(57)【要約】  哺乳動物対象のためのリポソームベースの治療を開示する。本方法は、リポソームおよび／または治療が目的とされる生物学的表面に特異的に結合するのに有効な親和性部分を含む外表面を有するリポソーム、および親水性ポリマーコーティングを使用する。本親水性ポリマーコーティングは、表面脂質成分に共有結合的に結合したポリマー鎖から成る。望むリポソーム生体分布が達成された後、親和性薬剤が標的表面に結合し、リポソームの内在化を助ける。【特許請求の範囲】
【請求項１】
治療剤を含む二価カチオンマトリックスを含むリポソーム組成物を対象に全身的に投与することを含む、治療剤を哺乳動物対象に投与する方法。
【請求項２】
該治療剤が水溶性である、請求項１記載の方法。
【請求項３】
該治療剤が、式Ｉ：
【化１】
2009507029.tif 000004
〔式中、Ｒ１は、ヘテロ原子として、２から４個のＮ原子または１個もしくは２個のＮ原子と１個のＯまたはＳ原子を含み、そして非置換であるか、または低級アルキル、フェニルまたはフェニル(これは、低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンで置換されている)、または低級アルコキシ、ヒドロキシ、ジ−低級アルキルアミノ、低級アルキルチオおよび／またはハロゲンでＣ置換されている、および／または低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンで置換可能なＮ原子でＮ置換されている５員ヘテロアリールラジカルであり、そしてＲ２は水素、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキルチオまたはハロゲン。〕
の化合物、および薬学的に許容されるそれらの塩である、請求項２記載の方法。
【請求項４】
該治療剤がゾレドロン酸である、請求項３記載の方法。
【請求項５】
二価カチオンマトリックスが、カルシウムイオンまたは亜鉛カチオンまたはマグネシウムカチオンのような二価カチオンを含む、請求項１記載の方法。
【請求項６】
二価カチオンマトリックスがカチオン性脂質を含む、請求項１記載の方法。
【請求項７】
リポソーム組成物が約１０から約５００ナノメーターの平均粒子径を有する、請求項１記載の方法。
【請求項８】
リポソーム組成物がさらに親水性ポリマーを含む、請求項１記載の方法。
【請求項９】
リポソーム組成物がさらに親和性部分を含む、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
治療剤を含む二価カチオンマトリックスを含むリポソーム組成物を対象に全身的に投与することを含む、治療剤を哺乳動物対象に投与する方法。
【請求項１１】
治療剤を標的細胞に投与するための請求項１０記載の方法であって、ここで、該親和性部分が、標的細胞上の細胞表面受容体と特異的に結合するのに有効なリガンドであり、そして該リポソームがさらに封入された形態で治療剤を含む、方法。
【請求項１２】
親和性部分が腫瘍特異的抗原に特異的に結合するのに有効である、請求項１０記載の方法。
【請求項１３】
該治療剤が水溶性である、請求項１０記載の方法。
【請求項１４】
該治療剤が式Ｉ：
【化２】
2009507029.tif 000005
〔式中、Ｒ１は、ヘテロ原子として、２から４個のＮ原子または１個もしくは２個のＮ原子と１個のＯまたはＳ原子を含み、そして非置換であるか、または低級アルキル、フェニルまたはフェニル(これは、低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンで置換されている)、または低級アルコキシ、ヒドロキシ、ジ−低級アルキルアミノ、低級アルキルチオおよび／またはハロゲンでＣ置換されている、および／または低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンで置換可能なＮ原子でＮ置換されている５員ヘテロアリールラジカルであり、そしてＲ２は水素、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキルチオまたはハロゲンである。〕
の化合物、および薬学的に許容されるそれらの塩である、請求項１０記載の方法。
【請求項１５】
該治療剤がゾレドロン酸である、請求項１０記載の方法。
【請求項１６】
二価カチオンマトリックスがカルシウムイオンまたは亜鉛カチオンまたはマグネシウムカチオンのような二価カチオンを含む、請求項１０記載の方法。
【請求項１７】
二価カチオンマトリックスがカチオン脂質を含む、請求項１０記載の方法。
【請求項１８】
リポソーム組成物が約１０から約５００ナノメーターの平均粒子径を有する、請求項１０記載の方法。
【請求項１９】
リポソーム組成物がさらに親水性ポリマーを含む、請求項１０記載の方法。
【請求項２０】
リポソーム組成物がさらに親和性部分を含む、請求項１０記載の方法。
【請求項２１】
治療剤を含む二価カチオンマトリックスを含む、リポソーム組成物。
【請求項２２】
該治療剤が水溶性である、請求項２１記載の組成物。
【請求項２３】
該治療剤が式Ｉ：
【化３】
2009507029.tif 000006
〔式中、Ｒ１は、ヘテロ原子として、２から４個のＮ原子または１個もしくは２個のＮ原子と１個のＯまたはＳ原子を含み、そして非置換であるか、または低級アルキル、フェニルまたはフェニル(これは低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンで置換されている)、または低級アルコキシ、ヒドロキシ、ジ−低級アルキルアミノ、低級アルキルチオおよび／またはハロゲンでＣ置換されている、および／または低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンで置換可能なＮ原子でＮ置換されている５員ヘテロアリールラジカルであり、そしてＲ２は水素、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキルチオまたはハロゲンである。〕
の化合物、および薬学的に許容されるそれらの塩である、請求項２１記載の組成物。
【請求項２４】
該治療剤がゾレドロン酸である、請求項２１記載の組成物。
【請求項２５】
二価カチオンマトリックスがカルシウムイオンまたは亜鉛カチオンまたはマグネシウムカチオンのような二価カチオンを含む、請求項２１記載の組成物。
【請求項２６】
リポソーム組成物がさらに親水性ポリマーを含む、請求項２１記載の方法。
【請求項２７】
