(57)【要約】  本発明は、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９リガンドなどのＴＬＲリガンドのプロファイルを調節する、ある種のオリゴヌクレオチドの能力に関する。2009510096.tif 000014
2009510096.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＬＲ７／８リガンドと、ＴＬＲ８媒介免疫応答を刺激するのに有効な量のアダプターオリゴヌクレオチドとを、それを必要とする対象に投与すること
を含む、ＴＬＲ８媒介免疫応答を刺激する方法。
【請求項２】
ＴＬＲ７媒介免疫応答を経験した対象に、ＴＬＲ７媒介免疫応答をＴＬＲ８媒介免疫応答に向け直すのに有効な量のアダプターオリゴヌクレオチドを投与すること
を含む、ＴＬＲ７媒介免疫応答をＴＬＲ８媒介免疫応答に向け直す方法。
【請求項３】
ＴＬＲ７／８リガンドがＴＬＲ７特異リガンドである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項４】
ＴＬＲ７特異リガンドがＣ８置換グアノシンである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項５】
Ｃ８置換グアノシンが、７−アリル−７，８−ジヒドロ−８−オキソグアノシン（ロキソリビン）、７−チア−８−オキソグアノシン（イムノシン）、８−メルカプトグアノシン、８−ブロモグアノシン、８−メチルグアノシン、８−オキソ−７，８−ジヒドログアノシン、Ｃ８−アリールアミノ−２’−デオキシグアノシン、Ｃ８−プロピニルグアノシン、Ｃ８−およびＮ７−置換グアニンリボヌクレオシド、７−メチル−８−オキソグアノシン、８−アミノグアノシン、８−ヒドロキシ−２’−デオキシグアノシン、７−デアザ−８置換グアノシン、ならびに８−ヒドロキシグアノシンである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
Ｃ８置換グアノシンがロキソリビンである、請求項４に記載の方法。
【請求項７】
ＴＬＲ７特異リガンドが７−デアザグアノシンである、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
ＴＬＲ７特異リガンドが、６−アミノ−９−ベンジル−２−（３−ヒドロキシ−プロポキシ）−９Ｈ−プリン−８−オールまたは６−アミノ−９−ベンジル−２−ブトキシ−９Ｈ−プリン−８−オールである、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
ＴＬＲ７／８リガンドがＴＬＲ８特異リガンドである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１０】
ＴＬＲ７／８リガンドが、ＴＬＲ７リガンドであり、ＴＬＲ８リガンドである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１１】
ＴＬＲ７／８リガンドがイミダゾキノリンである、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
イミダゾキノリンが、イミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、１，２架橋イミダゾキノリンアミン、Ｒ−８４８（Ｓ−２８４６３もしくはレシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ））、４−アミノ−２エトキシメチル−α，α−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（Ｒ−８３７もしくはイミキモド（Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ））、またはＳ−２７６０９である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
イミダゾキノリンがＲ−８４８である、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
アダプターオリゴヌクレオチドが非メチル化ＣｐＧモチーフを含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１５】
アダプターオリゴヌクレオチドが非メチル化ＣｐＧを含まない、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１６】
アダプターオリゴヌクレオチドが、５’Ｎ−ＴＴＴＴＴ−Ｎ３’を含み、Ｎが任意のヌクレオチドである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１７】
アダプターオリゴヌクレオチドが、５’Ｎ−ＴＴＴＴＴＴ−Ｎ３’を含み、Ｎが任意のヌクレオチドである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１８】
アダプターオリゴヌクレオチドがｄＴホモポリマーである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項１９】
アダプターオリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエート骨格修飾を含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２０】
ＴＬＲ７／８リガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドが、別々に投与される、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２１】
ＴＬＲ７／８リガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドが、相互にコンジュゲートしている、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２２】
アダプターオリゴヌクレオチドがＤＮＡである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２３】
アダプターオリゴヌクレオチドがＲＮＡである、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２４】
対象に抗原を投与することを更に含む、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２５】
対象が感染症を有している、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２６】
対象が癌を有している、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２７】
対象がアレルギーまたは喘息を有している、請求項１または２に記載の方法。
【請求項２８】
６−アミノ−９−ベンジル−２−（３−ヒドロキシ−プロポキシ）−９Ｈ−プリン−８−オールおよび６−アミノ−９−ベンジル−２−ブトキシ−９Ｈ−プリン−８−オール
からなる群から選択されるＴＬＲ７特異リガンドと、
アダプターオリゴヌクレオチドと
を含む組成物。
【請求項２９】
ＴＬＲ８特異リガンド、および
アダプターオリゴヌクレオチド
を含む組成物。
【請求項３０】
アダプターオリゴヌクレオチドが非メチル化ＣｐＧモチーフを含む、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項３１】
アダプターオリゴヌクレオチドが非メチル化ＣｐＧを含まない、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項３２】
アダプターオリゴヌクレオチドが、５’Ｎ−ＴＴＴＴＴ−Ｎ３’を含み、Ｎが任意のヌクレオチドである、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項３３】
アダプターオリゴヌクレオチドが、５’Ｎ−ＴＴＴＴＴＴ−Ｎ３’を含み、Ｎが任意のヌクレオチドである、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項３４】
アダプターオリゴヌクレオチドがｄＴホモポリマーである、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項３５】
アダプターオリゴヌクレオチドが、少なくとも１個のヌクレオチド間ホスホロチオエート連結部を含む、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項３６】
アダプターオリゴヌクレオチドがＤＮＡである、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項３７】
アダプターオリゴヌクレオチドがＲＮＡである、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項３８】
アダプターオリゴヌクレオチド、およびＴＬＲ７特異リガンドまたはＴＬＲ８特異リガンドが、相互にコンジュゲートしている、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項３９】
抗原を更に含む、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項４０】
医薬製剤である、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項４１】
ＴＬＲ８リガンドを同定する方法であって、
アダプターオリゴヌクレオチドの存在下および非存在下、ＴＬＲ８発現性細胞を試験リガンドと接触させる段階、および
アダプターオリゴヌクレオチドの存在下および非存在下、該試験リガンドに応答するＴＬＲ８発現性細胞の刺激量を測定する段階
を含み、ＴＬＲ８リガンドは、アダプターオリゴヌクレオチドの存在下での刺激量の増加により同定される方法。
【請求項４２】
アダプターオリゴヌクレオチドを同定する方法であって、
試験アダプターオリゴヌクレオチドの存在下および非存在下、ＴＬＲ８発現性細胞をＴＬＲ７リガンドと接触させる段階、および
試験アダプターオリゴヌクレオチドの存在下および非存在下、ＴＬＲ７リガンドに応答するＴＬＲ８発現性細胞の刺激量を測定する段階
を含み、アダプターオリゴヌクレオチドは、該アダプターオリゴヌクレオチドの存在下でのＴＬＲ８発現性細胞の刺激量の増加により同定される方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願は、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれる、２００５年９月２７日出願、名称“ＭＯＤＵＬＡＴＩＯＮ  ＯＦ  ＴＬＲ−ＭＥＤＩＡＴＥＤ  ＩＭＭＵＮＥ  ＲＥＳＰＯＮＳＥＳ  ＵＳＩＮＧ  ＡＤＡＰＴＯＲ  ＯＬＩＧＯＮＵＣＬＥＯＴＩＤＥＳ”の米国仮出願第６０／７２０９８１号からの米国特許法に基づく優先権を請求する。
【０００２】
本発明は、特定の核酸を用いたＴＬＲ媒介免疫応答の調節に関する。
【背景技術】
【０００３】
細菌ＤＮＡ中のある種のモチーフに対する反応は、自然免疫の重要な機能である。細菌ＤＮＡは、哺乳類Ｂリンパ球（Ｂ細胞）に対してマイトジェン活性を示すことが長らく知られてきたが、哺乳類ＤＮＡは、一般にそのような性質を示さない。この免疫認識が、非メチル化ＣｐＧジヌクレオチドを含有するモチーフを中心とする特定のＤＮＡ配列を対象としているとの発見は、分子免疫学的手法に対する分野を開いた。Ｋｒｉｅｇ  ＡＭ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｎａｔｕｒｅ  ３７４：５４６−９。いわゆるＣｐＧ  ＤＮＡの免疫賦活作用は、好ましいある種のフランキング配列、ＣｐＧモチーフに関して、ＣｐＧジヌクレオチドを含有する合成オリゴデオキシヌクレオチド（ＯＤＮ）を用いて再現することができる。ＣｐＧ含有ＯＤＮ（ＣｐＧ−ＯＤＮ）は、初代Ｂ細胞のアポトーシスからの保護、細胞周期への参入促進、ならびに免疫応答のＴｈ１型免疫応答への傾斜、例えば、インターロイキン６（ＩＬ−６）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、ガンマインターフェロン（ＩＦＮ−γ）の誘導、抗原特異的細胞溶解性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）の活性化およびＩｇＧ２ａのマウス内誘導を含めた、免疫系の各種細胞型に様々な作用を及ぼすことが報告されてきた。
【０００４】
最近、ＣｐＧ  ＤＮＡの免疫調節作用には、Ｔｏｌｌ様受容体９（ＴＬＲ９）によるシグナル伝達が関与していることが報告された。ＣｐＧ  ＤＮＡは、配列非特異的な経路を介して細胞内に取り込まれ、エンドソーム区画に移送され、そこで配列特異的にＴＬＲ９と相互作用をする。ＴＬＲ９シグナル伝達経路は、殊にＮＦ−κＢを含めた幾種もの免疫機能関連遺伝子を誘導する。
【０００５】
ＴＬＲは、病原体中に存在する特有の分子構造（病原体関連分子パターン、またはＰＡＭＰ）を認識する大きな受容体ファミリーであり、パターン認識受容体（ＰＲＲ）とも呼称される。ＰＲＲを発現する免疫細胞は、ＰＡＭＰの認識時に活性化され、最適な適応的免疫応答の生成を誘発する。１０種のＴＬＲサブタイプ、ＴＬＲ１からＴＬＲ１０までからなるＰＲＲの記述が、これまでにあった。このようなＴＬＲは、二本鎖ＲＮＡ（ＴＬＲ３）、リポ多糖（ＬＰＳ）（ＴＬＲ４）、細菌フラジェリン（ＴＬＲ５）、小分子抗ウイルス化合物（ＴＬＲ７およびＴＬＲ８）、ならびに細菌ＤＮＡまたはＣｐＧ  ＯＤＮ（ＴＬＲ９）の認識に関与していると記載されてきた。（Ｕｈｌｍａｎｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｄｅｖｅｌ  ６：２０４−１７による総説を参照されたい）。その上、ＴＬＲ７およびＴＬＲ８と相互作用し、それを介してシグナル伝達をすると考えられるＲＮＡ分子が、同定された。（国際特許出願ＰＣＴ／ＵＳ第０３／１０４０６号を参照されたい）。このような免疫賦活ＲＮＡ分子は、少なくとも１個のグアニンおよび少なくとも１個のウラシルを含む塩基配列を有すると考えられている。この免疫賦活Ｇ・Ｕ多量ＲＮＡは、ＴＬＲ９に対して記載したようなＣｐＧモチーフを必要としない。自然に見出されるＲＮＡ分子の該対応クラスは、リボソームＲＮＡ（ｒＲＮＡ）、トランスファーＲＮＡ（ｔＲＮＡ）、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）およびウイルスＲＮＡ（ｖＲＮＡ）中に存在すると考えられている。
【０００６】
免疫賦活ＣｐＧ  ＤＮＡの発見後、免疫賦活作用を有する短鎖ＤＮＡ配列に関して記載した幾つもの報告が出現した。ポリＧ配列が免疫抑制的であることは、長らく知られてきた。ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ第００／１４２１７号には、抑制的モチーフＮ１Ｎ２ＧＮ３Ｇを含有し、Ｎ１、Ｎ２およびＮ３のうち少なくとも任意の２個がＧ（グアノシン）であるＯＤＮが記載されている。Ｋｒｉｅｇおよびその共同研究者は、３連または４連のＧを有し、賦活的ＯＤＮが誘発するアポトーシス保護および細胞周期参入を阻止する、一群の抑制的１５量体ＯＤＮについて記載した。Ｌｅｎｅｒｔ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  １１：２４７−５６；Ｓｔｕｎｚ  ＬＬ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３２：１２１２−２２；Ｌｅｎｅｒｔ  Ｐ  ｅｔ  ａｌ．（２００３）Ａｎｔｉｓｅｎｓｅ  Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｖ  １３：１４３−５０。こうしたＯＤＮの免疫抑制作用は、ＣｐＧ−ＯＤＮに対して特異的であり、細胞取込みの単なる競合以外の機構を伴うと報告された。Ｓｔｕｎｚ  ＬＬ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｅｕｒ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ３２：１２１２−２２。それとは独立に、Ｋｌｉｎｍａｎおよびその共同研究者は、単一の免疫抑制的ＯＤＮを報告した。Ｚｅｕｎｅｒ  ＲＡ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ４６：２２１９−２４；Ｙａｍａｄａ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６９：５５９０−４。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本発明は、幾つかの応答の抑制、他の応答の増強、またはそれらの組合せを含む、ＴＬＲ媒介応答を調節する方法および組成物を提供する。本発明は、ある種のオリゴヌクレオチドが、ＴＬＲリガンドのＴＬＲシグナル伝達プロファイルを明らかに変えることができるという知見を一部前提としている。したがって、こうした「アダプター」オリゴヌクレオチドは、一実施形態によれば、ＴＬＲ７リガンドをＴＬＲ８リガンドに、別の実施形態によれば、ＴＬＲ７／８リガンドをＴＬＲ８リガンドに本質的に転化することができる。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
したがって一態様では、本発明は、ＴＬＲ７／８リガンドと、ＴＬＲ８媒介免疫応答を刺激するのに有効な量のアダプターオリゴヌクレオチドとを、それを必要とする対象に投与することを含む、ＴＬＲ−８媒介免疫応答を刺激する方法を提供する。
【０００９】
別の態様では、本発明は、ＴＬＲ７媒介免疫応答を経験した対象に、ＴＬＲ７媒介免疫応答をＴＬＲ８媒介免疫応答に向け直すのに有効な量のアダプターオリゴヌクレオチドを投与することを含む、ＴＬＲ７媒介免疫応答をＴＬＲ８媒介免疫応答に向け直す方法を提供する。
【００１０】
更に別の態様では、本発明は、ＴＬＲ７／８リガンドとアダプターオリゴヌクレオチドとを含む組成物を提供する。
【００１１】
一実施形態では、該ＴＬＲ７／８リガンドは、ＴＬＲ７特異リガンドなどのＴＬＲ７リガンドである。該ＴＬＲ７リガンドは、それだけに限らないが、Ｃ８置換グアノシンなどのグアノシン類縁体でもよい。該ＴＬＲ７リガンドは３Ｍ−００１でもよい。該ＴＬＲ７リガンドは、それだけに限らないが、６−アミノ−９−ベンジル−２−（３−ヒドロキシプロポキシ）−９Ｈ−プリン−８−オールや６−アミノ−９−ベンジル−２−ブトキシ−９Ｈ−プリン−８−オールなどのアデノシン系化合物でもよい。該ＴＬＲ７リガンドは、７−デアザグアノシンでもよい。
【００１２】
Ｃ８置換グアノシンの例には、７−アリル−７，８−ジヒドロ−８−オキソグアノシン（ロキソリビン）、７−チア−８−オキソグアノシン（イムノシン、イサトリビン、ＡＮＡ２４５、７−チア−８−オキソ−７，８−ジヒドログアノシン、５−アミノ−３−（β−Ｄ−リボフラノシル）−３Ｈ，６Ｈ−チアゾール［４，５−ｄ］ピリミジン−２，７−ジオン）、８−メルカプトグアノシン、８−ブロモグアノシン、８−メチルグアノシン、８−オキソ−７，８−ジヒドログアノシン、Ｃ８−アリールアミノ−２’−デオキシグアノシン、Ｃ８−プロピニルグアノシン、Ｃ８・Ｎ７置換グアニンリボヌクレオシド、７−メチル−８−オキソグアノシン、８−アミノグアノシン、８−ヒドロキシ−２’−デオキシグアノシン、７−デアザ−８置換グアノシン、および８−ヒドロキシグアノシンが挙げられる。幾つかの実施形態では、該Ｃ８置換グアノシンは、ロキソリビン、イムノシンまたは７−デアザグアノシンである。
【００１３】
別の実施形態では、該ＴＬＲ７／８リガンドは、ＴＬＲ８特異リガンドを含めたＴＬＲ８リガンドである。該ＴＬＲ８リガンドは３Ｍ−００２でもよい。リガンドがＴＬＲ８リガンドである実施形態では、ＴＬＲ８媒介免疫応答は、そのアダプターオリゴヌクレオチドが存在しない場合に実現される免疫応答の程度より、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、またはそれを超えて増強し得る。
【００１４】
別の実施形態では、該ＴＬＲ７／８リガンドは、ＴＬＲ７リガンドであり、ＴＬＲ８リガンドである。このようなＴＬＲ７／８リガンドの例は、イミダゾキノリンである。イミダゾキノリンの例には、イミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、６，７縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、１，２架橋イミダゾキノリンアミン、Ｒ−８４８（Ｓ−２８４６３もしくはレシキモド）、４−アミノ−２エトキシメチル−α，α−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（Ｒ−８３７もしくはイミキモド）、またはＳ−２７６０９が挙げられる。幾つかの重要な実施形態では、該イミダゾキノリンはＲ８４８である。
【００１５】
該ＴＬＲ７／８リガンドは３Ｍ−００３でもよい。リガンドがＴＬＲ７でありＴＬＲ８であるリガンドの実施形態では、ＴＬＲ８媒介免疫応答は、そのアダプターオリゴヌクレオチドが存在しない場合に実現されるＴＬＲ８媒介免疫応答の程度より、少なくとも２倍、３倍、４倍、５倍、１０倍、１５倍、２０倍、またはそれを超えて増強し得る。
【００１６】
一実施形態では、該アダプターオリゴヌクレオチドは、式５’Ｘ−Ｎ５−Ｘ３’または式５’Ｘ−Ｎ４３’を含み、Ｘが、任意のヌクレオチドとなり得るもので、存在しても、しなくてもよく、Ｎ４およびＮ５は、Ｎ４またはＮ５中の各Ｎが同一となるような、４連または５連のＴ（チミジン）、Ｕ（ウラシル）またはＡ（アデニン）を表す。その実施形態に応じて、該オリゴヌクレオチドは、長さが７個、８個、９個、１０個、１１個、１２個、１３個、１４個、１５個、１６個、１７個、またはそれを超えるヌクレオチドである。重要な実施形態では、それには、ヌクレオチド間ホスホロチオエート連結部が少なくとも１個含まれる（完全なホスホロチオエート化骨格までを含む）。
【００１７】
関連する実施形態では、該アダプターオリゴヌクレオチドは、式５’Ｘａ−ＴＴＴＴＴ−Ｘｂ３’を含み、ＸａおよびＸｂが、独立に任意のヌクレオチドとなり得るもので、存在しても、しなくてもよい。ＸａおよびＸｂは、１個または複数のヌクレオチド（例えば、１〜１００ヌクレオチド）でもよい。一実施形態では、該オリゴヌクレオチドは、６連、７連、またはそれより多連のＴを含む。重要な一実施形態では、該アダプターオリゴヌクレオチドは、長さが場合により１７ヌクレオチドであるチミジン（ｄＴ）ホモポリマーである。
【００１８】
別の実施形態では、該アダプターオリゴヌクレオチドは、式５’Ｘａ−ＵＵＵＵＵ−Ｘｂ３’を含み、ＸａおよびＸｂが、独立に任意のヌクレオチドとなり得るもので、存在しても、しなくてもよい。ＸａおよびＸｂは、１個または複数のヌクレオチド（例えば、１〜１００ヌクレオチド）でもよい。一実施形態では、該オリゴヌクレオチドは、６連、７連、またはそれより多連のＵを含む。重要な実施形態では、該オリゴヌクレオチドは、長さが場合により１７ヌクレオチドであるウラシル（ｄＵ）ホモポリマーである。
【００１９】
別の実施形態では、該アダプターオリゴヌクレオチドは、式５’Ｘａ−ＡＡＡＡＡ−Ｘｂ３’を含み、ＸａおよびＸｂが、独立に任意のヌクレオチドとなり得るもので、存在しても、しなくてもよい。ＸａおよびＸｂは、１個または複数のヌクレオチド（例えば、１〜１００ヌクレオチド）でもよい。一実施形態では、該オリゴヌクレオチドは、６連、７連、またはそれより多連のＡを含む。重要な実施形態では、該オリゴヌクレオチドは、長さが場合により１７ヌクレオチドであるアデニン（ｄＡ）ホモポリマーである。
【００２０】
更に別の実施形態では、該アダプターオリゴヌクレオチドは、式５’Ｃｎ−Ｔｍ−Ｃｐ３’を含み、ｎが０〜１００の範囲の整数、ｐが０〜１００の範囲の整数、ｍが０〜１００の範囲の整数である。一実施形態では、ｎおよびｐの合計は、オリゴヌクレオチド全体のＣ含量が５０％、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、またはそれより少なくなるように、ｍの値以下である。幾つかの実施形態では、ｎが３〜７の範囲、ｍが２〜１０の範囲、ｐが４〜８の範囲であり、但し、前記の各比率（％）を満たすことを条件とする。その例には、５’Ｃ３Ｔ１０Ｃ４３’（配列番号１）および５’Ｃ４Ｔ８Ｃ５３’（配列番号２）が挙げられる。
【００２１】
該アダプターオリゴヌクレオチドは、ＣｐＧモチーフを含んでもよく、またはそのようなモチーフを欠いてもよい。該モチーフは非メチル化ＣｐＧモチーフでもよい。
【００２２】
一実施形態では、ＴＬＲ７／８リガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドは、対象に別々に投与される。こうした、および他の実施形態では、該リガンドおよびオリゴヌクレオチドは、それでも、実質的に相互に同時に投与してもよい。更に別の実施形態では、該オリゴヌクレオチドおよびＴＬＲ７／８リガンドは、相互にコンジュゲートされる。一実施形態では、該アダプターオリゴヌクレオチドは、ＴＬＲ７／８リガンドと共有結合で結合される。
【００２３】
一実施形態では、該アダプターオリゴヌクレオチドはＤＮＡであるが、別の実施形態ではＲＮＡである。一実施形態では、該アダプターオリゴヌクレオチドは、単独で使用すると免疫賦活的ではない。一実施形態では、該アダプターオリゴヌクレオチド単独では、ＴＬＲ７またはＴＬＲ８媒介免疫応答を刺激しない。
【００２４】
一実施形態では、該組成物は抗原を更に含み、および／または該方法は抗原を対象に投与することを含む。
【００２５】
一実施形態では、該対象は感染症を有する。別の実施形態では、該対象は癌を有する。更に別の実施形態では、該対象はアレルギーまたは喘息を有する。
【００２６】
該組成物は、薬学的に許容できる担体を更に含む医薬製剤でもよい。
【００２７】
一態様では、本発明は、対象にワクチン接種をする薬剤を調製するための、前記のようなＴＬＲリガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドの組合せの使用を提供する。
【００２８】
一態様では、本発明は、ワクチンを調製する方法を提供する。該方法は、前記のようなＴＬＲリガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドの組合せを、抗原、および場合により薬学的に許容できる担体と密着させる段階を含む。
【００２９】
一態様では、本発明は、対象の感染症を治療する薬剤を調製するための、前記のようなＴＬＲリガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドの組合せの使用を提供する。
【００３０】
一態様では、本発明は、前記のようなＴＬＲリガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドの組合せ、ならびに抗微生物性の作用剤または薬剤を含む、感染症治療に有用な組成物を提供する。
【００３１】
一態様では、本発明は、対象の癌を治療する薬剤を調製するための、前記のようなＴＬＲリガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドの組合せの使用を提供する。
【００３２】
一態様では、本発明は、前記のようなＴＬＲリガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドの組合せ、ならびに癌用薬剤を含む、癌治療に有用な組成物を提供する。
【００３３】
一態様では、本発明は、対象のアレルギー病状を治療する薬剤を調製するための、前記のようなＴＬＲリガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドの組合せの使用を提供する。
【００３４】
一態様では、本発明は、前記のようなＴＬＲリガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドの組合せ、ならびにアレルギー用薬剤を含む、アレルギー病状の治療に有用な組成物を提供する。
【００３５】
一態様では、本発明は、対象の喘息を治療する薬剤を調製するための、前記のようなＴＬＲリガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドの組合せの使用を提供する。
【００３６】
一態様では、本発明は、前記のようなＴＬＲリガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドの組合せ、ならびに喘息用薬剤を含む、喘息治療に有用な組成物を提供する。
【００３７】
他の態様では、本発明は、ＴＬＲ７／８リガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドを同定するためのスクリーニング法を提供する。したがって、一態様では、本発明は、アダプターオリゴヌクレオチドの存在下および非存在下、ＴＬＲ８発現性細胞を試験リガンドと接触させ、アダプターオリゴヌクレオチドの存在下および非存在下、該試験リガンドに応答するＴＬＲ８発現性細胞の刺激量を測定することを含む、ＴＬＲ８リガンドを同定する方法を提供する。ＴＬＲ８リガンドは、アダプターオリゴヌクレオチドの存在下での刺激量の増加により同定される。刺激量の増加は、好ましくは、アダプターオリゴヌクレオチドの非存在下での非ゼロ刺激量を超える増加である。
【００３８】
別の態様では、本発明は、アダプターオリゴヌクレオチドの存在下および非存在下、ＴＬＲ７発現性細胞およびＴＬＲ８発現性細胞を試験リガンドと接触させ、アダプターオリゴヌクレオチドの存在下および非存在下、該試験リガンドに応答するＴＬＲ７発現性細胞およびＴＬＲ８発現性細胞の刺激量を測定することを含む、ＴＬＲ７リガンドを同定する方法を提供する。ＴＬＲ７リガンドは、アダプターオリゴヌクレオチドの存在下、ＴＬＲ７発現性細胞の刺激量の減少、およびＴＬＲ８発現性細胞の刺激量の増加により同定される。この態様では、刺激量の増加は、好ましくは、アダプターオリゴヌクレオチドの非存在下でのゼロ刺激量を超える増加である。
【００３９】
別の態様では、本発明は、試験アダプターオリゴヌクレオチドの存在下および非存在下、ＴＬＲ８発現性細胞を既知のＴＬＲ７リガンドと接触させ、試験アダプターオリゴヌクレオチドの存在下、該ＴＬＲ７リガンドに応答するＴＬＲ８発現性細胞の刺激量を測定することを含む、アダプターオリゴヌクレオチドを同定する方法を提供する。該刺激量は、試験オリゴヌクレオチドの非存在下での量と、ＴＬＲ７リガンドの非存在下であって試験オリゴヌクレオチドの存在下、および／またはＴＬＲ７リガンド、既知のアダプターオリゴヌクレオチドとも存在下での量と比較し得る。一実施形態では、アダプターオリゴヌクレオチドは、その非存在下と比較した場合のその存在下でのＴＬＲ８発現性細胞の刺激量の増加により同定されるが、但し、該アダプターオリゴヌクレオチド自体は、ＴＬＲ８媒介免疫応答を媒介してはいない（上記の対照アッセイで判定した場合）。
【００４０】
ＴＬＲ７およびＴＬＲ８用該リガンド、ならびに該アダプターオリゴヌクレオチドは、前記の態様および実施形態に記載のものいずれでもよい。ＴＬＲ７またはＴＬＲ８発現性細胞は、自然にＴＬＲ７もしくはＴＬＲ８を発現する細胞であってよく、またはＴＬＲ７もしくはＴＬＲ８を発現する（例えば、異所に）ように改変した細胞であってもよい。刺激量は、ＴＬＲ７またはＴＬＲ８を介するシグナル伝達、および、それだけに限らないが、遺伝子発現の増加（例えば、ＴＬＲ７またはＴＬＲ８の下流標的のプロモーター要素とコンジュゲートしたレポーター構築体を用いて可視化した際）、成長因子（サイトカイン）の発現、産生または分泌の増加などを含めたその下流作用によって、測定し得る。
【００４１】
本発明の以上および他の態様および実施形態は、本明細書でより詳細に説明する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４２】
