(57)【要約】  本発明は、式（Ｉ）の新規４−アミノピリミジン−５−チオン誘導体及びその薬剤学的に許容される塩に関し、これはサイクリン依存性キナーゼ、特にＣｄｋ１、Ｃｄｋ２、及びＣｄｋ４を阻害し、従って抗増殖活性を有し、癌、特に固形腫瘍、さらに詳しくは乳癌、肺癌、結腸癌、及び前立腺癌の治療又は抑制に有用である。本発明はまた、かかる化合物を含有する医薬組成物と、癌を治療する方法、詳しくは乳癌、肺癌、結腸癌、及び前立腺癌の治療又は抑制に関する。
2009516666.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式の化合物
【化１】
2009516666.tif 000036
［式中、
Ｒ1は、
複素環と低級アルキル−複素環（いずれの場合も複素環部分は、
Ｈ，
低級アルキル、
オキソ、ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、ＮＲ5Ｒ6、Ｓ（Ｏ）nＲ15、又はＣ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、
ＣＯ2Ｒ7、
ＣＯＲ11、
ＣＯＲ12、
Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14、
Ｓ（Ｏ）nＲ15、
オキソ、
ＯＲ12、又は
ＮＲ5Ｒ6、から独立に選択される最大４個の置換基で任意に置換され得る）；
アリール；
以下により置換されたアリール：
Ｈ、
Ｓ（Ｏ）n−Ｒ15、
ＮＲ5Ｒ6、
カルボニル、
低級アルキル、ＯＲ12、又はＮＲ5Ｒ6により置換されたカルボニル、
低級アルキル、
ＯＲ10又はＮＲ5Ｒ6、ＯＲ8により置換された低級アルキル、
ハロゲン；
シクロアルキル；
ＯＲ7、ＮＲ5Ｒ6、又はＳ（Ｏ）nＲ15により置換されたシクロアルキル；
低級アルキル、及び
以下により置換された低級アルキル：
ＮＲ5Ｒ6、
ＮＲ11ＳＯ2Ｒ15、
ＣＯ2Ｒ10、
Ｓ（Ｏ）n−Ｒ15、
複素環、
低級アルキル、ＣＯ2Ｒ12、又はＳＯ2Ｒ15により置換された複素環、
ヘテロアリール、
低級アルキル、ＣＯ2Ｒ12、又はＳＯ2Ｒ15により置換された複素環、
アリール、及び
低級アルキル、ハロゲン、ＮＲ5Ｒ6、ＣＯＲ12、又はＣＯ2Ｒ12により置換されたアリール、の基から選択され；
Ｒ2は、
アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、及び複素環（それぞれ、
低級アルキル、
ハロゲン又はＯＲ10により置換された低級アルキル、
ハロゲン、
ＯＲ12、
ＮＯ2、
ＣＮ，
ＮＲ5Ｒ6、
Ｓ（Ｏ）n−Ｒ9、及び
ＳＯ2−ＮＲ16Ｒ17、の基から独立に選択される最大４個の置換基で置換され得る）、の基から選択され；
Ｒ5とＲ6は、
Ｈ、
低級アルキル、
オキソ、ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14、ＳＯ2Ｒ15、ＮＳＯ2Ｒ12、ヘテロアリール、複素環、又はオキソにより置換された複素環、により置換された低級アルキル、
シクロアルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14、又はＳＯ2Ｒ15により置換されたシクロアルキル、
アリール、
ＮＲ13Ｒ14、ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14、ＳＯ2Ｒ15、ハロゲン、低級アルキル、又はハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14、もしくはＮＲ13Ｒ14により置換された低級アルキル、により置換されたアリール、
ＳＯ2Ｒ15
ＣＯ2Ｒ12、及び
ＣＯＲ12、の基からそれぞれ独立に選択され、
又は、−ＮＲ5Ｒ6基は全部で３〜７個の環原子を有する環を形成することができ、該環原子はＲ5とＲ6が結合した窒素に加えて炭素環原子を含み、該炭素環原子は１つ又はそれ以上の追加のＮもしくはＯ環原子又はＳＯ2基により任意に置換され、該環原子は、ＯＨ、オキソ、ＮＲ13Ｒ14、低級アルキル、及びＯＲ12により置換された低級アルキル、により任意に置換され；
Ｒ7は、
Ｈ、
低級アルキル、
ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、ＮＲ5Ｒ6、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、ハロゲン、オキソ、アリール、又は低級アルキル、ハロゲン及びＮＲ5Ｒ6から独立して選択される最大で３個の置換基により置換されたアリール、により置換された低級アルキル、
シクロアルキル、
ＯＨ、オキソ、又はＮＨ2により置換されたシクロアルキル、
ＳＯ2Ｒ15、及び
ＣＯＲ12、の基から選択され；
Ｒ8は、
Ｈ、
低級アルキル、
ＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、
複素環、及び
低級アルキル、ＣＯ2Ｒ12又はＳＯ2Ｒ15により置換された複素環、の基から選択され；
Ｒ9は、
Ｈ、及び
低級アルキル、の基から選択され；
Ｒ10は、
低級アルキル、
アリール、及び
ハロゲン又はＮＲ5Ｒ6により置換されたアリール、の基から選択され；
Ｒ11は、
Ｈ、
低級アルキル、及び
オキソ及びハロゲンにより置換された低級アルキル、の基から選択され；
Ｒ12は、
Ｈ、
低級アルキル、及び
ＮＲ5Ｒ6又はＯＲ11により置換された低級アルキル、の基から選択され；
Ｒ13とＲ14は、
Ｈ、
低級アルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ5Ｒ6、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、ＳＯ2Ｒ15、ＮＳＯ2Ｒ12、ヘテロアリール、複素環、又はオキソにより置換された複素環により置換された低級アルキル、
シクロアルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ5Ｒ6、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＳＯ2Ｒ15により置換されたシクロアルキル、
アリール、
ＮＲ5Ｒ6、ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、ＣＯＮＲ5Ｒ6、ＳＯ2Ｒ15、ハロゲン、低級アルキル、及びハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、もしくはＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、により置換されたアリール、
ＳＯ2Ｒ15
ＣＯ2Ｒ12、及び
ＣＯＲ12、の基からそれぞれ独立に選択され、
又は、−ＮＲ13Ｒ14基は、全部で３〜７個の環原子を有する環を形成することができ、該環原子はＲ13とＲ14が結合した窒素に加えて炭素環原子を含み、該炭素環原子は１つ又はそれ以上の追加のＮもしくはＯ環原子により任意に置換され、該環原子は、ＯＨ、オキソ、ＮＲ5Ｒ6、低級アルキル、及びＯＲ12により置換された低級アルキル、により任意に置換され；
Ｒ15は、
アリール、
ハロゲン、ＣＯ2Ｒ12、ＳＯ2Ｒ10、ＣＯＲ12、低級アルキル、及びハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、の基により置換されたアリール、
ヘテロアリール、
ハロゲン、ＣＯ2Ｒ12、ＳＯ2Ｒ10、ＣＯＲ12、低級アルキル、及びハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、の基により置換されたヘテロアリール、
ＮＲ5Ｒ6、
低級アルキル、
ハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、
複素環、及び
ＣＯ2Ｒ12、ＣＯＲ12、ＳＯ2Ｒ12、低級アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6、の基により置換された複素環、の基から選択され；
Ｒ16とＲ17は、
Ｈ、及び
低級アルキル、の基からそれぞれ独立に選択され；
又は、−ＮＲ16Ｒ17基は全部で３〜７個の環原子を有する環を形成することができ、該環原子はＲ16とＲ17が結合した窒素に加えて炭素環原子を含み、該炭素環原子は１つ又はそれ以上の追加のＮもしくはＯ環原子により任意に置換され、該環原子は、低級アルキル、ＯＨ、オキソ、及びＮＨ2により任意に置換され；
ｎは０、１、又は２である］
又は、その薬剤学的に許容される塩。
【請求項２】
Ｒ2は、ハロゲン又はＯＲ12により任意に置換され得るアリールである、請求項１の化合物。
【請求項３】
Ｒ2は、Ｆ又はＯＲ12により任意に置換され得るフェニルであり、Ｒ12は低級アルキルである、請求項２の化合物。
【請求項４】
Ｒ2は、２つのＦ分子と１つのＯＲ12により置換されたフェニルであり、Ｒ12はメチルである、請求項３の化合物。
【請求項５】
Ｒ2は、ハロゲンにより任意に置換され得るヘテロアリールである、請求項１の化合物。
【請求項６】
ヘテロアリールは、ベンゾフラン、ベンゾオキサゾール、及びベンゾアゾールから選択される、請求項５の化合物。
【請求項７】
ハロゲンはＦである、請求項５の化合物。
【請求項８】
Ｒ2は、１つ又はそれ以上の低級アルキル及びアルコキシで任意に置換され得るシクロアルキルである、請求項１の化合物。
【請求項９】
シクロアルキルはシクロペンチル及びシクロヘキシルから選択される、請求項８の化合物。
【請求項１０】
シクロアルキルはアルコキシで任意に置換されたシクロヘキシルである、請求項９の化合物。
【請求項１１】
Ｒ1は、１つ又はそれ以上のＳ（Ｏ）nＲ15又はＣＯ2Ｒ7で任意に置換され得る複素環である、請求項１の化合物。
【請求項１２】
複素環はピペリジン又はピロリジンから選択される、請求項１１の化合物。
【請求項１３】
複素環はＳ（Ｏ）nＲ15（ここでｎは２であり、Ｒ15は低級アルキル、ＮＨ2、又はヘテロアリールである）により置換される、請求項１２の化合物。
【請求項１４】
複素環はＣＯ2Ｒ7（ここでＲ7は低級アルキルである）により置換される、請求項１２の化合物。
【請求項１５】
Ｒ1は、ＮＲ5Ｒ6で任意に置換され得るシクロアルキルである、請求項１の化合物。
【請求項１６】
シクロアルキルはシクロヘキサンである、請求項１５の化合物。
【請求項１７】
シクロアルキルはＮＲ5Ｒ6（ここでＲ5とＲ6は、Ｈであるか、又はＲ5もしくはＲ6の１つはＳＯ2Ｒ15であり、Ｒ15はＮＲ5Ｒ6により任意に置換され得る低級アルキルである）で置換されたシクロヘキサンである、請求項１５の化合物。
【請求項１８】
Ｒ1は低級アルキル−複素環である、請求項１の化合物。
【請求項１９】
Ｒ1は、ＣＯＲ11、オキソ、ＯＲ12、又はＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル−複素環である、請求項１８の化合物。
【請求項２０】
Ｒ1は、Ｓ（Ｏ）nＲ15により任意に置換され得るアリールである、請求項１の化合物。
【請求項２１】
Ｒ1は、Ｓ（Ｏ）nＲ15（ここでＲ15は低級アルキルである）により任意に置換され得るフェニルである、請求項２０の化合物。
【請求項２２】
Ｒ1は、ＮＲ5Ｒ6により任意に置換され得る低級アルキルである、請求項１の化合物。
【請求項２３】
Ｒ1は、ＮＲ5Ｒ6（ここでＲ5又はＲ6の１つはＳＯ2Ｒ15であり、Ｒ15は低級アルキルである）により任意に置換されたエチル又はプロピルである、請求項２２の化合物。
【請求項２４】
Ｎ−｛３−［４−アミノ−５−（５−フルオロ−２−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−プロピル｝−メタンスルホンアミド（実施例８）である、請求項２３の化合物。
【請求項２５】
Ｒ1は、
【化２】
2009516666.tif 000037
の基から選択され、ここで
Ｒ3は、
Ｈ、
低級アルキル、
オキソ、ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、ＮＲ5Ｒ6、ＳＯ2Ｒ15、又はＣ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、
ＣＯ2Ｒ7、
ＣＯＲ12、
Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、及び
ＳＯ2Ｒ15、の基から選択され；
Ｒ4は、
Ｈ、
ＯＲ11、
低級アルキル、
ＮＲ5Ｒ6、
ＮＯ2、
オキソ、
ＣＮ、及び
ハロゲン、の基から選択され；
Ｒ4’は、
Ｈ、
ＯＲ11、
低級アルキル、
ＮＲ5Ｒ6、
ＮＯ2、
ＣＮ、及び
ハロゲン、の基から選択され；
Ｒ5とＲ6は、それぞれ独立に
Ｈ、
低級アルキル、
オキソ、ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14、ＳＯ2Ｒ15、ＮＳＯ2Ｒ12、ヘテロアリール、複素環、又はオキソにより置換された複素環、により置換された低級アルキル、
シクロアルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14、又はＳＯ2Ｒ15により置換されたシクロアルキル、
アリール、
ＮＲ13Ｒ14、ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、ＣＯＮＲ13Ｒ14、ＳＯ2Ｒ15、ハロゲン、低級アルキル、およびハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、ＣＯＮＲ13Ｒ14、又はＮＲ13Ｒ14により置換された低級アルキル、により置換されたアリール；
ＳＯ2Ｒ15、
ＣＯ2Ｒ12、及び
ＣＯＲ12、の基から選択され；
又は、−ＮＲ5Ｒ6基は全部で３〜７個の環原子を有する環を形成することができ、該環原子はＲ5とＲ6が結合した窒素に加えて炭素環原子を含み、該炭素環原子は１つ又はそれ以上の追加のＮもしくはＯ環原子又はＳＯ2基により任意に置換され、該環原子は、ＯＨ、オキソ、Ｎ13Ｒ14、低級アルキル、及びＯＲ12により置換された低級アルキル、により任意に置換され；
Ｒ7は、
Ｈ、
低級アルキル、
ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、ＮＲ5Ｒ6、又はＣＯＮＲ5Ｒ6、ハロゲン、オキソ、アリール、及び低級アルキル、ハロゲン、もしくはＮＲ5Ｒ6から独立に選択される最大３つの置換基により置換されたアリール、により置換された低級アルキル、
シクロアルキル、
ＯＨ、オキソ、又はＮＨ2により置換されたシクロアルキル、
ＳＯ2Ｒ15、及び
ＣＯＲ12、の基から選択され；
Ｒ10は、
低級アルキル、
アリール、及び
