(57)【要約】  本発明は、短時間で且つ高い反応効率で分析物又はそのアナログと当該分析物又はそのアナログとの複合体を形成し得る物質（複合体形成物質）との複合体を形成させる方法、形成された複合体と当該複合体の形成に関与しなかった複合体形成物質又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログとを迅速、簡便且つ高精度に分離する方法、並びに試料中の分析物を高感度に測定する方法を提供することを目的とする。
2009507223.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の工程を含む複合体の形成方法。
(1)細管内に、(a)分析物又はそのアナログを含有する溶液と、(b)１種以上の、当該分析物又はそのアナログとの複合体を形成し得る物質（複合体形成物質）を含有する溶液とを、これらの溶液を予め混合することなく且つ当該細管に電圧を印加することにより当該分析物又はそのアナログと複合体形成物質との複合体が形成されるように配置させる工程、及び
(2)これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、当該分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種の複合体形成物質を濃縮させながら、当該分析物又はそのアナログと複合体形成物質とを接触させ、当該分析物又はそのアナログと複合体形成物質との複合体を形成させる工程。
【請求項２】
前記工程(2)における電圧印加により、結果として当該分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種の複合体形成物質が1.5倍以上濃縮される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記工程(2)をITP（等速電気泳動）又はFASS（フィールド・アンプリフィケーション・サンプル・スタッキング）により行う請求項１に記載の方法。
【請求項４】
１種以上の複合体形成物質が、標識物質、又は／及び分析物又はそのアナログの電気泳動移動度を変化させ得る物質（反応向上物質）が結合したものである、請求項１〜３の何れかに記載の方法。
【請求項５】
複合体形成物質を２種以上使用し且つそれらの複合体形成物質をそれぞれ含有する２種以上の溶液を使用する場合であって、(1)少なくとも１種の複合体形成物質が、標識物質が結合したものであり、それ以外の少なくとも１種の複合体形成物質が、分析物又はそのアナログの電気泳動移動度を変化させ得る物質（反応向上物質）が結合したものであるか、又は(2)少なくとも１種の複合体形成物質が、標識物質及び、分析物又はそのアナログの電気泳動移動度を変化させ得る物質（反応向上物質）が結合したものである、請求項１〜３の何れかに記載の方法。
【請求項６】
複合体形成物質の１種が、分析物又はそのアナログに対する抗体、或いは分析物又はそのアナログに結合するタンパク質である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
以下の工程を含む複合体の分離方法。
(1)細管内に、(a)分析物又はそのアナログを含有する溶液と、(b)１種以上の、当該分析物又はそのアナログとの複合体を形成し得る物質（複合体形成物質）を含有する溶液とを、これらの溶液を予め混合することなく且つ当該細管に電圧を印加することにより当該分析物又はそのアナログと複合体形成物質との複合体が形成されるように配置させる工程、
(2)これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、当該分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種の複合体形成物質を濃縮させながら、当該分析物又はそのアナログと複合体形成物質とを接触させ、当該分析物又はそのアナログと複合体形成物質との複合体を形成させる工程、及び
(3)当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかった複合体形成物質又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログとを、更に電気的に移動させて分離する工程。
【請求項８】
前記工程(2)における電圧印加により、結果として当該分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種の複合体形成物質が1.5倍以上濃縮される、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記工程(2)をITP（等速電気泳動）又はFASS（フィールド・アンプリフィケーション・サンプル・スタッキング）により行う請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
１種以上の複合体形成物質が、標識物質、又は／及び分析物又はそのアナログの電気泳動移動度を変化させ得る物質（反応向上物質）が結合したものである、請求項７〜９の何れかに記載の方法。
【請求項１１】
複合体形成物質を２種以上使用し且つそれらの複合体形成物質をそれぞれ含有する２種以上の溶液を使用する場合であって、(1)少なくとも１種の複合体形成物質が、標識物質が結合したものであり、それ以外の少なくとも１種の複合体形成物質が、分析物又はそのアナログの電気泳動移動度を変化させ得る物質（反応向上物質）が結合したものであるか、又は(2)少なくとも１種の複合体形成物質が、標識物質及び、分析物又はそのアナログの電気泳動移動度を変化させ得る物質（反応向上物質）が結合したものである、請求項７〜９の何れかに記載の方法。
【請求項１２】
複合体形成物質の１種が、分析物又はそのアナログに対する抗体、或いは分析物又はそのアナログに結合するタンパク質である、請求項７に記載の方法。
【請求項１３】
以下の工程を含む分析物の測定方法。
(1)細管内に、(a)分析物又はそのアナログを含有する溶液と、(b)１種以上の、当該分析物又はそのアナログとの複合体を形成し得る物質（複合体形成物質）を含有する溶液とを、これらの溶液を予め混合することなく且つ当該細管に電圧を印加することにより当該分析物又はそのアナログと複合体形成物質との複合体が形成されるように配置させる工程、
(2)これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、当該分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種の複合体形成物質を濃縮させながら、当該分析物又はそのアナログと複合体形成物質とを接触させ、当該分析物又はそのアナログと複合体形成物質との複合体を形成させる工程、
(3)当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかった複合体形成物質又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログとを、更に電気的に移動させて分離する工程、及び
(4)分離された複合体の量、又は当該複合体の形成に関与しなかった複合体形成物質又はアナログの量を測定し、その結果に基づいて分析物の量を求める工程。
【請求項１４】
前記工程(2)における電圧印加により、結果として当該分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種の複合体形成物質が1.5倍以上濃縮される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記工程(2)をITP（等速電気泳動）又はFASS（フィールド・アンプリフィケーション・サンプル・スタッキング）により行う請求項１３に記載の方法。
【請求項１６】
１種以上の複合体形成物質が、標識物質、又は／及び分析物又はそのアナログの電気泳動移動度を変化させ得る物質（反応向上物質）が結合したものである、請求項１３〜１５に記載の方法。
【請求項１７】
複合体形成物質を２種以上使用し且つそれらの複合体形成物質をそれぞれ含有する２種以上の溶液を使用する場合であって、(1)少なくとも１種の複合体形成物質が、標識物質が結合したものであり、それ以外の少なくとも１種の複合体形成物質が、分析物又はそのアナログの電気泳動移動度を変化させ得る物質（反応向上物質）が結合したものであるか、又は(2)少なくとも１種の複合体形成物質が、標識物質及び、分析物又はそのアナログの電気泳動移動度を変化させ得る物質（反応向上物質）が結合したものである、請求項１３〜１５に記載の方法。
【請求項１８】
複合体形成物質の１種が、分析物又はそのアナログに対する抗体、或いは分析物又はそのアナログに結合するタンパク質である、請求項１１に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、試料中の分析物又はそのアナログと当該分析物又はそのアナログとの複合体を形成し得る物質（以下、複合体形成物質又はCFSと略記する。）との複合体を形成させる方法、形成された複合体と当該複合体の形成に関与しなかったCFS又はアナログとを分離する方法、並びに分離された複合体の量又は複合体の形成に関与しなかったCFS又はアナログの量に基づいて試料中の分析物を測定する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
試料の分析物を分析するためには、通常試料と各種試液（例えば分析物に対する抗体を含む試液や標識物質を含有する試液等）等の複数の溶液を混合して、試料中の分析物と試液中の反応物（分析物に対する抗体や標識物質等）を反応させる必要がある。
近年、その技術が発展し、種々の研究がなされている、微小流体装置（マイクロフルイディクスデバイス）を用いる微細総分析システム〔Micro Total Analysis System（μ-TAS）〕においては、このような複数の溶液を細管外で予め混合して反応させた後、その混合液を細管（チャネル）内に導入する方法や複数の溶液を同時に混合用細管（チャネル）内に導入して、これらを混合・反応させる方法（特許文献１）が知られている。
しかしながら、前者の方法では、予め混合するためにマイクロリットル（μl）オーダーの試料や試液が必要となり、ナノリットル（nl）乃至ピコリットル（pl）オーダーの試料や試液で微量分析が行えるというμ-TASのメリットが得られなくなる。また、後者の方法では、導入時に細管内に生じる相流により複数の溶液は容易に混合されず、分子拡散に依存することとなるので、分子量や粘度が異なる複数の溶液を混合する場合には、拡散係数の変動によりこれらの溶液を完全に混合させる時間が変化してしまうという問題点や、混合する溶液の粘度比が変化すると、チャネル内に導入される複数の溶液の体積比も変動してしまうので、混合させる溶液の種類により混合比率が変化し一定の混合比率で混合することができない等の問題点がある。
また、上記以外の方法として、Bao,J.M, Regnier, F. E, J. Chromatogr. 1992, 608, 217-224（非特許文献１）や特表平10-512371号公報（特許文献２）に開示されて方法がある。
これらの方法は、分析用細管内に、電気泳動移動度の高い分子を含む溶液を電気泳動移動度の低い分子を含む溶液の後ろになるように配置させた後、電界印加によって電気泳動移動度の高い分子が、電気泳動移動度の低い分子を追い越すことによってこれら分子同士の反応を行う方法である。これらの方法は、分子拡散に依存した従来の混合方法に比べて、分子混合を均一且つ短時間に行うことが可能である。
しかしながら、これらの方法では、反応効率が満足できるものではなく、試料中の分析物を高感度に検出するためには、反応に供する分子濃度を増加させたり或いは電気泳動による分子移動速度を遅らせて反応時間を長くする等の十分な反応効率を確保するための方策が必要である。
【０００３】
【特許文献１】特開2005-31070
【特許文献２】特表平10-512371
【非特許文献１】Bao,J.M, Regnier, F. E, J. Chromatogr. 1992, 608, 217-224
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、短時間で且つ高い反応効率で当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体を形成させる方法、形成された複合体と当該複合体の形成に関与しなかったCFS又はアナログとを迅速、簡便且つ高精度に分離する方法、並びに試料中の分析物を高感度に測定する方法に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、以下の構成よりなる。
１．以下の工程を含む複合体の形成方法。
(1)細管内に、(a)分析物又はそのアナログを含有する溶液と、(b)１種以上の、当該CFSを含有する溶液とを、これらの溶液を予め混合することなく且つ当該細管に電圧を印加することにより当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体が形成されるように配置させる工程、及び
(2)これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、当該分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSを濃縮させながら、当該分析物又はそのアナログとCFSとを接触させ、当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体を形成させる工程。
【０００６】
２．以下の工程を含む複合体の分離方法。
(1)細管内に、(a)分析物又はそのアナログを含有する溶液と、(b)１種以上の、当該CFSを含有する溶液とを、これらの溶液を予め混合することなく且つ当該細管に電圧を印加することにより当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体が形成されるように、配置させる工程、
(2)これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、当該分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSを濃縮させながら、当該分析物又はそのアナログとCFSとを接触させ、当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体を形成させる工程、及び
(3)当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかったCFS又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログとを、更に電気的に移動させて分離する工程。
【０００７】
３．以下の工程を含む分析物の測定方法。
(1)細管内に、(a)分析物又はそのアナログを含有する溶液と、(b)１種以上の、当該CFSを含有する溶液とを、これらの溶液を予め混合することなく且つ当該細管に電圧を印加することにより当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体が形成されるように、配置させる工程、
(2)これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、当該分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSを濃縮させながら、当該分析物又はそのアナログとCFSとを接触させ、当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体を形成させる工程、
(3)当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかったCFS又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログとを、更に電気的に移動させて分離する工程、及び
(4)分離された複合体の量、或いは当該複合体の形成に関与しなかったCFS又はアナログの量を測定し、その結果に基づいて分析物の量を求める工程。
【０００８】
即ち、本発明者らは、分析物又はそのアナログを含有する溶液と、CFSを含有する溶液とを、これらの溶液を予め混合することなく細管内に配置させ、この細管に電圧を印可して、当該分析物又はそのアナログ、又は／及びCFSを、これらの電気泳動移動度の差を利用して電気泳動的に濃縮させながら、当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体を形成させれば、ナノリットル（nl）乃至ピコリットル（pl）オーダーの極微量の試料及び当該溶液を使用するのみで、試料及び当該溶液の粘度の違いに起因する混合比率の変動を考慮する必要なく、短時間で且つ高い反応効率で、当該複合体を形成させることができることを見出し、本発明を完成するに至った。
【発明の効果】
【０００９】
本発明の方法により、溶液中の分析物又はそのアナログと溶液中のCFSとの反応を、短時間で且つ高い反応効率で行うことができる。その結果、CFSとの複合体と複合体の形成に関与しなかったCFS又はアナログとを迅速、簡便且つ高精度に分離することが可能となり、更には分離された、複合体の量又は複合体の形成に関与しなかったCFS又はアナログの量に基づいて試料中の分析物を高感度に測定するすることが可能となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
１．本発明の複合体形成方法
本発明の方法は、(a)分析物又はそのアナログを含有する溶液と、CFSを含有する溶液とを、これらの溶液を細管外で予め混合させてこれらの複合体を形成させることなく、これらの溶液を、それぞれ別々のゾーンとなるように細管内に導入・配置させ、次いで、(b)当該細管に電圧を印加して、これらの溶液が細管内で均一に混合される前に、当該分析物又はそのアナログ、又は／及びCFSを電気泳動的に濃縮させながらこれらを接触させて、当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体を形成させることを特徴とする。
【００１１】
本発明の複合体形成方法は、具体的には以下の工程(1)及び(2)を含むものである。
(1)細管内に、(a)分析物又はそのアナログを含有する溶液と、(b)１種以上の、CFSと当該分析物又はそのアナログを含有する溶液とを、これらの溶液を予め混合することなく且つ当該細管に電圧を印加することにより当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体が形成されるように配置させる工程（導入工程）、及び
(2)これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、当該分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSを濃縮させながら、当該分析物又はそのアナログとCFSとを接触させ、当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体を形成させる工程（濃縮反応工程）。
【００１２】
１−１．導入工程〔工程(1)〕
本発明の工程(1)は、分析物又はそのアナログを含有する溶液と、１種以上のCFSを含む溶液とを、これらの溶液を細管外で予め混合せずに、細管に電圧を印加することにより、即ち、後述する本発明の工程(2)を実施した際に、分析物又はそのアナログとCFSとの複合体が形成されるように、これらの溶液を細管内に導入・配置させる工程である。
ここで、「細管に電圧を印加することにより、分析物又はそのアナログとCFSとの複合体が形成されるように」とは、分子拡散によらず（依存せず）に、より高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液を、それよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液の上流に配置させて、電気泳動を行った場合、溶液中のより高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質がそれよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を追い越すことを利用して、分析物又はそのアナログとCFSとの複合体を形成させることを意味する。
即ち、本発明は、(1)分析物又はそのアナログ、若しくは分析物又はそのアナログとあるCFSとの複合体と、(2)少なくとも１種のCFS（注：先のCFSとは異なるもの）との複合体を、細管に電圧を印加することによって、細管内で形成させればい。言い換えれば、本発明は、分析物又はそのアナログと全てのCFSとの複合体が細管内のみで形成される場合だけでなく、例えば、２種以上のCFSを使用する場合には、分析物又はそのアナログと２種以上のCFSのうちの一部のCFSとの複合体（中間複合体）を予め細管外又は電圧を印加せずに細管内で形成させた後、当該中間複合体と残りの１種以上のCFSとを、細管に電圧を印加することにより細管内で接触させて予め形成されている中間複合体と残りの１種以上の複合体形成物質との複合体を形成させる場合も包含される。
例えばCFSを２種使用する場合にあっては、(1)分析物又はそのアナログと１種のCFSとの複合体（中間複合体）、及び当該中間複合体と残りの１種のCFSとの複合体を、細管に電圧を印加することによって、細管内で形成させる場合はもちろんのこと、(2)分析物又はそのアナログと１種のCFSとの中間複合体を予め細管外又は電圧を印加せずに細管内で形成させた後、当該中間複合体と残りの１種のCFSとの複合体を、細管に電圧を印加することによって、細管内で形成させる場合も包含される。また、例えばCFSを３種使用する場合にあっては、(1)分析物又はそのアナログと１種のCFS（CFS-１）との複合体（中間複合体１）、当該中間複合体１と残りの１種のCFS（CFS-２）との複合体（中間複合体２）、及び当該中間複合体２と残りの１種のCFS（CFS-３）との複合体を、細管に電圧を印加することによって、細管内で形成させる場合はもちろんのこと、(2)分析物又はそのアナログとCFS-１との中間複合体１を予め細管外又は電圧を印加せずに細管内で形成させた後、当該中間複合体１とCFS-２との中間複合体２、並びに当該中間複合体２と複合体形成物質CFS-３との複合体を、細管に電圧を印加することによって、細管内で形成させる場合、或いは、(3)分析物又はそのアナログとCFS-１との中間複合体１、及び当該中間複合体１とCFS-２との中間複合体２を予め細管外又は電圧を印加せずに細管内で形成させた後、当該中間複合体２とCFS-３との複合体を、細管に電圧を印加することによって、細管内で形成させる場合も包含される（尚、４種以上のCFSを使用する場合も、これらと同様の考え方である。）。
従って、本発明において、「溶液を予め混合することなく」とは、分析物又はそのアナログを含有する溶液と、少なくとも１種のCFSを含有する溶液とを予め混合しないことを意味し、分析物又はそのアナログを含有する溶液と、CFSを含有する溶液とを予め一切混合しないことを意味するものではない（言い換えれば、分析物を含む試料と全てのCFSを含有する溶液、要すればアナログを含有する溶液とを、一切混合しないことを意味しない。）。
本発明においては、電圧を印加した場合に最終的に形成される分析物又はそのアナログと１種以上のCFSとの複合体が移動していく方を「下流」側、その反対を「上流」側と定義する。（以下、同様である。）
また、本発明において、「（分析物又はそのアナログ、CFS等の電気泳動にかけられるものの）電気泳動速度が遅い」又は「（分析物又はそのアナログ、CFS等の電気泳動にかけられるものの）電気泳動移動度が低い」とは、これ以外の少なくとも１種以上の物質よりも電気泳動速度が遅い（電気泳動移動度が低い）場合）だけでなく、これ以外の少なくとも１種以上の物質と逆方向に移動する場合も意味する。
【００１３】
分析物又はそのアナログを含有する溶液と１種以上のCFSを含む溶液との配置順序としては、細管に電圧を印加することにより分析物又はそのアナログとCFSとの複合体を形成し得る順序であれば良く、特に限定されない。
表１−１〜１―５に、分析物又はそのアナログを含有する溶液とCFSを含む溶液の配置順序と、分析物又はそのアナログ、及びCFSの電気泳動移動度（電気泳動速度）の関係を示すが、これらに限定されるものではない。
尚、表１−１〜１―５においては、１種乃至３種のCFSを用いる場合を示したが、４種以上のCFSを使用する場合も、表１−１〜１―５と同様の考え方で適宜配置すればよい。
表１−１〜１―５において、Ａｎａは分析物又はそのアナログを、ＣＦＳ−１はCFS-１を、ＣＦＳ−２はCFS-２を、ＣＦＳ−３はCFS-３をそれぞれ示す。また、表１−１〜１―５において、細管内の配置順序Ａは、分析物又はそのアナログを含有する溶液及び１種以上のCFSを含む溶液のなかで、細管内の最も上流側に配置させる溶液のゾーンを、Ｂは、ゾーンＡの下流側に配置させる溶液のゾーンを、ＣはゾーンＢの下流側に配置させる溶液のゾーンを、ＤはゾーンＣの下流側に配置させる溶液のゾーンを示す。尚、当該細管内の配置順序（Ａ〜Ｄ）は、あくまでも分析物又はそのアナログを含有する溶液及び１種以上のCFSを含む溶液の間での順序であり、これらのうち最も下流側に配置された当該溶液の更に下流側やこれらのうち最も上流側に配置された当該溶液の更に上流側に、当該溶液以外の溶液等が配置されていても良いことは言うまでもない。
【００１４】
表１−１
2009507223.tif 000003
【００１５】
表１−２
2009507223.tif 000004
【００１６】
表１−３
2009507223.tif 000005
【００１７】
表１−４
2009507223.tif 000006
【００１８】
表１−５
2009507223.tif 000007
【００１９】
尚、表１−１〜１―５において、「先に形成される」とは、前者の複合体が後者の複合体に比べ実質的に先に形成されることを意味し、例えば以下のように、前者の複合体と後者の複合体の一部が同時或いは逆の順序で形成される場合等を排除するものではない。
(1)各ゾーン（分析物又はそのアナログを含有する溶液ゾーン、CFSを含有する溶液ゾーン）を隣接させた際に、これら各ゾーン間の液−液界面付近で生じる分子拡散によって一部前者の複合体と後者の複合体とが同時或いは逆の順序で形成される場合。
(2)分析物又はそのアナログ及び１種以上のCFSの電気泳動移動速度の関係から、一部前者の複合体と後者の複合体とが同時或いは逆の順序で形成される場合。
(3)分析物又はそのアナログ及び１種以上のCFSのうちの少なくとも１種以上のCFSがそれ以外の物質と逆方向に移動することによって、一部前者の複合体と後者の複合体とが同時或いは逆の順序で形成される場合。
このような場合には、表１−１〜１―５と同様の考え方で分析物又はそのアナログを含有する溶液及びCFSを含有する溶液を適宜配置すればよい。
【００２０】
また、表１−１〜１―５のうち、２種以上のCFSを使用する場合は、全てのCFS（CFS-１〜-３）が分析物又はそのアナログに結合する場合、換言すれば、２種以上のCFSの結合部位が全て分析物又はそのアナログ上のみに存在する場合〔結合形態(1)：AnaをCFS-1とCFS-2とで挟むサンドイッチ複合体〕を示したものである。これ以外の場合、例えば２種のCFS（CFS-１及び-２）のうちCFS-１が分析物又はそのアナログに結合し、CFS-２が分析物又はそのアナログとCFS-１との複合体が形成されたことによって新たに生じた部位に結合する場合、換言すれば、２種以上のCFSのうち、少なくとも１種のCFS（例えばCFS Ａ）の結合部位は分析物又はそのアナログ上のみに存在し、その他の少なくとも１種のCFS（例えばCFS Ｂ）の結合部位は分析物又はそのアナログとCFS Ａとの複合体が形成されたことによって新たに生じる部位に存在する場合〔結合形態(2)〕、或いは例えば２種のCFS（CFS-１及び-２）のうちCFS-１が分析物又はそのアナログに結合し、CFS-２が分析物又はそのアナログと結合したCFS-１に結合する場合、換言すれば、２種以上のCFSのうち、少なくとも１種のCFS（例えばCFS Ａ）の結合部位は分析物又はそのアナログ上のみに存在し、その他の少なくとも１種のCFS（例えばCFS Ｂ）の結合部位はCFS Ａ上のみに存在する場合〔結合形態(3)〕は、結合形態(1)においてCFS-1をAnaとCFS-2とで挟むサンドイッチ複合体が形成されると考えればよい〔表１−１〜１―５の２種のCFSを用いる場合における分析物又はそのアナログをCFS-１に読み替え、表１−１〜１―５のCFS-１を分析物又はそのアナログに読み替えればよい。〕。また、上記結合形態(2)及び(3)において３種以上のCFSを用いる場合や上記結合形態(1)〜(3)を適宜組み合わせた場合等には、上表１−１〜１−５及び上記と同様の考え方で分析物又はそのアナログを含有する溶液及びCFSを含有する溶液を適宜配置すればよい。
【００２１】
尚、分析物のアナログを用いた競合法において本発明を実施する場合には、試料中の分析物（即ち、分析物を含む試料）と、アナログ〔例えば標識物質により標識されたアナログ（標識アナログ）、反応向上物質が結合したアナログ（反応向上アナログ）〕とを同一の溶液中に存在させて、一つの溶液ゾーン（即ち、分析物を含む試料及びアナログを含有する溶液のゾーン）として細管内に導入・配置させても、分析物を含む試料とアナログ（例えば標識アナログ又は反応向上アナログを含む溶液とをそれぞれ別々のゾーン（溶液）として細管内に導入・配置させてもよい、また、試料中の分析物（即ち、分析物を含む試料）と１種以上のCFSを含有する溶液と、アナログ〔例えば標識アナログ、反応向上アナログ〕を含む溶液とをそれぞれ別々のゾーン（溶液）として細管内に導入・配置させることもできる。
尚、上記の競合法において、細管に電圧を印加することにより、当該分析物とCFSとの複合体A及び当該標識アナログとCFSとの複合体Bが形成されるように、(1)分析物を含む試料及び標識アナログを含む溶液（分析物及びアナログを含有する溶液）と１種以上のCFS（CFS、反応向上CFS、これらの組合せ）を含有する溶液とを、或いは(2)分析物を含む試料（分析物又はアナログを含有する溶液）と、標識アナログを含有する溶液及び１種以上のCFS（CFS、反応向上CFS、これらの組合せ）を含有する溶液とを、又は、(3)分析物を含む試料及び１種以上のCFS（CFS、反応向上CFS、これらの組合せ）を含有する溶液と標識アナログを含む溶液とを、細管内に配置するには、分析物、標識アナログ及びCFSの電気泳動移動度を考慮して、前述において説明した、分析物又はアナログを含有する溶液と１種以上のCFSを含む溶液との配置順序に準じて、これら溶液の配置順序を決定すればよい。また、細管に電圧を印加することにより、当該分析物と標識CFSとの複合体A及び当該反応向上アナログと標識CFSとの複合体Bが形成されるように、(1)分析物を含む試料及び反応向上アナログを含む溶液（分析物及びアナログを含有する溶液）と分析物又はそのアナログとの複合体を形成し得る能力を有し且つ標識物質で標識されたCFS（以下、標識結合物質又は標識CFSと略記する。）の１種以上を含有する溶液とを、或い(2)は分析物を含む試料（分析物又はアナログを含有する溶液）と、反応向上アナログを含有する溶液及び１種以上の標識CFSを含有する溶液とを、又は、(3)分析物を含む試料及び１種以上の標識CFSを含有する溶液と反応向上アナログを含む溶液とを、細管内に配置するには、分析物、反応向上アナログ及び標識CFSの電気泳動移動度を考慮して、前述において説明した、分析物又はアナログを含有する溶液と１種以上のCFSを含む溶液との配置順序に準じて、これらの溶液の配置順序を決定すればよい。
また、分析物又はそのアナログを含有する溶液と１種以上のCFSを含む溶液は必ずしも隣接させる必要はなく、これらの溶液の間には、例えば水、生理食塩水、各種緩衝液、有機溶媒等の液体を挿入しても良い。尚、このような緩衝液としては、分析物又はそのアナログと１種以上のCFSとの複合体の形成を阻害しないものであれば、使用可能であり、例えばトリス緩衝液、グッド緩衝液、TE緩衝液、TAE緩衝液、TBE緩衝液、TBS緩衝液、リン酸塩緩衝液、ホウ酸塩緩衝液等の通常この分野で用いられる緩衝液が挙げられる。
尚、分析物又はそのアナログを含有する溶液と１種以上のCFSを含む溶液、要すれば液体は、細管内に、それぞれ別々のゾーンとして形成され、配置される。言い換えれば、分析物又はそのアナログを含有する溶液と１種以上のCFSを含む溶液との間、要すれば分析物又はそのアナログを含有する溶液と液体との間或いは１種以上のCFSを含む溶液と液体との間には、これら溶液、要すれば液体が配置された時点で液−液界面が形成・保持されている。
【００２２】
工程(1)において、分析物又はそのアナログを含有する溶液と１種以上のCFSを含む溶液とを細管内に導入する方法としては、上記したような配置となるように、分析物又はそのアナログを含有する溶液のゾーンと１種以上のCFSを含む溶液のゾーンとを細管内に別々に形成し得る方法、換言すれば、分析物又はそのアナログを含有する溶液と１種以上のCFSを含む溶液との間、要すれば分析物又はそのアナログを含有する溶液と液体との間或いは１種以上のCFSを含む溶液と液体との間に、液−液界面を形成し得る方法であればよく、自体公知の導入方法が使用可能である。このような自体公知の導入方法としては、例えば細管に電圧を印加して、これら溶液（及び液体）を電気的に細管内に導入する方法、細管内を加圧又は／及び減圧して、これら溶液（及び液体）を細管内に導入する方法、毛細管現象を利用してこれら溶液（及び液体）を細管内に導入する方法等が挙げられる。
また、分析物又はそのアナログを含有する溶液と１種以上のCFSを含む溶液とを細管内に導入して配置させる方法としては、自体公知の導入・配置方法が使用可能である。このような自体公知の導入・配置方法としては、例えば、(1)先ず分析物又はそのアナログを含有する溶液及び１種以上のCFSを含む溶液のうちの１種を、上記の如き導入方法により細管の端から細管内に導入し、次いで、残りの溶液のうちの１種を同様に上記の如き導入方法により細管の端から細管内に導入し、これを繰り返して全ての溶液を細管内に配置させる方法、(2)先ず液だめ（ウェル）内に分析物又はそのアナログを含有する溶液及び１種以上のCFSを含む溶液のうちの１種を滴下して、これを上記の如き導入方法により細管内に導入し、次いで液だめ（ウェル）内の溶液を、残りの溶液のうちの１種に交換した後、これを同様に上記の如き導入方法により細管内に導入し、これを繰り返して全ての溶液を細管内に配置させる方法、(3)複数の液だめ（ウェル）のそれぞれに分析物又はそのアナログを含有する溶液及び１種以上のCFSを含む溶液のうちの１種を別々に滴下して、これらを上記の如き導入方法により同一の細管内に別々に導入して全ての溶液を細管内に配置させる方法等が挙げられる。尚、分析物又はそのアナログを含有する溶液と１種以上のCFSを含む溶液とを細管内に導入する方法及び分析物又はそのアナログを含有する溶液と１種以上のCFSを含む溶液とを細管内に導入して配置させる方法は上記の方法に限定されない。
