(57)【要約】  ベルベリンと同じ機構を介して機能する血中脂質低下剤（例えば、ベルベリン、１種若しくは複数の薬理学的に許容できるベルベリンの塩又はそれらの混合物）及びベルベリンと異なる機構を介して機能する血中脂質低下剤（例えば、フィトステロール、フィトスタノール、それらのエステル又はそれらの混合物）が相乗的に作用して、例えば総コレステロール、ＬＤＬ−Ｃ又は非ＨＤＬ−Ｃ、及びトリグリセリドを低下させ、ＨＤＬ−Ｃと非ＨＤＬ−Ｃの比を増加させる等、血中脂質プロファイルを改善する。前記２種は併用して、心血管疾患、高脂血症、アテローム性動脈硬化症、冠状動脈性心臓病、狭心症、脳血管疾患、発作、体重超過若しくは肥満、糖尿病、インシュリン抵抗性、高血糖症、高血圧症、不整脈、中枢神経系の疾患、末梢神経系の疾患及び／又は炎症を治療するか、或いはこれらの疾患にかかる可能性を低下させることができる。また、ベルベリンと同じ機構を介して機能する前記血中脂質低下剤は、ベルベリンと異なる機構を介して機能する血中脂質低下剤と共に、又はそれなしで体重管理のために使用してもよい。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
ベルベリンと同じ機構を介して機能する血中脂質低下剤と、ベルベリンと異なる機構を介して機能する血中脂質低下剤とを含む血中脂質濃度低下組成物。
【請求項２】
ベルベリンと同じ機構を介して機能する前記血中脂質低下剤が、ベルベリン、１種若しくは複数の薬理学的に許容できるベルベリンの塩又はそれらの混合物を含む、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
ベルベリンと異なる機構を介して機能する前記血中脂質低下剤が、植物ステロール、植物スタノール、スタチン、イソフラボン、それらを１種若しくは複数含有する天然物、それらの誘導体、又はそれらの混合物を含む、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項４】
ベルベリンと異なる機構を介して機能する前記血中脂質低下剤が、植物ステロール、植物スタノール、植物ステロールのエステル、植物スタノールのエステル又はそれらの混合物を含む、請求項１又は２に記載の組成物。
【請求項５】
紅麹米をさらに含む、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
接着防止剤、結合剤、剤皮、崩壊剤、賦形剤若しくは希釈剤、香味料、着色料、流動促進剤、滑沢剤、防腐剤、収着剤、甘味料、酸化防止剤又はそれらの混合物をさらに含む、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項７】
哺乳動物における血中脂質濃度を低下させるための、ベルベリンと同じ機構を介して機能する血中脂質低下剤及びベルベリンと異なる機構を介して機能する血中脂質低下剤の使用。
【請求項８】
哺乳動物における血中脂質濃度を低下させる薬剤を製造するための、ベルベリンと同じ機構を介して機能する血中脂質低下剤及びベルベリンと異なる機構を介して機能する血中脂質低下剤の使用。
【請求項９】
哺乳動物の体重を管理するための、ベルベリンと同じ機構を介して機能する血中脂質低下剤及びベルベリンと異なる機構を介して機能する血中脂質低下剤の使用。
【請求項１０】
低下させる前記血中脂質濃度がトリグリセリド濃度を含む、請求項７又は８に記載の使用。
【請求項１１】
低下させる前記血中脂質濃度が低密度リポタンパク質コレステロール濃度又は非高密度リポタンパク質コレステロール濃度を含む、請求項７、８又は１０に記載の使用。
【請求項１２】
低下させる前記血中脂質濃度が総コレステロール濃度を含む、請求項７、８、１０又は１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記の血中脂質濃度の低下により、心血管疾患、高脂血症、アテローム性動脈硬化症、冠状動脈性心臓病、狭心症、脳血管疾患、発作、体重超過若しくは肥満、糖尿病、インシュリン抵抗性、高血糖症、高血圧症、不整脈、中枢神経系の疾患、末梢神経系の疾患又は炎症を治療するか、或いはこれらの疾患にかかる可能性を低下させる、請求項７、８、１０、１１又は１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記の血中脂質濃度の低下により、冠状動脈性心臓病、アテローム性動脈硬化症、発作、不整脈、心筋梗塞又はサドンデス症候群を治療するか、或いはこれらの疾患にかかる可能性を低下させる、請求項７、８、１０、１１又は１２に記載の使用。
【請求項１５】
ベルベリンと同じ機構を介して機能する前記血中脂質低下剤が、ベルベリン、１種若しくは複数の薬理学的に許容できるベルベリンの塩又はそれらの混合物を含む、請求項７〜１４のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１６】
ベルベリンと異なる機構を介して機能する前記血中脂質低下剤が、植物ステロール、植物スタノール、スタチン、イソフラボン、大豆タンパク、繊維、水溶性繊維、他の脂質低下剤、及びそれらを１種若しくは複数含有する天然物、それらの誘導体又はそれらの混合物を含む、請求項７〜１５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１７】
ベルベリンと異なる機構を介して機能する前記血中脂質低下剤が、植物ステロール、植物スタノール、植物ステロールのエステル、植物スタノールのエステル又はそれらの混合物を含む、請求項７〜１５のいずれか一項に記載の使用。
【請求項１８】
紅麹米も使用される、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
哺乳動物がヒトである、請求項７〜１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２０】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物を含む剤形。
【請求項２１】
粉末、錠剤、カプセル、ソフトカプセル、液剤、懸濁剤又は乳剤である、請求項２０に記載の剤形。
【請求項２２】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物を含む食品又は飲料。
【請求項２３】
シリアル、スナックバー、乳製品、果汁、粉末食品又は乾燥粉末飲料ミックスである、請求項２２に記載の食品又は飲料。
【請求項２４】
哺乳動物における血中脂質濃度を低下させるための使用説明書と共に、ベルベリンと同じ機構を介して機能する血中脂質低下剤と、ベルベリンと異なる機構を介して機能する血中脂質低下剤とを含む商品パッケージ。
【請求項２５】
ベルベリンと同じ機構を介して機能する前記血中脂質低下剤が、ベルベリン、１種若しくは複数の薬理学的に許容できるベルベリンの塩又はそれらの混合物を含む、請求項２４に記載の商品パッケージ。
【請求項２６】
ベルベリンと異なる機構を介して機能する前記血中脂質低下剤が、植物ステロール、植物スタノール、スタチン、イソフラボン、それらを１種若しくは複数含有する天然物、それらの誘導体、又はそれらの混合物を含む、請求項２４又は２５に記載の商品パッケージ。
