(57)【要約】  本発明は、放射性核種のようなレポーター部分でペプチドのような生物学的活性ベクターを標識するための方法及び装置に関する。本方法は、小口径銅容器内において、式（Ｉ）の化合物を式（ＩＩ）（Ｒ*−Ｌ２−Ｎ3）の化合物と反応させるか或いは式（ＩＩＩ）の化合物を式（ＩＶ）の化合物と反応させることを含んでなる。本発明の方法を実施するためのミクロ流体装置も特許請求される。【化１】2009541286.tif 000029【化２】2009541286.tif 000030（式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３及びＬ４の各々はリンカー基であり、Ｒ*はレポーター部分である。）【選択図】    図１
2009541286.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の以下の式（Ｉ）の化合物と式（ＩＩ）の化合物又は式（ＩＩＩ）の化合物と式（ＩＶ）の化合物とを反応させてそれぞれ式（Ｖ）又は（ＶＩ）のコンジュゲートを得ることを含むベクターの標識方法であって、該反応が小口径銅容器内で実施される方法。
【化１】
2009541286.tif 000023
【化２】
2009541286.tif 000024
（式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３及びＬ４の各々はリンカー基であり、Ｒ*はレポーター部分である。）
【化３】
2009541286.tif 000025
（式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４及びＲ*は上記に定義した通りである。）
【請求項２】
Ｒ*が放射性核種を含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
Ｒ*が陽電子放出型放射性核種、好ましくは11Ｃ又は18Ｆを含む、請求項１又は請求項２記載の方法。
【請求項４】
ベクターがペプチド、タンパク質、ホルモン、細胞、細菌、ウイルス又は薬物様低分子であり、最も好適にはペプチドである、請求項１乃至請求項３のいずれか１項記載の方法。
【請求項５】
ベクターがＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド又はその類似体である、請求項１乃至請求項４のいずれか１項記載の方法。
【請求項６】
ベクターが次式のフラグメントを含むペプチドである、請求項１乃至請求項５のいずれか１項記載の方法。
【化４】
2009541286.tif 000026
【請求項７】
ベクターが次の式（Ａ）のペプチドである、請求項１乃至請求項６のいずれか１項記載の方法。
【化５】
2009541286.tif 000027
式中、Ｘ7は−ＮＨ2又は次式の基である。
【化６】
2009541286.tif 000028
式中、ａは１〜１０の整数であり、好ましくはａは１である。
【請求項８】
請求項１乃至請求項７のいずれか１項記載の方法を実施するためのミクロ流体装置であって、当該装置は第１の開口、第２の開口及びそれらを流体連通する１以上の細長いミクロ流体通路を画成する装置本体を含み、ミクロ流体通路の少なくとも一部は装置本体の金属銅部分によって画成されているミクロ流体装置。
【請求項９】
１以上のミクロ流体通路を画成する装置本体が金属銅で形成されている、請求項８記載のミクロ流体装置。
【請求項１０】
装置本体がさらに、第１の開口、第２の開口及びそれらを流体連通する１以上の細長いミクロ流体通路を画成するベース部とカバー部とを含む、請求項８又は請求項９記載のミクロ流体装置。
【請求項１１】
ミクロ流体通路が、ベース部又はカバー部のいずれか或いはそれらの間に上下に整合して形成された流路からなる、請求項１０記載のミクロ流体装置。
【請求項１２】
ミクロ流体通路が、請求項１乃至請求項７のいずれか１項に定義した式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）の化合物を含む、請求項８乃至請求項１１のいずれか１項記載のミクロ流体装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、放射性核種のようなレポーター部分でペプチドのような生物学的活性ベクターを標識するための方法及び装置に関する。こうして得られる標識コンジュゲートは、例えば放射性医薬品として、さらに具体的には陽電子放射断層撮影（ＰＥＴ）又は単光子放射断層撮影（ＳＰＥＣＴ）用の診断薬或いは放射線療法のための放射性医薬品として有用である。
【背景技術】
【０００２】
放射性標識された生物活性ペプチドを診断イメージングのために使用することは、核医学において重要性を増しつつある。特定の細胞タイプと選択的に相互作用する生物学的活性分子は、標的組織に放射能を送達するために有用である。例えば、放射性標識ペプチドは、診断イメージング及び放射線療法のため、腫瘍、梗塞巣部及び感染組織に放射性核種を送達するための大きな潜在的可能性を有している。約１１０分の半減期を有する18Ｆは、多くのレセプターイメージング調査のために最適な陽電子放出核種である。したがって、18Ｆ標識された生物活性ペプチドは、多種多様の疾患を定量的に検出して特性決定するためにＰＥＴで利用できるので大きな臨床的可能性を有している。他の有用な放射性核種には、11Ｃ、125Ｉや123Ｉや124Ｉや131Ｉのような放射性ヨウ素、及び99mＴｃがある。
【０００３】
これまで、ペプチド及び生体分子を標識するための迅速な汎用法がなかったため、ペプチド及び生体分子を診断薬として使用することができなかった。したがって、放射性核種（例えば、18Ｆ）のような標識を特にペプチドに温和な条件下で迅速かつ化学選択的に導入して、高い放射化学収率及び純度で標識生成物を得ることのできる18Ｆ標識補欠分子族のような標識剤並びに方法に対するニーズが依然として存在する。同時係属出願である国際公開第２００６／０６７３７６号には、診断イメージングのためにペプチドのようなベクターを標識するための方法及び試薬が記載されている。さらに、かかる方法であって、臨床現場での診断薬の調製を容易にするための自動化に適した方法に対するニーズも存在する。今回、本発明者らは、触媒兼反応器として役立つ小口径銅容器内で国際公開第２００６／０６７３７６号の方法を実施することで該方法を改良できるという知見を得た。このようにすれば、放射化学収率を約８６％から９９％超に高めることができる。加えて、小口径銅容器は自動合成システム内に容易に組み込むことができる。
【特許文献１】国際公開第２００６／０６７３７６号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０３／１０１９７２号パンフレット
【特許文献３】国際公開第２００５／００３２９４号パンフレット
【特許文献４】国際公開第０３／００６４９１号パンフレット
【特許文献５】国際公開第２００５／０２９０４２号パンフレット
【特許文献６】国際公開第２００５／０２５９７７号パンフレット
【特許文献７】米国特許第３２０７７７１号明細書
【特許文献８】米国特許第４７３５０６３号明細書
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
