(57)【要約】  ネコの炎症性腸疾患（ＩＢＤ）を予防または治療するために、ドコサヘキサエン酸を含む組成物（ＤＨＡ）、および、任意にエイコサぺンタエン酸（ＥＰＡ）、アラキドン酸（ＡＲＡ）、リノール酸（ＬＡ）、および、α−リノール酸（ＡＬＡ）からなる群より選択される１またはそれより多くの脂肪酸がネコに投与される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
炎症性腸疾患に罹りやすい、または、罹っているネコにおいて炎症性腸疾患を予防または治療する方法であって、該ネコに、治療有効量のドコサヘキサエン酸を投与することを含む、上記方法。
【請求項２】
前記ネコに、約６〜約１６５ｍｇ／ｋｇ体重／日のドコサヘキサエン酸を投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ネコに、約１２〜約６５ｍｇ／ｋｇ体重／日のドコサヘキサエン酸を投与する、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ネコへの投与が、前記ネコにドコサヘキサエン酸を給餌することを含む、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ドコサヘキサエン酸が、ドコサヘキサエン酸を含む組成物として前記ネコに給餌される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記ネコに給餌される前記組成物が、約０.０５〜約１%のドコサヘキサエン酸を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記ネコに給餌される前記組成物が、約０．０５〜約０．２％のドコサヘキサエン酸を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記組成物には、食品、サプリメント、スナック、特別食、または、部分的に、もしくは完全に食用の玩具が含まれる、請求項５に記載の方法。
【請求項９】
前記組成物には、ドライ、セミモイストまたはモイストフードが含まれる、請求項５に記載の方法。
【請求項１０】
前記ネコに前記組成物を給餌することと共に、前記ネコに抗炎症性腸疾患剤を投与することをさらに含む、請求項５に記載の方法。
【請求項１１】
前記ネコに抗炎症性腸疾患剤を投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記ネコに、エイコサぺンタエン酸、アラキドン酸、リノール酸およびα−リノール酸からなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸を投与することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記ネコに投与されるそれぞれの脂肪酸が、前記組成物の約０．０５〜約１％を構成する、請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
前記脂肪酸が、エイコサぺンタエン酸である、請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記組成物中のエイコサぺンタエン酸のドコサヘキサエン酸に対する比率が、約１〜約２である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
ネコが炎症性腸疾患に罹っているかどうかを決定する方法であって：
ネコから得られた血液から回収されたリンパ球を、第一、第二および第三のサンプルに分割すること（ここで、全てのサンプルは等量のリンパ球を含む）；
第二のサンプルを所定量のマイトジェンに所定期間晒すこと；
第三のサンプルを、所定量のドコサヘキサエン酸の存在下で、第二のサンプルと同じ量の同じマイトジェンに第二のサンプルと同じ期間晒すこと；および、
全てのサンプル中のリンパ球の増殖レベルを比較すること、
を含み、ここで、第二のサンプルにおけるリンパ球の増殖レベルが、第一のサンプルにおけるリンパ球の増殖レベルよりも高く、第三のサンプルにおけるリンパ球の増殖レベルが、第二のサンプルにおけるリンパ球の増殖レベルよりも低い場合、そのネコは、炎症性腸疾患に罹っている、上記方法。
【請求項１７】
前記マイトジェンが、フィトヘムアグルチニン、コンカナバリン、アメリカヤマゴボウマイトジェン、リポ多糖体、および、抗ＣＤ３抗体からなる群より選択される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記リンパ球の増殖レベルが、デオキシリボ核酸合成を測定することによって決定される、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
前記デオキシリボ核酸合成が、デオキシリボ核酸における３Ｈ−チミジン、または、５−ブロモ−２’−デオキシウリジンの取り込みを測定することによって測定される、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
キットの構成要素に応じて適切になるように単一包装中の別個の容器、または、仮想包装中の別個の容器に、以下を含むキット：（Ａ）ドコサヘキサエン酸、（Ｂ）ドコサヘキサエン酸を含む組成物、または、（Ｃ）一緒に混合すると（ここで任意に、キットの一部である追加成分またはキットの一部ではない追加成分を共に混合してもよい）、ドコサヘキサエン酸を含む組成物が生じる２種またはそれより多くの成分のいずれか、ならびに、
以下の（１）〜（４）のうち１種またはそれより多く：（１）エイコサぺンタエン酸、アラキドン酸、リノール酸およびα−リノール酸からなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸、（２）炎症性腸疾患に罹りやすい、または、罹っているネコが食べるのに適した食品組成物、（３）抗炎症性腸疾患剤、および、（４）以下の（ａ）〜（ｆ）のうち１種またはそれより多くに関する説明：（ａ）ドコサヘキサエン酸を単独で含む組成物、または、ドコサヘキサエン酸と、エイコサぺンタエン酸、アラキドン酸、リノール酸およびα−リノール酸からなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸と組み合わせて含む組成物を製造すること、（ｂ）炎症性腸疾患に罹りやすい、または、罹っているネコが食べるのに適した、治療有効量のドコサヘキサエン酸を単独で、または、エイコサぺンタエン酸、アラキドン酸、リノール酸およびα−リノール酸からなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸と組み合わせて含む食品組成物を製造すること、（ｃ）炎症性腸疾患を予防および／または治療するために、ドコサヘキサエン酸を、単独で、または、エイコサぺンタエン酸、アラキドン酸、リノール酸およびα−リノール酸からなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸と組み合わせてネコに投与すること、（ｄ）ドコサヘキサエン酸を単独で含む組成物、または、ドコサヘキサエン酸を、エイコサぺンタエン酸、アラキドン酸、リノール酸およびα−リノール酸からなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸と組み合わせて含む組成物をネコに供給することによって、ネコにおける炎症性腸疾患を予防および／または治療すること、（ｅ）ドコサヘキサエン酸を単独で含む組成物、または、ドコサヘキサエン酸を、エイコサぺンタエン酸、アラキドン酸、リノール酸およびα−リノール酸からなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸と組み合わせて含む組成物をネコに供給することと共に、ネコに抗炎症性腸疾患剤を投与すること、および、（ｆ）ドコサヘキサエン酸を単独で含む組成物、または、ドコサヘキサエン酸を、エイコサぺンタエン酸、アラキドン酸、リノール酸およびα−リノール酸からなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸と組み合わせて含む組成物をネコに供給することと共に、ネコに抗炎症性腸疾患剤を投与することによって、ネコにおける炎症性腸疾患を予防および／または治療すること。
