(57)【要約】  本発明は、カルパイン活性の抑制、及び／又は活性酸素種（ＲＯＳ）のトラッピング活性を有する一般式（Ｉ）で表されるアミジン誘導体に関する。  【化１】2009513577.tif 000015
2009513577.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式（Ｉ）の化合物、それらの塩、ラセミ体、ジアステレオ異性体又はその組み合わせであり、
【化１】
2009513577.tif 000011
ここで式中：
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ5及びＲ6は、独立に水素原子、ハロゲン原子、ＯＨ基、アルキル基、アルコキシ基、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、アルキルアミノ基又はカルボン酸であり；
Ｒ3は、水素原子、アルキル基又はＣＯＲ10基であり；
Ｒ10は、水素原子もしくはアルキル基、アルコキシル基、アリール基、又は複素環であり；
Ｗは酸素原子又は硫黄原子であり、−Ｗ−は、結合を示し；
Ｒ7は、水素原子又はアルキル基であり；
Ｒ8は、水素原子、ハロアルキル基、アルケニル基、シクロアルキル基、又は、直鎖もしくは分岐アルキル基であり、置換されていても非置換でも良く、置換されている場合、カルボン酸、アミノ、アルコール、グアニジン、アミジン、チオール、チオエーテル、チオエステル、アルコキシ、複素環、又はカルボキサミドのような官能基を有し；
Ｒ9は、水素原子、アルキル基、アリール基、アリールアルキル基、ビスアリールアルキル基、複素環、複素環アルキル基又はＣＯＲ10基であり；
ここで、
【化２】
2009513577.tif 000012
は、
【化３】
2009513577.tif 000013
の何れかである。
【請求項２】
Ｒ1が水素原子である請求項１の化合物。
【請求項３】
Ｒ2が水素原子である請求項１の化合物。
【請求項４】
Ｒ3が水素原子である請求項１の化合物。
【請求項５】
Ｒ4が水素原子である請求項１の化合物。
【請求項６】
Ｒ5が水素原子である請求項１の化合物。
【請求項７】
Ｒ6が水素原子である請求項１の化合物。
【請求項８】
Ｒ7が水素原子である請求項１の化合物。
【請求項９】
Ｒ8がイソブチル基である請求項１の化合物。
【請求項１０】
Ｗが硫黄原子である請求項１の化合物。
【請求項１１】
Ｒ9が水素原子である請求項１の化合物。
【請求項１２】
Ｒ9がアセチル基である請求項１の化合物。
【請求項１３】
Ｒ9がメチル基である請求項１の化合物。
【請求項１４】
Ｒ9がベンジル基である請求項１の化合物。
【請求項１５】
Ｒ9がナフチルメチル基である請求項１の化合物。
【請求項１６】
以下の化合物又はそれらの塩から選択されることを特徴とする請求項１〜１５の何れか一項に記載の化合物；
Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２−メトキシテトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド；
Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（ベンジルオキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２イル）メチル］−Ｌ−ロイシンアミド；
Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（２−ナフチルメトキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド；
（３Ｓ）−３−（｛Ｎ−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｌ−ロイシル｝アミノ）テトラヒドロフラン−２−イル−アセテート；
Ｎ1−［（３Ｓ）−２−ヒドロキシテトラヒドロフラン−３−イル］−Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｌ−ロイシンアミド。
【請求項１７】
治療用の有効成分として使用するための請求項１〜１６の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１８】
ＲＯＳの過度の産生及び／又はカルパイン活性によって特徴づけられる病変の治療への有効成分として使用するための請求項１〜１６の何れか一項に記載の化合物。
【請求項１９】
炎症性疾患、免疫学的疾患、心血管疾患、脳血管疾患、中枢神経系もしくは末梢神経系障害、カヘキシー、サルコペニア、聴力損失、骨粗鬆症、筋ジストロフィー、癌性もしくは非癌性の増殖性疾患、白内障、臓器移植の後の拒絶反応、自己免疫性疾患、ウイルス疾患、又は、癌から選択される疾病及び疾患の治療の有効成分として使用するための請求項１〜１６の何れか一項に記載の化合物。
【請求項２０】
聴力損失、特に、老人性難聴、音響外傷、又は、抗生物質、抗癌剤、非ステロイド性抗炎症薬、利尿剤、抗潰瘍剤、もしくは、抗痙攣剤のような薬剤の投与により引き起こされる聴力損失の治療の有効成分として使用するための請求項１〜１６の何れか一項に記載の化合物。
【請求項２１】
筋ジストロフィー、特に、デュシェンヌ筋ジストロフィー、ベッカー筋ジストロフィー、筋緊張性筋ジストロフィーもしくはスタイナー病、先天性筋ジストロフィー、肢帯筋ジストロフィー、及び、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィーの治療の有効成分として使用するための請求項１〜１６の何れか一項に記載の化合物。
【請求項２２】
請求項１〜１６で定義される一般式（Ｉ）の化合物又はそれらの塩のうちの一種以上を含む薬剤。
【請求項２３】
薬剤としての、請求項１〜１６で定義される一般式（Ｉ）の化合物、又は、薬学的に許容できるそれらの塩。
【請求項２４】
請求項１〜１６で定義される一般式（Ｉ）の化合物のうちの一種以上、又は、薬学的に許容できるそれらの塩のうちの一種以上を含む薬剤組成物。
【請求項２５】
以下の化合物から選択される化合物又はそれらの塩；
メチル１０Ｈ−フェノチアジン−２−カルビミドチオエート；
Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２−メトキシテトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド；
Ｎ2−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２−オキソテトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド；
Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（ベンジルオキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｎ2−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−ロイシンアミド；
Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（ベンジルオキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド；
Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（ベンジルオキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｌ−ロイシンアミド；
Ｎ2−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（２−ナフチルメトキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド；
Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（２−ナフチルメトキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド；
Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（２−ナフチルメトキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド；
（３Ｓ）−３−（Ｌ−ロイシルアミノ）テトラヒドロフラン−２−イル−アセテート；
