(57)【要約】  本発明はウシで微生物学的感染を予防及び治療する混合ワクチンに関し、前記ワクチンは、ウシウイルス性下痢ウイルス（BVDV）感染の予防及び治療を目的とする弱毒BVDV、並びにBVDV以外の微生物学的感染の予防及び治療を目的とするさらに別の免疫学的に活性な成分を含む。
2009516002.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のａ)及びｂ)を含む、微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチン：
ａ）糖タンパク質Ernsのためのコード配列中に少なくとも1つの変異及び／又はNproのためのコード配列中に少なくとももう1つの変異を有する1つ以上の弱毒BVDVであって、糖タンパク質Ernsのためのコード配列中の前記変異がErnsに存在するRNase活性の不活化をもたらし、及び／又は、Nproのためのコード配列中の前記変異が前記Nproの不活化をもたらす、前記弱毒BVDV；及び
ｂ）BVDV以外のウシの病原体によって引き起こされるウシの微生物学的感染の治療及び／又は予防に有効な1つ以上の免疫学的に活性な成分。
【請求項２】
前記混合ワクチンが以下のａ）及びｂ）を含む、請求項1に記載のワクチン：
ａ）糖タンパク質Ernsのためのコード配列中に少なくとも1つの変異を有する1つ以上の弱毒BVDVであって、糖タンパク質Ernsのためのコード配列中の前記変異がErnsに存在するRNase活性の不活化をもたらす、前記弱毒BVDV；及び
ｂ）BVDV以外のウシの病原体によって引き起こされるウシの微生物学的感染の治療及び／又は予防に有効な1つ以上の免疫学的に活性な成分。
【請求項３】
前記混合ワクチンが以下のａ）及びｂ）を含む、請求項1に記載のワクチン：
ａ）Nproのためのコード配列中に少なくとも1つの変異を有する1つ以上の弱毒BVDVであって、Nproのためのコード配列中の前記変異が前記Nproの不活化をもたらす、前記弱毒BVDV；及び
ｂ）BVDV以外のウシの病原体によって引き起こされるウシの微生物学的感染の治療及び／又は予防に有効な1つ以上の免疫学的に活性な成分。
【請求項４】
前記混合ワクチンが以下のａ）及びｂ）を含む、請求項1に記載のワクチン：
ａ）糖タンパク質Ernsのためのコード配列中に少なくとも1つの変異、及びNproのためのコード配列中に少なくとももう1つの変異を有する1つ以上の弱毒BVDVであって、糖タンパク質Ernsのためのコード配列中の前記変異がErnsに存在するRNase活性の不活化をもたらし、及び／又は、Nproのためのコード配列中の前記変異が前記Nproの不活化をもたらす、前記弱毒BVDV；及び
ｂ）BVDV以外のウシの病原体によって引き起こされるウシの微生物学的感染の治療及び／又は予防に有効な1つ以上の免疫学的に活性な成分。
【請求項５】
前記混合ワクチンが、弱毒BVDV 1型及び弱毒BVDV 2型を含み、1型及び2型の両方が、糖タンパク質Ernsのためのコード配列中に少なくとも1つの変異及びNproのためのコード配列中に少なくとももう1つの変異を有し、ここで、糖タンパク質Ernsのためのコード配列中の前記変異がErnsに存在するRNase活性の不活化をもたらし、及び／又は、Nproのためのコード配列中の前記変異が前記Nproの不活化をもたらす、請求項1から4のいずれかの項に記載のワクチン。
【請求項６】
ウシのBVDV以外の前記感染が、以下から成る群から選択される少なくとも1つの病原体によって引き起こされる、請求項1から5のいずれかの項に記載の混合ワクチン：
パラインフルエンザ-3ウイルス（PI-3）、伝染性ウシ鼻気管炎ウイルス（IBR）、ウシ呼吸器系合胞体形成ウイルス（BRSV）、ウシヘルペスウイルス（BHV）、ウシロタウイルス（BRV）、ウシエンテロウイルス（BEV）、ウシコロナウイルス（BCV）、ウシ狂犬病（BR）、ウシパルボウイルス（PPV）、アデノウイルス、アストロウイルス、マンヘイミア・ヘモリチカ（以前にはパスツレラ・ヘモリチカ）、パスツレラ・マルトシダ、ヘモフィルス・ソムヌス（ヒストフィルス・オヴィス及びヘモフィルス・アグニ）、アクチノミセス（コリネバクテリウム）、アクチノミセス・ピオゲネス、クラミジア・プシッタキ、カンピロバクター・フェーツス・ヴェネレアリス及びカンピロバクター・フェーツス・フェーツス（以前にはC.フェーツス・インテスティナリス）、レプトスピラ・インテルロガンス、レプトスピラ・ハルジョ、レプトスピラ・ポモナ及びレプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、ブルセラ・アボルツス、ブルセラ・スイス及びブルセラ・メリテンシス、リステリア・モノサイトゲネス、クラミジア・プシッタキ、クロストリジウム・ショーベイ、クロストリジウム・セプチクム、クロストリジウム・ヘモリチクム、クロストリジウム・ノヴィー、クロストリジウム・ソルデリー、クロストリジウム・パーフリンゲンス、クロストリジウム・テタニ、モラキセラ・ボヴィス、クレブシーラspp、クレブシーラ・プニューモニエ、サルモネラ・チフィムリウム、サルモネラ・ニューポルト、マイコバクテリウム・アビウム・パラツベルクローシス、クリプトスポリジウム・パルブム、クリプトスポリジウム・ホミニス、スタフィロコッカス・アウレウス、ストレプトコッカス・ディスガラクチエ、ストレプトコッカス・ウベルス、マイコプラズマspp、マイコプラズマ・ディスパル、マイコプラズマ・ボヴィス、及びウレアプラズマspp、トリコモナス・フェーツス、トリコフィトン・ベルルコスム、トリコフィトン・メンタグロフィテス、トリコフィトン・サルキソヴィー、ネオスポラ・カニヌム（以前にはトキソプラズマ・ゴンディー）、バベシア・ビゲミナ及びバベシア・ボヴィス、並びにディクチオカウルス・ヴィヴィパロウス（肺虫症）。
【請求項７】
前記免疫学的に活性な成分が、以下から成る群から選択される少なくとも1つの病原体の抗原である、請求項1から6のいずれかの項に記載の混合ワクチン：
パラインフルエンザ-3ウイルス（PI-3）、伝染性ウシ鼻気管炎ウイルス（IBR）、ウシ呼吸器系合胞体形成ウイルス（BRSV）、ウシヘルペスウイルス（BHV）、ウシロタウイルス（BRV）、ウシエンテロウイルス（BEV）、ウシコロナウイルス（BCV）、ウシ狂犬病（BR）、ウシパルボウイルス（PPV）、アデノウイルス、アストロウイルス、マンヘイミア・ヘモリチカ（以前にはパスツレラ・ヘモリチカ）、パスツレラ・ムルトシダ、ヘモフィルス・ソムヌス（ヒストフィルス・オヴィス及びヘモフィルス・アグニ）、アクチノミセス（コリネバクテリウム）、アクチノミセス・ピオゲネス、クラミジア・プシッタキ、カンピロバクター・フェーツス・ヴェネレアリス及びカンピロバクター・フェーツス・フェーツス（以前にはC.フェーツス・インテスティナリス）、レプトスピラ・インテルロガンス、レプトスピラ・ハルジョ、レプトスピラ・ポモナ及びレプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、ブルセラ・アボルツス、ブルセラ・スイス及びブルセラ・メリテンシス、リステリア・モノサイトゲネス、クラミジア・プシッタキ、クロストリジウム・ショーベイ、クロストリジウム・セプチクム、クロストリジウム・ヘモリチクム、クロストリジウム・ノヴィー、クロストリジウム・ソルデリー、クロストリジウム・パーフリンゲンス、クロストリジウム・テタニ、モラキセラ・ボヴィス、クレブシーラspp、クレブシーラ・プニューモニエ、サルモネラ・チフィムリウム、サルモネラ・ニューポルト、マイコバクテリウム・アビウム・パラツベルクローシス、クリプトスポリジウム・パルブム、クリプトスポリジウム・ホミニス、スタフィロコッカス・アウレウス、ストレプトコッカス・ディスガラクチエ、ストレプトコッカス・ウベルス、マイコプラズマspp、マイコプラズマ・ディスパル、マイコプラズマ・ボヴィス、及びウレアプラズマspp、トリコモナス・フェーツス、トリコフィトン・ベルルコスム、トリコフィトン・メンタグロフィテス、トリコフィトン・サルキソヴィー、ネオスポラ・カニヌム（以前にはトキソプラズマ・ゴンディー）、バベシア・ビゲミナ及びバベシア・ボヴィス、並びにディクチオカウルス・ヴィヴィパロウス（肺虫症）。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は動物の健康分野、特に混合ワクチンに関し、前記ワクチンは、感染性因子によって惹起されるウシの疾患又は異常の治療又は予防のために、弱毒ウシウイルス性下痢ウイルス（BVDV）及び少なくとも1つのさらに別の免疫学的に活性な成分を含む。
【背景技術】
【０００２】
ウシウイルス性下痢ウイルス（BVDV）1型（BVDV-1）及び2型（BVDV-2）は、ウシでウシウイルス性下痢（BVD）及び粘膜性疾患（MD）を引き起こす（Baker, 1987；Moenning and Plagemann, 1992；Thiel et al. 1996）。BVDVを2つの種に分類するのは、ゲノムの配列レベルにおける顕著な相違による（Heinzら（2000）に要約されている）。前記相違はまた中和抗体の限定的な交差反応からも明らかである（Ridpath et al. 1994）。BVDV（及びペプチウイルス科の他の全てのウイルス）のウイルスタンパク質は、NH2-Npro-C-Erns-E1-E2-p7-NS2-NS3-NS4A-NS4B-NS5A-NS5B-COOHの順序でポリプロテインとして編成されている（Lindenbach and Rice, 2001）。タンパク質C（＝コアタンパク質又はキャプシドタンパク質）並びに糖タンパク質Erns、E1及びE2はBVDVの構造成分を表している。Erns及びE2は抗体中和のための標的となることが判明した（Donis et al. 1988；Paton et al. 1992；van Rijn et al. 1993；Weiland et al. 1990, 1992）。Ernsは、典型的な膜アンカーを欠き、感染細胞から膨大な量で分泌される。前記タンパク質は、RNase活性を示すことが報告された（Hulst et al. 1994；Schneider et al. 1993；Windisch et al. 1996）。ウイルスの生活環に対するこの酵素の機能は現在のところ不明である。前記酵素活性は、ペスチウイルスのErnsと植物及び菌類起源の種々の公知のRNaseとの間で保存されている2つの連続アミノ酸の存在による。これらの両保存配列はヒスチジン残基を含む（Schneider et al. 1993）。古典的ブタ発熱ウイルス（CSFV）ワクチン株のErnsタンパク質でこれら残基の各々とリジンとの交換は、RNase活性の破壊をもたらした（Hulst et al. 1998）。これらの変異のCSFVワクチン株ゲノムへの導入は、ウイルスの生存率又は増殖特性に影響しなかったが、細胞病原性表現型を示すウイルスを生じる（Hulst et al. 1998）。同様に、Meyersらは、強毒CSFV株Alfort/TubingenのRNase陰性変種は完全な生存活性を有することを示した。しかしながら、対応するウイルス変種は細胞病原性表現型を示さなかった（Meyers et al. 1999）。
【０００３】
Nproは、ペスチウイルスRNAの長いオープンリーディングフレームによってコードされる最初のタンパク質を表す。Nproは非構造タンパク質であり、前記はプロテアーゼ活性を有し、おそらくは翻訳中に初期ポリプロテインからそれ自体を切り離す（（Stark et al. 1993；Wiskerchen et al. 1991）。Nproは、ウイルスの複製に必須ではない（Tratschin et al. 1998）システインプロテアーゼである（Rumenapf et al. 1998）。最近、Nproは、細胞の抗ウイルス防御にいくらか干渉し、それによりNproは感染宿主内で免疫系を調節するとの仮説が示された（Ruggli et al. 2003）。Mayerと共同研究者らは、Npro遺伝子欠失の結果としてCSFVの弱毒化の証拠を提示した（Mayer et al. 2004）。
BVDV感染の予防及び治療を目的とする現在のBVDVワクチンはなお欠点を有する（Oirschot et al. 1999）。古典的BVDV-1に対するワクチンは、BVDV-2感染に対して部分的防御しか提供せず、ワクチン接種された母獣は、強毒BVDV-2に持続感染した仔牛を出産する可能性がある（Bolin et al. 1991；Ridpath et al. 1994）。この問題は、1型及び2型株間の大きな抗原多様性によるものであり、前記多様性は糖タンパク質E2（ウイルス中和のための主要な抗原）でもっとも顕著である（Tijssen et al. 1996）。1型株に対するほとんどのモノクローナル抗体は2型ウイルスと結合することができない（Ridpath et al. 1994）。
これまでのところ、認可されたBVDV MLVワクチンは、ウシ又はブタ細胞での反復継代により得られた弱毒ウイルス（Coggins et al. (1961) Cornell Vet. 51:539；Philips et al. (1975) Am J Vet Res 36:135）を用いるか、又は温度感受性表現型を示す化学的改変ウイルス（Lobmann et al. (1984) Am J Vet Res 45:2498；（1986）47：557-561）を用いて製造される。シングルドースのMLVワクチンが免疫に十分であり、免疫期間はワクチン接種されたウシで数年間持続する。しかしながら、これらのワクチンは1型BVDVウイルス株を用いて作製されたので、1型ウイルスに対してのみ防御を示す。さらにまた、これらのワクチンは弱毒化されているが、しばしば安全性に関する問題を伴う。ワクチンウイルスは妊娠動物（例えばウシ）の胎盤を通過する可能性があり、胎児で臨床症状を生じるか、及び／又は持続感染仔牛をもたらす。したがって、それらは、妊娠牛を含む繁殖群に入れることはできない。胎児を保護するために妊娠牛はワクチン接種牛から分離する必要があり、それら自身にはワクチンを接種してはならない。
【０００４】
パラインフルエンザ-3ウイルス（PI-3）は、パラミクソウイルスに分類されるRNAウイルスである。PI-3によって引き起こされる感染はウシでは一般的である。PI-3は疾患を引き起こすことができるが、通常は軽度から無症状感染に付随している。PI-3のもっとも重要な役割は、二次的な細菌性肺炎の発症をもたらしえる開始因子として機能することである。臨床症状には、発熱、咳、漿液性の鼻汁及び涙液の排出、呼吸数の増加、呼吸音の増大が含まれる。症状の重篤度は細菌性肺炎の開始で悪化する。合併症のないPI-3肺炎の致死率は極めて低い。病変は、頭腹側（cranioventral）の肺硬化、気管支炎、並びに顕著なうっ血及び出血を伴う肺胞炎を含む。封入体を特定しえる。ほとんどの致死的症例ではまた同時発生の細菌性気管支肺炎を有する。
【０００５】
ウシ呼吸器系合胞体形成ウイルス（BRSV）は、パラミクソウイルス科のニューモウイルスとして分類されるRNAウイルスである。ウシの他に、ヒツジ及びヤギもまた呼吸器系合胞体形成ウイルスに感染しえる。このウイルスは、その特徴的な細胞病変作用（合胞体細胞の形成）のために命名された。BRSVについては抗原性サブタイプが存在することが知られており、予備的証拠はBRSVの抗原性サブタイプが存在しえることを示唆している。BRSVは世界中に分布し、ウイルスはウシの集団に固有である。呼吸器疾患を伴うBRSV感染はもっぱら若い肉牛及び乳牛で発生する。受動免疫はBRSV感染を予防するようにはみえないが、疾患の重篤度を低下させるであろう。ウイルスへの最初の暴露は重篤な呼吸器疾患を伴い、その後の暴露は軽度から準臨床的症状をもたらす。BRSVは、その発生頻度、下気道への嗜好性、気道を二次的な細菌感染に罹りやすくするその能力のために、ウシの呼吸器系疾患群で重要なウイルスであるように思われる。大発生では、罹患率は高くなる傾向があり致死率は0−20%となりえる。症状には直腸温度の増加（40−42℃）、沈うつ、飼料摂取の低下、呼吸速度の増加、並びに鼻汁及び涙液の排出増加が含まれる。一般的には、呼吸器症状が主体である。この疾患の後期には呼吸困難が深刻になる。皮下気腫は時に報告される。二次的な細菌性肺炎が頻繁に発生する。二相性病型が報告されているが、一定してはいない。肉眼病変は、間質性浮腫とともに、胸膜下及び間質性気腫を伴うびまん性間質性肺炎を含む。これらの病変は他の間質性肺炎の原因と類似しており、区別するする必要がある。非定型的間質性肺炎もまた参照されたい。組織学的試験によって、細気管支上皮及び肺実質の合胞体細胞、細胞質内封入体、細気管支上皮の増殖及び／又は変性、肺胞上皮形成、浮腫及びガラス質様膜の形成が提示される。
【０００６】
ウシヘルペスウイルス（BHV-1）は、ウシのいくつかの疾患及び症状（すなわち伝染性ウシ鼻気管炎（IBR）、伝染性嚢胞性外陰部膣炎（IPV）、亀頭包皮炎、結膜炎、流産、脳心筋炎及び乳房炎）に付随する。BHV-1のただ1つの血清型が認識されているが、BHV-1の3つのサブタイプが、ウイルスDNAのエンドヌクレアーゼ切断パターンを基にして報告されている。これらのサブタイプはBHV-1.1（呼吸器サブタイプ）、BHV-1.2（生殖器サブタイプ）及びBHV-1.3（脳炎サブタイプ）と称される。最近、BHV-1.3はBHV-5と称される別個のヘルペスウイルスとして再分類された。BHV-1感染はウシの集団で広範囲に拡散している。肥育場のウシでは、呼吸器型がもっとも一般的である。ウイルス感染だけでは生命を脅かすものではないが、ウシは二次的な細菌性肺炎に罹りやすくなり、この肺炎は死に至る可能性がある。繁殖牛では流産又は生殖器感染がより一般的である。生殖器感染は雄牛（伝染性嚢胞性亀頭包皮炎）及び雌牛（IPV）において、感染動物との交尾又は緊密な接触の1−3日以内に発生しえる。伝播は、肉眼的な病変が存在しなくても、さらに無症状感染雄牛の精液による人工授精を介して起こりえる。潜伏性BHV-1感染を有するウシはウイルスが再活性化されたときに一般的には臨床症状を示さないが、それらは、他の感受性を有する動物に対して感染源として機能し、したがって前記疾患を永続させる。呼吸器型及び生殖器型のインキュベーション期間は2−6日である。呼吸器型では、臨床症状の範囲は二次的な細菌性肺炎の存在に応じて軽度から重度に及ぶ。臨床症状には、発熱、食欲不振、咳、過剰な唾液分泌、漿液性から粘液膿性に進行する鼻汁排出、涙液排出を伴う結膜炎、炎症外鼻孔（したがって一般的な名称は“赤鼻”）、及び呼吸困難（喉頭が膿性物質で閉塞した場合）が含まれる。嚢胞が鼻粘膜上に発達し、後にジフテリア性プラークを形成する。角膜混濁を有する結膜炎がBFV-1感染の唯一の症状として発達することがある。細菌性肺炎が存在しなければ、一般的に回復は、臨床症状の開始後4−5日で生じる。流産は呼吸器症状と同時に発生しえるが、さらにまた感染後100日まで生じえる。流産は母獣の症状の重篤度にかかわりなく発生しえる。一般的に流産は妊娠の後半に発生するが、初期の胎児の死亡もまた発生しえる。雌牛の生殖器感染の最初の徴候は、頻繁な排尿、テールヘッドの隆起、及び軽度の膣液の排出である。外陰部は腫脹し、丘疹に続いて糜爛及び潰瘍が粘膜表面に出現する。二次的な細菌感染が発生しない場合、動物は10−14日で回復する。細菌感染が発生した場合、子宮の炎症及び一過性の不妊が生じ、膿性の膣液の排出が数週間続く。雄牛では、類似の病変が陰茎及び包皮に生じる。BHV-1感染は若いウシでは重篤な場合があり、全身症状を引き起こしえる。発熱、涙液及び鼻汁排出、呼吸困難、下痢、協調運動不能、最終的に痙攣及び死亡が、全身的ウイルス感染後短期間で発生しえる。IBRは、細菌性肺炎を併発しないかぎり死亡することは稀である。合併症のないIBR感染では、ほとんどの病変は上気道及び器官に限局する。点状から斑状出血が鼻腔及び副鼻腔の粘膜に見出されえる。壊死病巣が鼻、咽頭、喉頭及び気管に生じる。前記病巣は融合してプラークを形成しえる。洞はしばしば漿液性又は漿液線維���性浸出物で満たされる。症状が進行するにつれ、咽頭は漿液線維素浸出物で覆われ、血液の混じった液体が気管に見出されえる。咽頭及び肺リンパ節が急激に腫脹し出血することがある。気管炎は気管支及び細気管支に広がりえる。前記症状が発生したとき、上皮が気道に剥がれ落ちる。ウイルス病変はしばしば二次的な細菌感染によって隠される。全身性のBHV-1感染を示す若い動物では、残屑で覆われた糜爛及び潰瘍を鼻、食道、噴門洞に見出すことができる。さらにまた、白色病巣が肝臓、腎臓、脾臓及びリンパ節で見出されえる。流産胎児は蒼白で巣状の壊死病巣を全組織に有するが、特に肝臓に認めることができる。
【０００７】
他の多数のウシ呼吸器系ウイルスがBRDに関与するとして特定された。ウシヘルペスウイルス-4はいくつかの疾患（BRDを含む）に関係している。ウシアデノウイルスは、広範囲の疾患に付随し、ウシアデノウイルス3型はBRDにもっとも頻繁に付随する血清型である。ウシライノウイルスの2つの血清型がウシで気道感染を引き起こすことが判明した。BRDに付随することが報告された他のウイルスには、ウシレオウイルス、エンテロウイルス、及びコロナウイルスが含まれる。これらのウイルスは、細菌性肺炎の開始因子として機能しえるという点で、以前に考察した他のウイルスと類似の役割を有する。ウシコロナウイルスはまたウシの下痢に通常的に付随している。前記は上気道の上皮及び腸のエンテロサイトで複製し、そこでロタウイルスと類似の病変を生じるが、大腸の上皮細胞にも感染して結腸隆線の萎縮をもたらす。これらのウイルス性呼吸器疾患の予防に利用可能なワクチンはない。
ウシロタウイルスはもっとも一般的なウシのウイルス性下痢の原因である。群A及びBロタウイルスが含まれるが、群Aがもっとも優勢であり臨床的に重要であって、種々の毒性を有するいくつかの血清型を含んでいる。ロタウイルスは、成熟した吸収性を有し酵素を産生する、小腸絨毛上のエンテロサイトで複製し、エンテロサイトの破裂及び壊死塊を生じ、ウイルスを放出して隣接細胞を感染させる。ロタウイルスは陰窩に存在する未成熟な細胞には感染しない。ロタウイルスの強毒株により、エンテロサイトの消失が腸陰窩のそれらエンテロサイトを置き換える能力を超え、したがって絨毛の高さが減少し、その結果、腸表面の吸収面積及び腸の消化酵素活性が低下する。
【０００８】
他のウイルス（ブレダウイルス、カリシ様ウイルス、アデノウイルス、アストロウイルス及びパルボウイルスを含む）は下痢のウシの糞便で認められ、実験的にウシに下痢を発生させることができる。しかしながら、これらの因子はまた健康なウシの糞便でも認められる。新生児下痢におけるこれら因子の重要性は今後決定されねばならない。マンヘイミア・ヘモリティカ（Manheimia haemolytica）（以前にはパスツレラ・ヘモリティカ（Pasteurella haemolytica））バイオタイプA、血清型1は、BRDのウシの肺からもっとも頻繁に単離される細菌である。M.ヘモリティカほど頻繁には培養されないが、パスツレラ・マルトシダ（Pasteurella multocida）もまた細菌性肺炎の重要な原因である。肺膿瘍が出現するとき（一般的には慢性肺炎に付随）、アクチノミセス・ピオゲネス（Actinomyces pyogenes）がしばしば単離される。通常の条件下では、M.ヘモリティカは上気道の範囲内、特に扁桃腺陰窩にとどまり、健康なウシから培養するのは困難である。ストレス又はウイルス感染後に、上気道のM.ヘモリティカの複製速度は急速に増加し、細菌の培養の可能性も高まる。細菌の増殖速度及び肺のコロニー形成の増加は、環境性ストレス因子又はウイルス感染に関連する宿主の防御メカニズムの抑制のためであろう。M.ヘモリティカによって毒性因子（例えばロイコトキシンと称されるエキソトキン）が生成されるのは、この増殖ログ期の間である。細菌の毒性因子と宿主の防御との間の相互作用が、組織の損傷及び肺炎の発生をもたらす。細菌性肺炎の臨床症状では、しばしば気道のウイルス感染の症状が先行する。細菌性肺炎の開始とともに、臨床症状の重篤度が高まり、前記は抑うつ及び毒血症を特徴とする。発熱（40−41℃）；漿液性から粘液膿性の鼻汁；湿性咳；及び速く浅い呼吸速度が見られるであろう。頭腹側肺の聴診によって、気管支音の増大、パチパチという音、ぜいぜいという音が明らかになる。重篤な症例では胸膜炎が発生しえる。前記は、不規則な呼吸パターン及び呼気に際してブーブーという音が特徴である。動物は、肺炎が慢性になると（通常肺膿瘍の形成を伴う）、外観的に発育不全になるであろう。M.ヘモリティカは、重篤で急性の線維性肺炎又は線維性壊死性肺炎を引き起こす。この肺炎は気管支肺炎パターンを示す。肉眼的には、小葉間隔壁のゼラチン性肥厚を示す、広範囲の赤黒色から灰褐色の頭腹側領域の硬化及び線維性胸膜炎が存在する。広範囲の血栓症、肺壊死巣、並びに気管支炎及び細気管支炎の限局性形跡が存在する。P.マルトシダは、亜急性に進行する線維性から線維性化膿性の気管支肺炎に付随する。M.ヘモリティカとは対照的に、P.マルトシダは、少量のフィブリン浸出物、いくらかの血栓、限局性肺壊死、並びに化膿性気管支炎及び細気管支炎に付随する。
【０００９】
ヘモフィルス・ソムヌス（Haemophillus somnus）は、BRDの重要な病原体としての認識がますます高まりつつある。これらの細菌はウシの鼻咽頭の正常な生息菌である。肺のH.ソムヌス感染は、敗血症及び多臓器感染を伴いえる化膿性気管支肺炎を生じる。時に、H.ソムヌスは、急性（通常は致死性）敗血症性疾患（神経系、骨格筋系、循環器系及び呼吸器系を単独に又は総合的に含みえる）を引き起こすことができる。生殖器系はしばしば影響を受けるが、通常では他の系は臨床的関与を示さない。前記疾患は、発熱、重度の抑うつ、運動失調、脆弱、失明、昏睡及び数時間から数日以内の死亡を特徴とする。前記は散発的に個々の肉牛及び乳牛で発生し、ほぼ世界中で見出される。H.ソムヌスは、グラム陰性、非運動性、芽胞非形成性、多型性の球杆菌であり、培養には高栄養培地及び微好気性環境を要求する。前記は、ヒストフィルス・オヴィス（Histophilus ovis）及びヘモフィルス・アグニ（Haemophilus agni）（ヒツジの敗血症、乳房炎及び精巣上体炎の疫学的因子）と同一であるようである。しかしながらH.ソムヌスのヒツジとウシとの間の伝播は明らかではない。病原性及び非病原性株は、種々の供給源に由来する生物の若いウシへのくも膜下槽内接種によって識別されている。H.ソムヌスの病原性及び非病原性株は、雄牛の鞘膜及び包皮、雌牛の膣、並びに両性別の鼻の通路で保持される。前記菌は、おそらくは吸入後に気道内にコロニーを形成しえるが、しばしば尿中に見出される。被検牛の大きな集団で高い特異的抗体力価が見出されるので、ウシにおける前記生物の支配性は高い。H.ソムヌスによって引き起こされるいくつかの疾患の徴候（血栓性髄膜脳炎、線維性化膿性気管支肺炎、線維性胸膜炎、及び多発性関節炎を含む）が認識されている。心筋及び骨格筋の壊死が発生する。化膿性膣炎、子宮頸部炎及び内膜炎が、実験的及び交配後の自然感染雌牛で報告されており、前記菌は散発的流産の原因である。疾患をもたらすH.ソムヌスの株は血管の内皮に付着し、収縮、コラーゲンの露出、血小板付着及び血栓症をもたらす。前記症状が、前記の菌が感受性のウシの血流に侵入後に脳及び結合膜で発生したときにTMEがもたらされる。菌株は、胸膜、心筋、洞、又は多様な他の組織の血管内皮に付着し、それらの部位で炎症を起こしえる（例えば喉頭及び中耳の感染が報告されている）。個々の動物の感受性及び前記菌株の種々の組織の血管に対する嗜好性の多様性が、前記病型の発生で重要でありえるが、必要とされるメカニズムは完全には理解されていない。繁殖に関する問題は、必ずしも菌血症の先行を必要とするわけではないが、その病理発生はほとんど明確にされていない。しばしば42℃の高熱が疾患の最初の徴候であり、これは通常は数時間以内に正常又はほぼ正常になる。他の所見は関与する系によって決まり、前記には呼吸速度の増加、硬直、球節のナックリング、重篤な抑うつ、運動失調、麻痺、強直性発作、前記に続き数時間以内の昏睡及び死亡が含まれえる。罹患動物は失明し、網膜の壊死を示す灰色巣を有する網膜出血が観察される。過敏症、痙攣、興奮、眼球振盪及び円運動のような徴候が脈絡なく生じ、疾患の進行過程に影響を受けたCNSの領域に関係しえる。時に動物は死亡し、急激な致死性過程が��唆される。相対的及び弁別的なWBC数の顕著な変化は一般的であり、白血球減少症及び好中球減少症が重度（通常は急性）の致死的症状で発生するが、一方、好中球増加症は重症度の低い症状でも存在しえる。TMEでは、CSFの全細胞数は顕著に増加し、好中球が優勢である。敗血症の間、前記菌は、血液、類洞液、CSF、脳、腎、尿及び他の多様な器官から回収することができる。病変の特徴は血栓症及び周辺組織の梗塞である。脳及び脊髄、網膜、骨格筋、心筋、腎、腸並びに脾臓表面及び切断面にランダムに分布する赤色から褐色の出血壊死巣が特徴的である。混濁CSFを有する線維性化膿性髄膜炎が脳及び脊髄の表面で観察され、多発性硬化症（特に関節及び胸膜）が発生しえる。組織の壊死を有する急性線維性気管支肺炎が空気感染後に進行しえる。
【００１０】
BRDにおけるマイコプラズマ及びウレアプラズマの正確な役割は更なる規定を必要としている。マイコプラズマは非肺炎牛の気道から回収することができるが、単離頻度は気道疾患を有するウシではるかに高い。肺炎牛の肺から一般的に回収されるマイコプラズマには、マイコプラズマ・ディスパル（Mycoplasma dispar）、マイコプラズマ・ボヴィス（M. bovis）及びウレアプラズマ spp.が含まれる。実験的な感染では、気道症状が不明瞭な症状から軽度の症状を生じる。このことは、BRDでのウイルス及び細菌と一緒になったマイコプラズマの協調的役割を排除するものではない。記載された病変には、気管支周囲及び細気管支周囲の類リンパ球性カフィング及び肺胞炎が含まれる。これらの菌の培養は、特別な培地及び条件を必要とし、前記菌の増殖のために1週間を要しえる。
クラミジアは、ウシにおける動物の地方病性肺炎の原因として世界の多様な区域で同定された。原因因子はクラミジア・プシッタキ（Chlamydia psittaci）である。ウシ由来のいくつかの呼吸器系単離株は免疫型1及び6の特性を有し、ウシ及びヒツジの腸内感染及び流産から回収された株と類似している。免疫型6はウシ及びブタの肺炎の肺から回収された。したがって、GI管はクラミジア感染の病因で重要な部位として、さらに前記菌の天然の媒介物及び供給源として考えねばならない。クラミジア肺炎は、酪農場とともに全ての範囲の条件下のウシを冒す。クラミジアとP.ヘモリティカとの間の協調作用が実験的に示された。クラミジア肺炎のウシは通常では発熱し、嗜眠性であり、呼吸困難を有し、さらに、漿液性で後に粘液性膿性となる鼻汁及び乾性の空咳を有する。離乳期のウシがもっとも頻繁に冒されるが、より月齢の進んだウシもまた症状を示す。急性肺病変は気管支間質肺炎である。肺の頭腹側部分が冒されるが、重症例では全肺葉が含まれえる。乾性咳は気管炎のためである。肺の顕微鏡的変化には、化膿性気管支炎並びにII型肺胞細胞過形成及び間質肥厚に進む肺胞炎が含まれる。
【００１１】
ウシ生殖器カンピロバクター症は、主として胎児の早期死亡、不妊、出産期の延長及び時に流産を特徴とするウシの性病である。おそらく世界中に分布している。その原因は、運動性、グラム陰性、湾曲又はらせん状であり極鞭毛を有する細菌カンピロバクター・フェーツス・ベネレアリス（Campylobacter fetus venerealis）又はカンピロバクター・フェーツス・フェーツス（Campylobacter fetus fetus）である。何年もの間、C.フェーツス・フェーツス（以前にはC.フェーツス・インテスティナリス（C. fetus intestinalis））は一般的に腸管内生物であり、ウシで稀に流産を引き起こし不妊の原因ではないと考えられていた。しかしながら、C.フェーツス・フェーツスはまた、通常はカンピロバクター・フェーツス・ベネレアリスによるとされた古典的不妊症候群の重大な原因でありえることが示された。C.フェーツス・フェーツスのいくつかの株が存在し、ある株が不妊の原因か否かを決定するただ1つの方法は、未経産雌牛群での可能性を調べることである。コリネバクターsppは非常に不安定であり、熱、乾燥および大気への暴露によって迅速に破壊される。動物から採集後迅速に培養し、微好気性又は嫌気性条件下で増殖させなければ、カンピロバクターは増殖しないであろう。カンピロバクター・フェーツスは、交尾及び汚染された器具、寝わらにより、又は汚染された精液を用いた人工授精によって伝播される。個々の雄牛は感染に対してその感受性が異なる。なぜならば、あるウシは永続的な保菌動物となり、一方他のウシは感染に対して耐性のように思われるからである。雄牛はまた、感染雌牛との交尾後数時間機械的に感染を伝播することができる。雌牛では保菌状態の期間はまた変動し、いくらかの雌牛は迅速に感染が消失し、一方、他の雌牛はC.フェーツスを2年以上保持しえる。IgA抗体が、約50％の雌牛で感染後数ヶ月、子宮頸粘液に大量に分泌され、診断に有用である。雌牛が最終的に妊娠したとき、生殖管の大半は非感染状態でありえるが、膣は慢性的に、妊娠期間を通して感染状態のままでありえる。雌牛は全身的には正常であるが、様々な程度に粘液性膿性子宮内膜炎が存在し、前記は、胎児の早期死亡、黄体期の延長、不規則な発情期、反復交尾及び結果として出産期間の延長を引き起こす。流産が観察されるのはありふれたことではない。管理が十分に行われない群れでは、妊娠試験によって低い又は極めて低い妊娠率、より重要なことには、特に疾患が群れに最近導入されたときは妊娠期間の大きな変動が判明したときにのみ疾患に気付くことができる。その後の数年間は、不妊は入れ替えた未経産牛及び数頭の感受性の雌牛に限定される。
【００１２】
レプトスピラ症は、ヒトを含む動物の接触伝染性疾患であり、免疫学的に別個の種々のレプトスピラ血液型亜型（その大半はレプトスピラ・インテルロガンス（Leptospira interrogans）のサブグループとみなされる）によって引き起こされる。感染は無症状であるか又は種々の症状（発熱、黄疸、血色素尿、腎不全、不妊、流産及び死亡を含む）を引き起こしえる。急性期感染の後、レプトスピラはしばしば腎または生殖器官に局在し、尿中に、時には大量に数ヶ月間又は数年間放出される。前記の菌は、長期間にわたって表層水に生存するので、この疾患はしばしば水によって媒介される。米国では、この疾患は、主として血液型亜型レプトスピラ・ハルジョ（L. hardjo）、レプトスピラ・ポモナ（L. pomona）及びレプトスピラ・グリッポチフォサ（L. grippotyphosa）による。しかしながら、レプトスピラ・カニコラ（L. canicola）及びレプトスピラ・イクテロヘモラジエ（L. icterohaemorrhagiae）血液型亜型もまた単離された。ウシは、発熱、食欲不振及び呼吸困難を示し、さらにレプトスピラ・ポモナ感染では、黄疸、血色素尿及び貧血を示しえる。体温は、突然40.5−41℃に上昇しえる。血色素尿は稀に48−72時間を越えて持続する。黄疸は急速に解消しその後に貧血が続く。RBCは4−5日までに数が増加し始め、7−10日後には正常に戻る。しかしながら、レプトスピラ・ハルジョ感染は通常では溶血性貧血を引き起こさず、診断がより困難である。罹患率及び死亡率は成獣のウシより若いウシで高い。より高齢のウシでは症状は大きく変動し、診断はより困難である。動物の地方病性レプトスピラ・ハルジョ感染（前記は通常異常なミルクを生じる）は、肉牛よりも乳牛で明確である。症状は、通常ではミルク及び仔牛の生産低下に限定される；出血性クリーゼは生じない。ミルクは濃厚、黄色で、血液が薄く混じる。ミルクは凝塊を含むが、乳房の炎症の形跡はほとんどない。ミルクの生産は、処置がなくても10−14日で正常に戻る。流産及び死産（レプトスピラ・ポモナ感染及びレプトスピラ・ハルジョの散発感染では一般的である）は、一般的には最初の感染後3−10週で発生する。流産は第三期トリメスターにより一般的である。交配群における流産ストームは、しばしばレプトスピラ症が存在することを示す最初のものである。なぜならば、最初の軽度の徴候はしばしば見逃されるからである。地方病的感染群では、流産は主により若い動物で発生し、さらに流産ストームとして現れるのではなく散発性である。以前に感染した雌牛に育てられた仔牛は、初乳抗体によって6ヶ月まで防御される。一般的には仔牛は、母獣の抗体力価と類似の抗体力価を有する。急性型では、貧血、黄疸、血色素尿及び粘膜下出血が著名である。腎は、多数の点状及び斑状出血巣を示して腫脹し、時間とともに蒼白となる。肝臓は腫脹し微細な巣状壊死領域を有する。劇症例では他の器官で点状出血が認められるが、より頻繁に見られるレプトスピラ・ハルジョ感染では、病変は主として腎臓に限定される。
【００１３】
