(57)【要約】  本発明は、ｔｒｋＢアンタゴニストを末梢投与することにより肥満を治療する方法に関する。本発明は、ｔｒｋＢアンタゴニストを含む組成物およびキットにもまた関する。【図１】2009525319.tif 000003
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
肥満または過体重状態を、そのような治療を必要とする哺乳動物において治療する方法であって、前記哺乳動物に治療有効量のｔｒｋＢアンタゴニストまたはその薬学的に許容できる塩を末梢投与することを含む方法。
【請求項２】
前記ｔｒｋＢアンタゴニストが抗ＢＤＮＦ抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ｔｒｋＢアンタゴニストが抗ｔｒｋＢアンタゴニスト抗体である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ｔｒｋＢアンタゴニストがｔｒｋＢ−Ｆｃ融合タンパク質である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
体重増加を阻害、摂食を低減、またはカロリー摂取を低減する、そのような治療を必要とする哺乳動物における方法であって、前記哺乳動物に治療有効量のｔｒｋＢアンタゴニストまたはその薬学的に許容できる塩を末梢投与することを含む方法。
【請求項７】
前記ｔｒｋＢアンタゴニストが抗ＢＤＮＦ抗体である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記ｔｒｋＢアンタゴニストが抗ｔｒｋＢアンタゴニスト抗体である、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記ｔｒｋＢアンタゴニストがｔｒｋＢ−Ｆｃ融合タンパク質である、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記哺乳動物がヒトである、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
前記ｔｒｋＢアンタゴニストまたはその薬学的に許容できる塩が、抗肥満剤である第２の薬剤と組み合わせて投与される、請求項１から１０に記載の方法。
【請求項１２】
哺乳動物における肥満もしくは過体重状態を治療するための、または哺乳動物において体重増加を阻害、摂食を低減、もしくはカロリー摂取を低減するための医薬の製造へのｔｒｋＢアンタゴニストの使用。
【請求項１３】
前記ｔｒｋＢアンタゴニストが抗ＢＤＮＦ抗体である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１４】
前記ｔｒｋＢアンタゴニストがｔｒｋＢアンタゴニスト抗体である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１５】
前記ｔｒｋＢアンタゴニストがｔｒｋＢ−Ｆｃ融合タンパク質である、請求項１２に記載の使用。
【請求項１６】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、肥満の治療および／または予防におけるｔｒｋＢアンタゴニストの使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
肥満は、慢性疾患であり、現代社会における主要な健康上の問題である。米国では成人の約３０％が肥満であり、成人の約６５％が過体重である。肥満は、社会的不名誉に関連するだけでなく、寿命の短縮にも、高血圧、２型糖尿病、血漿インスリン濃度上昇、インスリン抵抗性、異脂肪血症、高脂血症、子宮内膜癌、乳癌、前立腺癌、および結腸癌、変形性関節症、閉塞性睡眠時無呼吸症などの呼吸器合併症、胆石症、胆石、動脈硬化症、心疾患、心調律異常、および心不整脈を含めた非常に多くの健康上の問題にも関連する。Ｋｏｐｅｌｍａｎ，Ｐ．Ｇ．、Ｎａｔｕｒｅ  ４０４、６３５〜６４３（２０００）。
【０００３】
肥満のための現行の治療法には、標準的な食事療法および運動、超低カロリー食、行動療法、食欲抑制剤、発熱薬、食物吸収阻害剤を含む薬物療法、顎間固定（ｊａｗ  ｗｉｒｉｎｇ）、ウェストコード（ｗａｉｓｔ  ｃｏｒｄ）およびバルーンなどの機械装置、ならびに外科手術が含まれる。ＪｕｎｇおよびＣｈｏｎｇ、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ、３５：１１〜２０（１９９１）；Ｂｒａｙ、Ａｍ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｎｕｔｒ．、５５：５３８Ｓ〜５４４Ｓ（１９９２）。タンパク質保持性修正絶食法（ｐｒｏｔｅｉｎ−ｓｐａｒｉｎｇ  ｍｏｄｉｆｉｅｄ  ｆａｓｔｉｎｇ）は、青年における体重低減に有効であると報告されている。Ｌｅｅら、Ｃｌｉｎ．Ｐｅｄｉａｔｒ．、３１：２３４〜２３６（１９９２年４月）。しかし、現行の治療法は、多くの肥満患者にあまり有効ではない。最も重症の肥満患者については、外科的介入が必要なことがある。上に論じるように我々の社会における肥満の高い有病率およびそれに関連する深刻な結果を考えると、肥満のヒトの体重を低減するのに潜在的に有用な任意の治療薬は、それらのヒトの健康に顕著な有益効果を有しうる。肥満対象の全身体重を顕著な有害副作用なしにその対象の理想的な体重に低減し、その肥満対象が低減した体重レベルを維持するのを助ける薬物に対する必要性がある。
【０００４】
ニューロトロフィンは、小型ホモ二量体タンパク質のファミリーであり、このタンパク質は、神経系の発生および維持に重要な役割を果たす。ニューロトロフィンファミリーのメンバーには、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）、ニューロトロフィン３（ＮＴ−３）、ニューロトロフィン４／５（ＮＴ−４／５）、ニューロトロフィン６（ＮＴ−６）、およびニューロトロフィン７（ＮＴ−７）が含まれる。ニューロトロフィンは、他のポリペプチド性成長因子に類似して、細胞表面受容体と相互作用することによりその標的細胞に影響する。現在分かっていることによると、２種類の膜貫通糖タンパク質が、ニューロトロフィンに対する受容体として作用する。ニューロトロフィン応答性神経細胞は、２×１０−９ＭのＫＤでＮＧＦ、ＢＤＮＦ、ＮＴ−３、およびＮＴ−４／５と結合する、ｐ７５ＮＴＲまたはｐ７５としても公知である共通の低分子量（６５〜８０ｋＤａ）低親和性受容体（ＬＮＧＦＲ）と、ｔｒｋファミリーの受容体型チロシンキナーゼのメンバーである、高分子量（１３０〜１５０ｋＤａ）高親和性（１０−１１Ｍ範囲のＫＤ）受容体とをもつ。Ｔｒｋ受容体ファミリーの同定されたメンバーは、ｔｒｋＡ、ｔｒｋＢ、およびｔｒｋＣである。
【０００５】
ＢＤＮＦおよびＮＴ−４／５は、両方共に類似の親和性でｔｒｋＢおよびｐ７５ＮＴＲ受容体に結合する。しかし、ＮＴ−４／５突然変異マウスおよびＢＤＮＦ突然変異マウスは、極めて対照的な表現型を示す。ＮＴ−４／５−／−マウスは生存可能で、繁殖性であり、軽度の感覚欠損を有するだけであるが、ＢＤＮＦ−／−マウスは、重症の神経細胞欠損および行動症状を有して、出生初期に死亡する。Ｆａｎら、Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３（４）：３５０〜７、２０００；Ｌｉｕら、Ｎａｔｕｒｅ  ３７５：２３８〜２４１、１９９５；Ｃｏｎｏｖｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３７５：２３５〜２３８、１９９５；Ｅｒｎｆｏｒｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３６８：１４７〜１５０、１９９４；Ｊｏｎｅｓら、Ｃｅｌｌ  ７６：９８９〜９９９、１９９４。いくつかの刊行物は、ＮＴ−４／５およびＢＤＮＦが、ｉｎ  ｖｉｖｏで別個の生物学的活性を有すると報告し、この別個の活性が、ＮＴ−４／５およびＢＤＮＦによるｔｒｋＢ受容体およびその下流のシグナル伝達経路の差次的活性化に部分的に起因するおそれがあると示唆している。Ｆａｎら、Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．３（４）：３５０〜７、２０００；Ｍｉｎｉｃｈｉｅｌｌｏら、Ｎｅｕｒｏｎ．２１：３３５〜４５、１９９８；Ｗｉｒｔｈら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ．１３０（２３）：５８２７〜３８、２００３；Ｌｏｐｅｚら、発表番号３８．６、２００３年要旨集、Ｓｏｃｉｅｔｙ  ｆｏｒ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ。
【０００６】
ＢＤＮＦおよびＮＴ−４／５は、Ｃ５７ｄｂ／ｄｂマウスなどのＩＩ型糖尿病モデル動物において血中グルコースおよび血中脂質の制御活性ならびに抗肥満活性を有することが示された。米国特許第６，３９１，３１２号；Ｉｔａｋｕｒａら、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ４９：１２９〜３３（２０００）；米国特許出願公開第２００５／０２０９１４８号；ＰＣＴ  ＷＯ２００５／０８２４０１。ＢＤＮＦは、高脂肪食を給餌されたマウスにおいて抗肥満活性およびレプチン抵抗性の回復活性を有することもまた示された。米国特許出願公開第２００３／００３６５１２号。Ｋｅｒｎｉｅらは、ＢＤＮＦ遺伝子の発現が低減したヘテロ接合性ＢＤＮＦノックアウトマウスにおいて、ＢＤＮＦまたはＮＴ−４／５が摂食行動および肥満を一時的に後退させることができたと報告した。Ｋｅｒｎｉｅら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１９（６）：１２９０〜３００、２０００。ヒトｔｒｋＢに対するＹ７２２Ｃ置換というｄｅ  ｎｏｖｏミスセンス突然変異が、受容体のリン酸化およびＭＡＰキナーゼへのシグナル伝達の障害を招くこと、ならびにこの突然変異が過食性肥満という独特なヒト症状を招くと思われることが報告された。Ｙｅｏら、Ｎａｔ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．７：１１８７〜１１８９（２００４）。
【０００７】
肥満を有する人々および神経性食欲不振を有する患者におけるＢＤＮＦの循環レベルが研究された。Ｍｏｎｔｅｌｅｏｎｅら、Ｐｓｙｃｈｏｓｏｍａｔｉｃ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ６６：７４４〜７４８、２００４；Ｎａｋａｚａｔｏら、Ｂｉｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ  ５４：４８５〜４９０、２００３。マウスにおけるＢＤＮＦ産生障害は摂食増加、エネルギー消費の低減、および体重増加と関連したという研究成果に基づく推測とは反対に、循環ＢＤＮＦは、神経性食欲不振の患者では有意に低減し、非肥満健常対照に比べて肥満対象で有意に増加する。神経性食欲不振では、ＢＤＮＦ低減は、摂食を促進することにより、負のバランスを導く患者の行動変更を相殺しようとし、肥満では、ＢＤＮＦのレベル増加は、エネルギー消費を刺激し、食物摂取を減少させることにより、正のエネルギー不均衡状態に対抗する適応メカニズムとなりうると仮定されている。Ｍｏｎｔｅｌｅｏｎｅら、Ｐｓｙｃｈｏｓｏｍａｔｉｃ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ６６：７４４〜７４８、２００４。
【０００８】
本明細書に引用するすべての特許、特許出願、および刊行物は、その全体が参照により本明細書に組み込まれている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、ｔｒｋＢアンタゴニストの末梢投与により体重および／または摂食を減少させる方法を提供する。これらの方法は、肥満または過食（食べ過ぎ）障害（例えば大食症およびプラーダーヴィリ症候群）を治療または予防するために用いることができる。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
一態様では、本発明は、個体における体重を制御する（減少させることを含める）方法を提供し、その方法は、その個体に有効量のｔｒｋＢアンタゴニストを末梢投与することを含む。
【００１１】
別の態様では、本発明は、個体における摂食を制御する（減少させることを含める）方法を提供し、その方法は、その個体に有効量のｔｒｋＢアンタゴニストを末梢投与することを含む。
【００１２】
いくつかの実施形態では、その個体は肥満である。いくつかの実施形態では、その個体は、肥満のリスクがあるか、または過体重である。いくつかの実施形態では、その個体は、プラーダーヴィリ症候群などの先天性疾患に関連する食べ過ぎおよび肥満を患っている。いくつかの実施形態では、その個体は、神経性大食症などの摂食障害に関連して、肥満不在の気晴らし食いを患っている。
【００１３】
別の態様では、本発明は、個体における肥満を治療する（肥満を管理することを含める）方法を提供し、その方法は、その個体に有効量のｔｒｋＢアンタゴニストを末梢投与することを含む。肥満の治療には、個体を治療することが含まれ、その個体の体重は、治療後に低減し、もはや肥満ではない。
【００１４】
別の態様では、本発明は、個体における肥満の発生および進行を遅延させる方法を提供し、その方法は、その個体に有効量のｔｒｋＢアンタゴニストを末梢投与することを含む。いくつかの実施形態では、肥満の発症が遅延する。他の実施形態では、肥満の進行（例えば肥満関連合併症の発生、ＢＭＩの増加）が遅延する。いくつかの実施形態では、個体における肥満の発生が予防される。いくつかの実施形態では、個体における肥満に関連する合併症の発生が予防される。いくつかの実施形態では、個体は肥満のリスクがあるか、または過体重である。
【００１５】
いくつかの実施形態では、その個体はヒトである。
【００１６】
本発明は、肥満または過体重状態を、そのような治療を必要とする哺乳動物において治療する方法を提供し、その方法は、その哺乳動物に治療有効量のｔｒｋＢアンタゴニストまたはその薬学的に許容できる塩を末梢投与することを含む。好ましい実施形態では、そのｔｒｋＢアンタゴニストは、抗ＢＤＮＦ抗体、抗ｔｒｋＢアンタゴニスト抗体、またはｔｒｋＢ−Ｆｃ融合タンパク質であり、その哺乳動物はヒトである。
【００１７】
本発明は、体重増加を阻害、摂食を低減、またはカロリー摂取を低減する、そのような治療を必要とする哺乳動物における方法もまた提供し、その方法は、その哺乳動物に治療有効量のｔｒｋＢアンタゴニストまたはその薬学的に許容できる塩を末梢投与することを含む。好ましい実施形態では、そのｔｒｋＢアンタゴニストは抗ＢＤＮＦ抗体であり、そのｔｒｋＢアンタゴニストは抗ｔｒｋＢアンタゴニスト抗体であり、そのｔｒｋＢアンタゴニストはｔｒｋＢ−Ｆｃ融合タンパク質であり、その哺乳動物はヒトである。
【００１８】
本発明は、ｔｒｋＢアンタゴニストまたはその薬学的に許容できる塩が、抗肥満剤である第２の薬剤と組み合わせて投与される上記の方法もまた提供する。
【００１９】
本発明は、哺乳動物における肥満もしくは過体重状態を治療するための、または哺乳動物における体重増加を阻害、摂食を低減、もしくはカロリー摂取を低減するための医薬の製造へのｔｒｋＢアンタゴニストの使用もまた提供する。好ましい実施形態では、そのｔｒｋＢアンタゴニストは、抗ＢＤＮＦ抗体、ｔｒｋＢアンタゴニスト抗体、またはｔｒｋＢ−Ｆｃ融合タンパク質であり、その哺乳動物はヒトである。
【００２０】
ｔｒｋＢアンタゴニストは末梢投与される。例えば、ｔｒｋＢアンタゴニストは、以下の手段、すなわち静脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、腸管外、吸入経由、動脈内、心臓内、脳室内、および経皮的のうちの１つにより投与することができる。
【００２１】
本明細書に記載する方法に使用することができるｔｒｋＢアンタゴニストの例には、非限定的に、抗ＢＤＮＦ抗体、抗ＮＴ−４／５抗体、抗ｔｒｋＢ抗体、およびｔｒｋＢイムノアドヘシンが含まれる。
【００２２】
別の態様では、本発明は、有効量のｔｒｋＢアンタゴニストと、薬学的に許容できる賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。医薬組成物は、本明細書に記載する任意の疾患を治療または予防するために使用することができる。
【００２３】
別の態様では、本発明は、本明細書に記載する任意の方法に使用するためのｔｒｋＢアンタゴニストを含むキットを提供する。いくつかの実施形態では、キットは、容器と、薬学的に許容できる賦形剤と組み合わせた有効量のｔｒｋＢアンタゴニストを含む組成物と、本明細書に記載する任意の方法にその組成物を使用するための説明書とを含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
Ｉ．一般的な技術
本発明の実施は、特に示さない限り、当技術分野の技術の範囲内に入る分子生物学（組換え技術を含める）、微生物学、細胞生物学、生化学、および免疫学の従来技術を使用する。そのような技術は、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、第２版（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９）Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｐｒｅｓｓ；Ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（Ｍ．Ｊ．Ｇａｉｔ編、１９８４）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｎｏｔｅｂｏｏｋ（Ｊ．Ｅ．Ｃｅｌｌｉｓ編、１９９８）Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ａｎｉｍａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｒ．Ｉ．Ｆｒｅｓｈｎｅｙ編、１９８７）；Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ（Ｊ．Ｐ．ＭａｔｈｅｒおよびＰ．Ｅ．Ｒｏｂｅｒｔｓ、１９９８）Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ；Ｃｅｌｌ  ａｎｄ  Ｔｉｓｓｕｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ：Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｏｃｅｄｕｒｅｓ（Ａ．Ｄｏｙｌｅ、Ｊ．Ｂ．Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓ、およびＤ．Ｇ．Ｎｅｗｅｌｌ編、１９９３〜８）Ｊ．Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ；Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編）；Ｇｅｎｅ  Ｔｒａｎｓｆｅｒ  Ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌｓ（Ｊ．Ｍ．ＭｉｌｌｅｒおよびＭ．Ｐ．Ｃａｌｏｓ編、１９８７）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｆ．Ｍ．Ａｕｓｕｂｅｌら編、１９８７）；ＰＣＲ：Ｔｈｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ  Ｃｈａｉｎ  Ｒｅａｃｔｉｏｎ、（Ｍｕｌｌｉｓら編、１９９４）；Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｊ．Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎら編、１９９１）；Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｗｉｌｅｙ  ａｎｄ  Ｓｏｎｓ、１９９９）；Ｉｍｍｕｎｏｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃ．Ａ．ＪａｎｅｗａｙおよびＰ．Ｔｒａｖｅｒｓ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｐ．Ｆｉｎｃｈ、１９９７）；Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｄ．Ｃａｔｔｙ編、ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ、１９８８〜１９８９）；Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｐｒａｃｔｉｃａｌ  ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐ．ＳｈｅｐｈｅｒｄおよびＣ．Ｄｅａｎ編、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、２０００）；Ｕｓｉｎｇ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：ａ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  ｍａｎｕａｌ（Ｅ．ＨａｒｌｏｗおよびＤ．Ｌａｎｅ（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ、１９９９）；Ｔｈｅ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ（Ｍ．ＺａｎｅｔｔｉおよびＪ．Ｄ．Ｃａｐｒａ編、Ｈａｒｗｏｏｄ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ、１９９５）などの文献に十分に説明されている。