（３Ｓ）−３−（｛Ｎ−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｌ−ロイシル｝アミノ）テトラヒドロフラン−２−イル−アセテート；
Ｎ−エチル−１０Ｈ−フェノチアジン−２−カルボキサミド；
Ｎ−エチル−１０Ｈ−フェノチアジン−２−カルボチオアミド；
メチルＮ−エチル−１０Ｈ−フェノチアジン−２−カルビミドチオエート。
【請求項２６】
請求項１〜１６及び２５の何れか一項に記載の化合物又はそれらの塩のうちの少なくとも一種以上の、化学、化粧品、食品工業、又は、農業分野での使用。
【請求項２７】
一般式（ＳＩ）の化合物、それらの塩、立体異性体又はその組み合わせであり、
【化４】
2009513577.tif 000014
ここで：
Ｗ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6及びＲ7は、請求項１に記載の上記一般式（Ｉ）の化合物と同様であり、
そして、
Ｒ11は、アルキル基、アリール基、アリールアルキル基、ビスアリールアルキル基、複素環、又は、複素環アルキル基である。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カルパイン活性の抑制、及び／又は活性酸素種（ＲＯＳ）のトラッピング活性を有するアミジン誘導体を目的とする。また、本発明は、アミジン誘導体の製造方法、アミジン誘導体含有医薬品、及び、カルパイン活性の抑制、及び選択的又は非選択的活性酸素種（ＲＯＳ）トラップとして、治療のためのアミジン誘導体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
本発明の新しい誘導体であれば、生理病理学において、カルパイン活性及び活性酸素種（ＲＯＳ）に潜在的に役割を与え、酵素及び／又は神経根を含んだ、例えば以下に挙げる疾患の治療に有益で好ましい効果を与えることができる：
−炎症性及び免疫性疾患、例えば慢性関節リウマチ、膵炎、多発性硬化症、消化管の炎症（たとえば潰瘍性又は非潰瘍性大腸炎、クローン病）
−心臓脈管及び／又は脳血管疾患、例えば、動脈の高血圧、感染性ショック、出血又は虚血性の心筋梗塞又は脳梗塞、血小板凝集を起源とする障害及び虚血
−中枢神経系又は末梢神経系の疾患、例えば、脳または脊髄への精神的外傷、くも膜下出血、癲癇、老化、アルツハイマー病を含む老人性痴呆症、ハンチントン舞踏病、パーキンソン病、末梢性神経障害などの神経変
−カヘキシー（悪液質、カヘキシー）
−サルコペニア
−聴力損失、特に、老人性難聴、音響外傷、ゲンタマイシンなどの抗生物質、シスプラチンなどの抗癌剤、サリチル酸又はイブプロフェン誘導体などの非ステロイド性の抗炎症薬、フロセミドなどの利尿剤、シメチジン又はオメプラゾールなどの抗潰瘍剤、カルバマゼピン又はバルプロ酸などの抗痙攣剤により引き起こされる聴力損失
−筋ジストロフィー、例えば、特に、デュシェンヌ筋ジストロフィー、ベッカー筋ジストロフィー、筋緊張性筋ジストロフィー又はスタイナー病、先天性筋ジストロフィー、肢帯筋ジストロフィー、顔面肩甲上腕型筋ジストロフィー
−骨粗鬆症
−非癌性の増殖性疾患、例えば、アテローム性動脈硬化症又は狭窄の再発
−白内障
−臓器移植
−自己免疫性疾患又はウイルス性疾患、例えば、狼瘡、エイズ、寄生性又はウイルス性感染症、糖尿病とその合併症
−癌及び癌性の増殖性疾患
−ＲＯＳの過度の産生及び／又はカルパイン活性によって特徴づけられるすべての疾患。
【０００３】
カルパイン(Trends Pharmacol. Sci. (1994) 15, 412419; Drug News Perspect (1999) 12, 73-82)のみならず、ＲＯＳ(Free Radic. Biol. Med. (1996) 20, 675705; Antioxid. Health. Dis. (1997) 4 (Handbook of Synthetic Antioxidants), 1-52)が、これらの病気の全てに関与していることが実験的に証明されている。例えば、脳梗塞又は実験的な頭蓋精神的外傷に伴う脳障害は、カルパイン(Proc Natl Acad Sci U S A (1996) 93, 3428-33; Stroke, (1998) 29, 152-158; Stroke (1994) 25, 2265-2270)の阻害によってだけでなく、酸化防止剤(Acta. Physiol. Scand. (1994) 152, 349-350; J. Cereb. Blood Flow Metabol. (1995) 15, 948-952; J Pharmacol Exp Ther (1997) 2, 895-904)によっても減少させることができる。
【非特許文献１】Trends Pharmacol. Sci. (1994) 15, 412419; Drug News Perspect (1999) 12, 73-82
【非特許文献２】Free Radic. Biol. Med. (1996) 20, 675705; Antioxid. Health. Dis. (1997) 4 (Handbook of Synthetic Antioxidants), 1-52
【非特許文献３】Proc Natl Acad Sci U S A (1996) 93, 3428-33
【非特許文献４】Stroke, (1998) 29, 152-158
【非特許文献５】Stroke (1994) 25, 2265-2270
【非特許文献６】Acta. Physiol. Scand. (1994) 152, 349-350
【非特許文献７】J. Cereb. Blood Flow Metabol. (1995) 15, 948-952
【非特許文献８】J Pharmacol Exp Ther (1997) 2, 895-904
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
このような産業界からの需要に応えるためには、カルパインの活性阻害能及び／又は活性酸素種のトラッピング活性を有した他の化合物を発見することが必要である。
【０００５】
そこで、本発明はこれを解決することを目的とし、カルパインの活性阻害能及び／又は活性酸素種のトラッピング活性を有した新規の化合物を提供する。
【０００６】
驚くべきことに、我々は、化学式（Ｉ）で以下に表される化合物のラセミ体、ジアステレオ異性体、又はその組み合わせ、又はそれらの塩がカルパインの活性阻害能及び／又は活性酸素種のトラッピング活性を有していることを示すことができた。
【０００７】
本発明の利点は、それが全ての産業、特に医薬、獣医、化粧品、食品業界、及び、農業分野で使用できる点である。
【０００８】
本発明の化合物又はそれらの塩であれば、生物学的媒体、特に水性媒体への溶解性が高くなる。
【０００９】
本発明の他の利点と特徴は、以下の説明と実施例により明らかになるが、実施例は例示目的にすぎず、それに限定されるものではない。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、一般式（Ｉ）の化合物又はそれらの塩に関し、
【化１】
2009513577.tif 000003
そのラセミ体、ジアステレオ異性体又はその組み合わせであり、
ここで：
Ｒ1、Ｒ2、Ｒ4、Ｒ5及びＲ6は、独立に水素原子、ハロゲン原子、ＯＨ基、アルキル基、アルコキシ基、シアノ基、ニトロ基、アミノ基、アルキルアミノ基又はカルボン酸であり；
Ｒ3は、水素原子、アルキル基又はＣＯＲ10基であり；
Ｒ10は、水素原子又はアルキル基、アルコキシル基、アリール基、又は複素環であり；
Ｗは酸素原子又は硫黄原子であり、−Ｗ−は、結合を示し；
Ｒ7は、水素原子又はアルキル基であり；
Ｒ8は、水素原子、ハロアルキル又はアルケニル基、シクロアルキル基は直鎖又は分岐アルキル基であり、置換されていても非置換でも良く、置換されている場合、カルボン酸、アミノ、アルコール、グアニジン、アミジン、チオール、チオエーテル、チオエステル、アルコキシ、複素環式、又はカルボキサミドのような化学機能を有し；
Ｒ9は、水素原子、アルキル基、アリール基、アリールアルキル基、ビスアリールアルキル基、複素環、複素環アルキル基又はＣＯＲ10基であり；
ここで、
【化２】
2009513577.tif 000004
は、
【化３】
2009513577.tif 000005
のいずれかである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明の化合物は、好ましくは、Ｒ1が水素原子である。
本発明の化合物は、好ましくは、Ｒ2が水素原子である。
本発明の化合物は、好ましくは、Ｒ3が水素原子である。