【請求項２１】
（１）ネコにおける炎症性腸疾患を予防および／または治療するために、ドコサヘキサエン酸、または、ドコサヘキサエン酸を含む組成物を用いること、（２）ネコにドコサヘキサエン酸、または、ドコサヘキサエン酸を含む組成物を供給することと共に、ネコに抗炎症性腸疾患剤を投与することによって、ネコにおける炎症性腸疾患を予防および／または治療すること、および、（３）請求項２０に記載のキットを用いること、のうち１種またはそれより多くに関する情報または説明を伝達するための手段であって、該情報または説明を含む文書、デジタル記憶媒体、音声による提示、または、視覚表示端末を含む、上記手段。
【請求項２２】
小冊子、製品ラベル、添付文書、広告、ウェブサイト表示、および、視覚表示端末からなる群より選択される、請求項２１に記載の手段。
【請求項２３】
ネコにおける炎症性腸疾患を予防または治療するのに適した組成物を製造するためのドコサヘキサエン酸の使用。
【請求項２４】
前記組成物が、ＥＰＡ、ＡＲＡ、ＬＡ、および、ＡＬＡからなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸をさらに含む、請求項２３に記載の使用。
【請求項２５】
前記組成物が、約０．０５〜約１％の前記組成物中に存在する各脂肪酸を含む、請求項２４に記載の使用。
【請求項２６】
前記組成物は医薬品である、請求項２３に記載の使用。
【請求項２７】
ネコの炎症性腸疾患を予防または治療するための医薬品を製造するための、治療有効量のドコサヘキサエン酸、および、任意にエイコサぺンタエン酸、アラキドン酸、リノール酸およびα−リノール酸からなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸の使用。
【請求項２８】
ネコに治療有効量のドコサヘキサエン酸を投与することを含む、ネコにおけるＣＤ４＋リンパ球および好中球のレベルを低くする方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の開示】
【０００１】
発明の背景
発明の分野
本発明は、一般的に、炎症性腸疾患を予防または治療するための組成物および方法に関し、具体的には、ネコの炎症性腸疾患を予防または治療するためのドコサヘキサエン酸の使用に関する。
【０００２】
関連技術の説明
用語「炎症性腸疾患」または「ＩＢＤ」は、消化管の粘膜固有層内への炎症性浸潤を特徴とする慢性的な特発性の胃腸障害の一群を意味する。ＩＢＤには、分節性の肉芽腫性腸炎（ｓｅｇｍｅｎｔａｌ  ｇｒａｎｕｌｏｍａｔｏｕｓ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｓ）、リンパ形質細胞性腸炎、好酸球性胃腸炎、リンパ球性腸炎、化膿性腸炎、および、組織球性大腸炎が包含される。最も一般的なタイプのＩＢＤは、リンパ形質細胞性の形態であると思われる。これらの特定のタイプのＩＢＤは、粘膜固有層で見出される炎症性浸潤のタイプに基づいて特徴付けられる。炎症性浸潤は、重症度および細胞型に関して極めて多様な形態をとり得るが、リンパ球および形質細胞が最も一般的な細胞型である。炎症性浸潤は、胃、小腸および結腸で生じる可能性がある。ネコの場合、例えば胃および小腸が影響を受けることがほとんどである。多くの場合において、腸の複数の分節において発生し、臨床徴候は混合型の可能性があるが、これは粘膜病変が広範囲に分布することを示している。ＩＢＤの重症度は、軽度の臨床徴候から、生命を脅かすタンパク喪失性腸症に至るまで様々である。
【０００３】
粘膜における炎症性浸潤は、ＩＢＤの臨床症状の原因である。粘膜における炎症は、正常な吸収に関する工程を崩壊させる。このような崩壊によって、吸収不良および浸透圧性下痢が生じる。消化管の透過性が変化することによって、腸管内腔への体液、タンパク質および血液の漏出が生じる可能性がある。脂肪、炭水化物および胆汁酸の吸収不良によって、分泌性下痢が生じる。また炎症性メディエーターも、杯状細胞による腸内分泌および粘液産生を直接開始させる可能性がある。粘膜における炎症性浸潤は、腸および結腸の運動パターン、平滑筋へのプロスタグランジンおよびロイコトリエンの作用に起因するメカニズムを変化させる可能性がある。胃および小腸の炎症は、嘔吐を引き起こす受容体を刺激する。例えばネコの場合、最も一般的なＩＢＤの臨床徴候は、慢性嘔吐、下痢、および、体重減少である。
【０００４】
ＩＢＤ発症の基本的な経路は、過敏症を含む。２つの関連する理論で、過敏性反応の根本的な原因を説明する試みがなされている。第一の理論では、ＩＢＤを有するネコは、腸粘膜バリアにおける欠陥を発生させていると推測している。粘膜の完全性が失われることによって、消化管の透過性、および、正常な場合には許容されるアレルゲンに対する過敏性の応答が増加する。第二の理論では、ＩＢＤは、管腔の抗原に対する異常な免疫応答によって生じると推測している。これら両方の起こり得る経路によって、炎症性メディエーターの放出に至る。これらの物質は、腸粘膜表面にさらにダメージを与え、炎症のサイクル、および、バリア機能の喪失を引き起こす可能性がある。
【０００５】
必須脂肪酸は、細胞機能の調節において特定の役割を有する。例えば、オメガ−３エイコサぺンタエン酸（ＥＰＡ）、および、オメガ−６アラキドン酸およびガンマ−リノレン酸は、局所ホルモンおよび炎症のメディエーターとして機能する免疫調節性分子であるエイコサノイド合成のための前駆体である。アラキドン酸（ＡＲＡ）から合成されたエイコサノイドは、エイコサぺンタエン酸およびガンマ−リノレン酸から生産されたエイコサノイドと比較して炎症促進性であり、過剰な量で生産されると病的状態をもたらす可能性がある。マクロファージは、重要なエイコサノイド源であり、炎症性反応および免疫反応の強度および持続時間を調節する。マクロファージおよびリンパ球の膜リン脂質中の主要なポリ不飽和脂肪酸は、ＡＲＡである。ガンマ−リノレン酸またはＥＰＡが投与されると、マクロファージの膜内のＡＲＡが、エイコサぺンタエン酸またはガンマ−リノレン酸に交換される。このような交換の結果、ＡＲＡによって誘導されたエイコサノイドの生産が少なくなり、ＥＰＡによって誘導された、または、ガンマ−リノレン酸によって誘導されたエイコサノイドの生産が多くなり、それによって炎症性変化に対する免疫応答が減少する。
