(57)【要約】  式（Ｉ）2009519919.tif 000024（式中、Ａ、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、明細書で定義されるとおりである。）によって表される化合物、または医薬上許容しうる塩またはこの溶媒和物、この組成物、およびこの使用の方法。
2009519919.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2009519919.tif 000023
（式中、
Ａは、ピリジン−４−イル、３−フルオロ−ピリジン−４−イル、および２−アミノ−ピリミジン−４−イルからなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲンおよび（Ｃ１−Ｃ６）アルキルからなる群から選択され、
Ｒ２は、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ポリフッ化アルキル、ヘテロサイクリル、アリール、ヘテロアリール、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヘテロサイクリル−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリール−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）ヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルコキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、アリールオキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、ヘテロアリールオキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アミノアルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルキルアミノ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）ジアルキルアミノ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、カルバモイル−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、およびアルコキシカルボニルからなる群から選択され、上記アリール、ヘテロアリール、ヘテロサイクリル、アリールオキシおよびヘテロアリールオキシ部分の各々は、未置換であるか、または１個以上の置換基によって置換されていてよく、各置換基は、アルキル、アリール、−ＯＣＦ３、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、−ＯＣ（Ｏ）アリール、−ＣＦ３、ヘテロアリール、アラルキル、アルキルアリール、ヘテロアラルキル、アルキルヘテロアリール、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アラルコキシ、アシル、アリール、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アルキルスルフィニル、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アラルキルチオ、ヘテロアラルキルチオ、シクロアルキル、ヘテロサイクリル、ヘテロサイクレニル、−ＮＨ（アルキル）、−ＮＨ（シクロアルキル）、および−Ｎ（アルキル）２からなる群から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は各々水素、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ポリフッ化アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルケニル、（Ｃ１−Ｃ６）ポリフッ化アルケニル、（Ｃ１−Ｃ８）ヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルコキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、アリールオキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、ヘテロアリールオキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、アリール−（Ｃ１−Ｃ８）アルコキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アジドアルキル基、（Ｃ１−Ｃ８）アミノアルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルキルアミノ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）ジアルキルアミノ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、および（Ｃ１−Ｃ８）アルキル−ＯＣ（Ｏ）−アミノ（Ｃ１−Ｃ８）アルキルからなる群から独立に選択され、ただしＲ３、Ｒ４、Ｒ５またはＲ６の内の少なくとも１つは水素と異なる。）
によって表される化合物または医薬的に許容される塩またはその溶媒和物。
【請求項２】
Ｒ３およびＲ４の両方が水素原子である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ５およびＲ６の両方が水素原子である請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が水素原子である請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４およびＲ６が水素原子である請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
前記治療を必要とする哺乳類に、請求項１に記載の化合物を投与することを含む、哺乳類における細胞増殖障害または症状を治療する方法。
【請求項７】
前記障害または症状が、改変Ｃｄｃ７キナーゼ活性に起因し、または関連している請求項６に記載の方法。
【請求項８】
Ｃｄｋ２またはＣｄｃ７に対する活性に拮抗する上で有効である請求項１の化合物の量を前記Ｃｄｋ２またはＣｄｃ７に、投与することを含む、Ｃｄｋ２またはＣｄｃ７に対する活性に拮抗する方法。
【請求項９】
Ｃｄｋ２またはＣｄｃ７に対する拮抗剤活性が前記哺乳類で必要とされ、Ｃｄｋ２またはＣｄｃ７に対する活性に拮抗する上で有効である請求項１の化合物の量を前記哺乳類に投与することを含む、哺乳類における障害または症状を治療する方法。
【請求項１０】
Ｃｄｋ２またはＣｄｃ７に対する拮抗剤活性が前記哺乳類に必要とされ、前記障害または症状を治療する上で有効である請求項１の化合物の量を前記哺乳類に投与することを含む、哺乳類における障害または症状を治療する方法。
【請求項１１】
前記治療を必要とする前記哺乳類に、前記症状または障害を治療するのに有効である請求項１に記載の化合物の量を投与することを含む、哺乳類における膀胱癌、乳癌、結腸癌、腎臓癌、肝癌、肺小細胞癌を含めた肺癌、食道癌、胆嚢癌、卵嚢癌、膵癌、胃癌、子宮頸癌、甲状腺癌、前立腺癌、および有棘細胞癌を含む皮膚癌；白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞系リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリーセルリンパ腫、バーキットリンパ腫を含むリンパ様系列の造血系腫瘍；急性および慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群と前骨髄球性白血病を含む骨髄性系統の造血系腫瘍；線維肉腫および横紋筋肉腫を含む間葉起源の腫瘍；星状腫、神経芽細胞腫、神経膠腫およびシュワン細胞腫を含む中枢および末梢神経系の腫瘍；黒色腫、セミノーマ、奇形癌、骨肉腫、色素性乾皮症、角膜黄色腫症、甲状腺小胞癌およびカポジ肉腫を含む他の腫瘍からなる群から選択される障害または症状を治療する方法。
【請求項１２】
Ｃｄｋ２またはＣｄｃ７に対する活性を拮抗するのに有効である量の請求項１に記載の化合物を、前記治療を必要とする前記哺乳類に投与することを含む、哺乳類における、膀胱癌、乳癌、結腸癌、腎臓癌、肝癌、肺小細胞癌を含む肺癌、食道癌、胆嚢癌、卵巣癌、膵癌、胃癌、子宮頸癌、甲状腺癌、前立腺癌、および有棘細胞癌を含む皮膚癌、；白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞系リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリーセルリンパ腫、バーキットリンパ腫を含むリンパ様系統の造血系腫瘍；急性および慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群および前骨髄球白血病を含む骨髄性系統の造血系腫瘍；繊維肉腫および横紋筋肉腫を含む間葉起源の腫瘍；星状腫、神経芽細胞腫、神経膠腫およびシュワン細胞腫を含む中枢および末梢神経系の腫瘍；黒色腫、セミノーマ、奇形癌、骨肉腫、色素性乾皮症、角膜黄色腫症、甲状腺小胞癌およびカポジ肉腫を含む他の腫瘍からなる群から選択される障害または症状を治療する方法。
【請求項１３】
前記癌が、癌腫、有棘細胞癌、骨髄様またはリンパ様系統の造血系腫瘍、間葉起源の腫瘍、中枢および末梢神経系の腫瘍、黒色腫、セミノーマ、奇形癌、骨肉腫、色素性乾皮症、角膜黄色腫症、甲状腺小胞癌およびカポジ肉腫からなる群から選択される請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記癌が、癌腫、有棘細胞癌、骨髄様またはリンパ様系統の造血系腫瘍、間葉起源の腫瘍、中枢および末梢神経系の腫瘍、黒色腫、セミノーマ、奇形癌、骨肉腫、色素性乾皮症、角膜黄色腫症、甲状腺小胞癌およびカポジ肉腫からなる群から選択される請求項１２に記載の方法。
【請求項１５】
前記治療を必要とする前記哺乳類に、Ｃｄｋ２またはＣｄｃ７に対する活性に拮抗する上で有効である請求項１に記載の化合物の量を投与することを含む、哺乳類における、良性の前立腺肥大、家族性腺腫症、ポリープ症、神経線維腫症、乾癬、アテローム性動脈硬化、肺線維症、関節炎、糸球体腎炎、術後狭窄症および再狭窄に関連した脈管平滑細胞増殖のような細胞繁殖性の障害からなる群から選択される障害または症状を治療する方法。
【請求項１６】
請求項１に記載の化合物の、または医薬的に許容される塩またはこの溶媒和物、および医薬的に許容される担体を含む医薬組成物。
【請求項１７】
（Ｒ）−６−ベンジルオキシメチル−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
ＤＬ−７−（２−フルオロ−エチル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
（Ｒ）および（Ｓ）−７−（２−フルオロ−エチル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オンヒドロクロリド、
６−アジドメチル−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
（Ｒ）−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−６−ベンジルオキシメチル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（２−ベンジルオキシプロピル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（２−フルオロ−エチル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（３，３，３−トリフルオロ−プロピル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オンヒドロクロリド、
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（３，３−ジフルオロ−アリル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オンヒドロクロリド、
ＤＬ−６−（３−アミノ−プロピル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（３−ヒドロキシ−プロピル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
（Ｒ）−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−６−ベンジルオキシメチル−１−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
ＤＬ−６−ヒドロキシメチル−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オンヒドロクロリド、
ＤＬ−６−（３−ベンジルアミノ−プロピル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、および
ＤＬ−６−（３−ジベンジルアミノ−プロピル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
ＤＬ−６−（３−イソブチルアミノ−プロピル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
ＤＬ−６−（３−ジイソブチルアミノ−プロピル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
（４−オキソ−２−ピリジン−４−イル−４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−６−イルメチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、
６−アミノメチル−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オンビス−トリフルオロアセテート、
６−（イソプロピルアミノ−メチル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン；
６−［（ジイソプロピルアミノ）−メチル］−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン；
６−（３−アミノ−プロピル）−２−（３−フルオロ−ピリジン−４−イル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン；
２−（３−フルオロ−ピリジン−４−イル）−７−（３，３，３−トリフルオロ−プロピル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン；
７−（２−フルオロ−エチル）−２−（３−フルオロ−ピリジン−４−イル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン；
５−（２−ベンジルオキシ−エチル）−ピペリジン−２，４−ジオン、
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（２−ヒドロキシ−プロピル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
６−ベンジルオキシメチル−２−（３−フルオロ−ピリジン−４−イル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、および
２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−１−エチル−７−（２−フルオロ−エチル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン
からなる群から選択される請求項１に記載の化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヘテロアリールピロロピリジノンに、これを含む医薬組成物に、および特に癌および細胞増殖障害の治療で治療剤としてのこれらの用途に関する。
【背景技術】
【０００２】
タンパク質キナーゼ（ＰＫ）の機能不全は、膨大な疾患の特質である。ヒト癌に関与した癌遺伝子および癌原遺伝子の大きな役割は、ＰＫをコードする。ＰＫの強化された活性は、良性前立腺肥大、家族性腺腫症、ポリープ症、神経線維腫症、乾癬、アテローム性動脈硬化を伴う脈管平滑細胞増殖、肺線維症、関節炎、糸球体腎炎、および術後狭窄症および再狭窄のような多くの非悪性疾患にも関係する。ＰＫは、炎症性症状にも、およびウイルスおよび寄生虫の増殖にも関係する。ＰＫは、神経変性障害の病因と発症に重要な役割も果たしうる。ＰＫ機能不全および逆調節は、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  ｉｎ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，１９９９，３，４５９−４６５でさらに概説される。
【０００３】
癌細胞の成長に関与するような当分野で知られる数種のタンパク質キナーゼの中でも、ＤＮＡ複製起点の開始に必須であるゲノム複製に対する細胞周期調節に関連して重要な役割を果たす進化的に保存されるセリン−スレオニンキナーゼＣｄｃ７である（Ｍｏｎｔａｇｎｏｌｉ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，ＥＭＢＯ  Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｖｏｌ．２１，Ｎｏ．１２，ｐｐ．３１７１−３１８１，２００２；Ｍｏｎｔａｇｎｏｌｉ  Ａ．ｅｔ  ａｌ．，Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｖｏｌ．６４，Ｏｃｔｏｂｅｒ  １，ｐｐ．７１１０−７１１６，２００４を参照）。
【０００４】
数種の複素環式化合物が、タンパク質キナーゼ阻害剤として当分野で知られている。これらの中でも、例えば、ＷＯ０２／１２２４２で開示されるピロロ−ピラゾール、ＷＯ００／６９８４６で開示されるテトラヒドロインダゾール、ＷＯ０１／９８２９９で開示されるピロロ−ピリジン、ＷＯ０３／０１４０９０で開示されるアミノフタルアジノンおよびＷＯ０３／０２８７２０で開示されるアミノインダゾールである。
【０００５】
さらに、肥満の治療のためのピロロピリジノン誘導体は、Ｂａｙｅｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎに対する特許ＷＯ２００３／２７１１４で開示されている。特に、ピリジルピロロピリジノン、即ち５−シクロヘキシル−１−（２，４−ジクロロ−フェニル）−３−メチル−２−ピリジン−３−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オンが報告されている。
【０００６】
分裂促進因子で活性化されたタンパク質キナーゼ活性化タンパク質キナーゼ−２阻害活性を付与されたピロロピリジノン誘導体は、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｃｏｒｐ．に対する特許ＷＯ２００４／０５８７６２  Ａ１（優先権２００２年１２月、外国出願２００３年１２月）で開示されている。
【発明の開示】
【０００７】
本発明は、治療で、逆調節タンパク質キナーゼ活性およびさらに詳細には、Ｃｄｋ２およびＣｄｃ７活性に起因し、および／または関連した疾患の宿主に対する薬剤として有用である新規化合物に関する。
【０００８】
本発明は、タンパク質キナーゼ阻害活性および、さらに詳細には、Ｃｄｋ２およびＣｄｃ７阻害活性を有する化合物にも関する。
【０００９】
本発明の１つの形態は、式（Ｉ）
【００１０】
【化２】
2009519919.tif 000003
（式中、
Ａは、ピリジン−４−イル、３−フルオロ−ピリジン−４−イル、および２−アミノ−ピリミジン−４−イルからなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲンおよび（Ｃ１−Ｃ６）アルキルからなる群から選択され、
