(57)【要約】本発明は式Ｉで表されるキナーゼ阻害剤（Ｉ）2009513639.tif 000064（式中、Ｒ１、Ｒ２及びＸは本願明細書に記載の通りである）、又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。
2009513639.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉで表される化合物
【化１】
2009513639.tif 000060
［式中、Ｘは以下からなる群から選択される
【化２】
2009513639.tif 000061
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基からなる群から選択される１若しくは２個の置換基で任意に置換されてもよいＣ３−Ｃ４シクロアルキル基、メチル基及びトリフルオロメチル基であるか、又はＣ１−Ｃ４アルキルハロ基である；
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されてもよいフェニル基であるか、又はＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されてもよいピリジニル基である；
Ｒ３は、メチル基、トリフルオロメチル基若しくはハロ基から選択される置換基で任意に置換されてもよいアミノ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、Ｃ１−Ｃ４アルキルハロ基、Ｃ３−Ｃ４シクロアルキル基であるか、又はフェニル基若しくはチエニル基であり、各々ハロ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基及びＣ１−Ｃ４アルコキシ基からなる群から選択される第１の置換基で任意に置換されてもよく、ハロ基から選択される第２の置換基で更に任意に置換されてもよい］
又はその薬理学的に許容できる塩。
【請求項２】
Ｘが式：
【化３】
2009513639.tif 000062
で表される、請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ２が４−トリル基である、請求項１又は請求項２記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１が１−メチル−１−シクロプロピル基、２−フルオロ−１，１−ジメチル−エチル基又は２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル基である、請求項１から３のいずれか１項記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ３が１−メチル−１−シクロプロピル基である、請求項１から４のいずれか１項記載の化合物。
【請求項６】
式Ｉで表される化合物
【化４】
2009513639.tif 000063
又はその薬理学的に許容できる塩。
【請求項７】
薬理学的に許容できる賦形剤、担体又は希釈剤との組み合わせで請求項１から６のいずれか１項記載の化合物を含んでなる医薬製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はキナーゼ阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
ｐ３８キナーゼは、セリン／トレオニンキナーゼスーパーファミリーに属するマイトジェン活性化タンパク質（ＭＡＰ）キナーゼである。このキナーゼは、熱、紫外線及び浸透圧ストレスなどの細胞外からのストレス、並びに炎症性刺激（例えばリポ多糖類）によって活性化する。活性化したとき、ｐ３８キナーゼは細胞内のタンパク質基質をリン酸化し、それにより炎症誘発性サイトカイン腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）及びインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）の生合成が制御される。これらのサイトカインは、多くの慢性炎症性障害（非特許文献１及び２）、心血管及び中枢神経系障害（非特許文献３）及び自己免疫不全（非特許文献４）の病理に関与する。更に、マイトジェン活性化プロテインキナーゼ−プロテインキナーゼ２（又はｐＭＡＰＫＡＰＫ２）のリン酸化形態はまたｐ３８ＭＡＰＫ経路のキナーゼであり、ｐ３８ＭＡＰＫによって直接活性化されうる。ＭＡＰＫＡＰＫ２のノックアウトマウスにおける研究では、サイトカイン産生の減少が示されており、すなわちＭＡＰＫＡＰＫ２が炎症反応における主要な調節物質であり、抗炎症治療における良好な標的物質となりうることを示唆するものである（特許文献１）。
【０００３】
ｐ３８キナーゼの阻害剤又はサイトカイン阻害剤として、多くの尿素化合物が同定されている（例えば特許文献２から１０）。Ｐ３８キナーゼ阻害剤又はサイトカイン阻害剤は、通常生産コストが高く、また生物学的利用能及び吸収性に課題があるため、ｉｎ  ｖｉｖｏ効果及び治療的な使用が制限されうる。以上より、新規な小分子のサイトカイン抑圧剤、すなわち、改良された効力及びより大きな生物学的利用能を有する、ｐ３８キナーゼ阻害化合物に対するニーズが存在する。
【特許文献１】国際公開第０５／１２０５０９号パンフレット
【特許文献２】国際公開第９９／２３０９１号パンフレット
【特許文献３】国際公開第０１／０１２１８８号パンフレット
【特許文献４】国際公開第０４／００４７２０号パンフレット
【特許文献５】国際公開第０４／０３７７８９号パンフレット
【特許文献６】国際公開第９９／３２１１１号パンフレット
【特許文献７】米国特許出願公開第２００４／００５８９６１号公報
【特許文献８】欧州特許第１６０９７８９号公報
【特許文献９】国際公開第０３／０７２５６９号パンフレット
【特許文献１０】国際公開第００／４３３８４号パンフレット
【非特許文献１】Ｌｅｅら、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，６９６，１４９−１７０（１９９３）
【非特許文献２】Ｍｕｌｌｅｒ−Ｌａｄｎｅｒ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．，８，２１０−２２０（１９９６）
【非特許文献３】Ｓａｌｉｔｕｒｏら、ＣｕｒｒｅｎｔＭｅｄｉｃｉｎａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，６，８０７−８２３（１９９９）
【非特許文献４】Ｐａｒｇｅｌｌｉｓら、ＮａｔｕｒｅＳｔｒｕｃｔｕｒａｌＢｉｏｌｏｇｙ，９（４），２６８−２７２（２００２）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
本発明は、過剰なサイトカイン産生から生じる症状の治療に有用な、新規なｐ３８キナーゼ阻害剤の提供に関する。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
本発明は、式Ｉで表される化合物
【化１】
2009513639.tif 000003
（式中、Ｘは以下からなる群から選択され、
【化２】
2009513639.tif 000004
Ｒ１はＣ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基からなる群から選択される１若しくは２個の置換基で任意に置換されてもよいＣ３−Ｃ４シクロアルキル基、メチル基及びトリフルオロメチル基であるか、又はＣ１−Ｃ４アルキルハロ基であり、
Ｒ２はＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されてもよいフェニル基であるか、又はＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されてもよいピリジニル基であり、
Ｒ３はメチル基、トリフルオロメチル基若しくはハロ基から選択される置換基で任意に置換されてもよいアミノ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、Ｃ１−Ｃ４アルキルハロ基、Ｃ３−Ｃ４シクロアルキル基であるか、又はフェニル基若しくはチエニル基であり、各々ハロ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基及びＣ１−Ｃ４アルコキシ基からなる群から選択される第１の置換基で任意に置換されてもよく、ハロ基から選択される第２の置換基で更に任意に置換されてもよい）、
又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。
【０００６】
本発明はまた、哺乳類におけるｐ３８キナーゼの阻害方法であって、有効量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる処置を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【０００７】
本発明はまた、哺乳類における腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）の産生を抑制する方法であって、有効量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる処置を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【０００８】
本発明はまた、哺乳類におけるインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）の産生を抑制する方法であって、有効量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる治療を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【０００９】
本発明は更に、哺乳類における過剰なサイトカイン産生から生じる症状を治療する方法であって、サイトカイン抑制に充分な量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる治療を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【００１０】
本発明はまた、哺乳類における感受性腫瘍の増殖を阻害する方法であって、ｐ３８の阻害に充分な量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる治療を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【００１１】
本発明はまた、哺乳類における転移の阻害方法であって、ｐ３８の阻害に充分な量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる処置を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【００１２】
本発明はまた、哺乳類における慢性関節リウマチの治療方法であって、ｐ３８の阻害に充分な量の式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を、かかる処置を必要とする哺乳類に投与することを含んでなる方法の提供に関する。
【００１３】
本発明はまた、薬理学的に許容できる賦形剤、担体又は希釈剤との組み合わせで式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる医薬製剤の提供に関する。
【００１４】
本発明はまた、ｐ３８キナーゼの阻害用薬剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。本発明は更に、哺乳類におけるｐ３８キナーゼの阻害用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。本発明は更に、１つ以上の薬理学的に許容できる賦形剤、担体若しくは希釈剤との組み合わせで式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる、ｐ３８キナーゼの阻害用の医薬組成物の提供に関する。
【００１５】
本発明はまた、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）の産生抑制用薬剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。本発明は更に、哺乳類における腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）の産生抑制用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。本発明は更に、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）の産生抑制用の医薬組成物であって、１つ以上の薬理学的に許容できる賦形剤、担体又は希釈剤との組み合わせで式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる医薬組成物の提供に関する。
【００１６】
本発明はまた、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）の産生抑制用の薬剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。本発明は更に、哺乳類におけるインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）の産生抑制用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。本発明は更に、１つ以上の薬理学的に許容できる賦形剤、担体若しくは希釈剤との組み合わせで式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる、インターロイキン−１β（ＩＬ−１β）の産生抑制用の医薬組成物の提供に関する。
【００１７】
本発明はまた、過剰なサイトカイン産生から生じる症状の治療用薬剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。本発明は更に、哺乳類の過剰なサイトカイン産生から生じる症状の治療用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。本発明は更に、１つ以上の薬理学的に許容できる賦形剤、担体若しくは希釈剤との組み合わせで式Ｉの化合物若しくはその薬理学的に許容できる塩を含んでなる、過剰なサイトカイン産生から生じる症状の治療用の医薬組成物の提供に関する。
【００１８】
本発明はまた、感受性腫瘍の増殖抑制用薬剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。本発明は更に、哺乳類の感受性腫瘍の増殖抑制用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。本発明は更に、１つ以上の薬理学的に許容できる賦形剤、担体若しくは希釈剤との組み合わせで式Ｉの化合物若しくはその薬理学的に許容できる塩を含んでなる、感受性腫瘍の増殖抑制用の医薬組成物の提供に関する。
【００１９】
本発明はまた、転移の抑制用の薬剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。本発明は更に、哺乳類の転移抑制用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。本発明は更に、１つ以上の薬理学的に許容できる賦形剤、担体又は希釈剤との組み合わせで式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩を含んでなる、転移抑制用の医薬組成物の提供に関する。
【００２０】
本発明はまた、慢性関節リウマチの治療用薬剤の製造への、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の使用の提供に関する。本発明は更に、哺乳類の慢性関節リウマチの治療用の、式Ｉの化合物又はその薬理学的に許容できる塩の提供に関する。本発明は更に、１つ以上の薬理学的に許容できる賦形剤、担体若しくは希釈剤との組み合わせで式Ｉの化合物若しくはその薬理学的に許容できる塩を含んでなる、慢性関節リウマチの治療用の医薬組成物の提供に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２１】
用語「ｐ３８キナーゼ」とは、ｐ３８α及び／又はｐ３８βキナーゼアイソフォームを意味する。
【００２２】
用語「ＴＮＦα（ＩＬ−１β、サイトカイン）の産生の抑制」とは、哺乳類のＴＮＦα、ＩＬ−１β又は他のサイトカインの過剰なｉｎ  ｖｉｖｏ濃度が、正常値若しくは正常値以下のレベルに減少することを意味する。この減少は、大食細胞などの全ての細胞からの、ＴＮＦα、ＩＬ−１β又は他のサイトカインのｉｎ  ｖｉｖｏでの放出を抑制すること、ゲノムレベルにおける、哺乳類のＴＮＦα、ＩＬ−１β又は他のサイトカインの過剰なｉｎ  ｖｉｖｏでのレベルを、通常若しくは通常以下のレベルに下方制御すること、翻訳後において、ＴＮＦα、ＩＬ−１β又は他のサイトカインの合成を阻害すること、又は翻訳レベルにおいて、ＴＮＦα、ＩＬ−１β又は他のサイトカインを下方制御することによって可能となる。
【００２３】
当業者であれば、本発明の化合物が酸付加塩を形成できることを理解するであろう。全ての場合において、全ての化合物の薬理学的に許容できる塩は、それらの名称の範疇に包含される。本発明の化合物はアミンであるため、多くの無機及び有機酸のうちのいずれかと反応して、薬理学的に許容できる酸付加塩を形成する。本発明の用語「薬理学的に許容できる塩」とは、生存する生物体に対する中毒性を実質的に有さない、式Ｉの化合物の塩のことを指す。典型的な薬理学的に許容できる塩としては、薬理学的に許容できる有機酸若しくは無機酸と、本発明の化合物との反応により調製される塩が挙げられる。かかる塩の例としては、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，６６，２−１９（１９７７）に列記されている薬理学的に許容できる塩が挙げられ、それらは当業者に公知である。式Ｉの化合物のメシル酸塩が最も好ましい。