本発明は、以下の以下の式（Ｉ）の化合物と式（ＩＩ）の化合物又は式（ＩＩＩ）の化合物と式（ＩＶ）の化合物とを反応させてそれぞれ式（Ｖ）又は（ＶＩ）のコンジュゲートを得ることを含むベクターの標識方法であって、該反応が小口径銅容器内で実施される方法。
【０００５】
【化１】
2009541286.tif 000003
【０００６】
【化２】
2009541286.tif 000004
式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３及びＬ４の各々はリンカー基であり、Ｒ*はレポーター部分である。
【０００７】
【化３】
2009541286.tif 000005
式中、Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３、Ｌ４及びＲ*は上記に定義した通りである。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００８】
リンカー基Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３及びＬ４は各々独立に、１〜３０のヘテロ原子（例えば、酸素又は窒素）、好適には１〜１０のヘテロ原子を任意に含むＣ1-60ヒドロカルビル基、好適にはＣ1-30ヒドロカルビル基である。好適なリンカー基には、アルキル鎖、アルケニル鎖、アルキニル鎖、芳香環、多核芳香環及びヘテロ芳香環があり、これらはいずれも例えば１以上のエーテル、チオエーテル、スルホンアミド又はアミド官能基で任意に置換されていてよく、さらにエチレングリコール、アミノ酸又は炭水化物サブユニットを含むモノマー及びポリマーがある。
【０００９】
「ヒドロカルビル基」という用語は炭素及び水素からなる有機置換基を意味し、かかる基は飽和部分、不飽和部分又は芳香族部分を含み得る。
【００１０】
リンカー基Ｌ１、Ｌ２、Ｌ３及びＬ４は、得られる式（Ｖ）又は（ＶＩ）の化合物において好ましい排泄特性などの良好なインビボ薬物動態が得られるように選択できる。親油性及び／又は電荷の異なるリンカー基を使用することで、診断上のニーズに応じてペプチドのインビボ薬物動態を大きく変化させることができる。例えば、式（Ｖ）又は（ＶＩ）の化合物を腎排泄によって体外に排除することが望ましい場合には親水性リンカーが使用され、肝胆道排泄による排除が望ましい場合には疎水性リンカーが使用される。ポリエチレングリコール部分を含むリンカーは血中クリアランスを遅らせることが判明しており、これは状況によっては望ましい。
【００１１】
Ｒ*は、インビボ光学イメージングのために適したレポーター、放射性核種を含むレポーター、或いは磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）又は磁気共鳴分光法（ＭＲＳ）で使用するのに適した同位体を含むレポーターのような、任意のイメージングモダリティによって検出できるレポーター部分である。Ｒ*は、好ましくは放射性核種（例えば、陽電子放出型放射性核種）を含む。このような目的に適した陽電子放出型放射性核種には、11Ｃ、18Ｆ、75Ｂｒ、76Ｂｒ、124Ｉ、82Ｒｂ、68Ｇａ、64Ｃｕ及び62Ｃｕがあり、これらのうちで11Ｃ又は18Ｆが好ましい。本発明の一態様では、放射性核種は18Ｆである。他の有用な放射性核種には、123Ｉ、125Ｉ、131Ｉ、211Ａｔ、99mＴｃ及び111Ｉｎがある。金属放射性核種は、好適には、例えば当業者にとって公知の方法による直接組込みでキレート剤に組み込まれる。金属レポーターのキレート化は、Ｃｕ（Ｉ）触媒のキレート化を避けるため、好ましくは式（Ｉ）又は（ＩＶ）の化合物をそれぞれ式（ＩＩ）又は（ＩＩＩ）の化合物と反応させる前に実施される。
【００１２】
Ｒ*に含まれる好適なキレート剤には、以下の式Ｘのものがある。
【００１３】
【化４】
2009541286.tif 000006
式中、
Ｒ1A、Ｒ2A、Ｒ3A及びＲ4Aは各々独立にＲA基であり、
ＲA基は各々独立にＨ、Ｃ1-10アルキル、Ｃ3-10アルキルアリール、Ｃ2-10アルコキシアルキル、Ｃ1-10ヒドロキシアルキル、Ｃ1-10アルキルアミン又はＣ1-10フルオロアルキルであるか、或いは２以上のＲA基がこれらに結合した原子と共に炭素環式又は複素環式の飽和又は不飽和環を形成する。
或いは、Ｒ*は下記の式（ｉ）、（ｉｉ）、（ｉｉｉ）又は（ｉｖ）で表されるキレート剤を含み得る。
【００１４】
【化５】
2009541286.tif 000007
キレート剤の好ましい例は下記の式（ｖ）で表される。
【００１５】
【化６】
2009541286.tif 000008
式Ｘのキレート剤を含む式（ＩＩ）又は（ＩＶ）の化合物を放射性標識すれば、中性ｐＨ付近の水性条件下において室温で良好な放射化学純度（ＲＣＰ）を得ることができる。
【００１６】
Ｒ*がインビボ光学イメージングのために適したレポーターである場合、レポーターは光学イメージング手続きで直接又は間接に検出できる任意の成分である。レポーターは、光散乱剤（例えば、着色又は無着色粒子）、吸光剤又は発光剤であり得る。さらに好ましくは、レポーターは発色団又は蛍光化合物のような染料である。染料は、紫外域乃至近赤外域の波長をもった電磁スペクトル中の光と相互作用する任意の染料であり得る。最も好ましくは、レポーターは蛍光特性を有する。好ましい有機発色性及び発蛍光性レポーターには、広範な非局在化電子系を有する群、例えばシアニン類、メロシアニン類、インドシアニン類、フタロシアニン類、ナフタロシアニン類、トリフェニルメチン類、ポルフィリン類、ピリリウム染料、チアピリリウム染料、スクアリリウム染料、クロコニウム染料、アズレニウム染料、インドアニリン類、ベンゾフェノキサジニウム染料、ベンゾチアフェノチアジニウム染料、アントラキノン類、ナフトキノン類、インダスレン類、フタロイルアクリドン類、トリスフェノキノン類、アゾ染料、分子内及び分子間電荷移動染料及び染料錯体、トロポン類、テトラジン類、ビス（ジチオレン）錯体、ビス（ベンゼン−ジチオレート）錯体、インドアニリン染料、ビス（Ｓ，Ｏ−ジチオレン）錯体がある。緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）及び異なる吸収／発光特性を有するＧＦＰの変種のような蛍光タンパク質も有用である。特定の状況においてはある種の希土類金属（例えば、ユウロピウム、サマリウム、テルビウム又はジスプロシウム）の錯体が使用され、蛍光ナノ結晶（量子ドット）についても同様である。
【００１７】