【０００６】
確実なＩＢＤ診断は、内視鏡または外科技術によって採取された粘膜または全層腸生検標本の組織病理学試験に基づいている。従って、ネコのＩＢＤを診断するための、生検標本の採取よりも侵襲性の低い代替法への必要性がある。また、ネコのＩＢＤの予防および治療に有用な新規の方法および組成物への必要性もある。
【０００７】
発明の要約
従って、本発明の目的は、ネコにおけるＩＢＤを予防または治療する方法を提供することである。
【０００８】
本発明のその他の目的は、ネコにおけるＩＢＤの予防または治療に適した組成物を提供することである。
本発明のその他の目的は、ネコがＩＢＤに罹っているかどうかを決定する方法を提供することである。
【０００９】
本発明のさらなる目的は、ネコにおけるＩＢＤの予防または治療に有用な食品、化合物、成分および装置の組み合わせを含む、キットの形態の製造品を提供することである。
本発明のその他の目的は、本発明の方法、組成物、製造品および利点に関する情報を伝達するための手段を提供することである。
【００１０】
これらのおよびその他の目的の１つまたはそれより多くは、ＩＢＤに罹りやすい、または、罹っているネコにおけるＩＢＤを予防および／または治療する新規の方法を用いて達成され、本方法は、上記ネコに、治療有効量のドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を投与することを含む。また、ＩＢＤの診断方法、および、ＩＢＤの予防および／または治療に有用な食品、化合物、成分および装置の組み合わせを含むキットも提供される。
【００１１】
本発明のさらなる目的、特徴および利点は、当業者にはよく知られていると思われる。
発明の詳細な説明
一形態において、本発明は、ＩＢＤに罹ったネコにおけるＩＢＤの治療方法を提供する。ＩＢＤを治療することとは、ＩＢＤを改善、抑制および／または根絶することを含む。当業者であれば、診断テスト（例えば、全血球計算、血清生化学、血清中のチロキシンレベル、免疫不全ウィルス試験、ネコ白血病ウイルス試験、尿検査、寄生虫および細菌に関する検便）；食事の検査；腹部のＸ線撮影および／または超音波；および、／または、粘膜または全層腸生検標本の試験を利用して、ＩＢＤを診断する（および、ＩＢＤとその他の胃腸疾患とを区別する）ことができる。その他の形態において、本発明は、ＩＢＤを発症させやすいネコにおけるＩＢＤの予防方法を提供する。ＩＢＤを予防することとは、ＩＢＤの危険を減少させること、ＩＢＤの発病を遅らせること、および／または、ネコがＩＢＤを発症させないように維持することを含む。本方法は、ネコに、治療有効量のドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）を投与することを含む。治療有効量とは、ネコがＩＢＤに罹っている場合はＩＢＤを治療する、または、ネコがＩＢＤを発症しやすい場合はＩＢＤを予防する、または、ＩＢＤに罹りやすい、または、罹っているネコにおけるＣＤ４＋リンパ球および好中球のレベルを低くするという目的を達成すると予想される量である。投与とは、ネコに、ＤＨＡまたはその他の化合物を、適切な剤形で、適切な投与経路（例えば、経口、外用または非経口的な経路）によって導入することを意味する。ＤＨＡは、例えば、純粋なＤＨＡまたはＤＨＡ誘導体（例えば、エステルのような塩）として投与してもよいし、または、ＤＨＡおよび／またはＤＨＡ誘導体を含む組成物として投与してもよい。本明細書においてＤＨＡおよびその他の脂肪酸と言う場合、それにはこのような化合物の誘導体も含まれる。またＤＨＡを含む組成物は、１種またはそれより多くの従来の製薬上許容できる賦形剤（例えば、アジュバント、キャリアーおよび／または媒体）を含んでいてもよい。いくつかの実施態様において、ＤＨＡを含む組成物は、食品組成物を含んでいてもよい。
【００１２】
本発明は、ＥＰＡまたはその他の類似の脂肪酸ではなくＤＨＡが、ネコにおけるＩＢＤの予防または治療に有用であり、ＤＨＡは、その他の動物において逆の作用を有する可能性があるという驚くべき発見に基づく。ＥＰＡおよび関連の脂肪酸は、単独でも、または、組み合わせてもＩＢＤを予防または治療しないが、これらは、ＩＢＤの予防または治療においてＤＨＡを補うのに有用である。従って、ＤＨＡ単独、または、ＥＰＡおよび関連の脂肪酸と組み合わせたＤＨＡは、ネコに治療有効量で投与すると、ＩＢＤの予防または治療に有効であるという予想外の結果が得られた。
【００１３】
本明細書において説明されるように、ＤＨＡが治療有効量で投与されると、ＤＨＡは、ネコ、例えばＩＢＤに罹りやすい、または、罹っているネコにおけるＣＤ４＋リンパ球および好中球のレベルを効果的に低くする。
【００１４】
いくつかの実施態様において、本方法は、ネコに、約６〜約１６５ｍｇ／ｋｇ体重／日のＤＨＡを投与することを含む。このような実施態様のいくつかにおいて、ネコに、約１２〜約６５ｍｇ／ｋｇ体重／日のＤＨＡが投与される。その他の実施態様において、ネコに、約１２〜約３２ｍｇ／ｋｇ体重／日のＤＨＡが投与される。ＤＨＡの一日量は、単回投与で投与してもよいし、またあるいは、合計して１日用量になる２回またはそれより多くに分割した投与量で投与してもよい。
【００１５】
いくつかの実施態様において、ＤＨＡを投与することは、ネコにＤＨＡを供給すること、すなわち、ＤＨＡ、または、ＤＨＡを含む組成物（ＤＨＡ誘導体を含む）を供給することを含む。
【００１６】
様々な実施態様において、ネコに供給されるＤＨＡを含む組成物には、食品組成物が含まれる。いくつかの実施態様において、本食品組成物は、繁殖または生命維持に必要なＡＡＦＣＯの最低栄養基準を満たしている。２００５  ＡＡＦＣＯ  Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ，１３７〜４０頁を参照。いくつかの実施態様において、本食品組成物には、ドライフードが含まれる。その他の実施態様において、本食品組成物には、セミモイストフードが含まれる。さらにその他の実施態様において、本食品組成物には、モイストフードが含まれる。本明細書で用いられる「ドライ」、「モイスト」および「セミモイスト」という用語は、当業者にはよく知られている。本食品組成物は、サプリメント、特別食（ｔｒｅａｔ）、スナック、または、部分的に、もしくは完全に食用の玩具であってもよい。いくつかの実施態様において、本組成物には、１種またはそれより多くの食品の混合物、または、低アレルギー性の食品組成物が含まれる。
【００１７】
いくつかの実施態様において、上記ネコは、コンパニオンキャット（ｃｏｍｐａｎｉｏｎ  ｆｅｌｉｎｅ）である。コンパニオンキャットは、ペットとして飼われているネコであってもよい。またコンパニオンキャットは、ペットとして飼われているかどうかに関係なく、例えばネコ（Ｆｅｌｉｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）のような広く飼いならされた種に由来するネコであってもよい。いくつかの実施態様において、上記ネコは、発育期のネコである。発育期のネコとは、成長したサイズに達していないネコである。例えば、発育期のネコは、典型的には約１歳未満のネコである。いくつかの実施態様において、上記ネコは、成長したネコである。成長したネコとは、若年期の成長および発達が終わった後のあらゆる年齢のネコであり、年長のネコ、および、老齢のネコが含まれる。例えば、成長したネコとは、典型的には約１歳からその寿命の最後までのいずれかの年齢のネコである。年長のネコとは、ネコが明白な老化の物理的または行動徴候を示すかどうかに関係なく、加齢随伴病に罹る危険を有するようなあらゆる年齢のネコである。例えば、年長のネコは、典型的には約７〜１１歳のネコである。老齢のネコとは、高齢の徴候を示すネコである。例えば、老齢のネコは、典型的には、約１２歳およびそれより高齢のネコである。