【請求項２７】
ベルベリンと異なる機構を介して機能する前記血中脂質低下剤が、植物ステロール、植物スタノール、植物ステロールのエステル、植物スタノールのエステル又はそれらの混合物を含む、請求項２４又は２５に記載の商品パッケージ。
【請求項２８】
紅麹米をさらに含む請求項２７に記載の商品パッケージ。
【請求項２９】
哺乳動物における血中脂質濃度を低下させるための使用説明書と共に、請求項２０〜２１のいずれか一項に記載の剤形を含む商品パッケージ。
【請求項３０】
哺乳動物における血中脂質濃度を低下させるための使用説明書と共に、請求項２２〜２３のいずれか一項に記載の食品又は飲料を含む商品パッケージ。
【請求項３１】
ボトル、ジャー、ブリスターパック又はボックスである、請求項２４〜３０のいずれか一項に記載の商品パッケージ。
【請求項３２】
血中脂質濃度を低下させる必要がある哺乳動物に、ベルベリンと同じ機構を介して機能する血中脂質低下剤と、ベルベリンと異なる機構を介して機能する血中脂質低下剤とを投与することを含む方法。
【請求項３３】
ベルベリンと同じ機構を介して機能する前記血中脂質低下剤が、ベルベリン、１種若しくは複数の薬理学的に許容できるベルベリンの塩又はそれらの混合物を含む、請求項３２に記載の方法。
【請求項３４】
ベルベリンと異なる機構を介して機能する前記血中脂質低下剤が、植物ステロール、植物スタノール、スタチン、イソフラボン、それらを１種若しくは複数含有する天然物、それらの誘導体又はそれらの混合物を含む、請求項３２又は３３に記載の方法。
【請求項３５】
ベルベリンと異なる機構を介して機能する前記血中脂質低下剤が、植物ステロール、植物スタノール、植物ステロールのエステル、植物スタノールのエステル又はそれらの混合物を含む、請求項３２又は３３に記載の方法。
【請求項３６】
紅麹米を投与することをさらに含む請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
投与が経口投与である、請求項３２〜３６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３８】
低下させる前記血中脂質濃度がトリグリセリド濃度を含む、請求項３２〜３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
低下させる前記血中脂質濃度が低密度リポタンパク質コレステロール濃度を含む、請求項３２〜３８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４０】
低下させる前記血中脂質濃度が総コレステロール濃度を含む、請求項３２〜３９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４１】
哺乳動物における、心血管疾患、高脂血症、アテローム性動脈硬化症、冠状動脈性心臓病、狭心症、脳血管疾患、発作、体重超過若しくは肥満、糖尿病、インシュリン抵抗性、高血糖症、高血圧症、不整脈、中枢神経系の疾患、末梢神経系の疾患又は炎症を治療するか、或いはこれらの疾患にかかる可能性を低下させる、請求項３２〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４２】
哺乳動物における、冠状動脈性心臓病、アテローム性動脈硬化症、発作、不整脈、心筋梗塞又はサドンデス症候群を治療するか、或いはこれらの疾患にかかる可能性を低下させる、請求項３２〜４０のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４３】
前記哺乳動物がヒトである、請求項３２〜４２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項４４】
哺乳動物の体重を管理するための、ベルベリンと同じ機構を介して機能する血中脂質低下剤の使用。
【請求項４５】
ベルベリンと同じ機構を介して機能する前記血中脂質低下剤が、ベルベリン、１種若しくは複数の薬理学的に許容できるベルベリンの塩又はそれらの混合物を含む、請求項４４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
関連出願の相互参照
[0001]本出願は２００６年２月９日出願の米国仮特許出願第６０／７７１４５５号明細書についての利益を請求する。
【０００２】
発明の分野
[0002]本発明は医薬組成物に関し、特に心血管の健康を促進するための植物抽出物の組合せに関する。
【０００３】
発明の背景
[0003]冠状動脈性心臓病、アテローム性動脈硬化症、発作、心筋梗塞、サドンデス症候群を含む心血管疾患（ＣＶＤ）は、世界中の大部分の先進国における死因の第１位である。また、開発途上国では、ＣＶＤの有病率は増加傾向にあり、より西洋（北米）化した（高脂肪の）食生活及び（座りがちな）生活様式を取り入れている人々と関係があるように思われる。上昇した循環コレステロール濃度、特に低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬコレステロール）濃度は、ＣＶＤの発現及び進行の主な危険因子の１つとして充分に確立されている。高濃度の循環トリグリセリドも、ＣＶＤ発生率の増加において決定的な危険因子である。したがって、罹患及び致死の発生率の増加と関係していることが周知であり、また証明されている心血管関連の危険因子を減らすために、リスクの高い患者には総コレステロール及び／又はトリグリセリドの各濃度を低下させることが助言されている。肥満、糖尿病及び高脂血症を有する対象は、高濃度のコレステロール及びトリグリセリドにより悪影響を受ける集団の三大サブグループである。
【０００４】
[0004]現在までのところ、植物ステロール／スタノール及びそれらの様々な類似物は、腸内での食事性及び胆汁性コレステロールの吸収を阻害することにより、循環血中コレステロール濃度を低下できることが知られている。紅麹米サプリメントは、哺乳動物におけるコレステロール生合成を本質的に支配する律速酵素のＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの活性を阻害することによって、血中コレステロールを低下させる。ベルベリンは、ＬＤＬ受容体介在のコレステロールクリアランスを増やして、コレステロールクリアランスを増進することによって、血中コレステロールを低下させることが可能であると、ごく最近報告された。これら３種類の生物活性化合物（ベルベリン、植物ステロール／スタノール及び紅麹米）は、別個の機構を介して機能する。
【０００５】