リポソーム組成物がさらに親和性部分を含む、請求項２１記載の方法。
【請求項２８】
(ａ)治療剤；(ｂ)二価カチオンマトリックス、(ｃ)親水性ポリマーコーティング；および(ｄ)所望により親和性部分を含む、リポソーム組成物。
【請求項２９】
親和性部分が、標的表面上の細胞表面受容体と特異的に結合するのに有効なリガンドである、請求項２８記載のリポソーム組成物。
【請求項３０】
親和性部分が腫瘍特異的抗原と特異的に結合するのに有効である、請求項２８記載のリポソーム組成物。
【請求項３１】
該治療剤が水溶性である、請求項２８記載のリポソーム組成物。
【請求項３２】
該治療剤が式Ｉ：
【化４】
2009507029.tif 000007
〔式中、Ｒ１は、ヘテロ原子として、２から４個のＮ原子または１個もしくは２個のＮ原子と１個のＯまたはＳ原子を含み、そして非置換であるか、または低級アルキル、フェニルまたはフェニル(これは低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンで置換されている)、または低級アルコキシ、ヒドロキシ、ジ−低級アルキルアミノ、低級アルキルチオおよび／またはハロゲンでＣ置換されている、および／または低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンで置換可能なＮ原子でＮ置換されている５員ヘテロアリールラジカルであり、そしてＲ２は水素、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキルチオまたはハロゲンである。〕
の化合物および薬学的に許容されるそれらの塩である、請求項２８記載のリポソーム組成物。
【請求項３３】
該治療剤がゾレドロン酸である、請求項２８記載のリポソーム組成物。
【請求項３４】
二価カチオンマトリックスがカルシウムイオンまたは亜鉛カチオンまたはマグネシウムカチオンのような二価カチオンを含む、請求項２８記載のリポソーム組成物。
【請求項３５】
二価カチオンマトリックスがカチオン性脂質を含む、請求項２８記載のリポソーム組成物。
【請求項３６】
リポソーム組成物が約１０ナノメーターから約５００ナノメーターの平均粒子径を有する、請求項２８記載のリポソーム組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、治療用組成物および、送達媒体としてそれを用いる方法、二価カチオンマトリックスを有するリポソームに関する。本二価カチオンマトリックスは、治療剤を遮蔽する。本リポソームは、所望により標的組織による有効な結合および内在化のために、リポソーム外表面上に親和性部分を含む。本リポソームは、所望によりまた立体安定性および長時間の循環のために親水性ポリマーの表面コーティングも含む。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
リポソームは、種々の治療目的のために、特に、治療剤を、リポソームの全身投与により標的細胞に運搬させるために使用される。
【０００３】
多くの理由のために、リポソームを使用する治療剤を遮蔽することが望ましいことがある。ビスホスホネートクラスの薬剤の治療効果を発揮させるために、本薬剤は、治療の照準場所である標的表面に対して該治療剤が有効に特異的に相互作用できるような方法で、薬剤分布を変えなければならない。故に、治療剤が遮蔽されている二価カチオンマトリックスを含む、治療用リポソーム組成物の提供が望まれる。
【発明の開示】
【０００４】
発明の要約
一つの局面において、本発明は、(ｉ)有効な二価カチオンマトリックスおよび(ii)治療剤を含むリポソームを対象に全身的に投与することを含む、哺乳動物対象のリポソームベースの治療方法を含む。本二価カチオンマトリックスは、他の方法では、体内に導入されたら、伝統的リポソーム製剤から漏れ出るであろう治療剤の保護を提供する。
【０００５】
他の局面で、本発明は、(ｉ)二価カチオンマトリックス、(ii)治療剤、(iii)立体安定性および長時間の循環のための親水性ポリマーコーティング；および(iv)所望により治療の照準である標的表面に特異的に結合するのに有効な親和性部分を含むリポソームを対象に全身的に投与することを含む、哺乳動物対象のリポソームベースの治療方法を提供する。本親水性ポリマーコーティングは、リポソーム中の表面脂質成分に共有結合により結合したポリマー鎖から成る。
【０００６】
一つの態様において、本二価カチオンマトリックスは、カルシウムイオン、亜鉛イオン、マグネシウムイオンのような二価カチオンを含む。
【０００７】
一つの態様において、治療剤を標的領域に投与するとき、本親和性部分は、標的領域で受容体と特異的に結合するのに有効なリガンドであり、そして本リポソームは、封入された形態で治療剤を含む。この態様の例は、固形腫瘍の処置であり、ここで、本親和性部分が腫瘍特異的抗原に特異的に結合するのに有効であり、本リポソームが約１０から約５００nmの平均サイズを有し、そして封入された薬剤を含む。
【０００８】
一つの態様において、本二価カチオンマトリックスはカチオン性脂質を含む。このような脂質は、ステロール、アシルまたはジアシル鎖を含むものであり、ここで、本脂質は全体的に正味の正の荷電を有する。脂質の例は、１,２−ジアシル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン(ＤＯＴＡＰ)、ジメチルジオクタデシルアンモニウム(ＤＤＡＢ)、Ｎ−[１−(２,３−ジテトラデシルオキシ)プロピル]−Ｎ,Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロマイド(ＤＭＲＩＥ)；Ｎ−[１−(２,３,−ジオレイルオキシ)プロピル]−Ｎ,Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヒドロキシエチルアンモニウムブロマイド(ＤＯＲＩＥ)；Ｎ−[１−(２,３−ジオレイルオキシ)プロピル]−Ｎ,Ｎ,Ｎ−トリメチル塩化アンモニウム(ＤＯＴＭＡ)；３β[Ｎ−(Ｎ',Ｎ'−ジメチルアミノエタン)カルバモイル]コレステロール(ＤＣ−Ｃｈｏｌ)を含む。
【０００９】
発明の詳細な記載
Ｉ. リポソーム組成物
リポソームベースの治療に使用するためのリポソームは、外表面を有する少なくとも１個の外二層を有する。本リポソームは、さらなる二層を含み得ることは認められるであろう。本外二層は、各々内部および外部脂質層の二層から成り、各層は、典型的にジアシル疎水性脂質尾部および極性頭基を有するリン脂質およびコレステロールのような小胞形成脂質から成る。リポソームは、主にこのような小胞形成脂質から成る。
