(57)【要約】  本発明は、（ａ）少なくとも１つの遊離アミノ基を持つポリマー、（ｂ）単環式オルトジヒドロキシ芳香族化合物、単環式パラジヒドロキシ芳香族化合物、二環式モノヒドロキシ芳香族化合物、多環式モノヒドロキシ芳香族化合物、二環式ジヒドロキシ芳香族化合物、多環式ジヒドロキシ芳香族化合物、二環式トリヒドロキシ芳香族化合物、多環式トリヒドロキシ芳香族化合物およびこれらの混合物で構成されるグループから選択された架橋分子、および（ｃ）ポリフェノールオキシダーゼ、それも特にリグノリティックポリフェノールオキシダーゼの各個別成分を擁し、且つその場合に個別成分のｂ）とｃ）が接触していないというキットに関する。
2009525795.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の個別成分、すなわち、
ａ）少なくとも１つの遊離アミノ基を持つポリマー、
ｂ）単環式オルトジヒドロキシ芳香族化合物、単環式パラジヒドロキシ芳香族化合物、二環式モノヒドロキシ芳香族化合物、多環式モノヒドロキシ芳香族化合物、二環式ジヒドロキシ芳香族化合物、多環式ジヒドロキシ芳香族化合物、二環式トリヒドロキシ芳香族化合物、多環式トリヒドロキシ芳香族化合物およびこれらの混合物で構成されるグループから選択された架橋分子、および
ｃ）ポリフェノールオキシダーゼ、それも特にリグノリティックポリフェノールオキシダーゼ
を擁していて、且つその場合に個別成分ｂ）とｃ）とが接触していないキット。
【請求項２】
前記遊離アミノ基がジアミノ酸によって得られる、請求項１に記載のキット。
【請求項３】
前記ポリマーが前記ジヒドロキシ芳香族化合物および／または前記リグノリティックポリフェノールオキシダーゼと接触している、請求項１または２に記載のキット。
【請求項４】
該キットが、前記ジヒドロキシ芳香族化合物および前記リグノリティックポリフェノールオキシダーゼを別々に放出させることができる２つのカニューレを持つ噴射器である、請求項１〜３のうちの一項に記載のキット。
【請求項５】
下記の個別成分、すなわち、
ａ）少なくとも１つの遊離アミノ基を持つ、但し人体の構成要素でないポリマー、
ｂ）単環式オルトジヒドロキシ芳香族化合物、単環式パラジヒドロキシ芳香族化合物、二環式モノヒドロキシ芳香族化合物、多環式モノヒドロキシ芳香族化合物、二環式ジヒドロキシ芳香族化合物、多環式ジヒドロキシ芳香族化合物、二環式トリヒドロキシ芳香族化合物、多環式トリヒドロキシ芳香族化合物およびこれらの混合物で構成されるグループから選択された架橋分子、および
ｃ）ポリフェノールオキシダーゼ、それも特にリグノリティックポリフェノールオキシダーゼ
を擁していて、且つその場合に個別成分ｂ）とｃ）とが接触している接着剤。
【請求項６】
前記個別成分ａ）〜ｃ）が接触している、請求項５に記載の接着剤。
【請求項７】
粉砕、分別および２００℃未満の温度における脱水の過程を経て得られる、少なくとも７０重量％の沸石成分を含む、平均孔径０．３〜０．５ｎｍの沸石顆粒。
【請求項８】
前記沸石顆粒の平均粒径が０．２〜０．８ｍｍである、請求項７に記載の沸石顆粒。
【請求項９】
前記沸石顆粒が水棲生物からのバイオマスを含んでいる、請求項７〜８のうちの一項に記載の沸石顆粒。
【請求項１０】
前記バイオマスの脂質成分が＞２０％である、請求項７〜９のうちの一項に記載の沸石顆粒。
【請求項１１】
前記水棲生物が抗菌活性を有している、および／またはポリ−Ｎ−アセチル−グルコサミンを含んでいる、請求項７〜１０のうちの一項に記載の沸石顆粒。
【請求項１２】
緑藻類、クラミドモナスおよび／または微小藻類スピルリナおよび／またはアナベナの凍結乾燥バイオマスが使用される、請求項７〜１１のうちの一項に記載の沸石顆粒。
【請求項１３】
前記バイオマスと前記沸石顆粒が１：１０〜１０：１の比率で混合されている、請求項７〜１２のうちの一項に記載の沸石顆粒。
【請求項１４】
前記沸石顆粒および選択的に前記バイオマスが、好ましくは、セルロースベースまたはテキスタイルベースまたはコラーゲン不織布ベースの包囲材に適用される、請求項７〜１３のうちの一項に記載の沸石顆粒。
【請求項１５】
前記キットまたは前記接着剤が、また別な個別成分としてｄ）請求項７〜１４のうちの一項に記載の沸石顆粒を含んでいる、請求項１〜６のうちの一項に記載のキットまたは接着剤。
【請求項１６】
前記沸石顆粒が前記その他の個別成分ａ）〜ｃ）と接触していない、請求項１５に記載のキット。
【請求項１７】
前記沸石顆粒が前記その他の個別成分と接触している、請求項１５に記載の接着剤。
【請求項１８】
前記芳香族化合物が置換されている、請求項１〜６および１５〜１７の一項に記載のキットまたは接着剤。
【請求項１９】
前記ジヒドロキシ芳香族化合物が２，５−ジヒドロキシベンザミドである、請求項１〜６および１５〜１８の一項に記載のキットまたは接着剤。
【請求項２０】
前記ジヒドロキシ芳香族化合物が２，５−ジヒドロキシ−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ベンザミドである、請求項１〜６および１５〜１９の一項に記載のキットまたは接着剤。
【請求項２１】
前記リグノリティックポリフェノールオキシダーゼがラッカーゼである、請求項１〜６および１５〜２０の一項に記載のキットまたは接着剤。
【請求項２２】
前記ポリマーがオリゴペプチド、ペプチドおよびタンパク質で構成されるグループから選択されたものである、請求項１〜６および１５〜２１の一項に記載のキットまたは接着剤。
【請求項２３】
前記ポリマーがリジンを含有している、請求項１〜６および１５〜２２の一項に記載のキットまたは接着剤。
【請求項２４】
前記ポリマーがリジンを含有するオリゴペプチドまたはコラーゲンである、請求項１〜６および１５〜２３の一項に記載のキットまたは接着剤。
【請求項２５】
前記請求項の一項に記載の医薬品としてのキット、接着剤または沸石顆粒。
【請求項２６】
請求項５、６、１５、１７〜２４のうちの一項に記載された接着剤の使用下で、堅固に架橋する、吸収性のある結合が行われることを特徴とする、水性環境中で適用できる接着方法。
【請求項２７】
下記の個別成分、すなわち、
ａ）少なくとも１つの遊離アミノ基を持つ、任意選択成分としてのポリマー、
ｂ）単環式オルトジヒドロキシ芳香族化合物、単環式パラジヒドロキシ芳香族化合物、二環式モノヒドロキシ芳香族化合物、多環式モノヒドロキシ芳香族化合物、二環式ジヒドロキシ芳香族化合物、多環式ジヒドロキシ芳香族化合物、二環式トリヒドロキシ芳香族化合物、多環式トリヒドロキシ芳香族化合物およびこれらの混合物で構成されるグループから選択された架橋分子、および
ｃ）ポリフェノールオキシダーゼ
を擁していて、且つその場合に個別成分ｂ）とｃ）とが接触していないキットの、傷口封鎖用接着剤の製造のための使用。
【請求項２８】
前記キットが、当該使用において、請求項２〜４、１５、１６および１８〜２４のうちの一項に従って補足的に定義付けされている、請求項２７に記載の使用。
【請求項２９】
請求項７〜１４のうちの一項に記載の沸石顆粒を含むキットの、傷口封鎖用接着剤の製造のための使用。
【請求項３０】
請求項２７〜２９のうちの一項に記載の、コラーゲン架橋結合のための使用。
【請求項３１】
請求項２７〜３０のうちの一項に記載の、無血手術領域形成のための使用。
【請求項３２】
請求項２７〜３０のうちの一項に記載の、吻合部の密封および血管または空洞器官への当接のための使用。
【請求項３３】
当該使用において、前記密封部がその何らかの空間により吸収性を持つ、請求項２７〜３２のうちの一項に記載の使用。
【請求項３４】
当該使用において、前記密封部がフレキシブルである、請求項２７〜３３のうちの一項に記載の使用。
【請求項３５】
請求項２７〜３４のうちの一項に記載の、慢性創傷の治療のための使用。
【請求項３６】
請求項２７〜３５のうちの一項に記載の、感染傷の衛生処理のための使用。
【請求項３７】
請求項２７〜３６に記載の、器官、組織または骨、およびインプラント材付き骨の接着のための使用。
【請求項３８】
請求項７〜１４のいずれか一項に記載の沸石顆粒の、創傷封鎖用止血剤の製造のための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は医療用接着剤および止血剤に関する。本発明は、特に、硬質組織と軟質組織を互いに接着させて傷口を塞ぐのに適した接着剤の製造キット、および接着剤自体のほか、さらには医療領域におけるそれの使用にも関する。キットまたはそれに属する接着剤は、個別成分としてポリフェノールオキシダーゼの基質およびポリフェノールオキシダーゼそれ自体を擁している。本発明はそのほか、新型止血剤および傷口を塞ぐための止血剤／接着剤の組み合わせ使用にも照準している。
【背景技術】
【０００２】
特に問題症例に使用できる新しい組織用接着剤の開発は、近年著しく重要性を増してきた。従来から使用されているアクリレートベースの組織用接着剤は表面の傷口にしか使用できない。アクリレートは生物学的には分解し得ないことから、毒性危険に到る可能性が存するからである。したがって、着眼点は、とりわけ、使用材料の生物学的分解性である。この理由から、接着剤の製造では、例えば植物起源または動物起源のポリマーが重要な役割を果たしている。例えば、貝は、水中では様々な担体物質と非常に堅固な結合をすることができる。その要因はＭＡＰｓ（貝の粘着性タンパク質）の生成／分泌にある。ＭＡＰｓは、貝の種属によって、その種類を異にすることがあるが、多数のタンパク質で構成されている。貝から単離された極めて特殊なデカペプチドが重要成分として利用されている組織用接着剤が、ＵＳ５０１５６７７Ａで権利保護されている。このデカペプチドは、非常に特殊なアミノ酸の置換基として、ペプチド鎖の本質的構成成分と見なし得るジヒドロキシ芳香族化合物を含んでいる。この場合、ペプチド鎖は、チロシナーゼの影響下で相互に結合する。そのほか、骨とインプラント材との接着剤による固定に関しては、満足な解決策は知られていない。
【０００３】
ＥＰ０９４７１４２には、タンパク質の分子量を増大させることについて、マルチ銅酵素を通じての架橋結合により実現できることが開示されている。その記述によれば、基質タンパク質の分子量の増大は１７時間の潜伏後に発現した。ＥＰ０９４７１４２記載の方法を利用して架橋結合させたタンパク質は、特に食品での使用、例えばソーセージの粘稠度を変更させるのに適している。置換されたジヒドロキシ芳香族化合物によるタンパク質の交叉結合についてはＥＰ０９４７１４２には開示されていない。
【０００４】
多量出血の負傷に傷口接着剤を使用した場合、接着剤成分が血流と共に流し去られて願わしくない場所で接着が起きるという危険がある。それによって血栓生成の危険が大きく高まる。多量出血創傷の応急手当は、今日でもなお満足に解決されていない問題である。止血は、現状技術では下記の方法によって、すなわち、
ａ）  例えば金属塩によるタンパク質の変性処理、
