(57)【要約】本発明は、好ましい薬理学的特徴の予期しない組合せを有する、ＭＣＰ−１受容体活性の新規のアンタゴニストまたは部分アゴニスト／アンタゴニスト：Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド、またはその医薬的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを提供する。本発明の結晶形もまた提供される。それを含む医薬組成物、並びに炎症性疾患、アレルギー性、自己免疫、代謝、癌および／または循環器疾患の治療剤としてのその使用方法もまた、本発明の目的である。本開示はまた、式（Ｉ）の化合物、例えば、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド：2009544758.tif 000109［式中、Ｒ１、Ｒ８、Ｒ９、Ｒ１０、および「ＨＥＴ」は、本明細書に記載されたものである］の製造方法も提供する。本方法の有用な中間体である化合物もまた、本明細書で提供される。
2009544758.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドが結晶形である請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
Ｎ−２型を含む、請求項１〜２の結晶形。
【請求項４】
結晶が約＋２２℃の温度であり、下表：
2009544758.tif 000102
に実質的に等しい単位格子パラメータの特徴を有する、請求項１〜３の結晶形。
【請求項５】
約２２℃の温度で、７．２、８．７、９．７、１２．５、１２．８、１３．３、１６．０、１６．６、１８．２、および１８．８から選択される３つ以上の２θ値（ＣｕＫα λ＝１．５４１Å）を含む粉末Ｘ線回折パターンの特徴を有する、請求項１〜４の結晶形。
【請求項６】
約２２℃の温度で、７．２、８．７、９．７、１２．５、１２．８、１３．３、１６．０、１６．６、１８．２、および１８．８からなる群から選択される４つ以上の２θ値（ＣｕＫα λ＝１．５４１Å）を含む粉末Ｘ線回折パターンの特徴をさらに有する、請求項１〜５の結晶形。
【請求項７】
実質的に表７に記載される部分原子座標の特徴を有する、請求項１〜６の結晶形。
【請求項８】
実質的に図２の粉末Ｘ線回折パターンを有する、請求項１〜７の結晶形。
【請求項９】
請求項１〜８の化合物、および医薬的に許容される担体もしくは希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１〜９の化合物の治療上の有効量を哺乳類に投与することを特徴とする、哺乳類における疾患の治療方法であって、該疾患が、糖尿病、肥満症、メタボリックシンドローム、脳卒中、神経因性疼痛、虚血性心筋症、乾癬、高血圧症、強皮症、骨関節炎、動脈瘤、発熱、循環器疾患、クローン病、うっ血性心不全、自己免疫疾患、ＨＩＶ感染、ＨＩＶ関連痴呆、乾癬、突発性肺線維症、移植動脈硬化症、物理的もしくは化学的に誘発した頭部外傷、炎症性腸疾患、肺胞炎、大腸炎、全身性エリテマトーデス、腎毒性血清腎炎、糸球体腎炎、喘息、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、血管炎、不安定プラーク、関節リウマチ、再狭窄、静脈新生内膜過形成、透析−移植新生内膜過形成、動静脈シャント内膜過形成、臓器移植、慢性移植腎症、および癌から選択される方法。
【請求項１１】
該疾患が、糖尿病、肥満症、クローン病、全身性エリテマトーデス、糸球体腎炎、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、および臓器移植から選択される、請求項１０の方法。
【請求項１２】
該疾患が、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、クローン病、および糖尿病から選択される、請求項１０〜１１の方法。
【請求項１３】
該疾患が糖尿病である、請求項１０〜１２の方法。
【請求項１４】
該疾患がアテローム性動脈硬化症である、請求項１０〜１２の方法。
【請求項１５】
該疾患がクローン病である、請求項１０〜１２の方法。
【請求項１６】
該疾患が多発性硬化症である、請求項１０〜１２の方法。
【請求項１７】
式（ＶＩ）：
【化１】
2009544758.tif 000103
を有する化合物、またはその塩の製造方法であって、式Ｖの化合物を式ＮＨ（Ｒ８）（Ｒ９）のアミンで還元的にアミノ化して、式ＶＩの化合物を得ることを特徴とする方法であって、還元的アミノ化が、
（ａ）  約−２０℃〜約＋５０℃の温度で、該アミンおよび脱水剤を、式Ｖの化合物の非プロトン溶媒溶液に加えて、式Ｖａのイミン／エナミン化合物を形成する段階：
【化２】
2009544758.tif 000104
；並びに
（ｂ）  式Ｖａのイミン／エナミン化合物および白金触媒である５％ Ｐｔ／Ｓ／Ｃの溶液を、水素ガスで処理して、式ＶＩのエステル化合物を得る段階
を含むことを特徴とする方法
［上記の式中、
Ｒ１およびＲ２は独立して、水素、またはＢＯＣ、Ｃｂｚ、もしくはベンジルから選択されるアミン保護基であり；
Ｒ４は、Ｃ１−６アルキルであり；並びに
Ｒ８およびＲ９は独立して、水素またはＣ１−６アルキルである］。
【請求項１８】
式Ｖの化合物が、
【化３】
2009544758.tif 000105
、またはその塩であり；
式Ｖａの化合物が、
【化４】
2009544758.tif 000106
、またはその塩であり、並びに
式ＶＩの化合物が、
【化５】
2009544758.tif 000107
、またはその塩である、請求項１７の方法。
【請求項１９】
（ｉ）
【化６】
2009544758.tif 000108
；または
（ｉｉ）  その（ｉ）の塩
から選択される化合物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、望ましい薬理学的特徴の予想外の組合せを有する、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド、またはその医薬上許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを提供する。本発明の結晶形も提供する。
【０００２】
上記を含む医薬組成物ならびに上記を炎症性疾患、アレルギー性、自己免疫、代謝、癌および／または心血管の疾患を治療するための薬剤として使用する方法も、本発明の目的である。本開示はまた、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド：
【化１】
2009544758.tif 000003
［式中、Ｒ1、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10、および
【化２】
2009544758.tif 000004
は本明細書中に記載のとおりである］を含めた式（Ｉ）の化合物を調製する方法も提供する。方法の有用な中間体である化合物も、本明細書中で提供する。
【背景技術】
【０００３】
