(57)【要約】血清群Ｃ髄膜炎菌結合体抗原を含むワクチンに対する種々改変であって、（ａ）無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原との同時投与；（ｂ）不活性化ポリオウイルス抗原との同時投与；（ｃ）別々の肺炎球菌コンポーネントと一緒にキット中に供給され、これが液体形態であり得；（ｄ）リン酸アルミニウムアジュバントなしで肺炎球菌結合体抗原との組み合わせ使用を含む。キットは、（ａ）Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖の水性形態を含む第１の免疫原性成分；および（ｂ）Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖を含む第２の免疫原性成分を有し得る。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖、および不活性化ポリオウイルス抗原を含有する免疫原性組成物であって、該組成物が水性形態である、組成物。
【請求項２】
さらにＢ型肝炎ウイルス表面抗原を含有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物が水酸化アルミニウムアジュバントおよびリン酸アルミニウムアジュバントを含有する、請求項１または請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分を含むキットであって、ここで：
（ａ）該第１の免疫原性成分がＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖の水性処方物を含み；そして（ｂ）該第２の免疫原性成分がＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖を含む、キット。
【請求項５】
前記Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の莢膜糖がＯＡｃ＋である、請求項１〜４のいずれかに記載の組成物またはキット。
【請求項６】
前記第１の成分がリン酸アルミニウムアジュバントを含まない、請求項４または請求項５に記載のキット。
【請求項７】
前記第２の成分がリン酸アルミニウムアジュバントを含まない、請求項４または請求項５または請求項６に記載のキット。
【請求項８】
前記Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ結合体がリン酸アルミニウムアジュバントに吸着されない、請求項１〜７に記載の組成物またはキット。
【請求項９】
前記Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ結合体がリン酸アルミニウムアジュバントに吸着される、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物またはキット。
【請求項１０】
前記Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の莢膜糖が凍結乾燥形態である、請求項４〜９のうちのいずれか１項に記載のキット。
【請求項１１】
前記第１の成分が：ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原；Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原；および不活性化ポリオウイルス抗原のうちの１つ以上を含む、請求項４〜１０のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１２】
前記第２の成分が：ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原；Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原；および不活性化ポリオウイルス抗原のうちの１つ以上を含む、請求項４〜１０のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１３】
前記ポリオウイルス抗原が、１型ポリオウイルス、２型ポリオウイルスおよび３型ポリオウイルス由来の抗原を含む、請求項１１または請求項１２に記載のキット。
【請求項１４】
前記Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原が、リン脂質、ホスファチジルイノシトールおよびポリソルベート２０を含む脂質マトリックスを含有する粒子の形態である、請求項１１または請求項１２に記載のキット。
【請求項１５】
前記Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原が、アミノ酸配列番号１を有する、請求項１１〜１４のいずれか１項に記載のキット。
【請求項１６】
Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の莢膜糖およびＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の莢膜糖が各々同じキャリアタンパク質に結合体化される、請求項１〜１５のいずれかに記載の組成物またはキット。
【請求項１７】
前記同じキャリアタンパク質が破傷風トキソイドである、請求項１６に記載の組成物またはキット。
【請求項１８】
前記同じキャリアタンパク質がＨａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のプロテインＤである、請求項１６に記載の組成物またはキット。
【請求項１９】
前記同じキャリアタンパク質がＣＲＭ１９７である、請求項１６に記載の組成物またはキット。
【請求項２０】
前記Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ結合体が１：１０と１０：１との間の糖：タンパク質比（ｗ／ｗ）を有する請求項１〜１９のいずれかに記載の組成物またはキット。
【請求項２１】
前記Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ結合体が１：１０と１０：１との間の糖：タンパク質比（ｗ／ｗ）を有する請求項１〜２０のいずれかに記載の組成物またはキット。
【請求項２２】
前記Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ結合体が用量あたり１μｇと２０μｇ（糖として測定して）との間で存在する、請求項１〜２１のいずれかに記載の組成物またはキット。
【請求項２３】
前記Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ結合体が用量あたり１μｇと２０μｇ（糖として測定して）との間で存在する、請求項１〜２２のいずれかに記載の組成物またはキット。
【請求項２４】
前記組成物が少なくともＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ血清群６Ｂ、１４、１９Ｆおよび２３Ｆについての糖抗原を含有する、請求項１〜２３のいずれかに記載の組成物またはキット。
【請求項２５】
２−フェノキシエタノールを含む、請求項１〜２４のいずれかに記載の組成物またはキット。
【請求項２６】
いずれかのアルミニウム塩の濃度が３ｍｇ／ｍｌ未満である、請求項１〜２５に記載の組成物またはキット。
【請求項２７】
医薬における使用のための請求項１〜２６のいずれかに記載の組成物またはキット。
【請求項２８】
患者において免疫応答を惹起する方法であって、請求項１〜２７のいずれかに記載の組成物を該患者に投与する工程を包含する、方法。
【請求項２９】
患者を免疫するための医薬の製造における、（ａ）Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖の水性処方物、および（ｂ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖の使用。
【請求項３０】
（ａ）Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖、（ｂ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群ＣのＯＡｃ＋株由来の結合体化莢膜糖、および（ｃ）Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原を含有する、免疫原性組成物。
【請求項３１】
少なくとも第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分を含むキットであって、ここで（ａ）該成分のうちの１つが、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖を含み、（ｂ）該成分のうちの１つが、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群ＣのＯＡｃ＋株由来の結合体化莢膜糖を含み、（ｃ）該成分のうちの１つが、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原を含む、キット。
【請求項３２】
（ａ）Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖、（ｂ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群ＣのＯＡｃ＋株由来の結合体化莢膜糖、および（ｃ）不活性化ポリオウイルス抗原を含む、免疫原性組成物。
【請求項３３】
少なくとも第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分を含むキットであって、ここで（ａ）該成分のうちの１つが、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖を含み、（ｂ）該成分のうちの１つが、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群ＣのＯＡｃ＋株由来の結合体化莢膜糖を含み、（ｃ）該成分のうちの１つが、不活性ポリオウイルス抗原を含む、キット。
【請求項３４】
第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分を含むキットであって、ここで凍結乾燥形態において（ａ）該第１の免疫原性成分が、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイドおよび無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原の水性組成物を含み；そして（ｂ）該第２の免疫原性成分が、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群ＣのＯＡｃ＋株由来の結合体化莢膜糖を含む、キット。
【請求項３５】
第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分を含むキットであって、ここで（ａ）該第１の免疫原性成分が、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群ＣのＯＡｃ＋株由来の結合体化莢膜糖を含み；そして（ｂ）該第２の免疫原性成分が、無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原および不活性化ポリオウイルス抗原を含む、キット。
【請求項３６】
第１の免疫原性成分、第２の免疫原性成分および第３の免疫原性成分を含むキットであって、ここで（ａ）該第１の免疫原性成分が、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群ＣのＯＡｃ＋株由来の結合体化莢膜糖を含み；（ｂ）該第２の免疫原性成分が、無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原および／または不活性化ポリオウイルス抗原を含み；そして（ｃ）該第３の免疫原性成分が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖を含む、キット。
【請求項３７】
第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分および必要に応じて第３の免疫原性成分を含むキットであって、ここで（ａ）該第１の免疫原性成分が、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群ＣのＯＡｃ＋株由来の結合体化莢膜糖を含むが、リン酸アルミニウムアジュバントを含まず；（ｂ）該第２の免疫原性成分が、無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原および／または不活性化ポリオウイルス抗原を含み；そして（ｃ）該必要に応じた第３の成分が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖を含む、キット。
【請求項３８】
Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群ＣのＯＡｃ＋株由来の結合体化莢膜糖、無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原および／または不活性化ポリオウイルス抗原を含む、免疫原性組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本明細書に引用されるすべての文書は、その全体が参考として援用される。
【０００２】
（技術分野）
本発明は、複数の病原体に対して患者に免疫性を与える分野にある。
【背景技術】
【０００３】
（背景技術）
１回の用量中に１つより多い病原性生物体由来の抗原を含むワクチンは、「多価」または「組み合わせ」ワクチンとして公知である。ジフテリア、破傷風および百日咳を予防するための３価のワクチン（「ＤＴＰ」ワクチン）ならびに麻疹、おたふくかぜおよび風疹を予防するための３価のワクチン（「ＭＭＲ」ワクチン）を含む種々の組み合わせワクチンが、ＥＵおよびＵＳＡにおいてヒトの使用のために認可されている。
【０００４】
組み合わせワクチンは、受ける注射の数が減るという利点を患者に提供し、これは特に小児のワクチン接種に関してコンプライアンスの増加（参考文献１（非特許文献１）の２９章を参照のこと）という臨床的利点を導く。しかしながら同時に、抗原と他の成分との間の物質的および生化学的不適合性；免疫学的干渉；および安定性を含む因子による製造上の問題が存在する。種々の組み合わせワクチンは、参考文献２〜１０（非参考文献２〜８、特許文献１、２）に開示される。
【０００５】
２００５年に広く公表された研究［１１］（非特許文献９）は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ（「ＭｅｎＣ」）莢膜糖結合体ワクチンの免疫原性が、組み合わせワクチンとして９価のＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ結合体化糖とともに投与されると減少されることを報告した。さらに、減少した応答は、ｂ型Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ（「Ｈｉｂ」）結合体との同時投与およびジフテリアトキソイドとの同時投与の両方にみられた。著者らは、「Ｐｎｃ９−ＭｅｎＣ」組み合わせワクチンが、「個々のＭｅｎＣワクチンまたは肺炎球菌複合糖質ワクチンの適した代替物ではないかもしれない」と結論付けている。さらに、著者らは、この不適合性は、合わせた抗原の性質に関連付けられ得ず、「このワクチンを別々に投与することは、同じ効果を有し得ることが可能である」ことを示唆した。
【０００６】
従って、これら２つの成分（ＭｅｎＣおよび肺炎球菌）の免疫原性の有意な損失なしにＭｅｎＣおよび肺炎球菌を予防し得る免疫が以前として必要である。これら４つの成分（ＭｅｎＣ、肺炎球菌、ジフテリアおよびＨｉｂ）の免疫原性の有意な損失なしにＭｅｎＣ、肺炎球菌、ジフテリアおよびＨｉｂを予防し得る免疫がさらに必要である。より一般的には、ＭｅｎＣ免疫を既存の免疫スケジュールに組み込むことが以前として必要である。
【特許文献１】国際公開第０２／００２４９号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０２／０８０９６５号パンフレット
【非特許文献１】Ｖａｃｃｉｎｅｓ、ＰｌｏｔｋｉｎおよびＯｒｅｎｓｔｅｉｎ、第４版、２００４年、ＩＳＢＮ：０−７２１６−９６８８−０
【非特許文献２】Ｄａｇａｎら、Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ、７２：５３８３〜９１、２００４年
