(57)【要約】  単離されたポリペプチドが提供される。このポリペプチドは、ヒトスカベンジャー受容体と特異的に結合することができる抗原認識ドメインを含み、この抗原認識ドメインは配列番号１１、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２３、配列番号２７および配列番号３１からなる群から選択される少なくとも３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む。また、このペプチドを含む組成物およびその使用も提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトスカベンジャー受容体と特異的に結合することができる抗原認識ドメインを含む単離されたポリペプチドであって、前記抗原認識ドメインは配列番号１１、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２３、配列番号２７および配列番号３１からなる群から選択される少なくとも３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド。
【請求項２】
ヒトスカベンジャー受容体と特異的に結合することができる抗原認識ドメインを含む単離されたポリペプチドであって、前記抗原認識ドメインは配列番号１１、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２３、配列番号２７および配列番号３１に示されるようなＣＤＲアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチド。
【請求項３】
請求項１または２に記載のポリペプチドをコードする核酸配列を含む単離されたポリヌクレオチド。
【請求項４】
請求項１または２に記載のポリペプチドを有効成分として含む医薬組成物。
【請求項５】
請求項１または２に記載のポリペプチドの治療効果的な量を対象に投与し、それにより、炎症を対象において軽減することを含む、炎症をその必要性のある対象において軽減する方法。
【請求項６】
ＩＢＤを治療するために特定された医薬品の製造のための請求項１または２に記載のポリペプチドの使用。
【請求項７】
多発性硬化症を治療するために特定された医薬品の製造のための請求項１または２に記載のポリペプチドの使用。
【請求項８】
自己免疫疾患を治療するために特定された医薬品の製造のための請求項１または２に記載のポリペプチドの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、炎症を診断および治療するための抗体、組成物および方法に関する。より具体的には、本発明は、炎症応答の治療における抗スカベンジャー受容体抗体の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
炎症は、痛み、発熱、赤み、腫れおよび機能喪失の古典的徴候による急性形態で特徴づけられる生理学的状態である。炎症は、多くの場合、様々な疾患（例えば、多発性硬化症（ＭＳ）、変形性関節症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）（クローン病および潰瘍性大腸炎を含む）、リウマチ様関節炎（ＲＡ）、ＳＬＥ、Ｉ型糖尿病（ＩＤＤＭ）、アテローム性動脈硬化、脳脊髄炎、アルツハイマー病、脳卒中、外傷性脳傷害、パーキンソン病および敗血症ショックなど）に付随する。ほとんどの場合において、そのような疾患に関連した炎症についての効果的な治療はなく、また、既存の治療は一時的なものであり、ほとんどが組織破壊の根本的原因を抑制することができない。
【０００３】
スカベンジャー受容体（ＳＲ）は、典型的にはマクロファージ上に見出され、様々なタイプの化学修飾されたリポタンパク質（１〜３）、例えば、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）などと結合する細胞表面のタンパク質である。構造的に非常に多様であるこのファミリーの膜貫通受容体は、受容体媒介によるエンドサイトーシス、アポトーシス細胞および細菌の食作用、ならびに、細胞接着に関与する［Ｐｅｉｓｅｒ  Ｌ．他、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎ．、１４（１）：１２３〜１２８、２００２］。修飾されたＬＤＬからのコレステロールの大量の受容体媒介による取り込みは、培養されたマクロファージを、コレステリルエステルで満たされた泡沫細胞（これは、アテローム性動脈硬化プラークに見出される泡沫細胞に類似する）に転換させることができるので、これらの受容体もまた、アテローム性動脈硬化プラーク形成の初期段階の期間中での動脈壁におけるマクロファージのＬＤＬコレステロールの沈着において機能することが仮定されている。
【０００４】
スカベンジャー受容体（ＳＲ）は、非常に広範囲の様々なポリアニオン性のリガンド［例えば、修飾タンパク質、硫酸化多糖および特定のポリヌクレオチド］との結合を媒介するので［１、３、４］、そのようなものとして呼ばれる。この性質から、これらの受容体が、広範囲の様々な病原体成分と結合するパターン認識受容体として働くことによって生来的な免疫応答の一部を形成するという仮説がもたらされた〔２〜５〕。
【０００５】
ＳＲ−Ｂ１（これは、ＳＲ−ＢＩまたはＣＬＡ−Ｉとも呼ばれる）はマクロファージのスカベンジャー分子であり、高密度リポタンパク質（ＨＤＬ）に対する受容体であり［２、３、６、７］、この場合、この受容体は細胞からのコレステロール取り込みを媒介する［Ｒｉｇｏｔｔｉ  Ａ．他、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｌｉｐｉｄｏｌ．、８：１８１〜８、１９９７；Ｒｉｇｏｔｔｉ  Ａ．他、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．、９４：１２６１０〜５、１９９７］。ＳＲ−Ｂ１は、非ＨＤＬリポタンパク質に対する受容体としても機能を果たすことが可能であり、逆のコレステロール輸送において重要な役割を果たすように見受けられる。インビボ実験では、この受容体はマウスではＨＤＬ代謝のために重要であり、ヒトではＬＤＬコレステロールおよびＨＤＬコレステロールの代謝のために重要であることが示された［Ｓｔａｎｇ  Ｈ．他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７４：３２６９２〜８、１９９９；Ｓｗａｒｎａｋａｒ  Ｓ．他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７４：２９７３３〜９、１９９９］。マウスにおけるＳＲ−Ｂ１遺伝子発現の操作を伴う研究では、その発現がアテローム性動脈硬化を防ぐことが示される［Ｋｏｚａｒｓｋｙ  Ｋ．Ｆ．およびＫｒｉｅｇｅｒ  Ｍ．、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｌｏｐｉｄｏｌ．、１０：４９１〜７、１９９９；Ｕｅｄａ  Ｙ．他、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２７５：２０３６８〜７３、２０００；Ａｃｔｏｎ  Ｓ．Ｌ．他、Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．Ｔｏｄａｙ、５：５１８〜２４、１９９９］。ＨＤＬおよび特に、そのタンパク質画分のＡｐｏ−Ａ１は、マクロファージによる前炎症性媒介因子のインビトロでの産生に影響を及ぼすことも示唆された（８）。炎症を伝播するマクロファージ由来の媒介因子には、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、ＴＮＦ−α、および、おそらくはＩＬ−６が含まれ、これに対して、ＴＧＦ−βおよびＩＬ−１０は主として抗炎症性作用を有する［Ｋｉｅｆｅｒ  Ｒ．他、Ｐｒｏｇ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．、６４（２）：１０９〜２７、２００１］。
【０００６】
ＰＣＴ国際特許出願公開ＷＯ２００４／０４１１７９は、外来抗原（例えば、細菌抗原またはウイルス抗原など）の侵入に関連した感染性疾患（例えば、感染症、敗血症および関連した炎症など）を治療するためにスカベンジャー受容体ＳＲ−Ｂ１（Ｃｌａ−Ｉ）を標的化することを教示する。これは、両親媒性のらせん状モチーフを有するペプチドが、インビトロで、ＬＰＳ（リポ多糖）の細胞取り込みを阻止し、また、ＬＰＳ、ＬＴＡ（リポテイコ酸）、ならびに、細菌ｃｐｎ６０（シャペロニン６０）およびアミロイドペプチドにより誘導される前炎症性応答を阻止するという発見に基づいている。従って、ＰＣＴ国際特許出願公開ＷＯ２００４／０４１１７９の発明者らは、ＳＲ−ＢＩ（スカベンジャー受容体クラスＢのタイプＩ）を標的化する両親媒性モチーフを有する薬剤が、潜在的には、敗血症、細菌感染症およびウイルス感染症、ならびに、ＬＰＳ、ＬＴＡ、ウイルスエンベロープタンパク質および／または熱ショックタンパク質が病理発生の一因である炎症性疾患を治療するために使用できると結論している。
【０００７】
国際特許出願公開ＷＯ２００４／０４１１７９は、自己免疫疾患（これは、外来の病原性因子（例えば、ＬＰＳなど）にも、また、アミロイドにも関連しない）（例えば、ＩＢＤなど）の好都合な治療のための上記薬剤を示唆していない。また、当該技術分野では、一般には炎症性疾患、具体的には自己免疫疾患（例えば、多発性硬化症など）を治療するための、抗炎症性活性を有するＳＲ−Ｂ１特異的抗体配列の使用が教示されていない。
【０００８】
従って、ＳＲ−Ｂ１を標的化し、自己免疫疾患を治療するための新規な薬剤およびその使用方法が必要であることが広く認識されており、また、そのような薬剤および方法を有することは非常に好都合である。
【発明の開示】
【０００９】
本発明の１つの態様によれば、ヒトスカベンジャー受容体と特異的に結合することができる抗原認識ドメインを含む単離されたポリペプチドであって、この抗原認識ドメインは配列番号１１、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２３、配列番号２７および配列番号３１からなる群から選択される少なくとも３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドが提供される。
【００１０】
本発明の別の態様によれば、ヒトスカベンジャー受容体と特異的に結合することができる抗原認識ドメインを含む単離されたポリペプチドであって、この抗原認識ドメインは配列番号１１、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２３、配列番号２７および配列番号３１に示されるようなＣＤＲアミノ酸配列を含む単離されたポリペプチドが提供される。
【００１１】
本発明のさらに別の態様によれば、このポリペプチドをコードする核酸配列を含む単離されたポリヌクレオチドが提供される。
【００１２】
本発明のなおさらに別の態様によれば、このポリペプチドを有効成分として含む医薬組成物が提供される。
【００１３】
本発明のさらなる態様によれば、このポリペプチドの治療効果的な量を対象に投与し、それにより、炎症を対象において軽減することを含む、炎症をその必要性のある対象において軽減する方法が提供される。
【００１４】
本発明のさらなる態様によれば、ＩＢＤを治療するために特定された医薬品の製造においてにこのポリペプチドの使用が提供される。
【００１５】
本発明のなおさらなる態様によれば、多発性硬化症を治療するために特定された医薬品を製造するためのそのようなポリペプチドの使用が提供される。
【００１６】
本発明のさらなる態様によれば、自己免疫疾患を治療するために特定された医薬品を製造するためのそのようなポリペプチドの使用が提供される。
【００１７】
本発明は、炎症性応答を診断および治療するための新規な組成物およびその含有方法を提供することによって、現在知られている形態の欠点に対処することに成功している。
【００１８】
別途定義されない限り、本明細書中で使用されるすべての技術的用語および科学的用語は、本発明が属する技術分野の当業者によって一般に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書中に記載される方法および材料と類似または同等である方法および材料を本発明の実施または試験において使用することができるが、好適な方法および材料が下記に記載される。矛盾する場合には、定義を含めて、本特許明細書が優先する。加えて、材料、方法および実施例は例示にすぎず、限定であることは意図されない。
【００１９】
図面の簡単な記述
本明細書では本発明を単に例示し図面を参照して説明する。特に詳細に図面を参照して、示されている詳細が例示として本発明の好ましい実施態様を例示考察することだけを目的としており、本発明の原理や概念の側面の最も有用でかつ容易に理解される説明であると考えられるものを提供するために提示していることを強調するものである。この点について、本発明を基本的に理解するのに必要である以上に詳細に本発明の構造の詳細は示さないが、図面について行う説明によって本発明のいくつもの形態を実施する方法は当業者には明らかになるであろう。
図１は、ヒトオルソログおよびマウスオルソログとのモノクローナル抗ＳＲ−Ｂ１抗体（Ｅ１２）の交差反応性を示す写真である。組換えタンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥで分離し、ニトロセルロースメンブランに転写した。メンブランをＥ１２に供した。
図２は、Ｅ１２により処理された培養腹膜マクロファージからのＩＬ−１０分泌の用量依存的誘導を示すグラフである。
図３は、Ｅ１２により処理された培養腹膜マクロファージにおけるＮＯレベルの用量依存的抑制を示す棒グラフである。
図４は、ＥＡＥスコアにおける低下によって明らかにされた、Ｅ１２による処置（黒四角）、コントロールのイソタイプ一致抗体による処置（丸）、または、無処置により誘導されたマウスにおける進行しつつあるＥＡＥに対するこれらの処置の影響を示すグラフである。
図５ａ〜図５ｃは、１９日目のＥＡＥ誘導マウスの脾臓細胞からのサイトカイン分泌に対するＥ１２（ピンク色）またはコントロール抗体（灰色）の影響を示す棒グラフである。図５ａ、ＩＬ−４。図５ｂ、ＩＬ−１２。図５ｃ、ＩＬ−１０。
図６ａ〜図６ｆは、非処置（図６ａ）、Ｅ１２による処置（図６ｂ）、または、イソタイプが一致するコントロール抗体による処置（図６ｃ）を受けたＥＡＥ誘導マウス（疾患発症の１９日目）に由来する腰髄切片のＩＬ−１０免疫染色を示す写真である。図６ａ〜図６ｃは、スカベンジャー受容体を発現する細胞の存在についてのビオチン化Ｅ１２による染色を示す。図６ｄ〜図６ｆは、抗ＩＬ−１０抗体による染色を示す。抗ＳＲ−ＢＩ治療はＥＡＥの組織学的スコアを低下させる。