【００２４】
式Ｉの化合物はｐ３８キナーゼの阻害剤である。すなわち、本発明はまた、哺乳類のｐ３８キナーゼを阻害する方法であって、前記処置を必要とする哺乳類に対して、ｐ３８キナーゼを阻害するのに十分な量の式Ｉの化合物を投与することを含んでなる方法の提供に関する。式Ｉの化合物の投与により処置される哺乳類としては、ヒトが好ましい。
【００２５】
本発明の化合物は、ｐ３８キナーゼの阻害剤として、炎症誘発性サイトカイン腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）及びインターロイキン−１β（ＩＬ−１β）の産生の抑制、すなわち過剰なサイトカイン産生から生じる障害の治療に有用である。現在の化合物はしたがって、炎症性障害（湿疹、アトピー性皮膚炎、慢性関節リウマチ、骨関節炎、炎症性腸疾患及び毒性ショック症候群など）の治療に有用であると考えられる。本発明の化合物はまた、心血管障害（例えば急性心筋梗塞、慢性心不全、アテローム性動脈硬化症、ウィルス性筋心臓炎、心臓同種移植拒否及び敗血症関連の心臓機能不全）の治療にも有用であると考えられる。更に本発明の化合物はまた、中枢神経系障害（例えば髄膜炎菌性髄膜炎、アルツハイマー疾患、パーキンソン疾患及び多発性硬化症）の治療にも有用であると考えられる（国際公開第０３／０７２５６９号、第０４／００４７２０号、第９９／２３０９１号、第９９／３２１１１号）。
【００２６】
大部分の固形腫瘍は悪性細胞及び間質細胞（内皮細胞を含む）の激増により質量が増加する。腫瘍が直径２〜３ｍｍより大きくなるには、脈管系を形成しなければならず、そのプロセスは血管新生として知られている。腫瘍により誘発された血管形成のアンジオスタチン及びエンドスタチンによる抑制は、抗腫瘍活性をもたらすことが報告されている（Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙ，ら、Ｃｅｌｌ，８８，２７７−２８５（１９９７））。選択的なｐ３８キナーゼ阻害剤ＳＢ２２０２５が血管新生を阻害することが示されている（Ｊ．Ｒ．Ｊａｃｋｓｏｎら、Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，２８４，６８７（１９９８））。血管新生は、大部分の固形腫瘍が広範囲に拡大するための不可欠な要素であるため、このプロセスの抑制のための新規なｐ３８キナーゼ阻害剤の開発は、抗腫瘍治療における有望なアプローチである。抗腫瘍治療におけるこのアプローチは、中毒性の副作用又は従来の化学療法における薬剤耐性の誘導という問題を含まないと考えられる（Ｊｕｄａｈ  Ｆｏｌｋｍａｎ，Ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ  Ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｏｆ  Ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ，Ｔｈｅ  Ｈａｒｖｅｙ  Ｌｅｃｔｕｒｅｓ，  Ｓｅｒｉｅｓ９２，ｐａｇｅｓ  ６５−８２，Ｗｉｌｅｙ−Ｌｉｓｓ  Ｉｎｃ．，（１９９８））。
【００２７】
したがって本発明の化合物はまた、感受性腫瘍の増殖を阻害する際の、ｐ３８キナーゼの阻害剤として有用である。（Ｓｃｈｕｌｔｚ，Ｒ．Ｍ．Ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｏｆ  ｐ３８  ＭＡＰ  ｋｉｎａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ．（Ｅ．Ｊｕｃｋｅｒ（ｅｄ．），Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，６０，５９−９２，（２００３））より）。感受性腫瘍は、その生存、増殖又は転移がｐ３８キナーゼに依存する腫瘍であるものとして定義される。感受性腫瘍の例としては、脳、尿生殖路、リンパ系、胃、喉頭及び肺における腫瘍が挙げられる（米国特許第５７１７１００号）。好ましくは、本発明の用語「感受性腫瘍」には、非小細胞肺癌（Ａ．Ｇｒｅｅｎｂｅｒｇら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．ＣｅｌｌＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．，２６，５５８（２００２））、乳癌（Ｊ．Ｃｈｅｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７６，４７９０１（２００１）、Ｂ．Ｓａｌｈら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，９８，１４８（２００２）、及びＳ．Ｘｉｏｎｇら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，６１，１７２７（２００１））、胃癌（Ｙ．Ｄ．Ｊｕｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ａｍ．Ａｓｓｏｃ．ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，４３，９（２００２）、結腸直腸癌（Ｓ．Ｘｉｏｎｇら、ＣａｎｃｅｒＲｅｓ．，６１，１７２７（２００１））及び悪性黒色腫（Ｃ．Ｄｅｎｋｅｒｔら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｍｅｔａｓｔａｓｉｓ，１９，７９（２００２））などのヒト癌が挙げられる。
【００２８】
ＴＮＦαの抑制による血管新生の阻害は、転移の阻害若しくは防止にも有用であることが教示されている（米国特許第６４１４１５０号、米国特許第６３３５３３６号）。更に、ＴＮＦαの抑制は、悪液質（全てのがん患者の約半数が経験する消耗性症候群）の治療及び予防にもつながると考えられる（Ｔ．Ｙｏｎｅｄａら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，８７，９７７（１９９１））。
【００２９】
更に、ｐ３８キナーゼの抑制は、特定のウィルス性の症状、例えばインフルエンザ（Ｋ．Ｋｕｊｉｍｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ．，１６４，３２２２−３２２８（２０００））、ライノウイルス（Ｓ．Ｇｒｉｅｇｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，１６５，５２１１−５２２０（２０００））及びＨＩＶ（Ｌ．Ｓｈａｐｉｒｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９５，７４２２−７４２６，（１９９８））による症状の治療に効果的であると考えられる。
【００３０】
本発明の用語「Ｃ１−Ｃ４アルキル」とは、１〜４個の炭素原子を有する、直鎖状若しくは分岐状の、一価の飽和脂肪族鎖のことを指し、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、イソブチル及びｔｅｒｔ−ブチル基などが包含されるがこれらに限定されない。
【００３１】
本発明の用語「Ｃ１−Ｃ４アルコキシ」とは、１〜４個の炭素原子数の、酸素原子と結合する直鎖若しくは分岐状アルキル鎖のことを指す。典型的なＣ１−Ｃ４アルコキシ基としては、メトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、ｔｅｒｔ−ブトキシ基などが挙げられる。用語「Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基」の定義中には、用語「Ｃ１−Ｃ３アルコキシ基」が包含される。
【００３２】
本明細書中で特に明記しない限り、本発明の用語「ハロ」とは、塩素、臭素、ヨウ素又はフッ素原子のことを指す。
【００３３】
本発明の用語「Ｃ１−Ｃ４アルキルハロ」とは、最高５個のハロ原子で置換されてもよいＣ１−Ｃ４アルキルのことを指す。典型的なＣ１−Ｃ４アルキルハロ基としては、メチルハロ、トリフルオロメチル、エチルハロ、ビスフルオロメチルエチル、プロピルハロ、イソプロピルハロ、ブチルハロ、ｔｅｒｔ−ブチルハロなどが挙げられる。用語「Ｃ１−Ｃ４アルキルハロ基」の定義中には、用語「Ｃ１−Ｃ３アルキルハロ基」が包含される。
【００３４】
本発明の用語「Ｃ３−Ｃ４シクロアルキル基」とは、カーボン及び水素原子を含んでなる非芳香族環を意味し、シクロプロピル基及びシクロブチル基が包含される。
【００３５】
本発明の用語「１−メチル−１−シクロプロピル基」とは、以下の基のことを指す。
【化３】
2009513639.tif 000005
【００３６】
特定の種類の式Ｉの化合物が、好ましいｐ３８キナーゼ阻害剤である。以下のパラグラフでは、かかる好ましい種類のものを記載する。
ａ）Ｘが
【化４】
2009513639.tif 000006
である。
ｂ）Ｒ１がメチル、トリフルオロメチル又はハロから選択される置換基で任意に置換されてもよいＣ３−Ｃ４シクロアルキル基である。
ｃ）Ｒ１が１−メチル−１−シクロプロピル基である。
ｄ）Ｒ１が２−フルオロ−１，１−ジメチル−エチル基である。
ｅ）Ｒ１が２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル基である。
ｆ）Ｒ２がメチル基で任意に置換されてもよいフェニル基であるか、又はメチル基で任意に置換されてもよいピリジニル基である。
ｇ）Ｒ２が４−トリル基である。
ｈ）Ｒ３がＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されてもよいＣ３−Ｃ４シクロアルキル基であるか、又はメチル基で任意に置換されてもよいチエニル基であるか、又はハロ、Ｃ１−Ｃ４アルキル又はＣ１−Ｃ４アルコキシ基（更に任意に１つのハロ置換基で置換されてもよい）からなる群から選択される第１の置換基で任意に置換されてもよいフェニル基である。
ｉ）式Ｉの化合物がフリーの塩基である。
ｊ）式Ｉの化合物が塩である。ｋ）式Ｉの化合物がメシル酸塩である。
【００３７】
本発明の好ましい実施態様は、パラグラフａ）〜ｋ）のすべての組合せを含んでなる。式Ｉで表される他の好ましい化合物は、Ｘが以下で表される化合物である。
【化５】
2009513639.tif 000007
式中、Ｒ１はパラグラフｃ）で説明したとおりであり、Ｒ２はパラグラフｇ）で説明したとおりである。
【００３８】
またＸが以下で表される態様も好ましい。
【化６】
2009513639.tif 000008
式中、Ｒ１はパラグラフｃ）で説明したとおりであり、Ｒ２はパラグラフｇ）で説明したとおりであり、Ｒ３はパラグラフｈ）で説明したとおりである。
【００３９】
Ｘが以下で表される態様が特に好ましい。
【化７】
2009513639.tif 000009
式中、Ｒ２は４位がＣ１−Ｃ４アルキル基で置換されたフェニル基である。
【００４０】
Ｘが以下で表される態様が最も好ましい。
【化８】
2009513639.tif 000010
【００４１】
また、以下の化合物が特に最適である。
【化９】
2009513639.tif 000011
【００４２】
本発明の化合物は様々な方法で調製することができ、その幾つかを下記の反応式において例示する。当業者であれば、式Ｉの化合物の調製において、以下の反応式中の個々の処理を適宜変化させてもよいことを認識するであろう。式Ｉの化合物の調製に必要となる処理の具体的な順序は、合成しようとする具体的な化合物、開始化合物及び置換された部分の相対的な不安定性などに依存する。説明の便宜上、若干の置換基を以下の反応式において省略することもあるが、それによりいかなる形であれ反応式の教示が限定されるものではない。
【００４３】
式Ｉの化合物及びその中間体は、上記で定義したようなＲ１、Ｒ２及びＸを有する態様で、以下の反応式で図示するように調製できる。
【００４４】
反応式１
【化１０】
2009513639.tif 000012
【００４５】
アミン（ａ）を、適当なイソシアネート又はカルバメート（例えばピラゾリル−２，２，２−トリクロロエチルカルバメート）と反応させ、式Ｉの化合物を得る。例えば、アミン（１当量）、トリクロロエチルカルバメート（１当量）及び適切な塩基溶液（ジイソプロピルエチルアミン（２当量）又は炭酸カリウムなど）を、適切な溶媒（アセトニトリル又はジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）など）中で加熱する。その後所望の化合物を単離してもよく、また必要に応じて、公知の精製法（例えばクロマトグラフィ）を使用して式Ｉの化合物を精製してもよい。
【００４６】
必要なアミンは以下の反応式２に示すように調製され、式中、Ｘは上記の通り定義される。
【００４７】
反応式２
【化１１】
2009513639.tif 000013
【００４８】
ニトロ部分（ｂ）をスタンダードの還元条件下で還元してもよく、例えば、適切な溶媒（低級アルカノール又は酢酸エチルなど）中で、パラジウム触媒の存在下で水素で還元し、対応するアミン（ａ）を調製してもよい。かかる還元処理は当業者に公知である。Ｌａｒｏｃｋ，Ｒ．，“Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，”４１２，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９を参照のこと。
【００４９】
必要となるニトロ化合物は下記の反応式３で図示するように調製され、式中、Ｒ３は上記で定義したとおりであり、Ｘ’はＣ（Ｏ）Ｒ３又は適切な保護基（ＰＧ）である。
【００５０】
反応式３
【化１２】
2009513639.tif 000014
【００５１】
適切な有機溶剤（ＴＨＦなど）中の１−クロロ−４−ニトロ−イソキノリン（ｅ）を、Ｎ保護（ＰＧ）ヒドロキシピペリジン及び水素化ナトリウムと反応させ、対応する置換ピペリジンｂ（ｉ）を得る。適切なアミノ保護基「Ｐｇ」（例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル（ＢＯＣ）部分）を必要に応じて利用してもよく、又は必要となる場合もある。これらの基の導入方法は当業者に公知である。当業者であれば、窒素保護基を、本発明の化合物の合成経路上のいかなる時点においても除去できることは自明であろう。アミノ保護基の方法は公知技術である（例えばＴ．Ｗ．Ｇｒｅｅｎ、Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ“Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ、”Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，１９９９を参照）。
【００５２】
あるいは、１−クロロ−４−ニトロ−イソキノリン（ｅ）を極性溶媒（例えばアセトニトリル）中で、炭酸カリウム中のＮ−ＢＯＣ保護されたピペラジンと反応させ、対応する置換ピペラジンｂ（ｉｉ）を得てもよい。
【００５３】
必要となるピラゾリルカルバメートは以下の反応式で説明するように調製してもよく、式中、Ｒ１及びＲ２は上記で定義したとおりである。
【００５４】
反応式４
【化１３】
2009513639.tif 000015
【００５５】
３−アミノピラゾール（ｍ）は公知の条件で形成される（"Ｃｏｍｐｒｅｈｅｎｓｉｖｅ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎｓ，" ７９，ＶＣＨ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８９）。例えば、α−シアノ・ケトン（ｊ）及び適切な有機溶媒（例えばエタノール）中の適切なヒドラジン又はヒドラジン塩（ｋ）を高温で反応させ、標準的な技術（例えばシリカゲルカラム上のクロマトグラフィ）を使用して精製できる。
【００５６】
２，２，２−トリクロロエチルクロロホルメート（ｎ）を、適切に置換された３−アミノピラゾール（ｍ）及び適切な溶媒（例えばＴＨＦ）中の塩基（例えば炭酸ナトリウム）と反応させ、対応する２，２，２−トリクロロエチルカルバメート（ｏ）を得る。当業者であれば、３−アミノピラゾールを他の活性炭酸塩と反応させることにより対応するカルバメートを調製できることを認識する。
【００５７】
式Ｉ（ｉ）の化合物は、以下の反応式５のとおりに調製でき、式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３及びＰＧは上記で定義したとおりである。
【００５８】
反応式５
【化１４】
2009513639.tif 000016
【００５９】
式（ｆ）の化合物を、公知技術の条件下で脱保護する。例えば保護基がｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルである場合、式（ｆ）の化合物を適切な有機溶媒又は溶媒混合物（例えばジクロロメタン）中に溶解し、酸（例えばジオキサン中の塩酸又はトリフルオロ酢酸）で処理する。Ｎ保護ピペリジンで置換された尿素（ｆ）の脱保護により、置換ピペリジン（ｇ）が得られ、カップリング剤（例えばＮ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸（ＥＤＣＩ）、４−ジメチルアミノピリジン、ＤＭＡＰ）及び１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ）の触媒反応に充分な量の存在下、有機酸及び有機アミンのための標準的なカップリング条件下で、置換カルボン酸と反応させ、式Ｉ（ｉ）を得る。当業者であれば、式Ｉ（ｉ）は例えば異なるＮ保護基（例えばホルミル基）を有する他の被保護ピペリジンを開始原料として調製でき、その場合には他の脱保護方法を使用して中間体（ｇ）を形成する必要があることを認識するであろう。
【００６０】