【非特許文献３】Ｔｅｊｅｄｏｒら、Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  Ｊ、２３：１１０９〜１５、２００４年
【非特許文献４】Ｈａｌｐｅｒｉｎら、Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  Ｍｅｄ、２５：２４３〜５１、２００２年
【非特許文献５】Ｓｃｈｍｉｔｔら、Ｖａｃｃｉｎｅ、２１：３６５３〜６２、２００３年
【非特許文献６】Ｓｈｉｎｅｆｉｅｌｄら、Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  Ｊ．、１８：７５７〜６３
【非特許文献７】Ｓｌａｃｋら、Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ．、１８４：１６１７〜２０、２００１年
【非特許文献８】Ｔｉｃｈｍａｎｎ−Ｓｃｈｕｍａｎｎら、Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ、２４：７０〜７７、２００５年
【非特許文献９】Ｂｕｔｔｅｒｙら、ＪＡＭＡ、２９３：１７５１〜１、２００５年
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
（本発明の開示）
参考文献１１の研究は、ＭｅｎＣの免疫原性の減少を見出したが、この減少は本発明に関してはみられない。参考文献１１の研究と比較して、本発明は、いくつかの鍵となる局面において異なり、個々にまたは組み合わせて開発され得、先行技術の失敗に代わって成果を挙げる。
【０００８】
参考文献１１の研究は、全細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原を使用し、ＭｅｎＣ免疫原性の減少を見出したが、本発明の第１の局面においてＭｅｎＣ結合体抗原は、無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原とともに同時投与され、免疫原性の損失は観察されなかった。この状況は、Ｈｉｂ結合体を用いた以前の経験と対照的であり、一般的に全細胞性百日咳と適合するが、無細胞性百日咳とは不適合であることがしばしば報告されている。このことはまた、肺炎球菌結合体を用いた以前の経験と対照的であり、ここで無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原とともに同時投与された場合、抗体応答は減少されるが細胞性抗原を使用した場合、抗体応答は減少されなかった［２］。無細胞性抗原の使用は、細胞性抗原の使用よりもむしろ安全性および反応産生の点で利点を提示する。
【０００９】
さらに、参考文献１１の研究は、ＭｅｎＣ／Ｐｎｃ９ワクチンを経口ポリオワクチン（「ＯＰＶ」）と同時に投与し、ＭｅｎＣの免疫原性の減少を見出したが、本発明の第２の局面においてＭｅｎＣ結合体抗原は、注射可能形態でポリオワクチン（例えば、不活性化ポリオウイルスワクチン（「ＩＰＶ」）とともに同時投与され、免疫原性の損失は観察されなかった。ＯＰＶに代わるＩＰＶの使用は、ワクチン関連性のポリオ麻痺の危険性を排除する。
【００１０】
さらに、参考文献１１の研究は、肺炎球菌およびＭｅｎＣ結合体が、予め混合された組み合わせとして供給されるワクチン組成物を使用し、ＭｅｎＣの免疫原性の減少を見出すが、本発明の第３の局面においてＭｅｎＣ結合体抗原は肺炎球菌結合体と別々に供給され、キットの一部の形態において、免疫原性の損失は観察されていない。ＭｅｎＣおよび肺炎球菌結合体は、患者に別々に投与され得る（例えば、異なる部位で）か、または組み合わせ投与として使用時に混合され得る。キットを製造し、配布することは、完全液体組み合わせワクチンとしては都合がよくないが、この種のキットが現在使用されており（例えば、ＩＮＦＡＮＲＩＸ  ＨＥＸＡＴＭ製）、この不都合は、免疫原性の増加および抗原の安定性により相殺され得る。
【００１１】
さらに参考文献１１の研究は、肺炎球菌およびＭｅｎＣ結合体が凍結乾燥した組み合わせとして供給されるワクチン組成物を使用し、ＭｅｎＣの免疫原性の減少を見出すが、本発明の第４の局面において肺炎球菌結合体抗原は、液体の形態で供給され、免疫原性の損失が観察されなかった。ＭｅｎＣ結合体は、凍結乾燥された形態であり得るか、または液体の形態でもあり得る。液体の形態で肺炎球菌結合体を供給することは、使用時の再構成の必要性をさけ、また凍結乾燥形態にある任意のその他の免疫原性成分を再構成するために使用されることを可能にする。
【００１２】
さらに、参考文献１１の研究は、肺炎球菌およびＭｅｎＣ結合体がリン酸アルミニウムアジュバントとの組み合わせで供給され、ＭｅｎＣ免疫原性の減少が見出され、本発明の５つの局面において、髄膜炎菌結合体抗原は、リン酸アルミニウムアジュバントなしで供給され、免疫原性の損失は観察されない。リン酸アルミニウムアジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバントで置換され得るか、またはアルミニウムアジュバントを全くふくまないことが可能である。さらにアルミニウム塩の代替物もまた可能である。
【００１３】
最終的に、本発明の第６の局面において、ＭｅｎＣおよび肺炎球菌結合体は、無細胞性百日咳抗原および不活性化ポリオウイルス抗原のいずれかまたは両方とともに投与され、２つの結合体は同じキャリアタンパク質を使用する。一般的なキャリアタンパク質は、同時に免疫系にもたらされる異なる抗原の数全体を減少させ、また製造中、より利便性を提供する。１つより多い肺炎球菌結合体が投与される場合、次いで各肺炎球菌結合体は、同じキャリアタンパク質を有し得るか、または異なるキャリアタンパク質があり得るが、少なくとも１つの肺炎球菌結合体は、ＭｅｎＣ結合体と同じキャリアタンパク質を有する。
【００１４】
本発明のこれら第６の局面が、以下により詳細に記載される。
【００１５】
２００４年１２月に刊行された参考文献３は、ＩＮＦＡＮＲＩＸ  ＨＥＸＡＴＭ（ＧＳＫ）を乳児に対して別々に、大腿にＭＥＮＩＮＧＩＴＥＣＴＭ（Ｗｙｅｔｈ）とともに同時投与した研究を記載する。ＩＮＦＡＮＲＩＸ  ＨＥＸＡＴＭは、付加的に凍結乾燥されたＨｉｂ成分を有する液体Ｄ−Ｔ−Ｐａ−ＨＢｓＡｇ−ＩＰＶ処方物として供給され、このＨｉｂ成分は使用時に５価の液体処方物とともに再懸濁され、６価の組み合わせワクチンを与える。ＭＥＮＩＮＧＩＴＥＣＴＭは、リン酸アルミニウムアジュバントを含む液体処方物として供給される。反対に、本発明の第５の局面を用いて、髄膜炎菌結合体抗原は、リン酸アルミニウムアジュバント抗原なしで供給される。参考文献３と比べてまた、本発明の第７の局面において、髄膜炎菌結合体抗原凍結乾燥形態で供給される。この凍結乾燥形態は、注射前に液体形態に再構成され、この再構成は（ａ）組み合わせワクチンを与えるための水性Ｄ−Ｔ−Ｐ含有処方物、または（ｂ）Ｄ−Ｔ−Ｐａ含有処方物との同時投与のための別々の水性キャリアを使用し得る。
【００１６】
参考文献４は、髄膜炎菌Ｃ結合体ワクチンが５価のＤ−Ｔ−Ｐａ−ＩＰＶ−Ｈｉｂワクチンと同時投与された研究を開示する。参考文献５は、肺炎球菌Ｃ結合体ワクチンが５価のＤ−Ｔ−Ｐａ−ＩＰＶ−Ｈｉｂワクチンとともに同時投与された研究を開示する。これら５価のワクチンは、いずれもＨＢｓＡｇを含まない。参考文献６は、（ａ）ＨＢｓＡｇが、乳児に肺炎球菌結合体ワクチンと同時に投与され、そして（ｂ）別々のＤ−Ｔ−ＰａワクチンおよびＨｉｂワクチンが、歩き始めの幼児に肺炎球菌結合体ワクチンと同時に投与された研究について開示する。参考文献７は、髄膜炎菌Ｃ結合体ワクチンが４価のＤ−Ｔ−Ｐａ−Ｈｉｂワクチンと同時投与された研究を記載する。本発明の第８の局面において、髄膜炎菌血清群Ｃおよび肺炎球菌結合体は、Ｂ型肝炎表面抗原とともに投与される。本発明の第９の局面において、髄膜炎菌血清群Ｃおよび肺炎球菌結合体は、不活性化ポリオウイルス抗原とともに投与される。
【００１７】
本発明のこれら９つの局面は以下により詳細に記載される。この９つの局面は、個々にまたは組み合わせて利用される。
【００１８】
参考文献８は、６価のＤ−Ｔ−Ｐａ−ＨＢＶ−ＩＰＶ−Ｈｉｂワクチンが、７価の肺炎球菌結合体ワクチンとともに同時投与されたが、髄膜炎菌結合体が使用されない研究を記載する。参考文献９および１０は、種々の可能な組み合わせワクチンを記載し、これらは、髄膜炎菌結合体を含み得るが、具体的な詳細は欠如している（例えば、提案された髄膜炎菌血清群Ｃ糖のＯ−アセチル化状態に関する開示はない）。
【００１９】
（無細胞性百日咳抗原の使用）
本発明の第１の局面において、ＭｅｎＣ結合体（「ＭＣＣ」）抗原は、通常「Ｐａ」として公知の無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原とともに同時に投与される。このＭＣＣ抗原およびＰａ抗原は、患者に別々に投与されるか、組み合わせワクチンとして投与され得る。
【００２０】
従って本発明は、第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分を含むキットを提供し、ここで：（ａ）第１の免疫原性成分は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖を含み；そして（ｂ）第２の免疫原性成分は、無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原を含む。
【００２１】
無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原に加え、第２の免疫原性成分は、好ましくは：ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；ＨＢｓＡｇ；不活性化ポリオウイルス抗原；および必要に応じて結合体化Ｈｉｂ抗原のうちの１つ以上を含む。
【００２２】
このキットはまた、結合体化肺炎球菌糖抗原を含む成分を含み得る。
【００２３】
本発明はまた：（ａ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖；および（ｂ）無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原を含む免疫原性組成物を提供する。ＭＣＣおよび無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原に加え、この組成物は：ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；ＨＢｓＡｇ；不活性化ポリオウイルス抗原；および必要に応じて結合体化Ｈｉｂ抗原のうちの１つ以上を含み得る。この組成物はまた、結合体化肺炎球菌糖抗原を含み得る。
【００２４】
（注射可能ポリオワクチンの使用）
本発明の第２の局面において、ＭｅｎＣ結合体（「ＭＣＣ」）抗原は、注射可能なポリオウイルス抗原（例えば、ソールクワクチンとしても公知の不活性化ポリオウイルスワクチン（ＩＰＶ））とともに同時に投与される。このＭＣＣ抗原およびＩＰＶ抗原は、患者に別々に投与されるか、または組み合わせワクチンとして投与され得る。
【００２５】
従って、本発明は、第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分を含むキットを提供し、ここで：（ａ）第１の免疫原性成分は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖を含み；そして（ｂ）第２の免疫原性成分は、不活性化ポリオウイルス抗原を含む。
【００２６】
ＩＰＶに加え、第２の免疫原性成分は、好ましくは：ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；ＨＢｓＡｇ；無細胞性百日咳抗原；および必要に応じて結合体化Ｈｉｂ抗原のうちの１つ以上を含む。
【００２７】
このキットはまた、結合体化肺炎球菌糖抗原を含む成分を含み得る。
【００２８】
本発明はまた：（ａ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖；および（ｂ）不活性化ポリオウイルス抗原を含む免疫原性組成物を提供する。ＭＣＣおよび無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原に加え、この組成物は：ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；ＨＢｓＡｇ；不活性化ポリオウイルス抗原；および必要に応じて結合体化Ｈｉｂ抗原のうちの１つ以上を含み得る。この組成物はまた、結合体化肺炎球菌糖抗原を含み得る。
【００２９】
（セパレートキット成分としてのＭｅｎＣの供給）
本発明の第３の局面において、ＭｅｎＣ結合体（「ＭＣＣ」）抗原は、キットの各部の形態で、肺炎球菌結合体（「ＰｎＣ」）と別々に供給される。
【００３０】
従って本発明は、第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分を含むキットを提供し、ここで：（ａ）第１の免疫原性成分は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖を含み；そして（ｂ）第２の免疫原性成分は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖を含む。
【００３１】
第１の成分は加えて：ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；百日咳抗原；およびＨＢｓＡｇのうちの１つ以上を含み得る。この成分はまた、不活性化ポリオウイルス抗原を含み得る。この成分はまた、結合体化Ｈｉｂ抗原を含み得る。しかしながらこれら６つの付加的な抗原のうちの１つが第１の成分に含まれる場合、この抗原はまた第２の成分に含まれない。
【００３２】
第２の成分は加えて：ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；百日咳抗原；およびＨＢｓＡｇのうちの１つ以上を含み得る。この成分はまた、不活性化ポリオウイルス抗原を含み得る。この成分はまた、結合体化Ｈｉｂ抗原を含み得る。しかしながらこれら６つの付加的な抗原のうちの１つが第２の成分に含まれる場合、この抗原はまた第１の成分に含まれない。
【００３３】
第１の成分も第２の成分もジフテリアトキソイドを含まない場合、ジフテリアトキソイドは、さらにキットのコンポーネント中に含まれ得る。同様に、第１の成分も第２の成分も破傷風トキソイドを含まない場合、破傷風トキソイドは、さらにキットのコンポーネント中に含まれ得る。同様に、第１の成分も第２の成分も百日咳抗原を含まない場合、百日咳抗原は、さらにキットのコンポーネント中に含まれ得る。同様に、第１の成分も第２の成分もＨＢｓＡｇを含まない場合、ＨＢｓＡｇは、さらにキットのコンポーネント中に含まれ得る。同様に、第１の成分も第２の成分もＨｉｂ結合体を含まない場合、Ｈｉｂ結合体は、さらにキットのコンポーネント中に含まれ得る。同様に、第１の成分も第２の成分もＩＰＶを含まない場合、ＩＰＶは、さらにキットのコンポーネント中に含まれ得る。
【００３４】
ジフテリア、破傷風および百日咳抗原は、代表的にはキット中の同じコンポーネントに一緒に含まれる。
【００３５】
（液体肺炎球菌結合体）
本発明の第４の局面において、肺炎球菌結合体抗原は、液体形態で供給される。同時に投与されるＭｅｎＣ結合体は：（ｉ）凍結乾燥形態で別々に；（ｉｉ）液体形態でも別々に；または（ｉｉｉ）液体形態で肺炎球菌結合体との混合物で供給され得る。
【００３６】
従って本発明は、第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分を含むキットを提供し、ここで：（ａ）第１の免疫原性成分は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖の水性形態を含み；そして（ｂ）第２の免疫原性成分は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖を含む。この第２の成分のＭＣＣは、水性形態または凍結乾燥形態であり得る。
【００３７】
第１および／または第２の成分はまた：ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原；ＨＢｓＡｇ；および不活性化ポリオウイルス抗原のうちの１つ以上を含み得る。好ましくは、これら付加的な抗原の５つすべてが第１の成分または第２の成分のいずれかに含まれる。代替物として、この５つの抗原は、第３の免疫原性成分としてキットに提供され得る。このキットは、第１の成分または第２（あるいは第３）の成分に結合体化Ｈｉｂ抗原を含み得る。
【００３８】
本発明はまた、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖およびＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖を含む免疫原性組成物を提供し、ここでこの組成物は水性形態である。この免疫原性組成物はまた、好ましくは：ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原；ＨＢｓＡｇ；不活性化ポリオウイルス抗原；および必要に応じて結合体化Ｈｉｂ抗原のうちの１つ以上を含む。