ハロゲン又はＮＲ5Ｒ6により置換されたアリール、の基から選択され；
Ｒ11は、
Ｈ、
低級アルキル、及び
オキソ及びハロゲンにより置換された低級アルキル、の基から選択され；
Ｒ12は、
Ｈ、
低級アルキル、及び
ハロゲン、オキソ、ＮＲ5Ｒ6、又はＯＲ11により置換された低級アルキル、の基から選択され；
Ｒ13とＲ14は、
Ｈ、
低級アルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ5Ｒ6、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、ＳＯ2Ｒ15、ＮＳＯ2Ｒ12、ヘテロアリール、複素環、又はオキソにより置換された複素環、により置換された低級アルキル、
シクロアルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ5Ｒ6、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＳＯ2Ｒ15により置換されたシクロアルキル、
アリール、
ＮＲ5Ｒ6、ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、ＳＯ2Ｒ15、ハロゲン、低級アルキル、およびハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、及びＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、により置換されたアリール；
ＳＯ2Ｒ15、
ＣＯ2Ｒ12、及び
ＣＯＲ12、から独立に選択され；
又は、−ＮＲ13Ｒ14基は、全部で３〜７個の環原子を有する環を形成することができ、該環原子はＲ13とＲ14が結合した窒素に加えて炭素環原子を含み、該炭素環原子は１つ又はそれ以上の追加のＮもしくはＯ環原子により任意に置換され、該環原子はＯＨ、オキソ、Ｎ5Ｒ6、低級アルキル、及びＯＲ12により置換された低級アルキル、により任意に置換され；
Ｒ15は、
アリール、
ハロゲン、ＣＯ2Ｒ12、ＳＯ2Ｒ10、ＣＯＲ12、低級アルキル、及びハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、の基により置換されたアリール、
ヘテロアリール、
ハロゲン、ＣＯ2Ｒ12、ＳＯ2Ｒ10、ＣＯＲ12、低級アルキル、及びハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、の基により置換されたヘテロアリール、
ＮＲ5Ｒ6、
低級アルキル、
ハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6の基により置換された低級アルキル、
複素環、及び
ＣＯ2Ｒ12、ＣＯＲ12、ＳＯ2Ｒ12、低級アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6の基により置換された複素環、の基から選択され；
ｎは０、１、又は２である、請求項１の化合物、
又は、その薬剤学的に許容される塩。
【請求項２６】
Ｒ2は、フェニル、チオフェニル、ベンゾフラニル、又はベンゾオキサゾリル（これらはそれぞれ、置換されていないか、又はハロゲン又は−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルから独立に選択される１、２、又は３個の置換基により置換される）であり；
Ｒ3は、
−ＳＯ2−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、
−ＳＯ2−ＮＨ2、
−ＳＯ2−（ＣＨ2）3−モルホリノ、
−ＳＯ2−ピリジニル、又は
−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり；
Ｒ4、Ｒ4’、及びＲ5は水素であり；
Ｒ6は、−ＳＯ2−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり；
Ｒ15は、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり；そして
ｎは２である、請求項２５の化合物、
又はその薬剤学的に許容される塩。
【請求項２７】
以下の式の化合物
【化３】
2009516666.tif 000038
｛式中、
Ｒ3は、
Ｈ、
低級アルキル、
オキソ、ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、ＮＲ5Ｒ6、ＳＯ2Ｒ15、又はＣ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、
ＣＯ2Ｒ7、
ＣＯＲ12、
Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、及び
ＳＯ2Ｒ15、の基から選択され；
Ｒ4は、
Ｈ、
ＯＲ11、
低級アルキル、
ＮＲ5Ｒ6、
ＮＯ2、
オキソ、
ＣＮ、及び
ハロゲン、の基から選択され；
Ｒ5とＲ6は、それぞれ独立に
Ｈ、
低級アルキル、
オキソ、ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14、ＳＯ2Ｒ15、ＮＳＯ2Ｒ12、ヘテロアリール、複素環、又はオキソにより置換された複素環、により置換された低級アルキル、
シクロアルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14、又はＳＯ2Ｒ15により置換されたシクロアルキル、
アリール、
ＮＲ13Ｒ14、ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、ＣＯＮＲ13Ｒ14、ＳＯ2Ｒ15、ハロゲン、低級アルキル、およびハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、ＣＯＮＲ13Ｒ14、又はＮＲ13Ｒ14により置換された低級アルキル、により置換されたアリール；
ＳＯ2Ｒ15、
ＣＯ2Ｒ12、及び
ＣＯＲ12、の基から選択され；
又は、−ＮＲ5Ｒ6基は全部で３〜７個の環原子を有する環を形成することができ、該環原子はＲ5とＲ6が結合した窒素に加えて炭素環原子を含み、該炭素環原子は１つ又はそれ以上の追加のＮもしくはＯ環原子又はＳＯ2基により任意に置換され、該環原子は、ＯＨ、オキソ、Ｎ13Ｒ14、低級アルキル、及びＯＲ12により置換された低級アルキル、により任意に置換され；
Ｒ7は、
Ｈ、
低級アルキル、
ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、ＮＲ5Ｒ6、又はＣＯＮＲ5Ｒ6、ハロゲン、オキソ、アリール、及び低級アルキル、ハロゲン、もしくはＮＲ5Ｒ6から独立に選択される最大３つの置換基により置換されたアリール、により置換された低級アルキル、
シクロアルキル、
ＯＨ、オキソ、又はＮＨ2により置換されたシクロアルキル、
ＳＯ2Ｒ15、及び
ＣＯＲ12、の基から選択され；
Ｒ11は、
Ｈ、
低級アルキル、及び
オキソ及びハロゲンにより置換された低級アルキル、の基から選択され；
Ｒ12は、
Ｈ、
低級アルキル、及び
ハロゲン、オキソ、ＮＲ5Ｒ6、又はＯＲ11により置換された低級アルキル、の基から選択され；
Ｒ13とＲ14は、
Ｈ、
低級アルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ5Ｒ6、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、ＳＯ2Ｒ15、ＮＳＯ2Ｒ12、ヘテロアリール、複素環、又はオキソにより置換された複素環、により置換された低級アルキル、
シクロアルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ5Ｒ6、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＳＯ2Ｒ15により置換されたシクロアルキル、
アリール、
ＮＲ5Ｒ6、ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、ＳＯ2Ｒ15、ハロゲン、低級アルキル、およびハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、及びＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、により置換されたアリール；
ＳＯ2Ｒ15、
ＣＯ2Ｒ12、及び
ＣＯＲ12、から独立に選択され；
又は、−ＮＲ13Ｒ14基は、全部で３〜７個の環原子を有する環を形成することができ、該環原子はＲ13とＲ14が結合した窒素に加えて炭素環原子を含み、該炭素環原子は１つ又はそれ以上の追加のＮもしくはＯ環原子により任意に置換され、該環原子はＯＨ、オキソ、Ｎ5Ｒ6、低級アルキル、及びＯＲ12により置換された低級アルキル、により任意に置換され；
Ｒ15は、
アリール、
ハロゲン、ＣＯ2Ｒ12、ＳＯ2Ｒ10、ＣＯＲ12、低級アルキル、及びハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、の基により置換されたアリール、
ヘテロアリール、
ハロゲン、ＣＯ2Ｒ12、ＳＯ2Ｒ10、ＣＯＲ12、低級アルキル、及びハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、の基により置換されたヘテロアリール、
ＮＲ5Ｒ6、
低級アルキル、
ハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6の基により置換された低級アルキル、
複素環、及び
ＣＯ2Ｒ12、ＣＯＲ12、ＳＯ2Ｒ12、低級アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6の基により置換された複素環、の基から選択され；
Ｒ18、Ｒ19、Ｒ20、及びＲ21はそれぞれ独立に、
低級アルキル、
ハロゲン、及び
ＯＲ12、から選択される｝
又は、その薬剤学的に許容される塩。
【請求項２８】
Ｒ3は、ＣＯ2Ｒ7、ＣＯＲ12、及びＳＯ2Ｒ15の基から選択される、請求項２７の化合物。
【請求項２９】
Ｒ3はＳＯ2Ｒ15であり、Ｒ15は低級アルキル又はＮＲ5Ｒ6である、請求項２８の化合物。
【請求項３０】
Ｒ4はＨ、ＯＲ11、又は低級アルキルである、請求項２７の化合物。
【請求項３１】
−ＮＲ5Ｒ6基は全部で３〜７個の環原子を有する環を形成することができ、該環原子はＲ5とＲ6が結合した窒素に加えて炭素環原子を含み、該炭素環原子は１つ又はそれ以上の追加のＮもしくはＯ環原子により任意に置換され、該環原子は、ＯＨ、オキソ、ＮＨ2、低級アルキル、又はＯＲ12により置換された低級アルキル、により任意に置換される、請求項２７の化合物。
【請求項３２】
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタンチオン（実施例１）；
４−［４−アミノ−５−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−ピペリジン−１−スルホン酸アミド（実施例４）；
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（５−フルオロ−２−メトキシ−フェニル）−メタンチオン（実施例５）；
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（５，６−ジフルオロ−ベンゾフラン−７−イル）−メタンチオン（実施例６）；
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（５，６−ジフルオロ−ベンゾオキサゾール−７−イル）−メタンチオン（実施例７）；
［４−アミノ−２−（３−モルホリン−４−イル−プロピルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタンチオン（実施例９）；
｛４−アミノ−２−（［１−（ピリジン−２−スルホニル）−ピペリジン−４−イルアミノ］−ピリミジン−５−イル｝−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタンチオン（実施例１０）；
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−チオフェン−２−イル−メタンチオン（実施例１１）；及び
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（６−クロロ−２，３−ジフルオロ−フェニル）−メタンチオン（実施例１３）；
の群から選択される、  請求項２７の化合物。
【請求項３３】
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタンチオン（実施例１５）；
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−フェニル−メタンチオン（実施例１６）；
４−［４−アミノ−５−（５−フルオロ−２−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（実施例１７）；及び
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピロリジン−３−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタンチオン（実施例１８）
の群から選択される、  請求項２７の化合物。
【請求項３４】
以下の式の化合物
【化４】
2009516666.tif 000039
｛式中、
Ｒ4は、
Ｈ、
ＯＲ11、
低級アルキル、
ＮＲ5Ｒ6、
ＮＯ2、
オキソ、
ＣＮ、及び
ハロゲン、の基から選択され；
Ｒ5とＲ6は、それぞれ独立に
Ｈ、
低級アルキル、
オキソ、ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14、ＳＯ2Ｒ15、ＮＳＯ2Ｒ12、ヘテロアリール、複素環、又はオキソにより置換された複素環、により置換された低級アルキル、
シクロアルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14、又はＳＯ2Ｒ15により置換されたシクロアルキル、
アリール、
ＮＲ13Ｒ14、ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、ＣＯＮＲ13Ｒ14、ＳＯ2Ｒ15、ハロゲン、低級アルキル、およびハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、ＣＯＮＲ13Ｒ14、又はＮＲ13Ｒ14により置換された低級アルキル、により置換されたアリール；
ＳＯ2Ｒ15、
ＣＯ2Ｒ12、及び
ＣＯＲ12、の基から選択され；