使用できる発色団の具体例には、フルオレセイン、スルホローダミン１０１（Ｔｅｘａｓ Ｒｅｄ）、ローダミンＢ、ローダミン６Ｇ、ローダミン１９、インドシアニングリーン、Ｃｙ２、Ｃｙ３、Ｃｙ３．５、Ｃｙ５、Ｃｙ５．５、Ｃｙ７、Ｍａｒｉｎａ Ｂｌｕｅ、Ｐａｃｉｆｉｃ Ｂｌｕｅ、Ｏｒｅｇｏｎ Ｇｒｅｅｎ ８８、Ｏｒｅｇｏｎ Ｇｒｅｅｎ ５１４、テトラメチルローダミン、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ３５０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４３０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５３２、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５４６、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５５５、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５６８、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ５９４、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６３３、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６４７、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６６０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ６８０、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７００及びＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ７５０がある。
【００１８】
発色団を導入するための好適な方法は、国際公開第９８／０４８８３８号に詳述されている。
【００１９】
Ｒ*が磁気共鳴イメージング（ＭＲＩ）又は磁気共鳴分光法（ＭＲＳ）で使用するのに適した同位体を含む場合、かかる同位体は好適には19Ｆ及び13Ｃから選択される。
【００２０】
式（Ｉ）及び（ＩＩＩ）中並びに特記しない限り本発明の他の態様では、標識用の好適なベクターはペプチドである。かかるペプチドには、オクトレオチドのようなソマトスタチン類似体、ボンベシン、血管作用性小腸ペプチド、走化性ペプチド類似体、α−メラノサイト刺激ホルモン、ニューロテンシン、Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド、ヒトプロインスリン結合ペプチド、インスリン、エンドセリン、アンギオテンシン、ブラジキニン、エンドスタチン、アンギオスタチン、グルタチオン、カルシトニン、マガイニンＩ及びＩＩ、黄体形成ホルモン放出ホルモン、ガストリン、コレシストキニン、サブスタンスＰ、バソプレッシン、ホルミル−ノルロイシル−ロイシル−フェニルアラニル−ノルロイシル−チロシル−リシン、アネキシンＶ類似体、バソアクティブプロテイン−１（ＶＡＰ−１）ペプチド並びにカスパーゼペプチド基質がある。好ましい標識用ペプチドは、国際公開第０１／７７４１５号及び同第０３／００６４９１号に記載されているもののようなＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐペプチド及びその類似体、好ましくは次式のフラグメントを含むペプチドである。
【００２１】
【化７】
2009541286.tif 000009
さらに好ましくは、次の式（Ａ）のペプチドである。
【００２２】
【化８】
2009541286.tif 000010
式中、Ｘ7は−ＮＨ2又は次式の基である。
【００２３】
【化９】
2009541286.tif 000011
式中、ａは１〜１０の整数であり、好ましくはａは１である。
【００２４】
当業者には容易に理解されようが、本発明の方法は、タンパク質、ホルモン、多糖類、オリゴヌクレオチド及び抗体フラグメントのような他の生体分子、細胞、細菌、ウィルス並びに薬物様低分子の放射性標識にも使用でき、多種多様な診断薬を与える。式（Ｉ）及び（ＩＩＩ）中並びに特記しない限り本発明の他の態様では、特に好適な放射性標識用ベクターはペプチド、タンパク質、ホルモン、細胞、細菌、ウィルス及び薬物様低分子である。
【００２５】
小口径銅容器内における式（Ｉ）の化合物と式（ＩＩ）の化合物との反応、又は式（ＩＩＩ）の化合物と式（ＩＶ）の化合物との反応は、適当な溶媒（例えば、アセトニトリル、Ｃ1-4アルキルアルコール、ジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジメチルスルホキシド又はこれらのいずれかの水性混合物、或いは水）中において５〜２００℃（好ましくは５０〜１５０℃）の温度で実施できる。
【００２６】
反応を実施するために使用される小口径銅容器は、好ましくは小口径の管（例えば、固体担体充填物を含まないＨＰＬＣループ）の形態を有する。小口径銅容器は金属銅で作製するのが好都合であるが、当業者には理解される通り、金属銅の内面を有しさえすれば何らかの他の適当な材料で小口径容器を作製してもよい。小口径銅容器の内径は、通常は約１マイクロメートル〜１．５ｍｍ、好ましくは４０〜２００μｍの範囲内にある。小口径銅容器を通して試薬をフラッシュできるように、その両端が開いていれば特に好都合である。
【００２７】
小口径銅容器の長さは、反応を達成するためには十分に長いが容器内の滞留時間を最小にするためには十分に短くなるように選択される。小口径の管の形態を有する小口径銅容器にとって好都合な長さは、約５〜５０ｃｍ、さらに通常は５〜２０ｃｍ、典型的には約１５ｃｍである。
【００２８】
反応に際しては、小口径銅容器の内面上に本質的に存在するＣｕ（Ｉ）が触媒として機能すると考えられる。
【００２９】
本発明のさらに別の態様では、反応を実施するために使用される小口径銅容器は、第１の開口、第２の開口及びそれらを流体連通する１以上の細長いミクロ流体通路を画成する装置本体を含むミクロ流体装置であって、ミクロ流体通路の少なくとも一部は装置本体の金属銅部分によって画成されている。かかるミクロ流体装置では、典型的には１０〜３００μｍ、さらに典型的には５０〜３００μｍの直径を有する所定のミクロ流体通路は、エッチング又は他の機械加工によって装置本体に（好都合にはその一表面上に）形成される。装置本体は、好都合には銅ブロックから作製される。別法としては、装置本体は例えばガラス、シリコン、ポリマー又は金属であり、その中に形成されたミクロ流体通路にスパッタリング、電気めっき又は他の堆積技法で銅被膜が設置される。
【００３０】
これらのミクロ流体通路は、好ましくは銅で作製され、別法としては別の金属又はさらに一般的には上述したように銅で被覆したガラスで作製されたカバープレートによって部分的に画成することができる。カバープレートによってミクロ流体通路を画成すれば、ピコリットル量の液体又は気体を操作できる内蔵ネットワークが生み出される。カバープレートを所定の場所に封止するために使用される方法は選択される材料に依存するが、好都合には２つの表面間に不活性ガスケットシール（例えば、Ｔｅｆｌｏｎ（商標）シール）を任意に含むクランピングである。かかる装置は、毎分数百マイクロリットルまでの流量を処理することができる。これは、例えば、複数の装置を積み重ねることでさらに増加させることができる。これらの装置は、ポンプ、マイクロシリンジポンプ（例えば、Ｋｌｏｅｈｅｎ Ｌｉｍｉｔｅｄ（ラスヴェガス、米国）から入手できるもの）、又は試薬との界面部分に融解石英毛管を用いる電気浸透流れと共に使用するように設計される。カバープレートは、任意にはミクロ流体通路の一部を画成する。
【００３１】
好ましい実施形態では、ミクロ流体装置は銅ブロックにミクロ流体通路をエッチングすることで作製されるが、これは化学エッチング剤（例えば、塩化第二鉄）を用いて達成できる。次いで、ミクロ流体通路の少なくとも一部を任意に画成する銅製カバープレートで覆えばよい。
