(57)【要約】  本発明は式(Ｉ):Ｈ2Ｎ−ＣＨ(Ｒ1)−ＣＨ2−Ｓ−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ(Ｒ2)−ＣＯＮＨ−Ｒ5で示される新規化合物に関する。式中、Ｒ1は炭化水素鎖、フェニルもしくはベンジル基、または５〜６員複素環で置換されたメチレン基であり;Ｒ2はフェニルもしくはベンジル基、５〜６員芳香族複素環、または5〜6員複素環で置換されたメチレン基であり;Ｒ5は、ＣＨ(Ｒ3)−ＣＯＯＲ4基（ここで、Ｒ3は、水素、ＯＨもしくはＯＲ基、飽和炭化水素基、フェニルもしくはベンジル基であり、ＯＲ4は親水性エステル基である）であるか、または窒素、硫黄および酸素よりなる群から選ばれた複数のヘテロ原子を含み、そのうちの２原子は窒素である、５〜６員複素環（この複素環は、Ｃ1〜Ｃ6アルキル、フェニルもしくはベンジル基で置換可能）である。本発明の化合物の医薬形態における使用、該化合物と薬剤に許容される賦形剤とを含む薬剤組成物、式(Ｉ)で示される新規化合物ならびに／またはモルヒネもしくはその誘導体の鎮痛および抗うつ作用を増強するための少なくとも１種のカンナビノイド誘導体との併用も開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記一般式（Ｉ）で示される化合物：
Ｈ2Ｎ−ＣＨ(Ｒ1)−ＣＨ2−Ｓ−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ(Ｒ2)−ＣＯＮＨ−Ｒ5        (Ｉ)
式中
Ｒ1は下記のいずれかの基を意味し：
・炭素数１〜６の飽和または不飽和の線状または分岐炭化水素鎖、これは場合により下記＊に記した置換基で置換されていてもよい：
＊ＯＲ、ＳＲまたはＳ(Ｏ)Ｒ基、ここで各Ｒ基はそれぞれ水素、炭素数１〜４の線状もしくは分岐炭化水素鎖、フェニルまたはベンジル基を意味する、
＊フェニルまたはベンジル基、
・フェニルまたはベンジル基、これは場合により下記＊に記した置換基で置換されていてもよい：
＊１〜５個のハロゲン、特にフッ素、
＊ＯＲ、ＳＲまたはＳ(Ｏ)Ｒ基、ここで各Ｒ基は上記と同じ意味である、
・場合によりＮ−オキシドまたはＳ−オキシドの形に酸化されていてもよい窒素または硫黄原子をヘテロ原子として有する、芳香族または飽和の５または６員環の複素環で置換されているメチレン基；
Ｒ2は下記のいずれかの基を意味し：
・フェニルまたはベンジル基、これは場合により下記＊に記した置換基で置換されていてもよい：
＊１〜５個のハロゲン、特にフッ素、
＊ＯＲまたはＳＲ基、ここで各Ｒ基はそれぞれ上記と同じ意味である、
＊場合により炭素数１〜６の環式または線状脂肪族基によりモノまたはジ置換されていてもよいアミノ基、
＊５または６員環の芳香族環、
・ヘテロ原子が酸素、窒素または硫黄である５または６員環の芳香族複素環、
・ヘテロ原子が酸素、窒素または硫黄であり、窒素および硫黄原子は場合によりＮ−オキシドまたはＳ−オキシドの形に酸化されていてもよい、芳香族または飽和の５または６員環の複素環で置換されているメチレン基；
Ｒ5は、下記(ａ)または(ｂ)のいずれかの基を意味する：
ａ）ＣＨ(Ｒ3)−ＣＯＯＲ4基、ここで
Ｒ3は下記のいずれかを意味し：
・水素、
・ＯＨまたはＯＲ基、ここでＲは上記と同じ意味である、
・場合によりＯＲまたはＳＲ基（各Ｒ基はそれぞれ上記と同じ意味）で置換されていてもよい、炭素数１〜６の線状または分岐飽和炭化水素鎖（アルキル）、
・フェニルまたはベンジル基、これは場合により下記＊に記した置換基で置換されていてもよい：
＊１〜５個のハロゲン、特にフッ素、
＊ＯＲまたはＳＲ基、ここで各Ｒ基はそれぞれ上記と同じ意味である、そして
ＯＲ4は下記のいずれかの基を意味する：
・ＯＣＨ2ＣＯＯＲ'（グリコール酸エステル）基またはＯＣＨ(ＣＨ3)ＣＯＯＲ'（乳酸エステル）基、ここで、各Ｒ'基はそれぞれ下記のいずれかの基を意味する：
＊場合によりＣ１〜Ｃ３のアルコキシ基で置換されていてもよい、炭素数１〜６の線状または分岐飽和炭化水素鎖（アルキル）、好ましくは場合によりメトキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、
＊Ｃ５〜Ｃ８のシクロアルキル基、好ましくはＣ５〜Ｃ６のシクロアルキル基、
＊フェニル、ベンジル、ヘテロアリール、またはアルキルヘテロアリール基、
・ＯＣＨ(Ｒ")Ｏ(ＣＯ)ＯＲ'またはＯＣＨ(Ｒ")Ｏ(ＣＯ)Ｒ'基、ここでこれらのＲ'基はそれぞれ上記と同じ意味であり、各Ｒ"基はそれぞれ下記のいずれかの基を意味する：
＊水素原子、
＊場合によりＣ１〜Ｃ３のアルコキシ基で置換されていてもよい、線状または分岐のＣ１〜Ｃ６アルキル鎖、好ましくは場合によりメトキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、
＊Ｃ５〜Ｃ８のシクロアルキル基、好ましくはＣ５〜Ｃ６のシクロアルキル基、
＊フェニル、ベンジル、ヘテロアリール、またはアルキルヘテロアリール基、
・ＯＣＨ(ＣＨ2ＯＣＯＲ')2またはＯＣＨ2−ＣＨ(ＯＣＯＲ')−ＣＨ2ＯＣＯＲ'で示されるトリグリセリド基、ここで各Ｒ'基はそれぞれ上記と同じ意味である、
・Ｄ−グルコース、β−Ｄ−グルコピラノース、α−もしくはβ−ガラクトピラノースのようなグリコシド基、
・ＯＣＨ2ＣＨ2(ＳＯ2)ＣＨ3で示されるスルホネート基、
・ＯＣＨ(ＣＨ2ＯＨ)2基；
ｂ）窒素、硫黄および酸素よりなる群から選ばれた複数のヘテロ原子を含み、そのうちの２原子は窒素である、５または６員複素環、この複素環は場合によりＣ１〜Ｃ６アルキル、フェニルまたはベンジル基で置換されていてもよく、５員複素環は、イミダゾリル、ピラゾリル、イミダゾリジニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、チアジアゾリルおよびフラザニルよりなる群から選ばれる、ならびに
上記化合物（Ｉ）の薬剤に許容されるに鉱酸または有機酸との酸付加塩。
【請求項２】
Ｒ1がＳＲ基で置換された炭素数１〜４のアルキル基を意味し、Ｒの意味は上記の通りであり、特にＲが炭素数１〜４の線状または分岐飽和炭化水素鎖を意味することを特徴とする、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ2基が、ベンジル基、或いはヘテロ原子として、場合によりＮ−オキシドまたはＳ−オキシドの形に酸化されていてもよい窒素または硫黄１原子を有する、芳香族または飽和の５または６員環の複素環で置換されたメチレン基を意味することを特徴とする、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ3基が、水素原子、またはＯＨもしくはＳＨ基で置換された炭素数１〜６のアルキル基を意味することを特徴とする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
ＯＲ4基がＯＣＨ(Ｒ")Ｏ(ＣＯ)ＯＲ'またはＯＣＨ(Ｒ")Ｏ(ＣＯ)Ｒ'基を意味し、
・Ｒ'基はＣ１〜Ｃ４アルキル鎖、特にエチル基を意味し、そして
・Ｒ"基はメチル、ＣＨ(ＣＨ3)2、シクロヘキシルまたはフェニル基を意味する、
ことを特徴とする、請求項１〜４のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ5基が、場合によりＣ１〜Ｃ４アルキル鎖、フェニルまたはベンジル基で置換されていてもよい、２個の窒素原子を含む５員複素環を意味することを特徴とする、請求項１〜５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項７】
前記化合物が下記化合物よりなる群から選ばれることを特徴とする、請求項１〜６のいずれか１項に記載の化合物：
１−(２−(１−(２,３−ジアセトキシプロポキシカルボニル)−エチルカルバモイル)−３−チオフェン−３−イルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−(１−(２−メタンスルホニルエトキシカルボニル)−エチルカルバモイル)−３−チオフェン−３−イルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−(１−(１−エトキシカルボニルオキシエトキシカルボニル)−エチルカルバモイル)−３−チオフェン−３−イルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−(１−エトキシカルボニルメチルオキシカルボニルエチルカルバモイル)−３−チオフェン−３−イルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−(１−(１−エトキシカルボニルオキシエトキシカルボニル)−２−ヒドロキシプロピルカルバモイル)−３−チオフェン−３−イルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−(１−(２−アセトキシ−１−アセトキシメチルエトキシカルボニル)−エチルカルバモイル)−３−チオフェン−３−イルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−(１−(２−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチルエトキシカルボニル)−エチルカルバモイル)−３−チオフェン−３−イルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−(１−(３,４,５,６−テトラヒドロキシテトラヒドロピラン−２−イルメトキシカルボニル)−エチルカルバモイル)−３−チオフェン−３−イルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−(１−(１−エトキシカルボニルオキシエトキシカルボニル)−２−ヒドロキシプロピルカルバモイル)−３−フェニルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−(１−(２−アセトキシ−１−アセトキシメチルエトキシカルボニル)−２−ヒドロキシプロピルカルバモイル)−３フェニルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−((１−エトキシカルボニルオキシ−エトキシカルボニルメチル)−カルバモイル)−３−フェニルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
３−(２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブチルジスルファニル)−２−ベンジル−Ｎ−(５−エチル−(１,３,４)−チアジアゾール−２−イル)プロピオンアミド、
１−(２−((１−エトキシカルボニルオキシ−２−メチルプロポキシカルボニルメチル)−カルバモイル)−３−フェニルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−((シクロヘキシル−エトキシカルボニルオキシ−メトキシカルボニルメチル)−カルバモイル)−３−フェニルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−((エトキシカルボニルオキシ−フェニル−メトキシカルボニルメチル)−カルバモイル)−３−フェニルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
３−メチルスルファニル−１−(３−フェニル−２−((１−プロピオニルオキシ−エトキシカルボニルメチル)−カルバモイル)−プロピルジスルファニルメチル)−プロピルアミン、
１−(２−((２−メチル−１−プロピオニルオキシ−プロポキシカルボニルメチル)−カルバモイル)−３−フェニルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−((シクロヘキシル−プロピオニルオキシ−メトキシカルボニルメチル)−カルバモイル)−３−フェニルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
３−メチルスルファニル−１−(３−フェニル−２−((フェニル−プロピオニルオキシ−メトキシカルボニルメチル)−カルバモイル)−プロピルジスルファニルメチル)−プロピルアミン。
【請求項８】
医薬としての、請求項１〜７のいずれか１項に記載の一般式(Ｉ)で示される化合物。
【請求項９】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の一般式(Ｉ)で示される少なくとも１種の化合物と、製剤に適した賦形剤、特に経口、経鼻、または静脈内経路による投与に適した賦形剤とを含有することを特徴とする薬剤組成物。
【請求項１０】
うつ病ならびに急性疼痛、炎症性疼痛および神経性疼痛のような各種疼痛の治療用であることを特徴とする、請求項９に記載の薬剤組成物。
【請求項１１】
うつ病および疼痛の治療用医薬を製造するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の一般式(Ｉ)で示される化合物の使用。
【請求項１２】
少なくとも１種のカンナビノイド誘導体、特にΔ9−テトラヒドロカンナビノールをさらに含有することを特徴とする、請求項９または１０に記載の薬剤組成物。
【請求項１３】
請求項１〜７のいずれか１項に記載の一般式(Ｉ)で示される化合物の鎮痛および／または抗うつ作用を増強するための、少なくとも１種のカンナビノイド誘導体、特にΔ9−テトラヒドロカンナビノールの薬剤組成物における使用。
【請求項１４】
うつ病および疼痛の治療用医薬を製造するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の一般式(Ｉ)で示される少なくとも１種の化合物と、少なくとも１種のカンナビノイド誘導体、特にΔ9−テトラヒドロカンナビノールとの組み合わせの使用。
