(57)【要約】  特定のジアゾンアミドＡ類似体ならびにその塩およびコンジュゲートは増殖性疾患の治療に効果的である。【選択図】  図１
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
式
【化１】
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の化合物またはその製薬上許容される塩またはコンジュゲート。
【請求項２】
製薬上許容される塩の形態である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
式Ｉの化合物がターゲティング剤に結合されている、請求項１に記載のコンジュゲート。
【請求項４】
請求項１に記載の化合物を有効成分として含み、製薬上許容される賦形剤をさらに含む、医薬組成物。
【請求項５】
増殖性疾患を治療する方法であって、このような治療を必要とする対象に有効量の請求項１に記載の化合物またはその製薬上許容される組成物を投与することを含む、方法。
【請求項６】
式：
【化２】
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の化合物を合成するための方法であって、式：
【化３】
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の化合物または少なくとも１つの環窒素上に水素の代わりに保護基を有するその保護形態を、（Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−メチル酪酸の活性化エステルまたは２−ヒドロキシル基上に保護基を有するその保護形態で処理した後に、そのアミン基またはヒドロキシル基上に存在している保護基を除去することを含む、方法。
【請求項７】
（Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−メチル酪酸の活性化エステルが（Ｓ）−２−ヒドロキシ−３−メチル酪酸のＮ−ヒドロキシスクシンイミドエステルであり、これが式：
【化４】
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の化合物で処理され、式：
【化５】
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の生成物が得られる、請求項６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、優れた抗腫瘍活性を有するジアゾンアミドＡの類似体に関する。この化合物の合成経路も開示される。
【背景技術】
【０００２】
ジアゾンアミドＡは海洋生物ジアゾナ・アングラータ(Diazona angulata)から初めて単離された紡錘体阻害剤である。この化合物およびその類似体を合成するための多くの試みがなされてきた。ＰＣＴ公報ＷＯ０３／１０６４３８には推定合成経路が記載されているが、この公報に示されているジアゾンアミドＡの構造は適切でない。米国特許第７，０２２，７２０（‘７２０）号にはジアゾンアミドＡの構造が正しく開示され、触媒的ヘックエンドサイクライゼーション(catalytic Heck endocyclization)、立体制御縮環ピナコール転位(stereo-controlled ring-contracting pinnacol rearrangement)、および分子内光誘起電子移動によるインドールアリール化の併用によるそのいくつかの類似体の合成が記載されている。いくつかの類似体の一般構造が示されている。この特許の優先権を主張する後続出願が２００５年１０月３１日に出願され、第２００６／００８９３９７号として公開され、これには本明細書で請求される類似体化合物Ｊの構造が含まれている。この‘７２０号特許には、驚くべき強力な抗有糸分裂活性を有する本発明の化合物は明示されていない。
【発明の開示】
【０００３】
本発明は式
【０００４】
【化１】
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の化合物（化合物Ｊ）およびその製薬上許容される塩に関する。本発明はまた、この化合物および／またはその塩を含有する医薬組成物、安定化剤またはターゲティング剤に結合されたこの化合物の修飾形態、ならびにこれらの化合物および処方物を用いて増殖性疾患、特にタキソール(Taxol)（商標）耐性癌を治療する方法に関する。
【０００５】
別の態様において、本発明は、化合物Jおよびその塩を合成するための方法に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
化合物Jは、以下の例で示されるように、ある種の癌、特にタキソール(Taxol)（商標）に耐性のある癌に対して強力な抗有糸分裂活性を有することが示されている。化合物Jはその遊離塩基形態で供給することもできるし、あるいは製薬上許容される塩として、または図示されている形態と対応する塩の混合物として供給することもできる。好適な塩としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、ヒドロスルフェート(hydrosulfates)などの無機酸の塩、または酢酸塩、ギ酸塩、マレイン酸塩などの有機酸付加塩などが挙げられる。
【０００７】
さらに、化合物Jはターゲティング剤などの部分(moieties)と結合させてもよい。このようなターゲティング剤としては、抗体またはその免疫活性フラグメント、例えば、腫瘍抗原に対する、または腫瘍関連の受容体もしくはインテグリンに対する単鎖抗体形態、およびこれらの部分(moieties)に対するペプチドミメティクスなどがある。さらに、化合物Jは薬物動態を変化させるため、ポリエチレングリコールなどの賦形剤と結合させてもよい。
【０００８】