【００３９】
（ＭｅｎＣを含むリン酸アルミニウムアジュバント）
本発明の第５の局面において、髄膜炎菌結合体抗原は、リン酸アルミニウムアジュバントなしで供給される。このリン酸アルミニウムアジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバントで置き換えられ得るか、またはアルミニウムアジュバントを少しも含まないことが可能である。同時に投与される肺炎球菌結合体は、リン酸アルミニウムアジュバントとともに供給され得る。
【００４０】
従って本発明は、第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分を含むキットを提供し、ここで：（ａ）第１の免疫原性成分は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖を含むがリン酸アルミニウムアジュバントを含まず；そして（ｂ）第２の免疫原性成分は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖を含む。
【００４１】
好ましい組み合わせにおいて、第１の免疫原性成分はリン酸アルミニウムアジュバントを含まないが、水酸化アルミニウムアジュバントを含み得る。代替物として、第１の免疫原性成分が非アルミニウムベースのアジュバントを含み得る場合、アルミニウム塩を含まなくてもよいか、またはアジュバントを少しも含まなくてよい。
【００４２】
好ましい組み合わせにおいて、リン酸アルミニウムが第１の成分に許容される場合、第１の成分は水酸化アルミニウムアジュバントとリン酸アルミニウムアジュバントの混合物を含み得る。従って本発明はまた、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖およびＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖を含む免疫原性組成物を提供し、ここでこの組成物は水酸化アルミニウムアジュバントおよびリン酸アルミニウムアジュバントを含む。
【００４３】
さらなる代替物において、リン酸アルミニウムアジュバントは第１の成分に許容され、髄膜炎菌結合体成分はリン酸アルミニウムアジュバントに吸着される。従って本発明はまた、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖およびＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖を含む免疫原性組成物を提供し、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ結合体はリン酸アルミニウムアジュバントに吸着される。本発明はまた、第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分を含むキットを提供し、ここで：（ａ）第１の免疫原性成分は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖を含み、これはリン酸アルミニウムアジュバントに吸着され；そして（ｂ）第２の免疫原性成分は、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖を含む。この肺炎球菌結合体はまた、リン酸アルミニウムアジュバントに吸着され得る。
【００４４】
この成分は加えて：ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；百日咳抗原；およびＨＢｓＡｇのうちの１つ以上を含み得る。また、不活性化ポリオウイルス抗原を含み得る。また、結合体化Ｈｉｂ抗原を含み得る。
【００４５】
（ＭｅｎＣおよびＰｎＣのためのキャリアタンパク質）
本発明の第６の局面において、ＭｅｎＣ結合体および肺炎球菌結合体は、無細胞性百日咳抗原および不活性化ポリオウイルス抗原のいずれか、または両方とともに投与され、この２つの結合体は、同じキャリアタンパク質を使用する。キャリア誘導性の抑制の危険性にもかかわらず、参考文献１１の著者の示唆と対照的に、ＭｅｎＣ結合体および肺炎球菌結合体は互いに相互作用しないことが本明細書中に見出されている。
【００４６】
従って本発明は：（ａ）第１のキャリアタンパク質に結合体化されるＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の莢膜糖、（ｂ）第２のキャリアタンパク質に結合体化されるＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の莢膜糖、および（ｃ）第１のキャリアタンパク質および第２のキャリアタンパク質が同じであることに特徴付けられる無細胞性百日咳抗原および／または不活性化ポリオウイルス抗原を含む免疫原性組成物を提供する。この組成物はまた：ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；ＨＢｓＡｇ；および／または結合体化Ｈｉｂ糖のうちの１つ以上を含み得る。
【００４７】
「同じ」キャリアタンパク質を使用することは、肺炎球菌糖および髄膜炎菌糖の両方が接着される１つのキャリアタンパク質分子があることを意味しない（参考文献１２と比較せよ）。むしろこの２つの結合体は互いに別々であるが、第１の結合体に使用されるキャリアは、第２の結合体に使用されるのと同じキャリアである。例えば、肺炎球菌糖はＣＲＭ１９７に結合体化され、髄膜炎菌糖もまたＣＲＭ１９７に結合体化されるが、肺炎球菌糖および髄膜炎菌糖の両方が結合体化されるＣＲＭ１９７はない。従ってこの結合体は、別々に調製され、続いて合わせられる。
【００４８】
本発明はまた、ＰｎＣ、ＭＣＣおよびＰａまたはＩＰＶのうちの１つあるいは両方を含むキットを提供する：
・少なくとも第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分を含むキットであって、ここで：（ａ）成分のうちの１つは第１のキャリアタンパク質に結合体化されるＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の莢膜糖を含み、（ｂ）成分のうちの１つは第２のキャリアタンパク質に結合体化されるＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の莢膜糖を含み、そして（ｃ）成分のうちの１つは第１のキャリアタンパク質および第２のキャリアタンパク質が同じであることに特徴付けられる無細胞性百日咳抗原を含む。
・少なくとも第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分を含むキットであって、ここで：（ａ）成分のうちの１つは第１のキャリアタンパク質に結合体化されるＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の莢膜糖を含み、（ｂ）成分のうちの１つは第２のキャリアタンパク質に結合体化されるＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の莢膜糖を含み、そして（ｃ）成分のうちの１つは第１のキャリアタンパク質および第２のキャリアタンパク質が同じであることに特徴付けられる不活性化ポリオウイルス抗原を含む。
【００４９】
抗原（ａ）、（ｂ）および（ｃ）は、すべてキット内に存在するが、これらはすべて同じキットコンポーネントの一部ではない。以下の抗原の組み合わせが可能であり、抗原（ａ）、（ｂ）および（ｃ）のために３つまで別々のコンポーネントを有する。
【００５０】
【化１】
2009525260.tif 000002
ＰｎＣ、ＭＣＣ、ＰａおよびＩＰＶの各々を提供するために、本発明は少なくとも第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分を含むキットを提供し、ここで（ａ）成分のうちの１つは第１のキャリアタンパク質に結合体化されるＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の莢膜糖を含み、（ｂ）成分のうちの１つは第２のキャリアタンパク質に結合体化されるＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の莢膜糖を含み、そして（ｃ）成分のうちの１つは無細胞性百日咳抗原を含み；そして（ｄ）成分のうちの１つは第１のキャリアタンパク質および第２のキャリアタンパク質が同じであることに特徴付けられる不活性化ポリオウイルス抗原を含む。
【００５１】
抗原（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）は、すべてキット内に存在するが、これらはすべて同じキットコンポーネントの一部ではない。以下の抗原の組み合わせが包含され、抗原（ａ）、（ｂ）、（ｃ）および（ｄ）のために４つまで別々のコンポーネントを有する。
【００５２】
【化２】
2009525260.tif 000003
代表的には抗原（ｃ）および（ｄ）は、同じコンポーネントの一部である。
【００５３】
これらのキットはまた：ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；ＨＢｓＡｇ；および／または結合体化Ｈｉｂ糖のうちの１つ以上を含み得る。
【００５４】
組成物またはキットが、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの１つより多い血清群および／またはＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの１つより多い血清群由来の糖を含む場合、本発明のこの局面は、同じキャリアタンパク質が少なくとも１つのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ結合体および少なくとも１つのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ結合体のために使用されることが必要である。いくつかの実施形態において、同じキャリアタンパク質はすべてのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ結合体および少なくとも１つのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ結合体のために使用される。他の実施形態において、同じキャリアタンパク質が少なくとも１つのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ結合体およびすべてのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ結合体のために使用される。他の実施形態において、同じキャリアタンパク質がすべてのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ結合体およびすべてのＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ結合体のために使用される。キャリアの選択は、以下でより詳細に考察される。
【００５５】
この組成物またはキットが結合体化Ｈｉｂ糖を含む場合、Ｈｉｂ糖中のキャリアタンパク質は、肺炎球菌結合体および髄膜炎菌結合体中のキャリアと同じであり得るか、またはＨｉｂ結合体は異なるキャリアを使用し得る。
【００５６】
この組成物またはキットが破傷風トキソイドを含む場合、肺炎球菌結合体および髄膜炎菌結合体中のキャリアタンパク質は、好ましくは破傷風トキソイドではない。いくつかの実施形態において、肺炎球菌結合体および髄膜炎菌結合体は、破傷風トキソイドキャリアを有さない。
【００５７】
この組成物またはキットがジフテリアトキソイドを含む場合、肺炎球菌結合体および髄膜炎菌結合体中のキャリアタンパク質は、好ましくはジフテリアトキソイドではない。いくつかの実施形態において、肺炎球菌結合体および髄膜炎菌結合体は、ジフテリアトキソイドキャリアを有さない。
【００５８】
この組成物またはキットがジフテリアトキソイドおよび破傷風トキソイドの両方を含む場合、肺炎球菌結合体および髄膜炎菌結合体中のキャリアタンパク質は、好ましくはジフテリアトキソイドでも破傷風トキソイドでもない。
【００５９】
（ＭｅｎＣの凍結乾燥）
本発明の第７の局面において、髄膜炎菌血清群Ｃ結合体抗原は、水性Ｄ−Ｔ−Ｐａ含有処方物もまた含むキットにおいて、凍結乾燥形態で供給される。
【００６０】
従って本発明は、第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分を含むキットを提供し、ここで：（ａ）第１の免疫原性成分は、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイドおよび無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原の水性処方物を含み；そして（ｂ）第２の免疫原性成分は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖を凍結乾燥形態で含む。
【００６１】
この凍結乾燥されたＭｅｎＣ結合体は、注射前に水性形態に再構成される。この再構成の工程は、（ａ）ＭｅｎＣ結合体を含む組み合わせワクチンを与えるための水性Ｄ−Ｔ−Ｐａ含有処方物、または（ｂ）Ｄ−Ｔ−Ｐａ含有注射を用いる同時投与において第２の注射を与えるための別々の水性キャリアを使用し得、このような場合にはキットはさらなる成分として水性キャリアを含み得る。
【００６２】
このＤ−Ｔ−Ｐａ含有処方物はまた：Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原；および不活性化ポリオウイルス抗原のいずれかまたは両方を含み得る。
【００６３】
結合体化Ｈｉｂ抗原はまた、キット内に含まれ得る。結合体化Ｈｉｂ抗原は、凍結乾燥形態で含まれる（例えば、凍結乾燥されたＭｅｎＣ成分として同じ容器中に）か、またはＤ−Ｔ−Ｐａ含有処方物内に含まれ得る。
【００６４】
（ＭｅｎＣ、ＰｎＣおよびＨＢｓＡｇの投与）
本発明の第８の局面において、髄膜炎菌血清群Ｃおよび百日咳結合体は、Ｂ型肝炎表面抗原とともに投与される。
【００６５】
従って本発明は：（ａ）Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖、（ｂ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖、および（ｃ）Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原を含む免疫原性組成物を提供する。この組成物はまた：ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原；不活性化ポリオウイルス抗原；および／または結合体化Ｈｉｂ糖のうちの１つ以上を含み得る。
【００６６】
本発明はまた、少なくとも第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分を含むキットを提供し、ここで：（ａ）成分のうちの１つはＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖を含み、（ｂ）成分のうちの１つはＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖を含み、（ｃ）成分のうちの１つはＢ型肝炎ウイルス表面抗原を含む。
【００６７】
抗原（ａ）、（ｂ）および（ｃ）は、すべてキット内に存在するが、これらはすべて同じキットコンポーネントの一部ではない。以下の抗原の組み合わせが可能であり、抗原（ａ）、（ｂ）および（ｃ）のために３つまで別々のコンポーネントを有する。
【００６８】
【化３】
2009525260.tif 000004
このキットはまた：ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原；不活性化ポリオウイルス抗原；および／または結合体化Ｈｉｂ糖のうちの１つ以上を含み得る。これらの付加的な抗原は、（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のいずれかとして、同じキットコンポーネント内に含まれ得るか、別々のコンポーネントに含まれ得る。しかしながら代表的には、１つのキットコンポーネントは：ＨＢｓＡｇ；ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原；および不活性化ポリオウイルス抗原のすべてを含み得る。
【００６９】
（ＭｅｎＣ、ＰｎＣおよびＩＰＶの投与）