ケモカインとは、様々な細胞によって放出され、数ある細胞種の中でとりわけ、マクロファージ、ＴおよびＢリンパ球、好酸球、好塩基球ならびに好中球を誘引および活性化する、分子量６〜１５ｋＤａの化学走性サイトカインである（CharoおよびRasonhoff、New Eng. J. Med.、2006、354、610〜621；Luster、New Eng. J. Med.、1998、338、436〜445；ならびにRollins、Blood、1997、90、909〜928に総説）。アミノ酸配列中の最初の２つのシステインが単一のアミノ酸によって分離されているか（ＣＸＣ）、または隣接しているか（ＣＣ）に応じて、２つの主要なケモカインのクラス、すなわちＣＸＣおよびＣＣが存在する。インターロイキン−８（ＩＬ−８）、好中球活性化タンパク質−２（ＮＡＰ−２）および黒色腫成長刺激活性タンパク質（ＭＧＳＡ）などのＣＸＣケモカインは、主に好中球およびＴリンパ球に対して化学走性であり、一方、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１α、ＭＩＰ−１β、単球走化性タンパク質（ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−４、およびＭＣＰ−５）ならびにエオタキシン（−１および−２）などのＣＣケモカインは、数ある細胞種の中でとりわけ、マクロファージ、Ｔリンパ球、好酸球、樹状細胞、および好塩基球に対して化学走性である。また、主要なケモカインサブファミリーのどちらにも属さないケモカインのリンフォタクチン−１、リンフォタクチン−２（どちらもＣケモカイン）、およびフラクタルカイン（ＣＸ3Ｃケモカイン）も存在する。
【０００４】
ケモカインは、「ケモカイン受容体」と呼ばれる、Ｇタンパク質結合７回膜貫通ドメインタンパク質のファミリーに属する特異的な細胞表面受容体と結合する（Horuk、Trends Pharm. Sci.、1994、15、159〜165に総説）。その同族リガンドと結合する際、ケモカイン受容体は会合した三量体Ｇタンパク質を介して細胞内シグナルを伝達し、数ある他の応答でとりわけ、細胞内カルシウム濃度の急速な増加、細胞形状の変化、細胞接着分子の発現の増加、脱顆粒、および細胞遊走の促進をもたらす。以下の特徴パターンでＣＣケモカインと結合するまたはそれに応答するヒトケモカイン受容体が少なくとも１０種存在する（ZlotnikおよびOshie、Immunity、2000、12、121に総説）：ＣＣＲ−１（または「ＣＫＲ−１」もしくは「ＣＣ−ＣＫＲ−１」）［ＭＩＰ−１α、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−４、ＲＡＮＴＥＳ］（Ben-Barruch, et al.、Cell、1993、72、415〜425、およびLuster、New Eng. J. Med.、1998、338、436〜445）；ＣＣＲ−２ＡおよびＣＣＲ−２Ｂ（または「ＣＫＲ−２Ａ」／「ＣＫＲ−２Ｂ」もしくは「ＣＣ−ＣＫＲ−２Ａ」／「ＣＣ−ＣＫＲ−２Ｂ」）［ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−４、ＭＣＰ−５］（Charo, et al.、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、1994、91、2752〜2756、およびLuster、New Eng. J. Med.、1998、338、436〜445）；ＣＣＲ−３（または「ＣＫＲ−３」もしくは「ＣＣ−ＣＫＲ−３」）［エオタキシン−１、エオタキシン−２、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＣＰ−３、ＭＣＰ−４］（Combadiere, et al.、J. Biol. Chem.、1995、270、16491〜16494、およびLuster、New Eng. J. Med.、1998、338、436〜445）；ＣＣＲ−４（または「ＣＫＲ−４」もしくは「ＣＣ−ＣＫＲ−４」）［ＴＡＲＣ、ＭＤＣ］（Power, et al.、J. Biol. Chem.、1995、270、19495〜19500、およびLuster、New Eng. J. Med.、1998、338、436〜445）；ＣＣＲ−５（または「ＣＫＲ−５」もしくは「ＣＣ−ＣＫＲ−５」）［ＭＩＰ−１α、ＲＡＮＴＥＳ、ＭＩＰ−１β］（Sanson, et al.、Biochemistry、1996、35、3362〜3367）；ＣＣＲ−６（または「ＣＫＲ−６」もしくは「ＣＣ−ＣＫＲ−６」）［ＬＡＲＣ］（Baba, et al.、J. Biol. Chem.、1997、272、14893〜14898）；ＣＣＲ−７（または「ＣＫＲ−７」もしくは「ＣＣ−ＣＫＲ−７」）［ＥＬＣ］（Yoshie et al.、J. Leukoc. Biol.、1997、62、634〜644）；ＣＣＲ−８（または「ＣＫＲ−８」もしくは「ＣＣ−ＣＫＲ−８」）［Ｉ−３０９］（Napolitano et al.、J. Immunol.、1996、157、2759〜2763）；ＣＣＲ−１０（または「ＣＫＲ−１０」もしくは「ＣＣ−ＣＫＲ−１０」）［ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−３］（Bonini, et al.、DNA and Cell Biol.、1997、16、1249〜1256）；ならびにＣＣＲ−１１［ＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、およびＭＣＰ−４］（Schweickert, et al.、J. Biol. Chem.、2000、275、90550）。
【０００５】
哺乳動物ケモカイン受容体に加えて、哺乳動物サイトメガロウイルス、ヘルペスウイルスおよびポックスウイルスが、感染細胞において、ケモカイン受容体の結合特性を有するタンパク質を発現することが示されている（WellsおよびSchwartz、Curr. Opin. Biotech.、1997、8、741〜748に総説）。ＲＡＮＴＥＳおよびＭＣＰ−３などのヒトＣＣケモカインは、これらのウイルスによってコードされた受容体を介して急速なカルシウムの動員を引き起こすことができる。受容体の発現は、正常な免疫系監視および感染に対する応答の破壊を可能にすることによって、感染症に許容状態となり得る。さらに、ＣＸＣＲ４、ＣＣＲ２、ＣＣＲ３、ＣＣＲ５およびＣＣＲ８などのヒトケモカイン受容体は、たとえばヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）の場合のように、微生物による哺乳動物細胞の感染の補助受容体として作用することができる。
【０００６】