【００３２】
上述したように本発明の方法を実施するために有用な特定のミクロ流体装置は新規であり、したがって本発明のさらに別の態様をなす。
【００３３】
かくして、本発明のさらに別の態様では、本発明に係る方法を実施するためのミクロ流体装置であって、当該装置は第１の開口（ｃ）、第２の開口（ｄ）及びそれらを流体連通する１以上の細長いミクロ流体通路（ａ）を画成する装置本体を含み、ミクロ流体通路（ａ）の少なくとも一部は装置本体の金属銅部分によって画成されているミクロ流体装置が提供される。好適には、１以上のミクロ流体通路を画成する装置本体は金属銅で形成されている。
【００３４】
さらに別の態様では、装置本体はさらに、第１の開口、第２の開口及びそれらを流体連通する１以上の細長いミクロ流体通路を画成するベース部とカバー部とを含む。好適には、ミクロ流体通路は、ベース部又はカバー部のいずれか或いはそれらの間に上下に整合して形成された流路からなる。
【００３５】
本発明のさらに別の態様では、上述のミクロ流体装置であって、ミクロ流体通路が上記で定義した式（Ｉ）、（ＩＩ）、（ＩＩＩ）又は（ＩＶ）の化合物を含むミクロ流体装置が提供される。
【００３６】
放射性合成を実施するためにミクロ加工装置又はミクロ流体装置を使用することは、国際公開第０３／０７８３５８号に記載されている。ミクロ加工装置の製造方法及び特に合成化学でのそれの使用に関する総説は、ＤｅＷｉｔｔ（１９９９）“Ｍｉｃｒｏｒｅａｃｔｏｒｓ ｆｏｒ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｏｐｉｎｉｏｎ ｉｎ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｂｉｏｌｏｇｙ，３：３５０−６、Ｈａｓｗｅｌｌ，Ｍｉｄｄｌｅｔｏｎ ｅｔ ａｌ（２００１）“Ｔｈｅ Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｒｅａｃｔｏｒｓ ｔｏ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ”，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ：３９１−８、Ｈａｓｗｅｌｌ ａｎｄ Ｓｋｅｌｔｏｎ（２０００）“Ｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｍｉｃｒｏｒｅａｃｔｏｒｓ”，Ｔｒｅｎｄｓ ｉｎ Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９（６），３８９−３９５、及びＪｅｎｓｅｎ（２００１）“Ｍｉｃｒｏｒｅａｃｔｉｏｎ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ−Ｉｓ Ｓｍａｌｌ Ｂｅｔｔｅｒ？”，Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ Ｓｃｉｅｎｃｅ，５６：２９３−３０３に見出すことができる。
【００３７】
次に、本発明のこの態様の一実施形態を、本発明に係る方法を実施するために適した本発明に係るミクロ加工装置の分解図を示す図２を参照しながら説明する。ベース部（１１）に形成された銅ミクロ流体通路（１０）は、１メートルの長さ及び０．２２ｍｍの内径（３８μＬの管容積）を有している。カバープレート（１２）を所定の位置にクランプすることでミクロ流体通路が封止される。微小口径のプラスチック送入管（図示せず）を介して、気密注射器（Ｈａｍｉｌｔｏｎ社、５００μｌ）（図示せず）がミクロ加工装置に連結される。プラスチック送入管は、ねじを切った入口（８）に対して適当な圧縮継手を使用することでミクロ加工装置に連結される。同様な方法を用いて、排出管が出口（９）に連結される。反応混合物は、３００℃までの温度及び０．５ｍｌ／分までの流量でミクロ加工装置にポンプ送入できる。適当な温度調節器を用いて、加熱キャビティ（１３）内に配置された電気加熱カートリッジを加熱できる。
【００３８】
本発明は、ペプチド又はベクター前駆体の合成に際して標識の正確な導入部位が予め選択される化学選択的な放射性標識アプローチを提供する。ベクター中の所定部位で起こる連結反応は、ただ１種の可能な生成物を与える。したがって、このような方法は化学選択的であり、それの用途は多種多様のペプチド、生体分子及び低分子量薬物に対して汎用的であると考えられる。さらに、アルキン及びアジド官能基は共にほとんどの反応条件下で安定であり、しかも大抵の慣用ペプチド官能基と反応しないので、標識合成の際に必要な保護及び脱保護段階が最小限で済む。さらに、標識反応時に形成されるトリアゾール環は加水分解せず、しかも酸化及び還元に対して極めて安定であり、これは標識ベクターが高いインビボ安定性を有することを意味する。トリアゾール環はまた、アミドと同程度の大きさ及び極性であるので、標識ペプチド又はタンパク質は対応する天然物に対する良い模倣体となる。
【００３９】
ベクターがペプチド又はタンパク質である式（Ｉ）及び（ＩＩＩ）の化合物は、ペプチド合成の常法、例えばＡｔｈｅｒｔｏｎ，Ｅ．ａｎｄ Ｓｈｅｐｐａｒｄ，Ｒ．Ｃ．；“Ｓｏｌｉｄ Ｐｈａｓｅ Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”；ＩＲＬ Ｐｒｅｓｓ：Ｏｘｆｏｒｄ，１９８９に記載されているような固相ペプチド合成法で製造できる。式（Ｉ）又は（ＩＩＩ）の化合物中へのアルキン又はアジド基の導入は、ペプチドのＮ又はＣ末端の反応、或いはペプチド配列に含まれる何らかの他の官能基であって、それの修飾がベクターの結合特性に影響を及ぼさない官能基との反応によって達成できる。アルキン又はアジド基は、好ましくは安定なアミド結合の形成によって式（Ｉ）又は（ＩＩＩ）の化合物に導入される。かかるアミド結合は、例えば、ペプチドのアミン官能基と活性化された酸との反応或いは別法としてペプチドの酸官能基とアミン官能基との反応によって形成され、ペプチドの合成中又は合成後に導入される。細胞、ウィルス、細菌のようなベクターにアルキン又はアジド基を導入する方法は、Ｈ．Ｃ．Ｋｏｌｂ ａｎｄ Ｋ．Ｂ．Ｓｈａｒｐｌｅｓｓ，Ｄｒｕｇ Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ Ｔｏｄａｙ，Ｖｏｌ ８（２４），Ｄｅｃｅｍｂｅｒ ２００３及びその引用文献に見出すことができる。式（Ｉ）又は（ＩＩＩ）の化合物にアルキン又はアジド基を導入するために有用である好適な中間体には以下のものがある。
【００４０】
【化１０】
2009541286.tif 000012
本発明の方法で使用するための好ましい式（ＩＶ）の化合物には以下のものがある。
【００４１】
【化１１】
2009541286.tif 000013
Ｒ*が11Ｃ放射性標識を含む式（ＩＩ）の化合物は、例えば下記の図式に従って製造できる。
【００４２】
【化１２】
2009541286.tif 000014
式中、−ＮｕＨは、ヒドロキシル、チオール、アミン官能基のような求核性反応中心である。
【００４３】
Ｒ*が18Ｆである式（ＩＩ）の化合物は、例えば次式のように、求電子又は求核フッ素化反応で製造できる。
【００４４】
【化１３】
2009541286.tif 000015