[0005]現在入手できる製品は、種々の機構を介して機能し、ある程度までは期待された結果を出すことが証明されているが、現在入手できる製品の効力は、副作用により限定されるか、及び／又は副作用を伴っている。スタチン系薬剤は、コレステロール合成における律速酵素であるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの活性を抑制することにより、血中コレステロールを低下させるが、この部類の化合物は、トリグリセリドを低下させる効果をほとんど又はまったく有していない。スタチン又はスタチン様化合物の主な欠点は、無傷で機能的であるべきＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼによっては、Ｑ１０と呼ばれる重要なミトコンドリア酵素の合成が阻害されることである。スタチンによるＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼの遮断によって、補酵素Ｑ１０濃度が低下する。さらにこれが、筋肉痛、筋力低下、筋圧痛、筋肉の激痛、末梢神経障害、及び横紋筋融解症と呼ばれる筋タンパクの破壊等、報告されている多くのスタチンに伴う筋肉関連ミオパシーの原因の元になると考えられており、さらに補酵素Ｑ１０の正常な生理的濃度の存在に依存する他の副作用の元になり得る。特に、横紋筋融解症は、スタチン系薬剤の使用に明らかに伴う重大かつ生命にかかわる副作用となる恐れがあり、この場合、筋破壊により、肝臓及び腎臓の両方に重大な臓器障害を起こし、その結果多くの報告された死亡を引き起こしてきた。あらゆる原因によるスタチンの使用中止率は約１０％で、さらに有害事象による中止率は約４％であった。植物ステロール及びその種々の類似物は、コレステロールの吸収を阻害し、それにより血漿中のコレステロール濃度が低下する。しかし、血中コレステロール濃度が、コレステロールの吸収を阻害することにより低下すると、食事性及び胆汁性コレステロールの吸収の低下に拮抗する補償機構として、コレステロール合成が同時に増加する。植物ステロール及びその種々の類似物が、血清トリグリセリド濃度の低下に顕著な効果を有することは、これまで示されていない。
【０００６】
[0006]中国黄連、ヒドラスチス又は黄連に含有される植物生物活性アルカロイド化合物ベルベリンに関する最近の発見では、ＬＤＬ受容体介在のコレステロールクリアランスを増やすことによって、コレステロール濃度が低下する。
【０００７】
発明の概要
[0007]ベルベリンと同じ機構を介して機能する血中脂質低下剤及びベルベリンと異なる機構を介して機能する血中脂質低下剤は相乗的に作用して、血中脂質プロファイルを改善することが今や判明した。この改善は、例えば総コレステロール（Ｔ−Ｃ）、低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）若しくは非高密度リポタンパク質コレステロール（非ＨＤＬ−Ｃ）、及び／又はトリグリセリド（ＴＧ）等の血中脂質の低下、並びに／或いは高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）とＬＤＬ−Ｃ又は非ＨＤＬ−Ｃとの比の増加において明らかにすることができる。組み合わせて投与した前記２種の血中脂質の調節（例えば低下作用）は、単独で投与した前記２種の合計を超える。
【０００８】
[0008]このため、本発明の第１の態様では、ベルベリンと同じ機構を介して機能する血中脂質低下剤と、ベルベリンと異なる機構を介して機能する血中脂質低下剤とを含む血中脂質濃度低下組成物が提供される。
【０００９】
[0009]本発明の第２の態様では、哺乳動物における血中脂質濃度を低下させるための、ベルベリンと同じ機構を介して機能する血中脂質低下剤及びベルベリンと異なる機構を介して機能する血中脂質低下剤の使用が提供される。
【００１０】
[0010]本発明の第３の態様では、哺乳動物における血中脂質濃度を低下させる薬剤を製造するための、ベルベリンと同じ機構を介して機能する血中脂質低下剤及びベルベリンと異なる機構を介して機能する血中脂質低下剤の使用が提供される。
【００１１】
[0011]本発明の第４の態様では、哺乳動物おける血中脂質濃度を低下させるための使用説明書と共に、ベルベリンと同じ機構を介して機能する血中脂質低下剤と、ベルベリンと異なる機構を介して機能する血中脂質低下剤とを含む商品パッケージが提供される。
【００１２】
[0012]本発明の第５の態様では、血中脂質濃度の低下をもたらすための、ベルベリンと同じ機構を介して機能する血中脂質低下剤と、ベルベリンと異なる機構を介して機能する血中脂質低下剤とを哺乳動物に投与することを含む方法が提供される。
【００１３】
[0013]本発明の第６の態様では、哺乳動物の体重を管理するための、ベルベリンと同じ機構を介して機能する血中脂質低下剤の使用が提供される。
【００１４】
[0014]ベルベリンと同じ機構を介して機能する前記血中脂質低下剤（以降、「ＢＢＲ」と呼ぶ）は、天然源由来、或いは合成源又は半合成源由来であってよい。天然源のＢＢＲは、そのまま使用できる。例えば、前記ＢＢＲを含有する植物素材は、直接使用することができる。任意源由来のＢＢＲに、１回又は複数回の単離又は濃縮の工程（例えば、抽出、結晶化、ろ過）を通して、前記ＢＢＲをより純粋及び／又はより濃縮した形にすることができる。好ましくは、ＢＢＲは、天然源由来の粗製抽出物として、天然源由来の濃縮抽出物として、天然源由来の部分的に精製された抽出物として使用されるか、或いは天然源、合成源又は半合成源由来の実質的に純粋な形で使用される。ＢＢＲは、多数の供給業者から商業的に入手し得る。
【００１５】
[0015]ＢＢＲは、例えばベルベリン、１種又は複数のベルベリン誘導体又は類似物、１種又は複数の薬理学的に許容できるそれらの塩、或いはそれらの混合物を含むことができる。ベルベリンは式（Ｉ）のイソキノリンアルカロイドである。
【化１】
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【００１６】
[0016]ベルベリン、ベルベリン誘導体又は類似物、それらの塩、或いはそれらの混合物は、例えばCoptis chinensis 根茎（黄連（huanglian、 coptis、 goldthread））、ヒドラスチス、黄連、Phellodendron amurense樹皮、Berberis sargentiana、Berberis thunbergii、Berberis vulgaris（メギ）、Berberis aquifolium（オレゴングレープ）、Hydrastis Canadensis（ヒドラスチス）、及びBerberis aristata（ツリーターメリック）の様々な植物中で見出すことができる。最近の研究論文には、ヒドラスチス由来のベルベリン混合物は、純粋な塩化ベルベリン単独よりも有効であることが証明されている。
【００１７】
[0017]ベルベリン、ベルベリン誘導体又は類似物、及びそれらの塩は、例えば、その開示内容が参照により本明細書に組み込まれている２００６年１０月５日公開の米国特許出願公開第２００６／０２２３８３８号明細書に記載のように、当技術分野で周知の様々な化学法及び／又は酵素法によって合成的に或いは半合成的に調製してもよい。
【００１８】
[0018]一実施形態では、前記ＢＢＲは、ベルベリン、１種若しくは複数の薬理学的に許容できるベルベリンの塩、又はそれらの混合物を含む。好ましい薬理学的に許容できるベルベリンの塩としては、例えば塩化物、硫酸塩、炭酸塩、リン酸塩、クエン酸塩及び酢酸塩等の酸付加塩が挙げられる。酸付加塩は、ベルベリンと適当な酸とを反応させて製造できる。