本発明において有用な処方物としては、引用することにより本明細書に繰込み記載されるRemington's Pharmaceutical Sciences, 最新版, Mack Publishing Co., Easton, PAに示されているものなどの標準的な処方物がある。このような処方物としては、経口投与、徐放、局所投与、非経口投与、または担当する医師もしくは獣医師により決定される他のいずれかの好適な経路向けにデザインされたものが含まれる。このように投与は全身投与であっても局所投与であってもよい。好適なビヒクルまたは賦形剤としては、リポソーム、ミセル、ナノ粒子、ポリマーマトリックス、バッファーおよび医師に知られている全範囲の処方物が含まれる。
【０００９】
化合物Jは増殖性疾患、特に、乳房、卵巣、肺、結腸、前立腺、黒色腫、結腸、膵臓、神経膠腫、癌腫(carcinoma)などに関連する腫瘍および悪性疾患の治療において特に有用である。
【００１０】
また、化合物Jおよび／またはその塩および／またはそのコンジュゲートを含むこれらの処方物は、付加的抗腫瘍薬などの他の薬剤、または栄養もしくは健康全般を補助する化合物などの他の緩和化合物と併用してもよい。
【００１１】
化合物Jは、遊離型のアミノ前駆体をＳ−２，５−ジオキソピロリジン−１−イル−２−ヒドロキシ−３−メチルブタノエートで処理することにより簡便に合成される。これによりこの遊離アミンは３−メチル−２−ヒドロキシブチレートへ変換する。
【００１２】
当業者ならば、このカップリング反応は、単に例に過ぎないが、Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾールエステル、ペルフルオロフェニルエステル、Ｎ−ヒドロキシフタルイミドエステル、カルボン酸とカルボジイミドとの反応により生じた活性化エステル、およびアミンをアクリル化してアミド結合を形成させるために便宜に用いられる他の活性化エステルといった２−ヒドロキシ３−メチルブタノエートなどの他の活性化エステルによって達成することもできることが分かるであろう。よって、本発明は、活性化２−ヒドロキシ−３−メチルブタノエート誘導体（所望により２−ヒドロキシルの部位で保護されていてもよい）と上記のアミンを結合させることにより化合物Jを製造する方法を提供する。このアミンもまた所望により保護形態であってもよく、すなわち、このアミンはそのインドール窒素とインドリン窒素の一方または両方上に保護基を有し得る。ヒドロキシルに用いるのに好適な保護基としては、アシル基、シリル基、ピランアセタールなどが挙げられる。このアミン化合物の環窒素原子に用いるのに好適な保護基は、ヒドロキシブタノエートにより活性化されたエステルとの反応を意図していないが、カルバメートまたはトリフルオロアセテートなどのアシル基ならびにシリル基が挙げられる。好適な保護基ならびにそれらを付加および除去する方法は当技術分野では周知であり、例えば、T. H. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, 第２版に記載されている。
【００１３】
下記の実施例は例として示されるものであり、本発明を限定するものではない。実施例１〜１６は化合物Ｊの合成を記載している。実施例１７〜２０はその生物活性を記載している。
【実施例】
【００１４】
実施例１
７−ブロモインドール
２−ブロモニトロベンゼン（１．１０ｋｇ，５．４５ｍｏｌ）を室温でテトラヒドロフラン（１０Ｌ）に溶解させた。この溶液を−７８℃に維持した槽内で攪拌しながら冷却した。内部温度が−４０℃に達した際に、臭化ビニルマグネシウム（１６．３Ｌ，１６．３ｍｏｌ）を、添加中、内部温度が−４０℃に維持されるような速度で添加した。添加が完了したところで、反応物を槽から取り出し、４５分かけて−３０℃までゆっくり温めた。時々冷却する必要があった。この−３０℃の反応溶液を軽く冷却した（〜１０℃）飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（１０Ｌ）を急速に加えてクエンチ（quench）した。若干の発泡が見られた。（塩化アンモニウム溶液への逆クエンチも上手くいった。）これによりゲル形態の不溶マグネシウム塩をいくらか含む二相混合物が得られた。この混合物を３０分間攪拌すると、分離した。水層についてテトラヒドロフラン（１０Ｌ）を用いて逆抽出を行った。合した有機層を減圧下、槽温３５℃で蒸発させ、得られた暗色油を塩化メチレン（５Ｌ）に取り、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。この混合物を濾過し、濃縮した。得られた材料をクロマトグラフィーに付し、２％酢酸エチル−ヘキサンで溶出し、７−ブロモインドール（５５７ｇ，収率５２％）を灰白色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：提示構造と一致。
【００１５】
実施例２
２−アセトアミド−３−（７−ブロモ−１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン酸
攪拌子、窒素雰囲気、熱電対および冷却器を備えた５Ｌの三口丸底フラスコに、実施例１の標題化合物（２５２．１ｇ，１．２９ｍｏｌ）、次いで酢酸（１．５Ｌ）および無水酢酸（７６０ｍＬ，８．０４ｍｏｌ）を加えた。２０分間攪拌した後、Ｌ−セリン（２６６．９ｇ，２．５３ｍｏｌ）を入れた。この混合物を４時間攪拌した後、４０℃まで加熱した。大部分の固体が溶けた後、この反応物を９０℃まで加熱し、その後１１０℃まで急速進行させた。次に、この反応物を８０℃まで冷却し、この温度で攪拌し、反応をＨＰＬＣによりモニタリングした。５時間後、クロマトグラムに７−ブロモインドールが存在しないことを判断して反応が完了した。除熱し、反応物を一晩室温で攪拌し続けた。
【００１６】
