(57)【要約】  本発明は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による癌患者の治療の有効性を予測する診断方法及び予後の方法を提供する。上皮及び／又は間葉バイオマーカーの発現レベルを測定することによって、腫瘍細胞が上皮間葉遷移（ＥＭＴ）を起こしたかどうかを評価することを含み、ＥＭＴを起こす腫瘍細胞はＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性が実質的に低い、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法を提供する。上記方法論を取り入れた、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いて癌患者を治療する改善された方法も提供する。さらに、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する腫瘍の応答性を予示する新しいバイオマーカーを特定する方法も提供する。また、ＥＭＴを起こした腫瘍細胞の、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する、感受性を回復する薬剤を特定する方法も提供する。
2009509168.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞によって発現された上皮バイオマーカーのレベルを評価すること、及び
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対するＮＳＣＬＣ腫瘍細胞増殖の感受性を予測することを含み、
ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞による上皮バイオマーカー発現の高いレベルは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する、
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対するＮＳＣＬＣ腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法。
【請求項２】
上皮バイオマーカーが、Ｅ−カドヘリン、Ｂｒｋ、γ−カテニン、α−カテニン、ケラチン８及びケラチン１８から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞によって発現された間葉バイオマーカーのレベルを評価すること、及び
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対するＮＳＣＬＣ腫瘍細胞増殖の感受性を予測することを含み、
ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞による間葉バイオマーカー発現の高いレベルは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する低い感受性と相関する、
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対するＮＳＣＬＣ腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法。
【請求項４】
間葉バイオマーカーが、ビメンチン、フィブロネクチン、フィブリリン−１、フィブリリン−２、コラーゲンアルファ−２（ＩＶ）、コラーゲンアルファ−２（Ｖ）、ＬＯＸＬ１、ニドジェン、Ｃ１１ｏｒｆ９、テネイシン、Ｎ−カドヘリン及び胚性ＥＤＢ＋フィブロネクチン、チューブリンアルファ−３及びエピモルフィンから選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞によって発現された１つまたはそれ以上の上皮バイオマーカーのレベルを評価すること、及び
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対するＮＳＣＬＣ腫瘍細胞増殖の感受性を予測することを含み、
評価されたＮＳＣＬＣ腫瘍細胞上皮バイオマーカーの全ての同時の高い発現レベルは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する、
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対するＮＳＣＬＣ腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法。
【請求項６】
１つ又はそれ以上の上皮バイオマーカーが、Ｅ−カドヘリン及びＢｒｋを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
１つ又はそれ以上の上皮バイオマーカーが、Ｅ−カドヘリン及びγ−カテニンを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞によって発現された１つまたはそれ以上の間葉バイオマーカーのレベルを評価すること、及び
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対するＮＳＣＬＣ腫瘍細胞増殖の感受性を予測することを含み、
評価されたＮＳＣＬＣ腫瘍細胞間質バイオマーカーの全ての同時の低い発現レベル又は検出不能な発現レベルが、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する、
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対するＮＳＣＬＣ腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法。
【請求項９】
１つ又はそれ以上の間葉バイオマーカーが、ビメンチン及びフィブロネクチンを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞によって発現される上皮バイオマーカーのレベルを評価すること、
ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞によって発現される間葉バイオマーカーのレベルを評価すること、及び
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対するＮＳＣＬＣ腫瘍細胞増殖の感受性を予測することを含み、
上皮バイオマーカー発現レベルと間葉バイオマーカー発現レベルとの高い比がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する、
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対するＮＳＣＬＣ腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法。
【請求項１１】
上皮バイオマーカーがＥ−カドヘリンを含み、及び間葉バイオマーカーがフィブロネクチンを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
上皮バイオマーカーがＢｒｋを含み、及び間葉バイオマーカーがフィブロネクチンを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
上皮バイオマーカーがＥ−カドヘリンを含み、及び間葉バイオマーカーがビメンチンを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
上皮バイオマーカーがγ−カテニンを含み、及び間葉バイオマーカーがフィブロネクチンを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
ＮＳＣＬＣ腫瘍細胞が上皮間葉遷移を起こしたかどうかを評価することによって、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する患者の想定される応答性を診断する段階と、及び
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の治療有効量を前記患者に投与する段階とを含む、患者におけるＮＳＣＬＣ腫瘍又はＮＳＣＬＣ腫瘍転移を治療する方法。
【請求項１６】
１つ又はそれ以上の追加の抗癌剤が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と同時又は順次に同時投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
（ａ）新生物症状を有する患者から得た新生物細胞含有試料中の候補上皮バイオマーカーのレベルを測定すること、及び
（ｂ）前記患者から得た前記試料中の前記候補上皮バイオマーカーのレベルと、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による、前記新生物症状の治療の有効性との間の相関を明らかにすることを含み、
上皮バイオマーカーの高いレベルとＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による新生物症状のさらに有効な治療との相関が、前記上皮バイオマーカーがＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による新生物症状のさらに有効な治療に対する診断指標であることを示す、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での新生物症状のさらに有効な治療に対する診断指標である上皮バイオマーカーを明らかにする方法。
【請求項１８】
（ａ）新生物症状を有する患者から得た新生物細胞含有試料中の候補間葉バイオマーカーのレベルを測定すること、及び
（ｂ）前記患者から得た前記試料中の前記候補間葉バイオマーカーのレベルと、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による、前記新生物症状の治療の有効性との間の相関を明らかにすることを含み、
間葉バイオマーカーの高いレベルとＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による新生物症状のより低い有効性の治療との相関が、前記間葉バイオマーカーがＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による新生物症状のより低い有効性の治療に対する診断指標である、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での新生物症状のより低い有効性の治療に対する診断指標である間葉バイオマーカーを明らかにする方法。
【請求項１９】
腫瘍細胞が、以前に上皮間葉遷移した腫瘍細胞として特徴づけられ、前記腫瘍細胞の試料をＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と接触させること、前記腫瘍細胞の同一試料を試験薬剤の存在下でＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と接触させること、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤によって媒介される増殖阻害を試験薬剤の存在下と非存在下で比較すること、並びに試験薬剤がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する腫瘍細胞増殖の感受性を高める薬剤であるかどうかを判定することを含む、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する腫瘍細胞増殖の感受性を高める薬剤を特定する方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、癌患者を診断及び治療する方法を対象とする。特に、本発明は、インシュリン様成長因子−１受容体（ＩＧＦ−１Ｒ）キナーゼ阻害剤を用いた治療から最も利点を得る患者を判定する方法を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
癌は、制御されない増殖、分化の欠如、及び局所組織に浸潤し、転移する能力を特徴とする、細胞の広範な悪性腫瘍の一般名である。これらの新生物悪性腫瘍は、体内のあらゆる組織及び器官において多様な罹患率で発症する。
【０００３】
種々の癌を治療するために、複数の治療薬が過去数十年にわたって開発されてきた。最も一般に使用される抗癌剤タイプとしては、ＤＮＡアルキル化剤（例えば、シクロホスファミド、イホスファミド）、代謝拮抗剤（例えば、メトトレキセート、葉酸塩拮抗物質及び５−フルオロウラシル、ピリミジン拮抗物質）、微小管分裂剤（例えば、ビンクリスチン、ビンブラスチン、パクリタキセル）、ＤＮＡインターカレーター（例えば、ドキソルビシン、ダウノマイシン、シスプラチン）及びホルモン療法（例えば、タモキシフェン、フルタミド）などが挙げられる。
【０００４】
ＩＧＦ−１Ｒは、主としてＩＧＦ−１に結合するが、ＩＧＦ−ＩＩ及びインシュリンにも、より低い親和性で結合する膜貫通ＲＴＫである。ＩＧＦ−１受容体へのＩＧＦ−１の結合は、受容体のオリゴマー化、チロシンキナーゼの活性化、分子間受容体自己リン酸化及び細胞基質のリン酸化をもたらす（主な基質は、ＩＲＳ１及びＳｈｃである。）。リガンドによって活性化されたＩＧＦ−１Ｒは、正常な細胞中で有糸分裂促進活性を誘導し、異常な増殖において重要な役割を果たす。ＩＧＦ−１系の主要な生理的役割は、正常な増殖と再生を促進することである。過剰発現されたＩＧＦ−１Ｒ（１型インシュリン様成長因子受容体）は、有糸分裂誘発を開始させ、リガンド依存性新生物形質転換を促進することが可能である。さらに、ＩＧＦ−１Ｒは、悪性表現型の確立及び維持において重要な役割を果たしている。上皮成長因子（ＥＧＦ）受容体とは異なり、ＩＧＦ−１Ｒの変異発癌形態は同定されていない。しかしながら、幾つかの発癌遺伝子は、ＩＧＦ−１及びＩＧＦ−１Ｒ発現に影響を与えることが示されている。ＩＧＦ−１Ｒ発現の減少と形質転換に対する耐性との間の相関が観察されてきた。ＩＧＦ−１ＲＲＮＡに対してアンチセンスであるｍＲＮＡに細胞を曝露することによって、幾つかのヒト腫瘍細胞株の軟寒天増殖が抑制される。ＩＧＦ−１Ｒは、インビボ及びインビトロの両者で、アポトーシスへの進行を停止させる。野生型レベルを下回るＩＧＦ−１Ｒの減少が、インビボで、腫瘍細胞のアポトーシスを引き起こすことも示されている。ＩＧＦ−１Ｒ破壊がアポトーシスを引き起こす能力は、正常な非腫瘍原性細胞中では減弱しているようである。
【０００５】
ヒト腫瘍の発育におけるＩＧＦ−１経路は、重要な役割を有する。ＩＧＦ−１Ｒ過剰発現は、しばしば、様々な腫瘍（乳癌、結腸癌、肺癌、肉腫）中に見出され、多くの場合、侵襲性の表現型を伴う。高いＩＧＦ１循環濃度は、前立腺癌、肺癌及び乳癌のリスクと強く相関している。さらに、形質転換された表現型の確立及び維持のために、インビトロ及びインビボにおいて、ＩＧＦ−１Ｒが必要とされる（Ｂａｓｅｒｇａ  Ｒ．Ｅｘｐ．Ｃｅｌｌ．Ｒｅｓ．，１９９９，２５３，１−６）。ＩＧＦ−１Ｒのキナーゼ活性は、幾つかの発癌遺伝子：ＥＧＦＲ、ＰＤＧＦＲ、ＳＶ４０Ｔ抗原、活性化されたＲａｓ、Ｒａｆ及びｖ−Ｓｒｃの形質転換活性にとって不可欠である。正常な繊維芽細胞中でのＩＧＦ−１Ｒの発現は、新生物表現型を誘導し、次いで、インビボにおいて、新生物表現型は腫瘍を形成することができる。ＩＧＦ−１Ｒ発現は、足場非依存性増殖において重要な役割を果たしている。ＩＧＦ−１Ｒは、化学療法、放射線照射及びサイトカインによって誘導されるアポトーシスから細胞を保護することも示されている。逆に、ドミナントネガティブＩＧＦ−１Ｒ、三重螺旋形成又はアンチセンス発現ベクターによる内在性ＩＧＦ−１Ｒの阻害は、インビトロにおいて形質転換活性を抑制し、動物モデルにおいて腫瘍増殖を抑制することが示されている。
【０００６】
タンパク質チロシンキナーゼの阻害剤は、哺乳動物の癌細胞の増殖の選択的阻害剤として有用であることが認められる。例えば、ＢＣＲ−ＡＢＬ融合遺伝子産物のキナーゼ活性を阻害する２−フェニルピリミジンチロシンキナーゼ阻害剤であるＧｌｌｅｖｅｃＴＭ（イマチニブメシラートとしても知られている。）が、ＣＭＬの治療に対して、アメリカ食品医薬品局によって承認された。４−アニリノキナゾリン化合物であるＴａｒｃｅｖａＴＭ（エルロチニブＨＣｌ）も、最近、ＦＤＡによって承認され、高い効力を有するＥＧＦ受容体キナーゼを選択的に阻害する。ＩＧＦ−１Ｒのキナーゼ活性を直接的に阻害する化合物及びＩＧＦ−１Ｒの活性化を遮断することによって、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ活性を低下させる抗体又はＩＧＦ−１Ｒ発現を遮断するアンチセンスオリゴヌクレオチドを抗癌剤として使用するための開発は、多大な研究努力が向けられている分野である（例えば、Ｌａｒｓｓｏｎ，  Ｏ．  ｅｔ  ａｌ（２００５）Ｂｒｉｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ９２：２０９７−２１０１；Ｉｂｒａｈｉｍ，  Ｙ．Ｈ．  ａｎｄ  Ｙｅｅ，  Ｄ．（２００５）Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１１：９４４ｓ−９５０ｓ；Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ，Ｃ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ５：２２１−２３０；Ｃａｍｉｒａｎｄ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ７：Ｒ５７０−Ｒ５７９（ＤＯＩ１０．１１８６／ｂｃｒｌＯ２８）；Ｃａｍｉｒａｎｄ，  Ａ．  ａｎｄ  Ｐｏｌｌａｋ，  Ｍ．（２００４）Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ９０：１８２５−１８２９；Ｇａｒｃｉａ−Ｅｃｈｅｖｅｒｒｉａ，  Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ５：２３１−２３９参照）。
【０００７】
抗新生物薬は、非悪性細胞に対するその毒性に比較して治療指数が広く、癌細胞を選択的に死滅させる理想的薬剤であろう。また、抗新生物薬は、該薬物に長時間曝露した後でも、悪性細胞に対してその効力を保持する。残念ながら、現行の化学療法のいずれも、かかる理想的な特性を持たない。むしろ、大部分は、極めて狭い治療指数を有する。さらに、致死濃度をわずかに下回る化学療法薬に曝露された癌細胞は、かかる薬剤に対して耐性を獲得することが極めて多く、幾つかの他の抗腫瘍薬に対しても交差耐性を獲得することが頻繁にある。さらに、任意の所与の癌タイプに対して、特定の治療に応答する可能性がある患者を予測することは、タンパク質チロシンキナーゼ阻害剤などのより新しい遺伝子標的療法でも不可能であることが多く、したがって、最も有効な療法を見出すためにかなりの試行錯誤を必要とし、患者に対してかなりのリスクと不快感を与えることが多い。
【０００８】
したがって、新形成及び他の増殖性障害に対するより効果的な治療、及びどの腫瘍がどの治療に応答するかを決定するより有効な手段が求められている。既存薬物の治療効力を高める戦略は、その投与スケジュールの変更が必要であり、他の抗癌剤又は生化学的調節剤との併用も必要である。併用療法は、各薬剤単体の治療上妥当な用量を使用するよりも、効力が大きく、副作用が減少し得る方法としてよく知られている。多剤併用の効力が相加的である（併用の効力が各薬物単体の効果の合計にほぼ等しい。）場合もあるが、効果が相乗的である（併用の効力が、単体投与された各薬物の効果の合計よりも大きい。）場合もある。標的特異的な治療アプローチは、一般に、慣用の細胞毒製剤と比べて、減少した毒性を伴い、従って、併用治療計画において、かかるアプローチが使用される。
【０００９】
幾つかのグループが、タンパク質チロシンキナーゼ阻害剤、例えば、ＥＧＦＲ阻害剤に対する患者の応答を予測するバイオマーカー候補を検討した（例えば、ＰＣＴ国際公開第２００４／０６３７０９号、同２００５／０１７４９３号、同２００４／１１１２７３号及び同２００４／０７１５７２号並びに米国特許出願公開第２００５／００１９７８５号及び同２００４／０１３２０９７号参照）。しかし、このような阻害剤による患者の治療において開業医を手引することができる診断試験又は予後の試験はまだ出現していない。
【００１０】
したがって、任意の特定の癌患者に対する最適な治療様式を決定するための改善された方法に対して、重大な要望が依然として存在する。本発明は、腫瘍細胞が上皮から間葉への遷移を経たかどうかに基づいて、何れの腫瘍がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での治療に対して最も効果的に応答するかを決定する方法（“ＥＭＴ”；  Ｔｈｉｅｒｙ，  Ｊ．Ｐ．  （２００２）  Ｎａｔ．  Ｒｅｖ．  Ｃａｎｃｅｒ  ２：４４２−４５４；  Ｓａｖａｇｎｅｒ，  Ｐ．  （２００１）  Ｂｉｏｅｓｓａｙｓ  ２３：９１２−９２３；  Ｋａｎｇ  Ｙ．  ａｎｄ  Ｍａｓｓａｇｕｅ，  Ｊ．  （２００４）  Ｃｅｌｌ  １１８：２７７−２７９；  Ｊｕｌｉｅｎ−Ｇｒｉｌｌｅ，  Ｓ．，  ｅｔ  ａｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ６３：２１７２−２１７８；  Ｂａｔｅｓ，  Ｒ．Ｃ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  １３：１７２１−１７２７；  Ｌｕ  Ｚ．，  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ．  ４（６）：４９９−５１５）、及びこのような阻害剤が、単一の薬剤として使用されるかどうか、又は他の抗癌剤と組み合わされて地要されるかどうか、癌患者のためのさらに有効な治療計画にこのような決定を取り込む方法を提供する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１１】
本発明は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による癌患者の治療の有効性を予測する診断方法及び予後の方法を提供する。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性が、かかる腫瘍細胞がＥＭＴを起こすかどうかに依存するという驚くべき発見に基づいて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する腫瘍細胞の感受性を予測する上皮及び／又は間葉バイオマーカーを測定する方法を考案した。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
したがって、本発明は、腫瘍細胞によって発現される上皮バイオマーカーのレベルを評価すること、及びＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測することを含み、腫瘍細胞上皮バイオマーカーの高い発現レベルがＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法を提供する。
【００１３】
本発明は、腫瘍細胞によって発現された間葉バイオマーカーのレベルを評価すること；及びＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測することを含み、腫瘍細胞による間葉バイオマーカー発現の高いレベルは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する低い感受性と相関する、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法も提供する。
【００１４】
上記方法論を取り込んだ、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤で癌患者を治療するための改善された方法も提供される。従って、さらに、本発明は、腫瘍細胞が上皮−間葉遷移を経たかどうかを評価することによって、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して患者が応答し得る可能性を診断する段階、及びＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の治療有効量を前記患者に投与する段階を含む、患者中の腫瘍又は腫瘍転移を治療する方法を提供する。
【００１５】
さらに、ＩＧＦ−ＩＲキナーゼ阻害剤に対する腫瘍の応答性を予測する新規上皮又は間葉バイオマーカーを同定するための方法が提供される。
【００１６】
従って、例えば、本発明は、新生物症状を有する患者から得た新生物細胞含有試料中の候補上皮バイオマーカーのレベルを測定すること、及び前記患者から得た前記試料中の前記候補上皮バイオマーカーのレベルと、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による、前記新生物症状の治療の有効性との間の相関を明らかにすることを含み、上皮バイオマーカーの高いレベルとＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による新生物症状のさらに有効な治療との相関は、前記上皮バイオマーカーが、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による新生物症状のさらに有効な治療に対する診断指標である、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での新生物症状のさらに有効な治療に対する診断指標である上皮バイオマーカーを明らかにする方法を提供する。
【００１７】
さらに、本発明は、（ａ）新生物症状を有する患者から得た新生物細胞含有試料中の候補間葉バイオマーカーのレベルを測定すること、及び（ｂ）前記患者から得た前記試料中の前記候補間葉バイオマーカーのレベルと、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による、前記新生物症状の治療の有効性との間の相関を明らかにすることを含み、間葉バイオマーカーの高いレベルとＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による新生物症状のより低い有効性の治療との相関は、前記間葉バイオマーカーが、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による新生物症状のより低い有効性の治療に対する診断指標である、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での新生物症状のより低い有効性の治療に対する診断指標である間葉バイオマーカーを明らかにする方法を提供する。
【００１８】
さらに、ＩＧＦ−ＩＲキナーゼ阻害剤による阻害に対する、ＥＭＴを経た腫瘍細胞の感受性を回復させる因子を同定するための方法も提供される。従って、例えば、本発明は、腫瘍細胞が、以前に上皮間葉遷移を経た腫瘍細胞として特徴づけられ、前記腫瘍細胞の試料をＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と接触させること、前記腫瘍細胞の同一試料を試験薬剤の存在下でＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と接触させること、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤によって媒介される増殖阻害を試験薬剤の存在下と非存在下で比較すること、並びに試験薬剤がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する腫瘍細胞増殖の感受性を高める薬剤であるかどうかを判定することを含む、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する腫瘍細胞増殖の感受性を高める薬剤を特定する方法を提供する。
【００１９】
図面の簡単な説明
図１：ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤である化合物６６に対するＮＳＣＬＣ細胞株の感受性。
図２：ＩＧＦ−１受容体阻害に対して感受性のＮＳＣＬＣ株は、Ｅ−カドヘリンの上昇したレベルを発現し、γ−カテニン及びα−カテニンに対して観察された傾向を有する。２つの異なる抗体を用いて、Ｅ−カドヘリンイムノブロットを行い、同様の結果を得た（データは示さず。）。化合物６６による増殖阻害に対して比較的非感受性のＮＳＣＬＣ株は、間葉タンパク質であるビメンチン及び／又はフィブロネクチンを発現した。
図３：ＮＳＣＬＣ株は、約５００ｍｍ３の体積になるまで、ＳＣＩＤマウス中での皮下異種移植片として増殖され、切り出され、液体窒素中で瞬間凍結された（４匹の動物／細胞株）。凍結された状態で、腫瘍組織を粉末化し、記載されているように、界面活性剤による溶解及びＳＤＳ−ＰＡＧＥに供し、Ｅ−カドヘリン、γ−カテニン、Ｂｒｋ、フィブロネクチン、ビメンチン及びＧＡＰＤＨに対する抗体で探索するイムノブロットに供した。インビトロでの結果と合致し、Ｅ−カドヘリンの発現は、化合物６６感受性株に限定され、フィブロネクチンは相対的に非感受性株に限定されていた。
図４：ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害に対して最も感受性であるＮＳＣＬＣ細胞株中でより高いＢｒｋ発現レベルを示すイムノブロット。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
動物における「癌」という用語は、抑制されない増殖、不死、転移能、急速な成長及び増殖速度、ある種の特徴的な形態など、発癌細胞の典型的な特性を有する細胞の存在を指す。癌細胞は、腫瘍の形態であることが多いが、かかる細胞は、動物内に単独で存在し得、又は白血病細胞などの独立細胞として血流中を循環し得る。