【００１９】
[0019]ベルベリンと異なる機構を介して機能する血中脂質低下剤（以降、「ＢＬＬＡ」と称する）は、例えば植物ステロール（フィトステロール）、植物スタノール（フィトスタノール）、スタチン、イソフラボン、前記のもの及び／又は他の血中脂質低下剤を１種又は複数含有する天然物、それらの誘導体、或いはそれらの混合物であってよい。
【００２０】
[0020]特に、植物ステロール、植物スタノール、植物ステロールのエステル、植物スタノールのエステル又はそれらの混合物は、ＢＢＲと併用すると、驚くべき相乗効果をもたらす。植物ステロールは、シクロペンタノペルヒドロフェナントレンのアルコール誘導体を含む。植物スタノールは、前記ステロールの飽和した形である。植物ステロールのいくつかの代表的な例には、βシトステロール、カンペステロール及びスチグマステロールがある。植物スタノールのいくつかの代表的な例には、シトスタノール及びカンペスタノールがある。植物ステロール又は植物スタノールのエステルは、不飽和脂肪酸、例えばΩ３脂肪酸（例えば、ドコサヘキサエン酸（ＤＨＡ）、ドコサペンタエン酸（ＤＰＡ）、エイコサペンタエン酸（ＥＰＡ）及びα−リノレン酸（ＡＬＡ））とのエステル、並びに摂取に適している及び／又は健康に有益である他の酸（例えばアスコルビン酸）とのエステルが特に好ましい。植物ステロール及び植物スタノールは、マメ、果物、野菜、樹木及び他の植物、並びに菌類及び他の微生物中に見出される。植物ステロール及び／又はスタノールを含有する植物素材を直接使用してもよく、或いは植物ステロール及び／又はスタノールを植物素材から抽出して、より精製及び／又は濃縮した形で使用してもよい。植物ステロール及び植物スタノールは、植物又は他のフィトステロール／フィトスタノール含有物質から抽出されるのが好ましい。植物素材のいくつかの例としては、例えば大豆油、トール（松）油、木材パルプ、葉、木の実、植物油、とうもろこし及び米が挙げられる。植物ステロール及び植物スタノールは、多数の業者から市販されている。
【００２１】
[0021]いくつかの天然物は、様々なＢＬＬＡを含有している。例えば、紅麹米は、紅麹米の製造と関連した発酵プロセス中に自然に生成される、ロバスタチンを含む何種かの天然スタチンを含有している。しかし、紅麹米を摂取して得られるスタチンの量は、スタチン系薬剤の用量をはるかに下回るため、紅麹米の脂質低下有効成分は、単にスタチンだけではない。紅麹米の脂質低下作用は、ロバスタチンと、紅麹米抽出物中で見出された他の種々のスタチン及びイソフラボンとを組み合わせた結果である可能性が高い。さらに、紅麹米は、何世紀もの間血液の循環を促進するために、中華料理の中で、及び薬膳として使用されてきた発酵米製品であり、スタチン系薬剤の補給後に起こる顕著な副作用がない。
【００２２】
[0022]血中脂質濃度としては、例えばトリグリセリド（ＴＧ）濃度、総コレステロール（Ｔ−Ｃ）濃度及び非高密度リポタンパク質コレステロール（非ＨＤＬ−Ｃ）濃度（例えば、超低密度リポタンパク質コレステロール（ＶＬＤＬ−Ｃ）濃度、中間密度リポタンパク質コレステロール（ＩＤＬ−Ｃ）濃度及び／又は低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬ−Ｃ）濃度）を挙げることができる。本発明の組成物、使用及び方法は、血中の前記濃度を１種又は複数低下させることができる。前記血中脂質濃度の低下は、全血、血漿及び／又は血清中で測定できる。
【００２３】
[0023]ＢＢＲ及びＢＬＬＡは、血中脂質濃度を低下させる成分の組合せの１日量とするのに有効な量で使用される。例えば、各成分の１日量は、ある場合は、対象の体重１ｋｇ当たり５ｍｇ以上となり得る。他の場合は、体重１ｋｇ当たり各成分１０ｍｇ以上の用量を適当とし得る。さらに他の場合では、体重１ｋｇ当たり各成分５０ｍｇ以上の用量を適当とし得る。８０ｋｇの対象の場合、体重１ｋｇ当たり各成分１０ｍｇ以上の用量は、１日当たり各成分約０．８ｇ以上となる。１日投与量は、１度に単回用量で投与してもよく、また何回か少量を増量しながら投与してもよい。このため、本発明の組成物は、推奨された１日量を、単回用量で投与するか、又は何回か少量を投与することによって実現されるように製剤することができる。
【００２４】
[0024]ＢＢＲ及びＢＬＬＡは、対象中の血中脂質濃度を低下させるのに適当な期間使用できる。ＢＢＲ及びＢＬＬＡは、少なくとも２週間使用するのが好ましい。より長い期間使用することで、血中脂質濃度を大幅に低下させることができる。また、周知の脂質管理療法すべてを継続的に使用することが、脂質濃度の低下を長期間効果的に管理又は維持するために必要とされるため、長期間の使用が想定される。例えば、スタチン療法を中止すると、血中脂質プロファイルは介入前の水準に戻る。
【００２５】
[0025]ＢＢＲ及びＢＬＡＡは、ある剤形に製剤化してもよい。剤形としては、粉末、錠剤、カプセル、ソフトカプセル、液剤、懸濁剤、乳剤、及び当業者により既に認識されている他の形が挙げられる。該組成物は、経口投与、非経口投与、静脈投与、又は他の簡便な方法によって投与できる。経口投与が好ましい。
【００２６】
[0026]ＢＢＲ及びＢＬＬＡは、同時に又は互いに短期間に投与してもよい。ＢＢＲ及びＢＬＬＡは同時に投与されるのが好ましい。ＢＢＲ及びＢＬＬＡが互いに短期間に投与される場合、その期間は、ＢＢＲ及びＢＬＬＡの相乗効果が実現される長さでなくてはならない。
【００２７】
[0027]ＢＢＲ及びＢＬＬＡは、例えば、接着防止剤、結合剤（例えば、デンプン、砂糖、セルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、エチルセルロース、乳糖、キシリトール、ソルビトール及びマルチトール）、剤皮（例えば、セルロース、合成ポリマー、トウモロコシタンパク質ゼイン及び他の多糖類）、崩壊剤（例えば、デンプン、セルロース、架橋ポリビニルピロリドン、スターチグリコレートナトリウム及びカルボキシメチルセルロースナトリウム）、賦形剤／希釈剤（例えば、水、植物セルロース、第二リン酸カルシウム、植物性脂肪及び植物油、乳糖、ショ糖、ブドウ糖、マンニトール、ソルビトール、並びに炭酸カルシウム）、香味料及び着色料、流動促進剤、滑沢剤（例えば、タルク、シリカ、植物性ステアリン、ステアリン酸マグネシウム及びステアリン酸）、防腐剤（例えば、ビタミンＡ、ビタミンＥ、ビタミンＣ、セレン、システイン、メチオニン、クエン酸、クエン酸ナトリウム、メチルパラベン及びプロピルパラベン）、酸化防止剤、収着剤、甘味料、並びにそれらの混合物等の、栄養補助組成物及び／又は医薬組成物において通常使用される他の薬理学的に許容できる成分と共に配合してもよい。
【００２８】
[0028]ＢＢＲ及びＢＬＬＡは、食品又は飲料に混合し、このようにして経口投与してもよい。補強食品及び飲料は、食品又は飲料の製造中にＢＢＲ及びＢＬＬＡを添加することにより製造できる。或いは、消費者は、摂取時間が近づいたらＢＢＲ及びＢＬＬＡを食品又は飲料に添加することもできる。各成分は、他の成分と共に、又は他の成分とは別個に食品又は飲料に添加してもよい。食品及び飲料の例は、それだけに限らないが、シリアル、スナックバー、乳製品、果汁、粉末食品及び乾燥粉末飲料ミックスである。