また、分析物を含む試料、分析物を含む試料及び標識アナログ又は反応向上アナログを含む溶液（分析物又はアナログを含有する溶液）、分析物及び１種以上のCFS（例えばCFS、標識CFS、反応向上CFS、これらの組合せ）を含有する溶液、標識アナログを含む溶液又は反応向上アナログを含む溶液を細管内に導入する方法は、上記した、分析物又はアナログを含有する溶液と１種以上のCFSを含む溶液とを細管内に導入する方法と同じである。
【００２３】
１−２．濃縮反応工程〔工程(2)〕
本発明の工程(2)は、分子拡散によらず（依存せず）に、当該分析物又はそのアナログ、又は／及びCFSを電気泳動的に濃縮させながら当該分析物又はそのアナログとCFSを接触させて、当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体を形成させる工程である。
「溶液（分析物又はそのアナログを含有する溶液と１種以上のCFSを含有する溶液）が均一に混合される前に」とは、本発明の工程(1)により、細管内に配置された、分析物又はそのアナログを含有する溶液と１種以上のCFSを含む溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）が、全て分子拡散によって均一に混合される前を意味する。
尚、本発明において、「界面」とは、分析物又はそのアナログを含有する溶液と１種以上のCFSを含む溶液とが接している境界、要すれば分析物又はそのアナログを含有する溶液と液体とが接している境界或いは１種以上のCFSを含む溶液と液体とが接している境界を意味し、当該界面は、現実には拡散によって必ずしも全然混ざらないということを意味するものではない。
また、分析物のアナログを用いた競合法において標識アナログを使用する場合にあっては、工程(1)により、細管内に配置された、(1)分析物を含む試料及び標識アナログを含む溶液（分析物及びアナログを含有する溶液）と１種以上のCFS（CFS、反応向上CFS、これらの組合せ）を含有する溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）、(2)分析物を含む試料、標識アナログを含有する溶液及び１種以上のCFS（CFS、反応向上CFS、これらの組合せ）を含有する溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）、又は(3)分析物を含む試料及び１種以上のCFS（CFS、反応向上CFS、これらの組合せ）を含有する溶液及び標識アナログを含有する溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）が、分子拡散によって均一に混合される前を意味する。
また、分析物のアナログを用いた競合法において反応向上アナログを使用する場合にあっては、(1)分析物を含む試料及び反応向上アナログを含む溶液（分析物及びアナログを含有する溶液）と１種以上の標識CFSを含有する溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）、(2)分析物を含む試料、反応向上アナログを含有する溶液及び１種以上の標識CFSを含有する溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）が、又は(3)分析物を含む試料及び１種以上のCFS（CFS、標識CFS、これらの組合せ）を含有する溶液及び反応向上アナログを含有する溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）が、分子拡散によって均一に混合される前を意味する。
尚、「界面」も前述と同じ意味である。
【００２４】
工程(2)において、「細管に電圧を印加することによって、分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSを濃縮させる」とは、分析物又はそのアナログ及び１種以上のCFSのうちの少なくとも１種が、細管に電圧を印加した際に、バンド状（プラグ状）に集合してくることを言う。換言すれば、細管に電圧を印加した際に、当該物質が集合し、工程(1)で配置されたゾーン中の物質の濃度よりも、当該物質の濃度の方が高くなるような部分が生じること、即ち、細管に電圧を印加した際に、分析物又はそのアナログ、又は／及びCFSが集合し、工程(1)で配置された溶液ゾーン（例えば分析物又はそのアナログを含有する溶液ゾーン、CFSを含有する溶液ゾーン）中の分析物又はそのアナログの濃度又は／及びCFSの濃度よりも、分析物又はそのアナログの濃度又は／及びCFSの濃度の方が高くなるような部分が生じることを意味する。
尚、本発明における濃縮の度合い（程度）としては、工程(1)で配置されたゾーン中の分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSの濃度に対する、細管に電圧を印加した際に当該物質が集合した部分（バンド状）の分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSの濃度が、下限が通常1.5倍以上、好ましくは５倍以上、より好ましくは10倍以上、更に好ましくは25倍以上であり、上限は特に限定されないが、通常107倍以下、好ましくは106倍以下、より好ましくは105倍以下である。
【００２５】
また、本発明において、「当該分析物又はそのアナログとCFSとを接触させる」とは、分析物又はそのアナログとCFSとの接触が、前述したように、分子拡散によらず（依存せず）に、より高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液を、それよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液の下流に配置させて、電気泳動を行った場合、溶液中のより高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質がそれよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を追い越すことを利用して、分析物又はそのアナログと１種以上のCFSのうち、より高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質がそれよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を追い越すことによって生じることを意味する。即ち、本発明の工程(2)においては、細管内に配置された、分析物又はそのアナログを含有する溶液、１種以上のCFSを含む溶液及び、要すれば液体を放置することによって生じる分子拡散によって（依存して）これらを混合するのではなく、また、細管内でこれらを物理的に混合するのでもなく、溶液中の分析物又はそのアナログと溶液中のCFSとを電気泳動的に移動させながら接触させるのである。
上記したように、本発明の工程(2)は、分析物を又はそのアナログを含有する溶液とCFSを含む溶液、要すれば液体とが、分子拡散によって均一に混合される前であって、更にこれらを細管内で物理的に均一に混合することなく、言い換えれば、隣接するこれらの液−液界面を保持させたまま、分析物又はそのアナログ、又は／及びCFSを電気泳動的に濃縮させながら、溶液中の分析物又はそのアナログと溶液中のCFSとを電気泳動的に移動させながら接触させて当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体を形成させるものである。
【００２６】
本発明において、「当該細管に電圧を印加することによって、当該分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSを濃縮させながら、当該分析物又はそのアナログとCFSとを接触させる」とは、(1)上記した如き分析物又はそのアナログ、又は／及びCFSの濃縮と分析物又はそのアナログとCFSとの接触が、同時並行的に行われる場合、或いは(2)、上記した如き分析物又はそのアナログ、又は／及びCFSの濃縮が実質的に完了した後に分析物又はそのアナログとCFSとの接触が行われる場合、の両者を意味し、言うなれば分析物又はそのアナログとCFSとの接触が実質的に完了した後に分析物又はそのアナログ、又は／及びCFSの濃縮が行われる場合以外の場合を包含する。
【００２７】
本発明の工程(2)は、言い換えれば、分析物又はそのアナログを含有する溶液と１種以上のCFSを含有する溶液とが均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することにより、上記したように、当該分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSを濃縮させながら、当該分析物又はそのアナログとCFSとを接触させて当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体を形成させることのできる条件下で、当該細管に電圧を印加することにより実施し得る。
このような条件としては、具体的には、細管内で物質を濃縮する、所謂電気泳動濃縮法で用いられている条件である。
電気泳動濃縮法としては、例えば(1)Field Amplification Sample Stacking法(FASS)〔米国特許公開US2003-0057092 A1；Weiss, D.J., Saunders, K., Lunte, C.E. Electrophoresis 2001, 22, 59-65；Britz-McKibbin, P., Bebault, G.M., Chen, D.D.Y. Anal Chem. 2000, 72, 1729-1735；Ross, D., Locascio, L.E. Anal Chem. 2002, 71, 5137-5145等〕、(2)Field Amplification Sample Injection法（FASI）〔Chien, R.L et al. J. Chromatogr. 1991, 559, 141-148等〕、(3)等速電気泳動法（Isotachophoresis：ITP）〔Everaerts, F.M., Geurts, M. Mikkers, F.E.P., Verheggen, T.P.E.M J Chromatagr. 1976, 119, 129-155；Mikkers, F.E.P., Everaerts, F.M., Peek, J.A.F. J. Chromatogr. 1979, 168, 293-315；Mikkers, F.E.P., Everaerts, F.M., Peek, J.A.F. J. Chromatogr. 1979, 168, 317-332；Hirokawa, T, Okamoto, H. Ikuta, N., and Gas, B., Analytical Sciences 2001, Vol. 17 Supplement il85等〕、(4)Isoelectric Focusing法（IF）〔Wehr T, et al. Am. Biotechnol. Lab. 1990, 8, 22；Kilar F. et al., Electrophoresis 1989, 10, 23-29等〕、(5)Large-volume sample stacking法(LVSS)〔Siri,N. et al., J.Chormatogr.B, (2003), 793, 151-157等〕、(6)pHジャンクション法（pH-mediated stacking）〔P.Britz-McKibbin et al, 2000, Anal.Chem., 72, 1242, P. Britz-McKibbin et al, 2002, Anal. Chem., 74, 3736〕、(7)スウィーピング法（stacking micellar electrokinetic chromatography）〔J.P.Quirino et al.,1998, Science, 282, 465, J.P.Quirino et al., 1999, Anal. Chem., 71, 1638, Y. Sera et al., 2001, Electrophoresis, 22, 3509〕等の、細管内で電気泳動移動度の差異を利用する電気泳動濃縮法等が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２８】
上記した如き電気泳動濃縮法のなかでも、例えばITP、FASSが好ましく、ITPが特に好ましい。
【００２９】
尚、ITPは、目的物質よりも電気泳動速度の速いリーディングイオンを含む泳動媒体（リーディングバッファー）と、目的物質よりも電気泳動速度の遅いトレーリングイオンを含む泳動媒体（トレーリングバッファー）の間に目的の物質が挟まれて泳動される際に濃縮されるという原理に基づくものである。
従って、本発明の工程(2)をITPにより行う場合には、少なくとも、分析物又はそのアナログ、又は／及び１種以上のCFSよりも電気泳動速度の速いリーディングイオンを含む泳動媒体（リーディングバッファー）、分析物又はそのアナログ、又は／及び１種以上のCFSよりも電気泳動速度の遅いトレーリングイオンを含む泳動媒体（トレーリングバッファー）が必要であり、これらの構成要件も本発明の「分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSが濃縮される条件」に含まれる。
尚、リーディングバッファーは、分析物又はそのアナログを含有する溶液及び１種以上のCFSを含む溶液のうち、細管の最下流に配置された溶液の更に下流側に配置され、トレーリングバッファーは、分析物又はそのアナログを含有する溶液及び１種以上のCFSを含む溶液のうち、細管の最上流に配置された溶液の更に上流側に配置される。
上記において、リーディングイオンとしては、分析物又はそのアナログ、又は／及び１種以上のCFSよりも電気泳動速度の速いイオンであればよく、通常この分野で使用されるものから適宜選択して使用されるが、例えばCl−等が挙げられる。また、リーディングイオンの使用濃度も、通常この分野で用いられる範囲から適宜選択すればよく、例えば通常１μM〜10M、好ましくは100μM〜１M、より好ましくは１mM〜500mMである。
このようなリーディングイオンを含むリーディングバッファーも、通常この分野で使用されるものから適宜選択して使用され、例えばグッド緩衝液、Tris緩衝液、ホウ酸緩衝液、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、イミダゾール緩衝液、グリシン緩衝液等が挙げられる。その使用濃度及びｐHは、通常この分野で用いられる範囲から適宜選択すればよく、使用濃度は、例えば通常１μM〜10M、好ましくは100μM〜１M、より好ましくは１mM〜500mMであり、ｐHは、通常２〜12、好ましくは４〜10、より好ましくは６〜９である。である。
上記において、トレーリングイオンとしては、分析物又はそのアナログ、又は／及び１種以上のCFSよりも電気泳動速度の遅いイオンであればよく、通常この分野で使用されるものから適宜選択して使用されるが、例えばHEPES、TAPS、MES、MOPS等のグッド緩衝液、グリシン、スレオニン等のアミノ酸等が挙げられる。また、トレーリングイオンの使用濃度も、通常この分野で用いられる範囲から適宜選択すればよく、例えば通常１μM〜10M、好ましくは100μM〜１M、より好ましくは１mM〜500mMである。
このようなトレーリングイオンを含むトレーリングバッファーも、通常この分野で使用されるものから適宜選択して使用され、例えばグッド緩衝液、Tris緩衝液、ホウ酸緩衝液、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、イミダゾール緩衝液、グリシン緩衝液等が挙げられる。その使用濃度及びｐHは、通常この分野で用いられる範囲から適宜選択すればよく、使用濃度は、例えば通常１μM〜10M、好ましくは100μM〜１M、より好ましくは１mM〜500mMであり、ｐHは、通常２〜12、好ましくは４〜10、より好ましくは６〜９である。
尚、上記した如き条件（リーディングイオン、リーディングバッファー、トレーリングイオン、トレーリングバッファー等）、その他の試薬類、操作方法、その他の条件等は、前述した如き文献等の記載に準じて適宜選択することができる。
【００３０】
FASS、FASI及びLVSSは、目的物質が、目的物質の存在する媒質と目的物質の存在する媒質よりも高い電気伝導度を有する媒質との界面に達した際に、目的物質の電気泳動速度が遅くなり、目的物質が濃縮されるという原理に基づくものである。
従って、本発明の工程(2)をFASS、LVSS又はFASIにより行う場合には、分析物又はそのアナログを含有する溶液及び１種以上のCFSを含む溶液のうち、少なくとも１種の溶液よりも他の少なくとも１種の溶液が高い電気伝導度を有するようにするか、或いは、分析物又はそのアナログを含有する溶液又は／及び１種以上のCFSを含む溶液よりも高い電気伝導度を有する泳動媒体（高電気伝導度泳動媒体）を別途使用する必要があり、これらの構成要件も本発明の「分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSが濃縮される条件」に含まれる。
尚、高電気伝導度泳動媒体は、分析物又はそのアナログを含有する溶液及び１種以上のCFSを含む溶液のうち、細管の最下流に配置された溶液の更に下流側に配置される。
また、高電気伝導度泳動媒体は、分析物又はそのアナログを含有する溶液又は／及び１種以上のCFSを含む溶液よりも塩濃度が高いものであればよく、通常この分野で使用されるものから適宜選択して使用され、例えばNaCl、KCｌ等を含む泳動媒体等が挙げられる。泳動媒体としては、例えばグッド緩衝液、Tris緩衝液、ホウ酸緩衝液、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、イミダゾール緩衝液、グリシン緩衝液等が挙げられる。その使用濃度及びｐHは、通常この分野で用いられる範囲から適宜選択すればよく、使用濃度は、例えば通常１μM〜10M、好ましくは100μM〜１M、より好ましくは１mM〜500mMであり、ｐHは、通常２〜12、好ましくは４〜10、より好ましくは６〜９である。
尚、上記した如き条件（高電気伝導度泳動媒体等）、その他の試薬類、操作方法、その他の条件等は、等は、前述した如き文献等の記載に準じて適宜選択することができる。
【００３１】
IFは，種々の等電点をもつ両性物質の溶液でチャンネルを満たし、電圧を印加してチャンネル内にpH勾配を形成させ，目的物質がその等電点に対応したpH領域まで移動してそこで濃縮されるという原理に基づくものである。
従って、本発明の工程(2)をIFにより行う場合には、少なくとも、細管内にpH勾配を形成させ得る泳動媒体が必要であり、これらの構成要件も本発明の「分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSが濃縮される条件」に含まれる。
上記において、細管内にpH勾配を形成させ得る泳動媒体としては、電界印加により細管内にpH勾配を形成させ得るものであればよく、通常この分野で使用されるものから適宜選択して使用される。このような泳動媒体としては、例えばアンフォライト等の細管内にpH勾配を形成させ得る物質を含有する泳動媒体が挙げられる。泳動媒体としては、例えばグッド緩衝液、Tris緩衝液、ホウ酸緩衝液、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、イミダゾール緩衝液、グリシン緩衝液等が挙げられる。その使用濃度及びｐHも、通常この分野で用いられる範囲から適宜選択すればよく、使用濃度は、例えば通常１μM〜10M、好ましくは100μM〜１M、より好ましくは１mM〜500mMである。
尚、上記した如き条件（細管内にpH勾配を形成させ得る物質を含有する泳動媒体等）、その他の試薬類、操作方法、その他の条件等は、等は、前述した如き文献等の記載に準じて適宜選択することができる。
【００３２】
pHジャンクション法は、酸性又は弱酸性の試料領域（ゾーン）をアルカリ性の泳動媒体中に形成させ、試料とアルカリ性の泳動媒体との境界面で試料中に含まれる目的物質の濃縮を行うものである。
従って、本発明の工程(2)をpHジャンクション法により行う場合には、少なくとも、試料を含有する溶液よりもアルカリ性のpHを有する泳動媒体が必要であり、これらの構成要件も本発明の「分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSが濃縮される条件」に含まれる。
上記において、アルカリ性のpHを有する泳動媒体としては、電界印加により細管内に試料を含有する溶液と当該泳動媒体との間にpHの異なる境界面を形成させ得るものであればよく、通常この分野で使用されるものから適宜選択して使用される。このような泳動媒体としては、例えばHEPES、TAPS、MES、MOPS等のグッド緩衝液、ホウ酸緩衝液、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、イミダゾール緩衝液、グリシン緩衝液等が挙げられる。その使用濃度及びｐHは、通常この分野で用いられる範囲から適宜選択すればよく、使用濃度は、例えば通常１μM〜10M、好ましくは100μM〜１M、より好ましくは１mM〜500mMであり、ｐHは、通常７〜11、好ましくは７〜10、より好ましくは７〜９である。
尚、上記した如き条件（アルカリ性のpHを有する泳動媒体等）、その他の試薬類、操作方法、その他の条件等は、等は、前述した如き文献等の記載に準じて適宜選択することができる。
【００３３】
スウィーピング法は、以下の如き原理に基づくものである。
即ち、目的物質を含む溶液ゾーンの上流側に、ミセルを形成する荷電物質を含む泳動媒体を配置させる。ここに電界を印加すると、形成されたミセルが目的物質を追い越しながら目的物質とのミセル複合体が形成される。このミセル複合体が目的物質の存在する媒質と目的物質の存在する媒質よりも高い電気伝導度を有する媒質との界面に達した際に、目的物質の電気泳動速度が遅くなり、目的物質が濃縮される。
従って、本発明の工程(2)をスウィーピング法により行う場合には、分析物又はそのアナログを含有する溶液及び１種以上のCFSを含む溶液のうち、少なくとも１種の溶液よりも他の少なくとも１種の溶液が高い電気伝導度を有するようにするか、或いは、分析物又はそのアナログを含有する溶液又は／及び１種以上のCFSを含む溶液よりも高い電気伝導度を有する泳動媒体（高電気伝導度泳動媒体）を別途使用する必要があり、また、分析物又はそのアナログ、又は／及び１種以上のCFSよりも電気泳動速度の速いミセルを形成する荷電物質を含み、且つ高い電気伝導度を有する溶液（或いは泳動媒体）よりも低い電気伝導度を有する泳動媒体が必要であり、これらの構成要件も本発明の「分析物又は／及び少なくとも１種のCFSが濃縮される条件」に含まれる。
尚、高電気伝導度泳動媒体は、分析物又はそのアナログを含有する溶液及び１種以上のCFSを含む溶液のうち、細管の最下流に配置された溶液の更に下流側に配置され、ミセルを形成する荷電物質を含む泳動媒体は、分析物又はそのアナログを含有する溶液及び１種以上のCFSを含む溶液のうち、細管の最上流に配置された溶液の更に上流側に配置される。
上記において、ミセルを形成する荷電物質としては、分析物又はそのアナログ、又は／及び１種以上のCFSよりも電気泳動速度の速いミセルを形成する荷電物質であればよく、通常この分野で使用されるものから適宜選択して使用されるが、例えばSDS等の界面活性剤が挙げられる。また、当該荷電物質の使用濃度も、通常この分野で用いられる範囲から適宜選択すればよく、限界ミセル濃度を超える量が使用され、より具体的には例えば通常１μM〜10M、好ましくは100μM〜１M、より好ましくは１mM〜500mMである。
泳動媒体も、通常この分野で使用されるものから適宜選択して使用され、例えばグッド緩衝液、Tris緩衝液、ホウ酸緩衝液、リン酸緩衝液、ヒスチジン緩衝液、イミダゾール緩衝液、グリシン緩衝液等が挙げられる。その使用濃度及びｐHは、通常この分野で用いられる範囲から適宜選択すればよく、使用濃度は、例えば通常１μM〜10M、好ましくは100μM〜１M、より好ましくは１mM〜500mMであり、ｐHは、通常２〜12、好ましくは４〜10、より好ましくは６〜９である。
尚、上記した如き条件〔ミセルを形成する荷電物質、泳動媒体等〕、その他の試薬類、操作方法、その他の条件等は、等は、前述した如き文献等の記載に準じて適宜選択することができる。
【００３４】
工程(2)における、印加電圧は、分析物又はそのアナログ、又は／及びCFSが充分に濃縮され、且つ分析物又はそのアナログとCFSとの複合体が充分に形成される範囲であればよく、通常この分野で用いられている自体公知の方法に従い適宜選択される。より具体的には、電圧は、下限が通常５V／cm以上、好ましくは10V／cm以上、より好ましくは50V／cm以上、更に好ましくは500V／cm以上、特に好ましくは1000V／cm以上であり、上限が通常10000V／cm以下、好ましくは5000V/cm以下、より好ましくは2000V／cm以下の範囲の電界強度となるように印加される。
また、その他の反応条件（例えばpH、温度、時間等）は、分析物又はそのアナログ、又は／及びCFSの濃縮と、分析物又はそのアナログとCFSとの複合体の形成を妨げない範囲であればよい。
具体的には、分析物又はそのアナログとCFSの性質により異なるため一概には言えないが、pHは下限が通常２以上、好ましくは５以上であり、上限が通常10以下、好ましくは９以下であり、反応温度は、下限が通常０℃以上、好ましくは５℃以上、より好ましくは10℃以上であり、上限が通常50℃以下、好ましくは40℃以下、より好ましくは30℃以下である。反応時間は、使用するCFSの分析物又はそのアナログに対する結合定数によって異なり、結合定数が低い場合は比較的長い反応時間が必要であり、また、結合定数が高い場合は比較的短い反応時間でよい。より具体的には、例えば下限が通常１分以上、好ましくは３分以上、より好ましくは５分以上であり、上限が24時間以下、好ましくは12時間以下、より好ましくは１時間以下、更に好ましくは30分以下である。
【００３５】
１−３．細管（チャネル）
本発明において用いられる細管（チャネル）としては、キャピラリー電気泳動法、キャピラリーチップ電気泳動法等の通常この分野で用いられるものであればよく、特に限定されない。
本発明で用いられる細管（チャネル）の材質としては、通常この分野で用いられているものであればよく、分析物又はそのアナログと１種以上のCFSとを接触させて、最終的に分析物又はそのアナログと１種以上のCFSとの複合体を形成することが出来るものであればよく、特に限定されない。細管（チャネル）の材質の具体例としては、例えばガラス，石英，シリコン等のシリカ系化合物、例えばサイクリックオレフィンコポリマー(COC)，サイクリックオレフィンポリマー（COP），ポリメチルメタクリレート，ポリメチルシロキサン，ポリビニルクロライド，ポリウレタン，ポリスチレン，ポリスルホン，ポリカーボネート，ポリテトラフルオロエチレン等の合成ポリマー等が挙げられる。また、細管（チャネル）の内径及び長さは、分析物又はそのアナログ、又は／及びCFSの濃縮と、分析物又はそのアナログとCFSとの複合体の形成を充分に行い得るものであればよく特に限定されないが、内径は、通常１〜1000μm、好ましくは１〜200μm、より好ましくは１〜100μmであり、長さは、通常0.1mm〜100cm、好ましくは0.1mm〜20cm、より好ましくは0.1mm〜10cmである。
【００３６】
また、本発明の工程(2)は、通常、上記した如き細管内に泳動媒体が充填された状態で実施される。泳動媒体としては、泳動用緩衝液又は充填剤を含有する当該泳動用緩衝液等が挙げられる。尚、泳動媒体は、１種でも２種以上組み合わせて用いても何れでもよい。また、細管内に泳動媒体を導入する方法としては、上記した如き分析物又はそのアナログを含有する溶液と１種以上のCFSを含む溶液とを細管内に導入する方法が挙げられ、(1)分析物又はそのアナログを含有する溶液又は／及びCFSを含む溶液を細管内に導入する前に細管内に泳動媒体を導入しても、(2)分析物又はそのアナログを含有する溶液又は／及びCFSを含む溶液と同時に細管内に導入しても、また、(3)分析物又はそのアナログを含有する溶液又は／及びCFSを含む溶液を細管内に導入した後に細管内に泳動媒体を導入しても何れでも良い。
このような泳動用緩衝液としては、通常この分野で用いられているものであればよく、特に限定されないが、具体的には、例えばトリス緩衝液，リン酸緩衝液，ベロナール緩衝液，ホウ酸緩衝液，グッド緩衝液，ＳＳＣ緩衝液，ＴＢＥ緩衝液，ＴＡＥ緩衝液等のハイブリダイゼーション法，免疫法等の分野で用いられる緩衝液等が挙げられろ。これら緩衝液の濃度としては、通常0.1mM〜10M、好ましくは１mM〜５M、より好ましくは５mM〜１Mである。また、当該緩衝液のpHとしては、物質の分離に悪影響を及ぼさないものであればよいが、通常２〜13、好ましくは４〜11、より好ましくは５〜９である。尚、これら緩衝液は、１種でも２種以上組み合わせて用いても何れでもよい。
細管に充填される充填剤（ポリマー）としては、通常この分野で用いられているものであればよく、特に限定されない。充填剤（ポリマー）の具体例としては、例えばポリエチレンオキサイド（ポリエチレングリコール），ポリプロピレンオキサイド等のポリエーテル類、例えばポリエチレンイミン等のポリアルキレンイミン、例えばポリアクリル酸，ポリアクリル酸エステル，ポリアクリル酸メチル等のポリアクリル酸系ポリマー、例えばポリアクリルアミド，ポリメタクリルアミド等のポリアミド系ポリマー、例えばポリメタクリル酸，ポリメタクリル酸エステル，ポリメタクリル酸メチル等のポリメタクリル酸系ポリマー、例えばポリビニルアセテート，ポリビニルピロリドン，ポリビニルオキサゾリドン等のポリビニル系ポリマー、例えばプルラン，エルシナン，キサンタン，デキストラン，グアガム等の水溶性ヒドロキシルポリマー、例えばメチルセルロース，ヒドロキシエチルセルロース，ヒドロキシプロピルセルロース等の水溶性セルロース化合物、これらの誘導体、及びこれらポリマーを構成するモノマーユニットを複数種含有するコポリマー等が挙げらる。尚、これら充填剤は、１種でも２種以上組み合わせて用いても何れでもよい。
また、上記した如き充填剤の分子量としては、通常500Da〜6000kDa、好ましくは１〜1000kDa、より好ましくは50〜500kDaである。
上記した如き充填剤の使用濃度は、通常この分野で用いられている範囲から適宜選択すればよく、通常0.01〜40％（W/V）、好ましくは0.01〜20％（W/V）、より好ましくは0.1〜10％（W/V）である。
尚、上記充填剤を泳動用緩衝液に添加した際の、泳動用緩衝液の粘度は、通常１〜1000センチポアズ、好ましくは１〜200センチポアズ、より好ましくは１〜10センチポアズである。
【００３７】
１−４．分析物、試料、アナログ及び分析物又はアナログを含有する溶液
（１）分析物
本発明における分析物としては、例えばヌクレオチド鎖（オリゴヌクレオチド鎖、ポリヌクレオチド鎖）；染色体；ペプチド鎖（例えばＣ−ペプチド、アンジオテンシンＩ等）、タンパク質〔例えばプロカルシトニン、免疫グロブリンＡ（IgA），免疫グロブリンＥ（IgE），免疫グロブリンＧ（IgG），免疫グロブリンＭ（IgM），免疫グロブリンＤ（IgD），β2−ミクログロブリン、アルブミン、これらの分解産物、フェリチン等の血清タンパク質〕；酵素〔例えばアミラーゼ（例えば膵型，唾液腺型，Ｘ型等）、アルカリホスファターゼ（例えば肝性，骨性，胎盤性，小腸性等）、酸性ホスファターゼ（例えばPAP等）、γ−グルタミルトランスファラーゼ（例えば腎性，膵性，肝性等）、リパーゼ（例えば膵型，胃型等）、クレアチンキナーゼ（例えばCK-1，CK-2，，mCK等）、乳酸脱水素酵素（例えばLDH1〜LDH5等）、グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ（例えばASTm，ASTs等）、グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（例えばALTm，ALTs等）、コリンエステラーゼ（例えばChE1〜ChE5等）、ロイシンアミノペプチダーゼ（例えばC-LAP，AA，CAP等）、レニン、プロテインキナーゼ、チロシンキナーゼ等〕；例えば細菌（例えば結核菌，肺炎球菌，ジフテリア菌，髄膜炎菌，淋菌，ブドウ球菌，レンサ球菌，腸内細菌，大腸菌，ヘリコバクター・ピロリ等）、ウイルス（例えばルベラウイルス，ヘルペスウイルス，肝炎ウイルス，ＡＴＬウイルス，ＡＩＤＳウイルス，インフルエンザウイルス，アデノウイルス,エンテロウイルス，ポリオウイルス，ＥＢウイルス，ＨＡＶ，ＨＢＶ，ＨＣＶ，ＨＩＶ，ＨＴＬＶ等）、真菌（例えばカンジダ，クリプトコッカス等）、スピロヘータ（例えばレプトスピラ，梅毒トレポネーマ等）、クラミジア、マイコプラズマ等の微生物；当該微生物に由来するタンパク質又はペプチド或いは糖鎖抗原；気管支喘息，アレルギー性鼻炎，アトピー性皮膚炎等のアレルギーの原因となる各種アレルゲン（例えばハウスダスト、例えばコナヒョウダニ，ヤケヒョウダニ等のダニ類、例えばスギ、ヒノキ、スズメノヒエ，ブタクサ，オオアワガエリ，ハルガヤ，ライムギ等の花粉、例えばネコ，イヌ，カニ等の動物、例えば米，卵白等の食物、真菌、昆虫、木材、薬剤、化学物質等に由来するアレルゲン等）；脂質（例えばリポタンパク質等）；プロテアーゼ（例えばトリプシン，プラスミン，セリンプロテアーゼ等）；腫瘍マーカータンパク抗原（例えばＰＳＡ，ＰＧＩ，ＰＧII等）；糖鎖抗原〔例えばＡＦＰ（例えばL1からL3等）、ｈＣＧ（ｈＣＧファミリー）、トランスフェリン、ＩｇＧ、サイログロブリン、Decay-accelerating-factor（ＤＡＦ）、癌胎児性抗原（例えばCEA，NCA，NCA-2，NFA等）、ＣＡ１９−９、ＰＩＶＫＡ−ＩＩ、ＣＡ１２５、前立腺特異抗原、癌細胞が産生する特殊な糖鎖を有する腫瘍マーカー糖鎖抗原、ＡＢＯ糖鎖抗原等〕；糖鎖（例えばヒアルロン酸、β−グルカン、上記糖鎖抗原等が有する糖鎖等）；糖鎖に結合するタンパク質（例えばヒアルロン酸結合タンパク、βグルカン結合タンパク等）；レクチン（例えばコンカナバリンＡ、レンズマメレクチン、インゲンマメレクチン、ダツラレクチン、小麦胚芽レクチン等）；リン脂質（例えばカルジオピリン等）；リポ多糖（例えばエンドトキシン等）；化学物質（例えばＰＴＨ，Ｔ３,Ｔ４，ＴＳＨ，インシュリン，ＬＨ，ＦＳＨ，プロラクチン等のホルモン、例えばトリブチルスズ，ノニルフェノール，４−オクチルフェノール，フタル酸ジ−ｎ−ブチル，フタル酸ジシクロヘキシル，ベンゾフェノン，オクタクロロスチレン，フタル酸ジ−２−エチルヘキシル等の環境ホルモン）；レセプター（例えばエストロゲン，ＴＳＨ等に対するレセプター）；リガンド（例えばエストロゲン，ＴＳＨ等）；及びこれらに対する抗体等が挙げられる。