図７ａ〜図７ｅは、ナイーブラット（図７ａ）、ＴＮＢＳ誘導によるＩＢＤを患う陽性コントロールラット（図７ｂ）、イソタイプを一致させたコントロールＩｇＧの反復投与を受けた、ＴＮＢＳ誘導によるＩＢＤを患うラット（図７ｃ）から疾患発症の１２日目に得られた代表的な組織学的結腸切片を、ｍＡｂ  Ｅ１２により処置されたラット（図７ｄ〜図７ｅ）との比較で示す写真である。
図８ａ〜図８ｉは、ＴＮＢＳ誘導によるＩＢＤを患うコントロールラット（図８ａ〜図８ｃ）、イソタイプを一致させたコントロールＩｇＧの反復投与を受けた、ＴＮＢＳ誘導によるＩＢＤを患うラット（８ｄ〜図８ｆ）から疾患発症の１２日目に得られた代表的な免疫組織学的切片を、ｍＡｂ  Ｅ１２により処置された疾患ラット（図８ｇ〜図８ｉ）との比較で示す写真である。図８ａ、図８ｄおよび図８ｇはｍＡｂ  ＥＤ１（マクロファージのバイオマーカー）により染色され、図８ｂ、図８ｅおよび図８ｈは抗ＣＤ３（Ｔ細胞のバイオマーカー）により染色され、図８ｃ、図８ｆおよび図８ｉは抗ＩＬ−１０ｍＡｂにより染色される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
本発明は、炎症を治療するために使用することができる組成物および方法に関する。具体的には、本発明は、炎症性応答を治療することにおける抗スカベンジャー受容体抗体の使用に関連する。
【００２１】
本発明の原理および作用が、図面および付随する説明を参照してより十分に理解されることができる。
【００２２】
本発明の少なくとも１つの実施形態を詳しく説明する前に、本発明は、その適用において、下記の説明において示される細部、または、実施例によって例示される細部に限定されないことを理解しなければならない。本発明は他の実施形態が可能であり、または、様々な方法で実施または実行される。また、本明細書中で用いられる表現法および用語法は記述のためであって、限定であると見なしてはならないことを理解しなければならない。
【００２３】
著しい炎症性成分を有する疾患および障害は随所で見られる。皮膚障害、腸障害、特定の変性的な神経学的障害、関節炎、自己免疫疾患および他の病気により、多くの患者が冒される。これらの障害の基礎となる要因は様々であり、これらには、感染性因子、自己免疫による要因、食事または環境による要因、および、遺伝的要因が含まれる。大部分の場合において、原因となる要素は明らかにされておらず、また、重要な病態生理学的成分の多くが解明されていない。従って、これらの疾患の大部分に対する治療選択肢は最適ではない。
【００２４】
本発明者は、ケモカインおよび他の前炎症性媒介因子に対する自己免疫性が宿主のために有益であるときには、かかる応答を免疫系が選択的に生じさせ得ることを以前に示している［９、１０、１１、１２、１４、１５］。例えば、変形性関節症（ＯＡ）ではなく、リウマチ様関節炎（ＲＡ）に罹患する患者は、ＴＮＦ−αに対して著しいレベルの自己抗体を有しており、ＴＮＦ−αの機能を中和する治療は、ＯＡではなく、ＲＡを抑制する。本発明者によって行われた研究では、標的化されたＤＮＡワクチンによる有益な抗体の選択的増幅が保護免疫性を実験モデルにおいてもたらしたことが示されている（９、１０、１１、１２、１４、１５）。本発明者はさらに、炎症性疾患に罹患する対象がスカベンジャー受容体（ＳＲ）に対して上昇したレベルの自己抗体を示し、また、ＳＲ−Ｂ１に対するＤＮＡワクチン接種により、そのような疾患が、前炎症性サイトカインから抗炎症性サイトカインまでのマクロファージにより産生されるサイトカインプロフィルを変化させることによって防止され得ることを示している（国際特許出願公開ＷＯ２００４／０８０３８５を参照のこと）。
【００２５】
今回、本発明者はまた、入念な実験およびスクリーニングにより、マクロファージのサイトカインプロフィルおよび炎症活性を変化させることができる新規な治療的抗ＳＲ−Ｂ１モノクローナル抗体のＥ１２を開発したことが報告された。配列決定されたこの抗体はスカベンジャー受容体の表面露出エピトープに対して向けられ（図１）、また、ヒトＣＬＡ−Ｉ（ヒトＳＲ−Ｂ１）に対して交差反応性であり、また、ヒトマクロファージ（細胞株）のサイトカインプロフィルおよびインビトロ活性にも影響を及ぼし、そのため、治療および診断での有益なツールとして使用することができる（実施例１および図１〜図３を参照のこと）。この抗体はまた、進行しつつあるＥＡＥおよびＴＮＢＳ誘導ＩＢＤを抑制することにおいて効果的であることが示された（図４〜図８を参照のこと）。免疫組織化学的分析では、両方の疾患において、抗ＳＲ−ＢＩ治療が、高ＩＬ−１０産生細胞の内部への自己免疫部位での侵入中の白血球のサイトカイン産生を変化させたことが明瞭に示された。これは、これらの疾患におけるこの抗体の顕著な治療的効果を説明し得る。抗ＳＲ−ＢＩ  ｍＡｂを使用するＣＮＳ切片の免疫組織化学的分析ではまた、ＳＲ−ＢＩ陽性の白血球が炎症部位に進入することが示された（これは、これまでのところ、ＥＡＥについてのみ検出される）。従って、本明細書中に記載される抗ＳＲ−ＢＩ抗体は、自己免疫部位に進入する炎症性白血球のサイトカインプロフィルおよび炎症性機能に影響を及ぼし、従って、そこでの自己免疫Ｔ細胞の機能および極性化に影響を及ぼすことが示唆される。
【００２６】
これらの知見により、本発明の抗体は、スカベンジャー受容体を標的化するために、また、炎症性疾患（特に、ＩＢＤおよび多発性硬化症）を治療するために使用することができることが示唆される。
【００２７】
従って、本発明の１つの態様によれば、ヒトスカベンジャー受容体と特異的に結合することができる抗原認識ドメインを含む単離されたポリペプチドが提供され、この場合、抗原認識ドメインは、配列番号１１、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２３、配列番号２７および配列番号３１からなる群に対して少なくとも９０％相同的であるものから選択される少なくとも３つのＣＤＲアミノ酸配列を含む。
【００２８】
本発明のこの態様の１つの実施形態によれば、そのようなポリペプチドは、配列番号１１、配列番号１５、配列番号１９、配列番号２３、配列番号２７および配列番号３１に示されるようなＣＤＲアミノ酸配列を含む。
【００２９】
好ましくは、そのようなポリペプチドは抗体である。より好ましくは、抗体は抗炎症性活性を誘発することができる。本明細書中で使用される「抗炎症性活性」は、免疫細胞の炎症活性における何らかの低下を示し、例えば、抗炎症性サイトカイン（例えば、ＩＬ−１０、ＩＬ−４およびＴＧＦ−ｂ）の分泌の誘導が好ましくは付随する、前炎症性サイトカイン（例えば、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１およびＩＬ−１２など）の分泌における減少などを示す。
【００３０】
用語「抗体」は、完全な抗体分子、ならびに、標的ポリペプチドの抗原性部分と結合することができるその機能的フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２およびＦｖなど）を示す。これらの機能的な抗体フラグメントは本発明の好ましい実施形態を構成し、下記のように定義される：
（１）Ｆａｂ、これは、抗体分子の一価の抗原結合性フラグメントを含有するフラグメントであり、完全な抗体を酵素パパインで消化して、無傷の軽鎖と、１つの重鎖の一部分とを生じさせることによって作製することができる；
（２）Ｆａｂ’、これは、完全な抗体をペプシンで処理し、続いて、還元して、無傷の軽鎖と、重鎖の一部分とを生じさせることによって得ることができる、抗体分子のフラグメントである；２つのＦａｂ’フラグメントが１分子の抗体分子について得られる；
（３）（Ｆａｂ’）２、これは、完全な抗体を、その後の還元を伴うことなく、酵素ペプシンで処理することによって得ることができる、抗体のフラグメントである；（Ｆａｂ’）２は、２つのジスルフィド結合によってつながれた２つのＦａｂ’フラグメントの二量体である；
（４）Ｆｖ、これは、２つの鎖として発現された軽鎖の可変領域および重鎖の可変領域を含有する遺伝子操作されたフラグメントとして定義される；および
（５）単鎖抗体（「ＳＣＡ」）、これは、例えば、米国特許第４９４６７７８号に記載されるような遺伝子融合された単鎖分子として、好適なポリペプチドリンカーによって連結された軽鎖の可変領域および重鎖の可変領域を含有する遺伝子操作された分子である。
【００３１】
抗体を作製する様々な方法が当技術分野では周知である。血清免疫グロブリン抗体（ポリクローナル抗血清）またはその反応性部分の精製を、当業者に既知である様々な方法によって達成することができ、そのような方法には、硫酸アンモニウムまたは硫酸ナトリウムによる沈殿化、それに続く、生理的食塩水に対する透析、イオン交換クロマトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィーまたは免疫アフィニティークロマトグラフィー、ならびに、ゲルろ過、ゾーン電気泳動などが含まれる（Ｇｏｄｉｎｇ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（第２版、１０４頁〜１２６頁、１９８６年、Ｏｒｌａｎｄ、Ｆｌａ．、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）を参照のこと）。正常な生理学的条件のもとでは、様々な抗体が、血漿および他の体液、ならびに、特定の細胞の膜において見出され、また、Ｂ細胞として示されるタイプのリンパ球またはその機能的等価体によって産生される。ＩｇＧクラスの抗体は、ジスルフィド結合によって連結された４つのポリペプチド鎖から構成される。無傷のＩｇＧ分子の４つの鎖は、Ｈ鎖と呼ばれる２つの同一の重鎖、および、Ｌ鎖と呼ばれる２つの同一の軽鎖である。さらなるクラスには、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＡ、ＩｇＭおよび関連したタンパク質が含まれる。
【００３２】
モノクローナル抗体を作製および単離する様々な方法が、例えば、総説（例えば、ＴｒａｍｏｎｔａｎｏおよびＳｃｈｌｏｅｄｅｒ、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ、１７８、５５１〜５６８、１９８９など）において要約されるように、当技術分野では周知である。組換えスカベンジャー受容体ポリペプチドを、抗体をインビトロで作製するために使用することができる（下記の実施例の節の実施例６を参照のこと）。一般には、好適な宿主動物が組換えポリペプチドにより免疫化される。好都合には、使用される動物宿主は同系交配系統のマウスである。動物は、典型的には、生理学的に許容され得るビヒクルにおける組換えポリペプチドの溶液と、免疫原に対する強化された免疫応答を達成する任意の好適なアジュバントとを含む混合物により免疫化される。例としては、一次免疫化を組換えポリペプチドの溶液とフロイント完全アジュバントとの混合物を用いて好都合に達成することができ、この場合、この混合物は油中水型エマルションの形態で調製される。典型的には、免疫化は、筋肉内、皮内、皮下、腹腔内、足蹠内、または、任意の適切な投与経路によって動物に施される。免疫原の免疫化スケジュールは、必要に応じて適合化することができるが、常法的には、より穏和なアジュバント（例えば、フロイント不完全アジュバントなど）を使用する数回にわたる免疫化または二次免疫化を伴う。抗体力価、および、ポリペプチドに対する結合の特異性を任意の好都合な方法（これには、例として、放射免疫アッセイまたは酵素結合免疫吸着アッセイ（これはＥＬＩＳＡアッセイとして知られている）が含まれる）によって免疫化スケジュールの期間中に明らかにすることができる。好適な抗体力価が達成されるとき、免疫化された動物に由来する様々な抗体産生リンパ球が得られ、これらは、当技術分野では知られているように、培養、選抜され、クローン化される。典型的には、リンパ球を、免疫化された動物の脾臓から多数の数で得ることができ、しかし、リンパ球はまた、循環、リンパ節または他のリンパ系器官からも回収することができる。その後、リンパ球は、当技術分野では周知であるように、ハイブリドーマを得るために、任意の好適なミエローマ細胞株と融合される。あるいは、リンパ球はまた、培養で成長するように刺激することができ、その後、確立されているプロトコルに従って、当技術分野で知られている方法（これには、これらのリンパ球を、ウイルス、化学物質または核酸（例えば、ガン遺伝子など）にさらすことが含まれる）によって不死化することができる。融合後、ハイブリドーマは、好適な培養条件のもと、例えば、マルチウエルプレートで培養され、培養上清が、選ばれたハプテンを認識する抗体を含有する培養物を特定するためにスクリーニングされる。組換えポリペプチドを認識する抗体を分泌するハイブリドーマが限界希釈によってクローン化され、適切な培養条件のもとで拡大培養される。モノクローナル抗体が精製され、免疫グロブリンタイプおよび結合親和性に関して特徴づけされる。
【００３３】
本発明による抗体フラグメントは、抗体のタンパク質分解的加水分解によって、あるいは、フラグメントをコードするＤＮＡの大腸菌細胞または哺乳動物細胞（例えば、チャイニーズハムスター卵巣細胞培養または他のタンパク質発現システム）における発現によって調製することができる。
【００３４】
抗体フラグメントは、従来の方法による全長抗体のペプシン消化またはパパイン消化によって得ることができる。例えば、抗体フラグメントを、Ｆ（ａｂ’）２と呼ばれる５Ｓフラグメントを提供するためにペプシンによる抗体の酵素的切断によって製造することができる。このフラグメントはさらに、チオール還元剤、および、場合により、ジスルフィド連結の切断から生じるスルフヒドリル基のための保護基を使用してさらに切断して、３．５ＳのＦａｂ’一価フラグメントを生じさせることができる。あるいは、ペプシンを使用する酵素的切断により、２つの一価のＦａｂ’フラグメントと、１つのＦｃフラグメントとが直接に生じる。これらの方法が、例えば、Ｇｏｌｄｅｎｂｅｒｇの米国特許第４０３６９４５号および同第４３３１６４７号、ならびに、それらに含まれる参考文献に記載される（これらの特許は本明細書によりその全体が参考として組み込まれる）。Ｐｏｒｔｅｒ，Ｒ．Ｒ．［Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．、７３：１１９〜１２６（１９５９）］もまた参照のこと。フラグメントが、無傷の抗体によって認識される抗原に結合する限り、抗体を切断する他の方法、例えば、一価の軽鎖−重鎖フラグメントを形成するための重鎖の分離、フラグメントのさらなる切断、あるいは、他の酵素的技術、化学的技術または遺伝学的技術などもまた使用することができる。
【００３５】
