(57)【要約】ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）であるヒト患者を、ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患について治療するための方法を提供する。ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）であるヒト患者におけるＢ細胞による抗体生産を阻害する方法も提供する。これらの方法は、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体をヒト患者に投与することを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患についてヒト患者を治療するための方法であって、該ヒト患者は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）であり、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を該ヒト患者に投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記炎症性疾患または自己免疫疾患が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、円板状狼瘡、ループス腎炎、サルコイドーシス、炎症性関節炎（若年性関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、ライター症候群、強直性脊椎炎および痛風性関節炎を含む）、臓器もしくは組織移植の拒絶反応、超急性、急性もしくは慢性拒絶反応および／または移植片対宿主疾患、多発性硬化症、高ＩｇＥ症候群、結節性多発性動脈炎、原発性胆汁性肝硬変、炎症性大腸炎、クローン病、セリアック病（グルテン過敏性腸症）、自己免疫性肝炎、悪性貧血、自己免疫性溶血性貧血、乾癬、強皮症、重症筋無力症、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性甲状腺炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、免疫複合体疾患、慢性疲労免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、多発性筋炎および皮膚筋炎、クリオグロブリン血症、血栓崩壊、心筋症、尋常性天疱瘡、間質性肺線維症、Ｉ型およびＩＩ型糖尿病、１、２、３および４型遅延型過敏症、アレルギーまたはアレルギー性疾患、治療用タンパク質に対する望ましくない／意図されたものでない免疫反応、喘息、チャーグ・ストラウス症候群（アレルギー性肉芽腫症）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性および刺激性接触皮膚炎、じんま疹、ＩｇＥ媒介アレルギー、アテローム性動脈硬化症、脈管炎、特発性炎症性ミオパシー、溶血性疾患、アルツハイマー病、および慢性炎症性脱髄性多発性ニューロパシー、肺の炎症（肺移植片拒絶反応、喘息、サルコイドーシス、肺気腫、嚢胞性線維症、特発性肺線維症、慢性気管支炎、アレルギー性鼻炎および肺のアレルギー性疾患、例えば過敏性肺炎、好酸球性肺炎、骨髄および／または肺移植または他の原因に起因する閉塞性細気管支炎、移植片アテローム性動脈硬化症／移植片静脈硬化症、ならびに膠原病、血管疾患および自己免疫疾患（例えば、関節リウマチおよびエリテマトーデス）に起因する肺線維症を含むが、これらに限定されない）から成る群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記炎症性疾患または自己免疫疾患が、ＣＤ２０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記炎症性疾患または自己免疫疾患が、関節リウマチ、乾癬、全身性エリテマトーデス、クローン病、重症筋無力症、特発性血小板減少性紫斑病、またはシェーグレン症候群である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記炎症性疾患または自己免疫疾患が、多発性硬化症、移植片拒絶反応、移植片対宿主疾患、アルツハイマー病、または糖尿病である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記炎症性疾患または自己免疫疾患が、ＣＤ４０とＣＤ２０の両方を発現する細胞と関連のある炎症性疾患、または自己免疫疾患である、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
前記炎症性疾患または自己免疫疾患が、関節リウマチ、乾癬、全身性エリテマトーデス、クローン病、重症筋無力症、特発性血小板減少性紫斑病、またはシェーグレン症候群である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記炎症性疾患または自己免疫疾患が、多発性硬化症、移植片拒絶反応、移植片対宿主疾患、アルツハイマー病、または糖尿病である、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記抗ＣＤ４−抗体が、非経口投与経路により投与される、請求項１−８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１０】
前記抗ＣＤ４０抗体が、静脈内または皮下投与される、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者におけるＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患を治療するための薬物の製造における、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体の使用。
【請求項１２】
前記炎症性疾患または自己免疫疾患が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、円板状狼瘡、ループス腎炎、サルコイドーシス、炎症性関節炎（若年性関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、ライター症候群、強直性脊椎炎および痛風性関節炎を含む）、臓器もしくは組織移植の拒絶反応、超急性、急性もしくは慢性拒絶反応および／または移植片対宿主疾患、多発性硬化症、高ＩｇＥ症候群、結節性多発性動脈炎、原発性胆汁性肝硬変、炎症性大腸炎、クローン病、セリアック病（グルテン過敏性腸症）、自己免疫性肝炎、悪性貧血、自己免疫性溶血性貧血、乾癬、強皮症、重症筋無力症、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性甲状腺炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、免疫複合体疾患、慢性疲労免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、多発性筋炎および皮膚筋炎、クリオグロブリン血症、血栓崩壊、心筋症、尋常性天疱瘡、間質性肺線維症、Ｉ型およびＩＩ型糖尿病、１、２、３および４型遅延型過敏症、アレルギーまたはアレルギー性疾患、治療用タンパク質に対する望ましくない／意図されたものでない免疫反応、喘息、チャーグ・ストラウス症候群（アレルギー性肉芽腫症）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性および刺激性接触皮膚炎、じんま疹、ＩｇＥ媒介アレルギー、アテローム性動脈硬化症、脈管炎、特発性炎症性ミオパシー、溶血性疾患、アルツハイマー病、および慢性炎症性脱髄性多発性ニューロパシー、肺の炎症（肺移植片拒絶反応、喘息、サルコイドーシス、肺気腫、嚢胞性線維症、特発性肺線維症、慢性気管支炎、アレルギー性鼻炎および肺のアレルギー性疾患、例えば過敏性肺炎、好酸球性肺炎、骨髄および／または肺移植または他の原因に起因する閉塞性細気管支炎、移植片アテローム性動脈硬化症／移植片静脈硬化症、ならびに膠原病、血管疾患および自己免疫疾患（例えば、関節リウマチおよびエリテマトーデス）に起因する肺線維症を含むが、これらに限定されない）から成る群より選択される、請求項１１に記載の使用。
【請求項１３】
前記炎症性疾患または自己免疫疾患が、ＣＤ２０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患である、請求項１１に記載の使用。
【請求項１４】
前記炎症性疾患または自己免疫疾患が、関節リウマチ、乾癬、全身性エリテマトーデス、クローン病、重症筋無力症、特発性血小板減少性紫斑病、またはシェーグレン症候群である、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
多発性硬化症、移植片拒絶反応、移植片対宿主疾患、アルツハイマー病、または糖尿病、請求項１３に記載の使用。
【請求項１６】
前記炎症性疾患または自己免疫疾患が、ＣＤ４０とＣＤ２０の両方を発現する細胞と関連のある炎症性疾患、または自己免疫疾患である、請求項１３に記載の使用。
【請求項１７】
前記炎症性疾患または自己免疫疾患が、関節リウマチ、乾癬、全身性エリテマトーデス、クローン病、重症筋無力症、特発性血小板減少性紫斑病、またはシェーグレン症候群である、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
多発性硬化症、移植片拒絶反応、移植片対宿主疾患、アルツハイマー病、または糖尿病、請求項１６に記載の使用。
【請求項１９】
前記薬物が、非経口投与経路による投与用に調合される、請求項１１−１８のいずれか一項に記載の使用。
【請求項２０】
前記薬物が、静脈内または皮下投与用に調合される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
有効量の抗ＣＤ４０抗体をヒト患者に投与することを含む、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者におけるＢ細胞による抗体生産を阻害する方法。
【請求項２２】
前記ヒト患者が、ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患を有する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者におけるＢ細胞による抗体生産を阻害するための薬物の製造における、有効量の抗ＣＤ４０抗体の使用。
【請求項２４】
前記抗ＣＤ４０抗体が、ヒトモノクローナル抗体である、請求項1〜２３のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２５】
前記ヒト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体が、ヒトＩｇＧ１重鎖定常領域を含む、請求項２４に記載の方法または使用。
【請求項２６】
前記ヒトＩｇＧ１が、配列番号４または配列番号５に記載のアミノ酸配列を含む、請求項１−２５に記載の方法または使用。
【請求項２７】
前記抗ＣＤ４０抗体に有意なアゴニスト活性がない、請求項１〜２６のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２８】
前記抗ＣＤ４０抗体が、ＣＤ４０発現性細胞でのＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌシグナル伝達のアンタゴニストである、請求項１〜２７のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項２９】
前記抗ＣＤ４０抗体が、
ａ）モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２；
ｂ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって生産されるモノクローナル抗体；
ｃ）配列番号２に示す配列、配列番号４に示す配列、配列番号５に示す配列、配列番号２および配列番号４に示す両方の配列、ならびに配列番号２および配列番号５に示す両方の配列から成る群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；
ｄ）配列番号１に示す配列、配列番号３に示す配列、ならびに配列番号１および配列番号３に示す両方の配列から成る群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子によってコードされたアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；
ｅ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって生産されるモノクローナル抗体に結合することができるエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｆ）配列番号７または配列番号９に示すヒトＣＤ４０配列の残基８２−８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｇ）配列番号７または配列番号９に示すヒトＣＤ４０配列の残基８２−８９を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｈ）競合結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；
ｉ）前記項目ａ）に記載のモノクローナル抗体または前記項目ｃ）−ｈ）のいずれか一項目に記載のモノクローナル抗体であって、該抗体が組換え生産される、抗体；ならびに
ｊ）前記項目ａ）−ｉ）のいずれか一項目に記載のモノクローナル抗体の抗原結合フラグメントであるモノクローナル抗体であって、該フラグメントは、ヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持する、抗体
から成る群より選択される、請求項１〜２８のいずれか一項に記載の方法または使用。
【請求項３０】
前記抗ＣＤ４０抗体が、モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２である、請求項２９に記載の方法または使用。
【請求項３１】
前記抗原結合フラグメントが、Ｆａｂフラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆｖフラグメント、および１本鎖Ｆｖフラグメントから成る群より選択される、請求項２９に記載の方法はたは使用。
【請求項３２】
抗ＣＤ４０抗体で治療することができ、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））での治療に対しては難治性である炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を特定するための方法であって、
ａ）ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を特定する工程；および
ｂ）該ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型（Ｖ／Ｖ、Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）を決定する工程
を含み、
該ヒト患者が、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である場合、該炎症性疾患または自己免疫疾患を抗ＣＤ４０抗体で治療することができる、方法。
【請求項３３】
リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））での治療に対して難治性である炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を治療するための抗体療法を選択する方法であって、
ａ）ＣＤ４０発現性細胞と関連があり、かつリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））での治療に対して難治性である、炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を特定する工程；および
ｂ）該ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型（Ｖ／Ｖ、Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）を決定する工程
を含み、
該ヒト患者が、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である場合、該炎症性疾患または自己免疫疾患の治療に抗ＣＤ４０抗体が選択される、方法。
【請求項３４】
前記ヒト患者が、炎症性または自己免疫疾患のための療法に対して難治性である、請求項１〜３３のいずれかに記載の方法または使用。
【請求項３５】
前記ヒト患者が、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体での療法に対して難治性である、請求項３４に記載の方法。
【請求項３６】
前記ヒト患者が、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体での療法に対して耐性である、請求項３５に記載の方法。
【請求項３７】
前記ヒト患者が、抗ＣＤ２０モノクローナル抗体での療法に対して反応しない、請求項３５に記載の方法。
【請求項３８】
前記抗ＣＤ２０モノクローナル抗体が、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｎ（登録商標））である、請求項３５−３７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３９】
ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するための試薬を含む、抗ＣＤ４０抗体で治療することができる炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を特定するためのキット。
【請求項４０】
ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するための試薬を含む、ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を治療するための抗体療法を選択するためのキット。
【請求項４１】
長さ１０ヌクレオチド以上であり、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型の決定に好適な配列である、少なくとも１つのプローブを含むマイクロアレイを含む、請求項３９または請求項４０に記載のキット。
【請求項４２】
ＦｃγＲＩＩＩａのアミノ酸１５８をコードするゲノム領域のポリメラーゼ触媒増幅においてプライマーとしての使用に好適なオリゴヌクレオチドを含む、請求項３９または請求項４０に記載のキット。
【請求項４３】
ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型の決定に好適な１つ以上の制限酵素を含む、請求項３９または請求項４０に記載のキット。
【請求項４４】
ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患についてヒト患者を治療するための方法であって、該方法は、抗ＣＤ４０抗体が投与後にＣＤ４０発現性細胞によって有意に内在化されないように、治療または予防有効量の該抗ＣＤ４０抗体を該ヒト患者に投与することを含む、方法。
【請求項４５】
ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患についてヒト患者を治療するための方法であって、該方法は、抗ＣＤ４０抗体が投与後にＣＤ４０発現性細胞の表面に実質的に均一に分布したままであるように、治療または予防有効量の該抗ＣＤ４０抗体を該ヒト患者に投与することを含む、方法。
【請求項４６】
ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患についてヒト患者を治療するための方法であって、該方法は、該ヒト患者において治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体が投与後にＣＤ４０発現性細胞の表面に存在するように、該抗ＣＤ４０抗体を該ヒト患者に投与することを含む、方法。
【請求項４７】
ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ発現性ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞によりＣＤ４０発現性細胞の抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）をもたらす、請求項１−３１または４４−４６のいずれかに記載の方法または使用。
【請求項４８】
抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）のアッセイにおいて、前記抗ＣＤ４０抗体が、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｎ（登録商標））より効力が高く、該アッセイが、単離されたヒトナチュラルキラー（ＮＫ）細胞と共にＣＤ４０発現性細胞およびＣＤ２０発現性細胞を適切な抗体の存在下でインキュベートすることを含む、請求項１−３１または４４−４６のいずれかに記載の方法または使用。
【請求項４９】
前記抗ＣＤ４０抗体が、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症、炎症およびアテローム性動脈硬化症、移植、またはアルツハイマー病のモデルにおいてリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘｉｎ（登録商標））より効力が高い、請求項１−３１または４４−４６のいずれかに記載の方法または使用。
【請求項５０】
前記抗ＣＤ４０抗体が、少なくとも約１０−６Ｍから少なくとも約１０−１２Ｍの親和性（ＫＤ）でヒトＣＤ４０に結合する、請求項１−３１または４４−４６のいずれかに記載の方法または使用。
【請求項５１】
前記抗ＣＤ４０抗体が、少なくとも約０．５μＭの親和性（ＫＤ）でヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに結合する、請求項１−３１または４４−４６のいずれかに記載の方法または使用。
【請求項５２】
前記抗ＣＤ４０抗体が、少なくとも約１２μＭの親和性（ＫＤ）でヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに結合する、請求項１−３１または４４−４６のいずれかに記載の方法または使用。
【請求項５３】
前記抗ＣＤ４０抗体が、少なくとも約０．５μＭの親和性（ＫＤ）でヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに結合し、および少なくとも約１２μＭの親和性（ＫＤ）で。ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに結合する、請求項１−３１または４４−４６のいずれかに記載の方法または使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、抗ＣＤ４０抗体の新規使用、特に、ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患の治療における抗ＣＤ４０抗体の新規使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
リガンドの腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）ファミリーの多数のメンバーおよびそれらの対応する受容体は、アポトーシスの誘導または細胞生存および増殖の増進により、正常な細胞の成長を調節する。アポトーシスシグナルと生存および増殖シグナルとのこのバランスが、正常な細胞の恒常性を維持する。少なくとも２６のＴＮＦファミリー受容体および１８のＴＮＦファミリーリガンドが、今日までに同定されている。前記受容体と前記リガンドの両方の生物活性形は、自己組織化タンパク質三量体である。前記受容体と前記リガンドの両方の膜貫通および可溶性型が同定されている。前記受容体の細胞内ドメインは、配列相同性を共有しないが、それらの細胞外ドメインは、４０のアミノ酸、システインリッチリピートを含む。それらの細胞質テールは、細胞内タンパク質の２つの主要グループ［ＴＮＦ受容体関連因子（ＴＲＡＦ）およびデスドメイン（ＤＤ）含有タンパク質］との相互作用によりシグナル伝達する。少なくとも６つのヒトＴＲＡＦとこれらの受容体の一部の細胞質テール上のＴＲＡＦ結合部位との相互作用が、ＡＫＴ（プロテインキナーゼＢまたはＰＫＢと呼ばれるセリン／トレオニンキナーゼ）、核因子−κＢ（ＮＦ−κＢ）およびマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）をはじめとする幾つかのシグナル経路を開始させる。例えば、Ｙｏｕｎｅｓ  ａｎｄ  Ｋａｄｉｎ（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１８：３５２６−３５３４による論評を参照のこと。
【０００３】
ＴＮＦファミリー受容体メンバーＣＤ４０は、正常および新生物性両方のヒトＢ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、ＣＤ８＋Ｔ細胞、内皮細胞ならびに単球性および上皮性細胞の表面に存在する、５０−５５ｋＤａ細胞表面抗原である。ＣＤ４０抗原は、活性化Ｔ細胞、活性化血小板、炎症化した血管平滑筋細胞、好酸球、関節リウマチの際の滑膜、皮膚線維芽細胞、および他の非リンパ球系細胞型上でも発現される。ＣＤ４０を発現する細胞型に依存して、ライゲーションが細胞間接着、分化、活性化および増殖を誘導し得る。例えば、ＣＤ４０のその同族リガンド、ＣＤ４０Ｌ（ＣＤ１５４とも呼ばれる）、への結合は、Ｂ細胞増殖および形質細胞への分化、抗体生産、アイソタイプスイッチング、ならびにＢ細胞記憶生成を刺激する。Ｂ細胞分化中、ＣＤ４０は、プレＢ細胞上で発現されるが、形質細胞に分化されると失われる。
【０００４】
ＣＤ１５４としても公知のＣＤ４０リガンド（ＣＬ４０Ｌ）は、３２−３３ｋＤａ膜貫通タンパク質であり、これは、より小さな２つの生物活性可溶性型であって、それぞれ１８ｋＤａおよび３１ｋＤａででも存在する（Ｇｒａｆら（１９９５）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：１７４９−１７５４；Ｍａｚｚｅｉら（１９９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：７０２５−７０２８；Ｐｉｅｔｒａｖａｌｌｅら（１９９６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：５９６５−５９６７）。ＣＤ４０Ｌは、活性化ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞上では発現されるが、休止ＣＤ４＋Ｔヘルパー細胞上では発現されない（Ｌａｎｅら（１９９２）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２２：２５７３−２５７８；Ｓｐｒｉｇｇｓら（１９９２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７６：１５４３−１５５０；およびＲｏｙら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：１−１４）。ＣＤ４０およびＣＤ４０Ｌの両方は、クローニングされ、特性付けされている（Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉら（１９８９）ＥＭＢＯ  Ｊ．８：１４０３−１４１０；Ａｒｍｉｔａｇｅら（１９９２）Ｎａｔｕｒｅ  ３５７：８０−８２；Ｌｅｄｅｒｍａｎら（１９９２）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７５：１０９１−１１０１；およびＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈら（１９９２）ＥＭＢＯ  Ｊ．１１：４３１３−４３２１）。ヒトＣＤ４０Ｌを記載している特許文献１も参照のこと。ＣＤ４０Ｌ遺伝子でトランスフェクトされ、表面でＣＤ４０Ｌタンパク質を発現する細胞は、Ｂ細胞増殖を誘発することができ、ならびに他の刺激シグナルと一緒に、抗体生産を誘導することができる（Ａｒｍｉｔａｇｅら（１９９２）上記を参照のこと；および特許文献１）。自己免疫疾患を有する患者は、健常な被検者では見られない、可溶性ＣＤ４０Ｌ（ｓＣＤ４０Ｌ）の高い血清中レベルを有する。ＣＤ４０Ｌの過発現は、齧歯動物モデルにおいて、全身性エリテマトーデスに類似した自己免疫疾患を引き起こす（Ｈｉｇｕｃｈｉら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６８：９−１２）。対照的に、活性化Ｔ細胞上の機能的ＣＤ４０Ｌの不在は、Ｘ連鎖高ＩｇＭ症候群の原因となる（Ａｌｌｅｎら（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５９：９９０；およびＫｏｒｔｈａｕｅｒら（１９９３）Ｎａｔｕｒｅ  ３６１：５３９）。さらに、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ相互作用の遮断によって、非ヒト霊長類モデルにおいて、移植拒絶反応を予防することができる。例えば、Ｗｅｅら（１９９２）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５３：５０１−７参照。
【０００５】
ＡＰＣ上でのＣＤ４０発現は、これらの細胞の活性化において重要な補助刺激的役割を果たす。例えば、アゴニスト性抗ＣＤ４０モノクローナル抗体（ｍＡｂ）は、Ｂ細胞活性化においてＴヘルパー細胞の効果を模倣することが証明されている。ＦｃγＲＩＩを発現する付着細胞上に提示されたとき、これらの抗体は、Ｂ細胞増殖を誘導する（Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕら（１９８９）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１：７０）。さらに、ＩＬ−４の存在下、ＩｇＭ、ＩｇＧおよびＩｇＥの分泌のために、Ｔヘルパーシグナルの代わりにアゴニスト性抗ＣＤ４０  ｍＡｂを用いることができる（Ｇａｓｃａｎら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８）。さらに、アゴニスト性抗ＣＤ４０  ｍＡｂは、リンパ節から単離されたＢ細胞のプログラム細胞死（アポトーシス）を防止することができる。
【０００６】
これらおよび他の観察は、ＣＤ４０とＣＤ４０Ｌの相互作用が、体液性免疫反応と細胞媒介免疫反応の両方の調節において中心的役割を果たすという現行の理論を支持する。より最近の研究は、多様な生理および病理プロセスにおけるＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ相互作用のさらにはるかに広範な役割を明らかにした。
【０００７】
ＣＤ４０シグナル伝達経路は、多くの細胞内因子の協調調節に依存する。ＴＮＦ受容体ファミリーの他のメンバーと同様に、ＣＤ４０は、ＣＤ４０とＣＤ４０Ｌ（膜結合ＣＤ４０Ｌまたは可溶性ＣＤ４０Ｌのいずれか）の係合後、細胞外シグナル調節キナーゼ（ＥＲＫ）、ｃ−ｊｕｎアミノ末端キナーゼ（ＪＮＫ）、ｐ３８  ＭＡＰＫおよびＮＦ−κＢをはじめとする様々なシグナル経路をアップレギュレートする、ＴＲＡＦ−２、−３、−５および−６をはじめとするＴＲＡＦを活性化する（例えば、ＹｏｕｎｅｓおよびＣａｒｂｏｎｅ（１９９９）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｍａｒｋｅｒｓ  １４：１３５−１４３；ｖａｎ  ＫｏｏｔｅｎおよびＢａｎｃｈｅｒｅａｕ（２０００）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃ．Ｂｉｏｌ．６７：２−１７参照）。
【０００８】
ＣＤ４０経由のシグナル伝達が、アポトーシスからの細胞死を防止することは証明されている（Ｍａｋｕｓら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：９７３−９８２）。アポトーシスシグナルは、プログラム細胞死を協調して誘導するために必要である。細胞死シグナルは、小胞体ストレスなどの細胞内からの内因性刺激を含み、またはＦａｓＬもしくはＴＮＦαの受容体結合などの外因性刺激を含み得る。このシグナル経路は、複雑であり、Ｃａｓｐａｓｅ−３およびＣａｓｐａｓｅ−９などのカスパーゼの活性化、ならびにポリ（ＡＤＰリボース）ポリメラーゼ（ＰＡＲＰ）の活性化を含む。このカスケードの間に、抗アポトーシスシグナル伝達タンパク質、例えばｍｃｌ−１およびｂｃｌ−ｘ、ならびにタンパク質のＩＡＰファミリーのメンバー、例えばＸ連鎖アポトーシス阻害因子（ＸＩＡＰ）は、ダウンレギュレートされる（Ｂｕｄｉｈａｒｄｊｏら（１９９９）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｃｅｌｌ  Ｄｅｖ．Ｂｉｏｌ．１５：２６９−２９０）。例えば、樹状細胞において、ＣＤ４０細胞シグナル伝達は、ＦａｓＬによって伝達されるアポトーシスシグナルを遮断することができる（Ｂｊｏｒｃｋら（１９９７）Ｉｎｔｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：３６５−３７２）。
【０００９】
