試薬である。しかし、最も有望な類似体の臨床評価であるＡｄｏｚｅｌｅｓｉｎ  ａｎｄ  Ｃａｒｚｅｌｅｓｉｎにより期待はずれの結果がもたされた（Ｂ．Ｆ．Ｆｏｓｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．、Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎａｌ  Ｎｅｗ  Ｄｒｕｇｓ、１３、３２１−３２６（１９９６）；Ｉ．Ｗｏｌｆｆ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２、１７１７−１７２３（１９９６））。これらの薬物は、これらの高い全身的毒性により、乏しい治療効果を示す。
【０００８】
ＣＣ−１０６５類似体の治療有効性は、腫瘍部位へ標的送達を介するｉｎ  ｖｉｖｏ分布を変えることにより大きく向上させることができるため、非標的組織に対する毒性が低くなり、したがって全身的毒性が低くなる。この目標を達成するため、腫瘍細を特異的に標的とする、細胞結合剤を用いたＣＣ−１０６５の類似体および誘導体の結合体が記載された（米国特許５４７５０９２；同５５８５４９９；同５８４６５４５）。これらの結合体は、通常、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの標的特異性が高い細胞毒性、およびマウスにおけるヒト腫瘍異種移植モデルにおいて例外的な抗腫瘍活性を示す（Ｒ．Ｖ．Ｊ．Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５５、４０７９−４０８４（１９９５））。
【０００９】
細胞結合剤は、通常水性媒体にしか溶解せず、大抵水溶液中に蓄積される。したがって、これらの類似体は、細胞結合剤との効率的な反応、およびこれに続く水溶液における剤形を可能にするのに十分な水溶性を有するべきである。さらに、細胞結合剤が結合して有用な保管寿命を有するためには、これらの細胞結合剤に連結するＣＣ−１０６５類似体が水溶液中で長期間安定であることが重要である。
【００１０】
これまでに記載したＣＣ−１０６５類似体（例えば、図１Ｂおよび１Ｃを参照）は、水中で僅かに溶解するだけである。ＣＣ−１０６５類似体の乏しい溶解性により、細胞結合剤との結合反応は、現在、極めて希釈な水溶液中で行わなければならない。したがって、これらのプロドラッグは、親薬物と比較して、向上した水溶性を有するべきである。
【００１１】
また、これまでに記載されたＣＣ−１０６５類似体は、次の理由により、水溶液中で非常に不安定である。薬物のｓｅｃｏ−形態がシクロプロピル形態に自発的に転換し、シクロプロピル形態が次いで、存在する場合、ＤＮＡをアルキル化する可能性がある。しかし、シクロプロピル形態と水との競争反応の結果、シクロプロピル環を開環して、不活性であるヒドロキシ化合物を生成する。したがって、例えば、ＣＣ−１０６５類似体のプロドラッグの開発により、ＣＣ−１０６５類似体の反応部分を保護して、水溶液中のこれらの有用寿命を延長する必要がある。
【００１２】
したがって、水溶液中の貯蔵に非常に安定なＣＣ−１０６５類似体のプロドラッグを開発する必要がある。好ましくは、これらのプロドラッグは、ｉｎ  ｖｉｖｏだけで活性薬物に変換するべきである。プロドラッグは、好ましくは、患者に注入されると活性薬物に効率的に転換するべきである。
【００１３】
カルゼレシンは、アドゼレシンにおけるフェノール基がフェニルカルバメートとして保護されているプロドラッグである（Ｌ．Ｈ．Ｌｉ  ｅｔ  ａｌ．、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５２、４９０４−４９１３（１９９２））。しかし、このプロドラッグは、治療的使用にはあまりにも変化し易い上、親薬物と比較して、水溶性が増加する余地がない。第二の例において、ＣＣ−１０６５類似体のフェノール残基はグリコシル化されて、プロドラッグが生成された（米国特許５６４６２９８）。しかし、このプロドラッグは、ｉｎ  ｖｉｖｏで活性薬物に変換せず、細菌源由来の酵素を追加投与して細胞毒性形態に変換させることが必要である。
【００１４】
水溶性のプロドラッグに変換した、ＣＣ−１０６５とは関係のない抗癌剤の一部の例がある。該抗癌剤イリノテカンにおいて、フェノール基は４−ピペリジノ−ピペリジノカルバメートにより保護されている。この保護基は薬物に水溶性を与えることが報告された。さらに、該プロドラッグは、おそらく、ヒト血清、腫瘍組織、および一部の器官において生来存在する酵素カルボキシルエステラーゼにより、ヒトにおけるｉｎ  ｖｉｖｏで活性薬物に容易に変換する（Ａ．Ｓｐａｒｒｅｂｏｏｍ、４、Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、２７４７−２７５４（１９９８）、Ｌ．Ｐ．Ｒｉｖｏｒｙ  ｅｔ  ａｌ．、５２、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、１１０３−１１１１（１９９６））。
【００１５】
同様に、抗癌剤リン酸エトポシドは、ホスフェート保護基を有し、おそらく、内因性アルカリホスファターゼにより加水分解を介してｉｎ  ｖｉｖｏで活性薬物に急速に変換するプロドラッグの例である（Ｓ．Ｚ．Ｆｉｅｌｄｓ  ｅｔ  ａｌ．、１  Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、１０５−１１１（１９９５））。
【００１６】
近年、Ｒ．Ｙ．Ｚｈａｏ  ｅｔ  ａｌ．（ＵＳ６７５６３９７Ｂ２）は、分子のアルキル化部分のフェノール環上にカルバメート置換基またはホスフェート置換基を含むＣＣ−１０６５類似体の水溶性プロドラッグの第１種を開示した。本発明者らは、これらの種類の置換基を含有する化合物の溶解性は、生理学的条件下で満足のいかないことを発見した。さらに、これらの化合物は、生物活性のある形態に変換するのに、ホスファターゼなどの特定作用物質の作用が必要である。したがって、一般的に、水溶液中の溶解性が増加した、および／または生理学的条件において容易に溶解できるＣＣ−１０６５の類似体が必要である。その上、生物活性を保存しながら、水溶液中における細胞結合剤との結合を促進するのが非常に望ましい。さらに、毒性副作用を低減するため、主に所望の治療部位で、好ましくは生理的ｐＨでの自発的加水分解により細胞毒性薬に変換するプロドラッグの形態におけるＣＣ−１０６５類似体を提供するのが有利であると思われる。以下の開示および実施例を読めば当業者には明らかとなるように、これらの利点全て、およびそれ以上の利点が本明細書に記載の本発明により提供される。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
本発明の目的は、水性媒体中における溶解性が向上したＣＣ−１０６５類似体のプロドラッグを提供することである。この目的および他の目的は、分子のアルキル化部分のフェノール基が、酸性水溶液中の貯蔵に安定な薬物を与える官能基で保護されているプロドラッグを提供することにより達成された。さらに、該保護基により、保護されていない類似体と比較して増加した水溶性が薬物に与えられる。該保護基は、生理的ｐＨでｉｎ  ｖｉｖｏにおいて容易に開裂して、対応する活性薬物を生成する。本明細書に記載のプロドラッグにおいて、フェノール置換基は、生理的ｐＨで電荷を有するフェニルスルホン酸含有カルバメートとして保護され、したがって、向上した水溶性を有する。水溶性をさらに向上させるため、任意選択のポリエチレングリコールスペーサーを、インドリルサブユニットとジスルフィド基などの開裂可能な結合との間のリンカーに導入することができる。このスペーサーの導入により、薬物の効力が変化することはない。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
より詳細な本発明の実施形態により、水溶性および安定性を向上させ、生理的ｐＨでｉｎ  ｖｉｖｏにおいて開裂できる保護基を有するｓｅｃｏ−シクロプロパベンズインドール含有細胞毒性薬の類似体を含むプロドラッグが提供される。この詳細な実施形態のプロドラッグは、アミド結合により、第一サブユニットのピロール部分の第２級アミノ基から第二サブユニットのＣ−２カルボキシルに連結している第一および第二のサブユニットを有している。第一サブユニットは式（Ｉ）として表され、式（ＩＩ）−（ＸＩ）、または医薬として許容できるこれらの塩、水和物、もしくは水和塩、またはこれらの化合物もしくはこれらの光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、もしくはエナンチオマーの多形結晶構造体の中から選択される第二サブユニットに結合している。
【００１９】
【化７】
2009529030.tif 000002
2009529030.tif 000003
式中、
Ｙは、これらに限定されないが、ハロゲン化物（フッ化物、塩化物、臭化物、またはヨウ化物）、メタンスルホネート、パラ−トルエンスルホネート、トリフルオロメタンスルホネート、モノニトロ、またはジニトロフェノレートから選択される脱離基を表す。好ましくは、脱離基は、塩化物または臭化物である。
【００２０】
Ｒ、Ｒ’、Ｒ１−Ｒ６はそれぞれ独立に、水素、Ｃ１−Ｃ３直鎖アルキル、メトキシ、ヒドロキシル、第１級アミノ、第２級アミノ、第３級アミノ、もしくはアミド、または細胞結合剤へのプロドラッグの連結をもたらすリンカーであるが、但し、こうした連結は、スルフィド結合またはジスルフィド結合を介しているのが好ましく、Ｒ、Ｒ’、Ｒ１−Ｒ６の少なくとも１つがリンカーであるのが前提となる。好ましくは、Ｒがリンカーである。リンカーは、ポリエチレングリコールスペーサーを含むことができる。
【００２１】
Ｒ７は、ｉｎ  ｖｉｖｏで開裂することが可能であり、シクロプロパベンズインドール含有細胞毒の水溶性を向上させる保護基であり、スルホン酸含有フェニルカルバメートである。Ｒ７は、一般式ＸＩＩ：
【００２２】
【化８】
2009529030.tif 000004
［式中、Ｒ９は、Ｈであり、またはＣ１−Ｃ４の分枝もしくは直鎖アルキルである。Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は同じであるか異なっており、少なくとも１つが−Ｘ−ＳＯ３−Ｍ＋基（Ｍ＋は、Ｈ＋であり、またはＮａ＋、Ｋ＋などＩＡ族の原子から由来する陽イオンである。）であり、Ｘは、直接結合、またはＣ１からＣ４の直鎖もしくは分枝アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、−Ｏアルキル−、−Ｓアルキル−、およびアミノアルキルから選択されるスペーサーであり、他のＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、またはＲ１３は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６の分枝もしくは直鎖アルキル、−Ｏアルキル、−Ｓアルキル、ヒドロキシル、第１級アミノ、第２級アミノ、またはアミド、ハロゲン化物、ニトロ、アジドである。］を有する。
【００２３】
好ましい実施形態によると、本発明のプロドラッグは、式：
【００２４】
【化９】
2009529030.tif 000005
（式中、Ｙ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲは、上記の通り定義され、Ｒは、本明細書で定義した通りのリンカーである。）、
または医薬として許容できるこれらの塩、水和物、もしくは水和塩、またはこれらの化合物、または化合物の光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、もしくはエナンチオマーの多形結晶構造体である。
【００２５】
好ましくは、前記プロドラッグは、
（Ｓ）−Ｎ−［２−｛（１−クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−５−［（３−ヒドロキシスルホニフェニル）アミノカルボニルオキシ］−３Ｈ−ベンズ（ｅ）インドール−３−イル｝カルボニル］−１Ｈ−インドール−５−イル］−５−［（３−メチルジチオプロパノイル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド、
（Ｓ）−Ｎ−［２−｛（１−クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−５−［（３−ヒドロキシスルホニフェニル）−アミノカルボニルオキシ］−３Ｈ−ベンズ（ｅ）インドール−３−イル｝カルボニル］−１Ｈ−インドール−５−イル］−５−［（３−メルカプトプロパノイル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド
（Ｓ）−Ｎ−［２−｛（１−クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−５−［（３−ヒドロキシスルホニルメチルフェニル）アミノカルボニルオキシ］−３Ｈ−ベンズ（ｅ）インドール−３−イル｝カルボニル］−１Ｈ−インドール−５−イル］−５−｛［３−（２−ピリジルジチオ）−プロパノイル］−アミノ｝−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド、
（Ｓ）−Ｎ−［２−｛（１−クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−５−［（３−ヒドロキシスルホニルメチルフェニル）アミノカルボニル−オキシ］−３Ｈ−ベンズ（ｅ）インドール−３−イル｝カルボニル］−１Ｈ−インドール−５−イル］−５−［（３−メルカプトプロパノイル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド、
（Ｓ）−Ｎ−［２−｛（１−クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−５−［（３−ヒドロキシスルホニルメチルフェニル）アミノカルボニルオキシ］−３Ｈ−ベンズ（ｅ）インドール−３−イル｝カルボニル］−１Ｈ−インドール−５−イル］−５−［（３−メルカプトプロパノイル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド、
または医薬として許容できるこれらの塩、水和物、もしくは水和塩、またはこれらの化合物、または化合物の光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、もしくはエナンチオマーの多形結晶構造体からなる群から選択される。
【００２６】
別の好ましい実施形態によると、プロドラッグは、式：
【００２７】
【化１０】
2009529030.tif 000006
（式中、Ｙ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、およびＲは、上記の通り定義され、Ｒは、上記で定義した通りのリンカーである。）、
または医薬として許容できるこれらの塩、水和物、もしくは水和塩、またはこれらの化合物、または化合物の光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、もしくはエナンチオマーの多形結晶構造体である。
【００２８】
好ましくは、前記プロドラッグは、
（Ｓ）−３−（（１−（クロロメチル）−３−（５−（３−メルカプトプロパンアミド）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イルオキシ）カルボニルアミノ）ベンゼンスルホン酸、
（Ｓ）−３−（（１−（クロロメチル）−３−（５−（３−（メチルジスルファニル）プロパンアミド）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イルオキシ）カルボニルアミノ）ベンゼンスルホン酸、