【００２１】
本明細書では「異常な細胞増殖」とは、別段の記載がないかぎり、正常な調節機構とは無関係である細胞増殖（例えば、接触阻止の喪失）を指す。「異常な細胞増殖」としては、（１）変異チロシンキナーゼの発現又は受容体チロシンキナーゼの過剰発現によって増殖する腫瘍細胞（腫瘍）、（２）異常なチロシンキナーゼ活性化が起こる他の増殖性疾患の良性及び悪性細胞、（４）受容体チロシンキナーゼによって増殖するあらゆる腫瘍、（５）異常なセリン／トレオニンキナーゼ活性化によって増殖するあらゆる腫瘍並びに（６）異常なセリン／トレオニンキナーゼ活性化が起こる他の増殖性疾患の良性及び悪性細胞、の異常な増殖などが挙げられる。
【００２２】
本明細書では「治療する」という用語は、別段の記載がないかぎり、患者における腫瘍、腫瘍転移又は他の発癌細胞若しくは新生細胞の進行の逆転、緩和、阻害、或いは腫瘍、腫瘍転移又は他の発癌細胞若しくは新生細胞の増殖の部分的又は完全な抑制を意味する。本明細書では「治療」という用語は、別段の記載がないかぎり、治療行為を指す。
【００２３】
「治療方法」という句又はその等価な句は、例えば、癌に適用するときには、動物における癌細胞数を減少させる、若しくはゼロにするように設計された、又は癌の症候を軽減するように設計された手順若しくは方針を指す。癌又は別の増殖性障害の「治療方法」は、癌細胞若しくは他の障害が実際に除去されること、細胞数若しくは障害が実際に抑制されること、又は癌若しくは他の障害の症候が実際に軽減することを必ずしも意味しない。癌を治療する方法は、成功の可能性が低い場合でも実施され、動物の病歴及び推定余命を考慮して、それでも全体として有益な方針と考えられるものであることが多い。
【００２４】
「治療有効薬剤」という用語は、研究者、獣医師、医師又は他の臨床家によって求められる、組織、系、動物又はヒトの生物学的又は医学的応答を誘発する組成物を意味する。
【００２５】
「治療有効量」又は「有効量」という用語は、研究者、獣医師、医師又は他の臨床家によって求められる、組織、系、動物又はヒトの生物学的又は医学的応答を誘発する対象化合物又は組合せの量を意味する。
【００２６】
以下の本明細書の実施例に示すデータによれば、細胞培養又はインビボで増殖されたＮＳＣＬＣ細胞などの腫瘍細胞は、上皮間葉遷移（ＥＭＴ）を起こしたかどうかによって、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対してある範囲の感受性を示す。ＥＭＴ前には、腫瘍細胞は、化合物６６（強力な（約５０ｎＭのＩＣ５０）且つＩＧＦ−１Ｒ選択的な低分子量ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤）などのＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対して感受性が極めて高いが、ＥＭＴを起こした腫瘍細胞は、かかる化合物による阻害に対する感受性がかなり低い。このデータは、ＥＭＴが、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する腫瘍の感受性レベルを決定する「全般的な生物学的スイッチ」であり得ることを示している。ＥＭＴ現象の前に、又はそれに続いて、腫瘍細胞によって発現される、細胞に特徴的であるバイオマーカーのレベルを測定することによって、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する腫瘍の感受性レベルを評価できることが実証された。例えば、Ｅ−カドヘリンなどの上皮バイオマーカーの腫瘍細胞発現レベルが高いことは、ＥＭＴをまだ起こしていない細胞を示し、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する高い感受性と相関する。逆に、ビメンチン又はフィブロネクチンなどの間葉バイオマーカーの腫瘍細胞発現レベルが高いことは、ＥＭＴを起こした細胞を示し、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する低い感受性と相関する。さらに、腫瘍細胞の上皮又は間葉状態及びそれに続いて起こる、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性に関する情報を提供するために、形態計測細胞分析を使用することが可能である。したがって、これらの知見は、腫瘍増殖に対するＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の効果を予測する貴重な新しい診断法の基礎を形成し得るものであり、患者に対して最も適切な治療を選択するのに役立つ追加のツールを腫瘍専門医に提供することができる。
【００２７】
したがって、本発明は、腫瘍細胞によって発現される上皮バイオマーカーのレベルを評価すること、及びＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測することを含み、腫瘍細胞上皮バイオマーカーの高い発現レベルはＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法を提供する。上皮バイオマーカーの好ましい例としてはＥ−カドヘリン及びＢｒｋ（すなわちＰＴＫ−６）が挙げられる（表１参照）。本発明による方法に利用することができる上皮バイオマーカーの追加の例としては、γ−カテニン（すなわち、ジャンクションプラコグロビン）、α−カテニン（すなわちα１、α２又はα３カテニン）、ケラチン８及びケラチン１８（表１参照）が挙げられる。
【００２８】
本発明は、腫瘍細胞によって発現される間葉バイオマーカーのレベルを評価すること、及びＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測することを含み、腫瘍細胞間葉バイオマーカーの高い発現レベルはＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する低い感受性と相関する、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法も提供する。間葉バイオマーカーの好ましい例としてはビメンチン及びフィブロネクチンが挙げられる（表１参照）。本発明による方法に利用することができる間葉バイオマーカーの追加の例としては、フィブリリン−１、フィブリリン−２、コラーゲンアルファ−２（ＩＶ）、コラーゲンアルファ−２（Ｖ）、ＬＯＸＬ１、ニドジェン、Ｃ１１ｏｒｆ９、テネイシン、Ｎ−カドヘリン及び胚性ＥＤＢ＋フィブロネクチンが挙げられる（表１参照）。
【００２９】
本発明の実施においては、好ましい上皮バイオマーカーを用いると、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して感受性が高い腫瘍細胞における発現レベルは、一般に、バイオマーカーを、例えば特異的抗バイオマーカー抗体を検出に用いて、極めて容易に検出することができるような高いレベルである。好ましい上皮バイオマーカーを用いると、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して感受性の比較的低い腫瘍細胞における発現レベルは、一般に、バイオマーカーが、類似の手順を用いて、検出されたとしてもわずかであるような低いレベルである（例えば、以下の本明細書の実施例に記載のデータにおいて、図２及び３中の感受性の高い腫瘍細胞と感受性の比較的低い腫瘍細胞のＥ−カドヘリンレベルを比較されたい。）。
【００３０】
しかし、他のさほど好ましくない上皮バイオマーカーの場合には、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して感受性の比較的低い腫瘍細胞におけるバイオマーカー発現レベルは、容易に検出可能であり得るが、それでも、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して感受性が高い腫瘍細胞よりもかなり低い発現レベルである（例えば、以下の本明細書の実施例に記載のデータにおいて、図２中の感受性の比較的低い腫瘍細胞ＳＷ１５７３と感受性の高い腫瘍細胞Ｈ４４１、Ｈ３５８及びＨ２９２のα−カテニンレベルを比較されたい。）。
【００３１】
同様に、本発明の実施においては、好ましい間葉バイオマーカーを用いると、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して感受性の比較的低い腫瘍細胞における発現レベルは、一般に、バイオマーカーを、例えば特異的抗バイオマーカー抗体を検出に用いて、極めて容易に検出することができるような高いレベルである。好ましい間葉バイオマーカーを用いると、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して感受性の比較的高い腫瘍細胞における発現レベルは、一般に、バイオマーカーが、類似の手順を用いて、検出されたとしてもわずかであるような低いレベルである（例えば、以下の本明細書の実施例に記載のデータにおいて、図２及び３中の感受性の高い腫瘍細胞と感受性の比較的低い腫瘍細胞のフィブロネクチン又はビメンチンレベルを比較されたい。）。
【００３２】
また、他のさほど好ましくない間葉バイオマーカーの場合には、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して感受性の比較的高い腫瘍細胞におけるバイオマーカー発現レベルは、容易に検出可能であり得るが、それでも、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して感受性の比較的低い腫瘍細胞よりもかなり低い発現レベルである。
【００３３】
任意の所与の上皮又は間葉バイオマーカーの場合、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して感受性の比較的低い腫瘍細胞と感受性の高い腫瘍細胞の発現レベルの範囲は、例えば、本明細書に記載されている腫瘍細胞パネル上で試験することによって（例えば、図２）、又は腫瘍がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤（例えば、化合物６６）に対してある範囲の感受性を示す患者から得られた腫瘍生検の試験によって、当業者によって容易に評価することができる。
【００３４】
本発明に関連して、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して感受性の比較的低い腫瘍細胞の割合が比較的小さい場合には、単一のバイオマーカーレベルのみを評価する状況において、腫瘍細胞によって発現される上皮又は間葉バイオマーカーのレベルを評価することを含む、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する上記方法は、腫瘍細胞増殖が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対して感受性が高いことを誤って予測する恐れがある。例えば、以下の本明細書の実施例に記載されているデータにおいて、Ｈ４６０腫瘍細胞中の上皮バイオマーカーγ−カテニン及びα−カテニンのレベル、又はＨ４６０細胞中の間葉バイオマーカービメンチンのレベルは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する高い感受性を誤って予測する（図２参照）。したがって、かかる誤った予測に基づいて、医師は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いて少数の患者を治療する恐れがあり、腫瘍は、阻害剤に対して感受性を示さない恐れがある。しかし、腫瘍細胞の大多数（例えば、以下の本明細書の実施例に記載のデータから、少なくとも９０％）では、単一のバイオマーカー発現レベルの評価によって、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する感受性レベルが正確に予測されると期待される。
【００３５】
また、本発明に関連して最も重要なことには、上記方法によって試験したとき（単一のバイオマーカーレベルのみを評価する場合）、腫瘍細胞増殖がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対して低感受性であるという誤った予測を与える、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して感受性が高い腫瘍細胞は見出されなかった。したがって、本明細書に記載の試験方法を利用することによって、患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療から利点を得ることができる場合に、医師がかかる治療を差し控えることはないはずである。
【００３６】
また、医薬分野の当業者は、特に診断テスト及び治療用物質による治療の適用に関して、生体系は幾らか可変であり、完全に予測可能では必ずしもなく、したがって多数の良好な診断テスト又は治療用物質が無効である場合もあることを理解している。したがって、試験結果、患者の症状及び病歴並びに主治医の経験に基づいて、個々の患者に最適な治療コースを決定するのは、最終的には主治医の判断による。例えば、診断テスト又は他の判定基準から得られるデータに基づいて、腫瘍がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して特に感受性であると予測されないときでも、特に、他の明白な治療選択肢の全部若しくは大部分が失敗した場合、又は別の治療と併用したときにある相乗作用が予測される場合には、医師がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いて患者を治療することを選択する場合さえある。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、化合物のクラスとして、癌治療に使用されるより伝統的な化学療法又は細胞毒性薬などの多数の他の抗癌薬よりも比較的耐容性が良好であることから、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤はより実行可能な選択肢になっている。
【００３７】
Ｅ−カドヘリンなどの本発明における使用に適切な上皮バイオマーカーの好ましい例は、上記方法に使用したときに（単一のバイオマーカーレベルのみを評価する場合）、誤った予測をもたらさない。
【００３８】
また、本発明は、腫瘍細胞における１種類を超えるバイオマーカーレベルの発現レベルの同時評価を利用する追加の方法も提供する。（以下に記述する）これらの方法の好ましい実施形態において、単一のバイオマーカー発現レベルを評価する上記方法の幾つかの場合と同様に、誤った予測のレベルが存在しない。
【００３９】
したがって、本発明は、腫瘍細胞によって発現される１つ又はそれ以上の種（又は１パネルの）上皮バイオマーカーのレベルを評価すること、及びＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測することを含み、評価された腫瘍細胞上皮バイオマーカー全部の同時の高い発現レベルはＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法を提供する。この方法の好ましい一実施形態において、上皮バイオマーカーはＥ−カドヘリン及びＢｒｋを含み、２種類の腫瘍細胞上皮バイオマーカーの同時の高い発現レベルは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する。この方法の別の好ましい実施形態において、上皮バイオマーカーはＥ−カドヘリン及びγ−カテニンを含み、２種類の腫瘍細胞上皮バイオマーカーの同時の高い発現レベルは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する。後者２つの好ましい実施形態において、両方のバイオマーカーの高い発現レベルが、高い感受性を示すのに必要であることに注意されたい。
【００４０】
本発明は、腫瘍細胞によって発現される１つ又はそれ以上の（又は１パネルの）間葉バイオマーカーのレベルを評価すること、及びＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測することを含み、評価された腫瘍細胞間葉バイオマーカー全部の同時の低い又は検出不可能な発現レベルはＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法も提供する。この方法の好ましい一実施形態において、間葉バイオマーカーはビメンチン及びフィブロネクチンを含み、２種類の腫瘍細胞間葉バイオマーカーの同時の低い又は検出不可能な発現レベルは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する。後半の好ましい実施形態において、両方のバイオマーカーの低い又は検出不可能な発現が、高い感受性を示すのに必要であることに注意されたい。
【００４１】
本発明は、腫瘍細胞によって発現される上皮バイオマーカーのレベルを評価すること、腫瘍細胞によって発現される間葉バイオマーカーのレベルを評価すること、及びＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測することを含み、上皮バイオマーカー発現レベルと間葉バイオマーカー発現レベルとの高い比はＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法も提供する。この方法の好ましい一実施形態において、上皮バイオマーカーはＥ−カドヘリンを含み、間葉バイオマーカーはフィブロネクチンを含む。この方法の別の好ましい実施形態において、上皮バイオマーカーはＢｒｋを含み、間葉バイオマーカーはフィブロネクチンを含む。この方法の別の好ましい実施形態において、上皮バイオマーカーはＥ−カドヘリンを含み、間葉バイオマーカーはビメンチンを含む。この方法の別の好ましい実施形態において、上皮バイオマーカーはγ−カテニンを含み、間葉バイオマーカーはフィブロネクチンを含む。
【００４２】
本発明は、腫瘍細胞によって発現される１種類又はそれ以上の（又はパネルの）上皮バイオマーカーのレベルを評価すること、及びＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍増殖の感受性を予測することを含み、評価された腫瘍細胞上皮バイオマーカー全部の同時の高い発現レベルはＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍増殖の感受性を予測する方法も提供する。この方法の好ましい一実施形態において、上皮バイオマーカーはＥ−カドヘリン及びＢｒｋを含み、２種類の腫瘍細胞上皮バイオマーカーの同時の高い発現レベルは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する。この方法の別の好ましい実施形態において、上皮バイオマーカーはＥ−カドヘリン及びγ−カテニンを含み、２種類の腫瘍細胞上皮バイオマーカーの同時の高い発現レベルは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する。後半の２つの好ましい実施形態において、両方のバイオマーカーの高い発現レベルが、高い感受性を示すのに必要であることに注意されたい。
【００４３】
本発明は、腫瘍細胞によって発現される１種類又はそれ以上の（又はパネルの）間葉バイオマーカーのレベルを評価すること、及びＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍増殖の感受性を予測することを含み、評価された腫瘍細胞間葉バイオマーカー全部の同時の低い又は検出不可能な発現レベルはＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍増殖の感受性を予測する方法も提供する。この方法の好ましい一実施形態において、間葉バイオマーカーはビメンチン及びフィブロネクチンを含み、２種類の腫瘍細胞間葉バイオマーカーの同時の低い又は検出不可能な発現レベルは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する。後半の好ましい実施形態において、両方のバイオマーカーの低い又は検出不可能な発現レベルが、高い感受性を示すのに必要であることに注意されたい。
【００４４】
本発明は、腫瘍細胞によって発現される上皮バイオマーカーのレベルを評価すること、腫瘍細胞によって発現される間葉バイオマーカーのレベルを評価すること、及びＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍増殖の感受性を予測することを含み、上皮バイオマーカー発現レベルと間葉バイオマーカー発現レベルとの高い比はＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍増殖の感受性を予測する方法も提供する。この方法の好ましい一実施形態において、上皮バイオマーカーはＥ−カドヘリンを含み、間葉バイオマーカーはフィブロネクチンを含む。この方法の別の好ましい実施形態においては、上皮バイオマーカーはＢｒｋを含み、間葉バイオマーカーはフィブロネクチンを含む。この方法の別の好ましい実施形態において、上皮バイオマーカーはＥ−カドヘリンを含み、間葉バイオマーカーはビメンチンを含む。この方法の別の好ましい実施形態において、上皮バイオマーカーはγ−カテニンを含み、間葉バイオマーカーはフィブロネクチンを含む。
【００４５】
本発明は、腫瘍細胞によって発現される１種類又はそれ以上の（又はパネルの）上皮バイオマーカーのレベルを評価すること、及び腫瘍がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答するかどうかを予測することを含み、腫瘍細胞上皮バイオマーカー全部の同時の高い発現レベルはＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する腫瘍と相関する、癌患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する腫瘍に罹患しているかどうかを予測する方法も提供する。この方法の好ましい一実施形態において、上皮バイオマーカーはＥ−カドヘリン及びＢｒｋを含み、２種類の腫瘍細胞上皮バイオマーカーの同時の高い発現レベルは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する腫瘍と相関する。この方法の別の好ましい実施形態において、上皮バイオマーカーはＥ−カドヘリン及びγ−カテニンを含み、２種類の腫瘍細胞上皮バイオマーカーの同時の高い発現レベルは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する腫瘍と相関する。後半の２つの好ましい実施形態において、両方のバイオマーカーの高い発現レベルが、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する腫瘍を示すのに必要であることに注意されたい。
【００４６】
本発明は、腫瘍細胞によって発現される１種類又はそれ以上の（又はパネルの）間葉バイオマーカーのレベルを評価すること、及び腫瘍がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答するかどうかを予測することを含み、腫瘍細胞間葉バイオマーカー全部の同時の低い又は検出不可能な発現レベルはＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する腫瘍と相関する、癌患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する腫瘍に罹患しているかどうかを予測する方法も提供する。この方法の好ましい一実施形態において、間葉バイオマーカーはビメンチン及びフィブロネクチンを含み、２種類の腫瘍細胞間葉バイオマーカーの同時の低い又は検出不可能な発現レベルは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する腫瘍と相関する。後半の好ましい実施形態において、両方のバイオマーカーの低い又は検出不可能な発現が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する腫瘍を示すのに必要であることに注意されたい。
【００４７】
本発明は、腫瘍細胞によって発現される上皮バイオマーカーのレベルを評価すること、腫瘍細胞によって発現される間葉バイオマーカーのレベルを評価すること、及び腫瘍がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答するかどうかを予測することを含み、上皮バイオマーカー発現レベルと間葉バイオマーカー発現レベルとの高い比はＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する腫瘍と相関する、癌患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する腫瘍に罹患しているかどうかを予測する方法も提供する。この方法の好ましい一実施形態において、上皮バイオマーカーはＥ−カドヘリンを含み、間葉バイオマーカーはフィブロネクチンを含む。この方法の別の好ましい実施形態において、上皮バイオマーカーはＢｒｋを含み、間葉バイオマーカーはフィブロネクチンを含む。この方法の別の好ましい実施形態において、上皮バイオマーカーはＥ−カドヘリンを含み、間葉バイオマーカーはビメンチンを含む。この方法の別の好ましい実施形態において、上皮バイオマーカーはγ−カテニンを含み、間葉バイオマーカーはフィブロネクチンを含む。
【００４８】
本発明の方法に関連して、腫瘍細胞によって発現されるバイオマーカーは、腫瘍細胞の遷移状態を示す分子マーカー及び細胞マーカーを含むことができる。好ましい実施形態において、バイオマーカーは、腫瘍の特定の遷移状態、すなわち上皮若しくは間葉特性を示す腫瘍に特徴的な個々のマーカータンパク質、又はそれをコードするｍＲＮＡである。別の実施形態において、ある種の状況において、バイオマーカーは、上皮状態又は間葉状態に特徴的である細胞の巨大分子によって、腫瘍細胞中に形成される特徴的な形態学的パターンであり得る。従って、腫瘍細胞の上皮又は間葉状態及びそれに続いて起こる、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する感受性に関する情報を提供するために、形態計測的細胞分析を使用することが可能である。
【００４９】
【表１】
2009509168.tif 000003
【００５０】
表１に、本明細書に記載の本発明の方法の実施に使用することができる分子バイオマーカーの例をコードする遺伝子を列挙する。分子バイオマーカーは、これらの遺伝子の変異体、例えば、発現ｍＲＮＡ又はタンパク質、スプライスバリアント、同時翻訳及び翻訳後修飾タンパク質、多形バリアントなどを含む、これらの遺伝子によって発現される任意の生成物を含むことができる。一実施形態において、バイオマーカーは、フィブロネクチン１遺伝子によって発現されるスプライスバリアントである胚性ＥＤＢ＋フィブロネクチンである（Ｋｉｌｉａｎ，  Ｏ．  ｅｔ  ａｌ．  （２００４）  Ｂｏｎｅ  ３５（６）：１３３４−１３４５）。フィブロネクチンのこの胎性形態（ｆｅｔａｌ  ｆｏｒｍ）を決定する考えられる利点は、間葉様腫瘍を周囲の間質組織から容易に区別することができることである。追加の実施形態において、バイオマーカーは、ヒト遺伝子産物の動物相同体であり得る（例えば、イヌ、マウス、ラット、ウサギ、ネコ、サル、類人猿由来など）。
【００５１】
本明細書に記載の方法において、腫瘍細胞は、典型的には、癌、前癌状態又は異常細胞増殖の別の形態と診断された患者、及び治療を要する患者から得られる。癌は、肺癌（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、すい癌、頭頚部癌、胃癌、乳癌、結腸癌、卵巣癌、又は本明細書に記載の以下の種々の他の癌のいずれかであり得る。癌は、好ましくは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いて治療可能であることが知られている癌である。
【００５２】
本発明の方法において、バイオマーカー発現レベルは、発現レベルがＥＭＴを通して一定である対照分子と比較して評価することができ、又は分子バイオマーカー（例えば、ＧＡＰＤＨ、β−アクチン、チューブリンなどの「ハウスキーピング」遺伝子）によって示される上皮若しくは間葉遷移状態を発現する腫瘍細胞を比較したときに評価することができる。バイオマーカー発現レベルは、腫瘍細胞バイオマーカーのもう一方のタイプと比較して（すなわち、間葉と比較された上皮）、又は同じ組織の非腫瘍細胞中のバイオマーカーレベルと比較して、又はアッセイ基準として使用される別の細胞若しくは組織源と比較して評価することもできる。
【００５３】
本発明の方法において、腫瘍細胞によって発現される上皮又は間葉バイオマーカーのレベルは、以下により詳細に記述するように、例えば、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、免疫沈降、免疫ブロット、免疫蛍光顕微鏡検査、ＲＴ−ＰＣＲ、ｉｎ  ｓｉｔｕハイブリド形成、ｃＤＮＡマイクロアレイなどなど、遺伝子の発現レベルを測定するための、当分野では公知の標準的バイオアッセイ手順のいずれかを用いることによって評価することができる。
【００５４】
本発明の方法において、腫瘍細胞上皮又は間葉バイオマーカーの発現レベルは、好ましくは腫瘍生検をアッセイすることによって評価される。しかし、別の実施形態において、腫瘍細胞バイオマーカーの発現レベルは、腫瘍又は腫瘍細胞から生じるバイオマーカーの検出可能なレベルを含有する体液又は排せつ物において評価することができる。本発明において有用である体液又は排せつ物としては、血液、尿、唾液、便、胸膜液、リンパ液、痰、腹水、前立腺液、脳脊髄液（ＣＳＦ）又は任意の他の体分泌物若しくはその誘導体などが挙げられる。血液とは、全血、血しょう、血清又は血液の任意の誘導体を含むものとする。かかる体液又は排せつ物中の腫瘍上皮又は間葉バイオマーカーの評価は、観血的な試料採取方法が不適当又は不都合である状況において好ましいことがある。