【００１０】
本リポソームは、治療剤が、その標的に曝され、相互作用する前に漏れ出ることを有効に遮蔽する二価カチオンを含む。本二価カチオンマトリックスは、本薬剤を捕捉することにより治療剤がリポソーム二層を通過する透過性を低下させる。二価カチオンマトリックスは、非常に可溶性の治療剤の捕捉を助ける。加えて、二価カチオンマトリックスは、治療剤の腫瘍へのより効率的な送達を促進できる。
【００１１】
一つの態様において、本リポソームに包含されたカルシウムイオンは、標的に到達する前に活性剤が分散されないように維持することを助ける。
【００１２】
標的細胞または領域に投与すべき治療剤をリポソーム内に封入する。ここで使用する治療剤、化合物および薬剤は相互交換可能に使用される。本治療剤は、該化合物の性質に依存して、本リポソーム内の内部水性区画にまたは脂質二層内に封入され得る。
【００１３】
本封入された治療剤は、小胞の水性区画内に安定に封入できる水溶性薬剤、小胞の脂質相中に安定に分配される親油性化合物、または、例えば小胞外表面に静電気的結合により安定に結合できる薬剤を含む、脂質小胞内に封入できる多数の治療剤のいずれかであり得る。水溶性化合物の例は、ビスホスホネートクラスの薬剤を含む。治療剤の例は、置換アルカン二リン酸、特に式Ｉ
【化１】
2009507029.tif 000002
〔式中、Ｒ１は、ヘテロ原子として、２から４個のＮ原子または１個もしくは２個のＮ原子と１個のＯまたはＳ原子を含み、そして非置換であるか、または低級アルキル、フェニルまたはフェニル(これは低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンで置換されている)、または低級アルコキシ、ヒドロキシ、ジ−低級アルキルアミノ、低級アルキルチオおよび／またはハロゲンでＣ置換されている、および／または低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンで置換可能なＮ原子でＮ置換されている５員ヘテロアリールラジカルであり、そしてＲ２は水素、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキルチオまたはハロゲンである。〕
のヘテロアリールアルカン二リン酸およびそれらの塩である。
【００１４】
ヘテロ原子として、２から４個のＮ原子または１個もしくは２個のＮ原子と１個のＯまたはＳ原子を含む５員ヘテロアリールラジカルの例は：イミダゾリル、例えばイミダゾル−１−イル、イミダゾル−２−イルまたはイミダゾル−４−イル、ピラゾリル、例えばピラゾル−１−イルまたはピラゾル−３−イル、チアゾリル、例えばチアゾル−２−イルまたはチアゾル−４−イル、または、あまり好ましくないが、オキサゾリル、例えばオキサゾル−２−イルまたはオキサゾル−４−イル、イソオキサゾリル、例えばイソオキサゾル−３−イルまたはイソオキサゾル−４−イル、トリアゾリル、例えば１Ｈ−１,２,４−トリアゾル−１−イル、４Ｈ−１,２,４−トリアゾル−３−イルまたは４Ｈ−１,２,４−トリアゾル−４−イルまたは２Ｈ−１,２,３−トリアゾル−４−イル、テトラゾリル、例えばテトラゾール−５−イル、チアジアゾリル、例えば１,２,５−チアジアゾル(thiadazol)−３−イル、およびオキサジアゾリル(oxdiazolyl)、例えば１,３,４−オキサジアゾル−２−イルである。これらのラジカルは、最初に記載した基から選択される、１個以上の同一または異なる、好ましくは１個または２個の同一または異なる置換基を含み得る。非置換であるか、または示す通りに置換されたラジカルＲ１は、例えばイミダゾル−２−イルまたはイミダゾル−４−イルラジカルであり、それは、非置換であるか、またはフェニルまたは示す通りに置換されたフェニルによりＣ置換されているか、またはそれは、Ｃ１−Ｃ４アルキル、例えばメチルでＣまたはＮ置換されており、そして、典型的に、イミダゾル−２−イル、１−Ｃ１−Ｃ４アルキルイミダゾル−２−イル、例えば１−メチルイミダゾル−２−イル、または２−または５−Ｃ１−Ｃ４アルキルイミダゾル−４−イル、例えば２−または５−メチルイミダゾル−４−イル、非置換チアゾリルラジカル、例えばチアゾル−２−イル、または非置換であるか、もしくはＣ１−Ｃ４アルキル、例えばメチルで置換された１Ｈ−１,２,４−トリアゾルラジカル、例えば１−Ｃ１−Ｃ４アルキル−１Ｈ−１,２,４−トリアゾル−５−イル、例えば１−メチル−１Ｈ−１,２,４−トリアゾル−５−イル、または非置換であるか、またはフェニルまたは示す通りに置換されたフェニルで、またはＣ１−Ｃ４アルキル、例えばメチルでＣ置換されたイミダゾル−１−イル、ピラゾリル−１−イル、１Ｈ−１,２,４−トリアゾル−１−イル、４Ｈ−１,２,４−トリアゾル−４−イルまたはテトラゾール−１−イルラジカル、例えばイミダゾル−１−イル、２−、４−または５−Ｃ１−Ｃ４アルキルイミダゾル−１−イル、例えば２−、４−または５−メチルイミダゾル−１−イル、ピラゾル−１−イル、３−または４−Ｃ１−Ｃ４アルキルピラゾル−１−イル、例えば３−または４−メチルピラゾル−１−イル、１Ｈ−１,２,４−テトラゾール−１−イル、３−Ｃ１−Ｃ４アルキル−１Ｈ−１,２,４−トリアゾル−１−イル、例えば３−メチル−１Ｈ−１,２,４−トリアゾル−１−イル、４Ｈ−１,２,４−トリアゾル−１−イル、３−Ｃ１−Ｃ４アルキル−４Ｈ−１,２,４−トリアゾル−４−イル、例えば３−メチル−４Ｈ−１,２,４−トリアゾル−４−イルまたは１Ｈ−１,２,４−テトラゾール−１−イルで���る。
【００１５】
以後用語“低級”により限定されているラジカルおよび化合物は、典型的に７個まで(７個を含む)の炭素原子、好ましくは４個まで(４個を含む)の炭素原子を含むものを意味するとして理解されよう。本一般的用語は、例えば以下の意味を有する：
【００１６】
低級アルキルは、例えばＣ１−Ｃ４アルキル、例えばメチル、エチル、プロピルまたはブチル、およびまたイソブチル、ｓｅｃ−ブチルまたはｔｅｒｔ−ブチルであり、およびさらにＣ５−Ｃ７アルキル、例えばペンチル、ヘキシルまたはヘプチルであり得る。
【００１７】
フェニル−低級アルキルは、例えばフェニル−Ｃ１−Ｃ４アルキル、好ましくは１−フェニル−Ｃ１−Ｃ４アルキル、例えばベンジルである。
【００１８】
低級アルコキシは、例えばＣ１−Ｃ４アルコキシ、例えばメトキシ、エトキシ、プロポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、イソブトキシ、ｓｅｃ−ブトキシまたはｔｅｒｔ−ブトキシである。
