(57)【要約】眼の炎症および血管異常（例えば虚血関連のもの）、その予防並びにその軽減は、少量のリン酸−グリセロール基を供与する物体、例えばホスファチジルグリセロールリポソームの哺乳類への投与によって治療される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類の患者における糖尿病性網膜症の発症および／または進行の遅延剤の製造における使用であって、医薬的に許容されるリン酸−グリセロール基を供与する物体で、アポトーシス細胞またはアポトーシス小体と大きさが似ており、非脂質性の医薬的に活性なものが本質的に含まれていない物体の有効量を患者に投与することを特徴とする使用。
【請求項２】
該物体がリポソームである、請求項１の使用。
【請求項３】
リポソームに、６０重量％〜１００重量％のホスファチジルグリセロールが含まれる、請求項２の使用。
【請求項４】
該物体が約２０ｎｍから約５００μｍの直径を有する、請求項１から３のいずれかの使用。
【請求項５】
該物体が約５００から約３×１０14個の物体の単位用量で投与される、請求項１から４のいずれかの使用。
【請求項６】
該医薬的に許容される物体が全身に投与される、請求項１から６のいずれかの使用。
【請求項７】
該医薬的に許容される物体が筋肉内に投与される、請求項１から６のいずれかの使用。
【請求項８】
該医薬的に許容される物体が局所的に投与される、請求項１から６のいずれかの使用。
【請求項９】
哺乳類の患者の眼における炎症性および／または血管性障害の治療剤または予防剤の製造または生産における使用であって、医薬的に許容されるリン酸−グリセロール基を供与する物体で、直径約２０ｎｍから５００μｍの大きさで、非脂質性の医薬的に活性なものが本質的に含まれていない物体の使用。
【請求項１０】
該物体がリポソームである、請求項９の使用。
【請求項１１】
リポソームに、６０重量％〜１００重量％のホスファチジルグリセロールが含まれる、請求項１０の使用。
【請求項１２】
該物体が約５００から約３×１０14個の物体の単位用量である、請求項９から１１のいずれかの使用。
【請求項１３】
該医薬的に許容される物体が全身に投与される、請求項９から１２のいずれかの使用。
【請求項１４】
該医薬的に許容される物体が筋肉内に投与される、請求項９から１２のいずれかの使用。
【請求項１５】
該医薬的に許容される物体が局所的に投与される、請求項９から１２のいずれかの使用。
【請求項１６】
網膜において、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、またはＩＬ−６の少なくとも一つのｍＲＮＡ量が減少する、請求項９から１５のいずれかの使用。
【請求項１７】
該障害がぶどう膜炎である、請求項１０から１６のいずれかの使用。
【請求項１８】
該障害が黄斑変性症である、請求項１０から１６のいずれかの使用。
【請求項１９】
黄斑変性症が加齢性黄斑変性症である、請求項１８の使用。
【請求項２０】
ヒトの患者における糖尿病性網膜症の構成要素である糖尿病性黄斑浮腫の治療剤の製造における使用であって、糖尿病性網膜症の構成要素として糖尿病性黄斑浮腫を示すヒトの患者を特定することを特徴とし、および医薬的に許容されるリン酸−グリセロール基を供与する物体で、アポトーシス細胞またはアポトーシス小体と大きさが似ている物体の有効量を患者に投与することを特徴とする方法。
【請求項２１】
該物体がリポソームである、請求項２０の使用。
【請求項２２】
リポソームに、６０重量％〜１００重量％のホスファチジルグリセロールが含まれる、請求項２１の使用。
【請求項２３】
該物体が約２０ｎｍから約５００μｍの直径を有する、請求項２０から２２のいずれかの使用。
【請求項２４】
該物体が約５００から約３×１０14個の物体の単位用量である、請求項２０から２３のいずれかの使用。
【請求項２５】
該医薬的に許容される物体が全身に投与される、請求項２０から２４のいずれかの使用。
【請求項２６】
該医薬的に許容される物体が筋肉内に投与される、請求項２０から２４のいずれかの使用。
【請求項２７】
該医薬的に許容される物体が局所的に投与される、請求項２０から２４のいずれかの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、哺乳類の患者における眼の炎症および血管異常（例えば虚血関連のもの）、その予防、並びにその軽減に関する。
【背景技術】
【０００２】
眼球は、３つの層：
光受容体を含む内側の網膜；
中間のぶどう膜（脈絡膜、毛様体、および虹彩）；並びに
透明な角膜を含む外側の強膜を有する。眼球にはまた、２つの空洞、すなわち
虹彩によって前房と後房に分割され、両方とも房水で満たされている、水晶体の前の、より小さな前側の空洞；並びに
ゼリー状硝子体（体液）を含む、水晶体の後ろの、より大きな後側の空洞も含まれる。水晶体は虹彩の後ろにあり、毛様体および提靱帯(suspensory ligament)によって決まった場所に保持されている。強膜の可視部(visible portion)は結膜、すなわち眼瞼内層(lining of the eyelid)として続く膜で覆われている。外在筋(Extrinsic muscle)は、眼球を動かす。
【０００３】
眼は一般に、免疫特権部位(immune privileged site)であると考えられる。その構成部分の多くは血管を含み、それは体の循環器系から継続的に血流が供給されているが、眼を体の正常に作用する免疫系に組み入れるのに十分な程度まで、体の免疫系の活性成分は眼に入り込まない。眼の障害、例えば炎症、および血管異常の治療に十分な有効性を得るために、投与経路と独立して、薬物もしくは活性な医薬品、または少なくとも薬物もしくは活性な医薬品の効果は、異なる血液組織関門(blood-tissue barrier)、例えば血液網膜関門を越える(cross)／貫通する(penetrate)ことができなければならない。
【０００４】
眼の生理的成分の多くは、炎症および／または虚血または脈管構造異常に関与する障害を受けやすい。標題「眼の炎症および／または血管異常」の下に分類されるこれらの障害には、これらに限らないが、以下のものが含まれる：
【０００５】
（ａ）−糖尿病性網膜症− 真性糖尿病(diabetes mellitus)、すなわち高血糖を特徴とする慢性代謝障害を有する患者における網膜損傷。真性糖尿病は、体の膵臓がインスリンを産生しない１型であってもよく、または体がインスリン耐性を示すとともに、正常な代謝を維持するのに十分でないインスリン分泌を示す２型であってもよい。両方の型は、糖尿病性網膜症として公知の網膜の損傷をもたらす。「網膜症」は、網膜の障害に適用される一般用語である。
【０００６】
糖尿病性網膜症は、網膜の脈管構造に影響を及ぼす糖尿病の合併症である。炎症が進行中の網膜の症状に寄与すること、並びに網膜における内在性ミクログリアの活性化およびマクロファージの動員を通して、糖尿病が網膜の中で局所的な自己永続炎症反応を引き起こし、その結果、炎症性メディエーターを産生することが一層明らかになっている。例えば、糖尿病性網膜症の動物モデルの網膜組織において、炎症性サイトカインＩＬ−１およびＩＬ−６の量が増加することが明らかとなっている。
【０００７】
