(57)【要約】本発明はキナーゼ活性により媒介される疾患を治療するために用いることができる、式(I)の新規ピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータを提供する。2009519218.tif 000092
2009519218.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式：
【化１】
2009519218.tif 000091
で示される化合物：
［式中、
Aは置換もしくは非置換ヘテロアリールまたは置換もしくは非置換アリールであり；
R1は水素、フッ素、臭素、-OR5、-(CH2)nNR6R7、-(CH2)nC(X1)R8、-S(O)WR9、-CN、-NO2、-CF3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、ここに、nは0〜5の整数であり；
R2は水素、ハロゲン、-OR5、-NR6R7、-C(X1)R8、-S(O)WR9、-CN、-NO2、-CF3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
R3は水素、ハロゲン、-OR5、-NR6R7、-C(X1)R8、-S(O)WR9、-CN、-NO2、-CF3、置換もしくは非置換アルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアルキルであり；
R4は水素、ハロゲン、-OR5、-NR6R7、-C(X1)R8、-S(O)WR9、-CN、-NO2、-CF3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
X1は独立して=N(R40)、=Sまたは=Oであり、ここに、R40は水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
wは独立してO〜2の整数であり；
R5は独立して水素、-CF3、-C(O)R10、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
R6およびR7は独立して水素、-C(O)R10、-S(O)2R11、-C(NH)R10、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アリールアルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
R10は水素、-NR12R13、-OR16、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
R11は-NR12R13、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
R12およびR13は独立して水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
R8は独立して水素、-NR14R15、-OR16、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
R14、R15およびR16は独立して水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アリールアルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
R9は独立して水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、ここに、wが2である場合、R9は適宜-NR17R18であってもよく；
R17およびR18は独立して水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
ここに、R6とR7、R6とR10、R12とR13、R14とR15、およびR17とR18は独立して適宜それらが結合している窒素と一緒になって、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、
但し、R1が-C(Z)R8であり、ZがOであり、R8が-NR14R15であり、Aがフェニルである場合、Aは置換フェニルであり、ここに、置換フェニルはハロゲンまたはアルコキシで置換されていない］。
【請求項２】
AがR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールまたはR19-置換もしくは非置換アリールであり；
R1が水素、臭素、フッ素、-OR5、-NR6R7、-C(X1)R8、-S(O)WR9、-CN、-NO2、-CF3、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
R2が水素、ハロゲン、-OR5、-NR6R7、-C(X1)R8、-S(O)WR9、-CN、-NO2、-CF3、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
R3が水素、ハロゲン、-OR5、-NR6R7、-C(X1)R8、-S(O)WR9、-CN、-NO2、-CF3、R19-置換もしくは非置換アルキルまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアルキルであり；
R4が水素、ハロゲン、-OR5、-NR6R7、-C(X1)R8、-S(O)WR9、-CN、-NO2、-CF3、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
X1が独立して=N(R40)、=Sまたは=Oであり、ここに、R40は水素、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
R5が独立して水素、-CF3、-C(O)R10、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
R6およびR7が独立して水素、-C(O)R10、-S(O)2R11、-C(NH)R10、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
R10が水素、-NR12R13、-OR16、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
R11が-NR12R13、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
R12およびR13が独立して水素、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
R8が独立して水素、-NR14R15、-OR16、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
R14、R15およびR16が独立して水素、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
R9が独立して水素、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
R17およびR18が独立して水素、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
ここに、R6とR7、R6とR10、R12とR13、R14とR15、およびR17とR18が独立して適宜それらが結合している窒素と一緒になって、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく；
R19が独立してハロゲン、-L1-C(X2)R22、-L1-OR23、-L1-NR24R25、-L1-S(O)mR26、-CN、-NO2、-CF3、
(1) 非置換C3-C7シクロアルキル；
(2) 非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル；
(3) 非置換ヘテロアリール；
(4) 非置換アリール；
(5) 置換C3-C7シクロアルキル；
(6) 置換3〜7員ヘテロシクロアルキル；
(7) 置換アリール；
(8) 置換ヘテロアリール；
(9) 非置換C1-C2Oアルキル；
(10) 非置換2〜20員ヘテロアルキル；
(11) 置換C1-C20アルキル；または
(12) 置換2〜20員ヘテロアルキルであり、
ここに、(5)、(6)、(11)および(12)が独立してオキソ、-OH、-CF3、-COOH、シアノ、ハロゲン、R20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R21-置換もしくは非置換アリール、R21-置換もしくは非置換ヘテロアリール、-L1-C(X2)R22、-L1-OR23、-L1-NR24R25または-L1-S(O)mR26で置換されており、
(7)および(8)が独立して-OH、-CF3、-COOH、シアノ、ハロゲン、R20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R21-置換もしくは非置換アリール、R21-置換もしくは非置換ヘテロアリール、-L1-C(X2)R22、-L1-OR23、-L1-NR24R25または-L1-S(O)mR26で置換されており、
ここに、(a) X2が独立して=S、=Oまたは=NR27であり、ここに、R27がH、-OR28、R20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R21-置換もしくは非置換アリールまたはR21-置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
ここに、R28が水素またはR20-置換もしくは非置換C1-C10アルキルであり、
(b) mが独立して0〜2の整数であり；
(c) R22が独立して水素、R20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R21-置換もしくは非置換アリール、R21-置換もしくは非置換ヘテロアリール、-OR29または-NR30R31であり、
ここに、R29、R30およびR31が独立して水素、R20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R21-置換もしくは非置換アリールまたはR21-置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、
ここに、R30およびR31が適宜それらが結合している窒素と一緒になって、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキルまたはR21-置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく；
(d) R23、R24およびR25が独立して水素、-CF3、R20-置換もしくは非置換C1-C1Oアルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R21-置換もしくは非置換アリール、R21-置換もしくは非置換ヘテロアリール、-C(X3)R32または-S(O)qR32であり、ここに、R24およびR25が適宜それらが結合している窒素と一緒になって、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキルまたはR21-置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく、
ここに、(i) X3が独立して=S、=Oまたは=NR33であり、ここに、R33がR20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R21-置換もしくは非置換アリールまたはR21-置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
(ii) qが独立して0〜2の整数であり；
(iii) R32が独立して水素、R20-置換もしくは非置換C1-C1Oアルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R21-置換もしくは非置換アリール、R21-置換もしくは非置換ヘテロアリールまたは-NR34R35であり、
ここに、R34およびR35が独立して水素、R20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R21-置換もしくは非置換アリールまたはR21-置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、ここに、R34およびR35が適宜それらが結合している窒素と一緒になって、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキルまたはR21-置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく；
(e) R26が独立して水素、R20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R21-置換もしくは非置換アリール、R21-置換もしくは非置換ヘテロアリールまたは-NR36R37であり、
ここに、(i) R36およびR37が独立して水素、R20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員21-置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、ここに、R36およびR37が適宜それらが結合している窒素と一緒になって、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキルまたはR21-置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよく；
(f) L1が独立して結合、非置換C1-C10アルキレンまたは非置換ヘテロアルキレンであり；
(g) R20が独立してオキソ、-OH、-COOH、-CF3、-OCF3、-CN、アミノ、ハロゲン、R38-置換もしくは非置換2〜10員アルキル、R38-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R38-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R38-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R39-置換もしくは非置換アリールまたはR39-置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
(h) R21が独立して-OH、-COOH、アミノ、ハロゲン、-CF3、-OCF3、-CN、R38-置換もしくは非置換2〜10員アルキル、R38-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R38-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R38-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R39-置換もしくは非置換アリールまたはR39-置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；
(i) R38が独立してオキソ、-OH、-COOH、アミノ、ハロゲン、-CF3、-OCF3、-CN、非置換C1-C10アルキル、非置換2〜10員ヘテロアルキル、非置換C3-C7シクロアルキル、非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリールであり；
(j) R39が独立して-OH、-COOH、アミノ、ハロゲン、-CF3、-OCF3、-CN、非置換C1-C10アルキル、非置換2〜10員ヘテロアルキル、非置換C3-C7シクロアルキル、非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリールである、
請求項１記載の化合物。
【請求項３】
Aが置換もしくは非置換フェニル、置換もしくは非置換ピリジニル、置換もしくは非置換ピリミジニル、置換もしくは非置換オキサゾリル、置換もしくは非置換ピロリル、置換もしくは非置換フラニル、置換もしくは非置換イミダゾリル、置換もしくは非置換チアゾリル、置換もしくは非置換イソオキサゾリル、置換もしくは非置換ピラゾリル、置換もしくは非置換インドリル、置換もしくは非置換ベンゾチアゾリルまたは置換もしくは非置換イソチアゾリルである、請求項２記載の化合物。
【請求項４】
Aが置換もしくは非置換フェニルである、請求項２記載の化合物。
【請求項５】
A中R19がハロゲン、置換もしくは非置換C1-C20アルキル、-L1-C(X2)R22、-L1-OR23、-L1-NR24R25または-L1-S(O)mR26、-CNまたは-NO2である、請求項２記載の化合物。
【請求項６】
A中L1が結合である、請求項５記載の化合物。
【請求項７】
A中R23が水素または非置換(C1-C5)アルキルである、請求項６記載の化合物。
【請求項８】
A中X2が=Oであり；A中R22がR20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、-OR29または-NR30R31である、請求項６記載の化合物。
【請求項９】
A中mが2であり、A中R26がR20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキルである、請求項６記載の化合物。
【請求項１０】
A中R19がR20-置換もしくは非置換C1-C20アルキルまたはR20-置換もしくは非置換C1-C20ヘテロアルキルである、請求項２記載の化合物。
【請求項１１】
A中R20が-L1-OR23、-L1-NR24R25または非置換ヘテロシクロアルキルである、請求項１０記載の化合物。
【請求項１２】
A中R20がR38-置換もしくは非置換ピペリジニルまたはR38-置換もしくは非置換モルホリノである、請求項１１記載の化合物。
【請求項１３】
A中L1が結合である、請求項１１記載の化合物。
【請求項１４】
A中R23が水素、非置換C1-C5アルキルまたは非置換2〜5員ヘテロアルキルである、請求項１１記載の化合物。
【請求項１５】
A中R24が水素であり、Aに結合しているR25がR20-置換もしくは非置換C1-C5アルキルまたはR20-置換もしくは非置換2〜5員ヘテロアルキルである、請求項１１記載の化合物。
【請求項１６】
R2およびR4が独立して水素、ハロゲン、-OR5、-NR6R7、-C(X1)R8、-S(O)wR9、-CN、-NO2、-CF3、非置換(C1-C10)アルキル、非置換2〜10員ヘテロアルキル、非置換(C3-C7)シクロアルキル、非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールであり；R3が水素、ハロゲン、-OR5、-NR6R7、-C(X1)R8、-S(O)wR9、-CN、-NO2、-CF3、非置換(C1-C10)アルキルまたは非置換2〜10員ヘテロアルキルである、請求項２記載の化合物。
【請求項１７】
R2、R4およびR3中R5、R6、R7、R8およびR9が独立して非置換(C1-C10)アルキル、非置換2〜10員ヘテロアルキル、非置換(C3-C7)シクロアルキル、非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである、請求項１６記載の化合物。
【請求項１８】
R2、R4およびR3中R5、R6、R7、R8およびR9が独立して非置換(C1-C10)アルキルまたは非置換2〜10員ヘテロアルキルである、請求項１６記載の化合物。
【請求項１９】
R3が水素である、請求項２記載の化合物。
【請求項２０】
R2が水素である、請求項２記載の化合物。
【請求項２１】
R2が水素である、請求項１９記載の化合物。
【請求項２２】
R2、R4およびR3が水素である、請求項２記載の化合物。
【請求項２３】
R1が-OR5、-NR6R7、-C(X1)R8、-S(O)WR9、R19-置換もしくは非置換(C1-C10)アルキル、R19-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換(C3-C7)シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールである、請求項２記載の化合物。
【請求項２４】
R1が-C(X1)R8である、請求項２記載の化合物。
【請求項２５】
R1中X1が=Oであり、R1中R8が-NR14R15である、請求項２４記載の化合物。
【請求項２６】
R1中R14およびR15が独立して水素またはR19-置換もしくは非置換アルキルである、請求項２５記載の化合物。
【請求項２７】
R1中R19が置換もしくは非置換2〜10員アルキルまたは置換もしくは非置換アリールである、請求項２６記載の化合物。
【請求項２８】
R1がR19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールである、請求項２３記載の化合物。
【請求項２９】
R1がR19-置換もしくは非置換フェニル、R19-置換もしくは非置換ピリジニル、R19-置換もしくは非置換ピリミジニル、R19-置換もしくは非置換ベンゾチオフェニルである、請求項２８記載の化合物。
【請求項３０】
R1中R19がハロゲン、-L1-C(X2)R22、-L1-OR23、-L1-NR24R25、置換もしくは非置換C1-C20アルキルまたは置換もしくは非置換アリールである、請求項２８記載の化合物。
【請求項３１】
R1中R19が-L1-C(X2)R22であり、ここに、L1が結合であり、X2がOであり、R22が-NR30R31である、請求項３０記載の化合物。
【請求項３２】
R1中R30およびR31が独立して水素、R20-置換もしくは非置換アルキル、R20-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたはR21-置換もしくは非置換アリールである、請求項３１記載の化合物。
【請求項３３】
R1中R19が-L1-OR23であり、ここに、L1が結合または非置換C1-C10アルキレンであり、R23がR20-置換もしくは非置換アルキルまたはR21-置換もしくは非置換アリールである、請求項３０記載の化合物。
【請求項３４】
R1中R19が-L1-NR24R25であり、L1が結合であり、R24およびR25が独立して水素またはR20-置換もしくは非置換アルキルである、請求項３０記載の化合物。
【請求項３５】
R1が-NR6R7である、請求項２３記載の化合物。
【請求項３６】
R1中R6が水素または非置換C1-C5アルキルであり、R7が-C(O)R10であり、ここに、R6およびR10がそれらが結合している窒素と一緒になって、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールである、請求項３５記載の化合物。
【請求項３７】
R1中R10が-OR16、R19-置換もしくは非置換アルキルまたはR19-置換もしくは非置換アリールである、請求項３６記載の化合物。
【請求項３８】
R1が-S(O)WR9である、請求項２３記載の化合物。
【請求項３９】
R1のwが2である、請求項３８記載の化合物。
【請求項４０】
R1中R9が-NR17R18である、請求項３９記載の化合物。
【請求項４１】
R1中R17およびR18が独立してR19-置換もしくは非置換アルキル、R19置換もしくは非置換ヘテロアルキルであるか、またはR17およびR18がそれらが結合している窒素と一緒になって、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルを形成する、請求項４０記載の化合物。
【請求項４２】
R1中R17およびR18がそれらが結合している窒素と一緒になって、R19-置換もしくは非置換ピペリジニルまたはR19-置換もしくは非置換ピペラジニルである、請求項４０記載の化合物。
【請求項４３】
タンパク質キナーゼを請求項１記載の化合物と接触させることを含む、タンパク質キナーゼの活性を調節する方法。
【請求項４４】
治療的有効量の請求項１記載の化合物を対象に投与することを含む、癌、アレルギー、喘息、炎症、閉塞性気道疾患、自己免疫疾患、代謝性疾患、感染症、中枢神経系疾患、脳腫瘍、肥満、喘息、血液疾患、変性神経疾患、心疾患または血管形成、血管新生もしくは脈管形成を伴う疾患をその治療を必要とする対象にて治療する方法。
【請求項４５】
タンパク質キナーゼがエイブルソンチロシンキナーゼ、Ronレセプターチロシンキナーゼ、Metレセプターチロシンキナーゼ、Fms様チロシンキナーゼ-3、オーロラキナーゼ、ヤヌスキナーゼ、CSF1R、HCK、JAK2、KDR、TRKC、FAK、RETおよびROS1である、請求項４３記載の方法。
【請求項４６】
タンパク質キナーゼがオーロラキナーゼまたはMetレセプターチロシンキナーゼである、請求項４３記載の方法。
【請求項４７】
癌が結腸癌、乳癌、膵臓癌、卵巣癌または胃癌から選択される、請求項４４記載の方法。
【請求項４８】
医薬的に許容される賦形剤および請求項１記載の化合物を含む、医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の背景
関連出願の相互参照
本出願は、２００６年１１月３日に出願された米国仮出願番号60/733,585「ピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータ」の優先権の利益を主張する。出願日における優先権は本明細書にて主張され、該出願の開示は本明細書にそのまま引用される。
【０００２】
哺乳類タンパク質キナーゼは細胞機能の重要な調節因子である。タンパク質キナーゼ活性における機能障害がいくつかの疾患および障害と関連するため、タンパク質キナーゼは薬物開発のための標的である。
【背景技術】
【０００３】
チロシンキナーゼレセプター、FMS様チロシンキナーゼ3（FLT3）は、急性骨髄性白血病（AML）、急性リンパ性白血病（ALL）などの白血病および骨髄異形成を含む癌に関与する。約四分の一〜三分の一のAML患者は、キナーゼの構成的活性化および下流シグナリング経路をもたらすFLT3変異を有する。正常なヒトにてFLT3は正常な骨髄性前駆細胞およびリンパ性前駆細胞により主に発現されるが、FLT3は70〜80%のAMLおよびALLの患者の白血病細胞にて発現する。FLT3を標的する阻害剤は、変異および／または構成的に活性なFLT3を発現する白血病細胞に毒性であると報告されている。従って、白血病などの疾患および障害を治療するために用いることができる強力なFLT3阻害剤を開発する必要性がある。
【０００４】
エイブルソン（Abelson）非レセプターチロシンキナーゼ（c-Abl）は、その基質タンパク質のリン酸化によりシグナル伝達に関与する。細胞にて、c-Ablは細胞質および核間を往復し、その活性は通常、多様な機序を通して正常にしっかりと調整される。Ablは成長因子の制御およびインテグリンシグナル伝達、細胞周期、細胞分化および神経新生、アポトーシス、細胞接着、細胞骨格構造、およびDNA損傷および酸化ストレスへの応答に関与している。
【０００５】
c-Ablタンパク質は、N-末端キャップ領域、SH3およびSH2ドメイン、チロシンキナーゼドメイン、核局在配列、DNA-結合ドメインおよびアクチン結合ドメインに分類される、およそ1150のアミノ酸残基を含む。
【０００６】
慢性骨髄性白血病（CML）は9〜22の染色体のフィラデルフィア染色体転座を伴う。この転座はbcr遺伝子および遺伝子コード化c-Abl間の異常な融合を生成する。得られたBcr-Abl融合タンパク質は、構成的に活性なチロシンキナーゼ活性を有する。上昇したキナーゼ活性は、CMLの主な原因となる因子であることが報告されており、細胞形質転換、成長因子依存の欠乏および細胞増殖に関与する。
【０００７】
2-フェニルアミノピリミジン化合物イマチニブ（STI-571、CGP 57148またはGleevecとしても称される）は、Bcr-Ablの具体的および強力な阻害剤ならびに２の他のチロシンキナーゼ、c-キットおよび血小板由来成長因子レセプターとして認識されている。イマチニブはこれらのタンパク質のチロシンキナーゼ活性を遮断する。イマチニブはCMLのすべての段階の治療のための有効な治療剤であることが報告されている。しかし、薬物への耐性の発展によりイマチニブ治療が続くにもかかわらず、大多数の進行期または急性転化CMLの患者は再発に苦しんでいる。しばしば、この耐性についての分子基盤は、Bcr-Ablのキナーゼドメインのイマチニブ耐性変異形の出現である。通常観察される基本的なアミノ酸置換としては、Glu255Lys、Thr315Ile、Tyr293PheおよびMet351Thrが挙げられる。
【０００８】
METは、N-メチル-N'-ニトロ-ニトロソグアニジンで処理されたヒト骨肉腫細胞系における形質転換DNA転位（TPR-MET）として最初に同定された（Cooper et al. 1984）。METレセプターチロシンキナーゼ（肝細胞成長因子レセプター、HGFR、METまたはc-Metとしても知られている）およびそのリガンド肝細胞成長因子（「HGF」）は、増殖、生存、分化および形態形成、分岐管形成、細胞運動および浸潤性増殖の刺激などの多くの生物学的活性を有する。病理学的に、METは、腎臓癌、肺癌、卵巣癌、肝臓癌および乳癌などの癌の多くの異なる形態の成長、浸潤および転移に関与している。METにおける体細胞活性化変異は、ヒト癌転移および乳頭状腎細胞癌などの散発性癌にて見られた。METが転移への進行を制御する念願の癌遺伝子の一つである証拠が増大し、それゆえ興味の標的である。癌に加えて、MET阻害がリステリア浸潤、多発性骨髄腫を伴う骨溶解、マラリア感染症、糖尿病性網膜症、乾癬および関節炎などの種々の適応の治療に有用性を有することができる証拠がある。
【０００９】
チロシンキナーゼRONは、タンパク質を刺激するマクロファージのためのレセプターであり、レセプターチロシンキナーゼのMETファミリーに属する。METのように、RONは胃癌および膀胱癌などのいくつかの異なる形態の癌の成長、浸潤および転移に関与する。
【００１０】
セリン／スレオニンキナーゼのオーロラ（Aurora）ファミリーは細胞分裂進行に不可欠である。オーロラキナーゼの発現および活性は、細胞周期中にしっかりと調整される。細胞分裂に役立つ種々のタンパク質は、オーロラキナーゼ基質として同定されている。オーロラキナーゼの既知の機能に基づき、それらの活性の阻害は細胞周期を乱し、増殖を遮断し、それゆえ腫瘍細胞生存率を遮断すると考えられる。Harrington et al., Nature Medicine, advanced publication online (2004).
