(57)【要約】  本発明は、動脈バイパス移植術を受けた患者における血管移植片機能不全の予防のための、式（Ｉ）［式中、Ｒ1は、ピリジル又はチアゾリルであり、そのいずれもが、場合によりＣ1-8アルキル又はＣ2-8アルケニルで置換されていてもよく；そしてａ）Ｒ2は、メトキシであり、かつｎは、０又は１であるか；あるいはｂ）Ｒ2は、塩素であり、かつｎは、０である］の化合物及び薬学的に許容しうるその塩の使用に関する。
2009507890.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
動脈バイパス移植術後の血管移植片機能不全の予防用医薬の製造のための、式（Ｉ）：
【化１】
2009507890.tif 000005
［式中、
Ｒ1は、ピリジル又はチアゾリルであり、そのいずれもが、場合によりＣ1-8アルキル又はＣ2-8アルケニルで置換されていてもよく；そして
ａ）  Ｒ2は、メトキシであり、かつｎは、０又は１であるか；あるいは
ｂ）  Ｒ2は、塩素であり、かつｎは、０である］で示される化合物及び薬学的に許容しうるその塩の使用。
【請求項２】
動脈バイパスのために使用される血管が、それぞれ、伏在静脈又は肘脈、及び内胸（胸部）動脈又は胃大網動脈のような、静脈又は動脈表現型のいずれかである、請求項１記載の使用。
【請求項３】
動脈バイパス移植術により移植される血管が、冠状動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）のためには冠状動脈に、又は大腿膝窩、大腿下腿バイパス移植術若しくは鼠径下バイパス術（ＩＩＢＳ）のためには大腿動脈のような末梢動脈に移植される、請求項１又は２記載の使用。
【請求項４】
動脈バイパス移植術により移植される血管が、冠状動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）のために冠状動脈に移植される、請求項１〜３のいずれか１項記載の使用。
【請求項５】
式（Ｉ）の化合物が、５−メチル−ピリジンスルホン酸［６−メトキシ−５−（２−メトキシ−フェノキシ）−２−ピリジン−４−イル−ピリミジン−４−イル］−アミドである、請求項１〜４のいずれか１項記載の使用。
【請求項６】
動脈バイパス移植術後の血管移植片機能不全の予防方法であって、ヒト又は哺乳動物への、有効量の式（Ｉ）：
【化２】
2009507890.tif 000006
［式中、
Ｒ1は、ピリジル又はチアゾリルであり、そのいずれもが、場合によりＣ1-8アルキル又はＣ2-8アルケニルで置換されていてもよく；そして
ａ）  Ｒ2は、メトキシであり、かつｎは、０又は１であるか；あるいは
ｂ）  Ｒ2は、塩素であり、かつｎは、０である］で示される化合物及び薬学的に許容しうるその塩の投与を特徴とする方法。
【請求項７】
式（Ｉ）の化合物が、５−メチル−ピリジン−２−スルホン酸［６−メトキシ−５−（２−メトキシ−フェノキシ）−２−ピリジン−４−イル−ピリミジン−４−イル］−アミドである、請求項６記載の処置方法。
【請求項８】
動脈バイパス移植術後の血管移植片機能不全の予防用の医薬組成物であって、
Ａ）  式（Ｉ）：
【化３】
2009507890.tif 000007
［式中、
Ｒ1は、ピリジル又はチアゾリルであり、そのいずれもが、場合によりＣ1-8アルキル又はＣ2-8アルケニルで置換されていてもよく；そして
ａ）  Ｒ2は、メトキシであり、かつｎは、０又は１であるか；あるいは
ｂ）  Ｒ2は、塩素であり、かつｎは、０である］で示される化合物及び薬学的に許容しうるその塩、並びに
Ｂ）  抗高血圧薬、血糖降下薬、脂質調節薬、抗狭心症薬、抗不整脈薬、抗血栓薬、血小板凝集阻害薬、線維素溶解薬、抗炎症薬、抗感染薬、免疫調節薬及び抗増殖薬を含む群から選択される、１種以上の更に別の化合物、並びに