具体的には、本発明の方法は、上記したなかでも、糖鎖構造が異なる糖タンパク質、ヌクレオチド鎖（オリゴヌクレオチド鎖、ポリヌクレオチド鎖）、ペプチド鎖（ポリペプチドを含む）等の分析（定量）に有用であり、糖鎖構造が異なる糖タンパク質に特に有用である。尚、糖鎖構造が異なる糖タンパク質は、癌などある特定の疾患において糖鎖構造が変化することが知られており、臨床検査上の有用性が報告されているので、本発明の方法を用いることにより臨床検査上の有用性を検証することも可能である。また、ヌクレオチド鎖（オリゴヌクレオチド鎖、ポリヌクレオチド鎖）やペプチド鎖（ポリペプチドを含む）等の微小な変異・置換により生じた変異体と野生体の分離も、分子生物学や分子臨床検査の分野では重要な分析対象物質と考えられているので、本発明の方法を用いてこれらを分析（定量）することにより臨床検査上重要な因子等が見出される可能性も高い。
【００３８】
（２）分析物を含む試料
上記した如き本発明に係る分析物を含む試料としては、例えば血清，血漿，髄液，滑液，リンパ液等の体液、尿，糞便のような排泄物、喀たん，膿，皮膚由来物等の生体由来試料、例えば食品，飲料，水道水，海水，湖沼水，河川水，工場廃液，半導体用洗浄水，医療器具等を洗浄した後の洗浄液等の環境試料及びこれらを水や通常この分野で用いられている例えばトリス緩衝液、リン酸緩衝液、ベロナール緩衝液、ホウ酸緩衝液、グッド緩衝液等の緩衝液等に適宜溶解させて再構成して得られた処理物等が挙げられる。尚、本発明に係る試料には、化学的に合成された上記した如き分析物を含有するものも包含される。
【００３９】
（３）アナログ（標識アナログ及び反応向上アナログ）
本発明で用いられるアナログとは、分析目的である、試料中の分析物に結合するCFSが結合し得る物質、言い換えれば、当該試料中の分析物に存在する、CFSが結合し得る結合部位と同じ結合部位を有する物質である。
このような物質としては、例えば分析目的である試料中の分析物と同じもの、試料中の分析物の構造の一部を修飾、改変、変性、除去等したもの（所謂アナログ）等が挙げられ、具体的には、例えば分析目的である試料中の分析物の一部に変異を導入した組み換え蛋白質、分析目的である試料中の分析物のペプチド配列の一部を改変したペプチド、分析目的である試料中の分析物のヌクレオチド配列の一部を改変したヌクレオチド鎖等が挙げられる。尚、分析目的である試料中の分析物の具体例は、前述した通りである。
尚、本発明で用いられる標識アナログ及び反応向上アナログは、上記した如き物質に、標識物質又は反応向上物質を結合させたものであり、標識物質及び反応向上物質の具体例、好ましい態様等は後述した通りである。また、上記した如き物質に標識物質又は反応向上物質を結合させる方法は、後述する反応向上物質とCFSとを結合する方法や標識物質によりCFSを標識する方法と同様の方法により行えばよい。
アナログ（標識アナログ又は反応向上アナログ）の使用量は、使用するアナログ（標識アナログ又は反応向上アナログ）の種類、CFSの種類や使用濃度等により一概に言えない。
より具体的には、アナログを含有する溶液（例えば分析物及びアナログを含有する溶液、アナログを含有する溶液、アナログ及びCFSとを含有する溶液）中のアナログ（標識アナログ又は反応向上アナログ）の使用量が、下限は通常10pM以上、好ましくは１nM以上、より好ましくは100nM以上であり、上限は通常10μM以下、好ましくは1μM以下、より好ましくは500nM以下となるように、上記した如き溶液中にアナログ（標識アナログ又は反応向上アナログ）を含有させればよい。
【００４０】
（４）分析物又はアナログを含有する溶液
本発明における分析物又はそのアナログを含有する溶液とは、上記した如き本発明に係る分析物（それを含む試料）又はアナログ（標識アナログ又は反応向上アナログ）を含む溶液を意味する。
このような溶液としては、(a)上記した如き分析物を含む試料自体、(b)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液（言い換えれば分析物と１種以上のCFSとの複合体を含む溶液）、(c)アナログ（標識アナログ又は反応向上アナログ）を含有する溶液、(d)分析物を含む試料とアナログ（標識アナログ又は反応向上アナログ）とを含有する溶液（言い換えれば分析物とアナログとを含む溶液）、(e)アナログ（標識アナログ又は反応向上アナログ）と１種以上のCFSとを含有する溶液（言い換えればアナログと１種以上のCFSとの複合体を含む溶液）、(f)分析物を含む試料、アナログ（標識アナログ又は反応向上アナログ）及び１種以上のCFSを含む溶液等が挙げられる。
尚、上記の溶液(b)又は(e)としては、例えば、本発明において、２種以上のCFSを使用する場合には、分析物又はそのアナログと最終的に結合する全てのCFSのうちの一部のCFS（全CFSの一部）と分析物又はそのアナログとの複合体（中間複合体）、言い換えれば、最終的に形成される分析物又はそのアナログと２種以上のCFSとの複合体を構成するCFSよりも少ない数のCFSと分析物又はそのアナログとの複合体（中間複合体）、を含有する溶液が具体的に挙げられる。
即ち、例えばCFSを２種使用する場合にあっては、１種のCFSと分析物又はそのアナログとの複合体（中間複合体）を含有する溶液であり、例えばCFSを３種使用する場合にあっては、１種のCFSと分析物又はそのアナログとの複合体（中間複合体）を含有する溶液、及び２種のCFSと分析物又はそのアナログとの複合体（中間複合体）を含有する溶液である（尚、４種以上のCFSを使用する場合も、これらと同様の考え方である。）。
より具体的には、例えば後述するように、CFSとして標識物質及び反応向上物質が結合していないCFSと反応向上CFSとを組み合わせて使用する場合には、分析物と当該CFSとの複合体（中間複合体）を含む溶液及び分析物と反応向上CFSとの複合体（中間複合体）を含む溶液が上記した如き溶液(b)に相当し、CFSとして標識CFSと反応向上CFSとを組み合わせて使用する場合には、分析物と標識CFSとの複合体（中間複合体）を含む溶液及び分析物と反応向上CFSとの複合体（中間複合体）を含む溶液が上記した如き溶液(b)に相当する。また、CFSとして、標識物質及び反応向上物質が結合していないCFSと標識反応向上CFSとを組み合わせて使用する場合には、分析物と当該CFSとの複合体（中間複合体）を含む溶液及び分析物と標識反応向上CFSとの複合体（中間複合体）を含む溶液が上記した如き溶液(b)に相当する。
尚、上記において、分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液は、通常は、前述した如き分析物を含む試料（CFSは含まない）と、後述するCFSを含む溶液とを適宜混合して得られた反応液が一般的である。
上記の溶液(e)としては、より具体的には、例えば、標識アナログ又は反応向上アナログを使用する場合であって、２種以上のCFSを使用する場合には、上記と同様に、標識アナログ又は反応向上アナログと最終的に結合する全てのCFSのうちの一部のCFS（全CFSの一部）と標識アナログ又は反応向上アナログとの複合体（中間複合体）、言い換えれば、最終的に形成される標識アナログ又は反応向上アナログと２種以上のCFSとの複合体を構成するCFSよりも少ない数のCFSと標識アナログ又はアナログとの複合体（中間複合体）、を含有する溶液が挙げられる。尚、上記において、アナログ（標識アナログ又は反応向上アナログ）とを含有する溶液は、通常は、標識アナログ又は反応向上アナログを含む溶液と後述するCFSを含む溶液とを適宜混合して得られた反応液が一般的である。
また、上記の溶液(d)としては、例えば、試料中の分析物と、標識物質により標識されたアナログ（標識アナログ）又は反応向上物質が結合したアナログ（反応向上アナログ）とを含有する溶液が挙げられる。尚、分析物を含む試料とアナログとを含有する溶液は、通常は、分析物を含む試料（CFSは含まない）と、アナログを含む溶液とを適宜混合して得られた混合液が一般的である。
上記の溶液(f)としては、より具体的には、例えば、標識アナログ又は反応向上アナログを使用する場合であって、２種以上のCFSを使用する場合には、上記と同様に、分析物又は／及び標識アナログ（又は反応向上アナログ）と最終的に結合する全てのCFSのうちの一部のCFS（全CFSの一部）と分析物又は／及び標識アナログ（又は反応向上アナログ）との複合体（中間複合体）、言い換えれば、最終的に形成される分析物、又は／及び標識アナログ（又は反応向上アナログ）と２種以上のCFSとの複合体を構成するCFSよりも少ない数のCFSと分析物又は／及び標識アナログ（又は反応向上アナログ）との複合体（中間複合体）、を含有する溶液が挙げられる。尚、分析物を含む試料、アナログ（標識アナログ又は反応向上アナログ）及び１種以上のCFSを含む溶液は、通常は、前述した如き分析物を含む試料と、標識アナログ又は反応向上アナログを含む溶液、及び１種以上のCFSを含む溶液を適宜混合して得られた反応液が一般的である。
【００４１】
上記において、(a)分析物を含む試料は先述した通りである。また、溶液(b)〜(f)としては、分析物とCFSとの複合体又は／及びアナログ（標識アナログ又は反応向上アナログ）とCFSとの複合体の形成を妨げないものであれば良く、例えば水、緩衝液等が挙げられる。
このような緩衝液としては、通常pH５〜１１の範囲で緩衝作用を有し、例えばトリス緩衝液、グッド緩衝液、TE緩衝液、TAE緩衝液、TBE緩衝液、TBS緩衝液、リン酸塩緩衝液、ホウ酸塩緩衝液等、通常この分野で用いられるものが挙げられ、その使用濃度としては、通常１mM〜２Ｍ、好ましくは10mM〜１Ｍの範囲であり、また、pHは、通常５〜11、好ましくは５〜10、より好ましくは5.5〜8.5、更に好ましくは６〜８、特に好ましくは７付近である。
【００４２】
１−５．CFS及びそれを含む溶液
本発明において、「分析物又はそのアナログとの複合体を形成し得る物質（CFS）」とは、上記した如き分析物又はそのアナログに結合するか又は他のCFSを介して分析物又はそのアナログと結合して当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体、即ち分析物又はそのアナログとCFSと構成成分として含む複合体を形成し得る性質を有する物質を意味する。
このようなCFSとしては、例えば「抗原」−「抗体」間反応、「糖鎖」−「タンパク質」間反応、「糖鎖」−「レクチン」間反応、「酵素」−「インヒビター」間反応、「タンパク質」−「ペプチド鎖」間反応又は「染色体又はヌクレオチド鎖」−「ヌクレオチド鎖」間反応等の相互反応によって分析物又はそのアナログと結合するもの等を意味し、上記各組合せに於いて何れか一方が分析物又はそのアナログである場合、他の一方がこのCFSである。例えば、分析物又はそのアナログが「抗原」であるときはCFSは「抗体」であり、分析物又はそのアナログが「抗体」であるときはCFSは「抗原」である（以下、その他の上記各組合せにおいても同様である）。
より具体的には、例えばヌクレオチド鎖（オリゴヌクレオチド鎖、ポリヌクレオチド鎖）；染色体；ペプチド鎖（例えばＣ−ペプチド、アンジオテンシンＩ等）、タンパク質〔例えばプロカルシトニン、免疫グロブリンＡ（IgA），免疫グロブリンＥ（IgE），免疫グロブリンＧ（IgG），免疫グロブリンＭ（IgM），免疫グロブリンＤ（IgD），β2−ミクログロブリン、アルブミン、これらの分解産物、フェリチン等の血清タンパク質〕；酵素〔例えばアミラーゼ（例えば膵型，唾液腺型，Ｘ型等）、アルカリホスファターゼ（例えば肝性，骨性，胎盤性，小腸性等）、酸性ホスファターゼ（例えばPAP等）、γ−グルタミルトランスファラーゼ（例えば腎性，膵性，肝性等）、リパーゼ（例えば膵型，胃型等）、クレアチンキナーゼ（例えばCK-1，CK-2，，mCK等）、乳酸脱水素酵素（例えばLDH1〜LDH5等）、グルタミン酸オキザロ酢酸トランスアミナーゼ（例えばASTm，ASTs等）、グルタミン酸ピルビン酸トランスアミナーゼ（例えばALTm，ALTs等）、コリンエステラーゼ（例えばChE1〜ChE5等）、ロイシンアミノペプチダーゼ（例えばC-LAP，AA，CAP等）、レニン、プロテインキナーゼ、チロシンキナーゼ等〕；例えば細菌（例えば結核菌，肺炎球菌，ジフテリア菌，髄膜炎菌，淋菌，ブドウ球菌，レンサ球菌，腸内細菌，大腸菌，ヘリコバクター・ピロリ等）、ウイルス（例えばルベラウイルス，ヘルペスウイルス，肝炎ウイルス，ＡＴＬウイルス，ＡＩＤＳウイルス，インフルエンザウイルス，アデノウイルス,エンテロウイルス，ポリオウイルス，ＥＢウイルス，ＨＡＶ，ＨＢＶ，ＨＣＶ，ＨＩＶ，ＨＴＬＶ等）、真菌（例えばカンジダ，クリプトコッカス等）、スピロヘータ（例えばレプトスピラ，梅毒トレポネーマ等）、クラミジア、マイコプラズマ等の微生物；当該微生物に由来するタンパク質又はペプチド或いは糖鎖抗原；気管支喘息，アレルギー性鼻炎，アトピー性皮膚炎等のアレルギーの原因となる各種アレルゲン（例えばハウスダスト、例えばコナヒョウダニ，ヤケヒョウダニ等のダニ類、例えばスギ、ヒノキ、スズメノヒエ，ブタクサ，オオアワガエリ，ハルガヤ，ライムギ等の花粉、例えばネコ，イヌ，カニ等の動物、例えば米，卵白等の食物、真菌、昆虫、木材、薬剤、化学物質等に由来するアレルゲン等）；脂質（例えばリポタンパク質等）；プロテアーゼ（例えばトリプシン，プラスミン，セリンプロテアーゼ等）；腫瘍マーカータンパク抗原（例えばＰＳＡ，ＰＧＩ，ＰＧII等）；糖鎖抗原〔例えばＡＦＰ（例えばL1からL3等）、ｈＣＧ（ｈＣＧファミリー）、トランスフェリン、ＩｇＧ、サイログロブリン、Decay-accelerating-factor（ＤＡＦ）、癌胎児性抗原（例えばCEA，NCA，NCA-2，NFA等）、ＣＡ１９−９、ＰＩＶＫＡ−ＩＩ、ＣＡ１２５、前立腺特異抗原、癌細胞が産生する特殊な糖鎖を有する腫瘍マーカー糖鎖抗原、ＡＢＯ糖鎖抗原等〕；糖鎖（例えばヒアルロン酸、β−グルカン、上記糖鎖抗原等が有する糖鎖等）；糖鎖に結合するタンパク質（例えばヒアルロン酸結合タンパク、βグルカン結合タンパク等）；レクチン（例えばコンカナバリンＡ、レンズマメレクチン、インゲンマメレクチン、ダツラレクチン、小麦胚芽レクチン等）；リン脂質（例えばカルジオピリン等）；リポ多糖（例えばエンドトキシン等）；化学物質（例えばＰＴＨ，Ｔ３,Ｔ４，ＴＳＨ，インシュリン，ＬＨ，ＦＳＨ，プロラクチン等のホルモン、例えばトリブチルスズ，ノニルフェノール，４−オクチルフェノール，フタル酸ジ−ｎ−ブチル，フタル酸ジシクロヘキシル，ベンゾフェノン，オクタクロロスチレン，フタル酸ジ−２−エチルヘキシル等の環境ホルモン）；レセプター（例えばエストロゲン，ＴＳＨ等に対するレセプター）；リガンド（例えばエストロゲン，ＴＳＨ等）；及びこれらに対する抗体等が挙げられる。尚、本発明に於いて用いられる抗体には、パパインやペプシン等の蛋白質分解酵素、或いは化学的分解により生じるＦａｂ、Ｆ（ａｂ'）２フラグメント等の分解産物も包含される。
上記した如きCFSは、１種又は２種以上適宜組み合わせて用いても良い。
尚、２種以上のCFSを組み合わせて使用（併用）する場合、分析物又はそのアナログと２種以上のCFSとの複合体を形成し得るものであれば、それぞれのCFSの結合部位は特に限定されない。このようなCFSの結合部位としては、例えば２種以上のCFSの結合部位が全て分析物又はそのアナログ上のみに存在する場合〔結合形態(1)〕、２種以上のCFSのうち、少なくとも１種のCFS（例えばCFS Ａ）の結合部位は分析物又はそのアナログ上のみに存在し、その他の少なくとも１種のCFS（例えばCFS Ｂ）の結合部位は分析物又はそのアナログとCFS Ａとの複合体が形成されたことによって新たに生じる部位に存在する場合〔結合形態(2)〕、２種以上のCFSのうち、少なくとも１種のCFS（例えばCFS Ａ）の結合部位は分析物又はそのアナログ上のみに存在し、その他の少なくとも１種のCFS（例えばCFS Ｂ）の結合部位はCFS Ａ上のみに存在する場合〔結合形態(3)〕等が挙げられる。なかでも、２種以上のCFSの結合部位は、それぞれ異なるものであるのが好ましい。尚、上記結合形態(2)において、新たに生じる部位に特異的に結合する性質を有するもの（CFS）としては、例えば分析物又はそのアナログとCFSとの複合体を認識してこれに結合し得る抗体、ペプチド鎖、ヌクレオチド鎖等が挙げられる。
【００４３】
上記した如きCFSとしては、「抗原」−「抗体」間反応或いは「糖鎖−タンパク質」間反応によって分析物又はそのアナログと結合するものが好ましい。具体的には、分析物又はそのアナログに対する抗体、又は分析物又はそのアナログが結合する抗原、或いは分析物又はそのアナログに結合するタンパク質が好ましく、分析物又はそのアナログに対する抗体、或いは分析物又はそのアナログに結合するタンパク質がより好ましい。
【００４４】
上記した如きCFSには、標識物質又は／及び分析物又はそのアナログの電気泳動移動度を変化させ得る物質（以下、反応向上物質と略記する）を結合させて、(i)分析物又はそのアナログとの複合体を形成し得且つ分析物又はそのアナログの電気泳動移動度を変化させ得る性質を有するCFS（以下、反応向上CFSと略記する）、(ii)分析物又はそのアナログとの複合体を形成し得る性質を有し且つ標識物質により標識されたCFS（標識CFS）、及び(iii)標識物質により標識され、分析物又はそのアナログとの複合体を形成し得且つ分析物又はそのアナログの電気泳動移動度を変化させ得る性質を有するCFS（標識反応向上CFS）としてもよい。
反応向上物質を結合させたCFSを用いることによって、CFSの電気泳動移動度を変化させることができ、工程(1)における分析物又はそのアナログを含有する溶液及び１種以上のCFSを含む溶液の配置順序を任意の順序に制御し得、分析物又はそのアナログ、又は／及びCFSの濃縮並びに分析物又はそのアナログとCFSとの反応（複合体形成反応）効率を向上することができる。
また、標識物質を結合させたCFSを用いることによって試料中の分析物を測定（検出）することができる。
【００４５】
（１）反応向上CFS
反応向上CFSは、分析物又はそのアナログとの複合体を形成し得且つ分析物又はそのアナログの電気泳動移動度を変化させ得る性質、言い換えれば、分析物又はそのアナログとの複合体を形成することによって、当該分析物又はそのアナログの電気泳動操作に対応する挙動（電気泳動移動度）に差を生ぜしめ得る性質を有するものであり、分析物又はそのアナログと反応向上CFSとの複合体（又は、分析物又はそのアナログと、反応向上CFS以外のCFSとの複合体）の電気泳動移動度を、分析物又はそのアナログ自体（反応向上CFSが結合していない分析物）の電気泳動移動度よりも高く又は低く（電気泳動速よりも速く又は遅く）し得るものである。
【００４６】
このような反応向上CFSとしては、上記した如きCFSに、反応向上物質〔例えばシリカ、アルミナ等の無機金属酸化物、例えば金、チタン、鉄及びニッケル等の金属及び、無機金属酸化物等にシランカップリング処理等の操作で官能基を導入したもの、例えば各種微生物、真核生物細胞等の生物、例えばアガロース、セルロース、不溶性デキストラン等の多糖類、例えばポリスチレンラテックス、スチレン−ブタジエン共重合体、スチレン−メタクリル酸共重合体、アクロレイン−エチレングリコールジメタクリレート共重合体、スチレン−スチレンスルホン酸ラテックス、ポリアクリルアミド、ポリグリシジルメタクリレート、ポリアクロレイン被覆粒子、架橋ポリアクリロニトリル、アクリル酸またはアクリル酸エステル系重合体、アクリロニトリル−ブタジエン、塩化ビニル−アクリル酸エステル、ポリ酢酸ビニル−アクリレート等の合成高分子化合物、例えば赤血球、糖、核酸（RNA、DNA等のポリヌクレオチド）、タンパク質、ポリペプチド、ポリアミノ酸（ポリグルタミン酸、ポリアスパラギン酸、ポリリジン等）、脂質等の生体分子等〕を結合させたものが一般的である。しかしながら、例えば反応向上物質表面に官能基を導入した後、この官能基を介して分析物に結合させる方法、反応向上物質と分析物をリンカーを介して結合させる方法等の化学的結合法等により分析物に直接反応向上物質を結合させてもよい。尚、上記に於いて、反応向上物質とは、CFSと結合することによって、当該CFSに、上記した如き反応向上CFSとしての性質を付与するものである。即ち、分析物又はそのアナログの電気泳動移動度を変化させ得る性質、言い換えれば、分析物又はそのアナログ、及びCFSとの複合体（又は、分析物又はそのアナログ、反応向上CFS、及び反応向上CFS以外のCFSとの複合体）を形成することによって、CFSを介して、当該分析物又はそのアナログの電気泳動操作に対応する挙動（電気泳動移動度）に差を生ぜしめ得る性質であり、分析物又はそのアナログと反応向上CFSとの複合体の電気泳動移動度を、分析物又はそのアナログ自体又は反応向上CFSが結合していない分析物又はそのアナログとCFSとの複合体の電気泳動移動度よりも高く又は低く（電気泳動速度よりも速く又は遅く）し得るものである。
【００４７】
なかでも、反応向上CFSとしては、上記した如きCFSに、核酸（ヌクレオチド鎖）、タンパク質、ポリペプチド又はポリアミノ酸を結合させたものが好ましく、CFSに核酸（ヌクレオチド鎖）又はポリアミノ酸を結合させたものがより好ましい。また、反応向上物質は、CFSとして抗体を含むものが好ましく、具体的にはCFSとしての抗体に、反応向上物質である核酸（ヌクレオチド鎖）、タンパク質、ポリペプチド又はポリアミノ酸が結合させたものが好ましく、なかでもCFSとしての抗体に、反応向上物質である核酸（ヌクレオチド鎖）又はポリアミノ酸を結合させたものが特に好ましい。
【００４８】
CFSに反応向上物質を結合させるには、即ち、反応向上CFSを作製するには、通常この分野で用いられる常法、例えば自体公知のＥＩＡ、ＲＩＡ、ＦＩＡ或いはハイブリダイゼーション法等に於いて一般的に行われている自体公知の標識方法［例えば、医化学実験講座、第８巻、山村雄一監修、第１版、中山書店、1971；図説 蛍光抗体、川生明著、第１版、（株）ソフトサイエンス社、1983；酵素免疫測定法、石川栄治、河合忠、宮井潔編、第３版、医学書院、1987、モレキュラー クローニング ア ラボラトリー マニュアル セカンド エディション、Ｊ．サムブルック，Ｅ．Ｆ．フリッシュ，Ｔ．マニアティス、コールド スプリング ハーバー ラボラトリー プレス、ハンドブック・オブ・フルオレッセント・プローブ・アンド・リサーチ・ケミカルズ７版第８章；モレキュラー・プローブInc.、国際公開パンフレットWO2002/082083号等］や、アビジン（又はストレプトアビジン）とビオチンの反応を利用した常法等何れの方法により行ってもよい。
【００４９】
尚、CFSとして反応向上CFSを用いる場合には、上記した如き標識CFSを組み合わせて使用する（併用する）のが好ましい。しかしながら、反応向上CFS自身が何らかの方法により測定（検出）可能であるか、又は標識物質により標識可能なものである場合等には、標識CFSを併用する必要はない。
【００５０】
また、CFSとして標識CFSと反応向上CFSとを組み合わせて使用する（併用する）場合、分析物又はそのアナログ、標識CFS及び反応向上CFSの三者の複合体が形成されるのであれば、これら三者の結合形態や標識CFSと反応向上CFSの結合部位は特に限定されない。このような結合形態としては、例えば(1)分析物又はそのアナログを標識CFSと反応向上CFSとで挟む所謂サンドイッチ複合体、(2)分析物又はそのアナログと標識CFS又は反応向上CFSとの結合部位に更に反応向上CFS又は標識CFSが結合した複合体、(3)分析物又はそのアナログと結合した標識CFS又は反応向上CFSに更に反応向上CFS又は標識CFSが結合した複合体等が挙げられる。また、当該結合部位は、例えば(1)標識CFSと反応向上CFSの結合部位が全て分析物又はそのアナログ上のみに存在する場合〔結合形態(1)〕、(2)標識CFSと反応向上CFSの一方の結合部位は分析物又はそのアナログ上のみに存在し、他方の結合部位は分析物と当該標識CFSと反応向上CFSの一方との複合体が形成されたことによって新たに生じる部位に存在する場合〔結合形態(2)〕、(3)標識CFSと反応向上CFSの一方の結合部位は分析物又はそのアナログ上のみに存在し、他方の結合部位は当該標識CFSと反応向上CFSの一方のみに存在する場合〔結合形態(3)〕、(4)これらを組み合わせた場合等が挙げられる。なかでも、標識CFSの結合部位と反応向上CFSの結合部位は異なるものであるのが好ましい。尚、上記(2)において、新たに生じる部位に特異的に結合する性質を有するもの（標識CFS又は／及び反応向上CFS）としては、例えば分析物又はそのアナログと標識CFS又は／及び反応向上CFSとの複合体を認識してこれに結合し得る抗体、ペプチド鎖、ヌクレオチド鎖等が挙げられる。
【００５１】
（２）標識CFS
上記した如きCFSは、それ自身が何らかの方法により測定（検出）可能であるか、又は標識物質により標識可能なものが一般的である。このような性質のものを用いることによって試料中の分析物を測定（検出）することが可能となる。尚、分析物又はそのアナログ自身が何らかの方法により検出可能なものである場合（例えば酵素等）、或いは分析物又はそのアナログが、CFSを用いずに（介さずに）直接標識物質と結合し得るものである場合には、当該CFSが上記した如き性質を有していなくても、試料中の分析物を測定（検出）することができる。それら自身が何らかの方法により検出可能なものの例としては、酵素、色素、蛍光物質、発光物質、紫外部に吸収を有する物質等がある。
なかでも、本発明に於いて使用されるCFSとしては、分析物又はそのアナログとの複合体を形成し得且つ標識物質により標識された物質（標識CFS）が好ましい。
【００５２】
本発明において用いられる標識物質としては、酵素免疫測定法（EIA）、放射免疫測定法（RIA）、蛍光免疫測定法（FIA）、ハイブリダイゼーション法等、通常この分野で用いられるものであればよく、例えばアルカリホスファターゼ（ＡＬＰ），β-ガラクトシダーゼ（β-Ｇａl），パーオキシダーゼ（ＰＯＤ），マイクロパーオキシダーゼ，グルコースオキシダーゼ（ＧＯＤ），グルコース-6-リン酸脱水素酵素（Ｇ６ＰＤＨ），リンゴ酸脱水素酵素，ルシフェラーゼ等の酵素類、例えばクーマシーブリリアントブルーR250，メチルオレンジ等の色素、例えば99mＴｃ，131Ｉ，125Ｉ，14Ｃ，3Ｈ，32Ｐ，35Ｓ，等の放射性同位元素、例えばHiLyte Fluor 488、HiLyte Fluor 555、HiLyte Fluor 647、HiLyte Fluor 680、HiLyte Fluor 750等のHiLyte系色素〔何れもハイライトバイオサイエンス社（HiLyte Bioscience, Inc.）商品名〕、Alexa Fluor Dye 350、Alexa Fluor Dye 430、Alexa Fluor Dye 488、Alexa Fluor Dye 532、Alexa Fluor Dye 546、Alexa Fluor Dye 555、Alexa Fluor Dye 568、Alexa Fluor Dye 594、Alexa Fluor Dye 633、Alexa Fluor Dye 647、Alexa Fluor Dye 660、Alexa Fluor Dye 680、Alexa Fluor Dye 700、Alexa Fluor Dye 750等のAlexa系色素〔何れもモレキュラープローブス社（Molecular Probes）商品名〕、Cy3、Cy3.5、Cy5、Cy5.5、Cy7等のCyDye系色素〔何れもアマシャムバイオサイエンス社（Amersham Biosciences）商品名〕、例えばフルオレセイン，ローダミン，ダンシル，フルオレスカミン，クマリン，ナフチルアミン或はこれらの誘導体，希土類蛍光色素体〔例えばサマリウム（Sm）、ユーロピューム（Eu）、テルビウム（Tb）又はディスプロシウム（Dy）等の希土類金属と4，4'-ビス（1'',1'',1'',2'',2'',3'',3'',ヘプタフルオロ-4'',6''-ヘキサンジオン‐6''-イル）クロロスルフォ-o-テルフェニル（BHHCT）、4,7-ビス（クロロスルフォニル）-1,10-フェナンスロリン-2,9-ジカルボキシリックアシッド（BCPDA）、β-ナフチルトリフルオロアセチックアシッド（β-NTA）等のキレート化合物との組み合わせからなるもの等〕，インターカレーター色素〔例えばアクリジンオレンジ等のアクリジン色素、例えば臭化エチジウム，エチジウムホモダイマー１（EthD-1），エチジウムホモダイマー２（EthD-2），臭化エチジウムモノアジド（EMA），ジヒドロエチジウム等のエチジウム化合物、例えばヨウ素化プロピジウム，ヨウ素化ヘキシジウム等のヨウ素化合物、例えば７−アミノアクチノマイシンＤ（7-AAD）、例えばPOPO-1, BOBO-1, YOYO-1, TOTO-1, JOJO-1, POPO-3, LOLO-1, BOBO-3, YOYO-3, TOTO-3等のシアニンダイマー系色素（何れもモレキュラープローブ社商品名）、例えばSYBR Gold, SYBR Green I and SYBR Green II, SYTOX Green, SYTOX Blue, SYTOX Orange等のSYTOX系色素（何れもモレキュラープローブ社商品名）等〕、DNA二重らせんのマイナーグルーブに結合するもの〔例えば4',6-ジアミジノ-2-フェニルインドール（DAPI：モレキュラープローブ社商品名），ペンタハイドレ−ト（ビス−ベンズイミド）（Hoechst 33258：モレキュラープローブ社商品名），トリヒドロクロライド（Hoechst 33342：モレキュラープローブ社商品名），ビスベンズイミド色素（Hoechst 34580：モレキュラープローブ社商品名）等〕、アデニン−チミン（A-T）配列に特異的に結合するもの〔例えば9-アミノ-6-クロロ-2-メトキシアクリジン（ACMA），ビス-（6-クロロ-2-メトキシ-9-アクリジニル）スペルミン（アクリジンホモダイマー）等のアクリジン色素、例えばヒドロキシ���チルバミジン等〕等の蛍光性物質、例えばルシフェリン，イソルミノール，ルミノール，ビス(2,4,6-トリフロロフェニル)オキザレート等の発光性物質、例えばフェノール，ナフトール，アントラセン或はこれらの誘導体等の紫外部に吸収を有する物質、例えば4-アミノ-2,2,6,6-テトラメチルピペリジン-1-オキシル，3-アミノ-2,2,5,5-テトラメチルピロリジン-1-オキシル，2,6-ジ-t-ブチル-α-(3,5-ジ-t-ブチル-4-オキソ-2,5-シクロヘキサジエン-1-イリデン)-p-トリルオキシル等のオキシル基を有する化合物に代表されるスピンラベル化剤としての性質を有する物質等が挙げられる。
【００５３】
標識物質により、CFSを標識するには、先に述べた如き標識物質によりCFSを標識する方法と同様の方法や国際公開パンフレットWO2002/082083号等に記載の常法により行えばよい。
【００５４】
（３）標識反応向上CFS
更に、本発明においては、CFSとして、標識物質により標識され、分析物又はそのアナログとの複合体を形成し得且つ分析物の電気泳動移動度を変化させ得る物質（標識反応向上CFS）、即ち、標識物質で標識された反応向上CFSを使用することもできる。尚、標識物質及び反応向上CFSは前述した通りであり、また、標識物質によって、反応向上CFSを標識する方法も、先に述べた如き標識物質によりCFSを標識する方法と同様の方法や国際公開パンフレットWO2002/082083号等に記載の常法により行えばよい。
【００５５】
（４）CFSの組合せ
上記したように、本発明においては、例えば以下のような種々のCFSが用いられる。尚、これらを適宜組合せて使用してもよいことは言うまでもない。
(a)標識物質及び反応向上物質が結合していないCFS
(b)標識CFS
(c)反応向上CFS
(d)標識反応向上CFS
(e)標識物質及び反応向上物質が結合していないCFS及び反応向上CFS
(f)標識CFS及び反応向上CFS
(g)標識物質及び反応向上物質が結合していないCFS及び標識反応向上CFS
【００５６】
（５）CFSを含む溶液
上記した如き本発明に係るCFSを含有する溶液としては、分析物又はそのアナログと当該CFSとの複合体の形成を妨げないものであれば良く、例えば水、緩衝液等が挙げられる。
このような緩衝液としては、通常pH５〜１１の範囲で緩衝作用を有し、当該複合体形成反応を阻害しないものであればよく、例えばトリス緩衝液、グッド緩衝液、TE緩衝液、TAE緩衝液、TBE緩衝液、TBS緩衝液、リン酸塩緩衝液、ホウ酸塩緩衝液等、通常この分野で用いられるものが挙げられる。これら緩衝液の濃度としては、通常１mM〜２Ｍ、好ましくは10mM〜１Ｍの範囲であり、また、pHは、通常５〜11、好ましくは５〜10、より好ましくは5.5〜8.5、更に好ましくは６〜８、特に好ましくは７付近である。
上記した如き溶液中に含有させるCFSの濃度、即ち、CFSの使用量は、使用するCFSの種類等により一概に言えないが、通常、反応液中（分析物又はそのアナログとCFSとを含有する溶液中）において、設定された検量限界濃度に相当する分析物又はそのアナログ全てと結合し得る濃度以上（好ましくはその２倍濃度以上、より好ましくはその５倍濃度以上）が当該反応液中に存在していることが望ましい。また、使用量の上限は特に限定されないが、経済性等を考慮して、通常設定された検量限界濃度に相当する分析物又はそのアナログ全てと結合し得る濃度の1012倍以下（好ましくは109倍以下、より好ましくは106倍以下）である。
より具体的には、分析物又はそのアナログとCFSとを含有する溶液中のCFSの使用量が、下限は通常10pM以上、好ましくは１nM以上、より好ましくは100nM以上であり、上限は通常10μM以下、好ましくは1μM以下、より好ましくは500nM以下となるように、上記した如き溶液中にCFSを含有させればよい。
【００５７】
１−６．具体的な複合体形成方法
本発明の複合体形成方法の実施の形態を以下に具体的に示す。
【００５８】