Ｒ２は、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ポリフッ化アルキル、ヘテロサイクリル、アリール、ヘテロアリール、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヘテロサイクリル−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリール−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）ヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルコキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、アリールオキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、ヘテロアリールオキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アミノアルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルキルアミノ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）ジアルキルアミノ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、カルバモイル−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、およびアルコキシカルボニルからなる群から選択され、上記アリール、ヘテロアリール、ヘテロサイクリル、アリールオキシおよびヘテロアリールオキシ部分の各々は、未置換であるか、または１個以上の置換基によって置換されていてよく、各置換基は、アルキル、アリール、−ＯＣＦ３、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、−ＯＣ（Ｏ）アリール、−ＣＦ３、ヘテロアリール、アラルキル、アルキルアリール、ヘテロアラルキル、アルキルヘテロアリール、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アラルコキシ、アシル、アリール、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アルキルスルフィニル、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アラルキルチオ、ヘテロアラルキルチオ、シクロアルキル、ヘテロサイクリル、ヘテロサイクレニル、−ＮＨ（アルキル）、−ＮＨ（シクロアルキル）、および−Ｎ（アルキル）２からなる群から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は各々水素、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ポリフッ化アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルケニル、（Ｃ１−Ｃ８）ポリフッ化アルケニル、（Ｃ１−Ｃ８）ヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルコキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、アリールオキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、ヘテロアリールオキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、アリール−（Ｃ１−Ｃ８）アルコキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アジドアルキル基、（Ｃ１−Ｃ８）アミノアルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルキルアミノ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）ジアルキルアミノ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、および（Ｃ１−Ｃ８）アルキル−ＯＣ（Ｏ）−アミノ（Ｃ１−Ｃ８）アルキルからなる群から独立に選択され、ただしＲ３、Ｒ４、Ｒ５またはＲ６の少なくとも１つは水素と異なる。）
によって表されるヘテロアリールピロロピリジノン誘導体
または医薬的に許容される塩またはその溶媒和物に関する。
【００１１】
本発明の別の態様は、上記治療を必要とする哺乳類に、式（Ｉ）の化合物のある量を投与することによって、改変タンパク質キナーゼ活性によって起因し、および／または、関連した細胞増殖障害または症状を治療する方法に関する。
【００１２】
本発明の別の態様は、Ｃｄｋ２またはＣｄｃ７に対する活性に拮抗する上で有効である式（Ｉ）の化合物のある量を上記Ｃｄｋ２またはＣｄｃ７に、投与することを含む、Ｃｄｋ２またはＣｄｃ７に対する活性と拮抗させる方法に関する。
【００１３】
本発明の別の態様は、Ｃｄｋ２またはＣｄｃ７に対する拮抗剤活性が哺乳類で必要とされ、Ｃｄｋ２またはＣｄｃ７に対する活性を拮抗させるときに式（Ｉ）の化合物のある量を上記哺乳類に投与することを含む、哺乳類における障害または症状を治療する方法に関する。
【００１４】
本発明の別の態様は、Ｃｄｋ２またはＣｄｃ７に対する拮抗剤活性が哺乳類に必要とされ、上記障害または症状を治療するのに有効である、式（Ｉ）の化合物のある量を上記哺乳類に投与することを含む、哺乳類における障害または症状を治療する方法に関する。
【００１５】
本発明の別の態様は、上記治療を必要とする上記哺乳類に、上記症状または障害を治療する上で有効である、式（Ｉ）の化合物のある量を投与することを含む、哺乳類における膀胱癌、乳癌、結腸癌、腎臓癌、肝癌、肺小細胞癌を含む肺癌、食道癌、胆嚢癌、卵巣癌、膵癌、胃癌、子宮頸癌、甲状腺癌、前立腺癌、および有棘細胞癌を含む皮膚癌；白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞系リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリーセルリンパ腫、バーキットリンパ腫を含むリンパ系統の造血系腫瘍；急性および慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群および前骨髄球性白血病を含む骨髄性系統の造血系腫瘍；線維肉腫および横紋筋肉腫を含む間葉起源の腫瘍；星状腫、神経芽細胞腫、神経膠腫およびシュワン細胞腫を含む中枢および末梢神経系の腫瘍；黒色腫、セミノーマ、奇形癌、骨肉腫、色素性乾皮症、角膜黄色腫症、甲状腺小胞癌およびカポジ肉腫を含む他の腫瘍からなる群から選択される障害または症状を治療する方法に関する。
【００１６】
本発明の別の態様は、上記症状または障害を治療するのに効果的である、式（Ｉ）の化合物のある量を上記治療を必要とする上記哺乳類に投与することを含む、哺乳類における、例えば良性の前立腺肥大、家族性腺腫症、ポリープ症、神経線維腫症、乾癬、アテローム性動脈硬化、肺線維症、関節炎、糸球体腎炎、および術後狭窄症および再狭窄に関する脈管平滑細胞増殖のような細胞繁殖性の障害からなる群から選択される障害または症状を治療する方法に関する。
【００１７】
本発明の別の態様は、Ｃｄｋ２またはＣｄｃ７に対する活性を拮抗するのに有効である、式（Ｉ）の化合物のある量を上記治療を必要とする上記哺乳類に投与することを含む、哺乳類における、膀胱癌、乳癌、結腸癌、腎臓癌、肝癌、肺小細胞癌を含む肺癌、食道癌、胆嚢癌、卵巣癌、膵癌、胃癌、子宮頸癌、甲状腺癌、前立腺癌、および有棘細胞癌を含む皮膚癌、；白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞系リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリーセルリンパ腫、バーキットリンパ腫を含むリンパ様系統の造血系腫瘍；急性および慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群および前骨髄球白血病を含む骨髄性系統の造血系腫瘍；繊維肉腫および横紋筋肉腫を含む間葉起源の腫瘍；星状腫、神経芽細胞腫、神経膠腫およびシュワン細胞腫を含む中枢および末梢神経系の腫瘍；黒色腫、セミノーマ、奇形癌、骨肉腫、色素性乾皮症、角膜黄色腫症、甲状腺小胞癌およびカポジ肉腫を含む他の腫瘍からなる群から選択される障害または症状を治療する方法に関する。
【００１８】
本発明の別の態様は、Ｃｄｋ２またはＣｄｃ７に対する活性を拮抗するのに有効である、式（Ｉ）の化合物のある量を上記治療を必要とする上記哺乳類に投与することを含む、哺乳類における、良性前立腺肥大、家族性腺腫症、ポリープ症、神経線維腫症、乾癬、アテローム性動脈硬化を伴う脈管平滑細胞増殖、肺線維症、関節炎、糸球体腎炎、術後狭窄症および再狭窄からなる群から選択される障害または症状を治療する方法に関する。
【００１９】
本発明の別の態様は、式（Ｉ）の化合物のある量、または医薬的に許容される塩またはこの溶媒和物、および医薬的に許容される担体を含む医薬組成物に関する。
【００２０】
好ましくは、上に列挙されるものから治療されうる特定の型の癌としては、癌腫、有棘細胞癌、骨髄様またはリンパ様系統の造血系腫瘍、間葉起源の腫瘍、中枢および末梢神経系の腫瘍、黒色腫、セミノーマ、奇形癌、骨肉腫、色素性乾皮症、角膜黄色腫症、甲状腺小胞癌およびカポジ肉腫が挙げられる。
【００２１】
本発明のさらに完全な認識、およびこれの付随する利点の多くは、以下の詳細な説明に対する参照により、これが一層よく理解できるようになると十分に理解される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
本発明の１つの態様は、式（Ｉ）
【００２３】
【化３】
2009519919.tif 000004
（式中、
Ａは、ピリジン−４−イル、３−フルオロ−ピリジン−４−イル、および２−アミノ−ピリミジン−４−イルからなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲンおよび（Ｃ１−Ｃ６）アルキルからなる群から選択され、
Ｒ２は、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ２−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ２−Ｃ６）アルキニル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ポリフッ化アルキル、ヘテロサイクリル、アリール、ヘテロアリール、（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヘテロサイクリル−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリール−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）ヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルコキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、アリールオキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、ヘテロアリールオキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アミノアルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルキルアミノ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）ジアルキルアミノ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、カルバモイル−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、およびアルコキシカルボニルからなる群から選択され、上記アリール、ヘテロアリール、ヘテロサイクリル、アリールオキシ、およびヘテロアリールオキシ部分の各々は、未置換であっても、または１つ以上の置換基で置換されていてもよく、各置換基は、アルキル、アリール、−ＯＣＦ３、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、−ＯＣ（Ｏ）アリール、−ＣＦ３、ヘテロアリール、アラルキルアルキルアリール、ヘテロアラルキル、アルキルヘテロアリール、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アラルコキシ、アシル、アリール、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アルキルスルフィニル、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アラルキルチオ、ヘテロアラルキルチオ、シクロアルキル、ヘテロサイクリル、ヘテロサイクリレニル、−ＮＨ（アルキル）、−ＮＨ（シクロアルキル）、および−Ｎ（アルキル）２からなる群から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は各々独立に、水素、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ポリフッ化アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルケニル、（Ｃ１−Ｃ６）ポリフッ化アルケニル、（Ｃ１−Ｃ８）ヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルコキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、アリールオキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、ヘテロアリールオキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、アリール−（Ｃ１−Ｃ８）アルコキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アジドアルキル基、（Ｃ１−Ｃ８）アミノアルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルキルアミノ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）ジアルキルアミノ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、および（Ｃ１−Ｃ８）アルキル−ＯＣ（Ｏ）−アミノ（Ｃ１−Ｃ８）アルキルからなる群から選択されるが、ただし、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５またはＲ６の少なくとも１つは水素と異なる。）
によって表されるヘテロアリールピロロピリジノン誘導体、
または医薬的に許容される塩またはこれの溶媒和物に関する。
【００２４】
本発明の式（Ｉ）の化合物は、不斉炭素原子を有することができ、したがって、個々の光学異性体として、ラセミ混合物として、またはこの２つの光学異性体の内の１つの大部分を含む他のいずれかの混合物として存在でき、これらは全て本発明の範囲内に含まれると意図される。
【００２５】
同様に、式（Ｉ）の化合物の有望な異性体およびこれらの混合物、および代謝産物および医薬的に許容される生物前駆体（特に限定されなければ、プロドラッグと称される）の両方の全ての抗腫瘍剤としての使用も、本発明の範囲内にある。プロドラッグは、インビボで式（Ｉ）による活性な親ドラッグを放出するいずれかの共有結合で結合した化合物である。
【００２６】
化合物が、互変異性形態、例えばケトエノール互変異性体で存在できる場合に、各互変異性体形態は、１つの形態で平衡に存在しようと、または優勢に存在しようと本発明内に含まれることが意図される。
【００２７】
特に指示される場合を除き、以下の定義は、本明細書および請求項を通して適用される。これらの定義は、用語が、これ自体によっても、他の用語との組合せにもかかわらず適用される。したがって、「アルキル」の定義は、「アルキル」並びに「アルキルアミノ」、「ジアルキルアミノ」、「アリール−（Ｃ１−Ｃ８）アルコキシ−（Ｃ１−Ｃ８）−アルキル」等の「アルキル」部分に適用される。
【００２８】
「哺乳類」は、ヒトおよび他の動物を意味する。
【００２９】
「治療する」は、疾患、障害または症状、または１つ以上の兆候の進行を逆転、緩和、阻害するか、または防止することに該当し、これを含む。さらに「治療」および「治療上」は、上に定義されるとおり治療の行動に該当する。
【００３０】
用語「有効量」は、特定の疾患を治療するか、または特定の酵素、例えば特定のタンパク質キナーゼを拮抗する能力がある本発明の化合物のある量を意味する。本発明によって投与される化合物の特定の用量は、例えば投与される化合物、投与の経路、対象のそうある現状、および治療されるべき病理学上の症状の重度を含む場合に及ぶ特定の環境によって決定される。
【００３１】
「アルキル」は、直鎖または分岐鎖でありうる脂肪族炭化水素基を意味する。分岐は、メチル、エチル、またはプロピルのような１つ以上のアルキル基が、線状アルキル鎖に結合されていることを意味する。アルキル基の制限のない例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルおよび同等物が挙げられる。アルキル基は、未置換であるか、またはハロ、アルキル、アリール、アラルキル、シクロアルキル、シアノ、ヒドロキシ、アルコキシ、アルキルチオ、アミノ、−ＮＨ（アルキル）、−ＮＨ（シクロアルキル）、−Ｎ（アルキル）２、カルボキシおよび−Ｃ（Ｏ）Ｏ−アルキルからなる群から独立に選択される１つ以上の置換基によって置換されていてもよい。適切なアルキル基の制限のない例としては、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチルおよびｔ−ブチル、イソブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルおよび同等物が挙げられる。
【００３２】
「アルケニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素二重結合を含み、直鎖または分岐鎖であってよい脂肪族炭化水素基を意味する。アルケニル基は、未置換であっても、または同じであるか、または異なっていてよい１つ以上の置換基によって置換されていてもよく、各置換基は、ハロ、アルキル、アリール、シクロアルキル、シアノおよびアルコキシからなる群から独立に選択される。適切なアルケニル基の制限なしの例としては、エテニル、プロペニルおよびｎ−ブテニルが挙げられる。
【００３３】
「アルキニル」は、少なくとも１つの炭素−炭素三重結合を含み、直鎖または分岐鎖であってよい脂肪族炭化水素基を意味する。分岐鎖は、メチル、エチルまたはプロピルのような１つ以上の低級アルキル基が、線状アルキニル鎖に結合されていることを意味する。適切なアルキニル基の制限なしの例としては、エチニル、プロピニル、および２−ブチニルが挙げられる。アルキニル基は、未置換であるか、またはアルキル、アリールおよびシクロアルキルからなる群から独立に選択される１つ以上の置換基によって置換されていてもよい。
【００３４】
「アミノ」は、−ＮＨ２基を意味する一方で、用語アリールアミノは−ＮＨ−アリール（アリールは下で定義されるとおりである。）のいずれかの基を含む。
【００３５】
「ハロゲン」または「ハロ」は、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子を意味する。
【００３６】
「ポリフッ化アルキル」は、例えば、トリフルオロメチル、２，２，２−トリフルオロエチル、３，３，３−トリフルオロプロピル、１，１−ジフルオロエチル、３，３−ジフルオロプロピルおよび同等物のような２つ以上のフッ素原子によって置換されている、上に定義されるとおりのいずれかのアルキル基を意味する。
【００３７】
「アリール」は、単結合によって互いに融合されるか、または連結されるかのいずれかである１から２までの環部分を有するいずれかの炭素環または複素環式炭化水素（環の少なくとも１つは芳香族である。）を意味する。存在する場合、あらゆる芳香族複素環式炭化水素も、「ヘテロアリール」基と称され、Ｎ、ＯまたはＳの中から選択される１から３個のヘテロ原子を有する５から６員までの環を含む。
【００３８】
アリールまたはヘテロアリール基は、未置換であるか、または１つ以上の置換基で環上に置換されていてもよく、各々は、アルキル、アリール、−ＯＣＦ３、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、−ＯＣ（Ｏ）アリール、−ＣＦ３、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアラルキル、アルキルヘテロアリール、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アラルコキシ、アシル、アリール、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アルキルスルフィニル、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アラルキルチオ、ヘテロアラルキルチオ、シクロアルキル、ヘテロサイクリル、ヘテロサイクレニル、−ＮＨ（アルキル）、−ＮＨ（シクロアルキル）、および−Ｎ（アルキル）２からなる群から独立に選択される。適切なアリール基の制限なしの例としては、フェニルおよびナフチルが挙げられる。「アリール」基は、例えばメチレンジオキシ、エチレンジオキシおよび同等物のような１つ以上の炭素原子および１つ以上の酸素原子の組合せを介してこの芳香族環上で２つの隣接炭素を連結させることによっても置換されうる。本発明によるアリール基の例は、例えばフェニル、ビフェニル、α−またはβ−ナフチル、ジヒドロナフチル、チエニル、ベンゾチエニル、フリル、ベンゾフラニル、ピロリル、イミダゾリル、ピラゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピラダジニル、インドリル、イソインドリル、プリニル、キノリル、イソキノリル、ジヒドロキノリニル、キノオキサリニル、ベンゾジオキソリル、インダニル、インデニル、トリアゾリル、および同等物である。
【００３９】