ケモカインおよびその同族受容体は、喘息およびアレルギー性疾患を含めた炎症性、感染性、および免疫調節性の障害および疾患；関節リウマチおよび多発性硬化症などの自己免疫病；ならびにアテローム性動脈硬化症および糖尿病などの代謝性疾患の重要な媒介物質であることが示唆されている（CharoおよびRasonhoff、New Eng. J. Med.、2006、354、610〜621；Z. GaoおよびW. A. Metz、Chem. Rev.、2003、103、3733；P. H. Carter、Current Opinion in Chemical Biology、2002、6、510；Trivedi, et al.、Ann. Reports Med. Chem.、2000、35、191；SaundersおよびTarby、Drug Disc. Today、1999、4、80；PremackおよびSchall、Nature Medicine、1996、2、1174に総説）。たとえば、ケモカイン単球化学誘引物質−１（ＭＣＰ−１）およびその受容体であるＣＣケモカイン受容体２（ＣＣＲ−２）は、白血球を炎症部位へと勇進すること、および続いてこれらの細胞を活性化することにおいて、中心的役割を果たす。ケモカインＭＣＰ−１がＣＣＲ−２と結合した際、これは、細胞内カルシウム濃度の急速な増加、細胞接着分子の発現の増加、および白血球遊走の促進を誘導する。ＭＣＰ−１／ＣＣＲ−２相互作用の重要性の実証は、遺伝子改変したマウスを用いた実験によって提供されている。ＭＣＰ−１-/-マウスは、いくつかの異なる種類の免疫誘発後に単球を炎症部位内へと動員することができなかった（Bao Lu, et al.、J. Exp. Med.、1998、187、601）。同様に、ＣＣＲ−２−／−マウスは、様々な外因性因子で誘発した場合に単球を動員することもインターフェロン−γを産生することもできなかった；さらに、ＣＣＲ−２ヌルマウスの白血球はＭＣＰ−１に応答して遊走せず（Landin Boring, et al.、J. Clin. Invest.、1997、100、2552）、したがって、ＭＣＰ−１／ＣＣＲ−２相互作用の特異性が実証された。２つの他のグループが、異なるＣＣＲ−２−／−マウスの株を用いた同等の結果を独立して報告している（William A. Kuziel, et al.、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、1997、94、12053、およびTakao Kurihara, et al.、J. Exp. Med.、1997、186、1757）。ＭＣＰ−１−／−およびＣＣＲ−２−／−の動物の生存度および一般に正常な健康は、ＭＣＰ−１／ＣＣＲ−２相互作用の破壊が生理的発作を引き起こさないという観点から注目すべきである。総合すると、これらのデータにより、ＭＣＰ−１／ＣＣＲ２の作用を遮断する分子がいくつかの炎症性および自己免疫障害の治療に有用であるという結論がもたらされる（M. FeriaおよびF. Diaz-Gonzalez、Exp. Opin. Ther. Patents、2006、16、49；ならびにJ. Dawson、W. Miltz、およびC. Wiessner、C. Exp. Opin. Ther. Targets、2003、7、35に総説）。この仮説は、下に記載するように、現在いくつかの異なる動物疾患モデルにおいて妥当性確認されている。
【０００７】
ＭＣＰ−１は関節リウマチに罹患している患者においてアップレギュレーションされていることが、知られている（Alisa Koch, et al.、J. Clin. Invest.、1992、90、772〜779）。さらに、いくつかの前臨床研究により、関節リウマチの治療においてＭＣＰ−１／ＣＣＲ２相互作用を拮抗することの潜在的な治療的価値が実証されている。最近、ＭＣＰ−１をコードしているＤＮＡワクチンがラットにおいて慢性のポリアジュバント誘発関節炎を寛解させることが示された（Sawsan Youssef, et al.、J. Clin. Invest.、2000、106、361）。同様に、疾患症状は、ＭＣＰ−１に対する抗体を、コラーゲン誘発関節炎（Hiroomi Ogata, et al.、J. Pathol.、1997、182、106）、またはストレプトコッカス細胞壁誘発関節炎（Ralph C. Schimmer, et al.、J. Immunol.、1998、160、1466）に罹患しているラットに直接投与することによって制御することができる。恐らくは最も顕著なことに、ＭＣＰ−１のペプチド拮抗剤、ＭＣＰ−１（９−７６）は、関節炎のＭＲＬ−ｌｐｒマウスモデルにおいて、疾患の発症の予防および疾患症状の軽減（投与時間に応じる）をどちらも行うことが示された（Jiang-Hong Gong, et al.、J. Exp. Med.、1997、186、131）。さらに、小分子ＣＣＲ２拮抗剤を投与することにより、関節炎のげっ歯類モデルにおいて臨床スコアが低下したことが実証されている（C. M. Brodmerkel, et al.、J. Immunol.、2005、175、5370；およびＭ．Ｘｉａ他、米国特許出願第００６９１２３号、２００６）。抗ＣＣＲ２抗体の投与は、ネズミＣＩＡに対して、投与時間に応じて様々な効果を有していた（H. Bruhl, et al.、J. Immunol.、2004、172、890）。ＣＣＲ２−／−マウスを用いた最近の研究は、ＣＣＲ２の欠失が特定の実験状況においてげっ歯類の関節炎モデルを悪化させる可能性があることを示唆している（M. P. Quinones, et al.、J. Clin. Invest.、2004、113、856；M. P. Quinones, et al.、J. Mol. Med.、2006、84、503）。
【０００８】
ＭＣＰ−１がアテローム性動脈硬化性病変においてアップレギュレーションされていることは知られており、ＭＣＰ−１の循環レベルが治療剤を用いた治療によって低下することが示されている（Abdolreza Rezaie-Majd, et al.、Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol.、2002、22、1194〜1199）。いくつかの重要な研究により、アテローム性動脈硬化症の治療においてＭＣＰ−１／ＣＣＲ２相互作用を拮抗することの潜在的な治療的価値が実証されている。たとえば、ＭＣＰ−１−／−マウスをＬＤＬ受容体欠損マウスと交差させた場合に、大動脈脂質沈着の８３％の低下が観察された（Long Gu, et al.、Mol. Cell、1998、2、275）。同様に、ヒトアポリポタンパク質Ｂを既に過剰発現していたマウスからＭＣＰ−１を遺伝子除去した場合に、生じたマウスは、ＭＣＰ−１＋／＋ａｐｏＢ対照マウスと比較してアテローム性動脈硬化性病変の形成から保護されていた（Jennifa Gosling, et al.、J. Clin. Invest.、1999、103、773）。同様に、ＣＣＲ−２−／−マウスをアポリポタンパク質Ｅ−／−マウスと交差させた場合に、アテローム性動脈硬化性病変の発生率の有意な低下が観察された（Landin Boring, et al.、Nature、1998、394、894；T. C. Dawson, et al.、Atherosclerosis、1999、143、205）。最後に、アポリポタンパク質Ｅ−／−マウスにＣＣＲ２のペプチド拮抗剤をコードしている遺伝子を投与した場合、病変の大きさが減少し、溶菌斑の安定性が増加した（W. Ni, et al.、Circulation、2001、103、2096〜2101）。ＣＣＲ２−／−マウスからの骨髄をＡｐｏＥ３−Ｌｅｉｄｅｎマウス内へと移植することで初期アテローム発生が阻害されたが（J. Guo, et al.、Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol.、2003、23、447）、進行した病変には最小限の効果しか有さなかった（J. Guo, et al.、Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol.、2005、25、1014）。
