(57)【要約】  本発明は、試料をチャンバー装置（１００）のアレイウェル中に挿入したときその試料が漏出したり又は他の試料若しくはチャンバーアレイウェルと混合したりすることを禁止するチャンバー装置（１００）をユーザーが組み立てることを可能にするシステムを提供する。加えて、チャンバーフレーム（１０１）の設計により、簡略化された使用及び従来のマイクロアレイスキャナーでのスライド基板（１０３）のスキャンのための容易な組立及び分解が可能である。チャンバー装置（１００）は、上部一体化ガスケット（１０１ａ）及び下部一体化ガスケット（１０１ｂ）を有するチャンバーフレーム（１０１）、基板、並びに基板（１０３）を位置決めし捕捉する基板フレーム（１０５）を含んでいる。下部一体化ガスケット（１０１ｂ）はチャンバーフレーム（１０１）と基板（１０３）との間に単一のシール面を提供する。上部一体化ガスケット（１０１ａ）はチャンバーカバー（６１１）と接して、ハイブリダイゼーションプロセスの間蒸発に起因する試料の損失を防止する圧縮シールを形成する。チャンバーフレーム（１０１）と基板フレーム（１０５）は、ラッチ又はスナップにより自身を互いに整列させ固定することを可能にする一体化機構（１０５ａ）を有していて、その結果一体化下部ガスケット（１０１ｂ）と基板（１０３）との間に圧縮シールを生成する最適なクランプ力が得られる。【選択図】    図２
2009542222.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一体化上部ガスケット及び一体化下部ガスケットを有するチャンバーフレームであって、該一体化上部ガスケットを覆ってカバーが配置されており、該一体化上部ガスケット及び一体化下部ガスケットがオーバーモールド成形によって該チャンバーフレーム上に配置されている、該チャンバーフレームと、
該チャンバーフレームの下に配置されており、該一体化下部ガスケットと接する基板と、
該基板の下に配置された基板フレームであって、該基板フレーム構造が該基板を受容するように構成されており、該基板フレームが該チャンバーフレームと整列して固定されている、該基板フレームと
を含んでなるチャンバー装置。
【請求項２】
前記チャンバーフレームが一体化スライドレールを含む、請求項１記載の装置。
【請求項３】
前記カバーがチャンバーカバーである、請求項２記載の装置。
【請求項４】
前記カバーが、ポリプロピレン、ポリスチレン、熱可塑性エラストマー、鋼又はアルミニウムを含む材料で作られている、請求項３記載の装置。
【請求項５】
前記一体化上部ガスケット及び一体化下部ガスケットが、ツーショット成形プロセスによりチャンバーフレーム上にオーバーモールド成形されている、請求項１記載の装置。
【請求項６】
前記一体化上部ガスケット及び一体化下部ガスケットが、共射出成形プロセスによりチャンバーフレーム上にオーバーモールド成形されている、請求項１記載の装置。
【請求項７】
前記基板がガラスで作られている、請求項１記載の装置。
【請求項８】
前記基板が高温ポリエステルで作られている、請求項１記載の装置。
【請求項９】
前記基板がポリエチレンで作られている、請求項１記載の装置。
【請求項１０】
前記基板が２次元又は３次元コーティングを含有する、請求項１記載の装置。
【請求項１１】
前記チャンバーフレームに一体化スライドレールと基板フレームが互いに嵌合するように構成されている、請求項２記載の装置。
【請求項１２】
前記一体化下部ガスケットが基板中に圧入されるように構成されている、請求項１１記載の装置。
【請求項１３】
前記チャンバーフレームに一体化スライドレールが、このチャンバーフレームに一体化スライドレールを基板フレーム中にスナップ式に嵌め込むことにより基板フレームに嵌合している、請求項１２記載の装置。
【請求項１４】
前記チャンバーフレームが複数のウェル構造を含む、請求項１記載の装置。
【請求項１５】
前記チャンバーフレームが複数のアレイウェルを含む、請求項１記載の装置。
【請求項１６】
前記複数のアレイウェルが２、４、６、８、１２又は１６のアレイウェルを含む、請求項１５記載の装置。
【請求項１７】
請求項１記載のチャンバー装置を複数の含んでなり、該複数のチャンバー装置がチャンバートレイ中に挿入され、該チャンバートレイが該複数のチャンバー装置を受容するように構成されている、複数のチャンバー装置を利用するシステム。
