(57)【要約】  本発明は、ジャスモネート誘導体（例えば、ジャスモン酸メチル、又は式Ｉから式ＶＩＩのいずれかの化合物、又は当該式で表されるジャスモネート誘導体のいずれか）並びに化学療法薬（例えば、ニトロソ尿素、プラチナ化合物、タキサン誘導体、抗腫瘍抗生物質）及び解糖阻害薬（例えば、２−デオキシ−Ｄ−グルコース）から選択される少なくとも１つの他の薬剤を含む組合せを投与することによって癌を治療するための組成物及び方法に関する。ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤は一緒になって、好ましくは相乗的（協働的）である治療効果をもたらす。【特許請求の範囲】
【請求項１】
それを必要とする対象における癌を治療するための方法であって、ジャスモネート誘導体と、ニトロソ尿素、プラチナ化合物、タキサン誘導体、抗腫瘍抗生物質及び解糖阻害薬からなる群から選択される少なくとも１つの他の薬剤との組合せを該対象に投与することを含み、ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤は一緒になって、相乗的治療効果をもたらす、上記方法。
【請求項２】
癌細胞増殖を阻害するための方法であって、癌細胞を、ジャスモネート誘導体と、ニトロソ尿素、プラチナ化合物、タキサン誘導体、抗腫瘍抗生物質及び解糖阻害薬からなる群から選択される少なくとも１つの他の薬剤との組合せと接触させることを含み、ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤は一緒になって、相乗的抗増殖効果をもたらす、上記方法。
【請求項３】
ジャスモネート誘導体がジャスモン酸メチルである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
ジャスモネート誘導体が、以下の式で表される化合物である、請求項１又は２に記載の方法。
【化１】
2009542799.tif 000031
【請求項５】
ジャスモネート誘導体が、以下の式で表される化合物である、請求項１又は２に記載の方法。
【化２】
2009542799.tif 000032
【請求項６】
ジャスモネート誘導体が、式９で表される化合物である、請求項１又は２に記載の方法。
【化３】
2009542799.tif 000033
【請求項７】
ニトロソ尿素が１，３−ビス［２−クロロエチル］−１０−ニトロソ尿素（ＢＣＮＵ）である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項８】
プラチナ化合物がシスプラチンである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項９】
タキサン誘導体がタキソールである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項１０】
抗腫瘍抗生物質がアドリアマイシンである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項１１】
少なくとも１つの他の薬剤が解糖阻害薬である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項１２】
解糖阻害薬が２−デオキシ−Ｄ−グルコース（２ＤＧ）である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
化学療法薬が、１，３−ビス［２−クロロエチル］−１０−ニトロソ尿素（ＢＣＮＵ）、シスプラチン、タキソール及びアドリアマイシンからなる群から選択される、請求項３に記載の方法。
【請求項１４】
解糖阻害薬が２−デオキシ−Ｄ−グルコース（２ＤＧ）である、請求項３に記載の方法。
【請求項１５】
対象がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤が、同一の医薬組成物で投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤が、個別の医薬組成物で、同時に又は任意の順序で順次投与される、請求項１に記載の方法。
【請求項１８】
癌が、癌腫、肉腫又は白血病である、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項１９】
癌が、乳癌、肺癌、結腸癌、前立腺癌又は膵臓癌である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
癌が乳腺癌であり、ジャスモネート誘導体がジャスモン酸メチルであり、少なくとも１つの他の薬剤がタキソールである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項２１】
癌が肺癌であり、ジャスモネート誘導体がジャスモン酸メチルであり、少なくとも１つの他の薬剤がタキソールである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項２２】
癌が膵臓癌であり、ジャスモネート誘導体がジャスモン酸メチルであり、少なくとも１つの他の薬剤がシスプラチン又はＢＣＮＵである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項２３】
癌が胸腺癌であり、ジャスモネート誘導体がジャスモン酸メチルであり、少なくとも１つの他の薬剤がタキソールである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項２４】
癌が前立腺癌であり、ジャスモネート誘導体がジャスモン酸メチルであり、少なくとも１つの他の薬剤がシスプラチン又はタキソールである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項２５】
癌がＢ細胞白血病であり、ジャスモネート誘導体がジャスモン酸メチルであり、少なくとも１つの他の薬剤がアドリアマイシン又はＢＣＮＵである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項２６】
癌が、結腸癌、肺癌又は胸腺癌であり、ジャスモネート誘導体がジャスモン酸メチルであり、少なくとも１つの他の薬剤が２ＤＧである、請求項１又は２に記載の方法。
【請求項２７】
ジャスモネート誘導体と、ニトロソ尿素、プラチナ化合物、タキサン誘導体、抗腫瘍抗生物質及び解糖阻害薬からなる群から選択される少なくとも１つの他の薬剤との組合せを含む医薬組成物であって、ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤の合計量が相乗的治療抗癌効果をもたらす医薬組成物。
【請求項２８】
経口投与、注射による静脈内投与、局部投与、吸入による投与又は坐薬を介する投与に好適な形である、請求項２７に記載の医薬組成物。
【請求項２９】
癌を治療するための医薬品の製造における、ジャスモネート誘導体と、ニトロソ尿素、プラチナ化合物、タキサン誘導体、抗腫瘍抗生物質及び解糖阻害薬からなる群から選択される少なくとも１つの他の薬剤との組合せの使用であって、ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤は一緒になって、相乗的治療効果をもたらす、上記使用。
【請求項３０】
それを必要とする対象における癌を治療するための方法であって、ジャスモネート誘導体と化学療法薬及び解糖阻害薬から選択される少なくとも１つの他の薬剤との組合せを該対象に投与することを含み、ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤は一緒になって、相乗的治療効果をもたらす、上記方法。
【請求項３１】
癌細胞増殖を阻害するための方法であって、癌細胞を、ジャスモネート誘導体と、化学療法薬及び解糖阻害薬から選択される少なくとも１つの他の薬剤との組合せと接触させることを含み、ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤は一緒になって、相乗的抗増殖効果をもたらす、上記方法。
【請求項３２】
化学療法薬が、アルキル化剤、抗生剤、抗代謝剤、ホルモン剤、植物由来薬剤、抗血管形成剤、分化誘発剤、細胞成長抑止誘発剤、アポトーシス誘発剤、細胞毒性剤、生物学的薬剤、遺伝子治療薬、及びそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項３０又は３１に記載の方法。
【請求項３３】
ジャスモネート誘導体がジャスモン酸メチルである、請求項３０又は３１に記載の方法。
【請求項３４】
癌の治療で使用するための、ニトロソ尿素、プラチナ化合物、タキサン誘導体、抗腫瘍抗生物質及び解糖阻害薬からなる群から選択される少なくとも１つの他の薬剤と組合せたジャスモネート誘導体であって、ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤は一緒になって、相乗的治療効果をもたらす、上記ジャスモネート誘導体。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ジャスモネート誘導体を化学療法薬及び／又は解糖阻害薬と組み合わせて含む組合せ治療を用いる癌の治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
ジャスモネートは、オクタデカノイド経路によりリノレン酸から誘導され、多くの可食植物に少量見いだされる植物ストレスホルモン族である。ジャスモネート族などのストレスホルモンは、植物中で進化し、極紫外線、浸透圧衝撃、熱衝撃及び病原菌攻撃などのストレス時に放出されて、適切な応答で終了する様々なカスケードを開始する。ジャスモネート族の構成要素の例は、傷害に応答する細胞内シグナル伝達にとって重要なジャスモン酸、及び創傷又は病原菌攻撃に応答して低濃度で蓄積する、プロテイナーゼ阻害薬を誘発させるジャスモン酸メチル（ＭＪ）である。哺乳類の癌の治療のためのジャスモネートの使用は、その内容が全面的に参照により組み込まれている米国特許第６，４６９，０６１号に開示された。米国特許第６，４６９，０６１号において、ジャスモネートは、乳癌、前立腺癌、皮膚癌及び血液癌から誘導される様々な種類のヒト癌細胞に対して直接的な細胞毒性を有することが示された。特にＭＪは、マウスにおけるリンパ腫の発生の防止に効果的であることが示された（米国特許第６，４６９，０６１号並びにＦｉｎｇｒｕｔ，Ｏ．及びＥ．Ｆｌｅｓｃｈｅｒ．２００２（１）参照）。ＭＪは、ヒト白血病、前立腺、乳房及び黒色腫細胞系並びに慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）患者の白血病細胞の死を誘発することも示された（２、３）。
【０００３】
ジャスモネートは、ヒト白血球Ｍｏｌｔ−４細胞の死を誘発したが、正常な末梢血赤血球（４）、正常なリンパ球（２）及びヒト精子細胞に損傷を与えない。その内容が全面的に参照により組み込まれているＷＯ０２／０８０８９０も参照されたい。これらの結果は、ジャスモネートが形質転換細胞を具体的に標的とするとの結論を強く支持するものである。
【０００４】
その内容が全面的に参照により本明細書に組み込まれているＰＣＴ国際特許公開ＷＯ２００５／０５４１７２には、新規のハロゲン化ジャスモネート誘導体、該誘導体を含む医薬組成物、及び癌細胞成長を抑制するため、且つ癌を治療するためのそれらの使用が開示されている。
【０００５】
そのそれぞれの内容が全面的に参照により本明細書に組み込まれている国際特許公開ＷＯ２００７／０６６３３６及びＷＯ２００７／０６６３３７には、新規のジャスモネート誘導体、該誘導体を含む医薬組成物、及び癌細胞成長を抑制するため、且つ癌を治療するためのそれらの使用が開示されている。
【０００６】
ジャスモネートは、Ｍｏｌｔ−４ヒトリンパ芽球性白血病細胞（１）における壊死及びアポトーシス死の両方を誘発することが可能であることがさらに示された。また、ジャスモネートは、細胞ｍＲＮＡ転写、タンパク質翻訳（５）及びｐ５３発現（６）と無関係に癌細胞を死滅させることが可能である。
【０００７】
最近の研究では、ジャスモネートが細胞死を誘発するメカニズムの分析が行われた。ミトコンドリアは、ジャスモネートの作用のメカニズムにおいて中心的役割を果たすことが認められた。実際、ジャスモネートは、ミトコンドリアに直接作用して、細胞死をもたらす（２）。ジャスモネートは、無傷の癌細胞においてミトコンドリア膜脱分極及びシトクロムｃ放出を誘発した（２）。より重要なことは、ＭＪは、ヒト白血病及び肝癌細胞系並びにＣＬＬ患者の白血病細胞から単離されたミトコンドリアにおいて膨潤及びシトクロムｃ放出を誘発した（２）。しかし、ジャスモネートは、正常のリンパ球から単離されたミトコンドリアにおいてシトクロムｃ放出又は膨潤を誘発しなかった。したがって、正常細胞と癌細胞の差がミトコンドリアレベルで存在すると思われる。興味深いことには、ジャスモネートは、不死であるが、形質転換されていない３Ｔ３ヒト線維芽球から単離されたミトコンドリアにおいて膨潤を誘発せず（２）、新生物性形質転換により、ミトコンドリアがジャスモネートの影響を受けやすくなることを示唆していた。したがって、ＭＪは、直接的なミトコンドリア毒性効果を有し、ミトコンドリアがジャスモネートの標的細胞器官であることを強く示唆している。その主張を支持するものとして、ミトコンドリア浸透転移孔複合体（ＰＴＰＣ、細胞死をもたらすミトコンドリア摂動を媒介する孔）の開口に対する阻害薬は、癌細胞及びこれらの細胞から単離されたミトコンドリア上のＭＪの毒性効果を著しく抑制した。これらの研究（２）は、ジャスモネートがＰＴＰＣに依存して癌細胞を死滅させることを示している。ミトコンドリアに対するジャスモネートの直接的な効果は、前ミトコンドリア抗アポトーシス変異をバイパスすることによって、この抗癌薬類を様々な薬物抵抗性腫瘍に対して潜在的に活性にする能力をそれらに付与するものである。
【０００８】