また当業者であれば、式Ｉの化合物の置換基の全てが、化合物の合成に採用される特定の反応条件を許容するわけではないことを認識する。これらの基は、合成にとり好適なタイミングで導入してもよく、またそれらを適宜保護し、脱保護してもよい。当業者であれば、保護基が本発明の化合物の合成経路中のいかなる工程においても除去できることを認識するであろう。窒素及び酸素の保護基を導入及び除去する方法は公知技術である（Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，（１９９９）参照）。更に当業者であれば、多くの場合、それらの基を導入する順序は特定のものに限定されないことを認識するであろう。式Ｉの化合物の調製に必要な具体的な処理手順は、合成し用途する具体的な化合物、出発化合物及び置換基の相対的な不安定性に依存する。
【００６１】
実施例及びアッセイにおいて使用する略語、記号及び用語は以下の意味を有する。ＡｃＯＨ＝酢酸、ＤＣＣ＝ジシクロヘキシルカルボジイミド、ＤＩＥＡ＝Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン、ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド、ｈ＝時間、ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ＨＯＢｔ  １−ヒドロキシベンゾトリアゾール、ＬＤＡ＝リチウムジイソプロピルアミド、ＥＤＣＩ＝１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩、ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル、ＥｔＯＨ＝エタノール、ＭｅＯＨ＝メタノール、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３＝ナトリウム三アセトキシ・ボロハイドライド、ＴＢＡＦ＝テトラブチルアンモニウムフッ化物、Ｔｆ２Ｏ＝トリフルオロメタンスルホン酸無水物、ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン。
【００６２】
調製１：１−トリフルオロメチル−シクロプロパンカルボン酸  メチルエステル
【化１５】
2009513639.tif 000017
【００６３】
１−トリフルオロメチルシクロプロパン−１−カルボン酸（３．６５ｇ、２３．７ｍｍｏｌ）のメタノール−ヘキサン（２．５ｍＬ−２２．５ｍＬ）中の溶液に、２Ｍのジアゾメタンのヘキサン（１４．２ｍＬ、２８．４５ｍｍｏｌ）中溶液を添加した。減圧下で溶媒を除去し、残余物を蒸留し、黄色の油状物（２．９３ｇ、７３％の収率）を得た。
【００６４】
調製２：３−（１−メトキシ−シクロプロピル）−３−オキソ−プロピオニトリル
【化１６】
2009513639.tif 000018
【００６５】
１−メトキシシクロプロパンカルボン酸メチルエステル（国際公開第２００５／０１４５７７号）（３．４５ｇ、２６．５ｍｍｏｌ）及びアセトニトリル（２．１７ｇのｍＬ、５３．０ｍｍｏｌ）の、ドライアイス−アセトンで冷却したＴＨＦ（３０ｍＬ）中の溶液に、２Ｍ  ＬＤＡのＴＨＦ（２９．１ｍＬ、５８．３ｍｍｏｌ）中の溶液を添加した。−７８℃で１時間、更に２２℃で０．５時間反応混合物を撹拌した。溶媒を蒸発させ、茶色の固体を得た。濾過し、ヘキサンで洗浄した。２Ｎ塩酸を添加し、ジエチルエーテルで３回（各５０ｍＬ）抽出した。硫酸ナトリウム上で混合有機相を乾燥させた。溶媒を除去し、赤色の油状物（３．５５ｇ（９６％の収率）、ＥＳ＋（ｍ／ｚ）１４０．１［Ｍ＋Ｈ］）を得た。
【００６６】
上記の方法と実質的に同様の方法で以下の化合物を調製した。
【表１】
2009513639.tif 000019
【００６７】
調製５：３−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチル−２−メチルプロピオン酸  メチルエステル
【化１７】
2009513639.tif 000020
【００６８】
３−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチル−２−メチル−プロピオン酸（１００ｇ）のＭｅＯＨ（１Ｌ、ＨＰＬＣ級の溶媒）中の懸濁液にＨ２ＳＯ４（４．５ｇ）を添加し、室温で約７０時間撹拌した。溶媒を除去し、ＥｔＯＡｃ（１Ｌ）及びＨ２Ｏ（１００ｍＬ）との間に残余物を分離させた。ＥｔＯＡｃで水性層を再度抽出し、ＭｇＳＯ４上で混合有機画分を乾燥させた。濾過し、減圧下で濃縮した。更なる精製をせずに粗混合物を使用した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）：δｐｐｍ  ３．９（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝１１．１Ｈｚ）３．７６（ｓ、３Ｈ）３．７１（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝１１．１Ｈｚ）２．８（ｂｓ、２Ｈ）１．１（ｓ、３Ｈ）
【００６９】
上記の方法と実質的に同様の方法で以下の化合物を調製した。
【表２】
2009513639.tif 000021
【００７０】
調製７：３−ヒドロキシ−２，２−ジメチルプロピオン酸  ベンジルエステル
【００７１】
２，３−ジヒドロキシ−２−メチルプロピオン酸（４２３．２ｍｍｏｌ、５０ｇ）のＤＭＦ  ３００ｍＬ中溶液に、水酸化カリウム（４８６．７ｍｍｏｌ、３２．１ｇ）を添加した。１００℃で１時間撹拌した。次に臭化ベンジル（５８４．０４ｍｍｏｌ、６９．４６ｍＬ）を添加し、一晩撹拌した。混合物を冷却し、酢酸エチルで希釈した。水で有機層を洗浄した。酢酸エチルで数回水性層を洗浄した。有機層を混合し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）：δｐｐｍ：７．３６−７．３２（ｍ、５Ｈ）５．１（ｓ、２Ｈ）３．５（ｓ、２Ｈ）１．２１（ｓ、６Ｈ）。
【００７２】
調製８：５−ペンタフルオロエチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３イルアミン
【化１８】
2009513639.tif 000022
【００７３】
封止した試験管中で、９５℃で１５時間、４，４，５，５，５−ペンタフルオロ−３−オキソ−ペンタニトリル（４ｇ、２１．４ｍｍｏｌ）及びｐ−トリル−ヒドラジン（１０ｇ、６４．１ｍｍｏｌ）のエタノール（２０ｍＬ）中の混合物を加熱した。室温に冷却後、減圧下で溶媒を除去し、茶色の残余物を得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、酢酸エチル及びヘキサンで溶出し、標題化合物（３．２４ｇ（５２％の収率）ＥＳ＋（ｍ／ｚ）２９２．１［Ｍ＋Ｈ］）を得た。
【００７４】
上記の方法と実質的に同様の方法で以下の化合物を調製した。
【表３】
2009513639.tif 000023
【００７５】
調製１０：５−（１−フルオロメチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン
【００７６】
２２ｍＬのアセトニトリル中の１−フルオロｃｙｃｌｏｂｕｔａｎｅカルボン酸エチルエステル（１．６ｇ、８ｍｍｏｌ）溶液の、２７４ｍＬの水中の溶液に、ＡｇＦ（４．５当量、４．５６ｇ）を添加した。激しく撹拌しながら、８０℃で２０時間、封止した試験管中で混合物を加熱した。混合物を冷却し、セライトで濾過した。減圧下で溶媒を除去し、油状物（０．８１ｇ、６１％の収率）として１−フルオロメチル−シクロプロパンカルボン酸エチルエステル化合物を得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）１４７．１［Ｍ＋１］
【００７７】
ｉ−Ｐｒ２ＮＨ（１．７ｍＬ、２．２当量、１２．１ｍｍｏｌ）及びｎ−ＢｕＬｉ（ヘキサン中１．６Ｍ、７．５ｍＬ、２．２当量、１２．１ｍｍｏｌ）を、Ｎ２雰囲気下で３０分間、−７８℃の１２ｍＬ  ＴＨＦ中で撹拌し、次に１−フルオロメチルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル（０．８１ｇ、５．５ｍｍｏｌ）の７ｍＬ  ＴＨＦ中溶液をＬＤＡ溶液に添加した。撹拌し、混合物を−７８℃から室温まで加温し、室温で５時間撹拌した。ＮＨ４Ｃｌの飽和水溶液を１０ｍＬ添加した。ＡｃＯＥｔを添加し、有機層を分離し、飽和塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、溶媒を除去し、茶色の油状物（０．４２ｇ、５４％の収率）を得た。化合物を１０ｍＬのＥｔＯＨに溶解し、ｐ−トリルヒドラジン（０．４７ｇ、１当量、３ｍｍｏｌ）を添加した。９０℃で一晩、封止した試験管中で混合物を加熱した。次に混合物を冷却し、溶媒を除去し、残余物を得た。クロマトグラフィ（ヘキサン／ＡｃＯＥｔ、１５−８０％）で精製し、油状物（０．３３６ｇ、４５％の収率）として標題化合物を得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）：２４６．１［Ｍ＋１］
【００７８】
調製１１：５−（１−メトキシ−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン
【化１９】
2009513639.tif 000024
【００７９】
９０℃で１８時間、３−（１−メトキシ−シクロプロピル）−３−オキソ−プロピオニトリル（調製２、３．５５ｇ、２５．５ｍｍｏｌ）及びｐ−トリルヒドラジン塩酸塩（１２．１５ｇ、７６．５ｍｍｏｌ）のエタノール（５０ｍＬ）中の混合物を封止した試験管中で加熱した。溶媒の除去後、残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０−５％メタノール／ジクロロメタンで溶出し、黄色の固体（３．２９ｇ（５３％の収率）、ＥＳ＋（ｍ／ｚ）２４４．２［Ｍ＋Ｈ］）として標題化合物を得た。
【００８０】
上記の方法と実質的に同様の方法で以下の化合物を調製した。
【表４】
2009513639.tif 000025
【００８１】
調製１３：［５−（１−メトキシ−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］カルバミン酸  ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル
【化２０】
2009513639.tif 000026
【００８２】
５−（１−メトキシ−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（調製１１、２．４３ｇ、１０ｍｍｏｌ）及びピリジン（０．９ｍＬ、１１ｍｍｏｌ）の、氷−塩冷却したＴＨＦ（３０ｍＬ）中の溶液に、２，２，２−トリクロロエチルクロロホルメート（２．１２ｇ、１０ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１０ｍＬ）中の溶液を滴下して添加した。−１５℃で０．５時間、次に２２℃で１時間撹拌した。ジクロロメタン（５０ｍＬ）及び飽和水重炭酸ナトリウム（５０ｍＬ）との間に反応混合物を分離させた。水溶性相を単離し、ジクロロメタンで２度（各２５ｍＬ）抽出した。硫酸ナトリウム上で混合有機相を乾燥させ、濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチルで溶出し、白色固体（３．７３ｇ（８９％の収率）、ＥＳ＋（ｍ／ｚ）４１８．１［Ｍ＋Ｈ］）を得た。
【００８３】
上記の方法と実質的に同様の方法で以下の化合物を調製した。
【表５】
2009513639.tif 000027
【００８４】
調製１７：１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸  ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル
【００８５】
５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（Ｒｅｇａｎら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２００２，４５，２９９４−３００８、４００ｇ、１．７４ｍｏｌ）のＴＨＦ（８Ｌ）中の溶液に、炭酸ナトリウム（２．４Ｌ）の飽和溶液を添加し、混合物を０℃に冷却した。次に、２，２，２−トリクロロエチルクロロホルメート（４０６．７７ｇ、１．９２ｍｏｌ）を滴下して添加し、０℃で２時間混合物を撹拌した。酢酸エチル（３×６．５Ｌ）で反応混合物を抽出し、無水硫酸マグネシウムを通じて乾燥させ、溶媒を蒸発させた。固体を最小量の酢酸エチル中に溶解し、過剰のヘキサンを添加し、固体を沈殿させた。固体を濾過して回収し、乾燥させ、オフホワイトの固体（５８６ｇ、８３％の収率）として標題化合物を得た。（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ４０６．１（Ｍ＋Ｈ）。
【００８６】
調製１８：［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸  ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル
【化２１】
2009513639.tif 000028
【００８７】
水素化ナトリウム（６６ｇ、１．６ｍｏｌ）のＴＨＦ（７００ｍＬ）中の懸濁液にアセトニトリル（８７ｍＬ、１．６ｍｏｌ）を添加し、室温で１０分撹拌した。次に１−メチルシクロプロパンカルボン酸メチルエステル（９０．０ｇ、０．７８ｍｏｌ）を添加し、白いスラリーを３時間還流した。混合物を冷却し、メタノール（２００ｍＬ）を添加し、混合物を水（５００ｍＬ）の上に注いだ。相を分離させ、１．０Ｎ  ＨＣｌを用いて水性相のｐＨをｐＨ３〜４まで低下させた。ジエチルエーテル（２×３５０ｍＬ）で水性相を抽出し、有機層を連結し、塩化ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、黄色の油状物として３−（１−メチル−シクロプロピル）−３−オキソ−プロピオニトリルを得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：３．５９（ｓ、２Ｈ）１．３７（ｓ、３Ｈ）１．３０（ｑ、Ｊ＝４Ｈｚ、２Ｈ）０．８６（ｑ、Ｊ＝４Ｈｚ、２Ｈ）。
【００８８】
別法として、オーバーヘッド撹拌器、熱電対、還流濃縮器及び滴下漏斗を備えた５Ｌ容の３首の丸底フラスコに、ＴＨＦ（３．００Ｌ、３．００ｍｏｌ）中のカリウムｔｅｒｔ−ブトキシドを添加した。１−メチルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル（２６４．００ｇ、２．０６ｍｏｌ）とアセトニトリル（１２３．００ｇ、３．００ｍｏｌ）を混合し、更にブトキシド溶液に０．５時間にわたり添加漏斗で添加した。得られた混合物を還流加熱した。２時間還流し、メタノール（９６．００ｇ、３．００ｍＬ）を添加して＜４０℃に冷却した。１０分間混合物を撹拌し、内容物を、激しく撹拌している水（３．９６Ｌ、２１９．８１ｍｏｌ）とＭＴＢＥ（３．９６Ｌ、３３．３２ｍｏｌ）の混合液を含有する１２Ｌの分離漏斗へ移した。層を分離させ、ＭＴＢＥ（３．９６Ｌ、３３．３２ｍｏｌ）で水性層を抽出した。５Ｎ  ＨＣｌ（６１０．００ｍＬ、３．０５ｍｏｌ）を使用して水性層のｐＨを１２．５から３．５に調節した。ＭＴＢＥ（２×１．３２Ｌ、１１．１１）で水性層を抽出した。有機層を混合し、硫酸ナトリウム（６２．００ｇ、４３６．４９ｍｏｌ）を通じて乾燥させ、濾過し、３−（１−メチル−シクロプロピル）−３−オキソ−プロピオニトリルを得た。
【００８９】
３−（１−メチル−シクロプロピル）−３−オキソ−プロピオニトリル（６０ｇ、４８７．２ｍｍｏｌ）及びｐ−トリル−ヒドラジン塩酸塩（７８ｇ、４７８．２ｍｍｏｌ）のエタノール（９７５ｍＬ）中の溶液を、還流しながら４時間加熱した。溶媒を蒸発させ、残留している固体を水に溶解させた。１．０Ｎ  水酸化ナトリウム溶液を使用し、溶液のｐＨをｐＨ８に上昇させた。沈殿物を濾過し、白色固体として５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミンを得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：７．３９（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）７．２２（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）５．１２（ｓ、２Ｈ）２．３１（ｓ、３Ｈ）１．３０（ｓ、３Ｈ）０．８０（ｑ、Ｊ＝４Ｈｚ、２Ｈ）０．６１（ｑ、Ｊ＝４Ｈｚ、２Ｈ）。
【００９０】
５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（４．７５ｇ、２１ｍｍｏｌ）のテトラヒドロフラン（１０５ｍＬ）及び飽和炭酸ナトリウム（３２ｍＬ）水溶液中溶液に、滴下して２，２，２−トリクロロエチルクロロホルメート（３．０ｍＬ、２３ｍｍｏｌ）を０℃で添加した。この温度で２時間撹拌した。混合液を水に注入し、相を分離させた。酢酸エチルで水相を抽出した。
【００９１】
操作Ａ：有機層を混合し、塩化ナトリウム水溶液で洗浄し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、黄色の固体を得た。最小量の酢酸エチルで固体を溶解させ、撹拌しながら、濁りが生じるまでヘキサンを添加した。結晶化させ、濾過して標題化合物を白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ）：９．８９（ｂｒｓ、１Ｈ）７．３１（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）７．２３（ｄ、Ｊ＝８Ｈｚ、２Ｈ）６．１２（ｓ、１Ｈ）４．８２（ｓ、２Ｈ）２．３１（ｓ、３Ｈ）１．３７（ｓ、３Ｈ）０．８９（ｑ、Ｊ＝４Ｈｚ、２Ｈ）０．７１（ｑ、Ｊ＝４Ｈｚ、２Ｈ）。
【００９２】
操作Ｂ：酢酸エチル溶媒をイソプロピルアルコール（９１．５６ｍｏｌ）で置換した。スラリーを＜０℃で２時間撹拌し、濾過し、冷却イソプロピルアルコール（１３．０８ｍｏｌ）で洗浄し、減圧下で４０℃で一晩乾燥させ、白い結晶状固体として標題化合物を得た。
