(57)【要約】生分解性ポリマーをさらに含むミクロ粒子を含有する免疫原性組成物を本明細書に記載する。ミクロ粒子組成物はまた、カチオン性多糖、および抗原、免疫アジュバントおよびそれらの組合せから選択される免疫学的種を含む。また、そのような組成物を作製する方法およびそのような組成物を投与する方法を記載する。ミクロ粒子からの免疫学的種の放出速度を調節する方法も説明する。これらの方法は、ミクロ粒子内のカチオン性多糖対生分解性ポリマーの比率を変化させることを含む。【特許請求の範囲】
【請求項１】
生分解性ポリマーを含有するポリマーミクロ粒子を含み、カチオン性多糖、ならびに抗原、免疫アジュバントおよびそれらの組合せから選択される免疫学的種をさらに含む、免疫原性ミクロ粒子組成物。
【請求項２】
前記カチオン性多糖がアミン置換カチオン性多糖を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３】
前記カチオン性多糖がＤ−グルコサミンモノマー単位を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項４】
前記カチオン性多糖がＤ−グルコサミンおよびＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンモノマー単位の組合せを含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項５】
前記カチオン性多糖が、無作為に分布するβ−（１−４）連結Ｄ−グルコサミンおよびＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンモノマー単位を含むポリマー鎖を含有する、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項６】
前記カチオン性多糖がキトサンを含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項７】
前記カチオン性多糖が、１００，０００ｇ／ｍｏｌ〜１，２５０，０００ｇ／ｍｏｌの範囲の分子量を有する、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項８】
前記カチオン性多糖が。６．０〜７．０の範囲のｐＫａを有する、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項９】
前記免疫学的種が前記ミクロ粒子の少なくとも一部に吸着される、請求項１に記載の免疫原性ミクロ粒子組成物。
【請求項１０】
前記組成物が凍結乾燥組成物である、請求項９に記載の免疫原性組成物。
【請求項１１】
請求項１０に記載の凍結乾燥組成物１０ｍｇを水１ｍｌに再構成したとき、生じる懸濁液が、吸着された免疫アジュバントの総量の１０％以上が再構成後１５日間を超えて前記ミクロ粒子から放出される放出プロフィールを示す、請求項１０に記載の免疫原性組成物。
【請求項１２】
前記カチオン性多糖対前記生分解性ポリマーの重量比が０．０００５：１から０．０５：１までの範囲である、請求項９に記載の免疫原性組成物。
【請求項１３】
前記カチオン性多糖対前記生分解性ポリマーの重量比が０．００２５：１から０．０１：１までの範囲である、請求項９に記載の免疫原性組成物。
【請求項１４】
前記免疫学的種対前記生分解性ポリマーの重量比が０．０００５：１から０．０５：１までの範囲である、請求項９に記載の免疫原性組成物。
【請求項１５】
前記免疫学的種対前記生分解性ポリマーの重量比が０．００１：１から０．０２５：１までの範囲である、請求項９に記載の免疫原性組成物。
【請求項１６】
前記免疫学的種が、前記ミクロ粒子の少なくとも一部の中に封入されている、請求項１に記載の免疫原性ミクロ粒子組成物。
【請求項１７】
前記免疫学的種と前記カチオン性多糖を含む複合体が、前記ミクロ粒子の少なくとも一部の中に封入されている、請求項１６に記載の免疫原性ミクロ粒子組成物。
【請求項１８】
前記カチオン性多糖対前記免疫学的種の重量比が０．０００１：１から０．０１：１までの範囲である、請求項１７に記載の免疫原性組成物。
【請求項１９】
前記カチオン性多糖対前記生分解性ポリマーの重量比が０．０００００５：１から０．００５：１までの範囲である、請求項１７に記載の免疫原性組成物。
【請求項２０】
前記免疫学的種が、正に荷電した免疫アジュバントである、請求項１７に記載の免疫原性組成物。
【請求項２１】
前記免疫学的種がＣｐＧオリゴヌクレオチドである、請求項１７に記載の免疫原性組成物。
【請求項２２】
前記組成物が合成生分解性ポリマーを含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項２３】
前記組成物が、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリシアノアクリレート、チロシン由来ポリカーボネート、チロシン由来ポリエステル−アミド、およびそれらの組合せから選択される生分解性ポリマーを含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項２４】
前記生分解性ポリマーがポリ（α−ヒドロキシ酸）を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項２５】
前記生分解性ポリマーが、ポリ（ラクチド）、ポリ（グリコリド）、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）およびそれらの組合せから選択されるポリ（α−ヒドロキシ酸）を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項２６】
前記生分解性ポリマーが、４０：６０から６０：４０までの範囲のラクチド：グリコリドモル比を有するポリ（ラクチド−コ−グリコリド）を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項２７】
前記組成物が少なくとも９０重量％の生分解性ポリマーを含む、請求項２６に記載の免疫原性組成物。
【請求項２８】
前記ミクロ粒子のＤ（ｖ，０．５）粒径が０．１−５０ミクロンの範囲である、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項２９】
前記ミクロ粒子のＤ（ｖ，０．５）粒径が０．５−１０ミクロンの範囲である、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３０】
前記免疫学的種が抗原を含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３１】
前記抗原がポリペプチド含有抗原である、請求項３０に記載の免疫原性組成物。
【請求項３２】
前記抗原がポリヌクレオチド含有抗原である、請求項３０に記載の免疫原性組成物。
【請求項３３】
前記抗原が糖含有抗原である、請求項３０に記載の免疫原性組成物。
【請求項３４】
前記抗原が腫瘍細胞に由来する、請求項３０に記載の免疫原性組成物。
【請求項３５】
前記抗原が病原体に由来する、請求項３０に記載の免疫原性組成物。
【請求項３６】
前記病原体が、ウイルス、細菌、真菌および寄生生物から選択される、請求項３５に記載の免疫原性組成物。
【請求項３７】
病原体が、ＨＩＶ、Ｂ型肝炎ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、Ｂ型髄膜炎、インフルエンザ菌Ｂ型、百日咳、ジフテリア、破傷風およびインフルエンザＡ型ウイルスから選択される、請求項３５に記載の免疫原性組成物。
【請求項３８】
前記免疫学的種が免疫アジュバントを含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項３９】
前記免疫学的種が、ＣｐＧオリゴヌクレオチドおよびモノホスホリル脂質Ａ類似体から選択される免疫アジュバントを含む、請求項１に記載の免疫原性組成物。
【請求項４０】
（ａ）水、有機溶媒、生分解性ポリマーおよびカチオン性多糖を含む乳剤を提供すること；（ｂ）ミクロ粒子を形成するために該乳剤から該有機溶媒を除去すること；および（ｃ）該免疫学的種を該ミクロ粒子に吸着させることを含む、請求項９に記載のミクロ粒子組成物を生産する方法。
【請求項４１】
前記ミクロ粒子が、前記抗原の吸着前に、５−６．５の範囲のｐＨで２５−１００ｍＶの範囲のζ電位を有する、請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
前記乳剤が水中油中水型乳剤である、請求項４０に記載の方法。
【請求項４３】
前記水中油中水型乳剤が、
（ａ）前記生分解性ポリマーと前記有機溶媒を含む有機相を、水を含む第一水相で乳化し、それによって油中水型乳剤を形成する工程；および
（ｂ）該水中油中水型乳剤を形成するために、前記カチオン性多糖と水を含む第二水相を、工程（ａ）で形成された乳剤で乳化する工程
を含むプロセスによって形成される、請求項４２に記載の方法。
【請求項４４】
前記第二水相のｐＨが４．５−６．０の範囲である、請求項４３に記載の方法。
【請求項４５】
（ａ）生分解性ポリマーと有機溶媒を含む有機相を、水、カチオン性多糖および免疫学的種を含む第一水相で乳化し、それによって油中水型乳剤を形成すること；および
（ｂ）水中油中水型乳剤を形成するために、界面活性剤と水を含む第二水相を、工程（ａ）で形成された乳剤で乳化すること；および
（ｃ）該水中油中水型乳剤から該有機溶媒を除去すること
を含む、請求項１６に記載のミクロ粒子組成物を生産する方法。
【請求項４６】
前記界面活性剤がアニオン性界面活性剤である、請求項４５に記載の方法。
【請求項４７】
生分解性ポリマーとカチオン性多糖を含み、その少なくとも一部に抗原、免疫アジュバントおよびそれらの組合せから選択される免疫学的種が吸着されているミクロ粒子からの免疫学的種の放出速度を調節する方法であって、該ミクロ粒子内の該生分解性ポリマーに対する該カチオン性多糖の比率を変化させることを含む方法。
【請求項４８】
前記ミクロ粒子内の前記生分解性ポリマーに対する前記カチオン性多糖の比率を上昇させることによって前記放出速度が低下する、請求項４７に記載の方法。
【請求項４９】
請求項１に記載の免疫原性組成物を宿主脊椎動物に投与することを含む、宿主脊椎動物において免疫応答を刺激する方法。
【請求項５０】
前記宿主脊椎動物がヒトである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５１】
請求項１に記載の組成物を宿主脊椎動物に投与することを含む、宿主脊椎動物を病原体または腫瘍に対して免疫する方法。
【請求項５２】
前記宿主脊椎動物がヒトである、請求項５１に記載の方法。
【請求項５３】
請求項１に記載の免疫原性組成物を含むワクチン。
【請求項５４】
請求項１０に記載の凍結乾燥組成物を含む第一容器を含むキット。
【請求項５５】
前記第一容器内の凍結乾燥組成物を再懸濁するために有用な滅菌液体媒体を含む第二容器をさらに含む、請求項５４に記載のキット。
【請求項５６】
注射器をさらに含む、請求項５４に記載のキット。
【請求項５７】
前記抗原と前記免疫アジュバントを含み、該抗原が前記ミクロ粒子の少なくとも一部に吸着されており、および該免疫アジュバントが該ミクロ粒子の少なくとも一部の中に封入されている、請求項１に記載の免疫原性ミクロ粒子組成物。
【請求項５８】
前記抗原が同じミクロ粒子に吸着されており、および前記免疫アジュバントが同じミクロ粒子内に封入されている、請求項５７に記載の免疫原性ミクロ粒子組成物。
【請求項５９】
前記抗原が異なるミクロ粒子に吸着されており、および前記免疫アジュバントが異なるミクロ粒子内に封入されている、請求項５７に記載の免疫原性ミクロ粒子組成物。
【請求項６０】
前記免疫アジュバントと前記カチオン性多糖を含む複合体が、前記ミクロ粒子の少なくとも一部の中に封入されている、請求項５７に記載の免疫原性ミクロ粒子組成物。
【請求項６１】
前記抗原がポリペプチド含有抗原であり、および前記ポリマーミクロ粒子の少なくとも一部がアニオン性界面活性剤をさらに含む、請求項６０に記載の免疫原性ミクロ粒子組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（関連出願の陳述）
この出願は、2006年2月24日に出願された米国仮特許出願第６０/776,757号（これは、その全体が参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
微粒子担体は、適切な免疫応答を惹起することを目的として吸着または封入された抗原と共に使用されてきた。そのような担体は、選択された抗原の多数のコピーを免疫系に提示し、局所リンパ節における抗原の捕捉および保持を促進すると考えられている。粒子はマクロファージによって貪食され、サイトカイン放出を通して抗原提示を増強し得る。
【０００３】
例えば、所有者が共通の特許文献１および同時係属中の特許文献２は、細胞媒介性免疫応答を含む、免疫応答を刺激するための抗原吸着および抗原封入ミクロ粒子の使用、ならびにミクロ粒子を作製する方法を述べている。ミクロ粒子を形成するために使用されるポリマーは、ポリ（ラクチド）およびポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）を含む。
【０００４】
所有者が共通の特許文献３および特許文献４および特許文献５は、ポリヌクレオチドおよびポリペプチド抗原を含む、吸着された高分子を有するミクロ粒子を作製する方法を開示する。ミクロ粒子は、例えばポリ（α−ヒドロキシ酸）（例えばＰＬＧ、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物等）などのポリマーを含み、例えばカチオン性、アニオン性または非イオン性界面活性剤を使用して形成される。ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を含有するＰＬＧミクロ粒子などの、アニオン性界面活性剤を含むミクロ粒子は、ポリペプチドなどの正に荷電した高分子の使用のために記述されている。ＣＴＡＢ（セトリミドまたは臭化セチルトリメチルアンモニウムとしても知られる）を有するＰＬＧミクロ粒子などの、カチオン性界面活性剤を含むミクロ粒子は、ＤＮＡなどの負に荷電した高分子の使用に関して記述されている。細胞媒介性免疫応答を含む、免疫応答を刺激するためのそのようなミクロ粒子の使用も開示されている。
【特許文献１】国際公開第９８／３３４８７号パンフレット
【特許文献２】米国特許出願公開第２００３／００４９２９８号明細書
【特許文献３】国際公開第００／０６１２３号パンフレット
【特許文献４】国際公開第０１／３６５９９号パンフレット
【特許文献５】米国特許第６，８８４，４３５号明細書
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００５】
（要旨）
１つの態様では、本発明は、生分解性ポリマーをさらに含むミクロ粒子を含有する免疫原性組成物を提供する。ミクロ粒子組成物はまた、カチオン性多糖および抗原、免疫アジュバントおよびそれらの組合せから選択される免疫学的種を含む。
【０００６】
一部の実施形態では、免疫学的種はミクロ粒子に吸着される。これらの実施形態では、カチオン性多糖対生分解性ポリマーの重量比は、例えば、特に０．０００５：１−０．００１：１−０．００２５：１−０．００５：１−０．０１：１−０．０２５：１−０．０５：１の範囲で変化し得る。免疫学的種対生分解性ポリマーの重量比も、例えば、特に０．０００５：１−０．００１：１−０．００２５：１−０．００５：１−０．０１：１−０．０２５：１−０．０５：１の範囲で変化し得る。
【０００７】
一部の実施形態では、免疫学的種はミクロ粒子内に封入されている。これらの実施形態では、カチオン性多糖対生分解性ポリマーの重量比は、例えば、特に０．００００５：１−０．０００１：１−０．０００２５：１−０．０００５：１−０．００２５：１−０．００５：１の範囲で変化し得る。カチオン性多糖対前記免疫学的種の重量比も、例えば、特に０．０００１：１−０．０００２５：１−０．０００５：１−０．００１：１−０．００２５：１−０．００５：１−０．０１：１の範囲で変化し得る。
【０００８】
ミクロ粒子の平均粒径は、例えばＤ（ｖ，０．５）粒径で０．１−５０ミクロン、より典型的には０．５−１０ミクロンの範囲で広く変化し得る。
【０００９】
本発明の組成物が２つの抗原、２つの免疫アジュバント、または１つの抗原と１つの免疫アジュバントを含む場合、それらは、例えば（ａ）両方が同じ集団のミクロ粒子に吸着されている、（ｂ）各々が別々の集団のミクロ粒子に吸着されている、（ｃ）１つがミクロ粒子に吸着または封入されており、他方が溶液中に存在する、（ｄ）１つがミクロ粒子に吸着されており、他方が同じ集団のミクロ粒子内に封入されている、（ｅ）１つが第一集団のミクロ粒子に吸着されており、他方が第二集団のミクロ粒子内に封入されている、（ｆ）両方が同じ集団のミクロ粒子内に封入されている、（ｇ）各々が別々の集団のミクロ粒子内に封入されている、等であり得る。
【００１０】
ある実施形態では、カチオン性多糖は、アミン置換カチオン性多糖、例えば、特にＤ−グルコサミンモノマー単位を含有するものを含む。カチオン性多糖の具体例は、特に、無作為に分布するβ−（１−４）連結Ｄ−グルコサミンおよびＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンモノマー単位を含有するポリマー鎖を含むもの、例えばキトサンを包含する。
【００１１】
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は、例えば、特にポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトン、ポリジオキサノンおよびポリバレロラクトンを含むポリラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリシアノアクリレート、チロシン由来のポリカーボネートまたはポリエステル−アミド、およびそれらの組合せから選択される、合成生分解性ポリマーを含む。ある実施形態では、ミクロ粒子は、中でも特にポリ（ラクチド）（「ＰＬＡ」）などのポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（「ＰＬＧ」）などのラクチドとグリコリドのコポリマー、およびＤ，Ｌ−ラクチドとカプロラクトンのコポリマーから形成される。ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）ポリマーは、例えば２０：８０−２５：７５−４０：６０−４５：５５−５５：４５−６０：４０−７５：２５−８０：２０の範囲のラクチド／グリコリドモル比を有し、および例えば、特に５，０００−１０，０００−２０，０００−４０，０００−５０，０００−７０，０００−１００，０００−２００，０００ダルトンの範囲の分子量を有するものを含む。
【００１２】
抗原は、例えばポリペプチド含有抗原、ポリヌクレオチド含有抗原、および糖含有抗原から選択され得る。抗原は、例えば腫瘍細胞およびウイルス、細菌、真菌および寄生生物などの病原体に由来し得る。
【００１３】
免疫アジュバントは、例えば、特にＣｐＧオリゴヌクレオチドなどの負に荷電した免疫アジュバントならびにＭＰＬ類似体から選択され得る。
【００１４】
ある実施形態では、本発明の免疫原性組成物は凍結乾燥組成物である。そのような凍結乾燥組成物は、例えば９０重量％またはそれ以上の生分解性ポリマーを含み得る。
【００１５】
他の態様では、本発明は、前記のようなミクロ粒子組成物を生産する方法を提供する。カチオン性多糖は、所望生成物に依存して、生産工程で異なる役割を果たし得る。
【００１６】
例えば一部の実施形態では、カチオン性多糖は、免疫学的種がミクロ粒子内に容易に封入されることを可能にする、免疫学的種のための複合化剤として使用され得る。それ故これらの実施形態では、キトサンは捕捉剤として働く。これらの実施形態は、以下の工程：（ａ）生分解性ポリマーと有機溶媒を含む有機相を、水およびカチオン性多糖と免疫学的種の複合体を含む第一水相で乳化し、それによって油中水型乳剤を形成すること；（ｂ）水中油中水型乳剤を形成するために、界面活性剤と水を含む第二水相を、工程（ａ）で形成された乳剤で乳化すること；および（ｃ）水中油中水型乳剤から有機溶媒を除去し、それによって免疫学的種とカチオン性多糖が封入されたミクロ粒子の懸濁液を提供すること、を含む、ミクロ粒子組成物を生産する方法を含む。
【００１７】
他の実施形態では、カチオン性多糖は、最終的に固体ミクロ粒子に変換される（溶媒蒸発後）分散油相を安定化するための、乳剤に基づく処理の間に使用し得る。これらの実施形態は、以下の工程：（ａ）水、有機溶媒、生分解性ポリマーおよびカチオン性多糖を含む乳剤を提供すること；（ｂ）ミクロ粒子を形成するために乳剤から有機溶媒を除去すること；および（ｃ）免疫学的種をミクロ粒子に吸着させること、を含む、ミクロ粒子組成物を生産する方法を含む。一部の場合には、乳剤は、（ａ）生分解性ポリマーと有機溶媒を含む有機相を、水を含む第一水相で乳化し、それによって油中水型乳剤を形成すること；および（ｂ）水中油中水型乳剤を形成するために、カチオン性多糖と水を含む第二水相を、工程（ａ）で形成された乳剤で乳化すること、を含む工程によって形成される、水中油中水型乳剤であり得る。
【００１８】
これらの実施形態では、実質的な量のカチオン性多糖がミクロ粒子表面に位置すると考えられる。これは、例えば生じるミクロ粒子が何らかの免疫学的種の吸着前に一般に正のζ電位、例えば５．０−６．５の範囲のｐＨで＋２５から＋１００ｍＶの範囲のζ電位を有するという事実によって実証される。さらに、ミクロ粒子の正電荷は、水性媒質に懸濁したとき懸濁液中にとどまるミクロ粒子の能力を改善すると考えられる。さらい、ミクロ粒子の正電荷は、負に荷電した種を吸着させるミクロ粒子の能力を改善すると考えられる。それ故、これらの実施形態では、キトサンは結合剤として働く。
【００１９】
本発明のさらなる他の態様は、ミクロ粒子内の生分解性ポリマーに対するカチオン性多糖界面活性剤の比率を変化させることを含む、前記のようなミクロ粒子組成物からの免疫学的種の放出速度を調節する方法を対象とする。例えば、発明人は、ミクロ粒子内の生分解性ポリマーに対するカチオン性多糖界面活性剤の比率を上昇させることによってある免疫学的種の放出速度が低下することを認めた。
【００２０】
本発明の他の実施形態は、ここで述べる免疫原性組成物のいずれかを宿主動物に投与することを含む、宿主動物に免疫学的種を送達する（例えば免疫のため）方法を対象とする。宿主動物は、好ましくは脊椎動物、より好ましくは哺乳動物、さらに一層好ましくはヒトである。
【００２１】
本発明の免疫原性組成物の送達は、直接注射（例えば皮下、静脈内、筋肉内または腹腔内等）を含む、何らかの公知の方法によって実施され得る。
【００２２】
さらなる態様では、本発明は、本発明の組成物を含むキットを提供する。
【００２３】
本発明の利点は、ＣＴＡＢなどの他の一般的なカチオン種、キトサン名とのカチオン性多糖に比べて、中でも特に、以下の１またはそれ以上の潜在的可能性を提供することである：（ａ）より低い毒性、（ｂ）特にポリマーの長さに沿って電荷を有するカチオン性多糖を使用する場合、より高い電荷密度、（ｃ）複合化剤として使用する場合、改善された封入、および（ｄ）粒子安定剤として使用する場合、（ｉ）ミクロ粒子表面とカチオン種のより良好な結合、（ｉｉ）免疫学的種の高い吸着、および（ｉｉｉ）吸着された免疫学的種の持続放出。本発明のこれらや他の実施形態、態様および利点は、ここでの開示を考慮して当業者にはより容易に明白となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
（発明の詳細な説明）
本発明の実施は、異なる指示がない限り、当分野の技術範囲内の、化学、高分子化学、生化学、分子生物学、免疫学および薬理学の従来の方法を用いる。そのような手法は文献において詳細に説明されている。例えばＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版（Ｅａｓｔｏｎ，Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ：Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，１９９０）；Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．ＣｏｌｏｗｉｃｋとＮ．Ｋａｐｌａｎ編集、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．）；Ｗｅｉｒ，Ｄ．Ｍ．，Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｓ．Ｉ−ＩＶ，第５版（Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｐｕｂｌｉｓｈｅｒｓ，１９９６）；Ｓａｍｂｒｏｏｋ，Ｊ．ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，第３版（Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ，２００１）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら、Ｓｈｏｒｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，第５版（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，２００２）；Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｓｕｒｆａｃｅ  ａｎｄ  Ｃｏｌｌｏｉｄａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ（Ｂｉｒｄｉ，Ｋ．Ｓ．編集、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，１９９７）およびＳｅｙｍｏｕｒ／Ｃａｒｒａｈｅｒ’ｓ  Ｐｏｌｙｍｅｒ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，第５版（Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ  Ｉｎｃ．，２０００）参照。
【００２５】
上記または下記の、ここで引用するすべての出版物、特許および特許出願は、それらの全体が参照によりここに組み込まれる。
【００２６】
本明細書および付属の特許請求の範囲置いて使用するとき、単数形態の「ａ」、「ａｎ」および「ｔｈｅ」は、文脈が明らかに異なる指示を与えない限り、複数の言及を包含する。それ故例えば、「ミクロ粒子」という用語は、１またはそれ以上のミクロ粒子を指す、等である。
【００２７】
異なる記載がない限りまたは文脈が明らかに異なる指示を与えない限り、ここでのすべてのパーセンテージおよび比は重量ベースで示される。
【００２８】
Ａ．定義
本発明を説明するとき、以下の用語を使用し、これらは以下で指示するように定義されることが意図されている。
【００２９】
ここで使用する「ミクロ粒子」という用語は、直径約１０ｎｍ−約１５０μｍ、より典型的には直径約２００ｎｍ−約３０μｍ、さらに一層典型的には直径約５００ｎｍ−約１０μｍの粒子を指す。本発明のミクロ粒子は、凍結乾燥などの一部の状況下でより大きな塊に凝集し得る。ミクロ粒子は一般に、針および毛細管を閉塞することなく非経口投与または粘膜投与を許容する直径である。ミクロ粒子の大きさは、光子相関分光法、レーザー回折法および／または走査型電子顕微鏡などの、当技術分野で周知の手法によって容易に測定される。「粒子」という用語はまた、ここで定義するミクロ粒子を表わすために使用され得る。
【００３０】
粒径は、当技術分野で使用可能な方法を用いて決定（測定）できる。例えば粒径は、光子相関分光法、動的光散乱法または準弾性光散乱法を用いて測定できる。これらの方法はブラウン運動測定から得られる粒子の拡散特性と粒径の相関に基づく。ブラウン運動は、粒子を取り巻く溶媒分子による衝突に起因する粒子のランダムな動きである。粒子が大きいほどブラウン運動はより緩やかである。速度は併進拡散係数（Ｄ）によって定義される。測定される数値は、粒子が流体内でどのように運動するか（流体力学直径）を表わす。得られる直径は、粒子と同じ併進拡散係数を有する球体の直径である。