炎症性サイトカインＴＮＦ−αは、糖尿病性網膜症の病因に関与している。結果として、その活性の遮断(blocking)に基づく多数の実験的治療が行われてきた。抗ＴＮＦ−α療法の結果として、糖尿病性黄斑浮腫の４つの症例で、症状の退行が生じた（Sfikakisら, Diabetes Care 2005; 28(2): 445-447）。さらに、網膜症を有する糖尿病の子供の血清中でＴＮＦ−αが亢進されるが、一方、血清のＩＬ−１０（抗炎症性サイトカイン）が減少することが示された（Mysliwiecら, Clin. Biochem. 2006 Aug.; 39(8): 851-856）。
【０００８】
血管の喪失および網膜への漏出を引き起こす網膜の血管の悪化は、脈管障害として公知であり、視力障害をもたらし、失明へと進行しうる。真性糖尿病は、労働年齢の個体の間で、失明の最も一般的な原因である。網膜の血流制御は、糖尿病の非常に初期の段階で破壊される。網膜の主な酸素消費部位への血液および酸素供給の破壊を結果として生じる血管損傷は、糖尿病性網膜症の進行への明らかな寄与因子として示唆されてきた（Dao-Yi Yuら, 「Clinical and Experimental Ophthalmology」, (2001) 29, 164-166）。
【０００９】
また、黄斑浮腫（糖尿病性黄斑浮腫としても公知である）は、糖尿病性網膜症の重要な臨床症状であり、ここでもまた炎症が病理に関与する。トリアムシノロンアセトニド（副腎皮質ステロイド抗炎症剤）は、硝子体内注射による糖尿病性黄斑浮腫の治療に用いられる。拡張型高透過性毛細血管(dilated hyperpermeable capillary)および毛細血管瘤の漏出のため、糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）は血液網膜関門の損傷後に生じる（Ciullaら, Diabetic Retinopathy and Diabetic Macular Edema: Parthophysiology, Screening, and Novel Therapies, Diabetes Care, (September 2003) Vol. 26, No. 9, 2653-2664）。糖尿病性網膜症を患っている糖尿病患者もまた、ＤＭＥを進行させうる。終末糖化産物は、炎症誘発性シグナル過程(proinflammatory signalling process)の永続化に関与し得、終末糖化産物と、このような産物についての特定の受容体との間の相互作用は、網膜の血行動態の破壊および／または血管内皮細胞の損傷をもたらしうる（Ciulla, 上記）。
【００１０】
（ｂ）−ぶどう膜炎− 眼内の炎症性障害についての非特異的用語。言及したように、ぶどう膜は、非常に血管に富んだ眼球の中間層であり、強膜の直下にある。それは、虹彩、毛様体および脈絡膜からなり、色素含有層(pigmented layer)を形成する。ぶどう膜炎は通常、これらのいくつかまたはすべての炎症に関与するが、またぶどう膜でない眼の他の部位、例えば網膜および角膜にも関与しうる。それは既知の原因、または未知の原因の感染または疾患に関連し得、後者の場合、それは「内因性ぶどう膜炎」として公知であり、自己免疫的な原因であると考えられている。「交感性ぶどう膜炎」は重篤な両側ぶどう膜炎であり、穿刺創から生じた一つの眼のぶどう膜の炎症として始まる。ぶどう膜炎が、サイトカイン、例えばＩＬ−１によって誘導可能であることは明らかである（Chiou, J. Ocul. Pharmacol. Ther., 17:189-198, 2001）。ＩＬ−１誘導性ぶどう膜炎がＩＬ−１遮断薬によって阻害されると説明している研究者もいる（Chiou, J. Ocul. Pharmacol. Ther., 16:407-418, 2000）。
【００１１】
（ｃ）−黄斑変性症− 中心視野の喪失を生ずる、網膜の黄斑部における色素沈着の喪失。それはかなりの炎症成分を有しており、ＩＬ−６およびＣ反応性蛋白質（ＣＲＰ）の高い血中濃度が、５年間かけて初期および中間期から進行期へと黄斑変性症が進行する危険性が２倍に増加することと関連があると指摘している研究者もいる。
【００１２】
加齢性黄斑変性症（ＡＭＤ）は、高齢者における失明の最も一般的な型である。網膜色素上皮細胞の喪失および脈絡膜と網膜の間の界面でのドルーゼンの出現によって特徴付けられる。症例の８５％を構成する乾燥型ＡＭＤのための有効な治療は存在しない。ＡＭＤへの顕著な炎症成分が、特にドルーゼンの領域において存在する。炎症マーカー、例えばＣ反応性蛋白質、活性化ミクログリアおよび活性化補体成分が、損傷に付随して確認されている。リウマチ様関節炎はＡＭＤの１０倍の余地を有し、それが抗炎症剤の長期使用に起因していることが最近報告されている（PL McGeer and J Sibley, Neurobiology of Aging 26 (2005) 1199-1203）。この発見は、Ｈ因子における多型(polymorphism)（保体による自己への攻撃に対する保護因子）が、ＡＭＤの危険性に何倍も影響を及ぼしていることが明らかとなった４つの他の報告と一致している（GS Hagemanら PNAS 102 (2005) 7227-7232; RJ Kleinら Science 308 (2005) 385-389; JL Hainesら Science 308 (2005) 419-421; AO Edwardsら Science 308 (2005) 421-424）。
【００１３】
炎症性サイトカインＩＬ−６およびＴＮＦ−αは、ＡＭＤの病変形成に関係している。ＩＬ−６がＡＭＤの症例の血清中で著しく亢進されていることが明らかとなったが、一方、ＴＮＦ−αにおいては軽く増加した（Seddonら, Arch. Opthalmol. 2005; 123: 774-782）。
【００１４】
これらの発見は、ＡＭＤの有効な抗炎症治療が非常に有利な効果を有しているはずであることを示している。コリオキャピラリスアルカ(choriocapillaris arca)において、加齢性黄斑変性症が一酸化窒素シンターゼの誘導および一酸化窒素（炎症過程におけるメディエーターとして関与しうる非常に反応性の高い化合物）の過剰産生によって引き起こされるという証拠がいくつか存在する（Chiou, 2001）。
【００１５】
先行技術に対する簡単な引用
眼の炎症の異なった徴候の各々には、その現在推奨される治療法がある。
【００１６】
糖尿病性網膜症の発症および進行は、厳しい（制限された）血糖コントロールおよび厳しい血圧コントロールによって軽減されうる。しかしながら、今までの糖尿病性網膜症の治療は、障害のある眼の直接治療を必要としてきた。レーザー治療は、糖尿病性網膜症の治療に用いられる。黄斑浮腫についてのレーザー治療は、障害がある眼の視角の倍加(doubling of visual angle)（部分的な視界を引き起こす）の発生率を２年で５０％以上まで減少させている。眼内副腎皮質ステロイドは、糖尿病性網膜症の最も初期の段階で現れた炎症の処置として、特定の患者に利用して成功している例がある。これには、ごく小さい針を通して硝子体腔に注入した長時間作用性副腎皮質ステロイド、例えばトリアムシノロンアセトニドの使用、および局所麻酔が含まれる。トリアムシノロンアセトニドはまた、硝子体内注射による糖尿病性黄斑浮腫の治療にも用いられている。副腎皮質ステロイドを眼の内部に外科的に埋め込んで、徐放薬物送達装置において薬物を一定して放出する使用も報告されている。
