(57)【要約】本発明は、式Ｉの化合物［式中、ＡおよびＺは明細書中に定義されるとおりである］、そのような誘導体を調製するための方法、および炎症性疾患（例えば、神経因性疼痛）の処置のためのその使用を提供する。【化１】2009542738.tif 000016
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）
【化１】
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の化合物
［式中：
ＡはＣＨまたはＮであり；
Ｚはフェニルまたはピリジル環であり、互いに同じであるかまたは異なっていてもよく、Ｃ1〜Ｃ4アルキル、Ｃ1〜Ｃ4ハロアルキルまたはハロゲンから選択される、１個または２個のＲ基で場合により置換されている］。
【請求項２】
Ｒがメチル、イソプロピル、ｔｅｒｔ−ブチルまたはトリフルオメチルから選択される請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式（Ｉａ）
【化２】
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［式中、Ｚは請求項１に定義されたとおりである］
の請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
式（Ｉｂ）
【化３】
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［式中、Ｚは請求項１に定義されたとおりである］
の請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
式：
【化４】
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の請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
医薬としての使用のための請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
炎症性疾患および泌尿器系障害の処置のための医薬の調製のための請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物の使用。
【請求項８】
炎症性疾患が神経因性疼痛である請求項７に記載の使用。
【請求項９】
請求項１から６のいずれか一項に記載の化合物を薬学的に許容可能な担体および／または賦形剤と混合して含有する薬学的組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、バニロイド受容体のモジュレータ、特にＴＲＰＶ１アンタゴニストに関する。
【背景技術】
【０００２】
一過性受容体電位バニロイド１（Ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  Ｖａｎｉｌｌｏｉｄ  １）（ＴＲＰＶ１）は、温熱性および機械的痛覚過敏症の発生に強く関わり、神経因性疼痛および泌尿器系障害を含む種々の病態において、重要な役割を担うことが提起されている。
【０００３】
ビアリール部分を含むバニロイド受容体アンタゴニストは公知であり、ＷＯ２００４／０５６７７４1は、下記の置換ビアリール−４−カルボン酸アリールアミドを開示している。
【０００４】
【化１】
2009542738.tif 000003
【先行技術文献】
【特許文献】
【０００５】
【特許文献１】国際公開第２００４／０５６７７４号パンフレット
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００６】
上の化合物のピリジル部分をイソキノリン−５−イル環で置換することにより、改善された特性を有するＴＲＰＶ１が得ることができることが現在見出されている。
【０００７】
したがって、本発明は、一般式（Ｉ）
【０００８】
【化２】
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【０００９】
の改善されたバニロイド−１受容体モジュレータを提供し、式中、
ＡはＣＨまたはＮであり；
Ｚはフェニルまたはピリジル環であり、互いに同じであるかまたは異なっていてもよく、Ｃ1〜Ｃ4アルキル（好ましくはメチル、イソプロピルもしくはｔｅｒｔ−ブチル）、Ｃ1〜Ｃ4ハロアルキル（好ましくはトリフルオメチル）またはハロゲンから選択される１個または２個のＲ基で場合により置換されている。
【００１０】
