(57)【要約】本発明は、ゲムシタビンのアミドプロドラッグの新規な結晶形、その組成物および使用方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  モノ−ｐ−トルエンスルホネートまたは結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  ヘミ−ベンゼンスルホネート半水和物である化合物。
【請求項２】
結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  モノ−ｐ−トルエンスルホネートである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
実質的に純粋形態にある請求項２に記載の化合物。
【請求項４】
（ａ）４．８６±０．１°の２θ回折角におけるＸ線スペクトルのピーク、または
（ｂ）１５２．５±０．１ｐｐｍ、１５９．６±０．１ｐｐｍおよび１８２．２±０．１ｐｐｍの化学シフトにおける固体状態１３Ｃ  ＮＭＲのピーク、
のうちの少なくとも１つを特徴とする、請求項２または請求項３に記載の化合物。
【請求項５】
酢酸イソプロピル中の１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンの溶液にｐ−トルエンスルホン酸一水和物を加えるプロセスにより調製される、請求項２、請求項３または請求項４に記載の化合物。
【請求項６】
請求項２から請求項５のいずれか１項に記載の化合物と、薬学的に許容できる賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項７】
腸溶性コーティングされている、請求項６に記載の医薬組成物。
【請求項８】
哺乳動物における感受性腫瘍の治療方法であって、それを必要とする哺乳動物に治療上有効量の請求項２から請求項５のいずれか１項に記載の化合物を投与することを含む方法。
【請求項９】
前記感受性腫瘍が、Ｔ細胞リンパ腫、軟部組織の肉腫、膵臓癌、乳癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、卵巣癌および膀胱癌からなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
感受性腫瘍の治療のための医薬の製造のための、請求項２から請求項５のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１１】
医薬としての使用のための、請求項２から請求項５のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｔ細胞リンパ腫、軟部組織の肉腫、膵臓癌、乳癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、卵巣癌または膀胱癌の治療のための医薬の製造における、請求項２から請求項５のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項１３】
結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  ヘミ−ベンゼンスルホネート半水和物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
実質的に純粋形態にある請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
（ａ）５．２２±０．１°および７．３３±０．１°の２θ回折角におけるＸ線スペクトルのピーク、または
（ｂ）１５６．９±０．１ｐｐｍ、１６３．３±０．１ｐｐｍ、１７６．９±０．１ｐｐｍおよび１７７．８±０．１ｐｐｍの化学シフトにおける固体状態１３Ｃ  ＮＭＲスペクトルのピーク、
のうちの少なくとも１つを特徴とする、請求項１３または請求項１４に記載の化合物。
【請求項１６】
メタノール中の１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンおよびベンゼンスルホン酸の溶液にヘキサンを加えるプロセスにより製造される、請求項１３、請求項１４または請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
請求項１３から請求項１６のいずれか１項に記載の化合物と、薬学的に許容できる賦形剤とを含む医薬組成物。
【請求項１８】
腸溶性コーティングされている、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
哺乳動物における感受性腫瘍の治療方法であって、それを必要とする哺乳動物に治療上有効量の請求項１３から請求項１６のいずれか１項に記載の結晶形を投与することを含む方法。
【請求項２０】
前記感受性腫瘍が、Ｔ細胞リンパ腫、軟部組織の肉腫、膵臓癌、乳癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、卵巣癌および膀胱癌からなる群から選択される、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
感受性腫瘍の治療のための医薬の製造のための、請求項１３から請求項１６のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項２２】
医薬としての使用のための、請求項１３から請求項１６のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｔ細胞リンパ腫、軟部組織の肉腫、膵臓癌、乳癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、卵巣癌または膀胱癌の治療のための医薬の製造における、請求項１３から請求項１６のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はゲムシタビンの新規なプロドラッグに関する。このプロドラッグは、経口投与することができ、親薬物よりも小さい胃腸毒性およびより良好なバイオアベイラビリティを有して実質的に無傷なまま門脈血流へと腸管を移動することができ、かつより少ない用量で親薬物の効力を維持することができる。
【背景技術】
【０００２】