【００１７】
動物モデルは、糖尿病性網膜症の研究に利用可能である。これはストレプトゾトシンによって誘導される糖尿病性ラットモデルである。糖尿病は、ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）の腹腔内または血管内注入によって、実験用成体ラットに誘導される。注入の３〜５日以内に、ラットは、真性糖尿病のレンジ特性(range characteristic)まで上昇した血漿グルコース濃度を示す。これらは、ヒト糖尿病性網膜症に関連する網膜の構造および機能における多くの初期変化を示す。
【００１８】
ぶどう膜炎は通常、副腎皮質ステロイドおよび他の免疫抑制剤の投与によって治療されるが、これらの治療は普遍的に有効ではない。高用量副腎皮質ステロイドは、交感性ぶどう膜炎の治療として有効であることが多く、このような化合物は硝子体内に投与される。トリアムシノロンアセトニドの硝子体内注入はまた、ぶどう膜炎の治療にも用いられてきた。
【００１９】
レーザー光凝固は、斑の損傷への進行を予防するのに有効であるが、治療された部位の不可逆的な瘢痕を引き起こす。硝子体内注入によるペガプタニブ(pegaptanib)（「マクゲン(Macugen)」）の投与は、黄斑変性症についての実験的治療である。
【００２０】
眼内への直接注入は、多くの患者が受けたがらない明らかに望ましくない方法である。今まで、糖尿病性網膜症の成功した治療の報告がいくつかなされてきたが、それには眼内への直接注入が含まれていない。
【００２１】
国際特許出願公開番号WO/03/061667 バソジェンアイルランドリミテッド(Vasogen Ireland Limited)は、ホスファチジルグリセロール（ＰＧ）をその表面上に露出するリポソームおよび粒子を開示し、全身投与および体の免疫系の改変による、炎症および自己免疫疾患の治療におけるその使用を一般的に示している。
【００２２】
上記を考慮して、眼の炎症性および／または血管性障害のために、治療を改善する必要性が長年にわたって存在する。またヒトの患者における眼の炎症性および／または血管性障害の治療に有用なものの組成物を提供する必要性も存在する。
【００２３】
発明の概要
適当な用量のリン酸−グリセロール基を供与する物体で、アポトーシス哺乳類細胞またはアポトーシス小体の大きさと似ている大きさの物体を哺乳類の患者に投与することによって、その眼の炎症を軽減しうることが現在明らかとなっている。投与は、必ずしも眼に直接ではなく、全身に、例えば筋肉内または静脈内投与でありうる。驚くべきことに、通常は免疫特権部位と考えられており、体の全身作用から一般に保護されている眼において、該薬物の投与は抗炎症性または血管性障害の軽減効果を生ずる。
【００２４】
そのため本発明の一つの態様によれば、哺乳類の患者の眼における炎症性および／または血管性障害の発症および／または進行を遅延させる方法が提供され、それは医薬的に許容されるリン酸−グリセロール基を供与する物体で、アポトーシス細胞またはアポトーシス小体と大きさが似ている物体の有効量を患者に投与することを特徴とする。
【００２５】
一つの態様において、血管性障害は虚血性障害である。本発明の別の態様によれば、哺乳類の患者の眼における炎症性および／または血管性障害の治療剤または予防剤の製造または生産における使用であって、医薬的に許容されるリン酸−グリセロール基を供与する物体で、アポトーシス細胞またはアポトーシス小体の大きさと似ている大きさの物体の使用が提供される。
【００２６】
好ましい態様
本発明に有用なリン酸−グリセロール基を供与する物体の詳細、およびその製造は、上記の国際特許出願公開番号WO/03/061667 バソジェンアイルランドリミテッド、および２００３年１月２１日に出願され、その全体が本明細書に引用される、その米国対応特許 U.S.S.N. 10/348,601 Bolton and Mandelに見られる。適宜、該物体は、アポトーシス細胞またはアポトーシス小体の大きさに似ている大きさを有する。これらの医薬的に許容される物体には、これらに限らないが典型的には、回転楕円状(spheroidal)、円柱状、楕円体(ellipsoidal)、例えば扁円および扁長な回転楕円状、ヘビ状、腎臓形などの形を有する合成および半合成の物体が含まれ、好ましくはその最長軸に沿って測定して、直径約２０ｎｍから約５００μｍの大きさに作り、その表面上にリン酸−グリセロール基を含む。
【００２７】
医薬的に許容される物体(body)は、外面にあらかじめ決まっている特徴のリン酸グリセロール基、またはインビボで変換されうる基を有する。これらの基の構造は、合成的に改良され得、本来のホスファチジルグリセロール基の修正された型のすべてまたは一部が含まれる。例えば、リン酸基の負電荷の酸素は、リン酸エステル基（例えば、Ｌ−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ’）（ＯＲ”）［式中、Ｌはホスファチジルグリセロール基の残基であり、Ｒ’は−ＣＨ2ＣＨ（ＯＨ）ＣＨ2ＯＨであり、Ｒ”は１〜４個の炭素原子のアルキル、または２〜４個の炭素原子および１〜３個のヒドロキシル基のヒドロキシル置換されたアルキルであるが、但しＲ”はＲ’基よりも容易にインビボで加水分解される］）、二リン酸エステルを含む二リン酸基（例えば、Ｌ−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ’）ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ”）2［式中、ＬおよびＲ’は上記と同義であり、各Ｒ”は独立して、水素、１〜４個の炭素原子のアルキル、または２〜４個の炭素原子および１〜３個のヒドロキシル基のヒドロキシル置換されたアルキルであるが、但し第二のリン酸基［−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ”）2］は、Ｒ’基よりも容易にインビボで加水分解される］）、または三リン酸エステルを含む三リン酸基（例えば、Ｌ−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ’）ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ”）ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ”）2［式中、ＬおよびＲ’は上記と同義であり、各Ｒ”は独立して、水素、１〜４個の炭素原子のアルキル、または２〜４個の炭素原子および１〜３個のヒドロキシル基のヒドロキシル置換されたアルキルであるが、但し第二および第三のリン酸基はＲ’基よりも容易にインビボで加水分解される］）などに変換され得る。このような合成的に改変したリン酸グリセロール基はインビボでリン酸グリセロールを発現でき、したがって、このような改変した基はリン酸グリセロール可変基である。
【００２８】