【００３１】
粒径はまた、単一時間に溶液中の粒子によって散乱される光の強度を測定する、静的光散乱法を用いて測定することもできる。静的光散乱法は、光強度を散乱角度と溶質濃度の関数として測定する。光源、例えばレーザー光を通過する粒子は、それらの大きさに逆比例する角度で光を散乱させる。大きな粒子は高い強度を有する低散乱角度での回折パターンを生じ、一方小さな粒子は広い角度の低強度シグナルを生じる。試料から散乱される光の強度が角度の関数として測定される場合、粒径分布を算定することができる。粒径分布を算定するために角度情報を散乱モデル（例えばミー理論）と比較する。
【００３２】
一般に、粒径は室温で測定され、粒子直径についての平均値を求めるために対象とする試料の多数の分析（例えば同じ試料に関して少なくとも３回の反復測定）を含む。
【００３３】
光子相関分光法に関して、Ｚ平均（キュミュラント平均または流体力学直径とも呼ばれる）は、典型的にはキュミュラント（単峰性）分析から算定される。
【００３４】
静的光散乱測定に関しては（およびまた光子相関分光法に関しても）、容積に基づくサイズパラメータが測定され得る。例えばＤ（ｖ，０．５）（ｖは容積を意味する）は、その数値が、測定したとき、組成物中の粒子の５０％（容積ベース）がＤ（ｖ，０．５）値未満の粒径を有し、および組成物中の粒子の５０％がＤ（ｖ，０．５）値より大きい粒径を有する点と定義されるサイズパラメータである。同様に、Ｄ（ｖ，０．９）は、その数値が、組成物中の粒子の９０％（容積ベース）がＤ（ｖ，０．９）値未満の粒径を有し、および組成物中の粒子の１０％がＤ（ｖ，０．９）値より大きい粒径を有する点と定義されるサイズパラメータである。
ここでの使用のためのポリマーミクロ粒子は、典型的には、滅菌可能で、実質的に非毒性であり、生分解性である材料から形成される。そのような材料は、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリラクトン（例えばポリカプロラクトン）、ポリオルトエステル、ポリ無水物、チロシン由来のポリカーボネートまたはポリエステル−アミド、およびポリシアノアクリレート（例えばポリアルキルシアノアクリレートまたは「ＰＡＣＡ」）を含む。より典型的には、本発明に関する使用のためのミクロ粒子は、ポリ（α−ヒドロキシ酸）から、例えばポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）などのポリ（ラクチド）（「ＰＬＡ」）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（「ＰＬＧ」）などのラクチドとグリコリドのコポリマー、またはＤ，Ｌ−ラクチドとカプロラクトンのコポリマーから誘導されるポリマーミクロ粒子である。ポリマーミクロ粒子は、様々な分子量を有し、およびＰＬＧなどのコポリマーの場合は、様々なモノマー（例えばラクチド：グリコリド）比を有する、種々のポリマー出発物質のいずれかから誘導でき、その選択は、一部には同時投与される種に依存するが、主として選択の問題である。これらのパラメータを以下でさらに論じる。
【００３５】
ここで使用する「ζ電位」は、全ての固体と液体の界面を横切って存在する電位、例えば荷電したコロイド状粒子を取り巻くイオンの拡散層を横切る電位を指す。ζ電位は、当技術分野で周知の手法を使用して、電気泳動移動度、すなわちコロイド状粒子が、測定する物質と接して位置する帯電電極の間を移動する速度から算定できる。
【００３６】
ここで使用する「界面活性剤」という用語は、分散剤、懸濁化剤、乳化安定剤および洗浄剤を包含する。本発明のポリマーミクロ粒子組成物における使用のためのカチオン性界面活性剤は、例えば臭化セチルトリメチルアンモニウムまたは「ＣＴＡＢ」（例えばセトリミド）、塩化ベンザルコニウム、ＤＤＡ（臭化ジメチルジオクタデシルアンモニウム）、ＤＯＴＡＰ（ジオレオイル−３−トリメチルアンモニウム−プロパン）等を含む。アニオン性界面活性剤は、例えばＳＤＳ（ドデシル硫酸ナトリウム）、ＳＬＳ（ラウリル硫酸ナトリウム）、ＤＳＳ（ジスルホスクシネート）、硫酸化脂肪アルコール等を含む。非イオン界面活性剤は、例えばＰＶＡ（ポリビニルアルコール）、ポビドン（ポリビニルピロリドンまたはＰＶＰとしても知られる）、ソルビタンエステル、ポリソルベート、ポリオキシエチル化グリコールモノエーテル、ポリオキシエチル化アルキルフェノール、ポロキサマー等を含む。
【００３７】
「単糖」は、多価アルコール、すなわちアルデヒド基（この場合単糖はアルドースである）またはケト基（この場合単糖はケトースである）のいずれかをさらに含むアルコールである。単糖は、典型的には３−１０個の炭素を含む。さらに、単糖は一般に実験式（ＣＨ２Ｏ）ｎ［式中、ｎは３またはそれ以上の整数、典型的には３−１０である］を有する。炭素数３−６のアルドースの例は、グリセルアルデヒド、エリトロース、トレオース、リボース、２−デオキシリボース、アラビノース、キシロース、リキソース、アロース、アルトロース、グルコース、マンノース、グロース、イドース、ガラクトースおよびタロースを含む。炭素数３−６のケトースの例は、ジヒドロキシアセトン、エリトルロース、リブロース、キシルロース、プシコース、フルクトース、ソルボースおよびタガトースを含む。天然に生じる単糖は、通常はＬ−形態ではなくＤ−異性体として認められる。「オリゴ糖」は、比較的短い単糖ポリマー、すなわち２−３０の単糖単位を含むものを指す。「多糖」は、オリゴ糖の長さを超える単糖ポリマー（すなわち３０単糖単位以上を含むもの）である。さらに、ここで使用する、「多糖」という用語はまた、２またはそれ以上の連結された単糖を含む単糖ポリマーを指す。あいまいさを避けるため、２番目の定義は、矛盾する明白な指示がない限り、常に適用されるものとする。「多糖」という用語はまた、数ある中でも特に、アミノ官能基化およびカルボキシル官能基化多糖誘導体などの多糖誘導体を含む。単糖は、典型的にはグリコシド結合によって連結される。
【００３８】
ここで使用する、「糖」という用語は、単糖、オリゴ糖および多糖を包含する。「糖含有種」は、少なくともその一部が糖である分子である。例は、糖抗原、担体ペプチドに結合した糖を含む抗原等を包含する。
【００３９】
「ポリヌクレオチド」は核酸ポリマーである。ここで使用する「ポリヌクレオチド」は、わずかに５、６、７または８個のヌクレオチドを含み得る。さらに、「ポリヌクレオチド」は、二本鎖および一本鎖配列の両方を含むことができ、ウイルスからのｃＤＮＡ、原核生物または真核生物ｍＲＮＡ、ウイルスからのゲノムＲＮＡおよびＤＮＡ配列（例えばＲＮＡおよびＤＮＡウイルスおよびレトロウイルス）または原核生物ＤＮＡ、および合成ＤＮＡ配列を指すが、これらに限定されない。この用語はまた、ＤＮＡおよびＲＮＡの公知の塩基類似体のいずれかを含む配列を包含する。この用語はさらに、例えば核酸分子が抗原タンパク質をコードする場合、天然配列への、欠失、付加および置換（一般に本来は保存的）などの修飾を包含する。これらの修飾は、部位指定突然変異誘発を通してのように、意図的であり得るか、または抗原を産生する宿主の突然変異を通してのように、偶発的であり得る。
【００４０】
ここで定義する「オリゴヌクレオチド」は、５−１００ヌクレオチド、より好ましくは５−３０ヌクレオチドの範囲内の大きさを有するポリヌクレオチドである。
【００４１】
ここで使用する、「核酸」という語句は、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはそれらから形成されるキメラを指す。
【００４２】
「ポリヌクレオチド含有種」は、少なくともその一部がポリヌクレオチドである分子である。例は、ＲＮＡベクター構築物、ＤＮＡベクター構築物等を含む。
【００４３】
「ポリペプチド」および「タンパク質」という用語は、アミノ酸残基のポリマーを指し、生成物の最小限の長さに限定されない。それ故ペプチド、オリゴペプチド、ダイマー、マルチマー等はこの定義に包含される。完全長タンパク質およびそのフラグメントの両方がこの定義に包含される。これらの用語はまた、例えば、タンパク質が、免疫応答を惹起するまたはタンパク質が投与される被験者に治療作用を及ぼす能力を保持するように、天然配列への、欠失、付加および置換（一般に本来は保存的）などの修飾を含む。
【００４４】
「ポリペプチド含有種」は、少なくともその一部がポリペプチドである分子である。例は、ポリペプチド、糖タンパク質を含むタンパク質、輸送タンパク質に結合した糖抗原等を含む。
【００４５】
「薬剤」という用語は、抗生物質、抗ウイルス薬、増殖因子、ホルモン、抗原等のような生物学的に活性な化合物を指す。
【００４６】
「アジュバント」という用語は、抗原に対する免疫応答を高めるまたは多様化する免疫アジュバントを含むが、これらに限定されない、薬剤の作用を助けるまたは改変する物質を指す。それ故免疫アジュバントは、抗原に対する免疫応答を増強することができる化合物である。免疫アジュバントは、体液性および／または細胞性免疫を増強し得る。
【００４７】
「抗原」により、抗原が提示されたとき細胞性抗原特異的免疫応答または体液性抗体応答を生じるように宿主の免疫系を刺激することができる１またはそれ以上のエピトープを含む分子が意味される。抗原は、単独でまたはもう１つ別の分子と組み合わせて存在するとき、細胞性および／または体液性応答を惹起し得ると考えられる。
【００４８】
「エピトープ」は、その免疫学的特異性を決定する抗原分子または抗原複合体の部分である。エピトープは本発明の抗原の定義の範囲内である。一般に、エピトープは、天然に生じる抗原ではポリペプチドまたは多糖である。人工抗原では、アルサニル酸誘導体などの低分子量物質であり得る。エピトープは、例えば同種抗体またはＴリンパ球と、インビボまたはインビトロで特異的に反応する。選択的記述語は、抗原決定基、抗原構造群およびハプテン群である。
【００４９】
しばしば、エピトープは約５−１５アミノ酸を含む。所与のタンパク質のエピトープは、当技術分野において周知の多くのエピトープマッピング手法を用いて同定され得る。例えばＥｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，第６６巻（Ｇｌｅｎｎ  Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ編集、１９９６）Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｔｏｔｏｗａ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ参照。例えば線状エピトープは、例えば固体支持体上でタンパク質分子の部分に対応する多数のペプチドを同時に合成し、ペプチドを支持体に結合したままでペプチドを抗体と反応させることによって決定し得る。そのような手法は当技術分野で公知であり、例えば米国特許第４，７０８，８７１号；Ｇｅｙｓｅｎら（１９８４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８１：３９９８−４００２；Ｇｅｙｓｅｎら（１９８６）Ｍｏｌｅｃ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３：７０９−７１５に述べられている。同様に、立体配座エピトープは、例えばｘ線結晶学および二次元核磁気共鳴などにより、アミノ酸の空間立体配座を決定することによって容易に同定される。例えばＥｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ，前出参照。
【００５０】
ここで使用する「抗原」という用語は、サブユニット抗原、すなわち抗原が本来結合している生物全体から離れた別個の抗原、ならび死滅、弱毒化または不活性化細菌、ウイルス、寄生生物または他の病原体または腫瘍細胞の両方を表わす。抗イディオタイプ抗体などの抗体またはそのフラグメント、および抗原または抗原決定基を模倣し得る合成ペプチドミモトープも、ここで使用する抗原の定義に包含される。
【００５１】
同様に、核酸免疫適用などにおいて、インビボで免疫原性タンパク質または抗原決定基を発現するオリゴヌクレオチドまたはポリヌクレオチドも、ここでの抗原の定義に包含される。
【００５２】
さらに、本発明に関して、「抗原」は、そのタンパク質が免疫応答を惹起する能力を保持する限り、天然配列への、欠失、付加および置換（一般に本来は保存的）などの修飾を有するタンパク質を指す。これらの修飾は、部位指定突然変異誘発を通してのように、意図的であり得るか、または抗原を産生する宿主の突然変異を通してのように、偶発的であり得る。
【００５３】
抗原または組成物に対する「免疫学的応答」または「免疫応答」は、被験者における、対象組成物中に存在する分子に対する体液性および／または細胞性免疫応答の発現である。本発明に関して、「体液性免疫応答」は、抗体分子によって媒介される免疫応答を指し、一方「細胞性免疫応答」は、Ｔリンパ球および／または他の白血球によって媒介されるものである。細胞性免疫の１つの重要な態様は、細胞傷害性Ｔ細胞（「ＣＴＬ」）による抗原特異的応答を含む。ＣＴＬは、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）によってコードされ、細胞の表面で発現されるタンパク質と結合して提示されるペプチド抗原に対して特異性を有する。ＣＴＬは、細胞内微生物の細胞内破壊、またはそのような微生物に感染した細胞の溶解を誘導し、促進するのを助ける。細胞性免疫のもう１つの態様は、ヘルパーＴ細胞による抗原特異的応答を含む。ヘルパーＴ細胞は、その表面のＭＨＣ分子と結合してペプチド抗原を提示する細胞に対する非特異的エフェクター細胞の機能を刺激し、その活性を集中させるのを助けるように働く。「細胞性免疫応答」はまた、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞に由来するものを含む、活性化Ｔ細胞および／または他の白血球によって産生されるサイトカイン、ケモカインおよび他のそのような分子の産生を指す。
【００５４】
細胞性免疫応答を惹起する免疫原性組成物またはワクチンなどの組成物は、細胞表面でのＭＨＣ分子に結合した抗原の提示によって脊椎動物被験者を感作する役割を果たし得る。細胞媒介性免疫応答は、それらの表面で抗原を提示する細胞または細胞の近くに向けられる。加えて、抗原特異的Ｔリンパ球は、免疫宿主の将来の防御を可能にするために生成され得る。
【００５５】
細胞媒介性免疫応答を刺激する特定抗原または組成物の能力は、リンパ球増殖（リンパ球活性化）アッセイ、ＣＴＬ細胞傷害性細胞アッセイなどの当技術分野で公知の多くのアッセイによって、感作被験者において抗原に特異的なＴリンパ球を検定することによって、または抗原による再刺激に応答したＴ細胞によるサイトカイン産生の測定によって決定され得る。例えばＥｒｉｃｋｓｏｎら（１９９３）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５１：４１８９−４１９９；Ｄｏｅら（１９９４）Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２４：２３６９−２３７６）；および以下の実施例参照。
【００５６】
それ故免疫学的応答は、例えば以下の作用の１またはそれ以上を含み得る：Ｂ細胞による抗体の産生；および／またはサプレッサーＴ細胞および／または対象組成物またはワクチン中に存在する抗原（１またはそれ以上）を特異的に対象とするγδＴ細胞の活性化。これらの応答は、感染を中和する、および／または免疫宿主への防御を与える抗体−補体または抗体依存性細胞傷害（ＡＤＣＣ）を媒介する役割を果たし得る。そのような応答は、当技術分野で周知の標準免疫検定法および中和アッセイ、例えば放射免疫測定法およびＥＬＩＳＡを用いて測定され得る。
【００５７】
本発明の免疫原性組成物は、異なる組成物中の等量の抗原によって惹起される免疫応答より大きな免疫応答を惹起する能力を有するとき、「高い免疫原性」を示す。それ故組成物は、例えば組成物がより強力な免疫応答を生じさせるので、または抗原が投与される被験者において免疫応答を達成するためにより低用量の抗原しか必要としないため、「高い免疫原性」を示し得る。そのような高い免疫原性は、例えば本発明の組成物と抗原対照を動物に投与し、２つの検定結果を比較することによって測定され得る。
【００５８】
ここで使用する、「治療」（その様々な変形、例えば「治療する」または「治療される」を含む）は、（ｉ）問題の病原体または疾患（例えば癌または伝統的なワクチンにおけるように、病原菌感染）の予防、（ｉｉ）症状の軽減または排除、および（ｉｉｉ）問題の病原体または疾患の実質的または完全な排除のいずれかを指す。治療は、予防的に（問題の病原体または疾患の出現以前に）または治療的に（問題の病原体または疾患の出現後に）実施され得る。
【００５９】
本発明の免疫原性組成物の「有効量」または「医薬的に有効な量」という用語は、ここでは対象とする状態を治療するまたは診断するために十分な免疫原性組成物の量を指す。必要とされる正確な量は、数ある因子の中でも特に、例えば被験者の種、年齢および全身状態；治療される状態の重症度；対象とする特定抗原；免疫応答の場合は、例えば抗体を合成する被験者の免疫系の能力および所望する防御の程度；および投与方式に依存して、被験者ごとに異なる。個々の場合の適切な「有効」量は、当業者によって決定され得る。それ故「治療有効量」は、典型的には常套的治験を通して決定され得る比較的広い範囲に属する。
【００６０】
「脊椎動物被験者」または「脊椎動物」により、限定を伴わずに、ウシ、ヒツジ、ブタ、ヤギ、ウマおよびヒトなどの哺乳動物；イヌおよびネコなどの愛玩動物；およびニワトリ、シチメンチョウおよび他の家禽を含むオンドリおよびメンドリなどの家禽、野鳥および狩猟鳥を含む鳥類を包含する、脊索動物亜門の何らかの成員が意味される。この用語は特定の年齢を意味しない。それ故成体および新生児動物の両方が含まれる。
【００６１】
「医薬的に許容される」または「薬理的に許容される」により、生物学的に有害でない物質、すなわち物質が、個体において過度の望ましくない生物学的作用を引き起こさずにまたは物質が含まれる組成物の成分のいずれかと過度に有害に相互作用せずに個体に投与され得ることが意味される。
【００６２】
「賦形剤」という用語は、最終投与形態中に存在し得る基本的に付属的な物質を指す。例えば「賦形剤」という用語は、ビヒクル、結合剤、崩壊剤、充填剤（希釈剤）、潤滑剤、すべり剤（流動促進剤）、圧縮助剤、着色料、甘味料、防腐剤、懸濁化／分散剤、薄膜形成剤／被覆剤、香味料および印刷インクを含む。
【００６３】
「生理的ｐＨ」または「生理的範囲内のｐＨ」により、約７．２−８．０（両端を含む）の範囲内、より典型的には約７．２−７．６（両端を含む）の範囲内のｐＨが意味される。
【００６４】
ここで使用する、「ベクター構築物」という語句は、一般に対象とする核酸配列または遺伝子の発現を指令することができる何らかの集合物（ａｓｓｅｍｂｌｙ）を指す。ベクター構築物は、典型的には転写プロモーター／エンハンサーまたは遺伝子座規定エレメント、または選択的スプライシング、ＲＮＡ核外輸送、メッセンジャーの翻訳後修飾またはタンパク質の翻訳後修飾などの他の手段によって遺伝子発現を制御する他のエレメントを含む。加えて、ベクター構築物は、典型的には、転写されたとき、対象配列または遺伝子に作動可能に連結され、翻訳開始配列として働く配列を含む。ベクター構築物はまた、場合によりポリアデニル化を指令するシグナル、選択マーカー、ならびに１またはそれ以上の制限部位および翻訳終結配列を含む。加えて、ベクター構築物がレトロウイルスに導入される場合、ベクター構築物は、パッケージングシグナル、ロングターミナルリピート（ＬＴＲ）、および使用されるレトロウイルスに適切な正鎖および負鎖プライマー結合部位を含み得る（これらが既に存在していない場合）。
【００６５】
「ＤＮＡベクター構築物」は、対象とする核酸配列または遺伝子の発現を指令することができるＤＮＡ分子を指す。
【００６６】
ＤＮＡベクター構築物の１つの特定型はプラスミドであり、プラスミドは、宿主細胞内で自律複製することができる環状エピソームＤＮＡ分子である。典型的には、プラスミドは、その中に付加的なＤＮＡセグメントを連結することができる環状二本鎖ＤＮＡループである。ｐＣＭＶは当技術分野において周知の１つの具体的なプラスミドである。好ましいｐＣＭＶベクターは、ＣＭＶの最初期エンハンサー／プロモーターおよびウシ成長ホルモンターミネーターを含むものである。これは、Ｃｈａｐｍａｎ，Ｂ．Ｓ．ら（１９９１）Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１９：３９７９−３９８６の中で詳細に述べられている。
【００６７】
他のＤＮＡベクター構築物は公知であり、それらはＲＮＡウイルスに基づく。これらのＤＮＡベクター構築物は、典型的には真核細胞において機能するプロモーター、転写産物がＲＮＡベクター構築物（例えばアルファウイルスＲＮＡベクターレプリコン）であるｃＤＮＡ配列の５’末端領域、および３’末端領域を含む。ＲＮＡベクター構築物は、好ましくは、対象産物をコードする選択された異種核酸配列による１またはそれ以上の構造タンパク質遺伝子の置換によって修飾された、ピコルナウイルス、トガウイルス、フラビウイルス、コロナウイルス、パラミクソウイルス、黄熱病ウイルスまたはアルファウイルス（例えばシンドビスウイルス、セムリキ森林ウイルス、ベネズエラウマ脳炎ウイルスまたはロスリバーウイルス）からのＲＮＡゲノムを含む。ＲＮＡベクター構築物は、ＤＮＡ鋳型からのインビトロでの転写によって入手できる。具体例は、例えば米国特許第５，８１４，４８２号および同第６，０１５，６８６号、ならびに国際公開広報第ＷＯ９７／３８０８７号、同第ＷＯ９９／１８２２６号および共同所有の同第ＷＯ０２／２６２０９号に述べられている、ｐＳＩＮＣＰなどのシンドビスウイルスに基づくプラスミド（ｐＳＩＮ）を含む。そのようなベクターの構築は、一般に、米国特許第５，８１４，４８２号および同第６，０１５，６８６号に述べられている。
【００６８】
ベクター構築物の他の例は、ＲＮＡベクター構築物（例えばアルファウイルスベクター構築物）等を含む。ここで使用する、「ＲＮＡベクター構築物」、「ＲＮＡベクターレプリコン」および「レプリコン」は、インビボで、典型的には標的細胞内で、それ自身の増幅または自己複製を指令することができるＲＮＡ分子を指す。ＲＮＡベクター構築物は、細胞へのＤＮＡの導入および転写が起こる核内への輸送を必要とせずに、直接使用される。宿主細胞の細胞質への直接送達のためにＲＮＡベクターを使用することにより、異種核酸配列の自律複製と翻訳が効率的に起こる。
【００６９】
Ｂ．一般的方法
１．抗原
一部の実施形態では、本発明の組成物は、各々が有効量（例えば本発明に従った治療、予防または診断方法における使用のために有効な量）である、１またはそれ以上の抗原を含む。例えば本発明の組成物は、以下に列挙する病原体のいずれかによって引き起こされる感染を治療するまたは予防するために使用され得る。
【００７０】
本発明に関する使用のための抗原は、以下に示す抗原、あるいは以下に示す病原体の１またはそれ以上に由来する抗原の１またはそれ以上を含むが、これらに限定されない。
【００７１】
Ａ．細菌抗原
本発明における使用に適する細菌抗原は、細菌から単離され得る、精製され得るまたは細菌に由来し得るタンパク質、多糖、リポ多糖および外膜小胞を含む。加えて、細菌抗原は、細菌溶解産物および不活性化細菌製剤を含む。細菌抗原は組換え発現によって生産され得る。細菌抗原は、好ましくはその生活環の少なくとも１つの段階の間に細菌の表面に曝露されるエピトープを含む。細菌抗原は、好ましくは多数の血清型にわたって保存されている。細菌抗原は、以下に示す細菌の１またはそれ以上に由来する抗原ならびに以下で特定する特異抗原の例を含む。
【００７２】
髄膜炎菌：
髄膜炎菌タンパク質：髄膜炎菌の血清型Ａ群（Ｐａｒｋｈｉｌｌら（２０００）Ｎａｔｕｒｅ  ４０４：５０２−５０６）およびＢ群（Ｔｅｌｌｅｌｉｎら（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８７：１８０９−１８１５；国際公開広報第ＷＯ００／６６７９１号）についてのゲノム配列が報告されており、コードされるポリペプチドから適切な抗原を選択することができる（例えばＰｉｚｚａら（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８７：１８１６−１８２０；国際公開広報第ＷＯ９９／２４５７８号；同第ＷＯ９９／３６５４４号；同第ＷＯ９９／５７２８０号；同第ＷＯ００／２２４３０号；および同第ＷＯ００／６６７４１号）。特定抗原は、以下の５つの抗原の１またはそれ以上を含む（国際公開広報第ＷＯ２００４／０３２９５８号）：（１）好ましくはオリゴマー形態（例えばトリマー形態）の、「ＮａｄＡ」タンパク質；（２）「７４１タンパク質」；（３）「９３６タンパク質」；（４）「９５３タンパク質」；および（５）「２８７タンパク質」。本発明の組成物に含めるための他の抗原は、ＴｂｐＢ（国際公開広報第ＷＯ２００４／０１４４１９号）および／またはＮｓｐＡなどのＨｓｆ接着タンパク質および／またはトランスフェリン結合タンパク質を含む。
【００７３】
髄膜炎菌からの外膜小胞（ＯＭＶ）の作製。「ＯＭＶ」という用語は、外膜のタンパク質成分を含む外膜の小胞を形成するために細菌の外膜を破壊することによって得られる何らかのプロテオリポソーム小胞を含む。ＯＭＶは細菌から人工的に作製される（例えば界面活性剤処理によってまたは非界面活性剤手段によって）。この用語はまた、ブレブ、微小小胞（ＭＶ（国際公開広報第ＷＯ０２／０９６４３号））および、細菌増殖の間に自然に形成され、培地に放出される天然に生じる膜小胞である、「天然ＯＭＶ」（「ＮＯＭＶ」（Ｋａｔｉａｌら（２００２）Ｉｎｆｅｃｔ，Ｉｍｍｕｎ．７０：７０２−７０７）を包含する。ＭＶは、ブロス培地で髄膜炎菌を培養し、ブロス培地中のより小さなＭＶから全細胞を分離して（例えばろ過によって、または細胞だけをペレット化し、より小さな小胞をペレット化しないための低速遠心分離によって）、その後細胞枯渇培地からＭＶを収集すること（例えばろ過によって、ＭＶの分画沈殿または凝集によって、ＭＶをペレット化するための高速遠心分離によって）によって入手できる。ＭＶの生産における使用のための菌株は、一般に培養下で生産されるＭＶの量に基づいて選択され得る（例えば参考文献、米国特許第６，１８０，１１１号および国際公開広報第ＷＯ０１／３４６４２号は、高いＭＶ生産を有する髄膜炎菌を述べている）。ＯＭＶは様々な方法で作製され得る。適切な製剤を得るための方法は、例えばここで引用する参考文献に開示されている。ＯＭＶを形成するための手法は、界面活性剤を沈殿させないように十分に高いｐＨで、胆汁酸界面活性剤（例えばデオキシコール酸ナトリウムと、リトコール酸、ケノデオキシコール酸、ウルソデオキシコール酸、デオキシコール酸、コール酸、ウルソコール酸等の塩（欧州特許第ＥＰ００１１２４３Ｂ号；およびＦｒｅｄｒｉｋｓｅｎら（１９９１）ＮＩＰＨ  Ａｎｎ．１４（２）：６７−８０）が、髄膜炎菌を処理するために好ましい）で細菌を処理することを含む。ＯＭＶ作製のために使用される菌株は、例えば修飾ｆｕｒ遺伝子を有するように（国際公開広報第ＷＯ９８／５６９０１号）、ｎｓｐＡ発現の上方調節およびｐｏｒＡとｃｐｓの同時ノックアウトを有するように（国際公開広報第ＷＯ０２／０９７４６号）、または参考文献、国際公開広報第ＷＯ０１／０９３５０号；同第ＷＯ０２／０６２３７８号；同第ＷＯ２００４／０１４４１７号；同第ＷＯ２００４／０１９９７７号；および同第ＷＯ２００４／０４８４０４号に述べられているように修飾されていてもよい。ＯＭＶは付加的なタンパク質で補足されてもよく、例えば参考文献、国際公開広報第ＷＯ００／２５８１１号および同第ＷＯ０１／５２８８５号参照。ＯＭＶは、好ましくは以下の髄膜炎筋血清亜型：Ｐ１，７ｂ，４；Ｐ１．７，１６；Ｐ１．１９，１５の１つから得られる。
【００７４】
