(57)【要約】  本発明は、有効量の家禽ワクチン薬剤および該家禽ワクチン薬剤用の支持量のキャリアを含む、吸入による家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物であって、該キャリアは、還元糖または非還元糖と生体適合性ポリマーとの組み合わせを含み、該乾燥粉末組成物は、２〜３０μｍの平均粒径および１．１〜４．０の粒径多分散性を有する粒子の形態である、乾燥粉末組成物を提供する。本発明はまた、該乾燥粉末組成物を生成するための方法および吸入による家禽のワクチン接種のためのシステムに関する。
2009529558.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効量の家禽ワクチン薬剤および前記家禽ワクチン薬剤用の支持量のキャリアを含む、吸入による家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物であって、前記キャリアは、還元糖または非還元糖と生体適合性ポリマーとの組み合わせを含み、前記乾燥粉末組成物は、２〜３０μｍの平均粒径および１．１〜４．０の粒径多分散性を有する粒子の形態である、乾燥粉末組成物。
【請求項２】
ワクチン薬剤が、ウイルス、細菌、真菌、寄生生物およびそれらの部分からなる群から選択される、請求項１に記載の家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物。
【請求項３】
ウイルスが、パラミクソウイルス科、ニューカッスル病ウイルス、ニューモウイルス属、オルソミクソウイルス科、インフルエンザウイルス、コロナウイルス科、伝染性気管支炎ウイルス、シチメンチョウコロナウイルス、シチメンチョウトロウイルス、ピコルナウイルス科、トリ脳脊髄炎ウイルス、アヒル肝炎ウイルス、シチメンチョウ肝炎ウイルス、レオウイルス科、ロタウイルス、ビルナウイルス科、伝染性ファブリキウス嚢病ウイルス、レトロウイルス科、トリ白血病／肉腫ウイルス、アストロウイルス科、パルボウイルス科、ガチョウパルボウイルス、アデノウイルス科、ヘルペスウイルス科、伝染性喉頭気管炎ウイルス、マレック病ウイルス、ポックスウイルス科、ヘパドナウイルス科、アヒル肝炎ウイルス、シチメンチョウ肝炎ウイルス、サーコウイルス科、パポバウイルス科、ガチョウ出血性ポリオーマウイルス、カリシウイルス科、トガウイルス科、アルテリウイルス科、フラビウイルス科、ブンヤウイルス科、ラブドウイルス科、フィロウイルス科、アレナウイルス科からなる群から選択される、請求項２に記載の家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物。
【請求項４】
前記キャリアの割合が、前記乾燥粉末組成物の９０重量％〜９９．９９９重量％である、請求項１〜３のいずれかに記載の家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物。
【請求項５】
前記乾燥粉末が、１０〜３０μｍの平均粒径を有する粒子の形態である、請求項１〜４のいずれかに記載の家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物。
【請求項６】
前記乾燥粉末が、３〜９μｍの平均粒径を有する粒子の形態である、請求項１〜４のいずれかに記載の家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物。
【請求項７】
前記還元糖が、グルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、ソルボース、キシロース、リボース、ラクトース、マルトース、セロビオースおよびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１〜６のいずれかに記載の家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物。
【請求項８】
前記非還元糖が、トレハロース、スクロースおよびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１〜６のいずれかに記載の家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物。
【請求項９】
前記生体適合性ポリマーが、ポリビニルピロリドン、ポリビニルアルコール、デキストラン、化学的に改変されたデキストラン、脂肪族ポリエステル、ポリアクリル酸、カラギナン、キトサン、セルロース誘導体、イヌリン、マルトデキストリン、ポリデキストロース、ポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリメタクリレート、デンプンおよびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１〜８のいずれかに記載の家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物。
【請求項１０】
前記キャリアの組み合わせにおける、前記生体適合性ポリマーと前記還元糖または非還元糖との重量比が、１／１〜１／８である、請求項１〜９のいずれかに記載の家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物。
【請求項１１】
前記キャリアが、１つ以上のタンパク質および／またはポリオールをさらに含む、請求項１〜１０のいずれかに記載の家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物。
【請求項１２】
前記乾燥粉末組成物の含水量が、生成時に４重量％を超えない、請求項１〜１１のいずれかに記載の家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物。
【請求項１３】
乾燥粉末ワクチン接種組成物を生成する方法であって、前記方法は、ワクチン薬剤、液体キャリア、および還元糖または非還元糖と生体適合性ポリマーとの組み合わせを含む支持量の固体キャリアの混合物を含む液相を噴霧乾燥することにより、前記乾燥粉末ワクチン接種組成物が２〜３０μｍの平均粒径を有する粒子の形態で提供される工程を含む、方法。
【請求項１４】
ワクチン薬剤が、ウイルス、細菌、真菌、寄生生物およびそれらの部分からなる群から選択される、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
ウイルスが、パラミクソウイルス科、ニューカッスル病ウイルス、ニューモウイルス属、オルソミクソウイルス科、インフルエンザウイルス、コロナウイルス科、伝染性気管支炎ウイルス、シチメンチョウコロナウイルス、シチメンチョウトロウイルス、ピコルナウイルス科、トリ脳脊髄炎ウイルス、アヒル肝炎ウイルス、シチメンチョウ肝炎ウイルス、レオウイルス科、ロタウイルス、ビルナウイルス科、伝染性ファブリキウス嚢病ウイルス、レトロウイルス科、トリ白血病／肉腫ウイルス、アストロウイルス科、パルボウイルス科、ガチョウパルボウイルス、アデノウイルス科、ヘルペスウイルス科、伝染性喉頭気管炎ウイルス、マレック病ウイルス、ポックスウイルス科、ヘパドナウイルス科、アヒル肝炎ウイルス、シチメンチョウ肝炎ウイルス、サーコウイルス科、パポバウイルス科、ガチョウ出血性ポリオーマウイルス、カリシウイルス科、トガウイルス科、アルテリウイルス科、フラビウイルス科、ブンヤウイルス科、ラブドウイルス科、フィロウイルス科、アレナウイルス科からなる群から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
噴霧乾燥が、３０℃〜１９０℃の範囲の吸込温度において実施される、請求項１３〜１５のいずれかに記載の方法。