または医薬として許容できるこれらの塩、水和物、もしくは水和塩、またはこれらの化合物、または化合物の光学異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、もしくはエナンチオマーの多形結晶構造体からなる群から選択される。
【００２９】
本発明のプロドラッグは細胞毒の結合体において使用することができ、該結合体においては、細胞結合剤が、本発明のプロドラッグの１つ以上に連結基を介して連結している。
【００３０】
前記連結基は、細胞結合剤のチオール、スルフィド、またはジスルフィドに対して反応性の官能基に、上記で定義した通りに連結している前記リンカーを含む。
【００３１】
細胞結合剤として、抗体およびこれらの断片、インターフェロン、リンフォカイン、ビタミン、ホルモン、および成長因子が挙げられる。こうした結合体を含有する医薬組成物も提供する。
【００３２】
細胞毒性結合体は、上記医薬組成物の有効量を投与することにより対象を治療する方法において使用することができる。選択される細胞結合剤が結合する細胞型に従って、多くの疾患を、ｉｎ  ｖｉｖｏで、ｅｘ  ｖｉｖｏで、またはｉｎ  ｖｉｔｒｏのいずれかで治療することができる。こうした疾患として、例えば、リンパ腫、白血病、肺癌、乳房癌、大腸癌、前立腺癌、腎臓癌、膵臓癌などを含む、多種の癌の治療が挙げられる。
【００３３】
したがって、水溶液中において向上した溶解性および安定性を有し、活性化してアルキル化薬を生成するときに細胞毒性を保持し、特異的細胞結合剤の結合手段によって特異的細胞型を標的にする際に有用である、ＣＣ−１０６５類似体のプロドラッグを提供する。
【００３４】
（発明の詳細な記述）
本発明者らは、特定のＣＣ−１０６５類似体の安定性、水溶性、および有用性が、適当な保護基を用いて類似体のアルキル化部分を保護することにより向上することを見出した。これによって、本発明者らは、向上した水溶解性を有し、細胞結合剤への連結がさらに可能であるＣＣ−１０６５類似体のプロドラッグであり、ＣＣ−１０６５類似体のこうしたプロドラッグの治療有効性が、腫瘍部位へのプロドラッグの標的送達を介してｉｎ  ｖｉｖｏでの分布を変えることにより向上することで、非標的組織に対する毒性が低くなり、したがって全身的毒性が低くなるプロドラッグを実現した。生理的ｐＨは、実質的に、プロドラッグを活性薬物形態に変換し、細胞結合剤に対する開裂可能なリンカーを有する実施形態において、ＣＣ−１０６５類似体の活性薬物形態が放出されることで、これの細胞毒活性をさらに向上させる。別法としては、細胞結合剤に対するリンカーを、先ず標的細胞の内部で開裂させてプロドラッグを放出した後、活性薬物に内因性変換をさせてもよい。
【００３５】
この目標を達成するため、本発明者らは、（ａ）保護基によりフェノールヒドロキシルで保護されて水溶性を向上し、生理的ｐＨでｉｎ  ｖｉｖｏにおいて開裂する式（Ｉ）の第一サブユニットと、（ｂ）式（ＩＩ）−（ＸＩ）の１つにより表される構造を有する第二サブユニットとを含み、細胞結合剤にプロドラッグを結合させるリンカーを含む、ｓｅｃｏ−シクロプロパベンズインドール（ＣＢＩ）含有細胞毒プロドラッグであるＣＣ−１０６５類似体の例示的なプロドラッグ（図２−４Ｂ）を合成した。該リンカーは、ポリエチレングリコールスペーサー（図３）を含有することができる。プロドラッグの保護基の除去により、親薬物の高細胞毒性を保持する薬物の活性化状態が得られる。該リンカーは細胞結合剤への結合に使用されるが、ジスルフィド結合またはスルフィド（または本明細書においてチオエーテルと称する）結合を含むのが好ましい。
【００３６】
ジスルフィド結合などの開裂可能な結合を用いる、高細胞毒性の薬物の抗体への連結により、細胞内部での十分に活性している薬物の放出が確実になり、こうした結合体は、抗原特異的な様式における細胞毒であることは、既に示されている（Ｒ．Ｖ．Ｊ．Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ、５２  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１２７−１３１（１９９２）；Ｒ．Ｖ．Ｊ．Ｃｈａｒｉ  ｅｔ  ａｌ．；５５  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４０７９−４０８４（１９９５）；ならびに米国特許第５２０８０２０号および同５４７５０９２号）。本発明において、本発明者らは、ＣＣ−１０６５類似体のプロドラッグの合成、単クローン抗体への結合手順、およびこうした結合体のｉｎ  ｖｉｔｒｏでの細胞毒性および特異性の測定手順を記載する。したがって本発明は、腫瘍細胞、ウイルス感染細胞、微生物感染細胞、寄生虫感染細胞、自己免疫細胞（自己抗体を生成する細胞）、活性化細胞（移植片拒絶または移植片ｖｓ宿主の疾患に伴う活性化細胞）、または任意の他種の患部細胞または異常細胞など、死滅または渙散させるべき患部細胞または異常細胞を、最小の副作用を示しながら排除することを対象とする治療剤の調製に有用な化合物を提供する。
【００３７】
したがって、本発明により、細胞結合剤へ化学的に連結することができ、保護基の放出で親化合物ＣＣ−１０６５の高細胞毒性を維持するＣＣ−１０６５のプロドラッグ類似体および誘導体の合成が教示される。さらに、活性化すると、これらの化合物は、細胞結合剤に連結した場合、細胞結合剤が結合する細胞に対して細胞毒であり、非標的細胞に対しては毒性が非常に少ない。
【００３８】
本発明のプロドラッグ
本発明に従ったプロドラッグは、分子のアルキル化部分のフェノール基が保護されているＣＣ−１０６５の類似体を含み、プロドラッグは、細胞結合剤にプロドラッグを結合させることが可能なリンカーをさらに含む。プロドラッグは、アミド結合を介して連結される第一および第二のサブユニットを含むことができる。
【００３９】
本発明の特定の実施形態によると、ＣＣ−１０６５類似体のプロドラッグは、開いたハロメチルの形におけるｓｅｃｏ−ＣＢＩ（シクロプロパベンズインドール単位）である第一サブユニット（第一サブユニットは、ｉｎ  ｖｉｖｏで開裂できる水溶性保護基により保護されているフェノールヒドロキシルを有する。）を有する。本発明の特定の実施形態のプロドラッグの第二サブユニットは、２−カルボキシ−インドールもしくは２−カルボキシ−ベンゾフランの誘導体、または両方であり、式（ＩＩ）−（ＸＩ）により表されるＣＣ−１０６５（図１）のＢサブユニット、またはＢおよびＣを合わせたサブユニットのいずれかの類似体を含む。天然ＣＣ−１０６５および既に公表された類似体の特性（例えば、Ｗａｒｐｅｈｏｓｋｉ  ｅｔ  ａｌ、３１  Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５９０−６０３（１９８８）、Ｂｏｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ、６６  Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６６５４−６６６１（２００１））から確認することができる通り、ＢおよびＣのサブユニットは、他の複素環または置換複素環を含むこともできるので、式（ＩＩ）−（ＸＩ）のＲ１−Ｒ６位置に対応する、インドール環またはベンゾフラン環上の異なる位置に異なる置換基を保有することができ、なお強力な細胞毒活性を保持する。
【００４０】
ＣＣ−１０６５類似体のプロドラッグを細胞結合剤に連結するため、プロドラッグが、先ず、ジスルフィド結合、スルフィド（または本明細書においてチオエーテルと称する）結合、酸不安定基、感光性基、ペプチダーゼ不安定基、またはエステラーゼ不安定基などの連結を介して誘導体を細胞結合剤に連結させる部分を含んでいなければならない。プロドラッグ類似体は、例えば、ジスルフィド結合、チオエーテル結合、酸不安定基、感光性基、ペプチダーゼ不安定基、またはエステラーゼ不安定基を介して、類似体を細胞結合剤に連結させるのに必要な部分を含有するように調製する。水溶液中における溶解性をさらに向上させるため、リンカーは、ポリエチレングリコールスペーサー（図３）を含有することができる。
【００４１】
標的細胞の還元環境により、ジスルフィドの開裂およびプロドラッグ（または、プロドラッグの細胞結合剤からの開裂、および保護基の加水分解の相対順序に応じて薬物）の放出がもたらされ、これに関連して細胞毒性が増加するので、好ましくは、ジスルフィド連結が用いられる。
【００４２】
より詳細には、本発明の特定の実施形態によると、ＣＣ−１０６５の類似体のプロドラッグは、アミド結合を介して、第一サブユニットのピロール部分の第２級アミノ基から式（ＩＩ）−（ＸＩ）を有する第二サブユニットのＣ−２カルボキシ基へ共有結合的に連結する、第一および第二のサブユニットを含む。
【００４３】
式（ＩＩ）−（ＸＩ）の中で、リンカーは、ＣＣ−１０６５類似体のプロドラッグの細胞結合剤への連結を可能にする。リンカーはポリエチレングリコールスペーサーを含有することができる。例として、ジスルフィド結合、チオエーテル結合、酸不安定基、感光性基、ペプチダーゼ不安定基、またはエステラーゼ不安定基を介して連結を可能にする、当技術分野においてよく知られている成分が挙げられる（例えば、参照として本明細書に組み込まれる米国特許５８４６５４５を参照）。好ましい成分は、ジスルフィド結合、例えば、チオール（ＤＣ１、ＤＣ０７、ＤＣ０８）またはジスルフィド（ＤＣ１−ＳＭｅ、ＤＣ０７−ＳＭｅ、ＤＣ０８ＳＰｙ、図２−４Ｂ参照）を介した連結を可能にする成分である。チオメチル（ＤＣ１−ＳＭｅ、ＤＣ０７−ＳＭｅ）、ＤＣ０８ＳＰｙ、グルタチオン、アルキルチオール、ピリジルチオ、アリールチオール、ニトロピリジルチオ、ヒドロキシカルボニルピリジルチオ、および（ニトロ）ヒドロキシカルボニル−ピリジルチオ等など、任意の末端脱離基を含有する混合ジスルフィドは、プロドラッグの細胞結合剤へのカップリングのためのジスルフィド交換反応を起こすことが可能であることを前提として使用することができる。リンカーは、連結を可能にする部分の反応性基と２−カルボキシ−インドールまたは２−カルボキシ−ベンゾフランの誘導体部分との間に入れたスペーサー領域を、任意選択によりさらに含むことができる。
【００４４】
好ましくは、前記リンカーは、式：
−Ｇ−Ｄ−（Ｚ）ｐ−Ｓ−Ｚ’
［式中、
Ｇは、単結合もしくは二重結合、−Ｏ−、−Ｓ−、または−ＮＴ−であり、
Ｄは、単結合、または−Ｅ−、−Ｅ−ＮＴ−、−Ｅ−ＮＴ−Ｆ−、−Ｅ−Ｏ−、−Ｅ−Ｏ−Ｆ−、−Ｅ−ＮＴ−ＣＯ−、−Ｅ−ＮＴ−ＣＯ−Ｆ−、−Ｅ−ＣＯ−、−ＣＯ−Ｅ−、−Ｅ−ＣＯ−Ｆ、−Ｅ−Ｓ−、−Ｅ−Ｓ−Ｆ−、−Ｅ−ＮＴ−Ｇ−Ｓ−、−Ｅ−ＮＴ−ＣＳ−Ｆ−であり、
（Ｔは、Ｈであり、またはＣ１−Ｃ６の分枝もしくは直鎖アルキルであり、
ＥおよびＦは、同じであるか異なっており、独立に、直鎖または分枝−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−アルキル−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉシクロアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ複素環（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉヘテロアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉシクロアルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉ複素環（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル−（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−アルキル（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｉヘテロアリール（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｊ−、−シクロアルキル−アルキル−、−アルキル−シクロアルキル−、−複素環−アルキル−、−アルキル−複素環−、−アルキル−アリール−、−アリール−アルキル−、−アルキル−ヘテロアリール−、−ヘテロアリール−アルキル−から選択され、
ここで、ｉおよびｊは、同じであるか異なっており、整数であり、独立に、０、１から２０００から選択される。）
Ｚは、直鎖または分枝−アルキル−であり、
ｐは、０または１であり、
Ｚ’は、Ｈを表し、ＣＯＲなどのチオール保護基、Ｒ２０またはＳＲ２０（Ｒ２０は、Ｈ、メチル、アルキル、場合により置換されているシクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、または複素環を表す。）を表す。］
を有する。
【００４５】
以下の実施形態またはこれらの組合せのいずれかが好ましい：
Ｇは、単結合または−ＮＴ−である；
Ｇは−ＮＴ−である；
Ｄは−ＣＯ−Ｅ−である；
Ｅは、直鎖または分枝−アルキル−である；
ｐは０である；
Ｚ’は、ＨまたはＳＲ２０（Ｒ２０は、アルキルまたはヘテロアリールを表す。）である。
【００４６】
リンカーの好ましい実施形態として、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｍＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍＳＺ、（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｍＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｍ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍ  （ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＳＺ、（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｍ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｍＣＨ（Ｍｅ）ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍＣＨ（Ｍｅ）ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｍＣＨ（Ｍｅ）ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ  （ＣＨ２）ｍ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＣＨ（Ｍｅ）ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＣＨ（Ｍｅ）ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｍ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＣＨ（Ｍｅ）ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｍＣ（Ｍｅ）２ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍＣ（Ｍｅ）２ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｍＣ（Ｍｅ）２ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）ｍ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＣ（Ｍｅ）２ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＣ（Ｍｅ）２ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＯ（ＣＨ２）ｍ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＣ（Ｍｅ２）ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍＳＺ、（ＣＨ２）ｐＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍ  ＣＨ（Ｍｅ）ＳＺ、（ＣＨ２）ｐＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＣＨＭｅＳＺ、（ＣＨ２）ｐＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍＣＭｅ２ＳＺ、または（ＣＨ２）ｐＯＣ６Ｈ４（ＣＨ２）ｍ（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＣ（Ｍｅ）２ＳＺ（Ｚは、Ｈを表し、Ａｃなどのチオール保護基、Ｒ８、またはＳＲ８、（Ｒ８は、メチル、直鎖アルキル、分枝アルキル、環状アルキル、単純もしくは置換されているアリール、または複素環を表す。）を表し、ｍは、０から１０の整数を表し、ｎは、０から２０００の整数を表し、ｐは、０から１０の整数を表す。）が挙げられる。