又は、−ＮＲ5Ｒ6基は全部で３〜７個の環原子を有する環を形成することができ、該環原子はＲ5とＲ6が結合した窒素に加えて炭素環原子を含み、該炭素環原子は１つ又はそれ以上の追加のＮもしくはＯ環原子又はＳＯ2基により任意に置換され、該環原子は、ＯＨ、オキソ、Ｎ13Ｒ14、低級アルキル、及びＯＲ12により置換された低級アルキル、により任意に置換され；
Ｒ10は、
低級アルキル、
アリール、及び
ハロゲン又はＮＲ5Ｒ6により置換されたアリール、の基から選択され；
Ｒ11は、
Ｈ、
低級アルキル、及び
オキソ及びハロゲンにより置換された低級アルキル、の基から選択され；
Ｒ12は、
Ｈ、
低級アルキル、及び
ハロゲン、オキソ、ＮＲ5Ｒ6、又はＯＲ11により置換された低級アルキル、の基から選択され；
Ｒ13とＲ14は、
Ｈ、
低級アルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ5Ｒ6、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、ＳＯ2Ｒ15、ＮＳＯ2Ｒ12、ヘテロアリール、複素環、又はオキソにより置換された複素環、により置換された低級アルキル、
シクロアルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ5Ｒ6、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＳＯ2Ｒ15により置換されたシクロアルキル、
アリール、
ＮＲ5Ｒ6、ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、ＳＯ2Ｒ15、ハロゲン、低級アルキル、およびハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、及びＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、により置換されたアリール；
ＳＯ2Ｒ15、
ＣＯ2Ｒ12、及び
ＣＯＲ12、から独立に選択され；
又は、−ＮＲ13Ｒ14基は、全部で３〜７個の環原子を有する環を形成することができ、該環原子はＲ13とＲ14が結合した窒素に加えて炭素環原子を含み、該炭素環原子は１つ又はそれ以上の追加のＮもしくはＯ環原子により任意に置換され、該環原子はＯＨ、オキソ、Ｎ5Ｒ6、低級アルキル、及びＯＲ12により置換された低級アルキル、により任意に置換され；
Ｒ15は、
アリール、
ハロゲン、ＣＯ2Ｒ12、ＳＯ2Ｒ10、ＣＯＲ12、低級アルキル、及びハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、の基により置換されたアリール、
ヘテロアリール、
ハロゲン、ＣＯ2Ｒ12、ＳＯ2Ｒ10、ＣＯＲ12、低級アルキル、及びハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、の基により置換されたヘテロアリール、
ＮＲ5Ｒ6、
低級アルキル、
ハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6の基により置換された低級アルキル、
複素環、及び
ＣＯ2Ｒ12、ＣＯＲ12、ＳＯ2Ｒ12、低級アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6の基により置換された複素環、の基から選択され；
Ｒ18、Ｒ19、Ｒ20、及びＲ21はそれぞれ独立に、
低級アルキル、
ハロゲン、及び
ＯＲ12、から選択される｝
又は、その薬剤学的に許容される塩。
【請求項３５】
Ｒ4はＨであり、Ｒ5もしくはＲ6の１つはＨもしくは低級アルキルであり、他の１つはＳＯ2Ｒ15であり、Ｒ15は低級アルキルであり、Ｒ18〜Ｒ21のうちの２つはハロゲンであり、Ｒ18〜Ｒ21のうちの１つはＣＯＲ12（ここでＲ12は低級アルキルである）である、請求項３４の化合物。
【請求項３６】
Ｎ−｛４−［４−アミノ−５−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝メタンスルホンアミド（実施例２）；及び
Ｎ−｛４−［４−アミノ−５−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−Ｎ−メチルメタンスルホンアミド（実施例３）、
の群から選択される、請求項３４の化合物。
【請求項３７】
以下の式の化合物
【化５】
2009516666.tif 000040
｛式中、
Ｒ4は、
Ｈ、
ＯＲ11、
低級アルキル、
ＮＲ5Ｒ6、
ＮＯ2、
ＣＮ、及び
ハロゲン、の基から選択され；
Ｒ5とＲ6は、それぞれ独立に
Ｈ、
低級アルキル、
オキソ、ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14、ＳＯ2Ｒ15、ＮＳＯ2Ｒ12、ヘテロアリール、複素環、又はオキソにより置換された複素環、により置換された低級アルキル、
シクロアルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14、又はＳＯ2Ｒ15により置換されたシクロアルキル、
アリール、
ＮＲ13Ｒ14、ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、ＣＯＮＲ13Ｒ14、ＳＯ2Ｒ15、ハロゲン、低級アルキル、およびハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、ＣＯＮＲ13Ｒ14、又はＮＲ13Ｒ14により置換された低級アルキル、により置換されたアリール；
ＳＯ2Ｒ15、
ＣＯ2Ｒ12、及び
ＣＯＲ12、の基から選択され；
又は、−ＮＲ5Ｒ6基は全部で３〜７個の環原子を有する環を形成することができ、該環原子はＲ5とＲ6が結合した窒素に加えて炭素環原子を含み、該炭素環原子は１つ又はそれ以上の追加のＮもしくはＯ環原子又はＳＯ2基により任意に置換され、該環原子は、ＯＨ、オキソ、Ｎ13Ｒ14、低級アルキル、及びＯＲ12により置換された低級アルキル、により任意に置換され；
Ｒ11は、
Ｈ、
低級アルキル、及び
オキソ及びハロゲンにより置換された低級アルキル、の基から選択され；
Ｒ12は、
Ｈ、
低級アルキル、及び
ハロゲン、オキソ、ＮＲ5Ｒ6、又はＯＲ11により置換された低級アルキル、の基から選択され；
Ｒ13とＲ14は、
Ｈ、
低級アルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ5Ｒ6、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、ＳＯ2Ｒ15、ＮＳＯ2Ｒ12、ヘテロアリール、複素環、又はオキソにより置換された複素環、により置換された低級アルキル、
シクロアルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ5Ｒ6、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＳＯ2Ｒ15により置換されたシクロアルキル、
アリール、
ＮＲ5Ｒ6、ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、ＳＯ2Ｒ15、ハロゲン、低級アルキル、およびハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、及びＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、により置換されたアリール；
ＳＯ2Ｒ15、
ＣＯ2Ｒ12、及び
ＣＯＲ12、から独立に選択され；
又は、−ＮＲ13Ｒ14基は、全部で３〜７個の環原子を有する環を形成することができ、該環原子はＲ13とＲ14が結合した窒素に加えて炭素環原子を含み、該炭素環原子は１つ又はそれ以上の追加のＮもしくはＯ環原子により任意に置換され、該環原子はＯＨ、オキソ、Ｎ5Ｒ6、低級アルキル、及びＯＲ12により置換された低級アルキル、により任意に置換され；
Ｒ15は、
アリール、
ハロゲン、ＣＯ2Ｒ12、ＳＯ2Ｒ10、ＣＯＲ12、低級アルキル、及びハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、の基により置換されたアリール、
ヘテロアリール、
ハロゲン、ＣＯ2Ｒ12、ＳＯ2Ｒ10、ＣＯＲ12、低級アルキル、及びハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、の基により置換されたヘテロアリール、
ＮＲ5Ｒ6、
低級アルキル、
ハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6の基により置換された低級アルキル、
複素環、及び
ＣＯ2Ｒ12、ＣＯＲ12、ＳＯ2Ｒ12、低級アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6の基により置換された複素環、の基から選択され；
Ｒ18、Ｒ19、Ｒ20、及びＲ21はそれぞれ独立に、
低級アルキル、
ハロゲン、及び
ＯＲ12、から選択され；そして
ｎは０、１、又は２である｝
又は、その薬剤学的に許容される塩。
【請求項３８】
ｎは２であり、Ｒ4’はＨであり、Ｒ15は低級アルキル又はＮＲ5Ｒ6である、請求項３７の化合物。
【請求項３９】
Ｒ15はメチルである、請求項３８の化合物。
【請求項４０】
Ｒ15はＮＲ5Ｒ6であり、Ｒ5とＲ6はＨである、請求項３９の化合物。
【請求項４１】
Ｒ18-21のうちの２つはハロゲンであり、Ｒ18-21のうちの１つはＯＲ12（ここでＲ12は低級アルキルである）である、請求項３８の化合物。
【請求項４２】
［４−アミノ−２−（４−メタンスルホニル−フェニルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタンチオン（実施例１２）；及び
４−［４−アミノ−５−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−ベンゼンスルホンアミド（実施例１４）、
から選択される、請求項３７の化合物。
【請求項４３】
活性成分として治療的有効量の請求項１の化合物、及び薬剤学的に許容される担体又は賦形剤を含む組成物。
【請求項４４】
非経口投与に適した、請求項４３の医薬組成物。
【請求項４５】
癌、特に固形腫瘍、さらに詳しくは乳癌、結腸癌、肺癌、又は前立腺癌の治療のための、請求項４３の医薬組成物。
【請求項４６】
癌、特に固形腫瘍、さらに詳しくは乳癌、結腸癌、肺癌、又は前立腺癌の治療のための、請求項１〜４２のいずれか１項の化合物。
【請求項４７】
癌、特に固形腫瘍、さらに詳しくは乳癌、結腸癌、肺癌、又は前立腺癌の治療のための医薬を製造するための、請求項１〜４２のいずれか１項の化合物の使用。
【請求項４８】
請求項１の少なくとも１つの化合物の治療的有効量を投与することを含む、乳癌、結腸癌、肺癌、又は前立腺癌の治療法。
【請求項４９】
ａ）以下の式
【化６】
2009516666.tif 000041
の化合物をＰ2Ｓ5の存在下で反応させて、以下の化合物
【化７】
2009516666.tif 000042
（ここで、Ｒ1とＲ2は請求項１〜４２に示した意味を有する）を得て；そして
ｂ）ａ）の反応生成物を反応混合物から単離し、そして
ｃ）ｂ）で得られた該単離された生成物を、任意に薬剤学的に許容される塩に変換する、請求項１〜４２のいずれか１項の化合物の製造法。
【請求項５０】
実質的に本明細書中に記載した、新規生成物、中間体、方法、及び使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、サイクリン依存性キナーゼを阻害する新規４−アミノピリミジン−５−チオン誘導体に関する。これらの化合物とその薬剤学的に許容される塩は抗増殖活性を有し、特に癌、特に固形腫瘍の治療又は抑制に有用である。本発明はまた、かかる化合物を含有する医薬組成物と、癌を治療又は抑制、特に乳癌、肺癌、結腸癌、及び前立腺癌を治療又は抑制する方法とに関する。
【０００２】
無制限な細胞増殖は癌の特徴である。癌性腫瘍細胞は、典型的には細胞分裂サイクルを直接または間接に制御する遺伝子に対して何らかの傷害を有する。
【０００３】
細胞サイクルの種々の段階を経由する細胞の進行は、制御タンパク質、サイクリン、及びキナーゼからなる一連の多酵素複合体により制御される。これらのキナーゼはサイクリン依存性キナーゼ（Ｃｄｋ）と呼ばれる。Ｃｄｋは細胞サイクルを通して発現されるが、サイクリンのレベルは細胞サイクルの段階により変化する。
【０００４】
細胞サイクル制御の４つの主要な段階は、一般的にＧ1、Ｓ、Ｇ2、及びＭと記載される。細胞サイクル制御に必須のいくつかの酵素は、サイクリンＤ／Ｃｄｋ４、サイクリンＤ／Ｃｄｋ６、サイクリンＥ／Ｃｄｋ２、サイクリンＡ／Ｃｄｋ２、及びサイクリンＢ／Ｃｄｋ１（Ｃｄｃ２／サイクリンＢとも呼ばれる）のようである。サイクリンＤ／Ｃｄｋ４、サイクリンＤ／Ｃｄｋ６、及びサイクリンＥ／Ｃｄｋ２は、網膜芽細胞腫ホスホタンパク質（ｐＲｂ）のリン酸化によりＧ1期中及びＧ1期からＳ期への移行を制御する。サイクリンＡ／Ｃｄｋ２は、Ｓ期中の通過を制御し、サイクリンＢ／Ｃｄｋ１は、Ｇ2チェックポイントを制御し、Ｍ（有糸分裂）期に入ることを制御する。
【０００５】
細胞サイクルの進行は、細胞が細胞分裂することに決定している時、早期Ｇ1を超えてＣｄｋ１（ｃｄｃ２）とＣｄｋ２により制御される。従ってこれらのＣｄｋの薬剤阻害は、細胞増殖を停止させるのみでなく、アポトーシス性細胞死滅を開始させるようである。細胞がいったんＧ1制限点を通過して、Ｓ期に入ることが決定されると、これらは細胞サイクル進行の継続のための成長因子刺激には依存しなくなる。
【０００６】
ＤＮＡ複製の完了後、細胞は細胞サイクルのＧ2期に入り、Ｍ期と細胞分裂の準備をする。Ｃｄｋ１は、サイクリンＡ及びＢと共同して細胞サイクルのこれらの後期を細胞が通過するのを制御することが証明されている。Ｃｄｋ１の完全な活性化には、サイクリン結合と特異的リン酸化の両方を必要とする（Morgan, D.O., De Bondt, H.L., Curr. Opin. Cell. Biol. 1994, 6, 239-246）。いったん活性化されると、Ｃｄｋ１／サイクリン複合体は、細胞をＭ期中の分裂の準備をする。
【０００７】
上記したようにＧ1期からＳ期への移行は、Ｃｄｋ４とサイクリンＤ及びＣｄｋ２とサイクリンＥとの複合体により制御される。これらの複合体は腫瘍サプレッサータンパク質網膜芽細胞腫（ｐＲｂ）をリン酸化し、転写因子Ｅ２Ｆを放出し、Ｓ期で必要な遺伝子の発現を可能にする（Nevins, J.R. Science 1992, 258, 424-429; lavia, P. BioEssays 1999, 21, 221-230）。Ｃｄｋ４／サイクリンＤとＣｄｋ２／サイクリンＥ複合体の活性を阻止すると、細胞サイクルがＧ1期で停止する。例えばＩＮＫ４ファミリーのタンパク質（ｐ１６INK4aを含む）（これはＣｄｋ４／サイクリンＤ複合体のキナーゼ活性を阻止する）はＧ1での停止を引き起こす（Sherr, C.J. Science 1996, 274, 1672-1677）。この特異的阻止には総説がある（Vidal, A. Gene 2000, 247, 1-15）。