Ｃ）  賦形剤
を含むことを特徴とする組成物。
【請求項９】
式（Ｉ）の化合物が、５−メチル−ピリジン−２−スルホン酸［６−メトキシ−５−（２−メトキシ−フェノキシ）−２−ピリジン−４−イル−ピリミジン−４−イル］−アミドである、請求項８記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、特定のピリジルスルホンアミドピリミジン類の使用を特徴とする、動脈バイパス移植術を受けた患者における血管移植片機能不全の予防のための新しい医薬／方法に関する。
【０００２】
発明の背景
動脈バイパス移植術の開発及び実施は、西欧諸国における死亡原因第１位の疾患である、症候性及び無症候性のアテローム動脈硬化症の患者の症状を軽減し、かつ生存率を改善した。手術の適応症は、多様な臨床症候群、並びに解剖学的に虚血性心疾患及び／又は末梢動脈閉塞性疾患の一部の患者にまで拡大している。これらは、安定及び不安定狭心症の患者、急性心筋梗塞の患者、無症候性虚血の患者、突然心臓死の生存者、先天性冠状動脈異常の患者並びに可逆性虚血に続発する鬱血性心不全を示す患者を含む。冠状動脈バイパス移植術の主な臨床的有益性は、虚血の軽減及び続発する心筋異常発生の予防に関する。末梢動脈閉塞性疾患の外科的バイパス術は、下肢への血流を回復するための有効な手段を提供し、そして障害跛行又は重症肢虚血の患者の標準治療法であった。したがって、未変性の冠状及び末梢循環の両方における、それぞれ早期及び後期バイパス移植片の開存性並びに疾患の進行の制限、並びにバイパス導管が最も重要である。
【０００３】
自家大伏在静脈は、動脈移植片を使用する有利さが支持されているにもかかわらず、なお最も一般的に使用される冠状又は鼠径下バイパス導管であり、そして多枝病変及び糖尿病の患者において特に有効である。残念なことに、動脈バイパス移植術の長期の成績は、移植血管の狭窄及び続発する閉塞により制限されて、５年及び１０年ではそれぞれ２０％及び５０％の失敗率となっている（Campeauら, Circulation, 1983, volume 68, page II 1-7；Vaislicら, Union Med Can, 1983, volume 112, pages 229-234；WhittemoreとBelkin, Vasc. Surgery, volume 1, pages 794-814）。静脈又は動脈移植片の機能不全は、繰り返し手術又は経皮的血行再建術により処置することができる。しかし、繰り返し手術は、高い死亡率及び発病率を伴う。また、血管移植片疾患の経皮的処置は、末梢の塞栓、血流低下又は無還流、処置周縁の心筋梗塞及び続発する再狭窄の相関する現象による、処置上の長期の高合併症率によって複雑化する。したがって、確定した病変部の処置よりもむしろ移植片狭窄の予防が、長期開存性に顕著な影響を及ぼすだろうし、静脈又は動脈バイパス移植術を受ける多数の患者に照らして、予防的な治療アプローチの開発は重要な目的である。
【０００４】
冠状動脈又は末梢バイパス移植術の後に、移植血管は、動脈系における血流及び血圧の上昇に曝される。バイパス移植術の結果として生じる剪断応力及び壁応力の変化並びに内皮損傷は、その後の内膜過形成（新生内膜）へと至る血管障害の原因になると考えられる。静脈又は動脈移植片の肥厚は、中膜肥厚の増大及び新生内膜形成により測定される。血小板由来成長因子、トロンビン及びエンドセリン−１を含む、多数の放出成長因子及びサイトカイン類に反応しての平滑筋細胞の遊走及び増殖は、内膜過形成の発生において重要な役割を演じている。新生内膜過形成は、内腔の障害、血流低下及びその後の移植片機能不全に至ることもある。