本発明の第９の局面において、髄膜炎菌血清群Ｃおよび肺炎球菌結合体は、不活性化ポリオウイルス抗原とともに投与される。
【００７０】
従って本発明は：（ａ）Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖、（ｂ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖、および（ｃ）不活性化ポリオウイルス抗原を含む免疫原性組成物を提供する。この組成物はまた：ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原；ＨＢｓＡｇ；および／または結合体化Ｈｉｂ糖のうちの１つ以上を含み得る。
【００７１】
本発明はまた、少なくとも第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分を含むキットを提供し、ここで：（ａ）成分のうちの１つはＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖を含み、（ｂ）成分のうちの１つはＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖を含み、（ｃ）成分のうちの１つは不活性化ポリオウイルス抗原を含む。
【００７２】
抗原（ａ）、（ｂ）および（ｃ）は、すべてキット内に存在するが、これらはすべて同じキットコンポーネントの一部ではない。以下の抗原の組み合わせが可能であり、抗原（ａ）、（ｂ）および（ｃ）のために３つまで別々のコンポーネントを有する。
【００７３】
【化４】
2009525260.tif 000005
このキットはまた：ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原；ＨＢｓＡｇ；および／または結合体化Ｈｉｂ糖のうちの１つ以上を含み得る。これらの付加的な抗原は、（ａ）、（ｂ）または（ｃ）のいずれかとして、同じキットコンポーネント内に含まれ得るか、別々のコンポーネントに含まれ得る。しかしながら代表的には、１つのキットコンポーネントは：不活性化ポリオウイルス抗原；ジフテリアトキソイド；破傷風トキソイド；Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原；およびＨＢｓＡｇのすべてを含み得る。
【００７４】
（第１、第２、第３、第４、第５、第６、第７、第８および第９の局面の組成物）
本発明の９つの局面は、別々に利用されるか、２つ、３つ、４つ、５つ、６つ、７つ、８つまたは９つの局面と組み合わせて利用され得る。例えば、本発明はまた以下のキットなどを提供する：
・第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分を含むキットであって、ここで：（ａ）第１の免疫原性成分が、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖を含み；そして（ｂ）第２の免疫原性成分が無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原および不活性化ポリオウイルス抗原を含む。
・第１の免疫原性成分、第２の免疫原性成分および第３の免疫原性成分を含むキットであって、ここで：（ａ）第１の免疫原性成分が、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖を含み；（ｂ）第２の免疫原性成分が、無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原および／または不活性化ポリオウイルス抗原を含み；そして（ｃ）第３の免疫原性成分が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖を含む。
・第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分、ならびに必要に応じて第３の成分を含むキットであって、ここで：（ａ）第１の免疫原性成分が、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖を含むが、リン酸アルミニウムアジュバントを含まず；（ｂ）第２の免疫原性成分が、無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原および／または不活性化ポリオウイルス抗原を含み；そして（ｃ）必要に応じて第３の成分が、Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖を含む。
・第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分を含むキットであって、ここで：（ａ）第１の免疫原性成分が、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖を含み；（ｂ）第２の免疫原性成分が、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原および不活性化ポリオウイルス抗原を含み、第１の免疫原性成分は凍結乾燥され、そして／またはリン酸アルミニウムアジュバントを含まないことに特徴付けられる。
・少なくとも第１の免疫原性成分および第２の免疫原性成分を含むキットであって、ここで：（ａ）成分のうちの１つが、第１のキャリアタンパク質に結合体化されるＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の莢膜糖を含み、（ｂ）成分のうちの１つが、第２のキャリアタンパク質に結合体化されるＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の莢膜糖を含み、（ｃ）成分のうちの１つが、無細胞性百日咳抗原を含み、第１のキャリアタンパク質および第２のキャリアタンパク質が同じであり、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃを含む成分が凍結乾燥され、そして／またはリン酸アルミニウムアジュバントを含まないことに特徴付けられる。
【００７５】
本発明はまた、以下の免疫原性組成物などを提供する：
・Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖、無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原および不活性化ポリオウイルス抗原を含む免疫原性組成物。
・（ａ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖、（ｂ）無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原および／または不活性化ポリオウイルス抗原；および（ｃ）Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖を含む免疫原性組成物。
・（ａ）第１のキャリアタンパク質に結合体化されるＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の莢膜糖、（ｂ）第２のキャリアタンパク質に結合体化されるＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の莢膜糖、および（ｃ）無細胞性百日咳抗原、不活性化ポリオウイルス抗原およびＢ型肝炎ウイルス表面抗原を含む免疫原性組成物であって、ここで第１のキャリアタンパク質および第２のキャリアタンパク質は同じである。
【００７６】
（本発明を用いる使用のための抗原）
本発明の組成物およびキットは、結合体化Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ糖抗原を含む。代表的には、これらはまた少なくとも１つのＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ糖抗原を含む。これらはまた、さらに他の病原体由来、特に細菌および／またはウイルス由来の抗原を含み得る。
【００７７】
さらに好ましい抗原は、
・ジフテリアトキソイド（「Ｄ」）
・破傷風トキソイド（「Ｔ」）
・百日咳抗原（「Ｐ」）、これは代表的には無細胞性（「ａＰ」）
・Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）表面抗原（「ＨＢｓＡｇ」）
・Ａ型肝炎ウイルス（ＨＢＡ）抗原
・結合体化Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ  ｂ型莢膜糖（「Ｈｉｂ」）
・不活性化ポリオウイルスワクチン（ＩＰＶ）
・結合体化Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ａ莢膜糖（「ＭｅｎＡ」）
・結合体化Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｗ１３５莢膜糖（「ＭｅｎＷ１３５」）
・結合体化Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｙ莢膜糖（「ＭｅｎＹ」）
から選択される。
【００７８】
これらさらなる抗原のうちの１つ以上が使用され得る。抗原の以下の組み合わせが特に好ましい：
２価のワクチン：ＭｅｎＣ−ＰｎＣ
４価のワクチン：Ｄ−Ｔ−Ｐａ−ＭｅｎＣ
５価のワクチン：Ｄ−Ｔ−Ｐａ−Ｈｉｂ−ＭｅｎＣ；Ｄ−Ｔ−Ｐａ−ＩＰＶ−ＭｅｎＣ；Ｄ−Ｔ−Ｐａ−ＨＢｓＡｇ−ＭｅｎＣ；Ｄ−Ｔ−Ｐａ−ＭｅｎＣ−ＰｎＣ
６価のワクチン：Ｄ−Ｔ−Ｐａ−ＨＢｓＡｇ−ＩＰＶ−ＭｅｎＣ；Ｄ−Ｔ−Ｐａ−ＨＢｓＡｇ−ＭｅｎＣ−ＰｎＣ
７価のワクチン：Ｄ−Ｔ−Ｐａ−ＨＢｓＡｇ−ＩＰＶ−Ｈｉｂ−ＭｅｎＣ；Ｄ−Ｔ−Ｐａ−ＨＢｓＡｇ−Ｈｉｂ−ＭｅｎＣ−ＭｅｎＡ
８価のワクチン：Ｄ−Ｔ−Ｐａ−ＨＢｓＡｇ−ＩＰＶ−Ｈｉｂ−ＭｅｎＣ−ＭｅｎＡ；Ｄ−Ｔ−Ｐａ−ＨＢｓＡｇ−ＩＰＶ−Ｈｉｂ−ＭｅｎＣ−ＰｎＣ。
【００７９】
これらの組成物は、列挙された抗原からなり得るか、またはさらに付加的な病原体由来の抗原を含み得る。
【００８０】
（結合体化Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ糖）
結合体化髄膜炎菌抗原は、キャリアタンパク質に結合体化されたＮｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ由来の莢膜糖抗原を含む。血清群Ｃに対して結合体化された１価のワクチンは、ヒトへの使用が認可されており、ＭＥＮＪＵＧＡＴＥＴＭ［１３]、ＭＥＮＩＮＧＩＴＥＣＴＭおよびＮＥＩＳＶＡＣ−ＣＴＭが挙げられる。血清群Ａ＋Ｃ由来の結合体の混合物が公知であり［１４、１５］、そして血清群Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙ由来の結合体の混合物が報告され［１６〜１９］、２００５年にＭＥＮＡＣＴＲＡＴＭ製品として認可された。
【００８１】
本発明は、少なくとも血清群Ｃ由来の髄膜炎菌糖を使用するが、本発明はまた血清群Ａ、Ｗ１３５および／またはＹのうちの１つ以上由来の糖を含み得る（例えば、Ａ＋Ｃ、Ｃ＋Ｗ１３５、Ｃ＋Ｙ、Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５、Ａ＋Ｃ＋Ｙ、Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙ、Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙ）。１つ以上の血清群が使用される場合、血清群ＡおよびＣの両方を使用することが好ましい。
【００８２】
髄膜炎菌血清群Ｃ莢膜糖は、シアル酸（Ｎ−アセチルノイラミン酸）のα２→９結合ホモポリマーであり、代表的にはＣ−７残基またはＣ−８残基でＯ−アセチル（ＯＡｃ）基を有する。この化合物は：→９）−Ｎｅｕ  ｐ  ＮＡｃ  ７／８  ＯＡｃ−（α２→として示される。
【００８３】
いくつかのＭｅｎＣ株（侵襲性単離物の約１２％）は、このＯＡｃ基を欠損する多糖を生成する。ＯＡｃ基の存在または不在は、特有のエピトープを生成し、糖に対する抗体結合の特異性は、Ｏ−アセチル化（ＯＡｃ−）株および脱−Ｏ−アシル化（ＯＡｃ＋）株に対する殺細菌活性に影響を及ぼし得る［２０〜２２］。認可されたＭｅｎＣ結合体ワクチンは、ＯＡｃ−（ＮＥＩＳＶＡＣ−ＣＴＭ）糖およびＯＡｃ＋（ＭＥＮＪＵＧＡＴＥＴＭおよびＭＥＮＩＮＧＩＴＥＣＴＭ）糖の両方を含む。本発明を用いて使用される血清群Ｃ糖は、ＯＡｃ＋株またはＯＡｃ−株のいずれかから調製され得る。血清群Ｃ結合体の産生のための好ましい株は、ＯＡｃ＋株、好ましくは血清群１６、好ましくは血清群Ｐ１．７ａ，１である。従ってＣ：１６：Ｐ１．７ａ，１  ＯＡｃ＋株が好ましい。血清群Ｐ１．１におけるＯＡｃ＋株がまた有用である（例えば、Ｃ１１株）。
【００８４】
この髄膜炎菌血清群Ａ莢膜糖は、（α１→６）結合型Ｎ−アセチル−Ｄ−マンノサミン−１−ホスフェートのホモポリマーであり、Ｃ３位およびＣ４位において部分的Ｏ−アセチル化を含む。Ｃ３位でのアセチル化は７０〜９５％であり得る。この糖を精製するために使用される条件は、脱−Ｏ−アシル化を生じ得る（例えば、塩基性条件下）が、このＣ−３位でＯＡｃを保持することが好ましい。従って、好ましくはマンノサミン残基の少なくとも５０％（例えば、少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはそれ以上）がＣ−３位でＯ−アセチル化される。
【００８５】
血清群Ｗ１３５糖は、シアル酸−ガラクトース二糖単位のポリマーである。血清群Ｃ糖のように、可変性のＯ−アシル化を有するが、シアル酸の７位および９位でＯ−アシル化を有する［２３］。この構造は：→４）−Ｄ−Ｎｅｕｐ５Ａｃ（７／９ＯＡｃ）−α−（２→６）−Ｄ−Ｇａｌ−α−（１→として記載される。
【００８６】
血清群Ｙは、二糖繰り返し単位ガラクトースに代わってグルコースを含むことを除いて、血清群Ｗ１３５糖に類似している。血清群Ｗ１３５糖のように、シアル酸の７位および９位で可変性のＯ−アシル化を有する［２３］。この血清群Ｙ構造は：→４）−Ｄ−Ｎｅｕｐ５Ａｃ（７／９ＯＡｃ）−α−（２→６）−Ｄ−Ｇａｌ−α−（１→として記載される。
【００８７】
ＭＥＮＪＵＧＡＴＥＴＭおよびＭＥＮＩＮＧＩＴＥＣＴＭ製品は、ＣＲＭ１９７キャリアタンパク質を使用し、このキャリアはまた、本発明に従って使用され得る。ＮＥＩＳＶＡＣ−ＣＴＭ製品は、破傷風トキソイドキャリアタンパク質を使用し、このキャリアはまた、ジフテリアトキソイドが使用され得る場合、本発明に従って使用され得る。髄膜炎菌結合体の別の有用なキャリアタンパク質は、Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のプロテインＤであり、これは既存の認可された結合体ワクチンのいずれにも存在しない。
【００８８】
結合体の糖部分は、髄膜炎菌から調製されるような完全長の糖を含み得、そして／または完全長の糖の断片を含み得る。本発明に従って使用される糖は、細菌において観察されるネイティブ莢膜糖よりも好ましくは短い。従って、上記糖は、好ましくは、脱重合され、脱重合は、精製後であるが結合体化の前に生じる。脱重合は、その糖の鎖長を低減させる。１つの脱重合方法は、過酸化水素の使用を含む［１６］。過酸化水素は、（例えば、最終Ｈ２Ｏ２濃度１％を生じるように）糖に添加され、その後、この混合物は、望ましい鎖長低減が達成されるまで（例えば、約５５℃にて）インキュベートされる。別の脱重合方法は、酸加水分解を含む［１７］。他の脱重合方法は、当業者にとって公知である。本発明に従う使用のために結合体を調製するために使用される糖は、これらの脱重合方法のうちのいずれかによって取得され得る。脱重合は、免疫原性のために最適な鎖長を提供するため、および／またはその糖の物理的管理能（ｐｈｙｓｉｃａｌ  ｍａｎａｇｅａｂｉｌｉｔｙ）のために鎖長を低減するために、使用され得る。好ましい糖は、以下の範囲の平均重合度（Ｄｐ）を有する：Ａ＝１０〜２０；Ｃ＝１２〜２２；Ｗ１３５＝１５〜２５；Ｙ＝１５〜２５。Ｄｐよりむしろ分子量に関して好ましい範囲は、すべての血清群において：＜１００ｋＤａ；５ｋＤａ〜７５ｋＤａ；７ｋＤａ〜５０ｋＤａ；８ｋＤａ〜３５ｋＤａ；１２ｋＤａ〜２５ｋＤａ；１５ｋＤａ〜２２ｋＤａ。
【００８９】
糖：タンパク質比（ｗ／ｗ）が１：１０（すなわち、過剰なタンパク質）と１０：１（すなわち、過剰な糖）の間を有する髄膜炎菌結合体を使用され得る（例えば、１：５と５：１の間；１：２．５と２．５：１の間；または１：１．２５と１．２５：１の間）。特に血清群Ｃに関しては、１：１の比が使用され得る。
【００９０】
代表的には、組成物は、存在する各血清群の用量あたり１μｇと２０μｇ（糖として測定される）の間を含む。
【００９１】
結合体の投与は好ましくは、関連する血清群について少なくとも４倍、好ましくは少なくとも８倍の血清殺菌アッセイ（ＳＢＡ）力価の増加を生じる。ＳＢＡ力価は、新生児のウサギ補体またはヒト補体を使用して測定され得る［２４］。