ホスファチジルグリセロールは公知の化合物である。例えば、天然に存在するホスファチジルグリセロールのカルジオリピンの二量体をホスホリパーゼＤで処理して生成できる。また、ホスホリパーゼＤを用いてホスファチジルコリンから酵素的合成によっても製造できる（参照：例えば米国特許第5,188,951号Tremblay, et al.）。化学的にそれは、リン酸グリセロール基および類似しているが相異するＣ18−Ｃ20脂肪酸鎖を有する。
【００２９】
本明細書で用いられる用語「ＰＧ」とは、少なくとも１個の広範囲の脂肪酸鎖を有するリン酸グリセロール基を保有するリン脂質をカバーするが、但し、生じたＰＧ体はリポソームの構造の構成要素として関与し得ることを意図する。好ましくは、このようなＰＧ化合物は式Ｉ：
【化１】
2009510076.tif 000002
［式中、ＲおよびＲ’は独立して、Ｃ1−Ｃ24炭化水素鎖（飽和または不飽和の、直鎖または少なくとも１個の鎖が１０〜２４個の炭素原子を有する制限された量の分枝を含む）から選択される］で表される。本質的に脂肪鎖ＲおよびＲ1は、活性な構成要素よりむしろリポソームの構造的構成要素を形成する。したがって、これらは、構造的機能を満たすことを条件に、同一または異なる２つまたは１つのこのような脂肪鎖を含むために変化し得る。好ましくは、脂肪鎖は、長さ約１０から約２４個の炭素原子で、飽和、モノ不飽和またはポリ不飽和の、直鎖または制限された量の分枝を含むものである。ラウリン酸（Ｃ１２）、ミリスチン酸（Ｃ１４）、パルミチン酸（Ｃ１６）、ステアリン酸（Ｃ１８）、アラキジン酸（Ｃ２０）、ベヘン酸（Ｃ２２）およびリグノセラート（Ｃ２４）は、本発明に用いるＰＧのための有用な飽和脂肪鎖の例である。パルミトレイン酸（Ｃ１６）およびオレイン酸（Ｃ１８）は、適当なモノ不飽和脂肪鎖の例である。リノール酸（Ｃ１８）、リノレン酸（Ｃ１８）およびアラキドン酸（Ｃ２０）は、本発明のリポソームにおけるＰＧの使用のための適当なポリ不飽和脂肪鎖の例である。単一のこのような脂肪鎖を有するリン脂質は、本発明においても有用であり、リゾリン脂質として知られている。本発明はまた、その中で活性成分がＰＧの二量体であるリポソームの使用をカバーすること、すなわち式Ｉの他の二量体でないカルジオリピンも適当であることを意図している。好ましくは、このような二量体はマレイミドのような合成架橋剤と合成的に架橋せず、むしろ文献（Lehniger, Biochemistry, p. 525 (1970)）に記載され、以下の反応で図示しているようなグリセロールユニットの除去によって架橋される。
【化２】
2009510076.tif 000003
（式中、各ＲおよびＲ1は独立して、上記と同義である。）
【００３０】
用語「リン酸−コリン」とは、以下の構造：
【化３】
2009510076.tif 000004
［式中、Ｒ2およびＲ3は独立して、Ｃ1〜Ｃ24炭化水素鎖から選択され、飽和または不飽和、直鎖または限られた量の分枝を含み、その中で少なくとも一つの鎖は１０〜２４個の炭素原子を有する］
に示される脂質の残基に結合した−Ｏ−Ｐ（＝Ｏ）（ＯＨ）−Ｏ−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｎ+（ＣＨ3）3基およびその塩をいう。
【００３１】
本明細書に記載した「リン酸−グリセロール基を供与する物体」とは、生体適合性の、医薬的に許容される、その表面上にリン酸−グリセロール基またはリン酸−グリセロール基に変換されうる基を有する三次元物体をいう。一例として、ＰＧは、膜の唯一の成分として、またはその主成分もしくは微量成分として、他のリン脂質および／または膜形成物質とともに、リポソームの膜を形成しうる。
【００３２】
「三次元物体(body)部分」、「三次元物体」または「医薬的に許容される物体(body)」の例には、医薬産業界で共通して用いられるか、または当該技術分野で公知の、天然または合成の生体適合性物質の、リポソーム、固体のビーズ、中空のビーズ、充填ビーズ、粒子、顆粒剤および微粒子のような生体適合性の合成または半合成のもの(entity)が含まれる。該ビーズは固体もしくは中空、または生体適合性物質で充填され得る。用語「生体適合性」とは、用いる量において、無毒性またはインビボでの使用が許容されるような許容毒性プロファイルを有する物質(substance)をいう。同様に、「医薬的に許容される物体(body)」に関連して用いられる用語「医薬的に許容される」とは、医薬的に許容され、インビボでの送達に適した１またはそれ以上の物質(material)を含む物体(body)いう。このような物体には、ＰＧの１つである、脂質で形成したリポソームが含まれ得る。あるいは、医薬的に許容される物体は、生体適合性物質の固体のビーズ、中空のビーズ、充填ビーズ、粒子、顆粒剤および微粒子であり、該生体適合性物質には、リン酸グリセロール基を有した、ポリエチレングリセロール、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリビニルピロリドン、ポリスチレンおよび他の天然、半合成および合成物質の広範囲のような１またはそれ以上の生体適合性物質が含まれる。
【００３３】
本発明の組成物に使用する物体の適当な形態には、これらに限らないが、生体適合性物質の粒子、顆粒、微粒子またはビーズで、天然または合成の、例えばポリエチレングリコール、ポリビニルピロリドン、ポリスチレンなど；
多糖、例えばヒドロキシエチルデンプン、ヒドロキシエチルセルロース、アガロースなど；
医薬産業に通常用いられるものが含まれる。好ましくは、このような物質は、リン酸−グリセロール基、例えばＰＧが、好ましくは共有結合によってそれに結合しうるように、誘導体化に適した側鎖または部位を有する。本発明の物体は、中身があるか、もしくは中空であるか、または生体適合性物質で満たされうる。これらはリン酸−グリセロール分子、例えばＰＧをその表面上に有するように、必要に応じて修飾される。一般にリン酸−グリセロール、特にＰＧを様々な基質に結合させる方法は、当該技術分野で公知である。
【００３４】
物質の好ましい組成物は、様々な脂質から構成され得るリポソームである。しかしながら、好ましくは、脂質はいずれも陽電荷でない。リポソームの場合、ホスファチジルグリセロールＰＧは、それのリン酸グリセロール基部分が外に提供され、脂質鎖が構造壁を形成するように、適応されたリポソーム層または壁の大部分または全部分を構成してもよい。
【００３５】
リポソームまたは脂質小胞は、ミクロンまたはサブミクロンの範囲でサックスシール(sealed sacs)され、それの壁（単層または多層）は、液体で満たされうる中央の空洞を囲む単層または二重層を形成する適当な両親媒性物質を含む。本発明では内容物は重要でなく、一般的に不活性であるけれども、それらは水性の媒体を通常含んでいる。リン脂質は両親媒性分子（すなわち両親媒性物質）であり、このことは該化合物が疎水性炭化水素鎖に結合する極性水溶性基を有する分子を含むことを意味している。マトリックスの層として用いられる両親媒性物質は、極性および無極性部位を定義する。両親媒性物質には、本発明におけるＰＧに加えて、活性な基を有する(carrying)リン脂質と共にまたは別のものと組合せて用いられる他の天然の脂質が含まれ得る。リポソームの層として用いられる両親媒性物質は、不活性で、構造を与える(structure-conferring)合成化合物であり得、例えば、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアルキルエステルおよびショ糖ジエステルである。好ましくは、リポソームの形成に使用するために、両親媒性分子には、異なるヘッド基のリン脂質（例えば、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジルセリン、ホスファチジルコリン）の一つまたはそれ以上の形態が含まれ、上記に記載した様々な脂肪酸側鎖、並びに他の親油性分子、例えばコレステロール、スフィンゴ脂質およびステロールを有する。