【００２５】
ＩＩ．定義
本明細書に使用する「肥満」は、対象における体脂肪が過剰な状態である。肥満は、遺伝的にせよ環境的にせよ任意の原因によることがある。肥満の操作的定義は、メートル単位の身長の二乗あたりの体重（ｋｇ／ｍ２）として計算されるボディーマスインデックス（ＢＭＩ）に基づく。一般に、「肥満」は、他の点では健康な対象が３０．０ｋｇ／ｍ２以上のボディーマスインデックス（ＢＭＩ）を有する状態、または少なくとも１つの共存罹患を有する対象が、２７．０ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩを有する状態を表す。「肥満の対象」は、３０．０ｋｇ／ｍ２以上のボディーマスインデックス（ＢＭＩ）を有する他の点では健康な対象、または２７．０ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩを有する少なくとも１つの共存罹患を有する対象である。肥満の対象は、少なくとも約３１．０、約３２．０、約３３．０、約３４．０、約３５．０、約３６．０、約３７．０、約３８．０、約３９．０、および約４０．０のいずれかのＢＭＩを有することがある。「過体重の対象」は、２５．０から２９．９ｋｇ／ｍ２のＢＭＩを有する対象である。
【００２６】
異なる国では、異なるＢＭＩで肥満および過体重を定義することがある。用語「肥満」は、すべての国での定義を包含することを意図する。例えば、肥満に関連するリスク増加は、アジアでは比較的低いボディーマスインデックス（ＢＭＩ）で起こる。日本を含めたアジアの国々では、「肥満」は、体重低減を必要とするか、体重低減により改善するであろう少なくとも１つの肥満誘導性または肥満関連性共存罹患を有する対象が、２５．０ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩを有する状態を表す。日本を含めたアジアの国々では、「肥満の対象」は、体重低減を必要とするか、体重低減により改善するであろう少なくとも１つの肥満誘導性または肥満関連性共存罹患を有する対象であって、２５．０ｋｇ／ｍ２以上のＢＭＩを有する対象を表す。
【００２７】
肥満誘導性または肥満関連性共存罹患には、非限定的に、糖尿病、インスリン非依存性糖尿病ＩＩ型、耐糖能障害、空腹時血糖障害、インスリン抵抗性症候群、異脂肪血症、高血圧、高尿酸血症、痛風、冠状動脈疾患、心筋梗塞、狭心症、睡眠時無呼吸症候群、ピックウィック症候群、脂肪肝、脳梗塞、脳血栓、一過性脳虚血発作、整形外科的障害、変形性関節症、腰痛（ｌｕｍｂｏｄｙｎｉａ）、月経異常、および不妊症が含まれる。特に、共存罹患には、高血圧、高脂血症、異脂肪血症、血糖能異常、心血管疾患、睡眠時無呼吸症、糖尿病、および他の肥満関連状態が含まれる。
【００２８】
肥満の「リスクがある」個体は、検出可能な疾患を有することがあるし、有さないこともあり、本明細書に記載する治療法の前に検出可能な疾患を表出していることもあるし、表出していないこともある。「リスクがある」は、個体が１つまたは複数のいわゆるリスク因子を有することを意味し、そのリスク因子は、肥満の発生と相関する測定可能なパラメータである。１つまたは複数のこれらのリスク因子を有する個体は、これらのリスク因子を有さない個体よりも肥満である高い確率を有する。これらのリスク因子には、非限定的に、年齢、食事、身体活動不足、代謝症候群、肥満の家族歴、民族性、遺伝性症候群、前病歴（例えば摂食障害、代謝症候群、および肥満）、前駆疾患（例えば過体重）の存在が含まれる。例えば、ＢＭＩが２５．０から３０．０ｋｇ／ｍ２未満の、他の点では健康な個体、またはＢＭＩが２５．０ｋｇ／ｍ２から２７．０ｋｇ／ｍ２未満の、少なくとも１つの共存罹患を有する個体に肥満のリスクがある。
【００２９】
本明細書に使用する「治療」は、有益な、または所望の臨床的結果を得るためのアプローチである。本発明の目的のために、有益な、または所望の臨床的結果には、非限定的に、以下、すなわち疾患に関連する１つまたは複数の症状の改善、重症度の軽減、緩和のうちの１つまたは複数が含まれる。肥満について、有益な、または所望の臨床的結果には、以下、すなわち体重の低減もしくは維持、摂食もしくはカロリー摂取の制御（低減を含める）、代謝率の増加もしくは代謝率の低減阻害、ならびに肥満に関連する任意の障害（糖尿病、インスリン非依存性糖尿病、高血糖、低グルコース耐性、インスリン抵抗性、脂質障害、異脂肪血症、高脂血症、高トリグリセリド血症、高コレステロール血症、腹部肥満、摂食障害、代謝症候群、高血圧、変形性関節症、心筋梗塞、脳卒中、および他の関連疾患など）の改善、重症度の軽減、および／もしくは緩和、肥満を患う者の生活の質の増加、ならびに／または寿命の延長のうち任意の１つまたは複数が含まれる。
【００３０】
本明細書に使用する、肥満の発生を「遅延させること」は、この疾患の進行を、延期、妨害、減速、遅滞、安定化、および／または繰り延べすることを意味する。この遅延は、その疾患の履歴および／または治療されている個体に応じて様々な時間でありうる。当業者に明らかなように、十分または有意な遅延は、その個体が疾患を発生しない点で事実上予防を包含することがある。例えば、発生を遅延させる１つの成り行きは、肥満のリスクがある対象の体重を、本明細書に記載する組成物の投与直前での対象の体重に比べて低減することでありうる。発生を遅延させる別の成り行きは、ダイエット、運動、または薬物療法の結果として以前に失われた体重の再増加を予防することでありうる。発生を遅延させる別の成り行きは、肥満のリスクがある対象に肥満が発症する前に治療が行われた場合に、肥満が発生するのを予防することでありうる。発生を遅延させる別の成り行きは、肥満のリスクがある対象に肥満が発症する前に治療が行われた場合に、肥満関連障害の出現および／または重症度を減少させることでありうる。
【００３１】
肥満の「発生」は、個体の疾患の発症および／または進行を意味する（これは、本発明の異なる実施形態でありうる）。肥満の発生は、本明細書に記載する標準的な臨床技術を使用して検出可能でありうる。しかし、発生は、最初は検出不能でありうる疾患の進行もまた表す。本発明のために、進行は、病状（この場合は、ＢＭＩを推定するための身長および体重の評定、腰囲の測定、共存罹患の評定、ならびに動脈硬化症、ＩＩ型糖尿病、多嚢胞性卵巣疾患、心血管疾患、変形性関節症、皮膚障害、高血圧、インスリン抵抗性、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、および胆石症などの肥満合併症の発症および／または悪化の評定により決定される）の生物学的経過を表す。様々なこれらの診断検査は、当技術分野で公知である。「発生」には、出現、再発、および発症が含まれる。本明細書に使用する、肥満の「発症」または「出現」には、最初の発症および／または再発が含まれる。
【００３２】
本明細書に使用する、薬物、化合物、または医薬組成物の「有効投与量」または「有効量」は、有益な、または所望の結果をもたらすために十分な量である。予防的使用に関して、有益な、または所望の結果には、疾患の生化学的、組織学的、および／または行動的症状、その合併症、ならびに疾患の発生時に現れる中間の病理学的表現型を含めた疾患のリスクを排除もしくは低減すること、重症度を軽減すること、または始まりを遅延させることなどの結果が含まれる。治療的使用に関して、有益な、または所望の結果には、疾患の攻撃の強度、期間、もしくは回数を低減すること、ならびに疾患の合併症および疾患の発生時に現れる中間の病理学的表現型を含めた（生化学的、組織学的、および／または行動的）疾患に起因する１つもしくは複数の症状を減少させること、その疾患を患っている者の生活の質を上げること、その疾患を治療するために必要な他の薬物療法の用量を減少させること、別の薬物療法の効果を高めること、および／または患者の疾患の進行を遅延させることなどの臨床結果が含まれる。有効投与量は、１回または複数回の投与で施すことができる。本発明の目的のために、薬物、化合物、または医薬組成物の有効投与量は、直接的または間接的のいずれかで予防または治療的処置を達成するために十分な量である。臨床的状況で理解されているように、有効投与量の薬物、化合物、または医薬組成物は、別の薬物、化合物、または医薬組成物と共に達成されることもあるし、達成されないこともある。したがって、「有効投与量」は、１つまたは複数の治療剤を投与する状況で考慮することができ、１種または複数の他の薬剤と共に、所望の結果が達成できるか、または達成されるならば、単一の薬剤を、有効量で与えることを考慮することができる。例えば、肥満を治療するためのｔｒｋＢアンタゴニストの有効量は、肥満に関連する１つまたは複数の症状を治療または回復させるために十分な量である。「有効量」は、以下、すなわち体重の低減もしくは制御、摂食の制御、代謝率の増加、肥満に関連する疾患に起因する１つもしくは複数の症状の減少、肥満を患う者の生活の質の増加、および／または寿命を延長することのうち１つまたは複数を招くために十分な量である（これは、本発明の様々な実施形態にもまた対応することがある）。
【００３３】
本明細書に使用する「体重の制御」または「体重の改善」は、個体における体重を（治療前のレベルに比べて）低減または維持することを表す。いくつかの実施形態では、体重は概して正常範囲に維持される。体重は、カロリー摂取を低減することおよび／または体脂肪の蓄積を低減することにより、低減することができる。いくつかの実施形態では、体重は、治療前のレベルに比べて、個体において少なくとも約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、または約５０％のいずれかだけ低減する。
【００３４】
本明細書に使用する「摂食の制御」は、（治療前のレベルに比べて）個体における摂食を低減または維持することを表す。いくつかの実施形態では、摂食は、概して正常範囲に維持される。いくつかの実施形態では、摂食は、治療前のレベルに比べて、個体において約５％、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、または約６０％のいずれかだけ低減する。
【００３５】
「個体」または「対象」は、哺乳動物、さらに好ましくはヒトである。哺乳動物には、非限定的に、農用動物、スポーツ用の動物、ペット、霊長類（ヒトを含める）、ウマ、イヌ、ネコ、マウス、およびラットもまた含まれる。
【００３６】
「ｔｒｋＢアンタゴニスト」は、ｔｒｋＢシグナル伝達により仲介される下流の経路（ＢＤＮＦもしくはＮＴ−４／５へのｔｒｋＢの結合および／またはＢＤＮＦもしくはＮＴ−４／５への細胞応答の誘発など）を含めた、ｔｒｋＢの生物学的活性を（有意にを含めて）ブロック、抑制、または低減することができる薬剤を表す。用語「アンタゴニスト」は、いかなる生物学的作用の特異的メカニズムも意味せず、直接的であろうと間接的であろうと、ＢＤＮＦ、ＮＴ−４／５、ｔｒｋＢまたは別のメカニズムを介して相互作用しようと、ｔｒｋＢとのすべての可能な薬理学的、生理学的、および生化学的相互作用、ならびに多様な異なる、化学的に多岐にわたる組成物によって達成することができるその結果を特に含み、かつ包含するとみなされる。ｔｒｋＢアンタゴニストの例には、非限定的に、抗ＢＤＮＦ抗体、抗ＮＴ−４／５抗体、ＢＤＮＦ阻害化合物もしくはＮＴ−４／５阻害化合物、ＢＤＮＦ構造アナログもしくはＮＴ−４／５構造アナログ、ＢＤＮＦおよび／もしくはＮＴ−４／５と結合するｔｒｋＢ受容体のドミナントネガティブ突然変異、ｔｒｋＢイムノアドヘシン、抗ｔｒｋＢ抗体、ならびにｔｒｋＢ阻害化合物が含まれる。本発明のために、用語「アンタゴニスト」が、以前に同定された用語、表題、ならびに機能的状態および特徴を包含することが明確に理解されているものであり、ここで、ｔｒｋＢ受容体自体、ｔｒｋＢの生物学的活性（非限定的にｔｒｋＢが体重および摂食の任意の局面を仲介する能力を含める）、または生物学的活性の成り行きは、任意の意味ある程度で実質的に無効化、減少、または中和される。
【００３７】
ｔｒｋＢ受容体の「生物学的活性」は、概してＢＤＮＦおよびＮＴ−４／５と結合し、かつ／またはｔｒｋＢ受容体シグナル伝達経路を活性化する能力を表す。非限定的に、生物学的活性には、以下の１つまたは複数が含まれる。ｔｒｋＢのリガンドであるＢＤＮＦおよび／またはＮＴ−４／５と結合する能力、リガンドの結合後に二量体化および／または自己リン酸化する能力、ｔｒｋＢシグナル伝達経路を活性化する能力、細胞生理学における細胞の分化、増殖、生存、生育、および（（末梢神経細胞および中枢神経細胞を含めた神経細胞の場合には）神経細胞の形態、シナプス形成、シナプスの機能、神経伝達物質および／または神経ペプチドの放出、ならびに損傷後の再生における変化を含めた）他の変化を促進する能力、ならびに体重および／または摂食を仲介する能力。
【００３８】
「抗ＢＤＮＦ抗体」（「抗ＢＤＮＦアンタゴニスト抗体」と相互交換可能に称される）は、ＢＤＮＦに結合することができる抗体であって、ＢＤＮＦによるｔｒｋＢの活性化および／またはｔｒｋＢシグナル伝達機能により仲介される下流の経路を阻害する抗体を表す。
【００３９】
「抗ＮＴ−４／５抗体」（「抗ＮＴ−４／５アンタゴニスト抗体」と相互交換可能に称される）は、ＮＴ−４／５に結合することができる抗体であって、ＮＴ−４／５によるｔｒｋＢの活性化および／またはｔｒｋＢシグナル伝達機能により仲介される下流の経路を阻害する抗体を表す。
【００４０】
「抗ｔｒｋＢ抗体」（「抗ｔｒｋＢアンタゴニスト抗体」と相互交換可能に称される）は、ｔｒｋＢに結合することができる抗体であって、ＢＤＮＦおよび／もしくはＮＴ−４／５によるｔｒｋＢの活性化ならびに／またはｔｒｋＢシグナル伝達機能により仲介される下流の経路を阻害する抗体を表す。
【００４１】
「ｔｒｋＢイムノアドヘシン」は、ｔｒｋＢ受容体の断片、例えばｔｒｋＢ受容体の細胞外ドメインと、免疫グロブリン配列との可溶性キメラ分子であって、ｔｒｋＢ受容体の結合特異性を保持しているキメラ分子を表す。
【００４２】
本明細書に使用する「末梢投与」または「末梢に投与される」は、中枢神経系または血液脳関門の外側から対象に薬剤を導入することを表す。末梢投与は、脊椎または脳への直接投与以外の任意の投与経路を包含する。末梢投与は局所または全身性でありうる。
【００４３】
「抗体」は、免疫グロブリン分子の可変領域に局在する少なくとも１つの抗原認識部位を介して、糖質、ポリヌクレオチド、脂質、ポリペプチドなどの標的に特異的に結合することができる免疫グロブリン分子である。本明細書に使用するとき、この用語は、無傷のポリクローナル抗体またはモノクローナル抗体を包含するだけでなく、その断片（Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖなど）、単鎖（ＳｃＦｖ）、その突然変異体、抗体の部分を含む融合タンパク質（ドメイン抗体など）、および抗原認識部位を含む、免疫グロブリン分子の他の任意の修正された立体配置もまた包含する。抗体には、ＩｇＧ、ＩｇＡ、またはＩｇＭ（またはそのサブクラス）などの任意のクラスの抗体が含まれ、その抗体は任意の特定のクラスである必要はない。抗体重鎖の定常ドメインの抗体アミノ酸配列に応じて、免疫グロブリンは異なるクラスに割り付けることができる。５つの主要なクラスの免疫グロブリン、すなわちＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、およびＩｇＭがあり、これらのいくつかはサブクラス（アイソタイプ）、例えばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１、およびＩｇＡ２にさらに分けることができる。これらの異なるクラスの免疫グロブリンに対応する重鎖定常ドメインは、それぞれα、δ、ε、γ、およびμと呼ばれる。異なるクラスの免疫グロブリンのサブユニットの構造および三次元立体配置は、十分に公知である。
【００４４】
本明細書に使用する「モノクローナル抗体」は、実質的に相同な抗体集団から得られた抗体を表し、すなわち、その集団を構成する個別の抗体は、少量存在しうる、可能な、天然に存在する突然変異を除いて同一である。モノクローナル抗体は、単一の抗原部位に対しており、高度に特異的である。さらに、異なる決定基（エピトープ）に対する異なる抗体が典型的には含まれるポリクローナル抗体調製物とは対照的に、各モノクローナル抗体は、抗原上の単一の決定基に対する。修飾語「ポリクローナル」は、実質的に均一な抗体集団から得られるという抗体の特徴を示し、任意の特定の方法により抗体を産生することを必要とするとみなしてはならない。例えば、本発明により使用されるモノクローナル抗体は、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ、１９７５、Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５により最初に記載されたハイブリドーマ法により作ることができるし、米国特許第４，８１６，５６７号に記載されたような組換えＤＮＡ法により作ることもできる。モノクローナル抗体は、例えば、ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、１９９０、Ｎａｔｕｒｅ、３４８：５５２〜５５４に記載された技術を使用して作製されたファージライブラリーから単離することもまたできる。
【００４５】
本明細書に使用する「ヒト化」抗体は、特異的キメラ免疫グロブリン、免疫グロブリン鎖、または非ヒト免疫グロブリンから誘導された最小の配列を含有するその断片（Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、または抗体の他の抗原結合サブ配列など）である非ヒト（例えばマウス）抗体の形態を表す。通例、ヒト化抗体は、レシピエントの相補性決定領域（ＣＤＲ）由来の残基が、所望の特異性、親和性、および生物学的活性を有する、マウス、ラット、またはウサギなどの非ヒト種（ドナー抗体）のＣＤＲ由来の残基に置き換えられたヒト免疫グロブリン（レシピエント抗体）である。場合によっては、ヒト免疫グロブリンのＦｖフレームワーク領域（ＦＲ）の残基は、対応する非ヒト残基に置き換えられる。さらに、ヒト化抗体は、レシピエント抗体にも、移入されたＣＤＲもしくはフレームワーク配列にもみられないが、抗体の性能をさらに洗練および最適化するために含められた残基を含むことがある。一般に、ヒト化抗体は、ＣＤＲ領域のすべてまたは実質的にすべてが非ヒト免疫グロブリンのＣＤＲ領域に対応し、ＦＲ領域のすべてまたは実質的にすべてがヒト免疫グロブリンコンセンサス配列のＦＲ領域である、少なくとも１つ、典型的には２つの可変ドメインのうちの実質的にすべてを含むものである。ヒト化抗体は、最適には免疫グロブリンの定常領域または定常ドメイン（Ｆｃ）の、典型的にはヒト免疫グロブリンの定常領域または定常ドメイン（Ｆｃ）の少なくとも部分もまた含むものである。抗体は、ＷＯ９９／５８５７２に記載されているように修飾されたＦｃ領域を有することがある。他の形態のヒト化抗体は、本来の抗体に関して変更されている１つまたは複数（１、２、３、４、５、および６つ）のＣＤＲを有し、そのＣＤＲは、本来の抗体由来の１つまたは複数のＣＤＲ「から誘導された」１つまたは複数のＣＤＲとも称される。
【００４６】
