(57)【要約】  本願発明は、うつ、不安、運動障害、ならびに特に失調症および精神障害、ならびに特に統合失調症およびその他の精神障害に関連する精神病症状を含む中枢神経系障害の治療または予防を目的とした、４位に二基置換のアミンラジカルを含む１−アリール（アルキル）イミダゾリン−２−オンの使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも一種以上の、式（Ｉ）
【化１】
2009513539.tif 000023
［式中、Ｘは水素、Ｃ１−４−アルキル、Ｃ１−４−アルコキシ、トリフルオロメチル、またはハロゲン残基であり、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立してＣ１−４−アルキル、Ｃ３−１０−シクロアルキルまたはＣ３−１０−ヘテロアルキル残基であり、あるいはＲ１およびＲ２は共にＣ２−６アルキレン残基であって、その−ＣＨ２−基は任意に酸素、窒素、または硫黄により置換され、ｎは０または１であり、ｍは０または１〜５の基数である］に示される１−アリール（アルキル）イミダゾリン−２−オンの有効量を必要に応じて患者に投与することによる、精神病性障害、運動障害、および／または他の精神障害に関連する精神病症状を含む中枢神経系疾患の治療および予防のための方法。
【請求項２】
アルファ３サブユニットを運搬するベンゾジアゼピンレセプターのサブタイプ選択的アゴニストであるが、ＧＡＢＡＡレセプターのアルファ２またはアルファ４サブユニットを運搬するレセプターには作動しない物質の少なくとも一種以上を、有効量投与することを含む、精神病性障害、運動障害、および／または他の精神障害に関連する精神病症状を含む中枢神経系疾患の治療および予防するための方法、ならびに、特に、不安障害を治療するための方法。
【請求項３】
物質が、アルファ３運搬レセプターに対して高い親和性を持つ部分アゴニストとして、さらにアルファ１および／またはアルファ５運搬レセプターに対して低い親和性を持つ部分アゴニストとして働くことを特徴とする、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
有効量の１−（４−クロロフェニル）−４−ピペリジノイミダゾリン−２−オンを投与することを特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載の方法。
【請求項５】
式（Ｉ）の化合物を非経口または経口投与することを特徴とする、請求項１、２、または３に記載の方法。
【請求項６】
式（Ｉ）の化合物を患者の体重に対して１〜１００ｍｇ／ｋｇの量を投与することを特徴とする、請求項１のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
中枢神経系疾患が精神病または精神病エピソードであることを特徴とする、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項８】
精神病または精神病エピソードが、統合失調症の一種（例えば、妄想型、解体型、緊張型、未分化型、または残遺統合失調症）および躁うつ病のような双極性気分障害ならびに統合失調症の精神病後の抑うつ障害であり；精神病エピソードは、統合失調症様障害、統合失調性感情障害、妄想性障害、（例えば、アルコール、アンフェタミン、大麻、コカイン、幻覚剤、吸入剤、オピオイドまたはフェンシクリジンなどにより誘発される）物質誘発性精神病性障害；（例えば境界性人格障害などの）人格障害、例えば不適応による攻撃などの衝動性障害；双極性障害および注意欠陥、多動性障害（ＡＤ／ＨＤ）ならびに（例えばアルコール、アンフェタミン、コカインまたは麻薬依存症の）乱用および依存症、であることを特徴とする、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
中枢神経系疾患が気分障害または気分エピソードであることを特徴とする、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
気分障害または気分エピソードが、大うつ病性障害またはエピソード、躁病性・混合性および軽躁病性気分障害、非定型性・緊張性または憂うつに特徴付けられるうつ病エピソード、出産後に発現した月経前不快気分障害によるうつ病エピソード、小うつ病性障害、外傷後の急性ストレス障害、強迫神経症および摂食障害を有する患者であることを特徴とする、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
中枢神経系疾患が不安障害または不安エピソードであることを特徴とする、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
不安障害または不安エピソードが、慢性の不安障害、パニック障害、広場恐怖症、特定恐怖症、対人恐怖症および全般性不安障害であることを特徴とする、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
中枢神経系疾患が、主に基底核の機能不全に関連する運動障害であることを特徴とする、請求項１〜６のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
運動障害がさまざまなサブタイプのジストニア、例えば局所性ジストニア、多形の局所性または部分性ジストニア、捻転ジストニア、半側性、全身性ならびに遅発性のジストニア（精神薬理学的薬剤により誘発される）であり；局所性ジストニアには頸部ジストニア（斜頸）、眼瞼痙攣（瞼の痙攣）、四肢ジストニア（書痙のような四肢の痙攣）、口顎ジストニアおよび痙攣性発生障害（声帯の痙攣）ならびに発作性ジストニアであることを特徴とする、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
少なくとも一種以上の、式（Ｉ）
【化２】
2009513539.tif 000024
［式中、Ｘは水素、Ｃ１−４−アルキル、Ｃ１−４−アルコキシ、トリフルオロメチル、またはハロゲン残基であり、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立してＣ１−４−アルキル、Ｃ３−１０−シクロアルキルまたはＣ３−１０−ヘテロアルキル残基であり、あるいはＲ１およびＲ２は共にＣ２−６アルキレン残基であって、その−ＣＨ２−基は任意に酸素、窒素、または硫黄により置換され、ｎは０または１であり、ｍは０または１〜５の基数である］に示される１−アリール（アルキル）イミダゾリン−２−オンの有効量を含有する、精神病性障害、運動障害、および／または他の精神障害に関連する精神病症状を含む中枢神経系疾患の治療および予防のための医薬組成物。
【請求項１６】
ベンゾジアゼピンレセプターのアルファ３サブユニットに対して選択性を有するが、ＧＡＢＡレセプターのアルファ２および／またはアルファ４サブユニットを運ぶレセプターに対して陽性ＧＡＢＡ増強効果を有意に発揮しないベンゾジアゼピンレセプターリガンドを含有する、精神病性障害、運動障害、および／または他の精神障害に関連する精神病症状を含む中枢神経系疾患の治療のための医薬組成物。
【請求項１７】
ベンゾジアゼピンリガンドが、アルファ３運搬レセプターに対して高い親和性を持つ部分アゴニストとして、さらにアルファ１および／またはアルファ５運搬レセプターに対して低い親和性を持つ部分アゴニストとして働くことを特徴とする、請求項１６に記載の医薬組成物。
【請求項１８】
式（Ｉ）の化合物が１−（４−クロロフェニル）−４−ピペリジノイミダゾリン−２−オンであること特徴とする、請求項１５、１６または１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
さらに賦形剤、助剤を含有することを特徴とする、請求項１５〜１８のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２０】
非経口または経口投与することを特徴とする、請求項１５〜１９のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２１】
式（Ｉ）の化合物を患者の体重に対して１〜１００ｍｇ／ｋｇの量を投与することを特徴とする、請求項１５または１６に記載の医薬組成物。
【請求項２２】
中枢神経系疾患が精神病または精神病エピソードであることを特徴とする、請求項１５〜２１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２３】
精神病または精神病エピソードが、統合失調症の一種（例えば、妄想型、解体型、緊張型、未分化型、または残遺統合失調症）および躁うつ病のような双極性気分障害ならびに統合失調症の精神病後の抑うつ障害であり；精神病エピソードは、統合失調症様障害、統合失調性感情障害、妄想性障害、（例えば、アルコール、アンフェタミン、大麻、コカイン、幻覚剤、吸入剤、オピオイドまたはフェンシクリジンなどにより誘発される）物質誘発性精神病性障害；（例えば境界性人格障害などの）人格障害、例えば不適応による攻撃などの衝動性障害；双極性障害および注意欠陥、多動性障害（ＡＤ／ＨＤ）ならびに（例えばアルコール、アンフェタミン、コカインまたは麻薬依存症の）乱用および依存症、であることを特徴とする、請求項２２に記載の医薬組成物。
【請求項２４】
中枢神経系疾患が気分障害または気分エピソードであることを特徴とする、請求項１５〜２１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２５】
気分障害または気分エピソードが、大うつ病性障害またはエピソード、躁病性・混合性および軽躁病性気分障害、非定型性・緊張性または憂うつに特徴付けられるうつ病エピソード、出産後に発現した月経前不快気分障害によるうつ病エピソード、小うつ病性障害、外傷後の急性ストレス障害、強迫神経症および摂食障害を有する患者であることを特徴とする、請求項２４に記載の医薬組成物。
【請求項２６】
中枢神経系疾患が不安障害または不安エピソードであることを特徴とする、請求項１５〜２１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２７】
不安障害または不安エピソードが、慢性の不安障害、パニック障害、広場恐怖症、特定恐怖症、対人恐怖症および全般性不安障害であることを特徴とする、請求項２６に記載の医薬組成物。
【請求項２８】
中枢神経系疾患が、主に基底核の機能不全に関連する運動障害であることを特徴とする、請求項１５〜２１のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項２９】
運動障害がさまざまなサブタイプのジストニア、例えば局所性ジストニア、多形の局所性または部分性ジストニア、捻転ジストニア、半側性、全身性ならびに遅発性のジストニア（精神薬理学的薬剤により誘発される）であり；局所性ジストニアには頸部ジストニア（斜頸）、眼瞼痙攣（瞼の痙攣）、四肢ジストニア（書痙のような四肢の痙攣）、口顎ジストニアおよび痙攣性発生障害（声帯の痙攣）ならびに発作性ジストニアであることを特徴とする、請求項２８に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本願発明の属する分野
本願発明は、精神異常および特に統合失調症、ならびにうつ、不安および失調症を含む中枢神経系障害の治療または予防を目的とした４位に二基置換のアミンラジカルを含む１−アリール（アルキル）イミダゾリン−２−オンの使用、ならびに、これらおよびその他の作動物質であって、アルファ３サブユニットを含むベンゾジアゼピンレセプターに対してサブタイプ選択的なリガンドの使用に関するものである。
【０００２】
発明の背景
中枢神経系障害は重篤な精神障害であり、日常生活に著しく支障をきたすものである。例えば、世界人口の約１％が統合失調症に罹患しているが（Ｃａｐｕａｎｏら、２００２年）、多くは生涯に渡る治療を暗示する３０歳以前に発症している（Ｂｅｎｅｓ、１９９３年）。
【０００３】
精神病（精神疾患）、特に統合失調症は異質の症状を示す（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｉｃ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、１９９４年）。本症状は二つの側面（画分）に分かれる。統合失調症は急性期には幻覚（外的刺激がない状態における知覚）および妄想（誤りであり、固定化されており、そして異常な信念）、例えば被害妄想が主症状となる。患者は激越し、現実との関係を絶つ。これらは陽性症状と呼ばれる（ＤａｖｉｄｓｏｎおよびＮｅａｌｅ、１９８８年；Ｂａｉｌｅｒら、１９９９年）。激越相が和らぐと、いわゆる陰性症状が明らかとなってくる。本症状には、認知障害、注意力の低下、言語学習および記憶、発語の流暢さ、運動機能、ワーキングメモリの欠如のみならず、無関心や倦怠感も含まれる。患者らは不安定かつ不安である（ＤａｖｉｄｓｏｎおよびＮｅａｌｅ、１９８８年；Ｂａｉｌｅｒら、１９９９年）。
【０００４】
種々の抗精神病薬が入手可能であるものの、現在の精神病治療が充分なものだとはいえない。ドーパミンＤ２レセプターに対し高い親和性を持つ古典的な抗精神病薬は激しい運動障害と鎮静副作用を示す（Ｎｙｂｅｒｇら、２００２年）。古典的な抗精神病薬の最も有名な原型であり、今もなお一次治療に使用される薬剤はハロペリドールである（Ｃａｐｕａｎｏら、２００２年）。本剤のネガティブな副作用により、また、本剤は統合失調症の陽性急性症状を減じるものの、陰性症状を減じるものではないという現実により、本剤が患者を日常生活へと戻すことは不可能である。
【０００５】
この現実が、いわゆる非定型抗精神病薬と呼ばれる新規な抗精神病薬の開発を導いた。これらは、低いドーパミンＤ２レセプター親和性と、セロトニンレセプターサブタイプ５−ＨＴ２をターゲットとして、より多様なレセプター親和性プロフィールとを示す（ＳａｗａおよびＳｎｙｄｅｒ、２００２年）。本剤のレセプター親和性プロフィールにおける変化により、運動障害の副作用が減じられたが、その副作用は激しい体重増加、性的障害、認知機能障害、快感消失（無快感症）などの問題へと移行した。統合失調症の陽性および陰性症状双方の改善を行なうが、運動障害の副作用を呈さない標準治療薬として登場したクロザピンは、死に至る可能性を有する主要な副作用として顆粒球減少症を示している（Ｃａｐｕａｎｏら、２００２年）。何より、治療に抵抗を示す患者が未だに多数存在している（Ｌｉｎｄｅｎｍａｙｅｒら、２００２年）。
【０００６】
統合失調症の原因および抗精神薬、ならびに特に非定型抗精神病薬の作用機序は充分に解明されていない。遺伝的形質におけるポリジーンな態様であるように考えられる一方で、非遺伝的な要因によっても制御されている（Ｐｒａｓａｄら、２００２年）。疫学的、遺伝的、ならびに臨床的な神経生物学上のエビデンスによれば、脳内における異常の進行が統合失調症の病態生理において決定的な役割を演じることが示唆されている（Ａｒｎｏｌｄ、１９９９年）。
【０００７】
統合失調症の主要な仮説はドーパミン作動系の機能不全に起因する。したがって、急性の精神病症状はドーパミン作動薬による刺激を受ける可能性があり（Ｃａｐｕａｎｏら、２００２年）、先に記述したように、ハロペリドールのような古典的な抗精神薬はドーパミンＤ２レセプターに対して高い親和性を有する（Ｎｙｂｅｒｇら、２００２年）。しかしながら、非定型抗精神薬の作用機序は、統合失調症の進行に関与するさらに別の神経伝達物質が存在することを示唆している。標準抗精神病薬であり、統合失調症における陽性および陰性症状の双方を改善する唯一の薬剤であるクロザピンは、ドーパミンＤ２レセプターに対する高親和性を呈さない（Ｇｅｒｌａｃｈ、２００２年）。例えば、統合失調症の病態生理に関与するもうひとつの神経伝達物質はセロトニンである（ＳａｗａおよびＳｎｙｄｅｒ、２００２年）。
【０００８】
グルタミン酸作動性神経伝達物質系もまた、統合失調症の進行に関与しているようである。したがって、フェンシクリジンおよびケタミンのようなＮＭＤＡ拮抗薬は、ヒトおよびげっ歯類における統合失調症状を刺激することが可能である（Ａｂｉ−Ｓａａｂら、１９９８年；Ｌａｈｔｉら、２００１年）。統合失調症の陽性段階における激越・衝動行動のみならず陰性段階における認知障害を再現したことから、ＮＭＤＡアンタゴニスト（拮抗薬）をベースとする精神病の動物モデルは、ドーパミン作動性モデルに対して優れている（Ａｂｉ−Ｓａａｂら、１９９８年；ＪｅｎｔｓｃｈおよびＲｏｔｈ、１９９９年）。したがって、このモデルは抗精神病薬としての効力を有する新薬を特定するために使用することが出来る。