【００３６】
本発明のリポソームは典型的には、水相を囲む、リン脂質二重層または複数個の同心円状のリン脂質二重層から形成される。いくつかの場合において、リポソームの壁は単層であってもよいが；しかしながら、このようなリポソーム（「単一単層小胞(single unilamellar vesicle)」と呼ばれる）は、以下に記載されるように、二重層で形成されたものよりも一般にずっと小さい（直径約７０ｎｍ未満）。本発明に従って形成されるリポソームは、生体適合性、生分解性、および無毒性であるようにデザインされる。この型のリポソームは、現在、市場で多数の医薬製剤において用いられ、典型的にはその水を含む内部のコア領域において活性な薬物分子を運ぶ。しかしながら本発明においては、リポソームは医薬製剤で満たされておらず、すなわち、これらはリポソームでない医薬的に活性な成分は本質的に含んでいない。従って、好ましい態様において、リポソーム、並びに他の医薬的に許容される物体は、脂質でない医薬的に活性なものが本質的に含まれておらず（例えば、＜１％）、より好ましくは、脂質でない医薬的に活性なものが含まれていない。リポソームはそれ自身が活性を有し、薬物担体としては作用しない。
【００３７】
このようなリポソームは、活性な基がリポソーム体の外に提供されるように製造され、処理される。このようにして、本発明の好ましい態様のリポソームにおけるＰＧは、リポソーム自身のリガンドおよび構造の構成成分の両方として用いられる。
【００３８】
このように本発明の好ましい態様は、哺乳類の患者の眼における炎症性および／または血管性障害の治療剤または予防剤の製造におけるリポソーム体の使用を提供し、それは結合基として作用するために、その表面上に１またはそれ以上のリン酸グリセロール基を露出するか、露出するように処理または誘導されうる。このような脂質は、不活性な成分（例えばホスファチジルコリンＰＣ）、もしくは異なるメカニズムで作用する成分（例えばホスファチジルセリンＰＳ）、またはそれらの混合物であるバランス成分と共に、１０％〜１００％のリポソームを含むべきである。ＰＣのような不活性な共成分(co-constituent)が好ましい。
【００３９】
本発明の好ましいリン酸−グリセロール基を供与するリポソームは、少なくとも１０重量％の程度までＰＧで構成され、そのバランス成分は、ホスファチジルコリン（ＰＣ）または他のこのような生物学的に許容されるリン脂質であり、好ましくは少なくとも５０％、より好ましくは６０〜１００％、最も好ましくは７０〜９０％、最も好ましい態様の１点は、約７５重量％のＰＧである。
【００４０】
不活性なリポソームとのおよび／または異なるメカニズムを通して作用するリン脂質のリポソームとのＰＧリポソームの混合物もまた用いられうるが、但しＰＧの総量は、全混合物中、最低でも約１０％超、好ましくは６０％超残存する。本発明の好ましい特徴によれば、リン酸−グリセロール基を供与する物体には、５０％未満、好ましくは４０％未満、さらに好ましくは２５％未満、より一層好ましくは１０％未満のホスファチジルコリンが含まれる。
【００４１】
本発明は、膜構成成分としてＰＧを有するこれらのリポソームの使用だけではなく、例えば、物体のリポソーム表面の化学修飾によって化学的に結合した、単量体またはオリゴマーとして（ホスファチジルグリセロールと区別されるように）リン酸−グリセロールの外表面分子上にＰＧでない膜置換基を有するリポソームのリン酸−グリセロール基を供与する物体の使用も意図しており、それによってリン酸−グリセロール基を後続の相互作用に利用することが可能となる。このような分子の表面上にリン酸−グリセロール基が含まれるため、これらはリン酸−グリセロール基を供与する物体の定義の範囲内に含まれる。
【００４２】
本発明に用いられる非リポソーム体に関しては、記載されているようなものには、生体適合性の個体または適当な大きさの空中のビーズが含まれる。生体適合性の非リポソームの合成または半合成物体は、その表面に結合するリン酸グリセロール基を有した、ポリエチレングリコール、ポリ（メタクリル酸メチル）、ポリビニルピロリドン、ポリスチレンおよび他の天然、半合成および合成物質の広範囲から選択してもよい。生物分解性ポリマーは、先行技術に開示されており、例えば、ポリ乳酸、ポリグリコリド、ポリカプロラクトン、ポリアンハイドライド、ポリアミド、ポリウレタン、ポリエステルアミド、ポリオルトエステル、ポリジオキサノン、ポリアセタール、ポリケタール、ポリカルボネート、ポリオルトカルボネート、ポリホスファゼン、ポリヒドロキシブチレート、ポリヒドロキシ吉草酸、ポリアルキレンシュウ酸、ポリアルキレンコハク酸、ポリ（リンゴ酸）、ポリ（アミノ酸）、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリヒドロキシセルロース、キチン、キトサン、およびコポリマー、ターポリマーおよびその組合せのような直鎖ポリマーが挙げられる。他の生物分解性ポリマーには、例えばゼラチン、コラーゲンなどが含まれる。
【００４３】
リン脂質または基もしくは結合基を有したそれの部分を三次元物体に結合するための誘導体化のための適当な物質は、例えば、ポリサイエンシス社（Polysciences Inc., 400 Valley Road, Warrington, PA 18976）またはシグマアルドリッチファインケミカル（Sigma Aldrich Fine Chemicals）から購入可能である。誘導体化の方法は当該技術分野で公知である。このような方法の具体的な好ましい例は、国際特許出願（PCT/CA02/01398 Vasogen Ireland Limited；これは本明細書に引用される）に開示されている。
【００４４】
リポソームは、当該技術分野で公知の様々な技術、例えばSzokaらに詳述されたもの（Ann. Rev. Biophys. Bioeng. 9:467 (1980)）で製造されうる。リポソームを形成するのに用いられる方法、並びにいずれの形成後の処理によっても、リポソームは様々な大きさおよび外形で形成されうる。適当な大きさのリポソームを製造する方法は当該技術分野で公知であり、本発明の一部となってはいない。その問題に関する様々な教科書および文献(literature article)、例えば、Yechezkel Barenholz および Daan J. A. Chromeline による総説、並びにそこに引用される文献、例えば New, R. C. (1990)、および Nassander, U. K.ら (1990)、並びに Barenholz, Y および Lichtenberg, D., Liposomes: preparation, characterization, and preservation, Methods Biochem Anal. 1988, 33:337-462に対して引用されうる。