【００９３】
調製１９：［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸  ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル
【００９４】
３−ヒドロキシ−２−ヒドロキシメチル−２−メチルプロピオン酸  メチルエステル（調製５、３２．５ｇ）の冷却したジクロロメタン（４００ｍＬ）及び２，６−ルチジン（８０ｍＬ）中の溶液（−７８℃）に、Ｔｆ２Ｏ（８０ｍＬ）を滴下して添加した。反応を室温に加温し、約２時間撹拌した。ジクロロメタン（４００ｍＬ）で希釈し、ＨＣｌ（３％水溶液）で洗浄した。ＭｇＳＯ４上で有機層を乾燥させ、濾過し、濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／５％酢酸エチルで溶出し、無色油状物として２−メチル−２，３−ビス−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−プロピオン酸  メチルエステルを得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）：δｐｐｍ  ４．７（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝１０．３Ｈｚ）４．５（ｄ、２Ｈ、Ｊ＝１０．３Ｈｚ）３．８（ｓ、３Ｈ）１．４（ｓ、３Ｈ）。
【００９５】
２−メチル−２，３−ビス−トリフルオロメタンスルホニルオキシ−プロピオン酸メチルエステル（６５．９ｍｍｏｌ、２６．３ｇ）の、０℃に冷却した無水ＴＨＦ中の溶液５００ｍＬに、１Ｍ（１３２ｍｍｏｌ、１３２ｍＬ）ＴＢＡＦを添加した。一晩撹拌した。減圧下で濃縮し、ジクロロメタンを添加した。飽和塩化ナトリウム水で有機層を洗浄した。有機層を混合し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、３−フルオロ−２−フルオロメチル−２−メチルプロピオン酸メチルエステルを得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３、３００ＭＨｚ）：δｐｐｍ：４．７−４．４（ｍ、４Ｈ）３．５（ｓ、３Ｈ）０．９８（ｔ、３Ｈ、Ｊ＝１．７Ｈｚ）
【００９６】
３−フルオロ−２−フルオロメチル−２−メチルプロピオン酸  メチルエステル（２８．２ｍｍｏｌ、４．３ｇ）の、−７８℃に冷却した１００ｍＬの無水ＴＨＦ中溶液に、２．０Ｍ（６２．０ｍｍｏｌ、３１ｍＬ）ＬＤＡ、更に無水アセトニトリル（５６．４ｍｍｏｌ、２．９ｍＬ）を添加した。−７８℃で２時間撹拌し、溶液を一晩室温に加温した。減圧下で濃縮し、ジクロロメタンを添加した。飽和塩化ナトリウム水及び１０％のＨＣｌ水溶液で有機層を洗浄した。有機層を混合し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残余物を得た。
【００９７】
３１ｍＬのエタノール中で、９０℃で一晩、ｐ−トリルヒドラジン塩酸塩（１５．５ｍｍｏｌ、２．５ｇ）及び上記残余物（１５．５ｍｍｏｌ、２．５ｇ）を撹拌した。溶媒を蒸発させ、水中に残余物を溶解させた。１０％の水酸化ナトリウム溶液を添加し、酢酸エチルで抽出した。有機層を混合し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミンを得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、溶出液としてヘキサン／酢酸エチル（１５％〜５０％）を用い、溶出させた。ＬＣＭＳ  ＥＳ＋（ｍ／ｚ）２６６［Ｍ＋Ｈ］）。
【００９８】
５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（７．３ｍｍｏｌ、１．９ｇ）の３７ｍＬのＴＨＦ中溶液に、２，２，２−トリクロロエチルクロロホルメート（８．１ｍｍｏｌ、１．１ｍＬ）及び炭酸ナトリウム水溶液（４．８ｍＬ）を添加した。２４時間撹拌した。溶液を水に注入し、酢酸エチルで抽出した。有機層を混合し、飽和塩化ナトリウム水で洗浄した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸  ２，２，２−トリクロロ−エチルエステルを得た。ＬＣＭＳ  ＥＳ＋（ｍ／ｚ）４４０［Ｍ＋Ｈ］
【００９９】
上記の方法と実質的に同様の方法で以下の化合物を調製した。
【表６】
2009513639.tif 000029
【０１００】
調製２２：４−（４−アミノ−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化２２】
2009513639.tif 000030
【０１０１】
氷／アセトンバスを使用して硫酸（９００ｍＬ）を５℃に冷却し、次に混合物の内部温度を＜２０℃に維持しながら４５分にわたり１−アミノイソキノリン（２０８．８ｇ、１４４８ｍｍｏｌ）を添加した。窒素下、装置を用いて撹拌しながら暗色の混合物を０℃に冷却し、反応混合物の温度＜１０℃に維持しながら４５分にわたり、ＫＮＯ３（１４９．４ｇ、１４７７ｍｍｏｌ）を徐々に添加した。１５℃に加温しながら混合物を２時間撹拌した。混合物を水／氷（３ｋｇ）に注入し、更に水（６Ｌ）で希釈した。スラリーを４５分間撹拌し、濾過した。水（６×１．５Ｌ）でケーキ状物を洗浄した。金色の材料を一晩かけて徐々に空気乾燥させ、更に真空オーブン（５０〜５５℃、約１０Ｔｏｒｒ、窒素供給有、２４時間）で乾燥させ、１−アミノ−４−ニトロイソキノリンＨ２ＳＯ４（２５６．８ｇ、６２％の収率）を得た。（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ  １９０（Ｍ＋＋Ｈ）。
【０１０２】
窒素雰囲気下、３５℃で１−アミノ−４−ニトロイソキノリンＨ２ＳＯ４（１２０ｇ、４１８ｍｍｏｌ）のＨＣｌ水溶液（６Ｎ、２Ｌ）中のスラリーを、装置を用いて撹拌した。５０℃にスラリーを加温しながら、１時間にわたりＮａＮＯ２（７２．１ｇ、１０４４ｍｍｏｌ）の水溶液（３００ｍＬ）を添加した。更に混合物を３０分間加熱し、次に室温に冷却し、一晩撹拌させた。混合物を５０℃に加熱し、更に３０分にわたりＮａＮＯ２（３６ｇ／１５０ｍＬの水）の水溶液を添加した。混合物を２時間撹拌し、更に６０℃に加熱し、更に３時間以上かけて室温に徐々に冷却させた。得られたスラリーを濾過し、水（３×６００ｍＬ）でケーキ状物を洗浄した。部分的に空気乾燥した（１８０ｇ）。還流しながらｉ−ＰｒＯＨ（１Ｌ）及びＥｔＯＨ（１Ｌ）でウエットな固体をスラリー化し、ＴＨＦ（３５０ｍＬ）を添加し完全に溶解させた。溶液に水（４００ｍＬ）を添加し、３時間にわたり１０℃に冷却した。濾過し、ＥｔＯＨ（２×３００ｍＬ）及びジエチルエーテル（３×１５０ｍＬ）で洗浄した。一晩空気乾燥させ、ライトブラウンの固体として１−ヒドロキシ−４−ニトロイソキノリン（６２．６２ｇ、７９％の収率）を得た。（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ  １９１（Ｍ＋＋Ｈ）。
【０１０３】
窒素下で１−ヒドロキシ−４−ニトロイソキノリン（６２．２ｇ、３２７ｍｍｏｌ）のＰＯＣｌ３（１８０ｍＬ）中のスラリーを機械的に撹拌し、１００〜１０５℃で１時間加熱し、均一な暗褐色の溶液を得た。コンデンサを短いパスの蒸留ヘッドと交換し、減圧（約１０〜３０Ｔｏｒｒ）下で過剰なＰＯＣｌ３を除去し、５５℃のポット温度とした。この混合物に１，２−ジクロロエタン（１５０ｍＬ）を添加し、７０℃に混合物を加温し、均一な溶液を得た。溶液を１５℃に冷却し、５分間にわたりｉ−ＰｒＯＨ（４５０ｍＬ）を添加した。発熱し、３３℃になった。１５℃で３．５時間スラリーを撹拌し、濾過し、ｉ−ＰｒＯＨ（３×１００ｍＬ）で洗浄した。得られた固体を一晩空気乾燥し、黄褐色の固体として１−クロロ−４−ニトロイソキノリン（５２．０８、７６％の収率）を得た。（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ  ２０９／２１１（Ｍ＋＋Ｈ）。
【０１０４】
１−クロロ−４−ニトロイソキノリン（２６．０ｇ、１２５ｍｍｏｌ）及び１−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル−４−ヒドロキシピペリジン（２７．６ｇ、１３７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３５０ｍＬ）中の溶液に、徐々にＮａＨ（鉱油中６０％、洗浄なし、６．２３ｇ、１５６ｍｍｏｌ）を添加し、窒素雰囲気下で室温で撹拌した。４０℃で１．５時間、更に５５℃で１．５時間撹拌し、暗赤色の混合物を得た。更にＮａＨ（１．３ｇ）を添加し、５５℃で２時間得られた混合物を撹拌し、一晩かけて室温に冷却した。ヘキサン（７５ｍＬ）を添加し、徐々に水（６００ｍＬ）を添加した。反応混合物をＨＣｌ（１Ｎ）水溶液でｐＨ７に調節し、層を分離させた。水性層を廃棄し、有機層にヘキサン（２００ｍＬ）を添加した。混合物が５０〜１００ｍＬとなるように部分的に減圧濃縮した。ジエチルエーテル（１５０ｍＬ）及びヘキサン（２５０ｍＬ）を添加し、得られたスラリーを濾過した。ジエチルエーテル／ヘキサン（１：１）でケーキ状物を洗浄し、空気乾燥させ、黄褐色の固体として４−（４−ニトロ−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３３．８４ｇ、７３％の収率）を得た。（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ  ３７４（Ｍ＋＋Ｈ）。
【０１０５】
４−（４−ニトロ−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（３３．５ｇ、８９．７ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３００ｍＬ）及びエタノール（３００ｍＬ）中のスラリーに、エタノール（２５ｍＬ）中のスラリーとしての１０％のＰｄ／Ｃ（１．８０ｇ、１．６９ｍｍｏｌ）を添加した。水素雰囲気下（２５−４０ｐｓｉ）、Ｐａｒｒシェーカ中に、室温で８時間混合物を静置した。珪藻土を用いて混合物をパッドで濾過し、濾過液が無色となるまでエタノールで洗浄した。減圧下で濾過液を濃縮し、暗色の油状物を得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、１％更に２．５％のＭｅＯＨ／ジクロロメタンで溶出し、オレンジ色のガラス状物として標題化合物（３０．３ｇ、９８％の収率）を得た。（ＥＳ＋）：ｍ／ｚ  ３４４（Ｍ＋＋Ｈ）。
【０１０６】
調製２３：［４−（４−アミノ−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−（１−メチル−シクロプロピル）−メタノン
【化２３】
2009513639.tif 000031
【０１０７】
オーバーヘッドスターラー、熱電対、窒素供給口／排出口及び滴下漏斗を備えた２２Ｌ容の３首の丸底フラスコ（水浴中）に、イソキノリン（５００．００ｇ、３．７５ｍｏｌ）及び酢酸エチル（７．６０Ｌ、７７．６２ｍｏｌ）を添加した。撹拌して溶解させた。室温で０．５時間以上かけて滴下して過酢酸（１．２５Ｌ、５．９４ｍｏｌ）を添加した。室温で一晩撹拌した。氷水浴中で反応フラスコを冷却し、４５分にわたりジメチル硫化物（５２５．００ｍＬ、７．１４ｍｏｌ）を滴下して添加し、反応をクエンチした。室温に加温しつつ一晩撹拌した。反応混合物中の過酸化物の含有を試験した。
【０１０８】
反応混合物の２ロットを混合した。反応混合物を５０Ｌの分離漏斗へ移し、水（２．００Ｌ、１１１．０２ｍｏｌ）及びジクロロメタン（１２．００Ｌ、１８７．２１ｍｏｌ）を添加した。炭酸ナトリウム（２．０７ｋｇ、１９．５３ｍｏｌ）を徐々に添加し、層を分離させた。ジクロロメタン（３×４Ｌ）で水性層を抽出し、有機層を混合し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させた。濾過し、減圧下で溶媒を除去し、暗赤色の油／液体（粗生成物）を得た。
【０１０９】
暗赤色の粗油状物／液体に酢酸エチル（８．００Ｌ、８１．７６ｍｏｌ）を添加し、６．８Ｌの酢酸エチルが除去されるまで減圧下で撹拌した。沈殿した固体をフィルターに通し、冷却酢酸エチル（７５０．００ｍＬ、７．６６ｍｏｌ）で洗浄し、更にヘプタン（８００．００ｍＬ、５．４６ｍｏｌ）で洗浄した。固体を乾燥させ、微細な砂状の固体としてイソキノリン−２−オキシド（７１４．２０ｇ、６４％）を得た。
【０１１０】
代替法：ヘプタン線状前に、濾過液から１Ｌの溶媒を除去した。濾過液を一晩静置した。固体をフィルターに通し、冷却酢酸エチル（５００．００ｍＬ、５．１１ｍｏｌ）、更にヘプタン（５００．００ｍＬ、３．４１ｍｏｌ）で洗浄した。固体を乾燥させ、微細な砂状の固体としてイソキノリン−２−オキシド１１０．１０ｇ（１０％）（ｃｒｏｐ＃２（合計収率７４％）を得た。
【０１１１】
Ｎ２供給口、蒸留ヘッド及び熱電対を有する２２Ｌのフラスコに、イソキノリン２−オキシド（４．８２ｍｏｌ、６９９．１ｇ）及び無水酢酸（７３．９５ｍｏｌ、６．９９Ｌ）を添加した。反応混合物を穏やかに還流加熱し、蒸留によって揮発性の物質を除去した。加熱を継続し、蒸留液を２時間かけて回収した（総反応液体積の半分にまで除去した）。反応混合物を５０℃に冷却した。メタノール（２Ｌ）を滴下して添加し、反応液を７０℃に加熱した。反応混合物を室温で一晩撹拌した。溶液からイソキノリン−１−オルを結晶化させ、濾過して単離し、５０℃で減圧下で乾燥させた。収量＝２４６．７ｇ（３５％）。
【０１１２】
５Ｌのフラスコに、イソキノリン−１−オル（２．３５ｍｏｌ、３４１．０ｇ）、並びに１７０５ｍＬの水：酢酸＝１：４の混合物を添加した。反応混合物を６０℃に加熱した。水：酢酸＝１：４の１７０５ｍＬの混合物に、硝酸の溶液（７．０４ｍｏｌ、４４３．０ｍＬ）を３時間以上にわたり滴下して添加した。硝酸を添加している間、６８〜７０℃に反応液温度を維持した。３時間後、反応液を室温に冷却させた。反応混合液に水（５５６４ｍＬ）を添加し、濾過した。水（１ｌ）でケーキ状物をリンスし、５０℃で真空乾燥させた。収量＝１９６．８ｇ（４４％）。
【０１１３】
Ｎ２インレット、コンデンサ及び熱電対を有する２Ｌのフラスコに、１−ヒドロキシ−４−ニトロイソキノリン（８８０．３ｍｍｏｌ、１６７．４ｇ）及びＰＯＣｌ３（４．９５ｍｏｌ、４６０ｍＬ）を添加した。得られたスラリーを１００℃で約１時間加熱した。ロータリーエバポレーターを使用し、反応混合液を濃縮して乾燥させた。残余物を１，２−ジクロロエタン（４０２ｍＬ）中にスラリー化し、１５℃に冷却させた。３０℃未満にポット温度を維持しながら、ｉ−ＰｒＯＨ（１０１５ｍＬ）を滴下して添加した。反応混合物を２０℃で２時間、更に１０℃で１時間撹拌した。反応混合物を濾過し、イソプロピルアルコール（１００ｍＬ）でケーキ状物をリンスした。減圧下、５０℃で乾燥させた。収量＝１１８．５ｇ（６５％）。
【０１１４】
３Ｌの３首の丸底フラスコに、１−メチルシクロプロパンカルボン酸エチルエステル（４０５．０ｇ、３．１６ｍｏｌ）、５Ｎ水酸化ナトリウム（１．０Ｌ、５．００ｍｏｌ）及びメタノール（４００．０ｍＬ、９．８８ｍｏｌ）を添加した。５０℃〜６０℃で５時間反応混合物を加熱し、一晩かけて室温に冷却させた。有機溶媒を除去し、ＭＴＢＥ（２×５００ｍＬ）で塩基性溶液を抽出した。６００ｍＬの濃塩酸を使用して水溶液のｐＨをｐＨ１に調節した。ＭＴＢＥ（４×５００ｍＬ）で抽出した。有機層を混合し、塩化ナトリウム水で洗浄し、硫酸マグネシウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で溶媒を除去した。残余物を凝固させ、１００ｍＬのヘプタンを添加し、０〜５℃で得られたスラリーを撹拌した。スラリーを濾過し、得られた固体を減圧下で乾燥させた。濾過液を濃縮し、アイスバス中で冷却し、更なる白色固体材料を得た。混合し、白色固体として１−メチルシクロプロパンカルボン酸の２６５ｇ（８４％）を得た。
【０１１５】
オーバーヘッドスターラーを備える５Ｌの３首の丸底フラスコに、１−メチルシクロプロパンカルボン酸（２６０．０ｇ、２．６０ｍｏｌ）、２−ブタノン（２．５Ｌ、２７．９２ｍｏｌ）及びＮ−メチルモルホリン（３２５．０ｍＬ、２．９５ｍｏｌ）を添加した。０℃で混合物を撹拌し、３０分にわたり２−クロロ−４，６−ジメトキシ−［１，３，５］トリアジン（５１０．０ｇ、２．８６ｍｏｌ）を徐々に添加した。０℃で１５分間、更に常温で２時間撹拌を継続させた。得られたＮメチルモルホリン塩酸塩を濾過し、２×２００ｍＬの２−ブタノンでリンスした。濾過水を濃縮し、１５００ｍＬのＴＨＦ中に残余物を溶解させ、溶液Ａを得た。
【０１１６】
５Ｌの３首の丸底フラスコに、２Ｌの炭酸カリウム（５５０．０ｇ、３．９４ｍｏｌ）水溶液を添加した。４−ヒドロキシピペリジン（２７５．０ｇ、２．６６ｍｏｌ）を添加し、溶液Ｂを調製した。
【０１１７】
氷水浴中で溶液Ｂを冷却し、溶液Ａを滴下して添加した。冷バスを取り除で、室温で２時間反応混合物を撹拌した。減圧下で有機溶媒を除去した。ジクロロメタン（６×２Ｌ）を用い、残留している塩基性水溶液を抽出した。有機層を混合し、１．５Ｌの塩化ナトリウム水及び２００ｍＬの飽和濃塩酸混合液で洗浄した。ジクロロメタン（３×１Ｌ）で酸性水溶液を抽出した。有機層を混合し、５００ｇの硫酸マグネシウム及び１００ｇの炭酸カリウムを用いて一晩乾燥させた。乾燥剤を濾過して除去し、残留溶媒が約５００ｍＬとなるまで溶媒を除去した。ヘプタンを１Ｌ添加し、結晶化が開始するまで溶媒を除去した。固体をフィルター濾過し、ヘプタンで十分洗浄し、減圧下で乾燥させ、（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（１−メチル−シクロプロピル）−メタノンの白い結晶状固体３３０ｇ、６９％を得た。
【０１１８】