「シクロアルキル」は、非芳香族単環系または多環系を意味する。シクロアルキルは、未置換であっても、または環上の利用可能な水素を１つ以上の置換基に置換することによって環上で置換されていてもよく、各々は、アルキル、アリール、ヘテロアリール、アラルキル、アルキルアリール、アラルケニル、ヘテロアラルキル、アルキルヘテロアリール、ヘテロアラルケニル、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アラルコキシ、アシル、アリール、ハロ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アルキルスルフィニル、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アラルキルチオ、ヘテロアラルキルチオ、シクロアルキル、シクロアルケニル、ヘテロサイクリル、ヘテロサイクレニル、−ＮＨ（アルキル）、−ＮＨ（シクロアルキル）、および−Ｎ（アルキル）２からなる群から独立に選択される。適切な単環シクロアルキルの制限なしの例としては、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルが挙げられる。
【００４０】
「ヘテロサイクリル」または「ヘテロサイクル」は、Ｎ、ＯまたはＳの中から選択される１から３個までのヘテロ原子を含むいずれかの５または６員複素環式環を意味する。上記複素環または複素環基が、ヘテロアリールとも称される芳香族複素環である場合、これは、アリール基に対して与えられた上の定義によって含まれる。
【００４１】
上の芳香族複素環に加えて、このようなものとして、用語「複素環」は、例えばピロリン、ピロリジン、イミダゾリン、イミダゾリジン、ピラゾリン、ピラゾリジン、ピペリジン、ピペラジン、モルホリンおよび同等物のような飽和または部分的に不飽和複素環も包含する。複素環基は、未置換であっても、またはアルキル、アリール、−ＣＦ３、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、−ＯＣ（Ｏ）アリール、−ＯＣＦ３、ヘテロアリール、アルキルアリール、ヘテロアラルキル、アルキルヘテロアリール、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アラルコキシ、アシル、アリール、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アルキルスルフィニル、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アラルキルチオ、ヘテロアラルキルチオ、シクロアルキル、ヘテロサイクリル、ヘテロサイクレニル、−ＮＨ（アルキル）、−ＮＨ（シクロアルキル）、および−Ｎ（アルキル）２からなる群から独立に選択される１つ以上の置換基によって環上で置換されていてもよい。
【００４２】
この点で、例として、アリールアルキルとして識別される任意の基は、さらにアリールに置換されるアルキル基として意図されるべきであり、アリールおよびアルキルの両方は、上で定義されるとおりである。明らかに、Ｒ３およびＲ４またはＲ５およびＲ６は一緒に（Ｃ３−Ｃ８）シクロアルキル基を形成する場合、化合物は、スピロ誘導体と称される。
【００４３】
「アルコキシ」は、式−Ｏ−アルキル（アルキルは、上に定義されるとおりである。）のラジカルに該当する。アルコキシの限定なしの例としては、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、１−メチルエトキシ（イソプロポキシ）、ｎ−ブトキシ、ｎ−ペントキシ、１，１−ジメチルエトキシ（ｔ−ブトキシ）および同等物が挙げられる。
【００４４】
「アリールオキシ」は、式−Ｏ−アリール（アリールは、上に定義されるとおりである。）のラジカルに該当する。
【００４５】
「ヘテロアリールオキシ」は、式−Ｏ−ヘテロアリール（ヘテロアリールは、上に定義されるとおりである。）のラジカルに該当する。
【００４６】
式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容される塩としては、例えば硝酸、塩酸、臭化水素酸、硫酸、過塩素酸、リン酸、酢酸、トリフルオロ酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、乳酸、シュウ酸、マロン酸、リンゴ酸、マレイン酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、桂皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、イセチオン酸およびサリチル酸のような無機または有機酸を有する酸付加塩が挙げられる。
【００４７】
本発明の化合物のプロドラッグおよび溶媒和物も、ここで考慮される。ここで使用される場合、用語「プロドラッグ」は、対象に対する投与により、代謝または化学的プロセスにより化学的変換を受けて、式（Ｉ）の化合物またはこの塩および／または溶媒和物を生じるドラッグ前駆体である化合物を示す。プロドラッグの検討は、Ｔ．ＨｉｇｕｃｈｉおよびＶ．Ｓｔｅｌｌａ、Ｐｒｏ−ｄｒｕｇｓ  ａｓ  Ｎｏｖｅｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（１９８７）Ｖｏｌｕｍｅ  １４  ｏｆ  ｔｈｅ  Ａ．Ｃ．Ｓ．Ｓｙｍｐｏｓｉｕｍ  ＳｅｒｉｅｓでおよびＢｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ，（１９８７）Ｅｄｗａｒｄ  Ｂ．  Ｒｏｃｈｅ編、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓで提供され、この両方は、そこで参照によりここに組み込まれる。
【００４８】
「溶媒和物」は、１つ以上の溶媒分子との本発明の化合物の物理的結合を意味する。この物理的結合は、水素結合を含むイオンおよび共有結合の可変程度と関連する。所定の例では、溶媒和物は、例えば１つ以上の溶媒分子が結晶性固形物の結晶格子に組み込まれるときに単離の能力がある。「溶媒和物」は、溶液相および単離可能な溶媒の両方を含む。適切な溶媒和物の限定なしの例としては、エタノーラート、メタノラートおよび同等物が挙げられる。「水和物」は、溶媒分子がＨ２Ｏである溶媒和物である。
【００４９】
本発明の化合物の好ましい分類は、式（Ｉ）（式中、Ａは上で定義されるとおりであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ５およびＲ６は上で定義されるとおりであり、およびＲ３およびＲ４の両方が水素原子である。）の誘導体によって表される。
【００５０】
別の好ましい分類の本発明の化合物は、式（Ｉ）（式中Ａは、上で定義されるとおりであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３およびＲ４は上で定義されるとおりであり、およびＲ５およびＲ６の両方が水素原子である。）の誘導体によって表される。
【００５１】
上記分類中でさらに好ましい本発明の化合物は、式（Ｉ）（式中Ａは、上で定義されるとおりであり、Ｒ１は水素原子であり、Ｒ２、Ｒ３は上で定義されるとおりであり、およびＲ４、Ｒ５、Ｒ６は水素原子である。）の誘導体である。
【００５２】
上記分類中でさらに好ましい本発明の化合物は、式（Ｉ）（式中Ａは、上で定義されるとおりであり、Ｒ１は水素原子であり、Ｒ２、Ｒ５は上で定義されるとおりであり、およびＲ３、Ｒ４、Ｒ６は水素原子である。）の誘導体である。
【００５３】
ここ以降に詳細に示される以下のスキームにより式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
【００５４】
【化４】
2009519919.tif 000005
【００５５】
【化５】
2009519919.tif 000006
【００５６】
【化６】
2009519919.tif 000007
【００５７】
【化７】
2009519919.tif 000008
【００５８】
【化８】
2009519919.tif 000009
2009519919.tif 000010
【００５９】
式（ＩＩ）のヘテロアリール誘導体を、式（ＩＩＩ）（式中、ＱはＨまたは適切な窒素保護基、好ましくはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル、または例えばｐ−メトキシベンジル、ｐ−メトキシエチルベンジル、ｐ−メトキシフェニル基のような基である。）の適切なピペリジン−２，４−ジオン誘導体と反応させることによって、以下の合成スキームによって式（Ｉ、Ｒ２＝Ｈ）の化合物を製造できる。
【００６０】
【化９】
2009519919.tif 000011
【００６１】
この反応は、例えば低級アルコールまたは酢酸のような適切な溶媒中で酢酸アンモニウムの存在下で起こる。好ましくは、室温で、および約２時間から約２４時間までの変動する適切な期間で、作用させることによって、エタノールの存在下でこの反応を行う。
【００６２】
式（ＩＩ）および式（ＩＩＩ）の化合物、並びにこのプロセスの他のいずれかの反応体が知られているが、これ自体が市販で入手可能でない場合は、既知方法によってこれらを容易に製造できる。
【００６３】
例としては、以下の経路によって適切なヘテロアリール−エタノン誘導体をハロゲン化、例えば臭化または塩化することによって、式（ＩＩ）のヘテロアリール誘導体を製造できる。
【００６４】
【化１０】
2009519919.tif 000012
【００６５】
この反応は、例えば臭素の存在下で、および酢酸および臭化水素酸の混合物のような適切な溶媒中で、約１時間および約２４時間の間で変動する時間、従来の方法下で作用させることによって起こる。代わりに、適切に活性化されたヘテロアリール誘導体、例えばエノールエーテルまたはシリルエーテルを、テトラヒドロフラン／水混合物のような適切な溶媒中でハロゲン源、例えばＮ−ブロモ−スクシンイミド（ＮＢＳ）と反応させうる。
【００６６】
ハロゲン化できる適切なヘテロアリール−エタノン誘導体の限定なしの例としては、１−ピリジン−４−イルエタノン、１−ピリジン−４−イルプロパン−１−オン、１−（３−フルオロピリジン−４−イル）エタノンおよび１−（２−アミノピリミジン−４−イル）エタノンが挙げられる。
【００６７】
例えばリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）のような塩基の存在下で、例えば市販の３−フルオロピリジンをアセトアルデヒドと反応させ、トルエンのような適切な溶媒中で例えば二酸化マンガンの手段により、得られた１−（３−フルオロピリジン−４−イル）エタノールを酸化させることによって、１−（３−フルオロピリジン−４−イル）エタノンを製造できる。以下の経路によって、１−（２−アミノピリミジン−４−イル）エタノンを得ることができる。
【００６８】
【化１１】
2009519919.tif 000013
【００６９】
１−（ジメチルアミノ）−４，４−ジメトキシ−１−ペンテン−３−オンは、例えばＪ．Ｈｅｔ．Ｃｈｅｍ．、２２（６）、１７２３−６、１９８５で報告されるとおり、既知方法によって製造できる既知化合物である。これを、グアニジンと容易に反応させ、および例えば酸付加塩、例えば塩酸グアニジニウム塩の形態で利用可能である。塩基条件下で、例えばナトリウムエチレートの、および低級アルコール、好ましくはエタノールのような適切な溶媒の存在下で、この反応を行う。この反応は、環流温度で、約２４時間までの適切な時間で起こる。
【００７０】
上記反応は、アミノピリミジン核を導き、この後室温で、例えば酢酸の存在下で酸性処理を通して最終中間体に変換される。
【００７１】
さらに、ピペリジン−２，４−ジオン誘導体（ＩＩＩ）は、既知化合物であるか、または代わりに、例えば下の合成経路（Ａｌｋは適切な低級アルキル基、例えばエタノールを意味し、ＡはクロロまたはＯＡｌｋを意味する）にしたがって、例えば既知方法によって製造されうる。
【００７２】
【化１２】
2009519919.tif 000014
【００７３】
この点で、適切なβ−アミノ−カルボキシエステル（ＩＶ）誘導体（Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、上に報告される意味を示す）を、それぞれ、ジアルキルマロナートと、または代わりに３−クロロ−３−オキソプロパン酸アルキルエステル、例えばジメチルマロナートまたはエチル３−クロロ−３−オキソプロパノアートと反応させる。Ａがクロロである場合、塩基条件下で、例えばトリエチルアミンの存在下で、およびジクロロメタンのような適切な溶媒中で、室温から環流までの間に含まれる温度でこの反応を行う。ＡがＯａｌｋである場合、塩基条件を用いて、または用いずに、さらに場合により溶媒の存在下で、ジアルキルマロナートの環流温度で、この反応を行う。
【００７４】
市販で利用可能でない場合、文献で記述された公知手段にしたがって、上で明記されたβ−アミノ−カルボキシエステル誘導体（ＩＶ）を得ることができる。
【００７５】
この後、最初に塩基条件下で、例えばナトリウムメチレートの、および適切な溶媒、好ましくはトルエンの存在下で、環流温度で、および約２時間と約２４時間との間で変動する時間、これを反応させることによって、このように得られた中間誘導体（Ｖ）を、式（ＩＩＩ）の化合物に変換する。続いて、前の段階の生成物を、単離せずにこれ自体で、アセトニトリル／水／酢酸混合物と、環流条件下で、および約１２時間と約２４時間との間で変動する時間、反応させる。
【００７６】
代わりに、例えば下の合成経路にもしたがって、ピペリジン−ジオン誘導体（ＩＩＩ）を製造できる。
【００７７】
【化１３】
2009519919.tif 000015
【００７８】
この手段で、式（ＶＩＩ）（Ｑは適切な窒素保護基であり、およびＲ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は上で定義されるとおりである。）の化合物を得るために、メルドラムの酸を、式（ＶＩ）の適切なアミノ酸誘導体と反応させる。この後、式（ＶＩＩ）の化合物を、適切な溶媒、例えば酢酸エチルに溶解させ、および１から２４時間までの時間環流することによって環状化する。
【００７９】
アミノ酸誘導体（ＶＩ）は、既知化合物であるか、または代わりに文献に記述された既知手段にしたがって、既知方法によって製造できる。
【００８０】
例えば、下で示される合成スキームにしたがって、ＤＬ−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−酪酸（ＸＩＩ）を合成できる。この手段において、生成物（ＩＸ）を得るために、ＤＬアスパラギン酸（ＶＩＩＩ）をジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボナート（Ｂｏｃ２Ｏ）と反応させる。１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣｌ）の存在下で、化合物（ＩＸ）を水素化ホウ素ナトリウムで還元された、（２，４−ジオキソ−シクロペンチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（Ｘ）に変換し、生成物（ＸＩ）を得る。
【００８１】
ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリドを用いた連続保護によって、この後、所望の化合物（ＸＩＩ）を得る。
【００８２】
【化１４】
2009519919.tif 000016
【００８３】
プロセスの段階（ａ）によって、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミンの存在下で、ＤＬアスパラギン酸（ＶＩＩＩ）を、ジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボナートと反応させる。例えばジオキサンおよび水のような溶媒の混合物中で、約０℃から約１０℃までの範囲にある温度で、反応を行うことができる。
【００８４】
プロセスの段階（ｂ）でのとおり、クロロホルム、ジクロロメタン、ジメチルホルムアイドを含む多様な溶媒中で、式（ＩＸ）の化合物を、１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリドと反応させる。約０℃から室温までの範囲にある温度で、約４時間から約１０時間までで変動する適切な時間、攪拌を維持する。
【００８５】
段階（ｃ）にしたがって、水素化ホウ素ナトリウムのような適切な還元剤との反応を通して、式（Ｘ）の化合物を、ヒドロキシ誘導体（ＸＩ）に変換する。テトラヒドロフラン中で反応を行うことができる。この点で、水素化ホウ素ナトリウムを０℃に冷却し、化合物（Ｘ）を滴下で添加する。約１時間から３時間までの適切な時間、攪拌を維持する。
【００８６】
段階（ｄ）にしたがって、ｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド（ＴＢＤＭＳＣＩ）を、イミダゾールの存在下で化合物（ＸＩ）と反応させる。例えばクジロロメタン、ジメチルホルムアミドのような適切な溶媒中で反応を行うことができる一方で、攪拌を、約５時間から１０時間までで変動する時間維持する。
【００８７】
アミノ酸誘導体（ＶＩ）の製造の別の例は、下のスキームで示されるとおりに合成できるＤＬ−４−アジド−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−酪酸（ＸＶＩＩ）によって表される。
【００８８】
【化１５】
2009519919.tif 000017
【００８９】
この手段において、ＤＬ−２−アミノ−コハク酸４−メチルエステル（ＸＩＩＩ）を、水素化ホウ素ナトリウムで還元される生成物（ＸＩＶ）を得るためにジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルボナート（Ｂｏｃ２Ｏ）と反応させて、生成物（ＸＶ）を得る。メシレートとしてのヒドロキシ活性化およびアジド基によるこの求核置換は、酸（ＸＶＩＩ）に対する塩基性条件で最終的に加水分解される所望の化合物（ＸＶＩ）を提供する。
【００９０】
プロセスの段階（ａ）によって、ＤＬ−２−アミノ−コハク酸４−メチルエステル（ＸＩＩＩ）を、塩基、例えば炭酸ナトリウムの存在下でジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカーボネートと反応させる。約０℃から室温までの範囲にある温度で、例えばジオキサンおよび水のような溶媒の混合物中で反応を行うことができる。
【００９１】
プロセスの段階（ｂ）でのように、式（ＸＩＶ）の化合物を、トリエチルアミンの存在下で、エチルクロロホルメートと反応させ、０℃で、約１時間水素化ホウ素ナトリウムで迅速に処理し、この後攪拌を、室温で、約１時間から約４時間までで変動する適切な時間維持させる。
【００９２】
段階（ｃ）（第一の部分）によって、０℃で、都合のよい期間、約３０分から約１時間、適切な溶媒、例えばジクロロメタン中のメタンスルホニルクロリドとの反応を通して式（ＸＶ）のアルコールを、対応するメシレート誘導体に変換し、この後室温での攪拌を、約１時間から約３時間までの適切な時間維持する。段階（ｃ）（第二の部分）は、約４０および約８０℃の間の温度で、約１時間から約８時間までの期間、ジメチルホルムアリド中のアジ化ナトリウムによってアジド基（化合物ＸＶＩ）へのメチレートの変換を行う。
【００９３】
段階（ｄ）によって、メシルエステルの加水分解を、塩基性条件で、例えば水酸化リチウムの存在下で行う。例えばテトラヒドロフラン／水のような溶媒の適切な混合物中で反応を行うことができる一方で、攪拌は、約１時間から約４時間までの範囲にある期間維持する。
【００９４】
代わりに、ピペリジン−ジオン（ＩＩＩ）を、例えば下の合成経路によって別のピペリジン−ジオン（ＩＩＩ）（Ｑは、特にｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルのような適切な窒素保護基、または例えばｐ−メトキシフェニルのような他の基を意味し、Ｘは、ハライド、トリフレート、メシレート、トシレートおよび同等物である。）で変換できる。
【００９５】
【化１６】
2009519919.tif 000018
【００９６】
この点で、適切なピペリジン−ジオン誘導体（ＩＩＩａ）（Ｒ３、Ｒ５およびＲ６およびＱは、上で報告された意味を示す）を、塩基、例えばリチウムビス（トリメチルシリル）アミド（ＬＩＨＭＤＳ）と反応させる。−７８℃と室温との間を含む温度で、テトラヒドロフランのような適切な溶媒中で反応を行う。
【００９７】
この後、反応混合物を、適切なＲ４Ｘ（Ｘは、ハライド、トリフレート、メシレート、トシレートおよび同等物のような基である。）で処理して、式（ＩＩＩｂ）の化合物を得る。
このように得られた化合物を、例えば、Ｑがｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基である場合、酸性条件で、例えばトリフルオロ酢酸の、および適切な溶媒、好ましくはジクロロメタンの存在下で、室温で、および約１時間から約６時間の間に含まれる時間、式（ＩＩＩｃ）の化合物に変換できる。
【００９８】
このように得られた式（Ｉ）の最終化合物を、当分野で周知の方法によって別の式（Ｉ）の化合物に変換できる。例としてピロール誘導体のハロゲン化についての文献で報告された従来の方法を通して、式（Ｉ）（Ｒ１は水素原子を表す）の化合物を、対応の化合物（Ｒ１は、ハロゲン原子である。）に容易に変換できる。
【００９９】
様々な一般の手段によって、例えば式（Ｉ）（Ｒ２は水素原子である。）の化合物のピロール窒素原子のＮ−誘導化によって、これらを求電子物質Ｒ２−Ｘ（Ｘは、例えばハライド、トリフレート、メシレート、トシレートおよび同等物でありうる）と反応させることによって、式（Ｉ）（Ｒ２は水素原子と異なる。）を得ることができ、この結果、定義されるとおりのＲ２を有する化合物を得る。
【０１００】