【００４５】
多重膜小胞(Multilamellar vesicle)（ＭＬＶ）は、当該技術分野で公知の方法に従って、簡単な脂質フィルム水和法(lipid-film hydration technique)によって形成されうる。この方法において、リポソームを形成する脂質の混合物を適当な有機溶媒中に溶解する。混合物を容器中で蒸発させて、容器の内表面上に薄膜を形成し、次いでそれに水溶媒を加える。脂質膜は水和して、典型的には、直径約１００〜１０００ｎｍ（０．１〜１０ミクロン）の間の大きさを有するＭＬＶを形成する。
【００４６】
関連する、逆相蒸着(reverse evaporation phase)（ＲＥＶ）法もまた、ミクロンの直径サイズの範囲で単層膜リポソームを形成するのに用いられうる。ＲＥＶ法は、ガラス試験管(boiling tube)において、有機溶媒、例えばジエチルエーテル中、選択した脂質成分を溶解し、リポソームの内部で運ばれるべき薬液を適宜含む水溶液を、小さなゲージ管(gauge passage)、例えば２３ゲージ皮下針(23-gauge hypodermic needle)を通して管の中にすばやく注入することを特徴とする。次いで、管を密封し、バスソニケーター(bath sonicator)中で超音波処理する。管の内容物を交互に、減圧下で蒸発させたり、勢いよく混合したりして、最終のリポソームの懸濁液を形成する。
【００４７】
本発明の好ましい態様の、リン酸−グリセロール基を供与するリポソーム、並びに他の医薬的に許容される物体の直径は、約２０ｎｍから５００μｍ、より好ましくは２０ｎｍから約１０００ｎｍ、より好ましくは約２０ｎｍから約５００ｎｍ、最も好ましくは約２０ｎｍから約２００ｎｍの範囲にわたる。このような好ましい直径は、例えば当該技術分野で公知でありうる哺乳類のアポトーシス小体の直径に対応する。
【００４８】
ＲＥＶおよびＭＬＶについての一つの有効なサイジング法(sizing method)には、０．０３〜０．２ミクロンの範囲、典型的には０．０５、０．０８、０．１、または０．２ミクロンで選択された均一な細孔の大きさを有する一連のポリカーボネート膜を通して、リポソームの水懸濁液を押し出すことが含まれる。膜の細孔の大きさは、その膜を通して押し出すことによって生成したリポソームのメジアン径におおよそ対応し、特にこの場合、該製剤を同一の膜を通して２回またはそれ以上押し出す。リポソームのサイジングのこの方法は、均一な大きさのＲＥＶおよびＭＬＶ組成物を製造するのに用いられる。本明細書に引用される米国特許第4,737,323号および第4,927,637号には、出発物質として１μｍの範囲にある直径を有するリポソームを用いて、０．１〜０．４μｍ（１００〜４００ｎｍ）の範囲にある均一な大きさを有するリポソームの懸濁液を生成する方法が記載されている。均質化法(Homogenization method)もまた、１００ｎｍまたはそれ未満の大きさまでリポソームを小型化(down-sizing)するのに有用である（Martin, F. J. (1990) In: Specialized Drug Delivery Systems-- Manufacturing and Production Technology, P. Tyle (ed.) Marcel Dekker, New York, pp. 267-316）。リポソームの大きさを減少させる別の方法は、フレンチプレスのように、リポソームの製剤に高圧をかけることによるものである。
【００４９】
当該技術分野で公知の方法に従って、リポソームは、直径約０．０７と０．２ミクロンの間（７０〜２００ｎｍ）で選択された大きさの範囲で、実質的に均一な大きさの単一の二重層小胞を有するように製造されうる。特に、この大きさの範囲のリポソームは、血管上皮細胞を通って周囲の組織の中に容易に血管外遊出しうる。更なる利点は、これらが当該技術分野で公知の簡単な濾過法によって滅菌されうることである。本発明に使用するリン酸−グリセロール基を供与する物体の好ましい態様は、ＰＧがその外表面上に与えられるリポソームであるが、上記に言及したように、リン酸−グリセロール基を供与する物体がリポソーム構造に限らないことは理解される。
【００５０】
医薬的に許容される物体は、医薬的に許容される担体、例えば滅菌生理食塩水、滅菌水、パイロジェンフリー水、等張滅菌生理食塩水、リン酸緩衝滅菌溶液（例えば、リン酸緩衝剤を含む滅菌水溶液）中、並びに医薬製剤に用いられる他の無毒性の融和基質、例えばアジュバント、緩衝剤、保存剤などと懸濁してもよい。好ましくは、医薬的に許容される物体は、緩衝滅菌生理食塩水のような滅菌生体適合性液体中の液体懸濁液中に構成され、１またはそれ以上の免疫系の構成成分にそれを曝すいずれかの適当な経路、例えば、経口、経鼻、直腸、局所、動脈内、静脈内もしくは皮下または最も好ましくは筋肉内投与で患者に投与される。
【００５１】
医薬的に許容される物体を投与用に後に再懸濁し得るようにフリーズドライまたは凍結乾燥していてもよいと考えられる。したがって、本発明はまた、凍結乾燥またはフリーズドライされたリン酸−グリセロール基を供与する物体、および医薬的に許容される担体、例えば滅菌生理食塩水、滅菌水、パイロジェンフリー水、等張生理食塩水、リン酸緩衝溶液、並びに医薬製剤に用いられる他の無毒性の融和基質を含む部分キット(kit of parts)も含む。このようなキットは、患者に該組成物を投与するための注入または投与手段を適宜提供しうる。
【００５２】
医薬的に許容される物体を患者に投与する好ましい方法は、注射であり、毎日、週数回、毎週または毎月患者に投与し、一週間から数ヶ月もしくはそれ以上の範囲の期間にわたって投与される。投与の過程の頻度および期間は、患者の間で、並びに治療される症状の重症度、および治療が予防的、治療的または治癒的なものと意図されるかどうかによって変化し得る。その計画および最適化は在籍している医師の技術の十分範囲内である。筋肉内注射が最も好ましい。現在の一つの好ましい投与計画は、６日間続けて毎日注入し、続いて毎月ブースター注入することである。このような投与計画を他の哺乳類種に外挿することは、定期試験の範囲内である。一つの具体的な注射スケジュールは、臀部の筋肉を通して、適量の物体を１日目、更に２日目、更に１４日目に注入し、次いで適当であれば、１月の間隔で「ブースター」注入がされる。別の注入計画は、６日間毎日注入し、２〜４週間ごとにブースター注入することである。投与されるべきリン酸−グリセロール基を供与する物体の量は、患者の同一性および特徴に依存して変化する。リン酸−グリセロール基を供与する物体の有効量が患者に対して無毒であることが重要である。
【００５３】
最も有効な量は、意外にも少ない。リン酸−グリセロール基を供与する物体の液体懸濁液の動脈内、静脈内、皮下または筋肉内投与を用いる場合、約０．１〜５０ｍｌの液体、すなわち同等の容量の血液全体に正常に見られる白血球の数またはそれらから生成されうるアポトーシス小体の数の１０％〜１０００％に大体相当するリン酸−グリセロール基を供与する物体の量を含む該液体を、用量ごとに投与するのが好ましい。一般に、ヒトの患者へ１送達あたりに投与されるリン酸−グリセロール基を供与する物体の数は、約５００〜約３×１０14個（その範囲の最高で約３０ｍｇの重量）、好ましくは約５，０００個〜約５００，０００，０００個、より好ましくは約１０，０００個〜約１０，０００，０００個、最も好ましくは約２００，０００個〜約２，０００，０００個の範囲内である。
