(57)【要約】  本発明は、ステロイド化合物とインターフェロンβタンパク質との連続的又は同時投与を含む、脱髄性視神経炎（ＤＯＮ）を有する患者を治療する方法を提供する。そのような治療において、例えばインターフェロンβタンパク質が毎週の累積投与量が１２ＭＩＵを超えて投与される場合に、ＩＦＮ−βの早期積極的治療が有効であることがわかった。本発明の方法は、早期段階ＤＯＮを有する患者の治療に特に適しておりかつ有効である。特に本発明で治療されることにより利益を受けるＤＯＮは無症状の段階にあるものである。【特許請求の範囲】
【請求項１】
免疫抑制化合物とインターフェロンβタンパク質との連続的又は同時投与を含んで成る、視神経炎（ＯＮ）を有する患者を治療する方法であって、ここで該インターフェロンβタンパク質は毎週の累積投与量が１２ＭＩＵを超えて投与されることを特徴とする方法。
【請求項２】
免疫抑制化合物の連続的又は同時投与を含んで成る視神経炎（ＯＮ）を有する患者の治療のための医薬の製造におけるインターフェロンβタンパク質の使用であって、ここで該インターフェロンβタンパク質は毎週の累積投与量が１２ＭＩＵを超えて投与されることを特徴とする使用。
【請求項３】
毎週の累積投与量が、１６ＭＩＵ以上、２０ＭＩＵ以上、２４ＭＩＵ以上、２８ＭＩＵ以上、３２ＭＩＵ以上、３６ＭＩＵ以上、又は４０ＭＩＵ以上であることを特徴とする、請求項１又は２の方法。
【請求項４】
前記視神経炎（ＯＮ）が脱髄性視神経炎（ＤＯＮ）である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項５】
患者が臨床的に明確な多発性硬化症（ＣＤＭＳ）を有さない、請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
患者が、ＭＲＩ基準に従って臨床的に明確な多発性硬化症（ＣＤＭＳ）を発症するリスクが高くない、請求項１〜５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７】
患者が、直径が３ｍｍを超える白質病変を、３つまたはそれ以上、好ましくは２つまたはそれ以上有さない、請求項１〜６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
患者が、直径が３ｍｍを超える白質病変を有さない、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
患者が室周囲又は卵形白質病変を有さない、請求項１〜８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１０】
前記ＯＮが、１つのみの視神経において臨床的に明確である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記ＯＮが臨床的に明確でない、請求項１〜１０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１２】
前記ＯＮが単独の臨床症状である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
患者が、治療の開始時に、少なくとも１つの眼において３０ミクロン以下、好ましくは２５、２０、１５、又は１０ミクロン以下のＲＮＦＬの厚さの低下を有することを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
患者が、少なくとも１つの眼において少なくとも１０、７．５、又は５ミクロンのＲＮＦＬの厚さの低下を有することを特徴とする、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記インターフェロンβがインターフェロンβ１ａである、請求項１〜１４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１６】
前記インターフェロンβがインターフェロンβ１ｂである、請求項１〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
前記インターフェロンβタンパク質が皮下投与される、請求項１〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
前記インターフェロンβタンパク質が筋肉内投与される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記インターフェロンβが修飾インターフェロンβである、請求項１〜１８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２０】
前記インターフェロンβが長時間作用性インターフェロンβである、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２１】
前記長時間作用性インターフェロンβが、ペグ化インターフェロンβ又はインターフェロンβＦｃ融合タンパク質から選択される、請求項１〜２０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２２】
前記インターフェロンβが１回の投与当たり少なくとも４４ｍｃｇにおいて皮下投与される、請求項１〜２１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２３】
前記インターフェロンβが少なくとも週に３回投与される、請求項１〜２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
前記インターフェロンβが４４ｍｃｇにおいて週に３回皮下投与される、請求項１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２５】
前記インターフェロンβが、免疫抑制化合物による治療の停止後に２８日以内の間隔で、好ましくは２１日以内の間隔で、少なくとも４４ｍｃｇ皮下の用量で週３回投与まで漸増されることを特徴とする、請求項１〜２４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２６】
前記免疫抑制化合物がステロイド化合物である、請求項１〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
前記ステロイド化合物が、メチルプレドニソロン、プレドニソン、もしくはデキサメタゾン、又はステロイド分泌性薬剤、例えばＡＣＴＨよりなる群から選択される、請求項１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２８】
前記ステロイド化合物がメチルプレドニソロンである、請求項１〜２７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２９】
投与が連続的である、請求項１〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
前記免疫抑制化合物の投与がインターフェロンβタンパク質の投与より先に行われる、請求項１〜２９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３１】
前記免疫抑制化合物が少なくとも２つの異なるの用量で投与される、請求項１〜３０のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３２】
前記免疫抑制化合物がステロイド化合物である、請求項１〜３１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３３】
前記ステロイド化合物が、視神経炎治療治験（ＯＮＴＴ）プロトコールに従って投与される、請求項１〜３２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３４】
さらなるＭＳ化合物が連続的に又は同時に投与される、請求項１〜３３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３５】