本明細書の目的では、ハロゲンは、フッ素、塩素、臭素およびヨウ素から選択されるハロゲン原子、好ましくは塩素を意味する。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明の好ましい化合物の第１のグループは、式（Ｉａ）
【００１２】
【化３】
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【００１３】
の化合物であり、式中、Ｚは上に定義されたとおりである。
【００１４】
本発明による好ましい化合物の第２のグループは、式（Ｉｂ）
【００１５】
【化４】
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【００１６】
の化合物であり、式中、Ｚは上に定義されたとおりである。
【００１７】
式（Ｉａ）および（Ｉｂ）の化合物において、Ｚは好ましくは、パラ位でＲ基（水素以外、好ましくは塩素）で置換されたフェニル環である。本発明による最も好ましい化合物は、Ｎ−（４−クロロフェニル）−６−（イソキノリン−５−イル）ピリジン−３−カルボキサミド（本明細書中では以後Ｖ３９４と称する）
【００１８】
【化５】
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【００１９】
である。
【００２０】
式（Ｉ）の化合物は、従来の方法、例えば式（ＩＩ）の化合物
【００２１】
【化６】
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【００２２】
（式中、Ａは上に定義されたとおりであり、カルボキシ基は塩化物として活性化されている）と式（ＩＩＩ）の化合物
Ｚ−ＮＨ2  （ＩＩＩ）
（式中、Ｚは上に定義されたとおりである）との反応により調製できる。
【００２３】
好ましくは、式（Ｉ）の化合物は、式（ＩＶ）の化合物
【００２４】
【化７】
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【００２５】
（式中、ＡおよびＺは上に定義されたとおりであり、Ｘはヨウ素および臭素から選択されるハロゲンである）と
ボロン酸（Ｖ）
【００２６】
【化８】
2009542738.tif 000010
【００２７】
との間のＳｕｚｕｋｉ反応2により得ることができる。
【００２８】
例えば、化合物Ｖ３９４は、都合よく６−ブロモ−または６−クロロ−Ｎ−（４−クロロフェニル）ピリジン−３−カルボキサミドとイソキノリン−５−イル−５−ボロン酸との間のＳｕｚｕｋｉ反応により調製される。
【００２９】
式（Ｉ）の化合物は、バニロイドＴＲＰＶ１受容体をモジュレートする。好ましい化合物Ｖ３９４は、ラット脊髄において１５ｎＭ（１３〜１７）のＫi値、および培養ラット後根神経節ニューロンにおいて０．８３ｎＭ（０．７４〜０．９３）のＩＣ50値を示した。したがって、本発明の化合物は、炎症状態（例えば、慢性疼痛および炎症性痛覚過敏症）の処置のための薬学的組成物の調製のために使用できる。これらの製剤は、従来の方法および賦形剤（例えば、Remington's Pharmaceutical Science Handbook, XVII ed. Mack Pub., N.Y., U.S.A.に開示されたもの）により調製できる。
【００３０】
本発明を、下記の実施例により以下に例示する。
【実施例】
【００３１】
材料および方法
すべての市販化合物は、Ａｌｄｒｉｃｈから購入し、さらに精製することなしに使用した。反応経路を、シリカゲル薄層クロマトグラフィー（プレコートされたＦ254  Ｍｅｒｃｋプレート）によりモニターし、スポットをＵＶ光で観察し、ＫＭｎＯ4溶液で可視化した。フラッシュクロマトグラフィーは、Ｍｅｒｃｋシリカゲル（２３０〜２４０メッシュ）を用いて実施した。1Ｈ−ＮＭＲスペクトルは、内部標準としてＴＭＳを用いてＶａｒｉａｎ  ４００ＭＨｚ分光計にて記録した。質量スペクトルは、Ｗａｔｅｒｓ−Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＭＤ分光計により得た。融点は、Ｂｕｃｈｉ−Ｔｏｔｔｏｌｉ機器で測定し、未修正である。
【００３２】
実施例  Ｎ−（４−クロロフェニル）−６−（−イソキノリン−５−イル）ピリジン−３−カルボキサミド（Ｖ３９４）
ステップａ）−６−クロロ−Ｎ−（４−クロロフェニル）ピリジン−３−カルボキサミド
