(57)【要約】本発明は、アデノシンＡ３受容体に対して高い親和性を示す新規化合物を提供する。本発明はまた、アデノシンＡ３受容体のモジュレーターも提供する。さらに、本発明は、アデノシンＡ３受容体が役割を果たす病態および疾患の治療および／または予防のための化合物を提供する。アデノシンＡ３受容体が役割を果たす病態および疾患の治療および／または予防のための薬剤組成物も記載される。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）の化合物：
【化１】
2009519988.tif 000105
｛式中、
Ｒ１およびＲ２は互いに独立に、水素、ハロゲン、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、アルキル、ＣＯＯＨ、Ｏ−（アルキル）、Ｓ−（アルキル）、Ｎ−（低級アルキル）（アルキル）、ヘテロシクロアルキル、アリールもしくはヘテロアリール、ＮＨ−（アルキル）であり、
Ｘは、Ｒ３もしくはＣＯＲ３、Ｏ−Ｒ３もしくはＳ−Ｒ３、Ｎ−Ｒ３Ｒ４、ＮＨＣＯＲ３、Ｎ（低級アルキル）ＣＯＲ３、ＮＨＳＯ２Ｒ３、Ｎ（低級アルキル）ＳＯ２Ｒ３、またはＮＨＣＯＮＨＲ３を表し、
Ｒ３およびＲ４は互いに独立に、水素、アルキル、ＣＦ３、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、またはアルキルヘテロアリールであり、
Ｙは、（Ａ）ｎ−Ｂ基を表し、式中、
ｎは０または１を表し、
Ａは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、Ｎ−（低級アルキル）、Ｎ−アリール、Ｎ−ヘテロアリールからなる群において選択された部分であり、
Ｂは、アリール基またはヘテロアリール基である。｝、
或いはその薬剤として許容できる塩、当該化合物もしくは当該塩のプロドラッグ、または当該化合物、当該塩もしくは当該プロドラッグの溶媒和物もしくは水和物。
【請求項２】
Ｒ１、Ｒ２、およびＸが請求項１に定義する通りであり、Ｙがアリール基を表す、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が水素であり、Ｒ２およびＸが請求項１に定義する通りであり、Ｙがアリール基を表す、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１およびＲ２が水素であり、Ｘが請求項１に定義する通りであり、Ｙがアリール基を表す、請求項１から３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１およびＲ２が水素であり、ＸがＲ３、Ｏ−Ｒ３またはＳ−Ｒ３、Ｎ−Ｒ３Ｒ４を表し、
Ｒ３およびＲ４は互いに独立に、水素、アルキル、ＣＦ３、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、またはアルキルヘテロアリールであり、
Ｙがアリール基を表す、請求項１から４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
２−フェニル−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オンおよび２−（４−メトキシ−フェニル）−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オンから選択される、請求項１から５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
薬剤として有効な量の請求項１に記載の式（Ｉ）の化合物またはその薬剤として許容できる塩を、薬剤として許容できる担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて含む薬剤組成物。
【請求項８】
治療上有効量の請求項１に記載の一般式（Ｉ）の化合物を、それを必要とする患者にＡ３受容体活性の調節が行われるように投与することによって、Ａ３受容体の機能化を調節する方法。
【請求項９】
治療上有効量の一般式（Ｉ）の化合物を、それを必要とする患者にＡ３受容体活性の遮断が行われるように投与することによって、Ａ３受容体を選択的に遮断する方法。
【請求項１０】
喘息、過敏症、鼻炎、枯草熱、血清病、アレルギー性血管炎、アトピー性皮膚炎、皮膚炎、乾癬、湿疹、特発性肺線維症、好酸球性胆嚢炎、慢性気道炎症、慢性閉塞性肺疾患、好酸球増加症候群、好酸球性胃腸炎、浮腫、蕁麻疹、好酸球性心筋疾患、好酸球増加を伴うエピソード性血管浮腫、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、アレルギー性肉芽腫症、癌腫症、好酸球性肉芽腫、家族性組織球症、高血圧、肥満細胞脱顆粒、腫瘍、心臓低酸素症、脳虚血、利尿、腎不全、神経学的障害、精神障害、認知障害、心筋虚血、気管支収縮、関節炎、自己免疫疾患、クローン病、グレーブス病、糖尿病、多発性硬化症、貧血、乾癬、生殖障害、紅斑性狼瘡、再潅流障害、脳細動脈径、アレルギーメディエーターの放出、強皮症、卒中、全虚血、中枢神経系障害、心血管障害、腎障害、炎症性障害、胃腸障害、眼障害、アレルギー性障害、呼吸器障害、または免疫障害に関連する障害および／または病態の治療および／または予防のための薬剤組成物を調製するための、請求項１から６のいずれか一項に記載の一般式（Ｉ）の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、アデノシンＡ３受容体に対して高い親和性を示す新規化合物を提供する。本発明はまた、アデノシンＡ３受容体のモジュレーターも提供する。さらに、本発明は、アデノシンＡ３受容体が役割を果たす病態および疾患の治療および／または予防のための化合物も提供する。アデノシンＡ３受容体が役割を果たす病態および疾患の治療および／または予防のための薬剤組成物も記載される。
【背景技術】
【０００２】
アデノシンは、特に心血管系および神経系内で多数の生理活性を有する広範に分布するモジュレーターである。アデノシンの効果は、特異的な細胞表面受容体タンパク質によって媒介される。アデノシンは、鎮静の誘発、血管拡張、心拍数および心収縮性の抑制、血小板凝集能の抑制、糖新生の刺激、ならびに脂肪分解の抑制を含めて、多様な生理機能を調節する。アデノシンは、アデニル酸シクラーゼへの効果に加えて、カリウムチャネルを開き、カルシウムチャネルを通過する流れを低減し、かつ受容体を介する機序によってホスホイノシチドターンオーバーを抑制または刺激することが示されている（Muller C.E.およびStein B., Current Pharmaceutical Design, 2:501, 1996、ならびにMuller CE. , Exp. Opin. Ther. Patents, 7(5):419, 1997）。
【０００３】
アデノシン受容体は、プリン受容体のスーパーファミリーに属する。４つの主要なクラスのアデノシン受容体は、薬理学的、構造的、および機能的に特徴付けられ（Fredholmら、Pharm. Rev. (1994) 46:143-156）、Ａ１、Ａ２ａ、Ａ２Ｂ、およびＡ３と分類される（本願ではＡ１、Ａ２Ａ、Ａ２Ｂ、およびＡ３受容体と称する）。Ａ１受容体は、Ｇｉタンパク質を介してアデニル酸シクラーゼの抑制に共役しており、またホスホイノシトールターンオーバーの抑制または刺激およびイオンチャネルの活性化を含めて、他のセカンドメッセンジャー系に共役していることも示されている。Ａ２ＡおよびＡ２Ｂ受容体は、アデニル酸シクラーゼの活性化を促進し、ｃＡＭＰの細胞内レベルの上昇を導くＧｓタンパク質に共役している。Ａ１、Ａ２ａ、およびＡ２Ｂサブタイプは、アゴニストの薬理作用の研究によって最初に発見されたが、Ａ３サブタイプは、分子生物学の研究によって最近発見された。実際、Ａ３受容体配列は、最初にラット精巣ｃＤＮＡライブラリーから同定され、この配列は後に、ラット脳ｃＤＮＡライブラリーからの他のＧタンパク質共役受容体（ＧＰＣＲ）との相同性によってクローン化された。
【０００４】
ラットにおいて、Ａ３受容体転写産物は、主に中枢神経系、精巣、肺、腎臓、心臓、および炎症／免疫細胞に見出される。哺乳動物の間で、Ａ３受容体の末梢分布の種間差が大きいようである。ヒツジにおいて、転写産物は、特に肺、脾臓、下垂体隆起部、松果体、および炎症／免疫細胞に見出され、より低いレベルでは精巣、腎臓、および脳に見出され（Lindenら、Mol. Pharmacol. (1993), 44:524-532）。ヒト転写産物は広範に存在し、肺および肝臓において最大発現が検出されている（Salvatoreら、Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1993), 90:10365-10369）。Ａ３受容体は、喘息、および慢性閉塞性肺疾患としてのさらなる炎症性病態の病態生理に関与することが示されている（Meade C. J.ら、Life Science (2001), 69, 1225-1240; Polosaら、Eur Respir. (2002), 20:488-496; Cronstein B.N.ら、Arthritis Rheum. (1995), 38, 1040-1045）。また、Ａ３受容体は眼圧の制御にも関与し（Yangら、Current Eye Research 30 (2005), 747-754）、これらの受容体の調節は、緑内障を治療する新しい手法である。
【０００５】
さらなる調査によって、膵癌、大腸癌、乳癌、肺癌、およびヒト悪性黒色腫を含めて、いくつかのヒト癌において、Ａ３受容体が同定されている。驚くべきことに、健康な正常組織に比べて、癌性細胞にＡ３受容体がより高い濃度で存在する。参照により本明細書に組み込まれる米国特許出願第１０／１３４，２１９号（Baraldiら）では、発明者らが、Ａ３受容体アンタゴニストを使用して、ヒト癌におけるアポトーシスの誘導に成功したことを示している。Ａ３アンタゴニストの使用によって、癌細胞をアポトーシスの標的とすることができ、それによって患者の治療において予測される副作用が低減されることが記載されている。
【０００６】