【００２９】
[0029]ＢＢＲ及びＢＬＬＡは、前記の使用説明書と共に、商品パッケージにまとめて梱包できる。このようなパッケージは、当業者に周知であり、例えばボトル、ジャー、ブリスターパック、ボックス等が挙げられる。
【００３０】
[0030]ＢＢＲ及びＢＬＬＡは、対象において、多数の疾患若しくは病状を治療し、又はそれにかかる可能性若しくはその進行を低下させるために使用してもよい。疾患又は症状としては、例えば心血管疾患、高脂血症、アテローム性動脈硬化症、冠状動脈性心臓病、狭心症、脳血管疾患、発作、体重超過又は肥満、糖尿病、インシュリン抵抗性、高血糖症、高血圧症、不整脈、中枢神経系の疾患、末梢神経系の疾患及び炎症が挙げられる。ＢＢＲ及びＢＬＬＡは、例えば、冠状動脈性心臓病、アテローム性動脈硬化症、発作、不整脈、心筋梗塞及びサドンデス症候群等の心血管疾患の予防に特に有効である。ＢＢＲ及びＢＬＬＡは、対象の体重を管理するために使用してもよい。
【００３１】
[0031]対象は、血管系を有するヒト及び動物とし、特に哺乳動物、例えばヒト、犬、猫、馬及び齧歯類（例えば、ハムスター、マウス及びラット）とする。
【００３２】
[0032]特定の作用機構に全く拘わらないが、ＢＢＲとＢＬＬＡとの間の相乗効果は、２つ以上の血中脂質制御機構に影響を及ぼして、相加効果を超える血中脂質低下効力を得ることにより生じると考えられている。ＢＢＲ及びＢＬＬＡにより、特に心血管系に対しては、さらなる健康上の利益及び保護をもたらす抗炎症作用も得られる。相乗効果に加えて、単一の機構を標的とした場合と比較して副作用プロファイルが減少する。例えば、ＢＢＲ及びＢＬＬＡは、３つの独立経路に同時に影響を及ぼし、相乗的に血清コレステロール濃度を低下させ、トリグリセリドを低下させ、慢性炎症機構を減少又は下方制御することができる。
【００３３】
[0033]循環コレステロール濃度は、肝除去機構又は非肝除去機構を介したクリアランス及び排泄物を介したコレステロール除去に対する、吸収（食事性及び胆汁性コレステロール）及び新規合成による投入量の関数である。人体におけるコレステロール恒常性の制御に関わる主要経路は３つある。体内のコレステロールを低下させる入手可能な天然物の多くは、単一の個別経路を標的とし、限られた効力しか示さないか、又はコレステロールを制御するには高いレベルの用量を必要とする。現在、適当な１日量で顕著な副作用を起こさずにコレステロール濃度を大幅に低下できる新規な製品に対して大きな消費者需要がある。本発明の実施形態は、この需要を満たすことができる。
【００３４】
[0034]本発明の別の特徴は、以下の詳細な説明の過程で説明されるか、又は明らかになるであろう。
【００３５】
[0035]本発明がより明確に理解できるように、次に、その実施形態について、例証として添付の図面を参照しながら詳細に説明する。
【００３６】
好適な実施形態の説明
[0047]以下の実施例の目的は、心血管系、脳血管系、血管系、肝臓及び体重にとって明確な健康上の利益のために、ＢＢＲとＢＬＬＡとの組合せにより、単独でそれぞれ介入するよりも血中脂質プロファイルが相乗的に改善されることを示すことであった。
【００３７】
[0048]材料：
【００３８】
[0049]表１には、以下の実施例で使用した材料が記載されている。
【表１】
2009525990.tif 000004
【００３９】
[0050]実施例１：
【００４０】
[0051]本実施例は、心血管系、脳血管系、血管系、肝臓及び体重にとって明確な健康上の利益のために、血中脂質プロファイルを改善する塩化ベルベリン（ＢＢＲＣＩ）と植物スタノール（ＰＳ）との組合せに関するデータを提供する。
【００４１】
[0052]対照を用いた４週間の動物試験を行い、３つの介入戦略が血中コレステロール及びトリグリセリドの各濃度に与える影響を比較対照した。Ｇｏｌｄｅｎ  Ｓｙｒｉａｎ系雄性ハムスターを各々１５匹の４群に無作為に選別して、等カロリーの飼料を以下のように供給した。
対照            コレステロール０．１５％（ｗ／ｗ）及び脂質５％（ｗ／ｗ）含有準合成カゼインコーンスターチスクロース飼料
ＢＢＲＣＩ        ＢＢＲＣＩ１００ｍｇ／ｋｇ・ｄ含有対照飼料
ＰＳ              ＰＳ１％（ｗ／ｗ）含有対照飼料
ＢＢＲＣＩ＋ＰＳ  ＢＢＲＣＩ１００ｍｇ／ｋｇ・ｄ及びＰＳ１％（ｗ／ｗ）含有対照飼料
【００４２】
[0053]ＢＢＲＣＩ及びＰＳは、ブレンドにより飼料に導入した。この試験最後の主要評価項目は、各介入が総コレステロール（Ｔ−Ｃ）、高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）、非ＨＤＬ−Ｃ（ＬＤＬ−Ｃ濃度を示す）及びトリグリセリド（ＴＧ）の各プロファイルを含む循環血中脂質に与える影響を決定することであった。すべての脂質は、標準的な酵素法によって測定した。
【００４３】
[0054]ハムスターは、ヒトコレステロール代謝を研究するのに優れたモデルとして確立されており、ＢＢＲＣＩ及び植物スタノールをそれぞれ単独で及び組み合わせた場合の循環血中脂質濃度に与える影響を調査するために使用した。その上、組織を採取して、試験済みの実験的介入によって活性化、誘発又は増強される関連の生化学機構及び分子機構を決定した。
【００４４】
[0055]Ｇｏｌｄｅｎ  Ｓｙｒｉａｎ系雄性ハムスターは、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  Ｃｏ．から購入し、試験を開始する前の２週間、ケージに個別に収容した。この調整期間中、動物には通常の齧歯類用固形飼料を供給し、飼料及び水はいずれも自由に摂取させた。合計６０匹のハムスターの体重を測定し、各々１５匹の４群の内の１群に無作為に割り当てた。動物は、温度制御環境で１２：１２時間の明暗サイクルに曝した。各群には、等カロリーの実験飼料４種の内の１種を４週間供給した。予備試験からは、対照飼料からＢＢＲＣＩを１００ｍｇ／ｋｇ含有する飼料に変更しても飼料摂取量が変わらなかったため、ＢＢＲＣＩを固形飼料に添加した場合、味覚嫌悪作用が誘発されないことが示された。実験期間中、動物の体重を毎週測定し、飼料消費量を実験期間中毎日決定した。
【００４５】
[0056]試験最後に、全ての動物はイソフルランで麻酔し、断頭術により殺した。血液試料は、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）を含有するチューブに採取した。赤血球と血漿は分離し、さらなる分析まで−８０℃で保管した。血漿は総コレステロール、ＨＤＬ−Ｃ及びＴＧの各濃度について分析した。その結果は以下に報告されている。非ＨＤＬ−Ｃは、総コレステロールからＨＤＬ−Ｃを減じて計算した。
【００４６】
[0057]図１〜３及び表２は、ＢＢＲＣＩ及びＰＳを単独又は組み合わせた場合の血中コレステロール及びトリグリセリドの各濃度に与える影響を示している。値は、平均値±ＳＤ、ｎ＝１５である。データは、一元配置ＡＮＯＶＡにより分析した後、有意性が検出された場合はテューキー検定を行った。有意差はｐ＜０．０５で示した。