【０００９】
２型真性糖尿病に罹患している患者は、典型的には、疾患の顕著な特長の１つとしてインスリン抵抗性を示す。インスリン抵抗性はまた、肥満症、アテローム性動脈硬化症、高血圧、および異常脂質血症が含まれる、「代謝症候群」または「症候群Ｘ」として知られる異常の分類とも関連している（Eckel, et al.、Lancet、2005、365、1415に総説）。炎症が２型糖尿病および「症候群Ｘ」の病理における疾患プロセスの悪化に役割を果たすことは、十分に認識されている（Chen、Pharmacological Research、2006、53、469；NeelsおよびOlefsky、J. Clin. Invest.、2006、116、33；DanadonaおよびAljada、Am J Cardiol.、2002、90、27G〜33G；PickupおよびCrook、Diabetologia、1998、41、1241に総説）。ＭＣＰ−１は、肥満症誘発インスリン抵抗性において役割を果たすことが認識されている。培養物中では、ヒト前脂肪細胞がＭＣＰ−１を構成的に発現した（Gerhardt、Mol. Cell. Endocrinology、2001、175、81）。ＣＣＲ２は脂肪細胞上で発現される；インビトロで分化した脂肪細胞にＭＣＰ−１を加えることで、インスリン刺激性のグルコースの取り込みならびにいくつかの脂肪生成遺伝子（ＬｐＬ、アジプシン、ＧＬＵ−４）、ａＰ２、β３−アドレナリン作動性受容体、およびＰＰＡＲγ）の発現が低下する（P. SartipyおよびD. Loskutoff、Proc. Natl. Acad. Sci USA、1999、96、6902）。２型糖尿病に罹患している患者は、非糖尿病対照よりも高い循環ＭＣＰ−１レベルを有しており（S. Nomura, et al.、Clin. Exp. Immunol.、2000、121、437）、脂肪組織からのＭＣＰ−１の放出は、メトホルミンまたはチアゾリジンジオンなどの抗糖尿病治療剤を用いた治療によって減少させることができる（J. M. Bruun, et al.、J. Clin. Endocrinol. Metab.、2005、90、2282）。同様に、ＭＣＰ−１は、肥満症のネズミ実験モデルにおいても過剰発現されており、主に脂肪組織によって産生されていた（SartipyおよびLoskutoff、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、2003、100、7265）。肥満マウスでは、ＭＣＰ−１の発現は、インスリン抵抗性の発症に先行しておよびそれと同時に起こっていた（H. Xu, et al.、J. Clin. Invest.、2003、112、1821）。別の研究により、ＭＣＰ−１の発現は、マウスの性腺周囲脂肪組織において体重と正に相関したことが示された（Weisberg, et al.、J. Clin. Invest.、2003、112、1796）。これらのデータと一致して、ｄｂ／ｄｂマウスにおけるインスリン抵抗性の発生は、ＭＣＰ−１の遺伝子欠失または遺伝子誘発性のドミナントネガティブペプチドの発現のどちらかによって寛解された（H. Kanda, et al.、J. Clin. Invest.、2006、116、1494）。論理的な逆関係は実証することができ、脂肪組織におけるＭＣＰ−１の過剰発現はインスリン抵抗性を促進した（N. Kamei, et al.、J. Biol. Chem.、2006、281、26602）。ＭＣＰ−１の遺伝子欠失がｄｂ／ｄｂマウスにおいてインスリン抵抗性に影響を与えないことを示す、１つの矛盾する結果も示された（F. Y. Chow, et al.、Diabetologia、2007、50、471）。ＭＣＰ−１のデータと一致して、ＣＣＲ２（ＭＣＰ−１受容体）を用いた直接研究により、これが、肥満症および肥満症誘発インスリン抵抗性の形成において役割を果たすことが示された。高脂肪の食餌を維持することで、野生型（C. L. Tsou, et al.、J. Clin. Invest.、2007、117、902）およびＡｐｏＥ-/-マウス（F. Tacke, et al.、J. Clin. Invest.、2007、117、185）のどちらにおいても循環ＣＣＲ２+炎症性単球の数��増加した。ＣＣＲ２の遺伝子欠失により、ネズミ脂肪組織における活性マクロファージが減少したが（C. N. Lumeng, et al.、Diabetes、2007、56、16）、「痩せた」状態を維持すると考えられていたＭ２脂肪マクロファージの集団には影響を与えなかった（C. N. Lumeng, et al.、J. Clin. Invest.、2007、117、175）。ＣＣＲ２の遺伝子欠失により、実験条件に応じて（A. Chen, et al.、Obes. Res.、2005、13、1311）食餌誘発性の肥満症が減少し、食餌誘発性の肥満症モデルにおけるインスリン感度が改善された（S. P. Weisberg, et al.、J. Clin. Invest.、2006、116、115；Ｐ  Ｃｏｒｎｅｌｉｕｓ、ＲＰ  Ｇｌａｄｕｅ、ＲＳ  Ｓｅｂａｓｔｉａｎ、国際公開公報特許ＷＯ２００６／０１３４２７  Ａ２号）、２００６年）。小分子ＣＣＲ２拮抗剤の投与によっても、この同じモデルにおけるインスリン感度が改善された（S. P. Weisberg, et al.、J. Clin. Invest.、2006、116、115）。
【００１０】
２つの研究が、高血圧誘発性の血管の炎症、再構築、および肥厚におけるＣＣＲ２の重要な役割を記載している（E Bush et al.、Hypertension、2000、36、360；M Ishibashi, et al.、Circ. Res.、2004、94、1203）。
【００１１】
