(57)【要約】本発明は内生共生菌であるバーコルデリア・リゾキシナ（Burkholderia rhizoxina）の４種の新規二次代謝物、これら化合物のバクテリア培養物からの単離方法及びこれら物質の使用に関する。本発明は抗有糸分裂作用を有する新規なリゾキシン誘導体を提供することを課題とし、強力な抗増殖性、細胞毒性及び抗真菌性を示す物質１〜４を提供する。【化６】2009510135.tif 000013【選択図】なし
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
式１〜４：
【化１】
2009510135.tif 000012
で表される物質。
【請求項２】
請求項１に記載の物質（１〜４）の製造方法であって、内生共生菌を液体栄養培地で培養し、培養液から該物質を単離することを特徴とする方法。
【請求項３】
内生共生菌はバーコルデリア・リゾキシナであることを特徴とする、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
内生共生菌はバーコルデリア・リゾキシナＤＳＭ１７３６０であることを特徴とする、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
物質１〜４を含む医薬組成物。
【請求項６】
化合物１〜４の、細胞増殖抑制効果を有する治療薬製造のための使用。
【請求項７】
化合物１〜４の、細胞毒性を有する治療薬製造のための使用。
【請求項８】
化合物１〜４の、抗真菌作用を有する治療薬製造のための使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、内生共生菌であるバーコルデリア・リゾキシナ（Burkholderia rhizoxina）の４種の新規二次代謝物、これら化合物のバクテリア培養物からの単離方法及びこれら物質の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
悪性腫瘍は、ドイツにおいて心臓循環器系疾患に次ぐ二番目の死亡原因である（ＤＫＦＺ，２０００）。
【０００３】
近年盛んに行われている研究にもかかわらず、ガン治療は未だに克服できない壁となっている。
【０００４】
リゾキシンは抗有糸分裂作用を有する大環状ポリケチドの一種で、リゾプス属の真菌から単離されている（イワサキＳら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．，１９８４，３７，３５４−３６２）。リゾキシンは一連のヒト腫瘍細胞株、特にビンクリスチン耐性細胞に対する強力な活性を示すため、可能性のあるケモセラピー薬として非常に注目されている。この作用は真核細胞におけるβ−チューブリンへの結合に起因し、この結合により微小管の集積化が阻止される。本発明者らは、リゾキシンをリゾプスから得るのではなく真菌類の内生共生菌から得ることを既に報告した（Ｌ．Ｐａｒｔｉｄａ−Ｍａｒｔｉｎｅｚ及びＣ．Ｈｅｒｔｗｅｃｋ、Ｎａｔｕｒｅ，２００５，４３７，８８４−８８８）。この内生共生菌の培養により、リゾキシン及びその誘導体の製造をかなり向上させることが可能である。
【０００５】
【非特許文献１】Ｎａｔｕｒｅ，２００５，４３７，８８４−８８８
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
本発明の課題は、抗有糸分裂作用を有する新規なリゾキシン誘導体及びその製造方法を提供することである。また、その使用も更なる課題である。
【０００７】
本発明に従えば、これらの課題は請求項１に係る物質、請求項２に係る方法及び請求項６〜８に係る使用により解決される。有利な構成形態が従属請求項に記載されている。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
式１〜４で表される物質は、内生共生菌のバクテリア株であるバーコルデリア・リゾキシナを培養し、続いて培養物を抽出に付し、化合物をクロマグラフィーにより単離することにより製造される。
【０００９】
ここでは、バーコルデリア・リゾキシナＤＳＭ１７３６０を液体培地において震盪培養し、続いて培養沈澱物を有機溶剤で抽出する。
【００１０】
続いてこの抽出液をデキストランゲル（Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０）を用いた体積排除クロマトグラフィーにより分画する。これら物質は、ＲＰ−１８相とアセトニトリル−水混合物（濃度勾配）を用いた分取ＨＰＬＣにより精製する。