別の実施形態では、式（Ｉ）（Ｒ２は水素原子である。）の化合物のピロール窒素のＮ−誘導化によって、ミツノブ反応を介してこれらをアルコールと反応させることによって、式（Ｉ）（Ｒ２は水素原子と異なる。）の化合物を製造できる。
【０１０１】
別の実施形態では、例えばハンチ型反応を介して簡単な構成要素からの直接構築によって、式（Ｉ）（Ｒ２は水素原子と異なる。）の化合物を製造できる。
【０１０２】
上で概説されるとおり、−３０℃から室温までの範囲にある温度で、好ましくは約０℃で、約１時間から約２４時間までの範囲にある期間、水素化ナトリウムのような適切な塩基の存在下で、ジメチルホルムアミド、ＴＨＦ、ジオキサンのような適切な溶媒中で式（Ｉ）（Ｒ２は水素原子である。）のピロロピリジノンを、都合のよいハライドまたはトリフレートのような適切な求電子物質と反応させることによって、式（Ｉ）（Ｒ２は定義されるとおりである。）の化合物を製造できる。
【０１０３】
代わりに、場合によりクラウンエーテル、例えば１８−クラウン−６の存在下で、約室温から約１００℃までの温度で、場合によりマイクロ波空洞で、ＤＭＦのような適切な溶媒中で、異なる塩基、例えば炭酸カリウムまたは炭酸セシウムを使用できる。
【０１０４】
トリフェニルホスフィンおよびジアルキルアゾジカルボキシレート、例えばジエチルアゾジカルボキシレートの存在下で、約−７８℃から約環流までの範囲にある温度で、約１時間から２４時間までの範囲にある期間、ジメチルホルムアミド、ＴＨＦ、ジクロロメタンのような適切な溶媒中で、ミツノブ反応を介して式（Ｉ）（Ｒ２は水素原子である。）のピロロピリジノンを、適切なアルコールと反応させることによっても、式（Ｉ）（Ｒ２は定義されるとおりである。）の化合物を製造できる。
【０１０５】
ジメチルホルムアミド、ＴＨＦまたはジクロロメタンのような適切な溶媒中で、ミツノブ反応を介して式（Ｉ）（Ｒ２は水素原子である。）のピロロピリジノンを、適切なアルコールと反応させることによっても、式（Ｉ）（Ｒ２は定義されるとおりである。）の化合物を製造できる。約−７８℃から約環流までの範囲にある温度で、約１時間から２４時間までの範囲にある期間、トリフェニルホスフィンおよびジアルキルアゾジカルボキシレート、例えばジエチルアゾジカルボキシレートの存在下で、ミツノブ反応を行うことができる。
【０１０６】
代わりのアプローチによって、式（ＸＶＩＩＩ）（Ｒ２は定義されるとおりである。）の適切なアミンの存在下で、式（ＩＩ）の上に記述されるヘテロアリール誘導体を、式（ＩＩＩ）（ＱはＨであるか、または前述の窒素保護基、好ましくはｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基である。）の適切なピペリジン−ジオン誘導体と反応させることによって、以下の合成スキームによって、式（Ｉ）の化合物も直接製造できる。
【０１０７】
【化１７】
2009519919.tif 000019
【０１０８】
この反応は、例えば低級アルコールまたは酢酸のような適切な溶媒の存在下で起こる。好ましくは、約室温から約１００℃までの範囲にある温度で、および約２時間から約２４時間までの範囲にある適切な時間、作用させることによって、エタノールの存在下で反応を行う。
【０１０９】
Ｑが保護基、例えばｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル基である場合、これを酸性条件、例えばトリフルオロ酢酸の、および適切な溶媒、好ましくはジクロロメタンの存在下で、室温で、および約１時間および約６時間の範囲にある時間処理することによって、式（Ｉ）（Ｑ＝Ｈである。）の所望の化合物を得ることができる。
【０１１０】
同様に、既知方法によって、例えば任意の遊離塩基を、任意の適切な医薬的に許容される酸と接触されることによって、式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容される塩への変換を容易に行う。
【０１１１】
上記の全てから、前述のプロセスによって式（Ｉ）の化合物を製造するときに、これの任意の変種、出発材料内の随意の官能基、またはこれの中間体および歓迎されない副作用を引起す可能性があるものの総合が、従来の技術によって適切に保護される必要があることは当業者に明らかである。同様に、これらの後者の遊離保護化合物への変換は既知手段によって行うことができる。
【０１１２】
類推により、例えば先に報告されたものの中から選択されるいずれかの医薬的に許容される酸の存在下で作用させることによって、塩に変換されたと思われる式（Ｉ）のいずれかの化合物を、対応の酸付加塩に容易に変換できる。
【０１１３】
十分に認識されるとおり、上で記述されるプロセスにしたがって式（Ｉ）の化合物を、異性体の混合物として得る場合、従来の技術にしたがった式（Ｉ）の単独異性体へのこれらの分離も、本発明の範囲内にある。
【０１１４】
ラセミ分割のための従来の技術としては、例えばジアステレオ異性体塩誘導体の分割結晶化または分取キラルＨＰＬＣが挙げられる。
【０１１５】
薬理学
式（Ｉ）の化合物は、タンパク質キナーゼ阻害剤として活性であり、したがって、例えば腫瘍細胞の調節できない増殖を限定するために有用である。
【０１１６】
治療では、これらを、公式に報告されたもののような種々の腫瘍の治療に、並びに乾癬、アテローム性動脈硬化と関連した脈管平滑細胞増殖、および術後狭窄症と再狭窄のような他の細胞増殖障害の治療に、およびアルツハイマー疾患の治療に使用できる。
【０１１７】
推定Ｃｄｃ７阻害剤の阻害活性および選択される化合物の効力を、ダウエックス樹脂捕捉技術の使用に基づいたアッセイの方法を通して決定する。
【０１１８】
アッセイは、アクセプター基質に対するキナーゼによる放射活性で標識されたリン酸部分の移動からなる。生じる３３Ｐ標識生成物を、未反応トレーサーから分離し、シンチレーションカクテルに移し、発生された光をシンチレーション計測器で測定する。
【０１１９】
Ｃｄｃ７活性の阻害アッセイ
ダウエックス樹脂捕捉技術の使用に基づいたアッセイの方法を通して、推定Ｃｄｃ７阻害剤の阻害活性、および選択される化合物の効力を測定する。
【０１２０】
アッセイは、アクセプター基質に対するキナーゼによる放射活性で標識されたリン酸部分の移動からなる。生じる３３Ｐ標識生成物を、未反応トレーサーから分離し、シンチレーションカクテルに移し、発生された光をシンチレーション計測器で測定する。
【０１２１】
以下のプロトコルにしたがって、Ｃｄｃ７／Ｄｂｆ４活性の阻害アッセイを行う。
【０１２２】
ＭＣＭ２基質は、γ３３−ＡＴＰで追跡されるＡＴＰの存在下でＣｄｃ７／Ｄｂｆ４複合体によってトランスリン酸化される。蟻酸の存在下、ダウエックス樹脂の添加によって反応を停止させる。ダウエックス樹脂粒子は、未反応γ３３−ＡＴＰを捕捉し、ウエルの底にこれを引っ張る一方で、３３Ｐリン酸化ＭＣＭ２基質は、溶液中に残る。上澄を収集し、オプチプレート（Ｏｐｔｉｐｌａｔｅ）プレートに移し、基質リン酸化の範囲をβ計測によって評価する。
【０１２３】
以下のプロトコルにしたがって、Ｃｄｃ７／Ｄｂｆ４活性の阻害アッセイを、９６穴ウエルプレートで行った。
【０１２４】
プレートの各ウエルに以下を加えた。
−  １０μｌ試験化合物（１０はｎＭからｕＭまでの範囲で濃度を増大して、容量応答曲線を生じる）。試験化合物用の溶媒は、３％ＤＭＳＯを含有した（最終濃度１％）。
−  冷ＡＴＰ（２ｍＭ最終濃度）および放射活性ＡＴＰ（冷ＡＴＰと１／５０００モル比）の混合物である１０μｌ基質ＭＣＭ２（６ｍＭ最終濃度）。
−  反応を開始した１０μｌ酵素（Ｃｄｃ７／Ｄｂｆ４、２ｎＭ最終濃度）。５０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．９）で含まれる反応の緩衝剤は、１５ｍＭ  ＭｇＣｌ２、２ｍＭ  ＤＴＴ、３μＭ  ＮａＶＯ３、２ｍＭグリセロホスフェートおよび０．２ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡを含有する。
−  室温で６０分間の温置の後、１５０ｍＭ蟻酸の存在下で、各ウエルにダウエックス樹脂１５０μｌを添加することによって、反応を停止させた。さらに６０分の温置の後、懸濁液５０μＬを廃棄し、マイクロシンチ（ＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ）４０（Ｐａｃｋａｒｄ）１５０μｌを含有する９６穴オプチプレートに移す。５から１０分振った後、プレートを、ＰａｃｋａｒｄのＴＯＰ−Ｃｏｕｎｔ放射活性読取装置で１分間読取った。
【０１２５】
ＩＣ５０測定：阻害剤を、０．０００５から１０μＭまでの範囲にある様々な濃度で試験した。４パラメーター論理的方程式：
ｙ＝底部＋（頂部−底部）／（１＋１０Ａ（（ｌｏｇＩＣ５０−ｘ）＊スロープ））
（式中、ｘは、阻害剤濃度の対数であり、ｙは応答であり、ｙは底部で出発し、Ｓ字型を有する頂部になる。）
を使用して、コンピュータプログラムのアッセイエックスプローラー（Ａｓｓａｙ  Ｅｘｐｌｏｒｅｒ）によって、実験データを解析した。
【０１２６】
さらに、選択される化合物は、Ｃｄｋ２Ａにおける、細胞周期に厳密に関連したセリン／スレオキナーゼ（Ｃｄｋ２／サイクリンＥ、Ｃｄｋ１／サイクリンＢ１、Ｃｄｋ４／サイクリンＤ１、Ｃｄｋ５／ｐ２５）のパネルにおける、ＩＧＦ１−Ｒ、オーロラ−２、ＡＫＴ１における特異性で特徴付けられた。
【０１２７】
Ｃｄｋ２／サイクリンＡ活性の阻害アッセイ
キナーゼ反応：１００μｌ緩衝液（トリスＨＣｌ  １０ｍＭ（ｐＨ７．５）、ＭｇＣｌ２  １０ｍＭ、７．５ｍＭ  ＤＴＴ）の最終体積中の１．５μＭヒストンＨ１基質、２５μＭ  ＡＴＰ（０．２μＣｉ  Ｐ３３γ−ＡＴＰ）、バスキュロウイルス同時発現Ｃｄｋ２／サイクリンＡ  ３０ｎｇ、１０μＭ阻害剤を、９６Ｕ底部ウエルプレートの各ウエルに添加した。３７℃温置で１０分後、ＥＤＴＡ（１２０ｍＭ）２０μｌによって反応を停止させた。
【０１２８】
捕捉：１００μｌを各ウエルからマルチクスリーンプレートに移し、ホスホセルロース濾材に基質を結合させた。この後、プレートを１５０μｌ／ウエルＰＢＳ（Ｃａ＋＋／Ｍｇ＋＋なし）で三回洗浄し、マルチスクリーン濾過システムによって濾過した。
検出：濾材を、３７℃で乾燥させ、この後１００μｌ／ウエルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）を添加し、およびトップ−カウント装置での放射活性計測によって、３３Ｐ標識ヒストンＨ１を検出した。
結果：データを解析し、酵素の総活性（＝１００％）に当たる阻害率（％）として表された。
【０１２９】
Ｋｉ計算を通して阻害剤の効力（ＩＣ５０）並びに動的プロファイルを研究および定義するために、阻害
【０１３０】
【化１８】
2009519919.tif 000020
を示す全化合物をさらに解析した。
【０１３１】
ＩＣ５０測定：使用したプロトコルは、阻害剤を０．００４５から１０μＭまでの範囲にある様々の濃度で試験した場合、上で記述されるものと同じであった。４パラメーター論理的方程式：
ｙ＝底部＋（頂部−底部）／（１＋１０Ａ（（ｌｏｇＩＣ５０−ｘ）＊スロープ））
（式中、ｘは、阻害剤濃度の対数であり、ｙは応答であり、ｙは底部で出発し、Ｓ字型を有する頂部になる。）
を使用して、コンピュータプログラムのグラフパッドプリズム（ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｚｍ）によって、実験データを解析した。
【０１３２】
Ｋｉ計算：ＡＴＰおよびヒストンＨ１の濃度のいずれも変動された。ＡＴＰについては４、８、１２、２４、４８μＭ（比例して希釈されたＰ３３γ−ＡＴＰを含有する）およびヒストンについては０．４、０．８、１．２、２．４、４．８μＭを、２つの異なる適切に選択される阻害剤濃度の不在または存在下で使用した。
【０１３３】
ランダムバイアクタントシステム方程式：
【０１３４】
【数１】
2009519919.tif 000021
を使用して、Ｋｉ測定についてのコンピュータプログラム「シグマプロット（ＳｉｇｍａＰｌｏｔ）」によって、実験データを解析した。
【０１３５】
Ｃｄｋ２／サイクリンＥ活性の阻害アッセイ
キナーゼ反応：１００μｌ緩衝液（トリスＨＣｌ  １０ｍＭ（ｐＨ７．５）、ＭｇＣｌ２  １０ｍＭ、７．５ｍＭ  ＤＴＴ＋０．２ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡ）の最終体積中の１．５μＭヒストンＨ１（シグマ番号Ｈ−５５０５）基質、２５μＭ  ＡＴＰ（０．２μＣｉ  Ｐ３３γ−ＡＴＰ）、バスキュロウイルス同時発現ｃｄｋ２／ＧＳＴ−サイクリンＥ  １５ｎｇ、適切な濃度の阻害剤を、９６Ｕ底部ウエルプレートの各ウエルに添加した。３７℃温置で１０分後、ＥＤＴＡ（１２０ｍＭ）２０μｌによって反応を停止させた。
捕捉：１００μｌを各ウエルからマルチクスリーンプレートに移し、ホスホセルロース濾材に基質を結合させた。この後、プレートを１５０μｌ／ウエルＰＢＳ（Ｃａ＋＋／Ｍｇ＋＋なし）で三回洗浄し、マルチスクリーン濾過システムによって濾過した。
検出：濾材を、３７℃で乾燥させ、この後１００μｌ／ウエルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）を添加し、およびトップ−カウント装置での放射活性計測によって、３３Ｐ標識ヒストンＨ１を検出した。
【０１３６】
Ｃｄｋ１／サイクリンＢ１活性の阻害アッセイ
キナーゼ反応：１００μｌ緩衝液（トリスＨＣｌ  １０ｍＭ（ｐＨ７．５）、ＭｇＣｌ２  １０ｍＭ、７．５ｍＭ  ＤＴＴ＋０．２ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡ）の最終体積中の１．５μＭヒストンＨ１（シグマ番号Ｈ−５５０５）基質、２５μＭ  ＡＴＰ（０．２μＣｉ  Ｐ３３γ−ＡＴＰ）、バスキュロウイルス同時発現Ｃｄｋ１／サイクリンＢ１  ３０ｎｇ、適切な濃度の阻害剤を、９６Ｕ底ウエルプレートの各ウエルに添加した。３７℃温置で１０分後、ＥＤＴＡ（１２０ｍＭ）２０μｌによって反応を停止させた。
捕捉：１００μｌを各ウエルからマルチクスリーンプレートに移し、ホスホセルロース濾材に基質を結合させた。この後、プレートを１５０μｌ／ウエルＰＢＳ（Ｃａ＋＋／Ｍｇ＋＋なし）で三回洗浄し、マルチスクリーン濾過システムによって濾過した。
検出：濾材を、３７℃で乾燥させ、この後１００μｌ／ウエルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）を添加し、およびトップ−カウント装置での放射活性計測によって、３３Ｐ標識ヒストンＨ１を検出した。
【０１３７】
阻害アッセイＣｄｋ４／サイクリンＤ１活性
キナーゼ反応：５０μｌ緩衝液（トリスＨＣｌ  １０ｍＭ（ｐＨ７．５）、ＭｇＣｌ２  １０ｍＭ、７．５ｍＭ  ＤＴＴ＋０．２ｍｇ／ｍｌ  ＢＳＡ）の最終体積中の０．４μＭマウスＧＳＴ−Ｒｂ（７６９−９２１）（サンタクルーズから得られる番号ｓｃ−４１１２）基質、１０μＭ  ＡＴＰ（０．５μＣｉ  Ｐ３３γ−ＡＴＰ）、バスキュロウイルス発現ＧＳＴ−Ｃｄｋ４／ＧＳＴ−サイクリンＤ１  １００ｎｇ、適切な濃度の阻害剤を、９６Ｕ底部ウエルプレートの各ウエルに添加した。３７℃温置で４０分後、ＥＤＴＡ（１２０ｍＭ）２０μｌによって反応を停止させた。
捕捉：６０μｌを各ウエルからマルチクスリーンプレートに移し、ホスホセルロース濾材に基質を結合させた。この後、プレートを１５０μｌ／ウエルＰＢＳ（Ｃａ＋＋／Ｍｇ＋＋なし）で三回洗浄し、マルチスクリーン濾過システムによって濾過した。
検出：濾材を、３７℃で乾燥させ、この後１００μｌ／ウエルのシンチラント（ｓｃｉｎｔｉｌｌａｎｔ）を添加し、およびトップ−カウント装置での放射活性計測によって、３３Ｐ標識ヒストンＨ１を検出した。
【０１３８】
Ｃｄｋ５／ｐ２５活性の阻害アッセイ
以下のプロトコルにしたがって、Ｃｄｋ５／ｐ２５活性の阻害アッセイを行った。
キナーゼ反応：１００μｌ緩衝液（ヘペス  ２０ｍＭ（ｐＨ７．５）、ＭｇＣｌ２  １５ｍＭ、１ｍＭ  ＤＴＴ）の最終体積中の１．０μＭビオチン化ヒストンペプチド基質、０．２５μＣｉ  Ｐ３３ｇ−ＡＴＰ、４ｎＭ  Ｃｄｋ５／ｐ２５複合体、０から１００μＭ阻害剤を、９６Ｕ底部ウエルプレートの各ウエルに添加した。３７℃温置で２０分後、０．１％トリトンＸ−１００、５０μＭ  ＡＴＰおよび５ｍＭ  ＥＤＴＡを含有するリン酸緩衝生理食塩水中の５００μｇＳＰＡビーズの添加によって反応を停止させた。ビーズを固定させ、３３Ｐ標識ペプチドに組み込まれた放射活性を、トップ−カウントシンチレーション計測計で検出した。
結果：式：
１００×（１−（未知−バックグランド）／（酵素対照−バックグランド））
を使用して、データを解析し、阻害率（％）として表現した。
【０１３９】
４パラメータ倫理的方程式：
Ｙ＝１００／［１＋１０Ａ（（ＬｏｇＥＣ５０−Ｘ）＊スロープ）］
の変動を使用してＩＣ５０値を計算した。
（Ｘ＝ｌｏｇ（μＭ）およびＹ＝阻害率（％））
【０１４０】
ＩＧＦ−１Ｒキナーゼ活性についての阻害アッセイ
３３Ｐ−γ−ＡＴＰで追跡されたＡＴＰ（ガンマリン酸標識された、Ｒｅｄｉｖｕｅ（登録商標）コード番号ＡＨ９９６８、１０００から３０００Ｃｉ／ミリモル、米国ニュージャージー州ピスケータウエイ（Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ，ＮＪ  ＵＳＡ）のＡｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）の存在下で、およびこれら自体の最適緩衝液およびコファクターの存在下でのこれらの特異的ｓｅｒ−ｔｈｒまたはｔｙｒキナーゼにより、特異的ペプチドまたはタンパク質基質を、トランスリン酸化する。
【０１４１】
リン酸化反応の終点で、過剰量のイオン交換ダウエックス樹脂により、９８％超の冷ＡＴＰおよび放射活性ＡＴＰを捕捉する。この後、樹脂は、重力によって反応プレートの底部に固定する。
【０１４２】
連続して、上澄を廃棄し、計測プレートに移し、この後β計測法によって評価する。
【０１４３】
試薬／アッセイ条件
ｉ）ダウエックス樹脂調製：
湿潤樹脂（ＳＩＧＭＡ、特別注文で調製された樹脂ダウエックス１×８  ２００から４００メッシュ、２．５Ｋｇ）５００ｇを秤量し、１５０ｍＭ蟻酸ナトリウム（ｐＨ３．００）中で２１まで希釈した。
【０１４４】
樹脂を、（数時間）固定させ、この後、上澄を捨てる。
【０１４５】
数日にわたって上のとおり三回洗浄の後、樹脂を固定させ、１５０ｍＭ蟻酸ナトリウム緩衝液２倍体積（樹脂体積に関して）を添加した。
この後、ｐＨを測定し、３．００周辺であるべきである。
洗浄樹脂は、１週間超安定である。保存樹脂を、使用前に４℃で保存する。
【０１４６】
ｉｉ）キナーゼ緩衝液（ＫＢ）：
ヘペス５０ｍＭ（ｐＨ７．９）
ＭｎＣｌ２  ３ｍＭ
ＤＴＴ  １ｍＭ
ＮａＶＯ３  ３ｕＭ
ＢＳＡ  ０．２ｍｇ／ｍｌ
ｉｉｉ）酵素予備活性化：
キナーゼ阻害アッセイを開始する前に、総酵素ミックスの１／６０に等しい体積で、ＫＢ中の１００ｕＭ  ＡＴＰの存在下で、３０分間、２８℃で、ＩＧＦ−１Ｒを予備温置する。これは、酵素自動リン酸化および完全活性化を可能にする。
【０１４７】
ｉｉｉ）アッセイ条件（最終濃度）：
酵素濃度＝６ｎＭ
ＩＲＳ１基質＝１０ｕＭ
ＡＴＰ＝６ｕＭ
３３Ｐ−γ−ＡＴＰ＝１ｎＭ
【０１４８】
ロボット化ダウエックスアッセイ
試験ミックスは、
１）３×酵素ミックス（キナーゼ緩衝液３×で行われた）、７μｌ／ウエル
２）３×基質およびＡＴＰミックス（ｄｄＨ２Ｏで行われた）、３３Ｐ−γ−ＡＴＰと一緒に、７μｌ／ウエル
３）３×試験化合物（ｄｄＨ２Ｏ−３％ＤＭＳＯに希釈）−７μｌ／ウエル
から構成される。
【０１４９】
化合物希釈およびアッセイスキーム
ｉ）化合物の希釈：
試験化合物は、１００％ＤＭＳＯ中の１０ｍＭ溶液として利用でき、専任実験室によって９６穴プレートに分配する。
【０１５０】
ａ）−阻害率（％）研究については、１ｍＭ、１００ｍＭおよび１０ｕＭでの個々の希釈プレートを、１００％ＤＭＳＯで調製し、この後ｄｄＨ２Ｏ、３％ＤＭＳＯ中の３×濃度（３０、３および０．３ｕＭ）で希釈する。マルチメック（Ｍｕｌｔｉｍｅｋ）９６（米国９２８３４−３１００カリフォルニア州フュレトン、ポストイフィースボックス３１００、ノースハーバードブルバード４３００（４３００  Ｎ．Ｈａｒｂｏｒ  Ｂｏｕｌｅｖａｒｄ，Ｐ．Ｏ．Ｂｏｘ  ３１００  Ｆｕｌｌｅｒｔｏｎ，ＣＡ  ９２８３４−３１００  ＵＳＡ）のＢｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ，  Ｉｎｃ．）を、試験プレートにピペット採取する化合物として使用する。
【０１５１】
ｂ）−ＩＣ５０測定については、化合物を、１００％ＤＭＳＯ中で１ｍＭに希釈し、マイクロタイタープレート（Ａ１からＧ１まで）（１００μｌ）の第一のカラムに乗せる。
【０１５２】
ウエルＨ１を、内部標準阻害剤スタウロスポリン（ＳＩＧＭＡ−Ａｌｄｒｉｃｈ、米国ミズーリー州セントルイス（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡ））のために空にする。
【０１５３】
バイオメック２０００（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）を、カラムＡ１からＡ１０まで、水、３％ＤＭＳＯで一連の１：３希釈のために、およびプレート中の７つの化合物全てについて使用する。標準実験で、全化合物の最高濃度は、３０ｕＭであり、この後、最終試験混合物で１０ｕＭまで希釈する。
【０１５４】
カラム１１および１２は、総活性参照およびバックグランド評価のために利用可能にさせる。
【０１５５】
ｉｉ）アッセイスキーム
化合物希釈（３×）７μｌを用いて、３８４ウエルプレート、Ｖ底（試験プレート）を調製し、この後プレートトラック１２ロボット化ステーション（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ、米国０２４８１−４０７８マサチューセッツ州ウエールスレイ、ウイリアムストリート４５）に乗せる。ロボットは、酵素ミックス（３×）のための１つのリサーバーおよびＡＴＰミックス（３×）のためのものと一緒に、アッセイを開始するための１つの３８４チップピペット採取ヘッド、これに加えて樹脂を分散するための１つの９６チップヘッドを有する。