肺炎連鎖球菌：肺炎球菌のいくつかの菌株についてのゲノム配列が入手可能であり（Ｔｅｔｔｅｌｉｎら（２００１）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２９３：４９８−５０６；およびＨｏｓｋｉｎｓら（２００１）Ｊ  Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ  １８３：５７０９−５７１７）、適切なポリペプチド抗原を同定するために逆ワクチン学（Ｒａｐｐｕｏｌｉ（２０００）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ３：４４５−４５０；Ｒａｐｐｕｏｌｉ（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ  １９：２６８８−２６９１；Ｍａｓｉｇｎａｎｉら（２００２）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ  ２：８９５−９０５；およびＭｏｒａら（２００３）Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖ  Ｔｏｄａｙ  ８：４５９−４６４）に供することができる（Ｗｉｚｅｍａｎｎら（２００１）Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ  ６９：１５９３−１５９８；およびＲｉｇｄｅｎら（２００３）Ｃｒｉｔ  Ｒｅｖ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ３８：１４３−１６８）。例えば組成物は、参考文献、国際公開広報第ＷＯ０２／２２１６７号において定義されるように、以下の抗原：ＰｈｔＡ、ＰｈｔＤ、ＰｈｔＢ、ＰｈｔＥ、ＳｐｓＡ、ＬｙｔＢ、ＬｙｔＣ、ＬｙｔＡ、Ｓｐ１２５、Ｓｐ１０１、Ｓｐ１２８、Ｓｐ１３０およびＳｐ１３０の１またはそれ以上を含み得る。組成物は、これらの抗原の２以上（例えば２、３、４、５、６、７、８、９  １０、１１、１２、１３または１４）を含み得る。
【００７５】
化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）：Ａ群連鎖球菌抗原は、例えば国際公開公報第０２／３４７７１号；同第ＷＯ２００５／０３２５８２号；同第ＷＯ０２／０９４８５１号；Ｄａｌｅ（１９９９）Ｖａｃｃｉｎｅ  １７：１９３−２００；Ｄａｌｅ（１９９６）Ｖａｃｃｉｎｅ  １４（１０）：９４４−９４８）；およびＦｅｒｒｅｔｔｉら（２００１）ＰＮＡＳ  ＵＳＡ  ９８：４６５８−４６６３に開示されているものを含む。
【００７６】
Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ：モラクセラ属抗原は、国際公開公報第０２／１８５９５号；および同第９９／５８５６２号において特定される抗原、外膜タンパク質抗原（ＨＭＷ−ＯＭＰ）、Ｃ抗原および／またはＬＰＳを含む。
【００７７】
百日咳菌：百日咳抗原は、場合によりパータクチンおよび／またはアグルチノーゲン２および３抗原と組み合わせた、百日咳ホロ毒素（ＰＴ）および百日咳菌からの線維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）を含む。
【００７８】
典型的には不活性化百日咳菌細胞の形態の、細胞百日咳菌抗原。細胞百日咳抗原の作製は広く文書化されている（例えばＶａｃｃｉｎｅｓの第２１章（ＰｌｏｔｋｉｎとＯｒｅｎｓｔｅｉｎ編集），第４版、２００４，ＩＳＢＮ：０−７２１６−９６８８−０参照）。ｗＰ抗原の量は国際単位（ＩＵ）で表わすことができる。例えばＮＩＢＳＣは、「Ｔｈｉｒｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  Ｆｏｒ  Ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ  Ｖａｃｃｉｎｅ」［ＮＩＢＳＣコード：６６／３０３］を供給しており、これは４６ＩＵ／アンプルを含む。各アンプルは、Ｍ／１５セーレンセン緩衝液、ｐＨ７．０  ８リットルで希釈した細菌懸濁液１０リットル（米国不透明度基準では１８０不透明度単位に等しい）を含む水溶液の２．０ｍｌアリコートの凍結乾燥残留物を含む。ＩＵ系に代わるものとして、「ＯＵ」単位（「不透明度単位」）も使用される（例えば４ＯＵは約１ＩＵであり得る）。典型的には少なくとも８ＩＵ／ｍｌが存在する。
【００７９】
百日咳毒素（ＰＴ）、線維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）、パータクチン（「６９キロダルトン外膜タンパク質」としても知られる）、および線毛（アグルチノーゲン２および３）の１またはそれ以上を含む、無細胞百日咳菌抗原。本発明は、好ましくはＰＴ、ＦＨＡおよびパータクチンの少なくとも２つ、好ましくは３つ全部を使用する（すなわち線毛を使用しない）。ＦＨＡおよびパータクチンは、本発明に従った使用の前にホルムアルデヒドで処理し得る。ＰＴは、好ましくはホルムアルデヒドおよび／またはグルタルアルデヒドでの処理によって無毒化する。この化学的無毒化手順に代わるものとして、ＰＴは、突然変異誘発によって酵素活性を低下させた突然変異型ＰＴであり得る（Ｒａｐｐｕｏｌｉら（１９９１）ＴＩＢＴＥＣＨ  ９：２３２−２３８）が、化学的処理による無毒化が好ましい。無細胞百日咳抗原の量は、典型的にはマイクログラムで表わされる。典型的には用量当たりＰＴ２５−７５μｇ、ＦＨＡ約２５−７５μｇおよびパータクチン約１０−２０μｇが存在する。
【００８０】
黄色ブドウ球菌：黄色ブドウ球菌抗原は、ＳｔａｐｈＶＡＸ（商標）などの、場合により非毒性組換え緑膿菌体外毒素Ａに結合された黄色ブドウ球菌５型および８型莢膜多糖、および表面タンパク質に由来する抗原、インベイシン（ロイコシジン、キナーゼ、ヒアルロニダーゼ）、食細胞貪食を阻害する表面因子（莢膜、プロテインＡ）、カロチノイド、カタラーゼ産生、プロテインＡ、コアグラーゼ、凝固因子、および真核細胞膜を溶解する膜傷害毒素（場合により無毒化された）（溶血素、ロイコトキシン、ロイコシジン）を含む。黄色ブドウ球菌抗原は、例えばＫｕｒｏｄａら（２００１）Ｌａｎｃｅｔ  ３５７（９２６４）：１２２５−１２４０；ｐ．１２１８−１２１９も参照のこと、に開示されている抗原を含む。
【００８１】
表皮ブドウ球菌：表皮ブドウ球菌抗原は、粘液関連抗原（ＳＡＡ）を含む。
【００８２】
破傷風菌（破傷風）：破傷風抗原は、好ましくは本発明の組成物と併用／複合して輸送タンパク質として使用される、破傷風トキソイド（ＴＴ）を含む。
【００８３】
Ｖａｃｃｉｎｅｓの第２７章（ＰｌｏｔｋｉｎとＯｒｅｎｓｔｅｉｎ編集）第４版、２００４，ＩＳＢＮ：０−７２１６−９６８８−０の中でより詳細に開示される、破傷風トキソイド（「Ｔｔ」）。好ましい破傷風トキソイドは、ホルムアルデヒド処理によって作製されるものである。破傷風トキソイドの量は国際単位（ＩＵ）で表わすことができる。例えばＮＩＢＳＣは、「Ｔｅｔａｎｕｓ  Ｔｏｘｏｉｄ  Ａｄｓｏｒｂｅｄ  Ｔｈｉｒｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  ２０００」（Ｓｅｓａｒｄｉｃら（２００２）Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ  ３０：４９−６８；およびＮＩＢＳＣコード：９８／５５２）を供給しており、これは４６９ＩＵ／アンプルを含む。ＩＵ系に代わるものとして、「Ｌｆ」単位（「凝集単位」（ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｎｇ  ｕｎｉｔｓ）または「石灰凝集用量」（ｌｉｍｅｓ  ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｎｇ  ｄｏｓｅ））は、１国際単位の抗毒素と混合したとき、最適凝集混合物を生じるトキソイドの量と定義される［ＷＨＯのＴｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｓｅｒｉｅｓのモジュール１（Ｇａｌａｚｋａ）］。例えばＮＩＢＳＣは、「Ｔｈｅ  １ｓｔ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｔｅｔａｎｕｓ  Ｔｏｘｏｉｄ  Ｆｏｒ  Ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｔｅｓｔ」［ＮＩＢＳＣコード：ＴＥＦＴ］を供給しており、これは１０００Ｌｆ／アンプルを含む。本発明の組成物中の破傷風トキソイドの濃度は、典型的には少なくとも１００ＩＵ／ｍｌである。
【００８４】
ジフテリア菌（ジフテリア）：ジフテリア抗原は、ＣＲＭ１９７などの、好ましくは無毒化された、ジフテリア毒素を含む。加えて、ＡＤＰリボシル化を調節する、阻害する、またはＡＤＰリボシル化に関連する抗原が、本発明の組成物との組合せ／同時投与／複合のために考慮される。ジフテリアトキソイドは輸送タンパク質として使用し得る。
【００８５】
Ｖａｃｃｉｎｅｓの第１３章（ＰｌｏｔｋｉｎとＯｒｅｎｓｔｅｉｎ編集）第４版、２００４，ＩＳＢＮ：０−７２１６−９６８８−０においてより詳細に開示される、ジフテリアトキソイド（「Ｄｔ」）。好ましいジフテリアトキソイドは、ホルムアルデヒド処理によって作製されるものである。ジフテリアトキソイドの量は国際単位（ＩＵ）で表わすことができる。例えばＮＩＢＳＣは、「Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ  Ｔｏｘｏｉｄ  Ａｄｓｏｒｂｅｄ  Ｔｈｉｒｄ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｔａｎｄａｒｄ  １９９９」（Ｓｅｓａｒｄｉｃら（２００１）  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌｓ  ２９：１０７−２２；およびＮＩＢＳＣコード：９８／５６０）を供給しており、これは１６０ＩＵ／アンプルを含む。ＩＵ系に代わるものとして、「Ｌｆ」単位（「凝集単位」または「石灰凝集用量」）は、１国際単位の抗毒素と混合したとき、最適凝集混合物を生じるトキソイドの量と定義される［ＷＨＯのＴｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  ｂａｓｉｓ  ｆｏｒ  ｉｍｍｕｎｉｚａｔｉｏｎ  ｓｅｒｉｅｓのモジュール１（Ｇａｌａｚｋａ）］。例えばＮＩＢＳＣは、「Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ  Ｔｏｘｏｉｄ，Ｐｌａｉｎ」［ＮＩＢＳＣコード：６９／０１７］を供給しており、これは３００ＬＦ／アンプルを含み、また「Ｔｈｅ  １ｓｔ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  Ｒｅａｇｅｎｔ  ｆｏｒ  Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ  Ｔｏｘｏｉｄ  Ｆｏｒ  Ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ  Ｔｅｓｔ」［ＮＩＢＳＣコード：ＤＩＦＴ］も供給しており、これは９００Ｌｆ／アンプルを含む。本発明の組成物中のジフテリアトキソイドの濃度は、典型的には少なくとも５０ＩＵ／ｍｌである。
【００８６】
インフルエンザ菌Ｂ型（Ｈｉｂ）：Ｈｉｂ抗原は、Ｈｉｂ糖抗原を含む。
【００８７】
緑膿菌：シュードモナス属抗原は、内毒素Ａ、Ｗｚｚタンパク質、緑膿菌ＬＰＳ、より詳細にはＰＡＯ１（Ｏ５血清型）から単離されるＬＰＳ、および外膜タンパク質Ｆ（ＯｐｒＦ）を含む外膜タンパク質（Ｐｒｉｃｅら（２００１）Ｉｎｆｅｃｔ  Ｉｍｍｕｎ．６９（５）：３５１０−３５１５）を含む。
【００８８】
レジオネラ・ニューモフィラ菌：細菌抗原は、レジオネラ・ニューモフィラ菌に由来し得る。
【００８９】
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群連鎖球菌）：Ｂ群連鎖球菌抗原は、国際公開公報第０２／３４７７１号；同第０３／０９３３０６号；同第０４／０４１１５７号；同第２００５／００２６１９号；およびＳｃｈｕｃｈａｔ（１９９９）Ｌａｎｃｅｔ  ３５３（９１４６）：５１−６６において特定されるもの（タンパク質ＧＢＳ５９、ＧＢＳ６７、ＧＢＳ８０、ＧＢＳ１０４、ＧＢＳ２７６およびＧＢＳ３２２を含み、および血清型Ｉａ、Ｉｂ、Ｉａ／ｃ、ＩＩ、ＩＩＩ、ＩＶ、Ｖ、ＶＩ、ＶＩＩおよびＶＩＩＩに由来する糖抗原を含む）のような、タンパク質および糖抗原を含む。
【００９０】
淋菌：淋病抗原は、ＰｏｒＢなどのＰｏｒ（またはポーリン）タンパク質（例えばＺｈｕら（２００４）Ｖａｃｃｉｎｅ  ２２：６６０−６６９参照）、ＴｂｐＡおよびＴｂｐＢなどのトランスフェリン結合タンパク質（例えばＰｒｉｃｅら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７１（１）：２７７−２８３参照）、不透過タンパク質（ｏｐａｃｉｔｙ  ｐｒｏｔｅｉｎ）（Ｏｐａなど）、還元調節性タンパク質（Ｒｍｐ）、および外膜小胞（ＯＭＶ）製剤（例えばＰｌａｎｔｅら（２０００）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８２：８４８−８５５；国際公開公報第ＷＯ９９／２４５７８号；同第ＷＯ９９／３６５４４号；同第ＷＯ９９／５７２８０号；および同第ＷＯ０２／０７９２４３号参照）を含む。
【００９１】
トラコーマクラミジア：トラコーマクラミジア抗原は、血清型Ａ、Ｂ、ＢａおよびＣ（トラコーマの病原因子、失明の原因）、血清型Ｌ１、Ｌ２およびＬ３（性病性リンパ肉芽腫に関連する）、および血清型Ｄ−Ｋに由来する抗原を含む。トラコーマクラミジア抗原はまた、ＰｅｐＡ（ＣＴ０４５）、ＬｃｒＥ（ＣＴ０８９）、ＡｒｔＪ（ＣＴ３８１）、ＤｎａＫ（ＣＴ３９６）、ＣＴ３９８、ＯｍｐＨ様（ＣＴ２４２）、Ｌ７／Ｌ１２（ＣＴ３１６）、ＯｍｃＡ（ＣＴ４４４）、ＡｔｏｓＳ（ＣＴ４６７）、ＣＴ５４７、Ｅｎｏ（ＣＴ５８７）、ＨｒｔＡ（ＣＴ８２３）、ＭｕｒＧ（ＣＴ７６１）、ＣＴ３９６およびＣＴ７６１を含む、国際公開公報第ＷＯ００／３７４９４号；同第ＷＯ０３／０４９７６２号；同第ＷＯ０３／０６８８１１号；および同第ＷＯ０５／００２６１９号において特定される抗原、およびこれらの抗原の特定の組合せを含む。
【００９２】
梅毒トレポネーマ（梅毒）：梅毒抗原はＴｍｐＡ抗原を含む。
【００９３】
軟性下疳菌（軟性下疳を引き起こす）：デュクレー抗原は、外膜タンパク質（ＤｓｒＡ）を含む。
【００９４】
Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓまたはＥｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃｉｕｍ：抗原は、三糖反復単位および米国特許第６，７５６，３６１号において提供される他のエンテロコッカス属由来の抗原を含む。
【００９５】
ピロリ菌：ピロリ菌抗原は、Ｃａｇ、Ｖａｃ、Ｎａｐ、ＨｏｐＸ、ＨｏｐＹおよびウレアーゼ抗原を含む。
【００９６】
Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ：抗原は、Ｓ．ｓａｐｒｏｐｈｙｔｉｃｕｓ抗原の１６０ｋＤａ赤血球凝集素を含む。
【００９７】
Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｅｎｔｅｒｏｃｏｌｉｔｉｃａ：抗原は、ＬＰＳ（Ｘｕら（２００２）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７０（８）：４４１４−４４２３）を含む。
【００９８】
大腸菌：大腸菌抗原は、腸管毒素原性大腸菌（ＥＴＥＣ）、腸管凝集性大腸菌（ＥＡｇｇＥＣ）、分散接着性大腸菌（ＤＡＥＣ）、腸管病原性大腸菌（ＥＰＥＣ）または腸管出血性大腸菌（ＥＨＥＣ）に由来し得る。
【００９９】
炭疽菌（炭疽）：炭疽菌抗原は、場合により無毒化されており、Ａ成分（どちらも防御抗原（ＰＡ）として知られる共通のＢ成分を共有し得る、致死因子（ＬＦ）および浮腫因子（ＥＦ））から選択され得る。ある実施形態では、本発明の組成物は炭疽抗原を含まない。
【０１００】
ペスト菌（ペスト）：ペスト抗原は、Ｆ１莢膜抗原（Ｇｏｓｆｅｌｄら（２００３）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７１（１））：３７４−３８３）、ＬＰＳ（Ｆｉｅｌｄｓら（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６７（１０）：５３９５−５４０８）、ペスト菌Ｖ抗原（Ｈｉｌｌら（１９９７）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６５（１１）：４４７６−４４８２）を含む。
【０１０１】
ヒト結核菌：結核抗原は、リポタンパク質、ＬＰＳ、ＢＣＧ抗原、場合によりカチオン性脂質小胞に製剤された抗原８５Ｂ（Ａｇ８５Ｂ）とＥＳＡＴ−６の融合タンパク質（Ｏｌｓｅｎら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７２（１０）：６１４８−６１５０）、ヒト結核菌（Ｍｔｂ）イソクエン酸デヒドロゲナーゼ関連抗原（Ｂａｎｅｒｊｅｅら（２００４）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  １０１（３４）：１２６５２−１２６５７）、およびＭＰＴ５１抗原（Ｓｕｚｕｋｉら（２００４）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７２（７）：３８２９−３８３７）を含む。
【０１０２】
リケッチア：抗原は、外膜タンパク質Ａおよび／またはＢ（ＯｍｐＢ）（Ｃｈａｏら（２００４）Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ．１７０２（２）：１４５−１５２）を含む外膜タンパク質、ＬＰＳ、および表面タンパク質抗原（ＳＰＡ）（Ｃａｒｌら（１９８９）Ｊ．Ａｕｔｏｉｍｍｕｎ．２  Ｓｕｐｐｌ：８１−９１）を含む。
【０１０３】
リステリア菌：細菌抗原はリステリア菌に由来し得る。
【０１０４】
Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ：抗原は、国際公開公報第ＷＯ０２／０２６０６号において特定されるものを含む。
【０１０５】
コレラ菌：抗原は、プロテイナーゼ抗原、ＬＰＳ、特にコレラ菌ＩＩのリポ多糖、Ｏ１群イナバ型Ｏ特異的多糖、コレラ菌Ｏ１３９、ＩＥＭ１０８ワクチンの抗原（Ｌｉａｎｇら（２００３）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７１（１０）：５４９８−５０４）、および閉鎖帯毒素（Ｚｏｔ）を含む。
【０１０６】
腸チフス菌（腸チフス）：抗原は、莢膜多糖、好ましくは複合体（Ｖｉ、すなわちｖａｘ−ＴｙＶｉ）を含む。
【０１０７】
Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ（ライム病）：抗原は、リポタンパク質（ＯｓｐＡ、ＯｓｐＢ、ＯｓｐＣおよびＯｓｐＤなど）、ＯｓｐＥ関連タンパク質（Ｅｒｐｓ）などの他の表面タンパク質、デコリン結合タンパク質（ＤｂｐＡなど）、およびＰ３９およびＰ１３に関連する抗原などの抗原多様性ＶＩタンパク質（内在性膜タンパク質、Ｎｏｐｐａら（２００１）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６９（５）：３３２３−３３３４）、ＶｌｓＥ抗原性変異タンパク質（Ｌａｗｒｅｎｚら（１９９９）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３７（１２）：３９９７−４００４）を含む。
【０１０８】
Ｐｏｒｐｈｙｒｏｍｏｎａｓ  ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ：抗原は、Ｐ．ｇｉｎｇｉｖａｌｉｓ外膜タンパク質（ＯＭＰ）を含む。
【０１０９】
Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ：抗原は、ＯＭＰ  Ａを含むＯＭＰ、および場合により破傷風トキソイドに結合された多糖を含む。
【０１１０】
他の細菌抗原は、上記のいずれかの莢膜抗原、多糖抗原またはタンパク質抗原を含む。さらなる細菌抗原はまた、外膜小胞（ＯＭＶ）製剤を含む。加えて、抗原は、上記細菌のいずれかの生、弱毒化および／または精製形態を含む。抗原は、グラム陰性またはグラム陽性菌に由来し得る。抗原は、好気性または嫌気性細菌に由来し得る。
【０１１１】
加えて、上記細菌由来の糖（多糖、ＬＰＳ、ＬＯＳまたはオリゴ糖）のいずれもが、輸送タンパク質（例えばＣＲＭ１９７）などのもう１つ別の物質または抗原に複合できる。そのような複合は、米国特許第５，３６０，８９７号；およびＲｏｙら（１９８４）Ｃａｎ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ．６２（５）：２７０−２７５において提供されるような、糖鎖上のカルボニル部分の、タンパク質上のアミノ基への還元的アミノ化によって実施される直接複合であり得る。もう１つの実施形態では、糖は、スクシンアミドなどのリンカーを通して、またはＨｅｒｍａｎｓｏｎ，Ｇ．Ｔ．，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，第１版、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ（１９９６）およびＷｏｎｇ，Ｓ．Ｓ．，ＣＲＣ，Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｃｏｎｊｕｇａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｃｒｏｓｓ−Ｌｉｎｋｉｎｇ，第１版、ＣＲＣ−Ｐｒｅｓｓ（１９９１）において提供される他の結合を通して複合され得る。適切な糖抗原は、以下の細菌からの複合莢膜糖を含むが、これらに限定されない。
【０１１２】
インフルエンザ菌Ｂ型（「Ｈｉｂ」）：Ｈｉｂ複合体は、Ｖａｃｃｉｎｅｓの第１４章（ＰｌｏｔｋｉｎとＯｒｅｎｓｔｅｉｎ編集），第４版、２００４，ＩＳＢＮ：０−７２１６−９６８８−０においてより詳細に開示される。Ｈｉｂ複合体の糖鎖部分は、Ｈｉｂ細菌から作製される完全長ポリリボシルリビトールリン酸（ＰＲＰ）を含み得るか、または完全長ＰＲＰのフラグメントを含み得る。本発明の組成物中の、糖として測定されるＨｉｂ複合体の量は、典型的には１０−３０μｇ／ｍｌである。Ｈｉｂ複合体の投与は、好ましくは≧０．１５μｇ／ｍｌ、より好ましくは≧１μｇ／ｍｌの抗ＰＲＰ抗体濃度を生じさせ、これらは標準的な許容される応答閾値である。
【０１１３】
髄膜炎菌血清型Ｃ群（「ＭｅｎＣ」）：ＭｅｎＣに対する複合体ワクチンはヒトでの使用に関して承認されており、ＭＥＮＪＵＧＡＴＥ（商標）［Ｊｏｎｅｓ（２００１）Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  Ｄｒｕｇｓ  ２：４７−４９］、ＭＥＮＩＮＧＩＴＥＣ（商標）およびＮＥＩＳＶＡＣ−Ｃ（商標）を含む。血清型Ｃ群の糖はＯＡｃ＋またはＯＡｃ−菌株のいずれかから作製され得る。
【０１１４】
髄膜炎菌血清型Ａ群（「ＭｅｎＡ」）：好ましくはマンノサミン残基の少なくとも５０％（例えば少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはそれ以上）が、Ｃ−３位でＯ−アセチル化されている。
【０１１５】
髄膜炎菌血清型Ｗ１３５群（「ＭｅｎＷ１３５」）。
【０１１６】
髄膜炎菌血清型Ｙ群（「ＭｅｎＹ」）。
【０１１７】
肺炎連鎖球菌（例えばＷａｔｓｏｎ（２０００）Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  Ｊ  １９：３３１−３３２；Ｒｕｂｉｎ（２０００）Ｐｅｄｉａｔｒ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ  ４７：２６９−２８５；およびＪｅｄｒｚｅｊａｓ（２００１）Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  Ｒｅｖ  ６５：１８７−２０７）。肺炎連鎖球菌の２以上の血清型からの糖を含むことが好ましい：５−１１の異なる血清型からの多糖との複合体ワクチンと同様に、２３の異なる血清型からの多糖の混合物が広く使用されている（Ｚｉｅｌｅｎら（２０００）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６８：１４３５−１４４０）。例えばＰｒｅｖＮａｒ（商標）（ＤａｒｋｅｓとＰｌｏｓｋｅｒ（２００２）Ｐａｅｄｉａｔｒ  Ｄｒｕｇｓ  ４：６０９−６３０）は、７つの血清型（４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆ）からの抗原を含み、各々の糖は還元的アミノ化によってＣＲＭ１９７に個別に結合しており、０．５ｍｌ用量当たり各々の糖２μｇ（血清型６Ｂ  ４μｇ）を含有する。本発明の組成物は、好ましくは少なくとも血清型６Ｂ、１４、１９Ｆおよび２３Ｆを含む。さらなる血清型は、好ましくは１、３、４、５、７Ｆ、９Ｖおよび１８Ｃから選択される。本発明の組成物中の、糖として測定される肺炎球菌複合体の量は、典型的には各血清型について２−２０μｇ／ｍｌである。
【０１１８】
例えばＳａｂｈａｒｗａｌら（２００６）Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  １９３：１２９−１３５に述べられているような、化膿連鎖球菌（「ＧＡＳ」）。
【０１１９】
例えばＢａｋｅｒとＥｄｗａｒｄｓ（２００３）Ａｒｃｈ  Ｄｉｓ  Ｃｈｉｌｄ  ８８：３７５−３７８；ＰａｏｌｅｔｔｉとＫａｓｐｅｒ（２００２）Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  １８６：１２３−１２６；Ｐａｌａｚｚｉら（２００４）Ｊ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  １９０：５５８−５６４；ＨｅａｔｈとＦｅｌｄｍａｎ（２００５）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ４：２０７−２１８；ＰａｏｌｅｔｔｉとＫａｓｐｅｒ（２００３）Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｌ  Ｔｈｅｒ  ３：９７５−９８４に述べられているようなＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ（「ＧＢＳ」）。ＧＢＳ血清型Ｉａ、Ｉｂおよび／またはＩＩＩからの糖が典型的に含まれる。ＧＢＳ血清型ＩＶ、ＶおよびＶＩＩも使用され得る。
【０１２０】
Ｂ．ウイルス抗原
本発明における使用に適するウイルス抗原は、不活性化（または死滅）ウイルス、弱毒化ウイルス、スプリットウイルス製剤、精製サブユニット製剤、ウイルスから単離、精製または誘導され得るウイルスタンパク質、およびウイルス様粒子（ＶＬＰ）を含む。ウイルス抗原は、細胞培養または他の基質で増殖させたウイルスに由来し得るかまたは組換えによって発現され得る。ウイルス抗原は、好ましくはその生活環の少なくとも１つの段階の間にウイルスの表面に曝露されるエピトープを含む。ウイルス抗原は、好ましくは多数の血清型または単離物にわたって保存されている。ウイルス抗原は、以下に示すウイルスの１またはそれ以上に由来する抗原ならびに以下で同定する特異抗原の例を含む。
【０１２１】
オルトミクソウイルス：ウイルス抗原は、インフルエンザＡ、ＢおよびＣ型などのオルトミクソウイルスに由来し得る。オルトミクソウイルス抗原は、赤血球凝集素（ＨＡ）、ノイラミニダーゼ（ＮＡ）、ヌクレオタンパク質（ＮＰ）、基質タンパク質（Ｍ１）、膜タンパク質（Ｍ２）を含むウイルスタンパク質の１またはそれ以上、転写酵素成分（ＰＢ１、ＰＢ２およびＰＡ）の１またはそれ以上から選択され得る。好ましい抗原はＨＡおよびＮＡを含む。