【００５４】
リポソームの重さとリポソームの数の相関は、リポソーム形成技術の当業者に受け入れられている、直径１００ｎｍの二重層の小胞が小胞あたり約８１，２３０の脂質分子を有し、二重層間で約５０：５０で分配するという知見から導き出せる［参照：Harrigan著−１９９２年ブリティッシュ コロンビア大学ＰｈＤ学位論文「Transmembrane pH gradients in liposomes (microform): drug-vesicle interactions and proton flux」カナダ オタワのカナダ国立図書館で公開(1993)；University Microfilms order no. UMI00406756; Canada no. 942042220, ISBN 0315796936］。このことから、例えば、以下の特定のインビボ実施例に用いられる用量のオーダーである５×１０8個の小胞の用量が、４．０６×１０13個の脂質分子に相当することが計算できる。グラム分子（ｍｏｌｅ）における脂質分子の数としてのアボガドロ数６．０２３×１０23を用いて、これが６．７４×１０-11ｍｏｌｅを表し、ＰＧの分子量７４７において、このような投与量で約５．０４×１０-8ｇｍまたは５０．４ｎｇのＰＧであることが決定される。
【００５５】
本発明の一つの特徴によれば、各投与用の注入部位に投与されるこのような物体の数は、一個体の患者の体重当たりの、リン酸−グリセロール基を供与する物体の数または重さより意味のある量であると考えられる。そのため、小動物使用でのリン酸−グリセロール基を供与する物体の有効量または数を、体重比に基づいて大型の哺乳動物の有効量に直接換算し得ないものと意図される。当業者は、本明細書に含まれるデータおよび他の情報から外挿して、他の哺乳類に適した投与に容易に想到し得る。
【００５６】
本発明の一つの好ましい有用性は、糖尿病性網膜症の治療にある。本発明の方法および組成物を用いた臨床前研究における実験的証拠によって、炎症性サイトカインＩＬ−１およびＩＬ−６並びに炎症性ケモカイン ＭＣＰ−１、すなわち哺乳類の糖尿病性網膜症の発症および進行における因子として公知の炎症性メディエーターの著しい減少が、糖尿病性網膜症を患っている動物の網膜において示される。
【００５７】
用語「糖尿病性網膜症」には、そこから付随するまたは生じるすべての症状、例えばこれに限らないが、糖尿病性黄斑浮腫が含まれる。糖尿病性黄斑浮腫は、糖尿病性網膜症の構成要素と考えられる。糖尿病性網膜症の治療は、常に糖尿病性黄斑浮腫に影響を及ぼし、逆もまた同様である。
【００５８】
本発明の別の好ましい有用性は、ヒトの患者における糖尿病性網膜症の構成要素である糖尿病性黄斑浮腫の治療方法である。別の好ましい有用性は、ヒトの患者における糖尿病性網膜症の構成要素である糖尿病性黄斑浮腫の治療剤の製造における使用である。
【００５９】
本発明の別の好ましい有用性は、ぶどう膜炎の治療にある。本発明の別の好ましい有用性は、黄斑変性症の治療にある。本発明のさらに好ましい有用性は、加齢性黄斑変性症の治療にある。
【００６０】
本発明およびその実施は、以下の具体例において、例示を目的としてさらに記載される。
実施例
１日目に、１５匹の実験用成体ラット（スプラーグドーリー）に、ＳＴＺ（６５ｍｇ／ｋｇ）を腹腔内に注入して、それらを高血糖性にし、糖尿病を誘導した。５匹の別のラットを、同じくらいの容積の生理食塩水で処置して、非糖尿病対照群を作成した。ＳＴＺ注入の３時間前、およびその後は全６日間を毎日、公知の押出法で作成された７５重量％ １−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホグリセロール（ＰＯＰＧ）および２５重量％ １−パルミトイル−２−オレオイル−ｓｎ−グリセロ−３−ホスホコリン（ＰＯＰＣ）を含む生理食塩水中の単層リポソームの懸濁液を、８匹の糖尿病ラットの大腿筋に筋肉内注入し、各注入液は、１ｍｌあたり１．２×１０7個のリポソーム体を含む懸濁液からの容積０．１１ｍｌからなる。糖尿病＋処置群の動物へのリポソーム注入を、毎日（１日目から６日目まで）行った。７匹の糖尿病動物には、同じ投与計画に従って、同じ容量の生理食塩水を同様に注入した。非糖尿病対照群の動物には注入せず、正常血糖のままにした。
【００６１】
１４日目、３つの群からのすべての動物を屠殺し、これらの眼を外科的に取り除き、そこから網膜組織を分離した。各動物の一つの眼からの組織をＲＮＡ単離のために処理し、サイトカインＩＬ−１、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α（これらはすべて炎症性サイトカインである）、およびＭＣＰ−１（炎症性ケモカイン）についてｑＲＴ−ＰＣＲで分析した。また単離したＲＮＡも、抗炎症性サイトカインＴＧＦ−β２およびＩＬ−１０についてｑＲＴ−ＰＣＲで分析した。
【００６２】
繰り返し実験において、１ｍｌあたり１．２×１０7個のリポソーム体を含む懸濁液（０．１５ｍｌ）をラットに注入することを除いては、同じ条件を用いた。
【００６３】
添付図面の図１は、各群の全サンプルについて平均をとったＩＬ−１β ｍＲＮＡ測定値の結果を図示する。縦軸は、１の値が与えられる無処置対照群からの結果を含めた、組織のサイトカインｍＲＮＡにおける相対的な増加の倍率(relative fold increase)である。糖尿病群からのＩＬ−１β ｍＲＮＡ量における増加の倍率が、非糖尿病対照動物の場合の約１．８倍である（ｐ＜０．０１４５）のに対し、動物の糖尿病＋処置群からの値が、非糖尿病対照動物の場合と同じであって、糖尿病動物の場合よりずっと低いこと（ｐ＜０．０２８５）が注目される。繰り返し実験において、糖尿病＋処置群に見られるｍＲＮＡ量は、糖尿病群の場合よりもかなり低かった（ｐ＝０．０４２）。
【００６４】
添付図面の図２も同様に、炎症性サイトカインＩＬ−６のｍＲＮＡ測定値の結果を与える。この場合、非糖尿病対照群と比較して、糖尿病群におけるこのサイトカインについてのｍＲＮＡ量に２．５倍の増加が見られたが（ｐ＜０．０１）、一方、糖尿病＋処置群に見られるｍＲＮＡ量は、非糖尿病対照群の場合の約１．２倍まで減少し、糖尿病群の場合より有意に低かった（ｐ＜０．０１７）。ｍＲＮＡ量における減少は、統計的な有意さに達していなかったが、繰り返し実験において、糖尿病＋処置群に見られるｍＲＮＡ量は、糖尿病群の場合と比較してｍＲＮＡ量が減少する傾向を示した。
【００６５】
添付図面の図３も同様に、炎症性サイトカインＴＮＦ−αのｍＲＮＡ測定値の結果を与える。この場合、非糖尿病対照群と比較して、糖尿病群におけるこのサイトカインについてのｍＲＮＡ量に２．３倍の増加が見られたが（ｐ＜０．０１７）、一方、糖尿病＋処置群に見られるｍＲＮＡ量は、非糖尿病対照群の場合の約１．７倍まで減少し、糖尿病群の場合より低いｍＲＮＡ量の傾向を示した（ｐ＝０．０６３）。繰り返し実験において、糖尿病＋処置群に見られるｍＲＮＡ量は、糖尿病群の場合よりも低いｍＲＮＡ量の傾向を示した（ｐ＝０．０５４）。
【００６６】