【００４７】
Ｒ８により表される直鎖アルキルの例として、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、およびヘキシルが挙げられる。Ｒ８により表される分枝アルキルの例として、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチル、および１−エチル−プロピルが挙げられる。Ｒ８により表される環状アルキルの例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが挙げられる。Ｒ８により表される単純なアリールの例として、フェニルおよびナフチルが挙げられる。Ｒ８により表される置換アリールの例として、アルキル基、Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、などのハロゲン、ニトロ基、アミノ基、スルホン酸基、カルボン酸基、ヒドロキシ基およびアルコキシ基に置換されているフェニルまたはナフチルなどのアリールが挙げられる。Ｒ８により表される複素環は、ヘテロ原子がＯ、Ｎ、およびＳから選択される化合物であり、例として、フリル、ピロリル、ピリジル（例えば、２−置換ピリミジン基）、およびチオフェンが挙げられる。
【００４８】
リンカーの最も好ましい実施形態として、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＳＨ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）２Ｃ（Ｍｅ）２ＳＨ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）２ＳＳＣＨ３、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＳＨ、（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ  （ＣＨ２）２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＣ（Ｍｅ）２ＳＳＣＨ３、および（ＣＨ２）ｐＮＨＣＯ（ＣＨ２）２（ＯＣＨ２ＣＨ２）ｎＳＳＭｅが挙げられる。
【００４９】
式（ＩＩ）−（ＸＩ）の中で、Ｒ、Ｒ’、Ｒ１からＲ６の少なくとも１つはリンカーであるという前提で、Ｒ、Ｒ’、Ｒ１からＲ６は同じであっても、または異なっていてもよく、独立に、水素、Ｃ１−Ｃ３直鎖アルキル、メトキシ、ヒドロキシル、第１級アミノ、第２級アミノ、第３級アミノ、もしくはアミド、またはリンカーを表す。好ましくは、Ｒはリンカーである。第１級アミノ基含有置換基の例は、メチルアミノ、エチルアミノ、およびイソプロピルアミノである。第２級アミノ基含有置換基の例は、ジメチルアミノ、ジエチルアミノ、およびエチル−プロピルアミノである。アミド基の例として、Ｎ−メチル−アセトアミド、Ｎ−メチル−プロピオンアミド、Ｎ−アセトアミド、およびＮ−プロピオンアミドが挙げられる。
【００５０】
式（ＩＩ）−（ＸＩ）の中で、Ｒ７は、ｓｅｃｏ−シクロプロパベンズインドール含有細胞毒性薬の水溶性を向上させるｉｎ  ｖｉｖｏで開裂可能な保護基であり、前記基は、一般式ＸＩＩ：
【００５１】
【化１１】
2009529030.tif 000007
［式中、Ｒ９は、Ｈであり、またはＣ１−Ｃ４の分枝もしくは直鎖アルキルである。Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は、同じであるか異なっており、少なくとも１つは、−Ｘ−ＳＯ３−Ｍ＋基（Ｍ＋は、Ｈ＋であり、またはＮａ＋、Ｋ＋等など、ＩＡ族の原子由来の陽イオンであり、Ｘは、直接結合、またはＣ１からＣ４の直鎖または分枝アルキル、アルケニル、もしくはアルキニル、−Ｏアルキル−、−Ｓアルキル−およびアミノアルキルから選択されるスペーサーである。）であり、他のＲ１０、Ｒ１１、Ｒ１２またはＲ１３は、Ｈ、Ｃ１−Ｃ６の分枝もしくは直鎖アルキル、−Ｏアルキル、−Ｓアルキル、ヒドロキシル、第１級アミノ、第２級アミノ、またはアミド、ハロゲン化物、ニトロ、アジドである。］のスルホン酸含有フェニルカルバメートから選択することができる。
【００５２】
Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、またはＲ１３により表される直鎖アルキルの例として、メチル、エチル、プロピル、ブチル、ペンチル、およびヘキシルが挙げられる。Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、またはＲ１３により表される分枝アルキルの例として、イソプロピル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、イソペンチル、および１−エチル−プロピルが挙げられる。Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、またはＲ１３により表される環状アルキルの例として、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、およびシクロヘキシルが挙げられる。
【００５３】
したがって、スルホン酸含有フェニルカルバメートは、血清および血漿において起こる生理的ｐＨでの加水分解により開裂可能であることがわかる。
【００５４】
本発明のＣＣ−１０６５類似体の、スルフィドまたはジスルフィド含有およびメルカプト含有のプロドラッグは、インキュベーション条件下でｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける様々な不要な株化細胞の増殖抑制能を評価することができる。例えば、ラモス株化細胞およびＨＬ６０などの株化細胞は、これらの化合物の細胞毒性の判定に容易に使用することができる。評価される細胞は、該化合物に２４時間曝露し、細胞の生存画分を公知の方法により直接アッセイにおいて測定することができる。次いでＩＣ５０値を、アッセイの結果から算定することができる。
【００５５】
本明細書に使用される場合、「細胞結合剤に連結可能」という表現は、細胞結合剤に前記誘導体を結合するのに適当な、少なくとも１つのリンカーを含むＣＣ−１０６５類似体プロドラッグまたはこの前駆体を意味し、好ましいリンカーは、チオール結合、スルフィド結合、もしくはジスルフィド結合、またはこれらの前駆体を含有する。
【００５６】
本明細書に使用される場合、「細胞結合剤に連結」という表現は、適当なリンカーを介して細胞結合剤に結合している少なくとも１つのＣＣ−１０６５類似体プロドラッグまたはこの前駆体を含む共役分子を意味し、好ましいリンカーは、チオール結合、スルフィド結合、もしくはジスルフィド結合、またはこの前駆体を含有する。
【００５７】
本明細書で挙げられる「細胞結合剤」という表現には、細胞結合剤が、改質剤により改質されて、反応性官能基、例えば、ＣＣ−１０６５類似体プロドラッグのリンカーのメルカプト結合、スルフィド結合、またはジスルフィド結合に対する反応性が向上している改良細胞結合剤も含まれる。前記改質剤として、下記で考察されるように、Ｎ−スルホスクシンイミジル−４−（５−ニトロ−２−ピリジルジチオ）ブタノエート（ＳＳＮＰＢ）、スクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、および４−（２−ピリジルジチオ）ブタン酸Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステル（ＳＰＤＢ）などが挙げられる。
【００５８】
本明細書において使用される場合、「類似体」という用語は、特異的化合物またはこの類の化学的に改質された形態を含み、前記化合物または類の特徴である医薬活性および／または薬理活性を維持する化合物を意味する。
【００５９】
本明細書において使用される場合、「患者」という用語は、飼育、交友、または保存目的の有益な動物か、本明細書に記載の１つもしくは複数の疾患および状態に罹患している、または罹患する可能性を有する、好ましくはヒトもしくはヒト小児などのいずれかの動物を意味する。
【００６０】
本明細書において使用される場合、「治療有効量」は、本明細書に記載の疾患および状態の症状を予防、軽減、排除、治療、または制御することに有効である、本発明の化合物の量を意味する。「制御」という用語は、本明細書に記載の疾患および状態の進行を緩徐、妨害、抑止、または停止する可能性がある全ての方法を意味することを意図するが、必ずしも疾患および状態の全症状を完全排除することを示しているのではなく、予防的な治療を含むことを意図している。
【００６１】
本明細書において使用される場合、「医薬として許容できる」という用語は、健全な医学的判断の範囲内であり、過度の毒性、刺激、アレルギー応答、または他の問題の合併症がなくヒトおよび動物の組織と接触するのに適当であり、妥当な効果／リスク比に相応なこれらの化合物、材料、賦形剤、組成物、または剤形を意味する。
【００６２】
本明細書において使用される場合、「医薬として許容できる塩」は、親化合物が、この酸塩または塩基塩を生成することにより改質されている、開示化合物の誘導体を意味する。医薬として許容できる塩として、例えば、非毒性の無機酸または有機酸から形成される親化合物の従来の非毒性塩または四級アンモニウム塩が挙げられる。例えば、こうした従来の非毒性塩として、塩酸塩、臭化水素、硫酸塩、スルファミン酸塩、リン酸塩、および硝酸塩などの無機酸由来の塩、ならびに酢酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩、メタンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、グルクロン酸塩、グルタミン酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、トルエンスルホン酸塩、シュウ酸塩、フマル酸塩、マレイン酸塩、および乳酸塩などの有機酸から調製される塩が挙げられる。さらに付加塩として、トロメタミン、メグルミン、エポラミン等などのアンモニウム塩、ナトリウム、カリウム、カルシウム、亜鉛、またはマグネシウムなどの金属塩が挙げられる。
【００６３】
本発明の医薬として許容できる塩は、従来の化学的方法により、塩基性または酸性部分を含有する親化合物から合成することができる。一般に、こうした塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基の形態を、適当な塩基または酸の化学量論量を用いて、水もしくは有機溶媒中で、またはこの２つの混合物中で反応させることにより調製することができる。一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルのような非水性媒体が好ましい。適当な塩の一覧表は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１７ｔｈ  ｅｄ．、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、１９８５、ｐ．１４１８において得られ、この開示を参照により本明細書に組み込む。
【００６４】
またさらなる目的によると、本発明は、本発明の化合物の調製方法にも関する。
【００６５】
本発明の化合物および方法は、当業者によく知られているいくつかの方法において調製することができる。化合物は、例えば、下記の方法、または当技術者により認められるこれらの変更の応用もしくは適応により合成することができる。適当な改変および代替は、当業者には容易に明らかであり、よく知られているか、科学文献から容易に得られる。
【００６６】
特に、こうした方法は、Ｒ．Ｃ．Ｌａｒｏｃｋ、Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９９において見つけることができる。
【００６７】
本発明の化合物が、非対称的に置換されている１つ以上の炭素原子を含有してもよく、光学活性またはラセミの形態において単離してもよいことは理解されよう。したがって、特定の立体化学または異性体の形態が特に指示されていない限り、全てのキラル、ジアステレオマー、ラセミの構造形態、および全ての幾何異性体の構造形態を対象とする。こうした光学活性形態を調製および単離する方法は、当分野においてよく知られている。例えば、立体異性体の混合物は、これらに限定されないが、ラセミ形態の分割、順相、逆相、およびキラルクロマトグラフィー、選択的塩形成、および再結晶などを含む標準的技術によって、またはキラル出発原料からのキラル合成、もしくは標的キラル中心の意図的合成によって分離することができる。
【００６８】
本発明の化合物は、様々な合成経路により調製することができる。試薬および出発原料は、市販されているか、当業者によりよく知られている技術によって容易に合成される。全ての置換基は、別段指定がない限り上記に定義した通りである。
【００６９】
以下に記載の反応において、反応性の官能基、例えば、ヒドロキシ基、アミノ基、イミノ基、チオ基、またはカルボキシ基は、これらが最終生成物において所望される場合、反応において不要な関与を避けるために保護することが必要なこともある。従来の保護基は、標準的手法に従って使用してよく、例えば、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３ｒｄ  ｅｄ．、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９９；Ｊ．Ｆ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、１９７３を参照されたい。
【００７０】
一部の反応は、塩基の存在下で行うことができる。分子の他の部分に悪影響がないことを前提として、この反応に使用される塩基の性質に特別な制限はなく、この種類の反応において従来から使用されている任意の塩基を、本発明においても同様に使用することができる。適当な塩基の例として、水酸化ナトリウム、炭酸カリウム、トリエチルアミン、水素化ナトリウムおよび水素化カリウムなどのアルカリ金属水素化物；メチルリチウムおよびブチルリチウムなどのアルキルリチウム化合物；ならびにナトリウムメトキシドおよびナトリウムエトキシドなどのアルカリ金属アルコキシドが挙げられる。
【００７１】
通常、反応は適当な溶媒中で行われる。反応、または関わる試薬に悪影響がないことを前提として、種々の溶媒を使用することができる。適当な溶媒の例として、ヘキサン、シクロヘキサン、ベンゼン、トルエン、およびキシレンなどの炭化水素（芳香族、脂肪族、または脂環式の炭化水素であってよい）；ジメチルホルムアミドなどのアミド；エタノールおよびメタノールなどのアルコール、またはジエチルエーテルおよびテトラヒドロフランなどのエーテルが挙げられる。