【請求項１８】
前記チャンバートレイがスライドホルダーである、請求項１７記載のシステム。
【請求項１９】
前記チャンバートレイが複数のスライド開口部を含んでいて複数のチャンバー装置を受容する、請求項１７記載のシステム。
【請求項２０】
前記複数のチャンバーが複数のチャンバーフレームを含む、請求項１７記載のシステム。
【請求項２１】
前記複数のチャンバーフレームが、アセタール、ポリプロピレン、ＰＴＦＥ、アルミニウム、ステンレス鋼、ポリスチレン又はアクリル樹脂を含む材料で作られている、請求項２０記載のシステム。
【請求項２２】
さらに、チャンバートレイ及び複数のチャンバー装置を覆って配置されたチャンバーカバーを含む、請求項１７記載のシステム。
【請求項２３】
前記チャンバーカバーが複数のチャンバー装置をシールするように構成されており、複数のチャンバー装置がハイブリダイゼーションプロセスを行うように構成されている、請求項２２記載のシステム。
【請求項２４】
基板を位置決めし捕捉する機構を含有する基板フレームを用意し、
該基板フレーム中に該基板を配置し、
一体化上部ガスケット及び一体化下部ガスケットを含むチャンバーフレームを該基板上に配置し、
該チャンバーフレーム及び該基板フレームのスナップ又はラッチを係合させて、一体化下部ガスケットが一体化下部ガスケットに押し付けられて漏出防止シールを形成するようにし、
該チャンバーフレーム上の一体化上部ガスケットを覆うチャンバーカバーを用意して、アレイウェルの処理の間密封シールを提供し、
該チャンバーフレーム及び該基板を該基板フレーム上に配置し、
該チャンバーフレームを該基板フレーム中に取り付ける
ことを含んでなる、チャンバー装置を組み立てる方法。
【請求項２５】
前記チャンバーフレームの一体化スライドレールを基板フレーム中に取り付ける、請求項２４記載の方法。
【請求項２６】
前記基板がガラスで作られる、請求項２４記載の方法。
【請求項２７】
請求項１記載のチャンバー装置のチャンバーアレイウェル中に溶液を入れ、
該チャンバー装置の上にチャンバーカバーを提供してチャンバーアレイウェルをシールし、
前記チャンバー装置を適当な条件下でインキュベートし、
該チャンバー装置をフラッシングし、
基板上の反応物質を検出の必要に応じて標識し、
基板上の各チャンバーアレイウェル領域の反応物質の量を決定する
ことを含んでなる、チャンバー装置を利用する方法。
【請求項２８】
前記基板が、１以上のアレイウェルを含有するマイクロアレイ構成を含む、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
さらに、
チャンバー装置のチャンバーアレイウェル中にハイブリダイゼーション溶液を入れ、
チャンバー装置上にチャンバーカバーを提供してチャンバーアレイウェルをシールし、
前記チャンバー装置を適当な条件下でインキュベートし、
チャンバー装置をフラッシングし、
基板上の反応物質を、検出のために蛍光性分子で標識し、
基板上の各チャンバーアレイウェル領域をスキャンすることによって反応物質の量を決定し、
チャンバー装置の各マイクロアレイスポットを定量して、チャンバーアレイウェル中のレベル又は反応物質を計算する、請求項２８記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、チャンバー装置に関する。
【背景技術】
【０００２】
数百〜数千の遺伝子又はタンパク質の並行発現プロファイリングを実施するには、通例マイクロアレイが利用される。マイクロアレイは定まったパターンで基板に付着させた顕微鏡的スポットの集合体であり、この基板は一般にガラス、プラスチック又はシリコンのスライド、チップ又はプレートからなる。これらのスポットは、ＤＮＡ、生物学的若しくは化学的試料、他の核酸、タンパク質又はその他のプローブ物質であり得る。これらのプローブは、各プローブが定まった位置を有するように、基板上に所定のパターンで固定化される。マイクロアレイに基づくアッセイでは、通例、マイクロアレイ上の特定のプローブと相互作用し得る標的物質を含有する流体試料をアレイ状のプローブに暴露する。例えば、核酸マイクロアレイでは、アレイ状に並んだ一本鎖の合成オリゴヌクレオチド又はｃＤＮＡプローブを、標識された（例えば、蛍光性、放射性、など）一本鎖の標的核酸と接触させる。これらの標的核酸はマイクロアレイ中の相補的プローブ分子とハイブリダイズする。このプローブは所定の位置にアレイ状に並んでいるので、蛍光又は放射線が検出される位置及び放出された蛍光又は放射線の強度によって、それぞれ、流体中の標的配列の存在及び量を同定することができる。