【０１２２】
インフルエンザ抗原は、汎流行間期（毎年）のインフルエンザ菌株に由来し得る。インフルエンザ抗原は、汎流行性発生を引き起こす潜在的可能性を有する菌株（すなわち現在流行中である菌株における赤血球凝集素と比較して新しい赤血球凝集素を有するインフルエンザ菌株、または鳥類被験者において病原性であり、ヒト集団において水平伝播する潜在的可能性を有するインフルエンザ菌株、またはヒトに対して病原性であるインフルエンザ菌株）に由来し得る。インフルエンザ抗原は、卵または細胞培養において増殖するウイルスに由来し得る。
【０１２３】
パラミクソウイルス科ウイルス：ウイルス抗原は、肺炎ウイルス属（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス属（ＰＩＶ）および麻疹ウイルス属（麻疹）などのパラミクソウイルス科ウイルスに由来し得る。
【０１２４】
肺炎ウイルス：ウイルス抗原は、ＲＳウイルス（ＲＳＶ）、ウシＲＳウイルス、マウス肺炎ウイルス、およびシチメンチョウ鼻気管炎ウイルスなどの肺炎ウイルスに由来し得る。好ましくは、肺炎ウイルスはＲＳＶである。肺炎ウイルス抗原は、以下のタンパク質：表面タンパク質融合物（Ｆ）、糖タンパク質（Ｇ）および低分子疎水性タンパク質（ＳＨ）、基質タンパク質ＭおよびＭ２、ヌクレオキャプシドタンパク質Ｎ、ＰおよびＬ、および非構造タンパク質ＮＳ１およびＮＳ２、の１またはそれ以上から選択され得る。好ましい肺炎ウイルス抗原は、Ｆ、ＧおよびＭを含む。例えばＪｏｈｎｓｔｏｎｅら（２００４）Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．８５（Ｐｔ１１）：３２２９−３２３８参照。肺炎ウイルス抗原はまた、キメラウイルスにおいて製剤され得るまたはキメラウイルスに由来し得る。例えばキメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶとＰＩＶの両方の成分を含み得る。
【０１２５】
パラミクソウイルス：ウイルス抗原は、パラインフルエンザウイルス１−４型（ＰＩＶ）、流行性耳下腺炎ウイルス、センダイウイルス、シミアンウイルス５、ウシパラインフルエンザウイルスおよびニューカッスル病ウイルス等のパラミクソウイルスに由来し得る。好ましくは、パラミクソウイルスはＰＩＶまたは流行性耳下腺炎ウイルスである。パラミクソウイルス抗原は、以下のタンパク質：赤血球凝集素ノイラミニダーゼ（ＨＮ）、融合タンパク質Ｆ１およびＦ２、ヌクレオタンパク質（ＮＰ）、リンタンパク質（Ｐ）、大型タンパク質（Ｌ）および基質タンパク質（Ｍ）、の１またはそれ以上から選択され得る。好ましいパラミクソウイルスタンパク質は、ＨＮ、Ｆ１およびＦ２を含む。パラミクソウイルス抗原はまた、キメラウイルスにおいて製剤され得るまたはキメラウイルスに由来し得る。例えばキメラＲＳＶ／ＰＩＶウイルスは、ＲＳＶとＰＩＶの両方の成分を含み得る。市販されている流行性耳下腺炎ワクチンは、一価形態または麻疹および風疹ワクチンと組み合わせた（ＭＭＲ）、生弱毒化流行性耳下腺ウイルスを含む。
【０１２６】
麻疹ウイルス：ウイルス抗原は、麻疹などの麻疹ウイルス属に由来し得る。麻疹ウイルス抗原は、以下のタンパク質：赤血球凝集素（Ｈ）、糖タンパク質（Ｇ）、融合因子（Ｆ）、大型タンパク質（Ｌ）、ヌクレオタンパク質（ＮＰ）、ポリメラーゼリンタンパク質（Ｐ）および基質タンパク質（Ｍ）、の１またはそれ以上から選択され得る。市販されている麻疹ワクチンは、典型的には流行性耳下腺炎および風疹ワクチンと組み合わせた（ＭＭＲ）、生弱毒化麻疹ウイルスを含む。
【０１２７】
ピコルナウイルス：ウイルス抗原は、エンテロウイルス、ライノウイルス、ヘパルナウイルス、カルジオウイルスおよびアフトウイルスなどのピコルナウイルス属に由来し得る。ポリオウイルスなどのエンテロウイルスに由来する抗原が好ましい。
【０１２８】
エンテロウイルス：ウイルス抗原は、ポリオウイルス１、２または３型、コクサッキーＡウイルス１−２２および２４型、コクサッキーＢウイルス１−６型、エコー（ＥＣＨＯ）ウイルス１−９、１１−２７および２９−３４型、およびエンテロウイルス６８−７１型などのエンテロウイルスに由来し得る。好ましくは、エンテロウイルスはポリオウイルスである。エンテロウイルス抗原は、好ましくはキャプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３およびＶＰ４の１またはそれ以上から選択される。市販されているポリオワクチンは、不活性化ポリオワクチン（ＩＰＶ）および経口ポリオウイルスワクチン（ＯＰＶ）を含む。
【０１２９】
ヘパルナウイルス：ウイルス抗原は、Ａ型肝炎ウイルス（ＨＡＶ）などのヘパルナウイルスに由来し得る。市販されているＨＡＶワクチンは、不活性化ＨＡＶワクチンを含む。
【０１３０】
トガウイルス：ウイルス抗原は、ルビウイルス、アルファウイルスまたはアルテリウイルスなどのトガウイルスに由来し得る。風疹ウイルスなどのルビウイルスに由来する抗原が好ましい。トガウイルス抗原は、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｃ、ＮＳＰ−１、ＮＳＰＯ−２、ＮＳＰ−３またはＮＳＰ−４から選択され得る。トガウイルス抗原は、好ましくはＥ１、Ｅ２およびＥ３から選択される。市販されている風疹ワクチンは、典型的には流行性耳下腺炎および麻疹ワクチンと組み合わせた（ＭＭＲ）、生低温適合性ウイルスを含む。
【０１３１】
フラビウイルス：ウイルス抗原は、ダニ媒介脳炎（ＴＢＥ）、デング熱（１、２、３または４型）、黄熱病、日本脳炎、西ナイル脳炎、セントルイス脳炎、ロシア春夏脳炎、ポーワッサン脳炎などのフラビウイルスに由来し得る。フラビウイルス抗原は、ＰｒＭ、Ｍ、Ｃ、Ｅ、ＮＳ−１、ＮＳ−２ａ、ＮＳ２ｂ、ＮＳ３、ＮＳ４ａ、ＮＳ４ｂおよびＮＳ５から選択され得る。フラビウイルス抗原は、好ましくはＰｒＭ、ＭおよびＥから選択される。市販されているＴＢＥワクチンは、不活性化ウイルスワクチンを含む。
【０１３２】
ペスチウイルス：ウイルス抗原は、ウシのウイルス性下痢（ＢＶＤＶ）、古典的豚コレラ（ＣＳＦＶ）またはボーダー病（ＢＤＶ）などのペスチウイルスに由来し得る。
【０１３３】
ヘパドナウイルス：ウイルス抗原は、Ｂ型肝炎ウイルスなどのヘパドナウイルスに由来し得る。ヘパドナウイルス抗原は、表面抗原（Ｌ、ＭおよびＳ）、コア抗原（ＨＢｃ、ＨＢｅ）から選択され得る。市販されているＨＢＶワクチンは、表面抗原Ｓタンパク質を含有するサブユニットワクチンを含む。
【０１３４】
Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原（「ＨＢｓＡｇ」）。典型的なＨＢｓＡｇは、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ、Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓまたはＨａｎｅｎｓｕｌａ  ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａなどの酵母において組換えＤＮＡ法によって発現される。ＨＢｓＡｇは、好ましくはグリコシル化されていない。ＨＢｓＡｇは、リン脂質および、場合により、ホスファチジルイノシトールを含む脂質マトリックスを含有する実質的に球状の粒子の形態をとり得る。ＨＢｓＡｇは、好ましくはＨＢＶ亜型ａｄｗ２からである。典型的にはＨＢｓＡｇ  １−５０μｇが存在する。
【０１３５】
Ａ型肝炎ウイルス：Ｖａｃｃｉｎｅｓの第１５章（ＰｌｏｔｋｉｎとＯｒｅｎｓｔｅｉｎ編集），第４版、２００４，ＩＳＢＮ：０−７２１６−９６８８−０に開示されるような、Ａ型肝炎ウイルス抗原（「ＨＡＶ」）。好ましいＨＡＶ成分は不活性化ウイルスに基づき、不活性化はホルマリン処理によって達成され得る。ウイルスは、ＭＲＣ−５細胞などのヒト胚肺二倍体線維芽細胞で増殖され得る。好ましいＨＡＶ菌株はＨＭ１７５であるが、ＣＲ３２６Ｆも使用できる。細胞は、ウイルス増殖を許容する条件下で増殖され得る。細胞を溶解し、生じた懸濁液を限外ろ過およびゲル浸透クロマトグラフィーによって精製することができる。ＥＵ（Ｅｌｉｓａ単位）で測定したＨＡＶ抗原の量は、典型的には少なくとも６００ＥＵ／ｍｌである。
【０１３６】
Ｃ型肝炎ウイルス：ウイルス抗原は、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）に由来し得る。ＨＣＶ抗原は、Ｅ１、Ｅ２、Ｅ１／Ｅ２、ＮＳ３４５ポリタンパク質、ＮＳ３４５コアポリタンパク質、コア、および／または非構造領域からのペプチドの１またはそれ以上から選択され得る（Ｈｏｕｇｈｔｏｎら（１９９１）Ｈｅｐａｔｏｌｏｇｙ  １４：３８１−３８８）。
【０１３７】
ラブドウイルス：ウイルス抗原は、リッサウイルス（狂犬病ウイルス）およびベシクロウイルス（ＶＳＶ）などのラブドウイルスに由来し得る。ラブドウイルス抗原は、糖タンパク質（Ｇ）、ヌクレオタンパク質（Ｎ）、大型タンパク質（Ｌ）および非構造タンパク質（ＮＳ）から選択され得る。市販されている狂犬病ウイルスワクチンは、ヒト二倍体細胞または胎仔アカゲザル肺細胞で増殖させた死滅ウイルスを含む。
【０１３８】
カルシウイルス科ウイルス：ウイルス抗原は、ノーウォークウイルス、およびハワイウイルスやスノーマウンテンウイルスなどのノーウォーク様ウイルスのようなカルシウイルス科に由来し得る。
【０１３９】
コロナウイルス：ウイルス抗原は、コロナウイルス、ＳＡＲＳ、ヒト呼吸器コロナウイルス、鳥類伝染性気管支炎（ＩＢＶ）、マウス肝炎ウイルス（ＭＨＶ）およびブタ伝染性胃腸炎ウイルス（ＴＧＥＶ）に由来し得る。コロナウイルス抗原は、スパイク（Ｓ）、エンベロープ（Ｅ）、基質（Ｍ）、ヌクレオキャプシド（Ｎ）タンパク質、および赤血球凝集素エステラーゼ糖タンパク質（ＨＥ）から選択され得る。好ましくは、コロナウイルス抗原はＳＡＲＳウイルスに由来する。ＳＡＲＳウイルス抗原は国際公開公報第ＷＯ０４／９２３６０号に述べられている。
【０１４０】
レトロウイルス：ウイルス抗原は、オンコウイルス、レンチウイルスまたはスプマウイルスなどのレトロウイルスに由来し得る。オンコウイルス抗原は、ＨＴＬＶ−１、ＨＴＬＶ−２またはＨＴＬＶ−５に由来し得る。レンチウイルス抗原は、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２に由来し得る。レトロウイルス抗原は、ｇａｇ、ｐｏｌ、ｅｎｖ、ｔａｘ、ｔａｔ、ｒｅｘ、ｒｅｖ、ｎｅｆ、ｖｉｆ、ｖｐｕおよびｖｐｒから選択され得る。ＨＩＶ抗原は、ｇａｇ（ｐ２４ｇａｇおよびｐ５５ｇａｇ）、ｅｎｖ（ｇｐ１６０およびｇｐ４１）、ｐｏｌ、ｔａｔ、ｎｅｆ、ｒｅｖ、ｖｐｕ、ミニタンパク質（好ましくはｐ５５ｇａｇおよびｇｐ１４０ｖ欠失型）から選択され得る。ＨＩＶ抗原は、以下の菌株：ＨＩＶＩＩＩｂ、ＨＩＶＳＦ２、ＨＩＶＬＡＶ、ＨＩＶＬＡＩ、ＨＩＶＭＮ、ＨＩＶ−１ＣＭ２３５、ＨＩＶ−１ＵＳ４の１またはそれ以上に由来し得る。
【０１４１】
レオウイルス：ウイルス抗原は、オルトレオウイルス、ロタウイルス、オルビウイルスまたはコルチウイルスなどのレオウイルスに由来し得る。レオウイルス抗原は、構造タンパク質λ１、λ２、λ３、μ１、μ２、σ１、σ２またはσ３、あるいは非構造タンパク質σＮＳ、μＮＳまたはσ１ｓから選択され得る。好ましいレオウイルス抗原は、ロタウイルスに由来し得る。ロタウイルス抗原は、ＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３、ＶＰ４（または切断産物ＶＰ５およびＶＰ８）、ＮＳＰ１、ＶＰ６、ＮＳＰ３、ＮＳＰ２、ＶＰ７、ＮＳＰ４またはＮＳＰ５から選択され得る。好ましいロタウイルス抗原は、ＶＰ４（または切断産物ＶＰ５およびＶＰ８）およびＶＰ７を含む。
【０１４２】
パルボウイルス：ウイルス抗原は、パルボウイルスＢ１９などのパルボウイルスに由来し得る。パルボウイルス抗原は、ＶＰ−１、ＶＰ−２、ＶＰ−３、ＮＳ−１およびＮＳ−２から選択され得る。好ましくは、パルボウイルス抗原はキャプシドタンパク質ＶＰ−２である。
【０１４３】
デルタ肝炎ウイルス（ＨＤＶ）：ウイルス抗原は、ＨＤＶ、特にＨＤＶからのδ抗原に由来し得る（例えば米国特許第５，３７８，８１４号参照）。
【０１４４】
Ｅ型肝炎ウイルス（ＨＥＶ）：ウイルス抗原はＨＥＶに由来し得る。
【０１４５】
Ｇ型肝炎ウイルス（ＨＧＶ）：ウイルス抗原はＨＧＶに由来し得る。
【０１４６】
ヒトヘルペスウイルス：ウイルス抗原は、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ）、水痘−帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン‐バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、ヒトヘルペスウイルス６（ＨＨＶ６）、ヒトヘルペスウイルス７（ＨＨＶ７）およびヒトヘルペスウイルス８（ＨＨＶ８）などのヒトヘルペスウイルスに由来し得る。ヒトヘルペスウイルス抗原は、最初期タンパク質（α）、初期タンパク質（β）および後期タンパク質（γ）から選択され得る。ＨＳＶ抗原は、ＨＳＶ−１またはＨＳＶ−２菌株に由来し得る。ＨＳＶ抗原は、糖タンパク質ｇＢ、ｇＣ、ｇＤおよびｇＨ、融合タンパク質（ｇＢ）、または免疫回避タンパク質（ｇＣ、ｇＥまたはｇＩ）から選択され得る。ＶＺＶ抗原は、コア、ヌクレオキャプシド、テグメントまたはエンベロープタンパク質から選択され得る。生弱毒化ＶＺＶワクチンが市販されている。ＥＢＶ抗原は、初期抗原（ＥＡ）タンパク質、ウイルスキャプシド抗原（ＶＣＡ）、および膜抗原（ＭＡ）の糖タンパク質から選択され得る。ＣＭＶ抗原は、キャプシドタンパク質、エンベロープ糖タンパク質（ｇＢおよびｇＨなど）、およびテグメントタンパク質から選択され得る。
【０１４７】
パポバウイルス：抗原は、パピローマウイルスおよびポリオーマウイルスなどのパポバウイルスに由来し得る。パピローマウイルスは、ＨＰＶ血清型１、２、４、５、６、８、１１、１３、１６、１８、３１、３３、３５、３９、４１、４２、４７、５１、５７、５８、６３および６５を含む。好ましくは、ＨＰＶ抗原は血清型６、１１、１６または１８に由来する。ＨＰＶ抗原は、キャプシドタンパク質（Ｌ１）および（Ｌ２）、またはＥ１−Ｅ７、またはそれらの融合物から選択され得る。ＨＰＶ抗原は、好ましくはウイルス様粒子（ＶＬＰ）に製剤される。ポリオーマウイルスは、ＢＫウイルスおよびＪＫウイルスを含む。ポリオーマウイルス抗原は、ＶＰ１、ＶＰ２またはＶＰ３から選択され得る。
【０１４８】
本発明における使用のための他の抗原、組成物、方法および微生物は、Ｐｌｏｔｋｉｎ，Ｓ．Ａ．ら、Ｖａｃｃｉｎｅｓ，第４版、Ｗ．Ｂ．Ｓａｕｎｄｅｒｓ  Ｃｏ．（２００４）；Ｍｕｒｒａｙ，Ｐ．Ｒ．ら、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ、第５版、Ｍｏｓｂｙ  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ（２００５）；Ｊｏｋｌｉｋ，Ｗ．Ｋ．（編集），Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第３版、Ａｐｐｌｅｔｏｎ  ＆  Ｌａｎｇｅ（１９８８）；Ｈｏｗｌｅｙ，Ｐ．Ｍ．ら（編集），Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第４版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（１９９１）；およびＦｉｅｌｄｓ，Ｂ．Ｎ．ら（編集）Ｆｉｅｌｄｓ  Ｖｉｒｏｌｏｇｙ，第４版、Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００１）に述べられている。
【０１４９】
Ｃ．真菌抗原
本発明における使用のための真菌抗原は、以下に示す真菌の１またはそれ以上に由来し得る。
【０１５０】
真菌抗原は、Ｅｐｉｄｅｒｍｏｐｈｙｔｏｎ  ｆｌｏｃｃｕｓｕｍ、オードアン小胞子菌、イヌ小胞子菌、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ  ｄｉｓｔｏｒｔｕｍ、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ  ｅｑｕｉｎｕｍ、石膏状小胞子菌、Ｍｉｃｒｏｓｐｏｒｕｍ  ｎａｎｕｍ、渦状白癬菌、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｅｑｕｉｎｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｇａｌｌｉｎａｅ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｇｙｐｓｅｕｍ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｍｅｇｎｉｎｉ、毛瘡白癬菌、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｑｕｉｎｃｋｅａｎｕｍ、紅色白癬菌、シェーンライン白癬菌、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｔｏｎｓｕｒａｎｓ、Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ、Ｔ．ｖｅｒｒｕｃｏｓｕｍ  ｖａｒ．ａｌｂｕｍ、ｖａｒ．ｄｉｓｃｏｉｄｅｓ、ｖａｒ．ｏｃｈｒａｃｅｕｍ、紫色白癬菌および／またはＴｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ  ｆａｖｉｆｏｒｍｅを含む、皮膚糸状菌に由来し得る。
【０１５１】
真菌病原体は、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、黄色アスペルギルス、黒色アスペルギルス、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｓｙｄｏｗｉ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｇｌａｕｃｕｓ、Ｂｌａｓｔｏｓｃｈｉｚｏｍｙｃｅｓ  ｃａｐｉｔａｔｕｓ、鵞口瘡カンジダ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｅｎｏｌａｓｅ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｓｔｅｌｌａｔｏｉｄｅａ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｐａｒａｋｗｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｌｕｓｉｔａｎｉａｅ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｐｓｅｕｄｏｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｕｉｌｌｉｅｒｍｏｎｓｉ、Ｃｌａｄｏｓｐｏｒｉｕｍ  ｃａｒｒｉｏｎｉｉ、Ｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｉｍｍｉｔｉｓ、Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｄｉｓ、クリプトコッカス・ネオフォルマンス、Ｇｅｏｔｒｉｃｈｕｍ  ｃｌａｖａｔｕｍ、ヒストプラスマ・カプスラーツム、肺炎杆菌、Ｐａｒａｃｏｃｃｉｄｉｏｉｄｅｓ  ｂｒａｓｉｌｉｅｎｓｉｓ、ニューモシスティス・カリニ、Ｐｙｔｈｉｕｍｎ  ｉｎｓｉｄｉｏｓｕｍ、Ｐｉｔｙｒｏｓｐｏｒｕｍ  ｏｖａｌｅ、Ｓａｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓａｅ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｂｏｕｌａｒｄｉｉ、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ、Ｓｃｅｄｏｓｐｏｒｉｕｍ  ａｐｉｏｓｐｅｒｕｍ、Ｓｐｏｒｏｔｈｒｉｘ  ｓｃｈｅｎｃｋｉｉ、Ｔｒｉｃｈｏｓｐｏｒｏｎ  ｂｅｉｇｅｌｉｉ、トキソプラスマ、Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ  ｍａｒｎｅｆｆｅｉ、マラセジア属、フォンセセア属、Ｗａｎｇｉｅｌｌａ属、スポロトリクス属、バシディオボールス属、コニディオボルス属、クモノスカビ属、ケカビ属、アブシディア属、モルティエラ属、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ属、Ｓａｋｓｅｎａｅａ属、アルテルナリア属、Ｃｕｒｖｕｌａｒｉａ属、ヘルミントスポリウム属、フザリウム属、アスペルギルス属、ペニシリウム属、モノリニア種、Ｒｈｉｚｏｃｔｏｎｉａ属、ペシロミセス属、Ｐｉｔｈｏｍｙｃｅｓ属およびクラドスポリウム属に由来し得る。
【０１５２】
真菌抗原を生産するための工程は当技術分野において周知である（米国特許第６，３３３，１６４号参照）。好ましい方法では、細胞壁が実質的に除去されたまたは少なくとも部分的に除去された真菌細胞から入手し得る不溶性分画から、可溶化された分画を抽出して分離し、前記方法は、生真菌細胞を得ること；細胞壁が実質的に除去されたまたは少なくとも部分的に除去された真菌細胞を得ること；細胞壁が実質的に除去されたまたは少なくとも部分的に除去された真菌細胞を破裂させること；不溶性分画を得ること；および不溶性分画から可溶化分画を抽出して分離すること、の工程を含むことを特徴とする。
【０１５３】
Ｄ．ＳＴＤ抗原
本発明の組成物は、性感染症（ＳＴＤ）に由来する１またはそれ以上の抗原を含み得る。そのような抗原は、クラミジア、陰部ヘルペス、肝炎（ＨＣＶなど）、性器いぼ、淋病、梅毒および／または軟性下疳（国際公開公報第ＷＯ００／１５２５５号参照）などのＳＴＤに対する予防または治療を提供し得る。抗原は、１またはそれ以上のウイルスまたは細菌ＳＴＤに由来し得る。本発明における使用のためのウイルスＳＴＤ抗原は、例えばＨＩＶ、単純ヘルペスウイルス（ＨＳＶ−１およびＨＳＶ−２）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）および肝炎（ＨＣＶ）に由来し得る。本発明における使用のための細菌ＳＴＤ抗原は、例えば淋菌、トラコーマクラミジア、梅毒トレポネーマ、軟性下疳菌、大腸菌およびＳｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅに由来し得る。これらの病原体に由来する特異抗原の例は上述されている。
【０１５４】
Ｅ．呼吸器系抗原
本発明の組成物は、呼吸器系疾患を引き起こす病原体に由来する１またはそれ以上の抗原を含み得る。例えば呼吸器系抗原は、オルトミクソウイルス（インフルエンザ）、肺炎ウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶ）、麻疹ウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、ＶＺＶおよびコロナウイルス（ＳＡＲＳ）などの呼吸器系ウイルスに由来し得る。呼吸器系抗原は、肺炎連鎖球菌、緑膿菌、百日咳菌、ヒト結核菌、肺炎マイコプラスマ、Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、炭疽菌およびＭｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓなどの、呼吸器疾患を引き起こす細菌に由来し得る。これらの病原体に由来する特異抗原の例は上述されている。
【０１５５】
Ｆ．小児用ワクチン抗原
本発明の組成物は、小児被験者における使用に適する１またはそれ以上の抗原を含み得る。小児被験者は、典型的には約３歳未満、または約２歳未満、または約１歳未満である。小児用抗原は、６ヶ月、１、２または３年間にわたって複数回投与され得る。小児用抗原は、小児集団を標的し得るウイルスおよび／または小児集団が感染しやすいウイルスに由来し得る。小児用ウイルス抗原は、オルトミクソウイルス（インフルエンザ）、肺炎ウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶおよび流行性耳下腺炎）、麻疹ウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、および水痘−帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン‐バーウイルス（ＥＢＶ）の１またはそれ以上に由来する抗原を含む。小児用細菌抗原は、肺炎連鎖球菌、髄膜炎菌、化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、百日咳菌、黄色ブドウ球菌、破傷風菌（破傷風）、ジフテリア菌（ジフテリア）、インフルエンザ菌Ｂ型（Ｈｉｂ）、緑膿菌、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群連鎖球菌）および大腸菌の１またはそれ以上に由来する抗原を含む。これらの病原体に由来する特異抗原の例は上述されている。
【０１５６】
Ｇ．高齢者または免疫無防備状態個体における使用に適する抗原
本発明の組成物は、高齢者または免疫無防備状態個体における使用に適する１またはそれ以上の抗原を含み得る。高齢者は、典型的には約５０、５５、６０、６５、７０または７５歳以上である。そのような個体は、標的抗原に対する免疫応答を改善するためにより頻繁に、より高用量でまたはアジュバント添加製剤でワクチン接種する必要があり得る。高齢者または免疫無防備状態個体における使用のために標的し得る抗原は、以下の病原体の１またはそれ以上に由来する抗原を含む：髄膜炎菌、肺炎連鎖球菌、化膿連鎖球菌（Ａ群連鎖球菌）、Ｍｏｒａｘｅｌｌａ  ｃａｔａｒｒｈａｌｉｓ、百日咳菌、黄色ブドウ球菌、表皮ブドウ球菌、破傷風菌（破傷風）、ジフテリア菌（ジフテリア）、インフルエンザ菌Ｂ型（Ｈｉｂ）、緑膿菌、レジオネラ・ニューモフィラ菌、Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ａｇａｌａｃｔｉａｅ（Ｂ群連鎖球菌）、Ｅｎｔｅｒｏｃｏｃｃｕｓ  ｆａｅｃａｌｉｓ、ピロリ菌、Ｃｌａｍｙｄｉａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ、オルトミクソウイルス（インフルエンザ）、肺炎ウイルス（ＲＳＶ）、パラミクソウイルス（ＰＩＶおよび流行性耳下腺炎）、麻疹ウイルス（麻疹）、トガウイルス（風疹）、エンテロウイルス（ポリオ）、ＨＢＶ、コロナウイルス（ＳＡＲＳ）、水痘−帯状疱疹ウイルス（ＶＺＶ）、エプスタイン‐バーウイルス（ＥＢＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）。これらの病原体に由来する特異抗原の例は上述されている。
【０１５７】
Ｈ．青年用ワクチンにおける使用に適する抗原
本発明の組成物は、青年期被験者における使用に適する１またはそれ以上の抗原を含み得る。青年被験者は、典型的には約１０−約２０歳、または約１２−約１４歳および約１９または２０歳である。青年は、以前に投与された小児用抗原の追加免疫を必要とし得る。青年における使用に適すると考えられる小児用抗原は上述されている。加えて、青年は、性活動の開始前に防御または治療免疫を確実にするためにＳＴＤ病原体に由来する抗原を摂取する標的であり得る。青年における使用に適し得るＳＴＤ抗原は上述されている。
【０１５８】
Ｉ．腫瘍抗原
本発明の組成物は、１またはそれ以上の腫瘍または癌抗原を含み得る。腫瘍抗原は、例えば、ポリペプチド腫瘍抗原または糖タンパク質腫瘍抗原などのペプチド含有腫瘍抗原であり得る。腫瘍抗原はまた、例えば、糖脂質腫瘍抗原またはガングリオシド腫瘍抗原などの糖含有腫瘍抗原であり得る。腫瘍抗原はさらに、例えば、ポリペプチド含有腫瘍抗原、例えばＲＮＡベクター構築物またはプラスミドＤＮＡなどのＤＮＡベクター構築物を発現するポリヌクレオチド含有腫瘍抗原であり得る。
【０１５９】