【請求項１５】
i) 請求項１〜７のいずれか１項に記載の一般式(Ｉ)で示される少なくとも１種の化合物と、
ii) 少なくとも１種のカンナビノイド誘導体と、
を含む、同時、別時期または交互使用のための組み合わせ品としての薬剤組成物。
【請求項１６】
i) 請求項１〜７のいずれか１項記載の一般式(Ｉ)で示される少なくとも１種の化合物と、
ii) 少なくとも１種のカンナビノイド誘導体と、
を含む、同時、別時期または交互使用のための組み合わせ品としての薬剤組成物のうつ病および疼痛の治療用医薬を製造するための使用。
【請求項１７】
モルヒネまたはその誘導体をさらに含有することを特徴とする、請求項９、１０または１２に記載の薬剤組成物。
【請求項１８】
うつ病および疼痛の治療用医薬を製造するための、請求項１〜７のいずれか１項に記載の一般式(Ｉ)で示される少なくとも１種の化合物とモルヒネまたはその誘導体との組み合わせの使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ネプリリシン (neprilysin，NEP) およびアミノペプチダーゼＮ（APN）の新規な混合阻害剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
天然オピオイドペプチドのエンケファリン (Tyr-Gly-Gly-Phe-Met または Tyr-Gly-Gly-Phe-Leu) は、これらのペプチドのGly3-Phe4結合を開裂するネプリリシン (EC 3.4.24.11) (Nature 276 (1978) 523)およびTyr1-Gly2結合を切断するアミノペプチダーゼＮ (EC 3.4.11.2) (Eur. J. Pharmcol. 117 (1985) 233; Pharmacological Review, 1993, 45, 87-146に概説)という２種類の亜鉛メタロペプチダ−ゼによって主に分解される。内因性エンケファリンを酵素分解から完全に防護することによるこれら２種類の酵素の混合阻害剤が知られており、それらはエンケファリンの薬理学的作用、特に鎮痛および抗うつ作用を示す。
【０００３】
従来技術に記載されているこれら２種類の酵素活性の混合阻害剤は、ヒドロキサメート(hydroxamates) 官能基を持つ化合物（FR 2 518 088およびFR 2 605 004）、アミノホスフィン系化合物(FR 2 755 135およびFR 2 777 780)、およびアミノ酸誘導体 (FR 2 651 229)である。これらの特許出願に開示されている化合物は、脳室内経路による投与後に優れたin vitroおよびin vivo活性を示す。これは特にヒドロキサメートの場合に実証された (Eur. J. Pharmacol., 102 (1984) 525-528; Eur. J. Pharmacol., 165 (1989) 199-207; Eur. J. Pharmacol., 192 (1991) 253-262)。これについて、ラット関節炎のモデルにおける静脈内 (ＩＶ) 投与後にも有意な活性を実証することができた (Brain Research, 497 (1989) 94-101)。ホスフィン誘導体およびアミノ酸誘導体の場合、試験分子を、油、エタノールおよび水の混合液中に溶解した場合には、ＩＶ経路による投与後に良好なin vivo活性が実証された (J. Med. Chem. 43 (2000) 1398-1408; J. Med. Chem. 44 (2001) 3523-3530; J. Pharm. Exp. Ther. 261 (1992) 181-10)。
【０００４】
しかし、アミノ酸誘導体の系列に属する化合物の１つが比較的水溶性であることが証明された(Pain, 73 (1997) 383-391) にもかかわらず、これまでに開示された分子には、水相中で可溶性を示し、かつ経口経路により投与して、ヒトに適用するのに十分な低い動物における投与量で有利な鎮痛反応を与えるのに十分な生物学的利用能を示すものはない。また、これまでに言及された分子のどれも、静脈内投与は可能ではない。なぜなら、動物試験では、ヒトでのこの投与経路による投与には適合しない混合液中での溶解を必要とするからである。
【特許文献１】仏国特許出願公開第２６５１２２９号
【非特許文献１】J. Med. Chem. 43 (2000) 1398-1408
【非特許文献２】J. Med. Chem. 44 (2001) 3523-3530
【非特許文献３】J. Pharm. Exp. Ther. 261 (1992) 181-10
【発明の開示】
【０００５】
本発明の１つの目的は、エンケファリンの分解の原因となる２種類の酵素活性を一緒に阻害することができる新規な水溶性化合物を提供すること、およびそれらの薬理学的性質を水性溶媒中に溶解後に、静脈内、皮下、経皮、くも膜下（髄腔内）もしくは関節内注射ならびに経口もしくは経鼻経路により発現させることである。
【０００６】
血液脳関門は疎水性で非極性の分子の方がより容易に通過することは一般に認められている。しかし、予想外にも、この予め合成された親水性分子は、いくつかの投与経路（局所経路を除く）によって脳構造に到達する良好な能力の存在を示す、中枢試験における強力な反応を示す。
【０００７】
本発明の別の目的は、モルヒネ物質の特性、特に、行動への有益な効果である痛覚消失（疼痛の情動的成分の低下および抗うつ反応）ならびに末梢効果（下痢止め、鎮咳、抗炎症）を、モルヒネ物質の主要な難点（耐薬性、身体的および精神的依存性、呼吸抑制、便秘、悪心）を伴わずに発揮する新規な化合物を提供することである。
【０００８】
さらに、その末梢要素が目立つ疼痛である炎症性および神経性の疼痛が、経口経路により投与された本発明にかかる化合物によって軽減され、さらには解消される。従って、この化合物が中枢神経系に到達することが妨げられていない。非常に有益であるが予想外であるこの結果は、脳に入ることができない拮抗薬を用いることによって正式に実証された。これにより、本発明に係る化合物による脳性オピオイド受容体の刺激に起因する全ての作用が、この化合物の上記種類の疼痛、特に神経性疼痛に対する鎮痛効果を変質させずに完全に軽減される。
【０００９】
最も顕著には、本発明は下記一般式(Ｉ)で示される化合物、ならびにこの化合物(Ｉ)の薬剤に許容されるに鉱酸または有機酸との酸付加塩に関する：
Ｈ2Ｎ−ＣＨ(Ｒ1)−ＣＨ2−Ｓ−Ｓ−ＣＨ2−ＣＨ(Ｒ2)−ＣＯＮＨ−Ｒ5      (Ｉ)
式中
Ｒ1は下記のいずれかの基を意味し：
・炭素数１〜６の飽和または不飽和の線状または分岐炭化水素鎖、これは場合により下記＊に記した置換基で置換されていてもよい：
＊ＯＲ、ＳＲまたはＳ(Ｏ)Ｒ基、ここで各Ｒ基はそれぞれ水素、炭素数１〜４の線状もしくは分岐炭化水素鎖、フェニルまたはベンジル基を意味する、
＊フェニルまたはベンジル基、
・フェニルまたはベンジル基、これは場合により下記＊に記した置換基で置換されていてもよい：
＊１〜５個のハロゲン、特にフッ素、
＊ＯＲ、ＳＲまたはＳ(Ｏ)Ｒ基、ここで各Ｒ基は上記と同じ意味である、
・場合によりＮ−オキシドまたはＳ−オキシドの形に酸化されていてもよい窒素または硫黄原子をヘテロ原子として有する、芳香族または飽和の５または６員環の複素環で置換されているメチレン基；
Ｒ2は下記のいずれかの基を意味し：
・フェニルまたはベンジル基、これは場合により下記＊に記した置換基で置換されていてもよい：
＊１〜５個のハロゲン、特にフッ素、
＊ＯＲまたはＳＲ基、ここで各Ｒ基はそれぞれ上記と同じ意味である、
＊場合により炭素数１〜６の環式または線状脂肪族基によりモノまたはジ置換されていてもよいアミノ基、
＊５または６員環の芳香族環、
・ヘテロ原子が酸素、窒素または硫黄である５または６員環の芳香族複素環、
・ヘテロ原子が酸素、窒素または硫黄であり、窒素および硫黄原子は場合によりＮ−オキシドまたはＳ−オキシドの形に酸化されていてもよい、芳香族または飽和の５または６員環の複素環で置換されているメチレン基；
Ｒ5は、下記(ａ)または(ｂ)のいずれかの基を意味する：
ａ）ＣＨ(Ｒ3)−ＣＯＯＲ4基、ここで
Ｒ3は下記のいずれかを意味し：
・水素、
・ＯＨまたはＯＲ基、ここでＲは上記と同じ意味である、
・場合によりＯＲまたはＳＲ基（各Ｒ基はそれぞれ上記と同じ意味）で置換されていてもよい、炭素数１〜６の線状または分岐飽和炭化水素鎖（アルキル）、
・フェニルまたはベンジル基、これは場合により下記＊に記した置換基で置換されていてもよい：
＊１〜５個のハロゲン、特にフッ素、
＊ＯＲまたはＳＲ基、ここで各Ｒ基はそれぞれ上記と同じ意味である、そして
ＯＲ4は下記のいずれかの基を意味する：
・ＯＣＨ2ＣＯＯＲ'（グリコール酸エステル）基またはＯＣＨ(ＣＨ3)ＣＯＯＲ'（乳酸エステル）基、ここで、各Ｒ'基はそれぞれ下記のいずれかの基を意味する：
＊場合によりＣ１〜Ｃ３のアルコキシ基で置換されていてもよい、炭素数１〜６の線状または分岐飽和炭化水素鎖（アルキル）、好ましくは場合によりメトキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、
＊Ｃ５〜Ｃ８のシクロアルキル基、好ましくはＣ５〜Ｃ６のシクロアルキル基、
＊フェニル、ベンジル、ヘテロアリール、またはアルキルヘテロアリール基、
・ＯＣＨ(Ｒ")Ｏ(ＣＯ)ＯＲ'またはＯＣＨ(Ｒ")Ｏ(ＣＯ)Ｒ'基、ここでこれらのＲ'基はそれぞれ上記と同じ意味であり、各Ｒ"基はそれぞれ下記のいずれかの基を意味する：
＊水素原子、
＊場合によりＣ１〜Ｃ３のアルコキシ基で置換されていてもよい、線状または分岐のＣ１〜Ｃ６アルキル鎖、好ましくは場合によりメトキシ基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基、
＊Ｃ５〜Ｃ８のシクロアルキル基、好ましくはＣ５〜Ｃ６のシクロアルキル基、
＊フェニル、ベンジル、ヘテロアリール、またはアルキルヘテロアリール基、
・ＯＣＨ(ＣＨ2ＯＣＯＲ')2またはＯＣＨ2−ＣＨ(ＯＣＯＲ')−ＣＨ2ＯＣＯＲ'で示されるトリグリセリド基、ここで各Ｒ'基はそれぞれ上記と同じ意味である、
・Ｄ−グルコース、β−Ｄ−グルコピラノース、α−もしくはβ−ガラクトピラノースのようなグリコシド基、
・ＯＣＨ2ＣＨ2(ＳＯ2)ＣＨ3で示されるスルホネート基、
・ＯＣＨ(ＣＨ2ＯＨ)2基；
ｂ）窒素、硫黄および酸素よりなる群から選ばれた複数のヘテロ原子を含み、そのうちの２原子は窒素である、５または６員複素環、この複素環は場合によりＣ１〜Ｃ６アルキル、フェニルまたはベンジル基で置換されていてもよい。
【００１０】
本発明はまた、リン酸塩、塩酸塩、酢酸塩、メタンスルホン酸塩、ホウ酸塩、乳酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、ヘミコハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、ヘミ酒石酸塩、マレイン酸塩、アスコルビン酸塩、ヘミフマル酸塩、ヘキサン酸塩、ヘプタン酸塩、馬尿酸塩、ヒドロ桂皮酸塩、フェニルグリオキシル酸塩およびニコチン酸塩といった、薬理学的に許容される有機酸または鉱酸から得られた上記一般式(Ｉ)で示される化合物の酸付加塩も目的とする。
【００１１】
本発明の構成内において、「炭化水素鎖」とは、アルカン、アルケンまたはアルキンを意味する。特に「飽和炭化水素鎖」とは線状または分岐の炭素数１〜６（Ｃ１〜Ｃ６）または炭素数１〜４（Ｃ１〜Ｃ４）のアルキル基を意味する。炭素数１〜４のアルキル基の例としては、メチル、エチル、プロピル、ブチル、イソプロピル、１−メチルエチル、１−メチルプロピルおよび２−メチルプロピル基が挙げられる。炭素数１〜６のアルキルの例は、上記以外にさらに、ペンチル、ヘキシル、１−メチルブチル、１−メチルペンチル、２−メチルブチル、２−メチルペンチル、３−メチルブチル、３−メチルペンチル、４−メチルペンチルまたは１−エチルプロピル、１−エチルブチルおよび２−エチルブチル基を含む。「不飽和炭化水素鎖」とは、炭素数が２〜６または２〜４の線状または分岐のアルケニル基（少なくとも１つの二重結合）（例、ビニル、アリルなど）またはアルキニル基（少なくとも１つの三重結合）を意味する。
【００１２】
ここで用いた「ハロゲン」とは、塩素、臭素、ヨウ素、またはふっ素を意味する。
窒素または硫黄原子をヘテロ原子として有する芳香族または飽和の５または６員環の複素環核の制限ではない例としては下記の基を挙げることができる：チエニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、イソチアゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、ピロリジニル、ピロリニル、イミダゾリジニル、ピラゾリジニル、ピラゾリニル、ピペリジル、ピペラジニル、チアジアゾリル。窒素および硫黄原子は場合によりＮ−オキシドまたはＳ−オキシドの形態に酸化されていてもよい。
【００１３】
酸素原子をヘテロ原子として有する芳香族または飽和の５または６員環の複素環核の制限ではない例としては下記の基を挙げることができる：フリル、ピラニル、イソオキサゾリル、モルホリニル、フラザニル、オキサゾリル、オキサゾリジニルおよびオキサゾリニル。
【００１４】
Ｒ1基は有利には、場合によりＯＲ、ＳＲまたはＳ(Ｏ)Ｒ基により置換された、炭素数１〜４のアルキル基を意味する（ここで各Ｒ基はそれぞれ上記と同じ意味である）。Ｒ1基は、より一層有利には、ＳＲ基で置換された炭素数１〜４のアルキル基を意味し、Ｒは上記と同じ意味であり、特にＲは炭素数１〜４の線状または分岐飽和炭化水素鎖を意味する。
【００１５】
Ｒ2基は有利には下記のいずれかの基を意味する：
・ベンジルまたはフェニル基、