組合せ化学療法投薬における使用に向けた薬剤の選択のための原理に従って、異なる作用メカニズム及び腫瘍に対する相加的又は相乗的細胞毒性効果を有する薬物を組み合わせることができる（７）。多薬治療は、単薬治療と比較して３つの重要な理論的長所を有する。第１に、非オーバーラップの投与制限毒性を有する薬剤を使用することによって宿主毒性を最小限に抑えながら細胞死滅を最大限にすることができる。第２に、特定の種類の治療に対する内因性抵抗を有する腫瘍細胞に対する薬物活性の範囲を拡大することができる。最後に、新たに抵抗性を有する腫瘍細胞の発生を防止又は遅延させることもできる（７）。実質的に、癌に対するほぼすべての治癒的化学療法投薬が多薬の薬物組合せを採用する（８）。理想的な薬物組合せは、全身毒性の増大を伴わずに悪性腫瘍細胞に対して相乗的に活性である組合せであるが、好ましい毒性プロファイルを有する相加的な抗腫瘍活性も臨床的に有益であり得る（９）。
【０００９】
伝統的な化学療法薬剤を作用のメカニズムによって分類することができる。アルキル化剤は、生物学的に重要な分子において、アミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基及びリン酸基と共有結合を形成することによって細胞機能を弱める。アルキル化の最も重要な部位は、ＤＮＡ、ＲＮＡ及びタンパク質である。アルキル化剤は、活性に対する細胞増殖に依存するが、細胞周期段階に特異的なものではない。アルキル化剤は、それらの化学構造及び共有結合のメカニズムに従って分類される。この薬物類は、窒素マスタード、ニトロソ尿素（ＢＣＮＵ）及びプラチナ錯体（シスプラチン）を含む（７）。タキサンは、イチイ属植物の針葉からの抽出前駆体の半合成誘導体である。これらの薬物は、新規の１４員環、即ちタキサンを有する。微小管解体を引き起こすビンカアルカロイドと異なり、タキサン（例えばタキソール）は、微小管集成及び安定を促進するため、有糸分裂における細胞周期を阻止する（７）。アドリアマイシンのような抗腫瘍抗生物質は、グアニン−シトシン及びグアニン−チミン配列においてＤＮＡをインターカレートすることで、自然酸化及び鎖破壊を引き起こす遊離酸素ラジカルの形成をもたらす（７）。
【００１０】
最近、３つのインビトロのシミュレート低酸素モデルを使用して（１０〜１２）、低酸素条件下の細胞は、好気条件下の細胞より、２−デオキシ−Ｄ−グルコース（２ＤＧ）などの解糖を阻害する薬剤に対して敏感であることが示された。徐々に増殖する腫瘍集団を解糖阻害薬で選択的に死滅させることができるため、当該薬剤と、急速に分裂する好気性細胞を標的とする化学療法薬とを組み合わせることで、これらの治療薬の全体的な効果を高める（１０〜１２）。実際、２ＤＧとシスプラチンの組合せは、インビトロで急速に増殖している様々な細胞系に適用すると、いずれの単独薬剤より効果的である（１３）。２ＤＧとアドリアマイシン（ＡＤＲ）の組合せをＭＣＦ７細胞に用いても同様のインビトロ相乗効果が観察された（１４）。２ＤＧ及びＭＪは、ｗｔ又は変異ｐ５３を発現するＢリンパ腫細胞におけるＡＴＰ枯渇に対する相加的効果を有していたことが認められた（６）。相加的効果の基礎は、恐らくは、ジャスモネート及び２ＤＧが有するＡＴＰを形成する異なる細胞経路、即ちそれぞれ酸化性リン酸化及び解糖に対する阻害作用である。
【００１１】
ＢＣＬ１（Ｂ細胞白血病／リンパ腫１）は、Ｓｌａｖｉｎ及びＳｔｒｏｂｅｒによって１９７８年に最初に記載された２歳の雌のＢＡＬＢ／ｃＫａ（Ｈ−２ｄ）マウスにおける自然発生的なマウス白血病である（１５）。腫瘍マウスは、白血球数が多く、脾腫が目立つ。ＢＣＬ１細胞の細胞学的特徴は、十分に分化されたリンパ球のリンパ腫及び慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）のヒト障害に見られるものと実質的に同じである（１６）。したがって、それらは、これらの疾患の研究に対して有用な動物モデルを提供する。ＣＬＬに関して、多くの患者は、良性の疾患を有し、正常な寿命を生きるが、他の患者は、より悪性の形の疾患を有し、化学療法に対する抵抗により診断後に非常に短い寿命しか生きられない（１７）。クロラムブシル、プレドニソン、及び特定の細胞表面タンパク質に向けられる一定のモノクローナル抗体などの化学療法薬は、インビボでＢ−ＣＬＬアポトーシスを誘発するが、完全な緩解を達成するのが困難であり、究極的にはすべての患者が再発する（１８）。プリン類似体は、有意な臨床的改善を誘発するが、必然的に免疫抑制を伴うため、易感染症をもたらす（１９）。加えて、９−β−Ｄ−アラビノフラノシル−２−フルオロアデニン（フルダラビン）とシクロホスファミドの組合せは、骨髄抑制を誘発する（２０）。したがって、ＣＬＬに対する新規の治療薬として有用であり得る新しい薬剤を単独又は既に知られている薬物と組み合わせて探求することが重要である。
【００１２】
ジャスモネート化合物の薬理活性により、それらは、単独又はさらなる化学療法薬と組み合わせて癌を治療するための治療薬としての魅力的な候補となる。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明は、ジャスモネート誘導体（例えば、ジャスモン酸メチル又は式ＩからＶＩＩのいずれかの化合物若しくは当該式によって例示されるジャスモネート誘導体のいずれか）を、化学療法薬（例えば、ニトロソ尿素、プラチナ化合物、タキサン誘導体、抗腫瘍抗体）、解糖阻害薬（例えば、２−デオキシ−Ｄ−グルコース）又はそれらの組合せから選択される少なくとも１つの他の薬剤と組み合わせて含む組合せを投与することによって癌を治療するための組成物及び方法に関する。好ましくは相乗効果的である治療効果を与える量でジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤を集約的に投与する。
【００１４】
本明細書に記載のジャスモネート誘導体の投与を含む第１の治療と、本明細書に記載の化学療法薬及び解糖阻害薬から選択される１つ又は複数の薬剤を使用する第２の治療との組合せは、治療に有効な抗癌作用を提供し得ることを思いがけず発見した。いくつかの実施形態において、該効果は相乗的である。即ち、ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤が一緒になって、治療投与量で単独で投与された場合にそれぞれ個々の構成成分によって達成される相加的効果より有意に良好な抗癌成果（例えば、細胞成長阻止、アポトーシス、分化の誘発、細胞死等）をもたらす。好ましくは、一連の治療後の組合せ治療の全体的な効果は、一連の治療薬の各々によって個々に達成される効果より有意に良好である。
【００１５】
組合せ治療における各薬剤の投与量を各薬剤による単一治療と比較して低減しながら、全体的な抗腫瘍効果を達成することができるため、治療の組合せは特に有益である。加えて、相乗効果により、有利には患者に投与する薬物の全量を低減することができるため、副作用を減少させることができる。
【００１６】
本明細書に例示されているように、本発明の出願人は、ジャスモン酸メチル（ＭＪ）と従来の化学療法薬（例えば、ニトロソ尿素ＢＣＮＵ、シスプラチン、タキソール及びアドリアマイシン）並びに解糖阻害薬、２−デオキシ−Ｄ−グルコース（２ＤＧ）の相互作用について調査した。ＭＪは、様々な細胞系におけるいくつかの細胞毒性剤及び２ＤＧと相乗的に作用することが認められた。具体的には、ＭＪは、乳腺癌、肺癌、胸腺癌及び前立腺癌細胞系におけるタキソール；膵臓癌及び前立腺癌細胞系におけるシスプラチン；Ｂ細胞白血病細胞系におけるアドリアマイシン、膵臓癌及びＢ細胞白血病細胞系におけるＢＣＮＵとの相乗効果を示した。さらに、ＭＪとアドリアマイシンの組合せ治療は、ＢＣＬ１白血病マウスの生存率を有意に向上させるが、ＭＪ又はアドリアマイシンの単独では生存率の向上を誘発しなかったことがインビトロの結果で証明されている。加えて、ＭＪは、結腸癌、肺癌及び胸腺癌細胞系において２ＤＧと相乗的に作用することが認められた。それらの予期せぬ結果は、ＭＪと化学療法薬の組合せの重要性を強調し、いくつかの種類の癌の治療に対する臨床的価値を有することができることを示唆している。
【００１７】
したがって、本発明は、それを必要とする対象における癌を治療するための方法であって、該方法は、ジャスモネート誘導体と化学療法薬及び解糖阻害薬から選択される少なくとも１つの他の薬剤との組合せを該対象に投与することを含み、ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤は一緒になって、相乗的治療効果をもたらす方法に関する。
【００１８】
別の実施形態において、本発明は、癌細胞増殖を阻害するための方法であって、癌細胞をジャスモネート誘導体と化学療法薬及び解糖阻害薬から選択される少なくとも１つの他の薬剤との組合せと接触させることを含み、ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤は、一緒になって相乗効果をもたらす方法に関する。
【００１９】
さらに別の実施形態において、本発明は、ジャスモネート誘導体と化学療法薬及び解糖阻害薬から選択される少なくとも１つの他の薬剤との組合せの使用であって、ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤は一緒になって、相乗的治療効果をもたらす使用に関する。
【００２０】
「組合せ」又は「組合せ治療」という用語は、本明細書に用いられているように、少なくとも２つの異なる治療薬による任意の形の同時又は並行治療を指す。この用語は、それら２つの治療方式の同時投与、即ち実質的に同じ治療スケジュール、並びに各治療の順次又は交互スケジュールにおける重複投与の両方を包含することを意図する。
【００２１】
ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の化学療法薬を（同一又は個別の剤形で）同時に投与することができ、又は任意の順序で順次投与することもできる。投与を交互投与スケジュールに従って行う、例えば、ジャスモネート誘導体の後に化学治療薬を投与し、次いでさらなる投与量のジャスモネート誘導体の後に解糖阻害薬等を投与することができる。本発明では同時、順次及び交互を含むすべての投与スケジュールが考えられる。
【００２２】
１つの現在好ましい実施形態において、ジャスモネート誘導体は、ジャスモン酸メチルである。別の現在好ましい実施形態において、ジャスモネート誘導体は、以下の式で表される化合物である。
【化１】
2009542799.tif 000002
【００２３】
別の現在好ましい実施形態において、ジャスモネート誘導体は、以下の式で表される化合物である。
【化２】
2009542799.tif 000003
【００２４】
別の現在好ましい実施形態において、ジャスモネートは、式９の化合物である。
【化３】
2009542799.tif 000004
【００２５】
しかし、他の実施形態において、ジャスモネート誘導体は、ジャスモン酸又はその任意の誘導体であり得る。好適なジャスモネート誘導体が、米国特許第６，４６９，０６１号、ＰＣＴ国際特許出願公開第ＷＯ０２／０８０８９０、ＷＯ２００５／０５４１７２並びにＷＯ２００７／０６６３３６及びＷＯ２００７／０６６３３７に開示されている。上記参考文献の各々の内容は、本明細書にすべて記載されているかの如く全面的に参照により本明細書に組み込まれている。
【００２６】
好適な化学療法薬としては、アルキル化剤、抗生剤、抗代謝剤、ホルモン剤、植物由来薬剤及びそれらの合成誘導体、抗血管形成剤、分化誘発剤、細胞成長抑止誘発剤、アポトーシス誘発剤、細胞毒性剤、細胞生体エネルギーに影響を与える、即ち細胞ＡＴＰ値及びこれらの値を調節する分子／活性に影響を与える薬剤、生物学的薬剤、例えば、モノクローナル抗体、キナーゼ阻害薬並びに成長因子及びそれらの受容体の阻害薬、遺伝子治療薬、細胞、例えば幹細胞治療薬、又はそれらの任意の組合せが挙げられるが、それらに限定されない。
【００２７】
いくつかの現在好ましい実施形態において、化学療法薬は、ニトロソ尿素（例えば、１，３−ビス［２−クロロエチル］−１０−ニトロソ尿素（ＢＣＮＵ））、プラチナ化合物（例えば、シスプラチン）、タキサン誘導体（例えば、タキソール）、抗腫瘍抗生物質（例えば、アドリアマイシン）又はそれらの任意の組合せである。別の現在好ましい実施形態において、解糖阻害薬は、２−デオキシ−Ｄ−グルコース（２ＤＧ）である。
【００２８】
別の実施形態において、本発明は、それを必要とする対象における癌を治療するための方法であって、該方法は、ジャスモネート誘導体と、ニトロソ尿素（例えば、１，３−ビス［２−クロロエチル］−１０−ニトロソ尿素（ＢＣＮＵ））、プラチナ化合物（例えば、シスプラチン）、タキサン誘導体（例えば、タキソール）、抗腫瘍抗生物質（例えば、アドリアマイシン）、解糖阻害薬（例えば、２ＤＧ）又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される少なくとも１つの他の薬剤との組合せを該対象に投与することを含み、ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤は一緒になって、治療効果をもたらす方法に関する。好ましい実施形態において、治療効果は相乗的である。
【００２９】
実施形態において、癌は肺癌であり、ジャスモネート誘導体はジャスモン酸メチルであり、少なくとも１つの他の薬剤はタキソールである。別の実施形態において、癌は膵臓癌であり、ジャスモネート誘導体はジャスモン酸メチルであり、少なくとも１つの他の薬剤はシスプラチン又はＢＣＮＵである。別の実施形態において、癌は乳腺癌であり、ジャスモネート誘導体はジャスモン酸メチルであり、少なくとも１つの他の薬剤はタキソールである。別の実施形態において、癌は前立腺癌であり、ジャスモネート誘導体はジャスモン酸メチルであり、少なくとも１つの他の薬剤はシスプラチン又はタキソールである。別の実施形態において、癌はＢ細胞白血病であり、ジャスモネート誘導体はジャスモン酸メチルであり、少なくとも１つの他の薬剤はアドリアマイシン又はＢＣＮＵである。さらに別の実施形態において、癌は結腸癌、肺癌又は乳腺癌であり、ジャスモネート誘導体はジャスモン酸メチルであり、少なくとも１つの他の薬剤は２ＤＧである。
【００３０】
本発明には、第１の量のジャスモネート誘導体と、化学療法薬及び解糖阻害薬から選択される第２の量の少なくとも１つの他の薬剤との組合せを含む医薬組成物も考えられる。総合量のジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤は、相乗的な治療的抗癌効果をもたらす。
【００３１】