【００１１】
3-ホスホイノシチド-依存キナーゼ1（PDK1）は、Akt/PKB、タンパク質キナーゼC（PKC）、PKC関連キナーゼ（PRK1およびPRK2）、p70リボソームS6-キナーゼ（S6K1）および血清およびグルココルチコイド調整キナーゼ（SGK）などのAGCキナーゼスーパーファミリーにて多くのキナーゼをリン酸化し活性化することができるSer/Thrタンパク質キナーゼである。最初に同定されたPDK1基質はプロトオンコジーンAktである。多くの研究は、黒色腫および乳癌、肺癌、胃癌、前立腺癌、血液癌および卵巣癌などの大きな割合（30〜60%）の一般的腫瘍タイプにて高レベルの活性化Aktを見つけた。従って、PDK1/Aktシグナリング経路は、癌の治療に有用であることができる小分子阻害剤の開発のための魅力的な標的を示す。Feldman et al., JBC Papers in Press. Published on March 16, 2005 as Manuscript M501367200.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
キナーゼが癌などの多くの疾患および病態に関与しているため、治療に用いることができる新規かつ強力なタンパク質キナーゼモジュレータを開発する必要がある。本発明は当分野におけるこれらおよび他の必要性を果たす。いくつかのタンパク質キナーゼが具体的に本明細書に命名されているが、本発明はこれらのキナーゼのモジュレータに限定されないで、その範囲内で、関連タンパク質キナーゼのモジュレータおよび同種タンパク質のモジュレータが挙げられる。
【課題を解決するための手段】
【００１３】
本発明の概要
驚くべきことに、本発明のピリミジニル-チオフェン化合物がキナーゼ活性を調節しキナーゼ活性により媒介される疾患を治療するために用いることができることを発見した。これらの新規ピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータは以下に詳細に記載されている。さらに、選択される化合物の阻害活性は本明細書に開示される。
【００１４】
ある態様にて、本発明は式：
【化１】
2009519218.tif 000003
で示されるピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータ（本明細書にて「本発明化合物」としても称される）を提供する。
【００１５】
式(I)の化合物にて、Aは置換もしくは非置換ヘテロアリールまたは置換もしくは非置換アリールである。
【００１６】
R1は水素、フッ素、臭素、-OR5、-(CH2)nNR6R7、--(CH2)nC(X1)R8、-S(O)WR9、-CN、-NO2、-CF3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールであり、ここに、nは0〜5の整数であり、R1がヘテロアルキルであるとき、ヘテロアルキルはアミド結合により結合していない。
【００１７】
R2は水素、ハロゲン、-OR5、-NR6R7、-C(X1)R8、-S(O)WR9、-CN、-NO2、-CF3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００１８】
R3は水素、ハロゲン、-OR5、-NR6R7、-C(X1)R8、-S(O)WR9、-CN、-NO2、-CF3、置換もしくは非置換アルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアルキルである。いくつかの具体的態様にて、R3が環状基（例えばシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよび／またはヘテロアリール）で置換されたアルキルであるとき、環状基はメチレン結合を通して分子の残りに結合したものではない。R3は環状基（例えばシクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよび／またはヘテロアリール）で置換されたアルキルであり、環状基はエチレン結合を通して分子の残りに結合したものではない。
【００１９】
R4は水素、ハロゲン、-OR5、-NR6R7、-C(X1)R8、-S(O)WR9、-CN、-NO2、-CF3、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００２０】
X1は独立して=N(R40)、=Sまたは=Oであり、ここに、R40は水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００２１】
記号wは独立して0〜2の整数である。
【００２２】
R5は独立して水素、-CF3、-C(O)R10、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００２３】
R6およびR7は独立して水素、-C(O)R10、-S(O)2R11、-C(NH)R10、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール、置換もしくは非置換アリールアルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００２４】
R10は水素、-NR12R13、-OR16、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである。いくつかの具体的態様にて、R6がC(NH)R10であるとき、R10はOR16ではない。
【００２５】
R11は水素、-NR12R13、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００２６】
R12およびR13は独立して水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００２７】
R8は独立して水素、-NR14R15、-OR16、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００２８】
R14、R15およびR16は独立して水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００２９】
R9は独立して水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである。wが2であるとき、R9は適宜-NR17R18であってもよい。
【００３０】
R17およびR18は独立して水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００３１】
R6とR7、R6とR10、R12とR13、R14とR15、およびR17とR18は独立して適宜それらが結合している窒素と一緒になって、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい。
【００３２】
R1が-C(Z)R8であり、ZがOであり、R8が-NR14R15であり、Aがフェニルであるとき、Aは置換フェニルがハロゲンまたはアルコキシで置換されていない置換フェニルである。いくつかの具体的態様にて、R1が-C(Z)R8であり、ZがOであり、R8が-NR14R15であるとき、Aは置換フェニルではない。いくつかの具体的態様にて、R1が-C(Z)R8であり、ZがOであり、R8が-NR14R15であるとき、Aはフェニルではない。いくつかの具体的態様にて、R1が-C(Z)R8であり、ZがOであり、R8が-NR14R15であるとき、Aは置換アリールではない。いくつかの具体的態様にて、R1が-C(Z)R8であり、ZがOであり、R8が-NR14R15であるとき、Aはアリールではない。いくつかの具体的態様にて、R1は、ZがOであり、R8が-NR14R15である、-C(Z)R8ではない。
【００３３】
別の態様にて、本発明は本発明のピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータを用いてタンパク質キナーゼ活性を調節する方法を提供する。該方法は、該キナーゼを本発明のピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータと接触させることを含む。
【００３４】
別の態様にて、本発明は、治療を必要とする対象（例えばヒトなどの哺乳動物）におけるキナーゼ活性により媒介される疾患（キナーゼ媒介疾患または障害）を治療する方法を提供する。該方法は、有効量の本発明のピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータを対象に投与することを含む。
【００３５】
別の態様にて、本発明はピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータを医薬的に許容される賦形剤とともに含む医薬組成物を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３６】
発明の詳しい記載
定義
本明細書において略語は、その化学的および生物学的分野の範囲内の従来の意味を有する。
【００３７】
置換基がその慣習的な化学式により左から右に記載することにより具体的に示されている場合、それらは右から左への構造を記載することから生じうる化学的に同一の置換基を均等的に包含し、例えば-CH2O-は-OCH2-と均等である。
【００３８】
用語「アルキル」は、それ自体でまたは別の置換基の一部として、特に明記されなければ、完全に飽和であるか、モノまたはポリ不飽和であることができる、直鎖（すなわち非分枝鎖）もしくは分枝鎖または環状炭化水素基またはその組合せを意味し、指定された数の炭素原子（すなわちC1-C10は１〜１０の炭素を意味する）を有する二価および多価の基を含むことができる。飽和炭化水素基の例としては、メチル、エチル、n-プロピル、イソプロピル、n-ブチル、t-ブチル、イソブチル、sec-ブチル、シクロヘキシル、(シクロヘキシル)メチル、シクロプロピルメチル、例えばn-ペンチル、n-ヘキシル、n-ヘプチル、n-オクチルなどの同族体および異性体などの基が挙げられるが、これらに限定されない。不飽和アルキル基は１以上の二重結合または三重結合を有するものである。不飽和アルキル基の例としては、ビニル、2-プロペニル、クロチル、2-イソペンテニル、2-(ブタジエニル)、2,4-ペンタジエニル、3-(1,4-ペンタジエニル)、エチニル、1-および3-プロピニル、3-ブチニル、および高級同族体および異性体が挙げられるが、これらに限定されない。炭化水素基に限定されるアルキル基は「ホモアルキル」と称される。
【００３９】
用語「アルキレン」は、それ自体でまたは別の置換基の一部として、-CH2CH2CH2CH2-、-CH2CH=CHCH2-、-CH2C≡CCH2-、-CH2CH2CH(CH2CH2CH3)CH2-により例示されるアルキルに由来する二価の基を意味するが、これらに限定されない。典型的に、アルキル（またはアルキレン）基は、1〜24の炭素原子、本発明において好ましくは10以下の炭素原子を有するだろう。「低級アルキル」または「低級アルキレン」は、一般に８以下の炭素原子を有する短鎖アルキルまたはアルキレン基である。
【００４０】
用語「ヘテロアルキル」は、それ自体でまたは別の用語と組み合わせて、特に明記されなければ、少なくとも一つの炭素原子とO、N、P、SiおよびSからなる群から選択される少なくとも一つのヘテロ原子からなる、安定な直鎖もしくは分枝鎖または環状炭化水素基またはその組合せを意味し、ここに、窒素、リンおよび硫黄原子は適宜酸化されていてもよく、窒素ヘテロ原子は適宜四級化されていてもよい。ヘテロ原子O、N、PおよびSおよびSiは、ヘテロアルキル基内の任意の位置またはアルキル基が残りの分子に結合している位置にあってよい。例としては、-CH2-CH2-O-CH3、-CH2-CH2-NH-CH3、-CH2-CH2-N(CH3)-CH3、-CH2-S-CH2-CH3、-CH2-CH2、-S(O)-CH3、-CH2-CH2-S(O)2-CH3、-CH=CH-O-CH3、-Si(CH3)3、-CH2-CH=N-OCH3、-CH=CH-N(CH3)-CH3、O-CH3、-O-CH2-CH3および-CNが挙げられるが、これらに限定されない。２または３までのヘテロ原子は連続していてもよく、例えば-CH2-NH-OCH3および-CH2-O-Si(CH3)3であることができる。同様に、用語「ヘテロアルキレン」は、それ自体でまたは別の置換基の一部として、ヘテロアルキルに由来する二価の基を意味し、例えば-CH2-CH2-S-CH2-CH2-および-CH2-S-CH2-CH2-NH-CH2-が挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロアルキレン基について、ヘテロ原子はまた、鎖の末端の一方または両方を占めることもできる（例えばアルキレンオキソ、アルキレンジオキソ、アルキレンアミノ、アルキレンジアミノなど）。さらに、アルキレンおよびヘテロアルキレン連結基について、連結基の配向は連結基の式が記載される方向により示されるものではない。例えば、式-C(O)OR'-は-C(O)OR'-および-R'OC(O)-の両方を意味する。上記のように、ヘテロアルキル基としては、本明細書において、ヘテロ原子を通して残りの分子に結合している基が挙げられ、例えば-C(O)R'、-C(O)NR'、-NR'R''、-OR'、-SR'および／または-SO2R'である。「ヘテロアルキル」が列挙され、次いで-NR'R''などの具体的なヘテロアルキル基が列挙されている場合、用語ヘテロアルキルと-NR'R''は重複しないかまたは互いに排他的ではないことは理解されよう。むしろ、具体的なヘテロアルキル基を列挙して明瞭性を加える。従って、用語「ヘテロアルキル」は、本明細書において、-NR'R''などの具体的なヘテロアルキル基を排除するように解釈すべきではない。
【００４１】
用語「シクロアルキル」および「ヘテロシクロアルキル」は、それ自体でまたは他の用語と組み合わせて、特に明記されなければ、それぞれ「アルキル」および「ヘテロアルキル」の環状版を意味する。さらに、ヘテロシクロアルキルについて、ヘテロ原子はヘテロ環が残りの分子に結合している位置を占めることができる。シクロアルキルの例としては、シクロペンチル、シクロヘキシル、1-シクロヘキセニル、3-シクロヘキセニル、シクロヘプチルなどが挙げられるが、これらに限定されない。ヘテロシクロアルキルの例としては、1-(1,2,5,6-テトラヒドロピリジル)、1-ピペリジニル、2-ピペリジニル、3-ピペリジニル、4-モルホリニル、3-モルホリニル、テトラヒドロフラン-2-イル、テトラヒドロフラン-3-イル、テトラヒドロチエン-2-イル、テトラヒドロチエン-3-イル、1-ピペラジニル、2-ピペラジニルなどが挙げられるが、これらに限定されない。用語「シクロアルキレン」および「ヘテロシクロアルキレン」は、それぞれシクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルの二価誘導体を意味する。
【００４２】
用語「ハロ」または「ハロゲン」は、それ自体でまたは別の置換基の一部として、特に明記されなければ、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素原子を意味する。さらに、「ハロアルキル」などの用語は、モノハロアルキルおよびポリハロアルキルを含むことを意味する。例えば用語「ハロ(C1-C4)アルキル」は、トリフルオロメチル、2,2,2-トリフルオロエチル、4-クロロブチル、3-ブロモプロピルなどを含むが、これらに限定されないことを意味する。
【００４３】
用語「アリール」は、特に明記されなければ、一緒に縮合しているかまたは共有結合している単環または複数環（好ましくは1〜3の環）であることができる、ポリ不飽和芳香族炭化水素置換基を意味する。用語「ヘテロアリール」は、N、OおよびSから選択される１〜４のヘテロ原子を（複数環の場合、それぞれ別の環に）含むアリール基（または環）を意味し、ここに、窒素および硫黄原子は適宜酸化されていてもよく、窒素原子は適宜四級化されていてもよい。ヘテロアリール基は炭素またはヘテロ原子を通して残りの原子に結合することができる。アリールおよびヘテロアリール基の非限定的な例としては、フェニル、1-ナフチル、2-ナフチル、4-ビフェニル、1-ピロリル、2-ピロリル、3-ピロリル、3-ピラゾリル、2-イミダゾリル、4-イミダゾリル、ピラジニル、2-オキサゾリル、4-オキサゾリル、2-フェニル-4-オキサゾリル、5-オキサゾリル、3-イソオキサゾリル、4-イソオキサゾリル、5-イソオキサゾリル、2-チアゾリル、4-チアゾリル、5-チアゾリル、2-フリル、3-フリル、2-チエニル、3-チエニル、2-ピリジル、3-ピリジル、4-ピリジル、2-ピリミジル、4-ピリミジル、5-ベンゾチアゾリル、プリニル、2-ベンズイミダゾリル、5-インドリル、1-イソキノリル、5-イソキノリル、2-キノキサリニル、5-キノキサリニル、3-キノリルおよび6-キノリルが挙げられる。上記それぞれのアリールおよびヘテロアリール環系についての置換基は、以下に記載の許容される置換基の群から選択される。用語「アリーレン」および「ヘテロアリーレン」は、それぞれアリールおよびヘテロアリールの二価の基を意味する。
【００４４】
略して、他の用語と組み合わせて用いられる場合（例えばアリールオキソ、アリールチオキソ、アリールアルキル）、用語「アリール」は、上記に定義されるアリールおよびヘテロアリール環の両方を含む。従って用語「アリールアルキル」は、アリールまたはヘテロアリール基がアルキル基（例えばベンジル、フェネチル、ピリジルメチル、フリルメチルなど）中の炭素原子（例えばメチレン基）が例えば酸素原子で置換されているアルキル基（例えばフェノキシメチル、2-ピリジルオキシメチル、3-(1-ナフチルオキシ)プロピルなど）などのアルキル基と結合している基を含むことを意味する。しかし、本明細書において、用語「ハロアリール」は、１以上のハロゲンで置換されているアリールのみに及ぶことを意味する。
【００４５】
ヘテロアルキル、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリールが具体的な員の数（例えば「3〜7員」）を含む場合、用語「員」は炭素またはヘテロ原子を意味する。
【００４６】
本明細書において、用語「オキソ」は、炭素原子に二重結合している酸素を意味する。
【００４７】
上記それぞれの用語（例えば「アルキル」、「ヘテロアルキル」、「シクロアルキル」および「ヘテロシクロアルキル」、「アリール」、「ヘテロアリール」ならびにその二価誘導基）は、示された基の置換および非置換形態の両方を含むことを意味する。それぞれのタイプの基についての好ましい置換基は以下に与える。
【００４８】
アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル単価および二価誘導基（アルキレン、アルケニル、ヘテロアルキレン、ヘテロアルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、シクロアルケニルおよびヘテロシクロアルケニルとして称されることが多い基など）についての置換基は、ゼロから(2m'+l)（ここに、m'は基の炭素原子の総数である）までの範囲の数の-OR'、=O、=NR'、=N-OR'、-NR'R''、-SR'、-ハロゲン、-SiR'R''R'''、-OC(O)R'、-C(O)R'、-CO2R'、-C(O)NR'R''、-OC(O)NR'R''、-NR''C(O)R'、-NR'-C(O)NR''R'''、-NR''C(O)OR'、-NR-C(NR'R'')=NR'''、-S(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)2NR'R''、-NRSO2R'、-CNおよび-NO2から選択される１以上の種々の基であることができるが、これらに限定されない。R'、R''、R'''およびR''''はそれぞれ、好ましくは独立して水素、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリール（例えば1〜3のハロゲンで置換されているアリール）、置換もしくは非置換アルキル、アルコキシもしくはチオアルコキシ基またはアリールアルキル基を意味する。本明細書において、「アルコキシ」基は二価の酸素基を通して残りの分子に結合しているアルキルである。本発明化合物が２以上のR基を含む場合、例えばR基はそれぞれ、２以上のR'、R''、R'''およびR''''基が存在している場合にそのそれぞれであるように独立して選択される。R'およびR''が同じ窒素原子に結合している場合、それらは窒素原子と一緒になって、4、5、6または7員環を形成することができる。例えば-NR'R''は、1-ピロリジニルおよび4-モルホリニルを含むことを意味するが、これらに限定されない。置換基の上記記載から、当業者は用語「アルキル」が水素基以外の基と結合している炭素原子を含む基、例えばハロアルキル（例えば-CF3および-CH2CF3）およびアシル（例えば-C(O)CH3、-C(O)CF3、-C(O)CH2OCH3など）を含むことを意味することを理解するだろう。
【００４９】
上記アルキル基について記載された置換基と同様に、アリールおよびヘテロアリール基（ならびにその二価誘導体）についての典型的な置換基は、芳香環系にてゼロから開環（open）価数の総数までの範囲の数にて、例えばハロゲン、-OR'、-NR'R''、-SR'、-ハロゲン、-SiR'R''R'''、-OC(O)R'、-C(O)R'、-CO2R'、-C(O)NR'R''、-OC(O)NR'R''、-NR''C(O)R'、-NR'-C(O)NR''R'''、-NR''C(O)OR'、-NR-C(NR'R''R''')=NR''''、-NR-C(NR'R'')=NR'''、-S(O)R'、-S(O)2R'、-S(O)2NR'R''、-NRSO2R'、-CNおよび-NO2、-R'、-N3、-CH(Ph)2、フルオロ(C1-C4)アルコキソおよびフルオロ(C1-C4)アルキルから変化し選択され；ここに、R'、R''、R'''およびR''''は、好ましくは独立して水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールおよび置換もしくは非置換ヘテロアリールから選択される。本発明化合物が２以上のR基を含む場合、例えばR基はそれぞれ、２以上のR'、R''、R'''およびR''''基が存在している場合にそのそれぞれであるように独立して選択される。
【００５０】
アリールまたはヘテロアリール環の隣接する原子上の２の置換基は、適宜式-T-C(O)-(CRR')q-U-（ここに、TおよびUは独立して-NR-、-O-、-CRR'-または単結合であり、qは0〜3の整数である）の環を形成していてもよい。あるいは、アリールまたはヘテロアリール環の隣接する原子上の２の置換基は、適宜式-A-(CH2)r-B-（ここに、AおよびBは独立して-CRR'-、-O-、-NR-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-、-S(O)2NR'-または単結合であり、rは1〜4の整数である）の置換基で置換されていてもよい。そのようにして形成される新たな環の単結合の一つは、適宜二重結合で置き換えられていてもよい。あるいは、アリールまたはヘテロアリール環の隣接する原子上の２の置換基は、適宜式-(CRR')s-X'-(C''R''')d-（ここに、sおよびdは独立してO〜3の整数であり、X'は-O-、-NR'-、-S-、-S(O)-、-S(O)2-または-S(O)2NR'-である）の置換基で置換されていてもよい。置換基R、R'、R''およびR'''は好ましくは独立して水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールおよび置換もしくは非置換ヘテロアリールから選択される。
【００５１】
本明細書において、用語「ヘテロ原子」または「環ヘテロ原子」は、酸素（O）、窒素（N）、硫黄（S）、リン（P）およびケイ素（Si）を含むことを意味する。
【００５２】
本明細書において、「アミノアルキル」は、アルキレンリンカーに共有結合しているアミノ基を意味する。アミノ基は-NR'R''であり、ここに、R'およびR''は、典型的に水素、置換もしくは非置換アルキル、置換もしくは非置換ヘテロアルキル、置換もしくは非置換シクロアルキル、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、置換もしくは非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールから選択される。
【００５３】
本明細書において、「置換基」は、以下の部分から選択される基を意味する：
【００５４】
(A) -OH、-NH2、-SH、-CN、-CF3、-NO2、オキソ、ハロゲン、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリールおよび
【００５５】
(B) 以下の基から選択される少なくとも一つの置換基で置換されている、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリール：
【００５６】
(i) オキソ、-OH、-NH2、-SH、-CN、-CF3、-NO2、ハロゲン、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリールおよび
【００５７】
(ii) 以下の基から選択される少なくとも一つの置換基で置換されている、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールおよびヘテロアリール：
【００５８】
(a) オキソ、-OH、-NH2、-SH、-CN、-CF3、-NO2、ハロゲン、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリールおよび
【００５９】
(b) オキソ、-OH、-NH2、-SH、-CN、-CF3、-NO2、ハロゲン、非置換アルキル、非置換ヘテロアルキル、非置換シクロアルキル、非置換ヘテロシクロアルキル、非置換アリールおよび非置換ヘテロアリールから選択される少なくとも一つの置換基で置換されている、アルキル、ヘテロアルキル、シクロアルキル、ヘテロシクロアルキル、アリールまたはヘテロアリール。
【００６０】
本明細書において、「サイズ限定置換体」または「サイズ限定置換基」は、「置換基」についての上記すべての置換基から選択される基を意味し、ここに、置換もしくは非置換アルキルはそれぞれ置換もしくは非置換C1-C20アルキルであり、置換もしくは非置換ヘテロアルキルはそれぞれ置換もしくは非置換2〜20員ヘテロアルキルであり、置換もしくは非置換シクロアルキルはそれぞれ置換もしくは非置換C4-C8シクロアルキルであり、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルはそれぞれ置換もしくは非置換4〜8員ヘテロシクロアルキルである。
【００６１】
本明細書において、「低級置換体」または「低級置換基」は、「置換基」についての上記すべての置換基から選択される基を意味し、ここに、置換もしくは非置換アルキルはそれぞれ置換もしくは非置換C1-C8アルキルであり、置換もしくは非置換ヘテロアルキルはそれぞれ置換もしくは非置換2〜8員ヘテロアルキルであり、置換もしくは非置換シクロアルキルはそれぞれ置換もしくは非置換C5-C7シクロアルキルであり、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルはそれぞれ置換もしくは非置換5〜7員ヘテロシクロアルキルである。
【００６２】
本発明化合物は塩として存在することができる。本発明はそのような塩を含む。適切な塩形態の例としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、硫酸塩、メタンスルホン酸塩、硝酸塩、マレイン酸塩、酢酸塩、クエン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩（例えば(+)-酒石酸塩、(-)-酒石酸塩またはそのラセミ混合物を含む混合物）、コハク酸塩、安息香酸塩、およびグルタミン酸塩などのアミノ酸との塩が挙げられる。これらの塩は当業者に知られている方法により製造することができる。さらに、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミノまたはマグネシウム塩または同様の塩などの塩基付加塩も含まれる。本発明化合物が相対的に塩基性の官能基を含む場合、酸付加塩はそのような化合物の中性形態を十分な量の所望な酸と無溶媒または適切な不活性溶媒中にて接触させることにより得ることができる。許容される酸付加塩の例としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、炭酸塩、炭酸一水素塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、硫酸塩、硫酸一水素塩、ヨウ化水素酸塩または亜リン酸塩などの無機酸由来のもの、ならびに酢酸塩、プロピオン酸塩、イソ酪酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、マンデル酸塩、フタル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、p-トリルスルホン酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩などの有機酸由来の塩が挙げられる。さらに、アルギン酸塩などのアミノ酸塩およびグルクロン酸塩またはガラクツロン酸塩などの有機酸の塩も含まれる。本発明化合物のいくつかの具体的な化合物は、該化合物を塩基または酸付加塩に変換することが可能な塩基性および酸性官能基の両方を含む。
【００６３】
化合物の中性形態は、好ましくは従来の方法で塩を塩基または酸と接触させ、親化合物を単離することにより再生する。化合物の親形態は、極性溶媒中の可溶性などのいくつかの物理的特性において種々の塩形態と異なる。
【００６４】