【００４７】
[0058]得られた結果は、（本実施例に関して）ＢＢＲＣＩ及びＢＢＲＣＩと植物スタノールとの組合せは、血中脂質プロファイルに有益な影響を及ぼすこと（図１〜３及び表２参照）を強く支持している。この結果から、ＢＢＲＣＩ及び植物スタノールを飼料へ補給すると、相乗的に作用して循環ＴＧ濃度を低下させる（図２参照）という新規の非常に重要な知見が示されたが、一方でＢＢＲＣＩ（１００ｍｇ／ｋｇ・ｄ）単独又は植物スタノール（１％（ｗ／ｗ））単独の場合は、ＴＧ濃度の有意な低下は示されなかった（ＢＢＲＣＩではＴＧは４％しか低下せず、ＰＳではＴＧの低下は１１％であった）。ＢＢＲＣＩ及びＰＳを組み合わせた場合、動物１５匹のこの群における血漿ＴＧ濃度は、平均３６％低下した。さらに、いずれの物質も、Ｔ−Ｃ及び非ＨＤＬ−Ｃの各濃度の低下において有意な効果を示した（図１参照）。
【表２】
2009525990.tif 000005
【００４８】
[0059]対照に対する血中の総コレステロール濃度及び画分コレステロール濃度の変化率が計算及び提示される、より従来型の報告形式にデータを変換すると、ＢＢＲＣＩではＴ−Ｃが２２％、非ＨＤＬ−Ｃは２８％低下し、一方植物スタノールではＴ−Ｃ及び非ＨＤＬ−Ｃが各々３０％及び４５％低下したことが判明した。両方の物質を組み合わせた場合、Ｔ−Ｃは４２％及び非ＨＤＬ−Ｃは６３％低下した（図３参照）。ＢＢＲＣＩ及びＰＳは、ＨＤＬ−Ｃと非ＨＤＬ−Ｃの比を改善する傾向があった。ＢＢＲＣＩ及びＰＳを同時に飼料に補給した場合、ＨＤＬ−Ｃと非ＨＤＬ−Ｃの比は、相乗作用モードによって有意に改善された。
【００４９】
[0060]様々な臓器の薄片を肉眼及び顕微鏡で検査する組織病理試験及び検査は、公認の病理学者により行われた。脳、肺、心臓、脾臓及び腎臓の外観又は重量に有意な変化はなかった。しかし、対照動物の肝臓は、黄色がかっていることが観察でき、ＢＢＲＣＩ又は植物スタノールで、或いは両方を組み合わせて処置した動物の肝臓よりも重かった。
【００５０】
[0061]表３には、ＢＢＲＣＩ及び植物スタノールが体重に対する組織重量パーセントに与える影響が要約されている。表３の体重に対する組織重量の各パラメーターについては、異なる上付き文字（ａ又はｂ）の付いた値は有意差がある。この結果からは、ＢＢＲＣＩ及びＰＳを単独で、特にＢＢＲＣＩ及びＰＳを組み合わせた場合では、対照動物の肝臓と比較して、脂肪肝の出現が目に見えて減少し、臓器重量が有意に低下したことから、肝臓及び肝機能に対する有益な影響が示唆される。
【表３】
2009525990.tif 000006
【００５１】
[0062]図４は、ＢＢＲＣＩとＰＳを単独で、及びそれらを組み合わせた場合の肝臓内のコレステロール含有量に与える影響が示されている。ＢＢＲＣＩ及びＰＳを単独で、又はそれらを組み合わせて飼料に補給した場合、ハムスターの肝臓内のコレステロール濃度が大幅に低下した。この知見は、肝重量の低下と共に、ＢＢＲＣＩ又はＰＳを単独で、或いは両方を組み合わせた場合、脂肪肝を治療するために使用できることを意味している。
【００５２】
[0063]動物が４週間の実験期間にわたって成長したとき、ＢＢＲＣＩの用量がｍｇ／ｋｇ単位で維持されるように、実験期間中、飼料消費量及び体重に関するデータを得た。データからは、体重及び飼料摂取量は、使用した３種の試験飼料（ＢＢＲＣＩ単独、ＰＳ単独、又はＢＢＲＣＩ／ＰＳの組合せ、図５〜６参照）のいずれかに対照飼料を変更したことで、直ちに影響を受けることはなかったことが分かった。データを分析した結果、ＢＢＲＣＩを単独で２週間供給した後と、ＢＢＲＣＩ＋ＰＳを組み合わせて３週間供給した後では体重が減少するという予想外の傾向が見られた（図５参照）。これらの結果は、ＢＢＲＣＩ及びＢＢＲＣＩとＰＳとの組合せは、脂質低下に有益な影響を与えることに加えて、体重の管理にも有用となり得ることを示している。これは、ヒト及び動物における体重管理、健康な体重管理戦略及び身体組成（除脂肪体重の増加）に対して重要な意味をもち得る。
【００５３】
[0064]同様に、実験の早期の段階では、飼料の１日摂取量は、３週間目まではＢＢＲＣＩによる影響を受けなかった（図６参照）。その後、２２〜２５日以降は飼料の摂取量に有意差が認められたが、各動物に対して２５日目に前記動物の首の部分にわずかな外科的介入を行い、それにより各治療における飼料の消費量が減少したため、この効果は２５〜２８日で消失した。外科的介入は、安定同位体コレステロールトレーサーの静脈注射が可能になるよう行った。
【００５４】
[0065]上記の実験結果から、ＴＧの低下に対してＢＢＲＣＩ及びＰＳの強力な相乗効果が存在することが分かる。ＢＢＲＣＩとＰＳとをこれらの実験で使用した濃度で組み合わせた場合、血清Ｔ−Ｃ及び非ＨＤＬ−Ｃは大幅に低下した。
【００５５】
[0066]肝臓及び腸内のコレステロールと関係している遺伝子の発現に与える影響を決定するための実験も行われた。総ＲＮＡを抽出し、ｍＲＮＡをｃＤＮＡに変換した。該ｍＲＮＡ発現は、リアルタイムＰＣＲによって測定し、これを４回繰り返し、各試料のハウスキーピング遺伝子の内部対照に関する相対的な発現として計算した。
【００５６】
[0067]表４及び図７ａ〜７ｂは、腸内ＡＢＣＧ５（図７ａ）及びＡＢＣＧ８（図７ｂ）のｍＲＮＡ発現に対するＢＢＣＲＩ及びＰＳを単独で又は組み合わせた場合の効果を要約している。ＢＢＲＣＩ及びＰＳは単独ではＡＢＣＧ５及びＡＢＣＧ８のｍＲＮＡ発現に影響を及ぼさなかった。しかし、それらを同時に投与した場合、両方の遺伝子のｍＲＮＡ発現は、相乗モードにおいて有意に減少した。腸内でのＡＢＣＧ５とＡＢＣＧ８の機能は、コレステロールを腸細胞から輸送し、腸に戻して、便を通じて排泄するものである。最近の知見では、ＡＢＣＧ５及びＡＢＣＧ８のｍＲＮＡ発現は、血中コレステロール濃度と密接かつ確実に関係していることが示されている。コレステロールの低下に対して強力な作用が生じた場合、これらの２つの遺伝子の発現は下方制御される。我々の試験（実施例１）知見は、コレステロールの低下に対するＢＢＲＣＩ及びＰＳの相乗作用を強力に支持している。
【表４】
2009525990.tif 000007
【００５７】
[0068]表５及び図８ａは、ＢＢＲＣＩ及びＰＳを単独で又はこれらを組み合わせた場合に肝臓ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼに与える影響を要約している。ＢＢＲＣＩ及びＰＳは単独ではＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼのｍＲＮＡ発現に影響を及ぼさなかった。しかし、それらを組み合わせた場合、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼのｍＲＮＡ発現は、７倍に増加した。ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼは、コレステロール生合成における律速酵素である。多量の証拠は、コレステロール合成が、コレステロール吸収と相互に変化することを示している。コレステロール吸収を阻害することで、コレステロールの低下に対して強力な作用が生じると、吸収の低下によるコレステロール喪失に対する代償性反応として、コレステロール生合成が増加する。ＢＢＲＣＩ及びＰＳがＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼのｍＲＮＡ発現に及ぼす強力な相乗作用は、これらの物質の組合せが相乗的に作用して、おそらくコレステロールの吸収を阻害することにより、血中コレステロールを低下できることを意味している。