【００１８】
特に他の指定がない限り、本明細書における全てのパーセンテージは、乾物の重量に基づく重量パーセンテージである。用語「乾物の重量に基づく」とは、組成物中の成分の濃度を、組成物中の全ての水分を除去した後に測定することを意味する。
【００１９】
いくつかの実施態様において、前記ネコに投与される組成物は、約０．０５〜約１％のＤＨＡを含む。このような実施態様うちいくつかにおいて、本組成物は、約０．１〜約０．４％のＤＨＡを含む。その他の実施態様において、本組成物は、約０．１〜約０．２％のＤＨＡを含む。このような実施態様のうちさらにその他において、本組成物は、約０．０５〜約０．２％のＤＨＡを含む。さらなるこのような実施態様において、本組成物は、約０．０５〜約０．１５％のＤＨＡを含む。加えて、このような実施態様のうちさらにその他において、本組成物は、約０．０５、または、約０．１〜約０．１５、約０．２、または、約０．４％のＤＨＡを含む。
【００２０】
追加の実施態様において、前記ネコに投与される組成物は、エイコサぺンタエン酸（ＥＰＡ）、アラキドン酸（ＡＲＡ）、リノール酸（ＬＡ）、および、α−リノール酸（ＡＬＡ）からなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸をさらに含む。このような実施態様うちいくつかにおいて、本組成物は、約０．０５〜約１％の組成物中に存在する各脂肪酸を含む。このような実施態様のうちその他において、本組成物は、約０．１〜約０．５％、または、０．１〜約０．３％の上記脂肪酸を含む。一実施態様において、前記ネコに投与される組成物は、約０．０５〜約１％のＥＰＡをさらに含む。このような実施態様うちいくつかにおいて、本組成物は、約０．１〜約０．５％のＥＰＡを含む。このような実施態様のうちその他において、本組成物は、約０．１〜約０．３％のＥＰＡを含む。このような実施態様のうちさらにその他において、本組成物は、約０．０５〜約０．３％のＥＰＡを含む。さらなるこのような実施態様において、本組成物は、約０．１５〜約０．３％のＥＰＡを含む。このような実施態様のうちさらにその他において、本組成物は、約０．０５、約０．１、または、約０．１５〜約０．２、約０．３、約０．４、または、約０．５％のＥＰＡを含む。
【００２１】
いくつかの実施態様において、ネコに投与される本組成物は、約０．０５〜約１％のＤＨＡ、および、約０．０５〜約１％のＥＰＡを含み、組成物中に存在するＥＰＡの量の組成物中に存在するＤＨＡの量に対する比率は、約１〜約２である。このような実施態様うちいくつかにおいて、組成物中に存在するＥＰＡの量の組成物中に存在するＤＨＡの量に対する比率は、約１．２〜約１．８である。このような実施態様のうちその他において、組成物中に存在するＥＰＡの量の組成物中に存在するＤＨＡの量に対する比率は、約１．２〜約１．５である。このような実施態様のうちさらにその他において、組成物中に存在するＥＰＡの量の組成物中に存在するＤＨＡの量に対する比率は、約１．３〜約１．６である。加えて、さらなるこのような実施態様において、組成物中に存在するＥＰＡの量の組成物中に存在するＤＨＡの量に対する比率は、約１、約１．２もしくは約１．３〜約１．５、約１．６、約１．８、または、約２である。
【００２２】
いくつかの実施態様において、上記予防および治療方法は、ＤＨＡ、または、ＤＨＡと、ＥＰＡ、ＡＲＡ、ＬＡおよびＡＬＡからなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸との組み合わせを投与することと共に、ネコに抗炎症性腸疾患（抗ＩＢＤ）剤を投与することをさらに含む。抗ＩＢＤ剤は、ＩＢＤを予防または治療するために用いられる化合物、それらの誘導体（例えば、その化合物の塩、溶媒化合物、または、水和物）、または、このような化合物および／または誘導体を含む組成物である。「〜と共に」とは、抗ＩＢＤ剤を、ＤＨＡと一緒にネコに投与すること、または、ＤＨＡとは別々に、同一または異なる頻度で、同一または異なる投与経路によって、さらに、ＤＨＡとほぼ同じ時間に、または、定期的にのいずれかで、ネコに投与することのいずれかを意味する。「ほぼ同時に」とは、一般的に、抗ＩＢＤ剤が、ネコにＤＨＡが投与される時に投与されるか、または、ネコにＤＨＡを投与してから約７２時間以内に投与されるかのいずれかを意味する。「定期的に」とは、一般的に、抗ＩＢＤ剤は、抗ＩＢＤ剤の投与に適した処方計画に従ってネコに投与され、一方でＤＨＡを含む組成物は、そのネコにとって適切になるように定期的にネコに供給されることを意味する。従って、用語「〜と共に」には、具体的には、抗ＩＢＤ剤はネコに既定された期間投与されるが、ＤＨＡはそれよりずっと長い期間（例えば死ぬまで）ネコに投与されるような状況も含まれる。１種より多くの物質がネコに投与される場合、物質それぞれの剤形および投与経路は様々であってよい。当業者であれば、ネコに供給されるＤＨＡを含む組成物が単一種類であっても、またあるいは、ネコに様々なＤＨＡを含む組成物が多様な時間間隔で供給される場合でも、１種またはそれより多くの抗ＩＢＤ剤をネコに投与できるということが理解されるだろう。
【００２３】
適切な抗ＩＢＤ剤としては、例えば、コルチコステロイド（例えば、プレドニゾン、ブレドニゾロン）、免疫抑制剤（例えば、アザチオプリン）、および、抗生物質（例えば、メトロニダゾール、アモキシリン、タイロシン）が挙げられる。抗ＩＢＤ剤は、例えば無機酸または有機酸から誘導された塩の形態で投与することができる。特定の化合物によっては、その化合物の塩が、例えば強化された様々な温度および湿度における薬剤の安定性、または、望ましい水溶性または油溶性のような１種またはそれより多くの塩の物理特性のために有利な場合がある。このような塩として好ましくは、製薬上許容できる塩である。
【００２４】
好ましい抗ＩＢＤ剤の１日あたりの総用量（単一用量、または、数回に分けた用量のいずれかで投与される）は、典型的には、約０．００１〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重であり、より好ましくは約０．０１〜約３０ｍｇ／ｋｇ体重であり、さらにより好ましくは約０．０１〜約１０ｍｇ／ｋｇ体重である。投与単位の組成物は、上述したような量を含んでいてもよいし、合計して１日用量になるそれらの約量を含んでいてもよい。多くの例において、抗ＩＢＤ剤の投与は、複数回繰り返されると予想される。１日あたり複数回の用量は、典型的には、必要に応じて１日あたりの総用量を増やすために用いられることがある。好ましい用法に影響を与える要因としては、例えば、ネコの年齢、重量および状態；病気の重症度；投与経路；用いられる具体的な抗ＩＢＤ剤の活性、有効性、薬物動態学的および毒物学的なプロファイルのような薬理学的な考察；薬物送達システムが利用されるかどうか；および、抗ＩＢＤ剤が複合薬の一部として投与されるかどうかが挙げられる。従って、用法は広範に様々であってよく、従って、上記で考察された好ましい用法とは異なっていてもよい。