本発明は、ある種のオリゴヌクレオチドが、ＴＬＲ媒介免疫応答を調節できるという発見に部分的に関する。本明細書で使用する場合、ＴＬＲ媒介免疫応答の調節とは、１種または複数のＴＬＲのシグナル伝達を操作できることを指す。例えば、本発明によれば、特定のＴＬＲリガンドのＴＬＲプロファイルを、ある種のオリゴヌクレオチドの存在下、こうしたリガンドが異なるＴＬＲを介してシグナル伝達するように、変化させることが可能である。別の例では、ある種のオリゴヌクレオチドの存在下、複数のＴＬＲを介してシグナル伝達することが知られているＴＬＲリガンドが、唯一のＴＬＲを介してシグナル伝達することを示し、多くの場合、このようなシグナル伝達は増強される。更に別の例では、ある種のオリゴヌクレオチドの存在下、ＴＬＲシグナル伝達の効果および効力が有意に間増加する。したがって、本発明は、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８およびＴＬＲ９のいずれか１つ、またはその任意の組合せによるシグナル伝達を選択的に抑制および／または増強することを可能にする。
【００４３】
本発明は、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８の両者をそれ自体活性化させるイミダゾキノリン誘導体、レシキモド（Ｒ−８４８）をオリゴ（ｄＴ）１７ホモポリマーオリゴヌクレオチド（ＯＤＮ６０５６）と共インキュベーションすると、ＴＬＲ８発現性ＨＥＫ２９３細胞に対するＲ−８４８の活性が増加する一方、ＴＬＲ７媒介シグナル伝達が消失したという観察を一部前提としている。同様に、それ自体ＴＬＲ７を活性化させるグアノシン類縁体、ロキソリビンをオリゴ（ｄＴ）１７ＯＤＮ６０５６と併用すると、ＴＬＲ８媒介シグナル伝達が配列選択的に誘発される一方、ＴＬＲ７媒介シグナル伝達が消失した。
【００４４】
ヒト免疫細胞においてロキソリビンが誘発するサイトカインプロファイルも、オリゴ（ｄＴ）１７との共インキュベーションにより変化した。ＩＬ−１２、ＴＮＦ−αまたはＩＦＮ−γが多量に分泌されたが、ＩＦＮ−α産生は停止した。特定の機構に拘るつもりは全くないが、観察された誘導サイトカインの変化は、ロキソリビン単独による類形質細胞ＤＣから、ＯＤＮとの併用による単球への被活性化細胞型の移行に起因し、単球が機能性ＴＬＲ７を発現しないことを示すと推測される。
【００４５】
したがって、本発明は一連の免疫応答の調節に有用である。特定の実施形態における本発明は、場合によりＴＬＲ８シグナル伝達（および付随するＴＬＲ８媒介免疫応答）を誘発すると同時に、ＴＬＲ７シグナル伝達（および付随するＴＬＲ７媒介免疫応答）を抑制する際に有用である。別の特定の実施形態では、本発明は、ＴＬＲ８シグナル伝達（および付随するＴＬＲ８媒介免疫応答）の誘発（増強を含む）をもたらす。アダプターオリゴヌクレオチドの特質に応じて、更に、ＴＬＲ９シグナル伝達（および付随するＴＬＲ９媒介免疫応答）を同時に誘発することも可能である。例えば、ＣｐＧモチーフを含むアダプターオリゴヌクレオチドと、ロキソリビンなどのＴＬＲ７リガンドとを併用すれば、ＴＬＲ８およびＴＬＲ９のシグナル伝達（ならびに付随するそれらの媒介免疫応答）が誘発されよう。
【００４６】
本発明は、場合によりＴＬＲ９媒介免疫応答の非存在下または存在下、ＴＬＲ７媒介免疫応答の抑制および／またはＴＬＲ８媒介免疫応答の誘発（増強を含む）で有利になると思われる、一連の病状の治療にも有用である。
【００４７】
ＴＬＲ７媒介免疫応答の抑制で有利になると思われる一連の病状には、狼瘡、関節リウマチなどであるが、それだけに限らない自己免疫病状、特にＤＮＡウイルスの感染に付随する該病状が挙げられる。ＴＬＲ８媒介免疫応答の誘発を同時に伴うＴＬＲ７媒介免疫応答の抑制は、調節性Ｔ細胞に抑制されているＴ細胞応答を増強することが望ましい場合に、使用することができる。このような病状には、それだけに限らないが、幾種かの癌、ならびにＨＣＶ、ＨＢＶおよびＨＩＶの感染症が挙げられる。ＴＬＲ７抑制およびＴＬＲ８誘発の組合せは、自己免疫疾患の治療に際しても、または、免疫応答を誘発するが、ＴＬＲ７付随毒性を避けることが望ましい場合にも有益となろう。ＴＬＲ７媒介免疫応答の調節に関わりのないＴＬＲ８媒介免疫応答の誘発（増強を含む）は、特に、ワクチン法または非ワクチン法での癌および感染症の治療に有用である。
【００４８】
本発明は、サイトカイン産生の変化で、または、対象が、ある種のサイトカインの作用に不応である、もしくは不応になる場合（例えば、ウイルス感染症の治療で時々認められるＩＦＮ−α）、有利になると思われる、病状の治療にも有用である。
【００４９】
ＴＬＲ
Ｔｏｌｌ様受容体（ＴＬＲ）は、哺乳類の先天性免疫において決定的な役割を演じる、高度に保存されたポリペプチドのファミリーである。現在までのところ、ＴＬＲ１〜ＴＬＲ１０と命名されたファミリー構成員１０種が同定されている。各種ＴＬＲの細胞質ドメインは、Ｔｏｌｌ−インターロイキン１（ＩＬ−１）受容体（ＴＩＲ）ドメインを特徴とする。Ｍｅｄｚｈｉｔｏｖ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９８）Ｍｏｌｌ  Ｃｅｌｌ  ２：２５３−８。ＴＬＲによる微生物侵入の認識は、ショウジョウバエ（Ｄｒｏｓｏｐｈｉｌａ）および哺乳類において、進化上保存されているシグナル伝達カスケードの活性化を引き起こす。ＴＩＲドメイン含有アダプタータンパク質、ＭｙＤ８８は、ＴＬＲと結合し、ＩＬ−１受容体関連キナーゼ（ＩＲＡＫ）および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体関連因子６（ＴＲＡＦ６）をＴＬＲへ動員することが報告された。ＭｙＤ８８依存性シグナル伝達経路は、免疫活性化および炎症性サイトカインの産生における決定的段階である、ＮＦ−κＢ転写因子およびｃ−Ｊｕｎ  ＮＨ２末端キナーゼ（Ｊｎｋ）マイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）の活性化を起こすと考えられている。総説としては、Ａｄｅｒｅｍ  Ａ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｎａｔｕｒｅ  ４０６：７８２−８７を参照されたい。
【００５０】
ＴＬＲは、様々な組織中、および様々な免疫細胞型上に差別的に発現すると考えられている。例えば、ヒトＴＬＲ７は、胎盤、肺、脾臓、リンパ節、扁桃腺の中、および類形質細胞前駆体の樹状細胞（ｐＤＣ）上に発現すると報告されてきた。Ｃｈｕａｎｇ  Ｔ−Ｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｅｕｒ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｎｅｔｗ  １１：３７２−８）；Ｋａｄｏｗａｋｉ  Ｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９４：８６３−９。ヒトＴＬＲ８は、肺、末梢血白血球（ＰＢＬ）、胎盤、脾臓、リンパ節の中、および単球上に発現すると報告されてきた。Ｋａｄｏｗａｋｉ  Ｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９４：８６３−９；Ｃｈｕａｎｇ  Ｔ−Ｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｅｕｒ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｎｅｔｗ  １１：３７２−８。ヒトＴＬＲ９は、脾臓、リンパ節、骨髄、ＰＢＬの中、ならびにｐＤＣおよびＢ細胞上に発現すると報告されている。Ｋａｄｏｗａｋｉ  Ｎ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ．Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９４：８６３−９；Ｂａｕｅｒ  Ｓ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８：９２３７−４２；Ｃｈｕａｎｇ  Ｔ−Ｈ  ｅｔ  ａｌ．（２０００）Ｅｕｒ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｎｅｔｗ  １１：３７２−８。
【００５１】
ヒトおよびマウスＴＬＲ７のヌクレオチドおよびアミノ酸の配列は、公知である。例えば、それぞれの内容が参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＦ２４０４６７、ＡＦ２４５７０２、ＮＭ＿０１６５６２、ＡＦ３３４９４２、ＮＭ＿１３３２１１；ならびにＡＡＦ６０１８８、ＡＡＦ７８０３５、ＮＰ＿０５７６４６、ＡＡＬ７３１９１およびＡＡＬ７３１９２を参照されたい。ヒトＴＬＲ７は、アミノ酸１０４９個の長さであると報告されている。マウスＴＬＲ７は、アミノ酸１０５０個の長さであると報告されている。ＴＬＲ７ポリペプチドは、富ロイシン反復領域を有する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＴＩＲドメインを含む細胞内ドメインを含んでいる。
【００５２】
ヒトおよびマウスＴＬＲ８のヌクレオチドおよびアミノ酸の配列は、公知である。例えば、それぞれの内容が参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＡＦ２４６９７１、ＡＦ２４５７０３、ＮＭ＿０１６６１０、ＸＭ＿０４５７０６、ＡＹ０３５８９０、ＮＭ＿１３３２１２；ならびにＡＡＦ６４０６１、ＡＡＦ７８０３６、ＮＰ＿０５７６９４、ＸＰ＿０４５７０６、ＡＡＫ６２６７７およびＮＰ＿５７３４７５を参照されたい。ヒトＴＬＲ８は、少なくとも２種のアイソフォームとして存在し、一方はアミノ酸１０４１個の長さ、他方はアミノ酸１０５９個の長さであると報告されている。マウスＴＬＲ８は、アミノ酸１０３２個の長さである。ＴＬＲ８ポリペプチドは、富ロイシン反復領域を有する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＴＩＲドメインを含む細胞内ドメインを含んでいる。
【００５３】
ヒトおよびマウスＴＬＲ９のヌクレオチドおよびアミノ酸の配列は、公知である。例えば、それぞれの内容が参照により本明細書に組み込まれる、ＧｅｎＢａｎｋ受入番号ＮＭ＿０１７４４２、ＡＦ２５９２６２、ＡＢ０４５１８０、ＡＦ２４５７０４、ＡＢ０４５１８１、ＡＦ３４８１４０、ＡＦ３１４２２４、ＮＭ＿０３１１７８；ならびにＮＰ＿０５９１３８、ＡＡＦ７２１８９、ＢＡＢ１９２５９、ＡＡＦ７８０３７、ＢＡＢ１９２６０、ＡＡＫ２９６２５、ＡＡＫ２８４８８およびＮＰ＿１１２４５５を参照されたい。ヒトＴＬＲ９は、少なくとも２種のアイソフォームとして存在し、一方はアミノ酸１０３２個の長さ、他方はアミノ酸１０５５個の長さであると報告されている。マウスＴＬＲ９は、アミノ酸１０３２個の長さである。ＴＬＲ９ポリペプチドは、富ロイシン反復領域を有する細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、およびＴＩＲドメインを含む細胞内ドメインを含んでいる。
【００５４】
ＴＬＲ媒介免疫応答
本明細書で使用する場合、用語「ＴＬＲシグナル伝達」とは、ＴＬＲを介するシグナル伝達に付随する細胞内シグナル伝達の任意の態様を指す。本明細書で使用する場合、用語「ＴＬＲ媒介免疫応答」とは、ＴＬＲシグナル伝達に付随する（例えば、その結果である）免疫応答を指す。
【００５５】
ＴＬＲ７媒介免疫応答は、ＴＬＲ７シグナル伝達に付随する応答である。ＴＬＲ７媒介免疫応答は、一般に、ＩＦＮ−αおよびＩＰ−１０、Ｉ−ＴＡＣなどのＩＦＮ誘導サイトカインを特徴とする。ＴＬＲ７媒介免疫応答において誘導される各サイトカインＩＬ−１α／β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＭＩＰ−１α／βおよびＭＩＰ−３α／βの量は、ＴＬＲ８媒介免疫応答において誘導される量より少ない。
【００５６】
ＴＬＲ８媒介免疫応答は、ＴＬＲ８シグナル伝達に付随する応答である。この応答は、ＩＦＮ−γ、ＩＬ−１２ｐ４０／７０、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１α／β、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＭＩＰ−１α／β、ＭＩＰ−３α／βなどの炎症促進性サイトカインの誘導を特徴とする。
【００５７】
ＴＬＲ９媒介免疫応答は、ＴＬＲ９シグナル伝達に付随する応答である。この応答は、ＴＬＲ８媒介免疫応答を介して実現される量より少ないが、少なくとも、ＩＦＮ−γおよびＩＬ−１２の産生および／または分泌を特徴とする。
【００５８】
ＴＬＲ７／８リガンド
本明細書で使用する場合、「ＴＬＲ７／８リガンド」とは、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８のシグナル伝達を増加する（即ち、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８のアゴニスト）ことができる任意の作用剤を総称的に指す。したがって、本発明のアダプターオリゴヌクレオチドの非存在下で使用すると、ＴＬＲ７シグナル伝達だけを誘発するＴＬＲ７／８リガンド（例えば、ＴＬＲ７特異リガンド）もあり、ＴＬＲ８シグナル伝達だけを誘発するもの（例えば、ＴＬＲ８特異リガンド）もあり、更にＴＬＲ７、ＴＬＲ８両方のシグナル伝達を誘発するものもある。本発明によれば、このようなリガンドをアダプターオリゴヌクレオチドと併用すると、こうしたリガンドのＴＬＲシグナル伝達プロファイルが変化することが判明した。幾つかの例では、ＴＬＲ７シグナル伝達が抑制され、ＴＬＲ８シグナル伝達が誘発される。他の例では、ＴＬＲ８シグナル伝達が、誘発され（即ち、バックグランド量を超えて増加する）、または増強され（即ち、非バックグランド量を超えて増加する）、更に他の実施形態では、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９両方のシグナル伝達が誘発または増強される。
【００５９】
本明細書で使用する場合、用語「ＴＬＲ７リガンド」とは、ＴＬＲ７シグナル伝達を増加することができる任意の作用剤（即ち、ＴＬＲ７のアゴニスト）を指す。これに関して、ＴＬＲ７シグナル伝達の量は、既存のシグナル伝達量を超えて増強される場合もあり、バックグランドのシグナル伝達量を超えて誘発される場合もある。ＴＬＲ７リガンドには、制限されることなく、Ｃ８置換グアノシンなどのグアノシン類縁体、ＧおよびＵから本質的になるリボヌクレオシドの混合物、グアノシンリボヌクレオチド、ならびにＲＮＡまたはＲＮＡ様分子（ＰＣＴ／ＵＳ０３／１０４０６）、更にアデノシン系化合物（例えば、６−アミノ−９−ベンジル−２−（３−ヒドロキシプロポキシ）−９Ｈ−プリン−８−オール（ＣＬ−０２９、住友）、６−アミノ−９−ベンジル−２−ブトキシ−９Ｈ−プリン−８−オール（図１３Ｄに表示）、および米国特許第６３１００７０Ｂ１号に記載のものなどの他の関連化合物）が含まれる。ＴＬＲ７リガンドは、Ｇｏｒｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５，１７４：１２５９−１２６８にも開示されている（例えば、３Ｍ−００１、Ｎ−［４−（４−アミノ−２−エチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル）ブチル−］メタンスルホンアミド、Ｃ１７Ｈ２３Ｎ５Ｏ２Ｓ、ｍｗ３６１）。
【００６０】
本明細書で使用する場合、用語「グアノシン類縁体」とは、グアニン塩基、グアノシンヌクレオシド糖、またはグアニン塩基、グアノシンヌクレオシド糖の両方が関わる化学修飾を有するグアノシン様ヌクレオチド（グアノシンは除外）を指す。具体的には、グアノシン類縁体には、制限されることなく、７−デアザグアノシンが含まれる。
【００６１】
グアノシン類縁体には、７−チア−８−オキソグアノシン（イムノシン）、８−メルカプトグアノシン、８−ブロモグアノシン、８−メチルグアノシン、８−オキソ−７，８−ジヒドログアノシン、Ｃ８−アリールアミノ−２’−デオキシグアノシン、Ｃ８−プロピニルグアノシン、７−アリル−８−オキソグアノシン（ロキソリビン）や７−メチル−８−オキソグアノシンといったＣ８・Ｎ７置換グアニンリボヌクレオシド、８−アミノグアノシン、８−ヒドロキシ−２’−デオキシグアノシン、８−ヒドロキシグアノシン、７−デアザ−８置換グアノシンなどのＣ８置換グアノシンが更に含まれる。
【００６２】
本明細書で使用する場合、用語「ＴＬＲ８リガンド」とは、ＴＬＲ８シグナル伝達を増加することができる任意の作用剤（即ち、ＴＬＲ８のアゴニスト）を指す。これに関して、ＴＬＲ８シグナル伝達の量は、既存のシグナル伝達量を超えて増強される場合もあり、バックグランドのシグナル伝達量を超えて誘発される場合もある。ＴＬＲ８リガンドには、ＧおよびＵから本質的になるリボヌクレオシドの混合物、グアノシンリボヌクレオチド、ならびにＲＮＡまたはＲＮＡ様分子（ＰＣＴ／ＵＳ０３／１０４０６）が含まれる。追加のＴＬＲ８リガンドは、Ｇｏｒｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５，１７４：１２５９−１２６８にも開示されている（例えば、３Ｍ−００２、２−プロピルチアゾロ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン、Ｃ１３Ｈ１３Ｎ３Ｓ、ｍｗ２４３）。
【００６３】
幾つかのＴＬＲ７／８リガンドは、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８両方のリガンドである。こうしたリガンドには、イミダゾキノリン、ＧおよびＵから本質的になるリボヌクレオシドの混合物、グアノシンリボヌクレオチド、ならびにＲＮＡまたはＲＮＡ様分子（ＰＣＴ／ＵＳ０３／１０４０６）が含まれる。追加のＴＬＲ７／８リガンドは、Ｇｏｒｄｅｎ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００５，１７４：１２５９−１２６８にも開示されている（例えば、３Ｍ−００３、４−アミノ−２−（エトキシメチル）−α，α−ジメチル−６，７，８，９−テトラヒドロ−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール・水和物、Ｃ１７Ｈ２６Ｎ４Ｏ２、ｍｗ３１８）。
【００６４】
イミダゾキノリンは、インターフェロン（例えば、ＩＦＮ−α）、ＴＮＦ−αおよび一部のインターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−６およびＩＬ−１２）を含めた、数種のサイトカインの発現を誘発すると考えられる免疫応答修飾因子である。イミダゾキノリンは、１つにはＩｇＧ２ａ量増加の誘発能により証明されるように、Ｔｈ１免疫応答を刺激することができる。イミダゾキノリン剤は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１３などのＴｈ２サイトカインの産生を抑制することもできると報告されている。イミダゾキノリンが誘発するサイトカインの幾つかは、マクロファージおよび樹状細胞により産生される。数種のイミダゾキノリンは、ＮＫ細胞溶解活性を高め、Ｂ細胞の増殖および分化を刺激し、それにより抗体の産生および分泌を誘発すると報告されてきた。
【００６５】
本明細書で使用する場合、イミダゾキノリンには、イミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、および１，２架橋イミダゾキノリンアミンが含まれる。これらの化合物は、米国特許第４６８９３３８号、第４９２９６２４号、第５２３８９４４号、第５２６６５７５号、第５２６８３７６号、第５３４６９０５号、第５３５２７８４号、第５３８９６４０号、第５３９５９３７号、第５４９４９１６号、第５４８２９３６号、第５５２５６１２号、第６０３９９６９号および第６１１０９２９号に記載されてきた。イミダゾキノリンの特定種には、Ｒ−８４８（Ｓ−２８４６３）、４−アミノ−２エトキシメチル−α，α−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（Ｒ８３７またはイミキモド）、およびＳ−２７６０９が含まれる。イミキモドは、生殖器や肛門の疣などの疣の局所治療に現在使用されており、基底細胞癌の局所治療にも試験されてきた。
【００６６】
本明細書で使用する場合、用語「ＴＬＲ９リガンド」とは、ＴＬＲ９シグナル伝達を増加することができる任意の作用剤（即ち、ＴＬＲ９のアゴニスト）を指す。具体的には、ＴＬＲ９リガンドには、制限されることなく、免疫賦活性核酸、特に免疫賦活性ＣｐＧ核酸が含まれる。
【００６７】
本明細書で使用する場合、用語「免疫賦活性ＣｐＧ核酸」とは、免疫細胞を活性化できる任意のＣｐＧ含有核酸を指す。ＣｐＧジヌクレオチドの少なくともＣは、必ずではないが通常、非メチル化型である。免疫賦活性ＣｐＧ核酸は、米国特許第６１９４３８８号、第６２０７６４６号、第６２１８３７１号、第６２３９１１６号、第６３３９０６８号、第６４０６７０５号および第６４２９１９９号を含む、幾つもの交付済み特許および公開特許出願に記載されている。
【００６８】
幾つかの実施形態では、ＴＬＲリガンドは特異リガンドである。本明細書で使用する場合、ＴＬＲ７特異リガンドは、本発明のアダプターオリゴヌクレオチドの非存在下で使用した際、ＴＬＲ７を介するが、ＴＬＲ８もＴＬＲ９も介さずにシグナル伝達するリガンドである。同様に、ＴＬＲ８特異リガンドは、本発明のアダプターオリゴヌクレオチドの非存在下で使用した際、ＴＬＲ８を介するが、ＴＬＲ７もＴＬＲ９も介さずにシグナル伝達するリガンドである。好ましくは、ＴＬＲ７特異リガンドは、アダプターオリゴヌクレオチドの非存在下で使用した際、ＴＬＲ７を介するが、他のＴＬＲを介さずにシグナル伝達し、ＴＬＲ８特異リガンドは、アダプターオリゴヌクレオチドの非存在下で使用した際、ＴＬＲ８を介するが、他のＴＬＲを介さずにシグナル伝達する。
【００６９】
幾つかの実施形態では、ＴＬＲリガンドはＲＮＡではない。
【００７０】
ＴＬＲ７／８リガンドをアダプターオリゴヌクレオチドと共に使用すると、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９の両方を刺激し、両受容体の下流作用を同時に生じ得る。例えば、該オリゴヌクレオチドによるＴＬＲ９の刺激は、例えばＩＦＮ−αの産生を起こし得る一方、該オリゴヌクレオチドによるＴＬＲ８の刺激は、例えばＩＬ−１２、ＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γの産生を起こし得る。該リガンドおよびオリゴヌクレオチドは、相互にコンジュゲートしていてもよいし、または物理的に相互に離れていてもよい。
【００７１】
アダプターオリゴヌクレオチド
本発明によれば、ＴＬＲ７／８リガンドは、アダプターオリゴヌクレオチドと併用される。本明細書で使用する場合のアダプターオリゴヌクレオチドは、ＴＬＲ７／８リガンドと共に使用した際、ＴＬＲ７リガンドによりＴＬＲ７シグナル伝達を抑制し、ＴＬＲ７リガンドによりＴＬＲ８シグナル伝達を誘発し、および／またはＴＬＲ７、ＴＬＲ８両者のリガンドであるリガンドによりＴＬＲ８シグナル伝達を増強することによって、該リガンドの活性を調節するオリゴヌクレオチドである。
【００７２】
本明細書で使用する場合、オリゴヌクレオチドという用語は、核酸という用語と互換的に使用される。好ましくは、該用語は、プラスミド、ベクター、および／またはアンチセンス核酸を除外する。幾つかの実施形態では、該オリゴヌクレオチドは免疫賦活性でもよいが、他の実施形態では、単独で使用した場合、非免疫賦活性でもよい。該オリゴヌクレオチドは、任意の長さでもよいが、好ましくは長さが、ヌクレオチド７個または８個から１００個までである。
【００７３】
アダプターオリゴヌクレオチドの広大な一部類は、式５’Ｘ−Ｎ４−Ｘ３’または５’Ｘ−Ｎ５−Ｘ３’を含み、式中、Ｘが任意のヌクレオチドとなることができ、存在しても、しなくてもよく、Ｎ４およびＮ５は、Ｎ４またはＮ５中のＮが同一となるように、４連および５連のＴ（チミジン）、Ｕ（ウラシル）またはＡ（アデニン）を表す。該オリゴヌクレオチドは、長さがヌクレオチド個数で７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７またはそれより多くてもよい。好ましくは、それは、少なくとも１個のヌクレオチド間ホスホロチオエート連結部を含む（最多で完全ホスホロチオエート化骨格まで）。
【００７４】
したがって、アダプターオリゴヌクレオチドの一部類は、式５’Ｘａ−ＴＴＴＴＴ−Ｘｂ３’を含み、式中、ＸａおよびＸｂが、独立に任意のヌクレオチドとなることができ、存在しても、しなくてもよい。ＸａおよびＸｂは、１個または複数のヌクレオチド（例えば、１〜１００ヌクレオチド）を表してもよい。該オリゴヌクレオチドは、長さがヌクレオチド個数で７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３またはそれより多くてもよい。該オリゴヌクレオチドは、６連、７連、またはそれより多連のＴを含んでもよい。好ましくは、該アダプターオリゴヌクレオチドは、ｄＴホモポリマー（即ち、長さがここに記載のオリゴｄＴ）である。より一層好ましくは、該アダプターオリゴヌクレオチドは、長さが１７ヌクレオチドのチミジン（ｄＴ）ホモポリマーである。最も好ましくは、それは、少なくとも１個のヌクレオチド間ホスホロチオエート連結部を含む（最多で完全ホスホロチオエート化骨格まで）。
【００７５】
該アダプターオリゴヌクレオチドは、その実施形態に応じて１００％Ｔ、９９％Ｔ、１９８Ｔ、９７％Ｔ、９６％Ｔ、９５％Ｔ、９４％Ｔ、９３％Ｔ、９２％Ｔ、９１％Ｔ、９０％Ｔ、８５％Ｔ、８０％Ｔ、７５％Ｔ、７０％Ｔ、６５％Ｔ、６０％Ｔ、５５％Ｔ、５０％Ｔ、４５％Ｔ、またはそれより低率のＴからなっていてもよい。
【００７６】
アダプターオリゴヌクレオチドの別部類は、式５’Ｘａ−ＵＵＵＵＵ−Ｘｂ３’を含み、式中、ＸａおよびＸｂが、独立に任意のヌクレオチドとなることができ、存在しても、しなくてもよい。ＸａおよびＸｂは、１個または複数のヌクレオチド（例えば、１〜１００ヌクレオチド）を表してもよい。該オリゴヌクレオチドは、長さがヌクレオチド個数で７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３またはそれより多くてもよい。該オリゴヌクレオチドは、６連、７連、またはそれより多連のＵを含んでもよい。重要な実施形態では、該オリゴヌクレオチドは、好ましくは長さが１７ヌクレオチドであり、少なくとも１個のヌクレオチド間ホスホロチオエート連結部を有する（最多で完全ホスホロチオエート化骨格まで）ｄＵホモポリマーである。
【００７７】
該アダプターオリゴヌクレオチドは、その実施形態に応じて１００％Ｕ、９９％Ｕ、１９８Ｕ、９７％Ｕ、９６％Ｕ、９５％Ｕ、９４％Ｕ、９３％Ｕ、９２％Ｕ、９１％Ｕ、９０％Ｕ、８５％Ｕ、８０％Ｕ、７５％Ｕ、７０％Ｕ、６５％Ｕ、６０％Ｕ、５５％Ｕ、５０％Ｕ、４５％Ｕ、またはそれより低率のＵからなっていてもよい。
【００７８】
アダプターオリゴヌクレオチドの更に別部類は、式５’Ｘａ−ＡＡＡＡＡ−Ｘｂ３’を含み、式中、ＸａおよびＸｂが、独立に任意のヌクレオチドとなることができ、存在しても、しなくてもよい。ＸａおよびＸｂは、１個または複数のヌクレオチド（例えば、１〜１００ヌクレオチド）を表してもよい。該オリゴヌクレオチドは、長さがヌクレオチド個数で７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３またはそれより多くてもよい。該オリゴヌクレオチドは、６連、７連、またはそれより多連のＡを含んでもよい。重要な実施形態では、該オリゴヌクレオチドは、好ましくは長さが１７ヌクレオチドであり、少なくとも１個のヌクレオチド間ホスホロチオエート連結部を有する（最多で完全ホスホロチオエート化骨格まで）ｄＡホモポリマーである。
【００７９】
該アダプターオリゴヌクレオチドは、その実施形態に応じて１００％Ａ、９９％Ａ、１９８Ａ、９７％Ａ、９６％Ａ、９５％Ａ、９４％Ａ、９３％Ａ、９２％Ａ、９１％Ａ、９０％Ａ、８５％Ａ、８０％Ａ、７５％Ａ、７０％Ａ、６５％Ａ、６０％Ａ、５５％Ａ、５０％Ａ、４５％Ａ、またはそれより低率のＡからなっていてもよい。
【００８０】
該アダプターオリゴヌクレオチドの別部類は、式５’Ｃｎ−Ｔｍ−Ｃｐ３’を含み、ｎが０〜１００（例えば、３〜７）の範囲の整数、ｐが０〜１００（例えば、４〜８）の範囲の整数、ｍが０〜１００（例えば、２〜１０）の範囲の整数である。好ましくは、ｎおよびｐの合計は、Ｃ含量が５０％、５０％未満、４５％未満、４０％未満、３５％未満、３０％未満、２５％未満、２０％未満、１５％未満、１０％未満、５％未満、またはそれより少なくなるように、ｍの値以下である。幾つかの実施形態では、ｎが３〜７の範囲、ｍが２〜１０の範囲、ｐが４〜８の範囲であり、但し、前記の各比率（％）を満たすことを条件とする。この式の数種は図８に示されている。その例には、５’Ｃ３Ｔ１０Ｃ４３’（配列番号１）、５’Ｃ４Ｔ８Ｃ５３’（配列番号２）、５’Ｃ５Ｔ６Ｃ６３’（配列番号６）、５’Ｃ６Ｔ４Ｃ７３’（配列番号７）および５’Ｃ７Ｔ２Ｃ８３’（配列番号８）が挙げられる。
【００８１】
幾つかの実施形態では、該アダプターオリゴヌクレオチドは免疫賦活性ＣｐＧモチーフを含む。該モチーフは、メチル化されていても、非メチル化でもよい。後者の例では、オリゴヌクレオチド全体が非メチル化とすることができ、またはその一部が非メチル化としてもよいが、５’ＣＧ３’の少なくともＣは、非メチル化でなければならない。非メチル化モチーフ、および免疫調節に対するその作用は、米国特許第６１９４３８８Ｂ１号、米国特許第６２０７６４６Ｂ１号、米国特許第６２３９１１６Ｂ１号、米国特許第６２１８３７１Ｂ１号などの米国特許、およびＰＣＴ／ＵＳ９８／０３６７８、ＰＣＴ／ＵＳ９８／１０４０８、ＰＣＴ／ＵＳ９８／０４７０３、ＰＣＴ／ＵＳ９９／０９８６３などの公開特許出願に広範に記載されてきた。これらの特許および特許出願の各々の全内容は、参照により本明細書に組み込まれる。
【００８２】
前記のように、用語「オリゴヌクレオチド」および「核酸」は、多重ヌクレオチド（即ち、リン酸基、およびピリミジン（例えば、シトシン（Ｃ）、チミジン（Ｔ）またはウラシル（Ｕ））、プリン（アデニン（Ａ）またはグアニン（Ｇ））のいずれかである交換性有機塩基に連結した糖（例えば、リボースまたはデオキシリボース）を含む分子）を意味するために、互換的に使用される。したがって、この用語はＤＮＡ、ＲＮＡの両オリゴヌクレオチドを包含する。この用語は、ポリヌクレオシド（即ち、ポリヌクレオチドからリン酸を除いたもの）および他の任意の有機塩基含有ポリマーも包含するものとする。オリゴヌクレオチドは、現存する核酸源（例えば、ゲノムまたはｃＤＮＡ）から得ることができるが、好ましくは合成品（例えば、核酸合成装置により製造される）である。
【００８３】
該オリゴヌクレオチドは、２本鎖、１本鎖のいずれでもよい。ある種の実施形態では、該オリゴヌクレオチドが１本鎖の場合、二次および三次構造を形成することができる（例えば、折り畳み返すことにより、または全体に亘り、もしくは長さに沿って選択されたセグメントでそれ自体とハイブリッド形成することにより）。したがって、このようなオリゴヌクレオチドの一次構造が１本鎖の場合でも、その高次構造は、２本鎖または３本鎖のこともある。
【００８４】
該オリゴヌクレオチドの長さには範囲があるが、好ましくは長さが１００ヌクレオチド（または塩基）以下である。該アダプターオリゴヌクレオチドは、好ましくはプラスミドやベクターではない。それは、抗アンチセンス活性能がないことも好ましく、または本発明に従って現れるその作用は、抗アンチセンス活性とは少なくとも何ら関係がない。
【００８５】
該オリゴヌクレオチドは修飾された骨格を有してもよい。例えば、ホスホジエステル連結部ではない、少なくとも１個のヌクレオチド間連結部を含んでもよい。このような連結部は、ホスホロチオエート連結部でもよい。幾つかの実施形態では、該オリゴヌクレオチドは、キメラ骨格を有してもよい（即ち、少なくとも２種のヌクレオチド間連結部からなる骨格）。
【００８６】
本明細書で使用する場合、用語「ホスホロチオエート骨格」とは、非架橋性リン酸エステル酸素が、少なくとも１個のヌクレオチド間連結部で硫黄に代替されている、オリゴヌクレオチドの安定化した糖リン酸エステル骨格を指す。一実施形態では、非架橋性リン酸エステル酸素は、ありとあらゆるヌクレオチド間連結部で硫黄に代替されている。
【００８７】
オリゴヌクレオチドの供給源および調製