【０００３】
マイクロアレイ技術により、ユーザーは、数百〜数千の並行生物学的又は化学的アッセイを実行することができる。この技術は基礎研究及び応用研究に適用することができる。基礎研究の場合、マイクロアレイに基づくアッセイは、例えば、遺伝子を見出すのに（例えば、ｃＤＮＡとハイブリダイズさせてオープンリーディングフレームを予測することにより）、また共通の調節要素の同定に（例えば遺伝子の共発現により）使用される。応用研究では、この技術は、例えば、複雑なシステムプロファイリング（例えば、特定の臓器及び病気、ストレス反応、加齢、並びに創傷治癒）、病気の診断、予後診断及び分類、毒性評価の実施（例えば、薬物、食物、環境条件、など）、並びに薬物の発見（例えば、標的を同定・確認して効力を最適化する、など）に使用される。
【０００４】
マイクロアレイは、通例、プローブ材料を平らな基板の表面上で合成するか又は分配することにより製造される。アッセイを実施するには、通例、基板の上面上にチャンバーを加えることによって流体ウェルを形成する。現在のところ、このマイクロアレイ又は複数のウェルプレートアッセイの構成には、標的ハイブリダイゼーション溶液を収容しているチャンバーを有するアレイ自身と、溶液をウェル内に収容し漏出を防止するための別個のガスケット又は接着剤とを有するアセンブリが含まれる。このタイプのプレート又はアッセイの構成には、組み立てられるべき複数の構成部材、非常に正確なガスケットの配置、及び基板を保持すると共に座屈することなくガスケットを基板に押し付けるのに充分な圧力が必要とされる。複数の構成部材を利用する必要性のため、マイクロアレイ又は複数のウェルプレートを十分に利用するのが厄介になる。加えて、アレイ又はウェルプレートに試料を入れるとき、この試料が別のアレイ又はウェルプレート中に漏出し得る（その結果、正確な試験の実施が妨げられる）ような不適当なガスケット配置のリスクがある。さらに、アッセイは長時間にわたって又は高温で実施されることが多いので、チャンバーは蒸発を防止するためにシール（密封）されなければならない。
【特許文献１】ドイツ特許出願公開第１０３２９９８３号明細書
【特許文献２】米国特許出願公開第２００５／１３５９７４号明細書
【特許文献３】米国特許出願公開第２００４／０７１６０５号明細書
【特許文献４】欧州特許出願公開第１６５２５８０号明細書
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従って、チャンバー設計には望ましい幾つかの特徴がある。基板とチャンバーとの界面は流体の漏出を防止するシールを形成しなければならない。チャンバーは基板上のプローブと厳密に整列しなければならない。チャンバー／基板装置は容易に組み立てられるべきである。さらに、チャンバーは取り外し可能であって、基板を標準的な設備でスキャン又は撮像することが可能であるべきである。また、チャンバーが、アッセイ中オペレーターの手動による取扱い又は標準的な自動装置との一体化により使用し易いように設計されることも有益である。このために、手動又は自動化システムにより容易にシールできる頂部チャンバー表面の構成が必要とされる。現在のところ、これらの特徴の全てを有する利用可能なマイクロアレイチャンバー設計はない。本発明は、基板に対して取り外し可能なシールを形成する一体化下部ガスケットと、チャンバーをチャンバーカバーで包囲することにより蒸発を制限するシール可能な表面を形成する一体化上部ガスケットとを有するチャンバー装置について記載する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は上記の技術的背景に鑑みて完成されたものであり、本発明の目的は挿入された試料がチャンバー装置の他の部分又は他のウェル中に漏出するのを防止する単一のウェル又は複数のウェルを含有し得るチャンバー装置を提供することである。本発明のさらなる目的は、容易に利用され、かつ組み立てられ、またさらに基板を加工処理ために容易に分解されるチャンバー装置を提供することである。