ＦｖフラグメントはＶＨ鎖およびＶＬ鎖の会合を含む。この会合は、Ｉｎｂａｒ他［Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、６９：２６５９〜６２（１９７２）］に記載されるように非共有結合性である場合がある。あるいは、可変鎖を分子間ジスルフィド結合によって連結することができ、または、化学試薬（例えば、グルタルアルデヒドなど）によって架橋することができる。好ましくは、Ｆｖフラグメントは、ペプチドリンカーによってつながれたＶＨ鎖およびＶＬ鎖を含む。このような単鎖の抗原結合タンパク質（ｓｃＦｖ）は、オリゴヌクレオチドによってつながれたＶＨドメインおよびＶＬドメインをコードするＤＮＡ配列を含む構造遺伝子を構築することによって調製される。そのような構造遺伝子は発現ベクターに挿入され、続いて、発現ベクターが宿主細胞（例えば、大腸菌など）に導入される。組換え宿主細胞により、リンカーペプチドが２つのＶドメインを架橋する単一ポリペプチド鎖が合成される。ｓｃＦｖを製造する方法が、例えば、ＷｈｉｔｌｏｗおよびＦｉｌｐｕｌａ、Ｍｅｔｈｏｄｓ、２：９７〜１０５（１９９１）；Ｂｉｒｄ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２：４２３〜４２６（１９８８）；Ｐａｃｋ他、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１１：１２７１〜７７（１９９３）；およびＬａｄｎｅｒ他、米国特許第４９４６７７８号によって記載される（これらの全ては本明細書によりその全体が参考として組み込まれる）。
抗体フラグメントの別の形態は、単一の相補性決定領域（ＣＤＲ）をコードするペプチドである。様々なＣＤＲペプチド（「最小認識ユニット」）を、目的とする抗体のＣＤＲをコードする遺伝子を構築することによって得ることができる。そのような遺伝子は、例えば、可変領域を抗体産生細胞のＲＮＡから合成するためにポリメラーゼ連鎖反応を使用して調製される。例えば、ＬａｒｒｉｃｋおよびＦｒｙ［Ｍｅｔｈｏｄｓ、２：１０６〜１０（１９９１）］を参照のこと。
【００３６】
非ヒト（例えば、マウス）抗体のヒト化形態は、非ヒト免疫グロブリンに由来する最小限の配列を含有する、免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖またはそのフラグメント（例えば、抗体のＦｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２または他の抗原結合性の部分配列など）のキメラ分子である。ヒト化抗体には、レシピエント抗体の相補性決定領域（ＣＤＲ）からの残基が、所望する特異性、親和性および能力を有する例えば、マウス、ラット、ウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲからの残基によって置換されるヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）が含まれる。いくつかの場合において、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク残基が、対応する非ヒト残基によって置換される。ヒト化抗体はまた、レシピエント抗体において、または、移入されたＣＤＲ配列もしくはフレームワーク配列においてそれらのいずれにも見出されない残基を含む場合がある。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、かつ、フレームワーク領域（ＦＲ）のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のフレームワーク領域である少なくとも１つ（典型的には２つ）の可変ドメインの実質的にすべてを含む。ヒト化抗体はまた、場合により、免疫グロブリンの定常領域（Ｆｃ）の一部分を少なくとも含み、典型的には、ヒト免疫グロブリンのそのような一部分を少なくとも含む［Ｊｏｎｅｓ他、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２〜５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ他、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３〜３２９（１９８８）；およびＰｒｅｓｔａ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．、２：５９３〜５９６（１９９２）］。
【００３７】
非ヒト抗体をヒト化するための様々な方法が当該分野で周知である（実施例節の実施例６もまた参照のこと）。一般に、ヒト化抗体は、非ヒトである供給源からヒト化抗体に導入された１つ以上のアミノ酸残基を有する。これらの非ヒトアミノ酸残基は、多くの場合、インポート残基と呼ばれ、そのようなインポート残基は、典型的には、インポート可変ドメインから選ばれる。ヒト化は本質的には、齧歯類のＣＤＲまたはＣＤＲ配列をヒト抗体の対応する配列の代わりに使用することによって、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者らの方法に従って行うことができる［Ｊｏｎｅｓ他、Ｎａｔｕｒｅ、３２１：５２２〜５２５（１９８６）；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ他、Ｎａｔｕｒｅ、３３２：３２３〜３２７（１９８８）；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎ他、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２３９：１５３４〜１５３６（１９８８）］。従って、そのようなヒト化抗体は、無傷のヒト可変ドメインの実質的に一部が非ヒト種由来の対応する配列によって置換されているキメラ抗体である（米国特許第４８１６５６７号）。実際には、ヒト化抗体は典型的には、一部のＣＤＲ残基と、可能であれば、一部のＦＲ残基とが、齧歯類抗体における類似部位に由来する残基によって置換されるヒト抗体である。
【００３８】
ヒト抗体はまた、当該技術分野で既知の様々な技術を使用して製造することができ、そのような技術には、ファージ呈示ライブラリー［ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１（１９９１）；Ｍａｒｋｓ他、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１（１９９１）］が含まれる。Ｃｏｌｅ他およびＢｏｅｒｎｅｒ他の技術もまた、ヒトモノクローナル抗体の調製のために利用することができる（Ｃｏｌｅ他、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ、７７頁（１９８５）；およびＢｏｅｒｎｅｒ他、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７（１）：８６〜９５（１９９１））。同様に、ヒトモノクローナル抗体は、ヒト免疫グロブリンの遺伝子座をトランスジェニック動物（例えば、内因性の免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活性化されているマウス）に導入することによって作製することができる。抗原による攻撃を受けたとき、ヒト抗体の産生が認められ、これは、遺伝子再配置、組み立ておよび抗体レパートリーを含めて、すべての点でヒトにおいて見られ得る抗体産生と非常に類似する。この方法が、例えば、米国特許第５５４５８０７号、同第５５４５８０６号、同第５５６９８２５号、同第５６２５１２６号、同第５６３３４２５号および同第５６６１０１６号において、また、下記の科学的刊行物において記載される：Ｍａｒｋｓ他、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１０；７７９〜７８３（１９９２）；Ｌｏｎｂｅｒｇ他、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：８５６〜８５９（１９９４）；Ｍｏｒｒｉｓｏｎ、Ｎａｔｕｒｅ、３６８：８１２〜１３（１９９４）；Ｆｉｓｈｗｉｌｄ他、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４、８４５〜５１（１９９６）；Ｎｅｕｂｅｒｇｅｒ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４：８２６（１９９６）；ＬｏｎｂｅｒｇおよびＨｕｓｚａｒ、Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１３、６５〜９３（１９９５）。
【００３９】
本発明の抗体は、例えば、配列番号１２、配列番号１６、配列番号２０、配列番号２４、配列番号２８および配列番号３２に示されるような核酸配列を含む単離されたポリヌクレオチドからコードされ得る。
【００４０】
本発明のポリペプチドは、当技術分野で周知であり、また、Ｊｏｈｎ  Ｍｏｒｒｏｗ  ＳｔｅｗａｒｔおよびＪａｎｉｓ  Ｄｉｌｌａｈａ  Ｙｏｕｎｇ、Ｓｏｌｉｄ  Ｐｈａｓｅ  Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｅｓ（第２版、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏｍｐａｎｙ、１９８４）によってさらに記載される固相ペプチド合成手法を使用して合成することができる。合成ペプチドは、調製用高速液体クロマトグラフィーによって精製することができ［Ｃｒｅｉｇｈｔｏｎ  Ｔ．（１９８３）、Ｐｒｏｔｅｉｎｓ，ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ、ＷＨ  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．、Ｎ．Ｙ．］、また、その組成をアミノ酸配列決定により確認することができる。
【００４１】
多量のポリペプチドが所望される場合、多量のポリペプチドは、様々な組換え技術を使用して、例えば、Ｂｉｔｔｅｒ他（１９８７）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１５３：５１６〜５４４；Ｓｔｕｄｉｅｒ他（１９９０）、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１８５：６０〜８９；Ｂｒｉｓｓｏｎ他（１９８４）、Ｎａｔｕｒｅ  ３１０：５１１〜５１４；Ｔａｋａｍａｔｓｕ他（１９８７）、ＥＭＢＯ  Ｊ．、６：３０７〜３１１；Ｃｏｒｕｚｚｉ他（１９８４）、ＥＭＢＯ  Ｊ．、１６７１〜１６８０；Ｂｒｏｇｌｉ他（１９８４）、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２２４：８３８〜８４３；Ｇｕｒｌｅｙ他（１９８６）、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．、６：５５９〜５６５；Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ＆Ｗｅｉｓｓｂａｃｈ、１９８８、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｐｌａｎｔ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、ＮＹ、第ＶＩＩＩ節、４２１頁〜４６３頁などに記載される組換え技術を使用して作製することができる。
【００４２】
述べられたように、本発明のポリペプチド（本明細書中では薬剤とも呼ばれる）は、炎症性応答（すなわち、炎症）を対象において軽減または治療するために使用することができる。
【００４３】
本明細書中で使用される用語「治療する（処置する）」は、炎症性応答の有害な影響を防止し、治療し、逆戻りさせ、弱め、緩和し、最小限に抑え、抑制し、または、停止させることを示す。
【００４４】
本明細書中で使用される表現「炎症性応答」は、典型的には傷害性の刺激（これには、感染、火傷、外傷、新生組織形成、自己免疫シグナル、ならびに、化学物質、高温または低温、あるいは、任意の他の有害な刺激に対する暴露が含まれる）の結果として生じる炎症をもたらす免疫応答を示す。本発明による炎症性応答は急性期応答および慢性的炎症を示す。
【００４５】
本明細書中で使用される用語「対象」は、本発明から利益を受けることができる対象、例えば、哺乳動物（例えば、イヌ、ネコ、ヒツジ、ブタ、ウマ、ウシ、ヒト）などを示し、好ましくはヒト対象を示す。
【００４６】
本発明のこの態様の方法は、その必要性のある対象に本発明のポリペプチドの治療効果的な量を投与し、それにより、対象における炎症性応答を軽減することによって行われる。
【００４７】
本明細書中で使用される「スカベンジャー受容体」は、当技術分野で既知であるスカベンジャー受容体の遺伝子産物（すなわち、ＲＮＡまたはタンパク質）を示す。スカベンジャー受容体の例には、クラスＡスカベンジャー受容体、クラスＢスカベンジャー受容体およびクラスＦスカベンジャー受容体が挙げられるが、これらに限定されない。スカベンジャー受容体は、好ましくは、マクロファージによって発現および呈示される受容体である。好ましくは、本発明のスカベンジャー受容体はＳＲ−ＢＩ（ＣＤ３６ファミリーのメンバー、ＧｅｎＢａｎｋアクセション番号ＮＰ＿００５４９６）である（ＣＬＡ−ＩまたはＳＲ−Ｂ１としても知られている）。
【００４８】
スカベンジャー受容体活性は、細胞接着活性、輸送因子活性、アポトーシス活性、脂質代謝活性、シグナル伝達活性、および／または、好ましくは、サイトカイン分泌活性を示す。
【００４９】
スカベンジャー受容体のエフェクターは、スカベンジャー受容体活性をアップレギュレーションまたは活性化する内因性分子を示す。例えば、エフェクターは、スカベンジャー受容体に結合し、スカベンジャー受容体からのシグナル伝達を活性化する修飾された脂質（例えば、酸化された脂質、糖化された脂質、アルキル化された脂質、ニトロ化された脂質、アセチル化された脂質）であることが可能である。
【００５０】
上記で記載された薬剤は、それ自体で、または、薬剤が医薬的に許容され得るキャリアと混合される医薬組成物の一部として対象に与えることができる。
【００５１】
本明細書中で使用される「医薬組成物」は、本明細書中に記載される有効成分の１つまたは複数と、他の化学的成分（例えば、生理学的に好適なキャリアおよび賦形剤など）との調製物を示す。医薬組成物の目的は、生物に対する化合物の投与を容易にすることである。
【００５２】
本明細書中において、用語「有効成分（活性成分）」は、生物学的効果を担う調製物を示す。
【００５３】
以降、交換可能に使用されうる表現「生理学的に許容され得るキャリア」および表現「医薬的に許容され得るキャリア」は、生物に対する著しい刺激を生じさせず、投与された化合物の生物学的な活性および性質を阻害しないキャリアまたは希釈剤を示す。アジュバントはこれらの表現に含まれる。医薬的に許容され得るキャリア中に含まれる成分の１つは、例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、有機媒体および水性媒体の両方における広範囲の溶解度特性を有している生体適合性ポリマーであることができる（Ｍｕｔｔｅｒ他（１９７９））。
【００５４】
本明細書中において、用語「賦形剤」は、有効成分の投与をさらに容易にするために医薬組成物に添加される不活性な物質を示す。賦形剤の非限定的な例には、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、様々な糖およびデンプン、セルロース誘導体、ゼラチン、植物油およびポリエチレングリコールが含まれる。