従って、ＣＤ４０ＬによるＣＤ４０係合およびその後のＣＤ４０シグナル伝達の活性化は、正常な免疫反応に必要な段階であるが、ＣＤ４０シグナル伝達の調節不良が死をもたらし得る。ＣＤ４０シグナル経路が、自己免疫疾患に関与することは証明されている（Ｉｃｈｉｋａｗａら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：２７８１−２７８７およびＭｏｏｒｅら（２００２）Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．１９：１３９−１４５）。加えて、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ相互作用は、炎症プロセスにおいて重要な役割を果たす。例えば、ヒトおよび実験的アテローム性動脈硬化症病巣では、ＣＤ４０とＣＤ４０Ｌの両方が過発現される。ＣＤ４０刺激は、アテローム関連細胞型、例えば内皮細胞、平滑筋細胞およびマクロファージ、において基質分解酵素の発現および組織因子の発現を誘導する。さらにＣＤ４０刺激は、炎症性サイトカイン、例えばＩＬ−１、ＩＬ−６およびＩＬ−８、ならびに付着分子、例えばＩＣＡＭ−１、Ｅ−セレクチンおよびＶＣＡＭ、の生産を誘導する。ＣＤ４０／ＣＤ４９Ｌ相互作用の阻害は、動物モデルにおいて、アテローム発生を防止する。移植モデルにおいて、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ相互作用の遮断は、炎症を防止する。ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ結合は、アルツハイマーアミロイド−ベータペプチドと相乗的に作用して小グリア細胞の活性化を促進し、従って、神経毒性をもたらす。
【００１０】
関節リウマチ（ＲＡ）を有する患者の場合、関節軟骨細胞上でのＣＤ４０発現が増加され、故に、ＣＤ４０シグナル伝達は、障害性サイトカインおよびマトリックスメタロプロテアーゼの生産に寄与する可能性が高い。Ｇｏｔｏｈら（２００４）Ｊ．Ｒｈｅｕｍａｔｏｌ．３１：１５０６−１５１２参照。さらに、ＲＡ患者からのＣＤ１４＋滑膜細胞上でのＣＤ４０のライゲーションによるＭＡＰＫおよびＮＦ−κＢの活性化により、滑膜炎症反応が発生する（Ｈａｒｉｇａｉら（２００４）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ．Ｔｈｅｕｍ．５０．２１６７−２１７７）。ＲＡの実験モデルにおいて、抗ＣＤ４０Ｌ抗体治療は、疾病誘導、関節炎症および抗コラーゲン抗体生産を予防した（Ｄｕｒｉｅら（１９９３）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６１：１３２８−１３３０）。最終的に、臨床試験において、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）（一般に、Ｂ細胞リンパ腫に対して適用される）の投与によるＲＡ患者のＣＤ２０＋陽性細胞の枯渇により症状が改善されることが証明された（Ｓｈａｗら（２００３）Ａｎｎ．Ｒｈｅｕｍ．Ｄｉｓ．６２（Ｓｕｐｐｌ．２）：ｉｉ５５−ｉｉ５９）。
【００１１】
Ｔ細胞への抗原提示中のＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ相互作用の遮断がＴ細胞耐性を誘導することも証明されている。従って、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ相互作用の遮断は、初期Ｔ細胞活性化を防止し、ならびに抗原への再暴露に対する長期的な耐性を誘導する。
【００１２】
ヒト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体およびその多数の使用は、特許文献２、特許文献３、特許文献４、特許文献５、特許文献６、特許文献７、および特許文献８として公開されている共同所有特許出願に開示されている。これらの出願には、ヒトＩｇＧ１重鎖遺伝子座およびヒトκ軽鎖遺伝子座を有するトランスジェニックマウス（ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ａｂｇｅｎｉｘ、カリフォルニア州）の免疫処置によって産生されたヒトＩｇＧ１抗ＣＤ４０モノクローナル抗体（本明細書中でＣＨＩＲ−１２．１２と呼ばれている）が特に開示されている。
【００１３】
ＦＡＣＳ分析によって証明されたように、ＣＨＩＲ−１２．１２は、ヒトＣＤ４０に特異的に結合し、ＣＤ４０−リガンド（ＣＤ４０Ｌ）結合を防止することができる。ＣＨＩＲ−１２．１２は、細胞表面ＣＤ４０に予め結合されたＣＤ４０Ｌと競合し、排除することができる。ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体は、強力なアンタゴニストであり、正常および悪性Ｂ細胞のインビトロＣＤ４０Ｌ媒介増殖を阻害する。ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体は、正常ヒトＢリンパ球においてＣＤ４０Ｌによって媒介される生存およびシグナル経路を直接阻害する。インビトロでは、ＣＨＩＲ−１２．１２は、ＡＤＣＣによりＮＨＬ患者からの原発性癌細胞を死滅させる。異種移植ヒトリンパ腫モデルにおいて、用量依存性抗腫瘍活性が見られた。ＣＨＩＲ−１２．１２は、現在、Ｂ細胞悪性疾患についての第Ｉ相試験中である。
【００１４】
ＣＤ２０は、Ｂ細胞分化の初期に発現される細胞表面抗原であり、Ｂ細胞が成長する間、細胞表面に留まる。ＣＤ２０は、Ｂ細胞活性化に関与し、新生物性Ｂ細胞上で非常に高レベルで発現され、ならびに臨床的に認知されている治療ターゲットである（例えば、Ｈｏｏｉｊｂｅｒｇら（１９９５）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ５５：２６２７参照）。ＣＤ２０をターゲットにする抗体、例えばリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））、は、非ホジキンリンパ腫の治療用に米国食品医薬品局に認可されている（例えば、Ｂｏｙｅら（２００３）Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．１４：５２０参照）。Ｒｉｔｕｘａｎは、軽度、中等度および高度悪性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）に対する有効な治療薬であることが証明された（例えば、Ｍａｌｏｎｅｙら（１９９４）Ｂｌｏｏｄ  ８４：２４５７−２４６６）、ＭｃＬａｕｇｈｌｉｎら（１９９８）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１６：２８２５−２８３３、Ｍａｌｏｎｅｙら（１９９７）Ｂｌｏｏｄ  ９０：２１８８−２１９５、Ｈａｉｎｓｗｏｒｔｈら（２０００）Ｂｌｏｏｄ  ９５：３０５２−３０５６、Ｃｏｌｏｍｂａｔら（２００１）Ｂｌｏｏｄ  ９７：１０１−１０６、Ｃｏｉｆｆｅｒら（１９９８）Ｂｌｏｏｄ  ９２：１９２７−１９３２）、Ｆｏｒａｎら（２０００）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１８：３ｌ７−３２４、Ａｎｄｅｒｓｏｎら（１９９７）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．２５：７０５−７０８、またはＶｏｓｅら（１９９９）Ａｎｎ．Ｏｎｃｏｌ．１０：５８ａ参照）。Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）は、炎症性および自己免疫疾患において一定の役割を果し得る正常なＢ細胞も枯渇させる。それらは、自己免疫疾患について臨床試験中である。
【００１５】
正確な作用メカニズムは不明であるが、証拠は、Ｒｉｔｕｘｓａｎ（登録商標）の抗リンパ腫効果が、補体媒介性細胞障害（ＣＭＣ）、抗体依存性細胞媒介性細胞障害（ＡＤＣＣ）、細胞増殖の阻害に、一部、起因し、最終的にはアポトーシスの誘導を命令することを示している。しかし、一部の患者は、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）での治療に対して耐性を有するようになった（Ｗｉｔｚｉｇら（２００２）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．２０：３２６２、Ｇｒｉｌｌｏ−  Ｌｏｐｅｚら（１９９８）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌ．１６：２８２５、またはＪａｚｉｒｅｈｉら（２００３）Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．２：１１８３−１１９３参照）。例えば、一部の患者は、抗ＣＤ２０抗体療法後、悪性Ｂ細胞上でのＣＤ２０発現を喪失する（Ｄａｖｉｓら（１９９９）Ｃｌｉｎ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５：６１１）。さらに、軽度悪性ＮＨＬを有する患者の３０％〜５０％は、このモノクローナル抗体に対する臨床反応を示さない（Ｈａｉｎｓｗｏｒｔｈら（２０００）Ｂｌｏｏｄ  ９５：３０５２−３０５６；Ｃｏｌｏｍｂａｔら（２００１）Ｂｌｏｏｄ  ９７：１０１−１０６）。ＮＨＬにおけるリツキシマブの臨床活性が、患者のＦｃγＲＩＩＩａ遺伝子型と相関することも証明された。Ｖ／ＶまたはＶ／ＦのＦｃγＲＩＩＩａ  １５８ａａ多型を有する患者は、Ｆ／Ｆを有する者よりリツキシマブに対して反応性が高い（例えば、Ｃａｒｔｒｏｎら（２００２）Ｂｌｏｏｄ  ９９（３）：７５４−７５８、またはＤａｌｌ’Ｏｚｚｏら（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６４：４６６４−４６６９参照）。このモノクローナル抗体に対する耐性を発現している患者、またはこの抗体での初期療法に対して耐性である炎症性疾患または自己免疫疾患を有する患者には、別の形の治療介入形態が必要である。
【００１６】
さらに、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）は、患者における正常なＢ細胞を枯渇させる。従って、Ｂ細胞依存性自己免疫および炎症性疾患を治療するためにそれを使用することができる。
【特許文献１】米国特許第５，９４５，５１３号明細書
【特許文献２】国際公開第２００５／０４４８５４号パンフレット
【特許文献３】国際公開第２００５／０４４３０４号パンフレット
【特許文献４】国際公開第２００５／０４４３０５号パンフレット
【特許文献５】国際公開第２００５／０４４３０６号パンフレット
【特許文献６】国際公開第２００５／０４４８５５号パンフレット
【特許文献７】国際公開第２００５／０４４３０７号パンフレット
【特許文献８】国際公開第２００５／０４４２９４号パンフレット
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１７】
このように、炎症性疾患および自己免疫疾患のための新規治療薬および新規治療戦略が、引き続き必要とされている。特に、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））などの抗ＣＤ２０抗体での治療に対して難治性の患者を治療するための新規治療戦略が、必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【００１８】
（発明の簡単な概要）
ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）であるヒト患者を、ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患について治療するための方法を提供する。前記方法は、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を前記患者の投与することを含む。本発明は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者におけるＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患を治療するための薬物の製造における、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体の使用にも備えている。
【００１９】
ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者におけるＢ細胞による抗体生産を阻害する方法も提供し、前記方法は、前記ヒト患者に有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与することを含む。本発明は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者におけるＢ細胞による抗体生産を阻害するための薬物の製造における、有効量の抗ＣＤ４０抗体の使用にも備えている。
【００２０】
抗ＣＤ４０抗体で治療することができ、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））での治療に対しては難治性である炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を特定するための方法およびキットも提供する。一部の実施形態において、前記方法は、ａ）ＣＤ４０発現性細胞と関連があり、かつリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））での治療に対して難治性である、炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を特定すること；および  ｂ）前記ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型（Ｖ／Ｖ、Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）を決定することを含み、そのヒト患者が、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である場合、その炎症性疾患または自己免疫疾患を抗ＣＤ４０抗体で治療することができる。本発明は、この方法を使用して特定された患者に、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与する段階をさらに含み得る。抗ＣＤ４０抗体で治療することができる炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者の特定に備える本発明のキットは、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するための試薬を含む。
【００２１】
本発明は、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））での治療に対して難治性である炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を治療するための抗体療法を選択するための方法およびキットも提供する。一部の実施形態において、前記方法は、ａ）ＣＤ４０発現性細胞と関連があり、かつリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））での治療に対して難治性である、炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を特定すること；および  ｂ）前記ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型（Ｖ／Ｖ、Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）を決定することを含み、  そのヒト患者が、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である場合、その炎症性疾患または自己免疫疾患の治療に、抗ＣＤ４０抗体が選択される。本発明は、この方法を使用して特定されたヒト患者に、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与する段階をさらに含み得る。ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性または自己免疫疾患を有するヒト患者を治療するための抗体療法の選択に備える本発明のキットは、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するための試薬を含む。
【００２２】
本発明は、ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患についてヒト患者を治療するための方法も提供し、前記方法は、緩徐内在化型抗体を前記ヒト患者に投与することを含む。１つのそうした実施形態では、抗ＣＤ４０抗体がその投与後にＣＤ４０発現性細胞によって有意に内在化されないように、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体をヒト患者に投与する。もう１つのそうした実施形態では、抗ＣＤ４０抗体がその投与後にＣＤ４０発現性細胞の表面に実質的に均一に分布したままであるように、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体をヒト患者に投与する。さらにもう１つのそうした実施形態では、ヒト患者において治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体がその投与後にＣＤ４０発現性細胞の表面に存在するように、抗ＣＤ４０抗体をヒト患者に投与する。
【００２３】
本発明に従って使用するための抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０抗原に特異的に結合する。一部の実施形態において、本発明の方法において使用するための抗ＣＤ４０抗体、特にモノクローナル抗体は、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに対する強い結合親和性、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに対する強い結合親和性、またはヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８ＶとＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆの両方に対する強い結合親和性を示す。これらの実施形態の一部において、抗ＣＤ４０抗体は、効力のある抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）を生じさせるために十分な結合特性で、ヒト患者のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上の２つのＦｃγＲＩＩＩａアミノ酸１５８アロタイプ（ＶまたはＦ）のいずれかに結合することができる。好適な抗ＣＤ４０抗体としては、例えば、ＣＤ４０発現性細胞でのＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌシグナル伝達のアンタゴニストである抗ＣＤ４０抗体を含む、有意なアゴニスト活性がない抗ＣＤ４０抗体が挙げられるが、これに限定されない。一部の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、ａ）モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２；ｂ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって生産されるモノクローナル抗体；ｃ）配列番号２に示す配列、配列番号４に示す配列、配列番号５に示す配列、配列番号２および配列番号４に示す両方の配列、ならびに配列番号２および配列番号５に示す両方の配列から成る群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；ｄ）配列番号１に示す配列、配列番号３に示す配列、ならびに配列番号１および配列番号３に示す両方の配列から成る群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子によってコードされたアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；ｅ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって生産されるモノクローナル抗体に結合することができるエピトープに結合するモノクローナル抗体；ｆ）配列番号７または配列番号９に示すヒトＣＤ４０配列の残基８２−８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；ｇ）配列番号７または配列番号９に示すヒトＣＤ４０配列の残基８２−８９を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；ｈ）競合結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；ｉ）前記項目ａ）のモノクローナル抗体または前記項目ｃ）−ｈ）のいずれか１項目のモノクローナル抗体（この場合、前記抗体は、組換え生産される）；ならびにｊ）前記項目ａ）−ｉ）のいずれか１項目のモノクローナル抗体の抗原結合フラグメントであるモノクローナル抗体（この場合、前記フラグメントは、ヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持する）から成る群より選択される。
【００２４】
本発明の方法は、ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患の治療に使用することができる。例としては、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、円板状狼瘡、ループス腎炎、サルコイドーシス、炎症性関節炎（若年性関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、ライター症候群、強直性脊椎炎および痛風性関節炎を含む）、臓器もしくは組織移植の拒絶反応、超急性、急性もしくは慢性拒絶反応および／または移植片対宿主疾患、多発性硬化症、高ＩｇＥ症候群、結節性多発性動脈炎、原発性胆汁性肝硬変、炎症性大腸炎、クローン病、セリアック病（グルテン過敏性腸症）、自己免疫性肝炎、悪性貧血、自己免疫性溶血性貧血、乾癬、強皮症、重症筋無力症、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性甲状腺炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、免疫複合体疾患、慢性疲労免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、多発性筋炎および皮膚筋炎、クリオグロブリン血症、血栓崩壊、心筋症、尋常性天疱瘡、間質性肺線維症、Ｉ型およびＩＩ型糖尿病、１、２、３および４型遅延型過敏症、アレルギーまたはアレルギー性疾患、治療用タンパク質に対する望ましくない／意図されたものでない免疫反応、喘息、チャーグ・ストラウス症候群（アレルギー性肉芽腫症）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性および刺激性接触皮膚炎、じんま疹、ＩｇＥ媒介アレルギー、アテローム性動脈硬化症、脈管炎、特発性炎症性ミオパシー、溶血性疾患、アルツハイマー病、および慢性炎症性脱髄性多発性ニューロパシー、肺の炎症（肺移植片拒絶反応、喘息、サルコイドーシス、肺気腫、嚢胞性線維症、特発性肺線維症、慢性気管支炎、アレルギー性鼻炎および肺のアレルギー性疾患、例えば過敏性肺炎、好酸球性肺炎、骨髄および／または肺移植または他の原因に起因する閉塞性細気管支炎、移植片アテローム性動脈硬化症／移植片静脈硬化症ならびに膠原病、血管疾患および自己免疫疾患（例えば、関節リウマチおよびエリテマトーデス）に起因する肺線維症を含むが、これらに限定されない）、ならびにＣＤ２０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患が挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法は、ＣＤ４０とＣＤ２０の両方を発現する細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患に対して特に有利である。このように、本発明は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してホモ接合性またはヘテロ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である患者のための抗ＣＤ２０抗体をはじめとする他の治療薬での療法に対して反応しないまたは難治性である炎症性または自己免疫疾患を有する患者の治療を可能にする。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
（発明の詳細な説明）
本発明者らは、ＣＨＩＲ−１２．１２などの抗ＣＤ４０抗体が、他のＡＤＣＣ媒介抗体があまり有効でないまたは比較的無力である条件下で、ＣＤ４０発現性ターゲット細胞の効力のある抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）を媒介することができるという驚くべき発見をした。リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））などの他の抗体とは異なり、本発明に従って使用する抗ＣＤ４０抗体は、効力のあるＡＤＣＣを生じさせるために十分な結合特性で、ヒト患者のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上の２つのＦｃγＲＩＩＩａアミノ酸１５８アロタイプ（ＶまたはＦ）のいずれかに結合することができる。この発見は、予想外であり、全患者断面にわたって炎症性疾患または自己免疫疾患を治療する本発明者らの能力の進歩を意味する。
【００２６】
従って、ＣＨＩＲ−１２．１２などの抗ＣＤ４０抗体は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに関してホモ接合性（遺伝子型Ｖ／Ｖ）のヒト患者に加えて、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者におけるＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患の治療に使用することができる。
【００２７】
従って、本発明は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）であるヒト患者を、ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患について治療するための方法を提供し、この方法は、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を前記ヒト患者に投与することを含む。本発明は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者におけるＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患を治療するための薬物の製造における、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体の使用も提供する。
【００２８】
上で述べたように、ＮＨＬにおけるリツキシマブの臨床活性が、患者のＦｃγＲＩＩＩａ遺伝子型と相関することは証明されている。Ｆ／ＦのＦｃγＲＩＩＩａ  １５８ａａ多型を有する患者は、Ｖ／ＶまたはＶ／Ｆを有する者よりリツキシマブに対する反応が小さい（例えば、Ｃａｒｔｒｏｎら（２００２）Ｂｌｏｏｄ  ９９（３）：７５４−７５８、またはＤａｌｌ’Ｏｚｚｏら（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６４：４６６４−４６６９参照）。上で述べたように、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）は、自己免疫疾患について臨床検査中である。従って、本発明は、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））などの抗ＣＤ２０抗体での治療に反応しない炎症性疾患または自己免疫疾患の治療に有利である。さらに、抗体−毒素共役を使用する必要がないこうした効力のあるターゲット細胞死滅により、結果として、製造に費用がかからず、副作用がより少ない薬物が得られるであろう。
【００２９】
ＣＨＩＲ−１２．１２などの抗ＣＤ４０抗体は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに関してホモ接合性（遺伝子型Ｖ／Ｖ）のヒト患者に加えて、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者におけるＢ細胞による抗体生産を阻害するための方法に使用することができる。
【００３０】
従って、本発明は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者におけるＢ細胞による抗体生産を阻害する方法を提供し、この方法は、有効量の抗ＣＤ４０抗体、例えばＣＨＩＲ−１２．１２、を前記ヒト患者に投与することを含む。本発明は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者におけるＢ細胞による抗体生産を阻害するための薬物の製造における、有効量の抗ＣＤ４０抗体の使用も提供する。
【００３１】
当業者は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関して、ヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者においてＢ細胞による抗体生産を阻害できるとは予想し得なかったであろう。
【００３２】
本発明によって、ＡＤＣＣ媒介性抗ＣＤ４０抗体を投与することにより、個々のヒト患者のためにその患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型に基づいて治療計画を選択することができる。
本発明は、抗ＣＤ４０抗体で治療することができ、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））での治療に対しては難治性である炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を特定するための方法を提供し、この方法は、
ａ）ＣＤ４０発現性細胞と関連があり、かつリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））での治療に対して難治性である、炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を特定すること；および
ｂ）前記ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型（Ｖ／Ｖ、Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）を決定すること
を含み、
前記ヒト患者が、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である場合、前記炎症性疾患または自己免疫疾患を治療することができる。本発明は、この方法を使用して特定されたヒト患者に、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与する段階をさらに含み得る。
当業者は、抗ＣＤ４０抗体で治療することができる炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を特定するこの方法を、好適な診断キットを使用して容易に行うことができる。このキットは、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型の決定に好適な試薬を含むはずである。従って、本発明は、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するための試薬を含む、抗ＣＤ４０抗体で治療することができる炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を特定するためのキットも提供する。好適なキットは、本明細書の他の箇所でより詳細に説明する。
本発明は、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））での治療に対して難治性である炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を治療するための抗体療法を選択するための方法も提供し、この方法は、
ａ）ＣＤ４０発現性細胞と関連があり、かつリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））での治療に対して難治性である、炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を特定すること；および
ｂ）前記ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型（Ｖ／Ｖ、Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）を決定すること
を含み、
前記ヒト患者が、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である場合、前記炎症性疾患または自己免疫疾患の治療に抗ＣＤ４０抗体が選択される。特に、抗ＣＤ４０抗体は、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））での治療に優先して選択することができる。本発明は、この方法を使用して特定されたヒト患者に、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与する段階をさらに含み得る。
【００３３】