オーバーヘッドスターラー、滴下漏斗及び熱電対を備える５Ｌのモートン型フラスコに、水素化ナトリウム（３８．４０ｇ、９６０．０９ｍｏｌ）及びＴＨＦ（１．５４Ｌ、１８．９２ｍｏｌ）を添加した。数分間撹拌し、（４−ヒドロキシ−ピペリジン−１−イル）−（１−メチル−シクロプロピル）−メタノン（１４９．００ｇ、８１３．０９ｍｏｌ）を添加した。０．５時間撹拌した。１時間にわたり１−クロロ−４−ニトロ−イソキノリン（１５４．００ｇ、７３８．２４ｍｏｌ）のＴＨＦ（１．５４Ｌ、１８．９２ｍｏｌ）中溶液を添加した。室温で２時間、４０℃で６時間反応混合物を撹拌し、一晩かけて室温に冷却した。反応混合物に水（５００ｍＬ、２７．７８ｍｏｌ）を滴下して添加した。激しく撹拌している水（２．５Ｌ、１３８．８９ｍｏｌ）とＭＴＢＥ（３．０８Ｌ、２５．９２ｍｏｌ）の混合物に反応混合物を添加してクエンチした。層を分離し、水（３．０８Ｌ、１７０．９７ｍｏｌ）で有機層を洗浄し、硫酸ナトリウム（１４２．００ｇ、９９９．７０ｍｏｌ）を通じて乾燥させた。乾燥剤を濾過して除去し、濾過液＃１を得た。
【０１１９】
上記手順を繰り返し、濾過液＃２を得た。濾過液＃１及び＃２を混合した。約１．５Ｌの残量となるまで、減圧下（〜１５０ｍｍ）で溶媒を除去し、２０〜２８℃の蒸発温度で蒸留液を回収した。蒸留フラスコにイソプロピルアルコール（４．６２Ｌ、６０．４３ｍｏｌ）を添加し、減圧（〜１２０ｍｍ）下で蒸留を再開し、約１Ｌの残量となるまで３５〜４４℃の蒸発温度で蒸留液を回収した。残留しているスラリーを氷上で一晩冷却した。固体をフィルターに通し、冷却イソプロピルアルコール（３００．００ｍＬ、３．９２ｍｏｌ）、更に３×１００ｍＬのヘプタン（３００．００ｍＬ、２．０５ｍｏｌ）でリンスした。減圧下、４０℃で一晩固体を乾燥させ、（１−メチル−シクロプロピル）−［４−（４−ニトロ−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−メタノン（橙色固体、３６８ｇ、合計７２％）を得た。
【０１２０】
３ガロンオートクレーブに、（１−メチル−シクロプロピル）−［４−（４−ニトロ−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−メタノン（３６８．０ｇ、１．０４ｍｏｌ）、ＴＨＦ（４．４２Ｌ、５４．３２ｍｏｌ）及び５％Ｐｄ／炭素（４０．５０ｇ、１９．０３ｍｏｌ、乾燥）を充填した。オートクレーブを密閉し、５０ｐｓｉとなるまで水素を導入した。室温で４．５時間、５０ｐｓｉの水素雰囲気下で１０００回転／分で内容物を撹拌した。フィルター濾過し、更にＴＨＦ（２．０Ｌ、２４．５８ｍｏｌ）でリンスした。４０℃で１時間、濾過液をカーボン（２０〜４０メッシュ、４２．００ｇ）処理し、加熱した。更にカーボン（６０メッシュ、４７．００ｇ）を添加し、１時間加熱を継続させた。ミクロ繊維ペーパー及びＨｙｆｌｏ  Ｓｕｐｅｒ  Ｃｅｌ（登録商標）のベッドでカーボンを濾過し、最小量のＴＨＦでリンスした。溶媒を除去し、暗いオレンジ−赤色の油状物／泡状物として［４−（４−アミノ−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−（１−メチル−シクロプロピル）−メタノン（３４８ｇ、１０３％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ３）：δ０．５９（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）０．９６（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）１．３４（ｓ、３Ｈ）１．８８−１．９４（ｍ、２Ｈ）２．０６−２．１０（ｍ、２Ｈ）３．６１−３．７０（ｍ、２Ｈ）３．９３−４．００（ｍ、２Ｈ）５．４８−５．５０（ｍ、１Ｈ）７．５２（ｓ、１Ｈ）７．５８（ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）７．７３（ｔ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）７．８１（ｄ、Ｊ＝７．０Ｈｚ、１Ｈ）８．２７（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）。
【０１２１】
調製２４：［４−（４−アミノ−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−（２−フルオロ−フェニル）メタノン
【化２４】
2009513639.tif 000032
【０１２２】
４−（４−ニトロ−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（９．６８ｇ、２５．９ｍｍｏｌ、０℃）の冷却ＤＣＭ（１００ｍＬ）中溶液に、ＴＦＡ（８０ｍＬ）を添加した。２２℃で２時間撹拌し、減圧下で溶媒を除去した。ＤＣＭ中に残余物を溶解させ、１Ｎ水酸化ナトリウムで処理し、ｐＨ〜１４とした。水性相を単離し、ＤＣＭで２度抽出した。有機相を混合し、無水硫酸ナトリウムで乾燥させた。溶媒を除去し、（４−ニトロ−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン（７．０６ｇ（９９％の収率）、ＥＳ＋（ｍ／ｚ）２７４．３［Ｍ＋Ｈ］）を得た。
【０１２３】
２２℃で一晩、４−（４−ニトロ−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン（４．０ｇ、１４．６ｍｍｏｌ）、２−フルオロ安息香酸性酸（２．４５ｇ、１７．５ｍｍｏｌ）ＤＣＣ（３．６ｇ、１７．５ｍｍｏｌ）及びＨＯＢｔ（２．３７ｇ、１７．５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（１００ｍＬ）中の反応混合液を撹拌した。濾過し、濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチルで溶出し、黄色の固体として（２−フルオロ−フェニル）−［４−（４−ニトロ−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−メタノンを得た（６．８２ｇ（９２％の収率）ＥＳ＋（ｍ／ｚ）３９６．３［Ｍ＋Ｈ］）。
【０１２４】
水素雰囲気下、（２−フルオロ−フェニル）−［４−（４−ニトロ−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−メタノン（５．８５ｇ、１４．８ｍｍｏｌ）及びパラジウム／カーボン（１０％、２．９ｇ）のメタノール（２５０ｍＬ）中の懸濁液を一晩撹拌した。濾過し、触媒を除去した。濾過液を濃縮し、淡黄色の固体（４．７ｇ（８７％の収率）ＥＳ＋（ｍ／ｚ）３６６．３［Ｍ＋Ｈ］）を得た。
【０１２５】
上記の方法と実質的に同様の方法で以下の化合物を調製した。
【表７】
2009513639.tif 000033
【０１２６】
調製２６：４−ニトロ１−ピペラジン−１−イル−イソキノリン
【化２５】
2009513639.tif 000034
【０１２７】
１−クロロ−４−ニトロ−イソキノリン（２．５ｇ、１２ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１００ｍＬ）中のスラリーを固体ピペラジン（５．２ｇ、６０ｍｍｏｌ）で処理した。６０℃で一晩、得られた黄色の混合物を加熱した。常温に冷却した後、酢酸エチル及び飽和重炭酸ナトリウム水溶液との間に反応混合物を分離させた。ＭｅＯＨ、ジクロロメタン及び酢酸エチルを添加し、全ての混合物を濾過し、明るい黄色の固体を得た。（２．１５ｇ、６９％、ＬＣＭＳ  ＥＳ＋（ｍ／ｚ）２５９［Ｍ＋Ｈ］）。
【０１２８】
調製２７：シクロプロピル−［４−（４−ニトロ−イソキノリン−１−イル）−ピペラジン−１−イル］−メタノン
【化２６】
2009513639.tif 000035
【０１２９】
４−ニトロ−１−ピペラジン−１−イル−イソキノリン（調製２６、５１７ｍｇ、２ｍｍｏｌ）、シクロプロパンカルボン酸（２５８ｍｇ、３ｍｍｏｌ）及び触媒ＤＭＡＰ（２４ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）中の溶液又はスラリーを、ＥＤＣＩ（５７５ｍｇ、３ｍｍｏｌ）で処理した。得られた混合物を室温で一晩激しく撹拌し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウム上で有機層を乾燥させ、減圧下で濃縮した。残余物を０〜２％  ２Ｍのアンモニア−メタノール／ジクロロメタンの勾配、及び０−７０％の酢酸エチル／ヘキサンの勾配の２つの勾配を用いたシリカゲルクロマトグラフィで精製した後、黄色の固体を得た（５１３ｍｇ（７９％の収率）、ＬＣＭＳ  ＥＳ＋（ｍ／ｚ）３２７［Ｍ＋Ｈ］）。
【０１３０】
上記の方法と実質的に同様の方法で以下の化合物を調製した。
【表８】
2009513639.tif 000036
【０１３１】
調製３：１［４−（４−アミノ−イソキノリン−１−イル）−ピペラジン−１−イル］−シクロプロピル−メタノン
【化２７】
2009513639.tif 000037
【０１３２】
シクロプロピル−［４−（４−ニトロ−イソキノリン−１−イル）−ピペラジン−１−イル］−メタノン（調製２７、５１３ｍｇ、１．５７ｍｍｏｌ）及び５％のパラジウム／炭素（９１ｍｇ）の酢酸エチル（５０ｍＬ）中のスラリーを、６０ｐｓｉの水素雰囲気下、常温でＰａｒｒシェーカに充填した。８時間後、反応混合物を濾過し、減圧下で濃縮し、茶色のフォーム状物を得た。（収量を定量、ＬＣＭＳ  ＥＳ＋、（ｍ／ｚ）２９７［Ｍ＋Ｈ］）。
【０１３３】
上記の方法と実質的に同様の方法で以下の化合物を調製した。
【表９】
2009513639.tif 000038
【０１３４】
調製３５：［４−（４−アミノ−イソキノリン−１−イル）−ピペラジン−１−イル］−（２−フルオロ−フェニル）−メタノン
【化２８】
2009513639.tif 000039
【０１３５】
ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１０ｇ、５３．７ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（３００ｍＬ）中の溶液に、トリエチルアミン（１５．１ｍＬ、１０７．４ｍｍｏｌ）及び２−フルオロベンゾイル塩化物（６．４ｍＬ、５３．７ｍｍｏｌ）を添加した。室温で一晩混合物を撹拌した。次に水（２００ｍＬ）を添加し、有機層を分離し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で溶媒を蒸発させ、１７．３ｇの４−（２−フルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）３０９［Ｍ＋Ｈ］
【０１３６】
４−（２−フルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１６．３ｇ、５３ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（１００ｍＬ）中の溶液に、４ＭのＨＣｌの１，４−ジオキサン（４０ｍＬ、１５９ｍｍｏｌ）中の溶液を添加し、室温で一晩反応混合物を撹拌した。得られた白い懸濁液にＥｔ２Ｏを添加し、減圧下で溶媒を蒸発させ、（２−フルオロ−フェニル）−ピペラジン−１−イル−メタノン塩酸塩１２．６ｇを得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）２０９［Ｍ＋Ｈ］。
【０１３７】
（２−フルオロ−フェニル）−ピペラジン−１−イル−メタノン（３．１６ｇ、１２．９ｍｍｏｌ）及びＫ２ＣＯ３（８．９ｇ、６４．５ｍｍｏｌ）を、１−クロロ−４−ニトロイソキノリン（２．８５ｇ、１３．７ｍｍｏｌ）のアセトニトリル（１００ｍＬ）中溶液に添加し、２４時間撹拌した。不溶性の固体をフィルターに通し、ＡｃＯＥｔでケーキ状物を洗浄した。減圧下で溶媒を蒸発させ、残余物を得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、２０〜９０％  ヘキサン：ＡｃＯＥｔで溶出し、固体として３．７２ｇの（２−フルオロ−フェニル）−［４−（４−ニトロ−イソキノリン−１−イル）−ピペラジン−１−イル］−メタノンを得た。ＬＣＭＳ  ＥＳ＋（ｍ／ｚ）３８１．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１３８】
Ｎａ２Ｓ２Ｏ４（６．８７ｇ、３９．４ｍｍｏｌ）、更に３２％  ＮＨ４ＯＨ（１５ｍＬ）を、（２−フルオロ−フェニル）−［４−（４−ニトロ−イソキノリン−１−イル）−ピペラジン−１−イル］−メタノン（３ｇ、７．８９ｍｍｏｌ）の１：１＝ＴＨＦ：Ｈ２Ｏの混合物１７０ｍＬを添加し、９０分間撹拌した。水で希釈し、ＡｃＯＥｔで数回抽出した。有機相を連結し、飽和塩化ナトリウム水で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４を通じて乾燥させ、減圧下で蒸発させ、固体として標題化合物１．８ｇを得た。ＬＣＭＳ  ＥＳ＋（ｍ／ｚ）３５１．２［Ｍ＋Ｈ］
【０１３９】
調製３６：１−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−３−［１−（ピペリジン−４−イルオキシ）−イソキノリン−４−イル］−尿素  ジヒドロクロライド
【化２９】
2009513639.tif 000040
【０１４０】
７ｍＬの無水ＤＭＳＯ中に、［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製１８、３．２０ｇ、７．９４ｍｍｏｌ及び２．０当量）及び４−（４−アミノ−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（調製２２、１．３７ｇ、３．９７ｍｍｏｌ、１．０ｊ当量）を溶解させ、ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＰＥＡ、１．３６ｍＬ、７．９４ｍｍｏｌ、２．０当量）を添加し、封止した試験管中、８０℃で２０時間撹拌しながら加熱した。ジクロロメタン及びアイス水の１：１（ｖ／ｖ）混合物に、上記溶液を注入した。ジクロロメタン（２×５０ｍＬ）で水溶性相を抽出し、水（２×５０ｍＬ）及び塩化ナトリウム水溶液（１００ｍＬ）で混合有機層を洗浄した。硫酸ナトリウム上で有機溶液を乾燥させ、減圧下で蒸発させた。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、１５％〜８０％のＥｔＯＡｃ／ヘキサンの勾配で溶出し、純粋な泡状のクリームとして４−（４−｛３−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−ウレイド｝−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル  １．４０ｇを得た。５９％の収率。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）  ５９７．４［Ｍ＋Ｈ］
【０１４１】
４Ｍ  ＨＣｌ／ジオキサン（２．４ｍＬ、９．３６ｍｍｏｌ）を、４−（４−｛３−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−ウレイド｝−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．４ｇ、２．３４ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）中溶液に室温で添加し、一晩撹拌した。減圧下で溶媒を蒸発させ、白色固体として標題化合物（１．３ｇ）を得た。（定量分析：ＥＳ＋（ｍ／ｚ）：４９７．４（Ｍ＋Ｈ））。
【０１４２】
調製３７：塩酸１−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−３−［１−（ピペリジン−４−イルオキシ）−イソキノリン−４−イル］−尿素
【０１４３】
４−（４−アミノ−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（調製２２、２．９ｍｍｏｌ、１．０ｇ）の４ｍＬのＤＭＳＯ中溶液に、［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸  ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製２７、２．７ｍｍｏｌ、１．２ｇ）及びＤＩＰＥＡ（２．９ｍｍｏｌ、０．５ｍＬ）を添加し、８５℃で一晩撹拌した。冷却し、水を添加し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を混合し、飽和塩化ナトリウム水で洗浄した。硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残余物を得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／酢酸エチル勾配（１５〜７０％）で溶出し、４−（４−｛３−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−ウレイド｝−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。ＬＣＭＳ  ＥＳ＋（ｍ／ｚ）６３５［Ｍ＋Ｈ］
【０１４４】
４−（４−｛３−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−ウレイド｝−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．１ｍｍｏｌ、０．６ｇ）を撹拌し、５ｍＬのジクロロメタン及び４．０Ｍ  塩化水素／ジオキサン（５．３ｍｍｏｌ、１．３ｍＬ）中に、室温で一晩かけて溶解させた。減圧下で濃縮した。形成された白色固体をジエチルエーテルで分散させた。ＬＣＭＳ  ＥＳ＋（ｍ／ｚ）５３５［Ｍ＋Ｈ］
【０１４５】
上記の方法と実質的に同様の方法で以下の化合物を調製した。
【表１０】
2009513639.tif 000041
【０１４６】
調製４０：１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３イル）−３−［１（ピペリジン−４−イルオキシ）−イソキノリン−４−イル］−尿素
【化３０】