本発明のオリゴヌクレオチドは、ホスホジエステルヌクレオシド間架橋、β−Ｄ−リボース単位、および／または天然ヌクレオシド塩基（アデニン、グアニン、シトシン、チミン、ウラシル）を含む天然のＲＮＡおよびＤＮＡと比較して、多様な化学的修飾および置換を包含することができる。化学的修飾の例は、当業者に公知であり、例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｃｈｅｍ  Ｒｅｖ  ９０：５４３；“Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ”Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ＆Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ，Ｅｄ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，ＵＳＡ  １９９３；Ｃｒｏｏｋｅ  ＳＴ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ａｎｎｕ  Ｒｅｖ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  Ｔｏｘｉｃｏｌ  ３６：１０７−２９およびＨｕｎｚｉｋｅｒ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．（１９９５）Ｍｏｄ  Ｓｙｎｔｈ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ７：３３１−４１７に記載されている。本発明によるオリゴヌクレオチドは、天然のＤＮＡまたはＲＮＡで構成される同じ配列のオリゴヌクレオチドと比較して、特定のホスホジエステルヌクレオシド間架橋および／または特定のβ−Ｄ−リボース単位および／または特定の天然ヌクレオシド塩基位置に、それぞれ配置されている１個または複数の修飾を有してもよい。
【００８８】
例えば、該オリゴヌクレオチドは、１個または複数の修飾を含んでもよく、各修飾は、以下のもの：
ａ）ヌクレオシドの３’および／または５’末端に位置するホスホジエステルヌクレオシド間架橋の修飾ヌクレオシド間架橋による代替、
ｂ）ヌクレオシドの３’および／または５’末端に位置するホスホジエステル架橋の脱リン架橋による代替、
ｃ）糖リン酸エステル骨格由来の糖リン酸エステル単位の別単位による代替、
ｄ）β−Ｄ−リボース単位の修飾糖単位による代替、ならびに
ｅ）天然ヌクレオシド塩基の修飾ヌクレオシド塩基による代替
から独立に選択される。
【００８９】
オリゴヌクレオチドの化学修飾に対するより詳細な例は、以下の通りである。
【００９０】
該オリゴヌクレオチドは、上記（ａ）または（ｂ）に記載のものなどの修飾されたヌクレオチド間連結部を含んでもよい。こうしたヌクレオチド間連結部は、分解に対して部分的に耐性を示し得る（例えば、安定化されている）。「安定化オリゴヌクレオチド」は、このような修飾の結果、インビボでの分解（例えば、エキソまたはエンドヌクレアーゼによる）に対して相対的に耐性を示すオリゴヌクレオチドを意味するものとする。幾つかの実施形態では、ホスホロチオエート連結部を有するオリゴヌクレオチドは、最大の活性を示し、細胞内エキソまたはエンドヌクレアーゼによる分解から該オリゴヌクレオチドを保護し得る。
【００９１】
ヌクレオシドの３’および／または５’末端に位置するホスホジエステルヌクレオシド間架橋は、修飾ヌクレオシド間架橋により代替することができ、該修飾ヌクレオシド間架橋は、例えば、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ＮＲ１Ｒ２−ホスホラミデート、ボラノホスフェート、α−ヒドロキシベンジルホスホネート、ホスフェート−（Ｃ１〜Ｃ２１）−Ｏ−アルキルエステル、ホスフェート−［（Ｃ６〜Ｃ１２）アリール−（Ｃ１〜Ｃ２１）−Ｏ−アルキル］エステル、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキルホスホネートおよび／または（Ｃ６〜Ｃ１２）アリールホスホネート架橋、（Ｃ７〜Ｃ１２）−α−ヒドロキシメチルアリール（例えば、国際公開第９５／０１３６３号に開示されている）から選択され、式中、（Ｃ６〜Ｃ１２）アリール、（Ｃ６〜Ｃ２０）アリールおよび（Ｃ６〜Ｃ１４）アリールは、ハロゲン、アルキル、アルコキシ、ニトロ、シアノで置換されていてもよく、Ｒ１およびＲ２は、相互に独立に水素、（Ｃ１〜Ｃ１８）アルキル、（Ｃ６〜Ｃ２０）アリール、（Ｃ６〜Ｃ１４）アリール−（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、好ましくは水素、（Ｃ１〜Ｃ８）アルキル、好ましくは（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、および／またはメトキシエチルであるか、Ｒ１およびＲ２は、両者を担う窒素原子と共に、追加としてＯ、ＳおよびＮの群からの更なるヘテロ原子を含有できる、５〜６員ヘテロ環を形成する。
【００９２】
ヌクレオシドの３’および／または５’末端に位置するホスホジエステル架橋は、脱リン架橋により代替することができ（脱リン架橋は、例えば、“Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ”，Ｖｏｌ．２０，“Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｆｏｒ  Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｓ  ａｎｄ  Ａｎａｌｏｇｓ”，Ｓ．Ａｇｒａｗａｌ，Ｅｄ，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，１９９３中のＵｈｌｍａｎｎ  Ｅ  ａｎｄ  Ｐｅｙｍａｎ  Ａ，Ｃｈａｐｔｅｒ  １６，ｐｐ．３５５ｆｆに記載されている）、脱リン架橋は、例えば、ホルムアセタール基、３’−チオホルムアセタール基、メチルヒドロキシルアミン基、オキシム基、メチレンジメチルヒドラゾ基、ジメチレンスルホン基および／またはシリル基の各脱リン架橋から選択される。
【００９３】
糖リン酸エステル骨格（即ち、糖リン酸エステル骨格は、糖リン酸エステル単位で構成されている）由来の糖リン酸エステル単位（即ち、糖リン酸エステル単位を一緒になって形成している、β−Ｄ−リボースおよびホスホジエステルヌクレオシド間架橋）は、別単位により代替することができ、その別単位は、例えば、「モルホリノ誘導体」オリゴマー（例えば、Ｓｔｉｒｃｈａｋ  ＥＰ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  １７：６１２９−４１に記載のようなもの）、即ち、例えばモルホリノ誘導体単位を有する代替物の構築、またはポリアミド核酸（「ＰＮＡ」、例えばＮｉｅｌｓｅｎ  ＰＥ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇ  Ｃｈｅｍ  ５：３−７に記載のようなもの）、即ち、例えばＰＮＡ骨格単位を有する、例えば２−アミノエチルグリシンによる代替物の構築に適している。該オリゴヌクレオチドは、リン酸エステル基を有するペプチド核酸（ＰＨＯＮＡ）、固定化核酸（ＬＮＡ）、および骨格部にアルキルリンカーまたはアミノリンカーを有するオリゴヌクレオチドなどの、糖鎖骨格の他の修飾および代替を有してもよい。該アルキルリンカーは、分岐または非分岐、置換または非置換、および純粋キラルまたはラセミ混合物でもよい。
【００９４】
β−リボース単位またはβ−Ｄ−２’−デオキシリボース単位は、修飾糖単位により代替することができ、該修飾糖単位は、例えば、β−Ｄ−リボース、α−Ｄ−２’−デオキシリボース、Ｌ−２’−デオキシリボース、２’−Ｆ−２’−デオキシリボース、２’−Ｆ−アラビノース、２’−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルリボース、２’−Ｏ−メチルリボース、２’−Ｏ−（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニルリボース、２’−［Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル−Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキル］リボース、２’−ＮＨ２−２’−デオキシリボース、β−Ｄ−キシロフラノース、α−アラビノフラノース、２，４−ジデオキシ−β−Ｄ−エリスロヘキソピラノース、ならびに炭素環糖類縁体（例えば、Ｆｒｏｅｈｌｅｒ  （１９９２）Ｊ  Ａｍ  Ｃｈｅｍ  Ｓｏｃ  １１４：８３２０に記載）、および／または開鎖糖類縁体（例えば、Ｖａｎｄｅｎｄｒｉｅｓｓｃｈｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  ４９：７２２３に記載）、および／または二環糖類縁体（例えば、Ｔａｒｋｏｖ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｈｅｌｖ  Ｃｈｉｍ  Ａｃｔａ  ７６：４８１に記載）から選択される。
【００９５】
幾つかの実施形態では、該修飾糖は２’修飾リボースである。幾つかの実施形態では、その糖は、特に、ホスホジエステルまたはホスホジエステル様ヌクレオシド間連結部で連結された一方または両方のヌクレオチドに対する、２’−Ｏ−メチルリボースである。
【００９６】
核酸は、Ｃ５プロピンピリミジンおよび７−デアザ−７置換プリンで修飾された各塩基などの置換されたプリンおよびピリミジンも包含する。Ｗａｇｎｅｒ  ＲＷ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６）Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ  １４：８４０−４。プリンおよびピリミジンには、それだけに限らないが、アデニン、シトシン、グアニンおよびチミン、ならびに他の天然および非天然の核酸塩基、置換および非置換芳香部が含まれる。
【００９７】
修飾塩基は、Ｔ、Ｃ、Ｇ、ＡおよびＵなどのＤＮＡおよびＲＮＡ中に通常見出される天然塩基とは、化学的に異なるが、これらの天然塩基と基本化学構造を共有する任意の塩基である。該修飾ヌクレオシド塩基は、例えば、ヒポキサンチン、ウラシル、ジヒドロウラシル、プソイドウラシル、２−チオウラシル、４−チオウラシル、５−アミノウラシル、５−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニルウラシル、５−（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニルウラシル、５−（ヒドロキシメチル）ウラシル、５−クロロウラシル、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−ヒドロキシシトシン、５−（Ｃ１〜Ｃ６）アルキルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）アルケニルシトシン、５−（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニルシトシン、５−クロロシトシン、５−フルオロシトシン、５−ブロモシトシン、Ｎ２−ジメチルグアニン、２，４−ジアミノプリン、８−アザプリン、置換７−デアザプリン、好ましくは７−デアザ−７置換プリンおよび／または７−デアザ−８置換プリン、５−ヒドロキシメチルシトシン、Ｎ４−アルキルシトシン例えばＮ４−エチルシトシン、５−ヒドロキシデオキシシチジン、５−ヒドロキシメチルデオキシシチジン、Ｎ４−アルキルデオキシシチジン例えばＮ４−エチルデオキシシチジン、６−チオデオキシグアノシン、およびニトロピロールのデオキシリボヌクレオシド、Ｃ５−プロピニルピリミジン、ならびにジアミノプリン例えば２，６−ジアミノプリン、イノシン、５−メチルシトシン、２−アミノプリン、２−アミノ−６−クロロプリン、ヒポキサンチン、または天然ヌクレオシド塩基の他の修飾体から選択してもよい。この列挙は、例示することを意図しており、限定するものと解釈すべきではない。
【００９８】
本明細書に記載の特定の式に、修飾塩基を組み込んでもよい。例えば、あるシトシンを修飾シトシンで代替してもよい。本明細書で使用する際の修飾シトシンは、当該オリゴヌクレオチドの免疫賦与活性を損なうことなくシトシンを代替できる、この塩基の天然または非天然のピリミジン塩基類縁体である。修飾シトシンには、それだけに限らないが、５置換シトシン（例えば、５−メチルシトシン、５−フルオロシトシン、５−クロロシトシン、５−ブロモシトシン、５−ヨードシトシン、５−ヒドロキシシトシン、５−ヒドロキシメチルシトシン、５−ジフルオロメチルシトシン、および非置換または置換５−アルキニルシトシン）、６置換シトシン、Ｎ４置換シトシン（例えば、Ｎ４−エチルシトシン）、５−アザシトシン、２−メルカプトシトシン、イソシトシン、プソイドイソシトシン、縮合環系を有するシトシン類縁体（例えば、Ｎ，Ｎ’−プロピレンシトシンまたはフェノキサジン）、ならびにウラシルおよびその誘導体（例えば、５−フルオロウラシル、５−ブロモウラシル、５−ブロモビニルウラシル、４−チオウラシル、５−ヒドロキシウラシル、５−プロピニルウラシル）が含まれる。好ましいシトシンの一部には、５−メチルシトシン、５−フルオロシトシン、５−ヒドロキシシトシン、５−ヒドロキシメチルシトシンおよびＮ４−エチルシトシンが含まれる。本発明の別の実施形態では、該シトシン塩基は、普遍的塩基（例えば、３−ニトロピロール、Ｐ−塩基）、芳香環系（例えば、フルオロベンゼンもしくはジフルオロベンゼン）、または水素原子（ｄスペーサー）で置換されている。
【００９９】
別の例として、グアニンは、修飾グアニン塩基で代替されてもよい。本明細書で使用する際の修飾グアニンは、当該オリゴヌクレオチドの免疫賦与活性を損なうことなくグアニンを代替できる、この塩基の天然または非天然のピリミジン塩基類縁体である。修飾グアニンには、それだけに限らないが、７−デアザグアニン、７−デアザ−７置換グアニン（７−デアザ−７−（Ｃ２〜Ｃ６）アルキニルグアニンなど）、７−デアザ−８置換グアニン、ヒポキサンチン、Ｎ２置換グアニン（Ｎ２−メチルグアニン）、５−アミノ−３−メチル−３Ｈ，６Ｈ−チアゾロ［４，５−ｄ］ピリミジン−２，７−ジオン、２，６−ジアミノプリン、２−アミノプリン、プリン、インドール、アデニン、置換アデニン（例えば、Ｎ６−メチルアデニン、８−オキソアデニン）、８置換グアニン（例えば、８−ヒドロキシグアニン、８−ブロモグアニン）、および６−チオグアニンが含まれる。本発明の別の実施形態では、該グアニン塩基は、普遍的塩基（例えば、４−メチルインドール、５−ニトロインドール、およびＫ−塩基）、芳香環系（例えば、ベンズイミダゾールもしくはジクロロベンズイミダゾール、１−メチル−１Ｈ−［１，２，４］トリアゾール−３−カルボン酸アミド）、または水素原子（ｄスペーサー）で置換されている。
【０１００】
本発明において使用するために、本発明のオリゴヌクレオチドは、例えば、β−シアノエチルホスホロアミダイト法（Ｂｅａｕｃａｇｅ  ＳＬ  ｅｔ  ａｌ．（１９８１）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ  ２２：１８５９）、またはヌクレオシドＨ−ホスホネート法（Ｇａｒｅｇｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ  ２７：４０５１−４；Ｆｒｏｅｈｌｅｒ  ＢＣ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ  １４：５３９９−４０７；Ｇａｒｅｇｇ  ｅｔ  ａｌ．（１９８６）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ  ２７：４０５５−８；Ｇａｆｆｎｅｙ  ｅｔ  ａｌ．（１９８８）Ｔｅｔｒａｈｅｄｒｏｎ  Ｌｅｔｔ  ２９：２６１９−２２）を含めた、当技術分野で周知の幾種もの手順のいずれかを用いて最初から合成することができる。こうした化学操作は、市販されている他種の自動核酸合成装置により行うことができる。これらのオリゴヌクレオチドは、合成オリゴヌクレオチドと呼称される。単離オリゴヌクレオチドとは、一般に、自然では関連し合っている成分から分離されたオリゴヌクレオチドを指す。例えば、単離オリゴヌクレオチドは、細胞、核、ミトコンドリア、またはクロマチンから分離されたものでもよい。
【０１０１】
ホスホロチオエートなどの修飾骨格は、ホスホロアミダイト化学法またはＨ−ホスホネート化学法を用いた自動化技法を用いて合成し得る。アリールおよびアルキルホスホネートは、例えば、米国特許第４４６９８６３号に記載のように作製することができ、アルキルホスホトリエステル（その中の荷電酸素部が、米国特許第５０２３２４３号および欧州特許第０９２５７４号に記載のようにアルキル化される）は、市販の試薬を用いた自動固相合成により調製することができる。ＤＮＡ骨格の他の修飾および置換を作製する方法は、記載されてきた（例えば、Ｕｈｌｍａｎｎ  Ｅ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｃｈｅｍ  Ｒｅｖ  ９０：５４４；Ｇｏｏｄｃｈｉｌｄ  Ｊ  （１９９０）Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ  １：１６５）。
【０１０２】
単離
ある種の実施形態では、ＴＬＲ７／８リガンドおよび／またはアダプターオリゴヌクレオチドが単離されている。単離されたリガンドまたはオリゴヌクレオチドは、実質的に純粋であるか、または、自然やインビボ系で通常一緒に見出される他の物質を、意図する用途にとって実用的で適当な程度まで含有することがない、リガンドまたはオリゴヌクレオチドである。特に、該リガンドまたはオリゴヌクレオチドは、例えば、医薬製剤の製造に有用となるように、十分に純粋であり、他の生体成分を含有することが十分にない。単離されたリガンドまたはオリゴヌクレオチドは、医薬製剤中で薬学的に許容可能な担体と混和し得るので、該リガンドまたはオリゴヌクレオチドは、製剤重量のほんの少数パーセントを占めるに過ぎないこともある。とは言え、該リガンドまたはオリゴヌクレオチドは、生体系の中では関連し合っていることもある物質類から実質的に分離されたために、単離されている。
【０１０３】
コンジュゲート
本明細書で使用する場合、用語「コンジュゲート」とは、任意の物理化学的相互作用により、直接または間接に連結し合っている構成要素部２個以上の任意の組合せを指す。一実施形態では、コンジュゲートは、共有結合により、直接または間接に連結し合っている構成要素部２個以上の組合せである。
【０１０４】
一態様では、本発明は、ＴＬＲリガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドのコンジュゲートを含む組成物を提供する。一実施形態では、該コンジュゲートは共有結合を介して作製される。一実施形態では、該コンジュゲートはリンカーを含む。
【０１０５】
該コンジュゲートは、本発明のアダプターオリゴヌクレオチド１個または複数個、およびＴＬＲ７／８リガンド１個または複数個を含むことができる。該コンジュゲートは、代替的または付加的に、それだけに限らないが、抗原または他の薬剤を含めた１種または複数の他の分子を含むことができる。
【０１０６】
図１３〜１５は、リガンド、オリゴヌクレオチド双方における結合点を含めたこのようなコンジュゲートの多くの特徴、およびこのようなコンジュゲーションを促進するためのリンカーの任意選択での使用を例示している。
【０１０７】
一実施形態では、該コンジュゲートは、アダプターオリゴヌクレオチドと、それだけに限らないが、イムノシンやロキソリビンなどのある種のＴＬＲ７特異リガンドとのコンジュゲートである。該アダプターオリゴヌクレオチドは、それだけに限らないが、長さがヌクレオチド数で８〜２０個、好ましくは１０〜２０個、より好ましくは１４〜１８個の長さ範囲にあるポリ（ｄＴ）オリゴヌクレオチドでもよい。幾つかの実施形態では、アダプターオリゴヌクレオチドと、イミダゾキノリン、Ｃ８置換グアノシンなどのある種のＴＬＲ７／８リガンドとのコンジュゲートは、特にアダプターオリゴヌクレオチドが、それ自体免疫賦活性であるか、ＴＬＲ９を介してシグナル伝達する場合、除外される。
【０１０８】
図１３Ａ〜Ｃは、イムノシン、ならびにコンジュゲーション法で使用できるその２種のモノマー変異体の構造を例示している。図１３Ｂに示した変異体は、内部位置または３’末端でオリゴヌクレオチドにコンジュゲートすることができる。オリゴヌクレオチドに結合したこうした変異体が、１種または複数あり得る。図１３Ｃに示した変異体は、５’末端でオリゴヌクレオチドにコンジュゲートすることができる。図１４は、リンカーを用いたイムノシンのオリゴヌクレオチドへのコンジュゲーションを例示している。図１５は、リンカーおよび／またはオリゴヌクレオチドがコンジュゲートし得る、Ｒ−８４８、ＣＬ−０２９およびイムノシン中の結合点を例示している。本発明のコンジュゲートは、リンカーを１個、２個、３個、４個、５個、もしくはそれより多く含み得る、またはリンカーを欠く場合もある。コンジュゲートの一例は、ポリ（ｄＴ）１４−Ｌ２−ＩＭである（式中、Ｌはリンカーを表し、ＩＭはイムノシンを表し、下付は、コンジュゲート中の各単位の個数を示す）（配列番号９）。別の例は、ＩＭ−Ｌ２−（ｄＴ）１４である（配列番号１０）。この２例の差は、イムノシンおよびリンカーの配置が３’末端、５’末端のいずれかにあることである。
【０１０９】
リンカーは、それだけに限らないが、骨格リン酸エステル基または糖ヒドロキシル基を含めて、オリゴヌクレオチド上の任意の反応性基に結合してもよい。例えば、リンカーは、ホスホジエステル、ホスホロチオエート、メチルホスホネートおよび／またはアミドの各連結部を介して組み込まれてもよい。
【０１１０】
リンカーは、特質が非ヌクレオチドの場合がある。リンカーは、例えば、非塩基性残基（ｄスペーサー）、トリエチレングリコール（スペーサー９）やヘキサエチレングリコール（スペーサー１８）などのオリゴエチレングリコール、またはブタンジオールなどのアルカンジオールを包含する。リンカー同士が、ホスホジエステルまたはホスホロチオエート結合により相互に結合していてもよい。その他のリンカーは、Ｃ３、Ｃ６、Ｃ１２アミノリンカーなどのアルキルアミノリンカーであり、Ｃ３またはＣ６チオールリンカーなどのアルキルチオールリンカーもそうである。異種のリンカーを１つのコンジュゲート中に使用してもよい。
【０１１１】
該オリゴヌクレオチドは、アルキル基または置換アルキル基で更に置換されることがある芳香族残基により、連結されてもよい。該オリゴヌクレオチドは、同種または異種の多重リガンドの該オリゴヌクレオチドへのコンジュゲーションを可能とする、二重または三重単位を含有してもよい。該オリゴヌクレオチドは、ペプチド修飾剤またはオリゴヌクレオチド修飾剤から生じるリンカーを含有してもよい。更に、それは、ペプチド（アミド）連結部で接続された天然または非天然アミノ酸残基を１個または複数含有してもよい。
【０１１２】
各種オリゴヌクレオチドは、確立した方法により合成され、固相合成中にそのライン上で一緒に連結することができる。別法として、個々の単位を合成した後、それらを一緒に連結してもよい。
【０１１３】
免疫応答
一実施形態では、ＴＬＲ媒介免疫応答はＴｈ１様免疫応答である。本明細書で使用する場合、用語「Ｔｈ１様」とは、Ｔｈ１免疫応答に特有の特徴を有することを指す。Ｔｈ１免疫応答は、ＩＦＮ−γなどのある種のサイトカインの誘導、ＩｇＧ２ａ免疫グロブリンの分泌（マウスにおいて）、およびマクロファージの活性化を特徴として包含し得る。用語「Ｔｈ１様」は、以下に考察するように、Ｔｈ２免疫応答に特有の特徴を有することを指す用語「Ｔｈ２様」と対比させるべきである。
【０１１４】
Ｔｈ１様免疫応答は、Ｔｈ１免疫応答と特徴的に関連している、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、ＩＦＮ−γ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１２、ＩＬ−１８、ＩＰ−１０を含む、ある種のサイトカインおよびケモカインのいずれか、ならびにそれらの任意の組合せの発現を包含することができる。Ｔｈ１免疫応答およびＴｈ２免疫応答は、逆行調節的であると考えられている。幾つかの実施形態では、Ｔｈ１様免疫応答は、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０およびＩＬ−１３を含む、ある種のＴｈ２関連サイトカインの抑制を包含することができる。Ｔｈ１様免疫応答は、ＩｇＥおよび（マウスにおける）ＩｇＧ１を含む、ある種のＴｈ２関連抗体イソタイプの抑制の有無に関わらず、（マウスにおける）ＩｇＧ２ａを含むある種の抗体イソタイプの発現を包含することができる。一実施形態では、Ｔｈ１様免疫応答はＴｈ１応答である。
【０１１５】
Ｔｈ２様免疫応答は、Ｔｈ２免疫応答と特徴的に関連している、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３を含む、ある種のサイトカインおよびケモカインのいずれか、ならびにそれらの任意の組合せの発現を包含することができる。幾つかの実施形態では、Ｔｈ２様免疫応答は、ある種のＴｈ１関連サイトカインの抑制を包含することができる。Ｔｈ２様免疫応答は、（マウスにおける）ＩｇＧ２ａを含む、ある種のＴｈ１関連抗体イソタイプの抑制の有無に関わらず、ＩｇＥおよび（マウスにおける）ＩｇＧ１を含む、ある種の抗体イソタイプの発現を包含することができる。一実施形態では、Ｔｈ２様免疫応答はＴｈ２応答である。
【０１１６】
したがって一実施形態では、本発明は、対象においてＴｈ１様免疫応答を誘発する方法を提供する。Ｔｈ１様免疫応答の誘発には、Ｔｈ１様免疫応答の増強または強化が含まれる。本方法は、対象においてＴｈ１様免疫応答を誘発するために、本発明のＴＬＲ７／８リガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドの有効量を対象に投与する段階を含む。
【０１１７】
一実施形態では、本発明は、対象においてＴｈ２様免疫応答を抑制する方法を提供する。本方法は、対象においてＴｈ２様免疫応答を抑制するために、本発明のＴＬＲ７／８リガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドの有効量を対象に投与する段階を含む。このような方法は、主にＴｈ２特性の免疫応答を特徴とする病状を有する、またはその危険性がある対象の治療に特別な用途を見出し得る。このような病状は、制限されることなく、アレルギーおよび喘息を包含する。
【０１１８】
一実施形態では、該免疫応答は、ＣＤ２５、ＣＤ８０、ＣＤ８６、ＣＤ１５４などの、免疫細胞活性化の細胞表面マーカーの上方調節を伴う。このようなマーカーの細胞表面発現を測定する方法は、当技術分野で周知であり、ＦＡＣＳ分析を包含する。
【０１１９】
細胞または細胞集団における免疫応答を測定するために、一実施形態では、該細胞または細胞集団は、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８またはＴＬＲ９の少なくとも１種、幾つかの事例では好ましくは１種だけを発現する。該細胞は、自然にＴＬＲを発現することができるか、またはＴＬＲ用の適当な発現ベクターを細胞内に導入することにより、ＴＬＲを発現するように操作することができる。一実施形態では、該細胞または細胞集団は、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）として得られる。一実施形態では、該細胞または細胞集団は、ＴＬＲを発現する細胞系として得られる。一実施形態では、該細胞または細胞集団は、ＴＬＲを一時的にトランスフェクトされた細胞系として得られる。一実施形態では、該細胞または細胞集団は、ＴＬＲを安定にトランスフェクトされた細胞系として得られる。
【０１２０】
細胞または細胞集団における免疫応答の測定に使用するためにも、ＴＬＲによる細胞内シグナル伝達に応答する（即ち、調節される）レポーター構築体を細胞または細胞集団内に導入することが、好都合となり得る。一実施形態では、このようなレポーターは、ＮＦ−κＢプロモーターの制御下にある遺伝子である。一実施形態では、そのプロモーターの制御下にある該遺伝子はルシフェラーゼであるが、他のレポーター遺伝子も、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）、β−ガラクトシダーゼ、アルカリホスファターゼなどを含めて、使用することができる。活性化の適当な条件下で、例えば、ルシフェラーゼレポーター構築体が発現され、照度計を用いて定量的に測定し得る、検出可能な光シグナルを発する。これらおよび他のレポーター構築体は、市販されている。他の実施形態では、ＴＬＲ媒介免疫応答は、ＩＦＮ−α、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１２、ＩＦＮ−γなどのサイトカインの産生（ｍＲＮＡもしくはタンパク質）または分泌によって、測定することができる。実施例では、こうした方式のアッセイが示される。本発明は、ＴＬＲ活性化の無細胞検出法の使用も想定している。
【０１２１】
本発明は、抗原特異的免疫応答（本明細書でより詳細に説明する）および非特異的な先天的免疫活性化、ならびに感染攻撃に対する広範囲耐性を誘発する方法も包含する。本明細書で使用する場合、抗原非特異的な先天的免疫活性化という用語は、Ｂ細胞以外で、ＮＫ細胞、Ｔ細胞、もしくは抗原非依存的に応答できる他の免疫細胞、またはこれらの細胞の組合せを含む免疫細胞の活性化を指す。感染攻撃に対する広範囲耐性は、該免疫細胞が、活性型にあり、侵入する任意の化合物または微生物に応答するように初回抗原刺激を受けているので、誘発される。該細胞は、特定の抗原に対して個別に初回抗原刺激を受ける必要はない。このことは、生物戦争、および旅行者などの他の前記状況において特に有用である。
【０１２２】
対象
本明細書で使用する場合、対象とは、人間または人間以外の脊椎動物を指す。人間以外の脊椎動物には、家畜動物、愛玩動物および実験動物が含まれる。人間外対象には、具体的には、人間外霊長類ならびにげっ歯類も含まれる。人間外対象には、具体的には、制限されることなく、ニワトリ、ウマ、ウシ、ブタ、ヤギ、イヌ、ネコ、モルモット、ハムスター、ミンクおよびウサギも含まれる。
【０１２３】
本明細書で使用する場合、病状発現の危険性がある対象とは、その病状を起こす、もしくはそれと関連することが知られている作用剤に晒されたことが明らかな、もしくは疑わしい対象、またはその病状を発現する素因が明らかな、もしくは疑わしい対象を指す（例えば、その病状に対する遺伝子マーカー、またはその病状の家系）。
【０１２４】
一態様では、本発明は、免疫系不全症の対象を治療する方法を提供する。本発明のこの態様による方法は、対象を治療するために、本発明の組成物の有効量を対象に投与する段階を含む。本明細書で使用する場合の免疫系不全症とは、抗原に対する免疫応答を開始する免疫系能力の異常低下を指す。一実施形態では、免疫系不全症は、対象の免疫系が正常な適応能力で機能していないか、例えば、対象の腫瘍もしくは癌、または感染症を除去するために、対象の免疫応答を高めることが有用になると思われる、疾患または障害である。本明細書で使用する場合の免疫不全症の対象とは、例えば、抗原に対する免疫応答を開始する、対象の免疫系能力の低下を示す対象を指す。免疫系不全症の対象には、後天性免疫系不全症の対象、ならびに先天性免疫系不全症の対象が含まれる。後天性免疫系不全症の対象には、制限されることなく、慢性炎症状態の対象、慢性腎臓不全または腎不全の対象、感染症の対象、癌の対象、免疫抑制薬の受容対象、他の免疫抑制受療対象、および栄養失調対象が含まれる。一実施形態では、該対象は、ＣＤ４＋Ｔ細胞集団が抑制されている。一実施形態では、該対象は、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染症を有するか、後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）を有する。したがって、本発明のこの態様による方法は、より活発な免疫応答を必要とする対象において、免疫応答を高める、または免疫応答を開始する能力を高める方法を提供する。
【０１２５】
本明細書で使用する場合、抑制するとは、正常と比較して、結果または効果を低下させることを意味するものとする。
【０１２６】
本明細書で使用する場合、疾患または病状に関して使用する際の治療するとは、疾患または病状の発現を予防もしくは遅延させる、その進行を予防もしくは遅延させる、その進行を停止させる、またはそれを除去するように、そのような疾患または病状に介入することを意味するものとする。例えば、癌の治療は、癌の発症（例えば、前癌状態からの）の予防、癌症状の低減、および／または定着した癌の増殖抑制を包含する。