前記さらなるＭＳ化合物が、スフィンゴシン−１−ホスフェート（Ｓ１Ｐ）受容体アゴニスト、修飾ペプチドリガンド、免疫抑制剤、アデノシンデアミナーゼインヒビター、IV免疫グロブリンＧ、Ｔ細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体、ＴＨ２促進サイトカイン、ＴＨ１促進サイトカインの発現を阻害する化合物、抗けいれん剤、ＡＭＰＡグルタミン酸受容体アンタゴニスト、ＶＣＡＭ−１発現のインヒビターもしくはそのリガンドのアンタゴニスト、抗マクロファージ遊走阻害因子、カテプシンＳインヒビター、及びｍＴＯＲインヒビターよりなる群から選択されることを特徴とする請求項１〜３４のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医学の分野であり、視神経炎の治療に関する。より具体的には、本発明は、例えば孤立脱髄性神経炎のような視神経炎を有する患者の治療法と、該患者の治療用薬剤の製造とにおけるＩＦＮβの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
視神経炎は、青年の視覚消失の一般的原因であり、またしばしば多発性硬化症の最初の兆候でもある。視神経炎を有する患者の約７５％は、１５年以内に臨床的に明確な多発性硬化症（ＣＤＭＳ）に進行することがわかっている。従って多発性硬化症を診断を最初に検討するのは眼科医かも知れない。
【０００３】
ＭＳは、軸策脱髄と消失とを特徴とする炎症性自己免疫疾患である。ＭＳ患者の大部分はまず視神経炎（ＯＮ）の症状を示し、これは視神経傷害を特徴とする。特に視神経炎研究グループ（Ｏｐｔｉｃ  Ｎｅｕｒｉｔｉｓ  Ｓｔｕｄｙ  Ｇｒｏｕｐ；ＯＮＴＴ）の臨床研究は、視神経炎の自然の病歴と治療を明らかにすることを促進した。これらの研究は、経口プレドニソロン又はプラセボと比較して、静脈内メチオニンプレドニソロン（ＩＶＭＰ）による治療が視力をより早く回復させるが、長期的には視力に差が無いことを証明した（例えば、ＯＮＴＴプロトコールとその結果についての説明は、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎ  Ｎｅｕｒｏｌ．１９９５  Ｆｅｂ；８（１）：７２−６を参照）。ＩＶＭＰで治療された患者の臨床的に明確な多発性硬化症のその後の発症は、最大２年間遅延された。しかし治療された患者をプラセボ群と比較すると、３年目で臨床的に明確な多発性硬化症（ＣＤＭＳ）の発症率に差はなかった。
【０００４】
すなわち、視神経炎の治療のためのこのプロトコールを改良する必要がある。
【０００５】
追加の臨床試験は、視神経炎における又は臨床的に明確な多発性硬化症の「リスク患者」の最初の臨床事象の治療におけるインターフェロンβ（ＩＦＮβ）の使用を示唆している。
【０００６】
例えばＢａｌｃｅｒとＧａｌｅｔｔａ，Ｓｅｍｉｎ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．２００２  Ｍａｒ；１７（１）：４−１０は、静脈内メチオニンプレドニソロン（ＩＶＭＰ）の次に週１回経口プレドニソンと筋肉内ＩＦＮβ１ａの３０マイクログラム（ｍｃｇ）又は週１回の皮下２２ｍｃｇにより、臨床的に明確な多発性硬化症（ＣＤＭＳ）を発症するリスクが高い患者の脱髄性視神経炎を治療することを提唱している。
【０００７】
ＣＨＡＭＰＳ研究は、「リスク患者」（ＭＲＩ基準：＞２のＴ２病変）と「高リスク患者」（＞９のＴ２病変、＞１のガドリニウム陽性病変）における最初の臨床事象後のＣＤＭＳへの転換速度を低下させるために、週１回の筋肉内ＩＦＮβ３０ｍｃｇの早期使用を調べた。
【０００８】
同様にＥＴＯＭＳ研究は、リスク患者（患者は、＞４のＴ２病変又は３の病変を有し、そのうちの１つはテント下又はガドリニウム陽性であった）における最初の臨床事象後のＣＤＭＳへの転換速度を低下させるために、週１回の皮下ＩＦＮβ２２ｍｃｇの早期使用を調べた。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
視神経炎の治療のための現在利用できる薬物治療のどれも充分満足できるものではない。従って本発明の目的は、視神経炎の改良された治療法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、ＯＮを有する患者、特に脱髄性視神経炎（ＤＯＮ）を有する患者を治療するための新しい有利な方法を提供する。この方法は、免疫抑制化合物（例えばステロイド化合物）とインターフェロンβタンパク質の連続的又は同時投与を含む。かかる治療法においてＩＦＮ−ｂによる積極的治療が有効であることがわかっている。本発明の方法は、早期段階ＯＮを有する患者の治療に特に適しておりかつ有効である。特に本発明の治療により利益を受ける早期段階ＯＮは、治療される時無症状の、すなわち診断手段を用いることによってのみ検出できる段階である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１１】
本発明は、ＩＦＮβが早期ＯＮ、特にＤＯＮの症状を有する患者に有効な効果を有することを示す臨床治験データに基づく。早期ＤＯＮには、視神経中の軸策消失に関連した構造変化が関連することがわかった。これらの構造変化は、網膜神経繊維層（ＲＮＦＬ）の厚さを測定する連続的光干渉断層撮影 （ｓｅｒｉａｌ  ｏｐｔｉｃａｌ  ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ）解析により同定され定量される。ＯＮとＭＳ疾患の進行中の軸索変性は経時的にＲＮＦＬ密度（厚さ）を減少させるため、ＯＣＴは、軸策消失、生存、及び治療への応答について求心性視覚系を評価するためにＯＮとＭＳで使用される。
【００１２】
驚くべきことに、例えばＤＯＮ患者の臨床的に罹患していない目のようなＯＮの観察された早期段階の変化は、ＯＮＴＴプロトコールのように、免疫抑制化合物（ステロイド剤を含む）に基づく標準的治療プロトコールに従うＯＮ治療と組合せてＩＦＮ−ｂを用いる早期積極的治療を用いて、停止、低減、及び逆転させることができることが、本発明で発見された。
【００１３】
従ってある態様において本発明は、視神経炎（ＯＮ）を有する患者を治療する方法であって、ステロイド化合物とインターフェロンβタンパク質を連続的又は同時に投与することを含み、ここでインターフェロンβタンパク質は毎週の累積投与量が１２ＭＩＵを超えることを特徴とする上記方法を提供する。好ましくは治療される視神経炎は脱髄性視神経炎（ＤＯＮ）である。
【００１４】
さらに好適な実施態様において本発明の治療法で治療される患者は、臨床的に明確な多発性硬化症（ＣＤＭＳ）を持っていない。好適な実施態様においてＯＮは孤立した症状である（孤立した視神経炎、「臨床的孤立症候群［ＣＩＳ］）。ＯＮを示す患者は、次にＣＤＭＳを示すことも示さないこともある。
【００１５】
すなわち本発明において、ＯＮ及び特にＤＯＮは、炎症性ＣＮＳ疾患に関連しているか、又は全身性炎症性ＣＮＳ疾患に関連していない。用語「炎症性ＣＮＳ疾患」は、特に脱髄性炎症性ＣＮＳ疾患、例えばＭＳ、進行性多病巣性白質脳症（ＰＭＬ）、急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）、又は他の関連疾患を含む。
【００１６】
好適な実施形態において本発明の治療法で治療される患者は、例えばＭＲＩ基準で規定される臨床的に明確な多発性硬化症（ＣＤＭＳ）を発症する高リスクにはない。例えば好適な実施態様において本発明の治療法で治療される患者は、３またはそれ以上の直径３ｍｍを超える白質病変を持たず、好ましくは２またはそれ以上の直径３ｍｍを超える白質病変を有さない。さらに好ましくは患者は、直径３ｍｍを超える白質病変を有さない。
【００１７】
好適な実施態様において本発明の治療法で治療される患者は、臨床的に明確な多発性硬化症（ＣＤＭＳ）を発症するリスクがあり、これはＯＮの最初の診断の１０年後に３０、２８、２６、２４、２２、又は２０％に等しい又はそれ以下である。
【００１８】
別の実施態様において本発明の治療法で治療される患者は、患者は男性であり、初めてＯＮを診断された時視神経円板浮腫、出血、又は浸出液を示し、及び／又は罹患した目の疼痛が無いため、臨床的に明確な多発性硬化症（ＣＤＭＳ）を発症する低リスクプロフィールを有する。
【００１９】