塩酸ゲムシタビン（２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジン塩酸塩）は公知の抗ウイルス作用を有する抗癌剤であり、現在はジェムザール（Ｇｅｍｚａｒ）（登録商標）として、種々の癌の治療のための凍結乾燥粉末製剤として製造され、市販されている。ジェムザール（登録商標）の製造方法および使用方法は、特許文献１および特許文献２に記載されている。現在、ジェムザール（登録商標）は、膵臓癌、乳癌および非小細胞肺癌（ＮＳＣＬＣ）の治療用として承認されており、卵巣癌について評価中である。さらに、ジェムザール（登録商標）は、ＨＣＶの治療においても、免疫機能の調節因子としても使用し得る（特許文献３）。ジェムザール（登録商標）は、現在、３０分間に約１０００〜１２５０ｍｇ／ｍ２の用量で、７週間まで週１回、次いで１週は治療を休むというスケジュールで静脈内注射により投与されている。
【０００３】
ゲムシタビンの経口使用は、その初回通過代謝の結果である経口アベイラビリティの低さによって制限される場合がある。非特許文献１を参照のこと。さらに、経口投与される場合、ゲムシタビンは、１６７、３３３または５００ｍｇ／ｋｇの用量の１回の経口（強制飼養）ゲムシタビンを与えられたマウスにおいて、腸管の全長にわたる粘膜上皮の中程度〜顕著な喪失（萎縮性腸疾患）を特徴とする、重篤な用量を規定する腸の病変の誘引に関与する。非特許文献２を参照のこと。これまでのマウスでの研究においては、静脈内投与による同等の曝露では、死または胃腸毒性は生じなかった。
【０００４】
ゲムシタビンのプロドラッグおよび徐放性製剤の製造方法は当該分野で公知である。かかるプロドラッグおよび徐放性製剤の例は、非特許文献４「Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ  ａｎｄ  Ｕｓｅｓ  Ｔｈｅｒｅｏｆ」（Ｇａｌｌｏｐら）、特許文献５「Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ」（Ｍｙｈｒｅｎ，Ｆｉｎｎら）、特許文献６「Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｐｏｌｙｅｓｔｅｒｓ  ａｎｄ  ｐｏｌｙａｍｉｄｅｓ」（Ｕｈｒｉｃｈ，Ｋａｔｈｒｙｎ  Ｅ．）、特許文献７「Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｏｆ  ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  ａｇｅｎｔｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｓｕｂｓｔｉｔｕｔｅｄ  ａｒｏｍａｔｉｃ  ａｃｉｄｓ」（Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ，  Ｒｉｃｈａｒｄ  Ｂ．ら）、特許文献８「Ｔｅｒｍｉｎａｌｌｙ−ｂｒａｎｃｈｅｄ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  ｌｉｎｋｅｒｓ  ａｎｄ  ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  ｃｏｎｊｕｇａｔｅｓ  ａｓ  ｐｒｏｄｒｕｇ」（Ｃｈｏｅ，Ｙｕｎ  Ｈｗａｎｇら）に見出すことができる。
【０００５】
ゲムシタビンアミド誘導体は、ゲムシタビンの合成における有用な中間体であると、当該分野で記載されている。例えば、Ｂｒｉｔｔｏｎらの特許文献９およびＧｒｉｎｄｅｙらの特許文献１を参照のこと。またゲムシタビンアミド誘導体は、ゲムシタビンの投与のためのプロドラッグ部分としても有用であると当該分野で記載されている。例えば、Ｇａｌｌｏｐらの特許文献１０を参照のこと。
【特許文献１】米国特許第５，４６４，８２６号明細書
【特許文献２】米国特許第４，８０８，６１４号明細書
【特許文献３】米国特許第６，５５５，５１８号明細書
【特許文献４】国際公開第０４／０４１２３０３号パンフレット
【特許文献５】国際公開第９８／３２７６２号パンフレット
【特許文献６】国際公開第０２／０９７６８号パンフレット
【特許文献７】国際公開第０２／７６４７６号パンフレット
【特許文献８】国際公開第０２／６５９８８号パンフレット
【特許文献９】米国特許第５，４２０，２６６号明細書
【特許文献１０】国際公開第０４／０４１２０３号パンフレット
【非特許文献１】Ｓｈｉｐｌｅｙ  ＬＡ．ら，「Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ａｎｄ  ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ，ａｎｄ  ｏｎｃｏｌｙｔｉｃ  ｄｅｏｘｙｃｙｔｉｄｉｎｅ  ａｎａｌｏｇ，ｉｎ  ｍｉｃｅ，ｒａｔｓ，ａｎｄ  ｄｏｇｓ」  Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ＆  Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ．２０（６）：８４９−５５，１９９２
【非特許文献２】Ｈｏｒｔｏｎ  ＮＤら，「Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  ｓｉｎｇｌｅ−ｄｏｓｅ  ｏｒａｌ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ｉｎ  ｍｉｃｅ」，Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｆｏｒ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，  Ｐｏｓｔｅｒ  Ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ，Ｏｒｌａｎｄｏ，ＦＬ，Ｍａｒｃｈ  ２７−３１，２００４
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
経口送達を可能にし、実質的に分解することなく腸管を無傷で通過し、許容できる安全性および効力を備えて罹患した領域にゲムシタビンを送達する、ゲムシタビンのプロドラッグに対するニーズがまだ存在している。さらに、製剤処方および製造に適したかかるプロドラッグの結晶形に対するニーズがまだ存在している。
【０００７】
驚くべきことに、本発明者らは、実質的に無傷で腸細胞を移動し、肝臓における主要なゲムシタビン代謝物であるデオキシジフルオロウリジン（ｄＦｄＵ）の有意な蓄積なくしてゲムシタビンに加水分解され、経口によるゲムシタビンよりも低い毒性を有し、かつ経口投与された場合に適切な効力および安全性のプロフィールを維持する、ゲムシタビンのアミドプロドラッグの新規な結晶形を見出した。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
１つの態様では、本発明は結晶性の１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  モノ−ｐ−トルエンスルホネートを提供する。