本発明の医薬組成物を当該技術分野で知られている任意の形、例えば、経口投与に好適な形（例えば、液剤、懸濁剤、シロップ剤、乳剤、分散剤、懸濁剤、錠剤、丸剤、カプセル剤、ペレット剤、顆粒剤及び粉剤）、非経口投与（例えば、静脈内投与、筋肉内投与、動脈内投与、経皮投与、皮下投与又は腹腔内投与）に好適な形、局部等投与に好適な形、又は坐薬を介する投与に好適な形で与えることができる。１つの特定の実施形態において、活性成分を任意の許容し得る脂質担体に溶解させる。
【００３２】
本発明の組合せは、広範な癌に対して活性である。本発明の組合せは、癌腫、肉腫、骨髄腫、白血病、リンパ腫及び混合型腫瘍を含む広範な癌に対して活性である。治療対象となる特定の範疇の腫瘍としては、リンパ球増殖障害、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頚癌、子宮内膜癌、骨癌、肝臓癌、胃癌、結腸癌、膵臓癌、甲状腺癌、頭及び首の癌、中枢神経系の癌、末梢神経系の癌、皮膚癌、腎臓癌、並びに上記すべての癌の転移が挙げられる。治療の対象となる特定の種類の腫瘍としては、肝細胞癌、血腫、肝芽腫、横紋筋肉腫、食道癌、甲状腺癌、神経節芽細胞腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋上皮肉腫、侵入性腺管癌、乳頭腺癌、黒色腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌（十分に分化、中程度に分化、不十分に分化又は未分化）、腎細胞癌、副腎腫、副腎様腺癌、胆道癌、繊毛上皮腫、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、抗癌腫、小細胞肺癌、非小細胞肺癌及び大細胞肺癌を含む肺癌、膀胱癌、神経膠腫、星状細胞腫、骨芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、網膜芽腫、神経芽腫、結腸癌、直腸癌、急性骨髄性白血病、急性骨髄球性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、肥胖細胞性白血病、多発性骨髄腫、骨髄性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫を含むすべての種類の白血病及びリンパ腫を含む造血系悪性腫瘍が挙げられる。
【００３３】
特に、本発明の組合せは、乳癌、腎臓癌、胃癌、リンパ芽球性白血病を含む白血病、肺癌、黒色腫及び結腸癌に対して活性である。
【００３４】
本発明の適用可能なさらなる実施形態及び全範囲は、以降に示す詳細な説明から明らかになるであろう。しかし、詳細な説明及び具体的な実施例は、本発明の好ましい実施形態を示すが、本発明の主旨及び範囲内の様々な変更及び修正が詳細な説明から当業者に明らかになるため、例示のみを目的として示されることを理解されたい。
【図面の簡単な説明】
【００３５】
【図１】腫瘍細胞系に対するＭＪの細胞毒性効果。細胞毒性は、対照未処理細胞の％（３回の平均値±ｓ．ｅ）として計算される。図１Ａ：ＣＴ２６、ＤＡ−３及びＤ１２２。図１Ｂ：ＴＲＡＭＰ  Ｃ１、ＭＩＡ  ＰａＣａ−２、ＭＣＦ７及びＢＣＬ１。
【図２】ＭＪ及び化学療法薬による組合せ治療のインビトロの異なる癌細胞系に対する細胞毒性効果。細胞毒性は、対照未処理細胞の％（３回の平均値±ｓ．ｅ）として計算される。期待値は、加算性を想定している。実測効果値は、ＭＪと細胞毒性剤の組合せによって実際に生成された値である。  図２Ａ：Ｍｉａ  ＰａＣａ−２細胞を指定濃度のシスプラチン若しくはＢＣＮＵ及び／又は１ｍＭのＭＪでの存在下でインキュベートした。ＢＣＮＵ＋ＭＪ（すべての指定濃度）及びシスプラチン＋ＭＪ（１及び２．５μｇ／ｍｌ）に対する期待細胞毒性値と実測値を比較するとｐＶ＜０．０５。  図２Ｂ：ＭＣＦ７細胞を指定濃度のタキソール及び／又は１ｍＭのＭＪの存在下でインキュベートした。タキソール＋２．５μｇ／ｍｌのＭＪに対する期待細胞毒性値と実測効果を比較するとｐＶ＜０．０５。  図２Ｃ：ＤＡ−３細胞を指定濃度のタキソール及び／又は０．５ｍＭのＭＪの存在下でインキュベートした。タキソール＋１０μｇ／ｍｌを除いてすべての指定濃度のＭＪに対する期待細胞毒性値と実測効果を比較するとｐＶ＜０．０５。  図２Ｄ：Ｄ１２２細胞を指定濃度のタキソール及び／又は１ｍＭのＭＪの存在下でインキュベートした。タキソール＋すべての指定濃度のＭＪに対する期待細胞毒性値と実測効果を比較するとｐＶ＜０．０５。  図２Ｅ：ＴＲＡＭＰ  Ｃ１細胞を指定濃度のタキソール若しくはシスプラチン及び／又は０．５ｍＭのＭＪ（シスプラチンの場合）及び１ｍＭのＭＪ（タキソールの場合）の存在下でインキュベートした。シスプラチン＋２．５μｇ／ｍｌのＭＪに対する期待細胞毒性値と実測効果を比較するとｐＶ＜０．０５。タキソール＋すべての指定濃度のＭＪに対する期待細胞毒性値と実測効果を比較するとｐＶ＜０．０５。
【図３】ＭＪ及び化学療法薬による組合せ治療のＢＣＬ１細胞に対する細胞毒性効果。細胞を指定濃度でＢＣＮＵ（Ａ）又はアドリアマイシン（Ｂ）とともに１時間プレインキュベートし、０．１ｍＭのＭＪを２４時間にわたって添加した。期待値は、加算性を想定している。実測効果値は、ＭＪと細胞毒の組合せによって実際に生成された値である。細胞毒性は、対照未処理細胞の％（３回の平均値±ｓ．ｅ）として計算される。ＢＣＮＵ＋２．５、５、１０μｇ／ｍｌのＭＪ又はアドリアマイシン＋５、１０、２５ｎｇ／ｍｌのＭＪに対する期待細胞毒性値と実測効果を比較するとｐＶ＜０．０５。
【図４】アドリアマイシン（ＡＤＲ）とＭＪの組合せ（ｉ．ｖ．）は、インビボでＢＣＬ１白血病に対して協働効果を示す。マウスを６０ｍｇ／ｋｇのＭＪ（ｉ．ｖ．）で４週間にわたって毎日（１週間に５日）処理した。ＢＣＬ１注射の７日及び１４日後にアドリアマイシン（ＡＤＲ）を４ｍｇ／ｋｇの量で２回ｉ．ｐ．投与した。対照マウスに媒体リポフンジン（ＬＰＦ）を注射した。各グループに１５匹のマウスが存在していた。ＡＤＲ処理マウスとＡＤＲ＋ＭＪ処理マウスの生存率を比較するとｐＶ＝０．０２８。
【図５】ＭＪ及び２ＤＧの異なる細胞系に対する組合せ効果。細胞毒性は、対照未処理細胞の％（３回の平均値±ｓ．ｅ）として計算される。期待値は、加算性を想定している。実測効果値は、ＭＪと細胞毒性剤の組合せによって実際に生成された値である。ＭＪ＋２ＤＧの期待効果とＭＪのすべての指定濃度でのＣＴ−２６及びＤ１２２細胞（図５Ａ及び５Ｂ）並びに０．５ｍＭのＭＪでのＭＣＦ細胞（図５Ｃ）における実測効果を比較するとｐＶ＜０．０５。ＤＡ３（図５Ｄ）細胞の場合における期待値と実測値の差は、有意なものではなかった。
【発明を実施するための形態】
【００３６】
本発明は、ジャスモネート誘導体を化学療法薬及び解糖阻害薬から選択される少なくとも１つの他の薬剤と組み合わせて含む組合せを投与することによって癌を治療するための組成物及び方法に関する。ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤を、治療効果、好ましくは相乗効果をもたらす合計量で投与する。
【００３７】
したがって、本発明は、それを必要とする対象における癌を治療するための方法であって、該方法は、ジャスモネート誘導体と化学療法薬、解糖阻害薬及びそれらの組合せから選択される少なくとも１つの他の薬剤との組合せを該対象に投与することを含み、ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤は一緒になって、相乗的治療効果をもたらす方法に関する。
【００３８】
別の実施形態において、本発明は、癌細胞増殖を阻害するための方法であって、癌細胞をジャスモネート誘導体と化学療法薬、解糖阻害薬及びそれらの組合せから選択される少なくとも１つの他の薬剤との組合せと接触させることを含み、ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤は、一緒になって相乗効果をもたらす方法に関する。
【００３９】
さらに別の実施形態において、本発明は、ジャスモネート誘導体と化学療法薬、解糖阻害薬及びそれらの組合せから選択される少なくとも１つの他の薬剤との組合せの使用であって、ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤は、一緒になって相乗的治療効果をもたらす使用に関する。
【００４０】
組合せ治療は、２つの個々の治療薬に伴う差次的毒性の観点から治療有利性をもたらすことができる。例えば、ジャスモネート誘導体による治療は、化学療法薬又は解糖阻害薬に見られない特定の毒性をもたらし、その逆も真であり得る。そのように、この差次的毒性は、組合せ治療薬が一緒になって治療投与量を提供しながら、組合せ薬剤の構成要素の各々の毒性を回避するように、前記毒性が存在しないか、又は最小になる投与量で各治療薬を投与することを可能にすることができる。また、組合せ治療の結果として達成される治療効果が増補的又は相乗的、即ち相加的治療効果より有意に良好である場合は、薬剤の各々の投与量をさらに低減することができるため、付随する毒性がさらにより大きく低下する。
【００４１】
「相乗的」、「協働的」及び「超相加的」という用語、並びにそれらの様々な文法的変形は、本明細書において区別なく用いられる。ジャスモン酸メチルと別の薬剤の相互作用は、一緒になった薬物の存在下における実測効果（例えば、細胞毒性）が、個別に投与される各薬物の個々の効果（例えば、細胞毒性）の合計より高い場合に、相乗的、協働的又は超相加的であると考えられる。一実施形態において、薬物の実測組合せ効果は、個々の効果の合計より有意に高い。有意という用語は、実測ｐが０．０５未満であることを意味する。
【００４２】
ジャスモネート誘導体
ジャスモン酸を含む任意のジャスモネート誘導体を本発明の組合せに使用することができる。本明細書に用いられているように、「ジャスモネート誘導体」という用語は、特定のジャスモネート誘導体のあらゆる塩、水和物、溶媒和物、多形体、光学異性体、幾何異性体、鏡像異性体、ジアステレオ異性体及びそれらの混合物を含む。
【００４３】
現在好ましい実施形態において、ジャスモネート誘導体は、化学的に設計されたメチル３−オキソ−２−（２−フェニル）シクロペンタン酢酸であるジャスモン酸メチルである。
【００４４】
１つの現在好ましい実施形態において、ジャスモネート誘導体は、ジャスモン酸メチルである。別の現在好ましい実施形態において、ジャスモネート誘導体は、以下の式で表される化合物である。
【化４】
2009542799.tif 000005
【００４５】
別の現在好ましい実施形態において、ジャスモネート誘導体は、以下の式で表される化合物である。
【化５】
2009542799.tif 000006
【００４６】
別の現在好ましい実施形態において、ジャスモネートは、式９の化合物である。
【化６】
2009542799.tif 000007
【００４７】
しかし、他の実施形態において、ジャスモネート誘導体は、ジャスモン酸又はその任意の誘導体であり得る。好適なジャスモネート誘導体としては、Ａ）米国特許第６，４６９，０６１号及びＰＣＴ国際特許出願公開第ＷＯ０２／０８０８９０；Ｂ）ＰＣＴ国際特許出願公開第ＷＯ２００５／０５４１７２；Ｃ）ＰＣＴ国際特許出願公開第ＷＯ２００７／０６６３３６；Ｄ）ＰＣＴ国際特許出願公開第ＷＯ２００７／０６６３３７に記載された誘導体；並びにＥ）ジャスモネート−アミノ酸結合体化合物が挙げられるが、それらに限定されない。上記参考文献の各々の内容は、本明細書にすべて記載されているかの如く全面的に参照により本明細書に組み込まれている。
【００４８】
好適なジャスモネート誘導体の非限定的な例としては、以下のものが挙げられる。
Ａ）式Ｉ：
【化７】
2009542799.tif 000008
（式中、
ｎは、０、１又は２であり；
Ｒ１は、ＯＨ、アルコキシ、Ｏ−グルコシル又はイミノであり；
Ｒ２は、ＯＨ、Ｏ、アルコキシ又はＯ−グルコシルであり；
Ｒ３、Ｒ４及びＲ５は、Ｈ、ＯＨ、アルコキシ又はＯ−グルコシルであり、且つ／又はＲ１及びＲ２若しくはＲ１及びＲ４は、一緒になってラクトンを形成し、さらにはＣ３：Ｃ７、Ｃ４：Ｃ５及びＣ９：Ｃ１０の間の結合は、二重又は一重結合であってもよい）
の構造で表される、米国特許第６，４６９，０６１号及びＷＯ０２／０８０８９０に開示された化合物；或いは前記式の誘導体（該誘導体は、Ｃ３における低級アシル側鎖（遊離酸又はエステル若しくは結合体）、Ｃ６における炭素にケト又はヒドロキシ（遊離ヒドロキシ又はエステル）成分、或いはＣ７におけるｎ−ペンテニル又はｎ−ペンチル側鎖の少なくとも１つを有する）；並びにそれらの塩、水和物、溶媒和物、多形体、光学異性体、幾何異性体、鏡像異性体、ジアステレオ異性体及び混合物。
【００４９】
代表的なジャスモネート誘導体としては、ジャスモン酸メチル、ジャスモン酸、ジャスモン、７−イソ−ジャスモン酸、９，１０−ジヒドロジャスモン酸、２，３−ジデヒドロジャスモン酸、３，４−ジデヒドロジャスモン酸、３，７−ジデヒドロジャスモン酸、４，５−ジデヒドロジャスモン酸、４，５−ジデヒドロ−７−イソ−ジャスモン酸、ククルビン酸、６−エピ−ククルビン酸、６−エピ−ククルビン酸ラクトン、１２−ヒドロキシ−ジャスモン酸、１２−ヒドロキシ−ジャスモン酸−ラクトン、１１−ヒドロキシ−ジャスモン酸、８−ヒドロキシ−ジャスモン酸、ホモ−ジャスモン酸、ジホモ−ジャスモン酸、１１−ヒドロキシ−ジホモ−ジャスモン酸、８−ヒドロキシ−ジホモ−ジャスモン酸、ツベロン酸、ツベロン酸−Ｏ−β−グルコピラノシド、ククルビン酸−Ｏ−β−グルコピラノシド、５，６−ジデヒドロジャスモン酸、６，７−ジデヒドロ−ジャスモン酸、７，８−ジデヒドロジャスモン酸、シス−ジャスモン、メチル−ジヒドロ−イソジャスモネート、ジヒドロ−ジャスモン、ジャスモン酸のアミノ酸結合体、前記ジャスモン酸の低級アルキルエステルが挙げられるが、それらに限定されない。
【００５０】
Ｂ）式ＩＩ：
【化８】
2009542799.tif 000009
（式中、
ｎは、０、１又は２であり；
Ｒ１は、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２置換アルコキシ、アリールオキシ、Ｏ−グルコシル又はイミノであり；