・ヘテロ原子として、場合によりＮ−オキシドまたはＳ−オキシドの形態に酸化されていてもよい窒素または硫黄原子を有する、芳香族または飽和の５または６員環の複素環で置換されているメチレン基。
【００１６】
特にＲ2基は、ベンジル基、または場合によりＮ−オキシドまたはＳ−オキシドの形態に酸化されていてもよい硫黄もしくは窒素原子をヘテロ原子として有する、芳香族もしくは飽和の５または６員環の複素環で置換されているメチレン基を意味し、より一層有利には、ベンジル基、またはチエフェニル基（チエニル）で置換されているメチレン基を意味する。
【００１７】
Ｒ5基は、普通にはむしろ疎水性の分子である分子全体の親水性を高める基である。
本発明の第１の態様によると、Ｒ5基はＣＨ(Ｒ3)−ＣＯＯＲ4基を意味する。
この第１の態様において、Ｒ3基は、有利には、水素原子または場合によりＯＲもしくはＳＲ基（各Ｒ基はそれぞれ上記と同じ意味）で置換されていてもよい、炭素数１〜６、さらに一層有利には炭素数１〜４のアルキル基を意味する。Ｒ3基は、より一層有利には、水素原子、またはＯＨもしくはＳＨ基で置換された炭素数１〜６、さらにより有利には炭素数１〜４のアルキル基を意味する。
【００１８】
ＯＲ4基は、有利には下記のいずれかの基を意味する：
・ＯＣＨ2ＣＯＯＲ'で示されるグリコール酸エステル基、ここでＲ'は上記と同じ意味であり（特にＲ'は場合によりメトキシ基またはＣ５〜Ｃ６シクロアルキル基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基を意味する）、
・ＯＣＨ(Ｒ")Ｏ(ＣＯ)ＯＲ'またはＯＣＨ(Ｒ")Ｏ(ＣＯ)Ｒ'基、ここでＲ'およびＲ"は上記と同じ意味であり（特にＲ'および／またはＲ"は、場合によりメトキシ基またはＣ５〜Ｃ６シクロアルキル基で置換されていてもよいＣ１〜Ｃ４アルキル基を意味し、またはＲ"は水素原子を意味する）、
・ＯＣＨ(ＣＨ2ＯＣＯＲ')2またはＯＣＨ2−ＣＨ(ＯＣＯＲ')−ＣＨ2ＯＣＯＲ'で示されるトリグリセリド基、ここで各Ｒ'基はそれぞれ上記と同じ意味であり、
・Ｄ−グルコースのようなグリコシド基、
・ＯＣＨ2ＣＨ2(ＳＯ2)ＣＨ3で示されるスルホネート基、
・ＯＣＨ(ＣＨ2ＯＨ)2基。
【００１９】
特に、ＯＲ4基はＯＣＨ(Ｒ")Ｏ(ＣＯ)ＯＲ'またはＯＣＨ(Ｒ")Ｏ(ＣＯ)Ｒ'基を意味し、Ｒ'基はＣ１〜Ｃ４アルキル鎖（特にエチル基）を意味し、そしてＲ"基はメチル、ＣＨ(ＣＨ3)2、シクロヘキシルまたはフェニル基を意味する。
【００２０】
本発明の第２の態様によると、Ｒ5基は、窒素、硫黄および酸素よりなる群から選ばれた複数のヘテロ原子を含み、そのうちの２原子は窒素である、５または６員複素環を意味し、この複素環は場合によりＣ１〜Ｃ６アルキル基またはフェニルもしくはベンジル基で置換されていてもよい。
【００２１】
この第２の態様において、複素環は有利には、場合によりＣ１〜Ｃ４アルキル鎖で置換されていてもよい、窒素原子２個を含む５員複素環、特に２−エチル−１,３,４−チアジアゾールである。
【００２２】
本発明は、とくに下記化合物に関する：
１−(２−(１−(２,３−ジアセトキシプロポキシカルボニル)−エチルカルバモイル)−３−チオフェン−３−イルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−(１−(２−メタンスルホニルエトキシカルボニル)−エチルカルバモイル)−３−チオフェン−３−イルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−(１−(１−エトキシカルボニルオキシエトキシカルボニル)−エチルカルバモイル)−３−チオフェン−３−イルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−(１−エトキシカルボニルメチルオキシカルボニルエチルカルバモイル)−３−チオフェン−３−イルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−(１−(１−エトキシカルボニルオキシエトキシカルボニル)−２−ヒドロキシプロピルカルバモイル)−３−チオフェン−３−イルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−(１−(２−アセトキシ−１−アセトキシメチルエトキシカルボニル)−エチルカルバモイル)−３−チオフェン−３−イルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−(１−(２−ヒドロキシ−１−ヒドロキシメチルエトキシカルボニル)−エチルカルバモイル)−３−チオフェン−３−イルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−(１−(３,４,５,６−テトラヒドロキシテトラヒドロピラン−２−イルメトキシカルボニル)−エチルカルバモイル)−３−チオフェン−３−イルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−(１−(１−エトキシカルボニルオキシエトキシカルボニル)−２−ヒドロキシプロピルカルバモイル)−３−フェニルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−(１−(２−アセトキシ−１−アセトキシメチルエトキシカルボニル)−２−ヒドロキシプロピルカルバモイル)−３フェニルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−((１−エトキシカルボニルオキシ−エトキシカルボニルメチル)−カルバモイル)−３−フェニルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
３−(２−アミノ−４−メチルスルファニル−ブチルジスルファニル)−２−ベンジル−Ｎ−(５−エチル−(１,３,４)−チアジアゾール−２−イル)プロピオンアミド、
１−(２−((１−エトキシカルボニルオキシ−２−メチルプロポキシカルボニルメチル)−カルバモイル)−３−フェニルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−((シクロヘキシル−エトキシカルボニルオキシ−メトキシカルボニルメチル)−カルバモイル)−３−フェニルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−((エトキシカルボニルオキシ−フェニル−メトキシカルボニルメチル)−カルバモイル)−３−フェニルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
３−メチルスルファニル−１−(３−フェニル−２−((１−プロピオニルオキシ−エトキシカルボニルメチル)−カルバモイル)−プロピルジスルファニルメチル)−プロピルアミン、
１−(２−((２−メチル−１−プロピオニルオキシ−プロポキシカルボニルメチル)−カルバモイル)−３−フェニルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
１−(２−((シクロヘキシル−プロピオニルオキシ−メトキシカルボニルメチル)−カルバモイル)−３−フェニルプロピルジスルファニルメチル)−３−メチルスルファニルプロピルアミン、
３−メチルスルファニル−１−(３−フェニル−２−((フェニル−プロピオニルオキシ−メトキシカルボニルメチル)−カルバモイル)−プロピルジスルファニルメチル)−プロピルアミン。
【００２３】
一般式(Ｉ)の化合物は、２〜９個の不斉中心を有する可能性がある。Ｒ1、Ｒ2、およびＲ3基は、酵素活性により認識された立体化学に対応する光学的に純粋な鎖を得るように導入されよう。Ｒ4基は場合により未分割の不斉中心を含有しうる。
【００２４】
一般式(Ｉ)の化合物は次の方法により得られる：
１）アミノ官能基がｔ−ブチルオキシカルボニル（Ｂｏｃ）基で保護されたβ−アミノチオール（ii）を、ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）溶液中でメトキシカルボニルスルホニルクロリドによってメルカプトアルカン酸（III）と縮合させると、化合物ＩＶが得られる。
【００２５】
【化１】
2009513600.tif 000002
【００２６】
Ｂｏｃ−β−アミノチオールIIは、下記に示すように、対応する市販のＢｏｃアミノ酸から当業者には周知の方法に従って立体配置を保持したＳの絶対配置で合成される（J. Med. Chem. 35 (1992) 1259）。
【００２７】
メルカプトアルカン酸IIIは、対応するメチルマロン酸モノエステルＶから、これを当業者には周知の方法（Ber. 57 (1924) 1116）に従って、アクリレートＶＩに転化させることにより得られる。
【００２８】
【化２】
2009513600.tif 000003
【００２９】
アクリレートＶＩにチオ酢酸を付加するとラセミ誘導体ＶIIを生ずる（Biochemistry 16 (1977) 5484）。α−キモトリプシンにより光学分割すると、光学的に純粋なアセチルチオ酸ＶIIIが単離される（Bioorg. Med. Chem. Let. 3 (1993) 2681）。このチオエステルのアルカリ加水分解により化合物IIIが得られる。
【００３０】
２）Ｒ5基がＣＨ(Ｒ3)−ＣＯＯＲ4基を意味する一般式(Ｉ)の化合物は、下記の合成経路により得ることができる。
２.１）非対称ジスルフィドＩＶを、慣用のペプチド結合条件下でアミノエステルＩＸと結合させると保護された阻害剤Ｘが得られる。
【００３１】
【化３】
2009513600.tif 000004
【００３２】
別の方法によると、化合物Ｘは、メトキシカルボニルスルフェニルクロリドによるＢｏｃ−β−アミノチオールIIと一般式ＸＩのメルカプトアシルアミノエステルとの縮合により得ることができる。
【００３３】
メルカプトアシルアミノエステルＸＩは化合物IIIから合成される。それをヨウ素エタノール溶液により酸化してジスルフィドＸIIにする。化合物ＸIIを慣用のペプチド結合条件下でアミノエステルＩＸと結合させると化合物ＸIIIが得られる。化合物ＸIIIを３Ｎ Ｚｎ＋ＨＣｌのような還元剤で処理すると、化合物ＸＩが生ずる。
【００３４】
【化４】
2009513600.tif 000005
【００３５】
ＸのＮ末端Ｂｏｃ基を、ギ酸を作用させて切断すると、化合物ＸＩＶを生ずる。ＸＩＶの対イオンを、１当量の０.１Ｍ ＮａＨＣＯ3で処理し、遊離アミノ官能基を有する化合物を有機溶媒（ＥｔＯＡｃ）で抽出した後、化合物Ｉを生ずるように選択した１当量の有機酸または鉱酸を添加することによって、定量的に変化させる。
【００３６】
２.２）アミノエステルＩＸは、Ｂｏｃアミノ酸ＸIIとアルコールＲ4ＯＨとの縮合とその後のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）による脱保護（保護基脱離）およびソーダによる中和によって得られる。アルコールＲ4ＯＨが第１級アルコールである場合には、ＸIIとの結合は、慣用の条件下で（１−[３−(ジメチルアミノ)プロピル]−３−エチルカルボジイミド塩酸塩（ＥＤＣＩ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（ＨＯＢｔ）または活性化エステルを用いて）行われる。アルコールＲ4ＯＨが第２級アルコールである場合は、アゾジカルボン酸ジエチル／トリフェニルホスフィン（ＤＥＡＤ／ＰＰｈｅ3）を用いた光延（ミツノブ）反応（Synthesis (1981) 1-28）によって縮合が実施される。
【００３７】
【化５】
2009513600.tif 000006
【００３８】
アルコールＲ4ＯＨは、ほとんどの場合は市販化合物である。Ｒ4ＯＨがエステル「カスケード」を生ずるアルコールである場合には、それは文献記載の方法から合成される。
【００３９】
２ａ）Ｒ5基が上述したような複素環基を表す一般式(Ｉ)の化合物は、下記の合成経路により得ることができる。
２.ａ.１）
【００４０】
【化６】
2009513600.tif 000007
【００４１】
非対称ジスルフィドＩＶを慣用のペプチド結合条件下でアミノ複素環化合物ＸＶと結合させて、ＸＶＩを生ずる。Ｂｏｃ基の脱保護を上記のようにして行うと、誘導体ＸＶIIが得られる。
【００４２】
【化７】
2009513600.tif 000008
【００４３】
アミノ複素環ＸＶは、文献記載の方法に従って合成される。
例えば、２−アミノ−５−エチル−(１,３,４)チアジアゾールＸＶａは、タカトリら、薬学雑誌79 (1959) 913に記載のように、チオセミカルバジドＸＶIIIとプロピオニルクロリドＸＩＸとの縮合により得られる。
【００４４】
【化８】
2009513600.tif 000009
【００４５】
２.ａ.２）
別の方法によると、Ｒ5基が複素環基を表す一般式(Ｉ)の化合物は、化合物ＸIIへの複素環化合物ＸＶの縮合によってＸＸを生ずる反応によって得ることができる。前述したようにジスルフィド結合を切断した後、得られた化合物ＸＸＩを化合物IIに縮合させて、化合物ＸＶＩを得る。
【００４６】
【化９】
2009513600.tif 000010
【００４７】
本発明の別の目的は、有効成分として一般式(Ｉ)で示される少なくとも１種の化合物またはその塩もしくはその塩水和物を、１種または２種以上の薬剤に許容される不活性担体または他のビヒクル（賦形剤）と共に含有する薬剤組成物である。これらの化合物はモルヒネ物質の性質、特に末梢成分を包含する痛覚消失作用（炎症性、神経性）、特にうつ病および／もしくは不安の場合の行動への有益な効果を、前記物質の主要な難点（耐薬性、依存性、呼吸抑制、便秘）を伴わずに発揮する。
【００４８】