【請求項１７】
噴霧乾燥が、１．１〜４．０の粒径多分散性を有する乾燥粉末組成物の提供に適した噴霧乾燥装置において実施される、請求項１３〜１６のいずれかに記載の方法。
【請求項１８】
吸入によって家禽においてワクチン接種を行うためのシステムであって、
−ワクチン薬剤を含む有効量の家禽ワクチンおよび前記家禽ワクチン用の支持量の１つ以上のキャリアを含む乾燥粉末ワクチン接種組成物を含むチャンバであって、前記乾燥粉末組成物が、２〜３０μｍの平均粒径および１．１〜４．０の粒径多分散性を有する粒子の形態である、チャンバおよび
−前記家禽の上に乾燥粉末ワクチン接種組成物を噴霧するための手段
を備える、システム。
【請求項１９】
ワクチン薬剤が、ウイルス、細菌、真菌、寄生生物およびそれらの部分からなる群から選択される、請求項１８に記載の家禽においてワクチン接種を行うためのシステム。
【請求項２０】
ウイルスが、パラミクソウイルス科、ニューカッスル病ウイルス、ニューモウイルス属
、オルソミクソウイルス科、インフルエンザウイルス、コロナウイルス科、伝染性気管支炎ウイルス、シチメンチョウコロナウイルス、シチメンチョウトロウイルス、ピコルナウイルス科、トリ脳脊髄炎ウイルス、アヒル肝炎ウイルス、シチメンチョウ肝炎ウイルス、レオウイルス科、ロタウイルス、ビルナウイルス科、伝染性ファブリキウス嚢病ウイルス、レトロウイルス科、トリ白血病／肉腫ウイルス、アストロウイルス科、パルボウイルス科、ガチョウパルボウイルス、アデノウイルス科、ヘルペスウイルス科、伝染性喉頭気管炎ウイルス、マレック病ウイルス、ポックスウイルス科、ヘパドナウイルス科、アヒル肝炎ウイルス、シチメンチョウ肝炎ウイルス、サーコウイルス科、パポバウイルス科、ガチョウ出血性ポリオーマウイルス、カリシウイルス科、トガウイルス科、アルテリウイルス科、フラビウイルス科、ブンヤウイルス科、ラブドウイルス科、フィロウイルス科、アレナウイルス科からなる群から選択される、請求項１９に記載の家禽においてワクチン接種を行うためのシステム。
【請求項２１】
前記乾燥粉末組成物の含水量が４重量％を超えない、請求項１８〜２０のいずれかに記載の家禽においてワクチン接種を行うためのシステム。
【請求項２２】
前記１つ以上のキャリアが、還元糖、非還元糖、生体適合性ポリマー、タンパク質およびポリオールからなる群から選択される、請求項１８〜２１のいずれかに記載の家禽においてワクチン接種を行うためのシステム。
【請求項２３】
前記１つ以上のキャリアが、還元糖または非還元糖と生体適合性ポリマーとの組み合わせを含む、請求項１８〜２２のいずれかに記載の家禽においてワクチン接種を行うためのシステム。
【請求項２４】
前記組み合わせにおける、前記生体適合性ポリマーと前記還元糖または非還元糖との重量比が、１／１〜１／８である、請求項２３に記載の家禽においてワクチン接種を行うためのシステム。
【請求項２５】
前記１つ以上のキャリアの割合が、前記乾燥粉末組成物の９０重量％〜９９．９９９重量％である、請求項１８〜２４のいずれかに記載の家禽においてワクチン接種を行うためのシステム。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、鳥類の疾患（例えば、ニューカッスル病およびトリインフルエンザであるがこれらに限定されない）に対して、家禽における防御反応の誘導に有用な家畜へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物に関する。本発明はまた、これらの乾燥粉末組成物を使用することによって、吸入を介して家禽においてワクチン接種を行うためのシステムに関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
鳥類の感染症は、家禽生産に対して、ならびにおそらくは、感染した鳥類と直接的または間接的に接触し得る他の動物（特に哺乳動物）および人間の健康に対しての負の経済的影響のために、よく知られている。
【０００３】
例えば、特定の鳥類の病原体（例えば、ニューカッスル病ウイルス（本明細書中、以後ＮＤＶと略す）、伝染性気管支炎ウイルス（ＩＢＶ）、伝染性ファブリキウス嚢病ウイルス（ＩＢＤＶ）、シチメンチョウ鼻気管炎ウイルス（ＴＲＴＶ）、伝染性喉頭気管炎ウイルス（ＩＬＴＶ）、産卵低下症候群（ＥＤＳ）ウイルス、トリ脳脊髄炎ウイルス、細網内皮症ウイルス、トリポックスウイルス、トリアデノウイルス、伝染性コリーザ、家禽チフス、家禽コレラ、トリインフルエンザ、マイコプラズマ・ガリセプチクム（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｇａｌｌｉｓｅｐｔｉｃｕｍ）、大腸菌、サルモネラ種（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐｐ）などであるがこれらに限定されない）は、感染した家禽から伝染し得る。
【０００４】
より詳細には、ニューカッスル病は、家禽産業に多大な経済的損失をもたらし得る、広く地理的に分布している家禽のウイルス感染症である。ＮＤＶは、該疾患の病因物質であり、パラミクソウイルス属のプロトタイプウイルスである。トリパラミクソウイルスには、９つの血清型があり、ＡＰＭＶ−１からＡＰＭＶ−９と命名されている。ニューカッスル病は、様々なＮＤＶ株が、疾患の重症度において非常に重大な変異を誘発し得るという点で複雑である。感染は、吸入または経口摂取のいずれかによって起き得、そして感染型のウイルスが１羽のトリから別のトリへと伝染する。
【０００５】
トリインフルエンザまたは「鳥インフルエンザ」は、通常は鳥類のみに感染するが、稀にブタに感染するインフルエンザＡウイルスによって引き起こされる、動物の接触伝染病である。トリインフルエンザウイルスは、種特異的である傾向にあるが、種の壁を超えて、哺乳動物および人間に感染しうる。インフルエンザＡウイルスは、１６個のＨサブタイプを有する。Ｈ５およびＨ７サブタイプのウイルスだけが、高病原型の疾患を引き起こすことが知られている。現在の鳥インフルエンザの世界的な流行に関与するＨ５Ｎ１ウイルスは、特に頑強であることが証明されており、現在、ヒトの健康に対して特に懸念されている。
【０００６】
粗い液滴および微細な液滴を用い、それぞれスプレーおよびエアロゾルによるワクチン接種が、呼吸器のウイルス感染に対して家禽を保護するために通常使用される集団ワクチン接種技術である。スプレーおよびエアロゾルによるワクチン接種において噴霧化するための方法およびデバイスは、家禽へのワクチン接種に対して特に重要である。なぜなら、その噴霧化には、特別な必要条件（例えば、そのデバイスは、外部のエネルギー供給源を用いて操作しなければならない）があるからである。
【０００７】
疾患の大流行を最適に予防するために、鳥類は、通常、生産者の規格または個々に適したプログラムに従って、生存中に多数回ワクチン接種される。いわゆる初接種（プライミング）は、通常、約２〜３週齢未満のニワトリにおいて行われる。通常、この初接種の後に、１回以上のいわゆる追加接種（ブースター）が行われる。
【０００８】
いくつかの呼吸器系ウイルス、特にＮＤＶを用いた家禽へのワクチン接種の約４８時間後に、ワクチン接種反応が現れ得る。罹患家禽（例えば、ニワトリ）は、呼吸器系の症状、食欲不振、うつ、成長遅延および死亡率の上昇を示し得る。このワクチン接種反応は、二次的な大腸菌症（大腸菌感染）によってさらに複雑になりうる。これを予防するために、それらの鳥類に対してワクチン接種の３６時間後に抗生物質による処置を施す（この処置は、有効であることがしばしば証明されている）。それにもかかわらず、抗生物質の使い過ぎまたは誤用によって、細菌抵抗性が誘導され得、それによって多耐性株がワクチン接種反応を悪化させるときは必ず適切な処置が妨害され得る。
【０００９】