メタノール（４５０ｍＬ）を加え、反応物を〜−５０℃で真空濃縮し、粘稠な黒いタールとした。この残渣にメタノール（３Ｌ）を加え、激しく振盪した後、残渣の大部分が溶液に移行し、後に微細な沈殿が残った。この混合物にＨ２ＳＯ４（５２．５ｍＬ）を加え、この反応物を還流下で一晩攪拌した。この反応物を室温まで冷却し、テトラヒドロフラン（３Ｌ）で希釈した。この溶液を、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（４Ｌ）の入った１２Ｌ分液漏斗に入れた。この混合物についてメチルｔ−ブチルエーテル（３×４Ｌ）を用いて抽出を行った。有機層を合わせ、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた後、真空濃縮し、褐色固体と褐色油の混合物を得た。この粗生成物に塩化メチレン（５００ｍＬ）を加えたところ、白色固体がいくらか溶けずに残った。これらの結晶を濾過し、〜１０ｇの生成物を得た。この濾液に種結晶を加えたところ、３０分後に褐色固体が沈殿した。この新たな混合物を濾過し、さらなる種結晶を加えて第三の沈殿生成物を得、この第三の混合物も濾過した。種結晶を加えてもさらなる生成物は得られなかった。この濾液を真空濃縮して褐色泡沫を得、これを塩化メチレン（６００ｍＬ）に再溶解した。この溶液にメチルｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）（１，２５０ｍＬ）をゆっくり加えると、褐色固体が沈殿した。この混合物を濾過し、濾液を他の不純サンプルに加えた後、塩化メチレン−ヘキサンで溶出するカラムクロマトグラフィーにより精製した。生成物を含む画分はあまり純粋でなかったので（範囲５０％〜７５％）、全てＭＴＢＥを用いて再結晶させ、標題化合物を得た（１３９ｇ，収率３３％，純度７５％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：提示構造と一致。
【００１７】
実施例３
２−アミノ−３−（７−ブロモ−１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン酸メチル塩酸塩
メタノール（３．４Ｌ）中、実施例２の標題化合物（３４２ｇ，１．０５ｍｏｌ）の攪拌混合物にＨ２ＳＯ４（３４０ｍＬ）をゆっくり加えた。得られた暗褐色混合物を１６時間加熱還流し、この時点でＨＰＬＣ分析は反応の完了を示した。反応物を室温まで冷却し、水（４．８Ｌ）、重炭酸ナトリウム（３４２ｇ）および塩化メチレン（４．８Ｌ）の攪拌混合物中でゆっくりクエンチした。１．５時間攪拌を続けた。層に分け、水層について塩化メチレン（３．０Ｌ）を用いて２回逆抽出を行った。合わせた抽出物を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して黒いタールを得た。この材料を塩化メチレン（３．０Ｌ）に溶解させた。ジエチルエーテル中１ＮのＨＣｌ（１．１Ｌ）を外部冷却しながらゆっくり加えた。この懸濁液を氷浴温度まで冷却し、濾過した。これらの固体を塩化メチレン（５００ｍＬ）で２回、ヘキサン（５００ｍＬ）で３回洗浄した。これらの固体を一定質量となるまで３２℃の真空炉で乾燥させ、標題化合物を得た（２６７．４ｇ，収率７６％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：提示構造と一致。
【００１８】
実施例４
２−（（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−メチルブタンアミド）−３−（７−ブロモ−１Ｈ−インドール−３−イル）プロパン酸メチル
実施例３の標題化合物（２５６．６ｇ，７７０ｍｍｏｌ）、ＴＢＴＵ（２９６．４ｇ，１．２当量）およびＣｂｚ−Ｌ−バリン（２１２．７ｇ，１．１当量）をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ，無水，２，７００ｍＬ）に溶解させ、３０分間０℃まで冷却した。ジイソプロピルエチルアミン（ＤＩＥＡ，２６８ｍＬ）をゆっくり加え、この溶液を室温まで温めた。攪拌を４時間続け、この時点でＨＰＬＣは反応の完了を示した。この反応物を酢酸エチル（１１Ｌ）および水（７．５Ｌ）で希釈した。この混合物を１時間攪拌し、分離させた。有機層を水（７．５Ｌ）で１回、ブライン（７．５Ｌ）で２回、飽和ＮａＨＣＯ３（７．５Ｌ）で２回洗浄した。この材料を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮して褐色黒色固体を得た。この材料を塩化メチレン（７．５Ｌ）に取り、同質の別ロットの材料２２．２ｇおよびシリカゲル（４００ｇ）と合わせた。この粗化合物をシリカ上に保持するために溶媒を除去した。この材料を半分に分け、各半分を、６ｉｎ×４ｆｔシリカ重力カラムのクロマトグラフィーに付した。各々、塩化メチレン（２０Ｌ）、次いで５％アセトン含有塩化メチレン（２０Ｌ）、次いで８％アセトン含有塩化メチレン（３０Ｌ）で溶出し、標題化合物を得た（３８３ｇ，収率８９％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：提示構造と一致。
【００１９】
実施例５
２−（（Ｓ）−１−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−メチルプロピル）−５−（７−ブロモ−１Ｈ−インドール−３−イル）オキサゾール−４−カルボン酸メチル
テトラヒドロフラン（１５Ｌ）に溶解させた実施例４の標題化合物（３６１．４ｇ，６８１ｍｍｏｌ）の攪拌溶液にジクロロジシアノキノン（３４０．８ｇ，１，５００ｍｍｏｌ）を加え、６時間加熱還流し、この時点でＨＰＬＣは反応の完了を示した。この反応物をその容量が１／４になるまで濃縮し、酢酸エチル（１２Ｌ）で希釈した。得られた黒い溶液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（５．５Ｌ）で３回洗浄した。有機層を硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮し、標題化合物を黒色固体として得た（３９２ｇ，収率１００％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：提示構造と一致。
【００２０】
実施例６
２−（（Ｓ）−１−アミノ−２−メチルプロピル）−５−（７−ブロモ−１Ｈ−インドール−３−イル）オキサゾール−４−カルボン酸メチル塩酸塩