ＭＣＰ−１がヒト多発性硬化症においてアップレギュレーションされていることは知られており、また、インターフェロンβ−１ｂを用いた有効な治療が末梢血単核細胞においてＭＣＰ−１の発現を減少させることが示されており、これは、ＭＣＰ−１が疾患の進行において役割を果たすことを示唆している（Carla Iarlori, et al.、J. Neuroimmunol.、2002、123、170〜179）。他の研究により、多発性硬化症の治療においてＭＣＰ−１／ＣＣＲ−２相互作用を拮抗することの潜在的な治療的価値が実証されている；これらの研究はすべて、多発性硬化症の慣用の動物モデルである実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）で実証されている。ＥＡＥに罹患している動物に、ＭＣＰ−１に対する抗体を投与することにより、疾患の再発が有意に減少した（K. J. Kennedy, et al.、J. Neuroimmunol.、1998、92、98）。さらに、２つの報告から、ＣＣＲ−２−／−マウスがＥＡＥに対して耐性を有することが示されている（B. T. Fife, et al.、J. Exp. Med.、2000、192、899；L. Izikson, et al.、J. Exp. Med.、2000、192、1075）。続く報告が、様々な株由来のマウスにおけるＣＣＲ２欠失の効果を検査することによってこれらの最初の観察を拡張した（S. Gaupp, et al.、Am. J. Pathol.、2003、162、139）。注目すべきことに、小分子ＣＣＲ２拮抗剤の投与は、Ｃ５７ＢＬ／６マウスにおける疾患の進行も鈍らせた（C. M. Brodmerkel, et al.、J. Immunol.、2005、175、5370）。
【００１２】
ＭＣＰ−１は、肺移植後に閉塞性細気管支炎症候群を発生する患者においてアップレギュレーションされていることが知られている（Martine Reynaud-Gaubert, et al.、J. of Heart and Lung Transplant.、2002、21、721〜730；John Belperio, et al.、J. Clin. Invest.、2001、108、547〜556）。閉塞性細気管支炎症候群のネズミモデルでは、ＭＣＰ−１に対する抗体を投与することにより気道閉塞の弱毒化がもたらされた；同様に、ＣＣＲ２−／−マウスは、この同じモデルで気道閉塞に対して体制を有していた（John Belperio, et al.、J. Clin. Invest.、2001、108、547〜556）。これらのデータは、ＭＣＰ−１／ＣＣＲ２の拮抗が移植後の器官拒絶の治療に有用であり得ることを示唆している。さらに、研究により、ＭＣＰ−１／ＣＣＲ２軸の破壊が島移植の生存を延長できることが示されている（I Lee et al.、J Immunol、2003、171、6929；R Abdi et al.、J Immunol、2004、172、767）。ラット移植モデルでは、ＣＣＲ２およびＭＣＰ−１が、移植片脈管障害を発生する移植片においてアップレギュレーションされていることが示されている（K Horiguchi et al.、J Heart Lung Transplant.、2002、21、1090）。別の研究では、抗ＭＣＰ−１遺伝子治療により移植片脈管障害が弱毒化された（A Saiura et al.、Artherioscler Thromb Vasc Biol、2004、24、1886）。１つの研究は、ＭＣＰ−１の遮断による実験的静脈移植片新生内膜形成の阻害を記載している（H Tatewaki et al.、J Vasc Surg.、2007、45、1236）。
【００１３】
他の研究により、喘息の治療においてＭＣＰ−１／ＣＣＲ２相互作用を拮抗することの潜在的な治療的価値が実証されている。卵白アルブミンで誘発したマウスにおける中和抗体を用いたＭＣＰ−１の隔離により、気管支応答性の亢進および炎症の顕著な低下がもたらされた（Jose-Angel Gonzalo, et al.、J. Exp. Med.、1998、188、157）。ＭＣＰ−１に対する抗体を投与することによって、マンソン住血吸虫の卵で誘発したマウスにおいてアレルギー性気道炎症の低下が可能であることが証明された（Nicholas W. Lukacs, et al.、J. Immunol.、1997、158、4398）。これと一致して、ＭＣＰ−１−／−マウスでは、マンソン住血吸虫の卵を用いた誘発に対する応答の低下が示された（Bao Lu, et al.、J. Exp. Med.、1998、187、601）。
【００１４】
他の研究により、腎臓病の治療においてＭＣＰ−１／ＣＣＲ２相互作用を拮抗することの潜在的な治療的価値が実証されている。糸球体腎炎のネズミモデルに、ＭＣＰ−１に対する抗体を投与することにより、糸球体半月の形成およびＩ型コラーゲンの沈着の顕著な低下がもたらされた（Clare M. Lloyd, et al.、J. Exp. Med.、1997、185、1371）。さらに、誘発させた腎毒性血清腎炎に罹患しているＭＣＰ−１−／−マウスは、そのＭＣＰ−１＋／＋の対応物よりも有意に少ない尿細管障害を示した（Gregory H. Tesch, et al.、J. Clin. Invest.、1999、103、73）。
【００１５】
いくつかの研究により、全身性エリテマトーデスの治療においてＭＣＰ−１／ＣＣＲ２相互作用を拮抗することの潜在的な治療的価値が実証されている。ＣＣＲ２-/-マウスは、全身性エリテマトーデスのネズミモデルにおいて、その野生型対応物と比較して延長された生存および低下した腎臓病を示した（G. Perez de Lema, et al.、J. Am. Soc. Neph.、2005、16、3592）。これらのデータは、ループスのげっ歯類モデルにおけるＭＣＰ−１の遺伝子欠失（S. Shimizu, et al.、Rheumatology (Oxford)、2004、43、1121；Gregory H. Tesch, et al.、J. Exp. Med.、1999、190、1813）またはＣＣＲ２のペプチド拮抗剤の投与（H. Hasegawa, et al.、Arthritis ＆ Rheumatism、2003、48、2555）の最近の研究で見い出された疾患変更活性と一致している。
【００１６】
ＣＣＲ２+固有層リンパ球中の顕著な３０倍の増加が、非患部の回腸と比較して、クローン病患者からの小腸で観察された（S. J. Connor, et al.、Gut、2004、53、1287）。また、注記すべきは、対照と比較して活性なクローン病に罹患している患者では、循環ＣＣＲ２+／ＣＤ１４+／ＣＤ５６+単球の部分組の拡大が存在していたことである。いくつかのげっ歯類の研究により、クローン病／大腸炎の治療においてＭＣＰ−１／ＣＣＲ２相互作用を拮抗することの潜在的な治療的価値が実証されている。ＣＣＲ−２-/-マウスは、デキストラン硫酸ナトリウム誘発大腸炎の効果から保護されていた（Pietro G. Andres, et al.、J. Immunol.、2000、164、6303）。ＣＣＲ２、ＣＣＲ５、およびＣＸＣＲ３（ネズミ結合親和性＝それぞれ２４、２３６、および３６９ｎＭ）の小分子拮抗剤を投与することによっても、デキストラン硫酸ナトリウム誘発大腸炎に対して保護された（H. Tokuyama, et al.、Int. Immunol.、2005、17、1023）。最後に、ＭＣＰ−１−／−マウスは、大腸炎のハプテン誘発モデルにおいて、実質的に低下した結腸損傷を示した（巨視的および組織学的）（W. I. Khan, et al.、Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol.、2006、291、G803）。
【００１７】