【０００５】
発明の詳細な説明
本発明は、式（Ｉ）：
【０００６】
【化４】
2009507890.tif 000003
【０００７】
［式中、
Ｒ1は、ピリジル又はチアゾリルであり、そのいずれもが、場合によりＣ1-8アルキル又はＣ2-8アルケニルで置換されていてもよく；そして
ａ）  Ｒ2は、メトキシであり、かつｎは、０又は１であるか；あるいは
ｂ）  Ｒ2は、塩素であり、かつｎは、０である］で示される化合物及び薬学的に許容しうるその塩に関する。
【０００８】
本発明は具体的には、哺乳動物、特にヒトにおける動脈バイパス移植術後の血管移植片機能不全の予防用医薬の製造のための、式（Ｉ）の化合物の使用に関する。このバイパスは、それぞれ、伏在静脈又は肘脈、及び内胸（胸部）動脈又は胃大網動脈のような、静脈又は動脈表現型のいずれかの血管により行いうる。好ましい血管は、自家移植性のものである。血管は、冠状動脈バイパス移植術（ＣＡＢＧ）のためには冠状動脈に、又は大腿膝窩、大腿下腿バイパス移植術若しくは鼠径下バイパス術（ＩＩＢＳ）のためには大腿動脈のような末梢動脈に移植することができる。
【０００９】
更には、本発明は、動脈バイパス移植術後の後期血管移植片機能不全の予防方法であって、好ましくはヒト対象、又は哺乳動物への治療有効量の式（Ｉ）の化合物の投与を特徴とする方法に関する。
【００１０】
「予防」という用語は、本発明の説明の至るところで使用されるとき、「処置」及び「進行の遅延」をも含むものとする。詳細には「予防」という用語は、血管狭窄の予防又は血管開存性の延長、そして移植片機能不全の減少、必要な薬理学的又は外科的介入の減少及び死亡率の減少を含む。
【００１１】
本発明のスルホンアミドは、エンドセリン受容体のインヒビターとして知られており、そして製造方法は、WO 00/52007に開示されている。
【００１２】
更に詳細には、本発明は、下記の式（Ｉ）の化合物に関する：Ｒ1は、好ましくは２−ピリジル又は２−チアゾリルであり、それぞれ場合によりＣ1-8アルキル又はＣ2-8アルケニルで置換されており、そして最も好ましくは２−ピリジルであり、場合によりＣ1-8アルキル又はＣ2-8アルケニルで置換されており、Ｃ1-8アルキル又はＣ2-8アルケニルは、分岐又は直鎖の基、例えば、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ビニル、１−プロペニル、アリル、イソプロペニル、１−ブテニル、２−ブテニル、３−ブテニルなどである。好ましいのは、４個まで（４個を含む）の炭素原子を有する基である。最も好ましい置換は、メチル基による。
【００１３】
特に好ましいのは、Ｒ1が、場合によりＣ1-4アルキルで置換されている２−ピリジルであり；そしてＲ2がメトキシであり、かつｎが０である、式（Ｉ）の化合物、及び薬学的に許容しうるその塩である。
【００１４】
最も好ましいのは、５−メチル−ピリジン−２−スルホン酸｛６−メトキシ−５−（２−メトキシ−フェノキシ）−２−ピリジン−４−イル−ピリミジン−４−イル｝−アミドである。
【００１５】
「薬学的に許容しうる塩」という用語は、塩酸、臭化水素酸、硝酸、硫酸、リン酸、クエン酸、ギ酸、マレイン酸、酢酸、コハク酸、酒石酸、メタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸などのような無機又は有機酸との式（Ｉ）の化合物の塩であって、哺乳動物に対して非毒性であるものを含む。また、ナトリウム及びカリウム塩のようなアルカリ塩、カルシウム及びマグネシウム塩のようなアルカリ土類金属塩、Ｎ−メチル−Ｄ−グルタミン塩、並びにアルギニン、リシンなどのようなアミノ酸との塩などの、無機又は有機塩基との塩をも含む。
【００１６】
