(57)【要約】 【課題】  骨欠損を完全に充填する、更に、吸収可能な、形状結合状態の、即ち、解剖学的にまたは欠損に対応して形成された脆くない骨代用成形体を製造する。【解決手段】  架橋されたコラーゲンマトリックスに埋込まれたリン酸カルシウム粒子の混合物から骨代用材料を製造する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
異なる相（複数）のリン酸カルシウム粒子とコラーゲンを含んで構成される吸収性骨代用材料において、コラーゲンが、置換されたポリヒドロキシ芳香族化合物およびラッカーゼによって完全にまたは部分的に架橋されたマトリックスとして構成されていることを特徴とする吸収性骨代用材料。
【請求項２】
ポリヒドロキシ芳香族化合物が、単環式ジヒドロキシ芳香族化合物、二環式ジヒドロキシ芳香族化合物、多環式ジヒドロキシ芳香族化合物、二環式トリヒドロキシ芳香族化合物または多環式トリヒドロキシ芳香族化合物を含むグループから選択されることを特徴とする請求項１に記載の吸収性骨代用材料。                                  
【請求項３】
置換されたポリヒドロキシ芳香族化合物が、１１０〜１１００ｇ／ｍｏｌの分子量を有することを特徴とする請求項２に記載の吸収性骨代用材料。
【請求項４】
ポリヒドロキシ芳香族化合物が、２，５−ジヒドロキシ−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ベンズアミドであることを特徴とする請求項３に記載の吸収性骨代用材料。
【請求項５】
骨代用材料が、相互に連通気孔の多孔質体を形成することを特徴とする請求項１〜４の何れか一項に記載の骨代用材料。
【請求項６】
コラーゲンマトリックスが、更に、ＳｉＯ2ゲルを含むことを特徴とする請求項１〜５の何れか一項に記載の骨代用材料。
【請求項７】
相互に連通気孔の多孔質ボデーが、ボデーの内表面が、位置的に規定されて架橋されたコラーゲンによって著しく被われるよう、構成されていることを特徴とする請求項５または６に記載の骨代用材料。                                                  
【請求項８】
異なる材料成分（複数）が、不規則な順序または規則的な順序で配列されていることを特徴とする請求項１〜７の何れか一項に記載の骨代用材料。
【請求項９】
該骨代用材料が、成形体として構成されていることを特徴とする請求項１〜８の何れか一項に記載の骨代用材料。
【請求項１０】
該骨代用材料が、内部支持構造を有することを特徴とする請求項９に記載の骨代用材料。
【請求項１１】
支持構造が、金属、好ましくは、チタンからなることを特徴とする請求項１０に記載の骨代用材料。
【請求項１２】
支持構造が、吸収性金属からなることを特徴とする請求項１１に記載の骨代用材料。
【請求項１３】
支持構造が、吸収性有機材料からなることを特徴とする請求項１０に記載の骨代用材料。
【請求項１４】
骨代用材料の外表面および／または内表面に、作用物質が担持されていることを特徴とする請求項１〜１３の何れか一項に記載の骨代用材料。
【請求項１５】
作用物質が、容積内に導入され、材料の吸収によって始めて遊離されることを特徴とする請求項１〜１３の何れか一項に記載の骨代用材料。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、発明特有の態様で架橋されたコラーゲンマトリックス内に内包された異なった相からなるリン酸カルシウム粒子からなる吸収性骨代用材料に関する。
【背景技術】
【０００２】
組織による自然治癒では閉鎖できない骨欠損は、欠損に充填し、身体特有の骨に改変される自然源または人工源の骨代用材料の使用を必要とする。
【０００３】