【００７２】
反応は、広範囲の温度で行うことができる。一般に、０℃から１５０℃の温度（より好ましくは約室温から１００℃）で反応を行うのが好都合であることがわかる。反応に必要な時間も、多くの要因、とりわけ反応温度および試薬の性質に依存して非常に幅がある。しかし、反応が上記概略の好ましい条件下で有効であるという前提で、通常、３時間から２０時間の間で十分である。
【００７３】
こうして調製された化合物は、常法により反応混合物から回収することができる。例えば、化合物は、反応混合物から溶媒を蒸留除去することにより、または必要であれば、反応混合物から溶媒を蒸留除去した後、残留物を水に注ぎ、次いで水不混和性有機溶媒で抽出し、抽出物から溶媒を蒸留除去することにより回収することができる。さらに、生成物は、所望であれば、再結晶、再沈殿、または各種クロマトグラフィー技術など様々な周知の技術、とりわけカラムクロマトグラフィーまたは調製薄層クロマトグラフィーによりさらに精製することができる。
【００７４】
本発明の式の化合物の調製方法は、本発明のさらなる目的である。
【００７５】
式の化合物の調製方法は、対応するＣＣ−１０６５の類似体のアルキル化部分のフェノール基を、スルホン酸含有カルバメート官能基により保護するステップを含む。この反応は、Ｔ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｐ．Ｇ．Ｍ．Ｗｕｔｓ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、３ｒｄ  ｅｄ．、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９９  ｏｒ  Ｊ．Ｆ．Ｗ．ＭｃＯｍｉｅ、Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ、１９７３に開示されている、カルバメート官能基でＯＨ基を保護する方法の適応または応用により行うことができる。
【００７６】
一般に、この反応は、ＣＤＩ／ＤＭＡ、および式：
【００７７】
【化１２】
2009529030.tif 000008
（式中、Ｒ９、Ｒ１０、Ｒ１１、Ｒ１２、Ｒ１３は、式（ＸＩＩ）において定義した通りである。）の対応するアミノフェニルスルホネート誘導体で行う。該方法は、得られる生成物を単離するさらなるステップを含んでもよい。
【００７８】
細胞結合剤の調製
本発明のプロドラッグ化合物は、有効な治療剤として、細胞結合剤との結合体として使用することができる。細胞結合剤は、現在知られている、または知られるようになる任意の種類であり、ペプチドおよび非ペプチドが挙げられる。一般に、これらは、少なくとも１つの結合部位を含有する抗体（特に単クローン抗体）または抗体の断片、リンフォカイン、ホルモン、成長因子、（トランスフェリンなどの）栄養素輸送分子、または任意の他の細胞結合性の分子もしくは物質であってよい。
【００７９】
使用できる細胞結合剤のより具体的な例として：
単クローン抗体；
単鎖抗体；
Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖなどの抗体の断片（Ｐａｒｈａｍ、１３１  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２８９５−２９０２（１９８３）；Ｓｐｒｉｎｇ  ｅｔ  ａｌ、１１３  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．４７０−４７８（１９７４）；Ｎｉｓｏｎｏｆｆ  ｅｔ  ａｌ、８９  Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．２３０−２４４（１９６０））；
インターフェロン；
ペプチド；
ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６などのリンフォカイン；
インスリンなどのホルモン、ＴＲＨ（甲状腺刺激ホルモン放出ホルモン）、ＭＳＨ（メラニン細胞刺激ホルモン）、アンドロゲンおよびエストロゲンなどのステロイドホルモン；
ＥＧＦ、ＴＧＦα、インスリン様成長因子（ＩＧＦ−Ｉ、ＩＧＦ−ＩＩ）Ｇ−ＣＳＦ、Ｍ−ＣＳＦ、およびＧＭ−ＣＳＦなどの成長因子およびコロニー−刺激因子（Ｂｕｒｇｅｓｓ、５  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  １５５−１５８（１９８４））；フォレートなどのビタミン；および
トランスフェリン（Ｏ’Ｋｅｅｆｅ  ｅｔ  ａｌ、２６０  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．９３２−９３７（１９８５））；
が挙げられる。
【００８０】
単クローン抗体技術により、特異的単クローン抗体の形態における、極めて選択的細胞結合剤の生成が可能となる。当技術分野において特によく知られているのは、無傷の標的細胞など関心対象の抗原、標的細胞から単離した抗原、ウイルス全体、弱毒化したウイルス全体、およびウイルスコートタンパク質などのウイルス性タンパク質を用いて、マウス、ラット、ハムスターまたは任意の他の哺乳動物を免疫化することにより生成される単クローン抗体の作製技術である。
【００８１】
適当な細胞結合剤の選択は、標的とされる特定の細胞集団に依存する選択の問題であり、一般に、単クローン抗体は、適当な抗体を利用できる場合が好ましい。
【００８２】
例えば、単クローン抗体ＭＹ９は、ＣＤ３３抗原に特異的に結合するマウスＩｇＧ１抗体であり（Ｊ．Ｄ．Ｇｒｉｆｆｉｎ  ｅｔ  ａｌ  ８  Ｌｅｕｋｅｍｉａ  Ｒｅｓ．、５２１（１９８４））、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）の疾患において見られるように、標的細胞がＣＤ３３を発現する場合は使用することができる。同様に、単クローン抗体抗Ｂ４は、Ｂ細胞上のＣＤ１９抗原に結合するマウスＩｇＧ１であり（Ｎａｄｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ、１３１  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４４−２５０（１９８３））、標的細胞が、例えば、非ホジキンリンパ腫または慢性リンパ芽球性白血病においてこの抗原を発現させるＢ細胞または患部細胞である場合は使用することができる。
【００８３】
さらに、骨髄細胞に結合するＧＭ−ＣＳＦは、急性骨髄性白血病の患部細胞に対する細胞結合剤として使用することができる。活性化Ｔ細胞に結合するＩＬ−２は、移植片拒絶の予防、移植片対宿主病の治療および予防、急性Ｔ細胞白血病の治療に使用することができる。メラニン細胞に結合するＭＳＨは、メラノーマの治療に使用することができる。
【００８４】
プロドラッグ結合体の調製
プロドラッグおよび細胞結合剤の結合体は、任意の技術を用いて形成することができる。インドリル、ベンゾフラニル、ビス−インドリル、ビス−ベンゾフラニル、インドリル−ベンゾフラニル、またはｓｅｃｏ−ＣＢＩ類似体にカップリングしたベンゾフラニル−インドリル誘導体を調製して遊離アミノ基を含有し、次いで、酸不安定リンカーを介して、または感光性リンカーにより、抗体または他の細胞結合剤に連結することができる。プロドラッグ化合物は、適当な配列を有するペプチドと縮合し、続いて、細胞結合剤に連結してペプチダーゼ不安定性リンカーを生成することができる。細胞毒化合物を調製して第一級ヒドロキシル基を含有させ、該化合物をサクシニル化し、細胞結合剤に連結し、細胞内エステラーゼにより開裂して遊離プロドラッグを遊離することができる結合体を生成することができる。好ましくは、プロドラッグ化合物を合成して、ＰＥＧ含有スペーサーを有する、または有することがない遊離または保護チオール基を含有させ、次いで、１つ以上のスルフィド、ジスルフィド、もしくはチオール含有のプロドラッグをそれぞれ、ジスルフィド結合またはチオエーテル結合を介して、細胞結合剤へ共有結合的に連結させる。
【００８５】
本発明の代表的結合体は、抗体、抗体断片、上皮成長因子（ＥＧＦ）、メラニン細胞刺激ホルモン（ＭＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）、エストロゲン、エストロゲン類似体、アンドロゲン、およびアンドロゲン類似体とのＣＣ−１０６５類似体プロドラッグ結合体である。
【００８６】
ＣＣ−１０６５類似体プロドラッグと細胞結合剤との各種結合体を調製する代表例を下に記載する。
【００８７】
ジスルフィドリンカー：抗体ｈｕＭｙ−９−６は、急性骨髄球性白血病（ＡＭＬ）の症例の大半を含めて、ヒト骨髄細胞の表面上で発見されるＣＤ３３抗原に対して向けられたマウス単クローン抗体Ｍｙ−９−６を遺伝子的にヒト化した形態である（Ｅ．Ｊ．Ｆａｖａｌｏｒｏ、Ｋ．Ｆ．Ｂｒａｄｓｔｏｃｋ、Ａ．Ｋａｂｒａｌ、Ｐ．Ｇｒｉｍｓｌｅｙ＆Ｍ．Ｃ．Ｂｅｒｎｄｔ、Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｍａｒｋｅｒｓ、５（４）：２１５（１９８７）；Ｍ．Ｇ．  Ｈｏｆｆｅｅ、Ｄ．Ｔａｖａｒｅｓ、Ｒ．Ｊ．Ｌｕｔｚ、Ｒｏｂｅｒｔ  Ｊ．、ＰＣＴ  Ｉｎｔ．Ａｐｐｌ．（２００４）ＷＯ２００４０４３３４４）。Ｍｙ−９−６は、結合体の調製に使用することができる。該抗体は、上記した通りに（Ｊ．Ｃａｒｌｓｓｏｎ、Ｈ．Ｄｒｅｖｉｎ＆Ｒ．Ａｘｅｎ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．、１７３：７２３（１９７８））、Ｎ−スクシンイミジル−３−ピリジルジチオプロピオネートで改変し、抗体分子当たり平均して４つのピリジルジチオ基を導入する。改変した抗体をチオール含有プロドラッグと反応させてジスルフィド連結結合体を生成する。
【００８８】
チオエーテルリンカー：本発明のチオール含有誘導体は、上記した通り（米国特許第５２０８０２０号）、チオエーテル連結を介して抗体および他の細胞結合剤に連結することができる。抗体または他の細胞結合剤は、Ｎ−スクシンイミジル４−（マレイミドメチル）シクロヘキサンカルボキシレート（ＳＭＣＣ）、ＳＭＣＣの「長鎖」類似体（ＬＣ−ＳＭＣＣ）であるＮ−スクシンイミジル−４−（Ｎ−マレイミドメチル）−シクロヘキサン−１−カルボキシ−（６−アミドカプロエート）など市販の化合物で改変することができる。これらの架橋試薬は、マレイミド系部分由来の開裂できないリンカーを形成する。
【００８９】
ハロアセチル系部分を含む架橋試薬として、Ｎ−スクシンイミジル−４−（ヨードアセチル）−アミノベンゾエート（ＳＩＡＢ）、Ｎ−スクシンイミジルヨードアセテート（ＳＩＡ）、Ｎ−スクシンイミジルブロモアセテート（ＳＢＡ）、およびＮ−スクシンイミジル３−（ブロモ−アセトアミド）プロピオネート（ＳＢＡＰ）が挙げられる。これらの架橋試薬は、ハロアセチル系部分由来の開裂できないリンカーを形成する。改良細胞結合剤は、チオール含有薬物と反応させてチオエーテル連結結合体を得ることができる。
【００９０】
酸不安定リンカー：本発明のアミノ基含有プロドラッグは、上記した通り（Ｗ．Ａ．Ｂｌａｔｔｌｅｒ  ｅｔ  ａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ２４、１５１７−１５２４（１９８５）；米国特許第４５４２２２５号、同４５６９７８９号、同４６１８４９２号、同４７６４３６８号）、酸不安定リンカーを介して抗体および他の細胞結合剤に連結することができる。
【００９１】
同様に、本発明のヒドラジド基含有プロドラッグは、酸不安定ヒドラゾンリンカーを介して、抗体および他の細胞結合剤の炭水化物部分に連結することができる（ヒドラゾンリンカーの例として、Ｂ．Ｃ．Ｌａｇｕｚｚａ  ｅｔ  ａｌ、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．、３２、５４８−５５５（１９８９）；Ｒ．Ｓ．Ｇｒｅｅｎｆｉｅｌｄ  ｅｔ  ａｌ、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．、５０、６６００−６６０７（１９９０）参照）。
【００９２】
感光性リンカー：本発明のアミン基含有プロドラッグは、上記した通り（Ｐ．Ｓｅｎｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ、Ｐｈｏｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ａｎｄ  Ｐｈｏｔｏｂｉｏｌｏｇｙ、４２、２３１−２３７（１９８５）；米国特許第４６２５０１４号）、感光性リンカーを介して、抗体および他の細胞結合剤に連結することができる。
【００９３】
ペプチダーゼ不安定性リンカー：本発明のアミン基含有プロドラッグは、ペプチドスペーサーを介して細胞結合剤に連結してもよい。薬物と高分子タンパク質担体との間の短いペプチドスペーサーは血清中で安定であるが、細胞内ペプチダーゼにより容易に加水分解することが既に示されている（Ａ．Ｔｒｏｕｅｔ  ｅｔ  ａｌ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、７９、６２６−６２９（１９８２））。アミノ基含有プロドラッグは、１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド−ＨＣｌ（ＥＤＣ−ＨＣｌ）などの縮合剤を用いてペプチドと縮合し、細胞結合剤に連結できるペプチド誘導体を生成することができる。
【００９４】
エステラーゼ不安定性リンカー：ヒドロキシアルキル基を有する本発明のプロドラッグは、無水コハク酸でサクシニル化し、次いで、細胞結合剤に連結し、細胞内エステラーゼにより開裂して遊離薬物を遊離させることができる結合体を生成することができる（例えば、Ｅ．Ａｂｏｕｄ−Ｐｉｒａｋ  ｅｔ  ａｌ、Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．、３８、６４１−６４８（１９８９）参照）。
【００９５】
抗体、抗体断片、タンパク質またはペプチドホルモン、タンパク質またはペプチド成長因子、および他のタンパク質のＣＣ−１０６５類似体結合体は、公知の方法により同様にして作製する。例えば、ペプチドおよび抗体は、公知の方法により、Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート、Ｎ−スクシンイミジル４−（２−ピリジルジチオ）ペンタノエート（ＳＰＰ）、４−スクシンイミジル−オキシカルボニル−α−メチル−α−（２−ピリジルジチオ）−トルエン（ＳＭＰＴ）、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）ブチレート（ＳＤＰＢ）、スクシンイミジルピリジルジチオプロピオネート（ＳＰＤＰ）、４−（２−ピリジルジチオ）ブタン酸Ｎ−ヒドロスクシンイミドエステル（ＳＰＤＢ）、スクシンイミジル４−［Ｎ−マレイミドメチル］シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）、Ｎ−スルホスクシンイミジル−３−（２−（５−ニトロ−ピリジルジチオ）ブチレート（ＳＳＮＰＢ）、２−イミノチオラン、またはＳアセチル無水コハク酸などの架橋試薬で改変することができる。Ｃａｒｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ、１７３  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．７２３−７３７（１９７８）；Ｂｌａｔｔｌｅｒ  ｅｔ  ａ１、２４  Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５１７−１５２４（１９８５）；Ｌａｍｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ、２２  Ｂｉｏｃｈｅｍ．３９１３−３９２０（１９８３）；Ｋｌｏｔｚ  ｅｔ  ａｌ、９６  Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．６０５（１９６２）；およびＬｉｕ  ｅｔ  ａｌ、１８  Ｂｉｏｃｈｅｍ．６９０（１９７９）、Ｂｌａｋｅｙ  ａｎｄ  Ｔｈｏｒｐｅ、１  Ａｎｔｉｂｏｄｙ、Ｉｍｍｕｎｏｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ＆Ｒａｄｉｏ−ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、１−１６（１９８８）、Ｗｏｒｒｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ  １  Ａｎｔｉ−Ｃａｎｃｅｒ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ  １７９−１８４（１９８６）を参照されたい。こうした由来の遊離または保護チオール含有細胞結合剤を、次いで、ジスルフィドまたはチオール含有ＣＣ６１０６５プロドラッグ類似体と反応させて結合体を生成する。結合体は、標準カラムクロマトグラフィー、ＨＰＬＣ、またはゲルろ過により精製することができる。