別の実施態様において本発明の治療法で治療される患者は、最初にＯＮが現れる時、軸策消失及び／又は網膜神経節消失の高リスクを有する。最初にＯＮが現れる時軸策消失及び／又は網膜神経節消失の高リスクを有する患者は、例えばパルス静脈内ステロイド療法で３〜４週間以内に視覚機能が改善しない患者、及び／又は軸索の消失症状（ＯＣＴ、例えば連続的光コヒーレンストモグラフィー（ｓＯＣＴ）、又はスキャニングレーザー偏光測定法（ＳＬＰ）により測定するとＲＮＦＬ厚さが少なくとも平均５％、１０％、２０％、さらには３０％の低下）を示す患者である。さらにＯＮが最初に現れる時に５％を超える又は１０％もしくは１５％を超える軸策消失を示す患者は、本発明の治療法により治療される時、利益を受けると考えられる。かかる軸策消失は、免疫抑制剤（例えばステロイド）による初期治療前又は後に侵襲的又は非侵襲的方法により測定される。好ましくは軸策消失について非侵襲的なインビボのバイオマーカーが測定される。
【００２０】
本発明で用語「多発性硬化症」は、ＤＳＭ−ＩＶ分類のように定義される（「炎症性ＣＮＳ疾患の診断と統計的マニュアル（Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍａｎｕａｌ  ｏｆ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ＣＮＳ  Ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ）」、第４版、アメリカ精神医学会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ）、ワシントンＤ．Ｃ．、１９９４）。
【００２１】
さらに好適な実施態様においてＤＯＮは、１つの視神経でのみ臨床的に現れる。「臨床的に現れる」とは、患者が主観的に感じる（例えば、視力の低下）か、又は生理学的臓器機能が機能的に確認できる量で低下している、生理学的臓器機能の障害のような少なくとも１つの症状を有することを意味する。視神経について確認される生理学的臓器機能には、例えば視力、コントラスト感度、色覚、及び視野がある。
【００２２】
ある実施態様においてＯＮは、治療される患者では臨床的に現れていない。ＯＮが臨床的に現れていない場合、患者は視力は低下していないであろうが、軸策消失のような病理プロセスは、適切な診断法、例えばＯＣＴ、ＳＬＰ、視覚誘発電位（ＶＥＰ）又は網膜電位図（ＰＥＲＧ）記録により確認される。
【００２３】
ある実施態様において本発明で治療される患者は、治療の開始時に少なくとも１つの眼でＲＮＦＬ厚さが３０ミクロン以下、好ましくは２５、２０、又は１５ミクロン以下の低下を有する。
【００２４】
別の実施態様において本発明で治療される患者は、少なくとも１つの眼でＲＮＦＬ厚さが少なくとも１０又は５ミクロンの低下を有する。
【００２５】
本発明のある実施態様において使用されるインターフェロンβタンパク質は、インターフェロンβ１ａであり、例えばＡｖｏｎｅｘ（登録商標）又はＲｅｂｉｆ（登録商標）である。本発明の別の実施態様においてインターフェロンβタンパク質はインターフェロンβ１ｂであり、例えばＢｅｔａｆｅｒｏｎ（登録商標）である。
【００２６】
本発明のさらなる実施態様においてインターフェロンβタンパク質は改変インターフェロンβタンパク質であり、例えば長時間作用型インターフェロンβである。特に長時間作用性インターフェロンβは、ペグ化インターフェロンβ、インターフェロンβＨＡＳ融合タンパク質、及びインターフェロンβＦｃ融合タンパク質から選択される。
【００２７】
好適な実施態様においてＩＦＮは免疫グロブリン分子のコード領域に融合される。好ましくはこれは重鎖領域（例えばヒトＩｇＧ１のＣＨ２及びＣＨ３ドメイン）に融合される。他のアイソフォーム型の免疫グロブリン分子（例えばアイソフォームＩｇＧ2、ＩｇＧ3、もしくはＩｇＧ4）又は他の免疫グロブリンクラス（例えばＩｇＭ又はＩｇＡ）も、本発明の融合タンパク質の作成に適している。融合タンパク質はモノマー又はマルチマー、ヘテロもしくはホモマルチマーでもよい。
【００２８】
さらに好適な実施態様において官能性誘導体は、アミノ酸残基上の１つまたはそれ以上の側鎖として存在する１つまたはそれ以上の官能基に結合した少なくとも１つの成分を含む。好ましくは成分はポリエチレン（ＰＥＧ）成分である。ＰＥＧ化は、例えばＷＯ９９／５５３７７に記載のように公知の方法により行われる。
【００２９】
本発明のある実施態様においてインターフェロンβは、１回の投与当たり少なくとも４４ｍｃｇ皮下投与される。好ましくはインターフェロンβは週３回投与される。ある特に好適な実施態様においてインターフェロンβは、週３回４４ｍｃｇ皮下投与される。
【００３０】
本発明においてインターフェロンβタンパク質は、ステロイド治療の終了後、２８日以内、２１日以内、又は１４日以内、さらに７日以内の間隔で、週３回少なくとも４４ｍｃｇ皮下の用量まで徐々に増量される。
【００３１】
本発明で使用される免疫抑制化合物は、例えば随時抗増殖活性／抗新生物活性を有する免疫抑制剤（例えば、ミトキサントロン、メソトレキセート、アザチオプリン、シクロホスファミド、又はステロイド）から選択される。例えば免疫抑制剤は、以下の用量範囲でヒトに投与される：シクロホスファミド５００〜１５００ｍｇ／ｍ２静脈内；メソトレキセート最大２０ｍｇ経口；ミトキサントロン１２ｍｇ／ｍ２静脈内、又はアザチオプリン２ｍｇ／ｋｇ経口。
【００３２】
好適な実施態様において免疫抑制化合物はステロイド化合物である。
【００３３】
本発明のステロイド化合物は、例えばメチルプレドニソロン、プレドニソンもしくはデキサメタゾン、又はステロイド分泌性薬剤、例えばＡＣＴＨよりなる群から選択される。ステロイドは以下の用量範囲でヒトに投与される：メチルプレドニソロン１〜２ｍｇ静脈内、又は２４〜４８ｍｇ経口；プレドニソン１ｍｇ／ｍ２経口、又はＡＣＴＨ最大１００ＭＩＵ。
【００３４】
好適な実施態様においてステロイド化合物はメチルプレドニソロンである。
【００３５】
ステロイド化合物及びインターフェロンβタンパク質の投与は連続的でも同時でもよい。本発明の好適な実施態様において免疫抑制化合物（例えばステロイド化合物及びインターフェロンβタンパク質）の投与は連続的である。好ましくは免疫抑制化合物による治療は、インターフェロンβタンパク質の投与の前に行われる。
【００３６】
本発明においてステロイド化合物は分割用量で投与される。好適な実施態様においてステロイド化合物は少なくとも２回の分割用量で投与される。
【００３７】
別の好適な実施態様においてステロイド化合物は、視神経炎治療治験（ＯＮＴＴ）プロトコール（Ｂｅｃｋ  ＲＷ，視神経炎研究グループ、視神経炎治療治験、Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  １９８８；１０６：１０５１−５３）。
【００３８】
本発明の治療法は、単独で又はＭＳに有効な追加の化合物と組合せて行われる。すなわち本発明のある実施態様において、さらなる「ＭＳ化合物」（又は「ＭＳ薬」）が患者に投与される。
【００３９】
本明細書において用語「インターフェロンβ（ＩＦＮβ又はＩＦＮ−β）」はヒト繊維芽細胞インターフェロンを含み、これは未変性、すなわち天然の供給源から精製されるか、又は原核生物源（例えば大腸菌（E. coli））又は真核生物宿主細胞（例えば酵母又は哺乳動物細胞）から組換えＤＮＡ技術により得られる。例えばチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ）又はヒト細胞のような哺乳動物細胞は、組換えＩＦＮβの生産のための好適な宿主である。ＩＦＮβはグリコシル化されてもグリコシル化されなくてもよい。本明細書において用語「インターフェロンβ」は、天然のインターフェロンβ、ならびに原核生物（例えば大腸菌）又は真核生物（例えばＣＨＯ）宿主からでも、組換え法により産生されるインターフェロンβを包含する。本発明で使用されるＩＦＮβがグリコシル化されていない（例えば大腸菌中で産生される）場合、グリコシル化ＩＦＮβに匹敵する生物学的作用又は薬理効果を得るために、より多量のＩＦＮβを投与することが好ましい。例えば同等の活性を得るために、グリコシル化ＩＦＮβの量より約１０倍多い量の非グリコシル化ＩＦＮβを投与することが好ましい。本明細書において用語「インターフェロンβ」はまた、ＩＦＮβの官能性誘導体、ムテイン、類似体、又は融合タンパク質を包含する。