腫瘍抗原は、（ａ）ポリペプチド（例えば８−２０アミノ酸長にわたり得るが、この範囲外の長さも一般的である）、リポポリペプチドおよび糖タンパク質を含む、ポリペプチド含有腫瘍抗原、（ｂ）多糖、ムチン、ガングリオシド、糖脂質および糖タンパク質を含む、糖含有腫瘍抗原、および（ｃ）抗原性ポリペプチドを発現するポリヌクレオチドを含む。
【０１６０】
腫瘍抗原は、例えば（ａ）癌細胞に関連する完全長分子、（ｂ）欠失、付加および／または置換部分を有する分子を含む、前記完全長分子のホモログおよび修飾形態、および（ｃ）前記完全長分子のフラグメントであり得る。腫瘍抗原は組換え形態で提供され得る。腫瘍抗原は、例えばＣＤ８＋リンパ球によって認識されるクラスＩ拘束性抗原またはＣＤ４＋リンパ球によって認識されるクラスＩＩ拘束性抗原を含む。
【０１６１】
以下を含む、数多くの腫瘍抗原が当技術分野において公知である：（ａ）ＮＹ−ＥＳＯ−１、ＳＳＸ２、ＳＣＰ１などの癌精巣抗原ならびにＲＡＧＥ、ＢＡＧＥ、ＧＡＧＥおよびＭＡＧＥファミリーポリペプチド、例えばＧＡＧＥ−１、ＧＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−１、ＭＡＧＥ−２、ＭＡＧＥ−３、ＭＡＧＥ−４、ＭＡＧＥ−５、ＭＡＧＥ−６およびＭＡＧＥ−１２（例えば黒色腫、肺、頭頸部、ＮＳＣＬＣ、乳房、胃腸および膀胱腫瘍に対して使用できる）、（ｂ）突然変異抗原、例えばｐ５３（様々な固形腫瘍、例えば結腸直腸、肺、頭頸部癌に関連する）、ｐ２１／Ｒａｓ（例えば黒色腫、膵癌および結腸直腸癌に関連する）、ＣＤＫ４（例えば黒色腫に関連する）、ＭＵＭ１（例えば黒色腫に関連する）、カスパーゼ−８（例えば頭頸部癌に関連する）、ＣＩＡ０２０５（例えば膀胱癌に関連する）、ＨＬＡ−Ａ２−Ｒ１７０１、βカテニン（例えば黒色腫に関連する）、ＴＣＲ（例えばＴ細胞非ホジキンリンパ腫に関連する）、ＢＣＲ−ａｂｌ（例えば慢性骨髄性白血病に関連する）、トリオースリン酸イソメラーゼ、ＫＩＡ０２０５、ＣＤＣ−２７およびＬＤＬＲ−ＦＵＴ、（ｃ）過剰発現抗原、例えばガレクチン４（例えば結腸直腸癌に関連する）、ガレクチン９（例えばホジキン病に関連する）、プロテイナーゼ３（例えば慢性骨髄性白血病に関連する）、ＷＴ１（例えば様々な白血病に関連する）、カルボニックアンヒドラーゼ（例えば腎癌に関連する）、アルドラーゼＡ（例えば肺癌に関連する）、ＰＲＡＭＥ（例えば黒色腫に関連する）、ＨＥＲ−２／ｎｅｕ（例えば乳房、結腸、肺および卵巣癌に関連する）、αフェトプロテイン（例えば肝細胞癌に関連する）、ＫＳＡ（例えば結腸直腸癌に関連する）、ガストリン（例えば膵癌および胃癌に関連する）、テロメラーゼ触媒タンパク質、ＭＵＣ−１（例えば乳癌および卵巣癌に関連する）、Ｇ−２５０（例えば腎細胞癌に関連する）、ｐ５３（例えば乳癌、結腸癌に関連する）、および癌胎児性抗原（例えば乳癌、肺癌、および結腸直腸癌などの胃腸管の癌に関連する）、（ｄ）共有抗原、例えばＭＡＲＴ−１／Ｍｅｌａｎ  Ａなどの黒色腫−メラノサイト分化抗原、ｇｐ１００、ＭＣ１Ｒ、メラノサイト刺激ホルモン受容体、チロシナーゼ、チロシナーゼ関連タンパク質−１／ＴＲＰ１およびチロシナーゼ関連タンパク質−２／ＴＲＰ２（例えば黒色腫に関連する）、（ｅ）例えば前立腺癌に関連する、ＰＡＰ、ＰＳＡ、ＰＳＭＡ、ＰＳＨ−Ｐ１、ＰＳＭ−Ｐ１、ＰＳＭ−Ｐ２などの前立腺関連抗原、（ｆ）免疫グロブリンイディオタイプ（例えば骨髄腫およびＢ細胞リンパ腫に関連する）、および（ｇ）（ｉ）シアリルＴｎおよびシアリルＬｅＸ（例えば乳癌および結腸直腸癌に関連する）などの糖タンパク質ならびに様々なムチン；糖タンパク質は輸送タンパク質に結合していてもよい（例えばＭＵＣ−１はＫＬＨに結合し得る）；（ｉｉ）リポポリペプチド（例えば脂質部分に連結されたＭＵＣ−１）；（ｉｉｉ）輸送タンパク質に（例えばＫＬＨに）結合していてもよい、多糖（例えばＧｌｏｂｏ  Ｈ合成六糖）；（ｉｖ）同じく輸送タンパク質（例えばＫＬＨ）に結合していてもよい、ＧＭ２、ＧＭ１２、ＧＤ２、ＧＤ３などのガングリオシド（���えば脳の癌、肺癌、黒色腫に関連する）を含む、ポリペプチド含有抗原および糖含有抗原などの他の腫瘍抗原。
【０１６２】
他の腫瘍抗原は、ｐ１５、Ｈｏｍ／Ｍｅｌ−４０、Ｈ−Ｒａｓ、Ｅ２Ａ−ＰＲＬ、Ｈ４−ＲＥＴ、ＩＧＨ−ＩＧＫ、ＭＹＬ−ＲＡＲ、エプスタイン‐バーウイルス抗原、ＥＢＮＡ、Ｅ６およびＥ７を含むヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）抗原、Ｂ型およびＣ型肝炎ウイルス抗原、ヒトＴリンパ球向性ウイルス抗原、ＴＳＰ−１８０、ｐ１８５ｅｒｂＢ２、ｐ１８０ｅｒｂＢ−３、ｃ−ｍｅｔ、ｍｎ−２３Ｈ１、ＴＡＧ−７２−４、ＣＡ１９−９、ＣＡ７２−４、ＣＡＭ１７．１、ＮｕＭａ、Ｋ−ｒａｓ、ｐ１６、ＴＡＧＥ、ＰＳＣＡ、ＣＴ７、４３−９Ｆ、５Ｔ４、７９１Ｔｇｐ７２、β−ＨＣＧ、ＢＣＡ２２５、ＢＴＡＡ、ＣＡ１２５、ＣＡ１５−３（ＣＡ２７．２９／ＢＣＡＡ）、ＣＡ１９５、ＣＡ２４２、ＣＡ−５０、ＣＡＭ４３、ＣＤ６８／ＫＰ１、ＣＯ−０２９、ＦＧＦ−５、Ｇａ７３３（ＥｐＣＡＭ）、ＨＴｇｐ−１７５、Ｍ３４４、ＭＡ−５０、ＭＧ７−Ａｇ、ＭＯＶ１８、ＮＢ／７０Ｋ、ＮＹ−ＣＯ−１、ＲＣＡＳ１、ＳＤＣＣＡＧ１６、ＴＡ−９０（Ｍａｃ−２結合タンパク質／シクロフィリンＣ関連タンパク質）、ＴＡＡＬ６、ＴＡＧ７２、ＴＬＰ、ＴＰＳ等を含む。これらならびに他の細胞成分は、例えば米国特許公開第２００２／０００７１７３号およびその中で引用される参考文献に述べられている。
【０１６３】
本発明に従ったポリヌクレオチド含有抗原は、典型的には上記で列記したようなポリペプチド癌抗原をコードするポリヌクレオチドを含む。好ましいポリヌクレオチド含有抗原は、ポリペプチド癌抗原をインビボで発現することができる、プラスミドベクター（例えばｐＣＭＶ）などのＤＮＡまたはＲＮＡベクター構築物を含む。
【０１６４】
腫瘍抗原は、例えば突然変異したまたは変化した細胞成分に由来し得る。変化後、細胞成分はもはやそれらの調節機能を果たさず、それ故細胞は制御されない増殖を経験し得る。変化した細胞成分の代表的な例は、ｒａｓ、ｐ５３、Ｒｂ、ウィルムス腫瘍遺伝子によってコードされる変化したタンパク質、ユビキチン、ムチン、ＤＣＣ、ＡＰＣおよびＭＣＣ遺伝子によってコードされるタンパク質、ならびにｎｅｕ、甲状腺ホルモン受容体、血小板由来増殖因子（ＰＤＧＦ）受容体、インスリン受容体、上皮増殖因子（ＥＧＦ）受容体およびコロニー刺激因子（ＣＳＦ）受容体などの受容体または受容体様構造を含む。これらならびに他の細胞成分は、例えば米国特許第５，６９３，５２２号およびその中で引用される参考文献に述べられている。
【０１６５】
細菌およびウイルス抗原は、癌の治療のために本発明の組成物と共に使用し得る。ＣＲＭ１９７などの輸送タンパク質、破傷風トキソイドまたはネズミチフス菌抗原は、癌の治療のために本発明の化合物と併用／複合して使用し得る。癌抗原併用療法は、既存の治療法と比較して高い効果とバイオアベイラビリティーを示す。
【０１６６】
癌または腫瘍抗原に関するさらなる情報は、例えばＭｏｉｎｇｅｏｎ（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ  １９：１３０５−１３２６；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（２００１）Ｎａｔｕｒｅ  ４１１：３８０−３８４；Ｄｅｒｍｉｎｅら（２００２）Ｂｒｉｔ．Ｍｅｄ．Ｂｕｌｌ．６２：１４９−１６２；Ｅｓｐｉｎｏｚａ−Ｄｅｌｇａｄｏ（２００２）Ｔｈｅ  Ｏｎｃｏｌｏｇｉｓｔ  ７（補遺３）：２０−３３；Ｄａｖｉｓら（２００３）Ｊ．Ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ  Ｂｉｏｌ．２３：３−２９；Ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｅｙｎｄｅら（１９９５）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７：６７４−６８１；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（１９９７）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １８：１７５−１８２；Ｏｆｆｒｉｎｇａら（２０００）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２：５７６−５８２；Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ（１９９９）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  １０：２８１−２８７；Ｓａｈｉｎら（１９９７）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．９：７０９−７１６；Ｏｌｄら（１９９８）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８７：１１６３−１１６７；Ｃｈａｕｘら（１９９９）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８９：７６７−７７８；Ｇｏｌｄら（１９６５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１２２：４６７−４６８；Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎら（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．４５：１−６；Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎら（１９９７）Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．４５：１０−１９；Ｔａｙｌｏｒ−Ｐａｐａｄｉｍｉｔｒｉｏｕ（１９９７）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  １８：１０５−１０７；Ｚｈａｏら（１９９５）Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８２：６７−７４；Ｔｈｅｏｂａｌｄら（１９９５）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９２：１１９９３−１１９９７；Ｇａｕｄｅｒｎａｃｋ（１９９６）Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ２：３−９；国際公開広報第ＷＯ９１／０２０６２号；米国特許第６，０１５，５６７号；国際公開広報第ＷＯ０１／０８６３６号；国際公開広報第ＷＯ９６／３０５１４号；米国特許第５，８４６，５３８号；および米国特許第５，８６９，４４５号に見出される。
【０１６７】
さらなる抗原はまた、外膜小胞（ＯＭＶ）製剤を含み得る。
【０１６８】
さらなる製剤方法および抗原（特に腫瘍抗原）は、米国特許公開第２００４／０２０２６８０号において提供される。また米国特許第６，８８４，４３５号も参照のこと。
【０１６９】
２．免疫アジュバント
ある実施形態では、本発明のワクチンは他の免疫調節剤と併用して投与される。特に、組成物は一般にアジュバントを含む。例えば、アジュバントは抗原含有組成物と同時に、例えば同じ組成物中でまたは別々の組成物中で投与され得る。あるいは、アジュバントは抗原投与の前にまたは抗原投与後に投与され得る。
【０１７０】
本発明に関する使用のためのアジュバントは、以下に述べるものの１またはそれ以上を含むが、これらに限定されない。
【０１７１】
Ａ．無機質含有組成物
アジュバントとしての使用に適する無機質含有組成物は、アルミニウム塩およびカルシウム塩などの無機塩を含む。本発明は、水酸化物（例えばオキシ水酸化物）、リン酸塩（例えばヒドロキシリン酸塩、オルトリン酸塩）、硫酸塩等のような無機塩（例えばＶａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．とＮｅｗｍａｎ，Ｍ．Ｊ．編集）（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ）１９９５，第８および９章参照）、または種々の無機化合物の混合物（例えば、場合によりリン酸塩過剰の、リン酸塩と水酸化物アジュバントの混合物）を含み、それらの化合物は何らかの適切な形態（例えばゲル、結晶、非晶質等）をとり、塩に吸着していることが好ましい。無機質含有組成物はまた、金属塩の粒子としても製剤され得る（国際公開広報第ＷＯ００／２３１０５号）。
【０１７２】
アルミニウム塩は、Ａｌ３＋の用量が０．２−１．０ｍｇ／用量であるように本発明のワクチンに含有され得る。
【０１７３】
１つの実施形態では、本発明における使用のためのアルミニウムベースのアジュバントは、ミョウバン（硫酸カリウムアルミニウム（ＡｌＫ（ＳＯ４）２））、または、リン酸緩衝液中の抗原をミョウバンと混合し、その後水酸化アンモニウムまたは水酸化ナトリウムなどの塩基で滴定および沈殿させることによってインサイチューで形成されるような、ミョウバン誘導体である。
【０１７４】
本発明のワクチン製剤における使用のためのもう１つのアルミニウムベースのアジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバント（ＡＬ（ＯＨ）３）または、約５００ｍ２／ｇの表面積を有する、優れた吸着剤である結晶性オキシ水酸化アルミニウム（ＡｌＯＯＨ）である。もう１つの実施形態では、アルミニウムベースのアジュバントは、水酸化アルミニウムアジュバントのヒドロキシル基の一部または全部の代わりにリン酸基を含む、リン酸アルミニウムアジュバント（ＡｌＰＯ４）またはヒドロキシリン酸アルミニウムである。ここで提供される好ましいリン酸アルミニウムアジュバントは、非晶質であり、酸性、塩基性および中性媒質に可溶性である。
【０１７５】
もう１つの実施形態では、アジュバントは、リン酸アルミニウムと水酸化アルミニウムの両方を含む。そのより特定の実施形態では、アジュバントは、リン酸アルミニウム対水酸化アルミニウムの重量比で２：１、３：１、４：１、５：１、６：１、７：１、８：１、９：１または９：１以上の比率のように、水酸化アルミニウムを上回る量のリン酸アルミニウムを有する。もう１つの実施形態では、ワクチン中のアルミニウム塩は、ワクチン用量当たり０．４−１．０ｍｇ、またはワクチン用量当たり０．４−０．８ｍｇ、またはワクチン用量当たり０．５−０．７ｍｇ、またはワクチン用量当たり約０．６ｍｇで存在する。
【０１７６】
一般に、好ましいアルミニウムベースのアジュバント、または、リン酸アルミニウム対水酸化アルミニウムのような、複数のアルミニウムベースのアジュバントの比率は、抗原が所望ｐＨでアジュバントと反対の電荷を担持するように分子間の静電引力の最適化によって選択される。例えばリン酸アルミニウムアジュバント（等電点＝４）はｐＨ７．４でリゾチームを吸着するが、アルブミンは吸着しない。アルブミンが標的である場合は、水酸化アルミニウムアジュバントが選択される（等電点＝１１．４）。あるいは、リン酸塩による水酸化アルミニウムの前処理はその等電点を低下させ、より塩基性の抗原にとって好ましいアジュバントにする。
【０１７７】
Ｂ．油性乳剤
アジュバントとしての使用に適する油性乳剤組成物および製剤（ムラミルペプチドまたは細菌細胞壁成分などの他の特異的免疫刺激剤と共にまたは他の免疫刺激剤なしで）は、ＭＦ５９（５％スクアレン、０．５％トゥイーン８０および０．５％スパン８５、マイクロフルイダイザーを用いてサブミクロン粒子に製剤されている）などのスクアレン−水乳剤を含む。国際公開広報第ＷＯ９０／１４８３７号参照。また、Ｐｏｄｄａ（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ  １９：２６７３−２６８０；Ｆｒｅｙら（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅ  ２１：４２３４−４２３７も参照のこと。ＭＦ５９は、ＦＬＵＡＤ（商標）インフルエンザウイルス三価サブユニットワクチンにおいてアジュバントとして使用されている。
【０１７８】
組成物における使用のための特に好ましいアジュバントは、サブミクロンの水中油型乳剤である。ここでの使用のための好ましいサブミクロン水中油型乳剤は、４−５％ｗ／ｖスクアレン、０．２５−１．０％ｗ／ｖトゥイーン８０（商標）（モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン）および／または０．２５−１．０％スパン８５（商標）（トリオレイン酸ソルビタン）、および場合によりＮ−アセチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）を含むサブミクロン水中油型乳剤などの、場合により様々な量のＭＴＰ−ＰＥを含むスクアレン／水乳剤、例えば「ＭＦ５９」として知られるサブミクロン水中油型乳剤（国際公開公報第ＷＯ９０／１４８３７号；米国特許第６，２９９，８８４号；米国特許第６，４５１，３２５号；およびＯｔｔら、“ＭＦ５９――Ｄｅｓｉｇｎ  ａｎｄ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｓａｆｅ  ａｎｄ  Ｐｏｔｅｎｔ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  ｆｏｒ  Ｈｕｍａｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ”ｉｎ  Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ  Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｐｏｗｅｌｌ，Ｍ．Ｆ．とＮｅｗｍａｎ，Ｍ．Ｊ．編集）（Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ：Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ）１９９５，ｐ．２７７−２９６）である。ＭＦ５９は、１１０Ｙ型マイクロフルイダイザー（Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，Ｎｅｗｔｏｎ，ＭＡ）などのマイクロフルイダイザーを用いてサブミクロン粒子に製剤された、４−５％ｗ／ｖスクアレン（例えば４．３％）、０．２５−０．５％ｗ／ｖトゥイーン８０（商標）および０．５％ｗ／ｖスパン８５（商標）を含み、および場合により様々な量のＭＴＰ−ＰＥを含む。例えばＭＴＰ−ＰＥは、約０−５００μｇ／用量、より好ましくは０−２５０μｇ／用量、最も好ましくは０−１００μｇ／用量の量で存在し得る。ここで使用する、「ＭＦ５９−０」という用語は、ＭＴＰ−ＰＥを含まない上記サブミクロン水中油型乳剤を指し、一方ＭＦ５９−ＭＴＰという用語は、ＭＴＰ−ＰＥを含む製剤を表わす。例えば「ＭＦ５９−１００」は、ＭＴＰ−ＰＥ  １００μｇ／用量を含む、等である。ここでの使用のためのもう１つのサブミクロン水中油型乳剤、ＭＦ６９は、４．３％ｗ／ｖスクアレン、０．２５％ｗ／ｖトゥイーン８０（商標）および０．７５％ｗ／ｖスパン８５（商標）、および場合によりＭＴＰ−ＰＥを含む。さらにもう１つのサブミクロン水中油型乳剤は、やはりサブミクロン乳剤にマイクロフルイダイズされた、１０％スクアレン、０．４％トゥイーン８０（商標）、５％プルロニックブロックポリマーＬ１２１およびｔｈｒ−ＭＤＰを含む、ＳＡＦとしても知られるＭＦ７５である。ＭＦ７５−ＭＴＰは、ＭＴＰ−ＰＥ  １００−４００μｇ／用量のような、ＭＴＰを含むＭＦ７５製剤を表わす。
【０１７９】
組成物における使用のための、サブミクロン水中油型乳剤、その製造方法およびムラミルペプチドなどの免疫刺激剤は、国際公開公報第ＷＯ９０／１４８３７号；米国特許第６，２９９，８８４号；および米国特許第６，４５１，３２５号に詳述されている。
【０１８０】
フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）およびフロイント不完全アジュバント（ＩＦＡ）も、本発明におけるアジュバントとして使用し得る。
【０１８１】
Ｃ．サポニン製剤
サポニン製剤も、本発明におけるアジュバントとしての使用に適する。サポニンは、広範囲の植物種の樹皮、葉、幹、根、さらには花において認められるステロールグリコシドおよびトリテルペノイドグリコシドの異種群である。Ｑｕｉｌｌａｉａ  ｓａｐｏｎａｒｉａ  Ｍｏｌｉｎａの木の樹皮から単離されるサポニンは、アジュバントとして広く研究されてきた。サポニンはまた、Ｓｍｉｌａｘ  ｏｒｎａｔａ（サルサパリラ）、Ｇｙｐｓｏｐｈｉｌｌａ  ｐａｎｉｃｕｌａｔａ（ブライダルベール）およびＳａｐｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉａｎａｌｉｓ（サボンソウの根）から商業的に入手できる。サポニンアジュバント製剤は、ＱＳ２１などの精製製剤、ならびにＩＳＣＯＭなどの脂質製剤を含む。サポニンアジュバント製剤は、ＳＴＩＭＵＬＯＮ（登録商標）アジュバント（Ａｎｔｉｇｅｎｉｃｓ，Ｉｎｃ．，Ｌｅｘｉｎｇｔｏｎ，ＭＡ）を含む。
【０１８２】
サポニン組成物は、高速薄層クロマトグラフィー（ＨＰ−ＴＬＣ）および逆相高速液体クロマトグラフィー（ＲＰ−ＨＰＬＣ）を用いて精製されてきた。ＱＳ７、ＱＳ１７、ＱＳ１８、ＱＳ２１、ＱＨ−Ａ、ＱＨ−ＢおよびＱＨ−Ｃを含む、これらの手法を用いた特定精製画分が同定されている。好ましくは、サポニンはＱＳ２１である。ＱＳ２１の生産方法は、米国特許第５，０５７，５４０号に開示されている。サポニン製剤はまた、コレステロールなどのステロールを含み得る（国際公開公報第ＷＯ９６／３３７３９号参照）。
【０１８３】
サポニンとコレステロールとの組合せは、免疫刺激複合体（ＩＳＣＯＭ）と呼ばれる独特の粒子を形成するために使用できる。ＩＳＣＯＭはまた、典型的にはホスファチジルエタノールアミンまたはホスファチジルコリンなどのリン脂質を含む。いかなる公知のサポニンもＩＳＣＯＭにおいて使用できる。好ましくは、ＩＳＣＯＭは、Ｑｕｉｌ  Ａ、ＱＨＡおよびＱＨＣの１またはそれ以上を含む。ＩＳＣＯＭはさらに、欧州特許第０１０９９４２号、国際公開公報第ＷＯ９６／１１７１１号および同第ＷＯ９６／３３７３９号に述べられている。場合により、ＩＳＣＯＭは付加的な界面活性剤を含まなくてもよい。国際公開公報第ＷＯ００／０７６２１号参照。
【０１８４】
サポニンベースのアジュバントの開発の総説は、Ｂａｒｒら（１９９８）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．３２：２４７−２７１に見出される。Ｓｊｏｌａｎｄｅｒら（１９９８）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．３２：３２１−３３８も参照のこと。
Ｄ．ビロゾームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）
ビロゾームおよびウイルス様粒子（ＶＬＰ）もアジュバントとして適切である。これらの構造は一般に、場合によりリン脂質と組み合わせたまたはリン脂質と共に製剤された、ウイルスからの１またはそれ以上のタンパク質を含む。それらは一般に非病原性、非複製性であり、一般にいかなる天然ウイルスゲノムも含まない。ウイルスタンパク質は、組換えによって生産され得るかまたは全ウイルスから単離され得る。ビロゾームまたはＶＬＰにおける使用に適するこれらのウイルスタンパク質は、インフルエンザウイルス（ＨＡまたはＮＡなど）、Ｂ型肝炎ウイルス（コアまたはキャプシドタンパク質など）、Ｅ型肝炎ウイルス、麻疹ウイルス、シンドビスウイルス、ロタウイルス、口蹄疫ウイルス、レトロウイルス、ノーウォークウイルス、ヒトパピローマウイルス、ＨＩＶ、ＲＮＡファージ、Ｑβファージ（コートタンパク質など）、ＧＡファージ、ｆｒファージ、ＡＰ２０５ファージ、およびＴｙ（レトロトランスポゾンＴｙタンパク質ｐ１など）に由来するタンパク質を含む。ＶＬＰは、国際公開公報第ＷＯ０３／０２４４８０号；同第ＷＯ０３／０２４４８１号；Ｎｉｉｋｕｒａら（２００２）Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ２９３：２７３−２８０；Ｌｅｎｚら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６６（９）５３４６−５３５５；Ｐｉｎｔｏら（２００３）Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１８８：３２７−３３８；およびＧｅｒｂｅｒら（２００１）Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７５（１０）：４７５２−４７６０においてさらに論じられている。ビロゾームは、例えばＧｌｕｃｋら（２００２）Ｖａｃｃｉｎｅ  ２０：Ｂ１０−Ｂ１６においてさらに論じられている。免疫増強性再構成インフルエンザビロゾーム（ＩＲＩＶ）が、鼻内三価ＩＮＦＬＥＸＡＬ（商標）製品（ＭｉｓｃｈｌｅｒとＭｅｔｃａｌｆｅ（２００２）Ｖａｃｃｉｎｅ  ２０、Ｓｕｐｐｌ  ５：Ｂ１７−２３）およびＩＮＦＬＵＶＡＣ  ＰＬＵＳ（商標）製品におけるサブユニット抗原送達システムとして使用されている。
【０１８５】
Ｅ．細菌または微生物誘導体
本発明における使用に適するアジュバントは、以下のような細菌または微生物誘導体を含む：
（１）腸内細菌リポ多糖（ＬＰＳ）の非毒性誘導体：そのような誘導体は、モノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）および３−Ｏ−脱アシル化ＭＰＬ（３ｄＭＰＬ）を含む。３ｄＭＰＬは、４、５または６位がアシル化された鎖を有する３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａの混合物である。３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリル脂質Ａの好ましい「微小粒子」形態は、欧州特許第０６８９４５４号に開示されている。そのような３ｄＭＰＬの「微小粒子」は、０．２２ミクロンの膜を通して滅菌ろ過されるのに十分な程度に小さい（欧州特許第０６８９４５４号参照）。他の非毒性ＬＰＳ誘導体は、リン酸アミノアルキルグルコサミニド誘導体、例えばＲＣ−５２９などのモノホスホリル脂質Ａミミックを含む。Ｊｏｈｎｓｏｎら（１９９９）Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．９：２２７３−２２７８参照。
【０１８６】
（２）脂質Ａ誘導体：脂質Ａ誘導体は、ＯＭ−１７４などの大腸菌からの脂質Ａの誘導体を含む。ＯＭ−１７４は、例えばＭｅｒａｌｄｉら（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅ  ２１：２４８５−２４９１；およびＰａｊａｋら（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅ  ２１：８３６−８４２に述べられている。
【０１８７】
（３）免疫刺激オリゴヌクレオチド：本発明におけるアジュバントとしての使用に適する免疫刺激オリゴヌクレオチドまたはポリマー分子は、ＣｐＧモチーフ（非メチル化シトシンとそれに続くグアノシンを含む、リン酸結合によって連結された配列）を含むヌクレオチド配列を含む。パリンドロームまたはポリ（ｄＧ）配列を含む細菌二本鎖ＲＮＡまたはオリゴヌクレオチドも、免疫刺激性であることが示された。ＣｐＧ配列は、ホスホロチオエート修飾などのヌクレオチド修飾／類似体を含むことができ、二本鎖または一本鎖であり得る。場合により、グアノシンは、２’−デオキシ−７−デアザグアノシンなどの類似体で置換されていてもよい。可能な類似体置換の例に関しては、Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら（２００３）Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．３１（９）：２３９３−２４００；国際公開公報第ＷＯ０２／２６７５７号；および同第ＷＯ９９／６２９２３号参照。ＣｐＧオリゴヌクレオチドのアジュバント作用はさらに、Ｋｒｉｅｇ（２００３）Ｎａｔ．Ｍｅｄ．９（７）：８３１−８３５；ＭｃＣｌｕｓｋｉｅら（２００２）ＦＥＭＳ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．３２：１７９−１８５；国際公開公報第ＷＯ９８／４０１００号；米国特許第６，２０７，６４６号；同第６，２３９，１１６号；および同第６，４２９，１９９号において論じられている。