【００９２】
髄膜炎菌結合体は、アルミニウム塩アジュバントに吸着されても、されていなくてもよい。
【００９３】
髄膜炎菌結合体は本発明に従って、使用する前に凍結乾燥される。凍結乾燥された場合、この組成物は、マンニトールのような安定剤を含み得る。これはまた、塩化ナトリウムも含み得る。
【００９４】
（結合体化肺炎球菌糖）
結合体化肺炎球菌抗原は、キャリアタンパク質に結合体化されたＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の莢膜糖抗原を含む［例えば、参考文献２５〜２７］。Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅの１つよりも多くの血清群に由来する糖類を含むことが好ましく、２３種の異なる血清群に由来する多糖類の混合物が、広範に使用され、同様に、５種〜１１種の異なる血清群に由来する多糖を含む結合体ワクチンも、広範に使用される［２８］。例えば、ＰＲＥＶＮＡＲＴＭ［２９］は、７種の血清群（４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆ）に由来する抗原を含み、各糖は、還元的アミノ化によってＣＲＭ１９７に別々に結合体化されており、０．５ｍｌ用量あたり２μｇの各糖（４μｇの血清群６Ｂ）を有する。
【００９５】
本発明の組成物は、好ましくは、少なくとも血清群６Ｂ、１４、１９Ｆおよび２３Ｆについての糖抗原を含む。さらに血清群は、好ましくは１、３、４、５、７Ｆ、９Ｖおよび１８Ｃから選択される。７価（ＰＲＥＶＮＡＲＴＭのように）、９価（例えば、ＰＲＥＶＮＡＲ由来の７つの血清群と１および５）、１０価（例えば、ＰＲＥＶＮＡＲ由来の７つの血清群と１、５および７Ｆ）ならびに１１価（例えば、ＰＲＥＶＮＡＲ由来の７つの血清群と１、３、５および７Ｆ）の肺炎球菌血清群の範囲が、特に有用である。
【００９６】
この結合体の糖部位は、肺炎球菌から調製される場合、完全長の糖を含み得、そして／または完全長の糖の断片を含み得る。本発明に従って使用される糖は、好ましくは、髄膜炎菌結合体について上で記載されるように細菌でみられる天然の莢膜糖より短い。
【００９７】
１：１０（すなわち過剰なタンパク質）と１０：１（すなわち過剰な糖）の間の糖：タンパク質比（ｗ／ｗ）を有する肺炎球菌結合体が使用され得る（例えば、１：５と５：１の間の比、１：２．５と２．５：１の間の比、または１：１．２５と１．２５：１の間の比）。
【００９８】
ＰＲＥＶＮＡＲＴＭ製品は、ＣＲＭ１９７キャリアタンパク質を使用し、このキャリアはまた本発明に従って使用され得る。肺炎球菌糖を用いて使用するための代替キャリアとして、破傷風トキソイドキャリア、ジフテリアトキソイドキャリア、および／またはＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅプロテインＤキャリアが挙げられるが、これらに限定されない。混合した肺炎球菌血清群のための複数のキャリアの使用が有利であり得る［３０］（例えば、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅプロテインＤキャリアと例えば破傷風トキソイドキャリアおよび／またはジフテリアトキソイドキャリアの両方を含む）。例えば、血清群１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４および２３Ｆのうちの１つ以上（好ましくはすべて）がＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅプロテインＤキャリアに結合体化され得、血清群１８Ｃは破傷風トキソイドに結合体化され得、血清群１９Ｆはジフテリアトキソイドキャリアに結合体化され得る。
【００９９】
代表的に組成物は、存在する各血清群を用量あたり１μｇと２０μｇの間（糖として測定）で含有する。
【０１００】
（百日咳抗原）
Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓは、百日咳を引き起こす。ワクチン中の百日咳抗原は、細胞性（全細胞、不活性化Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ細胞の形態で）または無細胞性のいずれかである。細胞性百日咳抗原の調製は、十分に報告されている［例えば参考文献１の第２１章を参照のこと］（例えば、Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓの第Ｉ相培養物の熱不活性化により得られ得る）。しかしながら、好ましくは、本発明は無細胞性抗原を使用する。
【０１０１】
無細胞性抗原が使用される場合、以下の抗原のうち１つ、２つまたは（好ましくは）３つを使用することが好ましい：（１）無毒化された百日咳トキシン（百日咳トキソイドまたは「ＰＴ」）；（２）線状血球凝集素（「ＦＨＡ」）；（３）ペルラクチン（「６９キロダルトン外膜タンパク質」としても公知）。これら３つの抗原は、好ましくは改変されたＳｔａｉｎｅｒ−Ｓｃｈｏｌｔｅ液体培地で増殖させたＢ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ培養物からの単離により調製される。ＰＴおよびＦＨＡは、発酵培養液から単離され得る（例えば、ヒドロキシアパタイトゲルへの吸着により）一方、ペルラクチンは、熱処理および凝集（例えば、塩化バリウムを使用する）により、細胞から抽出され得る。この抗原は、継続的なクロマトグラフィー工程および／または沈降工程で精製され得る。ＰＴおよびＦＨＡは、例えば疎水クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィーおよびサイズ除外クロマトグラフィーにより精製され得る。ペルトラクチンは、例えばイオン交換クロマトグラフィー、疎水性クロマトグラフィーおよびサイズ除外クロマトグラフィーにより精製され得る。ＦＨＡおよびペルラクチンは、本発明に従って使用する前にホルムアルデヒドで処理され得る。ＰＴは好ましくは、ホルムアルデヒドおよび／またはグルタルアルデヒドで処理され無毒化される。この化学的無毒化手順の代替として、ＰＴは、酵素活性が突然変異により減少されたＰＴ変異体であり得る［３１］が、化学的処理による無毒化が好ましい。
【０１０２】
無細胞性百日咳抗原は、好ましくは１つ以上のアルミニウム塩アジュバントに吸着され得る。代替として、これらは未吸着の状態で加えられ得る。ペルラクチンが加えられる場合、すでに水酸化アルミニウムアジュバントに吸着されていることが好ましい。ＰＴおよびＦＨＡは、水酸化アルミニウムアジュバントまたはリン酸アルミニウムに吸着され得る。ＰＴ、ＦＨＡおよびペルラクチンすべての水酸化アルミニウムへの吸着が最も好ましい。
【０１０３】
組成物は、代表的には：１〜５０μｇ／用量のＰＴ；１〜５０μｇ／用量のＦＨＡ；および１〜５０μｇ／用量のペルラクチンを含む。好ましい量は、約２５μｇ／用量のＰＴ、約２５μｇ／用量のＦＨＡおよび約８μｇ／用量のペルラクチンである。
【０１０４】
またＰＴ、ＦＨＡおよびペルラクチンは、無細胞性百日咳ワクチン中に采（例えば、凝集原２および３）を含む可能性がある。
【０１０５】
（不活性化ポリオウイルスワクチン）
ポリオウイルスはポリオを引き起こす。経口ポリオウイルスワクチンを使用するよりも、参考文献１の第２４章により詳細に開示するように、本発明の好ましい実施形態はＩＰＶを使用する。
【０１０６】
ポリオウイルスは、細胞培養物中で成長され得、好ましい培養物は、サルの腎臓由来のＶｅｒｏ細胞株を使用する。Ｖｅｒｏ細胞は、都合よくミクロキャリアに培養され得る。成長後、ビリオンは、限外濾過、透析濾過（ｄｉａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）およびクロマトグラフィのような方法を使用して精製され得る。患者に投与される前、ポリオウイルスは不活性化されなければならず、これはホルムアルデヒドで処理することにより達成され得る。
【０１０７】
ポリオは、３つの型のポリオウイルスのうちの１つにより引き起こされ得る。この３つの型は類似しており、同一の症状を引き起こすが、これらは免疫原性的に非常に異なっており、１つの型による感染は他の型による感染を予防しない。それ故、本発明において、３つのポリオウイルス抗原：１型ポリオウイルス（例えば、Ｍａｈｏｎｅｙ株）、２型ポリオウイルス（例えば、ＭＥＦ−１株）および３型ポリオウイルス（例えば、Ｓａｕｋｅｔｔ株）の使用が好ましい。これらウイルスは、好ましくは個々に成長させ精製し、そして不活化し、次いで合わされ、本発明による使用のために大量の３価の混合物を得る。
【０１０８】
ＩＰＶの量は、代表的に「ＤＵ」単位（「Ｄ−抗原単位」［３２］）で表わされる。用量あたりウイルス型によって１〜１００ＤＵの間で使用することが好ましい（例えば、１型ポリオウイルスに関しては約８０ＤＵ、２型ポリオウイルスに関しては約１６ＤＵ、および３型ポリオウイルスに関しては約６４ＤＵ）。
【０１０９】
ポリオウイルス抗原は、好ましくは本発明の組成物を作製するために使用する前に、いずれのアルミニウム塩アジュバントにも吸着されないが、これらは貯蔵の間にワクチン組成物中でアルミニウムアジュバントに吸着されるようになり得る。
【０１１０】
（ジフテリアトキソイド）
Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅはジフテリアを引き起こす。ジフテリアトキシンは、毒性を除去するために処理され得る（例えば、ホルマリンまたはホルムアルデヒドを使用して）が、注射後の特異的な抗トキシン抗体を誘導する能力を保持している。これらジフテリアトキソイドは、ジフテリアワクチンに使用され、参考文献１の１３章により詳細に開示される。好ましいジフテリアトキソイドは、ホルムアルデヒド処理により調製される。このジフテリアトキソイドは、ウシの抽出物を添加し得る増殖培地（例えば、Ｆｅｎｔｏｎ培地またはＬｉｎｇｇｏｕｄ  ＆  Ｆｅｎｔｏｎ培地）中でＣ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅを成長させ、続いてホルムアルデヒドで処理し、限外濾過および沈降させることにより得られ得る。次いでこのトキソイド化した物質は、滅菌濾過および／または透析を包含する工程により、処理され得る。
【０１１１】
ジフテリアトキソイドの量は、国際単位（ＩＵ）で示され得る。例えば、ＮＩＢＳＣは、「Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ  Ｔｏｘｏｉｄ  Ａｄｓｏｒｂｅｄ  Ｔｈｉｒｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  １９９９」［３３、３４]を提供し、これは、アンプルあたり１６０  ＩＵを含む。ＩＵ系の代替として、「Ｌｆ」単位（「凝集単位」または「凝集限界量」）は、１国際単位の抗毒素を用いて混合した場合、最適の凝集混合物を産生するトキソイドの量として定義される［３５］。例えば、ＮＩＢＳＣは１アンプルあたり３００ＬＦを含む「Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ  Ｔｏｘｏｉｄ，  Ｐｌａｉｎ」［３６］を提供し、そしてまた１アンプルあたり９００Ｌｆを含む「Ｔｈｅ  １ｓｔ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｆｏｒ  Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ  Ｔｏｘｏｉｄ  Ｆｏｒ  Ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｔｅｓｔ」［３７]を提供する。
【０１１２】
代表的には組成物は、２０Ｌｆおよび８０Ｌｆの間のジフテリアトキソイド、代表的には約５０Ｌｆを含む。
【０１１３】
ＩＵ測定により、組成物は代表的に少なくとも３０ＩＵ／用量を含む。
【０１１４】
ジフテリアトキソイドは、好ましくは、水酸化アルミニウムアジュバントに吸着される。
【０１１５】
（破傷風トキソイド）
Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉは破傷風を引き起こす。破傷風トキシンは、予防的トキソイドを与えるために処理され得る。このトキソイドは、破傷風ワクチンで使用され、参考文献１の第２７章により詳細に開示される。好ましい破傷風トキソイドは、ホルムアルデヒドで処理されたものである。破傷風トキソイドは、増殖培地（例えば、ウシのカゼイン由来のＬａｔｈａｍ培地）中Ｃ．ｔｅｔａｎｉを成長させ、その後ホルムアルデヒド処理、限外濾過および沈降させることにより得られ得る。次いでこの物質は、滅菌濾過および／または透析を含むプロセスにより処理され得る。
【０１１６】
破傷風トキソイドの量は、国際単位（ＩＵ）で表わされ得る。例えば、ＮＩＢＳＣは、「Ｔｅｔａｎｕｓ  Ｔｏｘｏｉｄ  Ａｄｓｏｒｂｅｄ  Ｔｈｉｒｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  ２０００」［３８、３９］を提供し、これは１アンプルあたり４６９ＩＵを含む。ＩＵ系の代替として、「Ｌｆ」単位（「凝集単位」または「凝集限界量」）は、１国際単位の抗毒素を用いて混合した場合、最適の凝集混合物を産生するトキソイドの量として定義される［３５］。例えば、ＮＩＢＳＣは、「Ｔｈｅ  １ｓｔ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｔｅｔａｎｕｓ  Ｔｏｘｏｉｄ  Ｆｏｒ  Ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｔｅｓｔ」［４０]を提供し、これは１アンプルあたり１０００Ｌｆを含む。
【０１１７】
組成物は代表的には５Ｌｆおよび５０Ｌｆの間の破傷風トキソイド、代表的には約２０Ｌｆを含む。
【０１１８】
ＩＵ測定法により、組成物は代表的に少なくとも４０ＩＵ／用量を含む。
【０１１９】
破傷風トキソイドは、水酸化アルミニウムアジュバントに吸着され得るが、これは必須ではない（例えば、総破傷風トキソイドの０〜１０％の間の吸着が使用され得る）。
【０１２０】
（Ａ型肝炎ウイルス抗原）
Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）は、ウイルス性肝炎を引き起こす公知の因子の１つである。ＨＡＶワクチンは、参考文献１の第１５章に開示される。好ましいＨＡＶ成分は不活性ウイルスに基づいており、不活性化は、ホルマリン処理により達成され得る。ウイルスは、ヒト胎児肺二倍体線維芽細胞（例えば、ＭＲＣ−５細胞）で増殖され得る。好ましいＨＡＶ株は、ＨＭ１７５であるが、ＣＲ３２６Ｆがまた使用され得る。この細胞は、ウイルスの増殖を可能にする条件下で増殖される。この細胞を溶解し、得られた懸濁液は限外濾過およびゲル透過クロマトグラフィーで精製され得る。
【０１２１】
ＨＡＶ抗原の量は、ＥＵ（エライザ単位）で測定され、代表的には少なくとも約５００ＥＵ／ｍｌである。
【０１２２】
（Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原）
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）は、ウイルス性肝炎を引き起こす公知の因子の１つである。ＨＢＶビリオンは外膜タンパク質コートまたはカプシドに囲まれた内部コアからなり、このウイルスコアは、ウイルス性ＤＮＡゲノムを含む。カプシドの主要成分は、ＨＢＶ表面抗原として公知のタンパク質であり、より一般的には「ＨＢｓＡｇ」である。これは代表的には分子量約２４ｋＤａを有する２２６アミノ酸のポリペプチドである。既存のすべてのＢ型肝炎ワクチンはＨＢｓＡｇを含み、この抗原が正常なワクチン接種者に投与されると、ＨＢＶ感染に対して予防する抗ＨＢｓＡｇ抗体の産生を刺激する。
【０１２３】
ワクチンの製造に関して、ＨＢｓＡｇは、２つの方法で作製される。第１の方法は、大量のＨＢｓＡｇはＨＢＶに感染している間肝臓で合成され、血流に放出されるので、慢性Ｂ型肝炎保有者の血漿から粒子形態で抗原を精製する工程を包含する。第２の方法は、組み換えＤＮＡ法によりタンパク質を発現する工程を包含する。本発明の方法を用いて使用するためのＨＢｓＡｇは、好ましくは組み換えで酵母細胞に発現される。適した酵母として、例えばＳａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ（例えば、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）またはＨａｎｅｎｓｕｌａ（例えば、Ｈ．ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａ）宿主が挙げられる。
【０１２４】