疾患の状況に応じて、低ビルレンス（レントジェニック（ｌｅｎｔｏｇｅｎｉｃ））または中ビルレンス（メソジェニック（ｍｅｓｏｇｅｎｉｃ））の生ウイルスが、通常、ニューカッスル病に対する家禽のワクチン接種に使用される。しかしながら、メソジェニックＮＤワクチンウイルスは、ブースターワクチン接種に対してのみ適している。しかしながら、レントジェニック群においても、ビルレンスにかなりの範囲がある。通常使用される生ワクチンには、レントジェニック株（例えば、Ｖ４、ヒッチナー（Ｈｉｔｃｈｎｅｒ）Ｂ１、Ｆおよびラ・ソタ（Ｌａ  Ｓｏｔａ））およびメソジェニック株（例えば、Ｈ株、ムクテスワール（Ｍｕｋｔｅｓｗａｒ）、コイナロフ（Ｋｏｉｎａｒｏｖ）およびロアキン（Ｒｏａｋｉｎ））が含まれる。
【００１０】
生ＮＤＶワクチンの主な利点は、これらが安価な大量適用手法（例えば、スプレー、エアロゾルおよび飲料水への適用）によって投与され得るという点である。しかしながら先に述べたように、生ワクチンは、エアロゾルワクチン接種後に、特に下気道において重篤なワクチン接種反応を引き起こし得る。この欠点を最小限にするために、特に初接種用の薬剤として、極端に弱いウイルスを使用することが重要である。それにもかかわらず、通常使用される、弱い生ＮＤＶ株のヒッチナーＢ１およびラ・ソタでさえも、中等度の呼吸器系ワクチン接種反応を引き起こし得る。ゆえに、予防接種される動物におけるワクチン接種反応を回避するが、その疾患に対する確かな免疫をもたらすような、ＮＤＶワクチン接種を改善することが当該分野における急務である。
【００１１】
エアロゾル粒子が有効であるために、パラメータ（例えば、トリの種、その年齢、吸入粒子の大きさおよびワクチン接種後反応に対する感受性であるがこれらに限定されない）を考慮して、吸入した粒子が、鳥類の気道の特定領域に沈着されるべきであることが知られている。
【００１２】
粗い噴霧を作るために使用される現在市販されている噴霧器は、より深い気道に沈着させるかなりの割合の粒子を生成する。すなわち、最適サイズ付近の粒径分布が広すぎる。この効果は、ブースターワクチン接種に対して望ましいが、若い鳥類においては有害なワクチン接種反応をもたらし得る。
【００１３】
新しく生成された、空気で運ばれる液滴は、もとの大きさの約１０％まで蒸発する。現在利用可能な噴霧手法を用いて生成されるとき、この現象は、適切なワクチン接種結果を妨害する。なぜなら、
−本来そうあるべきでないが、初接種の間に、かなりの割合のワクチン粒子が、鳥類のより深い気道に沈着し、それによって、高い発生率で呼吸器系のワクチン接種後反応が観察されると説明されるから、
−粒径分布が広く、制御されていないことが原因で、液滴から蒸発したほんの少しの割合の粒子が、追加ワクチン接種の間に下気道に吸入されるから、
である。
【００１４】
不適切な液滴サイズ分布の次に、生成、再構成および噴霧化の間の不活性化に起因するワクチンウイルスの損失が、公知のスプレーおよびエアロゾルによるワクチン接種の効率が低い第２の主な理由である。第１に、通常、液体環境、例えば、特定病原体除去（ＳＰＦ）卵の尿膜腔において増殖するワクチンウイルスは、貯蔵のために凍結乾燥される。ウイルスは、乾燥形態では、環境的な不活性化の要因の影響を受けにくく、また、安定化賦形剤が乾燥前に加えられ得るにもかかわらず、なおも生ワクチンの生成および貯蔵の間にウイルス濃度がいくらか低下する。ワクチンケーク（ｖａｃｃｉｎｅ  ｃａｋｅ）は、噴霧化の前に再構成する必要があり、再構成に使用する水の中に微量の消毒薬が存在するとき、また、液体環境におけるウイルスの温度感度に起因して、ウイルス濃度は、さらに低下し得る。分散後にワクチン液滴が蒸発するとき、この不活性化はさらに増大する。スプレーおよびエアロゾルによるワクチン接種の間のワクチン濃度の大幅な低下によって、十分な免疫応答の誘発が危うくなり得る。さらに、現在の液体懸濁液中のワクチンは、安定性を著しく欠くという欠点を有する。
【００１５】
ＡｌｌａｎらのＡｖｉａｎ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ（１９８０）９：１５３−１６２では、粒径が１〜４μｍであるニワトリワクチン接種用のほぼ単分散のエアロゾルを作製するために一連のカラムに通すことによって曝露チャンバの前に乾燥され得る、湿ったエアロゾル粒子を、非常に高速の回転頂部（ｔｏｐ  ｓｐｉｎｎｉｎｇ）の表面から生成するために、水に溶解したソルビトールを含むニューカッスル病ウイルス溶液の使用が教示されている。
【００１６】
ＷＯ９７／３６５７８では、遺伝子治療用の薬剤と炭水化物などの賦形剤との実質的に均質な混合物を含む、噴霧乾燥された微小粒子が開示されており、その微小粒子の少なくとも９０％は、１〜１０μｍの体積粒径中央値（ｖｏｌｕｍｅ  ｍｅｄｉａｎ  ｐａｒｔｉｃｌｅ  ｓｉｚｅ）を有する。これらの微小粒子は、大きいサイズのキャリアとともに製剤化され得、得られた製剤は、乾燥粉末吸入器を用いて投与され得る。ＷＯ９７／３６５７８には、ワクチン接種、家畜への適用ならびに微小粒子サイズの多分散性についての記載がない。
【００１７】
ＷＯ９９／５２５５０では、水不溶性タンパク質抗原を組み込むためのポリマー粒子ワクチン送達系が開示されており、該系は、生分解性ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）共重合体のエマルジョンから作製され、ここで、得られたポリマー粒子の平均直径は、体積サイズ分布によると０．０５〜２０μｍである。図２は、平均直径が１０μｍである典型的な粒子のサイズ分散度を示している。ＷＯ９９／５２５５０には、鳥類のウイルスおよび噴霧化についての記載がなく、ワクチン送達系における糖類の存在を教示していない。
【００１８】
米国特許第６，６５１，６５５号では、いかなる噴霧ガスも含まない、すなわち、吸息作動式（ｂｒｅａｔｈ  ａｃｔｕａｔｅｄ）の乾燥粉末吸入器を使用して患者において免疫応答をもたらすための方法が開示されている。該乾燥粉末吸入器に充填されているワクチン製剤には、空気力学的粒径が５０μｍ未満である乾燥粉末ワクチン粒子が含まれ、図１は、典型的な粉砕されたワクチン粉末の粒径分布を示している。深肺沈着のためにそのような小さい粒子を作製した時点で、微粉物質は、大きなラクトース粒子、すなわち約１００μｍであるか、または粉砕ワクチン粒子よりも約５０倍大きい粒子と混合される。その構成原理に起因して、米国特許第６，６５１，６５５号に記載の乾燥粉末吸入器は、明らかに、家禽へのワクチン接種に適していない。
【００１９】
ＷＯ２００５／１２３１３１では、抗体またはワクチンを噴霧乾燥するための製剤が開示されており、それには、４〜１０重量％の抗体またはワクチン抗原、０．１ｍＭ〜５０ｍＭの１つ以上のアミノ酸、０．５〜４重量％の糖および水が含まれる。使用される高圧噴霧装置に応じて、液滴は、０．５〜１００μｍの大きさの範囲の乾燥粉末粒子を生成する。ＷＯ２００５／１２３１３１には、微小粒子サイズの多分散性についての記載がなく、アミノ酸と糖類の組み合わせ以外の製剤を考慮していない。
【００２０】
ＭｅｓｚａｒｏｓらのＡｃｔａ  Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｉａ  Ｈｕｎｇａｒｉａ（１９９２）４０：１２１−１２７では、１０μｍ未満のサイズの液滴をもたらすＭａｓｔｅｒｄｒｏｐ  ＭＤ−２５００装置を使用したエアロゾルワクチン接種による、ニューカッスル病に対する１〜１０日齢のニワトリの免疫法が開示されている。この刊行物では、粒子を乾燥させる液滴蒸発を防止するために液滴安定剤が加えられており、また、液滴の平均サイズおよび多分散性について記載されていない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２１】