【００４０】
すなわち本明細書において用語「インターフェロン（ＩＦＮ）」及び「インターフェロンβ（ＩＦＮβ）」は、生物学的液体から単離することにより得られるような特にヒト起源の繊維芽細胞インターフェロン、又は原核生物もしくは真核生物宿主細胞から組換えＤＮＡ技術により得られるインターフェロン、ならびにその塩、官能性誘導体、変異体、類似体、及び活性断片を含む。
【００４１】
好ましくは本発明の範囲内で使用されるＩＦＮβは、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）、Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標）、又はさらに好ましくはＲｅｂｉｆ（登録商標）である。
【００４２】
Ｒｅｂｉｆ（登録商標）（インターフェロンβ１ａ）は、分子量が約２２，５００ダルトンの精製された１６６アミノ酸の糖タンパク質である。これは組換えＤＮＡ技術を使用して、ヒトインターフェロンβ遺伝子を導入された遺伝子改変したチャイニーズハムスター卵巣細胞を使用して産生される。Ｒｅｂｉｆ（登録商標）のアミノ酸配列は、ヒトインターフェロンβから得られる天然の繊維芽細胞と同じである。天然のインターフェロンβ及びインターフェロンβ１ａ（Ｒｅｂｉｆ（登録商標））はグリコシル化されており、それぞれが単一のＮ結合複合炭水化物成分を含有する。
【００４３】
世界保健機構（Ｗｏｒｌｄ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｏｒｇａｎｉｚａｔｉｏｎ）の天然インターフェロンβ標準物質（インターフェロン第２国際標準物質（Ｓｅｃｏｎｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  ｆｏｒ  Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ）、ヒト繊維芽細胞ＧＢ２３９０２５３１）に対して較正した標準物質を使用すると、ＷＩＳＨ細胞及び水疱性口内炎ウイルス（Ｖｅｓｉｃｕｌａｒ  Ｓｔｏｍａｔｉｔｉｓ  ｖｉｒｕｓ）を使用するインビトロ細胞変性作用バイオアッセイにより測定すると、Ｒｅｂｉｆ（登録商標）は比活性が１ｍｇのインターフェロンβ１ａについて約２億７０００万国際単位（ＭＩＵ）の抗ウイルス活性を有する。
【００４４】
【表１】
2009507003.tif 000002
この方法を使用すると、Ｒｅｂｉｆ（登録商標）４４ｍｃｇは約１２  ＭＩＵの抗ウイルス活性を有する。
【００４５】
ＭＳの現在の薬物療法には、疾患改変治療法、すなわちＭＳの経過を改変、免疫系を調節又は抑制する治療法がある。従って本発明の意味においてＭＳ化合物には、ＲＲＭＳのための４つのＦＤＡ認可免疫調節剤；３つのベータインターフェロン（Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ（登録商標）、Ｂｅｒｌｅｘ；Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）、Ｂｉｏｇｅｎ；Ｒｅｂｉｆ（登録商標）、Ｓｅｒｏｎｏ）、及びＧｌａｔｉｍａｒｅｒ  Ａｃｅｔａｔｅ（Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）がある。本発明の意味においてＭＳの薬物療法はまた、悪化性ＭＳのＦＤＡ認可免疫抑制剤ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）がある。
【００４６】
本発明に適したＩＦＮβは市販されており、例えばＲｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ）、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）（Ｂｉｏｇｅｎ）、又はＢｅｔａｆｅｒｏｎ（登録商標）（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ）である。本発明ではヒト起源のインターフェロンの使用も好ましい。本明細書において用語インターフェロンは、その塩、官能性誘導体、変異体、類似体、及び活性断片を包含する。
【００４７】
Ｒｅｂｉｆ（登録商標）（組換えヒトインターフェロンβ）は、多発性硬化症（ＭＳ）のインターフェロン療法で最も最近開発されたものであり、治療における大きな進歩である。Ｒｅｂｉｆ（登録商標）は、哺乳動物細胞株から産生されたインターフェロン（ＩＦＮ）−ベータ１ａである。インターフェロンβ１ａを週に３回皮下投与することは再発／寛解型多発性硬化症（ＲＲＭＳ）の治療に有効であることが証明された。インターフェロンβ１ａは、再発の頻度と重症度を低減させることにより、及びＭＲＩで測定される疾患及び疾患活性の負荷を低減させることにより、ＭＳの長期経過に有効な作用を有する。
【００４８】
本発明の再発／寛解型ＭＳの治療におけるＩＦＮβの投与は、使用されるＩＦＮβの種類に依存する。
【００４９】
本発明においてＩＦＮが大腸菌で産生された組換えＩＦＮβ１ｂ（商標Ｂｅｔａｓｅｒｏｎで市販されている）である場合、これは好ましくは１日置きに１人当たり約２５０〜３００ｍｃｇ又は８ＭＩＵ〜９．６ＭＩＵの用量で皮下投与される。
【００５０】
本発明においてＩＦＮがチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）で産生された組換えＩＦＮβ１ａ（商標Ａｖｏｎｅｘで市販されている）である場合、これは好ましくは週に１回１人当たり約３０〜３３ｍｃｇ又は６ＭＩＵ〜６．６ＭＩＵの用量で筋肉内投与される。
【００５１】
本発明においてＩＦＮがチャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ細胞）で産生された組換えＩＦＮβ１ａ（商標Ｒｅｂｉｆで市販されている）である場合、これは好ましくは、週に３回（ＴＩＷ）１人当たり２２〜４４ｍｃｇ又は６ＭＩＵ〜１２ＭＩＵの用量で皮下投与される。好ましくは１回の投与当たり４４ｍｃｇ又は１２ＭＩＵの用量が選択される。
【００５２】
本発明のＩＦＮβタンパク質は、ＩＦＮβの誘導体、変異体、及びムテインを含む。
【００５３】
本明細書において「官能性誘導体」は、ＩＦＮ−ベータの誘導体、その変異体又はムテイン及び融合タンパク質を含み、これは残基上の側鎖として又はＮ末端基もしくはＣ末端基として存在する官能基から当該分野で公知の方法により調製される。これらの官能性誘導体は、医薬的に許容される限り、すなわちタンパク質の活性を破壊せず、ＩＦＮβの活性と実質的に同様の又はこれより優れており、これを含有する組成物に有害な性質を付与しない限り、本発明に含まれる。
【００５４】
これらの誘導体は例えばポリエチレングリコール側鎖を含んでよく、これはタンパク質の他の性質、例えば安定性、半減期、バイオアベイラビリティ、人体による耐性、又は免疫原性を改善することがある。この目標を達成するために、ＩＦＮβは例えばポリエチレングリコール（ＰＥＧ）に連結してもよい。ＰＥＧ化は例えばＷＯ９２／１３０９５に記載のような公知の方法により行われる。特にＰＥＧ−ＩＦＮは、ＷＯ９９／５５３７７の教示に従って調製することができる。
【００５５】
従って好適な実施態様においてＩＦＮβの官能性誘導体は、アミノ酸残基上の１つまたはそれ以上の側鎖として存在する１つまたはそれ以上の官能基に結合した少なくとも１つの成分を含む。成分がポリエチレングリコール（ＰＥＧ）成分である実施態様が極めて好ましい。本発明において数個のＰＥＧ成分をＩＦＮβに結合させてもよい。
【００５６】
他の誘導体には、カルボキシル基の脂肪族エステル、カルボキシル基とアンモニア又は１級もしくは２級アミンとの反応によるアミド、アシル成分（例えば、アルカノイルもしくは炭素環アロイル基）と生成されるアミノ酸残基の遊離アミノ基のＮ−アシル誘導体、又はアシル成分と生成される遊離ヒドロキシル基（例えばセリル又はスレオニル残基のもの）のＯ−アシル誘導体がある。
【００５７】