本発明のいくつかの化合物は、非溶媒和形態ならびに水和形態などの溶媒和形態にて存在することができる。一般に、溶媒和形態は非溶媒和形態と均等であり、本発明の範囲内に包含される。本発明のいくつかの化合物は、複数の結晶形または非晶質形態にて存在することができる。一般に、すべての物理的形態は、本発明により包含される使用について均等であり、本発明の範囲内にあるものである。
【００６５】
本発明のいくつかの化合物は、不斉炭素原子（光学またはキラル中心）または二重結合を有し；絶対立体化学の意味において、(R)-もしくは(S)-またはアミノ酸について(D)-もしくは(L)-として定義することができる鏡像異性体、ラセミ体、ジアステレオマー、互変異性体、幾何異性体、立体異性体、および個別の異性体は本発明の範囲内に包含される。本発明化合物は、当分野にて合成および／または単離することができないほど不安定であるものと知られているものは含まない。本発明は、ラセミ体および光学的に純粋な形態にて化合物を含むことを意味する。光学活性な(R)-および(S)-または(D)-および(L)-異性体は、キラルシントンもしくはキラル試薬を用いて製造するか、または従来の技術を用いて分解することができる。本明細書に記載の化合物がオレフィン結合または他の幾何学的不斉中心を含む場合、特に明記されなければ、化合物はEおよびZの両方の幾何異性体を含むものである。
【００６６】
本明細書において、用語「互変異性体」は、平衡に存在し容易に一の異性体から別のものに変換される、２以上の構造異性体のうちの一つを意味する。
【００６７】
本発明のいくつかの化合物が互変異性体にて存在することができ、化合物のそのようなすべての互変異性体が本発明の範囲内であることは、当業者にとって明らかであろう。
【００６８】
特に明記されなければ、本明細書に示される構造はまた、該構造のすべての立体化学形態、すなわち各不斉中心についてのRおよびSコンフィギュレーションを含むことも意味する。それゆえ、本発明化合物の単一立体化学異性体ならびに鏡像異性体およびジアステレオマー混合物は本発明の範囲内である。
【００６９】
特に明記されなければ、本明細書に示される構造はまた、１以上の同位体濃縮原子の存在のみ異なる化合物を含むことも意味する。例えば、水素の重水素もしくは三重水素による置換または炭素の13C-もしくは14C-濃縮炭素による置換を除き、本発明の構造を有する化合物は、本発明の範囲内である。
【００７０】
本発明化合物はまた、そのような化合物を構成する１以上の原子にて非天然的割合の原子同位体も含むことができる。例えば、化合物は、例えば三重水素（3H）、ヨウ素-125（125I）または炭素-14（14C）などの放射性同位体で放射性標識することができる。本発明化合物のすべての同位体的変形は、放射性であろうとなかろうと、本発明の範囲内に包含される。
【００７１】
用語「医薬的に許容される塩」は、本明細書に記載の化合物に見られる特定の置換部分に応じて、相対的無毒性酸または塩基と製造される活性化合物の塩を含むことを意味する。本発明化合物が相対的酸性官能基を含む場合、塩基付加塩は、無溶媒または適切な不活性溶媒中にてそのような化合物の中性形態を十分な量の所望の塩基と接触させることにより得ることができる。医薬的に許容される塩基付加塩の例としては、ナトリウム、カリウム、カルシウム、アンモニウム、有機アミノまたはマグネシウム塩または同様の塩が挙げられる。本発明化合物が相対的塩基性官能基を含む場合、酸付加塩は、無溶媒または適切な不活性溶媒中にてそのような化合物の中性形態を十分な量の所望の酸と接触させることにより得ることができる。医薬的に許容される酸付加塩の例としては、塩酸塩、臭化水素酸塩、硝酸塩、炭酸塩、炭酸一水素塩、リン酸塩、リン酸一水素塩、リン酸二水素塩、硫酸塩、硫酸一水素塩、ヨウ化水素酸塩または亜リン酸塩などの無機酸由来の塩ならびに酢酸塩、プロピオン酸塩、イソ酪酸塩、マレイン酸塩、マロン酸塩、安息香酸塩、コハク酸塩、スベリン酸塩、フマル酸塩、乳酸塩、マンデル酸塩、フタル酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、p-トリルスルホン酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、メタンスルホン酸塩などの相対的に無毒性の有機酸由来の塩が挙げられる。さらに、アルギン酸塩などのアミノ酸の塩およびグルクロン酸またはガラクツロン酸などの有機酸の塩も含まれる（例えば、文献（Berge et al.,「Pharmaceutical Salts」, Journal of Pharmaceutical Science, 1977, 66, 1-19）を参照のこと）。本発明のいくつかの特定の化合物は、化合物を塩基または酸付加塩に変換することができる塩基性および酸性官能基の両方を含む。
【００７２】
塩形態に加えて、本発明はプロドラッグ形態の化合物を提供する。本明細書に記載の化合物のプロドラッグは、生理学的条件下、化学変化を容易に受けて本発明化合物を提供する化合物である。さらに、プロドラッグは、生体外環境中、化学的または生化学的方法により本発明化合物に変換されうる。例えば、プロドラッグは、適切な酵素または化学的試薬と経皮パッチ容器内に置いた場合、本発明化合物にゆっくりと変換しうる。
【００７３】
用語「a」、「an」または「a(n)」は、本明細書の置換基に関して用いる場合、少なくとも一つを意味する。例えば、化合物が「an」アルキルまたはアリールで置換されている場合、該化合物は適宜少なくとも一つのアルキルおよび／または少なくとも一つのアリールで置換されていてもよい。さらに、部分がR置換基で置換されている場合、基は「R-置換」と称することができる。部分がR-置換である場合、該部分は少なくとも一つのR置換基で置換されており、各R置換基は適宜異なっていてもよい。
【００７４】
本発明化合物の記載は、当業者に知られている化学結合の原理により限定される。従って、基が１以上の数の置換基で置換することができる場合、そのような置換基は、化学結合の原理に適合し、本質的には不安定でなくおよび／または当業者に水性、中性およびいくつかの知られている生理学的条件などの通常条件下にて不安定であるようだと知られているような化合物を得るように選択する。例えば、ヘテロシクロアルキルまたはヘテロアリールは、当業者に知られている化学結合の原理に適合する環ヘテロ原子により残りの分子に結合し、それにより本質的に不安定な化合物を回避する。
【００７５】
特定の疾患に関する用語「治療する」または「治療」は、疾患の予防を含む。
【００７６】
記号：
【化２】
2009519218.tif 000004
は、部分が残りの分子に結合する点を示す。
【００７７】
ピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータ
ある態様にて、本発明は式：
【化３】
2009519218.tif 000005
［式中、A、R1、R2、R3およびR4は上記に定義されるとおりである］
で示されるピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータ（本明細書にて「本発明化合物」とも称される）を提供する。
【００７８】
いくつかの具体的態様において、AはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールまたはR19-置換もしくは非置換アリールである。
【００７９】
いくつかの具体的態様において、R1は水素、臭素、フッ素、-OR5、-NR6R7、-C(X1)R8、-S(O)WR9、-CN、-NO2、-CF3、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００８０】
いくつかの具体的態様において、R2は水素、ハロゲン、-OR5、-NR6R7、-C(X1)R8、-S(O)wR9、-CN、-NO2、-CF3、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００８１】
いくつかの具体的態様において、R3は水素、ハロゲン、-OR5、-NR6R7、-C(X1)R8、-S(O)wR9、-CN、-NO2、-CF3、R19-置換もしくは非置換アルキルまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアルキルである。
【００８２】
いくつかの具体的態様において、R4は水素、ハロゲン、-OR5、-NR6R7、-C(X1)R8、-S(O)WR9、-CN、-NO2、-CF3、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００８３】
いくつかの具体的態様において、X1は独立して=N(R40)、=Sまたは=Oであり、ここに、R40は水素、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００８４】
いくつかの具体的態様において、R5は独立して水素、-CF3、-C(O)R10、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００８５】
いくつかの具体的態様において、R6およびR7は独立して水素、-C(O)R10、-S(O)2R11、-C(NH)R10、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００８６】
いくつかの具体的態様において、R10は水素、-NR12R13、-OR16、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００８７】
いくつかの具体的態様において、R11は水素、-NR12R13、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００８８】
いくつかの具体的態様において、R12およびR13は独立して水素、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００８９】
いくつかの具体的態様において、R8は独立して水素、-NR14R15、-OR16、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００９０】
いくつかの具体的態様において、R14、R15およびR16は独立して水素、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００９１】
いくつかの具体的態様において、R9は独立して水素、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００９２】
いくつかの具体的態様において、R17およびR18は独立して水素、R19-置換もしくは非置換アルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【００９３】
いくつかの具体的態様において、R6とR7、R6とR10、R12とR13、R14とR15およびR17とR18は独立して、適宜それらが結合している窒素と一緒になって、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい。
【００９４】
R19は独立してハロゲン、-L1-C(X2)R22、-L1-OR23、-L1-NR24R25、-L1-S(O)mR26、-CN、-NO2、-CF3、(1) 非置換C3-C7シクロアルキル；(2) 非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル；(3) 非置換ヘテロアリール；(4) 非置換アリール；(5) 置換C3-C7シクロアルキル；(6) 置換3〜7員ヘテロシクロアルキル；(7) 置換アリール；(8) 置換ヘテロアリール；(9) 非置換C1-C20アルキル；(10) 非置換2〜20員ヘテロアルキル；(11) 置換C1-C20アルキル；または(12) 置換2〜20員ヘテロアルキルである。
【００９５】
(5)、(6)、(11)および(12)は独立してオキソ、-OH、-CF3、-COOH、シアノ、ハロゲン、R20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R21-置換もしくは非置換アリール、R21-置換もしくは非置換ヘテロアリール、-L1-C(X2)R22、-L1-OR23、-L1-NR24R25または-L1-S(O)mR26で置換されている。
【００９６】
(7)および(8)は独立して-OH、-CF3、-COOH、シアノ、ハロゲン、R20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R21-置換もしくは非置換アリール、R21-置換もしくは非置換ヘテロアリール、-L1-C(X2)R22、-L1-OR23、-L1-NR24R25または-L1-S(O)mR26で置換されている。
【００９７】
X2は独立して=S、=Oまたは=NR27であり、ここに、R27はH、-OR28、R20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R21-置換もしくは非置換アリールまたはR21-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R28は独立して水素またはR20-置換もしくは非置換C1-C10アルキルである。
【００９８】
記号mは独立して0〜2の整数である。
【００９９】
R22は独立して水素、R20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R21-置換もしくは非置換アリール、R21-置換もしくは非置換ヘテロアリール、-OR29または-NR30R31である。
【０１００】
R29、R30およびR31は独立して水素、R20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R21-置換もしくは非置換アリールまたはR21-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R30およびR31は適宜それらが結合している窒素と一緒になって、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキルまたはR21-置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい。
【０１０１】
R23、R24およびR25は独立して水素、-CF3、R20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R21-置換もしくは非置換アリール、R21-置換もしくは非置換ヘテロアリール、-C(X3)R32または-S(O)qR32であり、ここに、R24およびR25は適宜それらが結合している窒素と一緒になって、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキルまたはR21-置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい。
【０１０２】
X3は独立して=S、=Oまたは=NR33である。R33は独立してR20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R21-置換もしくは非置換アリールまたはR21-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【０１０３】
記号qは独立して0〜2の整数である。
【０１０４】
R32は独立して水素、R20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R21-置換もしくは非置換アリール、R21-置換もしくは非置換ヘテロアリールまたは-NR34R35である。
【０１０５】
R34およびR35は独立して水素、R20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R21-置換もしくは非置換アリールまたはR21-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R34およびR35は適宜それらが結合している窒素と一緒になって、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキルまたはR21-置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい。
【０１０６】
R26は独立して水素、R20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R21-置換もしくは非置換アリール、R21-置換もしくは非置換ヘテロアリールまたは-NR36R37である。
【０１０７】
R36およびR37は独立して水素、R20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員21-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R36およびR37は適宜それらが結合している窒素と一緒になって、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキルまたはR21-置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい。
【０１０８】
L1は独立して結合、非置換C1-C10アルキレンまたは非置換ヘテロアルキレンである。
【０１０９】
R20は独立してオキソ、-OH、-COOH、-CF3、-OCF3、-CN、アミノ、ハロゲン、R38-置換もしくは非置換2〜10員アルキル、R38-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R38-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R38-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R39-置換もしくは非置換アリールまたはR39-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【０１１０】
R21は独立して-OH、-COOH、アミノ、ハロゲン、-CF3、-OCF3、-CN、R38-置換もしくは非置換2〜10員アルキル、R38-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R38-置換もしくは非置換C3-C7シクロアルキル、R38-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R39-置換もしくは非置換アリールまたはR39-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【０１１１】
R38は独立してオキソ、-OH、-COOH、アミノ、ハロゲン、-CF3、-OCF3、-CN、非置換C1-C10アルキル、非置換2〜10員ヘテロアルキル、非置換C3-C7シクロアルキル、非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリールである。
【０１１２】
R39は独立して-OH、-COOH、アミノ、ハロゲン、-CF3、-OCF3、-CN、非置換C1-C10アルキル、非置換2〜10員ヘテロアルキル、非置換C3-C7シクロアルキル、非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、非置換アリール、非置換ヘテロアリールである。
【０１１３】
いくつかの具体的態様において、Aは置換もしくは非置換フェニル、置換もしくは非置換ピリジニル、置換もしくは非置換ピリミジニル、置換もしくは非置換オキサゾリル、置換もしくは非置換ピロリル、置換もしくは非置換フラニル、置換もしくは非置換イミダゾリル、置換もしくは非置換チオアゾリル、置換もしくは非置換イソオキサゾリル、置換もしくは非置換ピラゾリル、置換もしくは非置換インドリル、置換もしくは非置換ベンゾチアゾリルまたは置換もしくは非置換イソチアゾリルである。
【０１１４】
いくつかの具体的態様において、Aは置換もしくは非置換フェニルである。いくつかの具体的態様において、AのR19置換基は独立してハロゲン、置換もしくは非置換C1-C20アルキル、-L1-C(X2)R22、-L1-OR23、-L1-NR24R25または-L1-S(O)mR26、-CNまたは-NO2である。いくつかの具体的態様において、AへのL1結合は結合である。いくつかの具体的態様において、Aに結合しているR23基は独立して水素または非置換(C1-C5)アルキルである。いくつかの具体的態様において、AのX2は=Oである。いくつかの具体的態様において、Aに結合しているR22は独立してR20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R20-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、-OR29または-NR30R31である。記号mは、Aの-L1-S(O)mR26置換基として含まれる場合、2であることができる。Aに結合しているR26はR20-置換もしくは非置換C1-C10アルキル、R20-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキルであることができる。Aに結合しているR26はまた、非置換(C1-C5)アルキルであることができる。
【０１１５】
いくつかの具体的態様において、AのR19は独立してR20-置換もしくは非置換C1-C20アルキルまたはR20-置換もしくは非置換C1-C20ヘテロアルキルである。AのR20はまた、独立して-L1-OR23、-L1-NR24R25または非置換ヘテロシクロアルキルであることもできる。Aに結合しているR20はまた、独立してR38-置換もしくは非置換ピペリジニルまたはR38-置換もしくは非置換モルホリノであることもできる。いくつかの具体的態様において、AのL1は結合である。いくつかの具体的態様において、AのR23は独立して水素、非置換C1-C5アルキルまたは非置換2〜5員ヘテロアルキルである。いくつかの具体的態様において、Aに結合しているR24は水素である。Aに結合しているR25は、独立してR20-置換もしくは非置換C1-C5アルキルまたはR20-置換もしくは非置換2〜5員ヘテロアルキルであることができる。
【０１１６】
いくつかの具体的態様において、R2およびR4は独立して水素、ハロゲン、-OR5、-NR6R7、-C(X1)R8、-S(O)wR9、-CN、-NO2、-CF3、非置換(C1-C10)アルキル、非置換2〜10員ヘテロアルキル、非置換(C3-C7)シクロアルキル、非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである。R3は水素、ハロゲン、-OR5、-NR6R7、-C(X1)R8、-S(O)WR9、-CN、-NO2、-CF3、非置換(C1-C10)アルキルまたは非置換2〜10員ヘテロアルキルであることができる。
【０１１７】
いくつかの具体的態様において、R2、R4およびR3に結合しているR5、R6、R7、R8およびR9基は、独立して非置換(C1-C10)アルキル、非置換2〜10員ヘテロアルキル、非置換(C3-C7)シクロアルキル、非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、非置換アリールまたは置換もしくは非置換ヘテロアリールである。いくつかの具体的態様において、R2、R4およびR3基のR5、R6、R7、R8およびR9は、独立して非置換(C1-C10)アルキルまたは非置換2〜10員ヘテロアルキルである。
【０１１８】
いくつかの具体的態様において、R3、R2および／またはR4は水素である。いくつかの具体的態様において、R2、R4およびR3は水素である。
【０１１９】
いくつかの具体的態様において、R1は-OR5、-NR6R7、-C(X1)R8、-S(O)WR9、R19-置換もしくは非置換(C1-C10)アルキル、R19-置換もしくは非置換2〜10員ヘテロアルキル、R19-置換もしくは非置換(C3-C7)シクロアルキル、R19-置換もしくは非置換3〜7員ヘテロシクロアルキル、R19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。
【０１２０】
いくつかの具体的態様において、R1は-C(X1)R8である。いくつかの具体的態様において、R1のX1は=Oであり、R1のR8は-NR14R15である。いくつかの具体的態様において、窒素によりR1に結合しているR14およびR15は、独立して水素またはR19-置換もしくは非置換アルキルである。いくつかの具体的態様において、R1のR19は独立して-OH、-CN、置換もしくは非置換2〜10員アルキルまたは置換もしくは非置換アリールである。いくつかの具体的態様において、R1はR19-置換もしくは非置換アリールまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールである。いくつかの具体的態様において、R1はR19-置換もしくは非置換フェニル、R19-置換もしくは非置換ピリジニル、R19-置換もしくは非置換ピリミジニルまたはR19-置換もしくは非置換ベンゾチオフェニルである。
【０１２１】
いくつかの具体的態様において、R1のR19は独立してハロゲン、-L1-C(X2)R22、-L1-OR23、-L1-NR24R25、置換もしくは非置換C1-C20アルキルまたは置換もしくは非置換アリールである。いくつかの具体的態様において、R1のR19は-L1-C(X2)R22である。R1のL1は結合であることができる。R1のX2はOであることができる。R1のR22は-NR30R31であることができる。窒素によりR1に結合しているR30およびR31は独立して水素、R20-置換もしくは非置換アルキル、R20-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたはR21-置換もしくは非置換アリールであることができる。
【０１２２】
いくつかの具体的態様において、R1のR19は独立して-L1-OR23である。R1のL1は結合または非置換C1-C10アルキレンであることができる。R1のR23はR20-置換もしくは非置換アルキルまたはR21-置換もしくは非置換アリールであることができる。
【０１２３】
いくつかの具体的態様において、R1のR19は-L1-NR24R25である。R1のL1は結合であることができる。R1のR24およびR25は独立して水素またはR20-置換もしくは非置換アルキルであることができる。
【０１２４】
いくつかの具体的態様において、R1は-NR6R7である。R1のR6は水素または非置換C1-C5アルキルであることができる。R1のR7は-C(O)R10であることができる。R6およびR10はそれらが結合している窒素と一緒になって、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルまたはR19-置換もしくは非置換ヘテロアリールを形成してもよい。いくつかの具体的態様において、R1のR10は-OR16、R19-置換もしくは非置換アルキルまたはR19-置換もしくは非置換アリールである。
【０１２５】
いくつかの具体的態様において、R1は-S(O)WR9である。R1のwは2であることができる。R1のR9は-NR17R18であることができる。いくつかの具体的態様において、R1のR17およびR18は独立してR19-置換もしくは非置換アルキル、R19置換もしくは非置換ヘテロアルキルである。あるいは、R17およびR18はそれらが結合している窒素と一緒になって、R19-置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルを形成してもよい。いくつかの具体的態様において、R1のR17およびR18は窒素と一緒になって、R19-置換もしくは非置換ピペリジニルまたはR19-置換もしくは非置換ピペラジニルを形成する。
【０１２６】
いくつかの具体的態様において、式(I)の化合物における上記の置換基はそれぞれ、少なくとも一つの置換基で置換されている。より具体的には、いくつかの具体的態様において、式(I)の化合物における上記の置換アルキル、置換ヘテロアルキル、置換シクロアルキル、置換ヘテロシクロアルキル、置換アリール、置換ヘテロアリール、置換アルキレンおよび／または置換ヘテロアルキレンはそれぞれ、少なくとも一つの置換基で置換されている。他の具体的態様において、これらの基の少なくとも一つまたはすべては少なくとも一つのサイズ限定置換基で置換されている。あるいは、これらの基の少なくとも一つまたはすべては少なくとも一つの低級置換基で置換されている。
【０１２７】
式(I)の化合物の他の具体的態様において、置換もしくは非置換アルキルはそれぞれ置換もしくは非置換C1-C20アルキルであり、置換もしくは非置換ヘテロアルキルはそれぞれ置換もしくは非置換2〜20員ヘテロアルキルであり、置換もしくは非置換シクロアルキルはそれぞれ置換もしくは非置換C4-C8シクロアルキルであり、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルはそれぞれ置換もしくは非置換4〜8員ヘテロシクロアルキルであり、置換もしくは非置換アルキレンはそれぞれ置換もしくは非置換C1-C20アルキレンであり、および／または置換もしくは非置換ヘテロアルキレンはそれぞれ置換もしくは非置換2〜20員ヘテロアルキレンである。
【０１２８】
あるいは、置換もしくは非置換アルキルはそれぞれ置換もしくは非置換C1-C8アルキルであり、置換もしくは非置換ヘテロアルキルはそれぞれ置換もしくは非置換2〜8員ヘテロアルキルであり、置換もしくは非置換シクロアルキルはそれぞれ置換もしくは非置換C5-C7シクロアルキルであり、置換もしくは非置換ヘテロシクロアルキルはそれぞれ置換もしくは非置換5〜7員ヘテロシクロアルキルであり、置換もしくは非置換アルキレンはそれぞれ置換もしくは非置換C1-C8アルキレンであり、および／または置換もしくは非置換ヘテロアルキレンはそれぞれ置換もしくは非置換2〜8員ヘテロアルキレンである。
【０１２９】
別の具体的態様において、本発明化合物は、第1〜9表のいずれか一もしくはすべての化合物または方法1〜9のいずれか一もしくはすべてのものを含む。
【０１３０】
典型的な合成