ｂ）  微孔性バイオポリマーまたは大きな内表面を持つバイオポリマーの使用。（これらは水を吸収するので、血液細胞および凝固因子の濃度が上昇する。ポリ−Ｎ−アセチル−グルコサミンまたはチトサンから成るポリサッカリドが非常に有利であると実証された。これらは、例えば昆虫の骨や藻類に含まれている。ゼラチン、コラーゲン、海綿状フィブリンなどのバイオポリマーまたは酸化セルロースは大きな内表面を有している。この大きな面に吸収されるので、凝固因子の濃度が上昇する。）
ｃ）  酵素、特に、カルシウムの添加、無添加に関わりなく、トロンビンまたはトロンビン類似作用を持つタンパク質分解酵素、
ｄ）  高濃度化した凝固因子、
ｅ）  ｃ）とｄ）の組み合わせ、
ｆ）  カルシウムアルギネート、
ｇ）  微孔構造を持つアルミノ珪酸塩合成製品
によって達成することができる。
【０００５】
これ迄止血に用いられてきたアルミノ珪酸塩合成製品は、様々な組成を持つアルカリ珪酸アルミニウムおよびアルカリ土類珪酸アルミニウムである。
【０００６】
合成後４００℃超の温度で完全脱水処理したアルカリ土類珪酸アルミニウムをベースとする合成製品が、Ｚ−Ｍｅｄｉｃａ社（アメリカ）により、戦争負傷者の応急処置および救急手当て用として開発された。これによれば、強発熱反応により血液から水が取り除かれて止血に到る。当合成製品は顆粒状のまま直接傷口に適用される。これは、“Ｑｕｉｋｃｌｏｔ”の品名で販売されている。専門誌によれば、この製品の場合、発熱反応（６０℃までの温度）によって隣接組織に損傷が現われるのが欠点であると記述されている（Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｔｒａｕｍａ  ５４（２００３）第６巻、１０７７〜１０８２ページ）。
【０００７】
傷口手当て専用に合成リチウム珪酸アルミニウム（ＥＰ１１７６９９１Ａ１、ＷＯ００／６９４８０）が開発され、商品名ＣＥＲＤＡＣで販売されている。ＣＥＲＤＡＣの場合、傷口手当てに最大限の効果を達成するために、高温（＞１０００℃）の適用下で微孔セラミック製品として製造されている。
【０００８】
毛管引力の作用では、一部高コストの製造は別にして、すべての要求をかなえるにはあまりにも微力である。
【０００９】
さらに、大きな問題として、特に危険な状態にある患者の場合傷が慢性化する可能性がある。慢性化の問題は、これ迄のところ確かに回避できておらず、そのような傷の治療は依然として非常に困難である。慢性化に伴って傷口に病原菌が繁殖することもしばしば起きる。
【００１０】
ドイツだけで４００万人の患者が慢性開口創傷に罹っている。その年間治療コストは１７〜３２億ユーロである。これ迄、慢性創傷の手当てについて満足な解決策は得られなかった。
【００１１】
総体的に見て、硬質組織および軟質組織の接着問題や、多量に出血する傷口の迅速な封鎖および手当て、特に慢性創傷の手当てに関しても、どの点を取ってもこれ迄満足な解決には到らなかったと言うことができる。
【００１２】
上記より、ここでの課題は、現状技術に見られる問題を、硬質組織および軟質組織に対して高効率の接着特性を示す製品によって解決することにある。それは特に、多量に出血する創傷の止血および／または個々の骨部分の相互間または骨部分とインプラント材間の堅固な結合を可能にする、接着剤などの組成物を提供することである。インプラント軟骨の場合のように、軟質組織を骨と結合させることができる接着剤も望まれよう。見出された傷口封鎖の可能性は、好ましくは、慢性傷および感染傷に転用できるものでなければならない。
【００１３】
少なくとも１つの遊離アミノ基を持つポリマーは、（リグノリティック）ポリフェノールオキシダーゼ使用下での架橋分子により、相互に、および／または肉体固有組織との間で共有結合を形成しながら架橋することから、硬質組織および軟質組織の接着剤として使用可能であるというのが本発明の認識するところである。
【００１４】
そのほか、特殊加工した天然沸石には迅速な止血作用があるというのが本発明のまた別な認識である。
【００１５】
上記認識から、本発明の第１実施形態では下記の個別成分、すなわち、
ａ）少なくとも１つの遊離アミノ基を持つポリマー、
ｂ）単環式オルトジヒドロキシ芳香族化合物、単環式パラジヒドロキシ芳香族化合物、二環式モノヒドロキシ芳香族化合物、多環式モノヒドロキシ芳香族化合物、二環式ジヒドロキシ芳香族化合物、多環式ジヒドロキシ芳香族化合物、二環式トリヒドロキシ芳香族化合物、多環式トリヒドロキシ芳香族化合物およびこれらの混合物で構成されるグループから選択された架橋分子、および
ｃ）ポリフェノールオキシダーゼ、それも特にリグノリティックポリフェノールオキシダーゼ
を擁していて、且つその場合に両個別成分（成分ｂ）とｃ））、すなわち、架橋分子とポリフェノールオキシダーゼ、特にリグノリティックポリフェノールオキシダーゼとが接触していないキットを設定目標に置いている。
【００１６】
本発明におけるキットの意味は、特に、個別成分が接触しないように並べて保管し得るパックのことである。本例では、少なくとも架橋分子（コンポーネントｂ））は、早過ぎて望ましくない反応を避けるために、（リグノリティック）ポリフェノールオキシダーゼ（コンポーネントｃ））から離しておかねばならない。その結果として混合可能なのは、成分ａ）とｂ）および／またはａ）とｃ）である。
【００１７】
架橋分子と（リグノリティック）ポリフェノールオキシダーゼとの接触を避けるために、両個別成分は別々の容器またはキャビネットに保管することができ、またそれが好ましい。これは、個別成分ｂ）およびｃ）の一方または両方がポリマーａ）と混合されている場合にも当てはまる。両個別成分、すなわち、架橋分子と（リグノリティック）ポリフェノールオキシダーゼを２つのカニューレを通じて別々に放出させることのできる注入器の使用が考えられる。その場合、両個別成分、すなわち、架橋分子と（リグノリティック）ポリフェノールオキシダーゼは、注入器内では別々の収容部に入れておくのが好ましい。
【００１８】
キットに少なくとも２つの注入器を持たせ、一方に架橋分子を、もう一方に（リグノリティック）ポリフェノールオキシダーゼを入れることも、当然考えられる。
【００１９】
実施形態の１つでは、２構成部の注入器を持つキットもあるが、その場合、接続式混合押出し機が既に装備されているのが好ましい。これによれば、非常に正確な配量および簡易な操作が可能になる。２構成部注入器としては、例えばＭｉｘｐａｃタイプ（Ｍｉｘｐａｃ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（株）、スイス／ロートクロイツ）が好ましい。
【００２０】
本発明の枠内では、単一または複数の異種個別成分ａ）、ｂ）およびｃ）は互いに独立した使用が可能なのは自明のことである。したがって、すべての成分について単数構成でも複数構成でも差異はない。
【００２１】
キットが個別成分として、少なくとも１つの遊離アミノ基を含むａ）ポリマーを有していることが必要条件である。本発明で言うアミノ基とは、ポリマーチェーンの構成部ではなくて、ポリマーチェーンの残基となるアミノ基の意味である。このポリマーは、それがキット内にある以上、人間の身体の構成部ではない。このポリマーとして好ましいのは、アミノ基を複数持つポリマー、すなわち、ペプチドなどアミノ基の豊富なポリマーである。
【００２２】
当ペプチド（すなわち、オリゴペプチドおよびタンパク質）では、当然、アミノ酸の間にアミド結合が存在する。ペプチドはリジン含有のものが好ましい。本発明の好ましい実施形態の１つでは、リジン含有オリゴペプチドが使用されている。当ペプチドがコラーゲンであることも考えられる。
【００２３】
ポリマーがペプチドであれば、成分の反応によって生じる化合物は、非常に有利なことに、生物学的に分解可能であることが明らかになっている。接着作用に関与するアミノ酸を含むペプチド連鎖の結合により、非常に堅固な接着が得られるが、しかしそれは、治療過程の経過と共に吸収させることができる。高い接着特性を伴う初期の硬化段階および後続治療過程における緩やかな経時的体内吸収が非常に有利である。それは、接着位置に身体固有の組織が蓄積するからである。
【００２４】
本発明の枠内では、ペプチドとは、オリゴペプチド（２〜約１００のアミノ酸の長さ、好ましくは、約４〜約２０のアミノ酸の長さまたは約６〜約１０のアミノ酸の長さ）だけでなくプロテイン（タンパク質、約１００〜約５０００のアミノ酸の長さ、好ましくは、１００〜１０００または１００〜２００のアミノ酸の長さ）も含めた概念のことである。ペプチドは、長さが１０〜１０００のアミノ酸に相当するものが好ましい。ペプチドは約１〜約１００または約２００ｋＤａまでの分子量、特に約２〜約５０ｋＤａ、または約５〜約２０ｋＤａの分子量を持つことができる。これは改質または置換、例えばグリコシル化することができる。オリゴペプチド内には、通常のタンパク性アミノ酸のほか、改質された、あるいはヒドロキシリジンなど非典型的なアミノ酸を含ませることもできる。Ｌアミノ酸の代わりに、またはそれに追加してＤアミノ酸の使用が可能であり、それによりペプチドの分解が緩慢になる。
【００２５】
アミノ基としては、好ましくは、一次アミノ基または二次アミノ基が可能であるとする。しかし、一次アミノ基は非常に反応性が高い。ペプチドの反応基の少なくとも１つは、好ましくは、ジアミノ酸、例えばリジンの構成成分とする。したがって、ペプチドは、好ましくは、少なくとも１つのジアミノ酸、より好ましくは、少なくとも２、３、４、５またはそれ以上のジアミノ酸を含んでいる。上記のように、リジン含有ペプチド（オリゴペプチドまたはタンパク質）が優先的に使用される。
【００２６】
アルギニン、アスパラギン、グルタミンまたはヒスチジンなどのその他アミノ酸も、ジヒドロキシ芳香族化合物と反応可能な反応性アミノ基を有している。
【００２７】
アミノ基、それも特にジアミン酸によって提供されるアミノ基は、ペプチドと架橋分子との間の架橋反応に特に適している。しかしまた、ペプチド内のヒドロキシ基またはメルカプト基も架橋反応に寄与することができる。それ故、ペプチドはヒドロキシ基を持つアミノ酸、特にセリン、トレオニンまたはチロシンを、あるいはメルカプト基を持つアミノ酸、例えばシステインを持つアミノ酸を少なくとも１つ有しているのが好ましい。ＭＡＰｓ内に存在するようなヒドロキシリジンまたはポリフェノール系のアミノ酸構成要素も、本発明に基づき使用されるペプチドに含ませることができる。しかし、本発明の長所は、この特殊なアミノ酸構成要素の存在、つまりＭＡＰｓの使用が必ずしも必要でないというところにある。したがって、好ましい実施形態の１つでは、ポリマーはポリフェノール系のアミノ酸構成要素、つまりＭＡＰｓを含んでいない。そのため、使用ペプチドは組換技術により難なく作製することができる。
【００２８】