この場合、自身の骨の利用は、いわゆる“ゴールデン・スタンダード”を意味し、即ち、患者において、健康な骨、例えば、腹骨稜から骨片を採取し、欠損充填に利用する。骨欠損が大きい場合または自身の骨が不適である場合、対応して加工した自己以外からの（外部由来の）骨にも依拠する。外部由来の場合、多量に利用できると云う利点に対して、多様な処理プロセスによって異なる機械的性質が誘起されることになると云う欠点がある（Ｐａｌｍｅｒ  Ｓ．Ｈ．，Ｇｉｂｓｏｎｓ  Ｃ．Ｌ．Ｍ．Ｈ．，Ａｔｈａｎａｓｏｕ  Ｎ．Ａ．：ＪＢＪＳ（Ｂｒ）１９９９，８１−Ｂ，３３３−５）。更に、外部由来の場合、感染が排除されない（ＢｏｙｃｅＴ．，Ｅｄｗａｒｄｓ  Ｊ．，Ｓｃａｒｂｏｒｏｕｇｈ  Ｎ．：Ｏｒｔｈｏｐ．Ｃｌｉｎ．Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ．１９９９，３０（４），５７１−８１）。脱（非）生物化処理（生物成分を除去）した獣骨の使用についても、外部由来の使用の場合と同様の問題点があり、かくして、各種の合成骨代用材料が開発された。
【０００４】
合成骨代用材料の利点は、有用性以外に、化学組成および構造に関するコントロールが存在し、最適な治療推移が達成されるよう、生物学的に作用する性質を制御できると云う点にある。
【０００５】
多数の合成骨代用材料は、カルシウムミネラル質（例えば、炭酸カルシウム、硫酸カルシウムおよび各種のリン酸カルシウム）を含む。過去において、特に、リン酸カルシウム（例えば、β−リン酸三カルシウムおよびヒドロキシルアパタイト）が使用された。この場合、ヒドロキシルアパタイトは、自然骨の本質的成分である（Ｄｏｒｏｚｈｋｉｎ  Ｓ．Ｖ．，Ｅｐｐｌｅ，Ｍ．：Ａｎｇｅｗ．Ｃｈｅｍｉｅ  ２００２，１１４，３２６０−７７）。
【０００６】
リン酸カルシウムベースの骨代用材料は、多様な実施例にもとづき、多様な使用分野のために製造される。顆粒は、例えば、歯科の骨欠損充填（補填）のために使用され、他方、注入可能なセメントは、椎体の安定化において使用される。負荷支持用セラミック成形体は、頭蓋および大きい管状骨の欠損の場合に使用される。
【０００７】
荷重支持の場合、リン酸カルシウムからなる骨代用材料には、特殊な困難（問題点）がある。必要な構造は、一定の最大力を受容できるに過ぎず、合成リン酸カルシウムの本来的に存在する脆性は、適合した製造プロセスによって補償しなければならない。強度増大は、例えば、焼結によって達成される。この場合、焼結させたリン酸カルシウムには、その吸収速度が正常な治療推移に対応する速度よりも本質的に遅いと云う欠点がある（ＬｅＧｅｒｏｓ  Ｒ．Ｚ．：Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  １９９３，１４，６５−８８）。焼結とともに、更に、ナノ気孔率の喪失が記録される。
【０００８】
リン酸カルシウムベースの骨代用材料の強度を増大する他の方式は、低温の等方性プレスによる圧縮である。この場合、しかしながら、この成形体の気孔率は、大きく失われ、従って、この効果の補償のため、機械的後加工（例えば、穿孔）によって巨視的パタンを形成しなければならない（Ｄ．Ｔａｄｉｃ  Ｄ．，Ｍ．Ｅｐｐｌｅ  Ｍ．：Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２００３，２４，４５６５−７１）。
【０００９】
機械的負荷能が本質的役割を演ずることがない場合、気孔率のより良好な調節を実現できる他の方法によって、リン酸カルシウムベースの骨代用材料を製造できる。材料成分として無機コンポーネントに限定した場合、特に、ゾル・ゲル・プロセスが、開（連続）気孔形ネットワーク構造を形成するのに好適である（Ｂｒｉｎｋｅｒ  Ｃ．Ｊ．，Ｓｃｈｅｒｅｒ  Ｇ．Ｗ．：Ｓｏｌ−Ｇｅｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ：Ｔｈｅ  Ｐｈｙｓｉｃｓ  ａｎｄ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｓｏｌ−Ｇｅｌ  Ｐｒｏｃｅｓｓｉｎｇ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９０）。