本明細書に使用する、「ヒト抗体」は、ヒトにより産生された抗体のアミノ酸配列に対応するアミノ酸配列を有し、かつ／または当技術分野で公知であるか、もしくは本明細書に開示するヒト抗体を作るための任意の技術を使用して作られた抗体を意味する。このヒト抗体の定義には、少なくとも１つのヒト重鎖ポリペプチドまたは少なくとも１つのヒト軽鎖ポリペプチドを含む抗体が含まれる。そのような一例は、マウス軽鎖ポリペプチドおよびヒト重鎖ポリペプチドを含む抗体である。ヒト抗体は、当技術分野で公知の様々な技術を使用して産生することができる。一実施形態では、ヒト抗体は、ファージライブラリーがヒト抗体を発現する場合には、そのファージライブラリーから選択される（Ｖａｕｇｈａｎら、１９９６、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、１４：３０９〜３１４；Ｓｈｅｅｔｓら、１９９８、ＰＮＡＳ、（ＵＳＡ）９５：６１５７〜６１６２；ＨｏｏｇｅｎｂｏｏｍおよびＷｉｎｔｅｒ、１９９１、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２７：３８１；Ｍａｒｋｓら、１９９１、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１）。ヒト抗体は、トランスジェニック動物に、例えば内因性免疫グロブリン遺伝子が部分的または完全に不活性化されたマウスに、ヒト免疫グロブリン遺伝子座を導入することによってもまた作ることができる。このアプローチは、米国特許第５，５４５，８０７号、第５，５４５，８０６号、第５，５６９，８２５号、第５，６２５，１２６号、第５，６３３，４２５号、および第５，６６１，０１６号に記載されている。あるいは、ヒト抗体は、標的抗原に対する抗体を産生する不死化ヒトＢリンパ球により調製することができる（そのようなＢリンパ球は、個体から回収することもできるし、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで免疫処置されていることもある）。例えば、Ｃｏｌｅら、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ、７７頁（１９８５）；Ｂｏｅｒｎｅｒら、１９９１、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１４７（１）：８６〜９５；および米国特許第５，７５０，３７３号を参照されたい。
【００４７】
抗体の「可変領域」は、抗体軽鎖の可変領域または抗体重鎖の可変領域を、単独または組合せのいずれかで表す。重鎖および軽鎖の可変領域は、超可変領域としても公知の３つの相補性決定領域（ＣＤＲ）により接続された４つのフレームワーク領域（ＦＲ）からそれぞれなる。各鎖のＣＤＲは、ＦＲによって近接して繋がり合って、もう一方の鎖由来のＣＤＲと共に抗体の抗原結合部位の形成に寄与する。ＣＤＲを決定するために、（１）種相互の配列変動性に基づくアプローチ（すなわち、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、（第５版、１９９１、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、メリーランド州ベセスダ））、および（２）抗原抗体複合体の結晶学的研究に基づくアプローチ（Ａｌ−ｌａｚｉｋａｎｉら（１９９７）Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２７３：９２７〜９４８））の少なくとも２つの技術がある。本明細書に使用するＣＤＲは、一方のアプローチまたは両方のアプローチの組合せのいずれかによって規定されるＣＤＲを表すことがある。
【００４８】
抗体の「定常領域」は、抗体軽鎖の定常領域または抗体重鎖の定常領域を、単独または組合せのいずれかで表す。
【００４９】
抗体またはポリペプチドに「優先的に結合する」か、または「特異的に結合する」（本明細書において相互交換可能に使用される）エピトープは、当技術分野で十分に理解された用語であり、そのような特異的または優先的結合を決定する方法もまた、当技術分野で十分に公知である。分子が代替の細胞または物質と反応または関連するよりも、高頻度に、迅速に、長い継続時間で、かつ／または大きな親和性で、その分子が特定の細胞または物質と反応または関連するならば、その分子は、「特異的結合」または「優先的結合」を示すと言われる。抗体が他の物質に結合するよりも、大きな親和性、アビディティーで、より容易に、かつ／またはより長い継続時間で、その抗体が結合するならば、その抗体は、標的に「特異的結合」または「優先的結合」する。例えば、ｔｒｋＢエピトープに特異的または優先的に結合する抗体は、それが他のｔｒｋＢエピトープまたは非ｔｒｋＢエピトープに結合するよりも、大きな親和性、アビディティーで、より容易に、かつ／またはより長い継続時間で、このエピトープと結合する抗体である。この定義を読むことによって、例えば、第１の標的に特異的または優先的に結合する抗体（または部分もしくはエピトープ）は、第２の標的に特異的または優先的に結合することもあるし、結合しないこともあることもまた理解されている。それとして、「特異的結合」または「優先的結合」は、必ずしも排他的結合を必要としない（がそれを含むこともある）。必然的ではなく概して、結合の言及は、優先的結合を意味する。
【００５０】
用語「Ｆｃ領域」は、免疫グロブリン重鎖のＣ末端領域を定義するために使用される。「Ｆｃ領域」は、天然由来配列のＦｃ領域または変異Ｆｃ領域のことがある。免疫グロブリン重鎖のＦｃ領域の境界は変動するおそれがあるが、ヒトＩｇＧ重鎖Ｆｃ領域は、通常は位置Ｃｙｓ２２６のアミノ酸残基またはＰｒｏ２３０からそのカルボキシル末端まで伸びると定義される。Ｆｃ領域の残基の付番は、ＫａｂａｔにおけるようなＥＵインデックスの付番である。Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、メリーランド州ベセスダ、１９９１。免疫グロブリンのＦｃ領域は、一般に２つの定常ドメインであるＣＨ２およびＣＨ３を含む。
【００５１】
本明細書に使用する「Ｆｃ受容体」および「ＦｃＲ」は、抗体のＦｃ領域に結合する受容体を記述するものである。好ましいＦｃＲは、天然由来配列のヒトＦｃＲである。さらに、好ましいＦｃＲは、ＩｇＧ抗体と結合するＦｃＲ（γ受容体）であり、それには、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、およびＦｃγＲＩＶサブクラスの受容体が、これらの受容体の対立遺伝子変異体および選択的スプライシングされた形態を含めて含まれる。ＦｃγＲＩＩ受容体には、ＦｃγＲＩＩＡ（「活性化受容体」）およびＦｃγＲＩＩＢ（「抑制受容体」）が含まれ、これらの受容体は、その細胞質ドメインが主に異なる類似のアミノ酸配列を有する。ＦｃＲは、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、１９９１、Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、９：４５７〜９２；Ｃａｐｅｌら、１９９４、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ、４：２５〜３４；ｄｅ  Ｈａａｓら、１９９５、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．、１２６：３３０〜４１；Ｎｉｍｍｅｒｊａｈｎら、２００５、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２３：２〜４に総説されている。「ＦｃＲ」には、胎児への母体ＩｇＧの輸送を担う新生児型受容体であるＦｃＲｎもまた含まれる。（Ｇｕｙｅｒら、１９７６、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１１７：５８７；およびＫｉｍら、１９９４、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２４：２４９）。
【００５２】
「補体依存性細胞傷害作用」および「ＣＤＣ」は、補体の存在下で標的を溶解することを表す。補体活性化経路は、コグネイト抗原と複合体を形成した分子（例えば抗体）に補体系第１成分（Ｃ１ｑ）が結合することによって開始する。補体活性化を評定するために、例えばＧａｚｚａｎｏ−Ｓａｎｔｏｒｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ、２０２：１６３（１９９６）に記載されているＣＤＣアッセイを行うことができる。
【００５３】
「機能的Ｆｃ領域」は、天然由来配列のＦｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能をもつ。「エフェクター機能」の例には、Ｃ１ｑの結合、補体依存性細胞傷害作用（ＣＤＣ）、Ｆｃ受容体の結合、抗体依存性細胞性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）、食作用、細胞表面受容体（例えばＢ細胞受容体（ＢＣＲ））のダウンレギュレーションなどが含まれる。そのようなエフェクター機能は、一般にＦｃ領域が結合ドメイン（例えば抗体可変ドメイン）と結合していることが必要であり、そのような抗体エフェクター機能を評価するために当技術分野で公知の様々なアッセイを使用して評定することができる。
【００５４】
「天然由来配列のＦｃ領域」は、自然界でみられるＦｃ領域のアミノ酸配列と同一のアミノ酸配列を含む。「変異Ｆｃ領域」は、少なくとも１つのアミノ酸修飾により天然由来配列のＦｃ領域のアミノ酸配列と異なるアミノ酸配列を含むが、天然由来配列のＦｃ領域の少なくとも１つのエフェクター機能をなお保持する。好ましくは、変異Ｆｃ領域は、天然由来配列のＦｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域に比べて、天然由来配列のＦｃ領域または親ポリペプチドのＦｃ領域に少なくとも１つのアミノ酸置換、例えば約１個から約１０個のアミノ酸置換、および好ましくは約１個から約５個のアミノ酸置換を有する。本明細書における変異Ｆｃ領域は、天然由来配列のＦｃ領域および／または親ポリペプチドのＦｃ領域と好ましくは少なくとも約８０％の配列同一性、最も好ましくはそれと少なくとも約９０％の配列同一性、より好ましくはそれと少なくとも約９５％、少なくとも約９６％、少なくとも約９７％、少なくとも約９８％、少なくとも約９９％の配列同一性をもつ。
【００５５】
本明細書に使用する「抗体依存性細胞性細胞傷害作用」および「ＡＤＣＣ」は、Ｆｃ受容体（ＦｃＲ）を発現している非特異的細胞傷害性細胞（例えばナチュラルキラー（ＮＫ）細胞、好中球、およびマクロファージ）が標的細胞上に結合した抗体を認識し、続いて標的細胞の溶解を引き起こす細胞介在性反応を表す。関心対象の分子のＡＤＣＣ活性は、米国特許第５，５００，３６２号または第５，８２１，３３７号に記載されているアッセイのようなｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＡＤＣＣアッセイを用いて評定することができる。そのようなアッセイに有用なエフェクター細胞には、末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）およびＮＫ細胞が含まれる。あるいはまたは追加的に、関心対象の分子のＡＤＣＣ活性は、例えばＣｌｙｎｅｓら、１９９８、ＰＮＡＳ（ＵＳＡ）、９５：６５２〜６５６に開示されているモデルのような動物モデルでｉｎ  ｖｉｖｏ評定することができる。
【００５６】
本明細書に使用する「薬学的に許容できる担体」または「薬学的に許容できる賦形剤」には、活性成分と組み合わせた場合に、その成分に生物学的活性を保持させ、対象の免疫系と反応しない任意の物質が含まれる。例には、非限定的に、リン酸緩衝溶液、水、油／水型乳剤などの乳剤、および様々な種類の湿潤剤などの任意の標準的な医薬担体が含まれる。エアロゾルまたは腸管外投与用の好ましい希釈剤は、リン酸緩衝溶液または普通の（０．９％）生理食塩水である。そのような担体を含む組成物は、十分に公知の従来法により製剤される（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、第１８版、Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、ペンシルベニア州イーストン、１９９０；およびＲｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ、２０００参照）。
【００５７】
用語「ポリペプチド」、「オリゴペプチド」、「ペプチド」、および「タンパク質」は、本明細書において相互交換可能に使用され、任意の長さのアミノ酸ポリマーを表す。このポリマーは、直鎖または分岐であってよく、修飾アミノ酸を含んでよく、非アミノ酸により分断されてもよい。この用語は、天然に修飾された、または介入により、例えばジスルフィド結合の形成、グリコシル化、脂質化、アセチル化、リン酸化、または標識構成要素とのコンジュゲーションなどの任意の他の操作もしくは修飾により修飾されたアミノ酸ポリマーもまた包含する。同様にこの定義に含まれるのは、例えば、アミノ酸の１つまたは複数のアナログ（例えば非天然アミノ酸などを含める）を含有するポリペプチド、および当技術分野で公知の他の修飾である。本発明のポリペプチドが抗体に基づくことから、そのポリペプチドは、一本鎖または関連した鎖として存在することがあることが理解されている。
【００５８】
本明細書において相互交換可能に使用される「ポリヌクレオチド」または「核酸」は、任意の長さのヌクレオチドのポリマーを表し、これには、ＤＮＡおよびＲＮＡが含まれる。ヌクレオチドは、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド、修飾ヌクレオチドもしくは塩基、および／またはそれらのアナログ、あるいはＤＮＡポリメラーゼまたはＲＮＡポリメラーゼによりポリマーに組み込むことができる任意の基質でありうる。ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチドおよびそのアナログなどの修飾ヌクレオチドを含んでいてもよい。存在するならば、ヌクレオチド構造への修飾は、ポリマーの集合前または集合後に加えられてよい。ヌクレオチドの配列は、非ヌクレオチド構成要素により分断されていてもよい。ポリヌクレオチドは、標識化構成要素とのコンジュゲーションによるなどのポリマー化後にさらに修飾することができる。他の種類の修飾には、例えば、「キャップ」、１つまたは複数の天然に存在するヌクレオチドのアナログへの置換、ヌクレオチド間修飾、例えば非荷電連結を有するもの（例えばメチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメートなど）および荷電連結を有するものなど（例えばホスホロチオエート、ホスホロジチオエートなど）、ペンダント部分を含有するもの、例えばタンパク質（例えばヌクレアーゼ、毒素、抗体、シグナルペプチド、ポリ−Ｌ−リシンなど）など、介入物を有するもの（例えばアクリジン、ソラーレンなど）、キレート剤を含有するもの（例えば金属、放射性金属、ホウ素、酸化的金属など）、アルキル化剤を含有するもの、修飾された連結を有するものなど（例えばα−アノマー核酸など）、および未修飾形態のポリヌクレオチドが含まれる。さらに、糖に通例存在する任意のヒドロキシル基は、例えばホスホネート基、ホスフェート基に置き換えるか、標準的な保護基により保護するか、または活性化して追加のヌクレオチドへの追加の連結を調製することができるし、固体支持体にコンジュゲートすることもできる。５’および３’末端のＯＨは、リン酸化することもできるし、アミンまたは１から２０個の炭素原子の有機キャップ基部分と置換することができる。他のヒドロキシルもまた標準的な保護基に誘導体化することができる。ポリヌクレオチドは、例えば２’−Ｏ−メチル−、２’−Ｏ−アリル、２’−フルオロ−、または２’−アジド−リボース、炭素環式糖アナログ、□−アノマー糖、アラビノース、キシロース、またはリキソースなどのエピマー糖、ピラノース糖、フラノース糖、セドヘプツロース、非環式アナログ、およびメチルリボシドなどの脱塩基ヌクレオシドアナログを含めた、当技術分野で一般に公知の、アナログ形態のリボースまたはデオキシリボース糖もまた含有することがある。１つまたは複数のホスホジエステル連結は、代替連結基に置き換えることができる。これらの代替連結基には、非限定的に、ホスフェートがＰ（Ｏ）Ｓ（「チオエート」）、Ｐ（Ｓ）Ｓ（「ジチオエート」）、（Ｏ）ＮＲ２（「アミデート」）、Ｐ（Ｏ）Ｒ、Ｐ（Ｏ）ＯＲ’、ＣＯ、またはＣＨ２（「ホルムアセタール」）に置き換えられる実施形態が含まれ、式中、各ＲまたはＲ’は、独立してＨであるか、または���ーテル（−Ｏ−）連結、アリール、アルケニル、シクロアルキル、シクロアルケニル、もしくはアラルジルを含有してもよい置換または未置換アルキル（１〜２０Ｃ）である。ポリヌクレオチド中のすべての結合が同一である必要はない。前述の説明は、ＲＮＡおよびＤＮＡを含めた本明細書に言及するすべてのポリヌクレオチドにあてはまる。
【００５９】
本明細書に使用する「実質的に純粋な」は、少なくとも５０％純粋な（すなわち混入物を有さない）、さらに好ましくは少なくとも９０％純粋な、さらに好ましくは少なくとも９５％純粋な、さらに好ましくは少なくとも９８％純粋な、さらに好ましくは少なくとも９９％純粋な物質を表す。
【００６０】
「宿主細胞」には、ポリヌクレオチド挿入物の組み込み用のベクターについてのレシピエントでありうるか、またはレシピエントであった個別の細胞または細胞培養物が含まれる。宿主細胞には、単一宿主細胞の子孫が含まれ、その子孫は、自然突然変異、偶発的突然変異、または計画的突然変異が原因で、本来の親細胞と（形態またはゲノムＤＮＡ相補体が）必ずしも完全には同一ではないことがある。宿主細胞には、本発明のポリヌクレオチドをｉｎ  ｖｉｖｏでトランスフェクトされた細胞が含まれる。
【００６１】
本明細書に使用する「ベクター」は、宿主細胞に関心対象の１つまたは複数の遺伝子または配列を送達し、好ましくは発現させることができる構築物を意味する。ベクターの例には、非限定的に、ウイルスベクター、裸のＤＮＡ発現ベクターまたはＲＮＡ発現ベクター、プラスミド、コスミドまたはファージベクター、陽イオン凝縮剤と関連したＤＮＡ発現ベクターまたはＲＮＡ発現ベクター、リポソームに封入されたＤＮＡ発現ベクターまたはＲＮＡ発現ベクター、および産生細胞などのある種の真核細胞が含まれる。
【００６２】
本明細書に使用する「発現制御配列」は、核酸の転写を指令する核酸配列を意味する。発現制御配列は、構成性もしくは誘導性プロモーターなどのプロモーター、またはエンハンサーでありうる。発現制御配列は、転写される核酸配列に作動可能に連結している。
【００６３】
本明細書に使用する用語「ｋｏｎ」は、抗原への抗体の会合についての速度定数を表すことを意図する。
【００６４】
本明細書に使用する用語「ｋｏｆｆ」は、抗体／抗原複合体からの抗体の解離についての速度定数を表すことを意図する。
【００６５】
本明細書に使用する用語「ＫＤ」は、抗体−抗原相互作用の平衡解離定数を表すことを意図する。
【００６６】
本明細書に使用する単数形「ａ」、「ａｎ」、および「ｔｈｅ」には、別に示さない限り複数の参照が含まれる。
【００６７】
ＩＩＩ．本発明の方法
本発明は、ｔｒｋＢアンタゴニストの末梢投与により体重および／または摂食を制御する方法を包含する。これらの方法は、哺乳動物における肥満または過食（食べ過ぎ）障害を治療または予防するために用いることができる。その方法は、有効量の１つまたは複数のｔｒｋＢアンタゴニストを、それを必要とする個体に末梢投与することを伴う（様々な表示および態様は本明細書に記載する）。
【００６８】
本明細書に記載するすべての方法に関して、ｔｒｋＢアンタゴニストの参照には、１つまたは複数のこれらの薬剤を含む組成物もまた含まれる。これらの組成物は、当技術分野で十分に公知の緩衝液を含めた、薬学的に許容できる賦形剤などの適切な賦形剤をさらに含むことがある。本発明は、単独で、または他の従来の治療方法と組み合わせて使用することができる。
【００６９】
ｔｒｋＢアンタゴニストは末梢投与される。たとえ薬剤が末梢投与されても、わずかな率の薬剤は血液脳関門を通過して、薬剤の性質に応じて中枢神経系への送達を招くおそれがあることが理解されている。いくつかの実施形態では、末梢投与されたｔｒｋＢアンタゴニスト（例えばｔｒｋＢアンタゴニスト抗体）の約１％、約０．５％、約０．２５％、および約０．１％のいずれか未満が、ＣＮＳにアクセスする。
【００７０】
ｔｒｋＢアンタゴニストは、任意の適切な末梢経路により個体に投与することができる。本明細書に記載する実施例が、利用できる技術の限定ではなく例示を意図することは、当業者に明らかなはずである。したがって、いくつかの実施形態では、ｔｒｋＢアンタゴニストは、例えばボーラスまたは一定時間にわたる連続点滴のような静脈内投与、筋肉内、腹腔内、皮下、関節内、舌下、滑膜内、吹入経由、経口、吸入、または局所経路によるものなどの公知の方法により個体に投与される。投与は、全身的（例えば静脈内投与）または局所的でありうる。ジェットネブライザーおよび超音波ネブライザーを含めた、液体製剤用の市販のネブライザーが投与に有用である。液体製剤を直接噴霧することもできるし、凍結乾燥粉末を再構成後に噴霧することもできる。あるいは、ｔｒｋＢアンタゴニストは、フッ化炭素製剤および定量吸入器を使用してエアロゾル化することができるし、凍結乾燥して粉砕した粉末として吸入することができる。
【００７１】