【００１９】
ジ−低級アルキルアミノは、例えばジ−Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノ、例えばジメチルアミノ、ジエチルアミノ、Ｎ−エチル−Ｎ−メチルアミノ、ジプロピルアミノ、Ｎ−メチル−Ｎ−プロピルアミノまたはジブチルアミノである。
【００２０】
低級アルキルチオは、例えばＣ１−Ｃ４アルキルチオ、例えばメチルチオ、エチルチオ、プロピルチオまたはブチルチオ、およびまたイソブチルチオ、ｓｅｃ−ブチルチオまたはｔｅｒｔ−ブチルチオである。
【００２１】
ハロゲンは、例えば３５まで(３５を含む)の原子番号を有するハロゲン、例えばフッ素、塩素または臭素である。
【００２２】
式Ｉの化合物の塩は、特に薬学的に許容される塩基とのそれらの塩、例えば、Ｉａ、Ｉｂ、IIａおよびIIｂ属の金属由来の非毒性金属塩、例えばアルカリ金属塩、好ましくはナトリウムまたはカリウム塩、アルカリ土類金属塩、好ましくはカルシウムまたはマグネシウム塩、銅、アルミニウムまたは亜鉛塩、およびまたアンモニアまたは有機アミンまたは４級アンモニウム塩基、例えば遊離またはＣ−ヒドロキシル化脂肪族アミン、好ましくはモノ−、ジ−またはトリ−低級アルキルアミン、例えばメチルアミン、エチルアミン、ジメチルアミンまたはジエチルアミン、モノ−、ジ−またはトリ(ヒドロキシ−低級アルキル)アミン、例えばエタノールアミン、ジエタノールアミンまたはトリエタノールアミン、トリス(ヒドロキシメチル)アミノメタンまたは２−ヒドロキシ−ｔｅｒｔ−ブチルアミン、またはＮ−(ヒドロキシ−低級アルキル)−Ｎ,Ｎ−ジ−低級アルキルアミンまたはＮ−(ポリヒドロキシ−低級アルキル)−Ｎ−低級アルキルアミン、例えば２−(ジメチルアミノ)エタノールまたはＤ−グルカミン、または４級脂肪族アンモニウム水酸化物、例えばテトラブチルアンモニウム水酸化物とのアンモニウム塩である。
【００２３】
これに関連して、式Ｉの化合物はまた、基Ｒ１が十分に塩基性であるならば、分子内塩の形でも得ることが出来ることも記載すべきである。これらの化合物は、故に、強プロトン性酸、例えばハロゲン化水素酸、硫酸、スルホン酸、例えばメタンスルホン酸またはｐ−トルエンスルホン酸、またはスルファミン酸、例えばＮ−シクロヘキシルスルファミン酸で処理により、対応する酸付加塩に変換もできる。
【００２４】
一つの態様において、本治療剤は、Ｒ１がイミダゾリル、ピラゾリル、２Ｈ−１,２,３−トリアゾリル、１Ｈ−１,２、４−トリアゾリルまたは４Ｈ−１,２,４−トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアゾリルまたはチアジアゾリルラジカルあり、これは、非置換であるか、または低級アルキル、低級アルコキシ、フェニルまたは、フェニル(これは次に低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲン１個または２個の基で置換されている)、ヒドロキシ、ジ−低級アルキルアミノ、低級アルキルチオおよび／またはハロゲンから選択される１個または２個の基によりＣ置換されており、および／または低級アルキルまたはフェニル−低級アルキル(これは、非置換であるか、または低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンから選択される１個または２個の基により置換されている)により置換できるＮ原子でＮ置換されており；そしてＲ２が水素、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキルチオまたはハロゲンである、式Ｉの化合物、およびそれらの塩、とりわけ分子内塩および塩基との薬学的に許容されるそれらの塩である。
【００２５】
一つの態様において、本治療剤は、Ｒ１がイミダゾリル、ピラゾリル、２Ｈ−１,２,３−トリアゾリルまたは４Ｈ−１,２,４−トリアゾリル、テトラゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、オキサジアゾリル、チアゾリルまたはチアジアゾリルラジカルであり、これは非置換であるか、または低級アルキル、低級アルコキシ、フェニルまたはフェニル(これは、次に低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンから選択される１個または２個の基により置換されている)、ヒドロキシ、ジ−低級アルキルアミノ、低級アルキルチオおよび／またはハロゲンから選択される１個または２個の基によりＣ置換されており、および／または低級アルキルまたはフェニル−低級アルキル(これは、低級アルキル、低級アルコキシおよび／またはハロゲンから選択される１個または２個の基により置換されている)により置換できるＮ原子でＮ置換されており；そしてＲ２が水素、ヒドロキシ、アミノ、低級アルキルチオまたはハロゲンである、式Ｉの化合物、およびそれらの塩、とりわけ分子内塩および塩基との薬学的に許容されるそれらの塩である。
【００２６】
一つの態様において、本治療剤は、Ｒ１がイミダゾリルラジカル、例えばイミダゾル−１−イル、イミダゾル−２−イルまたはイミダゾル−４−イル、４Ｈ−１,２,４−トリアゾリルラジカル、例えば４Ｈ−１,２,４−トリアゾル−４−イル、またはチアゾリルラジカル、例えばチアゾル−２−イルであり、このラジカルは、非置換であるか、またはＣ.ｓｕｂ.１−Ｃ.ｓｕｂ.４アルキル、例えばメチル、Ｃ１−Ｃ４アルコキシ、例えばメトキシ、フェニル、ヒドロキシ、ジ−Ｃ１−Ｃ４アルキルアミノ、例えばジメチルアミノまたはジエチルアミノ、Ｃ１−Ｃ４アルキルチオ、例えばメチルチオ、および／または３５まで(３５を含む)の原子番号を有するハロゲン、例えば塩素から選択される１個または２個の基でＣ置換されており、および／またはＣ１−Ｃ４アルキル、例えばメチル、またはフェニル−Ｃ１−Ｃ４アルキル、例えばベンジルにより置換できるＮ原子でＮ置換されており；そしてＲ２が好ましくはヒドロキシ、または、あまり好ましくないが、水素またはアミノである、式Ｉの化合物、およびそれらの塩、とりわけ分子内塩および塩基との薬学的に許容されるそれらの塩である。
【００２７】