ブルセラ症は、ブルセラ属の細菌によって引き起こされ、流産、停留胎盤、並びに頻度は低いが精巣炎及び雄での副性腺の感染を特徴とする。ウシ、スイギュウ及びバイソンにおける前記疾患はほぼ例外なくブルセラ・アボルツス（Brucella abortus）で起こるが、ブルセラ・スイス（B. suis）又はブルセラ・メリテンシス（B. melitensis）もいくつかのウシの群れで時折関係している。ブルセラ・スイスは、乳牛から乳牛へと接触伝染するようには思われない。感染は急速に拡散し、非ワクチン接種群で多くの流産を引き起こす。典型的には、疾患がある地方に固有である群れでは、感染乳牛は暴露後1回だけ流産し、その後の妊娠及び授乳は正常のように見える。暴露後に、多くのウシが短期間細菌血症を示し、アグルチニン及び他の抗体を生じ、他は感染に耐性を示し、わずかのパーセントの感染牛が回復する。通常は、陽性の血清凝集検査が流産又は正常分娩に先行するが、ほぼ15%の動物で遅延しえる。インキュベーション期間は変動し、暴露時の妊娠期と関係する。菌はミルク及び尿中に排出され、乳牛は一時的に不妊になる。菌は、妊娠中、子宮回復中、及び稀に非妊娠期子宮では長期間、子宮において見出されえる。膣からの菌排出は、分娩後の液体の減少とともに大半が消失する。以前に流産したいくらかの感染乳牛は、その後の正常な分娩で子宮からブルセラを排出する。菌は、種々の期間（大半のウシで生涯にわたって）ミルクに排出される。自然界での伝播は菌の摂取によって生じる（菌は、多数の流産胎児、胎児膜及び尿排出物に存在する）。ウシは汚染された飼料及び水を摂取し、又は他の動物の汚染した生殖器を舐める。感染雄牛と感受性雌牛による性交伝播は稀なようである。伝播は、ブルセラに汚染された精液が子宮に接種される人工受精によって生じえるが、報告によれば、子宮頸中部に接種されたときには発生しない。ブルセラは、粘膜、結膜、創傷を介し又は無傷の皮膚からでさえ体内に侵入することができる。機械的ベクター（例えばヒトを含む他の動物）が感染を拡大させる。ブルセラは、胎児から、及び低温環境で2ヶ月以上維持された肥料から回収された。直射日光への暴露は数時間以内にこの菌を殺す。流産はもっとも明白な症状である。感染はまた、死産又は脆弱仔牛、停留胎盤、及びミルクの生産低下をもたらしえる。通常、合併症を伴わない流産では全身的な健康は害されない。雄牛では精嚢、精管膨大部、精巣及び精巣上体が感染されえる。したがって、菌は精液に存在する。アグルチニンは、感染雄牛の精液プラスマで示されえる。精巣膿瘍が生じることがある。長期間の持続感染ではいくらかのウシで関節炎を生じることがある。
【００１４】
アクチノミセス（コリネバクテリウム（Corynebacterium））・ピオゲネス（Actinomyces pyogenes）は、最終トリメスターで散発性流産を起こす。稀に、群れにおける発症率は地方病レベル（64%）に達しえる。前記の菌は、多くの正常な乳牛の粘膜並びに子宮及び膿瘍排出物に存在する。それらは血流に侵入し、子宮内膜炎及び胎盤炎（赤褐色から褐色でびまん性である）を引き起こす。胎児は通常自己溶解し、線維性心膜炎、胸膜炎又は腹膜炎が起こりえる。
クロストリジウムは比較的大きな嫌気性芽胞形成杆菌である。芽胞は楕円形、時に球形であり、中央、末端近く又は末端に位置する。感染動物の組織液中でクロストリジウムの栄養形は、単一で、対を形成して又は稀には鎖状で出現する。種々の病原性及び関連種の区別は、培養に関する特徴、芽胞の形及び位置、生化学反応、及び毒素又は表面の抗原の抗原特異性を基準にする。菌の自然界の生息場所は土壌及び動物（ヒトを含む）の腸管である。病原性株は、創傷の汚染又は食物の摂取によって感受性動物により獲得されえる。このようにしてもたらされる疾患は世界の多くの部分で家畜の生産の成功に対する不変の脅威である。
【００１５】
クロストリジウム・ヘモリチクム（Clostridium haemolyticum）は土壌菌であり、自然界ではウシのGI管で見出しえる。前記は、汚染土壌中で又は感染した動物の死骸の骨の中で長期間生存することができる。摂取後、潜伏芽胞は、最終的には肝臓にとどまる。インキュベーション時間は極めて変動し、開始は肝臓に嫌気生活の場所が存在するか否かに左右される。そのような発芽のための場所は、もっとも頻繁には吸虫類感染によって、はるかに低い頻度では硝酸塩高含有食物、偶然の肝臓穿刺、肝臓生検又は限局化された壊死をもたらす他の任意の原因によって引き起こされる。嫌気生活のための条件が整ったとき、芽胞は発芽し、生じた栄養細胞は増殖してβ毒素を（ホスホリパーゼC）を生成する。前記は血管内溶血及びその後遺症（溶血性貧血および血色素尿を含む）を引き起こす。ウシは予告症状無しに突然死亡しえる。通常は、重篤な抑うつ、発熱、腹痛、呼吸困難、赤痢及び血色素尿が突然開始する。貧血及び黄疸が種々の程度で存在する。胸前に浮腫が生じえる。Hgb及びRBCレベルは極めて低い。臨床症状を示す期間は、妊娠牛で約12時間から他のウシで約3−4日まで変動する。未処置動物の死亡率は約95％である。いくらかのウシはこの疾患の潜在性攻撃を受け、その後は免疫キャリアーとして機能する。脱水、貧血及び時には皮下浮腫が存在する。腹腔及び胸腔に血液様液体が存在する。肺は、肉眼的には影響を受けず、気管は粘膜内に出血を有し血液状の泡を含む。小腸及び時には大腸で出血し、それらの内容物はしばしば遊離血液又は凝固血を含む。肝臓の貧血性梗塞は実質的に疾患特有症状である。梗塞はわずかに隆起し、色は周辺組織よりも明るく、うっ血の青赤色ゾーンによって輪郭が描かれている。腎臓は暗色で脆く、通常は点状出血が散りばめられている。膀胱は赤紫色の尿を含む。死亡後、死体硬直は通常よりも迅速に開始する。
【００１６】
クロストリジウム・ショーベイ（C. chauvoei）は、自然界では動物の腸管に存在する。前記はおそらく土壌中で何年も生存するが、ただしそこでは活発に増殖しない。汚染牧草が、菌の供給源であるらしい。最近に発掘が行われた農場のウシで黒脚病の大発生が生じ、これは、土壌のかく乱が潜伏芽胞を活性化した可能性を示唆している。おそらく菌が摂取され、GI管の壁を通過した後、血流に接近して筋肉及び他の組織に堆積される。ウシでは、黒脚病感染は、悪性浮腫とは対照的に内因性である。病変は創傷歴が全くない状態で発生するが、ただし打ち身又は過剰な運動がいくつかの症例を促進したかもしれない。一般的には、黒脚病に罹患する動物は、肉牛種で、健康状態は良好で、体重が重く、通常は群れの中で優良動物である。いくつかの新規な事例が数日間毎日発見される大発生が起こる。ほとんどの症例は6ヶ月から2年のウシで発生するが、6週齢の成長期のウシ及び10−12年のウシも罹患しえる。この疾患は通常夏及び秋に発生し、冬では稀である。ヒツジでは、この疾患は若年動物に限定されず、ほとんどの症例が何らかの損傷形態（例えば毛の刈り取りの切り傷、尾の切り縮め、クラッチング、又は去勢）の後で発生する。通常、開始は突然であり、数頭のウシが前兆なく死んでいるのが発見されるであろう。急性の跛行（lameness）及び顕著な抑うつが一般的である。最初発熱するが、臨床症状が明確になるまでに、体温は正常又は正常以下になるであろう。特徴的な浮腫様及びクレピタント様腫脹が、臀部、肩、胸部、背中、頸、又はその他の場所に発生する。最小は、腫脹は小さく、熱を帯び、痛みがある。疾患が急速に進行するにつれ、腫脹は拡大し、触診でクレピテーションが認識され、前記領域への血液補給が減少するにつれ、皮膚は冷たくなり感覚を失う。一般的な症状には虚脱及び振せんが含まれる。12−48時間で死亡する。いくらかのウシでは、病変は心筋及び横隔膜に限定されるが、前記限局病変を死亡前に確信させえる徴候はない。
【００１７】
クロストリジウム・ノヴィー（C. novyi）は、高レベルの穀粒飼料を与えられているウシ及びブタの突然死の原因として疑われているが、未だ確認されてなく、さらに前記では以前から存在する肝臓の病巣が検出されなかった。致死的で壊死性毒素（主としてα毒素）が肝実質を損傷し、それによって細菌の増殖を可能にし、致死量の毒素を産生させる。通常は、明確に規定される徴候が無く突然死亡する。罹患動物は群れから遅れる傾向があり、胸骨横臥（sternal recumbency）の姿勢をとり、数時間以内に死亡する。大半の症例が、肝臓の吸虫類感染が最高に達する夏及び初秋に発生する。急性肝蛭症との区別は困難であろうが、剖検で典型的な病巣を示す動物の超急性死は、伝染性壊死性肝炎の疑いを生じるはずである。もっとも特徴的な病巣は、若い吸虫の遊走軌道に続く、肝臓の灰黄色の壊死巣である。他の一般的な所見は、麦わら色の液体で満たされた拡張した心膜嚢、並びに腹腔及び胸腔の過剰な液体である。通常は、皮下組織中の毛細血管の広範囲な破壊が存在し、前記は隣接する皮膚を黒変させる（したがって一般的名称はブラック病である）。
クロストリジウム・セプチクム（C. septicum）は、世界中の土壌及び動物の腸内容物で見出される。通常では、感染は、衰弱組織、土壌、又は組織を衰弱させる何らかのものを含む創傷の汚染から生じる。事故、去勢、尾の切縮め、不衛生なワクチン接種及び分娩は感染をもたらしえる。一般的な症状、例えば食欲不振、中毒及び高熱の他、局所病変が損傷処置後数時間又は数日以内に発生する。局所病変は軟性腫脹である（前記腫脹は圧により窪み、罹患領域の皮下及び筋肉内結合組織に浸潤する大量の浸出液の形成により急速に広がる）。そのような領域内の筋肉は黒褐色から黒色である。ガスの蓄積は一般的ではない。雄羊の頭部の重度の浮腫は、闘争によって受けた創傷の感染後に生じる。分娩での外陰部の裂傷に伴う悪性の浮腫は、外陰部の顕著な浮腫、重度の毒血症、及び24−48時間での死亡を特徴とする。黒脚病との類似性は顕著であり、剖検で為される区別は不確実で、実験室での確認はある種の方法のみである。ウマ及びブタは悪性浮腫に感受性であるが、黒脚病には非感受性である。
【００１８】
クロストリジウム・ソルデリー（C. sordellii）によって引き起こされる感染性疾患はまた、若い雄羊の頭部、顔面及び頸部のガスを発生せず、非出血性、浮腫性の腫脹を特徴とする。前記感染は、若い雄羊で互いの頻繁な闘争によって始まる。打撲を受けた皮下組織は、病原性クロストリジウムの増殖に適切な条件を提供し、皮膚の開裂はそれら菌が侵入する機会を提供する。
クロストリジウム・パーフリンゲンス（C. perfringens）A、B及びC型は、重篤な腸炎、赤痢、毒血症及び若いウシでは高い死亡率をもたらす。B及びC型はともに、重篤な腸損傷を引き起こす強い壊死性及び致死性β毒素を産生する。この毒素はタンパク分解酵素に感受性であり、疾患は腸内のタンパク分解反応の阻害を伴う。雌の初乳（トリプシン阻害物質を含む）は、幼弱豚の感受性の一因として示唆されてきた。C型はまた、成獣牛で腸性毒血症を引き起こす。ウシでは、急性の下痢、赤痢、腹痛、痙攣及び強直性発作が存在する。数時間で死亡するが、より重度でない症例では数日生存し、数日を越える回復が可能である。粘膜に潰瘍を有する出血性腸炎は全ての種で主要な病変である。肉眼的には、腸の罹患部分は深い青紫色であり、腸間膜の捻転に伴う梗塞であることが一瞥して分かる。多数のグラム陽性杆菌について腸内容物の塗抹を試験し、毒素の検出及びその後の特異的抗血清を用いた中和による特定のためにろ液を作成することができる。
C.パーフリンゲンスD型によって引き起こされる古典的腸性毒血症はウシで発生する。前記は世界中に分布し、任意の年齢の動物で発生しえる。この疾患は、十分な栄養を与えられた仔牛に授乳している、新鮮な牧草を食べる高生産性の乳牛、及び肥育場のウシの突然死症候群で疑われていたが、後者を支持する実験的証拠は得られていない。死亡していない急性罹患牛は、躁病、痙攣、失明及び数時間での死亡を示す。亜急性罹患牛は数日間混迷し、回復しえる。
破傷風毒血症は、クロストリジウム・テタニ（C. tetani、破傷風菌）によって壊死組織で産生された特異的な神経毒によって引き起こされる。ほぼ全ての哺乳動物がこの疾患に感受性を有する。破傷風は世界中に分布しているが、この菌が土壌でほとんど見つからず、破傷風がほとんど知られていないいくつかの地域（例えば米国の北部ロッキー山郡区）が存在する。一般的には、土壌のC.テタニの存在並びにヒト及びウマでの破傷風の発生率は、種々の大陸のより温暖な部分で高い。クロストリジウム・テタニ（末端に存在する球形の芽胞をもつ嫌気性菌）は、土壌及び腸管で見出される。ほとんどの事例で、前記は、創傷（特に適切な嫌気性環境を提供する深い穿刺創）から組織に導入される。
【００１９】
サルモネラ（Salmonella）sppによる感染は、全ての年齢の動物（特にストレスに曝されているか、密に飼育されているか、又は重度に汚染された飼料又は飲み水に暴露されている動物）で下痢を生じえる。サルモネラ症はサルモネラ科の多くの種によって引き起こされ、3つの主要な症候群（敗血症、急性腸炎及び慢性腸炎）の1つ以上を臨床的特徴とする。発生率は、家畜生産の強化に伴って増加している。通常若い牛は敗血症型を発する。成獣牛は急性腸炎を発する。円錐腸炎（conic enteritis）がときにウシで発生しえる。妊娠動物は流産する可能性がある。より高齢の動物では、前記疾患は赤痢及び毒血症を呈し、死亡率は極めて高くなりえる。多くの他のサルモネラsppが疾患を引き起こすが、ウシにより関係があるものは、S. チフィムリウム（S. typhimulium、ネズミチフス菌）、S.ダブリン（S. Dublin）及びS.ニューポルト（S. newport）である。それらがもたらす臨床パターンに違いはないが、サルモネラの種々の種は疫学的に相違する傾向がある。プラスミドプロフィル及び薬剤耐性パターンは時に疫学的調査の有用なマーカーである。感染動物の糞便は、飼料及び水、ミルク、屠殺場の生及び加工肉、肥料又は飼料材料として用いられる植物及び動物製品、牧草及び放牧地、並びに多くの自動力のない物質を汚染しえる。この菌は、湿った温かい場所（例えばブタの飼育小屋又は水飲み場）で数ヶ月生存しえるが、ウシの堆肥中では1週間未満しか生存できない。げっ歯類及び野鳥もまた感染源である。感染の蔓延性は種及び国の間で様々であるが、臨床症状の発生率よりも高く、一般的にストレスを与える状況（例えば餌を突然失う、輸送、干ばつ、密集、分娩、及びいくつかの薬剤の投与）によって促進される。
【００２０】
さらに関連する胃腸の病原体はクリプトスポリジウム・パルブム（Cryptosporidium parvum）及びマイコバクテリウム・アビウム・パラツベルクローシス（Mycobacterium avium paratuberculosis）である。パラツベルクローシスは慢性の接触伝染性腸炎であり、持続性及び進行性の下痢、体重減少、衰弱、最終的には死亡を特徴とする。前記は、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ラマ、ラクダ、飼育されたシカ、並びに他の飼育、外来及び野生反芻獣を冒す。前記はまた野生のウサギで認められた。ウマ及びブタは実験的に感染が可能である。世界中に分布している。クローン病（ヒトの慢性腸炎）にこの菌が関与しているということに関して相反するデータが存在する。パラツベルクローシスをもつ動物は、状況が明確になるまでは、潜在的な人獣共通伝染病リスクと考えられるべきである。原因菌はマイコバクテリウム・アビウム・パラツベルクローシス（以前にはM.パラツベルクローシス又はM.ジョーニー（M. Johnei））である。時には、他のM.アビウム亜種が症例から単離される。この菌は極めて抵抗力が強く、牧草地で1年を超えて生存できるが、日光、アルカリ性土壌及び乾燥がその生存率を低下させる。前記菌は感染動物の糞便に多数排出され、感染は汚染された試料及び水の摂取によって達成される。この疾患の清浄な群れへの導入は、通常は無症状の感染保菌動物による。感染は誕生後初期に起こるが、臨床症状は2歳未満のウシで稀に発生する。抵抗性は年齢とともに高まり、成獣として暴露されたウシは感染するのは稀である。ほとんどのウシは、感染動物の糞便で汚染された乳房の授乳によって、又は汚染された檻に収容されることによって、誕生後まもなく感染する。この菌はまた、感染牛の初乳及びミルクに存在し、さらに子宮内感染もまた記載されている。摂取後、菌は、小腸下部の粘膜及び関連するリンパ節のマクロファージに感染する。ほとんどの動物は、マクロファージの殺菌活性を高める初期細胞性免疫応答によって感染を排除するであろう。感受性動物では、この菌は増殖して、臨床症状をもたらす慢性腸炎を惹起する。発症には数ヶ月から数年を要し、通常は細胞性免疫の低下及び無効の血清抗体の上昇と平行する。しかしながら糞便への菌の排出は、臨床症状が明白になる前に開始する。マイコバクテリウム・アビウム・パラツベルクローシスは、糞便、腸間膜及び回盲部リンパ節、肥厚した腸壁から単離することができ、さらに頻度は少なくなるが乳房及び両性の生殖器から単離することができる。
【００２１】
クリプトスポリジウム症は、コクシジウム寄生虫であるクリプトスポリジウム・パルブム（Cryptosporidium parvum）によって引き起こされる世界的に分布する腸炎である。前記は宿主特異的ではなく、若い反芻獣（特にウシ）に共通である。前記はまたヒト及びブタでも見つかり、イヌ、ネコ及びウマでは稀である。他のクリプトスポリジウムは爬虫類及び鳥類で疾患を引き起こす。ウシのこの疾患（体重減少及び水性下痢を特徴とする）は、他の多くのウシの下痢と臨床的に区別することはできない。クリプトスポリジウム・パルブムは、糞便-経口ルートで伝播される微小原虫である。卵母細胞は、糞便に排出されたとき胞子を形成し（4つのスポロゾイト）、したがって直ちに感染性をもつ。平均インキュベーション期間はほぼ4日である。1−3週齢の仔牛がもっとも感受性を有するように思われる。症状（例えば食欲減退、体重減少、下痢及びテネスムス）は、他のいくつかの腸病原体によって起こるものと類似するが、症状のない感染も生じる。合併症を伴わないクリプトスポリジウム症は致死的であることは稀である。免疫減退個体では症状は重篤でありえる。仔牛で重篤な症状が認められたら、他の病因又は同時感染を除外しなければならない。C.パルブムは実質的に全腸管に感染しえるが、通常は、遠位小腸がもっとも激しく冒される。ウマでの感染は小腸に限定される。肉眼病変は、腸粘膜の充血及び黄色腸内容物から成る。顕微鏡的には、ブラシ縁に球形のこの寄生虫を有する、軽度から重度の絨毛の萎縮が明白である。アイメリア（Eimeria）及びイソスポラ（Isospora）spp（前記は細胞内寄生虫である）と異なり、C.パルブムは膜内に存在し、小腸上皮細胞のブラシ縁内に生息する。
クラミジア・プシッタキ（Chlamydia psittaci）は、妊娠4ヵ月後（通常は最後にトリメスター）に散発的流産を引き起こす。クラミジアは、胎盤炎、胎児肺炎及び肝炎を引き起こす。胎盤分葉の塗抹染色によってこの生物を明示することができる。もしそれで明らかにならない場合は、発育鶏卵で組織を培養することができる。雌牛では、流産は通常散発性であるが、ヒツジのクラミジアワクチンがウシで用いられている。
【００２２】
乳腺（乳房）の炎症は、ほぼ常に細菌又は真菌性病原体による感染の影響による。乳房炎は、他の多くの生物（ストレプトコッカス・ウベリス（Streptococcus uberis）、ストレプトコッカス・ディスガラクチエ（Streptococcus dysgalactiae）、クレブシーラ（Klebsiella）spp、シュードモナス・エルギノーザ（Pseudomonas aeruginosa）、アクチノミセス・ピオゲネス（Actinomyces pyogenes）、マイコイラズマ（Mycoplasma）spp、ノカルジア・アステロイデス（Nocardia asteroides）、セラチア・マイコバクテリウム（Serratia Mycobacterium）spp、クロストリジウム・パーフリンゲンス（Clostridium perfringens）、パスツレラ（Pasteurella）spp、酵母及びプロトテカ（Prototheca）sppを含む）による感染に付随しえる。
動物の皮膚真菌症（皮膚糸状菌症）は、皮膚及び関連組織の人畜伝染病である。臨床症状は、患部域の毛髪の消失、充血、落屑、アスベスト様痂皮である。炎症はしばしば化膿を伴う。皮膚真菌症はしばしば皮膚の局在感染を特徴とする。動物の皮膚真菌症は実質的社会経済学的影響を与える。病気の動物は長期の治療を必要とし、感染を動物と人間の両方に広げる。皮膚糸状菌症は、トリコフィトン（Trichophyton）spp又はミクロスポラム（Microsporum）sppの真菌感染よって生じる。ウシにもっとも関係がある原因は、トリコフィトン・ヴェルルコスム（Trichophyton verrucosum）、トリコフィトン・メンタグロフィテス（T. mentagrophytes）又はトリコフィトン・サルキソヴィー（T. sarkisovii）である。
下気道の感染（通常、気管支炎又は肺炎をもたらす）は、いくつかの寄生性線虫（ウシのジクチオカウルス・ヴィヴィパロウス（Dictyocaulus viviparous）を含む）のいずれかによって引き起こされえる。この肺虫は、トリコストロンギロイド上科に属し、直接生活環を有する。ウシの肺虫は北西ヨーロッパで一般的であり、若い生草を食べるウシで“ハスク（husk）”又は“寄生虫性気管支炎”の重大な大発生の原因である。ウシのD.ヴィヴィパロウス感染は経済的に最も重要であるので、もっともよく研究されてきており、前記の観察の多くが他の種に応用することができる。臨床症状は、十分な感染性幼虫への最初の暴露で発生する。ウシでは、これは、通常は牧草における前記の最初のシーズンに発生するが、より高齢の罹患牛数の増加が報告されている。肺虫感染の症状は、わずかに呼吸数が増加する軽度の咳から重度の持続的な咳及び呼吸困難、場合によっては呼吸不全にまで範囲が広い。体重増加の低下、ミルクの産生量の低下、及び体重減少が、ウシの多くの感染に付随する。明確な無症状感染が全ての種で起こりえる。ウシのもっとも一定した症状は頻呼吸及び咳である。
【００２３】
トリコモナス症は性交によるウシの原虫性疾患であり、主として胎児の早期死亡及び不妊（出産間隔の延長をもたらす）を特徴とする。おそらく世界中に分布する。原因原虫、トリコモナス（トリトリコモナス）・フェーツス（Trichomonas(Tritrichomonas) foetus）は洋梨状で、通常は10−15ｘ5−10μmであるが、顕著な多型性を有する。前記は、人工培地で培養されるとき球形になる。その前方端には、寄生虫の虫体とほぼ同じ長さの3本の鞭毛が存在する。波動膜は虫体の長さに伸長し、前記は、後鞭毛として前記膜を越えて伸びる辺縁フィラメントによって縁どられている。T.フェーチシは、精液凍結に用いられるプロセスで生存することができるが、乾燥又は高温で死滅する。トリコモナス・フェーツスはウシの生殖道で見出される。雌牛が自然の状態で感染雄牛と交配されるとき、30−90%が感染し、株の相違が存在することが示唆されている。トリコモナス症に対する感受性の品種における相違もまた存在する。全年齢の雄牛が無制限に感染しえるが、より若い雄では蓋然性はより低い。対照的に、ほとんどの雌牛は、交配後3ヶ月以内は感染しない。しかしながら免疫は長く続かず、再感染が起こる。感染雄牛の精液が人工授精に用いられたとき、伝播はまた生じえる。もっとも一般的な症状は、胎児の死亡によって生じる不妊である。これは、反復交配及び出産期の延長をもたらす。胎児の死亡及び流産もまた発生するが、妊娠期間のより初期における消失ほど一般的ではない。トリコモナス・フェーツスは、妊娠8ヶ月に採取された膣培養物で見出され、感染母獣は外見的に元気な仔牛を出産しえる。交配後に子宮留膿症が時に発生する。
ネオスポラ・カニナム（Neospora caninum）は、以前にはトキソプラズマ・ゴンディー（Toxoplasma gondii）と混同されていた真性細胞内原虫寄生虫である。無生殖期のみが知られており、それらはT.ゴンディーと類似する。N.カニナムの完全な生活環は不明であるが、イヌ、ウシ、ヤギ、ヒツジ及びネコでは、前記は胎盤を介して伝播され、その後子孫が罹患しえる。タキゾイトは、分裂のステージに応じて5−7ｘ1−5μmである。それらはエンドジオゲニーによって分裂する。タキゾイトは筋細胞、神経細胞、皮膚細胞、マクロファージ及び他の細胞内で見出される。直径が100μmまでの組織シストが神経細胞で見出される。前記シスト壁は無定形で、4μmまでの厚さを有する。シストは隔壁を持たず、細長い7ｘ1.5μmのブラディゾイトを封入する。乳牛では、N.カニナムは多くの国（特に米国）で流産の主要原因である。仔牛は流産、死産、又は低体重、脆弱若しくは麻痺をもって生まれるか、又は出生4週間以内に麻痺を生じる可能性がある。非化膿性脳炎は流産胎児組織の主要病変である。流産は妊娠期間を通して発生し、いくらかの乳牛は再び流産を繰り返す。前記仔牛の母獣は臨床的には正常である。
【００２４】
バベシア症は、バベシア（Babesia）属の赤血球内原虫寄生虫によって引き起こされる。広範囲の家畜及び野生動物並びに時には人間がこの疾患に罹患し、前記はダニによって伝播され、世界中に分布する。ウシで重要な2つの種（バベシア・ビゲミナ（Babesia bigemina）及びバベシア・ボヴィス（Babesia bovis））が熱帯及び亜熱帯領域に広範囲に広がり、この考察の焦点である。地方病的な発生領域では、以下の2つの特徴が病気の発生リスクの決定に重要である：1）仔牛が、ほぼ6ヶ月続く一定の免疫（初乳由来抗体及び年齢の両方に関連する）を有する；及び2）バベシア感染から回復した動物は生涯免疫を有する。したがって、高レベルのダニ伝播では、全ての新生児仔牛は6ヶ月齢までにバベシアに感染し、何らかの臨床症状があるとしてもほとんどこれを示さず、続いて免疫を有する。この地方病的安定状況は、ダニによるバベシアのウシへの伝播が不十分なレベルまで、ダニ数が自然に（例えば気候）又は人工的に（例えば殺ダニ処置）減少することによってひっくり返され、この初期の決定的な期間に全ての感染が確実になる。臨床的大発生をもたらしえる他の環境には、感受性牛の地方病的発生領域への導入、及び以前にはダニが存在しなかった領域へのバベシア感染ダニの侵入が含まれる。免疫における株の多様性が示されたが、これは、おそらく野外では重要なことではない。急性症状は、一般的にはほぼ1週間続く。最初の症状は発熱（しばしば41℃以上）であり、これは初めから終わりまで持続し、後に、食欲不振、呼吸数の増加、筋振せん、貧血、黄疸、並びに最終段階で血色素血症及び血色素尿を伴う体重減少が付随する。B.ボヴィス感染では、寄生赤血球の脳毛細血管塞栓によりCNSがしばしば巻き込まれる。便秘又は下痢のどちらかが存在しえる。妊娠牛はしばしば流産する。B.ボヴィスの強毒株に関しては、全身性の非特異的炎症、凝集障害、毛細血管内の赤血球静止を合併した低血圧ショック症候群が病変に寄与する。B.ビゲミナのほとんどの株に関しては、病原性作用は、赤血球の破壊とより直接的に関係がある。急性症状から回復した動物では、何年間もB.ボヴィスに、B.ビゲミナの事例では数ヶ月の間感染した状態が持続する。この保菌状態の間は症状は明白ではない。病変には、拡張し脆い脾臓；濃厚な粒状胆汁を含む拡張胆嚢をもつ腫脹肝臓；うっ血した暗色の腎臓；及び全身性貧血及び黄疸が含まれる。尿はしばしば赤色であるが、常にというわけではない。他の器官（脳及び心臓を含む）はうっ血又は点状出血を示すことがある。バベシア感染に対する感受性はウシの品種で変動する。例えば、ブラーマン（Brahman）牛は、英国品種よりもB.ボヴィスにより抵抗性である。
【００２５】
以下の全ての配列は、ダッシュ（-）で表示された欠失領域を示し（前記にはまた番号が付与されている）、一方、本明細書に添付された配列表の配列は、欠失した領域又はアミノ酸コドンがなく連続的に番号が付与されている。
配列番号:1      XIKE-A-cDNA配列
配列番号:2      XIKE-A-NdN-cDNA配列
配列番号:3      XIKE-B-cDNA配列
配列番号:4      XIKE-B-NdN-cDNA 
配列番号:5      XIKE-A-アミノ酸配列
配列番号:6      XIKE-A-NdN-アミノ酸配列
配列番号:7      XIKE-B-アミノ酸配列
配列番号:8      XIKE-B-NdN-アミノ酸配列
配列番号:9      XIKE-C-NdN-アミノ酸配列
配列番号:10     XIKE-C-NdN-cDNA配列
配列番号:11     XIKE-C-cDNA配列
配列番号:12     XIKE-C-アミノ酸配列
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００２６】
発明の要旨
本発明は、微生物学的感染（前記感染の1つはBVDVによって引き起こされる）に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関する。本明細書に記載する混合ワクチンは、少なくとも1つの弱毒BVDVを含み、ここで、前記弱毒BVDVは、糖タンパク質Ernsのためのコード配列中に少なくとも1つの変異及びNproのためのコード配列中に少なくとももう1つの変異を含み、前記は、好ましくは、Nproに存在する（仮説的）免疫調節活性の不活化に加えて、糖タンパク質Ernsに存在するRNase活性を一緒に不活化する。
好ましい実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系の感染に対してウシを治療及び／又は予防する混合ワクチンに関し、ここで前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV並びに、ウシヘルペスウイルス（BHV）、ウシ呼吸器系合胞体形成ウイルス（BRSV）、パラインフルエンザウイルス（PI-3）、カンピロバクター・フェーツス（Campylobacter fetus）、レプトスピラ・カニコラ（Leptospira canicola）、レプトスピラ・グリッポチフォサ（Leptospira grippotyphosa）、レプトスピラ・ボルグペテルセニー（Leptospira borgpetersenii）、レプトスピラ・プラジトノ（Leptospira prajitno）、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ（Leptospira icterohaemmorrhagiae）、レプトスピラ・ハルジョ（Leptospira hardjo）、レプトスピラ・ボヴィス（Leptospira bovis）、レプトスピラ・インテルロガンス（Leptospira interrogans）、及び／又はレプトスピラ・ポノマ（Leptospira ponoma）によって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的に活性な成分を含む。より好ましい実施態様にしたがえば、本発明の混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV、並びにBHV、BRSV、PI-3、カンピロバクター・フェーツス、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ボルグペテルセニー、レプトスピラ・プラジトノ、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョ・プラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ボヴィス、レプトスピラ・インテルロガンス、及び／又はレプトスピラ・ポノマの少なくとも1つの抗原を含む。
より好ましい実施態様にしたがえば、本発明は、BVDV、PI-3、BRSV、IBR及び／又はBHVによって引き起こされるウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防する混合ワクチンに関し、ここで、前記ワクチンは、本明細書に記載の少なくとも1つの弱毒BVDV、並びにPI-3、BRSV、IBR及びBHVによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効なさらに別の免疫学的に活性な少なくとも1つの成分を含む。さらに好ましい実施態様にしたがえば、本発明は、BVDV、PI-3、IBR、BRSV、及び／又はBHVによって引き起こされるウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防する混合ワクチンに関し、ここで、前記ワクチンは、本明細書に記載の少なくとも1つの弱毒BVDV、並びにPI-3、IBR、BRSV、及び／又はBHVの少なくとも1つの抗原を含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
発明の詳細な説明
説明に用いられた用語の定義：
本発明の実施態様の前に、単数形の不定冠詞及び定冠詞は、本明細書及び添付の特許請求の範囲で用いられているとおり、文脈が明瞭に別の事柄を述べている場合を除き、複数も含まれることは特記されねばならない。したがって、例えば、“a BVDV”という場合、前記BVDVの複数が含まれ、“the cell”という場合、1つ以上の細胞及び当業者に公知のその等価物を意味するという具合である。また別に規定しないかぎり、本明細書で用いられる全ての技術用語及び学術用語は、本発明が属する分野の通常の技術を有する者のいずれかが一般的に理解する意味と同じ意味を有する。本明細書に記載された方法及び材料と類似するか又は等価であるいずれのものも、本発明の実施及び試験で用いることができるが、好ましい方法、装置及び材料をこれから記載する。本明細書に記載する全ての刊行物は、前記刊行物で報告された細胞株、ベクター及び方法論（前記は本発明との関連で用いられる可能性がある）を記述しさらに開示するために、その全体が参照により本明細書に含まれる。前記のいずれも、先行発明という理由により本発明がそのような開示に先行する資格を与えられないことを容認するものと解されるべきではない。
本明細書で用いられる“BVDV”という用語は、ウシウイルス性下痢ウイルス（BVDV）1型（BVDV-1）及びBVDV 2型（BVDV-2）の種に属する全てのウイルス（任意の亜種、例えばフラビウイルス科内のペスチウイルス属の中の1a、1b、2a、2bなどを含む）を指す（Heinz et al. 2002）。より古典的なBVDV 1型株及びより最近になって認識されたBVDV 2型株は、ヌクレオチド及びアミノ酸配列においていくつかの限定的ではあるが識別される相違を示す。
本明細書で用いられる“タンパク質C”又は“Cタンパク質”又は“C-タンパク質”は、ペスチウイルスビリオンの構造成分をいう（Thiel et al. 1991）。“タンパク質C”はペスチウイルスのキャプシド又はコアタンパク質である。前記用語は、文脈にしたがい、コードヌクレオチド配列の変異から生じる、1つ又はいくつかのアミノ酸交換を有する“タンパク質C”もまた意味することができる。
【００２８】
本明細書で理解される“Npro”という用語は、合成されたポリプロテインの残余からそれ自体を切断する、ウイルスのオープンリーディングフレームによってコードされる第一のタンパク質をいう（Stark et al. (1993) J Virol 67:7088-7093；Wiskerchen et al. (1991) Virol 65:4508-4514）。前記用語はまた、文脈にしたがって、コードヌクレオチド配列の変異後に存在する“Npro”アミノ酸、又は前記タンパク質自体のコードヌクレオチド配列も意味することができる。“Nproに存在するプロテアーゼ活性”とは、前記“Npro”のポリペプチド切断活性をいう。
本明細書で用いられるNproの不活化とは、おそらくは免疫調節活性の変異による防止又は顕著な低下を意味する。好ましい実施態様では、この変異は、Ruggliら（2003）が記載したように感染細胞によるインターフェロン応答誘発のNproよる干渉を妨げるか、又は顕著に低下させる。この事例では、Nproの不活性化は、細胞が正常なインターフェロン応答を立ち上げることを可能にする。
本明細書で用いられる“プロセッシングシグナル”は、ペスチウイルス、好ましくはBVDVのC-タンパク質の機能的N-末端の生成を担保する物質、特にユビキチン、LC3、SUMO-1、NEDD8、GATE-16及びGABA(A)RAPの群から選択される物質を指す。さらにまた、インテイン、ピコルナウイルス3C、カリドウイルス2A及びウサギ出血病ウイルスのp15の群から選択されるプロテアーゼが、本明細書で用いられる“プロセッシングシグナル”として理解される。C-タンパク質の機能的N-末端の生成を担保する、当業者に公知の他の同様な任意のプロセッシングシグナルもまた、“プロセッシングシグナル”という用語に含まれるであろう。
本明細書で用いられる“Erns”は、ペスチウイルスビリオンの構造成分を表す糖タンパク質Ernsを指す（Thiel et al. 1991）。Ernsは典型的な膜アンカーを欠き、感染細胞から顕著な量で分泌される。このタンパク質はRNase活性を示すことが報告された（Hulst et al. 1994；Schneider et al. 1993；Windisch et al. 1996）。糖タンパク質E0という用語は、文献ではしばしば糖タンパク質Ernsと同義語に用いられるということは特記されるべきである。前記用語は、文脈にしたがい、さらにコードヌクレオチド配列の変異後の変異“Erns”タンパク質、又は前記タンパク質自体のためのコードヌクレオチド配列も指すことができる。“糖タンパク質Ernsに存在するRNase活性”とは、前記糖タンパク質のRNA切断活性、すなわち糖タンパク質ErnsのRNAを加水分解する能力をいう。“前記糖タンパク質に存在するRNase活性の不活化”という用語は、前記糖タンパク質Ernsの未改変野生型と比較して、改変糖タンパク質ErnsのRNA加水分解不能又は能力低下を指す。
【００２９】
本明細書で用いられるErnsの不活化は、Meyersら（1999）の文献に記載されたRNaseアッセイで非感染コントロール細胞について測定されるレベルを有意には超えないRNase活性を意味する。“Meyersら（1999）の文献に記載されたRNaseアッセイで非感染コントロール細胞について測定されるレベルを有意には超えない”とは、例えば、RNase活性が非感染コントロール細胞と比較して150%未満であることを意味する。