ｔｒｋＢアンタゴニストは、ＣＮＳの外側に部位特異的または標的化局所送達技術により投与することができる。部位特異的または標的化局所送達技術の例には、ｔｒｋＢアンタゴニストの様々な植込み可能なデポー供給源、または点滴カテーテル、留置カテーテル、もしくはニードルカテーテルなどの局所送達カテーテル、合成移植片、外膜ラップ（ａｄｖｅｎｔｉｔｉａｌ  ｗｒａｐｓ）、シャントおよびステントもしくは他の埋込み可能な装置、部位特異的担体、直接注射、または直接適用が含まれる。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ００／５３２１１および米国特許第５，９８１，５６８号を参照されたい。
【００７２】
ｔｒｋＢアンタゴニストの様々な製剤は、投与のために使用することができる。いくつかの実施形態では、ｔｒｋＢアンタゴニストは、混ぜ物なしに（ｎｅａｔ）投与することができる。他の実施形態では、ｔｒｋＢアンタゴニストおよび薬学的に許容できる賦形剤が投与され、それらは様々な製剤のことがある。薬学的に許容できる賦形剤は、当技術分野において公知であり、薬理学的に有効な物質の投与を容易にする相対的に不活性な物質である。例えば、賦形剤は、形態またはコンシステンシーを与えることができるし、希釈剤として作用することもできる。適切な賦形剤には、非限定的に、安定化剤、湿潤剤および乳化剤、モル浸透圧濃度を変動させるための塩、封入剤、緩衝剤、ならびに皮膚透過促進剤が含まれる。腸管外および非腸管外薬物送達のための賦形剤および製剤は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ、Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ（２０００）に述べられている。概して、これらの薬剤は、注射による投与（例えば腹腔内、静脈内、皮下、筋肉内など）のために製剤されるが、他の形態（例えば経口、粘膜、経皮、吸入など）の投与を使用することもまたできる。
【００７３】
特定の投薬方式、すなわち用量、タイミング、および繰り返しは、特定の個体ならびにその個体の病歴、治療する疾患（例えば肥満）の特定の段階、および特定のｔｒｋＢアンタゴニストに依存するものである。概して、以下の任意の用量のｔｒｋＢアンタゴニスト（例えば、抗ＢＤＮＦ、抗ＮＴ−４／５、および抗ｔｒｋＢアンタゴニスト抗体）を使用することができ、少なくとも約５０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１０ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約３ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１ｍｇ／ｋｇ体重、少なくとも約７５０μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５００μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約２５０ｕｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１００μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約５０μｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１０ｕｇ／ｋｇ体重、少なくとも約１μｇ／ｋｇ体重、またはそれを超える用量が投与される。半減期などの経験的考察は、一般に投与量の決定に寄与するものである。数日間以上にわたる繰り返し投与について、治療は、疾患の症状の所望の抑制が起こるか、または十分な治療レベルが達成されるまで、状態に応じて継続される。例えば、１週間に１から５回の投薬が考えられている。他の投薬方式には、１日に最大１回、１週間に１から５回、またはそれよりも回数の少ない方式が含まれる。いくつかの実施形態では、ｔｒｋＢアンタゴニストは、１週間に約１回、１カ月に約１から４回投与される。段階投与量を用いた、２日から最大７日、または１４日までもの間隔の間欠投薬方式を用いることができる。いくつかの実施形態では、治療は、毎日投薬で開始して、その後毎週または毎月までもの投薬に変えることができる。この治療法の進行は、従来の技術およびアッセイにより容易にモニターされる。
【００７４】
一部の個体では、１回を超える投与が必要なことがある。投与回数は、治療クールにわたり決定および調整することができる。例えば、投与回数は、治療する疾患の種類および重症度、その薬剤が予防目的それとも治療目的で投与されるか、以前の治療法、患者の臨床歴およびその薬剤に対する応答、ならびに担当医師の判断に基づき決定または調整することができる。典型的には、臨床家は、所望の結果を達成する投与量に達するまでｔｒｋＢアンタゴニストを投与するものである。場合によっては、ｔｒｋＢアンタゴニストの持続性連続放出製剤が適切なことがある。持続性放出を達成するための様々な製剤および装置が、当技術分野で公知である。例えば、ｔｒｋＢアンタゴニストは、機械的ポンプにより投与することができるし、持続放出または低速放出用のマトリックス床に包埋することができる。
【００７５】
一実施形態では、１回または複数回の投与を与えられた個体におけるｔｒｋＢアンタゴニストについての投与量は、経験的に決定することができる。個体に漸増する投与量のｔｒｋＢアンタゴニストを与える。ｔｒｋＢアンタゴニストの有効性を評定するために、病状のマーカーをモニターすることができる。個体、疾患の段階（例えば肥満の段階）、ならびに過去の治療および使用中の同時治療に応じて投与量が変動するものであることは、当業者に明らかなものである。
【００７６】
本発明の方法によるｔｒｋＢアンタゴニストの投与は、例えばレシピエントの生理的状態、投与の目的が治療であるかそれとも予防であるか、および当業者に公知の他の要因に応じて連続的または間欠的でありうる。ｔｒｋＢアンタゴニストの投与は、予め選択された期間にわたり本質的に連続的なこともあるし、間隔を空けた一連の投与のこともある。
【００７７】
他の製剤には、非限定的にリポソームなどの担体を含めた、当技術分野で公知の適切な送達形態が含まれる。例えば、Ｍａｈａｔｏら（１９９７）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１４：８５３〜８５９を参照されたい。リポソーム製剤には、非限定的に、サイトフェクチン、多重膜小胞、および単膜小胞が含まれる。
【００７８】
疾患の評価は、当技術分野で公知の標準法を用いて、例えば、適切なマーカーをモニターすることによって行われる。例えば肥満については、以下のマーカー、すなわち体重、ボディーマスインデックス（ＢＭＩ）、体組成実験、摂食またはカロリー摂取、空腹および飽食の行動測定、代謝率、および肥満関連共存罹患（高脂血症および高血圧など）をモニターすることができる。
【００７９】
ＩＶ．組成物および組成物を作る方法
本発明の方法はｔｒｋＢアンタゴニストを使用し、ｔｒｋＢアンタゴニストは、ｔｒｋＢシグナル伝達により仲介される下流の経路を含めたｔｒｋＢの生物学的活性（ｔｒｋＢのリガンドであるＢＤＮＦもしくはＮＴ−４／５へのｔｒｋＢの結合および／またはＢＤＮＦもしくはＮＴ−４／５への細胞応答の誘発など）を（有意に含めて）抑制または低減する任意の分子を表す。ｔｒｋＢアンタゴニストの例には、非限定的に、抗ＢＤＮＦ抗体、抗ＮＴ−４／５抗体、ＢＤＮＦとＮＴ−４／５とのヘテロ二量体と結合および阻害する抗体、ＢＤＮＦ阻害化合物またはＮＴ−４／５阻害化合物（例えば、競合的またはアロステリックにｔｒｋＢ−リガンド相互作用を妨害または弱める化合物）、アゴニスト活性を欠くＢＤＮＦ構造アナログまたはＮＴ−４／５構造アナログ、ＢＤＮＦおよび／またはＮＴ−４／５と結合するｔｒｋＢ受容体のドミナントネガティブ突然変異、ｔｒｋＢイムノアドヘシン、抗ｔｒｋＢ抗体、ならびにｔｒｋＢ阻害化合物が含まれる。
【００８０】
いくつかの実施形態では、ｔｒｋＢアンタゴニスト（例えば抗体）は、ＢＤＮＦまたはＮＴ−４／５と結合（物理的に相互作用）し、下流のｔｒｋＢ受容体シグナル伝達を低減（妨害および／またはブロック）する。いくつかの実施形態では、ｔｒｋＢアンタゴニスト（例えば抗体）は、ｔｒｋＢ受容体と結合（物理的に相互作用）し、下流のｔｒｋＢ受容体シグナル伝達を低減（妨害および／またはブロック）する。いくつかの実施形態では、ｔｒｋＢアンタゴニストは、下流のｔｒｋＢ受容体シグナル伝達を低減（妨害および／またはブロック）する（例えばキナーゼシグナル伝達阻害剤）。他の実施形態では、ｔｒｋＢアンタゴニストは、ＢＤＮＦおよび／もしくはＮＴ−４／５の合成ならびに／または循環への放出を阻害（低減）する。いくつかの実施形態では、ｔｒｋＢアンタゴニストはｔｒｋＢイムノアドヘシンである。いくつかの実施形態では、ｔｒｋＢアンタゴニストはＢＤＮＦ（ｈＢＤＮＦなど）と結合し、ＮＴ−３、ＮＴ−４／５、および／またはＮＧＦなどの関連ニューロトロフィンとは有意には結合しない。いくつかの実施形態では、ｔｒｋＢアンタゴニストは、ＮＴ−４／５（ｈＮＴ−４／５など）と結合し、ＮＴ−３、ＢＤＮＦ、および／またはＮＧＦなどの関連ニューロトロフィンとは有意には結合しない。いくつかの実施形態では、ｔｒｋＢアンタゴニストは、ＮＴ−４／５（ｈＮＴ−４／５など）およびＢＤＮＦ（ｈＢＤＮＦなど）の両方と結合するが、ＮＴ−３および／またはＮＧＦなどの関連ニューロトロフィンとは有意には結合しない。いくつかの実施形態では、ｔｒｋＢアンタゴニストは、単量体性ＮＴ−４／５と単量体性ＢＤＮＦとのヘテロ二量体と結合するが、ＮＴ−３および／またはＮＧＦなどの関連ニューロトロフィンとは有意には結合しない。いくつかの実施形態では、ｔｒｋＢアンタゴニストは、有害免疫応答に関連しない。いくつかの実施形態では、この抗体性アンタゴニストはエフェクター機能障害を有する。いくつかの実施形態では、この小分子ｔｒｋＢアンタゴニストは、末梢投与した場合に血液脳関門を有意には通過しない。
【００８１】
ｔｒｋＢアンタゴニストは、本明細書に記載する任意の方法に使用するための組成物の形態でありうる。本発明の方法に使用する組成物は、有効量のｔｒｋＢアンタゴニストを含む。組成物は、凍結乾燥製剤または水溶液の形態で、薬学的に許容できる担体、賦形剤、または安定化剤をさらに含むことがある（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、第２０版（２０００）Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ａｎｄ  Ｗｉｌｋｉｎｓ、Ｋ．Ｅ．Ｈｏｏｖｅｒ編）。許容できる担体、賦形剤、または安定化剤は、その投与量および濃度でレシピエントに無毒であり、リン酸、クエン酸、および他の有機酸などの緩衝液；アスコルビン酸およびメチオニンを含めた抗酸化剤；保存料（オクタデシルジメチルベンジルアンモニウムクロリド、塩化ヘキサメトニウム、塩化ベンザルコニウム、塩化ベンゼトニウム、フェノール、ブチルアルコール、またはベンジルアルコール、メチルパラベンまたはプロピルパラベンなどのアルキルパラベン、カテコール、レゾルシノール、シクロヘキサノール、３−ペンタノール、およびｍ−クレゾールなど）；低分子量（約１０残基未満の）ポリペプチド；血清アルブミン、ゼラチン、もしくは免疫グロブリンなどのタンパク質；ポリビニルピロリドンなどの親水性ポリマー；グリシン、グルタミン、アスパラギン、ヒスチジン、アルギニン、もしくはリシンなどのアミノ酸；グルコース、マンノース、もしくはデキストランを含めた単糖、二糖、および他の糖質；ＥＤＴＡなどのキレート剤；スクロース、マンニトール、トレハロース、もしくはソルビトールなどの糖；ナトリウムなどの塩形成性対イオン；金属錯体（例えばＺｎ−タンパク質複合体）；ならびに／またはＴＷＥＥＮ（商標）、ＰＬＵＲＯＮＩＣＳ（商標）、もしくはポリエチレングリコール（ＰＥＧ）などの非イオン系界面活性剤を含むことがある。薬学的に許容できる賦形剤を本明細書にさらに記載する。
【００８２】
本明細書に記載するｔｒｋＢアンタゴニストは、持続放出用に製剤することができる。持続放出調製物の適切な例には、ｔｒｋＢアンタゴニストを含有する固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスが含まれ、そのマトリックスは、造型品の形態、例えばフィルムまたはマイクロカプセルである。持続放出マトリックスの例には、ポリエステル、ヒドロゲル（例えばポリ（２−ヒドロキシエチル−メタクリレート）またはポリビニルアルコール）、ポリラクチド（米国特許第３，７７３，９１９号）、Ｌ−グルタミン酸および７  エチル−Ｌ−グルタミン酸のコポリマー、非分解性エチレン−ビニル酢酸、ＬＵＰＲＯＮ  ＤＥＰＯＴ（商標）（乳酸−グリコール酸コポリマーおよび酢酸ロイプロリドから構成される注射用ミクロスフェア）などの分解性乳酸−グリコール酸コポリマー、スクロースアセテートイソブチレート、およびポリ−Ｄ−（−）−３−ヒドロキシ酪酸が含まれる。使用することができる持続放出薬物送達システムの別の例は、Ａｔｒｉｘ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓが作るＡＴＲＩＧＥＬ（登録商標）である。例えば、米国特許第６，５６５，８７４号を参照されたい。ＡＴＲＩＧＥＬ（登録商標）薬物送達システムは、生物分解性縫合糸に使用されるポリマーに類似した生物分解性ポリマーを生物適合性担体に溶解したものからなる。ｔｒｋＢアンタゴニストは、製造時にこの液体送達系に混合することができるし、製品に応じて、後で使用時に医師が添加することもできる。液体製品をゲージの小さい針を通して皮下または筋肉内に注射するか、またはカニューレを通してアクセス可能な組織部位に置く場合には、担体と組織液中の水との置き換えにより、ポリマーが沈殿し、固体フィルムまたは植込剤が形成する。その植込剤に封入されたｔｒｋＢアンタゴニストは、次にポリマーマトリックスが経時的に生物分解するときに制御された方式で放出される。患者の医学的必要性に応じて、Ａｔｒｉｇｅｌシステムは、数日から数カ月までの期間にわたりタンパク質を送達することができる。Ａｌｋｅｒｍｅｓが製造するＰｒｏＬｅａｓｅ（登録商標）、Ｍｅｄｉｓｏｒｂ（登録商標）などの注射用持続放出システムもまた使用することができる。
【００８３】
いくつかの実施形態では、本発明は、医薬としての使用の状況であろうと、かつ／または医薬の製造のための使用の状況であろうと、本明細書に記載する任意の方法に使用するための組成物（本明細書に記載）を提供する。
【００８４】
本発明のｔｒｋＢアンタゴニストは、本明細書に記載する病状または状態の治療のための他の薬学的薬剤と共に使用することができる。したがって、本発明の化合物を、他の薬学的薬剤と組み合わせて投与することを含む治療方法もまた、本発明により提供される。
【００８５】
本発明のｔｒｋＢアンタゴニストと組み合わせて使用することができる適切な薬学的薬剤には、ＰＹＹ、ＰＹＹアナログ、およびＰＹＹ誘導体（ＰＥＧ化誘導体など）を含めたＮＰＹＹ２アゴニスト、カンナビノイド１（ＣＢ−１）アンタゴニスト（リモナバンなど）、１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１（１１β−ＨＳＤ１型）阻害剤、ＭＣＲ−４アゴニスト、コレシストキニンＡ（ＣＣＫ−Ａ）アゴニスト、モノアミン再取り込み阻害剤（シブトラミンなど）、交感神経刺激剤、β３アドレナリン受容体アゴニスト、ドーパミン受容体アゴニスト（ブロモクリプチンなど）、メラニン細胞刺激ホルモン受容体アナログ、５ＨＴ２ｃ受容体アゴニスト、メラニン凝集ホルモンアンタゴニスト、レプチン、レプチンアナログ、レプチン受容体アゴニスト、ガラニンアンタゴニスト、リパーゼ阻害剤（テトラヒドロリプスタチン、すなわちオルリスタットなど）、食欲低下剤（ボンベシンアゴニストなど）、神経ペプチドＹ受容体アンタゴニスト（例えばＮＰＹ  Ｙ５受容体アンタゴニスト）、甲状腺ホルモン様（ｔｈｙｒｏｍｉｍｅｔｉｃ）薬剤、デヒドロエピアンドロステロンまたはそのアナログ、グルココルチコイド受容体アゴニストまたはアンタゴニスト、オレキシン受容体アンタゴニスト、グルカゴン様ペプチド１受容体アゴニスト、毛様体神経栄養因子（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（ニューヨーク州タリータウン）およびＰｒｏｃｔｅｒ  ＆  Ｇａｍｂｌｅ  Ｃｏｍｐａｎｙ（オハイオ州シンシナティ）から入手できるＡｘｏｋｉｎｅ（商標）など）、ヒトのアグーチ関連タンパク質（ＡＧＲＰ）阻害剤、グレリン受容体アンタゴニスト、ヒスタミン３受容体アンタゴニストまたは逆アゴニスト、ニューロメジンＵ受容体アゴニスト、ＭＴＰ／ＡｐｏＢ阻害剤（例えば、ジルロタピドなどの腸管選択的ＭＴＰ阻害剤）等の他の抗肥満剤が含まれる。
【００８６】
本発明のｔｒｋＢアンタゴニストと組み合わせて使用するために好ましい抗肥満剤には、ＣＢ−１受容体アンタゴニスト、腸管選択的ＭＴＰ阻害剤、ＣＣＫａアゴニスト、５ＨＴ２ｃ受容体アゴニスト、ＮＰＹ  Ｙ５受容体アンタゴニスト、オルリスタット、およびシブトラミンが含まれる。本発明の方法に使用するために好ましいＣＢ−１受容体アンタゴニストには、リモナバン（ＳＲ１４１７１６Ａ、Ａｃｏｍｐｌｉａ（商標）の商標でも公知である）が、Ｓａｎｏｆｉ−Ｓｙｎｔｈｅｌａｂｏから入手できるし、米国特許第５，６２４，９４１号に記載されているように調製することができる；Ｎ−（ピペリジン−１−イル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−ヨードフェニル）−４−メチル−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド（ＡＭ２５１）が、Ｔｏｃｒｉｓ（商標）（ミズーリ州エリスヴィル）から入手できる、米国特許第６，６４５，９８５号に記載されているように調製することができる［５−（４−ブロモフェニル）−１−（２，４−ジクロロ−フェニル）−４−エチル−Ｎ−（１−ピペリジニル）−１Ｈ−ピラゾール−３−カルボキサミド］（ＳＲ１４７７７８）；ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ０３／０７５６６０に記載されているように調製することができるＮ−（ピペリジン−１−イル）−４，５−ジフェニル−１−メチルイミダゾール−２−カルボキサミド、Ｎ−（ピペリジン−１−イル）−４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−クロロフェニル）−１−メチルイミダゾール−２−カルボキサミド、Ｎ−（ピペリジン−１−イル）−４，５−ジ−（４−メチルフェニル）−１−メチルイミダゾール−２−カルボキサミド、Ｎ−シクロヘキシル−４，５−ジ−（４−メチルフェニル）−１−メチルイミダゾール−２−カルボキサミド、Ｎ−（シクロヘキシル）−４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−クロロフェニル）−１−メチルイミダゾール−２−カルボキサミド、およびＮ−（フェニル）−４−（２，４−ジクロロフェニル）−５−（４−クロロフェニル）−１−メチルイミダゾール−２−カルボキサミド；米国特許出願公開第２００４／００９２５２０号に記載されているように調製することができる１−［９−（４−クロロ−フェニル）−８−（２−クロロ−フェニル）−９Ｈ−プリン−６−イル］−４−エチルアミノ−ピペリジン−４−カルボン酸アミドの塩酸塩、メシル酸塩、およびベシル酸塩；米国特許出願公開第２００４／０１５７８３９号に記載されているように調製することができる１−［７−（２−クロロ−フェニル）−８−（４−クロロ−フェニル）−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］［１，３，５］トリアジン−４−イル］−３−エチルアミノ−アゼチジン−３−カルボン酸アミドおよび１−［７−（２−クロロ−フェニル）−８−（４−クロロ−フェニル）−２−メチル−ピラゾロ［１，５−ａ］［１，３，５］トリアジン−４−イル］−３−メチルアミノ−アゼチジン−３−カルボン酸アミド；米国特許出願公開第２００４／０２１４８５５号に記載されているように調製することができる３−（４−クロロ−フェニル）−２−（２−クロロ−フェニル）−６−（２，２−ジフルオロ−プロピル）−２，４，５，６−テトラヒドロ−���ラゾロ［３，４−ｃ］ピリジン−７−オン；米国特許出願公開第２００５／０１０１５９２号に記載されているように調製することができる３−（４−クロロ−フェニル）−２−（２−クロロ−フェニル）−７−（２，２−ジフルオロ−プロピル）−６，７−ジヒドロ−２Ｈ，５Ｈ−４−オキサ−１，２，７−トリアザ−アズレン−８−オン；米国特許出願公開第２００４／０２１４８３８号に記載されているように調製することができる２−（２−クロロ−フェニル）−６−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−３−（４−トリフルオロメチル−フェニル）−２，６−ジヒドロ−ピラゾロ［４，３−ｄ］ピリミジン−７−オン；ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ０２／０７６９４９に記載されているように調製することができる（Ｓ）−４−クロロ−Ｎ−｛［３−（４−クロロ−フェニル）−４−フェニル−４，５−ジヒドロ−ピラゾール−１−イル］−メチルアミノ−メチレン｝−ベンゼンスルホンアミド（ＳＬＶ−３１９）および（Ｓ）−Ｎ−｛［３−（４−クロロ−フェニル）−４−フェニル−４，５−ジヒドロ−ピラゾール−１−イル］−メチルアミノ−メチレン｝−４−トリフルオロメチル−ベンゼンスルホンアミド（ＳＬＶ−３２６）；米国特許第６，４３２，９８４号に記載されているように調製することができるＮ−ピペリジノ−５−（４−ブロモフェニル）−１−（２，４−ジクロロフェニル）−４−エチルピラゾール−３−カルボキサミド；米国特許第６，５１８，２６４号に記載されているように調製することができる１−［ビス−（４−クロロ−フェニル）−メチル］−３−［（３，５−ジフルオロ−フェニル）−メタンスルホニル−メチレン］−アゼチジン；ＰＣＴ特許出願公開ＷＯ０４／０４８３１７に記載されているように調製することができる２−（５−（トリフルオロメチル）ピリジン−２−イルオキシ）−Ｎ−（４−（４−クロロフェニル）−３−（３−シアノフェニル）ブタン−２−イル）−２−メチルプロパンアミド；米国特許第５，７４７，５２４号に記載されているように調製することができる４−｛［６−メトキシ−２−（４−メトキシフェニル）−１−ベンゾフラン−３−イル］カルボニル｝ベンゾニトリル（ＬＹ−３２０１３５）；ＷＯ０４／０１３１２０に記載されているように調製することができる１−［２−（２，４−ジクロロフェニル）−２−（４−フルオロフェニル）−ベンゾ［１，３］ジオキソール−５−スルホニル］−ピペリジン；ならびにＰＣＴ特許出願公開第ＷＯ０４／０１２６７１号に記載されているように調製することができる［３−アミノ−５−（４−クロロフェニル）−６−（２，４−ジクロロフェニル）−フロ［２，３−ｂ］ピリジン−２−イル］−フェニル−メタノンがある。