一つの態様において、本治療剤は、Ｒ１がイミダゾル−２−または−４−イルラジカルであり、これは非置換であるか、またはフェニルによりＣ置換されているか、またはＣ−またはＣ１−Ｃ４アルキル、例えばメチルによりＮ置換されており、例えばイミダゾル−２−イル、１−Ｃ１−Ｃ４アルキルイミダゾル−２−イル、例えば１−メチルイミダゾル−２−イル、または２−または５−Ｃ１−Ｃ４アルキルイミダゾル−４−イル、例えば２−または５−メチルイミダゾル−４−イルであるか、または非置換チアゾリルラジカル、例えばチアゾル−２−イルであるか、または１Ｈ−１,２,４−トリアゾリルラジカルであり、これは、非置換であるか、またはＣ１−Ｃ４アルキル、例えばメチルで置換されており、例えば１Ｃ１−Ｃ４アルキル−１Ｈ−１,２,４−トリアゾル−５−イル、例えば１−メチル−１Ｈ−１,２,４−トリアゾル−５−イルであり、そしてＲ２がヒドロキシ、またはあまり好ましくないが、水素である式Ｉの化合物、およびそれらの塩、とりわけ薬学的に許容される塩である。
【００２８】
一つの態様において、本治療剤は、Ｒ１がイミダゾル−１−イル、ピラゾル−１−イル、１Ｈ−１,２、４−トリアゾル−１−イル、４Ｈ−１,２,４−トリアゾル−４−イルまたはテトラゾール−１−イルラジカルであり、これは非置換であるか、またはフェニルもしくはＣ１−Ｃ４アルキル、例えばメチルによりＣ置換されている、例えばイミダゾル−１−イル、２−、４−または５−Ｃ１−Ｃ４アルキルイミダゾル−１−イル、例えば２−、４−または５−メチルイミダゾル−１−イル、ピラゾル−１−イル、３−または４−Ｃ１−Ｃ４アルキルピラゾル−１−イル、例えば３−または４−メチルピラゾル−１−イル、１Ｈ−１,２,４−テトラゾール−１−イル、３−Ｃ１−Ｃ４アルキル−１Ｈ−１,２,４−トリアゾル−１−イル、例えば３−メチル−１Ｈ−１,２,４−トリアゾル−１−イル、４Ｈ−１,２,４−トリアゾル−１−イル、３−Ｃ１−Ｃ４アルキル−４Ｈ−１,２,４−トリアゾル−４−イル、例えば３−メチル−４Ｈ−１,２,４−トリアゾル−４−イルまたは１Ｈ−テトラゾール−１−イルであり、そしてＲ２がヒドロキシまたは、あまり好ましくないが、水素である、式Ｉの化合物、およびそれらの塩、とりわけ薬学的に許容される塩である。
【００２９】
一つの態様において、本治療剤が、Ｒ１がイミダゾリルラジカルであり、これは非置換であるか、またはＣ１−Ｃ４アルキル、例えばメチルで置換されており、例えばイミダゾル−１−イル、イミダゾル−２−イル、１−メチルイミダゾル−２−イル、イミダゾル−４−イルまたは２−または５−メチルイミダゾル−４−イルであり、そしてＲ２がヒドロキシまたは、あまり好ましくないが、水素である、式Ｉの化合物、およびそれらの塩、とりわけ薬学的に許容される塩である。
【００３０】
本発明の好ましい態様において、本リポソームは、ゾレドロン酸のような固形腫瘍の処置のための封入された薬剤を含む。
【００３１】
リポソームの外表面は、リポソーム表面成分を遮蔽するのに有効なブラシ様(brushlike)コーティングを形成するために好ましくは高密度充填された、親水性ポリマー鎖を含む親水性ポリマーの表面コーティングを含み得る。本発明によって、本親水性ポリマー鎖は、化学的にリポソーム脂質と結合する。
【００３２】
リポソームの外表面は、リポソームベースの治療が目的とされる標的、例えば、生物学的表面、例えば細胞膜、細胞マトリックス、組織または標的表面または領域に特異的に結合するのに有効な親和性部分を含み得る。本親和性部分は、表面脂質成分への共有結合的結合によりリポソーム外表面におよび／またはリポソーム中の親水性ポリマーコートに結合する。本親和性部分は、標的上に担持されるリガンド結合分子に特異的に、そして高親和性で結合するのに有効なリガンドである。例えば、一つの態様において、本親和性部分は、腫瘍特異的抗原および／または固形腫瘍上で過剰発現している受容体に結合するのに有効であり、そして他の態様において、本親和性部分は、炎症部位の細胞に結合するのに有効である。他の態様において、本親和性部分はビタミン、ポリペプチドまたはポリサッカライドまたはタンパク質エフェクターである。
【００３３】
本発明のリポソームは、治療剤の標的への投与に使用するためである。本治療剤は、本リポソーム内に封入されている。
【００３４】
本発明のリポソーム組成物は、主に小胞形成脂質から成る。このような小胞形成脂質は、(ａ)リン脂質が例である、水中で本質的に二層小胞を形成できるもの、または(ｂ)脂質二層に安定に挿入されるもの(その疎水性部分は、二層膜の内部、疎水性領域と接触し、そしてその頭基部分は、小胞の外部および内部、極性表面に向いている)である。
【００３５】
このタイプの小胞形成脂質は、好ましくは２個の炭化水素鎖、典型的にアシル鎖、および、極性または非極性いずれかの頭基を含むものである。しかしながら、４個の炭化水素鎖を含む他のリン脂質、例えば、テトラミリスチルカルジオリピン(tetramyristylcardiolipin)もまた適する。炭化水素鎖は、典型的に約１４−２２炭素原子長であり、種々の不飽和度を有する、リン脂質、例えばホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジン酸、ホスファチジルイノシトール、およびスフィンゴミエリンを含む種々の合成小胞形成脂質および天然に存在する小胞形成脂質が存在する。アシル鎖が種々の程度に飽和されている上記脂質およびリン脂質は、商業的に得ることができ、または公開された方法に従い製造できる。他の適当な脂質は、糖脂質およびステロール、例えばコレステロールまたはコレステロール誘導体を含む。
【００３６】
本発明において使用するために好ましいジアシル鎖脂質は、単独または組み合わせでジアシルグリセロール、例えば、ホスファチジルコリン(ＰＣ)、ホスファチジルエタノールアミン(ＰＥ)、ホスファチジルグリセロール(ＰＧ)、ホスファチジルセリン(ＰＳ)、ホスファチジン酸(ＰＡ)、ホスファチジルイノシトール(ＰＩ)、スフィンゴミエリン(ＳＰＭ)、カルジオリピンなどを含む。これらの脂質は、主要リポソーム成分である小胞形成脂質として使用するのに、そして以下の誘導体化脂質において使用するために好ましい。
【００３７】
加えて、本小胞形成脂質は、血清中のリポソームの安定性を制御し、そして本リポソーム内に封入された薬剤の放出速度を制御するために、特異的な流動性または剛性を達成するために選択される。小胞形成脂質により決定されるリポソームの剛性はまた、記載の通り、リポソームの標的細胞への融合に役割を有する。
【００３８】
より硬い脂質二層、または液晶性二層を有するリポソームは、相対的に硬い脂質、例えば、相対的に高い、例えば、６０℃までの相遷移温度を有する脂質の挿入により達成される。硬い、すなわち、飽和、脂質が、脂質二層におけるより大きな膜剛性に寄与する。コレステロールのような他の脂質成分も、脂質二層構造中の膜剛性に寄与することが知られている。