【００５５】
本発明の方法において、腫瘍細胞は、肺癌腫瘍細胞（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、すい癌腫瘍細胞、乳癌腫瘍細胞、頭頚部癌腫瘍細胞、胃癌腫瘍細胞、結腸癌腫瘍細胞、卵巣癌腫瘍細胞、又は本明細書に記載の以下の種々の他の癌のいずれかに由来する腫瘍細胞であり得る。腫瘍細胞は、好ましくは、固形腫瘍由来の全腫瘍細胞がそうであるように、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼを発現することが知られているタイプ又は予想されるタイプである。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼは、野生型でも変異体でもよい。
【００５６】
本発明の方法において、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、本明細書に記載の以下の任意のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤（医薬として許容されるその塩又は多形体を含む。）であり得る。
【００５７】
以下の方法は、本発明の方法の追加の具体的実施形態である。
【００５８】
本発明は、腫瘍細胞によって発現される上皮バイオマーカーのレベルを評価すること、及びＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍増殖の感受性を予測することを含み、腫瘍細胞上皮バイオマーカーの高い発現レベルはＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍増殖の高い感受性と相関する、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍増殖の感受性を予測する方法を提供する。
【００５９】
本発明は、腫瘍細胞によって発現される間葉バイオマーカーのレベルを評価すること、及びＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍増殖の感受性を予測することを含み、腫瘍細胞間葉バイオマーカーの高い発現レベルはＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍増殖の低い感受性と相関する、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍増殖の感受性を予測する方法を提供する。
【００６０】
本発明は、腫瘍細胞によって発現される上皮バイオマーカーのレベルを評価すること、及び腫瘍がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答するかどうかを予測することを含み、腫瘍細胞上皮バイオマーカーの高い発現レベルはＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する腫瘍と相関する、癌患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する腫瘍に罹患しているかどうかを予測する方法を提供する。
【００６１】
本発明の方法においては、腫瘍は、肺癌腫瘍（例えば、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ））、すい癌腫瘍、乳癌腫瘍、頭頚部癌腫瘍、胃癌腫瘍、結腸癌腫瘍、卵巣癌腫瘍、又は本明細書に記載の以下の種々の他の癌のいずれかに由来する腫瘍であり得る。腫瘍は、好ましくは、全固形腫瘍がそうであるように、細胞がＩＧＦ−１Ｒキナーゼを発現することが知られているタイプ又は予想されるタイプである。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼは、野生型又は変異体であり得る。
【００６２】
本発明は、腫瘍細胞によって発現される間葉バイオマーカーのレベルを評価すること、及び腫瘍がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答するかどうかを予測することを含み、腫瘍細胞間葉バイオマーカーの高い発現レベルはＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に対してより有効に応答しない腫瘍と相関する、癌患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に対して有効に応答する腫瘍に罹患しているかどうかを予測する方法を提供する。
【００６３】
本発明は、少なくとも１種類の上皮バイオマーカーポリペプチドの腫瘍細胞レベルを測定すること、少なくとも１種類の対照ポリペプチドの腫瘍細胞レベルを測定すること、少なくとも１種類の上皮バイオマーカーポリペプチドの腫瘍細胞レベルを少なくとも１種類の対照ポリペプチドの腫瘍細胞レベルと比較することを含み、腫瘍細胞バイオマーカーポリペプチドと腫瘍細胞対照ポリペプチドの高い比はＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の予測される高い感受性を示す、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法を提供する。この方法に関し、有用である上皮バイオマーカーポリペプチドの例として、Ｅ−カドヘリン、γ−カテニン、ケラチン８、ケラチン１８及びＢｒｋが挙げられる。
【００６４】
本発明は、ポリペプチドをコードする少なくとも１種類の上皮バイオマーカーポリヌクレオチドの腫瘍細胞レベルを測定すること、少なくとも１種類の対照ポリヌクレオチドの腫瘍細胞レベルを測定すること、ポリペプチドをコードする少なくとも１種類の上皮バイオマーカーポリヌクレオチドの腫瘍細胞レベルを少なくとも１種類の対照ポリヌクレオチドの腫瘍細胞レベルと比較することを含み、腫瘍細胞バイオマーカーポリヌクレオチドと腫瘍細胞対照ポリヌクレオチドの高い比はＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の予測される高い感受性を示す、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法を提供する。この方法に関し、上皮バイオマーカーポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドの例として、Ｅ−カドヘリン、γ−カテニン、ケラチン８、ケラチン１８及びＢｒｋが挙げられる。
【００６５】
本発明は、少なくとも１種類の間葉バイオマーカーポリペプチドの腫瘍細胞レベルを測定すること、少なくとも１種類の対照ポリペプチドの腫瘍細胞レベルを測定すること、少なくとも１種類の間葉バイオマーカーポリペプチドの腫瘍細胞レベルと少なくとも１種類の対照ポリペプチドの腫瘍細胞レベルを比較することを含み、腫瘍細胞バイオマーカーポリペプチドと腫瘍細胞対照ポリペプチドの低い比はＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の予測された高い感受性を示す、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法を提供する。この方法に関し、有用である間葉バイオマーカーポリペプチドの例として、ビメンチン及びフィブロネクチンが挙げられる。
【００６６】
本発明は、ポリペプチドをコードする少なくとも１種類の間葉バイオマーカーポリヌクレオチドの腫瘍細胞レベルを測定すること、少なくとも１種類の対照ポリヌクレオチドの腫瘍細胞レベルを測定すること、ポリペプチドをコードする少なくとも１種類の間葉バイオマーカーポリヌクレオチドの腫瘍細胞レベルを少なくとも１種類の対照ポリヌクレオチドの腫瘍細胞レベルと比較することを含み、腫瘍細胞バイオマーカーポリヌクレオチドと腫瘍細胞対照ポリヌクレオチドの低い比は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の予測される高い感受性を示す、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法を提供する。この方法に関し、バイオマーカーポリヌクレオチドによってコードされる有用なポリペプチドの例として、ビメンチン及びフィブロネクチンが挙げられる。
【００６７】
本発明は、少なくとも１種類の上皮バイオマーカーポリペプチドの腫瘍細胞レベルを測定すること、少なくとも１種類の上皮バイオマーカーポリペプチドの非腫瘍細胞レベルを測定すること、少なくとも１種類の上皮バイオマーカーポリペプチドの腫瘍細胞レベルを少なくとも１種類の上皮バイオマーカーポリペプチドの非腫瘍細胞レベルと比較することを含み、腫瘍細胞バイオマーカーポリペプチドと非腫瘍細胞バイオマーカーポリペプチドの高い比は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の予測される高い感受性を示す、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法を提供する。この方法に関し、有用である上皮バイオマーカーポリペプチドの例として、Ｅ−カドヘリン、γ−カテニン、ケラチン８、ケラチン１８及びＢｒｋが挙げられる。
【００６８】
本発明は、ポリペプチドをコードする少なくとも１種類の上皮バイオマーカーポリヌクレオチドの腫瘍細胞レベルを測定すること、ポリペプチドをコードする少なくとも１種類の上皮バイオマーカーポリヌクレオチドの非腫瘍細胞レベルを測定すること、ポリペプチドをコードする少なくとも１種類の上皮バイオマーカーポリヌクレオチドの腫瘍細胞レベルとポリペプチドをコードする少なくとも１種類の上皮バイオマーカーポリヌクレオチドの非腫瘍細胞レベルを比較することを含み、腫瘍細胞バイオマーカーポリヌクレオチドと非腫瘍細胞バイオマーカーポリヌクレオチドの高い比は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の予測される高い感受性を示す、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法を提供する。この方法に関し、上皮バイオマーカーポリヌクレオチドによってコードされる有用なポリペプチドの例として、Ｅ−カドヘリン、γ−カテニン、ケラチン８、ケラチン１８及びＢｒｋが挙げられる。
【００６９】
本発明は、少なくとも１種類の間葉バイオマーカーポリペプチドの腫瘍細胞レベルを測定すること、少なくとも１種類の間葉バイオマーカーポリペプチドの非腫瘍細胞レベルを測定すること、少なくとも１種類の間葉バイオマーカーポリペプチドの腫瘍細胞レベルと少なくとも１種類の間葉バイオマーカーポリペプチドの非腫瘍細胞レベルを比較することを含み、腫瘍細胞バイオマーカーポリペプチドと非腫瘍細胞バイオマーカーポリペプチドの低い比は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の予測される高い感受性を示す、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法を提供する。この方法に関し、有用である間葉バイオマーカーポリペプチドの例として、ビメンチン及びフィブロネクチンが挙げられる。
【００７０】
本発明は、ポリペプチドをコードする少なくとも１種類の間葉バイオマーカーポリヌクレオチドの腫瘍細胞レベルを測定すること、ポリペプチドをコードする少なくとも１種類の間葉バイオマーカーポリヌクレオチドの非腫瘍細胞レベルを測定すること、ポリペプチドをコードする少なくとも１種類の間葉バイオマーカーポリヌクレオチドの腫瘍細胞レベルを、ポリペプチドをコードする少なくとも１種類の間葉バイオマーカーポリヌクレオチドの非腫瘍細胞レベルと比較することを含み、腫瘍細胞バイオマーカーポリヌクレオチドと非腫瘍細胞バイオマーカーポリヌクレオチドの低い比は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の予測される高い感受性を示す、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法を提供する。この方法に関し、バイオマーカーポリヌクレオチドによってコードされる有用なポリペプチドの例として、ビメンチン及びフィブロネクチンが挙げられる。
【００７１】
本発明は、少なくとも１種類の上皮バイオマーカーポリペプチドの腫瘍細胞レベルを測定すること、少なくとも１種類の間葉バイオマーカーポリペプチドの腫瘍細胞レベルを測定すること、少なくとも１種類の上皮バイオマーカーポリペプチドのレベルを少なくとも１種類の間葉バイオマーカーポリペプチドのレベルと比較することを含み、上皮バイオマーカーポリペプチドと間葉バイオマーカーポリペプチドの高い比は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の予測される高い感受性を示す、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法を提供する。この方法に関し、有用である上皮バイオマーカーポリペプチドの例として、Ｅ−カドヘリン、γ−カテニン、ケラチン８、ケラチン１８及びＢｒｋが挙げられる。この方法に関し、有用である間葉バイオマーカーポリペプチドの例として、ビメンチン及びフィブロネクチンが挙げられる。
【００７２】
本発明は、ポリペプチドをコードする少なくとも１種類の上皮バイオマーカーポリヌクレオチドの腫瘍細胞レベルを測定すること、ポリペプチドをコードする少なくとも１種類の間葉バイオマーカーポリヌクレオチドの腫瘍細胞レベルを測定すること、（ｃ）少なくとも１種類の上皮バイオマーカーポリヌクレオチドのレベルを少なくとも１種類の間葉バイオマーカーポリヌクレオチドのレベルと比較することを含み、上皮バイオマーカーポリヌクレオチドと間葉バイオマーカーポリヌクレオチドの高い比は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の予測される高い感受性を示す、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法を提供する。この方法に関し、上皮バイオマーカーポリヌクレオチドによってコードされる有用なポリペプチドの例として、Ｅ−カドヘリン、γ−カテニン、ケラチン８、ケラチン１８及びＢｒｋが挙げられる。この方法に関し、間葉バイオマーカーポリヌクレオチドによってコードされる有用なポリペプチドの例として、ビメンチン及びフィブロネクチンが挙げられる。
【００７３】
本発明は、患者試料中の間葉バイオマーカーの発現レベルを対照非癌試料中のバイオマーカーの正常発現レベルと比較することを含み、正常レベルに対する患者試料中の間葉バイオマーカーの発現レベルの有意な増加によって、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する可能性が低い癌に患者が罹患していることが示される、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する癌に癌患者が罹患しているかどうかを評価する方法を提供する。この方法に関し、有用である間葉バイオマーカーの例として、ビメンチン及びフィブロネクチン並びにこれらのタンパク質をコードする核酸が挙げられる。
【００７４】
本発明は、患者試料中の上皮バイオマーカーの発現レベルを対照非癌試料中のバイオマーカーの正常発現レベルと比較することを含み、正常レベルに対する患者試料中の上皮バイオマーカーの発現レベルの有意な減少によって、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する可能性が低い癌に患者が罹患していることが示される、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する癌に癌患者が罹患しているかどうかを評価する方法を提供する。この方法に関し、有用である上皮バイオマーカーの例として、Ｅ−カドヘリン、γ−カテニン、ケラチン８、ケラチン１８及びＢｒｋ並びにこれらのタンパク質をコードする核酸が挙げられる。
【００７５】
本発明は、患者試料中の上皮バイオマーカーの発現レベルを患者試料中の間葉バイオマーカーの発現レベルと比較することを含み、上皮バイオマーカーの発現レベルと間葉バイオマーカーの発現レベルの高い比によって、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する可能性が高い癌に患者が罹患していることが示される、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する癌に癌患者が罹患しているかどうかを評価する方法を提供する。この方法に関し、有用である上皮バイオマーカーの例として、Ｅ−カドヘリン、γ−カテニン、ケラチン８、ケラチン１８及びＢｒｋ並びにこれらのタンパク質をコードする核酸が挙げられる。この方法に関し、有用である間葉バイオマーカーの例としては、ビメンチン及びフィブロネクチン並びにこれらのタンパク質をコードする核酸が挙げられる。
【００７６】
患者試料に関する上記方法のいずれかにおいて、かかる試料の例は腫瘍生検であり得る。
【００７７】
本発明は、（ａ）ヒト対象の細胞から生じるヒト核酸又はタンパク質を含有する生体物質の試料を採取すること、（ｂ）試料中の１種類若しくはそれ以上の上皮細胞バイオマーカータンパク質又は１種類若しくはそれ以上の上皮細胞バイオマーカータンパク質特異的ｍＲＮＡの発現レベルを定量的又は半定量的に測定すること、及び（ｃ）（ｂ）における発現レベルを正常対照におけるバイオマーカー発現レベルと、又は試料中の対照ポリペプチド若しくは核酸のレベルと比較することを含み、対照レベルに対する、１種類若しくはそれ以上の上皮細胞バイオマーカータンパク質又は１種類若しくはそれ以上の上皮細胞バイオマーカータンパク質特異的ｍＲＮＡの発現の低下によって、ヒト対象においてＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する可能性が低い腫瘍の存在が示される、ヒト対象において腫瘍がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に対して応答性であるかどうかを判定する方法を提供する。
【００７８】
本発明は、（ａ）ヒト対象の細胞から生じるヒト核酸又はタンパク質を含有する生体物質の試料を採取すること、（ｂ）試料中の１種類若しくはそれ以上の間葉細胞バイオマーカータンパク質又は１種類若しくはそれ以上の間葉細胞バイオマーカータンパク質特異的ｍＲＮＡの発現レベルを定量的又は半定量的に測定すること、及び（ｃ）（ｂ）における発現レベルを正常対照におけるバイオマーカー発現レベルと、又は試料中の対照ポリペプチド若しくは核酸のレベルと比較することを含み、対照レベルに対する、１種類若しくはそれ以上の間葉細胞バイオマーカータンパク質又は１種類若しくはそれ以上の間葉細胞バイオマーカータンパク質特異的ｍＲＮＡの発現の増加によって、ヒト対象においてＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に有効に応答する可能性が低い腫瘍の存在が示される、ヒト対象において腫瘍がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に対して応答性であるかどうかを判定する方法を提供する。
【００７９】
本発明は、腫瘍細胞中の１種類又はそれ以上の上皮バイオマーカーのレベルを測定すること、前記レベルを非腫瘍対照における上皮バイオマーカー発現レベルと、又は腫瘍試料中の対照ポリペプチド若しくは核酸のレベルと比較すること、及び腫瘍細胞が１種類又はそれ以上の上皮バイオマーカーの比較的高いレベルを含有するかどうかを判定することを含み、高いレベルによって、腫瘍患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた療法によって比較的長い延命効果を示すことが示される、腫瘍患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた療法によって比較的長い延命効果を示す可能性を判定する方法を提供する。
【００８０】
本発明は、腫瘍細胞中の１種類又はそれ以上の間葉バイオマーカーのレベルを測定すること、前記レベルを非腫瘍対照における間葉バイオマーカー発現レベルと、又は腫瘍試料中の対照ポリペプチド若しくは核酸のレベルと比較すること、及び腫瘍細胞が１種類又はそれ以上の間葉バイオマーカーの比較的低いレベルを含有するかどうかを判定することを含み、低いレベルによって、腫瘍患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた療法によって比較的長い延命効果を示すことが示される、腫瘍患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた療法によって比較的長い延命効果を示す可能性を判定する方法を提供する。
【００８１】
本発明は、腫瘍細胞中の１種類又はそれ以上の上皮バイオマーカーのレベルを測定すること、前記レベルを非腫瘍対照における上皮バイオマーカー発現レベルと、又は腫瘍試料中の対照ポリペプチド若しくは核酸のレベルと比較すること、及び腫瘍細胞が１種類又はそれ以上の上皮バイオマーカーの比較的高いレベルを含有するかどうかを判定すること、腫瘍細胞中の１種類又はそれ以上の間葉バイオマーカーのレベルを測定すること、前記レベルを非腫瘍対照における間葉バイオマーカー発現レベルと、又は腫瘍試料中の対照ポリペプチド若しくは核酸のレベルと比較すること、及び腫瘍細胞が１種類又はそれ以上の間葉バイオマーカーの比較的低レベルを含有するかどうかを判定することを含み、１種類又はそれ以上の上皮バイオマーカーの高いレベル及び１種類又はそれ以上の間葉バイオマーカーの低いレベルによって、腫瘍患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた療法によって比較的長い延命効果を示すことが示される、腫瘍患者がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた療法によって比較的長い延命効果を示す可能性を判定する方法を提供する。
【００８２】
本発明は、新生細胞に関連する上皮バイオマーカーのレベルを測定すること、及び前記上皮バイオマーカーのレベルを非腫瘍性上皮バイオマーカー基準レベルと、又は新生細胞に関連する対照ポリペプチド若しくは核酸のレベルと比較することを含み、新生細胞に関連する上皮バイオマーカーの減少したレベルが前記患者の減少した生存と相関する、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた療法に対して腫瘍性症状の患者の生存についての予後を判定する方法を提供する。
【００８３】
本発明は、新生細胞に関連する間葉バイオマーカーレベルを測定すること、及び前記間葉バイオマーカーレベルを非腫瘍性間葉バイオマーカー基準レベルと、又は新生細胞に関連する対照ポリペプチド若しくは核酸のレベルと比較することを含み、新生細胞に関連する間葉バイオマーカーレベルの増加が前記患者の生存の低下と相関する、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤療法に対して腫瘍性症状の患者の生存についての予後を判定する方法を提供する。
【００８４】
腫瘍細胞上皮又は間葉バイオマーカー発現の評価では、腫瘍細胞又はこれらの腫瘍細胞によって産生されるタンパク質若しくは核酸を含有する患者試料を本発明の方法に使用することができる。これらの実施形態においては、腫瘍細胞試料、例えば、患者から得られた腫瘍生検、又は腫瘍由来の材料を含有する他の患者試料（例えば、血液、血清、尿又は本明細書の上記他の体液若しくは排せつ物）中のマーカーの量（例えば、絶対量又は濃度）を評価することによって、バイオマーカーの発現レベルを評価することができる。細胞試料は、試料中のマーカー量を評価する前に、採取後の種々の周知の調製及び保存技術（例えば、核酸及び／又はタンパク質抽出、固定、保存、凍結、限外ろ過、濃縮、蒸発、遠心分離など）に供することができることは言うまでもない。同様に、腫瘍生検も、採取後の調製及び保存技術、例えば、固定に供することができる。
【００８５】
本発明の方法においては、バイオマーカータンパク質を発現する腫瘍細胞の表面に提示される少なくとも１個の部分を有するバイオマーカータンパク質の発現を検出することができる。マーカータンパク質又はその一部が細胞表面に露出しているかどうかを判定することは当業者には簡単なことである。例えば、免疫学的方法を使用して、ホールセル上のかかるタンパク質を検出することができ、又は周知のコンピュータ配列解析法を使用して、少なくとも１個の細胞外ドメイン（すなわち、分泌タンパク質及び少なくとも１個の細胞表面ドメインを有するタンパク質を含む。）の存在を予測することができる。マーカータンパク質を発現する細胞の表面に提示される少なくとも１個の部分を有するマーカータンパク質の発現は、腫瘍細胞を必ずしも溶解せずに（例えば、タンパク質の細胞表面ドメインに特異的に結合する標識抗体を用いて）検出することができる。
【００８６】
本発明に記載のバイオマーカーの発現は、転写された核酸又はタンパク質の発現を検出する多種多様な周知の方法のいずれかによって評価することができる。かかる方法の非限定的例としては、分泌された、細胞表面タンパク質、細胞質タンパク質又は核タンパク質を検出する免疫学的方法、タンパク質精製方法、タンパク質の機能又は活性アッセイ、核酸ハイブリド形成法、核酸逆転写法及び核酸増幅方法が挙げられる。
【００８７】
一実施形態において、バイオマーカーの発現は、腫瘍細胞において通常受ける翻訳後修飾（例えばグリコシル化、リン酸化、メチル化など）の全部又は一部を起こすバイオマーカータンパク質など、バイオマーカータンパク質又はその断片と特異的に結合する、抗体（例えば、放射性標識、発色団標識、蛍光団標識又は酵素標識抗体）、抗体誘導体（例えば、基質若しくはタンパク質との複合抗体又はタンパク質−リガンド対｛例えばビオチン−ストレプトアビジン｝のリガンド）又は抗体断片（例えば、単鎖抗体、単離抗体超可変ドメインなど）を用いて評価される。
【００８８】
別の実施形態において、バイオマーカーの発現は、患者試料中の細胞からｍＲＮＡ／ｃＤＮＡ（すなわち、転写ポリヌクレオチド）を調製することによって、及び、ｍＲＮＡ／ｃＤＮＡをバイオマーカー核酸又はその断片の補体である基準ポリヌクレオチドとハイブリド形成することによって、評価される。ｃＤＮＡは、基準ポリヌクレオチドとのハイブリド形成前に、種々のポリメラーゼ連鎖反応法のいずれかを用いて、場合によって増幅することが可能である。１種類又はそれ以上のバイオマーカーの発現は、同様に、バイオマーカーの発現レベルを評価する定量ＰＣＲを用いて検出することができる。或いは、本発明のバイオマーカーの変異体又は変種（例えば、一塩基多形体、欠失体など）を検出する多数の公知の方法のいずれかを使用して、患者におけるバイオマーカーの存在を検出することができる。
【００８９】
関係する実施形態においては、試料から得られた転写ポリヌクレオチドの混合物を、バイオマーカー核酸の少なくとも一部（例えば、少なくとも７、１０、１５、２０、２５、３０、４０、５０、１００、５００以上のヌクレオチド残基）と相補的又は相同であるポリヌクレオチドが固定された基質と接触させる。相補的又は相同のポリヌクレオチドが、基質上で異なって検出可能である（例えば、異なる発色団若しくは蛍光団を用いて検出可能である、又は異なる選択位置に固定されている）場合には、複数のバイオマーカーの発現レベルを、単一の基質（例えば、選択位置に固定されたポリヌクレオチドの「遺伝子チップ」マイクロアレイ）を用いて同時に評価することができる。１種類の核酸と別の核酸のハイブリド形成を含むバイオマーカー発現評価方法を使用するときには、厳密なハイブリド形成条件下でハイブリド形成を実施することが好ましい。
【００９０】
本発明の方法において本発明の複数のバイオマーカーを使用するときは、患者試料中の各バイオマーカーの発現レベルを、単一反応混合物中（すなわち、各バイオマーカーに対する異なる蛍光プローブなどの試薬を用いて）又はバイオマーカーの１種類又はそれ以上に対応する個々の反応混合物中の、同じタイプの非癌試料中の複数のバイオマーカーの各々の正常発現レベルと比較することができる。
【００９１】
正常（すなわち非癌）ヒト組織におけるバイオマーカー発現レベルは、種々の方法で評価することができる。一実施形態において、この正常発現レベルは、非癌性であると考えられる細胞部分におけるバイオマーカーの発現レベルを評価し、次いでこの正常発現レベルを腫瘍細胞部分における発現レベルと比較することによって評価される。交互に、特に、本明細書に記載の方法を定常的に実施した結果としてさらなる情報が利用可能になるので、本発明のバイオマーカーの正常発現の集団平均値を使用することができる。他の実施形態においては、「正常」バイオマーカー発現レベルは、非癌患者から得られた患者試料中の、患者における癌の発症が疑われる前に患者から得られた患者試料からの、保存された患者試料などからの、バイオマーカーの発現を評価することによって求めることができる。
【００９２】
生体試料中のバイオマーカータンパク質又は核酸の有無を検出する例示的な方法は、生体試料（例えば、腫瘍に関連する体液）を被検者から採取すること、及び生体試料をポリペプチド又は核酸（例えば、ｍＲＮＡ、ゲノムＤＮＡ又はｃＤＮＡ）を検出することができる化合物又は検出剤と接触させることを含む。したがって、本発明の検出方法を使用して、例えば生体試料中の、ｍＲＮＡ、タンパク質、ｃＤＮＡ又はゲノムＤＮＡをインビトロ及びインビボで検出することができる。例えば、ｍＲＮＡを検出するインビトロ技術としては、ノーザンハイブリド形成及びｉｎ  ｓｉｔｕハイブリド形成が挙げられる。バイオマーカータンパク質を検出するインビトロ技術としては、酵素結合免疫吸着検定法（ＥＬＩＳＡ）、ウエスタンブロット法、免疫沈降、免疫蛍光などが挙げられる。ゲノムＤＮＡを検出するためのインビトロ技術としては、サザンハイブリド形成が挙げられる。ｍＲＮＡを検出するためのインビボ技術としては、ポリメラーゼ連鎖反応法（ＰＣＲ）、ノーザンブロットハイブリド形成及びｉｎ  ｓｉｔｕハイブリド形成が挙げられる。さらに、バイオマーカータンパク質を検出するためのインビボ技術としては、タンパク質又はその断片に対する標識抗体を対象に導入することが挙げられる。例えば、抗体は、対象における存在及び場所を標準画像化技術によって検出することができる放射性マーカーで標識することができる。