架橋分子とペプチドとの反応によって生じる架橋結合の如何は、提供される反応基のペプチド内に占める割合がどの程度なのかにも依存する。良好な接着特性は、反応性アミノ基を持つペプチドのアミノ酸（例えば、リジンなどのジアミノ酸）成分が少なくとも１０％のレベルから達成可能になる。ポリマーがペプチドでなければ、アミノ基を持つポリマー構成要素の割合は、好ましくは、少なくとも約１０％とする。しかし、このアミノ酸または構成要素の成分は、より高ければ、すなわち、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％または少なくとも５０％であれば、あるいはそれにも増して、少なくとも８０〜１００％であればなおさら好ましい。自然界に存在するペプチドおよび例えば、アルブミンまたはカゼインなどのタンパク質を使用することができ、例えばＭＡＰｓが特に適している。
【００２９】
しかし、もっと短くて、人工的に簡単に製造することができるペプチドを使用することもできる。本発明の特に好ましい実施形態の１つでは、ペプチドのアミノ酸の約５０％はリジンである。リジンともう１つ別なアミノ酸が、例えば、繰返し模様のジペプチドユニットとして配置されている。しかし、別な順序または別なアミノ酸、特にアルギニン、アスパラギン、グルタミンまたはヒスチジン（リジンの代わり、またはそれに追加）、セリンまたはトレオニン（チロシンの代わり、またはそれに追加）、システインまたはその他アミノ酸の取り込みも可能である。約１０〜２０のアミノ酸の長さを持つペプチド、または様々な鎖長を持つペプチドの混合が好ましい。
【００３０】
特に好ましい実施形態の１つでは、専ら２種類のアミノ酸から成るポリマー、例えば（リジン／チロシン）ｎが使用の対象である。但し、ｎは５、１０または２０など５〜４０の値を取ることができる。
【００３１】
本発明におけるもう１つの必要条件は、ずっと上段で定義付けしたとおり、キットが、少なくとも１つの遊離アミノ基を持つポリマー（例、ジアミノ酸）の架橋結合を惹起する架橋分子を有していることである。
【００３２】
架橋分子としては、原則的には、置換されたジヒドロキシ芳香族化合物および／またはラッカーゼなどの（リグノリティック）ポリフェノールオキシダーゼの基質が適している。
【００３３】
上記結果から、単環式オルトジヒドロキシ芳香族化合物、単環式パラジヒドロキシ芳香族化合物、二環式モノヒドロキシ芳香族化合物、多環式モノヒドロキシ芳香族化合物、二環式ジヒドロキシ芳香族化合物、多環式ジヒドロキシ芳香族化合物、二環式トリヒドロキシ芳香族化合物、多環式トリヒドロキシ芳香族化合物およびこれらの混合物が使用される。本発明に基づくヒドロキシ芳香族化合物は、公知の貝成分接着剤とは異なり、ポリマー鎖の構成成分ではない。
【００３４】
これらの芳香族化合物をさらに置換することも考えられる。好ましい官能基は、ハロゲン、スルフォ、スルフォン、スルファミンド、スルファニル、アミノ、アミド、アゾ、イミノおよびヒドロキシで構成されるグループから選択された置換基である。その場合特に注目されるのは、置換された芳香族化合物、特に置換されたジヒドロキシ芳香族化合物が驚異的な極めて好ましい重合特性を示すことであり、特に、迅速な重合、低調な自己連結および良好な接着強度が達成される。その上、芳香族化合物の然るべき置換により、モノヒドロキシ芳香族化合物の場合でも、架橋分子として架橋結合に適するようにすることが可能である。置換された、とは、本発明の枠内では、特に、芳香族化合物においてヒドロキシ基のほかに１、２、３および４つの別な残基が結合していることを意味している。他方、モノヒドロキシル化されたビアリル化合物も適している。
【００３５】
オルトまたはパラの位置にヒドロキシ基またはメトキシ基を有するフェノール誘導体が特に好ましい。したがって、式３および４で表わされる下記の化合物が好ましい。
【００３６】
【化１】
2009525795.tif 000003
なお、式中の符号は下記の意味である。
【００３７】
ｎ＝０〜１０の数字、好ましくは０または１、特に好ましくは０、
Ｒ１＝ＯＨまたはＮＨ２またはハロゲン、好ましくはＯＨ、ＣｌまたはＢｒ、特に好ましくはＯＨ、
Ｒ２＝Ｈ、ＣＨ３、ＣＨＯ、ＣＯＣＨ３、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮ−アルキル、ＣＯＮ−アルキル−ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−アルキル、アルキル、置換された芳香族化合物、特に好ましくはＣＯＮ−アルキルまたはＣＯＯ−アルキルおよび
Ｒ３＝Ｈ、ＣＨ３、アルキル、置換された芳香族化合物、特に好ましくはＨまたはＣＨ３。
【００３８】
アルキルは、好ましくは１〜２０、より好ましくは１〜６の炭素を持つ分枝または非分枝の脂肪族炭化水素鎖、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、イソブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルを意味している。
【００３９】
式３の化合物およびそれより誘導されたハイドロキノンが使用可能であり、後者はさらに置換することができる。できる限り迅速な接着反応という観点下では、自己連結性の弱い置換されたジヒドロキシ芳香族化合物が、本発明に従えば非常に適している。２，５−ジヒドロキシベンザミドの使用が好ましく、２，５−ジヒドロキシ−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ベンザミドが特に好ましい。
【００４０】
トリヒドロキシ芳香族化合物の場合、ベンゾール単位につき２超のヒドロキシ基が存在しないことが好ましい。特に好ましいのは次式５で表わされるポリフェニル、例えばビフェニルまたはトリフェニルである。
【００４１】
【化２】
2009525795.tif 000004
なお、式中の符号は下記の意味である。
【００４２】
ｎ＝０〜１０の数字、好ましくは０または１、
Ｒ１＝ＨおよびＲ２＝ＯＨ、またはＲ１＝ＯＨおよびＲ２＝Ｈ。
【００４３】
その場合式５のフェニルは置換することができる。例えば、オルト位置で、ＣＨ３、ＣＨＯ、ＣＯＣＨ３、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮ−アルキル、ＣＯＮ−アルキル−ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−アルキル、アルキルを持つＯＨ基へと置換された芳香族化合物、特にＣＯＮ−アルキルまたはＣＯＯ−アルキル、および／またはメタ位置で、ＣＨ３、アルキルを持つＯＨ基へと置換された芳香族化合物、特にＣＨ３が挙げられる。
【００４４】
さらに、キットはまた別な個別成分として、リグノリティックポリフェノールオキシダーゼのようなポリフェノールオキシダーゼ、特にラッカーゼ（ＥＣ  １．１０．３．２）を有していることが必要である。ラッカーゼは現状技術では公知である。それは、植物、糸状菌、細菌または昆虫から取り出すことができるし、あるいは天然酵素から誘導することもできる。本発明の枠内で使用されるラッカーゼは、組換技術によって製造または精製することができる。その場合ラッカーゼには一般に特別な純度は要求されない。必要な場合には、リグノリティック糸状菌の上澄液を使用することもできる。しかし医療目的には、リポポリサッカリドなどの微生物系物質またはその他細胞壁構成部からの実質的分離がしばしば望まれる。ラッカーゼの例としては、アスペルギルス、ニューロスポラ、ポドスポラ、ボトリチス、コリビア、フォームス、レンチヌス、プロイロトゥス、ピクノポルス、ピリクラリア、トラメテス、リゾクトニア、コプリヌス、プサチレラ、ミセリオフトーラ、シュタリジウム、ポリポルス、フレビアまたはコリオルスの各種属からのものがある。ラッカーゼの製造は、例えばＥＰ０９４７１４２に開示されている。
【００４５】
キットにリグノリティックポリフェノールオキシダーゼのようなポリフェノールオキシダーゼ、好ましくはラッカーゼ（ＥＣ  １．１０．３．２）を投入することにより、その幅広く特殊な基質スペクトルを接着反応に対して十二分に利用することができる。このように、当キットは、特に、接着反応が、架橋分子として機能する、自然界に見出された特殊ペプチドに限定されることなく、１つには架橋分子の、また１つにはオリゴペプチドのようなペプチドまたはタンパク質の幅広いスペクトルをも利用できることで優れている。
【００４６】
量比のバリエーションは個別成分ａ）、特にペプチドの場合でも架橋分子の場合でも約１〜５０ｍＭの間で可能である。それぞれの適用ごとに最適量比を予備試験で求めなければならない。
【００４７】
その場合、選択された架橋分子によっては、架橋生成物の形成を低下させる架橋分子の自己反応も起きることに注意しなければならない。架橋分子の濃度が低過ぎると反応が緩慢になり、濃度が高過ぎると自己連結により強い副作用が現われる。ペプチドの成分が少なければ、被接着基質における反応性のアミノ基、メルカプト基および／またはヒドロキシル基が架橋結合により強く関わってくる。ポリフェノールオキシダーゼの量は反応速度に影響を与える。その適用の如何に応じて、ゲル点への迅速な到達、完全な硬化または組み合わせの長時間加工性が実現可能である。したがって、予備試験を通しての量比の最適化により、キットをその時々の具体的な課題設定に適合させることができる。
【００４８】
キットの構成成分が、それぞれの使用に適合した、最適化された量比にあることは、キットの持つ特別な長所である。軟質組織の接着に好ましい量比は、例えば［チロシン／リジン］ｎ、ｎ＝４〜３５、８．５ｍＭ、２，５−ジヒドロキシ−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ベンザミド１２．５ｍＭ、ポリフェノールオキシダーゼ：０．３２Ｕ（１５６ｎｍｏｌ  ｍｌ−１、ｍｉｎ−１）である。この量比はキットでプレセットすることができ、添加剤の煩わしい個別配量が省けることになる。
【００４９】
キットで使用する組み合わせには、さらに添加剤および補助剤を、例えばコラーゲン、アルブミン、ヒアルロン酸などの填料を含ませることができる。ペプチドなどの個別成分ａ）と架橋分子との総成分が約５０〜９０％であるのが好ましい。
【００５０】
キットの主要構成成分は、好ましくは、１種類または数種類の水性溶剤で溶解させる。溶剤は医療用として毒性のない、生体に相容するものとする。生体へ適用される溶剤としては、燐酸カルシウム系、燐酸ナトリウム系またはＰＢＳなどの燐酸塩緩衝剤が好ましい。しかし、別な適用目的には、ＤＭＳＯなどの有機溶剤または水性溶剤と有機溶剤との混合物も使用可能である。他の選択肢として、組み合わせまたはその構成成分を溶剤への添加直前に決定して、キットに導入することもできる。
【００５１】
しかし、キット内で使用する成分の粘稠度は流動性に富む必要はなく、パスタ状であっても差し支えない。使用する個別成分の粘度および流動性は、例えば、固定処置対象の傷の長さ、傷口の深さまたは接着対象の基質に依存して適合させることができる。これらのパラメータには、使用するペプチド／ポリマーの長さのほか、溶剤の量も影響する。粘度および流動性の適合化にはチキソトロピー誘起剤などの添加剤も使用することができる。硬質組織の接着には、典型例では、軟質組織の接着に対するより高い粘度の組み合わせを使用する。
【００５２】