２つの報告が、炎症性腸疾患に罹患している患者の腸管上皮細胞および腸粘膜におけるＭＣＰ−１の過剰発現を記載している（H. C. Reinecker, et al.、Gastroenterology、1995、108、40、およびMichael C. Grimm, et al.、J. Leukoc. Biol.、1996、59、804）。
【００１８】
１つの研究は、ＭＣＰ−１遺伝子中のプロモーター多型性と強皮症（全身性硬化症）との関連を記載している（S Karrer et al.、J Invest Dermatol.、2005、124、92）。組織線維症の関連モデルでは、ＣＣＲ２／ＭＣＰ−１軸の阻害により、皮膚（T YamamotoおよびK Nishioka、J Invest Dermatol、2003、121、510；AM Ferreira et al.、J Invest Dermatol.、2006、126、1900）、肺（T Okuma et al.、J Pathol.、2004、204、594；M Gharaee-Kermani et al.、Cytokine、2003、24、266）、腎臓（K Kitagawa et al.、Am J Pathol.、2004、165、237；T Wada et al.、J Am Soc Nephrol、2004、15、940）、心臓（S Hayashidani et al.、Circulation、2003、108、2134）、および肝臓（S Tsuruta et al.、Int J Mol Med.、2004,14、837）における線維症が低下した。
【００１９】
１つの研究により、肺胞炎の治療においてＭＣＰ−１／ＣＣＲ２相互作用を拮抗することの潜在的な治療的価値が実証されている。ＩｇＡ免疫複合体肺傷害に罹患しているラットを、ラットＭＣＰ−１（ＪＥ）に対して産生させた抗体を用いて静脈内治療した場合、肺胞炎の症状が部分的に緩和された（Michael L. Jones, et al.、J. Immunol.、1992、149、2147）。
【００２０】
いくつかの研究により、癌の治療においてＭＣＰ−１／ＣＣＲ２相互作用を拮抗することの潜在的な治療的価値が示されている（M. J. CraigおよびR. D. Loberg、Cancer Metastasis Rev.、2006、25、611；I. ContiおよびB. Rollins、Seminars in Cancer Biology、2004、14、149；R. GilesおよびR. D. Loberg、Curr. Cancer Drug Targets、2006、6、659に総説）。ヒト乳癌細胞を保有している免疫不全マウスを抗ＭＣＰ−１抗体で治療した場合、肺の微小転移の阻害および生存の増加が観察された（Rosalba Salcedo, et al.、Blood、2000、96、34〜40）。ヒト臨床腫瘍検体を用いて、ＣＣＲ２の発現は、前立腺癌の進行と関連づけられている（Y. Lu, et al.、J. Cell. Biochem.、2007、101、676）。インビトロで、ＭＣＰ−１の発現は前立腺癌細胞の成長および侵襲を媒介することが示されている（Y. Lu, et al.、Prostate、2006、66、1311）；さらに、前立腺癌細胞によって発現されたＭＣＰ−１は骨吸収のヒト骨髄前駆体を誘発した（Y. Lu, et al.、Cancer Res.、2007、67、3646）。
【００２１】
複数の研究により、再狭窄の治療においてＭＣＰ−１／ＣＣＲ２相互作用を拮抗することの潜在的な治療的価値が記載されている。ヒトでは、ＭＣＰ−１レベルが再狭窄の危険性と直接相関している（F. Cipollone, et al.、Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol.、2001、21、327）。ＣＣＲ２またはＭＣＰ−１を欠くマウスは、動脈傷害後に内膜面積および内膜／培地比の低下を示した（野生型の同腹仔と比較して）（Merce Roque, et al.、Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol.、2002、22、554；A. Schober, et al.、Circ. Res.、2004、95、1125；W. J. Kim, et al.、Biochem Biophys Res Commun.、2003、310、936）。マウスでは、骨格筋におけるＭＣＰ−１のドミナントネガティブ阻害剤の形質移入も（K. Egashira, et al.、Circ. Res.、2002、90、1167）、動脈傷害後の内膜過形成を低下させた。中和抗体を用いたＣＣＲ２の遮断は、霊長類におけるステント術後の新生内膜過形成を低下させた（C. Horvath, et al.、Circ. Res.、2002、90、488）。
【００２２】
２つの報告が、誘発させた脳外傷を有するラットにおけるＭＣＰ−１の過剰発現を記載している（J. S. King, et al.、J. Neuroimmunol.、1994、56、127、およびJoan W. Berman, et al.、J. Immunol.、1996、156、3017）。さらに、ＣＣＲ２-/-（O. B. Dimitrijevic, et al.、Stroke、2007、38、1345）およびＭＣＰ−１-/-マウス（P. M. Hughes, et al.、J. Cereb. Blood Flow Metab.、2002、22、308）がどちらも虚血／再灌流傷害から部分的に保護されていることが、研究によって示されている。
【００２３】
単球／マクロファージが神経因性疼痛の発生に重要な役割を果たしていることが知られている（Liu T、van Rooijen N、Tracey DJ、Pain、2000、86、25）。この考えと一致して、炎症性および神経因性の疼痛のどちらの治療にもおけるＣＣＲ２の潜在的な役割が、最近記載された。ＣＣＲ２-/-マウスは、その野生型対応物と比較して、足底内ホルマリン注射後の疼痛行動の減少および足底内ＣＦＡ注射後の機械的アロディニアのわずかな減少を含めた、炎症性疼痛に対する応答の変化を示している（C. Abbadie, et al.、Proc. Natl. Acad. Sci., USA、2003、100、7947）。さらに、ＣＣＲ２-/-マウスは、坐骨神経傷害後に顕著な機械的アロディニアを示さなかった。同様に、小分子ＣＣＲ２拮抗剤は、経口投与後に機械的アロディニアを傷害前のレベルの約８０％まで低下させた（Ｃ．Ａｂｂａｄｉｅ、Ｊ．Ａ．Ｌｉｎｄｉａ、およびＨ．Ｗａｎｇ、国際公開公報ＷＯ  ＰＣＴ１１０３７６号、２００４年）。
【００２４】
１つの研究が、虚血性心筋症におけるＭＣＰ−１の重要な役割を記載している（N. G. Frangogiannis, et al.、Circulation、2007、115、584）。別の研究は、ＭＣＰ−１の阻害後の実験的心不全の弱毒化を記載している（S Hayashidani et al.、Circulation、2003、108、2134）。
【００２５】