【００９３】
かかる診断及び予後のアッセイの一般的原理は、バイオマーカーとプローブを含有し得る試料又は反応混合物を適切な条件下で、バイオマーカーとプローブが相互作用し、結合して、反応混合物中で除去及び／又は検出することができる複合体を形成するのに十分な時間調製することを含む。これらのアッセイは、種々の方法で実施することができる。
【００９４】
例えば、かかるアッセイを実施する一方法は、バイオマーカー又はプローブを、基質とも称される固相支持体上に固定すること、及び固相に固定された標的バイオマーカー／プローブ複合体を反応の最後に検出することを含む。かかる方法の一実施形態においては、バイオマーカーの存在及び／又は濃度をアッセイする、対象から得られた試料を担体又は固相支持体上に固定することができる。別の実施形態においては、逆の状況が考えられ、プローブを固相に固定し、対象から得られた試料をアッセイの非固定成分として反応させることができる。
【００９５】
アッセイ成分を固相に固定する、確立された多数の方法が存在する。これらの方法としては、ビオチンとストレプトアビジンの連結によって固定されるバイオマーカー又はプローブ分子などが挙げられるが、これだけに限定されない。かかるビオチン化アッセイ成分は、当分野で公知の技術（例えば、ビオチン化キット、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、Ｉｌｌ．）を用いて、ビオチン−ＮＨＳ（Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド）から調製することができ、ストレプトアビジン被覆９６ウェルプレート（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）のウェル中に固定することができる。ある実施形態においては、固定アッセイ成分を含む表面を前もって調製し、保存することができる。
【００９６】
かかるアッセイに適切な他の担体又は固相支持体として、バイオマーカー又はプローブが属する分子クラスに結合することができる任意の材料などが挙げられる。周知の支持体又は担体として、ガラス、ポリスチレン、ナイロン、ポリプロピレン、ナイロン、ポリエチレン、デキストラン、アミラーゼ、天然セルロース及び修飾されたセルロース、ポリアクリルアミド、斑れい岩及び磁鉄鉱が挙げられるが、これらだけに限定されない。
【００９７】
上記アプローチによってアッセイを実施するために、非固定成分を固相に添加し、その後、第２の成分を固定する。反応が完結した後に、形成された任意の複合体が固相上に固定されて残るような条件下で非複合成分を（例えば、洗浄によって）除去することができる。固相に固定されたバイオマーカー／プローブ複合体は、本明細書に概説する幾つかの方法で検出することができる。
【００９８】
一実施形態において、プローブが非固定アッセイ成分であるときには、プローブをアッセイの検出及び読み取り目的で、本明細書で考察する、当業者に周知の検出可能な標識で直接又は間接的に標識することができる。
【００９９】
バイオマーカー／プローブ複合体の形成は、例えば蛍光エネルギー移動技術（すなわちＦＥＴ、例えば、Ｌａｋｏｗｉｃｚ他、米国特許第５，６３１，１６９号、Ｓｔａｖｒｉａｎｏｐｏｕｌｏｓ他、米国特許第４，８６８，１０３号参照）を利用することによって、何れかの成分（バイオマーカー又はプローブ）をさらに操作又は標識せずに、直接検出することもできる。第１の「供与体」分子上の蛍光団標識は、適切な波長の入射光によって励起されると、その放射蛍光エネルギーが第２の「受容体」分子上の蛍光標識によって吸収され、蛍光標識が、吸収されたエネルギーによって蛍光を発することができるように選択される。交互に、「供与体」タンパク質分子は、トリプトファン残基の天然蛍光エネルギーを単に利用することもできる。光の異なる波長を発する標識が選択され、その結果、「受容体」分子標識を「供与体」の標識から区別することができる。標識間のエネルギー移動効率は分子間の距離に関係するので、分子間の空間的関係を評価することができる。結合が分子間で起こる状況においては、アッセイにおける「受容体」分子標識の蛍光発光は最大になるはずである。ＦＥＴ結合現象は、当分野で周知の標準的な蛍光定量検出手段（例えば、蛍光光度計を用いて）都合よく測定することができる。
【０１００】
別の実施形態においては、プローブのバイオマーカー認識能力は、一方のアッセイ成分（プローブ又はバイオマーカー）を標識せずに、リアルタイム生体分子間相互作用解析（ＢＩＡ）などの技術を利用することによって求めることができる（例えば、Ｓｊｏｌａｎｄｅｒ，  Ｓ．  ａｎｄ  Ｕｒｂａｎｉｃｚｋｙ，  Ｃ．，  １９９１，  Ａｎａｌ．  Ｃｈｅｍ．  ６３：２３３８−２３４５及びＳｚａｂｏ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９５，  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｓｔｒｕｃｔ．  Ｂｉｏｌ．  ５：６９９−７０５参照）。本明細書では「ＢＩＡ」又は「表面プラズモン共鳴」は、相互作用物のいずれも標識せずに、生体分子特異的相互作用をリアルタイムに研究するための技術である（例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ）。（結合現象を示している）結合表面における質量変化は、表面近傍の光の屈折率を変化させ（表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）の光学現象）、生体分子間のリアルタイム反応の指標として使用することができる検出可能なシグナルを生ずる。
【０１０１】
或いは、別の実施形態において、バイオマーカー及びプローブを液相中の溶質として用いて、類似の診断及び予後のアッセイを実施することができる。かかるアッセイにおいて、複合化されたバイオマーカーとプローブは、分画遠心分離、クロマトグラフィー、電気泳動及び免疫沈降を含む（ただしこれらだけに限定されない。）、幾つかの標準技術のいずれかによって、非複合成分から分離される。分画遠心分離において、バイオマーカー／プローブ複合体は、異なるサイズ及び密度に基づく複合体の異なる沈降平衡のために、一連の遠心段階によって非複合アッセイ成分から分離することができる（例えば、Ｒｉｖａｓ，  Ｇ．，  ａｎｄ  Ｍｉｎｔｏｎ，  Ａ．Ｐ．，  １９９３，  Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｓｃｉ．  １８（８）：２８４−７参照）。標準クロマトグラフィー技術を利用して、複合分子を非複合分子から分離することもできる。例えば、ゲルろ過クロマトグラフィーは、サイズに基づいて分子を分離し、例えば、カラム形式の適切なゲルろ過樹脂を利用することによって、比較的大きい複合体を比較的小さい非複合成分から分離することができる。同様に、非複合成分と比べて、バイオマーカー／プローブ複合体の比較的異なる電荷特性を利用して、例えばイオン交換クロマトグラフィー樹脂を利用して、複合体を非複合成分から区別することもできる。かかる樹脂及びクロマトグラフィー技術は当業者に周知である（例えば、Ｈｅｅｇａａｒｄ，  Ｎ．Ｈ．，  １９９８，  Ｊ．  Ｍｏｌ．  Ｒｅｃｏｇｎｉｔ．  Ｗｉｎｔｅｒ  １１（１−６）：１４１−８；Ｈａｇｅ，  Ｄ．Ｓ．，  ａｎｄ  Ｔｗｅｅｄ，  Ｓ．Ａ．  Ｊ．  Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ  Ｂ  Ｂｉｏｍｅｄ  Ｓｃｉ  Ａｐｐｌ  １９９７  Ｏｃｔ  １０；６９９（１−２）：４９９−５２５参照）。ゲル電気泳動を使用して、複合アッセイ成分を非結合成分から分離することもできる（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，  １９８７−１９９９参照）。この技術において、タンパク質又は核酸複合体は、例えばサイズ又は電荷に基づいて分離される。電気泳動プロセス中の結合相互作用を維持するために、非変性ゲルマトリックス材料及び還元剤の非存在下の条件が典型的には好ましい。特定のアッセイ及びその成分に適切な条件は、当業者に周知である。
【０１０２】
特定の実施形態において、バイオマーカーｍＲＮＡのレベルは、生体試料中で、当分野で公知の方法を用いて、ｉｎ  ｓｉｔｕ及びインビトロ形式で測定することができる。「生体試料」という用語は、対象から単離された組織、細胞、体液及びその単離物、並びに対象中に存在する組織、細胞及び体液を含むものとする。多数の発現検出方法が単離されたＲＮＡを使用する。インビトロ方法のために、ｍＲＮＡの単離に対して選択しない任意のＲＮＡ単離技術が、腫瘍細胞からＲＮＡを精製するために利用され得る（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，  ｅｄ．，  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  １９８７−１９９９参照）。さらに、多数の組織試料を、例えば、Ｃｈｏｍｃｚｙｎｓｋｉの１段階ＲＮＡ単離法（１９８９、米国特許第４，８４３，１５５号）などの当業者に周知の技術を用いて容易に加工することができる。
【０１０３】
単離されたｍＲＮＡは、サザン又はノーザンブロット分析、ポリメラーゼ連鎖反応解析、プローブアレイなど（ただし、これらだけに限定されない。）、ハイブリド形成又は増幅アッセイにおいて使用することができる。ｍＲＮＡレベルを検出する好ましい一診断法は、単離されたｍＲＮＡを、検出されている遺伝子によってコードされるｍＲＮＡとハイブリッド形成することができる核酸分子（プローブ）と接触させることを含む。核酸プローブは、例えば、完全長ｃＤＮＡとすることができ、又は少なくとも７、１５、３０、５０、１００、２５０若しくは５００ヌクレオチド長の、また、本発明のバイオマーカーをコードするｍＲＮＡ若しくはゲノムＤＮＡと厳密な条件下で特異的にハイブリッド形成するのに十分な、オリゴヌクレオチドなどの完全長ｃＤＮＡの一部とすることができる。本発明の診断アッセイに使用するのに適切な他のプローブを本明細書に記載する。ｍＲＮＡとプローブのハイブリド形成は、問題のバイオマーカーが発現されていることを示している。
【０１０４】
一形式において、例えば単離されたｍＲＮＡをアガロースゲル上で泳動させ、ｍＲＮＡをゲルからニトロセルロースなどの膜に転写することによって、ｍＲＮＡを固体表面に固定し、プローブと接触させる。別の形式において、プローブは固体表面に固定され、ｍＲＮＡを、例えばＡｆｆｙｍｅｔｒｉｘ遺伝子チップアレイ中で、プローブと接触させる。当業者は、公知のｍＲＮＡ検出方法を、本発明のバイオマーカーによってコードされるｍＲＮＡのレベルの検出に使用するために容易に改作することができる。
【０１０５】
試料中のｍＲＮＡバイオマーカーレベルを測定する代替法は、核酸増幅プロセス、例えば、ＲＴ−ＰＣＲ（Ｍｕｌｌｉｓ、１９８７、米国特許第４，６８３，２０２号に記載の実験実施形態）、リガーゼ連鎖反応（Ｂａｒａｎｙ，  １９９１，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ，  ８８：１８９−１９３）、自立配列複製（Ｇｕａｔｅｌｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９９０，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８７：１８７４−１８７８）、転写増幅システム（Ｋｗｏｈ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６：１１７３−１１７７）、Ｑ−Ｂｅｔａレプリカーゼ（Ｌｉｚａｒｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８８，  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ６：１１９７）、ローリングサークル複製（Ｌｉｚａｒｄｉ他、米国特許第５，８５４，０３３号）又は任意の他の核酸増幅方法と、それに続く当業者に周知の技術を用いた増幅分子の検出を含む。これらの検出スキームは、核酸分子が極めて少数しか存在しない場合に、かかる分子の検出に特に有用である。本明細書では、増幅プライマーは、遺伝子の５’又は３’領域にアニールすることができる核酸分子の１対（それぞれプラス及びマイナス鎖又はその逆）として定義され、間に短い領域を含有する。一般に、増幅プライマーは、約１０から３０ヌクレオチド長であり、約５０から２００ヌクレオチド長の領域に隣接する。適切な条件下で、適切な試薬を用いて、かかるプライマーによって、プライマーが隣接するヌクレオチド配列を含む核酸分子を増幅することができる。
【０１０６】
ｉｎ  ｓｉｔｕ方法のために、ｍＲＮＡを腫瘍細胞から検出前に単離する必要はない。かかる方法においては、細胞又は組織試料を公知の組織学的方法を用いて調製／加工する。次いで、試料を支持体、典型的にはスライドガラス上に固定し、次いでバイオマーカーをコードするｍＲＮＡとハイブリッド形成することができるプローブと接触させる。
【０１０７】
バイオマーカーの絶対発現レベルに基づく測定の代替として、測定は、バイオマーカーの標準化された発現レベルに基づくことができる。バイオマーカーの絶対発現レベルをバイオマーカーでない遺伝子、例えば、恒常的に発現されるハウスキーピング遺伝子の発現と比較して、バイオマーカーの絶対発現レベルを補正することによって、発現レベルを標準化する。標準化に適切な遺伝子として、アクチン遺伝子などのハウスキーピング遺伝子、又は上皮細胞特異的遺伝子などが挙げられる。この標準化によって、一試料、例えば患者試料を別の試料、例えば非腫瘍試料と、又は異なる出所からの試料間で、発現レベルを比較することができる。
【０１０８】
或いは、発現レベルを相対発現レベルとすることができる。バイオマーカーの相対発現レベル（例えば、間葉バイオマーカー）を求めるために、問題の試料の発現レベルを測定する前に、バイオマーカー発現レベルを正常対癌細胞単離体の１０個又はそれ以上の試料、好ましくは５０個又はそれ以上の試料について測定する。より多数の試料においてアッセイされた遺伝子の各々の平均発現レベルを求め、これをバイオマーカーのベースライン発現レベルとして使用する。次いで、試験試料について測定したバイオマーカー発現レベル（絶対発現レベル）をそのバイオマーカーについて得られた平均発現値で除算する。これによって相対発現レベルが得られる。
【０１０９】
本発明の別の実施形態において、バイオマーカータンパク質を検出する。本発明のバイオマーカータンパク質を検出する好ましい薬剤は、かかるタンパク質又はその断片と結合することができる抗体、好ましくは検出可能な標識を有する抗体である。抗体はポリクローナル、又はより好ましくはモノクローナルであり得る。完全な抗体又はその断片若しくは誘導体（例えば、Ｆａｂ又はＦ（ａｂ’）２）を使用することができる。プローブ又は抗体に関する「標識された」という用語は、検出可能な物質をプローブ又は抗体と連結（すなわち、物理的に連結）することによるプローブ又は抗体の直接標識、及び直接標識された別の試薬との反応（ｒｅａｃｔｉｖｉｔｙ）によるプローブ又は抗体の間接標識を包含するものとする。間接標識の例としては、蛍光標識二次抗体を用いた一次抗体の検出、及び蛍光標識ストレプトアビジンを用いて検出することができるようなビオチンによるＤＮＡプローブの末端標識が挙げられる。
【０１１０】
腫瘍細胞由来のタンパク質は、当業者に周知の技術を用いて単離することができる。用いられるタンパク質単離方法は、例えば、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ（Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，  １９８８，  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，  Ｎ．Ｙ．）に記載されている方法などである。
【０１１１】
多様な形式によって、試料が、所与の抗体に結合するタンパク質を含有するかどうかを判定することができる。かかる形式の例としては、酵素免疫測定法（ＥＩＡ）、放射性免疫測定法（ＲＩＡ）、ウエスタンブロット分析及び酵素結合免疫吸着（ｉｍｍｕｎｏａｂｓｏｒｂａｎｔ）測定法（ＥＬＩＳＡ）が挙げられるが、これらだけに限定されない。当業者は、公知のタンパク質／抗体検出方法を、腫瘍細胞が本発明のバイオマーカーを発現するかどうかの判定に使用するために容易に改作することができる。
【０１１２】
一形式において、抗体又は抗体断片若しくは誘導体をウエスタンブロット又は免疫蛍光技術などの方法に使用して、発現されたタンパク質を検出することができる。かかる使用においては、抗体又はタンパク質を固体支持体に固定することが一般に好ましい。適切な固相支持体又は担体として、抗原又は抗体と結合することができる任意の支持体などが挙げられる。周知の支持体又は担体として、ガラス、ポリスチレン、ポリプロピレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、天然セルロース及び修飾されたセルロース、ポリアクリルアミド、斑れい岩及び磁鉄鉱が挙げられる。
【０１１３】
当業者は、抗体又は抗原と結合する多数の他の適切な担体を承知しており、かかる支持体を本発明での使用に改作することができる。例えば、腫瘍細胞から単離されたタンパク質を、ポリアクリルアミドゲル電気泳動によって泳動させ、ニトロセルロースなどの固相支持体上に固定することができる。次いで、支持体を適切な緩衝剤で洗浄し、続いて検出可能な標識抗体を用いて処理することができる。次いで、固相支持体を再度緩衝剤で洗浄して非結合抗体を除去することができる。次いで、固体支持体上の結合標識の量を従来手段によって検出することができる。
【０１１４】
ＥＬＩＳＡアッセイの場合、特異的結合対は、免疫タイプでもよく、又は非免疫タイプでもよい。免疫特異的結合対は、抗原−抗体系又はハプテン／抗ハプテン系によって例示される。フルオレセイン／抗フルオレセイン、ジニトロフェニル／抗ジニトロフェニル、ビオチン／抗ビオチン、ペプチド／抗ペプチドなども挙げることができる。特異的結合対の抗体メンバーは、当業者によく知られた通例の方法によって生成することができる。かかる方法は、特異的結合対の抗原メンバーを有する動物を用いた免疫化を含む。特異的結合対の抗原メンバーが免疫原性でない場合、例えば、ハプテンである場合、担体タンパク質と共有結合させて免疫原性にすることができる。非免疫結合対は、２種類の成分が互いに天然の親和性を共有するが、抗体ではない系を含む。例示的な非免疫対は、ビオチン−ストレプトアビジン、内因子−ビタミンＢ１２、葉酸−葉酸塩結合タンパク質などである。
【０１１５】
種々の方法を利用して、抗体を特異的結合対のメンバーで共有結合標識することができる。この方法は、特異的結合対メンバーの性質、所望の連結のタイプ、及び種々の複合化化学反応に対する抗体の寛容性に基づいて選択される。ビオチンは、市販の活性誘導体を利用して抗体へ共有結合的に連結させることができる。これらの一部は、タンパク質上のアミン基に結合するビオチン−Ｎ−ヒドロキシ−スクシンイミド；炭水化物部分、アルデヒド及びカルボキシル基とカルボジイミド連結によって結合するビオチンヒドラジド、並びにスルフヒドリル基と結合するビオチンマレイミド及びヨードアセチルビオチンである。フルオレセインは、フルオレセインイソチオシアナートを用いてタンパク質アミン基と連結させることができる。ジニトロフェニル基は、２，４−ジニトロベンゼンスルファート又は２，４−ジニトロフルオロベンゼンを用いてタンパク質アミン基と連結させることができる。ジアルデヒド、カルボジイミド連結、ホモ官能性架橋及びヘテロ二官能性架橋など、複合化の他の標準方法を使用して、モノクローナル抗体を特異的結合対メンバーと連結させることもできる。カルボジイミド連結は、一物質上のカルボキシル基を別の物質上のアミン基と連結させる有効な方法である。カルボジイミド連結は、市販試薬１−エチル−３−（ジメチル−アミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＡＣ）を用いることによって促進される。
【０１１６】
二官能性イミドエステル及び二官能性Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルなど、ホモ二官能性架橋剤は、市販されており、一物質上のアミン基と別の物質上のアミン基の連結に使用される。ヘテロ二官能性架橋剤は、異なる官能基を有する試薬である。最も一般的な市販ヘテロ二官能性架橋剤は、アミン反応性Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドエステルを第１の官能基として有し、スルフヒドリル反応基を第２の官能基として有する。最も一般的なスルフヒドリル反応基は、マレイミド、ピリジルジスルフィド及び活性ハロゲンである。官能基の１つは、照射によって種々の基と反応する光活性アリールニトレンであり得る。
【０１１７】
検出可能に標識された抗体、又は検出可能に標識された特異的結合対メンバーは、放射性同位体、酵素、蛍光発生材料、化学発光材料又は電気化学材料であり得るレポーターと連結させることによって調製される。一般に使用される２種類の放射性同位体は１２５Ｉ及び３Ｈである。標準放射性同位体標識手順としては、クロラミンＴ、ラクトペルオキシダーゼ、１２５ＩのＢｏｌｔｏｎ−Ｈｕｎｔｅｒ方法及び３Ｈの還元的メチル化などが挙げられる。「検出可能に標識された」という用語は、標識の内因性酵素活性によって、又はそれ自体容易に検出することができる別の成分の標識との結合によって、容易に検出することができるように標識された分子を指す。
【０１１８】
本発明に使用するのに適切な酵素として、西洋ワサビペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、グルコースオキシダーゼ、ホタル及びウミシイタケを含めたルシフェラーゼ、β−ラクタマーゼ、ウレアーゼ、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）及びリゾチームが挙げられるが、これらだけに限定されない。酵素標識は、抗体と特異的結合対メンバーの連結の場合と同様に、上述のようにジアルデヒド、カルボジイミド連結、ホモ二官能性架橋剤及びヘテロ二官能性架橋剤を使用することによって促進される。
【０１１９】
選択される標識方法は、酵素及び標識される材料に対して利用可能な官能基、並びに連結条件に対する酵素及び標識される材料の耐性によって決まる。本発明に使用される標識方法は、これらだけに限定されないが、Ｅｎｇｖａｌｌ  ａｎｄ  Ｐｅａｒｌｍａｎｎ，  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ８，  ８７１（１９７１），  Ａｖｒａｍｅａｓ  ａｎｄ  Ｔｅｒｎｙｎｃｋ，  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ８，  １１７５（１９７５），  Ｉｓｈｉｋａｗａ  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙ  ４（３）：２０９−３２７（１９８３）及びＪａｂｌｏｎｓｋｉ，  Ａｎａｌ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  １４８：１９９（１９８５）に記載の方法など、現在使用されるあらゆる従来法の１つとすることができる。
【０１２０】
標識は、スペーサー又は特異的結合対の他のメンバーの使用などの間接的方法によることができる。間接的方法の例は、逐次又は同時に添加される非標識ストレプトアビジンとビオチン化酵素を用いたビオチン化抗体の検出である。したがって、本発明によれば、検出に使用される抗体は、レポーターによって直接的に、又は第１の特異的結合対メンバーによって間接的に、検出可能に標識することができる。抗体と第１の特異的結合対メンバーとの連結は、検出は、抗体−第１の特異的結合メンバー複合体を第２の標識又は非標識結合対メンバーと上述したように反応させることによって行われる。
【０１２１】
さらに、非標識検出抗体は、非標識抗体を非標識抗体に特異的な標識抗体と反応させることによって検出することができる。この場合、上で使用する「検出可能に標識された」は、非標識抗体に特異的な抗体が結合することができるエピトープを含有することを意味する。かかる抗抗体は、上で考察した手法のいずれかを用いて直接的又は間接的に標識することができる。例えば、抗抗体は、上で考察したストレプトアビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼ系と反応させることによって検出されるビオチンと連結させることができる。
【０１２２】
本発明の一実施形態において、ビオチンが利用される。ビオチン化抗体は、次いで、ストレプトアビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼ複合体と反応する。オルトフェニレンジアミン、４−クロロ−ナフトール、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）、ＡＢＴＳ、ＢＴＳ又はＡＳＡを色素検出に使用することができる。
【０１２３】
本発明を実施するための一免疫測定法形式において、捕捉試薬が従来技術を用いて支持体表面に固定されたフォワード（ｆｏｒｗａｒｄ）サンドイッチ測定法が使用される。アッセイに使用される適切な支持体として、ポリプロピレン、ポリスチレン、置換ポリスチレン、例えばアミノ化又はカルボキシル化ポリスチレン、ポリアクリルアミド、ポリアミド、ポリ塩化ビニル、ガラスビーズ、アガロース又はニトロセルロースなどの合成高分子支持体が挙げられる。
【０１２４】
本発明は、生体試料中のバイオマーカータンパク質又は核酸の存在を検出するキットも包含する。かかるキットを使用して、被検者が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対して影響されにくい腫瘍に罹患しているかどうか、又はその発症リスクが高いかどうかを判定することができる。例えば、キットは、生体試料中のバイオマーカータンパク質又は核酸を検出することができる標識化合物又は標識剤、及び試料中のタンパク質又はｍＲＮＡの量を測定する手段（例えば、タンパク質若しくはその断片に結合する抗体、又はタンパク質をコードするＤＮＡ若しくはｍＲＮＡに結合するオリゴヌクレオチドプローブ）を含むことができる。キットは、キットを用いて得られた結果を解釈する説明書を含むこともできる。
【０１２５】
抗体を用いたキットの場合、キットは、例えば、（１）バイオマーカータンパク質と結合する（例えば、固体支持体に付着した）第１の抗体を含むことができ、（２）タンパク質又は第１の抗体と結合し、検出可能な標識に連結された第２の異なる抗体を場合によっては含んでいてもよい。
【０１２６】
オリゴヌクレオチドを用いたキットの場合、キットは、例えば、（１）バイオマーカータンパク質をコードする核酸配列とハイブリッド形成するオリゴヌクレオチド、例えば、検出可能に標識されたオリゴヌクレオチド、又は（２）バイオマーカー核酸分子の増幅に有用である１対のプライマーを含むことができる。キットは、例えば、緩衝剤、防腐剤又はタンパク質安定剤を含むこともできる。キットは、検出可能な標識の検出に必要な構成要素（例えば、酵素又は基質）をさらに含むこともできる。キットは、アッセイし、試験試料と比較することができる対照試料又は一連の対照試料を含有することもできる。キットの各構成要素は、個々の容器に封入することができ、種々の容器のすべてを、キットを用いて実施したアッセイの結果を解釈する説明書と一緒に、単一パッケージに入れることができる。
【０１２７】
本発明は、さらに、腫瘍細胞が上皮間葉遷移を起こしたかどうかを評価することによって、例えば、腫瘍細胞上皮及び／又は間葉バイオマーカーの発現レベルを測定する本明細書に記載の方法のいずれかによって、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する患者の想定される応答性を診断する段階と、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の治療有効量を前記患者に投与する段階とを含む、患者における腫瘍又は腫瘍転移を治療する方法も提供する。この方法に関し、好ましいＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の例は、薬理学的に許容されるその塩又は多形体を含む、化合物６６と類似の特性（例えば、選択性、効力）を有するものである。この方法において、個々の患者に関する任意の追加の状況と組み合わせて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する患者の考えられる応答性の予測を考慮して、投与医師によって適切であると判断されたときに、１種類又はそれ以上の追加の抗癌剤又は治療をＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と同時又は逐次投与することができる。
【０１２８】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する患者の想定される応答性の診断後に、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の治療有効量を前記患者に投与する具体的な方法は、主治医の判断によることを医薬分野の当業者は理解する。投与量、他の抗癌剤との組合せ、投与のタイミング及び頻度などを含めた投与の様式は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する患者の想定される応答性の診断、並びに患者の症状及び病歴によって左右され得る。したがって、腫瘍がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対して感受性が比較的低いと予測されると診断された患者でも、かかる阻害剤、特に他の抗癌剤と組み合わせた阻害剤による、又はＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する腫瘍の感受性を変化させ得る薬剤による治療の利点が依然として得られ得る。