式（ＩＩ）の化合物を製造するための好適な放射性フッ素化方法には、環状ポリエーテル（例えば、１８−クラウン−６又はＫｒｙｐｔｐｆｉｘ２．２．２）のような相間移動剤の存在下で、脱離基（例えば、アルキル又はアリールスルホネート（例えば、メシレート、トリフレート又はトシレート）、ニトロ或いはトリアルキルアンモニウム塩）を組み込んだ前駆体を18Ｆ-と反応させるものがある。この反応は、当技術分野で公知の標準的条件［例えば、Ｍ．Ｊ．Ｗｅｌｃｈ ａｎｄ Ｃ．Ｓ．Ｒｅｄｖａｎｌｙ，“Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ Ｒａｄｉｏｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ”，Ｗｉｌｅｙ社発行］下において（アセトニトリルのような非プロトン性溶剤を溶媒として用いた）溶液相中で実施するか、或いは国際公開第０３／００２１５７号に記載された方法に従って式（ＩＩ）の化合物の精製を容易にするために固体担体を用いて実施できる。
【００４５】
式（ＩＶ）の化合物は、式（ＩＩ）の化合物の合成に関して記載した方法に類似する方法により、適当なアセチレン前駆体から製造できる。
【００４６】
式（Ｖ）又は（ＶＩ）の標識ベクターは、インビボイメージングのため、所望の信号を得るのに十分な量で患者に投与すればよく、ＰＥＴ又はＳＰＥＣＴイメージングのための典型的な放射性核種投与量は体重７０ｋｇ当たり０．０１〜１００ｍＣｉ、好ましくは０．１〜５０ｍＣｉで通常は十分である。
【００４７】
したがって、式（Ｖ）又は（ＶＩ）の標識ベクターは、完全に当業者の技術常識に属するやり方で、生理学的に許容されるキャリヤー又は賦形剤を用いて投与用に製剤化すればよい。例えば、薬学的に許容される賦形剤を任意に添加した化合物を水性媒質に懸濁又は溶解し、次いで得られた溶液又は懸濁液を滅菌すればよい。
【００４８】
本明細書に記載した化学反応は、診断薬又はインビボイメージング剤としてのスクリーニングに適した放射性標識ベクターのライブラリの作製にも使用できる。即ち、上述した方法を用いて式（ＩＩ）又は（ＩＶ）の補欠分子族の混合物をそれぞれ式（Ｉ）又は（ＩＩＩ）の化合物の１種以上と反応させることで、放射性標識ベクターのライブラリを得ることができる。
【実施例】
【００４９】
以下の実施例によって本発明を例示するが、実施例では下記の略語を用いる。
ＨＰＬＣ：高速液体クロマトグラフィー
ＤＭＦ：Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＤＭＳＯ：ジメチルスルホキシド
ＥＳＩ−ＭＳ：エレクトロスプレーイオン化質量分析法
ｒｔ：室温
ＴＯＦ−ＥＳＩ−ＭＳ：飛行時間型エレクトロスプレーイオン化質量分析法
ＦＴ−ＩＲ：フーリエ変換赤外
ｐｐｍ：百万分率
ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸
ＡＣＮ：アセトニトリル
実施例１：銅ループ反応器を用いる［18Ｆ］−４−（２−フルオロエチル）−トリアゾール−１−イル−［ＫＧＦＧＫ］の製造
本実施例は図１を参照しながら説明する。加熱銅管は１．０ｍの長さ及び０．５６ｍｍの内径（２４６μｌの管容積）を有している。
【００５０】
【化１４】
2009541286.tif 000016
モデルペプチド１（２．４ｍｇ、４．０８μｍｏｌ）、リン酸ナトリウム緩衝液（０．２ｍｌ、ｐＨ６．０、２５０ｍＭ）及びＤＭＦ（０．０５ｍｌ）の溶液を、アセトニトリル（０．２ｍｌ）中の［18Ｆ］２−フルオロエチルアジド（０．６ｍＣｉ、２３ＭＢｑ）と混合する。ハミルトン気密ガラス注射器（１）に標識混合物をロードし、次いでこれを０．２ｍｌ／分の流量で８０℃の銅ループ（２）にポンプ送入する。電気加熱シリンダー（３）は、温度制御ユニット（５）を備えた加熱モジュール（４）によって最高２００℃まで加熱できる。反応混合物は、ベント（７）を備えたバイアル（６）内に捕集する。反応混合物をＨＰＬＣで分析すれば、３〜４分後に８５％の放射化学収率で２が生成されることがわかる。同一条件下で標識混合物を銅ループ反応器に再注入すれば、＞９９％の放射化学収率が得られる。
【００５１】
比較例１１では、ペプチド濃度がずっと高かった（９ｍＭに対して１７ｍＭ）にもかかわらず、８６％という低い標識収率が得られた。このように、本実施例は双極性１，３−付加環化反応を触媒するために銅ループ反応器装置を使用することの利益を実証している。
【００５２】
実施例２：銅ループ反応器を用いる化合物２０の製造
化合物１９（２．９ｍｇ、２．０４μｍｏｌ）を、ジメチルホルムアミド（２５μｌ）の添加物と共にリン酸ナトリウム緩衝液（１００μｌ、ｐＨ６．０、１００ｍＭ）に溶解した。アセトニトリル（１００μｌ）中の化合物１１（５１８μＣｉ／１９ＭＢｑ）を添加した後、混合物を０．１ｍｌ／分の流量で８０℃の予熱銅ループ反応器にポンプ送入した。次いで、系を水（０．５ｍｌ）でフラッシュした。第１及び第２の画分のＨＰＬＣ分析により、それぞれ９％及び３４％の標識効率が判明した。系からの放射能の総回収率は５３％であった。
【００５３】
実施例３：銅ループ反応器を用いる［18Ｆ］−４−（２−フルオロエチル）−トリアゾール−１−イル−［ＫＧＦＧＫ］の製造
モデルペプチド１（２．４ｍｇ、４．０８μｍｏｌ）、リン酸ナトリウム緩衝液（０．２ｍｌ、ｐＨ６．０、２５０ｍＭ）及びＤＭＦ（０．０５ｍｌ）の溶液を、アセトニトリル（０．２ｍｌ）中の［18Ｆ］２−フルオロエチルアジド（０．９ｍＣｉ、３４ＭＢｑ）と混合する。０．１ｍｌ／分の流量を用いる点を除き、実施例１に記載したようにして混合物を加熱銅ループにポンプ送入する。混合物の通過時間は３分であり、総反応時間は１０分である。標識ペプチド２を７７％の回収率（崩壊補正）で捕集する。放射化学純度は＞９９％である。水（１ｍｌ）、水／ＴＦＡ（１／１、２ｍｌ）、水（２ｍｌ）及びアセトニトリル（３ｍｌ）を用いて銅ループ反応器を洗浄し、窒素流（１分、５０ｍｌ／分）を用いて乾燥する。同じ初期放射能の［18Ｆ］２−フルオロエチルアジドを用いて実験を繰り返す。単離された２の放射化学収率は７１％（崩壊補正）であり、放射化学純度は９８％である。
【００５４】
参照化合物の製造
【００５５】
【化１５】
2009541286.tif 000017
比較例１―化合物（２）：１−アジド−２−フルオロエタンの製造
トルエン−４−スルホン酸２−フルオロエチルエステル（化合物（１））をＥ．Ｕ．Ｔ．ｖａｎ Ｖｅｌｚｅｎ ｅｔ ａｌ．，Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ（１９９５）９８９−９９７に記載されたようにして製造した。化合物（１）（１２８ｍｇ、０．５８６ｍｍｏｌ）及びアジ化ナトリウム（１１４ｍｇ、１．７５８ｍｍｏｌ）を無水ＤＭＦ（１０ｍｌ）と混合し、室温で４８時間撹拌した。反応混合物を濾過したが、生成物（２）は反応溶液から単離されなかった。
【００５６】
比較例２―化合物（３）：１−（２−フルオロエチル）−４−フェニル−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾールの製造