Ｒ２は、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２置換アルコキシ、Ｏ−グルコシル、オキソ、アルキル又はイミノであり；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥは、それぞれ独立に、Ｈ、ハロゲン、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ１２アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ１２置換アルコキシ、アリールオキシ、Ｏ−グルコシル、Ｃ１〜Ｃ１２アルキル又はＣ１〜Ｃ１２置換アルキルであり；Ｒ１及びＲ２又はＲ１及びＲ４は一緒になって、所望により置換されたラクトンを形成してもよく；Ｃ３：Ｃ７、Ｃ４：Ｃ５及びＣ９：Ｃ１０は、独立に、二重結合又は一重結合であってもよく；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６、Ｒ７、Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｄ及びＥの少なくとも１つがハロゲンであることを条件とする）の構造で表される、ＷＯ２００５／０５４１７２に開示された化合物、並びにそれらの塩、水和物、溶媒和物、多形体、光学異性体、幾何異性体、鏡像異性体、ジアステレオ異性体及び混合物。
【００５１】
代表的なジャスモネート誘導体としては、二臭化ジャスモン酸メチル（ＭＪＤＢ）、四臭化ジャスモン酸メチル（ＭＪＴＢ）、Ｒ６及びＲ７がそれぞれフルオロである化合物、Ｒ６及びＲ７がそれぞれヨードである化合物、Ｒ６及びＲ７がそれぞれクロロである化合物、Ｒ６及びＲ７の一方がヨードであり、他方がヒドロキシである化合物、並びにＲ６及びＲ７の一方がヨードであり、他方がメトキシである化合物が挙げられるが、それらに限定されない。
【００５２】
Ｃ）それらの塩、水和物、溶媒和物、多形体、光学異性体、幾何異性体、鏡像異性体、ジアステレオ異性体及び混合物を含めて、式ＩＩＩの構造で表される、ＰＣＴ国際特許出願ＰＣＴ／ＩＬ２００６／００１４０８に開示された化合物。
【化９】
2009542799.tif 000010
（式中、
Ａは、
ａ）ＣＯＲ１；
ｂ）Ｏ−ＣＯＲ１０；及び
ｃ）ＯＲ１１からなる群から選択され；
Ｒ１は、
ａ）ヘテロアリールオキシ；
ｂ）−Ｏ［（ＣＨ２）ｐＯ］ｍ−Ｒ１２；
ｃ）式：
【化１０】
2009542799.tif 000011
の基からなる群から選択され、
ｄ）Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７の少なくとも１つがハロアルキルである場合、又はＲ５及びＲ６は、それらが結合した炭素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル又はハロで置換されたＣ３〜Ｃ８シクロアルキルを形成する場合は、Ｒ１は、水素又は無置換若しくは置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキルをさらに表すことができ；
Ｒ２は、水素、無置換又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、無置換又は置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、無置換又は置換アリール、無置換又は置換ヘテロアリール、ＯＲ８、オキソ及びＮＲ９ａＲ９ｂからなる群から選択され；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立に、水素、ハロゲン、無置換又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、無置換又は置換Ｃ１〜Ｃ１２ハロアルキル、無置換又は置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、無置換又は置換アリール、無置換又は置換ヘテロアリール、ＯＲ８及びＮＲ９ａＲ９ｂからなる群から選択され；
或いはＲ５及びＲ６は、それらが結合した炭素と一緒になって、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル又はハロで置換されたＣ３〜Ｃ８シクロアルキルを形成し；
或いはＲ５及びＲ６の一方は、Ｃ６に結合することによって、それぞれ酸素含有６又は５員複素環式環を形成する酸素原子を表し；
Ｃ９とＣ１０の結合は、一重又は二重結合であってもよく；
Ｒ８、Ｒ９ａ及びＲ９ｂは、それぞれ独立に、水素、無置換又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、無置換又は置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、無置換又は置換アリール、無置換又は置換ヘテロアリール、グルコシルからなる群から選択され、或いはＲ９ａ及びＲ９ｂは、それらが結合した窒素と一緒になって、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１つ又は複数のさらなるヘテロ原子を所望により含む無置換又は置換複素環式又は芳香族複素環式環を形成し；
Ｒ１０は、水素、無置換又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、無置換又は置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、無置換又は置換アリール及び無置換又は置換ヘテロアリールからなる群から選択され；
Ｒ１１及びＲ１２は、それぞれ独立に、水素又はヒドロキシ保護基であり；
Ｒ１３は、カルボキシ保護基であり；
Ｒ１４は、天然又は非天然アミノ酸の残基であり；
ｎは、０、１及び２から選択され；
ｍは、１から２０の整数であり；
ｐは、１から１２の整数である。）。
【００５３】
式ＩＩＩの化合物の具体例としては、
【化１１】
2009542799.tif 000012
が挙げられるが、それらに限定されない。
【００５４】
別の例は、式１２の構造で表されるジャスモネート誘導体を含む。
【化１２】
2009542799.tif 000013
【００５５】
Ｄ）以下の化合物を含む、ＰＣＴ国際特許公開ＷＯ２００７／０６６３３７に開示された化合物。
ａ）それらの塩、水和物、溶媒和物、多形体、光学異性体、幾何異性体、鏡像異性体、ジアステレオ異性体及び混合物を含めて、式ＩＶの構造で表される化合物。
【化１３】
2009542799.tif 000014
（式中、
ｎは、０、１又は２であり；
Ｒ１は、水素、無置換又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、無置換又は置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、無置換又は置換アリール、無置換又は置換ヘテロアリール、天然又は非天然アミノ酸、ペプチド、ＯＲ８及びＮＲ９ａＲ９ｂからなる群から選択され；
Ｒ２は、水素、無置換又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、無置換又は置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、無置換又は置換アリール、無置換又は置換ヘテロアリール、ＯＲ８、ＮＲ９ａＲ９ｂ、ＮＨＣＯＲ１０及びＮＨＳＯ２Ｒ１１からなる群から選択され；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立に、水素、無置換又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、無置換又は置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、無置換又は置換アリール、無置換又は置換ヘテロアリール、ＯＲ８及びＮＲ９ａＲ９ｂからなる群から選択され；
Ｃ９とＣ１０の結合は、一重又は二重結合であってもよく；
Ｒ８、Ｒ９ａ、Ｒ９ｂ、Ｒ１０及びＲ１１は、それぞれ独立に、水素、無置換又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、無置換又は置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、無置換又は置換アリール、無置換又は置換ヘテロアリール、グルコシルからなる群から選択され、或いはＲ９ａ及びＲ９ｂは、それらが結合した窒素と一緒になって、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１つ又は複数のさらなるヘテロ原子を所望により含む無置換又は置換複素環式又は芳香族複素環式環を形成することができる。）。
【００５６】
式ＩＶの化合物の具体例としては、
【化１４】
2009542799.tif 000015
が挙げられるが、それらに限定されない。
【００５７】
ｂ）それらの塩、水和物、溶媒和物、多形体、光学異性体、幾何異性体、鏡像異性体、ジアステレオ異性体及び混合物を含めて、式Ｖの構造で表される化合物。
【化１５】
2009542799.tif 000016
（式中、
ｎは、各存在において独立に、０、１又は２であり；
Ｒ１は、式：
【化１６】
2009542799.tif 000017
の基であり；
Ｒ２は、各存在において独立に、水素、無置換又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、無置換又は置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、無置換又は置換アリール、無置換又は置換ヘテロアリール、ＯＲ８、オキソ及びＮＲ９ａＲ９ｂからなる群から選択され；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、各存在においてそれぞれ独立に、水素、無置換又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、無置換又は置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、無置換又は置換アリール、無置換又は置換ヘテロアリール、ＯＲ８及びＮＲ９ａＲ９ｂからなる群から選択され；
Ｃ９とＣ１０の結合は、各存在において独立に、一重又は二重結合であってもよく；
Ｒ８、Ｒ９ａ及びＲ９ｂは、各存在においてそれぞれ独立に、水素、無置換又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、無置換又は置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、無置換又は置換アリール、無置換又は置換ヘテロアリール、グルコシルからなる群から選択され、或いはＲ９ａ及びＲ９ｂは、それらが結合した窒素と一緒になって、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１つ又は複数のさらなるヘテロ原子を所望により含む無置換又は置換複素環式又は芳香族複素環式環を形成することができる。）。
【００５８】
式Ｖの化合物の具体例は、
【化１７】
2009542799.tif 000018
である。
【００５９】
ｃ）それらの塩、水和物、溶媒和物、多形体、光学異性体、幾何異性体、鏡像異性体、ジアステレオ異性体及び混合物を含めて、式ＶＩの構造で表される化合物。
【化１８】
2009542799.tif 000019
（式中、
ｎは、０、１又は２であり；
Ｒ１は、天然又は非天然アミノ酸又はペプチドであり；
Ｒ２は、水素、無置換又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、無置換又は置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、無置換又は置換アリール、無置換又は置換ヘテロアリール、ＯＲ８、オキソ及びＮＲ９ａＲ９ｂからなる群から選択され；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、それぞれ独立に、水素、無置換又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、無置換又は置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、無置換又は置換アリール、無置換又は置換ヘテロアリール、ＯＲ８及びＮＲ９ａＲ９ｂからなる群から選択され；
Ｃ９とＣ１０の結合は、一重又は二重結合であってもよく；
Ｒ８、Ｒ９ａ及びＲ９ｂは、それぞれ独立に、水素、無置換又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、無置換又は置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、無置換又は置換アリール、無置換又は置換ヘテロアリール、グルコシルからなる群から選択され、或いはＲ９ａ及びＲ９ｂは、それらが結合した窒素と一緒になって、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１つ又は複数のさらなるヘテロ原子を所望により含む無置換又は置換複素環式又は芳香族複素環式環を形成することができる。）。
【００６０】
式ＶＩの化合物におけるアミノ酸残基は、任意の天然又は非天然アミノ酸の残基であり得る。現在好ましいアミノ酸は、ロイシン及びトリプトファンである。しかし、本明細書に定義されており、当業者に知られている任意の他の天然及び非天然アミノ酸を本発明のジャスモネート−アミノ酸誘導体に組み込むことができる。或いは、Ｒ１基は、天然アミノ酸、非天然アミノ酸又はそれらの組合せであり得る２つ以上のアミノ酸を含むペプチド配列を表すことができる。
【００６１】
式ＶＩの化合物の例としては、
【化１９】
2009542799.tif 000020
が挙げられるが、それらに限定されない。
ｄ）複数の共有結合ジャスモン酸成分を含むダイマー、オリゴマー又はポリマージャスモネート誘導体：それらの塩、水和物、溶媒和物、多形体、光学異性体、幾何異性体、鏡像異性体、ジアステレオ異性体及び混合物を含めて、式ＶＩＩの構造で表される化合物。
【化２０】
2009542799.tif 000021
（式中、
ｎは、各存在において独立に、０、１又は２であり；
ｐは、２、３、４、５又は６であり；