【０１２９】
本発明は、さらに、腫瘍細胞が上皮間葉遷移を起こしたかどうかを評価することによって、例えば、腫瘍細胞上皮及び／又は間葉バイオマーカーの発現レベルを測定する本明細書に記載の方法のいずれかによって、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する患者の想定される応答性を診断する段階と、患者を、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に対する有効な応答を示す可能性が高い患者として確認する段階と、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の治療有効量を前記患者に投与する段階とを含む、患者における腫瘍又は腫瘍転移を治療する方法も提供する。
【０１３０】
本発明は、さらに、腫瘍細胞が上皮間葉遷移を起こしたかどうかを評価することによって、例えば、腫瘍細胞上皮及び／又は間葉バイオマーカーの発現レベルを測定する本明細書に記載の方法のいずれかによって、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する患者の想定される応答性を診断する段階と、患者を、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療に対する有効な応答を示す可能性が低い、又は可能性がない患者として確認する段階と、前記患者をＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤以外の抗癌療法によって治療する段階とを含む、患者における腫瘍又は腫瘍転移を治療する方法も提供する。
【０１３１】
本発明は、さらに、（ａ）ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対してある範囲の感受性を示す腫瘍細胞パネル中の上皮バイオマーカー候補の発現レベルを測定すること、及び（ｂ）腫瘍細胞中の前記上皮バイオマーカー候補の発現レベルとＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性との相関を明らかにすることを含み、上皮バイオマーカーの高いレベルとＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の高い感受性との相関によって、前記上皮バイオマーカーの発現レベルが、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予示することが示される、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性がその発現レベルによって予示される上皮バイオマーカーを特定する方法も提供する。この方法の一実施形態において、腫瘍細胞パネルは腫瘍細胞系パネルである。別の実施形態において、腫瘍細胞パネルは、患者又は実験動物モデルに由来する腫瘍試料から調製される原発腫瘍細胞パネルである。さらに別の実施形態において、腫瘍細胞パネルは、マウス異種移植片中の腫瘍細胞系パネルであり、腫瘍細胞増殖は、例えば、増殖の分子マーカー又は腫瘍増殖全体の測定、例えば、腫瘍寸法若しくは重量をモニタリングすることによって測定することができる。
【０１３２】
本発明は、さらに、（ａ）ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対してある範囲の感受性を示す腫瘍細胞パネル中の間葉バイオマーカー候補の発現レベルを測定すること、及び（ｂ）腫瘍細胞中の前記間葉バイオマーカー候補の発現レベルとＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性との相関を明らかにすることを含み、間葉バイオマーカーの高いレベルとＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の低い感受性との相関によって、前記間葉バイオマーカーの発現レベルが、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性の欠如を予示することが示される、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性がその発現レベルによって予示される間葉バイオマーカーを特定する方法も提供する。この方法の一実施形態において、腫瘍細胞パネルは腫瘍細胞系パネルである。別の実施形態において、腫瘍細胞パネルは、患者モデルに由来する腫瘍試料から調製される原発腫瘍細胞パネルである。さらに別の実施形態において、腫瘍細胞パネルは、マウス異種移植片中の腫瘍細胞系パネルであり、腫瘍細胞増殖は、例えば、増殖の分子マーカー又は腫瘍増殖全体の測定、例えば、腫瘍寸法若しくは重量をモニタリングすることによって測定することができる。
【０１３３】
本発明は、さらに、（ａ）腫瘍性症状の患者から得られた新生細胞含有試料中の上皮バイオマーカー候補のレベルを測定すること、及び（ｂ）患者から得られた試料中の前記上皮バイオマーカー候補のレベルとＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による腫瘍性症状の治療の有効性との相関を求めることを含み、上皮バイオマーカーの高いレベルとＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による腫瘍性症状のより有効な治療との相関によって、前記上皮バイオマーカーが、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による腫瘍性症状のより有効な治療の診断指標になることが示される、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた腫瘍性症状のより有効な治療の診断指標になる上皮バイオマーカーを特定する方法も提供する。
【０１３４】
本発明は、さらに、（ａ）腫瘍性症状の患者から得られた新生細胞含有試料中の間葉バイオマーカー候補のレベルを測定すること、及び（ｂ）患者から得られた試料中の前記間葉バイオマーカー候補のレベルとＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による腫瘍性症状の治療の有効性との相関を求めることを含み、間葉バイオマーカーの高いレベルとＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による腫瘍性症状のさほど有効でない治療との相関によって、前記間葉バイオマーカーが、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による腫瘍性症状のさほど有効でない治療の診断指標になることが示される、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた腫瘍性症状のさほど有効でない治療の診断指標になる間葉バイオマーカーを特定する方法も提供する。
【０１３５】
上記方法における治療の有効性は、例えば、腫瘍性症状を有する患者における腫瘍サイズの減少を測定することによって、又は腫瘍細胞の増殖度の分子決定要因をアッセイすることによって、求めることができる。
【０１３６】
本発明は、（ａ）腫瘍性症状を有する患者から得られた新生細胞含有試料中の上皮バイオマーカー候補のレベルを測定すること、及び（ｂ）患者から得られた試料中の前記上皮バイオマーカー候補のレベルとＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いて治療したときの患者の生存との相関を求めることを含み、上皮バイオマーカーと前記患者の生存との相関によって、前記上皮バイオマーカーが、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いて治療したときの、前記腫瘍性症状を有する患者の延命の診断指標になる、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いて治療したときに、腫瘍性症状を有する患者の延命の診断指標になる上皮バイオマーカーを特定する方法を提供する。
【０１３７】
本発明は、（ａ）腫瘍性症状を有する患者から得られた新生細胞含有試料中の間葉バイオマーカー候補のレベルを測定すること、及び（ｂ）患者から得られた試料中の前記間葉バイオマーカー候補のレベルとＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いて治療したときの患者の生存との逆相関を求めることを含み、間葉バイオマーカーと前記患者の生存との逆相関によって、前記間葉バイオマーカーが、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いて治療したときの、前記腫瘍性症状を有する患者の生存短縮の診断指標になる、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いて治療したときに、腫瘍性症状を有する患者の生存短縮の診断指標になる間葉バイオマーカーを特定する方法を提供する。
【０１３８】
本発明は、腫瘍細胞が、以前に上皮間葉遷移した腫瘍細胞として特徴づけられ、前記腫瘍細胞の試料をＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と接触させること、前記腫瘍細胞の同一試料を試験薬剤の存在下でＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と接触させること、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤によって媒介される増殖阻害を試験薬剤の存在下と非存在下で比較すること、並びに試験薬剤がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する腫瘍細胞増殖の感受性を高める薬剤であるかどうかを判定することを含む、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する腫瘍細胞増殖の感受性を高める薬剤を特定する方法を提供する。この方法に関し、好ましいＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の例は、薬理学的に許容されるその塩又は多形体を含む化合物６６と類似の特性を有する化合物である。この方法の一実施形態において、腫瘍細胞試料は、腫瘍細胞系、原発腫瘍細胞培養物などのインビトロでの細胞であり得る。別の実施形態において、腫瘍細胞試料は、マウス異種移植片中の腫瘍細胞などのインビボでの細胞であり得る。後者の実施形態において、腫瘍細胞増殖は、例えば、増殖の分子マーカー又は腫瘍増殖全体の測定、例えば、腫瘍寸法若しくは重量をモニタリングすることによって測定することができる。
【０１３９】
上記方法において試験することができる適切な試験薬剤として、コンビナトリアルライブラリー、特定の化学物質、ペプチド及びペプチド模倣物、オリゴヌクレオチド、及びディスプレイ（例えばファージディスプレイライブラリー）などの天然物ライブラリー及び抗体産物などが挙げられる。試験薬剤は、例えば１つの反応当たり１０種類の物質の初期スクリーニングに使用することができ、阻害又は活性化を示すこれらのバッチの物質を個々に試験することができる。試験薬剤は、１ｎＭから１０００μＭ、好ましくは１μＭから１００μＭ、より好ましくは１μＭから１０μＭの濃度で使用することができる。
【０１４０】
上記方法によって特定されたＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する腫瘍細胞増殖の感受性を高める薬剤は、（肺癌、又は本明細書に記載の他の癌タイプのいずれかなど）ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する応答性が低いことが予測される癌の患者の治療に使用することができ、本発明の追加の実施形態である。したがって、本発明は、さらに、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に関連して本明細書に記載する方法など、当分野で公知の方法のいずれかによって処方及び投与することができるかかる薬剤を含む組成物も提供する。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する腫瘍細胞増殖の感受性を高めるかかる薬剤は、例えば、間葉上皮遷移（ＭＥＴ）を誘発する薬剤、又はＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する低感受性の原因である特定の細胞活性を阻害する薬剤、又はＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する感受性を高める特定の細胞活性を誘導する薬剤であり得る。適切な薬剤の例として、ＥＭＴ誘発剤の拮抗物質が挙げられる。
【０１４１】
本発明は、さらに、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の治療有効量と、さらに、１つ又はそれ以上の他の細胞傷害剤、化学療法剤若しくは抗癌剤又はこのような薬剤の効果を高める化合物とを同時又は逐次的に患者に投与することを含む、患者における腫瘍又は腫瘍転移を治療する前記方法も提供する。
【０１４２】
本発明に関連して、追加の他の細胞傷害剤、化学療法剤若しくは抗癌剤、又はかかる薬剤の効果を高める化合物として、例えば、シクロホスファミド（ＣＴＸ；例えば、ＣＹＴＯＸＡＮ（登録商標））、クロランブシル（ＣＨＬ；例えば、ＬＥＵＫＥＲＡＮ（登録商標））、シスプラチン（ＣｉｓＰ；例えば、ＰＬＡＴＩＮＯＬ（登録商標））ブスルファン（例えば、ＭＹＬＥＲＡＮ（登録商標））、メルファラン、カルムスチン（ＢＣＮＵ）、ストレプトゾトシン、トリエチレンメラミン（ＴＥＭ）、マイトマイシンＣなどのアルキル化剤又はアルキル化作用を有する薬剤；メトトレキセート（ＭＴＸ）、エトポシド（ＶＰ１６；例えば、ＶＥＰＥＳＩＤ（登録商標））、６−メルカプトプリン（６ＭＰ）、６−チオｃグアニン（６ＴＧ）、シタラビン（Ａｒａ−Ｃ）、５−フルオロウラシル（５−ＦＵ）、カペシタビン（例えば、ＸＥＬＯＤＡ（登録商標））、ダカルバジン（ＤＴＩＣ）などの抗代謝産物；アクチノマイシンＤ、ドキソルビシン（ＤＸＲ；例えば、ＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮ（登録商標））、ダウノルビシン（ダウノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシンなどの抗生物質；ビンクリスチン（ＶＣＲ）、ビンブラスチンなどのビンカアルカロイドなどのアルカロイド、並びにパクリタキセル（例えば、ＴＡＸＯＬ（登録商標））及びパクリタキセル（ｐａｃｔｉｔａｘｅｌ）誘導体、細胞分裂阻害剤、デキサメタゾン（ＤＥＸ；例えば、ＤＥＣＡＤＲＯＮ（登録商標））などのグルココルチコイド及びプレドニゾンなどのコルチコステロイド、ヒドロキシ尿素などのヌクレオシド酵素阻害剤、アスパラギナーゼなどのアミノ酸枯渇酵素、ロイコボリン及び他の葉酸誘導体、類似の多様な制癌剤などの他の制癌剤が挙げられる。以下の薬剤も追加の薬剤として使用することができる：アミフォスチン（ａｒｎｉｆｏｓｔｉｎｅ）（例えば、ＥＴＨＹＯＬ（登録商標））、ダクチノマイシン、メクロレタミン（ナイトロジェンマスタード）、ストレプトゾシン、シクロホスファミド、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、ドキソルビシンリポ（ｌｉｐｏ）（例えば、ＤＯＸＩＬ（登録商標））、ゲムシタビン（例えば、ＧＥＭＺＡＲ（登録商標））、ダウノルビシンリポ（ｌｉｐｏ）（例えば、ＤＡＵＮＯＸＯＭＥ（登録商標））、プロカルバジン、マイトマイシン、ドセタキセル（例えば、ＴＡＸＯＴＥＲＥ（登録商標））、アルデスロイキン、カルボプラチン、オキサリプラチン、クラドリビン、カンプトセシン、ＣＰＴ１１（イリノテカン）、１０−ヒドロキシ７−エチル−カンプトセシン（ＳＮ３８）、フロクスウリジン、フルダラビン、イホスファミド、イダルビシン、メスナ、インターフェロンベータ、インターフェロンアルファ、ミトキサントロン、トポテカン、ロイプロリド、メゲストロール、メルファラン、メルカプトプリン、プリカマイシン、ミトタン、ペガスパルガーゼ、ペントスタチン、ピポブロマン、プリカマイシン、タモキシフェン、テニポシド、テストラクトン、チオグアニン、チオテパ、ウラシルマスタード、ビノレルビン、クロランブシル。
【０１４３】
本発明は、さらに、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の治療有効量と、１種類又はそれ以上の抗ホルモン剤とを同時又は逐次的に患者に投与することを含む、患者における腫瘍又は腫瘍転移を治療する上記方法も提供する。ここで用いられているように、「抗ホルモン剤」という用語は、腫瘍に対するホルモン作用を調節又は阻害するように作用する天然又は合成の有機又はペプチド化合物を含む。
【０１４４】
抗ホルモン剤として、例えば、ステロイド受容体拮抗物質、タモキシフェン、ラロキシフェン、アロマターゼ阻害４（５）−イミダゾール、他のアロマターゼ阻害剤、４２−ヒドロキシタモキシフェン、トリオキシフェン、ケオキシフェン（ｋｅｏｘｉｆｅｎｅ）、ＬＹ  １１７０１８、オナプリストン及びトレミフェン（例えば、ＦＡＲＥＳＴＯＮ（登録商標））などの抗エストロゲン；フルタミド、ニルタミド、ビカルタミド、ロイプロリド及びゴセレリンなどの抗アンドロゲン；並びに薬剤として許容される、上記いずれかの塩、酸又は誘導体；卵胞刺激ホルモン（ＦＳＨ）、甲状腺刺激ホルモン（ＴＳＨ）並びに黄体形成ホルモン（ＬＨ）及びＬＨＲＨ（黄体形成（ｌｅｕｔｅｉｎｉｚｉｎｇ）ホルモン放出ホルモン）などの糖タンパク質ホルモンの作動物質及び／又は拮抗物質；ＺＯＬＡＤＥＸ（登録商標）（ＡｓｔｒａＺｅｎｅｃａ）として市販されているＬＨＲＨ作動物質である酢酸ゴセレリン；ＬＨＲＨ拮抗物質Ｄ−アラニンアミドＮ−アセチル−３−（２−ナフタレニル）−Ｄ−アラニル−４−クロロ−Ｄ−フェニルアラニル−３−（３−ピリジニル）−Ｄ−アラニル−Ｌ−セリル−Ｎ６−（３−ピリジニルカルボニル）−Ｌ−リシル−Ｎ６−（３−ピリジニルカルボニル）−Ｄ−リシル−Ｌ−ロイシル−Ｎ６−（１−メチルエチル）−Ｌ−リシル−Ｌ−プロリン（例えば、ＡＮＴＩＤＥ（登録商標）、Ａｒｅｓ−Ｓｅｒｏｎｏ）；ＬＨＲＨ拮抗物質  ガニレリクス酢酸塩；ステロイド性抗アンドロゲン  酢酸シプロテロン（ＣＰＡ）及びＭＥＧＡＣＥ（登録商標）（Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ）として市販されている酢酸メゲストロール；ＥＵＬＥＸＩＮ（登録商標）（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  Ｃｏｒｐ．）として市販されている非ステロイド性抗アンドロゲンであるフルタミド（２−メチル−Ｎ−［４，２０−ニトロ−３−（トリフルオロメチル）フェニルプロパンアミド）；非ステロイド性抗アンドロゲンであるニルタミド、（５，５−ジメチル−３−［４−ニトロ−３−（トリフルオロメチル−４’−ニトロフェニル）−４，４−ジメチル−イミダゾリジン−ジオン）；並びにＲＡＲ、ＲＸＲ、ＴＲ、ＶＤＲなどの拮抗物質などの他の非許容受容体拮抗物質が挙げられる。
【０１４５】
化学療法計画における上記細胞傷害剤及び他の抗癌剤の使用は、癌治療分野において一般特徴が明らかにされており、ここにおけるその使用も、耐性及び有効性のモニタリング並びに投与経路及び投与量の制御について、幾らかの調節の上、同様に考慮される。例えば、細胞毒性薬の実際の投与量は、組織培養法を使用することによって求められる、患者の培養細胞応答に応じて変化し得る。一般に、投与量は、追加の他の薬剤の非存在下で使用される量よりも減少する。
【０１４６】
有効な細胞毒性薬の典型的な投与量は、製造者によって推奨される範囲内であり得、インビトロでの応答又は動物モデルにおける応答によって示される場合に、最高で約１桁の濃度又は量減少させ得る。したがって、実際の投与量は、医師の判断、患者の状態、及び悪性細胞の初代培養若しくは組織試料の組織培養のインビトロでの応答性に基づく、又は適切な動物モデルにおいて観察される応答に基づく治療方法の有効性によって決まる。
【０１４７】
本発明は、さらに、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の治療有効量と、さらに、１種類又はそれ以上の血管新生阻害剤とを同時又は逐次的に患者に投与することを含む、患者における腫瘍又は腫瘍転移を治療する上記方法も提供する。
【０１４８】
抗血管新生剤として、例えば、ＳＵ−５４１６及びＳＵ−６６６８（Ｓｕｇｅｎ  Ｉｎｃ．  ｏｆ  Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、Ｃａｌｉｆ．、ＵＳＡ）又は例えば、国際公開第９９／２４４４０号、同９９／６２８９０号、同９５／２１６１３号、同９９／６１４２２号、同９８／５０３５６号、同９９／１０３４９号、同９７／３２８５６号、同９７／２２５９６号、同９８／５４０９３号、同９８／０２４３８号、同９９／１６７５５号及び同９８／０２４３７号並びに米国特許第５，８８３，１１３号、同５，８８６，０２０号、同５，７９２，７８３号、同５，８３４，５０４号及び同６，２３５，７６４号に記載のものなどのＶＥＧＦＲ阻害剤；ＩＭ８６２（Ｃｙｔｒａｎ  Ｉｎｃ．  ｏｆ  Ｋｉｒｋｌａｎｄ、Ｗａｓｈ．、ＵＳＡ）などのＶＥＧＦ阻害剤；ａｎｇｉｏｚｙｍｅ、Ｒｉｂｏｚｙｍｅ社（Ｂｏｕｌｄｅｒ、Ｃｏｌｏ．）とＣｈｉｒｏｎ社（Ｅｍｅｒｙｖｉｌｌｅ、Ｃａｌｉｆ．）製の合成リボザイム；及びベバシズマブ（例えば、ＡＶＡＳＴＩＮ（商標）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ、Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、ＣＡ）、ＶＥＧＦに対する組み換えヒト化抗体などのＶＥＧＦに対する抗体；αｖβ３、αｖβ５及びαｖβ６インテグリン並びにそのサブタイプ、例えば、シレンギチド（ｃｉｌｅｎｇｉｔｉｄｅ）（ＥＭＤ  １２１９７４）などのインテグリン受容体拮抗物質及びインテグリン拮抗物質又は例えば、αｖβ３特異的ヒト化抗体（例えば、ＶＩＴＡＸＩＮ（登録商標））などの抗インテグリン抗体；ＩＦＮ−アルファ（米国特許第４１５３０，９０１号、同４，５０３，０３５号及び同５，２３１，１７６号）などの因子；アンギオスタチン及びプラスミノゲン断片（例えば、クリングル１−４、クリングル５、クリングル１−３（Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙ，  Ｍ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９４）  Ｃｅｌｌ  ７９：３１５−３２８；Ｃａｏ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７１：２９４６１−２９４６７；Ｃａｏ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７２：２２９２４−２２９２８）；エンドスタチン（Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙ，  Ｍ．Ｓ．  ｅｔ  ａｌ．  （１９９７）  Ｃｅｌｌ  ８８：２７７及び国際公開第９７／１５６６６号）；トロンボスポンジン（ＴＳＰ−１；Ｆｒａｚｉｅｒ，  （１９９１）  Ｃｕｒｒ．  Ｏｐｉｎ．  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．  ３：７９２）；血小板因子４（ＰＦ４）；プラスミノゲンアクチベーター／ウロキナーゼ阻害剤；ウロキナーゼ受容体拮抗物質；ヘパリナーゼ；ＴＮＰ−４７０１などのフマギリン類似体；スラミン及びスラミン類似体；血管新生抑制（ａｎｇｉｏｓｔａｔｉｃ）ステロイド；ｂＦＧＦ拮抗物質；ｆｌｋ−１及びｆｌｔ−１拮抗物質；ＭＭＰ−２（マトリックス−メタロプロテイナーゼ２）阻害剤及びＭＭＰ−９（マトリックス−メタロプロテイナーゼ９）阻害剤などの抗血管新生剤が挙げられる。有用なマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤の例は、国際公開第９６／３３１７２号、同９６／２７５８３号、同９８／０７６９７号、同９８／０３５１６号、同９８／３４９１８号、同９８／３４９１５号、同９８／３３７６８号、同９８／３０５６６号、同９０／０５７１９号、同９９／５２９１０号、同９９／５２８８９号、同９９／２９６６７号及び同９９／０７６７５号、欧州特許公報第８１８，４４２号、同７８０，３８６号、同１，００４，５７８号、同６０６，０４６号及び同９３１，７８８号；英国特許公報第９９１２９６１号及び米国特許第５，８６３，９４９号及び同５，８６１，５１０号である。好ましいＭＭＰ−２及びＭＭＰ−９阻害剤は、ＭＭＰ−１を阻害する活性をほとんど又は全く持たない阻害剤である。他のマトリックス−メタロプロテイナーゼ（すなわちＭＭＰ−１、ＭＭＰ−３、ＭＭＰ−４、ＭＭＰ−５、ＭＭＰ−６、ＭＭＰ−７、ＭＭＰ−８、ＭＭＰ−１０、ＭＭＰ−１１、ＭＭＰ−１２及びＭＭＰ−１３）に対して、ＭＭＰ−２及び／又はＭＭＰ−９を選択的に阻害する阻害剤がより好ましい。
【０１４９】
本発明は、さらに、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の治療有効量と、及び、さらに、１種類又はそれ以上の腫瘍細胞アポトーシス促進剤又はアポトーシス刺激剤とを同時又は逐次的に患者に投与することを含む、患者における腫瘍又は腫瘍転移を治療する上記方法も提供する。
【０１５０】
本発明は、さらに、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の治療有効量と、及び、さらに、１種類又はそれ以上のシグナル伝達阻害剤とを同時又は逐次的に患者に投与することを含む、患者における腫瘍又は腫瘍転移を治療する上記方法も提供する。
【０１５１】
シグナル伝達阻害剤として、有機分子、例えば、エルロチニブＨＣＬ（ＴＡＲＣＥＶＡ（登録商標））又はＥＧＦ受容体に結合する抗体などのＥＧＦＲキナーゼ阻害剤、例えば、有機分子などのｅｒｂＢ２受容体阻害剤又はｅｒｂＢ２受容体に結合する抗体、例えば、トラスツヅマブ（例えば、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（登録商標））；他のタンパク質チロシン−キナーゼ阻害剤、例えば、イマチニブ（ｉｍｉｔｉｎｉｂ）（例えば、ＧＬＥＥＶＥＣ（登録商標））；ｒａｓ阻害剤；ｒａｆ阻害剤（例えば、ＢＡＹ  ４３−９００６、Ｏｎｙｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／Ｂａｙｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）；ＭＥＫ阻害剤；ｍＴＯＲ阻害剤；サイクリン依存性キナーゼ阻害剤；プロテインキナーゼＣ阻害剤；及びＰＤＫ−１阻害剤（かかる阻害剤の幾つかの例の記述、及び癌治療の臨床試験におけるその使用については、Ｄａｎｃｅｙ，  Ｊ．  ａｎｄ  Ｓａｕｓｖｉｌｌｅ，  Ｅ．Ａ．  （２００３）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖ．  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ  ２：９２−３１３を参照されたい。）が挙げられる。
【０１５２】