本発明の範囲で使用される「変異体」又は「ムテイン」は、ＩＦＮβの類似体を意味し、ここで天然のＩＦＮβの１つまたはそれ以上のアミノ酸残基は、野生型ＩＦＮβと比較して生じる生成物の活性を大きく低下させることなく、異なるアミノ酸残基で置換されるか、又は欠失されるか、又は１つまたはそれ以上のアミノ酸残基が天然の配列のＩＦＮβに付加される。これらのムテインは、公知の合成法及び／又は部位特異的突然変異誘発法、又は任意の他の適切な方法により調製される。
【００５８】
本発明の用語「変異体」又は「ムテイン」は、厳密性条件下で例えばＵＳ４，７３８，９３１号に開示されたようにＩＦＮβをコードするＤＮＡ又はＲＮＡにハイブリダイズする核酸（例えばＤＮＡ又はＲＮＡ）によりコードされるタンパク質を含む。用語「厳密性条件」は、ハイブリダイゼーションと以後の洗浄条件を意味し、これを当業者は「厳密」であると呼ぶ。Ａｕｓｕｂｅｌら、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（前述）、Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎ．Ｙ．、セクション６．３と６．４（１９８７、１９９２）を参照。特に限定されないが、厳密性条件の例には、試験中のハイブリッドの計算されるＴｍより低い１２〜２０℃での、例えば２×ＳＳＣと０．５％ＳＤＳ中で５分間、２×ＳＳＣと０．１％ＳＤＳ中で１５分間の洗浄条件；０．１×ＳＳＣと０．５％ＳＤＳ中で３７℃で３０〜６０分間、次に０．１×ＳＳＣと０．５％ＳＤＳ中で６８℃で３０〜６０分間の洗浄条件がある。当業者は、厳密性条件がＤＮＡ配列、オリゴヌクレオチドプローブ（例えば１０〜４０塩基）、又はこの混合オリゴヌクレオチドプローブの長さにも依存することを理解するであろう。混合プローブを使用する場合は、ＳＳＣの代わりに塩化テトラメチルアンモニウム（ＴＭＡＣ）を使用することが好ましい。Ａｕｓｕｂｅｌ（前述）を参照されたい。
【００５９】
同一性は、配列を比較することにより決定される２つまたはそれ以上のポリペプチド配列又は２つまたはそれ以上のポリヌクレオチド配列の間の関係を反映する。一般に同一性は、比較される配列の長さにわたって、それぞれ２つのポリヌクレオチド又は２つのポリペプチド配列の正確なヌクレオチド対ヌクレオチド又はアミノ酸対アミノ酸の一致を意味する。
【００６０】
正確な対応の無い配列について、「％同一性」が測定される。一般に、比較される２つの配列は配列間の最大相関を与えるように整列される。これは、整列の程度を上昇させるために、１つの配列又は両方の配列に「ギャップ」を挿入することを含む。％同一性は、比較される配列のそれぞれの全長にわたって決定され（いわゆる全体整列）、これは同じ長さ又は似た長さの配列、又はより短い特定の長さ（いわゆる局所的整列）にわたって特に適しており、これは長さの等しくない配列により適している。
【００６１】
２つまたはそれ以上の配列の同一性と相同性を比較する方法は当該分野で公知である。すなわち例えば、Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐａｃｋａｇｅ、バージョン９．１（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ  Ｊら、１９８４）で入手できるプログラム、例えばプログラムＢＥＳＴＦＩＴとＧＡＰを使用して、２つのポリヌクレオチド間の％同一性、及び２つのポリペプチド配列間の％同一性と％相同性を決定することができる。ＢＥＳＴＦＩＴはＳｍｉｔｈとＷａｔｅｒｍａｎ（１９８１）の「局所相同性」アルゴリズムを使用し、２つの配列間の類似性の最適な単一の領域を見つける。配列間の同一性及び／又は類似性を決定するための他のプログラムも当該分野で公知であり、例えばＢＬＡＳＴファミリのプログラム（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、１９９０，Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら、１９９７、ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｍｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖでＮＣＢＩのホームページからアクセスできる）やＦＡＳＴＡ（Ｐｅａｒｓｏｎ  Ｗ  Ｒ，１９９０）がある。
【００６２】
かかる変異体又はムテインは好ましくは、ＩＦＮβと実質的に同様の活性を有するように、ＩＦＮβのアミノ酸配列と充分重複したの配列を有する。任意の変異体又はムテインがＩＦＮβと同様の活性を有するかどうかを評価するための機能的アッセイは、例えばＹｏｕｃｅｒｆｉら、１９８５が記載したＷＩＳＨ細胞中の水疱性口内炎ウイルスの細胞変性作用に対するインターフェロンの活性を測定するアッセイである。すなわち、あるムテインはＩＦＮβと実質的に同じ活性を有するかどうかを慣習的な実験により測定することができる。
【００６３】
好適な実施態様においてかかる変異体又はムテインは、米国特許第４，７３８，９３１号に記載のＩＦＮβの配列と少なくとも４０％の同一性又は相同性を有する。さらに好ましくはこれは、少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、最も好ましくは少なくとも９０％の同一性又は相同性を有する。
【００６４】
本発明で使用できるＩＦＮβのムテイン、又はこれをコードする核酸は、本明細書に記載した教示や指針に基づき、過度の実験をすることなく、当業者により慣習的に得られる置換ペプチドまたはポリヌクレオチドとして実質的に対応する配列の有限のセットを含む。
【００６５】
本発明のムテインの好適な変化は、「保存的」置換として知られているものである。ＩＦＮβポリペプチドの保存的アミノ酸置換には、群のメンバー間の置換でも分子の生物学的機能が保存されるように、充分に似ている生理化学的性質を有する群内の同義のアミノ酸を含む（例えば、Ｇｒａｎｔｈａｍ，１９７４）。特に挿入及び／又は欠失が数個のアミノ酸（例えば３０未満、好ましくは１０未満）のみを含み、かつ機能コンフォメーションに決定的に重要なアミノ酸（例えばシステイン残基）を除去したり排除したりしないなら、その機能を変化させることなく、上記で定義した配列にアミノ酸を挿入及び／又は欠失させてもよいことは明らかである。かかる欠失及び／又は挿入により産生されるタンパク質及びムテインは、本発明の範囲内である。
【００６６】
好ましくは、同義のアミノ酸群は表Ｉで定義されるものである。さらに好ましくは同義のアミノ酸群は表IIで定義されるものである。さらに好ましくは同義のアミノ酸群は表IIIで定義されるものである。
【００６７】
表Ｉ
同義のアミノ酸の好適な群
アミノ酸      同義の群
Ser           Ser, Thr, Gly, Asn
Arg           Arg, Gln, Lys, Glu, His
Leu           Ile, Phe, Tyr, Met, Val, Leu
Pro           Gly, Ala, Thr, Pro
Thr           Pro, Ser, Ala, Gly, His, Gln, Thr
Ala           Gly, Thr, Pro, Ala
Val           Met, Tyr, Phe, Ile, Leu, Val
Gly           Ala, Thr, Pro, Ser, Gly
Ile           Met, Tyr, Phe, Val, Leu, Ile
Phe           Trp, Met, Tyr, Ile, Val, Leu, Phe
Tyr           Trp, Met, Phe, Ile, Val, Leu, Tyr
Cys           Ser, Thr, Cys
His           Glu, Lys, Gln, Thr, Arg, His
Gln           Glu, Lys, Asn, His, Thr, Arg, Gln
Asn           Gln, Asp, Ser, Asn
Lys           Glu, Gln, His, Arg, Lys
Asp           Glu, Asn, Asp
Glu           Asp, Lys, Asn, Gln, His, Arg, Glu
Met           Phe, Ile, Val, Leu, Met