【０１８８】
ＣｐＧ配列は、モチーフＧＴＣＧＴＴまたはＴＴＣＧＴＴなどのＴＬＲ９を対象とし得る。Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３１（第３部）：６５４−６５８参照。ＣｐＧ配列は、ＣｐＧ−Ａ  ＯＤＮなどのＴｈ１免疫応答を誘導することに特異的であり得るか、またはＣｐＧ−Ｂ  ＯＤＮなどのＢ細胞応答を誘導することにより特異的であり得る。ＣｐＧ−ＡおよびＣｐＧ−Ｂ  ＯＤＮは、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌら（２００３）Ｊ．Ｉｍｍｎｏｌ．１７０（８）：４０６１−４０６８；Ｋｒｉｅｇ（２００２）ＴＲＥＮＤＳ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３（２）：６４−６５；および国際公開公報第ＷＯ０１／９５９３５号において論じられている。好ましくは、ＣｐＧはＣｐＧ−Ａ  ＯＤＮである。
【０１８９】
好ましくは、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、５’末端が受容体認識のためにアクセス可能であるように構築される。場合により、２個のＣｐＧオリゴヌクレオチドがそれらの３’末端で結合して、「イムノマー」を形成し得る。例えばＫａｎｄｉｍａｌｌａら（２００３）ＢＢＲＣ  ３０６：９４８−９５３；Ｋａｎｄｉｍａｌｌａら（２００３）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．Ｔｒａｎｓ．３１（ｐａｒｔ３）：６６４−６５８；Ｂｈａｇａｔら（２００３）ＢＢＲＣ  ３００：８５３−８６１；および国際公開公報第ＷＯ０３／０３５８３６号参照。
【０１９０】
免疫刺激オリゴヌクレオチドおよびポリマー分子はまた、ポリビニル骨格（Ｐｉｔｈａら（１９７０）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  ２０４（１）：３９−４８；Ｐｉｔｈａら（１９７０）Ｂｉｏｐｏｌｙｍｅｒｓ  ９（８）：９６５−９７７）、およびモルホリノ骨格（米国特許第５，１４２，０４７号；同第５，１８５，４４４号）などの、しかしこれらに限定されない、選択的ポリマー骨格構造を含む。様々な他の荷電および非荷電ポリヌクレオチド類似体が当技術分野において公知である。非荷電結合（例えばメチルホスホネート、ホスホトリエステル、ホスホアミデート、カルバメート）および荷電結合（例えばホスホロチオエートおよびホスホロジチオエート）を含むが、これらに限定されない、数多くの骨格修飾が当技術分野において公知である。
【０１９１】
（４）ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその無毒化誘導体：細菌ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその無毒化誘導体は、本発明におけるアジュバントとして使用し得る。好ましくは、タンパク質は、大腸菌（すなわち大腸菌易熱性エンテロトキシン「ＬＴ」）、コレラ菌（「ＣＴ」）または百日咳菌（「ＰＴ」）に由来する。粘膜アジュバントとしての無毒化ＡＤＰ−リボシル化毒素の使用は国際公開公報第ＷＯ９５／１７２１１号に、および非経口アジュバントとしての使用は国際公開公報第ＷＯ９８／４２３７５号に述べられている。好ましくは、アジュバントは、ＬＴ−Ｋ６３、ＬＴ−Ｒ７２およびＬＴＲ１９２Ｇなどの無毒化ＬＴ突然変異体である。ＡＤＰ−リボシル化毒素およびその無毒化誘導体、特にＬＴ−Ｋ６３およびＬＴ−Ｒ７２のアジュバントとしての使用は、以下の参考文献に見出される：Ｂｅｉｇｎｏｎら（２００２）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７０（６）：３０１２−３０１９；Ｐｉｚｚａら（２００１）Ｖａｃｃｉｎｅ  １９：２５３４−２５４１；Ｐｉｚｚａら（２０００）Ｉｎｔ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．２９０（４−５）：４５５−４６１；Ｓｃｈａｒｔｏｎ−Ｋｅｒｓｔｅｎら（２０００）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６８（９）：５３０６−５３１３；Ｒｙａｎら（１９９９）Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．６７（１２）：６２７０−６２８０；Ｐａｒｔｉｄｏｓら（１９９９）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｌｅｔｔ．６７（３）：２０９−２１６；Ｐｅｐｐｏｌｏｎｉら（２００３）Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ２（２）：２８５−２９３；およびＰｉｎｅら（２００２）Ｊ．Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ８５（１−３）：２６３−２７０。アミノ酸置換についての数字参照は、好ましくは、Ｄｏｍｅｎｉｇｈｉｎｉら（１９９５）Ｍｏｌ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．１５（６）：１１６５−１１６７に示されているＡＤＰ−リボシル化毒素のＡおよびＢサブユニットのアラインメントに基づく。
【０１９２】
「ＥＲ  ８０３０５８」、「ＥＲ  ８０３７３２」、「ＥＲ  ８０４０５３」、「ＥＲ  ８０４０５８」、「ＥＲ  ８０４０５９」、「ＥＲ  ８０４４４２」、「ＥＲ  ８０４６８０」、「ＥＲ  ８０４７６４」、「ＥＲ  ８０３０２２」または「ＥＲ  ８０４０５７」などの、国際公開広報第ＷＯ０３／０１１２２３において定義される、式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの化合物、またはそれらの塩：
【０１９３】
【化１】
2009527572.tif 000002
例えば：
【０１９４】
【化２】
2009527572.tif 000003
も、アジュバントとして使用することができる。
【０１９５】
Ｆ．ヒト免疫調節剤
アジュバントとしての使用に適するヒト免疫調節剤は、インターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−１２等）、インターフェロン（例えばインターフェロン−γ）、マクロファージコロニー刺激因子（Ｍ−ＣＳＦ）および腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）などのサイトカインを含む。
【０１９６】
Ｇ．生体接着剤および粘膜接着剤
生体接着剤および粘膜接着剤もアジュバントとして使用し得る。適切な生体接着剤は、エステル化ヒアルロン酸ミクロスフェア（Ｓｉｎｇｈら（２００１）Ｊ．Ｃｏｎｔ．Ｒｅｌｅａｓｅ．７０：２６７−２７６）、またはポリアクリル酸の架橋誘導体、ポリビニルアルコール、ポリビニルピロリドン、多糖およびカルボキシメチルセルロースなどの粘膜接着剤を含む。キトサンおよびその誘導体も、本発明におけるアジュバントとして使用し得る（国際公開公報第ＷＯ９９／２７９６０号参照）。
【０１９７】
Ｈ．リポソーム
アジュバントとしての使用に適するリポソーム製剤の例は、米国特許第６，０９０，４０６号；同第５，９１６，５８８号；および欧州特許公開第０６２６１６９号に述べられている。
【０１９８】
Ｉ．ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステル製剤
本発明における使用に適するアジュバントは、ポリオキシエチレンエーテルおよびポリオキシエチレンエステルを含む（例えば国際公開公報第ＷＯ９９／５２５４９号参照）。そのような製剤は、オクトキシノールと組み合わせたポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性剤（国際公開公報第ＷＯ０１／２１２０７号）ならびにオクトキシノールなどの少なくとも１つの付加的な非イオン性界面活性剤と組み合わせたポリオキシエチレンアルキルエーテルまたはエステル界面活性剤（国際公開公報第ＷＯ０１／２１１５２号）をさらに含む。
【０１９９】
好ましいポリオキシエチレンエーテルは、以下の群：ポリオキシエチレン−９−ラウリルエーテル（ラウレス９）、ポリオキシエチレン−９−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−８−ステオリルエーテル、ポリオキシエチレン−４−ラウリルエーテル、ポリオキシエチレン−３５−ラウリルエーテル、およびポリオキシエチレン−２３−ラウリルエーテルから選択される。
【０２００】
Ｊ．ポリホスファゼン（ＰＣＰＰ）
アジュバントとしての使用に適するＰＣＰＰ製剤は、例えばＡｎｄｒｉａｎｏｖら（１９９８）Ｂｉｏｍａｔｅｒｉａｌｓ  １９（１−３）：１０９−１１５；およびＰａｙｎｅら（１９９８）Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ．Ｄｅｌ．Ｒｅｖ．３１（３）：１８５−１９６に述べられている。
【０２０１】
Ｋ．ムラミルペプチド
アジュバントとしての使用に適するムラミルペプチドの例は、Ｎ−アセチルムラミル−Ｌ−トレオニル−Ｄ−イソグルタミン（ｔｈｒ−ＭＤＰ）、Ｎ−アセチル−ノルムラミル−ｌ−アラニル−ｄ−イソグルタミン（ｎｏｒ−ＭＤＰ）、およびＮ−アセチルムラミル−ｌ−アラニル−ｄ−イソグルタミニル−ｌ−アラニン−２−（１’−２’−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−ヒドロキシホスホリルオキシ）−エチルアミン（ＭＴＰ−ＰＥ）を含む。
【０２０２】
Ｌ．イミダゾキノリン化合物
アジュバントとしての使用に適するイミダゾキノリン化合物の例は、イミキモドおよびその類似体を含み、それらは、Ｓｔａｎｌｅｙ（２００２）Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２７（７）：５７１−５７７；Ｊｏｎｅｓ（２００３）Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ  ４（２）：２１４−２１８；および米国特許第４，６８９，３３８号；同第５，３８９，６４０号；同第５，２６８，３７６号；同第４，９２９，６２４号；同第５，２６６，５７５号；同第５，３５２，７８４号；同第５，４９４，９１６号；同第５，４８２，９３６号；同第５，３４６，９０５号；同第５，３９５，９３７号；同第５，２３８，９４４号；および同第５，５２５，６１２号においてさらに説明されている。
【０２０３】
Ｍ．チオセミカルバゾン化合物
アジュバントとしての使用に適するチオセミカルバゾン化合物の例、ならびにそのような化合物を製剤する、製造する、およびスクリーニングする方法は、国際公開公報第ＷＯ０４／６０３０８号に述べられているものを含む。チオセミカルバゾンは、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの生産のためのヒト末梢血単核細胞の刺激において特に有効である。
【０２０４】
Ｎ．トリプタントリン化合物
アジュバントとしての使用に適するトリプタントリン化合物の例、ならびにそのような化合物を製剤する、製造する、およびスクリーニングする方法は、国際公開公報第ＷＯ０４／６４７５９号に述べられているものを含む。トリプタントリン化合物は、ＴＮＦ−αなどのサイトカインの生産のためのヒト末梢血単核細胞の刺激において特に有効である。
【０２０５】
Ｏ．ヌクレオシド類似体
様々なヌクレオシド類似体、例えば（ａ）イサトラビン（Ｉｓａｔｏｒａｂｉｎｅ）（ＡＮＡ−２４５；７−チア−８−オキソグアノシン）：
【０２０６】
【化３】
2009527572.tif 000004
およびそのプロドラッグ；（ｂ）ＡＮＡ９７５；（ｃ）ＡＮＡ−０２５−１；（ｄ）ＡＮＡ３８０；（ｅ）米国特許第６，９２４，２７１号；米国特許公開第２００５／００７０５５６号；および米国特許第５，６５８，７３１号に開示されている化合物；（ｆ）式：
【０２０７】
【化４】
2009527572.tif 000005
［式中、
Ｒ１およびＲ２は、各々独立してＨ、ハロ、−ＮＲａＲｂ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルコキシ、置換Ｃ１−６アルコキシ、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、Ｃ６−１０アリール、置換Ｃ６−１０アリール、Ｃ１−６アルキル、または置換Ｃ１−６アルキルであり；
Ｒ３は、存在しないか、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、Ｃ６−１０アリール、置換Ｃ６−１０アリール、ヘテロシクリル、または置換ヘテロシクリルであり；
Ｒ４およびＲ５は、各々独立してＨ、ハロ、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、−Ｃ（Ｏ）−Ｒｄ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキルであるか、または一緒に結合してＲ４−５：
【０２０８】
【化５】
2009527572.tif 000006
［結合は
【０２０９】
【化６】
2009527572.tif 000007
によって示される結合で達成される］
として５員環を形成し；
Ｘ１およびＸ２は、各々独立してＮ、Ｃ、ＯまたはＳであり；
Ｒ８は、Ｈ、ハロ、−ＯＨ、Ｃ１−６アルキル、Ｃ２−６アルケニル、Ｃ２−６アルキニル、−ＯＨ、−ＮＲａＲｂ、−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−Ｒｃ、−Ｏ−（Ｃ１−６アルキル）、−Ｓ（Ｏ）ｐＲｅ、または−Ｃ（Ｏ）−Ｒｄであり；
Ｒ９は、Ｈ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリルまたはＲ９ａであり、Ｒ９ａは：
【０２１０】
【化７】
2009527572.tif 000008
［結合は
【０２１１】
【化８】
2009527572.tif 000009
によって示される結合で達成される］
であり；
Ｒ１０およびＲ１１は、各々独立してＨ、ハロ、Ｃ１−６アルコキシ、置換Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＲａＲｂ、または−ＯＨであり；
各々のＲａおよびＲｂは、独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒｄ、Ｃ６−１０アリールであり；
各々のＲｃは、独立してＨ、リン酸塩、二リン酸塩、三リン酸塩、Ｃ１−６アルキル、または置換Ｃ１−６アルキルであり；
各々のＲｄは、独立してＨ、ハロ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、Ｃ１−６アルコキシ、置換Ｃ１−６アルコキシ、−ＮＨ２、−ＮＨ（Ｃ１−６アルキル）、−ＮＨ（置換Ｃ１−６アルキル）、−Ｎ（Ｃ１−６アルキル）２、−Ｎ（置換Ｃ１−６アルキル）２、Ｃ６−１０アリール、またはヘテロシクリルであり；
各々のＲｅは、独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、Ｃ６−１０アリール、置換Ｃ６−１０アリール、ヘテロシクリル、または置換ヘテロシクリルであり；
各々のＲｆは、独立してＨ、Ｃ１−６アルキル、置換Ｃ１−６アルキル、−Ｃ（Ｏ）Ｒｄ、リン酸塩、二リン酸塩、または三リン酸塩であり；
各々のｎは、独立して０、１、２または３であり；
各々のｐは、独立して０、１、２または３である］
を有する化合物；または（ｇ）（ａ）−（ｆ）のいずれかの医薬的に許容される塩、（ａ）−（ｆ）のいずれかの互変異性体、または互変異性体の医薬的に許容される塩
が、アジュバントとして使用できる。
【０２１２】
Ｐ．リン酸含有非環式骨格に連結された脂質
リン酸含有非環式骨格に連結された脂質を含むアジュバントは、ＴＬＲ４拮抗物質Ｅ５５６４（Ｗｏｎｇら（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４３（７）：７３５−７４２；米国特許出願第２００５／０２１５５１７号）：
【０２１３】
【化９】
2009527572.tif 000010
を含む。
【０２１４】
Ｑ．低分子免疫増強剤（ＳＭＩＰ）
ＳＭＩＰは以下を含む：
・Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−エチル−Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ２−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・１−（２−メチルプロピル）−Ｎ２−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−ブチル−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−ブチル−Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ２−ペンチル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ２−プロプ−２−エニル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・１−（２−メチルプロピル）−２−［（フェニルメチル）チオ］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；
・１−（２−メチルプロピル）−２−（プロピルチオ）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−４−アミン；
・２−［［４−アミノ−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−イル］（メチル）アミノ］エタノール；
・２−［［４−アミノ−１−（２−メチルプロピル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−イル］（メチル）アミノ］エチルアセテート；
・４−アミノ−１−（２−メチルプロピル）−１，３−ジヒドロ−２Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２−オン；
・Ｎ２−ブチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ４，Ｎ４−ビス（フェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−ブチル−Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ４，Ｎ４−ビス（フェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２−メチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ４，Ｎ４−ビス（フェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・Ｎ２，Ｎ２−ジメチル−１−（２−メチルプロピル）−Ｎ４，Ｎ４−ビス（フェニルメチル）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン；
・１−｛４−アミノ−２−［メチル（プロピル）アミノ］−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル｝−２−メチルプロパン−２−オール；
・１−［４−アミノ−２−（プロピルアミノ）−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−１−イル］−２−メチルプロパン−２−オール；
・Ｎ４，Ｎ４−ジベンジル−１−（２−メトキシ−２−メチルプロピル）−Ｎ２−プロピル−１Ｈ−イミダゾ［４，５−ｃ］キノリン−２，４−ジアミン。
【０２１５】
Ｒ．プロテオソーム
１つのアジュバントは、第二のグラム陰性細菌に由来するリポ糖製剤と組み合わせた第一グラム陰性細菌から作製される外膜タンパク質プロテオソーム製剤であり、外膜タンパク質プロテオソームとリポ糖製剤は、安定な非共有結合アジュバント複合体を形成する。そのような複合体は、髄膜炎菌外膜とリポ多糖から成る複合体、「ＩＶＸ−９０８」を含む。それらはインフルエンザワクチンのためのアジュバントとして使用されてきた（国際公開広報第ＷＯ０２／０７２０１２号）。
【０２１６】
Ｓ．他のアジュバント
免疫刺激剤として働く他の物質は、Ｂｕｒｄｍａｎ，Ｊ．Ｒ．ら（編集）（１９９５）（Ｖａｃｃｉｎｅ  Ｄｅｓｉｇｎ：Ｓｕｂｕｎｉｔ  ａｎｄ  Ａｄｊｕｖａｎｔ  Ａｐｐｒｏａｃｈ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ）（第７章）およびＯ’Ｈａｇａｎ，Ｄ．Ｔ．（２０００）（Ｖａｃｃｉｎｅ  Ａｄｊｕｖａｎｔｓ：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ａｎｄ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ（Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ）（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅシリーズの第４２巻）に開示されている。
【０２１７】
さらなる有用なアジュバント物質は以下を含む：
・メチルイノシン５’−一リン酸（“ＭＩＭＰ”）（ＳｉｇｎｏｒｅｌｌｉとＨａｄｄｅｎ（２００３）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．３（８）：１１７７−１１８６）。
・式：
【０２１８】
【化１０】
2009527572.tif 000011
［式中、Ｒは、水素、直鎖または分枝、非置換または置換、飽和または不飽和アシル、アルキル（例えばシクロアルキル）、アルケニル、アルキニルおよびアリール基、あるいはそれらの医薬的に許容される塩または誘導体を含む群から選択される］
を有するものなどの、ポリヒドロキシル化ピロリジジン化合物（国際公開広報第ＷＯ２００４／０６４７１５号）。例は、カジュアリン（ｃａｓｕａｒｉｎｅ）、カジュアリン−６−α−Ｄ−グルコピラノース、３−エピ−カジュアリン、７−エピ−カジュアリン、３，７−ジエピ−カジュアリン等を含む。
・γイヌリン（Ｃｏｏｐｅｒ（１９９５）Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．６：５５９−５８０）またはアルガムリンなどのその誘導体。
・国際特許出願第ＰＣＴ／ＵＳ２００５／０２２７６９号に開示されている化合物。
・アシルピペラジン化合物、インドールジオン化合物、テトラヒドロイソキノリン（ＴＨＩＱ）化合物、ベンゾシクロジオン化合物、アミノアザビニル化合物、アミノベンズイミダゾールキノリノン（ＡＢＩＱ）化合物（米国特許第６，６０５，６１７号；国際公開広報第ＷＯ０２／１８３８３号）、ヒドロフタルアミド化合物、ベンゾフェノン化合物、イソキサゾール化合物、ステロール化合物、キナゾリノン化合物、ピロール化合物（国際公開広報第ＷＯ２００４／０１８４５５号）、アントラキノン化合物、キノキサリン化合物、トリアジン化合物、ピラゾロピリミジン化合物、およびベンズアゾール化合物（国際公開広報第ＷＯ０３／０８２２７２号）を含む、国際公開広報第ＷＯ２００４／８７１５３号に開示されている化合物。
・ロキソリビン（７−アリル−８−オキソグアノシン（米国特許第５，０１１，８２８号）。
・アミノプロピル−ジメチル−ミリストレイルオキシ−プロパナミニウムブロマイド−ジフィタノイルホスファチジル−エタノールアミン（「Ｖａｘｆｅｃｔｉｎ（商標）」）またはアミノプロピル−ジメチル−ビス−ドデシルオキシ−プロパナミニウムブロマイド−ジオレオイルホスファチジル−エタノールアミン（「ＧＡＰ−ＤＬＲＩＥ：ＤＯＰＥ」）などの、カチオン脂質と（通常は中性の）共脂質の製剤。（±）−Ｎ−（３−アミノプロピル）−Ｎ，Ｎ−ジメチル−２，３−ビス（シン−９−テトラデセネイルオキシ）−１−プロパナミニウム塩を含む製剤が好ましい（米国特許第６，５８６，４０９号）。
【０２１９】
本発明はまた、上記で特定したアジュバントの１またはそれ以上の態様の組合せを含み得る。例えば以下のアジュバント組成物は本発明において使用し得る：（１）サポニンおよび水中油型乳剤（国際公開広報第ＷＯ９９／１１２４１号）；（２）サポニン（例えばＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば３ｄＭＰＬ）（国際公開広報第ＷＯ９４／００１５３号参照）；（３）サポニン（例えばＱＳ２１）＋非毒性ＬＰＳ誘導体（例えば３ｄＭＰＬ）＋コレステロール；（４）サポニン（例えばＱＳ２１）＋３ｄＭＰＬ＋ＩＬ−１２（場合により＋ステロール）（国際公開広報第ＷＯ９８／５７６５９号）；（５）例えばＱＳ２１および／または水中油型乳剤と３ｄＭＰＬの組合せ（欧州特許第０８３５３１８号；同第０７３５８９８号；および同第０７６１２３１号参照）；（６）１０％  スクアラン、０．４％トゥイーン８０、５％プルロニックブロックポリマーＬ１２１、およびサブミクロン乳剤にマイクロフルイダイズされるかまたはより大きな粒径の乳剤を生成するためにボルテックスされたｔｈｒ−ＭＤＰを含有する、ＳＡＦ；（７）２％スクアレン、０．２％トゥイーン８０、およびモノホスホリル脂質Ａ（ＭＰＬ）、トレハロースジミコレート（ＴＤＭ）および細胞壁骨格（ＣＷＳ）から成る群からの１またはそれ以上の細菌細胞壁成分、好ましくはＭＰＬ＋ＣＷＳ（Ｄｅｔｏｘ（商標））を含有する、Ｒｉｂｉ（商標）アジュバント系（ＲＡＳ）（Ｒｉｂｉ  Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍ，Ｈａｍｉｌｔｏｎ，ＭＴ）；（８）１またはそれ以上の無機塩（アルミニウム塩など）＋ＬＰＳの非毒性誘導体（例えば３ｄＰＭＬ）；（９）１またはそれ以上の無機塩（アルミニウム塩など）＋免疫刺激オリゴヌクレオチド（ＣｐＧモチーフを含むヌクレオチド配列など）。
【０２２０】
アルミニウム塩およびＭＦ５９は、注射用インフルエンザワクチンに関する使用のための好ましいアジュバントである。細菌毒素および生体接着剤は、鼻内ワクチンなどの経粘膜送達ワクチンに関する使用のための好ましいアジュバントである。
【０２２１】
３．カチオン性多糖
本発明における使用のためのカチオン性多糖は、数ある中でも特に、以下の適切な成員から選択される１またはそれ以上の官能基を有するまたは有することができる（例えばプロトン化によって）多糖を含む：中でも特に、荷電した第一級（−ＮＨ３＋）、第二級および第三級アミノ基を含む荷電アミノ基、アミジニウム基、グアニジニウム基、トリアゾリウム基、イミダゾリウム基、イミダゾリニウム基、ピリジニウム基、第一級（−ＳＨ２＋）および第二級スルホニウム基を含むスルホニウム基、ヒドロスルフィド基、第一級（−ＰＨ３＋）、第二級および第三級ホスホニウム基を含むホスホニウム基、イソチオウロニウム基、ニトロシル基、ニトリル基、トロピリウム基、ヨードニウム基、アンチモン基、オキソニウム基、およびアニリニウム基。
【０２２２】
ある実施形態では、カチオン性多糖は、その骨格に沿って多数のアミノ基を含み、６−７の範囲にわたるｐＫａを有する。その結果として、これらの種のアミノ基の分画だけが生理的ｐＨでイオン化される。