【００９６】
好ましくは、単クローン抗体−または細胞結合剤−ＣＣ−１０６５プロドラッグ類似体結合体は、ジスルフィド結合を介して接合しており、上記で考察した通り、ＣＣ−１０６５プロドラッグ類似体を送達できる結合体である。
【００９７】
こうした細胞結合性結合体はスクシンイミジルピリジル−ジチオプロピオネート（ＳＰＤＰ）で単クローン抗体を改変するなどの公知の方法により調製することができる（Ｃａｒｌｓｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ、１７３  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．７２３−７３７（１９７８））。生成されるチオピリジル基を、次いで、チオール含有ＣＣ−１０６５プロドラッグ類似体で処理することにより置き換えて、ジスルフィド連結結合体を生成する。この方法による結合は、参照により組み込まれている米国特許５５８５４９９に完全に記載されている。
【００９８】
別法として、アリールジチオ−ＣＣ−１０６５プロドラッグ類似体の場合、細胞結合性結合体の形成は、ＣＣ−１０６５プロドラッグ類似体のアリール−チオールを、前もって抗体分子に導入したスルフヒドリル基と直接置き換えることによって達成される。ジスルフィドブリッジを介して連結している１から１０のＣＣ−１０６５プロドラッグ類似体を含有する結合体は、いずれかの方法により容易に調製される。
【００９９】
さらなる一目的によると、本発明は、医薬として許容できる担体と共に、上記で定義した通りの本発明の共役分子または式（Ｉ）の化合物を含む医薬組成物にも関する。
【０１００】
さらなる一目的によると、本発明は、標的細胞または標的細胞を含有する組織を本発明に従った医薬組成物の有効量に接触させることを含む、細胞の成長、好ましくは選択した細胞集団を死滅または阻害する方法にも関する。
【０１０１】
選択した細胞集団は、これらの癌性および／または増殖性の細胞である。
【０１０２】
さらなる一目的によると、本発明は、本発明に従った医薬組成物の有効量を、これを必要とする患者に投与することを含む癌の治療方法、好ましくは選択的治療方法にも関する。
【０１０３】
本発明によると、「癌の選択的治療」は、正常および／または非増殖性の細胞を死滅させることなく、癌性および／または増殖性の細胞を実質的に死滅させることを意味する。
【０１０４】
さらなる一目的によると、本発明は、癌治療用薬物の調製のための、上記で定義した通りの本発明の共役分子または式（Ｉ）の化合物の使用にも関する。
【０１０５】
選択した細胞集団の成長を阻害する方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、またはｅｘ  ｖｉｖｏで実施することができる。
【０１０６】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの使用例として、標的抗原を発現しない望ましい変種を除く全細胞を死滅させるため、または望ましくない抗原を発現する変種を死滅させるため、細胞培養の処理が挙げられる。
【０１０７】
非臨床的なｉｎ  ｖｉｔｒｏでの使用条件は、当技術者により容易に決定される。
【０１０８】
ｅｘ  ｖｉｖｏでの使用例として、患部細胞または悪性細胞を死滅させるため、自己骨髄を、同じ患者に移植する前に処理すること、コンピテントＴ細胞を死滅させ、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防するため、移植前に骨髄を処理することが挙げられる。
【０１０９】
癌治療または自己免疫疾患の治療における自家移植の前に骨髄から腫瘍細胞もしくはリンパ球を除去する、または移植の前に同種間の骨髄または組織からＴ細胞および他のリンパ球を除去してＧＶＨＤを予防するために臨床的ｅｘ  ｖｉｖｏ治療は、以下の通りに行うことができる。骨髄は、患者または他の個体から収集し、次いで、本発明の細胞毒性剤を添加する血清を含有する培養液中で、約１０μＭから１ｐＭの範囲の濃度、約３０分から約４８時間、約３７℃でインキュベートする。インキュベーション（＝用量）の濃度および時間の正確な条件は、熟練技術者により容易に決定される。インキュベーション後、骨髄細胞は、血清を含有する培養液で洗浄し、公知の方法に従って静脈内注入により患者に戻す。骨髄の収集および処理された細胞の再注入の時間の間、患者が切除化学療法または全身照射の過程など他の治療を受ける環境において、処理した髄細胞は、標準的医療装置を使用し、液体窒素中に冷凍保存する。
【０１１０】
臨床的なｉｎ  ｖｉｖｏでの使用に関し、本発明の細胞毒性剤は、無菌性および内毒素濃度を試験する溶液として、または注射用滅菌水に再溶解できる凍結乾燥個体として供給される。結合体投与の適当なプロトコールの例は以下の通りである。結合体は、静脈内ボーラスとして６週の間毎週与えられる。ボーラス用量は、ヒト血清アルブミンを添加することができる規定生理食塩水５０ｍｌから４００ｍｌで与えられる（例えば、ヒト血清アルブミンの濃縮溶液１００ｍｇ／ｍＬの０．５ｍＬから１ｍＬ）。投与量は、静脈内で１週当たり体重の約５０μｇから１０ｍｇ／ｋｇとなる（１注射当たり１０μｇから１００ｍｇ／ｋｇの範囲）。治療６週間後、患者は治療の第二過程を受けることができる。投与経路、賦形剤、希釈剤、投与量、時間等に関する特定の臨床的プロトコールは、臨床的状況が保証する場合、熟練技術者により決定することができる。
【０１１１】
選択した細胞集団を死滅させるｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏでの方法に従って治療することができる病状の例として、例えば、肺、乳房、大腸、前立腺、腎臓、膵臓、卵巣、およびリンパ器官の癌；メラノーマ；全身性ループス、関節リウマチ、および多発性硬化症などの自己免疫疾患；腎臓移植拒絶、肝臓移植拒絶、肺移植拒絶、心臓移植拒絶、および骨髄移植拒絶などの移植片拒絶；移植片対宿主病；ＣＭＶ感染症、ＨＩＶ感染症、ＡＩＤＳ、等などのウイルス感染症；細菌感染症；ならびにジアルジア症、アメーバ症、住血吸虫症、および当業者により決定された他の症状などの寄生虫感染症を含む、任意の種類の悪性疾患が挙げられる。
【０１１２】
本明細書に記載した疾患および状態の治療が必要であるこれらの対象の同定は、当業者の能力および知識の範囲内で十分である。当技術において熟練した獣医または医師は、臨床試験、理学的検査、病歴／家族歴、または生物試験および診断試験を用いることにより、こうした治療が必要であるこれらの対象を容易に同定することができる。
【０１１３】
治療有効量は、従来技術の利用により、および類似の環境下で得られた結果を観察することよって、当業者である担当診断医により容易に決定することができる。治療有効量の決定において、これらに限定されないが、対象種；対象の大きさ、年齢、および全般的な健康；関与する特異的疾患；関与の程度または疾患の重症度；個体対象の反応；特定の投与化合物；投与方法；投与製剤に特徴的な生物学的利用能；選択する投与計画；併用薬の使用；ならびに他の関連する環境を含むいくつかの要因が担当診断医により検討される。
【０１１４】
所望の生物学的効果を達成するのに必要である、式（Ｉ）の化合物または結合体の量は、用いる化合物の化学的特性（例えば、疎水性）、化合物の効力、疾患の種類、患者が属する種、患者の患部状態、投与経路、選択経路による化合物の生物学的利用能、投与するのに必要な投与量、送達量、および計画を決定する全要因を含むいくつかの要因に依存して変化する。
【０１１５】
本明細書で使用される場合、「医薬として許容できる賦形剤」として、防腐剤または抗酸化剤、充填剤、崩壊剤、湿潤剤、乳化剤、懸濁剤、溶媒、分散媒、コーティング剤、抗菌剤および抗かび剤、ならびに等張遅延剤および吸収遅延剤など、任意の担体、希釈剤、助剤、または賦形剤が挙げられる。医薬活性物質用のこうした媒体および薬剤の使用は、当技術分野においてよく知られている。任意の従来の媒体または薬剤が活性成分と相容性がない場合を除いて、該治療組成物における使用を企図する。補助活性成分も、適当な治療組合せ剤として組成物中へ組み込むことができる。
【０１１６】
本発明の文脈において、本明細書で使用される「治療する」または「治療」という用語は、こうした用語が適応する障害もしくは状態、またはこうした障害もしくは状態の１つもしくは複数の症状の進行の逆転、緩和、阻害、または予防を意味する。
【０１１７】
一般には、本発明の化合物は、非経口投与に対して０．１％ｗ／ｖから１０％ｗ／ｖの化合物を含有する生理緩衝水溶液で提供することができる。通常の用量範囲は１日当たり体重の１μｇ／ｋｇから０．１ｇ／ｋｇであり、好ましい用量範囲は１日当たり体重の０．０１ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ、またはヒト小児における等価用量である。投与される薬物の好ましい用量は、疾患または障害の進行のタイプおよび程度、特定患者の総合的な健康状態、選択した化合物の相対的な生物学的有効性、化合物の剤形、（静脈内、筋肉内、または他の）投与経路、選択した送達経路による化合物の薬物動態学的特性、ならびに投与の（ボーラスまたは持続注入の）速さおよびスケジュール（所定期間における反復数）などの可変要素に依存する可能性が高い。
【０１１８】
本発明の化合物は単位用量形態において投与することも可能であるが、この「単位用量」という用語は、患者に投与することが可能であり、以下に記載する通り、活性化合物自体を含む物理的および化学的に安定な単位用量として、または医薬として許容できる組成物としてとどまりながら、取り扱いおよび包装が容易にできる単回用量を意味する。したがって、通常の１日総用量範囲は体重の０．０１ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇである。一般的手引きとして、ヒトに対する単位用量は、１日当たり１ｍｇから３０００ｍｇの範囲である。好ましくは、単位用量範囲は、１日１回から６回で投与される１ｍｇから５００ｍｇであり、一層好ましくは１日１回１０ｍｇから５００ｍｇである。本発明で提供される化合物は、１つ以上の医薬として許容できる賦形剤と混合することにより医薬組成物に処方することができる。こうした単位用量組成物は、特に錠剤、単純なカプセル、もしくはソフトゲルカプセルの形態において経口投与により；または特に散剤、点鼻薬、もしくはエアロゾルの形態において鼻腔内で；または経皮的に、例えば、軟膏剤、クリーム、ローション、ゲル、もしくはスプレー剤において、または経皮パッチを介して局所的に使用するために調製することができる。
【０１１９】
前記組成物は、単位剤形において投与するのが好都合である場合があり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、２０ｔｈ  ｅｄ．；Ｇｅｎｎａｒｏ、Ａ．Ｒ．、Ｅｄ．；Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ：Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ、２０００において記載されている通り、製薬技術においてよく知られている方法のいずれかにより調製することができる。
【０１２０】
好ましい製剤として、本発明の化合物が経口または非経口投与のために配合される医薬組成物が挙げられる。
【０１２１】
経口投与のため、錠剤、丸薬、散剤、カプセル、およびトローチなどは、以下成分の任意の１つ以上、または同様の性質の化合物を含有することができる：微結晶性セルロースもしくはトラガカントガムなどの結合剤；デンプンもしくはラクトースなどの希釈剤；デンプンおよびセルロースの誘導体などの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤；コロイド状二酸化ケイ素などの流動促進剤；ショ糖もしくはサッカリンなどの甘味剤；またはペパーミントもしくはメチルサリチレートなどの香味剤。カプセルは、可塑剤と任意選択によりブレンドされたゼラチンブレンドから一般に製作される硬カプセルまたは軟カプセル、ならびにデンプンカプセルの形態であってよい。さらに、投与単位形態は、投与単位の物理的形態、例えば、糖、セラック、または腸溶性コーティング剤を改変する様々な他の材料を含有することができる。他の経口剤形のシロップまたはエリキシル剤は、甘味剤、防腐剤、色素、着色剤、および香味剤を含有することができる。さらに、該活性化合物は、速い溶解、改変放出、または徐放の調製物および製剤に組み込むことができ、この場合、こうした徐放製剤はバイモーダルが好ましい。好ましい錠剤は、任意の組合せにおいて、ラクトース、コーンスターチ、ケイ酸マグネシウム、クロスカルメロースナトリウム、ポビドン、ステアリン酸マグネシウム、またはタルクを含有する。
【０１２２】
非経口投与のための液体調製物として、滅菌の水溶液または非水溶液、懸濁液、および乳濁液が挙げられる。液体組成物は、結合剤、緩衝剤、防腐剤、キレート剤、ならびに甘味剤、香味剤、および着色剤なども含むことができる。非水性溶媒として、アルコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、オリーブ油の植物油、およびオレイン酸エチルなどの有機エステルが挙げられる。水性担体として、アルコールと水との混合物、緩衝化媒体、および生理食塩水が挙げられる。特に生体適合性、生分解性のラクチドポリマー、ラクチド／グリコリドコポリマー、またはポリオキシエチレンポリオキシプロピレンコポリマーは、活性化合物の放出を制御する有用な賦形剤であり得る。静脈内の賦形剤として、流動および栄養の補充液、ならびにリンゲルデキストロースに基づくものなどの電解質補充液などが挙げられる。これらの活性化合物のための潜在的に有用な非経口の他の送達系として、エチレン−酢酸ビニルコポリマー粒子、浸透圧ポンプ、移植可能な注入系、およびリポソームが挙げられる。
【０１２３】