【０００９】
本発明はまた、結晶性の１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  モノ−ｐ−トルエンスルホネートと、１つ以上の薬理学的に許容できる賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。
【００１０】
本発明はまた、治療を必要とする哺乳動物における感受性腫瘍の治療のための、結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  モノ−ｐ−トルエンスルホネートの使用に関する。
【００１１】
本発明はまた、治療を必要とする哺乳動物における感受性ウイルス感染の治療のための、結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  モノ−ｐ−トルエンスルホネートの使用に関する。
【００１２】
本発明はまた、感受性腫瘍または感受性ウイルス感染の治療のための医薬の製造のための、結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  モノ−ｐ−トルエンスルホネートの使用に関する。
【００１３】
本発明はまた、結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  モノ−ｐ−トルエンスルホネートの製造方法を提供する。
【００１４】
第２の態様では、本発明は結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  ヘミ−ベンゼンスルホネート半水和物を提供する。
【００１５】
本発明はまた、結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  ヘミ−ベンゼンスルホネート半水和物および１つ以上の薬理学的に許容できる賦形剤を含む医薬組成物を提供する。
【００１６】
本発明はまた、治療を必要とする哺乳動物における感受性腫瘍の治療のための、結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  ヘミ−ベンゼンスルホネート半水和物の使用に関する。
【００１７】
本発明はまた、治療を必要とする哺乳動物における感受性ウイルス感染の治療のための、結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  ヘミ−ベンゼンスルホネート半水和物の使用に関する。
【００１８】
本発明はまた、感受性腫瘍または感受性ウイルス感染の治療のための医薬の製造のための、結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  ヘミ−ベンゼンスルホネート半水和物の使用に関する。
【００１９】
本発明はまた、結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  ヘミ−ベンゼンスルホネート半水和物の調製方法を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
本明細書中で使用する場合、用語は以下に示された意味を有する。
【００２１】
「哺乳動物」との用語は、皮膚が毛で覆われていること、および雌性においては子供を育てるための乳汁を産生する乳腺をもつことを特徴とする、哺乳綱の種々の温血脊椎動物のいずれか、最も好ましくはヒトを意味する。
【００２２】
「薬理学的に許容できる賦形剤」との用語は、製剤特性を向上させるための薬理学的に許容できる製剤用担体、溶液または添加物を指す。かかる賦形剤は、製剤の他の成分と適合性でなければならず、服用者に有害であってはならないが、これらは当業者に周知なものである。例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１９版，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９５を参照。
【００２３】
「実質的に純粋な」との用語は、約９０％を超える所望の結晶形、好ましくは約９５％を超える所望の結晶形を含む、化合物の純粋な結晶形を指す。
【００２４】
「感受性腫瘍」との用語は、式Ｉの化合物の経口投与によって治療することができる、哺乳動物における組織の異常な増殖を指す。このプロドラッグはゲムシタビンに加水分解されるため、このプロドラッグの投与は、充実性および非充実性の様々な腫瘍に対して広範囲の活性スペクトルを有することが予想される。好ましくは、感受性腫瘍としては、Ｔ細胞リンパ腫、軟部組織の肉腫、膵臓癌、乳癌、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、非小細胞肺癌、卵巣癌および膀胱癌が挙げられる。
【００２５】
本発明の化合物は、ウイルス感染、特にＨＣＶの治療において有用である。
【００２６】
「治療上有効量」との用語は、研究者、医師または臨床医が求めている組織、系または哺乳動物の所望の生物学的応答または医学的応答を惹起する化合物／組成物の量を意味する。
【００２７】
ゲムシタビンは、３’ヒドロキシル基、５’ヒドロキシル基およびＮ４−アミノ基の３つの誘導可能な官能基を含む。１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンは、３’ヒドロキシル官能基および５’ヒドロキシル官能基をブロックする適切な保護基を使用したのちＮ４−アミノ基をアシル化することにより調製することができる。代表的な保護基は周知であり、当該分野で認識されている。Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，第３版，Ｔｈｅｏｄｏｒａ  Ｇｒｅｅｎｅ，  Ｐｅｔｅｒ  Ｗｕｔｓ（Ｗｉｌｅｙ−Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ）１９９９を参照。Ｎ４−アミノ基のアシル化は、酸塩化物または酸無水物との反応により、またはカップリング試薬（例えば、Ｎ，Ｎ−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ＤＣＣ）、Ｎ−エチル−Ｎ’−（３−ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド（ＥＤＣ）、１，１−カルボニルジイミダゾール（ＣＤＩ）もしくは有機化学の分野の当業者に周知の他の類似の試薬）の存在下でのカルボン酸との反応により実現することができる。あるいは、式Ｉの化合物は保護基を使用することなく調製することもできる。この場合は、一付加物、二付加物および三付加物の混合物が生成するであろうから、所望の生成物はその混合物から分離できる。