本発明の化合物は、好ましくは、Ｒ4が水素原子である。
本発明の化合物は、好ましくは、Ｒ5が水素原子である。
本発明の化合物は、好ましくは、Ｒ6が水素原子である。
本発明の化合物は、好ましくは、Ｒ7が水素原子である。
本発明の化合物は、好ましくは、Ｒ8がイソブチル基である。
【００１２】
本発明の化合物は、好ましくは、Ｗが硫黄原子である。
本発明の化合物は、好ましくは、Ｒ9が水素原子である。
本発明の化合物は、好ましくは、Ｒ9がアセチル基である。
本発明の化合物は、好ましくは、Ｒ9がメチル基である。
本発明の化合物は、好ましくは、Ｒ9がベンジル基である。
本発明の化合物は、好ましくは、Ｒ9がナフチルメチル基である。
【００１３】
アルキルは、特に定義しない限り、１〜１２個、好ましくは１〜６個、より好ましくは１〜４個の炭素原子を含有する直鎖又は分岐アルキル基を意味する。１〜６個の炭素原子を有する直鎖又は分岐アルキル基は、特に、メチル基、エチル基、プロピル基、イソプロピル基、ブチル基、イソブチル基、ｓｅｃ−ブチル基、ｔｅｒｔ−ブチル基、ペンチル基、ネオペンチル基、イソペンチル基、ヘキシル基、イソヘキシル基などを意味する。
【００１４】
ハロアルキルは、少なくとも一つ以上の水素原子がハロゲン原子で置換されたアルキル基を意味する。例えば、−ＣＦ3、−ＣＨＦ2又は−ＣＨ2Ｃｌ基を意味する。
【００１５】
アルケニルは、特に定義しない限り、少なくとも１つ以上の不飽和及び、２〜１２個、好ましくは２〜６個の炭素原子を含有する直鎖又は分岐アルケニル基を意味する。
【００１６】
アルコキシは、特に定義しない限り、直鎖又は分岐であり、１〜６個の炭素原子を含有する鎖Ｒを含有するＲ−Ｏ−を意味する。
【００１７】
アルコキシは、特に定義しない限り、３〜７個の炭素原子を含む飽和環状基を意味する。３〜７個の炭素原子を含む飽和環状基とは、シクロヘキシル基を意味する。
【００１８】
アリールは、特に定義しない限り、芳香族炭素環式基であり、好ましくは１〜３個の縮合環を有している。特に、フェニル基、ナフチル基及びフェナントリル（phenantryl）基、好ましくはフェニル基及びナフチル基、より好ましくはフェニル基を意味する。
【００１９】
アリールアルキル基は、上記でそれぞれ定義したアルキル基及びアリール基成分を有し、アリール基はアルキル基を介して（Ｉ）又は（ＳＩ）分子と結合するものである。
【００２０】
本発明においては、ビスアリールアルキル基は少なくとも２つの環を有し、そのうち１つは芳香環であり、最大１４個の炭素原子、好ましくは最大１０個の炭素原子を有する。また、ビスアリールアルキル基はアルキル基を介して（Ｉ）又は（ＳＩ）分子と結合するものである。
【００２１】
本発明においては、複素環は芳香族、又は１〜１４個の原子を含まない複素環基をいい、それらの原子は、炭素、窒素、酸素もしくは硫黄、又は、それらの化合物のひとつから選択される。また、複素環は部分的に不飽和でも良い。複素環の例としては、ヘテロアリール、又はヘテロシクロアルキル基である。
【００２２】
本発明においては、複素環式アルキルは上記に定義した複素環とアルキル基を有した複素環アルキル基であり、複素環アルキル基はアルキル基を介して（Ｉ）又は（ＳＩ）分子と結合するものである。
【００２３】
ハロゲン原子はフッ素、塩素、臭素又はヨウ素原子より選択される。
【００２４】
本発明においては、アミノは−ＮＨ2基を意味する。
本発明においては、アルキルアミノは−ＮＲＨ基又は−Ｎ（Ｒ）2基を意味し、Ｒは上記で定義したアルキル基である。
【００２５】
Ｒ8基を保護する保護機能を有した保護基としては以下のような例が挙げられる：
−メチル、エチル、ｔｅｒｔ−ブチル又はベンジルエステル類は、酸官能基を保護できる；
−ベンジル又はフルオレニルメチルｔｅｒｔ−ブチルカルバミン酸は、アミン官能基を保護できる；
−アセトアミドは、アミン官能基を保護できる；そして
−ｔｅｒｔ−ブチル、ベンジル、テトラヒドロピラン又はシリルエーテルは、アルコール官能基を保護できる；そして
−アセチルはアルコール官能基を保護できる；そして
−メチルチオエーテル又はメチルチオエステルは、チオール官能基を保護できる。
【００２６】
特に、本発明は以下の化合物とそれらの塩から選択される一般式（Ｉ）の化合物に関する：
Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２−メトキシテトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド；
Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（ベンジルオキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２イル）メチル］−Ｌ−ロイシンアミド；
Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（２−ナフチルメトキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド；
（３Ｓ）−３−（｛Ｎ−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｌ−ロイシル｝アミノ）テトラヒドロフラン−２−イル−アセテート；
Ｎ1−［（３Ｓ）−２−ヒドロキシテトラヒドロフラン−３−イル］−Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｌ−ロイシンアミド。
【００２７】
上記の合成物の命名法のために使用される用語は、英語IUPAC用語である。
【００２８】
本発明の対象としては、また、上記で定義した一般式（Ｉ）に表された化合物又はそれらの塩の、治療用の有効成分としての使用である。
【００２９】
本発明の化合物とそれらの塩は、ＲＯＳの過度の産生及び／又はカルパイン活性によって特徴づけられる病変の治療への有効成分として、特に、使用できる。
【００３０】
より具体的には、炎症性疾患又は免疫学的疾患、心血管疾患、脳血管疾患、中枢神経系又は末梢神経系障害、カヘキシー、サルコペニア、聴力損失、骨粗鬆症、筋ジストロフィー、癌性又は非癌性の増殖性疾患、白内障、臓器移植の後の拒絶反応、自己免疫性疾患、ウイルス疾患、又は、癌から選択される疾病及び疾患の治療の有効成分として、本発明の化合物とそれらの塩を使用することができる。
【００３１】
好ましくは、本発明の対象としては、聴力損失又は筋ジストロフィーの治療の有効成分として、本発明の一般式（Ｉ）の化合物とそれらの塩を使用することである。
【００３２】
本発明は、上記で定義した一般式（Ｉ）に表された化合物又はそれらの塩を少なくとも１種以上含んだ薬剤も対象とする。好ましくは、これらはそのような化合物の薬学的に許容できる塩である。
【００３３】
本発明の対象としては、薬剤としての、上記で定義した一般式（Ｉ）に表された化合物及び、その薬学的に許容できる塩である。
【００３４】
本発明は、また、上記で定義した一般式（Ｉ）に表された化合物又はそれらの塩を少なくとも１種以上含んだ薬剤組成物に関する。その医薬品は、少なくとも１種以上の薬学的に許容できる賦形剤を含むことが好ましい。好ましくは、上記で定義した一般式（Ｉ）に表された化合物又はそれらの塩が薬学的な有効組成物中に有効成分として含まれていることが好ましい。
【００３５】
薬学的に許容できる塩、としては、特に、例えば、塩酸塩、臭化水素塩、沃化水素塩、リン酸塩、二リン酸塩もしくは、硝酸塩などの無機酸、又は、アセテート、マレアート、フマル酸エステル、酒石酸塩、琥珀酸塩、クエン酸塩、乳酸塩、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、パモ酸塩、もしくは、ステアリン酸塩なでの有機酸を意味する。その他の薬学的に許容できる塩の例としては、「Salt selection for basic drugs", Int. J. Pharm. (1986), 33, 201-217」を参照できる。
【００３６】
本発明の一般式（Ｉ）に表された化合物又はそれらの塩は、粉末、顆粒、タブレット、ゼラチンカプセル、リポソーム又は坐薬などの固体でも良い。また、適切な固体の担体としては、例えば、リン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルカムパウダー、砂糖、ラクトース、デキストリン、澱粉、ゼラチン、セルロース、メチルセルロース、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリビニルピロリジン又はワックスなどである。
【００３７】