投与の代替方法として吸入用製剤が挙げられ、吸入用製剤には乾燥散剤、エアロゾル、または点滴剤などの手段が挙げられる。これらは、例えば、ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル、グリココレート、およびデオキシコレートを含有する水溶液、または点鼻薬の形態における、もしくは鼻腔内で適用されるゲルとしての投与用油性溶液であってよい。口腔内投与のための製剤として、例えば、舐剤またはパステル剤が挙げられ、ショ糖またはアカシアなどの香料ベース、およびグリココレートなどの他の賦形剤も挙げることができる。直腸投与に適当な製剤は、カカオ脂など固体型担体を使用する単位用量坐剤として提供されるのが好ましく、サリチレートを含むことができる。皮膚に対する局所適用製剤は、軟膏、クリーム、ローション、ペースト、ゲル、スプレー、エアロゾル、またはオイルの形態をとるのが好ましい。使用することができる担体として、石油ゼリー、ラノリン、ポリエチレングリコール、アルコール、またはこれらの組合せが挙げられる。経皮投与に適当な製剤は個別パッチとして提供することができ、親油性の乳濁液または緩衝水溶液であってよく、ポリマーまたは接着剤中に溶解および／または分散することができる。
【０１２４】
細胞結合剤と本発明のプロドラッグとの間の結合体のｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性
本発明のプロドラッグ、および細胞結合剤とのこれらの結合体の細胞毒性は、保護基の開裂および活性薬物への転換後に測定することができる。ナマルバおよびＨＬ６０などの非粘着性株化細胞に対する細胞毒性は、Ｇｏｌｄｍａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ、１３５  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．３６４８−３６５１（１９８５）に記載の通り、細胞増殖曲線の逆外挿により測定することができる。Ａ−３７５およびＳＣａＢＥＲなどの付着性株化細胞に対するこれらの化合物の細胞毒性は、Ｇｏｌｄｍａｃｈｅｒ  ｅｔ  ａｌ、１０２  Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．１３１２−１３１９（１９８６）に記載の通り、クローン原性アッセイにより決定することができる。
【０１２５】
選択した細胞集団の成長を阻害する治療剤および方法
本発明は、
（ａ）細胞結合剤に連結する上記のプロドラッグの１つ以上の細胞毒量、および
（ｂ）医薬として許容できる担体、希釈剤、または賦形剤
を含む、選択した細胞集団の成長を阻害する治療剤も提供する。
【０１２６】
同様に、本発明は、前記の選択した細胞集団由来の細胞を含有していると疑わしい細胞集団または組織を、細胞結合剤に連結する上記プロドラッグの１つ以上を含む、細胞毒性剤の細胞毒量と接触させることを含む、選択した細胞集団の成長を阻害する方法を提供する。
【０１２７】
細胞毒性剤は上記した通りに調製する。
【０１２８】
医薬として許容できる適当な担体、希釈剤、および賦形剤はよく知られており、臨床的な状況が保障する場合、当業者により決定することができる。
【０１２９】
適当な担体、希釈剤、および／または賦形剤の例として、（１）ヒト血清アルブミンを約１ｍｇ／ｍｌから２５ｍｇ／ｍｌ含有する、ｐＨ約７．４のダルベッコリン酸緩衝生理食塩水、（２）０．９％生理食塩水（０．９％ｗ／ｖ  ＮａＣｌ）、および（３）５％（ｗ／ｖ）デキストロースが挙げられる。
【０１３０】
選択した細胞集団の成長を阻害する方法は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、ｉｎ  ｖｉｖｏ、またはｅｘ  ｖｉｖｏで実施することができる。
【０１３１】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの使用例として、細胞培養を処理して、標的抗原を発現しない所望の変種を除く全細胞を死滅させるか、所望されない抗原を発現する変種を死滅させることが挙げられる。
【０１３２】
非臨床的なｉｎ  ｖｉｔｒｏでの使用の条件は、熟練技術者により容易に決定される。
【０１３３】
ｅｘ  ｖｉｖｏでの使用例として、自己骨髄を同じ患者に移植する前に自己骨髄を処理して患部細胞もしくは悪性細胞を死滅させるか、骨髄を移植前に処理してコンピテントＴ細胞を死滅させ、移植片対宿主病（ＧＶＨＤ）を予防することが挙げられる。
【０１３４】
癌治療もしくは自己免疫疾患の治療において自家移植の前に骨髄由来の腫瘍細胞または腫瘍リンパ球を除去する、またはＧＶＨＤを予防するため移植の前に同種間の骨髄もしくは組織由来のＴ細胞および他のリンパ球を除去する臨床的なｅｘ  ｖｉｖｏ治療は、以下の通りに行うことができる。骨髄は、患者または他の個体から収集され、次いで、本発明の細胞毒性剤が添加される血清を含有する培養液中で、約１０μＭから１ｐＭの濃度範囲、約３０分から約４８時間、約３７℃でインキュベートする。インキュベーション（＝用量）の濃度および時間の正確な条件は、熟練技術者により容易に決定される。インキュベーション後、骨髄細胞は、血清を含有する培養液で洗浄し、公知の方法に従って静脈内注入により患者に戻す。骨髄の収集および処理された細胞の再注入の時間の間、患者が切除化学療法または全身照射の過程など他の治療を受ける環境においては、処理した髄細胞は、標準的医療装置を使用して液体窒素中に冷凍保存する。
【０１３５】
ｉｎ  ｖｉｖｏでの臨床的使用に関し、本発明の細胞毒性剤は、無菌性および内毒素濃度を試験する溶液として、または注射用滅菌水に再溶解できる凍結乾燥個体として供給される。結合体投与の適当なプロトコールの例は以下の通りである。結合体は、静脈内ボーラスとして６週の間毎週与えられる。ボーラス用量は、ヒト血清アルブミンを添加することができる規定生理食塩水５０ｍｌから４００ｍｌで与えられる（例えば、ヒト血清アルブミンの濃縮溶液１００ｍｇ／ｍＬを、０．５ｍＬから１ｍＬ）。投与量は、静脈内で１週当たり体重の約５０μｇから１０ｍｇ／ｋｇとなる（１注射当たり１０μｇから１００ｍｇ／ｋｇの範囲）。治療６週間後、患者は治療の第二過程を受けてよい。投与経路、賦形剤、希釈剤、投与量、時間等に関する特定の臨床的プロトコールは、臨床的状況により保証される場合、熟練技術者により決定することができる。
【０１３６】
選択した細胞集団を死滅させるｉｎ  ｖｉｖｏまたはｅｘ  ｖｉｖｏでの方法に従って治療することができる病状の例として、例えば、肺、乳房、大腸、前立腺、腎臓、膵臓、卵巣、およびリンパ器官の癌；メラノーマ；全身性ループス、関節リウマチ、および多発性硬化症などの自己免疫疾患；腎臓移植拒絶、肝臓移植拒絶、肺移植拒絶、心臓移植拒絶、および骨髄移植拒絶などの移植片拒絶；移植片対宿主病；ＣＭＶ感染症、ＨＩＶ感染症、ＡＩＤＳ、等などのウイルス感染症；細菌感染症；ならびにジアルジア症、アメーバ症、住血吸虫症、および当業者により決定された他の症状などの寄生虫感染症を含む、任意の種類の悪性疾患が挙げられる。
【０１３７】
（実施例）
次に本発明を、非限定的実施例を参照することにより例証する。別段の提示がない限り、全ての百分率、割合、部などは重量による。
【０１３８】
材料および方法
融点は、電熱装置を使用して測定し、未修正である。ＮＭＲスペクトルはＢｒｕｋｅｒ  ＡＶＡＮＣＥ４００（４００ＭＨｚ）分光計上で記録した。化学シフトは、内部標準としてＴＭＳに対するｐｐｍで報告される。質量スペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  Ｅｓｑｕｉｒｅ  ３０００システムを使用して得た。紫外線スペクトルは、日立  Ｕ１２００分光光度計上で記録した。ＨＰＬＣは、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒシステム  ＧＯＬＤ  １６８可変波長検出器およびＷａｔｅｒｓ  Ｒａｄｉａｌｐａｋ（逆相Ｃ−１８カラム）を装備したＢｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ  ＧＯＬＤ  １２５システムを使用して行った。薄層クロマトグラフィーは、Ａｎａｌｔｅｃｈ  ＧＦ  シリカゲルＴＬＣプレート上で行った。フラッシュカラムクロマトグラフィー用シリカゲルは、Ｂａｋｅｒから入手した。テトラヒドロフランは、ナトリウム金属上で蒸留により乾燥させた。ジメチラクトアミドおよびジメチルホルムアミドは、水素化カルシウム上で、減圧下で蒸留することにより乾燥した。使用した他の全ての溶媒は、試薬用またはＨＰＬＣ用であった。
【０１３９】
プロドラッグＤＣ０７（７ａ）、ＤＣ０８（８ａ）、およびＤＣ１０７（図４）の合成を、本明細書において記載する。ＤＣ０７およびＤＣ０８ならびにＤＣ１０７は、親薬物ＤＣ１およびＤＣ１０１から由来するが、ＤＣ０９（９ａ）は、ペグ化した親薬物ＤＣ５から調製することができ、このことは米国特許６７５６３９７Ｂ２（図３）に記載されている。プロドラッグＤＣ０７は、ｐＨ５．５以下の水溶液中で極めて安定であり、血清または血漿中におけるインキュベーションにより親薬物ＤＣ１に変換することができる。これらの薬物は、ＤＣ１と比較して水溶性も向上している。マウス血清におけるＤＣ０７ＳＭｅのインキュベーションにより、ＤＣ０７ＳＭｅを親薬物ＤＣ１ＳＭｅに変換する。
【０１４０】
ヒト癌株化細胞ＨＬ６０、ナマルバ、Ａ−３７５、ＣＯＬＯ２０５、およびラモスは、アメリカン・タイプ・カルチャー・コレクション（ＡＴＣＣ）から得た。Ｋａｒａは、ヒトＣＤ３３抗原で安定に形質移入したマウス腫瘍株化細胞である。
【実施例１】
【０１４１】
（Ｓ）−Ｎ−［２−｛（１−クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−５−［（３−ヒドロキシスルホニフェニル）アミノカルボニルオキシ］−３Ｈ−ベンズ（ｅ）インドール−３−イル｝カルボニル］−１Ｈ−インドール−５−イル］−５−［（３−メチルジチオプロパノイル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド（ＤＣ０７−ＳＭｅ、７ｂ）の調製
ＤＣ１ＳＭｅ（１−［Ｓ］−（クロロメチル）−５−ヒドロキシ−３−｛｛５−［５−（３−メチルジチオプロピオニル）インドール−２−イル−カルボニルアミノ］インドール−２−イル｝カルボニル｝−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ベンズ［ｅ］インドール）１１．６ｍｇ（０．０１７ｍｍｏｌ）のＤＭＡ２．５ｍｌ溶液に、ＤＩＰＥＡ３．０μｌを添加した。Ａｒ下で３分間撹拌した後、カルボニルジイミダゾール４．０ｍｇ（１．４６当量）を添加した。混合物を２時間撹拌し、ＴＬＣにより全てのＤＣ１ＳＭｅが消費されたのが示され、次いで、新たに調製した３−アミノベンゼンスルホネートジイソプロピルエチルアミン塩１６ｍｇ（３当量）（ｐＨ５）を添加した。混合物をＡｒ下で終夜撹拌し、ＨＰＬＣにより反応が完了したことが示された。混合物をオイルポンプで蒸発させ、０．０１％酢酸１００％から０．０１％酢酸５０％およびＴＨＦ５０％で希釈したＣ−１８カラム（１．０×５ｃｍ）で精製した。画分をプールし、蒸発させて、標題化合物（ＤＣ０７ＳＭｅ）１１．８ｍｇを得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＦ−ｄ７）１１．８５（ｂｒ，２Ｈ）、１１．７９（ｓ，１Ｈ）、１１．７０（ｓ，１Ｈ）、１０．５３（ｓ，１Ｈ）、１０．２７（ｓ，１Ｈ）、１０．０３（ｓ，１Ｈ）、８．５０（ｓ，１Ｈ）、８．４１（ｓ，１Ｈ）、８．２１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ）、８．１７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、８．１２（ｍ，１Ｈ）、７．４６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９，８．８Ｈｚ）、７．６６（ｍ，２Ｈ）、７．６１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．９Ｈｚ）、７．５８（ｍ，２Ｈ）、７．４８（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．４Ｈｚ）、７．４５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９，８．８Ｈｚ）、７．３５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６Ｈｚ）、５．０１（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ）、４．８４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２，１０．９Ｈｚ）、４．４９（ｍ，２Ｈ）、４．２１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．２，１１．３Ｈｚ）、４．１０（ｍ，２Ｈ）、３．１２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）、２．４９（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ  １７２．５２、１７０．３３、１６９．５４、１６２．９４、１６１．２０、１６０．４１、１５２．６７、１４７．９４、１４２．６９、１３９．１１、１３４．７３、１３４．５６、１３３．７２、１３３．３７、１３３．１８、１３２．１６、１３０．７２、１２８．７６、１２８．４１、１２８．３４、１２５．７１、１２５．６１、１２４．０７、１２３．１６、１２１．５１、１２０．０５、１１８．３６、１１３．５４、１１２．９７、１１２．９２、１１２．１６、１１１．６１、１０８．１４、１０７．５６、１０６．７８、１０４．０２、６９．０３、６７．９５、６７．３７、５５．８４、５４．９１、４８．１３、４２．７１、３７．０５、３４．１０、２３．１２；ＭＳ  ｍ／ｚ＋  ８３１．１４（Ｍ＋Ｈ）＋、８８３．０、８８３．９、８８４．９（Ｍ＋Ｎａ）＋、９０５．０、（Ｍ＋Ｋ）＋  ９２０．９、９２２．９；ＭＳ  ｍ／ｚ−  ８８０．８、８８１．８、８８２．８、８８３．８（Ｍ−Ｈ）−。
【実施例２】
【０１４２】
（Ｓ）−Ｎ−［２−｛（１−クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−５−［（３−ヒドロキシスルホニフェニル）−アミノカルボニルオキシ］−３Ｈ−ベンズ（ｅ）インドール−３−イル｝カルボニル］−１Ｈ−インドール−５−イル］−５−［（３−メルカプト−プロパノイル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド（ＤＣ０７、７ａ）の調製
ＴＣＥＰ  １０ｍｇ（０．１０４ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ  ２ｍｌ溶液を、ＮａＨＣＯ３粉末を添加することでｐＨ７．０に調節した。該溶液に、ＤＭＡ３ｍｌ中のＤＣ０７ＳＭｅ  １５ｍｇを、続いて２００ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４  １．０ｍｌ中のＤＴＴ  ５ｍｇ  ｐＨ４．５を添加した。２時間撹拌し、ＭＳによりＤＣ０７ＳＭｅピークが（ｍ／ｚ  ８８３（Ｍ−１））消失したことが示された後、混合物を濃縮し、４０分後に１０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４  ６０％および４０％ＤＭＡから８０％ＤＭＡで希釈した分取用ＨＰＬＣ  ｃ−１８カラムで精製した。回収した画分をプールし、濃縮し、ＤＭＡ中に再溶解し、該塩をろ過し、再び蒸発させて、ＤＣ０７  １３ｍｇを得た。ＭＳ  ｍ／ｚ−  ８３５．１（Ｍ−Ｈ）、８３６．１、８３７．１、８３８．１
【実施例３】
【０１４３】
（Ｓ）−Ｎ−［２−｛（１−クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−５−［（３−ヒドロキシスルホニルメチル−フェニル）アミノカルボニルオキシ］−３Ｈ−ベンズ（ｅ）インドール−３−イル｝カルボニル］−１Ｈ−インドール−５−イル］−５−｛［３−（２−ピリジルジチオ）−プロパノイル］−アミノ｝−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド（ＤＣ０８ＳＰｙ）の調製：