【００２５】
さらにその他の形態において、本発明は、ネコにおいてＩＢＤを予防および／または治療することに適した組成物を提供する。これらの組成物は、本明細書に記載のネコにおけるＩＢＤの予防および／または治療方法に関して説明され、例示される。
【００２６】
さらなる形態において、本発明は、ＩＢＤの予防および治療方法に使用するのに適した組成物を製造する方法を提供する。このような組成物は、例えば、混合すると本発明の組成物が得られる２種またはそれより多くの成分（食品組成物を含む）を混合することによって製造してもよいし、または、１種またはそれより多くの食品組成物と、例えばＤＨＡ、ＥＰＡおよび／または抗ＩＢＤ剤のような追加成分とを混合することによって製造してもよい。またこのような組成物は、例えば、Ｓｍａｌｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ，１２７〜４６頁（２０００）で考察された方法のうち１種またはそれより多くによって製造してもよい。
【００２７】
さらなる追加の形態において、本発明は、ネコのＩＢＤの予防または治療に適した本発明の組成物を製造するための、ＤＨＡ、ならびに、任意にＥＰＡ、ＡＲＡ、ＬＡおよびＡＬＡからなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸の使用を提供する。いくつかの実施態様において、本発明は、約０．０５〜約１％のＤＨＡを含む組成物を製造するための、ＤＨＡの使用を提供する。このような実施態様うちいくつかにおいて、本組成物は、約０．１〜約０．４％のＤＨＡを含む。その他の実施態様において、本組成物は、約０．１〜約０．２％のＤＨＡを含む。このような実施態様のうちさらにその他において、本組成物は、約０．０５〜約０．２％のＤＨＡを含む。さらなるこのような実施態様において、本組成物は、約０．０５〜約０．１５％のＤＨＡを含む。このような実施態様のうちさらにその他において、本組成物は、約０．０５もしくは約０．１〜約０．１５、約０．２、または、約０．４％のＤＨＡを含む。いくつかの実施態様において、本組成物には、食品組成物が含まれる。
【００２８】
いくつかの実施態様において、本発明は、ネコのＩＢＤを予防および／または治療するための、約０．０５〜約１％のＤＨＡ、および、約０．０５〜約１％の組成物中に存在するＥＰＡ、ＡＲＡ、ＬＡおよび／またはＡＬＡのそれぞれを含む組成物を製造するための、ＤＨＡ、ならびに、ＥＰＡ、ＡＲＡ、ＬＡおよびＡＬＡからなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸、好ましくはＥＰＡの使用を提供する。このような実施態様うちいくつかにおいて、本組成物は、約０．１〜約０．４％のＤＨＡ、および、約０．１〜約０．５％の１種またはそれより多くのＥＰＡ、ＡＲＡ、ＬＡおよび／またはＡＬＡを含む。このような実施態様のうちその他において、本組成物は、約０．１〜約０．２％のＤＨＡ、および、約０．１〜約０．３％の１種またはそれより多くのＥＰＡ、ＡＲＡ、ＬＡおよび／またはＡＬＡを含む。このような実施態様のうちさらにその他において、本組成物は、約０．０５〜約０．２％のＤＨＡ、および、約０．０５〜約０．３％の１種またはそれより多くのＥＰＡ、ＡＲＡ、ＬＡおよび／またはＡＬＡを含む。さらなるこのような実施態様において、本組成物は、約０．０５〜約０．１５％のＤＨＡ、および、約０．１５〜約０．３％の１種またはそれより多くの上記脂肪酸を含む。このような実施態様のうちさらにその他において、本組成物は、約０．０５もしくは約０．１〜約０．１５、約０．２、または、約０．４％のＤＨＡ、および、約０．０５、約０．１もしくは約０．１５〜約０．２、約０．３、約０．４、または、約０．５％の１種またはそれより多くの上記脂肪酸を含む。いくつかの実施態様において、本組成物には、食品組成物が含まれる。
【００２９】
いくつかの実施態様において、本発明は、ネコのＩＢＤを予防および／または治療するための、約０．０５〜約１％のＤＨＡ、および、約０．０５〜約１％のＥＰＡを含む組成物を製造するためのＤＨＡおよびＥＰＡの使用を提供し、ここで、組成物中に存在するＥＰＡの量の組成物中に存在するＤＨＡの量に対する比率は、約１〜約２である。このような実施態様うちいくつかにおいて、組成物中に存在するＥＰＡの量の組成物中に存在するＤＨＡの量に対する比率は、約１．２〜約１．８である。このような実施態様のうちその他において、組成物中に存在するＥＰＡの量の組成物中に存在するＤＨＡの量に対する比率は、約１．２〜約１．５である。このような実施態様のうちその他において、組成物中に存在するＥＰＡの量の組成物中に存在するＤＨＡの量に対する比率は、約１．３〜約１．６である。さらなるこのような実施態様において、組成物中に存在するＥＰＡの量の組成物中に存在するＤＨＡの量に対する比率は、約１、約１．２もしくは約１．３〜約１．５、約１．６、約１．８、または、約２である。いくつかの実施態様において、本組成物には、食品組成物が含まれる。
【００３０】
さらなる形態において、本発明は、ネコがＩＢＤに罹っているかどうかを決定する方法を提供する。本方法は、ネコから得られた血液から回収されたリンパ球を、等量のリンパ球を含む第一、第二および第三のサンプルに分割すること；第二のサンプルを所定量のマイトジェンに所定期間晒すこと；第三のサンプルを、所定量のＤＨＡの存在下で、第二のサンプルと同じ量の同じマイトジェンに第二のサンプルと同じ期間晒すこと；および、全てのサンプル中のリンパ球の増殖レベルを比較すること、を含む。ここで、第二のサンプルにおけるリンパ球の増殖レベルが、第一のサンプルにおけるリンパ球の増殖レベルよりも高く、第三のサンプルにおけるリンパ球の増殖レベルが、第二のサンプルにおけるリンパ球の増殖レベルよりも低い場合、そのネコはＩＢＤに罹っている。
【００３１】
ネコから得られた血液からリンパ球を回収し、これを等量のリンパ球を含むサンプルに分割する。ネコから血液を採取し、その血液からリンパ球を単離し、リンパ球の数を数える手法は、当業者既知である。いくつかの実施態様において、リンパ球は、実施例１で説明されているようにして回収することができる。ネコの血液から単離されたリンパ球は、全てのサンプルが等量のリンパ球を含むように３個またはそれより多くのサンプルに分けられる。いくつかの実施態様において、このようなリンパ球は、３個のサンプル（すなわち、第一、第二および第三のサンプル）に分けられる。これらサンプルのうち１個（すなわち第一のサンプル）は、コントロールとして用いられる。残りの２個のサンプルの一方（すなわち第二のサンプル）は、所定量のマイトジェンに所定期間晒され、他方（すなわち第三のサンプル）は、所定量のＤＨＡの存在下で、第二のサンプルと同じ量のマイトジェンに第二のサンプルと同じ期間晒される。全てのサンプルは、同じ温度で同じ期間インキュベートされる。
【００３２】