【００５８】
[0069]表５、図８ｂ及び図８ｃは、ＢＢＲＣＩ及びＰＳが肝臓内のＣＹＰ７Ａ１及びＣＹＰ２７Ａ１のｍＲＮＡ発現に与える影響を要約している。ＢＢＲＣＩ及びＰＳは単独では両方の遺伝子のｍＲＮＡ発現を増加させる傾向が見られた。ＣＹＰ７Ａ１及びＣＹＰ２７Ａ１は、胆汁酸合成を制御する２つの律速酵素であり、この胆汁酸合成は、コレステロールを胆汁酸に変換して体内からコレステロールを除去する一機構である。ＢＢＲＣＩ及びＰＳを組み合わせた場合、相乗作用が生じるようであった。この結果は、ＢＢＲＣＩ及びＰＳは、相乗作用モードを介して肝臓内のコレステロール異化作用に影響を与えることにより、血中コレステロールを低下させることを意味している。
【表５】
2009525990.tif 000008
【００５９】
[0070]身体におけるコレステロールの合成とクリアランスとの間にはバランスがある。コレステロールの効率的なクリアランスにもかかわらず、身体は、コレステロールをある一定のベースライン値に維持するために補償しようとする。実施例１では、ＢＢＲＣＩとＰＳとの組合せの強力な作用により、コレステロール濃度をほぼ最小値又は基準値まで低下させたとも思われる。このような場合、たとえ相乗作用が遺伝子発現によって暗示されたとしても、目に見える相乗効果は予想されない。したがって、実施例１では、血中脂質を最大限又はほぼ最大限まで低下できたとき、コレステロールの低下に対する相乗作用は検出されなかった。したがって、食事性コレステロールの摂取量を増やすことにより十分な高さの血中コレステロール濃度が得られる場合、並びに／或いは十分に少ないＢＢＲＣＩ及び／又はＰＳを飼料中で使用する場合、コレステロール低下の相乗作用が観測できるはずである。以下の実施例２及び３には、このような試験が記載されている。
【００６０】
[0071]実施例２：
【００６１】
[0072]本実施例では、対照を用いた５週間の動物試験を行った。合計４８匹のＧｏｌｄｅｎ  Ｓｙｒｉａｎ系雄性ハムスターを各々１２匹の４群に無作為に選別して、以下のように等カロリー飼料を供給した。ハムスターの飼育、生活及び給餌条件は、実施例１で使用したのと同様の条件とした。
対照              コレステロール０．２５％（ｗ／ｗ）含有準合成カゼインコーンスターチスクロース飼料
ＢＢＲＣＩ        ＢＢＲＣＩ１００ｍｇ／ｋｇ・ｄ含有対照飼料
ＰＳ              ＰＳ１％（ｗ／ｗ）含有対照飼料
ＢＢＲＣＩ＋ＰＳ  ＢＢＲＣＩ１００ｍｇ／ｋｇ・ｄ及びＰＳ１％（ｗ／ｗ）含有対照飼料
【００６２】
[0073]本実施例の１つの目的は、高濃度、例えば飼料中の０．２５％重量のコレステロールを含有する飼料をハムスターに供給したとき、各介入が、総コレステロール（Ｔ−Ｃ）、高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）、非ＨＤＬ−Ｃ（ＬＤＬ−Ｃ濃度を示す）及びトリグリセリド（ＴＧ）の各プロファイルを含む循環血中脂質に与える影響を決定することであった。
【００６３】
[0074]表６は、血中脂質濃度に与える影響を要約している（値は平均値±ＳＤ、ｎ＝１２である）。データは、一元配置ＡＮＯＶＡにより分析した後、有意性が検出された場合はテューキー検定を行った。有意差は、ｐ＜０．０５で示した。特定の脂質群内の異なる上付き文字（ａ、ｂ又はｃ）の付いた値は、有意差がある。
【００６４】
[0075]この試験の結果は、ＢＢＲＣＩ及びＰＳが相乗的に血中ＴＧ濃度を低下させることを示している。ＢＢＲＣＩ及びＰＳは、コレステロールの低下に対して相乗作用を示さなかった。しかし、実施例１で論じたように、組み合わせたＢＢＲＣＩ及びＰＳの非常に強力なコレステロール低下作用が、該試験条件下で最大化された（例えば、コレステロールのベースライン値に到達したなど）ことが、やはりこの理由となり得る。実施例２の動物は、実施例１の動物より重量があり、それより高い濃度の食事性コレステロールをそれより長い給餌期間補給された。以下の実施例３から分かるように、コレステロール濃度を十分な高さにし、飼料に補給したＰＳの量を５０％に減少させると、コレステロールの低下に対する相乗効果が認められる。ＨＤＬ−Ｃと非ＨＤＬ−Ｃの比は、ＢＢＲＣＩ又はＰＳ単独で増加する傾向が見られた。ＢＢＲＣＩ及びＰＳを組み合わせた場合、ＨＤＬ−Ｃと非ＨＤＬ−Ｃの比は有意に増加した。
【表６】
2009525990.tif 000009
【００６５】
[0076]表７は、体重と組織重量の比に与える影響を要約している（値は平均値±ＳＤ）。データは、一元配置ＡＮＯＶＡにより分析した後、有意な治療効果が検出された場合はテューキー検定を行った。有意差は、ｐ＜０．０５で示した。組織群内の各組織重量対体重のパラメーターに対する異なる上付き文字（ａ、ｂ又はｃ）の付いた値は、有意差がある。平均肝重量は、対照群と比較してＰＳ群では統計上低かったが、ＢＢＲＣＩ群を対照群と比較した場合は有意に低くはなかった。しかし、ＢＢＲＣＩ及びＰＳの組合せ（ＢＢＲＣＩ＋ＰＳ）では、ＢＢＲＣＩ及びＰＳの各群の肝重量と比較して、強力で統計的に有意で、さらに相乗的に平均肝重量が減少した。平均肝重量に対するＢＢＲＣＩ＋ＰＳ誘発効果も、対照群においては有意に低下した。
【表７】
2009525990.tif 000010
【００６６】
[0077]実施例３：
【００６７】
[0078]本実施例では、対照を用いた５週間の動物試験を行った。Ｇｏｌｄｅｎ  Ｓｙｒｉａｎ系雄性ハムスターを各々１２匹又は６匹の４群に無作為に選別して、以下のように等カロリー飼料を供給した。ＰＳの投与量は、飼料中１％から０．５％（ｗ／ｗ）に減らした。ハムスターの飼育、生活及び給餌条件は、実施例１と同様の条件とした。
対照              コレステロール０．２５％（ｗ／ｗ）含有準合成カゼインコーンスターチスクロース飼料
ＢＢＲＣＩ        ＢＢＲＣＩ１００ｍｇ／ｋｇ・ｄ含有対照飼料
ＰＳ              ＰＳ０．５％（ｗ／ｗ）含有対照飼料
ＢＢＲＣＩ＋ＰＳ  ＢＢＲＣＩ１００ｍｇ／ｋｇ・ｄ及びＰＳ０．５％（ｗ／ｗ）含有対照飼料
【００６８】
[0079]本実施例の１つの目的は、各介入が総コレステロール（Ｔ−Ｃ）、高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ−Ｃ）、非ＨＤＬ−Ｃ（ＬＤＬ−Ｃ濃度を示す）及びトリグリセリド（ＴＧ）の各プロファイルを含む循環血中脂質に与える影響を決定することであった。
【００６９】