市販の６−クロロ−ニコチン酸塩化物（５６．８ｍｍｏｌ、１０ｇ）を５０ｍｌの無水ＣＨ2Ｃｌ2に溶解し、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ）（１．２当量、６８．２ｍｍｏｌ、１１．６７ｍｌ）および４−クロロアニリン（１．２当量、６８．２ｍｍｏｌ、８．７０ｇ）の５０ｍｌ  ＣＨ2Ｃｌ2中溶液に０℃で滴下した。この混合物を室温で２０時間撹拌し、次いでＣＨ2Ｃｌ2（２００ｍｌ）で希釈し、水（１×２００ｍｌ）およびブライン（１×１００ｍｌ）で洗った。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ濃縮した。この粗製物をジエチルエーテルから結晶化し、１３ｇの白色固体を得た。収率＝８６％。1Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3，２００ＭＨｚ）δ  ７．３５（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．４７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．２Ｈｚ）、７．５８（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．８８（１Ｈ，ｂｓ）、８．１６（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｊ’＝２．８Ｈｚ）、８．８４（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝２．４Ｈｚ）
ステップｂ）−イソキノリン−５−イル−５−ボロン酸
−７８℃まで冷却した、蒸留したばかりのＴＨＦ２０ｍｌ中の２．５Ｍ  ｎ−ＢｕＬｉの溶液（１．２当量、３ｍｍｏｌ、１．２ｍｌ）を、ＴＨＦ５ｍｌ中の５−ブロモイソキノリン（２．５ｍｍｏｌ、５２０ｍｇ）溶液に添加した。生じた混合物をこの温度で４５分にわたり反応させた。次いで、トリイソプロピルボレートの溶液（１．２当量、３ｍｍｏｌ、０．７ｍｌ）を添加し、この混合物を同じ温度で５分間撹拌し、次いで、室温まで加温し、更に１時間撹拌した。５％ＮａＯＨ溶液（３０ｍｌ）をゆっくり添加することにより、この混合物をクエンチした。水層を分離し、０℃で１０％ＨＣｌを添加することによりｐＨ５／６まで酸性化した。有機相を酢酸エチルで抽出、蒸発し、ジエチルエーテルからの結晶化により２５０ｍｇの白色固体を得た。収率＝５８％。1Ｈ  ＮＭＲ（ｄ6−ＤＭＳＯ，２００ＭＨｚ）δ  ７．６６（１Ｈ，ｔ，Ｊ＝７．２Ｈｚ）、８．０７（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝５．８Ｈｚ）、８．１３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、８．３４（１Ｈ，ｄ）、８．４７（１Ｈ，ｄ）、８．５０（２Ｈ，ｂｓ）、９．２９（１Ｈ，ｓ）；［Ｍ+1］１７４．１（Ｃ9Ｈ8ＢＮＯ2  計算値１７２．９８）
ステップｃ）−Ｎ−（４−クロロフェニル）−６−（イソキノリン−５−イル）ピリジン−３−カルボキサミド（Ｓｕｚｕｋｉ反応）
イソキノリン−５−イル−５−ボロン酸（１．５当量、８．４ｍｍｏｌ、１．４６ｇ）、６−クロロ−Ｎ−（４−クロロフェニル）ピリジン−３−カルボキサミド（５．６ｍｍｏｌ、１．５ｇ）、酢酸パラジウム（４％ｍｏｌ、４８ｍｇ）、トリフェニルホスフィン（２当量、２．９４ｇ）、１５％Ｎａ2ＣＯ3（４ｍｌ）、ＥｔＯＨ（４ｍｌ）およびトルエン（５０ｍｌ）の混合物を８０℃で１６時間加熱した。蒸発後、飽和炭酸水素ナトリウム溶液を添加し、沈殿した固体を濾過し、次いで酢酸エチルで洗った。残留物をメタノールから再結晶し、白色固体として１．４ｇの化合物Ｖ３９４を得た。融点（ジエチルエーテル）＝２５８℃。収率＝６９％。1Ｈ  ＮＭＲ（ｄ6−ＤＭＳＯ，４００ＭＨｚ）δ  ７．４７１（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．８３８（１Ｈ，ｍ）、７．８５２（２Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．８Ｈｚ）、７．９５３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．０Ｈｚ）、８．０４９（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝７．２Ｈｚ，Ｊ’＝０．８Ｈｚ）、８．０８５（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）、８．２９０（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ）、８．４９０（１Ｈ，ｄｄ，Ｊ＝８．４Ｈｚ，Ｊ’＝２．２Ｈｚ）、８．５４３（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝６．０Ｈｚ）、９．３００（１Ｈ，ｄ，Ｊ＝１．６Ｈｚ）、９．４３８（１Ｈ，ｓ）、１０．６９５（１Ｈ，ｓ）；［Ｍ+1］３６０．４（Ｃ21Ｈ14ＣｌＮ3Ｏ  計算値３５９．８１）。