本発明の目的は、これらの不利点を克服することである。
【課題を解決するための手段】
【００２２】
発明の要旨
本明細書中に示される発明は、家畜へのワクチン接種、特に、プライミングとブースターの両方のワクチン接種に対して使用され得る家禽へのワクチン接種に有効な乾燥固体粉末組成物を提供することによって、簡便かつ安価な様式で現在の家禽へのワクチン接種技術の不利点を克服することができる。
【００２３】
第１に、本発明は、家畜へのワクチン接種のための粉末組成物、特に、吸入による家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物に関し、該組成物は、有効量の家畜ワクチン、特に、１つ以上の微生物またはそれらの部分を含む家禽ワクチンおよび該家畜（特に家禽）ワクチンのための１つ以上のキャリアを含み、ここで、該粉末は、約２〜３０μｍの平均粒径および／または１．１〜４．０の粒径多分散性を有する粒子の形態である。有利なことに、該キャリアセットは、還元糖または非還元糖と生体適合性ポリマーとの組み合わせおよび必要に応じて他のキャリアを含む。第２に、本発明は、家禽においてワクチン接種を行うための方法およびシステムに関し、該方法は、該家禽の上に乾燥粉末ワクチン接種組成物を噴霧する工程を含み、特に、該乾燥粉末ワクチン接種組成物は、約２〜３０μｍの平均粒径および／または１．１〜４．０の粒径多分散性を有する粒子の形態である。第３に、本発明は、乾燥粉末剤形の製剤化において標準的な製造装置を用いて、簡便かつ安価な様式で上記の乾燥粉末家禽ワクチン接種組成物を生成するための方法およびプロセスに関する。
【発明の効果】
【００２４】
一態様において、本発明は、ワクチン溶液を再構成することなく、家禽の上に直接噴霧化するのに適した、家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物を提供し、ゆえに、家禽産業において現在実施されている、家禽の上に噴霧化する前のワクチン接種組成物の溶解に関連する、任意の再構成工程に固有のワクチン濃度の損失が克服され、そして、液滴が制御されずに乾燥するという重大なリスクが克服される。本発明のこの態様において、ワクチン溶液を事前に再構成することなく、乾燥粉末ワクチン接種組成物の噴霧化が、容易かつ効率的に分配され、吸入に適さない粒径をもたらし得る粒子凝集の著しいリスクを回避する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
発明の詳細な説明
本発明の第１の態様の最も関連性のある特徴は、
−家畜へのワクチン接種のための粉末組成物（好ましくは、吸入による家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物）中に、適当な量（好ましくは、支持量）の家畜ワクチン用の１つ以上のキャリアが存在することであって、該１つ以上のキャリアが、好ましくは、還元糖または非還元糖と生体適合性ポリマーとの組み合わせおよび必要に応じて他のタイプのキャリアを含むこと、および／または
−ワクチン接種粉末が、粒子（好ましくは、約２〜３０μｍの平均粒径を有する本質的に乾燥された粒子）の形態であること、および／または
−ワクチン接種粉末が、例えば、約１．１〜４．０の比較的狭い粒径多分散性を有すること、
である。
【００２６】
乾燥ワクチン接種粉末の粒径に関するとき、用語「多分散性」とは、本明細書中で使用されるとき、別途記載されない限り、比ｄ（８４％）／ｄ（５０％）、すなわち、体積ベースの粒径分布の積算曲線上の８４％に相当する直径を、体積ベースの粒径分布の積算曲線上の５０％に相当する直径で除算したもののことをいう。
【００２７】
有用なワクチン接種組成物は、本発明の目的を満たしながら、ワクチン接種される家禽のタイプ（種）および年齢に応じて、上で述べた重要なパラメータの特定の部分範囲を組み合わせることによって適切に選択され得る。この点において、家禽のタイプ（種）は、本発明の重大なパラメータではなく、そのタイプには、ニワトリだけでなく、家畜鳥類（例えば、シチメンチョウ、ガチョウ、キジ、子ガモなど）および愛玩鳥類もまた含まれ得る。例えば、約１０〜３０μｍ、好ましくは約１５〜２５μｍ、またはなおも良くはおよそ２０μｍの平均粒径を有する粉末組成物は、１日齢〜約３週齢のニワトリの１回目のワクチン接種に特に望ましい。他方で、約３〜９μｍ、例えば約３〜６μｍまたはおよそ５μｍの平均粒径を有する粉末ワクチン接種組成物は、家禽の追加（ブースター）ワクチン接種に対して好ましい。
【００２８】
可能な限り小さい粒径多分散性は、本発明の乾燥粉末ワクチン接種組成物およびシステムの正確な制御における重要なパラメータであり、対応するワクチン接種方法が最終的に成功することにおける決定的なパラメータである。適当なワクチン接種効率は、すでに本発明の乾燥粉末組成物を使用して達成することができており、ここで、その粒径多分散性は、３．０より低く、好ましくは２．５より低く、なおもより好ましくは２．０より低い。粒径がより小さいときは多分散性制御を達成することがより困難であり、また、ワクチン接種効率と多分散性制御のコストとの適正なバランスが求められるので、多くの場合において、生成の再現性とコストとの相反する必要条件およびワクチン接種効率を考慮に入れて、少なくとも１．３、または少なくとも１．５、およびなおも少なくとも１．７であることが、乾燥粉末ワクチン接種組成物の粒径多分散性にとって十分であり得る。ゆえに、本発明の粉末組成物の粒径多分散性に適した作用範囲は、約１．３〜約３．０、好ましくは１．５〜２．５である。
【００２９】
乾燥粉末組成物中に存在する１つ以上のキャリアの割合は、本発明の限定的な特徴ではなく、通常、本組成物の生成可能性に影響を与えない。この割合は、様々なパラメータ（例えば、キャリアの技術的な機能および数、それらの相互適合性、家畜（特に家禽）ワクチン薬剤のタイプおよび濃度、すなわち、微生物（またはそれらの部分）のタイプ、ならびに、必要に応じて、達成されるべき標的平均粒径（例えば、ワクチン接種される家禽のタイプおよび年齢に応じて）であるがこれらに限定されない）に応じて、当該分野における標準的な知識を用いて当業者によって選択され得る。該１つ以上のキャリアの割合は、０．１％〜９９．９９９％という広い範囲、例えば、０．１％〜９９．９％（例えば、該
乾燥粉末組成物の０．５％〜９９．５重量％）または１％〜９９％もしくは２％〜９８％、例えば９０％〜９９．９９９重量％であり得る。その結果として、ワクチン接種薬剤の割合は、該乾燥粉末組成物の０．００１％〜９９．９重量％、例えば、０．００１％〜１０重量％の範囲であり得る。
【００３０】
乾燥粉末組成物中に存在する該１つ以上のキャリアの種類および性質が、粉末形態においてワクチンの安定性および直接的な噴霧化の容易さに関与し、様々なパラメータ（例えば、各々個別のキャリアによって発揮される技術的機能、他のキャリアとの適合性（複数のキャリアの場合）およびコストの問題であるがこれらに限定されない）に応じて、当該分野における標準的な知識を用いて当業者によって選択され得るならば、それらは、本発明の限定的な特徴ではない。該１つ以上のキャリアは、好ましくは獣医学的に許容可能なグレードであり、適切には、
−還元糖（例えば、グルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、ソルボース、キシロース、リボース、ラクトース、マルトース、セロビオースなどであるがこれらに限定されない）、
−非還元糖（例えば、トレハロース、スクロースなどであるがこれらに限定されない）
−ポリオール（例えば、マンニトール、ソルビトール、マルチトール、キシリトール、エリトリトール、イノシトールなどであるがこれらに限定されない）