(a)標識物質及び反応向上物質が結合していないCFSを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)１種以上の、CFSを含有する溶液とを、これらの溶液を予め細管外で混合することなく、分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕のゾーンと１種以上のCFSを含む溶液のゾーンとが別々に形成されるように（液−液界面が形成されるように）、且つ細管に電圧を印加した際に当該分析物とCFSとの複合体が形成されるように、導入・配置させる。
(2)次いで、これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、上記したように当該分析物又は／及び少なくとも１種のCFSを濃縮させながら、分子拡散に依存せず、また物理的な混合を行うことなく、当該分析物とCFSとを電気泳動的に接触させて当該分析物とCFSとの複合体を形成させる。
上記において、「溶液が均一に混合される前に」とは、工程(1)により、細管内に配置された、分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕、１種以上のCFSを含む溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）が、分子拡散によって均一に混合される前を意味する。尚、「界面」も前述と同じ意味である。
また、上記工程(2)において、「細管に電圧を印加することによって、当該分析物又は／及び少なくとも１種のCFSを濃縮させる」とは、前述と同様、当該分析物又は／及び少なくとも１種のCFSが、細管に電圧を印加した際に、バンド状（プラグ状）に集合してくることを言う。換言すれば、細管に電圧を印加した際に、当該物質が集合し、工程(1)で配置されたゾーン中の物質の濃度よりも、当該物質の濃度の方が高くなるような部分が生じること、即ち、細管に電圧を印加した際に、分析物又は／及び少なくとも１種のCFSが集合し、工程(1)で配置された溶液ゾーン〔例えば分析物を含有する溶液（例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液）のゾーン、１種以上のCFSを含む溶液のゾーン〕中の分析物の濃度又は／及び１種以上のCFSの濃度よりも、分析物の濃度又は／及び１種以上のCFSの濃度の方が高くなるような部分が生じることを意味する。
上記工程(2)において、「当該分析物とCFSとを電気泳動的に接触させる」とは、前述と同様に、分子拡散によらず（依存せず）に、より高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液を、それよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液の下流に配置させて、電気泳動を行った場合、溶液中のより高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質がそれよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を追い越すことを利用して、当該分析物とCFSを接触させることを意味する。
【００５９】
(b)標識CFSを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)１種以上の、標識CFSを含有する溶液とを、これらの溶液を予め細管外で混合することなく、分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕のゾーンと１種以上の標識CFSを含む溶液のゾーンとが別々に形成されるように（液−液界面が形成されるように）、且つ細管に電圧を印加した際に当該分析物と標識CFSとの複合体が形成されるように、導入・配置させる。
(2)次いで、これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、上記したように当該分析物又は／及び少なくとも１種の標識CFSを濃縮させながら、分子拡散に依存せず、また物理的な混合を行うことなく、当該分析物と標識CFSとを接触させて当該分析物と標識CFSとの複合体を形成させる。
上記において、「溶液が均一に混合される前に」とは、工程(1)により、細管内に配置された、分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕、１種以上の標識CFSを含む溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）が、分子拡散によって均一に混合される前を意味する。尚、「界面」も前述と同じ意味である。
また、上記工程(2)において、「細管に電圧を印加することによって、当該分析物又は／及び少なくとも１種の標識CFSを濃縮させる」とは、前述と同様、当該分析物又は／及び少なくとも１種の標識CFSが、細管に電圧を印加した際に、バンド状（プラグ状）に集合してくることを言う。換言すれば、細管に電圧を印加した際に、当該物質が集合し、工程(1)で配置されたゾーン中の物質の濃度よりも、当該物質の濃度の方が高くなるような部分が生じること、即ち、細管に電圧を印加した際に、分析物又は／及び少なくとも１種の標識CFSが集合し、工程(1)で配置された溶液ゾーン〔例えば分析物を含有する溶液（例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液）のゾーン、１種以上の標識CFSを含む溶液のゾーン〕中の分析物の濃度又は／及び少なくとも１種の標識CFSの濃度よりも、分析物の濃度又は／及び少なくとも１種の標識CFSの濃度の方が高くなるような部分が生じることを意味する。
上記工程(2)において、「当該分析物と標識CFSとを接触させる」とは、前述と同様に、分子拡散によらず（依存せず）に、より高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液を、それよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液の下流に配置させて、電気泳動を行った場合、溶液中のより高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質がそれよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を追い越すことを利用して、当該分析物と標識CFSを接触させることを意味する。
【００６０】
(c)反応向上CFSを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)１種以上の、反応向上CFSを含有する溶液とを、これらの溶液を予め細管外で混合することなく、分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕のゾーンと１種以上の反応向上CFSを含む溶液のゾーンとが別々に形成されるように（液−液界面が形成されるように）、且つ細管に電圧を印加した際に当該分析物と反応向上CFSとの複合体が形成されるように、導入・配置させる。
(2)次いで、これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、上記したように当該分析物又は／及び少なくとも１種の反応向上CFSを濃縮させながら、分子拡散に依存せず、また物理的な混合を行うことなく、当該分析物と反応向上CFSとを電気泳動的に接触させて当該分析物と反応向上CFSとの複合体を形成させる。
上記において、「溶液が均一に混合される前に」とは、工程(1)により、細管内に配置された、分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕、１種以上の反応向上CFSを含む溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）が、分子拡散によって均一に混合される前を意味する。尚、「界面」も前述と同じ意味である。
また、上記工程(2)において、「細管に電圧を印加することによって、当該分析物又は／及び少なくとも１種の反応向上CFSを濃縮させる」とは、前述と同様、当該分析物又は／及び少なくとも１種の反応向上CFSが、細管に電圧を印加した際に、バンド状（プラグ状）に集合してくることを言う。換言すれば、細管に電圧を印加した際に、当該物質が集合し、工程(1)で配置されたゾーン中の物質の濃度よりも、当該物質の濃度の方が高くなるような部分が生じること、即ち、細管に電圧を印加した際に、分析物又は／及び少なくとも１種の反応向上CFSが集合し、工程(1)で配置された溶液ゾーン〔例えば分析物を含有する溶液（例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液）のゾーンと１種以上の反応向上CFSを含む溶液のゾーン〕中の分析物の濃度又は／及び少なくとも１種の反応向上CFSの濃度よりも、分析物の濃度又は／及び少なくとも１種の反応向上CFSの濃度の方が高くなるような部分が生じることを意味する。
上記工程(2)において、「当該分析物と反応向上CFSとを電気泳動的に接触させる」とは、前述と同様に、分子拡散によらず（依存せず）に、より高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液を、それよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液の下流に配置させて、電気泳動を行った場合、溶液中のより高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質がそれよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を追い越すことを利用して、当該分析物と反応向上CFSを接触させることを意味する。
【００６１】
(d)標識反応向上CFSを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)１種以上の、標識反応向上CFSを含有する溶液とを、これらの溶液を予め細管外で混合することなく、分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕のゾーンと１種以上の標識反応向上CFSを含む溶液のゾーンとが別々に形成されるように（液−液界面が形成されるように）、且つ細管に電圧を印加した際に当該分析物と標識反応向上CFSとの複合体が形成されるように、導入・配置させる。
(2)次いで、これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、上記したように当該分析物又は／及び少なくとも１種の標識反応向上CFSを濃縮させながら、分子拡散に依存せず、また物理的な混合を行うことなく、当該分析物と標識反応向上CFSとを電気泳動的に接触させて当該分析物と標識反応向上CFSとの複合体を形成させる。
上記において、「溶液が均一に混合される前に」とは、工程(1)により、細管内に配置された、分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕、１種以上の標識反応向上CFSを含む溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）が、分子拡散によって均一に混合される前を意味する。尚、「界面」も前述と同じ意味である。
また、上記工程(2)において、「細管に電圧を印加することによって、当該分析物又は／及び少なくとも１種の標識反応向上CFSを濃縮させる」とは、前述と同様、当該分析物又は／及び少なくとも１種の標識反応向上CFSが、細管に電圧を印加した際に、バンド状（プラグ状）に集合してくることを言う。換言すれば、細管に電圧を印加した際に、当該物質が集合し、工程(1)で配置されたゾーン中の物質の濃度よりも、当該物質の濃度の方が高くなるような部分が生じること、即ち、細管に電圧を印加した際に、分析物又は／及び少なくとも１種の標識反応向上CFSが集合し、工程(1)で配置された溶液ゾーン〔例えば分析物を含有する溶液（例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液）のゾーンと１種以上の標識反応向上CFSを含む溶液のゾーン〕中の分析物の濃度又は／及び少なくとも１種の標識反応向上CFSの濃度よりも、分析物の濃度又は／及び少なくとも１種の標識反応向上CFSの濃度の方が高くなるような部分が生じることを意味する。
上記工程(2)において、「当該分析物と標識反応向上CFSとを電気泳動的に接触させる」とは、前述と同様に、分子拡散によらず（依存せず）に、より高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液を、それよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液の下流に配置させて、電気泳動を行った場合、溶液中のより高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質がそれよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を追い越すことを利用して、当該分析物と標識反応向上CFSを接触させることを意味する。
【００６２】
(e)標識物質及び反応向上物質が結合していないCFS及び反応向上CFSを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)少なくとも１種の、CFSを含有する溶液及び(c)少なくとも１種の、反応向上CFSを含有する溶液とを、これらの溶液を予め細管外で混合することなく、分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕のゾーン、１種以上のCFSを含む溶液のゾーン及び１種以上の反応向上CFSを含む溶液のゾーンが別々に形成されるように（液−液界面が形成されるように）、且つ細管に電圧を印加した際に当該分析物、CFS及び反応向上CFSの複合体が形成されるように、導入・配置させる。
(2)次いで、これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、上記したように当該分析物、少なくとも１種のCFS及び少なくとも１種の反応向上CFSから選ばれる少なくとも１種を濃縮させながら、分子拡散に依存せず、また物理的な混合を行うことなく、当該分析物、CFS及び反応向上CFSを接触させて当該分析物、CFS及び反応向上CFSの複合体を形成させる。
上記において、「溶液が均一に混合される前に」とは、工程(1)により、細管内に配置された、分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕、１種以上のCFSを含む溶液、１種以上の反応向上CFSを含む溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）が、分子拡散によって均一に混合される前を意味する。尚、「界面」も前述と同じ意味である。
また、上記工程(2)において、「細管に電圧を印加することによって、当該分析物、少なくとも１種のCFS及び少なくとも１種の反応向上CFSから選ばれる少なくとも１種を濃縮させる」とは、前述と同様、当該分析物、少なくとも１種のCFS及び少なくとも１種の反応向上CFSから選ばれる少なくとも１種が、細管に電圧を印加した際に、バンド状（プラグ状）に集合してくることを言う。換言すれば、細管に電圧を印加した際に、当該物質が集合し、工程(1)で配置されたゾーン中の物質の濃度よりも、当該物質の濃度の方が高くなるような部分が生じること、即ち、細管に電圧を印加した際に、分析物、少なくとも１種のCFS及び少なくとも１種の反応向上CFSから選ばれる少なくとも１種が集合し、工程(1)で配置された溶液ゾーン〔例えば分析物を含有する溶液（例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液）のゾーン、１種以上のCFSを含む溶液のゾーン及び１種以上の反応向上CFSを含む溶液のゾーン〕中の分析物の濃度、少なくとも１種のCFSの濃度又は少なくとも１種の反応向上CFSの濃度よりも、分析物の濃度、少なくとも１種のCFSの濃度又は少なくとも１種の反応向上CFSの濃度の方が高くなるような部分が生じることを意味する。
上記工程(2)において、「当該分析物、CFS及び反応向上CFSを接触させる」とは、前述と同様に、分子拡散によらず（依存せず）に、より高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液を、それよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液の下流に配置させて、電気泳動を行った場合、溶液中のより高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質がそれよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を追い越すことを利用して、当該分析物、CFS及び反応向上CFSを接触させることを意味する。
【００６３】
(f)標識CFS及び反応向上CFSを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)少なくとも１種の、標識CFSを含有する溶液及び(c)少なくとも１種の、反応向上CFSを含有する溶液とを、これらの溶液を予め細管外で混合することなく、分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕のゾーン、１種以上の標識CFSを含む溶液のゾーン及び１種以上の反応向上CFSを含む溶液のゾーンが別々に形成されるように（液−液界面が形成されるように）、且つ細管に電圧を印加した際に当該分析物、標識CFS及び反応向上CFSの複合体が形成されるように、導入・配置させる。
(2)次いで、これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、上記したように当該分析物、少なくとも１種の標識CFS及び少なくとも１種の反応向上CFSから選ばれる少なくとも１種を濃縮させながら、分子拡散に依存せず、また物理的な混合を行うことなく、当該分析物、標識CFS及び反応向上CFSを電気泳動的に接触させて当該分析物、標識CFS及び反応向上CFSの複合体を形成させる。
上記において、「溶液が均一に混合される前に」とは、工程(1)により、細管内に配置された、分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕、１種以上の標識CFSを含む溶液、１種以上の反応向上CFSを含む溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）が、分子拡散によって均一に混合される前を意味する。尚、「界面」も前述と同じ意味である。
また、上記工程(2)において、「細管に電圧を印加することによって、当該分析物、少なくとも１種の標識CFS及び少なくとも１種の反応向上CFSから選ばれる少なくとも１種を濃縮させる」とは、前述と同様、当該分析物、少なくとも１種の標識CFS及び少なくとも１種の反応向上CFSから選ばれる少なくとも１種が、細管に電圧を印加した際に、バンド状（プラグ状）に集合してくることを言う。換言すれば、細管に電圧を印加した際に、当該物質が集合し、工程(1)で配置されたゾーン中の物質の濃度よりも、当該物質の濃度の方が高くなるような部分が生じること、即ち、細管に電圧を印加した際に、分析物、少なくとも１種の標識CFS及び少なくとも１種の反応向上CFSから選ばれる少なくとも１種が集合し、工程(1)で配置された溶液ゾーン〔例えば分析物を含有する溶液（例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液）のゾーン、１種以上の標識CFSを含む溶液のゾーン、１種以上の反応向上CFSを含む溶液のゾーン〕中の分析物の濃度、少なくとも１種の標識CFSの濃度又は少なくとも１種の反応向上CFSの濃度よりも、分析物の濃度、少なくとも１種の標識CFSの濃度又は少なくとも１種の反応向上CFSの濃度の方が高くなるような部分が生じることを意味する。
上記工程(2)において、「当該分析物、標識CFS及び反応向上CFSを電気泳動的に接触させる」とは、前述と同様に、分子拡散によらず（依存せず）に、より高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液を、それよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液の下流に配置させて、電気泳動を行った場合、溶液中のより高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質がそれよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を追い越すことを利用して、当該分析物、標識CFS及び反応向上CFSを接触させることを意味する。
【００６４】
(g)標識物質及び反応向上物質が結合していないCFS及び標識反応向上CFSを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)少なくとも１種の、CFSを含有する溶液及び(c)少なくとも１種の、標識反応向上CFSを含有する溶液とを、これらの溶液を予め細管外で混合することなく、分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕のゾーン、１種以上のCFSを含む溶液のゾーン及び１種以上の標識反応向上CFSを含有する溶液のゾーンが別々に形成されるように（液−液界面が形成されるように）、且つ細管に電圧を印加した際に当該分析物、CFS及び標識反応向上CFSの複合体が形成されるように、導入・配置させる。
(2)次いで、これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、上記したように当該分析物、少なくとも１種のCFS及び少なくとも１種の標識反応向上CFSから選ばれる少なくとも１種を濃縮させながら、分子拡散に依存せず、また物理的な混合を行うことなく、当該分析物、CFS及び標識反応向上CFSを電気泳動的に接触させて当該分析物、CFS及び標識反応向上CFSの複合体を形成させる。
上記において、「溶液が均一に混合される前に」とは、工程(1)により、細管内に配置された、分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕、１種以上のCFSを含む溶液、１種以上の標識反応向上CFSを含有する溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）が、分子拡散によって均一に混合される前を意味する。尚、「界面」も前述と同じ意味である。
また、上記工程(2)において、「細管に電圧を印加することによって、当該分析物、少なくとも１種のCFS及び少なくとも１種の標識反応向上CFSから選ばれる少なくとも１種を濃縮させる」とは、前述と同様、当該分析物、少なくとも１種のCFS及び少なくとも１種の標識反応向上CFSから選ばれる少なくとも１種が、細管に電圧を印加した際に、バンド状（プラグ状）に集合してくることを言う。換言すれば、細管に電圧を印加した際に、当該物質が集合し、工程(1)で配置されたゾーン中の物質の濃度よりも、当該物質の濃度の方が高くなるような部分が生じること、即ち、細管に電圧を印加した際に、分析物、少なくとも１種のCFS及び少なくとも１種の標識反応向上CFSから選ばれる少なくとも１種が集合し、工程(1)で配置された溶液ゾーン〔例えば分析物を含有する溶液（例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液）のゾーン、１種以上のCFSを含む溶液のゾーン、１種以上の標識反応向上CFSを含有する溶液のゾーン〕中の分析物の濃度、少なくとも１種のCFSの濃度又は少なくとも１種の標識反応向上CFSの濃度よりも、分析物の濃度、少なくとも１種のCFSの濃度又は少なくとも１種の標識反応向上CFSの濃度の方が高くなるような部分が生じることを意味する。
上記工程(2)において、「当該分析物、CFS及び標識反応向上CFSをを電気泳動的に接触させる」とは、前述と同様に、分子拡散によらず（依存せず）に、より高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液を、それよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液の下流に配置させて、電気泳動を行った場合、溶液中のより高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質がそれよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を追い越すことを利用して、当該分析物、CFS及び標識反応向上CFSを接触させることを意味する。
【００６５】
本発明の複合体形成方法は、所謂競合法においても使用可能である。競合法において実施する場合は例えば以下の通りである。
(h)標識アナログとCFSとを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料と標識アナログを含有する溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）及び(b)１種以上のCFSを含有する溶液とを、これらの溶液を予め細管外で混合することなく、分析物を含む試料と標識アナログを含む溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）のゾーン及び１種以上のCFSを含む溶液のゾーンとが別々に形成されるように（液−液界面が形成されるように）、且つ細管に電圧を印加した際に当該分析物とCFSとの複合体A及び当該標識アナログとCFSとの複合体Bが形成されるように、導入・配置させる。
(2)次いで、これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、上記したように当該分析物及び標識アナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSを濃縮させながら、分子拡散に依存せず、また物理的な混合を行うことなく、当該分析物、標識アナログ及びCFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該分析物とCFS、及び標識アナログとCFSを電気泳動的に接触させて）当該分析物とCFSとの複合体A及び当該標識アナログとCFSとの複合体Bを形成させる。
上記において、「溶液が均一に混合される前に」とは、工程(1)により、細管内に配置された、分析物を含む試料と標識アナログを含む溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）、１種以上のCFSを含む溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）が、分子拡散によって均一に混合される前を意味する。尚、「界面」も前述と同じ意味である。
また、上記工程(2)において、「細管に電圧を印加することによって、当該分析物及び標識アナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSを濃縮させる」とは、前述と同様、当該分析物及び標識アナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSが、細管に電圧を印加した際に、バンド状（プラグ状）に集合してくることを言う。換言すれば、細管に電圧を印加した際に、当該物質が集合し、工程(1)で配置されたゾーン中の物質の濃度よりも、当該物質の濃度の方が高くなるような部分が生じること、即ち、細管に電圧を印加した際に、分析物及び標識アナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSが集合し、工程(1)で配置された溶液ゾーン〔例えば分析物及び標識アナログを含有する溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）ゾーン、CFSを含有する溶液ゾーン〕中の分析物及び標識アナログの濃度又は／及びCFSの濃度よりも、分析物及び標識アナログの濃度又は／及びCFSの濃度の方が高くなるような部分が生じることを意味する。
上記工程(2)において、「当該分析物、標識アナログ及びCFSとを電気泳動的に接触させる（即ち、当該分析物とCFS、及び標識アナログとCFSを電気泳動的に接触させる）」とは、前述と同様に、分子拡散によらず（依存せず）に、より高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液を、それよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液の下流に配置させて、電気泳動を行った場合、溶液中のより高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質がそれよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を追い越すことを利用して、当該分析物、標識アナログ及びCFSとを接触させること（即ち、当該分析物とCFS、及び標識アナログとCFSをそれぞれ接触させて）を接触させることを意味する。
【００６６】
(i)標識アナログと反応向上CFSとを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料と標識アナログを含有する溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）及び(b)１種以上の反応向上CFSを含有する溶液とを、これらの溶液を予め細管外で混合することなく、分析物を含む試料と標識アナログを含む溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）のゾーン及び１種以上の反応向上CFSを含む溶液のゾーンとが別々に形成されるように（液−液界面が形成されるように）、且つ細管に電圧を印加した際に当該分析物と反応向上CFSとの複合体A及び当該標識アナログと反応向上CFSとの複合体Bが形成されるように、導入・配置させる。
(2)次いで、これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、上記したように当該分析物及び標識アナログ、又は／及び少なくとも１種の反応向上CFSを濃縮させながら、分子拡散に依存せず、また物理的な混合を行うことなく、当該分析物、標識アナログ及び反応向上CFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該分析物と反応向上CFS、及び標識アナログと反応向上CFSを電気泳動的に接触させて）当該分析物と反応向上CFSとの複合体A及び当該標識アナログと反応向上CFSとの複合体Bを形成させる。
上記において、「溶液が均一に混合される前に」とは、工程(1)により、細管内に配置された、分析物を含む試料と標識アナログを含む溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）、１種以上の反応向上CFSを含む溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）が、分子拡散によって均一に混合される前を意味する。尚、「界面」も前述と同じ意味である。
また、上記工程(2)において、「細管に電圧を印加することによって、当該分析物及び標識アナログ、又は／及び少なくとも１種の反応向上CFSを濃縮させる」とは、前述と同様、当該分析物及び標識アナログ、又は／及び少なくとも１種の反応向上CFSが、細管に電圧を印加した際に、バンド状（プラグ状）に集合してくることを言う。換言すれば、細管に電圧を印加した際に、当該物質が集合し、工程(1)で配置されたゾーン中の物質の濃度よりも、当該物質の濃度の方が高くなるような部分が生じること、即ち、細管に電圧を印加した際に、分析物及び標識アナログ、又は／及び少なくとも１種の反応向上CFSが集合し、工程(1)で配置された溶液ゾーン〔例えば分析物を含む試料と標識アナログを含む溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）のゾーン、反応向上CFSを含む溶液ゾーン〕中の分析物及び標識アナログの濃度又は／及び反応向上CFSの濃度よりも、分析物及び標識アナログの濃度又は／及び反応向上CFSの濃度の方が高くなるような部分が生じることを意味する。
上記工程(2)において、「当該分析物、標識アナログ及び反応向上CFSとを電気泳動的に接触させる（即ち、当該分析物と反応向上CFS、及び標識アナログと反応向上CFSを電気泳動的に接触させる）」とは、前述と同様に、分子拡散によらず（依存せず）に、より高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液を、それよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液の下流に配置させて、電気泳動を行った場合、溶液中のより高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質がそれよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を追い越すことを利用して、当該分析物、標識アナログ及び反応向上CFSとを接触させること（即ち、当該分析物と反応向上CFS、及び標識アナログと反応向上CFSをそれぞれ接触させて）を接触させることを意味する。
【００６７】
(j)標識アナログとCFS及び反応向上CFSを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料と標識アナログを含有する溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）、(b)少なくとも１種のCFSを含有する溶液及び(c)少なくとも１種の反応向上CFSを含有する溶液とを、これらの溶液を予め細管外で混合することなく、分析物を含む試料と標識アナログを含む溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）のゾーン、１種以上のCFSを含む溶液のゾーン及び１種以上の反応向上CFSを含む溶液のゾーンとが別々に形成されるように（液−液界面が形成されるように）、且つ細管に電圧を印加した際に当該分析物とCFS及び反応向上CFSとの複合体A及び当該標識アナログとCFS及び反応向上CFSとの複合体Bが形成されるように、導入・配置させる。