弱毒化：本明細書で用いられる“弱毒ペスチウイルス又はBVDV粒子”は、本発明の弱毒ペスチウイルス又はBVDV粒子（前記弱毒ウイルス粒子は本明細書に記載の方法によって弱毒化される）と前記弱毒ペスチウイルス又はBVDV粒子が誘導された野生型ペスチウイルス又はBVDV単離株との間で、重要な臨床パラメーターについて（BVDVの事例では、同じ用量（好ましくは6ｘ106 TCID50）で感染させた動物における下痢、発熱及び致死性）統計的に有意な相違が存在することを意味する。したがって、前記弱毒BVDV粒子は、下痢、発熱及び致死性を引き起こさず、したがってワクチンで用いることができる。
本明細書で用いられる“ウシ病原体”は、ウシの健康に影響を与える微生物を意味する。
本明細書で用いられる“免疫学的活性成分”又は“免疫学的に活性な成分”は、前記成分が投与される動物で免疫応答を誘発又は刺激する成分を意味する。好ましい実施態様にしたがえば、前記免疫応答は、前記成分に又は前記成分を含む微生物に向けられる。さらに好ましい実施態様にしたがえば、免疫学的活性成分は、弱毒微生物（改変生ウイルス（MLV）を含む）、死菌、又は微生物の少なくとも免疫学的に活性な部分である。
本明細書で用いられる“微生物の免疫学的活性部分”は、前記成分が投与される動物で、免疫応答を誘発又は刺激する少なくとも1つの抗原を含む微生物の部分を含むタンパク質、糖及び／又は糖タンパク質を指す。好ましい実施態様にしたがえば、前記免疫応答は、微生物の前記免疫学的活性部分に、又は前記免疫学的活性部分を含む微生物に向けられる。
【００３０】
本明細書で用いられる“ワクチン”という用語は、動物で免疫学的応答を誘発する少なくとも1つの免疫学的に活性な成分、及び前記活性成分の免疫学的活性を強化する、できうるかぎり（必ずというわけではないが）1つ以上の追加の成分を含む医薬組成物を指す。ワクチンは、医薬組成物に典型的なさらに別の成分を追加的に含むことができる。ワクチンの免疫学的に活性な成分は、完全なウイルス粒子を、それらの本来の形態で、又はいわゆる改変生ワクチン（MLV）の弱毒粒子として、又はいわゆる死菌ワクチン（KV）として適切な方法によって不活化された粒子として含むことができる。別の形態では、ワクチンの免疫学的に活性な成分は、前記微生物の適切なエレメントを含むことができる（サブユニットワクチン）。これらのエレメントは、全粒子又はそのような粒子を含む増殖培地を破壊し、場合によって所望の構造を得るその後の精製工程によって、又は例えば細菌、昆虫、哺乳動物種又は他の種をベースにした適切な系を使用することによる適切な操作を含む合成プロセス、場合によって前記にプラスされるその後の単離及び精製方法によって、又はワクチンを必要とする動物で適切な医薬組成物を用いることにより（ポリヌクレオチドワクチン接種）遺伝物質を直接取り込ませることによって前記合成プロセスを誘発して生成することができる。ワクチンは上記のエレメントの1つ又は2つ以上を同時に含むことができる。本明細書で理解される“ワクチン”という用語は、抗原性物質を含む、獣医が使用するワクチンであり、微生物感染、好ましくはBVDV感染によって惹起される疾患に対して特異的で能動的な免疫を誘発する目的のために投与される。本明細書に記載のBVDVは、前記が含む免疫原に対し、及び時にはまた抗原的に関連する生物に対する母親の抗体を介して受動的に伝播することができる能動免疫を付与する。本発明のワクチンは上記に定義するワクチンを指し、この場合、免疫学的に活性な1つの成分は、BVDVであるか、又は公知の任意のBVDV配列（センス又はアンチセンス）に対して70%を超える相同性を有するヌクレオチド配列に由来する。
“生ワクチン”という用語は、複製コンピテント、特に複製コンピテントなウイルス活性成分を含むワクチンを指す。
本明細書で用いられる“混合ワクチン”は、一価、二価又は多価結合の免疫学的活性成分と一緒に本明細書に記載の弱毒BVDVを含むワクチンを意味する。
【００３１】
本明細書で用いられる“微生物学的感染”は、ウシに対して病原性である微生物によって引き起こされる感染を指す。そのような微生物には細菌、ウイルス、酵母又は菌類、マイコプラズマ、及び寄生虫が含まれるが、ただしこれらに限定されない。
本発明の“フラグメント”は、本発明のポリヌクレオチド分子の任意のサブユニット、すなわち任意のサブセットである。DNAの場合、前記フラグメントは完全長のウイルスゲノムを含むDNAよりも短い。
本明細書で用いられる“ヌクレオチド分子の機能的変種”は、本発明のヌクレオチド分子と実質的に類似の生物学的活性（機能的または構造的活性のどちらか）を有するヌクレオチド分子である。“機能的変種”という用語はまた、“フラグメント”、“機能的変種”、“縮退核酸暗号による変種”、又は“化学的誘導体”を含む。そのような“機能的変種”は、例えば1つ又はいくつかのヌクレオチド交換、欠失又は挿入を含むことができる。前記機能的変種は、その生物学的活性、例えば感染性クローン又はワクチン株としての機能を少なくとも部分的に保持するか、又は改善された生物学的活性さえも示す。
“実質的に類似の生物学的活性を有する”とは、本明細書に提供されるペスチウイルスに関しては、前記ペスチウイルスは本明細書に記載の態様で弱毒化され、弱毒生ウイルス（前記は胎盤を通過する能力は喪失するが、ワクチン接種後に免疫応答を仲介する）の製造に適切な非病原性ウイルスを生じることを意味する。
“遺伝暗号の縮退性性質による変種”とは、ある種のアミノ酸は、いくつかの異なるヌクレオチドトリプレットによってコードされえるという事実から生じる変種である。前記変種は、その生物学的活性を少なくとも部分的に保持するか、又は改善された生物学的活性さえも示す。
もしも両方の分子が実質的に類似のヌクレオチド配列又は生物学的活性を有するならば、前記分子はもう一方の分子と“実質的に類似”である。したがって、2つの分子が類似の活性を有するということを条件に、ヌクレオチド配列が同一でないならば、それらは当該用語が本明細書で用いられる変種と考えられ、さらに類似のヌクレオチド配列を有する2つの分子は、それらの生物学的活性がたとえ同一でなくても当該用語が本明細書で用いられる変種と考えられる。
【００３２】
本明細書で用いられる“変異”とは、本発明のタンパク質／アミノ酸をコードする核酸分子における改変をいう。前記変異は、置換（1つ又はいくつかのヌクレオチド／塩基対の置き換え）、欠失（1つ又はいくつかのヌクレオチド／塩基対の除去）、及び／又は挿入（1つ又はいくつかのヌクレオチド／塩基対の付加）をいう（ただし前記に限定されない）。本明細書で用いられる変異はただ1つの変異又はいくつかの変異を指し、したがって英文では、前記用語にはしばしば複数を意味する“ｓ”が付され、ただ1つの変異及びいくつかの変異の両方を指す。前記変異には、点変異（ただ1つのヌクレオチドの変異）又はより大きな変異（例えばコード核酸分子の部分が欠失、置換されるか、及び／又は複数の付加コード核酸が挿入される）が含まれるが、ただしこれらに限定されない。前記変異は、コード配列における変化のために改変された発現ポリペプチドをもたらす。そのような改変ポリペプチドは、下記で説明する本発明の開示で示されるように所望される。
免疫応答を強化する追加の成分は、一般的には“アジュバント”と称される構成物質である。前記は、例えば水酸化アルミニウム、鉱物油若しくは他の油、又はワクチンに添加される、若しくはそのような追加成分によってそれぞれの誘発後に身体によって生成される補助物質（例えばインターフェロン、インターロイキン又は増殖因子であるが、ただしこれらに限定されない）である。
“医薬組成物”は、本質的には前記組成物が投与される生物、又は前記生物内若しくは生物上に生息する生物の生理学的（例えば免疫学的）機能を改変することができる1つ以上の成分からなる。前記用語には、抗生物質又は抗寄生虫薬の他に、ある種の他の目的を達成するために一般的に用いられる他の構成物質が含まれるが、ただしこれらに限定されない（前記他の目的は、プロセッシングの特質、滅菌性、安定性、腸管ルート又は非経口ルート（例えば経口、鼻内、静脈内、筋肉内、皮下、皮内又は他の適切なルート）を介する組成物投与の実行可能性、投与後の耐性及び制御放出特性のような目的であるが、ただしこれらに限定されない）。そのような医薬組成物の非制限的一例（例示のためにもっぱら提供される）は、以下のように製造することができる：感染細胞の細胞培養上清を安定化剤（例えばスペルミジン及び／又はBSA（ウシ血清アルブミン））と混合し、前記混合物を続いて凍結乾燥するか、又は他の方法によって脱水する。ワクチン接種の前に、続いて前記混合物を水性溶液（例えば食塩水、PBS（リン酸緩衝食塩水））又は非水性溶液（例えばオイルエマルジョン、アルミニウム系アジュバント）中で再水和させる。
【００３３】
発明の開示
上記の技術的な問題の解決は、特許請求の範囲に示す特徴を有する開示及び実施態様によって達成される。
本発明は、ウシの微生物感染の治療及び／又は予防のための混合ワクチンに関し、前記ワクチンは、本明細書に記載の弱毒生BVDV及び、BVDV以外の感染性因子によって引き起こされるウシの疾患又は異常の治療又は予防を目的とする少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む。
弱毒BVDV
BVDVは、糖タンパク質Ernsのコード配列に少なくとも1つの変異を導入することによって弱毒化されえることがWO99/64604に記載された（この場合、前記変異はErnsの遺伝子領域に存在するRNase活性の不活化をもたらす）。さらにまた、驚くべきことに、糖タンパク質Ernsのコード配列に少なくとも1つの変異及びNproのコード配列に少なくとももう1つの変異を導入することによって、BVDVをより効果的に弱毒化することができることが見出された。これによって、好ましくは、Nproに存在する免疫調節活性の不活化に加えて、糖タンパク質Ernsに存在するRNase活性の不活化が一緒にもたらされる（WO2005/111201）。１つの特徴としての免疫調節作用は、Ruggliら（2003）がペスチウイルスについて例示的態様で示している（ただしこの提示の機能に限定されない）。したがって、ある特徴にしたがえば、本発明は、糖タンパク質Ernsのコード配列に少なくとも1つの変異及びNproのコード配列に少なくとももう1つの変異を有する少なくとも1つの弱毒BVDVを含む混合ワクチンを提供する。好ましくは、そのような弱毒BVDVでは、糖タンパク質Ernsのコード配列における前記変異は、Ernsに存在するRNase活性の不活化をもたらし、及び／又はNproのコード配列における前記変異は前記Nproの不活化をもたらす。
【００３４】
本明細書に記載の弱毒BVDVは、ウシの微生物感染の治療及び／又は予防を目的とする混合ワクチンで有利に用いることができる。驚くべきことには、本明細書に記載のBVDV（Npro及びErns遺伝子領域に改変を含む）は、それらは胎盤を通過しないので妊娠動物での使用で安全である。このことは、実施例3でBVDVについて非限定的態様で実証される。さらにまた、弱毒の基礎としてNpro及びErns内に規定の変異を有するBVDVは、より病原性を有する株への復帰の恐れを回避させるであろう。前記弱毒変異の更なる利点は、それらの分子的固有性に存在する。前記固有性は、弱毒BVDVのための明確な標識としてそれらを使用し、野外由来のBVDVから前記を識別することを可能にする。したがって、さらに別の特徴では、本発明は、糖タンパク質Ernsのコード配列に少なくとも1つの変異及びNproのコード配列に少なくとももう1つの変異を有する少なくとも1つの弱毒BVDVを含む混合ワクチンを提供する。好ましくは、そのような弱毒BVDVでは、糖タンパク質Ernsのコード配列における前記変異は、Ernsに存在するRNase活性の不活化をもたらし、及び／又はNproのコード配列における前記変異は前記Nproの不活化をもたらす。前記不活化は、当業者に公知のErns及びNproのコード配列の任意の変異によってもたらしえる。この場合、前記変異は、“定義”の項で規定したいずれの変異（例えば欠失、挿入変異及び／又は置換変異）でもよい。もっとも好ましくは、変異は欠失である。なぜならば野生型への復帰の蓋然性は欠失でもっとも低いからである。
総合すれば、本明細書で一般的に用いられる弱毒BVDV又は弱毒ペスチウイルスという用語は、糖タンパク質Ernsのコード配列に少なくとも1つの改変及び／又はNproのコード配列に少なくとも1つの改変を有する、任意の弱毒BVDVまたはペスチウイルス（ただし前記に限定されない）を意味する。以下では、Erns及び／又はNproにおけるそのような改変のいずれかの具体的な実施態様がより詳細に記載される。好ましい特徴にしたがえば、本明細書で一般的に用いられる弱毒BVDV又は弱毒ペスチウイルスという用語は、糖タンパク質Ernsのコード配列に少なくとも1つの改変及びNproのコード配列に少なくとも1つの改変を有する、任意の弱毒BVDV又はペスチウイルス（ただし前記に限定されない）を意味する。しかしながら、本発明は、本明細書に記載される具体的な改変に限定されないことは本明細書によって理解されよう。本明細書で提供される教示を用いて当業者は、本明細書に記載の弱毒効果を有する糖タンパク質Erns及び／又はNpro内に更なる改変を作成及び導入することができる。
【００３５】
BVDVのErnsの改変
糖タンパク質Ernsは、約97kDのジスルフィド結合ホモダイマーを形成することが示された。各モノマーは、Rumenapfら（1993）が記載したCSFVポリプロテインのアミノ酸268から494に対応する227アミノ酸から成る。CSFVのAlfort/Teubingen株のゲノム配列は、アクセッション番号J04358によりGenBank/EMBLデータライブラリーで入手できる。また別にはBVDVのCP7株のアミノ酸配列は、GenBank/EMBLデータライブラリーでアクセスできる（アクセッション番号U63479）。BVDV CP7のポリプロテインでは、Ernsタンパク質は残基271から497に対応する。アミノ酸の2つの領域が、糖タンパク質Ernsとともにいくつかの植物及び菌類のRNase活性タンパク質で高度に保存されている（Schneider et al. 1993）。これら2つの領域はRNase酵素活性にとって特に重要である。第一の領域は、295位から307位（BVDV CP7株については298から310）のアミノ酸領域から成り、第二の領域は、Meyersら（1999）でCSFVのAlfort株について実証された前記ウイルスのポリプロテインの338位から357位（BVDV CP7株については341から360）のアミノ酸領域から成る（公表されたCSFV Alfort/Teubingen株（Meyers et al. 1989）の推定アミノ酸配列による番号付与）。上記で述べたRNase活性に特に重要なアミノ酸は、CSFV Alfort/Teubingen株について規定された厳密な位置に限定されないが、当該位置に存在するか又は他の株の当該位置に対応する好ましいアミノ酸、例えばBVDV及び一般的にペスチウイルスで見出されるものを指し示すために（なぜならばそれらは高度に保存されているので）、例示的態様で単に用いられる。CSFV Alfort/Teubingen株以外のペスチウイルスについては、好ましいアミノ酸の位置の番号は異なる可能性があるが、ペスチウイルスの分子生物学分野の専門家は、このアミノ酸配列及び当該配列内のこれらモチーフの位置の高度な保存によってこれら好ましいアミノ酸を容易に特定するであろう。ある具体的な非限定的な例では、CSFV Alfort/Teubingenの346の位置はBVDV cp7株の349位と同一である。
【００３６】
結果として、本発明は、好ましくは本発明のBVDVに関し、この場合、糖タンパク質Ernsのコード配列における前記変異は、298から310位及び／又は341から360位のアミノ酸に対応するコードヌクレオチド配列に存在する。好ましくは、そのような変異は、例えばH300Lである（前記は300位のヒスチジンがロイシンによって置換されることを意味する（アミノ酸は一文字記号で与えられ、位置の番号の前のアミノ酸は置換されるべきアミノ酸を示し、位置の番号の後ろのアミノ酸は代用されるアミノ酸を示す）。
糖タンパク質Ernsの適切な改変は、例えば、ただ1つの置換／欠失ではS298G、H300K、H300L、H300R、H300del、W303G、P304del、E305A、C308G、R343G、E345del、W346G、K348A、H349K、H349L、H349del、H349Q、H349SV（H349Sの変異及びVの挿入）、K348R、W351P、W351G、W351L、W351K、W351Hであり；二重置換／欠失では、H300L/H349L、K348del/H349del、H349del/G350del、E345del/H349del、W303G/E305A、H300K/H349K、H300K/H349Lであり；三重欠失では、L299del/H300del/G301del、K348del/H349del/G350delである。番号付与は、上記に列挙した全ての変異体についてBVDV CP7の公表されたアミノ酸配列による。上記に列挙した全ての変異体は、少なくとも、Npro領域内に変異をもたないBVDV変異体として検査された。ペスチウイルスのそのようなBVDV糖タンパク質の適切な変異体は、例えばWO99/64604（前記文献は参照により本明細書に含まれる）によって提供される。しかしながら、本発明のさらに好ましい実施態様にしたがえば、Npro領域内に少なくとも1つの追加の変異が、下記にさらに詳細に開示するように存在する必要がある。
【００３７】
349位（HVDV）のヒスチジン残基の欠失又は置換はErnsの効果的な不活化をもたらし、したがって特に有用なBVDV生ワクチンを生じることが見出された。本発明は、349位（BVDV CP7の公表された配列（Meyers et al. 1996b）による番号付与）のヒスチジン残基が欠失するとき、BVDVは生命活性を有しRNase活性をもたないErnsをコードすることを示す。したがって、好ましくは、混合ワクチンで用いられるBVDVは、糖タンパク質Ernsのコード配列に変異を有し、前記は349位のヒスチジン残基の欠失又は置換である。さらに具体的に言えば、RNaseの仮説的活性部位は、保存されたErns配列、SLHGIWPEKICTG（配列番号:13）及び／又はLQRHEWNKHGWCNWFHIEPW（配列番号:14）によって表される（BVDV-2 New York'93タンパク質の配列はここでは例示的態様で提供される；小さな変化が他のBVDV配列で見出されえるが、モチーフの実体は当業者には常に明白であろう）。例として、BVDV-1 CP7の対応するアミノ酸配列は、SLHGIWPEKICTG（配列番号:13）及び／又はLQRHEWNKHGWCNWYNIEPW（配列番号:15）であろう。したがって、好ましくは混合ワクチンのBVDVは、糖タンパク質Ernsのコード配列に変異を有し、前記は、保存されたErns配列、SLHGIWPEKICTG（配列番号:13）及び／又はLQRHEWNKHGWCNWFHIEPW（配列番号:14）をコードするヌクレオチド配列内に存在する。これらの配列はRNaseの仮説的活性部位である。仮説的Erns活性部位の配列、SLHGIWPEKIC（配列番号:16）及びRHEWNKHGWCNW（配列番号:17）は、ペスチウイルス間でさらにいっそう保存されている。したがって、本発明に記載の混合ワクチン製造に用いられるBVDVは、好ましくは、Nproタンパク質及び／又は糖タンパク質Ernsのコード配列内に少なくとも1つの変異を有し、この場合、糖タンパク質Ernsのコード配列内の前記変異は、保存されたErns配列、SLHGIWPEKIC（配列番号:16）及び／又はLQRHEWNKHGWCNWYNIEPW（配列番号:15）をコードするヌクレオチド配列に存在する。好ましくは、前記変異は前記配列のただ1つにおいて存在する。したがって、本明細書に記載の混合ワクチンのBVDVは、Nproタンパク質及び／又は糖タンパク質Ernsのコード配列内に少なくとも1つの変異を有し、この場合、糖タンパク質Ernsのコード配列内の前記変異は、保存されたErns配列、SLHGIWPEKIC（配列番号:16）又はRHEWNKHGWCNW（配列番号:17）をコードするヌクレオチド配列に存在する。好ましくは、そのような変異は、2つの異なるアミノ酸に関し、すなわちそれらは二重変異である。したがって、前記変異は、2つのアミノ酸をコードする2つの異なるトリプレット中の1つから3つのヌクレオチド変異でありえる。したがって、本発明はまた、Nproタンパク質及び／又は糖タンパク質Ernsのコード配列内に少なくとも1つの変異を有する弱毒生BVDVを含む混合ワクチンに関し、この場合、糖タンパク質Ernsのコード配列内の前記変異は、保存されたErns配列、SLHGIWPEKIC（配列番号:16）及び／又はRHEWNKHGWCNW（配列番号:17）をコードするヌクレオチド配列に存在する2つの変異である。好ましくは、そのような変異はただ1つのアミノ酸に関する。したがって、前記変異は、1つのアミノ酸をコードする1つのトリプレット中の1つから3つのヌクレオチド変異でありえる。したがって、本発明はまた、Nproタンパク質及び／又は糖タンパク質Ernsのコード配列中に少なくとも1つの変異を有する弱毒生BVDVを含む、微生物学的感染に対してウシを治療��び／又は予防することを目的とする混合ワクチンに関し、この場合、ただ1つの変異は、保存されたErns配列、SLHGIWPEKIC（配列番号:16）及び／又はRHEWNKHGWCNW（配列番号:17）に存在する。
【００３８】
BVDVのNpro遺伝子の改変
上記で述べたように、本明細書で提供される弱毒BVDVは、糖タンパク質Ernsのコード配列及び／又はNproタンパク質のコード配列に少なくとも1つの変異を有し、この場合、前記変異は、好ましくは糖タンパク質Ernsに存在するRNase活性の不活化及び／又はNproに存在する免疫調節活性の不活化をもたらす。Nproの不活化は、下記でさらに詳細に記載する特定の式を有するBVDVで達成される。前記の式では、Nproの0から全てのアミノ酸が存在し、プロセッシングシグナルとして機能するユビキチン若しくはLC3又は別の配列（例えばSUMO-1、NEDD8、GATE-16、GABA(A)RAP、又はプロテアーゼ（例えばインテリン、ピコルナウイルス3C、カルドウイルス2A、又はウサギ出血病ウイルスのp15）が存在するか、又は存在しない。プロセッシングシグナルが存在する場合は、プロセッシングシグナルのコード配列は、Nproタンパク質（残りの部分）のC-末端に又はその近くに存在する。プロセッシングシグナルが存在する場合のみ、Nproをコードする任意の数のアミノ酸（＝Nproアミノ酸）が存在しえる。プロセッシングシグナルが挿入されていない場合、Nproの（好ましくはアミノ末端アミノ酸の）最大で12のアミノ酸が存在することができ、残余のアミノ酸は欠失されねばならない。さらにまた、上記に開示したErns変異（少なくともその1つが本明細書記載の弱毒BVDVに存在する必要がある）を除いて、弱毒BVDVの残余の配列は未変化のままであるか（すなわち変異しない）、又はC-タンパク質のN-末端近くに変異を有することができる。これは、下記に記載する多数のより具体的な実施態様によって実証される。
【００３９】
本混合ワクチンの弱毒BVDVは、上記に記載したようにErnsのコード領域及び／又はNproで改変され、この場合、前記Nproのコード配列の変異は以下の式を特徴とするコードされたポリプロテインを生じる：
[Npro]x-[PS]y-[C-term]
式中、
[Npro]は、前記ポリプロテインのNpro部分を指し、ここで“x”はポリプロテインに存在するNproのアミノ酸数を表し；
[PS]は、ユビキチン、LC3、SUMO-1、NEDD8、GATE-16若しくはGABA(A)RAP、又はプロテアーゼ、例えばインテリン、ピコルナウイルス3C、カルドウイルス2A若しくはウサギ出血病ウイルスのp15、又は、C-タンパク質の機能的N-末端の生成を担保する当業者に公知の任意のプロセッシングシグナルから選択されるプロセッシングシグナルを指す。 “Y”は＝0でもよく（プロセッシングシグナルは存在しないことを意味する）、又は“Y”は＝１でもよい（プロセッシングシグナルが存在することを意味する（＝PS在り））。
[C-term]は、完全なペスチウイルス、特に完全なBVDVのポリプロテインでNproを除くが、キャプシド（C）タンパク質及びペスチウイルスポリプロテイン、特にBVDVポロプロテインに存在する、カルボキシ末端のNS5Bを含む他の任意のタンパク質を指す。好ましくは、前記[C-term]の糖タンパク質Ernsは、糖タンパク質Ernsに存在するRNase活性が不活化されるように変異されてある。“ペスチウイルスポリプロテイン／BVDVポリプロテインに存在する任意の他のタンパク質”という用語は、Erns、E1、E2、p7、NS2、NS3、NS4A、NS4B及びNS5Aを指し、ここで糖タンパク質Ernsは、好ましくは本明細書に開示されるように、糖タンパク質Ernsに存在するRNase活性が不活化されるように変異されてある。好ましくは、ペスチウイルス、特に本発明のBVDVは、2位のアミノ酸を除いて（前記はDからNに変異する）変異していないC-タンパク質を有する。したがって、[C-term*]は[C-term]と同じであるが、C-タンパク質の2位に変異（Dの代わりにN）を有し；
“ｙ”が＝0である場合（［PS］が存在しないことを意味する）、“ｘ”は0から12であり（Nproに固有のアミノ酸は存在しないか、又は1から12のNproのアミノ酸が存在することを意味し、好ましくはNproのN-末端のアミノ酸は存在する）；
“ｙ”が＝1である場合（［PS］が存在することを意味する）、“ｘ”は0から168である（Nproに固有のアミノ酸は存在しないか、又は1から168全てのNproのアミノ酸が存在することを意味し、好ましくはNproのN-末端のアミノ酸は存在する）。
【００４０】
またより好ましくは、Nproのコード配列の変異は、以下の式を特徴とするコードされたポリプロテインを生じる；
[Npro]1-[PS]0-[C-term]
式中、定義は上記で規定したとおりである。
その具体的な例は下記で開示するが、この場合、N-末端のメチオニンの後にC-タンパク質及びポリプロテインに存在する任意の他のタンパク質（カルボキシ末端のNS5Bを含む）が続く。したがって、もっとも好ましくは、本明細書に記載の弱毒BVDVは、以下の式を特徴とするポリプロテインによってコードされる：
M[C-term]
式中、定義は上記で規定したとおりである。
またより好ましくは、本発明は、微生物感染に対してウシを治療及び／又は予防する混合ワクチンに関し、前記ワクチンは、上記に記載したようにErnsのコード領域において及び／又はNproにおいて改変される弱毒BVDVを含み、Nproのコード配列における前記変異は、以下の式を特徴とするコードされたポリプロテインを生じる： 
[Npro]3-[PS]0-[C-term]
式中、定義は上記で規定したとおりである。
弱毒BVDVのさらに具体的な例を下記に開示するが、この場合、N-末端のメチオニンの後にNpro配列のEL、及びC-タンパク質、及びポリプロテインに存在する任意の他のタンパク質（カルボキシ末端のNS5Bを含む）が続く。したがって、もっとも好ましくは、本明細書に記載の弱毒BVDVは、以下の式を特徴とするポリプロテインによってコードされる：
MEL[C-term]
式中、定義は上記で規定したとおりである。
【００４１】
またより好ましくは、本発明は、微生物感染に対してウシを治療及び／又は予防する混合ワクチンに関し、前記ワクチンは、上記に記載したようにErnsのコード領域において及び／又はNproにおいて改変される弱毒BVDVを含み、Nproのコード配列における前記変異は、以下の式を特徴とするコードされたポリプロテインを生じる： 
[Npro]4-[PS]0-[C-term]
式中、定義は上記で規定したとおりである。
弱毒BVDVのさらに具体的な例を下記に開示するが、この場合、N-末端のメチオニンの後にNpro配列のELF（配列番号:18）、及びC-タンパク質、及びポリプロテインに存在する任意の他のタンパク質（カルボキシ末端のNS5Bを含む）が続く。したがって、もっとも好ましくは、本発明はBVDVに関し、この場合、Nproのコード配列における前記変異は、以下の式を特徴とするコードされたポリプロテインを生じる： 
MELF[C-term]
式中、定義は上記で規定したとおりである。
またより好ましくは、本発明は、微生物感染に対してウシを治療及び／又は予防する混合ワクチンに関し、前記ワクチンは、上記に記載したようにErnsのコード領域において及び／又はNproにおいて改変される弱毒BVDVを含み、Nproのコード配列における前記変異は、以下の式を特徴とするコードされたポリプロテインを生じる： 
[Npro]6-[PS]0-[C-term]
式中、定義は上記で規定したとおりである。
本明細書に記載の弱毒BVDVのさらに具体的な例を下記に提供するが、この場合、N-末端のメチオニンの後にNpro配列のELFSN（配列番号:19）、及びC-タンパク質、及びポリプロテインに存在する任意の他のタンパク質（カルボキシ末端のNS5Bを含む）が続く。したがって、もっとも好ましくは、本発明は、微生物感染に対してウシを治療及び／又は予防する混合ワクチンに関し、この場合、前記ワクチンは、上記に記載したようにErnsのコード領域において及び／又はNproにおいて改変される弱毒BVDVを含み、Nproのコード配列における前記変異は、以下の式を特徴とするコードされたポリプロテインを生じる：
MELFSN-[C-term]
式中、定義は上記で規定したとおりである。
【００４２】
本明細書に記載の弱毒BVDVのさらに具体的な例を下記に提供するが、この場合、N-末端のメチオニンの後に、Npro配列のELFSNE（配列番号:20）；ELFSNEL（配列番号:21）；ELFSNELL（配列番号:22）；ELFSNELLY（配列番号:23）；ELFSNELLYK（配列番号:24）；又はELFSNELLYKT（配列番号:25）、及びC-タンパク質、及びポリプロテインに存在する任意の他のタンパク質（カルボキシ末端のNS5Bを含む）が続く。したがってもっとも好ましくは、本発明は、微生物感染に対してウシを治療及び／又は予防する混合ワクチンに関し、この場合、前記ワクチンは、上記に記載したようにErnsのコード領域において及び／又はNproにおいて改変される弱毒BVDVを含み、Nproのコード配列における前記変異は、以下の式を特徴とするコードされたポリプロテインを生じる：
MELFSN-[C-term]
MELFSNE-[C-term]
MELFSNEL--[C-term]
MELFSNELL-[C-term]
MELFSNELLY-[C-term]
MELFSNELLYK-[C-TERM]
MELFSNELLYKT-[C-TERM]
またより好ましくは、本発明は、微生物感染に対してウシを治療及び／又は予防する混合ワクチンに関し、前記ワクチンは、上記に記載したようにErnsのコード領域において及び／又はNproにおいて改変される弱毒BVDVを含み、Nproのコード配列における前記変異は、以下の式を特徴とするコードされたポリプロテインを生じる： 
[Npro]4-[PS]0-[C-term*]
式中、定義は、C-タンパク質のアミノ末端部分が変化しているという事実（前記もまた上記に記載されている）を除いて上記で規定したとおりである。
BVDVのさらに具体的な例を下記で開示するが、この場合、N-末端のメチオニンの後にNpro配列のELFが続き、さらにC-タンパク質配列では、2位のアミノ酸がDからNに変異している。したがって、アミノ末端のC-タンパク質の配列は、SDEGSK（配列番号:27）ではなくSNEGSK（配列番号:26）である。したがって、もっとも好ましくは、本発明は、微生物感染に対してウシを治療及び／又は予防する混合ワクチンに関し、この場合、前記ワクチンは、上記に記載したようにErnsのコード領域において及び／又はNproにおいて改変される弱毒BVDVを含み、Nproのコード配列における前記変異は、以下の式を特徴とするコードされたポリプロテインを生じる：
MELF-[C-term*]
式中、C-タンパク質では2位のアミノ酸はDからNに変異し、さらに定義は上記で規定したとおりである。
【００４３】
またより好ましくは、本発明は、微生物感染に対してウシを治療及び／又は予防する混合ワクチンに関し、前記ワクチンは、上記に記載したようにErnsのコード領域において及び／又はNproにおいて改変される弱毒BVDVを含み、Nproのコード配列における前記変異は、以下の式を特徴とするコードされたポリプロテインを生じる： 
[Npro]x-[PS]1-[C-term]
式中、定義は上記で規定したとおりであり、
さらにPSは上記に開示した任意のPSであり、より好ましくはユビキチン又はLC3の群から選択される。
BVDVのさらに具体的な例を下記に開示するが、この場合、N-末端のメチオニンの後に任意の21又は28のNproアミノ酸、ユビキチン又はLC3、及びC-タンパク質が続く。したがって、もっとも好ましくは、本発明は、微生物感染に対してウシを治療及び／又は予防する混合ワクチンに関し、この場合、前記ワクチンは、上記に記載したようにErnsのコード領域において及び／又はNproにおいて改変される弱毒BVDVを含み、Nproのコード配列における前記変異は、以下の式を特徴とするコードされたポリプロテインを生じる：
[Npro]22-[PS]1-[C-term]、（式中、好ましくは、PSはユビキチン又はLC3）、又は
[Npro]29-[PS]1-[C-term]、（式中、好ましくは、PSはユビキチン又はLC3）
ユビキチンは、高度に保存された周知の76アミノ酸の細胞性タンパク質である。ユビキチンとの結合はプロテアソームによる分解のためにタンパク質に目印を付けることができるので、ユビキチンは、他の機能の中でとりわけ、タンパク質異化作用で重要な役割を果たす。カルボキシ末端のグリシンを介して他のタンパク質と結合又は融合したユビキチンは、細胞性のユビキチン特異的プロテアーゼによって切り離されることができる。したがって、通常、タンパク質とユビキチンのカルボキシ末端との融合は、細胞内で発現されたときに、融合タンパク質のその成分への規定されたタンパク質切断をもたらす。
LC3（微小管結合タンパク質の軽鎖3）は、多様な機能を示す125アミノ酸の細胞性タンパク質を表す（ウシLC3の長さ）。最近、オートファジーにおけるこのタンパク質の基本的な役割が規定された。このプロセスの間、LC3はカルボキシ末端の切断によって活性化される。それによって、グリシンから成る新しいカルボキシ末端が生成される。続いて、LC3は、カルボキシ末端のグリシンを介して、オートファージ小胞の膜に存在するホスファチジルエタノールアミンと結合する。このプロセスのために、LC3のカルボキシ末端と融合したタンパク質は、規定された位置で細胞性プロテアーゼによって切断される。
【００４４】
またより好ましくは、本発明は、微生物感染に対してウシを治療及び／又は予防する混合ワクチンに関し、前記ワクチンは、上記に記載したようにErnsのコード領域において及び／又はNproにおいて改変される弱毒BVDVを含み、Nproのコード配列における前記変異は、以下の群から選択される以下の式を特徴とするコードされたポリプロテインを生じる： 
[Npro]2-[PS]y-[C-term]及び好ましくはME-[PS]y-[C-term]；
[Npro]5-[PS]y-[C-term]及び好ましくはMELFS-[PS]y-[C-term]；
[Npro]7-[PS]y-[C-term]及び好ましくはMELFSNE-[PS]y-[C-term]；
[Npro]8-[PS]y-[C-term]及び好ましくはMELFSNEL-[PS]y-[C-term]；
[Npro]9-[PS]y-[C-term]及び好ましくはMELFSNELL-[PS]y-[C-term]；
[Npro]10-[PS]y-[C-term]及び好ましくはMELFSNELLY-[PS]y-[C-term]；
[Npro]11-[PS]y-[C-term]及び好ましくはMELFSNELLYK-[PS]y-[C-term]；
[Npro]12-[PS]y-[C-term]及び好ましくはMELFSNELLYKT-[PS]y-[C-term]。
式中、定義は上記で規定したとおりである。開示した好ましい実施態様はBVDVを示す。
もっとも好ましくは、yは0である（PSは存在しない）。
【００４５】
BVDVの適切なErns Nproの二重変異体には、下記の表に列挙したものが含まれる：
表5：BVDV Erns Npro 二重変異体
2009516002.tif 000003
2009516002.tif 000004
2009516002.tif 000005
2009516002.tif 000006
Npro−変異はそれらの残りのアミノ末端配列によって示される。例えば、MELF-変異体は、Nproのコード領域は、アミノ末端のアミノ酸MELFを除いて完全に欠失することを意味する。
【００４６】