本発明化合物は、一般によく知られている合成法の適当な組合せにより合成される。本発明化合物の合成に有用な技術は、関連分野の当業者に容易に明らかかつ利用可能なものである。以下の議論は、原則として、どのようにして本発明にて特許請求されている化合物へのアクセスを得、本発明化合物の組み立てにおける使用に利用できるいくつかの種々の方法に関する詳細を与えるかを説明するために提示する。しかし、議論は、本発明化合物の製造に有用な反応または一連の反応の範囲を定義または限定するものではない。本発明化合物は、以下の実施例に開示される手順および技術ならびに既知の有機合成技術により製造することができる。反応式1〜10において、R1、R2、R3、R4およびAは上記のように定義される。
【０１３１】
本発明のスルホンアミド類似体の合成は反応式1（R1＝SO2NRaRb）に概述する。そのような多くの化合物は市販の5-(2-メチルスルファニル-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-スルホニルクロリドから都合よく合成される。
反応式1
【化４】
2009519218.tif 000006
【０１３２】
スルホニルクロリドは、塩基性条件下アミン、例えばピリジン（これに限定されない）との反応によりスルホンアミドに変換する（工程a）。得られたメチルスルフィドは、m-CPBA、オキソン、H2O2またはTBHPなど（これらに限定されない）の種々の酸化剤により対応スルホンに酸化される（工程b）。スルホンのアリールアミンによる置換は、典型的に昇温下、無溶媒の芳香族アミンまたは適当な溶媒（n-BuOH、DMSO、DMF、CH3CNなど）中にて酸性触媒（すなわちTFA、HOAc、p-TSA）を用いることにより行う。あるいは、変換は、Yinらの文献（Organic Letters 2002, 4(20), 3481）により説明されるように、適当な溶媒（例えばDMF）中の塩基性条件下（例えばNaH）、または金属触媒（すなわちPdまたはCu）下、達成することができる。さらに、スルホンを加水分解し、次いでPOCl3、PCl5または他のハロゲン化剤で塩素化することによっても、2-ハロピリミジン類似体を生成することができ、これは塩基性条件（例えばNaH、DIPAなど）下または有機金属触媒（例えばPd(PPh3)4、Pd2(dba)3）により促進されて、芳香族アミンで都合よく置換することができる（反応式1の工程c）。
【０１３３】
スルホニルクロリドはまた、標準的条件下（Sugen-WO02096361A2）有機亜鉛誘導体に変換することもでき（工程d）、次いでこれをアルキルハライドで処理し、スルホニル中間体を生成した（工程e）。最終生成物への次の変換は、上記のように工程bおよびcの条件を適用することにより達成することができる。
【０１３４】
ブロモ類似体（R1 = Br）の合成は反応式2および3に概述する。
反応式2
【化５】
2009519218.tif 000007
【０１３５】
一つの方法は、鍵出発物質として市販の4-(5-ブロモチオフェン-2-イル)ピリミジンチオールを使用する（反応式2）。チオールのメチル化は、塩基性条件（すなわちK2CO3、NaH）下、適切な溶媒（すなわちEtOH/H2O、DCM、THFなど）中、MeIなど（これに限定されない）のメチル化剤により行う（工程a）。酸化（工程b）およびスルホンの置換（工程c）は、反応式1工程bおよびcに記載の同様の条件下にて達成される。
反応式3
【化６】
2009519218.tif 000008
【０１３６】
別の方法は、2-アセチル-5-ブロモチオフェンをジメチルホルムアミド ジメチルアセタール（DMF-DMA）またはブレデレク（Bredereck）試薬で無溶媒または溶媒（DMF、DMA）中にて処理し、アクリルアミドを得るものである（反応式3の工程a）。アクリルアミドの、エタノール性HNO3中シアナミドおよびアリールアミンから容易に製造されるアリールグアニジンとの環化は、エタノール、2-メトキシエタノールなどの溶媒中、昇温下NaOH、KOHなどの塩基により行う（工程b）。
【０１３７】
反応式2または3により得られる4-(5-ブロモ-2-チエニル)-2-ピリミジニル-N-アリールアミンは、5-アリールチエニル類似体（R1 = アリール）または5-N-アリールチオフェン-アミノ類似体（R1 = N-アリール）に容易に変換される（反応式4）。
反応式4
【化７】
2009519218.tif 000009
【０１３８】
5-アリールチエニル類似体の合成は、5-ブロモチオフェンとボロン酸、ボロン酸エステルまたは有機スズ試薬とのC-C形成により達成される。反応は、通常、塩基性条件（すなわちNa2CO3、KOAc、NaOHなど）下にて行い、リガンド添加剤（すなわちアミン、CsF）の非存在下または存在下、DMF、DMA、NMP、CH3CN、ジオキサン、トルエンなど（これらに限定されない）の水性溶媒混合物中、昇温下（90℃〜200℃）、従来の加熱またはマイクロウェーブ照射を用いて、テトラキス(トリフェニルホスフィノ)パラジウム(0)、ジクロロビス(トリフェニルホスフィノ)パラジウム(II)またはジクロロ[1,1'-ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン]パラジウム(II)など（これらに限定されない）のパラジウム触媒により促進させる（工程a）。5-N-アリールチオフェン-アミノ類似体は、文献（Organic Letters (2005), 7(18), 3965-3968）に記載のBuchwaldらにより開発されたパラジウム触媒条件下にて製造する。そのような条件の一つは、触媒としてPd2(dba)3、塩基としてNaOtBuおよびリガンドとして2-ジシクロヘキシルホスフィノ-2',6'-ジメトキシ-1,1'-ビフェニルを使用する。
【０１３９】
5-アリールチエニル類似体（R1 = アリール）または5-N-アリールチオフェン-アミノ類似体（R1 = N-アリール）の両方はまた、アリール化工程の順序を逆にすることにより得ることもできる（反応式5）。この方法にて、まずチオフェンのブロモをアリールまたはN-アリール基で置換し、次いでピリミジンのメチルスルホンをN-アリール化する。
反応式5
【化８】
2009519218.tif 000010
【０１４０】
いくつかのオレフィンは標準的ヘック反応条件下、4-(5-ブロモ-2-チエニル)-2-ピリミジニル-N-アリールアミン（反応式2または3から）から得る（反応式6）。
反応式6
【化９】
2009519218.tif 000011
【０１４１】
ウィッティヒ反応はまた、アルケンおよびエチレン結合類似体への導入も提供する（反応式7）。例えば5-(2-メチルスルファニル-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-カルバルデヒドは、反応式5工程d記載の標準的鈴木カップリング条件により２の市販の試薬、2-メチルチオピリミジン-4-クロリドおよび5-ホルミル-2-チオフェンボロン酸から製造する（反応式7工程a）。次いでN-アリール化を行い（工程b、反応式1工程bおよびcを参照のこと）、得られたアルデヒドはウィッティヒ反応条件を受けてアルケニル誘導体を生成する（工程c）。同アルデヒドはまた、よく確立された還元的アミノ化条件によるチエニル-2-アミノメチル類似体の合成にも有用である（工程c）。2,4-ジクロロ-ピリミジンが出発物質として用いられる場合、工程bおよびc'についての一連の変換に切り替えることができる。
反応式7
【化１０】
2009519218.tif 000012
【０１４２】
本発明におけるアミド（R1 = CONRaRb）類似体は、2-アセチルチオフェン-2-カルボン酸または(2-置換-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-カルボン酸エステルから容易に入手可能である（反応式8）。工程aおよびbは反応式3工程aおよびbに記載されている。工程dは、反応式1についての説明に記載されているように酸性または塩基性条件下にて容易に達成することができる（XはSO2MeまたはClであることができる）。カルボン酸エステルの加水分解（工程e）は標準的条件下にて行う（すなわちKOH、LiOHまたはK2CO3）。工程cの変換は、PyBOP、HBTUまたはHATUなど（これらに限定されない）の適切なカップリング剤とのよく確立されたアミドカップリング条件下にて達成する。そのようなアミドがワインレブアミドである場合、種々のケトンはグリニヤ試薬など（これに限定されない）の有機金属試薬を用いることにより製造することができる（工程f）。
反応式8
【化１１】
2009519218.tif 000013
【０１４３】
N-結合アミド類似体（R1 = N(Ra)CORb）、尿素（R1 = N(Ra)CONRbRc）またはカーバメート（R1 =NRaCO2Rb）の合成を反応式9にて説明する。
反応式9
【化１２】
2009519218.tif 000014
【０１４４】
反応式8からの酸（工程bの生成物）は、昇温下t-BuOH中、ジフェニルホスホリルアジドおよびトリエチルアミンで処理し、再転位tert-ブトキシカルボニルアミノチエニル中間体（反応式9中の工程a）を与える。そのようなクルチウス転位を与える他の方法もまた、この変換に適用可能である。例えば、そのような方法の一つは、アセトニトリル、ベンゼンまたはTHFなど（これらに限定されない）の溶媒中、酸塩化物（SOCl2など）およびNaN3を経由してアジド中間体を生成することである。イソシアネート中間体は、系中にて処理されるか、または単離し、アルコールで処理してカーバメート（R1 = NRcC(O)ORa, Rc = H）を得、またはアミンで処理して尿素（R1 = NRcC(O)NRaRb, Rc = H）を得ることができる（工程a'）。得られた尿素またはカーバメートは、例えばハロゲン化アルキル（すなわちMeI、EtBr、これらに限定されない）により塩基性条件下（すなわちNaH、K2CO3）アルキル化されて、N-アルキル尿素およびカーバメート（Rc = アルキル）を得ることができる。
【０１４５】
工程aからのtert-ブトキシカルボニルアミノチエニル中間体は、まずアルキル化され（工程d）次いでBoc除去条件を受けるか、または直接Boc除去条件（すなわちTFA/DCMまたはHCl/ジオキサン）を受けて、アミノチエニル類似体（工程bまたはb'）を生成することができ、これは例えばハロゲン化アルキルまたは還元的アミノ化条件（工程cまたはc'）によりアルキル化することができる（これらに限定されない）。工程bまたはb'からの生成物は、DCM、THF、ピリジンなど（これらに限定されない）の適当な溶媒中塩基（すなわちDIEA、Et3N、ピリジン）の存在下ハロゲン化アシルにより容易にアシル化（Ra = COR）される（工程cまたはc'）。上記アミド結合形成はまた、DCM、DMF、DMA、NMP、AcNまたはTHFなど（これらに限定されない）の適当な溶媒中、HATU、PyBOP、EDCIなど（これらに限定されない）のいくつかの試薬の存在下、アミンをカルボン酸と反応させることにより達成することもできる。さらに、Schotten-Bauman条件は、同一の変換の別の代替を提供する。さらに、ジメチルアミノピリジン（DMAP）または他の「活性化」添加物もまた用いて、工程cまたはc'を促進することができる。
【０１４６】
上記アミンはまた、ピリジン、DCMまたはTHFなど（これらに限定されない）の溶媒中、塩化スルホニルまたはスルホニルイミダゾリドなど（これらに限定されない）の活性化アルキルまたはアリールまたはヘテロアリールスルホニル試薬を用いて、スルホンアミド（R1 = NRbSO2Ra；Rb = H、アルキルまたはヘテロアルキル）に変換する（工程cまたはc'）。あるいは、第三級スルホンアミド（R1 = NRbSO2Ra；Rb = アルキルまたはヘテロアルキル）はまた、第二級スルホンアミド（R1 = NRbSO2Ra；Rb = H）を塩基性条件（すなわちNaH、K2CO3）下のハロゲン化アルキル（すなわちMeI、EtBr）または光延条件下のアルキルアルコールなど（これらに限定されない）のアルキル化条件にさらすことにより、製造することもできる。
【０１４７】
アミンはまた、塩基（すなわちピリジン、トリエチルアミン）を含む適当な溶媒（すなわちTHF、DCM、AcN）中、クロロギ酸エステルで処理した後、カーバメートに変換する。
【０１４８】
ピリミジン（A）の2位における多様性は、この位置にてフェニルまたは他の芳香環上の官能基を取り込むことにより達成される。これらの基としては、カルボン酸、アルデヒド、ヒドロキシルおよびヒドロキシメチルが挙げられるが、これらに限定されない（反応式10）。
反応式10
【化１３】
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【０１４９】
カルボン酸基は、よく確立されたアミド結合形成条件下、種々のアミドの製造のために従来の取扱いを提供する（工程a）。ヒドロキシメチル基は、直接アルキル化してヘテロアルキル置換基をアニリンに付加するか（工程d）、またはアルデヒド（工程b）に酸化（例えばMnO2）する。次いで、アルデヒドは還元的アミノ化されてアニリン上にアミノメチル置換基を与える（工程c）。ヒドロキシル基はハロゲン化アルキルによりアルキル化されて、例えば非プロトン性溶媒中K2CO3、CsCO3、DBUまたはPS-DBUなど（これらに限定されない）の塩基性条件下、エーテルを生成する。同じ変換はまた、光延条件下（工程e）達成することもできる。ハロゲンまたはトリフレートのアミノ基への変換は、BuchwaldまたはUllmannアミノ化条件下、達成する（工程f）。アニリン合成を行い、中間体または最終生成物を送達することができることは当業者に明らかである。効率的な合成、合成可能性および便宜性は、合成の段階を最終的に決定する。
【０１５０】
上記多くの方法論はまた、(4-置換-チオフェン-2-イル)ピリミジン類似体など（これらに限定されない）の他のチオフェン位置異性体にも適用可能である。
【０１５１】
用語「保護基」は、化合物のいくつかのまたはすべての反応性部分をブロックし、保護基が除去されるまでそのような部分を化学反応への参加から防ぐ化学的部分を意味し、例えば文献（T.W. Greene, P.G.M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 3rd ed. John Wiley Sc Sons (1999)）に列挙され記載される部分である。異なる保護基を用いる場合、それぞれの（異なる）保護基が異なる手段により除去可能であることは好都合であることがある。全体的に異種の反応条件下にて開裂する保護基により、そのような保護基の異なった除去が可能となる。例えば保護基は酸分解、塩基分解および水素化分解により除去することができる。トリチル、ジメトキシトリチル、アセタールおよびtert-ブチルジメチルシリルなどの基は、酸不安定であり、Cbz基（水素化分解により除去可能である）またはFmoc基（塩基不安定である）で保護されたアミノ基の存在下カルボキシおよびヒドロキシ反応性部分を保護するために用いることができる。カルボン酸およびヒドロキシ反応性部分は、tert-ブチルカーバメートなどの酸不安定基または酸および塩基の両方に安定であるが加水分解で除去可能なカーバメートでブロックされたアミンの存在下、メチル、エチルおよびアセチルなど（これらに限定されない）の塩基不安定基でブロックすることができる。
【０１５２】
カルボン酸およびヒドロキシ反応性部分はまた、ベンジル基などの加水分解で除去可能な保護基でブロックすることもできるが、酸と水素結合可能なアミン基は、Fmocなどの塩基不安定基でブロックすることができる。カルボン酸反応性部分は、2,4-ジメトキシベンジルなどの酸化的に除去可能な保護基でブロックすることができるが、共存アミノ基はフッ化物不安定シリルカーバメートでブロックすることができる。
【０１５３】
アリル保護基は、酸および塩基保護基の存在下にて有用であり（前者が安定である）、次いで金属またはパイ(pi)-酸触媒により除去することができる。例えばアリル保護カルボン酸は、酸不安定t-ブチルカーバメートまたは塩基不安定酢酸アミン保護基の存在下にてパラジウム(0)触媒反応で脱保護することができる。保護基のさらなる別の形態は、化合物または中間体が結合することができる樹脂である。残基が樹脂に結合する限り、その官能基は保護され、反応することができない。樹脂から放出されると、官能基は反応することができる。
【０１５４】
典型的なブロック／保護基としては、以下の基：
【化１４】
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が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１５５】
キナーゼを阻害する方法
別の態様にて、本発明は、本発明のピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータを用いてタンパク質キナーゼ活性を調節する方法を提供する。本明細書において、用語「キナーゼ活性を調節する」は、本発明のピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータと接触させた場合、ピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータの非存在下の活性と比較してタンパク質キナーゼの活性が増大または減少することを意味する。それゆえ、本発明は、タンパク質キナーゼを本発明のピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータ（例えば式(I)のいずれかの化合物）と接触させることによりタンパク質キナーゼ活性を調節する方法を提供する。
【０１５６】
いくつかの具体的態様において、ピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータはキナーゼ活性を阻害する。本明細書において、キナーゼ活性に関して用語「阻害」は、ピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータと接触させた場合、ピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータの非存在下の活性と比較してキナーゼ活性が減少することを意味する。それゆえ、本発明はさらに、タンパク質キナーゼを本発明のピリミジニル-チオフェンキナーゼと接触させることによりタンパク質キナーゼ活性を阻害する方法を提供する。
【０１５７】
いくつかの具体的態様において、タンパク質キナーゼはタンパク質チロシンキナーゼである。本明細書において、タンパク質チロシンキナーゼは、タンパク質におけるチロシン残基のホスホリル化をリン酸供与体（例えばATPなどのヌクレオチドリン酸供与体）で触媒する酵素を意味する。タンパク質チロシンキナーゼとしては、例えばエイブルソンチロシンキナーゼ（「Abl」）（例えばc-Ablおよびv-Abl）、Ronレセプターチロシンキナーゼ（「RON」）、Metレセプターチロシンキナーゼ（「MET」）、Fms様チロシンキナーゼ（「FLT」）（例えばFLT3）、src-ファミリーチロシンキナーゼ（例えばlyn、CSK）およびp21-活性化キナーゼ-4（「PAK」）、FLT3、オーロラキナーゼ、B-リンパ球チロシンキナーゼ（「Blk」）、サイクリン依存性キナーゼ（「CDK」）（例えばCDK1およびCDK5）、src-ファミリー関連タンパク質チロシンキナーゼ（例えばFynキナーゼ）、グリコーゲンシンターゼキナーゼ（「GSK」）（例えばGSK3αおよびGSK3β）、リンパ球タンパク質チロシンキナーゼ（「Lck」）、リボソームS6キナーゼ（例えばRsk1、Rsk2およびRsk3）、spermチロシンキナーゼ（例えばYes）、およびチロシンキナーゼ活性を示すそのサブタイプおよび同族体が挙げられる。いくつかの具体的態様において、タンパク質チロシンキナーゼはAbl、RON、MET、PAKまたはFLT3である。他の具体的態様において、タンパク質チロシンキナーゼはFLT3またはAblファミリーメンバーである。いくつかの具体的態様において、タンパク質キナーゼマクロファージコロニー刺激因子レセプターキナーゼ（CSF1R）、造血細胞キナーゼ（HCK）、ヤヌスキナーゼ2（JAK2）、レセプターキナーゼを含むキナーゼ挿入ドメイン（KDR）、チロシンキナーゼレセプターC（TRKC）、焦点接着キナーゼ（FAK）、RETキナーゼ（RET）およびROS1キナーゼ（ROS1）が挙げられる。
【０１５８】
別の具体的態様において、キナーゼは変異Bcr-Ablキナーゼ、FLT3キナーゼまたはオーロラキナーゼなどの変異キナーゼである。
【０１５９】
いくつかの具体的態様において、キナーゼはオーロラキナーゼ、Metレセプターチロシンキナーゼ、CSF1R、HCK、JAK2、KDR、TRKC、FAK、RETおよびROS1から選択される。
【０１６０】
いくつかの具体的態様において、キナーゼは既知のキナーゼと同族である（本明細書にて「同種キナーゼ」とも称される）。同種キナーゼの生物学的活性を阻害するのに有用な化合物および組成物は、例えば結合アッセイにて初めにスクリーニングすることができる。同種酵素は、既知の全長キナーゼのアミノ酸配列と少なくとも50%、少なくとも60%、少なくとも70%、少なくとも80%もしくは少なくとも90%同一であるか、または既知のキナーゼ活性ドメインと70%、80%もしくは90%相同である、同一の長さのアミノ酸配列を含む。相同は、例えば文献（Altschul, et al., Nuc. Acids Rec. 25:3389-3402 (1997)）記載のものなど（これに限定されない）のPSI BLASTサーチを用いて決定することができる。いくつかの具体的態様において、配列の少なくとも50%または少なくとも70%はこの分析にて調整される。調整を行うための他のツールとしては、例えばDbClustalおよびESPriptが挙げられ、これらは調整のPostScript版を生成するために用いることができる。文献（Thompson et al., Nucleic Acids Research, 28:2919-26, 2000; Gouet, et al., Bioinformatics, 15:305-08 (1999)）を参照のこと。同族体は例えば、FLT3、Ablもしくは別の既知のキナーゼ、またはFLT3、Ablもしくは別の既知のキナーゼの任意の機能ドメインを有する少なくとも100のアミノ酸にわたり、1×10-6のBLAST E値を有することができる（Altschul et al., Nucleic Acids Res., 25:3389-402 (1997)）。
【０１６１】
相同性はまた、酵素の活性部位結合ポケットを既知のキナーゼの活性部位結合ポケットと比較することにより決定することもできる。例えば、相同酵素において、分子または同族体の少なくとも50%、60%、70%、80%または90%のアミノ酸は、約1.5Å、約1.25Å、約1Å、約0.75Å、約0.5Åおよび／または約0.25Åまでのアルファ炭素原子の標準偏差を有するキナーゼドメインの大きさに匹敵するドメインのアミノ酸構造配位を有する。
【０１６２】
本発明の化合物および組成物は、キナーゼ活性を阻害し、さらにATPを結合する他の酵素を阻害するのに有用である。従って、それらはそのようなATP-結合酵素活性を阻害することにより緩和することができる疾患および障害の治療に有用である。そのようなATP結合酵素を決定する方法は、当業者に知られているもの、相同酵素の選択に関する本明細書に記載のものおよびデータベースPROSITEの使用によるものを含み、ここに、シグネチャー、配列パターン、モチーフまたはタンパク質ファミリーもしくはドメインのプロファイルを含む酵素は同定することができる。
【０１６３】
本発明化合物およびその誘導体はまた、キナーゼ結合剤としても用いることができる。結合剤として、そのような化合物および誘導体は、親和性クロマトグラフィー適用のための連結基質として安定な樹脂に結合することができる。本発明化合物およびその誘導体はまた、酵素もしくはポリペプチド特徴付け、構造および／または機能の調査にてそれらを利用するために改変する（例えば放射性標識または親和性標識など）こともできる。
【０１６４】
典型的な具体的態様にて、本発明のピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータはキナーゼ阻害剤である。いくつかの具体的態様において、キナーゼ阻害剤は、1マイクロモル未満の阻害定数（Ki）のIC50を有する。別の具体的態様において、キナーゼ阻害剤は、500マイクロモル未満のIC50または阻害定数（Ki）を有する。別の具体的態様において、キナーゼ阻害剤は、10マイクロモル未満のIC50またはKiを有する。別の具体的態様において、キナーゼ阻害剤は、1マイクロモル未満のIC50またはKiを有する。別の具体的態様において、キナーゼ阻害剤は、500ナノモル未満のIC50またはKiを有する。別の具体的態様において、キナーゼ阻害剤は、10ナノモル未満のIC50またはKiを有する。別の具体的態様において、キナーゼ阻害剤は、1ナノモル未満のIC50またはKiを有する。
【０１６５】
治療方法
別の具体的態様において、本発明は、治療を必要とする対象（例えばヒトなどの哺乳動物）におけるキナーゼ活性（キナーゼ媒介疾患または障害）により媒介される疾患を治療する方法を提供する。「キナーゼ媒介」または「キナーゼ関連」疾患は、疾患または症状がキナーゼ活性を阻害することにより（例えばキナーゼがシグナリング、媒介、調節または疾患過程の調整に関与する場合）緩和することができる疾患を意味する。「疾患」は、疾患または疾患症状を意味する。方法は、有効量の本発明のピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータ（例えば式(I)のいずれかの化合物）を対象に投与することを含む。
【０１６６】
キナーゼ媒介疾患の例としては、癌（例えば白血病、腫瘍および転移）、アレルギー、喘息、肥満、炎症（例えば炎症性気道疾患などの炎症性疾患）、血液疾患、閉塞性気道疾患、喘息、自己免疫疾患、代謝性疾患、感染症（例えば細菌性、ウイルス性、酵母性、真菌性）、中枢神経系疾患、脳腫瘍、変性神経疾患、心疾患、および血管形成、血管新生および脈管形成と関連する疾患が挙げられる。典型的な具体的態様において、化合物は白血病、骨髄増殖症候群などの異常細胞増殖を含む他の疾患または障害などの癌を治療するために有用である。いくつかの具体的態様において、式(I)の化合物は対象に投与される。
【０１６７】
本発明化合物で治療される癌のより具体的な例としては、乳癌、肺癌、黒色腫、結腸直腸癌、膀胱癌、卵巣癌、前立腺癌、腎臓癌、扁平上皮細胞癌、膠芽細胞腫、膵臓癌、カポジ肉腫、多発性骨髄腫および白血病（例えば骨髄性、慢性骨髄性、急性リンパ性、慢性リンパ性、ホジキンズおよび他の白血病および血液癌）が挙げられる。いくつかの具体的態様において、癌は結腸癌、乳癌、膵臓癌、卵巣癌または胃癌である。
【０１６８】
本発明の化合物または組成物による治療が治療または予防に有用な疾患または障害の他の具体的な例としては、移植拒絶反応（例えば腎臓、肝臓、心臓、肺、島細胞、膵臓、骨髄、角膜、小腸、皮膚同種移植片または異種移植片および他の移植組織）、移植片対宿主病、変形性関節症、関節リウマチ、多発性硬化症、糖尿病、糖尿病性網膜症、炎症性大腸炎（例えばクローン病、潰瘍性大腸炎および他の腸疾患）、腎疾患、悪液質、敗血性ショック、狼瘡、重症筋無力症、乾癬、皮膚炎、湿疹、脂漏症、アルツハイマー病、パーキンソン病、化学療法中の幹細胞保護、自家骨髄移植または同種骨髄移植のための生体外選択または生体外パージ、眼疾患、網膜症（例えば黄斑変性症、糖尿病性網膜症および他の網膜症）、角膜疾患、緑内障、感染症（例えば細菌性、ウイルス性または真菌性）、再狭窄など（これに限定されない）の心臓病が挙げられるが、これらに限定されない。
【０１６９】
アッセイ
本発明化合物は、タンパク質キナーゼ、結合タンパク質キナーゼを調節しおよび／または細胞成長もしくは増殖を予防する能力を決定するために容易にアッセイすることができる。有用なアッセイのいくつかの例は以下に提示する。
【０１７０】
キナーゼ阻害および結合アッセイ
種々のキナーゼの阻害は、本明細書に記載の種々の方法および文献（Upstate KinaseProfiler Assay Protocols June 2003 publication）に記載の方法などの当業者に知られている方法により測定する。
【０１７１】
例えば、インビトロアッセイが行われる場合、キナーゼは典型的に適当な濃度に希釈されて、キナーゼ溶液を形成する。キナーゼ基質およびATPなどのリン酸供与体をキナーゼ溶液に加える。キナーゼはリン酸塩をキナーゼ基質に移して、ホスホリル化基質を形成することができる。ホスホリル化基質の形成は、放射能（例えば[γ-32P-ATP]）または検出可能な二次抗体（例えばELISA）の使用などの任意の適当な手段により直接検出することができる。あるいは、ホスホリル化基質の形成は、ATP濃度の検出などの任意の適当な技術（例えばキナーゼ-Glo（登録商標）アッセイ系（Promega））を用いて検出することができる。キナーゼ阻害剤は試験化合物の存在下および非存在下にてホスホリル化基質の形成を検出することにより同定する（以下の実施例項を参照のこと）。
【０１７２】
細胞におけるキナーゼを阻害する化合物の能力はまた、当業者によく知られている方法を用いてアッセイすることもできる。例えば、キナーゼを含む細胞は、キナーゼを活性化する活性化剤（成長因子など）と接触することができる。試験化合物の非存在下および存在下にて形成される細胞内ホスホリル化基質の量は、細胞を溶解し、任意の適当な方法（例えばELISA）によりホスホリル化基質の存在を検出することにより測定することができる。試験化合物の存在下にて生成するホスホリル化基質の量が試験化合物の非存在下にて生成する量に対して減少する場合、キナーゼ阻害を示唆している。より詳細な細胞キナーゼアッセイは以下の実施例項にて議論される。
【０１７３】
キナーゼへの化合物の結合を測定するために、当業者に知られている任意の方法を用いることができる。例えば、Discoverx (Fremont, CA), ED-スタウロスポリンNSIP（商標）酵素結合アッセイキットにより製造される試験キット（米国特許番号5,643,734を参照のこと）を用いることができる。キナーゼ活性はまた、2003年7月8日発行の米国特許6,589,950のようにアッセイすることもできる。