【００５５】
薬物の配合および投与のための様々な技術が“Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ”（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ、ＰＡ、最新版）に見出され得る（これは参考として本明細書中に組み込まれる）。
【００５６】
好適な投与経路には、例えば、経口送達、直腸送達、経粘膜送達、特に経鼻送達、腸管送達または非経口送達（これには、筋肉内注射、皮下注射および髄内注射、ならびに、クモ膜下注射、直接的な脳室内注射、静脈内注射、腹腔内注射、鼻内注射または眼内注射が含まれる）が含まれ得る。あるいは、例えば、患者の身体の特定領域に直接的に調製物の注射をすることによって、全身的な方法よりも局所的に調製物を投与しうる。
【００５７】
本発明の医薬組成物は、この分野で十分に知られている様々なプロセスによって、例えば、混合、溶解、造粒、糖衣錠作製、研和、乳化、カプセル化、包括化または凍結乾燥の従来のプロセスによって製造することができる。
【００５８】
本発明に従って使用される医薬組成物は、医薬品として使用され得る調製物への有効成分の加工を容易にする賦形剤および補助剤を含む１つまたは複数の生理学的に許容され得るキャリアを使用して従来の様式で配合することできる。適正な配合は、選ばれた投与経路に依存する。
【００５９】
注射の場合、本発明の有効成分は、水溶液において、好ましくは生理学的に適合し得る緩衝液（例えば、ハンクス溶液、リンゲル溶液、または生理学的な生理的食塩緩衝液など）において配合することができる。経粘膜投与の場合、浸透されるバリヤーに対して適切な浸透剤が配合において使用される。そのような浸透剤はこの分野では一般に知られている。
【００６０】
経口投与の場合、化合物は、活性化合物をこの分野で広く知られている医薬的に許容され得るキャリアと組み合わせることによって容易に配合され得る。そのようなキャリアは、本発明の化合物が、患者によって経口摂取される錠剤、ピル、糖衣錠、カプセル、液剤、ゲル、シロップ、スラリー剤および懸濁物などとして配合されることを可能にする。経口使用される薬理学的調製物は、固体の賦形剤を使用し、得られた混合物を場合により粉砕し、錠剤または糖衣錠コアを得るために、所望する場合には好適な補助剤を添加した後、顆粒の混合物を加工して、作製することができる。好適な賦形剤には、特に、ラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトールを含む糖などの充填剤；セルロース調製物、例えば、トウモロコシデンプン、コムギデンプン、コメデンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウムカルボメチルセルロースなど；および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの生理学的に許容され得るポリマーがある。所望する場合には、架橋されたポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩（例えば、アルギン酸ナトリウムなど）などの崩壊剤を加えることができる。
【００６１】
糖衣錠コアには、好適なコーティングが施される。この目的のために、高濃度の糖溶液を使用することができ、この場合、糖溶液は、場合により、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、二酸化チタン、ラッカー溶液および好適な有機溶媒または溶媒混合物を含有し得る。色素または顔料を、活性化合物の量を明らかにするために、または活性化合物の量の種々の組合せを特徴づけるために、錠剤または糖衣錠コーティングに加えることができる。
【００６２】
経口使用され得る医薬組成物には、ゼラチンから作製されたプッシュ・フィット型カプセル、ならびに、ゼラチンおよび可塑剤（例えば、グリセロールまたはソルビトールなど）から作製された軟いシールされたカプセルが含まれる。プッシュ・フィット型カプセルは、充填剤（例えば、ラクトースなど）、結合剤（例えば、デンプンなど）、滑剤（例えば、タルクまたはステアリン酸マグネシウムなど）および場合により安定化剤との混合で有効成分を含有することができる。軟カプセルでは、有効成分を好適な液体（例えば、脂肪油、流動パラフィンまたは液状のポリエチレングリコールなど）に溶解または懸濁させることができる。また、安定化剤を加えることができる。経口投与される配合物はすべて、選ばれた投与経路について好適な投薬形態でなければならない。
【００６３】
口内投与の場合、組成物は、従来の様式で配合された錠剤またはトローチの形態を取ることができる。
【００６４】
鼻吸入による投与の場合、本発明による使用のための有効成分は、好適な噴射剤（例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタンまたは二酸化炭素）の使用により加圧パックまたはネブライザーからのエアロゾルスプレー提示物の形態で都合よく送達される。加圧されたエアロゾルの場合、投薬量単位が、計量された量を送達するためのバルブを備えることによって決定され得る。ディスペンサーにおいて使用される、例えば、ゼラチン製のカプセルおよびカートリッジで、化合物および好適な粉末基剤（例えば、ラクトースまたはデンプンなど）の粉末混合物を含有するカプセルおよびカートリッジを配合することができる。本明細書中に記載される調製物は、例えば、ボーラス注射または連続注入による非経口投与のために配合することができる。注射用配合物は、場合により保存剤が添加された、例えば、アンプルまたは多回用量容器における単位投薬形態で提供され得る。組成物は、油性ビヒクルまたは水性ビヒクルにおける懸濁物または溶液剤またはエマルションにすることができ、また、懸濁化剤、安定化剤および／または分散化剤などの配合剤を含有することができる。
【００６５】
非経口投与される医薬組成物には、水溶性形態での活性調製物の水溶液が含まれる。また、有効成分の懸濁物を適切な油性または水性の注射用懸濁物として調製することができる。好適な親油性の溶媒またはビヒクルには、脂肪油（例えば、ゴマ油など）、または合成脂肪酸エステル（例えば、オレイン酸エチルなど）、トリグリセリドまたはリポソームが含まれる。水性の注射用懸濁物は、懸濁物の粘度を増大させる物質、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ソルビトールまたはデキストランなどを含有することができる。場合により、懸濁物はまた、高濃度溶液の調製を可能にするために有効成分の溶解性を増大させる好適な安定化剤または薬剤を含有することができる。
【００６６】
あるいは、有効成分は、好適なビヒクル（例えば、無菌の、パイロジェン非含有水溶液）を使用前に用いて構成される粉末形態にすることができる。本発明の調製物はまた、例えば、カカオ脂または他のグリセリドなどの従来の座薬基剤を使用して、座薬または停留浣腸剤などの直腸用組成物に配合することができる。
【００６７】
本発明に関連した使用のために好適な医薬組成物には、有効成分が、その意図された目的を達成するために効果的な量で含有される組成物が含まれる。より具体的には、治療効果的な量は、治療されている対象の病状を予防、緩和あるいは改善するために効果的であるか、または、治療されている対象の生存を延ばすために効果的である、有効成分の量を意味する。治療効果的な量の決定は、十分に当業者の能力の範囲内である。
【００６８】
本発明の方法において使用される任意の調製物について、治療効果的な量または用量は、最初はインビトロでアッセイおよび細胞培養アッセイから推定することができる。例えば、用量は動物モデルにおいて配合することが可能であり、そのような情報は、ヒトにおける有用な用量をより正確に決定するために使用することができる。
【００６９】
本明細書中に記載される有効成分の毒性および治療効力は、細胞培養または実験動物における、インビトロで標準的な薬学的手法によって、明らかにすることができる。これらのインビトロでの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られたデータは、ヒトにおける使用に対する投薬量範囲を決定するために使用することができる。投薬量は、用いられる投薬形態および利用される投与経路に依存して変化し得る。正確な配合、投与経路および投薬量は、患者の状態を考慮して個々の医師によって選ぶことができる（Ｆｉｎｇｌ他、（１９７５）「Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ」，Ｃｈ．１ｐ．１参照）。
【００７０】
処置される状態の重篤度および応答性に依存して、投薬は、単回または複数回投与で行うことができ、この場合、処置期間は、数日から数週間まで、または治療が達成されるまで、または疾患状態の軽減が達成されるまで続く。
【００７１】
投与される組成物の量は、当然のことではあるが、処置されている患者、苦痛の重篤度、投与様式、処方医の判断などに依存する。
【００７２】
適合し得る医薬用キャリアに配合された本発明の調製物を含む医薬組成物はまた、適切な容器に入れられ、指示される状態の処置のために標識されて調製されることができる。
【００７３】
本発明の組成物は、所望されるならば、有効成分を含有する１つまたは複数の単位投薬形態物を含有し得るパックまたはディスペンサーデバイス（例えば、ＦＤＡ承認キットなど）で提供され得る。パックは、例えば、金属ホイルまたはプラスチックホイルを含むことができる（例えば、ブリスターパックなど）。パックまたはディスペンサーデバイスには、投与のための説明書が付随し得る。パックまたはディスペンサーデバイスはまた、医薬品の製造、使用または販売を規制する政府当局によって定められた形式で、容器に関連した通知によって適応させることがあり、この場合、そのような通知は、組成物の形態、あるいはヒトまたは動物への投与の当局による承認を反映する。そのような通知は、例えば、処方薬物について米国食品医薬品局によって承認されたラベル書きであり得るか、または、承認された製品添付文書であり得る。
【００７４】
典型的に個体において炎症性応答を引き起こす多数の疾患および状態は、上記で述べられた方法を使用して治療されることができる。このような疾患および状態を下記に要約する。
【００７５】
炎症性疾患−これには、慢性の炎症性疾患および急性の炎症性疾患が含まれるが、これらに限定されない。
【００７６】
過敏症に関連する炎症性疾患
過敏症の例には、Ｉ型過敏症、ＩＩ型過敏症、ＩＩＩ型過敏症、ＩＶ型過敏症、即時過敏症、抗体媒介過敏症、免疫複合体媒介過敏症、Ｔリンパ球媒介過敏症およびＤＴＨが含まれるが、これらに限定されない。
【００７７】
Ｉ型過敏症または即時過敏症、例えば、喘息など。
【００７８】
ＩＩ型過敏症には、下記の疾患が含まれるが、それらに限定されない：リウマチ様疾患、リウマチ様自己免疫疾患、リウマチ様関節炎（Ｋｒｅｎｎ  Ｖ．他、Ｈｉｓｔｏｌ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ、２０００（Ｊｕｌ）、１５（３）：７９１）、脊椎炎、強直性脊椎炎（Ｊａｎ  Ｖｏｓｗｉｎｋｅｌ他、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ、２００１、３（３）：１８９）、全身性疾患、全身性自己免疫疾患、全身性エリテマトーデス（Ｅｒｉｋｓｏｎ  Ｊ．他、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ、１９９８、１７（１−２）：４９）、硬化症、全身性硬化症（Ｒｅｎａｕｄｉｎｅａｕ  Ｙ．他、Ｃｌｉｎ  Ｄｉａｇｎ  Ｌａｂ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９９（Ｍａｒ）、６（２）：１５６）；Ｃｈａｎ  ＯＴ．他、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ、１９９９（Ｊｕｎ）、１６９：１０７）、腺疾患、腺の自己免疫疾患、膵臓の自己免疫疾患、糖尿病、Ｉ型糖尿病（Ｚｉｍｍｅｔ  Ｐ．、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｓ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒａｃｔ、１９９６（Ｏｃｔ）、３４  Ｓｕｐｐｌ：Ｓ１２５）、甲状腺疾患、自己免疫性甲状腺疾患、グレーヴス病（Ｏｒｇｉａｚｚｉ  Ｊ．、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ、２０００（Ｊｕｎ）、２９（２）：３３９）、甲状腺炎、自発性自己免疫性甲状腺炎（Ｂｒａｌｅｙ−Ｍｕｌｌｅｎ  Ｈ．およびＹｕ  Ｓ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０００（Ｄｅｃ  １５）、１６５（１２）：７２６２）、橋本甲状腺炎（Ｔｏｙｏｄａ  Ｎ．他、Ｎｉｐｐｏｎ  Ｒｉｎｓｈｏ、１９９９（Ａｕｇ）、５７（８）：１８１０）、粘液水腫、特発性粘液水腫（Ｍｉｔｓｕｍａ  Ｔ．、Ｎｉｐｐｏｎ  Ｒｉｎｓｈｏ、１９９９（Ａｕｇ）、５７（８）：１７５９）、自己免疫性生殖疾患、卵巣疾患、卵巣の自己免疫性（Ｇａｒｚａ  ＫＭ．他、Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９８（Ｆｅｂ）、３７（２）：８７）、自己免疫性抗精子不妊症（Ｄｉｅｋｍａｎ  ＡＢ．他、Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０００（Ｍａｒ）、４３（３）：１３４）、反復した胎児消失（Ｔｉｎｃａｎｉ  Ａ．他、Ｌｕｐｕｓ、１９９８、７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１０７−９）、神経変性疾患、神経学的疾患、神経学的自己免疫疾患、多発性硬化症（Ｃｒｏｓｓ  ＡＨ．他、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ、２００１（Ｊａｎ  １）、１１２（１−２）：１）、アルツハイマー病（Ｏｒｏｎ  Ｌ．他、Ｊ  Ｎｅｕｒａｌ  Ｔｒａｎｓｍ  Ｓｕｐｐｌ、１９９７；４９：７７）、重症筋無力症（Ｉｎｆａｎｔｅ  ＡＪ．およびＫｒａｉｇ  Ｅ、Ｉｎｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９９、１８（１−２）：８３）、運動神経障害（Ｋｏｒｎｂｅｒｇ  ＡＪ．、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、２０００（Ｍａｙ）、７（３）：１９１）、ギラン・バレー症候群、神経障害および自己免疫性神経障害（Ｋｕｓｕｎｏｋｉ  Ｓ．、Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ、２０００（Ａｐｒ）、３１９（４）：２３４）、筋無力症疾患、ランバード・イートン筋無力症症候群（Ｔａｋａｍｏｒｉ  Ｍ．、Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ、２０００（Ａｐｒ）、３１９（４）：２０４）、腫瘍随伴性神経学的疾患、小脳萎縮症、腫瘍随伴性小脳萎縮症、腫瘍非随伴性スティッフマン症候群、小脳萎縮症、進行性小脳萎縮症、脳炎、ラスムッセン脳炎、筋萎縮性側索��化症、シドナム舞踏病、ジル・ド・ラ・ツレット症候群、多発性内分泌腺症、自己免疫性多発性内分泌腺症（Ａｎｔｏｉｎｅ  ＪＣ．およびＨｏｎｎｏｒａｔ  Ｊ．、Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｌ（Ｐａｒｉｓ）、２０００（Ｊａｎ）、１５６（１）：２３）、神経障害、異常免疫性神経障害（Ｎｏｂｉｌｅ−Ｏｒａｚｉｏ  Ｅ．他、Ｅｌｅｃｔｒｏｅｎｃｅｐｈａｌｏｇｒ  Ｃｌｉｎ  Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ  Ｓｕｐｐｌ、１９９９、５０：４１９）；ニューロミオトニー、後天性ニューロミオトニー、先天性多発性関節拘縮症（Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ａ．他、Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ、１９９８（Ｍａｙ  １３）、８４１：４８２）、心臓血管疾患、心臓血管の自己免疫疾患、アテローム性動脈硬化（Ｍａｔｓｕｕｒａ  Ｅ．他、Ｌｕｐｕｓ、１９９８、７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１３５）、心筋梗塞（Ｖａａｒａｌａ  Ｏ．、Ｌｕｐｕｓ、１９９８、７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１３２）、血栓症（Ｔｉｎｃａｎｉ  Ａ．他、Ｌｕｐｕｓ、１９９８、７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１０７〜９）、肉芽腫症、ヴェーゲナー肉芽腫症、動脈炎、高安動脈炎および川崎症候群（Ｐｒａｐｒｏｔｎｉｋ  Ｓ．他、Ｗｉｅｎ  Ｋｌｉｎ  Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ、２０００（Ａｕｇ  ２５）、１１２（１５−１６）：６６０）；抗第ＶＩＩＩ因子の自己免疫疾患（Ｌａｃｒｏｉｘ−Ｄｅｓｍａｚｅｓ  Ｓ．他、Ｓｅｍｉｎ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈｅｍｏｓｔ、２０００、２６（２）：１５７）；血管炎、壊死性小血管血管炎、顕微鏡的多発血管炎、チャーグ・ストラウス症候群、糸球体腎炎、少免疫性巣状壊死性糸球体腎炎、半月体形成性糸球体腎炎（Ｎｏｅｌ  ＬＨ．、Ａｎｎ  Ｍｅｄ  Ｉｎｔｅｒｎｅ（Ｐａｒｉｓ）、２０００（Ｍａｙ）、１５１（３）：１７８）；抗リン脂質症候群（Ｆｌａｍｈｏｌｚ  Ｒ．他、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ａｐｈｅｒｅｓｉｓ、１９９９、１４（４）：１７１）；心不全、心不全におけるアゴニスト様β−アドレナリン作動性受容体抗体（Ｗａｌｌｕｋａｔ  Ｇ．他、Ａｍ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌ、１９９９（Ｊｕｎ  １７）、８３（１２Ａ）：７５Ｈ）、血小板減少性紫斑病（Ｍｏｃｃｉａ  Ｆ．、Ａｎｎ  Ｉｔａｌ  Ｍｅｄ  Ｉｎｔ、１９９９（Ａｐｒ−Ｊｕｎ）、１４（２）：１１４）；溶血性貧血、自己免疫性溶血性貧血（Ｅｆｒｅｍｏｖ  ＤＧ．他、Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ、１９９８（Ｊａｎ）、２８（３−４）：２８５）、胃腸疾患、胃腸管の自己免疫疾患、腸疾患、慢性炎症性腸疾患（Ｇａｒｃｉａ  Ｈｅｒｏｌａ  Ａ．他、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ、２０００（Ｊａｎ）、２３（１）：１６）、セリアック病（Ｌａｎｄａｕ  ＹＥ．およびＳｈｏｅｎｆｅｌｄ  Ｙ．、Ｈａｒｅｆｕａｈ、２０００（Ｊａｎ  １６）、１３８（２）：１２２）、筋組織の自己免疫疾患、筋炎、自己免疫性筋炎、シェーグレン症候群（Ｆｅｉｓｔ  Ｅ．他、Ｉｎｔ  Ａｒｃｈ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０００（Ｓｅｐ）、１２３（１）：９２）；平滑筋の自己免疫疾患（Ｚａｕｌｉ  Ｄ．他、Ｂｉｏｍｅｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ、１９９９（Ｊｕｎ）、５３（５−６）：２３４）、肝疾患、肝臓の自己免疫疾患、自己免疫性肝炎（Ｍａｎｎｓ  ＭＰ．、Ｊ  Ｈｅｐａｔｏｌ、２０００（Ａｕｇ）、３３（２）：３２６）��よび原発性胆汁性肝硬変（Ｓｔｒａｓｓｂｕｒｇ  ＣＰ．他、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ、１９９９（Ｊｕｎ）、１１（６）：５９５）。
【００７９】
ＩＶ型過敏症またはＴ細胞媒介過敏症には、下記の疾患が含まれるが、それらに限定されない：リウマチ様疾患、リウマチ様関節炎（Ｔｉｓｃｈ  Ｒ、ＭｃＤｅｖｉｔｔ  ＨＯ、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、１９９４（Ｊａｎ  １８）、９１（２）：４３７）、全身性疾患、全身性自己免疫疾患、全身性エリテマトーデス（Ｄａｔｔａ  ＳＫ．、Ｌｕｐｕｓ、１９９８、７（９）：５９１）、腺疾患、腺の自己免疫疾患、膵臓疾患、膵臓の自己免疫疾患、Ｉ型糖尿病（Ｃａｓｔａｎｏ  Ｌ．およびＥｉｓｅｎｂａｒｔｈ  ＧＳ．、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、８：６４７）、甲状腺疾患、自己免疫性甲状腺疾患、グレーヴス病（Ｓａｋａｔａ  Ｓ．他、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、１９９３（Ｍａｒ）、９２（１）：７７）、卵巣疾患（Ｇａｒｚａ  ＫＭ．他、Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９８（Ｆｅｂ）、３７（２）：８７）、前立腺炎、自己免疫性前立腺炎（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  ＲＢ．他、Ｕｒｏｌｏｇｙ、１９９７（Ｄｅｃ）、５０（６）：８９３）、多腺性症候群、自己免疫性多腺性症候群、Ｉ型自己免疫性多腺性症候群（Ｈａｒａ  Ｔ．他、Ｂｌｏｏｄ、１９９１（Ｍａｒ  １）、７７（５）：１１２７）、神経学的疾患、自己免疫性神経学的疾患、多発性硬化症、神経炎、視神経炎（Ｓｏｄｅｒｓｔｒｏｍ  Ｍ．他、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ、１９９４（Ｍａｙ）、５７（５）：５４４）、重症筋無力症（Ｏｓｈｉｍａ  Ｍ．他、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９０（Ｄｅｃ）、２０（１２）：２５６３）、スティッフマン症候群（Ｈｉｅｍｓｔｒａ  ＨＳ．他、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ、２００１（Ｍａｒ  ２７）、９８（７）：３９８８）、心臓血管疾患、シャガス病における心臓の自己免疫性（Ｃｕｎｈａ−Ｎｅｔｏ  Ｅ．他、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ、１９９６（Ｏｃｔ  １５）、９８（８）：１７０９）、自己免疫性血小板減少性紫斑病（Ｓｅｍｐｌｅ  ＪＷ．他、Ｂｌｏｏｄ、１９９６（Ｍａｙ  １５）、８７（１０）：４２４５）、抗ヘルパーＴリンパ球自己免疫性（Ｃａｐｏｒｏｓｓｉ  ＡＰ．他、Ｖｉｒａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９８、１１（１）：９）、溶血性貧血（Ｓａｌｌａｈ  Ｓ．他、Ａｎｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ、１９９７（Ｍａｒ）、７４（３）：１３９）、肝疾患、肝臓の自己免疫疾患、肝炎、慢性活動性肝炎（Ｆｒａｎｃｏ  Ａ．他、Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ、１９９０（Ｍａｒ）、５４（３）：３８２）、胆汁性肝硬変、原発性胆汁性肝硬変（Ｊｏｎｅｓ  ＤＥ．、Ｃｌｉｎ  Ｓｃｉ（Ｃｏｌｃｈ）、１９９６（Ｎｏｖ）、９１（５）：５５１）、腎疾患、腎臓の自己免疫疾患、腎炎、間質性腎炎（Ｋｅｌｌｙ  ＣＪ．、Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ、１９９０（Ａｕｇ）、１（２）：１４０）、結合組織疾患、耳疾患、自己免疫性結合組織疾患、自己免疫性耳疾患（Ｙｏｏ  ＴＪ．他、Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９４（Ａｕｇ）、１５７（１）：２４９）、内耳の疾患（Ｇｌｏｄｄｅｋ  Ｂ．他、Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ、１９９７（Ｄｅｃ  ２９）、８３０：２６６）、皮膚疾患、皮膚病、皮膚の疾患、水疱性皮膚疾患、尋常性天��瘡、水疱性類天疱瘡および落葉状天疱瘡。
【００８０】
遅発型過敏症の例には、接触性皮膚炎および薬疹が含まれるが、これらに限定されない。
【００８１】
様々なタイプのＴリンパ球媒介過敏症の例には、ヘルパーＴリンパ球および細胞障害性Ｔリンパ球が含まれるが、これらに限定されない。
【００８２】
ヘルパーＴリンパ球媒介過敏症の例には、Ｔｈ１リンパ球媒介過敏症およびＴｈ２リンパ球媒介過敏症が含まれるが、これらに限定されない。
【００８３】
自己免疫疾患
これには、心臓血管疾患、リウマチ様疾患、腺疾患、胃腸疾患、皮膚疾患、肝疾患、神経学的疾患、筋疾患、腎疾患、生殖関連疾患、結合組織疾患および全身性疾患が含まれるが、これらに限定されない。
【００８４】
自己免疫性による心臓血管疾患の例には、アテローム性動脈硬化（Ｍａｔｓｕｕｒａ  Ｅ他、Ｌｕｐｕｓ、１９９８、７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１３５）、心筋梗塞（Ｖａａｒａｌａ  Ｏ、Ｌｕｐｕｓ、１９９８、７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１３２）、血栓症（Ｔｉｎｃａｎｉ  Ａ他、Ｌｕｐｕｓ、１９９８、７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１０７〜９）、ヴェーゲナー肉芽腫症、高安動脈炎および川崎症候群（Ｐｒａｐｒｏｔｎｉｋ  Ｓ他、Ｗｉｅｎ  Ｋｌｉｎ  Ｗｏｃｈｅｎｓｃｈｒ、２０００（Ａｕｇ  ２５）、１１２（１５−１６）：６６０）、抗第ＶＩＩＩ因子による自己免疫疾患（Ｌａｃｒｏｉｘ−Ｄｅｓｍａｚｅｓ  Ｓ他、Ｓｅｍｉｎ  Ｔｈｒｏｍｂ  Ｈｅｍｏｓｔ、２０００、２６（２）：１５７）、壊死性小血管血管炎、顕微鏡的多発血管炎、チャーグ・ストラウス症候群、少免疫性巣状壊死性糸球体腎炎および半月体形成性糸球体腎炎（Ｎｏｅｌ  ＬＨ、Ａｎｎ  Ｍｅｄ  Ｉｎｔｅｒｎｅ（Ｐａｒｉｓ）、２０００（Ｍａｙ）、１５１（３）：１７８）、抗リン脂質症候群（Ｆｌａｍｈｏｌｚ  Ｒ他、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ａｐｈｅｒｅｓｉｓ、１９９９、１４（４）：１７１）、抗体誘導の心不全（Ｗａｌｌｕｋａｔ  Ｇ他、Ａｍ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌ、１９９９（Ｊｕｎ  １７）、８３（１２Ａ）：７５Ｈ）、血小板減少性紫斑病（Ｍｏｃｃｉａ  Ｆ、Ａｎｎ  Ｉｔａｌ  Ｍｅｄ  Ｉｎｔ、１９９９（Ａｐｒ−Ｊｕｎ）、１４（２）：１１４；Ｓｅｍｐｌｅ  ＪＷ他、Ｂｌｏｏｄ、１９９６（Ｍａｙ  １５）、８７（１０）：４２４５）、自己免疫性溶血性貧血（Ｅｆｒｅｍｏｖ  ＤＧ他、Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ、１９９８（Ｊａｎ）、２８（３−４）：２８５；Ｓａｌｌａｈ  Ｓ他、Ａｎｎ  Ｈｅｍａｔｏｌ、１９９７（Ｍａｒ）、７４（３）：１３９）、シャガス病における心臓の自己免疫性（Ｃｕｎｈａ−Ｎｅｔｏ  Ｅ他、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ、１９９６（Ｏｃｔ  １５）、９８（８）：１７０９）、および、抗ヘルパーＴリンパ球による自己免疫性（Ｃａｐｏｒｏｓｓｉ  ＡＰ他、Ｖｉｒａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９８、１１（１）：９）が含まれるが、これらに限定されない。
【００８５】
自己免疫によるリウマチ様疾患の例には、リウマチ様関節炎（Ｋｒｅｎｎ  Ｖ他、Ｈｉｓｔｏｌ  Ｈｉｓｔｏｐａｔｈｏｌ、２０００（Ｊｕｌ）、１５（３）：７９１；Ｔｉｓｃｈ  Ｒ、ＭｃＤｅｖｉｔｔ  ＨＯ、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ｕｎｉｔｓ  Ｓ  Ａ、１９９４（Ｊａｎ  １８）、９１（２）：４３７）および強直性脊椎炎（Ｊａｎ  Ｖｏｓｗｉｎｋｅｌ他、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ、２００１、３（３）：１８９）が含まれるが、これらに限定されない。
【００８６】