当業者は、炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を治療するための抗体療法のこの選択方法を、好適な診断キットを使用して容易に行うことができる。このキットは、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型の決定に好適な試薬を含むはずである。従って、本発明は、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するためのキットを含む、ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を治療するための抗体療法を選択するためのキットも提供する。
【００３４】
本発明者は、ＣＨＩＲ−１２．１２などの抗ＣＤ４０抗体が、投与後にＣＤ４０発現性細胞によって有意に内在化されないという驚くべき発見もした。その代わり、ＣＨＩＲ−１２．１２などの抗ＣＤ４０抗体は、投与後、有意な期間、ＣＤ４０発現性細胞の表面に実質的に均一に分布している。これは、他の抗体、特に、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））などの抗ＣＤ２０抗体とは対照的である。
【００３５】
ＣＤ４０発現性細胞表面でのＣＤ４０結合の継続期間、およびＣＤ４０発現性細胞表面での抗ＣＤ４０抗体の均一な分布によって、抗ＣＤ４０抗体は、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上のＦｃγＲＩＩＩａなどのＦｃＲへの結合によりＣＤ４０発現性ターゲット細胞の効力のある抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）を媒介することができる。
従って、本発明は、抗ＣＤ４０抗体が投与後にＣＤ４０発現性細胞によって有意に内在化されないように、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体をヒト患者に投与することを含む、ヒト患者をＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患について治療するための方法を提供する。
【００３６】
本発明は、抗ＣＤ４０抗体が投与後にＣＤ４０発現性細胞の表面に実質的に均一に分布したままであるように、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体をヒト患者に投与することを含む、ヒト患者をＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患について治療するための方法も提供する。
【００３７】
本発明は、ヒト患者において治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体が投与後にＣＤ４０発現性細胞の表面に存在するように、抗ＣＤ４０抗体をヒト患者に投与することを含む、ヒト患者をＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患について治療するための方法も提供する。
【００３８】
従って、本発明のこれらの態様は、緩徐内在化型抗体を患者に投与することを含む。「緩徐内在化型抗体」とは、有意な期間にわたって細胞表面に配置されたままである抗体を意味する。当業者はわかるであろうが、この特性は、治療が意図した効果を生ずるために抗体−受容体複合体の内在化を実際に必要とする多くの治療用途に有利だと考えられる特性と対照をなす。この文脈で、有意な期間は、一般に、３時間、好ましくは６時間、さらに好ましくは１２時間、さらに好ましくは２４時間、３６時間、４８時間、７２時間、９６時間、１２０時間、１４４時間、１６８時間以上である。
【００３９】
好ましくは、ＣＤ４０発現性細胞の表面に最初に配置された抗体の少なくとも５％、少なくとも１０％、少なくとも２０％、少なくとも３０％、少なくとも４０％。少なくとも５０％、少なくとも６０％、少なくとも７０％、少なくとも８０％、少なくとも９０％、以上が、上の有意な期間の後、その細胞の表面に配置されたままである。
【００４０】
抗体の内在化は、様々なアッセイによってアッセイすることができる。例えば、Ｄａｕｄｉリンパ腫細胞株またはＡＲＨ７７  ＭＭ細胞株などの細胞株を使用して、内在化に対する候補抗体結合の効果を評価することができる。氷上で（内在化を阻止するために０．１％アジ化ナトリウムと共に）、または３７℃で（アジ化ナトリウムを伴わずに）、一定期間（好適適切には３時間）、細胞をヒトＩｇＧ１（対照抗体）または候補抗体と共にインキュベートする。低温の染色用バッファ（ＰＢＳ＋１％ＢＳＡ＋０．１％アジ化ナトリウム）で洗浄した後、例えば、氷上で３０分間、ヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＦＩＴＣで細胞を染色する。その後、染色度をアッセイすることができる。この例では、幾何平均蛍光強度（ＭＦＩ）を、例えばＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒにより、記録することができよう。他の好適なアッセイは、当業者には公知である（例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ａｂｇｅｎｉｘ．ｃｏｍ／ｄｏｃｕｍｅｎｔｓ／ＳＢＳ２００３％２０ｐｏｓｔｅｒ．ｐｄｆ参照）。
【００４１】
本明細書中の実施例４および５において述べる実験では、アジ化ナトリウムの存在下、氷上で、またはアジ化ナトリウム不在下、３７℃で、ＣＨ１２．１２と共にインキュベートした細胞間に、ＭＦＩの有意な差は観察されなかった（図７−１０参照）。これらのデータは、ＣＨ１２．１２が、ＣＤ４０に結合すると、内在化せず、細胞表面上に提示され続けることを示している。
【００４２】
本発明を役立たせるために利用することができる標準的な技術および手順の概要を下に与える。本発明が、説明する特定の方法論、プロトコル、細胞株、ベクターおよび試薬に限定されないことは、理解されるであろう。本明細書において用いる専門用語が、特定の実施形態の説明のみを目的とするものであり、この専門用語が、本発明の範囲を限定するためのものでないことも理解されるはずである。本発明の範囲は、添付のクレームの項によってのみ限定される。
【００４３】
ヌクレオチドおよびアミノ酸については標準的な略語を本明細書において用いている。
【００４４】
本発明の実施には、別の指示がない限り、当業者の技能の範囲内である、分子生物学、微生物学、組換えＤＮＡ技術および免疫学の従来の技術が利用されるであろう。
【００４５】
そうした技術は、文献で十分に説明されている。参照に特に好適なテキストの例としては、次のものが挙げられる：Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ；Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（２ｄ  ｅｄ．）；Ｄ．Ｎ  Ｇｌｏｖｅｒ，ｅｄ．（１９８５）ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ  ａｎｄ  ＩＩ；Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ，ｅｄ．（１９８４）Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ；Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄ  Ｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ；Ｂ．Ｄ．Ｈａｍｅｓ  ＆  Ｓ．Ｊ．Ｈｉｇｇｉｎｓ，ｅｄｓ．（１９８４）Ｔｒａｎｓｃｒｉｐｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｔｒａｎｓｌａｔｉｏｎ；Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ，ｅｄ．（１９８６）Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ；Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ  Ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  Ｅｎｚｙｍｅｓ（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９８６）；Ｂ．Ｐｅｒｂａｌ（１９８４）Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ；ｔｈｅ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ｓｅｒｉｅｓ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．），特に、ｖｏｌｕｍｅｓ  １５４  ＆  １５５；Ｊ．Ｈ．Ｍｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｍ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ，ｅｄｓ．（１９８７）Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ）；Ｍａｙｅｒ  ａｎｄ  Ｗａｌｋｅｒ，ｅｄｓ．（１９８７）Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，  Ｌｏｎｄｏｎ）；Ｓｃｏｐｅｓ（１９８７）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ：Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ（２ｄ  ｅｄ．；Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｖｅｒｌａｇ，Ｎ．Ｙ．）；およびＤ．Ｍ．Ｗｅｉｒ  ａｎｄ  Ｃ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ，ｅｄｓ．（１９８６）Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅｓ  Ｉ−ＩＶ。
【００４６】
本発明の方法は、ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患の治療における抗ＣＤ４０抗体の使用を含む。
【００４７】
「ＣＤ４０」、「ＣＤ４０抗原」または「ＣＤ４０受容体」は、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）受容体ファミリーの５０−５５ｋＤａ膜貫通糖タンパク質を指す（例えば、米国特許第５，６７４，４９２号および同第４，７０８，８７１号；Ｓｔａｍｅｎｋｏｖｉｃら（１９８９）ＥＭＢＯ  ８：１４０３；Ｃｌａｒｋ（１９９０）Ｔｉｓｓｕｅ  Ａｎｔｉｇｅｎｓ３６：３３；Ｂａｒｃｌａｙら（１９９７）Ｔｈｅ  Ｌｅｕｃｏｃｙｔｅ  Ａｎｔｉｇｅｎ  Ｆａｃｔｓ  Ｂｏｏｋ（２ｄ  ｅｄ．；Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ）参照）。この遺伝子の選択的スプライスを受けた転写変異体によってコードされているヒトＣＤ４０の２つのアイソフォームが同定されている。第一のアイソフォーム（「ロング・アイソフォーム」または「アイソフォーム１」としても公知）は、最初の１９の残基によって表されるシグナル配列を有する、配列番号８（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｘ６０５９２およびＮＭ＿００１２５０）によってコードされている、２７７アミノ酸の前駆体ポリペプチド（配列番号９；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＣＡＡ４３０４５として最初に報告され、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿００１２４１でアイソフォーム１として同定された）として発現される。第二のアイソフォーム（「ショート・アイソフォーム」または「アイソフォーム２」としても公知）は、同様に最初の１９の残基によって表されるシグナル配列を有する、配列番号６（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿１５２８５４）によってコードされている、２０３アミノ酸の前駆体ポリペプチド（配列番号７；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿６９０５９３）として発現される。ヒトＣＤ４０のこれら２つのアイソフォームの前駆体ポリペプチドは、それらの最初の１６５残基（すなわち、配列番号７および配列番号９の残基１−１６５）を共同で共有する。ショート・アイソフォームの前駆体ポリペプチド（配列番号７に示す）は、翻訳フレームシフトをもたらすコーディングセグメントを欠く転写変異体（配列番号６）によってコードされ、結果として生じるＣＤ４０アイソフォームは、ＣＤ４０のロング・アイソフォーム（配列番号９の残基１６６−２７７で示すＣ末端）に含まれているものからの、より短い別個のＣ末端（配列番号７の前記１６６−２０３）を含有する。本発明のために、用語「ＣＤ４０」、または「ＣＤ４０抗原」、「ＣＤ４０細胞表面抗原」、または「ＣＤ４０受容体」は、ＣＤ４０のショート・アイソフォームとロング・アイソフォームの両方を包含する。ＣＤ４０抗原は、完全にグリコシル化されるか、または部分的にグリコシル化され得る。
【００４８】
本明細書の他の箇所で述べているように、ＣＤ４０は、正常および新生物性両方のヒトＢ細胞、樹状細胞、単球、マクロファージ、ＣＤ８＋Ｔ細胞、内皮細胞、単球性および上皮性細胞、活性化Ｔ細胞、活性化血小板、炎症した血管平滑筋細胞、好酸球、関節リウマチの際の滑膜、皮膚線維芽細胞、および他の非リンパ球系細胞型の表面で見出される。
【００４９】
本明細書における「ＣＤ４０発現性細胞」は、検出可能なレベルのＣＤ４０抗原を発現する任意の正常または悪性細胞を指す。好ましくは、ＣＤ４０発現性細胞は、検出可能なレベルの細胞表面ＣＤ４０抗原を発現する細胞である。細胞におけるＣＤ４０の発現を検出するための方法は、当該技術分野において周知であり、ＰＣＲ法、免疫組織化学、フローサイトメトリー、ウエスタンブロット、ＥＬＩＳＡなどを含むが、これらに限定されない。これらの方法により、ＣＤ４０  ｍＲＮＡ、ＣＤ４０抗原および細胞表面ＣＤ４０抗原を検出することができる。細胞表面ＣＤ４０発現の検出は、本明細書中の実施例３において説明するとおり、または他の好適な方法により、行うことができる。
【００５０】
「ＣＤ４０リガンド」または「ＣＤ４０Ｌ」は、主として３２−３３ｋＤａ膜貫通タンパク質を指し、これは、より小さな２つの生物活性可溶性型であって、それぞれ１８ｋＤａおよび３１ｋＤａででも存在する（Ｇｒａｆら（１９９５）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２５：１７４９−１７５４；Ｍａｚｚｅｉら（１９９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０：７０２５−７０２８；Ｐｉｅｔｒａｖａｌｌｅら（１９９６）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１：５９６５−５９６７）。ヒトＣＤ４０Ｌは、ＣＤ１５４またはｐｇ３９としても公知である。「ＣＤ４０リガンド」または「ＣＤ４０Ｌ」は、１つ以上のＣＤ４０シグナル経路に結合し、それらを活性化することができる、任意の他のペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質も指す。従って、「ＣＤ４０リガンド」は、ＣＤ４０発現性細胞上のＣＤ４０に結合し、ＣＤ４０シグナル伝達を刺激する機能を実行するために十分な活性を保持する、完全長ＣＤ４０リガンドタンパク質ならびにそれらの変異体およびフラグメントを含むが、これらに限定されない。天然ＣＤ４０リガンド、例えばヒトＣＤ４０Ｌ、への修飾としては、置換、欠失、トランケーション、伸長、融合タンパク質、フラグメント、ペプチド模倣体などが挙げられるが、これらに限定されない。
【００５１】
「ＣＤ４０シグナル伝達」は、細胞表面ＣＤ４０と、ＣＤ４０リガンドまたは他のアゴニスト、例えばアゴニスト抗体、との相互作用の結果として生じる任意の生物活性を意味する。ＣＤ４０シグナル伝達の例は、ＣＤ４０発現性細胞の増殖および生存ならびにＣＤ４０発現性細胞内の１つ以上のＣＤ４０シグナル経路の刺激をもたらすシグナルである。ＣＤ４０「シグナル経路」または「シグナル伝達経路」は、ＣＤ４０受容体と、ＣＤ４０リガンド、例えばＣＤ４０Ｌ、との相互作用の結果として生じる、ならびにそのシグナル経路を通して伝達されたときにそのシグナル伝達カスケードにおける１つ以上の下流分子の活性化をもたらすシグナルを生成させる、少なくとも１つの生化学反応または一群の性化学反応を意味する。シグナル伝達経路は、シグナルを細胞表面ＣＤ４０受容体から、細胞形質膜を越えて、一連のシグナル伝達分子のうちの１つ以上まで、その細胞の細胞質まで、および場合によってはその細胞核へと伝達することとなる、多数のシグナル伝達分子を含む。本発明にとって特に関心が高いのは、ＡＫＴシグナル経路［ＡＫＴの活性化をもたらし、最終的にはＮＦ−κＢシグナル経路によりＮＦ−κＢの活性化をもたらす］およびマイトジェン活性化プロテインキナーゼ（ＭＡＰＫ）シグナル経路［ＥＲＫおよびｐ３８の活性化をそれぞれもたらす、ＭＥＫ／ＥＲＫシグナル経路およびＭＥＫ／ｐ３８シグナル経路を含む］をはじめとするＣＤシグナル伝達経路である。
【００５２】
上で述べたように、本発明は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）であるヒト患者を、ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患について治療する方法を提供し、この方法は、前記ヒト患者の治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与することを含む。
【００５３】
「ヒト患者」は、ＣＤ４０発現性細胞と関連のある任意の炎症性疾患または自己免疫疾患に罹患している、または前記疾患を発現もしくは再発するリスクを有する、人間の患者を意味する。
【００５４】
「ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患」は、ＣＤ４０発現性細胞と関連のある任意の炎症性疾患または自己免疫疾患を意味する。ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患は、ＣＤ４０発現性細胞での望ましくないＣＤ４０シグナル伝達レベルと関連のある炎症性疾患もしくは自己免疫疾患であってよく、またはＣＤ４０発現性細胞とは間接的にしか関連のない炎症性疾患もしくは自己免疫疾患であり得る。「望ましくないＣＤ４０シグナル伝達レベルと関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患」は、その発現または進行が望ましくないＣＤ４０シグナル伝達レベルと関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患を意味する。
【００５５】
「望ましくないＣＤ４０シグナル伝達レベル」は、炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者におけるＣＤ４０発現性細胞において発生し得る、任意の生理学的に望ましくないＣＤ４０シグナル伝達レベルを意味する。
【００５６】
炎症性疾患は、炎症および組織破壊またはこれらの組み合わせを特徴とする。「炎症性疾患」は、免疫反応の開始事象またはターゲットが、例えば、同種抗原、異種抗原、ウイルス抗原、細菌抗原、未知の抗原またはアレルゲンをはじめとする非自己抗原（単数または複数）を伴う、任意の炎症性免疫媒介プロセスを含む。
【００５７】
本明細書で用いる場合、用語「自己免疫」は、一般に、「自己」抗原を含む炎症性免疫媒介プロセスを包含すると解釈する。自己免疫性疾患において、自己抗原（単数または複数）は、宿主免疫反応を誘発する。
【００５８】
本発明は、組織移植拒絶反応と関連のある炎症の治療において使用することができる。「移植拒絶反応」または「移植片拒絶反応」は、ＨＬＡ抗原、血液型抗原などをはじめとする（しかし、これらに限定されない）、移植片に対する任意の宿主誘発免疫反応を指す。
【００５９】
本発明は、例えば、骨髄移植と関連のあるものなどの移植片対宿主疾患を治療するために使用することもできる。こうした移植片対宿主疾患におけるドナー骨髄としては、リンパ球、およびリンパ球へと成熟する細胞が挙げられる。ドナーのリンパ球は、レシピエントの抗原を非自己と認識し、炎症性免疫反応を誘発する。従って、本明細書で用いる場合、「移植片対宿主疾患」または「移植片対宿主反応」は、ドナーリンパ球が宿主の抗原に反応する任意のＴ細胞媒介免疫反応を指す。
【００６０】
本発明の方法に従って治療することができる炎症性疾患および自己免疫疾患としては、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、円板状狼瘡、ループス腎炎、サルコイドーシス、炎症性関節炎（若年性関節炎、関節リウマチ、乾癬性関節炎、ライター症候群、強直性脊椎炎および痛風性関節炎を含む）、臓器もしくは組織移植の拒絶反応、超急性、急性もしくは慢性拒絶反応および／または移植片対宿主疾患、多発性硬化症、高ＩｇＥ症候群、結節性多発性動脈炎、原発性胆汁性肝硬変、炎症性大腸炎、クローン病、セリアック病（グルテン過敏性腸症）、自己免疫性肝炎、悪性貧血、自己免疫性溶血性貧血、乾癬、強皮症、重症筋無力症、自己免疫性血小板減少性紫斑病、自己免疫性甲状腺炎、グレーブス病、橋本甲状腺炎、免疫複合体疾患、慢性疲労免疫不全症候群（ＣＦＩＤＳ）、多発性筋炎および皮膚筋炎、クリオグロブリン血症、血栓崩壊、心筋症、尋常性天疱瘡、間質性肺線維症、Ｉ型およびＩＩ型糖尿病、１、２、３および４型遅延型過敏症、アレルギーまたはアレルギー性疾患、治療用タンパク質に対する望ましくない／意図されたものでない免疫反応（例えば、米国特許出願番号ＵＳ２００２／０１１９１５１、およびＫｏｒｅｎら（２００２）Ｃｕｒｒ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．３：３４９−６０参照）、喘息、チャーグ・ストラウス症候群（アレルギー性肉芽腫症）、アトピー性皮膚炎、アレルギー性および刺激性接触皮膚炎、じんま疹、ＩｇＥ媒介アレルギー、アテローム性動脈硬化症、脈管炎、特発性炎症性ミオパシー、溶血性疾患、アルツハイマー病、および慢性炎症性脱髄性多発性ニューロパシーなどが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法は、肺移植片拒絶反応、喘息、サルコイドーシス、肺気腫、嚢胞性線維症、特発性肺線維症、慢性気管支炎、アレルギー性鼻炎および肺のアレルギー性疾患、例えば過敏性肺炎、好酸球性肺炎、骨髄および／または肺移植または他の原因に起因する閉塞性細気管支炎、移植片アテローム性動脈硬化症／移植片静脈硬化症、ならびに膠原病、血管疾患および自己免疫疾患（例えば、関節リウマチおよびエリテマトーデス）に起因する肺線維症をはじめとする（しかし、これらに限定されない）、肺の炎症の治療においても有用である。
【００６１】
前記炎症性疾患または自己免疫疾患は、ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患であり得る。抗体依存性自己免疫疾患の例としては、関節リウマチ、乾癬、全身性エリテマトーデス、クローン病、重症筋無力症、特発性血小板減少性紫斑病、またはシェーグレン症候群が挙げられる。
【００６２】
さらに、Ｂ細胞および他のＣＤ４０保有細胞の枯渇は、ＣＤ４０リガンド結合によるシグナル伝達によるＴ細胞活性化を制限し得る。従って、Ｂ細胞および他のＣＤ４０保有細胞の枯渇を利用して、Ｔ細胞媒介自己免疫および炎症性疾患、例えば、多発性硬化症、移植片拒絶反応、移植片対宿主疾患、アルツハイマー病または糖尿病を治療することができよう。骨髄移植にも有用であろう。
【００６３】
本発明は、ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患に関して特に有利である。本明細書において開示するＣＨＩＲ−１２．１２は、本明細書の他の箇所でより詳細に説明しているように、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）などの抗ＣＤ２０抗体をはじめとする他の治療薬での療法に対して難治性である炎症性疾患または自己免疫疾患を有する患者を治療するために使用することができる。
【００６４】
「治療」は、本明細書では、被検者への抗ＣＤ４０抗体の適用もしくは投与または被検者からの単離された組織または細胞株への抗ＣＤ４０抗体の適用もしくは投与と定義し、この場合、前記被検者は、自己免疫疾患および／または炎症性疾患、自己免疫疾患および／または炎症性疾患と関連のある症状、または自己免疫疾患および／または炎症性疾患を発現する素因を有し、その目的は、自己免疫疾患および／または炎症性疾患、自己免疫疾患および／または炎症性疾患の任意の関連する症状、または自己免疫疾患および／または炎症性疾患を発現する素因を治す、癒す、緩和する、和らげる、改変する、軽減する、改善する、向上させる、またはそれらに作用することである。「治療」は、被検者への抗ＣＤ４０抗体を含む医薬組成物の適用もしくは投与、または被検者から単離された組織もしくは細胞株への抗ＣＤ４０抗体を含む医薬組成物の適用もしくは投与も意味し、この場合、前記被検者は、自己免疫疾患および／または炎症性疾患、自己免疫疾患および／または炎症性疾患と関連のある症状、または自己免疫疾患および／または炎症性疾患を発現する素因を有し、その目的は、自己免疫疾患および／または炎症性疾患、自己免疫疾患および／または炎症性疾患の任意の関連する症状、または自己免疫疾患および／または炎症性疾患を発現する素因を治す、癒す、緩和する、和らげる、改変する、軽減する、改善する、向上させる、またはそれらに作用することである。
【００６５】
「抗炎症活性」は、炎症の低減または予防を意味する。本明細書の他の箇所で定義する抗ＣＤ４０抗体での療法は、ＣＤ４０抗原を発現する細胞を伴う自己免疫疾患および／または炎症性疾患の治療に関して有益である生理反応を生じさせる。本発明の方法が、増殖、活性化などのような細胞の表現型変化の防止に有用であり得ることは理解される。
【００６６】
本発明の治療方法では、本明細書の他の箇所で定義するとおりの少なくとも１つの抗ＣＤ４０抗体を使用して、炎症性疾患または自己免疫疾患に関する陽性治療反応を促進する。
【００６７】
炎症性疾患または自己免疫疾患に関して、「陽性治療反応」は、抗体の抗炎症活性と関連のある疾患の改善、および／または前記疾患と関連のある症状の改善を意味する。すなわち、抗増殖効果；ＣＤ４０発現性細胞のさらなる増殖の予防；炎症性サイトカイン、接着分子、プロテアーゼ、免疫グロブリン（ＣＤ４０保有細胞がＢ細胞である場合）、これらの組み合わせなどの分泌減少をはじめとする（しかしそれらに限定されない）炎症反応の低減；抗炎症性タンパク質の生産増加；自己反応性細胞数の減少、免疫寛容性の増加；自己反応性細胞の生存の抑制；および／またはＣＤ４０発現性細胞の刺激によって媒介される１つ以上の症状の低減を観察することができる。そうした陽性治療反応は、投与経路に限定されず、ならびにドナー、ドナー組織（例えば、臓器潅流など）、宿主およびこれらの任意の組み合わせなどへの投与を含むことができる。
【００６８】
臨床反応は、スクリーニング技術、例えば、磁気共鳴撮像（ＭＲＩ）スキャン、Ｘ線撮影イメージング、コンピュータ連動断層撮影（ＣＴ）スキャン、フローサイトメトリーまたは蛍光細胞分析分離装置（ＦＡＣＳ）分析、組織学、肉眼的病理および血液化学（ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ、クロマトグラフィーなどによって検出できる変化を含むが、これらに限定されない）などを用いて評価することができる。これらの陽性治療反応に加えて、抗ＣＤ４０抗体での療法を受ける被検者は、その疾患と関連のある症状の改善という有益な効果を経験することができる。
【００６９】
「治療または予防有効用量」または「治療または予防有効量」は、投与されたとき、ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患を有する患者の治療に対して陽性治療反応を生じさせる抗ＣＤ４０抗体の量を意味する。好適な用量は、本明細書の他の箇所でより詳細に説明する。本治療方法は、本明細書の他の箇所でより詳細に説明するように、抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量の単回投与を含むこともあり、または治療有効用量の多数回投与を含むこともある。
【００７０】
本発明の方法は、炎症性または自己免疫疾患のための１つ以上の公知の療法に対して難治性である、上に列挙したものをはじめとする炎症性疾患または自己免疫疾患の治療に、特に有用である。そうした療法としては、本明細書の他の箇所でより詳細に説明するような、外科手術または外科手術手順（例えば、脾臓摘出術、リンパ節切除術、甲状腺切除術、血漿分離交換法、白血球フェレーシス、細胞、組織または臓器移植、腸の処置、臓器潅流など）；放射線療法；ステロイド療法および非ステロイド療法などの療法；ホルモン療法；サイトカイン療法；外皮用剤（例えば、アレルギー、接触皮膚炎および乾癬などの皮膚の状態を治療するために使用される局所用薬剤）での療法；免疫抑制療法；および他の抗炎症性モノクローナル抗体療法などが挙げられるが、これらに限定されない。「難治性」とは、特定の炎症性疾患または自己免疫疾患が、特定の療法に対して耐性である、または反応しないことを指す。炎症性疾患または自己免疫疾患は、特定の療法に対して、その特定の療法での治療の開始から難治性である（すなわち、その療法への最初の暴露に対して反応しない）場合もあり、またはその療法に対する耐性発現の結果として、その療法での最初の治療期間の経過と共に、もしくはその療法での後続の治療期間中に、難治性となり得る。従って、本発明は、炎症性または自己免疫疾患のための治療に対して難治性であるヒト患者の治療に、前記ヒト患者が前記療法に対して耐性であるまたは反応しないとき、有用である。
【００７１】
本発明の方法は、抗ＣＤ４０抗体の使用を伴う。「抗体」は、通常、２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖から成る約１５０，０００ダルトンのヘテロ四量体型糖タンパク質である。それぞれの軽鎖は、１つの共有結合性ジスルフィド結合によって重鎖に連結されているが、ジスルフィド連結の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖間で異なる。重鎖および軽鎖それぞれは、規則正しい間隔の鎖間ジスルフィド結合も有する。それぞれの重鎖は、一方の末端に１つの可変ドメイン（ＶＨ）、それに続いて多数の定常ドメインを有する。それぞれの軽鎖は、一方の末端に可変ドメイン（ＶＬ）を、およびもう一方の末端に定常ドメインを有し、その軽鎖の定常ドメインが、重鎖の第１定常ドメインとアラインされ、軽鎖可変ドメインが重鎖の可変ドメインとアラインされる。特定のアミノ酸残基が、軽鎖可変ドメインと重鎖可変ドメインとの界面を形成すると考えられている。用語「可変」は、可変ドメインの一定の部分が、抗体間で配列の点で大いに異なることを指す。可変領域が抗原結合特異性を付与する。定常領域は、抗体の抗原への結合に直接関与しないが、様々なエフェクター機能、例えば、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）結合、抗体依存性細胞毒性への抗体の関与、補体依存性細胞障害の開始およびマスト細胞脱顆粒を示す。
【００７２】
任意の脊椎動物種からの抗体（免疫グロブリン）の「軽鎖」は、それらの定常ドメインのアミノ酸配列に基づき、カッパ（κ）およびラムダ（λ）と呼ばれる２つの明瞭に異なるタイプのうちの１つに割り当てることができる。
【００７３】
それらの「重鎖」の定常ドメインのアミノ酸配列に依存して、免疫グロブリンを異なるクラスに割り当てることができる。ヒト免疫グロブリンには５つの主要クラス：ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＦおよびＩｇＭがあり、これらの幾つかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２、にさらに分けることができる。前記異なる免疫グロブリンクラスに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれ、アルファ、デルタ、イプシロン、ガンマおよびミューと呼ばれる。前記異なる免疫グロブリンクラスのサブユニット構造および三次元立体配置は、周知である。異なるアイソタイプは、異なるエフェクター機能を有する。例えば、ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３アイソタイプは、ＡＤＣＣ（抗体依存性細胞媒介性障害）活性を有する。ＩｇＧ１抗体、特にヒトＩｇＧ１抗体は、本発明の方法において特に有用である。
【００７４】
「ヒトエフェクター細胞」は、１つ以上のＦｃＲを発現し、エフェクター機能を果たす白血球である。好ましくは、前記細胞は、少なくともＦｃγＲＩＩＩを発現し、抗原依存性細胞媒介性障害（ＡＤＣＣ）エフェクター機能を遂行する。ＡＤＣＣを媒介するヒト白血球の例としては、血液単核細胞（ＰＢＭＣ）、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、単球、マクロファージ、好酸球および好中球が挙げられ、ＰＢＭＣおよびＮＫ細胞が好ましい。ＡＤＣＣ活性を有する抗体は、典型的に、ＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプのものである。ＩｇＧ１およびＩｇＧ３抗体の単離に加えて、そうしたＡＤＣＣ媒介抗体は、非ＡＤＣＣ抗体からの可変領域または可変領域フラグメントをＩｇＧ１またはＩｇＧ３アイソタイプ定常領域に遺伝子工学で作ることによって、作ることができることに留意すること。