2009513639.tif 000042
【０１４７】
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸  ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製１７、５８９ｍｇ、１．４５６ｍｍｏｌ）及び４−（４−アミノ−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（調製２２、５００ｍｇ、１．４５６ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（５ｍＬ）中の溶液に、５分間窒素ガスでバブリングした。次に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（５０７μＬ，２．９１２ｍｍｏｌ）を添加した。６０℃で６時間撹拌させ、次に一晩かけて室温に冷却した。２００ｍＬのＣＨ２Ｃｌ２及び１００ｍＬの蒸留水との間に反応混合物を分離させた。水（１×１００ｍＬ）で洗浄し、水性層を混合し、ＣＨ２Ｃｌ２（３×５０ｍＬ）で抽出した。有機層を混合し、飽和塩化ナトリウム（２×１００ｍＬ）水で洗浄した。混合有機相を硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチルで溶出し、茶色の固体として４−｛４−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−イソキノリン−１−イルオキシ｝−ピペリジン−１−カルボン酸  ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。ＬＣＭＳ  ＥＳ＋（ｍ／ｚ）  ５９９．５［Ｍ＋Ｈ］
【０１４８】
４−｛４−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−イソキノリン−１−イルオキシ｝−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（８２０ｍｇ、１．３７ｍｍｏｌ）の冷却ジクロロメタン（５０ｍＬ）中の溶液に、トリフルオロ酢酸（１５ｍＬ）を添加した。２２℃で１．５時間、反応混合物を撹拌した。溶媒の除去後、残余物を飽和ＮａＣｌ／１Ｎ水酸化ナトリウム溶液（５０ｍＬ）で処理し、ジクロロメタンで５回（各５０ｍＬ）で抽出した。硫酸ナトリウム上で混合有機相を乾燥させた。混合物を濾過し、残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ジクロロメタン及びメタノールで溶出し、白色固体（５１５ｍｇ（７５％の収率）、ＬＣＭＳ  ＥＳ＋（ｍ／ｚ）４９９．５［Ｍ＋Ｈ］）を得た。
【０１４９】
上記の方法と実質的に同様の方法で以下の化合物を調製した。
表３
【表１１】
2009513639.tif 000043
【０１５０】
＜実施例１＞：１−［１−（４−シクロプロパンカルボニル−ピペラジン−１−イル）−イソキノリン−４−イル］−３−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素
【化３１】
2009513639.tif 000044
【０１５１】
［４−（４−アミノ−イソキノリン−１−イル）−ピペラジン−１−イル］−シクロプロピル−メタノン（調製２９、２１４ｍｇ、０．７２２ｍｍｏｌ）、［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製１８、２９０ｍｇ、０．７２２ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．２６４ｍＬ）の４ｍＬのＤＭＳＯ中の溶液を、６０℃で５時間加熱した。得られた混合物を常温に冷却し、水を添加した。沈殿物を濾過し、水更にペンタンでリンスし、真空オーブン中で６０℃で乾燥させた。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、０〜２％の２Ｍのアンモニア−メタノール／ジクロロメタンの勾配で溶出し、生成物（ＬＣＭＳで９３％の純度）２０６ｍｇを得た。
【０１５２】
少量のジクロロメタン及びＭｅＯＨに溶解させ、２Ｍのメタンスルホン酸の１当量／ジクロロメタンで処理し、窒素流中で濃縮した。数ｍＬのＤＭＳＯ／ＭｅＯＨ／水中に、得られた固体を分散させ、濾過し、フリーの塩基（ＬＣＭＳ  ＥＳ＋（ｍ／ｚ）、５５０［Ｍ＋Ｈ］）１４５ｍｇを得た。
【０１５３】
更にＸｔｅｒｒａ  ３０×７５ｍｍ  ５ミクロンＭＳ  Ｃ１８カラムを用いて逆相クロマト精製（１０ｍＭの重炭酸アンモニウム水溶液／アセトニトリルの勾配を使用）した後、上記の方法と実質的に同様の方法に従い、以下の化合物を調製した。
【表１２】
2009513639.tif 000045
【０１５４】
＜実施例３＞：１−｛１−［４−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペラジン−１−イル］−イソキノリン−４−イル｝−３−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素
【０１５５】
［４−（４−アミノ−イソキノリン−１−イル）−ピペラジン−１−イル］−（２，６−ｄｉフルオロ−フェニル）−メタノン（調製３２、約０．８８ｍｍｏｌ）、［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸  ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製１８、３６２ｍｇ、０．９ｍｍｏｌ）及びジイソプロピルエチルアミン（０．３１４ｍＬ）の５ｍＬのＤＭＳＯ中の溶液を、６０℃で一晩加熱した。得られた混合液を室温に冷却し、水及び酢酸エチルとの間に分離させ、飽和塩化ナトリウム水を使用して相分離を補助した。酢酸エチルで水性層を抽出し、硫酸ナトリウム上で混合有機層を乾燥させた。減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、２Ｍのアンモニア−メタノール／ジクロロメタンの勾配（０〜２％）で溶出した。少量のジクロロメタン及びＭｅＯＨ中に溶解させ、２Ｍのメタンスルホン酸の１当量／ジクロロメタンで処理し、窒素流中で濃縮した。１０ｍＭの重炭酸アンモニウム水溶液／アセトニトリルの勾配を用い、Ｘｔｅｒｒａ  ３０×７５ｍｍの５ミクロンＭＳ  Ｃ１８カラムで更に逆相クロマト精製し、フリーの塩基７３ｍｇを得た。ＬＣＭＳ  ＥＳ＋（ｍ／ｚ）  ６２２［Ｍ＋Ｈ］）。
【０１５６】
上記と実質的に類似した方法を利用して、以下の化合物のフリー塩基を調製した。次に１ｍＬのＤＣＭに０．１３ｇを溶解し、１Ｎ  メタンスルホン酸のＤＣＭ（１当量）中の溶液を添加した。減圧して溶媒を蒸発させ、以下の化合物０．１５ｇを得た。
【表１３】
2009513639.tif 000046
【０１５７】
＜実施例５＞：１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛１−［１−（１−メチル−シクロプロパンカルボニル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−イソキノリン−４−イル｝−尿素
【０１５８】
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸  ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製１７、２０３ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）及び［４−（４−アミノ−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−（１−メチル−シクロプロピル）メタノン（１６３ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（２ｍＬ）中の溶液に、５分間窒素ガスでバブリングした。次に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２００μＬ、１．１ｍｍｏｌ）を添加した。一晩６０℃で撹拌した後、ジクロロメタン（１５ｍＬ）及び飽和重炭酸ナトリウム（５０ｍＬ）溶液との間に反応混合物を分離させた。水性相を単離し、ジクロロメタンで２回（各１５ｍＬ）を抽出した。硫酸ナトリウム上で混合有機相を乾燥させ、濃縮した。残余物をヘキサン及び酢酸エチルによりシリカゲルクロマトグラフィで精製し、白色固体（２２６ｍｇ（７８％の収率）、ＥＳ＋（ｍ／ｚ）５８１．３［Ｍ＋Ｈ］）を得た。
【０１５９】
上記と実質的に類似した方法を利用して、以下の化合物のフリー塩基を調製した。次に１ｍＬのＤＣＭ中に溶解させ、１Ｎ  メタンスルホン酸のＤＣＭ（１当量）中の溶液を添加した。減圧下で溶媒を蒸発させ、以下の化合物を得た。
【表１４】
2009513639.tif 000047
【０１６０】
＜実施例１１＞：１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛１−［４−（２，２−ジメチル−プロピオニル）−ピペラジン−１−イル］−イソキノリン−４−イル｝−尿素  メシラート
【０１６１】
１８ｍＬのアセトニトリル中に溶解させた１−［４−（４−アミノ−イソキノリン−１−イル）−ピペラジン−１−イル］−２，２−ジメチル−プロパン−１−オン（調製３、０．９ｍｍｏｌ、０．３ｇ）を撹拌した。炭酸カリウム（０．９９ｍｍｏｌ、０．１ｇ）及び１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−カルバミン酸  ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製１７、０．９ｍｍｏｌ、０．４ｇ）を添加し、室温で一晩撹拌した。次に１ｍＬのＤＭＦを添加し、６０℃で２４時間撹拌した。冷却し、水を添加し、ジクロロメタンで抽出した。有機層を混合し、飽和塩化ナトリウム水で洗浄し、硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮し、残余物を得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／酢酸エチルの勾配（５％〜２０％）で溶出した。得られた油状物にジクロロメタンを添加し、形成された沈殿物を濾過し、１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛１−［４−（２，２−ジメチル−プロピオニル）−ピペラジン−１−イル］−イソキノリン−４−イル｝−尿素を得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）  ５６８［Ｍ＋Ｈ］）。
【０１６２】
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛１−［４−（２，２−ジメチル−プロピオニル）−ピペラジン−１−イル］−イソキノリン−４−イル｝−尿素を室温で撹拌した。１Ｎメタンスルホン酸のジクロロメタン中の溶液を添加し、標題化合物を形成させた。ＬＣＭＳ  ＥＳ＋（ｍ／ｚ）５６８［Ｍ＋Ｈ］
【０１６３】
＜実施例１２＞：１−｛１−［１−（１−メチル−シクロプロパンカルボニル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−イソキノリン−４−イル｝−３−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素  メシラート
【化３２】
2009513639.tif 000048
【０１６４】
Ｎ２雰囲気下、フラスコ中に、ＥＤＣＩ（０．１４７ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（０．１０ｇ、０．７７ｍｍｏｌ）、１−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−３−［１−（ピペリジン−４−イルオキシ）−イソキノリン−４−イル］−尿素  ジヒドロクロライド（調製３、０．１６ｇ、０．６４ｍｍｏｌ）及び１−メチル−１−シクロプロピルカルボン酸（１．１当量）を添加した。ジクロロメタン（５ｍＬ）、続いてＤＩＰＥＡ（０．２２ｍＬ、１．２８ｍｍｏｌ）を添加し、室温で一晩撹拌させた。溶媒を蒸発させ、残余物を得た。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン：ＡｃＯＥｔ  ５０〜１００％で溶出し、フリーベースとして１−｛１−［１−（１−メチル−シクロプロパンカルボニル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−イソキノリン−４−イル｝−３−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素を得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）  ５７９．３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１６５】
１ｍＬのジクロロメタン中に０．３ｇの１−｛１−［１−（１−メチル−シクロプロパンカルボニル）−ピペリジン−４−イルオキシ］イソキノリン−４−イル｝−３−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素を溶解させ、１Ｎ  メタンスルホン酸のジクロロメタン中溶液３２１μＬを添加した。減圧下で溶媒を蒸発させ、白色固体として標題化合物０．３５７ｇを得た（定量的分析）ＥＳ＋（ｍ／ｚ）５７９．３（Ｍ＋Ｈ）。
【０１６６】
上記の方法と実質的に同様の方法で以下の化合物を調製した。
【表１５−１】
2009513639.tif 000049
【表１５−２】
2009513639.tif 000050
【０１６７】
＜実施例２３＞：４−｛４−［３−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−ウレイド］−イソキノリン−１−イルオキシ｝−ピペラジン−１−カルボン酸  アミド
【化３３】
2009513639.tif 000051
【０１６８】
１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−［１（ピペリジン−４−イルオキシ）−イソキノリン−４−イル］−尿素（調製３９、１００ｍｇ、０．２ｍｍｏｌ）及びカルバミン酸フェニルエステル（３２．９ｍｇ、０．２４ｍｍｏｌ）のＤＭＳＯ（１ｍＬ）中の溶液に、５分間窒素ガスバブリングした。次に、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（２００μＬ、１．１ｍｍｏｌ）を添加した。８５℃で一晩撹拌した後、酢酸エチル（１５ｍＬ）及び飽和重炭酸ナトリウム（５０ｍＬ）溶液との間に反応混合物を分離させた。水性相を単離し、酢酸エチルで２度（各１５ｍＬ）抽出した。硫酸ナトリウム上で混合有機相を乾燥させ、濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン及び酢酸エチルで溶出し、白色固体（４０ｍｇ（３７％の収率）、ＥＳ＋（ｍ／ｚ）５４２．３［Ｍ＋Ｈ］）を得た。
【０１６９】
＜実施例２４＞：１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛１−［１−（２−フルオロ−ベンゾイル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−イソキノリン−４−イル｝−尿素  メシラート
【０１７０】
２２℃で１８時間、１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３イル）−３−［１（ピペリジン−４−イルオキシ）−イソキノリン−４−イル］−尿素（調製３９、１１０ｍｇ、０．２２１ｍｍｏｌ）、２−フルオロ安息香酸（３７．１ｍｇ、０．２６５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（３５．８ｍｇ、０．２６５ｍｍｏｌ）及びＤＣＣ（５４．６ｍｇ、０．２６５ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３ｍＬ）中の反応混合液を撹拌した。混合物を濾過し、濾過液をＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）を含む分離漏斗に注入した。１Ｎ  ＮａＯＨ（２×２０ｍＬ）で洗浄し、水性層を混合し、ＣＨ２Ｃｌ２（２×５０ｍＬ）で抽出し、飽和塩化ナトリウム水（１×５０ｍＬ）で混合有機層を洗浄した。硫酸ナトリウム上で混合有機相を乾燥させ、混合物を濾過し、残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ジクロロメタン及びメタノールで溶出し、白色固体（１０９．８ｍｇ（８０％の収率）ＥＳ＋（ｍ／ｚ）６２１．５［Ｍ＋Ｈ］）を得た。
【０１７１】
ジクロロメタン（２ｍＬ）及びメタノール（２ｍＬ）中に０．１０７ｇの１−（５−ｔｅｒｔ−ブチル−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル）−３−｛３−クロロ−１−（２−フルオロ−ベンゾイル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−イソキノリン−４−イル）｝−尿素を溶解させ、メタンスルホン酸（１６．５６ｍｇ、０．１７２３ｍｍｏｌ）を添加した。減圧下で溶媒を蒸発させ、白色固体として標題化合物を得た（１１９．７ｍｇ、９７％，ＥＳ＋（ｍ／ｚ）６２１．５［Ｍ＋Ｈ−ＭｓＯＨ］
【０１７２】
上記の方法と実質的に同様の方法で以下の化合物を調製した。
【表１６−１】
2009513639.tif 000052
【表１６−２】
2009513639.tif 000053
【表１６−３】
2009513639.tif 000054
【表１６−４】
2009513639.tif 000055
【０１７３】