【００３９】
本発明のリポソームは、リポソーム表面脂質に結合したポリマー鎖から成る親水性ポリマーコーティングを含み得る。このような親水性ポリマー鎖は、約１−２０モルパーセント親水性ポリマー−脂質結合体含まれることにより、リポソームに挿入される。ポリマーコーティングに使用するのに適当な親水性ポリマーは、ポリビニルピロリドン、ポリビニルメチルエーテル、ポリメチルオキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド、ポリメタクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリヒドロキシプロピルメタクリレート、ポリヒドロキシエチルアクリレート、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリエチレングリコール、ポリグリセリンおよびポリアスパルタミド、ヒアルロン酸を含む。
【００４０】
好ましい態様において、本親水性ポリマーは、ポリエチレングリコール(ＰＥＧ)であり、好ましくはＰＥＧ鎖として、５００−１０,０００ダルトン、より好ましくは２,０００−１０,０００ダルトンおよび最も好ましくは１,０００−５,０００ダルトンの分子量を有するものである。
【００４１】
他の好ましい態様において、本親水性ポリマーは、ポリグリセリン(ＰＧ)であって、好ましくはＰＧ鎖として、４００−２０００ダルトン、より好ましくは５００−１,０００ダルトンおよび最も好ましくは６００−７００ダルトンの分子量を有するものである。
【００４２】
本発明のリポソーム組成物は親和性部分を含み得る。本親和性部分は、一般に、標的細胞表面または膜、細胞表面受容体、細胞マトリックス、プラークの領域などのような生物学的表面である標的と特異的に結合するのに有効である。本親和性部分は、記載される通り、リン脂質またはコレステロールいずれかへのリポソーム脂質の直接結合により、または短ポリマー鎖を介した結合により、リポソーム表面に結合する。
【００４３】
一つの態様において、本親和性部分は、標的領域の受容体と特異的に結合するのに有効なリガンド、より具体的に、標的細胞上の受容体に結合するためのリガンドである。この目的で適合なリガンドの非限定的例を表１に挙げる。
【表１】
2009507029.tif 000003
【００４４】
表１に挙げたリガンドは、本発明の一つの態様において、リポソームを特異的標的細胞に向けるために、使用できる。例えば、ＤＳＰＥの頭基またはＤＳＰＥに誘導体化された短ＰＥＧ鎖の遠位末端に結合した葉酸リガンドを、リポソーム内に挿入できる。ここで使用する“短”ＰＥＧ鎖は、リガンドが、リポソーム内に取りこまれたとき、親水性ポリマー鎖の表面コーティングによりマスクまたは遮蔽されるようない選択された長さ(分子量)を有するＰＥＧ鎖を特記することを意図する。リポソームに挿入された、表面に結合した葉酸リガンドは、標的細胞への治療剤の投与、例えば上皮性癌腫の処置のための新生物剤投与のために、上皮性細胞上の葉酸受容体に結合させるために有効である。
【００４５】
本親和性部分は、細胞結合活性を有し、受容体部位についてリガンドと競合するのに有効な短ペプチドである。リガンド−受容体細胞結合事象の阻害は、感染過程の停止をもたらす。
【００４６】
本封入された薬剤を含む脂質小胞は、上記の方法のような既知の方法に従い、典型的に、脂質フィルムを水和し、逆相蒸発させ、溶媒希釈し、界面活性剤透析し、凍結解凍し、そしてマイクロカプセル化することにより製造する。送達すべき化合物は、親油性化合物の場合、有機媒体中に包含され、または水溶性治療剤の場合、水和媒体中に包含されている。あるいは、本治療剤は、対象への投与前に予め形成された小胞上に充填する。
【００４７】
II. リポソーム製剤
Ａ． 放出可能なポリマーコーティングの製造
親水性ポリマー鎖は、選択した刺激に応答して開裂し得る結合を介して、リポソームに結合している。一つの態様において、本結合はペプチド、エステルまたはジスルフィド結合である。
【００４８】
ペプチドが結合した化合物を、例えばポリアルキルエーテル、例えばＰＥＧを脂質アミンにカップリングさせることにより製造する。末端を覆われたＰＥＧを、カルボニルジイミダゾールカップリング試薬で活性化して、活性化イミダゾール化合物を形成する。本活性化ＰＥＧを、次いで、示すトリペプチドの例のＮ末端アミンとカップリングさせる。本ペプチドカルボキシル基を、次いで、ジシクロヘキシルカルボジイミド(ＤＣＣ)のような慣用のカルボジイミドカップリング試薬を介した脂質アミン基のカップリングに使用できる。
【００４９】
エステル結合した化合物を、例えば、ホスファチジン酸のような脂質酸を、無水物カップリング剤を介してアルコールを使用して、ポリアルキルエーテルの末端アルコール基にカップリングさせることにより、製造できる。あるいは、内部エステル結合および適当な末端基、例えば１級アミン基を含む短結合フラグメントを使用して、アミドまたはカルバメート結合を介してポリアルキルエーテルを小胞形成脂質にカップリングできる。
【００５０】
Ｂ. 親和性部分の結合
上記の通り、本発明のリポソームは、ＰＥＧ被覆リポソームの表面に結合した親和性部分を含み得る。本親和性部分は、本部分の性質に依存して、リポソーム脂質表面成分への直接結語により、または短スペーサーアームもしくはエーテル(tether)を介して、リポソームに結合する。
【００５１】
分子、例えば、親和性部分を脂質小胞の表面に結合させるための種々の方法が利用可能である。一つの好ましい方法において、本親和性部分を、以下の通りのカップリング反応により本脂質と結合させて、親和性部分−脂質結合体を形成させる。この結合体をリポソーム形成のための脂質の溶液に添加する。他の方法において、親和性部分の共有結合的結合のために活性化された小胞形成脂質をリポソーム中に挿入させる。
【００５２】
一般に、部分のスペーサーアームへの結合は、小胞形成脂質、典型的にＤＳＰＥを、親和性部分の結合のための反応性末端基を有する親水性ポリマー、例えばＰＥＧで誘導体化することにより達成できる。リガンドの活性化ＰＥＧ鎖への結合方法は、文献に記載されている(Allen, et al., 1995;Zalipsky, 1993;Zalipsky, 1994;Zalipsky, 1995a;Zalipsky, 1995b)。これらの方法において、ｍＰＥＧの不活性末端メトキシ基を、結合反応のために適当な反応性官能基、例えばアミノまたはヒドラジド基と置換する。官能化ＰＥＧの末端を、脂質、典型的にＤＳＰＥと結合させる。官能化ＰＥＧ−ＤＳＰＥ誘導体を、リポソーム形成に使用し、望むリガンドを、リポソーム形成の前または後にＰＥＧ鎖の反応性末端と結合させる。