【０１５６】
稼動の開始時に、ロボットは、ＡＴＰミックス７μｌを吸引し、チップの内側に空隙（５μｌ）を作り、ＩＧＦ１Ｒミックス７μｌを吸引する。プレートへの以下の分散は、ロボットこれ自体によって行われるキナーゼ反応を３周期の混合により開始させる。
【０１５７】
この点で、正しい濃度が、全試薬について保存される。
【０１５８】
ロボットは、室温で６０分間プレートを温置し、この後ダウエックス樹脂懸濁液７０μｌを反応ミックスにピペット採取することによって反応を停止させる。３周期の混合を、樹脂の添加直後に行う。
【０１５９】
樹脂懸濁液は、この固定速度が極端に早いので、これを、反応停止の全段階の間注意深く攪拌しなければならない。樹脂懸濁液は非常に周密である。チップ粘りを避けるために、広い孔のチップを、これを分散させるために使用する。
【０１６０】
全プレートが停止された後に、今回は通常のチップを使用して別の混合周期を行う。この後、ＡＴＰ捕捉を最大限にするために、プレートを、約１時間静置させる。この時点で、上澄２０μｌを、マイクロシント４０（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）７０μｌを用いて３８４−オプチプレート（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）に移す。５分間の軌道振とうの後、プレートを、Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒのトップカウント放射活性計測計で読取る。
【０１６１】
ｉｉｉ）データ分析
特別注文版の「アッセイエクスプローラー」ソフトウエアパッケージ（Ｅｌｓｅｖｉｅｒ  ＭＤＬ、９４５７７カリフォルニア州サン  リンドロ）を使用して、データを分析した。単一の化合物濃度については、阻害活性は、特に、阻害剤が除外された場合に得られる酵素の総活性と比較して化合物の存在下で得られた阻害率（％）として表された。所望の阻害を示す化合物を、ＩＣ５０計算を通して阻害剤の効力を研究するためにさらに分析できる。この場合には、阻害剤の一連の希釈を使用して得られた阻害データを、以下の方程式を使用して非線状回帰によって合わせることができる。
【０１６２】
【数２】
2009519919.tif 000022
（ｖｂは、基本線速度であり、ｖは、観察される反応速度であり、ｖｏは、阻害剤の不在下での速度であり、および［ｌ］は、阻害剤濃度である。）
【０１６３】
ＭＣＦ−７ヒト乳癌細胞でのＩＧＦ−１を用いた刺激に伴う受容体リン酸化のウエスタンブロット分析。
【０１６４】
ＭＣＦ−７細胞（ＡＴＣＣ番号ＨＴＢ−２２）を、Ｅ−ＭＥＭ培地（ＭＥＭ＋ＥａｒｌｅのＢＳＳ＋２ｍＭグルタミン＋０．１ｍＭ非必須アミノ酸）＋１０％ＦＣＳ中２×１０Ａ５細胞／ウエルで、１２穴組織培養プレートに植え付け、一夜３７℃、５％ＣＯ２、１００％相対的湿度で温置する。この後、Ｅ−ＭＥＭ＋１０％ＦＣＳをＥ−ＭＥＭ＋０．１％ＢＳＡに変更することによって、細胞を飢餓状態にし、一夜温置した。この温置の後、ウエルを、１時間、３７℃で所望の濃度の化合物で処理し、この後、１０分間、３７℃で１０ｎＭ組換えヒトＩＧＦ−１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、米国カリフォルニア州カリスバッド（Ｃａｒｌｓｂａｄ，  ＣＡ，  ＵＳＡ））で刺激した。この後、細胞を、ＰＢＳで洗浄し、１００マイクロＬ／ウエル細胞溶解緩衝液（Ｍ−ＰＥＲ哺乳類タンパク質抽出試薬［製品番号７８５０１、米国イリノイ州ロックフォード、ピース（Ｐｉｅｒｃｅ，  Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ，ＵＳＡ）］＋１０ｍＭ  ＥＤＴＡ＋プロテアーゼ阻害剤カクテル［Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製品番号Ｐ８３４０］＋ホスファターゼ阻害剤カクテル［Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ製品番号Ｐ２８５０＋番号Ｐ５７２６］）中で溶解させた。５分間、１０，０００×ｇで遠心分離することによって、細胞溶解物を透明化し、透明溶解物タンパク質１０マイクロｇ／レーンを、ＭＯＰＳ稼動緩衝液を用いたＮｕＰＡＧＥゲル（ＮｕＰＡＧＥ４から１２％、１０レーン  ビス−トリスゲル、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に乗せ、この後Ｍｉｎｉ  ＰＲＯＴＥＡＮ  ＩＩチャンバー（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、米国カリフォルニア州ヘラクレス（Ｈｅｒｃｕｌｅｓ，ＣＡ，ＵＳＡ））を使用してハイボンド−ＥＣＬニトロセルロース濾材（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、英国バッキンガムシャー、リトルチャーフォント（Ｌｉｔｔｌｅ  Ｃｈａｌｆｏｎｔ，  Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ））に移行させた。移行したタンパク質を担持する濾材を、遮断緩衝液（ＴＢＳ＋５％ＢＳＡ＋０．１５％ツイーン２０）中で１時間温置し、リン酸化ＩＧＦ−１Ｒの検出のための１／１０００ウサギ抗ホスホＩＧＦ−１ＲＴｙｒ１１３１／ＩｎｓＲＴｙｒ１１４６抗体（製品番号３０２１、Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、米国マサチューセッツ州ビバリー（Ｂｅｖｅｒｌｙ，ＭＡ，ＵＳＡ））、または総ＩＧＦ−１Ｒβ鎖を検出するための１／１０００希釈のウサギＩＧＦ−Ｉｒβ（Ｈ−６０）抗体（製品番号ｓｃ−９０３８、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ．、米国カリフォルニア州サンタクルーズ（Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ，ＣＡ，ＵＳＡ））を含有する同じ緩衝液中で２時間プローブ探査した。いずれの場合にも、この後、濾材をＴＢＳ＋０．１５％ツイーン２０の数回の交換で３０分間洗浄し、１／５０００希釈の西洋ワサビペルオキシダーゼで接合した抗ウサギＩｇＧ（Ａｍｅｒｓｈａｍ製品番号ＮＡ９３４）を含有する洗浄緩衝液で１時間温置し、この後、再度洗浄し、製造業者の推奨に従ってＥＣＬ化学発光物質システム（Ａｍｅｒｓｈａｍ）を使用して展開させた。特に主張されない限り、使用される試薬は、米国ミズーリー州セントル��スのＳｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈから得た。
【０１６５】
原発性ヒト線維芽細胞における成長因子誘発Ｓ６リボソームタンパク質リン酸化
正常なヒト上皮線維芽細胞（ＮＨＤＦ）の成長因子刺激に応答するＳ６リボソームタンパク質のリン酸化を、細胞でのＩＧＦ−１誘発シグナル形質導入を阻害する上での化合物効力、およびＥＧＦおよびＰＤＧＦ刺激に対する選択性を評価するために使用した。プロモセル（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ）（Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ、ドイツ国）から得たＮＨＤＦ細胞を、完全線維芽細胞成長培地（ＰｒｏｍｏＣｅｌｌ）中の５％ＣＯ２で湿潤化された大気中で、３７℃で維持させた。アッセイについては、ＮＨＤＦを、０．１％子ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）を含有する血清不含培地中で、５０００細胞／ウエルの密度で、３８４穴組織培養プレート（透明および平坦底のブラックプレート、Ｍａｔｒｉｘ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ，Ｉｎｃ．、米国ニューハンプシャー州ハドソン）に植え付け、５日間温置した。飢餓細胞を、１時間、所望の用量の化合物で処理し、この後さらに２時間、１０ｎＭ  ＩＧＦ−１（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．、米国カリフォルニア州）、１０ｎＭ  ＥＧＦ（Ｇｉｂｃｏ  ＢＲＬ、米国）または１ｎＭ  ＰＤＧＦ−Ｂ／Ｂ（Ｒｏｃｈｅ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ  ＧｍｂＨ、ドイツ国）のいずれかで刺激した。この後、細胞を、室温で２０分間、ＰＢＳ／３．７％パラホルムアルデヒド中で固定し、ＰＢＳで二回洗浄し、１５分間、ＰＢＳ／０．３％トリトンＸ−１００で透過された。この後、ウエルを、１時間、ＰＢＳ／１％脱脂粉乳（Ｂｉｏ−Ｒａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、米国カリフォルニア州ヘラクレス）で飽和させ、この後１時間、３７℃で、ＰＢＳ／１％ミルク／０．３ツイーン２０中での１／２０００希釈で抗ホスホ−Ｓ６（Ｓｅｒ２３５／２３６）抗体（Ｃｅｌｌ  Ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，米国マサチューセッツ州ビバリー、ｃａｔ．番号２２１１）でプローブ探査した。この後、ウエルをＰＢＳで二回洗浄し、１時間、３７℃で、ＰＢＳ／１％ミルク／０．３％ツイーン２０＋１マイクロｇ／ｍＬ  ＤＡＰＩ（４，６−ジアミジノ−２−フェニルインドール）＋１／５００ヤギ抗ウサギＣｙ５（登録商標）接合二次抗体（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、英国バッキンガムシャー、リトルチャーフォント（Ｌｉｔｔｅ  Ｃｈａｌｆｏｎｔ，  Ｂｕｃｋｉｎｇｈａｍｓｈｉｒｅ，ＵＫ）と共に温置した。この後、ウエルをＰＢＳで２回洗浄し、４０マイクロＬ  ＰＢＳを、免疫蛍光分析のために各ウエルに残した。ＤＡＰＩおよびＣｙ５（登録商標）チャネルでの蛍光画像を自動的に取得し、保存し、セロミックス  アレースキャン（Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ  Ａｒｒａｙ  Ｓｃａｎ）（登録商標）ＩＶ装置（Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓ、米国ピッツバーグ（Ｐｉｔｔｓｂｕｒｇｈ，ＵＳＡ））を使用して分析した。Ｃｅｌｌｏｍｉｃｓの細胞毒性アルゴリズムを、各細胞について１０フィールド／ウエルで、ホスホ−Ｓ６（Ｃｙ５（登録商標）シグナルパラメーター：「ミーン  リソ  マス  ｐＨ」）に連結した細胞質蛍光を定量するために使用し、最終的に平均集合値として表された。特に指示されない限り、試薬は、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ、米国ミズーリー州セントルイスから得た。
【０１６６】
オーロラ−２活性の阻害アッセイ
このインビトロキナーゼ阻害アッセイは、ＩＧＦ−１Ｒについて記述されるものと同じである。原理、ダウエックス樹脂の調製、試験化合物の希釈、ロボット化アッセイおよびデータ分析は、厳密に同じであった。
【０１６７】
オーロラ−２酵素は、何ら予備活性を必要としない。
【０１６８】
ｉ）オーロラ−２についてのキナーゼ緩衝液（ＫＢ）
ヘペス  ５０ｍＭ（ｐＨ７．０）
ＭｎＣｌ２  １０ｍＭ
ＤＴＴ  １ｍＭ
ＮａＶＯ３  ３ｕＭ
ＢＳＡ  ０．２ｍｇ／ｍｌ
【０１６９】
ｉｉ）オーロラ−２についてのアッセイ条件（最終濃度）
酵素濃度＝２．５ｎＭ
基質（ＬＲＲＷＳＬＧの４×繰返し）＝８ｕＭ
ＡＴＰ＝１０ｕＭ
３３Ｐ−γ−ＡＴＰ＝１ｎＭ
【０１７０】
インビトロ細胞増殖アッセイ
ヒト大腸癌セルラインＨＣＴ−１１６を、１０％ＦＣＳ（ＥｕｒｏＣｌｏｎｅ、イタリア国）２ｍＭ  Ｌ−グルタミンおよび１％ペニシリン／ストレプトマイシンで補足したＦ１２培地（Ｇｉｂｃｏ）を使用して２４ウエルプレート（Ｃｏｓｔａｒ）中に５０００細胞／ｃｍ２で植え付け、３７℃、５％ＣＯ２および９６％相対湿度で維持した。次の日、プレートを、ＤＭＳＯ中の１０ｍＭ保存液から出発する適切な希釈の化合物５μｌで二重に処理した。２つの未処理対照ウエルが各プレートに含まれた。処理の７２時間後、培地を廃棄し、０．０５％（ｗ／ｖ）トリプシン、０．０２％（ｗ／ｖ）ＥＤＴＡ（Ｇｉｂｃｏ）０．５ｍＬを用いて、細胞を各ウエルから取り出した。サンプルを、イソトン（Ｃｏｕｌｔｅｒ）９．５ｍＬで希釈し、マルチスター３細胞計測計（Ｂｅｃｋｍａｎ  Ｃｏｕｌｔｅｒ）を使用して計数した。データを、対照ウエルの百分率として評価した。
ＣＴＲの百分率（％）＝（処理済み−ブランク）／（対照−ブランク）
ＭｉｃｒｏｓｏｆｔのエクセルＳ字型曲線フィッティングを使用して、ＬＳＷ／データ分析によって、ＩＣ５０値を計算した。
【０１７１】
上のアッセイを考慮して、本発明の式（Ｉ）の化合物は、際立ったタンパク質キナーゼ阻害活性、例えばオーロラ−２阻害活性を保持する結果になった。例として、オーロラ−２キナーゼ阻害剤として試験される（ＩＣ５０ｎＭ）、およびこれらの細胞抗増殖性効果（ＩＣ５０ｎＭ）について本発明の幾つかの代表的化合物の実験データを報告する以下の表１を参照。
【０１７２】
興味深いことに、これらの同じ誘導体を、前述のＷＯ０４／０１３１４６号特許出願で特に開示され、ここで参照化合物として定義される構造的に非常に近い化合物との比較で試験した。実施例６の化合物番号４２１を参照。
【０１７３】
ＡＫＴ−１活性の阻害アッセイ
試験化合物を、１００％ＤＭＳＯで１０ｍＭ溶液として調製し、９６ウエルのプレートに分配する。
ｉ）阻害率（％）研究については、１ｍＭ、１００μＭおよび１０μＭでの個々の希釈プレートを、１００％ＤＭＳＯで調製し、この後ｄｄＨ２Ｏ、３％ＤＭＳＯで３倍濃度（３０、３および０．３μＭ）で希釈する。マルチメック９６（Ｂｅｃｋｍａｎ）を化合物のために使用して、試験プレートにピペット採取する。
【０１７４】
ｉｉ）ＩＣ５０測定のために、化合物を、１００％ＤＭＳＯで１ｍＭに希釈し、マイクロタイタープレート（Ａ１からＧ１まで）、１００μｌの第一カラムに載せ、ウエルＨ１を、内部標準のために空にする。
【０１７５】
バイオメク２０００（Ｂｅｃｋｍａｎ）を、水、３％ＤＭＳＯ中でカラムＡ１からＡ１０まで逐次１：３希釈のために、およびプレート中の７つの化合物全てのために使用する。標準実験では、全化合物の最高濃度は、最終試験混合物中で１０μＭで希釈される３０μＭである。カラム１１および１２は、総活性参照およびバックグランド評価のために利用可能にさせる。アッセイスキーム：Ｕ底試験プレートを、ウエルあたり化合物希釈（３倍）１０μｌで、または３％ＤＭＳＯ／水でのいずれかで調製し、この後、酵素ミックス（３倍）について１つのリザーバー、およびＡＴＰミックス（３倍）についてのものと一緒にプレートトラック（ＰｌａｔｅＴｒａｋ）ロボット化ステーション（Ｐａｃｋａｒｄ）に入れる。試験が開始すると、ロボット（ＰｌａｔｅＴｒａｋ  ｓｙｓｔｅｍ、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）は、ＡＴＰミックス１０μｌを取り、チップ（１０μｌ）内部に空隙を作り、酵素ミックス１０μｌを吸引する。プレートへの以下の分散は、キナーセ反応に、ロボットこれ自体により行われる３周期の混合により開始させる。
【０１７６】
この点で、正確な濃度を、全試薬について復元する。
【０１７７】
ロボットは、室温で６０分間プレートを温置し、この後ダウエックス樹脂１５０μｌを反応ミックスにピペット採取することによって反応を停止させる。プレートへの添加の前に、樹脂を十分に攪拌する。
【０１７８】
樹脂を、さらに６０分固定させる。この後、ロボットは、各ウエルから上澄５０μｌを取り、これらのオプチプレート（Ｐａｃｋａｒｄ）に、マイクロシント（Ｍｉｃｒｏｓｃｉｎｔ）４０（Ｐａｃｋａｒｄ）１５０μｌで分散させる。
【０１７９】
計測：この後、放射活性流出を避けるためにプラスチック製フィルムによって被覆されたオプチプレートを、Ｐａｃｋａｒｄのトップカウントで計測する１０分前に混合する。
【０１８０】
本発明の化合物を、単一の剤として、または代わりに、細胞静止または細胞毒性剤、抗生物質型の剤、アルキル化剤、抗代謝産物剤、ホルモン剤、免疫薬、インターフェロン型の剤、シクロオキシゲナーゼ阻害剤（例えば、ＣＯＸ−２阻害剤）、マトリックスメタロプロテアーゼ阻害剤、テロメラーゼ阻害剤、チロシンキナーゼ阻害剤、抗成長因子受容体剤、抗ＨＥＲ剤、抗ＥＧＦＲ剤、抗脈管形成誘導剤（例えば、脈管形成誘導阻害剤）、ファルネシルトランスフェラーゼ阻害剤、ｒａｓ−ｒａｆシグナル形質導入経路阻害剤、細胞周期阻害剤、他のｃｄｋ阻害剤、チューブリン結合剤、トポイソメラーゼＩ阻害剤、トポイソメラーゼＩＩ阻害剤などとの組合せで放射療法または化学療法計画のような既知抗癌治療との組合せのいずれかで投与できる。
【０１８１】
固定用量として配合される場合、このような組合せ生成物は、下に記述される投与量範囲内にある本発明の化合物、および承認された投与量範囲内にある他の医薬的に活性な剤を使用する。
【０１８２】
組合せ処方が不適切である場合、式（Ｉ）の化合物を、公知抗癌剤と共に連続して使用できる。
【０１８３】
哺乳類に、例えばヒトに対する投与に適切である本発明の式（Ｉ）の化合物は、通常の経路によって投与でき、投与量は、患者の年齢、体重、および症状、および投与経路による。例えば、式（Ｉ）の化合物の経口投与のために適合した適切な投与量は、毎日１から５回、用量当たり約１０から約５００ｍｇまでの範囲に入りうる。多様な投与形態、例えば、経口で、錠剤、カプセル、糖衣または膜被覆錠剤、溶液または懸濁液形態で；腸溶では、坐剤形態で；非経口では、例えば筋肉内で、または静脈内および／またはくも膜下および／または髄腔内注射または注入を通して本発明の化合物を投与できる。
【０１８４】
本発明は、式（Ｉ）の化合物、または担体または希釈剤でありうる医薬的に許容される天賦剤と関連してこれの医薬的に許容される塩を含む医薬組成物も含む。
【０１８５】
本発明の化合物を含有する医薬組成物は、以下の従来方法から通常に製造され、適切な医薬形態で投与される。
【０１８６】
例えば、固形経口形態は、活性化合物と一緒に、希釈剤、例えばラクトース、デキストロース、サッカロース、ショ糖、セルロース、コーンスターチまたはジャガイモ澱粉、潤滑剤、例えばシリカ、タルク、ステアリン酸、ステアリン酸マグネシウムまたはカルシウム、および／またはポリエチレングリコール、結合剤、例えば澱粉、アラビアゴム、ゼラチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、またはポリビニルピロリドン；崩壊剤、例えば澱粉、アルギン酸、アルギネート、またはグリコール酸ナトリウム澱粉；飽和剤；染料、甘味剤；レシチン、ポリソルベート、ラウリルスルフェートのような湿潤剤；および一般に医薬処方で使用される非毒性および医薬的に不活性な物質を含有できる。これらの医薬標品を、公知方法で、例えば混合、造粒、錠剤化、糖衣またはフィルム被覆プロセスを介して製造できる。
【０１８７】
経口投与用の液体分散液は、シロップ、エマルジョン、および懸濁液でありうる。
【０１８８】
例として、シロップは、担体としてサッカロースまたはグリセリンと共にサッカロース、および／またはマンニトールおよびソルビトールを含有できる。
【０１８９】
懸濁液およびエマルジョンは、担体の例として、天然ゴム、アガー、アルギン酸ナトリウム、ペクチン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、またはポリビニルアルコールを含有できる。
【０１９０】
筋肉内注射用の懸濁液または溶液は、活性化合物と一緒に、医薬的に許容される担体、例えば滅菌水、オリーブ油、オレイン酸エチル、グリコール、例えばプロピレングリコール、および所望の場合、適切な量の塩酸インドカインを含有できる。
【０１９１】
静脈注射または注入用の溶液は、担体として、滅菌水を含有できるか、または好ましくはこれらは、滅菌、水性、等張性生理食塩水溶液の形態にあるか、または担体としてプロピレングリコールを含有できる。
【０１９２】
坐剤は、活性化合物と一緒に、医薬的に許容される担体、例えばカカオ脂、ポリエチレングリコール、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル界面活性剤またはレシチンを含有できる。
【０１９３】
本発明をよりよく例示する目的で、いかなる限定を主張することもなく、以下の実施例をここに示す。
【０１９４】
一般的方法
シリカゲル（メルクの等級９３９５、６０Ａ）でフラッシュクロマトグラフィーを行った。９９６ウォーターズＰＤＡ検出器を具備したウォーターズ２７９０ＨＰＬＣシステム、およびエレクトロスプレー（ＥＳＩ）イオン源を具備したマイクロマスモード．ＺＱ単一の四極子質量分析計を使用して、ウォーターズＸテラＲＰ１８（４．６×５０ｍｍ、３．５μｍ）カラム上でＨＰＬＣを行った。可動相Ａは、酢酸アンモニウム５ｍＭ緩衝液（酢酸／アセトニトリル９５：５でｐＨ５．５）であり、可動相Ｂは、Ｈ２Ｏ／アセトニトリル（５：９５）であった。８分で１０から９０％までのの勾配は、９０％Ｂを２分保持する。２２０ｎｍおよび２５４ｎｍでのＵＶ検出。流速１ｍｌ／分。注入容積１０μｌ。完全走査、質量範囲、１００から８００ａｍｕまで。末梢電圧は２．５ＫＶであった。源温度は、１２０℃であった；コーンは１０Ｖであった。滞留時間（ＨＰＬＣｒ．ｔ．）は、２２０ｎｍで、または２５４ｎｍで数分で示される。質量は、ｍ／ｚ比で示される。
【０１９５】