従って、デルタ受容体と相互作用する外因性オピオイド作用物質（アゴニスト）とは異なり、本発明の混合阻害剤は、てんかん性作用または痙攣を引き起こす危険性を伴わずに抗うつ効果を有し、しかも迅速に作用する（Baamonde A. et al., 1992; Jutkiewicz E.M. et al., 2005）。これらの化合物は血液脳関門を通過することができる。本発明に係る化合物の主な適用は従って鎮痛（痛覚消失）、抗うつおよび抗不安（不安緩解）の分野である。
【００４９】
本発明の薬剤組成物は、例えば、経口、経鼻（エアゾールにより投与）、舌下（経舌拡散により投与）、直腸．非経口（腸管外）、静脈内、および経皮経路により投与される組成物とすることができる。経口経路により投与される組成物の例としては、錠剤、ゼラチンカプセル剤、顆粒剤、マイクロスフィア（微小球）、散剤、ならびに経口用溶液剤もしくは懸濁液剤が挙げられる。
【００５０】
Ｒ5基が本発明に係る化合物に十分な親水性を付与するため、化合物は各種の界面活性剤の存在下または不存在下で水および親水性溶媒中に可溶である。特に、本発明の化合物は、アルコール／ポリソルベート／水の混合溶媒、特にエタノール／TweenTM／水の混合溶媒、ならびにマンニトール／水の混合溶媒中に、または静脈内経路による投与によく使われるヒトの投与に適したシクロデキストリン類の援助によって、可溶である。従って、本発明に係る組成物は静脈内経路により投与することができる。
【００５１】
本発明に係る組成物は経口または経鼻経路により、特にエアゾールにより、または経舌拡散によりまたは適当なガレヌス製剤（マイクロエマルジョン）内で、投与することもできる。また、これらの組成物は経皮投与に使用することもできる。これらの組成物は特に炎症性および神経性疼痛の重症鎮痛薬、強力鎮痛薬として、ならびに抗うつ薬として使用することができる。
【００５２】
本発明に係る組成物を、エアゾール（マイクロエマルジョン）剤の形態で経口または経鼻経路によるか、或いは静脈内経路によって投与することが非常に有利である。これらの投与経路によれば、本発明の組成物を非消化経路によって投与することが可能となる。これは、組成物が、例えばカンナビノイド誘導体のような、消化系（特に腸管）に対して副作用を示すことがある補完化合物を含有する場合に特に有利である。これはまた、化合物またはその組み合わせの脳での生物学的利用能を高める。
【００５３】
本発明の別の目的は、上述した化合物または上記方法により得られる化合物の薬剤としての使用である。
予想外にも、本発明に係る新規化合物とカンナビノイド誘導体との組み合わせ（併用）が、より一層強力な鎮痛効果（各化合物、即ち、本発明に係る化合物とカンナビノイド誘導体について認められるそれぞれの効果の総和より優れた効果）を生ずることも認められた。
【００５４】
１９５４年まで、大麻は下記の複数の効能を示す薬用植物と見なされていた：鎮痛、鎮痙、抗痙攣、抗炎症、制吐、気管支拡張、血管拡張、弛緩および催眠。近年になって、抗増殖および抗神経変性特性も実証された。
【００５５】
一般に過剰摂取に関係する大麻のいくつかの副作用が記述されてきた：うつ患者に対する不安発作、飲料（茶）または食品（ケーキ類）に含有させて摂取した場合の幻覚。
大麻の効果は、そのカンナビノイド受容体の作用により説明される。これらの受容体は多くの脳構造中に存在し、それに天然的に関係する内因性分子であるアナンダミドが同定された。
【００５６】
次の２種類の受容体が特性決定されている：中枢神経系と末梢の両方に存在するＣＢ１受容体と、主に末梢に存在するＣＢ２受容体。ＣＢ１受容体は脳における興奮性または抑制性神経伝達物質のニューロン放出の調節に関与しているらしい。ＣＢ２自体の役割はあまりはっきりしないが、免疫系の調節に介在しているようである。
【００５７】
アナンダミドのような「エンドカンナビノイド」と呼ばれる、ＣＢ１およびＣＢ２受容体に関係する内因性分子は、各種の薬理作用を誘導することにより、脳内および末梢においてカンナビノイド受容体と相互作用する。
【００５８】
大麻（Cannabis sativa）に最も豊富に存在する向精神性化合物はΔ9−テトラヒドロカンナビノール（Δ9−ＴＨＣ）である。
Δ9−ＴＨＣは、脳内ＣＢ１受容体との相互作用によって、痛覚消失、体温低下、歩行活動低下、警戒と注意力の低下といった多くの薬理学的応答（反応）を引き起こす。これらの特性の一部は疼痛および緑内障の治療のための、ならびに重大な副作用を有する抗腫瘍および抗ウイルス化合物で治療された患者の悪心軽減および食欲刺激に有益な治療用途を有する。Δ9−ＴＨＣ、より広義にはＣＢ１受容体作用物質はまた、多発性硬化症に伴う痛みをこの疾病の進行を低下させながら軽減することができる。それにもかかわらず、これがサティベックス（SATIVEX）の開発につながる。サティベックスは、該植物（大麻）から直接得られる製剤であり、Δ9−ＴＨＣとカンナビジオール（該植物中に存在する別の成分）との等量混合物を含有する。この製剤は現在臨床試験の最終段階にある。しかし、口腔（orobuccal）経路により投与される用量が高く、副作用が認められた（Current Opinion in Investigational Drugs 2004, 5, 748）。
【００５９】
内因性エンドカンナビノイド（アナンダミド）系の別の特徴は、この特定の神経伝達物質の合成および分泌の様式に関係する。オルガネラ膜リン脂質から酵素的経路により形成されたアナンダミドは、シナプス後部ニューロンからトランスポーターにより分泌されて、シナプス前末端に位置するＣＢ１自体と相互作用する（逆行性神経伝達）（Piomelli et al., TIS, 2000, 21, 218-224）。
【００６０】
しかし、天然または合成カンナビノイドへの慢性（長期的）露出により生じたいくつかの行動への作用（警戒と注意力の低下、鎮静、運動失調、視覚障害、頻脈、体温低下等）ならびに行動の乱れ（幻覚、不安、パニック発作等）、ならびに記憶障害のために、その臨床使用は制限されている（概説: E.A. Carlini, The good and the bad effects of (-)trans-delta-9-tetrahydrocannabinol Δ9-THC on humans, Toxicon, 2004, 44, 461-467）。さらに、ヒトでは、Δ9−ＴＨＣの鎮痛効果は、上述した副作用を引き起こす量に近い高い用量でしか得られない（Campbell F.A. et al., Are cannabinoids an effective and safe treatment option in management of pain? A quantitative systemic review, Br. Med. J., 2001, 323, 12-16）。
【００６１】
予想外にも、低用量のカンナビノイド誘導体（特にΔ9−ＴＨＣ）を共投与（同時に、または逐次的に）すると、このカンナビノイドの副作用を著しく誘発することなく、本発明に係る誘導体（一般式(Ｉ)）の鎮痛効果および抗うつ効果が増強されることが判明した。その用量はＩＶ（静脈内）経路により４〜５ｍｇ／ｋｇ（鎮静）から始めると思われる。
【００６２】
本発明において、「非常に低いカンナビノイド濃度」とは、上記の望ましくない副作用を誘発する濃度より低いカンナビノイド濃度を意味する。
本発明において、「カンナビノイド（誘導体）」とは、Δ9−ＴＨＣ、合成ＣＢ１受容体作用物質（アゴニスト）、またはアナンダミド分解阻害剤を意味する。本発明に係る組成物中に導入するカンナビノイドは、好ましくはΔ9−ＴＨＣである。
【００６３】
本発明はまた、上記一般式(Ｉ)で示される少なくとも１種の化合物、少なくとも１種のカンナビノイド誘導体、特にΔ9−ＴＨＣもしくはその代謝産物の保護物質（概説は前掲のPiomelli et al., TIPS, 2000中）、ならびに製剤に適した賦形剤、特に経口、経鼻、静脈内もしくは経皮経路による投与に適した賦形剤を含む薬剤組成物を目的とする。
【００６４】
本発明はまた、上記一般式(Ｉ)で示される化合物の鎮痛および／または抗うつ効果を増強するための、薬剤組成物中における少なくとも１種のカンナビノイド誘導体、特にΔ9−ＴＨＣの使用にも関する。
【００６５】
本発明はまた、上記一般式(Ｉ)で示される少なくとも１種の化合物と少なくとも１種のカンナビノイド誘導体、特にΔ9−ＴＨＣとの組み合わせを、うつ病および疼痛の治療用の薬剤の製造のために使用することにも関する。
【００６６】
本発明の別の目的は、
ｉ）上記一般式(Ｉ)で示される少なくとも１種の化合物、
ii）少なくとも１種のカンナビノイド誘導体、
を同時、別個（別時期）、または交互投与用の併用製剤として含む薬剤組成物である。
【００６７】
また、本発明は、
ｉ）上記一般式(Ｉ)で示される少なくとも１種の化合物、
ii）少なくとも１種のカンナビノイド誘導体、
を同時、別個、または交互投与用の併用製剤として含む薬剤組成物をうつ病および疼痛の治療用の医薬の製造のために使用することも目的とする。
【００６８】
本発明の枠組内において、「疼痛」なる用語は、急性疼痛、炎症性疼痛、および神経性疼痛のような、多発性硬化症に伴う疼痛を含む、各種の痛みを意味する。場合によりカンナビノイド誘導体と組み合わせた本発明に係る化合物は、緑内障の治療にも適している。
【００６９】
本発明はまた、本発明に係る新規化合物とモルヒネまたはその誘導体との組合わせ（併用）もまた目的とする。実際、モルヒネは本発明に係る化合物により誘導される鎮痛効果を増強することができる。
【００７０】
即ち、本発明は、上記一般式(Ｉ)で示される少なくとも１種の化合物と、モルヒネまたはその誘導体と、製剤に適した賦形剤、特に経口、経鼻、静脈内もしくは経皮経路による投与に適した賦形剤とを含む薬剤組成物を目的とする。この組成物は、少なくとも１種のカンナビノイド誘導体、特にΔ9−ＴＨＣ、またはその代謝産物の保護物質をさらに含有することができる。
【００７１】
この組成物は医薬として、特にうつ病および疼痛の治療に使用することができる。各種の化合物を、同時、別個、または交互様式での併用製剤として使用することができる。
一般式(Ｉ)で示される本発明に係る化合物の水溶性が良好であることによって、静脈内、経鼻、肺（エアゾール）または経皮経路による治療用に適した製剤（マイクロエマルジョン、界面活性剤の存在下で溶液剤等）の構成が著しく容易になる。
【００７２】
本発明の化合物の有効用量は、例えば、選択した投与経路、患者の体重、年齢および性別、治療すべき病気の段階（ステージ）、ならびに患者の敏感性といった多くのパラメータに応じて変動する。従って、最適投与量は、関係する専門家によって関連すると考えられるパラメータに応じて決定されよう。
【００７３】
本発明を、以下の実施例において、いかなる制限もなさずに、さらに例示する。実施例１２に従って調製された化合物のリストを表１に示す。これらの実施例に開示した化合物のすべてについて、
・Ｒ1は−ＣＨ2−ＣＨ2−Ｓ−ＣＨ3基を表し、
・ＣＨ2−（Ｃ：ＣＨ・Ｓ・ＣＨ：ＣＨ）はチオフェン−３−イルメチル基を表し、
・Ｃ：ＣＨ・ＣＨ：ＣＨ−ＣＨ：ＣＨはフェニル基を表し、
・Ｃ6Ｈ11はシクロヘキシル基を表す。
【００７４】
【表１】
2009513600.tif 000011
【実施例】
【００７５】
例１： Boc-メチオニンチオール（化合物１）の合成
本化合物はJ. Med. Chem., 35, 1992, 2473に記載されたプロトコル（手順）に従って調製される。白色固体、融点：37℃、Rf (シクロヘキサン (CHex)：酢酸エチル（EtOAc）＝１：１) 0.73、αＤ20℃：−21.1°(ｃ＝1.0 CHCl3)。
【００７６】
例２： (2S)-2‐メルカプトメチル-3-フェニルプロパン酸（化合物２）の合成
工程１：（Ber.、 57, 1924, 1116）に従って調製された対応するアクリレートのメチルエステルにチオ酢酸を作用させることにより得られた2−アセチルチオメチル-3-フェニルプロパン酸メチルエステルを、（Bioor. Med. Chem. Let., 3, 1993, 2681）に記載されてプロトコルに従ってα−キモトリプシンで処理する。
収率：71.4％；鏡像体過剰率（ee）：88％、αＤ20℃：−42.7°。
【００７７】
工程２： (2S)‐メルカプトメチル-3-フェニルプロパン酸。
工程１で得られた化合物を０℃の脱気メタノール（MeOH）に溶解する。不活性雰囲気下で３当量（eq）の1Nソーダ（NaOH）を加える。混合物を室温（RT）で30分間撹拌する。6N塩酸（HCl）(25 ml)を添加して混合物を酸性化し、MeOHを減圧蒸発させる。水相を2×125 mlのEtOAcで抽出する。有機相を飽和塩化ナトリウム（sat. NaCl）の溶液で洗浄した後、硫酸ナトリウム（Na2SO4）で乾燥し、蒸発乾固する。黄色油状物が得られる。
収率：100％、クロマシル（Kromasil）C18 HPLC CH3CN／H2O（0.5％トリフルオロアセテート、TFA）60-40：4.96分。
【００７８】
例３： (2RS) 2-メルカプトメチル-3-チオフェン-3-イルプロパン酸（化合物３）の合成
工程１：マロン酸ジメチル (392 mmol、45 ml、1 eq)、チオフェン-3-イルアルデヒド (0.357 mmol)、ピペリジン (1.87 ml、0.05 eq)、および安息香酸 (4.58 g, 0.05 eq) の混合物を、ディーン・スターク装置を用いて、270 mlのトルエン中で12時間還流させる。有機相を2×140 mlの1N HCl、2×140 mlの10％炭酸ナトリウム (NaHCO3)および140 mlの飽和NaClで洗浄する。有機相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固する。油状物が得られる。
収率：100％、クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O（0.5％ TFA）60-40：5.97分。
【００７９】