【実施例】
【００２８】
以下の手順および実施例は、本発明の結晶物質の合成をさらに説明する。すべての出発物質および試薬は当該分野で周知でありかつ認識されており、市販されているか、または本明細書中に記載する方法により調製できる。ゲムシタビン（２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジン）の調製方法は、例えば、米国特許第４，８０８，６１４号に開示されている。
【００２９】
１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンの調製
【化１】
2009541344.tif 000002
【００３０】
２’，２’−ジフルオロ−２’−デオキシシチジン（１０．０ｇ、３８．０ｍｍｏｌ）を無水ピリジン（１００ｍＬ）に溶解させ、窒素下で撹拌しながら０℃に冷却した。クロロトリメチルシラン（２４．０ｍＬ、１９０．０ｍｍｏｌ）を滴加し、内部温度を５℃より低く維持した。０℃で２時間、撹拌を続けた。別のフラスコで、２−プロピルペンタン酸（６．０ｇ、４１．８ｍｍｏｌ）を無水アセトニトリル（１００ｍＬ）に溶解させた。１，１−カルボニルジイミダゾール（６．８ｇ、４１．８ｍｍｏｌ）を少しずつ３０分間かけて加え、２時間撹拌した。このアセトニトリル溶液を、０℃でピリジン溶液に滴加し、反応液を室温に戻した。反応液を４５℃で一晩加熱し、３０〜３５℃に冷却し、１００ｍＬの無水エタノールを加え、４５℃で３０分間加熱した。５０ｍＬの水を加え、４５℃で５時間加熱し、周囲温度まで冷却し、真空中で濃縮した。酢酸エチルと水との間で粗残渣を分配させた。リン酸でｐＨが約２となるまで酸性にし、有機層を分離した。水層をさらなる酢酸エチルで逆抽出した。有機溶液を合わせ、飽和炭酸水素ナトリウム溶液および飽和塩化ナトリウム溶液で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥し、真空中で濃縮した。塩化メチレン中の３０％〜６０％の酢酸エチルの勾配で溶出するシリカゲルクロマトグラフィ（１２０ｇ）により精製した。所望の生成物を、砕ける（crushable）フォーム状物として単離した（１１．２ｇ，７７％収率）。
ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ  ３９０．３＝［Ｍ＋Ｈ］＋
ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ  ３８８．３＝［Ｍ−Ｈ］＋
１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ−ｄ６）δ  ０．８３（ｔ，６Ｈ），１．１５−１．３６（ｍ，６Ｈ），１．４６−１．５５（ｍ，２Ｈ），２．６０（ｄｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１４．４，９．６，５．６，５．６Ｈｚ），（ｄｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝１２．６，６．２，３．６Ｈｚ），３，７７−３．８１（ｍ，１Ｈ），３，８７（ｄｔ，１Ｈ，Ｊ＝８．４，３．０Ｈｚ），４．１２−４．２２（ｍ，１Ｈ），５．２７（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝５．６Ｈｚ），６．１５（ｔ，１Ｈ，Ｊ＝７．４Ｈｚ），６．２９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６．４Ｈｚ），７．３１（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝７．２Ｈｚ），８．２３（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８．０Ｈｚ），１１．０３（ｓ，１Ｈ）。
【００３１】
（ｐＨ化学的安定性試験）
ｐＨ化学的安定性を半自動化ＨＰＬＣ技術を用いて評価した。１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンの試料を、消化管全体のｐＨ範囲（ｐＨ１〜ｐＨ８）を表す５つの緩衝液中で１００ｍｃｇ／ｍＬの濃度で調製した。試料を４０℃にインキュベーションしたＨＰＬＣオートサンプラーにロードした。試料を、１時間あたり１回の間隔で２４時間まで、ゲムシタビンから式Ｉの化合物を分離するカラムを備えたＨＰＬＣに繰り返し注入した。１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンのピーク面積をＵＶ検出器によって経時的にモニターし、初期のピーク面積と比較して安定性を判断した。
【００３２】
ｐＨ１〜ｐＨ８の範囲では、４時間後、２５％未満の１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンがゲムシタビンに分解した。
【００３３】
（薬物動態試験）
マウスでの薬物動態
ゲムシタビンおよび１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンの薬物動態プロフィールを、約１０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンを含むよう選択した用量で経口投与した雄性ＣＤ−１マウスで評価した。選んだ動物（１化合物あたり、１回あたりｎ＝３）を投与後０．０８、０．２５、０．５、１、２、および６時間後に犠牲にし、ゲムシタビンのさらなる代謝を阻害するためのテトラヒドロウリジン（血中の最終濃度０．５ｍＭ）を含むＥＤＴＡ処理したチューブに全身血液試料を集めた。０．０８時間で、肝臓の門脈血を収集するために、さらに３匹の動物を犠牲にした。遠心分離により血漿を単離し、分析まで凍結させた。ゲムシタビンおよびプロドラッグの血漿濃度は、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析により測定した。薬物動態パラメータは、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐ．，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）を使用して算出した。各プロドラッグの薬物動態パラメータを、類似の研究設計における塩酸ゲムシタビンの経口投与から測定したものと比較した。
【００３４】