自己免疫による腺疾患の例には、膵臓疾患、Ｉ型糖尿病、甲状腺疾患、グレーヴス病、甲状腺炎、突発性自己免疫性甲状腺炎、橋本甲状腺炎、特発性粘液水腫、卵巣の自己免疫性、自己免疫性抗精子不妊症、自己免疫性前立腺炎およびＩ型自己免疫性多腺性症候群が含まれるが、これらに限定されない。疾患には、膵臓の自己免疫疾患、Ｉ型糖尿病（Ｃａｓｔａｎｏ  ＬおよびＥｉｓｅｎｂａｒｔｈ  ＧＳ、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、８：６４７；Ｚｉｍｍｅｔ  Ｐ、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｒｅｓ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒａｃｔ、１９９６（Ｏｃｔ）、３４  Ｓｕｐｐｌ：Ｓ１２５）、自己免疫性甲状腺疾患、グレーヴス病（Ｏｒｇｉａｚｚｉ  Ｊ、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ  Ｍｅｔａｂ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ、２０００（Ｊｕｎ）、２９（２）：３３９；Ｓａｋａｔａ  Ｓ他、Ｍｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ、１９９３（Ｍａｒ）、９２（１）：７７）、突発性自己免疫性甲状腺炎（Ｂｒａｌｅｙ−Ｍｕｌｌｅｎ  ＨおよびＹｕ  Ｓ、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０００（Ｄｅｃ  １５）、１６５（１２）：７２６２）、橋本甲状腺炎（Ｔｏｙｏｄａ  Ｎ他、Ｎｉｐｐｏｎ  Ｒｉｎｓｈｏ、１９９９（Ａｕｇ）、５７（８）：１８１０）、特発性粘液水腫（Ｍｉｔｓｕｍａ  Ｔ、Ｎｉｐｐｏｎ  Ｒｉｎｓｈｏ、１９９９（Ａｕｇ）、５７（８）：１７５９）、卵巣の自己免疫性（Ｇａｒｚａ  ＫＭ他、Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９８（Ｆｅｂ）、３７（２）：８７）、自己免疫性抗精子不妊症（Ｄｉｅｋｍａｎ  ＡＢ他、Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０００（Ｍａｒ）、４３（３）：１３４）、自己免疫性前立腺炎（Ａｌｅｘａｎｄｅｒ  ＲＢ他、Ｕｒｏｌｏｇｙ、１９９７（Ｄｅｃ）、５０（６）：８９３）およびＩ型自己免疫性多腺性症候群（Ｈａｒａ  Ｔ他、Ｂｌｏｏｄ、１９９１（Ｍａｒ  １）、７７（５）：１１２７）が含まれるが、これらに限定されない。
【００８７】
自己免疫による胃腸疾患の例には、慢性炎症性腸疾患（Ｇａｒｃｉａ  Ｈｅｒｏｌａ  Ａ他、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ、２０００（Ｊａｎ）、２３（１）：１６）、セリアック病（Ｌａｎｄａｕ  ＹＥおよびＳｈｏｅｎｆｅｌｄ  Ｙ、Ｈａｒｅｆｕａｈ、２０００（Ｊａｎ  １６）、１３８（２）：１２２）、大腸炎、回腸炎およびクローン病が含まれるが、これらに限定されない。
【００８８】
自己免疫による皮膚疾患の例には、自己免疫による水疱性の皮膚疾患（例えば、尋常性天疱瘡、水疱性天疱瘡および落葉状天疱瘡など、これらに限定されない）が含まれるが、これらに限定されない。
【００８９】
自己免疫による肝疾患の例には、肝炎、自己免疫性慢性活動性肝炎（Ｆｒａｎｃｏ  Ａ他、Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ、１９９０（Ｍａｒ）、５４（３）：３８２）、原発性胆汁性肝硬変（Ｊｏｎｅｓ  ＤＥ、Ｃｌｉｎ  Ｓｃｉ（Ｃｏｌｃｈ）、１９９６（Ｎｏｖ）、９１（５）：５５１；Ｓｔｒａｓｓｂｕｒｇ  ＣＰ他、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌ  Ｈｅｐａｔｏｌ、１９９９（Ｊｕｎ）、１１（６）：５９５）および自己免疫性肝炎（Ｍａｎｎｓ  ＭＰ、Ｊ  Ｈｅｐａｔｏｌ、２０００（Ａｕｇ）、３３（２）：３２６）が含まれるが、これらに限定されない。
【００９０】
自己免疫による神経学的疾患の例には、多発性硬化症（Ｃｒｏｓｓ  ＡＨ他、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ、２００１（Ｊａｎ  １）、１１２（１−２）：１）、アルツハイマー病（Ｏｒｏｎ  Ｌ他、Ｊ  Ｎｅｕｒａｌ  Ｔｒａｎｓｍ  Ｓｕｐｐｌ、１９９７、４９：７７）、重症筋無力症（Ｉｎｆａｎｔｅ  ＡＪおよびＫｒａｉｇ  Ｅ、Ｉｎｔ  Ｒｅｖ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９９、１８（１−２）：８３；Ｏｓｈｉｍａ  Ｍ他、Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９０（Ｄｅｃ）、２０（１２）：２５６３）、神経障害、運動神経障害（Ｋｏｒｎｂｅｒｇ  ＡＪ、Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ、２０００（Ｍａｙ）、７（３）：１９１）、ギラン・バレー症候群および自己免疫性神経障害（Ｋｕｓｕｎｏｋｉ  Ｓ、Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ、２０００（Ａｐｒ）、３１９（４）：２３４）、筋無力症、ランバード・イートン筋無力症症候群（Ｔａｋａｍｏｒｉ  Ｍ、Ａｍ  Ｊ  Ｍｅｄ  Ｓｃｉ、２０００（Ａｐｒ）、３１９（４）：２０４）、腫瘍随伴性神経学的疾患、小脳萎縮症、腫瘍随伴性の小脳萎縮症およびスティッフマン症候群（Ｈｉｅｍｓｔｒａ  ＨＳ他、Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ｕｎｉｔｓ  Ｓ  Ａ、２００１（Ｍａｒ  ２７）、９８（７）：３９８８）；腫瘍非随伴性スティッフマン症候群、進行性小脳萎縮症、脳炎、ラスムッセン脳炎、筋萎縮性側索硬化症、シドナム舞踏病、ジル・ド・ラ・ツレット症候群および自己免疫性多発性内分泌腺症（Ａｎｔｏｉｎｅ  ＪＣおよびＨｏｎｎｏｒａｔ  Ｊ、Ｒｅｖ  Ｎｅｕｒｏｌ（Ｐａｒｉｓ）、２０００（Ｊａｎ）、１５６（１）：２３）；異常免疫による神経障害（Ｎｏｂｉｌｅ−Ｏｒａｚｉｏ  Ｅ他、Ｅｌｅｃｔｒｏｅｎｃｅｐｈａｌｏｇｒ  Ｃｌｉｎ  Ｎｅｕｒｏｐｈｙｓｉｏｌ  Ｓｕｐｐｌ、１９９９、５０：４１９）；後天性ニューロミオトニー、先天性多発性関節拘縮症（Ｖｉｎｃｅｎｔ  Ａ他、Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ、１９９８（Ｍａｙ  １３）、８４１：４８２）、神経炎、視神経炎（Ｓｏｄｅｒｓｔｒｏｍ  Ｍ他、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｎｅｕｒｏｓｕｒｇ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ、１９９４（Ｍａｙ）、５７（５）：５４４）および神経変性疾患が含まれるが、これらに限定されない。
【００９１】
自己免疫による筋疾患の例には、筋炎、自己免疫性筋炎および原発性シェーグレン症候群（Ｆｅｉｓｔ  Ｅ他、Ｉｎｔ  Ａｒｃｈ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、２０００（Ｓｅｐ）、１２３（１）：９２）、および、平滑筋の自己免疫疾患（Ｚａｕｌｉ  Ｄ他、Ｂｉｏｍｅｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｔｈｅｒ、１９９９（Ｊｕｎ）、５３（５−６）：２３４）が含まれるが、これらに限定されない。
【００９２】
自己免疫による腎疾患の例には、腎炎、および、自己免疫性間質性腎炎（Ｋｅｌｌｙ  ＣＪ、Ｊ  Ａｍ  Ｓｏｃ  Ｎｅｐｈｒｏｌ、１９９０（Ａｕｇ）、１（２）：１４０）が含まれるが、これらに限定されない。
【００９３】
生殖に関連する自己免疫疾患の例には、反復した胎児消失（Ｔｉｎｃａｎｉ  Ａ他、Ｌｕｐｕｓ、１９９８、７  Ｓｕｐｐｌ  ２：Ｓ１０７〜９）が含まれるが、これに限定されない。
【００９４】
自己免疫による結合組織疾患の例には、耳の疾患、自己免疫による耳の疾患（Ｙｏｏ  ＴＪ他、Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９４（Ａｕｇ）、１５７（１）：２４９）、および、内耳の自己免疫疾患（Ｇｌｏｄｄｅｋ  Ｂ他、Ａｎｎ  Ｎ  Ｙ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ、１９９７（Ｄｅｃ  ２９）、８３０：２６６）が含まれるが、これらに限定されない。
【００９５】
自己免疫全身性疾患の例には、全身性エリテマトーデス（Ｅｒｉｋｓｏｎ  Ｊ他、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｓ、１９９８、１７（１−２）：４９）および全身性硬化症（Ｒｅｎａｕｄｉｎｅａｕ  Ｙ他、Ｃｌｉｎ  Ｄｉａｇｎ  Ｌａｂ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１９９９（Ｍａｒ）、６（２）：１５６；Ｃｈａｎ  ＯＴ他、Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｒｅｖ、１９９９（Ｊｕｎ）、１６９：１０７）が含まれるが、これらに限定されない。
【００９６】
感染性疾患
感染性疾患の例には、慢性の感染性疾患、亜急性の感染性疾患、急性の感染性疾患、ウイルス疾患、細菌疾患、原虫疾患、寄生虫疾患、真菌疾患、マイコプラズマ疾患およびプリオン疾患が含まれるが、これらに限定されない。
【００９７】
移植片拒絶疾患
移植片の移植に関連する疾患の例には、移植片拒絶、慢性の移植片拒絶、亜急性の移植片拒絶、超急性の移植片拒絶、急性の移植片拒絶および移植片対宿主病が含まれるが、これらに限定されない。
【００９８】
アレルギー性疾患
アレルギー性疾患の例には、喘息、皮疹、じんま疹、花粉アレルギー、ほこり・ダニアレルギー、毒液アレルギー、化粧品アレルギー、ラテックスアレルギー、化学物質アレルギー、薬物アレルギー、昆虫咬傷アレルギー、動物鱗屑アレルギー、刺毛植物アレルギー、ツタウルシアレルギーおよび食物アレルギーが含まれるが、これらに限定されない。
【００９９】
ガン性疾患
ガンの例には、ガン腫、リンパ腫、芽細胞腫、肉腫および白血病が含まれるが、これらに限定されない。ガン性疾患の具体的な例には、下記の疾患が含まれるが、それらに限定されない：骨髄性白血病、例えば、慢性骨髄性白血病、成熟に伴う急性骨髄性白血病、急性前骨髄球性白血病、増大した好塩基球を伴う急性非リンパ球性白血病、急性単球性白血球、好酸球増加症を伴う急性骨髄単球性白血病など；悪性リンパ腫、例えば、バーキットリンパ腫、非ホジキンリンパ腫など；リンパ性白血病、例えば、急性リンパ芽球性白血病、慢性リンパ性白血病など；骨髄増殖性疾患、例えば、固形腫瘍、良性髄膜腫、唾液腺の混合腫瘍、慢性腺腫など；腺ガン、例えば、小細胞肺ガン、腎臓、子宮、前立腺、膀胱、卵巣、結腸、肉腫、脂肪肉腫、粘液様、滑膜肉腫、横紋筋肉腫（肺胞）、骨外性粘液様軟骨肉腫、ユーイング肉腫など。他のガンには、精巣および卵巣の未分化胚細胞腫、網膜芽細胞腫、ウィルムス腫瘍、神経芽細胞腫、悪性メラノーマ、中脾腫、乳房、皮膚、前立腺および卵巣が含まれる。
【０１００】
本発明のさらなる目的、利点および新規な特徴が、限定であることが意図されない下記の実施例を検討したとき、当業者には明らかになる。加えて、本明細書中上記に描かれるような、また、下記の請求項の節において特許請求されるような本発明の様々な実施形態および態様のそれぞれは、実験的裏付けが下記の実施例において見出される。
【実施例】
【０１０１】
次に下記の実施例が参照されるが、下記の実施例は、上記の説明と一緒に、本発明を非限定様式で例示する。
【０１０２】
本願で使用される用語と、本発明で利用される実験方法には、分子生化学、微生物学および組み換えＤＮＡの技法が広く含まれている。これらの技法は文献に詳細に説明されている。例えば以下の諸文献を参照されたい：「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ」Ｓａｍｂｒｏｏｋ他（１９８９）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｒ．Ｍ．編「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」Ｉ〜ＩＩＩ巻（１９９４）、Ａｕｓｕｂｅｌ他著；「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ」Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ，米国メリーランド州バルチモア（１９８９）；Ｐｅｒｂａｌ著「Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ」Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，米国ニューヨーク（１９８８）；Ｗａｔｓｏｎ他、「Ｒｅｃｏｍｂｉｎａｎｔ  ＤＮＡ」Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｂｏｏｋｓ、米国ニューヨーク；Ｂｉｒｒｅｎ他編「Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ  Ｓｅｒｉｅｓ」１〜４巻、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、米国ニューヨーク（１９９８）；米国特許の４６６６８２８号、４６８３２０２号、４８０１５３１号、５１９２６５９号および５２７２０５７号に記載される方法；Ｃｅｌｌｉｓ，Ｊ．Ｅ．編「Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ」Ｉ〜ＩＩＩ巻（１９９４）；Ｃｏｌｉｇａｎ，Ｊ．Ｅ．編「Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」Ｉ〜ＩＩＩ巻（１９９４）；Ｓｔｉｔｅｓ他編「Ｂａｓｉｃ  ａｎｄ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」（第８版）、Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ、米国コネティカット州ノーウォーク（１９９４）；ＭｉｓｈｅｌｌとＳｈｉｉｇｉ編「Ｓｅｌｅｃｔｅｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｗ．Ｈ．  Ｆｒｅｅｍａｎ  ａｎｄ  Ｃｏ．、米国ニューヨーク（１９８０）；また利用可能な免疫検定法は、例えば以下の特許と科学文献に広範囲にわたって記載されている：米国特許の３７９１９３２号、３８３９１５３号、３８５０７５２号、３８５０５７８号、３８５３９８７号、３８６７５１７号、３８７９２６２号、３９０１６５４号、３９３５０７４号、３９８４５３３号、３９９６３４５号、４０３４０７４号、４０９８８７６号、４８７９２１９号、５０１１７７１号および５２８１５２１号；Ｇａｉｔ，Ｍ．Ｊ．編「Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」（１９８４）；Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．およびＨｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．Ｊ．編「Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ」（１９８５）；Ｈａｍｅｓ，Ｂ．Ｄ．およびＨｉｇｇｉｎｓ  Ｓ．Ｊ．編「Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ」（１９８４）；Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，Ｒ．Ｉ．編「Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ」（１９８６）；「Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ」ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ（１９８６）；「Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ」Ｐｅｒｂａｌ，Ｂ．著（１９８４）および「Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ」１〜３１７巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；「ＰＣＲ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ：Ａ  Ｇｕｉｄｅ  Ｔｏ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ」、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、米国カリフォルニア州サンディエゴ（１９９０）；Ｍａｒｓｈａｋ他、「Ｓｔｒａｔｅｇｉｅｓ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｃｏｕｒｓｅ  Ｍａｎｕａｌ」、ＣＳＨＬ  Ｐｒｅｓｓ、（１９９６）；なおこれらの文献類は、あたかも本願に完全に記載されているように援用するものである。その外の一般的な文献は、本明細書を通じて提供される。それらの文献に記載の方法は当業技術界で周知であると考えられ、読者の便宜のために提供される。それらの文献に含まれるすべての情報は本願に援用するものである。