【０１２７】
病状
本発明は、ある種のＴＬＲ媒介免疫応答の抑制および／または誘発が有益と思われる病状の治療を意図している。本明細書で使用する場合、ＴＬＲ７媒介性の免疫賦活または免疫応答に関わる病状とは、ＴＬＲ７シグナル伝達に付随して免疫活性化が起こり、そのような活性化が有害である対象における、任意の疾患または他の病状を指す。このような病状には、通常、ＴＬＲ７リガンドとの接触に応じてＴＬＲ７シグナル伝達の活性化が伴う。
【０１２８】
本明細書で使用する場合、ＴＬＲ８媒介性の免疫賦活または免疫応答に関わる病状とは、ＴＬＲ８シグナル伝達に付随して免疫活性化が起こり、そのような活性化が有害である対象における、任意の疾患または他の病状を指す。このような病状には、通常、ＴＬＲ８リガンドとの接触に応じてＴＬＲ８シグナル伝達の活性化が伴う。
【０１２９】
本明細書で使用する場合、ＴＬＲ９媒介性の免疫賦活または免疫応答に関わる病状とは、ＴＬＲ９シグナル伝達に付随して免疫活性化が起こり、そのような活性化が有害である対象における、任意の疾患または他の病状を指す。このような病状には、通常、ＴＬＲ９リガンドとの接触に応じてＴＬＲ９シグナル伝達の活性化が伴う。
【０１３０】
感染症
本発明は、感染症などの病状の治療に使用することができる。感染症とは、対象中に細胞外または細胞内の生存微生物の異常な集合体または集団が存在する、任意の状態を指す。このような微生物は、対象にとって内因性の場合もあり、対象にとって外来性の場合もある。感染症を有する対象は、感染性微生物の対象への侵入で表面的、局所的もしくは全身的に起こる、または対象中に自然発生する内因性微生物の上方調節された異常増殖で起こる障害を有する対象である。感染性微生物は、前記のように、ウイルス、細菌、真菌または寄生虫の場合がある。細菌である微生物、ウイルスである微生物、真菌である微生物、および寄生虫である微生物を含めて、各種の微生物が感染症を起こすことができる。
【０１３１】
細菌は、二分裂により無性的に増殖する単細胞生物である。細菌は、形態、染色反応、栄養および代謝要求性、抗原構造、化学組成、ならびに遺伝的相同性に基づいて、分類され、命名されている。細菌は、形態学的形状に基づいて３群、球形（球菌）、直線棒（桿菌）、および曲線またはらせん棒（ビブリオ、カンピロバクター、スピリルムおよびスピロヘータ）に分類することができる。細菌は、染色反応に基づいて２群の微生物、グラム陽性およびグラム陰性に特性区分することもより一般的である。グラムとは、微生物学実験室で普通に行われる染色法を指す。グラム陽性微生物は、染色操作後に染色を保持し、濃紫色に見える。グラム陰性微生物は、染色を保持せずに、対比染色を取り込み、したがって桃色に見える。
【０１３２】
感染性細菌には、それだけに限らないが、グラム陽性細菌およびグラム陰性細菌が含まれる。グラム陽性細菌には、それだけに限らないが、パスツレラ種、ブドウ球菌種、連鎖球菌種などが挙げられる。グラム陰性細菌には、それだけに限らないが、大腸菌、シュードモナス種、サルモネラ種などが挙げられる。感染性細菌の具体的な例には、それだけに限らないが、ヘリコバクター・ピロリ、ボレリア・ブルグドルフェリ、レジオネラ・ニューモフィラ、マイコバクテリア種（例えば、ヒト結核菌、鳥結核菌、Ｍ．イントラセルラーレ、Ｍ．カンサシー、Ｍ．ゴルドネ）、黄色ブドウ球菌、淋菌、髄膜炎菌、リステリア菌、化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）、ストレプトコッカス・アガラクティエ（Ｂ群連鎖球菌）、連鎖球菌（ヴィリダンス群）、糞便連鎖球菌、ストレプトコッカス・ボビス、連鎖球菌（嫌気性種）、肺炎連鎖球菌、病原性カンピロバクター種、エンテロコッカス種、インフルエンザ菌、炭疽菌、ジフテリア菌、コリネバクテリウム種、ブタ丹毒菌、ウェルチ菌、破傷風菌、エンテロバクター・アエロゲネス、肺炎桿菌、パスツレラ・ムルトシダ、バクテロイデス種、フゾバクテリウム・ヌクレアツム、ストレプトバチルス・モニリフォルミス、梅毒トレポネーマ、フランペジア・トレポネーマ、レプトスピラ属、リケッチア属、イスラエル放線菌などが挙げられる。
【０１３３】
細菌には、それだけに限らないが、パスツレラ種、ブドウ球菌種、連鎖球菌種、大腸菌、シュードモナス種、サルモネラ種などが挙げられる。感染性細菌の具体的な例には、それだけに限らないが、ヘリコバクター・ピロリ、ボレリア・ブルグドルフェリ、レジオネラ・ニューモフィラ、マイコバクテリア種（例えば、ヒト結核菌、鳥結核菌、Ｍ．イントラセルラーレ、Ｍ．カンサシー、Ｍ．ゴルドネ）、黄色ブドウ球菌、淋菌、髄膜炎菌、リステリア菌、化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）、ストレプトコッカス・アガラクティエ（Ｂ群連鎖球菌）、連鎖球菌（ヴィリダンス群）、糞便連鎖球菌、ストレプトコッカス・ボビス、連鎖球菌（嫌気性種）、肺炎連鎖球菌、病原性カンピロバクター種、エンテロコッカス種、インフルエンザ菌、炭疽菌、ジフテリア菌、コリネバクテリウム種、ブタ丹毒菌、ウェルチ菌、破傷風菌、エンテロバクター・アエロゲネス、肺炎桿菌、パスツレラ・ムルトシダ、バクテロイデス種、フゾバクテリウム・ヌクレアツム、ストレプトバチルス・モニリフォルミス、梅毒トレポネーマ、フランペジア・トレポネーマ、レプトスピラ属、リケッチア属、イスラエル放線菌などが挙げられる。
【０１３４】
ウイルスは、核酸コアおよびタンパク膜を一般に含有するが、独立の生物ではない小さな感染体である。ウイルスは、タンパク質を欠いた感染性核酸の形態を取ることもできる。ウイルスは、その中で複製できる生細胞の非存在下では生存することができない。ウイルスは、エンドサイトーシスまたはＤＮＡ（ファージ）の直接注入によって特定の生細胞に侵入し、増殖し、疾患を起こす。増殖したウイルスは、次いで放出され、更なる細胞に感染することができる。一部のウイルスはＤＮＡ含有ウイルスであり、他のウイルスはＲＮＡ含有ウイルスである。幾つかの態様では、本発明は、例えば、牛海綿状脳症（即ち、狂牛病、ＢＳＥ）や動物のスクレイピー感染症、または人間のクロイツフェルト・ヤコブ病などの、疾患の進行にプリオンが関与している疾患の治療も意図している。
【０１３５】
ウイルスには、それだけに限らないが、エンテロウイルス（ポリオウイルス、コクサッキーウイルス、エコーウイルスなどのピコルナウイルス科のウイルスを含むが、それだけに限らない）、ロタウイルス、アデノウイルス、肝炎ウイルスなどが挙げられる。人間において見つかったウイルスの具体例には、それだけに限らないが、レトロウイルス科（例えば、ＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶもしくはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶとも称する）またはＨＩＶ−ＩＩＩ、およびＨＩＶ−ＬＰなどの他の分離株などのヒト免疫不全ウイルス）、ピコルナウイルス科（例えば、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）、カルシウイルス科（例えば、胃腸炎を起こす株）、トガウイルス科（例えば、ウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）、フラビウイルス科（例えば、デング熱ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）、コロナウイルス科（例えば、コロナウイルス）、ラブドウイルス科（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）、フィロウイルス科（例えば、エボラウイルス）、パラミクソウイルス科（例えば、パラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス）、オルトミクソウイルス科（例えば、インフルエンザウイルス）、ブンヤウイルス科（例えば、ハンタウイルス、ブンヤウイルス、フレボウイルスおよびナイロウイルス）、アレナウイルス科（例えば、出血熱ウイルス）、レオウイルス科（例えば、レオウイルス、オルビウイルスおよびロタウイルス）、ビルナウイルス科、ヘパドナウイルス科（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス）、パルボウイルス科（例えば、パルボウイルス）、パポバウイルス科（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）、アデノウイルス科（大部分のアデノウイルス）、ヘルペスウイルス科（１型および２型単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ）、水疱瘡ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ））、ポックスウイルス科（天然痘ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）、イリドウイルス科（例えば、アフリカ豚コレラウイルス）、ならびに未分類のウイルス（例えば、海綿状脳症の病原体、デルタ型肝炎の病原体（Ｂ型肝炎ウイルスの欠損性サテライトと考えられる）、非Ａ非Ｂ型肝炎の病原体（クラス１＝体内伝染、クラス２＝非経口伝染（即ち、Ｃ型肝炎））、ノーウォークおよび関連ウイルス、アストロウイルス）が含まれる。
【０１３６】
人間において見つかったウイルスの例には、それだけに限らないが、レトロウイルス科（例えば、ＨＩＶ−１（ＨＴＬＶ−ＩＩＩ、ＬＡＶもしくはＨＴＬＶ−ＩＩＩ／ＬＡＶとも称する）またはＨＩＶ−ＩＩＩ、およびＨＩＶ−ＬＰなどの他の分離株などのヒト免疫不全ウイルス）、ピコルナウイルス科（例えば、ポリオウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、エンテロウイルス、ヒトコクサッキーウイルス、ライノウイルス、エコーウイルス）、カルシウイルス科（例えば、胃腸炎を起こす株）、トガウイルス科（例えば、ウマ脳炎ウイルス、風疹ウイルス）、フラビウイルス科（例えば、デング熱ウイルス、脳炎ウイルス、黄熱病ウイルス）、コロナウイルス科（例えば、コロナウイルス）、ラブドウイルス科（例えば、水疱性口内炎ウイルス、狂犬病ウイルス）、フィロウイルス科（例えば、エボラウイルス）、パラミクソウイルス科（例えば、パラインフルエンザウイルス、ムンプスウイルス、麻疹ウイルス、呼吸器合胞体ウイルス）、オルトミクソウイルス科（例えば、インフルエンザウイルス）、ブンヤウイルス科（例えば、ハンタウイルス、ブンガウイルス、フレボウイルスおよびナイロウイルス）、アレナウイルス科（例えば、出血熱ウイルス）、レオウイルス科（例えば、レオウイルス、オルビウイルスおよびロタウイルス）、ボルナウイルス科、ヘパドナウイルス科（例えば、Ｂ型肝炎ウイルス）、パルボウイルス科（例えば、パルボウイルス）、パポバウイルス科（パピローマウイルス、ポリオーマウイルス）、アデノウイルス科（大部分のアデノウイルス）、ヘルペスウイルス科（１型および２型単純疱疹ウイルス（ＨＳＶ）、水疱瘡ウイルス、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヘルペスウイルス）、ポックスウイルス科（天然痘ウイルス、ワクシニアウイルス、ポックスウイルス）、およびイリドウイルス科（例えば、アフリカ豚コレラウイルス）、ならびに未分類のウイルス（例えば、デルタ型肝炎（Ｂ型肝炎ウイルスの欠損性サテライトと考えられる）、Ｃ型肝炎の病原体、ノーウォークおよび関連ウイルス、アストロウイルス）が含まれる。
【０１３７】
真菌は、そのごく一部だけが脊椎哺乳類に感染症を起こす真核生物である。真菌は真核生物であるので、大きさ、構造上の組織、ライフサイクルおよび増殖機構が原核性細菌と相当に異なっている。真菌は、形態的特徴、生殖方式および培養特性に基づいて一般に分類される。真菌は、真菌抗原の吸入後の呼吸器アレルギー、毒キノコが産生するアマニタ・ファロイデス毒素およびファロトキシン、アスペルギルス種が産生するアフラトキシンなどの有毒物質の摂取による真菌中毒など、各種の疾患を対象に起こす恐れがあるが、全ての真菌が感染症を起こすわけではない。
【０１３８】
感染性真菌は、全身性または表在性感染症を起こし得る。原発性全身性感染症は、正常な健常対象に起こり得るものであり、日和見感染症は、免疫障害を有する対象に最も頻繁に見出される。原発性全身性感染症を起こす最も一般的な真菌体には、ブラストミセス属、コクシジオイデス属、ヒストプラズマ属などが挙げられる。免疫障害または免疫抑制対象に日和見感染症を起こす一般的な真菌には、それだけに限らないが、カンジダ・アルビカンス、クリプトコッカス・ネオフォルマンス、および多種のアスペルギルス種などが挙げられる。全身性真菌感染症は、内臓の侵襲的感染症である。その生物は、肺、胃腸管または静脈カテーテルを介して普通、体内に侵入する。こうした種類の感染症は、原発性病原性真菌または日和見性真菌によって起こり得る。
【０１３９】
表在性真菌感染症は、内部組織に侵入することのない、外表面上での真菌の増殖を伴う。通常の表在性真菌感染症には、皮膚、毛髪または爪が関わる皮膚真菌感染症が含まれる。
【０１４０】
真菌感染に関わる疾患には、アスペルギルス症、ブラストミセス症、カンジダ症、クロモブラストミコーシス、コクシジオイデス症、クリプトコッカス症、眼の真菌感染症、毛髪、爪および皮膚の真菌感染症、ヒストプラズマ症、ロボ真菌症、足菌腫、耳真菌症、パラコクシジオイデス症、播種性ペニシリウム・マルネフェイ、フェオハイフォ真菌症、リノスポリジウム症、スポロトリクム症、接合菌症などが挙げられる。
【０１４１】
真菌には酵母およびカビが含まれる。真菌の例には、限定することなく、アスペギルス・フミガツス、ブラストミセス・デルマチチジス、カンジダ・アルビカンスを含めたカンジダ種、コクシジオイデス・イミティス、クリプトコッカス・ネオフォルマンス、ヒストプラズマ・カプスラーツム、ニューモシスティス・カリニ、リゾムコール種、クモノスカビ種などが挙げられる。
【０１４２】
寄生虫は、生存するために他の生物に依存し、したがってライフサイクルを継続するために、別の生物に侵入または感染しなければならない生物である。感染された生物、即ち宿主は、寄生虫に栄養分、生息域の両方を与える。寄生虫という用語は、最も広い意味では全ての感染体（即ち、細菌、ウイルス、真菌、原虫および蠕虫）を包含するが、一般的に言えば、この用語は、原虫、蠕虫および外部寄生節足動物（例えば、ダニ（ｔｉｃｋ、ｍｉｔｅ）など）だけを指すために使用される。原虫は、細胞内、細胞外のいずれでも、特に血中、消化管内、または組織の細胞外マトリックス内で複製できる単細胞生物である。蠕虫は、ほぼ常時細胞外にいる（例外は旋毛虫種である）多細胞生物である。蠕虫は、通常、複製するために、一次宿主から排出され、二次宿主中に伝染することが必要である。前記のこれら部類とは対照的に、外部寄生節足動物は、宿主生体の外表面と寄生関係を形成する。
【０１４３】
寄生虫には、細胞内寄生虫および偏性細胞内寄生虫が含まれる。寄生虫の例には、それだけに限らないが、熱帯熱マラリア原虫、卵形マラリア原虫、四日熱マラリア原虫、三日熱マラリア原虫、プラスモジウム・ノウレシ、バベシア・ミクロティ、バベシア・ディヴェルゲンス、クルーズ・トリパノソーマ、トキソプラスマ（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、旋毛虫（Ｔｒｉｃｈｉｎｅｌｌａ  ｓｐｉｒａｌｉｓ）、森林型熱帯リーシュマニア、ドノバン・リーシュマニア、ブラジル・リーシュマニア、熱帯リーシュマニア、ガンビア・トリパノソーマ、ローデシア・トリパノソーマ、マンソン住血吸虫などが挙げられる。
【０１４４】
他の感染性生物（即ち、原生生物）には、熱帯熱マラリア原虫、四日熱マラリア原虫、卵形マラリア原虫、三日熱マラリア原虫などのプラスモジウム種、およびトキソプラスマが含まれる。血液感染性および／または組織性寄生虫には、プラスモジウム種、バベシア・ミクロティ、バベシア・ディヴェルゲンス、トラコーマ・クラミジア、熱帯リーシュマニア、リーシュマニア種、ブラジル・リーシュマニア、ドノバン・リーシュマニア、ガンビア・トリパノソーマおよびローデシア・トリパノソーマ（アフリカ眠り病）、クルーズ・トリパノソーマ（シャーガス病）、トキソプラスマなどが挙げられる。
【０１４５】
他の医学関連微生物は、文献中に広範に記載されてきており、例えば、その内容全体が参照により本明細書に組み込まれるＣ．Ｇ．Ａ  Ｔｈｏｍａｓ，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，Ｂａｉｌｌｉｅｒｅ  Ｔｉｎｄａｌｌ，Ｇｒｅａｔ  Ｂｒｉｔａｉｎ  １９８３を参照されたい。
【０１４６】
癌
一態様では、本発明は、癌を有する対象を治療する方法を提供する。
【０１４７】
癌を有する対象は、検出可能な癌細胞を有する対象である。その癌は、悪性癌の場合も、非悪性癌の場合もある。本明細書で使用する場合の「癌」とは、体内の器官および系の正常な機能を妨害する、細胞の制御不能な増殖を指す。発生部位から移動し、重要な器官に播種する癌は、罹患器官の機能低下により最終的に対象を死なせることができる。白血病などの造血器の癌は、対象における正常な造血区画を圧倒し、それにより造血不全（貧血、血小板減少症および好中球減少症の形で）を起こし、最終的に死をもたらすことができる。
【０１４８】
転移部は、原発腫瘍から他の身体部分への癌細胞の播種で生じる、原発腫瘍部位とは異なる癌細胞領域である。原発腫瘍塊の診断時に、対象は、転移部の存在についてモニターを受けることもある。転移部は、特定の症状のモニター以外に、磁気共鳴映像（ＭＲＩ）スキャン、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャン、血液・血小板計数、肝機能試験、胸部Ｘ線、および骨スキャンの単独使用または併用により、最も多く検出される。
【０１４９】
癌には、それだけに限らないが、基底細胞癌、胆管癌、膀胱癌、骨癌、脳・中枢神経系（ＣＮＳ）癌、乳癌、子宮頚癌、絨毛癌、結腸・直腸癌、結合組織癌、消化器系癌、子宮内膜癌、食道癌、眼の癌、頭部・頚部癌、上皮内腫瘍、腎癌、喉頭癌、白血病、肝癌、肺癌（例えば、小細胞および非小細胞）、ホジキンおよび非ホジキンリンパ腫を含むリンパ腫、メラノーマ、骨髄腫、神経芽細胞腫、口腔癌（例えば、口唇、舌、口内、咽頭）、卵巣癌、膵癌、前立腺癌、網膜芽細胞腫、横紋筋肉腫、直腸癌、呼吸器系癌、肉腫、皮膚癌、胃癌、睾丸癌、甲状腺癌、子宮癌、泌尿器系癌、ならびに他の癌腫、腺癌、および肉腫が挙げられる。
【０１５０】
自己免疫病状
先天性免疫応答またはＴｈ１様免疫応答を伴う病状には、炎症、急性および慢性同種移植片拒絶、移植片対宿主病（ＧｖＨＤ）、ある種の自己免疫疾患、敗血症などが挙げられる。本発明は、本発明により実現できるＴＬＲシグナル伝達の選択的抑制から見て、このような病状の治療に使用することができる。
【０１５１】
自己免疫疾患は、抗体媒介性、Ｔ細胞媒介性、または抗体媒介性とＴ細胞媒介性との組合せとして、一般に分類することができる。本発明のアダプターＯＤＮとＴＬＲリガンドとの組合せは、抗体媒介性またはＴ細胞媒介性免疫が関与し、インスリン依存性（Ｉ型）糖尿病、関節リウマチ、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、および炎症性腸疾患（即ち、クローン病および潰瘍性大腸炎）を含む、多種の自己免疫症の治療に有用であると考えられている。こうした自己免疫疾患に対する動物モデルは、入手可能であり、こうした疾患における本発明の組合せの効力を評価するために有用である。その他の自己免疫疾患には、制限されることなく、円形脱毛症、後天性血友病、強直性脊椎炎、抗リン脂質症候群、自己免疫性肝炎、自己免疫性溶血性貧血、ベーチェット症候群、心筋症、セリアック病皮膚炎、慢性疲労免疫機能障害症候群（ＣＦＩＤＳ）、慢性炎症性脱髄性多発神経障害、チャーグ−ストラウス症候群、瘢痕性類天疱瘡、ＣＲＥＳＴ症候群、寒冷凝集素症、円板状狼瘡、本態性混合型クリオグロブリン血症、線維筋痛、線維筋炎、ギラン−バレー症候群、特発性肺線維症、特発性血小板減少性紫斑病、ＩｇＡネフロパシー、若年性関節炎、扁平苔癬、重症筋無力症、結節性多発性動脈炎、多発性軟骨炎、多内分泌腺症候群、皮膚筋炎、原発性無ガンマグロブリン血症、原発性胆汁性肝硬変、乾癬、レイノー現象、ライター症候群、サルコイドーシス、スティフマン症候群、タカヤス関節炎、側頭動脈炎／巨細胞性動脈炎、ブドウ膜炎、血管炎および白斑が挙げられる。
【０１５２】
数種の自己免疫疾患では、自己抗原に対する抗体がしばしば認められる。例えば全身性エリテマトーデスについては、１本鎖および２本鎖のＤＮＡまたはＲＮＡに対して、自己抗体が記載されてきた。Ｖａｌｌｉｎ  Ｈ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６３：６３０６−１３；Ｈｏｅｔ  ＲＭ  ｅｔ  ａｌ．（１９９９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６３：３３０４−１２；ｖｅｎ  Ｖｅｎｒｏｏｉｊ  （１９９０）Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ８６：２１５４−６０。自己免疫患者の血清中に見出される自己抗体の量は、非常に多くの場合、疾患の重度と相関することが判明している。例えばヒトＳＬＥで生じる自己抗体のパターンから、ＲＮＡ含有またはＤＮＡ含有複合体などの完全状態の高分子粒子は、それ自体免疫原性を示し得るため、抗核酸抗体が生じ得ることが示唆される。Ｌｏｔｚ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｒｅｐ  １６：１２７；Ｍｏｈａｎ  Ｃ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １７７：１３６７−８１。例えばアポトーシス細胞から放出されるこのようなＤＮＡもしくはＲＮＡ、または自己免疫患者の血清中に存在するＤＮＡ含有もしくはＲＮＡ含有微生物は、自己免疫疾患を助長する炎症の原因となり得る。Ｆａｔｅｎｅｊａｄ  Ｓ（１９９４）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５２：５５２３−３１；Ｍａｌｍｅｇｒｉｍ  ＫＣ  ｅｔ  ａｌ．（２００２）Ｉｓｒ  Ｍｅｄ  Ａｓｓｏｃ  Ｊ  ４：７０６−１２；Ｎｅｗｋｉｒｋ  ＭＭ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  ３：２５３−８。実際に、自己免疫疾患の発現を助長すると考えられる、ＩＦＮ−α分泌によって支配された効率的免疫応答を誘発するＳＬＥ血清から、ＣｐＧ含有配列を同定することができた。Ｍａｇｎｕｓｓｏｎ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｓｃａｎｄ  Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  ５４：５４３−５０；Ｒｏｎｎｂｌｏｍ  Ｌ  ｅｔ  ａｌ．（２００１）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １９４：Ｆ５９−６３。その上、抗ＲＮＡ抗体に対するエピトープを同定することができており、それはＧ、Ｕ豊富な配列から構成される。Ｔｓａｉ  ＤＥ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ８９：８８６４−８；Ｔｓａｉ  ＤＥ  ｅｔ  ａｌ．（１９９３）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５０：１１３７−４５。
【０１５３】
アレルギー
「アレルギー状態」または「アレルギー」とは、ある物質（アレルゲン）に対する後天性過敏症を指す。「アレルギー状態を有する対象」とは、アレルゲンに応答してアレルギー反応を現在経験しているところ、または以前に経験した対象を指すものとする。アレルギー状態には、それだけに限らないが、湿疹、アレルギー性の鼻炎またはコリーザ、枯草熱、アレルギー性結膜炎、気管支喘息、じんま疹（蕁麻疹）および食物アレルギー、アトピー性皮膚炎を含む他のアトピー状態、アナフィラキシー、薬物アレルギー、血管浮腫などが挙げられる。
【０１５４】
アレルギーは、通常、アレルゲンに対する特定クラスの免疫グロブリン、ＩｇＥ由来の抗体の産生に付随する発作性病状である。ありふれた空気アレルゲンに対するＩｇＥ媒介応答の発現は、喘息の発現への傾向を示す因子でもある。アレルゲンが、好塩基球（血中を循環している）または肥満細胞（固形組織全体に分散している）の表面上のＩｇＥ  Ｆｃ受容体（ＦｃεＲ）に結合した特定のＩｇＥに接触した場合、その細胞が活性化され、ヒスタミン、セロトニン、脂質メディエーターなどのメディエーターの産生および放出を起こす。
【０１５５】
アレルギー反応は、ＩｇＥ型の組織感作性免疫グロブリンが、外来アレルゲンと反応する際に起こる。該ＩｇＥ抗体は、肥満細胞および／または好塩基球に結合しており、これらの特殊細胞は、抗体分子の末端に橋架けしているアレルゲンにより刺激を受けて促されると、アレルギー反応の化学メディエーター（血管作用性アミン）を放出する。ヒスタミン、血小板活性化因子、アラキドン酸代謝産物、およびセロトニンは、人間におけるアレルギー反応の最も良く知られたメディエーターに入る。ヒスタミンおよび他の血管作用性アミンは、肥満細胞および好塩基球の中に普通は貯蔵されている。肥満細胞は動物組織全体に分散しており、好塩基球は血管系内を循環している。これらの細胞は、ＩｇＥ結合を伴う特殊なその一連の事象が起こって、ヒスタミンの放出を誘発することがない限り、細胞内でヒスタミンを製造し、貯蔵する。
【０１５６】
アレルギー反応の症状は、ＩｇＥがアレルゲンと反応する体内の部位に応じて変化する。反応が気道上皮に沿って起これば、その症状は、一般にくしゃみ、咳および喘息の反応である。その相互作用が、食物アレルギーの場合のように消化管内で起これば、腹痛および下痢が一般的である。例えば、蜂刺されやアレルギー対象へのペニシリン投与後の全身性アレルギー反応は、重症となり、しばしば生命を危うくする恐れがある。
【０１５７】
アレルギーは、少なくとも部分的にはＴｈ２サイトカインのＩＬ−４およびＩＬ−５を特徴とするＴｈ２型免疫応答、ならびに抗体イソタイプのＩｇＥへの切換えに付随する。Ｔｈ１およびＴｈ２免疫応答は、相互に逆行調節的であるため、免疫応答がＴｈ１型免疫応答へ傾くと、アレルギーを含めたＴｈ２型免疫応答を予防または改善することができる。
【０１５８】
喘息
本明細書で使用する場合の「喘息」とは、気道の炎症および狭窄、ならびに吸入した作用剤に対する気道反応性の増加を特徴とする、呼吸器系の障害を指す。喘息は、必ずというわけではないが、しばしばアトピー性またはアレルギー性状態に付随する。喘息の症状には、気道閉塞から生じる喘鳴、無呼吸、胸苦しさおよび咳の再発性発作が挙げられる。喘息に伴う気道炎症は、気道上皮の露出、基底膜下へのコラーゲン沈着、浮腫、肥満細胞活性化、好中球、好酸球およびリンパ球を含めた炎症性細胞浸潤などの幾種もの生理的変化の観察によって、検出することができる。気道炎症の結果、喘息患者は、気道過応答、気流通過制限、呼吸器障害および疾患慢性化をたびたび経験する。気流通過制限には、急性気管支収縮、気道浮腫、粘液栓形成、およびしばしば気道閉塞を起こす特徴である気道改造が含まれる。幾つかの喘息症例では、基底膜下線維症が起こり、肺機能の持続性異常を起こす場合がある。
【０１５９】
ここ数年に亘る研究から、喘息は、炎症細胞、メディエーター、ならびに気道中に常在する他の細胞および組織の間の複雑な相互作用から生じるらしいことが判明した。肥満細胞、好酸球、上皮細胞、マクロファージおよび活性化Ｔ細胞は全て、喘息に伴う炎症過程において重要な役割を演じている。Ｄｊｕｋａｎｏｖｉｃ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ａｍ  Ｒｅｖ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｄｉｓ  １４２：４３４−４５７。これらの細胞は、局所組織に直接または間接に作用できる、予備形成され、また新たに合成されたメディエーターの分泌を介して、気道機能に影響することができると考えられている。Ｔリンパ球の亜集団（Ｔｈ２）は、選択的なサイトカインの放出および疾患慢性化の確立により、気道中のアレルギー性炎症を調節する上で重要な役割を演じていることも認識された。Ｒｏｂｉｎｓｏｎ  ＤＳ  ｅｔ  ａｌ．（１９９２）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３２６：２９８−３０４。
【０１６０】
喘息は、発現の様々な段階で生じる複合的障害であり、症状の程度に基づいて急性、亜急性または慢性と分類することができる。急性炎症反応は、気道内への細胞の初期動員に伴う。亜急性炎症反応は、細胞の動員ならびに常在細胞の活性化を伴い、より持続的な炎症パターンを起こす。慢性炎症反応は、気道内の恒久的異常を起こしかねない、細胞損傷の持続的レベルおよび進行中の修復過程を特徴とする。
【０１６１】
「喘息を有する対象」とは、気道の炎症および狭窄、ならびに吸入した作用剤に対する気道反応性の増加を特徴とする、呼吸器系の障害を有する対象である。喘息の開始に関連する要因には、それだけに限らないが、アレルゲン、低温、運動、ウイルス感染およびＳＯ２が挙げられる。
【０１６２】
本明細書に記載するように、喘息は、少なくとも部分的にはＴｈ２サイトカインのＩＬ−４およびＩＬ−５を特徴とするＴｈ２型免疫応答、ならびに抗体イソタイプのＩｇＥへの切換えに付随し得る。Ｔｈ１およびＴｈ２免疫応答は、相互に逆行調節的であるため、免疫応答がＴｈ１型免疫応答へ傾くと、アレルギーを含めたＴｈ２型免疫応答を予防または改善することができる。
【０１６３】
本発明のＴＬＲ７／８リガンドとアダプターオリゴヌクレオチドとの組合せは、樹状細胞の生存、分化、活性化および成熟を改善するためにも有用である。
【０１６４】
ある種の態様では、本発明は、エピトープ拡散（ｅｐｉｔｏｐｅ  ｓｐｒｅａｄｉｎｇ）を強化する方法を提供する。本明細書で使用する場合の「エピトープ拡散」とは、自己または外来のタンパク質に対する、初期の焦点性の支配的なエピトープ特異的免疫応答から、そのタンパク質（分子内拡散）上または他のタンパク質（分子間拡散）上の非支配的および／または潜在性エピトープまでのエピトープ特異性の多様化を指す。エピトープ拡散は、多重のエピトープ特異的免疫応答を生じる。
【０１６５】
抗微生物剤
ＴＬＲ７／８リガンドとアダプターオリゴヌクレオチドとの組合せは、１種または複数の抗微生物剤と共に使用することができる。抗微生物剤またはそのような薬剤には、それだけに限らないが、抗細菌剤、抗ウイルス剤、抗真菌剤および抗寄生虫剤が挙げられる。「抗感染症剤」、「抗生物質」、「抗細菌剤」、「抗ウイルス剤」、「抗真菌剤」、「抗寄生虫剤」、「殺寄生虫剤」などの語句は、当業者には十分に確立された意味を有し、標準的な医学教科書に定義されている。手短に言えば、抗細菌剤は、細菌を殺滅または阻害し、抗生物質、ならびに同様な機能を有する他の合成または天然の化合物を包含する。抗ウイルス剤は、天然源から単離または合成でき、ウイルスの殺滅または阻害に有用である。抗真菌剤は、表在性真菌感染症、ならびに日和見性および原発性の全身性真菌感染症の治療に使用される。抗寄生虫剤は、寄生虫を殺滅または阻害する。多くの抗生物質は、微生物などの細胞により、二次代謝産物として産生される低分子量分子である。一般に、抗生物質は、当該微生物に特有であり、宿主細胞には存在しない１種または複数の機能または構造を妨害する。
【０１６６】
抗感染症治療薬に伴う問題の１つは、抗感染症剤で治療される宿主中に発生する副作用である。例えば、多くの抗感染症剤は、広範囲の微生物を殺滅または阻害することができ、特定型の種に特異的ではない。こうした型の抗感染症剤で治療すると、感染性微生物だけでなく、宿主中で生きている正常な微生物叢も死滅させる。該微生物叢は、感染性病原体と競合し、それに対する障壁として機能しているので、この微生物叢を失うと、合併症を起こし、宿主を他の病原体による感染に罹り易くする恐れがある。他の副作用が、非微生物性宿主細胞または組織に対するこうした化学物質の特異的または非特異的作用の結果として、生じる恐れもある。
【０１６７】