【００１１】
化合物1〜４の構造はＩＲスペクトル、高分解能質量スペクトル及び１Ｄ−、２Ｄ−ＮＭＲスペクトルから決定される。
【００１２】
本発明に係る物質１〜４は非常に強力な増殖抑制効果及び細胞毒性（例えば、 Ｌ−９２９マウスフィブロブラスト、Ｋ−５６２ヒト白血病細胞、ＨｅＬａヒト頚部ガン細胞等に対して）を示すだけでなく、抗真菌活性（例えば、Ｇｌｏｍｅｒｅｌｌａ ｃｉｎｇｕｌａｔａ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｎｏｔａｔｕｍ、Ｆｕｓａｒｉｕｍ ｃｕｌｍｏｒｕｍ、Ｈａｍｉｇｅｒａ ａｖｅｌｌａｎｅａ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｆｕｍｉｇａｔｕｓ等に対して）も示す（表１）。
【００１３】
前記物質、即ち物質１〜４は強力な抗増殖性及び細胞毒性を有するため、ガン疾患治療のためのケモセラピー薬として使用するのに非常に好適である。
【００１４】
物質１〜４は、その優れた抗真菌作用により真菌感染症治療のために使用することも可能である。
【００１５】
化合物（１〜４）は物質そのものとして、又は通常の助剤と共に医薬調剤として使用することができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
実施例
バーコルデリア・リゾキシナＤＳＭ１７３６０の培養は発酵で行われる。液体培地（組成：コーンスターチ１％、グリセリン０．５％、酵母エキス１％、トウモロコシ液１％、ＣａＣＯ３１％）にて３０℃で４日間震盪培養を行う。培養沈澱物全体を攪拌下酢酸エチルで抽出し、濾過する。この操作を二回繰り返す。抽出液を合一し、硫酸ナトリウムで乾燥させ、濃縮する。得られた抽出物をメタノールに溶解し、Ｓｅｐｈａｄｅｘ ＬＨ−２０を用いた体積排除クロマトグラフィーにより分画する（溶離液：メタノール）。物質１〜４の精製は、ＲＰ−１８相とアセトニトリル−水混合物を用いた分取ＨＰＬＣにより行う（方法：ＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ ２５：７５で５分間、続いてＭｅＣＮ／Ｈ２Ｏ ８０：２０で３５分間、続いてＭｅＣＮ１００％で５分間、３１１ｎｍにて検出）。
【００１７】
物質１：
【化２】
2009510135.tif 000003
【００１８】
物質２：
【化３】
2009510135.tif 000004
【００１９】
物質３：
【化４】
2009510135.tif 000005
【００２０】
物質４：
【化５】
2009510135.tif 000006
【００２１】
表１
【表１】
2009510135.tif 000007
【００２２】
表２  
【表２】
2009510135.tif 000008
【００２３】
【表３】
2009510135.tif 000009
【００２４】
【表４】
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【００２５】
【表５】
2009510135.tif 000011
【手続補正書】
【提出日】平成19年7月11日(2007.7.11)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式１〜４：
【化１】
2009510135.tif 000014
で表される物質。
【請求項２】
請求項１に記載の物質（１〜４）の製造方法であって、内生共生菌を液体栄養培地で培養し、培養液から該物質を単離することを特徴とする方法。
【請求項３】
内生共生菌はバーコルデリア・リゾキシナであることを特徴とする、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
内生共生菌はバーコルデリア・リゾキシナＤＳＭ１７３６０であることを特徴とする、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
物質１〜４を含む医薬組成物。
【請求項６】
化合物１〜４の、細胞増殖抑制効果を有する治療薬製造のための使用。
【請求項７】
化合物１〜４の、細胞毒性を有する治療薬製造のための使用。
【請求項８】
化合物１〜４の、抗真菌作用を有する治療薬製造のための使用。
【国際調査報告】
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