【０００８】
Ｃｄｋ４とサイクリンＣ３との複合体はまた、Ｇ2期の細胞サイクル進行においてある役割を果たすことが実験で証明されている。ｐ１６によるか又は優性阻害Ｃｄｋ４を使用するこの複合体の阻害は、ｐＲｂを発現しない細胞でＧ2期での停止を引き起こす（Gabrielli B.G. et al. J. Biol. Chem. 1999, 274, 13961-13969）。
【０００９】
ｐＲｂ経路の多くの欠陥が種々の癌に関与していることが証明されている。例えば遺伝性黒色腫でＣｄｋ４の過剰発現が観察されている（Webster, K.R. Exp. Opin. Invest. Drugs 1998, 7, 865-887）；サイクリンＤが多くのヒトの癌で過剰発現されている（Sherr, C.J. Science 1996, 274, 1672-1677）；ｐ１６が多くの腫瘍で変異しているか又は検出されている（Webster, K.R. Exp. Opin. Invest. Drugs 1998, 7, 865-887）；そして、多くのヒトの癌でｐＲｂ機能が変異又は欠失により消失している（Weinberg, R.A. Cell 1995, 81, 323-330）。この経路の欠陥はまた、予後に影響を与えることが証明されている。例えばｐ１６の消失は、非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）や悪性黒色腫の予後の悪さに相関している（Tsihlias, J. et al. Annu. Rev. Med. 1999, 50, 401-423）。遺伝子レベル及び／又は発現レベルでのサイクリンＤ１及び／又はｐＲｂの異常が、一連の非小細胞肺癌試料の９０％以上に存在し、これはサイクリンＤ１及び／又はｐＲｂが肺腫瘍発生の重要な工程であることを示している（Marchetti, A. et al. Int. J. Cancer 1998, 75, 573-582）。５０の膵臓癌症例の内の４９（９８％）で、ｐ１６遺伝子及び連結するサイクリンＤの不活性化のためにｐＲｂ／ｐ１６経路のみが消失していた（Schutte, M. et al. Cancer Res. 1998, 57, 3126-3134）。多くの組織におけるｐＲｂとサイクリン／サイクリン依存性キナーゼの発現の関連についての総説について、Teicher, B.A., Cancer Chemother. Pharmacol. 2000, 46, 293-304を参照されたい。
【００１０】
Ｇ1期からＳ期への細胞サイクルの進行を制御するその役割によりヒトの癌ではＣｄｋ４／サイクリンＤ／ｐＲｂ経路が関与していることと、この経路を調節することによる治療的有効性の可能性から、この経路の成分を阻害又は促進する物質に大きな関心が集まっている。例えば、抗体、アンチセンスオリゴヌクレオチド、及びこの経路に関与するタンパク質の過剰発現又は添加を使用して、癌細胞に対する作用が証明されている。例えば、Lukas, J. et al. Nature 1995, 79, 573-582; Nevins, J.R. Science 1992, 258, 424-429; Lim, I.K. et al. Molecular Carcinogenesis 1998, 23, 25-35; Tam, S.W. et al. Oncogene 1994, 9, 2663-2674; Driscoll, B. et al. Am. J. Physiol. 1997, 273 (Lung Cell. Mol. Physiol.), L941-L949; 及びSang, J. et al. Chin. Sci. Bull. 1999, 44, 51-544を参照されたい。
【００１１】
細胞増殖の制御におけるｃｄｋの役割は充分確立されている。例えば上記したように、抗増殖治療薬としてＣｄｋ４、Ｃｄｋ２、及びＣｄｋ１経路の標的を阻害する化合物の使用を実証する膨大な文献がある。すなわち細胞増殖のインヒビターは、異常な細胞増殖を特徴とする疾患プロセス、例えば、癌及び他の細胞増殖疾患、例えば炎症（例えば、良性前立腺肥大、家族性腺筋症、ポリープ症、神経繊維腫症、アテローム性動脈硬化症、肺繊維症、関節炎、乾癬、炎症性腸疾患、移植拒絶感染症）、ウイルス感染症（特に限定されないが、ヘルペスウイルス、ポックスウイルス、エプスタインバーウイルス）、自己免疫疾患（例えば、ループス、慢性関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患）、神経変性障害（特に限定されないが、アルツハイマー病）、及び神経変性疾患（例えば、パーキンソン病、筋萎縮性側策硬化症、色素性網膜炎、棘筋萎縮症、及び脳変性）の治療に有用である可逆的細胞静止剤として作用する。
【００１２】
Ｃｄｋ４／サイクリンＤ経路を阻害する化合物の総説については、例えばHarris, W. and Wilkinson, S., Emerging Drugs., 2000, 5, 287-297; Dumas, J., Exp. Opin. Ther. Patents, 2001, 11, 405-429; Sielecki T., et a ., J. Med. Chem., 2000, 43, 1-18を参照されたい。
【００１３】
本発明は、式
【化１】
2009516666.tif 000003
［式中、
Ｒ1は、
複素環と低級アルキル−複素環（いずれの場合も複素環部分は、
Ｈ、
低級アルキル、
オキソ、ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、ＮＲ5Ｒ6、Ｓ（Ｏ）nＲ15、又はＣ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、
ＣＯ2Ｒ7、
ＣＯＲ11、
ＣＯＲ12、
Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14、
Ｓ（Ｏ）nＲ15、
オキソ、
ＯＲ12、又は
ＮＲ5Ｒ6、から独立に選択される最大４個の置換基で任意に置換され得る）；
アリール；
以下により置換されたアリール：
Ｈ、
Ｓ（Ｏ）n−Ｒ15、
ＮＲ5Ｒ6、
カルボニル、
低級アルキル、ＯＲ12、又はＮＲ5Ｒ6により置換されたカルボニル、
低級アルキル、
ＯＲ10又はＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、
ＯＲ8、
ハロゲン；
シクロアルキル；
ＯＲ7、ＮＲ5Ｒ6、又はＳ（Ｏ）nＲ15により置換されたシクロアルキル；
低級アルキル、及び
以下により置換された低級アルキル：
ＮＲ5Ｒ6、
ＮＲ11ＳＯ2Ｒ15、
ＣＯ2Ｒ10、
Ｓ（Ｏ）n−Ｒ15、
複素環、
低級アルキル、ＣＯ2Ｒ12、又はＳＯ2Ｒ15により置換された複素環、
ヘテロアリール、
低級アルキル、ＣＯ2Ｒ12、又はＳＯ2Ｒ15により置換された複素環、
アリール、及び
低級アルキル、ハロゲン、ＮＲ5Ｒ6、ＣＯＲ12、又はＣＯ2Ｒ12により置換されたアリール、の基から選択され；
Ｒ2は、
アリール、ヘテロアリール、シクロアルキル、及び複素環（それぞれ、
低級アルキル、
ハロゲン又はＯＲ10により置換された低級アルキル、
ハロゲン、
ＯＲ12、
ＮＯ2、
ＣＮ，
ＮＲ5Ｒ6、
Ｓ（Ｏ）n−Ｒ9、及び
ＳＯ2−ＮＲ16Ｒ17、の基から独立に選択される最大４個の置換基で任意に置換され得る）、の基から選択され；
Ｒ5とＲ6は、
Ｈ、
低級アルキル、
オキソ、ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14、ＳＯ2Ｒ15、ＮＳＯ2Ｒ12、ヘテロアリール、複素環、又はオキソにより置換された複素環、により置換された低級アルキル、
シクロアルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14、又はＳＯ2Ｒ15により置換されたシクロアルキル、
アリール、
ＮＲ13Ｒ14、ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14、ＳＯ2Ｒ15、ハロゲン、低級アルキル、又はハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14、もしくはＮＲ13Ｒ14により置換された低級アルキル、により置換されたアリール、
ＳＯ2Ｒ15
ＣＯ2Ｒ12、及び
ＣＯＲ12、の基からそれぞれ独立に選択され、
又は、−ＮＲ5Ｒ6基は全部で３〜７個の環原子を有する環を形成することができ、該環原子はＲ5とＲ6が結合した窒素に加えて炭素環原子を含み、該炭素環原子は１つ又はそれ以上の追加のＮもしくはＯ環原子又はＳＯ2基により任意に置換され、該環原子は、ＯＨ、オキソ、ＮＲ13Ｒ14、低級アルキル、及びＯＲ12により置換された低級アルキル、により任意に置換され；
Ｒ7は、
Ｈ、
低級アルキル、
ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、ＮＲ5Ｒ6、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、ハロゲン、及びオキソにより置換された低級アルキル、
シクロアルキル、
ＯＨ、オキソ、又はＮＨ2により置換されたシクロアルキル、
ＳＯ2Ｒ15、及び
ＣＯＲ12、の基から選択され；
Ｒ8は、
Ｈ、
低級アルキル、
ＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、
複素環、及び
ＣＯ2Ｒ12又はＳＯ2Ｒ15により置換された複素環、の基から選択され；
Ｒ9は、
Ｈ、及び
低級アルキル、の基から選択され；
Ｒ10は、
低級アルキル、
アリール、及び
ハロゲン又はＮＲ5Ｒ6により置換されたアリール、の基から選択され；
Ｒ11は、
Ｈ、
低級アルキル、及び
オキソ及びハロゲンにより置換された低級アルキル、の基から選択され；
Ｒ12は、
Ｈ、
低級アルキル、及び
ＮＲ5Ｒ6又はＯＲ11により置換された低級アルキル、の基から選択され；
Ｒ13とＲ14は、
Ｈ、
低級アルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ5Ｒ6、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、ＳＯ2Ｒ15、ＮＳＯ2Ｒ12、ヘテロアリール、複素環、又はオキソにより置換された複素環、
シクロアルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ5Ｒ6、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＳＯ2Ｒ15により置換されたシクロアルキル、
アリール、
ＮＲ5Ｒ6、ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、ＣＯＮＲ5Ｒ6、ＳＯ2Ｒ15、ハロゲン、低級アルキル、及びハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、もしくはＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、により置換されたアリール、
ＳＯ2Ｒ15
ＣＯ2Ｒ12、及び
ＣＯＲ12、の基からそれぞれ独立に選択され、
又は、−ＮＲ13Ｒ14基は、全部で３〜７個の環原子を有する環を形成することができ、該環原子はＲ13とＲ14が結合した窒素に加えて炭素環原子を含み、該炭素環原子は１つ又はそれ以上の追加のＮもしくはＯ環原子により任意に置換され、該環原子は、ＯＨ、オキソ、ＮＲ5Ｒ6、低級アルキル、及びＯＲ12により置換された低級アルキル、により任意に置換され；
Ｒ15は、
アリール、
ハロゲン、ＣＯ2Ｒ12、ＳＯ2Ｒ10、ＣＯＲ12、低級アルキル、及びハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、の基により置換されたアリール、
ヘテロアリール、
ハロゲン、ＣＯ2Ｒ12、ＳＯ2Ｒ10、ＣＯＲ12、低級アルキル、及びハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、の基により置換されたヘテロアリール、
ＮＲ5Ｒ6、
低級アルキル、
ハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、
複素環、及び
ＣＯ2Ｒ12、ＣＯＲ12、ＳＯ2Ｒ12、低級アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6、の基により置換された複素環、の基から選択され；
Ｒ16とＲ17は、
Ｈ、及び
低級アルキル、の基からそれぞれ独立に選択され；
又は、−ＮＲ16Ｒ17基は全部で３〜７個の環原子を有する環を形成することができ、該環原子はＲ16とＲ17が結合した窒素に加えて炭素環原子を含み、該炭素環原子は１つ又はそれ以上の追加のＮもしくはＯ環原子により任意に置換され、該環原子は、低級アルキル、ＯＨ、オキソ、及びＮＨ2により任意に置換され；
ｎは０、１、又は２である］の新規ジアミノピリミジン類、
又は、その薬剤学的に許容される塩に関する。
【００１４】
これらの化合物は、サイクリン依存性キナーゼ、さらに詳しくはＣｄｋ１、Ｃｄｋ２、及びＣｄｋ４を阻害する。これらの化合物及びその薬剤学的に許容される塩は、抗増殖活性を有し、癌、特に固形腫瘍、さらに詳しくは乳癌、結腸癌、肺癌、又は前立腺癌の治療又は抑制に有用である。
【００１５】
本発明はまた、本発明の１つ又はそれ以上の化合物、又はその薬剤学的に許容される塩もしくはエステルと、薬剤学的に許容される担体もしくは賦形剤とを含む医薬組成物に関する。
【００１６】
本発明はまた、癌、特に固形腫瘍、さらに詳しくは乳癌、結腸癌、肺癌、又は前立腺癌の治療用の医薬を製造するための、少なくとも１つの式Ｉの化合物の使用に関する。
【００１７】
本発明はさらに、治療の必要な患者に治療的有効量の式Ｉの化合物又はその薬剤学的に許容される塩もしくはエステルを投与することにより、癌を治療又は抑制する方法、さらに詳しくは固形腫瘍の治療又は抑制、特に乳癌、結腸癌、肺癌、又は前立腺癌の治療又は抑制に関する。
【００１８】
本明細書において以下の用語は、以下に定義する意味を有する。
【００１９】
「アルコキシ」は酸素により分子の残りに結合した任意のアルキル基を意味し、しばしば１価の基−ＯＲで示される。例としては、特に限定されないが、メトキシ、エトキシなどがある。
【００２０】