マイトジェンは、有糸分裂を誘発する物質である。ネコのリンパ球の有糸分裂を誘発させることができるマイトジェンであればいずれも、本発明の方法に適している。いくつかの実施態様において、マイトジェンは、多クローン性のマイトジェンである。多クローン性のマイトジェンとは、多くの様々な特異性またはクローン起源を有するリンパ球において有糸分裂を誘導するマイトジェンである。本発明のＩＢＤ診断方法に適したマイトジェンとしては、例えば、フィトヘムアグルチニン（ＰＨＡ）、コンカナバリン（ＣｏｎＡ）、アメリカヤマゴボウマイトジェン（ＰＷＭ）、リポ多糖体（ＬＰＳ）、および、抗ＣＤ３抗体が挙げられる。
【００３３】
リンパ球増殖の測定法は当業者既知である。インビトロでリンパ球増殖を測定するあらゆる手法が本発明の方法に適している。インビトロでのリンパ球増殖は、直接的に（例えば、細胞を数えること、または、分裂指数を決定することによって）測定してもよいし、または、間接的に（例えば、リンパ球群における全体的な代謝活性の割合を決定すること、または、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）の合成をモニターすることによって）測定してもよい。いくつかの実施態様において、インビトロでのリンパ球増殖は、実施例１で考察されているようにして測定される。
【００３４】
本発明の方法のいくつかの実施態様において、リンパ球増殖は、ＤＮＡ合成をモニターすることによって測定される。ＤＮＡ合成をモニターおよび測定する手法は、当業者既知である。ＤＮＡ合成をモニターおよび測定するあらゆる手法が本発明の方法に適している。ＤＮＡ合成は、例えば、有糸分裂が活性な細胞のＤＮＡを３Ｈ−チミジン、または、５−ブロモ−２’−デオキシウリジン（ＢｒｄＵ）で標識付けし、続いて、ＤＮＡに取り込まれた３Ｈ−チミジンまたはＢｒｄＵの量を決定することによってモニターおよび測定することができる。いくつかの実施態様において、ＤＮＡ合成は、実施例１で考察されているようにして測定される。
【００３５】
上記で考察したように、ネコがＩＢＤに罹っているかどうかの決定は、第一、第二および第三のサンプルでインビトロでのリンパ球の増殖レベルを比較することによってなされる。第二のサンプル（すなわち、マイトジェンで処理されたが、ＤＨＡでは処理されていないサンプル）におけるリンパ球の増殖レベルが、第一のサンプル（すなわち、マイトジェンまたはＤＨＡで処理されなかったコントロールサンプル）におけるリンパ球の増殖レベルよりも高い場合、その分析で用いられたマイトジェンは、第二および第三のサンプルにおいてインビトロでのリンパ球増殖を実際に刺激したことになる。そうであるならば、続いて第三のサンプル（すなわち、マイトジェンおよびＤＨＡの両方で処理されたサンプル）におけるリンパ球の増殖レベルを、第二のサンプルにおけるリンパ球の増殖レベルと比較する。第三のサンプルにおけるリンパ球の増殖レベルが、第二のサンプルにおけるリンパ球の増殖レベルよりも低い場合、ＤＨＡがマイトジェンの炎症促進性作用を阻害したことになり、これはすなわち、ネコがＩＢＤを有することを示す。
【００３６】
さらなる形態において、本発明は、ＩＢＤの予防または治療に適したキットの形態の製造品を提供する。本キットは、ＤＨＡ、または、本発明のＤＨＡを含む組成物を含む。いくつかの実施態様において、本キットは、抗ＩＢＤ剤をさらに含む（すなわち、本キットは、１種またはそれより多くの抗ＩＢＤ剤を含む）。いくつかの実施態様において、本キットは、（ａ）ネコにＤＨＡを投与すること、（ｂ）ネコにＤＨＡを投与することと共に、ネコに抗ＩＢＤ剤を投与すること、（ｃ）ネコにＤＨＡを投与することによって、ネコにおけるＩＢＤを予防および／または治療すること、および、（ｄ）ネコにＤＨＡを投与することと共に、抗ＩＢＤ剤を投与することによって、ネコにおけるＩＢＤを予防および／または治療することのうち１種またはそれより多くに関する説明をさらに含む。
【００３７】
いくつかの実施態様において、本キットは、ＤＨＡを含む食品組成物を含む。いくつかの実施態様において、本キットは、抗ＩＢＤ剤をさらに含む。いくつかの実施態様において、本キットは、（ａ）ネコにＤＨＡを含む食品組成物を供給すること、（ｂ）ネコにＤＨＡを含む食品組成物を供給することと共に、ネコに抗ＩＢＤ剤を投与すること、（ｃ）ネコにＤＨＡを含む食品組成物を供給することによって、ネコにおけるＩＢＤを予防および／または治療すること、および、（ｄ）ＤＨＡを含む食品組成物ネコにを供給することと共に、ネコに抗ＩＢＤ剤を投与することによって、ネコにおけるＩＢＤを予防および／または治療することのうち１種またはそれより多くに関する説明をさらに含む。
【００３８】
さらなる形態において、本発明は、一緒に混合すると（ここで任意に、キットの一部である追加成分またはキットの一部ではない追加成分を共に混合してもよい）、ネコにおいてＩＢＤを予防および／または治療することに適した本発明のＤＨＡを含む組成物が生じる２種またはそれより多くの成分を含むキットの形態である製造品を提供する。混合される予定の２種またはそれより多くの成分のうち１種は、例えば、純粋なＤＨＡ、または、それらの誘導体、または、ＤＨＡを含む組成物であってもよい。混合される予定の２種またはそれより多くの成分のうちその他の１種は、例えば、食品組成物であってもよい。組成物を製造するために、キットの一部である追加成分またはキットの一部ではない追加成分が必要である場合、本キットは、これらの成分に関する説明も提供する。いくつかの実施態様において、本キットは、抗ＩＢＤ剤をさらに含む。いくつかの実施態様において、本キットは、（ａ）２種またはそれより多くの成分を、任意にキットの一部である追加成分またはキットの一部ではない追加成分と共に混合することによって組成物を製造すること、（ｂ）例えばＩＢＤを予防および／または治療するために、ネコに本組成物を供給すること、（ｃ）ネコに本組成物を供給することと共に、ネコに抗ＩＢＤ剤を投与すること、（ｄ）ネコに本組成物を供給することによって、ネコにおけるＩＢＤを予防および／または治療すること、および、（ｅ）ネコに本組成物を供給することと共に、ネコに抗ＩＢＤ剤を投与することによって、ネコにおけるＩＢＤを予防および／または治療することのうち１種またはそれより多くに関する説明をさらに含む。
【００３９】
いくつかの実施態様において、本キットは、キットの構成要素に応じて適切になるように単一包装中の別個の容器、または、仮想包装（ｖｉｒｔｕａｌ  