工程２：工程１の化合物 (340 mmol) をMeOH (540 ml) に溶解する。この混合物を０℃に冷却し、ホウ水素化ナトリウム (NaBH4) を少しずつ添加する。混合物を室温で15分間撹拌する。450 mlの1N HClを添加して反応を停止させる。メタノールを蒸発させ、反応混合物を2×500 mlのクロロホルム (CHCl3)で抽出する。有機相をsat. NaClで洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固する。油状物が得られる。
収量＝64.1 g; 収率: 82.4％。
クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O（0.5％ TFA）60-40：5.91分。
【００８０】
工程３：すぐ上の化合物 (30 mmol) をMeOH (27 ml) に溶解する。この混合物を０℃に冷却し、MeOH (365 ml) 中の苛性カリ KOH (1.71 g, 30.6 mmol) の溶液を少しずつ添加する。混合物を4℃で48時間撹拌する。メタノールを蒸発させ、得られた固体をエチルエーテル Et2O 中で摩砕する。得られた固体を濾過し、洗浄し、乾燥する。
収量＝25.2 g。収率: 71.0％。
クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O（0.5％ TFA）60-40：3.79分。
【００８１】
工程４：すぐ上の化合物 (21.9 mmol) をTHF (30 ml) 中に溶解する。ジエチルアミン Et2NH (3.0 ml、2 eq)と37％ホルムアルデヒド (3.7 ml、1.5 eq)を添加する。この混合物を一晩還流させる。THFを蒸発させ、残った混合物を90 mlのEtOAcにとる。有機相を3×30 mlの1N HClとsat NaClとで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固する。無色油状物が得られる。
収量＝13.1 g、 収率：72.0％。
クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O（0.5％ TFA）50-50：14.75分。
【００８２】
工程５：すぐ上の化合物 (72 mmol) をチオ酢酸 CH3COSH (10 ml、144 mmol、2eq)中で80℃に5時間加熱する。チオ酢酸を減圧蒸発させる。残った混合物をシクロヘキサンと共に数回共蒸発させる。橙色油状物が得られる。
収量＝18.6 g、 収率：100％。
クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O（0.5％ TFA）50-50：17.16分。
【００８３】
工程６：工程５の化合物を０℃で脱気 MeOH 中に溶解する。不活性雰囲気下に3 eqの1N NaOHを添加する。この混合物を室温で30分間撹拌する。6N HCl (25 ml) を加えて混合物を酸性化し、MeOHを減圧蒸発させる。水相を2×125 mlのEtOAcで抽出する。有機相をsat. NaClで洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発乾固する。黄色油状物が得られる。
収率：100％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O（0.5％ TFA）50-50：6.80分。
【００８４】
例４： (2S)-2‐メルカプトメチル-3-チオフェン-3-イルプロパン酸（化合物４）の合成
工程１：化合物３の合成の工程５に記載された2-アセチルチオメチル-3-チオフェン-3-イルプロパン酸メチルエステルを、化合物２の合成 (工程１) に記載されているようにα−キモトリプシンで処理する。収率：87.3％。
クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O（0.5％ TFA）50-50：7.37分。 ee＝76％。
【００８５】
工程２：工程１で得られた(2S) 2-アセチルチオメチル-3-チオフェン-3-イルプロパン酸を、化合物２の工程２に記載のように処理する。
収率：97.0％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O（0.5％ TFA）50-50：6.80分。
【００８６】
例５： 2-(2S)-ベンジル-3((2S)-2-t-ブチルオキシカルボニルアミノ-4-メチルスルファニル-ブチルジスルファニル)プロパン酸 (化合物５) の合成
23 mlの MeOH と23 mlの THF との混合液を窒素下に０℃に冷却し、クロロスルホニルクロリド (1.3 ml、15.25 mmol、1.09 eq) を加える。この混合物を０℃で15分間撹拌すると、メトキシカルボニルスルフェニルクロリドが生成する。その後、THF／MeOH 16 ml中の化合物１(14.86 mmol、1.06 eq)を一度に加える。得られた混合物を室温に戻し、30分間撹拌する。この溶液を、Et3N (1 eq) の存在下で、脱気CHCl3 100 ml中の化合物２ (14.02 mmol、1eq) の溶液に滴下する。得られた溶液を室温で１時間撹拌する。溶媒を減圧蒸発させる。残った混合物をジクロロメタンCH2Cl2にとる。有機相を10％クエン酸、sat. NaCl で洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥すると、粗生成物が得られる。これを、溶離液としてシクロヘキサン (CHex)／EtOAc 8／2混合液、次に6／4混合液を用いてシリカでカラムクロマトグラフィー処理する。収量4.1 g, 収率：65.9％。
クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O（0.5％ TFA）70-30：8.20分。
【００８７】
例６: 3-((2S)-2-t-ブチルオキシカルボニルアミノ-4-メチルスルファニル-ブチルジスルファニル)-(2RS)-2-チオフェン-3-イルメチル-プロパン酸 (化合物６) の合成
化合物５の合成に対して述べたプロトコルに従って、化合物２の代わりに化合物３を使用することにより、化合物６が得られる。収率：77.0％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O（0.5％ TFA）70-30：7.36分。
【００８８】
例７: 3-((2S)-2-t-ブチルオキシカルボニルアミノ-4-メチルスルファニル-ブチルジスルファニル)-(2S)-2-チオフェン-3-イルメチル-プロパン酸 (化合物７) の合成
化合物５の合成に対して述べたプロトコルに従って、化合物２の代わりに化合物４を使用することにより、化合物７が得られる。
収率：77％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O（0.5％ TFA）70-30：7.36分。
【００８９】
例８：アラニンエステル類の合成
化合物８ａ：アラニン 2-メチルスルホニルエチルエステル, TFA(塩)
CH2Cl2 10 ml中の BocAlaOH 1 eq、HOBt (1.2 eq、879 mg)、EDCI (1.2 eq、1.93 g)、 Et3N (トリエチルアミン) (3 eq、2.9 ml)を、1.2 eqの2-メチルスルホニルエタノールのCH2Cl2 中溶液の存在下で、室温において12時間撹拌する。溶媒を減圧蒸発させる。反応混合物をEtOAc／H2O中にとる。有機相を10％クエン酸 (2×15 ml)、10％ NaHCO3 (2×15 ml)、飽和NaClで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧蒸発させて、粗生成物を得る。これを、溶離液としてCHex／EtOAc 8／2混合液を用いてシリカでクロマトグラフィー処理すると、989 mgの生成物が得られる。
収率：61.8％。Rf (CHex／EtOAc：6／4): 0.49。
【００９０】
この生成物435 mg (1.488 mmol)を2.5 mlのCH2Cl2中に冷溶解し、1.2 mlのTFA を加える。この混合物を室温で2時間撹拌する。溶媒を減圧蒸発させる。混合物をシクロヘキサンと共蒸発させる。生成物８ａをEt2O中で冷析出させる。
収率：100％。Rf (CH2Cl2／MeOH：9／1): 0.25。
【００９１】
化合物８ｂ：アラニン 2,3-ジアセトキシプロピルエステル
CH2Cl2 10 ml中の BocAlaOH 1.026 g (5.428 mmol、1 eq)、HOBt (1.2 eq、879 mg)、EDCI (1.2 eq、1.93 g)、 Et3N (3 eq、2.9 ml)を、CH2Cl2 中の2,3-ジアセトキシプロパノール (Jensen, Topics in Lipid Chemistry, 1972, 3, 1に従って調製)の存在下で、室温において12時間撹拌する。溶媒を減圧蒸発させる。反応混合物をEtOAc／H2O中にとる。有機相を10％クエン酸 (2×15 ml)、10％ NaHCO3 (2×15 ml)、飽和NaClで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧蒸発させて、粗生成物1.62 gを得る。これを、溶離液としてCHex／EtOAc 8／2混合液を用いてシリカでクロマトグラフィー処理すると、1.29 gの生成物が得られる。
収率：68.78％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O（0.5％ TFA）70-30：4.25分。
【００９２】
この生成物を6 mlのCH2Cl2 中に冷溶解し、6 mlのTFA を加える。この混合物を室温で2時間撹拌する。溶媒を減圧蒸発させる。混合物をシクロヘキサンと共蒸発させる。生成物８ｂをEt2O中で冷析出させる。
収量 (W) ＝1.33 g、収率：100％。Rf (CHex／EtOAc：6／4): 0.14。
【００９３】
化合物８ｃ：アラニン 1,3-ジアセトキシ-2-プロピルエステル, TFA
1.23 gの1,3-ジアセチル-2-プロパノール (Bentley and McCrae, J. Org. Chem., 1971, 35, 2082に従って調製)を50 mlのEt2Oに溶解する。その後、アゾジカルボン酸ジエチル (DEAD) (1.2 eq、 1.1 ml)、 Boc-アラニン (5.83 mmol、1 eq)、次いでトリフェニルホスフィン (PPh3) (1.2 eq、1.83 g)を添加し、混合物を室温で一晩撹拌する。溶媒を減圧蒸発させる。混合物を、ヘプタン／EtOAc 8／2混合液を溶離剤としてシリカでクロマトグラフィー処理すると、生成物2.14 gが得られる。収率：84.6％。Rf (Hept／EtOAc：6／4): 0.42。
【００９４】
この生成物2.0 g (4.7 mmol)を6.5 mlのCH2Cl2中に冷溶解し、6.5 mlのTFA を加える。この混合物を室温で2時間撹拌する。溶媒を減圧蒸発させる。混合物をシクロヘキサンと共蒸発させ、CH2Cl2／MeOH／AcOHの9／1／0.5混合液を溶離剤とするシリカクロマトグラフィーにかけると、化合物８ｃ 1.16 gが得られる。
収率：65％、Rf (CH2Cl2／MeOH／AcOH：9／1／0.5)：0.22。
【００９５】
化合物８ｄ：アラニン 1,3-(t-ブチルジメチルシリル)ヒドロキシ-2-プロピルエステル
ジヒドロキシアセトン (2 g、11.10 mmol)を50 mlのジメチルホルムアミド (DMF)に溶解し、tert-ブチルジメチルシリルクロリド (tBuDMSCl) (4.8 eq、8.03 g)およびイミダゾール (10 eq、7.56 g)を加えて、混合物を20℃で12時間撹拌する。この混合物を蒸発乾固し、150 mlのEtOAcにとる。有機相を、水 H2O (2×50 ml)、10％ HCl (2×50 ml)、飽和NaClで洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧蒸発させると、粗生成物20.1 gが得られる。この混合物をCHex／EtOAc 8／2混合液を溶離剤とするシリカクロマトグラフィーで処理して、5.96 gの生成物を得る。
収率：84.5％、Rf (CH2Cl2／MeOH／AcOH：9／1／0.5)：0.24。
【００９６】
この生成物 (8.82 g、27.73 mmol)をTHF (74 ml)およびH2O (4.8 ml)に溶解する。得られた混合物を5℃に冷却し、NaBH4 (965 mg、1 eq)を少しずつ添加する。混合物を5℃で30分間撹拌する。過剰のNaBH4を酢酸 (1 ml)の添加により無能化する。THFを減圧蒸発させ、混合物をCHCl3／H2Oにとる。有機相をH2O (2×50 ml)、飽和NaHCO3 (2×50 ml)、飽和NaClで洗浄し、次いで硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧蒸発させると、8.24 gの生成物が得られる。収率：93.0％。
【００９７】
この化合物2.93 g (9.07 mmol、1.1 eq)を60 mlのEt2Oに溶解する。混合物を室温で撹拌し、DEAD (1.2 eq、1.56 ml)、アミノBocAcid (8.25 mmol、1 eq)と、次にPPh3 (1.2 eq、2.59 g)を添加する。溶媒を減圧蒸発させる。混合物を、CHex／EtOAc 95／5混合液を溶離剤としてシリカクロマトグラフィー処理すると、生成物4.42 gが得られる。
収率：92.96％。Rf (CHex／EtOAc 9／1): 0.65。
【００９８】