現在までのところ、ＩＢ−ＭＥＣＡ（Ｎ６−（３−ヨードベンジル）−アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロンアミド）およびＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡ（２−クロロ−Ｎ６（３−ヨードベンジル）−アデノシン−５’−Ｎ−メチルウロンアミド）（Jacobsonら、FEBS, 336(1), 57-60; Kim H. O.ら、Journal of Medicinal Chemistry, 1994, 37, 3614-3621）は、最も強力で特異的なＡ３受容体アゴニストであり、様々な研究で広範に使用されている。Ａ３受容体アゴニストの重要性を示すと、一例は、虚血の予防である。実際、アデノシンは、心筋虚血中に大量に放出され、心血管系において潜在的に重要な保護機能を媒介することができる。したがって、特異的Ａ３アゴニストを虚血の発症前に投与すると、心臓のプレコンディショニングを行うことができ、発症の結果の低減を引き起こす可能性がある（Ｌｉａｎｇら、米国特許第６，２１１，１６５号）。Ａ３受容体に選択的なアゴニストは、脳保護薬（Jacobsonら、Trends Pharmacol. Sci. (1996), 17, 108-113）、心保護薬（Nakanoら、Pharmacol. Ther. (2000) 86, 263-275、およびDoughertyら、FASEB J. (1998) 12, 1785-1792)、および抗癌剤(Fishmanら、Oncogene (2002), 21, 4060-4064）として興味深い。
【０００７】
肥満細胞脱顆粒は、心筋再灌流傷害、過敏反応（喘息、アレルギー性鼻炎、および蕁麻疹）、虚血性腸疾患、自己免疫性炎症、およびアトピー性皮膚炎の構成要素である。選択的Ａ３受容体アンタゴニストを使用して、これらの疾患、通常は肥満細胞脱顆粒に起因する病理学的効果を治療および／または予防することができる。 すでに同定されている特異的Ａ３受容体アンタゴニスト（Jacobsonら、米国特許第6,376,521号）が、現在いくつかの用途において開発されており、その用途の中には、喘息、慢性閉塞性肺疾患、緑内障、および他の眼圧疾患の治療がある（Okamuraら、Bioorganic & Med Chem Letters, 14 (2004), 3775-3779）。現在までのところ、Ａ３受容体アンタゴニストは、抗喘息薬、抗うつ薬、抗不整脈薬、腎保護薬、抗パーキンソン病薬、および認識増強薬として有用であることが求められているが、脳における抗炎症剤、またはことによると抗虚血剤として有用であることも求められている。
【０００８】
さらなるアデノシン受容体モジュレーターが、薬理学的ツールとして必要とされ、Ａ３受容体が役割を果たす様々な疾患の治療および／または予防のための薬物としてかなり興味深い。特異的Ａ３受容体モジュレーターが依然として求められている。本発明は、Ａ３受容体結合親和性および他のサブタイプと比較したＡ３選択性について改善された効力を有する化合物を提供する。本発明は、これらの化合物を使用して、それを必要とする患者においてＡ３受容体を選択的に調節する方法、およびこのような化合物を含む薬剤組成物も提供する。本発明の上記その他の目的および利点、ならびにさらなる発明の特徴は、本明細書に記載する本発明の説明から明らかになるであろう。
【発明の開示】
【０００９】
発明の概要
本発明は、式（Ｉ）の化合物：
【００１０】
【化１】
2009519988.tif 000002
【００１１】
｛式中、
Ｒ１およびＲ２は互いに独立に、水素、ハロゲン、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、アルキル、ＣＯＯＨ、Ｏ−（アルキル）、Ｓ−（アルキル）、Ｎ−（低級アルキル）（アルキル）、ヘテロシクロアルキル、アリールもしくはヘテロアリール、ＮＨ−（アルキル）であり、
Ｘは、Ｒ３もしくはＣＯＲ３、Ｏ−Ｒ３もしくはＳ−Ｒ３、Ｎ−Ｒ３Ｒ４、ＮＨＣＯＲ３、Ｎ（低級アルキル）ＣＯＲ３、ＮＨＳＯ２Ｒ３、Ｎ（低級アルキル）ＳＯ２Ｒ３、またはＮＨＣＯＮＨＲ３を表し、
Ｒ３およびＲ４は互いに独立に、水素、アルキル、ＣＦ３、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、またはアルキルヘテロアリールであり；
Ｙは、（Ａ）ｎ−Ｂ基を表し、式中、
ｎは０または１を表し、
Ａは、Ｏ、Ｓ、ＮＨ、Ｎ−（低級アルキル）、Ｎ−アリール、Ｎ−ヘテロアリールからなる群において選択された部分であり、
Ｂは、アリール基またはヘテロアリール基である。｝
およびその薬剤として許容できる塩、その化合物もしくはその塩のプロドラッグ、または当該化合物、塩、もしくはプロドラッグの溶媒和物もしくは水和物を提供する。
【００１２】
好ましい態様では、Ｒ１およびＲ２は互いに独立に、水素、ハロゲン、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、低級アルキル、ＣＯＯＨ、Ｏ−（低級アルキル）、Ｓ−（低級アルキル）、Ｎ−（低級アルキル）（低級アルキル）、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールである。
【００１３】
別の実施形態では、本発明は、以下の通りの式（ＩＩ）の化合物を提供する：
【００１４】
【化２】
2009519988.tif 000003
【００１５】
式中、
Ｒ１、Ｒ２、およびＹは、式（Ｉ）で定義された通りであり、
Ｘ’はＯまたはＳから選択され、
Ｒ５は、アルキル、アルキルアリール、またはアルキルへテロアリールから選択される。
【００１６】
好ましい態様では、Ｒ１およびＲ２は互いに独立に、水素、ハロゲン、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、低級アルキル、ＣＯＯＨ、Ｏ−（低級アルキル）、Ｓ−（低級アルキル）、Ｎ−（低級アルキル）（低級アルキル）、ヘテロシクロアルキル、アリール、またはヘテロアリールである。
【００１７】
本明細書では、用語「アルキル」は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓ−ブチル、およびｔ−ブチルのような１個〜８個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖飽和炭化水素残基を包含する。これらのアルキルは、さらにＣＯＯＨ、ヘテロシクロアルキル、ＣＦ３、ＯＨ、Ｏ−（低級アルキル）、またはＮ−（低級アルキル）（低級アルキル）のような基で置換されていることがある。
【００１８】
本明細書では、用語「低級アルキル」は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｉ−ブチル、ｓ−ブチル、またはｔ−ブチルのような１個〜４個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖飽和炭化水素残基を包含する。
【００１９】
用語「アリール」は、少なくとも１つの不飽和芳香族環を含有する、６個〜１０個の原子の芳香族炭化水素環または縮合芳香族炭化水素環系を意味する。用語「アリール」の例は、フェニル、ナフチル、および１，２，３，４−テトラヒドロナフチルである。これらのアリールは、さらにハロゲン、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、低級アルキル、ＣＯＯＨ、Ｏ−（低級アルキル）、Ｓ−（低級アルキル）、Ｎ−（低級アルキル）（低級アルキル）、またはヘテロシクロアルキルのような基で置換されていることがある。
【００２０】
用語「ヘテロアリール」は、１つもしくは複数のＯ原子、Ｓ原子、もしくはＮ原子を含有する、５個〜１０個の原子の芳香族環または縮合芳香族環を意味する。ヘテロアリールとしては例えば、ピリジニル、キノリニル、イソキノリニル、ピリダジニル、ピリミジニル、ピラジニル、フリル、ベンゾフリル、チエニル、ベンゾチエニル、ピロリル、インドリル、ピラゾリル、インダゾリル、オキサゾリル、ベンゾオキサゾリル、チアゾリル、ベンゾチアゾリル、イミダゾリル、ベンゾイミダゾリル、およびテトラゾリルなどが挙げられる。これらのヘテロアリールは、さらにハロゲン、ＣＮ、ＣＦ３、ＯＣＦ３、低級アルキル、ＣＯＯＨ、Ｏ−（低級アルキル）、Ｓ−（低級アルキル）、Ｎ−（低級アルキル）（低級アルキル）、またはヘテロシクロアルキルのような基で置換されていることがある。
【００２１】
用語「ヘテロシクロアルキル」は、１つまたは複数のＯ原子、Ｓ原子、またはＮ原子を含む４〜７個の原子の環を意味する。ヘテロシクロアルキルとしては例えば、アゼチジニル、ピロリジニル、テトラヒドロフラニル、イミダゾリニル、ピロリジン−２−オン、モルホリニル、チオモルホリニル、ピペリジニル、ピペリジン−２−オン、ピペラジニル、Ｎ−アルキル−ピペラジニルなどが挙げられる。
【００２２】
用語「アルキルアリール」は、アルキル−アリール基（groupまたはradical）を意味する。ただし、アルキルおよびアリールは上記に定義した意味を有する。例示的アルキルアリール基（groupまたはradical）としては例えば、ベンジル、２−フェニルエチル、３−フェニルプロピル、４−フェニルブチル、３−メチル−３−フェニルプロピル、１−ナフチルメチル、１−ナフチルエチルが挙げられる。
【００２３】
用語「アルキルへテロアリール」は、アルキル−へテロアリール基（groupまたはradical）を意味する。ただし、アルキルおよびへテロアリールは上記に定義した意味を有する。
【００２４】
用語「ハロゲン」は、臭素、塩素、フッ素、またはヨウ素を意味する。
式（Ｉ）の化合物の薬剤として許容できる塩としては、無機酸または有機酸、例えば塩酸、臭化水素酸、硝酸、炭酸、ギ酸、一水素炭酸（monohydrogencarbonic acid）、リン酸、一水素リン酸（monohydrogenphosphoric acid）、二水素リン酸（dihydrogenphosphoric acid）、過塩素酸、硫酸、一水素硫酸（monohydrogensulfuric acid）、ヨウ化水素酸、亜リン酸、酢酸、乳酸、プロピオン酸、酪酸、イソ酪酸、パルモ酸（palmoic acid）、マレイン酸、グルタミン酸、ヒドロキシマレイン酸、マロン酸、安息香酸、コハク酸、グリコール酸、スベリン酸、フマル酸、マンデル酸、フタル酸、サリチル酸、ベンゼンスルホン酸、ｐ−トリルスルホン酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸、およびヒドロキシナフトエ酸との塩が挙げられる。