ＤＭＦ（１ｍｌ）中のフェニルアセチレン（１０５μｌ、０．９７７ｍｍｏｌ）を窒素下で水（０．３ｍｌ）中の硫酸銅（ＩＩ）五水塩（１２ｍｇ、０．０４８９ｍｍｏｌ）及びＬ−アスコルビン酸（１６ｍｇ、０．０９７７ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加した。ＤＭＦ（５ｍｌ）中の化合物（２）（１．１７２ｍｍｏｌ）を添加した後、室温で２１時間攪拌を続けた。反応混合物を水（５ｍｌ）で希釈し、粗生成物をジクロロメタン（３×５ｍｌ）で抽出し、重炭酸ナトリウム溶液（１０％、３×１０ｍｌ）及び塩水（１×５ｍｌ）で洗浄した。硫酸ナトリウム上で乾燥した後、溶媒を減圧下で除去し、粗標品をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン／酢酸エチル）を用いて精製した。
収量：３２ｍｇ（１７％）、白色結晶、ｍ．ｐ．８３〜８５℃。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ＝４．７０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ2）、４．７６（ｍ，１Ｈ，ＣＨ2）、４．８０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ2）、４．８９（ｍ，１Ｈ，ＣＨ2）、７．３５（ｔｔ，１．０Ｈｚ，７．５Ｈｚ，１Ｈ，ＨＡｒ）、７．４４（ｍ，２Ｈ，ＨＡｒ）、７．８４（ｍ，２Ｈ，ＨＡｒ）、７．８９（ｄ，１Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ−トリアゾール）ｐｐｍ。
ＧＣ−ＭＳ：ｍ／ｚ＝１９１。
ＴＯＦ−ＥＳＩ−ＭＳ：実測値 ｍ／ｚ＝１９２．０９３５[ＭＨ]+、Ｃ10Ｈ10Ｎ3Ｆの計算値[ＭＨ]+ ｍ／ｚ＝１９２．０９３２。
【００５７】
比較例３―化合物（４）：４−［１−（２−フルオロエチル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］−フェニルアミンの製造
ＤＭＦ（０．７ｍｌ）中の４−エチニルアニリン（４０ｍｇ、０．３４４ｍｍｏｌ）を窒素下で水（１．２ｍｌ）中の硫酸銅（ＩＩ）五水塩（１２９ｍｇ、０．５１６ｍｍｏｌ）及びＬ−アスコルビン酸（１８２ｍｇ、１．０３２ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加した。ＤＭＦ（２．４５ｍｌ）中の化合物（２）（０．２８７ｍｍｏｌ）を添加した後、室温で４時間攪拌を続けた。反応混合物を水酸化ナトリウム溶液（１Ｍ、５ｍｌ）で奪活した。生成物を酢酸エチル（３×５ｍｌ）で抽出し、水（５ｍｌ）及び塩水（２ｍｌ）で洗浄した。硫酸ナトリウム上で乾燥した後、溶媒を減圧下で除去し、粗標品をフラッシュクロマトグラフィー（シリカ、ヘキサン／酢酸エチル）を用いて精製した。収量：１５ｍｇ（２５％）、ベージュ色結晶、ｍ．ｐ．７９〜８２℃。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ＝４．７０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ2）、４．７２（ｍ，１Ｈ，ＣＨ2）、４．７７（ｍ，１Ｈ，ＣＨ2）、４．８８（ｍ，１Ｈ，ＣＨ2）、６．７４（ｍ，２Ｈ，ＨＡｒ）、７．６３（ｍ，２Ｈ，ＨＡｒ）、７．７４（ｄ，０．１Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ−トリアゾール）ｐｐｍ。
ＴＯＦ−ＥＳＩ−ＭＳ：実測値 ｍ／ｚ＝２０７．１０３０[ＭＨ]+、Ｃ10Ｈ11Ｎ4Ｆの計算値[ＭＨ]+ ｍ／ｚ＝２０７．１０４０。
【００５８】
比較例４―化合物（５）：１−（２−フルオロエチル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸ベンジルアミドの製造
Ｇ．Ｍ．Ｃｏｐｐｏｌａ ＆ Ｒ．Ｅ．Ｄａｍｏｎ，Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ，２３（１９９３）２００３−２０１０のプロトコルに従って製造したプロピン酸ベンジルアミド（５０ｍｇ、０．３１４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１ｍｌ）に溶解し、窒素下で水（０．４ｍｌ）中の硫酸銅（ＩＩ）五水塩（３．９ｍｇ、０．０１５７ｍｍｏｌ）及びＬ−アスコルビン酸（１１ｍｇ、０．０６２８ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加した。ＤＭＦ（３．２ｍｌ）中の化合物（２）（０．３７７ｍｍｏｌ）を添加した後、室温で４８時間攪拌を続けた。反応混合物を重炭酸ナトリウム（１０％、５ｍｌ）で希釈し、粗生成物をジクロロメタン（３×５ｍｌ）で抽出し、塩水（５ｍｌ）で洗浄した。硫酸ナトリウム上で乾燥した後、溶媒を減圧下で除去し、粗標品を酢酸エチル／ジエチルエーテルからの再結晶によって精製した。
収量：８ｍｇ（１０％）、白色結晶、ｍ．ｐ．１６５〜１６７℃。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ＝４．７０（ｍ，６Ｈ，ＣＨ2）、７．３４（ｍ，５Ｈ，ＨＡｒ）、７．４６（ｍ，１Ｈ，ＮＨ）、８．２０（ｓ，１Ｈ，ＣＨ−トリアゾール）ｐｐｍ。
ＴＯＦ−ＥＳＩ−ＭＳ：実測値 ｍ／ｚ＝２４９．１１４３[ＭＨ]+、Ｃ12Ｈ13Ｎ4ＯＦの計算値[ＭＨ]+ ｍ／ｚ＝２４９．１１４６。
【００５９】
比較例５―化合物（６）：Ｎ−ベンジル−３−［１−（２−フルオロエチル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］プロピオンアミドの製造
ペント−４−イン酸ベンジルアミド：この化合物は、Ｎ−スクシンイミジル中間体の単離以外は、Ｇ．Ｍ．Ｃｏｐｐｏｌａ及びＲ．Ｅ．Ｄａｍｏｎ（比較例４参照）によって記載された方法と同様な方法を用いて合成した。
収量：１００ｍｇ（５３％）、白色針状晶、ｍ．ｐ．５０〜５５℃。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ＝１．９８（ｍ，１Ｈ，アルキン−ＣＨ）、２．４４（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）、２．５６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）、４．４６（ｄ，２Ｈ，ＣＨ2Ｎ）、７．２９〜７．２５（ｍ，５Ｈ，ＨＡｒ）ｐｐｍ。
ＦＴ−ＩＲ（フィルム）：１６５１、１６２９ｃｍ-1。
ＴＯＦ−ＥＳＩ−ＭＳ：実測値 ｍ／ｚ＝１８８．１０７３[ＭＨ]+、Ｃ12Ｈ13ＮＯの計算値[ＭＨ]+ ｍ／ｚ＝１８８．１０７０。
【００６０】
Ｎ−ベンジル−３−［１−（２−フルオロエチル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］プロピオンアミド：メタノール（０．５ｍｌ）中のペント−４−イン酸ベンジルアミド（５０ｍｇ、０．２６７ｍｍｏｌ）、ＤＭＦ（２．６２ｍｌ）中の化合物（２）（０．３２０ｍｍｏｌ）、及びジイソプロピルアミン（０．２３３ｍｌ、１．３３５ｍｍｏｌ）を窒素下でヨウ化銅（Ｉ）（２５５ｍｇ、１．３３５ｍｍｏｌ）のメタノール（０．８ｍｌ）中撹拌懸濁液に添加した。室温で２時間攪拌を続けた。反応混合物を水（１０ｍｌ）中のリン酸水素ナトリウム（１ｇ）の溶液で奪活し、セライトで濾過した。粗生成物を酢酸エチル（３×２０ｍｌ）で抽出し、塩水（２０ｍｌ）で洗浄した。硫酸ナトリウム上で乾燥した後、溶媒を減圧下で除去し、粗標品をシリカ及び酢酸エチル／ヘキサンを用いたカラムクロマトグラフィーで精製した。