【０１０３】
（実施例１）
治療的なモノクローナル性ヒト抗ＳＲ−Ｂ１抗体
モノクローナルなヒト抗ＳＲ−Ｂ１抗体を治療的使用のために作製した。
【０１０４】
材料および方法
ＳＲ−Ｂ１をコードするプラスミド：
ヒトＳＲ−Ｂ１（ＣＬＡ−Ｉ）をコードするＤＮＡを、センスプライマーの５’ＣＣＡＴＧＧＧＣＴＧＣＴＣＣＧＣＣＡＡＡ３’（配列番号６）およびアンチセンスプライマーの５’ＣＴＡＣＡＧＴＴＴＴＧＣＴＴＣＣＴＧＣＡＧ３’（配列番号７）を使用して増幅した。上記で記載された反応混合物を、２５サイクルにおいて９５℃で１分間、５５℃で１分間および７２℃で１分からなる増幅プログラムに供して、配列番号８の１．５３ｋｂのＤＮＡフラグメント（ヒトがコードするＳＲ−Ｂ１  ｍＲＮＡ、アクセション番号Ｚ２２５５５に由来するヌクレオチド７０〜１５９９）を得た。ＰＣＲ反応後、混合物をＴＡＥ緩衝液での５％ポリアクリルアミドゲルに負荷した。ＰＣＲ生成物をゲル精製し、ｐＵＣ５７／Ｔベクター（Ｔ−クローニングキットＫ１２１２；ＭＢＩ  Ｆｅｒｍｅｎｔａｓ（Ｖｉｌｎｉｕｓ、リトアニア））にクローン化し、その後、大腸菌細胞を形質転換するために使用した。その後、クローンを配列決定し（Ｓｅｑｕｅｎａｓｅバージョン２；Ｕｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、Ｃｌｅｖｅｌａｎｄ、ＯＨ）、ｐｃＤＮＡ３ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ）に移した。プラスミドＤＮＡの大規模調製を、Ｍｅｇａ  ｐｒｅｐ（Ｑｉａｇｅｎ、Ｃｈａｔｓｗｏｒｔｈ、ＣＡ）を使用して行った。
【０１０５】
細胞：
ＨＥＫ２９３（ＡＴＣＣ）を、以前に記載されたようにヒトＳＲ−Ｂ１により形質転換した［Ｓｃａｒｓｅｌｌｉ  Ｅ他、ＥＭＢＯ  Ｊ．、２１（１９）：５０１７〜２５、２００２］。以前に記載されたようにＦＡＣＳ分析によって発現を確認した［Ｓｃａｒｓｅｌｌｉ  Ｅ他、ＥＭＢＯ  Ｊ．、２１（１９）：５０１７〜２５、２００２］。
【０１０６】
モノクローナルなヒト抗ＳＲ−Ｂ１抗体の作製：
ヒトの抗ＳＲ−Ｂ１モノクローナル抗体を２つの下記プロトコルの１つに従って作製した：
【０１０７】
プロトコルＩ
Ｃ５７／Ｂ６マウスを、ヒトＳＲ−Ｂ１（配列番号８）をコードするＤＮＡプラスミドにより続いて免疫化した（週に３回の免疫化）。最後の投与を行った２週間後、これらのマウスをＥＡＥの積極的な誘導に供した。脾臓細胞を、以前に記載されるように（Ｅ．Ｈａｒｌｏｗ＆Ｄ．Ｌａｎｅ、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、１９９８）、２週間後、ＳＰ２細胞（ＡＴＣＣ）を融合パートナーとして用いてモノクローナル抗体を作製するために得た。陽性ハイブリドーマのスクリーニングを２段階の選抜で行った。最初の選抜では、陽性の抗体産生細胞が、ＨＥＫ２９３によって過剰発現される組換えＳＲ−Ｂ１と結合する能力に従って選抜された。その後、ハイブリドーマのクローン（１０００個のウエル）から単離された上清を、ＳＲ−Ｂ１と結合するその能力についてのＦＡＣＳ分析に供した。
【０１０８】
プロトコルＩＩ
上記のように得られるクローン化されたヒトＳＲ−Ｂ１（配列番号８）をｐＱＥ発現ベクターに再クローン化し、大腸菌（Ｑｉａｇｅｎ）において発現させ、その後、６ｘＨｉｓタンパク質のＮＩ−ＮＴＡスーパーフローによるアフィニティー精製（Ｑｉａｇｅｎ）によって精製した。精製後、組換えヒトＳＲ−Ｂ１の純度を、ゲル電気泳動、続いて、Ｔｅｃｈｎｉｏｎの配列決定サービス部門による配列決定（Ｎ末端）によって確認した。その後、この組換えヒトＳＲ−Ｂ１を１０週齢のＢＡＬＢ／Ｃマウスに注射した。最初の免疫化は、４００μｌの総体積における膜膜腔内へのＣＦＡ［オイルにおける１０ｍｇ／ｍｌの熱死菌化Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ  Ｈ３７Ｒａが補充された不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）；Ｄｉｆｃｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｄｅｔｒｏｉｔ、ＭＩ］に乳化された５０μｇのペプチドであった。その後も、３週間の間隔でこれらのマウスには、ＩＦＡ（Ｄｉｆｃｏ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｄｅｔｒｏｉｔ、ＭＩ）に乳化された組換えヒトＳＲ−Ｂ１の５０μｇ／４００μｌが投与された。３回目の間隔の後３週間で、マウスには５０μｇの組換えヒトＳＲ−Ｂ１を１００μｌのＰＢＳにおいて（静脈内）注射した。３日後、脾臓細胞を得て、モノクローナル抗体の調製を上記のように行った。
【０１０９】
ＥＬＩＳＡ
下記のように、間接的ＥＬＩＳＡをハイブリドーマをＳＲ−ＢＩに対する抗体についてスクリーニングするために使用した。９６ウエルマイクロタイタープレート（ＮＵＮＣ）をリン酸塩緩衝化生理的食塩水（ＰＢＳ）における５０ｎｇ／ｍｌのイムノ（組換え）ＳＲ−ＢＩ（配列番号８）により４℃で一晩被覆し、その後、２００μｌの５％ＢＳＡ／ＰＢＳによりブロッキング処理した。その後、１００μｌのハイブリドーマ上清を加え、室温（ＲＴ）で１時間インキュベーションした。０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ（ＰＢＳ−Ｔ）によりプレートを４回洗浄し、その後、ペルオキシダーゼコンジュゲート化ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体によりＲＴで１時間補充し、ＰＢＳ−Ｔにより５回洗浄した。その後、１００μｌの基質溶液（３，３’，５，５’−テトラメチルＢｅｎｚｅｄｒｉｎｅ液（ＩＣＮ  ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  ＩＮＣ、ドイツ、ＴＭＢ）を加えた。２．５ＭのＨ２ＳＯ４を使用して反応を停止させ、吸光度を４５０ｎｍの波長および６３０ｎｍのバックグラウンドでＥＬＩＳＡリーダーによって読み取った。
【０１１０】
細胞結合アッセイ
ＨＥＫ２９３細胞株を、ＳＲ−ＢＩをコードするｐｃＤＮＡ（ｐｃＳＲ−ＢＩ）により安定的にトランスフェクションした。ネオマイシン（Ｇ４１８）を使用して陽性のクローンを選抜した。陽性で単離されたＥＬＩＳＡハイブリドーマクローン（これは上記のように単離された）を２回目のスクリーニングに用いた。９６ウエルの使い捨て型の柔軟なポリ塩化ビニルの微量滴定プレート（Ｄｙｎａｔｅｃｈ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｖｉｒｇｉｎｉａ）に１＊１０６個のｐｃＳＲ−ＢＩ発現ＨＥＫ２９３細胞を播種した。細胞をＰＢＳにより２回洗浄し、その後、１００μｌのハイブリドーマ上清を氷上で３０分間加えた。ＰＢＳによる３回の洗浄の後、ペルオキシダーゼコンジュゲート化ヤギ抗マウスＩｇＧ抗体を、さらに２０分間、氷上で加えた。ＰＢＳによる３回の洗浄の後、１００μｌの基質溶液（ＴＭＢ）を加えた。反応を、２．５ＭのＨ２ＳＯ４を使用して停止させた。短時間の遠心分離の後、反応液を清浄なウエルに移し、吸光度を４５０ｎｍの波長および６３０ｎｍのバックグラウンドでＥＬＩＳＡリーダーによって読み取った。
【０１１１】
（実施例２）
抗ＳＲ−ＢＩ治療的抗体のインビトロ特徴づけ
プロトコル２に従って実施例１に記載されるように作製された（ＣＬＡ−Ｉとの）ヒトＳＲ−Ｂ１交差反応性抗体をインビトロスクリーニングし、特徴づけした。得られた最も成功した抗体はＥ１２であった。これを、本明細書中下記においてさらに記載されるようにさらにインビトロ特徴づけした。
【０１１２】
材料および実験手順
免疫ブロット分析
単一標識による免疫組織化学のために、切片を一次抗体（１：１００）とインキュベーションし、その後、二次抗体（１：１００）とインキュベーションした標準的な方法論を使用した。マウスＩｇＧおよびウサギポリクローナルＩｇＧをコントロール抗体として使用した。
【０１１３】
イソタイプ分析
イソタイプ分析を、Ｓｅｒｏｔｅｃキット（ｗｗｗ．ｓｅｒｏｔｅｃ．ｃｏｍ）を使用して行った。
【０１１４】
腹腔マクロファージの培養
常在性マクロファージをＰＢＳによる腹膜洗浄液から得た。誘発されたマクロファージを３ｍｌの３％チオグリコラート（ＴＧ、Ｄｉｆｃｏ、Ｌｉｖｏｎｉａ、ＭＩ）のｉ．ｐ．注射後５日で集めた。腹腔浸出液の細胞を洗浄し、１０％ＦＣＳ、１％ペニシリン、１％ストレプトマイシンが補充されたＲＰＭＩ１６４０培地に再懸濁し、２４平底プレートにおいて３７℃で一晩インキュベーションした（１ｍｌにおいてウエルあたり１０６個の細胞）。その後、非接着性の細胞を激しい洗浄（３回）によって除き、マクロファージ単層を、１０％ＦＣＳを含有する抗生物質非含有ＲＰＭＩにおいて１日〜１０日インキュベーションした。新鮮な培地を３日毎に与えた。
【０１１５】
マクロファージ培養物によるＩＬ−１０産生
上記のように作製された腹膜マクロファージを、０．５μｇ／ｍｌのＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ）の存在下または非存在下、ｍＡｂ  Ｅ１２により３７℃で２４時間処理した。処理されたマクロファージまたは非処理のマクロファージのいずれかに由来する上清を、ＩＬ−１０の存在について、または、免疫酵素的ＥＬＩＳＡキット（Ｂｉｏｌｅｇｅｎｄ）を使用してアッセイした。
【０１１６】
マクロファージ培養物による亜硝酸塩産生
［Ｋａｔａｋｕｒａ、Ｔ．、Ｍ．Ｍｉｙａｚａｋｉ、Ｍ．Ｋｏｂａｙａｓｈｉ、Ｄ．Ｎ．ＨｅｒｎｄｏｎおよびＦ．Ｓｕｚｕｋｉ（２００４）、選択的に活性化されたマクロファージが、古典的に活性化されたマクロファージの生成を阻害することを可能にするエフェクターとしてのＣＣＬ１７およびＩＬ−１０、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ、１７２：１４０７］によって記載されるように亜硝酸塩形成の測定を行った。腹膜マクロファージ（１＊１０６個／ｍｌ）を、上記で記載されたように２４ウエルプレートに播種した。ＬＰＳおよび／またはｍＡｂ  Ｅ１２による処理の後、上清を採取し、ＮＯ産生を、培養培地における亜硝酸塩の蓄積を、Ｇｒｉｅｓｓ試薬システムキット（Ｐｒｏｍｅｇａ）を使用してＧｒｉｅｓｓ反応により測定することによってアッセイした。簡単に記載すると、等体積のＧｒｉｅｓｓ試薬（スルファニルアミド溶液）およびマクロファージ上清を暗所においてＲＴで１０分間インキュベーションした。その後、等体積のＮ−１−ナフチルエチレンジアミン二塩酸塩（ＮＥＤ）を１０分間加えた。ＥＬＩＳＡリーダーにより、５５０ｎｍにおける吸光度を測定した。亜硝酸塩の濃度を、ＮａＮＯ２を標準物として使用して求めた。
【０１１７】
結果
Ｅ１２のイソタイプ分析により、Ｅ１２がＩｇＧ１であることが明らかにされた。精製されたＥ１２を、様々な組換えタンパク質を含有するニトロセルロースメンブランと反応させた。図１に示されるように、ｍＡｂ  Ｅ１２はＳＲ−ＢＩおよびＣＬＡ−１と交差反応したが、ＭＩＰ、ＣＸＣＬ６またはＩＬ−２７とは交差反応しなかった。これらの結果は、この抗体がスカベンジャーＢ１受容体を種間依存的な様式で特異的に認識し、また、このタンパク質の変性した形態を認識できることを示しており、これは、この抗体が、ＳＲ−Ｂ１活性を中和するその能力によってさらに明らかにされるように、未変性タンパク質の露出したエピトープに対して向けられることを示している。
【０１１８】
抗炎症性活性を誘発するＥ１２の能力を、培養された腹膜マクロファージに対してインビトロアッセイした。図２に示されるように、培養された腹膜マクロファージは、０．５μｇ／ｍｌのＬＰＳとともに、ｍＡｂ  Ｅ１２、または、イソタイプを一致させたコントロールＩｇＧにより２４時間処理されたとき、コントロール処理の細胞と比較して、増大する量のＥ１２の存在下で著しくより多いＩＬ−１０を産生した。
【０１１９】
これらの結果は、Ｅ１２抗体およびＬＰＳ（０．５μｇ／ｍｌ）の存在下でＮＯレベルが続く際に立証された。図３に示されるように、ｍＡｂ  Ｅ１２は、用量依存的な様式で腹膜マクロファージによる（亜硝酸塩レベルによって測定されるような）ＮＯ合成を抑制した。コントロールの一致したイソタイプはＮＯレベルの影響を何ら有していなかった。
【０１２０】
Ｅ１２の重鎖（ＶＨ）および軽鎖（ＶＫ）の可変領域を配列決定し、それらのＣＤＲ組成を決定した。配列番号９および配列番号１０はＥ１２の軽鎖のフレームワーク１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列および核酸配列をそれぞれ示す。配列番号１１および配列番号１２はＥ１２の軽鎖のＣＤＲ１のアミノ酸配列および核酸配列をそれぞれ示す。配列番号１３および配列番号１４はＥ１２の軽鎖のフレームワーク２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列および核酸配列をそれぞれ示す。配列番号１５および配列番号１６はＥ１２の軽鎖のＣＤＲ２のアミノ酸配列および核酸配列をそれぞれ示す。配列番号１７および配列番号１８はＥ１２の軽鎖のフレームワーク３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列および核酸配列をそれぞれ示す。配列番号１９および配列番号２０はＥ１２の軽鎖のＣＤＲ３のアミノ酸配列および核酸配列をそれぞれ示す。