(2)次いで、これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、上記したように当該分析物及び標識アナログ、少なくとも１種のCFS並びに少なくとも１種の反応向上CFSから選ばれる少なくとも１種を濃縮させながら、分子拡散に依存せず、また物理的な混合を行うことなく、当該分析物、標識アナログ、CFS及び反応向上CFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該分析物、CFS及び反応向上CFS、並びに標識アナログ、CFS及び反応向上CFSを電気泳動的に接触させて）当該分析物とCFS及び反応向上CFSとの複合体A及び当該標識アナログとCFS及び反応向上CFSとの複合体Bを形成させる。
上記において、「溶液が均一に混合される前に」とは、工程(1)により、細管内に配置された、分析物を含む試料と標識アナログを含む溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）、１種以上のCFSを含む溶液、１種以上の反応向上CFSを含む溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）が、分子拡散によって均一に混合される前を意味する。尚、「界面」も前述と同じ意味である。
また、上記工程(2)において、「細管に電圧を印加することによって、当該分析物及び標識アナログ、少なくとも１種のCFS並びに少なくとも１種の反応向上CFSから選ばれる少なくとも１種を濃縮させる」とは、前述と同様、当該分析物及び標識アナログ、少なくとも１種のCFS並びに少なくとも１種の反応向上CFSから選ばれる少なくとも１種が、細管に電圧を印加した際に、バンド状（プラグ状）に集合してくることを言う。換言すれば、細管に電圧を印加した際に、当該物質が集合し、工程(1)で配置されたゾーン中の物質の濃度よりも、当該物質の濃度の方が高くなるような部分が生じること、即ち、細管に電圧を印加した際に、当該分析物及び標識アナログ、少なくとも１種のCFS並びに少なくとも１種の反応向上CFSから選ばれる少なくとも１種が集合し、工程(1)で配置された溶液ゾーン〔例えば分析物を含む試料と標識アナログを含む溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）のゾーン、１種以上のCFSを含む溶液のゾーン、１種以上の反応向上CFSを含む溶液のゾーン〕中の分析物及び標識アナログの濃度、CFSの濃度、又は反応向上CFSの濃度よりも、分析物及び標識アナログの濃度、CFSの濃度、又は反応向上CFSの濃度の方が高くなるような部分が生じることを意味する。
上記工程(2)において、「当該分析物、標識アナログ、CFS及び反応向上CFSとを電気泳動的に接触させる（即ち、当該分析物、CFS及び反応向上CFS、並びに標識アナログ、CFS及び反応向上CFSを電気泳動的に接触させる）」とは、前述と同様に、分子拡散によらず（依存せず）に、より高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液を、それよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液の下流に配置させて、電気泳動を行った場合、溶液中のより高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質がそれよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を追い越すことを利用して、当該分析物、標識アナログ、CFS及び反応向上CFSとを接触させること（即ち、当該分析物、CFS及び反応向上CFS、並びに標識アナログ、CFS及び反応向上CFSをそれぞれ接触させて）を接触させることを意味する。
【００６８】
(k)反応向上アナログと標識CFSとを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料と反応向上アナログを含有する溶液及（又は分析物を含む試料、反応向上アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）び(b)１種以上の標識CFSを含有する溶液とを、これらの溶液を予め細管外で混合することなく、分析物を含む試料と反応向上アナログを含む溶液（又は分析物を含む試料、反応向上アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）のゾーン及び１種以上の標識CFSを含む溶液のゾーンとが別々に形成されるように（液−液界面が形成されるように）、且つ細管に電圧を印加した際に当該分析物と標識CFSとの複合体A及び当該反応向上アナログと標識CFSとの複合体Bが形成されるように、導入・配置させる。
(2)次いで、これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、上記したように当該分析物及び反応向上アナログ、又は／及び少なくとも１種の標識CFSを濃縮させながら、分子拡散に依存せず、また物理的な混合を行うことなく、当該分析物、反応向上アナログ及び標識CFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該分析物と標識CFS、及び反応向上アナログと標識CFSを電気泳動的に接触させて）当該分析物と標識CFSとの複合体A及び当該反応向上アナログと標識CFSとの複合体Bを形成させる。
上記において、「溶液が均一に混合される前に」とは、工程(1)により、細管内に配置された、分析物を含む試料と反応向上アナログを含む溶液（又は分析物を含む試料、反応向上アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）、１種以上の標識CFSを含む溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）が、分子拡散によって均一に混合される前を意味する。尚、「界面」も前述と同じ意味である。
また、上記工程(2)において、「細管に電圧を印加することによって、当該分析物及び反応向上アナログ、又は／及び少なくとも１種の標識CFSを濃縮させる」とは、前述と同様、当該分析物及び反応向上アナログ、又は／及び少なくとも１種の標識CFSが、細管に電圧を印加した際に、バンド状（プラグ状）に集合してくることを言う。換言すれば、細管に電圧を印加した際に、当該物質が集合し、工程(1)で配置されたゾーン中の物質の濃度よりも、当該物質の濃度の方が高くなるような部分が生じること、即ち、細管に電圧を印加した際に、分析物及び反応向上アナログ、又は／及び少なくとも１種の標識CFSが集合し、工程(1)で配置された溶液ゾーン〔例えば分析物を含む試料と反応向上アナログを含む溶液（又は分析物を含む試料、反応向上アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）のゾーン、１種以上の標識CFSを含む溶液のゾーン〕中の分析物及び反応向上アナログの濃度又は／及び標識CFSの濃度よりも、分析物及び反応向上アナログの濃度又は／及び標識CFSの濃度の方が高くなるような部分が生じることを意味する。
上記工程(2)において、「当該分析物、反応向上アナログ及び標識CFSとを電気泳動的に接触させる（即ち、当該分析物と標識CFS、及び反応向上アナログと標識CFSを電気泳動的に接触させる）」とは、前述と同様に、分子拡散によらず（依存せず）に、より高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液を、それよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液の下流に配置させて、電気泳動を行った場合、溶液中のより高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質がそれよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を追い越すことを利用して、当該分析物、反応向上アナログ及び標識CFSとを接触させること（即ち、当該分析物と標識CFS、及び反応向上アナログと標識CFSをそれぞれ接触させて）を接触させることを意味する。
【００６９】
(l)標識アナログとCFSとを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料及び１種以上のCFSを含有する溶液と(b)標識アナログを含有する溶液とを、これらの溶液を予め細管外で混合することなく、分析物を含む試料と及び１種以上のCFSを含む溶液のゾーンと標識アナログを含む溶液のゾーンとが別々に形成されるように（液−液界面が形成されるように）、且つ細管に電圧を印加した際に当該標識アナログとCFSとの複合体Bが形成されるように、導入・配置させる。
(2)次いで、これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、当該標識アナログ、又は／及び分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかったCFSを濃縮させながら、分子拡散に依存せず、また物理的な混合を行うことなく、当該標識アナログとCFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該標識アナログと、分析物を含む試料と１種以上のCFSを含有する溶液中の分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかったCFSとを電気泳動的に接触させて）、標識アナログとCFSとの複合体Bを形成させる。
上記において、「溶液が均一に混合される前に」とは、工程(1)により、細管内に配置された、分析物を含む試料と及び１種以上のCFSを含む溶液、標識アナログを含む溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）が、分子拡散によって均一に混合される前を意味する。尚、「界面」も前述と同じ意味である。
また、上記工程(2)において、「細管に電圧を印加することによって、当該標識アナログ、又は／及び複合体Aの形成に関与しなかったCFSを濃縮させる」とは、前述と同様、当該標識アナログ、又は／及び分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかったCFSが、細管に電圧を印加した際に、バンド状（プラグ状）に集合してくることを言う。換言すれば、細管に電圧を印加した際に、当該物質が集合し、工程(1)で配置されたゾーン中の物質の濃度よりも、当該物質の濃度の方が高くなるような部分が生じること、即ち、細管に電圧を印加した際に、当該標識アナログ又は／及び分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかったCFSが集合し、工程(1)で配置された溶液ゾーン〔例えば分析物を含む試料と及び１種以上のCFSを含む溶液のゾーン、標識アナログを含む溶液のゾーン〕中の標識アナログの濃度又は／及び複合体Aの形成に関与しなかったCFSの濃度よりも、標識アナログの濃度又は／及び複合体Aの形成に関与しなかったCFSの濃度の方が高くなるような部分が生じることを意味する。
上記工程(2)において、「当該標識アナログとCFSとを電気泳動的に接触させる（即ち、当該標識アナログと、分析物を含む試料と１種以上のCFSを含有する溶液中の分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかったCFSとを電気泳動的に接触させる）」とは、前述と同様に、分子拡散によらず（依存せず）に、より高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液を、それよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液の下流に配置させて、電気泳動を行った場合、溶液中のより高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質がそれよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を追い越すことを利用して、当該標識アナログとCFSとを接触させること（即ち、当該標識アナログと、分析物を含む試料と１種以上のCFSを含有する溶液中の分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかったCFSとを電気泳動的に接触させること）を意味する。
【００７０】
(m)標識アナログと反応向上CFSとを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料及び１種以上の反応向上CFSを含有する溶液と(b)標識アナログを含有する溶液とを、これらの溶液を予め細管外で混合することなく、分析物を含む試料及び１種以上の反応向上CFSを含む溶液のゾーンと標識アナログを含む溶液のゾーンとが別々に形成されるように（液−液界面が形成されるように）、且つ細管に電圧を印加した際に当該標識アナログと反応向上CFSとの複合体Bが形成されるように、導入・配置させる。
(2)次いで、これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、当該標識アナログ、又は／及び分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかった反応向上CFSを濃縮させながら、分子拡散に依存せず、また物理的な混合を行うことなく、当該標識アナログと反応向上CFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該標識アナログと、分析物を含む試料と１種以上の反応向上CFSを含有する溶液中の分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかった反応向上CFSとを電気泳動的に接触させて）、標識アナログと反応向上CFSとの複合体Bを形成させる。
上記において、「溶液が均一に混合される前に」とは、工程(1)により、細管内に配置された、分析物を含む試料と及び１種以上の反応向上CFSを含む溶液、標識アナログを含む溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）が、分子拡散によって均一に混合される前を意味する。尚、「界面」も前述と同じ意味である。
また、上記工程(2)において、「細管に電圧を印加することによって、当該標識アナログ、又は／及び複合体Aの形成に関与しなかった反応向上CFSを濃縮させる」とは、前述と同様、当該標識アナログ、又は／及び分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかった反応向上CFSが、細管に電圧を印加した際に、バンド状（プラグ状）に集合してくることを言う。換言すれば、細管に電圧を印加した際に、当該物質が集合し、工程(1)で配置されたゾーン中の物質の濃度よりも、当該物質の濃度の方が高くなるような部分が生じること、即ち、細管に電圧を印加した際に、当該標識アナログ又は／及び分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかった反応向上CFSが集合し、工程(1)で配置された溶液ゾーン〔例えば分析物を含む試料と及び１種以上の反応向上CFSを含む溶液のゾーン、標識アナログを含む溶液のゾーン〕中の標識アナログの濃度又は／及び複合体Aの形成に関与しなかった反応向上CFSの濃度よりも、標識アナログの濃度又は／及び複合体Aの形成に関与しなかった反応向上CFSの濃度の方が高くなるような部分が生じることを意味する。
上記工程(2)において、「当該標識アナログと反応向上CFSとを電気泳動的に接触させる（即ち、当該標識アナログと、分析物を含む試料と１種以上の反応向上CFSを含有する溶液中の分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかった反応向上CFSとを電気泳動的に接触させる）」とは、前述と同様に、分子拡散によらず（依存せず）に、より高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液を、それよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液の下流に配置させて、電気泳動を行った場合、溶液中のより高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質がそれよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を追い越すことを利用して、当該標識アナログと反応向上CFSとを接触させること（即ち、当該標識アナログと、分析物を含む試料と１種以上の反応向上CFSを含有する溶液中の分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかった反応向上CFSとを電気泳動的に接触させること）を意味する。
【００７１】
(n)標識アナログとCFS及び反応向上CFSを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料と少なくとも１種のCFS（又は少なくとも１種の反応向上CFS）を含有する溶液、(b)標識アナログを含有する溶液、及び(c)少なくとも１種の反応向上CFS（又は少なくとも１種のCFS）を含有する溶液とを、これらの溶液を予め細管外で混合することなく、分析物を含む試料と１種以上のCFS（又は少なくとも１種の反応向上CFS）を含む溶液のゾーン、標識アナログを含む溶液のゾーン、及び１種以上の反応向上CFS（又は少なくとも１種のCFS）を含む溶液のゾーンとが別々に形成されるように（液−液界面が形成されるように）、且つ細管に電圧を印加した際に当該分析物とCFS及び反応向上CFSとの複合体A及び当該標識アナログとCFS及び反応向上CFSとの複合体Bが形成されるように、導入・配置させる。
(2)次いで、これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、当該分析物と少なくとも１種のCFS（又は少なくとも１種の反応向上CFS）との複合体、標識アナログ、及び少なくとも１種の反応向上CFS（又は少なくとも１種のCFS）から選ばれる少なくとも１種を濃縮させながら、分子拡散に依存せず、また物理的な混合を行うことなく、当該分析物、標識アナログ、複合体形成物質及び反応向上結合物質とを電気泳動的に接触させて（即ち、溶液(a)中の分析物とCFS（又は反応向上CFS）との複合体と溶液(c)中の反応向上CFS（又はCFS）、並びに標識アナログ、溶液(a)中の分析物との複合体の形成に関与しなかったCFS（又は反応向上CFS）及び溶液(c)中の反応向上CFS（又はCFS）を電気泳動的に接触させて）、当該分析物とCFS及び反応向上CFSとの複合体A及び当該標識アナログとCFS及び反応向上CFSとの複合体Bを形成させる。
上記において、「溶液が均一に混合される前に」とは、工程(1)により、細管内に配置された、分析物を含む試料と１種以上のCFS（又は少なくとも１種の反応向上CFS）を含む溶液、標識アナログを含む溶液、１種以上の反応向上CFS（又は少なくとも１種のCFS）を含む溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）が、分子拡散によって均一に混合される前を意味する。尚、「界面」も前述と同じ意味である。
また、上記工程(2)において、「細管に電圧を印加することによって、当該分析物と少なくとも１種のCFS（又は少なくとも１種の反応向上CFS）との複合体、標識アナログ、及び少なくとも１種の反応向上CFS（又は少なくとも１種のCFS）から選ばれる少なくとも１種を濃縮させる」とは、前述と同様、当該分析物と少なくとも１種のCFS（又は少なくとも１種の反応向上CFS）との複合体、標識アナログ、及び少なくとも１種の反応向上CFS（又は少なくとも１種のCFS）から選ばれる少なくとも１種が、細管に電圧を印加した際に、バンド状（プラグ状）に集合してくることを言う。換言すれば、細管に電圧を印加した際に、当該物質が集合し、工程(1)で配置されたゾーン中の物質の濃度よりも、当該物質の濃度の方が高くなるような部分が生じること、即ち、細管に電圧を印加した際に、当該分析物と少なくとも１種のCFS（又は少なくとも１種の反応向上CFS）との複合体、標識アナログ、及び少なくとも１種の反応向上CFS（又は少なくとも１種のCFS）から選ばれる少なくとも１種が集合し、工程(1)で配置された溶液ゾーン〔例えば分析物を含む試料と１種以上のCFS（又は少なくとも１種の反応向上CFS）を含む溶液のゾーン、標識アナログを含む溶液のゾーン、１種以上の反応向上CFS（又は少なくとも１種のCFS）を含む溶液のゾーン〕中の分析物と少なくとも１種のCFS（又は少なくとも１種の反応向上CFS）との複合体の濃度、標識アナログの濃度、又は少なくとも１種の反応向上CFS（又は少なくとも１種のCFS）の濃度よりも、分析物と少なくとも１種のCFS（又は少なくとも１種の反応向上CFS）との複合体の濃度、標識アナログの濃度、又は少なくとも１種の反応向上CFS（又は少なくとも１種のCFS）の濃度の方が高くなるような部分が生じることを意味する。
上記工程(2)において、「当該分析物、標識アナログ、複合体形成物質及び反応向上結合物質とを電気泳動的に接触させる（即ち、溶液(a)中の分析物とCFS（又は反応向上CFS）との複合体と溶液(c)中の反応向上CFS（又はCFS）、並びに標識アナログ、溶液(a)中の分析物との複合体の形成に関与しなかったCFS（又は反応向上CFS）及び溶液(c)中の反応向上CFS（又はCFS）を電気泳動的に接触させる）」とは、前述と同様に、分子拡散によらず（依存せず）に、より高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液を、それよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液の下流に配置させて、電気泳動を行った場合、溶液中のより高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質がそれよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を追い越すことを利用して、当該分析物、標識アナログ、複合体形成物質及び反応向上結合物質とを電気泳動的に接触させること（即ち、溶液(a)中の分析物とCFS（又は反応向上CFS）との複合体と溶液(c)中の反応向上CFS（又はCFS）、並びに標識アナログ、溶液(a)中の分析物との複合体の形成に関与しなかったCFS（又は反応向上CFS）及び溶液(c)中の反応向上CFS（又はCFS）を電気泳動的に接触させること）を意味する。
【００７２】
(o)反応向上アナログと標識CFSとを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料及び１種以上の標識CFSを含有する溶液と(b)反応向上アナログを含有する溶液とを、これらの溶液を予め細管外で混合することなく、分析物を含む試料と及び１種以上の標識CFSを含む溶液のゾーンと反応向上アナログを含む溶液のゾーンが別々に形成されるように（液−液界面が形成されるように）、且つ細管に電圧を印加した際に当該反応向上アナログと標識CFSとの複合体Bが形成されるように、導入・配置させる。
(2)次いで、これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、当該反応向上、又は／及び分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかった標識CFSを濃縮させながら、分子拡散に依存せず、また物理的な混合を行うことなく、当該反応向上アナログと標識CFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該反応向上アナログと、分析物を含む試料と１種以上の標識CFSを含有する溶液中の分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかった標識CFSとを電気泳動的に接触させて）、反応向上アナログと標識CFSとの複合体Bを形成させる。
上記において、「溶液が均一に混合される前に」とは、工程(1)により、細管内に配置された、分析物を含む試料と及び１種以上の標識CFSを含む溶液、反応向上アナログを含む溶液、要すれば液体のそれぞれのゾーン（液−液界面）が、分子拡散によって均一に混合される前を意味する。尚、「界面」も前述と同じ意味である。
また、上記工程(2)において、「細管に電圧を印加することによって、当該反応向上アナログ、又は／及び複合体Aの形成に関与しなかった標識CFSを濃縮させる」とは、前述と同様、当該反応向上アナログ、又は／及び分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかった標識CFSが、細管に電圧を印加した際に、バンド状（プラグ状）に集合してくることを言う。換言すれば、細管に電圧を印加した際に、当該物質が集合し、工程(1)で配置されたゾーン中の物質の濃度よりも、当該物質の濃度の方が高くなるような部分が生じること、即ち、細管に電圧を印加した際に、当該反応向上アナログ、又は／及び分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかった標識CFSが集合し、工程(1)で配置された溶液ゾーン〔例えば分析物を含む試料と及び１種以上の標識CFSを含む溶液のゾーン、反応向上アナログを含む溶液のゾーン〕中の反応向上アナログの濃度又は／及び複合体Aの形成に関与しなかった標識CFSの濃度よりも、反応向上アナログの濃度又は／及び複合体Aの形成に関与しなかった標識CFSの濃度の方が高くなるような部分が生じることを意味する。
上記工程(2)において、「当該反応向上アナログと標識CFSとを電気泳動的に接触させる（即ち、当該反応向上アナログと、分析物を含む試料と１種以上の標識CFSを含有する溶液中の分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかった標識CFSとを電気泳動的に接触させる）」とは、前述と同様に、分子拡散によらず（依存せず）に、より高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液を、それよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を含有する溶液の下流に配置させて、電気泳動を行った場合、溶液中のより高い電気泳動移動度（より速い電気泳動速度）を有する物質がそれよりも低い電気泳動移動度（遅い電気泳動速度）を有する物質を追い越すことを利用して、当該反応向上アナログと標識CFSとを接触させること（即ち、当該反応向上アナログと、分析物を含む試料と１種以上の標識CFSを含有する溶液中の分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかった標識CFSとを電気泳動的に接触させること）を意味する。
【００７３】
上記方法(a)〜(o)において、濃縮される物質〔例えば分析物、CFS、標識CFS、反応向上CFS、標識反応向上CFS、標識アナログ、反応向上アナログ、分析物とCFSとの複合体、分析物と反応向上CFSとの複合体、分析物と標識CFSとの複合体、標識アナログとCFSとの複合体、及び反応向上アナログとCFSとの複合体等〕の濃縮の度合い（程度）としては、工程(1)で配置された溶液ゾーン中の物質〔例えば分析物、CFS、標識CFS、反応向上CFS、標識反応向上CFS、標識アナログ、反応向上アナログ、分析物とCFSとの複合体、分析物と反応向上CFSとの複合体、分析物と標識CFSとの複合体、標識アナログとCFSとの複合体、反応向上アナログとCFSとの複合体〕の濃度に対する、細管に電圧を印加した際に当該物質が集合した部分（バンド状）の物質〔例えば分析物、CFS、標識CFS、反応向上CFS、標識反応向上CFS、標識アナログ、反応向上アナログ、分析物とCFSとの複合体、分析物と反応向上CFSとの複合体、分析物と標識CFSとの複合体、標識アナログとCFSとの複合体、反応向上アナログとCFSとの複合体〕の濃度が、下限が通常1.5倍以上、好ましくは５倍以上、より好ましくは10倍以上、更に好ましくは25倍以上であり、上限は特に限定されないが、通常107倍以下、好ましくは106倍以下、より好ましくは105倍以下である。
また、上記方法(a)〜(o)において、「濃縮させながら、接触させる」とは、前述と同様に、濃縮と接触が、同時並行的に行われる場合、或いは、濃縮が実質的に完了した後に接触が行われる場合、の両者を意味し、言うなれば接触が実質的に完了した後に濃縮が行われる場合以外の場合を包含する。
【００７４】
上記方法(a)〜(o)において、工程(2)は、前述同様、工程(1)によって細管内に配置された溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することにより、濃縮、接触及び複合体の形成が行い得る条件下で、当該細管に電圧を印加することにより実施し得る。
上記方法(a)〜(o)において、工程(2)は、前述同様、工程(1)によって細管内に配置された溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することにより、濃縮、接触及び複合体の形成が行い得る条件下で、当該細管に電圧を印加することにより実施し得る。
このような条件の具体例、好ましい態様等は、前述した通りであり、例えば使用される、分析物、CFS、標識CFS、反応向上CFS、標識反応向上CFS、標識アナログ、反応向上アナログ、これらの２種以上の複合体等の電気泳動移動度、或いはこれらを含む溶液の電気伝導度等を適宜考慮して、前述した濃縮方法に準じて、上記の工程(2)を実施すればよい。
また、工程(2)における、印加電圧、その他の反応条件（例えばpH、温度、時間等）等も、前述した如き範囲から、分析物、CFS、標識CFS、反応向上CFS、標識反応向上CFS、標識アナログ、反応向上アナログ、これらの２種以上の複合体、これらを含む溶液等を考慮して、適宜決定すればよい。
【００７５】
２．本発明の分離方法
本発明の分離方法は、上記した如き本発明の複合体形成方法により形成された分析物又はそのアナログと１種以上のCFSとの複合体と、当該複合体の形成に関与しなかったCFS又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログとを、電気的に分離することを特徴とする。
即ち、本発明の工程(2)において、細管内を電気泳動的に移動することによって互いに接触して形成された溶液中の分析物又はそのアナログとCFSとの複合体と、当該複合体の形成に関与しなかったCFS又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログとを、更に電気泳動的に移動して分離するものである。
本発明の分離方法は、例えば細管を用いて物質を電気的に移動させて分離する自体公知の方法において、分析物又はそのアナログと１種以上のCFSとの複合体と、当該複合体の形成に関与しなかったCFS又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログとを電気的に分離する以外は、自体公知の方法に従って実施すれば良く、使用される材料、試薬類等も自体公知の方法で用いられているものを使用すればよい。
従って、本発明の分離方法は、以下の工程(1)〜(3)を含むものである。
(1)細管内に、(a)分析物又はそのアナログを含有する溶液と、(b)１種以上の、複合体形成物質（CFS）と当該分析物又はそのアナログを含有する溶液とを、これらの溶液を予め混合することなく且つ当該細管に電圧を印加することにより当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体が形成されるように配置させる工程（導入工程）、
(2)これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、当該分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSを濃縮させながら、当該分析物又はそのアナログとCFSとを接触させ、当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体を形成させる工程（濃縮反応工程）、及び
(3)当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかったCFS又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログとを、更に電気的に移動させて分離する工程（分離工程）。
尚、上記において、分析物、アナログ（標識アナログ、反応向上アナログ）、分析物又はそのアナログを含有する溶液、分析物を含む試料、CFS（標識CFS、反応向上CFS、標識反応向上CFS）、それを含む溶液、導入工程〔工程(1)〕、濃縮反応工程〔工程(2)〕等の態様、具体例、好ましい例等は前述した通りである。
【００７６】
２−１．分離工程〔工程(3)〕
上記の如く本発明の工程(1)及び(2)によって得られた分析物又はそのアナログとCFSとの複合体と、当該複合体の形成に関与しなかったCFS又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログとを、更に電気的に移動させて細管内で分離する。
本発明の分離方法は、分析物又はそのアナログとCFSとの複合体と当該複合体の形成に関与しなかったCFS又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログとを分離するものであり、より具体的には、(1)当該分析物とCFSとの複合体と、当該複合体の形成に関与しなかったCFSとを、更に電気的に移動させて分離するか、或いは(2)当該アナログとCFSとの複合体と、当該複合体の形成に関与しなかったアナログ、又は当該複合体の形成に関与しなかった当該分析物とCFSとの複合体とを、更に電気的に移動させて分離するものである。