収量：１９ｍｇ（２６％）、白色結晶、ｍ．ｐ．１２７〜１３３℃。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ＝２．６６（ｔ，７．０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2）、３．０９（ｔ，７．０Ｈｚ，２Ｈ，ＣＨ2）、４．４０（ｄ，５．７Ｈｚ，２Ｈ，ベンジル−ＣＨ2）、４．５６（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）、４．６１（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）、４．７０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）、４．８０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）、６．０（ｓ，１Ｈ，ＮＨ）、７．０〜７．３（ｍ，５Ｈ，ＨＡｒ）、７．４４（ｓ，１Ｈ，ＣＨ−トリアゾール）ｐｐｍ。
ＴＯＦ−ＥＳＩ−ＭＳ：実測値 ｍ／ｚ＝２７７．１４７４[ＭＨ]+、Ｃ12Ｈ13Ｎ4ＯＦの計算値[ＭＨ]+ ｍ／ｚ＝２７７．１４５９。
【００６１】
比較例６―化合物（７）：４−［１−（２−フルオロエチル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］安息香酸の製造
ＤＭＦ（１．５ｍｌ）中の４−エチニル安息香酸ナトリウム（５０ｍｇ、０．２９７ｍｍｏｌ）を窒素下で水（０．２ｍｌ）中の硫酸銅（ＩＩ）五水塩（３．７ｍｇ、０．０１４９ｍｍｏｌ）及びＬ−アスコルビン酸（１０．５ｍｇ、０．０５９５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加した。ＤＭＦ（０．７６ｍｌ）中の化合物（２）（０．３５６ｍｍｏｌ）を添加した後、室温で１２時間攪拌を続けた。反応混合物をＨＣｌ（２０ｍｌ、１Ｍ）で希釈した。粗生成物を酢酸エチル（３×１０ｍｌ）で抽出し、塩水（１０ｍｌ）で洗浄した。硫酸ナトリウム上で乾燥した後、溶媒を減圧下で除去し、粗標品を酢酸エチル／ヘキサンから再結晶した。
収量：３７ｍｇ（５２％）、白色結晶、ｍ．ｐ．２３６〜２４０℃。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ＝４．７４（ｍ，１Ｈ，ＣＨ2）、４．８０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）、４．９０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ2）、８．７０（ｓ，１Ｈｚ，１Ｈ，ＣＨ−トリアゾール）ｐｐｍ。
ＴＯＦ−ＥＳＩ−ＭＳ：実測値 ｍ／ｚ＝２３６．０８３８[ＭＨ]+、Ｃ11Ｈ10Ｎ3Ｏ2Ｆの計算値[ＭＨ]+ ｍ／ｚ＝２３６．０８３０。
【００６２】
比較例７―化合物（８）：１−（２−フルオロエチル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−カルボン酸の製造
ＤＭＦ（０．５ｍｌ）中のプロピオル酸（６０μｌ、０．９７７ｍｍｏｌ）を窒素下で水（０．４ｍｌ）中の硫酸銅（ＩＩ）五水塩（１２ｍｇ、０．０４８９ｍｍｏｌ）及びＬ−アスコルビン酸（３４ｍｇ、０．１３５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液に添加した。ＤＭＦ（２．５ｍｌ）中の化合物（２）（１．１７２ｍｍｏｌ）を添加した後、室温で４時間攪拌を続けた。反応混合物をＨＣｌ（２０ｍｌ、１Ｍ）で奪活し、粗生成物を酢酸エチル（３×２０ｍｌ）で抽出した。塩水（５ｍｌ）で洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥した後、溶媒を減圧下で除去し、生成物を酢酸エチル／ヘキサンからの再結晶によって精製した。
収量：１６ｍｇ（１０％）、白色結晶、ｍ．ｐ．１６０〜１６５℃。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−ｄ6）：δ＝４．７４（ｍ，１Ｈ，ＣＨ2）、４．８０（ｍ，２Ｈ，ＣＨ2）、４．９０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ2）、８．７１（ｓ，１Ｈ，ＣＨ−トリアゾール）ｐｐｍ。
ＴＯＦ−ＥＳＩ−ＭＳ：実測値 ｍ／ｚ＝１６０．０５１８[ＭＨ]+、Ｃ5Ｈ6Ｎ3Ｏ2Ｆの計算値[ＭＨ]+ ｍ／ｚ＝１６０．０５１７。
【００６３】
比較例８―化合物（９）：２−アセチルアミノ−３−［１−（２−フルオロエチル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール−４−イル］プロピオン酸エチルエステルの製造
メタノール（１ｍｌ）中の２−アセチルアミノペント−４−イン酸エチルエステル（２００ｍｇ、１．０９ｍｍｏｌ）を窒素下で銅粉（２００ｍｇ、４０メッシュ）に添加した後、ＤＭＦ（３ｍｌ）中の化合物（２）（１．０９ｍｍｏｌ）の溶液を添加した。混合物を９０分間撹拌した後、８０℃で３時間加熱した。化合物（９）を逆相フラッシュクロマトグラフィー（アセトニトリル／水）で単離した。
収量：１４５ｍｇ（４９％）、油、４℃での保存で結晶、ｍ．ｐ．５５〜６０℃。
1Ｈ−ＮＭＲ（ＣＤＣｌ3）：δ＝１．１３（ｔ，３Ｈ，ＣＨ2ＣＨ3）、１．８２（ｓ，３Ｈ，ＣＨ3）、２．９７（ｄｄ，2Ｊ＝１４．９Ｈｚ，3Ｊ＝８．５Ｈｚ，１Ｈ，プロピオン酸−ＣＨ2）、３．０７（ｄｄ，2Ｊ＝１４．９Ｈｚ，3Ｊ＝６．０Ｈｚ，１Ｈ，プロピオン酸−ＣＨ2）、４．０５（ｍ，２Ｈ，ＯＣＨ2ＣＨ3）、４．４７（ｍ，１Ｈ，ＣＨ）、４．４６（ｍ，１Ｈ，ＣＨ2）、４．６４（ｍ，１Ｈ，ＣＨ2）、４．７０（ｍ，１Ｈ，ＣＨ2）、４．８１（ｍ，１Ｈ，ＣＨ2）、７．８９（ｓ，１Ｈ，トリアゾール−ＣＨ）、８．３１（ｄ，１Ｈ，ＮＨ）ｐｐｍ。
ＴＯＦ−ＥＳＩ−ＭＳ：実測値 ｍ／ｚ＝２７３．１３７２[ＭＨ]+、Ｃ11Ｈ17Ｎ4Ｏ3Ｆの計算値[ＭＨ]+ ｍ／ｚ＝２７３．１３５７。
【００６４】
放射化学
【００６５】
【化１６】
2009541286.tif 000018
比較例９―化合物（１１）：［18Ｆ］１−アジド−２−フルオロエタンの製造
18Ｆフッ化物は、濃縮［18Ｏ］Ｈ2Ｏターゲットの１９ＭｅＶプロトン照射による18Ｏ（ｐ，ｎ）18Ｆ核反応を用いてサイクロトロンで生成させた。照射後、Ｋｒｙｐｔｏｆｉｘ（登録商標）（５ｍｇ）、炭酸カリウム（１ｍｇ）及びアセトニトリル（１ｍｌ）の混合物を18Ｆ水（１ｍｌ）に添加した。窒素流（１００ｍｌ／分）下において８０℃で加熱して溶媒を除去した。その後、アセトニトリル（０．５ｍｌ）を添加し、加熱及び窒素流下で蒸発させた。この操作を２回繰り返した。室温に冷却した後、無水アセトニトリル（０．２ｍｌ）中の化合物（１０）の溶液［１．５μｌ、Ｚ．Ｐ．Ｄｅｍｋｏ ａｎｄ Ｋ．Ｂ．Ｓｈａｒｐｌｅｓｓ，Ｏｒｇ．Ｌｅｔｔ．３（２００１）４０９１に記載の方法に従って調製］を添加した。反応混合物を８０℃で３０分間撹拌した。化合物（１１）を、蒸留（効率７６±８％（ｎ＝７））により、４０±１４％（ｎ＝７）の崩壊補正放射化学収率で単離した。