他の研究が、ＭＣＰ−１が上に言及していない様々な病状で過剰発現されているという証拠を提供している。これらの報告は、ＭＣＰ−１拮抗剤がそのような疾患の有用な治療剤である可能性を有するという相関証拠を提供している。別の研究は、げっ歯類の心臓同種移植におけるＭＣＰ−１の過剰発現を実証しており、これは、移植動脈硬化症の病因におけるＭＣＰ−１の役割を示唆している（Mary E. Russell, et al.、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、1993、90、6086）。ＭＣＰ−１の過剰発現は、特発性肺線維症に罹患している患者の肺内皮細胞で指摘されている（Harry N. Antoniades, et al.、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、1992、89、5371）。同様に、ＭＣＰ−１の過剰発現は乾癬に罹患している患者の皮膚で指摘されている（M. Deleuran, et al.、J. Dermatol. Sci.、1996、13、228、およびR. Gillitzer, et al.、J. Invest. Dermatol.、1993、101、127）；ＣＣＲ２＋細胞の優勢の相関発見も報告されている（C. Vestergaard, et al.、Acta Derm. Venerol.、2004、84、353）。最後に、最近の報告により、ＭＣＰ−１がＨＩＶ−１関連の認知症に罹患している患者の脳および脳脊髄液中で過剰発現されていることが示されている（Ａｌｆｒｅｄｏ  Ｇａｒｚｉｎｏ−Ｄｅｍｏ、国際公開公報ＷＯ９９／４６９９１号）。
【００２６】
さらに、ＣＣＲ２多型性が、患者の少なくとも１つの部分群において、サルコイドーシスと関連していることが示されている（P. Spagnolo, et al.、Am J Respir Crit Care Med.、2003、168、1162）。
【００２７】
また、ＣＣＲ−２がＨＩＶの一部の株の補助受容体として示唆されているも注記すべきである（B. J. Doranz, et al.、Cell、1996、85、1149）。また、ＣＣＲ−２のＨＩＶ補助受容体としての使用を疾患の進行と相関できることも、決定されている（Ruth I. Connor, et al.、J. Exp. Med.、1997、185、621）。この発見は、ＣＣＲ−２突然変異体、ＣＣＲ２−６４Ｉの存在が、ヒト集団におけるＨＩＶの遅延発症と正に相関しているという最近の発見と一致している（Michael W. Smith, et al.、Science、1997、277、959）。ＭＣＰ−１はこれらのプロセスと関連づけられていないが、ＣＣＲ−２と結合することで作用するＭＣＰ−１拮抗剤が、ＨＩＶに感染した患者におけるＡＩＤＳの疾患進行を遅延させることに有益な治療効果を有し得る可能性がある。
【００２８】
ＣＣＲ２は、ヒトケモカインＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、およびＭＣＰ−４の受容体でもあることに注記されたい（Luster、New Eng. J. Med.、1998、338、436〜445）。本明細書中に記載の式（Ｉ）の新しい化合物はＣＣＲ−２受容体と結合することによってＭＣＰ−１を拮抗するので、式（Ｉ）のこれらの化合物も、ＣＣＲ−２によって媒介されるＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３、およびＭＣＰ−４の作用の有効な拮抗剤である可能性がある。したがって、本明細書中で「ＭＣＰ−１の拮抗」に言及する場合、「ＣＣＲ−２のケモカイン刺激の拮抗」に等価であるとみなされるべきである。
【００２９】
したがって、ケモカイン活性を変調する化合物により、炎症性、アレルギー性、自己免疫、代謝、癌および／または心血管の疾患の治療において広範囲の利用性を実証することができる。米国特許出願の公報ＷＯ２００５０２１５００  Ａ１号（本明細書中に参考として組み込まれており、本出願人に与えられている）は、ＣＣＲ２によってＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３およびＭＣＰ−４の活性を変調する化合物を開示している。この参考文献は、保護基の導入および続く除去が含まれる複数工程の合成を含めた、これらの化合物を調製する様々な方法も開示している。
【００３０】
既知のケモカインモジュレーターと比較して改善された薬理学的特徴を有する新しい化合物を発見することが望ましい。たとえば、他のＧタンパク質共役型受容体（すなわち５ＨＴ２Ａ受容体）と比べて、ＣＣＲ−２に対する改善されたＣＣＲ−２阻害活性および選択性を有する新しい化合物を発見することが好ましい。また、以下の分類の１つまたは複数において有利かつ改善された特徴を有する化合物を発見することも望ましい：
（ａ）医薬特性（すなわち、溶解度、透過性、持続放出配合に対する従順性）；
（ｂ）用量要件（たとえば、より低い用量および／または１日１回の投薬）；
（ｃ）血液濃度ピークトラフ間特徴を低下させる要素（すなわち、クリアランスおよび／または分布容量）；
（ｄ）受容体における活性薬物の濃度を増加させる要素（すなわち、タンパク質結合、分布容量）；
（ｅ）臨床的薬物間相互作用が起こりやすい傾向を低下させる要素（ＣＹＰ  ２Ｄ６阻害などのチトクロームＰ４５０酵素の阻害または誘導、本明細書中に参考として取り込まれているG. K. Dresser、J. D. Spence、D. G. Bailey、Clin. Pharmacokinet.、2000、38、41〜57を参照）；
（ｆ）有害な副作用の潜在性を低下させる要素（たとえば、Ｇタンパク質共役型受容体を超える薬理学的選択性、潜在的な化学的もしくは代謝的反応性、限定されたＣＮＳへの浸透、イオンチャネル選択性）。前述の薬理学的特徴の望ましい組合せを有する化合物を発見することが特に望ましい。
【００３１】
また、そのような化合物を調製するための新しいおよび／または改善された方法を提供することも、当分野で望ましい。これらの方法は、それだけには限定されないが、ａ）試験的な工場または製造スケールなどの、より大スケールの産生への容易な適応；ｂ）純度（キラル純度を含む）、安定性ならびに／または中間体および／もしくは最終化合物の取扱いの容易性の改善を可能にする、プロセス工程および／または技術；ならびに／あるいはｃ）より少ないプロセス工程を特徴とし得る。
【００３２】
発明の概要
本発明は、好ましい薬理学的特徴の予期しない組合せを有する、ＭＣＰ−１受容体活性の新規のアンタゴニストまたは部分アゴニスト／アンタゴニスト：Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド、またはその医薬的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを提供する。本発明の結晶形もまた提供される。それを含む医薬組成物、並びに炎症性疾患、アレルギー性、自己免疫、代謝、癌および／または循環器疾患の治療剤としてのその使用方法もまた、本発明の目的である。本開示はまた、式（Ｉ）の化合物、例えば、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド：