「アリール」は、１価の、単環式又は二環式、芳香族炭素環式炭化水素基、好ましくは６〜１０員の芳香族芳香環系を意味する。好ましくはアリール基には、特に限定されないが、フェニル、ナフチル、トリル、及びキシリルがある。
【００２１】
「カルボニル」は、−Ｃ＝Ｏ基を意味する。
【００２２】
「シクロアルキル」は、３〜８個の原子を含む非芳香族の部分的又は完全に飽和した１価環状炭化水素基を意味する。シクロアルキル基の例は、特に限定されないがシクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、及びシクロヘキシルを含む。
【００２３】
「有効量」は、疾患の症状を予防、緩和、又は改善するか、又は治療される被験体の生存を延長するのに有効な量を意味する。
【００２４】
「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素、好ましくはフッ素又は塩素を意味する。
【００２５】
「ヘテロ原子」は、Ｎ、Ｏ、及びＳから選択される原子を意味する。
【００２６】
「ヘテロアリール」は、最大２つの環を含む芳香族複素環系を意味する。好適なヘテロアリール基には、特に限定されないが、チエニル、フリル、インドリル、ピロリル、ピリジニル、ピリジン、ピラジニル、オキサゾリル、チアキソリル、キノリニル、ピリミジニル、イミダゾール、ベンゾフラン、及びテトラゾリがある。好適な環系は、特に限定されないが、ベンゾフラン、ベンゾオキサゾール、及びチオフェンがある。
【００２７】
「複素環」又は「ヘテロシクリル」は、３〜８個の環原子の飽和又は部分的飽和した、非芳香族環状基であり、ここで１〜３個の環原子は、窒素、酸素、Ｓ（Ｏ）n（ここでｎは０〜２の整数である）、又はこれらの組合せから選択されるヘテロ原子であり、残りの環原子はＣである。好適な複素環の例は、ピペリジン、ピペラジン、ピロリジン、モルホリン、インドリン、テトラヒドロピラニル、チオモルホリノ、ペンタメチレンスルフィド、およびペンタメチレンスルホンである。
【００２８】
「ＩＣ50」は、特異的測定活性の５０％を阻害するのに必要な本発明の特定の化合物の濃度である。ＩＣ50は特に、後述の実施例１９Ａに記載のように測定することができる。
【００２９】
「Ｋｉ」は、標的タンパク質へのリガンド／インヒビター（すなわち、本発明の化合物）の熱力学的結合の尺度を示す。Ｋｉは、特に、後述の実施例１９Ａに記載のように測定することができる。
【００３０】
「低級アルキル」は単独又は別の用語（例えば低級アルキル−複素環）と組合せて、１〜６個、好ましくは１〜４個の炭素原子を有する直鎖または分岐鎖飽和脂肪族炭化水素を示す。典型的な低級アルキル基には、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ブチル、ｔ−ブチル、２−ブチル、ペンチル、ヘキシルなどがある。
【００３１】
「オキソ」は＝Ｏを意味する。
【００３２】
「薬剤学的に許容されるエステル」は、カルボキシル基を有する通常のエステル化された式Ｉの化合物を意味し、このエステルは式Ｉの化合物の生物学的有効性と性質とを保持し、インビボ（生体中）で切断されて対応する活性カルボン酸になる。医薬組成物の送達のためのエステルの例と使用についてのさらなる情報は、Design of Prodrugs, Bundgaard H編（Elsevier, 1985）に記載されている。またH. Ansel et al. Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems （第６版、1995）、pp. 108-109；Krogsgaard-Larsen et al., Textbook of Drug Design and Development （第２版、1996）、pp. 152-191参照。
【００３３】
「薬剤学的に許容される塩」は、式Ｉの化合物の生物学的有効性と性質を保持する通常の酸付加塩又は塩基付加塩であり、適切な非毒性有機酸もしくは無機酸又は有機塩基もしくは無機塩基から生成される。酸付加塩の例には、無機酸（例えば塩酸、臭化水素酸、ヨウ化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、及び硝酸）から得られるもの、および有機酸（例えば、p-トルエンスルホン酸、サリチル酸、メタンスルホン酸、シュウ酸、コハク酸、クエン酸、リンゴ酸、乳酸、フマル酸など）から得られるものがある。塩基付加塩の例には、アンモニウム、カリウム、ナトリウム、及び４級アンモニウム水酸化物（例えば、水酸化テトラメチルアンモニウム）から得られるものがある。医薬化合物（すなわち薬物）から塩への化学修飾は、化合物の改良された物理的及び化学的安定性、吸湿性、流動性、および溶解性を得るために、製剤化学者に公知の方法である。例えばH. Ansel et al. Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems （第６版、1995）、pp. 1456-1457を参照。
【００３４】
「薬剤学的に許容される」、例えば薬剤学的に許容される担体、賦形剤などは、薬剤学的に許容され、その具体的な化合物が投与される被験体に対して実質的に非毒性であることを意味する。
【００３５】
置換アルキルのような「置換」は、特に明記しない場合は置換が１つ又はそれ以上の位置で起きることができることを意味し、各置換の置換基が特定の選択肢から独立に選択されることを意味し、２つ以上の置換基が種々の部位に同時に存在してもよいことを意味する。
【００３６】
「治療的有効量」は、ヒト腫瘍細胞（ヒト腫瘍細胞株を含む）の増殖を有意に阻害するか及び／又はその分化を防ぐ、少なくとも１つの式Ｉの化合物又はその薬剤学的に許容される塩もしくはエステルの量を意味する。
【００３７】
ある実施態様において本発明は、式Ｉ
【化２】
2009516666.tif 000004
の化合物、又はその薬剤学的に許容される塩（ここでＲ1とＲ2は上記で定義したものである）に関する。
【００３８】
式Ｉの化合物の好適な実施態様において、Ｒ2はアリール、好ましくはフェニル、さらに好ましくはハロゲン特にＦにより置換されたフェニルであるか、又はＯＲ12（ここでＲ12は低級アルキルである）である。最も好適な実施態様においてＲ2は、１つまたは２つのＦ分子とＯＲ12基（ここでＲ12は低級アルキル、好ましくはメチルである）により置換されたフェニルである。
【００３９】
式Ｉの化合物の別の好適な実施態様において、Ｒ2はヘテロアリール、好ましくはベンゾフラン、ベンゾオキサゾール又はベンゾアゾールであり、最も好ましくはハロゲン特にフッ素により置換されたベンゾフランである。
【００４０】
式Ｉの化合物の別の好適な実施態様において、Ｒ2はシクロアルキル、好ましくはシクロペンチル又はシクロヘキシルであり、その各々は低級アルキル及び／又はアルコキシで任意に置換されてよい。
【００４１】
式Ｉの化合物の別の好適な実施態様において、Ｒ2は複素環、好ましくはピペリジン、ピロリジン、又はペンタメチレンスルフィドであり、その各々は低級アルキル又はアルコキシで任意に置換されてよい。
【００４２】
式Ｉの化合物の別の好適な実施態様において、Ｒ2は上記で定義したものであり、Ｒ1は複素環、好ましくはピペリジン又はピロリジンであり、最も好ましくはＳ（Ｏ）nＲ15（ここでｎは２であり、Ｒ15は低級アルキル、ＮＨ2又はヘテロアリールである）により置換される。またＣＯ2Ｒ7基（ここでＲ7は低級アルキルである）により置換された複素環も好適である。
【００４３】
式Ｉの化合物の別の好適な実施態様において、Ｒ2は上記で定義したものであり、Ｒ1はシクロアルキル、好ましくはシクロヘキシルであり、最も好ましくはＮＲ5Ｒ6（ここで、Ｒ5とＲ6はＨであるか、又はＲ5又はＲ6の１つはＳＯ2Ｒ15であり、好ましくはＲ15は低級アルキルもしくはＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキルである）により置換されたシクロヘキサンである。
【００４４】
式Ｉの化合物の別の好適な実施態様において、Ｒ2は上記で定義したものであり、Ｒ1は低級アルキル−複素環である。
【００４５】
式Ｉの化合物の別の好適な実施態様において、Ｒ2は上記で定義したものであり、Ｒ1はアリール、好ましくはフェニル、最も好ましくはＳ（Ｏ）nＲ15（ここでＲ15は低級アルキル、好ましくはメチルである）により置換されたフェニルである。
【００４６】
式Ｉの化合物の別の好適な実施態様において、Ｒ2は上記で定義したものであり、Ｒ1は低級アルキル、好ましくはエチルおよびプロピルであり、最も好ましくはＮＲ5Ｒ6（ここでＲ5又はＲ6の１つはＳＯ2Ｒ15であり、Ｒ15は低級アルキルである）により置換された低級アルキルである。かかる化合物の例には、以下がある：
Ｎ−｛３−［４−アミノ−５−（５−フルオロ−２−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−プロピル｝−メタンスルホンアミド（実施例８）。
【００４７】
別の好適な実施態様において、Ｒ1は、
【化３】
2009516666.tif 000005
の基から選択され、ここで
Ｒ3は、
Ｈ、
低級アルキル、
オキソ、ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、ＮＲ5Ｒ6、ＳＯ2Ｒ15、又はＣ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、
ＣＯ2Ｒ7、
ＣＯＲ12、
Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、及び
ＳＯ2Ｒ15、の基から選択され；
Ｒ4は、
Ｈ、
ＯＲ11、
低級アルキル、
ＮＲ5Ｒ6、
ＮＯ2、
オキソ、
ＣＮ、及び
ハロゲン、の基から選択され；
Ｒ4’は、
Ｈ、
ＯＲ11、
低級アルキル、
ＮＲ5Ｒ6、
ＮＯ2、
ＣＮ、及び
ハロゲン、の基から選択され；
Ｒ5とＲ6は、それぞれ独立に
Ｈ、
低級アルキル、
オキソ、ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14、ＳＯ2Ｒ15、ＮＳＯ2Ｒ12、ヘテロアリール、複素環、又はオキソにより置換された複素環、により置換された低級アルキル、
シクロアルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ13Ｒ14、Ｃ（Ｏ）ＮＲ13Ｒ14、又はＳＯ2Ｒ15により置換されたシクロアルキル、
アリール、
ＮＲ13Ｒ14、ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、ＣＯＮＲ13Ｒ14、ＳＯ2Ｒ15、ハロゲン、低級アルキル、およびハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、ＣＯＮＲ13Ｒ14、又はＮＲ13Ｒ14により置換された低級アルキル、により置換されたアリール；
ＳＯ2Ｒ15、
ＣＯ2Ｒ12、及び
ＣＯＲ12、の基から選択され；
又は、−ＮＲ5Ｒ6基は全部で３〜７個の環原子を有する環を形成することができ、該環原子はＲ5とＲ6が結合した窒素に加えて炭素環原子を含み、該炭素環原子は１つ又はそれ以上の追加のＮもしくはＯ環原子又はＳＯ2基により任意に置換され、該環原子は、ＯＨ、オキソ、Ｎ13Ｒ14、低級アルキル、及びＯＲ12により置換された低級アルキル、により任意に置換され；
Ｒ7は、
Ｈ、
低級アルキル、
ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、ＮＲ5Ｒ6、ＣＯＮＲ5Ｒ6、ハロゲン、又はオキソにより置換された低級アルキル、
シクロアルキル、
ＯＨ、オキソ、又はＮＨ2により置換されたシクロアルキル、
ＳＯ2Ｒ15、及び
ＣＯＲ12、の基から選択され；
Ｒ10は、
低級アルキル、
アリール、及び
ハロゲン又はＮＲ5Ｒ6により置換されたアリール、の基から選択され；
Ｒ11は、
Ｈ、
低級アルキル、及び
オキソ及びハロゲンにより置換された低級アルキル、の基から選択され；
Ｒ12は、
Ｈ、
低級アルキル、及び
ハロゲン、オキソ、ＮＲ5Ｒ6、又はＯＲ11により置換された低級アルキル、の基から選択され；
Ｒ13とＲ14は、
Ｈ、
低級アルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ5Ｒ6、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、ＳＯ2Ｒ15、ＮＳＯ2Ｒ12、ヘテロアリール、複素環、又はオキソにより置換された複素環、により置換された低級アルキル、
シクロアルキル、
ＣＯ2Ｒ12、ＯＲ12、ＮＲ5Ｒ6、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＳＯ2Ｒ15により置換されたシクロアルキル、
アリール、
ＮＲ5Ｒ6、ＯＲ12、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、ＳＯ2Ｒ15、ハロゲン、低級アルキル、およびハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、及びＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、により置換されたアリール；
ＳＯ2Ｒ15、
ＣＯ2Ｒ12、及び
ＣＯＲ12、の基から独立に選択され；
又は、−ＮＲ13Ｒ14基は、全部で３〜７個の環原子を有する環を形成することができ、該環原子はＲ13とＲ14が結合した窒素に加えて炭素環原子を含み、該炭素環原子は１つ又はそれ以上の追加のＮもしくはＯ環原子により任意に置換され、該環原子はＯＨ、オキソ、Ｎ5Ｒ6、低級アルキル、及びＯＲ12により置換された低級アルキル、により任意に置換され；
Ｒ15は、
アリール、
ハロゲン、ＣＯ2Ｒ12、ＳＯ2Ｒ10、ＣＯＲ12、低級アルキル、及びハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、の基により置換されたアリール、
ヘテロアリール、
ハロゲン、ＣＯ2Ｒ12、ＳＯ2Ｒ10、ＣＯＲ12、低級アルキル、及びハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6により置換された低級アルキル、の基により置換されたヘテロアリール、
ＮＲ5Ｒ6、
低級アルキル、
ハロゲン、ＯＲ12、オキソ、ＣＯ2Ｒ12、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6の基により置換された低級アルキル、
複素環、及び
ＣＯ2Ｒ12、ＣＯＲ12、ＳＯ2Ｒ12、低級アルキル、Ｃ（Ｏ）ＮＲ5Ｒ6、又はＮＲ5Ｒ6の基により置換された複素環、の基から選択され；
ｎは０、１、又は２であり、
又は、その薬剤学的に許容される塩である。
【００４８】