本発明のある実施態様にしたがえば、本明細書で提供される混合ワクチンの弱毒BVDVはBVDV 1型である。好ましくは、前記弱毒BVDVは、以下のBVDV 1型株の1つをベースにする：NADL、Osloss、SD-1、CP7、又はKE9。ここで前記株の各々は、上記に記載したErns及び／又はNpro変異の少なくとも1つ、好ましくは、上記の表に列挙したErns及びNpro領域内の二重変異体の少なくとも1つを含む。さらに別の実施態様にしたがえば、本明細書で提供される混合ワクチンの前記弱毒BVDVはBVDV 2型である。好ましくは、前記弱毒BVDVは、以下のBVDV 2型株の1つをベースにする：890、C413、又はNew York'93C。ここで前記株の各々は、上記に記載したErns及び／又はNpro変異の少なくとも1つ、好ましくは、上記の表に列挙したErns及びNpro領域内の二重変異体の少なくとも1つを含む。
BVDV-1及びBVDV-2は、それらのゲノム配列の特徴にしたがって区別される（Heinz et al. 2000及びその中の参考文献）。本明細書で開示されるBVDV-1を、ウシの育種ストック、妊娠乳牛におけるBVDV 1型感染の予防及び／又は治療で、並びに妊娠牛の胎児のBVDV 1型感染に対する防御の誘発で使用される組成物の製造に用いることができる。驚くべきことに、本明細書に開示するBVDV-2を、ウシの育種ストックにおけるBVDV 1型感染の予防及び／又は治療で使用される混合ワクチンの製造で用いることができる。特に、本発明は、妊娠乳牛のBVDV 1型感染の予防及び／又は治療で使用される混合ワクチンに製造における、本明細書に記載のBVDV 2型の使用に関する。好ましくは、妊娠牛におけるBVDV 1型感染に対する胎児の防御の誘発で使用される混合ワクチンの製造に本明細書で提供するBVDV 2型を用いることができる。また驚くべきことに、ウシの育種ストックにおけるBVDV 2型感染の予防及び／又は治療で使用される混合ワクチンの製造に、本明細書に開示するBVDV-1を用いることができる。特に、本発明は、妊娠乳牛のBVDV 2型感染の予防及び／又は治療で使用される混合ワクチンに製造における、本明細書に記載のBVDV 1型の使用に関する。好ましくは、妊娠牛におけるBVDV 2型感染に対する胎児の防御の誘発で使用される混合ワクチンの製造に、本発明のBVDV 1型を用いることができる。
【００４７】
ウシの育種ストック、妊娠乳牛におけるBVDV 1型及び／又は2型感染の予防及び／又は治療で、並びに妊娠牛の胎児のBVDV 1型及び／又は2型感染に対する防御の誘発で、使用される本明細書に記載の混合ワクチンを製造するために、BVDV 1型及び2型を混合して用いることがもっとも好ましい。したがって、好ましくは、これにより提供される混合ワクチンは、上記に記載の1つ以上の弱毒BVDV 1型及び2型を含む。例えば、これにより提供される混合ワクチンは、NADL/890；NAFL/C413；NADL/New York'93/C；CP7/890；CP7/C413；CP7/New York'93/C；KE9/890；KE9/C413；KE9/New York'93/Cなる株をベースにした、1型及び2型の弱毒BVDVを含み、この場合、各株は上記に記載のErns及び／又はNpro変異の少なくとも1つを含み、より好ましくは、上記の表に列挙したErns及びNpro領域内の二重変異体の少なくとも1つを含む。より好ましくは、これにより提供される混合ワクチンのいずれも、弱毒BVDV 1型の1つ以上のサブタイプ、及び弱毒BVDV-2の1つ以上のサブタイプ、例えばサブタイプ1a、1b、1c、1d、1e、1f、1g、1hなどの1つ以上の弱毒BVDV、及びサブタイプ2a、2bなどの1つ以上の弱毒BVDVを含む。サブタイプ1a、1b及び2aの弱毒BVDVを含む混合ワクチンがもっとも好ましい。したがって、本発明の好ましい実施態様にしたがえば、“弱毒BVDV（1及び／又は2型）”という語句には、1つ以上の1型弱毒BVDV（好ましくはサブタイプ1b）及び1つ以上の2型弱毒BVDV（好ましくはサブタイプ2a）を含むBVDVウイルスの組合せが含まれる（ただしこれに限定されない）。本発明のさらに別の実施態様にしたがえば、“弱毒BVDV（1及び／又は2型）”という語句には、サブタイプ1aの1つ以上の弱毒BVDV及び1つ以上の2型弱毒BVDV（好ましくはサブタイプ2a）を含むBVDVウイルスの組合せが含まれるが、ただしこれに限定されない。
【００４８】
本明細書に記載の混合ワクチンで2つ以上の弱毒BVDVが用いられる場合は、弱毒BVDVの各々は、弱毒BVDVのいずれも他のいずれかと組換えられて、ウイルスの弱毒化に必須であり原因となる前記変異を排除することがないように、Erns及び／又はNproの同じゲノム部位で変異が導入されるべきである。例えば、以下のErns変異（H349K、H349L、H349del、H349Q、H349SV（変異H349S及びVの挿入））の1つを有するBVDV 1a型が用いられる場合、BVDV 1b型及び／又は2型が用いられるべきである（前記はErnsの同じ部位、すなわち349位又はBVDV 1型の349位に対応するアミノ酸の位置で変異し、弱毒BVDV 1型又は2型の復帰を回避する）。したがって、本発明の好ましい実施態様にしたがえば、“弱毒BVDV（1及び／又は2型）”という語句には、1つ以上の1型弱毒BVDV及び1つ以上の2型弱毒BVDVを含むBVDVウイルスの組合せが含まれ（ただしこれに限定されない）、この場合、弱毒BVDVの各々は、弱毒BVDVのいずれも他のいずれかと組換えられて、ウイルスの弱毒化に必須であり原因となるErns及びNpro内の変異を排除することがないように、Erns及び／又はNproの同じゲノム部位で変異が導入される。本発明の別の実施態様にしたがえば、“弱毒BVDV（1及び／又は2型）”という語句には、1つ以上のサブタイプ1aの弱毒BVDV、1つ以上のサブタイプ1bの弱毒BVDV、及び1つ以上の2型弱毒BVDV（好ましくはサブタイプ2a）を含むBVDVウイルスの組合せが含まれ（ただしこれに限定されない）、弱毒BVDVの各々は、弱毒BVDVのいずれも他のいずれかと組換えられて、ウイルスの弱毒化に必須であり原因となるErns及び／又はNpro内の変異を排除することがないように、Erns及び／又はNproの同じゲノム部位に変異が導入される。
【００４９】
弱毒BVDVの調製
本発明のまた別の重要な特徴はペスチウイルスを弱毒化する方法である。前記方法は、糖タンパク質Ernsのコード配列に少なくとも1つの変異及び／又はNproのコード配列に少なくとももう1つの変異がBVDVゲノムにおいて作成されることを特徴とする。
より好ましい実施態様にしたがえば、前記方法は以下の工程を含む：
a）野生型ペスチウイルスヌクレオチド配列をcDNAへ逆転写する；
b）前記cDNAをクローニングする；
c）欠失、挿入変異及び／又は置換変異の群から選択される変異を前記cDNAへ導入する（ここで、前記変異は、糖タンパク質Erns及び／又はプロテアーゼNproタンパク質をコードするコード配列に存在する）； 
d）in vitroで又は適切な細胞の感染に際してBVDV cDNAのRNAへの転写を誘導することができるプラスミド又はDNAウイルスに、前記cDNAを取り込ませる。
本発明のBVDVを弱毒化する方法に関して、前記好ましい方法は以下の工程を含む：
a）野生型BVDVヌクレオチド配列をcDNAへ逆転写する；
b）前記cDNAをクローニングする；
c）欠失、挿入変異及び／又は置換変異の群から選択される変異を前記cDNAへ導入する（ここで、前記変異は、糖タンパク質Erns及び／又はプロテアーゼNproタンパク質をコードするコード配列に存在する）； 
d）in vitroで又は適切な細胞の感染に際してBVDV cDNAのRNAへ転写を誘導することができるプラスミド又はDNAウイルスに、前記cDNAを取り込ませる。
本明細書に記載の弱毒化BVDV（Nproのコード配列に少なくとも1つの変異及び／又は糖タンパク質Ernsのコード配列に少なくとも1つの変異を有する、この場合、前記変異は、糖タンパク質Ernsに存在するRNase活性の不活化及びNproに存在する免疫調節活性の不活化を一緒にもたらす）をコードするポリヌクレオチド分子の製造のための土台を表す、当分野で公知のいくつかのヌクレオチド配列が存在する。いくつかのBVDV株の野生型の核酸配列の例を下記に列挙する：
ウシウイルス性下痢ウイルス1
NADL株              NCBI GenBankアクセッション番号[M31182]
Osloss株            NCBI GenBankアクセッション番号[M96687]
SD-1株              NCBI GenBankアクセッション番号[M96751]
CP7株               NCBI GenBankアクセッション番号[U63479]
KE9株              （配列番号:1）
ウシウイルス性下痢ウイルス2
890株               NCBI GenBankアクセッション番号[U18059]
C413株              NCBI GenBankアクセッション番号[AF002227]
New York'93/C株     NCBI GenBankアクセッション番号[AF502399]
【００５０】
Npro及びErnsのコード配列に関する変異／改変は上記で詳細に記載されている。この情報により、当業者は、本明細書で提供される弱毒BVDVをコードするいずれのポリヌクレオチド／核酸の作製も達成することができる。ポリヌクレオチド配列に変異を導入する分子的方法は、前記変異ポリヌクレオチドのクローニング及び増幅とともに例えば、Sambrookら（1989）又はAusubelら（1994）の著書によって提供される。
もっとも好ましくは、本明細書に開示する変異を導入されるべきBVDV野生型は配列番号:5（XIKE Aと称される）のアミノ酸配列と一致するか、又は前記の機能的変種である。もっとも好ましくはまた、BVDVは、配列番号:6と一致する本明細書に記載のNpro変異（XIKE-A-NdNと称される）を有するか、又は前記の機能的変種である。好ましくは、そのような機能的変種は、本明細書に開示のアミノ酸配列と少なくとも65%相同性である。アミノ酸レベルでは、相同性は非常におおざっぱである：BVDV-1/-BVDV-1：93%；BVDV-1/-BVDV-2：84%；BVDV-2/-BVDV-2：98%。したがって、より好ましくは、そのような機能的変種は、本明細書に開示のアミノ酸配列と少なくとも70%、71%、72％、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%又は90%相同性である。より好ましくはまた、そのような機能的変種は、本明細書に開示のアミノ酸配列と少なくとも91%、92％、93%、94%、95%、96%、97%又は98%相同性である。もっとも好ましくは、そのような機能的変種は、本明細書に開示のアミノ酸配列と少なくとも99%又は99.9％相同性である。
【００５１】
もっとも好ましくはまた、本明細書に開示の弱毒BVDVは、ヒスチジン349をコードするコドンの欠失を有するErns変異（XIKE-Bと称される）を有するか、又は前記の機能的変種である。もっとも好ましくはまた、前記弱毒BVDVは、本明細書に記載のErns変異及び／又はNpro変異の両方を有し、この場合、Ernsのヒスチジン349をコードするコドンは欠失し、さらに完全なNproコード領域もまたコドン1から4を除いて完全に欠失し、したがってNproのアミノ酸MELFが残る。前記二重変異体（XIKE-B-NdNと称される）は、配列番号:8のアミノ酸配列と一致するか、又は前記の機能的変種である。好ましくは、そのような機能的変種は、本明細書に開示のアミノ酸配列と少なくとも65%相同性である。より好ましくは、そのような機能的変種は、本明細書に開示のアミノ酸配列と少なくとも70%、71%、72％、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%又は90%相同性である。より好ましくはまた、そのような機能的変種は、本明細書に開示のアミノ酸配列と少なくとも91%、92％、93%、94%、95%、96%、97%又は98%相同性である。もっとも好ましくは、そのような機能的変種は、本明細書に開示のアミノ酸配列と少なくとも99%又は99.9％相同性である。
もっとも好ましくはまた、本発明のBVDVは、ヒスチジン300をコードするコドンがロイシンをコードするコドンによって置換される、本発明のErns変異（XIKE-Cと称される）を有するか、又は前記の機能的変種である。もっとも好ましくはまた、本発明のBVDVは、本発明のErns変異及びNpro変異の両方を有し、この場合、ヒスチジン300をコードするコドンはロイシンをコードするコドンによって置換され、さらに完全なNproコード領域もまたコドン1から4を除いて完全に欠失し、したがってNproのアミノ酸MELFが残る。前記二重変異体（XIKE-C-NdNと称される）は、配列番号:10のアミノ酸配列と一致するか、又は前記の機能的変種である。好ましくは、そのような機能的変種は、本明細書に開示のアミノ酸配列と少なくとも65%相同性である。より好ましくは、そのような機能的変種は、本明細書に開示のアミノ酸配列と少なくとも70%、71%、72％、73%、74%、75%、76%、77%、78%、79%、80%、81%、82%、83%、84%、85%、86%、87%、88%、89%又は90%相同性である。より好ましくはまた、そのような機能的変種は、本明細書に開示のアミノ酸配列と少なくとも91%、92％、93%、94%、95%、96%、97%又は98%相同性である。もっとも好ましくは、そのような機能的変種は、本明細書に開示のアミノ酸配列と少なくとも99%又は99.9％相同性である。
【００５２】
組合せパートナー
上記で述べたように、本発明は、微生物感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、上記に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）及び、BVDV以外のウシの病原体によって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む。上記で述べたように、混合ワクチンは、好ましくは弱毒BVDV 1型及びBVDV 2型を含み、両ウイルスは、糖タンパク質Ernsのコード配列に少なくとも1つの変異及び／又はNproのコード配列に少なくとももう1つの変異を有し、前記糖タンパク質Ernsのコード配列内の変異はErnsに存在するRNase活性の不活化をもたらし、及び／又は前記Nproのコード配列の変異は前記Nproの不活化をもたらす。さらに好ましくは、弱毒BVDVの各々は、弱毒BVDVのいずれも他のいずれかと組換えられて、ウイルスの弱毒化に必須であり原因となるErns及び／又はNpro内の変異を排除することがないように、Erns及び／又はNproの同じゲノム部位で変異が導入される。さらに好ましくは、混合ワクチンは、弱毒BVDV 1型及びBVDV 2型を含み、両ウイルスは、糖タンパク質Ernsのコード配列に少なくとも1つの変異及びNproのコード配列に少なくとももう1つの変異を有し、前記糖タンパク質Ernsのコード配列内の変異はErnsに存在するRNase活性の不活化をもたらし、及び／又は前記Nproのコード配列の変異は前記Nproの不活化をもたらす。もっとも好ましくは、弱毒BVDVの各々は、弱毒BVDVのいずれも他のいずれかと組換えられて、ウイルスの弱毒化に必須であり原因となるErns及び／又はNpro内の変異を排除することがないように、Erns及びNproの同じゲノム部位で変異が導入される。
BVDV以外の関連するウシ病原体には以下が含まれる（ただしこれらに限定されない）：i）ウイルス起源の病原体、例えばパラインフルエンザ-3ウイルス（PI-3）、伝染性ウシ鼻気管炎ウイルス（IBR）、ウシ呼吸器系合胞体形成ウイルス（BRSV）、ウシヘルペスウイルス（BHV）、ウシロタウイルス（BRV）、ウシエンテロウイルス（BEV）、ウシコロナウイルス（BCV）、ウシ狂犬病（BR）、ウシパルボウイルス（PPV）、並びにアデノウイルス及びアストロウイルス；ii）細菌起源の病原体、例えばマンヘイミア・ヘモリチカ（以前にはパスツレラ・ヘモリチカ）、パスツレラ・マルトシダ、ヘモフィルス・ソムヌス（ヒストフィルス・オヴィス及びヘモフィルス・アグニ）、アクチノミセス（コリネバクテリウム）、アクチノミセス・ピオゲネス、クラミジア・プシッタキ、カンピロバクター・フェーツス・ヴェネレアリス及びカンピロバクター・フェーツス・フェーツス（以前にはC.フェーツス・インテスティナリス）、レプトスピラ・インテルロガンス、レプトスピラ・ポモナ及びレプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、ブルセラ・アボルツス、ブルセラ・スイス及びブルセラ・メリテンシス、リステリア・モノサイトゲネス、クラミジア・プシッタキ、クロストリジウム・ショーベイ、クロストリジウム・セプチクム、クロストリジウム・ヘモリチクム、クロストリジウム・ノヴィー、クロストリジウム・ソルデリー、クロストリジウム・パーフリンゲンス、クロストリジウム・テタニ、モラキセラ・ボヴィス、クレブシーラspp、クレブシーラ・プニューモニエ、サルモネラ・チフィムリウム、サルモネラ・ニューポルト、マイコバクテリウム・アビウム・パラツベルクローシス、スタフィロコッカス・アウレウス、ストレプトコッカス・ディスガラクチエ、及びストレプトコッカス・ウベルス；iii）その他の起源の病原体、例えばマイコプラズマ・ディスパル、マイコプラズマ・ボヴィス、及びウレアプラズマspp、トリコモナス・フェーツス、トリコフィトン・ベルルコスム、トリコフィトン・メンタグロフィテス、トリコフィトン・サルキソヴィー、ネオスポラ・カニヌム（以前にはトキソプラズマ・ゴンディー）、クリプトスポリジウム・パルブム、クリプトスポリジウム・ホミニス、バベシア・ビゲミナ及びバベシア・ボヴィス、並びにディクチオカウルス・ヴィヴィパロウス（肺虫症）。
【００５３】
したがって、本発明は、ウシの微生物感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記ワクチンは、上記に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）及び以下の病原体によって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効なさらに別の免疫学的活性成分を含む：パラインフルエンザ-3ウイルス（PI-3）、伝染性ウシ鼻気管炎ウイルス（IBR）、ウシ呼吸器系合胞体形成ウイルス（BRSV）、ウシヘルペスウイルス（BHV）、ウシロタウイルス（BRV）、ウシエンテロウイルス（BEV）、ウシコロナウイルス（BCV）、ウシ狂犬病（BR）、ウシパルボウイルス（PPV）、アデノウイルス、アストロウイルス、マンヘイミア・ヘモリチカ（以前にはパスツレラ・ヘモリチカ）、パスツレラ・マルトシダ、ヘモフィルス・ソムヌス（ヒストフィルス・オヴィス及びヘモフィルス・アグニ）、アクチノミセス（コリネバクテリウム）、アクチノミセス・ピオゲネス、クラミジア・プシッタキ、カンピロバクター・フェーツス・ヴェネレアリス及びカンピロバクター・フェーツス・フェーツス（以前にはC.フェーツス・インテスティナリス）、レプトスピラ・インテルロガンス、レプトスピラ・ポモナ及びレプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、ブルセラ・アボルツス、ブルセラ・スイス及びブルセラ・メリテンシス、リステリア・モノサイトゲネス、クラミジア・プシッタキ、クロストリジウム・ショーベイ、クロストリジウム・セプチクム、クロストリジウム・ヘモリチクム、クロストリジウム・ノヴィー、クロストリジウム・ソルデリー、クロストリジウム・パーフリンゲンス、クロストリジウム・テタニ、モラキセラ・ボヴィス、クレブシーラspp、クレブシーラ・プニューモニエ、サルモネラ・チフィムリウム、サルモネラ・ニューポルト、マイコバクテリウム・アビウム・パラツベルクローシス、スタフィロコッカス・アウレウス、ストレプトコッカス・ディスガラクチエ、ストレプトコッカス・ウベルス、マイコプラズマspp、マイコプラズマ・ディスパル、マイコプラズマ・ボヴィス、及びウレアプラズマspp、トリコモナス・フェーツス、トリコフィトン・ベルルコスム、トリコフィトン・メンタグロフィテス、トリコフィトン・サルキソヴィー、ネオスポラ・カニヌム（以前にはトキソプラズマ・ゴンディー）、バベシア・ビゲミナ及びバベシア・ボヴィス、並びにディクチオカウルス・ヴィヴィパロウス（肺虫症）。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）及び以下の病原体の少なくとも1つの抗原を含む：パラインフルエンザ-3ウイルス（PI-3）、伝染性ウシ鼻気管炎ウイルス（IBR）、ウシ呼吸器系合胞体形成ウイルス（BRSV）、ウシヘルペスウイルス（BHV）、ウシロタウイルス（BRV）、ウシエンテロウイルス（BEV）、ウシコロナウイルス（BCV）、ウシ狂犬病（BR）、ウシパルボウイルス（PPV）、アデノウイルス、アストロウイルス、マンヘイミア・ヘモリチカ（以前にはパスツレラ・ヘモリチカ）、パスツレラ・マルトシダ、ヘモフィルス・ソムヌス（ヒストフィルス・オヴィス及びヘモフィルス・アグニ）、アクチノミセス（コリネバクテリウム）、アクチノミセス・ピオゲネス、クラミジア・プシッタキ、カンピロバクター・フェーツス・ヴェネレアリス及びカンピロバクター・フェーツス・フェーツス（以前にはC.フェーツス・インテスティナリス）、レプトスピラ・インテルロガンス、レプトスピラ・ハルジョ、レプトスピラ・ポモナ及びレプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、ブルセラ・アボルツス、ブルセラ・スイス及びブルセラ・メリテンシス、リステリア・モノサイトゲネス、クラミジア・プシッタキ、クロストリジウム・ショーベイ、クロストリジウム・セプチクム、クロストリジウム・ヘモリチクム、クロストリジウム・ノヴィー、クロストリジウム・ソルデリー、クロストリジウム・パーフリンゲンス、クロストリジウム・テタニ、モラキセラ・ボヴィス、クレブシーラspp、クレブシーラ・プニューモニエ、サルモネラ・チフィムリウム、サルモネラ・ニューポルト、マイコバクテリウム・アビウム・パラツベルクローシス、クロストリジウム・パルブム、クロストリジウム・ホミニス、スタフィロコッカス・アウレウス、ストレプトコッカス・ディスガラクチエ、ストレプトコッカス・ウベルス、マイコプラズマspp、マイコプラズマ・ディスパル、マイコプラズマ・ボヴィス、及びウレアプラズマspp、トリコモナス・フェーツス、トリコフィトン・ベルルコスム、トリコフィトン・メンタグロフィテス、トリコフィトン・サルキソヴィー、ネオスポラ・カニヌム（以前にはトキソプラズマ・ゴンディー）、バベシア・ビゲミナ及びバベシア・ボヴィス、並びにディクチオカウルス・ヴィヴィパロウス（肺虫症）。
【００５４】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びIBRによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 001］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）及びIBRの少なくとも1つの抗原を含む［combo 002］。好ましい実施態様にしたがえば、前記IBR抗原は改変生ウイルスである［combo 003］。さらに別の実施態様にしたがえば、弱毒BVDV及びIBRの混合ワクチンは、防腐のために抗生物質、例えばネオマイシンを含む［combo 004］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びPI-3によって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 005］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）及びPI-3の少なくとも1つの抗原を含む［combo 006］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びBRSVによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 007］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）及びBRSVの少なくとも1つの抗原を含む［combo 008］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びBHVによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 009］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）及びBHVの少なくとも1つの抗原を含む［combo 010］。
【００５５】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、IBR及びPI-3によって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 011］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、IBR及びPI-3の少なくとも1つの抗原を含む［combo 012］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、IBR及びBRSVによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 013］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びにIBR及びBRSVの少なくとも1つの抗原を含む［combo 014］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、IBR及びBHVによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 015］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びにIBR及びBHVの少なくとも1つの抗原を含む［combo 016］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、PI-3及びBRSVによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 017］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びにPI-3及びBRSVの少なくとも1つの抗原を含む［combo 018］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、PI-3及びBHVによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 019］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びにPI-3及びBHVの少なくとも1つの抗原を含む［combo 020］。
【００５６】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、IBR、PI-3及びBRSVによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 021］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びにIBR、PI-3及びBRSVの少なくとも1つの抗原を含む［combo 022］。好ましくは、全てのウイルス抗原は改変生ウイルスである［combo 023］。前記混合ワクチンのさらに別の実施態様にしたがえば、IBR及びPI-3抗原は改変生ウイルスであり、BRSV抗原は死滅ウイルスである［combo 024］。前記混合ワクチンのさらに別の実施態様にしたがえば、IBR、PI-3及びBRSV抗原は死滅ウイルスである［combo 025］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、IBR、BRSV及びBHVによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 026］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びにIBR、BRSV及びBHVの少なくとも1つの抗原を含む［combo 027］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、PI-3、BRSV及びBHVによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 028］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びにPI-3、BRSV及びBHVの少なくとも1つの抗原を含む［combo 029］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、IBR、PI-3及びBHVによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 030］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びにIBR、PI-3及びBHVの少なくとも1つの抗原を含む［combo 031］。
【００５７】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、IBR、PI-3、BRSV及びBHVによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 032］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びにIBR、PI-3、BRSV及びBHVの少なくとも1つの抗原を含む［combo 033］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）及びH.ソムヌスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 034］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）及びH.ソムヌスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 035］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、IBR及びH.ソムヌスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 036］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）及びH.ソムヌスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 037］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、IBR、PI-3及びH.ソムヌスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 038］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びにIBR、PI-3及びH.ソムヌスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 039］。
【００５８】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、IBR、PI-3、BRSV及びH.ソムヌスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 040］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びにIBR、PI-3、BRSV及びH.ソムヌスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 041］。好ましくは、全てのウイルス抗原は改変生ウイルスである。前記混合ワクチンのさらに別の実施態様にしたがえば、IBR及びPI-3抗原は改変生ウイルスであり、BRSV抗原は死滅ウイルスである［combo 038］。前記混合ワクチンのさらに別の実施態様にしたがえば、IBR、PI-3及びBRSV抗原は死滅ウイルスである［combo 042］。さらに別の実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンのいずれも、好ましくは、死滅IBR、死滅PI-3及び死滅BRSVを抗原として含む混合ワクチンは、防腐剤としてネオマイシン及びチメロサールを含む［combo 043］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系のウイルス感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、IBR、PI-3、BRSV、BHV及びH.ソムヌスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 044］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びにIBR、PI-3、BRSV、BHV及びH.ソムヌスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 045］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系の感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及び1つ以上のレプトスピラの病原性の種（好ましくはレプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ボルグペテルセニー、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・プラジトノ、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ボヴィス、レプトスピラ・インテルロガンス、及びレプトスピラ・ポモナから選択される）によって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 046］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びレプトスピラの少なくとも1つ以上の病原性の種（好ましくはレプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ボルグペテルセニー、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・プラジトノ、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ボヴィス、レプトスピラ・インテルロガンス、及びレプトスピラ・ポモナから選択される）の抗原を含む［combo 047］。
【００５９】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系の感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、IBR及び1つ以上のレプトスピラの病原性種（好ましくはレプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ボルグペテルセニー、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・プラジトノ、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ボヴィス、レプトスピラ・インテルロガンス、及びレプトスピラ・ポモナから選択される）によって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 048］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR及び1つ以上のレプトスピラの病原性種（好ましくはレプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ボルグペテルセニー、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・プラジトノ、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ボヴィス、レプトスピラ・インテルロガンス、及びレプトスピラ・ポモナから選択される）の少なくとも1つの抗原を含む［combo 049］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系の感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、IBR及びレプトスピラ・ポモナによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 050］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR（好ましくは改変生ウイルス）及びレプトスピラ・ポモナのバクテリンの少なくとも1つの抗原を含む［combo 051］。