ＥＧＦＲ阻害剤には、例えば、［６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリン−４−イル］−（３−エチニルフェニル）アミン（ＯＳＩ−７７４、エルロチニブ又はＴＡＲＣＥＶＡＴＭ（エルロチニブＨＣｌ）としても知られる；ＯＳＩＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ／Ｒｏｃｈｅ）（米国特許第５，７４７，４９８号；国際特許公報ＷＯ０１／３４５７４及びＭｏｙｅｒ，Ｊ．Ｄ．ｅｔ  ａｌ．（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５７：４８３８−４８４８）；ＣＩ−１０３３（従来、ＰＤ１８３８０５として知られていた。；Ｐｆｉｚｅｒ）（Ｓｈｅｒｗｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４０：７２３）；ＰＤ−１５８７８０（Ｐｆｉｚｅｒ）；ＡＧ−１４７８（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ）；ＣＧＰ−５９３２６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＰＫＩ−１６６（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）；ＥＫＢ−５６９（Ｗｙｅｔｈ）；ＧＷ−２０１６（ＧＷ−５７２０１６又は二トシル酸ラパチニブとしても知られる；ＧＳＫ）；ゲフィチニブ（ＺＤ１８３９又はＩＲＥＳＳＡＴＭとしても知られる；Ａｓｔｒａｚｅｎｅｃａ）（Ｗｏｏｄｂｕｒｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．３８：６３３）；及び抗体をベースとしたＥＧＦＲキナーゼ阻害剤が含まれる。本発明において使用することができる特に好ましい小分子量ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤は、［６，７−ビス（２−メトキシエトキシ）−４−キナゾリン−４−イル］−（３−エチニルフェニル）アミン（すなわち、エルロチニブ）、その塩酸塩（すなわち、エルロチニブＨＣｌ、ＴＡＲＣＥＶＡＴＭ）又はその他の塩形態（例えば、メシル酸エルロチニブ）である。抗体をベースとしたＥＧＦＲキナーゼ阻害剤には、その天然リガンドによって、ＥＧＦＲの活性化を部分的又は完全に遮断することができる全ての抗ＥＧＦＲ抗体又は抗体断片が含まれる。抗体をベースとするＥＧＦＲキナーゼ阻害剤の非限定的な例には、「Ｍｏｄｊｔａｈｅｄｉ，Ｈ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ６７：２４７−２５３；Ｔｅｒａｍｏｔｏ，Ｔ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９６，Ｃａｎｃｅｒ７７：６３９−６４５；Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｃｌｉｎ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．１：１３１１−１３１８；Ｈｕａｎｇ，Ｓ．Ｍ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１５：５９（８）：１９３５−４０；ａｎｄ  Ｙａｎｇ，Ｘ．，ｅｔ  ａｌ．，１９９９，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５９：１２３６−１２４３」に記載されているものが含まれる。従って、ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤は、モノクローナル抗体ＭａｂＥ７．６．３（Ｙａｎｇ，  Ｘ．Ｄ．  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５９：１２３６−４３）又はＭａｂＣ２２５（ＡＴＣＣ受託番号ＨＢ−８５０８）又は抗体若しくは結合特異性を有するその抗体断片であり得る。適切なモノクローナル抗体ＥＧＦＲキナーゼ阻害剤には、ＩＭＣ−Ｃ２２５（セツキシマブ又はＥＲＢＩＴＵＸＴＭとしても知られる；Ｉｍｃｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ＡＢＸ−ＥＧＦ（Ａｂｇｅｎｉｘ）、ＥＭＤ７２０００（Ｍｅｒｃｋ  Ｋ��ａＡ、Ｄａｒｍｓｔａｄｔ）、ＲＨ３（Ｙｏｒｋ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｉｎｃ．）及びＭＤＸ−４４７（Ｍｅｄａｒｅｘ／  Ｍｅｒｃｋ  ＫｇａＡ）が含まれるが、これらに限定されない。
【０１５３】
ＥｒｂＢ２受容体阻害剤として、例えば、ＧＷ−２８２９７４（Ｇｌａｘｏ  Ｗｅｌｌｃｏｍｅ  ｐｌｃ）などのＥｒｂＢ２受容体阻害剤、ＡＲ−２０９（Ａｒｏｎｅｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．  ｏｆ  Ｗｏｏｄｌａｎｄｓ、Ｔｅｘ．、ＵＳＡ）及び２Ｂ−１（Ｃｈｉｒｏｎ）などのモノクローナル抗体、並びに国際公開第９８／０２４３４号、同９９／３５１４６号、同９９／３５１３２号、同９８／０２４３７号、同９７／１３７６０号及び同９５／１９９７０号並びに米国特許第５，５８７，４５８号、同５，８７７，３０５号、同６，４６５，４４９号及び同６，５４１，４８１号に記載のものなどのｅｒｂＢ２阻害剤が挙げられる。
【０１５４】
本発明は、さらに、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の治療有効量と、さらに、抗ＨＥＲ２抗体又は免疫療法的に活性なその断片とを同時又は逐次的に患者に投与することを含む、患者における腫瘍又は腫瘍転移を治療する上記方法も提供する。
【０１５５】
本発明は、さらに、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の治療有効量と、さらに、１種類又はそれ以上の追加の抗増殖剤とを同時又は逐次的に患者に投与することを含む、患者における腫瘍又は腫瘍転移を治療する上記方法も提供する。
【０１５６】
追加の抗増殖剤として、例えば、米国特許第６，０８０，７６９号、同６，１９４，４３８号、同６，２５８，８２４号、同６，５８６，４４７号、同６，０７１，９３５号、同６，４９５，５６４号、同６，１５０，３７７号、同６，５９６，７３５号及び同６，４７９，５１３号並びに国際公開第０１／４０２１７号に開示及び特許請求されている化合物など、酵素ファルネシルタンパク質トランスフェラーゼの阻害剤及び受容体チロシンキナーゼＰＤＧＦＲの阻害剤が挙げられる。
【０１５７】
本発明は、さらに、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の治療有効量と、さらに、ＣＯＸＩＩ（シクロオキシゲナーゼＩＩ）阻害剤とを同時又は逐次的に患者に投与することを含む、患者における腫瘍又は腫瘍転移を治療する上記方法も提供する。有用なＣＯＸ−ＩＩ阻害剤の例として、アレコキシブ（ａｌｅｃｏｘｉｂ）（例えば、ＣＥＬＥＢＲＥＸ（商標））、バルデコキシブ及びロフェコキシブが挙げられる。
【０１５８】
本発明は、さらに、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の治療有効量と、さらに、放射線治療又は放射性医薬品とを同時又は逐次的に患者に投与することを含む、患者における腫瘍又は腫瘍転移を治療する上記方法も提供する。
【０１５９】
放射線源は、治療する患者の外部でも内部でもよい。放射線源が患者の外部にあるときは、療法は外照射療法（ＥＢＲＴ）として知られている。放射線源が患者の内部にあるときは、治療は近接照射療法（ＢＴ）と称される。本発明に関連して使用される放射性原子は、ラジウム、セシウム−１３７、イリジウム−１９２、アメリシウム−２４１、金−１９８、コバルト−５７、銅−６７、テクネチウム−９９、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１３１及びインジウム−１１１など（ただし、これらだけに限定されない。）の群から選択することができる。本発明によるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤が抗体である場合、抗体をかかる放射性同位体で標識することもできる。
【０１６０】
放射線療法は、切除不能又は手術不能な腫瘍及び／又は腫瘍転移を制御する標準的な治療である。放射線療法を化学療法と組み合わせたときに、結果が改善される。放射線療法は、標的領域に対して与えられた高線量照射によって、腫瘍組織と正常組織の両方における生殖細胞が死滅するという原理に基づく。照射投与計画は、一般に、放射線吸収線量（Ｇｙ）、時間及び分割法の点から規定され、腫瘍専門医によって慎重に規定されなければならない。患者が受ける照射量は、種々考慮して決まるが、２つの最も重要なことは、体の他の重要な構造又は器官に対する腫瘍の場所と腫瘍の拡散度である。放射線療法を受けている患者の典型的な治療コースは、１から６週間の治療スケジュールであり、総線量１０から８０Ｇｙを患者に約１．８から２．０Ｇｙで１日１回、週５日分割投与する。本発明の好ましい実施形態において、ヒト患者における腫瘍を本発明と放射線の併用治療によって治療したときに相乗作用がある。換言すれば、本発明の組合せを構成する薬剤による腫瘍増殖阻害は、放射線と併用したときに、場合によってはさらに化学療法剤又は抗癌剤と併用したときに増強される。補助放射線療法のパラメータは、例えば、国際公開第９９／６００２３号に記載されている。
【０１６１】
本発明は、さらに、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の治療有効量を患者に投与すること、及び、さらに、抗腫瘍免疫応答を増強することができる１種類又はそれ以上の薬剤による同時又は逐次的治療を含む、患者における腫瘍又は腫瘍転移を治療する方法も提供する。
【０１６２】
抗腫瘍免疫応答を増強することができる薬剤として、例えば、ＣＴＬＡ４（細胞傷害性リンパ球抗原４）抗体（例えば、ＭＤＸ−ＣＴＬＡ４）、及びＣＴＬＡ４を遮断することができる他の薬剤が挙げられる。本発明に使用することができる特異的ＣＴＬＡ４抗体として、米国特許第６，６８２，７３６号に記載の抗体などが挙げられる。
【０１６３】
本発明に関連して、薬剤又は療法の「有効量」は上で定義した通りである。薬剤又は療法の「治療量未満」は、薬剤又は療法の有効量未満の量であるが、別の薬剤又は療法の有効量又は治療量未満と組み合わせたときに、例えば、得られる有効な効果における相乗作用のために、又は副作用が減少するために、医師が望む結果をもたらすことができる。
【０１６４】
本明細書では「患者」という用語は、好ましくは、あらゆる目的でＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療を要するヒトを指し、より好ましくは、癌又は前癌状態若しくは病変の治療を要するヒトを指す。しかし、「患者」という用語は、非ヒト動物、好ましくはイヌ、ネコ、ウマ、ウシ、ブタ、ヒツジ及び非ヒト霊長目などのほ乳動物、とりわけ、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による治療を要するほ乳動物も表し得る。
【０１６５】
好ましい実施形態において、患者は、癌、前癌状態若しくは病変又は他の異常細胞増殖形態の治療を要するヒトである。癌は、好ましくは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の投与によってある程度又は完全に治療可能である任意の癌である。癌は、例えば、下記癌のいずれかの難治性癌など、肺癌、非小細胞肺（ＮＳＣＬ）癌、細気管支肺胞（ｂｒｏｎｃｈｉｏｌｏａｌｖｉｏｌａｒ）癌、骨癌、すい癌、皮膚癌、頭部又は頚部癌、皮膚黒色腫又は眼内黒色腫、子宮癌、卵巣癌、直腸癌、肛門領域の癌、胃癌（ｓｔｏｍａｃｈ  ｃａｎｃｅｒ）、胃癌（ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ）、結腸癌、乳癌、子宮癌、ファロピウス管の癌腫、子宮内膜の癌腫、頚部の癌腫、膣の癌腫、外陰部の癌腫、ホジキン病、食道癌、小腸癌、内分泌系の癌、甲状腺癌、副甲状腺癌、副腎癌、軟部組織の肉腫、尿道癌、陰茎癌、前立腺癌、ぼうこう癌、腎癌又は尿管癌、腎細胞癌、腎うの癌腫、中皮腫、肝細胞癌、胆道癌、慢性若しくは急性白血病、リンパ球性リンパ腫、中枢神経系（ＣＮＳ）の新生物、脊髄軸腫瘍、脳幹神経こう腫、多形性こう芽腫、星状細胞腫、シュワン腫、上衣細胞腫、髄芽腫、髄膜腫、へん平上皮癌、下垂体腺腫、又は上記癌の１つ若しくはそれ以上の組合せであり得る。前癌状態又は病変として、例えば、口腔白板症、光線性角化症（日光性角化症）、結腸又は直腸の前癌ポリープ、胃上皮形成異常、腺腫性異形成、遺伝性非腺腫性大腸癌症候群（ＨＮＰＣＣ）、バレット食道、ぼうこう異形成及び頚部前癌状態からなる群が挙げられる。
【０１６６】
本明細書において使用される「難治性」という用語は、治療（例えば、化学療法薬、生物剤及び／又は放射線療法）が無効であることが証明された癌を定義するために使用される。難治性の癌腫瘍は、縮小し得るが、治療が有効であると決定された点までは縮小しない。しかしながら、典型的には、この腫瘍は、治療前と同じサイズに留まり（安定な疾病）又は増大する（進行性の疾病）。
【０１６７】
本発明ではＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と追加の抗癌剤（両方の成分を以下では「２種類の活性薬剤」と称する。）「の同時投与」及び「を同時投与する」とは、２種類の活性薬剤の別個又は一緒の任意の投与を指す。２種類の活性薬剤は、併用療法の利点が得られるように設計された適切な投薬計画の一部として投与される。したがって、２種類の活性薬剤は、同じ薬剤組成物の一部として、又は別個の薬剤組成物として、投与することができる。追加の薬剤は、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の投与前に、投与と同時に、若しくは投与に続いて投与することができ、又はそれらの組合せとして投与することができる。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を、例えば標準治療コース中に、患者に繰り返して投与する場合、追加の薬剤を、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤又はそれらの何らかの組合せの各投与前に、投与と同時に、若しくは投与に続いて、又はＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤治療に対して異なる間隔で投与することができ、又はＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を用いた治療コースの前に、治療コース中の任意の時間に、若しくは治療コースに続いて単回投与することができる。
【０１６８】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、典型的に、当分野で公知の、また、例えば国際公開第０１／３４５７４号に開示された、患者が治療を受ける癌の（効力と安全性の両方の観点から）最も有効な治療をもたらす投薬計画で患者に投与される。本発明による治療方法を実施する際、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、治療する癌のタイプ、使用するＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤のタイプ（例えば、小分子、抗体、ＲＮＡｉ、リボザイム又はアンチセンス構築体）及び、例えば公開された臨床試験の結果に基づく、処方医師の医学的判断に応じて、経口、局所、静脈内、腹膜内、筋肉内、関節内、皮下、鼻腔内、眼球内、膣、直腸又は皮内経路などの、当分野で公知の任意の有効な様式で投与することができる。
【０１６９】
投与されるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の量及びＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤投与のタイミングは、治療されている患者のタイプ（人種、性別、年齢、重量など）及び状態、治療されている疾患又は症状の重症度、並びに投与経路に応じて決まる。例えば、小分子ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、患者に０．００１から１００ｍｇ／ｋｇ体重／日若しくは週の用量で単回若しくは分割投与することができ、又は連続注入することができる（例えば、国際公開第０１／３４５７４号参照）。特に、化合物６６などの化合物又は類似の化合物は、患者に５−２００ｍｇ／日若しくは１００−１６００ｍｇ／週の範囲の用量で単回若しくは分割投与することができ、又は連続注入することができる。好ましい用量は１５０ｍｇ／日である。抗体を用いたＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤又はアンチセンス、ＲＮＡｉ若しくはリボザイム構築体は、患者に０．１から１００ｍｇ／ｋｇ体重／日若しくは週の範囲の用量で単回若しくは分割投与することができ、又は連続注入することができる。前記範囲の下限未満の投与量レベルが十二分である場合もあるが、さらに多い用量が、１日を通して幾つかの小投与用量にまず分割すれば、有害な副作用を何ら起こさずに使用できる場合もある。
【０１７０】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と他の追加の薬剤は、同じ又は異なる経路によって、別個に又は一緒に、また、多種多様な剤形で、投与することができる。例えば、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、好ましくは、経口又は非経口投与される。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤が化合物６６又は類似のこのような化合物である場合には、経口投与が好ましい。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と他の追加の薬剤の両方を単回又は複数回投与することができる。
【０１７１】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、薬剤として許容される種々の不活性担体と一緒に、錠剤、カプセル剤、舐剤、トローチ剤、ハードキャンデー剤、散剤、噴霧剤、クリーム剤、軟膏剤（ｓａｌｖｅ）、坐剤、ゼリー剤、ゲル剤、ペースト剤、ローション剤、軟膏剤（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、エリキシル剤、シロップ剤などの形で投与することができる。かかる剤形の投与は、単回又は複数回用量で実施することができる。担体として、固体希釈剤又は充填剤、無菌水性媒体及び種々の無毒有機溶媒などが挙げられる。経口薬剤組成物は、適切に甘くし、及び／又は香味づけすることができる。
【０１７２】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、噴霧剤、クリーム剤、軟膏剤（ｓａｌｖｅ）、坐剤、ゼリー剤、ゲル剤、ペースト剤、ローション剤、軟膏剤（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）などの形で、薬剤として許容される種々の不活性担体と組み合わせることができる。かかる剤形の投与は、単回又は複数回用量で実施することができる。担体としては、固体希釈剤又は充填剤、無菌水性媒体及び種々の無毒有機溶媒などが挙げられる。
【０１７３】
タンパク質性ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を含む全製剤は、阻害剤の変性及び／又は分解及び生物活性喪失を回避するように選択すべきである。
【０１７４】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を含む薬剤組成物の調製方法は当分野で公知であり、例えば国際公開第０１／３４５７４号に記載されている。本発明の教示を考慮して、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を含む薬剤組成物の調製方法は、上記刊行物及びＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，  Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，  Ｅａｓｔｏｎ，  Ｐａ．，  １８ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ（１９９０）などの他の公知参考文献から明らかである。
【０１７５】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の経口投与のために、活性薬剤の一方又は両方を含有する錠剤を、例えば、微結晶セルロース、クエン酸ナトリウム、炭酸カルシウム、リン酸二カルシウム及びグリシンなどの種々の賦形剤のいずれか、デンプン（好ましくは、トウモロコシ、ジャガイモ又はタピオカデンプン）、アルギン酸及びある種の複合シリカートなどの種々の崩壊剤、ポリビニルピロリドン、スクロース、ゼラチン及びアラビアゴムのような造粒結合剤と組み合わせる。さらに、ステアリン酸マグネシウム、ラウリル硫酸ナトリウム及びタルクなどの潤滑剤は、錠剤化目的に極めて有用であることが多い。類似のタイプの固体組成物は、ゼラチンカプセル中の充填剤として使用することもできる。これに関連して好ましい材料として、ラクトース又は乳糖並びに高分子量ポリエチレングリコールなども挙げられる。水性懸濁液剤及び／又はエリキシル剤が経口投与に対して望ましいとき、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を種々の甘味剤又は香味料、着色剤又は色素と組み合わせることができ、所望の場合には、同様に乳化剤及び／又は懸濁剤と、水、エタノール、プロピレングリコール、グリセリン及びこれらの種々の類似の組み合せなどの希釈剤と一緒に組み合わせることができる。
【０１７６】
活性薬剤の一方又は両方の非経口投与の場合、ゴマ若しくは落花生油溶液又はプロピレングリコール水溶液、並びに活性薬剤又は対応するその水溶性塩を含む無菌水溶液を使用することができる。かかる無菌水溶液は、好ましくは適切に緩衝され、また、好ましくは例えば十分な食塩水又はグルコースによって等張性にされている。これらの特定の水溶液は、静脈内、筋肉内、皮下及び腹腔内注射用に特に適切である。油状溶液は、関節内、筋肉内及び皮下注射用に適切である。これらの全溶液の無菌条件下での調製は、当業者に周知の標準製薬技術によって容易に実施することができる。タンパク質ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の投与に選択される任意の非経口製剤は、阻害剤の変性及び生物活性の喪失を回避するように選択すべきである。
【０１７７】
さらに、活性薬剤の一方又は両方を、標準製薬実務に従って、例えば、クリーム剤、ローション剤、ゼリー剤、ゲル剤、ペースト剤、軟膏剤（ｏｉｎｔｍｅｎｔ）、軟膏剤（ｓａｌｖｅ）などとして、局所投与することができる。例えば、濃度約０．１％（ｗ／ｖ）から約５％（ｗ／ｖ）のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を含む局所製剤を調製することができる。
【０１７８】
獣医学目的のために、活性薬剤は、上記剤形のいずれかを用いて、また、上記経路のいずれかによって、別個に又は一緒に動物に投与することができる。好ましい実施形態において、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤をカプセル剤、ボーラス、錠剤、水薬（ｌｉｑｕｉｄ  ｄｒｅｎｃｈ）の形で、注射によって、又は移植片として、投与する。別法として、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を動物飼料と一緒に投与することができる。このために、濃厚飼料添加剤又は混合飼料を、正常な動物飼料用に調製することができる。かかる製剤は、標準獣医実務に従って従来の様式で調製される。
【０１７９】
本明細書では「ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤」という用語は、当分野で現在公知である、又は将来確認される、任意のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を指し、患者に投与すると、さもなければその天然リガンドがＩＧＦ−１Ｒと結合することによって生じる下流の生物学的効果のいずれかなど、患者におけるＩＧＦ−１受容体の活性化に関連した生物活性を、阻害する任意の化学物質を含む。かかるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤として、ＩＧＦ−１Ｒの活性化を遮断することができる、又は患者における癌治療に関連する、ＩＧＦ−１Ｒ活性化の下流の生物学的効果のいずれかを遮断することができる、任意の薬剤などが挙げられる。かかる阻害剤は、受容体の細胞内ドメインに直接結合し、そのキナーゼ活性を阻害することによって作用することができる。或いは、かかる阻害剤は、ＩＧＦ−１受容体のリガンド結合部位又はその一部を占め、それによってその天然リガンドを受容体に近づきにくくして、その正常な生物活性を阻止又は抑制することによって作用することができる。或いは、かかる阻害剤は、ＩＧＦ−１Ｒポリペプチドの２量体化、若しくはＩＧＦ−１Ｒポリペプチドと他のタンパク質の相互作用を調節することによって作用することができ、又はＩＧＦ−１Ｒのユビキチン化及びエンドサイトーシス分解を増強することができる。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼの阻害は、ＩＧＦ−１Ｒを活性化するために利用可能なＩＧＦ−１の量を低下させることによって、例えば、ＩＧＦ−１のＩＧＦ−１受容体への結合を拮抗することによって、ＩＧＦ−１のレベルを低下させることによって、又はＩＧＦ結合タンパク質などのＩＧＦ−１Ｒ以外のタンパク質（例えば、ＩＧＦＢＰ３）とのＩＧＦ−１の会合を促進することによって作用することも可能である。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤として、低分子量阻害剤、抗体又は抗体断片、アンチセンス構築体、短い抑制性ＲＮＡ（すなわち、ｄｓＲＮＡによるＲＮＡ干渉；ＲＮＡｉ）及びリボザイムなどが挙げられるが、これらだけに限定されない。好ましい実施形態において、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、ヒトＩＧＦ−１Ｒに特異的に結合する小さい有機分子又は抗体である。
【０１８０】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤には、例えば、イミダゾピラジンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、キナゾリンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、ピリド−ピリミジンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、ピリミド−ピリミジンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、ピロロ−ピリミジンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、ピラゾロ−ピリミジンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、フェニルアミノ−ピリミジンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、オキシインドールＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、インドロカルバゾールＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、フタラジンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、イソフラボンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤、キナロン（ｑｕｉｎａｌｏｎｅ）ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤及びチロホスチンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤並びにこのようなＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の医薬として許容される全ての塩及び溶媒和物が挙げられる。
【０１８１】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤のさらなる例としては、イミダゾピラジンＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤を記載している国際特許公報ＷＯ０５／０３７８３６、ＩＧＦ−１Ｒ関連疾患を治療するためのピリミジンを記載している国際特許公報ＷＯ０３／０１８０２１及びＷＯ０３／０１８０２２、シクロリグナン及びＩＧＦ−１Ｒ阻害剤としてのシクロリグナンを記載している国際特許公報ＷＯ０２／１０２８０４及びＷＯ０２／１０２８０５、ＩＧＦ−１Ｒチロシンキナーゼの阻害に対して応答する疾病を治療するためのピロロピリミジンを記載している国際特許公報ＷＯ０２／０９２５９９、チロシンキナーゼ阻害剤としてピロロピリミジンを記載している国際特許公報ＷＯ０１／７２７５１、及びキナーゼのピロロトリアジン阻害剤を記載している国際特許公報ＷＯ００／７１１２９並びにピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン及びチロシンキナーゼ阻害剤としてのそれらの使用を記載している国際特許公報ＷＯ９７／２８１６１、インビトロ及びインビボでＩＧＦ−１Ｒ阻害活性を有するチロホスチンを記載しているＰａｒｒｉｚａｓら（Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１３８：１４２７−１４３３（１９９７））、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤としてのヘテロアリール−アリール尿素を記載している国際特許公報ＷＯ００／３５４５５、ＩＧＦ−１Ｒの調節物質として、ピリミジン誘導体を記載している国際特許公報ＷＯ０３／０４８１３３、キナーゼタンパク質に対する阻害的効果を有する化学的化合物を記載している国際特許公報ＷＯ０３／０２４９６７、ＷＯ０３／０３５６１４、ＷＯ０３／０３５６１５、ＷＯ０３／０３５６１６及びＷＯ０３／０３５６１９、過剰増殖症状を治療するための方法及び組成物を記載している国際特許公報ＷＯ０３／０６８２６５、タンパク質キナーゼ阻害剤としてのピロロピリミジンを記載している国際特許公報ＷＯ００／１７２０３、セフェム化合物、その産生及び抗微生物組成物を記載している日本国特許公開ＪＰ０７／１３３２８０、プテリジン研究及び４位が置換されていないプテリジンを記載するＡｌｂｅｒｔ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ，１１：１５４０−１５４７（１９７０）、並びに３，４−ジヒドロプテリジンを介して、ピラジンからプテリジン（４位が置換されていない）の合成を記載するＡ．  Ａｌｂｅｒｔ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｅｍ．  Ｂｉｏｌ．  Ｐｔｅｒｉｄｉｎｅｓ  Ｐｒｏｃ．  Ｉｎｔ．  Ｓｙｍｐ．，４ｔｈ，４：１−５（１９６９）中のものが含まれる。
【０１８２】