Ｒ１は、−Ｏ−、ポリオキシＣ１〜Ｃ１２アルキレン及び糖成分からなる群から選択されるリンカであり；
Ｒ２は、各存在において独立に、水素、無置換又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、無置換又は置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、無置換又は置換アリール、無置換又は置換ヘテロアリール、ＯＲ８、オキソ及びＮＲ９ａＲ９ｂからなる群から選択され；
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７は、各存在においてそれぞれ独立に、水素、無置換又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、無置換又は置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、無置換又は置換アリール、無置換又は置換ヘテロアリール、ＯＲ８及びＮＲ９ａＲ９ｂからなる群から選択され；
Ｃ９とＣ１０の結合は、各存在において独立に、一重又は二重結合であってもよく；
Ｒ８、Ｒ９ａ及びＲ９ｂは、各存在においてそれぞれ独立に、水素、無置換又は置換Ｃ１〜Ｃ１２アルキル、無置換又は置換Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、無置換又は置換アリール、無置換又は置換ヘテロアリール、グルコシルからなる群から選択され、或いはＲ９ａ及びＲ９ｂは、それらが結合した窒素と一緒になって、Ｏ、Ｎ及びＳから選択される１つ又は複数のさらなるヘテロ原子を所望により含む無置換又は置換複素環式又は芳香族複素環式環を形成することができる。）。
【００６２】
式ＶＩＩの化合物の具体例としては、
【化２１】
2009542799.tif 000022
が挙げられるが、それらに限定されない。
【００６３】
ｅ）式ＶＩＩＩの構造で表される、リンカ糖成分を介して結合された複数のジャスモネート成分を含むオリゴマー化合物。
【化２２】
2009542799.tif 000023
（式中、
Ｒは、式：
【化２３】
2009542799.tif 000024
で表され、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６及びＲ７の各々は、以上に定義した通りである。）。
【００６４】
式ＶＩＩＩの化合物の具体例は、
【化２４】
2009542799.tif 000025
である。
【００６５】
Ｅ）ジャスモン酸−アミノ酸結合体。
カルボキシル基を介してアミノ酸に結合したジャスモン酸は、天然で存在する（Ｐｌａｎｔ  Ｈｏｒｍｏｎｅｓ、Ｄａｖｉｅｓ  ＰＪ編、Ｋｌｕｗｅｒ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、Ｌｏｎｄｏｎ、２００４、６１８、６２０頁）。いくつかのジャスモン酸−アミノ酸結合体を合成により調製した。アミノ酸としては、グリシン、アラニン、バリン、ロイシン及びイソロイシンが挙げられる（Ｊｉｋｕｍａｒｕ  Ｙら、Ｂｉｏｓｃｉ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６８、１４６１〜１４６６、２００４）。これらの参考文献の内容は、本明細書にすべて記載されているかの如く全面的に参照により組み込まれている。これらの結合体のすべては、本発明の方法で用いることができる。
【００６６】
混合した形、又は純粋若しくは実質的に純粋な形の上記ジャスモネート誘導体のすべての立体異性体が考えられる。ジャスモネート誘導体は、原子のいずれかにおいて非対称中心を有することができる。結果として、該化合物は、鏡像異性体又はジアステレオ異性体或いはそれらの混合物の形で存在することができる。本発明では、あらゆるラセミ体（即ち、当量の各鏡像異性体を含む混合物）、鏡像異性体として高濃度の混合物（即ち、１つの鏡像異性体について高濃度の混合物）、純粋な鏡像異性体又はジアステレオ異性体、或いはそれらのあらゆる混合物が考えられる。キラル中心をＲ又はＳ又はＲ，Ｓ又はｄ，Ｄ、ｌ，Ｌ又はｄ，ｌ、Ｄ，Ｌで示すことができる。アミノ酸残基を含む化合物としては、Ｄ−アミノ酸、Ｌ−アミノ酸又はアミノ酸のラセミ誘導体が挙げられる。糖残基を含む化合物としては、Ｄ−糖、Ｌ−糖又は糖のラセミ誘導体の残基が挙げられる。天然で存在するＤ−糖の残基が好ましい。加えて、本発明の化合物のいくつかは、１つ又は複数の二重結合を含む。本発明は、各存在において独立に、シス、トランス、Ｅ及びＺ異性体を含むすべての構造的異性体及び幾何異性体を包含することを意図する。
【００６７】
本発明の化合物の１種又は複数種が塩として存在してもよい。「塩」という用語は、カルボン酸塩又はアミン窒素を有する塩を含むが、それらに限定されない塩基付加塩及び酸付加塩の両方を包含し、以下に記載する有機及び無機アニオン及びカチオンで形成された塩を含む。また、該用語は、塩基性基（アミノ基など）及び有機又は無機酸との標準的な酸−塩基反応によって形成する塩を含む。当該酸としては、塩酸、フッ化水素酸、トリフルオロ酢酸、硫酸、リン酸、酢酸、コハク酸、クエン酸、乳酸、マレイン酸、フマル酸、パルミチン酸、コリン酸、パモ酸、ムチン酸、Ｄ−グルタミン酸、Ｄ−樟脳酸、グルタル酸、フタル酸、酒石酸、ラウリン酸、ステアリン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、ソルビン酸、ピクリン酸、安息香酸及び桂皮酸及び類似の酸が挙げられる。
【００６８】
「有機又は無機カチオン」という用語は、カルボン酸塩のカルボン酸アニオンに対する対イオンを指す。対イオンは、アルカリ金属及びアルカリ土類金属（リチウム、ナトリウム、カリウム、バリウム、アルミニウム及びカルシウムなど）；アンモニウム、並びにモノアルキルアミン、ジアルキルアミン及びトリメチルアミンなどのトリアルキルアミン、シクロヘキシルアミン；並びにジベンジルアンモニウム、ベンジルアンモニウム、２−ヒドロキシエチルアンモニウム、ビス（２−ヒドロキシエチル）アンモニウム、フェニルエチルベンジルアンモニウム、ジベンジルエチレンジアンモニウムなどの有機カチオン及び類似のカチオンから選択される。例えば、参照により本明細書に組み込まれている「医薬塩（Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ）」、Ｂｅｒｇｅら、Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．、６６：１〜１９（１９７７）を参照されたい。上記用語に包含される他のカチオンとしては、プロカイン、キニン及びＮ−メチルグルコサミンのプロトン化形、並びにグリシン、オルニチン、ヒスチジン、フェニルグリシン、リシン及びアルギニンなどの塩基性アミノ酸のプロトン化形が挙げられる。また、カルボン酸及びアミノ基によって形成される本化合物の任意の両性イオン形も考えられる。
【００６９】
本発明は、また、本発明の化合物の溶媒和物及びそれらの塩を含む。「溶媒和物」は、本発明の化合物と１つ又は複数の溶媒分子との物理的結合を指す。この物理的結合は、水素結合を含む様々な程度のイオン結合及び共有結合を含む。場合によっては、溶媒は単離可能である。「溶媒和物」は、溶液相及び単離可能溶媒の両方を包含する。好適な溶媒和物の非限定的な例としては、エタノレート及びメタノレート等が挙げられる。「水和物」は、溶媒分子が水である溶媒和物である。
【００７０】
本発明は、また、本発明の化合物の多形体及びそれらの塩を含む。「多形体」という用語は、Ｘ線回折、ＩＲスペクトル及び融点などの特定の物理特性によって特徴づけることができる基質の特定の結晶状態を指す。
【００７１】
化学療法薬
本発明の組合せに使用するのに好適な化学療法薬としては、アルキル化剤、抗生剤、抗代謝剤、ホルモン剤、植物由来薬剤、抗血管形成剤、分化誘発剤、細胞成長抑止誘発剤、アポトーシス誘発剤、細胞毒性剤、細胞生体エネルギーに影響を与える薬剤、生物学的薬剤、例えば、モノクローナル抗体、キナーゼ阻害薬並びに成長因子及びそれらの受容体の阻害薬、遺伝子治療薬、細胞、例えば幹細胞治療薬、又はそれらの任意の組合せが挙げられるが、それらに限定されない。
【００７２】
アルキル化剤は、生物学的に重要な分子において、アミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基及びリン酸基と共有結合を形成することによって細胞機能を阻害する薬物である。アルキル化の最も重要な部位は、ＤＮＡ、ＲＮＡ及びタンパク質である。アルキル化剤は、活性に対する細胞増殖に依存するが、細胞周期段階に特異的なものではない。本発明に使用するのに好適なアルキル化剤としては、ビスクロロエチルアミン（窒素マスタード、例えば、クロラムブシル、シクロホスファミド、イフォスファミド、メクロレタミン、メルファラン、ウラシルマスタード）、アジリジン（例えば、チオテパ）、スルホン酸アルキルアルコン（例えば、ブスルファン）、ニトロソ尿素（例えば、ＢＣＮＵ、カルムスチン、ロムスチン、ストレプトゾシン）、非古典的アルキル化剤（例えば、アルトレタミン、デカルバジン及びプロカルバジン）並びにプラチナ化合物（例えば、カルボプラスチン及びシスプラチン）が挙げられるが、それらに限定されない。
【００７３】
アドリアマイシンのような抗腫瘍抗生物質は、グアニン−シトシン及びグアニン−チミン配列においてＤＮＡをインターカレートすることで、自然酸化及び鎖破壊を引き起こす遊離酸素ラジカルの形成をもたらす（７）。本発明に使用するのに好適な他の抗生剤としては、アントラシクリン（例えば、ドキソルビシン、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシン及びアントラセンジオン）、ミトマイシンＣ、ブレオマイシン、ダクチノマイシン及びプリカトマイシンが挙げられるが、それらに限定されない。
【００７４】
本発明に使用するのに好適な抗代謝剤としては、フロクスリジン、フルオロウラシル、メトトレキセート、ロイコボリン、ヒドロキシ尿素、チオグアニン、メルカプトプリン、シタラビン、ペントスタチン、リン酸フルダラビン、クラドリビン、アスパラギナーゼ及びゲムシタビンが挙げられるが、それらに限定されない。
【００７５】
本発明に使用するのに好適なホルモン剤としては、エストロゲン、プロゲストゲン、アンチエステロゲン、アンドロゲン、アンチアンドロゲン、ＬＨＲＨ類似体、アロマターゼ阻害薬、ジエチルスチベストロール、タモキシフェン、トレミフェン、フルオキシメステロール、ラロキシフェン、ビカルタミド、ニルタミド、フルタミド、アミノグルテチミド、テトラゾール、ケトコナゾール、酢酸ゴセレリン、ロイプロリド、酢酸メゲストロール及びミフェプリストーンが挙げられるが、それらに限定されない。
【００７６】
植物由来薬剤としては、イチイ属植物の針葉からの抽出前駆体の半合成誘導体であるタキサンが挙げられる。これらの薬物は、新規の１４員環、即ちタキサンを有する。微小管解体を引き起こすビンカアルカロイドと異なり、タキサン（例えばタキソール）は、微小管集成及び安定を促進するため、有糸分裂における細胞周期を阻止する（７）。他の植物由来薬剤としては、ビンクリスチン、ビンブラスチン、ビンデシン、ビンゾリジン、ビノレルビン、エトポシド、テニポシド及びドセタキセルが挙げられるが、それらに限定されない。
【００７７】
本発明に使用するのに好適な生物学的薬剤としては、免疫調節タンパク質、腫瘍抗原に対するモノクローナル抗体、腫瘍抑制遺伝子、キナーゼ阻害薬、及び成長因子及びそれらの受容体の阻害薬、並びに癌ワクチンが挙げられるが、それらに限定されない。例えば、免疫調節タンパク質は、インターロイキン２、インターロイキン４、インターロイキン１２、インターフェロンＥ１インターフェロンＤ、インターフェロンアルファ、エリスロポエチン、顆粒球−ＣＳＦ、顆粒球、マクロファージ−ＣＳＦ、カルメット・ゲランウシ型結核菌、レバミソール又はオクトレオチドであり得る。また、腫瘍抑制遺伝子は、ＤＰＣ−４、ＮＦ−１、ＮＦ−２、ＲＢ、ｐ５３、ＷＴ１、ＢＲＣＡ又はＢＲＣＡ２であり得る。
【００７８】
細胞生体エネルギーに影響を与える薬剤は、細胞ＡＴＰ値及び／又はこれらの値を調節する分子／活性に影響を与える。
【００７９】
最近の開発により、従来の細胞毒及びホルモン治療薬に加えて、癌の治療のためのさらなる治療薬が導入された。例えば、多くの形の遺伝子治療薬が前臨床試験又は臨床試験を受けている。加えて、腫瘍血管新生（血管形成）の阻害に基づく手法が現在開発段階にある。この構想の目的は、新たに形成される腫瘍血管系によって供給される栄養物及び酸素から腫瘍を遮断することである。加えて、新生物細胞の末端分化の誘発によっても癌治療が試みられている。好適な分化剤としては、ヒドロキサミン酸、ビタミンＤ及びレチン酸の誘導体、ステロイドホルモン、成長因子、腫瘍促進剤並びにＤＮＡ又はＲＮＡ合成の阻害薬が挙げられる。また、ヒストンデアセチラーゼ阻害薬は、本発明に使用される好適な化学療法薬である。
【００８０】
現在好ましい実施形態において、化学療法薬は、ニトロソ尿素（例えば、１，３−ビス［２−クロロエチル］−１０−ニトロソ尿素（ＢＣＮＵ）、プラチナ化合物（例えば、シスプラチン）、タキサン誘導体（例えば、タキソール又はその誘導体）、抗腫瘍抗生物質（例えば、アドリアマイシン）又はそれらの任意の組合せである。
【００８１】
解糖阻害薬
上述のように、低酸素条件下の細胞は、好気条件下の細胞より、２−デオキシ−Ｄ−グルコース（２ＤＧ）などの解糖を阻害する薬剤に対して敏感であることが最近示された。当該薬剤と、急速に分化する好気性細胞を標的とする化学療法薬とを組み合わせると、これらの治療薬の全体的な効果が高められると仮定された。２ＤＧとシスプラチンの組合せは、インビトロで急速に増殖している様々な細胞系に適用された場合に薬剤単独より効果的であることが示された。２ＤＧとアドリアマイシンの組合せでも同様のインビトロ相乗作用が認められ、２ＤＧは、確立されたヒト腫瘍細胞系においてトポイソメラーゼ阻害薬（エトポシド及びカンプトテシン）及び抗生薬（ブレオマイシン）のような抗癌薬の細胞毒性効果を有意に向上させることがさらに示された。
【００８２】
したがって、一実施形態において、本発明では、ジャスモネート誘導体と、２ＤＧなどの解糖阻害薬との組合せ、さらに所望により、上述の１つ又は複数のさらなる化学療法薬との組合せの使用が考えられる。