【００１０】
更に、有機コンポーネントを結合材として使用すれば、成形体を、直接成形プロセス（Ｍｉｃｈｎａａ  Ｓ．，Ｗｕａ  Ｗ．，Ｌｅｗｉｓａ  Ｊ．Ａ．：Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２００５  ２６，５６３２−９）において、例えば、立体的格子構造として形成でき、且つまた、プレス成形（Ｗｅｉｈｅ  Ｓ．，Ｗｅｈｍｏｅｌｌｅｒ  Ｍ．，Ｔｓｃｈａｋａｌｏｆｆ  Ａ．，ｖｏｎ  Ｏｅｐｅｎ  Ｒ．，Ｓｃｈｉｌｌｅｒ  Ｃ．，Ｅｐｐｌｅ  Ｍ．，ＥＵＦＩＮＧＥＲ  Ｈ．：Ｍｕｎｄ  Ｋｉｅｆｅｒ  Ｇｅｓｉｃｈｔｓ
Ｃｈｉｒ  ２００１，５：２９９−３０４）によっても製造できる。上記成形体の気孔率は、成形プロセス自体によってまたは機械的加工によって調節しなければならない（Ｄ．Ｔａｄｉｃ  Ｄ．，Ｍ．Ｅｐｐｌｅ  Ｍ．，Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  ２００３，２４，４５６５−７１）。
【００１１】
体液中の溶解度が異なる、従って、吸収速度が異なるリン酸カルシウム（複数）を調節可能な割合で含む骨代用材料を利用することによって、吸収推移を規定のとおり構成できる。かくして、新しい骨組織が形成、固定される時間インターバルにわたって、骨代用材料によって負荷を支持できる、低溶解度のリン酸カルシウムは、骨の復元中に始めて遅延して完全に吸収される（ＬｅＧｅｒｏｓ  Ｒ．Ｚ．：Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍａｔｅｒｉａｌｓ  １９９３，１４，６５−８８）。                
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
総括して、リン酸カルシウムベースの骨代用材料は、単純な欠損の処理に使用して成果を挙げ得ると云える。しかしなから、重大な欠損の場合の使用は、材料技術的問題に起因して、現在は成功していない。上記の諸問題点は、実際のプロセスが、骨代用材料に対するないし骨代用材料により形成される欠損充填体に対する下記の本質的要求を満足できないと云う点にある。
【００１３】
（１）一方では、骨欠損を完全に且つ力結合状態にも充填する形状結合（ありつぎ様結合、formschluessige）状態の、即ち、解剖学的にまたは欠損に対応して形成された骨代用成形体を製造すると云う要求，および、  
【００１４】
（２）他方では、吸収容易な構造を実現すると云う要求。
【００１５】
更に、実際の製造法を利用する場合、補足の有機物質または無機物質を著しく異なる（複数の）濃度で骨代用材料に導入することは極めて困難であり、埋込まれた恒久的な支持構造または吸収性の支持構造によって負荷支持特性の改善を行うことも極めて困難である。
【００１６】
本発明に係る設定課題は、骨欠損を完全に充填する、更に、吸収可能な、形状結合状態の、即ち、解剖学的（anatomisch）にまたは欠損に対応して形成された脆くない骨代用成形体を製造することにある。
【課題を解決するための手段】
【００１７】
設定課題の解決は、本発明にもとづき架橋され（vernetzt）たコラーゲンマトリックスに埋込まれたリン酸カルシウム粒子（複数）の混合物から骨代用材料を製造することによって達成される。
【００１８】
特に、ラッカーゼ誘導のペプチド架橋および適切な橋架け分子によって、コラーゲン架橋を達成する。
【００１９】
橋架け分子としては、基本的に、置換されたジヒドロキシ芳香族化合物および／またはリグノール系ポリフェノールオキシダーゼ（例えば、ラッカーゼ）の基質（Substrate）が好適である。