【０１７４】
適切なキナーゼ阻害剤は、例えばAntonysamyらのPCT公開番号WO03087816A1（これは、すべての目的のために本明細書にそのまま引用される）に開示されるタンパク質結晶学的スクリーニングを通して本発明化合物から選択することができる。
【０１７５】
本発明化合物はコンピュータでスクリーニングして、種々のキナーゼに結合しおよび／または阻害する能力をアッセイし視覚化することができる。複数の本発明化合物により構造をコンピュータでスクリーニングして、種々の部位にてキナーゼに結合する能力を測定することができる。そのような化合物は、医薬品化学努力における標的または先導として用いて、例えば有効な治療的重要性の阻害剤を同定することができる（Travis, Science, 262:1374, 1993）。そのような化合物の三次元構造を、キナーゼまたは活性部位またはその結合ポケットの三次元表示に重ね合わせて、化合物、従ってタンパク質がその表示に空間的に適合するか否かを分析することができる。このスクリーニングにて、そのような構成要素または化合物の結合ポケットへの適合の質は、形の相補性または推定の相互作用エネルギーにより判断することができる（Meng, et al., J. Comp. Chem. 13:505 24, 1992）。
【０１７６】
本発明によりキナーゼに結合しおよび／または調節する（例えばキナーゼを阻害するかまたは活性化する）本発明化合物のスクリーニングは一般に、二つの因子の考慮を含む。まず、化合物はキナーゼと共有的または非共有的に、物理的にかつ構造的に結合することができなければならない。例えば、共有的相互作用は、タンパク質の不可逆阻害剤または自殺型阻害剤を設計するのに重要であることができる。化合物とキナーゼの結合に重要な非共有的分子相互作用としては、水素結合、イオン性相互作用、ファンデルワールスおよび疎水性相互作用が挙げられる。第二に、化合物は、キナーゼと結合することができる結合ポケットに関するコンフォメーションおよび配向を推定することができなければならない。化合物の一部はこのキナーゼとの結合に直接関与しないが、分子の全体的なコンフォメーションにさらに影響し、有効性に有意な効果を有することができる。コンフォメーションの要件としては、すべてのもしくは一部の結合ポケットに関する化学基または化合物の三次元構造および配向、またはキナーゼと直接相互作用するいくつかの化学基を含む化合物の官能基間の空間が挙げられる。
【０１７７】
例えばDOCKまたはGOLDなどの本明細書に記載のドッキングプログラムを用いて、活性部位および／または結合ポケットに結合する化合物を同定する。化合物は、タンパク質の異なる分子動態コンフォメーションを考慮に入れて、タンパク質構造の２以上の結合ポケットまたは同じタンパク質についての２以上の配位に対してスクリーニングすることができる。次いで、一致したスコアリングを用いて、タンパク質についてのベストフィットである化合物を同定することができる（Charifson, P.S. et al., J. Med. Chem. 42: 5100-9 (1999)）。２以上のタンパク質分子構造から得られるデータはまた、2002年5月3日出願のKlinglerらの米国実用新案登録出願（タイトル「Computer Systems and Methods for Virtual Screening of Compounds」）に記載の方法によりスコアリングすることもできる。次いでベストフィットを有する化合物は、化学ライブラリーの生産者から得られるか、または合成し、結合アッセイおよびバイオアッセイに用いる。
【０１７８】
コンピュータモデリング法を用いて、化合物のキナーゼへの有効な調節効果または結合効果を評価することができる。コンピュータモデリングが強い相互作用を示す場合、分子を合成し、そのキナーゼに結合して活性に影響（阻害または活性化）する能力について試験することができる。
【０１７９】
キナーゼの調節または他の結合化合物は、化学基またはフラグメントをキナーゼの個別の結合ポケットまたは他の領域と結合する能力についてスクリーニングし選択する一連の工程を用いてコンピュータで評価することができる。この過程は、例えばキナーゼ配位に基づくコンピュータスクリーンの活性部位の視覚的検査により開始することができる。次いで、選択されたフラグメントまたは化学基は、種々の配向に位置するか、またはキナーゼの個別の結合ポケット内にて結合することができる（Blaney, J.M. and Dixon, J.S., Perspectives in Drug Discovery and Design, 1:301, 1993）。手動ドッキングは、Insight II（Accelrys, San Diego, CA）MOE（Chemical Computing Group, Inc., Montreal, Quebec, Canada）；およびSYBYL（Tripos, Inc., St. Louis, MO, 1992）などのソフトウエア、次いでエネルギー最小化および／またはCHARMM（Brooks, et al., J. Comp. Chem. 4:187-217, 1983）、AMBER（Weiner, et al., J. Am. Chem. Soc. 106: 765-84, 1984）およびC2 MMFF（Merck Molecular Force Field; Accelrys, San Diego, CA）などの標準的な分子構造力場を有する分子動態を用いて達成することができる。より自動化されたドッキングは、DOCK（Kuntz et al., J. Mol. Biol., 161:269 88, 1982；DOCKはカリフォルニア大, San Francisco, CAから入手可能である）；AUTODOCK（Goodsell＆Olsen, Proteins: Structure, Function, and Genetics 8:195 202, 1990；AUTODOCKはScripps Research Institute, La Jolla, CAから入手可能である）；GOLD（Cambridge Crystallographic Data Centre (CCDC)；Jones et al., J. Mol. Biol. 245:43-53, 1995)；およびFLEXX（Tripos, St. Louis, MO; Rarey, M., et al., J. Mol. Biol. 261:470-89, 1996）などのプログラムを用いることにより達成することができる。他の適当なプログラムは、例えばHalperinらの文献に記載されている。
【０１８０】
上記方法による化合物の選択中、その化合物がキナーゼに結合することができる効率は、コンピュータ評価により試験され最適化することができる。例えば、キナーゼ阻害剤として機能するために設計されるかまたは選択される化合物は、天然基質が結合する場合の活性部位残基により占められる容積と重複しない容積を占めることができるが、当業者は主鎖および側鎖の再配列を可能とするある程度の柔軟性があると認識するだろう。さらに、当業者は、例えば誘導適合をもたらす結合上にタンパク質再配列を活用することができる化合物を設計することができる。有効なキナーゼ阻害剤は、その結合および遊離状態の間のエネルギーにおける比較的小さい差を示すことができる（すなわち、それは結合の小変形エネルギーおよび／または結合上の低コンフォメーションひずみを有しなければならない）。従って、最も効率的なキナーゼ阻害剤は、例えば10 kcal/mol以下、7 kcal/mol以下、5 kcal/mol以下または2 kcal/mol以下の結合変形エネルギーで設計すべきである。キナーゼ阻害剤は、全体的な結合エネルギーが同様である２以上のコンフォメーションにてタンパク質と相互作用することができる。そのような場合、結合変形エネルギーは、阻害剤が酵素に結合する場合に観察される遊離化合物のエネルギーとコンフォメーションの平均的なエネルギーとの差とみなされる。
【０１８１】
具体的なコンピュータソフトウエアは、化合物変形エネルギーおよび静電相互作用を評価するために当分野にて入手可能である。そのような使用のために設計されるプログラムの例としては、Gaussian 94, revision C (Frisch, Gaussian, Inc., Pittsburgh, PA. 1995)；AMBER, version 7. (Kollman, University of California at San Francisco, 2002)；QUANTA/CHARMM (Accelrys, Inc., San Diego, CA, 1995)；Insight II/Discover (Accelrys, Inc., San Diego, CA, 1995)；DelPhi (Accelrys, Inc., San Diego, CA, 1995)；およびAMSOL (University of Minnesota) (Quantum Chemistry Program Exchange, Indiana University)が挙げられる。これらのプログラムは、例えば当業者によく知られているコンピュータ・ワークステーション、例えばLINUX、SGIまたはSunワークステーションを用いて実行することができる。他のハードウエアシステムおよびソフトウエアパッケージは当業者に知られているだろう。
【０１８２】
当業者は、当分野に知られている方法および本明細書に開示される方法を用いてキナーゼタンパク質を発現することができる。本明細書記載の天然および変異キナーゼポリペプチドは、当分野にてよく知られている技術を用いて全部または一部にて化学的に合成することができる（例えばCreighton, Proteins: Structures and Molecular Principles, W.H. Freeman＆Co., NY, 1983を参照のこと）。
【０１８３】
遺伝子発現系は、天然および変異ポリペプチドの合成のために用いることができる。当業者に知られている天然または変異ポリペプチドコード配列および適当な転写／翻訳制御シグナルを含む発現ベクターを構築することができる。これらの方法は、インビトロ組換えDNA技術、合成技術およびインビボ組換え／遺伝子組み換えを含む。例えば文献（Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, NY, 2001, and Ausubel et al., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates and Wiley Interscience, NY, 1989）記載の技術を参照のこと。
【０１８４】
ホスト発現ベクター系はキナーゼを用いて発現することができる。このようなものとしては、コード配列を含む組換えバクテリオファージDNA、プラスミドDNAまたはコスミドDNA発現ベクターで形質転換された細菌などの微生物；コード配列を含む組換え酵母発現ベクターで形質転換された酵母；コード配列を含む組換えウイルス発現ベクター（例えばバキュロウイルス）で感染させた昆虫細胞系；組換えウイルス発現ベクター（例えばカリフラワー・モザイク・ウイルス、CaMV；タバコモザイク・ウイルス、TMV）で感染させるか、またはコード配列を含む組換えプラスミド発現ベクター（例えばTiプラスミド）で形質転換された植物細胞系；または動物細胞系が挙げられるが、これらに限定されない。タンパク質はまた、例えば個体中のタンパク質の量を増加するかまたは改変治療タンパク質を発現するためのタンパク質を発現することを含む、ヒト遺伝子療法系にて発現することもできる。これらの系の発現要素は、その強度および特異性を変える。
【０１８５】
具体的に設計されたベクターは、細菌-酵母または細菌-動物細胞などのホスト間のDNAの往復を可能にする。適当に構築された発現ベクターは、ホスト細胞における自己複製のための複製の起源、１以上の選択可能なマーカー、限定数の有用な制限酵素部位、高コピー数についての可能性、および活性なプロモータを含むことができる。プロモータは、RNAポリメラーゼに向けたDNA配列として定義されて、DNAに結合し、RNA合成を開始する。強いプロモータは、高頻度にて開始されたmRNAをもたらす。
【０１８６】
発現ベクターはまた、例えば構成的および誘導プロモータなどの転写および翻訳に影響する種々の要素も含むことができる。これらの要素は、ホストおよび／またはベクター依存であることが多い。例えば細菌系にてクローニングされる場合、T7プロモータ、バクテリオファージλのpL、plac、ptrp、ptac（ptrp-lac複合プロモータ）などの誘導プロモータを用いることができ；昆虫細胞系にてクローニングされる場合、バキュロウイルスポリヘドリンプロモータなどのプロモータを用いることができ；植物細胞系にてクローニングされる場合、植物細胞のゲノム（例えば熱ショックプロモータ；RUBISCOの小サブユニットについてのプロモータ；クロロフィルa/b結合タンパク質についてのプロモータ）または植物ウイルス（例えばCaMVの35S RNAプロモータ；TMVの外皮タンパク質プロモータ）に由来するプロモータを用いることができ；哺乳類細胞系にてクローニングされる場合、哺乳類プロモータ（例えばメタロチオネインプロモータ）または哺乳類ウイルス性プロモータ（例えばアデノウイルス後期プロモータ；牛痘ウイルス7.5Kプロモータ；SV40プロモータ；ウシパピローマ・ウイルスプロモータ；およびエプスタイン・バー・ウイルスプロモータ）を用いることができる。
【０１８７】
種々の方法、例えば形質転換、トランスフェクション、感染、原形質融合およびエレクトロポレーションを用いて、ホスト細胞にベクターを導入することができる。発現ベクター含有細胞は、クローン増殖し、適当なポリペプチドを生産するか否かを決定するために個別に分析する。種々の選択方法、例えば抗生物質耐性を用いて、形質転換されたホスト細胞を同定することができる。ホスト細胞クローンを発現するポリペプチドの同定は、抗キナーゼ抗体との免疫学的反応およびホスト細胞関連活性の存在など（これらに限定されない）のいくつかの手段によりなすことができる。
【０１８８】
cDNAの発現はまた、インビトロで生成された合成mRNAを用いて行うこともできる。合成mRNAは、小麦胚芽抽出物および網状赤血球抽出液など（これらに限定されない）の種々の無細胞系にて効率的に翻訳することができ、ならびにカエル卵母細胞へのマイクロインジェクションなど（これに限定されない）の細胞ベース系にて効率的に翻訳することができる。
【０１８９】
最適なレベルの活性および／またはタンパク質を与えるcDNA配列を決定するために、改変cDNA分子を構築する。改変cDNAの非限定的な例は、cDNAが発現するようなホスト細胞についてcDNAにおけるコドン利用が最適化される場合である。ホスト細胞をcDNA分子で形質転換し、キナーゼRNAおよび／またはタンパク質のレベルを測定する。
【０１９０】
ホスト細胞におけるキナーゼタンパク質のレベルは、免疫親和性および／またはリガンド親和性技術などの種々の方法により定量化され、キナーゼ特異的親和性樹脂または特異的抗体を用いて35S-メチオニン標識または非標識タンパク質を単離する。標識または非標識タンパク質はSDS-PAGEにより分析する。非標識タンパク質は特異的抗体を用いたウエスタン・ブロッティング、ELISAまたはRIAにより検出する。
【０１９１】
組換えホスト細胞におけるキナーゼの発現の後、ポリペプチドを回収し、活性形態のタンパク質を提供することができる。いくつかの精製手順は使用のために利用可能であり、適切である。組換えキナーゼは、当分野にて知られている分画またはクロマトグラフィー工程の種々の組合せまたは個別適用により、細胞溶解物または条件付けされた培養培地から精製することができる。
【０１９２】
さらに、組換えキナーゼは、全長新生タンパク質またはそのポリペプチドフラグメントについて特異的なモノクローナルまたはポリクローナル抗体によりなされる免疫親和性カラムの使用により他の細胞タンパク質から分離することができる。当分野にて知られている他の親和性ベース精製法もまた用いることができる。
【０１９３】
あるいは、ポリペプチドは、変性不活性形態のホスト細胞、例えば細菌の封入体から回収することができる。この形態にて回収されるタンパク質は、変性剤、例えば塩酸グアニジニウムを用いて可溶化し、次いで透析などの当業者に知られている方法を用いて活性形態にリフォールディングすることができる。
【０１９４】
細胞成長アッセイ
種々の細胞成長アッセイは当分野にて知られており、細胞成長および／または増殖を阻害（例えば軽減）することができるピリミジニル-チオフェン化合物（すなわち「試験化合物」）を同定するのに有用である。
【０１９５】
例えば種々の細胞は、成長および／または増殖のための特異的なキナーゼを必要とすることが知られている。試験化合物の存在下そのような細胞の成長する能力を評価し、試験化合物の非存在下の成長と比較し、それにより試験化合物の抗増殖特性を同定することができる。このタイプの一つの一般的な方法は、分裂細胞のDNAへのトリチウム化チミジンなどの標識の取り込みの程度を測定することである。あるいは、細胞増殖の阻害は、細胞数と相互に関連する代理マーカーで細胞の全代謝活性を決定することにより評価することができる。細胞は、試験化合物の存在下および非存在下にて代謝指標で処理することができる。生存細胞は、代謝指標を代謝し、それにより検出可能な代謝生成物を形成する。検出可能な代謝生成物レベルが試験化合物の非存在下と比較して試験化合物の存在下にて減少する場合、細胞成長および／または増殖の阻害が示唆される。典型的な代謝指標としては、例えばテトラゾリウム塩およびAlamorBlue（登録商標）が挙げられる（以下の実施例項を参照のこと）。
【０１９６】
医薬組成物および投与
別の態様にて、本発明は、医薬的に許容される賦形剤とともにピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータを含む医薬組成物を提供する。当業者は、医薬組成物が上記ピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータの医薬的に許容される塩を含むことを認識するだろう。
【０１９７】
治療的および／または診断的適用にて、本発明化合物は全身および局所または限局性投与などの種々の投与形態のために製剤化することができる。技術および製剤化は一般に、文献（Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.) Lippincott, Williams＆Wilkins (2000)）にて見ることができる。
【０１９８】
本発明化合物は広範な投与量範囲にわたり有効である。例えば成人ヒトの治療において、0.01〜1000 mg、0.5〜100 mg、1〜50 mg／日および5〜40 mg／日の投与量は用いることができる投与量の例である。最も好ましい投与量は10〜30 mg／日である。正確な投与量は、投与経路、化合物が投与される形態、治療される対象、治療される対象の体重、および主治医の好みおよび経験に依存するだろう。
【０１９９】
医薬的に許容される塩は一般に、当業者によく知られており、一例として酢酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、ベシル酸塩、安息香酸塩、重炭酸塩、重酒石酸塩、臭化物塩、エデト酸カルシウム、カルンシレート（carnsylate）、炭酸塩、クエン酸塩、エデト酸塩、エジシル酸塩、エストル酸塩、エシル酸塩、フマル酸塩、グルセプト酸塩、グルコン酸塩、グルタミン酸塩、グリコリルアルサニレート、ヘキシルレゾルシン酸塩、ヒドラバミン、臭化水素酸塩、塩酸塩、ヒドロキシナフトエ酸塩、ヨウ化物塩、イセチオン酸塩、乳酸塩、ラクトビオン酸塩、リンゴ酸塩、マレイン酸塩、マンデル酸塩、メシル酸塩、ムケート、ナプシル酸塩、硝酸塩、パモ酸塩（エンボネート）、パントテン酸塩、リン酸塩／二リン酸塩、ポリガラクツロン酸塩、サリチル酸塩、ステアリン酸塩、塩基性酢酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、タンニン酸塩、酒石酸塩またはテオクル酸塩を挙げることができるが、これらに限定されない。他の医薬的に許容される塩は、例えば文献（Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.) Lippincott, Williams＆Wilkins (2000)）に見ることができる。好ましい医薬的に許容される塩としては、例えば酢酸塩、安息香酸塩、臭化物塩、炭酸塩、クエン酸塩、グルコン酸塩、臭化水素酸塩、塩酸塩、マレイン酸塩、メシル酸塩、ナプシル酸塩、パモ酸塩（エンボネート）、リン酸塩、サリチル酸塩、コハク酸塩、硫酸塩または酒石酸塩が挙げられる。
【０２００】
治療される具体的な条件に応じて、そのような薬剤を液体または固体剤形に製剤化し、全身または局所投与することができる。薬剤は当業者に知られているように、例えば徐放性または持続性低放出形態にて送達することができる。製剤化および投与についての技術は、文献（Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20th ed.) Lippincott, Williams＆Wilkins (2000)）に見ることができる。適切な経路としては、経口、口腔、吸入スプレー、舌下、直腸、経皮、膣内、経粘膜、経鼻または腸内投与；筋肉内、皮下、髄内注射ならびに髄腔内、直接心室内、静脈内、関節内、胸骨内、滑膜内、肝内、病巣内、頭蓋内、腹腔内、鼻腔内または眼球内注射などの非経口送達、または他の送達形態を挙げることができる。
【０２０１】
注射のために、本発明の薬剤は、ハンク溶液、リンゲル溶液または緩衝生理食塩水などの生理学的に混合可能な緩衝液などの水溶液にて製剤化および希釈することができる。そのような経粘膜投与について、透過すべき障壁に適当な透過剤を製剤化に用いる。そのような透過剤は一般に当分野に知られている。
【０２０２】
本発明の実践について開示される本明細書記載の化合物を全身投与に適切な投与量に製剤化するための医薬的に許容される不活性な担体の使用は、本発明の範囲内である。担体の適切な選択および適切な製造実践により、本発明の組成物、特に溶液として製剤化されるものは、静脈注射などにより非経口的に投与することができる。化合物は、当分野にてよく知られている医薬的に許容される担体を用いて、容易に経口投与に適切な投与量に製剤化することができる。そのような担体により、治療される対象（例えば患者）による経口摂取のための錠剤、丸剤、カプセル剤、液剤、ゲル剤、シロップ剤、スラリー、懸濁剤などとして本発明化合物を製剤化することができる。
【０２０３】
経鼻または吸入送達について、本発明の薬剤はまた、当業者に知られている方法により製剤化することもでき、例えば食塩水、ベンジルアルコールなどの保存剤、吸収促進剤およびフルオロカーボンなどの物質の可溶化、希釈または分散を挙げることができるが、これらに限定されない。
【０２０４】
本発明における使用に適切な医薬組成物は、有効成分を有効量にて含みその所望の目的を達成する組成物を含む。有効量の決定は、特に本明細書に提供される詳細な開示の観点から、十分に当業者の能力の範囲内である。
【０２０５】
有効成分に加えて、これらの医薬組成物は、活性化合物の加工を促進する賦形剤および助剤を含む適切な医薬的に許容される担体を医薬的に用いることができる製剤に含むことができる。経口投与のために製剤化される製剤は、錠剤、糖衣錠、カプセル剤または溶液剤の形態であることができる。
【０２０６】
経口使用のための医薬製剤は、活性化合物を固体賦形剤と混合し、適宜得られた混合物をすりつぶしてもよく、適切な助剤を加えた後、顆粒混合物を処理して、所望ならば錠剤または糖衣錠コアを得ることにより得ることができる。適切な賦形剤は、特にラクトース、スクロース、マンニトールまたはソルビトールなどの糖；セルロース製剤、例えばトウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、ジャガイモデンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル-セルロース、カルボキシメチル-セルロースナトリウム（CMC）および／またはポリビニルピロリドン（PVP：ポビドン）などの充填剤である。所望ならば、架橋ポリビニルピロリドン、寒天もしくはアルギン酸またはアルギン酸ナトリウムなどのその塩などの崩壊剤を加えることができる。
【０２０７】
糖衣錠コアは適切なコーティングを提供する。この目的のために、濃縮糖溶液を用いることができ、これは適宜アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール（PEG）および／または二酸化チタン、ラッカー溶液および適切な有機溶媒または溶媒混合物を含んでもよい。同定または異なる組合せの活性化合物の用量を特徴付けるために、染料または色素を錠剤または糖衣錠コーティングに加えることができる。
【０２０８】
経口的に用いることができる医薬製剤は、ゼラチンで作られた押し込み型カプセルならびにゼラチンで作られた軟密閉カプセルおよびグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤を含む。押し込み型カプセルは、ラクトースなどの充填剤、デンプンなどの結合剤および／またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、適宜安定剤とともに有効成分を含むことができる。軟カプセルにて、活性化合物は油脂、液体パラフィンまたは液体ポリエチレングリコール（PEG）などの適切な液体中に溶解するか、または懸濁することができる。さらに、安定剤を加えることができる。
【０２０９】
治療または予防される特定の病態または疾患状態に応じて、その病態を治療または予防するために通常投与されるさらなる治療剤を本発明の阻害剤と一緒に投与することができる。例えば化学療法剤または他の抗増殖剤は、本発明の阻害剤と混合して増殖性疾患および癌を治療することができる。既知の化学療法剤の例としては、アドリアマイシン、デキサメタゾン、ビンクリスチン、シクロホスファミド、フルオロウラシル、トポテカン、タキソール、インターフェロンおよび白金誘導体が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１０】
本発明の阻害剤と混合することができる他の薬剤の例としてはまた、コルチコステロイド、TNF遮断剤、IL-1 RA、アザチオプリン、シクロホスファミドおよびスルファサラジンなどの抗炎症剤；シクロスポリン、タクロリムス、ラパマイシン、ミコフェノール酸モフェチル、インターフェロン、コルチコステロイド、シクロホスファミド、アザチオプリンおよびスルファサラジンなどの免疫調節剤および免疫抑制剤；アセチルコリンエステラーゼ阻害剤、MAO阻害剤、インターフェロン、抗痙攣薬、イオンチャネル遮断薬、リルゾールおよび抗パーキンソン病薬などの神経栄養因子；ベータ遮断薬、ACE阻害剤、利尿薬、硝酸塩、カルシウムチャネル遮断薬およびスタチンなどの心疾患の治療剤；コルチコステロイド、コレスチラミン、インターフェロンおよび抗ウイルス剤などの肝疾患の治療剤；コルチコステロイド、抗白血病薬および成長因子などの血液疾患の治療剤；インスリン、インスリン類似体、アルファグルコシダーゼ阻害剤、ビグアニドおよびインスリン抵抗性改善薬などの糖尿病の治療剤；およびガンマグロブリンなどの免疫不全障害の治療剤が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２１１】
これらの添加剤は、複数回用量の一部として、阻害剤含有組成物と別に投与することができる。あるいは、これらの薬剤は単一剤形の一部であり、単一組成物中にて阻害剤と一緒に混合することができる。
【０２１２】
本発明は、例示の具体的態様による範囲に限定されるものではなく、これは本発明の一態様の説明として意図される。実際に、本明細書記載のものに加えて本発明の種々の改変は、上記記載から当業者に明らかとなるだろう。そのような改変は、本発明の範囲内に含まれるものである。さらに、本発明のいずれの具体的態様のいずれの１以上の特徴も、本発明の範囲から逸脱しないで、本発明のいずれの他の具体的態様のいずれの１以上の他の特徴とも組み合わせることができる。例えば、ピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータ項に記載のピリミジニル-チオフェンキナーゼモジュレータは、本明細書に記載の治療方法およびキナーゼを阻害する方法に同様に適用可能である。この出願を通して引用される参考文献は、当業者のレベルの例であり、先に具体的に組み込まれているか否かにかかわらず、すべての目的のために本明細書にそのまま引用される。
【実施例】
【０２１３】
実施例１：化合物製造
方法１：
【化１５】
2009519218.tif 000017
工程１：5-(2-メチルスルファニル-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-スルホン酸ジメチルアミドの合成
5-(2-メチルスルファニル-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-スルホニルクロリド200 mg（0.652 mmol）のDCM溶液6 mLをピリジン0.078 mL（0.97 mmol）および2Mジメチルアミン／THF 0.485 mL（0.97 mmol）で処理した。溶液を終夜撹拌した。さらに2Mジメチルアミン／THF 0.400 mL（0.8 mmol）を加え、反応物を終夜撹拌した。混合物はLCMSにより出発物質を＜5%含む。混合物を2X 1 N HCl、1X食塩水で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。5-(2-メチルスルファニル-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-スルホン酸ジメチルアミド154 mg（74.9%）をLCMSにより＞95%純度で灰白色固体として得た。この物質を次の工程に進めた。
MS: m/z 316 (M+H+).