【０２２３】
アミノ置換カチオン性多糖の具体例は、１またはそれ以上のアルドサミンまたはケトサミンモノマー単位、例えばＤ−グルコサミンモノマー単位を含有するカチオン性多糖を含む。例えばカチオン性多糖は、Ｄ−グルコサミンとＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンモノマー単位の組合せを含む、公知の、おそらく最も顕著なキトサンである。
【０２２４】
キトサンは、特に、無作為に分布するβ−（１−４）連結Ｄ−グルコサミンおよびＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンモノマー単位を含み、主としてＮ−アセチル−Ｄ−グルコサミンの非分枝鎖から成るセルロース様ポリマーである、キチンのアルカリ処理によるＮ−脱アセチル化によって商業的に生産される。市販のキトサンのアセチル化の程度は、一般に６０−７０−８０−９０−１００％にわたるが、基本的にはいかなる程度のアセチル化も可能である。キトサンは生体適合性であり、生分解性である。キトサンは、酸性から中性の溶液中で正に荷電し、電荷密度はｐＨと脱アセチル化の程度に依存する。キトサンのｐＫａ値は一般に、脱アセチル化の程度に依存して、６．１−７．０の範囲である。それ故、蒸留水には実質的に不溶性であるが、キトサンは希酸水溶液（例えばｐＨ＝６．５またはそれ以下）中では一般に可溶性である。キトサンは、典型的には無機酸（すなわち塩酸）に比べて有機酸（すなわち酢酸）により可溶性である。分子量は広い範囲をとることができ（例えば１，０００未満から２，５００−５，０００−１０，０００−２５，０００−５０，０００−１００，０００−２５０，０００−５００，０００−１，０００，０００−２，５００，０００−５，０００，０００−１０，０００，０００ｇ／ｍｏｌまたはそれ以上）、市販のキトサンは、典型的には分子量１００，０００−１，２００，０００ｇ／ｍｏｌの範囲である。キトサンの具体例は、１００，０００ｇ／ｍｏｌまたはそれ以下から１５０，０００ｇ／ｍｏｌ−２５０，０００ｇ／ｍｏｌ−５００，０００ｇ／ｍｏｌ−７５０，０００ｇ／ｍｏｌ−１，０００，０００ｇ／ｍｏｌまたはそれ以上の範囲の分子量、６０％またはそれ以下から７５％−８５％−９５％またはそれ以上の範囲の脱アセチル化の程度、またはその両方の組合せを有するものを含む。
【０２２５】
４．ミクロ粒子組成物
ここで述べるミクロ粒子組成物を形成するために有用なポリマーは、以下から誘導されるホモポリマー、コポリマーおよびポリマーブレンドを含む：数ある中でも特に、ポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリヒドロキシ酪酸、ポリカプロラクトンを含むポリラクトン、ポリジオキサノンおよびポリバレロラクトン、ポリオルトエステル、ポリ無水物、ポリシアノアクリレート、チロシン由来のポリカーボネートおよびポリエステルアミド。ポリ（Ｌ−ラクチド）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド）（ここではどちらも「ＰＬＡ」として知られる）、ポリ（ヒドロキシブチレート）などのポリ（α−ヒドロキシ酸）、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）（ここでは「ＰＬＧ」と称する）などのラクチドとグリコリドのコポリマー、またはＤ，Ｌ−ラクチドとカプロラクトンのコポリマーがより典型的である。
【０２２６】
上記ポリマーは様々な分子量で入手可能であり、所与の用途のための適切な分子量は、当業者によって容易に決定される。それ故、例えばＰＬＡについての適切な分子量は、約２，０００−５，０００であり得る。ＰＬＧについての適切な分子量は、約５，０００−約２００，０００の範囲であり得る。
【０２２７】
コポリマーを使用する場合、様々なモノマー比を有するコポリマーが使用可能であり得る。例えばミクロ粒子を形成するためにＰＬＧを使用する場合、様々なラクチド：グリコリドのモル比がここで使用でき、その比率は、一部には同時投与される吸着および／または封入種および所望分解速度に依存するが、主として選択の問題である。例えば５０％Ｄ，Ｌ−ラクチドと５０％グリコリドを含む５０：５０ＰＬＧポリマーはより速やかな吸収性コポリマーを提供するのに対し、７５：２５ＰＬＧはより緩やかに分解し、８５：１５および９０：１０は、ラクチド成分の上昇により、さらに一層緩やかに分解する。多様なラクチド：グリコリド比を有するミクロ粒子の混合物も、所望放出速度を達成するためにここで使用され得る。本発明のミクロ粒子の分解速度はまた、ポリマーの分子量およびポリマーの結晶度などの因子によっても制御され得る。
【０２２８】
様々なラクチド：グリコリド比と分子量を有するＰＬＧコポリマーは、Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍ，ＧｅｒｍａｎｙおよびＢｉｒｍｉｎｇｈａｍ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ，Ｉｎｃ．，Ｂｉｒｍｉｎｇｈａｍ，ＡＬ．を含む多くの供給源から市販のものを容易に入手し得る。一部の例示的なＰＬＧコポリマーは、（ａ）ＲＧ５０２、５０：５０のラクチド／グリコリドモル比および１２，０００Ｄａの分子量を有するＰＬＧ；（ｂ）ＲＧ５０３、５０：５０のラクチド／グリコリドモル比および３４，０００Ｄａの分子量を有するＰＬＧ；（ｃ）ＲＧ５０４、５０：５０のラクチド／グリコリドモル比および４８，０００Ｄａの分子量を有するＰＬＧ；（ｄ）ＲＧ７５２、７５：２５のラクチド／グリコリドモル比および２２，０００Ｄａの分子量を有するＰＬＧ；および（ｅ）ＲＧ７５５、７５：２５のラクチド／グリコリドモル比および６８，０００Ｄａの分子量を有するＰＬＧを含む。ＰＬＧポリマーはまた、Ｔａｂａｔａら（１９８８）（Ｊ．Ｂｉｏｍｅｄ．Ｍａｔｅｒ．Ｒｅｓ．２２：８３７−８５８）に述べられているような、当技術分野で周知の手法を使用して乳酸成分の簡単な重縮合によっても合成できる。
【０２２９】
使用する場合、ポリ（Ｄ，Ｌ−ラクチド−コ−グリコリド）ポリマーは、典型的には２０：８０−８０：２０、より典型的には４０：６０−６０：４０の範囲のラクチド／グリコリドモル比を有し、および１０，０００−１００，０００ダルトン、より典型的には２０，０００ダルトン−７０，０００ダルトンの範囲の分子量を有するものである。
【０２３０】
ミクロ粒子は、当技術分野で周知のいくつかの方法のいずれかを用いて作製し得る。例えば一部の実施形態では、米国特許第３，５２３，９０７号およびＯｇａｗａら、Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．（１９８８）３６：１０９５−１１０３に述べられているような、二重乳化／溶媒蒸発手法が、ミクロ粒子を作製するためにここで使用できる。これらの手法は、ポリマー溶液の小滴から成る一次乳剤の形成を含み、一次乳剤はその後、粒子安定剤／界面活性剤を含む連続水相と混合される。
【０２３１】
他の実施形態では、ミクロ粒子はまた、例えばＴｈｏｍａｓｉｎら（１９９６）Ｊ．  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  ４１：１３１；米国特許第２，８００，４５７号；Ｍａｓｔｅｒｓ，Ｋ．（１９７６）Ｓｐｒａｙ  Ｄｒｙｉｎｇ  第２版、Ｗｉｌｅｙ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋに述べられているような噴霧乾燥およびコアセルベーション；Ｈａｌｌら（１９８０）Ｔｈｅ  “Ｗｕｒｓｔｅｒ  Ｐｒｏｃｅｓｓ”ｉｎ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ：Ｍｅｔｈｏｄｓ，Ｔｈｅｏｒｙ，ａｎｄ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ａ．Ｆ．Ｋｙｄｏｎｉｅｕｓ編集）、第２巻、ｐ．１３３−１５４  ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ，Ｂｏｃａ  Ｒａｔｏｎ，ＦｌｏｒｉｄａおよびＤｅａｓｙ，Ｐ．Ｂ．（１９８８）Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．Ｓ（２）：９９−１３９によって述べられているような、パンコーティングおよびＷｕｒｓｔｅｒコーティングなどの気中懸濁被覆手法；および、例えばＬｉｍら（１９８０）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２１０：９０８−９１０によって述べられているようなイオンゲル化を使用して形成され得る。
【０２３２】
一部の実施形態では、水中油中水型（ｗ／ｏ／ｗ）溶媒蒸発システムは、Ｏ’Ｈａｇａｎら、（１９９３）Ｖａｃｃｉｎｅ１１：９６５−９６９、Ｏ’Ｈａｇａｎら、国際公開広報第ＷＯ００／０６１２３号、およびＪｅｆｆｅｒｙら（１９９３）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１０：３６２によって述べられているように、ミクロ粒子を形成するために使用できる。
【０２３３】
この方法では、ＰＬＧなどの対象とするポリマーを、典型的には、酢酸エチル、ジメチルクロリド（塩化メチレンおよびジクロロメタンとも呼ばれる）、アセトニトリル、アセトン、クロロホルム等のような有機溶媒に溶解する。ポリマーは、典型的には有機溶媒中約１−３０％、より典型的には約２−１５％、さらに一層典型的には約３−１０％、最も典型的には約４−８％溶液ｗ／ｖで提供される。次に、ポリマー溶液を第一容積の水溶液と併合し、乳化してｏ／ｗ乳剤を形成する。水溶液は、例えば脱イオン水、生理食塩水、緩衝液、例えばリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）またはクエン酸ナトリウム／エチレンジアミン四酢酸（クエン酸ナトリウム／ＥＤＴＡ）緩衝液であり得る。後者の溶液は、（ａ）通常の生理的液体と基本的に同じ張度、すなわち浸透圧を提供し、および（ｂ）通常の生理的条件と適合性のｐＨを維持することができる。あるいは、本発明の組成物の張度および／またはｐＨ特性は、ミクロ粒子形成のために所望に応じて最適化でき、投与のために所望に応じてミクロ粒子形成後に調整できる。好ましくは、ポリマー溶液対水溶液の容積比は、約１０：１−約２：１、より好ましくは約５：１の範囲である。乳化は、この作業のための適切な装置を使用して実施され、典型的には、例えばホモジナイザーなどの高せん断装置である。
【０２３４】
一部の実施形態では、１またはそれ以上の付加的な成分がミクロ粒子内に封入される。例えば抗原および免疫アジュバントなどの免疫学的種ならびに以下で述べるような他の任意の補足成分を、（ａ）油溶性または油分散性形態であれば、ポリマー溶液に、または（ｂ）水溶性または水分散性形態であれば、水溶液に添加することによって導入できる。
【０２３５】
一部の実施形態では、追加成分（例えば、中でも特に、ＣｐＧオリゴヌクレオチドなどの負に荷電した成分）は、１またはそれ以上のカチオン性多糖と複合して、水溶液中で提供される。これらの実施形態では、カチオン性多糖対追加成分の重量比は、例えば０．０００１：１−０．０１：１の範囲であり得、およびカチオン性多糖対生分解性ポリマーの重量比は、例えば０．００００５：１−０．００５：１の範囲であり得る。
【０２３６】
一定容積のｏ／ｗ乳剤を、次に、例えば１またはそれ以上のカチオン性多糖および／または１またはそれ以上の界面活性剤を含み得る、より大きな第二の容積の水溶液と併合する。水溶液は、数ある可能性の中で特に、例えば脱イオン水、生理食塩水、緩衝液、例えばリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）またはクエン酸ナトリウム／エチレンジアミン四酢酸（クエン酸ナトリウム／ＥＤＴＡ）緩衝液であり得る。後者の溶液は、（ａ）通常の生理的液体と基本的に同じ張度、すなわち浸透圧を提供し、および（ｂ）通常の生理的条件と適合性のｐＨを維持することができる。あるいは、本発明の組成物の張度および／またはｐＨ特性は、ミクロ粒子形成のために所望に応じて最適化でき、投与のためにミクロ粒子形成後に調整できる。例えばキトサンをカチオン性多糖として使用する場合、溶液は１％（ｖ／ｖ）酢酸を含み得る。ある実施形態では、カチオン性多糖および／または界面活性剤は、水溶液の代わりにまたは水溶液に加えて、上記有機溶液に添加し得る。水溶液対ｏ／ｗ乳剤の容積比は、典型的には約２：１−１０：１、より典型的には約４：１の範囲である。
【０２３７】
キトサンなどのカチオン性多糖がこの段階で供給される場合、典型的には約０．１−１ｗ／ｗ％溶液、より典型的には約０．４−０．６％ｗ／ｗ溶液中で提供される。約０．０００１：１−約０．１：１の範囲内の多糖対ポリマー重量比が典型的に使用され、より典型的には約０．０００５：１−約０．０２５：１、より典型的には約０．００１：１−約０．０１：１の重量比が使用される。
【０２３８】
ＣＴＡＢなどのカチオン性多糖がこの段階で供給される場合、典型的には約０．０００２５−１％溶液、より典型的には約０．００２５−０．１％溶液中で提供される。ＤＳＳなどのアニオン性界面活性剤が使用される場合、典型的には約０．００００１−０．０２５％溶液、より典型的には約０．０００１−０．００２５％溶液中で提供される。ＰＶＡなどの非イオン性界面活性剤が使用される場合、典型的には約２−１５％溶液、より典型的には約４−１０％溶液中で提供される。カチオン性界面活性剤については、約０．００００１：１−約０．５：１の範囲内の界面活性剤対ポリマー重量比が典型的に使用され、より典型的には約０．００１：１−約０．１：１、さらに一層典型的には約０．００２５：１−約０．０５：１の重量比が使用される；ＤＳＳなどのアニオン性界面活性剤については、約０．００００１：１−約０．０２５：１の範囲内の界面活性剤対ポリマー重量比が典型的に使用され、より典型的には約０．０００１：１−約０．００２５：１の重量比が使用される；ＰＶＡなどの非イオン性界面活性剤については、約０．００１：１−約０．１：１の範囲内の界面活性剤対ポリマー重量比が典型的に使用され、より典型的には約０．００２５：１−約０．０５：１の重量比が使用される。
【０２３９】
次に、安定なｗ／ｏ／ｗ二重乳剤を生成するためにこの混合物を均質化する。上記均質化工程の各々は、典型的には室温（すなわち２５℃）またはそれ以下で、より典型的にはそれ以下で、例えば氷浴内で冷却しながら実施される。
【０２４０】
製剤パラメータは、約０．０５μｍ（５０ｎｍ）の小さなミクロ粒子から５０μｍまたはさらに一層大きなミクロ粒子までの作製を可能にするように操作され得る。例えばＪｅｆｆｅｒｙら（１９９３）Ｐｈａｒｍ．Ｒｅｓ．１０：３６２−３６８；ＭｃＧｅｅら（１９９６）Ｊ．Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐ．参照。例えば攪拌の減弱は、内部相容積の上昇およびポリマー濃度の上昇と同様に、典型的にはより大きなミクロ粒子を生じさせる。小さな粒子は、典型的には攪拌の増大ならびに低い水相容積、高濃度の乳剤安定剤およびポリマー濃度の低下によって生産される。
【０２４１】
その後有機溶媒を蒸発させる。作製後、ミクロ粒子はそのままで使用できるかまたは将来の使用のために凍結乾燥することができる。
【０２４２】
粒径は、上述したように測定できる。
【０２４３】
作製後、抗原および免疫アジュバントなどの免疫学的種ならびに以下で述べるような他の任意の補足成分を含む、様々な成分をミクロ粒子と混合することができ、生じた製剤を、所望する場合は、使用前に凍結乾燥することができる。しばしば、これらの成分は水溶液または分散としてミクロ粒子に添加される。一部の場合には、これらの種はミクロ粒子の表面に吸着される（例えば、様々な種がミクロ粒子表面に吸着されている以下の実施例参照）。吸着された種の含量は、標準的な手法を用いて測定できる。
【０２４４】
吸着種の放出特徴は、凍結乾燥後に特性決定され得る。例えばある実施形態では、凍結乾燥組成物１０ｍｇを水１ｍｌに再構成したとき、本発明の組成物は、吸着された免疫アジュバントの総量の１０％−２０％−３０％−４０％−５０％が再構成後１５日間を超えてにわたってミクロ粒子から放出される放出プロフィールを示す。
【０２４５】
そこで、上記のような手法を用いて、本発明のポリマーミクロ粒子は、その上に吸着された様々な成分ならびにその中に封入または被包された様々な成分を有し得る。
【０２４６】
５．補足成分
本発明の免疫原性組成物は、極めて多様な任意の補足成分を含有し得る。そのような補足成分は、数ある成分の中でも特に以下を含む：（ａ）抗生物質および抗ウイルス薬、非ステロイド系抗炎症薬、鎮痛薬、血管拡張薬、心臓血管薬、向精神薬、神経弛緩薬、抗うつ薬、抗パーキンソン薬、β遮断薬、カルシウムチャネル遮断薬、ブラジキニン阻害薬、ＡＣＥ阻害薬、血管拡張薬、プロラクチン阻害薬、ステロイド、ホルモン拮抗物質、抗ヒスタミン薬、セロトニン拮抗物質、ヘパリン、化学療法剤、ＰＤＧＦ、ＥＧＦ、ＫＧＦ、ＩＧＦ−１およびＩＧＦ−２、ＦＧＦを含むがこれらに限定されない抗腫瘍薬および増殖因子などの薬剤、（ｂ）インスリン、プロインスリン、成長ホルモン、ＧＨＲＨ、ＬＨＲＨ、ＥＧＦ、ソマトスタチン、ＳＮＸ−１１１、ＢＮＰ、インスリノトロピン、ＡＮＰ、ＦＳＨ、ＬＨ、ＰＳＨおよびｈＣＧ、性腺ステロイドホルモン（アンドロゲン、エストロゲンおよびプロゲステロン）、甲状腺刺激ホルモン、インヒビン、コレシストキニン、ＡＣＴＨ、ＣＲＦ、ダイノルフィン、エンドルフィン、エンドセリン、フィブロネクチンフラグメント、ガラニン、ガストリン、インスリノトロピン、グルカゴン、ＧＴＰ結合タンパク質フラグメント、グアニリン、ロイコキニン、マガイニン、マストパラン、デルマセプチン、システミン、ニューロメジン、ニューロテンシン、パンクレアスタチン、膵ポリペプチド、サブスタンスＰ、セクレチン、サイモシン等のようなペプチドホルモンを含むホルモン、（ｃ）酵素、（ｄ）転写または翻訳メディエイタ、および（ｅ）代謝経路における中間体。
【０２４７】
そのような補足成分は、例えばミクロ粒子の表面に吸着される、ミクロ粒子内に封入される、ミクロ粒子に結合せずに溶液中に溶解または分散する、もう１つ別の群のミクロ粒子に吸着または封入される、等であり得る。
【０２４８】
５．投与
ひとたび製剤（および必要に応じて再懸濁）されれば、本発明のミクロ粒子組成物は非経口的に、例えば注射によって（無針でもよい）投与することができる。これに関して、ミクロ粒子組成物は、再懸濁媒質（例えば注射用蒸留水）を供給するためおよび生じた懸濁液を回収するための隔壁または他の適切な手段と共に供給されるバイアルまたは他の容器において凍結乾燥形態で供給され得る。適切な注射器も、注射のために供給され得る。
【０２４９】
組成物は、例えば皮下、皮内、筋肉内、静脈内、動脈内または腹腔内経路で注入され得る。他の投与方法は、鼻、眼内、直腸、膣、経口および肺投与、および経皮適用を含む。
【０２５０】
一部の実施形態では、本発明の組成物は部位特異的標的送達のために使用できる。例えば組成物の静脈内投与は、肺、肝臓、脾臓、血液循環または骨髄を標的するために使用できる。
【０２５１】
本発明のミクロ粒子組成物は、一般に１またはそれ以上の医薬的に許容される賦形剤を含む。例えば水、生理食塩水、グリセロール、ポリエチレングリコール、ヒアルロン酸、エタノール等のようなビヒクルが使用され得る。湿潤剤または乳化剤、生物学的緩衝物質等のような他の賦形剤も存在し得る。生物学的緩衝剤は、薬理的に許容され、所望ｐＨ、すなわち生理的範囲内のｐＨを有する製剤を提供する、実質的にいかなる溶液でもあり得る。例は、生理食塩水、リン酸緩衝生理食塩水、トリス緩衝生理食塩水、ハンクス緩衝生理食塩水等を含む。最終投与形態に依存して、結合剤、崩壊剤、充填剤（希釈剤）、潤滑剤、すべり剤（流動促進剤）、圧縮補助剤、着色料、甘味料、防腐剤、懸濁化／分散剤、薄膜形成剤／被覆剤、香味料および印刷インクを含む、当技術分野で公知の他の賦形剤も導入できる。
【０２５２】
治療は、単回投与スケジュールまたは多回投与スケジュールに従って実施し得る。多回投与スケジュールは、一次投与課程を、例えば１−１０回の別々の投与で実施し、次いで、治療応答を維持するおよび／または補強するように選択される、その後時間間隔を置いて、例えば２回目の投与については１−４ヵ月後に、別途の投与を行い、必要に応じて数ヵ月後にその後の投与を実施するものである。投与計画はまた、少なくとも一部には、被験者の必要性によって決定され、医師の判断に依存する。
【０２５３】
さらに、疾患の予防を所望する場合、組成物は一般に、対象とする感染または疾患の一次発生の出現前に投与される。他の治療形態、例えば症状または再発の軽減または排除を所望する場合は、組成物は一般に、対象とする感染または疾患の一次発生の出現後に投与される。
【０２５４】
６．キット
本発明は、被験者への適切な量の有効成分の投与を簡単にすることができるキットを含む。典型的な本発明のキットは、好ましくは密封容器中に、本発明の組成物の単位投与形態を含む。本発明のキットは、１またはそれ以上の有効成分を投与するために使用できる、医薬的に許容されるビヒクルをさらに含み得る。例えば本発明の組成物が、投与のために再構成しなければならない固体形態で提供される場合、キットは、投与に適する微粒子不含無菌溶液を形成するために組成物を溶解することができる適切なビヒクルの密封容器、および有効成分を投与するために使用できる装置をさらに含む。そのような装置の例は、注射器、点滴袋、パッチおよび吸入器を含むが、これらに限定されない。
【０２５５】
Ｃ．実験
以下は、本発明を実施するための特定実施形態の例である。これらの例は説明のためにのみ提供されるものであり、いかなる意味においても本発明の範囲を限定することは意図されていない。
【０２５６】
使用する数（例えば量、温度等）に関しては正確さを保証するように努力を払ったが、ある程度の実験誤差および偏差は、言うまでもなく、許容されるべきである。
【実施例】
【０２５７】
（実施例１）
ミクロ粒子の作製
比較用の生分解性ミクロ粒子を、アニオン性粒子（Ｓｉｎｇｈ，Ｍ．ら（２００４）  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９３（２）：２７３−２８２）およびカチオン性粒子（Ｓｉｎｇｈ，Ｍ．ら（２０００）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９７（２）：８１１−８１６）についてこれまでに確立されている方法と類似の溶媒蒸発法によって作製した。より詳細には、水／油／水乳剤手法を、ポリ（ラクチド−コ−グリコリド）（ＰＬＧ）ミクロ粒子を作製するために使用した。アニオン性粒子は、Ｓｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ，ＵＳＡより入手可能な０．０５％スルホコハク酸ジオクチルナトリウム（ＤＳＳ）で作製し、カチオン性粒子は、外部水相においてＳｉｇｍａより入手可能な１％（ｗ／ｗ）臭化セチルトリメチルアンモニウム（ＣＴＡＢ）で作製した。
【０２５８】
ＰＬＧ、すなわちＢｏｅｈｒｉｎｇｅｒ  Ｉｎｇｅｌｈｅｉｍより入手可能な、５０：５０のラクチド／グリコリドモル比および〜３０ｋＤａの分子量を有するＰＬＧポリマー、ＲＧ５０３をジクロロメタン（６％ｗ／ｖ）に溶解し、リン酸緩衝生理食塩水の水相（１：５  水：油）に添加して（１０ｍｌを５０ｍｌと併合）、ホモジナイザー（Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘ  Ｔ２５  ＩＫＡ−Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の１０ｍｍプローブを１５，０００ｒｐｍで使用して２分間均質化した。次にこの油中水型乳剤を、アニオン性またはカチオン性粒子を含む水２５０ｍｌに添加し、ホモジナイザー（Ｕｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘ  Ｔ５０  ＩＫＡ−Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ，Ｇｅｒｍａｎｙ）の４５ｍｍプローブを使用して高速で２０分間均質化した。溶媒を蒸発させるために懸濁液を磁気攪拌で攪拌した。
【０２５９】
本発明に従ったキトサン含有ミクロ粒子は、２番目の乳化工程における水相２５０ｍｌを、酢酸に溶解した、Ｓｉｇｍａより入手可能なキトサン保存溶液５ｍｇ／ｍｌを水に添加することによって形成したことを除き、上述した手順を用いて形成した。適切な比率（すなわち０．１％対１％ｗ／ｗＰＬＧ）を生成するために十分な量でキトサンを添加した。酢酸の量は、水相２５０ｍＬのｐＨを５．０−５．５にするために充分な量であった。０．２５％（ＰＬＧに対してｗ／ｗ）から１．０％（ｗ／ｗ）にわたるキトサン濃度で安定な粒子が形成された。Ｓｉｇｍａより入手可能な比較的低分子量のキトサン（平均分子量＝１５０，０００ｇ／ｍｏｌ、脱アセチル化の程度＝７５％−８５％）を、上述したすべての実験のために使用した。
【０２６０】
Ｓｉｇｍａより入手可能なもう１つのより溶解度が低く、高分子量のキトサン（分子量＝６００，０００ｇ／ｍｏｌ、脱アセチル化の程度＝７５％−８５％）も、安定な粒子を形成するために使用し、それらの粒子は低分子量キトサンで形成されるものと非常に類似した性質を有する。キトサン塩化物（水に易溶で、粘性溶液を形成し、最終的にはより高濃度でペーストになる）で粒子を形成する試みは、安定な乳剤を生じなかった。より詳細には、これらの化合物は、明らかにそれらの高い溶解度の故に油−水界面に有意の量で蓄積しなかったため、乳剤安定剤として機能しなかった。
【０２６１】
生じたミクロ粒子の粒径分布を、粒径分析器（Ｈｏｒｉｂａ  ＬＡ−９３０，Ｉｒｖｉｎｅ，ＣＡ）を用いて測定した。
【０２６２】
ζ電位を、ｐＨ４−ｐＨ７の範囲の緩衝液に希釈した試料に関してＺｅｔａｓｉｚｅｒ  （Ｚｅｔａｓｉｚｅｒ  ３０００ＨＳＡ  Ｍａｌｖｅｒｎ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，ＵＫ）で測定した。
【０２６３】
ペレットと結合したキトサンのパーセントを、９６穴プレート形式に適合させたニンヒドリン−ヒドリンダンチンアッセイによって測定した（Ｐｒｏｃｈａｚｋｏｖａ，Ｓ．  “Ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｉｔｏｓａｎｓ  ｂｙ  ｎｉｎｈｙｄｒｉｎ”Ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ３８：１  １５−１２２）。
【０２６４】
上記粒子の性質を表１Ａおよび１Ｂに要約する。
【０２６５】
【表１】
2009527572.tif 000012
（実施例２）
ＣｐＧオリゴヌクレオチドの吸着と放出
ＣｐＧオリゴヌクレオチドは強力なアジュバントであり、ミクロ粒子とのその共送達は広い製剤選択肢を提供する。
【０２６６】
可溶性ＣｐＧ溶液（実施例７参照）を実施例１のミクロ粒子懸濁液に添加し、実験室用揺動器（ｌａｂ  ｒｏｃｋｅｒ）にて４℃で一晩攪拌した。ミクロ粒子を遠心分離によって分離した。上清中に残存する（吸着されない）量を、２６０ｎｍの吸光度で紫外分光法によって測定した。
【０２６７】
図１は、３つの異なる粒子型に関して吸着されたＣｐＧの放出プロフィールを比較する。ＣｐＧは、キトサン−ＰＬＧ粒子からは緩やかな放出を有し、一方ＤＳＳ−ＰＬＧ粒子からは１００％放出され（ＣｐＧ吸着なしに等しい）、ＣＴＡＢ−ＰＬＧ粒子からは基本的に全部が即時放出される。
【０２６８】
ＣｐＧの吸着と放出およびキトサン−ＰＬＧ粒子からの放出はまた、ＰＬＧミクロ粒子と結合するキトサンの量によっても変化する。表２参照。キトサンの濃度が上昇すると共に、粒子から放出されるＣｐＧの量は低下する。１％キトサン−ＰＬＧに関しては、１週間後でさえも、ＣｐＧはごくわずかしか放出されなかった。
【０２６９】
【表２】
2009527572.tif 000013
（実施例３）
粒子への多糖の吸着