ＰＨ値は、好ましくは２〜１０、特に好ましくは５〜７とする。反応は約２〜８０℃で進めることができるが、しかし約２０〜３７℃または２５〜３０℃の温度が好ましい。このように、キットによる接着反応は室温／体温で行うことができる。
【００５３】
貯蔵に関しては、冷凍フィブリン接着剤に対するような特別な要求事項は存在しない。ラッカーゼなどの（リグノリティック）ポリフェノールオキシダーゼは溶解した状態で使用することができる。その貯蔵は冷蔵庫の温度で十分である。ラッカーゼなどの（リグノリティック）ポリフェノールオキシダーゼは、粉末状で供給して、適用前に見計らって溶解する方法も可能である。
【００５４】
キットおよびその個別成分の滅菌は、有利なことに、構造変更なく達成することができる。例えば、溶液の滅菌濾過が可能である。しかし、これはガンマ線による滅菌のほうが好ましい。それによればパック状態のまま作業できるので、滅菌のための詰替えが必要ないからである。５０％にまでなることがある、ガンマ線照射滅菌によるラッカーゼなどの（リグノリティック）ポリフェノールオキシダーゼの活性損失は、初期濃度を然るべきレベルに引き上げることによって簡単に補うことができる。
【００５５】
上記定義付けしたキットは、好ましくは、医薬品として使用する。製薬調剤か医薬製品かの分類は、国内法に依存しており、いずれも可能である。これらの概念は、本発明の説明目的に応じて入れ替えることができる。
【００５６】
もう１つの観点から、本発明は上記個別成分を持つ接着剤も対象にしている。
【００５７】
上記より、接着剤は下記の個別成分、すなわち、
ａ）少なくとも１つの遊離アミノ基を持つ、人間の身体の構成部分に該当しないポリマー、
ｂ）単環式オルトジヒドロキシ芳香族化合物、単環式パラジヒドロキシ芳香族化合物、二環式モノヒドロキシ芳香族化合物、多環式モノヒドロキシ芳香族化合物、二環式ジヒドロキシ芳香族化合物、多環式ジヒドロキシ芳香族化合物、二環式トリヒドロキシ芳香族化合物、多環式トリヒドロキシ芳香族化合物およびこれらの混合物で構成されるグループから選択された架橋分子、および
ｃ）ポリフェノールオキシダーゼ、それも特にリグノリティックポリフェノールオキシダーゼ
を擁していて、その場合に両個別成分（成分ｂ）とｃ））、すなわち、架橋分子とポリフェノールオキシダーゼ、特にリグノリティックポリフェノールオキシダーゼとが接触した状態にある、つまり混合している。
【００５８】
個別成分に関しては、キットの説明が参考になる。
【００５９】
上記より、本発明の枠内では、単一または複数の異種個別成分ａ）、ｂ）およびｃ）は互いに独立した使用が可能なのは自明のことである。したがって、すべての成分について単数構成でも複数構成でも差異はない。
【００６０】
接着剤が個別成分として、少なくとも１つの遊離アミノ基を含むａ）ポリマーを有していることが必要条件である。本発明で言うアミノ基とは、ポリマーチェーンの構成部ではなくて、ポリマーチェーンの残基となるアミノ基の意味である。接着剤のポリマーは、人間の身体を構成する部分に該当しないポリマーである。このポリマーとして好ましいのは、アミノ基を複数持つポリマー、すなわち、ペプチドなどアミノ基の豊富なポリマーである。
【００６１】
当ペプチド（すなわち、オリゴペプチドおよびタンパク質）では、当然、アミノ酸の間にアミド結合が存在する。ペプチドはリジン含有のものが好ましい。本発明の好ましい実施形態の１つでは、リジン含有オリゴペプチドが使用されている。当ペプチドがコラーゲンであることも考えられる。
【００６２】
ポリマーがペプチドであれば、成分の反応によって生じる化合物は、非常に有利なことに、生物学的に分解可能であることが明らかになっている。接着作用に関与するアミノ酸を含むペプチド連鎖の結合により、非常に堅固な接着が得られるが、しかしそれは、治療過程の経過と共に吸収させることができる。高い接着特性を伴う初期の硬化段階および後続治療過程における緩やかな経時的体内吸収が非常に有利である。それは、接着位置に身体固有の組織が蓄積するからである。
【００６３】
本発明の枠内では、ペプチドとは、オリゴペプチド（２〜約１００のアミノ酸の長さ、好ましくは、約４〜約２０のアミノ酸の長さまたは約６〜約１０のアミノ酸の長さ）だけでなくプロテイン（タンパク質、約１００〜約５０００のアミノ酸の長さ、好ましくは、１００〜１０００または１００〜２００のアミノ酸の長さ）も含めた概念のことである。ペプチドは、長さが１０〜１０００のアミノ酸に相当するものが好ましい。ペプチドは約１〜約１００または約２００ｋＤａまでの分子量、特に約２〜約５０ｋＤａ、または約５〜約２０ｋＤａの分子量を持つことができる。これは改質または置換、例えばグリコシル化することができる。オリゴペプチド内には、通常のタンパク性アミノ酸のほか、改質された、あるいはヒドロキシリジンなど非典型的なアミノ酸を含ませることもできる。Ｌアミノ酸の代わりに、またはそれに追加してＤアミノ酸の使用が可能であり、それによりペプチドの分解が緩慢になる。
【００６４】
アミノ基としては、好ましくは、一次アミノ基または二次アミノ基が可能であるとする。しかし、一次アミノ基は非常に反応性が高い。ペプチドの反応基の少なくとも１つは、好ましくは、ジアミノ酸、例えばリジンの構成成分とする。したがって、ペプチドは、好ましくは、少なくとも１つのジアミノ酸、より好ましくは、少なくとも２、３、４、５またはそれ以上のジアミノ酸を含んでいる。上記のように、リジン含有ペプチド（オリゴペプチドまたはタンパク質）が優先的に使用される。
【００６５】
アルギニン、アスパラギン、グルタミンまたはヒスチジンなどのその他アミノ酸も、ジヒドロキシ芳香族化合物と反応可能な反応性アミノ基を有している。
【００６６】
アミノ基、それも特にジアミン酸によって提供されるアミノ基は、ペプチドと架橋分子との間の架橋反応に特に適している。しかしまた、ペプチド内のヒドロキシ基またはメルカプト基も架橋反応に寄与することができる。それ故、ペプチドはヒドロキシ基を持つアミノ酸、特にセリン、トレオニンまたはチロシンを、あるいはメルカプト基を持つアミノ酸、例えばシステインを持つアミノ酸を少なくとも１つ有しているのが好ましい。ＭＡＰｓ内に存在するようなヒドロキシリジンまたはポリフェノール系のアミノ酸構成要素も、本発明に基づき使用されるペプチドに含ませることができる。しかし、本発明の長所は、この特殊なアミノ酸構成要素の存在、つまりＭＡＰｓの使用が必ずしも必要でないというところにある。したがって、好ましい実施形態の１つでは、ポリマーはポリフェノール系のアミノ酸構成要素、つまりＭＡＰｓを含んでいない。そのため、使用ペプチドは組換技術により難なく作製することができる。
【００６７】
架橋分子とペプチドとの反応によって生じる架橋結合の如何は、提供される反応基のペプチド内に占める割合がどの程度なのかにも依存する。良好な接着特性は、反応性アミノ基を持つペプチドのアミノ酸（例えば、リジンなどのジアミノ酸）成分が少なくとも１０％のレベルから達成可能になる。ポリマーがペプチドでなければ、アミノ基を持つポリマー構成要素の割合は、好ましくは、少なくとも約１０％とする。しかし、このアミノ酸または構成要素の成分は、より高ければ、すなわち、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％または少なくとも５０％であれば、あるいはそれにも増して、少なくとも８０〜１００％であればなおさら好ましい。自然界に存在するペプチドおよび例えば、アルブミンまたはカゼインなどのタンパク質を使用することができ、例えばＭＡＰｓが特に適している。
【００６８】
しかし、もっと短くて、人工的に簡単に製造することができるペプチドを使用することもできる。本発明の特に好ましい実施形態の１つでは、ペプチドのアミノ酸の約５０％はリジンである。リジンともう１つ別なアミノ酸が、例えば、繰返し模様のジペプチドユニットとして配置されている。しかし、別な順序または別なアミノ酸、特にアルギニン、アスパラギン、グルタミンまたはヒスチジン（リジンの代わり、またはそれに追加）、セリンまたはトレオニン（チロシンの代わり、またはそれに追加）、システインまたはその他アミノ酸の取り込みも可能である。約１０〜２０のアミノ酸の長さを持つペプチド、または様々な鎖長を持つペプチドの混合が好ましい。
【００６９】
特に好ましい実施形態の１つでは、専ら２種類のアミノ酸から成るポリマー、例えば（リジン／チロシン）ｎが使用の対象である。但し、ｎは５、１０または２０など５〜４０の値を取ることができる。
【００７０】
本発明におけるもう１つの必要条件は、ずっと上段で定義付けしたとおり、接着剤が、少なくとも１つの遊離アミノ基を持つポリマー（例、ジアミノ酸）の架橋結合を惹起する架橋分子を有していることである。
【００７１】
架橋分子としては、原則的には、置換されたジヒドロキシ芳香族化合物および／またはラッカーゼなどの（リグノリティック）ポリフェノールオキシダーゼの基質が適している。
【００７２】
上記結果から、単環式オルトジヒドロキシ芳香族化合物、単環式パラジヒドロキシ芳香族化合物、二環式モノヒドロキシ芳香族化合物、多環式モノヒドロキシ芳香族化合物、二環式ジヒドロキシ芳香族化合物、多環式ジヒドロキシ芳香族化合物、二環式トリヒドロキシ芳香族化合物、多環式トリヒドロキシ芳香族化合物およびこれらの混合物が使用される。本発明に基づくヒドロキシ芳香族化合物は、公知の貝成分接着剤とは異なり、ポリマー鎖の構成成分ではない。
【００７３】
これらの芳香族化合物をさらに置換することも考えられる。好ましい官能基は、ハロゲン、スルフォ、スルフォン、スルファミンド、スルファニル、アミノ、アミド、アゾ、イミノおよびヒドロキシで構成されるグループから選択された置換基である。その場合特に注目されるのは、置換された芳香族化合物、特に置換されたジヒドロキシ芳香族化合物が驚異的な極めて好ましい重合特性を示すことであり、特に、迅速な重合、低調な自己連結および良好な接着強度が達成される。その上、芳香族化合物の然るべき置換により、モノヒドロキシ芳香族化合物の場合でも、架橋分子として架橋結合に適するようにすることが可能である。置換された、とは、本発明の枠内では、特に、芳香族化合物においてヒドロキシ基のほかに１、２、３および４つの別な残基が結合していることを意味している。他方、モノヒドロキシル化されたビアリル化合物も適している。
【００７４】
オルトまたはパラの位置にヒドロキシ基またはメトキシ基を有するフェノール誘導体が特に好ましい。したがって、式３および４で表わされる下記の化合物が好ましい。
【００７５】
【化３】
2009525795.tif 000005
なお、式中の符号は下記の意味である。
【００７６】
ｎ＝０〜１０の数字、好ましくは０または１、特に好ましくは０、
Ｒ１＝ＯＨまたはＮＨ２またはハロゲン、好ましくはＯＨ、ＣｌまたはＢｒ、特に好ましくはＯＨ、
Ｒ２＝Ｈ、ＣＨ３、ＣＨＯ、ＣＯＣＨ３、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮ−アルキル、ＣＯＮ−アルキル−ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−アルキル、アルキル、置換された芳香族化合物、特に好ましくはＣＯＮ−アルキルまたはＣＯＯ−アルキルおよび