当然のことながら、本発明の式（Ｉ）の化合物は、官能基で誘導体化することにより、インビボで親化合物に変換して戻ることができる、プロドラッグ誘導体を提供することができる。更には、インビボで一般式（Ｉ）の親化合物を生成することができる、一般式（Ｉ）の化合物の任意の生理学的に許容しうる均等物は、本発明の範囲に含まれる。
【００１７】
上述のように、動脈バイパス移植術後の血管移植片機能不全の予防用医薬の製造のための式（Ｉ）の化合物の使用は、本発明の目的であるが、この医薬の製造法は、１種以上の式（Ｉ）の化合物、及び必要ならば１種以上の他の治療上有用な物質を、製剤の投与剤形にすることを特徴とする。
【００１８】
本医薬組成物は、例えば、錠剤、コーティング錠、糖衣錠、硬又は軟ゼラチンカプセル剤、液剤、乳剤又は懸濁剤の剤形で、経口投与してもよい。投与はまた、例えば、坐剤を用いることにより直腸内に；例えば、軟膏剤、クリーム剤、ゲル剤、液剤又は化合物をコーティングした静脈内ステント並びに血管外カフスを用いることにより、局所に又は経皮的に；あるいは非経口的に、例えば、注射液を用いることにより、例えば、静脈内、筋肉内、皮下、髄腔内又は経皮的に行うことができる。更に、投与は、舌下又は眼科用調剤として、あるいは例えば、スプレーの剤形でエーロゾルとして行うことができる。
【００１９】
錠剤、コーティング錠、糖衣錠又は硬ゼラチンカプセル剤の製造には、本発明の化合物は、薬学的に不活性の無機又は有機賦形剤と混合することができる。錠剤、糖衣錠又は硬ゼラチンカプセル剤に適した賦形剤の例は、乳糖、トウモロコシデンプン又はその誘導体、タルク及びステアリン酸又はその塩を含む。
【００２０】
軟ゼラチンカプセル剤と共に使用するのに適した賦形剤は、例えば、植物油、ロウ、脂肪、半固体又は液体ポリオールなどを含んでもよい。
【００２１】
液剤及びシロップ剤の製造に有用な賦形剤は、例えば、水、ポリオール類、サッカロース、転化糖及びブドウ糖を含んでもよい。
【００２２】
注射液の製造に有用な賦形剤は、例えば、水、アルコール類、ポリオール類、グリセリン及び植物油を含んでもよい。
【００２３】
坐剤及び他の局所又は経皮適用剤の製造に有用な賦形剤は、例えば、天然又は硬化油、ロウ、脂肪及び半固体又は液体ポリオール類を含んでもよい。
【００２４】
以下の実施例は、可能性ある投与剤形を例示する：
【００２５】
以下の成分を含む錠剤は、従来法で製造することができる：
【００２６】
成分                          mg（１錠中）
式（Ｉ）の化合物              0.1-500
乳糖                          125
トウモロコシデンプン          75
タルク                        4
ステアリン酸マグネシウム      1
【００２７】
以下の成分を含むカプセル剤は、従来法で製造することができる：
【００２８】
成分                          mg（１カプセル中）
式（Ｉ）の化合物              0.1-500
乳糖                          150
トウモロコシデンプン          20
タルク                        5
【００２９】
注射液は、以下の組成を有することができる：
【００３０】
成分                                        量        
式（Ｉ）の化合物                            0.01-50
塩化ナトリウム                              8.5
トリス（ヒドロキシメチル）−アミノエタン    0.5