必要な場合、９９６ウォーターズＰＤＡ検出器およびマイクロマスモード．ＺＱ単一の四極子質量分析計を具備したウォーターズ分取ＨＰＬＣ６００、電子スプレーイオン化（陽性モード）を使用して、ウォーターズシンメトリーＣ１８（１９×５０ｍｍ、５μｍ）カラム上での分取ＨＰＬＣによって化合物を精製した。可動相Ａは、水０．０１％ＴＦＡであり、および可動相Ｂはアセトニトリルであった。８分で１０から９０％Ｂまでの勾配は、９０％Ｂを２分保持する。流速２０ｍｌ／分。
【０１９６】
５ｍｍ二重共鳴プローブ［１Ｈ（１５Ｎ−３１Ｐ）ＩＤ＿ＰＦＧバリアン］を具備した４００．４５ＭＨｚで操作するマーキュリーＶＸ４００上で、１Ｈ−ＮＭＲ分光光度測定を行った。
【０１９７】
不斉炭素原子を有し、ラセミ混合物として得た式（Ｉ）の化合物を、キラルカラムでのＨＰＬＣ分離によって分割した。特に、例えば分取カラムキラルパック（ＣＨＩＲＡＬＰＡＣＫ）（登録商標）ＡＤを使用できる。
【実施例１】
【０１９８】
２−ブロモ−１−ピリジン−４−イルエタノン  ヒドロブロミド
氷酢酸（４０ｍＬ）および４８％臭化水素酸（１５ｍＬ）中の４−アセチルピリジン（１０ｍＬ、９０ミリモル）の攪拌溶液に、氷酢酸（１０ｍＬ）中のブロミン（４．６５ｍＬ、９０ミリモル）を滴下で添加した。添加後、溶液を室温で一夜攪拌した。白色沈殿物を濾取し、無水エタノールで洗浄し、これにより微量のジブロモ誘導体を含有する白色固形物として標記化合物（２２．２ｇ、９０％）を得て、これを次の段階にそのまま使用した。
【０１９９】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６／４００ＭＨｚ）δｐｐｍ５．０５（ｓ，２Ｈ）８．１５（ｄ，２Ｈ）９．０（ｄ，２Ｈ）。
【実施例２】
【０２００】
２−ブロモ−１−（３−フルオロピリジン−４−イル）エタノンヒドロブロミド
−７８℃まで冷却し、アルゴン下で無水ＴＨＦ（１５０ｍＬ）中の３−フルオロピリジン（１４ｇ、１４４．２ミリモル）の攪拌溶液に、ｎ−ヘプタン中のリチウムジイソプロピルアミド（ＬＤＡ）の２Ｎ溶液７９．ｍＬ（１５８．６ミリモル）、ＴＨＦ、エチルベンゼンを、１時間で滴下でゆっくりと添加した。２．５時間攪拌した後、無水ＴＨＦ２５ｍｌ中の冷却溶液（約０℃）を、ゆっくりと滴下し、反応混合液を−７８℃で１．５時間攪拌した。溶液を−３０℃に加温し、水７００ｍＬ中の塩化アンモニウム（１５０ｇ）の溶液を添加した。混合物を酢酸エチル（３×４００ｍＬ）で抽出し、有機相を生理食塩水（４×２００ｍＬ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥させた。濃縮後、油状物をｎ−ヘキサン（４０ｍＬ）で結晶化させて、１−（３−フルオロピリジン−４−イル）エタノール１５．６ｇ（７６％収率）を得た。トルエン（１００ｍＬ）中の１−（３−フルオロピリジン−４−イル）エタノール（１０ｇ、７０．３ミリモル）および市販の活性化ＭｎＯ２（８ｇ、９２．１ミリモル）の混合物を、出発材料が消えるまで環流させた。冷却後、セライトの床で混合物を濾過し、ケークをトルエンで洗浄し、有機相を濃縮して、３−フルオロ−４−アセチルピリジン（６．９ｇ、７０％）を得て、これを次の段階で直接使用した。氷酢酸（１４ｍＬ）および４８％臭化水素酸（５．３ｍＬ）中の３−フルオロ−４−アセチルピリジン（５．３ｇ、３８．１ミリモル）の攪拌溶液に、氷酢酸（５．３ｍＬ）中の臭素（２ｍＬ、３８ミリモル）をゆっくりと滴下で添加した。添加後、溶液を６０℃で２．５時間攪拌した。添加の後、溶液を６０℃で２．５時間攪拌した。この溶液を冷却し、酢酸エチル（７０ｍＬ）を添加した。攪拌の３０分後、混合物を濾取し、固形物を十分に酢酸エチルで洗浄し、乾燥させた。標記化合物を、８２％収率で得た（９．４ｇ）。
【０２０１】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６／４００ＭＨｚ）δｐｐｍ４．８８（ｓ，２Ｈ）７．８３（ｄｄ，１Ｈ）８．６２（ｄｄ，１Ｈ）８．８１（ｄ，１Ｈ）。
【実施例３】
【０２０２】
１−（２−アミノピリミジン−４−イル）−２−ブロモエタノンヒドロブロミド
３，３−ジメトキシ−２−ブタノン（２５ｇ、１８９．２ミリモル）およびＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドジメチルアセタール（２２．５ｇ、１８９．２ミリモル）の混合物を、３０時間、１１０℃で攪拌し、この後蒸留（１１５℃、１ｍｍＨｇ）し、これにより黄色固形物として１−（ジメチルアミノ）−４，４−ジメトキシペント−１−エン−３−オン（２７．３ｇ、１４６ミリモル、７７％）を得た。無水エタノール（４００ｍＬ）中のナトリウム（３．４８ｇ、１５１．６ミリモル）の溶液に、固形塩酸グアニジン（１４．５ｇ、１５１．６ミリモル）を室温（ｒｔ）で添加して、白色懸濁液を得て、これに、無水エタノール（５０ｍＬ）中の１−（ジメチルアミノ）−４，４−ジメトキシペント−１−エン−３−オン（２８．４ｇ、１５１．６ミリモル）の溶液を添加した。混合液を１９時間環流させた。冷却後、沈殿物を濾過し、エタノールで、および多量の水で洗浄して、これにより白色固形物（８．５６ｇ）を得た。エタノール性溶液を乾固するまで濃縮し、沸騰酢酸エチル（１Ｌ）で取込み、加熱しながら濾過し、この後冷却して、第二の産物を得た。４−（１，１−ジメトキシエチル）ピリミジン−２−アミンの総量：１７．６６ｇ、６３．５％。蟻酸中の上記アミン（１７．５ｇ、９５．５ミリモル）の溶液を室温で、６時間攪拌し、乾固するまで濃縮し、残渣をエタノール（５０ｍＬ）で攪拌し、この後濾過して、１−（２−アミノピリミジン−４−イル）エタノン（９．２ｇ、７０％）を得た。氷酢酸（１ｍＬ）中の１−（２−アミノピリミジン−４−イル）エタノン（４１２ｍｇ、３ミリモル）の溶液に、４８％水性ＨＢｒ（０．３ｍＬ）、酢酸（０．４ｍＬ）中のブロミン（０．１５３ｍＬ）を添加し、得られた有機溶液を、室温で１５時間攪拌した。酢酸エチル（１５ｍＬ）での希釈後、沈殿物を濾過し、酢酸エチルで洗浄して、これにより白色固形物（５８０ｍｇ、６５％）として標記化合物を得た。
【０２０３】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６／４００ＭＨｚ）δｐｐｍ：４．９（ｓ，２Ｈ），７．０（ｄ，２Ｈ），８．５（ｄ，２Ｈ）。
【実施例４】
【０２０４】
Ｎ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−ＤＬ−アスパラギン酸
ＤＬアスパラギン酸（１ｇ）を、ジオキサン／水１：１  ２０ｍＬ中に溶解し、トリエチルアミン４．１５ｍＬを添加した。混合液を０℃まで冷却し、重炭酸ジ−ｔｅｒｔ−ブチルを添加した。溶液を、一夜室温で静置した。懸濁液を濃縮し、酢酸エチルおよび水で抽出した。水性抽出物を５％水性ＮａＨＳＯ４で酸性化し、この後ＡｃＯＥｔで三回抽出した。有機抽出物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、溶媒を真空下で蒸散させて、標記化合物１．５３ｇを供した。
【０２０５】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ１．３６（ｓ，９Ｈ）２．４５−２．５７（ｍ，１Ｈ）２．６０−２．７２（ｍ，１Ｈ）４．１９−４．３１（ｍ，１Ｈ）７．０１（ｄ，Ｊ＝８．５０Ｈｚ，１Ｈ）１２．４５（ｂｓ，２Ｈ）。
【実施例５】
【０２０６】
ＤＬ−（２，５−ジオキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ＤＣＭ１００ｍＬ中のＮ−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル）−ＤＬ−アスパラギン酸１ｇ（４．２９ミリモル）および１−（３−ジメチルアミノプロピル）−３−エチルカルボジイミドヒドロクロリド（ＥＤＣｌ）０．９８ｇ（５．１５ミリモル）の混合物を一夜室温で攪拌した。溶液を、５％水性ＮａＨＳＯ４で三回抽出し、有機抽出物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、溶媒を真空下で蒸散させた。この方法で、標記化合物７５０ｍｇを回収した。
【０２０７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ１．３８（ｓ，９Ｈ）２．７８−２．９０（ｍ，１Ｈ）３．１５−３．２８（ｍ，１Ｈ）４．５４−４．６５（ｍ，１Ｈ）７．７３（ｄ，Ｊ＝７．９１Ｈｚ，１Ｈ）。
【実施例６】
【０２０８】
ＤＬ−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−ヒドロキシ酪酸
０℃に冷却した無水ＴＨＦ１５ｍＬ中の水素化ホウ素ナトリウム１９２ｍｇの溶液に、無水ＴＨＦ１５ｍＬに溶解したＤＬ−（２，５−ジオキソ−テトラヒドロ−フラン−３−イル）カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル１ｇを滴下で添加し、攪拌を４時間、０℃で維持した。
【０２０９】
溶液を、５％水性ＮａＨＳＯ４で酸性化し、濃縮した。生成物をＡｃＯＥｔで三回抽出した。合わせた有機相を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、真空下で濃縮して、標記化合物７００ｍｇを得た。
【０２１０】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ１．３７（Ｓ，９Ｈ）２．１４−２．２９（ｍ，１Ｈ）２．３６−２．４８（ｍ，１Ｈ）３．１３−３．４０（ｍ，２Ｈ）３．６５−３．８１（ｍ，１Ｈ）４．６９（ｂｓ，１Ｈ）６．４７−６．６０（ｄ，Ｊ＝８．２１Ｈｚ，１Ｈ）１１．９９−１２．１８（ｂｓ，１Ｈ）。
【実施例７】
【０２１１】
ＤＬ−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）−酪酸
ＤＭＦ／ＤＣＭ１：５の混合液中のＤＬ−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−ヒドロキシ−酪酸１ｇの溶液に、イミダゾール１．２４ｇおよびｔｅｒｔ−ブチルジメチルシリルクロリド１．７ｇを添加した。溶液を、一夜室温で攪拌させた。溶液を、５％水性ＮａＨＳＯ４で三回抽出し、水相をＤＣＭで二回洗浄した。有機抽出物を、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、溶媒を真空下で蒸散させて、標記化合物２．１ｇを供した。
［Ｍ＋Ｈ］＋＝３３４；［Ｍ−Ｈ］−＝３３２
【実施例８】
【０２１２】
ＤＬ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−コハク酸４−メチルエステル
ジオキサン／Ｈ２Ｏ（２：１、１１０ｍＬ）中のＤＬ−２−アミノ−コハク酸４−メチルエステルの攪拌溶液に、Ｎａ２ＣＯ３（３．９２ｇ、０．０３７モル）を添加した。ＣＯ２の発生が終わると、さらにＮａ２ＣＯ３（３．９２ｇ、０．０３７モル）を添加し、続いてＢｏｃ２Ｏ（８．８７ｇ、０．０４モル）を添加し、反応混合液を０℃で１時間（白色沈殿物が３０分以内に形成される）、室温で一夜攪拌した。溶媒を除去し、残渣をＥｔ２Ｏで洗浄した。水性溶液を、飽和水性ＮａＨＳＯ４で酸性化し、Ｅｔ２Ｏで抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸散させて、白色固形物（６．７ｇ、７４％）として標記化合物を得た。
［Ｍ＋Ｈ］＋＝２４８；［Ｍ−Ｈ］−＝２４６
【実施例９】
【０２１３】
ＤＬ−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−ヒドロキシ−酪酸メチルエステル
−１０℃で乾燥ＴＨＦ（１００ｍＬ）中のＤＬ−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−コハク酸４−メチルエステル（５ｇ、０．０２モル）の溶液に、Ｅｔ３Ｎ（３．１ｍＬ、０．０２２モル）を添加し、続いてエチルクロロホルメート（２．１ｍＬ、０．０２２モル）を添加した。１０分後、ＮａＢＨ４（２．２７ｇ、０．０６モル）を添加し、この後ＭｅＯＨを０℃で２０分の期間をかけて混合液に滴下した。反応混合液を０℃で１時間攪拌し、室温で２時間攪拌し、この後飽和水性ＮａＨＳＯ４で中和した。有機溶媒を除去し、生成物をＡｃＯＥｔで三回抽出した。
【０２１４】
合わせた有機相を、飽和水性ＮａＨＳＯ４、水、飽和水性ＮａＨＣＯ３、水で連続して洗浄し、無水ＮａＨＳＯ４上で乾燥させた。溶媒を蒸散させ、残渣をフラッシュクロマトグラフィー（ｎ−ヘキサン／ＡｃＯＥｔ５：１）によって精製し、標記化合物（１．６３ｇ、３５％）を得た。
［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３４
【実施例１０】
【０２１５】
ＤＬ−４−アジド−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−酪酸メチルエステル
ＣＨ２Ｃｌ２（１０ｍＬ）中のＤＬ−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−ヒドロキシ−酪酸メチルエステル（７００ｍｇ、３ミリモル）の攪拌溶液に、Ｅｔ３Ｎ（０．６２６ｍＬ、４．５ミリモル）およびメタンスルホニルクロリド（０．３５０ｍＬ、４．５ミリモル）を０℃で添加した。反応混合物を０℃で３０分間、室温で２時間攪拌した。有機相を生理食塩水、飽和水性ＮａＨＳＯ４、飽和水性ＮａＨＣＯ３および生理食塩水で洗浄し、乾燥させ、溶媒を除去して対応のメシレート（７１２ｍｇ、７６％）を得た。
【０２１６】
メシレートをＤＭＦ（１０ｍＬ）に溶解する。アジ化ナトリウム（５８５ｍｇ、９ミリモル）を添加し、混合液を６０℃で６時間加熱した。溶媒を除去し、残渣をＡｃＯＥｔに取り込んだ。有機相を生理食塩水で洗浄し、乾燥させ、蒸散させて、標記化合物（７６％）４５０ｍｇを得た。
【０２１７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ１．３８（ｓ，９Ｈ）２．４０−２．５８（ｍ，２Ｈ）３．３（ｂｓ，２Ｈ）３．６（ｓ，３Ｈ）３．９（ｍ，１Ｈ）７．０１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）。
【実施例１１】
【０２１８】
ＤＬ−４−アジド−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−酪酸
ＤＬ−４−アジド−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−酪酸メチルエステル（４５０ｍｇ、１．７４ミリモル）をＴＨＦ（１２ｍＬ）に溶解し、ＬｉＯＨ（３９３ｍｇ）の水性溶液を添加することによって加水分解した。
【０２１９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ１．４（ｓ，９Ｈ）２．４０（ｄ，２Ｈ，Ｊ＝６．８Ｈｚ）３．３（ｂｓ，２Ｈ）３．９（ｍ，１Ｈ）７．０１（ｄ，Ｊ＝８．３Ｈｚ，１Ｈ）１２．３（ｓ，１Ｈ）。
【実施例１２】
【０２２０】
ＤＬ−２−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−４，６−ジオキソ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ＤＣＭ７０ｍＬ中のＤＬ−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシ）酪酸２ｇの溶液に、メルドラムの酸１ｇおよび４−ジメチルアミノピリジン１．１ｇを添加した。溶液を０℃に冷却し、ＤＣＭ３０ｍＬ中に溶解したＥＤＣｌ  １．３７ｇを滴下で添加した。３時間攪拌を維持し、この後、溶液を５％水性ＮａＨＳＯ４で三回抽出した。有機抽出物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、溶媒を真空下で蒸散させた。固形物を、酢酸エチル２００ｍＬに溶解し、４時間環流し、この後乾固するまで濃縮した。シリカゲル上でフラッシュクロマトグラフィーにより原料生成物を精製し、これにより油状物として標記化合物５１０ｍｇを供した。
【０２２１】
ＨＰＬＣ  ｒ．ｔ．６．４２［Ｍ＋Ｈ］＋＝３５８；［Ｍ−Ｈ］−＝３５６
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６／４００ＭＨｚ）δｐｐｍ：−０．０９−−０．０７（６Ｈ），０．７６−０．９２（９Ｈ），１．４４（９Ｈ），２，５２（ｍ，１Ｈ），２．８１（ｍ，１Ｈ），３．３（２Ｈ），３．７（ｍ，２Ｈ），４．２７（ｍ，１Ｈ）。
【０２２２】
実施例１２でと類似の方法で作用させ、および室温でトリフルオロ酢酸を用いた治療により、場合によりｔｅｒｔ−ブトキシカルボニル保護基を除去させることにより、実施例１３から１５で以下の化合物を製造した。
【実施例１３】
【０２２３】
（Ｒ）−６−ベンジルオキシメチル−ピペリジン−２，４−ジオン
Ｂｏｃ−Ｏ−ベンジル−Ｌ−ベータ−ホモセリンから出発して、
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６／４００ＭＨｚ）δｐｐｍ：２．４（ｄｄ，１Ｈ），２．７（ｄｄ，１Ｈ），３．０１−３．１７（ｄｄ，２Ｈ），３．４８（ｓ，２Ｈ），３．７７（ｍ，１Ｈ），４．４６（ｓ，２Ｈ），７．２８（ｍ，２Ｈ），７．３３（ｍ，３Ｈ），８．０６（ｂｓ，１Ｈ）。
［Ｍ＋Ｈ］＋＝２３４
【実施例１４】
【０２２４】
ＤＬ−２−（３−ベンジルオキシカルボニルアミノ−プロピル）−４，６−ジオキソ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
Ｂｏｃ−β−ＬＹＳ（Ｚ）−ＯＨジシクロヘキシルアミンから出発して、
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：ｍ／ｚ  ４０５（ＭＨ＋）
【実施例１５】
【０２２５】
ＤＬ−６−アジドメチル−ピペリジン−２，４−ジオン
ＤＬ−４−アジド−３−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ酪酸
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６／４００ＭＨｚ）δｐｐｍ：２．３（ｍ，２Ｈ），３．１１（ｍ，３Ｈ），３．８５（ｍ，２Ｈ），９．５（ｓ，１Ｈ）。
【実施例１６】
【０２２６】
５−（３−ベンジルオキシ−プロピル）ピペリジン−２，４−ジオン
窒素雰囲気下で−２０℃に冷却した無水ＴＨＦ（１００ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル２，４−ジオキソピペリジン−１−カルボキシレート（３．８４ｇ、１８ミリモル）の溶液に、ＴＨＦ（５４ｍＬ）中の１Ｍ  ＬｉＨＭＤＳを滴下で添加した。攪拌下で２０分後、（３−ブロモ−プロポキシメチル）−ベンゼン（５４ミリモル）を添加し、溶液を、−２０℃で２時間攪拌した。反応混合液を５％水性ＫＨＳＯ４に注ぎ、ＤＣＭで二回抽出した。収集した有機相を５００ｍＬに濃縮し、ＴＦＡ５０ｍＬを添加した。得られる溶液を室温で１時間攪拌した。蒸散後、カラムクロマトグラフィー（ヘキサン／ＥｔＯＡｃ１：２）によって、残渣を精製して、標記化合物３．８５ｇ（１４．７ミリモル、８２％）を得た。
【０２２７】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ１．３５（ｍ，１Ｈ），１．５８（ｍ，２Ｈ），１．７４（ｍ，１Ｈ），２．５０（ｍ，１Ｈ），３．００−３．３３（ｍ，４Ｈ），３．４３（ｔ，２Ｈ），４．４５（ｓ，２Ｈ），７．２０−７．４０（ｍ，５Ｈ），８．０４（ｓ，１Ｈ）。
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：ｍ／ｚ２６２（ＭＨ＋）。
【０２２８】
適切なアルキルハライドから実施例１６でと類似の方法で作用させ、実施例１７から１９で以下の化合物を製造した。
【実施例１７】
【０２２９】
５−（２−ベンジルオキシ−エチル）−ピペリジン−２，４−ジオン
１Ｈ  ＮＭＲ（４４ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ１．６０（ｍ，１Ｈ），１．９７（ｍ，１Ｈ），２．５９（ｍ，１Ｈ），３．１５（ｍ，１Ｈ），３．４０（ｍ，１Ｈ），３．５１（ｍ，２Ｈ），４．４６（ｓ，２Ｈ），７．３３（ｍ，６Ｈ），８．０６（ｍ，２Ｈ）。
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：ｍ／ｚ２４８（ＭＨ＊）。
【実施例１８】
【０２３０】
５−）３，３，３−トリフルオロ−プロピル）−ピペリジン−２，４−ジオンおよび５−（３，３−ジフルオロ−アリル）−ピペリジン−２，４−ジオン
１，１−トリフルオロ−３−ヨード−プロパンから、
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：／ｍ／ｚ  ２１０（ＭＨ＋）
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：／ｍ／ｚ  １９０（ＭＨ＋）
【実施例１９】
【０２３１】
５−（２−フルオロ−エチル）−ピペリジン−２，４−ジオン
１−フルオロ−２−ブロモ−エタンから、
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ１．６５（ｍ，１Ｈ），２．０７（ｍ，１Ｈ），２．６３（ｍ，１Ｈ），３．１５−３．４３（ｍ，４Ｈ），４．４８（ｍ，１Ｈ），４．５２（ｍ，１Ｈ），８．０８（ｓ，１Ｈ）
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：ｍ／ｚ１６０（ＭＨ＋）。
【実施例２０】
【０２３２】