【００８７】
本発明の組合せ、医薬組成物、および方法に使用するために好ましい胃腸作用性ＭＴＰ阻害剤には、共に米国特許第６，７２０，３５１号に記載されている方法を用いて調製することができるジルロタピド（（Ｓ）−Ｎ−｛２−［ベンジル（メチル）アミノ］−２−オキソ−１−フェニルエチル｝−１−メチル−５−［４’−（トリフルオロメチル）［１，１’−ビフェニル］−２−カルボキサミド］−１Ｈ−インドール−２−カルボキサミド）および１−メチル−５−［（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−２−カルボニル）−アミノ］−１Ｈ−インドール−２−カルボン酸（カルバモイル−フェニル−メチル）−アミド；すべて米国特許出願公開第２００５／０２３４０９９Ａ１号に記載されているように調製することができる（Ｓ）−２−［（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−２−カルボニル）−アミノ］−キノリン−６−カルボン酸（ペンチルカルバモイル−フェニル−メチル）−アミド、（Ｓ）−２−［（４’−ｔｅｒｔ−ブチル−ビフェニル−２−カルボニル）−アミノ］−キノリン−６−カルボン酸｛［（４−フルオロ−ベンジル）−メチル−カルバモイル］−フェニル−メチル｝−アミド、および（Ｓ）−２−［（４’−ｔｅｒｔ−ブチル−ビフェニル−２−カルボニル）−アミノ］−キノリン−６−カルボン酸［（４−フルオロ−ベンジルカルバモイル）−フェニル−メチル］−アミド；米国特許第５，５２１，１８６号および第５，９２９，０７５号に記載されているように調製することができる（−）−４−［４−［４−［４−［［（２Ｓ，４Ｒ）−２−（４−クロロフェニル）−２−［［（４−メチル−４Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−イル）スルファニル］メチル−１，３−ジオキソラン−４−イル］メトキシ］フェニル］ピペラジン−１−イル］フェニル］−２−（１Ｒ）−１−メチルプロピル］−２，４−ジヒドロ−３Ｈ−１，２，４−トリアゾール−３−オン（ミトラタピドまたはＲ１０３７５７としても知られている）；ならびに米国特許第６，２６５，４３１号に記載されているように調製することができるインプリタピド（ＢＡＹ１３−９９５２）が含まれる。最も好ましくは、ジルロタピド、ミトラプリド、（Ｓ）−２−［（４’−トリフルオロメチル−ビフェニル−２−カルボニル）−アミノ］−キノリン−６−カルボン酸（ペンチルカルバモイル−フェニル−メチル）−アミド、（Ｓ）−２−［（４’−ｔｅｒｔ−ブチル−ビフェニル−２−カルボニル）−アミノ］−キノリン−６−カルボン酸｛［（４−フルオロ−ベンジル）−メチル−カルバモイル］−フェニル−メチル｝−アミド、または（Ｓ）−２−［（４’−ｔｅｒｔ−ブチル−ビフェニル−２−カルボニル）−アミノ］−キノリン−６−カルボン酸［（４−フルオロ−ベンジルカルバモイル）−フェニル−メチル］−アミドである。好ましいＮＰＹ  Ｙ５受容体アンタゴニストには：米国特許出願公開第２００２／０１５１４５６号に記載されているように調製することができる２−オキソ−Ｎ−（５−フェニルピラジニル）スピロ［イソベンゾフラン−１（３Ｈ），４’−ピペリジン］−１’−カルボキサミド；ならびにすべてがＰＣＴ特許出願公開ＷＯ０３／０８２１９０に記載されているように���製することができる３−オキソ−Ｎ−（５−フェニル−２−ピラジニル）−スピロ［イソベンゾフラン−１（３Ｈ），４’−ピペリジン］−１’−カルボキサミド；３−オキソ−Ｎ−（７−トリフルオロメチルピリド［３，２−ｂ］ピリジン−２−イル）−スピロ−［イソベンゾフラン−１（３Ｈ），４’−ピペリジン］−１’−カルボキサミド；Ｎ−［５−（３−フルオロフェニル）−２−ピリミジニル］−３−オキソスピロ−［イソベンゾフラン−１（３Ｈ），［４’−ピペリジン］−１’−カルボキサミド；トランス−３’−オキソ−Ｎ−（５−フェニル−２−ピリミジニル）］スピロ［シクロヘキサン−１，１’（３’Ｈ）−イソベンゾフラン］−４−カルボキサミド；トランス−３’−オキソ−Ｎ−［１−（３−キノリル）−４−イミダゾリル］スピロ［シクロヘキサン−１，１’（３’Ｈ）−イソベンゾフラン］−４−カルボキサミド；トランス−３−オキソ−Ｎ−（５−フェニル−２−ピラジニル）スピロ［４−アザイソ−ベンゾフラン−１（３Ｈ），１’−シクロヘキサン］−４’−カルボキサミド；トランス−Ｎ−［５−（３−フルオロフェニル）−２−ピリミジニル］−３−オキソスピロ［５−アザイソベンゾフラン−１（３Ｈ），１’−シクロヘキサン］−４’−カルボキサミド；トランス−Ｎ−［５−（２−フルオロフェニル）−２−ピリミジニル］−３−オキソスピロ［５−アザイソベンゾフラン−１（３Ｈ），１’−シクロヘキサン］−４’−カルボキサミド；トランス−Ｎ−［１−（３，５−ジフルオロフェニル）−４−イミダゾリル］−３−オキソスピロ［７−アザイソベンゾフラン−１（３Ｈ），１’−シクロヘキサン］−４’−カルボキサミド；トランス−３−オキソ−Ｎ−（１−フェニル−４−ピラゾリル）スピロ［４−アザイソベンゾフラン−１（３Ｈ），１’−シクロヘキサン］−４’−カルボキサミド；トランス−Ｎ−［１−（２−フルオロフェニル）−３−ピラゾリル］−３−オキソスピロ［６−アザイソベンゾフラン−１（３Ｈ），１’−シクロヘキサン］−４’−カルボキサミド；トランス−３−オキソ−Ｎ−（１−フェニル−３−ピラゾリル）スピロ［６−アザイソベンゾフラン−１（３Ｈ），１’−シクロヘキサン］−４’−カルボキサミド；およびトランス−３−オキソ−Ｎ−（２−フェニル−１，２，３−トリアゾール−４−イル）スピロ［６−アザイソベンゾフラン−１（３Ｈ），１’−シクロヘキサン］−４’−カルボキサミド；ならびにその薬学的に許容できる塩およびエステルが含まれる。上に引用した米国特許および公報のすべては、参照により本明細書に組み込まれている。
【００８８】
アンタゴニスト抗体
本発明のいくつかの実施形態では、ｔｒｋＢアンタゴニストは抗ＢＤＮＦ抗体を含む。抗ＢＤＮＦ抗体は、以下の特徴の任意の１つまたは複数を示すはずである。（ａ）ＢＤＮＦに結合する、（ｂ）ＢＤＮＦの生物学的活性またはＢＤＮＦシグナル伝達機能により仲介される下流の経路を阻害する、（ｃ）肥満の任意の局面を予防、回復、または治療する、（ｄ）ｔｒｋＢ受容体の活性化（ｔｒｋＢ受容体の二量体化および／または自己リン酸化を含める）をブロックまたは減少させる、（ｅ）循環中のＢＤＮＦのクリアランスを増加させる、および（ｆ）ＢＤＮＦの合成、産生、または放出を阻害（低減）する。
【００８９】
本発明のいくつかの実施形態では、ｔｒｋＢアンタゴニストは、抗ＮＴ−４／５抗体を含む。抗ＮＴ−４／５抗体は、以下の特徴の任意の１つまたは複数を示すはずである。（ａ）ＮＴ−４／５に結合する、（ｂ）ＮＴ−４／５の生物学的活性またはＮＴ−４／５シグナル伝達機能により仲介される下流の経路を阻害する、（ｃ）肥満の任意の局面を予防、回復、または治療する、（ｄ）ｔｒｋＢ受容体の活性化（ｔｒｋＢ受容体の二量体化および／または自己リン酸化を含める）をブロックまたは減少させる、（ｅ）循環中のＮＴ−４／５のクリアランスを増加させる、および（ｆ）ＢＤＮＦの合成、産生、または放出を阻害（低減）する。
【００９０】
本発明のいくつかの実施形態では、ｔｒｋＢアンタゴニストは、抗ｔｒｋＢ抗体を含む。抗ｔｒｋＢ抗体は、以下の特徴の任意の１つまたは複数を示すはずである。（ａ）ｔｒｋＢ受容体に結合する、（ｂ）ｔｒｋＢ受容体へのＢＤＮＦおよび／またはＮＴ−４／５の結合をブロックまたは阻害する、（ｃ）ｔｒｋＢの生物学的活性またはｔｒｋＢシグナル伝達機能により仲介される下流の経路を阻害する、（ｄ）肥満の任意の局面を予防、回復、または治療する、（ｅ）ｔｒｋＢ受容体の活性化（ｔｒｋＢ受容体の二量体化および／または自己リン酸化を含める）をブロックまたは減少させる。
【００９１】
本発明に有用な抗体は、モノクローナル抗体、ポリクローナル抗体、抗体断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、Ｆｃなど）、キメラ抗体、単鎖（ＳｃＦｖ）、その突然変異体、抗体の部分を含む融合タンパク質、および必要な特異性の抗原認識部位を含む免疫グロブリン分子の任意の他の修飾された立体配置を包含しうる。抗体は、マウス、ラット、ヒト、または（キメラ抗体もしくはヒト化抗体を含めて）他の任意の起源でありうる。
【００９２】
抗体のその抗原に対する（例えば抗ＢＤＮＦ抗体のＢＤＮＦに対する）結合親和性は、約５００ｎＭ、約４００ｎＭ、約３００ｎＭ、約２００ｎＭ、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、または約５０ｐＭのいずれかから、約２ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約１５ｐＭ、約２０ｐＭ、または約４０ｐＭのいずれかまででありうる。いくつかの実施形態では、結合親和性は、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、もしくは約５０ｐＭ、または約５０ｐＭ未満のいずれかである。いくつかの実施形態では、結合親和性は、約１００ｎＭ、約５０ｎＭ、約１０ｎＭ、約１ｎＭ、約５００ｐＭ、約１００ｐＭ、または約５０ｐＭのいずれか未満である。なお他の実施形態では、結合親和性は、約２ｐＭ、約５ｐＭ、約１０ｐＭ、約１５ｐＭ、約２０ｐＭ、約４０ｐＭ、または約４０ｐＭ超である。当技術分野で十分に公知のように、結合親和性は、ＫＤ、すなわち解離定数として表現することができ、結合親和性の増加はＫＤの減少に対応する。
【００９３】
抗体のその抗原への結合親和性を決定する一方法は、抗体の単官能性Ｆａｂ断片の結合親和性を測定することによる。単官能性Ｆａｂ断片を得るために、抗体（例えばＩｇＧ）をパパインで切断するか、組換え発現させることができる。抗体のＦａｂ断片の親和性は、表面プラズモン共鳴（ＢＩＡｃｏｒｅ３０００（商標）表面プラズモン共鳴（ＳＰＲ）システム、ＢＩＡｃｏｒｅ，ＩＮＣ、ニュージャージー州ピスカタウェイ）により決定することができる。ＣＭ５チップは、供給業者の説明書にしたがってＮ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣ）およびＮ−ヒドロキシスクシンイミド（ＮＨＳ）を用いて活性化することができる。抗原（ＢＤＮＦなど）は、１０ｍＭ酢酸ナトリウム（ｐＨ５．０）中で希釈し、活性化したチップの上に０．０００５ｍｇ／ｍＬ濃度でインジェクトすることができる。個別のチップチャンネルを通過する可変流動時間を使用して、２つの範囲の抗原密度、すなわち詳細な動力学的研究には２００〜４００応答単位（ＲＵ）およびスクリーニングアッセイには５００〜１０００ＲＵを達成することができる。チップは、エタノールアミンでブロックすることができる。再生の研究から、２００回を超えるインジェクションの間、Ｐｉｅｒｃｅ溶出緩衝液（製品番号２１００４、Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、イリノイ州ロックフォード）および４Ｍ  ＮａＣｌ（２：１）の混合物は、結合したＦａｂを効果的に除去するが、チップ上の抗原の活性を保つことが示された。ＨＢＳ−ＥＰ緩衝液（０．０１Ｍ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．４）、０．１５ＮａＣｌ、３ｍＭ  ＥＤＴＡ、０．００５％Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔ  Ｐ２９）は、ＢＩＡｃｏｒｅアッセイのための運転緩衝液として使用する。精製Ｆａｂ試料の系列希釈（０．１〜１０×推定ＫＤ）は、１００ＸＬ／ｍｉｎで１分間インジェクトし、最長２時間の解離時間を見込む。Ｆａｂタンパク質の濃度は、標準として（アミノ酸分析により決定した）公知の濃度のＦａｂを使用したＥＬＩＳＡおよび／またはＳＤＳ−ＰＡＧＥ電気泳動により決定する。動力学的会合速度（ｋｏｎ）および解離速度（ｋｏｆｆ）（一般に２５℃で測定される）は、ＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎプログラムを用いて１：１ラングミュア結合モデルにデータをあてはめることによって同時に得られる（Ｋａｒｌｓｓｏｎ，Ｒ．、Ｒｏｏｓ，Ｈ．、Ｆａｇｅｒｓｔａｍ，Ｌ．、Ｐｅｔｅｒｓｓｏｎ，Ｂ．（１９９４）Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  ６：９９〜１１０）。平衡解離定数（ＫＤ）の値は、ｋｏｆｆ／ｋｏｎとして計算する。
【００９４】
いくつかの実施形態では、抗体は、エフェクター機能障害を有する。本明細書に使用する「エフェクター機能障害」（用語「免疫学的に不活性」と相互交換可能に使用される）を有する抗体またはポリペプチドは、エフェクター機能をまったく有さないか、または（未修飾または天然に存在する定常領域を有する抗体またはポリペプチドに比べて）低減した活性のエフェクター機能を有する抗体またはポリペプチドを表し、その抗体またはポリペプチドは、例えば、以下の任意の１つまたは複数に活性を有さないか、または低減した活性を有する：ａ）補体介在性溶解をトリガーすること、ｂ）抗体依存性細胞性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）を刺激すること、およびｃ）ミクログリアを活性化すること。エフェクター機能の活性は、約１０％、約２０％、約３０％、約４０％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約９０％、約９５％、約９９％、および約１００％のいずれかだけ低減していることがある。いくつかの実施形態では、抗体は、有意な補体依存性溶解または標的の細胞介在性破壊をトリガーせずにｔｒｋＢ受容体、ＢＤＮＦまたはＮＴ−４／５に結合する。例えば、定常領域上のＦｃ受容体結合部位は、修飾または突然変異させて、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩ、ＦｃγＲＩＩＩ、および／またはＦｃγＲＩＶなどのある種のＦｃ受容体に対する結合親和性を除去または低減することができる。簡潔にするために、実施形態がポリペプチドにもまたあてはまることを理解して、抗体を参照する。ＥＵ付番システム（Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ；第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈｙ、メリーランド州ベセスダ、１９９１）を使用して、（例えばＩｇＧ抗体の）定常領域のどのアミノ酸残基が変更または突然変異されたかを表示することができる。類似の変化を複数の種類の抗体および種にわたり加えることができることを理解して、この付番を特定の種類の抗体（例えばＩｇＧ１）または種（例えばヒト）に使用することができる。
【００９５】
いくつかの実施形態では、抗体は、エフェクター機能障害を有する重鎖定常領域を含む。この重鎖定常領域は、天然に存在する配列を有することがあるか、または変異体である。いくつかの実施形態では、天然に存在する重鎖定常領域のアミノ酸配列は、例えばアミノ酸の置換、挿入、および／または欠失により突然変異させることによって、定常領域のエフェクター機能に障害が起こる。いくつかの実施形態では、重鎖定常領域のＦｃ領域のＮ−グリコシル化もまた変化させることができ、例えば完全または部分的に除去することができ、それによって定常領域のエフェクター機能に障害が起こる。
【００９６】
いくつかの実施形態では、（例えばＩｇＧのＣＨ２ドメイン中の）Ｆｃ領域のＮ−グリコシル化を除去することにより、エフェクター機能に障害が起こる。いくつかの実施形態では、グリコシル化アミノ酸残基または定常領域中のグリコシル化認識配列の部分である隣接残基を突然変異させることにより、Ｆｃ領域のＮ−グリコシル化を除去する。トリペプチド配列であるアスパラギン−Ｘ−セリン（Ｎ−Ｘ−Ｓ）、アスパラギン−Ｘ−スレオニン（Ｎ−Ｘ−Ｔ）、およびアスパラギン−Ｘ−システイン（Ｎ−Ｘ−Ｃ）（式中、Ｘは、プロリン以外の任意のアミノ酸である）は、Ｎ−グリコシル化のためのアスパラギン側鎖に糖質部分が酵素的に付着するための認識配列である。定常領域のトリペプチド配列中の任意のアミノ酸を突然変異させることにより、無グリコシル化ＩｇＧを得る。例えば、ヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３のＮ−グリコシル化部位Ｎ２９７は、Ａ、Ｄ、Ｑ、Ｋ、またはＨに突然変異させることができる。Ｔａｏら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １４３：２５９５〜２６０１（１９８９）およびＪｅｆｆｅｒｉｓら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １６３：５９〜７６（１９９８）を参照されたい。Ａｓｎ−２９７のＧｌｎ、Ｈｉｓ、またはＬｙｓへの置換を有するヒトＩｇＧ１およびＩｇＧ３は、ヒトＦｃγＲＩに結合せず、補体を活性化せず、ＩｇＧ１に対するＣ１ｑ結合能が完全に失われ、ＩｇＧ３に対しては劇的に減少することが報告された。いくつかの実施形態では、トリペプチド配列中のアミノ酸Ｎは、アミノ酸Ａ、Ｃ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｓ、Ｔ、Ｖ、Ｗ、Ｙのいずれか１つに突然変異される。いくつかの実施形態では、トリペプチド配列中のアミノ酸Ｎは、保存的置換残基に突然変異される。いくつかの実施形態では、トリペプチド配列中のアミノ酸Ｘは、プロリンに突然変異される。いくつかの実施形態では、トリペプチド配列中のアミノ酸Ｓは、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｖ、Ｗ、Ｙに突然変異される。いくつかの実施形態では、トリペプチド配列中のアミノ酸Ｔは、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｖ、Ｗ、Ｙに突然変異される。いくつかの実施形態では、トリペプチド配列中のアミノ酸Ｃは、Ａ、Ｄ、Ｅ、Ｆ、Ｇ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｍ、Ｎ、Ｐ、Ｑ、Ｒ、Ｖ、Ｗ、Ｙに突然変異される。いくつかの実施形態では、トリペプチドに続くアミノ酸は、Ｐに突然変異される。いくつかの実施形態では、定常領域でのＮ−グリコシル化は、酵素的に（Ｎ−グリコシダーゼＦ、エンドグリコシダーゼＦ１、エンドグリコシダーゼＦ２、エンドグリコシダーゼＦ３、およびエングリコシダーゼＨ（ｅｎｇｌｙｃｏｓｉｄａｓｅ  Ｈ）などで）除去される。Ｎ−グリコシル化の除去は、Ｎ−グリコシル化に欠損を有する細胞系で抗体を産生することによってもまた達成することができる。Ｗｒｉｇｈｔら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０（７）：３３９３〜４０２（１９９８）。
【００９７】