【００７５】
用語「Ｆｃ受容体」または「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記述するために使用する。好ましいＦｃＲは、天然配列ヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体に結合するもの（ガンマ受容体）であり、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩサブクラスの受容体（これらの受容体の対立変異体および選択的スプライスを受けた形を含む）を含む。ＦｃγＲＩＩ受容体は、主として細胞質ドメインが異なる類似したアミノ酸配列を有する、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「阻害受容体」）を含む。活性化受容体ＦｃγＲＩＩＡは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系活性化モチーフ（ＩＴＡＭ）を含有する。阻害受容体ＦｃγＲＩＩＢは、その細胞質ドメインに免疫受容体チロシン系阻害モチーフ（ＩＴＩＭ）を含有する（Ｄａｅｒｏｎ（１９９７）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５：２０３−２３４参照）。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ（１９９１）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：４５７−４９２（１９９１）；Ｃａｐｅｌら（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４；およびｄｅ  Ｈａａｓら（１９９５）Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−３４１において論評されている。将来同定されるものを含む他のＦｃＲは、本明細書における用語「ＦｃＲ」に包含される。この用語は、母体ＩｇＧの胎児への移動に責任を負う新生児受容体、ＦｃＲｎ（Ｇｕｙｅｒら（１９７６）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１７：５８７、およびＫｉｍら（１９９４）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２４９（１９９４））も含む。
【００７６】
用語「抗体」は、本明細書では最も広い意味で使用し、完全に組み立てられた抗体、ＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持する抗体フラグメント（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖおよび他のフラグメント）、１本鎖抗体、二重特異性抗体、抗体キメラ、ハイブリッド抗体、二重特異性抗体、ヒト化抗体など）、および前述のものを含む組換えペプチドを包含する。用語「抗体」は、ポリクローナル抗体とモノクローナル抗体の両方を包含する。
【００７７】
本明細書で用いる場合、「抗ＣＤ４０抗体」は、ＣＤ４０抗原を特異的に認識する任意の抗体を包含する。一部の実施形態において、本発明の方法において使用するための抗ＣＤ４０抗体、特に、モノクローナル抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０抗原に対する強い単一部位結合親和性を示す。そうしたモノクローナル抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）などの標準的なアッセイを使用して測定したとき、少なくとも１０−５Ｍの、少なくとも３×１０−５Ｍの、好ましくは少なくとも１０−６Ｍの、または少なくとも１０−７Ｍまでの、さらに好ましくは少なくとも１０−８Ｍの、または少なくとも１０−１２Ｍの親和性を示す。Ｂｉａｃｏｒｅ分析は、当該技術分野において公知であり、その詳細は、「ＢＩＡａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｈａｎｄｂｏｏｋ」に提供されている。ＷＯ  ０１／２７１６０に記載されている方法を使用して、結合親和性を調整することができる。
【００７８】
「特異的に認識する」または「に特異的に結合する」は、抗ＣＤ４０抗体が、ＣＤ２０抗原などの関連のない抗原には結合しないことを意味する。
【００７９】
一部の実施形態において、本発明の方法において使用するための抗ＣＤ４０抗体、特に、モノクローナル抗体は、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに対して強い結合親和性を示す。好ましくは、本発明において使用するための抗ＣＤ４０抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）などの標準的なアッセイを使用して測定したとき、少なくとも約０．５μＭの親和性（ＫＤ）で、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに結合する。本明細書の実施例６において開示するように、ＣＨＩＲ−１２．１２抗体は、４９２ｎＭの親和性（ＫＤ）でヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに結合する。
【００８０】
一部の実施形態において、本発明の方法において使用するための抗ＣＤ４０抗体、特に、モノクローナル抗体は、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに対して強い結合親和性を示す。好ましくは、本発明の方法において使用するための抗ＣＤ４０抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）などの標準的なアッセイを使用して測定したとき、少なくとも約１２μＭの親和性（ＫＤ）でヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに結合する。好ましくは、本発明の方法において使用するための抗ＣＤ４０抗体は、少なくとも約１０μＭ、少なくとも約８μＭ、少なくとも約６μＭ、少なくとも約５μＭ、少なくとも約４μＭ、または少なくとも約３μＭの親和性（ＫＤ）で、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに結合する。本明細書の実施例６において開示するように、ＣＨＩＲ−１２．１２抗体は、２．８μＭの親和性（ＫＤ）で、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに結合する。
【００８１】
一部の実施形態において、本発明の方法において使用するための抗ＣＤ４０抗体、特に、モノクローナル抗体は、ヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８ＶとＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆの両方に対して強い結合親和性を示す。好ましくは、本発明において使用するための抗ＣＤ４０抗体は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）などの標準的なアッセイを使用して測定したとき、少なくとも約０．５μＭの親和性（ＫＤ）でヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに、少なくとも約１２μＭの親和性（ＫＤ）でヒトＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆにおよび結合する。
【００８２】
本発明の方法において使用するための抗ＣＤ４０抗体は、当業者には公知の任意の好適な抗体生産法を使用して生産することができる。
【００８３】
本発明の方法において使用するための抗ＣＤ４０抗体は、ポリクローナル抗体であってもよい。例えば、ポリクローナル血清は、従来の方法によって作製することができる。一般に、先ず、対象となる抗原（この場合、ＣＤ４０抗原）を含有する溶液を使用して、好適な動物、好ましくは、マウス、ラット、ウサギまたはヤギを免疫する。得ることができる血清の容量、および標識された抗ウサギおよび抗ヤギ抗体の入手可能性のため、ポリクローナル血清の作製にはウサギまたはヤギが好ましい。
【００８４】
免疫された動物からの血清を初期抗原に対する抗体反応についてスクリーニングすることができる。リンパ球をリンパ節または脾臓細胞から単離することができ、さらに、ＣＤ１３８陰性およびＣＤ１９陽性細胞についての選択により、Ｂ細胞について選択することができる。１つの態様では、本明細書中で詳述するように、そうしたＢ細胞培養物（ＢＣＣ）を骨髄腫細胞に融合させて、ハイブリドーマを生成することができる。
【００８５】
ポリクローナル血清は、トランスジェニック動物、好ましくは、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を有するマウスにおいて作製することもできる。好ましい実施形態では、対象となるタンパク質（この場合、ＣＤ４０抗原）を発現するＳｆ９細胞を免疫原として使用する。免疫処置は、食塩水中で、好ましくはフロイント完全アジュバント中で、抗原含有溶液を混合または乳化し、その混合物またはエマルジョンを非経口的に（一般には皮下的にまたは筋肉内的に）注射することによって行うこともできる。一般に、５０−２００μｇ／注射の用量で十分である。免疫処置は、一般に、２−６週間後、前記食塩水中のタンパク質の１回以上の注射で、好ましくはフロイント不完全アジュバントを使用して、追加免疫する。あるいは、当該技術分野において公知の方法を使用するインビトロ免疫処置によって抗体を産生させることもでき、これは、本発明の目的には、インビボ免疫処置と等価であると考えられる。ポリクローナル血清は、免疫した動物から採血してガラスまたはプラスチック容器に入れ、その血液を１時間、２５℃でインキュベートし、その後、２−１８時間、４℃でインキュベートすることによって得る。その血清を遠心分離（例えば、１０分間、１，０００×ｇ）によって回収する。ウサギからは１回の採血につき約２０−５０ｍＬを採取することができる。
【００８６】
Ｓｆ９（Ｓｐｏｄｏｐｔｅｒａ  ｆｕｎｇｉｐｅｒｄａ）細胞の生産は、米国特許第６，００４，５５２号（本明細書に参照として組み込まれている）に開示されている。ＣＤ４０の場合、簡単に言えば、ヒトＣＤ４０をコードする配列をトランスファーベクターを使用してバキュロウイルスへと組み換えた。それらのプラスミドを野生型バキュロウイルスＤＮＡでＳｆ９細胞へとコ・トランスフェクトした。組換えバキュロウイルス感染Ｓｆ９細胞を同定し、クローン精製した。
【００８７】
本発明の方法において使用する抗ＣＤ４０抗体は、モノクローナル抗体であってもよい。用語「モノクローナル抗体」（および「ｍＡｂ」）は、本明細書で用いる場合、抗体の実質的に均一な集団から得られた抗体を指し、すなわち、前記集団を含む個々の抗体は、少量で存在し得る可能性のある天然突然変異を除き、同一である。この用語は、抗体の種に関する限定を受けず、任意の特定の方法による抗体の生産を必要としない。
【００８８】
種々の抗原決定基（エピトープ）に対する種々の抗体を一般に含むポリクローナル抗体の作製とは対照的に、それぞれのモノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基（エピトープ）に対するものである。
【００８９】
「エピトープ」は、抗体が生産され、抗体が結合することとなる、抗原分子の一部を意味する。エピトープは、線状アミノ酸残基（すなわち、エピトープ内の残基が、逐次的に次々と線形に配列されている）、非線状アミノ酸残基（本明細書では「非線状エピトープ」と呼ぶ；これらのエピトープは、逐次的に配列されていない）、または線状および非線状、両方のアミノ酸残基を含むことができる。本発明の方法における使用に好適な抗ＣＤ４０モノクローナル抗体は、ヒト細胞の表面で発現されるヒトＣＤ４０抗原上のエピトープ、すなわち細胞の外部に暴露されるエピトープ、に特異的に結合することができるであろう。
【００９０】
本発明に従って使用されるモノクローナル抗体は、Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５によって最初に記載されたハイブリドーマ法によって作ることができ、または組換えＤＮＡ法（例えば、米国特許第４，８１６，５６７号参照）によって作ることができる。モノクローナル抗体は、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら（１９９０）Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２−５５４（１９９０）および米国特許第５，５１４，５４８号に記載されている技術を使用して産生された抗体ファージライブラリから単離することもできる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４−６２８およびＭａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１−５９７には、ファージライブラリを使用するマウスおよびヒト抗体の単離がそれぞれ記載されている。後続の出版物には、鎖シャッフリングによる高親和性（ｎＭ範囲）ヒト抗体の生産（Ｍａｒｋｓら（１９９２）Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：７７９−７８４）、ならびに非常に大きなファージライブラリを構築するための戦略としての組換え感染およびインビボ組換え（Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら（１９９３）Ｎｕｃｌｅｉｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１：２２６５−２２６６）が記載されている。このように、これらの技術は、モノクローナル抗体の単離のための伝統的なモノクローナル抗体ハイブリドーマ技術の実行可能な代案である。
【００９１】
Ｋｏｈｌｅｒら（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９６の伝統的な方法では、一般に、抗原を含有する溶液でマウスを免疫する。免疫処置は、食塩水中で、好ましくは、フロイント完全アジュバントなどのアジュバント中で、抗原含有溶液を混合または乳化し、その混合物またはエマルジョンを非経口的に注射することによって行うことができる。当該技術分野において公知の任意の免疫法を使用して、本発明のモノクローナル抗体を得ることができる。動物を免疫した後、その脾臓（および場合によっては幾つかの大きなリンパ節）を除去し、単個細胞へと分離する。それらの脾臓細胞は、対象となる抗原でコーティングしたプレートまたはウエルに細胞懸濁液を塗布することによって、スクリーニングすることができる。その抗原に特異的な膜結合免疫グロブリンを発現するＢ細胞は、そのプレートに結合し、すすぎ落とされない。その後、結果として生じたＢ細胞、すなわち、すべての分離された脾臓細胞を、骨髄腫と融合してハイブリドーマを形成するように誘導し、選択培地中で培養する。結果として生じた細胞を系列希釈によってプレーティングし、対象となる抗原に特異的に結合する（および関連のない抗原には結合しない）抗体の生産についてアッセイする。その後、それらの選択されたモノクローナル抗体（ｍＡｂ）分泌性ハイブリドーマを、インビトロで（例えば、組織培養ビンもしくは中空繊維反応器内で）またはインビボで（マウスにおいて腹水として）培養する。
【００９２】
もう１つの態様において、Ｂ細胞培養物は、好ましくは、初期抗原に対する反応性についてさらにスクリーニングすることができる。そうしたスクリーニングとしては、ターゲット／抗原タンパク質での酵素結合イムノソルベントアッセイ（ＥＬＩＳＡ）、対象となる抗原に結合する既知抗体との競合アッセイ、および一過的にトランスフェクトされたＣＨＯへのまたはターゲット抗原を発現する他の細胞へのインビトロ結合が挙げられる。
【００９３】
本発明の方法において使用するための抗ＣＤ４０抗体を、組換えＤＮＡ法を使用して作製する場合、モノクローナル抗体をコードするＤＮＡは、従来の手順を使用して（例えば、マウス抗体の重および軽鎖をコードする遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することにより）、容易に単離され、配列決定される。本明細書に記載するハイブリドーマ細胞は、そうしたＤＮＡの好ましい供給源として役立つ。単離したら、そのＤＮＡを発現ベクター内に配置することができ、その後、それを、別様には免疫グロブリンタンパク質を生産しない宿主細胞、例えば、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞または骨髄腫細胞、にトランスフェクトして、前記組換え宿主細胞においてモノクローナル抗体の合成を達成する。抗体をコードするＤＮＡの細菌内での組換え発現に関する総説としては、Ｓｋｅｒｒａら（１９９３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．５：２５６、およびＰｈｉｃｋｔｈｕｎ（１９９２）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｒｅｖｓ．１３０：１５１が挙げられる。あるいは、抗体は、米国特許第５，５４５，４０３号、同第５，５４５，４０５号および同第５，９９８，１４４号（本明細書に参照として組み込まれている）に開示されているように、ＣＨＯ細胞株などの細胞株において生産することができる。簡単に言えば、軽鎖および重鎖をそれぞれ発現することができるベクターで、前記細胞株をトランスフェクトする。別個のベクター上の２つのタンパク質をトランスフェクトすることにより、キメラ抗体を生産することができる。もう１つの利点は、抗体の正しいグリコシル化である。
【００９４】
「宿主細胞」は、本明細書で用いる場合、組換えベクターまたは他のトランスファーポリヌクレオチドのためのレシピエントとして使用することができまたは使用されている、微生物または真核細胞、または単細胞単位として培養された細胞株を指し、トランスフェクトされた原細胞の後代を含む。単個細胞の後代が、自然な、偶発的な、または意図的な突然変異のため、形態の点でまたはゲノムもしくは全ＤＮＡ補体の点で、必ずしも原親と完全に一致しない場合があることは、理解される。
【００９５】
一部の実施形態において、ＣＨＩＲ１２．１２などの抗ＣＤ４０抗体は、グルタミンシンセターゼをマーカーとして使用する、ＧＳ遺伝子発現系（ニューハンプシャー州、ポーツマスのＬｏｎｚａ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃｓ）を使用して、ＣＨＯ細胞において生産される。例えば、米国特許第５，１２２，４６４号、同第５，５９１，６３９号、同第５，６５８，７５９号、同第５，７７０，３５９号、同第５，８２７，７３９号、同第５，８７９，９３６号、同第５，８９１，６９３号および同第５，９８１，２１６号（これらの内容は、本明細書に参照として組み込まれている）も参照。
【００９６】
ＣＤ４０に対するモノクローナル抗体は、当該技術分野において公知である。例えば、ＭｃＭｉｃｈａｅｌ，ｅｄ．（１９８７；１９８９）Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｔｙｐｉｎｇ  ＩＩＩ  ａｎｄ  ＩＶ（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；米国特許第５，６７４，４９２号、同第５，８７４，０８２号、同第５，６７７，１６５号および同第６，０５６，９５９号；ＷＯ  ００／６３３９５；国際公報番号  ＷＯ  ０２／２８９０５およびＷＯ  ０２／２８９０４；Ｇｏｒｄｏｎら（１９８８）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４０：１４２５；Ｖａｌｌｅら（１９８９）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９：１４６３；Ｃｌａｒｋら（１９８６）ＰＮＡＳ  ８３：４４９４；Ｐａｕｌｉｅら（１９８９）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４２：５９０；Ｇｏｒｄｏｎら（１９８７）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７：１５３５；Ｊａｂａｒａら（１９９Ｏ）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７２：１８６１；Ｚｈａｎｇら（１９９Ｉ）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４６：１８３６；  Ｇａｓｃａｎら（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８；Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕら（１９９１）Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｓｐｅｃｔｒｕｍ  ３：８；およびＢａｎｃｈｅｒｅａｕら（１９９１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５１：７０（これらのすべてが、本明細書に参照として組み込まれている）におけるＢ細胞抗原に割り当てられたセクションを参照のこと。
【００９７】
上で述べたように、用語「抗体」は、本明細書で用いる場合、キメラ抗体を包含する。「キメラ」抗体は、最も好ましくは、組換えデオキシリボ核酸法を使用して誘導され、ヒト（免疫学的に「関連のある」種、例えばチンパンジー、を含む）と非ヒトの両方の成分を含む抗体と解釈する。従って、キメラ抗体の定常領域は、最も好ましくは、天然ヒト抗体の定常領域と実質的に同一であり、キメラ抗体の可変領域は、最も好ましくは非ヒト源由来のものであり、対象となる抗原（ＣＤ４０）に対する望ましい抗原特異性を有する。前記非ヒト源は、ＣＤ４０抗原に対する抗体を産生させるために使用することができる任意の脊椎動物源であり得る。そうした非ヒト源としては、齧歯動物（例えば、ウサギ、ラット、マウスなど；例えば、本明細書に参照として組み込まれている米国特許第４，８１６，５６７号参照）および非ヒト霊長類（例えば、旧世界ザル、類人猿など；例えば、本明細書に参照として組み込まれている、米国特許第５，７５０，１０５号および同第５，７５６，０９６号参照）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００９８】
上で述べたように、用語「抗体」は、本明細書で用いる場合、ヒト化抗体を包含する。「ヒト化された」とは、非ヒト免疫グロブリン配列に由来する最小限の配列を含有する形態の抗体を意味する。殆どの部分について、ヒト化抗体は、レシピエントの超可変領域（相補性決定領域またはＣＤＲとしても知られている）からの残基が、望ましい特異性、親和性および能力を有するマウス、ラット、ウサギまたは非ヒト霊長類などの非ヒト種（ドナー抗体）の超可変領域からの残基によって置換されている、ヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。「相補性決定領域」というフレーズは、天然免疫グロブリン結合部位の天然Ｆｖ領域の結合親和性および特異性を協力して規定するアミノ酸配列を指す。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａら（１９８７）Ｊ．ＭｏＩ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７；Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ，ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２参照）。「定常領域」というフレーズは、エフェクター機能を付与する抗体分子の部分を指す。ヒト疾患の療法において使用するための非免疫原性抗体の生産に向た以前の研究では、マウス定常領域が、ヒトと定常領域によって置換された。被験体ヒト化細胞の定常領域は、ヒト免疫グロブリンに由来するものであった。しかし、これらのヒト化抗体は、ヒトにおいて望ましくない、潜在的に危険な免疫反応を惹起する場合があり、親和性が失われていた。
【００９９】
ヒト化は、Ｗｉｎｔｅｒおよび共同研究者の方法（Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６）に従って、ヒト抗体の対応する抗体を齧歯動物または突然変異齧歯動物ＣＤＲまたはＣＤＲ配列で置換することにより、行うことができる。米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号、同第５，８５９，２０５号（本明細書に参照として組み込まれている）も参照。場合によっては、ヒト免疫グロブリンの１つ以上の可変領域のフレームワーク領域内の残基が対応する非ヒト残基によって置換される（例えば、米国特許第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号および同第６，１８０，３７０号参照）。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体においておよびドナー抗体において見出されない残基を含み得る。これらの修飾は、抗体性能をさらに洗練するために（例えば、所望の親和性を得るために）行われる。一般に、ヒト化抗体は、少なくとも１つ、典型的には２つ、の可変ドメインの実質的にすべてを含むであろう（この場合、超可変領域のすべてまたは実質的にすべてが、非ヒト免疫グロブリンの超可変領域に対応し、ならびにフレームワーク領域のすべてまたは実質的にすべてが、ヒト免疫グロブリン配列のフレームワーク領域である）。ヒト化抗体は、場合によっては、免疫グロブリン定常領域（Ｆｃ）、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域、の少なくとも一部分も含むであろう。さらなる詳細については、Ｊｏｎｅｓら（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３３１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２９；およびＰｒｅｓｔａ（１９９２）Ｃｕｒｒ．Ｏｐ．Ｓｔｒｕｃｔ．Ｂｉｏｌ．２：５９３−５９６（本明細書に参照として組み込まれている）を参照のこと。従って、そうした「ヒト化」抗体は、無損傷ヒト可変ドメインより実質的に少ないドメインが、非ヒト種からの対応する配列によって置換されている抗体を包含し得る。実際には、ヒト化抗体は、典型的に、一部のＣＤＲ残基およびことによると一部のフレームワーク残基が齧歯動物抗体における類似の部位からの残基によって置換されているヒト化抗体である。例えば、米国特許第５，２２５，５３９号、同第５，５８５，０８９号、同第５，６９３，７６１号、同第５，６９３，７６２号、同第５，８５９，２０５号参照。ヒト化抗体、および所定の抗原に対する親和性が改善されたヒト化抗体の生産技術が開示されている、米国特許第６，１８０，３７０号および国際公報番号ＷＯ  ０１／２７１６０も参照のこと。
【０１００】
ヒト化抗ＣＤ４０抗体は、Ｈｕｍａｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（登録商標）記述（カリフォルニア州、バークレーのＸｏｍａ  Ｌｔｄ．）を使用して生産することもできる。
【０１０１】
ヒト化抗ＣＤ４０モノクローナル抗体としては、マウス抗ＣＤ４０抗体ＳＧＮ−１４（Ｆｒａｎｃｉｓｃｏら（２０００）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６０：３２２５−３１）のヒト化形であるＳＧＮ−４０（Ｔａｉら（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６４：２８４６−５２；米国特許第６，８３８，２６１号）、および米国特許出願公開第２００４／０１２０９４８号に開示されている抗体などの抗体が挙げられ、前記文献は、それら全体が本明細書に参照として取り入れられている。
【０１０２】
本発明は、不活性化された内因性免疫グロブリン（Ｉｇ）遺伝子座を特徴とする非ヒト哺乳動物宿主、さらに特にトランスジェニックマウス、において生産される異種または修飾抗体を使用して実施することもできる。そうしたトランスジェニック動物において、宿主免疫グロブリンの軽および重サブユニットの発現に有能な内因性遺伝子を非機能性にし、類似のヒト免疫グロブリン遺伝子座で置換する。これらのトランスジェニック動物は、宿主免疫グロブリン軽または重サブユニットが実質的に不在の状態で、ヒト抗体を生産する。例えば、米国特許第５，８７７，３９７号および同第５，９３９，５９８号参照（本明細書に参照として組み込まれている）。
【０１０３】
従って、一部の実施形態において、ＣＤ４０に対する完全ヒト抗体は、例えば、トランスジェニックマウスに免疫することによって得られる。あるそうしたマウスは、ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）技術（カリフォルニア州、フリーモントのＡｂｇｅｎｉｘ）を使用して得られ、米国特許第６，０７５，１８１号、同第６，０９１，００１号および同第６，１１４，５９８号（これらのすべてが、本明細書に参照として組み込まれている）に開示されている。例えば、ＣＨＩＲ−１２．１２抗体を生産するために、ヒトＩｇＧ１重鎖遺伝子座およびヒトκ軽鎖遺伝子座について遺伝形質転換されたマウス、ヒトＣＤ４０を発現するＳｆ９細胞で免疫した。マウスを他のアイソタイプについて遺伝形質転換することもできる。本発明の方法において有用な完全ヒト抗ＣＤ４０抗体は、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体によって示されるものに類似した結合特性を特徴とする。
【０１０４】
上で述べたように、用語「抗体」は、本明細書で用いる場合、抗原に結合することができる抗体フラグメントも包含する。「抗体フラグメント」は、無損傷抗体の一部分、好ましくは、その無損傷抗体の抗原結合領域または可変領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖフラグメント；二重特異性抗体；線状抗体（Ｚａｐａｔａら（１９９５）Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．１０：１０７５−１０６２）；１本鎖抗体分子；および抗体フラグメントから形成された多重特異性抗体が挙げられる。抗体のパパイン消化は、「Ｆａｂ」フラグメントと呼ばれる２つの同一の抗原結合フラグメント（それぞれが、単一抗原結合部位を有する）、および「Ｆｃ」フラグメント（その名前は、容易に結晶化するその能力を反映している）を生じさせる。ペプシン処理は、２つの抗原結合部位を有し、依然として抗原を架橋することができるＦ（ａｂ’）２フラグメントを生じさせる。
【０１０５】
「Ｆｖ」は、完全抗原認識および結合部位を含有する最小抗体フラグメントである。この領域は、緊密な、非共有結合性の会合状態にある１つの重鎖可変ドメインと１つの軽鎖可変ドメインの二量体から成る。この構造では、それぞれの可変ドメインの３つのＣＤＲが相互作用して、ＶＨ−ＶＬ二量体の表面の抗原結合部位を規定している。集合的に、６のＣＤＲが、抗体に抗原特異性をもたらす。しかし、単一の可変ドメイン（または抗原に対して特異的な３つのＣＤＲのみを含む、Ｆｖの半分）であっても、抗原を認識し、全結合部位より低い親和性でではあるが、抗原に結合する能力を有する。
【０１０６】
Ｆａｂフラグメントは、軽鎖の定常ドメインおよび重鎖の第一定常ドメイン（ＣＨ１）も含有する。Ｆａｂフラグメントは、抗体ヒンジ領域からの１つ以上のシステインを含む、重鎖ＣＨ１ドメインのカルボキシ末端での少数の残基の付加が、Ｆａｂ’フラグメントと異なる。Ｆａｂ’−ＳＨは、定常領域のシステイン残基（単数または複数）が遊離チオール基を有するＦａｂ’についての本明細書における呼称である。Ｆａｂ’フラグメントは、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントの重鎖ジスルフィド架橋を還元することによって生成される。抗体フラグメントの他の化学的カップリングも公知である。
【０１０７】
抗ＣＤ４０抗体のフラグメントは、完全長抗体の望ましい親和性を保持する限り、本発明の方法での使用に好適である。従って、例えば、抗ＣＤ４０抗体のフラグメントは、ＣＤ４０抗原に結合する能力を保持するであろう。そうしたフラグメントは、対応する完全長抗体に類似した特性を特徴とする。従って、例えば、完全長アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体のフラグメントは、好ましくは、ヒト細胞の表面で発現されるヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合することができるであろう。そして、ヒトＣＤ４０発現性細胞上のＣＤ４０抗原に結合すると、有意なアゴニスト活性はなく、アンタゴニスト活性を示す。そうしたフラグメントを、本明細書では、「抗原結合性」フラグメントと呼ぶ。本発明の方法において使用するための抗ＣＤ４０抗体のフラグメントは、好ましくは、単数または複数の適切なＦｃＲに結合する能力も保持しているであろう。従って、例えば、抗ＣＤ４０抗体のフラグメントは、ＦｃγＲＩＩＩａに結合する能力を保持し得る。従って、例えば、完全長抗ＣＤ４０抗体のフラグメントは、細胞表面ＣＤ４０抗原に特異的に結合することができてよく、ナチュラルキラー（ＮＫ）細胞などのヒトエフェクター細胞上のＦｃγＲＩＩＩａに結合することができてもよい。そうしたフラグメントを、本明細書では、「ＦｃＲ結合性」フラグメントと呼ぶ。そうしたフラグメントは、一般に、重鎖の定常領域の少なくとも一部を含むであろう。
【０１０８】