【０００９】
多くの中枢神経系疾患の原因の解明には程遠いものではあるが、神経伝達物質セロトニン（５−ＨＴ）が、多くの中枢神経系疾患において重要な役割を演じることが発見されている。うつおよび不安といった複雑な情動状態が、一種類の神経伝達物質によって誘発される平衡失調（アンバランス）へと単独で変化され得るわけではないが、５−ＨＴ神経伝達物質系における疾患は、うつおよび不安の進展に顕著に関与するものであると一般的に認識されている（Ｇｒａｅｆｆら、１９９６年）。したがって大うつ病性障害およびエピソード、躁病性、混合性および軽躁病性気分エピソード、非定型性、緊張性または憂鬱性のうつ病エピソード、出産後に発現した月経前不快気分障害のうつ病エピソード、小うつ病性障害、外傷後および急性ストレス障害など、うつ病における可変性の臨床型とは独立して、うつ病患者は、脳脊髄液における５−ＨＴの著しい減少ならびに患者中枢５−ＨＴ系における付加的な変性を示す（ＯｗｅｎｓおよびＮｅｍｅｒｏｆｆ、１９９４年）。うつ病に潜むメカニズムは、単なる５−ＨＴレベルの減少あるいはこの系の機能の低下に比べ、もっと複雑であることは間違いなく（ＤｅｌｇａｄｏおよびＭｏｒｅｎｏ、１９９９年）、うつ病にセロトニン作動システムが関与していることは、例えば選択的セロトニン再取込み阻害剤（ＳＳＲＩ）などの薬剤の、脳内における細胞外５−ＨＴ濃度の増加といった治療効果によって最も顕著に示される。したがって、ＳＳＲＩは、フルオキセチンあるいはシタロプラムと同様に、大うつ病性障害、強迫神経症を含むうつ病の各種サブグループおよび摂食障害の患者に有効であると記述されている（ＳｔｏｋｅｓおよびＨｏｌｚ、１９９７年）。セロトニン、ドーパミンおよびノルアドレナリンのレベルを同時に上昇させて広がりを（ｅｘｔｅｎｔ）変化させ、すなわちより多くの副作用を示す非選択的モノアミン再取込み阻害剤に比べ、ＳＳＲＩは中枢神経系疾患の治療において相当な進歩であると認められたことを特記することは重要である。
【００１０】
さらに、例えばＳＳＲＩによって脳内の細胞外５−ＨＴ濃度を長期間にわたって増加させることは、動物およびヒトにおける不安を減少させる可能性がある（Ｊｏｎｅｓら、２００２年；ＳｔｏｋｅおよびＨｏｌｔｚ、１９９７年）。したがって、ＳＳＲＩであるフルオキセチンは、種々の不安障害の治療に使用され（Ｎｕｔｔら、１９９９年）、パニック障害、広場恐怖症、特定恐怖症、対人恐怖症および全般性不安障害において５−ＨＴレベルを増強することによる付加的な調節作用が示唆される。薬理作用が神経伝達物質のレベルの増加により仲介され、その結果それぞれのレセプターの活性が増強されること、また、これは取込みを行なうトランスポーターの特異的な阻害の介在によるものではないことは明白である。しかしながら、ＳＳＲＩのような脳内の５−ＨＴレベルを増加する化合物において、抗不安作用および抗うつ作用の発現が遅いことは、これらの薬剤の治療上効果の限定要因となっている（Ｎｕｔｔら、１９９９年）。自殺の恐れが高い者が、治療薬が抗うつ作用、抗精神病作用および／または抗不安作用を呈示するまでの３週間を待つことは不可能である。
【００１１】
ＳＳＲＩとは反対に、ベンゾジアゼピンの抗不安作用は速やかに発現する（ＣｏｓｔａおよびＧｕｉｄｏｔｔｉ、１９９６年）。しかしながら、ベンゾジアゼピンの作用に対する耐性の形成および薬物依存のリスクにより長期投与が制限されていることから、これらを治療のために使用することは比較的短期間に限定されている（ＣｏｓｔａおよびＧｕｉｄｏｔｔｉ、１９９６年）。
【００１２】
したがって、ベンゾジアゼピンに対する作用の急速な発現およびＳＳＲＩにおける長期的な効果という、両メカニズムを併せ持つ治療薬は、不安障害およびうつ病の治療を非常に進展させるであろう。
【００１３】
中枢神経系疾患におけるその他の態様はジストニア（ジストニー、筋失調症）である。ジストニアは自発運動の調節に対する中枢神経系の機能不全に基づく運動障害であり、以前はｐｓｙｃｈｏｖｅｇｅｔａｔｉｖｅシンドロームとしても知られていた。これは、不随意の繰り返し運動と、痛みを伴う筋けいれんを部分的に併せ持つ姿勢異常とによって特徴付けられる（Ｇｒｅｅｎ、１９９２年；ＦｒｉｅｄｍａｎおよびＳｔａｎｄａｅｒｔ、２００１年；ＨａｍａｎｎおよびＲｉｃｈｔｅｒ、２００２年）。ジストニアのサブタイプにしたがい、症状は局所性から全身性のジストニア発作へと広がる。幼少期における局所性の発作が発端となった進行型もある。全ての年齢の人々が発症し得る。ドイツでは、ジストニア発作の患者は約８０，０００名である（ＤＤＧ  ｅＶ、２００２年）。
【００１４】
症状の分布に基づき、ジストニアはいくつかのサブタイプへと分けられる：局所性ジストニア、多発性−局所性または節性ジストニア、捻転ジストニア、半側性、全身性ならびに遅発性のジストニア。局所性ジストニアには頸部ジストニア（斜頸）、眼瞼痙攣（瞼の痙攣）、四肢ジストニア（書痙のような四肢の痙攣）、口顎ジストニアおよび痙攣性発生障害（声帯の痙攣）（ＤＤＧ  ｅＶ、２００２年；ＦｒｉｅｄｍａｎおよびＳｔａｎｄａｅｒｔ、２００１年）。
【００１５】
現在、いくつかの特殊型を除き、ジストニアの治療には、対症療法に主眼が置かれている。限局性ジストニアはボツリヌス毒素を用いて、非常に首尾よく治療を行うことが可能である（Ｈｓｕｉｕｎｇ  ＧＹら、２００２年）。ボツリヌス毒素を病巣部分に局所的に投与すると筋肉の弛緩が生じ、これが数週間続く。この処置を定期的に繰り返さねばならない。この治療法の弱点は、患者によっては毒素に対して生じた抗体により対毒素耐性が形成されてしまい、身体のさらに広い範囲に病巣が広がるとこれを使用することが出来なくなってしまう（Ｄｒｅｓｓｌｅｒら、２００２年；Ｈｓｉｕｎｇら、２００２年）。
【００１６】
節性および全身性ジストニアへの体系的な薬物療法は、満足のいくものとはいえない。これには抗コリン作用薬、ならびに前シナプス性に作用するＧＡＢＡＢアゴニストであり、ジストニア症状に好ましい影響を与えることが報告されたバクロフェンが含まれる（Ｆａｈｎ、１９８７年；Ｇｒｅｅｎ、１９９２年；Ｒａｗｉｃｋｉ、１９９９年）。ジストニアに対する抗痙攣薬の効果には一貫性が見られず、フェノバルビタールおよびラモトリジンはプロジストニック（ｐｒｏ−ｄｙｓｔｏｎｉｃ）な効果を有すると思われるが、一方、ガバペンチンは抗ジストニック（ａｎｔｉ−ｄｙｓｔｏｎｉｃ）である（ＲｉｃｈｅｒおよびＬｏｅｓｃｈｅｒ、１９９９年；ＲｉｃｈｔｅｒおよびＬｏｅｓｃｈｅｒ、２０００年；Ｓｉｅｐら、２００２年）。
【００１７】
淡蒼球への脳深層部電気刺激といった重篤なジストニーに対する外科的治療は、今だ開発の非常に初期段階にあり、特定型のジストニアでのみ成功に至っている。最も多くの場合、付加的な体系的薬物療法が必要である（ＫｒａｃｋおよびＶｅｒｃｕｅｉｌ、２００１年；Ｖｅｒｃｕｅｉｌら、２００２年；ＫｌｅｉｎおよびＯｚｅｌｉｕｓ、２００２年）。
【００１８】
ジストニアのメカニズムは充分に解明されていない。大脳基底核の機能不全に対する多数の手がかりは存在している（Ｇｅｒｎｅｒｔら、２００２年；Ｈｅｒｒｅｒｏら、２００２年）。体性求心性情報を統合し、これらの運動系への伝達を調整するメカニズムが損傷しているものと考えられている（Ｈｅｒｒｅｒｏら．、２００２年）。ジストニアは脳損傷または脳梗塞によって起こり得るものではあるが、約８０％の全身性ジストニアは特発性であり、異なる度合いの浸透度を有する遺伝性のものであると思われる（ＰａｕｌｓおよびＫｏｒｃｚｙｎ、１９９０年）。現在、１３種の異型ジストニアが遺伝的に識別されている（ジストニア１−１３型）（ＫｌｅｉｎおよびＯｚｅｌｉｕｓ、２００２年）。全身性ジストニアの希少なサブタイプ３種に対し、例えばＬ−ドーパ反応型の遺伝子突然変異が確認された（Ｔｈｙａｇａｒａｊａｎ、２００１年）。
【００１９】
発作性ジストニアのハムスター遺伝モデルは、ジストニアの動物モデルとして確立された希少なもののひとつである（ＨａｍａｎｎおよびＲｉｃｈｔｅｒ、２００２年）。
【００２０】
不安障害は、世界規模での発生率の増加により非常に一般的になっている。抗不安効果を速やかに発現するベンゾジアゼピンは、いまだに不安障害の治療に最も効果的な薬剤であるとみなされている。しかしながら、運動失調、鎮静、骨格筋弛緩、エタノールおよびバルビツール酸系催眠薬の相互作用による記憶喪失などの望ましくない副作用をも示す。主な問題として、これらの治療効果に対する耐性の発現および薬物乱用の可能性もある（ＣｏｓｔａおよびＧｕｉｄｏｔｔｉ、１９９６年；Ａｔａｃｋ、２００３年）。
【００２１】
上述の通り、不安障害の治療に使用される薬剤類は、選択的セロトニン再取込み阻害剤（ＳＳＲＩ）である。これらの薬剤は抗うつ病薬として充分に確立されており、耐性や薬物乱用などのベンゾジアゼピンの持つ主要な副作用を誘発しないが、遅延性の抗不安作用および抗うつ作用は、治療上の有効性における限定要因である（Ｎｕｔｔら、１９９９年）。その上、これらの治療上の使用は、患者を治療中止へと導きかねない体重増加および性的障害の影響を受ける（Ｐｅｒｎａら、２００１年）。ベンゾジアゼピンレセプターリガンドとＳＳＲＩとの、両者のポジティブな作用の組み合わせは、理想的な抗不安薬に対するテンプレートとして役立つであろう。要するに、理想的な抗不安薬に対する需要は未だに高いのである。
【００２２】
ＧＡＢＡＡレセプターにおけるベンゾジアゼピン認識部位に結合する薬剤の、これらの主要な副作用、すなわち鎮静作用、を軽減するためのひとつの試みは、特定のＧＡＢＡＡレセプターサブタイプに対して非常に選択的な薬剤を開発することであろう（ＣｏｓｔａおよびＧｕｉｄｏｔｔｉ、１９９６年）。ここ数年の薬理学的、遺伝学的研究によって、各種α−サブユニットが、ベンゾジアゼピンによって誘発されるそれぞれの行動症状の原因であることが解明された（Ａｔａｃｋ、２００３年）
これまでに、レセプターを含むアルファ１−サブユニットが、ベンゾジアゼピンの鎮痛および抗痙攣作用を仲介することが記載されている（ＣｏｓｔａおよびＧｕｉｄｏｔｔｉ、１９９６年；Ｃｒｅｓｔａｎｉら、２０００年；Ｄｕｂｉｎｓｋｙら、２００２年）。アルファ５−サブユニットを含むＧＡＢＡＡレセプターはベンゾジアゼピンにより誘発される記憶喪失に関与するはずであるが、一方、レセプターを含むアルファ２−およびアルファ３−サブユニットは、これらの化合物類の抗不安効果に関与すると思われる（ＣｏｓｔａおよびＧｕｉｄｏｔｔｉ、１９９６年；Ｌｏｗら、２０００年；Ｄｕｂｉｎｓｋｙら、２００２年）。
【００２３】
しかしながら、ベンゾジアゼピンのサブタイプの特定の効果は充分には解明されておらず、それぞれのサブユニットの役割については、物議を醸す論議が今もなお続いているが、各々のアルファサブユニットに加えて、各々のベータおよびガンマサブユニット、その他のサブユニットもまた報告されると共に多様性の一因となっているという事実によって、これはさらに複雑なものとなっている。例えば、ベンゾジアゼピンの鎮静作用は、レセプターサブタイプ（受容体サブタイプ）を含むアルファ１−サブユニットによって排他的に仲介されるわけではなく、その他のメカニズムによっても仲介されるものであり、そしてアルファ１−サブユニットは単独で運動失調症において主要な役割を演じることが複数の研究結果に示されている（Ｐｌａｔｔら、２００２年）。Ｔａｕｂｅｒら（２００３年）は、ジアゼパムおよびエタノールの同時投与による正向反射の消失はアルファ２−サブユニット突然変異マウスでは見られなかったが（レセプター活性の消失と併せて）、両化合物の投与に起因する自発運動の低下（鎮静の兆候）は、アルファ１−、アルファ２−、アルファ３−およびアルファ５−サブユニット突然変異マウスで見られた。脳内で不均一に発現している種々のベンゾジアゼピンレセプターサブタイプの作用に関する知識が欠落している主な理由は、種々のサブタイプに対するサブタイプ選択性が非常に高いリガンドが存在しないからである。しかしながら、アルファサブユニット欠損型の遺伝子改変マウスでは、ベンゾジアゼピン作用の仲介が不可能であることを基盤とした上述の研究結果がもとになって、多くの企業が、アルファ２およびアルファ３サブユニットの双方に選択性を有し、アルファ１サブユニットに対する活性を減じたベンゾジアゼピンレセプターリガンドを開発するための研究プログラムを既に開始している（Ｌｏｗら、２０００年；Ｇｒｉｅｂｅｌら、２００１年）。記載されているそのような類の化合物はわずかであり、サブタイプの選択性の度合いはどちらかといえば限りがあると思われる。機能的選択性は、各レセプターの部分アゴニズムの割合の違いにより達成される。例えば、ＳＬ６５１４９８という物質は、アルファ１およびアルファ５含有レセプターに対しておよそ４０〜５０％の部分アゴニズム活性、一方、アルファ２レセプター対して１００％の部分アゴニズム活性、そしてアルファ３レセプターに対して７０％の活性で作用することが示された。実際、これが機能的サブタイプ選択性をもたらしているかもしれないが、レセプターの活性化の割合が高いことを要件とする薬理効果に関してのみである。５０％未満の活性化を要件とする作用に対しては、Ｇｒｉｅｂｅｌら、２００１年の文献の第２図に見られるように、これらの化合物は非選択性アゴニストのように働くであろう。その議論は、どの作用にどういった割合のレセプター活性化が必要であるのかということが不足しているが、イミダゼニルなどの非選択性アゴニストが患者に鎮静作用をもたらすことが判った（Ａｔｔａｃｋ、２００３年）。したがって、アルファ１サブユニットを選択しない、という意図された選択性を機能的部分アゴニズムストラテジーがもたらすことが出来るか否かについては疑問が残る。この事実にもかかわらず、他者も同様のアプローチを用いている（Ｄａｗｓｏｎ、１９９８年；ＭｃＫｅｒｎａｎ、１９９８年）。Ｍｅｒｃｋ社の研究開発プログラムに基づくＮＳ２７１０および臨床段階にある未公開の新規化合物（Ａｄｉｓ  Ｄａｔａ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ、２００３年；Ｇｏｏｄａｃｒｅら、２００２年；Ｃｈａｍｂｅｒｓら、２００１年）は、期待された臨床プロフィールをもたらすことはなく、鎮静作用を示すことが判明すると共に、常習性をもたらす可能性があった（Ａｔａｃｋ、２００３年）。これらの結果をまとめると、とりわけサブタイプ選択性の高い、新規ベンゾジアゼピンレセプターリガンドの開発には、これまでに大きな進歩は見られない。さらに、疾患の生理機能、病態生理機能における各種サブユニットの役割に関する知見は非常に限られたものであるが、これもまた選択性化合物が存在しないことによるものである。サブユニットであるアルファ１およびアルファ２の役割に関する知見は、少なくともいくらかの研究の目指すところであったが、むしろ脳内で選択的に分布するサブユニットであるアルファ３サブユニットはさらに未知の部分が多い。現在までにアルファ３サブユニットに対して何らかの選択性を有するリガンドは得られておらず、上述の薬剤は全て、アルファ１サブユニットの特定の割合に対して非選択性を示し、アルファ２とアルファ３サブユニットとの組み合わせに対して選択性を有するように設計されたものであり、せいぜい幾らかの選択性を示す程度である。アルファ３−サブユニットを含有するレセプターに関しては、わずかな研究が行われているのみである。免疫細胞科学的研究において、線条体、隔膜および大脳脚橋核のコリン作動性ニューロンならびに黒質ち密部のドーパミン作動性ニューロンではアルファ３−サブユニットが多量に発現されるが、これらの細胞はアルファ２−サブユニットをわずかに発現するのみである、と記述されている（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｐａｌｌａｒｅｓら、２００１年）。黒質ち密部のドーパミン作動性ニューロンにおいて、アルファ３サブユニットは主にアルファ４サブユニット（アルファ４サブユニットはベンゾジアゼピンへの感受性を持たない、）を伴っているようであったが、アルファ２−サブユニットのｍＲＮＡは発見されなかった（Ｇｕｉｏｎら、１９９９年）。青斑核のノルアドレナリン作動性ニューロンは、アルファ３−およびアルファ２サブユニットに対する免疫反応性を持つと記述されている。これらの脳内領域は全てアルファ１−サブユニットに対する免疫反応性を有していた（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｐａｌｌａｒｅｓら、２００１年）。