＜実施例４０＞：１−｛１−［１−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−イソキノリン−４−イル｝−３−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素
【０１７４】
５ｍＬのジクロロメタン中で、１−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−３−［１−（ピペリジン−４−イルオキシ）−イソキノリン−４−イル］−尿素塩酸塩（調製３７、０．６ｍｍｏｌ、０．３ｇ）、２，６−ジフルオロベンゾイル塩化物（０．６ｍｍｏｌ、０．０７ｍＬ）及びトリエチルアミン（１．７ｍｍｏｌ、０．２ｍＬ）を室温で一晩撹拌した。ジクロロメタン中に若干の水及び抽出物を添加した。飽和塩化ナトリウム水で有機層を洗浄した。無水硫酸ナトリウムを通じて乾燥させ、減圧下で濃縮した。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、ヘキサン／酢酸エチル（３０％〜７０％）を溶出液として用い、溶出させた。ＬＣＭＳ  ＥＳ＋（ｍ／ｚ）６７５［Ｍ＋Ｈ］
【０１７５】
上記の方法と実質的に同様の方法で以下の化合物を調製した。
【表１７】
2009513639.tif 000056
【０１７６】
＜実施例４５＞：１−｛１−［１−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−イソキノリン−４−イル｝−３−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素  メシラート
【０１７７】
ジクロロメタン（２ｍＬ）中に１−｛１−［１−（２，６−ジフルオロ−ベンゾイル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−イソキノリン−４−イル｝−３−［５−（２−フルオロ−１−フルオロメチル−１−メチル−エチル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素  ０．１３ｇ（０．１９ｍｍｏｌ）を溶解させ、１Ｎ  メタンスルホン酸のジクロロメタン中溶液０．１９ｍＬを添加した。減圧下で溶媒を蒸発させ、白色固体として標題化合物０．０９ｇを得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）６７５（Ｍ＋Ｈ）。
【０１７８】
上記の方法と実質的に同様の方法で以下の化合物を調製した。
【表１８】
2009513639.tif 000057
【０１７９】
＜実施例４８＞：１−｛１−［１−（１−メチル−シクロプロパンカルボニル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−イソキノリン−４−イル｝−３−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素  メシラート
【０１８０】
オーバーヘッドスターラー、熱電対及び還流濃縮器を備える１２Ｌのモートン型フラスコに、［４−（４−アミノ−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−（１−メチル−シクロプロピル）−メタノン（調製２３、３３１．００ｇ、１．０２ｍｏｌ）、ＴＨＦ（３．９７Ｌ、４８．７９ｍｏｌ）、［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−カルバミン酸  ２，２，２−トリクロロ−エチルエステル（調製１８、４１０．００ｇ、１．０２ｍｏｌ）及びＤＩＰＥ（１５９．００ｇ、１．２２ｍｏｌ）を添加した。混合物を２２時間還流させた。＜５０℃に反応液を冷却し、カーボン（Ｄａｒｃｏ  Ｇ−６０、３３．００ｇ、２．７５ｍｏｌ）で処理した。４３〜５０℃で３０分間スラリーを撹拌し、マイクロファイバーペーパー及びＨｙｆｌｏ  Ｓｕｐｅｒ  Ｃｅｌ（登録商標）（２７．００ｇ）を通じて濾過した。濾過液をシードし、沈殿の間、室温まで冷却させた。得られたスラリーを氷中にパックし、一晩撹拌した。固体をフィルター濾過し、ＴＨＦ（３００．００ｍＬ、３．６９ｍｏｌ）で洗浄し、４０℃で減圧乾燥させた。残余物をシリカゲルクロマトグラフィに供し、１：３＝アセトン／ＤＣＭ、更に３０％のアセトン／ＤＣＭで溶出し、白色固体として４０１ｇ（６８％）の１−｛１−［１−（１−メチル−シクロプロパンカルボニル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−イソキノリン−４−イル｝−３−［５−（１−メチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−尿素を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．５６（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）０．７３（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）０．８４（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）０．９２（ｔ、Ｊ＝６．０Ｈｚ、２Ｈ）１．２７（ｓ、３Ｈ）１．４１（ｓ、３Ｈ）１．７３−１．８１（ｍ、２Ｈ）１．９９−２．０８（ｍ、２Ｈ）２．４１（ｓ、３Ｈ）３．５２−３．６５（ｍ、２Ｈ）３．８３−３．９６（ｍ、２Ｈ）５．４７−５．５８（ｍ、１Ｈ）６．２２（ｓ、１Ｈ）７．３７（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、２Ｈ）７．４４（ｄ、Ｊ＝８．１Ｈｚ、２Ｈ）７．６５−７．７１（ｍ、１Ｈ）７．７８−７．８３（ｍ、２Ｈ）８．１２（ｓ、１Ｈ）８．２７（ｄ（Ｊ＝８．４Ｈｚ、１Ｈ）８．５８（ｓ、１Ｈ）８．６９（ｓ、１Ｈ）。
【０１８１】
オーバーヘッドスターラーを備える５Ｌのフラスコに、フリーの塩基（４００．００ｇ、６．９１ｍｏｌ）及びジクロロメタン（３．００Ｌ、４６．８０ｍｏｌ）を添加した。メタンスルホン酸（７２．００ｇ、７．４９ｍｏｌ）を室温で滴下して添加した。反応液を１時間撹拌させた。濾過し、減圧下で溶媒を除去した。ジエチルエーテル（４Ｌ）を添加し、一晩撹拌した。濾過し、減圧下で乾燥させ、標題化合物（４６７．８ｇ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６）：δ０．５２（ｔ、Ｊ＝２．５Ｈｚ、２Ｈ）０．７０（ｔ、Ｊ＝２．５Ｈｚ、２Ｈ）０．８０（ｔ、Ｊ＝２．５Ｈｚ、２Ｈ）０．９０（ｔ、Ｊ＝２．５Ｈｚ、２Ｈ）１．２４（ｓ、３Ｈ）１．３８（ｓ、３Ｈ）１．７６（ｂｒ、２Ｈ）２．０２（ｂｒ、２Ｈ）２．３８（ｓ、３Ｈ）２．４０（ｓ、３Ｈ）３．５５（ｂｒ、２Ｈ）３．８５（ｂｒ、２Ｈ）５．４９（ｍ、１Ｈ）６．２０（ｓ、１Ｈ）７．３４（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）７．４２（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、２Ｈ）７．６４（ｄｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）７．７７（ｓ、１Ｈ）７．７９（ｓ、１Ｈ）８．０８（ｓ、１Ｈ）８．２４（ｄ、Ｊ＝８．５Ｈｚ、１Ｈ）８．６２（ｓ、１Ｈ）８．７２（ｓ、１Ｈ）。
【０１８２】
＜実施例４９＞：１−［５−（１−フルオロメチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−３−｛１−［１−（１−メチル−シクロプロパンカルボニル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−イソキノリン−４−イル｝−尿素  メシラート
【化３４】
2009513639.tif 000058
【０１８３】
１，１’−カルボニルジイミダゾール（１５８．６５ｍｇ、９７８．３９μｍｏｌｅｓ）のＤＣＭ中の溶液に、１ｍＬのＤＣＭに溶解させた５−（１−フルオロメチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イルアミン（１６０．００ｍｇ、６５２．２６μｍｏｌ）を徐々に添加した。４０℃で７時間混合物を撹拌した。次に［４−（４−アミノ−イソキノリン−１−イルオキシ）−ピペリジン−１−イル］−（１−メチル−シクロプロピル）−メタノン（調製２３、２１２．２５ｍｇ、６５２．２６μｍｏｌ、１．００当量）のＤＣＭ中溶液１ｍＬを添加した。混合物を一晩撹拌した。Ｎ２雰囲気下で溶媒を蒸発させた。ＨＬＢカートリッジ（６ｇ）を用い、ＮＨ４ＣＯ３／ＭｅＯＨ（１００：０〜０：１００）で第１の精製を行い、更にＨＰＬＣ（Ｋｒｏｍａｓｉｌ  Ｃ１８カラム（１００×２１．２ｍｍ、５μｍ（Ｈｉ−Ｃｈｒｏｍ）で最後の精製を行った。可動相を、水（溶媒Ａ）及びアセトニトリル（溶媒Ｂ）とし、両方ともに０．０５％のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）を含有させた。グラジェントモード：４０％のＢで２分、４０〜６０％のＢで６分、最後に９５％のＢで２分、流速：２５ｍＬ／分で操作し、固体（１９ｍｇ、５％の収率）として１−［５−（１−フルオロメチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−３−｛１−［１−（１−メチル−シクロプロパンカルボニル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−イソキノリン−４−イル｝−尿素を得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）：５９７［Ｍ＋１］。
【０１８４】
１−［５−（１−フルオロメチル−シクロプロピル）−２−ｐ−トリル−２Ｈ−ピラゾル−３−イル］−３−｛１−［１−（１−メチル−シクロプロパンカルボニル）−ピペリジン−４−イルオキシ］−イソキノリン−４−イル｝−尿素（１８．００ｍｇ、３０．１７μｍｏｌ）のジクロロメタン中溶液０．５ｍＬに、１Ｍ  メタンスルホン酸（３０．１７μｍｏｌｅｓ、３０．１７μＬ）を添加した。室温で１時間、混合物を撹拌した。窒素雰囲気下で溶媒を蒸発させ、固体（２０ｍｇ、９６％の収率）として標題化合物を得た。ＥＳ＋（ｍ／ｚ）：５９７．４．［Ｍ＋１］。
【０１８５】
ｐ３８キナーゼの阻害：
標準用液の調製
２．５ｍＬの１Ｍ  トリス−ＨＣｌ（ｐＨ７．５）、０．１ｍＬの１Ｍ  ジチオスレイトール、１．０ｍＬの１Ｍ  塩化マグネシウム及び３００μＬの１％  トリトンＸ−１００を混合し、水１００ｍＬで希釈し、キナーゼ緩衝液を調製した。このキナーゼ緩衝液８４ｍＬを１６ｍＬのＤＭＳＯと混合し、１６％のＤＭＳＯ溶液を調製した。
【０１８６】
１０２．６μＬの１０ｍＭ  ＡＴＰ水溶液、２５μＬ３３Ｐ−ＡＴＰ、及び１６３．５μＬの４ｍＭ  ＥｐｉｄｅｒｍａｌＧｒｏｗｔｈＦａｃｔｏｒＰｅｐｔｉｄｅ６６１−６８１水溶液（Ｂｉｏｍｏｌ，Ｃａｔａｌｏｇ＃Ｐ−１２１）を、５ｍＬのキナーゼ緩衝液に添加し、２００μＭのＡＴＰ溶液を調製した
【０１８７】
１５３６μＬのキナーゼ緩衝液に、９．５μＬの濃縮した酵素溶液（２５０ｎｇのｐ３８酵素／μＬキナーゼ緩衝液）を溶解し、ｐ３８キナーゼ酵素溶液を調製した。
【０１８８】
サンプル調製
Ｃｏｓｔａｒ社製９６穴マイクロタイタープレート内に、２４８μＬの１６％  ＤＭＳＯ溶液中に、各化合物のジメチルスルホキシド中の１０ｍＭストック液を２μＬ溶解させ、各試験化合物及びコントロール化合物の８０μＭ濃度の溶液を調製した。プレートを１：３で連続希釈し、Ｔｅｃａｎ  Ｇｅｎｅｓｉｓ自動液体ハンドラー上に配置した。
【０１８９】
アッセイ
連続希釈された化合物の溶液１０μＬを、Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｍｕｌｔｉｍｅｋ  ９６ウェル自働液体ハンドラーに配置したアッセイプレートに添加した。２００μＭのＡＴＰ溶液２０μＬを、Ｔｉｔｅｒｔｅｋ  Ｍｕｌｔｉｄｒｏｐ  ８−チャネル液体ハンドラーを用いて添加した。ｐ３８キナーゼ酵素溶液１０μＬを、Ｍｕｌｔｉｍｅｋを使用してアッセイプレートへ添加した。混合物を３０℃で４０分間反応させ、次にＭｕｌｔｉｄｒｏｐで調製直後の５％の結晶ＡｃＯＨ  ６０μＬを添加して反応を停止させた。この溶液８０μＬを、Ｍｕｌｔｉｍｅｋを使用して「ＭＡＰＨ」プレートへ移した。このプレートを、室温で３０分間静置し、次に調製直後の０．５％結晶ＡｃＯＨ（１×３００μＬ、２×２００μＬ）を用い、Ｔｉｔｅｒｔｅｋ  ＭＡＰ抽出機で洗浄／吸引した。プレートを吸引し、１００μＬ  ＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ−２０シンチレーション液（Ｐａｃｋａｒｄ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ社製）をＭｕｌｔｉｄｒｏｐで添加した。プレートを３０分間静置し、３３Ｐ−同位元素を、ＰＥ／Ｗａｌｌａｃ  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａ  Ｔｒｉｌｕｘシンチレーションカウンターでカウントした。
【０１９０】
実施例１２で例証した化合物を、最初に１０の濃度（２０μＭ〜１ｎＭとなるように、１：３連続希釈）で試験した。次に２５ｎＭ未満のＩＣ５０値を有する化合物を、２μＭ〜０．１ｎＭ（１：３連続希釈）の濃度で再試験した。ＩＣ５０値は、化合物ごとに非線形回帰を使用して算出した（ＩＤＢＳ  ＡｃｔｉｖｉｔｙＢａｓｅソフトウェアを使用）。基本的に上記に従い実施例１２を試験し、２２ｎＭのＩＣ５０でｐ３８キナーゼ酵素を阻害することが明らかとなった。
【０１９１】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるｐ−ＭＡＰＫＡＰＫ２の抑制
ＲＡＷ２６４．７細胞（マウス単球／大食細胞系  ＡＴＣＣ）を、ＲＰＭＩ−１６４０培地＋１０％のウシ胎児血清（ＦＢＳ）を用い９６ウェルプレート中に５０，０００の細胞／ウェルの密度で播種し、沈着させ、４８時間かけてウェルの底に付着させた。コンフルエンスとなった後、細胞を、各化合物の１０の連続希釈系列で２時間処理した。全ての試験においてコントロール化合物も含めた。２時間後にアニソマイシン（１００ｕｇ／ｍｌ）を添加し、細胞を５％のＣＯ２雰囲気下、３７℃で３０分間インキュベートした。次に細胞を固定し、過酸化水素で処理し、内在性ペルオキシダーゼを除去した。最後にプレートをＦＢＳでブロッキングし、洗浄し、抗リン酸化−ＭＡＰＫＡＰＫ２抗体（Ｔｈｒ３３４，Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｌｉｎｇ，Ｃａｔ＃３０４１）及びａｈＰ−コンジュゲート二次抗体を用いてＥＬＩＳＡアッセイを実施した。この反応では、強化された化学発光基質ａｈＰであるＦＥＭＴＯ（Ｐｉｅｒｃｅ社製）を用いた検出を行い、それにより急速な動態における発光及び高いシグナル強度がもたらされた。基本的に上記に従い、実施例１２で例証した化合物を試験した結果、７ｎＭのＩＣ５０でｐＭＡＰＫＡＰＫ２酵素の産生を阻害することが明らかとなった。
【０１９２】
基本的に上記に従い、例証した化合物を試験し、２００ｎＭ以下のＩＣ５０値を示すことが明らかとなった。以下の化合物を基本的に上記に従い試験し、以下の活性を有することが明らかとなった。
【表１９】
2009513639.tif 000059
【０１９３】
ｉｎ  ｖｉｔｒｏでＴＮＦαの抑制：
マウス腹腔マクロファージ
１ｍＬのチオグリコール酸塩ブロス（１．０Ｌの蒸留水中に、５．０ｇのイーストエキス、１５．０ｇのカシトン又はトリプチカーゼ、５．０ｇのデキストロース、２．５ｇの塩化ナトリウム、０．７５ｇのＬ−シスチン、０．５ｇのチオグリコール酸ナトリウム、１．０ｍｇのレサズリン及び０．７５ｇのアガー）を、Ｂａｌｂ／Ｃ雌マウスの腹膜空腔に注入した。注入後４日目又は５日目にマウスをと殺し、ＲＰＭＩ−１６４０培地（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）４ｍＬでｉ．ｐ．注入し、腹膜マクロファージをシリンジで吸引した。
【０１９４】
サイトカイン産生：
マウス腹膜マクロファージを血球計測板で計測し、１０％のウシ胎児血清を添加したＲＰＭＩ−１６４０培地で、９６ウェルプレート中に５×１０５細胞／ウェルとなるように調節した。２００μＬ／ウェルで９６ウェルプレートに沈着させ、少なくとも３時間、細胞をウェルの底部に付着させた。試験化合物又は標準物質のｐ３８キナーゼ阻害剤を、３７℃で１時間、８つの濃度系列を使用して前処理した（２０μＬ／ウェル）。３７℃で、１８時間、５０ｎｇ／ｍＬのリポ多糖（ＬＰＳ）及び１０Ｕ／ｍＬインターフェロン−γの混合物を用いて細胞を処理した（２０μＬ／ウェル）。処理に供された培地を回収し、Ｌｕｍｉｎｅｘ検出法を使用してＴＮＦα産生をアッセイした。
【０１９５】
ＴＮＦα／Ｌｕｍｉｎｅｘ検出アッセイ（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ  Ｋｉｔ−Ｃａｔａｌｏｇ＃１７１−Ｇ１２２２１）：