いくつかの実施形態では、定常領域のＮ−グリコシル化部位に付着したオリゴ糖と相互作用しているアミノ酸残基を突然変異させて、ＦｃγＲＩに対する結合親和性を低減する。例えば、ヒトＩｇＧ３のＦ２４１、Ｖ２６４、Ｄ２６５を突然変異させることができる。Ｌｕｎｄら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １５７：４９６３〜４９６９（１９９６）を参照されたい。
【００９８】
いくつかの実施形態では、ＰＣＴ  ＷＯ９９／５８５７２およびＡｒｍｏｕｒら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４０：５８５〜５９３（２００３）；Ｒｅｄｄｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６４：１９２５〜１９３３（２０００）に記載されているように、エフェクター機能は、ヒトＩｇＧの２３３〜２３６、２９７、および／または３２７〜３３１などの領域を修飾することにより障害を起こす。ＰＣＴ  ＷＯ９９／５８５７２およびＡｒｍｏｕｒらに記載されている抗体は、標的分子に対する結合ドメインに加えて、ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域のすべてまたは一部に実質的に相同なアミノ酸配列を有するエフェクタードメインを含む。これらの抗体は、有意な補体依存性溶解または標的の細胞介在性破壊をトリガーせずに標的分子と結合することができる。いくつかの実施形態では、エフェクタードメインは、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩａ、およびＦｃγＲＩＩＩに対して低減した親和性を有する。いくつかの実施形態では、エフェクタードメインは、ＦｃＲｎおよび／またはＦｃγＲＩＩｂと特異的に結合することができる。これらは、典型的には２つ以上のヒト免疫グロブリン重鎖ＣＨ２ドメインから誘導されたキメラドメインに基づく。このように修飾された抗体は、従来の抗体療法に対する炎症反応および他の有害反応を回避するための慢性抗体療法への使用に特に適する。いくつかの実施形態では、抗体の重鎖定常領域は、以下の任意の突然変異を有するヒト重鎖ＩｇＧ１である：１）Ａ３２７Ａ３３０Ｐ３３１からＧ３２７Ｓ３３０Ｓ３３１；２）Ｅ２３３Ｌ２３４Ｌ２３５Ｇ２３６からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５、Ｇ２３６欠失；３）Ｅ２３３Ｌ２３４Ｌ２３５からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５；４）Ｅ２３３Ｌ２３４Ｌ２３５Ｇ２３６Ａ３２７Ａ３３０Ｐ３３１からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５Ｇ３２７Ｓ３３０Ｓ３３１、Ｇ２３６欠失；５）Ｅ２３３Ｌ２３４Ｌ２３５Ａ３２７Ａ３３０Ｐ３３１からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５Ｇ３２７Ｓ３３０Ｓ３３１；および６）Ｎ２９７からＡ２９７またはＮ以外の任意の他のアミノ酸。いくつかの実施形態では、抗体の重鎖定常領域は、以下の突然変異を有するヒト重鎖ＩｇＧ２である：Ａ３３０Ｐ３３１からＳ３３０Ｓ３３１。いくつかの実施形態では、抗体の重鎖定常領域は、以下の任意の突然変異を有するヒト重鎖ＩｇＧ４である：Ｅ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５Ｇ２３６からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５、Ｇ２３６欠失；Ｅ２３３Ｆ２３４Ｌ２３５からＰ２３３Ｖ２３４Ａ２３５；およびＳ２２８Ｌ２３５からＰ２２８Ｅ２３５。
【００９９】
抗体の定常領域もまた修飾して、補体活性化に障害を起こすことができる。例えば、補体Ｃ１成分の結合後のＩｇＧ抗体の補体活性化は、Ｃ１結合モチーフ（例えばＣ１ｑ結合モチーフ）中の定常領域のアミノ酸残基を突然変異させることにより低減することができる。ヒトＩｇＧ１のＤ２７０、Ｋ３２２、Ｐ３２９、Ｐ３３１のそれぞれに関するＡｌａ突然変異は、抗体がＣ１ｑに結合して補体を活性化する能力を有意に低減することが報告された。マウスＩｇＧ２ｂについては、残基Ｅ３１８、Ｋ３２０、およびＫ３２２がＣ１ｑ結合モチーフを構成する。Ｉｄｕｓｏｇｉｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６４：４１７８〜４１８４（２０００）；Ｄｕｎｃａｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８〜７４０（１９８８）。
【０１００】
マウスＩｇＧ２ｂについて同定されたＣ１ｑ結合モチーフＥ３１８、Ｋ３２０、およびＫ３２２は、他の抗体アイソタイプと共通すると考えられる。Ｄｕｎｃａｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２２：７３８〜７４０（１９８８）。ＩｇＧ２ｂについてのＣ１ｑ結合活性は、３つの特定の残基の任意の１つを、その側鎖に不適切な官能基を有する残基と置き換えることによって撤廃することができる。Ｃ１ｑの結合を撤廃するために、イオン系残基のみをＡｌａに置き換えることは不必要である。Ｃ１ｑの結合を撤廃するために３つの残基のうちの任意の１つの代わりにＧｌｙ、Ｉｌｅ、Ｌｅｕ、もしくはＶａｌなどの他のアルキル置換非イオン系残基、またはＰｈｅ、Ｔｙｒ、Ｔｒｐ、およびＰｒｏなどの芳香族無極性残基を使用することもまた可能である。加えて、Ｃ１ｑの結合活性を撤廃するために、残基３１８ではなく３２０および３２２の代わりにＳｅｒ、Ｔｈｒ、Ｃｙｓ、およびＭｅｔなどの極性非イオン系残基を使用することもまた可能である。
【０１０１】
本発明は、エフェクター機能障害を有する抗体もまた提供し、ここで、その抗体は修飾されたヒンジ領域を有する。ヒトＩｇＧのＦｃ受容体に対するヒトＩｇＧの結合親和性は、ヒンジ領域を修飾することにより調節することができる。Ｃａｎｆｉｅｌｄら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１７３：１４８３〜１４９１（１９９１）；Ｈｅｚａｒｅｈら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５：１２１６１〜１２１６８（２００１）；Ｒｅｄｐａｔｈら、Ｈｕｍａｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ５９：７２０〜７２７（１９９８）。特異的アミノ酸残基は、突然変異または欠失させることができる。修飾されたヒンジ領域は、ＣＨ１ドメインとは異なる抗体クラスまたはサブクラスの抗体から誘導された完全なヒンジ領域を含むことがある。例えば、ＩｇＧクラスの抗体の定常ドメイン（ＣＨ１）は、ＩｇＧ４クラスの抗体のヒンジ領域に付着していることがある。あるいは、新しいヒンジ領域は、天然ヒンジの一部、または繰り返しの中の各ユニットが天然ヒンジ領域から誘導された繰り返しユニットの一部を含むことがある。いくつかの実施形態では、天然ヒンジ領域は、１つもしくは複数のシステイン残基を、アラニンなどの中性残基に変換することによって、または適切に配置された残基をシステイン残基に変換することによって変更される。米国特許第５，６７７，４２５号を参照されたい。そのような改変は、当技術分野で認識されているタンパク質化学および好ましくは遺伝子工学技術を用いて、ならびに本明細書に記載するように実施される。
【０１０２】
ＢＤＮＦ、ＮＴ−４／５、またはｔｒｋＢ受容体に特異的に結合するポリペプチドであって、エフェクター機能障害を有する重鎖定常領域に融合したポリペプチドもまた本明細書に記載する方法に使用することができる。
【０１０３】
当技術分野で公知の、エフェクター機能障害を有する抗体を製造する他の方法もまた用いることができる。
【０１０４】
修飾された定常領域を有する抗体およびポリペプチドは、１つまたは複数のアッセイで試験して、生物学的活性におけるエフェクター機能低減のレベルを出発抗体に比べて評価することができる。例えば、変更されたＦｃ領域または変更されたヒンジ領域を有する抗体またはポリペプチドが補体またはＦｃ受容体（例えばミクログリア上のＦｃ受容体）と結合する能力は、本明細書に開示するアッセイおよび当技術分野で認められている任意のアッセイを使用して評定することができる。ＰＣＴ  ＷＯ９９／５８５７２；Ａｒｍｏｕｒら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４０：５８５〜５９３（２００３）；Ｒｅｄｄｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  １６４：１９２５〜１９３３（２０００）；Ｓｏｎｇら、Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ７０：５１７７〜５１８４（２００２）。
【０１０５】
抗体は、抗ＢＤＮＦ抗体を作製するためのＢＤＮＦおよび抗ＮＴ−４／５抗体を作製するためのＮＴ−４／５などの免疫原を使用することによって作ることができる。抗ｔｒｋＢ抗体を作製するための免疫原の一例は、ｔｒｋＢを高く発現する細胞であり、その細胞は、本明細書に記載するように得ることができる。抗ｔｒｋＢ抗体を作製するための免疫原の別の例は、ｔｒｋＢ受容体の細胞外ドメインまたは細胞外ドメインの部分を含有する可溶性タンパク質（ｔｒｋＢイムノアドヘシンなど）である。
【０１０６】
宿主動物の免疫処置の経路およびスケジュールは、概して、本明細書にさらに記載する抗体の刺激および産生のための確立された技術および従来技術に沿う。ヒトおよびマウス抗体を産生するための一般技術は、当技術分野で公知であり、本明細書に記載されている。
【０１０７】
ヒトを含めた任意の哺乳動物対象またはそれに由来する抗体産生細胞は、ヒトを含めた哺乳動物のハイブリドーマ細胞系の産生のための基礎として役立つように操作することができることが考えられている。典型的には、宿主動物は、本明細書に記載するものを含めたある量の免疫原を腹腔内接種される。
【０１０８】
ハイブリドーマは、Ｋｏｈｌｅｒ，Ｂ．およびＭｉｌｓｔｅｉｎ，Ｃ．（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５〜４９７の、またはＢｕｃｋ，Ｄ．Ｗ．ら（１９８２）Ｉｎ  Ｖｉｔｒｏ、１８：３７７〜３８１により修正された一般体細胞ハイブリダイゼーション技術を用いて、リンパ球および不死化骨髄腫細胞から調製することができる。非限定的にＸ６３−Ａｇ８．６５３およびＳａｌｋ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、Ｃｅｌｌ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  Ｃｅｎｔｅｒ、米国カリフォルニア州サンディエゴからの骨髄腫細胞系を含めた入手できる骨髄腫細胞系を、ハイブリダイゼーションに使用することができる。一般に、その技術は、ポリエチレングリコールなどの融合源を使用して、または当業者に十分に公知の電気的手段により、骨髄腫細胞およびリンパ系細胞を融合させることを伴う。融合後に、融合用培地から細胞を分離し、ヒポキサンチン−アミノプテリン−チミジン（ＨＡＴ）培地などの選択生育培地中で生育させ、ハイブリダイズしてない親細胞を排除する。本明細書に記載する、血清を補充されたか、または補充されていない任意の培地は、モノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマを培養するために使用することができる。細胞融合技術の別の代替として、ＥＢＶで不死化したＢ細胞を使用して、主題発明のモノクローナル抗体を産生させることができる。ハイブリドーマを所望により増大させてサブクローニングし、従来のイムノアッセイ（例えばラジオイムノアッセイ、エンザイムイムノアッセイ、または蛍光イムノアッセイ）の手順により、抗免疫源活性について上清がアッセイされる。
【０１０９】
抗体の起源として使用することができるハイブリドーマは、抗原に特異的なモノクローナル抗体またはその部分を産生する親ハイブリドーマのすべての誘導体、子孫細胞を包含する。
【０１１０】
そのような抗体を産生するハイブリドーマは、公知の手順を用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏまたはｉｎ  ｖｉｖｏで生育させることができる。モノクローナル抗体は、所望により硫酸アンモニウム沈殿、ゲル電気泳動、透析、クロマトグラフィー、および限外濾過などの従来の免疫グロブリン精製手順によって培地または体液から単離することができる。望まれない活性がもしも存在すれば、固相に付着した免疫原からできた吸着剤の上に調製物を流し、その免疫原から所望の抗体を溶出または放出させることによってそれを除去することができる。ヒトもしくは他の種の免疫原（ＢＤＮＦ、ＮＴ−４／５、およびｔｒｋＢ受容体など）、またはヒトもしくは他の種の免疫原の断片、または二官能性薬剤もしくは誘導化剤（例えばマレイミドベンゾイルスルホスクシンイミドエステル（システイン残基を介したコンジュゲーション）、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミド（リシン残基を介する）、グルタルアルデヒド、無水コハク酸、ＳＯＣｌ２、またはＲ１Ｎ＝Ｃ＝ＮＲ（式中、ＲおよびＲ１は異なるアルキル基である））を使用し、免疫処置される種に免疫原性のタンパク質（例えばキーホールリンペットヘモシアニン、血清アルブミン、ウシチログロブリン、または大豆トリプシン阻害剤）にコンジュゲートした標的アミノ酸配列を含有するヒトもしくは他の種の免疫原もしくは断片を用いた宿主動物の免疫処置は、抗体（例えばモノクローナル抗体）集団を得ることができる。抗ｔｒｋＢ抗体を作製するための免疫原の別の例は、ｔｒｋＢを高く発現する細胞であり、その細胞は、組換え手段により、または天然起源から高レベルのｔｒｋＢを発現する細胞を単離もしくは富化することにより得ることができる。これらの細胞は、ヒトのものでも、他の動物起源であってもよく、直接単離された免疫原として使用することもできるし、免疫原性が増加または（ｔｒｋＢの断片の）ｔｒｋＢの発現が増加もしくは富化するように加工することもできる。そのような加工には、非限定的に、例えばホルムアルデヒド、グルタルアルデヒド、エタノール、アセトン、および／または様々な酸などの、細胞またはその断片の安定性または免疫原性を増加するように設計された薬剤を用いて、その細胞またはその断片を処理することが含まれる。さらに、そのような処理の前または後のいずれかで、細胞は、所望の免疫原について、この場合はｔｒｋＢまたはその断片について富化するために、加工することができる。これらの加工ステップには、当技術分野で十分に公知の膜分画技術が含まれることがある。
【０１１１】
所望であれば、関心対象の抗体（モノクローナルまたはポリクローナル）は配列決定することができ、次に、ポリヌクレオチド配列は、発現または伝播のために、ベクターにクローニングすることができる。関心対象の抗体をコードしている配列は、宿主細胞のベクター中に維持することができ、次に、宿主細胞は、将来に使用するために規模拡大および凍結することができる。その代わりとして、ポリヌクレオチド配列は、抗体を「ヒト化」するために、または抗体の親和性もしくは他の性質を改善するために、遺伝子操作に使用することができる。例えば、その抗体をヒトにおける臨床試験および治療に使用するならば、定常領域をヒト定常領域にさらに類似するように操作して、免疫応答を回避することができる。抗体配列を遺伝子操作して、抗原に対してさらに大きな親和性を得ることが理想的なことがある。１つまたは複数のポリヌクレオチド変化を抗体に加えても、その抗原結合能をなお維持することができることは、当業者に明らかであろう。
【０１１２】
モノクローナル抗体をヒト化するためには４つの一般的ステップがある。これらは、（１）出発抗体の軽鎖可変ドメインおよび重鎖可変ドメインのヌクレオチド配列および推定されるアミノ酸配列を決定するステップ、（２）ヒト化抗体を設計するステップ、すなわちヒト化工程の間にどの抗体のフレームワーク領域を使用すべきかを判断するステップ、（３）実際のヒト化方法論／技術、ならびに（４）ヒト化抗体のトランスフェクションおよび発現である。例えば、米国特許第４，８１６，５６７号；第５，８０７，７１５号；第５，８６６，６９２号；第６，３３１，４１５号；第５，５３０，１０１号；第５，６９３，７６１号；第５，６９３，７６２号；第５，５８５，０８９号；第６，１８０，３７０号；および第６，５４８，６４０号を参照されたい。例えば、その抗体をヒトにおける臨床試験および治療に使用するならば、定常領域をヒト定常領域にさらに類似するように操作して、免疫応答を回避することができる。例えば、米国特許第５，９９７，８６７号および第５，８６６，６９２号を参照されたい。
【０１１３】
げっ歯動物Ｖ領域または修飾げっ歯動物Ｖ領域、およびそれらに関連する相補性決定領域（ＣＤＲ）がヒト定常ドメインに融合したものを有するキメラ抗体を含めた、非ヒト免疫グロブリンから誘導された抗原結合部位を含むいくつかの「ヒト化」抗体分子が記載されている。例えば、Ｗｉｎｔｅｒら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４９：２９３〜２９９（１９９１）、Ｌｏｂｕｇｌｉｏら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８６：４２２０〜４２２４（１９８９）、Ｓｈａｗら、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３８：４５３４〜４５３８（１９８７）、およびＢｒｏｗｎら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．４７：３５７７〜３５８３（１９８７）を参照されたい。他の参考文献は、ヒト支持性フレームワーク領域（ＦＲ）にげっ歯動物ＣＤＲをグラフト化してから、適切なヒト抗体定常ドメインと融合させることを記載している。例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３〜３２７（１９８８）、Ｖｅｒｈｏｅｙｅｎら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４〜１５３６（１９８８）、およびＪｏｎｅｓら、Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２〜５２５（１９８６）を参照されたい。別の参考文献は、組換え上張り（ｖｅｎｅｅｒｅｄ）げっ歯動物フレームワーク領域により支持されるげっ歯動物ＣＤＲについて記載している。例えば、欧州特許公報第５１９，５９６号を参照されたい。これらの「ヒト化」分子は、げっ歯動物抗ヒト抗体分子に対する望まれない免疫応答であって、ヒトレシピエントにおけるそれらの部分の治療適用の期間および有効性を制限する免疫応答を最小化するように設計される。抗体定常領域は、それが免疫学的に不活性なように、例えばそれが補体介在性溶解をトリガーせず、抗体依存性細胞性細胞傷害作用（ＡＤＣＣ）を刺激しないように、操作することができる。他の実施形態では、定常領域は、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９９）２９：２６１３〜２６２４；ＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＧＢ９９／０１４４１；および／またはＵＫ特許出願第９８０９９５１．８号に記載されているように修飾される。同様に利用することができる、抗体をヒト化する他の方法は、Ｄａｕｇｈｅｒｔｙら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９：２４７１〜２４７６（１９９１）および米国特許第６，１８０，３７７号；第６，０５４，２９７号；第５，９９７，８６７号；第５，８６６，６９２号；第６，２１０，６７１号；第６，３５０，８６１号；およびＰＣＴ出願ＷＯ０１／２７１６０に開示されている。適切なヒト化またはヒト抗ＢＤＮＦ抗体を設計するための起源として使用することができるポリクローナル抗体（例えば、Ａｂｃａｍ（マサチューセッツ州ケンブリッジ）カタログ番号ａｂ６２００、Ａｂｃａｍカタログ番号ａｂ２７９３２、Ｂｉｏｓｅｎｓｉｓ（オーストラリア、フラッグスタッフヒル）カタログ番号Ｒ−０１７−５００）。
【０１１４】
なお別の代替では、完全ヒト抗体は、特異的ヒト免疫グロブリンタンパク質を発現するように操作された市販のマウスを使用することにより得ることができる。より理想的な（例えば完全ヒト抗体の）免疫応答またはより強い免疫応答を産生するように設計されたトランスジェニック動物もまた、ヒト化またはヒト抗体の作製に使用することができる。そのような技術の例は、Ａｂｇｅｎｉｘ，Ｉｎｃ．（カリフォルニア州フリーモント）からのＸｅｎｏｍｏｕｓｅ（商標）ならびにＭｅｄａｒｅｘ，Ｉｎｃ．（ニュージャージー州プリンストン）からのＨｕＭＡｂ−Ｍｏｕｓｅ（登録商標）およびＴＣ  Ｍｏｕｓｅ（商標）である。