酢酸（１．３３Ｌ）中３３％のＨＢｒに実施例５の標題化合物（４０３．４ｇ，７６６ｍｍｏｌ）を加え、１時間２０分激しく攪拌した。この混合物を外部冷却し、激しく振盪しながら、ゆっくり注意深くＭＴＢＥ（１２Ｌ）に加えた。この混合物を１時間０℃で攪拌し、Ｎ２下で濾過した。これらの吸湿性固体をＭＴＢＥ（１Ｌ）で洗浄し、一定質量となるまで真空炉で乾燥させ、標題化合物（２７７．５ｇ，７６．５％）を微細な褐色固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：提示構造と一致。
【００２１】
実施例７
２−（（Ｓ）−１−（（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−３−（４−ヒドロキシフェニル）プロパンアミド）−２−メチルプロピル）−５−（７−ブロモ−１Ｈ−インドール−３−イル）オキサゾール−４−カルボン酸メチル
０℃で攪拌したジイソプロピルエチルアミン（２２５ｍＬ，１，２９０ｍｍｏｌ）に、ジメチルホルムアミド（無水，２．７７Ｌ）中、実施例６の標題化合物（２７７．５ｇ，５８６．５ｍｍｏｌ）、Ｃｂｚ−Ｌ−チロシン（１９４．２ｇ，６１５．９ｍｍｏｌ）およびＴＢＴＵ（２０７．２ｇ，１．１当量）の溶液を加えた。この反応物を室温まで温め、１６時間攪拌し、この時点でＨＰＬＣは反応の完了を示した。この反応溶液を飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１２．０Ｌ）にゆっくり注ぎ、３０分間攪拌した。沈殿を濾過し、濾過ケーキを水で十分洗浄した。得られた褐色材料を一定質量となるまで４０℃の真空炉で乾燥させ、標題化合物（４３５ｇ）を得た。この標題化合物をさらに再結晶により精製した。標題化合物を７０℃のイソプロパノール（９．０Ｌ）に溶解させた。不溶材料を濾去し、濾液を、ヘキサン（９．０Ｌ）をゆっくり加えながら加熱した。この懸濁液を室温まで冷却し、、この時点で氷浴を適用した。冷却されたところで、この混合物を氷浴温度で３０分間攪拌し、濾過した。固体をヘキサンで洗浄し、４０℃の真空炉で一定質量となるまで乾燥させ、純粋な標題化合物を得た（２６４ｇ，６１％収率）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：提示構造と一致。
【００２２】
実施例８
【００２３】
【化２】
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実施例７の標題化合物（４５．０ｇ，６５ｍｍｏｌ）をテトラヒドロフラン（３２５ｍＬ）に溶解させ、−２０℃の、２，２，２−トリフルオロエタノール（１３．０Ｌ）中、ＰｈＩ（ＯＡｃ）２（２０ｇ，６２ｍｍｏｌ）およびＬｉＯＡｃ（１２．７ｇ，１９６ｍｍｏｌ）の溶液に手早く加えた。この溶液を−２０℃で２５分間攪拌し、この時点で固体ＮａＨＣＯ３（１１７．５ｇ）を加えた。冷浴を外し、さらに３０分間攪拌を続けた。この混合物を１０℃で濾過し、濾液を濃縮した。残渣９４．６ｇをＣＨＣｌ３−テトラヒドロフラン（３：１，３００ｍＬ）に取り、１０分間音波処理した。沈殿した不要のジアステレオマーを濾去し、濾液を濃縮し、標題化合物を得た。上記の操作を計３回行い、合わせて計２２３．６ｇの粗標題化合物を得た。この粗標題化合物をまず、１００％酢酸エチルで溶出するシリカプラグ濾過により精製した。これにより１７９．９ｇの材料が得られ、これを複数のカラムクロマトグラフィーによりさらに精製した。第一のカラムは６：１塩化メチレン−テトラヒドロフランを用いて溶出した。これにより７１．１ｇの材料が得られ、これを６：１塩化メチレン−テトラヒドロフラン（２００ｍＬ）に取り、一晩冷蔵した。沈殿した不要なジアステレオマーを濾去し、濾液を濃縮し、６６．６ｇの化合物を得た。この材料をさらに２回、１５：１塩化メチレン−テトラヒドロフランで溶出するクロマトグラフィーに付し、２回（２つの画分）で標題化合物を得た（１６．８ｇおよび９．３ｇ）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ−６）：提示構造と一致。質量スペクトル（ＥＳＩ）ｍ／ｚ：６８７（Ｍ＋１）。
【００２４】
実施例９
【００２５】
【化３】
2009513710.tif 000005
実施例８で合成した化合物（１０２ｍｇ，０．１４８ｍｍｏｌ）の入ったフラスコにメタノール（３．６ｍＬ）を加えた。この溶液を氷水浴で１５分間冷却した。ＬｉＯＨの保存水溶液（３５．４ｍｇ／０．６ｍＬ，１．４８ｍｍｏｌ）を０℃で滴下した。この混合物を室温まで温め（全ての沈殿物を溶解させ）、４時間攪拌した。ＬＣＭＳで確認したところ、残っていた出発材料は１％未満であった。この反応混合物に約１０ｇの氷を加え、温度を０℃まで下げた。ＨＣｌ水溶液（１Ｎ，１．６ｍＬ）を０℃で滴下し、反応混合物のｐＨを２〜３の間に調整した。酢酸エチル（２×２０ｍＬ）を用い、目的の酸を抽出した。合わせた有機層を水（１０ｍＬ）、ブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。この溶液を濃縮して１００ｍｇの標題化合物を得、これをそれ以上精製せずに次の工程で用いた。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ−６）：提示構造と一致。
【００２６】
実施例１０
【００２７】
【化４】
2009513710.tif 000006
実施例９で合成した化合物（１００ｍｇ）の入った乾燥フラスコに２−アミノ−１−（７−ヒドロキシ−１Ｈ−インドール−３−イル）エタノン塩酸塩（５０．３ｍｇ，０．２２２ｍｍｏｌ）および無水ＤＭＦ（０．５ｍＬ）を加えた。トリエチルアミン（３１μｌ，０．２２２ｍｍｏｌ）をＮ２下、室温で加えた。この溶液に室温で、予め作製したＤＨＯＢｔの黄色溶液（８．４５ｍｇ，０．０５１８ｍｍｏｌ）、無水ＤＭＦ（２．０ｍＬ）中、ＥＤＣ・ＨＣｌ（４２．６ｍｇ，０．２２２ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（３１μｌ，０．２２２ｍｍｏｌ）を加えた。この混合物をＮ２下、４１〜４２℃で６時間攪拌した。この反応混合物を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈した後、水（１０ｍＬ）、１０％ＮａＨＳＯ４（１０ｍＬ）水溶液、水（２×１０ｍＬ）、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液（１０ｍＬ）、水（２×１０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄した。この溶液をＮａ２ＳＯ４で乾燥させ、濾過し、蒸発させ、標題化合物（１３０ｍｇ）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ−６）：提示構造と一致。