【０００７】
本発明の好ましい実施形態では、チャンバー装置が開示される。チャンバーフレームは一体化上部ガスケットと一体化下部ガスケットとを有しており、カバーがその一体化上部ガスケットを覆って配置されている。一体化上部ガスケットと、一体化下部ガスケットとはオーバーモールド成形によってチャンバーフレーム上に配置されている。基板がチャンバーフレームの下に配置されており、この基板は一体化下部ガスケットと接している。基板フレームが基板の下に配置されており、この基板フレームの構造は基板を受容するように構成されており、またこの基板フレームは、基板フレームを受容するように構成されたチャンバーフレームと整列し、そのチャンバーフレームに固定される。チャンバーカバーが、一体化上部ガスケット上に配置されて、漏出防止シールを形成すると共にアッセイ流体の蒸発を防止する。このチャンバーカバーは１以上のチャンバー装置を被覆し得、また手動又は自動ハードウェアによって着脱することができる。
【０００８】
本発明の別の好ましい実施形態では、複数のチャンバー装置を利用するシステムが開示される。複数のチャンバー装置はチャンバートレイ中に挿入される。このチャンバートレイは複数のチャンバー装置を受容するように構成されている。
【０００９】
本発明のさらに別の好ましい実施形態では、チャンバー装置を組み立てる方法が開示される。まず、チャンバーフレームを準備する。このチャンバーフレームを一体化上部ガスケットと一体化下部ガスケットとの間にオーバーモールド成形によって配置する。基板フレームと基板を準備する。一体化上部ガスケットを覆うカバーを準備する。この基板フレームは基板を位置決めすると共に収容する。基板と基板フレームの上にチャンバーフレームを配置する。このチャンバーフレームを基板フレーム中に組み立てて、基板と個々のウェルとの間に漏出防止シールを作成する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１０】
本発明の上記その他の利点は、添付の図面と併せて以下の説明を読むとより明らかになるであろう。
【００１１】
本発明の現在のところ好ましい実施形態について、図面を参照して説明するが、図面中類似の構成部材は同じ数字で示す。この好ましい実施形態に関する説明は例示であり、本発明の範囲を制限する意図はない。
【００１２】
図１に、チャンバー装置を示す。このチャンバー装置１００はチャンバーフレーム１０１、基板１０３及び基板フレーム１０５を含んでいる。チャンバーフレーム１０１はチャンバー又はフレームといってもよい。チャンバーフレーム１０１と基板フレーム１０５はプラスチック、ポリプロピレン、ポリカーボネート、ポリスチレン又は当業者に公知のいかなる材料製であってもよい。チャンバーフレーム１０１は、チャンバーフレーム１０１の上側部分の中央に位置する一体化上部ガスケット１０１ａと、チャンバーフレーム１０１の下側部分の中央に位置する一体化下部ガスケット１０１ｂとを含んでいる。チャンバーフレーム１０１は、当業者に公知の標準的な機械射出成形、ツーショット射出成形又はオーバーモールド成形プロセスによって、上部一体化ガスケット１０１ａと下部一体化ガスケット１０１ｂとの間に配置される。このように、上部一体化ガスケット１０１ａと下部一体化ガスケット１０１ｂはチャンバーフレーム１０１にオーバーモールド成形されている。共射出成形又は「サンドイッチ」成形の場合、このプロセスでは、スキン(skin)を射出してキャビティーを部分的に充填した後コア構成部材によりその部品を包み込む(pack out)ことが必要である。このプロセスでは、連続射出用に設計された２つの射出装置及び回転金型又はロボットにより移送される金型を使用することができる。
【００１３】
フレーム１０１の下側外部はまたスライドレール１０１ｄも含んでおり、このスライドレール１０１ｄは、図６に示されているようにチャンバー装置１００を位置付け、また自動操作のためなどのためにそのチャンバー装置１００をチャンバートレイ６０９に固定又は嵌合するための手段として働く。カバー１０１ｃはチャンバーカバーといってもよい。カバー１０１ｃはポリプロピレン、ポリスチレン、熱可塑性エラストマー又は多くのプラスチック、鋼、アルミニウム及び当業者に公知の任意の他のプレート材料のような材料製とすることができる。