【００５３】
部分の結合はまた、コレステロールを、親和性部分の結合のための反応性末端基を有する親水性ポリマー、例えばＰＥＧで誘導体化することにより達成できる。リガンドの活性化ＰＥＧ鎖への結合方法はまた文献に記載されている(Guo, W., Lee, T., Sudimack, J., and Lee, R.J. Receptor-Targeted Delivery of Liposomes via Folate-PEG-Chol, (2000) J. Liposome Res., 10:179-195)。
【００５４】
Ｃ. リポソーム製造
本リポソームをまた、Szoka, et al., 1980. Multilamellar vesicles (MLVs) can be formed by simple lipid-film hydration techniquesに詳述されているような種々の技術を使用して製造できる。この方法において、適当な有機溶媒に溶解した上記のタイプのリポソーム形成脂質の混合物を、容器中で蒸発させて薄フィルムを形成し、次いでそれを水性媒体により被覆する。本脂質フィルムを水和させて、典型的に約０.１から１０ミクロンのサイズのＭＬＶを形成する。
【００５５】
本発明の融合リポソームの形成において使用する脂質成分は、好ましくは約７０−９５パーセント小胞形成脂質、１−２０パーセントの親水性ポリマー鎖で誘導体化された脂質、および０.１−５パーセントの結合した親和性部分を有する脂質のモル比率で存在する。一つの製剤例は、８０−９５モルパーセントホスファチジルコリン、１−２０モルパーセントのＰＥＧ−ＤＴＰ−ＤＳＰＥ、および０.１−５モルパーセントの親和性部分−ＤＳＰＥを含む。コレステロールは、製剤中に、約１−５０モルパーセントで包含され得る。
【００５６】
本発明の融合リポソームの製造に適当な他の方法は、Uster, et al., 1996に記載されている。この方法では、封入された治療剤を有するリポソームを、小胞形成脂質から製造する。予め形成されたリポソームを、親和性部分−ＤＳＰＥ結合体および／またはＰＥＧ−誘導体化脂質結合体のミセルの濃縮された分散を含む溶液に添加し、ミセル(micellular)脂質結合体の予め形成されたリポソームへの挿入を達成するのに有効な条件下でインキュベートする。
【００５７】
本発明のリポソームの製造に適当なさらに他のリポソーム製造方法は、溶媒注入方法である。この方法で、溶媒、好ましくはエタノールまたはＤＭＳＯに溶解した脂質の混合物を、撹拌しながら水性媒体に注入して、リポソームを形成する。本溶媒を、透析または蒸発のような適当な技術で除去し、次いでリポソームを望むサイズにする。この方法は、相対的に高いカプセル封入効率を達成する。
【００５８】
親水性治療剤を、本薬剤を水性水和混合物に包含させることによりリポソーム内に封入する。疎水性治療剤を、本薬剤を薄フィルム形成前に脂質と共に挿入させることにより、または水性媒体に注入前に脂質溶媒に溶解することによりリポソームに封入する。
【００５９】
本リポソームは、好ましくは、典型的に約１０から約５００nm、好ましくは５０から約３００nmおよび最も好ましくは８０から約２００nmの選択したサイズ範囲内の実質的に均一なサイズを有するように製造する。
【００６０】
望むとき、本リポソームを、蒸発または凍結乾燥により乾燥させ、何らかの望む溶媒に再懸濁できる。リポソームを凍結乾燥するとき、非還元糖をリポソーム製剤に凍結乾燥前、または凍結乾燥中に添加し、安定性を提供し得る。一つのこのような糖はスクロースである。
【００６１】
二価カチオンマトリックスを有するリポソームが、リポソーム製造中の二価カチオンを含む溶媒の添加により製造できる。
【００６２】
二価カチオンマトリックスを有するリポソームはまた、凍結乾燥リポソームを、対象への投与前に二価カチオンを含む適当な溶媒で再構成することによりまた製造できる。
【００６３】
膜を横切って濃度勾配を有する本発明のリポソームを、１種以上の糖の存在下で脱水し、それらの脱水条件で貯蔵し、その後再水和し、次いで二価カチオンをリポソームに充填し、そして薬剤−二価カチオンマトリックスを形成する膜貫通能を創成するために濃度勾配を使用できることが、判明した。
【００６４】
脱水リポソームを使用するとき、単に二価カチオン、例えば、塩化カルシウムの水性溶液、二価カチオンを含む緩衝溶液をリポソームに添加し、それらを再水和させ、そして薬剤−二価カチオンマトリックスを形成することにより達成できる。本リポソームを、水性溶液に、本溶液を穏やかに回旋させることにより再懸濁できる。本再水和は室温またはリポソームとそれらの内部成分の組成物に適当な他の温度で行い得る。
【００６５】
III. 処置方法
本発明は、一つの局面において、(ｉ)二価カチオンマトリックスおよび(ii)治療剤を含むリポソームを対象に全身的に投与することを含む、方法を含む、哺乳動物対象のためのリポソームベースの治療方法を含む。本二価カチオンマトリックスは、他の方法では、貯蔵中、および体内に導入されたとき、伝統的リポソーム製剤から漏れ出るであろう治療剤の保護を提供する。他の局面で、本発明は、(ｉ)二価カチオンマトリックス、(ii)治療剤、(iii)安定性および長時間の循環のための親水性ポリマーコーティング；および(iv)所望により治療の照準である標的表面に特異的に結合するのに有効な親和性部分を含むリポソームを対象に全身的に投与することを含む、哺乳動物対象のリポソームベースの治療方法を提供する。本親水性ポリマーコーティングは、リポソーム中の表面脂質成分に共有結合的に結合したポリマー鎖から成る。投与したリポソームは、リポソームの望む生体分布が達成され、それにより親和性薬剤が標的表面に曝されるまで、全身的循環が可能である。
【００６６】
好ましい態様において、本リポソームを固形腫瘍の処置に使用する。本リポソームは、封入された形態の抗腫瘍剤を含み、腫瘍特異的抗原への特異的結合に有効な親和性部分により腫瘍領域を標的とする。例えば、リポソームは、増殖している腫瘍内皮細胞上に発現されるＦｌｋ−１、２受容体への選択的結合のための、ＶＥＧＦリガンドをリポソーム内に包含させることにより、腫瘍の血管内皮細胞を標的とできる。
【００６７】