本発明の一般式（Ｉ）に表された化合物又はそれらの塩は溶液、広義のエマルジョン、ゲル、懸濁液、スプレー又はシロップなどの液体でも良い。また、適切な液体の担体としては、水、有機溶媒（例えば、グリセロールもしくはグリコール）、とこれらの混合物であり、水中でのこれらの比率を変化させたものなどがある。
【００３８】
さらに、本発明は、上記で定義した一般式（Ｉ）に表された化合物又はその薬学的に許容できる塩の薬剤製造への使用に関する。ここで当該薬剤は、ＲＯＳの過度の産生及び／又はカルパイン活性によって特徴づけられるすべての疾患の治療、特に、炎症性疾患又は免疫学的疾患、心血管疾患、脳血管疾患、中枢神経系又は末梢神経系障害、カヘキシー、サルコペニア、聴力損失、骨粗鬆症、筋ジストロフィー、癌性又は非癌性の増殖性疾患、白内障、臓器移植の後の拒絶反応、自己免疫性疾患、ウイルス疾患、又は、癌から選択される疾病及び疾患に使用することを意図する。
【００３９】
本発明の一般式（Ｉ）に表された化合物又はその薬学的に許容できる塩は、局所、経口、非経口ルートにより、筋肉内注射、皮下注射等で投与することができる。
【００４０】
本発明の化合物の投与量としては、上記の疾病及び疾患の治療に必要な量与えられ、投与方法、患者の年齢及び体重、体の状態などによって、診察医又は獣医により明確に決定される。診察医又は獣医により明確に決定される量が、ここでは、「治療に有効な量」として知られる。
【００４１】
本発明は、又、下記一般式（ＳＩ）の化合物、それらの塩、立体異性体又はその組み合わせであり、
【化４】
2009513577.tif 000006
ここで：
Ｗ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6及びＲ7は、上記化学式（Ｉ）の化合物と同じ意味であり、
そして、
Ｒ11は、アルキル基、アリール基、アリールアルキル基、ビスアリールアルキル基、複素環、又は、複素環アルキル基である。
【００４２】
本発明の対象として、一般的な化学式（Ｉ）の合成の過程で得られる以下の化合物から選択される化合物の合成中間体も含む：
メチル１０Ｈ−フェノチアジン−２−カルビミドチオエート；
Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２−メトキシテトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド；
Ｎ2−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２−オキソテトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド；
Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（ベンジルオキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｎ2−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−ロイシンアミド；
Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（ベンジルオキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド；
Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（ベンジルオキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｌ−ロイシンアミド；
Ｎ2−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（２−ナフチルメトキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド；
Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（２−ナフチルメトキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド；
Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（２−ナフチルメトキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド；
（３Ｓ）−３−（Ｌ−ロイシルアミノ）テトラヒドロフラン−２−イル−アセテート；
（３Ｓ）−３−（｛Ｎ−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｌ−ロイシル｝アミノ）テトラヒドロフラン−２−イル−アセテート；
Ｎ−エチル−１０Ｈ−フェノチアジン−２−カルボキサミド；
Ｎ−エチル−１０Ｈ−フェノチアジン−２−カルボチオアミド；
メチルＮ−エチル−１０Ｈ−フェノチアジン−２−カルビミドチオエート。
【００４３】
上記の合成物の命名法のために使用される用語は、英語IUPAC用語である。
【００４４】
本発明の対象としては、また、上記で定義した合成中間体（ＳＩ）に表された化合物又はそれらの塩の、治療用の有効成分としての使用である。本発明のこれらの化合物とそれらの塩は、ＲＯＳの過度の産生及び／又はカルパイン活性によって特徴づけられる病変の治療への有効成分として、特に、使用できる。
【００４５】
より具体的には、炎症性疾患又は免疫学的疾患、心血管疾患、脳血管疾患、中枢神経系又は末梢神経系障害、カヘキシー、サルコペニア、聴力損失、骨粗鬆症、筋ジストロフィー、癌性又は非癌性の増殖性疾患、白内障、臓器移植の後の拒絶反応、自己免疫性疾患、ウイルス疾患、又は、癌から選択される疾病及び疾患の治療の有効成分として、上記で定義した合成中間体（ＳＩ）の本発明のこれらの化合物とそれらの塩を使用することができる。
【００４６】
本発明は、上記で定義した合成中間体（ＳＩ）に表された化合物又はそれらの塩を少なくとも１種以上含んだ薬剤も対象とする。好ましくは、これらはそのような化合物の薬学的に許容できる塩である。
【００４７】
本発明の対象としては、薬剤としての、少なくとも一つ以上の上記で定義した合成中間体（ＳＩ）に表された化合物及び、その薬学的に許容できる塩である。
【００４８】
本発明は、また、上記で定義した合成中間体（ＳＩ）に表された化合物又はそれらの塩を少なくとも１種以上含んだ薬剤組成物に関する。その医薬品は、少なくとも１種以上の薬学的に許容できるビークル（vehicle）を含むことが好ましい。好ましくは、上記で定義した合成中間体（ＳＩ）に表された化合物又はそれらの塩が薬学的な有効組成物中に有効成分として含まれていることが好ましい。
【００４９】
本発明は、また、本発明の一般式（Ｉ）に表された化合物又は物質、又は、合成中間体（ＳＩ）又はそれらの塩の、医薬、獣医、化学、化粧品、食品業界及び、農業分野での使用も対象とする。
【００５０】
一般式（Ｉ）の化合物の製造
本発明の一般式（Ｉ）の化合物は下記に示す図１に示すような合成ルートにより製造することができる。Ｒ9が、水素原子、アルキル基、アリール基、アリールアルキル基、ビスアリールアルキル基、複素環、複素環アルキル基又はＣＯＲ10基であり、Ｒ10が、水素原子又はアルキル基、アルコキシル基、アリール基、又は複素環である一般式（Ｉ）の化合物は、以後の記述における一般式（Ｉ）1の化合物に該当する。Ｒ9が、水素原子である一般式（Ｉ）の化合物は、以後の記述における一般式（Ｉ）2の化合物に該当する。下記に示す図１、図２においては、一般式（ＩＩ）、（ＩＩＩ）、（Ｉ）1および（Ｉ）2中のＷ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ7、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10及びＲ11の意味は上記で述べた通りである。
【００５１】
［図１］
2009513577.tif 000007
【００５２】
図１に示すように、一般式（Ｉ）1および（Ｉ）2の化合物は、好ましくは２５〜６０℃に加熱し、好ましくはイソプロパノール、ＤＭＦ又はＴＨＦなどの極性溶液中で、４〜２０時間、一般式（ＩＩ）のチオイミデート誘導体を一般式（ＩＩＩ）のアミノ−ラクトールと縮合反応させることで得られる。一般式（Ｉ）2の化合物を生成するために、例えば、アセトン、ＴＨＦ、ジオキサン、アセトニトリル又はエタノールなど有機溶剤の溶液中で、ＨＣｌもしくはＨＢｒのような無機酸又はベンゼンスルホン酸のような有機酸を使用した酸性媒体において、一般式（Ｉ）1の化合物のヘミアセタール官能基を脱保護すれば良い。反応は通常２０℃で行われ、Ｒ9の性質のよって反応時間を４〜２０時間の間で変化させる。