抗感染症剤の広範な使用に伴う別の問題は、微生物の抗生物質耐性株の発現である。バンコマイシン耐性腸球菌、ペニシリン耐性肺炎球菌、多剤耐性黄色ブドウ球菌および多剤耐性結核菌株が、既に発現しており、主要な臨床問題となりつつある。抗感染症剤の広範な使用は、多くの抗生物質耐性細菌株を恐らく生み出すことになろう。その結果、こうした微生物に対処するために、新たな抗感染症戦略が必要となろう。
【０１６８】
広範囲の細菌の殺滅または阻害に有効な抗細菌性抗生物質は、広域抗生物質と呼称される。他の型の抗細菌性抗生物質は、グラム陽性群またはグラム陰性群の細菌に対して主に有効である。こうした型の抗生物質は、狭域抗生物質と呼称される。単一種の微生物または疾患に対して有効であり、他種の細菌には無効な他の抗生物質は、限定域抗生物質と呼称される。
【０１６９】
抗細菌剤は、主たる作用様式に基づいて分類されることがある。一般に、抗細菌剤は、細胞壁合成阻害剤、細胞膜阻害剤、タンパク質合成阻害剤、核酸の合成または機能阻害剤、および競合阻害剤である。細胞壁合成阻害剤は、細胞壁合成の過程、一般には細菌ペプチドグリカンの合成における段階を阻害する。細胞壁合成阻害剤には、β−ラクタム抗生物質、天然ペニシリン、半合成ペニシリン、アンピシリン、クラブラン酸、セファロスポリン、バシトラシンなどが挙げられる。
【０１７０】
β−ラクタムは、ペプチドグリカン合成の最終段階を阻害する、四員β−ラクタム環を含有する抗生物質である。β−ラクタム抗生物質は、合成することもでき、天然の場合もある。ペニシリウムが産生するβ−ラクタム抗生物質は、ペニシリンＧやペニシリンＶなどの天然ペニシリンである。こうしたものは、ペニシリウム・クリソゲヌムの発酵により産生される。該天然ペニシリンは、狭域活性を有し、連鎖球菌、淋菌およびブドウ球菌に対して一般に有効である。やはりグラム陽性細菌に対して有効な他種の天然ペニシリンには、ペニシリンＦ、Ｘ、ＫおよびＯが含まれる。
【０１７１】
半合成ペニシリンは、一般に、カビが産生する当該分子６−アミノペニシラン酸の修飾体である。６−アミノペニシラン酸は、天然ペニシリンより広域の活性または他の多様な有利な性質を有するペニシリンを産生する、側鎖の付加によって修飾することができる。数種の半合成ペニシリンは、グラム陽性およびグラム陰性細菌に対して広域活性を有するが、ペニシリナーゼにより失活する。こうした半合成ペニシリンには、アンピシリン、カルベニシリン、オキサシリン、アズロシリン、メズロシリン、ピペラシリンなどが挙げられる。他種の半合成ペニシリンは、グラム陽性細菌に対してより狭域な活性を有するが、ペニシリナーゼにより失活しないような性質を発現した。こうしたものには、例えば、メチシリン、ジクロキサシリン、ナフシリンなどが挙げられる。広域半合成ペニシリンの幾つかは、クラブラン酸、スルバクタムなどのβ−ラクタマーゼ阻害剤と併用することができる。β−ラクタマーゼ阻害剤は、抗微生物作用を有していないが、ペニシリナーゼを阻害するように機能し、したがって半合成ペニシリンを分解から保護する。
【０１７２】
別種のβ−ラクタム抗生物質は、あのセファロスポリンである。この類は、細菌β−ラクタマーゼによる分解に感受性があり、したがって必ずしも単独で有効ではない。しかし、セファロスポリンはペニシリナーゼには耐性を示す。この類は、多様なグラム陽性およびグラム陰性細菌に対して有効である。セファロスポリンには、それだけに限らないが、セファロチン、セファピリン、セファレキシン、セファマンドール、セファクロール、セファゾリン、セフロキシキン、セフォキシチン、セフォタキシム、セフスロジン、セフェタメット、セフィキシム、セフトリアキソン、セフォペラゾン、セフタジジン、モキサラクタムなどが挙げられる。
【０１７３】
バシトラシンは、膜外部へとムロペプチドサブユニットを送出する分子からの、該サブユニットまたはペプチドグリカンの放出を抑制することによって、細胞壁合成を阻害する別部類の抗生物質である。バシトラシンはグラム陽性細菌に対して有効であるが、毒性が高いために、その使用は一般に局所投与に限られる。
【０１７４】
カルバペネムは、細胞壁合成を阻害することができる別の広域β−ラクタム抗生物質である。カルバペネムの例には、それだけに限らないが、イミペネムが含まれる。モノバクタムも、広域β−ラクタム抗生物質であり、ユーズトレオナムを包含する。ストレプトミセスが産生する抗生物質のバンコマイシンも、細胞膜合成の阻害によってグラム陽性細菌に対して有効である。
【０１７５】
別部類の抗細菌剤は、細胞膜阻害剤の抗細菌剤である。こうした化合物は、細菌膜の構造を解体し、またはその機能を阻害する。細胞膜阻害剤の抗細菌剤に伴う一問題は、細菌膜および真核細胞膜のリン脂質が類似しているため、細菌だけでなく、真核細胞にも作用を及ぼし得ることである。したがって、こうした化合物は、該化合物を全身的に使用し、局所投与に対する高用量の使用を防止することを可能にする程十分に、特異的であることは稀である。
【０１７６】
臨床的に有用な一細胞膜阻害剤は、ポリミキシンである。ポリミキシンは、膜リン脂質に結合することにより膜機能を妨害する。ポリミキシンは、主にグラム陰性細菌に対して有効であり、一般に、重度のシュードモナス感染症、または毒性のより低い抗生物質に対して耐性を示すシュードモナス感染症に使用される。この化合物の全身投与に付随する重度の副作用は、腎臓および他の臓器に対する損傷を包含する。
【０１７７】
他の細胞膜阻害剤には、全身性真菌感染症およびカンジダ酵母菌感染症の治療に主に使用する抗真菌剤である、アンホテリシンＢおよびナイスタチンが含まれる。イミダゾールは、細胞膜阻害剤である別部類の抗生物質である。イミダゾールは、抗細菌剤ならびに抗真菌剤として使用され、例えば、酵母菌感染症、皮膚糸状菌感染症、および全身性真菌感染症の治療に使用される。イミダゾールには、それだけに限らないが、クロトリマゾール、ミコナゾール、ケトコナゾール、イトラコナゾール、フルコナゾールなどが挙げられる。
【０１７８】
多くの抗細菌剤は、タンパク質合成阻害剤である。こうした化合物は、細菌の構造タンパク質および酵素の合成を防止し、したがって細菌細胞の増殖もしくは機能の阻害、または細胞死を起こす。一般に、こうした化合物は転写または翻訳の過程を妨害する。転写を阻止する抗細菌剤には、それだけに限らないが、リファンピン、エタンブトールなどが挙げられる。ＲＮＡポリメラーゼ酵素を阻害するリファンピンは、広域活性を有し、グラム陽性およびグラム陰性細菌、ならびに結核菌に対して有効である。エタンブトールは結核菌に対して有効である。
【０１７９】
翻訳を阻止する抗細菌剤は、細菌リボソームを妨害することにより、ｍＲＮＡのタンパク質への翻訳を防止する。一般に、この部類の化合物には、それだけに限らないが、テトラサイクリン、クロラムフェニコール、マクロライド（例えば、エリスロマイシン）、アミノグリコシド（例えば、ストレプトマイシン）などが挙げられる。
【０１８０】
アミノグリコシドは、ストレプトミセス細菌により産生され、例えば、ストレプトマイシン、カナマイシン、トブラマイシン、アミカシン、ゲンタマイシンなどの抗生物質の一部類である。アミノグリコシドは、グラム陽性およびグラム陰性細菌を原因とする広範囲の細菌感染症に対して使用されてきた。ストレプトマイシンは、結核治療における一次薬として広範に使用されてきた。ゲンタマイシンは、シュードモナス感染症を含め、グラム陽性およびグラム陰性細菌の多くの菌株に対して、特にトブラマイシンと組み合わせて使用される。カナマイシンは、ペニシリン耐性ブドウ球菌を含め、多くのグラム陽性細菌に対して使用される。臨床的にその使用を制限してきたアミノグリコシドの一副作用は、効力に必須の用量で長期間使用すると、腎機能を傷害し、聴覚神経の損傷を起こして難聴になることが示されたことである。
【０１８１】
別種の翻訳阻害抗細菌剤は、テトラサイクリンである。テトラサイクリンは、広域であり、多様なグラム陽性およびグラム陰性細菌に対して有効な抗生物質の一部類である。テトラサイクリン類の例には、テトラサイクリン、ミノサイクリン、ドキシサイクリン、クロルテトラサイクリンなどが挙げられる。この類は、多種の細菌の処置にとって重要であるが、ライム病の治療に特に重要である。毒性が低く、直接的副作用が僅かなため、テトラサイクリン類は、医療界により乱用され、誤用されてきたため、問題となった。例えば、その乱用で広範な耐性の発現が生じてきた。
【０１８２】
マクロライドなどの抗細菌剤は、５０Ｓリボソームサブユニットに可逆的に結合し、ペプチジルトランスフェラーゼによるタンパク質の伸長を阻害する、もしくは細菌リボソームからの空きｔＲＮＡの放出を防止する、またはその双方を行う。こうした化合物には、エリスロマイシン、ロキシスロマイシン、クラリスロマイシン、オレアンドロマイシン、アジスロマイシンなどが挙げられる。エリスロマイシンは、大部分のグラム陽性細菌、ナイセリア、レジオネラおよびヘモフィルスに対して活性であるが、腸内細菌科に対しては不活性である。タンパク質合成中のペプチド結合形成を阻止するリンコマイシンおよびクリンダマイシンは、グラム陽性細菌に対して使用される。
【０１８３】
別種の翻訳阻害剤はクロラムフェニコールである。クロラムフェニコールは、７０Ｓリボソームに結合して細菌酵素のペプチジルトランスフェラーゼを阻害し、それによりタンパク質合成中のポリペプチド鎖の成長を防止する。クロラムフェニコールに伴う重度の一副作用は、再生不良性貧血である。再生不良性貧血は、細菌の治療に有効なクロラムフェニコールの用量で小さな比率（１／５００００）の患者に発現する。かつてはよく処方された抗生物質であるクロラムフェニコールは、再生不良性貧血に因る死亡例の結果、現在ではめったに使用されない。その有効性のために、生命にかかわる状況では今なお使用される（例えば、腸チフス）。
【０１８４】
幾つかの抗細菌剤は、核酸の合成または機能を混乱させる、例えば、そのメッセージを読み取ることができないようにＤＮＡまたはＲＮＡに結合する。こうしたものには、それだけに限らないが、共に合成薬品のキノロンおよびコトリモキサゾール、ならびに天然または半合成薬品のリファマイシンが含まれる。キノロンは、細菌が環状ＤＮＡの合成に必要とする酵素であるＤＮＡジャイレースの阻害によって、細菌のＤＮＡ複製を阻止する。そうしたものは広域であり、その例には、ノルフロキサシン、シプロフロキサシン、エノキサシン、ナリジクス酸、テマフロキサシンなどが挙げられる。ナリジクス酸は、ＤＮＡ複製に必須であり、スーパーコイルを弛緩させ、再形成させるＤＮＡジャイレース酵素（トポイソメラーゼ）に結合し、ＤＮＡジャイレース活性を阻害する抗細菌剤である。ナリジクス酸の主用途は、尿管感染症（ＵＴＩ）の共通原因である大腸菌、エンテロバクター・アエロゲネス、Ｋ．ニューモニエ、プロテウス種などのグラム陰性細菌数種に対して有効であるため、下部ＵＴＩの治療である。コトリモキサゾールは、サルファメトキサゾールおよびトリメトプリムの組合せであり、ＤＮＡヌクレオチドの作製に必要な葉酸の細菌合成を阻止する。リファンピシンは、グラム陽性細菌（結核菌、および髄膜炎菌が起こす髄膜炎）および一部のグラム陰性細菌に対して活性なリファマイシン誘導体である。リファンピシンは、当該ポリメラーゼのβサブユニットに結合し、該ポリメラーゼの活性化に必要な第１ヌクレオチドの付加を阻止し、それによりｍＲＮＡ合成を阻止する。
【０１８５】
別部類の抗細菌剤は、細菌酵素の競合的阻害剤として機能する化合物である。競合的阻害剤は、殆ど全て細菌増殖因子に構造的に類似しており、結合を求めて競合するが、細胞内で代謝機能を行使することはない。こうした化合物には、スルホンアミド、および抗細菌活性が一層増大し、広域化した化学修飾型スルファニルアミドが含まれる。スルホンアミド（例えば、ガントリシンおよびトリメトプリム）は、肺炎連鎖球菌、ベータ溶血性連鎖球菌および大腸菌の処置に有用であり、大腸菌による非複雑性ＵＴＩの治療、および髄膜炎菌性髄膜炎の治療に使用されてきた。
【０１８６】
抗ウイルス剤は、ウイルスによる細胞への感染、または細胞内でのウイルスの複製を予防する化合物である。ウイルス複製の過程は、非特異的抗ウイルス剤が宿主に対ししばしば有毒になると思われるほど、宿主細胞内でのＤＮＡ複製に密接に関係しているため、抗ウイルス薬は、抗細菌薬よりはるかに数少ない。ウイルス感染の過程には、抗ウイルス剤が阻止または阻害することのできる段階が幾つかある。これらの段階には、ウイルスの宿主細胞への結合（免疫グロブリンまたは結合性ペプチド）、ウイルスの脱殻（例えば、アマンタジン）、ウイルスｍＲＮＡの合成または翻訳（例えば、インターフェロン）、ウイルスＲＮＡまたはＤＮＡの複製（例えば、ヌクレオシド類縁体）、新たなウイルスタンパク質の成熟（例えば、プロテアーゼ阻害剤）、ならびにウイルスの出芽および放出が含まれる。
【０１８７】
別の種類の抗ウイルス剤は、ヌクレオシド類縁体である。ヌクレオシド類縁体は、ヌクレオシドに類似しているが、不完全または異常なデオキシリボース基またはリボース基を有する合成化合物である。ヌクレオシド類縁体が細胞内に一旦入ると、リン酸化され、三リン酸型を生成し、それが、ウイルスのＤＮＡまたはＲＮＡ中に組み込まれるために、正常なヌクレオチドと競合する。ヌクレオシド類縁体の三リン酸型が、成長中の核酸連鎖に一旦組み込まれると、ウイルスポリメラーゼと不可逆結合を起こし、したがって連鎖終結を起こす。ヌクレオシド類縁体には、それだけに限らないが、アシクロビル（単純疱疹ウイルスおよび水疱瘡ウイルスの処置に使用される）、ガンシクロビル（サイトメガロウイルスの処置に有用）、イドクスウリジン、リバビリン（呼吸器合胞体ウイルスの処置に有用）、ジデオキシイノシン、ジデオキシシトシン、ジドブジン（アジドチミジン）などが挙げられる。
【０１８８】
別部類の抗ウイルス剤には、インターフェロンなどのサイトカインが含まれる。インターフェロンは、免疫細胞だけでなくウイルス感染細胞によっても分泌されるサイトカインである。インターフェロンは、感染細胞に隣接する細胞上の特異的受容体に結合し、ウイルスによる感染からそれ自体を保護する細胞の変化を起こすことにより、機能する。αおよびβ−インターフェロンは、感染細胞の表面上にクラスＩおよびクラスＩＩのＭＨＣ分子の発現を誘発し、宿主免疫細胞の認識のために抗原提示量を増加させる。αおよびβ−インターフェロンは、組換え型として入手でき、慢性のＢ型およびＣ型肝炎感染症の治療に使用されてきた。抗ウイルス治療に有効な用量で、インターフェロンは、発熱、倦怠感、体重減少などの重度の副作用を示す。
【０１８９】
免疫グロブリン療法は、ウイルス感染症の予防に使用される。ウイルス感染症に対する免疫グロブリン療法は、抗原特異的というよりむしろ、細胞外ビリオンに結合し、そのビリオンが、ウイルス感染を受け易い細胞に結合し、細胞に進入するのを予防することにより、免疫グロブリン療法が機能するために、細菌感染症とは異なっている。この療法は、抗体が宿主中に存在する期間に対するウイルス感染症の予防に有用である。一般に、２種の免疫グロブリン療法、正常免疫グロブリン療法および超免疫グロブリン療法がある。正常免疫グロブリン療法は、正常血ドナーの血清から調製され、プールされる抗体産物を利用する。このプール産物は、Ａ型肝炎、パルボウイルス、エンテロウイルスなどの広範囲のヒトウイルス（特に、新生児における）に対する低力価の抗体を含有する。超免疫グロブリン療法は、特定のウイルスに対する抗体を高力価で含有する、個人の血清から調製される抗体を利用する。次いで、その抗体を特定のウイルスに対して使用する。超免疫グロブリンの例には、帯状疱疹免疫グロブリン（免疫能の低い児童および新生児における水痘の予防に有用）、ヒト狂犬病免疫グロブリン（狂犬病動物に咬まれた対象のウイルス暴露後の予防に有用）、Ｂ型肝炎免疫グロブリン（特にそのウイルスに暴露された対象における、Ｂ型肝炎ウイルスの予防に有用）、ならびにＲＳＶ免疫グロブリン（呼吸器合胞体ウイルス感染症の治療に有用）が含まれる。
【０１９０】
抗真菌剤は、感染性真菌の処置および予防に有用である。抗真菌剤は、その作用機構により分類されることがある。幾種かの抗真菌剤は、グルコースシンターゼの阻害により細胞壁阻害剤として機能する。こうしたものには、それだけに限らないが、バシウンギン／ＥＣＢなどが挙げられる。他の抗真菌剤は、膜完全性の不安定化により機能する。こうしたものには、それだけに限らないが、クロトリマゾール、セルタコンゾール、フルコナゾール、イトラコナゾール、ケトコナゾール、ミコナゾール、ボリコナコールなどのイミダゾール類、ならびにＦＫ４６３、アンホテリシンＢ、ＢＡＹ３８−９５０２、ＭＫ９９１、プラジミシン、ＵＫ２９２、ブテナフィン、テルビナフィンなどが挙げられる。他の抗真菌剤は、キチンの破壊（例えば、キチナーゼ）または免疫抑制（５０１クリーム）により機能する。
【０１９１】
殺寄生虫剤は、寄生虫を直接死滅させる作用剤である。そのような化合物は、当技術分野で公知であり、一般に市販されている。人間への投与に有用な殺寄生虫剤の例には、それだけに限らないが、アルベンダゾール、アンホテリシンＢ、ベンズニダゾール、ビチオノール、クロロキンＨＣｌ、クロロキンリン酸塩、クリンダマイシン、デヒドロエメチン、ジエチルカルバマジン、ジロキサニドフロエート、エフロルニチン、フラゾリダノン、グルココルチコイド、ハロファントリン、ヨードキノール、イベルメクチン、メベンダゾール、メフロキン、メグルミンアンチモン酸塩、メラルソプロール、メトリフォネート、メトロニダゾール、ニクロサミド、ニフルチモックス、オキサムニキン、パロモマイシン、ペンタミジンイセチオン酸塩、ピペラジン、プラジカンテル、プリマキンリン酸塩、プログアニール、ピランテルパモ酸塩、ピリメタンミンスルホンアミド、ピリメタンミンサルファドキシン、キナクリンＨＣｌ、キニン硫酸塩、キニジングルコン酸塩、スピラマイシン、スチボグルコン酸ナトリウム（グルコン酸ナトリウムアンチモン）、スラミン、テトラサイクリン、ドキシサイクリン、チアベンダゾール、チニダゾール、トリメトプリム−サルファメトキサゾール、トリパルサミドなどが挙げられる。
【０１９２】
抗癌治療
本発明のＴＬＲ７／８リガンドとアダプターオリゴヌクレオチドとの組合せは、抗癌治療と共に使用することができる。
【０１９３】
抗癌治療には、癌用医薬、放射線および外科処置が含まれる。本明細書で使用する場合、「癌用医薬」とは、癌を治療するために対象へ投与される作用剤を指す。癌を治療するための多種の医薬が、本明細書に記載されている。本明細書のために、癌用医薬は、化学療法剤、免疫療法剤、癌ワクチン、ホルモン療法剤、および生物学的応答調節剤として分類される。
【０１９４】
化学療法剤は、メソトレキセート、ビンクリスチン、アドリアマイシン、シスプラチン、無糖クロロエチルニトロソウレア、５−フルオロウラシル、マイトマイシンＣ、ブレオマイシン、ドキソルビシン、ダカルバジン、タキソール、フラジリン、メグラミンＧＬＡ、バルルビシン、カルムステインおよびポリフェルポサン、ＭＭＩ２７０、ＢＡＹ１２−９５６６、ＲＡＳファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ＭＭＰ、ＭＴＡ／ＬＹ２３１５１４、アリムタ、ＬＹ２６４６１８／ロメテキソール、グラモレック、ＣＩ−９９４、ＴＮＰ−４７０、ヒカムチン／トポテカン、ＰＫＣ４１２、バルスポダール／ＰＳＣ８３３、ノバントロン／ミトロキサントロン、メタレット／スラミン、バチマスタット、Ｅ７０７０、ＢＣＨ−４５５６、ＣＳ−６８２、９−ＡＣ、ＡＧ３３４０、ＡＧ３４３３、インセル／ＶＸ−７１０、ＶＸ−８５３、ＺＤ０１０１、ＩＳＩ６４１、ＯＤＮ６９８、ＴＡ２５１６／マルミスタット、ＢＢ２５１６／マルミスタット、ＣＤＰ８４５、Ｄ２１６３、ＰＤ１８３８０５、ＤＸ８９５１ｆ、レモナールＤＰ２２０２、ＦＫ３１７、ピシバニール／ＯＫ−４３２、ＡＤ３２／バルルビシン、メタストロン／ストロンチウム誘導体、テモダール／テモゾロミド、エバセット／リポソーム性ドキソルビシン、ユータキサン／パクリタキセル、タキソール／パクリタキセル、キセロード／カペシタビン、フルツロン／ドキシフルリジン、シクロパックス／経口パクリタキセル、経口タキソイド、ＳＰＵ−０７７／シスプラチン、ＨＭＲ１２７５／フラボピリドール、ＣＰ−３５８（７７４）／ＥＧＦＲ、ＣＰ−６０９（７５４）／ＲＡＳ癌遺伝子阻害剤、ＢＭＳ−１８２７５１／経口白金、ＵＦＴ（テガフール／ウラシル）、エルガミソール／レバミソール、エニルウラシル／７７６Ｃ８５／５ＦＵ増強剤、カンプト／レバミソール、カンプトサール／イリノテカン、ツモデックス／ラリトレキセド、ロイスタチン／クラドリビン、パキセックス／パクリタキセル、ドキシル／リポソーム性ドキソルビシン、カエリックス／リポソーム性ドキソルビシン、フルダラ／フルダラビン、ファルマルビシン／エピルビシン、ＤｅｐｏＣｙｔ、ＺＤ１８３９、ＬＵ７９５５３／ビスナフタリミド、ＬＵ１０３７９３／ドラステイン、カエティックス／リポソーム性ドキソルビシン、ゲムザール／ゲムシタビン、ＺＤ０４７３／アノルメド、ＹＭ１１６、ヨウ素種晶、ＣＤＫ４およびＣＤＫ２阻害剤、ＰＡＲＰ阻害剤、Ｄ４８０９／デキシフォサミド、イフェス／メスネックス／イフォサミド、ブモン／テニポシド、パラプラチン／カルボプラチン、プラチノール／シスプラチン、ベペシド／エトポシド、ＺＤ９３３１、タキソテール／ドセタキセル、グアニンアラビノシドのプロドラッグ、タキサン類縁体、ニトロソウレア、アルキル化剤（メルフェラン、シクロホスファミドなど）、アミノグルテチミド、アスパラギナーゼ、ブスルファン、カルボプラチン、クロロンブシル、シタラビンＨＣｌ、ダクチノマイシン、ダウノルビシンＨＣｌ、エストラムスチンリン酸ナトリウム、エトポシド（ＶＰ１６−２１３）、フロクスウリジン、フルオロウラシル（５−ＦＵ）、フルタミド、ヒドロキシウレア（ヒドロキシカルバミド）、イフォスファミド、インターフェロンα−２ａ、α−２ｂ、酢酸リュープロリド（ＬＨＲＨ放出因子類縁体）、ロムスチン（ＣＣＮＵ）、メクロルエタミンＨＣｌ（ナイトロジェンマスタード）、メルカプトプリン、メスナ、マイトタン（ｏ．ｐ’−ＤＤＤ）、マイトキサントロンＨＣｌ、オクトレオチド、プリカマイシン、プロカルバジンＨＣｌ、ストレプトゾシン、タモキシフェンクエン酸塩、チオグアニン、チオテパ、ビンブラスチン硫酸塩、アムサクリン（ｍ−ＡＭＳＡ）、アザシチジン、エルスロポエチン、ヘキサメチルメラミン（ＨＭＭ）、インターロイキン２、マイトグアゾン（メチルＧＡＧ、メチルグリオキサールビスグアニルヒドラゾン、ＭＧＢＧ）、ペントスタチン（２’デオキシコフォルマイシン）、セムスチン（メチルＣＣＮＵ）、テニポシド（ＶＭ−２６）、およびビンデシン硫酸塩からなる群から選択し得るが、このように限定されない。
【０１９５】
免疫療法剤は、３６２２Ｗ９４、４Ｂ５、ＡＮＡ  Ａｂ、抗ＦＬＫ−２、抗ＶＥＧＦ、ＡＴＲＡＧＥＮ、ＡＶＡＳＴＩＮ（ベバシズマブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＢＡＢＳ、ＢＥＣ２、ＢＥＸＸＡＲ（トシツモマブ、ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）、Ｃ２２５、ＣＡＭＰＡＴＨ（アレムツズマブ、Ｇｅｎｚｙｍｅ  Ｃｏｒｐ．）、ＣＥＡＣＩＤＥ、ＣＭＡ６７６、ＥＭＤ−７２０００、ＥＲＢＩＴＵＸ（セツキシマブ、ＩｍＣｌｏｎｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｉｎｃ．）、Ｇｌｉｏｍａｂ−Ｈ、ＧＮＩ−２５０、ＨＥＲＣＥＰＴＩＮ（トラスツズマブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＩＤＥＣ−Ｙ２Ｂ８、ＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡ、ｉｏｒ  ｃ５、ｉｏｒ  ｅｇｆ．ｒ３、ｉｏｒ  ｔ６、ＬＤＰ−０３、ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ、ＭＤＸ−１１、ＭＤＸ−２２、ＭＤＸ−２１０、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−２６０、ＭＤＸ−４４７、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−１、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−２、Ｍｏｎｏｐｈａｒｍ−Ｃ、ＮｏｖｏＭＡｂ−Ｇ２、Ｏｎｃｏｌｙｍ、ＯＶ１０３、Ｏｖａｒｅｘ、Ｐａｎｏｒｅｘ、Ｐｒｅｔａｒｇｅｔ、Ｑｕａｄｒａｍｅｔ、Ｒｉｂｕｔａｘｉｎ、ＲＩＴＵＸＡＮ（リツキシマブ、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＳＭＡＲＴ  １Ｄ１０  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  ＡＢＬ  ３６４  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５、ＴＮＴおよびＺＥＮＡＰＡＸ（ダクリズマブ、Ｒｏｃｈｅ）からなる群から選択し得るが、このように限定されない。
【０１９６】
癌ワクチンは、ＥＧＦ、抗イディオタイプ癌ワクチン、Ｇｐ７５抗原、ＧＭＫメラノーマワクチン、ＭＧＶガングリオシドコンジュゲートワクチン、Ｈｅｒ２／ｎｅｕ、Ｏｖａｒｅｘ、Ｍ−Ｖａｘ、Ｏ−Ｖａｘ、Ｌ−Ｖａｘ、ＳＴｎ−ＫＨＬ  ｔｈｅｒａｔｏｐｅ、ＢＬＰ２５（ＭＵＣ−１）、リポソーム性イディオタイプワクチン、Ｍｅｌａｃｉｎｅ、ペプチド抗原ワクチン、毒素／抗原ワクチン、ＭＶＡ系ワクチン、ＰＡＣＩＳ、ＢＣＧワクチン、ＴＡ−ＨＰＶ、ＴＡ−ＣＩＮ、ＤＩＳＣウイルスおよびＩｍｍｕＣｙｓｔ／ＴｈｅｒａＣｙｓからなる群から選択し得るが、このように限定されない。
【０１９７】
抗アレルギー医薬
本発明のＴＬＲ７／８リガンドとアダプターオリゴヌクレオチドとは、抗アレルギー医薬と共に使用することができる。
【０１９８】
アレルギーを治療または予防する従来法は、アレルギー用医薬および脱感作療法の使用を伴う。アレルギーを治療または予防するために展開中の幾つかの療法では、抗ＩｇＥ抗体の中和の使用が含まれる。アレルギー反応のケミカルメディエーターの作用を阻止する抗ヒスタミンおよびその他の薬物は、アレルギー症状の重度の調節を補助するが、アレルギー反応を予防せず、その後のアレルギー応答に対する効果も有していない。脱感作療法は、アレルゲンに対するＩｇＧ型応答を誘発するために、小用量のアレルゲンを普通、皮下注射で投与することにより行われる。ＩｇＧ抗体の存在は、ＩｇＥ抗体の誘発から生じるメディエーターの産生の中和を補助すると考えられている。重度の反応誘発を避けるために、最初は対象をごく小用量のアレルゲンで処置し、次第に用量を増やす。アレルギー応答を起こす化合物を実際に対象に投与し、アレルギー反応が生じる恐れがあるので、この種の療法は危険である。
【０１９９】
アレルギー用医薬には、それだけに限らないが、抗ヒスタミン、コルチコステロイド、プロスタグランジン誘導因子などが挙げられる。抗ヒスタミンは、肥満細胞または好塩基球が放出するヒスタミンに拮抗する化合物である。こうした化合物は、当技術分野で周知であり、アレルギー治療に汎用されている。抗ヒスタミンには、それだけに限らないが、アクリバスチン、アステミゾール、アザタジン、アゼラスチン、ベータタスチン、ブロムフェニラミン、ブクリジン、セチリジン、セチリジン類縁体、クロルフェニラミン、クレマスチン、ＣＳ５６０、シプロヘプタジン、デスロラタジン、デクスクロルフェニラミン、エバスチン、エピナスチン、フェキソフェナジン、ＨＳＲ６０９、ヒドロキシジン、レボカバスチン、ロラチジン、メトスコポラミン、ミゾラスチン、ノラステミゾール、フェニンダミン、プロメタジン、ピリルアミン、テルフェナジン、トラニラストが挙げられる。
【０２００】
コルチコステロイドには、それだけに限らないが、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、ベクロメタゾン、ブデソニド、デキサメタゾン、フルニソリド、フルチカゾンプロピオネート、トリアムシノロンなどが挙げられる。デキサメタゾンは、抗炎症作用を有するコルチコステロイドであるが、吸収性が高く、有効用量で長期の抑制副作用を有するので、吸入形態でアレルギーまたは喘息の治療に常用されない。しかし、本発明の組成物と組み合わせて投与する場合、副作用を抑制するために低用量で投与できるので、アレルギーまたは喘息を治療するために、デキサメタゾンを本発明に従って使用することができる。コルチコステロイドの使用に伴う副作用の中には、咳、発声困難、口内がこう瘡（カンジダ症）、および高用量では、副腎抑制、耐糖能異常、骨粗鬆症、骨の無菌壊死、白内障形成、成長抑制、高血圧、筋力低下、皮膚厚み減少、容易な挫傷形成などの全身性作用が含まれる。Ｂａｒｎｅｓ＆Ｐｅｔｅｒｓｏｎ（１９９３）Ａｍ  Ｒｅｖ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｄｉｓ  １４８：Ｓ１−Ｓ２６およびＫａｍａｄａ  ＡＫ  ｅｔ  ａｌ（１９９６）Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １５３：１７３９−４８。
【０２０１】
抗喘息薬
本発明のＴＬＲ７／８リガンドとアダプターオリゴヌクレオチドとの組合せは、抗喘息薬と共に使用することができる。
【０２０２】
喘息治療用の薬物（即ち、抗喘息薬）は、一般に、即効緩和薬物および長期抑制薬物の２種類に分けられる。喘息患者は、長期抑制薬物を毎日摂取することにより、持続的喘息の抑制を実現し、維持する。長期抑制薬物には、コルチコステロイド、クロモリンナトリウム、ネドクロミルなどの抗炎症剤、長時間作用性β２アゴニスト、メチルキサンチンなどの長時間作用性気管支拡張剤、ロイコトリエン調整剤などが挙げられる。即効緩和薬物には、短時間作用性β２アゴニスト、抗コリン剤、全身性コルチコステロイドなどが挙げられる。こうした薬物各々に付随して多くの副作用があり、該薬物のいずれも、単独または併用で喘息を予防または完全に治療できるものはない。
【０２０３】
喘息用医薬には、それだけに限らないが、ＰＤＥ−４阻害剤、気管支拡張剤／β−２アゴニスト、Ｋ＋チャンネル開放剤、ＶＬＡ−４アンタゴニスト、ニューロキンアンタゴニスト、トロンボキサンＡ２（ＴＸＡ２）合成阻害剤、キサンチン、アラキドン酸アンタゴニスト、５−リポキシゲナーゼ阻害剤、ＴＸＡ２受容体アンタゴニスト、ＴＸＡ２アンタゴニスト、５−リポクス活性化タンパク質の阻害剤、プロテアーゼ阻害剤などが挙げられる。
【０２０４】
気管支拡張剤／β２アゴニストは、気管支拡張または平滑筋弛緩を起こす一部類の化合物である。気管支拡張剤／β２アゴニストには、それだけに限らないが、サルメテロール、サルブタモール、アルブテロール、テルブタリン、Ｄ２５２２／フォルモテロール、フェノテロール、ビトルテロール、ピルブエロールメチルキサンチン、オルシプレナリンなどが挙げられる。長時間作用性のβ２アゴニストおよび気管支拡張剤は、抗炎症療法に加えて、症状の長期予防のために使用される化合物である。長時間作用性β２アゴニストには、それだけに限らないが、サルメテロール、アルブテロールなどが挙げられる。こうした化合物は、コルチコステロイドと普通併用され、一般に、全く炎症療法なしに使用されることはない。そうしたものは、頻脈、骨格筋振戦、低カリウム血症、過剰投与時のＱＴｃ間隔の延長などの副作用を伴ってきた。
【０２０５】
例えばテオフィリンを含めたメチルキサンチンは、症状の長期抑制および予防に使用されてきた。こうした化合物は、ホスホジエステラーゼ阻害および恐らくはアデノシン拮抗作用の結果、気管支拡張を起こす。用量関連急性毒性は、こうした種類の化合物に伴う特別な問題である。その結果、代謝クリアランスの個人差から生じる毒性および狭域治療範囲を説明するために、日常的に血清濃度をモニターしなければならない。副作用には、頻脈、頻脈性不整脈、吐き気および嘔吐、中枢神経系刺激、頭痛、発作、吐血、高血糖、低カリウム血症などが挙げられる。短時間作用性β２アゴニストには、それだけに限らないが、アルブテロール、ビトルテロール、ピルブテロール、テルブタリンなどが挙げられる。短時間作用性β２アゴニストの投与に付随する副作用の中には、頻脈、骨格筋振戦、低カリウム血症、乳酸増加、頭痛および高血糖が含まれる。
【０２０６】
クロモリンナトリウムおよびネドクロミルは、運動から生じる喘息症状、またはアレルゲンから生じるアレルギー症状を主に予防するために、長期抑制薬物として使用される。こうした化合物は、塩素チャンネル機能の妨害によって、アレルゲンに対する早発性および遅発性反応を阻止すると考えられている。それらのものは、肥満細胞膜を安定化し、イノシネオフィル（ｉｎｏｓｉｎｅｏｐｈｉｌ）および上皮細胞からのメディエーターの活性化および放出を阻害する。有益性を最大限とするには、一般に４〜６週間の投与期間が必要とされる。
【０２０７】