[0080]表８は、血中脂質濃度に与える影響を要約している（値は平均値±ＳＤ、ｎ＝１２である）。データは、一元配置ＡＮＯＶＡにより分析した後で、有意性が検出された場合はテューキー検定を行った。有意差は、ｐ＜０．０５で示した。特定の脂質群内の異なる上付き文字（ａ、ｂ又はｃ）の付いた値は、有意差がある。ＢＢＲＣＩ及びＰＳをハムスターに同時に与えた場合、有意な相乗作用がＴ−Ｃ、非ＨＤＬ−Ｃ及びＴＧの各濃度で認められた。ＢＢＲＣＩ及びＰＳの相乗作用は、ＨＤＬ−Ｃと非ＨＤＬ−Ｃの比でも認められた。この試験の結果には、ＢＢＲＣＩ及びＰＳは相乗的に作用して、血中総コレステロール、非ＨＤＬ−Ｃ及びトリグリセリドの各濃度を低下させることが示されている。
【表８】
2009525990.tif 000011
【００７０】
[0081]実施例４：
【００７１】
[0082]本実施例では、対照を用いた６週間の動物試験を異なる動物モデルにおいて行った。Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙ系雄性ラットを各々１０匹の６群に無作為に選別して、以下のように等カロリー飼料を供給した。ＰＳは、ブレンドにより飼料に導入し、ＢＢＲＣＩは、強制給餌により１日２回導入した。
対照                  コレステロール２％（ｗ／ｗ）及び脂質２８％（ｗ／ｗ）含有準合成カゼインコーンスターチスクロース飼料
ＢＢＲＣＩ−１        ＢＢＲＣＩ１００ｍｇ／ｋｇ・ｄ含有対照飼料
ＰＳ                  ＰＳ１％（ｗ／ｗ）含有対照飼料
ＢＢＲＣＩ−１＋ＰＳ  ＢＢＲＣＩ１００ｍｇ／ｋｇ・ｄ及びＰＳ１％（ｗ／ｗ）含有対照飼料
ＢＢＲＣＩ−２        ＢＢＲＣＩ２００ｍｇ／ｋｇ・ｄ含有対照飼料
ＢＢＲＣＩ−２＋ＰＳ  ＢＢＲＣＩ２００ｍｇ／ｋｇ・ｄ及びＰＳ１％（ｗ／ｗ）含有対照飼料
【００７２】
[0083]本実施例の１つの目的は、各介入が異なる動物モデルにおける血漿コレステロール濃度に与える影響を決定することであった。
【００７３】
[0084]表９は、血中総コレステロール濃度に与える影響を要約している（値は平均値±ＳＤ、ｎ＝１０である）。２つの内いずれかの用量のＢＢＲＣＩとＰＳとを組み合わせた場合について、総コレステロールの有意な相乗的低下が見られた。この試験の結果は、異なる動物モデルおいて、ＢＢＲＣＩ及びＰＳにより血中総コレステロール濃度が相乗的に低下することを示している。
【表９】
2009525990.tif 000012
【００７４】
[0085]この構成に固有の他の利点は、当業者には明らかである。その実施形態は、本明細書に例示的に記載されており、特許請求の範囲に規定する本発明の範囲を限定することを意図するものではない。前記実施形態の変形は、当業者であれば明らかであると思われ、前記特許請求の範囲に包含されることを本発明者等は意図している。
【図面の簡単な説明】
【００７５】
【図１】アテローム誘発対照食、並びに塩化ベルベリン及び／又は植物スタノールを補給したアテローム誘発対照食を４週間供給したハムスターにおける、塩化ベルベリン及び植物スタノールが循環コレステロール濃度に与える影響を示すグラフである（各脂質パラメーターについては、異なる上付き文字（ａ、ｂ、ｃ又はｄ）の付いた値は有意差がある）。
【図２】アテローム誘発対照食、並びに塩化ベルベリン及び／又は植物スタノールを補給したアテローム誘発対照食を４週間供給したハムスターにおける、塩化ベルベリン及び植物スタノールが血漿トリグリセリド濃度に与える影響を示すグラフである（異なる上付き文字（ａ又はｂ）の付いた値は有意差がある）。
【図３】アテローム誘発対照食、並びに塩化ベルベリン及び／又は植物スタノールを補給したアテローム誘発対照食を供給したハムスターにおける、血漿中コレステロール及びトリグリセリド濃度の変化率を示すグラフである。
【図４】アテローム誘発対照食、並びに塩化ベルベリン及び／又は植物スタノールを補給したアテローム誘発対照食を４週間供給したハムスターにおける、塩化ベルベリン及び植物スタノールが肝臓コレステロール濃度に与える影響を示すグラフである（異なる上付き文字（ａ、ｂ又はｃ）の付いた値は有意差がある）。
【図５】アテローム誘発対照食、並びに塩化ベルベリン及び／又は植物スタノールを補給したアテローム誘発対照食を４週間供給したハムスターにおける、塩化ベルベリン及び植物スタノールが週毎の体重に与える影響を示すグラフである。
【図６】アテローム誘発対照食、並びに塩化ベルベリン及び／又は植物スタノールを補給したアテローム誘発対照食を４週間供給したハムスターにおける、塩化ベルベリン及び植物スタノールが１日の平均飼料摂取量に与える影響を示すグラフである。
【図７ａ】アテローム誘発対照食、並びに塩化ベルベリン及び／又は植物スタノールを補給したアテローム誘発対照食を４週間供給したハムスターにおける、塩化ベルベリン及び植物スタノールが腸ＡＢＣＧ５のｍＲＮＡ発現に与える影響を示すグラフである（異なる上付き文字（ａ又はｂ）の付いた値は有意差がある）。
【図７ｂ】アテローム誘発対照食、並びに塩化ベルベリン及び／又は植物スタノールを補給したアテローム誘発対照食を４週間供給したハムスターにおける、塩化ベルベリン及び植物スタノールが腸ＡＢＣＧ８のｍＲＮＡ発現に与える影響を示すグラフである（異なる上付き文字（ａ又はｂ）の付いた値は有意差がある）。
【図８ａ】アテローム誘発対照食、並びに塩化ベルベリン及び／又は植物スタノールを補給したアテローム誘発対照食を４週間供給したハムスターにおける、塩化ベルベリン及び植物スタノールが肝臓ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼのｍＲＮＡ発現に与える影響を示すグラフである（異なる上付き文字（ａ又はｂ）の付いた値は有意差がある）。
【図８ｂ】アテローム誘発対照食、並びに塩化ベルベリン及び／又は植物スタノールを補給したアテローム誘発対照食を４週間供給したハムスターにおける、塩化ベルベリン及び植物スタノールが肝臓ＣＹＰ７Ａ１のｍＲＮＡ発現に与える影響を示すグラフである。
【図８ｃ】アテローム誘発対照食、並びに塩化ベルベリン及び／又は植物スタノールを補給したアテローム誘発対照食を４週間供給したハムスターにおける、塩化ベルベリン及び植物スタノールが肝臓ＣＹＰ２７Ａ１のｍＲＮＡ発現に与える影響を示すグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７ａ】
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【図７ｂ】
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【図８ａ】
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【図８ｂ】
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【図８ｃ】
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【国際調査報告】
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