Ｒ３＝Ｈ、ＣＨ３、アルキル、置換された芳香族化合物、特に好ましくはＨまたはＣＨ３。
【００７７】
アルキルは、好ましくは１〜２０、より好ましくは１〜６の炭素を持つ分枝または非分枝の脂肪族炭化水素鎖、例えばメチル、エチル、プロピル、ブチル、イソブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルを意味している。
【００７８】
式３の化合物およびそれより誘導されたハイドロキノンが使用可能であり、後者はさらに置換することができる。できる限り迅速な接着反応という観点下では、自己連結性の弱い置換されたジヒドロキシ芳香族化合物が、本発明に従えば非常に適している。２，５−ジヒドロキシベンザミドの使用が好ましく、２，５−ジヒドロキシ−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ベンザミドが特に好ましい。
【００７９】
トリヒドロキシ芳香族化合物の場合、ベンゾール単位につき２超のヒドロキシ基が存在しないことが好ましい。特に好ましいのは次式５で表わされるポリフェニル、例えばビフェニルまたはトリフェニルである。
【００８０】
【化４】
2009525795.tif 000006
なお、式中の符号は下記の意味である。
【００８１】
ｎ＝０〜１０の数字、好ましくは０または１、
Ｒ１＝ＨおよびＲ２＝ＯＨ、またはＲ１＝ＯＨおよびＲ２＝Ｈ。
【００８２】
その場合式５のフェニルは置換することができる。例えば、オルト位置で、ＣＨ３、ＣＨＯ、ＣＯＣＨ３、ＣＯＮＨ２、ＣＯＮ−アルキル、ＣＯＮ−アルキル−ＯＨ、ＣＯＯＨ、ＣＯＯ−アルキル、アルキルを持つＯＨ基へと置換された芳香族化合物、特にＣＯＮ−アルキルまたはＣＯＯ−アルキル、および／またはメタ位置で、ＣＨ３、アルキルを持つＯＨ基へと置換された芳香族化合物、特にＣＨ３が挙げられる。
【００８３】
さらに、接着剤はまた別な個別成分として、リグノリティックポリフェノールオキシダーゼのようなポリフェノールオキシダーゼ、特にラッカーゼ（ＥＣ１．１０．３．２）を有していることが必要である。ラッカーゼは現状技術では公知である。それは、植物、糸状菌、細菌または昆虫から取り出すことができるし、あるいは天然酵素から誘導することもできる。本発明の枠内で使用されるラッカーゼは、組換技術によって製造または精製することができる。その場合ラッカーゼには一般に特別な純度は要求されない。必要な場合には、リグノリティック糸状菌の上澄液を使用することもできる。しかし医療目的には、リポポリサッカリドなどの微生物系物質またはその他細胞壁構成部からの実質的分離がしばしば望まれる。ラッカーゼの例としては、アスペルギルス、ニューロスポラ、ポドスポラ、ボトリチス、コリビア、フォームス、レンチヌス、プロイロトゥス、ピクノポルス、ピリクラリア、トラメテス、リゾクトニア、コプリヌス、プサチレラ、ミセリオフトーラ、シュタリジウム、ポリポルス、フレビアまたはコリオルスの各種属からのものがある。ラッカーゼの製造は、例えばＥＰ０９４７１４２に開示されている。
【００８４】
接着剤にリグノリティックポリフェノールオキシダーゼのようなポリフェノールオキシダーゼ、好ましくはラッカーゼ（ＥＣ１．１０．３．２）を投入することにより、その幅広く特殊な基質スペクトルを接着反応に対して十二分に利用することができる。このように、当キットは、特に、接着反応が、架橋分子として機能する、自然界に見出された特殊ペプチドに限定されることなく、１つには架橋分子の、また１つにはオリゴペプチドのようなペプチドまたはタンパク質の幅広いスペクトルをも利用できることで優れている。
【００８５】
量比のバリエーションは個別成分ａ）、特にペプチドの場合でも架橋分子の場合でも約１〜５０ｍＭの間で可能である。それぞれの適用ごとに最適量比を予備試験で求めなければならない。
【００８６】
その場合、選択された架橋分子によっては、架橋生成物の形成を低下させる架橋分子の自己反応も起きることに注意しなければならない。架橋分子の濃度が低過ぎると反応が緩慢になり、濃度が高過ぎると自己連結により強い副作用が現われる。ペプチドの成分が少なければ、被接着基質における反応性のアミノ基、メルカプト基および／またはヒドロキシル基が架橋結合により強く関わってくる。ポリフェノールオキシダーゼの量は反応速度に影響を与える。その適用の如何に応じて、ゲル点への迅速な到達、完全な硬化または組み合わせの長時間加工性が実現可能である。したがって、予備試験を通しての量比の最適化により、接着剤をその時々の具体的な課題設定に適合させることができる。
【００８７】
接着剤の構成成分が、それぞれの使用に適合した、最適化された量比にあることは、接着剤の持つ特別な長所である。軟質組織の接着に好ましい量比は、例えば［チロシン／リジン］ｎ、ｎ＝４〜３５、８．５ｍＭ、２，５−ジヒドロキシ−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ベンザミド１２．５ｍＭ、ポリフェノールオキシダーゼ：０．３２Ｕ（１５６ｎｍｏｌ  ｍｌ−１、ｍｉｎ−１）である。この量比はキットでプレセットすることができ、添加剤の煩わしい個別配量が省けることになる。
【００８８】
接着剤で使用する組み合わせには、さらに添加剤および補助剤を、例えばコラーゲン、アルブミン、ヒアルロン酸などの填料を含ませることができる。ペプチドなどの個別成分ａ）と架橋分子との総成分が約５０〜９０％であるのが好ましい。
【００８９】
接着剤の主要構成成分は、好ましくは、１種類または数種類の水性溶剤で溶解させる。溶剤は医療用として毒性のない、生体に相容するものとする。生体へ適用される溶剤としては、燐酸カルシウム系、燐酸ナトリウム系またはＰＢＳなどの燐酸塩緩衝剤が好ましい。しかし、別な適用目的には、ＤＭＳＯなどの有機溶剤または水性溶剤と有機溶剤との混合物も使用可能である。他の選択肢として、組み合わせまたはその構成成分を溶剤への添加直前に決定することもできる。
【００９０】
しかし、使用する接着剤個別成分の粘稠度は流動性に富む必要はなく、パスタ状であっても差し支えない。使用する個別成分および／または接着剤の粘度および流動性は、例えば、固定処置対象の傷の長さ、傷口の深さまたは接着対象の基質に依存して適合させることができる。これらのパラメータには、使用するペプチド／ポリマーの長さのほか、溶剤の量も影響する。粘度および流動性の適合化にはチキソトロピー誘起剤などの添加剤も使用することができる。硬質組織の接着には、典型例では、軟質組織の接着に対するより高い粘度の組み合わせを使用する。
【００９１】
ＰＨ値は、好ましくは２〜１０、特に好ましくは５〜７とする。反応は約２〜８０℃で進めることができるが、しかし約２０〜３７℃または２５〜３０℃の温度が好ましい。このように、キットによる接着反応は室温／体温で行うことができる。
【００９２】
貯蔵に関しては、冷凍フィブリン接着剤に対するような特別な要求事項は存在しない。ラッカーゼなどの（リグノリティック）ポリフェノールオキシダーゼは溶解した状態で使用することができる。その貯蔵は冷蔵庫の温度で十分である。ラッカーゼなどの（リグノリティック）ポリフェノールオキシダーゼは、粉末状で供給して、適用前に見計らって溶解する方法も可能である。
【００９３】
キットおよびその個別成分の滅菌は、有利なことに、構造変更なく達成することができる。例えば、溶液の滅菌濾過が可能である。しかし、これはガンマ線による滅菌のほうが好ましい。それによればパック状態のまま作業できるので、滅菌のための詰替えが必要ないからである。５０％にまでなることがある、ガンマ線照射滅菌によるラッカーゼなどの（リグノリティック）ポリフェノールオキシダーゼの活性損失は、初期濃度を然るべきレベルに引き上げることによって簡単に補うことができる。
【００９４】
上記定義付けしたキットは、好ましくは、医薬品として使用する。製薬調剤か医薬製品かの分類は、国内法に依存しており、いずれも可能である。これらの概念は、本発明の説明目的に応じて入れ替えることができる。
【００９５】
以下では、本発明に基づくキットおよび接着剤の使用についてより詳しく説明する。
【００９６】
架橋分子によれば、ラッカーゼなどの（リグノリティック）ポリフェノールオキシダーゼの使用のもと、少なくとも１つの遊離アミノ基を持つポリマーとの共有結合の形成下で架橋結合を達成し得るというのが本発明の認識するところである。それ故、本発明では１つは、傷口封鎖のため、上記定義付けによるキットまたは接着剤の使用に照準している。下段で説明するように、傷などの接着には、キットまたは接着剤は個別成分ｂ）とｃ）だけを有しているだけで十分である。それより、本発明は下記の個別成分、すなわち、
ａ）単環式オルトジヒドロキシ芳香族化合物、単環式パラジヒドロキシ芳香族化合物、二環式モノヒドロキシ芳香族化合物、多環式モノヒドロキシ芳香族化合物、二環式ジヒドロキシ芳香族化合物、多環式ジヒドロキシ芳香族化合物、二環式トリヒドロキシ芳香族化合物、多環式トリヒドロキシ芳香族化合物およびこれらの混合物で構成されるグループから選択された架橋分子、および
ｂ）  ポリフェノールオキシダーゼ、それも特にリグノリティックポリフェノールオキシダーゼ
を擁していて、且つその場合に両個別成分（成分ａ）とｂ））、すなわち、架橋分子とポリフェノールオキシダーゼ、特にリグノリティックポリフェノールオキシダーゼとが接触していないキットの使用に照準している。傷口、特に硬質組織および軟質組織の接着のための接着剤の製造に関しては、ずっと後段で仔細に説明する。
【００９７】
したがって、以下では、キットまたは接着剤は、２つの個別成分「架橋分子」と「ポリフェノールオキシダーゼ」を擁する、あるいは３つの個別成分「少なくとも１つの遊離アミノ基を持つポリマー」、「架橋分子」および「ポリフェノールオキシダーゼ」を擁するキットまたは接着剤を意味するが、但し、キットまたは接着剤は今挙げた３つの個別成分を持つものが好ましい。
【００９８】
個別成分および好ましいその実施形態に関しては、上で定義付けされたキットまたは接着剤が参考になる。
【００９９】
キットおよび／または接着剤は硬質組織または軟質組織の接着に使用することができる。例えば、結合組織、皮膚、腱、器官、血管および／または神経（軟質組織）および／または骨（硬質組織）の接着が可能である。自明のとおり、異なった組織間、例えば腱と骨との接着も可能である。特に好ましい適用例は、創傷縁の接着あるいは肝臓、腎臓または脾臓など様々な器官の裂傷の接着において見られる。また、例えば腫瘍摘出後のケアなど外科処置された創傷の手当ても本発明に基づくキットおよび／または接着剤によって可能である。その他の使用領域としては、
−  特に、傷口の縫合時に誘起される瘢痕形成の防止のための形成外科、再生外科および／または美容外科での処置、
−  例えば、血管外科処置、動脈バイパス手術での出血穿刺部の密封、あるいは胸部外科処置での肺空隙部の密封など、液体／空気漏洩部の封鎖および密封
がある。
【０１００】