ＤＬ−６−（３−ベンジルオキシカルボニルアミノ−プロピル）−４−オキソ−２−ピリジン−４−イル−１，４，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
無水ＥｔＯＨ（４０ｍＬ）中の２−ブロモ−１−ピリジン−４−イルエタノンヒドロブロミド（０．７６ｇ、２．５９ミリモル）およびＤＬ−２−（３−ベンジルオキシカルボニルアミノ−プロピル）−４，６−ジオキソ−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．０５ｇ、２．５９ミリモル）の懸濁液に、酢酸アンモニウム（０．８１ｇ、１０．８ミリモル）を添加し、深赤色溶液を、室温で１８時間攪拌した。溶媒除去の後、残渣を酢酸エチル／完全エタノール１５：１（５０ｍＬ）で処理し、沈殿物を濾取し、得られた溶液をフラッスシリカゲルにかけ、酢酸エチル／完全エタノール１５：１で溶出した。この方法で、黄色味を帯びた固形物（０．４ｇ、３０％収率）として標記化合物を得た。
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：ｍ／ｚ５０５（ＭＨ＋）
実施例１９でと類似の方法で作用させて、実施例２１から３２で以下の化合物も得た。
【実施例２１】
【０２３３】
（Ｒ）−６−ベンジルオキシメチル−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６／４００ＭＨｚ）δｐｐｍ：２．９１（ｄｄ，１Ｈ），３．０１（ｄｄ，１Ｈ），３．５１（ｍ，２Ｈ），３．８７（ｍ，１Ｈ），４．５３（ｓ，２Ｈ），６．９６（ｓ，ｂｒ，１Ｈ），７．０１（ｓ，１Ｈ），７．３４（ｍ，５Ｈ），７．６１（ｄ，２Ｈ），８．４９（ｄ，２Ｈ），１１．９１（ｂｓ，１Ｈ）。
［Ｍ＋Ｈ］＋＝３３４
【実施例２２】
【０２３４】
ＤＬ−７−（２−フルオロ−エチル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ１．９２（ｍ，１Ｈ），２．１９（ｍ，１Ｈ），３．１０（ｍ，１Ｈ），３．２６（ｍ，１Ｈ），３．５３（ｍ，１Ｈ），４．５４（ｍ，１Ｈ），４．６３（ｍ，１Ｈ），７．０１（ｓ，１Ｈ），７．０７（ｓ，１Ｈ），７．６５（ｄ，２Ｈ），８．４９（ｄ，２Ｈ），１１．８０（ｓ，１Ｈ）。
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：ｍ／ｚ２６０（ＭＨ＋）。
【０２３５】
キラルパックエイディー（ＣＨＩＲＡＬＰＡＣＫ  ＡＤ）（登録商標）カラムを使用し、ｎ−ヘキサン／ｉ−プロパノール／メタノール＝５５：３５：１０で溶出することにより従来の方法にしたがって、不斉カラムクロマトグラフィーによって、ラセミ（７Ｒ、７Ｓ）混合物を分離して、所望の（７Ｒ）および（７Ｓ）エナンチオマーを得て、これの完全立体化学は決定されなかった。
【実施例２３】
【０２３６】
（Ｒ）および（Ｓ）−７−（２−フルオロ−エチル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オンヒドロクロリド
最初に溶出されたピーク）  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ２．０５（ｍ，１Ｈ），２．２４（ｍ，１Ｈ），３．１５（ｍ，１Ｈ），３．３０（ｍ，１Ｈ），３．６０（ｍ，１Ｈ），４．５６（ｍ，１Ｈ），４．６８（ｍ，１Ｈ），７．３１（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｓ，１Ｈ），８．２６（ｄ，２Ｈ），８．７２（ｄ，２Ｈ），１２．５３（ｓ，１Ｈ）。
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：ｍ／ｚ２６０（ＭＨ＋）。
第二に溶出されたピーク）  １Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ２．０８（ｍ，１Ｈ），２．２４（ｍ，１Ｈ），３．１５（ｍ，１Ｈ），３．３０（ｍ，１Ｈ），３．６０（ｍ，１Ｈ），４．５６（ｍ，１Ｈ），４．６８（ｍ，１Ｈ），７．３１（ｓ，１Ｈ），７．５９（ｓ，１Ｈ），８．２６（ｄ，２Ｈ），８．７２（ｄ，２Ｈ），１２．５３（ｓ，１Ｈ）。
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：ｍ／ｚ２６０（ＭＨ＋）。
【実施例２４】
【０２３７】
ＤＬ−６−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−４−オキソ−２−ピリジン−４−イル−１，４，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ＨＰＬＣ  ｒ．ｔ．６．７６［Ｍ＋Ｈ］＋＝４５８；［Ｍ−Ｈ］−＝４５６
【実施例２５】
【０２３８】
６−アジドメチル−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６／４００ＭＨｚ）δｐｐｍ：２．８７（ｄｄ，１Ｈ），３．０２（ｄｄ，１Ｈ），３．５０（ｄｄ，１Ｈ），３．５７（ｄｄ，１Ｈ），３．８３（ｍ，１Ｈ），７．０２（ｓ，１Ｈ），７．２０（ｓ，１Ｈ），７．６２（ｄ，２Ｈ），８．４９（ｄ，２Ｈ），１１．９５（ｂｓ，１Ｈ）。
［Ｍ＋Ｈ］＋＝２６９
類似の方法で作用させ、１−（２−アミノピリミジン−４−イル）−２−ブロモエタノンヒドロブロミドから出発することによって、以下の化合物も得た。
【実施例２６】
【０２３９】
（Ｒ）−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−６−ベンジルオキシメチル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６／４００ＭＨｚ）δｐｐｍ：２．８８（ｄｄ，１Ｈ），２．９７（ｄｄ，１Ｈ），３．４６（ｍ，２Ｈ），３．８２（ｍ，１Ｈ），４．４９（ｓ，２Ｈ），６．２８（ｂｓ，２Ｈ），６．８７（ｄ，１Ｈ），６．９４（ｂｓ，１Ｈ），６．９９（ｓ，１Ｈ），７．３２（ｍ，５Ｈ），８．１３（ｄ，１Ｈ），１１．７４（ｂｓ，１Ｈ）。
［Ｍ＋Ｈ］＋＝３５０
【実施例２７】
【０２４０】
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（２−ベンジルオキシプロピル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ１．７０（ｍ，４Ｈ），２．９２（ｍ，１Ｈ），３．１９（ｍ，１Ｈ），３．４２（ｍ，２Ｈ），３．４９（ｍ，１Ｈ），４．４３（ｓ，２Ｈ），６．２９（ｓ，２Ｈ），６．９０（ｄ，１Ｈ），６．９８（ｓ，１Ｈ），７，０１（ｓ，１Ｈ），７．２０−７．３５（ｍ，５Ｈ），８．１３（ｄ，１Ｈ），１１．６２（ｓ，１Ｈ）。
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：ｍ／ｚ３７８（ＭＨ＋）。
【実施例２８】
【０２４１】
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ１．８０（ｍ，１Ｈ），２．０７（ｍ，１Ｈ），３．０７（ｍ，１Ｈ），３．２４（ｍ，１Ｈ），３．４７（ｍ，１Ｈ），３．５５（ｍ，２Ｈ），４．５０（ｍ，２Ｈ），６．３０（ｓ，２Ｈ），６．９１（ｄ，１Ｈ），７．０１（ｓ，１Ｈ），７．０３（ｓ，１Ｈ），７．２５−７．３５（ｍ，５Ｈ），８．１４（ｄ，１Ｈ），１１．６０（ｓ，１Ｈ）。
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：ｍ／ｚ３６４（ＭＨ＋）。
【実施例２９】
【０２４２】
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（２−フルオロ−エチル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ１．９２（ｍ，１Ｈ），２．１５（ｍ，１Ｈ），３．１１（ｍ，１Ｈ），３．３２（ｍ，１Ｈ），３．５２（ｄｄ，１Ｈ），４．５２（ｔ，１Ｈ），４．６４（ｔ，１Ｈ），６．３３（ｓ，２Ｈ），６．９４（ｄ，１Ｈ），７．０４（ｓ，１Ｈ），７．０７（ｓ，１Ｈ），８．１７（ｄ，１Ｈ），１１．６８（ｓ，１Ｈ）。
【０２４３】
キラルセルオージェイ（ＣＨＩＲＡＬＣＥＬＬ  ＯＪ）（登録商標）カラムを使用し、ｎ−ヘキサン／エタノール／メタノール＝６０：３５：５で溶出することにより従来の方法にしたがって、不斉カラムクロマトグラフィーによって、ラセミ（７Ｒ、７Ｓ）混合物を分離して、所望の（７Ｒ）および（７Ｓ）エナンチオマーを得て、これの完全立体化学は決定されなかった。
【実施例３０】
【０２４４】
（Ｒ）および（Ｓ）−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（２−フルオロ−エチル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オンヒドロクロリド
第一の溶出ピーク）ｅｅ９９％
第二の溶出ピーク）ｅｅ９６％
【実施例３１】
【０２４５】
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（３，３，３−トリフルオロ−プロピル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オンヒドロクロリド
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ１．８１（ｍ，１Ｈ），２．０１（ｍ，１Ｈ），２．２７（ｍ，１Ｈ），２．４１（ｍ，１Ｈ），３．１２（ｍ，１Ｈ），３．４２（ｍ，２Ｈ），７．３０（ｓ，１Ｈ），７．３５（ｄ，１Ｈ），７．５１（ｓ，１Ｈ），７．９７（ｓ，２Ｈ），８．２４（ｄ，１Ｈ），１２．３３（ｓ，１Ｈ）。
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：ｍ／ｚ３２６（ＭＨ＋）。
【０２４６】
キラルセルオーディー（ＣＨＩＲＡＬＣＥＬＬ  ＯＤ）（登録商標）カラムを使用し、ｎ−ヘキサン／エタノール＝７５：２５で溶出することにより従来の方法にしたがって、不斉カラムクロマトグラフィーによって、ラセミ（７Ｒ、７Ｓ）混合物を分離して、所望の（７Ｒ）および（７Ｓ）エナンチオマーを得て、これの完全立体化学を決定しなかった。
【実施例３２】
【０２４７】
（Ｒ）および（Ｓ）−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（３，３，３−トリフルオロ−プロピル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オンヒドロクロリド
第一の溶出ピーク）ｅｅ９９％
第二の溶出ピーク）ｅｅ９８％
【実施例３３】
【０２４８】
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（３，３−ジフルオロ−アリル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オンヒドロクロリド
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ２．３２（ｍ，１Ｈ），２．４０（ｍ，１Ｈ），３．１１（ｍ，１Ｈ），３．５８（ｍ，２Ｈ），４．５５（ｍ，１Ｈ），７．２９（ｓ，１Ｈ），７．３４（ｄ，１Ｈ），７．５１（ｓ，１Ｈ），８．０１（ｓ，２Ｈ），８．２４（ｄ，１Ｈ），１２．３４（ｓ，１Ｈ）。
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：ｍ／ｚ３０６（ＭＨ＋）。
【実施例３４】
【０２４９】
ＤＬ−６−（３−アミノ−プロピル）−ピリミジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン
ＤＬ−６−（３−ベンジルオキシカルボニルアミノ−プロピル）−４−オキソ−２−ピリジン−４−イル−１，４，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．４ｇ）を、シクロヘキサン（１０ｍＬ）および完全ＥｔＯＨ（２０ｍＬ）に溶解し、炭素（０．２ｇ）上の１０％Ｐｄを添加し、混合物を１．５時間環流させた。セライトを通して濾過し、および減圧下での溶媒蒸散の後、化合物を、２．５時間、室温で、ジオキサン（２０ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＣｌで処理した。溶液を濃縮し、残渣を酢酸エチルで処理した。沈殿物を濾過し、少量の酢酸エチルで洗浄し乾燥させた。残渣をジオキサン中の４Ｍ  ＨＣｌに溶解した。溶液を濃縮し、ジヒドロクリリドとして標記化合物を黄色味がかった固形物として回収した（０．２９ｇ、定量）
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ１．５７−１．７１（ｍ，４Ｈ）２．７１−２．７７（ｍ，１Ｈ）２．７８−２．８４（ｍ，２Ｈ）３．０５−３．１１（ｍ，１Ｈ）３．６７−３．７８（ｍ，１Ｈ）７．３５（ｄ，Ｊ＝１．５９Ｈｚ，１Ｈ）７．５７（ｄ，Ｊ＝２．３２Ｈｚ，１Ｈ）７．８５（ｓ，３Ｈ）８．２３（ｄ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，２Ｈ）８．７０（ｄ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，２Ｈ）１２．９４（ｓ，１Ｈ）。
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：ｍ／ｚ２７１（ＭＨ＋）。
【０２５０】
実施例３４でと類似の方法で作用させることによって、実施例３５で以下の化合物も得た。
【実施例３５】
【０２５１】
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（３−ヒドロキシ−プロピル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ１．４０（ｍ，１Ｈ），１．５４（ｍ，２Ｈ），１．６５（ｍ，１Ｈ），２．９１（ｍ，１Ｈ），３．１８（ｍ，１Ｈ），３．４０（ｍ，２Ｈ），３．４８（ｍ，１Ｈ），４．４４（ｔ，１Ｈ），６．３０（ｓ，２Ｈ），６．９１（ｄ，１Ｈ），６．９９（ｓ，１Ｈ），７．０２（ｓ，１Ｈ），８．１３（ｄ，１Ｈ），１１．６２（ｓ，１Ｈ）。
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：２８８ｍ／ｚ（ＭＨ＋）。
【実施例３６】
【０２５２】
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ１．６９（ｍ，１Ｈ），１．８４（ｍ，１Ｈ），３．０５（ｍ，１Ｈ），３．２１（ｍ，１Ｈ），３．５１（ｍ，１Ｈ，４．７９（ｔ，２Ｈ），６．３１（ｓ，２Ｈ），６．９２（ｄ，１Ｈ），７．０１（ｓ，１Ｈ），７．０３（ｓ，１Ｈ），８．１５（ｄ，１Ｈ），１１．６０（ｓ，１Ｈ）。
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：ｍ／ｚ２７４（ＭＨ＋）。
【実施例３７】
【０２５３】
（Ｒ）（２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−６−ベンジルオキシメチル−１−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン
乾燥ＤＭＦ（２ｍＬ）中の（Ｒ）−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−６−ベンジルオキシメチル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン（７３ｍｇ、０．２１ミリモル）の攪拌混合物に、１８−クラウン−６エーテル（１１０．５ｍｇ、０．４２ミリモル）、Ｋ２ＣＯ３（１１５．５ｍｇ、０．８４ミリモル）およびＣＦ３ＣＨ２ＯＳＯ２ＣＦ３（０．２１ミリモル）を添加した。反応混合物を５０℃で７時間加熱し、この後水で処理し、ＡｃＯＥｔで抽出した。有機相を無水Ｎａ２ＳＯ４上で乾燥させ、蒸散させて、粗生成物を得て、これをフラッシュクロマトグラフィー（溶出剤：ＤＣＭ／ＭｅＯＨ９５：５）によって精製して標記化合物６４ｍｇを供した。
【０２５４】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６／４００ＭＨｚ）δｐｐｍ：２．９４（ｄｄ，１Ｈ），３．０８（ｄｄ，１Ｈ），３．５（ｍ，２Ｈ），３．８７（ｍ，１Ｈ），４．５１（ｓ，２Ｈ），５．７５（ｍ，１Ｈ），６．０１（ｍ，１Ｈ）６．６４（ｂｓ，２Ｈ），６．９１（ｄ，１Ｈ，７．１０（ｓ，１Ｈ），７．２１（ｓ，１Ｈ），７．３（ｍ，５Ｈ），８．１４（ｄ，１Ｈ）。
［Ｍ＋Ｈ］＋＝４３２
【実施例３８】
【０２５５】
ＤＬ−６−ヒドロキシメチル−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オンヒドロクロリド
４Ｍ  ＨＣｌ  ５ｍＬ中のＤＬ−６−（ｔｅｒｔ−ブチル−ジメチル−シラニルオキシメチル）−４−オキソ−２−ピリジン−４−イル−１，４，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル５０ｍｇの溶液を、室温で４時間攪拌した。溶液を濃縮し、標記化合物を回収した。
【０２５６】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ２．９２（ｄｄ，Ｊ＝１６．８３，７．６８Ｈｚ，２Ｈ）３．０３（ｄｄ，Ｊ＝１６．９５，５．９８Ｈｚ，１Ｈ）３．４６−３．５４（ｍ，２Ｈ）３．６５−３．７１（ｍ，１Ｈ）７．１２（ｓ，１Ｈ）７．５７（ｄ，Ｊ＝２．４４Ｈｚ，１Ｈ）８．１７（ｄ，Ｊ＝６．９５Ｈｚ，２Ｈ）８．７０（ｄ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，２Ｈ）１２．６５（ｂｓ，１Ｈ）。
【実施例３９】
【０２５７】
ＤＬ−６−（３−ベンジルアミノ−プロピル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オンおよびＤＬ−６−（３−ジベンジルアミノ−プロピル）−２−ピリジン−４−イル−１，４，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン
アルゴン下および０℃で冷却しつつ、無水ＤＭＦ（３ｍＬ）中のＤＬ−６−（３−アミノ−プロピル）−４−オキソ−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．１ｇ、０．２９６ミリモル）の溶液に、トリフルオロ酢酸（０．２５ｍＬ、３．２ミリモル）および新たに蒸留したベンズアルデヒド（０．０５５ｍＬ、０．５３９ミリモル）を添加した。トリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（０．１７ｇ、０．８１ミリモル）を添加し、透明な黄色法益を室温で６０時間攪拌した。反応混合物を水に注ぎ、酢酸エチルで抽出し、乾燥させ、フラッシュシリカゲルにかけて、最初にＤＣＭ／メタノール１５：１で溶出して、ＤＬ−６−（３−ジベンジルアミノ−プロピル）−４−オキソ−２−ピリジン−４−イル−１，４，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．０３５ｇ、０．０６３ミリモル、２１％）を収集し、この後ＤＣＭ／メタノール／３０％水性アンモニア１５：１０：０．２で、ＤＬ−６−（３−ベンジルアミノ−プロピル）−４−オキソ−２−ピリジン−４−イル−１，４，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．０３ｇ、０．０６５ミリモル、２２％）を収集した。２つの化合物を、メタノール（２ｍＬ）に別個に溶解し、室温で２．５時間、ジオキサン（２ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＣｌで処理した。溶液を濃縮し、残渣を酢酸エチルで処理した。沈殿物を濾過し、少量の酢酸エチルで洗浄し、乾燥させた。得られたのは、ジヒドロクロリドとしてＤＬ−６−（３−ジベンジルアミノ−プロピル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、およびジヒドロクロリドとしてＤＬ−６−（３−ジベンジルアミノ−プロピル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オンであった。
【０２５８】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ１．４３−１．５５（ｍ，２Ｈ）１．７７−２．０６（ｍ，２Ｈ）２．６４−３．１０（ｍ，４Ｈ）３．６０−３．７３（ｍ，１Ｈ）４．３４（ｓ，４Ｈ）７．３３（ｓ，１Ｈ）７．４１−７．６７（ｍ，１０Ｈ）８．２３（ｄ，Ｊ＝６．８３Ｈｚ，２Ｈ）８．７０（ｄ，Ｊ＝６．９５Ｈｚ，２Ｈ）１２．８８（ｓ，１Ｈ）。
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：ｍ／ｚ４５１（ＭＨ＋）。
【０２５９】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ１．５６−１，８２（ｍ，４Ｈ）２．７８（ｄｄ，Ｊ＝１６．７１，８．５４Ｈｚ，１Ｈ）２．８７−２．９７（ｍ，２Ｈ）３．０６（ｄｄ，Ｊ＝１６．３４，５．４９Ｈｚ，１Ｈ）３．６７−３．７７（ｍ，１Ｈ）４．１４（ｔ，Ｊ＝５，６１Ｈｚ，２Ｈ）７．３４（ｓ，１Ｈ）７．３９−７．５９（ｍ，Ｊ＝４８．９０Ｈｚ，５Ｈ）８．２２（ｄ，Ｊ＝６．８３Ｈｚ，２Ｈ）８．７０（ｄ，Ｊ＝７．０７Ｈｚ，２Ｈ）９．１１（ｓ，２Ｈ）。
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：ｍ／ｚ３６１（ＭＨ＋）。
【実施例４０】
【０２６０】