別の好適な実施態様において、本発明は、式Ｉ［ここで
Ｒ1は、
【化４】
2009516666.tif 000006
の基から選択され、
Ｒ2は、フェニル、チオフェニル、ベンゾフラニル、又はベンゾオキサゾリル（これらはそれぞれ、置換されていないか、又はハロゲン又は−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルから独立に選択される１、２、又は３個の置換基により置換される）であり；
Ｒ3は、
−ＳＯ2−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキル、
−ＳＯ2−ＮＨ2、
−ＳＯ2−（ＣＨ2）3−モルホリノ、
−ＳＯ2−ピリジニル、又は
−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり；
Ｒ4、Ｒ4’、及びＲ5は水素であり；
Ｒ6は、−ＳＯ2−（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり；
Ｒ15は、（Ｃ１−Ｃ４）−アルキルであり；そして
ｎは２である］の化合物、
又はその薬剤学的に許容される塩に関する。
【００４９】
別の好適な実施態様において本発明は、式
【化５】
2009516666.tif 000007
（式中、Ｒ3とＲ4は上記で定義したものであり、Ｒ18、Ｒ19、Ｒ20、及びＲ21はそれぞれ独立に、低級アルキル、ハロゲン、及びＯＲ12から選択される）の化合物に関する。
【００５０】
好ましくはＲ3は、ＣＯ2Ｒ7、ＣＯＲ12、及びＳＯ2Ｒ15の基から選択される。
【００５１】
最も好ましくはＲ3はＳＯ2Ｒ15であり、Ｒ15は低級アルキル又はＮＲ5Ｒ6である。好適なＲ4基には、Ｈ、ＯＲ11、及び低級アルキルがある。好適なＲ5とＲ6基は、−ＮＲ5Ｒ6基が全部で３〜７個の環原子を有する環を形成することができるものであり、該環原子はＲ5とＲ6が結合した窒素に加えて炭素環原子を含み、該炭素環原子は１つ又はそれ以上の追加のＮもしくはＯ環原子により任意に置換され、該環原子は、ＯＨ、オキソ、ＮＨ2、低級アルキル、又はＯＲ12により置換された低級アルキル、により任意に置換される。
【００５２】
式Ｉ（ａ）の化合物の例には以下がある：
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタンチオン（実施例１）；
４−［４−アミノ−５−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−ピペリジン−１−スルホン酸アミド（実施例４）；
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（５−フルオロ−２−メトキシ−フェニル）−メタンチオン（実施例５）；
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（５，６−ジフルオロ−ベンゾフラン−７−イル）−メタンチオン（実施例６）；
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（５，６−ジフルオロ−ベンゾオキサゾール−７−イル）−メタンチオン（実施例７）；
［４−アミノ−２−（３−モルホリン−４−イル−プロピルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタンチオン（実施例９）；
｛４−アミノ−２−（［１−（ピリジン−２−スルホニル）−ピペリジン−４−イルアミノ］−ピリミジン−５−イル｝−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタンチオン（実施例１０）；
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−チオフェン−２−イル−メタンチオン（実施例１１）；
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（６−クロロ−２，３−ジフルオロ−フェニル）−メタンチオン（実施例１３）；
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタンチオン（実施例１５）；
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−フェニル−メタンチオン（実施例１６）；
４−［４−アミノ−５−（５−フルオロ−２−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（実施例１７）；及び
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピロリジン−３−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタンチオン（実施例１８）。
【００５３】
本発明の他の好適な実施態様は、式
【化６】
2009516666.tif 000008
（式中、Ｒ4、Ｒ5、Ｒ6、Ｒ18、Ｒ19、Ｒ20、およびＲ21は上記で定義したものである）の化合物に関する。最も好ましくはＲ4はＨであり、Ｒ5又はＲ6の１つはＨ又は低級アルキルであり、他の１つはＳＯ2Ｒ15であり、ここでＲ15は低級アルキルであり、Ｒ18〜Ｒ21の２つはハロゲン、最も好ましくはＦであり、Ｒ18〜Ｒ21の１つはＣＯＲ12（ここでＲ12は、低級アルキル、最も好ましくはメチルである）である。
【００５４】
かかる化合物の例には以下がある：
Ｎ−｛４−［４−アミノ−５−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝メタンスルホンアミド（実施例２）；
Ｎ−｛４−［４−アミノ−５−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−Ｎ−メチルメタンスルホンアミド（実施例３）。
【００５５】
本発明の他の好適な実施態様は、式
【化７】
2009516666.tif 000009
（式中、Ｒ4’、Ｒ15、Ｒ18、Ｒ19、Ｒ20、およびＲ21は上記で定義したものである）の化合物に関する。最も好ましくはｎは２であり、Ｒ4’はＨであり、Ｒ15は低級アルキル、好ましくはメチルであり、又はＲ15はＮＲ5Ｒ6であり、ここでＲ5とＲ6はＨであり、Ｒ18-21の２つはハロゲン、好ましくはＦであり、Ｒ18〜Ｒ21の１つはＯＲ12（ここでＲ12は、低級アルキル、好ましくはメチルである）である。
【００５６】
かかる化合物の例には以下がある：
［４−アミノ−２−（４−メタンスルホニル−フェニルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタンチオン（実施例１２）；及び
４−［４−アミノ−５−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−ベンゼンスルホンアミド（実施例１４）。
【００５７】
本明細書に開示され上記式Ｉで包含される化合物は、互変異性又は構造異性を示してもよい。本発明は、これらの化合物の任意の互変異性体又は構造異性体、又はこれらの型の混合物を含み、上記式で示される１つの互変異性体又は構造異性体に限定されない。
【００５８】
本発明の化合物は、任意の従来法で調製することができる。これらの化合物を合成するための適切な方法は実施例で示される。一般に式Ｉの化合物は以下のスキームに従って、ＵＳ２００４／０１６２３０３Ａ１号（これは必要な程度に参照することにより本明細書に組み込まれる）に記載の方法に従って調製することができる。
【化８】
2009516666.tif 000010
（式中、Ｒ1とＲ2は本明細書で定義されるものである）。
【００５９】
立体異性体混合物を光学的に純粋な立体異性体に分離する
（式Ｉの化合物がキラルである時）
式Ｉの異性体構造の光学的分離は、例えばキラル高速液体クロマトグラフィー（キラルＨＰＬＣとしても知られている）のような公知の方法に従って行うことができる。分離法は公知であり、"Enantiomers, Racemates, and Resolutions" (Jacques, J. et al. Johen Wiley and Sons, NY, 1981）に要約されている。キラルＨＰＬＣの方法は公知であり、"Separation of Enantiomaers by Liquid Chromatographic Methods" (Pirkie, W.H. and Finn, J. in "Asmmetic Synthesis", 第１巻、Morrison, J.D.編、Academic Press, Inc., NY 1983, pp. 87-124）に要約されている。
【００６０】
塩基性窒素を有する式Ｉの化合物を薬剤学的に許容される酸付加塩に変換する
塩基性窒素を有する式Ｉの化合物の薬剤学的に許容される酸付加塩への随時変換は、従来法により行われる。例えば化合物を無機酸（例えば塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸）で処理するか、又は適切な有機酸（例えば酢酸、クエン酸、酒石酸、メタンスルホン酸、p-トルエンスルホン酸など）で処理することができる。
【００６１】
別の実施態様において本発明は、少なくとも１つの式Ｉの化合物、又はその薬剤学的に許容される塩もしくはエステル、及び薬剤学的に許容される賦形剤及び／又は担体を含む医薬組成物を含む。
【００６２】
これらの医薬組成物は、経口的に、例えば錠剤、被覆錠剤、糖衣錠、硬ゼラチンカプセル剤もしくは軟ゼラチンカプセル剤、液剤、エマルジョン剤、又は懸濁剤として投与することができる。これらはまた、例えば坐剤の形で直腸に投与されるか、又は非経口に、例えば注入可能な液剤の形で投与することができる。
【００６３】
式Ｉの化合物及び／又はその塩を含む本発明の医薬組成物は、当該分野で公知の方法（例えば従来の混合、封入、溶解、造粒、乳化、捕捉、糖衣錠作成、又は凍結乾燥）により製造される。これらの医薬製剤は、治療的に不活性の無機又は有機担体を用いて調製することができる。錠剤、被覆錠剤、糖衣錠、および硬ゼラチンカプセル用のかかる担体として、乳糖、コーンスターチ、又はこれらの誘導体、タルク、ステアリン酸、又はその塩を使用することができる。軟ゼラチンカプセルの適切な担体には、植物油、蝋、および脂肪がある。活性物質の性質に依存して、軟ゼラチンカプセルの場合は一般に担体が必要ではない。液剤やシロップ剤の製造用の適切な担体は、水、ポリオール、ショ糖、不活性糖およびグルコースである。注射用の適切な担体は、水、アルコール、ポリオール、グリセリン、植物油、リン脂質、および界面活性剤である。坐剤用の適切な担体は、天然の又は硬化油、蝋、脂肪、および半液体ポリオールである。
【００６４】
医薬製剤はまた、保存剤、可溶化剤、安定剤、湿潤剤、乳化剤、甘味剤、着色剤、香味剤、浸透圧を変化させるための塩、緩衝剤、被覆剤、又は抗酸化剤を含有してもよい。これらはまた、治療的に有用な物質（式Ｉの化合物以外の追加の活性成分を含む）を含有してもよい。
【００６５】
上記したように本発明の化合物（式Ｉの化合物を含む）は、細胞増殖性疾患の治療又は抑制（癌の化学的予防を含む）に有用である。化学的予防は、突然変異誘発イベントの開始を阻止するか、又は腫瘍再発を阻害する損傷をすでに受けた前悪性腫瘍細胞の進行を阻止することによる、侵襲的癌の進行を阻害するとして規定される。これらの化合物および該化合物を含有する製剤は、固形腫瘍、例えば乳癌、結腸癌、肺癌、および前立腺癌の治療又は抑制に特に有用である。
【００６６】
本発明の化合物の治療的有効量は、疾患の症状を予防、緩和、もしくは改善するのに有用な、又は治療されている被験体の生存を延長するのに有用な化合物の量を意味する。治療的有効量の決定は当該分野の技術の範囲内である。
【００６７】
本発明の化合物の治療的有効量又は用量は、広い範囲で変動することができ、当該分野で公知の方法で決定される。かかる用量は、各具体的な症例で個々の必要（投与される具体的な化合物、投与経路、治療される症状、ならびに治療される患者を含む）に応じて調整されるであろう。一般に体重が約７０Ｋｇの成人への経口又は非経口投与の場合は、１日用量約１０ｍｇ〜約１０，０００ｍｇ、好ましくは約２００ｍｇ〜約１，０００ｍｇが適切であるが、必要な場合は上限を超えても良い。１日用量は、単回用量で又は分割した用量で、又は非経口投与（これは点滴として与えられる）で投与することができる。
【００６８】
本発明の化合物は、既知の抗癌治療法（例えば放射線療法）、又は細胞静止剤もしくは細胞毒性剤（特に限定されないがＤＮＡ相互作用物質、例えばシスプラチン又はドキソルビシン；トポイソメラーゼIIインヒビター、例えばエトポシド：トポイソメラーゼＩインヒビター、例えばＣＰＴ−１１又はトポテカン；チューブリン相互作用物質、例えばパクリタキセル、ドセタキセル、又はエポチロン；ホルモン剤、例えばタモキシフェン；チミジラートシンターゼインヒビター、例えば５−フルオロウラシル；および代謝拮抗剤、例えばメソトレキセート）と組合せて使用（一緒に又は逐次的に投与される）してもよい。式Ｉの化合物はまた、ｐ５３トランス活性化の調節物質と組合せると有用である。
【００６９】
一定用量として調製される場合、上記組合せ生成物は、上記用量範囲の本発明の化合物と、その認可された用量範囲内での他の薬剤活性物質又は治療物とを含有する。例えば早期ｃｋｄ１インヒビターであるオロムシンは、アポトーシスの誘導において既知の細胞毒性剤と相乗作用的に作用することが発見されている（J. Cell Sci., 1995, 108, 2897-2904）。同時投与又は組合せが不適切な場合、式Ｉの化合物はまた既知の抗癌剤もしくは細胞毒性剤と逐次的に投与してもよい。本発明は投与の順序を限定されない：式Ｉの化合物は、既知の抗癌剤もしくは細胞毒性剤の投与の前もしくは後に投与してもよい。例えばｃｄｋインヒビターであるフラボピリドール（flavopiridol）の細胞毒性は、抗癌剤の投与順序により影響を受ける（Cancer Reseearch, 1997, 57, 3375）。
【実施例】
【００７０】
以下の例は、本発明の化合物及び製剤を合成及び使用するための好適な方法を例示する。これらの例および調製物は例示するのみであり、決して限定的ではない。添付の特許請求の範囲により規定される本発明の精神と範囲に入る他の実施態様があることが理解すべきである。
【００７１】
実施例１
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタンチオン
【化９】
2009516666.tif 000011
【００７２】