−生体適合性ポリマー（例えば、ポリビニルピロリドン、ポリ酢酸ビニル、脂肪族ポリエステル、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ乳酸−コ−グリコリド）、ポリカプロラクトン、ポリ（ラクチド−コ−カプロラクトン）、ポリアクリル酸、カラギナン、キトサン、セルロース誘導体、デキストラン、化学的に改変されたデキストラン、イヌリン、マルトデキストリン、ポリエチレングリコール、ポリエチレンオキシド、ポリメタクリレート、ポリビニルアルコール、デンプンなどであるがこれらに限定されない）、
−タンパク質（例えば、アルブミン、粉乳血清、カゼインなどであるがこれらに限定されない）および
−脂質（例えば、ＤＰＰＣ、ＤＳＰＣなどであるがこれらに限定されない）
からなる群から選択され得るが、これらに限定されない。
【００３１】
しかしながら、驚いたことに、還元糖または非還元糖と生体適合性ポリマーとの組み合わせが、家禽へのワクチン接種の当該分野で公知の他のタイプの獣医学的に許容可能なキャリアよりも、粉末形態でのワクチンの安定性および直接的な噴霧化の容易さに関して優れた効果を有することが見出された。ゆえに、そのような組み合わせが、本発明の乾燥粉末組成物中に存在するキャリアの最も重要な部分を構成することが好ましい。特定の状況において、この特定の組み合わせのキャリアを本明細書の上記で特定した他のタイプのキャリア（例えば、ポリオール、脂質、タンパク質などであるがこれらに限定されない）で補完することが望ましい場合がある。本発明の乾燥粉末組成物において非還元糖をキャリアとして使用することは、通常、還元糖を使用するよりも好ましい。この好ましさはまた、非還元糖の割合が優勢である混合物を使用することによっても達成され得る。
【００３２】
これらの１つ以上の好ましくは獣医学的に許容可能なキャリアは、単独で使用され得るか、または、好ましくは粉末特性を最適化するために任意の適当な割合で組み合わされて使用され得る。例えば、適当な安定化キャリアは、乾燥すると非晶質になる傾向があり、そして／または、水代替材料として作用する傾向があり、そして／または、カプセル化によって材料を保護する傾向があり、これらの性質は、乾燥粉末組成物の中に含まれている微生物（例えば、ウイルス）のもとの構造を保存することおよび長時間の粉末の安定性に寄与することを補助し得る。
【００３３】
従来の生ワクチン、弱毒化ワクチンおよび不活性化ワクチンならびに組換えワクチン、サブユニットワクチン、ペプチドワクチンおよびＤＮＡワクチンは、本発明の家畜へのワ
クチン接種（好ましくは家禽へのワクチン接種）のための粉末組成物中の家畜へのワクチン接種活性薬剤として適切に使用され得る。
【００３４】
ワクチン薬剤（例えば、家畜へのワクチン接種のための粉末組成物に適切に組み込まれ得る弱毒ウイルス、特に、本発明の吸入による家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物）は、任意の公知の従来の方法によって得ることができる。簡潔には、感受性の培養基に関連ウイルスを接種し得、そのウイルスが所望の濃度に複製するまで増殖させた後、ウイルス含有材料を回収する。ウイルス複製を持続することができる任意の培養基は、本発明を実施するために適切に使用され得、それらとしては、主要な（鳥類の）培養細胞（例えば、ニワトリ胚線維芽細胞（ＣＥＦ）またはニワトリ腎臓細胞（ＣＫ））または哺乳動物細胞株（例えば、ＶＥＲＯ細胞株またはベビーハムスター腎臓（ＢＨＫ）細胞株）が挙げられる。好ましくは、ウイルスを特定病原体除去（ＳＰＦ）ニワトリ胚において増殖する。
【００３５】
より詳細には、関連ウイルスが増殖され得る適当な培養基は、ＳＰＦ孵化卵である。例えば、１個の卵あたり、少なくとも１０２胚感染用量５０（本明細書中、ＥＩＤ５０と略する）を含む０．２ｍｌのＮＤＶ含有尿膜腔液を孵化卵に接種し得る。好ましくは、９〜１２日齢の孵化卵に約１０５ＥＩＤ５０で接種し、続いて２〜４日間３７℃でインキュベートした後、好ましくは尿膜腔液を回収することによってＮＤウイルス産物を回収し得る。次いで、この尿膜腔液を２５００ｇで約１０分間遠心した後、上清をフィルター（１００μｍ）で濾過し得る。
【００３６】
本発明はまた、家畜へのワクチン接種のための上記の粉末組成物、特に、吸入による家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物を生成する方法に関し、該方法は、有効量の家畜（好ましくは家禽）へのワクチン接種活性薬剤と、適当量の、好ましくは支持量の、該家畜へのワクチン接種活性薬剤のための１つ以上のキャリア（好ましくは、還元糖または非還元糖と生体適合性ポリマーとの組み合わせ）との混合物を含む水性製剤を凍結乾燥する工程、ならびに、次いで、約２〜３０μｍの平均粒径および必要に応じて約１．１〜４．０の粒径多分散性を有する乾燥粒子の形態で該粉末組成物を提供するように該凍結乾燥工程の直接的な生成物を粉砕する工程を含む。後者のパラメータの部分範囲は、本明細書の上記に記載した通りである。
【００３７】
さらに別の態様において、本発明は、家畜へのワクチン接種のための上記の乾燥粉末組成物、特に、吸入による家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物を生成する方法に関し、該方法は、約２μｍ〜約３０μｍの平均粒径および必要に応じて約１．１〜４．０の粒径多分散性を有する乾燥粒子の形態で該粉末組成物を提供するように、有効量の家畜ワクチンと、該家畜ワクチンのための支持量の１つ以上のキャリア（好ましくは、還元糖または非還元糖と生体適合性ポリマーとの組み合わせ）との混合物を含む液相を噴霧乾燥する工程を含む。本発明の生成方法、好ましくは、噴霧乾燥工程は、ある温度、すなわち、以下に説明するような約３０℃〜約１７０℃の範囲または１９０℃の高さの吸込温度において実施され得る。当業者は、使用される噴霧乾燥装置のタイプおよび供給速度に応じて、噴霧乾燥温度が、噴霧乾燥デバイスの入口と出口とにおいてかなり異なり得ることを理解する。噴霧乾燥温度は、本発明のこの態様の限定的な特徴ではなく、従来の温度範囲は、約４０℃〜約１６０℃である。本発明のこの態様において使用される噴霧乾燥装置は、本発明の重大な特徴ではなく、市販のまたは当該分野で標準的な任意のタイプであり得る。
【００３８】
本発明の家畜へのワクチン接種乾燥粉末組成物は、その平均粒径および／または粒径多分散性の特徴を考慮して、鳥類にとって吸入可能であり、ゆえに、家禽、例えば、任意のタイプのキジ類の家禽の予防的または治療的な免疫化に効率的に使用され得、また、適当
な投与経路としては、該家禽の上に乾燥粉末ワクチン接種組成物を噴霧化することが挙げられるがこれらに限定されない。
【００３９】
別の態様において、本発明は、ワクチン溶液の再構成なしに、家禽の上に直接噴霧化するためのシステムにおいて含まれるのに適した家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物を提供し、それにより、ワクチン濃度の損失および粒子凝集が回避される。本発明のこの態様は、本発明の先の態様の乾燥粉末組成物に限定されないが、ワクチン濃度の損失および粒子凝集の回避に対して同じ有益な効果を有する、家禽へのワクチン接種のための任意の乾燥粉末組成物にも使用され得る。
【００４０】
本発明のさらなる態様は、ワクチン接種システム（例えば、家畜へのワクチン接種、好ましくは、上記の家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物を含む噴霧装置）に関する。より詳細には、本発明は、吸入によって家禽においてワクチン接種を行うためのシステムに関し、そのシステムは、
−１つ以上の家禽ワクチンを含む有効量の家禽ワクチンおよび該家禽ワクチンのための支持量の１つ以上のキャリアを含む乾燥粉末ワクチン接種組成物を含むチャンバであって、該乾燥粉末組成物が、２〜３０μｍの平均粒径および１．１〜４．０の粒径多分散性を有する粒子の形態である、チャンバおよび