抗体フラグメントを生産するための様々な技術が開発された。伝統的には、これらのフラグメントは、無損傷抗体のタンパク質分解性消化によって誘導された（例えば、Ｍｏｒｉｍｏｔｏら（１９９２）Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２４：１０７−１１７（１９９２）、およびＢｒｅｎｎａｎら（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８１参照）。しかし、今ではこれらのフラグメントを組換え宿主細胞によって直接生産することができる。例えば、上で論じた抗体ファージライブラリから抗体フラグメントを単離することができる。あるいは、Ｆａｂ’−ＳＨフラグメントを大腸菌から直接回収し、化学的にカップリングさせて、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを形成することができる（Ｃａｒｔｅｒら（１９９２）  Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １０：１６３−１６７）。もう１つのアプローチによると、Ｆ（ａｂ’）２フラグメントは、組換え宿主細胞培養物から直接単離することができる。抗体フラグメントを生産するための他の技術は、当業者には明らかであろう。
【０１０９】
抗体の好適な抗原結合フラグメントは、完全長抗体の一部分、一般には、その抗原結合または可変領域を含む。抗体フラグメントの例としては、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、およびＦｖフラグメントならびに１本鎖抗体分子が挙げられるが、これらに限定されない。「Ｆａｂ」は、軽鎖と重鎖の一部とから成る免疫グロブリンの一価抗原結合フラグメントを意味する。Ｆ（ａｂ’）２は、両方の軽鎖と両方の重鎖の一部とを含有する免疫グロブリンの二価抗原結合フラグメントを意味する。「１本鎖Ｆｖ」または「ｓＦｖ」抗体フラグメントは、抗体のＶＨおよびＶＬドメインを含むフラグメントを意味する（この場合、これらのドメインは、単一のポリペプチド鎖内に存在する）。例えば、米国特許第４，９４６，７７８号、同第５，２６０，２０３号、同第５，４５５，０３０号および同第５，８５６，４５６号参照（本明細書に参照として組み込まれている）。一般に、Ｆｖポリペプチドは、ＶＨドメインとＶＬドメインの間にポリペプチドリンカーをさらに含み、それによって、ｓＦｖは、抗原結合のために望ましい構造を形成することができる。ｓＦｖの論評については、Ｐｌｕｃｋｔｈｕｎ  （１９９４）  ｉｎ  Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｖｏｌ．１１３，ｅｄ．Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ），ｐｐ．２６９−３１５を参照のこと。本明細書において下で説明するように、本明細書に開示するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の抗原結合フラグメントを細胞毒素に共役して、ターゲット細胞を死滅させることもできる。
【０１１０】
本発明の一部の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体である。そうした抗体は、ヒトＢ細胞などのヒト細胞の表面に提示されたＣＤ４０に結合したとき、有意なアゴニスト活性を生じさせない。一部の実施形態において、ヒト細胞の表面に提示されたＣＤ４０へのそれらの結合は、結果として、これらのヒト細胞の増殖および分化を阻害する。本発明の方法において使用するために好適な抗ＣＤ４０抗体は、細胞表面ＣＤ４０抗原を発現する正常および悪性ヒト細胞に対してアンタゴニスト活性を示すことができる抗体を含む。
【０１１１】
「アゴニスト活性」は、ある物質がアゴニストとして機能することを意味する。アゴニストは、細胞上の受容体と化合し、その受容体の天然リガンドによって開始されるのと同様または同じである反応または活性を開始させる。ＣＤ４０のアゴニストとしては、次の反応のうちのいずれかまたはすべてが挙げられるが、それらに限定されない：Ｂ細胞増殖および／または分化；ＩＣＡＭ−１、Ｅ−セレクチン、ＶＣＡＭなどのような分子による細胞間接着のアップレギュレーション；ＩＬ−１、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＴＮＦなどのような前炎症性サイトカインの分泌；ＴＲＡＦ（例えば、ＴＲＡＦ２および／またはＴＲＡＦ３）、ＭＡＰキナーゼ、例えばＮＩＫ（ＮＦ−κＢ誘導性キナーゼ）、Ｉ−カッパＢ（ＩＫＫ  α／β）、転写因子ＦＮ−κＢ、ＲａｓおよびＮＥＫ／ＥＲＫ経路、ＰＩ３Ｋ／ＡＫＴ経路、Ｐ３８ＭＡＰＫ経路などのような経路によるＣＤ４０受容体を通したシグナル伝達；ＸＩＡＰ、ｍｃｌ−１、ｂｃｌ−ｘなどのような分子による抗アポトーシスシグナルの伝達；Ｂおよび／またはＴ細胞記憶生成；Ｂ細胞抗体生産；Ｂ細胞アイソタイプスイッチング、ＭＨＣクラスＩＩおよびＣＤ８０／８６の細胞表面発現のアップレギュレーションなど。
【０１１２】
「有意な」アゴニスト活性は、Ｂ細胞反応アッセイにおいて測定され、天然物質または陰性対照によって誘導されるアゴニスト活性より少なくとも３０％、３５％、４０％、４５％、５０％、６０％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％または１００％を超えるアゴニスト活性を意味する。好ましくは、「有意な」アゴニスト活性は、Ｂ細胞反応アッセイにおいて測定して、天然物質または陰性対照によって誘導されるアゴニスト活性より少なくとも二倍を超えるまたは少なくとも３倍を超えるアゴニスト活性である。従って、例えば、対象となるＢ細胞反応が、Ｂ細胞増殖である場合、「有意な」アゴニスト活性は、天然物質または陰性対照によって誘導されるＢ細胞増殖レベルより少なくとも２倍を超えるまたは少なくとも３倍を超えるＢ細胞増殖レベルの誘導であろう。１つの実施形態において、Ｃ４０に結合しない非特異的免疫グロブリン、例えばＩｇＧ１は、陰性対照として役立つ。「有意なアゴニスト活性がない」物質は、Ｂ細胞反応アッセイにおいて測定して、天然物質または陰性対照によって誘導されるアゴニスト活性の約２５％以下、好ましくは、天然または陰性対照によって誘導されるアゴニスト活性の、約２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％以下、またさらには約０．１％以下のアゴニスト活性を示すであろう。
【０１１３】
「アンタゴニスト活性」は、その物質がアンタゴニストとして機能することを意味する。ＣＤ４０のアゴニストは、アゴニストリガンド、特にＣＤ４０Ｌ、へのＣＤ４０受容体の結合によって誘導される任意の反応の誘導を防止または減少させる。アンタゴニストは、アゴニスト結合に対する反応のいずれか１つ以上の誘導を、５％、１０％、１５％、２０％、２５％、３０％、３５％、好ましくは４０％、４５％、５０％、５５％、６０％、さらに好ましくは７０％、８０％、８５％、および最も好ましくは９０％、９５％、９９％または１００％減少させることができる。抗ＣＤ４０治療薬、例えば、抗ＣＤ４０抗体、のＣＤ４０リガンド結合特異性およびアンタゴニスト活性を測定するための方法は、当該技術分野において公知であり、標準的な競合結合アッセイ、Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌をモニターするためのアッセイ、Ｂ細胞増殖アッセイ、Ｂａｎｃｈｅｒｅａｕ様Ｂ細胞増殖アッセイ、抗体生産についてのＴ細胞ヘルパーアッセイ、Ｂ細胞増殖の共刺激のアッセイ、およびＢ細胞活性化マーカーのアップレギュレーションについてのアッセイを含むが、これらに限定されない。例えば、ＷＯ  ００／７５３４８および米国特許第６，０８７，３２９号（本明細書に参照として組み込まれている）に開示されているようなアッセイを参照のこと。ＷＯ２００５／０４４８５４、ＷＯ２００５／０４４３０４、ＷＯ２００５／０４４３０５、ＷＯ２００５／０４４３０６、ＷＯ２００５／０４４８５５、ＷＯ２００５／０４４３０７、およびＷＯ２００５／０４４２９４ＷＯも参照のこと（これらのそれぞれの内容は、それら全体が、本明細書に参照として組み込まれている）。
【０１１４】
アゴニスト活性のアンタゴニスト／欠如は、ＣＨＩＲ−１２．１２がアゴニスト活性を欠くことを証明するアッセイによって評価することができる。好適なアッセイは、ＵＳ  ５６７７１６５（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）に記載されているアッセイに示されている。
【０１１５】
本発明の１つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体には、１つの細胞の反応に関して有意なアゴニスト活性がない。本発明のもう１つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体には、１つより多くの細胞の反応（例えば、増殖および分化、または増殖、分化、およびＢ細胞について、抗体生産）のアッセイにおいて有意なアゴニスト活性がない。
【０１１６】
特に対象となるのは、ヒトＢ細胞上のＣＤ４０抗原に結合したとき、本明細書において定義するような有意なアゴニスト活性がなく、アンタゴニスト活性を示す、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体である。本発明の一つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体には、１つのＢ細胞反応に関して有意なアゴニスト活性がない。本発明のもう１つの実施形態において、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体には、１つより多くのＢ細胞反応（例えば、増殖および分化、または増殖、分化、および抗体生産）のアッセイにおいて有意なアゴニスト活性がない。
【０１１７】
当該技術分野において公知の任意のアッセイを使用して、抗ＣＤ４０抗体が１つ以上のＢ細胞反応のアンタゴニストとして作用するかどうかを判定することができる。一部の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞増殖、Ｂ細胞分化、抗体生産、細胞間接着、Ｂ細胞記憶生成、アイソタイプスイッチング、ＭＨＣクラスＩＩおよびＣＤ８０／８６の細胞表面発現のアップレギュレーション、ならびにＩＬ−８、Ｌ−１２およびＴＮＦなどの前炎症性サイトカインの分泌から成る群より選択される少なくとも１つのＢ細胞反応のアンタゴニストとして作用する。特に対象となるのは、ヒトＢ細胞の表面のヒトＣＤ４０抗原に結合したときにＢ細胞増殖に対して有意なアゴニスト活性がない、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体である。
【０１１８】
１つのそうした実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞増殖アッセイにおいて測定すると、可溶性または細胞表面ＣＤ４０Ｌによって誘導されるＢ細胞増殖のアンタゴニストである。好適なＢ細胞増殖アッセイは、当該技術分野において公知である。好ましくは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、天然物質または陰性対照によって誘導されるＢ細胞増殖の約２５％以下、好ましくは、天然物質または陰性対照によって誘導されるＢ細胞増殖の約２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％以下、またさらには約０．１％以下のレベルで、Ｂ細胞増殖を刺激する。
【０１１９】
他の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞増殖に関して測定すると、別の抗ＣＤ４０抗体、例えばＳ２Ｃ６抗ＣＤ４０抗体、によって誘導されるＢ細胞増殖のアンタゴニストであり、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の存在下で他の抗ＣＤ４０抗体によって刺激されるＢ細胞増殖レベルは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の不在下で他の抗ＣＤ４０抗体によって誘導されるＢ細胞増殖の約２５％以下（すなわち、少なくとも７５％阻害）、好ましくは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の不在下で他の抗ＣＤ４０抗体によって誘導されるＢ細胞増殖の約２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％以下、まさらには約０．１％以下である。
【０１２０】
さらに他の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞活性化アッセイにおいて測定すると、細胞株ＥＬ４Ｂ５によって誘導されるＢ細胞増殖のアンタゴニストであり、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の存在下でＥＬ４Ｂ５細胞によって刺激されるＢ細胞増殖レベルは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の不在下でこの細胞株によって誘導されるＢ細胞増殖の約２５％以下（すなわち、少なくとも７５％阻害）、好ましくは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の不在下でこの細胞株によって誘導されるＢ細胞増殖の約２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％以下、またさらには約０．１％以下である。
【０１２１】
さらに他の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、Ｂ細胞による抗体生産についてのヒトＴ細胞ヘルパーアッセイにおいて測定すると、ヒトＢ細胞によるヒトＴ細胞誘導抗体生産のアンタゴニストである。このように、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の存在下でＴ細胞によって刺激されるＢ細胞によるＩｇＧ抗体生産、ＩｇＭ抗体生産、またはＩｇＧとＩｇＭの両方の抗体生産のレベルは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の不在下でＴ細胞によって刺激されるＢ細胞によるそれぞれの抗体生産の約５０％以下（すなわち、少なくとも７５％阻害）、好ましくは、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の不在下でＴ細胞によって刺激されるＢ細胞によるそれぞれの抗体生産の約２５％、２０％、１５％、１０％、５％、１％、０．５％以下、または約０．１％以下でさえある。さらなるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体としては、５Ｄ１２、３Ａ８および３Ｃ６と呼ばれるモノクローナル抗体が挙げられ、これらは、それぞれ、ＡＴＣＣアクセッション番号ＨＢ  １１３３９、ＨＢ  １２０２４およびＨＢ  １１３４０を有するハイブリドーマによって分泌される。例えば、米国特許第６，３１５，９９８号参照（その全体が本明細書に参照として組み込まれている）。
【０１２２】
アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体は、当該技術分野において公知である。例えば、米国特許出願公開番号２００２０１４２３５８および２００３００５９４２７（それら全体が本明細書に参照として組み込まれている）に開示されている、Ｆ４−４６５と称するハイブリドーマによって生産されるヒト抗ＣＤ４０抗体を参照のこと。Ｆ４−４６５は、ＨＡＣマウス（Ｋｕｒｏｉｗａら（２０００）Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ．１０：１０８６（２０００））から得られたものであり、従って、ヒトラムダ軽鎖を発現する。ＷＯ２００５／０４４８５４、ＷＯ２００５／０４４３０４、ＷＯ２００５／０４４３０５、ＷＯ２００５／０４４３０６、ＷＯ２００５／０４４８５５、ＷＯ２００５／０４４３０７、およびＷＯ２００５／０４４２９４ＷＯも参照（これらのそれぞれの内容は、それら全体が本明細書に参照として組み込まれている）。
【０１２３】
アンタゴニスト活性に加えて、本発明の方法において使用するための抗ＣＤ４０抗体は、好ましくは、ターゲット細胞に対するもう１つの作用メカニズムを有するであろう。例えば、抗ＣＤ４０抗体は、好ましくは、ＡＤＣＣ活性を有するであろう。あるいは、抗ＣＤ４０抗体の可変領域を、ＡＤＣＣ活性を有する別の抗体アイソタイプを用いて発現させることができる。本明細書の他の箇所でさらに説明するように、抗ＣＤ４０抗体の天然形、組換え形または抗原結合フラグメントを、細胞毒素、治療薬または放射性金属イオンもしくは放射性同位体に共役することも可能である。
【０１２４】
本明細書の他の箇所で説明するように、本発明者らは、他の抗体とは異なり、ＣＨＩＲ−１２．１２などの抗ＣＤ４０抗体が、ヒト患者のナチュラルキラー（ＮＫ）細胞上の２つのＦｃγＲＩＩＩａアミノ酸１５８アロタイプ（ＶまたはＦ）のいずれかへの結合により、ＣＤ４０発現性ターゲット細胞の効力のある抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）を媒介することができるという驚くべき発見をした。従って、ＣＨＩＲ−１２．１２などの抗ＣＤ４０抗体は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖに関してホモ接合性（遺伝子型Ｖ／Ｖ）のヒト患者に加えて、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒト患者におけるＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患の治療に使用することができる。本発明は、ＮＨＬにおけるリツキシマブの臨床活性が患者のＦｃγＲＩＩＩａ遺伝子型と相関することは証明されているため、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））での治療に対して反応しない炎症性疾患または自己免疫疾患の治療に特に有利である。
【０１２５】
従って、本発明の方法において使用するために特に好ましい抗ＣＤ４０抗体は、アンタゴニスト活性に加えて、ＦｃγＲＩＩＩａを発現するナチュラルキラー細胞（ＮＫ細胞）などのヒトエフェクター細胞によるＣＤ４０発現性細胞のＡＤＣＣを媒介することができるものである。本明細書の他の箇所でさらに説明するように、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８ＦとＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖの両方に高い親和性で結合することができる抗ＣＤ４０抗体が、最も好ましい。
【０１２６】
特に好ましい抗ＣＤ４０抗体は、ＷＯ２００５／０４４８５４、ＷＯ２００５／０４４３０４、ＷＯ２００５／０４４３０５、ＷＯ２００５／０４４３０６、ＷＯ２００５／０４４８５５、ＷＯ２００５／０４４３０７、およびＷＯ２００５／０４４２９４ＷＯ（これらのそれぞれの内容は、それら全体が本明細書に参照として組み込まれている）に開示されているものである。
【０１２７】
本発明にとって特に関心が高いのは、ＷＯ２００５／０４４８５４、ＷＯ２００５／０４４３０４、ＷＯ２００５／０４４３０５、ＷＯ２００５／０４４３０６、ＷＯ２００５／０４４８５５、ＷＯ２００５／０４４３０７、およびＷＯ２００５／０４４２９４ＷＯに記載されているＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体の結合特性を共有するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体である。そうした抗体としては、次のものが挙げられるが、それらに限定されない：
ａ）モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２；
ｂ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって生産されるモノクローナル抗体；
ｃ）配列番号２に示す配列、配列番号４に示す配列、配列番号５に示す配列、配列番号２および配列番号４に示す両方の配列、ならびに配列番号２および配列番号５に示す両方の配列から成る群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；
ｄ）配列番号１に示す配列、配列番号３に示す配列、ならびに配列番号１および配列番号３に示す両方の配列から成る群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子によってコードされたアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；
ｅ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって生産されるモノクローナル抗体に結合することができるエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｆ）配列番号７または配列番号９に示すヒトＣＤ４０配列の残基８２−８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｇ）配列番号７または配列番号９に示すヒトＣＤ４０配列の残基８２−８９を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｈ）競合結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；
ｉ）前記項目ａ）のモノクローナル抗体または前記項目ｃ）−ｈ）のいずれか１項目のモノクローナル抗体（この場合、前記抗体は、組換え生産される）；ならびに
ｊ）前記項目ａ）−ｉ）のいずれか１項目のモノクローナル抗体の抗原結合フラグメントであるモノクローナル抗体（この場合、前記フラグメントは、ヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持する）。
【０１２８】
モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２は、本発明の方法において使用するために特に好ましい。
【０１２９】
モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２は、ＷＯ２００５／０４４８５４、ＷＯ２００５／０４４３０４、ＷＯ２００５／０４４３０５、ＷＯ２００５／０４４３０６、ＷＯ２００５／０４４８５５、ＷＯ２００５／０４４３０７、およびＷＯ２００５／０４４２９４に詳細に記載されている。ＣＨＩＲ−１２．１２抗体は、ハイブリドーマ細胞株１５３．８Ｅ２．Ｄ１０．Ｄ６．１２．１２（細胞株１２．１２と呼ぶ）から生産されるＩｇＧ１アイソタイプの完全ヒト抗ＣＤ４０モノクローナル抗体である。この細胞株は、ヒトＩｇＧ１重鎖遺伝子座およびヒトκ鎖遺伝子座を含有する、免疫処置された異種型マウス（ＸｅｎｏＭｏｕｓｅ（登録商標）ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ａｂｇｅｎｉｘ；カリフォルニア州、フリーモント）からの脾臓細胞を使用して作られた。それらの脾臓細胞は、マウス骨髄腫ＳＰ２／０細胞（Ｓｉｅｒａ  ＢｉｏＳｏｕｒｃｅ）と融合された。結果として生じたハイブリドーマは。数回サブクローニングされて、安定なモノクローナル細胞株１２．１２が作られた。本明細書の他の箇所で説明するように、ヒト免疫グロブリンについて遺伝形質転換したマウスを使用して、本発明の方法での使用に好適な他の抗体を同様に作製することができる。
【０１３０】
ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体は、ＥＬＩＳＡ型アッセイにおいて可溶性ＣＤ４０に結合し、ＣＤ４０リガンドの細胞表面ＣＤ４０への結合を防止し、ならびにフローサイトメトリーアッセイによって判定すると、前に結合したＣＤ４０リガンドを置換する。抗体ＣＨＩＲ−５．９およびＣＨＩＲ−１２．１２は、ＣＤ４０への結合について互いに競合するが、１５Ｂ８［２０００年１０月２日に出願された「Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」と題する米国特許仮出願番号６０／２３７，５５６、および２００１年１０月２日に出願され（代理人整理番号ＰＰ１６０９２．００３）、ＷＯ  ２００２／０２８９０４として公開された、同じく「Ｈｕｍａｎ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」と題するＰＣＴ国際出願番号ＰＣＴ／ＵＳ０１／３０８５７（これらの両方は、それら全体が本明細書に参照として組み込まれている）に記載されている抗ＣＤ４０モノクローナル抗体］とはしない。正常なヒト被験者からのＢ細胞の増殖に対する効果についてインビトロで検査すると、ＣＨＩＲ−１２．１２は、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体として作用する。さらに、ＣＨＩＲ−１２．１２は、正常な被検者からのヒトリンパ球の強い増殖を誘導しない。この抗体は、抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）によりＣＤ４０発現性ターゲット細胞を死滅させることができる。ヒトＣＤ４０に対するＣＨＩＲ−１２．１２の結合親和性は、Ｂｉａｃｏｒｅ（登録商標）アッセイによって判定すると、５×１０−１０Ｍである。
【０１３１】
ＣＨＩＲ−１２．１２抗体の可変領域のヌクレオチドおよびアミノ酸配列を本明細書において提供する。より詳細には、ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖および重鎖のリーダー、可変および定常領域についてのアミノ酸配列を、配列番号２（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖についての完全配列）、配列番号４（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖についての完全配列）、および配列番号５（配列番号４に示すｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２のについての重鎖の変異体についての完全配列；この場合、前記変異体は、配列番号４の位置１５３のアラニン残基に対するセリン置換を含む）に示す。ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖および重鎖をコードするヌクレオチド配列を、配列番号１（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の軽鎖についてのコーディング配列）および配列番号３（ｍＡｂ  ＣＨＩＲ−１２．１２の重鎖についてのコーディング配列）に示す。ＣＨＩＲ−１２．１２抗体を発現するハイブリドーマは、ＰＴＡ−５５４３の特許寄託番号でＡＴＣＣに寄託されている。
【０１３２】
本発明の方法において使用するための抗ＣＤ４０抗体は、ＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体とは異なるが、ＣＤＲを保持している抗体、および１つ以上のアミノ酸付加、欠失または置換を有する抗体を含む。本発明の方法において使用するための抗ＣＤ４０抗体は、例えば、国際公開番号ＷＯ９８／５２９７６およびＷＯ００３４３１７（本明細書に参照として組み込まれている）に記載されているように生産することができる脱免疫抗体、特に、脱免疫アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体であってもよい。このように、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の中の残基を修飾して、抗体をヒトに対して全くまたは然程免疫原性でないが、ヒトＣＤ４０発現性細胞に対するそれらのアンタゴニスト活性を保持しているようにし、この場合、そうした活性は、本明細書の他の箇所で述べるアッセイによって測定される。対象となる抗体、例えばアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体もしくはアンタゴニスト抗ＣＤ４０Ｌ抗体、またはそれらのフラグメントを含む融合タンパク質も本発明の範囲に包含され、これらの融合タンパク質は、当該技術分野において公知であるように、対応するポリヌクレオチドベクターから合成または発現させることができる。こうした融合タンパク質は、本明細書の他の箇所で述べるような抗体のコンジュゲーションに関連して説明する。
【０１３３】
対象となる結合特異性を有する任意の公知抗体は、例えば、特許公開番号ＥＰ  ０９８３３０３  Ａ１、ＷＯ  ００／３４３１７およびＷＯ  ９８／５２９７６（本明細書に参照として組み込まれている）に記載されている方法を使用して生成される配列変異を有し得る。例えば、ＣＤＲ内の配列が、ＭＨＣクラスＩＩに結合する抗体を生じさせ、望ましくないヘルパーＴ細胞反応を誘発し得ることは証明されている。保存的置換により、抗体に結合活性を保持させ、しかし、望ましくないＴ細胞反応を誘発するその能力を喪失させることができる。いずれのそうした保存的または非保存的置換も、本明細書の他の箇所で述べるものなどの当該技術分野において認知されている方法を使用して行うことができ、結果として生じる抗体も本発明の方法において使用することができる。それらの変異抗体は、本明細書において説明する方法を使用して、特定の活性、例えばアンタゴニスト活性、親和性および特異性、についてルーチンテストすることができる。
【０１３４】
例えば、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体、例えばＣＨＩＲ−１２．１２モノクローナル抗体、のアミノ酸配列変異体は、対象となる抗体をコードするクローニングされたＤＮＡ配列における突然変異によって作製することができる。突然変異誘発法およびヌクレオチド配列交替は、当該技術分野において周知である。例えば、  ＷａｌｋｅｒおよびＧａａｓｔｒａ，ｅｄｓ．（１９８３）Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（ＭａｃＭｉｌｌａｎ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；Ｋｕｎｋｅｌ（１９８５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．ＳｃＬ  ＵＳＡ  ８２：４８８−４９２；Ｋｕｎｋｅｌら（１９８７）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ  １５４：３６７−３８２；Ｓａｍｂｒｏｏｋら（１９８９）Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；米国特許第４，８７３，１９２号；およびそれらに引用されている参考文献（本明細書に参照として組み込まれている）を参照のこと。対象となるポリペプチドの生物活性に影響を及ぼさない適切なアミノ酸置換に関するガイダンスは、Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ（ワシントンＤ．Ｃ．のＮａｔｌ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｒｅｓ．Ｆｏｕｎｄ．）（本明細書に参照として組み込まれている）におけるＤａｙｈｏｆｆら（１９７８）のモデルにおいて見出すことができる。保存的置換、例えば、あるアミノ酸の類似した特性を有する別のアミノ酸での置換が好ましい場合がある。保存的置換の例としては、Ｇｌｙ⇔Ａｌａ、Ｖａｌ⇔Ｉｌｅ⇔Ｌｅｕ、Ａｓｐ⇔Ｇｌｕ、Ｌｙｓ⇔Ａｒｇ、Ａｓｎ⇔Ｇｌｎ、およびＰｈｅ⇔Ｔｒｐ⇔Ｔｙｒが挙げられるが、これらに限定されない。
【０１３５】
対象となる抗体の変異体、例えば、対象となるアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体ポリペプチド、を構築する際、変異体が、望ましい活性、すなわち類似した結合親和性、を継続して有するように、ならびにアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の場合には、ヒト細胞の表面で発現されたヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合することができ、ヒトＣＤ４０発現性細胞上のＣＤ４０抗原に結合したときに有意なアゴニスト活性がなく、アンタゴニスト活性を示すように、修飾することができる。明らかに、変異ポリペプチドをコードするＤＮＡになされるいずれの突然変異も、リーディングフレーム以外の配列で行われてはならず、好ましくは、二次ｍＲＮＡ構造を生成し得る相補領域を作らないであろう。ＥＰ特許出願公開第７５，４４４号参照。
【０１３６】
加えて、抗体（例えばアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体）の定常領域は、多数の方法で、エフェクター機能を改変するように突然変異させることができる。例えば、Ｆｃ受容体に結合する抗体を最適化するＦｃ突然変異を開示している、米国特許第６，７３７，０５６号Ｂ１および米国特許出願公開第２００４／０１３２１０１号Ａ１を参照のこと。
【０１３７】