ＤＭＡ  ２ｍｌ中の（ＤＣ１ＳＰｙ）２１．０ｍｇに、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ）１０マイクロリットルを添加した。３分間Ａｒ下で撹拌し、カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）８．０ｍｇを添加し、混合物を２時間撹拌し、Ｃ−１８カラム上のＨＰＬＣで調べた後、ＤＣ１ＳｐｙをＣＤＩと完全に反応させた。該混合物に、４−アミノベンジルスルホン酸２０ｍｇ、および１０マイクロリットルのＤＩＰＥＡを添加した。終夜撹拌した後、混合物を濃縮し、１０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４中の３０％ＤＭＡ  ｐＨ４．０から１０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４中の８０％ＤＭＡ  ｐＨ４．０に希釈したＣ−１８カラム上のＨＰＬＣにより精製した。画分をプールし、濃縮して、標題化合物２０．２ｍｇを得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＦ−ｄ７）１１．６７（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝９．９Ｈｚ）、１０．５８（ｓ，１Ｈ）、１０．２３（ｓ，１Ｈ）、９．８１（ｓ，１Ｈ）、８．８６（ｄｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝０．８，１．６，２．５，１４．６）、８．４１（ｓ，１Ｈ）、８．２７−８．２０（ｍ，４Ｈ）、８．１２（ｍ，１Ｈ）、７．９５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．８３（ｍ，１Ｈ）、７．７１（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０，９．９Ｈｚ）、７．６０−７．５１（ｍ，４Ｈ）、７．４７−７．４０（ｍ，４Ｈ）、７．３０（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．６Ｈｚ）、４．９０（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝１０．０Ｈｚ）、４．７５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．２，１０．９Ｈｚ）、４．３３（ｍ，１Ｈ）、４．１５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．２，１１．３Ｈｚ）、４．１１（ｓ，２Ｈ）、３．９７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．８，１１．０Ｈｚ）、３．２９（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、２．７６（ｍ，３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ  １７２．３５、１６２．９３、１６１．２０、１６０．４１、１５５．７７、１５１．３６、１４７．９４、１４２．６９、１４０．１４、１３９．１１、１３４．７３、１３４．５６、１３３．８２、１３３．３７、１３２．９７、１３２．１６、１３１．４９、１２９．２２、１２８．８２、１２８．３４、１２５．０１、１２５．６１、１２４．１７、１２３．７６、１２１．８１、１２０．０５、１１９．３２、１１６．４３、１１３．３１、１１２．９７、１１２．９２、１１２．１６、１１１．６１、１０８．１４、１０７．５６、１０６．８３、１０１．７８、６７．３７、５６．３７、４８．１３、４２．７１、３７．００、３４．１０；ＭＳ  ｍ／ｚ−  ９５８．３４（Ｍ−１）。
【０１４４】
４−アミノベンジルスルホン酸：
２５０ｍｌパール水素化瓶に、４−ニトロベンジルスルホン酸（６．８０ｇ、３１．３４ｍｍｏｌ）、１０％Ｐｄ／Ｃ（０．４ｇ）、ＣＨ３ＯＨ（１５０ｍｌ）を、数滴の水と共に注入し、水素でパージした。反応混合物を２０ｐｓｉのＨ２で終夜振盪した。触媒をセライトに通してろ過により除去し、溶媒を蒸発させた。粗化合物を、水３×５０ｍｌで３回共蒸発させ、水／ＴＨＦ／ＥｔＡｃ／トルエン（１：１０：１０：１００）で結晶化させて、標題化合物５．３ｇ（９１％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）、７．２８（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝２．２，４．３Ｈｚ）、６．９５（ｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝２．２，４．３Ｈｚ）、４．１０（ｓ，２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ  １３４．３０、１２７．１０、１２１．０４、１２０．４２、５９．１４；ＭＳ  ｍ／ｚ−  １８６．３５（Ｍ−Ｈ）。
【０１４５】
４−ニトロフェニルチオールアセテート：
チオール酢酸５ｍｌ（６９．９５ｍｍｏｌ）とトリエチルアミン１２ｍｌとのトルエン７５ｍｌ溶液に、１：２のＴＨＦ／トルエン１００ｍｌ中の４−ニトロ臭化ベンジル７．５ｇ（３４．７１ｍｍｏｌ）を滴下により４時間添加した。混合物を終夜連続的に撹拌し、蒸発させ、ＥｔＡｃ／トルエン／ヘキサンで結晶化させて、標題化合物７．１ｇ（９６％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）８．１３（ｄｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝２．５，４．５，９．３Ｈｚ）、７．４４（ｄｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝２．５，４．５  ９．３Ｈｚ）、４．１４（ｓ，２Ｈ）、２．３５（Ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ  １９４．５３、１４５．７３、１２９．９１、１２４．０７、３２．９３、３０．５０；ＭＳ  Ｍ＋  ２３４．３４（Ｍ＋Ｎａ）。
【０１４６】
４−ニトロベンジルスルホン酸：
４−ニトロフェニルチオールアセテート７．０ｇを、４時間で、１：３のＨ２Ｏ２／ＨＡｃ溶液１５０ｍｌ中に５回に分けて添加し、混合物を終夜連続的に撹拌した。混合物を蒸発させ、水３×５０ｍｌで３回共蒸発させ、ＣＨ３ＯＨ／ＴＨＦ／トルエンで結晶化させて、標題化合物６．８２ｇ（９５％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）８．０２（ｄｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝２．７，４．６，１１．１Ｈｚ）、７．２０（ｄｄｄ，２Ｈ，Ｊ＝２．６，４．６，１１．１Ｈｚ）、４．１１（ｓ，２Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ  １４１．７０、１３９．３０、１２９．９１、１２２．０７、５９．１５；ＭＳ  ｍ／ｚ−  ２１６．２１（Ｍ−Ｈ）
【実施例４】
【０１４７】
（Ｓ）−Ｎ−［２−｛（１−クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−５−［（３−ヒドロキシスルホニルメチル−フェニル）アミノカルボニルオキシ］−３Ｈ−ベンズ（ｅ）インドール−３−イル｝カルボニル］−１Ｈ−インドール−５−イル］−５−［（３−メルカプトプロパノイル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド（ＤＣ０８）の調製
ＴＣＥＰ  １０ｍｇ（０．１０４ｍｍｏｌ）のＨ２Ｏ  ２ｍｌ溶液を、ＮａＨＣＯ３粉末を添加することでｐＨ７．０に調節した。該溶液に、ＤＭＡ  ３ｍｌ中のＤＣ０８ＳＰｙ  １５ｍｇを添加し、続いて１．０ｍｌの２００ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４中のＤＴＴ  ５ｍｇ  ｐＨ４．５を添加した。２時間撹拌し、ＭＳによりＤＣ０８ＳＰｙピーク（ｍ／ｚ  ８８３（Ｍ−１））が消失したことが示された後、混合物を濃縮し、１０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４  ６０％／ＤＭＡ４０％から１０ｍＭ  ＮａＨ２ＰＯ４  ２０％／ＤＭＡ８０％に希釈した調製ＨＰＬＣ  ｃ−１８カラムで４０分間精製した。回収した画分をプールし、濃縮乾個し、ＤＭＡ中に再溶解させ、該塩をろ過し、再び蒸発させてＤＣ０８  １３ｍｇを得た。ＭＳ  ｍ／ｚ−  ８４９．１（Ｍ−Ｈ）、８５０．１、８５１．１。
【実施例５】
【０１４８】
（Ｓ）−Ｎ−（２−（１−（クロロメチル）−５−ヒドロキシ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３−カルボニル）−１Ｈ−インドール−５−イル）−３−（メチルジスルファニル）プロパンアミド（ＤＣ１０１ＳＭｅ）
５−ヒドロキシ−３−アミノ−１−［Ｓ］−（クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−３Ｈ−ベンズ（ｅ）インドール、塩酸塩（１５５ｍｇ、０．５７ｍｍｏｌ）、および５−（３−（メチル−ジスルファニル）プロパンアミド）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（１７０ｍｇ、０．５５ｍｍｏｌ）のＤＭＡ７．０ｍｌ溶液に、ＥＤＣ（３００ｍｇ、１．５６ｍｍｏｌ）をＡｒ下で添加した。終夜撹拌した後、混合物を蒸発乾固し、ＳｉＯ２クロマトグラフィー（トルエン中の２０％から４０％のＴＨＦ）により精製し、ＴＨＦ／トルエン／ヘキサンで結晶化させて、ＤＣ１０１ＳＭｅ  ２１８ｍｇ（７６％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＦ−ｄ７）１１．６３（ｓ，１Ｈ）、１０．５６（ｓ，１Ｈ）、９．９５（ｓ，１Ｈ）、８．２３（ｓ，２Ｈ）、７．９３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ）、７．５６（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０，８．１Ｈｚ）、７．５２（ｓ，１Ｈ）、７．４７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．９，８．９Ｈｚ）、７．４１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ）、７．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ）、４．８８（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．７，１１．０Ｈｚ）、４．７３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．３，１０．９Ｈｚ）、４．３１（ｍ，１Ｈ）、４．１２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．１，１１．０Ｈｚ）、３．９５（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４，１１．２Ｈｚ）、３．２１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）、２．７１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）、２．４５（ｓ，３Ｈ）；１３Ｃ  ＮＭＲ  １６９．５４、１６１．０６、１５５．３６、１３４．２１、１３３．３９、１３２．５４、１３１．０５、１２８．３９、１２７．９９、１２３．９８、１２３．７４、１２３．４６、１２３．３１、１１８．８８、１１５．９９、１１２．８７、１１２．３１、１０６．４０、１０１．３３、５５．９３、４８．１０、４２．６１、３６．９２、３０．８１、２５．３４。ＭＳ  ｍ／ｚ＋  ５４８．２（Ｍ＋Ｎａ）、５５０．２（Ｍ＋２＋Ｎａ）。
【０１４９】
５−（３−（メチルジスルファニル）プロパンアミド）−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸
３−（メチルジスルファニル）プロパン酸（１．１８ｇ、７．７６ｍｍｏｌ）のＤＭＡ  ５０ｍｌ溶液に、ヒドロキシスクシンイミド（１．１４ｇ、９．９０ｍｍｏｌ）およびＥＤＣ（１．９１ｇ、９．９６ｍｍｏｌ）をアルゴン下で添加した。混合物を終夜撹拌した。ＴＬＣ（１：６のＥｔＡｃ／ヘキサン）により完了を確認した後、混合物をさらに精製することなく、次のステップに直接使用した。
【０１５０】
５−アミノ−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（１．３２ｇ、７．４９ｍｍｏｌ）の１：４の０．５Ｍ  Ｎａ２ＨＰＯ４、ｐＨ８．０／ＤＭＡ  ５０ｍｌ溶液  ０℃に、上記で調製したＮＨＳエステル溶液を１時間一滴ずつ添加した。添加後、混合物を４℃で１時間、次いでＲＴで１時間続けて撹拌した。混合物を濃縮し、ＴＨＦ／トルエン／酢酸（１：４：０２％から１：２：０．０２％）で希釈したＳｉＯ２クロマトグラフィー上で精製して標題生成物（１．６２ｇ、７０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＦ−ｄ７）１２．８０（ｂｒ，０．８Ｈ）、１１．６６（ｓ，１Ｈ）、９．９６（ｓ，１Ｈ）、８．１７（ｓ，１Ｈ）、７．４４（ｓ，２Ｈ）、７．１４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．０Ｈｚ）、３．２０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝６．９Ｈｚ）、２．７２（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．０Ｈｚ）、２．３７（ｓ，３Ｈ）。１３Ｃ  ＮＭＲ  １６９．５３、１６３．４５、１３５．２４、１３３．３８、１３０．１２、１２７．９９、１１９．１３、１１３．１０、１１２．２７、１０８．０４、３６．８８、３０．６０。ＭＳ  ｍ／ｚ−  ３０９．２０（Ｍ−１）。
【実施例６】
【０１５１】
（Ｓ）−３−（（１−（クロロメチル）−３−（５−（３−（メチルジスルファニル）プロパンアミド）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イルオキシ）カルボニルアミノ）ベンゼンスルホン酸（ＤＣ１０７ＳＭｅ）
ＤＣ１０１ＳＭｅ（（Ｓ）−Ｎ−（２−（１−（クロロメチル）−５−ヒドロキシ−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−３−カルボニル）−１Ｈ−インドール−５−イル）−３−（メチルジスルファニル）プロパンアミド、１００ｍｇ  ０．１９ｍｍｏｌ）のＤＭＡ  １０ｍｌ溶液に、ＤＩＰＥＡ（３５μｌ、０．２０ｍｍｏｌ）を添加した。Ａｒ下で３分間撹拌した後、カルボニルジイミダゾール３２．０ｍｇ（０．２０ｍｍｏｌ）を添加した。混合物を２時間撹拌し、ＴＬＣにより全てのＤＣ１０１ＳＭｅが消費されたことが示され、次いで、新たに調製した３−アミノベンゼンスルホネートジイソプロピルエチルアミン塩（６５ｍｇ、０．２１ｍｍｏｌ）を添加した。混合物をＡｒ下で２４時間撹拌し、ＨＰＬＣにより反応が完了したことが示され、ＤＣ１０７ＳＭｅ［（Ｓ）−３−（（１−（クロロメチル）−３−（５−（３−（メチル−イスルファニル）プロパンアミド）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イルオキシ）カルボニルアミノ）ベンゼンスルホン酸］が形成された。混合物をおよそ５ｍｌまでオイルポンプで濃縮し、さらに精製することなく、次のステップに直接使用した。