【００２０】
従って、単環式オルソジヒドロキシ芳香族化合物、単環式パラジヒドロキシ芳香族化合物、二環式モノヒドロキシ芳香族化合物、多環式モノヒドロキシ芳香族化合物、二環式ジヒドロキシ芳香族化合物、多環式ジヒドロキシ芳香族化合物、二環式トリヒドロキシ芳香族化合物、多環式トリヒドロキシ芳香族化合物、またはこれらの混合物を使用する。本発明に係るヒドロキシ芳香族化合物は、公知のシェル接着剤とは異なり、ポリマー鎖の構成成分ではない。
【００２１】
上記の芳香族化合物（ないし芳香族炭化水素、Aromaten）は、更に、置換できる。好ましい官能基は、ハロゲン、スルホ−、スルホン−、スルファミド、スルファニル−、アミノ−、アミド−、アゾ−、イミノ−およびヒドロキシからなるグループから選択された置換基である。この場合、置換された芳香族化合物、特に、置換されたジヒドロキシ芳香族化合物は、極めて好適な重合特性（例えば、迅速な重合、僅かな固有結合および良好な架橋強度）を有することが確認される。芳香族化合物の適切な架橋によって、モノヒドロキシ芳香族化合物も橋架け分子として架橋に好適である。「置換」とは、本発明の意味において、芳香族化合物に、ヒドロキシル基以外に、更に、１，２，３または４つの残基が結合されていると云うことを意味する。更に、モノヒドロキシル化ビアリル化合物も橋架け分子として好適である。
【００２２】
橋架け分子として、オルソ位置またはパラ位置にヒドロキシ基またはメトキシ基を有し、一般式１および２に対応するフェノール誘導体が特に好ましい。
【００２３】
2009525799.tif 000002
式１                              式２
【００２４】
式中，
ｎ＝０〜１０，好ましくは，０または１，特に，０，
Ｒ1＝ＯＨまたはＮＨ2またはハロゲン（Ｈａｌ），好ましくは，ＯＨ，ＣｌまたはＢｒ，特に，ＯＨ，
Ｒ2＝Ｈ，ＣＨ3，ＣＨＯ，ＣＯＣＨ3，ＣＯＮＨ2，ＣＯＮ−アルキル，ＣＯＮ−アルキル−ＯＨ，ＣＯＯＨ，Ｃ００−アルキル，アルキル、置換された芳香族化合物、特に、ＣＯＮ−アルキルまたはＣ００−アルキル，および、
Ｒ3＝Ｈ，ＣＨ3，アルキル、置換された芳香族化合物、特に、ＨまたはＣＨ3である。
【００２５】
ここで、アルキルは、好ましくは、１−２０ヶの炭素原子、更に好ましくは、１−６ヶの炭素原子を有する分岐または非分岐脂肪族炭化水素鎖、例えば、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソブチル、ｎ−ペンチル，ｎ−ヘキシルを表す。
【００２６】
考え得る橋架け分子は、更に、一般式１の化合物および更に置換されてもよいそのヒドロキノンである。できる限り迅速な接着反応の観点の下で、本発明にもとづき、固有結合が僅かである、置換されたジヒドロキシ芳香族化合物が、特に好適である。２，５−ジヒドロキシベンズアミドを使用するのが好ましく、２，５−ジヒドロキシ−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ベンズアミドが、特に好ましい。
【００２７】
トリヒドロキシ芳香族化合物の場合、ベンゾール単位当り２つ以下のヒドロキシ基が存在することが好ましい。ポリフェニル、即ち、ビフェニルまたは下記一般式３のトリフェニルが、特に好ましい。
【００２８】
2009525799.tif 000003
式３
【００２９】
式中，
ｎ＝０〜１０，好ましくは，０または１
および
Ｒ1＝ＨおよびＲ2＝ＯＨ、またはＲ1＝ＯＨおよびＲ2＝Ｈ，
である。
【００３０】
この場合、一般式３のフェニルは、例えば、ＯＨ基に対するオルソ位置において、ＣＨ3，ＣＨＯ，ＣＯＣＨ3，ＣＯＮＨ2，ＣＯＮ−アルキル，ＣＯＮ−アルキル−ＯＨ，ＣＯＯＨ，Ｃ００−アルキル，アルキル、置換された芳香族化合物、特に、ＣＯＮ−アルキルまたはＣ００−アルキルで置換でき，および／または、ＯＨ基に対するメタ位置において、ＣＨ3，アルキル、置換された芳香族化合物、特に、ＣＨ3で置換できる。