【００６０】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系の感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR、PI-3及び1つ以上のレプトスピラの病原性種（好ましくはレプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ボルグペテルセニー、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・プラジトノ、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ボヴィス、レプトスピラ・インテルロガンス、及びレプトスピラ・ポモナから選択される）によって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 052］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR、PI-3及び1つ以上のレプトスピラの病原性種（好ましくはレプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ボルグペテルセニー、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・プラジトノ、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ボヴィス、レプトスピラ・インテルロガンス、及びレプトスピラ・ポモナから選択される）の少なくとも1つの抗原を含む［combo 053］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系の感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、IBR、PI-3、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、及びレプトスピラ・ポモナによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 054］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR、PI-3、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、及びレプトスピラ・ポモナの少なくとも1つの抗原を含む［combo 055］。
【００６１】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系の感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR、PI-3、BRSV及び1つ以上のレプトスピラの病原性種（好ましくはレプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ボルグペテルセニー、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・プラジトノ、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ボヴィス、レプトスピラ・インテルロガンス、及びレプトスピラ・ポモナから選択される）によって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 056］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR、PI-3、BRSV及び1つ以上のレプトスピラの病原性種（好ましくはレプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ボルグペテルセニー、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・プラジトノ、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ボヴィス、レプトスピラ・インテルロガンス、及びレプトスピラ・ポモナから選択される）の少なくとも1つの抗原を含む［combo 057］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系の感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、IBR、PI-3、BRSV、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、及びレプトスピラ・ポモナによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 058］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR、PI-3、BRSV、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、及びレプトスピラ・ポモナの少なくとも1つの抗原を含む［combo 059］。好ましい実施態様にしたがえば、前記ウイルス抗原は死滅ウイルスであり、前記細菌抗原はバクテリンである［combo 060］。好ましくは、この節に記載の混合ワクチンはさらにネオマイシン及びチメロサールを防腐剤として含む［combo 061］。
【００６２】
さらに別の実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、IBR、PI-3、BRSVの改変生ウイルス、並びに、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ及びレプトスピラ・ポモナのバクテリンを含む［combo 062］。さらに好ましい実施態様にしたがえば、この節に記載の混合ワクチンはネオマイシンを防腐剤として含む［combo 063］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系の感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR、PI-3、BRSV、BHV及び1つ以上のレプトスピラの病原性種（好ましくはレプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ボルグペテルセニー、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・プラジトノ、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ボヴィス、レプトスピラ・インテルロガンス、及びレプトスピラ・ポモナから選択される）によって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 064］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR、PI-3、BRSV、BHV及び1つ以上のレプトスピラの病原性種（好ましくはレプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ボルグペテルセニー、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・プラジトノ、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ボヴィス、レプトスピラ・インテルロガンス、及びレプトスピラ・ポモナから選択される）の少なくとも1つの抗原を含む［combo 065］。
【００６３】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種及びH.ソムヌスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 066］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種及びH.ソムヌスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 067］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR及び上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種及びH.ソムヌスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 068］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR及び上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種及びH.ソムヌスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 069］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3及び上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種及びH.ソムヌスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 070］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3及び上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種及びH.ソムヌスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 071］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系の感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、IBR、PI-3、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ポモナ、及びH.ソムヌスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 072］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ポモナ、及びH.ソムヌスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 073］。
【００６４】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV及び上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種及びH.ソムヌスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 074］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV及び上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種及びH.ソムヌスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 075］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系の感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）並びに、IBR、PI-3、BRSV、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ポモナ、及びH.ソムヌスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 076］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ハルジョ、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ポモナ、及びH.ソムヌスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 077］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV、BHV及び上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種及びH.ソムヌスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 078］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV、BHV及び上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種及びH.ソムヌスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 079］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種及びカンピロバクター・フェーツスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 080］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種及びカンピロバクター・フェーツスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 081］。
【００６５】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにレプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ポモナ、及びカンピロバクター・フェーツスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 082］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにレプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ハルジョ、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ポモナ、及びカンピロバクター・フェーツスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 083］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記細菌抗原は、化学的に不活化され、水酸化アルミニウム吸着された前記細菌の全培養物である［combo 084］。さらに好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは防腐剤としてゲンタマイシン及びアンホテリシンBを含む［combo 085］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR及び上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種及びカンピロバクター・フェーツスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 086］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR及び上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種及びカンピロバクター・フェーツスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 087］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3及び上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種、及びカンピロバクター・フェーツスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 088］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3及び上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種、及びカンピロバクター・フェーツスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 089］。
【００６６】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV及び上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種、及びカンピロバクター・フェーツスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 090］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV及び上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種、及びカンピロバクター・フェーツスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 091］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV、BHV及び上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種、及びカンピロバクター・フェーツスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 092］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV、BHV及び上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種、及びカンピロバクター・フェーツスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 093］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種、H.ソムヌス及びカンピロバクター・フェーツスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 094］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種、H.ソムヌス及びカンピロバクター・フェーツスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 095］。
【００６７】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種、H.ソムヌス及びカンピロバクター・フェーツスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 096］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種、H.ソムヌス及びカンピロバクター・フェーツスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 097］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3及び上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種、H.ソムヌス及びカンピロバクター・フェーツスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 098］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3及び上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種、H.ソムヌス及びカンピロバクター・フェーツスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 099］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ハルジョ、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ポモナ、H.ソムヌス及びカンピロバクター・フェーツスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 100］。さらに別の実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及び／又はレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ポモナ、H.ソムヌス及びカンピロバクター・フェーツスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 101］。
【００６８】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV、上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種、H.ソムヌス及びカンピロバクター・フェーツスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 102］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV、上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種、H.ソムヌス及びカンピロバクター・フェーツスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 100］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及び／又はレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ポモナ、H.ソムヌス及びカンピロバクター・フェーツスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 103］。さらに別の実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及び／又はレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ポモナ、H.ソムヌス及びカンピロバクター・フェーツスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 104］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV、BHV、及び上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種、H.ソムヌス及びカンピロバクター・フェーツスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 105］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV、BHV、及び上記に記載の1つ以上のレプトスピラの病原性種、H.ソムヌス及びカンピロバクター・フェーツスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 106］。
【００６９】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの呼吸系及び生殖系の感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、BHV、BRSV、PI-3、IBR、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ボルグペテルセニー、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及び／又はレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・プラジトノ、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ボヴィス、レプトスピラ・インテルロガンス、及びカンピロバクター・フェーツスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 107］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV、並びに、BHV、BRSV、IBR、PI-3、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ボルグペテルセニー、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及び／又はレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・プラジトノ、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ボルグペテルセニー、レプトスピラ・ボヴィス、レプトスピラ・インテルロガンス、及びカンピロバクター・フェーツスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 108］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにパスツレラ・ヘモリチカ及びパスツレラ・ムルトシダによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 109］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、パスツレラ・ヘモリチカのバクテリン及びパスツレラ・ムルトシダのバクテリンの少なくとも1つの抗原を含む［combo 110］。さらに好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンはネオマイシン及びチメロサールを防腐剤として含む［combo 111］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR、パスツレラ・ヘモリチカ及びパスツレラ・ムルトシダによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 112］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR（好ましくは改変生ウイルスとして）、パスツレラ・ヘモリチカのバクテリン及びパスツレラ・ムルトシダのバクテリンの少なくとも1つの抗原を含む［combo 113］。さらに好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンはネオマイシン及びチメロサールを防腐剤として含む［combo 114］。
【００７０】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR、PI-3、パスツレラ・ヘモリチカ及びパスツレラ・ムルトシダによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 115］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3（好ましくは改変生ウイルスとして）、パスツレラ・ヘモリチカのバクテリン及びパスツレラ・ムルトシダのバクテリンの少なくとも1つの抗原を含む［combo 116］。さらに好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンはネオマイシン及びチメロサールを防腐剤として含む［combo 117］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR、PI-3、BRSV、パスツレラ・ヘモリチカ及びパスツレラ・ムルトシダによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 118］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV（好ましくは改変生ウイルスとして）、パスツレラ・ヘモリチカのバクテリン及びパスツレラ・ムルトシダのバクテリンの少なくとも1つの抗原を含む［combo 119］。さらに好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンはネオマイシン及びチメロサールを防腐剤として含む［combo 120］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR、PI-3、BRSV、BHV、パスツレラ・ヘモリチカ及びパスツレラ・ムルトシダによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 121］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV、BHV（好ましくは改変生ウイルスとして）、パスツレラ・ヘモリチカのバクテリン及びパスツレラ・ムルトシダのバクテリンの少なくとも1つの抗原を含む［combo 122］。さらに好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンはネオマイシン及びチメロサールを防腐剤として含む［combo 123］。
【００７１】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びマイコプラズマ・ボヴィスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 124］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）及びマイコプラズマ・ボヴィスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 125］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR及びマイコプラズマ・ボヴィスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 126］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR（好ましくは改変生ウイルスとして）及びマイコプラズマ・ボヴィスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 127］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3及びマイコプラズマ・ボヴィスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 128］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3（好ましくは改変生ウイルスとして）及びマイコプラズマ・ボヴィスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 129］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV及びマイコプラズマ・ボヴィスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 130］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV（好ましくは改変生ウイルスとして）及びマイコプラズマ・ボヴィスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 131］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV、BHV及びマイコプラズマ・ボヴィスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 132］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV、BHV（好ましくは改変生ウイルスとして）及びマイコプラズマ・ボヴィスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 133］。
【００７２】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにパスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ及びマイコプラズマ・ボヴィスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 134］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ及びマイコプラズマ・ボヴィスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 135］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ及びマイコプラズマ・ボヴィスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 136］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR（好ましくは改変生ウイルスとして）、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ及びマイコプラズマ・ボヴィスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 137］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR、PI-3、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ及びマイコプラズマ・ボヴィスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 138］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3（好ましくは改変生ウイルスとして）、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ及びマイコプラズマ・ボヴィスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 139］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR、PI-3、BRSV、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ及びマイコプラズマ・ボヴィスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 140］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV（好ましくは改変生ウイルスとして）、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ及びマイコプラズマ・ボヴィスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 141］。