【０１２１】
配列番号２１および配列番号２２はＥ１２の重鎖のフレームワーク１（ＦＷＲ１）のアミノ酸配列および核酸配列をそれぞれ示す。配列番号２３および配列番号２４はＥ１２の重鎖のＣＤＲ１のアミノ酸配列および核酸配列をそれぞれ示す。配列番号２５および配列番号２６はＥ１２の重鎖のフレームワーク２（ＦＷＲ２）のアミノ酸配列および核酸配列をそれぞれ示す。配列番号２７および配列番号２８はＥ１２の重鎖のＣＤＲ２のアミノ酸配列および核酸配列をそれぞれ示す。配列番号２９および配列番号３０はＥ１２の重鎖のフレームワーク３（ＦＷＲ３）のアミノ酸配列および核酸配列をそれぞれ示す。配列番号３１および配列番号３２はＥ１２の重鎖のＣＤＲ３のアミノ酸配列および核酸配列をそれぞれ示す。
【０１２２】
（実施例３）
ＳＲ−Ｂ１に対するモノクローナル抗体は進行中のＥＡＥおよびＩＢＤを抑制することができる
上記の実施例１において教示されるように作製されたモノクローナル抗体は、本明細書中下記においてさらに記載されるように、進行中のＥＡＥ、および、ＴＮＢＳ誘導によるＩＢＤを抑制することにおいて非常に効果的であることが示された。
【０１２３】
材料および方法
マウスにおけるＥＡＥの誘導、および、ＳＲ−Ｂ１に対するｍＡｂによる進行中の疾患の抑制
１８匹のＣ５７ＢＬ／１６マウスの一群を、ＭＯＧｐ３５−５５誘導によるＥＡＥに供した。疾患が発症したとき（１３日目）、これらのマウスを、病状が等しい３つの群に分けた。この日ならびに１５日目および１７日目に、これらの群は、５００μｇのＥ１２  ｍＡｂ、イソタイプを一致させたヒトＩｇＧ（ＩｇＧ１）、または、ＰＢＳが投与され、実験プロトコルが知らされていない観察者によって疾患の臨床的発現について追跡された（図４）。
【０１２４】
脊髄の組織病理学
脊髄の下部胸部領域および腰部領域のホルマリン固定されたパラフィン包埋切片のＨ＆Ｅ染色切片の組織学的検査を行った。それぞれの切片を、動物の治療状態を知ることなく評価した。下記のスケールを使用した：０、単核細胞の浸潤がない；１、最小限の実質組織の浸潤を伴う、切片あたり１カ所〜５カ所の血管周囲の病変；２、実質組織の浸潤を伴う、切片あたり５カ所〜１０カ所の血管周囲の病変；および、３、広範囲の実質組織の浸潤を伴う、切片あたり１０カ所を越える血管周囲の病変。平均病理学的スコア±ＳＥをそれぞれの治療群について計算した。
【０１２５】
免疫組織化学
単一標識による免疫組織化学のために、切片を一次抗体（１：１００）とインキュベーションし、その後、二次抗体（１：１００）とインキュベーションした標準的な方法論を使用した。マウスＩｇＧおよびウサギポリクローナルＩｇＧをコントロール抗体として使用した。
【０１２６】
Ｌｅｗｉｓラットにおける実験的大腸炎の誘導
実験的大腸炎を、以前に記載されたように［Ｆｉｏｒｕｃｃｉ，Ｓ．他、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、１７：７６９、２００２］、８ｃｍの新生児用給餌チューブを使用して、５０％エタノールに溶解した１２５ｍｇ／ｍｌの２，４，６−トリニトロベンゼンスルホン酸（ＴＮＢＳ）溶液（Ｆｌｕｋａ、カタログ＃９２８２２）の２５０μｌの直腸内滴注によって誘導した。注入後２４時間で、すべてのラットが出血性下痢を発症し、翌日には重症の下痢を発症し、これには、継続した体重減少が付随していた。
【０１２７】
抗体移入のための治療プロトコル
実験的大腸炎の誘導後６日目、８日目および１０日目に、５００μｇのｍＡｂ  Ｅ１２を、尾静脈を介して静脈内注射した。ヒトＩｇＧ１（Ｓｉｇｍａ）をコントロール抗体として使用した。
【０１２８】
サンプル収集
１２日目に、ラットをケタミン−キシラジン麻酔のもとで殺した。その後、終端の結腸を抜去し、ＰＢＳにより穏やかに洗浄し、長さ方向に切開し、Ｍｏｒｒｉｓ、Ｇｕｔ（２００４）、５３、９９〜１０７によって記載される判断基準を改変したものに従って目視評価した。結腸の傷害を０（正常な結腸）〜５（重度の損傷）の尺度でスコア化した（下記の表２を参照のこと）。
【０１２９】
結腸の組織病理学
組織（終端の結腸、腸間膜リンパ節および脾臓）を１０％中性緩衝化ホルマリンにおいて固定処理し、パラフィンに包埋した。結腸のヘマトキシリンおよびエオシンによる染色切片を４つのパラメーターについて組織学的に評価した：潰瘍化の範囲、粘膜下の浸潤、陰窩膿瘍および壁の肥厚（表３を参照のこと）。すべてのスコアの和により、軽微〜重度の結腸炎症のランク付けが決定された。
【０１３０】
免疫組織化学
ホルマリン固定されたパラフィン包埋標本に由来する連続切片を、下降濃度のエチルアルコールで脱パラフィン化および再水和した。組織切片をメタノールにおける新鮮な３％Ｈ２Ｏ２と１０分間インキュベーションし、その後、ＰＢＳにより洗浄した。その後、切片を、クエン酸塩緩衝液において９０℃で１５分間、マイクロ波によって処理し、１０％ロバ血清により３０分間ブロッキング処理した。免疫組織化学的分析を、加湿チャンバーにおいて４℃で一晩、ラットＩＬ−１０に対する一次抗体（ポリクローナルのヤギ抗ラットＩＬ−１０、Ｒ＆Ｄ）、ＣＤ３に対する一次抗体（ｍＡｂマウス抗ラット、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、および、ＥＤ１に対する一次抗体（ｍＡｂマウス抗ラット、Ｓｅｒｏｔｅｃ）を使用して行った。ビオチン化されたロバ抗ヤギＩｇＧまたはロバ抗マウスＩｇＧを二次抗体として使用し、続いて、ストレプトアビジン−西洋ワサビペルオキシダーゼ（Ｚｙｍｅｄ）を使用した。反応を、アミノエチルカルバゾール基質キット（Ｚｙｍｅｄ）を使用して発色させた。
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【０１３１】
結果
抗ＳＲ−ＢＩ  ｍＡｂは長期にわたって進行中のＥＡＥを抑制する
類似する臨床的症状発現を示すＥＡＥのマウスモデルの３つの群をモノクローナル抗体治療およびコントロール処置に供した。図４に示されるように、ＰＢＳまたはコントロールＩｇＧにより処置されたマウスは重度のＥＡＥを発症し続け、一方、抗ＳＲ−ＢＩ  ｍＡｂ  Ｅ１２により処置されたマウスは、疾患の残存徴候を伴うことなく、速い寛解状態に入った（図４）。
【０１３２】
１９日目に、脾臓細胞を各群の代表的なマウスから単離し、疾患を誘導させた標的抗原と７２時間培養した。その後、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２（ｐ４０サブユニット）およびＩＬ−４のレベルを、市販のＥＬＩＳＡキットを使用して記録した。図５ａ〜図５ｃには、ＩＬ−１０産生における顕著な上昇（ｐ＜０．００１）、ＩＬ−１２産生における著しい低下（ｐ＜０．０１）が付随するＩＬ−４産生における著しい上昇（ｐ＜０．０１）を示すこの実験の結果がまとめられる。これらの結果はこの抗体のインビトロ性質（図５ａ〜図５ｃを参照のこと）と一致しており、また、少なくとも部分的にはこの治療の有益な効果を説明することができる（図４）。
【０１３３】
コントロールＥＡＥマウス、および、ＩｇＧ１治療またはＥ１２治療（図４を参照のこと）を受けたＥＡＥマウスから１９日目に得られた脊髄（腰髄）切片を、高内皮静脈（ＨＥＶ）の周りでの白血球におけるＳＲ−ＢＩの発現の免疫組織化学的分析に供した。図６ａ〜図６ｃは、処置されていないコントロールＥＡＥマウス、Ｅ１２により処置されたＥＡＥマウス、および、コントロールＩｇＧ１により処置されたＥＡＥマウスの代表的な切片をそれぞれ示す。病気マウスのすべての切片において、ＣＮＳに進入している白血球はＳＲ−ＢＩを非常に発現した。これらの細胞の密度が抗ＳＲ−ＢＩ処置のマウスにおいて低下することは、部分的には、炎症性プロセスにおける低下（すなわち、より低い組織学的スコア）から生じる、侵入する白血球の低下した数によって説明することができる。
【０１３４】
最後に、これらの群に由来する代表的な切片を、市販の抗ＩＬ−１０ｍＡｂを使用してＩＬ−１０の免疫組織化学的分析に供した。図６ｄ〜図６ｆは、処置されていないコントロールＥＡＥマウス、Ｅ１２により処置されたＥＡＥマウス、および、コントロールＩｇＧ１により処置されたＥＡＥマウスの代表的な切片をそれぞれ示す。Ｅ１２により処置されたマウスの切片におけるＩＬ−１０産生における上昇が、コントロール群のそれぞれと比較して明らかである。これらの結果は上記のインビトロ結果を裏付けており、これは抗ＳＲ−Ｂ１治療の抗炎症性役割を立証している。
【０１３５】
抗ＳＲ−ＢＩ  ｍＡｂは実験的大腸炎を抑制する
ＩＢＤに対する抗ＳＲ−Ｂ１モノクローナル抗体の作用の類似する分析を大腸炎のラットモデルに対して行った。下記には、大腸炎誘導ラット（群あたり６匹のラット）についての目視分析および顕微鏡分析、ならびに、組織病理学的分析、それに続く、すべての群におけるＥＤ１陽性細胞（マクロファージ）、ＣＤ３＋Ｔ細胞およびＩＬ−１０染色の免疫組織化学検出の代表的なサンプルがまとめられる。
【０１３６】
下記の表４は、結腸における組織病理学的変化における顕著な低下が付随する、疾患の目視スコアおよび顕微鏡スコアにおける著しい低下を明瞭に示す。
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【０１３７】
図７ａ〜図７は、ナイーブラット（図７ａ）、ＴＮＢＳ誘導によるＩＢＤを患う陽性コントロールラット（図７ｂ）、イソタイプを一致させたコントロールＩｇＧの反復投与を受けたＴＮＢＳ誘導によるＩＢＤを患うラット（図７ｃ）からＩＢＤ発症の１２日目に得られた代表的な組織学的結腸切片を、ｍＡｂ  Ｅ１２により処置されたラット（図７ｄ〜図７ｅ）との比較で示す。示されるように、Ｅ１２により処置された結腸と、コントロールと間における構造的変化が明らかである。これは、図８ａ〜図８ｉに示されるように、（コントロール処置の動物における）前炎症性サイトカインから、（Ｅ１２処置の動物における）抗炎症性サイトカインへのサイトカインプロフィルにおける変化によって説明され得る。
【０１３８】
図８ａ〜図８ｃは、処置されていないＩＢＤ誘導ラットの切片を示す。マクロファージ（ＥＤ１＋）の大量の粘膜下浸潤、ならびに、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）の粘膜浸潤および粘膜下浸潤の両方が示される。ＩＬ−１０産生が主に粘膜においてかろうじて検出された。
【０１３９】
図８ｄ〜図８ｆは、イソタイプが一致するコントロール処置の動物の切片を示す。マクロファージ（ＥＤ１＋）の粘膜下浸潤、Ｔ細胞（ＣＤ３＋）の粘膜浸潤、および、粘膜におけるＩＬ−１０産生が検出された。
【０１４０】
図８ｇ〜図８ｉは、Ｅ１２処置されたラットの切片を示す。損傷領域におけるマクロファージ（ＥＤ１＋）の粘膜下浸潤が示され、また、非罹患領域の粘膜固有層におけるマクロファージの存在が検出される。ＣＤ３＋  Ｔ細胞が健康な粘膜に浸潤し、粘膜における顕著なＩＬ−１０産生を伴う。
【０１４１】
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【図面の簡単な説明】
【０１４２】
【図１】ヒトオルソログおよびマウスオルソログとのモノクローナル抗ＳＲ−Ｂ１抗体（Ｅ１２）の交差反応性を示す写真である。
【図２】Ｅ１２により処理された培養腹膜マクロファージからのＩＬ−１０分泌の用量依存的誘導を示すグラフである。
【図３】Ｅ１２により処理された培養腹膜マクロファージにおけるＮＯレベルの用量依存的抑制を示す棒グラフである。
【図４】ＥＡＥスコアにおける低下によって明らかにされた、Ｅ１２による処置（黒四角）、コントロールのイソタイプ一致抗体による処置（丸）、または、無処置により誘導されたマウスにおける進行しつつあるＥＡＥに対するこれらの処置の影響を示すグラフである。
【図５】１９日目のＥＡＥ誘導マウスの脾臓細胞からのサイトカイン分泌に対するＥ１２（ピンク色）またはコントロール抗体（灰色）の影響を示す棒グラフである。図５ａ、ＩＬ−４。図５ｂ、ＩＬ−１２。図５ｃ、ＩＬ−１０。
【図６】非処置（図６ａ）、Ｅ１２による処置（図６ｂ）、または、イソタイプが一致するコントロール抗体による処置（図６ｃ）を受けたＥＡＥ誘導マウス（疾患発症の１９日目）に由来する腰髄切片のＩＬ−１０免疫染色を示す写真である。図６ａ〜図６ｃは、スカベンジャー受容体を発現する細胞の存在についてのビオチン化Ｅ１２による染色を示す。図６ｄ〜図６ｆは、抗ＩＬ−１０抗体による染色を示す。抗ＳＲ−ＢＩ治療はＥＡＥの組織学的スコアを低下させる。
【図７】ナイーブラット（図７ａ）、ＴＮＢＳ誘導によるＩＢＤを患う陽性コントロールラット（図７ｂ）、イソタイプを一致させたコントロールＩｇＧの反復投与を受けた、ＴＮＢＳ誘導によるＩＢＤを患うラット（図７ｃ）から疾患発症の１２日目に得られた代表的な組織学的結腸切片を、ｍＡｂ  Ｅ１２により処置されたラット（図７ｄ〜図７ｅ）との比較で示す写真である。
【図８】ＴＮＢＳ誘導によるＩＢＤを患うコントロールラット（図８ａ〜図８ｃ）、イソタイプを一致させたコントロールＩｇＧの反復投与を受けた、ＴＮＢＳ誘導によるＩＢＤを患うラット（８ｄ〜図８ｆ）から疾患発症の１２日目に得られた代表的な免疫組織学的切片を、ｍＡｂ  Ｅ１２により処置された疾患ラット（図８ｇ〜図８ｉ）との比較で示す写真である。図８ａ、図８ｄおよび図８ｇはｍＡｂ  ＥＤ１（マクロファージのバイオマーカー）により染色され、図８ｂ、図８ｅおよび図８ｈは抗ＣＤ３（Ｔ細胞のバイオマーカー）により染色され、図８ｃ、図８ｆおよび図８ｉは抗ＩＬ−１０ｍＡｂにより染色される。
【配列表フリーテキスト】
【０１４３】
（１）配列番号１、２、及び４〜７は、一本鎖ＤＮＡオリゴヌクレオチドの配列である。
（２）配列番号９及び１０は、Ｅ１２軽鎖のＦＷＲ１の配列である。
（３）配列番号１１及び１２は、Ｅ１２軽鎖のＣＤＲ１の配列である。
（４）配列番号１３及び１４は、Ｅ１２軽鎖のＦＷＲ２の配列である。
（５）配列番号１５及び１６は、Ｅ１２軽鎖のＣＤＲ２の配列である。
（６）配列番号１７及び１８は、Ｅ１２軽鎖のＦＷＲ３の配列である。
（７）配列番号１９及び２０は、Ｅ１２軽鎖のＣＤＲ３の配列である。
（８）配列番号２１及び２２は、Ｅ１２重鎖のＦＷＲ１の配列である。
（９）配列番号２３及び２４は、Ｅ１２重鎖のＣＤＲ１の配列である。
（１０）配列番号２５及び２６は、Ｅ１２重鎖のＦＷＲ２の配列である。
（１１）配列番号２７及び２８は、Ｅ１２重鎖のＣＤＲ２の配列である。
（１２）配列番号２９及び３０は、Ｅ１２重鎖のＦＷＲ３の配列である。
（１３）配列番号３１及び３２は、Ｅ１２重鎖のＣＤＲ３の配列である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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