この生成物881 mg (1.79 mmol)を3 mlのCH2Cl2中に冷溶解し、1.36 mlのTFA を加える。この混合物を室温で2時間撹拌する。溶媒を減圧蒸発させる。混合物をシクロヘキサンと共蒸発させる。混合物をEt2O中で冷析出させて、920 mgの化合物８ｄを得る。
収率：100％、Rf (CHex／EtOAc 9／1): 0.1。
【００９９】
化合物８ｅ：アラニン カルブエトキシメチルエステル, TFA
BocAlaOH (5 g, 26.4 mmol)とEt3N (3.7 ml、1 eq)を40 mlのEtOAcに溶解する。この混合物を室温で10分間撹拌する。ブロモ酢酸エチル (6.62 g、1.5 eq)を添加し、得られた混合物を30分間還流させる。析出した沈殿を濾別し、濾液にH2O 30 mlとEtOAc 50 mlとを加える。水相を3×30 mlのEtOAcで抽出する。有機相を10％クエン酸 (2×30 ml)、10％NaHCO3(2×30 ml)、飽和NaClで洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧蒸発すると、粗生成物7.09 gが得られる。この混合物をCHex／EtOAc 6／4混合液を溶離剤とするシリカクロマトグラフィーで処理して、4.68 gの生成物を得る。
収率：64.3％、Rf (CHex／EtOAc 6／4)：0.35。
【０１００】
この生成物500 mg (1.81 mmol)を3 mlのCH2Cl2中に冷溶解し、1.4 mlのTFA を加える。この混合物を室温で2時間撹拌する。溶媒を減圧蒸発させる。混合物をシクロヘキサンと共蒸発させる。生成物８ｅをEt2O中で冷析出させる。
収量(W)＝525 mg、収率：100％、Rf (CH2Cl2／MeOH：95／5)：0.14。
【０１０１】
化合物８ｆ：アラニン エチルカーボネート-1-エチルエステル, TFA
Boc Ala (76.54 mmol)およびEt3N (12.27 ml、1.2 eq)を70 mlのEtOAcに溶解する。この混合物を室温で15分間撹拌する。エチル-1-クロロエチルカーボネート (Barcelo et al., Synthesis, 1986, 627に従って調製) (14.01 g、1.2 eq)およびヨウ化ナトリウム NaI (926 mg、0.1 eq)を添加し、得られた混合物を16時間還流させる。析出した沈殿を濾別し、濾液にH2O 200 mlとEtOAc 200 mlとを加える。水相を3×300 mlのEtOAcで抽出する。有機相を10％クエン酸 (2×150 ml)、10％NaHCO3(2×150 ml)、飽和NaClで洗浄した後、硫酸ナトリウムで乾燥し、減圧蒸発すると、粗生成物24.5 gが得られる。この混合物をCHex／EtOAc 9／1混合液を溶離剤とするシリカカラムクロマトグラフィーで処理して、18.1 gの生成物を得る。
収率：77.51％。Rf (CH2Cl2／MeOH: 9／1): 0.33。
【０１０２】
この生成物9.15 g (30 mmol)を23 mlのCH2Cl2中に冷溶解し、23 mlのTFA を加える。この混合物を室温で2時間撹拌する。溶媒を減圧蒸発させる。混合物をシクロヘキサンと共蒸発させる。生成物８ｆをEt2O中で冷析出させる。
収量(W)＝9.57 g、収率：77.5％ (2段)、Rf (CHex／EtOAc 6／4)：0.1。
【０１０３】
化合物８ｇ：アラニン グルコシルエステル, TFA
ペンタクロロフェノール (3 eq、10 g、37.54 mmol)を０℃でEtOAc 12 mlに溶解し、N,N'-ジシクロヘキシルカルボジイミド (DCC) (2.58 g、12.51 mmol)を添加する。この混合物を−20℃に12時間放置する。冷ヘキサン (10 ml)を混合物に加え、析出した固体を濾別し、冷ヘキサンで洗浄する。この固体をヘキサン中で再結晶させると、褐色固体10.3 gが得られる。
収率：82.0％、融点: 115-130℃。
【０１０４】
この複合体を120 mlのEtOAcに添加する。完全に溶解した後、BocAlanine (Boc-アラニン) (1.0 eq、10.25 mmol)を加え、得られた混合物を室温で一晩撹拌する。溶媒を減圧蒸発させた後、100 mlのEt2Oを加える。生成した懸濁液を1時間冷却した後、固体を濾別する。この固体を100 mlのジオキサン中に懸濁させ、濾別し、2×20 mlのジオキサンで洗浄する。濾液を蒸発乾固させる。残渣を再びジオキサンで処理してジシクロヘキシル尿素 (DCU)を除去する。その後、固体を100 mlのEt2O中に懸濁させ、冷凍庫に一晩入れる。固体を濾過し、乾燥すると、1.29 gの褐色固体が得られる。収率：27.8％。
【０１０５】
再蒸留ピリジン57 ml中のグルコース (3 eq、1.54 g)の溶液に、すぐ上の化合物とイミダゾールとを加える。この混合物を室温で一晩撹拌する。溶媒を減圧蒸発させると、粗生成物が得られる。この混合物をEtOAc／AcOH 20／1の混合液を溶離剤としてシリカクロマトグラフィー処理すると、883 mgの生成物が得られる。
収率：88.3％、Rf (EtOAc／AcOH 20／1): 0.13。
【０１０６】
この生成物883 mg (2.51 mmol)を０℃に冷却し、TFA 61 mlを加える。この混合物を０℃で5分間、次に室温で30分間撹拌する。TFAを減圧蒸発させる。混合物をシクロヘキサンで共蒸発させる。混合物をEt2Oで冷析出させると、746 mgの褐色化合物８ｇが得られる。
収率：81.3％、Rf (EtOAc／AcOH 10／1): 0.10。
【０１０７】
例９：トレオニンエステル類の合成
化合物９ａ：トレオニン 1,3-ジアセチル-2-プロピルエステル
本化合物は、化合物８ｃについて述べた手順に従って、Boc-アラニンをBpc-トレオニンに変更することにより得られる。
【０１０８】
化合物９ｂ:トレオニン エチルカーボネート-1-エチルエステル, TFA
本化合物は、化合物８ｆについて述べた手順に従って、Boc-アラニンをBpc-トレオニンに変更することにより得られる。
収率：89.7％、Rf (CHex／EtOAc 6／4)：0.1。
【０１０９】
例１０：グリシンエステル類の合成
化合物10ａ：グリシン エチルカーボネート-1-エチルエステル, TFA
本化合物は、化合物８ｆについて述べた手順に従って、Boc-アラニンをBpc-グリシンに変更することにより得られる。
収率：92％、Rf (CHex／EtOAc 8／2)：0.22。
【０１１０】
化合物10ｂ：グリシン エチルカーボネート-1-(2-メチル)プロピルエステル, TFA
本化合物は、化合物10ａについて述べた手順に従って、エチル-1-クロロエチルカーボネートをエチル-1-クロロ-2-メチル-プロピルカーボネートに変更することにより得られる。
収率：88％、Rf (CHex／EtOAc 8／2)：0.12。
【０１１１】
化合物10ｃ：グリシン エチルカーボネートメチルシクロヘキシルエステル, TFA
本化合物は、化合物10ａについて述べた手順に従って、エチル-1-クロロエチルカーボネートをエチル-クロロメチル-シクロヘキシルカーボネートに変更することにより得られる。
収率：78％、Rf (CHex／EtOAc 7／3)：0.31。
【０１１２】
化合物10ｄ：グリシン エチルカーボネートメチルフェニルエステル, TFA
本化合物は、化合物10ａについて述べた手順に従って、エチル-1-クロロエチルカーボネートをエチルクロロメチルフェニルカーボネートに変更することにより得られる。
収率：82％、Rf (CHex／EtOAc 7／3)：0.46。
【０１１３】
化合物10ｅ：1-(2-アミノアセトキシ)エチル・プロピオン酸エステル (Gly-OCH(CH3)O-COEt)
本化合物は、酢酸エチル (10 ml/mmol)中、NaI (0.2 eq)およびEt3N (1.2 eq)の存在下でBoc-Glyと1-クロロエチル・プロピオネート (1.1 eq)とを一晩還流させる縮合反応により得られる。冷却後、有機相を水、10％クエン酸、10％NaHCO3、H2O、sat. NaClで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥する。蒸発後、油状生成物が得られる。収率：86％。
【０１１４】
Boc基を前出の実施例に記載したようにして脱保護する。固体の白色生成物が定量的収率で得られる。
Rf (CHex／EtOAc 6／4)：0.64。
【０１１５】
化合物10ｆ：1-(2-アミノアセトキシ)-2-メチルプロピル・プロピオン酸エステル (Gly-OCH(CH(CH3)2O-COEt)
本化合物は、例10ｅで述べた手順に従って、1-クロロエチル・プロピオネートを1-クロロ-2-メチルプロピル・プロピオネートに変更することにより得られる。
白色固体。収率：78％ (二段で)、Rf (CHex／EtOAc 6／4)：0.56。
【０１１６】
化合物10ｇ：(2-アミノアセトキシ)-シクロヘキシル-メチル・プロピオン酸エステル (Gly-OCH(Chex)O-COEt)
本化合物は、例10ｅで述べた手順に従って、1-クロロエチル・プロピオネートをクロロメチルプロピル(シクロヘキシル)・プロピオネートに変更することによって得られる。
白色固体。収率：72％ (二段で)、Rf (CHex／EtOAc 6／4)：0.38。
【０１１７】
化合物10ｈ：(2-アミノアセトキシ)-フェニルメチル・プロピオン酸エステル (Gly-OCH(Ph)O-COEt)
本化合物は、例10ｅで述べた手順に従って、1-クロロエチル・プロピオネートをクロロメチル(フェニル)・プロピオネートに変更することにより得られる。
【０１１８】
白色固体。収率：75％ (二段で)、Rf (CHex／EtOAc 6／4)：0.42。
例１１：2-アミノ-5-エチル(1,3,4)チアジアゾールの合成
チオセミカルバジド25 g (0.27 mol)と塩化プロパノイル46.6 ml (0.54 mol, 2 eq)との混合物を40℃で4時間撹拌する。次いで、過剰の塩化プロパノイルを減圧蒸発させ、残渣をエーテル中で摩砕する。固体生成物が得られる。これは目的とするチアジアゾールと不純物を含有する。不純物はエタノール中で析出させて除去する。白色固体、33.6 g (収率：83％)。クロマシルC18 HPLC Tr 6.32分 (30％CH3CN中)。
【０１１９】
例１２：R5＝CH(R3)COOR4である混合阻害剤の合成
ジスルフィド５、６または７(0.54 mmol)を4 mlのDMFに溶解する。これにベンゾトリアゾール-1-イルオキシ-トリス-(ジメチルアミノ)ホスホニウム・ヘキサフルオロホスフェート (BOP) (1.2 eq、1.0 g)とジイソプロピル-エチル-アミン (DIEA) (284 μl)、次にアミノ酸エステル８、９または10 (1.3 eq)を加える。混合物を室温で20分間撹拌した後、DMFを減圧蒸発させる。生成物をEtOAcにとる。有機相を、H2O、10％クエン酸、10％NaHCO3、sat. NaClで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥する。得られた粗生成物をシリカクロマトグラフィーにより精製する。
【０１２０】
得られた化合物 (0.38 mmol)を640μlのCH2Cl2に溶解し、320μlのTFAを加える。この混合物を室温で1時間撹拌する。過剰の溶媒を減圧蒸発させる。混合物をシクロヘキサンと共蒸発させる。混合物を、準分取HPLCにより精製するか、またはヘキサン／Et2O混合液中で析出させる。
【０１２１】
化合物12ａ：1-(2-(1-(2,3-ジアセトキシプロポキシカルボニル)-エチルカルバモイル)-3-チオフェン-3-イルプロピルジスルファニルメチル)-3-メチルスルファニルプロピル-アンモニウム・トリフルオロアセテート (化合物６または７＋化合物８ｂ)
Ｗ：176 mg；収率：66.9％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O (0.5％TFA) 40-60：9.07および10.18分。ESI (質量分析)：(M+H)+＝581。Log Kow＝1.31。
【０１２２】
化合物12ｂ：1-(2-(1-(2-メタンスルホニルエトキシカルボニル)-エチルカルバモイル)-3-チオフェン-3-イルプロピルジスルファニルメチル)-3-メチルスルファニルプロピル-アンモニウム・トリフルオロアセテート (化合物６または７＋化合物８ａ)
Ｗ：200 mg；収率：74.1％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O (0.5％TFA) 40-60：5.0および5.35分。ESI (質量分析)：(M+H)+＝529。Log Kow＝−0.13。
【０１２３】
化合物12ｃ：1-(2-(1-(1-エトキシカルボニルオキシエトキシカルボニル)-エチルカルバモイル)-3-チオフェン-3-イル-プロピルジスルファニルメチル)-3-メチルスルファニルプロピル-アンモニウム・トリフルオロアセテート (化合物６または７＋化合物８ｆ)
Ｗ：232 mg；収率：71.3％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O (0.5％TFA) 50-50：3.84および4.03分。ESI (質量分析)：(M+H)+＝509。Log Kow＝1.63。
【０１２４】
化合物12ｄ：1-(2-(1-エトキシカルボニルメチルオキシカルボニルエチルカルバモイル)-3-チオフェン-3-イル-プロピルジスルファニルメチル)-3-メチルスルファニルプロピル-アンモニウム・トリフルオロアセテート (化合物６または７＋化合物８ｅ)