【００５３】
一般式（ＩＩ）の中間体の製造
Ｗ、Ｒ1、Ｒ2、Ｒ3、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6及びＲ7の意味は上記で述べた通りである、市販されていない一般式（ＩＩ）のチオイミデート誘導体は、以下に示す図２のルートに従って製造することができる。
【００５４】
［図２］
2009513577.tif 000008
【００５５】
一般式（ＩＩ）のチオイミデート、フェノチアジン（Ｗ＝Ｓ）の誘導体、フェノキサジン（Ｗ＝Ｏ）又は、カルバゾール（−Ｗ−は結合である）は、一般式（ＩＩ．１）のカルボン酸に対応する出発物質から３つのステージで得られる。これらのカルボン酸は例えば以下の文献の方法により生成可能である；Pharmazie 1984, 39(1), 22-3; Bull. Soc. Chim. 1968, (7), 2832-42, Pharmazie 1966, 21(11), 645-9, Synthesis 1988, (3), 215-17, J. Med. Chem. 1992,  35(4),  716-24, J. Org. Chem. (1960), 25, 747-53, Heterocycles  (1994), 39(2),  833-45; J. Indian Chem. Soc. (1985), 62(7), 534-6; J. Chem. Soc. Chem. Comm. (1985), (2), 86-7。一般式（ＩＩ．２）のカルボキサミドの形成は、例えば、ＤＭＦなどの溶液下、ＤＣＣもしくはＨＢＴＵなどのペプチドカップリグ試薬を使用して、アンモニア（Ｒ7＝Ｈ）もしくはアミン（Ｒ7＝アルキル）の濃縮水性溶液の存在下で、実行することができる。一般式（ＩＩ．３）のチオカルボキサミドの形成は、１，４−ジオキサン溶液中のローソン（Ｌａｗｅｓｓｏｎ）試薬の活性によって実行することができる。一般式（ＩＩ）のチオイミデートを生成するためのチオカルボキサミドのアルキル化はＲ11−Ｘを使用して行うことができる。ここで、Ｘは脱離基であり、例えばハロゲン原子、硫酸基又はトリフラート基である。反応混合物は、例えばアセトン中で１５時間撹拌する。チオイミデート（ＩＩ）は塩の形で得られ、例えば、ヨードメタン（Ｒ11−Ｘ）を使用した時はヨウ化水素塩の形で得られる。また、任意に、炭酸ナトリウムなどの塩基を使用して脱塩することもできる。
【００５６】
一般式（ＩＩＩ）の中間体の製造
一般式（ＩＩＩ）のアミノ−ラクトール誘導体は、例えば、下記の図３の生成ルートにより合成できるものであり、Ｒ8及びＲ9は上記で述べた通りであり、Ｇｐは保護基であり好ましくはカルバミンタイプである。
【００５７】
［図３］
2009513577.tif 000009
【００５８】
一般式（ＩＩＩ．２）のアミノ−ブチロラクトン誘導体は、ここで、Ｒ8は上記で述べた通りであり、Ｇｐは保護基であり、例えば、ベンジル、ｔｅｒｔ−ブチル、又は、フルオレニルメチルカルバメートなどであり、ペプチド合成の標準条件で、一般式（ＩＩＩ．１）の保護されたアミノ酸を（Ｓ）−α−アミノブチロラクトンとの縮合反応によって、一般式（ＩＩＩ．２）のカルボキサミドを得ることができる。次に、ラクトン（ＩＩＩ．２）は、水素化ジイソブチルアルミニウム（ＤＩＢＡＬ）などの還元剤を使用し、ＴＨＦもしくはＣＨ2Ｃｌ2などの不活性溶媒中で、好ましくは−５０℃より低い温度で、例えば−７８℃においてラクトールに還元される。次に、一般式（ＩＩＩ．４）のアセタールを生成するために、一般式（ＩＩＩ．３）のラクトール誘導体のヘミアセタール官能基は、例えばメタノールなどのアルコール媒体もしくはベンジルアルコール中で、トリフルオロ酢酸もしくはカンファースルホン酸などの強酸を使用するか、又は、無水酢酸などのカルボン酸無水物の存在下で、ジクロロメタンなどの不活性溶媒中の４−ジメチルアミノピリジンの存在下で、保護される。
【００５９】
択一的に、一般式（ＩＩＩ）のアミノラクトールは商業的に利用可能な保護された（Ｓ）−α−アミノブチロラクトンを出発物質として５つのステージにより得られる。中間体（ＩＩＩ．５）及び（ＩＩＩ．６）を製造するための、ラクトンの還元及びヘミアセタールの保護の連続するステージは、上記に記載の中間体（ＩＩＩ．３）及び（ＩＩＩ．４）の生成のステージと同一である。Ｐｄ／Ｃの存在下で、主にこの方法で使用されるベンジルオキシカルボニル基の水素化分解により中間体（ＩＩＩ．７）の製造が行われる。一般式（ＩＩＩ．４）の中間体は、中間体（ＩＩＩ．７）及び、一般式（ＩＩＩ．１）のアミノ酸を、上記（ＩＩＩ．２）の製造のための記載と同じ条件でペプチド縮合させることにより得られる。一般式（ＩＩＩ．４）の中間体のアミノ基は文献に記載の方法で脱保護できる（T.W. Greene and P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, Second edition (Wiley-Interscience, 1991)）。
【００６０】
特に定義していない場合、使用している全ての技術及び科学用語の意味するところは、発明の属する技術の分野における通常の知識を有する者が理解する意味と同じである。同様に、ここで記載のすべての出版物、特許出願、すべての特許と他の全ての引用は、引例として取り入れられる。
【００６１】
以下の実施例は上記産物の例示目的であり、発明の範囲をこれに限定するものではない。
【実施例】
【００６２】
上記の合成物の命名法のために使用される用語は、英語IUPAC用語である。
以下の実施例においては、融点は商品名「Buchi」モデルB-545の装置を使用してキャピラリーにより測定した。
【００６３】
実施例１：Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２メトキシテトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミドヨウ化水素酸
１．１）Ｎ2−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２−オキソテトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド：
３．５１ｇ（１３．２５ｍｍｏｌ）のＣｂｚ−Ｌ−ロイシン、２．４１ｇ（１当量）の（Ｓ）−２−アミノ−４−ブチロラクトン臭化水素酸塩、１．９７ｇのＨＯＢＴ（１．１当量）、及び、５．５９ｇ（２．２当量）の−１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）を６０ｍｌの無水ＤＭＦに溶解し、その後７．６４ｍｌの（３．３当量）のＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンを添加した。反応混合物は、２０℃で、１５時間撹拌した後、エチルアセテート／水の１／１混合物２００ｍｌと混合した。撹拌とデカンテーションの後、有機溶液は、１００ｍｌのＮａＨＣＯ3の飽和溶液、５０ｍｌの水、１００ｍｌの１Ｍクエン酸溶液で連続的に洗浄し、最終的に１００ｍｌの塩水で洗浄した。有機相は硫酸ナトリウムの上で乾燥させ、濾過し、減圧下で乾燥、濃縮した。得られる油は、イソペンタンを使用して洗浄し、それからジクロロメタン／イソペンタンを混ぜたものにより結晶化した。６８％の収率で白色の固体が得られた。融点は１３０〜１３１℃であった。
【００６４】
１．２）Ｎ2−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２−ヒドロキシテトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド：
１．２４ｇ（３．５６ｍｍｏｌ）の中間体１．１を、アルゴン雰囲気下、三つ口フラスコ中の６０ｍｌの無水ジクロロメタンに溶解した。混合物を−６０℃に冷却し、その後、ジクロロメタン中の１ＭのＤＩＢＡＬ溶液を１０．７ｍｌ（３当量）徐々に添加した。添加の後、冷却バスを外し、さらに１５分間撹拌した。その後、１００ｍｌの２０％ロッシェル（Ｒｏｃｈｅｌｌｅ）塩溶液に反応媒体を注入した。２時間の撹拌の後、１００ｍｌのジクロロメタンを添加し、全体を分液漏斗に注いだ。有機層を取り出し、５０ｍｌの水及び５０ｍｌの塩水溶液で洗浄した。硫酸ナトリウム上及び濾過による乾燥の後、有機相を減圧下、濃縮乾燥した。濃縮物をシリカカラムで精製した（溶離液はヘプタン／ＡｃＯＥｔ：１／１〜２／８）。７２％の収率で白色の固体が得られた。融点は４８〜４９℃であった。
【００６５】