【００２５】
式（Ｉ）の化合物の薬剤として許容できる塩としては、無機塩基、例えばアルカリ金属塩基、特にナトリウム塩基もしくはカリウム塩基、またはアルカリ土類金属塩基、特にカルシウム塩基もしくはマグネシウム塩基、あるいは薬剤として許容できる有機塩基との塩も挙げることができる。
【００２６】
本発明は、上述する化合物を使用して、Ａ３受容体が役割を果たす様々な医学的障害および／または病態を予防および／または治療することができるという発見に少なくとも一部基づいている。これらの障害および／または病態は、例えば喘息、過敏症、鼻炎、枯草熱、血清病、アレルギー性血管炎、アトピー性皮膚炎、皮膚炎、乾癬、湿疹、特発性肺線維症、好酸球性胆嚢炎、慢性気道炎症、慢性閉塞性肺疾患、好酸球増加症候群、好酸球性胃腸炎、浮腫、蕁麻疹、好酸球性心筋疾患、好酸球増加を伴うエピソード性血管浮腫、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、アレルギー性肉芽腫症、癌腫症、好酸球性肉芽腫、家族性組織球症、高血圧、肥満細胞脱顆粒、腫瘍、心臓低酸素症、脳虚血、利尿、腎不全、神経学的障害、精神障害、認知障害、心筋虚血、気管支収縮、関節炎、自己免疫疾患、クローン病、グレーブス病、糖尿病、多発性硬化症、貧血、乾癬、生殖障害、紅斑性狼瘡、再潅流障害、脳細動脈径、アレルギーメディエーターの放出、強皮症、卒中、全虚血、中枢神経系障害、心血管障害、腎障害、炎症性障害、胃腸障害、眼障害、アレルギー性障害、呼吸器障害、または免疫障害に関連する。
【００２７】
式（Ｉ）の好ましい化合物のうち、好ましい態様では、Ｒ１、Ｒ２、およびＸが式（Ｉ）で定義する通りであり、Ｙがアリール基を表す化合物が含まれる。
さらに好ましい態様には、Ｒ１が水素であり、Ｒ２およびＸが式（Ｉ）で定義する通りであり、Ｙがアリール基を表す式（Ｉ）の化合物が含まれる。
【００２８】
式（Ｉ）の他の好ましい化合物は、Ｒ１およびＲ２が水素であり、Ｘが式（Ｉ）で定義する通りであり、Ｙがアリール基を表す化合物である。
式（Ｉ）の追加の好ましい化合物は、Ｒ１およびＲ２が水素であり、ＸがＲ３、Ｏ−Ｒ３またはＳ−Ｒ３、Ｎ−Ｒ３Ｒ４を表し、
Ｒ３およびＲ４は互いに独立に、水素、アルキル、ＣＦ３、アリール、ヘテロアリール、アルキルアリール、またはアルキルヘテロアリールであり、
Ｙがアリール基を表す化合物である。
【００２９】
一般式（Ｉ）の化合物、およびその薬剤として許容できる塩は、下記のスキームに記載されている方法に従って製造することができる。
【００３０】
【化３】
2009519988.tif 000004
【００３１】
一般式（Ｉ）の化合物をスキーム１に従って合成した。
第１の段階で、ピロール部分を求核置換により２−フルオロ−３−ニトロベンジル誘導体に導入した。次いで、ワンポット還元−環化工程で、三環式化合物が得られた。
【００３２】
Ｙが芳香族置換基である場合、それは、対応するアリールボロン酸とのクロスカップリング反応で：
−求核置換工程の前に、ピロール環に、
−還元工程の前に、二環式構造に、
−還元工程の後に、三環式構造に
導入される。
【００３３】
置換基Ｒ１およびＲ２は、求核置換工程の前または後に、最新の手法でベンジル部分に導入され、または修飾される。
スキーム２に従って、さらなる多様性が三環式構造に導入される。
【００３４】
【化４】
2009519988.tif 000005
【００３５】
本発明は、治療上有効量の一般式（Ｉ）の化合物をそれを必要とする患者に、Ａ３受容体活性の調節が行われるように投与することによって、Ａ３受容体の機能化を調節する方法に関する。
【００３６】
アデノシン受容体活性の調節を、当業者に周知の結合アッセイで評価することができる。下記の方法：Ａ１受容体の場合、Townsend-NicholsonおよびSchofieldによって記載されている手法（J. Biol. Chem. (1994), 269:2373-2376）、Ａ２Ａ受容体の場合、Luthinらによって記載されている手法（Mol. Pharmacol. (1995), 47:307-313）、Ａ２Ｂ受容体の場合、Stehleらによって記載されている手法（Mol. Endocrinol. (1992), 6:384-393）、およびＡ３受容体の場合、Salvatoreらによって記載されている手法（Proc. Natl. Acad. Sci. (1993), 90:10365-10369）が広く使用されている。
【００３７】
好ましい一実施形態では、式（Ｉ）の化合物はＡ３受容体アンタゴニストである。
別の態様では、本発明は、治療上有効量の一般式（Ｉ）の化合物をそれを必要とする患者に、Ａ３受容体活性の遮断が行われるように投与することによって、哺乳動物においてＡ３受容体を選択的に遮断する方法を提供する。
【００３８】
本発明に従う式（Ｉ）の好ましい化合物は下記の通りである。
−  ２−フェニル−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オン
【００３９】
【化５】
2009519988.tif 000006
【００４０】
−  ２−（４−メトキシ−フェニル）−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オン
【００４１】
【化６】
2009519988.tif 000007
【００４２】
−  ８−メチル−２−フェニル−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オン
【００４３】
【化７】
2009519988.tif 000008
【００４４】
−  ８−クロロ−２−フェニル−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オン
【００４５】
【化８】
2009519988.tif 000009
【００４６】
−  ８−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−２−フェニル−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オン
【００４７】
【化９】
2009519988.tif 000010
【００４８】
−  ８−（３−モルホリン−４−イル−プロピルアミノ）−２−フェニル−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オン
【００４９】
【化１０】
2009519988.tif 000011
【００５０】
−  ７−モルホリン−４−イル−２−フェニル−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オン
【００５１】
【化１１】
2009519988.tif 000012
【００５２】
−  ８−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−２−フェニル−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オン。
【００５３】
【化１２】
2009519988.tif 000013
【００５４】
本発明は、一般式（Ｉ）の化合物の、Ａ３受容体が役割を果たす病態および／または障害の治療および／または予防で使用するための薬物の製造における使用も提供する。
本発明はさらに、薬剤として有効量の式（Ｉ）の化合物またはその薬剤として許容できる塩を、薬剤として許容できる担体、希釈剤、または賦形剤と組み合わせて含む薬剤組成物を提供する。
【００５５】
本発明によれば、用語「治療および／または予防」は、哺乳動物、例えば患者と呼ばれる場合が多いヒトの病態の有益な変化をもたらすよう意図されているプロセスを意味する。有益な変化としては例えば、機能の回復、症状の低減、疾患、障害、もしくは病態の進行の制限もしくは遅延、または患者の病態、疾患、もしくは障害の悪化の予防、制限、もしくは遅延、患者の生活の質の改善の１つまたは複数を挙げることができる。
【００５６】
別の態様では、本発明は、例えば喘息、過敏症、鼻炎、枯草熱、血清病、アレルギー性血管炎、アトピー性皮膚炎、皮膚炎、乾癬、湿疹、特発性肺線維症、好酸球性胆嚢炎、慢性気道炎症、慢性閉塞性肺疾患、好酸球増加症候群、好酸球性胃腸炎、浮腫、蕁麻疹、好酸球性心筋疾患、好酸球増加を伴うエピソード性血管浮腫、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎、アレルギー性肉芽腫症、癌腫症、好酸球性肉芽腫、家族性組織球症、高血圧、肥満細胞脱顆粒、腫瘍、心臓低酸素症、脳虚血、利尿、腎不全、神経学的障害、精神障害、認知障害、心筋虚血、気管支収縮、関節炎、自己免疫疾患、クローン病、グレーブス病、糖尿病、多発性硬化症、貧血、乾癬、生殖障害、紅斑性狼瘡、再潅流障害、脳細動脈径、アレルギーメディエーターの放出、強皮症、卒中、全虚血、中枢神経系障害、心血管障害、腎障害、炎症性障害、胃腸障害、眼障害、アレルギー性障害、呼吸器障害、または免疫障害に関連する、Ａ３受容体が役割を果たす障害および／または病態の治療および／または予防のための薬剤組成物を提供する。
【００５７】
本発明の化合物は、経口使用に適した形、例えば錠剤、カプセル剤、水性もしくは油性液剤、懸濁剤、または乳剤；経粘膜および経皮使用を含む局所使用に適した形、例えばクリーム剤、軟膏剤、ゲル剤、水性液剤もしくは懸濁剤、膏薬、貼付剤、または硬膏剤；経鼻使用に適した形、例えば嗅薬、経鼻スプレー、または点鼻薬；腟もしくは直腸使用に適した形、例えば坐剤；吸入投与に適した形、例えば微細化散剤、または液体エアゾール；舌下もしくは頬側使用に適した形、例えば錠剤、またはカプセル剤；あるいは非経口使用（静脈内、皮下、筋肉内、血管内、または注入を含む）に適した形、例えば無菌水性液剤もしくは懸濁剤、または蓄積注射製剤で投与することができる。一般に、上記の組成物は、通常の方式で、周知の賦形剤を使用し、製薬技術分野の技術者に周知のゼラチン、脂質、ゲルデポー、リポソーム、および／またはマイクロカプセルベースの系のような放出制御技術を含む標準的技法を用いて調製することができる。