【００２４】
同様に、縫線のセロトニン作動性ニューロンは、アルファ３−サブユニットを高レベルで標識することが示されたが、アルファ２サブユニットを発現するニューロンはわずかであるにすぎない（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ−Ｐａｌｌａｒｅｓら、２００１年）。さらに、Ｇａｏら（１９９３年）は、縫線のセロトニン作動性ニューロンの大部分は、強力なアルファ３−サブユニット免疫反応性を発現するものの、これらはアルファ１−サブユニット染色性ではないが、両サブユニットは縫線のＧＡＢＡｅｒｇニューロン内に存在する。しかしながら、これら全ては染色試験による研究であり、アルファ３−サブユニットを通じて仲介される薬理作用に関して何ら明確な見解を示すものではない。
【００２５】
ＧＡＢＡＡアゴニストであるムシモールおよびＧＡＢＡＡ拮抗薬（アンタゴニスト）であるビククリンを背側および内側縫線に局所投与した場合の、局所および側座核細胞外５−ＨＴレベルに対する効果が、微小透析法の研究において確認された（ＴａｏおよびＡｕｅｒｂａｃｈ、２０００年）。このことは、ＧＡＢＡＡレセプターを含むアルファ３−サブユニットは、セロトニン作動性の神経伝達物質に関連する可能性があることを示唆している。
【００２６】
本願発明の説明
上記に鑑み、精神病性障害、うつ病、不安障害および失調症のような運動障害を含む中枢神経系疾患の現在の治療方法および治療可能性は不十分であると共に少なくとも部分的に重篤な副作用を示すことは明らかである。
【００２７】
したがって、本願発明のひとつの目的は、哺乳動物において、このような中枢神経系疾患の治療または予防のさらなる可能性を提供すること、とりわけヒトへの使用を目的とする治療法を提供することである。
【００２８】
本願発明の第一の主題によれば、少なくとも一種以上の、式（Ｉ）
【００２９】
【化１】
2009513539.tif 000002
［式中、Ｘは水素、Ｃ１−４−アルキル、Ｃ１−４−アルコキシ、トリフルオロメチル、またはハロゲン残基であり、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立してＣ１−４−アルキル、Ｃ３−１０−シクロアルキルまたはＣ３−１０−ヘテロアルキル残基であるか、あるいはＲ１およびＲ２は共にＣ２−６アルキレン残基であって、その−ＣＨ２−基は任意に酸素、窒素、または硫黄により置換され、ｎは０または１であり、ｍは０または１〜５の基数である］に示される１−アリール（アルキル）イミダゾリン−２−オンの有効量を患者に投与することによる、精神病性障害、うつ病、不安障害ならびに運動障害および／または他の精神障害に関連する精神病症状を含む中枢神経系疾患の治療ならびに予防の方法により、課題が解決された。
【００３０】
本願発明によれば、驚くべきことに式Ｉの化合物は以下の中枢神経系疾患の治療に非常に有効であることが解った。
１．精神病および精神病エピソード
さまざまなタイプの統合失調症（例えば、妄想型、解体型、緊張型、未分化型、または残遺統合失調症）および躁うつ病のような双極性気分障害ならびに統合失調症の精神病後の抑うつ障害。精神病エピソードは、統合失調症様障害、統合失調性感情障害、妄想性障害、（例えば、アルコール、アンフェタミン、大麻、コカイン、幻覚剤、吸入剤、オピオイドまたはフェンシクリジンなどにより誘発される）物質誘発性精神病性障害；（例えば境界性人格障害などの）人格障害、例えば不適応による攻撃などの衝動性障害；双極性障害および注意欠陥、多動性障害（ＡＤ／ＨＤ）ならびに（例えばアルコール、アンフェタミン、コカインまたは麻薬依存症などの）乱用および依存症
２．気分障害および気分エピソード
大うつ病性障害およびエピソード、躁病性・混合性および軽躁病性気分障害、非定型性・緊張性または憂うつに特徴付けられるうつ病エピソード、出産後に発現した月経前不快気分障害によるうつ病エピソード、小うつ病性障害、外傷後の急性ストレス障害、強迫神経症および摂食障害を有する患者。
３．不安障害および不安エピソード
慢性の不安障害、パニック障害、広場恐怖症、特定恐怖症、対人恐怖症および全般性不安障害。
４．主に基底核の機能不全に関連する運動障害
例えば局所性ジストニア、多形の（ｍｕｌｔｉｐｌｅ）局所性または部分性ジストニア、捻転ジストニア、半側性、全身性ならびに遅発性のジストニア（精神薬理学的薬剤により誘発される）。局所性ジストニアには頸部ジストニア（斜頸）、眼瞼痙攣（瞼の痙攣）、四肢ジストニア（書痙のような四肢の痙攣）、口顎ジストニアおよび痙攣性発生障害（声帯の痙攣）ならびに発作性ジストニアなどのさまざまなタイプのジストニアが含まれる。
【００３１】
式（Ｉ）の化合物は、てんかん性疾患の治療に好適な物質としてＷＯ９７／０９３１４号に初めて記載された。驚くべきことに、これらの物質は、上記疾患のような（ただしこれらに限定されることなく）中枢神経系疾患に有効な治療または予防のために使用することが可能である。本化合物は哺乳動物の治療、特にヒトへの使用のために用いることが可能である。
【００３２】
本願発明により使用される本化合物のＣＨ２基の数は０（１−アリールイミダゾリン−２−オン）または１（１−アラルキルイミダゾリン−２−オン）のいずれかである。式（Ｉ）の化合物の例には、以下のものが含まれる。
１−フェニル−４−モルホリノイミダゾリン−２−オン
１−（４−メトキシ）−４−ピペリジノイミダゾリン−２−オン
１−（４−クロロフェニル）−４−モルホリノイミダゾリン−２−オン
１−（４−クロロフェニル）−４−ピペリジノイミダゾリン−２−オン
１−（４−クロロフェニル）−４−ジメチルアミノイミダゾリン−２−オン
１−（４−ブロモフェニル）−４−モルホリノイミダゾリン−２−オン
１−（３−クロロフェニル）−４−モルホリノイミダゾリン−２−オン
１−（４−クロロフェニル）−４−ヘキサメチレンイミダゾリン−２−オン
１−（４−メチルフェニル）−４−モルホリノイミダゾリン−２−オン
１−（４−クロロフェニル）−４−（シクロヘキシルメチルアミノ）イミダゾリン−２−オン
１−（４−フルオロフェニル）−４−モルホリノイミダゾリン−２−オン、および
１−ベンジル−４−モルホリノイミダゾリン−２−オン。
【００３３】
本願発明の方法に用いるこの物質は、ＵＳ５，８６９，４８１号に記載の方法により調整することが出来る。
【００３４】
本願発明によれば、薬剤としての使用に特に好ましい化合物は、１−（４−クロロフェニル）−４−ピペリジノイミダゾリン−２−オンである（ＥＬＢ１３９；ＩＢ−命名法：１−（４−クロロフェニル）−４−ピペリジン−１−イル−２，５−ジヒドロ−１Ｈ−イミダゾリン−２−オン）。
【００３５】
一種以上の式（Ｉ）の化合物の投与、特に１−（４−クロロフェニル）−４−ピペリジノイミダゾリン−２−オンは、向精神薬の通常の投与方法において効果を奏すことが出来る。
【００３６】
この化合物は、薬理組成物の形で一日あたり患者の体重に対し１〜１００ｍｇ／ｋｇの量で投与することが好ましい。吸入または経鼻投与を選択した場合には、好ましい投与量は患者の体重に対して０．０５〜５ｍｇ／ｋｇである。統合失調症およびその他の精神病性障害の治療枠内での使用に関しては、体重に対し２〜７０ｍｇ／ｋｇがより好ましく、５〜５０ｍｇ／ｋｇが特に好ましいが、失調症の治療枠内での使用に関しては、１〜２０ｍｇ／ｋｇでの投与量がより好ましく、５〜１５ｍｇ／ｋｇの量が特に好ましい。
【００３７】
好ましい態様において、この化合物は経口、あるいは好適な非経口製剤として注射により、吸入により、経鼻により、または座剤として投与される。
【００３８】
さらに、この化合物は上記疾患および病期の単一治療剤として、あるいは該疾患および病期に有用な他の化合物との併用の形で投与される。併用治療は各薬剤を別々に投与することによる同時投与、あるいは通常使用される医薬品賦形剤または助剤と混合した結合剤の形であっても構わない。併用の使用形態は、有効成分の充分な吸収が保障されている限り、本願発明の枠組み内において限定されるものではない。
【００３９】
本願発明による１−アリール（アルキル）イミダゾリン−２−オンの添付の実施例によって、精神病性疾患を治療する場合に本願発明による方法が極めて有用であり、また、実際、副作用が見られないことが実証された。本願発明による化合物は非常に良好な耐容性を示し、また、容易に治療用および予防用組成物へと処方することが可能である。
【００４０】
したがって、本願発明のもうひとつの主題は、一種以上の有効量の式（Ｉ）
【００４１】
【化２】
2009513539.tif 000003
［式中、Ｘは水素、Ｃ１−４−アルキル、Ｃ１−４−アルコキシ、トリフルオロメチル、またはハロゲン残基であり、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立してＣ１−４−アルキル、Ｃ３−１０シクロアルキルまたはＣ３−１０ヘテロアルキル残基であるか、あるいはＲ１およびＲ２は共にＣ２−６アルキレン残基であって、その−ＣＨ２−基は任意に酸素、窒素、または硫黄により置換され、ｎは０または１であり、ｍは０または１〜５の基数である］の１−アリール（アルキル）イミダゾリン−２−オンを必要に応じて患者に投与すること含む、中枢神経系疾患の治療または予防用の医薬組成物である。
【００４２】
最も好ましくは、１−（４−クロロフェニル）−４−ピペリジノイミダゾリン−２−オン（ＥＬＢ１３９）を有効成分として含む医薬組成物である。
【００４３】
本願発明による医薬組成物は、さらに好適な賦形剤、助剤または充填剤、および／または好ましい使用形態を処方するために必要または効果的な物質を含有してもよい。本願発明による医薬組成物は、好ましくは患者の体重に対して１〜１００ｍｇ／ｋｇ量の有効成分を含有し、経口または非経口（例えば静脈内、筋肉内または皮下投与）による投与の対象となる。
【００４４】
より好ましくは、組成物は使用目的に応じてそれぞれ体重の２５〜７０ｍｇ／ｋｇ、あるいは体重の５〜１５ｍｇ／ｋｇ量の有効成分を含有する。
【００４５】
本願発明のもうひとつの主題によれば、精神病性障害、運動障害および／または他の精神障害に関連する精神病症状を含む中枢神経系疾患の治療ならびに予防方法、特に不安障害の治療方法を提供することにより、この課題が解決された。該方法は、アルファ３サブユニットを運搬するベンゾジアゼピンレセプターのサブタイプ選択性アゴニストでありながら、活性でない物質を少なくとも一種以上有効量投与することからなり、つまりこの物質は、レセプターへの結合の可否に関係なく、ＧＡＢＡレセプターのアルファ２および／またはアルファ４サブユニットを運搬するレセプターに対し、陽性ＧＡＢＡを顕著に増強する効果を発揮しない。
【００４６】
ベンゾジアゼピンレセプターのアルファ３サブユニットに選択性を有するベンゾジアゼピンレセプターリガンドは、上記ＣＮＳ疾患における治療に有効であると予測することが出来る。
【００４７】
本願発明によれば、選択性とは、実施例において示されるように、５０％の最大ＧＡＢＡ増強反応を誘発するために必要とされる濃度における差異が少なくとも２０倍であること、すなわちＥＣ５０における差異が少なくとも２０倍であること、として定義される。また、結合性をそれぞれのレセプターサブタイプに対する機能的アゴニスト作用として解釈する場合、選択性は、結合親和性における少なくとも２０倍の差異として定義することも可能である（標準的な結合性試験の手順を用いて特定した場合に比べて少なくとも２０倍高い親和性）。特に好ましいものは、アルファ３サブユニットＧＡＢＡレセプターを運搬するレセプターに対して選択的な化合物である。同様に好ましいものは、アルファ３サブタイプ選択的化合物であって、これがレセプターに反応するか否かに関係なく、ＧＡＢＡレセプターのアルファ２および４サブユニットを運搬するレセプターに対して完全に活性を示さない（顕著な陽性ＧＡＢＡ増強作用を発揮しない）。特に好ましいものは、上記の特色を持つ場合に、加えてアルファ３サブユニットを運搬するＧＡＢＡレセプターに対する部分アゴニストとして作用するような化合物および、加えて低親和性または部分アゴニストとして作用する（親和性において少なくとも２０倍の差を持つ）ような化合物であり、もう一度述べるが、部分アゴニストとしてとりわけ好ましいものはアルファ１および／またはアルファ５サブユニットに対する低親和性を持つものである。先に定義した式Ｉの１−アリール（アルキル）イミダゾリン−２−オン化合物は、所望の選択性を示す化合物である。上述の選択性の基準を完全に満たす化合物として特に好ましい例は、１−（４−クロロフェニル）−４−ピペリジノイミダゾリン−２−オン（ＥＬＢ１３９）である。
【００４８】
予期せずして、ＥＬＢ１３９および本願発明に含まれる他の物質は、アルファ３サブユニットを運搬するレセプターに対し、非常にサブタイプ選択的なベンゾジアゼピンレセプターへのアゴニストとして作用する。
これらのレセプターに対する作用の性質は、部分アゴニスト的なものであり、これらの化合物および特にＥＬＢ１３９は、アルファ３サブユニットを運搬するレセプターに対するサブタイプ選択的な部分アゴニストとして作用することを示している。また、これらの化合物および特にＥＬＢ１３９は、アルファ１またはサブユニットを運搬するレセプターに作用するが、アルファ３サブユニットと比較して２０倍を超える高濃度でのことである。さらに、予想に反して、この化合物はアルファ２サブユニットを含むレセプターに全く作用しないことが判明した。他のベンゾジアゼピンと同様にＥＬＢ１３９もまたアルファ４サブユニットを運搬するレセプターに作用しなかった。したがって、ＥＬＢ１３９はアルファ３含有レセプターを活性化し、アルファ１および５含有レセプターに対して２０倍低い効果を有し、アルファ２および４含有レセプターを選択しないサブタイプ選択性化合物として作用する。ＥＬＢ１３９に対し感受性を有する全てのレセプターに対し、部分アゴニスト特性を示すジアゼパムに比べ、この化合物ではＧＡＢＡが誘導する電流の増強作用が弱かった。この点について、１〜１０μｍの最大上（ｓｕｐｒａｍａｘｉｍａｌ）濃度において陽性対照化合物であるジアゼパムにより誘導された最大効果に比べ、試験における最大濃度におけるＧＡＢＡ誘発効果の最大増強作用がより低い場合、部分アゴニスト活性が推定される。相対部分アゴニズムは５０〜７０％の範囲であった。本願の化合物のサブタイプ選択性により、また、とりわけＥＬＢ１３９がアルファ３サブユニットに対し選択性であることにより、本化合物を生理機能および薬理作用に関するアルファ３サブユニットの役割の評価に使用することが可能であった。ＥＬＢ１３９がラット脳におけるセロトニンレベルの上昇を誘導することが発見されたが、当初、この作用のメカニズムは不明のままであった。この作用をさらに解明するために、これがセロトニントランスポーターの作用に関連するか否か、すなわちこのトランスポーターの作用を制限し、したがってセロトニンの上昇を生じる薬剤（選択的セロトニン再取込み阻害剤、ＳＳＲＩ）のメカニズムに、あるいは現在知られるアルファ３ベンゾジアゼピンレセプターとの選択的相互作用に関連するか否かの試験を行った。本願発明の化合物およびとりわけＥＬＢ１３９は、シナプトソーム調製におけるセロトニン取込みに対する作用を持たない。一方、細胞外のセロトニンレベルに対するＥＬＢ１３９の効果は完全にブロックされ得たと共に、特定のベンゾジアゼピンレセプター拮抗剤であり、ベンゾジアゼピンと、アルファ３サブユニットに対するレセプターを含む全ベンゾジアゼピン感受性レセプターとの相互作用を阻害するフルマゼニルの投与によって逆転された。サブタイプ選択性により、これらのデータは、セロトニン作動性システムに対するＥＬＢ１３９の作用は、アルファ３サブユニットに対するベンゾジアゼピンレセプターにより仲介されることを明確かつ予想外に示している。ジアゼパムは、同様の試験において投与を行ってもセロトニンレベルに作用しないことが報告されており、サブタイプ選択性化合物のみがこのような作用を発現することが示唆される。した���って、これらのデータをもとに、セロトニン作動性システムを含む疾患、またはセロトニン作動性システムの機能増強が望ましい疾患、例えばうつや不安を含む気分障害などに対して、アルファ３サブユニットがユニークかつ新規な対象であることがここに結論付けられる。
【００４９】