例えば本発明の分離方法を非競合法（例えば後述の方法(a)〜(g)等）で用いる場合において、標識物質を含むCFS（標識CFS又は標識反応向上CFS）を用いる場合には、少なくとも、分析物とCFSとの複合体の形成に関与しなかった（遊離の）標識物質を含むCFSと、分析物を含む複合体とを分離すればよく、標識物質を含まないCFSを必ずしも当該複合体から分離する必要はないが、当該複合体と複合体の形成に関与しなかったCFS（遊離のCFS）の全てとを分離するのが好ましい。
また、例えば本発明の分離方法を競合法（例えば後述の方法(h)〜(o)等）で用いる場合において、標識アナログを用いる場合には、少なくとも、標識アナログと（全ての）CFSとの（最終的な）複合体と、当該複合体の形成に関与しなかった標識アナログ（遊離の標識アナログ）とを分離すればよく、分析物とCFSとの複合体と、標識アナログと（全ての）CFSとの（最終的な）複合体とを必ずしも分離する必要はない。また、反応向上アナログを用いる場合には、少なくとも、反応向上アナログと標識CFSとの複合体と、分析物と標識CFSとの複合体とを分離すればよい。
【００７７】
本発明の工程(3)は、分析物又はそのアナログとCFSとの複合体と当該複合体の形成に関与しなかったCFS又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログとを充分に分離し得る方法を用いて実施すればよく、このような方法としては、通常この分野で用いられる自体公知の電気泳動法が使用可能である。
具体的には、例えば前述した如きITP、IF、例えば細管内が基本的に泳動緩衝液だけで満たされており、それぞれの物質が荷電の大小によって異なる速度で移動することによって目的物質の分離を行う、所謂キャピラリーゾーン電気泳動法（CZE）〔文献：H.Hisamoto at al., Chem.Commun., (2001), 2662等〕、イオン性のミセルを形成する荷電物質を使用して、当該ミセルとの相互作用によって目的物質の分離を行う、所謂ミセル動電クロマトグラフィー（MEKC）〔文献：S. Terabe, Trends Anal. Chem., (1989), 8, 129等〕、分子篩い効果を有するポリマー等の充填剤を使用し、目的物質の持つ荷電とポリマーとの相互作用を引き起こす分子の大きさによって目的物質を分離する、所謂キャピラリーゲル電気泳動法（CGE）〔文献：S. Hjerten, J.Chromatogr., (1987), 397, 409等〕等の種々の原理（分離モード）に基づく電気泳動法が使用できる。
尚、本発明においては、上記した如き電気泳動法において使用される試薬類等が適宜使用可能である。また、このような試薬類、分離の際の操作方法、条件等は、前述した如き文献等の記載に準じて適宜選択することができる。
本発明の工程(3)において用いられる電気泳動法としては、工程(2)で用いた濃縮法と同じ原理（分離モード）の電気泳動法を用いても、また、工程(2)で用いた濃縮法と異なる原理（分離モード）の電気泳動法を用いてもよい。
尚、工程(2)と同じ原理（分離モード）の電気泳動法を用いると、分析物又はそのアナログとCFSとの複合体と当該複合体の形成に関与しなかったCFS又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログとの分離が不十分である場合等においては、工程(2)で用いた濃縮法と異なる原理（分離モード）の電気泳動法を用いて本発明の工程(3)を行うのが望ましい。
このような場合には、工程(2)をITP、FASS等で実施した後、工程(3)をCZE等で実施するのが特に好ましい。
上記したように、本発明の分離方法においては、(i)工程(2)によって、分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSを濃縮させながら、当該分析物又はそのアナログとCFSとを接触させて当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体を形成させた後（言い換えれば、分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSが濃縮される条件下で当該細管に電圧を印加して、当該分析物又はそのアナログとCFSとを接触させて当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体を形成させた後）、引き続き、同じ分離モードを用いて印加する電圧を変化させることなく（言い換えれば、工程(2)と同じ条件下で、同じ強さの電圧を印加したまま）、当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかったCFS又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログとを、更に電気的に移動させて分離させる場合、或いは(ii)工程(2)によって、分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSを濃縮させながら、当該分析物又はそのアナログとCFSとを接触させて当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体を形成させた後（言い換えれば、分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSが濃縮される条件下で当該細管に電圧を印加して、当該分析物又はそのアナログとCFSとを接触させて当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体を形成させた後）、異なる分離モード又は／及び異なる印加電圧を用いて（言い換えれば、工程(2)と条件（用いる分離モード）又は／及び印加する電圧の強さを変化させて）、当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかったCFS又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログとを、更に電気的に移動させて分離させる場合を包含する。
【００７８】
工程(3)における印加電圧は、分析物又はそのアナログとCFSとの複合体と当該複合体の形成に関与しなかったCFS又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログとが充分に分離される範囲であればよく、通常この分野で用いられている範囲から適宜選択される。より具体的には、電圧は、下限が通常５V／cm以上、好ましくは10V／cm以上、より好ましくは50V／cm以上、更に好ましくは500V／cm以上、特に好ましくは1000V／cm以上であり、上限が通常10000V／cm以下、好ましくは5000V/cm以下、より好ましくは2000V／cm以下の範囲の電界強度となるように印加される。尚、前述したように、工程(3)における印加電圧は、工程(2)における印加電圧と同じ強さであっても、また、異なる強さであってもよい。
また、その他の分離条件（例えばpH、温度、時間等）は、分析物又はそのアナログとCFSとの複合体と当該複合体の形成に関与しなかったCFS又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログとが充分に分離される範囲であればよく、通常この分野で用いられている自体公知の方法に従い適宜選択される。
具体的には、分析物又はそのアナログとCFSの性質により異なるため一概には言えないが、pHは下限が通常２以上、好ましくは４以上、より好ましくは５以上であり、上限が通常13以下、好ましくは11以下、より好ましくは９以下である。温度は、下限が通常０℃以上、好ましくは５℃以上、より好ましくは10℃以上であり、上限が通常90℃以下、好ましくは80℃以下、より好ましくは50℃以下、更に好ましくは40℃以下、特に好ましくは30℃以下である。また、時間は、下限が通常１分以上、好ましくは２分以上、より好ましくは３分以上であり、上限が20分以下、好ましくは10分以下である。
【００７９】
上記したように工程(3)は細管内で行われるが、このような細管としては、工程(2)で用いられるのと同じものが挙げられ、また、細管の材質及び内径等も前述した通りである。
また、本発明の工程(3)は、通常、上記した如き細管内（分離領域内）に泳動用緩衝液又は充填剤を含有する当該泳動用緩衝液等の泳動媒体が充填された状態で実施される。尚、泳動媒体の具体例、使用濃度、pH、分子量、粘度、細管への導入方法、導入時期等は前述と同じである。
尚、上記したように、工程(2)で用いた濃縮法と異なる原理（分離モード）の電気泳動法を用いて本発明の工程(3)を行う場合には、工程(2)で使用する泳動媒体と工程(3)で使用する泳動媒体とは同一のものである必要はなく、これらを適宜選択して異なる泳動媒体を使用しても良い。
尚、本発明の工程(2)及び(3)は、通常、同一の細管を用いて（同一の細管内で）行われる。即ち、本発明の分離方法で用いられる細管は、少なくとも、本発明の工程(1)を実施し得る部分、本発明の工程(2)を実施し得る部分、及び本発明の工程(3)を実施し得る部分を有するものである。これらの部分は、細管にそれぞれ独立して存在していても、また、それらの一部或いは全部が重複して存在していても良い。言い換えれば、本発明の分離方法で用いられる細管は、結果的に、その細管内に、(a)分析物又はそのアナログを含有する溶液と、(b)１種以上の、当該分析物又はそのアナログとの複合体を形成し得る物質（CFS）を含有する溶液とを、これらの溶液を予め混合することなく且つ当該細管に電圧を印加することにより当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体が形成されるように配置させることができ、また、これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、当該分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSを濃縮させながら、当該分析物又はそのアナログとCFSとを接触させて当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体を形成させることができ、更には当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかったCFS又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログとを、更に電気的に移動させて分離することができるものである。
【００８０】
２−２．具体的な分離方法
本発明の分離方法の実施の形態を以下に具体的に示す。
【００８１】
(a)標識物質及び反応向上物質が結合していないCFSを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)１種以上の、CFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(a)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(a)における工程(2)のように、当該分析物とCFSとを電気泳動的に接触させて当該分析物とCFSとの複合体を形成させる。
(3)当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかったCFSとを、細管の分離領域において、更に電気的に移動させて分離する。
【００８２】
(b)標識CFSを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)１種以上の、標識CFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(b)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(b)における工程(2)のように、当該分析物と標識CFSとを接触させて当該分析物と標識CFSとの複合体を形成させる。
(3)当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかった標識CFSとを、細管の分離領域において、更に電気的に移動させて分離する。
【００８３】
(c)反応向上CFSを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)１種以上の、反応向上CFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(c)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(c)における工程(2)のように、当該分析物と反応向上CFSとを電気泳動的に接触させて当該分析物と反応向上CFSとの複合体を形成させる。
(3)当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかった反応向上CFSとを、細管の分離領域において、更に電気的に移動させて分離する。
【００８４】
(d)標識反応向上CFSを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)１種以上の、標識反応向上CFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(d)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(d)における工程(2)のように、当該分析物と標識反応向上CFSとを電気泳動的に接触させて当該分析物と標識反応向上CFSとの複合体を形成させる。
(3)当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかった標識反応向上CFSとを、細管の分離領域において、更に電気的に移動させて分離する。
【００８５】
(e)標識物質及び反応向上物質が結合していないCFS及び反応向上CFSを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)少なくとも１種の、CFSを含有する溶液及び(c)少なくとも１種の、反応向上CFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(e)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(e)における工程(2)のように、当該分析物、CFS及び反応向上CFSを接触させて当該分析物、CFS及び反応向上CFSの複合体を形成させる。
(3)当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかったCFS及び要すれば当該複合体の形成に関与しなかった反応向上CFSとを、細管の分離領域において、更に電気的に移動させて分離する。
【００８６】
(f)標識CFS及び反応向上CFSを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)少なくとも１種の、標識CFSを含有する溶液及び(c)少なくとも１種の、反応向上CFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(f)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(f)における工程(2)のように、当該分析物、標識CFS及び反応向上CFSを電気泳動的に接触させて当該分析物、標識CFS及び反応向上CFSの複合体を形成させる。
(3)当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかった標識CFS及び当該複合体の形成に関与しなかった要すれば反応向上CFSとを、細管の分離領域において、更に電気的に移動させて分離する。
【００８７】
(g)標識物質及び反応向上物質が結合していないCFS及び標識反応向上CFSを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)少なくとも１種の、CFSを含有する溶液及び(c)少なくとも１種の、標識反応向上CFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(g)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(g)における工程(2)のように、当該分析物、CFS及び標識反応向上CFSを電気泳動的に接触させて当該分析物、CFS及び標識反応向上CFSの複合体を形成させる。
(3)当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかった標識反応向上CFS及び要すればCFSとを、細管の分離領域において、更に電気的に移動させて分離する。
【００８８】
本発明の分離方法は、所謂競合法においても使用可能である。競合法において実施する場合は例えば以下の通りである。
(h)標識アナログとCFSとを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料と標識アナログを含有する溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）及び(b)１種以上のCFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(h)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(h)における工程(2)のように、当該分析物、標識アナログ及びCFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該分析物とCFS、及び標識アナログとCFSを電気泳動的に接触させて）当該分析物とCFSとの複合体A及び当該標識アナログとCFSとの複合体Bを形成させる。
(3)当該複合体Bと、当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログとを、細管の分離領域において、更に分離する。
【００８９】
(i)標識アナログと反応向上CFSとを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料と標識アナログを含有する溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）及び(b)１種以上の反応向上CFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(i)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(i)における工程(2)のように、当該分析物、標識アナログ及び反応向上CFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該分析物と反応向上CFS、及び標識アナログと反応向上CFSを電気泳動的に接触させて）当該分析物と反応向上CFSとの複合体A及び当該標識アナログと反応向上CFSとの複合体Bを形成させる。
(3)当該複合体Bと、当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログとを、細管の分離領域において、更に分離する。
【００９０】
(j)標識アナログとCFS及び反応向上CFSを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料と標識アナログを含有する溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）、(b)少なくとも１種のCFSを含有する溶液及び(c)少なくとも１種の反応向上CFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(j)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(j)における工程(2)のように、当該分析物、標識アナログ、CFS及び反応向上CFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該分析物、CFS及び反応向上CFS、並びに標識アナログ、CFS及び反応向上CFSを電気泳動的に接触させて）当該分析物とCFS及び反応向上CFSとの複合体A及び当該標識アナログとCFS及び反応向上CFSとの複合体Bを形成させる。
(3)当該複合体Bと、当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログとを、細管の分離領域において、更に分離する。
【００９１】
(k)反応向上アナログと標識CFSとを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料と反応向上アナログを含有する溶液及（又は分析物を含む試料、反応向上アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）び(b)１種以上の標識CFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(k)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(k)における工程(2)のように、当該分析物、反応向上アナログ及び標識CFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該分析物と標識CFS、及び反応向上アナログと標識CFSを電気泳動的に接触させて）当該分析物と標識CFSとの複合体A及び当該反応向上アナログと標識CFSとの複合体Bを形成させる。
(3)当該複合体Bと、当該複合体Aとを、細管の分離領域において、更に電気的に移動させて分離する。
【００９２】
(l)標識アナログとCFSとを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料及び１種以上のCFSを含有する溶液と(b)標識アナログを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(l)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(l)における工程(2)のように、当該標識アナログとCFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該標識アナログと、分析物を含む試料と１種以上のCFSを含有する溶液中の分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかったCFSとを電気泳動的に接触させて）、標識アナログとCFSとの複合体Bを形成させる。
(3)当該複合体Bと、当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログとを、細管の分離領域において、更に分離する。
【００９３】
(m)標識アナログと反応向上CFSとを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料及び１種以上の反応向上CFSを含有する溶液と(b)標識アナログを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(m)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(m)における工程(2)のように、当該標識アナログと反応向上CFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該標識アナログと、分析物を含む試料と１種以上の反応向上CFSを含有する溶液中の分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかった反応向上CFSとを電気泳動的に接触させて）、標識アナログと反応向上CFSとの複合体Bを形成させる。
(3)当該複合体Bと、当該複合体の形成に関与しなかった標識アナログとを、細管の分離領域において、更に分離する。
【００９４】
(n)標識アナログとCFS及び反応向上CFSを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料と少なくとも１種のCFS（又は少なくとも１種の反応向上CFS）を含有する溶液、(b)標識アナログを含有する溶液、及び(c)少なくとも１種の反応向上CFS（又は少なくとも１種のCFS）を含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(n)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(n)における工程(2)のように、当該分析物、標識アナログ、複合体形成物質及び反応向上結合物質とを電気泳動的に接触させる（即ち、溶液(a)中の分析物とCFS（又は反応向上CFS）との複合体と溶液(c)中の反応向上CFS（又はCFS）、並びに標識アナログ、溶液(a)中の分析物との複合体の形成に関与しなかったCFS（又は反応向上CFS）及び溶液(c)中の反応向上CFS（又はCFS）を電気泳動的に接触させる）。
(3)当該複合体Bと、当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログとを、細管の分離領域において、更に分離する。
【００９５】
(o)反応向上アナログと標識CFSとを用いる場合
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料及び１種以上の標識CFSを含有する溶液と(b)反応向上アナログを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(o)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(o)における工程(2)のように、当該反応向上アナログと標識CFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該反応向上アナログと、分析物を含む試料と１種以上の標識CFSを含有する溶液中の分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかった標識CFSとを電気泳動的に接触させて）、反応向上アナログと標識CFSとの複合体Bを形成させる。
(3)当該複合体Bと、当該複合体Aとを、細管の分離領域において、更に電気的に移動させて分離する。
【００９６】
３．本発明の測定方法
本発明の分離方法により分離された、分析物又はそのアナログとCFSとの複合体の量、当該複合体の形成に関与しなかったCFS又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログの量を、例えば複合体中の標識物質、又は複合体の形成に関与しなかったCFS中の標識物質又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログ中の標識物質の性質に応じた方法により測定すれば、試料中に存在する分析物の量を、簡便且つ高感度に短時間に求めることができる。
従って、本発明の測定方法は、
(1)細管内に、(a)分析物又はそのアナログを含有する溶液と、(b)１種以上の、当該分析物又はそのアナログとの複合体を形成し得る物質（CFS）を含有する溶液とを、これらの溶液を予め混合することなく且つ当該細管に電圧を印加することにより当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体が形成されるように配置させる工程（導入工程）、
(2)これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、当該分析物又はそのアナログ、又は／及び少なくとも１種のCFSを濃縮させながら、当該分析物又はそのアナログとCFSとを接触させ、当該分析物又はそのアナログとCFSとの複合体を形成させる工程（濃縮反応工程）、及び
(3)当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかったCFS又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログとを、更に電気的に移動させて分離する工程（分離工程）、及び
(4)分離された複合体の量、又は当該複合体の形成に関与しなかったCFS又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログの量を測定し、その結果に基づいて分析物の量を求める工程（測定工程）、
を含むことを特徴とする。
尚、上記において、分析物、アナログ（標識アナログ、反応向上アナログ）、分析物又はそのアナログを含有する溶液、分析物を含む試料、CFS（標識CFS、反応向上CFS、標識反応向上CFS）、それを含む溶液、導入工程〔工程(1)〕、濃縮反応工程〔工程(2)〕、分離工程〔工程(3)〕等の態様、具体例、好ましい例等は前述した通りである。
【００９７】
本発明の測定方法は、上記の如く本発明の工程(3)によって分離された、分析物又はそのアナログとCFSとの複合体の量、又は当該複合体の形成に関与しなかったCFSの量又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログの量を測定し、その結果に基づいて分析物の量を求めるものであり、より具体的には、(1)本発明の工程(3)によって分離された、分析物とCFSとの複合体の量又は当該複合体の形成に関与しなかったCFSの量を測定し、その結果に基づいて分析物の量を求めるか、或いは(2)分離された、アナログとCFSとの複合体の量、又は当該当該複合体の形成に関与しなかったアナログの量若しくは分析物とCFSとの複合体の量を測定し、その結果に基づいて分析物の量を求めるものである。
本発明の測定方法は、非競合法及び競合法の何れにも適用可能である。
即ち、非競合法により、本発明の測定法を実施する場合には、例えば以下のようにして行えばよい。
(1)本発明の工程(1)により、細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)１種以上の、CFS（CFS、標識CFS、反応向上CFS、標識反応向上CFS、これらの組合せ）を含有する溶液とを、これらの溶液を予め混合することなく且つ当該細管に電圧を印加することにより当該分析物とCFSとの複合体〔（分析物−CFS）複合体、（分析物−標識CFS）複合体、（分析物−反応向上CFS）複合体、（分析物−標識反応向上CFS）複合体、（CFS−分析物−反応向上CFS）複合体、（標識CFS−分析物−反応向上CFS）複合体、（CFS−分析物−標識反応向上CFS）複合体、これらの組合せ等〕が形成されるように、配置させ、
(2)本発明の工程(2)により、これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、当該分析物又は／及び少なくとも１種のCFSを濃縮させながら、当該分析物とCFSとを接触させて当該分析物とCFSとの複合体を形成させ、
(3)本発明の工程(3)により、当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかったCFSとを、更に電気的に移動させて分離し、ついで、
(4)分離された複合体の量又は当該複合体の形成に関与しなかったCFSの量を測定し、その結果に基づいて試料中の分析物の量を求める。
【００９８】
また、競合法により、本発明の測定法を実施する場合には、例えば以下のようにして行えばよい。
(1)本発明の工程(1)により、細管内に、(i)(a)分析物を含む試料（又は分析物を含む試料及び１種以上のCFSを含む溶液）、(b)標識物質により標識された標識アナログを含有する溶液（又は標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）及び(c)１種以上のCFS（CFS、反応向上CFS、これらの組合せ）を含有する溶液とを、又は(ii)(a)分析物を含む試料と標識アナログを含有する溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）及び(b)１種以上のCFS（CFS、反応向上CFS、これらの組合せ）を含有する溶液とを、或いは(iii)(a)分析物を含む試料と１種以上のCFS（CFS、反応向上CFS、これらの組合せ）を含有する溶液、及び(b)標識アナログを含有する溶液（又は標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）とを、これらの溶液を予め混合することなく且つ当該細管に電圧を印加することにより、当該標識アナログとCFSとの複合体B〔（標識アナログ−CFS）複合体、（標識アナログ−反応向上CFS）複合体、（CFS−標識アナログ−反応向上CFS）、これらの組合せ等〕が形成されるように、或いは当該分析物とCFSとの複合体A〔（分析物−CFS）複合体、（分析物−反応向上CFS）複合体、（CFS−分析物−反応向上CFS）、これらの組合せ〕及び複合体Bが形成されるように、配置させ、
(2)本発明の工程(2)により、これらの溶液が均一に混合される前に、当該細管に電圧を印加することによって、当該分析物、標識アナログ及び少なくとも１種のCFSの少なくとも１種を濃縮させながら、(i)当該標識アナログとCFSとを接触させて（即ち、当該標識アナログと、分析物を含む複合体（複合体A）の形成に関与しなかったCFSを接触させて）、又は(ii)当該分析物、標識アナログ及びCFSを接触させて（即ち、当該分析物とCFS、及び標識アナログとCFSとを接触させて）、当該標識アナログとCFSとの複合体B、又は当該分析物とCFSとの複合体A及び複合体Bを形成させ、
(3)本発明の工程(3)により、当該複合体Bと、当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログとを、更に分離し、
(4)分離された複合体Bの量又は当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログの量を測定し、その結果に基づいて試料中の分析物の量を求める。
【００９９】
また、本発明に係る競合法は、以下の方法によっても実施可能である。