【０２１４】
工程２：5-(2-メタンスルホニル-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-スルホン酸ジメチルアミドの合成
2 mL CH2Cl2に溶解した5-(2-メチルスルファニル-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-スルホン酸ジメチルアミド154 mg（0.488 mmol）の溶液を氷浴中にて冷却した。m-CPBA 269 mg（1.74 mmol）のCH2Cl2溶液2.0 mLを〜2分かけて添加漏斗により加えた。30分後、白色スラリーを氷浴から取り出した。室温にて45分後、混合物を飽和水性NaHCO3（2X）、食塩水（1X）で洗浄し、Na2SO4で乾燥した。有機層を減圧濃縮し、油状物をEt2Oでトリチュレーションし、5-(2-メタンスルホニル-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-スルホン酸ジメチルアミド125.8 mg（74.2%）を得た。物質はLCMSにより＞95%純度であり、次の工程に進めた。
MS: m/z 348 (M+H+).
【０２１５】
工程３：5-{2-[3-(1-ヒドロキシエチル)フェニルアミノ]ピリミジン-4-イル}チオフェン-2-スルホン酸ジメチルアミドの合成
5-(2-メタンスルホニル-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-スルホン酸ジメチルアミド19.8 mg（0.057 mmol）、1-(3-アミノフェニル)エタノール11.7 mg（0.085 mmol）およびトリフルオロ酢酸6.5 uL（0.085 mmol）をDMSO（0.5 M）中にて混合し、混合物を100℃にて16時間キャップしたバイアル中にて加熱した。暗色溶液をDMSOで希釈し、分取用LCにより精製した。5-{2-[3-(1-ヒドロキシエチル)フェニルアミノ]ピリミジン-4-イル}チオフェン-2-スルホン酸ジメチルアミド14.4 mg（62.6%）を凍結乾燥後、茶色固体として得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ1.35 (d, J = 6 Hz, 3H), 2.70 (s, 6H), 4.70 (m, 1H), 5.12 (d, J = 4 Hz, 1H), 6.97 (br d, J = 7 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.46 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.49 (br d, J = 6.5 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 4 Hz,  1H), 7.91 (br s, 1H), 8.12 (d, J = 4 Hz, 1H), 8.58 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 9.75 (s, 1H).  MS: m/z 405 (M+H+).
【０２１６】
第１表
方法１により製造した他の化合物：
【表１−１】
2009519218.tif 000018
【０２１７】
【表１−２】
2009519218.tif 000019
【０２１８】
【表１−３】
2009519218.tif 000020
【０２１９】
【表１−４】
2009519218.tif 000021
【０２２０】
【表１−５】
2009519218.tif 000022
【０２２１】
【表１−６】
2009519218.tif 000023
【０２２２】
方法２：
【化１６】
2009519218.tif 000024
【０２２３】
方法１：4-(5-ブロモチオフェン-2-イル)-2-メチルスルファニル-ピリミジンの合成
4-(5-ブロモチオフェン-2-イル)ピリミジンチオール2.5 g（9.15 mmol）をDI水14.8 mLおよび4 N NaOH 2.4 mLに完全に溶解した。混合物をEtOH 25 mLで希釈し、MeI 0.598 mL（9.61 mmol）を加えた。反応物を18時間撹拌した。黄色固体をろ過により集め、EtOHで洗浄し、乾燥して4-(5-ブロモチオフェン-2-イル)-2-メチルスルファニル-ピリミジン2.32g（88.6%）を薄黄色固体として得た。
MS: m/z 287 (M+H+).
【０２２４】
工程２：4-(5-ブロモチオフェン-2-イル)-2-メチルスルホニル-ピリミジンの合成
4-(5-ブロモチオフェン-2-イル)-2-メチルスルファニル-ピリミジン2.32g（8.08 mmol）をDCM 40 mLに溶解し、氷水浴中にて冷却した。m-CPBA 4.88 g（28.3 mmol）のDCM 40 mL溶液を添加漏斗により滴加した。1時間後、混合物をろ過し、DCMを飽和NaHCO3（2X）および食塩水（1X）で洗浄した。溶液をNa2SO4で乾燥し、濃縮して乾燥した。物質をEtOAcでトリチュレーションし、4-(5-ブロモチオフェン-2-イル)-2-メチルスルホニル-ピリミジンを明黄色固体（999 mg, 38.7%）として得た。
MS: m/z 319 (M+H+).
【０２２５】
工程３：1-{3-[4-(5-ブロモチオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イルアミノ]フェニル}エタノールを方法1工程3の手順により製造した。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ1.34 (d, J = 6 Hz, 3H), 4.69 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 5.13 (br s, 1H), 6.95 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.22 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.31 (d, J = 5 Hz, 1H) 7.36 (d,  J = 3.5 Hz, 1H), 7.56 (d,  J = 8 Hz, 1H), 7.80 (br t, H), 7.84 (d, J = 4 Hz, 1H), 8.48 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 9.63 (s, 1H). MS: m/z 376 (M+H+).
【０２２６】
第２表
方法２により製造された他の化合物：
【表２−１】
2009519218.tif 000025
【０２２７】
【表２−２】
2009519218.tif 000026
【０２２８】
【表２−３】
2009519218.tif 000027
【０２２９】
【表２−４】
2009519218.tif 000028
【０２３０】
方法３：
【化１７】
2009519218.tif 000029
【０２３１】
工程１：5-(3-ジメチルアミノ-アクリロイル)チオフェン-2-カルボン酸の合成
5-アセチル-チオフェン-2-カルボン酸1 g（5.87 mmol）をN,N-ジメチルホルムアミドジメチルアセタール10 mLで処理し、120℃にて16時間加熱した。混合物を減圧乾燥し、5-(3-ジメチルアミノ-アクリロイル)チオフェン-2-カルボン酸を得、これを次の工程に進めた。
MS: m/z 226 (M+H+).
【０２３２】
工程２：5-(2-m-トリルアミノ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-カルボン酸の合成
5-(3-ジメチルアミノ-アクリロイル)チオフェン-2-カルボン酸200 mg（0.888 mmol）、N-m-トリルグアニジン71.1 mg（1.77 mmol）およびNaOH 264 mg（1.77 mmol）を2-メトキシエタノール2 mLに溶解し、100℃にて48時間加熱した。冷却後、反応物を10%クエン酸水溶液で希釈し、固体をろ過により集めた。固体を水およびEt2Oで洗浄し、乾燥し、5-(2-m-トリルアミノ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-カルボン酸149 mg（53.8 %）を黄色固体として得た。
MS: m/z 312 (M+H+).
【０２３３】
工程３：5-(2-m-トリルアミノ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-カルボン酸ベンジルアミドの合成
5-(2-m-トリルアミノ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-カルボン酸20 mg（0.058 mmol）、ベンジルアミン9.5 uL（0.087 mmol）、DIEA 30.3 uL（0.174 mmol）およびHATU 33 mg（0.087 mmol）をスミス・マイクロウェーブ・バイアル（0.2〜5.0 mL）中のDMA 0.5 mL中にて混合し、混合物を90℃にて900秒間マイクロウェーブにより加熱した。混合物をDMSOで1 mLに希釈し、分取用HPLCにより精製した。5-(2-m-トリルアミノ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-カルボン酸ベンジルアミド14.7 mg（59%収率）を凍結乾燥後、黄色綿状固体として得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ2.61 (t, J =  7 Hz, 2H), 3.51 (m, 2H), 4.412 (d, J = 6 Hz, 2H), 4.55 (t, J =  5 Hz, 1H), 7.08, (d, J =  9 Hz, 2H), 7.19 (m, 2H), 7.26-7.28 (m, 5H), 7.62 (d, J = 9 Hz, 2H), 7.79 (d, J =  4 Hz, 1H), 7.92 (d, J =  4 Hz, 1H), 8.44 (d,  J = 5 Hz, 1H), 9.15 (t, 1H), 9.55 (s, 1H). MS: m/z 431 (M+H+).
【０２３４】
第３表
方法３により製造される他の化合物：
【表３−１】
2009519218.tif 000030
【０２３５】
【表３−２】
2009519218.tif 000031
【０２３６】
【表３−３】
2009519218.tif 000032
【０２３７】
【表３−４】
2009519218.tif 000033
【０２３８】
【表３−５】
2009519218.tif 000034
【０２３９】
【表３−６】
2009519218.tif 000035
【０２４０】
【表３−７】
2009519218.tif 000036
【０２４１】
【表３−８】
2009519218.tif 000037
【０２４２】
【表３−９】
2009519218.tif 000038
【０２４３】
方法４：
【化１８】
2009519218.tif 000039
【０２４４】
工程１：[5-(2-m-トリルアミノ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-イル]カルバミン酸tert-ブチルエステルの合成
5-(2-m-トリルアミノ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-カルボン酸200 mg（0.643 mmol）をジフェニルホスホリルアジド277 uL（1.28 mmol）およびt-BuOH 4 mL中のトリエチルアミン180 uL（1.28 mmol）で100℃にて7時間処理した。反応物を室温まで冷却し、減圧濃縮し、SiO2クロマトグラフィー（25分かけて0〜50% B；ヘキサン／EtOAc）により精製し、[5-(2-m-トリルアミノ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-イル]カルバミン酸tert-ブチルエステル101.8 mg（41.1%）を得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ1.49 (s, 9H), 2.32 (s, 3H), 6.57 (d, J =  4 Hz, 1H), 6.75 (d, J =  8 Hz, 1H), 7.13 (t, J =  8 Hz,  1H), 7.14 (d, J =  5 Hz, 1H), 7.47 (br m, 1H), 7.68 (d, J =  4 Hz, 1H), 7.83 (br s, 1H), 8.32 (d, J =  5 Hz, 1H), 9.42 (s, 1H), 10.8 (br s, 1H). MS: m/z 383 (M+H+).
【０２４５】
工程２：メチル-[5-(2-m-トリルアミノ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-イル]カルバミン酸tert-ブチルエステルの合成
水素化ナトリウム（鉱油中60%ディスパージョン）21.4 mg（0.535 mmol）を[5-(2-m-トリルアミノ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-イル]カルバミン酸tert-ブチルエステル186 mg（0.486 mmol）の無水THF 5 mL溶液に氷浴温度にて加えた。15分後、MeIを加え、混合物を氷浴から取り出した。さらにNaH 7.7 mg（0.19 mmol）およびMeI 9.0 uL（0.145 mmol）を5時間後に加え、反応物を3日間撹拌した。水数滴を加えて反応停止処理をし、濃縮して乾燥し、さらに精製しないで次の工程に進めた。
MS: m/z 397 (M+H+).
【０２４６】
工程３：[4-(5-アミノチオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イル]-m-トリル-アミンの合成
[5-(2-m-トリルアミノ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-イル]カルバミン酸tert-ブチルエステルを1,4-ジオキサン中の4 N HClで6時間またはDCM中の20% TFAで2時間処理した。溶液を減圧乾燥し、[4-(5-アミノチオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イル]-m-トリル-アミンHCl塩を得た。アミン塩もまた、HCl／ジオキサン溶液でふいて乾かし、EtOAcに再溶解させ、飽和NaHCO3（2X）および食塩水（1X）で洗浄し、Na2SO4で乾燥することにより中和した。濃縮し、再溶解し、DCMで2X乾燥し、橙色泡状物[4-(5-アミノチオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イル]-m-トリル-アミン（定量的）を得た。
MS: m/z 283 (M+H+).
【０２４７】
工程4a：N-[5-(2-m-トリルアミノ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-イル]プロピオンアミド（R' = Et）の合成（酸塩化物法）
プロピオニルクロリド4.85 uL（0.055 mmol）のDCM 100 uL溶液を[4-(5-アミノチオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イル]-m-トリル-アミンTFA塩20 mg（0.050 mmol）のDCM溶液400 uLを滴加し、次いでピリジン8.9 uL（0.11 mmol）を加えた。16時間後、反応物をDMSOで希釈し、分取精製し、N-[5-(2-m-トリルアミノ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-イル]プロピオンアミド6.7 mg（39.6%）を得た。主な不純物はTFAアミドであった。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ1.11 (t, J = 7 Hz, 3H), 2.33 (s, 3H), 2.38 (q, J = 7 Hz, 2H), 6.69 (d, J = 4 Hz, 1H), 6.75 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.12 (t, J = 8 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.81 (s, 1H), 8.33 (d, J = 5.5 Hz,  1H), 9.44 (s, 1H), 11.38 (s, 1H). MS: m/z 339 (M+H+). 
【０２４８】
工程4b：N-[5-(2-m-トリルアミノ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-イル]ベンズアミド（R' = Ph）の合成（カルボン酸法）
安息香酸5.2 mg（0.042 mmol）、[4-(5-アミノチオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イル]-m-トリル-アミン10 mg（0.035 mmol）、DMAP 4.2 mg（0.035 mmol）およびHATU 15.9 mg（0.042 mmol）を400 uL DMF中にて混合し、溶液をホットプレート上で蓋をしたバイアル中70℃にて加熱した。16時間後、混合物をDMSOで希釈し、分取精製し、N-[5-(2-m-トリルアミノ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-イル]ベンズアミド3.0 mg（22%）を得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ1.29 (s, 3H), 6.70 (d, J =7.5 Hz, 1H), 6.93 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.10 (t, J = 8 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.51 (m, 2H), 7.58 (m, 1H), 7.74 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.95 (m, 2H), 8.31 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 9.42 (s, 1H). MS: m/z 387 (M+H+). 
【０２４９】
方法５：
【化１９】
2009519218.tif 000040
【０２５０】
工程１：1-(3-{4-[5-(2,6-ジメチルフェニル)チオフェン-2-イル]ピリミジン-2-イルアミノ}フェニルエタノールの合成
1-{3-[4-(5-ブロモチオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イルアミノ]フェニル}エタノール15 mg（0.04 mmol）、2,6-ジメチルフェニルボロン酸7.2 mg（0.048 mmol）およびPdCl2(dppf)2 1.6 mg（0.002 mmol）をスミス・マイクロウェーブ・バイアル（0.2〜5.0 mL）中、脱気したDMA 300 uLおよび2 M Na2CO3 250 uL中にて混合した。混合物に165℃にて900秒間電磁波を当てた。混合物をDMSO 500 uLで希釈し、分取用HPLCで直接精製し、1-(3-{4-[5-(2,6-ジメチルフェニル)チオフェン-2-イル]ピリミジン-2-イルアミノ}フェニルエタノール4.9 mg（30%収率）を得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ1.29 (d, J = 6.5 Hz, 3H), 2.14 (s, 6H), 4.64 (m, 1H), 5.07 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 6.91 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.16-7.25 (m, 4H), 7.35 (d, J =  5 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.84 (br t, 1H), 8.03 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 8.48 (d, J = 5 Hz, 1H), 9.58 (s, 1H). MS: m/z 402 (M+H+).
【０２５１】
第４表
方法５により製造される他の化合物：
【表４−１】
2009519218.tif 000041
【０２５２】
【表４−２】
2009519218.tif 000042
【０２５３】
【表４−３】
2009519218.tif 000043
【０２５４】
【表４−４】
2009519218.tif 000044
【０２５５】
方法６：
【化２０】
2009519218.tif 000045
【０２５６】
工程１：{3-[4-(5-ブロモ-チオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イルアミノ}フェニル}-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)メタノンの合成
方法２工程３で製造した3-[4-(5-ブロモ-チオフェン-2-イルアミノ]安息香酸20 mg（0.048 mmol）および3-アミノ安息香酸をN-メチルピペラジン8.1 uL（0.073 mmol）、DIEA 29.2 uL（0.168 mmol）およびHATU 27.7 mg（0.073 mmol）とスミス・マイクロウェーブ・バイアル（0.2〜5.0 mL）中DMA 0.5 mL中にて混合した。混合物に90℃にて900秒間電磁波を当てた。溶液をDMSO 0.5 mLで希釈し、分取用HPLCで精製し、{3-[4-(5-ブロモ-チオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イルアミノ}フェニル}-(4-メチル-ピペラジン-1-イル)メタノン17.8 mg（79.1%）を凍結乾燥後得た。
MS: m/z 458 (M+H+).
【０２５７】
第５表
方法６により製造される他の化合物：
【表５−１】
2009519218.tif 000046
【０２５８】
【表５−２】
2009519218.tif 000047
【０２５９】
方法７：
【化２１】
2009519218.tif 000048
【０２６０】
工程１：(4-(4-(5-ブロモチオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イルアミノ)フェニル)(4-(2-(ジメチルアミノ)エチル)ピペラジン-1-イル)メタノンの合成
4-[4-(5-ブロモ-チオフェン-2-イルアミノ]安息香酸30 mg（0.080 mmol）（方法２工程３を参照のこと）をN,N-ジメチル-2-(ピペラジン-1-イル)エタンアミン12.5 mg（0.080 mmol）、DIEA 20.6 mg（0.16 mmol）およびHATU 30.3 mg（0.080 mmol）とスミス・マイクロウェーブ・バイアル（0.2〜5.0 mL）中DMF 0.5 mL中にて混合した。混合物に90℃にて1800秒間照射した。次いで反応混合物を飽和NaHCO3で希釈し、酢酸エチルで抽出した。有機層を集め、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過し、濃縮して乾燥した。次いで粗生成物をシリカゲルクロマトグラフィーにより精製し、(4-(4-(5-ブロモチオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イルアミノ)フェニル)(4-(2-(ジメチルアミノ)エチル)ピペラジン-1-イル)メタノン25.9 mg（63%収率）を明黄色固体として得た。
1H NMR (500 MHz, CD3OD) δ2.27 (s, 6H), 2.53 (m, 8H), 3.60 (br, 2H), 3.75 (br, 2H), 7.15 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.16 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 7.61 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.84 (d, J = 9.0 Hz, 2H), 8.40 (d, J = 5.5 Hz, 1H).  MS: m/z 515.1/517.1 (M+H+).
【０２６１】
第６表
方法７により製造される他の化合物：
【表６−１】
2009519218.tif 000049
【０２６２】
【表６−２】
2009519218.tif 000050
【０２６３】
【表６−３】
2009519218.tif 000051
【０２６４】
【表６−４】
2009519218.tif 000052
【０２６５】
方法８：
【化２２】
2009519218.tif 000053
【０２６６】
工程１：1-(3-{4-[5-(2-m-トリル-ビニル)チオフェン-2-イル]ピリミジン-2-イルアミノ}フェニル)エタノールの合成
1-{3-[4-(5-ブロモチオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イルアミノ]フェニル}エタノール20 mg（0.056 mmol）、3-メチルスチレン22 uL（0.168 mmol）、FibreCat1001 12 mg（0.0056 mmol）およびNaOAc 9.2 mg（0.112 mmol）を脱気した8 mLガラスバイアル中DMF 0.5 mL中にて混合した。反応物を100℃にて18時間加熱した。混合物をDMSOで希釈し、ろ過し、分取用LCMSにより精製し、1-(3-{4-[5-(2-m-トリル-ビニル)チオフェン-2-イル]ピリミジン-2-イルアミノ}フェニル)エタノール1.0 mg（4.3%）を得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ1.35 (d, J = 6 Hz, 3H), 2.27 (s, 3H), 4.68 (q, J = 6 Hz, 1H), 5.12 (br s, 1H), 6.90 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 16.5 Hz, 1H), 7.05 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.18-7.26 (m, 3H), 7.32 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.38 (Br s, 1H), 7.41 (d, J = 16 Hz, 1H), 7.50 (dd, J = 1.5 Hz, J = 8.5 Hz, 1H), 7.87 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.92 (br s, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.40 (d, J = 5 Hz, 1H), 9.57 (s, 1H). MS: m/z 414 (M+H+).
【０２６７】
第７表
方法８により製造される他の化合物：
【表７】
2009519218.tif 000054
【０２６８】
方法９：
【化２３】
2009519218.tif 000055
【０２６９】
工程１：ビス-5-(2-メチルスルファニル-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-スルホニル亜鉛の合成
亜鉛末106.5 mg（1.63 mmol）をTHF/H2O（2:1, 7.5 mL）中にて15分間超音波を当て、5-(2-メチルスルファニル-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-スルホニルクロリド500 mg（1.63 mmol）を固体としてすぐにすべて加えた。22時間後、混合物を四分の一の容積まで濃縮し、沈殿物が形成された。水を加え、懸濁物に1分間超音波を当てた。固体をろ過により集め、水で洗浄し、減圧乾燥し、ビス-5-(2-メチルスルファニル-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-スルホニル亜鉛を明黄色固体（1.3 g, ＞100%）として得た。この物質を次の工程にて用いた。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ2.52 (s, 3H), 7.15 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.88 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 8.54 (d, J = 5.5 Hz, 1H).
【０２７０】
工程２：2-メチルスルファニル-4-(5-フェニルメタンスルホニル-チオフェン-2-イル)ピリミジン合成
臭化ベンジル30.9 uL（0.180 mmol）をTHF 3 mLおよびH2O 1.5 mLに溶解したビス-5-(2-メチルスルファニル-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-スルホニル亜鉛の溶液に加えた。混合物を70℃まで加熱した。12時間後、混合物を室温まで冷却し、EtOAcおよび水で希釈し、層を分離した。物質をカラムクロマトグラフィー（EtOAc/Hex, 勾配0〜80%B）により精製し、2-メチルスルファニル-4-(5-フェニルメタンスルホニル-チオフェン-2-イル)ピリミジン7.1 mg（23.9%）を得た。
MS: m/z 363 (M+H+).