１．３）Ｎ2−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２−メトキシテトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド：
５０ｍｌのメタノール中の中間体溶液１．２（０．８２ｇ、２．３４ｍｍｏｌ）に過剰のトリフルオロ酢酸（５ｍｌ）を、２０℃で添加した。２０℃で、１５時間撹拌した。その後、反応混合物を一部減圧下で濃縮し、さらに、５０ｍｌのジクロロメタンに再溶解した。有機層は、５０ｍｌのＮａＨＣＯ3の飽和溶液、５０ｍｌの水、５０ｍｌの塩水で洗浄する。硫酸ナトリウムの上で乾燥させた後、減圧下で濾過及び濃縮し、濃縮物をシリカカラムで精製した（溶離液はヘプタン／ＡｃＯＥｔ：１／１〜３／７）。８０％の収率で白色の固体が得られた。融点は１１２〜１１３℃であった。
【００６６】
１．４）Ｎ1−［（３Ｓ）−２−メトキシテトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド：
２ｇ（５．５ｍｍｏｌ）の中間体１．３及び６００ｍｇのＰｄ／Ｃを１０％で６０ｍｌのメタノールを含んだステンレス反応器に導入した。２気圧の水素圧下で混合物を１時間撹拌した。結晶を濾過した後、メタノールを減圧下で蒸発させた。油上の残留物が得られ（１．２０ｇ、収率９４％）、それを次のステージに使用した。
【００６７】
１．５）１０Ｈ−フェノチアジン−２−カルボチオアミド：
３．４ｇ（１４ｍｍｏｌ）の１０Ｈ−フェノチアジン−２−カルボキサミド(J. Org. Chem. 1961, 26, 1138-1143)、及び、２０ｍｌのピリジンがすでに添加されている１，４−ジオキサン溶液中の３．４ｇ（８．４ｍｍｏｌ）ローソン（Ｌａｗｅｓｓｏｎ）試薬を含んだ反応混合物を１１０℃で１時間３０分加熱した。ブラウン色の溶液を減圧下で濃縮し、その後残留物を２００ｍｌのＡｃＯＥｔ及び１００ｍｌの水に溶解した。撹拌とデカンテーションの後、有機相は、１００ｍｌの１ＮのＨＣｌ溶液１００ｍｌの塩水で連続的に洗浄した。硫酸ナトリウムの上で乾燥させた後、減圧下で濾過及び濃縮し、オレンジ色の粉末を得た。この粉末をＥｔ2Ｏで洗浄し、濾液を除去し、アセトンで抽出した。アセトンの濾液を減圧下で濃縮し、残留物をシリカカラムで精製した（溶離液はヘプタン／ＡｃＯＥｔ：１／１〜４／６）。オレンジ粉末が得られ、融点は２０８〜２０９℃であった。
【００６８】
１．６）メチル１０Ｈ−フェノチアジン−２−カルビミドチオエート  ヨウ化水素酸：
０．３ｍｌ（１．２当量）のヨードメタンを、２３°Ｃで１０ｍｌアセトン中の１．０５ｇ（４．１ｍｍｏｌ）の中間体１．５の溶液に加えた。反応混合物を１５時間撹拌した。形成した沈殿を濾過し、次に、アセトン及びイソペンタンでリンスした。紫−ブラウン色の固体が８５％の収率で得られた。融点は２０７〜２０８℃であった。
【００６９】
１．７）Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２メトキシテトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド  ヨウ化水素酸：
１．１８ｇ（１当量）の中間体１．６を２０ｍｌのイソプロパノール中の０．６８ｇ（２．９５ｍｍｏｌ）の中間体１．４に添加した。反応混合物を６０℃で１５時間撹拌した。反応中に放出されるメタンチオールはソーダ溶液及び過マンガン酸カリウム溶液を使用して順次トラップされる。形成した固体は濾過により単離し、Ｅｔ2Ｏで洗浄し、シリカカラムで精製した（溶離液はヘプタン／ＡｃＯＥｔ：１／１〜０／１）。オレンジ粉末が収率７０％で得られ、融点は１５５〜１６５℃であった。
【００７０】
実施例２:Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（ベンジルオキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｌ−ロイシンアミド  ヨウ化水素酸
２．１）Ｎ2−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２−オキソテトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド：
実験方法は、Ｃｂｚ−Ｌ−ロイシンをＦｍｏｃ−Ｌ−ロイシンに置き換えたこと以外は、上記の中間体１．１の合成と同じ方法を使用し、ＡｃＯＥｔによる結晶化で、７２％の収率で白色の固体が得られた。融点は１７５〜１７６℃であった。
【００７１】
２．２）Ｎ2−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２−ヒドロキシテトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド：
実験方法は、中間体１．１を中間体２．１に置き換えたこと以外は、上記の中間体１．２の合成と同じ方法を使用した。シリカカラム（溶離液はヘプタン／ＡｃＯＥｔ：１／１）で精製後、６８％の収率で２．１６ｇの白色の固体が得られた。融点は１５５〜１５６℃であった。
【００７２】
２．３）Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（ベンジルオキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｎ2−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｌ−ロイシンアミド：
０．４１ｍｌ（１．１当量）のベンジルアルコール、及び、０．１１ｇ（０．１３当量）のカンファースルホン酸を７ｍｌジクロロメタン中の１．５７ｇ（３．５８ｍｍｏｌ）の中間体２．２の懸濁液に添加した。反応が進むにつれて、反応媒体は均質になった。２４時間の撹拌した後、２５ｍｌの水及び２５ｍｌのジクロロメタンで希釈し、撹拌し、デカンテーションした。有機溶液を硫酸ナトリウムの上で乾燥させた後、濾過及び濃縮し、乾燥した。残留物をシリカカラム（溶離液はヘプタン／ＡｃＯＥｔ：１／０〜１／１）で精製した。濃縮の後、７６％の収率で１．４３ｇの白色の固体が得られた。融点は１１６〜１１７℃であった。
【００７３】
２．４）Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（ベンジルオキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド：
０．２ｍｌ（５当量）のジエチルアミンを、３．５ｍｌのジクロロメタン中の０．２ｇ（０．３８ｍｍｏｌ）の中間体２．３の溶液に徐々に添加した。反応混合物を２３℃で５時間３０分撹拌した後、減圧下で濃縮した。残留物をＥｔ2Ｏで部分的に再溶解し、４℃で２〜３時間おいた。形成した白色の沈殿物を濾過により除去し、濾液を濃縮乾燥させた。得られた残留物は次のステージで使用した。
【００７４】
２．５）Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（ベンジルオキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｌ−ロイシンアミド  ヨウ化水素酸：
実験方法は、中間体１．４を中間体２．４に置き換えたこと以外は、上記の中間体１．６による中間体１．７の合成と同じ方法を使用した。反応生成物はシリカカラム（溶離液はヘプタン／ＡｃＯＥｔ：１／１〜０／１）で精製した。単一生成物のフラクションを濃縮した後、残留物をイソペンタン／ＡｃＯＥｔに混合し、パールオレンジの沈殿を生成した。５３％の収率で４３０ｍｇの生成物を得ることができた。融点は１４０〜１４５℃であった。
【００７５】
実施例３：Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（２−ナフチルメトキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド  ヨウ化水素酸
３．１）Ｎ2−［（９Ｈ−フルオレン−９−イルメトキシ）カルボニル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（２−ナフチルメトキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド：
実験方法は、ベンジルアルコールを置き換えて、２−ヒドロキシメチナフタレン及び中間体２．２を出発物質として、中間体２．３の合成と同じ方法を使用した。シリカカラム（溶離液はヘプタン／ＡｃＯＥｔ：７／３）で精製後、６６％の収率で１．３８ｇの白色の固体が得られた。融点は７９〜８０℃であった。
【００７６】