【００１４】
チャンバーカバー１０１ｃは通常の機械加工又は機械射出成形プロセスによって製造又は作成される。チャンバーカバー１０１ｃは成形又は機械加工プロセスを用いて製造され、手動で所定の位置にスナップ式に嵌め込むことにより配置されるか又は１０１に組み立てられる。この成形プロセスを利用するときにはドラフト及び金型温度のような重大な変量を考慮しなければならない。カバー又はチャンバーカバー１０１ｃは、上部一体化ガスケットと共に圧縮シールを形成することによって蒸発を防止するべくハイブリダイゼーションに利用される。下部一体化ガスケット１０１ｂシールは、試料をチャンバーフレーム１０１のウェル又はチャンバー１０１ｅ（図２）中に挿入した後試料、試験片又は生体分子（核酸、タンパク質など）が他のウェル中に漏出するのを防止する。１０１ｅで示される各ウェルはチャンバーアセンブリが形成されたとき基板上のアレイを収容する。本発明の別の実施形態では、チャンバーフレームは基板１０３上に、例えば２−アレイ、４−アレイ、６−アレイ、８−アレイ、１０−アレイ、１２−アレイウェル又は可能な限り多くのアレイを始めとする複数のアレイウェルを有することができる。
【００１５】
図２を参照して、別の実施形態では、チャンバーフレーム１０１の上側部分は、横８．６ｍｍ×縦９ｍｍのピッチで１６個の構成に作られた複数のウェル（１０１ｅで示す）をもつ開放ウェル構成を有しているが、１、２、６及び８個のウェルの構成を有していてもよい。標準的なＳＢＳ  ９ｍｍ×９ｍｍの構成より横のピッチを減らしたことで、チャンバーフレーム１０１上にラベル／バーコード１０１ｆを、また基板１０３上にラベル／バーコード１０３ａを配置する余地が生じる。このチャンバーフレーム１０１は横８．６ｍｍ×縦９ｍｍの開放ウェル構成を有しているが、開放ウェル構成は長さ１〜３０ｍｍの範囲で、幅が１〜５０ｍｍの範囲のチャンバー装置１００に適用可能ないかなる長さと幅の寸法を有していてもよく、好ましくは幅が２５ｍｍである。また、チャンバーフレーム１０１はウェル間の標準的なピッチとして４．５ｍｍ、９ｍｍ、２．２５ｍｍ及び当業者に公知のあらゆる標準的なウェルと標準的なピッチを使用することもできる。
【００１６】
これらのバーコードラベル１０１ｆ及び１０３ａは広範囲の工業用光学的スキャナーで読み取ることができる。これに代わる方法として、ラベルはラジオ周波数識別（ＲＦＩＤ）技術を利用するスキャナーで読み取ることができるＲＦＩＤタグ又は中継器を含んでいてもよい。
【００１７】
図１において、基板１０３はチャンバー装置１００中に挿入されるＤＮＡのような生物学的材料を保持するのに利用される。基板１０３の寸法はチャンバーフレーム１０１の内側部分及び基板フレーム１０５の上側部分の寸法に対応する。基板１０３はポリプロピレン、ポリエチレン、ガラス、シリコーン又は当業者に公知のあらゆる標準的な基板材料のような材料から作成することができ、またこれらの基板のいずれかを２次元又は３次元層で被覆してもよい。本発明の別の実施形態では、基板１０３は２〜１００以上の範囲の複数の基板フレームからなる。基板フレーム１０５は基板１０３の下に配置される。
【００１８】
図２において、この基板フレーム１０５は、組立が容易なように、基板１０３を受容すると共に基板フレーム１０５内に位置決めすることができる平坦な部分１０５ｂを含んでいる。チャンバーフレーム１０１が基板１０３の頂部上に配置されたとき、チャンバーフレーム１０１の底部１０１ｈ（図３）は基板１０３の頂部を受容する。チャンバーフレーム１０１が基板１０３の頂部を受容すると、基板フレーム１０５は基板１０３の下でその回りに配置される。図４を参照して、チャンバーフレーム１０１は基板フレーム１０５の外側部分１０５ａ中に嵌合し、すなわち共にスナップ止めされ、このため一体化下部ガスケット１０１ｂが基板１０３の頂部上に押し付けられて、一体化下部ガスケット１０１ｂと基板１０３との間に漏出防止シールを形成する。本発明の別の実施形態では、チャンバーフレーム１０１は、一体化スナップ又はラッチを利用することによって、基板フレーム１０５の上側部分１０５ａに取り付けることにより、一体化下部ガスケット１０１ｂを基板１０３の頂部に押し付ける。これらの一体化スナップ又はラッチは、チャンバーフレーム１０１と基板フレーム１０５との間に最適なクランプ力を提供して、基板１０３と、一体化下部ガスケット１０１ｂの界面との間に効果的なシールを生成する。