第二のアプローチにおいて、ベンゾジアゼピンに典型的ではない、ＥＬＢ１３９の精神薬理学的行動上の作用がフルマゼニルの投与により覆され得るか否かの試験を行った。抗うつ作用は、脳内のセロトニンレベルの増加に容易に関連付けられ得る。ＳＳＲＩの一種であるフルオキセチンを含む、セロトニンを増加させる全ての薬剤は、抗うつ作用を発現する。セロトニンの増加はフルマゼニルの投与により予防することが可能であったことから、ＥＬＢ１３９の精神病理学的な側面におけるアルファ３サブユニットの役割を評価するためには、抗精神病性作用が選択された。アルファ３サブユニットに対する選択性を持たないベンゾジアゼピンは抗精神病性作用を発揮しないことで知られている。フルマゼニルをＥＬＢ１３９との組み合わせにより投与した場合、意外なことにＥＬＢ１３９の抗精神病性作用はアンタゴナイズ（阻害）され得た。アルファ３サブユニットは、先に記載のセロトニン作動性システムに関連する疾患のみならず、精神疾患などの他のＣＮＳ疾患に対しても理想的なターゲットである。さらに、これらの知見によって、ＥＬＢ１３９およびアルファ３サブユニット含有レセプターに対する選択性を有する他の物質は、強力な抗不安、抗ジストニア、抗痙攣作用を持つことが示された。広範囲にわたるこの作用は、サブタイプ選択性、ならびに、アルファ３以外のサブユニットと他の疾患との関連で既に議論したものとは対照的である。例えば、抗痙攣作用は主にアルファ１サブユニットとこれまで関連付けられていたが、ＥＬＢ１３９は非常に強力な抗不安剤として作用する一方、アルファ１サブユニットに対する親和性が低い。同様に、アルファ２サブユニットは、アルファ３サブユニットの不安に対する付加的な寄与を伴う場合のみ、抗不安作用に対して支配的であると見なされていた。しかしながら、ＥＬＢ１３９はアルファ２サブユニットに作用するだけでなく、アルファ３サブユニットに対して選択性を有する。さらに、アルファ３サブユニットおよびアルファ３サブユニット上のベンゾジアゼピンレセプターは、不安障害やてんかんを含むこれらの疾患の治療への理想的な標的であることを、これらのデータは示している。
【００５０】
要約すると、データの主体、つまり精神疾患、うつ病、ジストニア、てんかんおよび不安障害のモデルにおけるインビボ作用、ならびに抗うつ作用の指標となるセロトニンレベルに対する作用は、サブタイプ選択性作用との組み合わせにおいて、効力が高まり、ベンゾジアゼピンレセプターのアルファ３サブユニットに対して選択的な全てのベンゾジアゼピンレセプターリガンドが、上述のＣＮＳ疾患において作用することを期待することが可能である。
【００５１】
したがって、本願発明のもうひとつの主題は、ベンゾジアゼピンレセプターのアルファ３サブユニットに対して選択的なベンゾジアゼピンレセプターリガンドを含む医薬組成物である。アルファ３サブユニットに対して高い選択性を有する物質は、十分に確立および記載されたスクリーニングシステムを用いて簡単に検出することが出来る。このようなシステムは、第一段階としてレセプターバインディングアッセイを含むことが可能であるが、しかしながら使用するバインディングアッセイは、それぞれのＧＡＢＡレセプターサブユニットを含む膜画分に基づいたものでなければならない。このような調製は、トランジエントトランスフェクションが安定化した後に、調査中のアルファサブユニット、すなわちアルファ１、２、３、４または５からなる機能的ＧＡＢＡレセプター複合体を、一種類のベータサブユニット、好ましくはベータ２サブユニット、および一種類のガンマサブユニット、好ましくガンマ２サブユニットと一緒に発現およびアセンブルした細胞系から得ることが出来る。ＧＡＢＡレセプターサブタイプのさまざまな供給元は、さまざまなサブユニットの組み換えたんぱく質を発現する発現系から得ることが可能である。このような発現系は細菌、酵母または真核細胞であっても構わない。こうしたバインディングアッセイを用いることにより、アルファ３サブユニットに対する高い親和性を有し、アルファサブユニット１、２、３、４または５を含む他のＧＡＢＡレセプターを超える高い選択性を有する化合物が容易に特定される。放射性リガンドは、３（Ｈ）−フルニトラゼパムまたはその他の十分に記載された放射性リガンドであって、それぞれのＧＡＢＡサブユニットに対する選択性を持たないものであっても構わない。
【００５２】
ベンゾジアゼピンレセプターリガンドはアゴニスト（作動剤）、中性リガンド（アンタゴニスト）およびインバースアゴニスト（逆作動剤）として作用し、アゴニストならびに部分アゴニストを特定するために機能的アッセイが必要となる。このようなアッセイとしては、アゴニストおよびアンタゴニストならびにインバースアゴニストはムシモールの結合特性にさまざまな形で作用することから、読み取りに３（Ｈ）−ムシモールの結合を使用した、改良型バインディングアッセイが可能である。
【００５３】
ベンゾジアゼピンリガンドの本質的な活性を特定するために使用することが可能な、さまざまな機能的アッセイは、電気生理学的技術をベースとし、発現系としてアフリカツメガエル卵母細胞を使用するか、あるいは他で記載したようにアルファ、ベータ、ガンマの各サブユニットでトランスフェクトしたＣＨＯ細胞のようなトランスフェクト細胞系を使用する。さらに、その他の機能的アッセイとしては、ＧＡＢＡおよび試験に供する化合物に暴露したトランスフェクト細胞系をベースとすることが可能であるが、レセプターの相互作用に対する読み取りには膜電位を使用する。このような段階的なスクリーニングアプローチの結果は、アルファ３サブユニットに対する高い選択性を有し、アルファ３サブユニットにおいて完全または部分アゴニストとして作用する化合物である。
【００５４】
こうしたレセプターリガンド化合物は、アルファ３含有ＧＡＢＡレセプターに比べて、アルファ１および５含有ＧＡＢＡレセプターに対して少なくとも２０倍は低い親和性を有する部分アゴニストとして働くことも可能である。好ましくは、このような医薬組成物は、上記式Ｉの１−アリール（アルキル）イミダゾリン−２−オンを含み、所望の選択性を示す。好ましくは、このような医薬組成物は、１−（４−クロロフェニル）−４−ピペリジノイミダゾリン−２−オン（ＥＬＢ１３９）を含む。加えて、本医薬組成物は、賦形剤または助剤をさらに含むことが可能であり、また、時には望ましく、本組成物は非経口または経口投与用に調製することが可能である。上記したように、患者の体重に対して１〜１００ｍｇ／ｋｇが活性化合物の有効量であることが判明している。医薬組成物中に含まれるさらに好ましい用量は、統合失調症またはその他の精神病性疾患の治療には２〜７０ｍｇ／ｋｇ体重または５〜５０ｍｇ／ｋｇ体重であり、ジストニアの治療には１〜２０ｍｇ／ｋｇ体重または５〜１５ｍｇ／ｋｇ体重である。
【００５５】
このような医薬組成物は中枢神経系疾患の治療、好ましくは先に詳述した精神疾患、うつ病、ジストニア、てんかん、および不安障害の治療に有用である。
【００５６】
ＥＬＢ１３９を含有するこのような化合物または組成物は、入手可能なベンゾジアゼピンレセプターリガンドを用いて現在治療することができないＣＮＳ疾患、すなわちうつ病、精神疾患、ジストニア、および、うつ症状を持つ脳内のセロトニンレベルに効力を発揮する化合物を用いて治療することが可能な疾病を特に主眼とする関連ＣＮＳ疾病に対する選択的陽性作用を発揮することも要求される。このような化合物は、ベンゾジアゼピンレセプターリガンドで現在治療することが可能である疾病において、健忘症、鎮静、催眠、依存症の誘発、筋肉弛緩ならびにベンゾジアゼピンレセプターリガンドのＣＮＳ抑制作用および耐性の形成を減少させるという、より良い副作用プロフィールにて効力を発揮することも要求される。このような疾病には、不安障害、てんかん、睡眠障害、およびベンゾジアゼピン治療への反応であるその他の疾病が含まれる。
【００５７】
本発明を以下の実施例および図面を用いてさらに説明する。
【００５８】
図面が示すものは：
第１図：試験の１０分前に０．２ｍｇ／ｋｇのＭＫ−８０１を腹腔内に投与して刺激した雌ラットにおける活動、総移動距離、ステレオタイプ性の匂い嗅ぎ、他のステレオタイプおよび運動失調。
試験の１時間前にハロペリドールを腹腔内に投与し、Ｅ−１３１−００１３９を経口投与した。*  ｐ＜０．０５で対照に対して有意、**  ｐ＜０．０１で対照に対して有意、***  ｐ＜０．００１で対照に対して有意、＃  ｐ＜０．０５で互いに有意。
【００５９】
第２図：Ｅ１３１−００１３９の抗ジストニア作用。
最小投与量、すなわち５ｍｇ／ｋｇの腹腔内投与においてさえ、顕著な抗ジストニア作用が見られた。
【００６０】
第３図：ラットの線条体における５−ＨＴ放出に対するＥ１３１−００１３９の作用。
３０ｍｇ／ｋｇのＥ１３１−００１３９を腹腔内に投与した。データは、５−ＨＴの平均基礎レベルの百分率（平均ＳＥＭ〔平均標準誤差〕）で表した。*＝ｐ＜０．０５でタイロースに対して有意。
【００６１】
第４図：ラットの線条体におけるドーパミン放出に対するＥ１３１−００１３９の作用。
３０ｍｇ／ｋｇのＥ１３１−００１３９を腹腔内に投与した。データは、ドーパミンの平均基礎レベルの百分率（平均ＳＥＭ〔平均標準誤差〕）で表した。
【００６２】
第５図：組み換えラットαｉβ２γ２（ｉ＝１〜５）ＧＡＢＡＡレセプターを発現するＨＥＫ２９３細胞に関する全細胞の記録。全種の薬剤の非存在下で使用されたＧＡＢＡ濃度に対して電流は正規化された。ジアゼパム（▲）、ジアゼパム＋１０μｍ  Ｒｏ１５−１７８８（△）、Ｅ１３１−１３９（■）またはＥ１３１−１３９＋１０μｍ  Ｒｏ１５−１７８８（□）の濃度の増加は、ＥＣ２０値あたりのＧＡＢＡ濃度と共に適用された。エラーバーは４細胞毎の平均の標準誤差（±ＳＥＭ）。
【００６３】
第６図：ラット強制水泳試験における無動時間、水泳時間および動物がよじ登って脱出しようとするタイムスパンに対し、賦形剤を処方した対照と比較したＥＬＢ１３９（＝Ｅ１３１−００１３９、１０＋３０ｍｇ／ｋｇ）の作用。（*ｐ＜０．０５、一元配置分散分析〔Ｏｎｅ  Ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ〕に引き続きＨｏｌｍ−Ｓｉｄａｋ法による）。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝１０）で示した。
【００６４】
第７図：ラット強制水泳試験における無動時間、水泳時間および動物がよじ登って脱出しようとするタイムスパンに対する、賦形剤を処方した対照と比較した、フルオキセチン（１０＋３０ｍｇ／ｋｇ）の作用。（*ｐ＜０．０５、一元配置分散分析〔Ｏｎｅ  Ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ〕に引き続きＨｏｌｍ−Ｓｉｄａｋ法による）。データは平均±ＳＥＭ（ｎ＝１０）で示した。
【００６５】
第８図：雌ラットにおけるＭＫ−８０１誘発性の精神疾患関連行動に対するハロペリドールの作用。
二種の異なる試験を示している。単独投与の場合は試験６０分前に、また、フルマゼニル（Ｆ）を加える場合は試験３０分前に、０．５ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）のハロペリドール（Ｈ）を投与した。５ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）のフルマゼニルは、試験２０分前に投与した。０．１ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）のＭＫ−８０１は、試験１０分前に投与した。データは平均±ＳＥＭで示した。対照（Ｃ）に対して有意：*  ｐ＜０．０５、**  ｐ＜０．０１、***  ｐ＜０．００１。
【００６６】
第９図：雌ラットにおけるＭＫ−８０１誘発性の精神疾患関連行動に対するＥＬＢ１３９の作用、およびフルマゼニルによるその可逆性。
３０ｍｇ／ｋｇ（経口）のＥＬＢ１３９を試験の一時間前に投与した。５ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）のフルマゼニルは、試験２０分前に投与した。０．１ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）のＭＫ−８０１は、試験１０分前に投与した。ＭＫ−８０１誘発性の、ステレオタイプ性の匂い嗅ぎ、他のステレオタイプおよび運動失調を、平均±ＳＥＭで示した。対照に対して有意：*  ｐ＜０．０５、**  ｐ＜０．０１、***  ｐ＜０．００１；ＥＬＢ１３９群に対して有意：＃  ｐ＜０．０５。
【００６７】
第１０ａ図：雌ラットにおけるＭＫ−８０１誘発性の精神疾患関連行動に対するＥＬＢ１３９の作用、およびフルマゼニルによるその可逆性。
３０ｍｇ／ｋｇ（経口）のＥＬＢ１３９を試験の一時間前に投与した。５ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）のフルマゼニルは、試験２０分前に投与した。０．１ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）のＭＫ−８０１は、試験１０分前に投与した。ＭＫ−８０１誘発性の活動および移動距離を平均±ＳＥＭで示した。対照に対して有意：*  ｐ＜０．０５；ＥＬＢ１３９群に対して有意：＃  ｐ＜０．０５。
【００６８】
第１０ｂ図：雌ラットにおけるＭＫ−８０１誘発性の精神疾患関連行動に対するＥＬＢ１３９の作用、およびフルマゼニルによるその可逆性。
３０ｍｇ／ｋｇ（経口）のＥＬＢ１３９を試験の一時間前に投与した。５ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）のフルマゼニルは、試験２０分前に投与した。０．１ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）のＭＫ−８０１は、試験１０分前に投与した。ＭＫ−８０１誘発性の活動および移動距離を五分間隔にて平均±ＳＥＭで示した。対照に対して有意：*  ｐ＜０．０５；ＥＬＢ１３９群に対して有意：＃  ｐ＜０．０５。
【００６９】
実施例
１．精神病疾患の治療
１．１．動物
１５０〜１８０ｇの重さの雌Ｗｉｓｔｅｒラット（Ｃｒｌ：（ＷＩ）ＢＲ、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ社、Ｓｕｌｚｆｅｌｄ、ドイツ）を試験に使用した。ラットは標準環境下、５匹を１グループとして１２時間の明暗サイクル（午前６時に点灯）にて、食餌（ペレット，ｓｓｎｉｆｆ  Ｍ／Ｒ  １５、Ｓｐｅｚｉａｌｄｉａｅｔ  ＧｍｂＨ社、Ｓｏｅｓｔ／Ｗｅｓｔｆａｌｅｎ）と水は自由に取らせて飼育した。
【００７０】
１．２．化学物質
Ｅ１３１−００１３９（１−（４−クロロフェニル）−４−ピペリジノイミダゾリン−２−オン、分子量（ＭＷ）２７７．７５）は、ｅｌｂｉｏｎ  ＡＧ社が製造した。ハロペリドール（４−（４−［４−クロロフェニル］−４−ヒドロキシ−１−ピペリジニル）−１−（４−フルオロフェニル）−１−ヌタノン、分子量（ＭＷ）３７５，９）は、ｒａｔｉｏｐｈａｒｍ  ＧｍｂＨ社（ウルム、ドイツ）から入手し、ＭＫ−８０１（ｄｉｚｏｃｌｉｐｉｎｅ、分子量（ＭＷ）３３７．３７）は、Ｔｏｃｒｉｓから入手し、Ｂｉｏｔｒｅｎｄ  Ｃｈｅｍｉｋａｌｉｅｎ  ＧｍｂＨ社（ケルン、ドイツ）から配給された。その他の化学物質はすべて、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＧｍｂＨ社（ドイツ）またはＭｅｒｃｋ社（ドイツ）から入手した。
【００７１】
１．３．投薬計画／投与量
適用量：０．５ｍｌ／１００ｇ
【００７２】
【表１】
2009513539.tif 000004
【００７３】
１．４．化合物の調製
Ｅ１３１−００１３９を、０．５％のヒドロキシエチルセルロース中で新たにけん濁することによって、各物質および投与量のための投薬容積である０．５ｍｌ／１００ｇとした。ハロペリドール注射液を生理食塩水で希釈することによって、投薬容積である０．５ｍｌ／１００ｇとした。投与前ならびに投与中は、けん濁液を電磁かくはん機に設置した。ヒドロキシエチルセルロースは蒸留水中に溶解した。
【００７４】
１．５．試験手順
ＮＭＤＡアンタゴニストであるＭＫ−８０１に誘発される行動は、精神疾患のラットモデルとして一般的に認められるものである。ＭＫ−８０１は、腹腔内投与後のラットにおいて、ステレオタイプ、多動および運動失調を誘発する。
【００７５】
ラットの自発運動を、ＭｏｔｉＴｅｓｔ装置（ＴＳＥ、Ｂａｄ  Ｈｏｍｂｕｒｇ、ドイツ）を用いて記録する。保護用のプレキシグラスの壁（高さ２０ｃｍ）を有する正方形のアリーナ（４５×４５ｃｍ）で構成される試験領域では、ラットは自由に動くことが出来る。アリーナの各壁底部に沿って取り付けた３２赤外線フォトセル（３２  ｉｎｆｒａｒｅｄ  ｐｈｏｔｏｃｅｌｌｓ）で、水平運動を記録する。床から１２センチ上部の、横一列に並べた３２赤外線フォトセルで、垂直運動（立ち上がり）を記録する。コンピュータプログラム「ＡｃｔｉＭｏｔ」（ＴＳＥ、Ｂａｄ  Ｈｏｍｂｕｒｇ、ドイツ）で、以下のパラメータを測定する：活動時間〔ｓ〕および総移動距離〔ｍ〕。