Ｗ：261 mg；収率：83.9％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O (0.5％TFA) 50-50：4.90および5.18分。ESI (質量分析)：(M+H)+＝539。Log Kow＝1.35。
【０１２５】
化合物12ｅ：1-(2-(1-(1-エトキシカルボニルオキシエトキシカルボニル)-2-ヒドロキシプロピルカルバモイル)-3-チオフェン-3-イル-プロピルジスルファニルメチル)-3-メチルスルファニルプロピル-アンモニウム・トリフルオロアセテート (化合物６または７＋＋化合物９ｂ)
Ｗ：285 mg；収率：47.8％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O (0.5％TFA) 40-60：10.55および11.09分。ESI (質量分析)：(M+H)+＝594。Log Kow＝0.76。
【０１２６】
化合物12ｆ：1-(2-(1-(2-アセトキシ-1-アセトキシメチルエトキシカルボニル)-エチルカルバモイル)-3-チオフェン-3-イルプロピルジスルファニルメチル)-3-メチルスルファニルプロピル-アンモニウム・トリフルオロアセテート (化合物６または７＋化合物８ｃ)
Ｗ：171 mg；収率：70.1％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O (0.5％TFA) 40-60：7.35および8.09分。ESI (質量分析)：(M+H)+＝581。Log Kow＝1.31。
【０１２７】
化合物12ｇ：1-(2-(1-(2-ヒドロキシ-1-ヒドロキシメチルエトキシカルボニル)-エチルカルバモイル)-3-チオフェン-3-イルプロピルジスルファニルメチル)-3-メチルスルファニルプロピル-アンモニウム・トリフルオロアセテート (化合物６または７＋化合物８ｄ)
Ｗ：166 mg；収率：67.2％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O (0.5％TFA) 40-60：2.94および3.27分。ESI (質量分析)：(M+H)+＝497。Log Kow＝−0.29。
【０１２８】
化合物12ｈ：1-(2-(1-(3,,5,6-テトラヒドロキシテトラヒドロピラン-2-イルメトキシカルボニル)-エチルカルバモイル)-3-チオフェン-3-イルプロピルジスルファニルメチル)-3-メチルスルファニルプロピル-アンモニウム・トリフルオロアセテート (化合物６または７＋化合物８ｇ)
Ｗ：85 mg；収率：93.2％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O (0.5％TFA) 50-50：2.34分。ESI (質量分析)：(M+H)+＝585。Log Kow＝−1.15。
【０１２９】
化合物12ｉ：1-(2-((1-(1-エトキシカルボニルオキシ-エトキシカルボニル)-2-ヒドロキシプロピルカルバモイル)-3-フェニルプロピルジスルファニルメチル)-3-メチルスルファニルプロピル-アンモニウム・トリフルオロアセテート (化合物５＋化合物９ｂ)
Ｗ：1.88 g；収率：83.8％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O (0.5％TFA) 45-55：7.0分。ESI (質量分析)：(M+H)+＝563。Log Kow＝0.76。
【０１３０】
化合物12ｊ：1-(2-(1-(2-アセトキシ-1-アセトキシメチルエトキシカルボニル)-2-ヒドロキシプロピルカルバモイル)-3-フェニルプロピルジスルファニルメチル)-3-メチルスルファニルプロピル-アンモニウム・トリフルオロアセテート (化合物５＋化合物９ａ)
Ｗ：582 mg；収率：53.6％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O (0.5％TFA) 40-60：6.16分。ESI (質量分析)：(M+H)+＝605。Log Kow＝0.44。
【０１３１】
化合物12ｋ：1-(2-(1-エトキシカルボニルオキシ-エトキシカルボニルメチル)-カルバモイル)-3-フェニルプロピルジスルファニルメチル)-3-メチルスルファニルプロピル-アンモニウム・トリフルオロアセテート (化合物５＋化合物10ａ)
Ｗ：1.76 g；収率：89.5％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O (0.5％TFA) 50-50：5.33分。ESI (質量分析)：(M+H)+＝519。Log Kow＝1.39。
【０１３２】
化合物12ｌ：1-(2-((1-エトキシカルボニルオキシ-2-メチル-プロポキシカルボニルメチル)-カルバモイル)-3-フェニルプロピルジスルファニルメチル)-3-メチルスルファニルプロピル-アンモニウム・トリフルオロアセテート (化合物５＋化合物10ｂ)
Ｗ：1.2 g；収率：82.3％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O (0.5％TFA) 50-50：9.33分。ESI (質量分析)：(M+H)+＝547。
【０１３３】
化合物12ｍ：1-(2-((シクロヘキシル-エトキシカルボニルオキシ-メトキシカルボニルメチル)-カルバモイル)-3-フェニルプロピルジスルファニルメチル)-3-メチルスルファニルプロピル-アンモニウム・トリフルオロアセテート (化合物５＋化合物10ｃ)
Ｗ：2.1 g；収率：65.3％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O (0.5％TFA) 50-50：12.65分。ESI (質量分析)：(M+H)+＝587。
【０１３４】
化合物12ｎ：1-(2-((エトキシカルボニルオキシ-フェニル-メトキシカルボニルメチル)-カルバモイル)-3-フェニルプロピルジスルファニルメチル)-3-メチルスルファニルプロピル-アンモニウム・トリフルオロアセテート (化合物５＋化合物10ｄ)
Ｗ：0.95 g；収率：68.1％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O (0.5％TFA) 50-50：10.86分。ESI (質量分析)：(M+H)+＝581。
【０１３５】
化合物12ｏ：3-メチルスルファニル-1-(3-フェニル-2-((1-プロピオニルオキシ-エトキシカルボニルメチル)-カルバモイル)-プロピルジスルファニルメチル)-プロピル-アンモニウム・トリフルオロアセテート (化合物５＋化合物10ｅ)
Ｗ：1.6 g；収率：81.2％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O (0.5％TFA) 50-50：6.82分。ESI (質量分析)：(M+H)+＝502。
【０１３６】
化合物12ｐ：1-(2-((2-メチル-1-プロピオニルオキシ-プロポキシカルボニルメチル)-カルバモイル)-3-フェニルプロピルジスルファニルメチル)-3-メチルスルファニルプロピル-アンモニウム・トリフルオロアセテート (化合物５＋化合物10ｆ)
Ｗ：1.05 g；収率：83％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O (0.5％TFA) 50-50：8.17分。ESI (質量分析)：(M+H)+＝531。
【０１３７】
化合物12ｑ：1-(2-((シクロヘキシル-プロピオニルオキシ-メトキシカルボニルメチル)-カルバモイル)-3-フェニルプロピルジスルファニルメチル)-3-メチルスルファニルプロピル-アンモニウム・トリフルオロアセテート (化合物５＋化合物10ｇ)
Ｗ：1.8 g；収率：78.2％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O (0.5％TFA) 50-50：12.24分。ESI (質量分析)：(M+H)+＝571。
【０１３８】
化合物12ｒ：3-メチルスルファニル-1-(3-フェニル-2-((フェニル-プロピオニルオキシ-メトキシカルボニルメチル)-カルバモイル)-プロピルジスルファニルメチル)-プロピル-アンモニウム・トリフルオロアセテート (化合物５＋化合物10ｈ)
Ｗ：0.98 g；収率：76.3％。クロマシルC18 HPLC CH3CN／H2O (0.5％TFA) 50-50：11.25分。ESI (質量分析)：(M+H)+＝565。
【０１３９】
例１３：R5＝複素環である混合阻害剤の合成
ジスルフィド５、６または７(0.54 mmol)を5 mlのCH2Cl2に溶解し、実施例11のアミノチアゾール化合物 (1.2 eq)、TBTU (O-ベンゾトリアゾール-1-イル-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート) (3 eq)、およびDIEA (ジイソプロピルエチルアミン) (3 eq)を順に添加する。この混合物を室温(約20℃)で30分間撹拌する。溶媒を減圧蒸発させ、残渣を酢酸エチルにとる。有機相を、クエン酸、水、飽和NaClで洗浄し、硫酸ナトリウムで乾燥する。減圧濾過および蒸発後に、白色固体が得られる。得られた化合物をギ酸に溶解し、混合物を室温で1時間撹拌する。過剰のギ酸を減圧蒸発させる。残渣をエーテルにとると、白色沈殿が析出する。
【０１４０】
化合物13ａ：3-(2-アミノ-4-メチルスルファニル-ブチルジスルファニル)-2-ベンジル-N-(5-エチル-(1,3,4)チアジアゾール-2-イル)-プロピオンアミド
Ｗ：256 mg (収率：75％)。
【０１４１】
例１４：対イオンの変更
例12および例13の化合物 (1 mmol)を9 mlの蒸留EtOAcに溶解する。有機相を12 mlの0.1N NaHCO3で洗浄する。この有機相をその後乾燥し、減圧蒸発する。生成物をEtOAc (3 ml)にとり、０℃に冷却し、EtOAc 3 ml中の選択した酸(AH) 1 eqを添加する。溶媒を蒸発させ、生成物をEt2O／ヘキサン混合液中で冷析出させる。
【０１４２】
(Ａ＝リン酸塩、塩酸塩、酢酸塩、メタンスルホン酸塩、ホウ酸塩、乳酸塩、フマル酸塩、コハク酸塩、ヘミコハク酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、ヘミ酒石酸塩、マレイン酸塩、アスコルビン酸塩、ヘムフマル酸塩、ヘキサン酸塩、ヘプタン酸塩、馬尿酸塩、ヒドロ桂皮酸塩、フェニルグリオキシル酸塩、ニコチン酸塩)。
【０１４３】
例１５：薬理学的結果−本発明に係る化合物
次式で示される化合物15を下記の各種の生物学的試験により試験した。
【０１４４】
【化１０】
2009513600.tif 000012
【０１４５】
ホットプレート試験：
本試験は、52℃に加熱されたプレート上でのマウスのリッキング (licking, 足なめ) およびジャンピング (飛び跳ね) 反射に関する (所定の例における飛び跳ね潜伏時間の測定)。結果は最大可能効果に対する％ (MPE％) で表される。即ち、次式を用いた痛覚消失の％として表される:
MPE(%)＝(測定された潜伏時間−対照潜伏時間)／(最大潜伏時間−対照潜伏時間)
最大潜伏時間＝240秒。
【０１４６】
結果は平均値±SEMとして表される。ｐ値が0.05未満である場合に、認められた差異が有意であると判断する。使用した検定は、多重比較検定を伴うANOVA検定である。
ａ) 雄性マウス (n＝10) でのホットプレート試験 (52℃、飛び跳ね反応) における化合物15の静脈内 (IV) 経路による注射後に観察された抗侵害受容反応。
【０１４７】
化合物15を水／マンニトール混合物 (50 mg/ml)に溶解する。静脈内経路による注射から10分後に飛び跳ね潜伏時間を測定する。
【０１４８】
【表２】
2009513600.tif 000013
【０１４９】
上の結果 (表2) は、化合物15が用量依存性の痛覚消失作用を発揮することを示している。
【０１５０】
**ｐ＜0.01； ***ｐ＜0.001 (対ビヒクル)
有効用量50 (ED50) は16.1 mg/kgである。
ED50とは、試験した個体数の50％に所望の効果を生ずる用量 (体重kg当たりのg) である。
【０１５１】
ｂ) 足に炎症を起こした（炎症はカラジーナンの足底内注射によって誘導）ラット (雄性Sprague Dawley) の足に圧力を加えた時の発声閾値に及ぼす化合物15 (100 mg/kg経口 <par os>)の痛覚消失効果
化合物15およびビヒクル (エタノール／ポリエチレングリコール (PEG) 400／水、10／40／50) をカラジーナン (食塩水中1％)の足底内注射から180分後に投与する。
【０１５２】
【表３】
2009513600.tif 000014
【０１５３】
足に圧力を加えた時の基底の発声閾値は炎症 (B) の前に測定し、炎症を起こした足については化合物15またはビヒクルの注射から20分後に測定する。結果を表３に、平均値±SEM (n＝10)として示す。認められた差異は、ｐの値が0.05未満である場合に有意であるとする。これらの結果は、化合物15が神経性の炎症性疼痛の治療に有効であることを示している。***ｐ＜0.001 (対ビヒクル)。
【０１５４】
ｃ) 雄性OF1マウスのホットプレート試験 (52℃、飛び跳ね反応)におけるエタノール／界面活性剤／水 (10／10／80)中に溶解した化合物15の静脈内注射後に認められた抗侵害受容反応およびビヒクルの性質に従った反応の比較
化合物15をエタノール／クレモフォール (Cremophor)TMEL／水の混合溶媒中に溶解する。静脈内注射から10分後に飛び跳ねの潜伏時間を測定する。結果を図1に示す。
【０１５５】
この用量依存性反応は、1.9±0.4 mg/kgの有効用量 (ED50) での痛覚消失応答 (反応) を生ずる。この値はモルヒネで認められたものに近い。ビヒクルに対して、**ｐ＜0.01、***ｐ＜0.001。