【００１９】
図５を参照して、チャンバーフレーム１０１は外部取付具又は機構によりチャンバー装置１００をチャンバートレイ又はあらゆる外側構成部材と位置合わせするために使用される基準穴（各端部に１つずつ）１０１ｇを含んでいる。
【００２０】
図６に、チャンバートレイに挿入される複数のチャンバー装置を示す。複数のチャンバー装置６０１、６０３、６０５及び６０７は上記チャンバー装置１００と同等であり、ここではこれらの装置の説明はしない。チャンバートレイ６０９は４つのスライド開口部６０９ａ、６０９ｂ、６０９ｃ及び６０９ｄを有している。各スライド開口部６０９ａ、６０９ｂ、６０９ｃ及び６０９ｄは、チャンバー装置をこのスライド開口部中にスライド式に挿入することによってチャンバー装置を受容するような寸法で構成されている。チャンバートレイ６０９はまたスライドホルダーといってもよい。チャンバートレイ６０９とチャンバーカバー６１１はアセタール、ポリプロピレン、ＰＴＦＥ、アルミニウム、ステンレス鋼、ポリスチレン、アクリル樹脂又は当業者に公知のあらゆる標準的なチャンバートレイ材料のような材料から作成することができる。チャンバーカバー６１１はチャンバートレイ６０９並びにチャンバー装置６０１、６０３、６０５及び６０７を覆って配置される。チャンバーカバー６１１の底部６１３は突出部６１１ａ及び６１１ｂを含んでいて、このチャンバーカバーがチャンバートレイ６０９の頂部の受容部６０９ｅ及び６０９ｆに嵌ることができるようになっている。このチャンバーカバー６１１はチャンバー装置６０１、６０３、６０５及び６０７をシールするために利用でき、これらのチャンバー装置でハイブリダイゼーションプロセスを実施する際に上部ガスケット１０１ａと共にシールを形成する。また、このチャンバーカバー６１１はチャンバーフレーム１０１と同じ材料で作成されてもよいし、そうでなくてもよい。本発明の別の実施形態では、チャンバー装置６０１、６０３、６０５及び６０７は、チャンバー装置１００と同様に複数のアレイ、例えば２−アレイ、４−アレイ、６−アレイ、８−アレイ、１０−アレイ、１２−アレイなどを含んでいてもよい。本明細書の説明を通じて単一のアレイの代わりに複数のアレイを使用することができる。すなわち、複数のチャンバー装置６０１、６０３、６０５、６０７又は１０１がアッセイ中自動プロセス又は任意のプロセスを経る場合、複数のアレイを単一のアレイの代わりに使用することができる。
【００２１】
図７に、チャンバー装置１００を組み立てる方法のフローチャートを示す。ブロック７０１で、基板フレーム１０５を準備する。この基板フレーム１０５は、上述したように、基板１０３を位置決めし捕捉するための機構を含んでいる。ブロック７０３で、基板１０３を基板フレーム１０５中に配置する。ブロック７０５で、基板１０３を収容した基板フレーム１０５を覆ってチャンバーフレーム１０１を配置する。次に、ブロック７０７で、スナップ又はラッチを係合させることによってチャンバーフレームと基板フレームを組み立て、一体化下部ガスケット１０１ｂを基板１０３に対して押し付けて漏出防止シールを形成する。こうして、このプロセスが終了し、チャンバー装置１００（図１）が組み立てられる。
【００２２】
図８は、チャンバー装置１００をハイブリダイゼーションプロセスに利用する方法の一例を示すフローチャートである。ブロック８０１で、ｃＲＮＡを断片化緩衝液に加え、セ氏９４度で５分〜１時間インキュベートする。ｃＲＮＡは２０分インキュベートするのが好ましい。ブロック８０３で、ハイブリダイゼーションミックスを調製する。すなわち、ｃＲＮＡを容器中でハイブリダイゼーション緩衝液Ａ及びハイブリダイゼーション緩衝液Ｂと混合する。ハイブリダイゼーション緩衝液Ａとハイブリダイゼーション緩衝液Ｂは当業者に公知の一般的なマイクロアレイ緩衝液である。ブロック８０５で、ピペットにより又は液体を１つの装置から別の装置に移すことができる任意の装置により、ハイブリダイゼーション混合物をチャンバー装置１００の各アレイウェル１０１ｅに入れる。次に、チャンバー装置１００の頂部を覆ってチャンバーカバー１０１ｃを取り付けて、チャンバーアレイウェル１０１ｅをシールする。次いで、このチャンバー装置１００を、ハイブリダイゼーションが起こるのに充分な時間セ氏３７度の温度のインキュベーター内に配置する。