−該家禽の上に乾燥粉末ワクチン接種組成物を噴霧するための手段
を備える。好ましくは、この装置は、ガスとともに該乾燥粉末組成物を家禽に向かって拍出するための手段を備える。好ましくは、該ガスは、空気である。本発明を効率的に実施するために、鳥類に吸入され得、気道に問題を引き起こし得る特別な噴霧ガスを使用する必要はない。
【００４１】
本発明のなおもさらなる態様は、家禽においてワクチン接種を行うための方法に関し、該方法は、該家禽の上に、上記のような乾燥粉末組成物を噴霧する工程を含む。このワクチン接種工程が、２〜３週齢前の家禽における初接種（プライミング）であるとき、該乾燥粉末組成物は、好ましくは約１０〜３０μｍ、より好ましくは約１５〜２５μｍ、またはなおも良くはおよそ２０μｍの平均粒径を有する粒子の形態である。このワクチン接種が、２〜３週齢を超える家禽における追加接種（ブースター）であるとき、該乾燥粉末組成物は、好ましくは、約３〜９μｍ、より好ましくはおよそ５μｍの平均粒径を有する粒子の形態である。
【００４２】
「家畜（特に家禽）へのワクチン接種組成物」とは、本明細書中で使用されるとき、動物、特に鳥類に有効量が投与されるとき、疾病から該動物を保護する免疫応答を惹起する少なくとも１つのタンパク質またはそのフラグメントを含む組成物のことをいう。本発明のワクチン接種組成物において使用するために、その家畜活性薬剤は、生の、弱毒化、不活性化または組換えの、微生物（例えば、ウイルス、細菌、マイコプラズマまたはクラミドフィラ（ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｙｌａ）であるがこれらに限定されない）を適切に含み得る。
【００４３】
特に適当なワクチンは、例えば、
−ウイルス（例えば、パラミクソウイルス科（Ｐａｒａｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ニューカッスル病ウイルス、ニューモウイルス属（Ｐｎｅｕｍｏｖｉｒｕｓｅｓ））、オルソミクソウイルス科（Ｏｒｔｈｏｍｙｘｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、インフルエンザウイルス）、コロナウイルス科（Ｃｏｒｏｎａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、伝染性気管支炎ウイルス、シチメンチョウコロナウイルス、シチメンチョウトロウイルス）、ピコルナウイルス科（Ｐｉｃｏｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、トリ脳脊髄炎ウイルス、アヒル肝炎ウイルス、シチメンチョウ肝炎ウイルス）、レオウイルス科（Ｒｅｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ロタウイルス）、ビルナウイルス科（Ｂｉｒｎａｖｉｒｉｄａｅ）（例
えば、伝染性ファブリキウス嚢病ウイルス）、レトロウイルス科（Ｒｅｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、トリ白血病／肉腫ウイルス）、アストロウイルス科（Ａｓｔｒｏｖｉｒｉｄａｅ）、パルボウイルス科（Ｐａｒｖｏｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ガチョウパルボウイルス）、アデノウイルス科（Ａｄｅｎｏｖｉｒｉｄａｅ）、ヘルペスウイルス科（Ｈｅｒｐｅｓｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、伝染性喉頭気管炎ウイルス、マレック病ウイルス）、ポックスウイルス科（Ｐｏｘ  ｖｉｒｉｄａｅ）、ヘパドナウイルス科（Ｈｅｐａｄｎａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、アヒル肝炎ウイルス、シチメンチョウ肝炎ウイルス）、サーコウイルス科（Ｃｉｒｃｏｖｉｒｉｄａｅ）、パポバウイルス科（Ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ）（例えば、ガチョウ出血性ポリオーマウイルス）、カリシウイルス科（Ｃａｌｉｃｉｖｉｒｉｄａｅ）、トガウイルス科（Ｔｏｇａｖｉｒｉｄａｅ）、アルテリウイルス科（Ａｒｔｅｒｉｖｉｒｉｄａｅ）、フラビウイルス科（Ｆｌａｖｉｖｉｒｉｄａｅ）、ブンヤウイルス科（Ｂｕｎｙａｖｉｒｉｄａｅ）、ラブドウイルス科（Ｒｈａｂｄｏｖｉｒｉｄａｅ）、フィロウイルス科（Ｆｉｌｏｖｉｒｉｄａｅ）、アレナウイルス科（Ａｒｅｎａｖｉｒｉｄａｅ）であるがこれらに限定されない）、
−細菌（例えば、サルモネラ属（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ）、カンピロバクター属（Ｃａｍｐｙｌｏｂａｃｔｅｒ）、大腸菌、パスツレラ属（Ｐａｓｔｅｕｒｅｌｌａ）（家禽コレラ）、リエメレラ・アナチペスチファー（Ｒｉｍｅｒｅｌｌａ  ａｎａｔｉｐｅｓｔｉｆｅｒ）、オルニトバクテリウム・リノトラキエレ（Ｏｒｎｉｔｈｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｒｈｉｎｏｔｒａｃｈｅａｌｅ）、ヘモフィルス・パラガリナルム（Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｐａｒａｇａｌｌｉｎａｒｕｍ）、ボルデテラ・アビウム（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ａｖｉｕｍ）（シチメンチョウコリーザ）、マイコプラズマ属（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ）（特にマイコプラズマ・ガリセプチクム）、クロストリジウム属（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉａ）、ブドウ球菌属（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）、連鎖球菌属（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ）、エンテロコッカス属（Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ）、スピロヘータ属（Ｓｐｉｒｏｃｈｅｔｅｓ）、マイコバクテリウム属（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ）およびクラミドフィラ属（Ｃｈｌａｍｙｄｏｐｈｉｌａ）（オウム病、鳥類病）であるがこれらに限定されない）、
−真菌（例えば、アスペルギルス属（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）などであるがこれらに限定されない）および
−寄生生物（例えば：線形動物（Ｎｅｍａｔｏｄｅｓ）、鉤頭虫類（Ａｃａｎｔｈｏｃｅｐｈａｌａｎｓ）、球虫類（Ｃｏｃｃｉｄｉａ）、クリプトスポリジウム属（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）およびコクロソマ・アナチス（Ｃｏｃｈｌｏｓｏｍａ  ａｎａｔｉｓ）であるがこれらに限定されない）
由来の、生の、弱毒のまたは不活化された、微生物および組換えワクチン、サブユニットワクチン、ペプチドワクチンならびにＤＮＡワクチンである。
【００４４】
本発明の特定の有用な実施形態の例示として、以下のニューカッスル病ウイルス株を使用し得る：