抗コリン剤は、急性気管支けいれんの緩和に一般に使用される。こうした化合物は、ムスカリン性コリン受容体の競合阻害により機能すると考えられている。抗コリン剤には、それだけに限らないが、臭化イプラトロピウムなどが挙げられる。こうした化合物は、コリン媒介気管支けいれんだけしか改善せず、抗原に対する反応を改変することは全くない。副作用には、口渇きおよび呼吸器分泌、一部の個人における喘鳴の亢進、ならびに眼内に噴霧した場合のかすみ目が含まれる。
【０２０８】
本発明の組成物は、気道改造の治療にも有用となり得る。気道改造は、気道における平滑筋細胞の増殖および／または粘膜下の肥厚から生じ、最終的には気道の狭窄の結果、気流通過が制限される。本発明の組成物は、更なる気道改造を予防し、改造過程から生じる組織増加を恐らく低減さえし得る。
【０２０９】
アジュバント
本発明のＴＬＲ７／８リガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドは、アジュバントなどの他の作用剤と併用してもよい。本明細書で使用する場合のアジュバントとは、抗原、ＴＬＲ７／８リガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドとは異なるもので、抗原に対する応答、例えば、体液性および／または細胞性免疫応答において、免疫細胞活性化を高める物質を指す。アジュバントは、抗原特異的免疫応答を高めるために、補助細胞の蓄積および／または活性化を促進する。アジュバントは、抗原に対する保護免疫の誘発に使用されるワクチン、即ち抗原含有組成物の効力を高めるために使用される。
【０２１０】
アジュバントは、一般に、デポー作用を創出するアジュバント、免疫賦活アジュバント、ならびにデポー作用を創出し、免疫系を刺激するアジュバントを包含する。本明細書で使用する場合、デポー作用を創出するアジュバントは、抗原を体内で徐々に放出させ、したがって抗原に対する免疫細胞の暴露を延長するアジュバントである。この部類のアジュバントには、それだけに限らないが、アルム（例えば、水酸化アルミニウム、リン酸アルミニウム）と、鉱油、非鉱油の油中水または油中水中油エマルジョンと、ＭｏｎｔａｎｉｄｅアジュバントのＳｅｐｐｉｃ  ＩＳＡシリーズ（例えば、Ｍｏｎｔａｎｉｄｅ  ＩＳＡ７２０、ＡｉｒＬｉｑｕｉｄｅ、パリ、フランス）、ＭＦ−５９（Ｓｐａｎ８５およびＴｗｅｅｎ８０で安定化した水中スクワレンエマルジョン、Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、エメリービル、カリフォルニア）、およびＰＲＯＶＡＸ（安定化界面活性剤およびミセル形成剤を含有する水中油エマルジョン、ＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、サンジエゴ、カリフォルニア）などの水中油エマルジョンとを含めたエマルジョン系配合物とが挙げられる。
【０２１１】
免疫賦活アジュバントは、免疫系の細胞の活性化を起こすアジュバントである。例えば、それにより、免疫細胞はサイトカインを産生し、分泌し得る。この部類のアジュバントには、それだけに限らないが、Ｑ．ｓａｐｏｎａｒｉａ樹の皮から精製した、ＱＳ２１（ＨＰＬＣ分画で２１番ピーク中に溶出する糖脂質、Ａｑｕｉｌａ  Ｂｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、ワーセスター、マサチューセッツ）などのサポニン、ポリ［ジ（カルボキシラトフェノキシ）ホスファゼン（ＰＣＰＰポリマー、Ｖｉｒｕｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、米国）、モノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ、Ｒｉｂｉ  ＩｍｍｕｎｏＣｈｅｍ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．、ハミルトン、モンタナ）などのリポ多糖の誘導体、ムラミルジペプチド（ＭＤＰ、Ｒｉｂｉ）およびスレオニルムラミルジペプチド（ｔ−ＭＤＰ、Ｒｉｂｉ）、ＯＭ−１７４（リピドＡ関連のグルミサミン二糖、ＯＭ  Ｐｈａｒｍａ  ＳＡ、メイリン、スイス）、ならびにリーシュマニア伸長因子（精製リーシュマニアタンパク質、Ｃｏｒｉｘａ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、シアトル、ワシントン）が含まれる。この部類のアジュバントには、ＣｐＧ  ＤＮＡも含まれる。
【０２１２】
デポー作用を創出し、免疫系を刺激するアジュバントは、前記に特定した機能の双方を有する化合物である。この部類のアジュバントには、それだけに限らないが、ＩＳＣＯＭＳ（混合されたサポニン、脂質を含有し、抗原を保持できる細孔を有するウイルス大粒子を形成する免疫賦活複合体、ＣＳＬ、メルボルン、豪州）、ＳＢ−ＡＳ２（ＭＰＬおよびＱＳ２１を含有する水中油エマルジョンであるＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍアジュバント系２番、ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ［ＳＢＢ］、リクセンサート、ベルギー）、ＳＢ−ＡＳ４（アルムおよびＭＰＬを含有するＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ  Ｂｅｅｃｈａｍアジュバント系４番、ＳＢＢ、ベルギー）、ミセルを形成するＣＲＬ１００５などの非イオン性ブロックコポリマー（これらのものは、ポリオキシエチレン鎖が隣接する疎水性ポリオキシプロピレンの線状鎖を含有する、Ｖａｘｃｅｌ，Ｉｎｃ．ノークロス、ジョージア）、ならびにＳｙｎｔｅｘ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ（ＳＡＦ、Ｔｗｅｅｎ８０および非イオン性ブロックコポリマーを含有する水中油エマルジョン、Ｓｙｎｔｅｘ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．、ボールダー、コロラド）が含まれる。
【０２１３】
このアジュバントは、Ｐａｍ３Ｃｙｓなどのリポペプチド、キトサンなどの陽イオン多糖、またはプロタミンなどの陽イオンペプチドの場合もある。
【０２１４】
サイトカイン
本発明のＴＬＲ７／８リガンドとアダプターオリゴヌクレオチドとの組合せは、サイトカインと共に使用してもよい。サイトカインは、炎症性および免疫性反応を媒介する多種の細胞が産生する、可溶性のタンパク質および糖タンパク質である。サイトカインは、免疫系の細胞間の連絡を媒介し、細胞を動員し、その機能および増殖を調節するために、局所的にも全身的にも作用する。サイトカインの種類には、先天性免疫のメディエーターおよび調節剤、適応的免疫のメディエーターおよび調節剤、ならびに造血の賦活剤が含まれる。サイトカインの中には、インターロイキン（例えば特に、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１１、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１４、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７、ＩＬ−１８、およびインターロイキン１９〜３２（ＩＬ−１９〜ＩＬ−３２））、ケモカイン（例えば特に、ＩＰ−１０、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、ＭＩＰ−３α、ＭＩＰ−１、ＭＩＰ−２、ＭＩＰ−３、ＭＩＰ−４、エオタキシン、Ｉ−ＴＡＣおよびＢＣＡ−１）、ならびに１型インターフェロン（例えば、ＩＦＮ−αおよびＩＦＮ−β）、２型インターフェロン（例えば、ＩＦＮ−γ）、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦ−α）、トランスフォーミング増殖因子β（ＴＧＦ−β）、およびＧＭ−ＣＳＦ、Ｇ−ＣＳＦおよびＭ−ＣＳＦを含む多様なコロニー刺激因子（ＣＳＦ）を含めた他のサイトカインが含まれる。
【０２１５】
抗原
本発明のＴＬＲ７／８リガンドとアダプターオリゴヌクレオチドとの組合せは、場合によりワクチン製剤中で、抗原と共に使用することができる。本明細書で使用する場合の「抗原」とは、Ｔ細胞抗原受容体またはＢ細胞抗原受容体が認識できる任意の分子を指す。この用語は、広義には宿主免疫系が異物と認識する任意種の分子を包含する。一般に、抗原には、それだけに限らないが、細胞、細胞抽出物、タンパク質、ポリペプチド、ペプチド、多糖類、多糖コンジュゲート、多糖類および他の分子のペプチド性および非ペプチド性模倣物質、小分子、脂質、リポタンパク質、糖脂質、多糖類、炭水化物、ウイルスおよびウイルス抽出物、ならびに寄生虫などの多細胞生物、更にはアレルゲンなどが挙げられる。タンパク質、ポリペプチドまたはペプチドである抗原に関しては、そのような抗原は、そのような抗原をコードする核酸分子を包含することができる。より具体的には、抗原には、それだけに限らないが、癌細胞および癌細胞中またはその上で発現する分子を包含する癌抗原、微生物および微生物中またはその上で発現する分子を包含する微生物抗原、ならびにアレルゲンなどが挙げられる。したがって、ある種の実施形態での本発明は、癌、感染体およびアレルゲン用のワクチンを提供する。
【０２１６】
多様な実施形態では、該抗原は、微生物抗原、癌抗原またはアレルゲンである。本明細書で使用する場合の「微生物抗原」とは、微生物の抗原であり、それだけに限らないが、ウイルス、細菌、寄生虫および真菌を包含する。このような抗原は、天然からの単離抗原およびその断片または誘導体だけでなく、無傷の微生物も含み、また天然の微生物抗原と同一または類似であり、その微生物に特異的な免疫応答を誘発する合成化合物も包含する。ある化合物が、天然の微生物抗原に対する免疫応答（体液性および／または細胞性）を誘発するならば、それは天然の微生物抗原に類似である。このような抗原は、当技術分野で日常的に使用され、当業者には周知である。本発明は、本明細書に記載の感染体のいずれか由来の抗原を包含することを意図している。
【０２１７】
本明細書で使用する場合、「癌抗原」および「腫瘍抗原」という用語は、腫瘍または癌細胞に付随し、主要組織適合性遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子に関わる抗原提示細胞の表面上に発現するとき免疫応答を誘発できる、ペプチド、タンパク質、リポタンパク質または糖タンパク質などの化合物を指すために、互換的に使用される。癌抗原は、癌細胞により差別的に発現され、それにより、癌細胞を標的とするために利用することができる。癌抗原は、見掛上腫瘍特異的な免疫応答を潜在的に刺激できる抗原である。こうした抗原の一部は、正常細胞によりコードされるが、必ずしも発現されるとは限らない。こうした抗原は、正常細胞内で通常サイレント（即ち、発現していない）である抗原、分化の特定の段階でしか発現しない抗原、および胚性抗原、胎児性抗原などの一過性に発現する抗原として、その特性を表現することができる。他の癌抗原は、癌遺伝子（例えば、活性化ｒａｓ癌遺伝子）、サプレッサー遺伝子（例えば、変異体ｐ５３）、内部欠失または染色体転座から生じる融合タンパク質などの変異細胞遺伝子によりコードされる。更に他の癌抗原は、ＲＮＡおよびＤＮＡ腫瘍ウイルス上に保持されるようなウイルス遺伝子が、コードすることができる。
【０２１８】
癌抗原は、例えば、Ｃｏｈｅｎ  ＰＡ  ｅｔ  ａｌ．（１９９４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ  ５４：１０５５−８に記載のような癌細胞の粗製抽出物の調製、組換え技術による該抗原の部分精製、既知抗原のデノボ合成のいずれかにより、癌細胞から調製することができる。癌抗原には、それだけに限らないが、組換え発現された抗原、その免疫原性部分、またはその腫瘍、癌、細胞いずれかの全体が含まれる。このような癌抗原は、組換えにより、または当技術分野で公知の他の任意の手段により単離または調製することができる。
【０２１９】
腫瘍抗原の例には、ＭＡＧＥ、ＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ−Ａ、ｇｐ１００、ジペプチジルペプチダーゼＩＶ（ＤＰＰＩＶ）、アデノシンデアミナーゼ結合性タンパク質（ＡＤＡｂｐ）、シクロフィリンｂ、結腸直腸関連抗原（ＣＲＣ）のＣ０１７−１Ａ／ＧＡ７３３、癌胎児性抗原（ＣＥＡ）とその免疫原性エピトープＣＡＰ−１およびＣＡＰ−２、ｅｔｖ６、ａｍｌ１、前立腺特異抗原（ＰＳＡ）とその免疫原性エピトープＰＳＡ−１、ＰＳＡ−２およびＰＳＡ−３、前立腺特異膜抗原（ＰＳＭＡ）、Ｔ細胞受容体／ＣＤ３−ζ鎖、ＭＡＧＥファミリー腫瘍抗原（例えば、ＭＡＧＥ−Ａ１、ＭＡＧＥ−Ａ２、ＭＡＧＥ−Ａ３、ＭＡＧＥ−Ａ４、ＭＡＧＥ−Ａ５、ＭＡＧＥ−Ａ６、ＭＡＧＥ−Ａ７、ＭＡＧＥ−Ａ８、ＭＡＧＥ−Ａ９、ＭＡＧＥ−Ａ１０、ＭＡＧＥ−Ａ１１、ＭＡＧＥ−Ａ１２、ＭＡＧＥ−Ｘｐ２（ＭＡＧＥ−Ｂ２）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ３（ＭＡＧＥ−Ｂ３）、ＭＡＧＥ−Ｘｐ４（ＭＡＧＥ−Ｂ４）、ＭＡＧＥ−Ｃ１、ＭＡＧＥ−Ｃ２、ＭＡＧＥ−Ｃ３、ＭＡＧＥ−Ｃ４、ＭＡＧＥ−Ｃ５）、ＧＡＧＥファミリー腫瘍抗原（例えば、ＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＧＡＧＥ−３、ＧＡＧＥ−４、ＧＡＧＥ−５、ＧＡＧＥ−６、ＧＡＧＥ−７、ＧＡＧＥ−８、ＧＡＧＥ−９）、ＢＡＧＥ、ＲＡＧＥ、ＬＡＧＥ−１、ＮＡＧ、ＧｎＴ−Ｖ、ＭＵＭ−１、ＣＤＫ４、チロシナーゼ、ｐ５３、ＭＵＣファミリー、ＨＥＲ２／ｎｅｕ、ｐ２１ｒａｓ、ＲＣＡＳ１、α−フェトプロテイン、Ｅ−カドヘリン、α−カテニン、β−カテニンおよびγ−カテニン、ｐ１２０ｃｔｎ、ｇｐ１００Ｐｍｅｌ１１７、ＰＲＡＭＥ、ＮＹ−ＥＳＯ−１、ｃｄｃ２７、大腸腺腫様ポリポーシスタンパク質（ＡＰＣ）、フォドリン、コネキシン３７、Ｉｇイディオタイプ、ｐ１５、ｇｐ７５、ＧＭ２およびＧＤ２ガングリオシド、ヒトパピローマウイルスタンパク質などのウイルス産物、Ｓｍａｄファミリー腫瘍抗原、ｌｍｐ−１、Ｐ１Ａ、ＥＢＶコード核抗原（ＥＢＮＡ）−１、脳グリコーゲンホスホリラーゼ、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−２（ＨＯＭ−ＭＥＬ−４０）、ＳＳＸ−１、ＳＳＸ−４、ＳＳＸ−５、ＳＣＰ−１およびＣＴ−７、ｃ−ｅｒｂＢ−２などが挙げられる。この列挙は限定することを意図するものではない。
【０２２０】
本明細書で使用する場合の「アレルゲン」とは、ＩｇＥの産生を特徴とする免疫応答を誘発できる分子である。アレルゲンは、感受性対象においてアレルギーまたは喘息応答を誘発できる物質でもある。したがって、本発明に関しては、アレルゲンという用語は、ＩｇＥ抗体が媒介するアレルギー応答を誘発できる特定種の抗原を意味する。
【０２２１】
アレルギーのリストは、厖大であり、花粉、昆虫毒、動物皮膚垢抗原、真菌胞子および薬物（例えば、ペニシリン）を包含する。天然の動植物性アレルゲンの例には、以下の属に特異的なタンパク質が含まれる。そうした属には、イヌ（Ｃａｎｉｓ  ｆａｍｉｌｉａｒｉｓ）、１種のダニ（例えば、Ｄｅｒｍａｔｏｐｈａｇｏｉｄｅｓ  ｆａｒｉｎａｅ）、ネコ（Ｆｅｌｉｓ  ｄｏｍｅｓｔｉｃｕｓ）、ブタクサ（Ａｍｂｒｏｓｉａ  ａｒｔｅｍｉｓｉｉｆｏｌｉａ）、ドクムギ（Ｌｏｌｉｕｍ  ｐｅｒｅｎｎｅおよびＬｏｌｉｕｍ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）、スギ（Ｃｒｙｐｔｏｍｅｒｉａ  ｊａｐｏｎｉｃａ）、アネテルナリア（Ａｌｔｅｒｎａｒｉａ  ａｌｔｅｒｎａｔａ）、ハンノキ（Ａｌｄｅｒ）、ハンノキ（Ａｌｎｕｓ  ｇｕｌｔｉｎｏｓａ）、カバノキ（Ｂｅｔｕｌａ  ｖｅｒｒｕｃｏｓａ）、コナラ（Ｑｕｅｒｃｕｓ  ａｌｂａ）、オリーブ（Ｏｌｅａ  ｅｕｒｏｐａ）、ヨモギ（Ａｒｔｅｍｉｓｉａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）、シャゼンソウ（例えば、Ｐｌａｎｔａｇｏ  ｌａｎｃｅｏｌａｔａ）、ヒカゲミズ（例えば、Ｐａｒｉｅｔａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓおよびＰａｒｉｅｔａｒｉａ  ｊｕｄａｉｃａ）、チャバネゴキブリ（例えば、Ｂｌａｔｔｅｌｌａ  ｇｅｒｍａｎｉｃａ）、ミツバチ（例えば、Ａｐｉｓ  ｍｕｌｔｉｆｌｏｒｕｍ）、イトスギ（例えば、Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ｓｅｍｐｅｒｖｉｒｅｎｓ、Ｃｕｐｒｅｓｓｕｓ  ａｒｉｚｏｎｉｃａおよびＣｕｐｒｅｓｓｕｓ  ｍａｃｒｏｃａｒｐａ）、セイヨウネズ（例えば、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｓａｂｉｎｏｉｄｅｓ、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｖｉｒｇｉｎｉａｎａ、Ｊｕｎｉｐｅｒｕｓ  ｃｏｍｍｕｎｉｓおよびＪｕｎｉｐｅｒｕｓ  ａｓｈｅｉ）、クロベ（例えば、Ｔｈｕｙａ  ｏｒｉｅｎｔａｌｉｓ）、ヒノキ（例えば、Ｃｈａｍｅｃｙｐａｒｉｓ  ｏｂｔｕｓａ）、ゴキブリ（例えば、Ｐｅｒｉｐｌａｎｅｔａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）、カモジグサ（例えば、Ａｇｒｏｐｙｒｏｎ  ｒｅｐｅｎｓ）、ライムギ（例えば、Ｓｅｃａｌｅ  ｃｅｒｅａｌｅ）、コムギ（例えば、Ｔｒｉｔｉｃｕｍ  ａｅｓｔｉｖｕｍ）、カモガヤ（例えば、Ｄａｃｔｙｌｉｓ  ｇｌｏｍｅｒａｔａ）、ウシノケグサ（例えば、Ｆｅｓｔｕｃａ  ｅｌａｔｉｏｒ）、イチゴツナギ（例えば、Ｐｏａ  ｐｒａｔｅｎｓｉｓおよびＰｏａ  ｃｏｍｐｒｅｓｓａ）、カラスムギ（例えば、Ａｖｅｎａ  ｓａｔｉｖａ）、シラゲガヤ（例えば、Ｈｏｌｃｕｓ  ｌａｎａｔｕｓ）、ハルガヤ（例えば、Ａｎｔｈｏｘａｎｔｈｕｍ  ｏｄｏｒａｔｕｍ）、オオカニツリ（例えば、Ａｒｒｈｅｎａｔｈｅｒｕｍ  ｅｌａｔｉｕｓ）、コヌカグサ（例えば、Ａｇｒｏｓｔｉｓ  ａｌｂａ）、アワガエリ（例えば、Ｐｈｌｅｕｍ  ｐｒａｔｅｎｓｅ）、クサヨシ（例えば、Ｐｈａｌａｒｉｓ  ａｒｕｎｄｉｎａｃｅａ）、スズメノヒエ（例えば、Ｐａｓｐａｌｕｍ  ｎｏｔａｔｕｍ）、サトウモロコシ（例えば、Ｓｏｒｇｈｕｍ  ｈａｌｅｐｅｎｓｉｓ）、スズメノチャヒキ（例えば、Ｂｒｏｍｕｓ  ｉｎｅｒｍｉｓ）などが挙げられる。
【０２２２】
抗体およびＡＤＣＣ
本発明のＴＬＲ７／８リガンドとアダプターオリゴヌクレオチドとの組合せは、ナチュラルキラー細胞溶解活性および抗体依存性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）も増加させる。ＡＤＣＣは、細胞標的に特異的な抗体との組合せを用いて行い、対象の免疫系がその腫瘍細胞を殺滅するように誘導することができる。ＡＤＣＣの進行に有用な抗体には、体内で細胞と相互作用する抗体が含まれる。細胞標的に特異的なこのような多くの抗体は、当技術分野で記載されてきており、多くは市販されている。一実施形態では、該抗体はＩｇＧ抗体である。
【０２２３】
本発明において有用な治療用抗体は、微生物抗原（例えば、細菌、ウイルス、寄生虫もしくは真菌抗原）、癌または腫瘍関連抗原、および自己抗原に特異的となり得る。好ましい抗体は、細胞上または細胞内に存在する抗原を認識し、結合する抗体である。適切な抗体の例には、それだけに限らないが、Ｒｉｔｕｘａｎ（商標）（リツキシマブ、抗ＣＤ２０抗体）、Ｈｅｒｃｅｐｔｉｎ（トラスツズマブ）、Ｑｕａｄｒａｍｅｔ、Ｐａｎｏｒｅｘ、ＩＤＥＣ−Ｙ２Ｂ８、ＢＥＣ２、Ｃ２２５、Ｏｎｃｏｌｙｍ、ＳＭＡＲＴ  Ｍ１９５、ＡＴＲＡＧＥＮ、Ｏｖａｒｅｘ、Ｂｅｘｘａｒ、ＬＤＰ−０３、ｉｏｒ  ｔ６、ＭＤＸ−２１０、ＭＤＸ−１１、ＭＤＸ−２２、ＯＶ１０３、３６２２Ｗ９４、抗ＶＥＧＦ、Ｚｅｎａｐａｘ、ＭＤＸ−２２０、ＭＤＸ−４４７、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−２、ＭＥＬＩＭＭＵＮＥ−１、ＣＥＡＣＩＤＥ、Ｐｒｅｔａｒｇｅｔ、ＮｏｖｏＭＡｂ−Ｇ２、ＴＮＴ、Ｇｌｉｏｍａｂ−Ｈ、ＧＮＩ−２５０、ＥＭＤ−７２０００、ＬｙｍｐｈｏＣｉｄｅ、ＣＭＡ６７６、Ｍｏｎｏｐｈａｒｍ−Ｃ、４Ｂ５、ｉｏｒ  ｅｇｆ．ｒ３、ｉｏｒ  ｃ５、ＢＡＢＳ、抗ＦＬＫ−２、ＭＤＸ−２６０、ＡＮＡ  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  １Ｄ１０  Ａｂ、ＳＭＡＲＴ  ＡＢＬ  ３６４  Ａｂ、ＣＣ４９（ｍＡｂ  Ｂ７２．３）、ＩｍｍｕＲＡＩＴ−ＣＥＡ、抗ＩＬ−４抗体、抗ＩＬ−５抗体、抗ＩＬ−９抗体、抗Ｉｇ抗体、抗ＩｇＥ抗体、血清由来Ｂ型肝炎抗体、組換えＢ型肝炎抗体などが挙げられる。
【０２２４】
本発明にとって同様に有用な他の抗体には、アレムツズマブ（Ｂ細胞性慢性リンパ球白血病）、ゲムツズマブオゾガミシン（ＣＤ３３＋急性骨髄性白血病）、ｈＰ６７．６（ＣＤ３３＋急性骨髄性白血病）、インフリキシマブ（炎症性腸疾患および関節リウマチ）、エタネルセプト（関節リウマチ）、トシツモマブ、ＭＤＸ−２１０、オレゴボマブ、抗ＥＧＦ受容体ｍＡｂ、ＭＤＸ−４４７、抗組織因子タンパク質（ＴＦ）（Ｓｕｎｏｌ）、ｉｏｒ−ｃ５、ｃ５、エドレコロマブ、イブリツモマブチウキセタン、ガングリオシドＧＤ３エピトープの抗イディオタイプｍＡｂ模倣物質、抗ＨＬＡ−Ｄｒ１０  ｍＡｂ、抗ＣＤ３３ヒト化ｍＡｂ、抗ＣＤ５２  ｈｕｍＡｂ、抗ＣＤ１  ｍＡｂ（ｉｏｒ  ｔ６）、ＭＤＸ−２２、セロゴバブ、抗１７−１Ａ  ｍＡｂ、ベバシズマブ、ダクリズマブ、抗ＴＡＧ−７２（ＭＤＸ−２２０）、高分子量プロテオグリカンの抗イディオタイプｍＡｂ模倣物質（Ｉ−Ｍｅｌ−１）、高分子量プロテオグリカンの抗イディオタイプｍＡｂ模倣物質（Ｉ−Ｍｅｌ−２）、抗ＣＥＡ  Ａｂ、ｈｍＡｂＨ１１、抗ＤＮＡまたはＤＮＡ関連タンパク質（ヒストン）ｍＡｂ、Ｇｌｉｏｍａｂ−Ｈ  ｍＡｂ、ＧＮＩ−２５０  ｍＡｂ、抗ＣＤ２２、ＣＭＡ６７６）、ＧＤ２ガングリオシドに対する抗イディオタイプヒトｍＡｂ、ｉｏｒ  ｅｇｆ／ｒ３、抗ｉｏｒ  ｃ２糖タンパク質ｍＡｂ、ｉｏｒ  ｃ５、抗ＦＬＫ−２／ＦＬＴ−３  ｍＡｂ、抗ＧＤ−２二重特異性ｍＡｂ、抗核自己抗体、抗ＨＬＡ−Ｄｒ  Ａｂ、抗ＣＥＡ  ｍＡｂ、パリビズマブ、ベバシズマブ、アレムツズマブ、ＢＬｙＳ−ｍＡｂ、抗ＶＥＧＦ２、抗Ｔｒａｉｌ受容体、Ｂ３  ｍＡｂ、ｍＡｂ  ＢＲ９６、乳癌、Ａｂｘ−Ｃｂ１  ｍＡｂなどが挙げられる。
【０２２５】
免疫グロブリン療法
本発明の作用剤類は、正常免疫および超免疫グロブリン療法と共に使用することもできる。正常免疫グロブリン療法は、正常血ドナーの血清から調製され、プールされる抗体産物を利用する。このプール産物は、感染性病原体（例えば、細菌、Ａ型肝炎、パルボウイルス、エンテロウイルスなどのウイルス、真菌および寄生虫）の抗原などの広範囲の抗原に対する低力価の抗体を含有する。超免疫グロブリン療法は、特定のウイルスに対する抗体を高力価で含有する、個人の血清から調製される抗体を利用する。超免疫グロブリンの例には、帯状疱疹免疫グロブリン（免疫能の低い児童および新生児における水痘の予防に有用）、ヒト狂犬病免疫グロブリン（狂犬病動物に咬まれた対象のウイルス暴露後の予防に有用）、Ｂ型肝炎免疫グロブリン（特にそのウイルスに暴露された対象における、Ｂ型肝炎ウイルスの予防に有用）、ならびにＲＳＶ免疫グロブリン（呼吸器合胞体ウイルス感染症の治療に有用）が含まれる。
【０２２６】
投与計画および投与
所望の効果を実現するために併用される該リガンドおよびオリゴヌクレオチドは、別々の組成物中に配合することができる。例えば、アダプターオリゴヌクレオチドおよびＴＬＲ７／８リガンドは、一緒に混合し、組合せとして実質的に同時に、対象に投与し、または細胞と接触させることができる。別の例では、アダプターオリゴヌクレオチドおよびＴＬＲ７／８リガンドは、異なるときに対象に投与し、または細胞と接触させることができる。更に別の例では、アダプターオリゴヌクレオチドおよびＴＬＲ７／８リガンドは、対象の異なる部位に投与することができる。
【０２２７】
上記の通り、用語「有効量」とは、所望の生物学的効果の実現に必要または十分な量を一般に指す。本明細書に示す教示と組み合わせ、多様な活性化合物の中から選択し、効力、生体利用率、患者の体重、有害な副作用の重度、好ましい投与方式などの要因を勘案することによって、実質的な毒性を起こさないが、特定の対象の治療に完全に有効である、予防または治療の有効な処置投与計画を策定することができる。任意の特定の用途に対する有効量は、治療する疾患または病態、投与する特定のオリゴヌクレオチド、対象のサイズ、疾患または病態の重度などの要因に応じて、変化させることができる。当業者であれば、過度の実験を必要とせずに、特定のアダプターオリゴヌクレオチドおよびＴＬＲ７／８リガンドおよび／または抗原および／または他の治療剤の有効量を、実験的に決定することができる。
【０２２８】
本明細書に記載の化合物の全身または局所送達のための対象投与量は、１投与当たり典型的には約１０ｎｇ〜１０ｍｇの範囲であり、その投与は、用途に応じて毎日、毎週または毎月、およびその間の任意量の時間に、または別の必要な際に与えることもできよう。より典型的には、全身または局所投与量は、１投与当たり典型的には約１μｇ〜１ｍｇの範囲、最も典型的には約１０μｇ〜１００μｇの範囲であり、２〜４回の投与を数日または数週の間隔で行う。非経口投与にはより多い投与量が必要となることもある。しかし、幾つかの実施形態では、このための非経口投与量は、上記の典型的投与量の５倍から１００００倍の範囲で使用し得る。
【０２２９】
本明細書に記載の化合物いずれに対しても、治療有効量は、動物モデルから当初に決定することができる。適用する投与量は、投与する化合物の生体利用率および効力に基づいて、調節することができる。前記の方法および当技術分野で周知のような他の方法に基づいて、最大の効果を実現するために投与量を調節することは、当業者の技量の範囲に十分入る。
【０２３０】
投与経路
臨床使用のために、本発明のＴＬＲ７／８リガンドとアダプターオリゴヌクレオチドとの組合せは、所望の治療結果の実現に有効である任意の適切な投与経路を介して、単独で投与するか、または送達用複合体として処方することができる。投与経路には、経腸的および非経腸的投与経路が含まれる。経腸的投与経路の例には、経口、経胃、腸経由および経直腸が含まれる。非経腸的投与経路の非限定的な例には、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、くも膜下、局所注射、局部、経鼻、経粘膜および経肺が含まれる。
【０２３１】
送達媒体
アダプターオリゴヌクレオチドおよびＴＬＲ７／８リガンドおよび／または抗原および／または他の治療薬は、単独で（例えば、塩水溶液もしくは緩衝液中で）、または当技術分野で公知の任意の送達媒体を使用して投与してもよい。
【０２３２】
例えば、本発明のＴＬＲ７／８リガンドとアダプターオリゴヌクレオチドとの組合せは、患者に直接投与してもよいし、または核酸送達複合体と共に投与してもよい。核酸送達複合体とは、標的誘導手段（例えば、標的細胞との親和性結合を高める分子）と結合した（例えば、イオン結合もしくは共有結合した、またはその中に封入された）核酸分子を意味するものとする。核酸送達複合体の例には、ステロール（例えば、コレステロール）、脂質（例えば、陽イオン脂質、ヴィロソームもしくはリポソーム）、または標的細胞特異的結合剤（例えば、標的細胞特異的受容体に認識されるリガンド）と結合した核酸が含まれる。好ましい複合体は、標的細胞による取り込み前に、相当程度の脱カップリングを防止するのに十分にインビボで安定な場合がある。しかし、該複合体は、オリゴヌクレオチドが機能形で放出されるように、細胞内では適当な条件下で開裂することができる。
【０２３３】
これまで記述され、本発明に従って使用できる他の送達媒体には、蝸牛状剤（ｃｏｃｈｌｅａｔｅ）（Ｇｏｕｌｄ−Ｆｏｇｅｒｉｔｅ等、１９９４年、１９９６年）、エマルソーム（Ｖａｎｃｏｔｔ等、１９９８年、Ｌｏｗｅｌｌ等、１９９７年）、ＩＳＣＯＭ（Ｍｏｗａｔ等、１９９３年、Ｃａｒｌｓｓｏｎ等、１９９１年、Ｈｕ等、１９９８年、Ｍｏｒｅｉｎ等、１９９９年）、リポソーム（Ｃｈｉｌｄｅｒｓ等、１９９９年、Ｍｉｃｈａｌｅｋ等、１９８９年、１９９２年、ｄｅ  Ｈａａｎ、１９９５年ａ、１９９５年ｂ）、生細菌ベクター（例えば、サルモネラ、大腸菌、カルメット・ゲラン菌、赤痢菌、乳酸桿菌）（Ｈｏｎｅ等、１９９６年、Ｐｏｕｗｅｌｓ等、１９９８年、Ｃｈａｔｆｉｅｌｄ等、１９９３年、Ｓｔｏｖｅｒ等、１９９１年、Ｎｕｇｅｎｔ等、１９９８年）、生ウイルスベクター（例えば、ワクシニア、アデノウイルス、ヘルペスシンプレックス）（Ｇａｌｌｉｃｈａｎ等、１９９３年、１９９５年、Ｍｏｓｓ等、１９９６年、Ｎｕｇｅｎｔ等、１９９８年、Ｆｌｅｘｎｅｒ等、１９９８年、Ｍｏｒｒｏｗ等、１９９９年）、ミクロスフェア（Ｇｕｐｔａ等、１９９８年、Ｊｏｎｅｓ等、１９９６年、Ｍａｌｏｙ等、１９９４年、Ｍｏｏｒｅ等、１９９５年、Ｏ’Ｈａｇａｎ等、１９９４年、Ｅｌｄｒｉｄｇｅ等、１９８９年）、核酸ワクチン（Ｆｙｎａｎ等、１９９３年、Ｋｕｋｌｉｎ等、１９９７年、Ｓａｓａｋｉ等、１９９８年、Ｏｋａｄａ等、１９９７年、Ｉｓｈｉｉ等、１９９７年）、ポリマー（例えば、カルボキシメチルセルロース、キトサン）（Ｈａｍａｊｉｍａ等、１９９８年、Ｊａｂｂａｌ−Ｇｉｌｌ等、１９９８年）、ポリマー環（Ｗｙａｔｔ等、１９９８年）、プロテオソーム（Ｖａｎｃｏｔｔ等、１９９８年、Ｌｏｗｅｌｌ等、１９８８年、１９９６年、１９９７年）、フッ化ナトリウム（Ｈａｓｈｉ等、１９９８年）、トランスジェニック植物（Ｔａｃｋｅｔ等、１９９８年、Ｍａｓｏｎ等、１９９８年、Ｈａｑ等、１９９５年）、ヴィロソーム（Ｇｌｕｃｋ等、１９９２年、Ｍｅｎｇｉａｒｄｉ等、１９９５年、Ｃｒｙｚ等、１９９８年）、ウイルス様粒子（Ｊｉａｎｇ等、１９９９年、Ｌｅｉｂｌ等、１９９８年）などが挙げられる。他の送達媒体は、当技術分野で公知である。
【０２３４】
医薬組成物
本発明のＴＬＲ７／８リガンドとアダプターオリゴヌクレオチドとの組合せは、薬学的に許容できる担体を更に含む医薬組成物として処方することができる。薬学的に許容できる担体とは、人間や他の脊椎動物への投与に適している、１種または複数の適合性で、固体または液体の充填剤、希釈剤または封入用物質を意味する。担体は、活性成分（複数も）を混合すると所望の効果を促進する、天然、合成いずれかの有機または無機の成分である。医薬組成物の各成分は、所望の薬学的効率を実質的に損なうような相互作用が起こらないように、相互に混和される。
【０２３５】
経口投与のために、該化合物（即ち、アダプターオリゴヌクレオチドおよびＴＬＲ７／８リガンド、抗原および／または他の治療剤）は、当技術分野で周知の薬学的に許容できる担体と活性化合物（複数も）と混合することにより、容易に処方することができる。このような担体により、治療する対象が経口摂取するために、本発明の化合物を錠剤、丸薬、糖衣錠、カプセル、液剤、ゲル剤、シロップ、スラリー、懸濁液などとして処方することが可能である。経口用医薬製剤は、生成した混合物を場合により粉砕し、所望なら適当な助剤の添加後、錠剤または糖衣錠コアを得るために顆粒混合物を加工することにより、固形賦形剤として得ることができる。適当な賦形剤は、特に、ラクトース、スクロース、マンニトールもしくはソルビトールを含めた糖類、例えば、トウモロコシ澱粉、小麦澱粉、米澱粉、ジャガイモ澱粉、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなどのセルロース製品、および／またはポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）などの充填剤である。所望であれば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはアルギン酸ナトリウムなどのその塩のような崩壊剤を添加してもよい。場合により、経口製剤は、内部酸性状態を中和するために塩水溶液もしくは緩衝液中に処方してもよいし、または担体を全く用いずに投与してもよい。
【０２３６】
糖衣錠コアには、適当な被膜が付与される。このために、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコールおよび／または二酸化チタン、ラッカー溶液、ならびに適当な有機の溶媒または溶媒混合物を場合により含有し得る、濃厚糖溶液を使用できる。識別するために、または活性化合物用量の相異なる組合せの特徴とするために、錠剤または糖衣に色素または顔料を添加してもよい。