【００２８】
実施例１１
【００２９】
【化５】
2009513710.tif 000007
実施例１０で合成した化合物の入った乾燥フラスコに無水テトラヒドロフラン（０．９ｍＬ）およびＣＨ２Ｃｌ２（２．７ｍＬ）を加えた。得られた溶液を氷水浴で１５分間冷却した。無水酢酸（４２μｌ，０．４４４ｍｍｏｌ）およびピリジン（１８μｌ，０．２２２ｍｍｏｌ）を０℃で加えた。その後、この混合物を室温まで温め、Ｎ２下で３．５時間攪拌した。反応をＬＣＭＳでモニタリングした。この反応溶液を酢酸エチル（３０ｍＬ）で希釈した後、水（１０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濃縮後、１３６ｍｇの粗生成物を得た。酢酸エチル／ＣＨ２Ｃｌ２，３０／７０〜３５／６５で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより標題化合物（８０ｍｇ，最後の三工程全体で収率６１％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ−６）：提示構造と一致。
【００３０】
実施例１２
【００３１】
【化６】
2009513710.tif 000008
攪拌子を備えた乾燥フラスコにトリフェニルホスフィン（４７４ｍｇ，１．８１ｍｍｏｌ）およびヘキサクロロエタン（４２８ｍｇ，１．８１ｍｍｏｌ）を加えた。無水ＣＨ２Ｃｌ２（１８．５ｍＬ）を加え、得られた溶液をＮ２下、氷水浴で十分冷却した。この溶液にトリエチルアミン（３５１μｌ，２．５２ｍｍｏｌ）をゆっくり加えた後、０℃で１０分間攪拌した。実施例１１で合成した化合物（１６０ｍｇ，０．１８０ｍｍｏｌ）を含む無水ＣＨ２Ｃｌ２（９．５ｍＬ）の溶液を滴下し、温度を０℃〜２℃に維持した。添加後、この反応混合物を０℃で１０分間攪拌した（総時間は１５分未満でなければならない）。水（３４μＬ）を加えて反応をクエンチした。全溶媒を減圧下、１５℃で蒸発させた。酢酸エチル（５ｍＬ）を加えて酸化トリフェニルホスフィンを沈殿させた。濾過後、濾液を再び濃縮し、上記の手順を２回繰り返し、余分な酸化トリフェニルホスフィンを除去した。濾液を濃縮した後、酢酸エチル−トルエン（６０：４０）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、標題化合物（１１０ｍｇ，収率７０％）を得た。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ−６）：提示構造と一致。
【００３２】
実施例１３
【００３３】
【化７】
2009513710.tif 000009
石英試験管に実施例１２で合成した化合物を含むアセトニトリル（１０．０ｍｇ／４ｍＬ）の溶液を加えた後、Ｎ２で３０分間スパージした。ＬｉＯＨ含有Ｈ２Ｏ（０．５９６ｍｇ／０．６０ｍＬ）の、脱気した保存溶液を滴下した。この反応溶液は暗黄色となり、Ｎ２で３０分間脱気した。この石英試験管を３００ｎｍ電球で光照射がなされるフォトリアクター内に置いた。この反応溶液に４５分間光を照射し、Ｎ２でスパージした。この反応を１２回繰り返した。合わせた反応混合物を酢酸エチル（２００ｍＬ）で希釈した後、飽和ＮＨ４Ｃｌ（５０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（５０ｍＬ）、ブライン（５０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、標題化合物を得た。
【００３４】
実施例１４
【００３５】
【化８】
2009513710.tif 000010
実施例１３で合成した化合物（０．１５０ｍｍｏｌ）の入った乾燥フラスコに乾燥Ｋ２ＣＯ３（６１ｍｇ）および無水ＤＭＦ（４ｍＬ）を加えた。この反応混合物に室温で４−ニトロフェニルトリフルオロメタンスルホネートを含む無水ＤＭＦ（６１ｍｇ／１．３ｍＬ）の溶液を加えた。得られた黄褐色溶液をＮ２下、室温で１時間攪拌した。次に、この混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ）で希釈した後、飽和ＮＨ４Ｃｌ水溶液（２×２０ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（５×２０ｍＬ）、ブライン（２×２０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濃縮後、生成物を酢酸エチル−ＣＨ２Ｃｌ２（３０：７０）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、標題化合物を得た（５０ｍｇ，最後の二工程全体で収率３８％）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ−６）：提示構造と一致。
【００３６】
実施例１５
【００３７】
【化９】
2009513710.tif 000011
実施例１４で合成した化合物（５０ｍｇ，０．０５７ｍｍｏｌ）の入ったフラスコにＭｅＯＨ（５ｍＬ）およびトリエチルアミン（２９μＬ，０．２０５ｍｍｏｌ）を加え、Ｎ２でパージした。次に、Ｐｄ（ＯＨ）２／Ｃ（９５ｍｇ）をＮ２下で加えた。水素ガスを充填した風船をすぐに付け、フラスコを４回水素でパージした。反応を３時間進行させた。この混合物をセライトパッドで濾過し、残渣をＭｅＯＨ（２×１０ｍＬ）で洗浄した。濾液を濃縮し、酢酸エチル（５０ｍＬ）で希釈した。溶液をＨ２Ｏ（３×１０ｍＬ）およびブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濃縮後、標題化合物を得（３３ｍｇ）、それ以上精製せずに次の工程で用いた。