このＨＢｓＡｇは、好ましくはグリコシル化されていない。天然のＨＢｓＡｇ（すなわち血漿を精製した製品）とは異なり、酵母に発現されたＨＢｓＡｇは一般的にグリコシル化されておらず、これは本発明での使用のためのＨＢｓＡｇの最も好ましい形態である。なぜなら、それは、免疫原性が高く、血液製品の汚染の危険性なしに調製され得るからである。
【０１２５】
ＨＢｓＡｇは、一般的に実質的に球形の粒子の形態であり（平均直径約２０ｎｍ）、リン脂質を含む脂質マトリックスを含む。酵母発現ＨＢｓＡｇ粒子は、ホスファチジルイノシトールを含み得、これは天然のＨＢＶビリオンには見出されない。この粒子はまた、免疫系を刺激するために非毒性量のＬＰＳを含み得る［４１］。好ましいＨＢｓＡｇは、リン脂質、ホスファチジルイノシトールおよびポリソルベート２０を含む脂質マトリックスを含む粒子の形態である。
【０１２６】
すべての公知のＨＢＶサブタイプは、共通の決定子「ａ」を含む。他の決定子と副決定因子（ｓｕｂｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔ）とを合わせて、９つのサブタイプが同定されている：ａｙｗ１、ａｙｗ２、ａｙｗ３、ａｙｗ４、ａｙｒ、ａｄｗ２、ａｄｗ４、ａｄｒｑ−およびａｄｒｑ＋。これらのサブタイプに加えて、他の変異体が発現している（例えば、免疫した個体で検出されるＨＢＶ変異体（「エスケープ変異体」）。本発明を用いて使用するために最も好ましいＨＢＶサブタイプは、サブタイプａｄｗ２である。好ましいＨＢｓＡｇは以下のアミノ酸配列（配列番号１）：
【０１２７】
【化５】
2009525260.tif 000006
を有する。
【０１２８】
この配列は、最も近いデータベース適合とアミノ酸１１７で異なり、ＳｅｒよりもＡｓｎを有する。本発明は、配列番号１または１０個まで（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０）の単一アミノ酸置換により異なる配列を使用し得る。
【０１２９】
「Ｓ」配列に加えて、表面抗原は、プレＳ配列のすべてまたは一部を含み得る（例えば、プレＳ１および／またはプレＳ２配列のすべてまたは一部）。
【０１３０】
ＨＢｓＡｇは好ましくは：（１）グリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼ遺伝子から上流プロモーターの制御下；および／または（２）下流のＡＲＧ３転写ターミネーターを用いて発現される。
【０１３１】
グリセルアルデヒド−３−ホスフェートデヒドロゲナーゼは、解糖酵素であり、そのプロモーターは、Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅにおいてＨＢｓＡｇの発現を制御するのに特に適していることが発見された［４２］。好ましいＧＡＰＤＨプロモーターは、以下の１０６１マーのヌクレオチド配列を有する（配列番号２）：
【０１３２】
【化６】
2009525260.tif 000007
この配列は、以下：（１）ヌクレオチド４２でＡ／Ｃ置換；（２）ヌクレオチド１９４でＴ／Ａ置換；（３）ヌクレオチド３０１でＣ／Ａ変異；（４）ヌクレオチド４７１でＡの挿入；（５）残基５６９でＣ／Ｔ置換；（６）残基５９７でＴ／Ｃ置換；（７）ヌクレオチド６０４でＴの挿入（４つのＴの代わりに５つのＴ）；および（８）単一のＡでの３’ＧＣＴＴ配列の置換：のように参考文献４２の配列とは異なる。
【０１３３】
本発明は、配列番号１のプロモーター配列または２０個まで（すなわち、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９または２０）の点変異により配列番号１と異なる配列を使用し得、各点変異は１つのヌクレオチドの欠失、置換または挿入である。
【０１３４】
この１０６０マー配列は、好ましくはＨＢｓＡｇのＮ末端をコードするＡＴＧ開始コドンのすぐ下流である（配列番号３）：
【０１３５】
【化７】
2009525260.tif 000008
酵母のＡＲＧ３遺伝子は、オルニチンカルバモイルトランスフェラーゼ酵素をコードし［４３］、その転写終止配列は、種々の酵母組換え発現系において使用されている［４４〜４６］。これは酵母におけるＨＢｓＡｇ発現の制御、特にＧＡＰＤＨプロモーターとの組合せで有用である。
【０１３６】
ＨＢｓＡｇをコードする遺伝子は代表的にプラスミドに挿入される。好ましいプラスミドは、ＧＡＰＤＨプロモーター、さらにＨＢｓＡｇをコードする配列、さらにＡＲＧ３ターミネーターを含む。好ましいプラスミドはまた、１つ、２つまたは（このましくは）３つすべてを含む：（１）ＬＥＵ２選択マーカー；（２）２μプラスミド配列；および／または（３）Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉにおける機能的な複製起点［４６］。従って好ましいプラスミドは、酵母とＥ．ｃｏｌｉとの間のシャトルベクターとしてはたらき得る。
【０１３７】
１４５００と１５０００ｂｐの間を有するプラスミドが好ましい（例えば、１４６００と１４７００ｂｐの間）。
【０１３８】
ＬＥＵ２選択マーカーが使用される場合、宿主はＬＥＵ２−ｖｅのはずである（すなわち、ロイシン栄養要求性株）。この宿主細胞はｌｅｕ２−３  ｌｅｕ２−１１２変異体であり得る。さらに好ましい酵母宿主の特徴は、ｈｉｓ３および／またはｃａｎ１−１１である。最も好ましい酵母宿主は、ＤＣ５株のようなｌｅｕ２−３  ｌｅｕ２−１１２  ｈｉｓ３  ｃａｎ１−１１である。
【０１３９】
ＨＢｓＡｇ精製のための好ましい方法として、細胞の破壊後の：限外濾過：サイズ除外クロマトグラフィー；陰イオン交換クロマトグラフィー；超遠心；脱塩および滅菌濾過が挙げられる。溶解産物は、細胞分裂後沈降され得（例えば、ポリエチレングリコールを使用して）、超遠心のために溶液中にＨＢｓＡｇを残す。
【０１４０】
精製後、ＨＢｓＡｇは、透析にかけられ得（例えば、システインを用いて）、これはＨＢｓＡｇ調製の間使用され得るチメロサールのような任意の水銀の保存剤を除去するために使用され得る［４７］。
【０１４１】
ＨＢｓＡｇの量は、代表的にはマイクログラムで表わされ、ワクチン用量あたりの代表的ＨＢｓＡｇ量は、５μｇと５μｇの間（例えば、１０μｇ／用量）である。
【０１４２】
ＨＢｓＡｇは、最終ワクチン（ＥＮＧＥＲＩＸ−ＢＴＭ製品）において水酸化アルミニウムアジュバントに吸着され得るか、または未吸着のままであるが、一般的にリン酸アルミニウムアジュバントに吸着される［４８］。
【０１４３】
（結合体化ｂ型Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ抗原）
ｂ型Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ（「Ｈｉｂ」）は、細菌性髄膜炎を引き起こす。Ｈｉｂワクチンは、代表的に莢膜糖抗原をベースにしており［例えば、参考文献１の第１４章］、これらの調製は十分に証明されている［例えば、参考文献４９〜５８］。
【０１４４】
このＨｉｂ莢膜糖は、その免疫原性を特に小児において増強するためにキャリアタンパク質に結合体化される。代表的なキャリアタンパク質は、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、ジフテリアトキソイドのＣＲＭ１９７誘導体、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅプロテインＤおよび血清群Ｂ髄膜炎菌に由来する外膜タンパク質複合体である。Ｈｉｂ結合体のキャリアタンパク質は、好ましくは髄膜炎菌結合体のキャリアタンパク質とは異なるが、同じキャリアがいくつかの実施形態で使用され得る。
【０１４５】
破傷風トキソイドは好ましいキャリアであり、製品中に使用される場合、一般に「ＰＲＰ−Ｔ」と呼ばれる。ＰＲＰ−Ｔは、臭化シアンを使用するＨｉｂ莢膜多糖を活性化し、活性化した糖をアジピン酸リンカー（例えば、（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド、代表的には塩酸塩）に結合し、次いでリンカー−糖の実体を破傷風トキソイドキャリアタンパク質と反応させることにより作製され得る。
【０１４６】
この結合体の糖部分は、Ｈｉｂバクテリアから調製されるような完全長ポリリボシルリビトールホスフェート（ＰＲＰ）および／または完全長ＰＲＰの断片を含み得る。
【０１４７】
糖：タンパク質比（ｗ／ｗ）が１：５（すなわち、過剰なタンパク質）と５：１（すなわち、過剰な糖）の間にあるＨｉｂ結合体が使用され得る（例えば、１：２と５：１の間の比および１：１．２５と１：２．５の間の比）。しかしながら好ましいワクチンにおいて、糖とキャリアタンパク質の重量比は、１：２と１：４の間、好ましくは１：２．５と１：３．５の間である。破傷風トキソイドが抗原およびキャリアタンパク質の両方として存在するワクチンにおいて、結合体中の糖とキャリアタンパク質の重量比は、１：０．３と１：２の間であり得る［５９］。
【０１４８】
Ｈｉｂ結合体の量は、一般にキャリアの選択による変動を避けるために糖の量で与えられる（すなわち、全体として結合体（キャリア＋糖）の用量は、規定された用量より高い）。代表的な用量あたりのＨｉｂ糖の量は、１〜３０μｇの間であり、好ましくは約１０μｇである。
【０１４９】
このＨｉｂ結合体の投与は、好ましくは０．１５μｇ／ｍｌ以上、より好ましくは１μｇ／ｍｌ以上の抗ＰＲＰ抗体濃度を生じ、これらは標準の応答の閾値である。
【０１５０】
Ｈｉｂ結合体は、本発明に従って使用する前に凍結乾燥され得る。さらなる成分がまた、凍結乾燥される前に添加され得る（例えば、安定剤のような）。含有するための好ましい安定剤は、ラクトース、スクロースおよびマンニトール、ならびにそれらの混合物（例えば、ラクトース／スクロース混合物、スクロース／マンニトール混合物など）である。スクロース／マンニトール混合物を使用することは、乾燥プロセスを加速し得る。
【０１５１】
Ｈｉｂ結合体は、アルミニウム塩アジュバントに吸着されてもされなくてもよい。それらを水酸化アルミニウムアジュバントに吸着しないことが好ましい。
【０１５２】
（本発明の組成物の特徴）
上に記載される抗原性成分に加えて、本発明の組成物は、一般的に非抗原性成分を含む。この非抗原性成分は、以下により詳細に記載されるようにキャリア、アジュバント、賦形剤、緩衝剤などを含み得る。これらの非抗原性成分は、種々の供給源を有し得る。例えば、これらは製造中に使用される１つの抗原中またはアジュバント材料中に存在し得るか、またはこれらの成分からは別個に添加され得る。
【０１５３】
本発明の好ましい組成物は、１つ以上の薬学的キャリアおよび／または賦形剤を含む。
【０１５４】
張度を制御するために、ナトリウム塩のような生理学的塩を含むことが好ましい。塩化ナトリウム塩（ＮａＣｌ）が好ましく、これは１ｍｇ／ｍｌと２０ｍｇ／ｍｌの間で存在し得る。
【０１５５】
組成物は、一般に２００ｍＯｓｍ／ｋｇと４００ｍＯｓｍ／ｋｇの間、好ましくは２４０〜３６０ｍＯｓｍ／ｋｇの間の浸透圧モル濃度を有し、より好ましくは２９０〜３２０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲内となる。浸透圧モル濃度は、ワクチン接種により引き起こされる痛みに対して影響を有しないことが以前に報告されている［６０］が、この範囲に浸透圧モル濃度を維持することが、やはり好ましい。
【０１５６】
本発明の組成物は、１つ以上の緩衝剤を含有し得る。代表的な緩衝剤として：リン酸緩衝剤；Ｔｒｉｓ緩衝剤；ホウ酸緩衝剤；コハク酸緩衝剤；ヒスチジン緩衝剤；またはクエン酸緩衝剤が挙げられる。緩衝剤は、代表的に５〜２０ｍＭの範囲で含有される。
【０１５７】
本発明の組成物のｐＨは、一般的に５．０と７．５の間、より代表的には至適安定性のため５．０と６．０の間、または６．０と７．０の間である。
【０１５８】
本発明の組成物は、好ましくは、無菌である。
【０１５９】
本発明の組成物は、好ましくは、非発熱性である（例えば、用量あたり＜１ＥＵ（エンドトキシン単位、標準測定）、そして好ましくは用量あたり＜０．１ＥＵを含む）。
【０１６０】
本発明の組成物は、好ましくは、グルテンを含まない。
【０１６１】
抗原が吸着される場合、組成物は濁った外観をもつ懸濁液であり得る。この外観は、微生物汚染が容易に見えず、そのためこのワクチンは、好ましくは保存剤を含むことを意味する。これは、このワクチンが複数用量容器にパッケージされる場合、特に重要である。含有物として好ましい保存剤は、２−フェノキシエタノールおよびチメロサールである。しかしながら、可能である場合、水銀保存剤（例えば、チメロサール）を用いないことが推奨される。本発明の組成物は、約２５ｎｇ／ｍｌより少ない水銀を含むことが好ましい。
【０１６２】
本発明の組成物中の任意のアルミニウムの濃度は、Ａｌ３＋によって表され、好ましくは、５ｍｇ／ｍｌより少ない（例えば、４ｍｇ／ｍｌ以下、３ｍｇ／ｍｌ以下、２ｍｇ／ｍｌ以下、１ｍｇ／ｍｌ以下など）。
【０１６３】
本発明の組成物は、好ましくは、患者に０．５ｍｌ用量で投与される。０．５ｍｌ用量に関して、通常の分散（例えば、０．５ｍｌ±０．０５ｍｌ）を含むことが理解される。
【０１６４】
本発明は、個々の用量へのパッケージングに適したバルク材料を提供し得、次いで患者に投与するために分配され得る。上に挙げられる濃度は、最終的にパッケージされた用量の代表的な濃度であり、そのためバルクワクチン中の濃度はより高くても良い（例えば、希釈によって最終濃度まで減少され得る）。
【０１６５】
個々の抗原性成分からの残留物質はまた、本発明のプロセスによって産生される最終ワクチンにおいてトレース量で存在し得る。例えば、ホルムアルデヒドは、ジフテリア、破傷風および百日咳のトキソイドを調製するために使用され、次いで最終ワクチン産物は、ホルムアルデヒドのトレース量を維持し得る（例えば、１０μｇ／ｍｌより少なく、好ましくは５μｇ／ｍｌより少ない）。媒体または安定剤は、ポリオウイルス調製の間使用され（例えば、Ｍｅｄｉｕｍ  １９９）、これらは最終ワクチンまで続く。同様に、遊離アミノ酸（例えば、アラニン、アルギニン、アスパラギン酸、システインおよび／またはシスチン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、プロリンおよび／またはヒドロキシプロリン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、セリン、スレオニン、トリプトファン、チロシンおよび／またはバリン）、ビタミン類（例えば、コリン、アスコルビン酸塩など）、リン酸二ナトリウム、リン酸一カリウム、カルシウム、グルコース、硫酸アデニン、フェノールレッド、酢酸ナトリウム、塩化カリウムなどは、最終ワクチン中に各々１００μｇ／ｍｌ以下、好ましくは１０μｇ／ｍｌ未満で保持し得る。ネオマイシン（例えば、硫酸ネオマイシン、特にＩＰＶ成分由来）、ポリミキシンＢ（例えば、硫酸ポリミキシンＢ、特にＩＰＶ成分由来）などのような抗原調製からの他の成分がまた、例えば、用量あたりサブナノグラム量で存在し得る。
【０１６６】
抗原調製において生じる最終ワクチンのさらなる可能性成分は、全量に満たない抗原の精製物を生じる。従って、少量のＢ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃ．ｔｅｔａｎｉおよび／またはＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅタンパク質、ならびに／あるいはゲノムＤＮＡが存在し得る。
【０１６７】
ＩＰＶ組成物が使用される場合、一般的にＶｅｒｏ細胞で成長される。この最終ワクチンは、好ましくは、５０ｐｇ／ｍｌより少ないＶｅｒｏ細胞ＤＮＡ（例えば、５０以下の塩基対の長さである５０ｐｇ／ｍｌより少ないＶｅｒｏ細胞ＤＮＡ）を含む。
【０１６８】
（アジュバント）
本発明の好ましい免疫原性組成物はアジュバントを含有し、このアジュバントは好ましくは１つ以上のアルミニウム塩、特にリン酸アルミニウムアジュバントおよび／または水酸化アルミニウムアジュバントを含む。本発明の組成物を調製するために使用される抗原性成分は、好ましくは使用される前にアルミニウムアジュバントを含む（すなわち「予め混合される」またはアジュバントに「予め吸着される」）。
【０１６９】
現在使用中のアルミニウムアジュバントは、代表的には「水酸化アルミニウム」か「リン酸アルミニウム」アジュバントのいずれかをいう。しかしながら、これらは便宜上の名前であり、どちらも存在する実際の化学化合物の正確な記述ではない（参考文献６１の第９章を参照のこと）。本発明は、一般的にアジュバントとして使用する「水酸化物」または「リン酸塩」のいずれかを使用し得る。
【０１７０】
「水酸化アルミニウム」として公知のアジュバントは、代表的には、アルミニウムオキシ水酸化物塩であり、これは通常少なくとも部分的に結晶である。アルミニウムオキシ水酸化物は、式ＡｌＯ（ＯＨ）で表され得、他のアルミニウム化合物（例えば、水酸化アルミニウム  Ａｌ（ＯＨ）３）と赤外（ＩＲ）分光法により区別され得る（具体的には、１０７０ｃｍ−１における吸収バンドおよび３０９０〜３１００ｃｍ−１における強いショルダー（ｓｈｏｕｌｄｅｒ）の存在により）（参考文献６１第９章）。