ＨＣｌ  ０．１Ｎ                            pH8.0まで
注射用水                                    1.0mlまで
【００３１】
本薬剤組成物はまた、保存料、可溶化剤、安定化剤、湿潤剤、乳化剤、甘味料、着色料、着臭剤、浸透圧の変化用の塩、緩衝剤、コーティング剤又は酸化防止剤を含んでいてもよい。上述のように、これらはまた、他の治療上有用な物質を含んでいてもよい。
【００３２】
本製剤の製造に使用される全てのアジュバントは、一般に安全と認められていることが必須条件である。
【００３３】
使用の好ましい形態は、静脈内、筋肉内又は経口投与であり、最も好ましいのは経口投与である。式（Ｉ）の化合物が治療有効量、即ち、移植片機能不全を予防する量で投与される、この用量は、具体的な活性成分の性質、患者の年齢及び要求並びに適用の様式に依存する。一般に、１日に約０．００１〜１０mg/kg体重の用量が考慮される。
【００３４】
式（Ｉ）の化合物はまた、抗高血圧薬、血糖降下薬、脂質調節薬、抗狭心症薬、抗不整脈薬、抗血栓薬、血小板凝集阻害薬、線維素溶解薬、抗炎症薬、抗感染薬、免疫調節薬及び／又は抗増殖薬との併用で投与することができる。更には、本化合物は、受容体ブロッカー、タンパク質キナーゼインヒビター、イオンチャネルモジュレーター、抗酸化物質として作用する薬剤との、フィブリノーゲン及びマトリックスメタロプロテイナーゼのようなタンパク質に作用する薬剤との併用で投与することができる。
【００３５】
抗高血圧薬の例は、アリスキレン、アムロジピン、ベナゼプリル、カンデサルタン、カプトプリル、ジルチアゼム、エナラプリル、エプレネロン、エプロサルタン、フェロジピン、フォシノプリル、イルベサルタン、イスラジピン、リシノプリル、ロサルタン、モエキシプリル、ニカルジピン、ニフェジピン、ニソルジピン、オルメサルタン、ペリンドプリル、キナプリル、ラミプリル、シルデナフィル、スピロノラクトン、テルミサルタン、トランドラプリル、バルサルタン及びベラパミルであり；
血糖降下薬の例は、インスリン、レパグリニド、ナテグリニド、グリメピリド、グリベンクラミド、グリクラジド、グリピジド、グリボルヌリド、メトホルミン、ミグリトール、アカルボース、ムラグリタザール、ピオグリタゾン、ロシグリタゾン及びテサグリタザルであり；
脂質調節薬の例は、アトルバスタチン、クロフィブラート、エゼチミブ、フェノフィブラート、フルバスタチン、ゲムフィブロジル、ロバスタチン、ピタバスタチン、プラバスタチン、ロスバスタチン、シンバスタチンであり；
タンパク質キナーゼインヒビターの例は、イマチニブ、ミドスタウリン、ロボキシスタウリン及びスタウロスポリンであり；
抗狭心症薬の例は、アセブトロール、カルベジロール、三硝酸グリセリル、一硝酸又は二硝酸イソソルビド、ラベタロール、メトプロロール、ナドロール、ニトログリセリン、ピンドロール、プロプノロール、チモロールであり；
抗不整脈薬の例は、アデノシン、アミオダロン、アトロピン、ブレチリウム、ジゴキシン、ジソピラミド、ドフェチリド、フレカイニド、リドカイン、プロカインアミド、プロパフェノン、キニジン、ソタロール、トカイニドであり；
抗血栓薬の例は、アセノクマロール、アルガトロバン、ビバリルジン、シロスタゾール、デシルジン、フォンダパリヌクス、イドラパリナックス、レピルジン、ペントキシフィリン、フェンプロクモン、ワルファリン、キシメラガトラン並びに非分画ヘパリン及び低分子量ヘパリン剤であり；
血小板凝集阻害薬の例は、アブシキシマブ、アセチルサリチル酸、クロピドグレル、エプチフィバチド、チクロピジン及びチロフィバンであり；
線維素溶解薬の例は、アルフィメプラーゼ、アルテプラーゼ、ラノテプラーゼ、マイクロプラスミン、レテプラーゼ、ストレプトキナーゼ及びウロキナーゼであり；