【００３８】
実施例１６
【００３９】
【化１０】
2009513710.tif 000012
上記で示した式（１）の化合物Ｊを合成するため、実施例１５で合成した化合物（２ｍｇ，０．０４６９ｍｍｏｌ）の入った乾燥フラスコに無水テトラヒドロフラン（１．１ｍＬ）を加えた。この反応混合物に室温で、無水テトラヒドロフラン（０．３ｍＬ）中、（Ｓ）−２，５−ジオキソピロリジン−ｌ−イル２−ヒドロキシ−３−メチルブタノエート（１１．１ｍｇ，０．０５１６ｍｍｏｌ）溶液を加えた。この反応混合物をＮ２下、室温で２時間攪拌した。反応混合物をＣＨ２Ｃｌ２（５０ｍＬ）で希釈した後、飽和ＮａＨＣＯ３（２×５ｍＬ）、Ｈ２Ｏ（５ｍＬ）およびブライン（５ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。濃縮後、最終生成物をＭｅＯＨ−ＣＨ２Ｃｌ２（３：９）で溶出するフラッシュクロマトグラフィーにより精製し、標題化合物を得た（１９ｍｇ，収率５８％）。質量スペクトル（ＥＳＩ）  ｍ／ｚ：  ６９７．２  （Ｍ＋１）。１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯｄ−６）：提示構造と一致。
【００４０】
実施例１７
化合物Ｊによる種々の細胞系統の阻害
肺癌、結腸癌、卵巣癌および前立腺癌ならびに黒色腫を呈するいくつかの腫瘍細胞系統をジアゾンアミドＡ、化合物Ｊのヒドロキシル化形態、化合物Ｊ、パクリタキセルおよびビンブラスチンの存在下、標準的な増殖条件下でアッセイした。図１で、これらの結果を、増殖を２分の１に低下させる濃度（ＧＩ５０）としてグラフ化した。図１に示されている四角の中で、ＡＢ−４は化合物Ｊのヒドロキシル化形態であり、ＡＢ−５は化合物Ｊである。示されているように、供試薬剤は全て乳癌細胞系統ＭＤＡ−ＭＢ−４３５で極めて低いＧＩ５Ｏ濃度を示したが、ＭＤＡ−ＭＢ−２３１に関してはジアゾンアミドＡ、化合物Ｊおよびビンブラスチンのほうが残りの薬剤よりも有効性が高かった。肺および結腸では、化合物Ｊのヒドロキシル化形態は残りの薬剤よりも有効性が低かった。供試薬剤は全て卵巣細胞系統ＯＶＣＡＲ３で極めて低い（一桁のｎＭ）ＧＩ５０を有していたが、卵巣細胞系統ＩＧＲ−ＯＶ１およびＳＫＭＥＬ−２に対してはパクリタキセルが残りの４つの薬剤より有意に有効性が低かった。黒色腫では、化合物Ｊおよびそのヒドロキシル化形態は残りの薬剤よりも有効性が低くかったが、前立腺細胞系統ＰＣ−３およびＬｎＣＡＰでは、全ての薬剤が十分働いた。（化合物Ｊのヒドロキシル化形態はＰＣ−３に対しては有効性が低かった。）
【００４１】
ＰＴＸ１０卵巣腫瘍細胞系統の生存率に対する化合物Ｊおよびパクリタキセルの作用を試験するさらなる実験を図２に示す。添加濃度に対してプロットしたところ、これらの結果は化合物Ｊが細胞生存率％の低下においてパクリタキセルよりも有効であることを示す。図２では、●は化合物Ｊを表し、◆はパクリタキセルを表す。
【００４２】
実施例１８
薬物動態学
化合物Ｊを、ＭＤＡ−ＭＢ−４３５乳癌細胞から増殖させた異種移植片腫瘍を含むマウスに静注した。化合物Ｊの腫瘍濃度を時間の関数として評価した。結果を表３に示す。要約すれば、この化合物の最終半減期は２９７．６分であり、曲線下面積は３０１０２２４分＊ｎｇ／ｍｌであり、分布容積は２．９１／ｋｇである。
【００４３】
実施例１９
in vivo活性
図４Ａおよび４Ｂに示されるように、化合物ＪはＨＣＴ１１６異種移植片およびＰＣ−３異種移植片の増殖阻害においてパクリタキセルに匹敵する。
【００４４】
ＨＣＴ１１６細胞またはＰＣ−３細胞の異種移植片を含むネズミモデルの作製の詳細は、これらの実施例に続く節に記載されている。腫瘍を増殖させた後、化合物Ｊまたはパクリタキセルを用いる療法を開始した。図４Ａに示されるように、ＩＶ投与された２０ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊは、同じ濃度でパクリタキセルと同様の腫瘍増殖を示す。図４Ａにおいて、＊は対照マウスを示し、■は５ｍｇ／ｋｇ化合物Ｊを示し、◆は２０ｍｇ／ｋｇ化合物Ｊを示し、斜線は２０ｍｇ／ｋｇパクリタキセルを示す。分かるように、パクリタキセルおよび化合物Ｊは同じ濃度で同様の増殖阻害曲線を示す。さらに、試験に用いた１０個体中４個体は５ヶ月間にわたって腫瘍がなく、体重減少も見られなかった。
【００４５】
異種移植片としてＰＣ−３細胞を用いる同様のモデルでも、２０ｍｇ／ｋｇの化合物Ｊまたはパクリタキセルが腫瘍増殖を有意に阻害した。図４Ｂで、■は対照であり、●は化合物Ｊのデータ点であり、◇はパクリタキセルのデータ点である。
【００４６】
実施例２０
好中球増殖および細胞総数に対する作用
図５に示されるように、パクリタキセルは骨髄および末梢血において５ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇの用量で好中球総数の減少を生じたが、化合物Ｊはこの濃度でこれらの細胞総数に作用しなかった。
【００４７】
腫瘍に対する作用を評価することに加え、骨髄および血液中の好中球に対するパクリタキセルおよび化合物Ｊの作用も得た。図５Ａに示されるように、パクリタキセルは２０ｍｇ／ｋｇで骨髄の好中球総数を有意に減少させたが、これに匹敵する用量の化合物Ｊには作用はなかった。これらのデータは一大腿でのＧＲ１＋細胞の数として示される。
【００４８】
図５Ｂでも同様に、末梢血の好中球総数は５ｍｇ／ｋｇおよび２０ｍｇ／ｋｇ双方のパクリタキセルにより著しく低下したが、同量の化合物Ｊによっては有意な作用はなかった。これらのデータをＡＮＣ（細胞／ｍｌ）として表に示す。
【００４９】
パクリタキセルと比較した場合の化合物Ｊの、異種移植片における増殖阻害に関して得られたデータを以下に示す。
【００５０】
【表１】
2009513710.tif 000013