ＣＤ−１マウスに経口投与した場合、１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンは、ｉｎ  ｖｉｖｏで多くが加水分解され、ゲムシタビンを放出した。１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンを投与した場合、塩酸ゲムシタビンを直接経口投与した場合に比べて、ゲムシタビンへの血漿曝露は、ＣＤ−１マウスにおいて増加した。無傷のプロドラッグの吸収は、経口投与後０．０８時間において、肝臓の門脈の血漿中の相対的に高い濃度により立証された。
【００３５】
（サルでの薬物動態試験）
ゲムシタビンおよび１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンの薬物動態プロフィールを、交叉デザインでの経口投与及び静脈内投与後のカニクイザルにおいて評価した。化合物を、約１０ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンを含むよう選択した用量で投与した。指定した間隔で４８時間まで、テトラヒドロウリジン（血中の最終濃度０．５ｍＭ）を含むＥＤＴＡ処理したチューブに血液試料を集めた。経口投与期間において、動物をラニチジン（静脈内、５ｍｇ／ｋｇ）で前処理した。血漿を遠心分離によって単離し、分析まで凍結させた。ゲムシタビンおよび１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンの血漿濃度を、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ分析により測定した。薬物動態パラメータは、ＷｉｎＮｏｎｌｉｎソフトウェア（Ｐｈａｒｓｉｇｈｔ  Ｃｏｒｐ．，Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ，ＣＡ）を使用して算出した。
【００３６】
カニクイザルに静脈内投与した場合、１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンはｉｎ  ｖｉｖｏで多くが加水分解され、ゲムシタビンを放出した。１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンを投与した場合、塩酸ゲムシタビンを直接経口投与した場合に比べて、ゲムシタビンへの血漿曝露は、カニクイザルにおいて約５倍増加した。
【００３７】
（加水分解試験）
（小腸ホモジネート試験）
腸内の酵素による加水分解に対する１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンの安定性を測定するため、小腸上皮細胞の粗ホモジネートを、ＣＤ−１マウス、ビーグル犬、カニクイザルおよびヒト由来の上部小腸の切片から調製した。マウスおよびイヌのホモジネートは、新しく収集した細胞から調製し、サルおよびヒトのホモジネートは以前から凍結していた組織から調製した。腸部分から細胞を丁寧に掬い取り、プールし、Ｐｏｌｙｔｒｏｎ（ＰＴ−１０−８５）を使用して５０ｍＭ酢酸緩衝液中でホモジナイズした。タンパク質濃度は、標準的な分光光度法により測定した。調製したホモジネートは、使用するまで−７０℃で保存した。
【００３８】
小腸ホモジネート（ＳＩＨ）中の１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンの加水分解速度は、式Ｉの化合物（１００μＭ）をＳＩＨ（２．５〜５ｍｇ／ｍＬ（全タンパク質））とともに、酢酸中、ｐＨ７．５で６時間までインキュベーションすることによって測定した。加水分解によって放出されるゲムシタビンの濃度は、反応をアセトニトリルでクエンチした後でＬＣ／ＭＳ分析によって測定した。加水分解速度を、１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンのスクリーニング実験においては３０分の時点で算出し、そして１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンのキャラクタリゼーション試験においては加水分解対時間曲線の直線部分の傾きから算出した。
【００３９】
１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンは小腸ホモジネート試験において遅い加水分解速度を示した。加水分解は、サルおよびヒトのホモジネートにおいて最も遅く、６時間のインキュベーションにおいて全化合物の３％未満がゲムシタビンに変換されただけであった。
【００４０】
（肝臓Ｓ９加水分解試験）
肝臓の酵素による１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンの加水分解を肝臓加水分解試験において測定した。肝臓ホモジネートを、ＣＤ−１マウス、ビーグル犬、カニクイザルおよびヒトの肝臓から調製した。はさみを使用して肝臓組織を小片に切り、Ｐｏｌｙｔｒｏｎ（ＰＴ−１０−８５）を使用して５０ｍＭ酢酸緩衝液中で１分間ホモジナイズした。９０００×ｇで、４℃で１０分間超遠心分離することにより、各々からミトコンドリアを含まない（Ｓ９）画分を調製した。マウス、イヌおよびサルの肝臓のＳ９画分は、新たに収集した細胞から調製し、ヒトの肝臓のＳ９画分は予め凍結していた組織から調製した。遠心分離後、上清を集め、標準的な分光光度法によりタンパク質濃度を測定した。調製したＳ９画分は、使用するまで−７０℃で保存した。
【００４１】
肝臓のＳ９における１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンの加水分解速度を、化合物（１０μＭ）をＳ９（２ｍｇ／ｍＬの全タンパク質）とともにｐＨ８．０のリン酸緩衝生理食塩水中で６時間までインキュベーションすることにより、測定した。加水分解により放出されたゲムシタビンの濃度は、反応をアセトニトリルでクエンチした後にＬＣ／ＭＳ分析により測定した。加水分解速度を、１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンのスクリーニング実験においては３０分の時点で算出し、そして１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンのキャラクタリゼーション試験においては加水分解対時間曲線の直線部分の傾きから算出した。
【００４２】
１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンは、記載したすべての種の肝臓のＳ９において加水分解された。加水分解は、サルおよびヒトのホモジネートで最も速く、全化合物の約３５％が６時間のインキュベーションでゲムシタビンに変換された。
【００４３】
（毒性試験）
４日間のマウスでのスクリーニング