【００５８】
経口投与の場合、本発明の化合物は、一般に錠剤もしくはカプセル剤の形で、または水性液剤もしくは懸濁剤として提供される。
経口使用の錠剤には、活性成分が、不活性希釈剤（炭酸ナトリウムおよび炭酸カルシウム、リン酸ナトリウムおよびリン酸カルシウム、またはラクトースなど）、崩壊剤（トウモロコシデンプンまたはアルギン酸など）、結合剤（デンプンまたはゼラチン）、滑沢剤（ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、またはタルク）、甘味剤、矯味剤、着色剤、および保存剤のような薬剤として許容できる賦形剤と混合されて含まれることがある。望むなら、モノステアリン酸グリセリンやジステアリン酸グリセリンのような材料で錠剤をコーティングして、消化管における吸収を遅延させることができる。
【００５９】
経口使用のカプセル剤としては、活性成分がその中で固体希釈剤と混合されている硬ゼラチンカプセル剤、および活性成分がその中で水、または落花生油、流動パラフィン、もしくはオリーブ油のような油と混合されている軟ゼラチンカプセル剤が挙げられる。
【００６０】
筋肉内、腹腔内、皮下、および静脈内使用の場合、本発明の化合物は、一般に適切なｐＨおよび等張性に緩衝された無菌水性液剤（リンゲル液や等張食塩水など）もしくは懸濁剤（レシチンのような湿潤化剤およびｐ‐ヒドロキシ安息香酸エチルやｐ‐ヒドロキシ安息香酸ｎ−プロピルのような保存剤が共に含まれている、セルロース誘導体、アルギン酸ナトリウム、ポリビニルピロリドン、およびトラガカントゴムなど）として提供される。
【００６１】
経皮製剤としては、膜透過系、多層接着剤分散系、およびマトリックス分散系が挙げられる。経皮送達には、電気補助輸送および皮膚浸透増強剤の使用も含まれる。
好ましい投与経路は、好ましくは最高７日間に及ぶ静脈内注入、または経口製剤、またはスタイレット（styrette）による筋肉内注射、または皮下注射である。
【００６２】
用いられる投与量レベルは、使用される化合物、患者によって示される病態の重症度、および患者の体重に応じて、極めて広範囲に変わり得ることを理解されたい。しかし、投与量の厳格な定義に拘泥することなく、活性成分の１日の投与量は０．０１〜約１００ｍｇ／治療対象の患者の体重（ｋｇ）／日であると記載することができる。好ましい投与量は、約０．１〜約１０ｍｇ／体重（ｋｇ）／日である。
【００６３】
本発明の他の特徴および利点を、図を参照して下記の実施例に述べる。
本発明は例示により説明されているにすぎず、細部の修正を、本発明の範囲から逸脱することなく実施できることを理解されたい。
【実施例】
【００６４】
調製Ａ：３−ブロモ−１−（２−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル
【００６５】
【化１３】
2009519988.tif 000014
【００６６】
４−ブロモ−ピロール−２−カルボン酸メチル（５．０ｇ、１．０当量）のＤＭＦ（４５ｍＬ）溶液に、炭酸セシウム（９．０ｇ、１．２当量）を添加した。混合物を室温で１０分間撹拌し、次いで１−フルオロ−２−ニトロベンゼン（３．９ｍＬ、１．５当量）を添加した。反応混合物を、マイクロ波照射により１３０℃で５分間加熱した。次いで、反応混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、１Ｍ  ＨＣｌ、水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。有機層を濃縮して、暗茶色油を得た。Ｅｔ２Ｏ中で粉末にした後、固体を得た。濾取し、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、乾燥して、黄色固体の所望生成物を収率８８％で得た。
【００６７】
【化１４】
2009519988.tif 000015
【００６８】
調製Ｂ：２−ブロモ−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オン
【００６９】
【化１５】
2009519988.tif 000016
【００７０】
調製Ａの化合物（６．４ｇ、１当量）および鉄粉（４．５ｇ、４．０当量）を酢酸（２５ｍＬ）に懸濁した懸濁液を、マイクロ波照射により１５０℃で８分間加熱した。暗色固体が得られた。これを１Ｍ  ＨＣｌに懸濁し、濾取し、１Ｍ  ＨＣｌ、ＡｃＯＥｔ、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、乾燥して、綿毛状白色固体を収率９０％で得た。
【００７１】
【化１６】
2009519988.tif 000017
【００７２】
調製Ｃ：１−（２−ニトロ−フェニル）−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル
【００７３】
【化１７】
2009519988.tif 000018
【００７４】
調製Ａの化合物（２．５０ｇ、１当量）、フェニルボロン酸（１．８７ｇ、２当量）、炭酸ナトリウム（２．４５ｇ、３当量）、およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（５０ｍｇ、１０％）の混合物をメタノール／水（４：１）（２５ｍＬ）中、マイクロ波照射により１５０℃で３０分間加熱した（Ｐｍａｘ  ７０Ｗ）。次いで、反応混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、１Ｍ  ＨＣｌ、水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。有機層を濃縮して、茶色油を得た。フラッシュクロマトグラフィー（５％から１５％  ＡｃＯＥｔ／シクロヘキサン）による精製によって、黄色固体が得られた。これをＥｔ２Ｏで粉末にし、乾燥して、所望生成物を収率２２％で得た。
【００７５】
【化１８】
2009519988.tif 000019
【００７６】
調製Ｄ：３−（４−メトキシ−フェニル）−１−（２−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル
【００７７】
【化１９】
2009519988.tif 000020
【００７８】
調製Ａの化合物および４−メトキシフェニルボロン酸から、調製Ｃに記載されている手順に従って、収率５４％で得られた黄色固体化合物。
【００７９】
【化２０】
2009519988.tif 000021
【００８０】
調製Ｅ：４−クロロ−２−フェニル−ピロロ［ｌ，２−ａ］キノキサリン
【００８１】
【化２１】
2009519988.tif 000022
【００８２】
実施例１の化合物（５００ｍｇ、１当量）のオキシ塩化リン（１０ｍＬ）懸濁液を、マイクロ波照射により１２０℃で１０分間加熱した。黄色固体が出現した。これを濾取し、ＣＨ２Ｃｌ２で洗浄し、乾燥した。次いで、固体をＤＭＦに溶解し、水を添加して、再沈殿させた。得られた白色固体を濾取し、Ｅｔ２Ｏ中で洗浄し、乾燥して、黄色固体の所望生成物を収率３６％で得た。
【００８３】
【化２２】
2009519988.tif 000023
【００８４】
調製Ｆ：４−ブロモ−１−（５−フルオロ−２−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル
【００８５】
【化２３】
2009519988.tif 000024
【００８６】
２，４−ジフルオロニトロベンゼン（４４８μＬ、１当量）、４−ブロモピロール−２−カルボン酸メチル（１．０ｇ、１．２当量）、および炭酸セシウム（１．２ｇ、１当量）をＤＭＦ（１０ｍＬ）に懸濁した懸濁液を、マイクロ波照射により１００℃で１０分間加熱した。次いで、反応混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、１Ｍ  ＨＣｌ、水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。有機層を濃縮して、黄色油を得た。フラッシュクロマトグラフィー（５％から２０％  ＡｃＯＥｔ／シクロヘキサン）による精製によって、黄色固体が収率３０％で得られた。
【００８７】
【化２４】
2009519988.tif 000025
【００８８】
調製Ｇ：４−ブロモ−１−（５−ジメチルアミノ−２−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル
【００８９】
【化２５】
2009519988.tif 000026
【００９０】
調製Ｆの化合物、ジイソプロピルエチルアミン（５０μＬ、１当量）、および２Ｍ  ジメチルアミンのＴＨＦ溶液（１．５ｍＬ）の混合物を、マイクロ波照射により１００℃で５分間加熱した。次いで、反応混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、１Ｍ  ＨＣｌ、水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。有機層を濃縮して、明橙色固体を定量的収率で得た。
【００９１】
【化２６】
2009519988.tif 000027
【００９２】
調製Ｈ：２−ブロモ−８−ジメチルアミノ−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オン
【００９３】
【化２７】
2009519988.tif 000028
【００９４】
調製Ｇの化合物から、調製Ｂに記載されている手順に従って、収率８０％で得られた白色針状化合物。
【００９５】
【化２８】
2009519988.tif 000029
【００９６】
調製Ｉ：４−ブロモ−１−（５−モルホリン−４−イル−２−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル
【００９７】
【化２９】
2009519988.tif 000030
【００９８】