【００７６】
一時間の間、５分毎に（１２インターバル）、Ａｎｄｉｎｅら（１９９９）に記載の方法に従い、ステレオタイプ性の匂い嗅ぎとその他のステレオタイプに分けたステレオタイプ、および運動失調を試験者が採点する。１２のインターバルにおける点数を各パラメータに加えた。
【００７７】
【表２】
2009513539.tif 000005
【００７８】
試験の当日、雌ラットを実験室に移し、試験化合物、対照品または賦形剤を試験前の適切な時間に与える。０．２ｍｇ／ｋｇのＭＫ−８０１を、試験の１０分前に腹腔内に投与する。
【００７９】
試験開始時に、ＭｏｔｉＴｅｓｔ装置の正方形のアリーナの中心にラットを置く。ラットの行動を一時間記録する。各記録作業後には動物を除去して箱を完全に清掃して乾燥させる。
【００８０】
１．６．統計
一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）により結果を分析した。個々の比較にはＴｕｋｅｙ検定を使用した。Ｐ＜０．０５を有意であると見なした。
【００８１】
１．７．結果
試験の結果を第１図に示す。Ａｎｄｉｅら（１９９９）に記載されるように、ハロペリドールはＭＫ−８０１により誘発されたすべての症状を有意に低減した〔ｐ＜０．００１〕。
【００８２】
３０ｍｇ／ｋｇ（経口）のＥ１３１−００１３９は、ＭＫ−８０１により誘発されたステレオタイプ性の匂い嗅ぎ、その他のステレオタイプおよび運動失調を有意に逆転させるとともに、ＭＫ−８０１により誘発された総移動距離を明らかに減少させた。この投与量ではＭＫ−８０１により刺激を受けた活動が減少することはなかった。
【００８３】
６０ｍｇ／ｋｇ（経口）では、Ｅ１３１−００１３９は、ＭＫ−８０１により誘発されたすべてのパラメータが有意に減少した。
【００８４】
ステレオタイプ性の匂い嗅ぎは投与量に依存して減少した〔ｐ＜０．０５〕。
【００８５】
２．ジストニアの治療
２．１．動物
先に詳述したように品種改良により得られた雄および雌のｄｔｓｚ突然変異シリアンゴールデンハムスター（ＦｒｅｄｏｗおよびＬｏｅｓｃｈｅｒ、１９９１）を試験に使用した。ハムスターは標準環境下、３〜５匹毎のグループで、１２時間の明暗サイクル（午前６時に点灯）にて、食餌（Ａｌｔｒｏｍｉｎ  １３２０  標準餌、Ａｌｔｒｏｍｉｎ社、Ｌａｇｅ、ドイツ）と水は自由に取らせて飼育した。
【００８６】
２．２．化学物質
Ｅ１３１−００１３９（１−（４−クロロフェニル）−４−ピペリジノイミダゾリン−２−オン、分子量（ＭＷ）２７７．７５）は、ｅｌｂｉｏｎ  ＡＧ社が製造した。その他の化学物質はすべて、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＧｍｂＨ社（ドイツ）またはＭｅｒｃｋ社（ドイツ）から入手した。
【００８７】
２．３．投薬計画／投与量
適用量：０．２ｍｌ／２０ｇ
【００８８】
【表３】
2009513539.tif 000006
【００８９】
２．４．化合物の調製
Ｅ１３１−００１３９を、０．５％のヒドロキシエチルセルロース中で新たにけん濁することによって、各物質および投与量のための投薬容積である０．２ｍｌ／２０ｇとした。投与前ならびに投与中は、けん濁液を電磁かくはん機に設置した。ヒドロキシエチルセルロースは蒸留水中に溶解した。
【００９０】
２．５．試験手順
ジストニア発病の誘発に対し、ハムスターの感受性が最大である３０〜４０日齢において薬剤試験を行った。三重刺激技法（ｔｒｉｐｌｅ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ  ｔｅｃｈｎｉｑｕｅ）によりジストニア発病を誘発した。ハムスターを飼育ケージから取り出し、（体重を測定するために）量りに載せた後、生理食塩水（対照）または薬剤を腹腔内に投与し、新品で空のプラスチックケージに速やかに入れる。新たなプラスチックケージにハムスターを入れてから数分以内に、ジストニアの発病が始まった。このケージ内で３時間のあいだ動物を観察し、０〜１時間、１〜２時間、２〜３時間の期間におけるジストニア運動を以下のように採点したが、観察期間内において、常に評定は最終ステージへと到達した。
第１ステージ：歩行中にフラットな耳およびフラットな姿勢。
第２ステージ：顔面のゆがみ、前脚を交差させた立ち上がり、前足のセッティングの遅延を伴う不安定な歩行。
第３ステージ：後肢の硬直、そのために動物は測定障害的な過剰歩行においてつま先で歩行しているように見える。
第４ステージ：平衡感覚障害
第５ステージ：尾方に過度に伸ばされた後肢、動物は動く前肢で体を引きずり続ける。
第６ステージ：後肢・前肢双方の強直状態での前方への伸展、尾の直立（Ｓｔａｒｕｂ様）、片側後肢の交互の挙上、頭部のゆれ、後弓反張を伴い、ねじれて湾曲した姿勢で動物の体が不動化。
【００９１】
最終ステージは２〜５時間持続したが、その後急速な回復が見られた。一連の記載した手順全体を通じ、突然変異ハムスターの回復はいずれにも見受けられず、最終ステージへは通常４５〜１７０分後にそれぞれ到達した。
【００９２】
２．６．統計
Ｆｒｉｅｄｍａｎ検定およびこれに続くＷｉｌｃｏｘｏｎ検定により結果を分析した。Ｐ＜０．０５を有意であると見なした。
【００９３】
２．７．結果
最初の群の動物（ｎ＝８）を、３２〜３３日齢にて、賦形剤（腹腔内）投与後、ならびに上述の三重刺激手順を行った後、ジストニア発病の頻度および重症度の試験に供した。２〜３日後、同じ動物にＥ１３１−００１３９（腹腔内）の投与を行い、再び３時間の観察を行い、再び２〜３日後には、投与後対照群を用意するためにこの動物に対して賦形剤を投与し、その後再試験に供した。この試験の結果を第２図に示した。このグラフでは、３本の棒グラフ毎の３つの束が示されている。最初の束は薬剤投与と共に開始された観察の最初の一時間を、２番目の棒グラフの束は観察の２時間目を、そして３番目の束は３時間目を表している。
【００９４】
各束には３本の棒グラフが表示されている。第１番目（白抜き）の棒グラフは薬剤試験の２〜３日前に記録した動物の対照反応を示し、黒色の棒グラフは薬剤投与後の結果を示し、第３番目（灰色）の棒グラフは、薬剤投与２〜３日後に試験に供した投与後対照例を示す。ジストニア発病の誘発に対する感受性の低下は日齢に依存する、ということだけを理由とするステージの重症度の低減を排除するために、投与前および投与後試験を採用した。
【００９５】
この試験では、Ｅ１３１−００１３９が強力な抗ジストニア作用を発揮することが示された。試験における投与量、すなわち１０ｍｇ／ｋｇにおいて、化合物は良好な耐容性を示すと共に鎮静作用は観察されなかった。全観察期間の間、ジストニア発病の重症度は有意に低下し、行動の長期化が示された。消失しなかった症状、すなわちステージ平均２．３〜２．４は、試験開始後数分以内に到達するステージであり、換言すれば、同時にＥ１３１−００１３９の血漿レベルは皆無であるか、あるいはほんの僅かである。
【００９６】
３．抗不安および抗うつ活性
Ｅ１３１−００１３９をさらに特徴付けるために、微小透析による本化合物の調査を行った。線条体におけるセロトニン（５ＨＴ）およびドーパミンの二種の神経伝達物質の細胞外濃度およびその代謝物を測定した。
【００９７】
３．１．動物
２００〜２６０ｇの重さの雌Ｗｉｓｔａｒラット（Ｃｒｌ：（ＷＩ）ＢＲ、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ社、Ｓｕｌｚｆｅｌｄ、ドイツ）を試験に使用した。ラットは標準環境下、５匹を１グループとして１２時間の明暗サイクル（午前６時に点灯）にて、食餌（Ｐｅｌｌｅｔｓ，ｓｓｎｉｆｆ  Ｍ／Ｒ  １５、Ｓｐｅｚｉａｌｄｉａｅｔ  ＧｍｂＨ社、Ｓｏｅｓｔ／Ｗｅｓｔｆａｌｅｎ）と水は自由に取らせて飼育した。
【００９８】
３．２．化学物質（ＰＥＧ３００）
Ｅ１３１−００１３９（１−（４−クロロフェニル）−４−ピペリジノイミダゾリン−２−オン、分子量（ＭＷ）２７７．７５）は、ｅｌｂｉｏｎ  ＡＧ社が製造した。その他の化学物質はすべて、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＧｍｂＨ社（ドイツ）またはＭｅｒｃｋ社（ドイツ）から入手した。
【００９９】
３．３．投薬計画／投与量
投与経路：腹腔内投与
適用量：０．５ｍｌ／１００ｇ
【０１００】
【表４】
2009513539.tif 000007
【０１０１】
３．４．１０％のポリエチレングリコールを含む０．５％のヒドロキシエチルセルロース中にけん濁した化合物の調製
Ｅ１３１−００１３９を、０．５％のヒドロキシエチルセルロース中で新たにけん濁することによって、各物質および投与量のための投薬容積である０．５ｍｌ／１００ｇとした。投与前ならびに投与中は、けん濁液を電磁かくはん機に設置した。ヒドロキシエチルセルロースは蒸留水中に溶解した。
【０１０２】
３．５．試験手順
手術
試験の前日、抱水クロラール（３．６％、１ｍｌ／１００ｇ、腹腔内投与）で雌ラットに麻酔をかけ、定位固定フレーム内に置き、微小透析のガイドカニューレ（ＣＭＡ／１２、Ｃａｒｎｅｇｉｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎ、スウェーデン）を移植した。頭皮はラムダとブレグマの間の中央を前後方向に切開し、ドリルで頭蓋骨に小さな穴を開けた。ＰａｘｉｎｏｓおよびＷａｔｓｏｎ（１９８６）にしたがい、定位座標はブレグマよりＡＰ＝＋１．０ｍｍ、Ｌ＝−３．０ｍｍ、線条体に対する頭蓋骨表面から１．５ｍｍであった（１）。頭蓋に対するガイドカニューレおよびアンカースクリューの固定には歯科用セメント（Ｓｉｎｆｏｎｙ（２））を使用した。手術中は、電気毛布を用いて直腸の温度を３７℃に保持した。
【０１０３】
微小透析
試験前日、ガイドカニューレを通じて微小透析プローブ（ＣＭＡ／１２、膜の長さ４ｍｍ、Ｃａｒｎｅｇｉｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎ、スウェーデン）を線条体に挿入した。試験当日、プローブをリンゲル液（１４８ｍＭ  ＮａＣｌ、４ｍＭ  ＫＣｌ、２，４ｍＭ  ＣａＣｌ２、ｐＨ＝６，０）で潅流した。流速（１μｍ）にて２０分毎に２０μｍの試料をマイクロバイアルに採取した。マイクロバイアルは、分析に供するまではフラクションコレクタ（ＣＭＡ／１７０）内で温度８℃にて貯蔵した。スイベルジョイントを用いて、潅流処理中も動物は半球形の容器内を自由に動くことが出来るようにした。一時間の調整時間をとった後、３回連続で２０分間の画分を採取し、神経伝達物質の放出の安定な基礎レベルを規定した。
【０１０４】
その後、３０ｍｇ／ｋｇのＥ１３１−００１３９または同一容積の０．５％のタイロース／ＰＥＧ３００  ９：１を、それぞれ投与した。その後、少なくとも２２０分の間、サンプル採取を続けた。
【０１０５】
透析液の分析
電気化学検出を用いた逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ−ＥＣ）により、透析液を直接分析した。ＺＯＲＢＡＸ  ＳＢ−Ａｑ  内径（ＩＤ）２．１ｍｍ×１００ｍｍ  カラム（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）を用いてサンプルを単離した。１％の過塩素酸１μｌを２０分間の画分に加え、この混合液１０μｌをＨＰＬＣシステムに注入した。
【０１０６】
移動相は以下を含んでいた：
ＫＨ２ＰＯ４  ５０ｍＭ
オクタン−１−スルホン酸ナトリウム塩（ＮＯＳ）  ２，２ｍＭ
ＥＤＴＡ  ０．０８６ｍＭ
２ＭＨ３ＰＯ４  ５ｍｌ
メタノール（ＭｅＯＨ）  ８３ｍｌ
アセトニトリル  １０ｍｌ
ｐＨ３．５にて
流速０．２３ｍｌ／分、カラム温度３８℃、サンプルのサーモスタット８℃にて、メソッド（セロトニン）を実行した。
【０１０７】
夜間の流速は、流速０．１ｍｌ／分に減じた。カテコールアミンを５００ｍＶ（モデル５０１４Ｂ  微小透析セル、ｅｓａ）で酸化した。Ｄｏｐａｃは２００ｎＡ、ドーパミンは２ｎＡ、ＨＩＡＡは１００ｎＡ、ＨＶＡは２ｎＡ、およびセロトニンは５００ｐＡにて測定した。
【０１０８】
５種類の濃度でのシステムの外部標準を標準化するためにそれぞれを定期的に実行した。
【０１０９】
ＤＯＰＡＣ（３，４−ジヒドロキシフェニル酢酸）  １０００，５００，２５０，１２５，６２．５ｎＭ
ＤＯＰＡＭＩＮＥ（塩酸  ３−ヒドロキシチラミン）  ８，４，２，１，０．５ｎＭ
ＨＩＡＡ（５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸）  ２００，１００，５０，２５，１２．５ｎＭ
ＨＶＡ（ホモバニリン酸）  ８００，４００，２００，１００，５０ｎＭ
ＳＥＲＯＴＯＮＩＮ（５−ヒドロキシトリプタミン−クレアチニン硫酸塩）  ０．１５，０．０７５，０．０３７５，０．０１８７５，０．００９３７５ｎＭ
微小透析プローブの移植前および除去後、２０００ｎＭのＤＯＰＡＣ、４０ｎＭのドーパミン、１０００ｎＭのＨＩＡＡ、２０００ｎＭのＨＶＡおよび０．８ｎＭのセロトニンを含む溶液でリカバリー（回収）を行った。プローブの回収率は５〜２０％の間であった。
【０１１０】
組織像
試験終了後にラットの脳を除去し、ホルマリン（１０％）中で約１０日間固定した。ビブロスライス（ＴＳＥ）を用いて脳を切断し、トロイジンブルーで染色してプローブが正しい位置にあることを確認した。
【０１１１】
統計
５−ＨＴ放出の基礎レベルは個体差を示した。そのため、各動物のデータを百分率で示した。薬剤投与前の微小透析のデータを平均化し、平均値を１００％とした；全個体値は適宜算出した。
【０１１２】
時間および薬剤を二つの因子として、二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）により結果を分析した。個々の比較にはＴｕｋｅｙ検定を使用した。Ｐ＜０．０５を有意であると見なした。
【０１１３】
３．６．結果
３０ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）のＥ１３１−００１３９は、５−ＨＡＴの代謝産物であるＨＩＡＡ濃度に影響を与えることなく（データは示さず）、１時間４０分の間（第３図）、ラット線条体における５−ＨＴの濃度を驚くべきことに上昇させた。同剤は、同時に測定された線条体におけるドーパミンの濃度にも影響を与えなかった（第４図）。５−ＨＴレベルの変化は抗不安および抗うつ作用を示している。
【０１１４】
この上昇のメカニズムは解明されていない。ジアゼパムのようなベンゾジアゼピンは、脳内の５−ＨＴ放出を増加させることはなく、むしろ減少させることから、この化合物のベンゾジアゼピン様の作用により（Ｐｅｉら、１９８９年）、また、ＳＳＲＩの作用に対して拮抗することにより、これを説明することはできない。加えて、線条体５−ＨＴの増加は必須とはいえず、脳内の５−ＨＴ放出に対する抗てんかん作用としての抗てんかん剤の典型的なメカニズムは、抗痙攣剤に依存して変化する。カルバマゼピンもまた、ＮタイプＣａ２＋チャンネルに影響を与えることによるものと推定されるが、基本的な５−ＨＴ放出を増大させる（Ｋａｗａｔａら、２００１年）。バルプロエートもまた細胞外５−ＨＴを増強させるが（Ｍｕｒａｋａｍｉら、２００１年）、一方、フェニトインおよびガバペンチンはこれを減少させる（Ｏｋａｄａら、１９９７年、Ｔａｙｌｏｒら、１９９８年）。
【０１１５】
細胞外５−ＨＴ濃度に対するＥ１３１−００１３９の作用を、フルオキセチンおよびその他の選択的セロトニン再取込み阻害剤（ＳＳＲＩ）のそれと比較することも可能である（Ｌｉら、１９９６年）。したがって、Ｅ１３１−００１３９は、中枢神経系疾患の治療に対する新たな展望を広げているが、この化合物類は、長期間ではあるが発現が遅い（遅延型の）脳内の細胞外５−ＨＴ濃度を増加させるという薬剤作用、およびベンゾジアゼピンの直接的で迅速な抗不安作用を併せ持つ可能性があるからであり、これは化合物類１−アリール（アルキル）イミダゾリン−２−オンの持つ周知の性質である。ベンゾジアゼピンアゴニストのもつ有益な特徴、ならびに、ベンゾジアゼピン仲介作用によるセロトニンレベルに対する作用を軽減する恐れが全くないというＳＳＲＩの特徴を併せることによって、Ｅ１３１−００１３９は、慢性不安症候群、パニック障害、広場恐怖症、特定恐怖症、対人恐怖症および全般性不安障害、ならびに、例えば大うつ病性障害およびエピソード、躁病性、混合性および軽躁病性気分エピソード、非定型性、緊張性または憂鬱性のうつ病エピソード、出産後に発現した月経前不快気分障害のうつ病エピソード、小うつ病性障害、外傷後および急性ストレス障害の抑うつ障害の治療に対して、桁外れで改良された効力を示す。