【００７３】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR、PI-3、BRSV、BHV、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ及びマイコプラズマ・ボヴィスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 140］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV、BHV（好ましくは改変生ウイルスとして）、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ及びマイコプラズマ・ボヴィスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 141］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにパスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ及びH.ソムヌスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 142］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ及びH.ソムヌスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 143］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ及びH.ソムヌスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 144］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR（好ましくは改変生ウイルスとして）、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ及びH.ソムヌスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 145］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR、PI-3、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ及びH.ソムヌスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 146］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3（好ましくは改変生ウイルスとして）、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ及びH.ソムヌスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 147］。
【００７４】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR、PI-3、BRSV、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ及びH.ソムヌスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 148］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV（好ましくは改変生ウイルスとして）、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ及びH.ソムヌスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 149］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにIBR、PI-3、BRSV、BHV、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ及びH.ソムヌスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 150］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、IBR、PI-3、BRSV、BHV（好ましくは改変生ウイルスとして）、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ及びH.ソムヌスの少なくとも1つの抗原を含む［combo 151］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、及び151］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらに、1つ以上のレプトスピラの病原性種（好ましくはレプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ボルグペテルセニー、レプトスピラ・ハルジョ、レプトスピラ・プラジトノ、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ボヴィス、レプトスピラ・インテルロガンス、及びレプトスピラ・ポモナから選択される）によって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 152］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、及び151］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらに、1つ以上のレプトスピラの種（好ましくはレプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ボルグペテルセニー、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・プラジトノ、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ボヴィス、レプトスピラ・インテルロガンス、及びレプトスピラ・ポモナから選択される）の抗原を含む［combo 153］。
【００７５】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、及び151］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらに、カンピロバクター・フェーツスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 154］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、及び151］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらに、カンピロバクター・フェーツスの抗原を含む［combo 155］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、及び151］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらに、1つ以上のレプトスピラの病原性種（好ましくはレプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ボルグペテルセニー、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・プラジトノ、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ボヴィス、レプトスピラ・インテルロガンス、及びレプトスピラ・ポモナから選択される）、及びカンピロバクター・フェーツスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 156］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、及び151］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらに、カンピロバクター・フェーツス、及び1つ以上のレプトスピラの種（好ましくはレプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポチフォサ、レプトスピラ・ボルグペテルセニー、レプトスピラ・ハルジョ（レプトスピラ・ハルジョプラジトノ及びレプトスピラ・ハルジョ-ボヴィス）、レプトスピラ・プラジトノ、レプトスピラ・イクテロヘモルラジエ、レプトスピラ・ボヴィス、レプトスピラ・インテルロガンス、及びレプトスピラ・ポモナから選択される）の抗原を含む［combo 157］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びクロストリジウム・パーフリンゲンス、好ましくはA、C及び／又はD型によって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 158］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、クロストリジウム・パーフリンゲンスC及びD型の毒素を含む［combo 254］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記ワクチンは、好ましくはクロストリジウム・パーフリンゲンスの毒素、好ましくはA、B、C及び／又はD型の毒素を含む［combo 159］。
【００７６】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、及び157］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらに、クロストリジウム・パーフリンゲンス、好ましくはA、C及び／又はD型によって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 160］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、及び157］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらに、クロストリジウム・パーフリンゲンス、好ましくはA、C及び／又はD型の抗原を含む［combo 161］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、及び157］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらに、クロストリジウム・パーフリンゲンスB、C及び／又はD型の抗原を含む［combo 162］。
【００７７】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びクロストリジウム・パーフリンゲンスA、C及び／又はD型、並びにクロストリジウム・テタニによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 163］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、クロストリジウム・パーフリンゲンスA、C及び／又はD型、及びクロストリジウム・テタニの毒素を含む［combo 164］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記ワクチンは、好ましくはクロストリジウム・パーフリンゲンスA、B、C及び／又はD型並びにクロストリジム・テタニの毒素を含む［combo 165］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、及び157］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらに、クロストリジウム・パーフリンゲンスA、C及び／又はD型、並びにクロストリジウム・テタニによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 166］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、及び157］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらに、クロストリジウム・パーフリンゲンスA、C及び／又はD型、並びにクロストリジウム・テタニの抗原を含む［combo 167］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、及び157］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらに、クロストリジウム・パーフリンゲンスA、B、C及び／又はD型、並びにクロストリジウム・テタニの抗原を含む［combo 168］。
【００７８】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、クロストリジウム・ショーベイ、クロストリジウム・セプチクム、クロストリジウム・ノヴィー、クロストリジウム・ソルデリー及びクロストリジウム・パーフリンゲンスA、C及び／又はD型によって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 169］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、好ましくはクロストリジウム・ショーベイ、クロストリジウム・セプチクム、クロストリジウム・ノヴィー、クロストリジウム・ソルデリー、及びクロストリジウム・パーフリンゲンスA、C及び／又は D型の毒素を含む［combo 170］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、及び157］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらに、クロストリジウム・ショーベイ、クロストリジウム・セプチクム、クロストリジウム・ノヴィー、クロストリジウム・ソルデリー及びクロストリジウム・パーフリンゲンスA、C及び／又はD型によって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 171］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、及び157］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらに、クロストリジウム・ショーベイ、クロストリジウム・セプチクム、クロストリジウム・ノヴィー、クロストリジウム・ソルデリー及びクロストリジウム・パーフリンゲンスA、C及び／又はD型の抗原を含む［combo 172］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、及び157］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらに、クロストリジウム・パーフリンゲンスA、B、C及び／又はD型、クロストリジウム・ショーベイ、クロストリジウム��セプチクム、クロストリジウム・ノヴィー、クロストリジウム・ソルデリー、及びクロストリジウム・テタニの抗原を含む［combo 173］。
【００７９】
より好ましい実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにクロストリジウム・ショーベイ、クロストリジウム・セプチクム、クロストリジウム・ノヴィー、クロストリジウム・ソルデリー、クロストリジウム・パーフリンゲンスA、C及び／又はD型、及びマイコプラズマ・ボヴィスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 174］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに抗原、好ましくはクロストリジウム・ショーベイ、クロストリジウム・セプチクム、クロストリジウム・ノヴィー、クロストリジウム・ソルデリー、クロストリジウム・パーフリンゲンスA、C及び／又はDの毒素、及びマイコプラズマ・ボヴィスの抗原を含む［combo 175］。
より好ましい実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにクロストリジウム・ショーベイ、クロストリジウム・セプチクム、クロストリジウム・ノヴィー、クロストリジウム・ソルデリー、クロストリジウム・パーフリンゲンスA、C及び／又はD型、及びH.ソムヌスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 176］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに抗原、好ましくはクロストリジウム・ショーベイ、クロストリジウム・セプチクム、クロストリジウム・ノヴィー、クロストリジウム・ソルデリー、クロストリジウム・パーフリンゲンスC及びDの毒素、及びH.ソムヌスの抗原を含む［combo 177］。
より好ましい実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにクロストリジウム・ショーベイ、クロストリジウム・セプチクム、クロストリジウム・ノヴィー、クロストリジウム・ソルデリー、クロストリジウム・パーフリンゲンスA、C及び／又はD型、マイコプラズマ・ボヴィス及びH.ソムヌスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 178］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに抗原、好ましくはクロストリジウム・ショーベイ、クロストリジウム・セプチクム、クロストリジウム・ノヴィー、クロストリジウム・ソルデリー、クロストリジウム・パーフリンゲンスA、C及び／又はD型の毒素、マイコプラズマ・ボヴィス及びH.ソムヌスの抗原を含む［combo 179］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにサルモネラ、好ましくはサルモネラ・ダブリン、サルモネラ・ニューポルト及びサルモネラ・チフィムリウムによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 180］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにサルモネラ、好ましくはサルモネラ・ダブリン、サルモネラ・ニューポルト及びサルモネラ・チフィムリウムの毒素を含む［combo 181］。
【００８０】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178及び179]のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらに、サルモネラ、好ましくはサルモネラ・ダブリン、サルモネラ・ニューポルト及びサルモネラ・チフィムリウムによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 182］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178及び179］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらに抗原、好ましくはサルモネラ、好ましくはサルモネラ・ダブリン、サルモネラ・ニューポルト及びサルモネラ・チフィムリウムの毒素を含む［combo 183］。
【００８１】
好ましい実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ、サルモネラ、好ましくはサルモネラ・ダブリン、サルモネラ・ニューポルト及びサルモネラ・チフィムリウムによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 184］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ、サルモネラ、好ましくはサルモネラ・ダブリン、サルモネラ・ニューポルト及びサルモネラ・チフィムリウムのバクテリン-トキソイドを含む［combo 185］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、パスツレラ・ヘモリチカA1型の多数の単離株及び関連するトキソイド分画、並びにP.ムルトシダ、S.ダブリン及びS.チフィムリウムのただ1つの単離株を含む［combo 186］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、モラキセラ・ボヴィス及び／又はクレブシーラspp、好ましくはクレブシーラ・プニューモニエによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 187］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、モラキセラ・ボヴィス及び／又はクレブシーラspp、好ましくはクレブシーラ・プニューモニエの毒素を含む［combo 188］。
【００８２】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185及び186]のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらに、モラキセラ・ボヴィス及び／又はクレブシーラspp、好ましくはクレブシーラ・プニューモニエによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 189］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185及び186］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらに抗原、好ましくはモラキセラ・ボヴィス及び／又はクレブシーラspp、好ましくはクレブシーラ・プニューモニエの毒素を含む［combo 190］。
【００８３】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）及びエスケリキア・コリ（Escherichia coli、大腸菌）によって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 191］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）及びエスケリキア・コリの毒素を含む［combo 192］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189及び190]のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにエスケリキア・コリによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 193］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189及び190］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらに抗原、好ましくはエスケリキア・コリの毒素を含む［combo 190］。
好ましい実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ、サルモネラ・ダブリン、サルモネラ・チフィムリウム及びエスケリキア・コリによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 195］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、パスツレラ・ヘモリチカ、パスツレラ・ムルトシダ、サルモネラ・ダブリン、サルモネラ・チフィムリウム及びエスケリキア・コリのバクテリン-トキソイドを含む［combo 196］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、パスツレラ・ヘモリチカA1型の多数の単離株及び関連するトキソイド分画、並びにP.ムルトシダ、S.ダブリン及びS.チフィムリウムのただ1つの単離株を含む［combo 197］。
【００８４】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びウシロタウイルスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 198］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）及びウシロタウイルスの抗原を含む［combo 199］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、195、196及び197]のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにウシロタウイルスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 200］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196及び197］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにウシロタウイルスの抗原を含む［combo 201］。
【００８５】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びウシコロナウイルスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 202］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）及びウシコロナウイルスの抗原を含む［combo 203］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196及び197]のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにウシコロナウイルスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 204］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196及び197］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにウシコロナウイルスの抗原を含む［combo 205］。
【００８６】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにウシコロナウイルス及びウシロタウイルスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 206］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにウシコロナウイルス及びウシロタウイルスの抗原を含む［combo 207］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196及び197]のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにウシコロナウイルス及びウシロタウイルスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 208］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196及び197］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにウシコロナウイルス及びウシロタウイルスの抗原を含む［combo 209］。
【００８７】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びクリプトスポリジウム・パルブムによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 210］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びクリプトスポリジウム・パルブムの抗原を含む［combo 211］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208及び209]のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにクリプトスポリジウム・パルブムによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 212］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208及び209］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにクリプトスポリジウム・パルブムの抗原を含む［combo 213］。
【００８８】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びクリプトスポリジウム・ホミニスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 214］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びクリプトスポリジウム・ホミニスの抗原を含む［combo 215］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208及び209]のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにクリプトスポリジウム・ホミニスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 216］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208及び209］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにクリプトスポリジウム・ホミニスの抗原を含む［combo 217］。
【００８９】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにクリプトスポリジウム・パルブム及びクリプトスポリジウム・ホミニスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 218］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにクリプトスポリジウム・パルブム及びクリプトスポリジウム・ホミニスの抗原を含む［combo 219］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208及び209]のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにクリプトスポリジウム・パルブム及びクリプトスポリジウム・ホミニスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 220］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208及び209］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにクリプトスポリジウム・パルブム及びクリプトスポリジウム・ホミニスの抗原を含む［combo 221］。
【００９０】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びマイコバクテリウム・アビウム・パラツベルクローシスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 222］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びマイコバクテリウム・アビウム・パラツベルクローシスの抗原を含む［combo 223］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220及び221]のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにマイコバクテリウム・アビウム・パラツベルクローシスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 224］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220及び221］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにマイコバクテリウム・アビウム・パラツベルクローシスの抗原を含む［combo 225］。
【００９１】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びアデノウイルスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 226］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びアデノウイルスの抗原を含む［combo 227］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224及び225]のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにアデノウイルスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 228］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224及び225］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにアデノウイルスの抗原を含む［combo 229］。
【００９２】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びアストロウイルスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 230］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びアストロウイルスの抗原を含む［combo 231］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228及び229]のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにアストロウイルスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 232］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228及び229］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにアストロウイルスの抗原を含む［combo 233］。
【００９３】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びウシパルボウイルスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 234］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びウシパルボウイルスの抗原を含む［combo 235］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232及び233]のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにウシパルボウイルスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 236］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232及び233］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにウシパルボウイルスの抗原を含む［combo 237］。