Trp           Trp
【００６８】
表II
同義のアミノ酸のより好適な群
アミノ酸      同義の群
Ser           Ser
Arg           His, Lys, Arg
Leu           Leu, Ile, Phe, Met
Pro           Ala, Pro
Thr           Thr
Ala           Pro, Ala
Val           Val, Met, Ile
Gly           Gly
Ile           Ile, Met, Phe, Val, Leu
Phe           Met, Tyr, Ile, Leu, Phe
Tyr           Phe, Tyr
Cys           Cys, Ser
His           His, Gln, Arg
Gln           Glu, Gln, His
Asn           Asp, Asn
Lys           Lys, Arg
Asp           Asp, Asn
Glu           Glu, Gln
Met           Met, Phe, Ile, Val, Leu
Trp           Trp
【００６９】
表III
同義のアミノ酸の最も好適な群
アミノ酸      同義の群
Ser           Ser
Arg           Arg
Leu           Leu, Ile, Met
Pro           Pro
Thr           Thr
Ala           Ala
Val           Val
Gly           Gly
Ile           Ile, Met, Leu
Phe           Phe
Tyr           Tyr
Cys           Cys, Ser
His           His
Gln           Gln
Asn           Asn
Lys           Lys
Asp           Asp
Glu           Glu
Met           Met, Ile, Leu
Trp           Met
【００７０】
本発明で使用されるＩＦＮβのムテインを得るために使用できるタンパク質のアミノ酸置換の作成例には、任意の公知の方法、例えばＭａｒｋらの米国特許第４，９５９，３１４号、４，５８８，５８５号、及び４，７３７，４６２号；Ｋｏｔｈｓらの５，１１６，９４３号、Ｎａｍｅｎらの４，９６５，１９５号；Ｃｈｏｎｇらの４，８７９，１１１号；及びＬｅｅらの５，０１７，６９１号に記載のもの；及び米国特許第４，９０４，５８４号（Ｓｈａｗら）に記載のリジン置換タンパク質がある。
【００７１】
特殊な種類のインターフェロン変異体が最近記載されている。いわゆる「コンセンサスインターフェロン」は、ＩＦＮの天然に存在しない変異体である（ＵＳ６，０１３，２５３）。コンセンサスインターフェロンはまた本発明で使用される。
【００７２】
本明細書においてＩＦＮβの「官能性誘導体」は、当該分野で公知の方法により、残基上の側鎖として又はＮ末端もしくはＣ末端基として存在する官能基から調製され、医薬的に許容される限り、すなわち上記タンパク質の生物活性を破壊しない限り、すなわち対応する受容体に結合し受容体シグナル伝達を開始する能力を破壊しない限り、及びこれを含有する組成物に毒性を付与しない限り、本発明に包含される。誘導体は化学的成分（例えば炭水化物又はリン酸塩残基）を有するが、ただしかかる誘導体はタンパク質の生物活性を保持し、医薬的に許容されるままである。
【００７３】
例えば誘導体は、カルボキシル基の脂肪族エステル、カルボキシル基とアンモニア又は１級もしくは２級アミンとの反応によるアミド、アシル成分（例えば、アルカノイルもしくは炭素環アロイル基）と生成されるアミノ酸残基の遊離アミノ基のＮ−アシル誘導体、又はアシル成分と生成される遊離ヒドロキシル基（例えばセリル又はスレオニル残基のもの）のＯ−アシル誘導体がある。かかる誘導体はまたポリエチレングリコール側鎖があり、これは抗原性部位をマスクし、体液中の分子の滞留を延長させることがある。
【００７４】
特に重要なのは、複合体形成物質で誘導体化又は組合せて持続性になるようにしたタンパク質である。例えば本発明でペグ化体又は体内で長期作用性を示すように遺伝子改変タンパク質を使用することができる。インターフェロンβ１ａのペグ化体はＷＯ９９／５５３７７に記載されており、本願のインターフェロンβの定義に含まれると考えられる。
【００７５】
本発明においてＩＦＮβの塩も視神経炎の治療に使用される。
【００７６】
本明細書において用語「塩」は、カルボキシル基の塩、及び上記タンパク質又はその類似体のアミノ基の酸付加塩の両方を意味する。カルボキシル基の塩は当該分野で公知の方法により生成され、無機塩、例えばナトリウム、カルシウム、アンモニウム、第二鉄、もしくは亜鉛塩など、及び例えばアミン（例えばトリエタノールアミン、アルギニン、又はリジン、ピペリジン、プロカインなど）と形成されるような他の塩基との塩を含む。酸付加塩には、例えば鉱酸、例えば塩酸又は硫酸との塩、及び有機酸、例えば酢酸又はシュウ酸との塩がある。もちろんかかる塩は、例えば上記バイオアッセイで測定されるＩＦＮβの生物活性を保持しなければならない。
【００７７】
用語「融合タンパク質」は、別のタンパク質に融合したＩＦＮβを含むタンパク質、又はその変異体もしくは断片を意味し、これは例えば体液中の滞留時間が延長している。すなわちＩＦＮβは、別のタンパク質、ポリペプチドなど（例えば免疫グロブリンまたはその断片）に融合してもよい。
【００７８】
従ってさらなる実施態様においてＩＦＮβは免疫グロブリン融合体を含み、すなわちＩＦＮβは、免疫グロブリンのすべて又は一部に融合したＩＦＮβのすべて又は一部を含む融合タンパク質である。免疫グロブリン融合タンパク質を作成する方法は当該分野で公知であり、例えばＷＯ０１／０３７３７に記載されている。本発明で得られる融合タンパク質がＩＦＮβの生物活性を保持することを当業者は理解するであろう。融合は、直接的でも、短いリンカーペプチド（１〜３アミノ酸残基の長さ又はそれ以上、例えば１３アミノ酸残基の長さでもよい）を介してもよい。該リンカーは配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（ＧＬｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチド、Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−ＧＬｙ−ＧＬｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔを含む１３アミノ酸リンカー配列、又はＩＦＮβ配列と免疫グロブリン配列から得られる配列との間に導入されたＧｌｙ−Ｓｅｒリッチなリンカーでもよい。生じる融合タンパク質は改良された性質、例えば体液中の滞留時間（半減期）の延長、比活性の上昇、発現レベルの上昇、又は融合タンパク質の精製の促進を有する。
【００７９】
さらに好適な実施態様においてＩＦＮβはＩｇ分子の定常領域（しばしば免疫グロブリンのＦｃ部分と呼ばれる）に融合される。好ましくはこれは重鎖領域（例えばヒトＩｇＧ１のＣＨ２及びＣＨ３ドメイン）に融合される。Ｉｇ分子の他のアイソフォーム（例えばアイソフォームＩｇＧ２又はＩｇＧ４、又は他のＩｇクラス、例えばＩｇＭ又はＩｇＡ）も、本発明の融合タンパク質の作成に適している。融合タンパク質はモノマーでも、マルチマーでも、ヘテロもしくはモノマルチマーでもよい。免疫グロブリン融合タンパク質の調製法は当該分野で公知であり、例えばＥＰ５２６４５２又はＵＳ５，１５５，０２７に記載されている。ＩＦＮβ成分を含むＩｇ融合タンパク質は、例えばＥＰ２２７１１０、ＵＳ５，５４１，０８７、ＷＯ９７／２４１３７、又はＷＯ００／２３４７２に記載されている。
【００８０】
本発明の「断片」は、ＩＦＮβの任意のサブセット（すなわち、上記バイオアッセイにより測定される所望の生物活性を保持するより短いペプチド）を意味する。断片は、分子のいずれかの端からアミノ酸を除去し、生成物を受容体アゴニストとしての性質について試験することにより容易に調製される。ポリペプチドのＮ末端又はＣ末端から１回に１つのアミノ酸を除去するためのプロテアーゼは公知であり、生物活性を保持する断片は、Ｙｏｕｃｅｆｉら、１９８５に記載された慣習的な実験のみを含む試験で測定される。