【０１１６】
実施例４
サブタイプ選択性で部分アゴニスト性のα３選択性化合物の一例としての、ＥＬＢ１３９のサブタイプ選択的作用および部分アゴニスト作用
γアミノ酪酸（ＧＡＢＡＡレセプター）により開く、リガンド開閉型イオンチャンネルは、６個のα、３個のβ、３個のγ、一個のδ、一個のε、一個のπ、一個のθサブユニットの配列から２〜３個の異なるサブユニットを組み合わせた５量体である（Ｈｅｖｅｒｓら、１９９８年）。その機能的多様性を形成するベースとなるものは、おそらくＧＡＢＡＡレセプターの構造的な多様性（不均一性）であろう。ＧＡＢＡＡレセプターを認識する多くのベンゾジアゼピン（ＢＺ）は、これらのレセプターチャンネルを通じてＣｌ−の流量を制御し、これによりＣＮＳにおけるシナプス性の伝達に作用する。例えば、今回の試験で対照化合物として使用した鎮静・催眠作用を持つＢＺジアゼパムは、ＣＮＳの機能に多くの影響を与え、低用量における鎮静作用から極めて高用量における感覚消失に至る、臨床作用の広がりを引き起こす。したがって、治療効果に含まれない神経系に対する作用を低減する目的で、ＢＺのような薬剤のＧＡＢＡ性サブタイプ特異性を改善するために多くの取り組みがなされている。
【０１１７】
ＧＡＢＡＡレセプターサブユニット化合物は、ＢＺのような薬剤と同様に内因性のリガンドの親和性ならびに有効性の双方を決定する。αサブユニット間の多様性は特定クラスのＢＺリガンドの親和性ならびに有効性に対しては意味深いインパクトを与えるが、その他のクラスでは差を生じない（Ｐｒｉｔｃｈｅｔｔら、１９８９年、Ｗｉｓｄｅｎら、１９９１年）。例えば、ジアゼパムは、すべてではないが大半の１，４−ＢＺと同様に、一般式αｉβｊγ２（ｉ＝１〜３、５；ｊ＝１〜３）のレセプターサブタイプに対して特異的に結合しないことが以前に示されている（Ｌｕｅｄｄｅｎｓ、１９９５年；Ｂｅｎａｖｉｄｅｓ、１９９２年；Ｐｒｉｔｃｈｅｔ、１９９０年）。
【０１１８】
本試験は、推定ＢＺアンタゴニストであるフルマゼニル（Ｒｏ１５−１７８８）の存在または非存在下で、ＢＺレセプターリガンドであるＥＬＢ１３９の、ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ２９３）細胞の異種系におけるＧＡＢＡＡレセプターサブタイプに対する効力および有効性を詳細に渡って検討するために行われた。選択されたレセプターサブタイプであるαｉβ２γ２（ｉ＝１〜５）は、天然型のＧＡＢＡＡ／ＢＺレセプターの大半を構成しているようである。新規化合物の有効性、効力ならびにαサブユニット特異性を、ジアゼパムの場合と比較した。
【０１１９】
４．１．試験の部
材料
ＥＬＢ１３９（Ｅ１３１−００１３９）を除くすべての化合物は商業的供給源から入手されており、分析に用いるグレードのものであった。
【０１２０】
４．２．細胞培養および細胞トランスフェクション
電気生理学的記録の目的で、ＨＥＫ−２９３細胞を継代培養し、１５８ｍｇ／ｌの重炭酸ナトリウム、２ｍＭのグルタミン（Ｇｉｂｃｏ社）、１００Ｕ／ｍｌのペニシリン−ストレプトマイシン（Ｇｉｂｃｏ社）、および１０％のウシ胎児血清（Ｇｉｂｃｏ社）を補充した１０ｍｌの最小必須培地（ＭＥＭ、Ｇｉｂｃｏ社）で満たした９．６ｃｍプラスチック皿中の１２ｍｍのガラス製のカバースリップ上に再プレート化した。９５％  Ｏ２／５％ＣＯ２雰囲気の加湿条件下、３７℃にて培養物を２〜３日の間保持した。
【０１２１】
詳細な記述に従い、組み換えラットＧＡＢＡＡレセプターを用いたトランスフェクションを実行した（ＫｏｒｐｉおよびＬｕｅｄｄｅｎｓ、１９９３年；ＬｕｅｄｄｅｎｓおよびＫｏｒｐｉ、１９９５ｂ）。手短に言えば、α、βおよびγサブユニットに対する真核発現ベクター（Ｐｒｉｔｃｈｅｔｔ、１９９０年）中のラットＧＡＢＡＡレセプターｃＤＮＡを用い、リン酸塩沈殿法を使用してＨＥＫ２９３細胞をトリプルコンビネーション中でトランスフェクトした。最適レセプター発現に対する最終濃度（μｇベクターＤＮＡ／９．６ｃｍ組織培養プレート）は：α１  ２；α２  ４．８；α３  １．２；α４  １０；α５  ０．８；β２  ０．４；およびγ２Ｓ  ０．３であった。本明細書の以下の記載において、γ２Ｓ変異体はγ２と略する。トランスフェクトした細胞を特定するために、すべてのサブユニットの組み合わせを１μｇ／プレートのｐＮＩ−ＥＧＦＰでコトランスフェクトした。
【０１２２】
４．３．電気生理学
トランスフェクションの２日後、ＨＥＫ２９３を含むシングルカバースリップを、蛍光顕微鏡（オリンパスＩＸ７０）の可動式ステージに取り付けた記録槽に入れ、１３０  ＮａＣｌ、５．４  ＫＣｌ、２  ＣａＣｌ２、２  ＭｇＳＯ４、１０  グルコース、５  ショ糖、および１０  ＨＥＰＥＳ（遊離酸）（単位はｍＭ）を含む特定の食塩溶液、約３５ｍＭのＮａＯＨでｐＨを７．３５に調整、を用いて潅流した。ｐＮＩ−ＥＧＦＰベクターの発現による緑色蛍光によってトランスフェクト細胞を特定し、これらの細胞のリガンド仲介による膜電流を、全細胞構造（ｃｏｎｆｉｇｒａｔｉｏｎ）パッチクランプ法により調査した（Ｈａｍｉｌら、１９８１年）。マルチステージ法において水平型のプラー（ｈｏｒｉｚｏｎｔａｌ  ｐｕｌｌｅｒ）（Ｓｕｔｔｅｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社、カナダ、モデルＰ−９７）を用いて、硬質ホウケイ酸ガラス毛管（内径０．５ｍｍ、外径１．５ｍｍ、Ｖｉｔｒｅｘ、Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ  ＧｍｂＨ社、Ｈｏｆｈｅｉｍ、ドイツ）で、パッチクランプピペットを吸引した。このピペットは、９０  ＫＣｌ、５０  ＫＯＨ、２  ＣａＣｌ２、２  ＭｇＣｌ２、１０  ＥＧＴＡ、３．１  ＡＴＰ（ジカリウム塩）、０．４  ＧＴＰ（三ナトリウム塩）および１０  ＨＥＰＥＳ（遊離酸）（単位はｍＭ）、ｐＨ７．３５、を含む溶液で満たした時に、２〜４ＭΩの初期抵抗を示した。
【０１２３】
ピペットと外部溶液との間の接合部電位は２．３ｍＶ未満であったので、考慮からはずした。緩やかにピペットを吸引することにより、１ＧΩを超えるシール抵抗が通常的に得られた。容量を増加するにつれ、膜の破裂が電気的に観察された。容量性の過渡電流が最小となるように、ピペット電気容量、膜電気容量、および直列抵抗を電気的に補正した。直列抵抗補正＞６０％を定期的に使用した。
【０１２４】
ｆａｓｔ  ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  ｓｔｅｐｐｅｒ  ｓｙｓｔｅｍ（ＳＦ−７７Ｂ、Ｐｅｒｆｕｓｉｏｎ  Ｆａｓｔ  Ｓｔｅｐ、Ｗａｒｎｅｒ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  Ｉｎｃ．社、ミッドウェスト、米国）を用いた、類似（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅ）レセプターサブタイプ特異性ＧＡＢＡ  ＥＣ２０、ＧＡＢＡ  ＥＣ２０に：０．０１、０．１、１、１０（μＭ単位）へと濃度を増加させたジアゼパムを加えたもの、および、ＧＡＢＡ  ＥＣ２０に：０．０１、０．０３、０．１、０．３、１、３、１０、３０（μＭ単位）へと濃度を増加させたＥＬＢ１３９を加えたもの、を含む試験溶液。ジアゼパムおよびＥＬＢ１３９の場合、全濃度に１０μＭのＲｏ１５−１７８８を加えた試験セットを試験に供した。記録を取った全細胞において、試験薬剤を試験する前に１μＭのゾルピデム＋ＧＡＢＡ  ＥＣ２０を与えることによりヘテロ５量体中のγ２サブユニットの存在をモニターした。
【０１２５】
細胞の応答は、標準的なパーソナルコンピュータおよびｐＣｌａｍｐ８．１ソフトウェアパッケージ（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、カナダ）に接続したパッチクランプ増幅器（ＥＰＣ−８、ＨＥＫＡ−Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃ社、Ｌａｍｂｒｅｃｈｔ、ドイツ）を用いて記録した。細胞に対する標準保持電位は−４０ｍＶであった。Ｄｉｇｉｄａｔａ  １３２２Ａインターフェース（Ａｘｏｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ社、Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ、カナダ）によりデジタル化を行う前に、全細胞の電流を、５または３ＫＨｚの８極Ｂｅｓｓｅｌフィルターを用いて低域通過フィルター（ローパスフィルター）に通し、少なくとも１ｋＨｚのサンプリング速度においてコンピュータに記録した。
【０１２６】
４．４．結果および考察
全細胞構造（ｃｏｎｆｉｇｒａｔｉｏｎ）パッチクランプ法を用い、緑色蛍光細胞上の類似（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅ）ＥＣ２０のＧＡＢＡと共に薬剤濃度を上昇させることにより、新規化合物ＥＬＢ１３９の効果、有効性、およびＧＡＢＡＡレセプターαサブユニット特異性を調査した。同一細胞における新規化合物のＢＺ結合部位特異性を、１０μＭ  Ｒｏ１５−１７８８をさらに加えた実験設定において調査した。
【０１２７】
β２およびγ２サブユニットと共に共発現したα１、α３およびα５を含有するレセプターにおいて、Ｅ１３９はＧＡＢＡ誘発性の電流を強めるが、ジアゼパムに比べて効果が弱く、また効率的ではなかった（第１表）。１０μＭのＲｏ１５−１７８８は、これらの３つのＧＡＢＡＡレセプターの全組み合わせにおいて、ＥＬＢ１３９の効果を完全に阻害した。α１含有レセプターでは、Ｅ１３９による正電流調節作用は、０．３μＭにおいて観察可能となり、３０μＭにおいて１．６±０．０８倍の最大値に到達したが（第５Ａ図）、これはジアゼパムの効果（ジアゼパム１μＭにおいて２．２±０．９倍）の約半分である。α５β２γ２レセプターでは、ＥＬＢ１３９による正電流調節作用は、１μＭにおいて初めて観察され、３０μＭにおいて１．４±０．０６倍の最大値に到達し、すなわち、ＥＬＢ１３９の効力および効果はジアゼパムより有意に低く、ジアゼパムは用量１０ｎＭにおいて電流が増強され、また、１μＭにおいては２±０．０５倍に電流が増強されるという最大アゴニスト作用に到達した（第５図Ｅ）。α３含有レセプターでは、０．３μＭを超える濃度における最高有効値１．３±０．０７倍を示す約３０ｎＭを超える濃度において、新規化合物ＥＬＢ１３９は、ＧＡＢＡ誘発型の電流を正の方向に調節した。対照的に、ジアゼパムに対しては、正電流調節作用は１０ｎＭ未満の濃度にて観察可能であり、１μＭにおいて１．８±０．１１倍の最大刺激に到達した。
【０１２８】
プロトタイプ的なＢＺジアゼパムとは対照的に、ＥＬＢ１３９はα２含有レセプターに対するαサブユニット特異性を示した。このＧＡＢＡＡレセプターに対し、ジアゼパムは、０．１μＭ未満の濃度において初めて検出され得、また、１μＭにおいては１．８倍の増強を伴う最大アゴニストを備えた、高い効力と有効性を示した（第５Ｂ図、第１表）。対照的に、Ｅ１３９は、組み換えα２β２γ２ＧＡＢＡＡレセプターにおけるＧＡＢＡ誘発性電流のアゴニスト性または逆アゴニスト性調節に機能しなかった。
【０１２９】
α４含有レセプターに対し、ジアゼパムは１μＭｍまでの濃度ではＧＡＢＡ誘発型の電流の調節作用の有意性を示さなかった（第５Ｄ図）。同様に、試験に供された全濃度において、Ｃｌ−電流はＥＬＢ１３９の影響を受けなかった。α１β２γ２およびα５β２γ２レセプターにおけるＥＬＢ１３９の効力は同様、すなわち、両ケースにおいて、約１μＭのＥＬＢ１３９における有意なアゴニスト性の効果は注目に値するものであるが、α１−含有レセプターに対するこの薬剤の効果は、α５β２γ２に対する効果に比べてわずかに高い（１．６倍に対し１．４倍、第１表を参照のこと）。興味深いことに、ＥＬＢ１３９は、α３β２γ２レセプターに対して、３０ｎＭを超える濃度において既に観察されている増強効果を伴った最も高い効力を示したものの、これらのレセプターに対してわずか１．３倍のみの電流増強という最も低い効果を示した。
第１表：類似（ａｐｐｒｏｘｉｍａｔｅ）レセプターサブタイプ特異性ＧＡＢＡ  ＥＣ２０と共に適用したＥＬＢ１３９およびジアゼパムのＥＣ５０および増強度。アスタリスク（*）はグラフィカルに特定された値である。
【０１３０】
【表５】
2009513539.tif 000008
【０１３１】
４．５．結論
結論として、新規薬剤ＥＬＢ１３９は、ジアゼパムに比べて低い効力および効果で、α１、α３およびα５β２γ２  ＧＡＢＡＡレセプターに対し、ＢＺ結合部位を介してＧＡＢＡ誘発型電流を正の方向に調節した。しかしながら、ＥＬＢ１３９は、α１およびα５に比べ、α３含有ＧＡＢＡＡレセプターに対して約５０倍の選択性を示した。さらに、ジアゼパムと比較して、ＥＬＢ１３９はα２含有レセプターに対してアゴニスト作用を示さなかった。ジアゼパムに比べてＥＬＢ１３９のＧＡＢＡＡレセプター選択性がばらばらであることは、これらのインビボにおける作用の違いの根拠をなす可能性があることを本結果は示している。
【０１３２】
実施例５
サブタイプ部分選択的アゴニストであるα３選択性化合物の一例としての、うつ病のげっ歯類モデルにおける、ＥＬＢ１３９のインビボでの抗うつ作用
ＥＬＢ１３９の効果をラット強制水泳試験（ＦＳＴ）にて調査した。大うつ病を含むうつ疾患は、重篤であり、生活に支障をきたすものである。選択的セロトニン再取込み阻害剤（ＳＳＲＩ）は、抗うつ治療の安全性および忍容性を改善した。しかしながら、薬物副作用（主に治療の初期段階における）により、コンプライアンスがしばしば妨害されている。特に重度にうつ状態の患者においては、ＳＳＲＩの抗うつ効果は、三環系抗うつ剤の効果よりも優れているとはいえない（約３０％の患者で改善が見られなかった）（ＡｎｄｅｒｓｏｎおよびＴｈｏｍｅｎｓｏｎ、１９９４年；Ｂｉｌｅｒ、２００１年；ＡｎｄｅｒｓｏｎおよびＴｏｍｅｎｓｏｎ、１９９４、年；ＢｕｒｋｅおよびＰｒｅｓｋｏｒｎ、１９９５年）。こうした理由から、うつ病治療への新規な治療上のアプローチに対し、非常に関心が集まっている。
【０１３３】
抗うつ剤に対する約１ダースの動物試験が使用されている（Ｃｒｙａｎら、２００２年、Ｃｒｉａｎら、２００２年）。ラットとマウスにおける使用に対し、Ｐｏｒｓｏｌｔおよび共同研究者ら（Ｐｏｒｓｏ  ｌｔら、１９７７年）による、ストレスに対する非特異的抵抗を測定するために使用された強制水泳試験が記述・検証されている（Ｐｏｒｓｏｌｔ、２０００年）。強制水泳試験は、ほぼ完全に消耗した状態へと強制的に泳がせる（１５分間）という行動療法アプローチを利用している。開始直後の力強い活動期間に続き、げっ歯類は一般的には固定姿勢を急に採るようになり、浮いた状態を保つために最小限にのみ活動する（Ｐｏｒｓｏｌｔら、１９７７年）。強制水泳試験（Ｐｏｒｓｏｌｔの試験）の有効性およびうつ状態との関連性が広きに渡って再検討され（Ｃｒｙａｎら、２００２年；Ｗｉｌｌｎｅｒ、１９８４年；Ｗｉｌｌｎｅｒ、１９９０年）ており、また、これは抗うつ剤に対する既に確立されたスクリーニング試験である。さまざまな研究所が本装置に技術的な改良を加えてはいるが、本試験の原理は変わらないままである。選択的セロトニン再取込み阻害剤（ＳＳＲＩ）の検出は臨床的に有効であるが、残念ながら、従来の強制水泳試験では信頼性が低い（ＢｏｒｓｉｎｉおよびＭｅｌｉ、１９８８；Ｄｅｔｋｅら、１９９５年、Ｃｒｙａｎ、２００２年）。行動の詳細な分析をベースとするＦＳＴの改良が、より信頼性の高いセロトニン作動性およびノルアドレナリン作動性の検出および識別を可能にしている（Ｌｕｃｋｉ、１９９７年；Ｄｅｔｋｅら、１９９５年）。
【０１３４】
５．１．材料および方法
動物