【００３３】
生物学的アッセイ
新生仔および成体Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラット（約２５０ｇ）を使用した（Ｈａｒｌａｍ、イタリア）。すべての実験は、国のガイドラインに従い、地域の倫理委員会により承認された。
【００３４】
放射性リガンド結合アッセイ
試験時の体重２５０〜３５０ｇの雄性Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙラットを使用した。結合アッセイのために、ラットを麻酔下、断頭により屠殺し、脊髄を取り出し、ポリトロン組織ホモジナイザーを用いて５ｍＭ  ＫＣｌ、５．８ｍＭ  ＮａＣｌ、０．７５ｍＭ  ＣａＣｌ2、２ｍＭ  ＭｇＣｌ2、３２０ｍＭ  スクロース、１０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓを含有するｐＨ８．６の氷冷緩衝液中で破壊した5。ホモジナイズした組織を、１０００×ｇで１０分間、４℃にて遠心分離し、上清を再度３５０００×ｇで３０分間、４℃にて遠心分離した（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ａｖａｎｔｉ  Ｊ２５）。ペレットを上記と同じ緩衝液中に再懸濁し、結合実験に使用した。飽和実験において、膜懸濁液から１５０μｇタンパク質／サンプルを［3Ｈ］−レシニフェラトキシン（［3Ｈ］−ＲＴＸ）（０．００３〜３ｎＭ）と共に、０．２５ｍｇ／ｍｌ脂肪酸不含ウシ血清アルブミンを含むアッセイ緩衝液中で、３７℃にて６０分間インキュベートした。競合実験において、膜を［3Ｈ］ＲＴＸ（０．４ｎＭ）および濃度を漸増させた試験化合物（０．１ｎＭ〜３μＭ）と共に３７℃で６０分間インキュベートした。
【００３５】
１μＭのＲＴＸの存在下で、非特異的結合を評価した。インキュベーション後、反応混合物を０℃に冷却し、ウシα１−酸性糖タンパク質（２００μｇ／チューブ）と共に１５分間インキュベートして、非特異的ＲＴＸ結合を減少させた。１８５００×ｇで１５分間サンプルを遠心分離することにより、膜結合ＲＴＸを遊離ＲＴＸから分離した。ペレットを含むミクロ遠心分離管の先端を切り取り、放射活性をシンチレーション計数（Ｐａｃｋａｒｄ  ２５００  ＴＲ）により測定した。ウシ血清アルブミンを標準参照として用いるＢｉｏ−Ｒａｄ法（Bradford、1976）によりタンパク質濃度を決定した。飽和および競合試験をＬｉｇａｎｄプログラムにより解析した6。
【００３６】
培養ラット後根神経節ニューロンのＣａ2+の蛍光測定
成体ラットに致命的な麻酔をかけ、断頭した。後根神経節を取り出し、冷リン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）中に置き、コラゲナーゼ（１０ｍｇ／ｍｌ）、トリプシン（５ｍｇ／ｍｌ）およびＤＮＡｓｅ（１ｍｇ／ｍｌ）に移して３７℃で３５分間保った。１０％ウシ胎児血清、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを添加した冷ＤＭＥＭ中に置いた神経節を、一連のシリンジ針（２３Ｇから２５Ｇ）に数回通過させて、単一の細胞に分離した。培地および神経節を濾過して破片を除去し、８ｍｌのＤＭＥＭ培地で満たし、遠心分離にかけた（２００×ｇで５分間）。最終的な細胞ペレットをＤＭＥＭ培地［１００ｎｇ／ｍｌのマウス神経成長因子（マウス−ＮＧＦ−７Ｓ）およびサイトシン−β−Ｄ−アラビノフラノシドフリー塩基（ＡＲＡ−Ｃ）２．５μＭを添加した］中に再懸濁した。細胞をポリ−Ｌ−リジン（８．３μＭ）およびラミニン（５μＭ）コートした２５ｍｍガラス製カバースリップ上に置いて、５％ＣＯ2および空気で満たした加湿インキュベーター内で、３７℃で５〜８日間保持し、次いで以下の組成（ｍＭ）：ＣａＣｌ2  １．４、ＫＣｌ  ５．４、ＭｇＳＯ4  ０．４、ＮａＣｌ  １３５、Ｄ−グルコース  ５、ＨＥＰＥＳ  １０、およびＢＳＡ（０．１％）を有するＣａ2+緩衝溶液中にＦｕｒａ−２−ＡＭ−エステル（３μＭ）をｐＨ７．４、３７℃で４０分間添加した。