−レントジェニックワクチン（例えば、ヒッチナー−Ｂ１、ラ・ソタ、クローン３０、Ｖ４、ＮＤＷ、Ｉ２およびＦであるがこれらに限定されない）および
−メソジェニックワクチン（例えば、ロアキン、ルクテスワール（Ｌｕｋｔｅｓｗａｒ）およびコマロフ（Ｋｏｍａｒｏｖ）であるがこれらに限定されない）。
【００４５】
本発明の特定の有用な実施形態の別の例示として、以下のトリインフルエンザ株を使用し得る：Ｈ５Ｎ１アジア株。
【００４６】
本発明によれば、免疫化は、家禽による本発明の乾燥粉末組成物の吸入によって達成される。例えば、選択された平均粒径および／または選択されたキャリアの組み合わせ、ならびに／または必要に応じて選択された粒径多分散性を有する乾燥粉末組成物群に、ニワトリを曝露する。免疫の持続時間は、選択されるワクチン接種プログラムに依存し得る。
ワクチン接種プログラムに影響を及ぼす最も重要な考慮すべき事柄の１つは、若いニワトリにおける先天性免疫のレベルであり、これは、農場ごと、バッチごとおよび個別のニワトリごとにかなり多様であり得る。このため、いくつかのストラテジーの１つ以上を以下のとおり使用してもよい。その鳥類のほとんどが、感受性であるとき、それらには２〜４週齢までワクチン接種しないか、または粗い噴霧を適用することによって、１日齢の鳥類をワクチン接種する。次いで、３〜４週間後に再度ワクチン接種を行う。
【００４７】
噴霧乾燥によって、噴霧乾燥工程の後に適当な平均粒径および／または適当な粒径多分散性の分散性乾燥粉末粒子を粉砕する必要なく、それらを直接送達することができる。このプロセスでは、液体のウイルス懸濁液を、高い温度の乾燥気体媒質（例えば、空気であるがこれらに限定されない）中に噴霧化することによって、適当な平均粒径および適当な粒径分布の乾燥微粒子の形態に迅速に転換する。大きな空気−水界面積を作り出し、迅速に水を蒸発させ、ほんの数秒で乾燥が完了する。乾燥の初期段階の間に、液滴表面が、１００％の相対湿度で残存する場合、表面温度は、上記の高い空気温度よりもかなり低い湿球温度で維持される。ウイルス自体は、高温に曝露されず、このことは、得られる粉末製剤の所望の安定性に寄与する。水を蒸発させるとき、固体のウイルス含有粒子の周りの空気は、水分の取り込みに起因してすでに冷却されている。不安定な材料の安定性のために通常使用されるキャリア（例えば、好ましくは、還元糖または非還元糖と生体適合性ポリマーとの組み合わせ、および必要に応じてポリオール、タンパク質もしくは脂質またはそれらの混合物）を本明細書の上で述べたように任意の適当な割合で使用することによって、ウイルスの変性も回避され得る。
【００４８】
特別で通常高額な生成条件および／または貯蔵条件が提供されない限り、粉末組成物の完全な乾燥を長時間達成または維持することが容易にできないことは、当業者に周知である。ゆえに、用語「乾燥」とは、本明細書中で使用されるとき、水分が完全に無くなるストリンジェントな条件のことをいうわけではない。すべての標準的な産業的予防措置のもとで、市販の装置を用いて適切に行う場合、本明細書の上記の噴霧乾燥および凍結乾燥による生成方法は、生成時に約４重量％を超えない、好ましくは、約３重量％を超えない、より好ましくは約２重量％を超えない、含水量の粉末組成物を再現性よく達成することができる。そのようなレベルの粉末ワクチン接種組成物の残留水分含有量は、本発明のワクチン接種システムに該粉末を含めるため、および本発明のワクチン接種方法を実施するために十分受け入れられる。実際に使用する前に都合よく保存される（すなわち、貯蔵室における過剰な貯蔵温度および／または過剰な湿度を回避する）場合、そのような乾燥粉末ワクチン接種組成物の含水量は、長時間著しく増加しない（特に、貯蔵の１２週間後に約６重量％を超えない）。
【００４９】
典型的には、本発明の家畜へのワクチン接種粉末組成物は、動物１頭あたり約１０３〜１０８のＥＩＤ５０の用量、好ましくは、約１０５〜１０７のＥＩＤ５０の範囲の用量で投与され得る。
【００５０】
本発明を、実際の特定の実施形態に関して以下の実施例において説明するが、本発明は、その実施例に限定されず、特許請求の範囲によってのみ限定される。
【実施例１】
【００５１】
実施例１−噴霧乾燥による乾燥粉末ワクチン接種組成物の調製
キャリアとして４重量％トレハロースおよび１重量％ポリビニルピロリドンならびにニューカッスル病ウイルス（２．１０１２のＥＩＤ５０／グラム固体）を含む水溶液を、Ｍｏｂｉｌｅ  Ｍｉｎｏｒ噴霧乾燥器を使用することによって噴霧乾燥した。１ｍｍの２流体ノズルを１バールの噴霧空気圧で操作した。吸込温度を１６０℃に設定し、それによって、２６ｍｌ／分の供給速度とともに７０℃の吹き出し温度がもたらされた。
【００５２】
得られた粉末を、
−カールフィッシャー滴定を用いて、含水量および水吸収について
−示差走査熱量測定を用いて熱力学的特性について、および
−レーザー散乱を使用して粒径分布について（図１を参照のこと）（使用される装置は、Ｍａｓｔｅｒｓｉｚｅｒ  Ｓロングベンチバージョン（Ｍａｌｖｅｒｎ製）である）
評価した。
【００５３】
生成した直後の得られた粉末の含水量は、３．１重量％であり、シリカを含む蓋で密閉されたガラスバイアル内において２２℃、４２％相対湿度で貯蔵した１週間後に５．９重量％に上昇した。得られた材料は、ガラス転移温度が６５℃の完全な非晶質であった。図１に示すように、乾燥粉末の粒径多分散性（本明細書の上記で定義したように）は、１．８であり、平均粒径は、６μｍであった。
【００５４】
乾燥させた直後に、粉末のアリコートをＳＰＦ卵に接種し、インキュベーション後、血球凝集試験を用いて尿膜腔液中のウイルス含有量を測定した。これによって、噴霧乾燥粉末の１グラムあたり２．１０１１のＥＩＤ５０が保持され得ることが示された。
【実施例２】
【００５５】
実施例２−微細な乾燥粉末ワクチンおよび液体ワクチンの噴霧化後の、空気中のウイルス濃度の比較評価
３．８重量％の含水量および家禽の追加接種（すなわち、下気道へ沈着）に適した粒径を有する微細な乾燥ワクチン接種粉末を、１ｍｍの２流体ノズル（吸込温度１６０℃、吹き出し温度７０℃、供給速度２５ｍｌ／分、乾燥ガス速度８０ｋｇ／時、噴霧空気圧２バール）を備えたＭｏｂｉｌｅ  Ｍｉｎｏｒパイロットプラント乾燥器を使用することによって水溶液から本発明に従って調製した。供給溶液１ｍｌあたり１０７のＥＩＤ５０クローン３０ワクチンウイルスが加えられた蒸留水中に、３％（ｗ／ｗ）トレハロース二水和物、１％（ｗ／ｗ）ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、１％（ｗ／ｗ）ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含む供給溶液を噴霧乾燥に供した。
【００５６】
比較目的で、市販のクローン３０ワクチンを５ｍｌの蒸留水中に再構成し、そのうちの３０μｌを、微細なエアロゾル追加接種ワクチンの実験的適用に使用されることが多いＷａｌｔｈｅｒ  Ｐｉｌｏｔ  Ｉ噴霧ヘッドを用いて噴霧化用に、さらに５ｍｌに希釈した。
【００５７】
本発明の乾燥粉末ワクチンの粒径分布および噴霧された比較液体ワクチンの液滴サイズ分布（ノズルレベルで）をレーザー回折によって測定した。結果を図２に示し、ここで、曲線（１）は、本発明の微細なトレハロース−ＰＶＰ−ＢＳＡ乾燥粉末ワクチンに関し、曲線（２）は、微細な比較液体エアロゾルに関する。本発明の乾燥粉末ワクチン接種組成物の粒径多分散性は、２．０であり、その平均粒径は、７μｍであった。比較液体エアロゾルの平均液滴サイズは、２４μｍであった。
【００５８】
１ｇの粉末ワクチンおよび５ｍｌの希釈液体ワクチンを１．３ｍ３の隔離器（２８℃および４０％ＲＨ）内に噴霧し、そして噴霧化の直後に、空気サンプルをゼラチンフィルター上に採取することにより、空気中におけるウイルス濃度を評価した（１０日齢の孵化卵におけるインキュベーションおよびその後の血球凝集アッセイ）。