雌性ＣＤ−１マウスに４日間毎日経口投与した１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンの毒性を評価するために、１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンの胃腸毒性プロフィールを、４日間のマウス試験において８ｍｇ／ｋｇでゲムシタビンを経口投与した場合の胃腸毒性に関する公知の結果と比較した。
【００４４】
５〜８週齢の雌性ＣＤ−１マウスに、経口による強制飼養により１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンを投与した。用量レベルは、約８ｍｇ／ｋｇのゲムシタビンのモル当量になるように選択した。１０ｍＬ／ｋｇの用量体積を使用し、用量を４日間連続で１日１回投与した。４回目の投与の約５〜８時間後に、剖検した。
【００４５】
臨床的兆候、臨床化学、全体の病状、および限定的な組織病理（回腸、空腸、および肝臓）を評価した。塩酸ゲムシタビンに対して等価な用量の１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンをマウスに投与したのちには、萎縮性の腸の変化または萎縮性腸疾患の重篤度の有意な低下が観察された。
【００４６】
１４日間のマウスの試験
１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンが１４日間の強制飼養による経口投与の後マウスにおいて副作用をもたらすかどうかを評価するために、そして１用量または１４用量後の１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンおよびその代謝物である塩酸ゲムシタビンおよびデオキシジフルオロウリジンの血漿濃度を測定するために、１４日間のマウスでの試験を行った。
【００４７】
９〜１２週齢の雄性および雌性ＣＤ−１マウスに、経口による強制飼養によって、薬物１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンを投与した。用量の範囲は、最大耐量および用量規定毒性を決定すべく選択した。１０ｍＬ／ｋｇの用量体積を使用し、用量を１日１回投与した。
【００４８】
臨床的兆候、体重、飼料消費、血液学、臨床化学、１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンおよびその代謝物である塩酸ゲムシタビンおよびデオキシジフルオロウリジンの血漿濃度、ならびに病状（全体の病状、臓器の重量、および組織病理を含む）を評価した。
【００４９】
モル当量基準で、１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンは、塩酸ゲムシタビンよりも少ない腸疾患を伴ったが、塩酸ゲムシタビンへの全身曝露の約２倍となった。
【００５０】
７日間のイヌの試験
ビーグル犬に７日間投与した場合の１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンの毒性プロフィールを評価するために、そして１回投与または７回投与後の１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンおよびその代謝物である塩酸ゲムシタビンおよびデオキシジフルオロウリジンの血漿濃度を測定するために、７日間のイヌの試験を行った。
【００５１】
６〜４８月齢の雄性および雌性ビーグル犬に、１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンをカプセルで経口投与した。用量の範囲は、最大耐量および用量規定毒性を決定すべく選択した。１ｍＬ／ｋｇの用量体積を使用し、用量を１日１回投与した。
【００５２】
臨床的兆候、体重、飼料消費、体温、血液学（凝固を含む）、臨床化学、尿検査、１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンおよびその代謝物である塩酸ゲムシタビンおよびデオキシジフルオロウリジンの血漿濃度、ならびに病状（全体の病状、臓器の重量、および組織病理を含む）を評価した。血液毒性および他の毒性（ＧＩ毒性を含む）は、非経口でのゲムシタビンについて以前に記載されているものと整合していた。それゆえ、これらの毒性のいずれも、経口投与経路に独特というものではない。
【００５３】
（ｉｎ  ｖｉｖｏ試験）
ＨＣＴ−１１６結腸腫瘍細胞を、標準的な組織培養条件下でｉｎ  ｖｉｔｒｏで増殖させ、採取し、洗浄し、５×１０６個の細胞（Ｍａｔｒｉｇｅｌ（Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｉｎｃ）中の１：１懸濁液）を、雌性ヌードマウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ、ＣＤ１  ｎｕ／ｎｕ、２４−２７ｇ、移植の２４時間以内に４５０ラドを照射した）の横腹後方に皮下注射した。治療開始前に、腫瘍を約１００ｍｍ３まで増殖させた。ビヒクル対照、種々の用量レベルの１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンまたは塩酸ゲムシタビンを、個々の実験において示された回数で経口による強制飼養（１０ｍｌ／ｋｇの体積）によってこのマウスに投与した。化合物を、１４日間毎日か、全７用量を１日おきにか、または全４用量を２日おきに投与した。毎日投与スケジュールについては、１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンを１００ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ６．０中で処方し、１日おき投与スケジュールおよび２日おき投与スケジュールについては１％カルボキシメチルセルロースナトリウム、０．５％ラウリル硫酸ナトリウム、０．０５％Ａｎｔｉｆｏａｍ１５０、および０．０８５％ポビドン中で処方した。塩酸ゲムシタビンは、経口投与のための生理食塩水中で調製した。腫瘍サイズはキャリパーによる測定で決定し、腫瘍体積（ｍｍ３）はｌ×ｗ２×０．５３６の式（式中、ｌは直交する直径のうちの大きいほうの直径であり、ｗは小さいほうの直径である）から見積もった。すべてのデータ（腫瘍測定値および動物の体重）を治療の開始から始めて週２回集め、腫瘍測定システムに基づいてコンピュータを使用して解析した。
【００５４】
１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンで観察される抗腫瘍効力は、等しい用量の塩酸ゲムシタビンで得られるものに匹敵していた。しかしながら、１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オンでの処理は、等量の塩酸ゲムシタビンを投与した動物と比較して全体の毒性が低かった。