最大Ｔ／Ｃ％＝処理腫瘍重中間値／対照腫瘍重中間値
Ｌｏｇ１０腫瘍細胞死滅数＝［（Ｔ−Ｃ）×０．３０１］／Ｔｄ
Ｔ＝処理群の３００ｍｇに達するまでの日数
Ｃ＝対照群の３００ｍｇに達するまでの日数
Ｔｄ＝腫瘍倍加時間
【００５１】
実施例１９および２０のプロトコールの詳細は次の通りである。
必要な材料：
・ＰＣ３前立腺(prostrate)腫瘍細胞およびＨＣＴ１１６結腸腫瘍細胞（ＮＣＩの腫瘍貯蔵所Division of Cancer Treatment and Diagnosis (DCTD)から入手）
・完全ＲＰＭＩ培地
ＲＰＭＩ（カタログ番号１１８７５−０８５，Invitrogen）
１０％熱不活化（３０’５６℃）ウシ胎児血清（カタログ番号１００−１０６，Gemini Bio-Products）
２ｍＭ  Ｌ−グルタミン（カタログ番号２５０３０−０８１，Invitrogen）
０．１ｍＭ  ＭＥＭ非必須アミノ酸溶液（カタログ番号１１１４０−０５０，Invitrogen）
１０Ｕ／ｍｌペニシリン／１０μｇ／ｍｌストレプトマイシン（カタログ番号１５１４０−１２２，Invitrogen）
１ｍＭピルビン酸ナトリウム（カタログ番号１１３６０−０７０）
・トリプシン−ＥＤＴＡ（カタログ番号２５３００−０５４，Invitrogen）
・Ｃａ２＋／Ｍｇ２＋不含リン酸緩衝生理食塩水、５％デキストロース水溶液
・細胞培養皿１５０ｍｍ×２５ｍｍ（カタログ番号４３０５９９，Corning, Inc.）
・１０ｍｌおよび２５ｍｌピペット、標準的なピペット補助品、ｐ２００およびｐ１０００ピペットチップおよび標準的なピペットマン
・無胸腺ＮＣｒ−ｎｕ／ｎｕヌードマウス、６〜１２週齢、両性（系統コード：０１Ｂ７４，NCI Frederick Animal Production Program−供給者としてはCharles River LabsおよびTaconic Farmsがある）。既存の試験にはおよそ７週齢の雌マウスを用いた。
・標準的な１ｃｃツベルクリンシリンジ、３０Ｇ１／２および２５Ｇ５／８ニードル(Becton Dickinson)
・ファルコン５ｍｌ試験管（カタログ番号３５２０５４）
・５０ｍｌおよび１５ｍｌディスポーザブルプラスチックコニカルチューブ(Falconまたは同等の業者）
・トリパンプルー溶液（０．４％）（カタログ番号Ｔ８１５４，Sigma）
・ハウザー(Hausser)位相差血球計（カタログ番号０２−６７１−５４，Fisher）
・アイスバケット
・マウス体重測定のための秤（０．２ｇまで正確なもの）
・ノギス(Vernier calipers)
・既知の病原体を含まない動物施設（ヌードマウスは可能な限り通常のマウスから隔離して飼育しなければならない。すなわち、部屋または個々の通気を備えたマイクロアイソレーターケージで隔離する。動物のハウジング、敷きわら、水は全て使用前にオートクレーブ処理しなければならない。標準的な照射処理済みのマウス餌を使用しなければならない。動物のケージの入れ替えは層流式フード内で行わなければならない。マウスを取扱う研究者は適宜、使い捨てのガウン、ボンネット、ブーツ、グローブ、マスク、を着用していなければならない。）
・ＡＢ−５（化合物Ｊ）化合物
・エチルアルコール、２００プルーフ(Aaper, MFD 041205)
・クレマホール(Cremaphor)（カタログ番号Ｃ５１３５，Sigma）
・パクリタキセル（カタログ番号ＡＮＰ００１０，Polymed Therapeutics）
手順：
１）３７℃の湯浴中でＰＣ３またはＨＣＴ１１６細胞（必要に応じて）を急速解凍する。内容物を９ｍｌの完全ＲＰＭＩ培地に移す。５分間１２００ｒｐｍ（２４０Ｘｇ）で回転沈降させる。培地を廃棄し、ペレットを８ｍｌの完全ＲＰＭＩ培地に再懸濁させる。５％ＣＯ２、３７℃加湿インキュベーター内、１００ｍｍ×２５ｍｍ細胞培養皿で平板培養する。
２）５〜１０日間増殖させ、必要に応じ３〜４日おきに１：８〜１：１０分割し（培地を吸引し、３〜５ｍｌのＰＢＳで洗浄し、１ｍｌのトリプシン−ＥＤＴＡを加え、３〜５分間３７℃でインキュベートし、所望の容量まで培地を加え、複数のプレートに移す）、細胞を対数増殖期に入らせる。
３）細胞がよく増殖している際に、１５０ｍｍ×２５ｍｍ皿への拡張を始める。本発明者らは１５０ｍｍ皿に２０ｍｌの培地を用い、分割に２ｍｌのトリプシンを用いる。ほぼ密集状態では、２×１０７細胞／１５０ｍｍ皿であろう。
４）動物を腫瘍細胞注射の１週間前に動物施設に馴化させることができるよう、ｎｕ／ｎｕマウスの到着時に先立って計画を立てる。この期間に、動物施設での標準的実践に従ってイヤータグやマークを付ける。
５）試験中のマウス総数に対して十分量の細胞が採れると予測された際にＰＣ３またはＨＣＴ１１６細胞を採取する（マウス総数＝７匹／群×群総数−示唆群：ビヒクル対照、パクリタキセル陽性対照、ＡＢ−５＋異種移植片の獲得率の変動を考慮するための追加マウス５匹まで、すなわち２６匹）。細胞１千万個／マウスを注射するように計画し、注射過程で容量当たりの細胞の損失を考慮する。すなわち３０匹に注射する場合、少なくとも３５回の注射に十分な細胞、すなわち３５×１０００万細胞＝３．５×１０８細胞を採取するようにする。既存のＨＣＴ１１６試験では、マウス当たり７．５×１０６細胞を注射した。各群５匹のマウスをＡＢ−５処理に用い、各群４匹のマウスを対照処理およびパクリタキセル処理に用いた。既存のＰＣ３試験では、１０７細胞を注射した。各群６匹のマウスを対照処理に用い、各群５匹のマウスＡＢ−５処理およびパクリタキセル処理に用いた。ＡＢ−５のアベラビリティーは限定されるため、さらに小さな群サイズが必要であった。
６）上記の工程２および３の分割の場合と同様に細胞を採取する。これによれば一度に１０プレートだけを採取するのが有用であるが、１回の試験に多数のプレートを処理する必要がある場合は採取した細胞を氷上に置く。最初にトリプシンを希釈し、細胞を採取するために用いた培地に加え、さらなる培地で１〜２回プレートを洗浄する。１０プレートからの細胞と洗液を合わせてちょうど５０ｍｌコニカル１本となる。工程は全て無菌技術を用いて行うべきであり、細胞および遠心分離物は手順の間低温で維持すべきである。