【００５９】
結果を図３に示し、ここで、用語「ウイルスの噴霧用量」とは、ウイルスが沈降によって空気から消失しないか、または噴霧プロセスによって不活性化されない場合に空気中に存在するはずのウイルスの理論的用量を表し、ここで、柱（１）は、微細なトレハロース
−ＰＶＰ−ＢＳＡ乾燥粉末ワクチンに関し、柱（２）は、噴霧された微細な比較液体ワクチンに関する。これらの結果は、噴霧化の直後に粉末ワクチンにおいて空気中の高いウイルス濃度が得られたこと、および、その濃度が理論的な噴霧濃度よりもわずかに低いだけであった（１０６．５から１０６．１への低下）ことを示している。しかしながら、微細な液体ワクチンの噴霧化の後に、ウイルス力価の大幅な低下が生じ（１０７．４から１０３．４未満に）、これは上で述べた気候条件におけるワクチン液滴の蒸発に起因する。
【実施例３】
【００６０】
実施例３−７μｍの平均粒径を有する乾燥粉末ワクチン接種組成物を用いたニワトリの免疫化
実施例２において生成し、特徴付けた微細な乾燥ワクチン接種粉末を、１．３ｍ３の容積の隔離器内に収容した４週齢の特定病原体除去ブロイラーニワトリ（すなわちＮＣＤ抗体を有しない）に投与した。１群は、微細な乾燥粉末ワクチンを投与され、１群は、ワクチン接種されていないブランクコントロールとして使用した。
【００６１】
ワクチン接種の２および４週間後の血液サンプルを採取し、血球凝集阻害（ＨＩ）アッセイによってＮＣＤウイルスに対する抗体について評価した。結果を図４に示し、ここで、柱（１）は、微細なトレハロース−ＰＶＰ−ＢＳＡ粉末に関する。本発明の乾燥粉末組成物は、レントジェニックＮＣＤワクチン１回の適用後に、通常得られる２４〜２６というＨＩ力価よりも高いＨＩ力価で、ワクチン接種の２週間後に十分な免疫応答をもたらす。反復測定ＡＮＯＶＡデザインによる統計解析は、ワクチン接種の２〜４週間後の力価の有意な増加を示した。
【実施例４】
【００６２】
実施例４−粗い乾燥粉末ワクチン接種組成物を用いたニワトリの免疫化
３．３重量％の含水量および初接種（すなわち、上気道における沈着）に適した粒径を有する粗い乾燥ワクチン接種粉末を、実施例２と同じ水性供給溶液からであるが、３０μｍの圧力作動式ノズル（吸込温度９０℃、吹き出し温度７０℃、供給速度３０ｍｌ／分、乾燥ガス流速２５ｋｇ／時、液滴生成周波数５０ｋＨｚ）を備えた噴霧乾燥器を使用して調製した。
【００６３】
粒径分布を、実施例２（レーザー回折）と同じ方法および装置によって評価し、結果を図２に示し、ここで、曲線（３）は、粗いトレハロース−ＰＶＰ−ＢＳＡ乾燥粉末ワクチンに関する。粒径多分散性は、１．２であり、平均粒径は、２９μｍであった。
【００６４】
このワクチンを、１．３ｍ３の容積の隔離器内に収容した４週齢の特定病原体除去ブロイラーニワトリ（すなわち、ＮＣＤ抗体を有しない）に投与した。１群は、粗い乾燥粉末ワクチンを投与され、１群は、ワクチン接種されていないブランクコントロールとして使用した。
【００６５】
ワクチン接種の２および４週間後の血液サンプルを採取し、血球凝集阻害（ＨＩ）アッセイによってＮＣＤウイルスに対する抗体について評価した。結果を図４に示し、ここで、柱（３）は、粗いトレハロース−ＰＶＰ−ＢＳＡ粉末に関する。本発明の乾燥粉末組成物は、レントジェニックＮＣＤワクチン１回の適用後に、通常得られる２４〜２６というＨＩ力価の範囲内のＨＩ力価で、ワクチン接種の２週間後に十分な免疫応答をもたらす。反復測定ＡＮＯＶＡデザインによる統計解析は、ワクチン接種の２〜４週間後の力価の有意な増加を示した。実施例３の微細なトレハロース−ＰＶＰ−ＢＳＡ粉末と比べて、有意に低い免疫応答は、ワクチンの沈着部位の違い（すなわち、粗い粉末については上気道、微細な粉末については下気道）に関するものである。
【図面の簡単な説明】
【００６６】
【図１】図１は、各画分（左の目盛り）と累積的な画分（右の目盛り）の両方に対する体積パーセンテージでの、本発明の家畜へのワクチン接種のための典型的な乾燥粉末組成物の粒径の分布（単位：ミクロン）を示している。
【図２】図２は、レーザー回折技術を用いて測定したときの、従来技術の噴霧された液体ワクチンの累積的な液滴のサイズ分布と比べて、本発明の噴霧された乾燥粉末ワクチンの累積的な粒径の分布を示している。
【図３】図３は、従来技術の噴霧された微細な液体ワクチンと比べて、本発明の噴霧された微細な乾燥粉末ワクチンのＥＩＤ５０／ｍ３空気として表されるウイルス濃度を示している。
【図４】図４は、噴霧型乾燥粉末ワクチンを用いたワクチン接種の２および４週間後に得られた平均血球凝集阻害（ＨＩ）血清力価を示している。エラーバーは、標準偏差を表している。
【図１】
2009529558.tif 000003
【図２】
2009529558.tif 000004
【図３】
2009529558.tif 000005
【図４】
2009529558.tif 000006
【手続補正書】
【提出日】平成20年11月14日(2008.11.14)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ウイルス、細菌、真菌、寄生生物およびそれらの部分からなる群から選択される有効量の家禽ワクチン薬剤および前記家禽ワクチン薬剤用の支持量のキャリアを含む、吸入による家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物であって、前記キャリアは、還元糖または非還元糖と生体適合性ポリマーとの組み合わせを含み、前記乾燥粉末組成物は、２〜３０μｍの平均粒径および１．１〜４．０の粒径多分散性を有する粒子の形態であり、前記キャリアの組み合わせにおける、前記生体適合性ポリマーと前記還元糖または非還元糖との重量比が、１／１〜１／８である、乾燥粉末組成物。
【請求項２】
前記還元糖が、グルコース、フルクトース、マンノース、ガラクトース、ソルボース、キシロース、リボース、ラクトース、マルトース、セロビオースおよびそれらの混合物からなる群から選択される、請求項１〜４のいずれかに記載の家禽へのワクチン接種のための乾燥粉末組成物。
【請求項３】
乾燥粉末ワクチン接種組成物を生成する方法であって、前記方法は、ウイルス、細菌、真菌、寄生生物およびそれらの部分からなる群から選択されるワクチン薬剤、液体キャリア、および還元糖または非還元糖と生体適合性ポリマーとの組み合わせを含む支持量の固体キャリアの混合物を含む液相を噴霧乾燥することにより、前記乾燥粉末ワクチン接種組成物が２〜３０μｍの平均粒径を有する粒子の形態で提供される工程を含む、方法。
【請求項４】
吸入によって家禽においてワクチン接種を行うためのシステムであって、
−ウイルス、細菌、真菌、寄生生物およびそれらの部分からなる群から選択されるワクチン薬剤を含む有効量の家禽ワクチンおよび前記家禽ワクチン用の支持量の１つ以上のキャリアを含む乾燥粉末ワクチン接種組成物を含むチャンバであって、前記乾燥粉末組成物が、２〜３０μｍの平均粒径および１．１〜４．０の粒径多分散性を有する粒子の形態である、チャンバおよび
−前記家禽の上に乾燥粉末ワクチン接種組成物を噴霧するための手段
を備える、システム。
【請求項５】
前記１つ以上のキャリアが、還元糖、非還元糖、生体適合性ポリマー、タンパク質およびポリオールからなる群から選択される、請求項４に記載の家禽においてワクチン接種を行うためのシステム。
【請求項６】
前記１つ以上のキャリアが、還元糖または非還元糖と生体適合性ポリマーとの組み合わせを含み、前記組み合わせにおける、前記生体適合性ポリマーと前記還元糖または非還元糖との重量比が、１／１〜１／８である、請求項５に記載の家禽においてワクチン接種を行うためのシステム。
【国際調査報告】
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