【００８３】
他の解糖阻害薬としては、オキサミン酸塩及びその誘導体が挙げられる。例えば、その内容が全面的に参照により組み込まれているＨａｍｉｌｔｏｎ  Ｅ、Ｆｅｎｎｅｌｌ  Ｍ、Ｓｔａｆｆｏｒｄ  ＤＭ．Ａｃｔａ  Ｏｎｃｏｌ．１９９５；３４（３）：４２９〜３３を参照されたい。
【００８４】
作用のメカニズム及び治療的使用
本発明は、それを必要とする対象における癌を治療するための方法であって、該方法は、ジャスモネート誘導体と、化学療法薬、解糖阻害薬及びそれらの組合せから選択される少なくとも１つの他の薬剤との組合せを該対象に投与することを含み、ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤は一緒になって、治療効果をもたらす方法に関する。
【００８５】
別の実施形態において、本発明は、それを必要とする対象における癌を治療するための方法であって、該方法は、ジャスモネート誘導体と、化学療法薬、解糖阻害薬及びそれらの組合せから選択される少なくとも１つの他の薬剤との組合せを該対象に投与することを含み、ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の薬剤は一緒になって、相乗的治療効果をもたらす方法に関する。
【００８６】
別の実施形態において、本発明は、癌を治療するための医薬品を製造するためのジャスモネート誘導体、及び化学療法薬、解糖阻害薬から選択される少なくとも１つの他の薬剤を含む組合せの使用であって、第１の量及び第２の量は一緒になって、相乗的治療効果をもたらす使用に関する。
【００８７】
本明細書において、実証されているように、異なる主な種類の悪性腫瘍、即ち乳癌、肺癌、前立腺癌及び膵臓癌並びに白血病により生じる６つの細胞系において、ＭＪといくつかの抗癌薬の協働効果が認められた。また、ＭＪは、インビボのアドリアマイシンの抗白血病効果を有意に向上させた。慣例の臨床的使用における４つの異なる化学療法薬を評価した。これらは、ＭＪの作用メカニズムと異なる作用メカニズムに基づいて選択された。何らかの特定のメカニズム又は理論に縛られることを望まないが、異なる作用メカニズムを有する薬物は、癌治療のための有望な組合せになると考えられる。しかしながら、これらの薬物の各々の細胞毒性効果は、ミトコンドリア摂動を介して、間接的であるが、媒介される。したがって、ミトコンドリアは、細胞の生死の決定の中心点として働く。何らかの特定のメカニズム又は理論に縛られることを望まないが、これらの細胞器官に影響を与える薬物の組合せは、異なる特異的なメカニズムを通じてではあるが、一緒になって、超相加的効果をもたらすことが可能であることが提示される。これにより、ＭＪの存在下で、様々な科学療法薬のＩＣ５０値が著しく低下し、望ましくない副作用を低減する可能性を指摘する。
【００８８】
ＭＪは、ＣＬＬ患者の白血病細胞に対して作用しながら、正常のリンパ球を消耗させないことが既に示された（１、２、３）。したがって、ＭＪは、副作用を引き起こすことなく、ＣＬＬに対する現在利用可能な治療を向上させることが可能である。さらに、ＭＪは、ｐ５３変異細胞（６）、及び高レベルのＰ−ｇｐを発現する細胞を死滅させることができることが既に示された。結果として、ＭＪを含む薬物の組合せは、薬物抵抗を示す患者を治療する上での利点を有することになる。
【００８９】
加えて、ＭＪと解糖阻害薬２ＤＧの組合せは、様々な癌細胞に対して超相加的細胞毒性効果を示した。何らかの特定のメカニズム又は理論に縛られることを望まないが、これは、ＡＴＰ生合成の２つの主たる細胞源として、酸化性リン酸化の阻害と解糖の阻害との間の協働を反映することを提唱する。
【００９０】
本発明の文脈における「癌」という用語は、固形腫瘍の形であるか、非固形腫瘍の形であるかにかかわらず、あらゆる起源のあらゆる種類の新生物を含み、悪性腫瘍状態及び前悪性腫瘍状態の両方並びにそれらの転移を含む。本発明の組合せは、広範な癌に対して活性である。本発明の組合せは、癌腫、肉腫、骨髄腫、白血病、リンパ腫及び混合型腫瘍を含む広範な癌に対して活性である。治療対象となる特定の範疇の腫瘍としては、リンパ球増殖障害、乳癌、卵巣癌、前立腺癌、子宮頚癌、子宮内膜癌、骨癌、肝臓癌、胃癌、結腸癌、膵臓癌、甲状腺癌、頭及び首の癌、中枢神経系の癌、末梢神経系の癌、皮膚癌、腎臓癌、並びに上記すべての癌の転移が挙げられる。治療の対象となる特定の種類の腫瘍としては、肝細胞癌、血腫、肝芽腫、横紋筋肉腫、食道癌、甲状腺癌、神経節芽細胞腫、線維肉腫、粘液肉腫、脂肪肉腫、軟骨肉腫、骨原性肉腫、脊索腫、血管肉腫、内皮肉腫、ユーイング肉腫、平滑筋肉腫、横紋筋上皮肉腫、侵入性腺管癌、乳頭腺癌、黒色腫、扁平上皮癌、基底細胞癌、腺癌（十分に分化、中程度に分化、不十分に分化又は未分化）、腎細胞癌、副腎腫、副腎様腺癌、胆道癌、繊毛上皮腫、精上皮腫、胎児性癌、ウィルムス腫瘍、抗癌腫、小細胞肺癌、非小細胞肺癌及び大細胞肺癌を含む肺癌、膀胱癌、神経膠腫、星状細胞腫、骨芽腫、頭蓋咽頭腫、上衣腫、松果体腫、網膜芽腫、神経芽腫、結腸癌、直腸癌、急性骨髄性白血病、急性骨髄球性白血病、急性リンパ性白血病、慢性骨髄性白血病、慢性リンパ性白血病、肥胖細胞性白血病、多発性骨髄腫、骨髄性リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫を含むすべての種類の白血病及びリンパ腫を含む造血系悪性腫瘍が挙げられる。
【００９１】
特に、本発明の組合せは、乳癌、腎臓癌、胃癌、リンパ性白血病を含む白血病、肺癌、黒色腫及び結腸癌に対して活性である。一実施形態において、対象は、哺乳類、好ましくはヒトである。しかし、本発明では、本発明の化合物をヒト以外、例えば獣医薬に使用することも考えられる。
【００９２】
「癌を治療又は阻害する」或いは「悪性腫瘍（癌）細胞増殖を治療又は阻害する」という用語が本明細書及び請求項に用いられている場合は常に、腫瘍形成、一次腫瘍、腫瘍進行又は腫瘍転移を包含することを意図すると理解されよう。
【００９３】
本発明の文脈において癌細胞に関する「増殖の阻害」という用語は、以下の少なくとも１つの減少を指す。対照と比較した細胞数（壊死、アポトーシス又は任意の他の種類の細胞死或いはそれらの組合せであってもよい細胞死による）；細胞成長率の低下、即ち、細胞の全数は増加し得るが、対照における増加レベル又は増加率より小さい；それらの全数が変化しなくても対照と比較した細胞の侵襲性の低下（例えば、軟寒天アッセイによって測定される）；より分化の少ない細胞型からより分化の多い細胞型への進行；悪性形質転換の減速；或いは１つの段階から次の段階への癌細胞の進行緩慢化。
【００９４】
本発明の文脈における「癌の治療」という用語は、以下の少なくとも１つを含む。癌の成長率の低下（即ち、癌はまだ成長しているが、その速度が遅い）；癌成長の停止、即ち腫瘍成長の静止、且つ好ましい場合は、腫瘍が減少する、又はサイズが低下する。該用語は、また、転移数の減少、形成される新たな転移の数の減少、１つの段階から他の段階への癌の進行の緩慢化、癌によって誘発される血管形成の低下を含む。最も好ましい場合では、腫瘍が完全に除去される。また、治療を受ける対象の生存期間を延ばすこと、疾患進行時間を延ばすこと、及び腫瘍退化等も該用語に含まれる。この用語は、予防状況、又は腫瘍にかかりやすい個体についての予防をも包含する。本発明の化合物を投与すると、個体が疾患にかかる確率が低下することになる。好ましい状況において、該化合物が投与された個体は、疾患にかからない。
【００９５】
本明細書に用いられているように、「投与する」という用語は、本発明の化合物と接触させることを指す。細胞又は組織培養物、或いは生体、例えばヒトに対して投与を遂行することができる。一実施形態において、本発明は、本発明の化合物をヒト対象に投与することを包含する。
【００９６】
「治療的」治療薬は、病状の徴候を示す対象に対して、それらの徴候を低減又は排除することを目的として投与される治療薬である。「治療有効量」は、該化合物が投与される対象に有益な効果を提供するのに十分な化合物の量である。「相乗的治療有効量」は、組合せ治療薬投薬が、各構成要素を単独で治療投与量だけ投与した場合のその相加効果より有意に良好な抗癌効果（例えば、細胞成長阻止、アポトーシス、分化の誘発、細胞死）をもたらすことを意味する。標準的な統計分析を採用して、それらの結果が有意に良好であるときを判断することができる。例えば、マン・ホイットニー検定又はいくつかの他の一般的に受け入れられている統計分析を採用することができる。
【００９７】
医薬組成物
本発明の組合せを単独で投与することができるが、少なくとも１つの医薬として許容し得る担体又は賦形剤をさらに含む医薬組成物で該組合せの構成要素を投与することが考えられる。該構成要素の各々を個別の医薬組成物で投与することができ、又は該組合せを１つの医薬組成物で投与することができる。
【００９８】
したがって、一実施形態において、本発明では、第１の量のジャスモネート誘導体と、化学療法薬及び解糖阻害薬から選択される第２の量の少なくとも１つの他の薬剤との組合せを含む医薬組成物も考えられる。第１の量及び第２の量は一緒になって、一実施形態において相乗的である治療的抗癌効果をもたらす。
【００９９】
別の実施形態において、本発明では、第１の量のジャスモネート誘導体を含む第１の医薬組成物、並びに化学療法薬及び解糖阻害薬から選択される第２の量の少なくとも１つの他の薬剤を含む第２の医薬組成物が考えられる。第１の量及び第２の量は一緒になって、一実施形態において相乗的である治療的抗癌効果をもたらす。該組合せが３つ以上の構成要素を含む場合は、ジャスモネート誘導体、化学療法薬及び／又は解糖阻害薬の合計量が、一実施形態において相乗的である治療的抗癌効果をもたらす。
【０１００】
経口、直腸、経皮、非経口（皮下、腹腔内、静脈内、動脈内、経皮及び筋肉内）、局部、鼻内又は坐薬を含む様々な経路による投与に向けて、本発明の医薬組成物を処方することができる。当該組成物は、医薬技術分野で良く知られている方法で調製され、活性成分としての上記の本発明の少なくとも１つの化合物並びに医薬として許容し得る賦形剤又は担体を含む。「医薬として許容し得る」という用語は、動物、特にヒトへの使用について連邦又は州政府の法的機関に承認されていること、或いは米国薬局方又は他の広く認識された薬局方に掲載されていることを指す。
【０１０１】
本発明による医薬組成物の調製を通じて、活性成分は、固体、半固体又は液体材料であってもよい担体又は賦形剤と通常混合される。組成物は、錠剤、丸剤、カプセル剤、ペレット剤、顆粒剤、粉剤、トローチ剤、サシェ剤、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁剤、分散剤、乳剤、液剤、シロップ剤、（固体として、又は液体媒体中の）エアロゾル剤、例えば、１０重量％までの活性化合物を含む軟膏剤、軟質及び硬質ゼラチンカプセル剤、坐薬、無菌注射可能液剤及び無菌梱包粉剤の形であり得る。
【０１０２】
担体は、従来使用されているもののいずれかであってもよく、溶解性及び本発明の化合物との反応性の欠如などの化学−物理条件並びに投与経路によってのみ制限される。担体の選択は、医薬組成物を投与するのに用いられる特定の方法によって決定されることになる。好適な担体のいくつかの例としては、ラクトース、グルコース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、珪酸カルシウム、微結晶セルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水及びメチルセルロースが挙げられる。製剤は、タルク、ステアリン酸マグネシウム及び鉱油などの潤滑剤；湿潤剤、界面活性剤、乳化剤及び懸濁剤；安息香酸メチル及びプロピルヒドロキシなどの防腐剤；甘味料；香料、着色剤、緩衝剤（例えば、酢酸塩、クエン酸塩又はリン酸塩）、崩壊剤、加湿剤、抗菌剤、酸化防止剤（例えば、アスコルビン酸又は重硫酸ナトリウム）、キレート化剤（例えば、エチレンジアミンテトラ酢酸）、及び塩化ナトリウムなどの張度調整剤をさらに含むことができる。他の医薬担体は、水及び石油、動物、植物又は合成起源の油を含む油、例えば、落花生油、大豆油、鉱油及びゴマ油等、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は他の合成溶媒などの無菌液であり得る。水は、医薬組成物が静脈内投与される場合に好ましい担体である。特に注射可能溶液としては、食塩水並びにデキストロース及びグリセリン水溶液を液体担体として採用することもできる。
【０１０３】
一実施形態では、医薬組成物において、活性成分を任意の許容し得る脂質担体に溶解する（例えば、脂肪酸、油に溶解して、例えばミセル体又はリポソームを形成する）。
【０１０４】
錠剤などの固体組成物を調製するには、主要活性成分を医薬賦形剤と混合して、本発明の化合物の均一混合物を含有する固体の予備処方組成物を形成する。これらの予備処方組成物を均一と言う場合は、組成物を同等の効果の錠剤、丸剤及びカプセル剤などの単位剤形に容易に細分できるように、活性成分を組成物全体に均一に分散させることを意味する。次いで、この固体の予備処方製剤を、例えば、約０．１ｍｇから約２０００ｍｇ、約０．１ｍｇから約５００ｍｇ、約１ｍｇから約１００ｍｇ、約１００ｍｇから約２５０ｍｇ等の本発明の活性成分を含む上記の種類の単位剤形に細分する。
【０１０５】
任意の方法を用いて、医薬組成物を調製することができる。固体剤形を湿式造粒、乾式造粒及び直接圧縮等によって調製することができる。本発明の固体剤形をコーティング、或いは配合して、作用を延ばす利点を与える剤形を提供することができる。例えば、錠剤又は丸剤は、内部投与構成要素及び外部投与構成要素を含むことができ、後者は、前者に対する外膜の形をとる。胃内での崩壊に抵抗し、内部構成要素が、そのまま十二指腸に入るか、或いはその放出を遅延させることを可能にするように働く腸溶層によって、それら２つの構成要素を分離することができる。当該腸溶層又はコーティングに様々な材料を使用することができ、当該材料は、シェラック、セチルアルコール及び酢酸セルロースのような材料とともにいくつかのポリマー酸及びポリマー酸の混合物を含む。
【０１０６】
本発明の組成物を経口又は注射により投与するために導入することができる液体剤形としては、水溶液剤、好適に着香されたシロップ剤、水性又は油性懸濁剤、綿実油、ゴマ油、ヤシ油又は落花生油などの可食性油による着香乳剤、並びにエリキシル剤及び同様の医薬媒体が挙げられる。