この態様において、本リポソームは、約１０−２００nm、好ましくは５０−１５０nmおよび最も好ましくは８０−１２０nmのサイズとする。このサイズ範囲のリポソームは、腫瘍脈管構造を裏打ちする内皮細胞に存在する“間隙”を介して、腫瘍に入ることができることが示されている(Yuan, et al., 1995)。
【００６８】
一つの態様において、本治療剤は、式Ｉの化合物から選択される。式Ｉの化合物およびそれらの塩は、価値ある薬理学的特性を有する。特に、それらは温血動物のカルシウム代謝に対して顕著な阻害作用を有する。最も特に、約０.０１から１.０mg／kgの範囲の用量の皮下投与後に血清カルシウムレベルのＰＴＨ誘発増加の手段により、ならびに、ＴＰＴＸ(副甲状腺摘出(thyroparathyroidectomised))ラットモデルにおいて、約０.０００３から１.０mgの用量の皮下投与後にビタミンＤ.ｓｕｂ.３により誘導される高カルシウム血症の手段により、Acta Endrocinol. 78, 613-24 (1975)に記載の実験方法において証明できる通り、ラットにおける骨再吸収の著しい阻害に作用する。Walker 256腫瘍により誘導される腫瘍高カルシウム血症は、同様に、約１.０から１００mg／kgの蛍光投与の後に阻害される。加えて、Newbould, Brit. J. Pharmacology 21, 127 (1963)に従う、およびKaibara et al., J. Exp. Med.  159, 1388-96 (1984)に従う実験方法で、約０.００１から１.０mg／kgの用量を皮下投与したとき、式Ｉの化合物およびそれらの塩は、ラットにおけるアジュバント関節炎を伴う関節状態の進行の顕著な阻害をする。故に、それらは、カルシウム代謝障害と関連する疾患、例えば関節の炎症状態、関節軟骨における変性過程、骨粗鬆症、歯周炎、副甲状腺機能亢進症、および血管もしくは補綴インプラント内のカルシウム沈着の処置用薬剤としての使用に、卓越して適当である。好ましい結果は、また、関節炎疾患、例えば強直性脊椎炎(ancylosing spondilitis)、神経炎、滑液包炎、歯周炎および腱炎、線維形成異常症、骨関節症または動脈硬化症におけるような、乏しい溶解性のカルシウム塩の異常沈着が見られる疾患、ならびに硬い体組織の異常な分解が主な症状である疾患、例えば遺伝性低ホスファターゼ症、関節軟骨の変性段階、種々の原因の骨粗鬆症、パジェット病および線維性骨異栄養症、およびまた腫瘍により誘発される溶骨性状態の処置においても達成される。
【００６９】
リポソームの投与、例えば、静脈内投与後、およびリポソームが対象内中に分布し、そして腫瘍内に放出されるのに十分な時間が経過した後、リポソームの親和性部分が、標的細胞への結合および内在化を提供する。一つの態様において、本親水性表面コーティングは、ｐＨ感受性結合によりリポソームに結合し、そして、該結合は、リポソームが腫瘍内に放出された後、腫瘍領域の低酸素症性質のために放出される。
【００７０】
前記から、本発明の種々の性質および目的がどのように適合されるか、認識できる。本発明のリポソームは、リポソームのターゲティング方法を提供する。本親水性表面コーティングはリポソームの取り込みを減らし、本リポソームの分布のための長い血中循環生存時間を達成する。分布後、本リポソーム結合親和性部分は、多価提示を可能にし、標的と結合する。
【００７１】
以下の実施例は本発明のリポソームの製造方法、特徴付け、および使用を説明する。これらの実施例は、いかなる方法でも本発明の範囲を限定することを意図しない。本発明は特定の態様を参照して記載されているが、本発明から逸脱することなく、種々の変化よび修飾を為し得ることは当業者には明らかである。
【実施例】
【００７２】
実施例１
７７０μmolesのホスファチジルコリンおよび３３０μmoles  コレステロールを塩化メチレンに溶解する。本混合物を撹拌し、その結果、溶媒を真空下、約３６℃で蒸発させて、脂質の薄い乾燥フィルムを形成させる。この混合物に、ゾレドロン酸(１１０μmoles)含有１５mlのスクロース溶液を添加し、ボルテックス処理する。単層リポソームを超音波処理器を使用して製造する。薬剤封入効率は、一定量のリポソームを一晩、適当な水性溶媒中で透析するか、またはリポソームの一定量を２００,０００×ｇで２時間遠心することにより、決定する。その後、リポソームフラクションをメタノールに溶解し、高速液体クロマトグラフィー(ＨＰＬＣ)、例えば逆相ＨＰＬＣのような標準法により分析する。
【００７３】
実施例２
脂質(ジステアロイルホスファチジルコリン、ポリグリセリン、コレステロール)を塩化メチレンに溶解する。本脂質溶液を、真空下ロータリーエバポレーターを使用して蒸発させる。蒸発後、脂質残渣を、さらに一晩デシケーター中で乾燥させる。ゾレドロン酸、スクロースおよびナトリウムクロライドを脱イオン水に溶解して、必要なバッチ濃度を達成する。次いで、乾燥させた脂質残渣を、ゾレドロン酸、スクロース／ＮａＣｌ溶液中で水和して、多重膜小胞(ＭＬＶ)を形成する。ＭＬＶのサイズを、０.２μm、および０.１μmポリカーボネートフィルターを通す、押し出し成形により小さくする。５ミリメーターの最終製剤をガラス容器に入れ、VIRTIS Lyophilizerを使用して凍結乾燥する。凍結乾燥したリポソームゾレドロン酸を、対象への投与前にカルシウム緩衝液で再構築する。
【００７４】
実施例３
カチオン性リン脂質、ＤＰＰＣ、葉酸−ＰＥＧ−ＤＳＰＥ、コレステロールをエタノールに溶解する。次いで、脂質アルコール混合物をゾレドロン酸／スクロース溶液に分散させる。次いで、塊のリポソームゾレドロン酸を０.２μMおよび０.１μMポリカーボネートフィルターを通して押し出し成形する。サイズ縮小に続き、生成物を真空下４０℃に加熱し、有機溶媒を蒸発させて、次いで０.２２μMフィルターを通して濾過し、凍結乾燥した。薬剤封入効率は、ＨＰＬＣ法によるアッセイで約５０％である。
【００７５】
実施例４
ＤＳＰＣ、ＰＥＧ−コレステロール、葉酸−ＰＥＧ−コレステロールをエタノールに溶解する。次いで、脂質アルコール混合物を、ゾレドロン酸／スクロース溶液に溶解する。次いで、塊のリポソームゾレドロン酸を０.２μMおよび０.１μMポリカーボネートフィルターを通して濾過する。サイズ縮小に続き、次いで、生成物を真空下４０℃に加熱し、有機溶媒を蒸発させ、次いで０.２２μMフィルターを通して滅菌濾過し、凍結乾燥した。
【国際調査報告】
2009507029.tif 000008
2009507029.tif 000009
2009507029.tif 000010
2009507029.tif 000011