好ましくは、参照抗体、例えばアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体、の変異体は、その参照抗体、例えばアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体分子、例えば本明細書に記載するＣＨＩＲ−１２．１２．モノクローナル抗体、のアミノ酸配列と、またはその参照抗体分子のより短い部分と、少なくとも７０％または７５％の配列同一性、好ましくは少なくとも８０％または８５％の配列同一性、さらに好ましくは少なくとも９０％、９１％、９２％、９３％、９４％または９５％の配列同一性を有するアミノ酸配列を有する。さらに好ましくは、それらの分子は、少なくとも９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を共有する。本発明のために、配列同一性パーセントは、１２のギャップ開始ペナルティーおよび２のギャップ伸張ペナルティー、６２のＢＬＯＳＵＭマトリックスでのアフィンギャップ検索を使用するＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムを用いて決定する。このＳｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズムは、Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２−４８９において教示されている。変異体は、例えば、１から１５ほどの少数のアミノ酸残基、１から１０ほどの少数、例えば６−１０、のアミノ酸残基、５ほどの少数の、４、３、２または１ほどもの少数のアミノ酸残基が、参照抗体、例えばアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体、と異なる。
【０１３８】
２つのアミノ酸配列の最適なアラインメントに関して、変異体アミノ酸配列の連続セグメントは、参照アミノ酸配列を基準にして追加のアミノ酸残基を有することがあり、またはアミノ酸残基の欠失を有することがある。参照アミノ酸配列との比較に使用される連続セグメントは、少なくとも２０の隣接するアミノ酸残基を含み、３０、４０、５０以上のアミノ酸残基であり得る。保存的残基置換またはギャップに関連した配列同一性の補正を行うことができる（Ｓｍｉｔｈ−Ｗａｔｅｒｍａｎ相同性検索アルゴリズム参照）。
【０１３９】
特にターゲット細胞上のＣＤ４０抗原に結合したときの、ＣＤ４０に特異的に結合することができ、アンタゴニストを保持することができるポリペプチドの正確な化学的構造は、多数の要因に依存する。イオン化可能なアミノおよびカルボキシル基が分子内に存在する場合、特定のポリペプチドを酸性もしくは塩基性塩として、または中性形態で得ることができる。好適な環境条件に置かれたときにそれらの生物活性を保持している、すべてのそうした製剤が、本明細書において使用するアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の定義に包含される。さらに、前記ポリペプチドの主アミノ酸配列は、糖部分を使用する誘導体化（グリコシル化）により、または脂質、リン酸塩、アセチル基などのような他の補足分子により、増やすことができる。糖類とのコンジュゲーションによって増やすこともできる。そうした増加の一定の態様は、生産宿主の後翻訳プロセッシングシステムによって遂行され、他のそうした修飾をインビトロで導入することもできる。いずれにせよ、そうした修飾は、抗ＣＤ４０抗体のアンタゴニスト特性が破壊されない限り、本明細書において使用する抗ＣＤ４０抗体の定義に包含される。そうした修飾は、様々なアッセイにおいて、そのポリペプチドの活性を強化または減少させることでその活性に量的にまたは質的に影響し得ると予想される。さらに、鎖内の個々のアミノ酸残基を酸化、還元または他の誘導体化によって修飾することができ、ならびにポリペプチドを切断して、活性を保持するフラグメントを得ることができる。アンタゴニスト活性を破壊しないそうした改変により、そのポリペプチド配列が、本明細書において使用する抗ＣＤ４０抗体の定義から除かれることはない。
【０１４０】
当該技術分野は、ポリペプチド変異体の作製および使用に関する実質的なナガイダンスを提供している。抗ＣＤ４０抗体変異体を作製する際、当業者は、天然タンパク質ヌクレオチドまたはアミノ酸配列へのどの修飾が、本発明の方法において使用する医薬組成物の治療活性成分としての使用に好適な変異体を生じさせることになるかを容易に決定することができる。
【０１４１】
本発明の方法において使用するための抗ＣＤ４０抗体は、好ましくは、次のインビトロおよび／またはインビボ生物活性のうちの少なくとも１つを有する：Ｔ細胞により刺激される正常ヒト末梢Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌の阻害；ＣＤ４０Ｌ発現性細胞または可溶性ＣＤ４０リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）により刺激される正常ヒト末梢Ｂ細胞の生存および／または増殖の阻害；ジャーカットＴ細胞により刺激される正常ヒト末梢Ｂ細胞の生存および／または増殖の阻害；ｓＣＤ４０Ｌまたは固相ＣＤ４０Ｌにより刺激される任意の細胞における「生存」抗アポトーシス細胞内シグナルの阻害；ならびにｓＣＤ４０Ｌまたは固相ＣＤ４０Ｌとのライゲーション、ＣＤ４０保有ターゲット細胞またはＣＤ４０に対する同族リガンドを保有する細胞（Ｔ細胞およびＢ細胞を含むが、これらに限定されない）の欠失、アネルギーおよび／または寛容性導入、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋調節Ｔ細胞の増幅または活性化の導入（例えば、ｄｏｎｏｒ  ａｌｌｏａｎｔｉｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｔｉｓｓｕｅ  ｒｅｊｅｃｔｉｏｎ  ｖｉａ  ＣＤ４０−ＣＤ４０Ｌ  ｉｎｔｅｒｆｅｒｅｎｃｅ，ｖａｎ  Ｍａｕｒｉｋら（２００２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９：５４０１−５４０４参照）、任意のメカニズム（抗体依存性細胞媒介性障害（ＡＤＣＣ）、補体依存性細胞障害（ＣＤＣ）、増殖のダウンレギュレーション、および／またはターゲット細胞におけるアポトーシス）による細胞障害、ターゲット細胞サイトカイン分泌および／または細胞表面分子発現の調整、ならびにこれらの組み合わせに基づく、任意の細胞におけるＣＤ４０シグナル伝達の阻害。
【０１４２】
そうした生物活性についてのアッセイは、本明細書において説明するように、ならびに２００３年１１月４日、２００３年１１月２６日および２００４年４月２７日に出願され、それぞれ、米国特許出願番号６０／５１７，３３７（代理人整理番号ＰＰ２０１０７．００１（０３５７８４／２５８４４２））、６０／５２５，５７９（代理人整理番号ＰＰ２０１０７．００２（０３５７８４／２７１５２５））および６０／５６５，７１０（代理人整理番号ＰＰ２０１０７．００３（０３５７８４／２７７２１４））を付与された「Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」と題する仮出願；ならびに２００４年１１月４日に出願された、同じく「Ａｎｔａｇｏｎｉｓｔ  Ａｎｔｉ−ＣＤ４０  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｉｒ  Ｕｓｅ」と題する、ＷＯ  ２００５／０４４８５４として公開された国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２００４／０３７１５２（代理人整理番号ＰＰ２０１０７．００４  （０３５７８４／２８２９１６））（これらのそれぞれの内容は、それら全体が本明細書に参照として組み込まれている）に記載されているように行うことができる。Ｓｃｈｕｌｔｚｅら（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９２：８２００−８２０４；Ｄｅｎｔｏｎら（１９９８）Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２：６−１５；Ｅｖａｎｓら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：６８８−６９７；Ｎｏｅｌｌｅ（１９９８）Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ  Ｓｕｐｐｌ．４９：１７−２２；Ｌｅｄｅｒｍａｎら（１９９６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ  ３：７７−８６；Ｃｏｌｉｇａｎら（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３：１２；Ｋｗｅｋｋｅｂｏｏｍら（１９９３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７９：４３９−４４４；および米国特許第５，６７４，４９２号および同第５，８４７，０８２号（本明細書に参照として組み込まれている）に記載されているアッセイも参照のこと。
【０１４３】
本明細書において特定するＣＤ４０抗原エピトープに特異的なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を検出するための代表的なアッセイは、「競合結合アッセイ」である。競合結合アッセイは、標識された既知リガンドのその特異的抗体への結合を阻害する能力によって未知のものを検出および定量する血清学的アッセイである。これは、競合阻害アッセイとも呼ばれる。代表的な競合結合アッセイでは、標識されたＣＤ４０ポリペプチドを、例えば、本発明のモノクローナル抗体の１つ以上のエピトープに対して産生させたモノクローナル抗体と併用で、サンプル中の候補抗体により沈殿させる。対象となるエピトープと特異的に反応する抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０タンパク質、または関心のあるＣＤ４０タンパク質の特定のエピトープを含むタンパク質のフラグメントに対して作製された一連の抗体をスクリーニングすることによって同定することができる。例えば、ヒトＣＤ４０について、対象となるエピトープとしては、ヒトＣＤ４０のショート・アイソフォーム（（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ＿６９０５９３参照）配列番号９に記載する配列によってコードされている、配列番号１０に記載するもの；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＭ＿１５２８５４も参照）の、またはヒトＣＤ４０のロング・アイソフォーム（ゲンバンクアクセッション番号ＧＡＡ４３０４５およびＮＰ＿００１２４１参照、配列番号１１に記載する配列によってコードされている、配列番号１２に記載するもの；ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｘ６０５９２およびＮＭ＿００１２５０参照）の線状および／または非線状アミノ酸残基を含むエピトープが挙げられる。あるいは、以前に同定された好適なアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体との競合結合アッセイを使用して、その以前に同定された抗体に匹敵するモノクローナル抗体を選択することができよう。
【０１４４】
そうしたイムノアッセイにおいて用いる抗体は、標識されてよく、または非標識であってもよい。非標識抗体は、凝集反応において用いることができ、標識抗体は、多種多様な標識を利用する多種多様なアッセイにおいて用いることができる。抗ＣＤ４０抗体と対象となるエピトープとの抗体−抗原複合体の形成の検出は、検出可能な物質を抗体に取り付けることによって助長することができる。好適な検出手段としては、放射性核種、酵素、補酵素、蛍光剤、化学発光剤、色原体、酵素基質または補因子、酵素阻害剤、補欠分子団複合体、遊離ラジカル、粒子、色素などのような標識の使用が挙げられる。好適な酵素の例としては、ホースラディッシュペルオキシダーゼ、アルカリホスファターゼ、β−ガラクトシダーゼ、またはアセチルコリンエステラーゼが挙げられ；好適な補欠分子団複合体の例としては、ストレプタビジン／ビオチンおよびアビジン／ビオチンが挙げられ；好適な蛍光物質の例としては、ウンベリフェロン、フルオレセイン、フルオレセインイソチオシアネート、ローダミン、ジクロロトリアジニルアミンフルオレセイン、ダンシルクロリドまたはフィコエリトリンが挙げられ；蛍光物質の例は、ルミノールであり；生物発光物質の例としては、ルシフェラーゼ、ルシフェリンおよびエクオリンが挙げられ；ならびに好適な放射性物質の例としては、１２５Ｉ、１３１Ｉ、３５Ｓまたは３Ｈが挙げられる。そうした標識された試薬を、様々な周知アッセイ、例えば、ラジオイムノアッセイ、エンザイムイムノアッセイ、例えばＥＬＩＳＡ、蛍光イムノアッセイなど、において使用することができる。例えば、米国特許第３，７６６，１６２号、同第３，７９１，９３２号、同第３，８１７，８３７号および同第４，２３３，４０２号参照。
【０１４５】
増加したＡＤＣＣ活性を有する抗体を遺伝子工学で作ることもできる。特に、ＣＨ２ドメインのカルボキシ末端側半分は、ＦｃＲＩＩＩ受容体によって媒介されるＡＤＣＣにとて非常に重要である。ＣＨ２およびヒンジ領域は、エフェクター機能において役割を有するので、余分なＣＨ２および／またはヒンジ領域を含有する一連の多ドメイン抗体を作り、エフェクター効力の任意の変化について調査することができる（Ｇｒｅｅｎｗｏｏｄ，Ｊ．，Ｇｏｒｍａｎ，Ｓ．Ｄ．，Ｒｏｕｔｌｅｄｇｅ，Ｅ．Ｇ．，Ｌｌｏｙｄ，ＬＳ．＆  Ｗａｌｄｍａｎｎ，Ｈ．，Ｔｈｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４  Ｏｃｔ；１（５）：２４７−５５参照）。代替アプローチは、例えばキメラＩｇのＨ鎖にシステインを遺伝子工学で作ることにより二量体を作ることによって、遺伝子工学で余分なドメインを並行して作るアプローチであり得る（Ｓｈｏｐｅｓ  Ｂ．（１９９２）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９２  １；１４８（９）：２９１８−２２参照）。さらに、ＡＤＣＣ活性を増加させる変化は、Ｆｃ領域への突然変異の誘導（例えば、米国特許第６，７３７，０６５号Ｂ１参照）、フコシルトランスフェラーゼ欠損細胞株における細胞の発現（例えば、ＵＳ２００３／０１１５６１４参照）、または抗体グリコシル化に他の変化をもたらすこと（例えば、米国特許第６，６０２，６８４号参照）により、巧みに実行することができる。
【０１４６】
本発明は、特に、リツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））耐性患者における、さらに特に、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である者における、ＣＤ２０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患の治療に特に有利である。
【０１４７】
本明細書で用いる場合、「抗ＣＤ２０抗体」は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、１本鎖抗体およびそれらのフラグメント、例えばＦａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ならびに親抗ＣＤ２０抗体の抗原結合機能を保持する他のフラグメントを含む、ＣＤ２０細胞表面抗原を特異的に認識する任意の抗体を包含する。本発明の方法に関連して特に対象となるのは、ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８モノクローナル抗体（マサチューセッツ州、ケンブリッジのＢｉｏｇｅｎ  ＩＤＥＣ  Ｉｎｃ．）によって示される結合特性を有する、抗ＣＤ２０抗体またはそれらの抗原結合フラグメントである。
【０１４８】
一部の実施形態において、本発明の方法において使用する抗ＣＤ４０抗体は、キメラ抗ＣＤ２０モノクローナル抗体ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８より効力の高い治療活性を示し、この場合の治療活性は、適切な実験モデルにおいて等量のこれらの抗体を用いてアッセイする。ＩＤＥＣ−Ｃ２Ｂ８（カリフォルニア州、サンディエゴのＩＤＥＣ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐ．；商品名Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）で市販されており、リツキシマブとも呼ばれる）は、マウス抗ＣＤ２０モノクローナル抗体、ＩＤＥＣ−２Ｂ８、から単離されたマウス可変領域とヒトＩｇＧ１およびカッパ定常領域を含有するキメラ抗ＣＤ２０モノクローナル抗体である（Ｒｅｆｆら（１９９４）Ｂｌｏｏｄ  ８３：４３５−４４５）。リツキシマブは、再発したＢ細胞低悪性度または濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の治療について認可されており、自己免疫疾患については臨床試験中である。リツキシマブと比較して優れた治療活性を有する抗体の発見は、炎症性疾患または自己免疫疾患のための治療方法を劇的に改善するであろう。
【０１４９】
下で説明するように、全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）、多発性硬化症、炎症およびアテローム性動脈硬化症、移植およびアルツハイマー病における活性について試験するために好適なモデルが存在する。
【０１５０】
例えば、ＳＬＥ患者からの末梢血単核細胞（ＰＭＢＣ）をＳＣＩＤマウスに移植する、ヒト全身性エリテマトーデス（ＳＬＥ）における効能についての試験。例えば、Ｄｕｃｈｏｓａｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７２：９８５−８参照。ＳＬＥ患者からＳＣＩＤマウスにＰＢＭＣを移入した後、治療が、自己抗原および自己抗体生産ならびに腎炎などの疾患発現に対するＴリンパ球の反応に影響を及ぼすかどうかを判定する。
【０１５１】
マーモセットモンキー実験的自己免疫性脳炎（ＥＡＥ）は、ヒト多発性硬化症のモデルである。例えば、Ｒａｉｎｅら（１９９９）Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．４６：１４４−６０、およびＨａｒｔら（２００４）Ｌａｎｃｅｔ  Ｎｅｕｒｏｌ．３：５８８−９７に記載されているモデルを参照のこと。
【０１５２】
抗体は、ＣＤ４０Ｌによって誘導される基質分解酵素の生産、組織因子発現、前炎症性サイトカイン、および接着分子のアップレギュレーションを阻害するそれらの能力について、インビトロで試験することができる。その後の研究では、ヒトＣＤ４０および／またはＣＤ２０を発現するトランスジェニックマウスを使用して、インビボで抗炎症活性を示す抗体の能力を試験している。例えば、Ｙａｓｕｉ（２００２）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：３１９−２９に記載されているモデルを参照のこと。
【０１５３】
抗体は、非ヒト霊長類モデルにおいて、移植拒絶反応を予防するそれらの能力について、試験することができる。カニクイザル同種移植腎レシピエントを抗体で治療して、追加の免疫抑制薬、例えば、シクロスポリン、ＦＫ５０６、ラパマイシン、コルチコステロイド、ＣＴＬＡ４−Ｉｇおよび抗Ｂリンパ球刺激抗体などを用いまたは用いずに移植片受容に対する効果を実証する。例えば、Ｗｅｅら（１９９２）Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ５３：５０１−７に記載されているモデル参照。
【０１５４】
アルツハイマー病については、抗体を、ミクログリア活性化を阻止するそれらの能力について、インビトロで試験することができる。ヒトＣＤ４０および／またはＣＤ２０を発現し、アミロイド−ベータペプチドを過剰生産する、二重トランスジェニックマウスにおいて、抗体でのインビボ効能試験を行うことができる。例えば、Ｔａｎら（２００２）Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．５：１２８８−９３に記載されているモデルを参照のこと。
【０１５５】
本発明の抗ＣＤ４０抗体およびＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）の「等量」は、重量ベースで同じまたはそれより少ないｍｇ用量が投与されることを意味する。従って、抗ＣＤ４０抗体が、そのモデルにおいて使用されるマウスの体重１ｋｇにつき０．０１ｍｇで投与される場合、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）も、そのマウス体重１ｋｇにつき０．０１ｍｇで投与される。同様に、抗ＣＤ４０抗体が、そのモデルにおいて使用されるマウスの体重１ｋｇにつき０．１、１または１０ｍｇで投与される場合、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）も、そのマウス体重１ｋｇにつき、それぞれ、０．１、１または１０ｍｇで投与される。
【０１５６】
抗体効能のもう１つの相違は、ＮＫ細胞の存在下、インビトロでターゲット細胞の最大溶解を達成するために必要な抗体の濃度のインビトロでの測定である。例えば、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）の１／２未満、好ましくは１／４未満および最も好ましくは１／１０未満の濃度のＥＣ５０で、Ｄａｕｄｉ細胞の最大溶解に到達する。このタイプの測定は、本明細書中、実施例においても説明する。
【０１５７】
上で説明したアッセイにおいて等量のＲｉｔｕｘａｎ（登録商標）より有意に大きい効能を有することの恩恵を受ける抗ＣＤ４０抗体としては、次のものが挙げられる：
ａ）モノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２；
ｂ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって生産されるモノクローナル抗体；
ｃ）配列番号２に示す配列、配列番号４に示す配列、配列番号５に示す配列、配列番号２および配列番号４に示す両方の配列、ならびに配列番号２および配列番号５に示す両方の配列から成る群より選択されるアミノ酸配列を含むモノクローナル抗体；
ｄ）配列番号１に示す配列、配列番号３に示す配列、ならびに配列番号１および配列番号３に示す両方の配列から成る群より選択されるヌクレオチド配列を含む核酸分子によってコードされたアミノ酸配列を有するモノクローナル抗体；
ｅ）ハイブリドーマ細胞株１２．１２によって生産されるモノクローナル抗体に結合することができるエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｆ）配列番号７または配列番号９に示すヒトＣＤ４０配列の残基８２−８７を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｇ）配列番号７または配列番号９に示すヒトＣＤ４０配列の残基８２−８９を含むエピトープに結合するモノクローナル抗体；
ｈ）競合結合アッセイにおいてモノクローナル抗体ＣＨＩＲ−１２．１２と競合するモノクローナル抗体；
ｉ）前記項目ａ）のモノクローナル抗体または前記項目ｃ）−ｈ）のいずれか１項目のモノクローナル抗体（この場合、前記抗体は、組換え生産される）；ならびに
ｊ）前記項目ａ）−ｉ）のいずれか１項目のモノクローナル抗体の抗原結合フラグメントであるモノクローナル抗体（この場合、前記フラグメントは、ヒトＣＤ４０抗原に特異的に結合する能力を保持する）。
【０１５８】
本発明は、抗ＣＤ４０抗体で治療することができる炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を特定するための方法を提供し、この方法は、
ａ）ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を特定すること；および
ｂ）前記ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型（Ｖ／Ｖ、Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）を決定すること
を含み、
前記ヒト患者が、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である場合、前記炎症性疾患または自己免疫疾患を治療することができる。前記炎症性疾患または自己免疫疾患は、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）での治療に難治性であってもよい。
【０１５９】
抗ＣＤ４０抗体で治療することができる炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を特定したら、その人患者を抗ＣＤ４０抗体で治療することができる。従って、この方法は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）と特定されたヒト患者に、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与するさらなる段階を含み得る。
【０１６０】
当業者は、好適な診断キットを使用して、抗ＣＤ４０抗体で治療することができる炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を特定するこの方法を、容易に行うことができる。このキットは、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型の決定に好適な試薬を含むはずである。従って、本発明は、抗ＣＤ４０抗体で治療することができる炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を特定するためのキットも提供し、このキットは、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するための試薬を含む。好適なキットは、本明細書の他の箇所でより詳細に説明する。
【０１６１】
本発明は、炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を治療するための抗体療法を選択するための方法も提供し、この方法は、
ａ）ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を特定すること；および
ｂ）前記ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型（Ｖ／Ｖ、Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）を決定すること
を含み、
前記ヒト患者が、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）である場合、前記炎症性疾患または自己免疫疾患の治療に抗ＣＤ４０抗体が選択される。前記炎症性疾患または自己免疫疾患は、Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）での治療に対して難治性であってもよい。
【０１６２】
炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を治療に抗ＣＤ４０抗体療法が選択されたら、そのヒト患者を抗ＣＤ４０抗体で治療することができる。従って、この方法は、（ｃ）ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）と特定されたヒト患者に、治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体を投与する、さらなる段階を含み得る。
【０１６３】
当業者は、好適な診断キットを使用して、炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を治療するための抗体療法を選択するこの方法を、容易に行うことができる。このキットは、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型の決定に好適な試薬を含むはずである。従って、本発明は、ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患を有するヒト患者を治療するための抗体療法を選択するためのキットも提供し、このキットは、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するための試薬を含む。
【０１６４】
「抗ＣＤ４０抗体で治療することができる」とは、ヒト患者（すなわち、炎症性疾患または自己免疫疾患を有する個人）が、抗ＣＤ４０抗体で治療されたとき、治療しようと努める炎症性疾患または自己免疫疾患に関して「陽性治療反応」（本明細書の他の箇所で定義するとおり）の恩恵を受けるであろうことを意味する。
【０１６５】
ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を、そのヒト患者から得た生体サンプルを使用して決定するための任意の方法が考慮される。
【０１６６】
例えば、本発明は、長さがヌクレオチド数１０以上であり、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型の決定に好適な配列である少なくとも１つのプローブを含むマイクロアレイを含む、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型の決定に使用するためのキットを提供する。標識されたＲＮＡまたはＤＮＡをそのアレイ上の相補プローブにハイブリダイズし、その後、レーザースキャニングによって検出する。そのアレイ上のそれぞれのプローブについてのハイブリダイゼーション強度を判定し、相対遺伝子発現レベルを表す定量値に変換する。当業者は、プローブの配列および長さについての選択を容易に行うことができる。ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８ＦおよびＶアロタイプをコードするヒト遺伝子およびｍＲＮＡのヌクレオチド配列は公知である。従って、当業者は、適切な実験条件下で、ターゲット配列のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定することができるプローブ（単数または複数）を選択することができる。
【０１６７】
機械合成法を使用するこれらのアレイの合成技術は、例えば、米国特許第５，３８４，２６１号（その全体が本明細書に参照として組み込まれている）に記載されている。平面のアレイ表面が好ましいが、アレイは、事実上いずれの形状の表面にも、または非常に多数の表面にでさえ作ることができる。アレイは、ビーズ、ゲル、ポリマー表面、繊維、例えば光ファイバー、ガラスまたは任意の他の好適な支持体上のペプチドまたは核酸であってもよい。米国特許第５，７７０，３５８号、同第５，７８９，１６２号、同第５，７０８，１５３号、同第６，０４０，１９３号および同第５，８００，９９２号参照（これらのおのおのは、すべての目的で、その全体が本明細書に取り入れられている）。アレイは、包括的装置の診断または他の操作に備えるような様式でパッケージすることができる。例えば、米国特許第５，８５６，１７４号および同第５，９２２，５９１号参照（本明細書に参照として組み込まれている）。
【０１６８】
例えば、本発明は、ＦｃγＲＩＩＩａのアミノ酸１５８をコードする遺伝子またはｍＲＮＡの領域のポリメラーゼ触媒増幅においてプライマーとして使用するために好適なオリゴヌクレオチドを含む、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型の決定に使用するためのキットも提供する。当業者は、プライマーの配列および長さの選択を容易に行うことができる。ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８ＦおよびＶアロタイプをコードするヒト遺伝子およびｍＲＮＡのヌクレオチド配列は公知である。従って、当業者は、適切な実験条件下でＦｃγＲＩＩＩのアミノ酸１５８をコードする遺伝子またはｍＲＮＡの領域を増幅することができるプライマーを選択することができる。その後、公知の方法を使用してその増幅配列の塩基配列を決定して、患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定することができる。
【０１６９】
ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するためのもう１つの方法は、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型に特有のＤＮＡフラグメンテーションを検出する核酸に基づく方法の使用である。アガロースゲルでの電気泳動を使用して分解すると、それぞれのＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型のＤＮＡは、特有のパターンを有する。従って、本発明は、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型の決定に好適な１つ以上の制限酵素を含む、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型の決定に使用するためのキットも提供する。好適な制限酵素は、当該技術分野において公知である（例えば、Ｋｏｅｎｅら、Ｂｌｏｏｄ，１９９７，Ｖｏｌ．９０，Ｎｏ．３，ｐ．１１０−１１１４参照）。
【０１７０】
本発明のキットは、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するためのそのキットの使用方法を示す説示も含み得る。本キットは、例えば、緩衝剤、保存薬またはタンパク質安定剤も含み得る。本キットのそれぞれの成分は、通常、個々の容器に封入され、それらの様々な容器のすべてが、ヒト患者のＦｃγＲＩＩＩａ−１５８遺伝子型を決定するためのそのキットの使用方法を示す説示と共に、単一のパッケージ内に存在する。
【０１７１】
本発明は、本明細書の他の箇所で説明するような、ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患を治療するための薬物の製造における抗ＣＤ４０抗体の使用を提供する。
【０１７２】
本発明の抗ＣＤ４０抗体は、ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患を予防または治療するために治療上有効である濃度で投与される。この目的を達成するために、当該技術分野において公知の様々な許容される担体および／または賦形剤を使用して、抗体を調合することができる。抗ＣＤ４０抗体は、非経口投与経路によって投与することができる。典型的に、これらの抗体は、静脈内注射または皮下的注射、いずれかによって投与される。この投与を遂行する方法は、通常の当業者に公知である。