調製Ｆの化合物、モルホリン（６１μＬ、１．２当量）、およびジイソプロピルエチルアミン（１２２μＬ、１当量）の混合物をＤＭＦ（１ｍＬ）中、マイクロ波照射により１００℃で５分間加熱した。次いで、反応混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、１Ｍ  ＨＣｌ、水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。有機層を濃縮して、黄色固体を得た。フラッシュクロマトグラフィー（１０％から５０％  ＡｃＯＥｔ／シクロヘキサン）による精製によって、黄色固体の所望生成物が収率８０％で得られた。
【００９９】
【化３０】
2009519988.tif 000031
【０１００】
調製Ｊ：１−（５−モルホリン−４−イル−２−ニトロ−フェニル）−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル
【０１０１】
【化３１】
2009519988.tif 000032
【０１０２】
調製Ｉの化合物から、調製Ｃに記載されている手順に従って、収率６０％で得られた黄色固体化合物。
【０１０３】
【化３２】
2009519988.tif 000033
【０１０４】
調製Ｋ：４−（４−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−フェニル）−１−（２−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル
【０１０５】
【化３３】
2009519988.tif 000034
【０１０６】
調製Ａの化合物、およびｔｅｒｔ−ブチル−Ｎ−［４−（４，４，５，５−テトラメチル−１，３，２−ジオキサボロラン−２−イル）フェニル］カルバマトメトキシフェニルボロン酸から、調製Ｃに記載されている手順に従って、収率４４％で得られた黄色固体化合物。
【０１０７】
【化３４】
2009519988.tif 000035
【０１０８】
調製Ｌ：４−（４−ジメチルアミノ−フェニル）−１−（２−ニトロ−フェニル）−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル
【０１０９】
【化３５】
2009519988.tif 000036
【０１１０】
調製Ｋの化合物（１５０ｍｇ、１当量）、４０％ホルムアルデヒド水溶液（３５０μＬ）、水素化トリアセトキシホウ素ナトリウム（２１０ｍｇ、３．２当量）、および酢酸（３０μＬ）の混合物をアセトニトリル（１．５ｍＬ）中、室温で撹拌した。２時間後、ＮａＢＨ（ＯＡｃ）３（１０５ｍｇ）およびホルムアルデヒド（１７５μＬ）を添加し、反応混合物をさらに２時間撹拌した。次いで、反応混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。有機層を濃縮して、橙色固体を定量的収率で得た。
【０１１１】
【化３６】
2009519988.tif 000037
【０１１２】
式（Ｉ）の化合物の下記の例が、上記の合成経路で得られた。
調製Ｍ：４−ブロモ−ピロール−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル
【０１１３】
【化３７】
2009519988.tif 000038
【０１１４】
４−ブロモ−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル（９．６８ｇ、１．０当量）のアセトニトリル（１００ｍＬ）溶液に、二炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチル（１３．４ｇ、１．３当量）および４−ジメチルアミノピリジン（５７８ｍｇ、０．１当量）を添加し、得られた混合物を室温で２時間撹拌した。反応混合物をＡｃＯＥｔ（３００ｍＬ）で希釈し、１Ｍ  ＫＨＳＯ４水溶液（２回×１５０ｍＬ）、水（１５０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１５０ｍＬ）、およびブライン（１５０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮して、黄色油生成物を定量的収率で得た。
【０１１５】
【化３８】
2009519988.tif 000039
【０１１６】
調製Ｎ：４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル
【０１１７】
【化３９】
2009519988.tif 000040
【０１１８】
４−ブロモ−ピロール−１，２−ジカルボン酸１−ｔｅｒｔ−ブチルエステル２−メチルエステル（１９．４ｇ、１．０当量）のメタノール（５００ｍＬ）溶液に、フェニルボロン酸（１３．６ｇ、２．０当量）、ナトリウムメトキシド（６．０ｇ、２．０当量）、およびＰｄ（ＰＰｈ３）４（２．０ｇ、３％）を添加した。得られた混合物を、窒素気流中７５℃で４日間加熱した。反応混合物を最初の体積の半分に濃縮し、次いでＡｃＯＥｔ（５００ｍＬ）および水（５００ｍＬ）で希釈した。触媒をセライトで濾別した。濾液層を分液し、有機層を水（５００ｍＬ）およびブライン（３００ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、シリカに前吸収させた。フラッシュクロマトグラフィー（５％から３０％  ＡｃＯＥｔ／シクロヘキサン）による精製によって、白色固体生成物が収率８０％で得られた。
【０１１９】
【化４０】
2009519988.tif 000041
【０１２０】
調製Ｏ：１−（５−メチル−２−ニトロ−フェニル）−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル
【０１２１】
【化４１】
2009519988.tif 000042
【０１２２】
２−フルオロ−４−メチル−１−ニトロ−ベンゼン（２８８ｍｇ、１．５当量）、４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル（２５０ｍｇ、１．０当量）、および炭酸セシウム（４８８ｍｇ、１．５当量）の混合物をジメチルホルムアミド（５ｍＬ）中、マイクロ波照射により１５０℃で３０分間加熱した。反応混合物をＡｃＯＥｔ（２０ｍＬ）で希釈し、水（４０ｍＬ＋２回×２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層から固体が沈殿した。これを濾過し、真空乾燥して、生成物を収率７８％で得た。
【０１２３】
【化４２】
2009519988.tif 000043
【０１２４】
調製Ｐ：１−（５−クロロ−２−ニトロ−フェニル）−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル
【０１２５】
【化４３】
2009519988.tif 000044
【０１２６】
４−クロロ−２−フルオロニトロベンゼン（２２８ｍｇ、１．０５当量）、４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル（２５０ｍｇ、１．０当量）、および炭酸セシウム（４２５ｍｇ、１．０５当量）の混合物をジメチルホルムアミド（９ｍＬ）中、マイクロ波照射により１３０℃で５分間加熱した。反応混合物をＡｃＯＥｔ（２０ｍＬ）で希釈し、水（３回×２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をＥｔ２Ｏ中で粉末にし、濾取し、Ｅｔ２Ｏ（５ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥して、黄色固体生成物を収率７５％で得た。
【０１２７】
【化４４】
2009519988.tif 000045
【０１２８】
調製Ｑ：１−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−２−ニトロ−フェニル］−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル
【０１２９】
【化４５】
2009519988.tif 000046
【０１３０】
１−（５−クロロ−２−ニトロ−フェニル）−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル（２２５ｍｇ、１．０当量）、Ｎ−メチルピペラジン（２１０μＬ、３．０当量）、およびＤＩＰＥＡ（１１０μＬ、１．０当量）の混合物をジメチルスルホキシド（５ｍＬ）中、１１０℃で１６時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、ＡｃＯＥｔ（１５ｍＬ）で希釈し、水（３回×１０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をＥｔ２Ｏ中で粉末にし、濾取し、ＭｅＯＨ（５ｍＬ）で洗浄し、真空乾燥して、黄色固体生成物を収率７３％で得た。
【０１３１】
【化４６】
2009519988.tif 000047
【０１３２】
調製Ｒ：１−［５−（３−モルホリン−４−イル−プロピルアミノ）−２−ニトロ−フェニル］−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル
【０１３３】
【化４７】
2009519988.tif 000048
【０１３４】
１−（５−クロロ−２−ニトロ−フェニル）−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル（１５０ｍｇ、１．０当量）、３−モルホリン−４−イル−プロピルアミン（１８５μＬ、３．０当量）、およびＤＩＰＥＡ（７５μＬ、１．０当量）の混合物をジメチルスルホキシド（４ｍＬ）中、１１０℃で６時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、ＡｃＯＥｔ（１０ｍＬ）で希釈し、水（３回×１０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（１％  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）による精製によって、緑色油生成物が収率６０％で得られた。
【０１３５】
【化４８】
2009519988.tif 000049
【０１３６】
調製Ｓ：（３−フルオロ−４−ニトロ−フェニル）−酢酸メチルエステル
【０１３７】
【化４９】
2009519988.tif 000050
【０１３８】