【０１７１】
「リン酸アルミニウム」として公知のアジュバントは、代表的には、ヒドロキシリン酸アルミニウムであり、しばしば少量の硫酸塩もまた含む。これらは沈殿により得られ得、沈殿中の反応条件および反応濃度は、この塩中のヒドロキシルに対するリン酸の置換の程度に影響し得る。ヒドロキシリン酸塩は、一般に０．３〜０．９９の間のＰＯ４／Ａｌモル比を有する。ヒドロキシリン酸塩は、厳密なＡｌＰＯ４からヒドロキシル基の存在によって区別され得る。例えば、３１６４ｃｍ−１におけるＩＲスペクトルバンド（例えば、２００℃に加熱した場合）は、構造的ヒドロキシルの存在を示す（参考文献６１の第９章）。
【０１７２】
リン酸アルミニウムアジュバントのＰＯ４／Ａｌ３＋モル比は、一般に０．３と１．２の間、好ましくは０．８と１．２の間、そしてより好ましくは０．９５±０．１である。このリン酸アルミニウムは、一般に、特にヒドロキシリン酸塩については非晶質である。代表的なアジュバントは、０．８４と０．９２の間のＰＯ４／Ａｌモル比を有する非晶質のヒドロキシリン酸アルミニウムであり、０．６ｍｇＡｌ３＋／ｍｌで含む。このリン酸アルミニウムは、一般に、粒子状である。この粒子の代表的な直径は、任意の抗原の吸着の後、０．５〜２０μｍの範囲（例えば、約５〜１０μｍ）である。
【０１７３】
リン酸アルミニウムのＰＺＣは、ヒドロキシルに対するリン酸の置換の程度に逆に相関し、そしてこの置換の程度は、沈殿によって塩を調製するために用いられる反応条件および反応物の濃度に依存して変動し得る。ＰＺＣはまた、溶液中の遊離のリン酸イオンの濃度を変化することによるか（より多くのリン酸＝より酸性のＰＺＣ）、またはヒスチジン緩衝剤（ＰＺＣをより塩基性にする）のような緩衝剤を添加することにより変更される。本発明に従って使用されるリン酸アルミニウムは、一般に、４．０と７．０の間、より好ましくは５．０と６．５の間、例えば、約５．７のＰＺＣを有する。
【０１７４】
本発明の組成物を調製するために用いられるリン酸アルミニウムの溶液は、緩衝剤を含み得るが（例えば、リン酸塩またはヒスチジンまたはＴｒｉｓ緩衝剤）、常に必要なわけではない。このリン酸アルミニウム溶液は、好ましくは、滅菌され、そして発熱物質を含まない。このリン酸アルミニウム溶液は、遊離の水性リン酸イオンを含み得る（例えば、１．０と２０ｍＭの間、好ましくは５と１５ｍＭの間、そしてより好ましくは約１０ｍＭの濃度で存在する）。このリン酸アルミニウム溶液はまた、塩化ナトリウムを含み得る。塩化ナトリウムの濃度は、好ましくは０．１〜１００ｍｇ／ｍｌの範囲（例えば、０．５〜５０ｍｇ／ｍｌ、１〜２０ｍｇ／ｍｌ、２〜１０ｍｇ／ｍｌ）であり、そしてより好ましくは約３±１ｍｇ／ｍｌである。ＮａＣｌの存在は、抗原の吸着前のｐＨの正確な測定を容易にする。
【０１７５】
（処置方法およびワクチンの投与）
本発明は、異なる病原体由来の抗原の同時投与を包含する。これら抗原は、組み合わせワクチンの形態で同時投与され得る（すなわち、その投与が複数の病原体に対して被験体を同時に免疫するような複数の抗原を含有する単一の水性組成物）。あるいは、これらは患者に別々に同時投与され得る（例えば、異なる部位で）が、実質的に互いに同時期に投与される（例えば、同じ医師または他の医療機関を受診の間）。従って、異なる抗原は、同時、別々、または連続して使用され得るか、またはこれらは使用前に混合され得る。同時であるが異なる部位への異なる結合体ワクチンの投与は、結合体がキャリアタンパク質を共有する場合にみられる潜在的な抑制効果を避け得る。
【０１７６】
本発明の組成物は、ヒト患者への投与に適しており、本発明は患者において免疫応答を惹起する方法を提供し、本発明の組成物を患者に投与する工程を包含する。
【０１７７】
本発明はまた、医薬における使用のために本発明の組成物を提供する。
【０１７８】
本発明はまた、患者を免疫するための医薬の製造において（ａ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清型Ｃ由来の結合体化莢膜糖、および（ｂ）無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原の使用を提供する。
【０１７９】
本発明はまた、患者を免疫するための医薬の製造において（ａ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清型Ｃ由来の結合体化莢膜糖、および（ｂ）不活性化ポリオウイルス抗原の使用を提供する。
【０１８０】
本発明はまた、患者を免疫するための医薬の製造において（ａ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清型Ｃ由来の結合体化莢膜糖、（ｂ）Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖、（ｃ）Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原の使用を提供する。
【０１８１】
本発明はまた、患者を免疫するための医薬の製造において（ａ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清型Ｃ由来の結合体化莢膜糖、（ｂ）Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖、（ｃ）不活性化ポリオウイルス抗原の使用を提供する。
【０１８２】
本発明はまた、患者を免疫するための医薬の製造において（ａ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清型Ｃ由来の結合体化莢膜糖、（ｂ）Ｓ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の結合体化莢膜糖、（ｃ）不活性化ポリオウイルス抗原、および（ｄ）無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原の使用を提供する。
【０１８３】
本発明はまた、患者を免疫するための医薬の製造において（ａ）第１のキャリアタンパク質に結合体化されたＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清型Ｃ由来の莢膜糖、（ｂ）第２のキャリアタンパク質に結合体化されたＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来の莢膜糖の使用を提供し、この第１のキャリアタンパク質および第２のキャリアタンパク質は同じであることを特徴とする。
【０１８４】
本発明の免疫原性組成物は、例えば：髄膜炎菌性髄膜炎、肺炎球菌性髄膜炎およびＨｉｂ髄膜炎を含む細菌性髄膜炎；ＨＢＶおよびＨＡＶ感染を含むウイルス性肝炎；ジフテリア；破傷風または開口障害（ｌｏｃｋｊａｗ）；百日咳（ｗｈｏｏｐｉｎｇ  ｃｏｕｇｈ）または百日咳（ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）；および／またはポリオのような疾患の低減または予防における使用において好ましくはワクチンである。
【０１８５】
本発明の組成物を受けるための好ましい患者は、２歳未満、好ましくは０〜１２ヶ月の間の年齢である。１つの特定の患者グループは、１ヶ月と３ヶ月の間の年齢であり、以前に髄膜炎菌結合体ワクチンを受けていなかった。別の患者グループは、３ヶ月と５ヶ月の間の年齢であり、以前にジフテリアトキソイドの予防接種を受けていなかった。
【０１８６】
完全な効果を有するために、小児のための代表的な一次免疫スケジュールは、１回より多い投薬を投与する工程を包含し得る。例えば、投薬は：０、２および４ヶ月（時間０が第１の投薬である）；０、１および２ヶ月；０および２ヶ月；０、２および８ヶ月などであり得る。第１の投薬（時間０）は、約２ヶ月齢で投与され得るか、またはときには（例えば、０−２−８ヶ月スケジュールにおいて）約３ヶ月齢で投与され得る。
【０１８７】
組成物はまた、追加抗原投与として使用され得る（例えば、生後２年の小児において）。
【０１８８】
本発明の組成物は、筋肉内注射により投与され得る（例えば、腕、脚または臀部）。次いで別々の投与が使用される場合、特に同時投与されるために２つの別々の組成物がある場合、反対の手足に組成物を注射すること（例えば、左および右の両方の腕に注射すること）が代表的である。
【０１８９】
本発明の組成物がアルミニウムベースのアジュバントを含有する場合、成分の沈殿が貯蔵中に生じ得る。従って、本組成物は、患者に投与する前に振盪されるべきである。振盪された組成物は、一般に不透明な白色懸濁液である。
【０１９０】
（本発明の組成物のパッケージ化）
本発明の組成物は、使用のために容器に入れられ得る。適した容器として、バイアルおよび使い捨てシリンジ（好ましくは滅菌されたもの）が挙げられる。
【０１９１】
本発明の組成物が、バイアルにパッケージされる場合、これらは、好ましくは、ガラスまたはプラスチック材料から作製される。このバイアルは、好ましくは、上記組成物がそれに添加される前に滅菌され得る。ラテックス感受性患者にともなう問題を避けるために、バイアルは、好ましくは、ラテックスを含まないストッパーでシールされる。このバイアルは、単回用量のワクチンを含み得るか、またはそれは、２回以上の用量（「複数回用量」バイアル）例えば、１０回用量を含み得る。複数回用量バイアルを用いる場合、各用量は、厳密な無菌状態下で滅菌ニードルおよびシリンジで引き出されるべきであり、バイアル内容物を汚染することを避けるよう注意をする。好ましいバイアルは、色のないガラスから作製される。
【０１９２】
バイアルは、あらかじめ充填されたシリンジがキャップに挿入され得るように適したキャップ（例えば、Ｌｕｅｒロック）を有し得、シリンジの内容物は、バイアル中に排出され得（例えば、その中で凍結乾燥された物質を再構成するため）、バイアル中の内容物は、シリンジに戻され得る。バイアルからシリンジをはずした後、次いで針は患者に添えられ、組成物が投与され得る。このキャップは、好ましくは、シールまたはカバーの内側に位置され、このシールまたはカバーは、キャップが接触され得る前に取り除かれるはずである。
【０１９３】
上記組成物が、シリンジ中にパッケージされる場合、このシリンジは、通常、それに取り付けられたニードルを有さないが、別個のニードルが組み立ておよび使用のためにシリンジとともに提供され得る。安全ニードルが好ましい。１−インチ２３−ゲージ、１−インチ２５−ゲージおよび５／８−インチ２５−ゲージのニードルが代表的である。シリンジには、その上に内容物のロット番号および使用期限日がプリントされ得るはがれるラベルが提供され得、記録維持を容易にする。このシリンジ中のプランジャーは、好ましくは、ストッパーを有し、プランジャーが吸引の間に偶発的に外れることを防ぐ。これらのシリンジは、ラテックスゴムキャップおよび／またはプランジャーを有し得る。使い捨てシリンジは、単回用量のワクチンを含む。
【０１９４】
このシリンジは、一般に、先端部キャップを有し、この先端部をニードルの取り付けの前にシールし、そしてこの先端部キャップは、好ましくはブチルゴムから作製される。このシリンジとニードルとが別個にパッケージされる場合、次いでこのニードルは、好ましくは、ブチルゴムシールドが取り付けられる。Ｇｒｅｙブチルゴムが好ましい。好ましいシリンジは、商標名「Ｔｉｐ−Ｌｏｋ」ＴＭの下で販売されるものである。
【０１９５】
ガラス容器（例えば、シリンジまたはバイアル）が使用される場合、次いでソーダ石灰ガラスよりむしろホウ珪酸ガラスからなる容器を使用することが好ましい。
【０１９６】
種々のキットが本発明により提供される。このキットは、別々の免疫原性組成物を含み得、これらの組成物は、使用時にお互い即座に混合され組み合わせワクチンを与え得るか、または別々に（例えば、異なる部位で）投与され得るが、実質的に同時である。従って、キット中の組成物は、同時の、別々のまたは連続的な使用のためであり得るか、または混合することにあり得る。この組成物が混合され得る場合、それらのうちの少なくとも１つが、初めは水性形態であり、１つが初めは凍結乾燥形態であることが好ましい（凍結乾燥組成物が使用時に水性組成物により再活性されるように）。凍結乾燥された成分が存在する場合、組成物は代表的には１つ以上の結合体化糖抗原を含む。
【０１９７】
本発明のキットにおいて別々に含まれているものの代表的な組成物として：ＭｅｎＣ結合体抗原を含む組成物；肺炎球菌結合体抗原を含む組成物；無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原および／または不活性化ポリオウイルス抗原を含む組成物；およびＨｉｂ結合体を含む組成物が挙げられる。
【０１９８】
無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原を含む組成物はまた、代表的にはジフテリアトキソイドおよび破傷風トキソイドを含む。これはまたＨＢｓＡｇおよび／またはＩＰＶのうちの１つ以上を含み得る。従って、キットの１つの組成物は、５価のＤ−Ｔ−Ｐａ−ＨＢｓＡｇ−ＩＰＶ組成物または完全な液体のＤ−Ｔ−Ｐａ−ＨＢｓＡｇ−ＩＰＶ−Ｈｉｂ成分である。
【０１９９】
キット中の各組成物は、別々に貯蔵され得る（例えば、各々別々のバイアルまたはシリンジ中に）。これはまたシリンジ中に１つの組成物およびバイアル中にその他を供給することが可能である。使用時に即座に混合されるべき成分がある場合、別々の容器を有する代替の配置は、複数のチャンバー容器を使用することである。複数のチャンバーシリンジは、個々の組成物を貯蔵の間別々に維持させるが、シリンジプランジャーが活性化されるように混合される。
【０２００】
キットの形態で供給されない場合、本発明の組成物は完全な液体形態であり得る。
【０２０１】
（免疫スケジュール）
上に言及されるように、小児のための代表的な一次免疫スケジュールは、１回より多い投薬を含む。例えば、投薬は：０、２および４ヶ月（時間０が第１の投薬である）；０、１および２ヶ月；０および２ヶ月などであり得る。第１の投薬（時間０）は通常、約２ヶ月齢で投与され得る。２回投薬スケジュール（例えば、２ヶ月間隔）は、より高価な３回投薬スケジュール（例えば、１ヶ月間隔）より劣っていないことが見出されている。通常の非髄膜炎菌ワクチンは、２回投薬スケジュールの２回投薬の間に与えられ得る。
【０２０２】
従って、本発明は、以前に（ｉ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の莢膜糖の単回投薬、および（ｉｉ）無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原および／または不活性化ポリオウイルスのうちの１つ以上の１回より多い投薬を受けた患者を処置する方法を提供し、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の莢膜糖のさらなる投薬を患者に投与する工程を包含する。さらなるＭｅｎＣの投薬は、必要に応じて上に記載されるような他の抗原と同時投与され得る。
【０２０３】
本発明はまた、患者において免疫応答を惹起するための方法を提供し、この工程は：（ｉ）患者にＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の莢膜糖と無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原および／または不活性化ポリオウイルスのうちの１つ以上とを同時投与する工程；次いで（ｉｉ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の莢膜糖を同時投与すること無しに、患者に無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原および／または不活性化ポリオウイルスのうちの１つ以上を投与する工程；および（ｉｉｉ）患者にＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の莢膜糖と無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原および／または不活性化ポリオウイルスのうちの１つ以上とを同時投与する工程を包含する。工程（ｉ）、（ｉｉ）および（ｉｉｉ）は好ましくは、少なくとも１ヶ月の間隔で連続して実施される。これらは、約２ヶ月齢、約３ヶ月齢、および約４ヶ月齢で実施され得る。この方法は（ｉ）第１のワクチンおよび第２のワクチン；（ｉｉ）第１のワクチンはなく第２のワクチン；（ｉｉｉ）第１のワクチンおよび第２のワクチンを投与することにより都合よく実施され得る。
【０２０４】
代替のスケジュールにおいて、工程（ｉｉ）および（ｉｉｉ）は、入れかえられ得る（すなわち、患者は第１および第２の検診で血清群Ｃワクチンを受けるが、第３の検診では受けない）。
【０２０５】