【００６６】
比較例１０―化合物（１２）〜（１６）：［18Ｆ］１−（２−フルオロエチル）−１Ｈ−［１，２，３］トリアゾール類の製造
【００６７】
【表１】
2009541286.tif 000019
ＤＭＦ（０．１ｍｌ）中のアルキン試薬（０．０１５ｍｍｏｌ）の溶液を窒素下で硫酸銅（ＩＩ）（５当量）とＬ−アスコルビン酸（２０当量）との混合物に添加した。アセトニトリル（０．２ｍｌ）中の化合物（１１）の溶液を添加した。８０℃で３０分間攪拌した後、反応混合物をＨＰＬＣで分析した。
【００６８】
比較例１１―化合物（１８）：［１８Ｆ］（Ｓ）−６−アミノ−２−（２−｛（Ｓ）−２−［２−（（Ｓ）−６−アミノ−２−｛［４−（２−フルオロエチル）−［１，２，３］トリアゾール−１−カルボニル］アミノ｝ヘキサノイルアミノ）アセチルアミノ］−３−フェニルプロピオニルアミノ｝アセチルアミノ）ヘキサン酸の製造
【００６９】
【化１７】
2009541286.tif 000020
化合物（１７）（１ｍｇ、１．７μｍｏｌ）をリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０、０．２５Ｍ、０．０５ｍｌ）に溶解した。アセトニトリル（０．０５ｍｌ）中の化合物（１１）（１７５μＣｉ、６．５ＭＢｑ）を添加し、次いで銅顆粒（４００ｍｇ、１０〜４０メッシュ）を添加した。混合物を８０℃で５分間加熱した。ＨＰＬＣ分析の結果、放射性標識ペプチド（１８）は８６％であった。
【００７０】
比較例１２―化合物（２０）の製造
【００７１】
【化１８】
2009541286.tif 000021
（ｉ）化合物１９：Ｃｙｓ２−６；ｃ［ＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ（ＤＬ−Ｐｒａ−Ａｃ）−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ］−ＣＣＸ６−ＮＨ2の製造
Ａｃ−ＤＬ−Ｐｒａ−ＯＨ（３１ｍｇ）、（７−アザベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリピロリジノホスホニウムヘキサフルオロホスフェート（ＰｙＡＯＰ）（１０４ｍｇ）及びＮ−メチルモルホリン（ＮＭＭ）（８８μＬ）をジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）（３ｍＬ）に溶解し、混合物を５分撹拌した後、国際公開第２００５／００３１６６号に記載されたようにして製造してＤＭＦ（４ｍｌ）に溶解したＣｌＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−ＰＥＧ−ＮＨ2（１２６ｍｇ）を添加した。反応混合物を４５分間撹拌した。追加のＣｌＣＨ2ＣＯ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ−Ｃｙｓ（ｔＢｕ）−Ｐｈｅ−Ｃｙｓ−ＰＥＧ−ＮＨ2（１３２ｍｇ）及びＮＭＭ（４４μＬ）を添加し、４５分間攪拌を続けた。次いでＤＭＦを真空中で蒸発させ、残留物（５ｍｌ）を１０％アセトニトリル（ＡＣＮ）／水（１００ｍｌ）で希釈し、分取ＨＰＬＣを用いて生成物を精製した。
【００７２】
精製及び特性決定
分取ＨＰＬＣ（勾配：Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡの場合に６０分で１０〜４０％Ｂ、流量：５０ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ５μ Ｃ１８（２）２５０×５０ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：３１．３分）による希釈残留物の精製で、１７０ｍｇの純粋ＡＨ−１１２１４５を得た。
【００７３】
純粋生成物を分析ＨＰＬＣ（勾配：Ａ＝Ｈ2Ｏ／０．１％ＴＦＡ及びＢ＝ＡＣＮ／０．１％ＴＦＡの場合に１０分で１０〜４０％Ｂ、流量：０．３ｍＬ／分、カラム：Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ Ｌｕｎａ ３μ Ｃ１８（２）５０×２ｍｍ、検出：ＵＶ２１４ｎｍ、生成物保持時間：６．３２分）で分析した。さらにエレクトロスプレー質量分析法を用いて生成物を特性決定した（ＭＨ+計算値：１３９５．５、ＭＨ+実測値：１３９５．７）。
【００７４】
（ｉｉ）化合物２０の製造
化合物（１９）（０．５ｍｇ、０．３５μｍｏｌ）をリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ６．０、５０ｍＭ）に溶解し、化合物（１１）の溶液（２５μｌ、７２８μＣｉ／２５ＭＢｑ）及び銅粉（２００ｍｇ、４０メッシュ）と混合した。７０℃で１５分間加熱した後、混合物を放射性ＨＰＬＣで分析する。
【００７５】
コンジュゲート生成物（２０）は、半分取ＨＰＬＣ（カラム：Ｌｕｎａ Ｃ１８（２）、１００×１０ｍｍ、流量：２．０ｍｌ／分、溶媒Ａ：水（０．０８５％リン酸ｖ／ｖ）、溶媒Ｂ：水（３０％エタノールｖ／ｖ）、勾配：１５分で５０％Ｂから１００％Ｂまで）を用いて単離した。標識ペプチド（２０）は、１０％の崩壊補正放射化学収率及び＞９９％の放射化学純度で得られた。放射性生成物ピーク（ｋ’＝２．０３）の同一性は、化合物（２０）の標準試料との同時注入によって確認した。
【００７６】
比較例１３―化合物（２０）を製造するための反応パラメーターの最適化
一般的手順：緩衝液（５０μｌ、緩衝液Ａ：リン酸ナトリウム、ｐＨ６．０、５０ｍＭ；緩衝液Ｂ：炭酸ナトリウム、ｐＨ９．３、５０ｍＭ）中の化合物（１９）（０．５ｍｇ、０．３５μｍｏｌ）の溶液に、アセトニトリル（１００μｌ）中の化合物（１１）（０．１ｍＣｉ、３．７ＭＢｑ）を添加した後、銅触媒（触媒１：銅顆粒１０＋４０メッシュ、触媒２：銅粉−４０メッシュ、触媒３：銅粉、樹枝状、３μｍ）を添加する。混合物を８０℃で１５分間インキュベートした後、ＨＰＬＣで分析した。
【００７７】
【表２】
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本明細書及び特許請求の範囲に記載された発明の技術的範囲は本明細書に開示した特定の実施形態に限定されるべきでない。これらの実施形態は本発明のいくつかの態様の例示にすぎないからである。いかなる同等の実施形態も本発明の技術的範囲に属すると想定される。実際、本明細書の以上の記載から当業者には本明細書に例示し記載した変更例以外の変更例も明らかであろう。かかる変更例も特許請求の範囲に記載された技術的範囲に属するものである。
【図面の簡単な説明】
【００７８】
【図１】本発明に係る方法を実施するための装置の略図である。
【図２】本発明に係る方法を実施するために適した本発明に係るミクロ加工装置の分解図である。
【符号の説明】
【００７９】
１  注射器
２  銅ループ
３  電気加熱シリンダー
４  加熱モジュール
５  温度制御ユニット
６  バイアル
７  ベント
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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