【０２７１】
工程３：2-メタンスルホニル-4-(5-フェニルメタンスルホニル-チオフェン-2-イル)ピリミジンの合成は、生成物をSi-CO3に通してろ過し、残存するm-CPBA/BAを除去することを除き、方法１工程２により製造した。
MS: m/z 395 (M+H+).
【０２７２】
工程４：1-{3-[4-(5-フェニルメタンスルホニル-チオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イルアミノ]フェニル}エタノールの合成は方法１工程３により製造した。
1H NMR (500 MHz, DCCl3) δ1.55 (d, J = 6 Hz, 3H), 2.64 (s, 2H), 4.47 (s, 1H), 4.96 (q, J = 6 Hz, 1H), 7.07 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.16-7.21 (m, 2H), 7.30-7.40 (m, 5H), 7.52 (br d, J = 10 Hz, 1H), 7.62 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.76 (br s, 1H), 8.04 (s, 1H), 8.38 (d, J = 5.5 Hz, 1H). MS: m/z 452 (M+H+).
【０２７３】
第８表
方法９により製造される他の化合物：
【表８】
2009519218.tif 000056
【０２７４】
方法１０：
【化２４】
2009519218.tif 000057
【０２７５】
工程１：(4-{5-[(ピリジン-2-イルメチル)アミノ]チオフェン-2-イル}ピリミジン-2-イル)-m-トリル-アミンの合成
[4-(5-アミノチオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イル]-m-トリル-アミン（方法４により製造した）15 mg（0.053 mmol）およびピリジン-2-カルバルデヒド4.5 uL（0.048 mmol）の溶液をHOAcのDMA 0.5 mL中の25%溶液に溶解した。MP-CNBH3樹脂（2.5当量）を2時間後に加え、反応物を18時間振盪した。反応物をろ過し、樹脂をDMAで洗浄した。粗製の混合物を分取用LCMSで精製し、11.1 mg（61.2%）を得た。
MS: m/z 374 (M+H+). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ2.26 (s, 3H), 4.42 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 5.96 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 6.72 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 6.986 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.10 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.27 (m, 1H), 7.38 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 4.0 Hz, 1H), 7.73 (br s, 1H), 7.76 (m, 1H), 7.81 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 8.16 (d, J = 6.0 Hz, 1H), 8.53 (br dd, J = 4.5 Hz, 1H), 9.24 (s, 1H).
【０２７６】
第９表
方法１０により製造される他の化合物：
【表９】
2009519218.tif 000058
【０２７７】
方法１１：
【化２５】
2009519218.tif 000059
【０２７８】
工程１：(2-オキソ-プロピル)-[5-(2-m-トリルアミノ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-イル]カルバミン酸tert-ブチルエステルの合成
[5-(2-m-トリルアミノ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-イル]カルバミン酸tert-ブチルエステル30 mg（0.078 mmol）をDMF 0.8 mLに溶解し、60% NaH 4.7 mg（0.117 mmol）を加えた。8分後、KI 12.9 mg（0.078 mmol）およびクロロアセトン9.4 uL（0.117 mmol）を加え、反応物を60℃まで15時間加熱した。反応物は〜60%変換し、さらに60% NaHのアリコート3.1 mg（0.078 mmol）およびクロロアセトン6.2 uL（0.078 mmol）を加え、反応物を60℃にてさらに18時間加熱した。反応物を減圧濃縮し、次の工程に粗製物のまま進めた。
【０２７９】
工程２：1-[5-(2-m-トリルアミノ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-イルアミノ]プロパン-2-オンの合成
(2-オキソ-プロピル)-[5-(2-m-トリルアミノ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-イル]カルバミン酸tert-ブチルエステル（0.078 mmol）をジオキサン中4N HCl 1 mLで処理した。1時間半後、混合物を減圧濃縮し、EtOAcに再溶解した。有機物を飽和NaHCO3で洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮した。残渣を分取用LCMSにより精製し、標記化合物2.8 mg（2工程で10.5%収率）を得た。
MS: m/z 339 (M+H+). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ2.15 (s, 3H), 2.318 (s, 3H), 4.077 (d, J = 5.5 Hz, 2H), 5.94 (d, J = 4 Hz, 1H), 6.73 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.02 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.13 (t, J = 8 Hz, 1H), 7.41 (t, J = 6 Hz, 1H), 7.52 (br d, J = 9 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.75 (br s, 1H), 8.19 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 9.27 (s, 1H).
【０２８０】
方法１２：
【化２６】
2009519218.tif 000060
【０２８１】
工程１：5-[2-(ピリジン-3-イルアミノ)ピリミジン-4-イル]チオフェン-2-カルボン酸エチルエステルの合成
酢酸パラジウムII 8.3 mg（0.1 mmol）およびキサントホス（xantphos）42.8 mg（0.2 mmol）を窒素雰囲気下、乾燥ジオキサン4 mL中にて予め混合した。炭酸カリウム1.03 g（7.46 mmol）を加え、次いで5-(2-クロロ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-カルボン酸エチルエステル100 mg（0.373 mmol）および3-アミノピリジン42 mg（0.447 mmol）のジオキサン溶液3 mLを加えた。反応物を蓋をしたバイアル中100℃にて20時間加熱した。冷却した反応混合物をEtOAcおよび水で希釈し、層を分離した。有機層をNa2SO4で乾燥し、減圧濃縮した。残渣をエチルエーテルに再溶解し、エーテル中2 M HClで処理し、沈殿物を生成し、これをろ過により集め、標記化合物76 mg（56.3%）を得た。粗製物を次の工程に用いた。
【０２８２】
工程２：5-[2-(ピリジン-3-イルアミノ)ピリミジン-4-イル]チオフェン-2-カルボン酸の合成
5-[2-(ピリジン-3-イルアミノ)ピリミジン-4-イル]チオフェン-2-カルボン酸エチルエステル76 mg（0.209 mmol）をMeOH 1.5 mL中4 N LiOH 0.524 mL（2.09 mmol）で40℃にて15時間処理することにより鹸化した。6 N HCl（2.09 mmol）を加え、混合物を水で希釈した。沈殿物をろ過により集め、EtOHですすぎ、真空乾燥し、標記化合物45 mg（72%）を得た。粗製物を次の工程に用いた。
【０２８３】
工程３：5-[2-(ピリジン-3-イルアミノ)ピリミジン-4-イル]チオフェン-2-カルボン酸(2-シアノエチル)エチルアミドの合成
5-[2-(ピリジン-3-イルアミノ)ピリミジン-4-イル]チオフェン-2-カルボン酸22 mg（0.065 mmol）、DIEA 27 uL（0.195 mmol）およびHATU 36.8 mg（0.097 mmol）をスミス・マイクロウェーブ・バイアル中DMA 0.5 mL中にて混合した。3-エチルアミノプロピオニトリル10.9 uL（0.097 mmol）を加え、900秒間90℃にてマイクロウェーブにて加熱した。粗製混合物を分取用LCMSにより精製し、標記化合物2.7 mg（10.9%）を得た。
MS: m/z 379 (M+H+). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ1.203 (br t, 3H), 2.88 (br t, J = 6.5 Hz, 2H), 3.65 (Br s, 2H), 3.70 (Br s, 2H), 7.33 (dd, J = 5, 8.5 Hz, 1H), 7.469 (dd, J = 1.5, 6.5 Hz, 1H), 7.497 (dd, J = 1.5, 4 Hz, 1H), 7.985 (dd, J = 1.5, 4 Hz, 1H), 8.16 (m, 1H), 8.22 (m, 1H), 8.56 (dd, J = 1.5, 5 Hz, 1H), 8.95 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 9.91, (s, 1H).
【０２８４】
第１０表
方法１２により製造される他の化合物：
【表１０】
2009519218.tif 000061
【０２８５】
方法１３：
【化２７】
2009519218.tif 000062
【０２８６】
工程１：[5-(2-クロロ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-イルメチル]フェニル-アミンの合成
[5-(2-クロロ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-カルバルデヒド100 mg（0.446 mmol）をDMA 4 mL中25% HOAcに溶解し、アニリン61 uL（0.669 mmol）で2時間処理した。MP-CNBH3樹脂を加え、反応物を18時間振盪した。反応物をろ過し、DMAですすぎ、溶液を減圧濃縮した。粗製物を勾配0〜100%ヘキサン／EtOAcを用いたSiO2クロマトグラフィーにより精製し、標記化合物80 mg（59%）を得た。
【０２８７】
工程２：1-{3-[4-(5-フェニルアミノメチル-チオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イルアミノ]フェニル}エタノールの合成
本生成物を方法２に記載のように製造した。
MS: m/z 403 (M+H+). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ1.25 (s, 3H), 4.42 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 4.6 (m, 1H), 5.01 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 6.31 (t, J = 8 Hz, 1H), 6.48 (t, J = 8 Hz, 1H), 6.56 (d, J = 7 Hz, 2H), 6.87 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.00 (t, J = 6 Hz, 1H), 7.06 (d, J = 3 Hz, 1H), 7.13 (t, J = 8 Hz, 1H), 7.16  (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.55 (br d, J = 8 Hz, 1H), 7.71 (br s, 1H), 7.77 (d, J = 3 Hz, 1H), 8.35 (d, J = 5 Hz, 1H), 9.46 (s, 1H).
【０２８８】
第１１表
方法１３により製造される他の化合物：
【表１１−１】
2009519218.tif 000063
【０２８９】
【表１１−２】
2009519218.tif 000064
【０２９０】
【表１１−３】
2009519218.tif 000065
【０２９１】
方法１４：
【化２８】
2009519218.tif 000066
【０２９２】
工程１：N-[5-(2-クロロ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-イルメチル]-N-(4-メトキシベンジル)ベンズアミドの合成
[5-(2-クロロ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-イルメチル]-(4-メトキシベンジル)アミン22 mg（0.063 mmol）をCH2Cl2 1 mLに溶解し、ピリジン4.3 uL（0.076 mmol）およびEt3N 17.8 uL（0.127 mmol）、次いで塩化ベンゾイル8.9 uL（0.765 mmol）で処理した。混合物を18時間撹拌した後、1 N HClで洗浄し、Na2SO4で乾燥し、濃縮した。物質を次の工程に粗製のまま用いた。
【０２９３】
工程２：N-[5-(2-クロロ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-イルメチル]ベンズアミドの合成
N-[5-(2-クロロ-ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-イルメチル]-N-(4-メトキシベンジル)ベンズアミド25 mg（0.055 mmol）の0.25 mL CH2Cl2溶液を共溶媒としてトリフルオロ酢酸0.25 mLおよびPS-チオフェノール樹脂（3 eq.）で40℃にて15時間処理した。物質をろ過し、濃縮して黄色固体16 mg（88%）とした。粗製物を次の工程に用いた。
【０２９４】
工程２：N-(5-{2-[3-(1-ヒドロキシエチル)フェニルアミノ]ピリミジン-4-イル}チオフェン-2-イルメチル)ベンズアミドの合成
標記化合物を方法２により製造した。
MS: m/z 431 (M+H+). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ1.23 (d, J = 6 Hz, 1H), 4.61 (m, 3H), 5.0 (br s, 1H), 6.86 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.04 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.10 (t, J = 8 Hz, 1H), 7.19 (d, J = 5 Hz, 1H), 7.42 (m, 2H), 7.47 (d, J = 7 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 6.5 Hz, 1H), 7.7 (br s, 1H), 7.77 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.83 (m, 2H), 8.36 (d, J = 5 Hz, 1H), 9.19 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 9.47 (s, 1H).
【０２９５】
方法１５：
【化２９】
2009519218.tif 000067
工程１：3-[4-(5-ブロモ-チオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イルアミノ]ベンズアルデヒドの合成
{3-[4-(5-ブロモ-チオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イルアミノ]フェニル}メタノール566 mg（1.57 mmol）の懸濁液をMnO2 1.4 g（15.7 mmol）で15時間処理した。さらなる500 mgアリコートのMnO2を加え、反応物を48時間撹拌させた。混合物をセライトろ過し、減圧乾燥し、375 mg（LCMSおよび1H NMRにより88%純度）を得、これを次の工程に粗製のまま用いた。
【０２９６】
工程２：[4-(5-ブロモ-チオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イル]-[3-(4-ジメチルアミノピペリジン-1-イルメチル)フェニル]アミンの合成
3-[4-(5-ブロモ-チオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イルアミノ]ベンズアルデヒド25 mg（0.069 mmol）および4-ジメチルアミノピペリジン13.3 mg（0.104 mmol）のDMA中の25% HOAc溶液を2時間混合した後、MP-CNBH3（2.5 eq.）で18時間処理した。反応物をろ過し、LCMSにより直接精製し、2工程で標記化合物2.3 mg（7%）を得た。
MS: m/z 472 (M+H+). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ1.37 (br q, J = 11 Hz, 2H), 1.70 (br d, J = 12 Hz, 2H), 1.94 (br t, J = 11Hz, 2H), 2.04 (br t, 1H), 2.87 (br d, J = 11 Hz, 2H), 3.33 (s, 2H), 6.89 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.24 (t, J = 7.5 Hz, 1H), 7.33 (dd, J = 1, 5 Hz, 1H), 7.37 (m, 1H), 7.55 (br d, J = 8 Hz, 1H), 7.86 (m, 1H), 7.89 (br s, 1H), 8.51 (dd, J = 1.5, 5 Hz, 1H), 9.68 (s, 1H).
【０２９７】
樹脂のろ過後、BOC保護基を含む生成物を0.5 mL 6 N HClで50℃にて2時間処理し、減圧乾燥し、分取精製のためにDMSOに再溶解した。
【０２９８】
第１２表
方法１５により製造される他の化合物：
【表１２−１】
2009519218.tif 000068
【０２９９】
【表１２−２】
2009519218.tif 000069
【０３００】
方法１６：
【化３０】
2009519218.tif 000070
【０３０１】
工程１：5-[2-ホルミル-フェニルアミノ)ピリミジン-4-イル]チオフェン-2-カルボン酸4-クロロベンジルアミドの合成
方法１２に記載のように製造した粗製の5-[2-(3-ヒドロキシメチル-フェニルアミノ)ピリミジン-4-イル]チオフェン-2-カルボン酸4-クロロベンジルアミド137.2 mg（0.305 mmol）をアセトン1 mL中MnO2 265 mg（3.05 mmol）で処理した。室温にて12時間後、混合物を減圧濃縮し、EtOAcに再溶解し、溶離液としてEtOAcを用いた5 g SiO2カートリッジに通した。黄色油状物69.6 mg（50.8%, 2工程）を得、次の工程に用いた。
【０３０２】
工程２：5-(2-{3-[(2-ヒドロキシ-エチルアミノ}-メチル]フェニルアミノ}ピリミジン-4-イル)チオフェン-2-カルボン酸4-クロロベンジルアミドの合成
5-[2-ホルミル-フェニルアミノ)ピリミジン-4-イル]チオフェン-2-カルボン酸4-クロロベンジルアミド22.4 mg（0.05 mmol）および2-アミノエタノール4.5 uL（0.075 mmol）を25% HOAc/DMA 0.5 mL中にて2時間インキュベーションした後、2.5 eq. MP-CNBH3樹脂で15時間処理した。反応物をろ過し、溶離液を分取精製し、標記化合物8.9 mg（36%）を得た。
MS: m/z 494 (M+H+). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ2.67 (t, J = 6 Hz, 2H), 3.50 (t, J = 6 Hz, 2H), 3.79 (s, 2H), 4.47 (d, J = 6.5 Hz, 2H), 6.98 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.25-7.38 (m, 5H), 7.69 (br d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.81 (br s, 1H), 7.86 (d, J = 4 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 4 Hz, 1H), 8.53 9 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 9.25 (t, J = 6 Hz, 1H), 9.70 (s, 1H).
【０３０３】
第１３表
方法１６により製造される他の化合物：
【表１３−１】
2009519218.tif 000071
【０３０４】
【表１３−２】
2009519218.tif 000072
【０３０５】
【表１３−３】
2009519218.tif 000073
【０３０６】
方法１７：
【化３１】
2009519218.tif 000074
【０３０７】
工程１：5-{2-[3-(1-ヒドロキシ-エチル)フェニルアミノ]ピリミジン-4-イル}チオフェン-2-カルボン酸メトキシ-メチル-アミドの合成
5-(3-ジメチルアミノ-アクリロイル)チオフェン-2-カルボン酸692 mg（2.02 mmol）、N,O-ジメチルヒドロキシルアミン塩酸塩297 mg（3.04 mmol）、O-(7-アザベンゾトリアゾール-1-イル)-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムヘキサフルオロホスフェート925 mg（2.43 mmol）およびジイソプロピルアミン1.39 mL（8.11 mmol）を乾燥DMF 4 mLに溶解した。90℃にて1時間撹拌した。混合物を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＋10%メタノール勾配）により精製し、5-{2-[3-(1-ヒドロキシ-エチル)フェニルアミノ]ピリミジン-4-イル}チオフェン-2-カルボン酸メトキシ-メチル-アミド297 mgを黄色固体0.76 mmol（38%）として得た。
【０３０８】
工程２：1-(5-{2-[3-(1-ヒドロキシ-エチル)フェニルアミノ]ピリミジン-4-イル}チオフェン-2-イル)エタノンの合成
5-{2-[3-(1-ヒドロキシ-エチル)フェニルアミノ]ピリミジン-4-イル}チオフェン-2-カルボン酸メトキシ-メチル-アミド30 mg（78μmol）を乾燥THF 5 mLに溶解し、-78℃まで冷却した。臭化メチルマグネシウム（エーテル中3M、130μl, 390μmol）を滴加した。混合物を室温までゆっくり昇温し、すべての出発物質が消費されるまで（LCMS）撹拌した。反応混合物に飽和塩化アンモニウム溶液を加えて反応停止処理し、Varian Chem Elutカートリッジに通した。粗生成物を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル＋10%メタノール勾配）および分取用HPLC（水／アセトニトリル勾配）により精製し、1-(5-{2-[3-(1-ヒドロキシ-エチル)フェニルアミノ]ピリミジン-4-イル}チオフェン-2-イル)エタノン6.6 mgを黄色固体0.19μmol（25%）として得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ9.71 (s, 1H), 8.56 (d, J = 5 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.99 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.61 (m, 1H), 7.43 (d, J = 5 Hz, 1H), 7.25 (t, J = 8 Hz, 1H), 6.98 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.13 (bs, 1H), 4.71 (q, J = 6.5 Hz, 1H), 2.57 (s, 3H), 1.36 (d, J = 6.5 Hz, 3H).  MS: m/z 340 (M+H+).  
【０３０９】
第１４表
方法１７により製造される他の化合物：
【表１４】
2009519218.tif 000075
【０３１０】
方法１８：
【化３２】
2009519218.tif 000076
【０３１１】
工程１：5-[2-(3-モルホリン-4-イル-フェニルアミノ)ピリミジン-4-イル]チオフェン-2-カルボン酸(1-フェニル-エチル)アミドの合成
5-[2-(3-ブロモ-フェニルアミノ)ピリミジン-4-イル]チオフェン-2-カルボン酸(1-フェニル-エチル)アミド20 mg（41μmol）、3-ジメチルアミノピロリジン6 mg（0.5μmol）、トリス(ジベンジリデンアセトン)ジパラジウム(0)クロロホルム付加体1.5 mg（2μmol）および2-ジシクロヘキシルホスフィノ-2'-(N,N-ジメチルアミノ)ビフェニル2 mg（5μmol）をTHF（1M）中のリチウムビス(トリメチルシリル)アミド溶液0.2 mLに懸濁した。反応混合物を65℃にて48時間撹拌した。反応をMeOH 1 mLで反応停止処理し、濃縮し、粗生成物をDMSOに再溶解し、質量誘発逆相HPLCにより精製し、純粋な5-{2-[3-(3-ジメチルアミノ-ピロリジン-1-イル)フェニルアミノ]ピリミジン-4-イル}チオフェン-2-カルボン酸(1-フェニル-エチル)アミド1.2 mg（2.5μmol, 6%, ジアステレオマーの1:1混合物）を得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ9.45 (s, 1H), 8.94 (d, J = 8 Hz, 1H), 8.50 (d, J = 5 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.39 (d, J = 5 Hz, 2H), 7.33 (m, 4H), 7.23 (t, J = 7 Hz, 1H), 7.18 (s, 1H), 6.98 (m, 1H), 6.17 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 5.14 (quintet, J = 6.5 Hz, 1H), 3.45 (q, J = 8 Hz, 1H), 3.39 (t, J = 8 Hz, 1H), 3.32 (m, 2H), 3.02 (q, J = 8 Hz, 1H), 2.77 (m, 1H), 2.15 (s, 6H), 1.79 (m, 1H), 1.49 (d, J = 6.5 Hz, 3H).  MS: m/z 513 (M+H+).
【０３１２】
第１５表
方法１８により製造される他の化合物：
【表１５】
2009519218.tif 000077
【０３１３】
方法１９：
【化３３】
2009519218.tif 000078
【０３１４】
工程１：5-{2-[3-(2-ジメチルアミノ-エトキシ)-4-メトキシ-フェニルアミノ]ピリミジン-4-イル}チオフェン-2-カルボン酸(1-フェニル-エチル)アミドの合成
5-[2-(3-ヒドロキシ-4-メトキシ-フェニルアミノ)ピリミジン-4-イル]チオフェン-2-カルボン酸(1-フェニル-エチル)アミド35 mg（78μmol）、ジメチルアミノエタノール26μL（156μmol）およびトリフェニルホスフィン41 mg（156μmol）をTHF 0.14 mLに溶解し、0℃まで冷却した。ジイソプロピルジアザジカルボキシレート31μL（156μmol）を滴加した。反応混合物を室温までゆっくりと昇温し、終夜撹拌した。粗生成物をDMSOで希釈し、質量誘発逆相HPLCにより精製し、純粋な5-{2-[3-(2-ジメチルアミノ-エトキシ)-4-メトキシ-フェニルアミノ]ピリミジン-4-イル}チオフェン-2-カルボン酸(1-フェニル-エチル)アミド0.3 mg（0.6μmol, 1%）を得た。
1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ9.49 (s, 1H), 8.94 (d, J = 8 Hz, 1H), 8.47 (d, J = 5 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.93 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.57 (m, 1H), 7.38 (m, 2H), 7.31 (m, 4H), 7.23 (m, 1H), 6.88 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.12 (quintet, J = 7.5 Hz, 1H), 4.05 (t, J = 6 Hz, 2H), 3.71 (s, 3H), 2.64 (t, J = 6 Hz, 2H), 2.17 (s, 6H), 1.48 (d, J = 6.5 Hz, 3H).  MS: m/z 518 (M+H+).  
【０３１５】
第１６表
方法１９により製造される他の化合物：
【表１６】
2009519218.tif 000079
【０３１６】
方法２０：
【化３４】
2009519218.tif 000080
【０３１７】
工程１：1-[5-(4-メチル-2,6,7-トリオキサ-ビシクロ[2.2.2]オクタ-1-イルメチル)チオフェン-2-イル]エタノンの合成
(5-アセチル-チオフェン-2-イル)酢酸2 g（10.8 mmol）、3-ヒドロキシメチル-3-メチルオキセタン1.07 mL（10.8 mmol）およびジメチルアミノピリジン221 mg（1.08 mmol）を乾燥THF 5 mLに溶解し、0℃まで冷却した。ジシクロヘキシルカルボジイミド2.24 g（10.8 mmol）を加え、混合物を0℃にて1時間撹拌した後、室温まで昇温し、終夜撹拌した。混合物を0℃まで冷却し、ろ過した。白色固体を冷THFで洗浄し、集めたろ液を濃縮した。粗生成物をフラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル勾配）により精製し、(5-アセチル-チオフェン-2-イル)酢酸3-メチル-オキセタン-3-イルメチルエステル2.3 g（8.5 mmol, 79%）を得た。生成物をDCM 20 mLに溶解し、-5℃まで冷却した。ボロントリフルオリドジエチルエーテラート121μL（1 mmol）を滴加し、混合物をゆっくりと室温まで昇温し、30分間撹拌した。反応をトリエチルアミンで反応停止処理し、濃縮し、フラッシュクロマトグラフィー（ヘキサン／酢酸エチル勾配）により精製し、1-[5-(4-メチル-2,6,7-トリオキサ-ビシクロ[2.2.2]オクタ-1-イルメチル)チオフェン-2-イル]エタノン1.44 g（4.1 mmol, 2工程で38%）を得た。
【０３１８】
方法３工程１および２により、1-[5-(4-メチル-2,6,7-トリオキサ-ビシクロ[2.2.2]オクタ-1-イルメチル)チオフェン-2-イル]エタノンを{5-[2-(3-ヒドロキシメチル-フェニルアミノ)ピリミジン-4-イル]チオフェン-2-イル}酢酸3-ヒドロキシ-2-ヒドロキシメチル-2-メチル-プロピルエステルに変換した。
【０３１９】
工程２：{5-[2-(3-ヒドロキシメチル-フェニルアミノ)ピリミジン-4-イル]チオフェン-2-イル}酢酸の合成
{5-[2-(3-ヒドロキシメチル-フェニルアミノ)ピリミジン-4-イル]チオフェン-2-イル}酢酸3-ヒドロキシ-2-ヒドロキシメチル-2-メチル-プロピルエステル717 mg（1.6 mmol）をTHF 30 mLおよび1N水酸化ナトリウム溶液3.5 mL（3.5 mmol）に溶解した。混合物を終夜撹拌し、酢酸で反応停止処理し、濃縮した。粗生成物を水でトリチュレーションし、{5-[2-(3-ヒドロキシメチル-フェニルアミノ)ピリミジン-4-イル]チオフェン-2-イル}酢酸496 mgを橙色固体（1.45 mmol, 90%）として得た。
【０３２０】
方法３工程１および２により、{5-[2-(3-ヒドロキシメチル-フェニルアミノ)ピリミジン-4-イル]チオフェン-2-イル}酢酸を2-{5-[2-(3-ヒドロキシメチル-フェニルアミノ)ピリミジン-4-イル]チオフェン-2-イル}-N-メチル-N-フェニル-アセトアミドに変換した。
MS: m/z 431 (M+H+).