(1)本発明の工程(1)により、細管内に、(i)(a)分析物を含む試料（又は分析物を含む試料及び１種以上の複合体形成物質を含む溶液）、(b)反応向上物質が結合したアナログ（反応向上アナログ）を含有する溶液（又は反応向上アナログ及び１種以上の複合体形成物質を含む溶液）及び(c)１種以上の複合体形成物質（複合体形成物質、反応向上結合物質、これらの組合せ）を含有する溶液とを、又は(ii)(a)分析物を含む試料と反応向上アナログを含有する溶液（又は分析物を含む試料、反応向上アナログ及び１種以上の複合体形成物質を含む溶液）及び(b)１種以上の複合体形成物質（複合体形成物質、反応向上結合物質、これらの組合せ）を含有する溶液とを、或いは(iii)(a)分析物を含む試料と１種以上の複合体形成物質（複合体形成物質、反応向上結合物質、これらの組合せ）を含有する溶液、及び(b)反応向上アナログを含有する溶液（又は反応向上アナログ及び１種以上の複合体形成物質を含む溶液）とを、これらの溶液を予め混合することなく且つ当該細管に電圧を印加することにより、反応向上アナログと標識CFSとの複合体B、又は分析物と標識CFSとの複合体A及び複合体Bが形成されるように、配置させ、
(2)本発明の工程(2)により、これらの溶液が均一に混合される前に、当該分析物、反応向上アナログ及び少なくとも１種の標識CFSの少なくとも１種を濃縮させながら、(i)当該反応向上アナログと標識CFSとを接触させ（即ち、反応向上アナログと、分析物を含む複合体（複合体A）の形成に関与しなかった標識CFSとを接触させ）、又は(ii)当該分析物、反応向上アナログ及び標識CFSとを接触させて（即ち、当該分析物と標識CFS、及び反応向上アナログと標識CFSを接触させて）、反応向上アナログと標識CFSとの複合体B、又は当該分析物と標識CFSとの複合体A及び複合体Bを形成させ、
(3)本発明の工程(3)により、当該複合体Bと、当該複合体Aとを、更に電気的に移動させて分離し、
(4)分離された複合体Bの量又は複合体Aの量を測定し、その結果に基づいて試料中の分析物の量を求める。
尚、アナログ（標識アナログ又は反応向上アナログ）は、(i)試料中の分析物（即ち、分析物を含む試料）と共存させて、標識アナログ又は反応向上アナログと分析物とを含む溶液（分析物及びアナログを含有する溶液）として、又は、(2)試料中の分析物（即ち、分析物を含む試料）と共存させずに、分析物を含有する溶液とは別の、アナログを含有する溶液として使用される。
【０１００】
３−１．測定工程〔工程(4)〕
本発明の工程(4)において、分離された複合体の量又は当該複合体の形成に関与しなかったCFSの量又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログの量を測定するには、例えば当該複合体中の標識物質又は当該複合体の形成に関与しなかったCFS中の標識物質又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログ中の標識物質の性質に応じた方法により当該標識物質を測定し、その結果に基づいて行えばよい。即ち、非競合法においては、分離された、分析物とCFSとの複合体の量又は当該複合体の形成に関与しなかったCFSの量を、例えば当該複合体中の標識物質又は当該複合体の形成に関与しなかったCFS中の標識物質の性質に応じた方法により当該標識物質を測定し、その結果に基づいて行えばよい。また、競合法においては、分離された、複合体Bの量又は当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログの量（或いは複合体Bの量又は複合体Aの量）を、当該複合体B中の標識物質又は当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログ中の標識物質（或いは複合体A中の標識物質）の性質に応じた方法により当該標識物質を測定し、その結果に基づいて行えばよい。
標識物質を測定するには、標識物質の種類に応じて夫々所定の方法に従って行えばよく、例えば、その性質が酵素活性の場合にはＥＩＡやハイブリダイゼーション法等の常法、例えば「酵素免疫測定法、蛋白質 核酸 酵素 別冊 No.31、北川常廣・ 南原利夫・辻章夫・石川榮治編集、51〜63頁、共立出版（株）、1987年９月10日発行」等に記載された方法に準じて測定を行えばよく、検出物質が放射性物質の場合にはＲＩＡやハイブリダイゼーション法等の常法に従い、該放射性物質の出す放射線の種類及び強さに応じて液浸型ＧＭカウンター，液体シンチレーションカウンター，井戸型シンチレーションカウンター等の測定機器を適宜選択して使用し、測定を行えばよい（例えば医化学実験講座、第８巻、山村雄一監修、第１版、中山書店、1971，生化学実験講座２  トレーサー実験法下、竹村彰祐，本庶佑、501〜525頁、（株）東京化学同人、1977年2月25日発行等参照。）。また、その性質が蛍光性の場合には蛍光光度計や共焦点レーザー顕微鏡等の測定機器を用いるＦＩＡやハイブリダイゼーション法等の常法、例えば「図説  蛍光抗体、川生明著、第１版、( 株)ソフトサイエンス社、1983」、「生化学実験講座２  核酸の化学III、実吉峯郎、299〜318頁、（株）東京化学同人、1977年12月15日発行等に記載された方法に準じて測定を行えばよく、その性質が発光性の場合にはフォトンカウンター等の測定機器を用いる常法、例えば「酵素免疫測定法、蛋白質 核酸 酵素 別冊 No.31、北川常廣・南原利夫・辻章夫・石川榮治編集、252〜263頁、共立出版（株）、1987年９月10日発行」等に記載された方法に準じて測定を行えばよい。更に、その性質が紫外部に吸収を有する性質の場合には分光光度計等の測定機器を用いる常法によって測定を行えばよく、その性質が発色性の場合には分光光度計や顕微鏡等の測定機器を用いる常法によって測定を行えばよい。また、検出物質がスピンの性質を有する物質の場合には電子スピン共鳴装置を用いる常法、例えば「酵素免疫測定法、蛋白質 核酸 酵素 別冊 No.31、北川 常廣・南原利夫・辻章夫・石川榮治編集、264〜271頁、共立出版（株）、1987年９月10日発行」等に記載された方法が挙げられる。
【０１０１】
また、測定された、複合体の量又は当該複合体の形成に関与しなかったCFSの量又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログの量、即ち、複合体中の標識物質の量又は当該複合体の形成に関与しなかったCFS中の標識物質の量又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログ中の標識物質の量に基づいて、試料中に存在する分析物の量を求めるには、例えば以下のように行えばよい。
競合法においては、測定された、複合体の量又は当該複合体の形成に関与しなかったCFSの量、即ち、上記の如きして得られた複合体中の標識物質の量又は当該複合体の形成に関与しなかったCFS中の標識物質の量に基づいて、試料中に存在する分析物の量を求めるには、例えば分析物濃度既知の試料を用いて同様の方法により測定を行い、得られた分析物の量と、複合体中の標識物質の量又は当該複合体の形成に関与しなかったCFS中の標識物質の量との関係を示す検量線を作製し、この検量線に分析物を含有する試料を用いて測定を行って得られた標識物質の量をあてはめることにより、目的の分析物の量を求めることができる。また、非競合法においては、複合体Bの量又は当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログの量（或いは複合体Bの量又は複合体Aの量）、即ち、上記の如きして得られた複合体B中の標識物質の量又は当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログ中の標識物質の量（或いは複合体A中の標識物質の量）に基づいて、試料中に存在する分析物の量を求めるには、例えば分析物濃度既知の試料を用いて同様の方法により測定を行い、得られた分析物の量と、複合体B中の標識物質の量又は当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログ中の標識物質の量（或いは複合体A中の標識物質の量）との関係を示す検量線を作製し、この検量線に分析物を含有する試料を用いて測定を行って得られた標識物質の量をあてはめることにより、目的の分析物の量を求めることができる。
【０１０２】
また、試料中に濃度既知の検出可能な物質を内部標準として添加し、内部標準として添加した当該物質の量と、当該複合体の形成に関与しなかった複合体の量又は当該複合体の形成に関与しなかったCFS又はアナログの量〔即ち、複合体中の標識物質の量又は当該複合体の形成に関与しなかったCFS中の標識物質の量、又は、複合体B中の標識物質の量又は当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログ中の標識物質の量（或いは複合体B中の標識物質の量又は複合体A中の標識物質の量）〕とを比較することによって、相対的な試料中の分析物の量の算出を行ってもよい。また、このようにすることによって、電気泳動装置間の誤差を補正することも可能となる。更には、内部標準ピークの移動度を用いて目的ピーク移動度の補正も出来る。
このような検出可能な物質（内部標準）としては、前述した如き標識物質や蛍光物質等で標識された例えばペプチド、タンパク質、核酸（DNA、RNA）、アミノ酸、蛍光物質、糖、糖鎖等が挙げられる。
【０１０３】
また、本発明において、標識物質として酵素を用いる場合等には、当該酵素の活性を測定するために、当該酵素の基質や他の共役酵素類等が必要な場合がある。そのような場合には、例えばこれら基質、他の共役酵素類等を、少なくとも本発明の工程(4)を実施する前に、本発明の工程(3)で分離された、複合体又は当該複合体の形成に関与しなかったCFS又は当該複合体の形成に関与しなかったアナログ〔即ち、分析物とCFSとの複合体又は当該複合体の形成に関与しなかったCFS、又は、複合体B又は当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログ（或いは複合体B又は複合体A）〕を含む溶液の下流側の細管内に配置させることができる。好ましくは、本発明の工程(1)において、分析物又はそのアナログを含有する溶液（ゾーン）及び１種以上のCFSを含む溶液（ゾーン）のうちの最も下流側に配置された溶液のさらに下流側に、これら基質、他の共役酵素類等を含む溶液を配置させて、本発明の工程(1)〜(4)を行うことができる。
また、標識物質としてインターカレーター色素を用いる場合には、本発明の工程(1)において、当該インターカレーター色素を、分析物又はそのアナログを含有する溶液及び１種以上のCFSを含む溶液と共に細管内に導入・配置させる必要はない。また、本発明の工程(2)において、当該インターカレーター色素を、分析物又はそのアナログ及びCFSと接触させる必要もない。少なくとも本発明の工程(3)を、当該インターカレーター色素の存在下で行えばよい。このような場合には、具体的には、例えば本発明の工程(3)で使用する泳動媒体又は／及びバッファー中に当該インターカレーター色素を含有させておけばよい。なかでも、本発明においては、本発明の工程(2)及び工程(3)を当該インターカレーター色素の存在下で行うのが好ましい。この場合には本発明の工程(2)及び(3)で用いられる泳動媒体又は／及びバッファー中に当該インターカレーター色素を含有させておけばよい。
【０１０４】
３−３．荷電ポリマーの使用
本発明においては、工程(2)を荷電ポリマーの存在下で行うのが好ましい。
即ち、(i)荷電ポリマーの存在下で、分析物又はアナログとCFSとを接触させて当該分析物又はアナログとCFSとの複合体を形成させるか、又は、(ii)荷電ポリマーの存在下で、分析物、アナログ（標識アナログ及びCFSとを接触させて当該分析物とCFSとの複合体A及び当該標識アナログとCFSとの複合体Bを形成させるか、或いは(iii)荷電ポリマーの存在下で、分析物、反応向上アナログ及び標識CFSとを接触させて当該分析物と標識CFSとの複合体A及び当該反応向上アナログと標識CFSとの複合体Bを形成させれば、試料（特に血清試料）中に共存する、分析に悪影響を及ぼす共存物質の影響を低減することが可能となる。具体的には、例えば、(i)荷電ポリマーの存在下で、分析物とCFSとを接触させて、当該分析物とCFSとの複合体〔（分析物−CFS）複合体、（分析物−標識CFS）複合体、（分析物−反応向上CFS）複合体、（分析物−標識反応向上CFS）複合体、（CFS−分析物−反応向上CFS）複合体、（標識CFS−分析物−反応向上CFS）複合体、（CFS−分析物−標識反応向上CFS）複合体、これらの組合せ等〕を形成させか、又は、(ii)荷電ポリマーの存在下で、分析物、標識アナログ及びCFSとを接触させて（即ち、当該分析物とCFS、及び標識アナログとCFSを接触させて）、当該分析物とCFSとの複合体A〔（分析物−CFS）複合体、（分析物−反応向上CFS）複合体、（CFS−分析物−反応向上CFS）、これらの組合せ等〕及び当該標識アナログとCFSとの複合体B〔（標識アナログ−CFS）複合体、（標識アナログ−反応向上CFS）複合体、（CFS−標識アナログ−反応向上CFS）、これらの組合せ等〕を形成させるか、或いは、(iii)荷電ポリマーの存在下で、分析物、反応向上アナログ及び標識CFSとを接触させて（即ち、当該分析物と標識CFS、及び反応向上アナログと標識CFSを接触させて）、当該分析物と標識CFSとの複合体A及び当該反応向上アナログと標識CFSとの複合体Bを形成させる。
本発明で用いる荷電ポリマーとしては、試料中に存在する共存物質と反対の種類の電荷（プラス又はマイナス）を有するものが使用される。また、使用されるCFSが有する電荷と同じ種類の電荷を有する荷電ポリマーが好ましい。
このような荷電ポリマーとしては、ポリアニオン性ポリマー、ポリカチオン性ポリマーが挙げられる。
ポリアニオン性ポリマーとしては、例えばヘパリン、ヘパリン硫酸、コンドロイチン硫酸、デキストラン硫酸、ポリタングステン酸、タングステンリン酸、ヒアルロン酸、デルマタン硫酸、ポリアネトール硫酸等のポリサッカライド；例えばDNA（プラスミドDNA、仔ウシ胸腺DNA、サケ精子DNA、セルロース連結DNA、合成DNA等）、RNA等のポリヌクレオチド；例えばポリアミノ酸（ポリアスパラギン酸、ポリグルタミン酸等）、合成ポリペプチド等のポリペプチド；例えばポリ-dIdC、ポリビニル硫酸、ポリアクリル酸等の合成高分子化合物；例えばガラス粒子、コロイドガラス、グラスミルク等のセラミック；及びこれらの複合体等が挙げられる。
また、ポリカチオン性ポリマーとしては、例えばキトサン、その誘導体等のポリサッカライド；例えばポリリジン、ポリヒスチジン、ポリアルギニン、プロタミン、ヒストン、オルニチン等のポリペプチド；例えばポリアリルアミン、ポリエチレンイミン、ポリビニルアミン等の合成高分子化合物；例えばスペルミン、スペルミジン等のポリアミン；例えばカチオン性脂質；例えばセラミック；及びこれらの複合体等が挙げられる。
上記したなかでも、アニオン性ポリサッカライドが好ましく、ヘパリン硫酸が特に好ましい。
上記した如き荷電ポリマーは１種でも、また、２種以上を適宜組み合わせて用いても良い。
【０１０５】
工程(2)を実施する際に、上記した如き荷電ポリマーを存在させる方法としては、最終的に複合体の形成を荷電ポリマーの存在下で行うことができる方法であれば特に限定されない。
このような方法としては、例えば上記した如き細管内に充填させる泳動媒体中に荷電ポリマーを共存させておく方法、分析物又はアナログを含有する溶液又は／及びCFSを含有する溶液中に荷電ポリマーを共存させておく方法等が挙げられる。
なかでも、荷電ポリマーは、分析物を含有する溶液（ゾーン）以外の溶液（ゾーン）中に共存させておくのが好ましく、少なくとも分析物を含有する溶液（ゾーン）の上流側又は下流側に隣接配置されている溶液（ゾーン）中に含有させておくのが特に好ましい。
【０１０６】
上記した如き荷電ポリマーの使用量は、使用される荷電ポリマーの種類等によって異なるため一概には言えないが、例えば細管内に充填される泳動媒体中の濃度としては、下限が通常0.01％（w/v）以上、好ましくは0.05％（w/v）以上、より好ましくは0.5％(w/v)以上であって、上限が通常50％(w/v)以下、好ましくは10％(w/v)以下、更に好ましくは５％(w/v)以下であり、なかでも約１％(w/v)が特に好ましい。また、分析物又はアナログを含有する溶液中又はCFS含有溶液中の濃度としては、下限が通常0.001％(w/v)以上、好ましくは0.01％(w/v)以上、より好ましくは0.02％(w/v)以上、更に好ましくは0.025％(w/v)以上であって、上限が通常10％(w/v)以下、好ましくは５％(w/v)以下、より好ましくは１％(w/v)以下、更に好ましくは0.05％(w/v)以下である。
【０１０７】
３−４．具体的な測定方法
本発明の測定方法の実施の形態を以下に具体的に示す。
【０１０８】
（１）非競合法
非競合法の場合は例えば以下の通りである。
(a)標識物質及び反応向上物質が結合していないCFSを用いる場合
この場合、例えば下記の〔方法A〕又は〔方法B〕のように実施することができる。
〔方法A〕：
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)１種以上の、CFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(a)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(a)における工程(2)のように、当該分析物とCFSとを電気泳動的に接触させて当該分析物とCFSとの複合体を形成させる。
(3)前記「２−２．具体的な分離方法」の(a)における工程(3)のように、当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかったCFSとを、更に電気的に移動させて分離する。
(4)分離された複合体中に含まれるCFSの量又は当該複合体の形成に関与しなかったCFSの量を、CFSの性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）を、分析物濃度既知の試料を用いて同様の方法により測定を行って得られた分析物の量とCFSの量との関係を示す検量線にあてはめることにより、試料中の分析物の量を算出する。
〔方法B〕：
上記〔方法Ａ〕の(1)の分析物を含有する溶液及びCFS含有溶液の少なくとも１種に濃度既知の検出可能な物質を内部標準として添加し、内部標準を含む溶液を用いて(1)〜(3)の工程を行う。分離された、複合体中に含まれるCFSの量又は当該複合体の形成に関与しなかったCFSの量を、CFSの性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）と、内部標準として添加した当該物質の量とを比較することによって、試料中の分析物の量を算出する。
【０１０９】
(b)標識CFSを用いる場合
この場合、例えば下記の〔方法A〕又は〔方法B〕のように実施することができる。
〔方法A〕：
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)１種以上の、標識CFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(b)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(b)における工程(2)のように、当該分析物と標識CFSとを接触させて当該分析物と標識CFSとの複合体を形成させる。
(3)前記「２−２．具体的な分離方法」の(b)における工程(3)のように、当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかった標識CFSとを、更に電気的に移動させて分離する。
(4)分離された複合体中に含まれる標識物質の量又は当該複合体の形成に関与しなかった標識CFS中に含まれる標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）を、分析物濃度既知の試料を用いて同様の方法により測定を行って得られた分析物の量と標識物質の量との関係を示す検量線にあてはめることにより、試料中の分析物の量を算出する。
〔方法B〕：
上記〔方法Ａ〕の(1)の分析物を含有する溶液及び標識CFS含有溶液の少なくとも１種に濃度既知の検出可能な物質を内部標準として添加し、内部標準を含む溶液を用いて(1)〜(3)の工程を行う。分離された、複合体中に含まれる標識物質の量又は当該複合体の形成に関与しなかった標識CFS中に含まれる標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）と、内部標準として添加した当該物質の量とを比較することによって、試料中の分析物の量を算出する。
【０１１０】
(c)反応向上CFSを用いる場合
この場合、例えば下記の〔方法A〕又は〔方法B〕のように実施することができる。
〔方法A〕：
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)１種以上の、反応向上CFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(c)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(c)における工程(2)のように、当該分析物と反応向上CFSとを電気泳動的に接触させて当該分析物と反応向上CFSとの複合体を形成させる。
(3)前記「２−２．具体的な分離方法」の(c)における工程(3)のように、当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかった反応向上CFSとを、更に電気的に移動させて分離する。
(4)分離された複合体中に含まれる反応向上CFSの量又は当該複合体の形成に関与しなかった反応向上CFSの量を、反応向上CFSの性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）を、分析物濃度既知の試料を用いて同様の方法により測定を行って得られた分析物の量と反応向上CFSの量との関係を示す検量線にあてはめることにより、試料中の分析物の量を算出する。
〔方法B〕：
上記〔方法Ａ〕の(1)の分析物を含有する溶液及び反応向上CFS含有溶液の少なくとも１種に濃度既知の検出可能な物質を内部標準として添加し、内部標準を含む溶液を用いて(1)〜(3)の工程を行う。分離された、複合体中に含まれる反応向上CFSの量又は当該複合体の形成に関与しなかった反応向上CFSの量を、反応向上CFSの性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）と、内部標準として添加した当該物質の量とを比較することによって、試料中の分析物の量を算出する。
【０１１１】
(d)標識反応向上CFSを用いる場合
この場合、例えば下記の〔方法A〕又は〔方法B〕のように実施することができる。
〔方法A〕：
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)１種以上の、標識反応向上CFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(d)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(d)における工程(2)のように、当該分析物と標識反応向上CFSとを電気泳動的に接触させて当該分析物と標識反応向上CFSとの複合体を形成させる。
(3)前記「２−２．具体的な分離方法」の(d)における工程(3)のように、当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかった標識反応向上CFSとを、更に電気的に移動させて分離する。
(4)分離された複合体中に含まれる標識物質の量又は当該複合体の形成に関与しなかった標識反応向上CFS中に含まれる標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）を、分析物濃度既知の試料を用いて同様の方法により測定を行って得られた分析物の量と標識物質の量との関係を示す検量線にあてはめることにより、試料中の分析物の量を算出する。
〔方法B〕：
上記〔方法Ａ〕の(1)の分析物を含有する溶液及び標識反応向上CFS含有溶液の少なくとも１種に濃度既知の検出可能な物質を内部標準として添加し、内部標準を含む溶液を用いて(1)〜(3)の工程を行う。分離された、複合体中に含まれる標識物質の量又は当該複合体の形成に関与しなかった標識反応向上CFS中に含まれる標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、得られた測定結果（測定値）と、内部標準として添加した当該物質の量とを比較することによって、試料中の分析物の量を算出する。
【０１１２】
(e)標識物質及び反応向上物質が結合していないCFS及び反応向上CFSを用いる場合
この場合、例えば下記の〔方法A〕又は〔方法B〕のように実施することができる。
〔方法A〕：
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)少なくとも１種の、CFSを含有する溶液及び(c)少なくとも１種の、反応向上CFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(e)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(e)における工程(2)のように、当該分析物、CFS及び反応向上CFSを接触させて当該分析物、CFS及び反応向上CFSの複合体を形成させる。
(3)前記「２−２．具体的な分離方法」の(e)における工程(3)のように、当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかったCFS及び要すれば当該複合体の形成に関与しなかった反応向上CFSとを、更に電気的に移動させて分離する。
(4)分離された複合体中に含まれるCFSの量、分離された複合体中に含まれる反応向上CFSの量、当該複合体の形成に関与しなかったCFSの量又は当該複合体の形成に関与しなかった反応向上CFSの量を、CFS又は反応向上CFSの性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）を、分析物濃度既知の試料を用いて同様の方法により測定を行って得られた分析物の量とCFS又は反応向上CFSの量との関係を示す検量線にあてはめることにより、試料中の分析物の量を算出する。
〔方法B〕：
上記〔方法Ａ〕の(1)の分析物を含有する溶液、CFS含有溶液及び反応向上CFS含有溶液の少なくとも１種に濃度既知の検出可能な物質を内部標準として添加し、内部標準を含む溶液を用いて(1)〜(3)の工程を行う。分離された複合体中に含まれるCFSの量、分離された複合体中に含まれる反応向上CFSの量、当該複合体の形成に関与しなかったCFSの量又は当該複合体の形成に関与しなかった反応向上CFSの量を、CFS又は反応向上CFSの性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）と、内部標準として添加した当該物質の量とを比較することによって、試料中の分析物の量を算出する。
【０１１３】
(f)標識CFS及び反応向上CFSを用いる場合
この場合、例えば下記の〔方法A〕又は〔方法B〕のように実施することができる。
〔方法A〕：
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)少なくとも１種の、標識CFSを含有する溶液及び(c)少なくとも１種の、反応向上CFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(f)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(f)における工程(2)のように、当該分析物、標識CFS及び反応向上CFSを電気泳動的に接触させて当該分析物、標識CFS及び反応向上CFSの複合体を形成させる。
(3)前記「２−２．具体的な分離方法」の(f)における工程(3)のように、当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかった標識CFS及び当該複合体の形成に関与しなかった要すれば反応向上CFSとを、更に電気的に移動させて分離する。
(4)分離された複合体中に含まれる標識物質の量又は当該複合体の形成に関与しなかった標識CFS中に含まれる標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）を、分析物濃度既知の試料を用いて同様の方法により測定を行って得られた分析物の量と標識物質の量との関係を示す検量線にあてはめることにより、試料中の分析物の量を算出する。
〔方法B〕：
上記〔方法Ａ〕の(1)の分析物を含有する溶液、標識CFS含有溶液及び反応向上CFS含有溶液の少なくとも１種に濃度既知の検出可能な物質を内部標準として添加し、内部標準を含む溶液を用いて(1)〜(3)の工程を行う。分離された、複合体中に含まれる標識物質の量又は当該複合体の形成に関与しなかった標識CFS中に含まれる標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、得られた測定結果（測定値）と、内部標準として添加した当該物質の量とを比較することによって、試料中の分析物の量を算出する。
【０１１４】
(g)標識物質及び反応向上物質が結合していないCFS及び標識反応向上CFSを用いる場合
この場合、例えば下記の〔方法A〕又は〔方法B〕のように実施することができる。
〔方法A〕：
(1)細管内に、(a)分析物を含有する溶液〔例えば(i)分析物を含む試料、(ii)分析物を含む試料と１種以上のCFSとを含有する溶液〕と、(b)少なくとも１種の、CFSを含有する溶液及び(c)少なくとも１種の、標識反応向上CFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(g)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(g)における工程(2)のように、当該分析物、CFS及び標識反応向上CFSを電気泳動的に接触させて当該分析物、CFS及び標識反応向上CFSの複合体を形成させる。
(3)前記「２−２．具体的な分離方法」の(g)における工程(3)のように、当該複合体と、当該複合体の形成に関与しなかった標識反応向上CFS及び要すればCFSとを、更に電気的に移動させて分離する。
(4)分離された複合体中に含まれる標識物質の量又は当該複合体の形成に関与しなかった標識反応向上CFS中に含まれる標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）を、分析物濃度既知の試料を用いて同様の方法により測定を行って得られた分析物の量と標識物質の量との関係を示す検量線にあてはめることにより、試料中の分析物の量を算出する。
〔方法B〕：
上記〔方法Ａ〕の(1)の分析物を含有する溶液、CFS質含有溶液及び標識反応向上CFS含有溶液の少なくとも１種に濃度既知の検出可能な物質を内部標準として添加し、内部標準を含む溶液を用いて(1)〜(3)の工程を行う。分離された、複合体中に含まれる標識物質の量又は当該複合体の形成に関与しなかった標識反応向上CFS中に含まれる標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）と、内部標準として添加した当該物質の量とを比較することによって、試料中の分析物の量を算出する。
【０１１５】
（２）競合法
競合法の場合は例えば以下の通りである。
(h)標識アナログとCFSとを用いる場合
この場合、例えば下記の〔方法A〕又は〔方法B〕のように実施することができる。
〔方法A〕：
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料と標識アナログを含有する溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）及び(b)１種以上のCFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(h)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(h)における工程(2)のように、当該分析物、標識アナログ及びCFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該分析物とCFS、及び標識アナログとCFSを電気泳動的に接触させて）当該分析物とCFSとの複合体A及び当該標識アナログとCFSとの複合体Bを形成させる。
(3)前記「２−２．具体的な分離方法」の(h)における工程(3)のように、当該複合体Bと、当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログとを、更に分離する。
(4)分離された複合体B中の標識物質の量又は当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログ中の標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）を、分析物濃度既知の試料を用いて同様の方法により測定を行って得られた分析物の量と標識物質の量との関係を示す検量線にあてはめることにより、試料中の分析物の量を算出する。
〔方法B〕：
上記〔方法Ａ〕の(1)の分析物を含む試料と標識アナログを含有する溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）又はCFS含有溶液に濃度既知の検出可能な物質を内部標準として添加し、内部標準を含む溶液を用いて(1)〜(3)の工程を行う。分離された、複合体B中に含まれる標識物質の量又は当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログ中に含まれる標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、得られた測定結果（測定値）と、内部標準として添加した当該物質の量とを比較することによって、試料中の分析物の量を算出する。
【０１１６】
(i)標識アナログと反応向上CFSとを用いる場合
この場合、例えば下記の〔方法A〕又は〔方法B〕のように実施することができる。
〔方法A〕：