１８０〜２２０ｇの体重の雌Ｗｉｓｔａｒラット（Ｓｈｏｅ：Ｗｉｓｔ、Ｄｉｍｅｄ  Ｓｃｈｏｅｎｗａｌｄｅ  ＧｍｂＨ社、ドイツ）を使用した。ラットはグループで飼育し、５匹を１ケージ（４５×６０×２５ｃｍ）として室温（２２±２℃）で、１２時間の明暗サイクル（午前６時に点灯）にて１７０ルクスを照射した。標準ペレットフード（Ａｌｔｒｏｍｉｎ  １３２６）および水は自由に摂取させた。新しい環境に確実に慣らすために、試験前の２週間は、ラットを個別（ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔａｌ）動物ユニット内で飼育した。到着次第、ラットを治療群へと無作為に割り当てた。照明を明るく付けた防音室で、１４：００〜１７：００の間に試験を行った。
【０１３５】
化学物質
試験化合物：ＥＬＢ１３９
化学名：１−（ｐ−クロロフェニル）−４−ピペリジン−１−イル−１，５−ジヒドロ−イミダゾ−２−オン）
分子量：２７７．７５
バッチ：Ｓ３０６７６７
製造業者：ｅｌｂｉｏｎ  ＡＧ
対照化合物：フルオキセチン
化学名：Ｎ−メチル−γ―〔４−（トリフルオロメチル）フェノキシ〕ベンゼンプロパンアミン
分子量：３４５．８
賦形剤１：タイロース
化学名：ヒドロキシエチルセルロース
バッチ：Ｓ２２３４１  ７４３
製造業者：Ｍｅｒｃｋ  Ｅｕｒｏｌａｂ  ＧｍｂＨ
賦形剤２：ＰＥＧ３００
バッチ：Ｌｏｔ５３６１６４３３
製造業者：Ｍｅｒｃｋ  Ｅｕｒｏｌａｂ  ＧｍｂＨ
投薬計画／投与量
Ｅ１３１−００１３９を、１０％のＰＥＧ＋９０％の０．５％  ヒドロキシエチルセルロース中で試験前に新たにけん濁した。確立された抗うつ剤であるＳＳＲＩのフルオキセチン（１０、３０ｍｇ／ｋｇ）および賦形剤を処方する対照品（１０％  ＰＥＧ＋９０％０．５％  ヒドロキシエチルセルロース）を含めることで試験手順を有効なものとした。
【０１３６】
馴化セッション（２３時間）の後すぐに、試験の５時間前および１時間前に、すべての動物にｖｅｒｕｍまたは賦形剤を３回処方した。すべての薬剤を、用量１ｍｇ／ｋｇにて経口にて投与した。
【０１３７】
５．２．試験手順
２２℃の水を２８ｃｍの深さまで満たした（動物は底面に届かない）ガラスタンク（２３×３０ｃｍ、高さ４０ｃｍ）の中で動物を試験に供した。ガラスタンクは間接的に照明を行い、濃茶色の遮へい壁（タンクからの距離２０ｃｍ）囲んで試験者が見えないようにした。試験は１４：００〜１７：００の間に行い、概ね記述に従った方法で行った（Ｐｏｒｓｏｌｔら、１９７９年、Ｌｕｃｋｉ、１９９７年）
試験の初日、馴化のために１５分の間、ラットをそっと水中にいれた。水から取り出して、床をペーパータオルで覆った標準プレキシガラスの箱に入れ、赤外線ヒーターで３０分間乾かした。翌日、もう一度ガラスタンクの中にそっと入れ、５分間観察した。動物の行動をビデオテープに録画した。
【０１３８】
５分終了時に、赤外線ヒーターの入った箱にラットを移して乾かした。試験後にビデオテープを手作業で分析し、以下の行動の持続期間を記録した。無動時間：浮いた状態で鼻を水面に保持するために必要な動きのみを行う。水泳時間：動物が活動的な動きをとっているとき、すなわち、潜水を含めてタンクの周囲を動きまわる。よじ登り：前足を水の中と外に強く動かしているときであり、通常は壁に向かって行う。
【０１３９】
５．３．解析
平均±ＳＥＭでデータを表し、群の大きさはラット１０匹であった。群と群との間の比較は一元配置分散分析（Ｏｎｅ  Ｗａｙ  ＡＮＯＶＡ）を用いて行い、続いてＨｏｌｍ−Ｓｉｄａｋ検定を用いた群間比較を行った。ｐ＜０．０５の値を有意と見なした。全ての解析手続きはＳｉｇｍａＳｔａｔ  ｖｅｒｓｉｏｎ  ３．０を用いて行った。各データを第２−４表に示した。
【０１４０】
５．４．結果
強制水泳試験中の無動時間に対してＥＬＢ１３９は効果を示さなかったものの、投与量３０ｍｇ／ｋｇ（経口）において水泳時間は増大し、その一方で、よじ登り行動は変化しなかった（第６図）。主観的観察では、３０ｍｇ／ｋｇ（経口）において、飼育用のケージに戻った後の中度の自発運動の抑制が示唆された。
【０１４１】
既に確立された抗うつ剤であるフルオキセチンは、１０および３０ｍｇ／ｋｇにおいて無動時間を減少し、水泳時間を増大したが、その一方で、よじ登り行動は変化しなかった（第７図）。
【０１４２】
５．５．考察
我々の研究において、ＥＬＢ１３９は強制水泳試験において効果を発揮した。想定される抗うつ様の作用に関するさらに多くの情報を調査するために、強制水泳試験中の行動を、種々のクラスの抗うつ剤間における差異を得るために、より複雑な方法で分析した（Ｌｏｐｅｚ−ＲｕｂａｌｃａｖａおよびＬｕｃｋｉ、２０００年：Ｌｕｃｋｉ、１９９７年）これまでの調査と同様に、選択的セロトニン再取込み阻害剤であるフルオキセチンは、よじ登り行動を増大させることなく、水泳行動を促進した。
【０１４３】
強制水泳試験における被測定パラメーターに対するＥＬＢ１３９の効果はフルオキセチンの場合と類似しており（水泳における変化、一方で無動時間への効果はより少なかった）、デシプラミンの場合（無動およびよじ登りにおける変化）とは異なる（Ｒｅｘら、現在印刷中）。したがって、ＥＬＢ１３９の作用がセロトニン作動性システムに含まれる可能性があると想像できる。セロトニン作動性の神経伝達の減少が、うつ病の原因論において鍵となる役割を演じていると提議されている。これは、第３世代の抗うつ剤であり、セロトニン作動性の伝達を高めるＳＳＲＩの臨床効果によって主に確立された（Ｂｅｉｑｕｅら、２０００年；Ｂｌｉｅｒ，２００１年）。ＥＬＢ１３９は、１０および３０ｍｇ／ｋｇ双方の投与量において非常に耐容性であった。
【０１４４】
試験セッションの間、ＥＬＢ１３９を１０または３０ｍｇ／ｋｇ投与されたラットは、無動時間の増加を示さず、しかしながら、３０ｍｇ／ｋｇでわずかではあるが有意ではないよじ登り時間の減少が検出され得た。これは、ＥＬＢ１３９の自発運動に対する減少効果によるものであるかもしれない。ラットを飼育ケージに戻した後、ラットの活動のわずかな減少も観察された。しかしながら、よじ登り時間の減少が、同時に水泳時間の著しい増加を伴うことから、ラットの総活動量は一定であるように見える。したがって、オープンフィールド試験において、また、さまざまなうつ病動物モデルにおいて、ＥＬＢ１３９は自発運動の有意な減少を示すことはなかった（Ｌａｎｇｅｎ、２００２年；Ｌａｎｇｅｎ、２００３ａ＋ｂ）。その上、フルオキセチンとは対照的に、ＥＬＢ１３９はラットの総活動量を増加させることはなかった。
【０１４５】
まとめると、投与量３０ｍｇ／ｋｇ（経口）における水泳行動の顕著な増加を考慮すると、ＥＬＢ１３９は抗うつ治療の候補化合物であると見なすことができる。
【０１４６】
実施例６
ベンゾジアゼピンアンタゴニストであるフルマゼニルを用いた、ＥＬＢ１３９のセロトニンレベルに対する作用の逆転
６．１．材料および方法
動物
２００〜２６０ｇの重さの雌Ｗｉｓｔａｒラット（Ｃｒｌ：（ＷＩ）ＢＲ、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ社、Ｓｕｌｚｆｅｌｄ、ドイツ）を試験に使用した。ラットは標準環境下、５匹を１グループとして１２時間の明暗サイクル（午前６時に点灯）にて、食餌（ペレット，ｓｓｎｉｆｆ  Ｍ／Ｒ  １５、Ｓｐｅｚｉａｅｌｄｉａｔ  ＧｍｂＨ社、Ｓｏｅｓｔ／Ｗｅｓｔｆａｌｅｎ）と水は自由に取らせて飼育した。
【０１４７】
化学物質
Ｅ１３９（１−（ｐ−クロロフェニル）−４−ピペリジン−１−イル−１，５−ジヒドロ−イミダゾ−２−オン、分子量（ＭＷ）２７７．７５）は、ｅｌｂｉｏｎ  ＡＧ社が製造した。フルマゼニル（８−フルオロ−５−メチル−６−オキソ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−２，５，１０ｂ−トリアザ−ベンゾ〔エ〕アズレン−３−カルボキシリカシドエチルエステル）は、Ｔｏｃｒｉｓ社から入手し、Ｂｉｏｔｒｅｎｄ  Ｃｈｅｍｉｋａｌｉｅｎ  ＧｍｂＨ社（ケルン、ドイツ）から配給された。その他の化学物質はすべて、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＧｍｂＨ社（ドイツ）またはＭｅｒｃｋ社（ドイツ）から入手した。
【０１４８】
投薬計画および投与量
投与経路：腹腔内
適用量：０．５ｍｌ／１００ｇ
【０１４９】
【表６】
2009513539.tif 000009
【０１５０】
６．２．化合物の調製
ＥＬＢ１３９を、９０％の０．５％  ヒドロキシエチルセルロースおよび１０％のＰＥＧ３００中で新たにけん濁することによって、各物質および投与量のための投薬容積である０．５ｍｌ／１００ｇを得た。ハロペリドール注射溶液を生理食塩水で希釈することによって、投薬容積である０．５ｍｌ／１００ｇを得た。投与前ならびに投与中は、溶液およびけん濁液を電磁かくはん機に設置した。ヒドロキシエチルセルロースは蒸留水中に溶解した。
【０１５１】
６．３．試験手順
手術
試験の前日、抱水クロラール（３．６％、１ｍｌ／１００ｇ、腹腔内）で雌ラットに麻酔をかけ、定位固定フレーム内に置き、微小透析のガイドカニューレ（ＣＭＡ／１２、Ｃａｒｎｅｇｉｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ社、スウェーデン）を移植した。頭皮はラムダとブレグマの間の中央を前後方向に切開し、ドリルで頭蓋骨に小さな穴を開けた。ＰａｘｉｎｏｓおよびＷａｔｓｏｎ（１９８６）にしたがい、定位座標はブレグマよりＡＰ＝＋１．０ｍｍ、Ｌ＝−３．０ｍｍ、線条体に対する頭蓋骨表面から１．５ｍｍであった（１）。頭蓋に対するガイドカニューレおよびアンカースクリューの固定には歯科用セメント（Ｓｉｎｆｏｎｙ（２））を使用した。手術中は、電気毛布を用いて直腸の温度を３７℃に保持した。
【０１５２】
微小透析
試験前日、ガイドカニューレを通じて微小透析プローブ（ＣＭＡ／１２、膜の長さ４ｍｍ、Ｃａｒｎｅｇｉｅ  Ｍｅｄｉｃｉｎ、スウェーデン）を線条体に挿入した。試験当日、プローブをリンゲル液（１４８ｍＭ  ＮａＣｌ、４ｍＭ  ＫＣｌ、２，４ｍＭ  ＣａＣｌ２、ｐＨ＝６，０）で潅流した。流速（１μｍ／分）にて２０分毎に２０μｍの試料をマイクロバイアルに採取した。マイクロバイアルは、分析に供するまではフラクションコレクタ（ＣＭＡ／１７０）内で温度８℃にて貯蔵した。スイベルジョイントを用いて、潅流処理中も動物は半球形の容器内を自由に動くことが出来るようにした。一時間の調整時間をとった後、３回連続で２０分間の画分を採取し、神経伝達物質の放出の安定な基礎レベルを規定した。
【０１５３】
その後、３０ｍｇ／ｋｇのＥＬＢ１３９または同一容積の０．５％のタイロースを、それぞれ投与した。その後、少なくとも２２０分の間、サンプル採取を続けた。
【０１５４】
透析液の分析
電気化学検出を用いた逆相高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ−ＥＣ）により、透析液を直接分析した。ＺＯＲＢＡＸ  ＳＢ−Ａｑ  内径（ＩＤ）２．１ｍｍ×１００ｍｍ  カラム（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ社）を用いてサンプルを単離した。１％の過塩素酸１μｌを２０分間の画分に加え、この混合液１０μｌをＨＰＬＣシステムに注入した。
【０１５５】
移動相は以下を含んでいた：
ＫＨ２ＰＯ４  ５０ｍＭ
オクタン−１−スルホン酸ナトリウム塩（ＮＯＳ）  ２，２ｍＭ
ＥＤＴＡ  ０．０８６ｍＭ
２ＭＨ３ＰＯ４  ５ｍｌ
メタノール（ＭｅＯＨ）  ８３ｍｌ
アセトニトリル  １０ｍｌ
ｐＨ３．５にて
流速０．２３ｍｌ／分、カラム温度３８℃、サンプルのサーモスタット８℃にて、メソッド（セロトニン）を実行した。
【０１５６】
夜間の流速は、流速０．１ｍｌ／分に減じた。カテコールアミンを５００ｍＶ（モデル５０１４Ｂ  微小透析セル、ｅｓａ）で酸化した。ＤＯＰＡＣは２００ｎＡ、ドーパミンは２ｎＡ、ＨＩＡＡは１００ｎＡ、ＨＶＡは２ｎＡ、およびセロトニンは５００ｐＡにて測定した。
【０１５７】
５種類の濃度でのシステムの外部標準を標準化（ｃａｌｉｂｒａｔｅ）するためにそれぞれを定期的に実行した。
【０１５８】
ＤＯＰＡＣ（３，４−ジヒドロキシフェニル酢酸）  １０００，５００，２５０，１２５，６２．５ｎＭ
ＤＯＰＡＭＩＮＥ（塩酸  ３−ヒドロキシチラミン）  ８，４，２，１，０．５ｎＭ
ＨＩＡＡ（５−ヒドロキシ−３−インドール酢酸）  ２００，１００，５０，２５，１２．５ｎＭ
ＨＶＡ（ホモバニリン酸）  ８００，４００，２００，１００，５０ｎＭ
ＳＥＲＯＴＯＮＩＮ（５−ヒドロキシトリプタミン−クレアチニン硫酸塩）  ０．１５，０．０７５，０．０３７５，０．０１８７５，０．００９３７５ｎＭ
微小透析プローブの移植前および除去後、２０００ｎＭのＤＯＰＡＣ、４０ｎＭのドーパミン、１０００ｎＭのＨＩＡＡ、２０００ｎＭのＨＶＡおよび０．８ｎＭのセロトニンを含む溶液でリカバリー（回収）を行った。プローブの回収率は５〜２０％の間であった。
【０１５９】
組織像
試験終了後にラットの脳を除去し、ホルマリン（１０％）中で約１０日間固定した。ビブロスライス（ＴＳＥ）を用いて脳を切断し、トロイジンブルーで染色してプローブが正しい位置にあることを確認した。
【０１６０】
６．４．統計
５−ＨＴ放出の基礎レベルは個体差を示した。そのため、各動物のデータを百分率で示した。物質投与前の微小透析のデータを平均化し、平均値を１００％とした；全個体値は適宜算出した。
【０１６１】
時間および薬剤を二つの因子として、二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）により結果を分析した。個々の比較にはＴｕｃｋｅｙ検定を使用した。Ｐ＜０．０５を有意であると見なした。
【０１６２】
６．５．結果
平均基礎レベルと比較すると、ＥＬＢ１３９はラット線条体における細胞外セロトニンの顕著な増加を誘発する。３０ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）のＥＬＢ１３９投与の４０分後に、１０ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）のフルマゼニルを与えると、細胞外のセロトニン増加が逆転するだけでなく、セロトニンレベルは平均基礎レベル以下へと減少さえする。記録時間（３時間）の終了時には、セロトニンレベルは再び平均基礎レベルへと戻った。
【０１６３】
実施例７
ベンゾジアゼピンアンタゴニストであるフルマゼニルを用いた、ＥＬＢ１３９の抗精神病性作用の逆転
７．１．材料および方法
動物
１６８〜２１７ｇの重さの雌Ｗｉｓｔａｒラット（Ｃｒｌ：（ＷＩ）ＢＲ、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ社、Ｓｕｌｚｆｅｌｄ、ドイツ）を試験に使用した。ラットは標準環境下、５匹を１グループとして１２時間の明暗サイクル（午前６時に点灯）にて、食餌（ペレット，ｓｓｎｉｆｆ  Ｍ／Ｒ  １５、Ｓｐｅｚｉａｌｄｉａｅｔ  ＧｍｂＨ社、Ｓｏｅｓｔ／Ｗｅｓｔｆａｌｅｎ）と水は自由に取らせて飼育した。
【０１６４】
化学物質
ＥＬＢ１３９（１−（ｐ−クロロフェニル）−４−ピペリジン−１−イル−１，５−ジヒドロ−イミダゾ−２−オン、分子量（ＭＷ）２７７．７５）は、ｅｌｂｉｏｎ  ＡＧ社が製造した。ハロペリドール（４−（４−［４−クロロフェニル］−４−ヒドロキシ−１−ピペリジニル）−１−（４−フルオロフェニル）−１−ヌタノン、分子量（ＭＷ）３７５，９）は、ｒａｔｉｏｐｈａｒｍ  ＧｍｂＨ社（ウルム、ドイツ）から入手し、ＭＫ−８０１（ｄｉｚｏｃｌｉｐｉｎｅ、分子量（ＭＷ）３３７．３７）およびフルマゼニル（８−フルオロ−５−メチル−６−オキソ−５，６−ジヒドロ−４Ｈ−２，５，１０ｂ−トリアザ−ベンゾ〔エ〕アズレン−３−カルボキシリカシドエチルエステル）は、Ｔｏｃｒｉｓ社から入手し、Ｂｉｏｔｒｅｎｄ  Ｃｈｅｍｉｋａｌｉｅｎ  ＧｍｂＨ社（ケルン、ドイツ）から配給された。その他の化学物質はすべて、Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃｈｅｍｉｅ  ＧｍｂＨ社（ドイツ）またはＭｅｒｃｋ社（ドイツ）から入手した。
【０１６５】
７．２．投薬計画および投与量
適用量：０．５ｍｌ／１００ｇ
【０１６６】
【表７】
2009513539.tif 000010
【０１６７】
７．３．化合物の調製
ＥＬＢ１３１−００１３９を、９０％の０．５％  ヒドロキシエチルセルロースおよび１０％のＰＥＧ３００中で新たにけん濁することによって、各物質および投与量のための投薬容積である０．５ｍｌ／１００ｇを得た。ハロペリドール注射溶液を生理食塩水で希釈することによって、投薬容積である０．５ｍｌ／１００ｇを得た。フルマゼニルおよびＭＫ−８０１を生理食塩水で希釈することによって、投薬容積である０．５ｍｌ／１００ｇを得た。投与前ならびに投与中は、溶液ならびにけん濁液を電磁かくはん機に設置した。ヒドロキシエチルセルロースは蒸留水中に溶解した。