キットおよび／または接着剤の上記以外で有利な適用例として、吻合部での一定期間に亘る吸収性のあるフレキシブルな密着および血管または空洞器官への当接がある。
【０１０１】
キットおよび／または接着剤は薬剤供給装置、多孔構造担体あるいは再生医学（組織工学）において潜在需要のある対応膜の固定にも適している。この場合、非生物起源の表面が遊離アミノ基を保持できる限り、それとも接着できることが非常な利点である。遊離アミノ基は、現状技術から公知の方法、例えばプラズマ法により、非生物起源のそのような表面上に保持させることができる（Ｓｃｈｒｏｄｅｒ他、Ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｌｏｗ−ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ｍｉｃｒｏｗａｖｅ  ｐｌａｓｍａ  ａｓｓｉｓｔｅｄ  ａｍｉｎｏ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｐｌａｓｍａ  ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ａｎｄ  ｐｏｌｙｍｅｒｓ、ドイツ、ヴァインハイム、Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ編（ヴァインハイム）、２００５年刊；Ｓｃｈｒｏｄｅｒ他の寄稿、Ｐｌａｓｍａ−Ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｓｕｒｆａｃｅ  Ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ｉｎ  Ａｍｍｏｎｉａ  Ｐｌａｓｍａ，Ｃｏｎｔｒｉｂ．Ｐｌａｓｍａ  Ｐｈｙｓ．第４１巻、２００１年刊、５６２〜５７２ページ；Ｍｅｙｅｒ−Ｐｌａｔｈ他、Ｃｕｒｒｅｎｔ  ｔｒｅｎｄｓ  ｉｎ  ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｚａｔｉｏｎ−ｎｉｔｒｏｇｅｎ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｐｌａｓｍａ  ａｓｓｉｓｔｅｄ  ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｗｉｔｈ  ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｉｔｙ、“Ｖａｃｕｕｍ”第７１巻、２００３年刊、３９１〜４０６ページ）。
【０１０２】
キットおよび／または接着剤により周辺組織と結合させねばならない、例えばインプラント材または薬剤供給装置の表面は、少なくとも約２％の遊離アミノ基を有していなければならない。なお、表面の概念は平坦な面だけでなく、あらゆる形態を持つ固形基質の境界層をも含んでいる。したがって、基質は、例えば小球（ビーズ）であったり、または複雑な形態をした表面を持つ場合もあり得る。
【０１０３】
堅固に架橋した吸収性のある結合をもたらす上記キットおよび／または接着剤の使用のもと、水性環境で適用できる接着方法も同様に本発明の対象である。その場合、上記定義付けのとおり、特に、ラッカーゼなど（リグノリティック）ポリフェノールオキシダーゼによって誘起され、遊離アミノ酸を担うポリマーと架橋分子を通じて推進される架橋により堅固な結合が行われる。
【０１０４】
本発明は、特に、上記のとおり定義付けされたキットおよび／または接着剤による軟質組織および硬質組織の接着のための方法に関する。軟質組織および硬質組織の接着では、なかでも、骨と骨の接着ということがあり得る。その場合、特に、その大きさからボルトでは全く、あるいは満足には固定できない骨片を、本発明に基づくキットおよび／または接着剤で固定させる。本発明に基づくキットおよび／または接着剤による接着の場合では、金属製インプラント材に比較して、骨折治癒後に第２の手術を行う必要がない。しかも、本発明に基づくキットおよび／または接着剤によれば、軟質組織に対しても固定させることができる。例えば、関節症の治療のための、特に移植軟骨（例えば組織培養からの移植体）は、本発明に基づくキットおよび／または接着剤によれば、関節面に生え付くまで十分に固定させることができる。この関係では、キットおよび／または接着剤が漸次吸収される点が非常に有利である。その上、本発明に基づくキットおよび／または接着剤によれば、骨をインプラント材に固定させることもできる。特に骨粗鬆症の骨の場合、ボルトの保持力は大幅に低下する。本発明に基づくキットおよび／または接着剤の使用下で、骨の外面とインプラント材（例えばプレート）とを広い面積で接着させることにより、ボルトの保持力を補助すること、あるいはそれにも増してボルトを完全に省くことが可能である。細胞活性度試験から、架橋製品に良好な生体適合性のあることが明らかになった。
【０１０５】
したがって、本発明は、特に、２つの個別成分「架橋分子」と「ポリフェノールオキシダーゼ」または、特に好ましくは、個別成分「少なくとも１つの遊離アミノ基を持つポリマー」、「架橋分子」および「ポリフェノールオキシダーゼ」を持つ本発明に基づくキットの使用、すなわち、上記定義付けどおり、創傷封鎖のための本発明に基づく接着剤の製造目的での使用をも含んでいる。創傷とは、例えば切傷および骨折における身体の表面と内面間の連続性の遮断を言う。上記結果より、本発明は、既述のとおり、特に、軟質組織および硬質組織の接着に、さらには骨とインプラント材（例えばプレート）との接着に用いる接着剤の製造のために、本発明に基づくキットを使用することも包含する。
【０１０６】
本発明に基づく組み合わせでの架橋により、特に、ラッカーゼなど（リグノリティック）ポリフェノールオキシダーゼのような酵素系の補助のもとで、接着作用に関与するアミノ酸を含むペプチド配列を結合させれば、様々な使用領域で非常に堅固な接着が得られ、しかもそれは治癒過程の経過と共に吸収させることができる。高い接着特性を伴う初期硬化過程および後続治癒過程における体内での経時的で緩やかな吸収が大きな利点である。
【０１０７】
当接着剤またはキットは、骨折の際に、人工血管、生物学的分解性インプラント材、カテーテル、ステントおよびその他材料の固定に利用することができる。
【０１０８】
したがって、本発明は、２つの個別成分「架橋分子」と「ポリフェノールオキシダーゼ」または、特に好ましくは、３つの個別成分「少なくとも１つの遊離アミノ基を持つポリマー」、「架橋分子」および「ポリフェノールオキシダーゼ」を持つ本発明に基づくキットの使用、すなわち、上記定義付けどおり、骨折箇所の接着および／または人口血管、生物学的分解性インプラント材、カテーテル、ステントおよびその他材料の固定のための接着剤の製造目的での使用をも含んでいる。
【０１０９】
骨の接着および特に骨の領域でのインプラント材の迅速な融合には、骨細胞のインプラント材受容能が基本的に重要である。これは、もちろん、使用接着剤に対しても当てはまる。骨芽細胞の発生および続いての成熟を伴う迅速な定着化を通して骨の新生が促進され、治癒過程が短縮される。それ故、インプラント材は微小構造化表面に仕上げられている。本発明に基づくキットおよび接着剤はこの構造を維持させ、骨の新生を補助する。骨の治癒に不可欠なコラーゲンの生産には、アミノ酸リジンとプロリンが必要である。
【０１１０】
したがって、この使用領域にはポリマーとして、好ましくは、（リジン／チロシン）ｎが使用される。ポリマーとして（リジン／チロシン）ｎを使用した場合、リジンは接着位置に高濃度で存在する。その結果として、骨の形成に好影響が現われる。形成された細胞外マトリックスは、ＲＤＧ配列（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）を手掛かりに、例えばα１β１またはα３β１などのインテグリンを通じて認識される。それにより、細胞内での細胞骨格の変化を惹起し、繁殖段階と分化段階の間でその切換を行う信号カスケードが始動する。形成されたタンパク質マトリックスは、その上、カルシウム塩の沈積にも用いられる。
【０１１１】
このことから、複雑骨折への適用および骨細片の接合が可能になる。複雑骨折の手術でこそ、本発明に基づく止血および高接着力の組み合わせによる利点が大きな威力になる。
【０１１２】
本発明は、さらに別な観点で、単独でも本発明に基づくキットの補助としても使用することができる止血に適した新型の沸石顆粒にも照準している。
【０１１３】
新型の沸石顆粒によって、特に傷縁部の迅速な接着が達成される。
【０１１４】
新型の沸石顆粒は、少なくとも７０重量％の沸石を含む、特に、斜プチロライト、斜方沸石およびモルデン沸石を成分とし、平均孔径０．３〜０．５ｎｍの微孔空隙を持つ沸石顆粒である。好ましくは、これは、水化物不含の沸石顆粒とするが、その状態は、好ましくは、乾燥および予備粉砕後温度２００℃未満の穏やかな脱水によって達成される。２００℃未満の穏やかな条件下の脱水では、特に温度インターバルは様々に設定される。沸石顆粒は、粒径０．８〜０．２ｍｍの範囲に属する部類からのものを使用するのが特に好ましい。
【０１１５】
当沸石顆粒の純度については、米国薬局方またはヨーロッパ薬局方の要求が満たされねばならない。
【０１１６】
この沸石顆粒の微孔空隙では、血液凝固に関与する特定のファクタが選択的に増大することが明らかになった。それにより、生理的血液凝固が活性化され、従来の止血剤を明かに上回る止血効果がもたらされる。その場合、傷口に毒性物質を全く放出しないことが非常な利点である。本発明に基づく既述の精製によれば、沸石顆粒は強静電電界により、それ自体重症出血を１分内で止めることができる結晶格子状に維持される。本発明に基づく沸石顆粒は、驚いたことに、微孔化合成珪酸リチウムベース（ＥＰ１１７６９９１Ａ１、ＷＯ００／６９４８０、ＵＳ６８３３４８６Ｂ１）の市販製品、例えばＣＥＲＤＡＣに比べて５〜１０倍の毛管引力作用を有していることが明らかになった。部分的脱水であるため、燃焼により組織損傷を惹き起こしかねない発熱反応は現れない。
【０１１７】
本発明に基づく既述の精製によって初めて、天然沸石がコスト的に有利な方法で止血剤および傷口処理剤として提供可能になった。したがって、本発明は、薬剤または医薬としての本発明に基づく沸石顆粒、および止血用の薬剤および／または医薬の製造のための、本発明に基づく沸石顆粒の使用をも包含する。キットの場合と同様、国内法に依存して、薬品製剤として、または薬剤としての分類が可能である。これらの概念は、本発明の明細書の目的に応じて取り換え可能である。
【０１１８】
既に上で述べたとおり、本発明に基づく沸石顆粒により止血だけでなく、傷縁部の迅速な接着が達成されることが明らかになった。傷縁部の接着後、鉱物分は、例えば痂皮類似の傷被覆膜を剥がし、残留分を吸引することによって完全に除去することができる。本発明の当実施形態では、沸石を、例えばセルロースベースまたはテキスタイルベースまたはコラーゲン不織布ベースの包囲材に適用することが可能である。それにより、続いての完全除去が特別な問題なく達成可能である。