１，４−ジオキサン中で還流している［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタノンの溶液（ＵＳ２００４／０１６２３０３Ａ１に従って調製される、８１０ｍｇ、１．８４ｍｍｏｌ）の溶液に、五硫化燐（８８８ｍｇ，２ｍｍｏｌ、Aldrich）を加えた。混合物を１．５時間還流攪拌し、次に室温に冷却した。飽和重炭酸ナトリウム（２０ｍｌ）を加え、生じた混合物を３０分攪拌した。混合物を酢酸エチル（３×２０ｍＬ）で抽出し、抽出物を一緒にし、乾燥した（Ｎａ2ＳＯ4）。次に残渣をＩＳＣＯ機器において、溶離剤として酢酸エチルとヘキサンを用いてクロマトグラフィーをし（３０％酢酸エチル／ヘキサンを０〜４分；４０％を４〜９分；５０％を９〜１２分；６０％を１２〜１５分；７０％を１５〜２０分；そして１００％を２０分〜３０分）、溶媒を除去してオレンジ色の固体を得た。６３０ｍｇ、７５％。ＬＣ／ＭＳ（ｍ＋Ｈ）+；４５８。
【００７３】
実施例２
Ｎ−｛４−［４−アミノ−５−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝メタンスルホンアミド
【化１０】
2009516666.tif 000012
【００７４】
実施例１の化合物の調製と同様の方法により、Ｎ−｛４−［４−アミノ−５−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−ベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝メタンスルホンアミド（ＵＳ２００４／０１６２３０３Ａ１に従って調製した、２００ｍｇ）から、Ｎ−｛４−［４−アミノ−５−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝メタンスルホンアミドを作成した。ＬＣ／ＭＳ（ｍ＋Ｈ）+；４７２。
【００７５】
実施例３
Ｎ−｛４−［４−アミノ−５−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−Ｎ−メチルメタンスルホンアミド
【化１１】
2009516666.tif 000013
【００７６】
実施例１の化合物の調製と同様の方法により、Ｎ−｛４−［４−アミノ−５−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−ベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミド（ＵＳ２００４／０１６２３０３Ａ１に従って調製した、４０ｍｇ）から、Ｎ−｛４−［４−アミノ−５−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−シクロヘキシル｝−Ｎ−メチル−メタンスルホンアミドを作成した。ＬＣ／ＭＳ（ｍ＋Ｈ）+；４８６。
【００７７】
実施例４
４−［４−アミノ−５−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−ピペリジン−１−スルホン酸アミド
【化１２】
2009516666.tif 000014
【００７８】
実施例１の化合物の調製と同様の方法により、４−［４−アミノ−５−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−ベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−ピペリジン−１−スルホン酸アミド（ＵＳ２００４／０１６２３０３Ａ１に従って調製した、８０ｍｇ）から、４−［４−アミノ−５−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−ピペリジン−１−スルホン酸アミドを作成した。ＬＣ／ＭＳ（ｍ＋Ｈ）+；４５９。
【００７９】
実施例５
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（５−フルオロ−２−メトキシ−フェニル）−メタンチオン
【化１３】
2009516666.tif 000015
【００８０】
実施例１の化合物の調製と同様の方法により、［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（５−フルオロ−２−メトキシ−フェニル）−メタノン（ＵＳ２００４／０１６２３０３Ａ１に従って調製した、４０ｍｇ）から、［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（５−フルオロ−２−メトキシ−フェニル）−メタンチオンを作成した。ＬＣ／ＭＳ（ｍ＋Ｈ）+；４４０。
【００８１】
実施例６
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（５，６−ジフルオロ−ベンゾフラン−７−イル）−メタンチオン
【化１４】
2009516666.tif 000016
【００８２】
実施例１の化合物の調製と同様の方法により、［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（５，６−ジフルオロベンゾフラン−７−イル）−メタノン（ＵＳ２００４／０１６２３０３Ａ１に従って調製した、１３０ｍｇ）から、［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（５，６−ジフルオロ−ベンゾフラン−７−イル）−メタンチオンを作成した。ＬＣ／ＭＳ（ｍ＋Ｈ）+；４６８。
【００８３】
実施例７
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（５，６−ジフルオロ−ベンゾオキサゾール−７−イル）−メタンチオン
【化１５】
2009516666.tif 000017
【００８４】
実施例１の化合物の調製と同様の方法により、［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（５，６−ジフルオロ−ベンゾオキサゾール−７−イル）−メタノン（ＵＳ２００４／０１６２３０３Ａ１に従って調製した、４０ｍｇ）から、［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（５，６−ジフルオロ−ベンゾオキサゾール−７−イル）−メタンチオンを作成した。ＬＣ／ＭＳ（ｍ＋Ｈ）+；４６９。
【００８５】
実施例８
Ｎ−｛３−［４−アミノ−５−（５−フルオロ−２−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−プロピル｝−メタンスルホンアミド
【化１６】
2009516666.tif 000018
【００８６】
実施例１の化合物の調製と同様の方法により、Ｎ−｛３−［４−アミノ−５−（５−フルオロ−２−メトキシ−ベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−プロピル｝−メタンスルホンアミド（ＵＳ２００４／０１６２３０３Ａ１に従って調製した、７０ｍｇ）から、Ｎ−｛３−［４−アミノ−５−（５−フルオロ−２−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−プロピル｝−メタンスルホンアミドを作成した。ＬＣ／ＭＳ（ｍ＋Ｈ）+；４１４。
【００８７】
実施例９
｛４−アミノ−２−［１−（３−モルホリン−４−イル−プロパン−１−スルホニル）−ピペリジン−４−イルアミノ］−ピリミジン−５−イル｝−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタンチオン
【化１７】
2009516666.tif 000019
【００８８】
実施例１の化合物の調製と同様の方法により、｛４−アミノ−２−［１−（３−モルホリン−４−イル−プロパン−１−スルホニル）−ピペリジン−４−イルアミノ］−ピリミジン−５−イル｝−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタノン（ＵＳ２００４／０１６２３０３Ａ１に従って調製した、６０ｍｇ）から、｛４−アミノ−２−［１−（３−モルホリン−４−イル−プロパン−１−スルホニル）−ピペリジン−４−イルアミノ］−ピリミジン−５−イル｝−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタンチオンを作成した。ＬＣ／ＭＳ（ｍ＋Ｈ）+；５７０。
【００８９】
実施例１０
｛４−アミノ−２−（［１−（ピリジン−２−スルホニル）−ピペリジン−４−イルアミノ］−ピリミジン−５−イル｝−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタンチオン
【化１８】
2009516666.tif 000020
【００９０】
実施例１の化合物の調製と同様の方法により、｛４−アミノ−２−（［１−（ピリジン−２−スルホニル）−ピペリジン−４−イルアミノ］−ピリミジン−５−イル｝−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタノン（ＵＳ２００４／０１６２３０３Ａ１に従って調製した、５０ｍｇ）から、｛４−アミノ−２−（［１−（ピリジン−２−スルホニル）−ピペリジン−４−イルアミノ］−ピリミジン−５−イル｝−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタンチオンを作成した。ＬＣ／ＭＳ（ｍ＋Ｈ）+；５２１。
【００９１】
実施例１１
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−チオフェン−２−イル−メタンチオン
【化１９】
2009516666.tif 000021
【００９２】
実施例１の化合物の調製と同様の方法により、［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−チオフェン−２−イル−メタノン（ＵＳ２００４／０１６２３０３Ａ１に従って調製した、８０ｍｇ）から、［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−チオフェン−２−イル−メタンチオンを作成した。ＬＣ／ＭＳ（ｍ＋Ｈ）+；３９８。
【００９３】
実施例１２
［４−アミノ−２−（４−メタンスルホニル−フェニルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタンチオン
【化２０】
2009516666.tif 000022
【００９４】
実施例１の化合物の調製と同様の方法により、［４−アミノ−２−（４−メタンスルホニル−フェニルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタノン（ＵＳ２００４／０１６２３０３Ａ１に従って調製した、１０４ｍｇ）から、［４−アミノ−２−（４−メタンスルホニル−フェニルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタンチオンを作成した。ＬＣ／ＭＳ（ｍ＋Ｈ）+；４５１。
【００９５】
実施例１３
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（６−クロロ−２，３−ジフルオロ−フェニル）−メタンチオン
【化２１】
2009516666.tif 000023
【００９６】
実施例１の化合物の調製と同様の方法により、［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（６−クロロ−２，３−ジフルオロ−フェニル）−メタノン（ＵＳ２００４／０１６２３０３Ａ１に従って調製した、６０ｍｇ）から、［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（６−クロロ−２，３−ジフルオロ−フェニル）−メタンチオンを作成した。ＬＣ／ＭＳ（ｍ＋Ｈ）+；４６２．９。
【００９７】
実施例１４
４−［４−アミノ−５−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−ベンゼンスルホンアミド
【化２２】
2009516666.tif 000024
【００９８】
実施例１の化合物の調製と同様の方法により、４−［４−アミノ−５−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−ベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−ベンゼンスルホンアミド（ＵＳ２００４／０１６２３０３Ａ１に従って調製した、５０ｍｇ）から、４−［４−アミノ−５−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−ベンゼンスルホンアミドを作成した。ＬＣ／ＭＳ（ｍ＋Ｈ）+；４５２。
【００９９】
実施例１５
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタンチオン
【化２３】
2009516666.tif 000025
【０１００】
実施例１の化合物の調製と同様の方法により、［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタノン（ＵＳ２００４／０１６２３０３Ａ１に従って調製した、８０ｍｇ）から、［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，６−ジフルオロ−フェニル）−メタンチオンを作成した。ＬＣ／ＭＳ（ｍ＋Ｈ）+；４２８。
【０１０１】
実施例１６
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−フェニル−メタンチオン
【化２４】
2009516666.tif 000026
【０１０２】
実施例１の化合物の調製と同様の方法により、［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−フェニル−メタノン（ＵＳ２００４／０１６２３０３Ａ１に従って調製した、５６ｍｇ）から、［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピペリジン−４−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−フェニル−メタンチオンを作成した。ＬＣ／ＭＳ（ｍ＋Ｈ）+；３９２。
実施例１７
４−［４−アミノ−５−（５−フルオロ−２−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
【化２５】
2009516666.tif 000027
【０１０３】
実施例１の化合物の調製と同様の方法により、４−［４−アミノ−５−（５−フルオロ−２−メトキシ−ベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（ＵＳ２００４／０１６２３０３Ａ１に従って調製した、３８０ｍｇ）から、４−［４−アミノ−５−（５−フルオロ−２−メトキシ−チオベンゾイル）−ピリミジン−２−イルアミノ］−ピペリジン−１−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを作成した。ＬＣ／ＭＳ（ｍ＋Ｈ）+；４６２。