【０１７３】
静脈内投与は、好ましくは、約半時間から１時間から約１０時間（１、２、３、４、５、６、７、８、９または１０時間未満）の期間にわたって注入により行われる。その後の注入剤は、例えば、約１から約４時間、約１から約３時間、もしくは約１から約２時間、または１時間未満を含めて、約１時間未満から約６時間の期間にわたって投与することができる。あるいは、ＣＨＩＲ−１２．１２などの抗ＣＤ４０抗体は、皮下投与することができる。
【０１７４】
本発明の医薬組成物は、その所期の投与経路に適合するように調合される。非経口用途に使用する溶液または懸濁液は、次の成分を含むことができる：滅菌希釈剤：例えば、注射用蒸留水、食塩溶液；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化物質、例えば、アスコルビン酸または重亜硫酸ナトリウム；キレート剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸；緩衝剤、例えば、酢酸塩、クエン酸塩またはリン酸塩、および張度を調整するための薬剤、例えば塩化ナトリウムまたはデキストロース。ｐＨは、塩酸または水酸化ナトリウムなどの酸または塩基で調整することができる。非経口製剤は、アンプル、使い捨て注射器、またはガラスもしくはプラスチック製の多数回用量用バイアルに封入することができる。
【０１７５】
抗ＣＤ４０抗体は、一般に、標準的な技術により、薬学的に許容される緩衝剤、例えば、滅菌食塩水、滅菌緩衝水、前述のものの組み合わせなど、の中に供給される。非経口投与できる薬剤を調製するための方法は、本明細書に参照として組み込まれているＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版；ペンシルバニア州、イートンのＭａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９０）に記載されている。例えば、本発明の方法での使用に好適な安定化された抗体医薬製剤を記載しているＷＯ  ９８／５６４１８も参照のこと。
【０１７６】
当業者は、投与する少なくとも１つの抗ＣＤ４０抗体の量を、過度の実験を伴うことなく、容易に決定することができる。少なくとも１つの抗ＣＤ４０抗体の投与方法およびそれぞれの量に影響を及ぼす因子としては、疾患の重症度、疾患の履歴、および治療を受ける個人の年齢、身長、体重、健康および体調が挙げられるが、これらに限定されない。同様に投与する抗ＣＤ４０抗体の量は、投与方法、およびその被検者が、この抗腫瘍剤の１回用量を受けるのか、多数回用量を受けるのかに依存するであろう。一般に、治療を受ける被検者の体重が増すほど、高い抗ＣＤ４０抗体用量が好ましい。
【０１７７】
投与される抗ＣＤ４０抗体の用量は、約０．００３ｍｇ／ｋｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約４０ｍｇ／ｋｇ、約０．０１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約３０ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ、約３ｍｇ／ｋｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ、約５ｍｇ／ｋｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ、または約７ｍｇ／ｋｇ〜約１２ｍｇ／ｋｇの範囲内である。
【０１７８】
従って、例えば、前記用量は、０．３ｍｇ／ｋｇ、０．５ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇ、１．５ｍｇ／ｋｇ、２ｍｇ／ｋｇ、２．５ｍｇ／ｋｇ、３ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇ、７ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇ、２５ｍｇ／ｋｇ、３０ｍｇ／ｋｇ、３５ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、４５ｍｇ／ｋｇもしくは５０ｍｇ／ｋｇ、または約０．３ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇの範囲内に入るような他の用量であり得る。
【０１７９】
治療有効量の抗体での被検者の治療としては、単回治療を挙げることができ、または、好ましくは、一連の治療を挙げることができる。従って、本発明のもう１つの実施形態において、本方法は、抗ＣＤ４０抗体の多数回用量の投与を含む。本方法は、抗ＣＤ４０抗体を含む医薬組成物の１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０回以上の治療有効用量の投与を含むことができる。当業者は、抗ＣＤ４０抗体を含む医薬組成物の多数回用量の投与の頻度および継続期間を、過度の実験を伴うことなく、容易に決定することができる。抗ＣＤ４０抗体の同じ治療有効用量を治療期間の間ずっと投与し得る。あるいは、治療期間の経過とともに、抗ＣＤ４０抗体の異なる治療有効量を投与し得る。
【０１８０】
好ましい例では、被検者を約１から１０週間の間、好ましくは約２から８週間の間、さらに好ましくは３から７週間の間、さらにいっそう好ましくは約４、５または６週間にわたって、週一度、約０．１から２０ｍｇ／（体重１ｋｇ）の間の範囲の抗ＣＤ４０抗体で治療する。治療は、再発を予防するために年２回もしくは年１回行ってもよいし、または再発の徴候に基づいて行ってもよい。治療に使用する抗体の有効量は、特定の治療の経過につれて増加する場合があり、または減少する場合があることも理解されるであろう。用量の変化は、本明細書において説明するような診断アッセイの結果から生じるおよび明らかになる場合もある。
【０１８１】
従って、一つの実施形態における投薬計画は、治療期間の１、８、１５および２２日目での少なくとも１つの抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量の初回投与を含む。もう１つの実施形態における投薬計画としては、毎日、または治療期間の中のある週の１、３、５および７日目に少なくとも１つの抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量の初回投与を有する投薬計画；治療期間中のある週の１日目及び３−４日目での少なくとも１つの抗ＣＤ４０抗体の治療有効量の初回投与を含む投薬計画；ならびに治療期間中のある週の１日目での少なくとも１つの抗ＣＤ４０抗体の治療有効量の初回投与を含む投与計画が挙げられる。治療期間は、１週間、２週間、３週間、１ケ月、２ヶ月、３カ月、６ヵ月または１年を含むことができる。治療期間は、続いてよく、または互いに１週間、２週間、３カ月、６ヵ月もしくは１年、離れていてもよい。
【０１８２】
他の実施形態において、本明細書の他の箇所で定義するような抗ＣＤ４０抗体の初期治療有効用量は、より低い投薬範囲内（すなわち、約０．００３ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇ）であってよく、より高い投薬範囲内（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇ）に入る用量がそれに続く。
【０１８３】
代替実施形態において、本明細書の他の箇所で定義するような初期治療有効用量は、より高い用量範囲内（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇ）であってよく、より低い投薬範囲内（すなわち、約０．００３ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇ）に入る用量がそれに続く。従って、本発明の一部の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体療法は、その療法が必要な被検者に抗体の「負荷投与量」を投与することによって開始することができる。「負荷投与量」とは、被検者に投与される抗ＣＤ４０抗体の初期用量を意味し、この投与される抗体の用量は、より高い投薬範囲内（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇ）に入る。「負荷投与量」は、単回投与（例えば、抗体をＩＶ投与する場合には単回注入）として投与してもよいし、または全部の「負荷投与量」を約２４時間以内に投与するのであれば、多数回投与（例えば、抗体をＩＶ投与する場合には多数回注入）として投与してもよい。「負荷投与量」の投与後、抗ＣＤ４０抗体の１つ以上の追加の治療有効用量を被検者に投与する。後続の治療有効用量は、例えば、週１回の投薬スケジュールに従って、または２週間に１回、３週間に１回もしくは４週間に１回、投与することができる。そうした実施形態において、後続の治療有効用量は、一般に、より低い投薬範囲内（すなわち、約０．００３ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇ）に入る。
【０１８４】
あるいは、一部の実施形態では、「負荷投与量」の後、抗ＣＤ４０抗体の後続の治療有効用量を、該抗体の治療有効用量を１ケ月に１回、６週間に１回、２ヶ月に１回、１０週間に１回、３カ月に１回、１４週間に１回、４ヶ月に１回、１８週間に１回、５ヶ月に１回、２２週間に１回、６ヶ月に１回、７ヶ月に１回、８ヶ月に１回、９ヶ月に１回、１０ヶ月に１回、１１ヶ月に１回、または１２ヶ月に１回投与する「維持スケジュール」に従って投与する。そうした実施形態において、前記抗ＣＤ４０抗体の治療有効用量は、特にその後続の用量をより頻繁な間隔で、例えば２週間に１回から１ケ月に１回、投与するときには、より低い投薬範囲内（すなわち、約０．００３ｍｇ／ｋｇから約２０ｍｇ／ｋｇ）に入り、または特にその後続の用量を低頻度の間隔で投与するとき、例えば後続の用量を約１ヶ月から約１２ヶ月空けて投与する場合には、より高い投薬範囲内（すなわち、約２０ｍｇ／ｋｇから約５０ｍｇ／ｋｇ）に入る。
【０１８５】
本発明の方法において使用するための本明細書において説明する医薬組成物中に存在する抗ＣＤ４０抗体は、天然のものであってよく、または組換え技術によって得てもよく、ならびに任意の源（例えば、マウス、ラット、霊長類、ブタおよびヒトなどの哺乳動物源を含む）からのものであってよい。好ましくは、そうしたポリペプチドは、ヒト源由来のものであり、さらに好ましくは、ハイブリドーマ細胞株からの組換えヒトタンパク質である。
【０１８６】
本発明の方法において有用な医薬組成物は、本明細書の他の箇所で説明するような、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体の生物活性変異体を含み得る。
【０１８７】
本明細書において説明する結合特性を有する抗ＣＤ４０抗体を治療活性成分として含む任意の医薬組成物を本発明の方法において使用することができる。従って、抗ＣＤ４０抗体の１つ以上を含む液体、凍結乾燥またはスプレー乾燥組成物を、本発明の方法に従って被検者に後に投与するための水性または非水性溶液または懸濁液として調製することができる。これらの組成物のそれぞれが、少なくとも１つの抗ＣＤ４０抗体を治療または予防活性成分として含むであろう。「治療または予防活性成分」とは、抗ＣＤ４０抗体が、組成物に特異的に組み込まれて、その医薬組成物が被験者に投与されたときにその被験者の疾患または状態の治療、予防または診断に対して望ましい治療または予防反応を生じさせることを意味する。好ましくは、前記医薬組成物は、調製および保管中のタンパク質の安定性および生物活性の喪失に関連した問題を最少にするために適切な安定剤、充填剤または両方を含む。
【０１８８】
本発明の抗ＣＤ４０抗体を含む医薬組成物に製剤化剤を添加してもよい。これらの製剤化剤としては、油、ポリマー、ビタミン、炭水化物、アミン酸、塩、緩衝剤、アルブミン、界面活性剤または充填剤を挙げることができるが、これらに限定されない。好ましくは、炭水化物としては、糖または糖アルコール、例えば、単糖類、二糖類もしくは多糖類または水溶性グルカンが挙げられる。糖類またはグルカンとしては、フルクトース、グルコース、マンノース、ソルボース、キシロース、マルトース、スクロース、デキストラン、プルラン、デキストリン、αおよびβシクロデキストリン、可溶性デンプン、ヒドロキシエチルデンプンならびにカルボキシメチルセルロース、またはこれらの混合物を挙げることができる。「糖アルコール」は、カルボキシル基を有するＣ４からＣ８炭化水素と定義され、ガラクチトール、イノシトール、マンニトール、キシリトール、ソルビトール、グリセロールおよびアラビトールを含む。これらの糖または糖アルコールは、個々に使用してもよいし、または併用してもよい。その糖または糖アルコール濃度は、１．０％と７％  ｗ／ｖの間、さらに好ましくは２．０％と６％  ｗ／ｖの間である。好ましくは、アミノ酸としては、カルニチン、アルギニンおよびベタインの左旋性（Ｌ）形が挙げられるが、他のアミノ酸を添加してもよい。好ましいポリマーとしては、２，０００と３，０００の間の平均分子量を有するポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）、または３，０００と５，０００の間の平均分子量を有するポリエチレングリコール（ＰＥＧ）が挙げられる。本製剤に添加することができる界面活性剤は、ＥＰ第２７０，７９９号および同第２６８，１１０号に示されている。
【０１８９】
加えて、ポリマーへの共有結合性コンジュゲーションにより抗体を化学的に修飾して、例えば、それらの循環半減期を増加することができる。好ましいポリマー、およびペプチドにそれらを取り付ける方法は、米国特許第４，７６６，１０６号、同第４，１７９，３３７号、同第４，４９５，２８５号および同第４，６０９，５４６号に示されており、それらは、すべて、それら全体が本明細書に参照として組み込まれている。好ましいポリマーは、ポリオキシエチル化ポリオールおよびポリエチレングリコール（ＰＥＧ）である。ＰＥＧは、室温で水溶性であり、一般式：Ｒ（Ｏ−−ＣＨ２−−ＣＨ２）ｎＯ−−Ｒを有し、この式中のＲは、水素であるか、保護基、例えばアルキルまたはアルカノール基である。好ましくは、前記保護基は、１個〜８個の間の炭素を有し、さらに好ましくはメチルである。記号ｎは、正の整数、好ましくは１〜１０００の間、さらに好ましくは２〜５００の間である。ＰＥＧは、１，０００〜４０，０００の間、さらに好ましくは２，０００〜２０，０００の間、最も好ましくは３，０００〜１２，０００の間の好ましい平均分子量を有する。好ましくは、ＰＥＧは、少なくとも１つのヒドロキシ基を有し、さらに好ましくは、末端ヒドロキシ基を有する。好ましくは、このヒドロキシ基が活性化されて、阻害因子上の遊離アミノ酸と反応する。しかし、それらの反応性基のタイプおよび量を変化させて、本発明の共有結合性共役化ＰＥＧ／抗体を獲得することができることは、理解されるであろう。
【０１９０】
水溶性ポリオキシエチル化ポリオールも本発明において有用である。それらとしては、ポリオキシエチル化ソルビトール、ポリオキシエチル化グルコース、ポリオキシエチル化グリセロール（ＰＯＧ）などが挙げられる。ＰＯＧが好ましい。１つの理由は、ポリオキシエチル化グリセロールのグリセロール骨格が、例えば、動物およびヒトにおいて、モノ、ジ、トリグリセリドで、自然に発生するのと同じ骨格であるからである。従って、この分枝は、体内で必ずしも外来因子と見られない。ＰＯＧは、ＰＥＧと同じ範囲の好ましい分子量を有する。ＰＯＧの構造は、Ｋｎａｕｆら（１９８８）Ｊ．Ｂｉｏ．Ｃｈｅｍ．２６３：１５０６４−１５０７０に示されており、ＰＯＧ／ＩＬ−２共役の考察は、米国特許第４，７６６，１０６号において見出せる（これらは、両方とも、それら全体が本明細書に参照として組み込まれている）。
【０１９１】
循環半減期を増加させるためのもう１つのドラッグデリバリーシステムは、リポソームである。リポソームデリバリーシステムの作製方法は、Ｇａｂｉｚｏｎら（１９８２）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ４２：４７３４；Ｃａｆｉｓｏ（１９８１）Ｂｉｏｃｈｅｍ  ＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａ  ６４９：１２９；およびＳｚｏｋａ（１９８０）Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｅｎｇ．９：４６７において論じられている。他のドラッグデリバリーシステムは、当該技術分野において公知であり、例えば、Ｐｏｚｎａｎｓｋｙら（１９８０）Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（Ｒ．Ｌ．Ｊｕｌｉａｎｏ，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ，Ｎ．Ｙ．）ｐｐ．２５３−３１５；Ｐｏｚｎａｎｓｋｙ（１９８４）Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｖｓ  ３６：２７７に記載されている。
【０１９２】
医薬組成物に添合される製剤化剤は、抗ＣＤ４０抗体の安定性に備えなければならない。すなわち、抗ＣＤ４０抗体は、その物理的および／または化学的安定性を保持しなければならず、望ましい生物活性、すなわち、本明細書において上で定義したアンタゴニスト活性（Ｔ細胞により刺激される正常ヒト末梢Ｂ細胞による免疫グロブリン分泌の阻害；ジャーカットＴ細胞により刺激される正常ヒト末梢Ｂ細胞の生存および／または増殖の阻害；ＣＤ４０Ｌ発現性細胞または可溶性ＣＤ４０リガンド（ｓＣＤ４０Ｌ）により刺激される正常ヒト末梢Ｂ細胞の生存および／または増殖の阻害；ｓＣＤ４０Ｌまたは固相ＣＤ４０Ｌにより刺激される任意の細胞における「生存」抗アポトーシス細胞内シグナルの阻害；ｓＣＤ４０Ｌまたは固相ＣＤ４０Ｌとのライゲーションに基づく任意の細胞におけるＣＤ４０シグナル伝達の阻害；ならびに本明細書の他の箇所で述べるようなヒト悪性Ｂ細胞の増殖の阻害を含むが、これらに限定されない）のうちの１つ以上を有さなければならない。
【０１９３】
タンパク質の安定性をモニターするための方法は、当該技術分野において公知である。例えば、Ｊｏｎｅｓ（１９９３）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖ．１０：２９−９０；Ｌｅｅ，ｅｄ．（１９９１）Ｐｅｐｔｉｄｅ  ａｎｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ）；および本明細書において下で開示する安定性アッセイを参照のこと。一般に、タンパク質の安定性は、選択された温度で特定の期間にわたって測定される。好ましい実施形態において、安定な抗体医薬製剤は、室温（約２５℃）で保管されたとき、少なくとも１ケ月、少なくとも３カ月、もしくは少なくとも６ヵ月間の安定性に備えており、および／または約２−８℃で、少なくとも６ヵ月、少なくとも９ヵ月、少なくとも１２ヶ月、少なくとも１８ヶ月、少なくとも２４ヶ月間安定である。
【０１９４】
医薬組成物に調合されたときの抗体などのタンパク質は、その医薬組成物の沈殿、凝集および／または変性の目に見える徴候（すなわち、変色もしくは透明性喪失）または測定可能な徴候（例えば、サイズ排除クロマトグラフィー（ＳＥＣ）もしくはＵＶ光散乱を使用）を示さない場合、所定の時点でその物理的安定性を保持するとみなされる。化学的安定性に関して、医薬組成物に調合されたときの抗体などのタンパク質は、化学的安定性の測定値が、その医薬組成物中のタンパク質（すなわち、抗体）が対象となる生物活性を保持することを示す場合、所定の時点でその化学的安定性を保持するとみなされる。化学的安定性の変化をモニターするための方法は、当該技術分野において周知であり、例えばＳＤＳ−ＰＡＧＥ、ＳＥＣおよび／またはマトリックス支援レーザー脱離イオン化／ 飛行時間型質量分析を使用するクリッピングからの結果、ならびに例えばイオン交換クロマトグラフィーを使用する（例えば、脱アミノ化に付随する）分子電荷の変化に関連した分解など、タンパク質の化学的に改変された形態を検出する方法を含むが、これらに限定されない。例えば、本明細書において下で開示する方法を参照のこと。
【０１９５】
医薬組成物に調合されたときの抗ＣＤ４０抗体は、ある時点での所望の生物活性が、その所望の生物活性に好適なアッセイで判定して、その医薬組成物を調製した時点で示した所望の生物活性の約３０％以内、好ましくは約２０％以内である場合、その所定の時点で所望の生物活性を保持するとみなされる。抗ＣＤ４０抗体の所望の生物活性を測定するためのアッセイは、本明細書中の実施例において説明するとおり行うことができる。Ｓｃｈｕｌｔｚｅら（１９９８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９２：８２００−８２０４；Ｄｅｎｔｏｎら（１９９８）Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．２：６−１５；Ｅｖａｎｓら（２０００）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６４：６８８−６９７；Ｎｏｅｌｌｅ（１９９８）Ａｇｅｎｔｓ  Ａｃｔｉｏｎｓ  Ｓｕｐｐｌ．４９：１７−２２；Ｌｅｄｅｒｍａｎら（１９９６）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｈｅｍａｔｏｌ．３：７７−８６；Ｃｏｌｉｇａｎら（１９９１）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １３：１２；Ｋｗｅｋｋｅｂｏｏｍら（１９９３）Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ７９：４３９−４４４；ならびに米国特許第５，６７４，４９２号および同第５，８４７，０８２号（本明細書に参照として組み込まれている）に記載されているアッセイも参照のこと。
【０１９６】
本発明の一部の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、液体医薬組成物に調合される。前記抗ＣＤ４０抗体は、本明細書において上で開示したものをはじめとする、当該技術分野において公知の任意の方法を使用して調製することができる。一つの実施形態において、前記抗ＣＤ４０抗体は、ＣＨＯ細胞株において組換え生産される。
【０１９７】
抗ＣＤ４０抗体をその調合前に保管しなければならない場合、例えば、−２０℃以下で凍結し、その後、さらなる調合のために室温で解凍する。本液体製剤は、治療有効量の抗ＣＤ４０抗体を含む。本製剤中の存在するその抗体の量は、投与経路および所望の用量容積を考慮に入れる。
【０１９８】
このように、本液体医薬組成物は、抗ＣＤ４０抗体を約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約５０．０ｍｇ／ｍＬ、約０．５ｍｇ／ｍＬ〜約４０．０ｍｇ／ｍＬ、約１．０ｍｇ／ｍＬ〜約３０．０ｍｇ／ｍＬ、約５．０ｍｇ／ｍＬ〜約２５．０ｍｇ／ｍＬ、約５．０ｍｇ／ｍＬ〜約２０．０ｍｇ／ｍＬ、または約１５．０ｍｇ／ｍＬ〜約２５．０ｍｇ／ｍＬの濃度で含む。一部の実施形態において、本液体医薬組成物は、抗ＣＤ４０抗体を約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約５．０ｍｇ／ｍＬ、約５．０ｍｇ／ｍＬ〜約１０．０ｍｇ／ｍＬ、約１０．０ｍｇ／ｍＬ〜約１５．０ｍｇ／ｍＬ、約１５．０ｍｇ／ｍＬ〜約２０．０ｍｇ／ｍＬ、約２０．０ｍｇ／ｍＬ〜約２５．０ｍｇ／ｍＬ、約２５．０ｍｇ／ｍＬ〜約３０．０ｍｇ／ｍＬ、約３０．０ｍｇ／ｍＬ〜約３５．０ｍｇ／ｍＬ、約３５．０ｍｇ／ｍＬ〜約４０．０ｍｇ／ｍＬ、約４０．０ｍｇ／ｍＬ〜約４５．０ｍｇ／ｍＬ、または約４５．０ｍｇ／ｍＬ〜約５０．０ｍｇ／ｍＬの濃度で含む。他の実施形態において、本液体組成物は、抗ＣＤ４０抗体を約１５．０ｍｇ／ｍＬ、約１６．０ｍｇ／ｍＬ、約１７．０ｍｇ／ｍＬ、約１８．０ｍｇ／ｍＬ、約１９．０ｍｇ／ｍＬ、約２０．０ｍｇ／ｍＬ、約２１．０ｍｇ／ｍＬ、約２２．０ｍｇ／ｍＬ、約２３．０ｍｇ／ｍＬ、約２４．０ｍｇ／ｍＬ、または約２５．０ｍｇ／ｍＬの濃度で含む。本液体医薬組成物は、抗ＣＤ４０抗体と、約ｐＨ５．０から約ｐＨ７．０の範囲内（約ｐＨ５．０、５．１、５．２、５．３、５．４、５．５、５．６、５．７、５．８、５．９、６．０、６．１、６．２、６．３、６．４、６．５、６．６、６．７、６．８、６．９、７．０、および約ｐＨ５．０から約ｐＨ７．０の範囲内の他のそうした値を含む）に製剤のｐＨを維持する緩衝剤とを含む。一部の実施形態において、前記緩衝剤は、本製剤のｐＨを約ｐＨ５．０〜約ｐＨ６．５、約ｐＨ５．０〜約ｐＨ６．０、約ｐＨ５．０〜約ｐＨ５．５、約ｐＨ５．５〜約ｐＨ７．０、約ｐＨ５．５〜約ｐＨ６．５、または約ｐＨ５．５〜約ｐＨ６．０の範囲内に維持する。
【０１９９】
約ｐＨ５．０から約ｐＨ７．０の範囲内に本液体抗ＣＤ４０抗体製剤のｐＨを維持する任意の好適な緩衝剤を、その抗体の物理化学的安定性および所望の活性が、本明細書において上で述べたとおり保持される限り、本製剤において使用することができる。好適な緩衝剤としては、従来の酸およびそれらの塩（この場合の対イオンは、例えば、ナトリウム、カリウム、アンモニウム、カルシウムまたはマグネシウムであり得る）が挙げられるが、これらに限定されない。本医薬液体製剤を緩衝するために使用することができる従来の酸およびそれらの塩の例としては、コハク酸またはコハク酸塩、クエン酸またはクエン酸塩、酢酸または酢酸塩、酒石酸または酒石酸塩、リン酸またはリン酸塩、グルコン酸またはグルコン酸塩、グルタミン酸またはグルタミン酸塩、アスパラギン酸またはアスパラギン酸塩、マレイン酸またはマレイン酸塩、およびリンゴ酸またはリンゴ酸塩が挙げられるが、これらに限定されない。前記製剤中の緩衝剤濃度は、約１ｍＭから約５０ｍＭ（約１ｍＭ、２ｍＭ、５ｍＭ、８ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、または約１ｍＭから約５０ｍＭの範囲内の他のそうした値を含む）であり得る。一部の実施形態において、本製剤中の緩衝剤濃度は、約５ｍＭから約１５ｍＭ（約５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭ、１５ｍＭ、または約５ｍＭから約１５ｍＭの範囲内の他のそうした値を含む）である。
【０２００】
本発明の一部の実施形態において、本液体医薬製剤は、治療有効量の抗ＣＤ４０抗体と、本製剤のｐＨを約ｐＨ５．０から約ｐＨ７．０、好ましくは約ｐＨ５．０から約ｐＨ６．５に維持する濃度のコハク酸塩緩衝剤またはクエン酸塩緩衝剤とを含む。「コハク酸塩緩衝剤」または「クエン酸塩緩衝剤」とは、それぞれ、コハク酸の塩またはクエン酸の塩を含む緩衝剤を意味する。好ましい実施形態において、コハク酸塩またはクエン酸対イオンは、ナトリウムカチオンであり、従って、前記緩衝剤は、それぞれ、コハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムである。しかし、任意のカチオンが有効であると予想される。他の可能なコハク酸またはクエン酸カチオンとしては、カリウム、アンモニウム、カルシウムおよびマグネシウムが挙げられるが、これらに限定されない。上で述べたように、本製剤中のコハク酸塩またはクエン酸塩緩衝剤濃度は、約１ｍＭから約５０ｍＭ（約１ｍＭ、２ｍＭ、５ｍＭ、８ｍＭ、１０ｍＭ、１５ｍＭ、２０ｍＭ、２５ｍＭ、３０ｍＭ、３５ｍＭ、４０ｍＭ、４５ｍＭ、５０ｍＭ、または約１ｍＭから約５０ｍＭの範囲内の他のそうした値を含む）であり得る。一部の実施形態において、前記製剤中の緩衝剤濃度は、約５ｍＭから約１５ｍＭ（約５ｍＭ、６ｍＭ、７ｍＭ、８ｍＭ、９ｍＭ、１０ｍＭ、１１ｍＭ、１２ｍＭ、１３ｍＭ、１４ｍＭ、または１５ｍＭを含む）である。他の実施形態において、本液体医薬製剤は、約０．１ｍｇ／ｍＬから約５０．０ｍｇ／ｍＬ、または約５．０ｍｇ／ｍＬから約２５．０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＣＤ４０抗体と、約１ｍＭから約２０ｍＭ、約５ｍＭから約１５ｍＭ、好ましくは約１０ｍＭの濃度のコハク酸塩またはクエン酸塩緩衝剤、例えばコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム、とを含む。
【０２０１】
液体医薬製剤がほぼ等張性であることが望ましい場合、抗ＣＤ４０抗体および緩衝剤を含むその液体医薬製剤は、その製剤をほぼ等張性にするために十分な量の等張化剤を含むことができる。「ぼほ等張性」とは、その水性製剤が、約２４０ｍｍｏｌ／ｋｇ〜約３６０ｍｍｏｌ／ｋｇ、好ましくは２４０〜３４０ｍｍｏｌ／ｋｇ、さらに好ましくは約２５０〜約３３０ｍｍｏｌ／ｋｇ、さらにいっそう好ましくは約２６０〜約３２０ｍｍｏｌ／ｋｇ、さらにいっそう好ましくは約２７０〜約３１０ｍｍｏｌ／ｋｇの浸透圧モル濃度を有することを意味する。溶液の等張性の判定方法は、当業者には公知である。例えば、Ｓｅｔｎｉｋａｒら（１９５９）Ｊ．Ａｍ．Ｐｈａｒｍ．Ａｓｓｏｃ．４８：６２８参照。
【０２０２】
当業者は、医薬組成物において等張性を生じさせることに役立つ、薬学的に許容される様々な溶質を熟知している。等張化剤は、本発明の液体医薬製剤の浸透圧を体液の浸透圧とほぼ等しい値に合わせることができるいずれの試薬であってもよい。生理学的に許容される等張化剤を使用することが望ましい。従って、治療有効量の抗ＣＤ４０抗体および緩衝液を含む液体医薬製剤は、等張性を生じさせるために使用することができる成分、例えば、塩化ナトリウム；アミノ酸、例えばアラニン、バリンおよびグリシン；糖および糖アルコール（ポリオール）（グルコース、デキストロース、フルクトース、スクロース、マルトース、マンニトール、トレハロース、グリセロール、ソルビトールおよびキシリトールを含むが、これらに限定されない）；酢酸、他の有機酸またはそれらの塩、ならびに比較的少量のクエン酸塩またはリン酸塩をさらに含み得る。通常の当業者は、本液体製剤の最適な等張性を生じさせるために好適なさらなる試薬を知っていよう。
【０２０３】
一部の好ましい実施形態において、抗ＣＤ４０抗体および緩衝剤を含む液体医薬製剤は、塩化ナトリウムを等張化剤としてさらに含む。前記調合物中の塩化ナトリウムの濃度は、等張性への他の成分の寄与に依存するであろう。一部の実施形態において、塩化ナトリウムの濃度は、約５０ｍＭ〜約３００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約２５０ｍＭ、約５０ｍＭ〜約２００ｍＭ、約５０ｍＭ〜約１７５ｍＭ、約５０ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約７５ｍＭ〜約１７５ｍＭ、約７５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１００ｍＭ〜約１７５ｍＭ、約１００ｍＭ〜約２００ｍＭ、約１００ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１２５ｍＭ〜約１７５ｍＭ、約１２５ｍＭ〜約１５０ｍＭ、約１３０ｍＭ〜約１７０ｍＭ、約１３０ｍＭ〜約１６０ｍＭ、約１３５ｍＭ〜約１５５ｍＭ、約１４０ｍＭ〜約１５５ｍＭ、または約１４５ｍＭ〜約１５５ｍＭである。１つのそうした実施形態において、塩化ナトリウムの濃度は、約１５０ｍＭである。他のそうした実施形態において、塩化ナトリウムの濃度は、約１５０ｍＭであり、緩衝剤は、約５ｍＭから約１５ｍＭの濃度のコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム緩衝剤であり、その液体医薬製剤は、治療有効量の抗ＣＤ４０抗体を含み、ならびにその製剤は、約ｐＨ５．０から約ｐＨ７．０、約ｐＨ５．０から約ｐＨ６．０、または約ｐＨ５．５から約ｐＨ６．５のｐＨを有する。他の実施形態において、液体医薬製剤は、約ｐＨ５．５のｐＨで、約０．１ｍｇ／ｍＬから約５０．０ｍｇ／ｍＬまたは約５．０ｍｇ／ｍＬから約２５．０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＣＤ４０抗体と、約１５０ｍＭの塩化ナトリウムと、約１０ｍＭのコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムとを含む。
【０２０４】
本発明の液体医薬製剤の加工中の凍結解凍または機械的剪断に起因するタンパク質分解は、本製剤に界面活性剤を添合して溶液−空気界面の表面張力を低下させることによって抑制することができる。従って、一部の実施形態において、本液体医薬製剤は、治療有効量の抗ＣＤ４０抗体および緩衝剤を含み、さらに、界面活性剤を含む。他の実施形態において、本液体医薬製剤は、抗ＣＤ４０抗体、緩衝剤および等張化剤を含み、さらに、界面活性剤を含む。
【０２０５】
利用される代表的な界面活性剤は、ポリオキシエチレンソルビトールエステル、例えばポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ  ８０）およびポリソルベート２０（Ｔｗｅｅｎ  ２０）；ポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレンエステル、例えばＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ６８；ポリオキシエチレンアルコール、例えばＢｒｉｊ  ３５；シメチコン；ポリエチレングリコール、例えばＰＥＧ４００；リゾホスファチジルコリン；ならびにポリエチレン−ｐ−ｔ−オクチルフェノール、例えばＴｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００をはじめとする、非イオン性界面活性剤である。界面活性剤または乳化剤による医薬の古典的安定化は、例えば、Ｌｅｖｉｎｅら（１９９１）Ｊ．Ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈｎｏｌ．４５（３）：１６０−１６５（本明細書に参照として組み込まれている）に記載されている。本発明の実施の際に利用される好ましい界面活性剤は、ポリソルベート８０である。界面活性剤を含める場合、それは、一般に、約０．００１％〜約１．０％（ｗ／ｖ）、約０．００１％〜約０．５％、約０．００１％〜約０．４％、約０．００１％〜約０．３％、約０．００１％〜約０．２％。約０．００５％〜約０．５％、約０．００５％〜約０．２％、約０．０１％〜約０．５％、約０．０１％〜約０．２％。約０．０３％〜約０．５％、約０．０３％〜約０．３％、約０．０５％〜約０．５％、または約０．０５％〜約０．２％の量で添加する。