【０１１５】
代替では、抗体は、当技術分野で公知の任意の方法を使用して組換え製造および発現させることができる。別の代替では、抗体は、ファージディスプレイ技術により組換え製造することができる。例えば、米国特許第５，５６５，３３２号、第５，５８０，７１７号、第５，７３３，７４３号、および第６，２６５，１５０号、ならびにＷｉｎｔｅｒら、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２：４３３〜４５５（１９９４）を参照されたい。あるいは、ファージディスプレイ技術（ＭｃＣａｆｆｅｒｔｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３４８：５５２〜５５３（１９９０））を用いて、非免疫処置ドナー由来の免疫グロブリン可変（Ｖ）ドメイン遺伝子レパートリーからヒト抗体および抗体断片をｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生させることができる。この技術によると、抗体Ｖドメイン遺伝子を、Ｍ１３またはｆｄなどの、繊維状バクテリオファージの主または副コートタンパク質遺伝子のいずれかにフレーム内でクローニングして、ファージ粒子表面に機能的抗体断片として表出させる。繊維状粒子がファージゲノムの一本鎖ＤＮＡコピーを含有することから、抗体の機能的性質に基づく選択は、それらの性質を示す抗体をコードしている遺伝子の選択もまた招く。したがって、ファージは、Ｂ細胞の性質の一部を模倣する。ファージディスプレイは、様々な形式で行うことができ、総説については、例えば、Ｊｏｈｎｓｏｎ，Ｋｅｖｉｎ  Ｓ．およびＣｈｉｓｗｅｌｌ，Ｄａｖｉｄ  Ｊ．、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ３、５６４〜５７１（１９９３）を参照されたい。いくつかの起源のＶ遺伝子セグメントは、ファージディスプレイのために使用することができる。Ｃｌａｃｋｓｏｎら（Ｎａｔｕｒｅ  ３５２：６２４〜６２８（１９９１））は、免疫処置されたマウスの脾臓から誘導されたＶ遺伝子の小規模ランダムコンビナトリアルライブラリーから抗オキサゾロン抗体の多様なアレイを単離した。本質的にＭａｒｋら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２２：５８１〜５９７（１９９１）またはＧｒｉｆｆｉｔｈら、ＥＭＢＯ  Ｊ．１２：７２５〜７３４（１９９３）に記載されている技法通りに、免疫処置されていないヒトドナー由来のＶ遺伝子レパートリーを構築することができ、多様なアレイの抗原（自己抗原を含める）に対する抗体を単離することができる。自然免疫応答では、抗体遺伝子は、高い率で突然変異を蓄積する（体細胞超変異）。導入される変化の一部は、高い親和性を付与するものであり、その後の抗原攻撃の間に、高親和性表面免疫グロブリンを表出しているＢ細胞が優先的に複製および分化する。この自然工程は、「鎖シャフリング」として公知の技術を使用することにより模倣することができる。Ｍａｒｋｓら、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌ．１０：７７９〜７８３（１９９２））。この方法では、ファージディスプレイにより得られた「一次」ヒト抗体の親和性は、重鎖および軽鎖Ｖ領域遺伝子を、免疫処置されていないドナーから得られたＶドメイン遺伝子の天然に存在する変異体のレパートリー（レパートリー）に連続的に置き換えることによって改善することができる。この技術は、ｐＭ〜ｎＭ範囲の親和性を有する抗体および抗体断片を産生させる。非常��大規模なファージ抗体レパートリー（「究極の（ｍｏｔｈｅｒ−ｏｆ−ａｌｌ）ライブラリー」としても公知である）を作るための戦略は、Ｗａｔｅｒｈｏｕｓｅら、Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２１：２２６５〜２２６６（１９９３）に記載されている。遺伝子シャフリングを用いて、げっ歯動物抗体からヒト抗体を誘導することもまたでき、ここで、そのヒト抗体は、出発げっ歯動物抗体と類似の親和性および特異性を有する。「エピトープインプリンティング」とも呼ばれるこの方法によると、ファージディスプレイ技術により得られるげっ歯動物抗体の重鎖または軽鎖Ｖドメイン遺伝子は、ヒトＶドメイン遺伝子のレパートリーと置き換えられ、げっ歯動物−ヒトキメラを創出する。抗原上での選択は、機能的抗原結合部位を復旧することができるヒト可変領域の単離を招く、すなわちエピトープがパートナーの選択を支配する（インプリントする）。残りのげっ歯動物Ｖドメインを置き換えるためにこの工程を繰り返すと、ヒト抗体が得られる（１９９３年４月１日に公開されたＰＣＴ公開ＷＯ９３／０６２１３参照）。ＣＤＲグラフト化によるげっ歯動物抗体の伝統的ヒト化とは異なり、この技術は、げっ歯動物起源のフレームワークもＣＤＲ残基も有さない完全なヒト抗体を提供する。上記論考はヒト化抗体に関するが、論じた一般原理は、例えばイヌ、ネコ、霊長類、ウマ、およびウシに使用するための抗体をあつらえるために適用できることは明らかである。
【０１１６】
抗体は、少なくとも２つの異なる抗原に結合特異性を有するモノクローナル抗体である二重特異性抗体のことがあり、それは、本明細書に開示する抗体を使用して調製することができる。二重特異性抗体を作るための方法は、当技術分野で公知である（例えば、Ｓｕｒｅｓｈら、１９８６、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １２１：２１０参照）。伝統的に、二重特異性抗体の組換え産生は、２つの免疫グロブリン重鎖−軽鎖対と、異なる特異性を有する２つの重鎖との同時発現に基づいた（ＭｉｌｌｓｔｅｉｎおよびＣｕｅｌｌｏ、１９８３、Ｎａｔｕｒｅ  ３０５、５３７〜５３９）。
【０１１７】
二重特異性抗体を作る一アプローチによると、所望の結合特異性（抗体−抗原組合せ部位）を有する抗体可変ドメインは、免疫グロブリン定常ドメイン配列に融合される。融合は、好ましくは、ヒンジ、ＣＨ２、およびＣＨ３領域の少なくとも一部を含む免疫グロブリン重鎖定常ドメインとのものである。軽鎖の結合に必要な部位を含有する第１重鎖定常領域（ＣＨ１）が融合体の少なくとも１つに存在することが好ましい。免疫グロブリン重鎖融合体と、所望により免疫グロブリン軽鎖とをコードしているＤＮＡは、別々の発現ベクターに挿入され、適切な宿主生物に共トランスフェクトされる。これは、構築物に使用される等しくない比の３つのポリペプチド鎖が最適の収率をもたらす実施形態において、この３つのポリペプチド断片の相互比率の調整に大きな柔軟性を与える。しかし、等しい比の少なくとも２つのポリペプチド鎖の発現が高い収率を招く場合またはその比が特に重要ではない場合には、２つまたは３つすべてのポリペプチド鎖に関するコード配列を、１つの発現ベクターに挿入することが可能である。
【０１１８】
一アプローチでは、二重特異性抗体は、一方のアームにおける第１の結合特異性を有するハイブリッド免疫グロブリン重鎖と、もう一方のアームにおけるハイブリッド免疫グロブリン重鎖−軽鎖対（第２の結合特異性を与える）とから構成される。二重特異性分子の半分だけに免疫グロブリン軽鎖を有するこの非対称構造は、望まれない免疫グロブリン鎖の組合せからの所望の二重特異性化合物を分離することを容易にする。このアプローチは、１９９４年３月３日に公開されたＰＣＴ公開ＷＯ９４／０４６９０に記載されている。
【０１１９】
２つの共有結合した抗体を含むヘテロコンジュゲート抗体もまた、本発明の範囲内に属する。そのような抗体は、望まれない細胞に免疫系細胞を標的化するために（米国特許第４，６７６，９８０号）、およびＨＩＶ感染の治療のために（ＰＣＴ公開ＷＯ９１／００３６０およびＷＯ９２／２００３７３、ならびにＥＰ０３０８９）使用されてきた。ヘテロコンジュゲート抗体は、任意の好都合な架橋法を使用して作ることができる。適切な架橋剤および技術は、当技術分野で十分に公知であり、米国特許第４，６７６，９８０号に記載されている。
【０１２０】
抗体は、宿主動物から作った抗体を最初に単離し、遺伝子配列を得、その遺伝子配列を使用して宿主細胞（例えばＣＨＯ細胞）に抗体を組換え発現させることにより、組換え的に作ることができる。使用することができる別の方法は、植物（例えばタバコ）、トランスジェニック乳、または他の生物に抗体配列を発現させることである。植物または乳に抗体を組換え発現させる方法が開示されている。例えば、Ｐｅｅｔｅｒｓら（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ  １９：２７５６；Ｌｏｎｂｅｒｇ，Ｎ．およびＤ．Ｈｕｓｚａｒ（１９９５）Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．ｌｍｍｕｎｏｌ  １３：６５；ならびにＰｏｌｌｏｃｋら（１９９９）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２３１：１４７を参照されたい。例えばヒト化抗体、単鎖抗体などの抗体誘導体を作る方法は、当技術分野で公知である。
【０１２１】
キメラまたはハイブリッド抗体は、架橋剤を伴う方法を含めた合成タンパク質化学の公知の方法を用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏで調製することもまたできる。例えば、ジスルフィド交換反応を用いて、またはチオエーテル結合を形成させることによって、免疫毒素を構築することができる。この目的に適した試薬の例には、イミノチオレートおよびメチル−４−メルカプトブチルイミデート（ｍｅｔｈｙｌ−４−ｍｅｒｃａｐｔｏｂｕｔｙｒｉｍｉｄａｔｅ）が含まれる。
【０１２２】
Ｉｌｉａｄｅｓら、１９９７、ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ、４０９：４３７〜４４１に記載されているような単鎖Ｆｖ断片もまた産生させることができる。様々なリンカーを使用したそのような単鎖断片の結合形成は、Ｋｏｒｔｔら、１９９７、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、１０：４２３〜４３３に記載されている。抗体の組換え産生および操作のための様々な技術は、当技術分野で十分に公知である。
【０１２３】
抗体は、１９９９年１１月１８日に公開されたＰＣＴ公開ＷＯ９９／５８５７２に記載されているように修飾することができる。これらの抗体は、標的分子に対する結合ドメインに加えて、ヒト免疫グロブリン重鎖の定常ドメインのすべてまたは一部に実質的に相同なアミノ酸配列を有するエフェクタードメインを含む。これらの抗体は、標的の有意な補体依存性溶解も細胞介在性破壊もトリガーせずに、標的分子と結合することができる。好ましくは、エフェクタードメインは、ＦｃＲｎおよび／またはＦｃγＲＩＩｂと特異的に結合することができる。これらは、典型的には２つ以上のヒト免疫グロブリン重鎖ＣＨ２ドメインから誘導されたキメラドメインに基づく。このように修飾された抗体は、従来の抗体療法に対する炎症および他の有害反応を回避するための慢性抗体療法に使用するために好ましい。
【０１２４】
宿主動物の免疫処置または組換えのいずれかで作られた抗体は、本明細書に記載する任意の１つまたは複数のｔｒｋＢアンタゴニスト活性を示すはずである。
【０１２５】
イムノアッセイおよび蛍光標識細胞選別（ＦＡＣＳ）などのフローサイトメトリー選別技術を使用して、抗原（ＢＤＮＦ、ＮＴ−４／５、およびｔｒｋＢ受容体など）に特異的な抗体を単離することもまたできる。
【０１２６】
抗体は、多数の異なる担体に結合させることができる。担体は、活性および／または不活性でありうる。十分に公知の担体の例には、ポリプロピレン、ポリスチレン、ポリエチレン、デキストラン、ナイロン、アミラーゼ、ガラス、天然および修飾セルロース、ポリアクリルアミド、アガロース、および磁鉄鉱が含まれる。担体の本質は、本発明の目的のために可溶性または不溶性のいずれかでありうる。当業者は、抗体を結合させるための他の適切な担体を知っているものであるし、日常的な実験を用いてそれを確かめることができるものである。
【０１２７】
アンタゴニスト抗体をコードしているＤＮＡは、当技術分野で公知のように配列決定することができる。一般に、モノクローナル抗体は、容易に単離され、従来の手順を用いて（例えば、モノクローナル抗体の重鎖および軽鎖をコードしている遺伝子に特異的に結合することができるオリゴヌクレオチドプローブを使用することによって）配列決定される。ハイブリドーマ細胞は、そのようなｃＤＮＡの好ましい入手源として役立つ。いったん単離したＤＮＡは、発現ベクター（ＰＣＴ公開ＷＯ８７／０４４６２に開示されている発現ベクターなど）に配置することができ、その発現ベクターは、次に大腸菌細胞、サルＣＯＳ細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、または別の方法では免疫グロブリンタンパク質を産生しない骨髄腫細胞などの宿主細胞にトランスフェクトされ、組換え宿主細胞にモノクローナル抗体の合成を得る。例えば、ＰＣＴ公開ＷＯ８７／０４４６２を参照されたい。ＤＮＡは、例えば相同マウス配列の代わりにヒト重鎖および軽鎖定常ドメインについてのコード配列に置換することによって（Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．８１：６８５１（１９８４））、または非免疫グロブリンポリペプチドについてのコード配列のすべてもしくは一部を、免疫グロブリンコード配列に共有結合形成させることによってもまた修飾することができる。そのようにして、抗原の結合特異性を有する「キメラ」または「ハイブリッド」抗体を調製する。アンタゴニスト抗体（その抗原結合断片など）をコードしているＤＮＡもまた、所望の細胞に抗体を送達および発現させるために使用することができる。ＤＮＡ送達技術は、当技術分野で公知である。
【０１２８】
ＴｒｋＢイムノアドヘシン
いくつかの実施形態では、ｔｒｋＢアンタゴニストは、少なくとも１つのｔｒｋＢイムノアドヘシンを含む。本明細書に使用されるＴｒｋＢイムノアドヘシンは、ｔｒｋＢ受容体の細胞外ドメインと、免疫グロブリン配列とを含む可溶性キメラ分子を表し、そのキメラ分子は、ｔｒｋＢ受容体の結合特異性を保持（ｔｒｋＢ受容体の結合特異性を実質的に保持）し、ＢＤＮＦおよび／またはＮＴ−４／５に結合することができる（例えばＲ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、ミネソタ州ミネアポリス、カタログ番号６８８−ＴＫ参照）。
【０１２９】
ＴｒｋＢイムノアドヘシンは、当技術分野で公知であり、ｔｒｋＢ受容体へのＢＤＮＦおよびＮＴ−４／５の結合をブロックすることが見出された。例えば、米国特許第６，１５３，１８９号参照。一実施形態では、ｔｒｋＢイムノアドヘシンは、ＢＤＮＦおよび／またはＮＴ−４／５に結合することができるｔｒｋＢ細胞外ドメイン由来のｔｒｋＢ受容体アミノ酸配列（またはその部分）（いくつかの実施形態では、ｔｒｋＢ受容体の結合特異性を実質的に保持するアミノ酸配列）と、免疫グロブリン配列との融合体を含む。いくつかの実施形態では、ｔｒｋＢ受容体はヒトｔｒｋＢ受容体配列であり、この融合体は、免疫グロブリン定常ドメイン配列を有する。他の実施形態では、免疫グロブリン定常ドメイン配列は、免疫グロブリン重鎖定常ドメイン配列である。他の実施形態では、（例えば、ジスルフィド結合による共有結合的連結による）２つのｔｒｋＢ受容体−免疫グロブリン重鎖融合体の関連は、ホモ二量体型免疫グロブリン様構造を生じる。ジスルフィド結合した二量体中のｔｒｋＢ受容体−免疫グロブリンキメラの一方または両方に、免疫グロブリン軽鎖をさらに関連させて、ホモ三量体またはホモ四量体構造を得ることができる。適切なｔｒｋＢイムノアドヘシンの例には、米国特許第６，１５３，１８９号に記載されているものが含まれる。
【０１３０】
ｔｒｋＢアンタゴニストの同定
ＴｒｋＢアンタゴニストは、当技術分野で公知の方法を用いて同定または特徴付けすることができ、ここで、ｔｒｋＢの生物学的活性の低減、回復、または中和が検出および／または測定される。例えば、米国特許第５，７６６，８６３号および第５，８９１，６５０号、ならびに実施例１に記載されているキナーゼ受容体活性化（ＫＩＲＡ）アッセイを用いて、ｔｒｋＢアンタゴニストを同定することができる。このＥＬＩＳＡ型アッセイは、例えばｔｒｋＢ受容体である受容体型タンパク質チロシンキナーゼ（以後「ｒＰＴＫ」）のキナーゼドメインの自己リン酸化を測定することによるキナーゼ活性化の定性または定量測定に、ならびに選択されたｒＰＴＫ、例えばｔｒｋＢの潜在的アンタゴニストの同定および特徴付けに適する。アッセイの第１の段階は、キナーゼ受容体、例えばｔｒｋＢ受容体のキナーゼドメインのリン酸化を伴い、ここで、その受容体は、真核細胞の細胞膜に存在する。受容体は、内因性受容体であってもよいし、受容体をコードしている核酸すなわち受容体構築物を細胞に形質転換してもよい。典型的には、第１の固相（例えば第１のアッセイプレートのウェル）にそのような細胞（通常は哺乳動物細胞系）の実質的に均一な集団を被覆することにより、細胞を固相に接着させる。多くの場合、細胞は接着性であり、その結果、第１の固相に自然に接着する。「受容体構築物」が使用されるならば、それは、通常はキナーゼ受容体とｆｌａｇポリペプチドとの融合体を含む。ｆｌａｇポリペプチドは、アッセイのＥＬＩＳＡ部分で、捕捉剤により、多くの場合、捕捉抗体により認識される。次に、接着した細胞を有するウェルに候補ＢＤＮＦ抗体または他のｔｒｋＢアンタゴニストなどの分析物をＢＤＮＦと共に（抗ＮＴ−４／５抗体を同定するためならばＮＴ−４／５と共に）加えることにより、チロシンキナーゼ受容体（ｔｒｋＢ受容体）をＢＤＮＦおよび分析物に曝露（または接触）させる。このアッセイは、ｔｒｋＢの活性化を阻害する抗体（または他のｔｒｋＢアンタゴニスト）の同定を、そのリガンドであるＢＤＮＦにより可能にする。ＢＤＮＦおよび分析物に曝露後に、接着細胞は、溶解緩衝液（可溶化洗剤を中に有する）および穏やかな撹拌を使用して可溶化することによって、アッセイのＥＬＩＳＡ部分に直接供することができる細胞溶解物を放出し、その細胞溶解物は、濃縮する必要も、清澄化する必要もない。
【０１３１】
このように調製された細胞溶解物は、次に、アッセイのＥＬＩＳＡ段階に供する準備ができている。ＥＬＩＳＡ段階の第１ステップとして、第２の固相（通常はＥＬＩＳＡマイクロタイタープレートのウェル）に、チロシンキナーゼ受容体または受容体構築物の場合にはｆｌａｇポリペプチドに特異的に結合する捕捉剤（多くの場合、捕捉抗体）を被覆する。第２の固相の被覆は、捕捉剤が第２の固相に接着するように実施する。捕捉剤は、概してモノクローナル抗体であるが、本明細書の実施例に記載するように、ポリクローナル抗体もまた使用することができる。得られた細胞溶解物は、次に接着性捕捉剤に曝露するか、またはそれと接触させることにより、その受容体または受容体構築物が第２の固相に接着する（または捕捉される）ようにする。次に、未結合の細胞溶解物を除去し、捕捉された受容体または受容体構築物を残す洗浄ステップを実施する。次に、接着または捕捉された受容体または受容体構築物は、チロシンキナーゼ受容体におけるリン酸化されたチロシン残基を同定する抗ホスホチロシン抗体に曝露するか、またはそれと接触させる。一実施形態では、抗ホスホチロシン抗体は、非放射性呈色試薬の色変化を触媒する酵素に（直接的または間接的に）コンジュゲートされる。したがって、受容体のリン酸化は、試薬のその後の色変化により測定することができる。酵素は、抗ホスホチロシン抗体に直接結合することもできるし、コンジュゲート分子（例えばビオチン）が抗ホスホチロシン抗体にコンジュゲートすることができ、その酵素は、そのコンジュゲート分子を介して続いて抗ホスホチロシン抗体に結合することができる。最終的に、捕捉された受容体または受容体構築物への抗ホスホチロシン抗体の結合は、例えば呈色試薬の色変化により測定する。
【０１３２】
ｔｒｋＢアンタゴニストは、候補薬剤をＢＤＮＦまたはＮＴ−４／５と共にインキュベートし、以下の特徴の任意の１つまたは複数をモニターすることによってもまた同定することができる。（ａ）ＢＤＮＦおよび／またはＮＴ−４／５に結合する、（ｂ）ｔｒｋＢ受容体に結合する、（ｃ）ｔｒｋＢの生物学的活性またはｔｒｋＢシグナル伝達機能により仲介される下流の経路を阻害する、（ｄ）ｔｒｋＢ受容体の活性化（ｔｒｋＢ受容体の二量体化および／または自己リン酸化を含める）を阻害、ブロック、または減少させる、（ｅ）循環中のＢＤＮＦおよび／またはＮＴ−４／５のクリアランスを増加させる、（ｆ）肥満の任意の局面を治療または予防する、ならびに（ｇ）ＢＤＮＦおよび／またはＮＴ−４／５の合成、産生、または放出を阻害（低減）する。いくつかの実施形態では、ｔｒｋＢアンタゴニストは、候補薬剤をＢＤＮＦまたはＮＴ−４／５と共にインキュベートし、結合およびそれに付随するｔｒｋＢの生物学的活性の低減または中和をモニターすることによって同定される。結合アッセイは、精製ＢＤＮＦもしくはＮＴ−４／５ポリペプチドを用いて、またはＢＤＮＦもしくはＮＴ−４／５ポリペプチドを自然に発現しているか、もしくは発現するようにトランスフェクトされた細胞を用いて行うことができる。一実施形態では、結合アッセイは競合結合アッセイであり、候補抗体がＢＤＮＦまたはＮＴ−４／５の結合を公知のｔｒｋＢアンタゴニストと競合する能力が評価される。アッセイは、ＥＬＩＳＡ形式を含めた様々な形式で行うことができる。他の実施形態では、ｔｒｋＢアンタゴニストは、候補薬剤をＢＤＮＦまたはＮＴ−４／５と共にインキュベートし、それに付随する、ｔｒｋＢ受容体の二量体化および／または自己リン酸化の阻害をモニターすることによって同定される。