（３−フルオロ−フェニル）−酢酸メチルエステル（２６．０ｇ、１．０当量）のＨ２ＳＯ４（９６％、４１ｍＬ、５．０当量）溶液を、窒素気流中０℃で冷却し、次いで発煙ＨＮＯ３（６．６ｍＬ、０．９当量）を徐々に添加した。混合物を０℃で１．５時間撹拌し、次いで水と氷の混合物（２５０ｍＬ）に注ぎ込み、１５分間激しく撹拌した。ＡｃＯＥｔ（２回×１００ｍＬ）で抽出し、有機層を水（１００ｍＬ）、ブライン（１００ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（１５％から２０％  ＡｃＯＥｔ／シクロヘキサン）による精製によって、黄色油の所望異性体が収率１１％で得られた。
【０１３９】
【化５０】
2009519988.tif 000051
【０１４０】
調製Ｔ：（３−フルオロ−４−ニトロ−フェニル）−酢酸
【０１４１】
【化５１】
2009519988.tif 000052
【０１４２】
（３−フルオロ−４−ニトロ−フェニル）−酢酸メチルエステル（５００ｍｇ、１．０当量）の１Ｍ  ＨＣｌ（５ｍＬ、２．０当量）懸濁液を、マイクロ波照射により１５０℃で５分間加熱した。室温で冷却する間に、固体が沈殿した。これを濾過で回収し、乾燥して、白色固体生成物を収率９０％で得た。
【０１４３】
【化５２】
2009519988.tif 000053
【０１４４】
調製Ｕ：（２−（３−フルオロ−４−ニトロ−フェニル）−１−モルホリン−４−イル−エタノン
【０１４５】
【化５３】
2009519988.tif 000054
【０１４６】
（３−フルオロ−４−ニトロ−フェニル）−酢酸（３６０ｍｇ、１．０当量）、モルホリン（４７５μＬ、１．１当量）、ＨＡＴＵ（７５６ｍｇ、３．０当量）、およびピリジン（４００μＬ、２．８当量）の混合物をジメチルホルムアミド（３．６ｍＬ）中、室温で３日間撹拌した。反応混合物をＡｃＯＥｔ（１５ｍＬ）で希釈し、水（３回×１０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（１％  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）による精製によって、生成物が収率５１％で得られた。
【０１４７】
【化５４】
2009519988.tif 000055
【０１４８】
調製Ｖ：４−［２−（３−フルオロ−４−ニトロ−フェニル）−エチル］モルホリン
【０１４９】
【化５５】
2009519988.tif 000056
【０１５０】
１Ｍ  ＢＨ３のＴＨＦ溶液（２．８ｍＬ、３．０当量）に、（２−（３−フルオロ−４−ニトロ−フェニル）−１−モルホリン−４−イル−エタノン（２５０ｍｇ、１．０当量）の無水ＴＨＦ（２．２ｍＬ）溶液を滴下した。得られた混合物を室温で５時間撹拌した。次いで、反応混合物を氷浴で冷却し、２Ｍ  ＨＣｌ（１．８ｍＬ、３．６当量）で加水分解した。混合物を減圧濃縮し、６Ｍ  ＨＣｌ（５ｍＬ）を添加し、得られた混合物を１．２５時間加熱還流した。５Ｍ  ＮａＯＨ（６ｍＬ）で中和し、ＡｃＯＥｔ（３回×１５ｍＬ）で抽出した。有機層をブライン（１５ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（２％  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）による精製によって、黄色油生成物が収率３３％で得られた。
【０１５１】
【化５６】
2009519988.tif 000057
【０１５２】
調製Ｗ：１−［５−（２−モルホリン−４−イル−エチル）−２−ニトロ−フェニル］−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル・トリフルオロ酢酸塩
【０１５３】
【化５７】
2009519988.tif 000058
【０１５４】
４−［２−（３−フルオロ−４−ニトロ−フェニル）−エチル］−モルホリン（３９ｍｇ、１．２当量）、４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル（４０ｍｇ、１．０当量）、および炭酸セシウム（６１ｍｇ、１．２当量）の混合物をジメチルホルムアミド（１．５ｍＬ）中、マイクロ波照射により１３０℃で１０分間加熱した。反応混合物をＡｃＯＥｔ（１５ｍＬ）で希釈し、水（３回×１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、生成物のＴＦＡ塩が収率１７％で得られた。
【０１５５】
【化５８】
2009519988.tif 000059
【０１５６】
調製Ｘ：４−（４−フルオロ−３−ニトロ−フェニル）−モルホリン
【０１５７】
【化５９】
2009519988.tif 000060
【０１５８】
４−フルオロ−３−ニトロ−フェニルアミン（２００ｍｇ、１．０当量）、１−ブロモ−２−（２−ブロモ−エトキシ）−エタン（４８５μＬ、３．０当量）、炭酸カリウム（１．０ｇ、６．０当量）、およびヨウ化カリウム（４２５ｍｇ、２．０当量）の混合物をアセトニトリル（４ｍＬ）中、マイクロ波照射により２００℃で２０分間加熱した。反応混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（１０％から４０％  ＡｃＯＥｔ／シクロヘキサン）による精製によって、生成物が収率３１％で得られた。
【０１５９】
【化６０】
2009519988.tif 000061
【０１６０】
調製Ｙ：１−（４−モルホリン−４−イル−２−ニトロ−フェニル）−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル
【０１６１】
【化６１】
2009519988.tif 000062
【０１６２】
４−（４−フルオロ−３−ニトロ−フェニル）−モルホリン（２７０ｍｇ、１．０当量）、４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル（２４０ｍｇ、１．０当量）、および炭酸セシウム（４６５ｍｇ、１．２当量）の混合物をジメチルホルムアミド（８ｍＬ）中、１２０℃で１６時間加熱した。反応混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をＡｃＯＥｔ（５ｍＬ）中で粉末にし、濾取し、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、真空乾燥した。固体を合わせて、生成物を収率７０％で得た。
【０１６３】
【化６２】
2009519988.tif 000063
【０１６４】
調製Ｚ：４−［２−（３−フルオロ−４−ニトロ−フェノキシ）−エチル］−モルホリン
【０１６５】
【化６３】
2009519988.tif 000064
【０１６６】
窒素気流中、トリフェニルホスフィン（８３５ｍｇ、１．０当量）の無水ＴＨＦ（１５ｍＬ）溶液に、３−フルオロ−４−ニトロ−フェノール（５００ｍｇ、１．１当量）およびジイソプロピルアゾジカルボキシル（６２５μＬ、１．１当量）を添加した。
得られた混合物を室温で３０分間撹拌し、次いで２−モルホリン−４−イル−エタノール（３５０μＬ、１．０当量）を添加した。混合物を室温で１６時間撹拌し、次いでＡｃＯＥｔで希釈し、飽和ＮＨ４Ｃｌ溶液およびブラインで洗浄した。有機層をＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（１％から５％  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）による精製によって、トリフェニルホスフィンオキシドが混入している生成物が得られた。
【０１６７】
【化６４】
2009519988.tif 000065
【０１６８】
調製ＡＡ：１−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−２−ニトロ−フェニル］−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル・塩酸塩
【０１６９】
【化６５】
2009519988.tif 000066
【０１７０】
４−［２−（３−フルオロ−４−ニトロ−フェノキシ）−エチル］−モルホリン（８６５ｍｇ、１．０当量）から、調製Ｙに従って、化合物を合成した。生成物をフラッシュクロマトグラフィー（１％から２％  ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）によって精製して、油の遊離塩基を得た。これを１Ｍ  ＨＣｌに溶解した。固体が沈殿し、これを回収し、乾燥して、対応する塩酸塩を収率４１％で得た。
【０１７１】
【化６６】
2009519988.tif 000067
【０１７２】
実施例１：２−フェニル−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オン
【０１７３】
【化６７】
2009519988.tif 000068
【０１７４】
調製Ｂの化合物（５００ｍｇ、１当量）、フェニルボロン酸（３４８ｍｇ、１．５当量）、炭酸ナトリウム（６０４ｍｇ、３当量）、およびＰｄ／Ｃ（２．５ｍｇ、０．５％）の混合物をメタノール／水（４：１）（１０ｍＬ）中、マイクロ波照射により１５０℃で１０分間加熱した（Ｐｍａｘ  ７０Ｗ）。白色固体が得られた。これを濾取し、水洗した。次いで、触媒を濾別するために、固体をＤＭＦに溶解した。水を濾液に添加すると、白色固体が再沈殿した。これを濾取し、水、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、乾燥して、所望生成物を収率８０％で得た。
あるいは、この化合物を、調製Ｃの化合物から、調製Ｂに記載されている手順に従って、綿毛状白色固体として収率６１％で得ることができる。
【０１７５】
【化６８】
2009519988.tif 000069
【０１７６】
実施例２：２−（４−メトキシ−フェニル）−５Ｈ−ピロロ［ｌ，２−ａ］キノキサリン−４−オン
【０１７７】
【化６９】
2009519988.tif 000070
【０１７８】
調製Ｄの化合物から、調製Ｂに記載されている手順に従って、収率８５％で得られたクリーム色綿毛状固体化合物。
【０１７９】
【化７０】
2009519988.tif 000071
【０１８０】