【００９４】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにクリプトスポリジウム・パルブム、アデノウイルス、アストロウイルス、ウシパルボウイルス及びマイコバクテリウム・アビウム・パラツベルクローシスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 238］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにクリプトスポリジウム・パルブム、アデノウイルス、アストロウイルス、ウシパルボウイルス及びマイコバクテリウム・アビウム・パラツベルクローシスの抗原を含む［combo 239］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにエスケリキア・コリ、サルモネラspp、好ましくはサルモネラ・ダブリン、サルモネラ・チフィムリウム及びサルモネラ・ニューポルト、ウシロタウイルス及びウシコロナウイルス、クリプトスポリジウム・パルブム、アデノウイルス、アストロウイルス、ウシパルボウイルス及びマイコバクテリウム・アビウム・パラツベルクローシスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 240］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びにエスケリキア・コリ、サルモネラspp、好ましくはサルモネラ・ダブリン、サルモネラ・チフィムリウム及びサルモネラ・ニューポルト、ウシロタウイルス及びウシコロナウイルス、クリプトスポリジウム・パルブム、アデノウイルス、アストロウイルス、ウシパルボウイルス及びマイコバクテリウム・アビウム・パラツベルクローシスの抗原を含む［combo 241］。
【００９５】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びストレプトコッカスspp.、好ましくはストレプトコッカス・ウベルス及び／又はストレプトコッカス・ディスガラクチエによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 242］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びストレプトコッカスspp.、好ましくはストレプトコッカス・ウベルス及び／又はストレプトコッカス・ディスガラクチエの抗原を含む［combo 243］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びストレプトコッカスspp.、好ましくはストレプトコッカス・ウベルス及び／又はストレプトコッカス・ディスガラクチエの抗原を含む［combo 244］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びストレプトコッカスspp.、好ましくはストレプトコッカス・ウベルス及び／又はストレプトコッカス・ディスガラクチエ、及び／又はスタフィロコッカス・アウレウスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 245］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、及びストレプトコッカスspp.、好ましくはストレプトコッカス・ウベルス及び／又はストレプトコッカス・ディスガラクチエ、及び／又はスタフィロコッカス・アウレウスの抗原を含む［combo 246］。
【００９６】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240及び241]のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにストレプトコッカスspp.、好ましくはストレプトコッカス・ウベルス及び／又はストレプトコッカス・ディスガラクチエ、及び／又はスタフィロコッカス・アウレウスによって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 247］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240及び241］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにストレプトコッカスspp.、好ましくはストレプトコッカス・ウベルス及び／又はストレプトコッカス・ディスガラクチエ、及び／又はスタフィロコッカス・アウレウスの抗原を含む［combo 248］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240及び241］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにストレプトコッカスspp.、好ましくはストレプトコッカス・ウベルス及び／又はストレプトコッカス・ディスガラクチエ、及び／又はスタフィロコッカス・アウレウスの抗原を含む［combo 249］。
【００９７】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、ストレプトコッカスspp.、好ましくはストレプトコッカス・ウベルス及び／又はストレプトコッカス・ディスガラクチエ、スタフィロコッカス・アウレウス、クレブシーラspp.、及びマイコプラズマspp.によって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 250］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、ストレプトコッカスspp.、好ましくはストレプトコッカス・ウベルス、ストレプトコッカス・ディスガラクチエ、及び／又はスタフィロコッカス・アウレウス、クレブシーラspp.、及びマイコプラズマspp.の抗原を含む［combo 251］。より好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、ストレプトコッカスspp.、好ましくはストレプトコッカス・ウベルス及び／又はストレプトコッカス・ディスガラクチエ、スタフィロコッカス・アウレウス、クレブシーラspp.、マイコプラズマspp.及びエンドトキシンの抗原を含む［combo 252］。
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、ウシの微生物学的感染に対してウシを治療及び／又は予防するための混合ワクチンに関し、この場合、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、トリコフィトン及びミクロスポラス（好ましくは、トリコフィトン・ヴェルルコスム、トリコフィトン・メンタグロフィテス、トリコフィトン・エクィヌム（Trichophyton euinum）、トリコフィトン・サルキソヴィー、ミクロスポラム・カニス、ミクロスポラム・カニスvar. オベスム（Microsporum canis var. obesum）、ミクロスポラム・カニスvar. ディストルツム（Microsporum canis var. distortum）及びミクロスポラム・ジプセウムから選択される）によって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な少なくとも1つのさらに別の免疫学的活性成分を含む［combo 253］。好ましい実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンは、本明細書に記載の弱毒BVDV（1及び／又は2型）、並びに、トリコフィトン及びミクロスポラム（好ましくは、トリコフィトン・ヴェルルコスム、トリコフィトン・メンタグロフィテス、トリコフィトン・エクィヌム（Trichophyton euinum）、トリコフィトン・サルキソヴィー、ミクロスポラム・カニス、ミクロスポラム・カニスvar. オベスム（Microsporum canis var. obesum）、ミクロスポラム・カニスvar. ディストルツム（Microsporum canis var. distortum）及びミクロスポラム・ジプセウムから選択される）の抗原を含む［combo 254］。
【００９８】
さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250及び251]のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにストレプトコッカスspp.、好ましくはトリコフィトン及びミクロスポラム（好ましくは、トリコフィトン・ヴェルルコスム、トリコフィトン・メンタグロフィテス、トリコフィトン・エクィヌム、トリコフィトン・サルキソヴィー、ミクロスポラム・カニス、ミクロスポラム・カニスvar. オベスム、ミクロスポラム・カニスvar. ディストルツム及びミクロスポラム・ジプセウムから選択される）によって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効な免疫学的活性成分を含む［combo 255］。さらに別の実施態様にしたがえば、本発明は、［combo 001、002、03、004、005、006、007、008、009、010、011、012、013、014、015、016、017、018、019、020、021、022、023、024、025、026、027、028、029、030、031、032、033、034、035、036、037、038、039、040、041、042、043、044、045、046、047、048、049、050、051、052、053、054、055、056、057、058、059、060、061、062、063、064、065、066、067、068、069、070、071、072、073、074、075、076、077、078、079、080、081、082、083、084、085、086、087、088、089、090、091、092、093、094、095、096、097、098、099、100、101、102、103、104、105、106、107、108、109、110、111、112、113、114、115、116、117、118、119、120、121、122、123、124、125、126、127、128、129、130、131、132、133、134、135、136、137、138、139、140、141、142、143、144、145、146、147、148、149、150、151、152、153、154、155、156、157、158、254、159、160、161、162、163、164、165、166、167、168、169、170、171、172、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、183、184、185、186、187、188、189、190、191、192、193、194、195、196、197、198、199、200、201、202、203、204、205、206、207、208、209、210、211、212、213、214、215、216、217、218、219、220、221、222、223、224、225、226、227、228、229、230、231、232、233、234、235、236、237、238、239、240、241、242、243、244、245、246、247、248、249、250及び251］のいずれかの混合ワクチンに関し、前記はさらにストレプトコッカスspp.、好ましくはトリコフィトン及びミクロスポラム（好ましくは、トリコフィ���ン・ヴェルルコスム、トリコフィトン・メンタグロフィテス、トリコフィトン・エクィヌム、トリコフィトン・サルキソヴィー、ミクロスポラム・カニス、ミクロスポラム・カニスvar. オベスム、ミクロスポラム・カニスvar. ディストルツム及びミクロスポラム・ジプセウムから選択される）の抗原を含む［combo 256］。
【００９９】
さらに別の実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンの供給源は以下のとおりである：
Alpha 7TM、ALPHA-7/MBTM、ALPHA-CDTM、BAR-VAC（登録商標） 7、BAR-VAC（登録商標） 7/SOMNUS、BAR-VAC（登録商標） 8、 BAR-VAC（登録商標） CD、BAR-VAC（登録商標） C/DT、BREED-BACKTM FP 10、BREED-BACKTM FP 10 HS、BREED-BACKTM FP 5、BREED-BACKTM FP 5 HS、BREED-BACK-10TM、CALIBER（登録商標） 3、CALIBER（登録商標） 7、ELITE 4TM、ELITE 9TM、ELITE 9-HSTM、EXPRESS（登録商標）10、EXPRESS（登録商標）10-HS、EXPRESS（登録商標） 3、EXPRESS（登録商標） 3/Lp、EXPRESS 4（登録商標）、EXPRESS（登録商標） 5、EXPRESS（登録商標） 5-HS、EXPRESS（登録商標） 5-PHM, EXPRESS（登録商標） I、EXPRESS（登録商標） I/LP、OCU-GUARD（登録商標） MB、PULMO-GUARDTM MpB、PULMO-GUARDTM PH-M、PULMO-GUARDTM PH-M/SDT、PULMO-GUARDTM PHM-1、TETGUARDTM、VIBRIO-LEPTO-5TM（いずれもベーリンガー・インゲルハイム社（Boehringer Ingelheim）（St. Joseph, MO））；CobaltTM 7、I-SiteTM、Lepto 5, Master Guard（登録商標） Preg 5、Master Guard（登録商標） 10、Master Guard（登録商標） 10 + Vibrio、Master Guard（登録商標） J5、P.H.M. Bac（登録商標） 1、Pre-vent 6TM、Respromune（登録商標） 4、Respromune（登録商標） 4 + Somnumune（登録商標） (IM, SC)、Respromune（登録商標） 5 I-B-P+BRSV、Respromune（登録商標） 5+L5、Respromune（登録商標） 5+L5 Somnus、Respromune（登録商標） 5+Somnumune、Respromune（登録商標） 5+VL5, Respromune（登録商標） 8、Respromune（登録商標） 9、Respromune（登録商標） 10、Scour VacTM 4、Scour VacTM 9、Scour VacTM E coli + C、Somnumune（登録商標）、TitaniumTM 3、TitaniumTM 4、TitaniumTM 4 L5、TitaniumTM 5、TitaniumTM 5 L5、Titanium（登録商標） 5+P.H.M. Bac（登録商標）-1、TitaniumTM BRSV 3、TitaniumTM IBR、TitaniumTM IBR-LP（いずれもアグリ・ラボラトリーズ社（Agri Laboratories Inc）（St. Joseph, MO））；Herd-Vac（登録商標） 3、Herd-Vac（登録商標） 3 S、Herd-Vac（登録商標） 8、Herd-Vac（登録商標） 9、SurroundTM 4、SurroundTM 4+HS、SurroundTM 8、SurroundTM 9、SurroundTM 9+HS、SurroundTM HS、SurroundTM L5、SurroundTM V-L5（いずれもバイオコア社（BioCor）（Omaha, NE (Pfizer))；Mycomune（登録商標） (Biomune Co., Lenexa, KS)；ブルータングワクチン、ウシウイルス性下痢ワクチン、カンピロバクター・フェータス・バクテリン-ボヴァイン、エッセンシャル1、エッセンシャル2+P、エッセンシャル3、エッセンシャル3+T、エッセンシャル4、Lepto-5、マンハイミア・ヘモリチカ-パスツレラ・ムルトシダ・バクテリン、Pre-breed 6、Pre-breed 8、Respira-1、Respira-3、Wart Vaccine（いずれもコロラド・シーラム社（Colorado Serum Company）（Denver, CO)）；Pyramid（登録商標） 3、Pyramid（登録商標） 4、Pyramid（登録商標） 4 + Presponse（登録商標） SQ、Pyramid（登録商標） 5、Pyramid（登録商標） 8、Pyramid（登録商標） 9、Pyramid（登録商標） IBR、Pyramid（登録商標） IBR+Lepto、Triangle（登録商標） 1 + Type II BVD、Triangle（登録商標） 3 + VL5、Triangle（登録商標） 4 + HS、Triangle（登録商標） 4 + PH/HS、Triangle（登録商標） 4 + PH-K、Triangle（登録商標） 4 + Type II BVD、Triangle（登録商標） 9 + HS、Triangle（登録商標） 9 + PH-K、Triangle（登録商標） + Type II BVD、Trichguard（登録商標）、Trichguard（登録商標） + V5L、TriVib 5L（登録商標）（いずれもフォート・ドッジ・アニマル・ヘルス社（Fort Dodge Animal Health）（Overland Park, KS（Wyeth））；J-5大腸菌バクテリン、Serpens Species Bacterin；スタフィロコッカス・アウレウスバクテリン-トキソイド（いずれもハイジーア・バイオロジカル・ラボラトリーズ社（Hygieia Biological Laboratories）（Woodland, CA）； Endovac-Bovi��登録商標） with Immuneplus（登録商標） (Immvac, Inc., Columbia, MO)；20/20 Vision（登録商標） with Spur（登録商標）、L5 SQ, NeoguardTM、MasterGuard（登録商標） Preg 5、Once PMH（登録商標）、Once PMH（登録商標） SQ、VibraloneTM-L5、Vision（登録商標） 7 Somnus with Spur（登録商標）、Vision（登録商標） 7 with Spur（登録商標）、Vision（登録商標） 8 Somnus with Spur（登録商標）、Vision（登録商標） 8 with Spur（登録商標）、Vision（登録商標） CD-T with Spur（登録商標）、Vision（登録商標） CD with Spur（登録商標）、VistaTM IBR SQ、VistaTM 3 SQ、VistaTM 5 SQ、VistaTM 5 L5 SQ、VistaTM Once SQ、VL5 SQ、Volar（登録商標）（いずれもインターヴェット社（Intervet Inc.）（Millsboro, DE））；Vac（登録商標）、Reliant（登録商標） 3、Reliant（登録商標） 4、Reliant（登録商標） IBR、Reliant（登録商標） IBR/BVD、Reliant（登録商標） IBR/Lepto、Reliant（登録商標） Plus BVD-K（Dual IBRTM）、Reliant（登録商標） Plus (Dual IBRTM)、RespishieldTM 4、RespishieldTM 4 L5、RespishieldTM HM（いずれもメリアル社（Merial LTD）（Duluth, GA））；Arsenal（登録商標） 4.1、Arsenal（登録商標） IBR、Arsenal（登録商標） IBR BVD、Bovine Pili ShieldTM、Bovine Pili ShieldTM+C、Clostri Shield（登録商標） 7、Clostri Shield（登録商標） BCD、Fusogard（登録商標）、Lepto ShieldTM 5、Pinkeye ShieldTM XT4、Salmo Shield（登録商標） T、Salmo Shield（登録商標） TD、Scour BosTM 4、Scour BosTM 9、Somnu ShieldTM、Trep ShieldTM HW、Vib Shield（登録商標） L5、Vib Shield（登録商標） Plus、Vib Shield（登録商標） Plus L5、Vira Shield（登録商標） 2、Vira Shield（登録商標） 2+BRSV、Vira Shield（登録商標） 3、Vira Shield（登録商標） 3+VL5、Vira Shield（登録商標） 4、Vira Shield（登録商標） 4+L5、Vira Shield（登録商標） 5、Vira Shield（登録商標） 5+L5、Vira Shield（登録商標） 5+L5 Somnus、Vira Shield（登録商標） 5+Somnus、Vira Shield（登録商標） 5+VL5、Vira Shield（登録商標） 5+VL5 Somnus、Vira Shield（登録商標） 6、Vira Shield（登録商標） 6+Somnus、Wart ShieldTM（いずれもノヴァチス・アニマル・ヘルス社（Novartis Animal Health）（Basel, Switzerland））；Bovi-K（登録商標） 4、Bovi-ShieldTM 3、Bovi-ShieldTM 4、Bovi-ShieldTM BRSV、Bovi-Shield（登録商標） FPTM 4+L5、Bovi-Shield（登録商標） GOLD 3、Bovi-Shield（登録商標） GOLD 5、Bovi-Shield（登録商標） GOLD FPTM 5 L5、Bovi-Shield（登録商標） GOLD FPTM 5 VL5、Bovi-Shield（登録商標） Gold IBR-BVD、Bovi-Shield（登録商標） Gold IBR-BVD-BRSV-LP、Bovi-ShieldTM IBR、Bovi-ShieldTM IBR-BRSV-LP、Bovi-ShieldTM IBR-BVD、Bovi-ShieldTM IBR-BVD-BRSV-LP、Bovi-ShieldTM IBR-PI3-BRSV、Calf-Guard（登録商標）、CattleMaster（登録商標） 4、CattleMaster（登録商標） 4+L5、CattleMaster（登録商標） 4+VL5、CattleMaster（登録商標） BVD-K、CattleMaster（登録商標） Gold FPTM 5、CattleMaster（登録商標） Gold FPTM 5 L5、Defensor（登録商標） 3, Fortress（登録商標） 7、Fortress（登録商標） 8、Fortress（登録商標） CD、Leptoferm（登録商標）-5、One Shot（登録商標）、One Shot UltraTM 7、One Shot UltraTM 8、PregGuardTM FP 9、PregGuard（登録商標） Gold FPTM 10、Resvac（登録商標） BRSV/Somubac（登録商標）、Resvac（登録商標） 4/Somubac（登録商標）、ScourGuard 3（登録商標） (K)、ScourGuard 3（登録商標） (K)/C、Somubac（登録商標）、Spirovac（登録商標）、Spirovac（登録商標） L5、Spirovac（登録商標） VL5、StayBredTM VL5、TSV-2TM、Ultrabac（登録商標） 7、Ultrabac（登録商標） 7/Somubac（登録商標）、Ultrabac（登録商標） 8、Ultrabac（登録商標） CD、UltraChoiceTM 7、UltraChoiceTM 8、UltraChoiceTM CD、Upjohn J-5 BacterinTM、Vibrin（登録商標）（いずれもファイザー社（Pfizer Inc.）（New York, NY)）；Covexin（登録商標） 8 Vaccine、Electroid（登録商標） 7 Vaccine、Electroid（登録商標） D、GuardianTM、Jencine（登録商標） 2、Jencine（登録商標） 3、Jencine（登録商標） 4、Nasalgen（登録商標） IP Vaccine、Piliguard（登録商標） Pinkeye-1 Trivalent、Piliguard（登録商標） Pinkeye + 7、Piliguard（登録商標） Pinkeye Triview（登録商標）、Siteguard（登録商標） G、Siteguard（登録商標） MLG Vaccine（いずれもシェーリング・プラウ・アニマルヘルス社（Schering-Plough Animal Health Corporation）（Kenilworth, NJ））；Myco-BacTM B、Poly-Bac B（登録商標） 3、Poly-Bac B（登録商標） Somnus、Super Poly-Bac B（登録商標） Somnus（いずれもテキサス・ヴェット・ラブ社（Texas Vet Lab, Inc.）（San Angelo, TX））；VirabosTM-3 with Immunostim（登録商標）、VirabosTM-4 + H. somnus with Immunostim（登録商標）、VirabosTM-4 with Immunostim（登録商標）（いずれもバイオニシュ・アニマルヘルス社（Bioniche Animal Health）（Athens, GA））。前記混合ワクチンには、本明細書に記載の弱毒BVDVが添加されるか、又は前記ワクチンのいずれに存在するBVDVも、本明細書に記載の弱毒BVDVによって置き換えられる。
【０１００】
処方：
本発明の重要な特徴は混合ワクチンの製造である。当業者は、前記組成物に混合することができる追加の成分を理解するであろう（以下もまた参照されたい：Remington's Pharmaceutical Sciences (1990) 18th ed. Mack Publ., Easton）。当業者は、公知の注射可能な生理学的に許容できる無菌的溶液を使用することができる。非経口的注射又は輸液用の即席溶液の製造のために、等張な水溶液、例えば食塩水又は対応する血漿タンパク質溶液は容易に入手できる。前記医薬組成物は、凍結乾燥物又は乾燥調製物（前記は、公知の注射可能な溶液を使用前に無菌的条件下で直接用いて再構成することができる）として、例えばパーツで構成されたキットとして存在しえる。
さらにまた、本発明の免疫原性及びワクチン組成物は、獣医が許容できる1つ以上の担体を含むことができる。本明細書で用いられる、“獣医が許容できる担体”には、任意の及び全ての溶媒、分散媒体、コーティング、アジュバント、安定化剤、稀釈剤、保存料、抗菌及び抗カビ剤、等張剤、吸収遅延剤などが含まれる。
稀釈剤には、水、食塩水、デキストロース、エタノール、グリセロールなどが含まれえる。等張剤には、とりわけ塩化ナトリウム、デキストロース、マンニトール、ソルビトール、及びラクトースが含まれる。安定化剤には、とりわけアルブミン及びエチレンジアミン四酢酸のアルカリ塩が含まれる。
アジュバントには、とりわけ、RIBIアジュバント系（RIBI Inc.）、ミョウバン、水酸化アルミニウムゲル、コレステロール、水中油エマルジョン（例えばフロイントの完全及び不完全アジュバント、ブロックコポリマー（CytRx、Atlanta GA）、SAF-M（Chiron, Emeryville CA）、CARBOPOL(商標)、AMPHIGENOアジュバント、サポニンQuil A、QS-21（Cambridge Biotech Inc., Cambridge MA）、GPI-0100（Galenica Pharmaceuticals, Inc., Birmingham, AL）又は他のサポニン分画、モノホスホリル脂質A、アヴィリジン脂質-アミンアジュバント、大腸菌の易熱性エンテロトキシン（組換え又はそれ以外）、コレラ毒素、又はムラミルジペプチドが含まれるが、これらに限られない。
免疫原性組成物はさらに、1つ以上の免疫調節剤、例えばインターロイキン、インターフェロン、又は他のサイトカインを含むことができる。免疫原性組成物はまたゲンタマイシン及びメルチオレートを含むことができる。本発明に関連して有用なアジュバント並びに添加物の量及び濃度は当業者には容易に決定できるが、一方、本発明は、約50μgから約2000μgのアジュバント及び好ましくは約250μg/mLの用量のワクチン組成物を含む組成物を意図する。別の好ましい実施態様では、本発明は、約1μg/mLから約60μg/mLの抗生物質、及びより好ましくは約30μg/mL未満の抗生物質を含む組成物を意図する。
例えば、本発明の組成物では、104から106 TCID50の弱毒BVDVを25% SGS（シュクロース75mg、ゼラチン20mg、水酸化カリウム0.274mg、L-グルタミン酸0.72mg、リン酸二水素カリウム0.516mg、リン酸二カリウム1.254mg、及び注射用の水2mL）及び5%（v/v）の細胞培養液、及び1mLの注射用の水に溶解させることができる。前記をさらに、少なくとも1つのさらに別のウシの病原体（上記に列挙）と混合する。
さらに別の実施態様にしたがえば、混合ワクチンは先ず初めに脱水される。前記組成物が、最初からワクチン接種前に凍結乾燥されているか、又は脱水されている場合は、前記組成物は、水溶液（例えば食塩水、PBS（リン酸緩衝食塩水））又は非水性溶液（例えば乳液（鉱物油、又は植物性／代謝可能油系／単一又は二重エマルジョン系）、アルミニウム系、カーボマー系アジュバント）で再水和される。
【０１０１】
用量及び投与：
本発明にしたがえば、ウシ（妊娠乳牛及び仔牛養育妊娠乳牛を含む）に投与される有効量の混合ワクチンは、BVDV及び上記に列挙した少なくとも1つのさらに別の病原体によって引き起こされる微生物学的感染に対して有効な免疫を提供する。ウシの微生物学的疾患の治療及び予防を目的とする好ましい抗原の組合せは上記に列挙されている。
ある実施態様にしたがえば、前記混合ワクチンはウシに3から4週間の間隔で2回投与される。例えば、第1回の投与は、前記動物が約1から約3ヶ月齢のときに実施される。第二の投与は、第一の混合ワクチンの投与後約1から約3週間して実施される。さらに別の実施態様にしたがえば、再ワクチン接種は、第二回の投与後6から12ヶ月の間隔で実施される。好ましい実施態様では、最初の投与は動物の交配の約2週間前に実施される。その後のワクチンの投与は好ましくは6ヶ月から1年を基準に実施される。別の好ましい実施態様では、約6ヶ月齢前にワクチン接種された動物は、6ヶ月齢後に再度ワクチン接種されるべきである。その後のワクチン投与は、好ましくは毎年実施される。
混合ワクチンの有効量は、ワクチンの成分及び投与スケジュールに左右される。典型的には、不活化ウイルス又は改変生ウイルス調製物が混合ワクチンに用いられるときは、約102から約109 TCID50/回、好ましくは約103から約108 TCID50/回、より好ましくは約104から約108 TCID50/回を含むワクチン量が用いられる。例えば、約105から約108 TCID50/回の弱毒BVDV（1及び／又は2型）が、約3から4週間の期間で動物に2回投与されるときに有効である。一般的には、不活化抗原は、改変生ウイルスよりも多い量で通常用いられる。典型的には、混合ワクチンで細菌抗原が用いられるとき、ワクチンは、約103から約109 CFU/回、好ましくは約104から約108 CFU/回、より好ましくは約105から約106 CFU/回の量を含む。
【０１０２】
ある事例では、混合ワクチンは改変生IBRを含み、前記IBR抗原の量は、好ましくは約105から約107.5 TCID50/回の範囲である。ある事例では、混合ワクチンは改変生PI3を含み、前記PI3抗原の量は、好ましくは約107から約109 TCID50/回の範囲である。ある事例では、混合ワクチンは改変生BRSVを含み、前記BRSV抗原の量は、好ましくは約104.5から約106.5 TCID50/回の範囲である。ある事例では、混合ワクチンは死滅IBRを含み、前記IBR抗原の量は、好ましくは約107.0から約109.0 TCID50/回の範囲である。ある事例では、混合ワクチンは死滅PI3を含み、前記PI3抗原の量は、好ましくは約107.2から約109.2 TCID50/回の範囲である。ある事例では、混合ワクチンは死滅BRSVを含み、前記BRSV抗原の量は、好ましくは約105.0から約107.5 TCID50/回の範囲である。ある事例では、混合ワクチンは死滅レプトスピラspp.を含み、各レプトスピラspp.の量は、好ましくは約107.0から約1010 CFU/回の範囲である。ある事例では、混合ワクチンは死滅H.ソムヌスを含み、前記H.ソムヌスの量は、好ましくは約106.0から約109 CFU/回の範囲である。
本発明の組成物は、皮内、気管内、膣内、筋肉内、又は鼻内に、好ましくは筋肉内又は鼻内に適用することができる。動物の体内では、静脈注射又は標的組織への直接注射による上記の医薬組成物の適用は有利であることを証明することができる。全身適用のためには、静脈内、脈管内、筋肉内、鼻内、動脈内、腹腔内、経口又は脊髄内ルートが好ましい。より局所的適用は皮下、皮内、皮膚内、噴門内、肺葉内（intralobally）、骨髄内、肺内に、又は治療されるべき組織内若しくは組織（結合組織、骨組織、神経組織、上皮組織）近くに直接実施することができる。所望される治療期間及び効果にしたがって、本発明の組成物は1回又は数回、間欠的に投与するとともに、例えば毎日、数日、数週又は数ヶ月間及び種々の用量で投与してもよい。
治療方法：
本発明のさらに別の重要な実施態様は、BVDV及びさらに別のウシの病原性微生物によって引き起こされる疾患の予防又は治療方法である。前記方法では、本明細書に記載の弱毒BVDV及びさらに別の前記ウシの病原性微生物によって引き起こされる感染の治療及び／又は予防に有効なさらに別の免疫学的活性成分が、その必要がある動物に、当業者に公知の適切な用量で投与される。
【実施例】
【０１０３】
以下の実施例は本発明をさらに説明するために供されるが、前記実施例を本明細書に開示する発明の範囲を限定するものと解してはならない。
実施例1：BVDV XIKE-B：妊娠未経産牛での胎児病原性の評価
BVDV XIKE-B（病原性の強いBVDV 2型単離株、NewYork'93/CのRNase陰性変異体）が感染性cDNAクローン、pKANE40Bから回収され、前記は、組織培養で野生型様（wt-様）の増殖の特徴を示した。動物実験では、前記変異体ウイルスは、それらが弱毒生ワクチンウイルス開発用の有望な候補となりえるほど顕著に弱毒化されていることが判明した（Meyer et al. 2002）。この弱毒ウイルスがなお胎盤を通過して胎児に感染することができるか否かを試験するために、妊娠未経産牛にXIKE-Bを感染させた。コントロールとして、cDNAクローン、pKANE40Aから回収した野生型BVDVを用いた。XIKE-Aと名付けた対応するウイルスは活性なErns RNaseを感染細胞で発現する。本実験は、XIKE-A及びXIKE-Bの妊娠動物における安全性を評価することを目的とした。
実験設計
10頭の妊娠未経産牛をBVDV陰性集団から選択した。5頭で構成される以下のグループが試験に含まれた：
2009516002.tif 000007
未経産牛を接種の８日前に実験施設に移動させた。妊娠状況は実験施設への輸送後に確認した。接種日に未経産牛は妊娠60日から90日であった。接種は全ての動物において1時点で実施された。
流産を含むBVDV感染の臨床症状の存在について未経産牛を観察期間中モニターした。血清学及び抗原検出のために、前記動物から血液サンプルを採集し、さらに白血球を計測した。この実験は感染後9週間で終了した。流産しなかった乳牛を屠殺し、胎児を調べ収集した。通常の剖検時に胎児の器官サンプルを採集し、BVDV感染について調べた。
胎児感染の存在が主要な評価パラメーターであり、前記は、乳牛のBVDV関連死亡率の数、BVDV関連流産の数及び終了時のBVDV陽性胎児の数で構成される。前記主要パラメーターに加えて、BVDV感染に関する臨床症状の特徴、乳牛のウイルス血症及び白血球数、並びにチャレンジ後の直腸温度が評価された。
動物
未経産牛はBVDVが存在しない農場から購入した。以下の包含基準に適合する動物のみを用いた。
包含基準
−BVDV抗体陰性：各個体は、輸送前及び実験開始時に（動物検査施設で）血清抗体検査で調べた。
−BVDV陰性：各個体の血漿及びバッフィーコート調製物を適切な検査によって調べた。
−実験開始時に健康診断で判定した臨床的に健常な個体。動物の健康診断は、従来の一般的に許容される獣医基準にしたがって実施した。
−妊娠は接種前に内科検査によって確認した。妊娠は接種時に60−90日であり、受精記録によって立証された。
【０１０４】
試験株A
2009516002.tif 000008
試験株B
2009516002.tif 000009