３．２）Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（２−ナフチルメトキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド：
実験方法は、中間体２．３を中間体３．１に置き換えたこと以外は、上記の中間体２．４の合成と同じ方法を使用した。生成物は、ジベンゾフルベン誘導体を除去した後、得ることができ、次のステージに使用した。
【００７７】
３．３）Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｎ1−［（３Ｓ）−２−（２−ナフチルメトキシ）テトラヒドロフラン−３−イル］−Ｌ−ロイシンアミド  ヨウ化水素酸：
実験方法は、中間体１．４を中間体３．２に置き換えたこと以外は、上記の中間体１．６による中間体１．７の合成と同じ方法を使用した。縮合反応の生成物はシリカカラム（溶離液はヘプタン／ＡｃＯＥｔ：１／１〜０／１）で精製した。単一生成物のフラクションを濃縮した後、残留物をイソペンタン／ＡｃＯＥｔに混合し、オレンジの沈殿を生成した。６４％の収率で５３０ｍｇの生成物を得ることができた。融点は１４５〜１４８℃であった。
【００７８】
実施例４：（３Ｓ）−３−（｛Ｎ−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｌ−ロイシル｝アミノ）テトラヒドロフラン−２−イル−アセテート  ヨウ化水素酸
４．１）（３Ｓ）−３−（｛Ｎ−［（ベンジルオキシ）カルボニル］−Ｌ−ロイシル｝アミノ）テトラヒドロフラン−２−イル−アセテート：
２ｇ（５．７３ｍｍｏｌ）の中間体１．２及び０．１４ｇ（０．２当量）の４−ジメチルアミノピリジンを１３ｍｌ無水ジクロロメタンにアルゴン雰囲気下で溶解した。５．４ｍｌ（１０当量）の無水酢酸をこの溶液に徐々に添加した。２３℃で５時間撹拌した後、反応液を５０ｍｌのジクロロメタンと、５０ｍｌの水で希釈した。その後、有機相を５０ｍｌのＮａＨＣＯ3の飽和溶液、５０ｍｌの水、最終的に５０ｍｌの塩水で洗浄する。ジクロロメタン溶液をＮａ2ＳＯ4上で乾燥させ、減圧下で濾過及び濃縮を行った。得られた残留物をＥｔ2Ｏと混合し、濾過し、イソペンタンでリンスした。５０％の収率で１．１４ｇの白色の固体を得ることができた。融点は１５８〜１５９℃であった。
【００７９】
４．２）（３Ｓ）−３−（Ｌ−ロイシルアミノ）テトラヒドロフラン−２−イル−アセテート：
１．１４ｇ（２．８９ｍｍｏｌ）の中間体４．１及び２２７ｍｇのＰｄ／Ｃを１０％で、３０ｍｌの酢酸を含んだステンレス反応器に導入した。２気圧の水素圧下で混合物を４時間３０分撹拌した。結晶を濾過した後、酢酸を減圧下で蒸発させた。得られた油上の残留物は、５０ｍｌのジクロロメタン及び５０ｍｌのＮａＨＣＯ3の飽和溶液に分離する。その後、有機相を水及び塩水で洗浄し、撹拌しデカンテーションする。Ｎａ2ＳＯ4上で乾燥させた後、濾過及び濃縮で乾燥させ得られた無色の油状物質を自発的に結晶化させ、６０％の収率で０．４５ｇの白色の固体を得ることができた。融点は７５〜８０℃であった。
【００８０】
４．３）（３Ｓ）−３−（｛Ｎ−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｌ−ロイシル｝アミノ）テトラヒドロフラン−２−イル−アセテート  ヨウ化水素酸：
実験方法は、反応溶媒としてＴＨＦを使用し加熱を４時間に限ったことを除いて、中間体１．６と中間体４．２を出発物質として、中間体１．７の上記の合成と同じ方法を使用した。反応混合物は直接シリカに吸収させ、精製のためにカラムクロマトグラフィーにそれを注入した（溶離液はヘプタン／ＡｃＯＥｔ：３／７〜０／１）。単一生成物のフラクションを濃縮した後、１８％の収率で０．２７ｇのオレンジ色の固体を得ることができた。融点は１３０〜１３１℃であった。
【００８１】
実施例５：Ｎ1−［（３Ｓ）−２−ヒドロキシテトラヒドロフラン−３−イル］−Ｎ2−［イミノ（１０Ｈ−フェノチアジン−２−イル）メチル］−Ｌ−ロイシンアミド  ヨウ化水素酸
１２ｍｇ（０．１当量）のベンゼンスルホン酸を、４２ｍｌのＴＨＦ中の０．４２ｇ（０．６９ｍｍｏｌ）の中間体４．３の溶液に２３℃で添加した。２３℃、５時間３０分の撹拌後、０．５ＭのＮａＨＣＯ3（０．１当量）溶液を１３７μｌ添加した。さらに５分撹拌し、形成した沈殿を濾過した。濾液を濃縮乾燥し、シリカカラムで精製した（ジクロロメタン／ＥｔＯＨ：９５／５〜９０／１０）。単一生成物のフラクションを濃縮した後、４３％の収率で１７１ｍｇのオレンジ色の固体を得ることができた。融点は１４８〜１５０℃であった。
【００８２】
実施例６：
６．１）Ｎ−エチル−１０Ｈ−フェノチアジン−２−カルボキサミド：
５．８ｍｌ（３．３当量）のＤＩＥＡＡを、５０ｍｌのＤＭＦ中の２．４３ｇ（１０ｍｍｏｌ）の１０Ｈ−フェノチアジン−２−カルボン酸、１．７９ｇ（２．２当量）のエチルアミン塩酸塩及び４．１７ｇ（１．１当量）のＨＢＴＵの溶液に添加し、０℃に冷却した。２３℃、１５時間の撹拌後、１００ｍｌのＮａＨＣＯ3の飽和溶液及び１００ｍｌのＡｃＯＥｔの混合液に注入した。２、３分撹拌した後、形成された沈殿を濾過で取り除き、濾液をデカンテーションした。有機層は水、１Ｍのクエン酸溶液、及び塩水で連続的に洗浄した。有機溶液を硫酸ナトリウムの上で乾燥させた後、濾過及び濃縮し、乾燥した。得られた固体をＥｔ2Ｏに懸濁し、練和し、濾過した。ベージュ色の固体が定量的に得られた。融点は１５０〜１５１℃であった。
【００８３】
６．２）Ｎ−エチル−１０Ｈ−フェノチアジン−２−カルボチオアミド：
実験方法は、１０Ｈ−フェノチアジン−２−カルボキサミドを中間体６．１に置き換えたこと以外は、上記の中間体１．５と同じ方法を使用した。６０％の収率で２．１７ｇの黄色の固体を得ることができた。融点は１５５〜１５６℃であった。
【００８４】
６．３）メチルＮ−エチル−１０Ｈ−フェノチアジン−２−カルビミドチオエート塩酸塩：
実験方法は、中間体１．５を中間体６．２に置き換えたこと以外は、ヨードメタンを使用する上記の中間体１．６と同じ方法を使用した。ヨウ化水素酸の形で得られた塩化された化合物は、ＮａＨＣＯ3の飽和溶液及びＡｃＯＥｔ溶液に分離する。デカンテーションの後、有機層を水、塩水で洗浄し、硫酸ナトリウムの上で乾燥させた後、濾過した。無水Ｅｔ2Ｏ中のＨＣｌの１Ｎの滴定溶液を１．１当量を、０℃に冷却した有機溶液に添加した。２３℃で１時間撹拌した後、反応混合物を減圧下で濃縮し乾燥させた。濃縮した残留物は最後にＥｔ2Ｏに懸濁し、濾過した。えんじ色の固体が得られた。融点は１４２〜１４３℃であった。
【００８５】
本発明の化合物の薬学的研究
全ての割合は、体積を基準とするものである。
【００８６】
生体中（in situ）におけるヒト骨格細胞（ＳＫＭ）のカルパイン酵素の活性に対する本発明の化合物の効果
試験の原理は、以下の通りである、すなわち：マイトトキシンは、細胞のカルシウムチャネルの開放を引き起こす毒素である。結果として生じるカルシウムの細胞内への流入は、細胞死の起源となる。細胞死のこのプロセスの間に、システインに依存性のプロテアーゼ（カルパイン）は、活性化される。試験は、カルパイン酵素を活性化するためにマイトトキシンの存在下で細胞を培養すること、及び、酵素がこの基質を分解する時に蛍光を発するカルパインの基質を加えることから成る。最後に、カルパイン抑制剤をテストする。
【００８７】
アンホテリシンＢ、人間の組み換え型上皮増殖因子及びデキサメタゾンを入れたＤＭＥＭ１０％のＦＣＳ（牛胎仔血清）培養媒体中に、９６穴プレートで１つのウェルにつき２５００セル導入されるように筋芽細胞をシーディングした。シーディングの３日後、細胞はウェルの底に付着した。筋管への細胞分化は２％の馬血清を含んでいる１００μｌのＤＭＥＭ、Ｆ１２媒体によって誘導できる。さらにその３日後、１００μｌの試験用化合物をウェルの底に導入した。５％のＣＯ2の雰囲気下の３７℃１時間培養した後、カルパイン（Ｓｕｃ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−ＡＭＣ）の蛍光基質とマイトトキシン（ＭＴＸ）（シグマ、リファレンス：Ｍ９１５９）を添加した。細胞酵素の全体の活性を決定するために、試験用化合物のないコントロールウェルは、プレート（１０μｌのＭＴＸ及び基質を添加することで１００回希釈される１００μｌのＤＭＳＯ）の上で準備する。バックグラウンドノイズは、ＭＴＸなしでさらなるコントロールウェルを準備することによって決定する。化合物の各々の濃度は、三回一組でテストする。プレートは撹拌され、蛍光は時刻０において商品名ビクター（Ｖｉｃｔｏｒ）装置を使って３８０／４６０ｎｍで測定する。培養は、暗所、３０℃で３時間行う。