実施例３：フェニル−（２−フェニル−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−イル）−アミン
【０１８１】
【化７１】
2009519988.tif 000072
【０１８２】
調製Ｅの化合物（６０ｍｇ、１当量）のＤＭＦ（１ｍＬ）溶液に、アニリン（３９μＬ、２当量）を添加し、混合物をマイクロ波照射により１５０℃で１０分間加熱した。次いで、反応混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。有機層を濃縮して、黄色油を得た。フラッシュクロマトグラフィー（５％  ＡｃＯＥｔ／シクロヘキサン）による精製によって、白色固体の所望生成物が収率５５％で得られた。
【０１８３】
【化７２】
2009519988.tif 000073
【０１８４】
実施例４：エチル−（２−フェニル−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−イル）−アミン塩酸塩
【０１８５】
【化７３】
2009519988.tif 000074
【０１８６】
調製Ｅの化合物（７０ｍｇ、１当量）を２Ｍ  エチルアミンのＴＨＦ（１ｍＬ）溶液に懸濁した懸濁液を、マイクロ波照射により１５０℃で２回×１０分間、１８０℃で２回×５分間、および１８０℃で１０分間加熱した。反応混合物を１Ｍ  ＨＣｌで加水分解し、ＡｃＯＥｔで希釈した。白色固体が出現した。これを濾取し、水、ＡｃＯＥｔ、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、乾燥して、所望生成物の対応する塩酸塩を収率３７％で得た。
【０１８７】
【化７４】
2009519988.tif 000075
【０１８８】
実施例５：ベンジル−（２−フェニル−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−イル）−アミン
【０１８９】
【化７５】
2009519988.tif 000076
【０１９０】
調製Ｅの化合物から、実施例３に記載されている手順に従って、収率１３％で得られた白色固体化合物。
【０１９１】
【化７６】
2009519988.tif 000077
【０１９２】
実施例６：ジメチル−（２−フェニル−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−イル）−アミン
【０１９３】
【化７７】
2009519988.tif 000078
【０１９４】
実施例５に記載されている化合物の精製中に、副生成物として単離（白色固体、収率４８％）。
【０１９５】
【化７８】
2009519988.tif 000079
【０１９６】
実施例７：フェネチル−（２−フェニル−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−イル）−アミン
【０１９７】
【化７９】
2009519988.tif 000080
【０１９８】
調製Ｅの化合物から、実施例３に記載されている手順に従って、収率２５％で得られた白色固体化合物。
【０１９９】
【化８０】
2009519988.tif 000081
【０２００】
実施例８：２−フェニル−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−チオン
【０２０１】
【化８１】
2009519988.tif 000082
【０２０２】
実施例１の化合物（１００ｍｇ、１当量）およびローソン試薬（７８ｍｇ、０．５当量）をトルエン（２．５ｍＬ）およびアセトニトリル（１ｍＬ）の混合物に懸濁した懸濁液を、マイクロ波照射により１３０℃で１０分間加熱した。固体が出現した。これを濾取し、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、乾燥して、淡黄色個体を収率７６％で得た。
【０２０３】
【化８２】
2009519988.tif 000083
【０２０４】
実施例９：４−メチルスルファニル−２−フェニル−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン
【０２０５】
【化８３】
2009519988.tif 000084
【０２０６】
実施例８の化合物（６０ｍｇ、１当量）のＴＨＦ（２ｍＬ）溶液をＮ２でパージし、０℃に冷却し、次いでＤＢＵ（４７μＬ、１．２当量）およびヨウ化メチル（１６μＬ、１．２当量）を添加した。反応混合物を、Ｎ２中０℃で１時間撹拌し、次いで反応混合物をＡｃＯＥｔで希釈し、水、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。有機層を濃縮して、淡黄色固体を得た。混合物をペンタンおよびＥｔ２Ｏで粉末にした後、クリーム色固体を単離し、乾燥して、所望生成物を収率６０％で得た。
【０２０７】
【化８４】
2009519988.tif 000085
【０２０８】
実施例１０：２−（４−ジメチルアミノ−フェニル）−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オン・トリフルオロ酢酸塩
【０２０９】
【化８５】
2009519988.tif 000086
【０２１０】
調製Ｌの化合物（１２０ｍｇ、１当量）および鉄粉（４４０ｍｇ、２．２当量）を酢酸（１ｍＬ）に懸濁した懸濁液を、マイクロ波照射により１３０℃で１０分間加熱した。反応混合物を濾取し、濾液をＡｃＯＥｔで希釈した。有機層を１Ｍ  ＨＣｌで抽出した。水層を６Ｎ  ＮａＯＨで塩基性にすると、固体が沈殿した。固体をフラッシュクロマトグラフィー（２０％から１００％  ＡｃＯＥｔ／シクロヘキサン）で精製し、続いて分取クロマトグラフィーで精製すると、生成物のＴＦＡ塩が得られた。
【０２１１】
【化８６】
2009519988.tif 000087
【０２１２】
実施例１１：８−モルホリン−４−イル−２−フェニル−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オン・トリフルオロ酢酸塩
【０２１３】
【化８７】
2009519988.tif 000088
【０２１４】
調製Ｊの化合物（１１０ｍｇ、１当量）および１０％パラジウム担持炭素（１０ｍｇ）を酢酸（０．５ｍＬ）およびエタノール（５ｍＬ）の混合物に懸濁した懸濁液を、水素雰囲気中、室温で終夜水素添加した。懸濁液を濾取し、エタノールで洗浄した。次いで、固体を熱ＤＭＦに溶解し、濾取した。水およびＮａＨＣＯ３を濾液に添加し、混合物をＡｃＯＥｔで抽出した。有機層を濃縮し、分取クロマトグラフィーで精製して、生成物のＴＦＡ塩を得た。
【０２１５】
【化８８】
2009519988.tif 000089
【０２１６】
実施例１２：８−メチル−２−フェニル−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オン
【０２１７】
【化８９】
2009519988.tif 000090
【０２１８】
１−（５−メチル−２−ニトロ−フェニル）−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル（５０ｍｇ、１．０当量）および鉄粉（３３ｍｇ、４．０当量）を酢酸（２ｍＬ）に懸濁した懸濁液を、マイクロ波照射により１５０℃で８分間加熱した。固体が沈殿した。反応混合物を１Ｍ  ＨＣｌ（１０ｍＬ）で加水分解し、ＡｃＯＥｔ（１０ｍＬ）で抽出した。有機層を水（３回×１０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をＥｔ２Ｏ中で粉末にし、濾取し、真空乾燥して、生成物を収率１７％で得た。
【０２１９】
【化９０】
2009519988.tif 000091
【０２２０】
実施例１３：８−クロロ−２−フェニル−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オン
【０２２１】
【化９１】
2009519988.tif 000092
【０２２２】
１−（５−クロロ−２−ニトロ−フェニル）−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル（５０ｍｇ、１．０当量）および鉄粉（３１ｍｇ、４．０当量）を酢酸（２ｍＬ）に懸濁した懸濁液を、マイクロ波照射により１５０℃で８分間加熱した。固体が沈殿した。反応混合物を１Ｍ  ＨＣｌで加水分解した。残留している固体を濾取し、１Ｍ  ＨＣｌ、ＭｅＯＨ、Ｅｔ２Ｏで洗浄し、真空乾燥して、黄色固体生成物を収率５５％で得た。
【０２２３】
【化９２】
2009519988.tif 000093
【０２２４】
実施例１４：８−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−２−フェニル−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オン
【０２２５】
【化９３】
2009519988.tif 000094
【０２２６】
１−［５−（４−メチル−ピペラジン−１−イル）−２−ニトロ−フェニル］−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル（１９０ｍｇ、１．０当量）の酢酸（５ｍＬ）溶液に、１０％パラジウム担持チャコール（４０ｍｇ）を添加した。混合物を水素でパージし、水素圧を３日間維持した。触媒をセライトで濾別し、濾液を濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（ＮＨ３／ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２（１：１０：９０））による精製によって、黄色固体生成物が収率７４％で得られた。
【０２２７】
【化９４】
2009519988.tif 000095
【０２２８】
実施例１５：８−（３−モルホリン−４−イル−プロピルアミノ）−２−フェニル−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オン・トリフルオロ酢酸塩
【０２２９】
【化９５】
2009519988.tif 000096
【０２３０】