【００８１】
本発明は、上記誘導体を作成するための組換え法を与えるが、これらの誘導体はまた、従来のタンパク質合成法（当業者には公知である）により作成することもできる。
【００８２】
ＩＦＮβ、又はＩＦＮβ活性を有するその変異体／ムテイン、官能性誘導体、活性断片、又は融合タンパク質は、好ましくは全身性に、かつ好ましくは皮下もしくは筋肉内に投与される。皮内、経皮（例えば持続放出性製剤で）、静脈内、経口、頭蓋内、硬膜外、局所的、直腸内、及び鼻内経路も本発明の範囲内である。
【００８３】
他の治療的に有効な投与経路も使用され、例えば上皮もしくは内皮組織を介する吸収、又は遺伝子治療（ＩＦＮβをコードするＤＮＡ分子が患者に投与される（例えばベクターを介して））が使用され、これはＩＦＮβをインビボで発現させ分泌させる。
【００８４】
ＩＦＮβは医薬組成物、すなわち医薬的に許容される担体、賦形剤などと一緒に調製される。
【００８５】
「医薬的に許容される」の定義は、活性成分の生物活性の有効性を妨害せず、投与される宿主に対して毒性ではない任意の担体を包含することを意味する。例えば非経口投与について活性タンパク質は、食塩水、ブドウ糖液、血清アルブミン、及びリンゲル液のようなビヒクル中の注射用の単位投与型で調製される。
【００８６】
本明細書において用語「治療する」又は「治療している」は、一時的に又は永久に症状を改善、軽減するか、症状の原因を排除するか、又は疾患の兆候または症状の出現を防ぐかもしくは遅らせることを意味する。本明細書において用語「治療」は「疾患の予防」という用語を含み、これは例えば、疾患症状の発症を医学的に有意な程度に遅らせることにより証明される。疾患の治療は、例えば疾患が引き起こす症状の低減、又は疾患症状の再発の改善により証明される。
【００８７】
単回投与又は多回投与として個体に投与される用量は、種々の要因［例えばＩＦＮβの薬物動態、投与経路、患者の症状と特徴（性、年齢、体重、健康、サイズ）、症状の程度、同時の治療、治療頻度を含む］により変化する。確立された用量範囲の調整と調節は、当業者により行われる。
【００８８】
本発明の好適な用量と治療法は、１２ＭＩＵ（４４ｍｃｇ）のＩＦＮβを週に３回、１２ＭＩＵ（４４ｍｃｇ）を毎日、２４ＭＩＵ（８８ｍｃｇ）を週に３回、２４ＭＩＵ（８８ｍｃｇ）を毎日、よりなる群から選択される。これらの用量は好ましくは皮下投与される。
【００８９】
１００ｍｃｇ（約２７ＭＩＵ）のＩＦＮβを週に１回筋肉内投与することも好ましい。
【００９０】
１日用量はまた、所望の結果を得るのに有効な分割用量又は持続放出性製剤で投与してもよい。２回目又はそれ以降の投与は、個体に投与された最初の又はその前の用量と同じか、より少ないか、又はより多い用量で行われる。
【００９１】
本発明のさらに好適な実施態様においてＩＦＮβによる治療は、ＭＳの治療に有用な他の薬剤（「ＭＳ剤」）と組合せることができる。これらの薬剤は、組換えＩＦＮβと同時に、別に、又は連続して投与することができる。例えばＭＳの薬物（ＭＳ剤）療法が治療（すなわちＭＳの経過）を改変するか、免疫系を調節もしくは抑制してもよい。すなわち本発明の意味内においてＭＳ剤には、Ｇｌａｔｉｍａｒｅｒ  Ａｃｅｔａｔｅ（Ｃｏｐａｘｏｎｅ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）、ならびに悪化するＭＳのＦＤＡ認可された免疫抑制剤ミトキサントロン（Ｎｏｖａｎｔｒｏｎｅ（登録商標）、Ａｍｇｅｎ）がある。さらにＭＳ治療のために開発中の薬剤も本発明で使用され、例えばスフィンゴシン−１−ホスフェート（Ｓ１Ｐ）受容体アゴニスト、修飾ペプチドリガンド、免疫抑制剤、アデノデアミナーゼインヒビター、IV免疫グロブリンＧ、Ｔ細胞表面マーカーのモノクローナル抗体、ＴＨ２促進サイトカイン、ＴＨ１促進サイトカインの発現を阻害する化合物、抗けいれん剤、ＡＭＰＡグルタミン酸受容体アンタゴニスト、ＶＣＡＭ−１発現のインヒビターもしくはそのリガンドのアンタゴニスト、抗マクロファージ遊走阻止因子、カテプシンＳインヒビター、及びｍＴＯＲインヒビターがある。すなわち本発明の意味内でＭＳ剤は以下を含む：
【００９２】
−  バクロフェン、ジアゼパム、ピラセタム、及びダントロレンを含む抗けいれん剤。例えば抗けいれん剤は、以下の用量でヒトに投与される：バクロフェンを経口で最大１００ｍｇ、ジアゼパムを経口で最大２０ｍｇ、ピラセタムを経口で最大２４ｍｇ、ダントロレンを経口で最大１００ｍｇ、ラモトリジンを最大１００ｍｇ／日、リルゾールを経口で最大１００ｍｇ、チザニジンを経口で最大１２ｍｇ、クロニジンを経口で最大０．１ｍｇ、ベータ遮断薬（例えばプロパノロール）を経口で最大１６０ｍｇ、シプロヘプタジエンを経口で最大８ｍｇ、オルフェナドリンを経口で最大１００ｍｇ、及びカナビノイド（例えばドロナビノール）を経口で最大５ｍｇ。
【００９３】
−  アデノシンデアミナーゼインヒビター、例えばクラドリビン。例えばクラドリビンのようなＡＤＡインヒビターは、最大０．０７ｍｇ／ｋｇ／日の用量範囲でヒトに投与される。
【００９４】
−  修飾ペプチドリガンド、例えば酢酸塩型のグラチラマー。グラチラマーは例えば皮下で最大２０ｍｇ又は経口で最大５０ｍｇでヒトに投与される。
【００９５】
−  ＡＭＰＡグルタミン酸受容体アンタゴニスト、例えば２，３−ジヒドロキシ−６−ニトロ−７−スルファモイルベンゾ（ｆ）キノキサリン、［１，２，３，４−テトラヒドロ−７−モルホリン−イル−２，３−ジオキシ−６−（トリフルオロメチル）キノキサリン−１−イル］メチルホスホネート、１−（４−アミノフェニル）−４−メチル−７，８−メチレン−ジオキシ−５Ｈ−２，３−ベンゾジアゼピン、又は（−）１−（４−アミノフェニル）−４−メチル−７，８−メチレン−ジオキシ−４，５−ジヒドロ−３−メチルカルバモイル−２，３−ベンゾジアゼピン。
【００９６】
−  カテプシンＳインヒビター。カテプシンＳインヒビター（例えばＷＯ０３／２０７２１に開示されたような化合物）は、０．１〜１００ｍｇ／ｋｇ／日の用量範囲でヒトに投与される。
【００９７】
−  免疫グロブリンＧ（例えば、Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，１９９８，Ｍａｙ  ５０（５）：１２７３−８１に開示されているもの）。例えば免疫グロブリンＧは最大４００ｍｇ／ｋｇの用量範囲でヒトに静脈内投与される。
【００９８】
−  種々のＴ細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体、例えばナタリズマブ（Ａｎｔｅｇｒｅｎ（登録商標）、Ｔｙｓａｂｒｉ（登録商標））又はアレムツズマブ。例えば種々のＴ細胞表面マーカーに対するモノクローナル抗体は以下の用量範囲でヒトに投与される：ナタリズマブを静脈内に最大３ｍｇ／ｋｇ、アレムツズマブを皮下又は静脈内に最大３０ｍｃｇ。
【００９９】
−  ＴＨ２促進サイトカイン、例えばＩＬ−４、ＩＬ−１０、又はＴＨ１促進サイトカインの発現を阻害する化合物、例えばホスホジエステラーゼインヒビター、例えばペントキシフィリン、ラモトリジン、リフルゾール、チザニジン、クロニジン、ベータ遮断薬、シプロヘプタジン、オルフェナドリン、又はカナビノイド。例えば、ＴＨ２促進サイトカインは以下の用量範囲でヒトに投与される：ＩＬ−４を皮下に最大３ｌｌｇ／ｋｇ、又はＩＬ−１０を皮下に最大２０ｐ．ｇ／ｋｇ。ＴＨ１促進サイトカインの発現を阻害する化合物（例えばホスホジエステラーゼインヒビターペントキシフィリン）は最大４ｍｇをヒトに経口投与される。
【０１００】
−  ＶＣＡＭ−１発現のインヒビター又はそのリガンドのアンタゴニスト、例えばｔｈｅａ４ＩインテグリンＶＬＡ−４及び／又はアルファ−４−ベータ−７インテグリンのアンタゴニスト、例えばナラリズマブ（ＡＮＴＥＧＲＥＮ）。
【０１０１】
−  Ｓ１Ｐ受容体アゴニスト、例えばＥＰ６２７４０６Ａ１（例えば、式Ｉの化合物）、ＥＰ０７７８２６３Ａ１（例えば式IIIの化合物）、ＷＯ０２／１８３９５（例えば式IVa又はIVbの化合物）、ＷＯ０２／０７６９９５（例えば式Ｖの化合物）、ＪＰ２００２３１６９８５（例えば式VIIIの化合物）、ＷＯ０３／２９１４（例えば、式IIIとIXの化合物）に開示されたＳ１Ｐ受容体アゴニスト。適切な用量と投与経路は、上記化合物についての上記文献から容易にわかる。