【０１１９】
フィブリン系の活性化により、傷縁部が互いに接着される。したがって、本発明は、傷口の接着、吻合部の密着および血管または空洞器官への当接のための、本発明に基づく接着剤の製造のための、本発明に基づく沸石顆粒の使用をも包含する。
【０１２０】
しかし、封鎖傷口の耐引裂性は従来のフィブリン接着剤の場合より劣っている。
【０１２１】
耐引裂性を高めるためには、上記のキットまたは接着剤の中に本発明に基づく沸石顆粒を組込むのが目的に適っている。この組み合わせにより、傷口処理、傷口封鎖および止血において特に高い作用を持つ止血性創傷接着剤を提供することができる。
【０１２２】
この点から、本発明はまた別な実施形態において、下記の個別成分、すなわち、
ａ）  少なくとも１つの遊離アミノ基を持つポリマー、
ｂ）  単環式オルトジヒドロキシ芳香族化合物、単環式パラジヒドロキシ芳香族化合物、二環式モノヒドロキシ芳香族化合物、多環式モノヒドロキシ芳香族化合物、二環式ジヒドロキシ芳香族化合物、多環式ジヒドロキシ芳香族化合物、二環式トリヒドロキシ芳香族化合物、多環式トリヒドロキシ芳香族化合物およびこれらの混合物で構成されるグループから選択された架橋分子、
ｃ）  ポリフェノールオキシダーゼ、それも特にリグノリティックポリフェノールオキシダーゼ、および
ｄ）  止血性鉱物、特に上記の沸石顆粒
を擁していて、且つその場合に両個別成分ｂ）、ｃ）とｄ）とが、すなわち、架橋分子およびポリフェノールオキシダーゼ、特にリグノリティックポリフェノールオキシダーゼが個別成分ｄ）とは互いに接触していないキットに照準されている。
【０１２３】
これら個別成分およびその好ましい実施形態については、前記の実施形態が参考になる。それによれば、キットは、ポリペプチドまたはオリゴペプチドの架橋結合を可能にする、特に、天然沸石の微小顆粒およびポリフェノールオキシダーゼ（特にラッカーゼ）をベースにしている。
【０１２４】
その場合、天然沸石の微小顆粒はキットの他の個別成分とは接触しないのが好ましい。すなわち、沸石は別途パックして別途使用するのが好ましい。天然沸石の微小顆粒は高い毛管引力を示すので、凝固因子を濃化させて傷口の迅速封鎖に有効に作用する。その後沸石は問題なく元どおりに取り除くことができる。手術領域に血液の流出がなく、手術部分の見通しが確保される。さらに、（望む場合は）例えば非架橋ポリマーの添加前になお修正の可能性があって、それが有利に作用する。
【０１２５】
当初応急的に封鎖されたこの創傷にキットの個別成分ａ）〜ｃ）を投入すれば、共有結合の形成下で、一方では持続的耐久性のある、また一方では吸収性のある傷口封鎖が達成される。
【０１２６】
出血を強力に抑制し、それにより（リグノリティック）ポリフェノールオキシダーゼ、特にラッカーゼの投入位置での逆流出を阻止し得る止血剤としては、本発明に基づく沸石顆粒意外のものも当然考えられる。天然沸石の微小顆粒による止血後に、別な薬剤として組織接着剤を使用することも可能である。しかし、記述の処置方法（最初に止血、天然沸石の微小顆粒による傷口封鎖、続いてラッカーゼなどポリフェノールオキシダーゼの作用下での持続性接着）は多くの利点を有しており、コストの観点からも競合の方法より優位にある。傷口処理、傷口封鎖および硬質組織、軟質組織、インプラント材の接着のための本発明に基づく止血キットは、その上、取り扱いが遥かに簡単である。止血性接着剤は
下記の領域、すなわち、
−  特に、傷口の縫合時に誘起される瘢痕形成の防止のための形成外科、再生外科および／または美容外科での処置、
−  例えば、血管外科処置、動脈バイパス手術での出血穿刺部の密封、あるいは胸部外科処置での肺空隙部の密封など、液体／空気漏洩部の封鎖および密封
で有利に使用することができる。
【０１２７】
本発明に基づくキットは、電気凝固に対する代替手段であるだけでなく、針と糸による傷口封鎖に対する代替手段でもある。
【０１２８】
その結果として、本発明は、個別成分ｂ）〜ｄ）またはそれ以上の成分、好ましくはａ）〜ｄ）を含む、傷口封鎖用接着剤の製造のための、本発明に基づくキットの使用をも包含する。本発明は、そのほか特に、個別成分ｂ）〜ｄ）またはそれ以上の成分、好ましくはａ）〜ｄ）を含む、軟質組織、硬質組織の接着用および骨とインプラント（例えばプレート）の接着用の接着剤の製造のための、本発明に基づく上記キットの使用をも包含する。
【０１２９】
本発明は、さらに上記に加えて、個別成分ｂ）〜ｄ）またはそれ以上の成分、好ましくはａ）〜ｄ）を含む、但しその場合少なくとも成分ｂ）〜ｃ）またはａ）〜ｃ）、好ましくはすべての個別成分ｂ）〜ｄ）またはａ）〜ｄ）が互いに接触している接着剤にも照準している。
【０１３０】
天然沸石の微小顆粒が持つ高い毛管引力は、これを傷の手当て、特に治り難い傷および既に慢性化した傷の手当てに使用する上で非常に重要である。滲出を伴う創傷には、すなわち、炎症傷口に血液構成成分が漏出している場合には、天然沸石の微小顆粒を使用するのが的を得ている。滲出が負傷部位の感染徴候になることがしばしばある。本発明に従って得られる、沸石顆粒の微孔構造が、「湿潤」創傷の場合に過剰に放出される傷口滲出物を吸収することができる。過剰滲出物の吸収が、同時に傷の上方位置にある湿った雰囲気を作り出す。それが傷の回復には重要である。
【０１３１】
本発明に基づくまた別な使用形態として次のものがある。
【０１３２】
−  事故後の応急処置のための手段、
−  感染性創傷の衛生処理
全く驚いたことに、孔径０．３〜０．５ｍｍの沸石は、ずっと下段で定義付けしている水棲生物からのバイオマスと、特に１：１０〜１０：１の比率で混合しても、止血作用または毛管引力を失わないことが分かった。
【０１３３】
それに基づき、新型沸石顆粒の用途は、この素材をバイオマスで補充することにより拡大することができる。その結果、本発明は、沸石とバイオマスの比率が特に１：１０〜１０：１になるようにバイオマスを追加成分として含む、本発明に基づく沸石顆粒も包含する。本発明によれば、好ましくは、抗菌活性を有する微小藻類が選択される。そのバイオマスは親液化および粉砕され、および／またはＬｕｋｏｗｓｋｉ他の技術的教示“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｌｙ  ｏｒ  ｃｏｓｍｅｔｉｃａｌｌｙ  ａｃｔｉｖｅ  ａｇｅｎｔｓ  ｏｂｔａｉｎｅｄ  ｆｒｏｍ  ｌｉｑｉｄ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｍａｒｉｎｅ  ｏｒｇａｎｉｓｍｓ”ＵＳ  １０／５０７，０６１に従って精製される。
【０１３４】
沸石微小顆粒と、抗菌作用物質を含むこのような精製バイオマスとの混合によって、傷口からの過剰滲出物の吸収を保証し、傷を湿潤保持し、創傷部の病原菌繁殖を防止し、炎症抑制および免疫増進の作用を示し、細胞増殖を促進する組み合わせの提供が可能になっている。ＵＳ１０／５０７，０６１に基づく精製の場合、微小藻類としては、好ましくは、脂質成分＞２０％、多くの不飽和脂肪酸および／または高成分比率のポリ−Ｎ−アセチル−グルコサミンを含むものを選択する。そうすることで、脂肪酸の抗菌活性を上記設定課題に対して有効に利用することができる。ポリサッカリドに関しては、ポリ−Ｎ−アセチル−グルコサミン系またはチトサン系のものが、有利なことに、大きな内表面を有している。この大きな面への吸収により、凝固因子の濃化の場合でも、傷からの分泌物および細菌毒素の吸収の場合と全く同様に相乗効果が得られる。このポリサッカリドは、それに加えて、免疫増進作用も有している。本発明の好ましい実施形態の１つでは、緑藻類、クラミドモナスおよび／または微小藻類スピルリナおよび／またはアナベナの凍結乾燥バイオマスが使用される。沸石を、バイオマスの添加または無添加のもとで出血性創傷に適用すれば、フィブリン系の活性化により、傷を細菌感染から確実に護る痂皮様の堅固な被複層が生成される。この被覆層は傷の治癒過程で剥がされる。
【０１３５】
天然沸石の微小顆粒と微小藻類バイオマスとで然るべき適用形態にすれば、強感染性の湿潤創傷の治療にも使用することができる。
【０１３６】
本発明に基づく沸石顆粒／バイオマスの組み合わせは、キットおよび／または接着剤に含ませることができる。それは、様々な使用領域向けに既に詳細記述済みであるすべての実施形態について当てはまる。
【０１３７】
本発明の特徴は、請求項のほか明細書からも明らかである。個々の特徴はそれぞれ単独で、あるいは幾つか組み合わされて、保護の対象になり得る有利な形態を呈しており、それらについて本書で保護を申請している。その発明的行為はそれぞれ有用である。
【０１３８】
本発明を、実施例に基づき説明するが、本発明はそれら実施例に限定されるものではない。
【実施例１】
【０１３９】
天然沸石からの微小顆粒の製造
好ましくは斜プチロライト、斜方沸石およびモルデン沸石から成る≧７０％の沸石成分を含む、選択的に採掘された鉱物を、乾燥および予備粉砕後分別して粒径０．８〜０．２ｍｍのものを得る。純度については、米国薬局方またはヨーロッパ薬局方の要求が満たされねばならない。＜２００℃を条件に選択した温度インターバルでの穏やかな熱処理により、結晶構造の維持下で部分脱水を行う。
【実施例２】
【０１４０】
微孔体積および粒径分布の試験
実施例１に従って製造された生成物は、２５〜５０％の微孔空間（総体積を基準として）および平均０．３〜０．５ｎｍのナノレベル孔径を有している。
【０１４１】
ナノレベルの孔径および微小顆粒構造が、最大限の血液吸収および微小顆粒吸収体への迅速浸透を可能にする。
【０１４２】
毛管引力は比較試験した市販製剤ＣＥＲＤＡＣの５〜１０倍の高さである。
【実施例３】
【０１４３】
微小顆粒の止血適性試験
方法
実施例１に従って製造した２種類の微小顆粒を試験した。
【０１４４】
試験は、血液強灌流器官の典型であるラットの肝臓に対して行った。この目的のためラットに麻酔をかけた。開腹後外科用メスにより長さ約１ｃｍの切傷を入れた。出血をフィルム撮影した。止血までの時間を測定した。
【０１４５】
結果
本発明に基づく顆粒を適用した場合、１分内で止血に到る（対照試料の場合加療なしでは８分までもかかる）。痂皮様の表皮が形成され、それが傷を保護している。
【実施例４】
【０１４６】
微小顆粒の止血適性に関する試験管内での試験
異なった血漿に対する試験より以下の結果を得た。
【０１４７】
【表１】
2009525795.tif 000007
【０１４８】
【表２】
2009525795.tif 000008
【０１４９】
【表３】
2009525795.tif 000009
結果が証明しているように、内因性の凝固システムが活性化していて、欠陥因子Ｆ−ＶＩＩおよび組織因子がトロンビンおよびフィブリンの生成増大化を誘発している。実施例１に基づく傷口での鉱物堆積によりフィブリン濃度が相対的に上昇する。
【実施例５】
【０１５０】
微小藻類からの抽出物の抗菌作用試験
方法