【０１０４】
実施例１８
［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピロリジン−３−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタンチオン
【化２６】
2009516666.tif 000028
【０１０５】
実施例１の化合物の調製と同様の方法により、［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピロリジン−３−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタノン（ＵＳ２００４／０１６２３０３Ａ１に従って調製した、６０ｍｇ）から、［４−アミノ−２−（１−メタンスルホニル−ピロリジン−３−イルアミノ）−ピリミジン−５−イル］−（２，３−ジフルオロ−６−メトキシ−フェニル）−メタンチオンを作成した。ＬＣ／ＭＳ（ｍ＋Ｈ）+；４４４。
【０１０６】
本発明の化合物の薬理学的性質は、多くの薬理学的測定法により確認される。以下の例示された薬理学的測定法は、本発明の化合物とその塩を用いて行われている。本発明の化合物は、０．５μＭ未満のＫｉ値で、Ｃｄｋ１／サイクリンＡ、Ｃｄｋ２／サイクリンＥ、及び／又はＣｄｋ４／サイクリンＤ活性を示した。さらに本発明のいくつかの化合物の抗増殖力価を、１．０μＭ未満、好ましくは０．５μＭ未満、最も好ましくは０．２μＭ未満のＭＴＴアッセイから報告されたＩＣ50値により、ヒト結腸腫瘍細胞株ＨＣＴ１１６において試験した。
【０１０７】
以下のキナーゼ及び細胞ベースの測定法が癌治療の有望性に適度に相関することは、医化学者により認識されるであろう。
【０１０８】
実施例１９：キナーゼアッセイ
Ａ：ＩＣ50測定
Ｃｄｋ４、Ｃｄｋ２、及びＣｄｋ１活性の阻害を測定するために、FlashPlate（登録商標）アッセイ（NEN（登録商標）-Life Science Products）を使用してキナーゼアッセイを行った。FlashPlateアッセイは、ヒトサイクリンＢ−ＣＤＫ１、ヒトサイクリンＥ−ＣＤＫ２、又はヒトサイクリンＤ１−ＣＤＫ４複合体を使用して行った。バキュロウイルスベクター中のＧＳＴ−サイクリンＥ（ＧＳＴ−ｃｙｃＥ）、ＣＤＫ２、ＧＳＴ−サイクリンＢ（ＧＳＴ−ｃｙｃＢ）、ＣＤＫ１、ＧＳＴ−ＣＤＫ４、およびサイクリンＤ１（ｃｙｃＤ１）ｃＤＮＡクローンは、Baylor College of Medicine（テキサス州ヒューストン）のW. Harper博士から提供された。タンパク質をHigh Five（登録商標）昆虫細胞で同時発現させ、複合体をグルタチオンセファロース樹脂（Pharmacia, Piscataway, NJ）で既に記載されている（Harper, J.W. et al. Cell 1993, 75, 805-816）ように精製した。網膜芽細胞腫（Ｒｂ）タンパク質の６×−ヒスチジンタグ付き末端切断型（アミノ酸３８６〜９２８）を、ｃｙｃＤ１−ＣＤＫ４、ｃｙｃＢ−ＣＤＫ１、及びｃｙｃＥ−ＣＤＫ２アッセイの基質として使用した（発現プラスミドは、Veronica Sullivan博士、Department of Molecular Virology, Roche Research Centre（Welwyn Garden City, 英国）により提供された）。Ｒｂタンパク質はＣＤＫ４、ＣＤＫ２、及びＣＤＫ１によるリン酸化の天然の基質である（Herwig and Strauss Eur. J. Biochem. Vol. 246 (1997) pp. 581-601、及びそこに引用されている文献を参照）。
【０１０９】
６２Ｋｄタンパク質の発現は、Ｍ１５大腸菌（E. coli）株中のＩＰＴＧ誘導性プロモーターの制御下で行われた。細胞を超音波処理により溶解し、１ｍＭイミダゾールで前処理したＮｉ−キレート化アガロースカラムに、ｐＨ８．０で溶解物を結合させて精製した。次に樹脂をｐＨ６．０まで徐々に低下するｐＨ緩衝液で数回洗浄し、５００ｍＭイミダゾールで溶出した。溶出したタンパク質を２０ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．５）、３０％グリセロール、２００ｍＭ ＮａＣｌ、及び１ｍＭ ＤＴＴに対して透析した。精製したＲｂ融合タンパク質ストックをタンパク質濃度について定量し、分注し、−７０℃で保存した。
【０１１０】
本明細書で報告されたすべてのキナーゼアッセイについて、１０μg/mlのＲｂタンパク質で１００μｌ／ウェルを使用して９６ウェルFlashPlatesを被覆した。プレートをシェーカー上で４℃で一晩又は室温で３時間インキュベートした。非特異的リン酸化の対照とするために、ウェルの１列を１００μｌ／ウェルの被覆緩衝液（２０ｍＭ ＨＥＰＥＳ、０．２Ｍ ＮａＣｌ）で被覆した。次にプレートを洗浄緩衝液（リン酸緩衝化生理食塩水中０．０１％Ｔｗｅｅｎ２０）で２回洗浄した。試験すべき化合物（「試験化合物」）を５×最終濃度でウェルに加えた。直ちに４０μｌの反応混合物（２５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、２０ｍＭ ＭｇＣｌ2、０．００２％ Ｔｗｅｅｎ２０、２ｍＭ ＤＴＴ、１μＭ ＡＴＰ、４ｎＭ 33Ｐ−ＡＴＰ）と、バックグランドより少なくとも１０倍高いカウントを与えるのに充分な量の酵素とを添加して、反応を開始させた。室温でシェーカー上でプレートを３０分間インキュベートした。洗浄緩衝液でプレートを４回洗浄し、密封し、TopCountシンチレーションカウンター（Packard Instrument Co., Downers Grove, IL）で計測した。Ｒｂリン酸化の阻害パーセント（これはＣＤＫ活性の阻害の尺度である）を以下の式に従って測定した：
【化２７】
2009516666.tif 000029
ここで「試験化合物」は、試験二重測定の１分当たりの平均カウントを意味し、「非特異的」は、サイクリンＤ／Ｃｄｋ４などを添加しなかった時の１分当たりの平均カウントを意味し、「全体」は化合物を加えなかった時の１分当たりの平均カウントを意味する。ＩＣ50値は、記載の条件下で放射能標識物のタンパク質キナーゼ誘導性取り込みを５０％低下させる試験化合物の濃度である。
【０１１１】
Ｂ：Ｋｉ測定
あるいは、阻害活性はＫｉを使用して測定される。上記実施例１９Ａに記載のタンパク質構築体を使用して、ＣＤＫ１、ＣＤＫ２、及びＣＤＫ４ ＨＴＲＦアッセイを組み立てた。これらは９６ウェルフォーマットで行い、３８４ウェルプレートフォーマットで読んだ。アッセイは、ＡＴＰについてのそれぞれのＫｍの３×で行った。
【０１１２】
ＣＤＫ４アッセイでは、２５ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．０）、６．２５ｍＭ ＭｇＣｌ2、１．５ｍＭ ＤＴＴ、１３５μＭ ＡＴＰで、試験化合物をその最終濃度の３×に希釈した。ＤＭＳＯ濃度は４．７６％以下であった。２０μｌを９６ウェルプレートのウェルに加えた。２５ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．０）、６．２５ｍＭ ＭｇＣｌ2、０．００３％ Ｔｗｅｅｎ２０、０．３ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ、１．５ｍＭ ＤＴＴ中に０．１８５μＭ Ｒｂと２．２５μｇ／ｍｌ ＣＤＫ４を含有する溶液を４０μｌ／ウェルで加えて、キナーゼ反応を開始させた。ＣＤＫ４を含まないブランクセルを含めた。プレートを攪拌しながら３７℃で３０分インキュベートした。２５ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．０）、６．２４ｍＭ ＥＤＴＡ、０．２ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ中の１．６μＭ 抗ホスホ−Ｒｂ（Ｓｅｒ７８０）抗体（Cell Signaling Inc.）の１５μｌ／ウェルを添加してキナーゼ反応を停止させた。３７℃で３０分後、２５ｍＭＨＥＰＥＳ（ｐＨ７．０）、０．５ｍｇ／ｍｌ ＢＳＡ中の３ｎＭ Lance-Eu-W1024標識抗ウサギＩｇＧと６０ｎＭ アロフィコシアニン結合抗Ｈｉｓ６（Perkin Elmer Life Sciences）の１５μｌ／ウェルを加えた。３７℃で１時間インキュベーション後、各ウェル（二重測定）の３５μｌを３８４ウェルブラックプレートに移した。ViewLuxor Victor Vリーダー（Perkin Elmer Life Sciences）を使用して励起波長３４０ｎｍと２重発光波長６１５ｎｍと６６５ｎｍで、プレートを読んだ。ＩＣ５０値（アッセイ対照の蛍光読み値を５０％低下させる試験化合物の濃度）をまず６６５ｎｍの真の読み値から計算し、６１５ｎｍでユーロピウムについて標準化した。ＡＴＰ競合インヒビターについて、Ｋｉ値を以下の式に従って計算した：
Ｋｉ＝ＩＣ５０／（１＋Ｓ／Ｋｍ）
（ここで、Ｓは基質濃度であり、Ｋｍはミハエリス−メンテン定数である）。
【０１１３】
試薬とタンパク質濃度の小さい差以外は、ＣＤＫ１とＣＤＫ２アッセイを同様に行った。
【０１１４】
両方のアッセイの化合物と酵素緩衝液は１０ｍＭ ＭｇＣｌ2を含有した。ＣＤＫ１とＣＤＫ２について、各試薬ＡＴＰ濃度は１６２μＭと９０μＭであった。試薬濃度０．１５ｎｇ／μｌのＣＤＫ１と０．０６ｎｇ／μｌのＣＤＫ２を使用した。検出試薬の試薬濃度を、３〜１２ｎＭ Ｅｕ−Ａｂと６０〜９０ｎＭ ＡＰＣ−抗Ｈｉｓ６の間で調整して、シグナル対バックグランド比が少なくとも１０対１になるようにした。
【０１１５】
代表的な本発明の化合物についてこのアッセイの結果を表１に示す。
【０１１６】
実施例２０
競合的結合アッセイ（テトラゾリウム色素増殖アッセイ）（「ＭＴＴアッセイ」）
Denizot and Langの方法（Denizot, F. and Lang, R. J Immunol Methods 1986, 89, 271-277）に従って、テトラゾリウム色素アッセイにより増殖を評価した。使用した細胞株は、アメリカンタイプカルチャーコレクション（American Type Culture Collection）（ＡＴＣＣ：Rockville, MD）から得られた結腸直腸癌細胞株ＨＣＴ１１６である。１０％ＦＣＳとＬ−グルタミンを補足したMcCoy's 5A培地で細胞を増殖させた。
【０１１７】
細胞を適当な接種密度で蒔き、９６ウェル組織培養プレート中でアッセイの間対数増殖を与えた。プレートを３７℃で５％ＣＯ2を有する加湿インキュベーター中で一晩インキュベートした。翌日試験化合物を連続希釈して、１．２％ ＤＭＳＯを含有する適切な培地中で最終濃度の４倍とした。各希釈の最終容量の４分の１を、細胞を含有するプレートに二重測定で加えた。培地中同じ容量の１．２％ ＤＭＳＯを「対照ウェル」の列に加えて、各ウェルのＤＭＳＯの最終濃度が０．３％になるようにした。細胞を加えなかったウェルを「ブランク」とした。インヒビターを加えなかったウェルは「インヒビター無し対照」とした。プレートをインキュベーターに戻し、設定した時点（増殖曲線から決定される）で、プレートを後述のように分析した。
【０１１８】
３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−２，５−ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロミド（チアゾリルブルー；ＭＴＴ；Sigma）を各ウェルに加えて、最終濃度１ｍｇ／ｍｌを得た。プレートをインキュベーターに３７℃で２．５〜３時間戻した。ＭＴＴ含有培地を取り出し、得られたホルマザン代謝物を１００％エタノールで室温で１５分攪拌して可溶化した。マイクロプレートリーダー（DynatechとMolecular Devicesプレートを区別なく使用した）で５７９ｎの波長で６５０ｎｍを参照として吸光度値を読んだ。すべてのウェルからブランクウェルの吸光度を引いて、各試験二重測定の平均吸光度（ＳAVE）を対照の平均（ＣAVE）で割った比を１．００から引いて阻害パーセント（％ＩＮＨ）が計算される。次に最終的な数に１００を掛ける（％ＩＮＨ＝（１．００−ＳAVE／ＣAVE）×１００。濃度の対数対阻害パーセントのプロットの線形回帰により、細胞増殖の５０％阻害が得られる濃度（ＩＣ50）が得られる。
【０１１９】
本発明の代表的化合物についてのこのアッセイの結果を以下の表１に示す。
【０１２０】
【表１】
2009516666.tif 000030
【表２】
2009516666.tif 000031
【０１２１】
実施例２１
【表３】
2009516666.tif 000032
【０１２２】
製造方法：
１．  品目１、２、及び３を適切なミキサー中で１５分間混合する。
２．  工程１からの粉末混合物を２０％ポビドンＫ３０溶液（品目４）で粒状にする。
３．  工程２からの粒状物を５０℃で乾燥する。
４．  工程３からの粒状物をを適切な粉砕装置に通す。
５．  品目５を工程４の粉砕粒状物に加え、３分間混合する。
６．  工程５からの粒状物を適切なプレス上で圧縮する。
【０１２３】
実施例２２
【表４】
2009516666.tif 000033
【０１２４】
製造方法：
１．  品目１、２、及び３を適切なミキサー中で１５分間混合する。
２．  品目４と５を加え、３分間混合する。
３．  適切なカプセルに充填する。
【０１２５】
実施例２３
【表５】
2009516666.tif 000034
【０１２６】
製造方法：
１．  品目１を品目２に溶解する。
２．  品目３、４、５を品目６に加え、分散するまで混合し、次にホモジナイズする。
３．  工程１からの溶液を工程２からの混合物に加え、分散物が透明になるまでホモジナイズする。
４．  ０．２μｍのフィルターに通して滅菌ろ過し、バイアルに充填する。
【０１２７】
実施例２４
【表６】
2009516666.tif 000035
【０１２８】
製造方法：
１．  品目１を品目２に溶解する。
２．  品目３、４、５を品目６に加え、分散するまで混合し、次にホモジナイズする。
３．  工程１からの溶液を工程２からの混合物に加え、分散物が透明になるまでホモジナイズする。
４．  ０．２μｍのフィルターに通して滅菌ろ過し、バイアルに充填する。
【０１２９】
本発明を具体的かつ好適な実施態様を参照して例示したが、日常的実験と本発明の実施により変更態様及び修飾態様が可能であることを当業者は理解するであろう。すなわち本発明は上記説明に限定されるものではなく、特許請求の範囲とその相当物により規定されるものである。
【国際調査報告】
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