【０２０６】
従って、一部の実施形態において、本液体医薬製剤は、治療有効量の抗ＣＤ４０抗体を含み、緩衝剤は、約１ｍＭから約５０ｍＭ、約５ｍＭから約２５ｍＭ、または約５ｍＭから約１５ｍＭの濃度のコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム緩衝剤であり、この製剤は、約ｐＨ５．０から約ｐＨ７．０、約ｐＨ５．０から約ｐＨ６．０、または約ｐＨ５．５から約ｐＨ６．５のｐＨを有し；ならびにこの製剤は、約０．００１％から約１．０％または約０．００１％から約０．５％の量の界面活性剤、例えばポリソルベート８０、をさらに含む。そうした製剤は、約５０ｍＭから約３００ｍＭ、約５０ｍＭから約２００ｍＭ、または約５０ｍＭから約１５０ｍＭの濃度の等張化剤、例えば塩化ナトリウム、を場合によっては含むことがある。他の実施形態において、本液体医薬製剤は、約２０．０ｍｇ／ｍＬをはじめとする、約０．１ｍｇ／ｍＬ〜約５０．０ｍｇ／ｍＬまたは約５．０ｍｇ／ｍＬ〜約２５．０ｍｇ／ｍＬの濃度の抗ＣＤ４０抗体；約１５０ｍＭの塩化ナトリウムをはじめとする、約５０ｍＭ〜約２００ｍＭの塩化ナトリウム；約１０ｍＭのコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウムをはじめとする、約５ｍＭ〜約２０ｍＭのコハク酸ナトリウムまたはクエン酸ナトリウム；約１５０ｍＭをはじめとする、約５０ｍＭ〜約２００ｍＭの濃度の塩化ントリウム；ならびに場合により、約０．００１％から約０．５％をはじめとする、約０．０１％〜約１．０％の量の界面活性剤、例えばポリソルベートを含み、この場合の液体医薬製剤は、約ｐＨ５．０〜約ｐＨ７．０、約ｐＨ５．０〜約ｐＨ６．０、約ｐＨ５．０〜約ｐＨ５．５、約ｐＨ５．５〜約ｐＨ６．５、または約ｐＨ５．５〜約ｐＨ６．０のｐＨを有する。
【０２０７】
本液体医薬製剤には、本明細書において上で述べたいずれの保存薬および他の担体、賦形剤または安定剤も本質的に含み得ない。あるいは、本製剤は、抗ＣＤ４０抗体の物理化学的安定性に悪影響を与えないことを条件として、本明細書において上で説明した１つ以上の保存薬、例えば、抗菌剤、薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤を含み得る。許容される担体、賦形剤および安定剤の例としては、追加の緩衝剤、補助溶媒、界面活性剤、抗酸化物質（アスコルビン酸およびメチオニンを含む）、キレート剤、例えば、ＥＤＴＡ、金属錯体（例えば、Ｚｎ−タンパク質錯体）および生体分解性ポリマー、例えばポリエステルが挙げられるが、これらに限定されない。薬学的に許容される担体、安定剤およびｉｓｏｍｏｌｙｔｅの調合および選択の詳細な考察は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（第１８版；ペンシルバニア州、イートンのＭａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、１９９０）（本明細書に参照として組み込まれている）において見出すことができる。
【０２０８】
「担体」は、本明細書で用いる場合、利用される用量および濃度でそれに暴露される細胞または哺乳動物にとって非毒性である、薬学的に許容される担体、賦形剤または安定剤を包含する。多くの場合、生理学的に許容される担体は、水性ｐＨ緩衝溶液である。生理学的に許容される担体の例としては、緩衝剤、例えばリン酸塩、クエン酸塩、コハク酸塩および他の有機酸；アルコルビン酸をはじめとする抗酸化物質；低分子量（残基数約１０未満）ポリペプチド；タンパク質、例えば血清アルブミン、ゼラチンもしくは免疫グロブリン；親水性ポリマー、例えばポリビニルピロリドン；アミノ酸、例えばグリシン、グルタミン、アスパラギン、アルギニンもしくはリシン；単糖類、二糖類および他の炭水化物（グルコース、マンノースもしくはデキストリンを含む）；キレート剤、例えばＥＤＴＡ；糖アルコール、例えばマンニトールもしくはソルビトール；塩形成性対イオン、例えばナトリウム；ならびに／または非イオン性界面活性剤、例えばＴＷＥＥＮ、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）およびＰｌｕｒｏｎｉｃｓが挙げられる。
【０２０９】
１つ以上のさらなる治療薬「と併用での」投与は、同時（同時発生的）投与および任意の順番での逐次投与を包含する。
【０２１０】
本明細書において説明する液体医薬製剤または他の医薬組成物を調製した後、それを凍結乾燥させて分解を防ぐことができる。液体組成物を凍結乾燥させる方法は、通常の当業者には公知である。使用直前、その組成物を、追加の成分を含み得る滅菌希釈剤（例えばリンガー溶液、蒸留水または滅菌食塩水）で、再構成することができる。好ましくは、再構成し次第、当業者に公知の方法を使用してその組成物を被検者に投与する。
【０２１１】
一部の実施形態において、抗ＣＤ４０抗体は、炎症性および／または自己免疫疾患のための少なくとも１つの他の公知の療法と併用で投与することができる。そうした療法としては、外科手術または外科手術手順（例えば、脾臓摘出術、リンパ節切除術、甲状腺切除術、血漿分離交換法、白血球フェレーシス、細胞、組織または臓器移植、腸の処置、臓器潅流など）；放射線療法；ステロイド療法および非ステロイド療法などの療法；ホルモン療法；サイトカイン療法；外皮用剤（例えば、アレルギー、接触皮膚炎および乾癬などの皮膚の状態を治療するために使用される局所用薬剤）での療法；免疫抑制療法；ならびに他の抗炎症性モノクローナル抗体療法などが挙げられるが、これらに限定されない。本発明の方法が、併用治療計画を含む場合、これらの療法は、同時に施される場合があり、すなわち、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合性フラグメントは、他の療法と同時発生的に投与されるか、同じ時間枠内で投与される（すなわち、これらの療法は、同時に進行するが、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合性フラグメントは、他の療法と全く同じ時間には投与されない）。あるいは、本発明のアンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体またはその抗原結合フラグメントは、他の療法の前に投与されてよく、または後に投与され得る。異なる療法の逐次的施与は、治療を受ける被検者が、第一の治療コースに反応して、寛解または再発の可能性を減少させるかどうかにかかわらず、行うことができる。
【０２１２】
このように、抗ＣＤ４０抗体は、手術、臓器潅流、放射線療法、ステロイド療法、非ステロイド療法、抗体療法、抗真菌療法、ホルモン療法、サイトカイン療法、外皮用剤（例えば、アレルギー、接触皮膚炎および乾癬などの皮膚の状態を治療するために使用される局所用薬剤）での療法、免疫抑制療法、他の抗炎症性モノクローナル抗体療法、ならびにそれらの組み合わせなどをはじめとする、少なくとも１つの他の療法と併用で、投与される。従って、併用される療法が、別の治療薬の投与と（例えば、一例としてステロイドと）併用で抗ＣＤ４０抗体の投与を含む場合、本発明の方法は、別の製剤または単一の医薬製剤を使用する併用投与、およびいずれかの順序での逐次投与を含む。
【０２１３】
抗ＣＤ４０抗体と併用で投与することができる免疫抑制剤の例としては、メトトレキサート、シクロホスファミド、ミゾリビン、クロラムブシル、シクロスポリン、例えばエーロゾル化シクロスポリン（米国特許出願公開第ＵＳ２００２０００６９０１号（その全体が本明細書に参照として組み込まれている））など、タクロリムス（ＦＫ５０６；ＰｒｏＧｒａｆ（登録商標））、マイコフェノレートモフェチル、およびアザチオプリン（６−メルカプトプリン）、シロリムス（ラパマイシン）、デオキシスパーガリン、レフルノミドおよびそのマロノニトリロアミド類似体；ならびに
を含む免疫抑制タンパク質
が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１４】
抗ＣＤ４０抗体と併用で投与することができる好適な抗炎症剤の例としては、例えば、クロベタゾール、ハロベタゾール、ヒドロコルチゾン、トリアムシノロン、ベタメタゾン、フルオシノール、フルオシノニド、プレドニゾン、プレドニゾロン、メチルプレドニゾロンなどのコルチコステロイド；例えば、スルファサラジン、メサラミン含有薬物（５−ＡＳＡ剤として公知）、セレコキシブ、ジクロフェナク、エトドラク、フェンプロフェン、フルビプロフェン、イブプロフェン、ケトプロフェン、メクロファマート、メロキシカム、ナブメトン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピロキシカム、ロフェコキシブ、サリチラート、スリンダクおよびトルメチンなどの、非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）；ならびにＥｎｂｒｅｌ（登録商標）（可溶性ＴＮＦ受容体）、抗炎症性抗体、例えばアダリムマブ（ＨＵＭＩＲＡ（登録商標）、ＴＮＡ−αアンタゴニスト）およびインフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ（登録商標）、ＴＮＦ−αアンタゴニスト）などが挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１５】
移植拒絶反応および移植片対宿主疾患は、超急性（体液性）、急性（Ｔ細胞媒介）、もしくは慢性（未知の病因）、またはこれらの組み合わせであり得る。従って、本発明の抗ＣＤ４０抗体は、一部の実施形態において、肝臓、腎臓、膵臓、膵島細胞、小腸、肺、心臓、角膜、皮膚、血管、骨、異種または自己骨髄などをはじめとする任意の組織の超急性、急性および／または慢性移植拒絶反応と関連のある拒絶反応および／または症状を予防および／または改善するために使用される。いずれのドナーから移植片組織を得て、いずれのレシピエントに移植してもよく、従って、移植手順は、動物の組織のヒトへの移植（異種移植）、あるヒトから別の人への組織移植（例えば、同種移植）、および／または人体のある部分から別の部分への組織移植（自己移植）を含み得る。本発明の抗体での治療は、移植の後遺症、例えば、発熱、食欲不振、血行動態異常、白血球減少、移植した臓器／組織の白血球浸潤、ならびに日和見感染を低減することもできる。
【０２１６】
本発明の抗ＣＤ４０抗体を使用して移植片拒絶反応、関節リウマチまたは多発性硬化症を治療する実施形態において、本抗体は、本明細書において説明したような好適な免疫抑制剤と併用することができる。
【０２１７】
従って、本発明は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）のヒトにおいてＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患を治療するための薬物の製造における治療または予防有効量の抗ＣＤ４０抗体の使用を提供し、この場合、前記薬物は、少なくとも１つの他の療法での治療と協調性である。
【０２１８】
「協調性」とは、抗ＣＤ４０抗体を含む薬物が、少なくとも１つの他の療法でのその被検者の治療前、中または後に使用できることを意味する。
【０２１９】
本発明は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｆに関してヘテロ接合性またはホモ接合性（遺伝子型Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ）であり、少なくとも１つの他の治療薬での前治療を受けたヒト患者をＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患または自己免疫疾患について治療するための薬物の製造における抗ＣＤ４０抗体の使用も提供する。
【０２２０】
「前治療された」または「前治療」とは、被検者が、抗ＣＤ４０抗体を含む薬物を受ける前に１つ以上の他の療法を受けた（すなわち、少なくとも１つの他の療法で治療された）ことを意味する。「前治療された」または「前治療」は、抗ＣＤ４０抗体を含む薬物での治療を開始する前の２年以内、１８ヶ月以内、１年以内、６ヶ月以内、２ヶ月以内、６週間以内、１ヶ月以内、４週間以内、３週間以内、２週間以内、１週間以内、６日以内、５日以内、４日以内、３日以内、２日以内、またはさらに１日以内に、少なくとも１つの他の療法での治療を受けた被検者を含む。その被検者が、前の療法（単数または複数）での前治療に対する反応者である必要は必ずしもない。従って、アンタゴニスト抗ＣＤ４０抗体を含む薬物を受ける被検者は、前の療法での治療に対して、または前治療が多数の療法を含んでいた場合にはそれらの前の療法のうちの１つ以上に対して、反応してもよく、または反応しなくてもよい。被検者が、抗ＣＤ４０抗体を含む薬物を受ける前に前治療を受け得る他の療法の例としては、本明細書の他の箇所で説明する炎症性疾患または自己免疫疾患のための療法が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２１】
１つ以上の他の療法と本明細書において説明する薬物の協調的使用に関連して、「治療」は、被検者への薬物もしくは他の療法の適用もしくは施与、または被検者からの単離された組織もしくは細胞株への前記薬物もしくは他の療法の適用もしくは使用と定義し、この場合、前記被検者は、ＣＤ４０発現性細胞と関連のある炎症性疾患もしくは自己免疫疾患、そうした疾患と関連のある症状、またはそうした疾患の発現に対する素因を有し、その目的は、前記疾患、前記疾患の任意の関連症状、または前記疾患の発現に対する素因を治す、癒す、緩和する、和らげる、改変する、軽減する、改善する、向上させる、またはそれらに作用することである。
【０２２２】
一部の実施形態において、併用療法は、単独で投与されたときの個々の治療薬を基準にして、治療有効度を相乗的に向上させる。用語「相乗効果」は、それぞれの活性薬剤各々の個々の効果の合計より大きい、２つ以上の活性薬剤の併用効果を記述するために使用する。従って、２つ以上の薬剤の併用効果が、結果として活性またはプロセスの「相乗的阻害」を生じさせる場合、その活性またはプロセスの阻害は、それぞれの活性薬剤各々の阻害効果の合計より大きい。用語「相乗的治療効果」は、（多数のパラメータのいずれかによって測定して）それぞれの個々の療法で観察される個々の治療効果の合計より大きい、２つ以上の療法の併用で観察される治療効果を指す。
【０２２３】
さて、本発明の様々な態様および実施形態を、単なる例として、より詳細に説明しよう。本発明の範囲から逸脱することなく詳細の変更を行うことができることは理解されるであろう。
【０２２４】
実験
下の実施例において使用する抗ＣＤ４０抗体は、ＣＨＩ−１２．１２である。ＣＨＩＲ−１２．１２抗体の生産、配列決定および特性付けは、ＷＯ２００５／０４４８５４、ＷＯ２００５／０４４３０４、ＷＯ２００５／０４４３０５、ＷＯ２００５／０４４３０６、ＷＯ２００５／０４４８５５、ＷＯ２００５／０４４３０７、およびＷＯ２００５／０４４２９４として公開された国際特許出願に詳細に記載されている。ＣＨＩＲ−１２．１２抗体を発現するハイブリドーマ系統１５３．８Ｅ２．Ｄ１０．Ｄ６．１２．１２（ＣＭＣＣ＃１２０５６）は、ＰＴＡ−５５４３の特許寄託番号で、米国微生物系統保存機関［ＡＴＣＣ；１０８０１  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｂｌｖｄ．，Ｍａｎａｓｓａｓ，Ｖｉｒｇｉｎｉａ  ２０１１０−２２０９（ＵＳＡ）］に寄託されている。
【０２２５】
多数の以下の実施例は、癌細胞株および癌患者細胞へのＣＨＩＲ−１２．１２の結合に基づく。しかし、以下の実施例のすべては、抗ＣＤ４０抗体を使用する炎症性疾患および／または自己免疫疾患の治療に等しく関連のあるＣＨＩＲ−１２．１２抗体の特性を例証するものであるため、直接的には、炎症性疾患および／または自己免疫疾患を治療するためのＣＨＩＲ−１２．１２の使用に関連している。
【実施例】
【０２２６】
実施例１：細胞株におけるＡＤＣＣの分析
ＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブを、リンパ腫細胞株（Ｄａｕｄｉ、Ｎａｍａｌｗａ）、多発性骨髄腫細胞株（ＡＲＨ７７、ＩＭ−９）、Ｂ−ＡＬＬ細胞株（ＣＣＲＦ−ＳＢ）およびＢ−ＣＬＬ細胞株（ＥＨＥＢ）をはじめとするＣＤ４０抗原とＣＤ２０抗原の両方を発現する様々な悪性Ｂ細胞に対するそれらの相対ＡＤＣＣ活性について比較した。
【０２２７】
最大溶解パーセントおよびＥＤ５０としてそれぞれ測定したＡＤＣＣ有効度および効力を、ＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブについて比較した。これらの実験結果を図１Ａ−１Ｆに示す。すべてのターゲット細胞株について、ＣＨＩＲ−１２．１２は、リツキシマブより効力および有効度の高いＡＤＣＣ媒介因子であった。試験した６つの細胞株において、細胞１個当たりの細胞表面ＣＤ２０分子の数は、ＣＤ４０より２．６から３０．８倍多かった。これらのデータは、ＣＤ２０より少ないＣＤ４０分子を提示するにもかかわらず、悪性Ｂ細胞株が、リツキシマブより効果的にＣＨＩＲ−１２．１２によって溶解されることを示している。
【０２２８】
実施例２：ＣＬＬ患者細胞におけるＡＤＣＣの分析
８人の患者からのエクスビボ原発性ＣＬＬ細胞に対するＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブの相対ＡＤＣＣ活性を比較した。ＣＨＩＲ−１２．１２は、すべての患者からのＣＬＬに対してリツキシマブより大きなＡＤＣＣを示した（図２Ａ−Ｄおよび図３参照）。結果を図３にまとめる。ＣＨＩＲ−１２．１２は、リツキシマブより効力が高い。
抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）実験計画
ターゲット細胞：ＣＬＬ患者細胞、５０００／ウエル。エフェクター細胞：精製した正常ヒトＮＫ細胞、５０，０００／ウエル。Ｅ：Ｔ比：１０。Ａｂ濃度：０．００００１、０．０００１、０．００１、０．０１、０．１、１および１０μｇ／ｍＬ。インキュベーション時間：４時間。培地：ＲＰＭＩ（フェノールレッド負含）＋１０％ＦＢＳ＋１％Ｐ／Ｓ。培養器具：９６ウエル丸底プレート。読出し：４８５ｎｍ  励起／５３５ｎｍ  放射での任意の蛍光単位（ＡＦＵ）によって測定されるカルセインＡＭ放出。計算：特異的溶解％＝１００ｘ（ＡＦＵ試験−ＡＦＵ自然放出１）／（ＡＦＵ最大放出２−ＡＦＵ自然発生）。陰性対照：抗体またはＮＫ細胞の不在下でターゲット細胞によって放出されるカルセイン。陽性対照：界面活性剤（１％ＮＰ４０）による溶解に基づきターゲット細胞によって放出されるカルセイン。
【０２２９】
図２および３に図示する結果は、ＣＨＩＲ−１２．１２が、ＣＬＬ患者細胞に対してリツキシマブより大きなＡＤＣＣを媒介することを示している。ＡＤＣＣの差の大きさは、ターゲット細胞に依存してよく、ＮＫドナー細胞に依存してもよいが、すべての患者サンプルに対して観察された。１人の患者からのＣＬＬ細胞を２つの異なるＮＫドナーで試験したとき、ＣＨＩＲ−１２．１２は、両方のＮＫドナー細胞についてリツキシマブより大きなＡＤＣＣを媒介したが、特異的ＡＤＣＣの大きさは、同一ではなかった（図４参照）。この優れたＡＤＣＣについてのメカニズムの基礎は、ターゲット抗原（ＣＤ２０およびＣＤ４０）の相対発現レベル、抗体の内在化の程度、およびＮＫ細胞上のＦｃγＲＩＩＩａ受容体に対する抗体の親和性を含み得る。従って、ＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブのＡＤＣＣ活性に対するこれらの因子の影響を調査した。
【０２３０】
実施例３：細胞表面ＣＤ４０およびＣＤ２０分子の定量
ＣＬＬ細胞上の定量的ＣＤ２０およびＣＤ４０密度（実施例３）および抗体内在化度（実施例４）を、ＡＤＣＣ活性における上で説明した差についての潜在的理由として調査した。ＣＨＩＲ−１２．１２のより大きなＡＤＣＣ活性および有効度は、より高い細胞表面ＣＤ４０分子密度には依存しなかった。細胞表面のＣＤ４０分子数よりＣＤ２０分子の数のほうが、１．３倍から１４倍多かったからである（図５および６参照）。
【０２３１】
方法
染色用緩衝剤（ＰＢＳは、１％ＢＳＡ、０．１％アジ化Ｎａを含有する）中、１ｍｇ／ｍＬのヒトＩｇＧ１と共に細胞をプレインキュベートして、非特異的結合部位をブロックした。それらは、３０分間、４℃（氷上）でインキュベートした。その後、ＦＩＴＣ共役化ヒトＩｇＧ１アイソタイプ対照、ＦＩＴＣ共役化ＣＨＩＲ−１２．１２、またはＦＩＴＣ共役化リツキシマブを１００、１０、１、０．１μｇ／ｍＬで添加し、細胞を３０分間、４℃（氷上）でインキュベートした。細胞を染色用緩衝液（ＰＢＳ＋１％ＦＢＳ＋０．１％アジ化ナトリウム）で洗浄し、ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒによって分析した。
幾何平均蛍光強度をＦＡＣＳによって測定した。その後、較正用ＦＩＴＣビーズによって設定した標準曲線に基づいて、Ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ  ｏｆ  Ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ  Ｓｏｌｕｂｌｅ  Ｆｌｕｏｒｃｈｒｏｍｅ（ＭＥＳＦ）を計算した。
【０２３２】
実施例４：ＣＨＩＲ−１２．１２は、細胞株上のＣＤ４０に結合すると内在化を誘導しない
Ｄａｕｄｉ、リンパ腫細胞株、およびＡＲＨ７７、ＭＭ細胞株、を使用して、内在化に対するＣＨＩＲ−１２．１２の効果を評価した。氷上（内在化を阻止するために０．１％アジ化ナトリウムを伴う）または３７℃（アジ化ナトリウムを伴わない）で３時間、１μｇ／ｍＬのヒトＩｇＧ１（対照抗体）またはＣＨＩＲ−１２．１２と共に細胞をインキュベートした。低温の染色用緩衝剤（ＰＢＳ＋１％ＦＢＳ＋０．１％アジ化ナトリウム）で洗浄した後、氷上で３０分間、ヤギ抗ヒトＩｇＧ−ＦＩＴＣで細胞を染色した。幾何平均蛍光強度（ＭＦＩ）をＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒによって記録した。アジ化ナトリウムの存在下、氷上でＣＨＩＲ−１２．１２と共にインキュベートした細胞と、アジ化ナトリウム不在下、３７℃でＣＨＩＲ−１２．１２と共にインキュベートした細胞との間に、差は観察されなかった（図７）。これらのデータは、ＣＤ４０に結合すると、ＣＨＩＲ−１２．１２が内在化せず、細胞表面に提示され続けることを示している。
【０２３３】
実施例５：ＣＬＬ患者細胞への結合後のＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブの内在化：ＦＡＣＳおよび共焦点顕微鏡
ＦＡＣＳ方法論
４０℃（０．１％アジ化ナトリウムを伴う）または３７℃（アジ化Ｎａを伴わない）で３時間、１０μｇ／ｍＬのｈｕＩｇＧ１、ＣＨＩＲ−１２．１２またはリツキシマブと共に細胞をインキュベートした。染色用緩衝剤（ＰＢＳ＋１％ＦＢＳ＋０．１％アジ化Ｎａ）で細胞を洗浄し、その後、ＦＩＴＣ−ヤギ抗ヒトＩｇＧを添加し、その後、細胞を３０分間、４０℃でインキュベートし、ＦＡＣＳ  Ｃａｌｉｂｕｒによって分析した。
共焦点顕微鏡方法論
４０℃（０．１％アジ化Ｎａを伴う）または３７℃（アジ化Ｎａを伴わない）で、３時間、１０μｇ／ｍＬのＡｌｅｘａ  ４８８またはＦＩＴＣ共役化ＣＨＩＲ−１２．１２、リツキシマブおよびＩｇＧ１と共に細胞をインキュベートした。その後、細胞を洗浄し、５分間、室温で、２％ホルムアルデヒドで固定した。その後、細胞を洗浄し、ポリ−Ｌ−リシン被覆スライドガラス上に配置し、マウントし、封止し、その後、共焦点イメージングによって分析した。
結果
これらの実験の結果を図８（ＦＡＣＳ）ならびに図９および１０（共焦点顕微鏡）に示す。これらの実験からの結果を図１１にまとめる。フローサイトメトリーおよび共焦点顕微鏡法によって行った原発性ＣＬＬ細胞を使用するこれらの抗体内在化試験は、３７℃でＣＤ４０に結合すると、３時間後でさえ、ＣＨＩＲ−１２．１２は細胞表面上に均一に分布したままであることを示している。対照的に、３７℃で結合後、リツキシマブは、キャップに再び分布し、内在化される。これらのデータは、ＣＨＩＲ−１２．１２の効力のあるＡＤＣＣ活性を、ターゲット細胞表面でそれ自体を均一に提示するその能力に関連付けることができ、それが、エフェクター細胞との最適な相互作用を可能ならしめることを示唆している。これらの結果は、ＣＨＩＲ−１２．１２が、インビボでＣＬＬ細胞に対して効力のあるＡＤＣＣを媒介する点で有効であり得ることを示唆している。
【０２３４】
実施例６：Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標）およびＣＨＩＲ−１２．１２によるＦｃγＲＩＩＩａ結合のＢｉａｃｏｒｅ分析
ＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブに対するＦｃγＲＩＩＩａ  ａａ１５８Ｆおよびａａ１５８Ｖ対立遺伝子の親和性を、標準的なＢｉａｃｏｒｅ（登録商標）分析によって比較した。ＣＨＩＲ−１２．１２は、リツキシマブと比較したとき、４．６倍高い親和性でａａ１５８Ｆ対立遺伝子に結合した（それぞれ、２．８μＭ対１３μＭ）。これらの実験の結果を下の表にまとめる：
【０２３５】
【表１】
2009513712.tif 000002
実施例７：ＮＫエフェクター細胞によるＡＤＣＣに対するＦｃγＲＩＩＩａ多型の影響
抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）は、多くの市販および治験モノクローナル抗体についての主要作用メカニズムである。濾胞性非ホジキンリンパ腫（ＮＨＬ）の治療用に市販されており、他のＢ細胞悪性病変において有効であるリツキシマブ（Ｒｉｔｕｘａｎ（登録商標））は、その主作用メカニズムの１つとしてＡＤＣＣを有すると考えられる。特に、ＮＨＬにおけるリツキシマブの臨床活性が、ＦｃγＲＩＩＩａ遺伝子型と相関することは証明されている。Ｖ／ＶまたはＶ／ＦのＦｃγＲＩＩＩａ  １５８ａａ多型を有する患者は、Ｆ／Ｆを有する者より大きくリツキシマブに反応する（例えば、Ｃａｒｔｏｎら（２００２）Ｂｌｏｏｄ  ９９（３）：７５４−７５８またはＤａｌｌ’Ｏｚｚｏら（２００４）Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．６４：４６６４−４６６９参照）。
【０２３６】
これらの実験では、様々なＦｃγＲＩＩＩａ  ａａ１５８多型を発現する多数のヒトドナーからの精製されたＮＫエフェクター細胞を、ヒトリンパ腫Ｄａｕｄｉ細胞株をターゲット細胞として使用して評価した（図１２および１３参照）。これらの図により示されているように、ＣＨＩＲ−１２．１２は、３つすべての遺伝子型のＮＫ細胞で効力のあるＡＤＣＣを誘導した。Ｄａｕｄｉ細胞株の溶解についてのＣＨＩＲ−１２．１２  ＥＤ５０は、Ｆ／Ｆ、Ｖ／ＦおよびＶ／Ｖについて、それぞれ、４、２および０．４ｐＭであった（図１３）。Ｄａｕｄｉ細胞株の溶解についてのリツキシマブ  ＥＤ５０は、Ｆ／Ｆ、Ｖ／ＦおよびＶ／Ｖについて、それぞれ、５３、２１および９ｐＭであった（図１３）。
【０２３７】
様々なＦｃγＲＩＩＩａ  ａａ１５８多型を発現する多数のヒトドナーからの精製されたＮＫエフェクター細胞を、ＣＬＬ患者細胞をターゲット細胞として使用しても評価した（図１４参照）。ＣＨＩＲ−１２．１２は、試験したすべてのＣＬＬ患者細胞に対して、リツキシマブより効力の高いＡＤＣＣ媒介因子であることが判明した（図１４）。これらのデータは、ＣＨＩＲ−１２．１２が、ａａ１５８  Ｖ／ＦまたはＦ／Ｆ遺伝子型のＮＫ細胞ででさえ、リツキシマブより効力の高いＡＤＣＣ媒介因子であることを示唆している。
【０２３８】
これらの発見は、驚くべきことである。ＣＨＩＲ−１２．１２は、Ｆ／ＦまたはＦ／ＶのＦｃγＲＩＩＩａ  １５８ａａ多型を有するＮＫ細胞を使用するほうが、Ｖ／Ｖを有するものを使用するより、ＡＤＣＣアッセイでの効力が有意に低いと予想されたからである。重ねて、ＮＨＬにおけるリツキシマブの臨床活性が、ＦｃγＲＩＩＩａ遺伝子型と相関することは証明されている。Ｖ／ＶまたはＶ／ＦのＦｃγＲＩＩＩａ  １５８ａａ多型を有する患者は、Ｆ／Ｆを有する者より、リツキシマブに対して大きく反応する。リツキシマブは、Ｂ細胞の表面で発現される抗原に結合するＩｇＧ１モノクローナル抗体でもあり、そのため、ＣＨＩＲ−１２．１２は、ＦｃγＲＩＩＩａ−１５８Ｖ多型について同じ嗜好性を提示すると予想された。そうではなく、ＣＨＩＲ−１２．１２は、３つすべての遺伝子型のＮＫ細胞で効力のあるＡＤＣＣを誘導することが判明した。
【０２３９】
上述の説明および関連図に提示した技術の恩恵を受けるこれらの発明が属する技術分野の技術者には、本明細書において述べた本発明についての多くの変形および他の実施形態が、思い浮かぶであろう。従って、本発明を、開示する特定の実施形態に限定すべきではなく、変形および他の実施形態が、添付のクレームの範囲に含まれると解釈されることは、理解されるであろう。本明細書の中では特定の用語を用いているが、それらは、単に一般的および説明的な意味で用いており、限定のためのものではない。
【０２４０】
本明細書において引用したすべての出版物および特許出願は、それぞれ個々の出版物または特許出願が参照として組み込まれていると具体的におよび個々に述べられているのと同程度に、完全に参照として組み込まれている。
【０２４１】
【数１】
2009513712.tif 000003
【図面の簡単な説明】
【０２４２】
【図１Ａ】６つの細胞系列における抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）の分析結果を示す図である。
【図１Ｂ】６つの細胞系列における抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）の分析結果を示す図である。
【図１Ｃ】６つの細胞系列における抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）の分析結果を示す図である。
【図１Ｄ】６つの細胞系列における抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）の分析結果を示す図である。
【図１Ｅ】６つの細胞系列における抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）の分析結果を示す図である。
【図１Ｆ】６つの細胞系列における抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）の分析結果を示す図である。
【図２Ａ】ＣＬＬ患者細胞（ｎ＝８）における抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）の分析結果を示す図である。
【図２Ｂ】ＣＬＬ患者細胞（ｎ＝８）における抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）の分析結果を示す図である。
【図２Ｃ】ＣＬＬ患者細胞（ｎ＝８）における抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）の分析結果を示す図である。
【図２Ｄ】ＣＬＬ患者細胞（ｎ＝８）における抗体依存性細胞障害（ＡＤＣＣ）の分析結果を示す図である。
【図３】ＣＬＬ患者細胞（ｎ＝９）におけるＡＤＣＣの分析結果をまとめた図である。
【図４】２人の異なるドナーからのＮＫエフェクター細胞を使用したＣＬＬ患者細胞におけるＡＤＣＣの分析結果を示す図である。
【図５】ＣＬＬ患者細胞および正常なＢ細胞上でのＣＤ４０およびＣＤ２０細胞表面発現の定量の結果を示す図である。
【図６】ＣＤ４０およびＣＤ２０細胞表面発現を定量した細胞についてのＡＤＣＣ活性をまとめた図である。
【図７】ＤａｕｄｉおよびＡＲＨ７７細胞株上の細胞表面結合ＣＨＩＲ−１２．１２のレベルを示す棒グラフである。
【図８】ＦＡＣＳ分析によるＣＬＬ患者細胞におけるＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブの内在化の調査結果を示す図である。
【図９】ＦＩＴＣ標識抗体の共焦点顕微鏡検査法による正常Ｂ細胞におけるＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブの内在化の調査結果を示す図である。
【図１０】Ａｌｅｘａ４８８標識抗体の共焦点顕微鏡検査法によるＣＬＬ患者細胞におけるＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブの内在化の調査結果を示す図である。
【図１１】ＡＤＣＣ活性と内在化との関係をまとめた図である。
【図１２】異なるＦｃγＲＩＩＩａ遺伝子型を有するドナーからの精製ＮＫエフェクター細胞ごとにＣＨＩＲ−１２．１２またはリツキシマブによるＤａｕｄｉ細胞の最大特異的溶解率を示す棒グラフである。
【図１３】異なるＦｃγＲＩＩＩａ遺伝子型を有するドナーからの精製ＮＫエフェクター細胞ごとにＤａｕｄｉ細胞上のＣＨＩＲ−１２．１２またはリツキシマブのＡＤＣＣ効力（ＥＤ５０）を示す棒グラフである。
【図１４】多数の遺伝子型のヒトドナーからのヒトＮＫ細胞ごとにＣＬＬ患者細胞（ｎ＝９）に対するＣＨＩＲ−１２．１２およびリツキシマブの比較ＡＤＣＣをまとめた図である。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【図１Ｃ】
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【図１Ｄ】
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【図１Ｅ】
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【図１Ｆ】
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【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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