本発明において使用することができるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の具体例は、ｈ７Ｃ１０（Ｃｅｎｔｒｅ  ｄｅ  Ｒｅｃｈｅｒｃｈｅ  Ｐｉｅｒｒｅ  Ｆａｂｒｅ）、ＩＧＦ−１アンタゴニスト；ＥＭ−１６４（ＩｍｍｕｎｏＧｅｎ  Ｉｎｃ．）、ＩＧＦ−ＩＲ調節物質；ＣＰ−７５１８７１（Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．）、ＩＧＦ−１アンタゴニスト；ランレオチド（Ｉｐｓｅｎ）、ＩＧＦ−Ｉアンタゴニスト；ＩＧＦ−１Ｒオリゴヌクレオチド（Ｌｙｎｘ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｉｎｃ．）；ＩＧＦ−１オリゴヌクレオチド（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）；Ｎｏｖａｒｔｉｓによって開発されているＩＧＦ−１Ｒタンパク質−チロシンキナーゼ阻害剤（例えば、ＮＶＰ−ＡＥＷ５４１，Ｇａｒｃｉａ−Ｅｃｈｅｖｅｒｒｉａ，  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ５：２３１−２３９；又はＮＶＰ−ＡＤＷ７４２、Ｍｉｔｓｉａｄｅｓ、ＣＳ．ｅｔ  ａｌ．（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｅｌｌ  ５：２２１−２３０）；ＩＧＦ−１Ｒタンパク質−チロシンキナーゼ阻害剤（Ｏｎｔｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ）；ＡＧ−１０２４（Ｃａｍｉｒａｎｄ，  Ａ．  ｅｔ  ａｌ．（２００５）Ｂｒｅａｓｔ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ７：Ｒ５７０−Ｒ５７９（ＤＯＩ１０．１１８６／ｂｃｒｌ０２８）；Ｃａｍｉｒａｎｄ，  Ａ．  ａｎｄ  Ｐｏｌｌａｋ，  Ｍ．（２００４）Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ  ９０：１８２５−１８２９；  Ｐｆｉｚｅｒ  Ｉｎｃ．）及びＩＧＦ−１アンタゴニスト；チルフォスチンＡＧ−５３８及びＩ−ＯＭｅ−ＡＧ５３８；ＢＭＳ−５３６９２４、ＩＧＦ−１Ｒの小分子阻害剤；及びＰＮＵ−１４５１５６Ｅ（Ｐｈａｒｍａｃｉａ  ＆  Ｕｐｊｏｈｎ  ＳｐＡ）、ＩＧＦ−１アンタゴニストが挙げられる。
【０１８３】
抗体を用いたＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤として、その天然リガンドによるＩＧＦ−１Ｒ活性化をある程度又は完全に遮断することができるあらゆる抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体又は抗体断片などが挙げられる。抗体を用いたＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤として、ＩＧＦ−１Ｒの活性化をある程度又は完全に遮断することができる全ての抗ＩＧＦ−１抗体又は抗体断片も挙げられる。抗体を用いたＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の非限定的例としては、Ｌａｒｓｓｏｎ，  Ｏ．  ｅｔ  ａｌ（２００５）  Ｂｒｉｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ９２：２０９７−２１０１及びＩｂｒａｈｉｍ，  Ｙ．Ｈ．  ａｎｄ  Ｙｅｅ，  Ｄ．（２００５）  Ｃｌｉｎ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  １  ｌ：９４４ｓ−９５０ｓに記載されているもの、又はＩｍｃｌｏｎｅ（例えば、Ａ１２）若しくはＳｃｈｅｒｉｎｇ−Ｐｌｏｕｇｈ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅによって開発されているもの（例えば、１９Ｄ１２；又は米国特許出願公開ＵＳ２００５／０１３６０６３Ａ１及び同２００４／００１８１９１Ａ１に記載されている）が挙げられる。ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、モノクローナル抗体、又は抗体若しくは結合特異性を有する抗体断片であり得る。
【０１８４】
抗体を用いたさらに別のＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、公知の方法に従って、例えば、とりわけ、ブタ、ウシ、ウマ、ウサギ、ヤギ、ヒツジ及びマウスから選択される宿主動物に、適切な抗原又はエピトープを投与することによって、生産することができる。当分野で公知の種々のアジュバントを使用して、抗体産生を増加させることができる。
【０１８５】
本発明の実施に有用である抗体はポリクローナルとすることもできるが、モノクローナル抗体が好ましい。ＩＧＦ−１Ｒに対するモノクローナル抗体は、培養中の連続細胞系によって抗体分子を産生する任意の技術を用いて、調製し、単離することができる。産生及び単離技術として、Ｋｏｈｌｅｒ及びＭｉｌｓｔｅｉｎによって最初に記述されたハイブリドーマ技術（Ｎａｔｕｒｅ，  １９７５，  ２５６：４９５−４９７）；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ技術（Ｋｏｓｂｏｒ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８３，  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ  ４：７２；Ｃｏｔｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８３，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｉ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８０：２０２６−２０３０）及びＥＢＶ−ハイブリドーマ技術（Ｃｏｌｅ  ｅｔ  ａｌ，  １９８５，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，  Ａｌａｎ  Ｒ．  Ｌｉｓｓ，  Ｉｎｃ．，  ｐｐ．７７−９６）などが挙げられるが、これらだけに限定されない。
【０１８６】
或いは、単鎖抗体の産生について記述された技術（例えば、米国特許第４，９４６，７７８号参照）を改作して、抗ＩＧＦ−１Ｒ単鎖抗体を生産することができる。本発明の実施に有用である、抗体を用いたＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤として、完全な抗体分子のペプシン消化によって生成し得るＦ（ａｂ’）２断片、及びＦ（ａｂ’）２断片のジスルフィド架橋を還元することによって生成し得るＦａｂ断片など（ただし、これらだけに限定されない。）、抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体断片なども挙げられる。或いは、Ｆａｂ及び／又はｓｃＦｖ発現ライブラリーを構築して（例えば、Ｈｕｓｅ  ｅｔ  ａｌ．，  １９８９，  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４６：１２７５−１２８１参照）、ＩＧＦ−１Ｒに対して所望の特異性を有する断片を迅速に特定することができる。
【０１８７】
モノクローナル抗体及び抗体断片の産生及び単離技術は当分野で周知であり、Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，  １９８８，  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ及びＪ．Ｗ．  Ｇｏｄｉｎｇ，  １９８６，  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ，  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｌｏｎｄｏｎに記載されている。ヒト化抗ＩＧＦ−１Ｒ抗体及び抗体断片も、Ｖａｕｇｈｎ，  Ｔ．Ｊ．  ｅｔ  ａｌ．，  １９９８，  Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．  １６：５３５−５３９及びその中で引用されている参考文献に記載の技術などの公知技術によって調製することができ、かかる抗体又はその断片も本発明の実施に有用である。
【０１８８】
或いは、本発明に使用するＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、アンチセンスオリゴヌクレオチド構築体に基づくことができる。アンチセンスＲＮＡ分子及びアンチセンスＤＮＡ分子など、アンチセンスオリゴヌクレオチドは、細胞中でＩＧＦ−１Ｒ  ｍＲＮＡに結合して、タンパク質翻訳を阻止し、又はｍＲＮＡ分解を増加させて、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼタンパク質のレベルを減少させ、従って活性を減少させることによって、ＩＧＦ−１Ｒ  ｍＲＮＡの翻訳を直接遮断するように作用する。例えば、少なくとも約１５塩基からなり、ＩＧＦ−１ＲをコードするｍＲＮＡ転写配列特有の領域に相補的であるアンチセンスオリゴヌクレオチドは、例えば従来のリン酸ジエステル技術によって合成することができ、例えば静脈内注射又は注入によって投与することができる。配列が既知である遺伝子の遺伝子発現を特異的に阻害するアンチセンス技術を使用する方法は当分野で周知である（例えば、米国特許第６，５６６，１３５号、同６，５６６，１３１号、同６，３６５，３５４号、同６，４１０，３２３号、同６，１０７，０９１号、同６，０４６，３２１号及び同５，９８１，７３２号参照）。
【０１８９】
短い抑制性ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）も、本発明に使用されるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤として機能し得る。腫瘍、対象又は細胞を短い二本鎖ＲＮＡ（ｄｓＲＮＡ）、又は短い二本鎖ＲＮＡを産生するベクター若しくは構築体と接触させることによってＩＧＦ−１Ｒ遺伝子発現を減少させることができ、それによってＩＧＦ−１Ｒの発現が特異的に阻害される（すなわち、ＲＮＡ干渉又はＲＮＡｉ）。適切なｄｓＲＮＡ又はｄｓＲＮＡをコードするベクターを選択する方法は、配列が既知である遺伝子について当分野で周知である（例えば、Ｔｕｓｃｈｉ，  Ｔ．，  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）  Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．  １３（２４）：３１９１−３１９７；Ｅｌｂａｓｈｉｒ，  Ｓ．Ｍ．  ｅｔ  ａｌ．（２００１）  Ｎａｔｕｒｅ  ４１１：４９４−４９８；Ｈａｎｎｏｎ，  Ｇ．Ｊ．（２００２）  Ｎａｔｕｒｅ  ４１８：２４４−２５１；ＭｃＭａｎｕｓ，  Ｍ．Ｔ．  ａｎｄ  Ｓｈａｒｐ，  Ｐ．Ａ．（２００２）  Ｎａｔｕｒｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ３：７３７−７４７；Ｂｒｅｍｍｅｌｋａｍｐ，  Ｔ．Ｒ．  ｅｔ  ａｌ．（２００２）  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９６：５５０−５５３；米国特許第６，５７３，０９９号及び同６，５０６，５５９号並びに国際公開第０１／３６６４６号、同９９／３２６１９号及び同０１／６８８３６号参照）。
【０１９０】
リボザイムも、本発明に使用されるＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤として機能し得る。リボザイムは、ＲＮＡの特異的切断を触媒することができる酵素ＲＮＡ分子である。リボザイムの作用機序は、リボザイム分子と相補的標的ＲＮＡの配列特異的ハイブリド形成と、それに続くエンドヌクレオチド鎖切断を含む。ＩＧＦ−１Ｒ  ｍＲＮＡ配列のエンドヌクレオチド鎖切断を特異的かつ効率的に触媒する、操作されたヘアピン又はハンマーヘッドモチーフリボザイム分子は、それによって本発明の範囲内で有用である。任意のＲＮＡ標的候補内の特異的リボザイム切断部位は、リボザイム切断部位について標的分子を走査することによって最初に特定され、典型的には以下の配列、すなわち、ＧＵＡ、ＧＵＵ及びＧＵＣを含む。特定された後、切断部位を含有する標的遺伝子領域に対応する約１５から２０リボヌクレオチドの短いＲＮＡ配列を、オリゴヌクレオチド配列を不適当なものにし得る、二次構造などの構造上の予測される特徴について評価することができる。候補標的の適合性は、相補的オリゴヌクレオチドとのハイブリド形成に対する到達性を、例えばリボヌクレアーゼ保護アッセイを用いて、試験することによって評価することもできる。
【０１９１】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤として有用であるアンチセンスオリゴヌクレオチドとリボザイムの両方は、公知の方法によって調製することができる。その方法として、例えば固相ホスホルアミダイト（ｐｈｏｓｐｈｏｒａｍａｄｉｔｅ）化学合成などによる化学合成技術などが挙げられる。或いは、アンチセンスＲＮＡ分子は、ＲＮＡ分子をコードするＤＮＡ配列のインビトロ又はインビボでの転写によって、作製することができる。かかるＤＮＡ配列は、Ｔ７又はＳＰ６ポリメラーゼプロモーターなどの適切なＲＮＡポリメラーゼプロモーターを取り込む多種多様なベクター中に組み込むことができる。本発明のオリゴヌクレオチドに、細胞内の安定性を高め、半減期を延長する手段として、種々の改変を導入することができる。考えられる改変として、リボヌクレオチド又はデオキシリボヌクレオチドのフランキング配列を分子の５’及び／又は３’末端に付加すること、或いはオリゴヌクレオチド骨格内のホスホジエステラーゼ結合ではなく、ホスホロチオアート又は２’−Ｏ−メチル結合を使用することなどが挙げられるが、これらだけに限定されない。
【０１９２】
本発明の治療方法に関連して、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤は、薬剤として許容される担体と、（薬剤として許容されるその塩を含めた）ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤化合物の無毒の治療有効量とを含む組成物として使用される。
【０１９３】
「薬剤として許容される塩」という用語は、薬剤として許容される無毒の塩基又は酸から調製される塩を指す。本発明の化合物が酸性であるとき、その対応する塩は、無機塩基及び有機塩基など、薬剤として許容される無毒の塩基から都合良く調製することができる。かかる無機塩基から誘導される塩として、アルミニウム、アンモニウム、カルシウム、銅（銅（ＩＩ）及び銅（Ｉ））、鉄（ＩＩＩ）、鉄（ＩＩ）、リチウム、マグネシウム、マンガン（マンガン（ＩＩＩ）及びマンガン（ＩＩ））、カリウム、ナトリウム、亜鉛などの塩が挙げられる。特に好ましい塩は、アンモニウム、カルシウム、マグネシウム、カリウム及びナトリウム塩である。薬剤として許容される無毒の有機塩基から誘導される塩として、第一級アミン、第二級アミン及び第三級アミン並びに環式アミン及び天然置換アミン及び合成置換アミンなどの置換アミンの塩などが挙げられる。塩を形成することができる、他の薬剤として許容される無毒の有機塩基として、例えば、アルギニン、ベタイン、カフェイン、コリン、Ｎ’，Ｎ’−ジベンジルエチレンジアミン、ジエチルアミン、２−ジエチルアミノエタノール、２−ジメチルアミノエタノール、エタノールアミン、エチレンジアミン、Ｎ−エチルモルホリン、Ｎ−エチルピペリジン、グルカミン、グルコサミン、ヒスチジン、ヒドラバミン、イソプロピルアミン、リジン、メチルグルカミン、モルホリン、ピペラジン、ピペリジン、ポリアミン樹脂、プロカイン、プリン、テオブロミン、トリエチルアミン（ｔｒｉｅｔｈｙｌａｍｅｉｎｅ）、トリメチルアミン、トリプロピルアミン、トロメタミンなどのイオン交換樹脂が挙げられる。
【０１９４】
本発明に使用する化合物が塩基であるとき、その対応する塩は、無機酸及び有機酸など、薬剤として許容される無毒の酸から都合良く調製することができる。かかる酸として、例えば、酢酸、ベンゼンスルホン酸、安息香酸、カンファースルホン酸、クエン酸、エタンスルホン酸、フマル酸、グルコン酸、グルタミン酸、臭化水素酸、塩化水素酸、イセチオン酸、乳酸、マレイン酸、リンゴ酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、粘液酸、硝酸、パモン酸、パントテン酸、リン酸、コハク酸、硫酸、酒石酸、ｐ−トルエンスルホン酸などが挙げられる。特に好ましい酸は、クエン酸、臭化水素酸、塩化水素酸、マレイン酸、リン酸、硫酸及び酒石酸である。
【０１９５】
（薬剤として許容されるその塩を含めた）ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤化合物を活性成分として含む、本発明に使用される薬剤組成物は、薬剤として許容される担体を含むことができ、他の治療成分又はアジュバントを含んでいてもよい。他の治療薬として、上記の細胞傷害剤、化学療法剤若しくは抗癌剤又はかかる薬剤の効果を高める薬剤などが挙げられる。本組成物は、経口、直腸、局所及び（皮下、筋肉内及び静脈内を含めた）非経口投与に適切な組成物を含むが、任意の所与の症例において最も適切な経路は、個々の宿主並びに活性成分を投与する症状の性質及び重症度に応じて決まる。薬剤組成物は、好都合には単位剤形とすることができ、薬学分野で周知の方法のいずれかによって調製することができる。
【０１９６】
実際には、本発明の（薬剤として許容されるその塩を含めた）ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤化合物は、均質混合物中の活性成分として従来の薬剤配合技術によって薬剤担体と混合することができる。担体は、投与、例えば、経口又は（静脈内を含めた）非経口投与に望ましい調製の形態に応じて多種多様な形をとり得る。したがって、本発明の薬剤組成物は、活性成分の所定量を各々が含有するカプセル剤、カシェ剤又は錠剤などの経口投与に適切な分離単位として提供することができる。また、本組成物は、散剤、顆粒剤、溶液剤、水系懸濁液剤、非水系液剤、水中油型乳剤又は油中水型液体乳剤として提供することができる。上記一般的剤形に加えて、（薬剤として許容される、その各成分の塩を含めた）ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤化合物は、制御放出手段及び／又は送達装置によって投与することもできる。組合せ組成物は、調剤方法のいずれかによって調製することができる。一般に、かかる方法は、活性成分を１種類又はそれ以上の必要な成分を構成する担体と会合させる段階を含む。一般に、本組成物は、活性成分を液体担体、微粉固体担体又はその両方と均一に十分混合することによって調製される。次いで、生成物を所望の形（ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）に都合良く成形することができる。
【０１９７】
本発明に使用する（薬剤として許容されるその塩を含めた）ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤化合物は、１種類又はそれ以上の他の治療有効化合物と組み合わせた薬剤組成物に含めることもできる。他の治療有効化合物として、上記の細胞傷害剤、化学療法剤若しくは抗癌剤又はかかる薬剤の効果を高める薬剤などが挙げられる。
【０１９８】
したがって、本発明の一実施形態において、薬剤組成物は、抗癌剤と組み合わせたＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤化合物を含むことができ、前記抗癌剤は、アルキル化薬、代謝拮抗剤、微小管阻害剤、ポドフィロトキシン、抗生物質、ニトロソ尿素、ホルモン療法、キナーゼ阻害剤、腫瘍細胞アポトーシスの活性化剤及び血管新生阻害剤からなる群から選択される剤である。
【０１９９】
使用する薬剤担体は、例えば、固体、液体又は気体とすることができる。固体担体の例としては、ラクトース、白土、スクロース、タルク、ゼラチン、寒天、ペクチン、アラビアゴム、ステアリン酸マグネシウム及びステアリン酸が挙げられる。液体担体の例は、糖シロップ、落花生油、オリーブ油及び水である。気体担体の例としては二酸化炭素及び窒素が挙げられる。
【０２００】
経口剤形用組成物を調製する際には、任意の好都合な薬剤媒体を使用することができる。例えば、水、グリコール、油、アルコール、香味剤、防腐剤、着色剤などを使用して懸濁液剤、エリキシル剤及び溶液剤などの経口液体製剤を形成することができる。また、デンプン、糖、微結晶セルロース、希釈剤、造粒剤、潤滑剤、結合剤、崩壊剤などの担体を使用して、散剤、カプセル剤及び錠剤などの経口固体製剤を形成することができる。錠剤及びカプセル剤は、投与が容易なので好ましい経口投与単位であり、それによって固体薬剤担体が使用される。場合によって、錠剤は、標準の水系又は非水系技術によって被覆してもよい。
【０２０１】
本発明に使用される組成物を含有する錠剤は、１種類又はそれ以上の副成分又はアジュバントと場合によって一緒に、圧縮又はモールディングによって調製することができる。圧縮錠剤は、場合によって結合剤、潤滑剤、不活性希釈剤、界面活性剤又は分散剤と混合されていてもよい、散剤又は顆粒剤などの易流動性の活性成分を適切な機械で圧縮することによって調製することができる。モールディングされた錠剤は、不活性希釈液で湿らせた粉末化合物の混合物を適切な機械でモールディングすることによって製造することができる。各錠剤は活性成分約０．０５ｍｇから約５ｇを好ましくは含有し、各カシェ剤又はカプセル剤は活性成分約０．０５ｍｇから約５ｇを好ましくは含有する。
【０２０２】
例えば、ヒトへの経口投与が予定されている製剤は、全組成物の約５から約９５パーセントで変動し得る担体材料の適切で好都合な量と配合された活性薬剤の約０．５ｍｇから約５ｇを含有し得る。単位剤形は、活性成分を一般に約１ｍｇから約２ｇ、典型的には２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、２００ｍｇ、３００ｍｇ、４００ｍｇ、５００ｍｇ、６００ｍｇ、８００ｍｇ又は１０００ｍｇ含有する。
【０２０３】
非経口投与に適切である、本発明に使用される薬剤組成物は、活性化合物の水溶液又は水懸濁液として調製することができる。例えばヒドロキシプロピルセルロースなどの適切な界面活性剤を含むことができる。分散剤は、グリセリン中で、液状ポリエチレングリコール中で、オイル中のそれらの混合物中で調製することもできる。また、防腐剤は、微生物の有害な増殖を防止するために含めることができる。
【０２０４】
注射用に適切である、本発明に使用される薬剤組成物として、無菌水溶液又は分散液が挙げられる。また、本組成物は、かかる無菌注射用溶液又は分散液を即座に調製するための無菌散剤の形とすることができる。すべての場合において、最終注射用剤形は無菌でなければならず、注射を容易にするために効果的に流動性でなければならない。本薬剤組成物は、製造及び貯蔵条件下で安定でなければならず、したがって、細菌及び真菌などの微生物の汚染作用に対して好ましくは保護されるべきである。担体は、例えば、水、エタノール、ポリオール（例えば、グリセリン、プロピレングリコール及び液状ポリエチレングリコール）、植物油及びこれらの適切な混合物を含有する溶媒又は分散媒とすることができる。
【０２０５】
本発明の薬剤組成物は、例えば、エアゾール剤、クリーム剤、軟膏剤、ローション剤、散布粉剤など局所用に適切な剤形とすることができる。また、本組成物は、経皮装置に使用するのに適切な剤形とすることができる。これらの製剤は、（薬剤として許容されるその塩を含めた）ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤化合物を利用して、従来の加工方法によって調製することができる。例として、クリーム剤又は軟膏剤は、親水性材料と水を本化合物の約５重量％から約１０重量％と一緒に混合して、所望の粘ちゅう性を有するクリーム剤又は軟膏剤を製造することによって調製される。
【０２０６】
本発明の薬剤組成物は、担体が固体である直腸投与に適切な形とすることができる。混合物は単位用量坐剤を形成することが好ましい。適切な担体として、カカオ脂及び当分野で通常使用される他の材料などが挙げられる。坐剤は、本組成物を軟化又は溶融担体とまず混合し、続いて型の中で冷却及び成形することによって都合良く形成することができる。
【０２０７】
上記医薬製剤は、上述の担体成分に加えて、希釈剤、緩衝剤、香味剤、結合剤、界面活性剤、増粘剤、潤滑剤、（抗酸化剤を含めた）防腐剤などの１種類又はそれ以上の追加の担体成分を適宜含むことができる。また、製剤を対象レシピエントの血液と等張性にするために他のアジュバントを含むことができる。（薬剤として許容されるその塩を含めた）ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤化合物を含有する組成物は、粉体又は濃縮液体の形で調製することもできる。
【０２０８】
本発明を実施するために使用される化合物の投与量レベルは、およそ、本明細書に記載の通りであり、又はこれらの化合物について当分野で記載されている通りである。しかし、任意の特定の患者に対する具体的用量レベルは、年齢、体重、全般的健康状態、性別、食餌、投与時間、投与経路、排出速度、薬物組合せ及び治療を受ける特定の疾患の重篤度など種々の要因に応じて決まることを理解されたい。
【０２０９】
例えば、本発明に関連する技術領域において利用可能な優れた手引書及び教科書の多くに記載されている（例えば、Ｕｓｉｎｇ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，  Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ｅｄｉｔｅｄ  ｂｙ  Ｈａｒｌｏｗ，  Ｅ．  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，  Ｄ．，  １９９９，  Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，（例えば、ＩＳＢＮ  ０−８７９６９−５４４−７）；Ｒｏｅ  Ｂ．Ａ．  ｅｔ．  ａｌ．  １９９６，  ＤＮＡ  Ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｓｅｑｕｅｎｃｉｎｇ（Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  Ｓｅｒｉｅｓ），  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ．（例えば、ＩＳＢＮ  ０−４７１−９７３２４−０）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ：  Ｃｈｉｍｅｒｉｃ  Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ”，  ２０００，  ｅｄ．  Ｊ．  Ａｂｅｌｓｏｎ，  Ｍ．  Ｓｉｍｏｎ，  Ｓ．  Ｅｍｒ，  Ｊ．  Ｔｈｏｒｎｅｒ．  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：  ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，  ２００１，  ３ｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，  ｂｙ  Ｊｏｓｅｐｈ  Ｓａｍｂｒｏｏｋ  ａｎｄ  Ｐｅｔｅｒ  ＭａｃＣａｌｌｕｍ，（以前のＭａｎｉａｔｉｓ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ｍａｎｕａｌ）（例えば、ＩＳＢＮ  ０−８７９６９−５７７−３）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，  Ｅｄ．  Ｆｒｅｄ  Ｍ．  Ａｕｓｕｂｅｌ，  ｅｔ．  ａｌ．  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（例えば、ＩＳＢＮ  ０−４７１−５０３３８−Ｘ）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  Ｅｄ．  Ｊｏｈｎ  Ｅ．  Ｃｏｌｉｇａｎ，  Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（例えば、ＩＳＢＮ  ０−４７１−１１１８４−８）及びＭｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ：  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ，  １９９０，  Ｖｏｌ．  １８２，  Ｅｄ．  Ｄｅｕｔｓｃｈｅｒ，  Ｍ．Ｐ．，  Ａｃｅｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｉｎｃ．（例えば、ＩＳＢＮ  ０−１２−２１３５８５−７））、又は分子生物学における実験法を記載した多数の大学及び商用のウェブサイトに記載されている、当分野で公知の多数の代替実験法によって、本発明の実施において本明細書に具体的に記載されている実験法を首尾良く置換することができる。
【０２１０】
本発明は、以下の実験の詳細によってより良く理解される。しかし、当業者は、考察する特定の方法及び結果は、以下の特許請求の範囲に詳述されている本発明を単に例示するためのものにすぎず、これらの方法及び結果に限定されるものでは決してないことを容易に理解される。
【実施例】
【０２１１】
実験の詳細：
序論