添付図面の図４も同様に、炎症性ケモカインＭＣＰ−１のｍＲＮＡ測定値の結果を与える。この場合、非糖尿病対照群と比較して、糖尿病群におけるこのケモカインのｍＲＮＡ量に２．２５倍の増加が見られたが（ｐ＝０．０５９）、一方、糖尿病＋処置群に見られるｍＲＮＡ量は、非糖尿病対照群の場合の約０．２倍まで減少し、糖尿病群の場合より有意に低かった（ｐ＜０．００１）。繰り返し実験において、糖尿病＋処置群に見られるｍＲＮＡ量は、糖尿病群の場合よりも有意に低かった（ｐ＝０．０４４５）。
【００６７】
添付図面の図５も同様に、抗炎症性サイトカインＴＧＦ−β２のｍＲＮＡ測定値の結果を与える。この場合、非糖尿病対照群と比較して、糖尿病群はＴＧＦ−β２のｍＲＮＡ量に有意な減少を示した（ｐ＜０．００１）。糖尿病＋処置群においてもまた、非糖尿病対照群と比較して、ＴＧＦ−β２のｍＲＮＡ量に有意な減少が見られたが（ｐ＜０．０４１）、糖尿病群と比較した場合、糖尿病＋処置群において、ＴＧＦ−β２のｍＲＮＡ量に有意な増加が見られた（ｐ＜０．０１４）。繰り返し実験において、糖尿病＋処置群に見られるｍＲＮＡ量は、糖尿病群の場合と比較して量が増加する傾向を示したが、その増加は統計的な有意さに達していなかった。
【００６８】
添付図面の図６も同様に、抗炎症性サイトカインＩＬ−１０のｍＲＮＡ測定値の結果を与える。この場合、非糖尿病対照群と比較して、糖尿病群において、ＩＬ−１０のｍＲＮＡ量におおよそ有意な減少が見られた（ｐ＜０．０２１５）。しかしながら、糖尿病群と比較して、糖尿病＋処置群において、ＩＬ−１０のｍＲＮＡ量に有意な増加が見られたが（ｐ＜０．０１９５）、一方、非糖尿病対照群と糖尿病＋処置群の間で、ＩＬ−１０の相対的な発現に有意な差は見られなかった。繰り返し実験において、糖尿病＋処置群に見られるｍＲＮＡ量は、糖尿病群の場合と比較して有意に増加した（ｐ＝０．０３１５）。
【００６９】
糖尿病性網膜症の標準的で、許容されるモデルで行われたこれらの実験に示される結果は、有害な炎症性サイトカインおよびケモカインのｍＲＮＡの発現の低下(down regulation)並びに糖尿病動物の網膜組織における抗炎症性サイトカインのｍＲＮＡの発現の増加を明らかに示し、本発明に従って、ヒトの患者における糖尿病性網膜症、ぶどう膜炎、黄斑変性症、および眼の他の炎症性および／または血管性障害の治療に有用性を示す。
【図面の簡単な説明】
【００７０】
【図１】図１は、実施例に記載したように治療および測定された、動物の網膜からのサイトカインＩＬ−１のメッセンジャーＲＮＡ（「ｍＲＮＡ」）量の測定値を図示したものであり；
【図２】図２は、同一の実験からのサイトカインＩＬ−６のｍＲＮＡ量の測定値を同様に示したものであり；
【図３】図３は、同一の実験からのサイトカインＴＮＦ−αのｍＲＮＡ量の測定値を同様に示したものであり；並びに
【図４】図４は、同一の実験からのサイトカインＭＣＰ−１のｍＲＮＡ量の測定値を同様に示したものである。
【図５】図５は、同一の実験からのサイトカインＴＧＦ−β２のｍＲＮＡ量の測定値を同様に示したものである。
【図６】図６は、同一の実験からのサイトカインＩＬ−１０のｍＲＮＡ量の測定値を同様に示したものである。
【図１】
2009510076.tif 000005
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【手続補正書】
【提出日】平成19年7月9日(2007.7.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳類の患者における糖尿病性網膜症の発症および／または進行の遅延剤の製造における使用であって、医薬的に許容されるリン酸−グリセロール基を供与する物体で、アポトーシス細胞またはアポトーシス小体と大きさが似ており、非脂質性の医薬的に活性なものが本質的に含まれていない物体の有効量を患者に投与することを特徴とする使用。
【請求項２】
該物体がリポソームである、請求項１の使用。
【請求項３】
リポソームに、６０重量％〜１００重量％のホスファチジルグリセロールが含まれる、請求項２の使用。
【請求項４】
該物体が約２０ｎｍから約５００μｍの直径を有する、請求項１から３のいずれかの使用。
【請求項５】
該物体が約５００から約３×１０14個の物体の単位用量で投与される、請求項１から４のいずれかの使用。
【請求項６】
該医薬的に許容される物体が全身に投与される、請求項１から６のいずれかの使用。
【請求項７】
該医薬的に許容される物体が筋肉内に投与される、請求項１から６のいずれかの使用。
【請求項８】
該医薬的に許容される物体が局所的に投与される、請求項１から６のいずれかの使用。
【請求項９】
哺乳類の患者の眼における炎症性および／または血管性障害の治療剤または予防剤の製造または生産における使用であって、医薬的に許容されるリン酸−グリセロール基を供与する物体で、直径約２０ｎｍから５００μｍの大きさで、非脂質性の医薬的に活性なものが本質的に含まれていない物体の使用。
【請求項１０】
該物体がリポソームである、請求項９の使用。
【請求項１１】
リポソームに、６０重量％〜１００重量％のホスファチジルグリセロールが含まれる、請求項１０の使用。
【請求項１２】
該物体が約５００から約３×１０14個の物体の単位用量である、請求項９から１１のいずれかの使用。
【請求項１３】
該医薬的に許容される物体が全身に投与される、請求項９から１２のいずれかの使用。
【請求項１４】
該医薬的に許容される物体が筋肉内に投与される、請求項９から１２のいずれかの使用。
【請求項１５】
該医薬的に許容される物体が局所的に投与される、請求項９から１２のいずれかの使用。
【請求項１６】
網膜において、ＩＬ−１β、ＴＮＦ−α、またはＩＬ−６の少なくとも一つのｍＲＮＡ量が減少する、請求項９から１５のいずれかの使用。
【請求項１７】
該障害がぶどう膜炎である、請求項１０から１６のいずれかの使用。
【請求項１８】
該障害が黄斑変性症である、請求項１０から１６のいずれかの使用。
【請求項１９】
黄斑変性症が加齢性黄斑変性症である、請求項１８の使用。
【請求項２０】
ヒトの患者における糖尿病性網膜症の構成要素である糖尿病性黄斑浮腫の治療剤の製造における使用であって、該薬物が、医薬的に許容されるリン酸−グリセロール基を供与する物体で、アポトーシス細胞またはアポトーシス小体と大きさが似ている物体の有効量を含むことを特徴とする使用。
【請求項２１】
該物体がリポソームである、請求項２０の使用。
【請求項２２】
リポソームに、６０重量％〜１００重量％のホスファチジルグリセロールが含まれる、請求項２１の使用。
【請求項２３】
該物体が約２０ｎｍから約５００μｍの直径を有する、請求項２０から２２のいずれかの使用。
【請求項２４】
該物体が約５００から約３×１０14個の物体の単位用量である、請求項２０から２３のいずれかの使用。
【請求項２５】
該医薬的に許容される物体が全身に投与される、請求項２０から２４のいずれかの使用。
【請求項２６】
該医薬的に許容される物体が筋肉内に投与される、請求項２０から２４のいずれかの使用。
【請求項２７】
該医薬的に許容される物体が局所的に投与される、請求項２０から２４のいずれかの使用。
【国際調査報告】
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