【０１０７】
吸入又は吹導のための組成物としては、医薬として許容し得る水性溶媒若しくは有機溶媒又はそれらの混合物による液剤及び懸濁剤、及び粉剤が挙げられる。液体組成物又は固体組成物は、上記の好適な医薬として許容し得る賦形剤を含むことができる。好ましくは、該組成物を局部又は全身効果に向けて、経口又は経鼻呼吸経路によって投与する。好ましくは医薬として許容し得る溶媒中の組成物を不活性ガスの使用によって噴霧することができる。噴霧溶液を噴霧デバイスから直接吸い込んでよく、又は噴霧デバイスを顔面マスクテント又は断続的正圧呼吸装置に装着してもよい。液剤、懸濁剤又は粉剤組成物を、製剤を適切な方法で送達するデバイスから好ましくは経口又は経鼻投与することができる。
【０１０８】
本発明の方法に採用される別の製剤は、経皮送達デバイス（「貼付剤」）を採用する。当該経皮貼付剤を使用して、本発明の化合物を制御した量で連続的又は不連続的に注入することができる。医薬の送達に向けた経皮貼付剤の構成及び使用は、当該技術分野で良く知られている。
【０１０９】
さらに別の実施形態において、該組成物は、例えば、軟膏剤、ゲル剤、滴剤又はクリーム剤として局部投与に好ましい。例えば、クリーム剤、ゲル剤、滴剤及び軟膏剤などを使用して体表面に局部投与するために、医薬担体を用いた、又は用いていない生理的に許容し得る希釈剤で本発明の化合物を調製・塗布することができる。本発明を局部的又は経皮的に使用して、癌、例えば黒色腫を治療することができる。局部形又はゲル基材形のアジュバントは、例えば、ナトリウムカルボキシメチルセルロース、ポリアクリレート、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレン−ブロック重合体、ポリエチレングリコール及び木製ワックスアルコールを含むことができる。
【０１１０】
代替的な製剤としては、当該技術分野で知られている経鼻スプレー剤、リポソーム製剤、徐放製剤、薬物を体内に送達するポンプ（機械的又は浸透圧ポンプを含む）及び制御放出製剤等が挙げられる。
【０１１１】
該組成物は、好ましくは単位剤形で処方される。「単位剤形」という用語は、ヒト対象及び他の哺乳類に対する単体投与物として好適な物理的に個別の単位であって、各単位は、所望の治療効果をもたらすように計算された所定量の活性材料を好適な医薬賦形剤と一緒に含む単位を指す。
【０１１２】
製剤を調製するのに際して、他の成分と組み合わせる前に、活性成分を粉砕して好適な粒径とすることが必要であり得る。活性化合物が実質的に不溶である場合は、それを通常２００メッシュ未満の粒径まで粉砕する。活性成分が実質的に水溶性である場合は、製剤における分布が実質的に均一になるように粉砕によって粒径を、例えば、約４０メッシュに通常調整する。
【０１１３】
本発明の医薬組成物を治療が必要な部分に局部的に投与することが所望され得る。これを、例えば、限定することを目的とせずに、手術時の局部注入、手術による、又はよらない血管供給を介する肝臓への注入、例えば、手術後の創傷被覆材を併用する局部的塗布、注射、カテーテル、坐薬、多孔質、非多孔質又はゼラチン状材料のインプラントによって達成することができる。いくつかの好ましい実施形態によれば、腫瘍又は新生物若しくは新生物発生前の組織の部位に、例えばシリンジを介して、直接的な注射によって投与することができる。
【０１１４】
該化合物を任意の便利な経路によって、例えば、注入又はボーラス注射、上皮内層（例えば、口内粘膜、直腸及び腸粘膜等）を介する吸収によって投与することもでき、他の治療活性薬と一緒に投与することができる。投与は、局部的であることが好ましいが、全身投与であってもよい。加えて、本発明の医薬組成物を、心室内及びクモ膜下注射を含む任意の好適な経路で中枢神経系に導入するのが望ましい場合がある。心室内注射を、例えば、レザバーに装着された心室内カテーテルによって促進することができる。例えば、吸入器又は噴霧器の使用、及びエアロゾル化剤による処方によって肺投与を採用することもできる。
【０１１５】
本発明の化合物を即時放出又は制御放出系で送達することができる。一実施形態において、化学療法薬を特定の器官又は腫瘍に送達するのに使用されるもののような注入ポンプを使用して、本発明の化合物を投与することができる（Ｂｕｃｈｗａｌｄら、１９８０、Ｓｕｒｇｅｒｙ  ８８：５０７；Ｓａｕｄｅｋら、１９８９、Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３２１：５７４参照）。好ましい形において、本発明の化合物を、選択された部位に制御された時間にわたって化合物を放出する生分解性の生体適合性ポリマーインプラントと組み合わせて投与する。好ましいポリマー材料の例としては、ポリ無水物、ポリオルトエステル、ポリグリコール酸、ポリ乳酸、ポリエチレン酢酸ビニル、それらの共重合体及び配合物（Ｍｅｄｉｃａｌ  ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｒｅｌｅａｓｅ、Ｌａｎｇｅｒ及びＷｉｓｅ（編）、１９７４、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓ．、Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ、ＦＩａ参照）。さらに別の実施形態において、制御放出系を治療目標の近傍に配置することができるため、全身投与の何分の一程度しか必要としない。
【０１１６】
また、ときには、医薬組成物は、非経口投与（皮下、静脈内、動脈内、経皮、腹腔内又は筋肉内注射）のために処方されてもよく、酸化防止剤、緩衝剤、静菌剤及び溶質を含むことができ、製剤を意図する受給者の血液に対して等張性にする水性及び非水性等張無菌注射液、並びに懸濁剤、可溶化剤、増粘剤、安定剤及び防腐剤を含む水性及び非水性無菌懸濁剤を含むことができる。石油、動物油、植物油又は合成油などの油及び脂肪アルカリ金属などの石鹸、アンモニウム及びトリエタノールアミン塩、並びに好適な洗剤を非経口投与に使用することもできる。上記製剤を直接的な腫瘍内注射に使用することもできる。さらに、注射の部位における刺激を最小にする、又は除去するために、組成物は、１つ又は複数の非イオン性界面活性剤を含むことができる。好適な界面活性剤としては、モノオレイン酸ソルビタンなどのポリエチレンソルビタン脂肪酸エステル、並びに酸化プロピレンとプロピレングリコールの縮合によって形成された酸化エチレンと疎水性塩基との高分子量付加物が挙げられる。
【０１１７】
非経口製剤をアンプル及びバイアルなどの単位投与又は多投与密封容器に入れ、使用直前に無菌液体担体、例えば注射用水を添加することのみを必要とする凍結乾燥条件で保管することができる。即時注射液及び懸濁液を既に記載し、当該技術分野で知られている種類の無菌粉剤、顆粒剤及び錠剤から調製することができる。
【０１１８】
或いは、本発明の組合せを白血球除去法及び他の関連方法などの血液透析に使用することができる。例えば、血液を柱／中空繊維膜、カートリッジ等を介する様々な方法によって患者から採取し、ジャスモネート誘導体及び／又は化学療法薬及び／又は解糖阻害薬により生体外で処理し、処理後に患者に戻す。当該治療方法は、当該技術分野で良く知られ、記載されている。例えば、その内容が全面的に参照により本明細書に組み込まれているＫｏｌｈｏら、（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｖｉｒｏｌ．１９９３、４０（４）：３１８〜２１）；Ｔｉｎｇら、（Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ、１９７８、２５（１）：３１〜３）を参照。
【０１１９】
投与量及び投与スケジュール
ジャスモネート誘導体及び少なくとも１つの他の化学療法薬及び／又は抗解糖阻害薬による治療を任意の順序で順次、同時に、又はそれらの組合せで行うことができる。例えば、ジャスモネート誘導体の投与を化学療法薬及び／又は解糖阻害薬の投与前、投与後又は投与と同時に行うことができる。例えば、ジャスモネート誘導体についての全治療時間を決定することができる。追加的な薬剤（化学療法薬及び／又は解糖阻害薬）をジャスモネート誘導体による治療の開始前、又はジャスモネート誘導体による治療後に投与することができる。加えて、追加的な薬剤をジャスモネート誘導体の投与時間中に投与することができるが、ジャスモネート誘導体の治療時間全体にわたって行う必要はない。別の実施形態において、治療投薬は、１つの薬剤、即ちジャスモネート誘導体又は化学療法薬／解糖阻害薬による前治療の後に、１つ又は複数の他の薬剤を追加することを含む。交互順序の投与も考えられる。交互投与は、ジャスモネート誘導体、化学療法薬及び／又は解糖阻害薬を交互順序で投与すること、例えば、ジャスモネート誘導体の後に化学療法薬を投与し、その後に解糖阻害薬を投与し、その後にジャスモネート誘導体を投与する等を含む。
【０１２０】
癌を含む特定の障害又は状態の治療に有効である本発明の化合物（即ちジャスモネート誘導体／化学療法薬／解糖阻害薬）の量は、障害又は状態の性質に依存し、標準的な臨床技術によって決定され得る。加えて、インビトロアッセイを所望により採用して、最適な投与量範囲を特定するのに役立てることができる。製剤において採用すべき厳密な投与量は、投与経路及び疾患又は障害の重度にも依存し、実務者の判断及び各患者の状況に応じて決定されるべきである。好ましい投与量は、体重１ｋｇ当たり０．０１〜１０００ｍｇ／ｋｇの範囲内、０．１ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇから１００ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇから７５ｍｇ／ｋｇ、０．１〜１ｍｇ／ｋｇ等である。ジャスモネート誘導体／化学療法薬／解糖阻害薬の代表的な（非限定）量は、０．１ｍｇ／ｋｇ、０．２ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、５０ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、７５ｍｇ／ｋｇ及び１００ｍｇ／ｋｇを含む。或いは、投与量を測定し、投与化合物のモル数として表すことができる。限定ではなく例として、ジャスモネート誘導体（例えば、ジャスモン酸メチル）を０．１〜１０ｍＭの範囲、例えば、０．１、０．２５、０．５、１及び２ｍＭで投与することができる。或いは、投与量を測定し、ｍｇ／ｍｌ、μｇ／ｍｌ又はｎｇ／ｍｌで表すことができる。限定ではなく例として、化学療法薬を１ｎｇ／ｍｌから１００ｍｇ／ｍｌ、例えば、１〜１０００ｎｇ／ｍｌ、１〜１００ｎｇ／ｍｌ、１〜１０００μｇ／ｍｌ、１〜１００μｇ／ｍｌ、１〜１０００ｍｇ／ｍｌ、１〜１００ｍｇ／ｍｌ等の量で投与することができる。効果的な投与量をインビトロ又は動物モデル試験バイオアッセイ又はシステムから導かれた投与量−応答曲線から推定することができる。相乗効果が認められる場合は、構成要素の各々の全投与量が小さくなり得るため、対象が経験する副作用が有意に低下し得る一方、十分な化学療法効果が達成される。本明細書の実験のセクションで実証されているように、ジャスモネート誘導体、ジャスモン酸メチルと様々な化学療法薬（アドリアマイシン、タキソール、ＢＣＮＵ及びシスプラチン）との組合せは、インビトロ及びインビボにおける様々な濃度範囲で相乗的抗増殖効果を示す。
【０１２１】
一実施形態において、組合せ治療薬は、その構成要素の各々の量を２分の１に減少させる。即ち、各構成要素は、単一薬治療薬と比較して半分の投与量で与えられ、なおも同一又は同様の治療効果を達成する。別の実施形態において、組合せ治療薬は、その構成要素の各々の量を５分の１、１０分の１、２０分の１、５０分の１又は１００分の１に減少させる。本明細書に実証されているように、様々な癌細胞における抗増殖薬としての化学療法薬のＩＣ５０は、単一で投与された場合の化学療法薬のＩＣ５０と比較して小さくなる。
【０１２２】
投与スケジュールは、治療されている癌、重度及び進行、患者種族、年齢、体重等のいくつかの要因に依存する。例えば、本発明の組成物を１日１回、１日に２回、１日３回、１週間に１回又は１ヶ月に１回摂取することができる。加えて、投与は、連続的、即ち毎日又は断続的であり得る。「断続的な」又は「断続的に」という用語は、本明細書に用いられているように、規則的又は不規則な間隔で停止及び開始することを指す。例えば、断続的投与は、１週間当たり１日から６日の投与であり得るか、或いは周期的な投与（例えば、２週間から８週間連続して毎日投与した後、１週間までの期間にわたって投与しない）を指してもよく、又は隔日の投与を指してもよい。該組合せの異なる構成要素は、互いに独立に、異なる投与スケジュールに従うことができる。
【０１２３】
以下の実施例は、本発明の一部の実施形態をより十分に例証するために示される。しかし、それらは、本発明の広い範囲を限定するものと見なされるべきではない。当業者は、本発明の範囲を逸脱することなく、本明細書に開示された原理の多くの変更及び修正を容易に考案できる。
【０１２４】
実験の詳細のセクション
（実施例１−材料及び方法）
化学物質：
ジャスモン酸メチル［メチル３−オキソ−２−（２−ペンテニル）シクロペンタン酢酸］、２−デオキシ−Ｄ−グルコース（２ＤＧ）、１，３−ビス｛２−クロロエチル｝−１−ニトロソ尿素（ＢＣＮＵ）及び二塩化シスジアミンプラチナ（ＩＩ）（シスプラチン）をＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＧｍｂＨ（ドイツＳｔｅｉｎｈｅｉｍ）から購入した。アドリアマイシンをＰｈａｒｍａｃｉａ  Ｉｔａｌｉａ  Ｓ．ｐ．Ａから購入し、タキソールをＭｅａｄＪｏｈｎｓｏｎ（米国）から購入した。ジャスモン酸メチルを無水エタノールに溶解させて、５００ｍＭの原液を得た。さらに、ＭＪの希釈及び細胞毒性剤の希釈を培地で行った。培地におけるエタノールの最終濃度は、０．６％を超えなかった。インビボ実験では、アドリアマイシンをリン酸緩衝食塩水に溶解させた。
【０１２５】
腫瘍細胞系：