【０１０２】
−  ｍＴｏｒインヒビター。例えばｍＴｏｒインヒビター［例えばラパマイシン又はその誘導体、例えば４０−０−（２−ヒドロキシエチル）−ラパマイシン］は、約０．１〜２５ｍｇ／ｋｇ／日の用量範囲で投与される。
【０１０３】
−  抗マクロファージ遊走阻止因子（抗ＭＩＦ）。
【０１０４】
−  抗炎症剤、例えばＵＳ５５４０９３８に記載の抗炎症化合物、例えばファムプリジン；ＷＯ０１／４５６９８に記載の抗炎症化合物、例えばシンバスタチン；ＷＯ９９６７２３０に記載の抗炎症化合物、例えばＣＤＰ３２３；ＷＯ２００４０４３９６５に記載の抗炎症化合物、例えばＭＬＮ３８９７；ＷＯ０３０７０７１１に記載の抗炎症化合物；ＷＯ０１／４７９２０に記載の抗炎症化合物；ＷＯ０３／０６８２３０に記載の抗炎症化合物、例えばデスカーピルフェニドン；ＷＯ９８４８８０２に記載の抗炎症化合物、例えばザリプロデン；ＷＯ０２２８８６６に記載の抗炎症化合物、例えばテンシロリムス；ＷＯ９９／５５６７８に記載の抗炎症化合物、例えばラキニモド；ＥＰ−７２７，４０６、ＷＯ２００４／０２８２５１及びＷＯ２００４／０２８２５１に記載の抗炎症化合物、例えばフィンゴリモド：ＷＯ０２０８０８９７に記載の抗炎症化合物、例えばテリフルノミド。
【０１０５】
通常の技術を有する医師、臨床家、又は獣医師は、症状の進行を緩和、抵抗し、又は停止させるのに必要な単一の活性成分の有効量を容易に決定し処方することができる。毒性を示さずに効力を与える範囲内の活性成分の濃度を達成するのに最適な精度は、標的部位への活性成分の利用可能性の動態に基づく処方を必要とする。
【０１０６】
本発明を充分説明したため、本発明の精神と範囲を逸脱することなくかつ過度の実験をすることなく、広範囲の同等のパラメータ、濃度、及び条件内で本発明を実施できることを当業者は理解するであろう。
【０１０７】
本発明をその具体例に関連して説明しているが、さらなる修飾が可能であることは理解されるであろう。本願は本発明の原理に一般的に従い、かつ本発明に関連する分野で公知もしくは慣習の範囲内で、及びこれまでの基本的な特徴に適用され請求の範囲に従う本開示との差を含む、本発明の任意の変更態様、使用、又は適用を包含することを企図する。
【０１０８】
雑誌論文又は書録、公開されたかもしくは非公開の米国特許もしくは外国特許、公告された米国特許もしくは外国特許、又は任意の他の文献を含む本明細書に引用されたすべての文献は、引用文献中のすべてのデータ、表、図面、及び本文を含む全体が参照することにより本明細書に組み込まれる。従って本明細書に引用された文献内で引用された文献の全内容も参照することにより本明細書に組み込まれる。
【０１０９】
公知の方法の工程、従来法の工程、公知の方法、又は従来法への参照は、決して関係する分野で本発明の態様、説明、又は実施態様が開示、教示、又は示唆されていることを認めるものではない。
【０１１０】
具体例の前記説明は本発明の一般的性質を充分に明らかにしているため、当該分野の技術内の知識（引用文献の内容を含む）を応用することにより、過度の実験をすることなく、本発明の一般的概念から逸脱することなく、種々の応用のためにかかる具体例を容易に修飾及び／又は改変することができるであろう。従ってかかる改変及び修飾は、本明細書に記載の教示と指針に基づき、開示された実施態様の同等物の範囲内であると考えられる。本明細書の語法又は用語は説明のためであって決して限定するものではなく、本明細書の語法又は用語は本明細書に提示した教示と指針に照らして当業者の知識と組合せて解釈すべきである。
【実施例１】
【０１１１】
視神経炎において光コヒーレンストモグラフィーを使用して軸索生存に対する皮下インターフェロンβ１ａの作用を評価
【０１１２】
目的：光コヒーレンストモグラフィー（ＯＣＴ）を使用して、多発性硬化症（ＭＳ）が引き起こす脱髄性視神経炎（ＯＮ）において軸索消失／生存に対する皮下インターフェロンβ１ａ（Ｒｅｂｉｆ（登録商標））の作用を評価する。症例研究を示す。
【０１１３】
方法：患者に標準的神経眼科検査（視力、求心性瞳孔欠陥、眼内圧、及び色視検査を含む）を行った。脳と脊髄病変の程度をＭＲＩで評価した。解析目的に、それぞれの目を１２のセクターに分けて、ベースライン、３ヶ月、６ヶ月、９ヶ月、及び１２ヶ月目にＯＣＴ測定値を得た。
【０１１４】
結果：３５才の白人男性は右目に一側性ＯＮを示し、視神経炎治療治験プロトコールに従って高用量静脈内メチルプレドニソロンにより治療された。患者は４年以上無症候性であり、次に左目にＯＮを示し大きな高強度ＭＲＩ脳病変を示した。ＯＣＴは、右目に顕著に減少したＲＮＦＬ厚さと左目に軽いＲＮＦＬ消失を証明した。再発／寛解型ＭＳで診断して、患者をメチルプレドニソロン、次にＲｅｂｉｆ皮下４４ｍｃｇ週３回で治療した。視力は改善し、ＭＲＩ病変は解消し、シグナル強度の低下した小さな領域となった。連続ＯＣＴ解析は、右目の継続する軸策消失を証明したが、左目の小セクターのＲＮＦＬ厚さがゆっくり上昇した。Ｒｅｂｉｆ療法は充分許容され、最後の２４ヶ月の間、患者は新しいＭＲＩ病変は無く再発が無かった。
【０１１５】
結論：ＯＣＴは、軸策消失／生存を定量するための信頼できる非侵襲的手段である。ＯＮ患者の我々の予備的観察は、臨床症状が無くても、罹患していない目のＲＦＮＬ厚さが経時的に低下することを示唆する。この症例研究の証拠は、インターフェロンβ１ａ皮下による早期積極的治療によりＯＮの無症状のＯＣＴ変化が停止され逆転する可能性のあることを示唆する。早期診断とＩＦＮβによる積極的治療は、長期の臨床的結果を改善することができる。
【実施例２】
【０１１６】
高用量高頻度インターフェロン療法によるインビボ神経保護：多発性硬化症と視神経炎における連続的光コヒーレンストモグラフィー実験
【０１１７】
目的：光コヒーレンストモグラフィー（ＯＣＴ）は網膜神経繊維層（ＲＮＦＬ）厚さを測定する。本研究は、再発／寛解型多発性硬化症（ＲＲＭＳ）と視神経炎（ＯＮ）を有する患者で連続ＯＣＴを使用して、高用量、高周波数インターフェロンβ１ａ皮下（Ｒｅｂｉｆ）療法で起きる軸索の変化を評価した。
【０１１８】
方法：患者（Ｎ＝１８）がＲＲＭＳと一側性ＯＮを有した場合、この進行中のプロスペクティブオープンラベル概念実証試験に参加させ、ベースラインで視神経の浮腫を有するか又は他のＤＭＴで治療中であった場合は除外した。患者は視神経炎治療治験プロトコールに従ってパルスIVメチルプレドニソロン（ＭＰ）で、その直後にＲｅｂｉｆ  ２２ｍｃｇを週３回〜４４ｍｃｇを週３回まで２週間変化させて治療した。１つの眼について１２のセクターのＲＮＦＬ厚さをＳｔｒａｔｕｓ  ＯＣＴを用いて、ベースライン、３、６、９、及び１２ヶ月目に測定した。罹患した目と罹患していない目について別々に、ベースラインから各時点までの変化を、対応のあるｔ−検定により比較した。それぞれの目のタイプでＯＣＴとの相関についてＭＲＩデータを解析した。応答（ベースラインから＞４％の上昇）をセクター毎かつ各タイプの目で応答するセクターの数を解析した。
【０１１９】
結果：ＯＮ患者についての我々の予備観察結果は、罹患した目における急速な軸策消失以外に、患者は臨床的に罹患していない目で、臨床症状が無くても無症候性の軸策消失を有することを示唆する。臨床的に罹患した目では、５つのセクターで３ヶ月までに、６つのセクターでベースライン後の最後の通院（最大１２ヶ月）までにＲＮＦＬ厚さは有意に低下し、臨床的に罹患していない目では、３ヶ月目又はベースライン後の最後の通院でも有意な変化は無かった。
【０１２０】
結論：我々の結果はＭＰとＲｅｂｉｆを用いる治療が、罹患していない目でＲＮＦＬ厚さを維持し、従って神経保護作用を与えることを示唆する。我々のデータは、ＯＮとＭＳの早期診断におけるＯＣＴの有用性を証明し、早期かつ積極的な治療を可能にし、これはＯＮにおける無症候性のＯＣＴ変化を遅らせ、停止させることができ、そして／又は場合によっては逆転させる可能性を有し、良好な長期の予後を促進することを証明している。
【国際調査報告】
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