本発明はまた、患者を免疫するための医薬の製造におけるＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の結合体化莢膜糖の使用を提供し、ここでこの患者は以前に（ｉ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃ由来の莢膜糖のｎ回投薬、および（ｉｉ）無細胞性Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ抗原、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原および／または不活性化ポリオウイルスのうちの１つ以上のｎ回より多い投薬を受けている。ｎの値は、好ましくは１である。
【０２０６】
（一般）
用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」は、「含有する（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」および「からなる」を包含し、例えば、Ｘを「含む」組成物は、専らＸからなり得るか、またはさらなる何かを含有し得る（例えば、Ｘ＋Ｙ）。
【０２０７】
語「実質的に」は、「完全に」を排除せず、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まなくてもよい。必要である場合、語「実質的に」は、本発明の定義から省略され得る。
【０２０８】
数値ｘに関する用語「約」は、例えば、ｘ±１０％を意味する。
【０２０９】
詳細に述べられていなければ、２つ以上の成分を混合する工程を含むプロセスは、混合の任意の特定の順序を要求しない。従って、成分は任意の順序で混合され得る。３つの成分が存在するとき、そのときは、２つの成分が互いと組み合わされ得、そして次にこの組み合わせが、第３の成分と組み合わされ得るなどである。
【０２１０】
抗原がアジュバントに「吸着される」と記載される場合、少なくとも５０％（重量で）の抗原が吸着されることが好ましい（例えば、５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％またはそれ以上）。ジフテリアトキソイドおよび破傷風トキソイドは両方とも完全に吸着されることが好ましい（すなわち、上清に検出されない）。ＨＢｓＡｇの完全な吸着がまた好ましい。
【０２１１】
結合体の量は、一般にキャリアの選択による変動を避けるために糖の量で与えられる（すなわち、全体として結合体（キャリア＋糖）の用量は、規定された用量より高い）。
【０２１２】
結合体における使用のための代表的なキャリアタンパク質は、細菌性トキシンである（例えば、ジフテリアトキシン［例えば、参考文献１の第１３章；参考文献６２〜６５を参照のこと］（またはそのＣＲＭ１９７変異体［６６〜６９］）および通常トキソイド形態の破傷風トキシン（例えば、ホルマリンまたはホルムアルデヒドのような不活性化物質を用いる処理により得られる））。他の適したキャリアタンパク質としては、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓの外膜タンパク質［７０］、合成ペプチド［７１、７２］、熱ショックタンパク質［７３、７４］、百日咳タンパク質［７５、７６］、サイトカイン［７７］、リンホカイン［７７］、ホルモン［７７］、成長因子［７７］、種々の病原体から誘導された抗原由来の複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質［７８］（例えば、Ｎ１９［７９］）、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のプロテインＤ［８０〜８２］、ヒューモライシン（ｐｎｅｕｍｏｌｙｓｉｎ）［８３］、肺炎球菌の表面タンパク質ＰｓｐＡ［８４］、鉄取り込みタンパク質［８５］、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来のトキシンＡまたはトキシンＢ［８６］などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１３】
動物（および特にウシ）材料が細胞の培養に使用される場合、伝染性海綿状脳症（ＴＳＥ）のない、および特にウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）のない供給源から取得しなければならない。
【実施例】
【０２１４】
（本発明を実施するための様式）
本発明は、例示のみによって記載され、改変は、本発明の範囲および精神の中にあるままでもなされ得ることが理解されるべきである。
【０２１５】
（２ヶ月、４ヶ月および６ヶ月での３回投与）
ＰＲＥＶＮＡＲＴＭワクチン（結合体化７価の肺炎球菌莢膜糖）および／またはＩＮＦＡＮＲＩＸ−ＨＥＸＡＴＭ製品（Ｄ−Ｔ−Ｐａ−ＨＢｓＡｇ−ＩＰＶ−Ｈｉｂ）と一緒に与えられる場合のＭＥＮＪＵＧＡＴＥＴＭワクチン（結合体化髄膜炎菌血清群Ｃ莢膜糖）の安全性および免疫原性を評価するために研究を設定した。
【０２１６】
登録時、２ヶ月齢の９９２人の乳児を：（１）ＰＲＥＶＮＡＲＴＭとＩＮＦＡＮＲＩＸ−ＨＥＸＡＴＭ；（２）ＭＥＮＪＵＧＡＴＥＴＭとＩＮＦＡＮＲＩＸ−ＨＥＸＡＴＭ；または（３）ＭＥＮＪＵＧＡＴＥＴＭとＰＲＥＶＮＡＲＴＭとＩＮＦＡＮＲＩＸ−ＨＥＸＡＴＭを受容する、３つのワクチン接種グループのうちの１つに割り当てた。これらワクチンは付随的に投与されるが、別の注射部位で投与される。ワクチンを２ヶ月齢、４ヶ月齢および６ヶ月齢で投与して、この研究を行った。
【０２１７】
局所的紅斑、硬変および腫脹はグループ２よりグループ３でわずかに低かった（代表的には約５％少ない応答）；圧痛は両グループで同じであった。全身性の応答は、すべてのグループで同じであったが、代表的にはグループ２が最も低く、下痢はグループ３が最も低かった。しかしながらすべての場合においてこのワクチンは十分許容され、安全であった。
【０２１８】
免疫原性を評価するために、ＭｅｎＣに対する殺菌力価（ＢＣＡ）を各被験体からの２つの血液サンプルで測定した：１つめは、第１のワクチン投与の時点で採取し；２つめは、第３の投与から４〜６週後に採取した。ＢＣＡアッセイは、ヒトの補体を使用した。
【０２１９】
本研究の免疫学的結果は、はっきりしなかった。なぜなら、Ｂｕｔｔｅｒｙら［１１］は、髄膜炎菌血清群Ｃ結合体が、免疫学的に肺炎球菌の多価結合体と不適合であったことが以前に報告されているからである。しかしながら対照的に、本発明の研究は、グループ（２）および（３）の被験体の１００％が、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ｃに対する予防的殺菌力価（すなわち、２つの血液サンプルにおいて、≧１：８のＢＣＡ力価の上昇）に達することを示した。さらに両グループ間のＧＭＴは、ほぼ一致し、種々の非ＭｅｎＣワクチン成分は、どのＭｅｎＣ結合体の免疫原性とも相互作用しないことを示している。
【０２２０】
ＢＣＡの結果を以下に示す：
【０２２１】
【化８】
2009525260.tif 000009
ＩＮＦＡＮＲＩＸ  ＨＥＸＡＴＭ成分の免疫原性は、損なわれなかった。２つめの血液サンプルにおいてＤ、Ｔ、Ｐ、ＨｉｂおよびＨＢｓＡｇに対する抗体力価を、ＥＬＩＳＡにより測定した。ポリオウイルスに対する抗体力価を、標準的な中和試験により測定した。結果は以下のとおりであった：
【０２２２】
【化９】
2009525260.tif 000010
ＰＲＥＶＮＡＲＴＭ成分の免疫原性は、有意に損なわれなかった。２つめの血液サンプルにおいてＥＬＩＳＡ力価≧０．１５μｇ／ｍＬを有する患者の割合を以下に示す：
【０２２３】
【化１０】
2009525260.tif 000011
従って、ＭｅｎＣ糖に対する免疫応答は、グループ（２）および（３）がグループ（１）に比べ劣っているわけではない。６価の抗原に対する免疫応答は、３つのグループにおいて同様である。従って肺炎球菌糖に対する免疫応答は、グループ（３）がグループ（１）に比べ劣っているわけではなかった。これらの結果は参考文献３と一致した。
【０２２４】
（２回投与スケジュールと３回投与スケジュールの比較）
ＩＮＦＡＮＲＩＸ  ＨＥＸＡＴＭは、３回投与基本スケジュールに従って２ヶ月齢、３ヶ月齢および４ヶ月齢で投与され得る。結合体ワクチンは、無細胞性百日咳抗原と同時に投与することにより阻害され得るので、３回投与スケジュールを用いてＩＮＦＡＮＲＩＸ  ＨＥＸＡＴＭ製品と一緒に投与される場合、ＭＥＮＪＵＧＡＴＥＴＭワクチンの安全性と免疫原性を評価するために研究を設定した。この髄膜炎菌結合体は、３回すべて６価の投薬（すなわち、２ヶ月齢、３ヶ月齢および４ヶ月齢）とともに同時投与されるか、または１回目および３回目（すなわち、２ヶ月齢および４ヶ月齢）にのみ投与される。髄膜炎菌結合体に対する記憶応答を、１２ヶ月齢で血清群ＡおよびＣ糖の非結合体化混合物をＩＮＦＡＮＲＩＸ  ＨＥＸＡＴＭのさらなる投与と同時に投与し、７または２８日後血液を採取して評価した。
【０２２５】
登録時７〜１１週齢の２４１人の乳児を、以下を受ける４つのワクチン接種グループのうちの１つに割り当てた：（１）３回投与スケジュールに従ってＭＥＮＪＵＧＡＴＥＴＭとＩＮＦＡＮＲＩＸ−ＨＥＸＡＴＭ、続いて１２ヶ月で非結合体化Ａ／ＣおよびＩＮＦＡＮＲＩＸ  ＨＥＸＡＴＭ、１週後に血液を採取する；（２）グループ（１）と同じだが非結合体化Ａ／Ｃ投与２８日後に血液を採取する；（３）２回投与スケジュールに従ってＭＥＮＪＵＧＡＴＥＴＭとＩＮＦＡＮＲＩＸ−ＨＥＸＡＴＭ、ＩＮＦＡＮＲＩＸ−ＨＥＸＡＴＭはまた３ヶ月齢で投与され、続いて１２ヶ月で非結合体化Ａ／ＣおよびＩＮＦＡＮＲＩＸ−ＨＥＸＡＴＭが投与され、１週間後に血液を採取する；（４）グループ（３）と同じだが、非結合体Ａ／Ｃ２８日後血液を採取する。同時に１つ以上の投与をした場合、これらは付随して投与されたが、別々の注射部位に投与された。
【０２２６】
処置グループとワクチンの間において局所の応答生成における臨床的に関連性のある違いを観察しなかった。ＭｅｎＰＳ  Ａ／Ｃワクチン接種後および１２ヶ月での６価ワクチンの第４の注射後、各グループにおいて高い割合の被験体が、６価ワクチンまたはＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭのいずれかを用いる第１、第２および第３注射後に比べて局所応答を経験した。大半の局所の応答は、注射２日以内に生じ、軽いまたは中程度と評価された。髄膜炎菌結合体に対する重篤な局所応答を報告した被験体はいなかった。
【０２２７】
すべての注射を合計すると誘発された全身性応答の発生率は、４つの処置グループの間で同様であった。第２の検診で、６価のワクチンとＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭの同時投与後の全身性の応答（グループ１および２）を６価のワクチンのみを投与した後の応答（グループ３および４）と比較したが、臨床的に関係する差は観察されなかった。ほとんどの全身性応答は、注射後６時間と２日の間で生じた。４０．５℃以上の直腸温を経験した被験体はいなかった。
【０２２８】
最初のＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭでの免疫から１ヶ月後、予防的ＳＢＡ力価（８以上の力価）を示すワクチンの割合は、２回投与免疫スケジュールおよび３回投与免疫スケジュールそれぞれについて９８％および１００％であった。予防的ＳＢＡ力価は、免疫後８ヶ月で８９％（２回投与グループ）であるのに対して９５％（３回投与グループ）で持続した。両免疫スケジュールは、２回免疫または３回免疫の１ヶ月後に測定されたＳＢＡ幾何平均力価において１００倍超の増加を誘導した。
【０２２９】
ＭｅｎＰＳ  Ａ／Ｃの単回チャレンジ投与において、ＭｅｎｊｕｇａｔｅＴＭのどちらかの免疫スケジュールを用いて刺激された被験体は、チャレンジ前に比べて１５倍以上のＳＢＡ  ＧＭＴの増加を示した。これを、ＭｅｎＰＳ  Ａ／Ｃの単回投与を、以前の研究の履歴コントロール群の未刺激の１２ヶ月齢の乳児に投与した場合観察される１．０９倍の増加と比較する。ＭｅｎＰＳ  Ａ／Ｃ  ＧＭＴを用いるチャレンジ後２８日に決定されるＳＢＡ（グループ２および４）は、７日で決定されるＳＢＡ（グループ１および３）と比べて高い傾向にあった。
【０２３０】
従って、応答生成および他の安全性プロフィールは、４つのワクチングループすべての間で同様であった。
【０２３１】
Ｂ型肝炎表面抗原に対する抗体のベースラインＧＭＣは、２回投与スケジュールグループおよび３回投与スケジュールグループにおける被験体において同様であった（８．６１  ＩＵ／ｌおよび５．９３  ＩＵ／ｌ）。最初の免疫の１ヶ月後で、これらはそれぞれ５２倍および９６倍の増加を有し、１０  ＩＵ／ｌ以上の予防的抗体濃度がどちらのグループにおいても９９％の被験体において存在した。
【０２３２】
従って２ヶ月齢および４ヶ月齢で投与される２つの髄膜炎菌結合体の注射は、健常な乳児において免疫学的記憶に関する免疫系を刺激した。２回投与グループの９８％の被験体および３回投与グループの１００％の被験体が、≧１：８のｈＢＣＡ力価に達した。２回投与スケジュールにより誘導されるこの免疫応答は、３回投与スケジュールにより誘導される免疫応答より劣っていないと考えられ得る。すべての被験体の９９％が６価ワクチンのＢ型肝炎成分に応答して１０  ＩＵ／ｌ以上の力価に進展し、従って２回投与の髄膜炎菌スケジュールまたは３回投与髄膜炎菌投与スケジュールのいずれとも干渉しないことが証明される。
【０２３３】
結論として、１歳未満の乳児において２ヶ月間隔をおいた髄膜炎菌結合体の２回投与スケジュールは、免疫原性であり、６価のワクチンと一緒に与えられたとき、免疫学的記憶を誘導した。ＭｅｎＣについての２回投与免疫スケジュールは、３回投与スケジュールに比べて劣っていない。同時投与されるＤ、Ｔ、ａＰ、ＩＰＶ、ＨＢＶまたはＨｉｂ抗原の減少された免疫原性に関する証拠はない。
【０２３４】
髄膜炎菌結合体のブースター投与は、生後２歳時のこれら患者に投与され得る。
【０２３５】
（乳幼児における７価のＤ−Ｔ−ａＰ−ＨＢＶ−ＩＰＶ−Ｈｉｂ−ＭｅｎＣ免疫）
上に記載の結果の支持するものとして、参考文献８７は、２つのワクチン接種スケジュール（それらのうちの１つが出生時のＢ型肝炎ワクチン接種を含む）に従って、髄膜炎菌Ｃ結合体ワクチン（破傷風トキソイドキャリアを用いるＮＥＩＳＶＡＣ−ＣＴＭ）のＤＴａＰベースの組み合わせとの同時使用の研究を報告する。健常な乳児を（ｉ）Ｄ−Ｔ−ａＰ−ＨＢＶ−ＩＰＶ／Ｈｉｂ（ＩＮＦＡＮＲＩＸ  ＨＥＸＡＴＭ）（２ヶ月、４ヶ月および６ヶ月で）、または（ｉｉ）出生時のＨＢＶに続いてＩＮＦＡＮＲＩＸ  ＨＥＸＡＴＭ（２ヶ月および６ヶ月で）、Ｄ−Ｔ−ａＰ−ＩＰＶ／Ｈｉｂ（４ヶ月で）、のいずれかを投与するために無作為化した。両群において、ＭｅｎＣ−ＴＴ結合体の２回の投与を２ヶ月および４ヶ月で同時投与し、２ヶ月、４ヶ月および６ヶ月でＩＮＦＡＮＲＩＸ  ＨＥＸＡＴＭと同時投与されるＭｅｎＣ−ＣＲＭ１９７結合体（ＭＥＮＩＮＧＩＴＥＣＴＭ）の３回投与と比較した。
【０２３６】
すべてのＮＥＩＳＶＡＣ−ＣＴＭレシピエントは、第３のワクチン投与１ヶ月後、抗ＰＲＰ抗体の血清予防的濃度を有し、ＮＥＩＳＶＡＣ−ＣＴＭの第２の投与後、すべて１：８以上のＳＢＡ−ＭｅｎＣ力価を有した。これらの応答は、ＤＴａＰ−ＨＢＶ−ＩＰＶ／ＨｉｂおよびＭＥＮＩＮＧＩＴＥＣＴＭの３回投与後にみられた応答より劣っていなかった。抗ＰＲＰ抗体ＧＭＣは、ＭＥＮＩＮＧＩＴＥＣＴＭワクチンよりＮＥＩＳＶＡＣ−ＣＴＭワクチンで有意に高かった。すべての他の同時に投与される抗原に対する免疫応答は損なわれず、ＮＥＩＳＶＡＣ−ＣＴＭワクチンにおいて９８．１％以上のセロプロテクション／セロポジティブ比を有する。
【０２３７】
すべてのスケジュールは十分許容され、研究群の間で反応生成に差はなかった。
【０２３８】
従って、Ｄ−Ｔ−ａＰ−ＨＢＶ−ＩＰＶ／ＨｉｂまたはＤ−Ｔ−ａＰ−ＩＰＶ／Ｈｉｂの破傷風トキソイドキャリアを有するＭｅｎＣの２回投与での同時投与は、同時投与される抗原に対する応答を損なうことなしに安全であり、十分許容され、免疫原性であると結論付けられる。
【０２３９】
【化１１】
2009525260.tif 000012
【０２４０】
【化１２】
2009525260.tif 000013
【０２４１】
【化１３】
2009525260.tif 000014
【配列表】
2009525260000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成20年8月7日(2008.8.7)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2009525260000001.app
【国際調査報告】
2009525260.tif 000017
2009525260.tif 000018
2009525260.tif 000019
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