【０３２１】
方法２１：
【化３５】
2009519218.tif 000081
[4-(4-(ブロモ-チオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イル]-m-トリルアミンの合成
[4-(4-(ブロモ-チオフェン-2-イル]-m-トリルアミンを方法３工程１および２により市販の1-(4-ブロモ-チオフェン-2-イル)エタノンから製造した。
MS: m/z 346 (M+H+). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ2.30 (s, 3H), 6.77 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 7.17 (t, J = 8 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.53 (br d, J = 8 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.92 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.07 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.51 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 9.64 (s, 1H).
【０３２２】
方法２２：
【化３６】
2009519218.tif 000082
{4-[4-(2,6-ジメチルフェニル)チオフェン-2-イル]ピリミジン-2-イル}-m-トリルアミンの合成
{4-[4-(2,6-ジメチルフェニル)チオフェン-2-イル]ピリミジン-2-イル}-m-トリルアミンを方法５により製造した。
MS: m/z 373 (M+H+). 1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ2.09 (s, 6H), 2.32 (s, 3H), 6.77 (d, J = 7 Hz, 1H), 7.11-7.19 (m, 4H), 7.35 (d, J = 5 Hz, 1H), 7.57 (br d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 7.80 (br s, 1H), 7.92 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.46 (d, J = 5 Hz, 1H), 9.58 (s, 1H).
【０３２３】
方法２３：
【化３７】
2009519218.tif 000083
5-{2-[3-(1-ヒドロキシ-エチル)フェニルアミノ]ピリミジン-4-イル}チオフェン-3-カルボン酸イソブチル-アミドの合成
5 mL Personal Chemistry（商標）マイクロウェーブバイアルに方法２２により製造した1-{3-[4-(4-ブロモ-チオフェン-2-イル)ピリミジン-2-イルアミノ]フェニル}エタノール149.3 mg（0.40mmol）、イソブチルアミン120 uL（1.20 mmol）、モリブデンヘキサカルボニル109.2 mg（0.41 mmol）、THF 2 mL、ヘルマン・パラダサイクル（Hermann's Palladacycle）[trans-ジ-mu-アセタトビス[2-9ジ-O-トリルホスフィノ)ベンジル]ジパラジウム(II)] 20 mg（0.02 mmol）およびDBU 180 uL（1.20 mmol）を充填した。反応混合物をマイクロウェーブバイアル中150℃まで15分間加熱した。粗製の反応混合物をDMSO 2 mLで希釈し、シリカゲルプラグに通してろ過した後、質量誘発逆相HPLC（C-18；水中0.1%ギ酸：ACN中0.1%ギ酸からなる5〜95%勾配で溶出）により精製した。精製されたフラクションの凍結乾燥により、5-{2-[3-(1-ヒドロキシ-エチル)フェニルアミノ]ピリミジン-4-イル}チオフェン-3-カルボン酸イソブチル-アミド39.5 mg（25%収率）を白色粉末として得た。
1H NMR (d6-DMSO) δ9.49 (br. s,1H), 8.34 (d, J= 5.0 Hz, 1H), 8.20 (t, J= 6.0 Hz, 1H), 8.16 (dd, J= 6.0, 0.5 Hz, 1H), 7.67 (br.s,1H), 7.49 (dd, J= 5.0, 1.2 Hz, 1H), 7.15(d, J= 5.0 Hz, 1H), 7.09 (t, J= 7.5 Hz, 1H), 6.80 (d, J= 7.5 Hz, 1H), 4.97 (br.d, J= 3.5 Hz, 1H), 4.55(qrt, J= 5.5 Hz, 1H), 2.91(t, J= 6.5 Hz, 2H),  1.67(m, 1H), 1.19(d, J= 6.0 Hz, 3H), 0.74(d, J= 7.0 Hz, 6H); HPLC/MS m/z: 397 [MH]+.
【０３２４】
第１７表
方法２３により製造される他の化合物：
【表１７−１】
2009519218.tif 000084
【０３２５】
【表１７−２】
2009519218.tif 000085
【０３２６】
実施例２：バイオアッセイ
当業者に知られているキナーゼアッセイを用いて、本発明の化合物および組成物の阻害活性を評価することができる。キナーゼアッセイとしては以下の例が挙げられるが、これらに限定されない。
【０３２７】
スクリーニングデータは次式：
Z'=1-[3＊(σ++σ-)/|μ+-μ-|]
（式中、μは平均を示し、σは標準偏差を示す）
を用いて評価した（Zhang, et al., 1999 J Biomol Screening 4(2) 67-73）。下付記号は陽性または陰性対照を示す。着実なスクリーニングアッセイのためのZ'値は≧0.50であるべきである。典型的な基準点＝μ+-3＊σ+である。基準点以下の任意の値は「ヒット」と指定した。
【０３２８】
MET発光ベースATP枯渇酵素アッセイ
物質：ポリGlu-Tyr（4:1）基質（Sigmaカタログ番号P-0275）、ATP（Sigmaカタログ番号A-3377, FW=551）、HEPES緩衝液、pH 7.5、ウシ血清アルブミン（BSA、Roche 92423420）、MgCl2、スタウロスポリン（Streptomyces sp. Sigmaカタログ番号85660-1MG）、白色Costar 384ウェル平底プレート（VWRカタログ番号29444-088）。METキナーゼ（以下を参照のこと）、キナーゼ-Glo（商標）（Promegaカタログ番号V6712）。
【０３２９】
ストック溶液：-20℃で保存した水中10 mg/ml ポリGlu-Tyr；100mM HEPES緩衝液、pH 7.5（5 ml 1Mストック＋45 ml miliQH2O）；-20℃で保存した10mM ATP（dH2O中5.51 mg/ml、50μlを全10 ml miliQH2O／日に希釈＝50μM ATP通常ストック）；1% BSA（0.1M HEPES 100 ml中1 g BSA、pH 7.5、-20℃で保存）、100mM MgCl2；200μMスタウロスポリン、2Xキナーゼ-Glo（商標）試薬（新たに調製または-20℃で保存）。
【０３３０】
384ウェルフォーマットについての標準アッセイ設定（20μlキナーゼ反応、40μl検出反応）：10mM MgCl2；0.3 mg/mlポリGlu-Tyr；0.1% BSA；試験化合物1μl（DMSO中）；0.4μg/ml METキナーゼ；10μM ATP；100mM HEPES緩衝液。陽性対照は試験化合物なしでDMSOを含む。陰性対照は10μM スタウロスポリンを含む。キナーゼ反応はt=0時点にてATPを添加することにより開始した。キナーゼ反応物を21℃にて60分間インキュベーションした後、キナーゼ-Glo（商標）試薬20μlを各ウェルに加え、キナーゼ反応を反応停止処理し、発光反応を開始させた。21℃にて20分インキュベーションした後、発光をプレート・リーディング照度計にて検出した。
【０３３１】
AurA発光ベースATP枯渇酵素アッセイ
物質：ケンプチドペプチド基質＝LRRASLG（Biopeptide, San Diego, CA）、ATP（Sigmaカタログ番号A-3377, FW=551）、HEPES緩衝液、pH 7.5、10% Brij 35（Calbiochemカタログ番号203728）、MgCl2、スタウロスポリン（Streptomyces sp. Sigmaカタログ番号85660-1MG）、白色Costar 384ウェル平底プレート（VWRカタログ番号29444-088）、自己リン酸化AurAキナーゼ（以下を参照のこと）、キナーゼ-Glo（商標）（Promegaカタログ番号V6712）。
【０３３２】
ストック溶液：-20℃にて保存した10 mM ケンプチドペプチド（水中7.72mg/ml）；100mM HEPES緩衝液＋0.015% Brij 35、pH 7.5（5 ml 1M HEPESストック＋75μL 10% Brij 35＋45 ml miliQH2O）；-20℃にて保存した10mM ATP（dH2O中5.51mg/ml、50μlを全10 ml miliQH2O／日に希釈＝50μM ATP通常ストック）；100mM MgCl2；200μMスタウロスポリン、2Xキナーゼ-Glo（商標）試薬（新たに調製または-20℃で保存）。
【０３３３】
AurA自己リン酸化反応：ATPおよびMgCl2をそれぞれ10mMおよび100mMの最終濃度にて1〜5mg/ml AurAに加えた。自己リン酸化反応は21℃にて2〜3時間インキュベーションした。反応はEDTAを添加することにより停止させ、50mMの最終濃度とし、サンプルを液体N2でフラッシュ凍結し、-80℃にて保存した。
【０３３４】
384ウェルフォーマットについての標準アッセイ設定（20μlキナーゼ反応、40μl検出反応）：10mM MgCl2；0.2mM ケンプチドペプチド；試験化合物1μl（DMSO中）；0.3μg/ml 自己リン酸化AurAキナーゼ；10μM ATP；100mM HEPES＋0.015% Brij緩衝液。陽性対照は試験化合物なしでDMSOを含む。陰性対照は5μM スタウロスポリンを含む。キナーゼ反応はt=0時点にてATPを添加することにより開始した。キナーゼ反応物を21℃にて45分間インキュベーションした後、キナーゼ-Glo（商標）試薬20μlを各ウェルに加え、キナーゼ反応を反応停止処理し、発光反応を開始させた。21℃にて20分インキュベーションした後、発光をプレート・リーディング照度計にて検出した。
【０３３５】
JAK2発光ベースATP枯渇酵素アッセイ
物質：JAK3チドペプチド基質＝GGEEEEYFELVKKKK（Biopeptide, San Diego, CA）、ATP（Sigmaカタログ番号A-3377, FW=551）、HEPES緩衝液、pH 7.6、10% Brij 35（Calbiochemカタログ番号203728）、MgCl2、スタウロスポリン（Streptomyces sp. Sigmaカタログ番号85660-1MG）、白色Corning (Costar) 384ウェル平底プレート（VWRカタログ番号29444-088）、JAK2 KD（キナーゼドメイン）またはJAK2 JH1JH2 V617Fキナーゼ（以下を参照のこと）、キナーゼ-Glo（商標）（Promegaカタログ番号V6712）。
【０３３６】
ストック溶液：-20℃にて保存した5 mM JAK3チドペプチド（100 mM HEPES中9.86 mg/ml、pH 7.6）；100mM HEPES緩衝液、pH 7.6、10% Brij 35；-20℃にて保存した10mM ATP（100 mM HEPES中5.51 mg/ml、pH 7.6、50μlを全10 ml 100 mM HEPES、pH 7.6／日に希釈＝50μM ATP通常ストック）；100mM MgCl2；200μMスタウロスポリン、2Xキナーゼ-Glo（商標）試薬（新たに調製または-20℃で保存）。
【０３３７】
384ウェルフォーマットについての標準アッセイ条件（20μlキナーゼ反応、40μl検出反応）：10mM MgCl2；0.1mM JAK3チドペプチド（またはJAK2 JH1JH2 V617Fアッセイについての0.5 mM JAK3チドペプチド）；試験化合物1μl（100% DMSO中）；0.4μg/ml JAK2 KDキナーゼまたは12μg/ml JAK2 JH1JH2 V617Fキナーゼ；10μM ATP；100mM HEPES＋0.01% Brij、pH 7.6。陽性対照は試験化合物なしで5% DMSOを含む。陰性対照は10μM スタウロスポリンを含む。キナーゼ反応はt=0時点にてATPを添加することにより開始した。キナーゼ反応物を21〜23℃にて30分間インキュベーションした後、キナーゼ-Glo（商標）試薬20μlを各ウェルに加え、キナーゼ反応を反応停止処理し、発光反応を開始させた。21〜23℃にて20分インキュベーションした後、発光をプレート・リーディング照度計にて検出した（Tecan Ultra Evolution）。
【０３３８】
Metの精製：
ヒトMetのキナーゼドメインを発現する12 L Sf9昆虫細胞培養物の半分から調製した細胞ペレットを、50mM Tris-HCl pH 7.7および250mM NaClを含む緩衝液中にて、初代培養物1 Lあたり約40 mlの容積に再懸濁した。１錠のRoche Complete、EDTA不含プロテアーゼ阻害剤カクテル（カタログ番号1873580）を初代培養物1 Lあたりに加えた。懸濁液を4℃にて1時間撹拌した。残屑は39,800 x g、4℃にて30分間遠心分離により除去した。上清を500 mlビーカーにデカンテーションし、50mM Tris-HCl pH 7.8にて予め平衡にしたQiagen Ni-NTAアガロースの50%スラリー10 ml（カタログ番号30250）、50mM NaCl、10%グリセロール、10mMイミダゾールおよび10mMメチオニンを加え、4℃にて30分間撹拌した。次いでサンプルを4℃にてドリップカラムに注ぎ、10カラム容積の50mM Tris-HCl pH 7.8、500mM NaCl、10%グリセロール、10mMイミダゾールおよび10mMメチオニンで洗浄した。タンパク質は、50mM、200mMおよび500mMイミダゾールを含む2カラム容積の同緩衝液の段階的勾配を用いて続けて溶出した。6xヒスチジンタグは40ユニットのTEVプロテアーゼ（Invitrogenカタログ番号10127017）／タンパク質1 mgを用いて終夜開裂したが、50mM Tris-HCl pH 7.8、500mM NaCl、10%グリセロール、10mMイミダゾールおよび10mMメチオニン中4℃にて透析した。6xヒスチジンタグは、ニッケルを充填し、50mM Tris-HCl pH 7.8、500mM NaCl、10% グリセロール、10mM イミダゾールおよび10mM メチオニンにて平衡にしたPharmacia 5 ml IMACカラム（カタログ番号17-0409-01）にサンプルを通すことにより除去した。開裂したタンパク質は低親和力にてニッケルカラムに結合し、段階的勾配で溶出した。段階的勾配は、15%、次いで80%のB面（A面 = 50mM Tris-HCl pH 7.8、500mM NaCl、10%グリセロール、10mM イミダゾールおよび10mM メチオニン；B面 = 50mM Tris-HCl pH 7.8、500mM NaCl、10% グリセロール、500mM イミダゾールおよび10mM メチオニン）でそれぞれ4カラム容積で行った。Metタンパク質は第一段階で溶出したが（15%）、非開裂Metおよび開裂ヒスチジンタグは80%フラクションにて溶出した。15%フラクションは開裂Metの存在を確認するSDS-PAGEゲル分析後にプールされ；さらなる精製は、50mM Tris-HCl pH 8.5, 150mM NaCl, 10% グリセロールおよび5 mM DTTにて平衡化したAmersham Biosciences HiLoad 16/60 Superdex 200分取グレード（カタログ番号17-1069-01）でのゲルろ過クロマトグラフィーにより行った。最もきれいなフラクションを集め、Amicon Ultra-15 10,000 Da MWCO遠心分離フィルターユニットにおける遠心分離により〜10.4mg/mlに濃縮した（カタログ番号UFC901024）。
【０３３９】
AurAの精製：
ヒトAurora-2を発現する6 Lの培養細胞から産生したSf9昆虫細胞ペレット（〜18 g）を50mMリン酸Na pH 8.0、500mM NaCl、10%グリセロール、0.2%n-オクチル-β-D-グルコピラノシド（BOG）および3mM β-メルカプトエタノール（BME）に再懸濁した。１錠のRoche Complete、EDTA不含プロテアーゼ阻害剤カクテル（カタログ番号1873580）およびベンゾネーゼ（Benzonase）85ユニット（Novagenカタログ番号70746-3）を初代培養物1 Lあたりに加えた。ペレットを初代培養物1 Lあたり約50 mlに再懸濁した後、２の30〜45秒バースト（100%デューティサイクル）で氷上にて超音波を当てた。残屑を遠心分離により除去し、上清を0.8μmシリンジフィルターに通した後、5 ml Ni2+ HiTrap カラム（Pharmacia）に充填した。カラムを6カラム容積の50mMリン酸Na pH 8.0、500mM NaCl、10%グリセロール、3mM BMEで洗浄した。タンパク質は、500mM イミダゾールを含む同緩衝液の直線勾配を用いて溶出した。溶出物24 mlは、50mMリン酸Na pH 8.0、500mM NaCl、10%グリセロール、3mM BMEおよび10,000ユニットのTEV（Invitrogenカタログ番号10127-017）を含む緩衝液中4℃にて終夜開裂した。タンパク質は上記のように二次ニッケル親和性カラムに通し；流出物を集めた。開裂したタンパク質フラクションを集め、スピンコンセントレータを用いて濃縮した。さらなる精製は、50mMリン酸Na（pH 8.0）、250mM NaCl、1mM EDTA、0.1mM AMP-PNPまたはATP緩衝液および5mM DTTにおけるS75サイズカラム上でゲルろ過クロマトグラフィーにより行った。最もきれいなフラクションを集め、約8〜11mg/mlに濃縮し、120μlアリコートにて液体窒素でフラッシュ凍結し、-80℃または4℃にて保存した。
【０３４０】
Jak2の精製
Jak2の6 L発現物から調製したSf9昆虫細胞のペレットは、1 Lの初代培養物あたり約40 mL容積で、50 mM Tris-HCl pH 8.5、250 mM NaCl、5%グリセロール、0.2%β-オクチルグルコシド、5 mMβ-メルカプトエタノールを含む緩衝液にて再懸濁した（またはリガンドとともに緩衝液に例えば5 mM ATPおよび10 mM MgCl2；0.05 mM本発明化合物を加えた）。１錠のRoche Complete、EDTA不含プロテアーゼ阻害剤カクテル（カタログ番号1873580）を初代培養物1 Lあたりに加えた。次いで懸濁物を1時間4℃にて撹拌した。残屑を39,800g、4℃にて30分間遠心分離することにより除去した。上清は500 mLビーカーにデカンテーションし、50 mM Tris-HCl pH 8.5中にて予め平衡化した50% Qiagen Ni-NTAアガロース10 mL（カタログ番号30250）、250 mM NaCl、5%グリセロール、0.2%β-オクチルグルコシド、5 mMβ-メルカプトエタノールを加え、4℃にて30分間撹拌した。サンプルを4℃にてドリップカラムに注ぎ、10カラム容積（CV）の50 mM Tris-HCl pH 8.5、250 mM NaCl、5%グリセロール、0.2%β-オクチルグルコシド、5 mMβ-メルカプトエタノールで洗浄した。タンパク質は250〜500 mMイミダゾールを含む5 CVの同緩衝液を用いて5 mLフラクションに溶出した。フラクションをSDS-PAGE分析によりプールし、タンパク質濃度をBradfordアッセイにより測定した。5 mM TCEPをプールに加え、タンパク質サンプルはAmicon Ultra-15 10,000 Da MWCO遠心分離フィルターユニット（カタログ番号UFC901024）にて遠心分離することにより〜8 mLに濃縮した。濃縮したタンパク質は、20 mM Tris-HCl pH 8.5、250 mM NaClおよび1 mM DTT中にて平衡化したGE Healthcare HiLoad 16/60 Superdex 75または200分取グレードカラム（カタログ番号17-1068-01、カタログ番号17-1069-01）に適用した。フラクションはSDS-PAGEゲルにて行い、最もきれいなフラクションをプールした。タンパク質を約6.5〜10 mg/mLに濃縮した。最終緩衝液（20 mM Tris-HCl pH 8.5、250 mM NaCl、1 mM DTT；[またはリガンドとともに例えば2 mM ATP/5 mM MgCl2もしくは0.05 mM本発明化合物を加えた]）中のサンプルを新たに送達し結晶化して4℃にて保存するか、または液体窒素にてフラッシュ凍結（120μLアリコートとして）して-80℃にて保存した。
【０３４１】
実施例３：細胞アッセイ
HCT116細胞は、10%ウシ胎仔血清（FBS）2mM L-グルタミンおよび100ユニットのペニシリン／100μgストレプトマイシンを補充したMcCoyの5a培地中、37℃にて5%CO2中で維持した。
【０３４２】
細胞生存アッセイ
化合物は次のアッセイにて２回試験した。
【０３４３】
96ウェルXTTアッセイ：細胞は、96ウェル平底プレート上の種々の濃度の化合物（二重）を含む成長培地中72時間37℃にて5%CO2中で成長させた。出発細胞数は5000細胞／ウェルであり、容積は120μlであった。72時間インキュベーションの最後に、XTT標識混合物40μl（3'-[1-(フェニルアミノカルボニル)-3,4-テトラゾリウム]-ビス(4-メトキシ-6-ニトロ)ベンゼンスルホン酸ナトリウム水和物および電子カップリング試薬：PMS（N-メチルジベンゾピラジン硫酸メチル）の50:1溶液）をプレートの各ウェルに加えた。さらに650nmの2〜6時間後、分光光度計で測定した。
【０３４４】
ヒストン-H3リン酸化アッセイ：HCT116細胞は、成長培地3mL（McCoyの5A Media, 10%FBS, 1% pen-strep）中1x106細胞／60 x 15 mm皿（Falcon）にてプレートし、終夜（37℃5% CO2）インキュベーションした。次の日、化合物を加え、1時間（37℃5% CO2）インキュベーションした。1時間後、細胞を1X PBSで一度洗浄し、次いで溶解緩衝液100μL（125mM Tris HCl pH 6.8および2x SDS充填緩衝液）でプレート上にて直接溶解させ、1.7mL エッペンドルフチューブに移し、氷上に置いた。サンプルに約5秒間超音波を当て、95℃熱ブロックに3分間置いた。加熱後、サンプルをNuPage 4〜12%ビス-Tris Gel（Invitrogen）に充填し、次いで0.45μmニトロセルロース膜（Invitrogen）に電気泳動輸送した。輸送後、膜は、穏やかに揺らしながら室温にて1時間0.1%Tweenを含むQiagen遮断緩衝液中に置いた。抗ホスホ-ヒストンH3（Ser10）抗体（Upstate番号06-570）は、遮断緩衝液中にて1:250に希釈し、ブロットに加え、室温にて1時間インキュベーションした。次いで、ブロットを1X PBS + 0.1% Tween20で３回洗浄した。ヤギ抗ウサギHRP二次抗体（Jackson ImmunoResearch Laboratories, Inc.番号111-035-003）を遮断緩衝液中1:3000に希釈し、次いで室温にて1時間加えた。ブロットを1X PBS + 0.1% Tween20で３回洗浄し、SuperSignal West Pico化学発光基質（Pierce番号34078）による化学発光により視覚化した。
選択化合物についての活性は第１８表に記載する。
第１８表
選択化合物についての活性：
【表１８−１】
2009519218.tif 000086
【０３４５】
【表１８−２】
2009519218.tif 000087
【０３４６】
【表１８−３】
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【０３４７】
【表１８−４】
2009519218.tif 000089
【０３４８】
【表１８−５】
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【国際調査報告】
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