【０２３７】
経口で使用できる医薬製剤は、ゼラチン製押込み式カプセル、ならびにゼラチンおよびグリセロール、ソルビトールなどの可塑剤で作製した軟質密封カプセルを包含する。押込み式カプセルは、ラクトースなどの充填剤、澱粉などの結合剤、および／またはタルクやステアリン酸マグネシウムなどの滑剤、ならびに場合により安定剤との混合物中に、活性成分を含有することができる。軟質カプセルでは、脂肪油、液体パラフィン、液体ポリエチレングリコールなどの適当な液体中に、活性を溶解または懸濁してもよい。その上、安定化剤を添加してもよい。経口投与用に処方したミクロスフェアを使用してもよい。このようなミクロスフェアは、当技術分野で十分に規定されてきた。経口投与用の全製剤は、このような投与に適した用量とすべきである。
【０２３８】
口腔投与のために、該組成物は、従来どおりに処方した錠剤またはトローチ剤の形態とし得る。
【０２３９】
該化合物は、標準的な吸入具を用いて、肺気道、特に気管支、より特定すれば深部肺胞に投与し得る。該化合物は、適当な高圧ガス、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素、または他の適当なガスを使用して、加圧容器または噴霧器からエアロゾルスプレーの供給形態で送達し得る。加圧エアロゾルの場合、定量を送達するためのバルブを備えることにより、その用量単位を決定し得る。対象に該化合物を送達するために、吸入装置を使用してもよい。本発明で使用する場合の吸入装置は、該化合物の乾燥粉末形態などのエアロゾルを投与する任意の用具である。この種の装置は、当技術分野で周知であり、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，１９ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９５，Ｍａｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ，ｐａｇｅｓ  １６７６−１６９２に見出される記載などのように、詳細にこれまで記載されてきた。米国特許第６１１６２３７号などの多数の米国特許も、吸入装置について記載している。
【０２４０】
本明細書で使用する場合の「粉末」とは、微細に分散した固体粒子からなる組成物を指す。好ましくは、該化合物は、かなり自由流動的であり、吸入具中で分散することができ、その後、対象により吸入されることにより、該化合物は肺に達し、肺胞内に進入することができる。「乾燥粉末」とは、その粒子が吸入具中で容易に分散し、エアロゾルを形成することができるような水分率を有する粉末組成物を指す。該水分率は、一般に約１０重量％（％ｗ）未満の水、幾つかの実施形態では約５％ｗ未満、好ましくは約３％ｗ未満である。粉末は、ポリマーと共に処方してもよいし、または場合により、リポソーム、アルブミンおよび／または他の担体などの他の物質と共に処方してもよい。
【０２４１】
エアロゾル用量および送達システムは、例えば、Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，６：２７３−３１３  （１９９０）中のＧｏｎｄａ，Ｉ．“Ａｅｒｏｓｏｌｓ  ｆｏｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ａｎｄ  ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｇｅｎｔｓ  ｔｏ  ｔｈｅ  ｒｅｓｐｉｒａｔｏｒｙ  ｔｒａｃｔ”、およびＡｅｒｏｓｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ．Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ，Ｄｉａｇｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｔｈｅｒａｐｙ，Ｍｏｒｅｎ，ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．，Ｅｌｓｅｖｉｅｒ，Ａｍｓｔｅｒｄａｍ，１９８５  中のＭｏｒｅｎ，“Ａｅｒｏｓｏｌ  ｄｏｓａｇｅ  ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ”に記載されるようなものを、特定の治療用途のために当業者が選択し得る。
【０２４２】
該化合物を全身的に送達することが望ましい場合、注入、例えば、ボーラス注入または継続注入による非経腸的投与のために、該化合物を処方してもよい。注入用製剤は、単位剤形で、例えば、アンプル中、または防腐剤を添加した多回用量容器中に提供してもよい。該組成物は、油性または水性媒体中の懸濁液、溶液、エマルジョンなどの形態を取ってもよく、懸濁剤、安定剤および／または分散剤などの配合剤を含有してもよい。
【０２４３】
非経腸的投与のための医薬製剤には、水溶形の活性化合物の水溶液が含まれる。加えて、活性化合物の懸濁液を適切な注入用油性懸濁液として調製してもよい。適当な親油性の溶媒または媒体には、ゴマ油などの脂肪油、もしくはオレイン酸エチルやトリグリセリドなどの合成脂肪酸エステル、またはリポソームが含まれる。注入用水性懸濁液は、懸濁液粘度を増加させる物質として、カルボキシメチルセルロースナトリウム、ソルビトールまたはデキストランなどを含有してもよい。場合により、その懸濁液は、高濃度溶液の調製を可能とするために、適当な安定剤または該化合物の溶解度を増加させる作用剤を含有してもよい。
【０２４４】
代替的に、活性化合物は、使用前に適当な媒体、例えば、発熱物質非含有滅菌水で構成するための粉末形態としてもよい。
【０２４５】
該化合物は、例えば、カカオ脂や他のグリセリドなどの従来からの座薬基剤を含有する、座薬または保持浣腸などの直腸または膣用組成物中に処方してもよい。
【０２４６】
これまで述べた製剤以外に、該化合物はデポー製剤として処方してもよい。このような持続作用性製剤は、ポリマー性か、疎水性の適当な物質（例えば、許容できる油中のエマルジョンとして）、もしくはイオン交換樹脂と共に、または難溶性誘導体、例えば難溶塩として処方してもよい。
【０２４７】
医薬組成物は、固相またはゲル相の適当な担体または賦形剤を含んでもよい。このような担体または賦形剤の例には、それだけに限らないが、炭酸カルシウム、リン酸カルシウム、多種の糖類、澱粉、セルロース誘導体、ゼラチン、およびポリエチレングリコールなどのポリマーなどが挙げられる。
【０２４８】
固体または液体の適切な製剤形態は、例えば、吸入用の水溶液もしくは塩水溶液であるか、マイクロカプセル化されている、蝸牛状化されている、金微粒子上に被覆されている、リポソーム中に含有されている、噴霧化されている、エアロゾルである、皮膚埋め込み用のペレットであるか、または皮膚内に掻き入れるために鋭利な物体上に乾燥されている。該医薬組成物には、顆粒、散剤、錠剤、被覆錠剤、（マイクロ）カプセル、坐剤、シロップ、エマルジョン、懸濁液、クリーム、ドロップまたは活性化合物の持続放出製剤も含まれ、そうしたものの調製時には、崩壊剤、結合剤、被覆剤、膨潤剤、潤滑剤、香味剤、甘味剤または可溶化剤などの賦形剤ならびに添加剤および／または補助剤が、前記のように通例使用される。該医薬組成物は、多様な薬物送達系における使用に適している。薬物送達法に関する簡単な総説については、参照により本明細書に組み込まれるＬａｎｇｅｒ  Ｒ（１９９０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４９：１５２７−３３を参照されたい。
【０２４９】
本発明の作用剤、ならびに場合により他の治療薬および／または抗原は、それ自体で（希釈せずに）、または薬学的に許容できる塩の形態で投与してもよい。医薬中に用いる場合、その塩は薬学的に許容できるものとすべきであるが、薬学的に許容できない塩を都合よく使用することにより、薬学的に許容できるその塩を調製してもよい。このような塩には、それだけに限らないが、以下の酸：塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、マレイン酸、酢酸、サリチル酸、ｐ−トルエンスルホン酸、酒石酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、マロン酸、コハク酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ベンゼンスルホン酸から調製した塩が含まれる。また、このような塩は、そのカルボン酸基のナトリウム塩、カリウム塩、カルシウム塩などのアルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩として調製することもできる。
【０２５０】
適当な緩衝剤には、酢酸および塩（１〜２％ｗ／ｖ）、クエン酸および塩（１〜３％ｗ／ｖ）、ホウ酸および塩（０．５〜２．５％ｗ／ｖ）、リン酸および塩（０．８〜２％ｗ／ｖ）などが挙げられる。適当な防腐剤には、塩化ベンザルコニウム（０．００３〜０．０３％ｗ／ｖ）、クロロブタノール（０．３〜０．９％ｗ／ｖ）、パラベン（０．０１〜０．２５％ｗ／ｖ）、チメロサール（０．００４〜０．０２％ｗ／ｖ）などが挙げられる。
【０２５１】
本発明の医薬組成物は、薬学的に許容できる担体中に場合により含まれる、本発明の作用剤の有効量、ならびに場合により抗原および／または他の治療剤を含有する。薬学的に許容できる担体という用語は、人間または他の脊椎動物への投与に適している、１種または複数の適合性で、固体または液体の充填剤、希釈剤または封入用物質を意味する。担体という用語は、活性成分と混合するとその適用が促進される、天然、合成いずれかの有機または無機の成分を意味する。医薬組成物の各成分は、所望の薬学的効率を実質的に損なうような相互作用が起こらないように、本発明の化合物および相互に混和することもできる。
【０２５２】
スクリーニング法
更に他の態様において、本発明は、ＴＬＲ７／８リガンドおよび／またはアダプターオリゴヌクレオチドを同定する方法を提供する。本法のステップは、同定される作用剤（即ち、リガンド対オリゴヌクレオチド）、リガンドがＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ７／８リガンドのいずれか、この方法に使用する細胞型が何かなどに応じて変動する。
【０２５３】
本明細書に示した教示に基づけば、ＴＬＲ７リガンドは、ＴＬＲ７シグナル伝達だけを刺激する能力、アダプターオリゴヌクレオチドの存在下でＴＬＲ８シグナル伝達（バックグランドレベルと比べ）を刺激する能力、および／またはアダプターオリゴヌクレオチドの存在下でのＴＬＲ７刺激の阻害によって、同定し得る。ＴＬＲ８リガンドは、アダプターオリゴヌクレオチドと併用した場合のＴＬＲ８シグナル伝達（バックグランドより高いレベルと比べ）の増強によって、同定し得る。ＴＬＲ７および８の両方を刺激する（単独で使用した際に）リガンドは、こうした活性の任意の組合せによって同定することができる。アダプターオリゴヌクレオチドは、ＴＬＲ７リガンドによるＴＬＲ７刺激を阻害し、ＴＬＲ７リガンドによるＴＬＲ８刺激を誘発し、および／またはＴＬＲ８リガンドからのＴＬＲ８刺激を増強する能力によって、同定し得る。
【０２５４】
こうした方法は、インビボ、インビトロいずれでも行い得る。インビトロアッセイは、本実施例に記録されている。適当な読取値には、それだけに限らないが、ＴＬＲ８刺激に対するＩＬ−１２、ＴＮＦ−αおよび／またはＩＦＮ−γ、ならびにＴＬＲ７刺激に対するＩＦＮ−αが含まれる。代替的に、該アッセイでは、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８シグナル伝達に応答する転写調節要素（例えば、ＮＦ−κＢ応答要素）に連結したレポーター遺伝子を有するレポーター構築体を採用してもよい。こうした構築体は、本実施例に記載されている。該アッセイでは、転写の上方または下方調節、翻訳の上方または下方調節、タンパク質の発現および／または分泌などを測定し得る。
【０２５５】
例えば、ＴＬＲ８リガンドアッセイでは、アダプターオリゴヌクレオチドの存在下および非存在下で、ＴＬＲ８発現細胞（または細胞集団）を試験リガンドと接触させ得る。該細胞は、好ましくはＴＬＲ８を発現するが、ＴＬＲ７またはＴＬＲ９を発現しない細胞である。ＴＬＲ８シグナル伝達は、オリゴヌクレオチドの存在下および非存在下で、試験リガンドに応答する細胞から測定される。次いで、オリゴヌクレオチドの非存在下と比較して、オリゴヌクレオチドの存在下で増強されるＴＬＲ８シグナル伝達プロファイルを有する試験リガンドが、ＴＬＲ８リガンドと同定される。このアッセイには、ＴＬＲ８またはＴＬＲ９を発現しないＴＬＲ７発現細胞を用いた、ＴＬＲ７シグナル伝達の分析を含めてもよい。この後者の分析は、該リガンドが、オリゴヌクレオチドの存在下でＴＬＲ８シグナル伝達に切り替わるＴＬＲ７リガンドであるという可能性を除外するために、使用することができる。
【０２５６】
既知のリガンドを用いた同様のアッセイから得た結果を図１２に示す。ロキソリビンおよびイムノシン（ＴＬＲ７特異的リガンド）は共に、ＯＤＮ６０５６存在下でＴＬＲ８シグナル伝達を刺激している。想定上のＴＬＲ７特異的リガンドも、定性的に同様なプロファイルを有すると予想されよう。Ｒ８４８（ＴＬＲ７、ＴＬＲ８兼用リガンド）によるＴＬＲ８シグナル伝達は、ＯＤＮ６０５６存在下で増強される。想定上のＴＬＲ８特異的リガンドも、定性的に同様なプロファイルを有すると予想されよう。ＴＬＲ７、ＴＬＲ８いずれのリガンドでもないリバビリンは、ＯＤＮ６０５６存在下または非存在下でＴＬＲ８シグナル伝達を刺激せず、このアッセイのＴＬＲ７／８リガンドに対する特異性を示している。
【０２５７】
アダプターオリゴヌクレオチドアッセイでは、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８またはＴＬＲ７／８用リガンドの存在下および非存在下で、ＴＬＲ８発現細胞（または細胞集団）を試験オリゴヌクレオチドと接触させ得る。該リガンドがＴＬＲ７リガンドであれば（単独で使用した際）、このアッセイにより、そのオリゴヌクレオチドを該リガンドと共に使用した場合、ＴＬＲ７シグナル伝達の阻害および／またはＴＬＲ８シグナル伝達の誘発を測定し得る。該リガンドがＴＬＲ８リガンドであれば（単独で使用した際）、このアッセイにより、そのオリゴヌクレオチドを該リガンドと共に使用した場合、該リガンド単独の効果と比較して、ＴＬＲ８シグナル伝達の増強を測定し得る。該リガンドがＴＬＲ７、ＴＬＲ８双方を刺激すれば（単独で使用した際）、このアッセイにより、前記読出し値の１つまたは複数を測定し得る。アッセイ結果は、陽性対照アッセイ（例えば、既知のアダプターオリゴヌクレオチドを用いるアッセイ）などと比較し得る。この方法は、そのオリゴヌクレオチドが、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ８リガンド自体であるか否かを判定するアッセイも包含し得る。
【０２５８】
こうした方法は、単独で使用した際には弱い刺激作用を示すが、オリゴヌクレオチドと併用した際には新たな、および／または増強されたシグナル伝達プロファイルを有するリガンドを特定するために、使用し得る。
【０２５９】
本発明を以下の実施例によって更に例示するが、その実施例を更に限定的なものと決して見なすべきではない。
【実施例】
【０２６０】
材料および方法
オリゴヌクレオチドおよび試薬
全てのオリゴヌクレオチドは、Ｂｉｏｓｐｒｉｎｇ（フランクフルト、ドイツ）から購入し、またはＣｏｌｅｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ＧｍｂＨ（ランゲンフェルト、ドイツ）により提供され、識別および純度についてＣｏｌｅｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ＧｍｂＨの管理を受け、リムルスアッセイで測定して検知限界以下の内毒素量（＜０．１ＥＵ／ｍｌ）を示した（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ、ヴェルヴィエ、ベルギー）。オリゴヌクレオチドは、内毒素非含有滅菌Ｔｒｉｓ−ＥＤＴＡ（Ｓｉｇｍａ、ダイセンホーフェン、ドイツ）中に懸濁し、微生物、内毒素双方の汚染を防止するために、無菌条件下で保存し、取り扱った。希釈は全て、内毒素非含有Ｔｒｉｓ−ＥＤＴＡを用いて行った。オリゴヌクレオチドの各配列は、表１および２に列挙してある。ロキソリビン（７−アリル−７，８−ジヒドロ−８−オキソグアノシン）（Ｓｉｇｍａ）は、最初１Ｎ  ＮａＯＨに溶解し、ＲＰＭＩ培地中に希釈し、ｐＨを１Ｎ  ＨＣｌで７．４に調節した（１９）。Ｒ−８４８（１−（２−ヒドロキシ−２−メチロプロピル）−２−メチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン）は、ＧＬＳｙｎｔｈｅｓｉｓ（ワーセスター、マサチューセッツ、米国）により商業的に合成されたもので、１０％ＤＭＳＯに溶解した。７−デアザグアノシン（ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ、ウィルミントン、マサチューセッツ、米国）は、１Ｎ  ＮａＯＨ中に１Ｍに溶解した。イノシン（Ｓｉｇｍａ）はＨ２Ｏに溶解した。希釈は全て、内毒素非含有Ｔｒｉｓ−ＥＤＴＡ中で行った。
【０２６１】
ＴＬＲアッセイ
ヒトＴＬＲ９、ＴＬＲ８またはＴＬＲ７を発現する、安定にトランフェクトしたＨＥＫ２９３細胞については、以前に記載した（１６、２０）。手短に言えば、ＨＥＫ２９３細胞は、各ヒトＴＬＲおよび６ｘＮＦ−κＢルシフェラーゼのレポータープラスミドを発現するベクターで、電気穿孔によりトランスフェクトした。安定なトランスフェクタント（３ｘ１０４細胞／ウェル）を加湿インキュベーター中３７℃、１６時間、ＯＤＮの非存在下または存在下でロキソリビンまたはＲ−８４８とインキュベートした。各データポイントは３回繰り返した。細胞を溶解し、ルシフェラーゼ遺伝子活性のアッセイ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ、ザヴェンテム、ベルギーのＢｒｉｔｅＬｉｔｅキットを用いる）を行った。オリゴヌクレオチドを添加しない場合の培地のレポーター遺伝子活性を基準として、刺激指数を計算した。
【０２６２】
細胞精製
健常者ドナーからの末梢血軟膜調製物をデュッセルドルフ大学（ドイツ）血液銀行から入手し、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ（Ｓｉｇｍａ）上での遠心分離によりＰＢＭＣを精製した。加湿インキュベーター中３７℃で、５％（ｖ／ｖ）熱不活化ヒトＡＢ血清（ＢｉｏＷｈｉｔｔａｋｅｒ）または１０％（ｖ／ｖ）熱不活化ＦＣＳ、２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、１００Ｕ／ｍｌペニシリン、および１００μｇ／ｍｌストレプトマイシン（全てＳｉｇｍａ製）を補足したＲＰＭＩ１６４０培地中で、細胞を培養した。
【０２６３】
サイトカイン検出およびフローサイトメトリー分析
ＰＢＭＣを５ｘ１０６細胞／ｍｌの濃度で再懸濁し、９６ウェル丸底プレート（２５０μｌ／ウェル）に添加した。ＰＢＭＣをＯＤＮおよび／またはロキソリビンの多様な濃度とインキュベートし、指示した時点後に培養上清（ＳＮ）を収集した。直ちに使用しない場合、必要となるまでＳＮを−２０℃で保存した。ＳＮ中のサイトカイン量は、市販のＥＬＩＳＡキット（ＩＬ−１２ｐ４０に対して、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製、ハイデルベルク、ドイツ）、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−α（Ｄｉａｃｌｏｎｅ製、ブザンソン、フランス）、またはＩＦＮ−γに対して市販の抗体（ＰＢＬ、ニューブランズウィック、ニュージャージー、米国）を用いて開発した自家製ＥＬＩＳＡを使用して評価した。
【０２６４】
細胞内染色のために、指示したオリゴヌクレオチド量および／またはロキソリビン濃度と９６ウェル丸底プレート（２５０μｌ／ウェル）中、ＰＢＭＣを５ｘ１０６細胞／ｍｌでインキュベートし、Ｂｒｅｆｅｌｄｉｎ  Ａ溶液（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を添加した。ＰＢＭＣを６時間インキュベートした。ＩＦＮ−γの細胞内染色のためには、Ｂｒｅｆｅｌｄｉｎ  Ａ溶液の添加前に、細胞をオリゴヌクレオチドおよび／またはロキソリビンと１６時間インキュベートした。細胞を収集し、細胞内染色を、製造業者の手順に従ってＩｎｔｒａｐｒｅｐ試薬（Ｂｅｃｋｍａｎ−Ｃｏｕｌｔｅｒ、ノイス、ドイツ）を用いて行った。単球（ＣＤ１４＋）、Ｂ細胞（ＣＤ１９＋）、およびＮＫ細胞（ＣＤ５６＋、ＣＤ３−）の同定のために、細胞を適切な抗体で染色した。フローサイトメトリーデータをＦＡＣＳＣａｌｉｂｕｒ上で収集し、コンピュータプログラムＣｅｌｌＱｕｅｓｔを用いて分析した（共にＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製）。フローサイトメトリー分析用の全ての抗体（ｍＡｂ）は、Ｄｉａｃｌｏｎｅ製ＣＤ１１ｃ、Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ（マルセイユ、フランス）製ＣＤ１４およびＭｉｌｔｅｎｙｉ（ベルギッシュグラートバッハ、ドイツ）製ＣＤ１２３を除き、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。ヒト単球は、製造業者（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）が説明するように、ＣＤ１４細胞分離キットを用いて全ＰＢＭＣから分離した。純度を決定するために、細胞をＣＤ１１ｃおよびＣＤ１４に対するｍＡｂで染色し、フローサイトメトリーにより同定した。全ての実験で、単球の純度は９５％を超えていた。精製単球（４ｘ１０６細胞／ｍｌ）は、増加していく各濃度のＯＤＮと２４時間インキュベートした。ＰＤＣは、製造業者（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ）が説明するように、ＢＤＣＡ−４  ｐＤＣ分離キットを用いて富化した。ＰＤＣ精製は、ＣＤ１２３（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ製）、ＨＬＡ−ＤＲおよびＣＤ１１ｃ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製）に対するｍＡｂで染色することにより、確認した。純度は約８５％であった。細胞（５ｘ１０５細胞／ｍｌ、２５０μｌ／ウェル）をオリゴヌクレオチドおよびロキソリビンと共に、またはそれらなしで２４時間培養した。ＳＮ中のＩＦＮ−αまたはＩＬ−１２ｐ４０は、前記の通り測定した。
【０２６５】
結果
ホモポリマーオリゴヌクレオチドとの共インキュベーションによるＴＬＲ８媒介シグナル伝達の配列選択的増強
ｈＴＬＲ８およびＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーター構築体を安定に発現するＨＥＫ２９３細胞を、Ｒ−８４８（１−（２−ヒドロキシ−２−メチロプロピル）−２−メチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４アミン）とオリゴヌクレオチドの存在下または非存在下でインキュベートした。次いで、異なるオリゴヌクレオチドとの共インキュベーションのＴＬＲ８媒介ＮＦ−κＢ活性化に対する影響を分析した。
【０２６６】
ホスホロチオエート骨格を有するオリゴ（ｄＴ）１７ホモポリマーＯＤＮのＯＤＮ６０５６は、Ｒ−８４８が刺激するＮＦ−κＢ活性化のレベルを著増させることが確認された（図１Ｂ）。ＯＤＮ６０５６単独では、ＴＬＲ８発現細胞中、２５μＭまでの濃度で相当程度のＮＦ−κＢ活性化（バックグランドの２．５倍以下）を刺激しなかった（未発表データ）。試験したオリゴヌクレオチド全てが、同等にＴＬＲ８シグナル伝達を増強したわけではない（例えば、関連性のないヘテロポリマー（ＯＤＮ１９８２）は、Ｒ−８４８によるＮＦ−κＢ活性化にさほど影響しなかった）ので、この効果はオリゴヌクレオチド依存性であると思われた。
【０２６７】
Ｒ−８４８のＯＤＮ６０５６との共インキュベーションは、ＴＬＲ８活性化の有効性だけでなく、効力も有意に増加させた。Ｒ−８４８のＥＣ５０は、０．１μＭ  ＯＤＮ６０５６の存在下で早くも顕著に低下した（実験３回の平均値で０．１μＭ  ＯＤＮ６０５６：ＥＣ５０（Ｒ−８４８）＝４．９μＭ；ＥＣ５０（Ｒ−８４８）単独＞３０μＭ）。しかし、ＯＤＮ６０５６の濃度が増加すると、ＥＣ５０が更に一層減少した（１μＭ  ＯＤＮ６０５６：ＥＣ５０（Ｒ−８４８）＝１．４μＭ；５μＭ  ＯＤＮ：ＥＣ５０（Ｒ−８４８）＝０．４μＭ）。この効果は、ＯＤＮ１９８２の場合にはＥＣ５０の減少がかなり小さかった（５μＭ  １９８２：ＥＣ５０（Ｒ−８４８）＝１９．０μＭ）ので、ＯＤＮ６０５６に特異的であった。ＴＬＲ８に対する刺激効果とは対照的に、ＯＤＮ６０５６（またはＯＤＮ１９８２）のｈＴＬＲ９発現ＨＥＫ２９３細胞上でのＴＬＲ９リガンドＣｐＧ  ＯＤＮ２００６との共インキュベーションは、ＣｐＧ媒介ＮＦ−κＢ刺激に影響しなかった（未発表データ）。
【０２６８】
観察された増強効果に対する潜在的な配列要件を調査し、異なるホスホロチオエートホモポリマー数種を試験した（表１）。オリゴ（ｄＴ）１７（ＯＤＮ６０５６）が最強の増強性を有し、オリゴ（ｄＵ）１７（配列番号１１）およびオリゴ（ｄＡ）１７（配列番号１２）がそれに続いた。オリゴ（ｄＣ）１７（配列番号１３）およびランダム化オリゴ（ｄＮ）１５に対しては、有意に小さい増強が検出された。ヘテロポリマーのＯＤＮ１９８２は増強活性を僅かしか示さず、オリゴ（ｄＧ）２４（配列番号１４）は活性を増強せずに、むしろＲ−８４８媒介ＮＦ−κＢ刺激を抑制した。ホスホロジエステル骨格を有するＯＤＮ６０５６の配列では、ＴＬＲ８媒介刺激に影響しなかった。オリゴヌクレオチドの長さも、ある程度の影響力を有するようであった。即ち、オリゴ（ｄＡ）２４（配列番号１５）は、それより短鎖のオリゴ（ｄＡ）１７（配列番号１２）と比べ、Ｒ−８４８との相乗作用が小さかった。
【０２６９】
ホモポリマーＴオリゴヌクレオチド存在下における、ＴＬＲ７特異リガンドによるＴＬＲ８発現細胞の刺激
Ｒ−８４８はｈＴＬＲ７、ｈＴＬＲ８双方のリガンドである（１６）が、ロキソリビン（７−アリル−７，８−ジヒドロ−８オキソグアノシン）はＴＬＲ７特異リガンドと記載された（１８）。ロキソリビン１０ｍＭまでの濃度は、ｈＴＬＲ８、ｈＴＬＲ９のいずれかでトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞においてＮＦ−κＢシグナル伝達を活性化しなかったが、ｈＴＬＲ７媒介シグナル伝達を活性化した（図２Ａ）。ＴＬＲ７リガンドではあるが、ロキソリビンおよびオリゴヌクレオチドをｈＴＬＲ８発現ＨＥＫ２９３細胞と共インキュベーションすると、ＮＦ−κＢシグナル伝達を活性化した（図２Ｂ）。この濃度依存性効果は、ＯＤＮ６０５６の存在下で専ら認められ、ＯＤＮ１９８２の存在下では認められなかった（図２Ｂ）。同様の観察は、別のＴＬＲ７リガンドである７−デアザグアノシンについてもなされた（１８）。７−デアザグアノシン単独では、ＯＤＮ６０５６の非存在下で５ｍＭまでの濃度でｈＴＬＲ８発現細胞上で不活性であったが、ＯＤＮ６０５６の存在下ではＴＬＲ８媒介ＮＦ−κＢ活性化を刺激した。ＨＥＫ２９３細胞においてＮＦ−κＢシグナル伝達を非特異的に活性化すると思われる化合物（未発表データ）のイノシンも、ｈＴＬＲ８発現ＨＥＫ２９３細胞上でＯＤＮ６０５６と共インキュベートした（図２Ｃ）。ＯＤＮ６０５６存在下でのイノシンによるＮＦ−κＢ活性化は、イノシンの非特異的活性化と比較して１０ｍＭまでの濃度で変化しなかった。
【０２７０】
同様の効果は、アデノシン系化合物である６−アミノ−９−ベンジル−２−ブトキシ−９Ｈ−プリン−８−オールについても観察されている。単独で使用した場合、この化合物は、ＴＬＲ７リガンドではあるがＴＬＲ８リガンドではない（図９Ａおよび９Ｂ）。ポリ（ｄＴ）１７アダプターオリゴヌクレオチドの存在下で使用した場合、ＴＬＲ８シグナル伝達を刺激することができる（図９Ｂ）。
【０２７１】
ＴＬＲ７シグナル伝達の配列非依存的阻害
こうしたデータは、小分子ＴＬＲ７リガンドが、ある種のオリゴヌクレオチドの存在下でＴＬＲ８依存性ＮＦ−κＢシグナル伝達を誘発することを示している。それにもかかわらず、その効果は、ＴＬＲ７発現ＨＥＫ２９３細胞では逆であった。オリゴヌクレオチドは、図１Ａ、３および９Ａに示すように、ＴＬＲ７特異リガンドおよびＴＬＲ７／８リガンドによるＴＬＲ７媒介ＮＦ−κＢ活性化を実際に阻害した。これまで試験した全てのホスホロチオエートオリゴヌクレオチドがｈＴＬＲ７活性化を阻害した（未発表データ）ので、この効果は配列非特異的であるように思われた。
【０２７２】
ＲＮＡアダプターオリゴヌクレオチドを用いたＴＬＲ８リガンドシグナル伝達の増強
ＴＬＲ７／８リガンドとしてＲ−８４８およびＲＮＡ系アダプターオリゴヌクレオチドを用いて、同様の実験を行った。図１０は、混合配列オリゴヌクレオチドおよびポリ（ｒＵ）１８オリゴヌクレオチドによる、ｈＴＬＲ８−ＬＵＣ−２９３細胞でのＮＦ−κＢ刺激に対する効果を示す。ポリ（ｒＵ）１８オリゴヌクレオチドの（ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ＊ｒＵ：配列番号５）は、単独で使用した場合、このオリゴヌクレオチドによるＮＦ−κＢの僅かな活性化で示される（図１０）ように、ＴＬＲ８を介してシグナル伝達する。混合配列ＲＮＡオリゴヌクレオチドの（ｒＧ＊ｒＣ＊ｒＣ＊ｒＡ＊ｒＣ＊ｒＣ＊ｒＧ＊ｒＡ＊ｒＧ＊ｒＣ＊ｒＣ＊ｒＧ＊ｒＡ＊ｒＡ＊ｒＧ＊ｒＧ＊ｒＣ＊ｒＡ＊ｒＣ＊ｒＣ：配列番号１６）は、単独で使用した場合、ＴＬＲ８を介してシグナル伝達しない。
【０２７３】
図１１では、ｈＴＬＲ８−ＬＵＣ−２９３細胞を増加していく量のＲ−８４８と、（ａ）ＴＥおよび５０μｇ／ｍｌ  ＤＯＴＡＰ、または（ｂ）５０μｇ／ｍｌ  ＤＯＴＡＰ存在下の表示ＯＲＮの５μＭのいずれかの存在下でインキュベートした。ＮＦ−κＢの刺激は、１６時間後にルシフェラーゼ活性の決定により測定した。刺激指数は、培地単独存在下でのバックグランドを基準にして計算した。その図が示すように、ポリ（ｒＵ）１８オリゴヌクレオチドのＴＬＲ８シグナル伝達に対する効果は、該オリゴヌクレオチドをＲ−８４８と組み合わせた場合、劇的に増強される（図１１）。ＴＬＲ７、ＴＬＲ８いずれに対するリガンドでもない混合配列ＲＮＡオリゴヌクレオチドも、図１１に示すように、Ｒ−８４８によるＴＬＲ８シグナル伝達を増強する。このデータは、ＲＮＡ系オリゴヌクレオチドがアダプターとしても機能できることを示している。
【０２７４】
ロキソリビンのオリゴ（ｄＴ）１７ＯＤＮとの共インキュベーションは、ヒトＰＢＭＣが示すサイトカインプロファイルを変化させる
ロキソリビンのＯＤＮ６０５６および１９８２との共インキュベーションがヒト免疫細胞に及ぼす効果を調べた。ロキソリビン単独とのインキュベーションは、ヒトＰＢＭＣを刺激してＩＦＮ−αを産生した（図４Ａ）。しかし、増加していくＯＤＮ濃度の存在下では、ロキソリビン誘導ＩＦＮ−αがバックグランド量に低下した。この効果は両種のＯＤＮについて認められたが、ＯＤＮ６０５６の方が強い抑制作用を有するように見えた。
【０２７５】
他のサイトカインの産生も調べた。ロキソリビン単独では、ヒトＰＢＭＣから少量のＩＬ−１２ｐ４０分泌しか誘発されなかった（図４Ｂ）。対照的に、ＯＤＮ６０５６の存在下では、ＩＬ−１２ｐ４０が相当な量で産生されたが、ロキソリビンと共用した同濃度のＯＤＮ１９８２は、培地単独を用いるバックグランドを超えてＩＬ−１２ｐ４０を誘導することはなかった。同様の結果は、ＩＬ−１２ｐ７０（未発表データ）およびＩＦＮ−γ（図４Ｃ）についても得られた。ＴＮＦ−α産生も、ロキソリビンおよびＯＤＮ６０５６を共インキュベートした場合に刺激された。しかし、ＴＮＦ−α産生は、ＯＤＮ１９８２をロキソリビンと共インキュベートした場合にも、ＯＤＮ６０５６との共インキュベーションで得られる量よりかなり少ないが、認められた。ＯＤＮ、ロキソリビンのいずれも、単独では有意量のＴＮＦ−α分泌を誘発しなかった（図４Ｄ）。
【０２７６】
ＩＬ−１２ｐ４０およびＴＮＦ−αは、ロキソリビンおよびオリゴ（ｄＴ）１７ＯＤＮで共同刺激した場合に単球により産生される