１−［５−（３−モルホリン−４−イル−プロピルアミノ）−２−ニトロ−フェニル］−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル（１１０ｍｇ、１．０当量）の酢酸（４ｍＬ）溶液に、１０％パラジウム担持チャコール（３０ｍｇ）を添加した。混合物を水素でパージし、水素圧を３日間維持した。触媒をセライトで濾別した。濾液を水（２０ｍＬ）で希釈し、ＮａＨＣＯ３で中和し、ＡｃＯＥｔ（３回×２０ｍＬ）で抽出した。有機層をブライン（２０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮した。分取ＨＰＬＣによる精製によって、茶色固体生成物が収率１５％で得られた。
【０２３１】
【化９６】
2009519988.tif 000097
【０２３２】
実施例１６：７−モルホリン−４−イル−２−フェニル−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オン・塩酸塩
【０２３３】
【化９７】
2009519988.tif 000098
【０２３４】
１−（４−モルホリン−４−イル−２−ニトロ−フェニル）−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル（５０ｍｇ、１．０当量）および鉄粉（４０ｍｇ、６．０当量）を酢酸（１ｍＬ）に懸濁した懸濁液を、マイクロ波照射により１３０℃で２回×１０分間加熱した。反応混合物を濾過し、濾液を減圧濃縮した。残渣を１Ｍ  ＨＣｌ中で粉末にし、固体を濾過で回収した。次いで、１．２５Ｍ  ＨＣｌのＭｅＯＨ溶液に溶解し、室温で１６時間撹拌した。固体が沈殿した。これを濾取し、乾燥して、白色固体の塩酸塩を収率６０％で得た。
【０２３５】
【化９８】
2009519988.tif 000099
【０２３６】
実施例１７：８−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−２−フェニル−５Ｈ−ピロロ［１，２−ａ］キノキサリン−４−オン・トリフルオロ酢酸塩
【０２３７】
【化９９】
2009519988.tif 000100
【０２３８】
１−［５−（２−モルホリン−４−イル−エトキシ）−２−ニトロ−フェニル］−４−フェニル−１Ｈ−ピロール−２−カルボン酸メチルエステル・塩酸塩（１．１ｇ、１．０当量）の酢酸（２２ｍＬ）溶液に、１０％パラジウム担持チャコール（１００ｍｇ）を添加した。混合物を水素でパージし、水素圧を５日間維持した。反応混合物を１Ｍ  ＨＣｌ（５０ｍＬ）で加水分解し、触媒をセライトで濾別した。濾液をＡｃＯＥｔおよびＥｔ２Ｏで洗浄した。ＮａＯＨペレットを添加することによって、水層を塩基性にし、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機層をブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、減圧濃縮した。フラッシュクロマトグラフィー（１％から１０％ＭｅＯＨ／ＣＨ２Ｃｌ２）による精製、続いて分取ＨＰＬＣによる精製によって、生成物のトリフルオロ酢酸塩を収率１０％未満で得た。
【０２３９】
【化１００】
2009519988.tif 000101
【０２４０】
実施例１８：化合物の薬理活性の評価
ヒトＡ１受容体：
Ｔｏｗｎｓｅｎｄ−ＮｉｃｈｏｌｓｏｎおよびＳｃｈｏｆｉｅｌｄ（J. Biol. Chem. (1994), 269 :2373-2376）によって記載されている手法に従って結合アッセイで、本発明の化合物を評価した。ＣＨＯ細胞において発現させたヒトＡ１受容体を、放射性リガンドとして［３Ｈ］ＤＰＣＰＸ（１ｎＭ）、非特異的結合用としてＤＰＣＰＸ（ｌμＭ）と共に、２２℃で６０分間インキュベーションして用いた。
【０２４１】
ヒトＡ２Ａ受容体：
Ｌｕｔｈｉｎら（Mol. Pharmacol. (1995), 47:307-313）によって記載されている手法に従って結合アッセイで、本発明の化合物を評価した。ＨＥＫ−２９３細胞において発現させたヒトＡ２Ａ受容体を、放射性リガンドとして［３Ｈ］ＣＧＳ  ２１６８０（６ｎＭ）、非特異的結合用としてＮＥＣＡ（１０μＭ）と共に、２２℃で９０分間インキュベーションして用いた。
【０２４２】
ヒトＡ２Ｂ受容体：
Ｓｔｅｈｌｅら（Mol. Endocrinol. (1992), 6:384-393）によって記載されている手法に従って結合アッセイで、本発明の化合物を評価した。ＨＥＫ−２９３細胞において発現させたヒトＡ２Ｂ受容体を、放射性リガンドとして［３Ｈ］ＭＲＳ  １７５４（０．５ｎＭ）、非特異的結合用としてＮＥＣＡ（１μＭ）と共に、２２℃で１２０分間インキュベーションして用いた。
【０２４３】
ヒトＡ３受容体：
Ｓａｌｖａｔｏｒｅら（Proc. Natl. Acad. Sci . (1993), 90 : 10365-10369）によって記載されている手法に従って結合アッセイで、本発明の化合物を評価した。ＨＥＫ−２９３細胞において発現させたヒトＡ３受容体を、放射性リガンドとして［１２５Ｉ］ＡＢ−ＭＥＣＡ（０．１５ｎＭ）、非特異的結合用としてＩＢ−ＭＥＣＡ（１μＭ）と共に、２２℃で９０分間インキュベーションして用いた。図１は、ヒトＡ３受容体（ｈＡ３）において、実施例１に記載される化合物で得られた競合曲線を示す。
【０２４４】
下記の表（Ｉ）に、実施例１の化合物の結果をまとめる。
【０２４５】
【表１】
2009519988.tif 000102
【０２４６】
ヒトＡ３受容体に関する機能アッセイ：
ヒトＡ３受容体を発現しているＣＨＯ細胞は、２４ウェル組織培養プレート中で、単層として一晩増殖させた（４００μｌ／ウェル；細胞２×１０５個／ウェル）。ｃＡＭＰ産生は、ダルベッコ変法イーグル培地（ＤＭＥＭ）／Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）緩衝液（ＨＥＰＥＳ  ０．６０ｇ／ＤＭＥＭ  ５０ｍｌ、ｐＨ  ７．４）中で行った。各ウェルをＨＥＰＥＳ／ＤＭＥＭ緩衝液（２５０μｌ）で２回洗浄し、次のロリプラム（５０μＭ）およびシロスタミド（５０μＭ）を添加した。これを３７℃で３０分間インキュベートし、続いて実施例１の化合物（１０μＭ）およびＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡ（０．１μＭ）またはＤＭＥＭ／ＨＥＰＥＳを導入した。さらに１０分間インキュベーションした後、フォルスコリン（１０μＭ）を添加した。それから１５分後に、アッセイ培地を吸引し、２００μｌの氷冷０．１Ｍ  ＨＣｌを添加することによって、インキュベーションを止めた。プロテインキナーゼＡ（ＰＫＡ）に対する、［３Ｈ］ｃＡＭＰとの競合によって、ｃＡＭＰ量を決定した。簡潔に言えば、試料の約１．８ｎＭ  ［３Ｈ］ｃＡＭＰ、および１００μｌのＰＫＡ溶液を氷で少なくとも２．５時間インキュベートした。２ｍｌの氷冷トリスＨＣｌ緩衝液（ｐＨ  ７．４）で速やかに希釈することによって、インキュベーションを止め、次いで結合している放射性物質を、Ｗｈａｔｍａｎ  ＧＦ／Ｃフィルタに通して濾過することによって回収した。フィルタをさらに、２回×２ｍｌのトリスＨＣｌ緩衝液ですすぎ、次いで放射能を、Ｐａｃｋａｒｄ  Ｅｍｕｌｓｉｆｉｅｒ  Ｓａｆｅシンチレーション液（３．５ｍＬ）中でカウントした。すべてのデータは、３回の独立した実験を反映している。
【０２４７】
下記の表（ＩＩ）に、ヒトＡ３受容体を発現しているＣＨＯ細胞におけるｃＡＭＰレベルに及ぼす実施例１の化合物の効果をまとめる。
【０２４８】
【表２】
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【０２４９】
考察：
結果は、実施例１の化合物が、Ａ３受容体の非常に強力なリガンドであることを示している。さらに、実施例１の化合物は、Ａ１とＡ２Ａについては１０μＭまで、Ａ２Ｂについては１μＭまで、検出可能な親和性が測定されなかったので、アデノシン受容体ファミリーのサブタイプ３に選択的である。実施例１の化合物は、参照アゴニストＣｌ−ＩＢ−ＭＥＣＡによって誘発されるｃＡＭＰ低下を抑制することができるので、Ａ３受容体のアンタゴニストとして作用する。
【０２５０】
実施例２の化合物は１μＭの濃度で特異的結合を８２％抑制するので、実施例２の化合物もＡ３受容体に強力な親和性を示す。
【０２５１】
結論：
実施例１の化合物は、Ａ３受容体の強力で選択的なアンタゴニストである。
【０２５２】
実施例１９：細胞傷害活性のｉｎ  ｖｉｔｒｏ評価
この試験の目的は、１０種のヒト癌細胞株群に対して本発明の化合物の細胞傷害活性を決定することである。
【０２５３】
試験：
パクリタキセル（Ｔａｘｏｌ（登録商標）、参照番号Ｔ１９１２、Ｓｉｇｍａ）を、正の対照として使用する。
【０２５４】
ヒト腫瘍細胞を細胞５，０００〜１０，０００個／ウェルで蒔き、治療前に２４時間のインキュベーション時間を設けた。１／４倍希釈段階で１０個の濃度の本発明の化合物（３．８×１０−１０〜１．０×１０−４Ｍ）、およびパクリタキセル（３．８×１０−１３〜１．０×１０−７Ｍ）を用いて、腫瘍細胞株を９６時間インキュベートした。実験を３回繰返し、それぞれの濃度は、４回繰り返しの測定から求められた。対照細胞は、対応するビヒクルのみで処置した。処置が終わると、ＭＴＳアッセイで細胞傷害活性を評価した（Baltrop JAら、Bioorg. Med. Chem. Lett. 1991, 611-4）。
【０２５５】
結果：
ヒト癌細胞群に関する被検化合物ＩＣ５０測定実験の平均および標準偏差（ＳＤ）。
【０２５６】
【表３】
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【０２５７】
結論：
本発明の化合物は、１０種の被検ヒト癌細胞株群に対して抗増殖作用を示し、ＩＣ５０値が１０マイクロモルの範囲である。
【図面の簡単な説明】
【０２５８】
【図１】ヒトＡ３受容体において、実施例１に記載される化合物で得られた競合曲線である。
【図２】フォルスコリンによって刺激されるｃＡＭＰ産生に及ぼす実施例１の化合物の効果を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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