ＩＧＦ−１受容体機能の阻害剤は臨床上有用であり、治療の利点を得る可能性が最も高い患者の部分集合を記述する重要なＩＧＦ−１受容体シグナル伝達経路の定義は、重要な検討領域になった。腫瘍細胞が、細胞外マトリックス又は細胞−細胞接触の不存在下で増殖及び生存シグナルを維持する能力は、細胞の遊走及び転移において重要であるだけでなく、細胞外マトリックスが再構築され、細胞接触阻害が減弱している創傷様腫瘍環境中で細胞増殖及び生存を維持する上でも重要である。ここで、本発明者らは、ＩＧＦ−１受容体阻害に対するＮＳＣＬＣ細胞の感受性が、Ｅ−カドヘリン上皮細胞表現型によって付与されることを示す。逆に、ＩＧＦ−１受容体阻害に対する非感受性は、ビメンチン及び／又はフィブロネクチンの発現に伴う上皮−間葉遷移（ＥＭＴ）を通じて媒介された。
【０２１２】
材料及び方法
【０２１３】
細胞培養及び細胞抽出物の調製
ＩＧＦ−１Ｒを有するＮＳＣＬＣ系、Ｈ２９２、Ｈ３５８、Ｈ３２２、Ｈ４４１、Ａ５４９、Ｃａｌｕ６、Ｈ４６０、Ｈ１７０３及びＳＷ１５７３を適切なＡＴＣＣ推奨補足培地中で培養した。細胞抽出物を、プロテアーゼ及びホスファターゼ阻害剤を含有する洗浄剤溶解（（５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ８、１５０ｍＭＮａＣｌ、１％ＮＰ−４０、０．５％デオキシコール酸Ｎａ、０．１％ＳＤＳ）によって調製した。可溶タンパク質濃度をｍｉｃｒｏ−ＢＳＡアッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ  ＩＬ）によって測定した。
【０２１４】
ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤化合物原溶液
ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤である化合物６６の原濃度は、１００％ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）中で１０ｍＭであった。ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤の５０％阻害用量を確立するために、段階希釈（１：３又は１：４）を使用した。投薬の前に、阻害剤を１００％ＤＭＳＯ中に希釈し、次いで、２つ組みにて、所望の最終濃度で細胞に添加した。最終ＤＭＳＯ濃度は、０．３から０．５％の間であった。
【０２１５】
ＮＳＣＬＣ細胞系抽出物の免疫ブロット分析
ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって分離されたタンパク質からニトロセルロースへの電気泳動的転写、抗体との温置及び化学発光第２段階検出（ｃｈｅｍｉｌｕｍｉｎｅｓｃｅｎｔ  ｓｅｃｏｎｄ  ｓｔｅｐ  ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ）（Ｐｉｃｏ  Ｗｅｓｔ；Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）によってタンパク質免疫検出を実施した。抗体は、Ｅ−カドヘリン（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ、ＣＡ；ｓｃ２１７９１）、α−カテニン（ｓｃ９９８８）、β−カテニン（ｓｃ７９６３）、γ−カテニン（ｓｃ８４１５）及びＢｒｋ（ｓｃ１１８８）；ビメンチン（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、ＣＡ；ＢＤ５５０５１３）及びフィブロネクチン（ＢＤ６１００７７）；ＧＡＰＤＨ（ＡｂＣａｍ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＵＫ）；Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ａｋｔ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ  ＃９２７１）、Ａｋｔ（ＣＳ、＃９２７２）、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ｐ４４／４２  ＭａｐキナーゼＴ２０２／Ｙ２０４（Ｅｒｋ１／２；ＣＳ  ＃９１０１）、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＳｒｃファミリーＹ４１６（ＣＳ  ＃２１０１）、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＳＴＡＴ３Ｙ７０５（ＣＳ、＃９１３１）及びＰｈｏｓｐｈｏ−Ｓ６Ｓ２３５／２３６（ＣＳ、＃２２１１）；β−アクチン（Ｓｉｇｍａ、Ｓａｉｎｔ  Ｌｏｕｉｓ、ＭＯ  ＃Ａ５４４１）であった。抗体は、さらに、Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｓｈｃ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃２４３４、Ｂｅｖｅｒｌｙ、ＭＡ）、Ｐｈｏｓｐｈｏ−パキシリン（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃２５４１）、Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ａｋｔ（Ｓｅｒ４７３及びＴｈｒ３０８）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃９２７１及び９２７５）、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＨＥＲ２／ＥｒｂＢ２（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃２２４５）、Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｈｅｒ３（Ｔｙｒ１２８９）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ＃４７９１）、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ｐ４４／４２  Ｍａｐキナーゼ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃９１０１）、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＩＧＦ−１Ｒ（Ｔｙｒ８４５）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃２２３１）、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＥＧＦＲ（Ｔｙｒ９９２）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃２２３５）、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＥＧＦＲ（Ｔｙｒ１０４５）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃２２３７）、ＥＧＦＲ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃２２３２）、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ｐ７０  Ｓ６キナーゼ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃９２０５）、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＧＳＫ−３アルファ／ベータ（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃９３３１）、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＥＧＦＲ（Ｔｙｒ１０６８）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ、＃２２３６）、Ｐｈｏｓｐｈｏ−Ｓｒｃファミリー（Ｔｙｒ４１６）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ＃２１０１）、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＳＡＰＫ／ＪＮＫ（Ｔｙｒ１８３／Ｔｙｒ１８５）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ＃９２５１）、Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＳＴＡＴ３（Ｔｙｒ７０５）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ＃９１３１）、ＥｒｂＢ２（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ＃２２４２）；ＥｒｂＢ４（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ４７９５）、ＰＹ２０（Ｅｘａｌｐｈａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ  Ｉｎｃ．）、Ｂｒｋ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）であった。
【０２１６】
インビトロ薬理学
細胞の生存性を測定するために、Ｐｒｏｍｅｇａからキットとして購入可能なＣｅｌｌ−Ｔｉｔｅｒ  Ｇｌｏを使用した。アッセイの基礎は、細胞培養プレートウェル中に存在するＡＴＰの発光の定量である。要約すれば、ウェル中に存在する生きた細胞の数が多いほど、存在するＡＴＰのレベルが高くなる。本アッセイは、ＡＴＰを結合して発光シグナルを発する基質を使用し、発光シグナルは、ルミノメータ上で読み取ることができる。別段の記載が無ければ、製造業者の指示書に正確に従った。簡潔に述べれば、第一日目に、白いポリスチレン９６ウェルアッセイプレート中に、４０００細胞／ウェルの密度で１０％血清含有増殖培地１２０μＬ中に細胞を播種した。第二日目に、１５０μＬの最終ウェル容量になるように、ＩＧＦ−１Ｒ阻害剤である化合物６６の１０倍濃度１５μＬ又はＤＭＳＯのみで細胞を処理した。阻害剤とともに７２時間温置した後、細胞のアッセイを行った。結果は、ＤＭＳＯ対照細胞の割合として計算した。
【０２１７】
インビボ薬理学
メスのＣＤ−１  ｎｕ／ｎｕマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）の側腹部えきか領域の単一皮下部位に、収集したＮＳＣＬＣ腫瘍細胞を移植した。腫瘍を２００±５０ｍｍ３まで増殖させた。腫瘍体積及び体重を毎週２回測定した。ノギスを用いて２方向を測定し、腫瘍体積＝（長さ×幅２）／２の式を用いて計算することによって、腫瘍体積を求めた。動物から腫瘍を採取し、液体窒素中に瞬間凍結した。
【０２１８】
結果
ｗｔＩＧＦ−１受容体を含有するＮＳＣＬＣ株は、化合物６６に対して幅広い感受性を示す
幅広いヒトＮＳＣＬＣ細胞株での化合物６６感受性の分析によって、広範な感受性が示された。従って、本発明者らは、これらの細胞株を、比較的非感受性である細胞株（ＳＷ１５７３及びＨ４６０）、中間の感受性を示す細胞株（Ａ５４９）及び化合物６６媒介性増殖阻害に対して感受性である細胞株（Ｈ４４１、Ｈ３５８及びＨ２９２に広く分類した。このように、最も感受性のもの（Ｈ３５８）から最も感受性が低いもの（ＳＷ１５７３）にわたって、化合物６６に対する細胞の幅広い感受性が観察された。
【０２１９】
上皮及び間葉細胞マーカーの変化は、化合物６６に対するＮＳＣＬＣ細胞株の感受性と相関している
本発明者らは、異常発現ビメンチン及び／又はフィブロネクチンにおける、化合物６６感受性ＮＳＣＬＣ株と比較的非感受性のＮＳＣＬＣ株の間の顕著な差を観察した（図２）。典型的には、ビメンチン及びフィブロネクチン発現は、間葉細胞に特徴的であり、上皮細胞系統では弱く、又は発現されない。ビメンチン発現は、主に、ＳＷ１５７３、Ｈ１７０３及びＣａｌｕ６中に見出されたが、フィブロネクチン発現はＨ４６０細胞中で観察された。ＳＷ１５７３細胞は、インビトロにおいて、化合物６６による増殖阻害に対して比較的非感受性であり、１０μＭ阻害剤では１０％未満の阻害であった。化合物６６感受性ＮＳＣＬＣ株であるＨ２９２、Ｈ４４１及びＨ３５８又は中間感受性株Ａ５４９では、ビメンチン又はフィブロネクチン発現は、殆ど又は全く見出されなかった。
【０２２０】
相対的に化合物６６に対して非感受性であるＮＳＣＬＣ株中での間葉タンパク質の発現に基づいて、本発明者らは、上皮又は間葉表現型の何れかに特徴的なマーカーの存在又は不存在に関して、相対的に非感受性及び感受性のＮＳＣＬＣ細胞株の同一パネルから得たタンパク質抽出物を分析した（図２）。注目すべきことに、感受性細胞株（Ｈ４４１、Ｈ３５８及びＨ２９２）中にはＥ−カドヘリンが検出されたが、相対的に非感受性の細胞株中には存在しなかった（ＳＷ１５７３及びＨ４６０）。中間感受性細胞株Ａ５４９は、低いが、検出可能な発現を示した。Ｈ４６０を除き、化合物６６に対して相対的に非感受性の細胞中で、γ−カテニンの類似の喪失が観察された。従って、相対的に非感受性の細胞株は、上皮細胞マーカータンパク質の発現を喪失したようである。次に、本発明者らは、これらの細胞株が、間葉マーカーフィブロネクチン及び／又はビメンチンを発現したかどうかについて疑問を抱いた。相対的に非感受性の細胞株は、フィブロネクチン及び／又はビメンチンの一方又は両方を明確に発現したのに対して（図２）、化合物６６に対して感受性の細胞株中では、何れのタンパク質も検出されなかった。興味深いことに、中間感受性細胞株Ａ５４９は、同じく、両タンパク質の低いが、検出可能なレベルを示した。しかしながら、細胞の二重染色は観察されなかったので、Ｅ−カドヘリン及びビメンチンに対して特異的な抗体による免疫染色を用いた共焦点顕微鏡実験（結果は示さず。）は、用いたＡ５４９細胞培養は、細胞の混合された集団であるように見受けられることが示された。これは、この細胞株を用いて得られた結果が若干変動することを説明し、化合物６６に対する中間感受性と合致する。
【０２２１】
化合物６６感受性は、インビボでの腫瘍増殖時の上皮マーカーの維持と相関する
本発明者らは、インビトロで同定された化合物６６感受性を予測するタンパク質マーカーがインビボでも観察可能であるかどうかを調べようと考えた。Ｈ４６０、Ｃａｌｕ６、Ａ５４９、Ｈ４４１及びＨ２９２細胞から増殖された３つの独立した腫瘍異種移植片からタンパク質抽出物を調製した。抽出物のイムノブロッティングによって、Ｅ−カドヘリンは、化合物６６に対して比較的非感受性であるＨ４６０細胞に由来した異種移植片中では検出可能に発現されず、中間感受性のＡ５４９細胞に由来する異種移植片中では低いレベルで発現され、化合物６６に対して感受性であるＨ４４１及びＨ２９２細胞株中では高いレベル発現されることが示された（図３）。γ−カテニンレベルの分析に対して、同様の結果が観察された。これに対して、Ｈ４６０から得られた異種移植片試料はフィブロネクチンのみを発現し、インビトロ細胞培養から得られた結果と合致していた（図２）。Ｈ４４１及びＨ２９２から得られた異種移植片抽出物は、フィブロネクチン又はビメンチンをほとんど又は全く発現しなかった。これらのインビボでの結果は、インビトロデータをさらに裏づけ、これらのタンパク質マーカーの存在が、細胞培養の人為的影響によるものではないことを示す。さらに、これらの結果は、化合物６６感受性が上皮表現型を有する細胞に限定され得ること、並びにＥＭＴを経た細胞は、細胞増殖及び生存に対するＩＧＦ−１Ｒシグナル伝達に依存する程度がより低くなるという仮説を支持する。
【０２２２】
ＩＧＦ−１受容体阻害に対して比較的非感受性であり、又は感受性であるＮＳＣＬＣ細胞株中でのＢｒｋの発現
興味深いことに、高いＢｒｋ発現が、より高い６６感受性に相当し、Ｂｒｋの不存在又はより低い発現が非感受性株を特徴付ける傾向がある限り、Ｂｒｋレベルと化合物６６感受性との間に極めて優れた相関が存在する。
【０２２３】
結論
Ｅ−カドヘリン発現の喪失、及びより間葉性の表現型の獲得は、複数の上皮由来の固形腫瘍における予後不良と相関することが示された。Ｅ−カドヘリンの喪失は、ＩＧＦ−１受容体阻害に対する細胞の非感受性と相関し、γ−カテニン及びＢｒｋの喪失も、Ｅ−カドヘリンよりも低度に相関した。逆に、細胞の間葉マーカー、ビメンチン、フィブロネクチン又はフィブリリンの獲得は、ＩＧＦ−１受容体阻害剤に対する感受性の喪失と相関する。本発明者らは、部分的又は完全な上皮間葉遷移が、ＩＧＦ−１受容体阻害剤に対する細胞応答にネガティブに影響し、抗ＩＧＦ−１受容体キナーゼ阻害剤及び抗ＩＧＦ−１受容体抗体療法の利点を得る可能性が最も高い患者に対する診断指標になることを明確に示した。
【０２２４】
略語
ＥＧＦ、上皮成長因子；ＥＭＴ、上皮間葉遷移；ＮＳＣＬＣ、非小細胞肺癌；ＨＮＳＣＣ、頭頚部へん平上皮癌；ＣＲＣ、結腸直腸癌；ＭＢＣ、転移性乳癌；ＥＧＦＲ、上皮成長因子受容体；Ｂｒｋ、（タンパク質チロシンキナーゼ６（ＰＴＫ６）としても知られる）乳房腫瘍キナーゼ；ＬＣ、液体クロマトグラフィー；ＭＳ、質量分析法；ＩＧＦ−１、インスリン様成長因子−１；ＩＧＦ−１Ｒ又はＩＧＦＲ、インシュリン様成長因子−１受容体；ＴＧＦα、トランスフォーミング成長因子アルファ；ＨＢ−ＥＧＦ、ヘパリン結合性上皮成長因子；ＬＰＡ、リゾホスファチジン酸；ＴＧＦα、トランスフォーミング成長因子アルファ；ＩＣ５０、最大半減の抑制濃度；ｐＹ、ホスホチロシン；ｗｔ、野生型；ＰＩ３Ｋ、ホスファチジルイノシトール−３キナーゼ；ＧＡＰＤＨ、グリセルアルデヒド３−ホスファートデヒドロゲナーゼ。
【０２２５】
参照による組み込み
本明細書に開示するすべての特許、公開特許出願及び他の参考文献を参照により本明細書に組み込む。
【０２２６】
均等物
当業者は、本明細書に具体的に記載された本発明の具体的実施形態の多数の均等物を、定型的な実験法に過ぎない実験法を用いて認識し、又は確認することができる。かかる均等物は以下の特許請求の範囲に包含されるものとする。
【図面の簡単な説明】
【０２２７】
【図１】図１は、野生型ＩＧＦ−１受容体を含有するＮＳＣＬＣ株がＩＧＦ−１受容体阻害剤である化合物６６に対して幅広い示すことを示す。
【図２】図２は、上皮及び間葉細胞マーカーの変化が化合物６６に対するＮＳＣＬＣ細胞株の感受性と相関していることを示す。
【図３】図３は、インビトロの結果と一致して、Ｅ−カドヘリンのインビボ発現は化合物６６感受性株に限定され、フィブロネクチンのインビボ発現は非感受性株に限定されていることを示す。
【図４】図４は、Ｂｒｋ発現レベルと化合物６６感受性との間に極めて勝れた相関が存在することを示す。
【図１】
2009509168.tif 000004
【図２】
2009509168.tif 000005
【図３】
2009509168.tif 000006
【図４】
2009509168.tif 000007
【手続補正書】
【提出日】平成20年5月21日(2008.5.21)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍細胞によって発現された上皮バイオマーカーのレベルを評価すること、及び
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測することを含み、
腫瘍細胞による上皮バイオマーカー発現の高いレベルは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する、
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法。
【請求項２】
上皮バイオマーカーが、Ｅ−カドヘリン、Ｂｒｋ、γ−カテニン、α−カテニン、ケラチン８及びケラチン１８から選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
腫瘍細胞によって発現された間葉バイオマーカーのレベルを評価すること、及び
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測することを含み、
腫瘍細胞による間葉バイオマーカー発現の高いレベルは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する低い感受性と相関する、
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法。
【請求項４】
間葉バイオマーカーが、ビメンチン、フィブロネクチン、フィブリリン−１、フィブリリン−２、コラーゲンアルファ−２（ＩＶ）、コラーゲンアルファ−２（Ｖ）、ＬＯＸＬ１、ニドジェン、Ｃ１１ｏｒｆ９、テネイシン、Ｎ−カドヘリン及び胚性ＥＤＢ＋フィブロネクチン、チューブリンアルファ−３及びエピモルフィンから選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
腫瘍細胞によって発現された１つまたはそれ以上の上皮バイオマーカーのレベルを評価すること、及び
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測することを含み、
評価された腫瘍細胞上皮バイオマーカーの全ての同時の高い発現レベルは、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する、
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法。
【請求項６】
１つ又はそれ以上の上皮バイオマーカーが、Ｅ−カドヘリン及びＢｒｋを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
１つ又はそれ以上の上皮バイオマーカーが、Ｅ−カドヘリン及びγ−カテニンを含む、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
腫瘍細胞によって発現された１つまたはそれ以上の間葉バイオマーカーのレベルを評価すること、及び
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測することを含み、
評価された腫瘍細胞間質バイオマーカーの全ての同時の低い発現レベル又は検出不能な発現レベルが、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する、
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法。
【請求項９】
１つ又はそれ以上の間葉バイオマーカーが、ビメンチン及びフィブロネクチンを含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
腫瘍細胞によって発現される上皮バイオマーカーのレベルを評価すること、
腫瘍細胞によって発現される間葉バイオマーカーのレベルを評価すること、及び
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測することを含み、
上皮バイオマーカー発現レベルと間葉バイオマーカー発現レベルとの高い比がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する高い感受性と相関する、
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による阻害に対する腫瘍細胞増殖の感受性を予測する方法。
【請求項１１】
上皮バイオマーカーがＥ−カドヘリンを含み、及び間葉バイオマーカーがフィブロネクチンを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
上皮バイオマーカーがＢｒｋを含み、及び間葉バイオマーカーがフィブロネクチンを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
上皮バイオマーカーがＥ−カドヘリンを含み、及び間葉バイオマーカーがビメンチンを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１４】
上皮バイオマーカーがγ−カテニンを含み、及び間葉バイオマーカーがフィブロネクチンを含む、請求項１０に記載の方法。
【請求項１５】
腫瘍細胞が上皮間葉遷移を起こしたかどうかを評価することによって、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する患者の想定される応答性を診断する段階と、及び
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤の治療有効量を前記患者に投与する段階とを含む、患者における腫瘍又は腫瘍転移を治療する方法。
【請求項１６】
１つ又はそれ以上の追加の抗癌剤が、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と同時又は順次に同時投与される、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
（ａ）新生物症状を有する患者から得た新生物細胞含有試料中の候補上皮バイオマーカーのレベルを測定すること、及び
（ｂ）前記患者から得た前記試料中の前記候補上皮バイオマーカーのレベルと、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による、前記新生物症状の治療の有効性との間の相関を明らかにすることを含み、
上皮バイオマーカーの高いレベルとＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による新生物症状のさらに有効な治療との相関が、前記上皮バイオマーカーがＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による新生物症状のさらに有効な治療に対する診断指標であることを示す、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での新生物症状のさらに有効な治療に対する診断指標である上皮バイオマーカーを明らかにする方法。
【請求項１８】
（ａ）新生物症状を有する患者から得た新生物細胞含有試料中の候補間葉バイオマーカーのレベルを測定すること、及び
（ｂ）前記患者から得た前記試料中の前記候補間葉バイオマーカーのレベルと、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による、前記新生物症状の治療の有効性との間の相関を明らかにすることを含み、
間葉バイオマーカーの高いレベルとＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による新生物症状のより低い有効性の治療との相関が、前記間葉バイオマーカーがＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤による新生物症状のより低い有効性の治療に対する診断指標である、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤での新生物症状のより低い有効性の治療に対する診断指標である間葉バイオマーカーを明らかにする方法。
【請求項１９】
腫瘍細胞が、以前に上皮間葉遷移した腫瘍細胞として特徴づけられ、前記腫瘍細胞の試料をＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と接触させること、前記腫瘍細胞の同一試料を試験薬剤の存在下でＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤と接触させること、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤によって媒介される増殖阻害を試験薬剤の存在下と非存在下で比較すること、並びに試験薬剤がＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する腫瘍細胞増殖の感受性を高める薬剤であるかどうかを判定することを含む、ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ阻害剤に対する腫瘍細胞増殖の感受性を高める薬剤を特定する方法。
【請求項２０】
腫瘍細胞が、ＮＳＣＬ腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、乳房腫瘍細胞、頭頸部腫瘍細胞または膵臓腫瘍細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項２１】
腫瘍細胞が、ＮＳＣＬ腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、乳房腫瘍細胞、頭頸部腫瘍細胞または膵臓腫瘍細胞である、請求項３に記載の方法。
【請求項２２】
腫瘍細胞が、ＮＳＣＬ腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、乳房腫瘍細胞、頭頸部腫瘍細胞または膵臓腫瘍細胞である、請求項５に記載の方法。
【請求項２３】
腫瘍細胞が、ＮＳＣＬ腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、乳房腫瘍細胞、頭頸部腫瘍細胞または膵臓腫瘍細胞である、請求項８に記載の方法。
【請求項２４】
腫瘍細胞が、ＮＳＣＬ腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、乳房腫瘍細胞、頭頸部腫瘍細胞または膵臓腫瘍細胞である、請求項１０に記載の方法。
【請求項２５】
腫瘍細胞が、ＮＳＣＬ腫瘍細胞、結腸腫瘍細胞、乳房腫瘍細胞、頭頸部腫瘍細胞または膵臓腫瘍細胞である、請求項１５に記載の方法。
【国際調査報告】
2009509168.tif 000008
2009509168.tif 000009
2009509168.tif 000010
2009509168.tif 000011
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