【０１０５】
妊娠の管理
妊娠は接種直前に確認した。
未経産牛の接種
接種の日が実験0日目である。
各外鼻孔に、針のない注射筒で3mLの試験材料を鼻内投与した。
各接種時に新しい滅菌注射筒を用いた。呼気による液体の喪失を最小限にするため、投与は吸気相中に実施した。
接種後の観察
血液サンプルの採集及び検査：
血液は、標準的な無菌的方法（採血部位を消毒する）にしたがって採集した。各動物について新しい滅菌注射筒及び針を用いた。
血清調製のための血液採集：
接種直前に、続いて感染後毎週及び実験の終了時に、少なくとも10mLの血液を未経産牛から採集した。血清は必要になるまで-20℃で保存した。
白血球数及びバッフィーコート調製のための血液採集：
白血球計測のために、採取後直ちに3mLの血液を、0.06mLのEDTA（0.235 mol/L）を予め加えた適切な滅菌容器（Venoject, Terumo Europe N.V., Leuven, Belgium）に移した。
バッフィーコートの調製のためには、採取後直ちに少なくとも15mLの血液を、0.1mLのヘパリン溶液（注射用Na-ヘパリン、5000IU/mL、ロットA7B163A、実験日：11/2000：Gedeon Richter RT, Budapest, Hangary）を予め加えた適切な滅菌容器（Venoject, Terumo Europe N.V., Leuven, Belgium）に移し、少なくとも20IUヘパリン/mL血液の血液サンプルを得た。その後、内容物を注意深く混合した。
バッフィーコートの調製及び白血球計測のために、
−感染後0日目から14日目まで毎日、
−15日目から40日目まで、又は全ての動物でサンプリング時に連続して3回ウイルス単離が陰性となるまで1日おき未経産牛から血液を採集した。
血清の調製：
血液を室温で凝固させ、遠心によって分離した。各血清サンプルを少なくとも2mLずつ2つに分割した。1セット分をELISAによってBVDV特異的抗体でアッセイした。残りの血清を凍結し、必要になるまで-20℃で保存した。
白血球数：
白血球数は半自動の電子血球計算盤装置（Diatron Minicell-16, Messtechnik GmbH, Wien, Austria）（申告精度0.1ｘ109/L、100/μL）を用いて決定した。前記装置は製造業者の推奨にしたがって用いた（目盛り設定及び白血球計測）。
バッフィーコートの調製：
ヘパリン血サンプルは可能なかぎり迅速に実験室へ輸送した。バッフィーコート調製の方法は、無菌的条件下（無菌的ピペット、取り扱い、クリーンベンチなど）で標準的な実験室手順にしたがって実施した。
得られたバッフィーコートを小体積（2mL）のRPMI1640に再懸濁し、-70℃で0.5mLの2つの部分に分けて凍結した。残りの1mLのバッフィーコートは直ちにパーミッシブ細胞培養での同時培養により血球付随BVDVの決定に用いた。
BVD血清抗体ELISA試験：
適切で有効性が実証されたELISA試験（SvanovirTM BVDV抗体検査、Cat# 102200-10）を用い、BVDV抗体の存在について各血清サンプルを調べた。各試験は、製造業者の推奨にしたがって有効性を実証して実施された。陽性サンプルはlog2スケールで稀釈し、BVDV抗体力価を決定した。
BVD抗原アッセイ：
感受性細胞又は細胞株で新しく調製したバッフィーコートを同時培養することによって、BVDV抗体の存在について各バッフィーコートサンプルをアッセイした。同時培養前には凍結は行われなかった。
各サンプルの血漿を採集し、Man-Geneに提供した。
【０１０６】
臨床観察
未経産牛の観察：
動物は、十分な訓練を受けた獣医師により、接種後0日目から42日目まで臨床症状の存在について調べられた。
全ての臨床症状を記録し、それらの性質、堅さ／手触り、重篤度（軽度、中等度又は重度）、位置、患部領域のサイズを記載し、さらに合意されている標準的な定義にしたがってスコアを付した。呼吸器症状（呼吸、その速度；鼻汁又は涙液排出；結膜炎、くしゃみ、咳など）及び下痢に特別な注意をはらった。
直腸温度：
直腸温度は、接種5日前から感染後21日まで、各未経産牛について毎日同じ時間（好ましくは午前）に測定した。
直腸温度の毎日の測定は、各動物が少なくとも3日間連続して39℃以下の直腸温度を示すまで継続した。
妊娠の中断の検出：
妊娠を確認し、流産又は胎児の再吸収についての疑いは直腸検査によって確認された。訓練された獣医が、接種時、接種後1ヶ月及び2ヵ月後に全動物を調べた。前記検査は一般的に許容される獣医の慣行にしたがって実施された。
未経産牛は実験終了まで（チャレンジ後8−12週）一切の流産徴候について毎日調べた。
実験の終了
本実験は未経産牛の屠殺及び胎児の摘出によって終了した。胎児及び胎児材料は、ウシの番号及び日付／時間を記した密閉輸送容器で輸送した。容器は選択した剖検室に運ばれた。
未経産牛の剖検は要求されなかった。剖検は胎児について実施し所見を記録した。以下に記載したようにサンプルパネルを採集した。
【０１０７】
死後検査
前記実験動物の詳細な剖検を各死亡例で実施した。死後検査は、熟練の外科獣医師が実施し、データは適切なデータシートに記録された。さらに別の実験室検査が、観察された臨床症状及び病巣にしたがって実施された。剖検による診断が、微生物性因子によって引き起こされる疾患に帰される場合は、前記診断は、前記因子に特有の適切な検査によって立証された。ラベルを付した少なくとも2つの別個の容器に各組織サンプルを採集し、液体窒素で瞬間凍結した。サンプルは、必要になるまで-70℃で保存した。
流産胎児及び実験の終了
少なくとも以下の組織サンプルを胎児から採集した：
−腹腔又は胸郭の浸出物（存在する場合）；
−腸間膜リンパ節；
−脾臓；
−胸腺；
−小脳；
−腎臓；
−胸骨の骨髄；
−胎盤のサンプル（利用可能な場合）。
死亡又は屠殺未経産牛
少なくとも以下の組織サンプルを採集した：
−バッフィーコート用血液（利用可能な場合）；
−血清用血液（利用可能な場合）；
−腸間膜リンパ節；
−脾臓；
−腎臓；
−子宮（胎盤サンプルを含む（利用可能な場合））。
保存及び輸送サンプル
2009516002.tif 000010
サンプルは、スポンサーの要求に従って検査室分析のために移送された。サンプルの選別及び輸送のタイミングは、実験管理者又はプロジェクトマネージャーの賛同を得た。一般的な原則として、流産材料又は新生仔由来のサンプルは可能なかぎり速やかに調べた。
【０１０８】
結果
BVD関連臨床及び検査室データの要旨
グループ1
2009516002.tif 000011
グループ2
2009516002.tif 000012
*胎児はサンプル採取時に自己融解していた。
結論
本実験は妊娠動物でのXIKE-A及びXIKE-Bの安全性を判定することを目的とした。10頭の妊娠未経産牛をBVDV陰性集団から選別した。試験には5頭の未経産牛を含む2つのグループが含まれた：一方にはXIKE-Aを他方にはXIKE-Bウイルス株を接種した。未経産牛は接種日に妊娠60日から90日であった。流産を含むBVDV感染の臨床症状の存在について未経産牛を観察期間中モニターした。血清学及び抗原検出のために、前記動物から血液サンプルを採集し、さらに白血球を計測した。この実験は感染後9週間で終了した。流産しなかった乳牛を屠殺し、胎児を調べ収集した。通常の剖検時に胎児の器官サンプルを採集し、BVDV感染について調べた。
XIKE-BウイルスはXIKE-Aよりも病原性が低いことが証明されたが、それにもかかわらず、BVD関連流産及び胎児の感染がXIKE-Bグループでもまた観察された。したがって、Erns RNaseの不活化は胎児の感染を防止しないと結論することができる。
【０１０９】
実施例2：BVDV XIKE-A-NdN：妊娠未経産牛での胎児病原性の評価
Npro遺伝子は、組織培養でのCSFVの増殖に必須ではないことが示された（Tratschin et al. 1998）。Npro欠失の結果としてBVDVが弱毒化したことが立証されていないとしても、ウイルスと宿主間の相互作用においてこのタンパク質が役割を果たす可能性があるように思われ、最近のCSFVについての実験によって、このことが実際に示唆された（Mayer et al. 2004；Ruggli et al. 2003）。我々は、したがって、Nproコード配列の主要部分の欠失が、妊娠未経産牛の胎児にはもはや感染しないウイルスを生じるか否かを解明しようとした。5'末端の4コドンを除いて、完全長のcDNAクローン、pKANE40AからNpro遺伝子を標準的な方法にしたがって欠失させた。得られた変異体の完全長クローンをin vitro転写のための鋳型として用い、生じたcRNAを記載（Meyer et al. 2002）にしたがってMDBK細胞にトランスフェクトした。回収ウイルスを組織培養で増殖させ、続いて以下に記載する動物実験で用いた。BVDV XIKE-Bは胎盤を通過できることが以前に示されたので（実施例1）、コントロールとして供した。
実験の対象／目的
本実験は、Nproコード領域の大半のゲノム欠失を有する弱毒生BVDVの妊娠動物における安全性を判定することを目的とする。
使用した材料及び方法は実施例1に記載されている。
実験設計
8頭の妊娠未経産牛を2つのグループに任意に割り当てた。それらを以下のスケジュールにしたがって処置して観察した：
2009516002.tif 000013
2009516002.tif 000014
【０１１０】
結果
実験開始時に、全ての未経産牛は健康であり妊娠していた。実験開始前に、全動物がBVDV及びBVDV抗体を持っていないことが実証された。
感染に使用されるウイルスの調製及び管理
全稀釈工程を通してサンプルを採集し、調製の日に（すなわち凍結することなく）、適切な組織培養上で同時培養することによってアッセイした。ウイルスの力価測定の結果は下記の表に示す。
2009516002.tif 000015
BVDV感染の臨床症状
下記の表は、観察期間中に臨床症状を示した動物についての要旨を提供する。
臨床症状及びそれらが観察された接種後日数（DPI）
2009516002.tif 000016
各群の数頭の動物で軽度及び一過性の臨床症状のみが観察された。グループ1では、5頭の未経産牛の1頭が接種後8日目に食欲減退を示した。グループ2では、3頭の動物の2頭が臨床症状を示した。両未経産牛は接種後21日目頃に咳を示し、前記症状は動物の1頭においては食欲の減退を伴った。
直腸温度
異常な温度変化は動物の接種前には検出されなかった。接種後検出された数例の温度上昇は下記の表に要約される。
2009516002.tif 000017
各グループで1頭の動物がわずかに上昇した温度を有し、さらにまた、各グループで1頭の動物が発熱した。発熱は接種後8又は9日目に検出された。体温は常に次の日には正常値に戻った。
白血球数
ある程度の白血球減少症が、接種後3−8日目に全てのグループで観察された。白血球数が少なくとも40％減少した動物の数を下記に記載する。
2009516002.tif 000018
血清学（BVDV抗体）
実験プロトコルにしたがい、全未経産牛はワクチン接種前にBVDV抗体がなかった。グループ1（XIKE-A NdNを接種）及びグループ2（XIKE-Bを接種）では、完全な血清変換は実験終了時（接種の2ヵ月後）にのみ検出された。
バッフィーコートのBVDVウイルス単離
ウイルス血症は検出されなかった。
胎児組織サンプルのBVDVウイルス単離
2009516002.tif 000019
結論
Npro欠失は、病原性が強いことが示された親ウイルスXIKE-Aと比較してBVDVの顕著な弱毒化をもたらした（Meyer et al. 2002）。しかしながら、Npro欠失単独では、妊娠乳牛の接種後にNY93系ウイルス組換え体の胎児への伝播を防ぐことはできない。
実施例3：BVDV XIKE-B-NdN：妊娠未経産牛での胎児病原性の判定
BVDV弱毒化及び胎児伝播に関して、RNase不活化とNpro欠失との組合せの潜在能力を試験することができるように、Nproコード領域内に欠失を有する種々のBVDV-2変異体を、感染性cDNAクローンpKANE40B（コドン349が欠失したpKANE40AのRNase陰性変異体）を土台にして樹立した。所望の変異の存在、導入した変異にフランキングする領域内に第二の部位変異が存在しないこと、及び組織培養におけるそれらの増殖の特徴について回収ウイルスを分析した。XIKE-B-NdN（V-pK88C）、（コドン349のRNase不活化欠失に加えてコドン1から4を除く完全なNproコード領域の欠失を有する変種）は所望の変異と許容できる増殖特徴を一緒に有していたので、前記を動物実験のために選択した。本実験の目的は、妊娠動物で弱毒生BVDV単離株の安全性を判定することであった。5頭のBVDV陰性妊娠未経産牛に、XIKE-B-NdNを105 TCID50/動物の感染用量で接種した。臨床データは毎日記録した。血液サンプルは、白血球数、バッフィーコート調製及び血清検査のために採集した。実験終了後に、ウイルスの単離のために胎児組織を採集した。
材料と方法
実施例1に記載したとおりである。
結果
臨床症状は観察されなかった（データは示されていない）。白血球数は実質的に変化しなかったが、ただし未経産牛番号1015で1日だけ（接種後6日目）基準値よりほぼ40％低い有意な低下があった（データは示されていない）。
ａ）バッフィーコート調製物の分析：
ほぼ106の白血球をMDBK細胞とともに24ウェルの組織培養プレートにて5日間デュープリケートで培養した。サンプルは2回凍結融解した。融解したサンプルの100μL部分を新しく播種した24ウェルの組織培養プレートに接種し、間接免疫蛍光染色（mAb Code4、非構造タンパク質NS3の保存エピトープに対して誘導されている）によってウイルスについて調べた。動物＃921、1013、1015、1055及び1075のバッフィーコート調製物からはBVDVは単離できなかったが、一方、陽性コントロールにおいては前記検査の正確な遂行が明瞭に示された。
ｂ）胎児の死後検査：
実験の終了後に、以下の胎児組織をウイルス単離のために採集した：脾臓、腎層、胸腺、胸骨、小脳、胎盤、腸及び腹腔液。簡単に記せば、滅菌海砂および氷冷PBS（Ca2+及びMg2+を含まない）を用いて乳鉢中で組織懸濁物を作成した。乳鉢を1mLの氷冷PBS（Ca2+及びMg2+を含まない）で洗浄し、懸濁物を2000ｘｇ（4℃）で10分遠心した。上清を先ず初めに0.45μmの使い捨てフィルターホルダーに通し、続いて第二のフィルター（ポアサイズ0.2μm）に通した。ウイルスの単離（400μLの胎児組織懸濁物又は100μLの胎児腹腔液）は、24ウェルの組織培養プレートのMDBK単層細胞にてデュープリケートで実施した（37℃、7％CO2）。組織サンプルは、細胞変性効果又は細菌汚染について毎日管理し、5日間のインキュベーションの後で、プレートを2回凍結融解した。100μLのサンプルを新しく播種したMDBK細胞に継代した。ウイルスは間接免疫蛍光染色（mAb Code4）によって検出した。BVDVは組織サンプル又は胎児の腹腔液では検出できなかった。
ｃ）血清学的所見：
血清中和力価は、接種前、接種後1ヶ月及び実験終了時に測定した。NY93/Cに対する中和抗体について、全動物の血清をトリプリケートで検査し、間接免疫蛍光染色によって終末点稀釈を読み取った。結果は終末点稀釈として表した（終末点稀釈はほぼ100TCID50を中和し、Kaerberの方法によって算出した）。血清はMBDK細胞にとっては1：16までの稀釈で毒性を示すので、感染後0日目並びに1及び2週については確定的な結果は得られず、より高い稀釈では中和は検出できなかった。ワクチン接種後3週から、全動物は相同なBVDV-2ウイルスNY'93/Cに対して中和抗体を生じ、実験終了時まで持続した（図1）。
ｄ）結論
動物実験中に得られたデータは、BVDV XIKE-B-NdNは高度に弱毒化されたウイルスであることを明瞭に示している。野生型ウイルス又は単一変異体（XIKE-B又はXIKE-A-NdN、前記は妊娠未経産牛で高率に胎児への伝播を示す）とは対照的に、二重変異体は胎盤を通過しなかった。BVDV XIKE-B-NdNは同様な二重変異体とともに生弱毒ワクチンとしての使用に極めて適切である。
【０１１１】
有効性及び交差防御実験
弱毒ウイルス変異体BVDV XIKE-B又はBVDV XIKE-B-NdNによるワクチン接種に関して、2つの可能な問題を直視しなければならない。第一に、BVDV-1及びBVDV-2間の交差防御に関する一般的な問題が存在する。少なくとも不活化BVDV-1ワクチンによるワクチン接種は、妊娠動物においてBVDV-2の胎児への伝播を防がなかった。胎児感染に対する防御は抗BVDVワクチンの主要目的であるので、そのようなワクチンは広域の防御免疫を誘発するとはみなしえない。したがって問題は、弱毒生BVDV-2によるワクチン接種が胎児へのウイルス伝播を防ぐことができるか否かであった。第二に、BVDV XIKE-B-NdNの低い増殖速度は、妊娠未経産牛での胎児の胎盤感染を防ぐことができない低レベルの防御しかもたらさない可能性がある。この問題のために、動物実験を開始した。動物（10頭ずつの2グループ）にBVDV XIKE-B又はXIKE-B-NdNのどちらかでワクチン接種を実施した（意図される用量：105 TCID50のウイルスを含む1mLの上清）。いずれの動物もワクチン接種後顕著な臨床症状は示さなかったが、ただし非ワクチン接種コントロールグループの1頭の動物が軽度の咳を1日示した点を除く。直腸温度値は、非ワクチン接種コントロールグループの1頭の動物が1日39.1℃であった点を除き39℃より低かった。ワクチン接種後に調製したバッフィーコートサンプルを上記に記載したようにウイルスの存在について分析した。接種後4から8日で20頭の動物のうち5頭のみが1日又は2日間ウイルスを含んでいることが実験によって示された。
ワクチン接種後4週間で、動物の人工授精を実施した。チャレンジ感染は、BVDV-1株（BVDV KE-9、異種チャレンジ、動物はXIKE-Bでワクチン接種）又は異種BVDV-2株（BVDV KE-13、同種チャレンジ、動物はXIKE-B-NdNでワクチン接種）のどちらかを用い、60又は90日後に実施した（意図される用量：6mLに105 TCID50）。ワクチン接種動物の各グループから、チャレンジ感染のために5頭の妊娠未経産牛を無作為に選択した。BVDV XIKE-Bでワクチン接種した動物にBVDV-1株のKF-9でチャレンジし、一方、BVDV XIKE-B/NdNでワクチン接種した未経産牛にはBVDV-2 KE-13でチャレンジした。さらにまた、2頭の非ワクチン接種コントロールにチャレンジウイルスの各々を感染させた。ワクチン接種動物は、チャレンジ感染に際してウイルス血症も臨床症状も示さなかった。非ワクチン接種コントロールの全てがBVDV陽性であったのでチャレンジは成功であった。軽度の症状のみがコントロール群で観察された。白血球数はほとんど正常であった（データは示されていない）。
血清中和力価は、接種前、接種後1ヶ月、チャレンジ前、チャレンジ後1ヶ月、及び実験終了時に測定した。KE9及びNY93/C（1456Nase）に対する中和抗体について、全動物の血清をトリプリケートで検査し、間接免疫蛍光染色によって終末点稀釈を読み取った。結果は終末点稀釈として表した（終末点稀釈はほぼ100TCID50を中和し、Kaerberの方法によって算出した）。高い方の抗体力価のいくつかで、用いた終末点稀釈は十分には高くなかった。KE9に対しては、XIKE-Bでワクチン接種した動物のみが、低い抗体力価を約4週目から生じた。チャレンジでは全ての動物が抗体力価を示し、前記はチャレンジ後ほぼ4週目後から顕著に増加した。XIKE-Bのワクチン接種動物は、XIKE-B-NdNでワクチン接種された動物よりも高い抗体を有していた。全ての動物が、ワクチン接種後4週間でNY93/Cに対してほぼ同じ中和力価を生じ、XIKE-B-NdNワクチン接種動物では極めて低い力価を示した。チャレンジ後、全ての動物が高い抗体力価を示した。図2はKE9（BVDV-1）に対する血清中和アッセイを示し、図3はNY93/C（BVDV-2）に対する血清中和アッセイを示す。
実験終了後に胎児から得た組織サンプルの分析は、ワクチン接種動物から得た材料は陰性結果提供したが、一方、伝播は4頭のコントロール動物全てで発生したことを示した。したがって、樹立したBVDV-2変異体は有効な交差防御ワクチンウイルスとして十分に適切であることが明らかである。
結論
全てのワクチン非接種コントロールがBVDVウイルス血症であり、全てのワクチン非接種コントロールの胎児がBVDV陽性であったので、チャレンジは成功であった。両単離株は前記検査及びアッセイ条件下で完全な防御を提供した。単離株XIKE-B（単一遺伝子マーカーを有する）は、チャレンジ後の胎児のBVDウイルス血症及びウイルス伝播に関してBVDV-1型に対し交差防御を提供することが示された。単離株XIKE-B-NdN（二重遺伝子マーカーを有する）は、チャレンジ後の胎児のBVDウイルス血症及びウイルス伝播に関して異種BVDV-2型チャレンジ株に対し完全に防御することができた：
１．単離株XIKE-B（2型単離株）は、前記検査及びアッセイ条件下で、チャレンジ後の胎児のBVDウイルス血症及びウイルス伝播に関し、BVDV-1型チャレンジに対して交差防御を提供することが示された（n=4）。
２．単離株XIKE-B-NdN（2型単離株）は、前記検査及びアッセイ条件下で、チャレンジ後の胎児のBVDウイルス血症及びウイルス伝播に関し、異種BVDV-2型チャレンジに対して完全に防御を提供した（n=5）。
【０１１２】
実施例4：Npro変異体の樹立
本実施例はさらに、Npro欠失を有するBVDV-2変異体を解析する。ゲノムのNproコード領域に欠失を有する種々の変異体を樹立した。先ず初めに、真の欠失のみ又は点変異を伴う欠失を導入した。
A：[Npro]1-[C-term]；
B：[Npro]3-[C-term]；
C：[Npro]4-[C-term]；
D：[Npro]6-[C-term]；
E：[Npro]4-[C-term*]
式中、[Npro]xは、変異ポリプロテインアミノ酸中に残されたNproのアミノ末端の残基数を表し、[C-term]はNproを除く完全なポリプロテイン（Cタンパク質で始まりNS5Bで終わる）であり、[C-term*]は[C-term]と同じであるが、C-タンパク質の2位に変異（Dの代わりにN）を有する。回収されたウイルスの増殖速度は、野生型XIKE-A又はRNase陰性変異体XIKE-Bのものより顕著に低かった。この所見については2つの可能な説明が存在する：（i）ウイルス株に応じて種々の長さのNproコード領域の配列が効率的な翻訳開始に必要であるとの説明、及び（ii）キャプシドタンパク質のアミノ末端へのまた別の配列の融合はキャプシドタンパク質機能を妨害するとの説明。より良好な増殖のNpro欠失変異体を得るために、第二の変異体セットをウシユビキチン遺伝子又はウシLC3-コード配列のフラグメントを用いてNpro遺伝子の主要部分を置き換えて作成した。これらの構築物は効率的な翻訳、及び正確なアミノ末端を有するキャプシドタンパク質の生成を可能にする。
[Npro]22-[PS]-[C-term]
式中、PSはユビキチン又はLC3であり、C-termはNproを除く完全なポリプロテイン（Cタンパク質で始まりNS5Bで終わる）である。
これらの変異体の増殖速度はXIKE-Aについて測定されたものにいっそう類似していた。V-pK87F及びV-pK87Gと称される、式[Npro]22-[PS]-[C-term]の2つのRNase陽性ウイルスは結局顕著な増殖遅延を示さず、一方、RNase陰性の対応するV-pK88Gはまた幾分増殖が妨げられたが、その程度は以前に述べた変異体よりも低かった。
Npro欠失変異体のさらに別の例は以下でありえる：
MESDEGSK...                    配列番号:28
MELFSSDEGSK...                 配列番号:29
MELFSNESDEGSK...               配列番号:30
MELFSNELSDEGSK...              配列番号:31
MELFSNELLSDEGSK...             配列番号:32
MELFSNELLYSDEGSK...            配列番号:33
MELFSNELLYKSDEGSK...           配列番号:34
MELFSNELLYKTSDEGSK...          配列番号:35
MELFSNELLYKTはBVDV単離株NewYork93/CのNproのアミノ末端配列を表す。
1つ又はいくつかの変異を有するこの配列の変種を用いることもまた可能であろう。特に、他のペスチウイルスで見出される天然に存在する変種は機能的であると期待できる。したがって、Nproのアミノ末端の種々の部分を有する検査された又は提唱される完全なリストは、アミノ酸交換を含む等価のセットによって拡大されえるであろう。下記に、いくつかのペスチウイルスについて、対応する配列の典型的な例を提供するが、可能な変型はこれらの例に限定されない。
BVDV NewYork93/C             MELFSNELLYKT
BVDV CP13                    MELISNELLYKT          配列番号:36
BVDV SD1                     MELITNELLYKT          配列番号:37
BVDV Brescia                 MELNHFELLYKT          配列番号:38
BVDV X818                    MELNKFELLYKT          配列番号:39
したがって、これらの変種には例えば以下が含まれる；
MELI-[PS]0-[C-term]；
MELIS-[PS]0-[C-term]；
MELISNE-[PS]0-[C-term]；
MELISNEL-[PS]0-[C-term]；
MELISNELL-[PS]0-[C-term]；
MELISNELLY-[PS]0-[C-term]；
MELISNELLYK-[PS]0-[C-term]；
MELISNELLYKT-[PS]0-[C-term]；
MELIT-[PS]0-[C-term]；
MELITN-[PS]0-[C-term]；
MELITNE-[PS]0-[C-term]；
MELITNEL-[PS]0-[C-term]；
MELITNELL-[PS]0-[C-term]；
MELITNELLY-[PS]0-[C-term]；
MELITNELLYK-[PS]0-[C-term]；
MELITNELLYKT-[PS]0-[C-term]
これらの式はまた[PS]1を有することができる。すなわちPSはまた本明細書に記載したPSの1つであることができる。Nproタンパク質に属する配列はイタリック体で示される。BVDV NewYork93/Cの配列に関するアミノ酸変更は太字で示される。
また別の例は、Becherら（Virology (2003) 311:96-104）の論文で提供されるGenBankアクセッション番号を用いることによって、又は標準的な配列データ検索によって見出すことができる。
さらに別の可能性は、（残余の）Npro配列とキャプシドタンパク質のアミノ末端との間に挿入されたプレセッシングシグナル（PS）の使用であろう。PSは、機能的キャプシドタンパク質を生成する切断をもたらす。そのような構築物の構造は以下であろう：
[Npro]22-[PS]-[C-term]
式中、PSはユビキチン又はLC3であり、C-termはNproを除く完全なポリプロテイン（Cタンパク質で始まりNS5Bで終わる）である。
PSは、プロセッシングシグナルであり、プロテアーゼの標的（例えば本明細書に記載のユビキチン、LC3）、又はプロテアーゼ、又はそれ自身のカルボキシ末端でのプロセッシングを生じる不安定なペプチド、例えばインテリン（Chong et al. 1998及びその中の参考文献）又はピコルナウイルスの3C、カルジオウイルス若しくはアフトウイルスの2A、ウサギ出血病ウイルスのp15、又は他のカルシウイルスの対応するプロテアーゼのいずれか（Proter (1993)及びその中の参考文献；Meyers et al. (2000)及びその中の参考文献）でありえる。PSはキャプシドタンパク質（C）の正確なアミノ末端の生成を担保するので、PSを用いるときは大量の種々の変種が可能である。したがって、PS構築物を用いるときは、詠み枠がシフトされない限り又はインフレーム終止コドンによって翻訳が停止されない限り、多様な生存可能な変異体をもたらすNpro配列の全種類の欠失又は変異が期待される。例として、我々は、式[Npro]29-[PS]-[C-term]の生存可能なCSFV Npro欠失変異体を樹立した。
特に興味深いものは、前記タンパク質のタンパク分解活性を阻止するNpro変異でありえよう。Rumenapfら（1998）はCSFV Alfort Tubibgen株のプロテアーゼの活性部位残基の特定を報告した。対応するアミノ酸（22位のグルタミン酸、49位のヒスチジン及び69位のシステイン）が他のペスチウイルスについて保存されている。したがって、セリン又はスレオニン以外の任意のアミノ酸による69位のシステインの交換はプロテアーゼ活性の破壊をもたらすであろう。同様に、22位のグルタミン酸の変異は、新しいアミノ酸がアスパラギン酸でない場合はプロテアーゼの不活化をもたらす可能性が高いであろう。同様に。49位の交換は、全部でないとしてもほとんどの場合、不活性なプロテアーゼをもたらすであろう。
【０１１３】
実施例5：本発明の混合ワクチンの調製
ワクチンA：IBR、BVDV1型及び2型、BRSV
糖タンパク質Ernsのためのコード配列中に少なくとも1つの変異及び／又はNproのためのコード配列中に少なくとももう1つの変異を含み、糖タンパク質Ernsのためのコード配列中の前記変異が、Ernsに存在するRNase活性の不活化をもたらし、Nproのためのコード配列中の前記変異が前記Nproの不活化をもたらす、弱毒BVDV1及び2型株を、細胞培養液1mL当りのTCID50が約105.0から108.1/ｍLとなるまでMDBK細胞で増殖させる。IBRの生弱毒株は、細胞培養液1mL当りのTCID50が約105.0から108.6/ｍLとなるまでMDBK細胞で増殖させる。BRSVの生弱毒株は、細胞培養液1mL当りのTCID50が約105.0から107.2/ｍLとなるまでMDBK細胞で増殖させる。各ウイルスを含む培養液を採集して凍結乾燥する。等量の凍結乾燥抗原を混合する。再構成のためには、1から3％のAl-ヒドロゲル0.8mLを含む水溶液を用いる。この混合ワクチンの1回分は4mLの再構成抗原を含む。最終投与量には、IBR（105.0から108.6 TCID50）、BVDV-1（105.0から108.1 TCID50）、BVDV-2（105.0から108.1 TCID50）及びBRSV（105.0から107.2 TCID50）が含まれる。
ワクチンB：IBR、BVDV1型及び2型、PI3、BRSV
IBR、BVDV 1及び2、並びにBRSV抗原の調製はワクチンAについて記載したとおりである。さらにまた、PI3の生弱毒株は、細胞培養液1mL当りのTCID50が約104.2から106.5/ｍLとなるまでMDBK細胞で増殖させる。その後、PI3含有培養液を採集し凍結乾燥する。104.2から106.5（TCID50）の量の凍結乾燥抗原を、凍結乾燥させたIBR、BVDV 1及び2型、並びにBRSV抗原と混合する。続いて、ワクチンAについて記載したように4mL中で前記混合物を再構成する。最終投与量には、IBR（105.0から108.6 TCID50）、BVDV-1（105.0から108.1 TCID50）、BVDV-2（105.0から108.1 TCID50）、BRSV（105.0から107.2 TCID50）及びPI3（104.2から106.5 TCID50）が含まれる。
ワクチンC：BVDV 1型及び2型、PI3、BRSV、マンヘイミア（パスツレラ）ヘモリチカ
BVDV 1及び2、並びにPI3ウイルスは、ワクチンA及びBについて記載したとおりに増殖させる。培養液を採集した後で、ウイルスを不活化し凍結乾燥させる。マンヘイミアは、培養液1mL当り108.0から1011.0細胞となるまで増殖させる。前記細菌を不活化し培養液を凍結乾燥又はフリーズドライする。108.0から1011.0の量の凍結乾燥又はフリーズドライした細菌細胞を、凍結乾燥BVDV 1及び2型抗原（各々の量は105.0から108.1 TCID50）、PI3（107.3から108.3 TCID50）並びにBRSV抗原（105.0から107.2 TCID50）と混合する。再構成懸濁液（5mL/ドース）は、さらに30から50mgの水酸化アルミニウム、0.4から0.8mgのQuil A（サポニン）、0.04から0.06mgのチメルフォネートナトリウム（sodium timerfonate）及び微量のネオマイシンを含む。各適用用量当たりの最終抗原量は、BVDV-1（105.0から108.1 TCID50）、BVDV-2（105.0から108.1 TCID50）、PI3（107.3から108.3 TCID50）、BRSV（105.0から107.2 TCID50）及びマンヘイミア（パスツレラ）ヘモリティカ（108.0から1011.0細胞）である。
ワクチンD：BVDV 1型及び2型、IBR、BRSV、PI3、レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポ、レプトスピラ・ハルジョ、レプトスピラ・ポノマ、レプトスピラ・ボルグペテルセニー・ハルジョ-ボヴィス
BVDV 1及び2の改変生ウイルス、BRSV、IBR、並びにPI3は、ワクチンA及びBについて記載したとおりに増殖させる。培養液を採集した後で、ウイルスを凍結乾燥する。レプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポ、レプトスピラ・ハルジョ、レプトスピラ・ポノマ、レプトスピラ・ボルグペテルセニー・ハルジョ-ボヴィスは別々に、培養液1mL当り108.0から1011.0細胞となるまで培養する。前記細菌培養を不活化し、続いて培養液を凍結乾燥又はフリーズドライする。それぞれ108.0から1011.0の凍結乾燥又はフリーズドライ細菌細胞を以下のものとともに再構成する：凍結乾燥改変BVDV 1及び2型（各々の量は105.0から108.1 TCID50）、改変生PI3（107.3から108.3 TCID50）、改変生BRSV（105.0から107.2 TCID50）及び改変生IBR（106.1から107.7 TCID50）。再構成懸濁物（2mL/ドース）は、防腐剤として微量のネオマイシンを含む。各適用用量当たりの最終抗原量は、BVDV-1（105.0から107.0 TCID50）、BVDV-2（105.0から107.0 TCID50）、PI3（107.3から108.3 TCID50）、BRSV（105.0から107.0 TCID50）、PI3（107.3から108.3 TCID50）、及びレプトスピラ・カニコラ、レプトスピラ・グリッポ、レプトスピラ・ハルジョ、レプトスピラ・ポノマ及びレプトスピラ・ボルグペテルセニー・ハルジョ-ボヴィス（それぞれ108.0から1011.0細胞）である。
ワクチンE：BVDV 1型及び2型、IBR、BRSV、PI3、及びH.ソムヌス
BVDV 1及び2の改変生ウイルス、IBR、並びにPI3は、ワクチンA及びBについて記載したとおりに増殖させる。培養液を採集した後で、ウイルスを凍結乾燥する。H.ソムヌスは、培養液1mL当り107.1から109.2細胞に達するまで培養する。前記細菌培養を不活化し培養液を凍結乾燥又はフリーズドライする。107.1から109.2の量の凍結乾燥又はフリーズドライした細菌細胞を、凍結乾燥改変BVDV 1及び2型（各々の量は105.0から107.0 TCID50）、改変生PI3（107.3から108.3 TCID50）、改変生BRSV（105.0から107.0 TCID50）、並びに改変生IBR（106.1から107.7 TCID50）と再構成する。再構成懸濁液（2mL/ドース）は防腐剤として微量のネオマイシンを含む。各適用用量当たりの最終抗原量は、BVDV-1（105.0から107.0 TCID50）、BVDV-2（105.0から107.0 TCID50）、PI3（107.3から108.3 TCID50）、BRSV（105.0から107.0 TCID50）、PI3（107.3から108.3 TCID50）及びH.ソムヌス（107.1から109.2細胞）である。
【０１１４】
（引用文献）
下記でリストアップされるものを含む、本明細書で引用される全ての引用文献（論文、特許、書籍の一部（book portion）、プレゼンテーションなど）の教示及び内容は、参照によって本明細書に明示的に取り込まれる。
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【図面の簡単な説明】
【０１１５】
【図１】NY93/C（BVDV II型）に対する血清中和を示す。
【図２】KE9（BVDV I型）に対する血清中和アッセイを示す。
【図３】NY93/C（BVDV II型）に対する血清中和アッセイを示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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