髄膜炎菌血清型Ｃ群（ＭｅｎＣ）からのオリゴ糖（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  （ＩＲＩＳ，Ｃｈｉｒｏｎ，Ｓ．ｒ．ｌ．，Ｓｉｅｎａ，Ｉｔａｌｙ）；Ｐ．Ｃｏｓｔａｎｔｉｎｏら（１９９２）Ｖａｃｃｉｎｅ  １０：６９１−６９８）に述べられている）を、粒子へのその吸着に関して検討した。ＭｅｎＣを実施例１のミクロ粒子懸濁液に添加し、実験室用揺動器にて４℃で一晩攪拌した。多糖の濃度を、シアル酸の検出のために修正Ｓｖｅｎｎｅｒｈｏｌｍ法（Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ（１９５７）  ２４：６０４）によって定量した。
【０２７０】
懸濁液を凍結乾燥し、蒸留水１ｍＬと共に２５℃で１時間またはそれ以上揺動してインビトロでの放出を測定した。ミクロ粒子を遠心分離によって分離し、ペレットを０．２Ｎ  ＮａＯＨで一晩加水分解した。ＭｅｎＣの放出を定量するために上清およびペレット中のシアル酸の濃度を測定した。
【０２７１】
０．５％（ｗ／ｗＰＬＧ）の標的負荷において、ＭｅｎＣは、ほぼ１００％の効率で０．５％キトサン−ＰＬＧミクロ粒子に、および７０％の効率で０．２５％キトサン−ＰＬＧに吸着するが、ＤＳＳ−ＰＬＧ粒子には低い効率で吸着する。表３参照。標的ＭｅｎＣ負荷を上昇させると共に、キトサン−ＰＬＧ粒子への吸着効率は低下し、キトサン−ＰＬＧ粒子の濃度が低いほど急激に低下する。
【０２７２】
【表３】
2009527572.tif 000014
図２からわかるように、放出プロフィールは、０．５％キトサン−ＰＬＧ粒子からのＭｅｎＣの安定した放出を示し、一方ＤＳＳ−ＰＬＧ粒子からはすべてのＭｅｎＣが基本的に即時放出される。
【０２７３】
（実施例４）
粒子へのタンパク質吸着
キトサン−ＰＬＧミクロ粒子はまた、タンパク質を吸着するためにも使用できる。髄膜炎菌血清型Ｂ群タンパク質ＭＢ９６１（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ（ＩＲＩＳ，Ｃｈｉｒｏｎ，Ｓ．ｒ．ｌ．，Ｓｉｅｎａ，Ｉｔａｌｙ）；Ｐｉｚｚａら（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８７：１８１６−１８２０）に述べられている）を実施例１のミクロ粒子懸濁液に添加し、実験室用揺動器にて４℃で一晩攪拌した。吸着タンパク質を有するミクロ粒子を遠心分離によって分離し、上清中に残存する結合していないタンパク質の量をゲルろ過クロマトグラフィーによって測定した。基本的には、Ｗａｔｅｒｓ  ２６９０／４３２装置（Ｂｅｄｆｏｒｄ，ＭＡ）を備えるＴＳＫ３０００ＳＷＸＬ（ＴＯＳＯＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｊａｐａｎ）に上清１００μｌを注入した。ＭｅｎＢタンパク質に関して１０−２００μｇ／ｍｌの範囲内で直線検量線を作成し、上清中に存在するタンパク質の量を算定した。次に、非結合タンパク質の総量を最初に添加したタンパク質の総量から差し引き、その差を、実際の負荷効率を算定するために使用した。
【０２７４】
表４からわかるように、タンパク質ＭＢ９６１は、ＤＳＳ−ＰＬＧ粒子と比較してキトサン−ＰＬＧ粒子にはるかに高い効率で吸着する。
【０２７５】
【表４】
2009527572.tif 000015
（実施例５）
アニオン性ミクロ粒子の作製
タンパク質吸着のためのアニオン性ＰＬＧミクロ粒子を、溶媒蒸発手法を用いて作製した。簡単に述べると、塩化メチレン中の６％ｗ／ｖポリマー（ＲＧ５０３）溶液３０ｍＬをＰＢＳ  ６ｍＬと共にＩＫＡホモジナイザーを使用して高速で乳化することによって作製した。次に一次乳剤を、ＤＳＳ（０．６％ｗ／ｖ）を含む蒸留水１４４ｍＬに添加し、Ｏｍｎｉホモジナイザーを使用して均質化した。これはｗ／ｏ／ｗ乳剤の形成を生じさせ、生じた乳剤を室温で１２時間攪拌して、塩化メチレンを蒸発させた。
【０２７６】
（実施例６）
アニオン性ミクロ粒子へのＭｅｎＢ  ２８７の吸着
大腸菌由来の組換え髄膜炎菌血清型Ｂ群ワクチン候補物質、ＭｅｎＢ  ２８７（Ｃｈｉｒｏｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ（ＩＲＩＳ，Ｃｈｉｒｏｎ，Ｓ．ｒ．ｌ．，Ｓｉｅｎａ，Ｉｔａｌｙ）；Ｐｉｚｚａら（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８７：１８１６−１８２０）に述べられている）をこの実施例で使用した。
【０２７７】
吸着タンパク質を有するミクロ粒子を作製するため、実施例５からのＰＬＧ  １００ｍｇを含むミクロ粒子懸濁液を総容量１０ｍＬ中でＭｅｎＢ  ２８７  １ｍｇと共にインキュベートした。次に懸濁液を実験室用揺動器（Ａｌｉｑｕｏｔ  Ｍｉｘｅｒ，Ｍｉｌｅｓ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）にて４℃で一晩攪拌した。糖（マンニトール４５ｍｇ／ｍｌおよびスクロース１５ｍｇ／ｍｌ）を添加し、次に懸濁液のアリコート（ＭｅｎＢ  ２８７  ２μｇまたは１０μｇまたは２０μｇ／動物）を小さなガラスバイアルに入れて凍結乾燥した（「ＰＬＧ／２８７  ２μｇバイアル」、または「ＰＬＧ／２８７  １０μｇバイアル」または「ＰＬＧ／２８７  ２０μｇバイアル」）。
【０２７８】
（実施例７）
可溶性ＣｐＧ
ＣｐＧオリゴヌクレオチド、５’−ＴＣＣ  ＡＴＧ  ＡＣＧ  ＴＴＣ  ＣＴＧ  ＡＣＧ  ＴＴ−３’（配列番号１）は、Ｏｌｉｇｏｓ  Ｅｔｃ．（Ｗｉｌｓｏｎｖｉｌｌｅ，ＯＲ，ＨＰＬＣにより９９％純度）によってホスホロチオエート骨格で合成され、凍結乾燥形態で供給された。これを１０ｍＭトリス（ｐＨ７．０）、１ｍＭ  ＥＤＴＡに懸濁し、−８０℃で保存した（「可溶性ＣｐＧ溶液」）。
【０２７９】
（実施例８）
ＣｐＧが封入された荷電ミクロ粒子の作製
５０％封入ＣｐＧを有するアニオン性ＰＬＧミクロ粒子を、溶媒蒸発手法を用いて作製した。簡単に述べると、塩化メチレン中の１２％ｗ／ｖポリマー溶液５ｍＬをＴＥ  ０．７００ｍＬおよびＣｐＧ−キトサン複合体０．３００ｍｌと共にＩＫＡホモジナイザーを使用して高速で乳化することによって作製した。ＣｐＧ−キトサン複合体は、１％（ｖ／ｖ）酢酸中２．２ｍｇ／ｍｌキトサンのキトサン溶液を、実施例７で述べた可溶性ＣｐＧ溶液にそれぞれ１：１０００のｗ／ｗ比で添加することによって作製した。ミクロ粒子製剤のために使用したＣｐＧの量は、ＰＬＧに対して０．５％ｗ／ｗであった。次に一次乳剤を、ＤＳＳ（０．９％ｗ／ｖ）を含む蒸留水３２ｍＬに添加し、Ｏｍｎｉホモジナイザーを使用して均質化した。これはｗ／ｏ／ｗ乳剤の形成を生じさせ、生じた乳剤を室温で１２時間攪拌して、塩化メチレンを蒸発させた。糖（マンニトール４５ｍｇ／ｍｌおよびスクロース１５ｍｇ／ｍｌ）を添加し、次に懸濁液のアリコート（ＣｐＧ  １０μｇ／動物）を小さなガラスバイアルに入れて凍結乾燥した（「ＰＬＧ／ＣｐＧ  ５０％封入バイアル」）。
【０２８０】
１００％封入ＣｐＧについての工程は、キトサン：ＣｐＧ比をそれぞれ１：１．４ｗ／ｗに変更して凍結乾燥したことを除いて上記と同様であった（「ＰＬＧ／ＣｐＧ  １００％封入バイアル」）。
【０２８１】
５０％封入ＣｐＧの標的を有するミクロ粒子はまた、ＰＶＡ（分子量１５，０００、ＩＣＮ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌｓ，Ａｕｒｏｒａ，Ｏｈｉｏより）を粘度付与剤として使用することによっても形成された。ミクロ粒子を、ＣｐＧとＰＶＡ溶液［０．５％ＣｐＧｗ／ｗＰＬＧおよび７．５％ＰＶＡｗ／ｗＰＬＧ］を混合し、その混合物を水相に添加した後均質化することによって上記のように作製した。このアプローチに関しては、封入効率は５０％で横ばい状態に達した。
【０２８２】
ミクロ粒子へのＣｐＧの封入／吸着効率を以下のように評価した。ＰＬＧ／ＣｐＧミクロ粒子を、１Ｎ水酸化ナトリウムを使用して加水分解し、試料を２６０ｎｍでの紫外吸収によって読み取り、ＣｐＧの負荷を生じさせた。ＰＬＧ／ＣｐＧミクロ粒子を遠心分離し、上清を分離して、２６０ｎｍでの紫外吸収によって検出した。上清とＣｐＧ負荷におけるＣｐＧの差が封入／吸着効率を示した。
【０２８３】
上記で指摘したように、ＣｐＧとキトサン複合体に関して１０００：１の比率で５０％の封入効率（０．５％標的負荷ｗ／ｗＰＬＧ）を得た。ＣｐＧの封入効率を高めるために努力を払い、１．４：１のＣｐＧとキトサン複合体が白色沈殿物を生じることを認めた。複合体を遠心分離し、上清の分析は、ＣｐＧとキトサンの完全な複合体化を示唆する、ＣｐＧとキトサンの不在を示した。さらに、ＣｐＧは、一晩のタンパク質吸着の間、粒子中に残存すると思われた（下記参照）。いずれの分子も（ＣｐＧもキトサンも）、タンパク質吸着後に実施したＨＰＬＣアッセイによって測定されたように、水相に分配しないと思われた。これは、これらの分子がキトサンと複合し、主としてミクロ粒子内に残存する傾向があるという事実に起因すると考えられる。
【０２８４】
（実施例９）
ＣｐＧオリゴヌクレオチドの放出
インビトロでの放出プロフィールを３つのミクロ粒子製剤に関して測定した（図５）。最初の製剤では、吸着されたＣｐＧを有するＣＴＡＢ−ＰＬＧミクロ粒子（すなわち実施例１からのＣＴＡＢ−ＰＬＧミクロ粒子、１％標的負荷ｗ／ｗＰＬＧ、実験室用揺動器にて４℃で一晩攪拌した）（以下「吸着」と称する）を再構成するために注射用蒸留水を添加した。２番目の製剤では、実施例８からのＣｐＧを有するＰＬＧミクロ粒子（「ＰＬＧ／ＣｐＧ５０％封入バイアル」）（０．５％標的負荷ｗ／ｗＰＬＧ）（以下「０．５％標的負荷ｗ／ｗＰＬＧで５０％封入」と称する）を再構成するために注射用蒸留水を添加した。３番目の製剤では、実施例８からのＣｐＧを有するＰＬＧミクロ粒子（「ＰＬＧ／ＣｐＧ１００％封入バイアル」）（０．５％標的負荷ｗ／ｗＰＬＧ）（以下「０．５％標的負荷ｗ／ｗＰＬＧで１００％封入」と称する）を再構成するために注射用蒸留水を添加した。０、７、１４および２８日目に各々の製剤についてＣｐＧ放出を測定した。放出測定のために、ミクロ粒子を遠心分離によって分離し、上清中に残存する（ＰＬＧミクロ粒子と結合していない）ＣｐＧの量を、２６０ｎｍの吸光度で紫外分光法によって測定した。
【０２８５】
図５は、３つの異なる粒子型に関するＣｐＧの放出プロフィールを比較する。「吸着」製材は最も速い放出を有し、「０．５％標的負荷ｗ／ｗＰＬＧで１００％封入」製材は最も緩やかな放出を有し、「０．５％標的負荷ｗ／ｗＰＬＧで５０％封入」製材は中間の放出を有していた。さらに、吸着製剤は、ゼロ時点で約８０−８５％の放出を有していた。初期５０％封入を有するＣｐＧ製剤は徐々にＣｐＧを放出し、４週間かけて総放出が達成された。約１００％封入を有するＣｐＧ製剤は、６週間を終えた時点でもＣｐＧを放出せず、平坦な放出プロフィールを生じた。
【０２８６】
（実施例１０）
さらなる放出試験
ＰＬＧ／ＤＳＳミクロ粒子を作製し、Ｄ．Ｏ’Ｈａｇａｎ，Ｍ．Ｓｉｎｇｈ，Ｍｉｃｒｏｐａｒｔｉｃｌｅｓ  ａｓ  ｖａｃｃｉｎｅ  ａｄｊｕｖａｎｔｓ  ａｎｄ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖｉｅｗ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ  ２（２００３）２６９−２８３に述べられているように特性決定した。実施例１におけるように、ＣｐＧ放出を上記実施例８におけるように評価した。タンパク質吸着は、上記実施例４におけるように評価した。
【０２８７】
得られた結果を表５に示す。ＭｅｎＢタンパク質のＰＬＧミクロ粒子への吸着は、標的負荷の８９−９９％で極めて効率的であった。初期ＣｐＧ放出は、５０％および１００％封入ＣｐＧミクロ粒子について予想されたものと一致した。放出は、吸着ＣｐＧに関するよりもＰＬＧミクロ粒子についてより高かった。
【０２８８】
【表５】
2009527572.tif 000016
（実施例１１）
吸着されたタンパク質の完全性
吸着されたタンパク質をＳＤＳ  ＰＡＧＥ分析、ウエスタンブロット法およびＨＰＬＣ分析によって完全性に関して評価した。タンパク質を、封入ＣｐＧを有するまたは有さないミクロ粒子１０ｍｇ［実施例１および４］からＳＤＳ試料緩衝液２００μｌで抽出し、ＳＤＳ  ＰＡＧＥ分析のために３０μｌを４−２０％勾配のトリス／グリシンポリアクリルアミドゲル（Ｎｏｖｅｘ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）に負荷した。ゲルをコロイダルブルー染色（Ｎｏｖｅｘ）で染色し、脱染色して、乾燥した。
【０２８９】
ミクロ粒子に吸着されたタンパク質の完全性は、凍結乾燥後も良好に保存されることが認められた。ミクロ粒子から抽出され、ＳＤＳ−ＰＡＧＥで泳動させたタンパク質は、吸着前のタンパク質と分子量が同じであり、見掛け上の凝集または分解を伴わなかった（データは示していない）。さらに、ミクロ粒子中のＣｐＧの存在は、表面に吸着されたＭｅｎ  Ｂタンパク質の完全性に影響を及ぼさないと思われた。これはワクチン製剤の重要な態様である。ワクチンが機能性抗体および強力な免疫応答を誘導するためには、無傷抗原を含むことが必要である。過去１０年間に、ＰＬＧミクロ粒子に封入された抗原を送達することがより一般的になってきた；しかしこのアプローチは、タンパク質の完全性に対する封入工程の有害作用という問題を抱える。Ｄ．Ｔ．Ｏ’Ｈａｇａｎ，Ｐｒｏｓｐｅｃｔｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ  ｏｆ  ｎｅｗ  ａｎｄ  ｉｍｐｒｏｖｅｄ  ｖａｃｃｉｎｅｓ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ｕｓｅ  ｏｆ  ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｉｏｎ  ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｎｅｗ  Ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  Ｖａｃｃｉｎｅｓ；  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，Ｉｎｃ．：Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９７）ｐｐ  ２１５−２２８。Ｈ．Ｏｋａｄａ，Ｈ．Ｔｏｇｕｃｈｉ，Ｂｉｏｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  ｍｉｃｒｏｓｐｈｅｒｅｓ  ｉｎ  ｄｒｕｇ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ，１２（１９９５）１−９９。我々は以前に、ミクロ粒子の表面に吸着された抗原の送達が、封入抗原に比べてはるかに強力な免疫応答を生じさせることを明らかにした。Ｊ．Ｃｈｅｓｋｏら、Ｐｈａｒｍ  Ｒｅｓ．２００４年１２月；２１（１２）：２１４８−５２。
【０２９０】
（実施例１２）
インビボ試験
以下の表６の第１群（「ＰＬＧ／２８７、２μｇ」）および第４群（「ＰＬＧ／２８７、２０μｇ」）に関しては、それぞれＭｅｎ  Ｂ２８７  ２μｇおよび２０μｇを含むＰＬＧ／２８７バイアル（すなわち実施例６のＰＬＧ／２８７  ２μｇおよびＰＬＧ／２８７  ２０μｇバイアル）を免疫の時点で注射用蒸留水によって再構成した。第２群（ＰＬＧ／２８７＋可溶性ＣｐＧ、２μｇ）および第５群（ＰＬＧ／２８７＋可溶性ＣｐＧ、２０μｇ）については、それぞれＰＬＧ／２８７バイアル、Ｍｅｎ  Ｂ２８７  ２μｇおよび２０μｇ／動物（実施例６より）を免疫の時点で注射用蒸留水によって再構成し、可溶性ＣｐＧを添加した（１０μｇ／動物）。第３群（ＰＬＧ／２８７＋ＰＬＧ／０．５％キトサン／封入ＣｐＧ、２μｇ）については、ＰＬＧ／２８７（Ｍｅｎ  Ｂ２８７  ２μｇ／動物）（実施例６より）およびＣｐＧを封入したＰＬＧ（封入ＣｐＧ）（ＣｐＧ  １０μｇ／動物）のバイアル（すなわち実施例８のＰＬＧ／ＣｐＧ  ５０％封入バイアル）を免疫の時点で注射用蒸留水によって再構成し、一緒に混合した。第６群（ＰＬＧ／２８７＋ＰＬＧ／０．５％キトサン／封入ＣｐＧ、２０μｇ）に関しては、ＰＬＧ／２８７（Ｍｅｎ  Ｂ２８７  ２０μｇ／動物）（実施例６より）およびＣｐＧを封入したＰＬＧ（封入ＣｐＧ）（ＣｐＧ  １０μｇ／動物）のバイアル（実施例８より）を免疫の時点で注射用蒸留水によって再構成し、一緒に混合した。
【０２９１】
すべての群について、０、２１および３５日目に１０匹の雌性ＣＤ−１マウスの群に試料を筋肉内注射した。３９日目と５６日目に、血清ＥＬＩＳＡ力価をＳｉｎｇｈ，Ｍ．ら（２００４）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９３（２）：２７３−２８２に述べられているように分析した。酵素結合イムノソルベント検定法（ＥＬＩＳＡ）マイクロタイタープレートをＮｕｎｃ，Ｄｅｎｍａｒｋより入手した。５６日目に、血清殺菌活性（ＳＢＡ）をＰｉｚｚａ，Ｍ．ら（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８７（５４５９）：１８１６−１８２０に述べられているように分析した。２９９６は、ＳＢＡ分析のために使用したＭｅｎＢの菌株である。ＳＢＡアッセイは、抗体が補体を細菌の表面に固定し、細菌溶解の引き金を引く能力を測定する。ＴＨ１およびＴＨ２型サイトカイン応答の検出のために、個々の動物から収集した脾臓からの単細胞懸濁液（ＳＰ）を、１０μｇ／ｍｌおよび２．５μｇ／ｍｌ抗マウスＣＤ２８抗体（ＢＤ）の最終濃度のＭｅｎＢ組換えタンパク質の存在下または不在下に１，０００，０００細胞／穴の濃度で９６穴プレート中にて１７時間培養した。上清を収集し、−８０℃で保存した。Ｍｕｌｔｉｐｌｅｘ  Ｌｕｍｉｎｅｘアッセイを、製造者のプロトコールに従って（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）サイトカインの同時検出のために上清５０μｌに関して実施した。
【０２９２】
結果を表６および図３および４に示す。［新しい図４参照］図３および４からわかるように、図３では「ＰＬＧ／２８７＋ＰＬＧ／０．５％キトサン／封入ＣｐＧ、２μｇ」と称され、図４では「ＰＬＧ／２８７＋ＰＬＧ／０．５％キトサン／ＣｐＧ（２μｇ）または「ＰＬＧ／２８７＋ＰＬＧ／０．５％キトサン／ＣｐＧ（２０μｇ）」と称される、ＰＬＧへのＣｐＧの封入は、吸着ＭｅｎＢ  ２８７単独および吸着ＭｅｎＢ  ２８７と可溶性ＣｐＧに比べて、同時投与した吸着ＭｅｎＢ  ２８７に対するＩＦＮ−γ（ＩＦＮγ）およびＴＮＦ−α（ＴＮＦα）応答を有意に増強した。抗体力価（ＩｇＧ）の表６も、「ＰＬＧ／２８７＋ＰＬＧ／０．５％キトサン／封入ＣｐＧ」群（２μｇまたは２０μｇ）が吸着ＭｅｎＢ  ２８７単独および吸着ＭｅｎＢ  ２８７と可溶性ＣｐＧに比べて高い応答を有することを示す。可溶性または封入ＣｐＧを伴わない吸着ＰＬＧ−２８７（２μｇ）単独は、有意に高いＩＬ−５応答を誘導した。比較的低いＩＬ−１３応答が検出可能であったが、データは示していない。ＣｐＧはＴＨ１型サイトカイン応答を上昇させることが示され、一方、それぞれ広く確立されているＴＨ１およびＴＨ２型サイトカインである、ＩＦＮγとＴＮＦα、ならびにＩＬ−５とＩＬ−１３を低下させることが測定された。
【０２９３】
【表６】
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（実施例１３）
インビボ試験
以下の表７の第１群（ＰＬＧ／ＭｅｎＢ  ２μｇ）に関しては、ＭｅｎＢ  ２８７  ２μｇを含むＰＬＧ／２８７バイアル（すなわち実施例６のＰＬＧ／２８７  ２μｇバイアル）を免疫の時点で注射用蒸留水によって再構成した。第２群（ＰＬＧ／ＭｅｎＢ  ２μｇ＋可溶性ＣｐＧ）については、ＰＬＧ／２８７のバイアル（ＭｅｎＢ  ２８７  ２μｇ／動物、実施例６より）を免疫の時点で注射用蒸留水によって再構成し、可溶性ＣｐＧを添加した（１０μｇ／動物）。第３群（ＰＬＧ／ＭｅｎＢ  ２μｇ＋ＰＬＧ／ＣＴＡＢ／吸着ＣｐＧ）については、ＰＬＧ／２８７のバイアル（ＭｅｎＢ  ２８７  ２μｇ／動物、実施例６より）を免疫の時点で注射用蒸留水によって再構成し、ＣｐＧを吸着したＣＴＡＢ−ＰＬＧミクロ粒子（実施例９参照）を添加した。第４群（ＰＬＧ／ＭｅｎＢ  ２μｇ＋キトサン／ＣｐＧ  ５０％封入）については、ＰＬＧ／２８７のバイアル（ＭｅｎＢ  ２８７  ２μｇ／動物）（実施例６より）および封入ＣｐＧを有するＰＬＧ（封入ＣｐＧ）（ＣｐＧ  １０μｇ／動物）（すなわち実施例８のＰＬＧ／ＣｐＧ  ５０％封入バイアル）を免疫の時点で注射用蒸留水によって再構成し、一緒に混合した。
【０２９４】
すべての群について、０、２１および３５日目に１０匹の雌性ＣＤ−１マウスの群に試料を筋肉内注射した。４９日目（３回目の免疫の２週間後）に、血清ＥＬＩＳＡ力価をＳｉｎｇｈ，Ｍ．ら（２００４）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９３（２）：２７３−２８２に述べられているように分析し、血清殺菌活性（ＳＢＡ）をＰｉｚｚａ，Ｍ．ら（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８７（５４５９）：１８１６−１８２０に述べられているように分析した。２９９６は、ＳＢＡ分析のために使用したＭｅｎＢの菌株である。
【０２９５】
結果を表７に示す。表７からわかるように、カチオン性ＰＬＧミクロ粒子を形成するためにキトサンを使用して、吸着形態のＣｐＧを添加することは、可溶性形態のＣｐＧを添加することに比べて有意の改善をもたらさなかった。同様の傾向が殺菌活性に関して認められた。別のＰＬＧミクロ粒子に吸着されている、同時投与した髄膜炎菌血清型Ｂ群と、キトサンを複合化剤として使用してＰＬＧミクロ粒子に封入したＣｐＧは、２μｇ用量の可溶性ＣｐＧ群と比較したとき、抗体力価と殺菌力価の３倍以上の増強を示した。これらのデータは、封入ＣｐＧがワクチン抗原に対する免疫応答を改善するために使用できることを明らかにする。ＭｅｎＢ特異的抗体の力価が有意に上昇したのみならず、より重要な点として、ＭｅｎＢワクチンに関する防御効果の信頼し得る相関物である、血清中の補体媒介性殺菌活性によって測定したとき、機能性抗体の産生も大きく増強された。Ｍ．Ｐｉｚｚａら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８７（２０００）１８１６−１８２０およびＲ．Ａ．Ｗａｌｌ，Ｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃａｌ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ａｎｄ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ，Ａｎｎ．Ｍｅｄ．３４（２００２）６２４−６３４．
【０２９６】
【表７】
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（実施例１４）
インビボ試験
以下の表８の第１群（ＰＬＧ／ＭｅｎＢ  １０μｇ）に関しては、ＭｅｎＢ  ２８７  １０μｇを含むＰＬＧ／２８７バイアル（すなわち実施例６のＰＬＧ／２８７  １０μｇバイアル）を免疫の時点で注射用蒸留水によって再構成した。第２群（ＰＬＧ／ＭｅｎＢ  １０μｇ＋可溶性ＣｐＧ）については、ＰＬＧ／２８７のバイアル（ＭｅｎＢ  ２８７  １０μｇ／動物、実施例６より）を免疫の時点で注射用蒸留水によって再構成し、可溶性ＣｐＧを添加した（１０μｇ／動物）。第３群（ＰＬＧ／ＭｅｎＢ  １０μｇ＋ＣｐＧ／キトサン）については、ＰＬＧ／２８７のバイアル（ＭｅｎＢ  ２８７  １０μｇ／動物、実施例６より）を免疫の時点で注射用蒸留水によって再構成し、キトサン−ＣｐＧ複合体を添加した（ＣｐＧ  １０μｇ／動物をそれぞれ１．４：１に比率でキトサンと複合した）。第４群（ＰＬＧ／ＭｅｎＢ  １０μｇ＋キトサン／ＣｐＧ  １００％封入）については、ＰＬＧ／２８７のバイアル（ＭｅｎＢ  ２８７  １０μｇ／動物）（実施例６より）および封入ＣｐＧを有するＰＬＧ（封入ＣｐＧ）（ＣｐＧ  １０μｇ／動物）（すなわち実施例８のＰＬＧ／ＣｐＧ  １００％封入バイアル）を免疫の時点で注射用蒸留水によって再構成し、一緒に混合した。第５群（ＰＬＧ／ＭｅｎＢ  １０μｇ＋キトサン／ＣｐＧ  ５０％封入）については、ＰＬＧ／２８７のバイアル（ＭｅｎＢ  ２８７  １０μｇ／動物）（実施例６より）および封入ＣｐＧを有するＰＬＧ（封入ＣｐＧ）（ＣｐＧ  １０μｇ／動物）（すなわち実施例８のＰＬＧ／ＣｐＧ封入バイアル）を免疫の時点で注射用蒸留水によって再構成し、一緒に混合した。
【０２９７】
すべての群について、０、２１および３５日目に１０匹の雌性ＣＤ−１マウスの群に試料を筋肉内注射した。４９日目（３回目の免疫の２週間後）に、血清ＥＬＩＳＡ力価をＳｉｎｇｈ，Ｍ．ら（２００４）Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．９３（２）：２７３−２８２に述べられているように分析し、血清殺菌活性（ＳＢＡ）をＰｉｚｚａ，Ｍ．ら（２０００）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８７（５４５９）：１８１６−１８２０に述べられているように分析した。２９９６は、ＳＢＡ分析のために使用したＭｅｎＢの菌株である。
【０２９８】
結果を表８に示す。表８からわかるように、ＣｐＧを約１００％の封入効率でミクロ粒子の内部に封入することは、抗体力価に関して可溶性ＣｐＧで得られるものよりも応答を増強した。ＣｐＧ−キトサン複合体群は、可溶性ＣｐＧより低いまたは匹敵する応答を示した。これは、ＣｐＧ−キトサン複合体をＰＬＧミクロ粒子に封入することの重要性を明らかにする。しかし、１０μｇ用量の封入製剤のＩｇＧ２ａ力価および血清殺菌力価は統計的に有意の作用を示さず、５０％封入製剤だけが血清殺菌力価の２倍の上昇を示した。この結果はＭｅｎＢ  ２８７  ２μｇ用量で認められた結果と異なっており、１０μｇの抗原用量から始まるプラトー効果が認められ得るので、ＭｅｎＢ  ２８７の用量選択の重要性を強調する。マウスでは、ＩｇＧ２ａ抗体アイソタイプの産生はＴｈ１応答の特徴として広く認識されている。例えばＣ．Ｍ．Ｓｎａｐｐｅｒ，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３６（１９８７）９４４−９４７参照。
【０２９９】
【表８】
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本発明の好ましい実施形態を少し詳しく説明したが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく明らかな変化を施し得ることは了解される。
【図面の簡単な説明】
【０３００】
【図１】図１は、１％の吸着ＣｐＧｗ／ｗＰＬＧの初期標的負荷を有する様々な粒子型についての２８日間のＣｐＧ放出のプロットである。
【図２】図２は、０．５％の吸着ＭｅｎＣｗ／ｗＰＬＧの初期標的負荷を有する様々な粒子型についての２８日間のＭｅｎＣ多糖放出のプロットである。
【図３】図３は、ＣｐＧオリゴヌクレオチドなしで、可溶性ＣｐＧオリゴヌクレオチドと共に、または封入ＣｐＧオリゴヌクレオチドと共に、ＭｅｎＢ  ２８７タンパク質（２または２０μｇ）を負荷したミクロ粒子製剤でワクチン接種したマウスについての免疫応答を示す。
【図４】図４は、ＣｐＧオリゴヌクレオチドなしで、可溶性ＣｐＧオリゴヌクレオチドと共に、または封入ＣｐＧオリゴヌクレオチドと共に、ＭｅｎＢ  ２８７タンパク質（２または２０μｇ）を負荷したミクロ粒子製剤でワクチン接種したマウスについての免疫応答を示す。
【図５】図５は、吸着製剤については１％ＣｐＧｗ／ｗＰＬＧおよび封入製剤については０．５％ＣｐＧｗ／ｗＰＬＧの初期標的負荷を有する吸着および封入製剤を比較した２８日間のＣｐＧ放出のプロットである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【国際調査報告】
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