ロキソリビンおよびＯＤＮの組合せは、ＴＬＲ７媒介シグナル伝達を抑制するＴＬＲ８発現ＨＥＫ２９３細胞を活性化する。ヒトＴＬＲ８陽性免疫細胞がＩＬ−１２およびＴＮＦ−αの一次源であり、ＴＬＲ７陽性ｐＤＣがＩＦＮ−αの一次源であると仮説した。細胞内ＦＡＣＳ染色により、ＣＤ１４＋細胞の大多数は、ロキソリビンおよびＯＤＮ６０５６とヒトＰＢＭＣを共インキュベーションした際に、ＴＮＦ−αを産生することが判明した（図５Ａ）。単独で使用またはＯＤＮ１９８２と併用したロキソリビンは、ＴＮＦ陽性単球を僅かしか産生しなかった。ＩＬ−１２陽性単球の比率（％）は、ＴＮＦ−αに対する対応比率より小さかった。それにもかかわらず、ロキソリビンとＯＤＮ６０５６との組合せの相乗作用は、細胞内ＩＬ−１２に対しても明瞭に検出可能であった（図５Ｂ）。こうした実験のいずれでも、ＯＤＮおよびロキソリビンで刺激した際のＣＤ１９＋Ｂ細胞中には、細胞内ＩＬ−１２またはＴＮＦ−αを検出することができなかった（未発表データ）。ＩＦＮ−γの細胞源も調べた。ロキソリビンとＯＤＮとの組合せで、ＩＬ−１２が高度に刺激され、以前の研究から、ＩＬ−１２が、ＮＫ細胞においてＩＦＮ−γ分泌を誘発することが示された（２１〜２３）。したがって、ＩＦＮ−γ産生をヒトＮＫ細胞において評価した（図６）。ロキソリビンおよびＯＤＮ６０５６とヒトＰＢＭＣを共インキュベートした場合、ヒトＮＫ細胞中にＩＦＮ−γ産生を実際に観察することができたが、ヒトＰＢＭＣの上清のＩＦＮ−γタンパク質ＥＬＩＳＡで既に示した通り、各刺激単独では相当程度のＩＦＮ−γ産生を誘発することはなかった。
【０２７７】
ロキソリビンおよびＯＤＮ６０５６に応答した直接的なＴＬＲ媒介単球刺激を実証するために、ヒトＰＢＭＣの単球を精製し、ＯＤＮ６０５６または１９８２の存在下または非存在下でロキソリビンとインキュベートした。分離した単球は、両種の刺激、ロキソリビンおよびＯＤＮ６０５６に応答した場合だけ、ＩＬ−１２ｐ４０（図７Ａ）またはＴＮＦ−α（未発表データ）を産生した。
【０２７８】
Ｒ−８４８やロキソリビンのような免疫調節性小化合物とのヒトＰＢＭＣのインキュベーションによって、ｐＤＣによるＩＦＮ−α産生が誘発された（図７Ｂおよび（２４、２５））。したがって、ロキソリビンが刺激したＩＦＮ−α産生に対するＯＤＮ６０５６の抑制効果が認められれば、ｐＤＣにおけるＴＬＲ７媒介シグナル伝達の阻害の直接的結果になり得たであろう。この可能性を調べるために、ヒトｐＤＣを分離し、オリゴ（ｄＴ）１７ホモポリマーまたはヘテロポリマーのＯＤＮ存在下、ロキソリビンで刺激した（図７Ｂ）。富化したヒトｐＤＣは、ロキソリビン単独とインキュベートした場合、ＩＦＮ−αを多量に産生した。対照的に、ＯＤＮ６０５６またはＯＤＮ１９８２と共インキュベートした場合、ＩＦＮ−α産生は停止した。ＯＤＮ６０５６の抑制効果は、ＩＦＮ−α産生の停止に必要なＯＤＮ濃度がより低かったので、ＯＤＮ１９８２のその効果より強力に見えた。
【０２７９】
図８は、ＴＬＲ８−ＬＵＣ−２９３細胞を用いて生成したデータを示す。一定濃度のＲ−８４８（５０μモル）および指定したＯＤＮの増加していく量を使用した。基準化するために、Ｒ−８４８のルシフェラーゼ読出し値を１００％に設定した。その結果を左側パネルに示してある。図８の右側パネルは、増加していく量のＲ−８４８存在下、１７量体ポリＣオリゴヌクレオチド１μモル中のＴ含量増加の効果を示す。その活性は、チミジン２個だけでも増強され、チミジン６個以上になると劇的に増加する。
【０２８０】
考察
本データは、ｈＴＬＲ８の活性が、ある種のホスホロチオエートＯＤＮの存在により、調節できることを示している。免疫賦与性小化合物Ｒ−８４８がｈＴＬＲ７、ｈＴＬＲ８双方を活性化する能力（１６）に反映されるように、ｈＴＬＲ８はｈＴＬＲ７と最も密接な関係にある（２６）。しかし、ＴＬＲ７の活性化に必要なＲ−８４８濃度はより低いので、ｈＴＬＲ７は、ｈＴＬＲ８よりＲ−８４８による刺激に対して感受性がかなり高い。Ｒ８４８のホスホロチオエートオリゴ（ｄＴ）１７との共インキュベーションによって、ＴＬＲ８はＲ８４８による刺激に対する感受性を高め、しかしＴＬＲ７の活性化は阻害されたが、この結果は、このＴホモポリマー単独では、これらのＴＬＲのいずれにも相当程度の効果を示さないという事実と相反していた。
【０２８１】
該Ｔホモポリマーが、他の刺激によるＴＬＲ活性化に影響するか否かを判定するために、ＴＬＲ８を刺激しない２種のＴＬＲ７リガンド、ロキソリビンおよび７−デアザグアノシン（１８）に対するその効果を調べた。驚くべきことに、両種リガンドに対してオリゴ（ｄＴ）１７が存在すると、ＴＬＲ７依存性からＴＬＲ８依存性のＮＦ−κＢ活性化へ完全な切換えが起こり、ＴＬＲ７媒介シグナル伝達はオリゴ（ｄＴ）１７により抑制された。ヒトＴＬＲ８が、利用可能な生物学的アッセイでは多分検出できない、弱い結合親和性をロキソリビンに対して有することは考えられる。ある種のオリゴヌクレオチドの存在が、未知の機構によってロキソリビンのＴＬＲ８に対する親和性を増強し得るために、安定にトランスフェクトされた細胞におけるＴＬＲ８のロキソリビン媒介刺激を検出することができる。
【０２８２】
シグナル伝達経路または取込機構の全般に対してオリゴヌクレオチドが影響を及ぼす可能性は、除外することができない。しかし、オリゴ（ｄＴ）１７が、ｈＴＬＲ７（ＮＦ−κＢシグナル伝達の阻害）、ｈＴＬＲ９（作用なし）またはｈＴＬＲ８（シグナル伝達の強い増強）をトランスフェクトしたＨＥＫ２９３細胞に対し異なる作用様式を示したという事実は、この可能性を強く否定している。観察された相乗作用は、異所性にＴＬＲ８を発現する細胞に限定されなかった。ヒトＴＬＲ７は、主にｐＤＣおよびＢ細胞上に発現される。こうした細胞はＴＬＲ８を発現しない一方、ＴＬＲ８は骨髄性細胞において発現される（２７〜３０）。実際のところ、ロキソリビンおよびＯＤＮのサイトカイン産生（ＩＬ−１２およびＴＮＦ−α）に対する相乗作用は、単球などの、内因的にＴＬＲ８を発現するヒト面細胞において測定された。対照的に、ロキソリビンおよびＲ−８４８で誘導されるＩＦＮ−αの大部分は、ヒトｐＤＣにおけるＴＬＲ７の活性化により産生される（当方データおよび（４、２４、２５））。これらのＴＬＲ７刺激によるｐＤＣにおけるＩＦＮ−α産生の活性化は、ホスホロチオエートＯＤＮとのインキュベーションにより完全に抑制されたが、このことは、ＴＬＲ７トランスフェクト細胞で見られた阻害効果と一致している。ＴＬＲ８に関して認められた配列選択的刺激効果とは対照的に、トランスフェクト細胞またはｐＤＣにおけるホスホロチオエートＯＤＮによるＴＬＲ７媒介シグナル伝達の阻害には、明白な配列依存性がなかった。ＯＤＮおよびロキソリビンの組合せは、ｐＤＣ由来ＩＦＮ−αから単球由来ＩＬ−１２およびＴＮＦ−αへの切換えだけでなく、ＮＫ細胞からのＩＦＮ−γの分泌も起こした。ヒトＮＫ細胞は、ＴＬＲ７およびＴＬＲ８の発現を欠いている（３１）ため、ＮＫ細胞由来ＩＦＮ−γの刺激は、恐らくＩＬ−１２に媒介された間接効果であるように見える（３２）。まとめると、ロキソリビン媒介免疫効果のプロファイルの完全な変化は、ある種のオリゴヌクレオチドを添加しただけで観察された。更に、これらのデータは、ある程度配列特異的な効果を指摘しており、ホスホロチオエートＴ多含量のＯＤＮが、ＴＬＲ８を活性化するために、ＴＬＲ７特異リガンドと併用できる最も効果的なＯＤＮである。
【０２８３】
幾つかの報告では、骨髄性の樹状細胞および単球が、ｍＲＮＡレベルでＴＬＲ７、ＴＬＲ８の双方を発現することが示されている（２７〜２９）。これらの細胞においてＴＬＲタンパク質の発現を実際に示すデータは、得られていない。ロキソリビンによる単球の直接刺激も、こうした実験で検出されなかった。対照的に、ロキソリビンおよびオリゴヌクレオチドの組合せだけが、単球由来サイトカインの産生を誘発した。こうした結果は、単球におけるＴＬＲ７の機能的発現を否定し、オリゴヌクレオチドおよびロキソリビンが標的とする受容体として、ＴＬＲ８を指示している。更に、ロキソリビン単独では有意量のＩＬ−１２を誘導しなかったが、Ｒ−８４８が誘発するヒトＰＢＭＣでのＩＬ−１２産生は報告されており（２９）、これは、両種ＴＬＲを刺激するＲ−８４８の能力と一致している（１６）。ＴＬＲ７、ＴＬＲ８の双方を発現し得る細胞において、両種受容体を刺激する化合物でどちらのＴＬＲが活性化されているかに関して、明確な識別をすることは非常に困難である。Ｉｔｏ等（３３）は、ｍＤＣが、Ｒ−８４８で刺激した場合にＩＬ−１２を産生するが、ＩＦＮ−αを産生しないと報告した。対照的に、ｐＤＣは、Ｒ−８４８または他のＴＬＲリガンドで刺激した場合にＩＬ−１２を産生しないが、ＩＦＮ−αを確かに産生し（２５）、このことは、ｍＤＣにおけるＩＬ−１２のＴＬＲ８媒介誘導、およびｐＤＣにおけるＩＦＮ−αのＴＬＲ７媒介誘導を示している。Ｒ−８４８またはロキソリビンのオリゴ（ｄＴ）１７ＯＤＮとの共インキュベーションですら、ヒトｐＤＣによるＩＬ−１２産生を起こさなかったため、このシグナルは、ｐＤＣにおいて適正な経路を活性化するには不十分であることを示唆した。
【０２８４】
オリゴヌクレオチドが結合し、エフェクター分子として機能し得る（多分アロステリックな）調節部位を、ある種のＴＬＲが有するモデルを仮定することは、魅力的である。ＴＬＲ７の場合、ホスホロチオエートオリゴヌクレオチドが、アンタゴニストとして作用するように思われる。したがって、ＴＬＲ７に結合するオリゴヌクレオチドは、例えば、その受容体内の適正な立体構造変化を悪化させることにより、結合ポケットへのＴＬＲ７リガンドの適切な結合、または適正な下流へのシグナル伝達を阻害し得る。他方、Ｔ多含量オリゴヌクレオチドのＴＬＲ８への結合は、（アロステリックな）活性化剤として機能することができ、Ｒ−８４８もしくはロキソリビンのような他の小分子リガンドの活性ＴＬＲ８結合ポケットへの結合量増加、または下流へのシグナル伝達の増加を可能にする。結合性ドメインが２箇所関与しているか否か、または小分子リガンドおよびエフェクターＯＤＮの結合が同じ部位に起こり得るか否かは、現在のところ決定することができない。数種のファミリーの受容体に対して、アロステリック増強剤が知られている。例えば、Ｋｎｏｆｌａｃｈ等（３４）は、Ｇタンパク質共役型受容体ファミリーに属する代謝調節型のグルタミン酸受容体に対する、アロステリック増強剤として挙動する小分子２部類の特定を報告した。受容体構造の詳細な分析により、増強剤結合部位は膜貫通ドメイン内に位置決定された。他の研究では、小分子が、ムスカリン様アセチルコリン受容体に対するアロステリック増強剤として作用できることが示されている（３５）。ある種の２−アミノチオフェンは、リガンド−受容体−Ｇタンパク質３成分複合体を安定化させ、非占有受容体およびＧタンパク質の結合を増加させること（３８）により、アデノシン受容体Ａ１のアロステリック増強剤として作用する（３６、３７）。興味深いことに、Ｇａｏ等（３９）は、ヒトＡ３アデノシン受容体に結合するアゴニストのアロステリック増強剤として作用する、一連のイミダゾキノリン誘導体を見出した。最近Ｒｕｔｚ等（４０）は、ＳＰＲバイオセンサー分析を用いて、小分子のクロロキンおよびキナクリンによる、精製ＴＬＲ９タンパク質に対するＣｐＧ  ＯＤＮ結合の直接的遮断を示した。こうした知見は、これらの分子が、ＴＬＲ９の細胞外ドメインに直接結合し、ＴＬＲ９媒介シグナル伝達のアンタゴニストとして作用することを示している。したがって、前記のオリゴヌクレオチドおよび小分子は、ＴＬＲ７および８に直接結合することもあり得る。単離タンパク質および各受容体リガンドを用いて結合研究をすれば、小分子ＴＬＲリガンドとオリゴヌクレオチドとの組合せのＴＬＲ７またはＴＬＲ８に対する正確な作用機構に対して、更なる洞察が得られよう。こうした知見は、ＴＬＲの分子的シグナル伝達機構の理解、ならびに薬学研究および薬物開発にとって重要な意味をもち得る。本発明によれば、ＴＬＲファミリーの２構成員、ＴＬＲ８およびＴＬＲ７のシグナル伝達活性は、ある種のオリゴヌクレオチドの有無により操作できることが実証された。まとめると、これらの結果は、ある種のオリゴヌクレオチドと組み合わせたロキソリビン（または他の小分子）を用いる、免疫応答の新たな修飾法を���唆している。これらの分子の組合せによって、ＴＬＲ小分子リガンドのシグナル伝達活性を異なるＴＬＲへ向け直すことにより、そのサイトカインプロファイルを変更することが可能である。変更または強化された免疫応答は、多様な疾患の治療に有益となろう。
【０２８５】
【表１】
2009510096.tif 000003
ｈＴＬＲ８およびＮＦ−κＢレポーター構築体を発現するＨＥＫ２９３細胞を、表示したＯＤＮ５μＭの非存在下または存在下でＲ−８４８の５０μＭとインキュベートした。ＯＤＮ非存在下でのＲ−８４８によるＮＦ−κＢ刺激を１００％に設定し、それに従ってＲ８４８活性に対する効果を計算した。数値は２〜４回の実験の平均値（±ＳＤ）を表す。「Ｎ」はランダムな順序でＡ、Ｃ、ＧまたはＴを表す。「＊」はホスホロチオエート骨格を表示し、「＿」はホスホジエステル骨格を表示する。
【０２８６】
【表２】
2009510096.tif 000004
参考文献
【０２８７】
【表３−１】
2009510096.tif 000005
【０２８８】
【表３−２】
2009510096.tif 000006
【０２８９】
【表３−３】
2009510096.tif 000007
【０２９０】
【表３−４】
2009510096.tif 000008
【０２９１】
等価事項
前出の明細書は、当業者が本発明を実施することを可能とするのに十分であると見なされる。提示した実施例は本発明の一態様を単に例示することを意図しているので、本発明はその実施例のために範囲が限定されるべきではなく、他の機能的に等価な実施形態も本発明の範囲に入る。本明細書に示し、記載した改変以外の本発明の多様な改変も、前記の記載から当業者には明白であろうし、添付した特許請求の範囲に入ることになろう。本発明の利点は、本発明の各実施形態により必ずしも包含されてはいない。
【０２９２】
本出願で引用した全ての参考文献、特許および特許公開は、その全体が参照により本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【０２９３】
【図１】図１Ａ〜１Ｂは、ＯＤＮによるヒトＴＬＲ８およびＴＬＲ７に対するＲ−８４８媒介活性の選択的な増強および阻害を示す。図１Ａは、ＯＤＮ６０５６（配列番号３）および１９８２（配列番号４）（各配列については表１および２を参照されたい）による、ヒトＴＬＲ７に対するＲ−８４８活性の阻害を示す。ＴＬＲ７およびＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーター構築体を安定に発現するＨＥＫ２９３細胞を、オリゴ（ｄＴ）１７ホモポリマーのＯＤＮ６０５６、またはヘテロポリマーのＯＤＮ１９８２の表示量の存在下または非存在下、２μＭ  Ｒ−８４８とインキュベートした。Ｒ−８４８単独の活性を１００％に設定した。全てのデータポイントは三重にアッセイし、平均値（＋／−ＳＤ）で表示してある。示した結果は、独立実験３回以上のうちの１つである。図１Ｂは、オリゴ（ｄＴ）１７ＯＤＮによる、ヒトＴＬＲ８に対するＲ−８４８活性の配列選択的増強を示す。ｈＴＬＲ８およびＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーター構築体を安定に発現するＨＥＫ２９３細胞を、オリゴ（ｄＴ）１７ホモポリマーのＯＤＮ６０５６、またはヘテロポリマーのＯＤＮ１９８２の非存在下または０．１、１および５μＭの存在下、増量系列のＲ−８４８とインキュベートした。ＮＦ−κＢ活性化の刺激は、培地バックグランドに対して算出した。全てのデータポイントは三重にアッセイし、平均値（±ＳＤ）で表示してある。示した結果は、独立実験４回のうちの１つである。
【図２】図２Ａ〜Ｃは、オリゴ（ｄＴ）１７ＯＤＮと比較した際の、ＴＬＲ７リガンドであるロキソリビンおよび７−デアザグアノシンの変化した標的特異性を示す。図２Ａでは、ｈＴＬＲ７、ｈＴＬＲ８またはｈＴＬＲ９を安定に発現するＨＥＫ２９３細胞を、増量系列のロキソリビンとインキュベートした。ＮＦ−κＢの活性化は、１６時間後のルシフェラーゼ活性のアッセイにより測定し、培地バックグランドに対する刺激倍率として表示した。図２Ｂでは、ｈＴＬＲ８を発現するＨＥＫ２９３細胞を、ホモポリマーＯＤＮ６０５６またはヘテロポリマーＯＤＮ１９８２の非存在下または表示濃度の存在下、増量系列のロキソリビンとインキュベートした。ＮＦ−κＢの活性化は、培地バックグランドに対する誘導倍率として示す。図２Ｃでは、増量系列の７−デアザグアノシン（左側パネル）およびイノシン（右側パネル）を、５μＭ  ＯＤＮ６０５６の非存在下（黒丸）または存在下（白丸）、ｈＴＬＲ８発現性ＨＥＫ２９３細胞上でアッセイし、培地バックグランドに対するＮＦ−κＢの活性化を算出した。全てのデータポイントは三重にアッセイした。独立実験３回のうちの１つから得たデータを示してある。
【図３】図３Ａ〜３Ｂは、ＯＤＮ６０５６が、ＨＥＫ２９３細胞におけるＴＬＲ媒介ＮＦ−κＢ活性化を阻害することを示す。ｈＴＬＲ７およびＮＦ−κＢルシフェラーゼレポーター構築体を安定に発現するＨＥＫ２９３細胞を、ＯＤＮ６０５６の表示濃度の存在下または非存在下、２．５ｍＭ  ロキソリビン（図３Ａ）または２μＭ  Ｒ−８４８（図３Ｂ）と１６時間インキュベートした。ＮＦ−κＢ活性化の刺激は、培地バックグランドに対して算出した。全てのデータポイントは三重にアッセイし、平均値（±ＳＤ）で表示してある。示した結果は、独立実験２回のうちの１つである。
【図４】図４Ａ〜４Ｄは、特異的ＯＤＮによるロキソリビン誘導サイトカイン産生の向け直しを示す。ヒトＰＢＭＣを、ＯＤＮ６０５６およびＯＤＮ１９８２の非存在下、またはその個々の増量系列の存在下、１ｍＭ  ロキソリビンとインキュベートした。上清を２４時間後に集め、ＩＦＮ−α（図４Ａ）、ＩＬ−１２ｐ４０（図４Ｂ）、ＩＦＮ−γ（図４Ｃ）およびＴＮＦ−α（図４Ｄ）の量をＥＬＩＳＡで測定した。数値は供与者３人の平均値（±ＳＥＭ）を表す。データは、実験４回のうちの代表的１実験のものである。
【図５】図５Ａ〜５Ｆは、ロキソリビンおよびオリゴ（ｄＴ）１７ＯＤＮと共培養した際の、ヒト単球の刺激によるＩＬ−１２ｐ４０およびＴＮＦ−αの産生を示す。ヒトＰＢＭＣを、ロキソリビンおよびＯＤＮの表示量とインキュベートした。抗ＩＬ−１２ｐ４０／ｐ７０（図５Ａ）および抗ＴＮＦ−α（図５Ｂ）抗体を用いて、細胞内染色を行った。細胞を抗ＣＤ１４および抗ＣＤ１９抗体で同時に染色した。細胞からＣＤ１４陽性細胞を選別し、ＩＬ−１２ｐ４０／ｐ７０陽性またはＴＮＦ−α陽性細胞の比率（％）を算出した。結果は供与者３人の平均値（±ＳＥＭ）を示す。図５Ｃ〜５Ｆは、フローサイトメトリーの代表的ドットブロットを表示する。独立実験２回のうちの１つを示してある。
【図６】図６Ａ〜６Ｌは、ロキソリビンおよびオリゴ（ｄＴ）１７ＯＤＮ６０５６と共培養した際の、ヒトＮＫ細胞の刺激によるＩＦＮ−γの産生を示す。ヒトＰＢＭＣを、ロキソリビンおよびＯＤＮの表示量とインキュベートした。抗ＩＦＮ−γ抗体を用いて、細胞内染色を行った。細胞は抗ＣＤ５６および抗ＣＤ３抗体で染色した。細胞からＣＤ５６陽性／ＣＤ３陰性細胞（ＮＫ細胞）を選別した。ＩＦＮ−γ陽性細胞の比率（％）を算出した後、フローサイトメトリーのドットブロット内に表示してある。供与者５人のうち、代表的２人を示してある。
【図７】図７Ａおよび７Ｂは、単離細胞集団のサイトカイン産生に対する、ロキソリビンとＯＤＮとの共インキュベーションの影響を示す。図７Ａでは、ＣＤ１４ｍＡｂを用いてヒトＰＢＭＣから単球を分離し（９６％純度）、ＯＤＮの存在下または非存在下、ロキソリビンの表示量とインキュベートした。ＩＬ−１２ｐ４０の量は、ＥＬＩＳＡにより上清中で決定した。データは、供与者２人の個別の結果を表示する（灰色および黒色の棒）。類似の３実験のうち１つを示してある。図７Ｂでは、ＢＤＣＡ−４ｍＡｂを用いて供与者２人（灰色および黒色の棒）のヒトＰＢＭＣから、ＰＤＣを富化し（８５％純度）、ロキソリビンとＯＤＮとの組合せ表示量と２４時間インキュベートした。ＩＦＮ−αは、ＥＬＩＳＡにより上清中で検出した。類似の３実験のうち１実験のデータを示してある。
【図８】図８Ａは、ＯＤＮの表示量の存在下、５０μＭ  Ｒ−８４８と１６時間インキュベートしたｈＴＬＲ８−ＬＵＣ−２９３細胞に対する作用を示す。ＮＦ−κＢの刺激量は、ルシフェラーゼ活性のアッセイにより測定した。５０μＭ  Ｒ−８４８単独で誘導されたＮＦ−κＢの活性を１００％に設定した。図８Ｂは、表示したＯＤＮ１μＭの存在下、増加濃度系列のＲ−８４８と１６時間インキュベートしたｈＴＬＲ８−ＬＵＣ−２９３細胞を示す。ＮＦ−κＢの刺激量は、ルシフェラーゼ活性のアッセイにより測定した。
【図９】図９Ａおよび９Ｂは、ＴＬＲ７特異リガンド、６−アミノ−９−ベンジル−２−ブトキシ−９Ｈ−プリン−８−オールおよびＯＤＮ６０５６の組合せを用いた、ＴＬＲ７およびＴＬＲ８のシグナル伝達を示す。図９Ａは、ＴＬＲ７シグナル伝達に対する該組合せの作用を示す。図９Ｂは、ＴＬＲ８シグナル伝達に対する該組合せの作用を示す。
【図１０】図１０は、２種のＲＮＡのＴＬＲ８シグナル伝達に対する作用を示す。ポリ（ｒＵ）１８（配列番号５）は、ＴＬＲ７／８リガンドの非存在下でＴＬＲ８を刺激する。混合ＲＮＡオリゴ（配列番号１６）は、ＴＬＲ８だけを刺激しない。
【図１１】図１１は、ＴＬＲ７／８リガンドの存在下、２種のＲＮＡのＴＬＲ８シグナル伝達に対する作用を示す。
【図１２】図１２は、ＴＬＲ７リガンド（ロキソリビン、イムノシン）、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８兼用リガンドであるリガンド（Ｒ８４８）、およびＴＬＲ７／８リガンドではない化合物（リバビリン）に対する、ＯＤＮ６０５６のＴＬＲ８媒介作用を示す。
【図１３】図１３Ａ〜Ｄは、イムノシン（Ａ）、３’末端もしくは内部で（Ｂ）、または５’末端（Ｃ）でオリゴヌクレオチドにコンジュゲートできる、２種のイムノシン変異体／モノマー（ＢおよびＣ）、ならびに６−アミノ−９−ベンジル−２−ブトキシ−９Ｈ−プリン−８−オール（Ｄ）の構造を示す。
【図１４】図１４は、リンカーを含むイムノシン−オリゴヌクレオチドコンジュゲートの構造を示す。
【図１５】図１５Ａ〜Ｃは、Ｒ８４８（Ａ）、ＣＬ−０２９（Ｂ）およびイムノシン（Ｃ）の構造、ならびにリンカーおよび／またはオリゴヌクレオチドが結合し得る点を示す。
【０２９４】
＜配列表＞
2009510096.tif 000009
2009510096.tif 000010
2009510096.tif 000011
2009510096.tif 000012
2009510096.tif 000013
【図１】
2009510096.tif 000015
【図２−１】
2009510096.tif 000016
【図２−２】
2009510096.tif 000017
【図３】
2009510096.tif 000018
【図４−１】
2009510096.tif 000019
【図４−２】
2009510096.tif 000020
【図５−１】
2009510096.tif 000021
【図５−２】
2009510096.tif 000022
【図６−１】
2009510096.tif 000023
【図６−２】
2009510096.tif 000024
【図７】
2009510096.tif 000025
【図８】
2009510096.tif 000026
【図９】
2009510096.tif 000027
【図１０】
2009510096.tif 000028
【図１１】
2009510096.tif 000029
【図１２】
2009510096.tif 000030
【図１３】
2009510096.tif 000031
【図１４】
2009510096.tif 000032
【図１５】
2009510096.tif 000033
【配列表】
2009510096000001.xml
【手続補正書】
【提出日】平成20年6月4日(2008.6.4)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＴＬＲ７／８リガンドとアダプターオリゴヌクレオチドの、ＴＬＲ８媒介免疫応答を刺激するための医薬の製造における使用。
【請求項２】
アダプターオリゴヌクレオチドの、ＴＬＲ７媒介免疫応答を経験した対象においてＴＬＲ７媒介免疫応答をＴＬＲ８媒介免疫応答に向け直すための医薬の製造における使用。
【請求項３】
ＴＬＲ７／８リガンドがＴＬＲ７特異リガンドである、請求項１に記載の使用。
【請求項４】
ＴＬＲ７特異リガンドがＣ８置換グアノシンである、請求項１に記載の使用。
【請求項５】
Ｃ８置換グアノシンが、７−アリル−７，８−ジヒドロ−８−オキソグアノシン（ロキソリビン）、７−チア−８−オキソグアノシン（イムノシン）、８−メルカプトグアノシン、８−ブロモグアノシン、８−メチルグアノシン、８−オキソ−７，８−ジヒドログアノシン、Ｃ８−アリールアミノ−２’−デオキシグアノシン、Ｃ８−プロピニルグアノシン、Ｃ８−およびＮ７−置換グアニンリボヌクレオシド、７−メチル−８−オキソグアノシン、８−アミノグアノシン、８−ヒドロキシ−２’−デオキシグアノシン、７−デアザ−８置換グアノシン、ならびに８−ヒドロキシグアノシンである、請求項４に記載の使用。
【請求項６】
Ｃ８置換グアノシンがロキソリビンである、請求項４に記載の使用。
【請求項７】
ＴＬＲ７特異リガンドが７−デアザグアノシンである、請求項３に記載の使用。
【請求項８】
ＴＬＲ７特異リガンドが、６−アミノ−９−ベンジル−２−（３−ヒドロキシ−プロポキシ）−９Ｈ−プリン−８−オールまたは６−アミノ−９−ベンジル−２−ブトキシ−９Ｈ−プリン−８−オールである、請求項３に記載の使用。
【請求項９】
ＴＬＲ７／８リガンドがＴＬＲ８特異リガンドである、請求項１に記載の使用。
【請求項１０】
ＴＬＲ７／８リガンドが、ＴＬＲ７リガンドであり、ＴＬＲ８リガンドである、請求項１に記載の使用。
【請求項１１】
ＴＬＲ７／８リガンドがイミダゾキノリンである、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
イミダゾキノリンが、イミダゾキノリンアミン、イミダゾピリジンアミン、６，７−縮合シクロアルキルイミダゾピリジンアミン、１，２架橋イミダゾキノリンアミン、Ｒ−８４８（Ｓ−２８４６３もしくはレシキモド（ｒｅｓｉｑｕｉｍｏｄ））、４−アミノ−２エトキシメチル−α，α−ジメチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−エタノール、１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン（Ｒ−８３７もしくはイミキモド（Ｉｍｉｑｕｉｍｏｄ））、またはＳ−２７６０９である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
イミダゾキノリンがＲ−８４８である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１４】
アダプターオリゴヌクレオチドが非メチル化ＣｐＧモチーフを含む、請求項１または２に記載の使用。
【請求項１５】
アダプターオリゴヌクレオチドが非メチル化ＣｐＧを含まない、請求項１または２に記載の使用。
【請求項１６】
アダプターオリゴヌクレオチドが、５’Ｎ−ＴＴＴＴＴ−Ｎ３’を含み、Ｎが任意のヌクレオチドである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項１７】
アダプターオリゴヌクレオチドが、５’Ｎ−ＴＴＴＴＴＴ−Ｎ３’を含み、Ｎが任意のヌクレオチドである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項１８】
アダプターオリゴヌクレオチドがｄＴホモポリマーである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項１９】
アダプターオリゴヌクレオチドが、ホスホロチオエート骨格修飾を含む、請求項１または２に記載の使用。
【請求項２０】
ＴＬＲ７／８リガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドが、別々の投与用に調製される、請求項１に記載の使用。
【請求項２１】
ＴＬＲ７／８リガンドおよびアダプターオリゴヌクレオチドが、相互にコンジュゲートしている、請求項１に記載の使用。
【請求項２２】
アダプターオリゴヌクレオチドがＤＮＡである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項２３】
アダプターオリゴヌクレオチドがＲＮＡである、請求項１または２に記載の使用。
【請求項２４】
医薬が抗原とともに用いられる、請求項１または２に記載の使用。
【請求項２５】
対象が感染症を有している、請求項１または２に記載の使用。
【請求項２６】
対象が癌を有している、請求項１または２に記載の使用。
【請求項２７】
対象がアレルギーまたは喘息を有している、請求項１または２に記載の使用。
【請求項２８】
６−アミノ−９−ベンジル−２−（３−ヒドロキシ−プロポキシ）−９Ｈ−プリン−８−オールおよび６−アミノ−９−ベンジル−２−ブトキシ−９Ｈ−プリン−８−オール
からなる群から選択されるＴＬＲ７特異リガンドと、
アダプターオリゴヌクレオチドと
を含む組成物。
【請求項２９】
ＴＬＲ８特異リガンド、および
アダプターオリゴヌクレオチド
を含む組成物。
【請求項３０】
アダプターオリゴヌクレオチドが非メチル化ＣｐＧモチーフを含む、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項３１】
アダプターオリゴヌクレオチドが非メチル化ＣｐＧを含まない、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項３２】
アダプターオリゴヌクレオチドが、５’Ｎ−ＴＴＴＴＴ−Ｎ３’を含み、Ｎが任意のヌクレオチドである、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項３３】
アダプターオリゴヌクレオチドが、５’Ｎ−ＴＴＴＴＴＴ−Ｎ３’を含み、Ｎが任意のヌクレオチドである、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項３４】
アダプターオリゴヌクレオチドがｄＴホモポリマーである、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項３５】
アダプターオリゴヌクレオチドが、少なくとも１個のヌクレオチド間ホスホロチオエート連結部を含む、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項３６】
アダプターオリゴヌクレオチドがＤＮＡである、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項３７】
アダプターオリゴヌクレオチドがＲＮＡである、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項３８】
アダプターオリゴヌクレオチド、およびＴＬＲ７特異リガンドまたはＴＬＲ８特異リガンドが、相互にコンジュゲートしている、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項３９】
抗原を更に含む、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項４０】
医薬製剤である、請求項２８または２９に記載の組成物。
【請求項４１】
ＴＬＲ８リガンドを同定する方法であって、
アダプターオリゴヌクレオチドの存在下および非存在下、ＴＬＲ８発現性細胞を試験リガンドと接触させる段階、および
アダプターオリゴヌクレオチドの存在下および非存在下、該試験リガンドに応答するＴＬＲ８発現性細胞の刺激量を測定する段階
を含み、ＴＬＲ８リガンドは、アダプターオリゴヌクレオチドの存在下での刺激量の増加により同定される方法。
【請求項４２】
アダプターオリゴヌクレオチドを同定する方法であって、
試験アダプターオリゴヌクレオチドの存在下および非存在下、ＴＬＲ８発現性細胞をＴＬＲ７リガンドと接触させる段階、および
試験アダプターオリゴヌクレオチドの存在下および非存在下、ＴＬＲ７リガンドに応答するＴＬＲ８発現性細胞の刺激量を測定する段階
を含み、アダプターオリゴヌクレオチドは、該アダプターオリゴヌクレオチドの存在下でのＴＬＲ８発現性細胞の刺激量の増加により同定される方法。
【国際調査報告】
2009510096.tif 000039
2009510096.tif 000040
2009510096.tif 000041
2009510096.tif 000042