【０１６８】
試験の３０分前にハロペリドールを、１０分前にＭＫ−８０１を投与されたハロペリドールラットを除き、その他の試験群には、試験の６０分前にハロペリドール、ＥＬＢ１３９または賦形剤を、試験の２０分前に生理食塩水またはフルマゼニルを、試験の１０分前にＭＫ８０１を投与した。
【０１６９】
７．４．試験手順
ＮＭＤＡアンタゴニストであるＭＫ−８０１に誘発される行動は、うつ病ラットモデルとして概ね許容できるものである。ＭＫ−８０１は、腹腔内投与後のラットにおいてステレオタイプ、多動および運動失調を誘発する。
【０１７０】
ラットの自発運動は、ＭｏｔｉＴｅｓｔ装置（ＴＳＥ、Ｂａｄ  Ｈｏｍｂｕｒｇ、ドイツ）を用いて記録する。保護用のプレキシグラスの壁（高さ２０ｃｍ）を有する正方形のアリーナ（４５×４５ｃｍ）で構成される試験領域では、ラットは自由に動くことが出来る。アリーナの各壁底部に沿って取り付けた３２赤外線フォトセル（３２  ｉｎｆｒａｒｅｄ  ｐｈｏｔｏｃｅｌｌｓ）で、水平運動を記録する。床から１２センチ上部の、横一列に並べた３２赤外線フォトセルで、垂直運動（立ち上がり）を記録する。コンピュータプログラム「ＡｃｔｉＭｏｔ」（ＴＳＥ、Ｂａｄ  Ｈｏｍｂｕｒｇ、ドイツ）で、以下のパラメータを測定する：
１．活動時間〔ｓ〕
２．総移動距離〔ｍ〕。
【０１７１】
一時間の間、５分毎に（１２インターバル）、Ａｎｄｉｎｅら（１９９９）に記載の方法に従い、ステレオタイプ性の匂い嗅ぎとその他のステレオタイプに分けたステレオタイプ、および運動失調を試験者が採点する。１２のインターバルにおける点数を各パラメータに加えた。
【０１７２】
【表８】
2009513539.tif 000011
【０１７３】
試験の当日、雌ラットを実験室に移し、試験化合物、対照品または賦形剤を試験前の適切な時間に与える。０．２ｍｇ／ｋｇのＭＫ−８０１を、試験の１０分前に腹腔内に投与する。
【０１７４】
試験開始時に、ＭｏｔｉＴｅｓｔ装置の正方形のアリーナの中心にラットを置く。ラットの行動を一時間記録する。各記録作業後には動物を除去して箱を完全に清掃して乾燥させる。
【０１７５】
７．５．統計
匂い嗅ぎ、その他のステレオタイプおよび運動失調の結果を、一元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）により分析した。個々の比較にはＴｕｋｅｙ検定を使用した。活動および総移動距離の結果は、二元配置分散分析（ＡＮＯＶＡ）（化合物×時間）により分析した。個々の比較にはＳｔｕｄｅｎｔ−Ｎｅｗｍａｎ−Ｋｅｕｌｓ検定を使用した。Ｐ＜０．０５を有意であると見なした。
【０１７６】
７．６．結果
０．５ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）のハロペリドールは、ＭＫ−８０１により誘発された活動の増加、総移動距離の増加、および匂い嗅ぎ（ステレオタイプ）を有意に逆転した（第１図）。ＭＫ−８０１により誘発されたその他のステレオタイプは、０．５ｍｇ／ｋｇのハロペリドールによってわずかに減少した。ハロペリドールのこれらの効果は５ｍｇ／ｋｇのフルマゼニルによる影響を受けなかった。ＭＫ−８０１誘発性の運動失調は、ハロペリドールによりわずかに減少したが、ハロペリドールとフルマゼニルを併用して投与することによって有意に逆転した。（第８図）
ＥＬＢ１３９のデータは、２名の実験助手により別々に行われた２回の試験（２００３年１１月、２００４年１月）によって得られたものである。２回の試験および両試験の合計は、第９図ならびに第１０図ａおよびｂに記載し、図示している。
【０１７７】
３０ｍｇ／ｋｇ（経口）のＥＬＢ１３９は、個々の試験において、また、両試験のデータを合算した場合において、ステレオタイプ性の匂い嗅ぎを有意に逆転させた。ＥＬＢの効果は、２回目の試験ではフルマゼニルにより明らかに無効となり、また、初回の試験および両試験の合計では有意に逆転した（第９図）。
【０１７８】
ＭＫ−８０１により誘発されたその他のステレオタイプは、３０ｍｇ／ｋｇ（経口）のＥＬＢ１３９により、初回の試験ではわずかに減少し、２回目の試験および両試験の合計では有意に逆転した。ＥＬＢ１３９の作用は、５ｍｇ／ｋｇのフルマゼニルにより、最初の試験ではどちらかといえば増幅され、２回目の試験では有意に逆転したことから、データを加算した場合、フルマゼニルによるＥＬＢ１３９の作用の変化はもはや見られない。これらの論争を招くような結果は、初回の試験における「その他のステレオタイプ」の定義が不明確であったことにより、おそらく起きたのであろう（第９図）。
【０１７９】
３０ｍｇ／ｋｇ（経口）のＥＬＢ１３９は、初回の試験（２００３年１１月）において、ＭＫ−８０１により誘発される運動失調にはほとんど作用しなかった。２回目の試験（２００４年１月）では作用がより明確になったものの、未だ有意に至るものではなく、したがって、両試験を合算しても運動失調のわずかな減少は観察されただけであった。２回目の試験で観察された、運動失調を減少させるＥＬＢ１３９の作用は、５ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）のフルマゼニルにより逆転した。両試験のデータを集計すると、フルマゼニルの逆転作用はわずかなものであった（第９図）。
【０１８０】
ＭＫ−８０１により誘発された多動（活動過剰）は、活動および移動距離として記録され、５分間隔で記述された。全時間曲線を考慮すると、３０ｍｇ／ｋｇ（経口）のＥＬＢ１３９は、ＭＫ−８０１により誘発される活動を２回目の試験では明らかに減少させ、また、初回の試験および両試験のデータの合計では有意に減少させた（二元配置ＡＮＯＶＡ、第１０ａ図）。２つの試験および両試験の合計において、活動に対するＥＬＢ１３９の作用は、５ｍｇ／ｋｇ（腹腔内）のフルマゼニルにより逆転した（第１０ａ図）。
【０１８１】
ＭＫ−８０１により誘発された移動距離の増加は、２つの試験および両試験のデータの合計において、全時間曲線を考慮した場合、ＥＬＢ１３９により有意に減少した（二元配置ＡＮＯＶＡ、第１０ａ図）。この作用は、全試験および両試験のデータの合計において、フルマゼニルにより有意に逆転した（第１０ａ図）。
【０１８２】
各タイムポイントに注目すると、活動および移動距離に対するＥＬＢ１３９の作用がより顕著であったのは最初の半時間であった（第１０ｂ図）。
【０１８３】
参考資料
【０１８４】
【表９】
2009513539.tif 000012
【０１８５】
【表１０】
2009513539.tif 000013
【０１８６】
【表１１】
2009513539.tif 000014
【０１８７】
【表１２】
2009513539.tif 000015
【０１８８】
【表１３】
2009513539.tif 000016
【０１８９】
【表１４】
2009513539.tif 000017
【０１９０】
【表１５】
2009513539.tif 000018
【０１９１】
【表１６】
2009513539.tif 000019
【０１９２】
【表１７】
2009513539.tif 000020
【０１９３】
【表１８】
2009513539.tif 000021
【０１９４】
【表１９】
2009513539.tif 000022
【図面の簡単な説明】
【０１９５】
【図１】図１は、試験の１０分前に０．２ｍｇ／ｋｇのＭＫ−８０１を腹腔内に投与して刺激した雌ラットにおける活動、総移動距離、ステレオタイプ性の匂い嗅ぎ、他のステレオタイプおよび運動失調を示している
【図２】図２は、Ｅ１３１−００１３９の抗ジストニア作用を示している
【図３】図３は、ラットの線条体における５−ＨＴ放出に対するＥ１３１−００１３９の作用を示している
【図４】図４は、ラットの線条体におけるドーパミン放出に対するＥ１３１−００１３９の作用を示している
【図５ａ】図５ａは、組み換えラットαｉβ２γ２（ｉ＝１〜５）ＧＡＢＡＡレセプターを発現するＨＥＫ２９３細胞に関する全細胞の記録を示している
【図５ｂ】図５ｂは、組み換えラットαｉβ２γ２（ｉ＝１〜５）ＧＡＢＡＡレセプターを発現するＨＥＫ２９３細胞に関する全細胞の記録を示している
【図５ｃ】図５ｃは、組み換えラットαｉβ２γ２（ｉ＝１〜５）ＧＡＢＡＡレセプターを発現するＨＥＫ２９３細胞に関する全細胞の記録を示している
【図５ｄ】図５ｄは、組み換えラットαｉβ２γ２（ｉ＝１〜５）ＧＡＢＡＡレセプターを発現するＨＥＫ２９３細胞に関する全細胞の記録を示している
【図５ｅ】図５ｅは、組み換えラットαｉβ２γ２（ｉ＝１〜５）ＧＡＢＡＡレセプターを発現するＨＥＫ２９３細胞に関する全細胞の記録を示している
【図６】図６は、ラット強制水泳試験における無動時間、水泳時間および動物がよじ登って脱出しようとするタイムスパンに対し、賦形剤を処方した対照と比較したＥＬＢ１３９（＝Ｅ１３１−００１３９、１０＋３０ｍｇ／ｋｇ）の作用を示している
【図７】図７は、ラット強制水泳試験における無動時間、水泳時間および動物がよじ登って脱出しようとするタイムスパンに対する、賦形剤を処方した対照と比較した、フルオキセチン（１０＋３０ｍｇ／ｋｇ）の作用を示している
【図８】図８は、雌ラットにおけるＭＫ−８０１誘発性の精神疾患関連行動に対するハロペリドールの作用を示している
【図９】図９は、雌ラットにおけるＭＫ−８０１誘発性の精神疾患関連行動に対するＥＬＢ１３９の作用、およびフルマゼニルによるその可逆性を示している
【図１０ａ】図１０ａは、雌ラットにおけるＭＫ−８０１誘発性の精神疾患関連行動に対するＥＬＢ１３９の作用、およびフルマゼニルによるその可逆性を示している
【図１０ｂ】図１０ｂは、雌ラットにおけるＭＫ−８０１誘発性の精神疾患関連行動に対するＥＬＢ１３９の作用、およびフルマゼニルによるその可逆性を示している
【図１】
2009513539.tif 000025
【図２】
2009513539.tif 000026
【図３】
2009513539.tif 000027
【図４】
2009513539.tif 000028
【図５ａ】
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【図５ｂ】
2009513539.tif 000030
【図５ｃ】
2009513539.tif 000031
【図５ｄ】
2009513539.tif 000032
【図５ｅ】
2009513539.tif 000033
【図６】
2009513539.tif 000034
【図７】
2009513539.tif 000035
【図８】
2009513539.tif 000036
【図９】
2009513539.tif 000037
【図１０ａ】
2009513539.tif 000038
【図１０ｂ】
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【手続補正書】
【提出日】平成19年4月5日(2007.4.5)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも一種以上の、式（Ｉ）
【化１】
2009513539.tif 000040
［式中、Ｘは水素、Ｃ１−４−アルキル、Ｃ１−４−アルコキシ、トリフルオロメチル、またはハロゲン残基であり、Ｒ１およびＲ２はそれぞれ独立してＣ１−４−アルキル、Ｃ３−１０−シクロアルキルまたはＣ３−１０−ヘテロアルキル残基であり、あるいはＲ１およびＲ２は共にＣ２−６アルキレン残基であって、その−ＣＨ２−基は任意に酸素、窒素、または硫黄により置換され、ｎは０または１であり、ｍは０または１〜５の基数である］に示される１−アリール（アルキル）イミダゾリン−２−オンの有効量を含有する、精神病性障害、運動障害、および／または他の精神障害に関連する精神病症状を含む中枢神経系疾患の治療および予防のための医薬組成物。
【請求項２】
ベンゾジアゼピンレセプターのアルファ３サブユニットに対して選択性を有するが、ＧＡＢＡレセプターのアルファ２および／またはアルファ４サブユニットを運ぶレセプターに対して陽性ＧＡＢＡ増強効果を有意に発揮しないベンゾジアゼピンレセプターリガンドを含有する、精神病性障害、運動障害、および／または他の精神障害に関連する精神病症状を含む中枢神経系疾患の治療のための医薬組成物。
【請求項３】
ベンゾジアゼピンリガンドが、アルファ３運搬レセプターに対して高い親和性を持つ部分アゴニストとして、さらにアルファ１および／またはアルファ５運搬レセプターに対して低い親和性を持つ部分アゴニストとして働くことを特徴とする、請求項２に記載の医薬組成物。
【請求項４】
式（Ｉ）の化合物が１−（４−クロロフェニル）−４−ピペリジノイミダゾリン−２−オンであること特徴とする、請求項１、２または３に記載の医薬組成物。
【請求項５】
さらに賦形剤、助剤を含有することを特徴とする、請求項１〜４のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項６】
非経口または経口投与することを特徴とする、請求項１〜５のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項７】
式（Ｉ）の化合物を患者の体重に対して１〜１００ｍｇ／ｋｇの量を投与することを特徴とする、請求項１または２に記載の医薬組成物。
【請求項８】
中枢神経系疾患が精神病または精神病エピソードであることを特徴とする、請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項９】
精神病または精神病エピソードが、統合失調症の一種（例えば、妄想型、解体型、緊張型、未分化型、または残遺統合失調症）および躁うつ病のような双極性気分障害ならびに統合失調症の精神病後の抑うつ障害であり；精神病エピソードは、統合失調症様障害、統合失調性感情障害、妄想性障害、（例えば、アルコール、アンフェタミン、大麻、コカイン、幻覚剤、吸入剤、オピオイドまたはフェンシクリジンなどにより誘発される）物質誘発性精神病性障害；（例えば境界性人格障害などの）人格障害、例えば不適応による攻撃などの衝動性障害；双極性障害および注意欠陥、多動性障害（ＡＤ／ＨＤ）ならびに（例えばアルコール、アンフェタミン、コカインまたは麻薬依存症の）乱用および依存症、であることを特徴とする、請求項８に記載の医薬組成物。
【請求項１０】
中枢神経系疾患が気分障害または気分エピソードであることを特徴とする、請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１１】
気分障害または気分エピソードが、大うつ病性障害またはエピソード、躁病性・混合性および軽躁病性気分障害、非定型性・緊張性または憂うつに特徴付けられるうつ病エピソード、出産後に発現した月経前不快気分障害によるうつ病エピソード、小うつ病性障害、外傷後の急性ストレス障害、強迫神経症および摂食障害を有する患者であることを特徴とする、請求項１０に記載の医薬組成物。
【請求項１２】
中枢神経系疾患が不安障害または不安エピソードであることを特徴とする、請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１３】
不安障害または不安エピソードが、慢性の不安障害、パニック障害、広場恐怖症、特定恐怖症、対人恐怖症および全般性不安障害であることを特徴とする、請求項１２に記載の医薬組成物。
【請求項１４】
中枢神経系疾患が、主に基底核の機能不全に関連する運動障害であることを特徴とする、請求項１〜７のいずれかに記載の医薬組成物。
【請求項１５】
運動障害がさまざまなサブタイプのジストニア、例えば局所性ジストニア、多形の局所性または部分性ジストニア、捻転ジストニア、半側性、全身性ならびに遅発性のジストニア（精神薬理学的薬剤により誘発される）であり；局所性ジストニアには頸部ジストニア（斜頸）、眼瞼痙攣（瞼の痙攣）、四肢ジストニア（書痙のような四肢の痙攣）、口顎ジストニアおよび痙攣性発生障害（声帯の痙攣）ならびに発作性ジストニアであることを特徴とする、請求項１４に記載の医薬組成物。
【国際調査報告】
2009513539.tif 000041
2009513539.tif 000042
2009513539.tif 000043
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2009513539.tif 000046
2009513539.tif 000047