ＴＮＦα標準的なのプレミックス（１つの標準的なチューブ／２つの９６ウェルプレート）の凍結乾燥品を、滅菌水５０μＬ（５００，０００ｐｇ／ｍＬ）に溶解させて再調製した。サンプルを５秒間ボルテックスし、３０分間氷上でインキュベートし、更に使用前に５秒間ボルテックスした。１２本の一組の１．５ｍＬチューブを＃１〜＃１２として適宜ラベルし、それらのチューブに以下に示す数値で培地を添加した。（標準的な濃度は以下の通り：５０，０００、２５，０００、１２，５００、６，２５０、３，１２５、１，５６２．５、７８１．３、３９０．６、１９５．３、９７．７、４８．８及び２４．４ｐｇ／ｍＬ）。抗サイトカインをコンジュゲートしたビーズのプレミックスを３０秒間激しくボルテックスした（２５×）。抗サイトカインをコンジュゲートしたビーズを、１×Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ  Ａｓｓａｙ  Ｂｕｆｆｅｒを使用している１×濃度に希釈した。全プレートについて、ビーズのプレミックス２４０μＬを、５，７６０μＬのＢｉｏ−Ｐｌｅｘ  Ａｓｓａｙ  Ｂｕｆｆｅｒに添加した。ミリポア社製の９６ウェルフィルタープレートをブロッキングバッファでブロッキングした（１００μＬ／ウェル）。ブロッキングバッファをミリポア社製の濾過システムを使用して濾過し、更に乾燥させた。フィルタープレートを、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ  Ａｓｓａｙ  Ｂｕｆｆｅｒで、１００μＬ／ウェルで２回洗浄し、タオルドライした。１×抗サイトカイン共役ビーズを１５秒間ボルテックスし、各ウェルに５０μＬずつ添加した。これを濾過し、タオルで乾燥させた。プレートを、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ  Ｗａｓｈ  Ｂｕｆｆｅｒで、１００μＬ／ウェルで２回洗浄した。再度濾過し、タオルで乾燥させた。サンプル又はスタンダードを５０μＬずつ、各サンプルウェルに添加した。これを、６にセットした状態で遮光しながら６０秒間、更に３にセットした状態で３０分間、シェーカ上で室温でインキュベートし、更に一晩冷蔵庫で保存した。Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ  Ｗａｓｈ  Ｂｕｆｆｅｒで３回洗浄した。濾過し、タオルで乾燥させた。全てのプレートにおいてサイトカイン検出抗体を調製し（使用前〜１０分）、サイトカイン検出抗体プレミックスのストック溶液６０μＬを、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ検出抗体希釈液５９４０μＬに添加した。
【０１９６】
サイトカイン検出抗体を５０μＬ添加し、６にセットした状態で遮光しながら６０秒間、更に３にセットした状態で３０分間、シェーカ上で室温でインキュベートした。Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ  Ｗａｓｈ  Ｂｕｆｆｅｒで３回洗浄した。これを濾過し、タオルで乾燥させた。全てのプレートにおいてＳｔｒｅｐｔ−ＰＥ（使用前〜１０分）を調製し、Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ  Ａｓｓａｙ  Ｂｕｆｆｅｒ  ５９４０μＬに６０μＬ添加した。５０μＬのＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＰＥを各ウェルに添加し、６にセットした状態で遮光しながら６０秒間、更に３にセットした状態で３０分間、シェーカ上で室温でインキュベートした。Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ  Ｗａｓｈ  Ｂｕｆｆｅｒで３回洗浄した。これを濾過した。Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ  Ａｓｓａｙ  Ｂｕｆｆｅｒ  １００μＬ／ウェル中にビーズを再懸濁した。標準的な及びサンプルをＬｕｍｉｎｅｘ装置で測定した。これらの強度値を、更に４パラメータの対数回帰法（Ｂｉｏ−Ｐｌｅｘ  Ｍａｎａｇｅｒ  ２．０、Ｂｉｏ−Ｒａｄ社製）を用いて作成した１２地点に関する標準曲線（２回）に基づいてｐｇ／ｍｌ単位に変換し、ＩＣ５０を算出した。
【０１９７】
実施例１２で例証した化合物を、基本的に上記に従い試験した結果、９ｎＭ未満のＩＣ５０でｉｎ  ｖｉｔｒｏでＴＮＦαを抑制した。
【０１９８】
ｉｎ  ｖｉｖｏでのＴＮＦαの抑制
雌のＢａｌｂ／ｃマウス（６マウス／投与群）に化合物を経口投与した（３０、１０、３及び１ｍｇ／ｋｇ）。４つの投与量（０．１ｍＬ／マウスのボリュームのＰ．Ｏ．、ビヒクル：水の１％のＮａＣＭＣ／０．２５％のＴｗｅｅｎ−８０）で当該化合物を投与してから１時間後において、マウスに４００μｇ／ｋｇでＬＰＳをＩＰ注入した。ＬＰＳ曝露の１．５時間後に、マウスをイソフルランで麻酔し、血液を心臓穴から採取した。血漿中のＴＮＦａ−濃度を、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社製のＥＬＩＳＡキットを使用して測定し、投与量に対する反応ＥＤ５０を測定した。
【０１９９】
実施例１２で例証した化合物を基本的に上記に従い試験した結果、１．０ｍｇ／ｋｇのＴＭＥＤ５０で、ｉｎ  ｖｉｖｏでＴＮＦαを抑制した。最小有効量５０（Ｔｈｒｅｓｈｏｌｄ  Ｍｉｎｉｍｕｍ  Ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ  Ｄｏｓｅ（ＴＭＥＤ５０））とは、５０％以上の抑制がなされ、かつそれがコントロール／プラセボ群とは統計学的に異なるときの投与量を指す。
【０２００】
経口曝露
雄のフィッシャー３４４マウスへの経口露光により、化合物をスクリーニングした。動物を一晩絶食させ、Ｔｗｅｅｎ８０（０．２５％ｖ／ｖ）及び消泡剤（０．１％ｗ／ｖ）を含有するカルボキシルメチルセルロースナトリウム（１％ｗ／ｖ）の懸濁液として調製した試験化合物を投与した。投与懸濁液を１ｍｇ／ｍＬで調製し、１ｍＬ／ｋｇで胃管を介して強制投与した。血液を投与後０．５〜７時間にサンプリングし、遠心分離により血漿を調製した。血漿サンプルを、オンライン固相抽出及びＬＣ／ＭＳ／ＭＳを使用して分析した。
【０２０１】
実施例１２で例証した化合物を、基本的に上記に従い試験し、Ｃｍａｘが９３９０ｎｇ／ｍＬ、ＡＵＣ（０−７ｈ）が３６８００ｎｇｈ／ｍＬであった。
【０２０２】
関節内ＬＰＳにより誘発されたＴＮＦαに対する効果
ネズミ足関節へのＬＰＳ関節内注入によりＴＮＦαの合成が誘導され、それを滑液洗浄液中で測定できる。２時間以内にＴＮＦαが高いレベルで検出できる。関節炎が進行する部位が関節であるため、経口投与の化合物が関節滑膜の炎症性反応に影響を及ぼすか否かを、このモデルで迅速に解析できる。
【０２０３】
６匹の雌のＬｅｗｉｓラット（１５０〜２００ｇ）を各治療群に含めた。動物に対し、担体（１％のカルボキシメチルセルロースＮａ−０．２５％  Ｔｗｅｅｎ８０中）又は試験化合物（１ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ及び３０ｍｇ／ｋｇ）を経口投与した。１時間後、１０μＬのＬＰＳ（１０μｇ）を各ネズミの右の足関節に関節内投与し、一方左の足関節に生理食塩水１０μＬを投与した。２時間後、各足関節を生理食塩水１００μＬで洗浄した。洗浄液を回収し、−８０℃で保存した。
群１：担体（１％  ＮａＣＭＣ−０．２５％  Ｔｗｅｅｎ８０、１ｍＬ、ＰＯ）
群２：試験化合物（１ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ）
群３：試験化合物（３ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ）
群４：試験化合物（１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ）
群５：試験化合物（３０ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ）
【０２０４】
市販のＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ、ＲＴＡ００）でＴＮＦαを測定した。実施例１２で例証した化合物による処理により、ＴＮＦα合成が用量依存的に阻害された（滑液洗浄液を用い、ＴＭＥＤ５０＝２．５４ｍｇ／ｋｇ）。
【０２０５】
フローサイトメトリを用いた、アニソマイシン刺激マウスにおけるｅｘ  ｖｉｖｏでのリン酸化ＭＡＰＫＡＰＫ２の阻害アッセイ
８〜１０週齢の雌のＢａｌｂ／ｃマウスをＴａｃｏｎｉｃ社から購入し、３０、１０、３、１ｍｇ／ｋｇの濃度で化合物を含有する溶液を０．２ｍＬ経口投与した。２時間又は他の所定時間の後、血液を心臓穴から採取し、ＥＤＴＡを含有する試験管に集めた。血液１００μＬを３７℃で１０分間インキュベートした。次に全血をＦＩＴＣコンジュゲートしたラット抗マウスＬｙ−６Ｇモノクローナル抗体（１：２５０）、及びＡＰＣコンジュゲートしたラット抗マウスＣＤ１１ｂｍＡｂ（１：１００）と混合し、１０μｇ／ｍｌのアニソマイシンで刺激した。両方の細胞表面抗原の染色、及びアニソマイシン刺激を３７℃で１５分間実施し、更にＬｙｓｅ／Ｆｉｘバッファ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｃａｔ＃５５８０４９）を用いて室温で１０分間処理した。溶解させた血液サンプルを室温で８分間、６００×ｇでスピンダウンし、４ｍＬのＰＢＳで更に洗浄した。希釈（１：１００希釈）した抗−リン酸化−ＭＡＰＫＡＰＫ−２抗体（Ｔｈｒ３３４）（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ社製、Ｃａｔ＃３０４１）、及びマウスＢＤ  Ｆｃ  Ｂｌｏｃｋ（１：１００希釈）（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，５５３１４１）を、２００μＬの透過用の溶媒Ｂ（Ｃａｌｔａｇ，Ｃａｔ＃ＧＡＳ００２Ｓ−５）に溶解させ、血球に添加し、室温で３０分間インキュベートした。インキュベート後、３ｍＬの染色／洗浄バッファを添加し、細胞を上記の通りスピンダウンし、更に３ｍｌの染色／洗浄バッファで洗浄した。更に細胞をＢｅｃｋｍａｎ  ＣｏｕｌｔｅｒＦ５００を使用してフローサイトメトリで解析した。ホスフィノ−ＭａｐＫａｐ−Ｋ２染色の平均の蛍光強度を、陽性染色されたＣＤ１１ｂ＋Ｌｙ６Ｇ−細胞に関して測定した。データの分析をＪＭＰプログラムにより実施した。実施例１２で例証した化合物による処理により、ＴＭＥＤ５０＝２．２０ｍｇ／ｋｇで、ｐ−ＭＡＰＫＡＰＫ２合成が用量依存的に阻害された。
【０２０６】
ネズミコラーゲン誘導による関節炎有効性モデル
雌のＬｅｗｉｓラット（≒１９０ｇ、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｌａｂｓ社製）を用い、ウシＩＩ型コラーゲン（２ｍｇ／ｍＬ）を等量のアジュバント（水酸化アルミニウム）と混合してエマルジョンを形成させ、免疫した。ラットの尾の付け根付近の背部に、約０．３ｍｇのエマルジョンを皮下注射した。すべての動物を、同じプロトコルに従って７日後に再度免疫した。ラット体内で、初回免疫後、１２〜１４日において関節炎（一方又は両方の足関節の膨張リング及び発赤を特徴とする）を開発し始める。関節炎の第１の徴候が見られたときに、ラットを５つの処理群に等しく分け、治療はラットに１日２回（Ｂｉｄ）、１４日間にわたり投薬することにより実施した。
処理群：
群１：担体１ｍＬ（１％  カルボキシメチルセルロースＮａ＋０．２５％  Ｔｗｅｅｎ８０）ＰＯ、Ｂｉｄ×１４日
群２：試験化合物５ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ、Ｂｉｄ×１４
群３：試験化合物１５ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ、Ｂｉｄ×１４
群４：試験化合物３０ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ、Ｂｉｄ×１４
群５：プレドニゾロン１０ｍｇ／ｋｇ、１ｍＬ、ＰＯ、ｑｄ（１日１回）×１４
【０２０７】
足関節の直径を週５日、カリパス副木で測定し記録した。データを複合炎症スコアから得た曲線下の領域（ＡＵＣ）として表し、統計分析を実施した。
【０２０８】
本発明の化合物は経口投与で用いるのが好ましい。しかしながら、経口投与が唯一の投与経路、又は唯一の好ましい投与経路ではない。例えば、経皮投与は薬剤の経口摂取を忘れやすい、若しくは経口摂取を敬遠する患者にとって好ましく、また静脈内投与は簡便性において、又は経口投与に関連する合併症の危険性を回避するという意味において好ましい。式Ｉの化合物は、具体的な状況によっては経皮的、筋肉内、鼻腔内、直腸内経路で投与してもよい。投与経路はいかなる形で変化させてもよく、例えば薬の物理的性質、患者及び介護者の便宜、及び他の関連する状況に応じて変化させてもよい（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１８ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．（１９９０））。
【０２０９】
医薬組成物は周知の製薬法で調製される。担体又は賦形剤は、固体、半固体、又は担体若しくは有効成分の媒体として機能しうる液体材料であってもよい。適切な担体又は賦形剤は公知である。医薬組成物は、経口投与、吸入、非経口投与又は局所投与に適する形態で調製でき、錠剤、カプセル、エアゾール、吸入器、坐薬、溶液、懸濁液等の形態で患者に投与できる。
【０２１０】
本発明の化合物は、例えば不活性希釈剤若しくはカプセルにより、又は錠剤に圧縮した形態で経口投与してもよい。治療目的で経口投与する場合、化合物を賦形剤と共に混合し、錠剤、トローチ、カプセル、エリキシル、懸濁液、シロップ、ウェーハ、チューインガムなどの形で用いてもよい。これらの調製物は本発明の化合物（活性成分）を少なくとも４％含有する必要があるが、具体的な形状によって、単位重量当り４％〜約７０％の間で適宜変化させることができる。かかる適切な投与量となるような量で、組成物中に当該化合物を添加した。本発明の好ましい組成及び調製法は、当業者に公知の方法を用いて決定できる。
【０２１１】
錠剤、ピル、カプセル、トローチなどの場合は、以下の補助剤のうちの１つ以上を含有させてもよい：結合剤（例えばポビドン、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶性セルロース又はゼラチン）、添加剤又は希釈剤（例えば澱粉、ラクトース、微結晶性セルロース又はリン酸ジカルシウム）、崩壊剤（例えばクロスカルメロース、クロスポビドン、澱粉グリコール酸ナトリウム、穀物澱粉など）、潤滑剤（例えばステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク又は水素化した植物油）、滑走剤（例えばコロイド状シリカ）、湿潤剤（例えばラウリル硫酸ナトリウム及びポリソルベート８０）、及び甘味料（例えば蔗糖、アスパルテーム又はサッカリン）又は香料（例えばペパーミント、サリチル酸メチル又はオレンジフレーバー）。投与単位の形態がカプセルである場合、上記のタイプの材料に加えて、液体担体（例えばポリエチレングリコール又は脂肪油）を含有させてもよい。他の投与単位の形態としては、コーティングなどの、投与単位の物理的な形状を修飾する他の様々な材料を含むものが挙げられる。すなわち、錠剤又はピルを砂糖、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリメタクリレートなどのコーティング剤でコーティングしてもよい。シロップとしてもよく、本発明の化合物に加えて、甘味料としての蔗糖、適切な防腐剤、染料、着色料及び風味料を含有させてもよい。これらの様々な組成物を調製する際に使用する材料は、薬理学的に純粋で、またその使用量が毒性をもたらす量ではないことが必要である。好ましい製剤は、式Ｉの化合物に、１０％のＮ−メチルピロリドンを適当量添加し、更に２０％のヒドロキシプロピル−β−シクロデクストリン、５％のメチルセルロース、０．５％の消泡剤及び０．０１ＮのＨＣｌからなる溶液を添加して調製される（いずれも重量％）。
【０２１２】
式Ｉの化合物は通常、広い投与量範囲において効果的である。例えば、１日当りの投与量を、約０．０００１〜約３０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲とすることができる。場合によっては、上記の範囲の下限投与量以下のレベルでも十分過ぎることもあり、一方で上限投与量以上でもいかなる有害な副作用を生じさせないこともあるため、上記の投与量範囲はいかなる形であれ本発明の範囲を限定することはない。実際の化合物の投与量は、治療しようとする症状、化合物の投与経路、実際に投与する化合物、年齢、体重及び個々の患者の反応、並びに患者の症状の重症度などの関連する状況を考慮に入れて、医師により決定されることが理解されよう。
【手続補正書】
【提出日】平成20年5月1日(2008.5.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉで表される化合物
【化１】
2009513639.tif 000065
［式中、Ｘは以下からなる群から選択される
【化２】
2009513639.tif 000066
Ｒ１は、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基からなる群から選択される１若しくは２個の置換基で任意に置換されてもよいＣ３−Ｃ４シクロアルキル基、メチル基及びトリフルオロメチル基であるか、又はＣ１−Ｃ４アルキルハロ基である；
Ｒ２は、Ｃ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されてもよいフェニル基であるか、又はＣ１−Ｃ４アルキル基で任意に置換されてもよいピリジニル基である；
Ｒ３は、メチル基、トリフルオロメチル基若しくはハロ基から選択される置換基で任意に置換されてもよいアミノ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ基、Ｃ１−Ｃ４アルキルハロ基、Ｃ３−Ｃ４シクロアルキル基であるか、又はフェニル基若しくはチエニル基であり、各々ハロ基、Ｃ１−Ｃ４アルキル基及びＣ１−Ｃ４アルコキシ基からなる群から選択される第１の置換基で任意に置換されてもよく、ハロ基から選択される第２の置換基で更に任意に置換されてもよい］
又はその薬理学的に許容できる塩。
【請求項２】
薬理学的に許容できる賦形剤、担体又は希釈剤との組み合わせで請求項１ 記載の化合物を含んでなる医薬製剤。
【請求項３】
薬理学的に許容できる希釈剤、担体又は賦形剤のうちの１つ以上のとの組み合わせで請求項１記載の化合物を含んでなる、癌の治療用の医薬組成物。
【国際調査報告】
2009513639.tif 000067
2009513639.tif 000068
2009513639.tif 000069