【００２３】
次に、ブロック８０７で、シールを取り外し、チャンバー装置１００のウェル１０１ｅをフラッシングし、別の溶液をウェル１０１ｅに加える。例えば、．７５×ＴＮＴで三回ウェル１０１ｅをフラッシングし、２５０μｌの．７５×ＴＮＴをウェル１０１ｅに加え、このウェル１０１ｅを再びシールする。チャンバー装置１００をセ氏４６度で１時間インキュベートする。ブロック８０９で、ウェル１０１ｅからシールを外し、ウェル１０１ｅから溶液を取り出す。次に、２５０μｌの染色溶液を加えた後、溶液を周囲温度において３０分間暗所でインキュベートする。ブロック８１１で、アレイウェル１０１ｅを三回フラッシングした後、各ウェル１０１ｅに１×ＴＮＴを加え、周囲温度において２０分間暗所でインキュベートする。次に、１×ＴＮＴを取り出し、ウェルに低塩最終濯ぎ緩衝液を充填する。ブロック８１３で、チャンバートレイをチャンバー装置と共に遠心分離バケットに入れて乾燥するまで遠心することにより、最終濯ぎ溶液を除き、基板を乾燥する。チャンバー装置１００はスキャンするまで遮光ボックスに入れておく。このチャンバー装置は分解して基板１０３を取り出すことができ、次いで適切なスキャン又は撮像装置でスキャンすることができる。
【００２４】
本発明は、試料をチャンバー装置のアレイウェル中に挿入したときその試料が漏出したり他の試料又はチャンバーアレイウェルと混合したりするのを禁止するチャンバー装置をユーザーが組み立てることを可能にするシステムを提供する。加えて、チャンバーフレームの設計により、簡略化された使用及び従来のマイクロアレイスキャナーでのスライド基板のスキャンのための容易な組立と分解が可能である。チャンバー装置は、上部一体化ガスケットと下部一体化ガスケットを有するチャンバーフレーム、基板、及び基板を位置決めし捕捉する基板フレームを含んでいる。下部一体化ガスケットはチャンバーフレームと基板との間に単一のシール面を提供する。上部一体化ガスケットはチャンバーカバーと接して、ハイブリダイゼーションプロセスの間蒸発に起因する試料の損失を防止する圧縮シールを形成する。チャンバーフレームと基板フレームは、ラッチ又はスナップにより自身を互いに整列させ固定することを可能にする一体化機構を有していて、その結果、一体化下部ガスケットと基板との間に圧縮シールを生成するのに最適なクランプ力が得られる。
【００２５】
以上の本発明の詳細な説明は限定ではなく例示と考えらるべきであり、本発明の範囲を定めるものは特許請求の範囲及びあらゆる等価物であると了解されたい。
【図面の簡単な説明】
【００２６】
【図１】図１は、本発明の一実施形態に係るチャンバー装置を示す。
【図２】図２は、本発明に従って多ウェル構成を有する図１のチャンバー装置を示す。
【図３】図３は、本発明による図１のチャンバー装置の底面分解図である。
【図４】図４は、本発明による図１のチャンバー装置のスライドレールを示す。
【図５】図５は、本発明による図１のチャンバー装置のツール構造を示す。
【図６】図６は、本発明に従ってチャンバートレイ中に挿入される複数のチャンバー装置を示す。
【図７】図７は、本発明に従って図１のチャンバー装置を組み立てる方法を示すフローチャートである。
【図８】図８は、図１のチャンバー装置をハイブリダイゼーションプロセスに利用する方法の一例を示すフローチャートである。
【符号の説明】
【００２７】
１００  チャンバー装置
１０１  チャンバーフレーム
１０１ａ  上部一体化ガスケット
１０１ｂ  下部一体化ガスケット
１０３  基板
１０５  基板フレーム
６１１  チャンバーカバー
【図１】
2009542222.tif 000003
【図２】
2009542222.tif 000004
【図３】
2009542222.tif 000005
【図４】
2009542222.tif 000006
【図５】
2009542222.tif 000007
【図６】
2009542222.tif 000008
【図７】
2009542222.tif 000009
【図８】
2009542222.tif 000010
【国際調査報告】
2009542222.tif 000011
2009542222.tif 000012