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料と標識アナログを含有する溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）及び(b)１種以上の反応向上CFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(i)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(i)における工程(2)のように、当該分析物、標識アナログ及び反応向上CFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該分析物と反応向上CFS、及び標識アナログと反応向上CFSを電気泳動的に接触させて）当該分析物と反応向上CFSとの複合体A及び当該標識アナログと反応向上CFSとの複合体Bを形成させる。
(3)前記「２−２．具体的な分離方法」の(i)における工程(3)のように、当該複合体Bと、当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログとを、更に分離する。
(4)分離された複合体B中の標識物質の量又は当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログ中の標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）を、分析物濃度既知の試料を用いて同様の方法により測定を行って得られた分析物の量と標識物質の量との関係を示す検量線にあてはめることにより、試料中の分析物の量を算出する。
〔方法B〕：
上記〔方法Ａ〕の(1)の分析物を含む試料と標識アナログを含有する溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）又は反応向上CFS含有溶液に濃度既知の検出可能な物質を内部標準として添加し、内部標準を含む溶液を用いて(1)〜(3)の工程を行う。分離された、複合体B中に含まれる標識物質の量又は当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログ中に含まれる標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）と、内部標準として添加した当該物質の量とを比較することによって、試料中の分析物の量を算出する。
【０１１７】
(j)標識アナログとCFS及び反応向上CFSを用いる場合
この場合、例えば下記の〔方法A〕又は〔方法B〕のように実施することができる。
〔方法A〕：
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料と標識アナログを含有する溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）、(b)少なくとも１種のCFSを含有する溶液及び(c)少なくとも１種の反応向上CFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(j)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(j)における工程(2)のように、当該分析物、標識アナログ、CFS及び反応向上CFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該分析物、CFS及び反応向上CFS、並びに標識アナログ、CFS及び反応向上CFSを電気泳動的に接触させて）当該分析物とCFS及び反応向上CFSとの複合体A及び当該標識アナログとCFS及び反応向上CFSとの複合体Bを形成させる。
(3)前記「２−２．具体的な分離方法」の(j)における工程(3)のように、当該複合体Bと、当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログとを、更に分離する。
(4)分離された複合体B中の標識物質の量又は当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログ中の標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）を、分析物濃度既知の試料を用いて同様の方法により測定を行って得られた分析物の量と標識物質の量との関係を示す検量線にあてはめることにより、試料中の分析物の量を算出する。
〔方法B〕：
上記〔方法Ａ〕の(1)の分析物を含む試料と標識アナログを含有する溶液（又は分析物を含む試料、標識アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）、CFS含有溶液及び反応向上CFS含有溶液の少なくとも１種に濃度既知の検出可能な物質を内部標準として添加し、内部標準を含む溶液を用いて(1)〜(3)の工程を行う。分離された、複合体B中に含まれる標識物質の量又は当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログ中に含まれる標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）と、内部標準として添加した当該物質の量とを比較することによって、試料中の分析物の量を算出する。
【０１１８】
(k)反応向上アナログと標識CFSとを用いる場合
この場合、例えば下記の〔方法A〕又は〔方法B〕のように実施することができる。
〔方法A〕：
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料と反応向上アナログを含有する溶液及（又は分析物を含む試料、反応向上アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）び(b)１種以上の標識CFSを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(k)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(k)における工程(2)のように、当該分析物、反応向上アナログ及び標識CFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該分析物と標識CFS、及び反応向上アナログと標識CFSを電気泳動的に接触させて）当該分析物と標識CFSとの複合体A及び当該反応向上アナログと標識CFSとの複合体Bを形成させる。
(3)前記「２−２．具体的な分離方法」の(k)における工程(3)のように、当該複合体Bと、当該複合体Aとを、更に電気的に移動させて分離する。
(4)分離された複合体B中の標識物質の量又は複合体A中の標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）を、分析物濃度既知の試料を用いて同様の方法により測定を行って得られた分析物の量と標識物質の量との関係を示す検量線にあてはめることにより、試料中の分析物の量を算出する。
〔方法B〕：
上記〔方法Ａ〕の(1)の分析物を含む試料と反応向上アナログを含有する溶液及（又は分析物を含む試料、反応向上アナログ及び１種以上のCFSを含む溶液）又は標識CFS含有溶液に濃度既知の検出可能な物質を内部標準として添加し、内部標準を含む溶液を用いて(1)〜(3)の工程を行う。分離された、複合体B中に含まれる標識物質の量又は複合体A中に含まれる標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）と、内部標準として添加した当該物質の量とを比較することによって、試料中の分析物の量を算出する。
【０１１９】
(l)標識アナログとCFSとを用いる場合
この場合、例えば下記の〔方法A〕又は〔方法B〕のように実施することができる。
〔方法A〕：
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料及び１種以上のCFSを含有する溶液と(b)標識アナログを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(l)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(l)における工程(2)のように、当該標識アナログとCFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該標識アナログと、分析物を含む試料と１種以上のCFSを含有する溶液中の分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかったCFSとを電気泳動的に接触させて）、標識アナログとCFSとの複合体Bを形成させる。
(3)前記「２−２．具体的な分離方法」の(l)における工程(3)のように、当該複合体Bと、当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログとを、更に分離する。
(4)分離された複合体B中の標識物質の量又は当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログ中の標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）を、分析物濃度既知の試料を用いて同様の方法により測定を行って得られた分析物の量と標識物質の量との関係を示す検量線にあてはめることにより、試料中の分析物の量を算出する。
〔方法B〕：
上記〔方法Ａ〕の(1)の分析物を含む試料及び１種以上のCFSを含有する溶液又は標識アナログを含有する溶液に濃度既知の検出可能な物質を内部標準として添加し、内部標準を含む溶液を用いて(1)〜(3)の工程を行う。分離された、複合体B中に含まれる標識物質の量又は当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログ中に含まれる標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、得られた測定結果（測定値）と、内部標準として添加した当該物質の量とを比較することによって、試料中の分析物の量を算出する。
【０１２０】
(m)標識アナログと反応向上CFSとを用いる場合
この場合、例えば下記の〔方法A〕又は〔方法B〕のように実施することができる。
〔方法A〕：
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料及び１種以上の反応向上CFSを含有する溶液と(b)標識アナログを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(m)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(m)における工程(2)のように、当該標識アナログと反応向上CFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該標識アナログと、分析物を含む試料と１種以上の反応向上CFSを含有する溶液中の分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかった反応向上CFSとを電気泳動的に接触させて）、標識アナログと反応向上CFSとの複合体Bを形成させる。
(3)前記「２−２．具体的な分離方法」の(m)における工程(3)のように、当該複合体Bと、当該複合体の形成に関与しなかった標識アナログとを、更に分離する。
(4)分離された複合体B中の標識物質の量又は当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログ中の標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）を、分析物濃度既知の試料を用いて同様の方法により測定を行って得られた分析物の量と標識物質の量との関係を示す検量線にあてはめることにより、試料中の分析物の量を算出する。
〔方法B〕：
上記〔方法Ａ〕の(1)の分析物を含む試料及び１種以上の反応向上CFSを含有する溶液又は標識アナログを含有する溶液に濃度既知の検出可能な物質を内部標準として添加し、内部標準を含む溶液を用いて(1)〜(3)の工程を行う。分離された、複合体B中に含まれる標識物質の量又は当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログ中に含まれる標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）と、内部標準として添加した当該物質の量とを比較することによって、試料中の分析物の量を算出する。
【０１２１】
(n)標識アナログとCFS及び反応向上CFSを用いる場合
この場合、例えば下記の〔方法A〕又は〔方法B〕のように実施することができる。
〔方法A〕：
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料と少なくとも１種のCFS（又は少なくとも１種の反応向上CFS）を含有する溶液、(b)標識アナログを含有する溶液、及び(c)少なくとも１種の反応向上CFS（又は少なくとも１種のCFS）を含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(n)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(n)における工程(2)のように、当該分析物、標識アナログ、複合体形成物質及び反応向上結合物質とを電気泳動的に接触させる（即ち、溶液(a)中の分析物とCFS（又は反応向上CFS）との複合体と溶液(c)中の反応向上CFS（又はCFS）、並びに標識アナログ、溶液(a)中の分析物との複合体の形成に関与しなかったCFS（又は反応向上CFS）及び溶液(c)中の反応向上CFS（又はCFS）を電気泳動的に接触させる）。
(3)前記「２−２．具体的な分離方法」の(n)における工程(3)のように、当該複合体Bと、当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログとを、更に分離する。
(4)分離された複合体B中の標識物質の量又は当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログ中の標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）を、分析物濃度既知の試料を用いて同様の方法により測定を行って得られた分析物の量と標識物質の量との関係を示す検量線にあてはめることにより、試料中の分析物の量を算出する。
〔方法B〕：
上記〔方法Ａ〕の(1)の分析物を含む試料と少なくとも１種のCFS（又は少なくとも１種の反応向上CFS）を含有する溶液、標識アナログを含有する溶液、及び少なくとも１種の反応向上CFS（又は少なくとも１種のCFS）を含有する溶液の少なくとも１種に濃度既知の検出可能な物質を内部標準として添加し、内部標準を含む溶液を用いて(1)〜(3)の工程を行う。分離された、複合体B中に含まれる標識物質の量又は当該複合体Bの形成に関与しなかった標識アナログ中に含まれる標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、得られた測定結果（測定値）と、内部標準として添加した当該物質の量ととを比較することによって、試料中の分析物の量を算出する。
【０１２２】
(o)反応向上アナログと標識CFSとを用いる場合
この場合、例えば下記の〔方法A〕又は〔方法B〕のように実施することができる。
〔方法A〕：
(1)細管内に、(a)分析物を含む試料及び１種以上の標識CFSを含有する溶液と(b)反応向上アナログを含有する溶液とを、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(o)における工程(1)のように、導入・配置させる。
(2)次いで、前記「１−６．具体的な複合体形成方法」の(o)における工程(2)のように、当該反応向上アナログと標識CFSとを電気泳動的に接触させて（即ち、当該反応向上アナログと、分析物を含む試料と１種以上の標識CFSを含有する溶液中の分析物との複合体（複合体A）の形成に関与しなかった標識CFSとを電気泳動的に接触させて）、反応向上アナログと標識CFSとの複合体Bを形成させる。
(3)前記「２−２．具体的な分離方法」の(o)における工程(3)のように、当該複合体Bと、当該複合体Aとを更に電気的に移動させて分離する。
(4)分離された複合体B中の標識物質の量又は複合体A中の標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、測定結果（測定値）を、分析物濃度既知の試料を用いて同様の方法により測定を行って得られた分析物の量と標識物質の量との関係を示す検量線にあてはめることにより、試料中の分析物の量を算出する。
〔方法B〕：
上記〔方法Ａ〕の(1)の分析物を含む試料及び１種以上の標識CFSを含有する溶液又は反応向上アナログを含有する溶液に濃度既知の検出可能な物質を内部標準として添加し、内部標準を含む溶液を用いて(1)〜(3)の工程を行う。分離された、複合体B中に含まれる標識物質の量又は複合体A中に含まれる標識物質の量を、標識物質の性質（種類）に応じた方法により測定し、得られた測定結果（測定値）と、内部標準として添加した当該物質の量とを比較することによって、試料中の分析物の量を算出する。
【０１２３】
本発明の測定方法は、本発明の分離方法を利用する以外は、上記した如き自体公知の方法に準じて実施すればよく、使用される試薬類もこれら自体公知の方法に準じて適宜選択すればよい。
【０１２４】
４．本発明のキット
本発明のキットは、上記した如き本発明の複合体形成方法、分離方法又は測定方法を実施するために使用されるものである。
このようなキットとしては、以下のようなものが挙げられる。
(1)少なくとも(i)先述した如きCFS、(ii)要すればアナログ及び(iii)前述した如き本発明の複合体形成方法、分離方法又は測定方法での使用のための説明書等を含んでなるもの、又は
(2)(i)前述した如き本発明の工程(1)を実施し得る部分及び工程(2)を実施し得る部分を少なくとも有する細管、好ましくは前述した如き本発明の工程(1)を実施し得る部分、工程(2)を実施し得る部分及び更に本発明の工程(3)を実施し得る部分を有する細管、を具備する電気泳動装置、(ii)CFS、(iii)要すればアナログ及び(iv)前述した如き本発明の複合体形成方法、分離方法又は測定方法での使用のための説明書とを含んでなるもの。
尚、当該「説明書」とは、本発明の方法における特徴・原理・操作手順等が文章又は図表等により実質的に記載されている当該キットの取り扱い説明書、添付文書、或いはパンフレット（リーフレット）等を意味する。
これら構成要件の好ましい態様と具体例は上で述べた通りである。
【０１２５】
更に、本発明のキットは上記以外の試薬類を含んでいても良い。このような試薬類としては、例えば電気泳動分離用緩衝液、試薬希釈液、内部標準、キャリブレーター（標準液）、コントロール、標識物質（例えば酵素、色素、発光、蛍光等）を測定するための試薬類（酵素基質、共役酵素類等）、検出器の焦点を合わせるための試薬等が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１２６】
以下に実施例及び比較例を挙げて本発明を詳細に説明するが、本発明はこれらにより何等限定されるものではない。
【実施例】
【０１２７】
実施例．１
〔分析物（抗原）〕
α−フェトプロテイン（AFP）（和光純薬工業（株）製）
【０１２８】
〔反応向上CFS（DNA標識抗体）〕
図１に示した手順に従って、DNAが結合した抗AFP抗体Fab'フラグメントを調製した。
即ち、先ず、常法により５'末端にNH2基が導入された250bpのDNA断片を精製した。次いで、このDNA断片に導入されたNH2基とスルホサクシニミジル 4-（p-マレイミドフェニル）ブチレイト（Sulfo-SMPB）リンカー（スクシンイミド基とマレイミド基を有するリンカー：ピアス社製）のスクシンイミド基とを常法により反応させた。その後、ゲル濾過処理を行い、未反応リンカーを除去して、リンカーが結合した250bpDNA断片を得た。得られたリンカー結合250bpDNA断片と、予め抗AFP抗体ＷＡ１（和光純薬工業（株）製）を用いて常法に従い調製した抗AFP抗体ＷＡ１Fab’フラグメントとを反応させた。得られた反応物を、夫々DEAEカラムを用いて精製し、250bpDNA断片が結合した抗AFP抗体ＷＡ１Fab’フラグメント（250bpDNA標識抗体）を調製した。
【０１２９】
〔標識CFS（蛍光標識抗体）〕
ＷＡ１抗体とは異なるＡＦＰのエピトープを認識する抗AFP抗体ＷＡ２（和光純薬工業（株）製）を常法により処理して抗AFP抗体ＷＡ２Fab’フラグメントを得た。当該フラグメントのアミノ基に、常法により蛍光物質Alexa647（モレキュラープローブ社製）を導入して、Alexa647標識抗AFP抗体ＷＡ２Fab’フラグメント（蛍光標識抗体）を調製した。
【０１３０】
〔キャピラリーチップ〕
図２に示すレイアウトを有するキャピラリーチップを、「マイクロ科学チップの技術と応用」  北森武彦ほか  2004年出版（丸善株式会社）に記載の方法に従い、以下のように作成した。
即ち、石英基板上に成膜したSi上にフォトレジスト膜を成膜した。このフォトレジストに図２に示すキャピラリデザイン（レイアウト）を有するマスクを用いて露光し、現像を行った。現像によりフォトレジストが除かれた部分のSiをスパッタによって除去した後、フッ化水素溶液を用いてウエットエッチングを行って石英基板にキャピラリチャンネル溝（細管）を作製した。石英基板上に残るフォトレジスト及びSi膜を除去した後、当該石英基板と液だめのための穴を有するカバープレートとをHF接合法によって張り合わせてキャピラリーチップを作製した。
尚、図２中、Ｌ１及びＬ２はリーディングバッファー導入用ウェルを、Ｓは泳動用試料導入用ウェルを、Ｒ１は試液（250bpDNA標識抗体含有溶液）導入用ウェルを、Ｗ１及びＷ２は、ドレイン用ウェルをそれぞれ示す。
【０１３１】
〔電気泳動〕
(1)泳動用試料
所定濃度のAFP  １μL、２μM 蛍光標識抗体  １μL及び50mM Cl−イオン含有リーディングバッファー  ８μLを0.5mLチューブで混合し、10uLの反応液を調製した。反応液は氷上に静置させ、約30分抗原抗体反応させ、〔蛍光標識抗体−AFP〕免疫複合体を形成させた。尚、AFPの最終濃度は、０pM、25pM、50pM又は100pMであり、蛍光標識抗体の最終濃度は、200nMである。
得られた、免疫複合体含有反応液を泳動用試料とした。
【０１３２】
(2)試液（250bpDNA標識抗体含有溶液）
20nM 250bpDNA標識抗体を含有するトレーリングバッファー（75mM HEPES含有）を試液とした。
【０１３３】
(3)電気泳動手順
a)泳動用試料及び試液の導入
図１のＳウェル（泳動用試料導入用ウェル）に泳動用試料（〔蛍光標識抗体−AFP〕免疫複合体含有溶液）  10μLを滴下し、Ｒ１ウェル（試液導入用ウェル）に試液（DNA標識抗体含有溶液）  10μLを滴下し、Ｌ１ウェル及びＬ２ウェルにリーディングバッファー  10μLをそれぞれを滴下し、Ｗ１（ドレイン用ウェル）−Ｗ２（ドレイン用ウェル）間に  100秒間、-５psiの圧力を印加して、泳動用試料、試液及びリーディングバッファーをチャネルに導入した。キャプラリー内の泳動用試料と試液の配置関係を、図３に模式的に示す。尚、図３中、斜線部分は泳動用試料の配置部分を、また、点部分は試液の配置部分をそれぞれ示す。
【０１３４】
b)濃縮・反応
Ｒ１ウェル−Ｌ１ウェル間に、312V、625V又は2500Vの電圧を印加して、10℃で、試液中の250bpDNA標識抗体を濃縮させながら、試液中の250bpDNA標識抗体を泳動用試料中の〔蛍光標識抗体−AFP〕免疫複合体と接触させて、〔蛍光標識抗体−AFP−250bpDNA標識抗体〕免疫複合体を形成させた。
尚、反応時間は、312V印加時で約200秒、625V印加時で約100秒、2500V印加時で約25秒である。
【０１３５】
c)分離・検出
〔蛍光標識抗体−AFP−250bpDNA標識抗体〕免疫複合体が、Ｌ２チャンネルとメインチャンネルとのクロス部分を通過したところで、Ｌ２ウェルに2800V、Ｌ１ウェルに300Vの電圧を100秒間印加して、当該免疫複合体の分離と検出を行った。
尚、検出は、635nmレーザー励起によりＬ２チャネルクロス部分から２cmのキャピラリー部分の蛍光強度を蛍光顕微鏡（BX-50；KSオリンパス（株）製）により経時的に測定することによって行った。
【０１３６】
〔結果〕
図４に、AFP濃度とピーク面積の関係（直線性）を、図５に、AFP濃度 ０pM及び100pMの泳動用試料を用いた場合の電気泳動クロマトグラムをそれぞれ示す。尚、図４において、縦軸はピーク面積を、横軸はAFP濃度をそれぞれ示す。また、図５において、実線（−）はAFP濃度 100pMの泳動用試料を用いた場合の結果を、点線（・・・）はAFP濃度 ０pMの泳動用試料を用いた場合の結果をそれぞれ示す。
【０１３７】
図４及び５の結果から、〔蛍光標識抗体−AFP−250bpDNA標識抗体〕免疫複合体のピークが観察され、そのピーク面積は、AFP濃度に比例していることが判る。即ち、キャピラリー（チャネル）内で電気泳動的に免疫複合体が形成され、免疫複合体を予めキャピラリー外で反応・形成させる必要がないことが判る。
【０１３８】
また、表２に、濃縮・反応時の印加電圧とAFP反応比率との関係を示す。比較例として、従来法である、複数の溶液を同時に混合用細管（チャネル）内に導入して、これらを混合・反応させる方法（特開2005-31070号公報等）により120秒間反応させた場合のAFP反応比率を併せて示す。
尚、AFP反応比率は、予めキャピラリー外で蛍光標識抗体、AFP及び250bpDNA標識抗体を10℃で30分間反応させ、200nM  蛍光標識抗体、100pM  AFP及び20nM  250bpDNA標識抗体を含有する反応液  10μLを得た後、得られた反応液をＳウェルから導入し、上記と同様に検出した場合のAFPシグナル（ピーク面積）を100％とした場合の相対値である。
【０１３９】
表２
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【０１４０】
表２から明らかなように、2500V印加時（反応時間約25秒）においても、従来法と同等以上の反応比率が得られ、従来法とほぼ同じ反応時間である625V印加時（約100秒反応）においては、従来法よりも著しく高い反応比率が得られたことが判る。即ち、従来の方法に比べて、本発明の方法では、極めて高い反応比率で複合体が形成されることが判る。
【０１４１】
実施例．２
〔分析物（抗原）〕
実施例．１と同じものを使用した。
〔反応向上CFS（DNA標識抗体）〕
実施例．１と同じものを使用した。
〔標識CFS（蛍光標識抗体）〕
実施例．１と同じものを使用した。
【０１４２】
〔キャピラリーチップ〕
図６に示すレイアウトを有するキャピラリーチップを、「マイクロ科学チップの技術と応用」  北森武彦ほか  2004年出版（丸善株式会社）に記載の方法に従い、以下のように作成した。
即ち、石英基板上に成膜したSi上にフォトレジスト膜を成膜した。このフォトレジストに図６に示すキャピラリデザイン（レイアウト）を有するマスクを用いて露光し、現像を行った。現像によりフォトレジストが除かれた部分のSiをスパッタによって除去した後、フッ化水素溶液を用いてウエットエッチングを行って石英基板にキャピラリチャンネル溝（細管）を作製した。石英基板上に残るフォトレジスト及びSi膜を除去した後、当該石英基板と液だめのための穴を有するカバープレートとをHF接合法によって張り合わせてキャピラリーチップを作製した。
尚、図６中、Ｌ１及びＬ２はリーディングバッファー導入用ウェルを、ＳＲは泳動用試料、第１試液（250bpDNA標識抗体含有溶液）及び第２試液（蛍光標識抗体含有溶液）導入用ウェルをそれぞれ示す。
【０１４３】
〔電気泳動〕
(1)泳動用試料
0nM、0.8nM、4nM、20nM、50nM及び100nMのAFPを含有するリーディングバッファー（50mM Cl−イオン含有）をそれぞれ泳動用試料とした。
【０１４４】
(2)第１試液（250bpDNA標識抗体含有溶液）
100nM 250bpDNA標識抗体を含有するリーディングバッファー（50mM Cl−イオン含有）を第１試液とした。
【０１４５】
(3)第２試液（蛍光標識抗体含有溶液）
400nM 250bp蛍光標識抗体を含有するリーディングバッファー（50mM Cl−イオン含有）を第２試液とした。
【０１４６】
(4)電気泳動手順
a)泳動用試料、第１試液及び第２試液の導入
図６のチャネル全体をリーディングバッファーで満たした後、ＳＲウェルに第２試液（蛍光標識抗体含有溶液）  10μL滴下し、Ｌ１ウェルに２秒間、-５psiの圧力を印可して、第２試液をチャネル内に導入した。次に、ＳＲウェルの第２試液を泳動用試料（AFP含有溶液）  10μLに交換して、同様にＬ１ウェルに２秒間、-５psiの圧力を印可して泳動試料をチャネル内に導入した。更に、ＳＲウェルの泳動用試料を第１試液（250bpDNA標識抗体含有溶液）  10μLに交換して、Ｌ１ウェルに２秒間、-５psiの圧力を印可して第１試液をチャネル内に導入した。これにより、下流側から第２試液ゾーン、泳動用試料ゾーン、第１試液ゾーンをチャネル内に形成させた。キャプラリー内の泳動用試料、第１試液及び第２試液の配置関係を、図７に模式的に示す。尚、図７中、縦線部分は第１試液の配置部分を、斜線部分は泳動用試料の配置部分を、また、点部分は第２試液の配置部分をそれぞれ示す。
その後、ＳＲウェルの第１試液を75mM HEPES含有トレーリングバッファー  10μLに交換して、Ｌ１ウェルに２秒間、-５psiの圧力を印可して、第１試液ゾーンの上流側にトレーリングバッファーを導入・配置させた。
【０１４７】
b)濃縮・反応
ＳＲウェル−Ｌ１ウェル（リーディングバッファー導入用ウェル）間に、312V印加して、10℃で、第１試液中のDNA標識抗体、泳動用試料中のAFP及び第２試液中の蛍光標識抗体とを、これらを濃縮させながら接触させて、〔蛍光標識抗体−AFP−250bpDNA標識抗体〕免疫複合体を形成させた。
尚、反応時間は、約200秒である。
【０１４８】
c)分離・検出
〔蛍光標識抗体−AFP−250bpDNA標識抗体〕免疫複合体が、Ｌ２チャンネルとメインチャンネルとのクロス部分を通過したところで、Ｌ２ウェルに2800V、Ｌ１ウェルに300Vの電圧を100秒間印加して、当該免疫複合体の分離と検出を行った。
尚、検出は、635nmレーザー励起によりＬ２チャネルクロス部分から２cmのキャピラリー部分の蛍光強度を蛍光顕微鏡（BX-50；KSオリンパス（株）製）により経時的に測定することによって行った。
【０１４９】
〔結果〕
図８に、AFP濃度とピーク面積の関係（直線性）を示す。また、図９に、AFP低濃度領域（AFP濃度 0nM、0.8nM、4nM及び20nMの泳動用試料を用いた場合の結果）におけるAFP濃度とピーク面積の関係（直線性）を示す。尚、図８及び９において、縦軸はピーク面積を、横軸はAFP濃度をそれぞれ示す。また、比較例として、予めキャピラリー外で蛍光標識抗体、AFP及び250bpDNA標識抗体を10℃で30分間反応させて得られた反応液をＳＲウェルから導入した後、上記と同様に検出した場合の結果を、図８及び９に併せて示す。尚、反応時の蛍光標識抗体の最終濃度は、200nMであり、AFPの最終濃度は、0nM、0.8nM、4nM、20nM、50nM又は100nMであり、250bpDNA標識抗体の最終濃度は、20nMである。
図８及び９中、●は実施例２の方法で得られた結果を、また、○は比較例の方法で得られた結果をそれぞれ示す。また、図９中、実線は実施例２の方法で得られた結果における回帰直線を、点線は比較例の方法で得られた結果における回帰直線をそれぞれ示す。
【０１５０】
図８及び９から、〔蛍光標識抗体−AFP−250bpDNA標識抗体〕免疫複合体のピークが観察され、そのピーク面積は、AFP濃度に比例していることが判る。特に、予め免疫複合体を形成させた後に、電気泳動処理を行った場合には、AFP低濃度域での直線性が悪い（測定値が回帰式の下に位置している）のに対して、本発明のキャピラリー内で免疫反応を電気泳動的に行わせた後に電気泳動処理を行った場合には、AFP低濃度域及び高濃度域の何れにおいても良好な直線性が得られることが判る。
【産業上の利用可能性】
【０１５１】
本発明は、分析物又はそのアナログと当該分析物又はそのアナログとの複合体を形成し得る物質（CFS）との複合体を形成させる方法、形成された複合体と当該複合体の形成に関与しなかったCFS又はアナログとを分離する方法、並びに分離された複合体の量又は複合体の形成に関与しなかったCFS又はアナログの量に基づいて試料中の分析物を測定する方法に関する。
本発明によれば、溶液中の分析物又はそのアナログと溶液中の当該分析物又はそのアナログとの複合体を形成し得る物質（CFS）との反応を、短時間で且つ高い反応効率で行うことができる。その結果、当該分析物と当該分析物又はそのアナログとの複合体を形成し得る物質（CFS）との複合体と、複合体の形成に関与しなかったCFS又はアナログとを迅速、簡便且つ高精度に分離することが可能となり、更には分離された、複合体の量又は複合体の形成に関与しなかったCFS又はアナログの量に基づいて試料中の分析物を高感度に測定するすることが可能となる。
【図面の簡単な説明】
【０１５２】
【図１】実施例１で作製した、DNA標識抗体〔250bpDNA断片（反応向上CFS）が結合した抗AFP抗体ＷＡ１Fab’フラグメント）の製造スキームを示したものである。
【図２】実施例１で作製した、キャピラリーチップのレイアウトを示したものである。
【図３】実施例１で、キャピラリー内に導入された泳動用試料と試液の配置関係を示したものである。
【図４】実施例１で得られた、AFP濃度とピーク面積の関係（直線性）を示したものである。
【図５】実施例１で得られた、AFP濃度 ０pM及び100pMの泳動用試料を用いた場合の電気泳動クロマトグラムをそれぞれ示したものである。
【図６】実施例２で作製した、キャピラリーチップのレイアウトを示したものである。
【図７】実施例２で、キャピラリー内に導入された泳動用試料、第１試液及び第２試液の配置関係を示したものである。
【図８】実施例２で得られた、AFP濃度とピーク面積の関係（直線性）を示したものである。
【図９】実施例２で得られた、AFP低濃度領域（AFP濃度 0nM、0.8nM、4nM及び20nMの泳動用試料を用いた場合の結果）におけるAFP濃度とピーク面積の関係（直線性）を示したものである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【国際調査報告】
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