様々なブドウ球菌菌株をホイットレイ自動スパイラルプレーターにより、寒天プレート（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社のミュラー・ヒントンＩＩ寒天既製プレート）上に直線モードで均一に分布させた。
【０１５１】
傷口堆積層の形成に使用するアセテート織物に、２ｍｇエキスに相当する量のエキス溶液を滴下して乾燥させる。
【０１５２】
エキスの調製には、緑藻類、クラミドモナス、微小藻類スピルリナ（Ｂｌｕｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ社／ビズム）およびアナベナ（エルンスト・モリツ・アムト大学／グライスヴァルトの薬学研究所の菌株収集室）の凍結乾燥バイオマスを使用した。Ｎ−ヘキサンによる抽出には抽出機ＤＩＯＮＥＸ  ＡＳＥ  ２００を利用した。抽出溶液を回転蒸発器にかけて溶剤を取り除いた。
【０１５３】
結果
対照試料では病原菌の数は７０〜１２０／ｃｍ２に上った。傷口に塗布した堆積層の下方では、創傷感染の病原体としての恐れのあるメチシリン耐性黄色ブドウ球菌菌株（ＭＲＳＡ）は検出されなかった。その他のブドウ球菌に関しては、病原菌の数が当初の１０〜２０％に減少した。
【実施例６】
【０１５４】
天然沸石および微小藻類バイオマスからの微小顆粒の製造
実施例１に従って製造した微小鉱物顆粒に、脂質成分＞２０％の微小藻類バイオマスを１：１０〜１０：１の比率で混合することができる。それによって、傷口での病原菌の繁殖が阻止される。
【実施例７】
【０１５５】
微小顆粒の止血および傷口封鎖についての適性試験
ａ）方法
実施例１に従って製造した２種類の微小顆粒を試験した。
【０１５６】
試験は、血液強灌流器官の典型であるラットの肝臓に対して行った。この目的のためラットに麻酔をかけた。開腹後外科用メスにより長さ約１ｃｍの切傷を入れた。出血をフィルム撮影した。止血までの時間を測定した。傷口の封鎖状態を肉眼で判定した。
【０１５７】
結果
本発明に基づく顆粒を適用した場合、１分内で止血に到る（対照試料の場合８分までもかかる）。痂皮様の表皮が形成され、それが傷を保護している。
【０１５８】
ｂ）別な試験では、１分後表皮を外科用メスで取り除いた。
【０１５９】
結果
傷口はもはや出血がなく、表面が閉じていて、視覚的には傷口の封鎖状態は良好である。傷口封鎖状態は、鉱物／藻類バイオマスベースの微小顆粒によるほうが、鉱物単独ベースで調製された製剤を使用する場合より良好である。
【０１６０】
ｃ）別な試験では、セルロース布の介在により微小顆粒を傷口から離した。
【０１６１】
結果
この条件下でも止血は１分内で達成される。手術領域の見通しが非常に良くなるので、本発明に基づく組織接着剤による傷の堅固な接着が問題なく行える。
【実施例８】
【０１６２】
接着剤プレポリマーの製造および軟質組織、硬質組織の接着のための接着反応の実施
開発した接着剤は、個別成分、オリゴペプチド１（ｎ＝５またはｎ＝１０で反覆するチロシンおよびリジンのジペプチドユニットから成るアミノ酸配列）、架橋分子（２，５−ジヒドロキシ−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ベンザミド）および酵素ラッカーゼ（式５）の混合物をベースにしている。試験は燐酸塩緩衝剤中で行った。
式５：
【０１６３】
【化５】
2009525795.tif 000010
接着作用は、オリゴペプチドと結合している架橋分子とのラッカーゼの酵素反応によって進行する。
【０１６４】
混合比として次の値を適用した。
【０１６５】
［チロシン／リジン］ｎ、ｎ＝４〜３５、８．５ｍＭ、２，５−ジヒドロキシ−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ベンザミド１２．５ｍＭ、酵素：０．３２Ｕ（１５６ｎｍｏｌ  ｍｌ−１、ｍｉｎ−１）。溶剤のメタノール成分は１０％（体積比）とした。
【実施例９】
【０１６６】
接着接合部の強度試験
引張試験による接着接合部の強度検査では、検査対象の組織部分を予め固定させねばならなかった。ブタの軟質組織を、ポリメチルメタクリレート（ＰＭＭＡ）製の試料ホルダにアクリル酸シアン系接着剤により固定させた。あるいは、牛の骨から成るプレート状骨材を固定機械に引張固定した。続いて、検査対象の接着剤混合物（実施例６参照）を組織上に塗布した。軟質組織の接着では、１０分後に接着接合部の強度を試験機Ｚｗｉｃｋ  ＢＺ２．５／ＴＮＩＳ（検査速度：１０ｍｍ／分）により引張負荷のもとで測定した。硬質組織接着後の接着接合部の機械的検査は、引張剪断負荷のもと検査速度５ｍｍ／分で行った。
【０１６７】
結果：比較試験した市販のフィブリン接着剤に比べて２倍の強度が達成される。
【実施例１０】
【０１６８】
本発明に基づきドープされたコラーゲン不織布と従来型抗菌剤のドープされた不織布との拡散抑制比較テスト
方法
Ｂｕｒｋｈａｒｄｔ式寒天培地拡散試験（Ｂｕｒｋｈａｒｄｔ，Ｆ．（編）“Ｍｉｋｒｏｂｉｏｌｏｇｉｓｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｋ”（微生物診断術）、Ｇｅｏｒｇ−Ｔｈｉｅｍｅ社刊／シュトゥットガルト、ニューヨーク、１９９２年、７２４ページ）を実施した。１５のテスト実施のため、スタッカーペトリシャーレ（ベクトン・ディッキンソン  マイクロバイオロジーシステム／アメリカＣｏｃｋｅｙｓｖｉｌｌｅ）にミュラー・ヒントンＩＩ寒天を使用した。テスト菌株として黄色ブドウ球菌菌株ＡＴＣＣ６５３８を選択した。このテスト菌株の播種は、１６２０時間後には種培養が密に広がるように、その反面、合流単独集団が形成されることがないように行った。接種された培養基の乾燥後には、ドープされたコラーゲン不織布を寒天表面にあてがった。３６０℃での１８＋２時間の培養後、抑制領域を測定した。
【０１６９】
【表４】
2009525795.tif 000011
本発明に基づく不織布は次の長所を有している。
【０１７０】
・多種耐性病原菌に対しても見られる改良された抗菌作用
・非常に良好な止血作用
・簡便な適用性に加え傷口への良好な接着性
【実施例１１】
【０１７１】
本発明に基づきポリフェノールがドープされた表面の抗菌作用試験
方法
様々なブドウ球菌菌株をホイットレイ自動スパイラルプレーターにより、寒天プレート（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ社のミュラー・ヒントンＩＩ寒天既製プレート）上に直線モードで均一に分布させた。
【０１７２】
ポリマー・バイオマテリアル（それぞれ１ｃｍ２）は、“Ｐｌａｓｍａ  Ｐｈｙｓ．”第４１巻の寄稿（２００１年、５６２〜５７２ページ）に従い、アンモニア／プラズマ条件で機能化させる。その後ラッカーゼの影響下で２，５−ジヒドロキシ−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ベンザミド（１２，５ｍＭ）により置換を行った（０．３２Ｕ（１５６ｎｍｏｌ  ｍｌ−１、ｍｉｎ−１））。溶剤のメタノール成分は１０％（体積比）とした。
【０１７３】
乾燥後プレートを寒天の上に置いた。
【０１７４】
結果
対照試料では病原菌の数は１２０／ｃｍ２である。塗布表面の下方では、病原菌は検出されない。
【実施例１２】
【０１７５】
出血性創傷の手当てにおける本発明に基づく組み合わせの適用
方法
実施例７と同様ラットに麻酔をかけ、開腹して肝臓に切傷を入れる。実施例７ｃと同様に止血する。形成された痂皮を除去する。続いて、切傷を創傷接着剤で接着する。
【０１７６】
そのため、実施例６で記述したオリゴペプチドをＰＢＳ（燐酸塩緩衝塩、２．７Ｍ  ＮａＣｌ、５４ｍＭ  ＫＣｌ、８７ｍＭ  Ｎａ２ＨＰＯ４、３０ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４、ｐＨ７．４）に入れ、ラッカーゼを添加する（成分１）。２，５−ジヒドロキシ−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ベンザミドをＰＢＳ中に溶かす（成分２）。オリゴペプチド／２，５−ジヒドロキシ−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）−ベンザミド／ラッカーゼを様々な比率（例えば、１／１／０．１、１／２／０．５、１／１０／１）でテストする。成分溶液をできる限り濃縮されたものにするため、溶剤量は最小限に選定する。成分はＭｉｘｐａｃ（ミックスパック・システム／スイス、ロートクロイツ）タイプの混合押出し機付き２成分型噴射器に投入し、創傷裂け目に適用する。
【０１７７】
結果：止血剤によって既に良好な傷口封鎖が行われる。接着剤は狭くなった裂け目に直接投入することができる。創傷縁が非常に堅固に接着する。
【実施例１３】
【０１７８】
コラーゲンの接着
方法
コラーゲン箔（ＤＯＴ（有））を平坦な基材上に固着させた。
【０１７９】
コラーゲン箔を８つのセグメント（４つずつ２列）に区分し、その箔の上に接着剤を直接置き（表面張力の利用下で）混ぜ合わせた。接着剤は燐酸塩／クエン酸塩緩衝液に溶かして使用した。
【０１８０】
架橋分子（ラッカーゼ基質）は様々な濃度でテストした。接着剤タンパク質は約４０００Ｄ（ダルトン）の分子量を有していた。
【０１８１】
続いて、小さなコラーゲン箔片を載せ、軽く押し付けてから乾燥させた。
【０１８２】
結果
コラーゲンの接着の際堅固な結合が達成された。
【０１８３】
接着は接着剤タンパク質の添加無しでも行われる。しかし、接着剤タンパク質によって結合力が強化される。
【実施例１４】
【０１８４】
コラーゲン溶液と接着剤との混合
コラーゲン溶液と接着剤との混合後には、顕微鏡観察によれば顕著な構造化が認められる。溶解後任意の位置取りにあるコラーゲン分子は、繊維の形成下で平行に並んでいる。
【実施例１５】
【０１８５】
コラーゲンとポリスチレンの接着
方法
１滴（２０μｌ）のクエン酸塩／燐酸塩緩衝液（対照試料）と接着剤溶液（緩衝剤、ラッカーゼ、ラッカーゼ基質）を６０ｍｍのＴＣＰＳ細胞培養シャーレの表面に付着させ、それぞれ１小片のコラーゲン箔（８×４ｍｍ）を載せ、軽く押し付けた後に乾燥させる。
【０１８６】
結果
完全に平滑で不活性の表面であるにも拘わらず接着が達成された。
【０１８７】
コラーゲンは基材と持続的に結合した。
【実施例１６】
【０１８８】
コラーゲンの被覆された表面における細胞接着
方法
細胞の接着は線維芽細胞の細胞線（ＦＬ細胞）で検査した。
【０１８９】
細胞の接着は、実施例１５に従いコラーゲンの被覆された６０ｍｍのＴＣＰＳ細胞培養シャーレに対して行った。クリスタルバイオレットによる細胞の着色後に細胞探査機により評価を行った。
【０１９０】
結果
ＦＬ細胞はより強く結合している（図１参照）。
【図面の簡単な説明】
【０１９１】
【図１】図１は細胞接着を示す表である。
【図１】
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【国際調査報告】
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