【００３１】
コラーゲンの架橋は、本発明にもとづき、ポリフェノールオキシダーゼ（例えば、リグノール系ポリフェノールオキシダーゼ，特に、ラッカーゼ）の作用の下で行う（ＥＣ１．１０．３．２）。ラッカーゼは、架橋剤として知られている。ラッカーゼは、植物、真菌類、バクテリアまたは昆虫から得られるか、天然酵素から導出できる。本発明の枠内で使用されるラッカーゼは、組換えによって調製したものでもよく、精製したものでもよい。例は、下記属、即ち、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ，Ｎｅｕｒｏｓｐｏｒａ，Ｐｏｄｏｓｐｏｒａ，Ｂｏｔｒｙｔｉｓ，Ｃｏｌｌｙｂｉａ，Ｆｏｍｅｓ，Ｌｅｎｔｉｎｕｓ，Ｐｌｅｕｒｏｔｕｓ，Ｐｙｃｎｏｐｏｒｕｓ，Ｐｙｒｉｃｕｌａｒｉａ，Ｔｒａｍｅｔｅｓ，Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ，Ｃｏｐｒｉｎｕｓ，Ｐｓａｔｙｒｅｌｌａ，Ｍｙｃｅｌｉｏｐｈｔｈｏｒａ，Ｓｃｈｔａｌｉｄｉｕｍ，Ｐｏｌｙｐｏｒｕｓ，ＰｈｌｅｂｉａまたはＣｏｒｉｏｌｕｓから得られるラッカーゼである。ラッカーゼの調製は、ＥＰ０９４７１４２に開示されている。
【００３２】
ポリフェノールオキシダーゼ（例えば、リグノール系ポリフェノールオキシダーゼ，好ましくは、ラッカーゼ）（ＥＣ１．１０．３．２）の使用によって、その基質群（spektrum）を架橋反応に利用できる。従って、本発明は、特に、広汎な橋架け分子群を架橋に使用できることを特徴とする。                                        
【００３３】
単一成分のコラーゲンの場合も橋架け分子物質の場合も、約１−５０ｍＭの濃度変化が可能である。
【００３４】
この場合、選択した橋架け分子に応じて、橋架け分子の妨害的な固有反応が起こり、この反応によって、架橋結合の形成が低下されると云うことを考慮しなければならない。橋架け分子の過小濃度は、反応の過度の減速を誘起し、過大濃度は、固有結合による過大な副次的反応を誘起する。ポリフェノールオキシダーゼの濃度は、反応速度に影響を与え、この場合、用途に応じて、濃度変更によって、架橋の増速または組合せの加工性を達成できる。軟部組織の架橋のための好ましい量比は、例えば、混合物、即ち、コラーゲン８．５ｍＭ；２，５−ジヒドロキシ−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ベンズアミド１２．５ｍＭ；ポリフェノールオキシダーゼ０．３２Ｕ（１５６ｎｍｏｌ／ｍｌ・ｍｉｎ）において実現される。                                                                  
【００３５】
相および濃度の異なるリン酸カルシウム粒子をマトリックスに埋込んだ場合、橋架け分子によるコラーゲンマトリックスの架橋によって、骨代用材料としての適性を有する固体材料が得られる。
【００３６】
ポリフェノールオキシダーゼおよびポリフェノールは、リン酸塩緩衝液（例えば、リン酸カルシウムまたはリン酸ナトリウム緩衝液またはＰＢＳ）に溶解するのが好ましい。使用成分、即ち、ラッカーゼおよびポリフェノールのコンシステンシーは、液状からペースト状までの範囲にある。使用した単一成分の粘度は、溶媒によって変更できる。溶媒の濃度は、架橋に影響を与える。
【００３７】
架橋反応は、好ましくはｐＨ値５−７において行われる。反応は、２−８０℃の温度範囲において推移できるが、２０−３７℃の範囲、特に、２５−３０℃の範囲の温度が好ましい。
【００３８】