次いで細胞を、Ｃａ2+緩衝溶液で２回洗い、Ｎｉｋｏｎ  ｅｃｌｉｐｓｅ  ＴＥ３００顕微鏡のステージ上のチャンバに移した。Ｆｕｒａ−２−ＡＭ−エステルを３４０ｎＭおよび３８０ｎＭで励起させて、動的画像分析システム（Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ａｕｔｏｍａｔｉｏｎ  ２．０、ＲＣＳ、Ｆｌｏｒｅｎｃｅ、イタリア）で記録されたＦ340／Ｆ380比によって、相対的な［Ｃａ2+］i変化を示し、安定な蛍光発光に達するまで細胞を放置（少なくとも１０分）してから、実験を開始した。Ｆｕｒａ−２−ＡＭ−エステルおよび決定した濃度の遊離Ｃａ2+を含有する緩衝液を用いて較正曲線を得た。次いで、この曲線を使用して、Ｆ340／Ｆ380比から得られたデータを［Ｃａ2+］i（ｎＭ）に変換した8。０．１μＭカプサイシンにより引き起こされる［Ｃａ2+］iの上昇におけるカプサゼピン（ＣＰＺ）、ＳＢ３６６７９１およびＶ３９４による前処理の効果を試験した。
【００３７】
ラットにおけるカプサイシン誘導二次性異痛症
カプサイシン（２０ｎｍｏｌｓ／５０μｌ／脚）を、ジエチルエーテルで麻酔したラットの右脚無毛皮膚の足底面に注射した（Chaplanら,1994）。化合物Ｖ３９４を、カプサイシン注射の２時間前に経口投与した（３０μｍｏｌ／ｋｇ）。接触性異痛症をカプサイシンチャレンジの９０分後に評価した。
【００３８】
薬物および試薬
薬物および試薬を示した会社より得た：［3Ｈ］−レシニフェラトキシン（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、ボストン、ＭＡ）、ＳＢ−３６６７９１（Ｔｏｃｒｉｓ、ＵＫ）、カプサイシン、カプサゼピン、イオノマイシン、ラミニン、ポリ−Ｌ−リジン、サブスタンスＰ（Ｓｉｇｍａ、イタリア）；マウスＮＧＦ−７Ｓおよびコラゲナーゼ／ディスパーゼ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ、イタリア）；ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）、加熱不活性化胎児ウシ血清（ＦＢＳ）、Ｌ−グルタミン（２００ｍＭ）、ペニシリン／ストレプトマイシン（１０，０００ＩＵ／ｍｌ±１０，０００ＵＧ／ｍｌ）、（Ｇｉｂｃｏ、イタリア）；Ｆｕｒａ−２−ＡＭ−エステル（Ｓｏｃｉｅｔａ  Ｉｔａｌｉａｎａ  Ｃｈｉｍｉｃｉ、イタリア）。カプサイシン（１０ｍＭ）、カプサゼピン（１０ｍＭ）、（Ｅ）−３−（４−クロロフェニル）−Ｎ−（３−メトキシフェニル）アクリルアミド（ＳＢ−３６６７９１として同定されている）（１ｍＭ）およびＶ３９４の貯蔵濃縮液は、５０％ＤＭＳＯおよび５０％Ｔｗｅｅｎ８０中で調製した。Ｆｕｒａ−２−ＡＭ−エステルおよびイオノマイシンは、１００％ＤＭＳＯ中に溶解した。他のすべての薬物は、蒸留水中に溶解した。次いでＫｒｅｂｓ緩衝溶液で適切な希釈を行った。
【００３９】
結果
放射性リガンド結合アッセイ
ラット脊髄に発現したＴＲＰＶｌに対する［3Ｈ］−ＲＴＸの飽和曲線は、０．２１（０．１６〜０．２７）のＫD値および５７（５３〜６２）ｆｍｏｌ／ｍｇタンパク質のＢmax値を示した。スキャッチャードプロットは、基本的に線形であり、データのコンピュータ解析は、１クラスのみの高親和性結合部位が存在することを示した。［3Ｈ］−ＲＴＸの競合結合実験は、Ｖ３９４およびその参照のＳＢ−３６６７９１がそれぞれ１５（１３〜１７）ｎＭおよび３６（３０〜４３）ｎＭのＫi値を有することを明らかにした。
【００４０】
Ｃａ2+蛍光発光
カプサイシン（０．１μＭ）は、大部分（９５％）の後根神経節ニューロンにおいて［Ｃａ2+］を増大させ、したがって、これらはＴＲＰＶ１発現ニューロンとして同定された。カプサイシン誘発［Ｃａ2+］i動員を阻害するＶ３９４のＩＣ50値は、０．８３ｎＭ（０．７４〜０．９３）であった。参照ＴＲＰＶ１アンタゴニスト、カプサゼピンおよびＳＢ−３６６７９１はカプサイシン反応を阻害し、それぞれ９４８（６７６〜１３３０）ｎＭおよび８．７（３．４〜１７．３）ｎＭのＩＣ50を有した。この結果は、平均および９５％信頼限界として表される。
【００４１】
ラットにおけるカプサイシン誘導二次性異痛症
カプサイシンチャレンジの９０分後、化合物Ｖ３９４は、カプサイシンの異痛症促進作用（ｐｒｏ−ａｌｌｏｄｉｎｉｃ  ｅｆｆｅｃｔ）に対して有意な予防効果（５５％）を示した。
【００４２】
参考文献
【００４３】
【表１】
2009542738.tif 000011
【国際調査報告】
2009542738.tif 000017
2009542738.tif 000018