【実施例７】
【０１５２】
（Ｓ）−３−（（１−（クロロメチル）−３−（５−（３−メルカプトプロパンアミド）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イルオキシ）カルボニルアミノ）ベンゼンスルホン酸（ＤＣ１０７）
上記の濃縮溶液に、１：１のＤＭＡ／０．４Ｍ  ＮａＨ２ＰＯ４  １０ｍｌ中のＴＣＥＰ  ６０ｍｇ（０．６２ｍｍｏｌ）  ｐＨ４．０を添加した。Ａｒ下で４時間撹拌した後、混合物を濃縮し、ＤＭＡ中の０．０１％酢酸９０％からＤＭＡ中の０．０１％酢酸４０％で希釈したＣ１８カラムで精製した。画分をプールし、蒸発させて、（Ｓ）−３−（（１−（クロロメチル）−３−（５−（３−メルカプトプロパンアミド）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イルオキシ）カルボニルアミノ）ベンゼンスルホン酸（ＤＣ１０７）９４ｍｇ（７３％、２つのステップ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＦ−ｄ７）１１．６３（ｓ，１Ｈ）、１０．５１（ｓ，１Ｈ）、９．８９（ｓ，１Ｈ）、８．３３（ｓ，２Ｈ）、７．９３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．３Ｈｚ）、７．５８（ｍ，２Ｈ）、７．５２（ｍ，２Ｈ）、７．４７（ｍ，２Ｈ）、７．４１（ｍ，１Ｈ）、７．３８（ｍ，１Ｈ）、７．２５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝１．７Ｈｚ）、４．８７（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．７，１１．０Ｈｚ）、４．７４（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝２．３，１０．９Ｈｚ）、４．３２（ｍ，１Ｈ）、４．１２（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝３．０，１１．０Ｈｚ）、３．９３（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．４，１１．２Ｈｚ）、３．２１（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）、２．７０（ｔ，２Ｈ，Ｊ＝７．１Ｈｚ）；１３Ｃ  ＮＭＲ  １６９．５５、１６１．３０、１５５．４６、１５０．２１、１４３．４５、１３４．２２、１３３．３７、１３２．５４、１３１．３５、１３０．３１、１２８．３８、１２７．９５、１２３．７８、１２３．７２、１２３．４８、１２３．３３、１２１．４１、１１８．８８、１１５．９０、１１２．８８、１１２．３５、１０６．４４、１０１．３８、５５．９５、４８．６０、４２．６７、３６．９０、２５．０１。ＭＳ  ｍ／ｚ−  ６７６．９０（Ｍ−Ｈ）、ε３４０ｎｍ＝１９０２５Ｍ−１ｃｍ−１。
【０１５３】
単クローン抗体に対するＤＣ０７の結合。ヒトＡＭＬ細胞の表面に優先的に発現するＣＤ３３抗原に結合するｈｕＭｙ９−６抗体が、ＤＣ０７の結合のために選択された。
【実施例８】
【０１５４】
ｈｕＭｙ９−６−ＳＳＮＰＢ−ＤＣ０７の調製：ジスルフィド連結結合体
第一ステップにおいて、抗体を変性剤Ｎ−スルホスクシンイミジル５−ニトロ−２−ピリジルジチオブタノエート（ＳＳＮＰＢ）と反応させて、ニトロピリジルジチオ基を導入した。０．０５Ｍリン酸カリウム、０．０５Ｍ塩化ナトリウム、２ｍＭエチレンジアミンテトラ−酢酸（ＥＤＴＡ）、３％ジメチルアセトアミド（ＤＭＡ）  ｐＨ６．５を含有する濃度８．５ｍｇ／ｍＬのｈｕＭｙ９−６抗体の緩衝水溶液を、７．５倍モル過剰のＳＳＮＰＢ（ＤＭＡ中に２０ｍＭ貯蔵）溶液で処理した。反応混合物を室温で９０分間撹拌し、０．１Ｍ  ＮａＨ２ＰＯ４、５０ｍＭ  ＮａＣｌ  ｐＨ６．５を含有する水性緩衝液に前もって平衡化しておいたセファデックスＧ２５プレパックカラム上で精製した。精製試料により９８％の生成を得た。改変抗体の小分割量をジチオトレイトールで処理して、ニトロ−ピリジルジスルフィドを開裂し、放出されたニトロ−ピリジン−２−チオネインを分光光度法でアッセイした。ニトロピロジン−２−チオネイン：ε３２５ｎｍ＝１０，９６４Ｍ−１ｃｍ−１およびε２８０ｎｍ＝３，３４４Ｍ−１ｃｍ−１、ならびに抗体：ε２８０ｎｍ＝２０６，４６０Ｍ−１ｃｍ−１。抗体の分子当たり平均５．０のニトロピリジルジスルフィド基が連結していた。
【０１５５】
改変抗体を、５％ＤＭＡでｐＨ６．５の上記緩衝液中２．０ｍｇ／ｍＬにまで希釈し、次いで、ＤＣ０７のＤＭＡ溶液で処理し、リンカー当たり薬物２．５の薬物過剰であった。結合混合物を室温で３０分反応させた。反応混合物を、２０％ＤＭＡ、０．１Ｍ  ＮａＨ２ＰＯ４、５０ｍＭ  ＮａＣｌ  ｐＨ５．０に前もって平衡化しておいたセファクリルＳ３００ゲルろ過カラムの通過により精製した。モノマー抗体−ＤＣ０７結合体を含有する画分をプールし、１０ｍＭクエン酸、１３５ｍＭ  ＮａＣｌ  ｐＨ５．０に透析した。最終結合体を、次の吸光係数を使用して分光光度法でアッセイした。薬物：ε３４０ｎｍ＝３８，０００Ｍ−１ｃｍ−１、ε２８０ｎｍ＝２３，０００Ｍ−１ｃｍ−１、および抗体：ε２８０ｎｍ＝２０６，４６０Ｍ−１ｃｍ−１。結合体は抗体当たり薬物３．５を含有していた。
【実施例９】
【０１５６】
ｈｕＭｙ９−６−ＳＭＣＣ−ＤＣ０７の調製：チオエーテル連結結合体
第一ステップにおいて、抗体を変性剤スクシンイミジル４−（Ｎ−マレイミドメチル）シクロヘキサン−１−カルボキシレート（ＳＭＣＣ）と反応させた。０．０５Ｍリン酸カリウム、０．０５Ｍ塩化ナトリウム、および２ｍＭエチレンジアミンテトラ−酢酸（ＥＤＴＡ）、３％ＤＭＡ  ｐＨ６．５を含有する濃度８．５ｍｇ／ｍＬのｈｕＭｙ９−６抗体の緩衝水溶液を、８．５倍モル過剰のＳＭＣＣ（ＤＭＡ中で２０ｍＭ）溶液で、９０分間室温で処理した。改変抗体を、０．１Ｍ  ＮａＨ２ＰＯ４、５０ｍＭ  ＮａＣｌ  ｐＨ６．５を含有する水性緩衝液に前もって平衡化しておいたセファデックスＧ２５プレパックカラム上で精製した。精製試料を、分光光度法（ε２８０ｎｍ＝２０６，４６０Ｍ−１ｃｍ−１）でアッセイして、抗体の濃度を算定した。結合リンカーの濃度は、チオール含有アミノ酸、システインと反応可能なリンカーの量を間接的に測定する確立された手順により決定した。変性後の抗体当たり６．０リンカーであると決定された。
【０１５７】
改変抗体を、０．１Ｍ  ＮａＨ２ＰＯ４、５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５％ＤＭＡ  ｐＨ６．５中２．０ｍｇ／ｍＬにまで希釈した後、０．２０ｍＭ  ＤＣ０７で処理した（２．５ｍｏｌ  ＤＣ０７／リンカー）。結合反応を室温で８０分間続行させた。次いで反応物を５％酢酸で酸性化し、抗体−薬物結合体を未反応ＤＣ０７から分離するのを可能にする、２０％ＤＭＡ、０．１Ｍ  ＮａＨ２ＰＯ４、５０ｍＭ  ＮａＣｌ  ｐＨ５．０中に平衡化した分析用サイズ排除（ＳＥＣ）カラムを装備したＨＰＬＣシステムを使用する分析に供した。カラムからの溶離液を、２８０ｎＭおよび３４０ｎＭでの吸光度に関してモニターした。抗体に対するＤＣ０７の割合は、分光光度法で決定して３．５であった。（薬物：ε３４０ｎｍ＝３８，０００Ｍ−１ｃｍ−１、ε２８０ｎｍ＝２３，０００Ｍ−１ｃｍ−１、および抗体：ε２８０ｎｍ＝２０６，４６０Ｍ−１ｃｍ−１）
【０１５８】
ＳＥＣ分析からの薬物／Ａｂ比の算定：
ＤＣ０７＝Ａ３４０／３８０００
ｈｕＭｙ９−６＝［（Ａ２８０−（２３０００＊  Ａ３４０））／３８０００］／２０６４６０
薬物／Ａｂ＝ＤＣ０７／Ｍｙ９−６
【実施例１０】
【０１５９】
生物学的結果
ラモス細胞およびＨＬ６０／Ｓ細胞に対するＤＣ０７−ＳＭｅ（図２）およびＤＣ１−ＳＭｅ（図１Ｄ）の細胞毒性を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて５日間の曝露で測定した。結果を図６に示す。ＩＣ５０を下記に示す。
【０１６０】
【表１】
2009529030.tif 000009
【０１６１】
ラモス細胞およびＨＬ６０細胞に対するＤＣ１−ＳＰｙおよびＤＣ０７−ＳＰｙの細胞毒性を測定した。結果を図７に示し、ＩＣ５０を下記に示す。
【０１６２】
【表２】
2009529030.tif 000010
【０１６３】
ナマルバ細胞およびラモス細胞に対するＤＣ０８−ＳＳＰｙの細胞毒性を測定した。結果を図８に示し、ＩＣ５０を下記に示す。
【０１６４】
【表３】
2009529030.tif 000011
【０１６５】
抗原陽性Ｋａｒａ細胞および抗原陰性ラモス細胞に対する（ジスルフィド連結）ＭＹ９−６−ＤＣ０７の細胞毒性を測定した。結果を図１０に示し、ＩＣ５０を下記に示す。
【０１６６】
【表４】
2009529030.tif 000012
【０１６７】
抗原陽性ＣＯＬＯ２０５および抗原陰性Ａ−３７５細胞に対する（チオエーテル連結）ｈｕＣ２４２−ＤＣ０７の細胞毒性を測定した。結果を図１１に示し、ＩＣ５０を下に示す。
【０１６８】
【表５】
2009529030.tif 000013
【０１６９】
特定の特許および印刷公報は、本開示において、参照によりそれぞれの教示全体が本明細書に組み込まれる。
【０１７０】
本発明を詳細に、特定の実施形態を参照して記載したが、様々な変更および修正が本発明の趣旨および範囲から逸脱することなく行われ得ることは、当業者には明らかである。
【図面の簡単な説明】
【０１７１】
【図１Ａ】ＣＣ−１０６５の構造ならびにこのサブユニットＡ、Ｂ、およびＣを示す図である。
【図１Ｂ】ＣＣ−１０６５の公知の類似体の構造を示す図である。
【図１Ｃ】ＣＣ−１０６５の公知の類似体の構造を示す図である。
【図１Ｄ】中間体ＤＣ１ＳＭｅ（米国特許６５３４６６０Ｂ１も参照）の調製物を示す図である。
【図２】本発明の例示的なＣＣ−１０６５類似体およびプロドラッグの構造を示す図である。
【図３】本発明の例示的なポリエチレングリコール含有プロドラッグの構造を示す図である。
【図４Ａ】（Ｓ）−Ｎ−［２−｛（１−クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−５−［（３−ヒドロキシスルホニルフェニル）アミノカルボニルオキシ］−３Ｈ−ベンズ（ｅ）インドール−３−イル｝カルボニル］−１Ｈ−インドール−５−イル）−５−［（３−メチルジチオプロパノイル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド（ＤＣ０７ＳＭｅ）、（Ｓ）−Ｎ−［２−｛（１−クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−５−［（３−ヒドロキシ−スルホニルフェニル）アミノカルボニルオキシ］−３Ｈ−ベンズ（ｅ）インドール−３−イル）カルボニル］−１Ｈ−インドール−５−イル］−５−［（３−メルカプト−プロパノイル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド（ＤＣ０７）を調製する合成スキームの図である。
【図４Ｂ】（Ｓ）−Ｎ−［２−｛（１−クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−５−［（３−ヒドロキシスルホニルメチルフェニル）アミノカルボニルオキシ］−３Ｈ−ベンズ（ｅ）インドール−３−イル｝カルボニル］−１Ｈ−インドール−５−イル］−５−｛［３−（２−ピリジルジチオ）−プロパノイル］−アミノ｝−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド（ＤＣ０８ＳＰｙ）、および（Ｓ）−Ｎ−［２−｛（１−クロロメチル）−１，２−ジヒドロ−５−［（３−ヒドロキシスルホニルメチル−フェニル）アミノカルボニルオキシ］−３Ｈ−ベンズ（ｅ）インドール−３−イル｝カルボニル］−１Ｈ−インドール−５−イル］−５−［（３−メルカプトプロパノイル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド（ＤＣ０８）を調製する合成スキームの図である。
【図４Ｃ】（Ｓ）−３−（（１−（クロロメチル）−３−（５−（３−（メチルジスルファニル）−プロパンアミド）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イルオキシ）カルボニルアミノ）ベンゼンスルホン酸（ＤＣ１０１ＳＭｅ）、（Ｓ）−３−（（１−（クロロメチル）−３−（５−（３−メルカプトプロパンアミド）−１Ｈ−インドール−２−カルボニル）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−ベンゾ［ｅ］インドール−５−イルオキシ）カルボニルアミノ）ベンゼンスルホン酸（ＤＣ１０７）を調製する合成スキームの図である。
【図５】生理的ｐＨで薬物の活性化／不活性化プロセスを描写しているスキームを示す図である。
【図６】５日間曝露の、ラモス細胞およびＨＬ６０細胞に対するＤＣ０７−ＳＭｅおよびＤＣ１−ＳＭｅのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性データを示すグラフである。
【図７】ラモス細胞およびＨＬ６０細胞に対するＤＣ１−ＳＰｙおよびＤＣ０７−Ｓｐｙのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性データを示すグラフである。
【図８】ラモス細胞およびナマルバ細胞に対するＤＣ０８−Ｓｐｙのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性データを示すグラフである。
【図９】ＨＬ−６０細胞およびラモス細胞に対するＤＣ１０１−ＳＭｅおよびＤＣ１０７−ＳＭｅのｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性データを示すグラフである。
【図１０】ＫＡＲＡ＆ラモス細胞に対する（ジスルフィド連結）ＭＹ９−６−ＤＣ０７のｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性データを示すグラフである。
【図１１】ＣＯＬＯ２０５＆Ａ−３７５細胞に対する（チオエーテル連結）ｈｕＣ２４２−ＤＣ０７のｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞毒性データを示すグラフである。
【図１Ａ】
2009529030.tif 000021
【図１Ｂ】
2009529030.tif 000022
【図１Ｃ】
2009529030.tif 000023
【図１Ｄ】
2009529030.tif 000024
【図２】
2009529030.tif 000025
【図３】
2009529030.tif 000026
【図４Ａ】
2009529030.tif 000027
【図４Ｂ】
2009529030.tif 000028
【図４Ｃ】
2009529030.tif 000029
【図５】
2009529030.tif 000030
【図６】
2009529030.tif 000031
【図７】
2009529030.tif 000032
【図８】
2009529030.tif 000033
【図９】
2009529030.tif 000034
【図１０】
2009529030.tif 000035
【図１１】
2009529030.tif 000036
【国際調査報告】
2009529030.tif 000037
2009529030.tif 000038