架橋支援のため、更に、短鎖のペプチドを添加使用できる。本発明の特に好ましい実施例の場合、ペプチドのアミノ酸の５０％は、リシンである。リシンおよび他のアミノ酸は、反復するジペプチド単位として配列したものでよい。また、それら（単独又は組合せ）の他の配列（ないしシーケンス、Abfolge）又は他のアミノ酸（複数）の受入（Aufnahme）が可能であり、特に、アルギニン、アスパラギン、グルタミンまたはヒスチジン（リシンの代わりにまたはリシンに加えて）、セリンまたはスレオニン（チロシンの代わりにまたはチロシンに加えて）、システインまたは他のアミノ酸（複数）の他の配列ないし受入が可能である。
【００３９】
同じく好ましい実施例の場合、２つのアミノ酸のみからなるポリマー、例えば、（リシン−チロシン）nが対象である。ここで、ｎは、５−４０の範囲の数値、例えば、５，
１０または２０を取ることができる。
【００４０】
更に、ペプチドとして（リシン−チロシン）nを使用するのが有利である。マトリックスに（リシン−チロシン）nを使用する場合、リシンは、骨代用材料中に高濃度で存在し、骨細胞の増殖および分化にプラスの影響を与える。
【００４１】
架橋前に、物質混合物は、粘稠な性質を有し、任意に造形（成形）できる。この場合、球片の如き簡単な形状も複雑な成形体も実現できる。
【００４２】
更に、多孔質成形体に粘稠な材料を充填し、固化（ないし硬化）することができる。
【００４３】
好ましい実施例の場合、材料は多孔質な相互結合体として構成される。
【００４４】
全重量に対するリン酸カルシウム粒子の重量割合が、７０〜９５％であり、コラーゲンおよび場合によるオリゴペプチドの重量割合が、５〜１５％であり、橋架け分子物質の重量割合が、０．５〜５％であるのが好ましい。
【００４５】
本発明に係る骨代用材料は、他の物質（複数）を含むことができる。好ましい実施例の場合、材料は、更に、ＳｉＯ2を含む。
【００４６】
骨代用材料に、抗生物質をドーピングできる。この場合、遊離アミノ基を含み架橋前に骨代用材料に添加混合された抗生物質は、ラッカーゼ誘導架橋の間に、コラーゲンに結合される。この場合、このように抗生物質をドーピングしたコラーゲンが強い抗微生物作用を有すると云うことを証明できた。
【００４７】
骨代用材料は、支持構造とともに且つ支持構造なしで使用できる。吸収可能な有機材料を支持構造として使用する場合、本発明にもとづき、遊離アミノ基を担持する有機材料を選択するのが特に有利である。この場合、橋架け分子によってコラーゲンのみならず支持構造に対しても架橋が行われ、かくして、強固な結合が得られるが、この結合は、治癒プロセスの過程において、身体固有の組織によって置換される。吸収の機序（メカニズム）は、加水分解性または酵素性であってよい。特に、ペプチドを分解し、個別フラグメントを搬出、排除できる。代替え方式として、フラグメントまたはアミノ酸を、再生される組織中に組込むこともできる。
【００４８】
更なる他の実施例の場合、リン酸カルシウム成形体の気孔率は、方向性をもって配向されている（gerichtet）。従って、生ずる複合成形体の機械的性質は、方向に依存する。
【００４９】
方向依存の機械的性質を有する２つの成形体の接触表面を架橋して成形体を強固に結合することによって、生ずる成形体の機械的性質の方向依存性が低下される。
【００５０】
成形体の対をなす接触表面の架橋によって複数の平坦な成形体を強固に結合することによって、大きい機械的負荷能を有する多層の複合成形体（Verbundformkoerper）が生ずる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００５１】
第１実施例
【００５２】
リン酸カルシウムの各種変性ないし装飾（modifikationen）の粒子とコラーゲンとからなる混合物を、２，５−ジヒドロキシ−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ベンズアミドと均一に混合し、かくして、１２．５ｍＭの濃度を得る。活性度０．３２Ｕ（１５６ｎｍｏｌ／ｍｌ・ｍｉｎ）のラッカーゼの添加によって架橋が開始する。接着剤の硬化後、無機構成成分は、接着剤とともに、固形物の割合に依存して、高粘度のまたは固体状の材料を形成する。  