抗炎症薬の例は、アダリムマブ、ベタメタゾン、デキサメタゾン、エタネルセプト、インフリキシマブ及びプレドニゾンであり；
抗感染薬の例は、ストレプトマイシンのようなアミノグリコシド類；セファクロル、セフトリアキソン及びセフロキシムのようなセファロスポリン類；エリスロマイシン及びアジスロマイシンのようなマクロライド類；アモキシシリン及びペニシリンＧのようなペニシリン類；シプロフロキサシン、ノルフロキサシン及びガチフロキサシンのようなキノロン類；トリメトプリム及びスルファメトキサゾールのようなスルホンアミド類；ミノサイクリン及びドキシサイクリンのようなテトラサイクリン類であり；
免疫調節薬の例は、アレファセプト、アザチオプリン、バシリキシマブ、シクロスポリン、エベロリムス、ムロモナブ、ミコフェノレート、ピメクロリムス、ラパマイシン、シロリムス及びタクロリムスであり；
抗増殖薬の例は、セツキシマブ、ドセタキセル、エディフォリジド（edifoligide）、ゲフィチニブ、パクリタキセル及びタキソールである。
【００３６】
動脈バイパス移植術後の血管移植片機能不全の予防に及ぼす式（Ｉ）の化合物の有効性は、本明細書に後述の実施例に記載される手順を利用して、立証することができる。実施例は、本発明を例示するものであり、具体的に記載される実施態様に本発明を限定するものではない。
【００３７】
実施例
冠状動脈バイパス移植術後の血管移植片機能不全を予防する式（Ｉ）の化合物の能力を立証するための実験手順について、以下に略述されるような食餌性高脂血症及びアテローム動脈硬化症の動物モデルの使用を記載する。静脈移植片疾患のモデルは、高コレステロール血症ＡｐｏＡ３ライデン（Leiden）マウスの頚動脈への静脈挿入物の留置である。このモデルは、臨床的に患者で観察されるような、血管閉塞に至るアテローム動脈硬化刺激と、その後の移植片機能不全の根底にある複雑さを最もよく反映している。
【００３８】
動物及び処理。  静脈移植片疾患のネズミモデル及び説明される実験手順は、基本的には参考文献の記載に追随する：Schepersら, Journal of Vascular Surgery, 2006, volume 43, page 809-815。Ｃ５７／ＢＬ６をバックグラウンドとする１４〜２０週齢のオスのＡｐｏＥ３ライデンマウスを使用する。マウスには、実験の３週間前に開始して、高コレステロール高脂肪飼料（１％コレステロール及び０．０５％コーラート；アリー・ブロック（Arie Blok）、ワーデン（Worden）、オランダ）を給餌する。全てのマウスには水と飼料を任意に摂らせる。血清コレステロールレベルを２回、即ち、実験開始の１週間前と動物を殺処分する前に測定する。
【００３９】
マウスをランダムに２群に分割する。１群（ｎ＝８）には飲料水に溶解した３〜３０mg/kgの式（Ｉ）の化合物を与える。１日薬剤用量は、マウス１匹あたり３mlの１日水消費量に基づく。もう１群（ｎ＝８）には、飲料水中のプラセボを与えて、実験結果を管理するためにこの群を用いる。全処理期間は２８日とする。手術前に、マウスをミダゾラム（５mg/kg；ロッシュ、バーゼル、スイス）、メデトミジン（０．５mg/kg；オリオン、ヘルシンキ、フィンランド）及びフェンタニル（０．０５mg/kg；ヤンセン、ヘール（Geel）、ベルギー）で麻酔する。頚動脈への静脈挿入物は、各マウスに留置する。簡単に述べると、一般的な頚動脈を、遠位端で近位端に向かって分岐部から切開する。この動脈を中ほどで切断して、両側の末端にカフスを配置する。次に、両方の動脈末端をカフスの上にめくり返して、８−０絹糸により結紮する。大静脈を、遺伝学的に同一のドナーマウスから摘出して、動脈カフスの上で静脈の末端をスリーブ状につなぎ、これらを一緒に８−０絹糸により結紮することにより、動脈の２つの末端の間に移植する。移植した静脈内を激しく振動させて、移植の成功を確認する。死亡時、マウスは４％ホルムアルデヒドにより５分間インビボで灌流する。静脈移植片を摘出して、４％ホルムアルデヒド中で一晩固定し、脱水してパラフィンに包埋する。