ｐａｃｋａｇｅ）中の別個の容器に、以下を含む：（Ａ）ＤＨＡ、（Ｂ）ＤＨＡを含む組成物、または、（Ｃ）一緒に混合すると（ここで任意に、キットの一部である追加成分またはキットの一部ではない追加成分を共に混合してもよい）、ＤＨＡを含む組成物が生じる２種またはそれより多くの成分のいずれか、ならびに、以下の（１）〜（４）のうち１種またはそれより多く：（１）ＥＰＡ、ＡＲＡ、ＬＡおよびＡＬＡからなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸、（２）炎症性腸疾患に罹りやすい、または、罹っているネコが食べるのに適した食品組成物、（３）抗ＩＢＤ剤、および、（４）以下の（ａ）〜（ｆ）のうち１種またはそれより多くに関する説明：（ａ）ＤＨＡを単独で含む組成物、または、ＤＨＡを、ＥＰＡ、ＡＲＡ、ＬＡおよびＡＬＡからなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸と組み合わせて含む組成物を製造すること、（ｂ）炎症性腸疾患に罹りやすい、または、罹っているネコが食べるのに適した、治療有効量のＤＨＡを単独で、または、ＥＰＡ、ＡＲＡ、ＬＡおよびＡＬＡからなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸と組み合わせて含む食品組成物を製造すること、（ｃ）ＩＢＤを予防および／または治療するために、ＤＨＡを、単独で、または、ＥＰＡ、ＡＲＡ、ＬＡおよびＡＬＡからなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸と組み合わせてネコに投与すること、（ｄ）ＤＨＡを単独で含む組成物、または、ＤＨＡを、ＥＰＡ、ＡＲＡ、ＬＡおよびＡＬＡからなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸と組み合わせて含む組成物をネコに供給することによって、ネコにおけるＩＢＤを予防および／または治療すること、（ｅ）ＤＨＡを単独で含む組成物、または、ＤＨＡを、ＥＰＡ、ＡＲＡ、ＬＡおよびＡＬＡからなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸と組み合わせて含む組成物をネコに供給することと共に、ネコに抗ＩＢＤ剤を投与すること、および、（ｆ）ＤＨＡを単独で含む組成物、または、ＤＨＡを、ＥＰＡ、ＡＲＡ、ＬＡおよびＡＬＡからなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸と組み合わせて含む組成物をネコに供給することと共に、ネコに抗ＩＢＤ剤を投与することによって、ネコにおけるＩＢＤを予防および／または治療すること。
【００４０】
用語「単一包装」とは、一般的に、キットの構成要素が、１個またはそれより多くの容器内で物理的に一まとまりになっているか、または容器に繋がっている状態を意味し、これらは、製造、分配、販売または使用の単位とみなされる。容器としては、例えば、バッグ、箱、ボトル、収縮包装、ステープル留め、または、その他の方法で固定した構成要素、および、それらの組み合わせが挙げられる。単一包装は、例えば、製造、分配、販売もしくは使用の単位とみなされるように物理的に一まとまりになった、容器または個々の食品組成物であり得る。用語「仮想包装」は、一般的に、１個またはそれより多くの物理的または仮想のキットの構成要素上に、どのように追加の構成要素を得るかを使用者に教示する説明によってキットの構成要素が関連付けられている形態を意味しており、例えば、バッグ中に、１種の構成要素が含まれ、それに加えて、ウェブサイトに行き、録音メッセージにアクセスし、画像メッセージを見るか、または、治療奉仕者と連絡を取って本キットをどのように使用するかに関する説明を入手することを使用者に教示する指示が含まれている形態である。本キットが仮想包装を含む場合、本キットは、１個またはそれより多くの物理的なキットの構成要素を含む仮想の環境における説明に限定される。
【００４１】
さらなる形態において、本発明は、（１）ネコにおけるＩＢＤを予防および／または治療するために、ＤＨＡ、または、ＤＨＡを含む組成物を用いること、（２）ネコにＤＨＡ、または、ＤＨＡを含む組成物を供給することと共に、ネコに抗ＩＢＤ剤を投与することによって、ネコにおけるＩＢＤを予防および／または治療すること、および、（３）ネコにおけるＩＢＤを予防および／または治療するために、情報または説明を含む文書、デジタル記憶媒体、光学記憶媒体、音声による提示、または、視覚表示端末を含む本発明のキットを用いることのうち１種またはそれより多くに関する情報または説明を伝達するための手段を提供する。いくつかの実施態様において、伝達手段は、このような情報または説明を含む文書、デジタル記憶媒体、光学記憶媒体、音声による提示、または、視覚表示端末を含む。好ましくは、伝達手段は、このような情報または説明を含むウェブサイト表示、または、小冊子、製品ラベル、添付文書、広告、または、視覚表示端末である。有用な情報または説明としては、例えば、（１）本発明の組成物、方法またはキットをどのように使用するかに関する情報および説明、および、（２）彼等が本発明およびその使用に関して質問がある場合、動物の治療奉仕者に関する連絡先が挙げられる。
【００４２】
さらなる形態において、本発明は、医薬品を製造するための、ＤＨＡ、および、任意にＥＰＡ、ＡＲＡ、ＬＡおよびＡＬＡからなる群より選択される少なくとも１種の脂肪酸の使用を提供する。その他の形態において、本発明は、ネコのＩＢＤを予防または治療するための医薬品を製造するための、このような治療有効量の脂肪酸の使用を提供する。一般的に、医薬品は、化合物または組成物と、賦形剤、緩衝液、結合剤、可塑剤、着色剤、希釈剤、圧縮剤（ｃｏｍｐｒｅｓｓｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、潤滑剤、香味物質、湿潤剤、および、動物への投与に適した医薬品製造および医薬品の製剤化に有用なその他の当業者既知の成分とを混合することによって製造される。
【００４３】
方法論、プロトコールおよび試薬は様々であってよいため、本発明は、本明細書において説明される特定の方法論、プロトコールおよび試薬に限定されない。さらに、本明細書において用いられる用語は、単に具体的な実施態様を説明するためであり、本発明の範囲を限定することは目的としない。本明細書および添付の請求項で用いられるように、単数形「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈において特に明記されない限り、複数形も示すこととする。同様に、「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」、「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」、および、「〜を含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という言葉は、限定的ではなく包括的に解釈することとする。
【００４４】
特に他の指定がない限り、本明細書において用いられる全ての専門用語や科学用語およびあらゆる頭字語は、本発明の分野における当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本発明の実施において、本明細書において説明されるものと類似しているか、または同等であるあらゆる方法および材料を用いることができるが、ここで好ましい方法、装置および材料を説明する。
【００４５】
本明細書で述べられた全ての特許、特許出願および公報は、そこで開示された本発明と共に用いられる可能性がある化合物、プロセス、技術、手法、技術、論文、ならびにその他の組成物および方法を説明し開示する目的で法的に許容される程度に、参照により開示に含まれる。しかしながら、先行発明によって、本発明がこのような開示より前になされたものではないとすることを認めるように解釈されるべきではない。
【００４６】
実施例
以下の実施例によって本発明をさらに説明するが、当然ながらこれらの実施例は単に説明のために示されたものであり、特に他の指定がない限り本発明の範囲を限定することは目的としない。
【００４７】
実施例１
この実施例は、健康なネコおよびＩＢＤを有するネコの血液から得られたリンパ球のインビトロでのリンパ球増殖に対するＤＨＡおよびＥＰＡの作用を説明する。