【００８８】
蛍光の値により、化合物の各々の濃度効果を計算することが可能となる。ＩＣ50（酵素活性の５０％を抑制した時点での試験用化合物の濃度）は、この濃度効果から算出できる。
【００８９】
実施例５の化合物のＩＣ50は、この試験では２０μＭより小さかった。
【００９０】
ラットの大脳皮質における脂質の過酸化における効果についての研究
本発明の化合物の抑制活性については、マロンジアルデヒド（ＭＤＡ）の濃度から測定できる脂質の過酸化における効果を測定することで決定できる。不飽和脂肪酸の過酸化によって産生するＭＤＡが脂質の過酸化の良い指標である(H Esterbauer and KH Cheeseman, Meth. Enzymol. (1990) 186: 407-421)。体重２００〜２５０ｇ(Charles River)の雄のスピローグドーリーラット（Male Sprague Dawley rats）を、断頭し実験材料とした。大脳皮質を取り除き、Ｔｒｉｓ−ＨＣｌバッファ（２０ｍＭ、ｐＨ＝７．４）中でトーマスポッター（Ｔｈｏｍａｓ  ｐｏｔｔｅｒ）によりホモジナイズする。ホモジェネートは４℃で１０分間、５００００ｇで二回遠心分離する。ペレットは−８０℃で保存する。実験を行う日には、１ｇ／１５ｍｌの濃度で再懸濁し、４℃で１０分間、５１５ｇで遠心分離する。直後に、上澄みを脂質の過酸化を決定するために使用する。ラットの大脳皮質（５００μｌ）のホモジェネートは、試験用化合物、又は、溶媒（１０μｌ）の存在下で、１５分間、３７℃でインキュベートする。脂質の過酸化反応は、１ｍＭ５０μｌのＦｅＣｌ2、１ｍＭのＥＤＴＡ及び４ｍＭのアスコルビン酸を加えることで開始できる。３７℃の３０分間のインキュベーションの後、反応はブチルヒドロキシトルエン（ＢＨＴ、０．２％）の溶液を５０μｌ加えることによって停止させる。ＭＤＡは、比色テストを使って定量化でき、色素生成試薬（Ｒ）、Ｎ−メチル−２フェニルインドール（６５０μｌ）を２００μｌのホモジェネートと４５°Ｃで１時間反応させる。試薬Ｒの２つの分子によるＭＤＡの分子の濃度は、５８６ｎｍと同等の最大の吸収波長を有する安定した発色団を産生する(Caldwell et al., European J. Pharmacol. (1995), 285, 203-206)。
【００９１】
実施例１〜５の化合物のＩＣ50は、この試験では５μＭより小さかった。
【００９２】
ヒト骨格細胞（ＳＫＭ）のマイトトキシンにより誘導される細胞死における本発明の化合物の保護効果
試験の原理は、以下の通りである、すなわち：マイトトキシンは、細胞のカルシウムチャネルの開放を引き起こす毒素である。結果として生じるカルシウムの細胞内への流入は、細胞死の起源となる。細胞死のこのプロセスの間に、システインに依存性のプロテアーゼ（カルパイン）は、活性化され、フリーラジカルが大量に発生する。試験は、試験用化合物の存在下で細胞を培養すること、及び、それによる細胞死の抑制、促進され、それにより保護効果を測定することから成る。
【００９３】
アンホテリシンＢ、人間の組み換え型上皮増殖因子及びデキサメタゾンを入れたＤＭＥＭ１０％のＦＣＳ（牛胎仔血清）培養媒体中に、９６穴プレートで１つのウェルにつき２５００セル導入されるように筋芽細胞をシーディングした。シーディングの３日後、細胞はウェルの底に付着した。筋管への細胞分化は２％の馬血清を含んでいる１００μｌのＤＭＥＭ、Ｆ１２媒体によって誘導できる。さらにその３日後、１００μｌの試験用化合物をウェルの底に導入した。５％のＣＯ2の雰囲気下の３７℃、１時間培養した後、マイトトキシン（ＭＴＸ）（Ｗａｋｏ，リファレンス：１３１−１０７３１）を加えて、細胞死に関しての試験用化合物の保護効果（濃度効果）を評価する。
【００９４】
３時間又は９６時間のインキュベートの後、培養媒体を１０％のＦＣＳ媒体が１０％のＷＳＴ−１により補充されたＤＭＥＭに置き換える。ＷＳＴ−１（ロシュ、リファレンス１６４４８０７）は、代謝活性細胞（すなわち生きている細胞）を染色する試薬である。細胞は、ＷＳＴ−１の存在下で１時間培養する。それから、生きている細胞数は、パーキン−エルマーウォーレスＥｎｖｉｓｉｏｎ２１０１（Perkin-Elmer Wallac Envision）装置を使って４５０ｎｍで吸収度を測定することにより決定できる。すなわち、細胞が生息しているフラクションにおける化合物の濃度効果により計算される。
【００９５】
ＥＣ50（細胞死から細胞を５０％保護した時点での試験基質の濃度）は、この濃度効果から算出できる。
【００９６】
実施例５の化合物のＥＣ50は、マイトトキシン存在下で３時間培養した後の場合、１６．４μＭより小さく、マイトトキシン存在下で９６時間培養した後の場合、１８．３μＭより小さかった。
【００９７】
比較のための試験では、デュシェンヌ筋ジストロフィーの治療に用いられる化合物、α−メチルプレドニゾロンを用いて行った。比較のため、同じ条件で試験を行ったところ、ＥＣ50は、マイトトキシン存在下で３時間培養した後の場合、３５４．３μＭであり、マイトトキシン存在下で９６時間培養した後の場合、１９５．７μＭであった。
【００９８】
ゲンタマイシンの治療により生じた中毒性難聴：本発明の化合物の保護効果
ゲンタマイシンによる繊毛細胞の喪失に対する共投与による本発明の化合物の保護効果について示す。
【００９９】
試験の原理は、以下の通りである、すなわち：ゲンタマイシンと他のアミノグルコシドは、人間の繊毛細胞と聴力損失を引き起こす。ゼブラフィッシュ（Zebrafish）は、感覚器官をその体の表面が感丘として知られている。これらの感丘繊毛細胞は、人間の耳の内部の繊毛細胞と、構造的に、そして、機能的に類似している。これらの魚において、感丘繊毛細胞はＤＡＳＰＥＩ（２，４−ジメチル−アミノスチリル−Ｎ−エチルピリジニウムヨウ化物）で染色することができ、そして、この染色は機能を有する繊毛細胞の数を反映する。
【０１００】
内部の繊毛細胞への損傷は、ゲンタマイシン治療によりゼブラフィッシュでも誘発される。ゲンタマイシンによって損害を受ける繊毛細胞上で、試験用化合物の保護効果を試験するために、化合物はゲンタマイシンと共投与した。それから、内部の繊毛細胞は、染色され、定量化される。
【０１０１】
実験は５日齢の魚で行われる。そして、化合物の存在または非存在下で２４時間１μｇ／ｍｌのゲンタマイシン中でインキュベートされる。コントロール；すなわち、ビヒクルのみ（１％のＤＭＳＯ；ポジティブコントロール）の実験も平行して行う。ゲンタマイシンで治療される魚は、ネガティブコントロールとなる。
【０１０２】
ＥＣ50（細胞死から細胞を５０％保護した時点での試験用化合物の濃度）は、この濃度効果から算出できる。
【０１０３】
ＤＡＳＰＥＩ染色は、生体内で（グループにつきｎ＝６）繊毛細胞を視覚化するために行う。形態測定分析は、繊毛細胞の染色シグナルを定量化するのに用いる。ポジティブコントロールのＤＡＳＰＥＩ染色シグナルを、１００％と定義した。
【０１０４】
表１の結果が示すところは：
−ネガティブコントロールの染色シグナルは、コントロールシグナルの２０％±０．６％を示した、すなわちゲンタマイシンでの治療の後の繊毛細胞は８０％の損失を示した。
−ゲンタマイシン及び５０μＭの実施例５の化合物で治療された動物とでの染色シグナルは、コントロールシグナルの５２％±１０％を示した、すなわち、ゲンタマイシン治療によって損害を受けた繊毛細胞のうち４０％を十分に保護した。２５μＭ〜１００μＭの範囲を超える範囲においては、５０％の染色細胞を視覚化することができる効果のある濃度であるＥＣ50が３２μＭであった。
−ゲンタマイシン及び５０μＭ実施例４の化合物で治療された動物とでの染色シグナルは、コントロールシグナルの４９％±５％を示した、すなわち、ゲンタマイシン治療によって損害を受けた繊毛細胞のうち３６．２％を十分に保護した。２５μＭ〜１００μＭの範囲を超える範囲においては、５０％の染色細胞を視覚化することができる効果のある濃度であるＥＣ50が５１μＭであった。
【０１０５】
【表１】
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【０１０６】
ここで、ポジティブコントロールはゼブラフィッシュ、１％のＤＭＳＯ；ネガティブコントロールはゼブラフィッシュ、１％のＤＭＳＯ、ゲンタマイシン１μｇ／ｍｌであり、化合物の効果は、ゼブラフィッシュ、１％のＤＭＳＯ、ゲンタマイシン、化合物の共投与により確認している。実験は各グループ６匹のゼブラフィッシュで行った。
【国際調査報告】
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