【００４０】
静脈移植片肥厚の定量及び免疫組織化学。  手術の２８日後、マウスを安楽死させ、静脈移植片を摘出してパラフィンに包埋する。包埋した静脈移植片の連続切片を全標本にわたり作成して、ヘマトキシリン−フロキシン−サフラン（ＨＰＳ）で通常どおり染色する。分析に連続切片を使用することにより、（ヒト静脈移植片でもネズミ静脈移植片挿入物でも両方で観察されるような）静脈移植片肥厚の不均一に分布した発生による処理効果の過大評価又は過小評価が回避される。
【００４１】
標本になった静脈における静脈移植片肥厚の測定は、画像解析ソフトウェア（Ｑｗｉｎ；ライカ、ウェッツラー、ドイツ）を用いて実施される。ネズミ静脈の中膜にはごくわずかな細胞の層しかなく、また新生内膜と中膜の間には形態学的境界がないため、静脈移植片肥厚、即ち、内腔と外膜の間の領域を、病変範囲を規定するのに使用する。各マウスについて、血管壁肥厚を測定するために５枚の等間隔の垂直切片を使用する。
【００４２】
全ての免疫組織化学は、手術の２８日後の静脈移植片のパラフィン包埋切片で実施する。肥厚静脈移植片の細胞構成は、マクロファージ（ＡＩＡ３１２４０；アキュレート化学（Accurate Chemical）、ウェストベリー、米国）、Ｔ細胞（ＣＤ３；セロテック、オックスフォード、英国）及び血管平滑筋細胞（アルファ−平滑筋アクチン；アマシャム、バッキンガムシャー、英国）に対する抗体を用いて視覚化する。平滑筋細胞及びマクロファージの数は、コンピュータ利用形態計測解析法（Ｑｗｉｎ）により定量して、切片中の全平滑筋アクチン陽性面積又はＡＩＡ陽性面積の割合（百分率）として表す。Ｔリンパ球数は、静脈移植片１つあたり６枚の等間隔切片の血管壁におけるＣＤ３陽性細胞を計数して、これらの切片の血管壁表面積で割ることにより求める。
【００４３】
統計解析。  各実験の開始前に、統計的に区別された治療群を得るために検出力分析を行う。データは、平均値±ＳＥＭとして提示する。ネズミ静脈移植片の形態計測データの比較は、マン・ホイットニー（Mann-Whitney）の順位和検定により実施する。
【００４４】
結果
手術前の血漿コレステロールレベルは、式（Ｉ）の化合物処理群とプラセボ処理群の間に差はない。静脈移植片肥厚の定量は、非移植血管に比較した移植血管の劇的な肥厚、及び対照群と比較した処理群における血管壁肥厚の有意な減少を示している。内腔面積もまた、非移植血管に比較して移植血管において増大しており、そして対照群に比較した薬剤処理群において更に増大している（表１を参照のこと）。
【００４５】
免疫組織化学により解析された肥厚移植片の細胞構成は、肥厚移植片が、主に平滑筋細胞及びマクロファージからなることを示している。更には、少数のＴリンパ球が血管壁に存在する。マクロファージの浸潤を示すＡＩＡ陽性面積は、対照群に比較して薬剤処理群で有意に小さい。血管平滑筋細胞の存在を示すアルファ−平滑筋アクチン陽性面積もまた、対照群では大きく、そして薬剤処理群では有意に減少している。また、１平方ミリメートルあたりのＴリンパ球の数は、対照群に比較すると処理群で有意に少ない。
【００４６】
【表１】
2009507890.tif 000004
【国際調査報告】
2009507890.tif 000008
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