【００４８】
この研究では、１１匹の健康なネコ、および、１１匹のＩＢＤを有するネコが用いられた。ＩＢＤを有するネコは、腸生検によって慢性下痢の病歴を有すると診断された。６週間、全てのネコに、胃腸の痛みに適用される栄養的に十分なドライフードを供給した。４、５および６週間目に全てのネコから血液を採取した。等量のリンパ球を含むサンプルを、インビトロでのリンパ球増殖分析で用いた。
【００４９】
さらに具体的に言えば、４．５ｍｌの血液を、４．５ｍｌのＨＢＳＳ（ハンクス平衡塩類溶液）＋２５ｍＭのＨＥＰＥＳと混合した。希釈血液の下に、４ｍｌのフィコール・パック・プラス（Ｆｉｃｏｌｌ−Ｐａｑｕｅ  Ｐｌｕｓ，アマシャム（Ａｍｅｒｓｈａｍ））をゆっくり注入した。この混合物を、５００ｇ、２５℃で２０分間遠心分離した。上層を捨てた。リンパ球を清潔なチューブに移し、６ｍｌのＨＢＳＳ＋２５ｍＭのＨＥＰＥＳに再懸濁し、２００ｇ、２５℃で１０分間遠心分離した。上清を捨て、リンパ球を６ｍｌのＨＢＳＳで洗浄した。この遠心分離および洗浄工程を２回より多く繰り返した。続いて洗浄したリンパ球を５ｍｌのＡＩＭ培地（インビトロジェン（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ））に再懸濁した。１００μｌのＡＩＭ培地中に２００，０００個のリンパ球を含むサンプルを、リンパ球増殖分析に用いた。
【００５０】
リンパ球増殖分析は、アマシャムのバイオトラック（Ｂｉｏｔｒａｋ）細胞増殖ＥＬＩＳＡシステムのバージョン２を利用して行われた。リンパ球サンプルを、７μｇ／ｍｌのＰＨＡ（フィトヘムアグルチニン）を含む９６ウェルプレート中で、１２．５μＭおよび２５μＭのＤＨＡまたはＥＰＡの非存在または存在下で、５％ＣＯ２および９０％湿度の３７℃のインキュベーター中で４０時間インキュベートした。その後、１００μＭのＢｒｄＵ（２０μｌ）を添加し、サンプルを３７℃で２時間インキュベートした。続いてこのプレートをインキュベーターから取り出し、３００ｇ、２５℃で１０分間遠心分離した。培地を軽く叩いて拭き取ることによって除去し、ケミカルドラフト中で細胞を少なくとも１５分間乾燥させた。各ウェルに２００μｌの固定剤を添加し、プレートを室温で３０分間インキュベートした。細胞固定剤を軽く叩いて拭き取ることによって除去し、各ウェルに２００μｌのブロッキング緩衝液を添加し、プレートを室温で３０分間インキュベートした。ブロッキング緩衝液を軽く叩いて拭き取ることによって除去し、各ウェルに１００μｌの抗ＢｒｄＵ使用溶液を添加し、室温で９０分間インキュベートした。抗ＢｒｄＵ溶液を軽く叩いて拭き取ることによって除去し、各ウェルを３００μｌの洗浄溶液で３回リンスした。各ウェルに１００μｌの３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジンを添加し、１０分間、または、色の強さが達成されるまでインキュベートした。反応を止めるために２５μｌの１Ｍ硫酸を添加して、融合型のマイクロプレートリーダー（パーキンエルマー（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ））で５分以内にプレートを読み取った。表１および２に、このインビトロでの増殖分析から得られた結果を示す。
【００５１】
【表１】
2009525949.tif 000002
【００５２】
【表２】
2009525949.tif 000003
【００５３】
表１および２からわかるように、ＩＢＤを有するネコの血液から得られたリンパ球の増殖活性は、健康なネコの血液から得られたリンパ球の増殖活性よりも高かった。ＩＢＤを有するネコからのリンパ球を、１２．５および２５μＭのＤＨＡいずれかと共にインキュベートしたところ、リンパ球増殖の減少が起こった。ＩＢＤを有するネコからのリンパ球を、１２．５および２５μＭのＥＰＡのいずれかと共にインキュベートしたところ、リンパ球増殖の減少は起こらなかった。
【００５４】
実施例２
この実施例は、健康なネコおよびＩＢＤを有するネコの血液から得られたリンパ球のサイトカインプロファイルに対するＤＨＡおよびＥＰＡの作用を説明する。
【００５５】
実施例１で説明されているように、リンパ球を健康なネコおよびＩＢＤを有するネコの血液から得て、続いて、同様に実施例１で説明されているようにしてＤＨＡまたはＥＰＡで処理した。全てのサンプルからリボ核酸（ＲＮＡ）を抽出し、リアルタイムポリメラーゼ連鎖反応（ＲＴ−ＰＣＲ）を行い、以下のサイトカインの発現レベルにおける変化を試験した：インターロイキン１α、１β、２、６、および、１０（ＩＬ−１α、ＩＬ−１β、ＩＬ−２、ＩＬ−６、および、ＩＬ−１０）、マクロファージ遊走阻止因子（ＭＩＦ）、インターフェロンガンマ（ＩＦＮ−γ）、および、トランスフォーミング増殖因子ベータ（ＴＧＦ−β）。表３に、これらのサイトカインのＰＣＲ解析から得られた結果を示す。
【００５６】
【表３】
2009525949.tif 000004
【００５７】
表３を参照すると、ＩＢＤを有するネコにおいて、炎症促進性のインターロイキンＩＬ−２およびＩＦＮ−γの発現レベルは、健康なネコと比較するとかなり高く、これは炎症の存在を示している。ＩＢＤを有するネコにおいて、抗炎症性サイトカインＴＧＦ−βの発現レベルは、健康なネコと比較するとわずかに高く、これは恐らく炎症を抑制するためと考えられる。ＤＨＡは、ＩＢＤを有するネコにおいて、ＩＬ−２およびＩＦＮ−γの発現レベルを、ＤＨＡの非存在下でＰＨＡで刺激された健康なネコにおけるＩＬ−２およびＩＦＮ−γの発現レベルと同様のレベルまで減少させた。ＰＨＡおよびＤＨＡで処理されたＩＢＤを有するネコからのリンパ球におけるサイトカインの発現レベルは、ＤＨＡの非存在下でＰＨＡで処理された健康なネコからのリンパ球におけるサイトカインの発現レベルに類似しており、これは、ＤＨＡが、ＩＢＤを有するネコからのリンパ球のマイトジェン刺激に対する応答を正常な状態にすることを示している。
【００５８】
またＥＰＡも、ＩＢＤを有するネコにおいて、ＩＬ−２およびＩＦＮ−γの発現レベルを、ＥＰＡの非存在下でＰＨＡで刺激されたに健康なネコおけるＩＬ−２およびＩＦＮ−γの発現レベルと同様のレベルに減少させた。ＰＨＡおよびＥＰＡで処理されたＩＢＤを有するネコからのリンパ球におけるサイトカインの発現レベルは、ＥＰＡの非存在下でＰＨＡで処理された健康なネコからのリンパ球におけるサイトカインの発現レベルに類似しており、これは（実施例１で示されるように、ＥＰＡは、インビトロでリンパ球の増殖レベルを減少させなかったにもかかわらず）、ＥＰＡも、ＤＨＡと同様に、ＩＢＤを有するネコからのリンパ球のマイトジェン刺激に対する応答を正常な状態にすることを示している。
【００５９】
本明細書において本発明の典型的な好ましい実施態様を開示し、特定の用語を用いたが、これらは一般的で説明的な意味でのみ用いられ、請求項に記載の本発明の範囲を限定することは目的としない。上記の教示の観点から、極めて多くの本発明の改変および変更が可能である。従って当然ながら、本発明は、添付の請求項の範囲内であれば、具体的に説明したもの以外の方法で実施することができる。
【国際調査報告】
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