ＤＬ−６−（３−イソブチルアミノ−プロピル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン
メタノール（３ｍＬ）中のＤＬ−６−（３−アミノ−プロピル）−４−オキソ−２−ピリジン−４−イル−１，４，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−５−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．１ｇ、０．２９６ミリモル）の溶液に、２−メチル−プロピオンアルデヒド（０．０２３ｍＬ、０．２５ミリモル）およびシアノ水素化ホウ素ナトリウム（０．０３ｇ、０．４９ミリモル）を添加し、溶液を室温で４時間攪拌した。溶媒を除去し、水を添加し、粗生成物を酢酸エチルで二回抽出し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させた。フラッシュクロマトグラフィーにより残渣を精製し、これによりＤＣＭ／メタノール１５：２で溶出し、この後ＤＣＭ／メタノール／３０％水性アンモニア１５：２：０．１で溶出した。保護された化合物（０．０４５ｇ、０．０９７ミリモル、４０％）をメタノール（２．５ｍＬ）に溶解し、室温で２．５時間、ジオキサン（１ｍＬ）中の４Ｎ  ＨＣｌで処理した。溶液を濃縮し、残渣を酢酸エチルで処理した。ジヒドロクロリドとしての標記化合物の黄色沈殿物を濾過し、少量の酢酸エチルで洗浄し、乾燥させた。
【０２６１】
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ０．９７（ｄ，Ｊ＝６，７１Ｈｚ，６Ｈ）１．５６−１．６８（ｍ，２Ｈ）１．６９−１．８１（ｍ，２Ｈ）１．９０−２．０５（ｍ，１Ｈ）２．７０−２．８１（ｍ，４Ｈ）２．８４−２．９７（ｍ，２Ｈ）３．０７（ｄｄ，Ｊ＝１６．５８，５．６１Ｈｚ，２Ｈ）３．６７−３．７９（ｍ，１Ｈ）７．３５（ｓ，１Ｈ）７．５７（ｄ，Ｊ＝２．３２Ｈｚ，１Ｈ）８．２１（ｄ，Ｊ＝５．４９Ｈｚ，２Ｈ）８．６９（ｄ，Ｊ＝６．９５Ｈｚ，２Ｈ）１２．８９（ｓ，１Ｈ）。
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：ｍ／ｚ３２７（ＭＨ＋）。
【０２６２】
実施例４０でと類似の方法で作用させ、２−メチル−プロピオンアルデヒド４当量および１８時間の反応時間を使用することによって、実施例４１で以下の化合物もジヒドロクロリドとして６３％収率で得た。
【実施例４１】
【０２６３】
ＤＬ−６−（３−ジイソブチルアミノ−プロピル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−Ｄ６）δｐｐｍ０．９７−１．０４（ｍ，１２Ｈ）２．４８−２．５５（ｍ，１４Ｈ）３．７０−３．８０（ｍ，１Ｈ）７．３８（ｓ，１Ｈ）７．５４−７．５７（ｍ，１Ｈ）８．２２（ｄ，Ｊ＝６．５８Ｈｚ，２Ｈ）８．７０（ｄ，Ｊ＝６．９５Ｈｚ，２Ｈ）１２．９３（ｓ，１Ｈ）。
ＥＳＩ（＋）ＭＳ：ｍ／ｚ３８３（ＭＨ＋）。
【実施例４２】
【０２６４】
（４−オキソ−２−ピリジン−４−イル−４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−６−イルメチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
ＴＨＦ（１Ｍ、０．１５ミリモル、０．１５０ｍＬ）中のＭｅ３Ｐの溶液を、室温でＴＨＦ（１ｍＬ）およびＮａＯＨ（１Ｍ、０．１６５ミリモル、０．１６５ｍＬ）中の６−アジドメチル−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン（０．０７５ミリモル、２０ｍｇ）の攪拌混合物に添加した。この後、ＴＨＦ／Ｈ２Ｏ（１ｍＬ）中のＢｏｃ２Ｏ（０．１６５ミリモル、３６ｍｇ）の溶液を添加した。２日後、リン酸緩衝溶液（ｐＨ７）の添加により、混合物を急冷した。ＣＨ２Ｃｌ２を用いた抽出、有機抽出物の乾燥、溶媒の除去およびＣＨ２Ｃｌ２／ヘキサンを用いた滴定で、標記化合物１６ｍｇを得た。
【０２６５】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６／４００ＭＨｚ）δｐｐｍ：１．４１（９Ｈ），２．７４（ｄｄ，１Ｈ），２．９１（ｄｄ，１Ｈ），３．１３（ｍ，２Ｈ），３．６８（ｍ，１Ｈ），６．９３（ｓ，１Ｈ），７．０１（２Ｈ），７．６２（ｄ，２Ｈ），８．４９（ｂｒ，２Ｈ），１１．９０（ｓ  ｂｒ，１Ｈ）。
［Ｍ＋Ｈ］＋＝３４３
【実施例４３】
【０２６６】
６−アミノメチル−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オンビス−トリフルオロアセテート
ＣＨ２Ｃｌ２（１ｍＬ）中の（４−オキソ−２−ピリジン−４−イル−４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−６−イルメチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．０４６ミリモル、１６ｍｇ）の攪拌混合物に、ＴＦＡ（１ｍＬ）を添加した。２時間後、溶媒を除去して、標記化合物（１４ｍｇ）を得た。
【０２６７】
１Ｈ  ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ６／４００ＭＨｚ）δｐｐｍ：２．９（ｄｄ，１Ｈ），３．０８（ｄｄ，１Ｈ），３．９５（ｍ，１Ｈ），７．２５（ｓ，１Ｈ），７．３８（ｓ，１Ｈ），７．９０（２Ｈ），７．９４（ｄ，２Ｈ），８．６４（ｄ，２Ｈ），１２．３８（ｓ  ｂｒ，１Ｈ）。
［Ｍ＋Ｎ］＋＝４７１
ここで上に記述されるプロセスにより、以下の化合物を製造した。
【０２６８】
６−（イソプロピルアミノ−メチル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン；
６−［（ジイソプロピルアミノ）−メチル］−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン；
６−（３−アミノ−プロピル）−２−（３−フルオロ−ピリジン−４−イル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン；
２−（３−フルオロ−ピリジン−４−イル）−７−（３，３，３−トリフルオロ−プロピル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン；
７−（２−フルオロ−エチル）−２−（３−フルオロ−ピリジン−４−イル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン；
６−ベンジルオキシメチル−２−（３−フルオロ−ピリジン−４−イル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン；
２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−１−エチル−７−（２−フルオロ−エチル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン；
２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（２−フルオロ−エチル）−１−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン；
２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−１−エチル−７−（３，３，３−トリフルオロ−プロピル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン；
２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−１−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−７−（３，３，３−トリフルオロ−プロピル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン；および
２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−６−アジドメチル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン。
【０２６９】
上の本発明の概要の説明を考慮して、多くの修正および変動を更新できるとみなされるべきである。このような修正および変動は、以下の請求項で定義されるとおり、本発明の概念および範囲内とみなすことができることが意図される。
【手続補正書】
【提出日】平成20年8月12日(2008.8.12)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）
【化１】
2009519919.tif 000025
（式中、
Ａは、ピリジン−４−イル、３−フルオロ−ピリジン−４−イル、３−フルオロ−ピリジン−４−イル、および２−アミノ−ピリミジン−４−イルからなる群から選択され、
Ｒ１は、水素、ハロゲンおよび（Ｃ１−Ｃ６）アルキルからなる群から選択され、
Ｒ２は、水素、（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）アルケニル、（Ｃ１−Ｃ６）アルキニル、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ポリフッ化アルキル、ヘテロサイクリル、アリール、ヘテロアリール、（Ｃ３−Ｃ６）シクロアルキル−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヘテロサイクリル−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、アリール−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）ヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルコキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、アリールオキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、ヘテロアリールオキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アミノアルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルキルアミノ−（Ｃ１−Ｃ６）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）ジアルキルアミノ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、カルバモイル−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、およびアルコキシカルボニルからなる群から選択され、上記アリール、ヘテロアリール、ヘテロサイクリル、アリールオキシおよびヘテロアリールオキシ部分の各々は、未置換であるか、または１個以上の置換基によって置換されていてよく、各置換基は、アルキル、アリール、−ＯＣＦ３、−ＯＣ（Ｏ）アルキル、−ＯＣ（Ｏ）アリール、−ＣＦ３、ヘテロアリール、アラルキル、アルキルアリール、ヘテロアラルキル、アルキルヘテロアリール、ヒドロキシ、ヒドロキシアルキル、アルコキシ、アリールオキシ、アラルコキシ、アシル、アリール、ハロ、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ニトロ、シアノ、カルボキシ、アルコキシカルボニル、アリールオキシカルボニル、アラルコキシカルボニル、アルキルスルホニル、アリールスルホニル、ヘテロアリールスルホニル、アルキルスルフィニル、アリールスルフィニル、ヘテロアリールスルフィニル、アルキルチオ、アリールチオ、ヘテロアリールチオ、アラルキルチオ、ヘテロアラルキルチオ、シクロアルキル、ヘテロサイクリル、ヘテロサイクレニル、−ＮＨ（アルキル）、−ＮＨ（シクロアルキル）、および−Ｎ（アルキル）２からなる群から独立に選択され、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は各々水素、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ポリフッ化アルキル、（Ｃ１−Ｃ６）ハロアルケニル、（Ｃ１−Ｃ６）ポリフッ化アルケニル、（Ｃ１−Ｃ８）ヒドロキシアルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルコキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、アリールオキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、ヘテロアリールオキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、アリール−（Ｃ１−Ｃ８）アルコキシ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アジドアルキル基、（Ｃ１−Ｃ８）アミノアルキル、（Ｃ１−Ｃ８）アルキルアミノ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、（Ｃ１−Ｃ８）ジアルキルアミノ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキル、および（Ｃ１−Ｃ８）アルキル−ＯＣ（Ｏ）−アミノ−（Ｃ１−Ｃ８）アルキルからなる群から独立に選択されるが、ただしＲ３、Ｒ４、Ｒ５またはＲ６の内の少なくとも１つは水素と異なる）
によって表される化合物または医薬的に許容できる塩またはこの溶媒和物。
【請求項２】
Ｒ３およびＲ４の両方が水素原子であるか、
Ｒ５およびＲ６の両方が水素原子であるか、
Ｒ１、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６が水素原子であるか、または
Ｒ１、Ｒ３、Ｒ４およびＲ６が水素原子である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
前記治療を必要とする哺乳類に、請求項１に記載の化合物を投与することを含み、前記障害または症状が、改変Ｃｄｃ７キナーゼ活性に起因し、または、関連している、哺乳類における細胞増殖障害または症状を治療する方法。
【請求項４】
前記Ｃｄｋ２またはＣｄｃ７に対する活性に拮抗する上で有効である請求項１の化合物の量を、前記Ｃｄｋ２またはＣｄｃ７に投与することを含む、Ｃｄｋ２またはＣｄｃ７に対する活性と拮抗させる方法。
【請求項５】
前記治療を必要とする前記哺乳類に、前記症状または障害を治療するのに有効である請求項１に記載の化合物の量を投与することを含む、哺乳類における膀胱癌、乳癌、結腸癌、腎臓癌、肝癌、肺小細胞癌を含めた肺癌、食道癌、胆嚢癌、卵嚢癌、膵癌、胃癌、子宮頸癌、甲状腺癌、前立腺癌、および有棘細胞癌を含む皮膚癌；白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞系リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、ヘアリーセルリンパ腫、バーキットリンパ腫を含むリンパ様系列の造血系腫瘍；急性および慢性骨髄性白血病、骨髄異形成症候群と前骨髄球性白血病を含む骨髄性系統の造血系腫瘍；線維肉腫および横紋筋肉腫を含む間葉起源の腫瘍；星状腫、神経芽細胞腫、神経膠腫およびシュワン細胞腫を含む中枢および末梢神経系の腫瘍；黒色腫、セミノーマ、奇形癌、骨肉腫、色素性乾皮症、角膜黄色腫症、甲状腺小胞癌およびカポジ肉腫を含む他の腫瘍からなる群から選択される障害または症状を治療する方法。
【請求項６】
（Ｒ）−６−ベンジルオキシメチル−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
ＤＬ−７−（２−フルオロ−エチル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
（Ｒ）および（Ｓ）−７−（２−フルオロ−エチル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オンヒドロクロリド、
６−アジドメチル−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
（Ｒ）−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−６−ベンジルオキシメチル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（２−ベンジルオキシプロピル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（２−フルオロ−エチル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（３，３，３−トリフルオロ−プロピル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オンヒドロクロリド、
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（３，３−ジフルオロ−アリル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オンヒドロクロリド、
ＤＬ−６−（３−アミノ−プロピル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（３−ヒドロキシ−プロピル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
（Ｒ）−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−６−ベンジルオキシメチル−１−（２，２，２−トリフルオロ−エチル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
ＤＬ−６−ヒドロキシメチル−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オンヒドロクロリド、
ＤＬ−６−（３−ベンジルアミノ−プロピル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、および
ＤＬ−６−（３−ジベンジルアミノ−プロピル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
ＤＬ−６−（３−イソブチルアミノ−プロピル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
ＤＬ−６−（３−ジイソブチルアミノ−プロピル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
（４−オキソ−２−ピリジン−４−イル−４，５，６，７−テトラヒドロ−１Ｈ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−６−イルメチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル、
６−アミノメチル−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オンビス−トリフルオロアセテート、
６−（イソプロピルアミノ−メチル）−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン；
６−［（ジイソプロピルアミノ）−メチル］−２−ピリジン−４−イル−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン；
６−（３−アミノ−プロピル）−２−（３−フルオロ−ピリジン−４−イル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン；
２−（３−フルオロ−ピリジン−４−イル）−７−（３，３，３−トリフルオロ−プロピル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン；
７−（２−フルオロ−エチル）−２−（３−フルオロ−ピリジン−４−イル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン；
５−（２−ベンジルオキシ−エチル）−ピペリジン−２，４−ジオン、
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（２−ヒドロキシ−エチル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
ＤＬ−２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−７−（２−ヒドロキシ−プロピル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、
６−ベンジルオキシメチル−２−（３−フルオロ−ピリジン−４−イル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン、および
２−（２−アミノ−ピリミジン−４−イル）−１−エチル−７−（２−フルオロ−エチル）−１，５，６，７−テトラヒドロ−ピロロ［３，２−ｃ］ピリジン−４−オン
からなる群から選択される請求項１に記載の化合物。
【国際調査報告】
2009519919.tif 000026
2009519919.tif 000027
2009519919.tif 000028