【００５３】
第２実施例
【００５４】
実施例１と同様の実験構成を選択するが、コラーゲンに加えて、オリゴペプチド（２〜約１００のアミノ酸残基長さ（数）、好ましくは、約４〜約２０のアミノ酸残基数）を添加する。オリゴペプチドは、通常の蛋白性アミノ酸以外に、改質（変性）アミノ酸または非典型的アミノ酸（例えば、ヒドロキシリシン）を含むことができる。リシン含有オリゴペプチドを使用するのが好ましく、ペプチドのアミノ酸の約５０％がリシンであれば特に有利である。更に、ペプチドのアミノ酸の約５０％は、チロシンであってよい。リシンおよびチロシンは、例えば、反復するジペプチド単位として配列できる。特に、リシンおよびチロシンの反復するジペプチド単位（［Ｌｙｓ−Ｔｙｒ］nまたは［Ｔｙｒ−Ｌｙｓ］n、但しｎ＝５又は１０）からなるペプチドの添加によって、コラーゲンの包含状態およびリン酸カルシウムの包含状態において、良好な架橋が達成される。
【００５５】
第３実施例                                                                  
【００５６】
実施例２に記載のオリゴペプチドをＰＢＳ（リン酸塩緩衝サリン，２．７モルＮａＣｌ，５４ミリモルＫＣｌ，８７ミリモルＮａ2ＨＰＯ4，３０ミリモルＫＨ2ＨＰＯ4，ｐＨ７．４）に装入し、ラッカーゼを添加する（コンポーネント１）。２，５−ジヒドロキシ−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ベンズアミドをＰＢＳに溶解する（コンポーネント２）。双方のコンポーネントの混合（複数）後、リン酸カルシウムの各種変性の粒子およびコラーゲンを混合した。コンポーネントのできる限り高濃度の溶液を得るため、溶媒量を最少に選択する。
【００５７】
第４実施例      
【００５８】
未焼結の相互結合状態の脆い多孔質のリン酸カルシウムベース成形体に、異なるリン酸カルシウム変性の粒子およびコラーゲンからなる粘稠な混合物、場合によっては更に、実施例２のオリゴペプチド、２，５−ジヒドロキシ−Ｎ−（２−ヒドロキシエチル）ベンズアミドおよびラッカーゼを、毛管作用、圧力印加または負圧によって、気孔内に導入し、硬化後、複合体（中）においてＣａＰ成形体と共に、固形複合成形体を形成する。特殊な実施例の場合、多孔質体の内表面が、所定箇所において架橋されたコラーゲンによって大きく（大部分）被われるよう、相互結合状態の多孔質体を形成する。
【００５９】
ラッカーゼによって開始された架橋の後、無機物（Mineral）に関してもコラーゲンに関しても相互結合状態の多孔質材料が得られる。上記材料は、移植時、その骨誘導（osteo konduktiv）作用によって、欠陥骨の構成のための、かくして、欠損の治癒のための案内レール（ガイド経路）として機能する。
【００６０】
第５実施例
【００６１】
接触表面の多層架橋によって単一のまたは多数の気孔（開孔）を有する中空体または閉鎖した中空体が生ずると云う点を別として、実施例３の複合成形体を製造する。移植後、形状安定性を維持して、骨欠損の再生が行われる。
【００６２】
第６実施例
【００６３】
ラッカーゼの添加前に、混合物中に、アミノ基担持（含有）抗生物質が均一に分布されると云う点を別として、実施例１の骨代用材料の製造。ラッカーゼによる架橋の後、コラーゲンに抗生物質をドーピングする。かくして、内部にも表面にも作用物質を担持する（含む）骨代用材料が生ずる。
【００６４】
第７実施例
【００６５】
１つまたは複数の層境界に同一のまたは異なる作用物質が内蔵（埋設）される点を別として、実施例６の多層骨代用材料の製造。
【国際調査報告】
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