７）細胞を全て採取したところで、５分間１２００ｒｐｍ（２４０Ｘｇ）で回転沈降させる。ペレットを５〜１０ｍｌのプレーン（血清フリーおよび添加剤フリー）ＲＰＭＩに再懸濁させる。ペレットをプールした後、プールした細胞集団を計数に適当な濃度に希釈して計数する。標準的な血球計で５０μｌ＋５０μｌトリパンプルーを計数する。先のように細胞を回転沈降させ、血清フリー洗浄をさらに２回繰り返して、血清を完全に除去する。計数や洗浄のためには５０ｍｌのコニカル管何本かに細胞を分割するのが有用であるが、最後の回転には、１本の試験管に必ずプールしなおす。
８）ペレット自体の容量を考慮して細胞ペレットを血清フリー培地に４×１０７／ｍｌで再懸濁させる。ピペット操作または穏やかなボルテックス攪拌が適用できる。
９）氷上にある細胞を動物施設に持って行く。この時、マウスはケージ中ですでに注射の準備ができていなければならない。
１０）０．８〜０．９ｍｌの細胞を１ｃｃのツベルクリンシリンジに吸い取る。２５Ｇのニードルを付け、注射用としてシリンジ内に０．７ｍｌの細胞が残るように注意深く気泡を消す。残りの細胞は氷上に置く。
１１）左手でマウスを押さえ、マウスが動けないが呼吸はできるように尾と頭の後ろの皮膚を強く保持する。注射する皮膚をアルコールワイプで拭き、皮膚のたるみの部分をつまみ上げる。ニードルを傾斜させつつ、細胞の入ったシリンジおよびニードルをマウスの皮膚直下に静かに挿入し、０．２ｍｌの細胞（１×１０７細胞）をゆっくり注射する。注射領域は皮下で隆起領域を形成しなければならない。マウスをケージに戻す。
１２）注射３日後、ノギスで腫瘍の大きさを測定（長さおよび幅を測定）し始め、体積を（Ｌ×Ｗ２）／２として計算する。マウス重量も測定する。一般に、マウス重量は、予測される１日の変動を避けるために毎日同じ時（１〜２時間以内）に測定しなければならない。腫瘍体積が増えていることを確認するため、腫瘍体積は２〜３日間隔で少なくともさらに１回測定する。腫瘍体積が１５０〜２５０ｍｍ３の間になったら治療を開始することができる。最初に注射してから５〜１０日以内にこの時点に到達しなければならない。腫瘍がこの範囲から著しく外れるマウスは用いない。既存のＰＣ３試験では腫瘍を注射してから５日後に、既存のＨＣＴ１１６試験では腫瘍を注射してから８日後に治療を開始する。
１３）治療初日の前に、パクリタキセルおよびＡＢ−５／化合物Ｊ化合物を個用量のアリコートに小分けする。最初の腫瘍増殖期間中に測定した重量に基づき、治療の初日にマウスの重量を評価することができなければならない。試験管毎に、処理群のマウス数に＋１．５〜２倍の用量に十分な化合物を小分けする。パクリタキセルおよび化合物Ｊは双方とも２０ｍｇ／ｋｇで与える。化合物の損失を最小限とし、正確さを最大限とするため、本発明者らは２０〜３０ｍｇの化合物を秤量し、エタノールに溶かす。次に、所望の化合物量のアリコートを個々の試験管にピペットで移し、真空乾燥させる。アリコートをテフロン（登録商標）管またはガラス管で−２０℃にて乾燥保存する。
１４）治療初日に、各群の平均腫瘍体積が一定となるようにマウスを無作為に群に分ける。雄を用いる場合、争うために雄ｎｕ／ｎｕマウスを新しいｎｕ／ｎｕマウスとグループ分け直すのは望ましくないので複数のケージを使用する必要のある場合がある。
１５）１：１クレマホール：エタノールの保存溶液を調製する。まず、２０μｌ／回（dose）のクレマホール：エタノールに、必要に応じて激しくボルテックス攪拌するか音波処理を行いながら溶解させることで注射用の化合物Ｊおよびパクリタキセルを調製する。クレマホール：エタノールの終濃度が１０％となるように５％デキストロースで希釈する（すなわち、一用量（回）当たり５％デキストロース１８０μｌを加える）。ボルテックスにかけて混合する。溶液はやや粘稠となる。パクリタキセルは溶液中に留めるためにやや高濃度（最終２０％まで）の賦形剤を必要とする場合がある。既存のＨＣＴ１１６およびＰＣ３試験では、パクリタキセル処方には２０％、ＡＢ−５処方には１０％の賦形剤を用いた。
１６）１５０Ｗの熱ランプを用いて尾を温める。本発明者らは尾だけを温めることを選択したが、動物施設により使用される標準的技術が優れている。マウスをテールベイナー(Tailveiner)に置く。静脈をアルコールワイプで拭き、５秒かけて０．２ｍｌをゆっくり注射する。
１７）１日おきに６回の投与を行わなければならない（ｑ２ｄＸ６）。既存のＨＣＴ１１６およびＰＣ３試験では、月水金で２週間投与を行った（ｑ２−３ｄＸ６）。
１８）動物を秤量し、各投与で用量を再計算しなければならない。
１９）腫瘍注射後数か月間、３〜４日おきに腫瘍体積と重量を測定しなければならない。対照マウスは３０〜４０日以内に最長径で２０ｍｍに達するべきである（本発明者らの施設で屠殺の必要な時点）。パクリタキセルおよび化合物Ｊは双方とも４０〜８０％のマウスに治癒をともなう有意な退縮を生じるはずである。
【図面の簡単な説明】
【００５２】
【図１】図１は、ジアゾンアミドＡ、化合物Ｊのヒドロキシル化型、パクリタキセルおよびビンブラスチンと比較した場合の化合物Ｊの種々の癌細胞系統の増殖を阻害する能力を示す。
【図２】図２は、化合物Ｊおよびパクリタキセルで、ＰＴＸ１０卵巣癌細胞系統に関し、薬剤濃度に対して生存率をプロットしたものを示す。
【図３】図３は、化合物Ｊの薬物動態を示すグラフである。
【図４】図４ＡおよびＢは、ＨＣＴ１１６およびＰＣ−３細胞の異種移植片に対する、パクリタキセルと比較した場合の化合物Ｊの作用を示す。
【図５】図５ＡおよびＢは、化合物Ｊがin vivoにおいて好中球増殖または細胞総数に対して作用しないことを示す。
【図１】
2009513710.tif 000019
【図２】
2009513710.tif 000020
【図３】
2009513710.tif 000021
【図４】
2009513710.tif 000022
【図５】
2009513710.tif 000023
【国際調査報告】
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