【０１５６】
化合物15は、ヒトの静脈内経路による注射によく使われる、エタノール／ツイーン (Tween)TM／水の混合溶媒にも可溶性である。
後者の溶媒中において、差異はクロモフォールELで得られた結果と有意な差ではない。これは、同じ2.5 mg/kg ＩＶ(静脈内)の濃度で次の表４ (注射後10分での飛び跳ね潜伏時間)に例証されている。***ｐ＜0.001 (ビヒクルに対して)。
【０１５７】
【表４】
2009513600.tif 000015
【０１５８】
ｄ) ホットプレート試験の20分前に経口(par os)注射した化合物15の抗侵害受容効果：ａ) 用量−反応曲線；ｂ) 200 mg/kgの経口投与後の作用速度
化合物15をエタノール／PEG400／水の10／40／50混合溶媒中に溶解する。図2aおよび2bに示した結果は、化合物15が用量依存性の痛覚消失 (鎮痛) 効果、ED50＝135 mg/kg、を示し (図2a)、化合物15の痛覚消失効果は投与直後で非常に高く、その後は効果が小さくなるが、少なくとも2時間は持続することを示している (図2b)。
【０１５９】
ビヒクルに対して、*ｐ＜0.05、**ｐ＜0.01、***ｐ＜0.001。
化合物15に対して、#ｐ＜0.05、###ｐ＜0.001。
ｅ) ホットプレート試験 (52℃、飛び跳ね反応)における化合物15 (n＝14〜17) または化合物Ａ (n＝8〜14) の静脈内注射 (5 mg/kg) 後に認められた抗侵害受容反応の比較
化合物Ａは、従来技術の出願であるWO 91/02718 (実施例7) に記載された次式で示される化合物である。
【０１６０】
【化１１】
2009513600.tif 000016
【０１６１】
この化合物Ａは、痛覚消失特性を示すネプリリシン／アミノペプチダーゼの混合阻害剤である。これは水性または親水性溶媒中には貧溶性である。
【０１６２】
化合物15と化合物Ａをエタノール／クレモフォールEL／水の10／10／80混合溶媒中に溶解する。静脈内注射から10分後に飛び跳ねの潜伏時間を測定する。
【０１６３】
【表５】
2009513600.tif 000017
【０１６４】
表５に示した結果は、同じ用量 (静脈内経路による化合物Ａの投与に対しては低い) では、化合物15が化合物Ａより活性が高いことを示している。
【０１６５】
**ｐ＜0.01 (ビヒクルに対して)、###ｐ＜0.001 (化合物Ａに対して)。
ｆ) マウスにおける静脈内経路により注射したモルヒネまたは化合物15により誘導された痛覚消失 (ホットプレート試験、52℃)
ホットプレート試験 (52℃) においてモルヒネまたは化合物15によりマウス (雄性OF1) に生じた痛覚消失を測定した。H2O／NaCl (9／1000) 中のモルヒネまたはEtOH／クレモフォールEL／水 (10／10／80) ビヒクル中に溶解した化合物15を静脈内注射した。結果は注射から10分後に測定する。潜伏時間は240秒 (例15および17に示した式)である。
【０１６６】
結果を次の表6に示す。
【０１６７】
【表６】
2009513600.tif 000018
【０１６８】
化合物15はモルヒネで得られるものに匹敵する痛覚消失 (鎮痛) 効果を有することがわかる。これは同じ条件下で実施された別の実験の結果 (図1、例15ｃ)の結果とも一致する。
【０１６９】
例１６：Δ9 ＴＨＣ単独での痛覚消失 (鎮痛) 効果
ホットプレート試験 (52℃) においてΔ9 THCによりマウス (雄性OF1) に生じた痛覚消失を測定した。EtOH／クレモフォールEL／水 (10／10／80)ビヒクル中に溶解したΔ9 THCを静脈内経路により注射した。結果は注射から10分後に測定し、潜伏時間は240秒 (例15および17に示した式)である。
【０１７０】
結果を次の表7に示す。
【０１７１】
【表７】
2009513600.tif 000019
【０１７２】
Δ9 THCは用量依存性の痛覚消失効果を生じたことがわかる。0.75 mg/kgおよび1.5 mg/kgの用量について有意の痛覚消失値が認められる。それより低い用量では、痛覚消失％は有意ではない。
【０１７３】
例１７：本発明に係る化合物＋Δ9 ＴＨＣの痛覚消失効果
本発明に係る化合物とΔ9 THCとの相乗作用の大きさを実証するために記述した実験を、抗侵害受容試験を用いて齧歯動物 (ラットおよびマウス)において実施した。実施した試験は、この種の特性を実証するために医薬産業において従来から使用されてきた下記の試験であった。
【０１７４】
・マウスのホットプレート試験 (Eddie and Leimbach, J. Pharmacol. Exp. Ther. 107, 385-389, 1953)、
・ラットのテイルフリック試験 (D'Amour and Smith, J. Pharmacol. Exp. Ther. 72, 74-79, 1941)、
・マウスのポルソルト水泳試験 (Porsolt, Arch. Int. Pharmacodyn. 229, 327, 1977)。
【０１７５】
中枢試験 (ホットプレート、テイルフリック)については、濃度は次の通りである:
・カンナビノイド類 (Δ9 THC) では0.3〜0.5 mg/kgの範囲が優先される;
・本発明に係る化合物 (化合物15) では1〜2 mg/kgの範囲が優先される。
【０１７６】
両者の相対的な濃度は侵害受容刺激に応じて異なる。
下記の例で使用したΔ9 THCはSigma-Aldrich社から購入した市販品 (T2386) である。
下記の例で使用した混合阻害剤は、上述した化合物15 (例15) である。
【０１７７】
化合物の溶液の調製
試験化合物はいずれもエタノール／クレモフォール80／水＝10／10／80混合溶媒に溶解した。
【０１７８】
効力増強 (相乗) 実験に対しては、それぞれ別々に投与した時には有意な応答反応を誘導しない用量でΔ9THCと阻害剤を使用した。
投与方式
これらの化合物を混合物として同じ注射器からラットまたはマウスの尾部 (テイル) に静脈内経路で投与する。
【０１７９】
動物
これらの試験で用いたマウスは雄性OF1マウスである。これらの試験で用いたラットは雄性Sprague-Dawleyラットである。
【０１８０】
薬理試験
・ホットプレート試験：
本試験は、52℃に加熱されたプレート上でのマウスの足なめ (リッキング) および飛び跳ね (ジャンピング) 反射に関する。結果は最大可能効果に対する％ (MPE％) で表される。即ち、次式を用いた痛覚消失の％として表される:
MPE(%)＝(測定された潜伏時間−対照潜伏時間)／(最大潜伏時間−対照潜伏時間)
最大潜伏時間＝240秒;
結果は平均値±SEMとして表される。ｐ値が0.05未満である場合に、認められた差異が有意であると判断する。
【０１８１】
・テイルフリック試験：
本試験は、尾部の所定部分に収束させた光源から放射される放射熱により刺激された、ラットにおける尾部フリック (振り動かし) 反射に関する。結果は、上の実験と同様に、上と同じ式に従って痛覚消失％の値を算出することにより表される。最大潜伏時間は任意に15秒に固定される。
【０１８２】
・水泳試験：
本試験は、逃げることができない21〜23℃の水浴中に入れたマウスの無動時間を測定する。無動時間はうつの１形態を反映し、この間はマウスはこの敵対的環境から逃げようと苦闘しない。結果は無動時間で表される。最大無動時間は4分間である。
【０１８３】
化合物15＋Δ9 THCの組み合わせの相乗効果を実証する必要性から、化合物15単独およびΔ9THC単独についての用量−反応曲線をエタノール／クレモフォールEL／水 (1／1／8)溶媒中で準備する。これは、Δ9 THCはこのような条件下では高濃度での静脈内経路でしか使用できないからである (例16)。痛覚消失反応 (ホットプレート) の棒グラフ (図3) は、Δ9 THC＋化合物15の組み合わせの痛覚消失効果が、これらの一方または他方の単独の場合に比べて非常に高く増強されることをはっきり示している。
【０１８４】
ａ) ホットプレート試験において雄性OF1マウスへの化合物15＋Δ9THC混合物の静脈内経路での注射により誘導された抗侵害受容反応 (図3)
化合物15 (0.4 mg/kg)およびΔ9 THC (0.375 mg/kg) の混合物をエタノール／Tween 80／水 (10／10／80) ビヒクル中で注射する。マウスの体重は25〜30グラムである。この溶媒混合物は、ヒトおよび動物における静脈内経路での投与に適合している。
【０１８５】
飛び跳ね潜伏時間を静脈内注射から10分後に測定する。結果は上述した式を用いて痛覚消失％として表され、図3に示す。
認められた差はｐ≦0.05 (１方向ANOVAの後に多重比較検定) の場合に有意であるとする。
【０１８６】
***ｐ≦0.01 (対照に対して)、###ｐ＜0.01 (化合物15とΔ9THCの混合物に対して)。
ｂ) 雄性Sprague-Dawleyラットでのテイルフリック試験において化合物15とΔ9THCの混合物の静脈内経路での注射により誘導された抗侵害受容反応
化合物15 (5 mg/kg)およびΔ9 THC (0.375 mg/kg) の混合物をエタノール／Tween 80／水 (10／10／80) ビヒクル中で注射する。テイルフリック (尾の振り動かし) 潜伏時間を、注射前 (試験前) および静脈内注射から10分後 (試験) に測定する。
【０１８７】
潜伏時間は15秒である。ラットの体重は260〜300グラムである。結果を表8に示す。
【０１８８】
【表８】
2009513600.tif 000020
【０１８９】
認められた差はｐ≦0.05 の場合に有意であるとする。2方向ANOVA後、多重比較検定：
***:ｐ≦0.001、**:ｐ≦0.01 (ビヒクル群に対して)、
#:ｐ≦0.05 (Δ9 THC群に対して)、
***:ｐ≦0.001、**:ｐ≦0.01 (化合物15群に対して)。
【０１９０】
ｃ) 雄性OF1マウスでの水泳試験において化合物15とΔ9THCの混合物の静脈内経路による注射により誘導された抗うつ反応
化合物15 (5 mg/kg)およびΔ9 THC (0.375 mg/kg) の混合物をエタノール／Tween 80／水 (10／10／80) ビヒクル中で試験の10分前に静脈内経路により注射する。
【０１９１】
合計無動時間を4分間測定する。
結果を表9に示す。マウスの体重は25〜30グラムである。
認められた差はｐ≦0.05 の場合に有意であるとする。1方向ANOVA後、多重比較検定：
***:ｐ≦0.001、**:ｐ≦0.05 (ビヒクル群に対して)、
###:ｐ≦0.001 (化合物15／Δ9 THC群、Δ9THC群に対して)。
【０１９２】
【表９】
2009513600.tif 000021
【０１９３】
結論：
カンナビノイドであるΔ9 THCの低用量 (即ち、0.5 mg/kg未満の濃度) での静脈内経路でのマウスへの投与は、化合物15により誘導された抗侵害受容または抗うつ反応を増強することが認められる。
【０１９４】
このような条件下で、マウスにおけるホットプレート試験で得られた痛覚消失効果を、Δ9 THCおよび化合物15の用量反応曲線を、これら２種類の化合物の痛覚消失より少ない用量で生じた効果と比較することにより、相乗作用が極めてはっきり実証される (図3)。
【０１９５】
Δ9 THC単独の有効用量／Δ9THC＋化合物15の有効用量の比率、そして逆に化合物15単独の有効用量／Δ9 THC＋化合物15の有効用量の比率で示される増強率は、どちらの場合も10を大きく超えることがわかるが、化合物15およびΔ9THCの使用用量が、これら２種類の分子をそれと同じ用量で単独使用した場合には不活性 (有効ではない) な量であるため、増強率を正確に計算することは容易ではない。
【０１９６】
本発明の化合物 (NEP／APN混合阻害剤、例えば、化合物15)とΔ9THCとを併用して、どちらの物質も活性を示さない非常に低い用量で投与することにより得られた抗侵害受容反応の強さは、内因性エンケファリン (本発明の化合物により保護された)とΔ9THCとの間に相乗作用が存在することを示している。これは、薬理学的反応のイソボログラフ (isobolographic) 解析により確認される。
【図面の簡単な説明】
【０１９７】
【図１】マウスに静脈内経路で注射したモルヒネまたは化合物15により誘導された痛覚消失（ホットプレート試験、52℃）の用量／反応曲線；横軸：用量（mg/kg）、縦軸：痛覚消失（％）。
【０１９８】
黒色（上）の線はモルヒネで得られた結果に対応し、灰色（下）の線は化合物１５で得られた結果に対応する。
【図２】Ａ）雄性OF1マウス（n＝10）にホットプレート試験（52℃、飛び跳ね潜伏時間、秒）の20分前に経口（par os）注射した化合物15により誘導された抗侵害受容反応；横軸：化合物15の用量（mg/kg）、縦軸：痛覚消失（％）。
【０１９９】
Ｂ）経口投与後の化合物15の作用速度（n＝10〜17）；横軸：時間（分）、縦軸：痛覚消失（％）。
【図３】化合物15とΔ9−テトラヒドロカンナビノールとの併用により誘導される抗侵害受容反応。ホットプレート試験（52±1℃）、飛び跳ね潜伏時間、雄性OF1マウス。カフオフ（Cuff-off）：240秒。*** ｐ＜0.001（対照に対して）、### ｐ＜0.001（化合物15およびΔ9−THFに対して）。Anova＋Newman-Keuls検定。横軸：化合物15の用量（0.4 mg/kg）、THCの用量（0.375 mg/kg）および化合物15／THCの用量（0.4および0.38 mg/kg）；縦軸：痛覚消失（％）。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【国際調査報告】
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