ＣＴ２６は、マウス結腸癌である。ＤＡ−３は、マウス乳腺癌である。ＴＲＡＭＰ  Ｃ１は、マウス前立腺癌である。ＭＣＦ７は、ヒト胸腺癌である。ＭＩＡ  ＰａＣａ−２は、ヒト膵臓癌である。Ｄ１２２は、マウス肺癌である。ＢＣＬ１は、マウスＢ細胞白血病である。Ｙ．Ｋｅｉｓａｒｉ教授（Ｔｅｌ−Ａｖｉｖ大学（イスラエル））が親切に提供してくれたＤＡ３及びＤ１２２を除いて、すべての細胞系をＡＴＣＣ（米国マサチューセッツ州Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ）から購入した。
【０１２６】
細胞系は、ＶｅｎｏｒＧｅｍマイコプラズマ検出キット２５Ｔ（Ｍｉｎｅｒｖａ  Ｂｉｏｌａｂｓ（ドイツＢｅｒｌｉｎ））によって明らかにされたように、マイコプラズマ感染に対して陰性であることが判明した。
【０１２７】
細胞を３７℃、５％ＣＯ２の加湿雰囲気に維持した。ＣＴ２６及びＤＡ−３細胞を、１０％ＦＣＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕｍｌ−１のペニシリン、１００μｇｍｌ−１のストレプトマイシン、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム及び可欠アミノ酸の１：１００希釈液（いずれもＢｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（イスラエル）から購入）が補給されたダルベッコー修飾イーグル培地（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（イスラエルＢｅｉｔ−Ｈａｅｍｅｋ））に維持した。
【０１２８】
ＭＣＦ７、ＭＩＡ  ＰａＣａ−２及びＢＣＬ１細胞を、１０％のＦＣＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕｍｌ−１のペニシリン及び１００μｇｍｌ−１のストレプトマイシンが補給されたＲＰＭＩ−１６４０培地（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ（イスラエル））に維持した。
【０１２９】
ＴＲＡＭＰ  Ｃ１細胞を、１０％ＦＣＳ、２ｍＭのＬ−グルタミン、１００Ｕｍｌ−１のペニシリン、１００μｇｍｌ−１のストレプトマイシン、１ｍＭのピルビン酸ナトリウム、可欠アミノ酸の１：１００希釈液、５μｇ／ｍｌのウシインシュリン及び１０ｎＭのデヒドロイソアンドロステロンが補給されたダルベッコー修飾イーグル培地で成長させた。
【０１３０】
培養において継続的に成長できないＢＣＬ１細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスに維持した。接種後２３〜２８日目にＢＣＬ１−担持マウスの尾血管から血液を採取し、ＲＢＣ溶解緩衝剤（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を使用して赤血球（ＲＢＣ）を枯渇させた。純化した白血球をインビトロ及びインビボ実験に使用した。
【０１３１】
細胞毒性アッセイ
すべての細胞（ＢＣＬ１を除く）を１ウェル当たり２＊１０３個の細胞の密度で９６ウェルのマイクロタイタープレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ）に仕込み、処理前に接着させた。ＢＣＬ１細胞を１ウェル当たり２０＊１０４個の細胞の密度で接種した。細胞をＭＪ、細胞毒性剤、２ＤＧ又はそれらの組合せに異なる濃度で２４時間にわたって曝露させた。ＭＪを添加する１時間前に細胞毒性剤及び２ＤＧを添加した。
【０１３２】
細胞増殖の阻害をＣｅｌｌＴｉｔｅｒ  ９６  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｎｏｎ−Ｒａｄｉｏａｃｔｉｖｅ  Ｃｅｌｌ  Ｐｒｏｌｉｆｅｒａｔｉｏｎ  Ａｓｓａｙ（Ｐｒｏｍｅｇａ（米国ウィスコンシン州Ｍａｄｉｓｏｎ））で測定した。所定の実験が終了したら、ＭＴＳ（３３３μｇ／ｍｌの最終濃度のテトラゾリウム化合物）＋メソ硫酸フェナジン（２５μＭの最終濃度）の混合物（２０：１）の２０μｌを３７℃で１時間にわたって９６ウェルプレートの各ウェルに添加した。これにより、デヒドロゲナーゼが代謝活性細胞におけるＭＴＳを低減する反応の発生が可能になった。細胞をＭＴＳの添加前に洗浄しなかったため、潜在的に疎接着性の細胞又は非接着性細胞による問題は認められなかった。波長４９０ｎｍにおける可溶性ＭＴＳホルマザン生成物をＣＥＲＥＳ  ９００  ＨＤｉ  ＥＬＩＳＡ読取装置（Ｂｉｏ−Ｔｅｋ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（米国バーモント州Ｈｉｇｈｌａｎｄ  Ｐａｒｋ））で測定した。光学密度は、培養における生細胞の数に正比例する。細胞毒性（％）を以下のようにして計算した。［（対照細胞の吸光度−薬物処理細胞の吸光度）／対照細胞の吸光度］×１００。
【０１３３】
インビボ試験：
雄のＢａｌｂ／ｃマウス（生後７〜８週間）をＴｅｌ−Ａｖｉｖ大学（イスラエル）の繁殖コロニーから入手した。動物の世話及び実験をＴｅｌ−Ａｖｉｖ大学のガイドラインに従って実施し、組織的な動物の使用及び世話に関する委員会に承認された。実験を通じて、マウスを標準的な食物及び飼育条件下でケージに維持した。
【０１３４】
ＢＣＬ１白血病のＢＡＬＢ／ｃマウスから新たに抽出した２×１０４ＢＣＬ１細胞を１００μｌのＰＢＳでマウスに腹腔内（ｉ．ｐ．）接種して、腫瘍を成長させた。６０ｍｇ／ｋｇのジャスモン酸メチルを、細胞接種の１日後から４週間にわたって毎日１週間に５回、動物に投与した。このＭＪの投与物は、予備実験において動物に十分許容されることが判明した。ＭＪを脂質製剤のリポフンジン（Ｂ．Ｂｒａｕｎ  Ｍｅｌｓｕｎｇｅｎ（ドイツＭｅｌｓｕｎｇｅｎ））に溶解させた。７日目及び１４日目に、アドリアマイシンをｉ．ｐ．により４ｍｇ／ｋｇの量でマウスに２回与えた。対照マウスを媒体のみで処理した。マウスの生存を毎日監視した。
【０１３５】
統計分析
両側スチューデントｔ検定を用いて、インビトロ実験における統計的有意性を評価した。Ｐ＜０．０５を統計的に有意であると見なした。統計ソフトウェアを使用して、生存曲線（カプラン−メイヤー試験）及び統計分析（マンテル−コックス試験）を実施した。
【０１３６】
（実施例２：インビトロの腫瘍細胞系に対するＭＪの細胞毒性効果）
ＭＪの細胞毒性活性を６つの接着性細胞系及び１つの生体外マウス細胞系に対してインビトロで試験した。各細胞系を０．１ｍＭから２ｍＭの濃度で２４時間にわたってＭＪに曝露し、方法のセクションに記載されるように細胞毒性を測定した。ＩＣ５０値を表１にまとめる。図１からわかるように、ＭＪは、０．２５ｍＭ以上の濃度で細胞毒性効果を発揮した。いずれの細胞系も投与量に応じてＭＪに応答した。
表１：異なる細胞系におけるＭＪのＩＣ５０
【表１】
2009542799.tif 000026
【０１３７】
（実施例３：インビトロの癌細胞系に対するＭＪ及び化学療法薬による組合せ治療の細胞毒性効果）
伝統的な化学療法薬によるＭＪの協働効果を調べた。抗癌薬が、単一治療薬として使用されることは希である。有効な化学療法は、２つ以上の薬剤の適性且つ効果的な組合せに通常依存する。作用様式の異なる４つの薬物を選択した。ＢＣＮＵ、シスプラチン、タキソール及びアドリアマイシンを７つの細胞系における一定濃度のＭＪとの組合せによる協働性について評価した。ＭＪの細胞毒性が４０％を超えないように、ＭＪ濃度を投与量応答データ（図１）に従って選択した。両薬物が一緒に存在するときの細胞毒性と個別に投与された各薬物の細胞毒性の合計との差（グラフ上の期待相加性）がｐＶ＜０．０５になる場合に、ＭＪと別の薬剤との相互作用を協働的（超相加的）であると見なした。これらの実験の概要を表２に示す。それからわかるように、ＭＪは、ＣＴ２６細胞において４つの薬物のいずれとも協働的活性を示さないが、他の細胞系において、１つ又は２つの化学療法薬とのＭＪの協働効果が認められた。
【表２】
2009542799.tif 000027
表２：ＭＪと様々な化学療法薬との組合せを評価する実験の概要
＋は、少なくともいくつかの濃度で協働効果をもたらす組合せ
【０１３８】
図２Ａに示すように、ＭＩＡ  ＰａＣａ−２細胞は、試験したすべての濃度（１〜２５μｇ／ｍｌ）においてＢＣＮＵとの強い協働効果を発揮するのに対して、シスプラチンとの協働は、低いシスプラチン濃度（１及び２．５μｇ／ｍｌ）で発揮される。ＢＣＮＵのＩＣ５０は、それ自体が２５μｇ／ｍｌ超であるが、組合せのＩＣ５０は、１μｇ／ｍｌ未満である。
【０１３９】
ＭＣＦ７細胞（図２Ｂ）において、ＭＪは、２．５μｇ／ｍｌのタキソールと組み合わせるとタキソールの細胞毒性能力を向上させるのに対して、他の濃度の組合せは、相加的である。
【０１４０】
ＤＡ−３細胞（図２Ｃ）において、１、２．５及び５μｇ／ｍｌにおいてＭＪとタキソールの協働効果が認められるのに対して、１０μｇ／ｍｌでは、その効果は相加的である。この組合せにおけるタキソールのＩＣ５０は、２．５μｇ／ｍｌまで低下するのに対して、タキソール単独のＩＣ５０は、９μｇ／ｍｌである。すべての指定濃度においてＤ１２２細胞（図２Ｄ）にタキソール及びＭＪの非常に強い協働性を確認することができる。この実験系におけるタキソール単独のＩＣ５０は、８．２μｇ／ｍｌであるが、ＭＪの存在下で１μｇ／ｍｌ未満まで低下する。
【０１４１】
ＴＲＡＭＰ  Ｃ１細胞におけるタキソールのＭＪとの協働を図２Ｅに示す。試験したすべての濃度（１〜５０μｇ／ｍｌ）において、ＴＲＡＭＰ  Ｃ１細胞における組合せ効果は、期待された相加性より有意に高い。ＴＲＡＭＰ  Ｃ１細胞に対するタキソールのＩＣ５０は、３８μｇ／ｍｌである。この値は、ＭＪとの組合せ治療によって２μｇ／ｍｌまで低下する。シスプラチンもＴＲＡＭＰ  Ｃ１細胞において、１及び２．５μｇ／ｍｌの濃度でタキソールとの協働性を発揮した。
【０１４２】
（実施例４：インビトロのＢＣＬ１細胞に対するＭＪの細胞毒性効果）
ＢＣＬ１白血病マウスから新たに抽出したＢＣＬ１細胞に対するＭＪの細胞毒性を調べた（図１）。これらの細胞は、ＭＪに対して最も敏感であることが判明した（ＩＣ５０＝０．５６）。また、ＢＣＬ１細胞は、ヒトＢ細胞白血病のモデルと考えられ、ＭＪは、ＣＬＬ患者の血液から新たに採取した白血病細胞を効果的に死滅させた（２、３）。結果として、これらの一次腫瘍細胞におけるＭＪの化学療法薬との見込まれる協働効果を評価した。これらの実験における選択されたＭＪ濃度（０．１ｍＭ）は、ＢＣＬ１細胞の感受性が高いため、癌細胞を用いた実験よりはるかに低かった。ＭＪのシスプラチン及びタキソールとの協働効果は認められなかった。しかし、図３に見られ、表２に要約されているように、２．５及び５μｇ／ｍｌにおいてＭＪとＢＣＮＵの間に協働が存在し（ｐＶ＜０．０５）、１０及び２５ｎｇ／ｍｌにおいてＭＪとアドリアマイシンの間に協働が存在する。他の濃度では、相加効果が認められた。
【０１４３】
（実施例５：ＭＪとアドリアマイシンの組合せは、インビボでＢＣＬ１に対して相乗的である）
アドリアマイシンは、白血病の治療に使用されるため、インビボでＭＪとの組合せを評価する実験に対してそれを選択した。新たに抽出した１０４個のＢＣＬ１細胞をＢＡＬＢ／ｃマウスにｉ．ｐ．注射し、４週間にわたってアドリアマイシンとＭＪの組合せでマウスを処理した。アドリアマイシンの投与量を先のインビボ実験に基づいて、即ち最小限の治癒効果を発揮する無毒性レベルに選択した。ＭＪによる処理は、ＢＣＬ１注射の１日後に開始した。ＭＪを静脈内注射によって毎日６０ｍｇ／ｋｇ投与したのに対して、アドリアマイシンを２回、即ち７日目と１４日目に注射した。図４に見られるように、ＭＪ＋ＡＤＲで処理したマウスの生存期間は、ＭＪ又はＡＤＲ単独で処理されたマウスと比較して有意に長かった（ｐＶ＝０．０２８）。したがって、ＭＪとＡＤＲの協働性をインビトロのみならずインビボでも認めることができる。
【０１４４】
（実施例６：インビトロの異なる細胞系に対するＭＪと２ＤＧの組合せ治療の細胞毒性効果）
本発明の出願人は、２９Ｍ４．１Ｂリンパ腫細胞における２ＤＧによる解糖阻害薬が、ＡＴＰ値に対するＭＪの効果を向上させて、ＭＪ単独によってもたらされる効果より有意に強い細胞ＡＴＰ値の著しい枯渇をもたらしたことを最近示した（６）。したがって、細胞生死に対するＭＪと２ＤＧの見込まれる組合せ効果を調べた。この目的のために、４つの細胞系を異なる濃度のＭＪと一定濃度の２ＤＧとの組合せに曝露した。この実験の結果を図５にまとめる。示されるように、０．５ｍＭの２ＤＧは、ＭＪ濃度の各々において、ＣＴ２６及びＤ１２２細胞におけるＭＪの細胞毒性を有意に向上させた（ｐＶ＜０．０５）のに対して、ＭＣＦ７細胞において、その効果は、０．５ｍＭのＭＪでのみ有意であり、他の濃度では相加的であった。ＤＡ−３細胞では協働効果が認められなかった。
【０１４５】
結論として、ミトコンドリア毒性抗癌薬ＭＪは、インビトロ及びインビボの双方において、様々な一般的化学療法薬並びに解糖阻害薬と協働することができる。これらのデータは、恐らくは薬物耐性腫瘍に対しても薬物組合せにおけるＭＪの潜在的な臨床的使用のための基礎を成す。
【０１４６】
本発明の一部の実施形態を例証・記載したが、本発明は、本明細書に記載の実施形態に限定されないことが明らかになるであろう。添付の請求項に記載されている本発明の主旨及び範囲から逸脱することなく、多くの修正、変更、変形、代用及び同等物が当業者に明らかになるであろう。
【０１４７】
参考文献
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【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図２−３】
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【図３】
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【図４】
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【図５−１】
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【図５−２】
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【国際調査報告】
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