【００５５】
（実施例１）
結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  モノ−ｐ−トルエンスルホネート
１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン（４００ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）を室温で酢酸イソプロピル（５ｍＬ）に溶解させた。ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（１９５ｍｇ、１．０３ｍｍｏｌ）をこの溶液に加えた。完全に溶解した後、直ちに白色固体の沈殿が生成した。このスラリーを１０分間撹拌した。固体生成物を真空濾過により濾過し、メタノール（１ｍＬ）で洗浄し、風乾して標題の化合物（３９２ｍｇ、６８％）を得た。
【００５６】
（Ｘ線粉末回折）
Ｘ線粉末回折分析を、４０ｋＶおよび５０ｍＡで作動するＣｕＫα線源（λ＝１．５４０５６Å）を備えたＤ４  Ｅｎｄｅａｖｅｒ回折計を用いて実施した。試料を、０．００９°（２θ）の刻み幅、１刻みあたり３秒以上の走査速度で、３°〜４０°（２θ）の範囲で走査した。試料の変位誤差は、ＮＩＳＴ標準ＳＲＭ６７５（８．８５°（２θ）の標準ピーク）を使用して補正することができる。
【００５７】
結晶形の確認は、特徴的なピーク（代表的には、より突き出たピーク）（°（２θ）単位）の任意の独特の組合せに基づいて行うことができる。結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  モノ−ｐ−トルエンスルホネートは、４．８６°の２θ値に特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターン、あるいは４．８６°、９．７６°および１６．８６°の２θ値のピークを特徴とする。すべての回折角を、０．１°の公差で表現している。
【００５８】
表１：結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  モノ−ｐ−トルエンスルホネートのＸ線粉末回折（ＣｕＫα線源、λ＝１．５４０５６Å）ピーク
【表１】
2009541344.tif 000003
【００５９】
（固体状態１３Ｃ  ＮＭＲ分光法）
固体状態１３Ｃ  ＮＭＲ分光法（ＳＳＮＭＲ）を、７０ｋＨｚの２位相パルス変調プロトンデカップリング、６２ｋＨｚの傾斜振幅の交差分極および１０．０ｋＨｚのマジック角試料回転（ＭＡＳ）を使用し、１００．５７８ＭＨｚの炭素共鳴周波数で作動するＶａｒｉａｎ  Ｕｎｉｔｙ  Ｉｎｏｖａ  ４００ＭＨｚ分光計で行った。取り込みパラメータは以下のとおりである：９０プロトン  ラジオ周波数  パルス幅４．０秒、接触時間５．０ミリ秒、パルス繰り返し時間２０秒、スペクトル幅５０ｋＨｚ、および取り込み時間５０ミリ秒。ｐｐｍで表現される化学シフトは、試料置き換えにより、ヘキサメチルベンゼンのメチル基（１７．３ｐｐｍ）を基準にしたものである。マジック角は、ＦｒｙｅおよびＭａｃｉｅｌ（Ｆｒｙｅ  Ｊ．Ｓ．およびＭａｃｉｅｌ  Ｇ．Ｅ．，Ｊ．Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．，１９８２，４８，１２５）により記載されるように、ＫＢｒの７９Ｂｒシグナルのサイドバンドを最適化して調整した。
【００６０】
結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  モノ−ｐ−トルエンスルホネートは、以下の化学シフトに等方性１３Ｃピークが存在することから、１３Ｃ  ＳＳＮＭＲ分光法により同定することができる：１５．７，２０．９，２２．３，３５．３，３８．１，４８．９，５７．４，６７．５，８２．５，８５．８，９８．７，１２１．０，１４０．６，１４３．５，１４６．４，１５２．５，１５９．６および１８２．２ｐｐｍ。このように、結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  モノ−ｐ−トルエンスルホネートは、１５２．５、１５９．６および１８２．２ｐｐｍに特徴的な化学シフトを有するＳＳＮＭＲスペクトルを特徴とする。すべての化学シフトは、±０．１ｐｐｍの精度で表現されている。
【００６１】
結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  モノ−ｐ−トルエンスルホネート酸は経口アベイラビリティがあり、通常は経口投与され、従って経口投与が好ましい。
【００６２】
（実施例２）
結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  ヘミ−ベンゼンスルホネート半水和物
メタノール（１ｍＬ）中の１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン（１０９ｍｇ、０．２８ｍｍｏｌ）およびベンゼンスルホン酸（２２ｍｇ、０．１４ｍｍｏｌ）の溶液に室温でヘキサン（６ｍＬ）を加えた。この溶液を乾固するまでエバポレーションした。残渣をヘキサン（２ｍＬ）に懸濁させ、撹拌した。固体生成物を真空濾過により単離し、風乾した。収率＝９１ｍｇ（６８％）。
【００６３】
（Ｘ線粉末回折）
Ｘ線粉末回折分析を、４０ｋＶおよび５０ｍＡで作動するＣｕＫα線源（λ＝１．５４０５６Å）を備えたＤ４  Ｅｎｄｅａｖｅｒ回折計を用いて実施した。試料を、０．００９°（２θ）の刻み幅、１刻みあたり３秒以上の走査速度で、３°〜４０°（２θ）の範囲で走査した。試料の変位誤差は、ＮＩＳＴ標準ＳＲＭ６７５（８．８５°（２θ）の標準ピーク）を使用して補正することができる。
【００６４】
結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  ヘミ−ベンゼンスルホネート半水和物は、表２に記載するように、ＣｕＫα線源を使用するＸ線回折パターンにより同定することができる。結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  ヘミ−ベンゼンスルホネート半水和物は、５．２２°の２θ値に特徴的なピークを有するＸ線粉末回折パターン、あるいは５．２２°および７．３３°の２θ値のピークを特徴とする。すべての回折角を、０．１°の公差で表現している。
【００６５】