【０１３３】
最初の同定に続いて、候補ｔｒｋＢアンタゴニストの活性は、標的の生物学的活性を試験することが公知であるバイオアッセイによりさらに確認および洗練することができる。あるいは、バイオアッセイは、候補を直接スクリーニングするために用いることができる。例えば、ＢＤＮＦおよびＮＴ−４／５は、応答細胞における形態的に認識可能ないくつかの変化を促進する。したがって、ｔｒｋＢの生物学的活性の阻害についてのアッセイは、ＢＤＮＦまたはＮＴ−４／５、ならびに候補抗ＢＤＮＦ抗体、候補抗ＮＴ−４／５抗体、および候補ｔｒｋＢアンタゴニストなどの分析物と共にＢＤＮＦおよび／またはＮＴ−４／５応答細胞を培養することを伴う。適切な時間の後で、細胞応答（細胞分化、神経突起の成長、または細胞生存）をアッセイする。例えば、候補アンタゴニストは、完全長ｔｒｋＢをトランスフェクトされたＰ１２細胞を使用したＰ１２神経突起成長アッセイで試験することができる。Ｊｉａｎら、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌ．８：３６５〜７０、１９９６。
【０１３４】
候補ｔｒｋＢアンタゴニストがｔｒｋＢの生物学的活性をブロックまたは中和する能力は、Ｂｕｃｈｍａｎら、Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  １１８：９８９〜１００１、１９９３に記載されているような胚性マウス下神経節神経細胞の生存バイオアッセイにおいて、候補薬剤がＢＤＮＦまたはＮＴ−４／５介在性生存を阻害する能力をモニターすることによってもまた評定することができる。
【０１３５】
Ｖ．キット
本発明は、本方法に使用するためのキットもまた提供する。本発明のキットは、精製されたｔｒｋＢアンタゴニスト（例えば、抗ＢＤＮＦアンタゴニスト抗体、抗ＮＴ−４／５アンタゴニスト抗体、および抗ｔｒｋＢアンタゴニスト抗体）を含む１つまたは複数の容器および本明細書に記載する本発明の任意の方法にしたがって使用するための説明書を包含する。概して、これらの説明書は、本明細書に記載する任意の方法により、肥満などの疾患を治療するためのｔｒｋＢアンタゴニストの投与の説明を含む。このキットは、治療に適した個体を、その個体が疾患および疾患の段階を有するかどうかを同定することに基づいて選択する説明をさらに含むことがある。
【０１３６】
ｔｒｋＢアンタゴニストの使用に関係する説明書は、概して意図される治療のための投与量、投薬スケジュール、および投与経路に関する情報を包含する。容器は、単位用量、バルクパッケージ（例えば多回量パッケージ）、または亜単位用量のことがある。本発明のキットに供給される説明書は、典型的にはラベルまたは添付文書（例えばキットに包含される紙片）に書かれた説明書であるが、機械可読の説明書（例えば、磁気または光保存ディスクに収容される説明書）もまた許容できる。
【０１３７】
ラベルまたは添付文書は、組成物が、本明細書に記載する疾患（肥満など）を治療するために使用されることを表示する。説明書は、本明細書に記載する任意の方法を実施するために提供することができる。
【０１３８】
本発明のキットは、適切なパッケージの中にある。適切なパッケージには、非限定的に、バイアル、ボトル、広口瓶、フレキシブルパッケージ（例えば密封マイラーまたはポリ袋）などが含まれる。吸入器、経鼻投与装置（例えばアトマイザー）、またはミニポンプなどの点滴装置などの特定の装置と組み合わせて使用するためのパッケージもまた考えられている。キットは、滅菌アクセスポートを有することがある（例えば、容器は、静脈用溶液バッグまたは皮下注射針で穿刺することができるストッパーを有するバイアルのことがある）。容器もまた、滅菌アクセスポートを有することがある（例えば、容器は、静脈用溶液バッグまたは皮下注射針で穿刺することができるストッパーを有するバイアルのことがある）。組成物中の少なくとも１つの活性薬剤はｔｒｋＢアンタゴニストである。容器は、第２の薬学的に活性な薬剤をさらに含むことがある。
【０１３９】
キットは、緩衝液および解釈上の情報などの追加の構成要素を場合により提供することがある。通常は、キットは、容器と、容器の上もしくは容器に関連したラベルまたは添付文書とを含む。
【０１４０】
以下の実施例は、非限定的に本発明を例示するために提供される。
【実施例】
【０１４１】
（実施例１）
抗ＢＤＮＦ抗体の作製およびスクリーニング
モノクローナル抗ＢＤＮＭアンタゴニスト抗体を作製するための免疫処置：Ｂａｌｂ／Ｃマウス１匹に、抗原としてヒトＢＤＮＦ２５ｕｇを定期的なスケジュールで５回注射した。ヒトＢＤＮＦは、Ｐｒｅｐｒｏ  Ｔｅｃｈ  Ｉｎｃ．（ニュージャージー州ロッキーヒル）から得た。最初の４回の注射については、ヒトＢＤＮＦをＲＩＢＩアジュバントシステムおよびミョウバンと混合することによって抗原を調製した。首筋、足底、およびＩＰにおよそ３日毎に１１日間のクールで注射することにより、合計２５ｕｇの抗原を与えた。１３日目にマウスを安楽死させ、脾臓を取り出した。リンパ球を８６５３細胞と融合させ、ハイブリドーマクローンを作った。クローンを生育させ、次に、ヒトＢＤＮＦ  ＥＬＩＳＡを用いたＥＬＩＳＡスクリーニングにより、抗ＢＤＮＦ陽性クローンとして選択した。
【０１４２】
抗ＢＤＮＦ抗体のＥＬＩＳＡスクリーニング：クローンがヒトＢＤＮＦと結合する能力について、生育中のハイブリドーマクローンからの上清をスクリーニングした。アッセイは、０．５ｕｇ／ｍｌのヒトＢＤＮＦ１００ｕｌを一晩被覆した９６ウェルプレートを用いて行った。各ステップの間に、０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０を含有するＰＢＳを用いて、過剰の試薬をウェルから洗浄する。次に、０．５％ＢＳＡを含有するリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）でプレートをブロックした。上清をプレートに添加し、室温で２時間インキュベートした。ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）とコンジュゲートしたヤギ抗マウスＦｃを添加して、ヒトＢＤＮＦに結合したマウス抗体に結合させた。次に、テトラメチルベンジジンをＨＲＰについての基質として添加し、上清に存在するマウス抗体の量を検出した。反応を停止させ、４５０ｎｍで吸光度を読み取ることにより抗体の相対量を定量した。１つの抗体１Ｂ５がヒトＢＤＮＦに結合すると同定され、ＫＩＲＡアッセイでのアンタゴニスト活性についてそれをさらに試験した。
【０１４３】
ヒトＴｒｋＢブロッキングＫＩＲＡアッセイ：このアッセイは、ヒトｔｒｋＢに関する受容体型チロシンキナーゼ活性化をブロックする能力について、ＥＬＩＳＡで陽性と見出された抗体をスクリーニングするために使用した。Ｓａｄｉｃｋら、１９９７、Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｃｅｌｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ、２３４（２）：３５４〜６１参照。ｇＤタグ付きヒトｔｒｋＢをトランスフェクトされた安定細胞系を利用して、ハイブリドーマクローンからの精製マウス抗体が、ＢＤＮＦ存在下で細胞表面のｔｒｋＢ受容体の活性化をブロックする能力について、それらの抗体を試験した。効率的なブロッキング抗体は、ｔｒｋＢのチロシンリン酸化低減を示し、用量依存的に行うことができる。天然リガンドは、ｔｒｋＢ受容体のキナーゼドメインの自己リン酸化を誘導した。２０％ハイブリドーマ上清の形の所定の濃度のＢＤＮＦおよび抗体の混合物（すなわち、この混合物は２０％（ｖｏｌ／ｖｏｌ）ハイブリドーマ上清を含有する）に細胞を曝露した後で、それらの細胞を溶解させ、ＥＬＩＳＡを行ってｔｒｋＢ受容体のリン酸化を検出した。このアッセイを使用して、抗体１Ｂ５は、ＢＤＮＦによるｔｒｋＢ活性化をブロックすることが示された（図１）。図１に、１Ｂ５抗ＢＤＮＦ抗体の存在下または不在下でのｔｒｋＢチロシンリン酸化の用量反応をＢＤＮＦに対して示す。このデータは、ＢＤＮＦにより誘導されるｔｒｋＢチロシンリン酸化が、１Ｂ５抗体上清の存在により有意に低減したことを示した。
【０１４４】
Ｅ１８節状神経細胞生存アッセイ：Ｅ１８の胚から得た下神経節神経細胞はＢＤＮＦにより支援されていたため、飽和濃度の神経栄養因子で、生存率は培養４８時間まで１００％に近かった（すなわち２００〜２５０神経細胞）。ＢＤＮＦの不在下では、約４０〜５０％の神経細胞（すなわち９０〜１００神経細胞）が４８時間まで生存した。したがって、Ｅ１８結節性神経細胞の生存数は、抗ＢＤＮＦ抗体のブロック活性を評価するための高感度アッセイであり、すなわち、ブロッキング抗体は、一定の飽和レベルのＢＤＮＦの存在下でＥ１８結節性神経細胞の生存数を低減するであろう。
【０１４５】
定時交配させた妊娠ＣＤ−１雌性マウスをＣＯ２吸入により安楽死させた。子宮角を取り出し、胚期Ｅ１８の胚を抽出した。下神経節を解剖し、次にトリプシン処理し、機械的に解離させ、ポリ−Ｌ−オルニチンおよびラミニンで被覆した９６ウェルプレートに入れた所定の無血清培地中で、ウェル１個あたり２００〜３００細胞の密度で平板培養した。抗ＢＤＮＦ抗体のブロック活性は、３回の繰り返しで一定レベルのＢＤＮＦ（０．５ｎｇ／ｍＬ）の存在下で用量反応的に評価した。培養４８時間後に、Ｂｉｏｍｅｋ  ＦＸ液体取扱いワークステーション（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）で行った自動免疫細胞化学プロトコールに細胞を供した。プロトコールには、固定（４％ホルムアルデヒド、５％スクロース、ＰＢＳ）、透過処理（ＰＢＳ中の０．３％トリトンＸ−１００）、非特異的結合部位のブロッキング（５％正常ヤギ血清、０．１％ＢＳＡ、ＰＢＳ）、ならびに神経細胞を検出するための一次および二次抗体を用いた連続インキュベーションが含まれた。タンパク質遺伝子産物９．５（ＰＧＰ９．５、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ）に対するウサギポリクローナル抗体は、樹立された神経細胞表現型マーカーであったが、その抗体を一次抗体として使用した。Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８ヤギ抗ウサギ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）は、培養物に存在するすべての細胞の核を標識するために、核色素Ｈｏｅｃｈｓｔ３３３４２（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）と一緒に二次試薬として使用した。画像取得および画像解析は、Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ−１／ＧｅｎＩＩ  Ｉｍａｇｅｒ（Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｉｍａｇｉｎｇ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）で行った。画像は、Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４８８およびＨｏｅｃｈｓｔ３３３４２に関する２波長で自動的に取得し、核染色がすべてのウェルに存在することから、画像装置の画像に基づくオートフォーカスシステムに関する基準点として核染色を使用した。適切な目標およびウェル毎に画像化する部位の数は、各ウェルの表面全体に及ぶように選択した。自動化画像解析は、抗ＰＧＰ９．５抗体を用いた神経細胞の特異的染色に基づいて、培養４８時間後に各ウェルに存在する神経細胞数を計数するために設定した。画像の慎重な閾値設定ならびに形態および蛍光強度に基づく選択性フィルターの適用は、ウェル毎に神経細胞の正確な計数を招いた。
【０１４６】
図２Ａは、ＢＤＮＦ単独に対する節状神経細胞の生存用量反応のグラフである。データは、１．０〜０．５ｎｇ／ｍｌのＢＤＮＦで最大の神経細胞の生存数が得られたことを示した。図２Ｂは、飽和濃度（０．５ｎｇ／ｍＬ）のＢＤＮＦおよび漸増する濃度の１Ｂ５抗ＢＤＮＦ抗体の存在下での節状神経細胞の生存数のグラフである。このデータは、極めて高濃度の１Ｂ５抗体で、節状神経細胞の生存レベルは、ＢＤＮＦ不在下での生存レベル（４８時間で生存している、ほぼ１００神経細胞）に近づいたことを示した。この条件における１Ｂ５抗体の５０％有効ブロック濃度（ＥＣ５０）は、約０．４〜１ｎＭであった。
【０１４７】
（実施例２）
抗ＢＤＮＦ抗体（１Ｂ５）の末梢注射は高脂肪食誘導性肥満（ＤＩＯ）マウスにおける体重および摂食を低減した
被験動物：Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙからの、食事誘導性肥満（ＤＩＯ）を有するＣ５７ＢＬ／６雄性マウスをこの実験に使用した。Ｅｌ−Ｈａｓｃｈｉｍｉ、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０５：１８２７〜１８３２（２０００）；Ｓｔｅｐｐａｎ、Ｎａｔｕｒｅ  ４０９：３０７〜３１２（２００１）。雄性Ｃ５７ＢＬ／６Ｊマウス２４匹を４週齢で離乳させた。離乳の直後から、実験全体にわたりマウスに約６０％高脂肪食（Ｄ１２３３１ｉ、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔ）を与えた。１３週齢で２８〜４０ｇの範囲の体重のＤＩＯマウスをこの実験に使用した。実験全体にわたり温度（１９．５〜２４．５℃）および相対湿度（４５〜６５％）の制御室の中で、１２時間の明暗サイクルで、濾過した水道水および６０％高脂肪食（Ｄ１２３３１ｉ、Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔ）を自由摂取させてこれらのマウスを飼育した。動物施設から受け取ると、フィルター付きキャップで覆ったケージ１台にこれらのマウスを１匹ずつ飼育し、少なくとも５日の順応期間を観察した。
【０１４８】
抗ＢＤＮＦ  １Ｂ５およびＮＴ４／５の投与：マウスを体重の等しい３群に分けた（各群ｎ＝８）。１日目に各群にそれぞれビヒクル、５ｍｇ／ｋｇのヒトＮＴ−４／５、または５ｍｇ／ｋｇの抗ＢＤＮＦ抗体１Ｂ５のいずれかの皮下投与を受けさせた。（処置前に測定した）体重および摂食を１日目および２日目に測定した。
【０１４９】
図３Ａおよび図３Ｂに示すように、ＮＴ−４／５および抗ＢＤＮＦは共に体重（図３Ａ）および摂食（図３Ｂ）を有意に低減した。二元配置ＡＮＯＶＡおよびＢｏｎｆｅｒｒｏｎｉ事後検定を統計解析に用いた。「＊＊」は、ビヒクル対照群に比べて処置群に関してＰ＜０．０１を示し「＊＊＊」はＰ＜０．００１を示す。
【０１５０】
（実施例３）
アンタゴニストｔｒｋＢ−Ｆｃ融合タンパク質の末梢投与はカニクイザルにおける体重および摂食を低減した
この実験に参入する前に、雄性および雌性カニクイザル（ベースライン体重４〜５ｋｇ）を６０日間サル用高脂肪食に順応させた。動物３匹（雌２匹および雄１匹）に、１日目から３５日目まで１週間に２回組換えヒトｔｒｋＢ−Ｆｃ融合タンパク質の静脈内注射を受けさせ、他の３匹の動物（雌２匹および雄１匹）にビヒクルの投与を受けさせた。摂食を毎日モニターした。体重および身長を毎週モニターし、式ＢＭＩ＝体重（ｋｇ）／（身長（ｍ））２によりＢＭＩを計算した。ＰＲＩＳＭ（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｉｎｃ．、カリフォルニア州サンディエゴ）を用いて統計解析を行った。すべてのデータおよびグラフは、平均±平均の標準誤差（ＳＥＭ）で表現した。
【０１５１】
５ｍｇ／ｋｇのｔｒｋＢ−Ｆｃタンパク質のＩＶ注射で１週間に２回処置したサルは、処置２週間以内に摂食の減少傾向を示し（図１Ａ）、処置の開始から３０日後までにボディーマスインデックスＢＭＩの有意な減少を示した（図１Ｂ）（Ｐ＝０．００８３、Ｆ＝８．２８５、２元配置ＡＮＯＶＡ）。これらのデータは、可溶性ｔｒｋＢ−Ｆｃ融合タンパク質などのｔｒｋＢアンタゴニストを使用することが、摂食および体重の低減を招くことを示している。
【０１５２】
本明細書に記載する実施例および実施形態は、単に例示目的であり、それに照らして当業者に様々な修飾または変化が示唆されるものであり、本出願の精神および範囲内に含まれるものとすることは、理解されている。本明細書に引用するすべての刊行物、特許、および特許出願は、各個別の刊行物、特許、または特許出願が、具体的かつ個別に、すべての目的に関してその全体が参照により本明細書に組み込まれていることが示されたかの如く、それと同程度に、そのようにこれによって参照により組み込まれている。
【図面の簡単な説明】
【０１５３】
【図１】１Ｂ５抗ＢＤＮＦ抗体の存在下または不在下でのＢＤＮＦに対するｔｒｋＢチロシンリン酸化の用量反応を示すグラフである。Ｘ軸は、ｔｒｋＢを発現しているチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞の培養物に加えた種々の濃度のＢＤＮＦを表す。Ｙ軸は、ＥＬＩＳＡにより検出されたｔｒｋＢチロシンリン酸化レベルを表す。データは、ＢＤＮＦにより誘導されたｔｒｋＢチロシンリン酸化が１Ｂ５抗体上清の存在により有意に低減したことを示した。
【図２Ａ】ＢＤＮＦ単独に対する節状神経細胞生存数の用量反応のグラフである。Ｘ軸は、ＣＤ−１マウスから得られた胚期１８日（Ｅ１８）の節状神経細胞培養物に加えた種々の濃度のＢＤＮＦを表す。Ｙ軸は、平板培養４８時間後の生存神経細胞数を表す。データは、０．１〜０．５ｎｇ／ｍｌのＢＤＮＦで最大の神経細胞生存数が達成されたことを示した。
【図２Ｂ】飽和濃度（０．５ｎｇ／ｍＬ）のＢＤＮＦおよび漸増する濃度の１Ｂ５抗ＢＤＮＦ抗体の存在下での節状神経細胞生存数のグラフである。Ｘ軸は、ＣＤ−１マウスから得られた胚期１８日（Ｅ１８）の節状神経細胞培養物に加えた種々の濃度の１Ｂ５抗ＢＤＮＦ抗体を表す。Ｙ軸は、平板培養４８時間後の生存神経細胞数を表す。データは、この条件における１Ｂ５抗体の５０％有効ブロック濃度（ＥＣ５０）が約０．４〜１ｎＭであったことを示した。
【図３】高脂肪食誘導性肥満（ＤＩＯ）マウスにおいて抗ＢＤＮＦ抗体（クローン１Ｂ５）の末梢注射が体重（図３Ａ）および摂食（図３Ｂ）に及ぼす効果を示すグラフである。図３Ａでは、Ｘ軸は、体重を測定した日に対応し、Ｙ軸は、ベースライン（任意の処置前の体重）に対する率として測定した体重に対応する。データは、抗ＢＤＮＦ抗体処置群およびＮＴ−４／５処置群両方の体重が、注射の１日後のビヒクル群と有意に異なったことを示した（Ｂｏｎｆｅｒｒｏｎｉ事後検定と共の二元配置ＡＮＯＶＡ、ビヒクル群に比べて抗ＢＤＮＦ抗体処置群についてＰ＜０．００１、ビヒクル群に比べてＮＴ−４／５処置群についてＰ＜０．０１）。図１Ｂでは、Ｘ軸は、摂食を測定した日に対応し、Ｙ軸はマウスが１日に接種した食物に対応する。データは、抗ＢＤＮＦ抗体処置群およびＮＴ−４／５処置群両方の摂食が、ビヒクル群と有意に異なったことを示した（ビヒクル群に比べて抗ＢＤＮＦ抗体処置群についてＰ＜０．００１、ビヒクル群に比べてＮＴ−４／５処置群についてＰ＜０．００１）。
【図４】組換えヒトｔｒｋＢ−Ｆｃ融合タンパク質の末梢注射が、それぞれ平均１日摂食およびボディーマスインデックス（ＢＭＩ）に及ぼす効果を示すグラフである。処置の３０日後に、摂食減少の傾向およびＢＭＩの有意な減少があった（Ｐ＝０．００８３、Ｆ＝８．２８５、２元配置ＡＮＯＶＡ）。
【図１】
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【図２−１】
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【図２−２】
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【図３】
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【図４】
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【国際調査報告】
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