表２：結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  ヘミ−ベンゼンスルホネート半水和物のＸ線粉末回折（ＣｕＫα線源、λ＝１．５４０５６Å）ピーク
【表２】
2009541344.tif 000004
【００６６】
（固体状態１３Ｃ  ＮＭＲ分光法）
固体状態１３Ｃ  ＮＭＲ分光法（ＳＳＮＭＲ）分析を、７０ｋＨｚの２位相パルス変調プロトンデカップリング、６２ｋＨｚの傾斜振幅の交差分極および１０．０ｋＨｚのマジック角試料回転（ＭＡＳ）を使用し、１００．５７８ＭＨｚの炭素共鳴周波数で作動するＶａｒｉａｎ  Ｕｎｉｔｙ  Ｉｎｏｖａ  ４００ＭＨｚ分光計で行った。取り込みパラメータは以下のとおりである：９０プロトン  ラジオ周波数  パルス幅４．０秒、接触時間５．０ミリ秒、パルス繰り返し時間２０秒、スペクトル幅５０ｋＨｚ、および取り込み時間５０ミリ秒。ｐｐｍで表現される化学シフトは、試料置き換えにより、ヘキサメチルベンゼンのメチル基（１７．３ｐｐｍ）を基準にしたものである。マジック角は、ＦｒｙｅおよびＭａｃｉｅｌ（Ｆｒｙｅ  Ｊ．Ｓ．およびＭａｃｉｅｌ  Ｇ．Ｅ．，Ｊ．Ｍａｇｎ．Ｒｅｓｏｎ．，１９８２，４８，１２５）により記載されるように、ＫＢｒの７９Ｂｒシグナルのサイドバンドを最適化して調整した。
【００６７】
結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  ヘミ−ベンゼンスルホネート半水和物は、以下の化学シフトに等方性１３ＣＳＳＮＭＲピークが存在することから、同定することができる：１４．４，１５．４，２１．８，３４．９，３６．３，４７．１，４９．１，５８．０，６８．３，８２．７，９７．６，９９．９，１２１．１，１２６．１，１２７．９，１３０．５，１４４．３，１４７．５，１４９．７，１５６．９，１６３．３，１７６．９および１７７．８ｐｐｍ。このように、結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  ヘミ−ベンゼンスルホネート半水和物は、１５６．９、１６３．３、１７６．９および１７７．８ｐｐｍに特徴的な化学シフトを有するＳＳＮＭＲスペクトルを特徴とする。すべての化学シフトは、±０．１ｐｐｍの精度で表現されている。
【００６８】
結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  ヘミ−ベンゼンスルホネート半水和物は経口アベイラビリティがあり、通常は経口投与され、従って経口投与が好ましい。
【００６９】
（製剤および投与）
医薬組成物は、製薬分野で周知の様式で調製される。担体または賦形剤は、活性成分のためのビヒクルまたは媒体として機能する固体、半固体、または液体物質であってよい。適切な担体または賦形剤は当該分野で周知である。医薬組成物は、経口用、吸入用、非経口用または局所用に構成されていてよく、錠剤、カプセル剤、エアロゾル、吸入剤、坐薬、液剤、懸濁剤などの形態で患者に投与することができる。本発明の化合物は、例えば不活性な希釈剤またはカプセル剤とともに経口投与されてもよく、錠剤に圧縮されてもよい。治療のための経口投与のために、当該化合物は、賦形剤に組み込んでもよく、錠剤、トローチ剤、カプセル剤、エリキシル剤、懸濁剤、シロップ剤、ウエハース、チューイングガムなどの形態で使用してもよい。これらの製剤は、好ましくは、少なくとも１％の本発明の化合物（すなわち、活性成分）を含むが、この量は具体的な形態に応じて変わってもよく、便宜的に投与単位の重量の１％〜約９０％であってもよい。組成物中に存在する化合物の量は、適切な投与量が得られるような量である。本発明の好ましい組成物および製剤は、当業者に周知の方法により決定されてよい。
【００７０】
錠剤、丸剤、カプセル剤、トローチ剤などは、以下のアジュバントの１つ以上を含んでいてもよい：ポビドン、ヒドロキシプロピルセルロース、微結晶性セルロース、またはゼラチンのような結合剤；デンプン、ラクトース、微結晶性セルロースまたはリン酸二カルシウムのような賦形剤または希釈剤；クロスカルメロース、クロスポビドン、デンプングリコール酸ナトリウム、コーンスターチなどの崩壊剤；ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、タルク、または水素化植物油のような滑沢剤；コロイド状二酸化ケイ素のような流動促進剤；ラウリル硫酸ナトリウムおよびポリソルベート８０のような湿潤剤。ショ糖、アスパルテームまたはサッカリンのような甘味剤、またはペパーミント、サリチル酸メチルもしくは柑橘系香味料のような矯味矯臭剤を添加してもよい。単位投与形態がカプセル剤であるとき、それは上記の種類の物質に加えて、ポリエチレングリコールまたは脂肪油のような液体担体を含んでいてもよい。他の単位投与形態は、単位投与形態の物理的形態を改変する他の種々の物質（例えば、コーティング剤）を含んでいてもよい。好ましくは、投与形態は、腸溶性コーティングされている。このように、錠剤または丸剤は、糖類、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリメタクリレート、または他のコーティング剤でコーティングされていてもよい。シロップ剤は、本発明の化合物に加えて、甘味剤としてのショ糖、および特定の防腐剤、色素、ならびに着色剤および香味料を含んでいてもよい。これらの種々の組成物の調製において使用される物質は、薬理学的に純粋であるべきであり、使用される量において無毒であるべきである。
【００７１】
結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  モノ−ｐ−トルエンスルホネートおよび結晶性１−（２，２−ジフルオロ−２−デオキシ−β−Ｄ−リボフラノシル）−４−（２−プロピル−１−オキソペンチル）アミノピリミジン−２−オン  ヘミ−ベンゼンスルホネート半水和物は、一般に広範囲な投与範囲にわたって有効である。例えば、１日あたりの投与量は、単回用量または分割用量で、通常は約１５ｍｇ／日〜約２００ｍｇ／日の範囲にあり、より好ましくは約８５ｍｇ／日である。ある場合には、前述の範囲の下限未満の投与レベルでも十分なレベル以上かも知れないし、他の場合では、さらに多い用量が用いられても有害な副作用を引き起こさないかもしれない。それゆえ、上述の投与量範囲により本発明の範囲を限定することは決して意図していない。実際に投与される化合物の量は、治療される病状、選択された投与経路、実際に投与される化合物（複数種であってもよい）、年齢、体重、個々の患者の反応、および患者の症状の重篤度を含めた関連する状況を参酌して医師によって決定されることは理解できるであろう。
【国際調査報告】
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