【化３】
2009544758.tif 000005
［式中、
Ｒ1、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10および
【化４】
2009544758.tif 000006
は、本明細書に記載されたものである］
の製造方法も提供する。本方法の有用な中間体である化合物もまた、本明細書で提供される。
【００３３】
本開示はまた、炎症性疾患、アレルギー性、自己免疫、代謝、癌および／または循環器疾患の治療剤の製造のための、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド、または医薬的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグの使用も提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３４】
【図１】図１は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドのジベンゼンスルホン酸塩 Ｎ−１型の実験およびシミュレーションの粉末パターンを開示する。
【００３５】
【図２】図２は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基 Ｎ−２型の実験およびシミュレーションの粉末パターンを開示する。
【００３６】
【図３】図３は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基 Ｅ−１型（モノエタノール付加物(mono-ethanolate)）の実験およびシミュレーションの粉末パターンを開示する。
【００３７】
【図４】図４は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドのＨＣｌ塩 Ｈ４−１型（四水和物）の実験およびシミュレーションの粉末パターンを開示する。
【００３８】
【図５】図５は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基 Ａ−１型（モノアセトン溶媒和物）の実験およびシミュレーションの粉末パターンを開示する。
【００３９】
【図６】図６は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基 ＤＣ−１型（モノジクロロメタン溶媒和物）の実験およびシミュレーションの粉末パターンを開示する。
【００４０】
【図７】図７は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基 ＡＮ−３型（モノアセトニトリル溶媒和物）の実験およびシミュレーションの粉末パターンを開示する。
【００４１】
【図８】図８は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドのジベシル酸塩 Ｎ−１型の示差走査熱量測定分析を開示する。
【００４２】
【図９】図９は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドのジベシル酸塩 Ｎ−１型の熱重量分析を開示する。
【００４３】
【図１０】図１０は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基、Ｎ−２型の示差走査熱量測定分析を開示する。
【００４４】
【図１１】図１１は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基、Ｎ−２型の熱重量分析を開示する。
【００４５】
【図１２】図１２は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基、Ｎ−２型の吸湿等温線(Moisture Sorption Isotherm)を開示する。
【００４６】
【図１３】図１３は、（１Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−アセトアミド−４−（（Ｓ）−３−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−オキソピロリジン−１−イル）シクロヘキシルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルのＸ線結晶構造を開示する。
【００４７】
【図１４】図１４。ｈＣＣＲ２ ＫＩ マウスにおける４８時間のＴＧ腹膜炎モデル：腹膜腔内への単球／マクロファージ浸潤の実施例１の阻害（示差的細胞計数）。
【００４８】
【図１５】図１５。ｈＣＣＲ２ ＫＩ マウスにおける４８時間のＴＧ腹膜炎モデル：腹膜腔内への単球／マクロファージ浸潤の実施例１の阻害（ＦＡＣＳ分析）。
【００４９】
【図１６】図１６。ｈＣＣＲ２ ＫＩ マウスにおけるＥＡＥ：実施例１の処置の臨床スコア。
【００５０】
詳細な説明
本発明は、好ましい薬理学的特徴の予期しない組合せを有する、ＭＣＰ−１受容体活性の新規のアンタゴニストまたは部分アゴニスト／アンタゴニスト：Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド、またはその医薬的に許容される塩、溶媒和物もしくはプロドラッグを提供する。本発明の結晶形もまた提供される。それを含む医薬組成物および炎症性疾患、アレルギー性、自己免疫、代謝、癌および／または循環器疾患の治療剤としてのその使用方法もまた、本発明の目的である。本開示はまた、式（Ｉ）の化合物、例えばＮ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド：
【化５】
2009544758.tif 000007
［式中、
Ｒ1、Ｒ8、Ｒ9、Ｒ10および
【化６】
2009544758.tif 000008
は、本明細書に記載されたものである］
の製造方法も提供する。本方法の有用な中間体である化合物もまた、本明細書で提供される。
【００５１】
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドは、薬理学的特徴の好ましい組合せ、例えば非常に効き目があり、かつ優れた安全基準を有する効能と組み合わされた驚くほど高度の経口バイオアベイラビリティを予想外に示す。
【００５２】
ＣＣＲ２受容体の公知の修飾因子、例えば２００５年３月１０日に発行された特許公報ＷＯ２００５０２１５００  Ａ１号（２００７年１月１６日に発行され、特許出願人に譲渡された米国特許第７，１６３，９３７号）に開示された十分な膜透過性（経口バイオアベイラビリティの重要な因子）を示す因子は、そのＣＣＲ２結合能（有効性の尺度）によって測定されるように、十分に有効なものではなく、および／または、ｈＥＲＧおよびＮａ+イオンチャネルの調査で測定されるイオンチャネル選択性によって示されるように、適切な安全基準を欠いている。
【００５３】
それに対して、以下の「薬理学的特徴の比較」と標題を付けた節において本明細書で与えられるデータによって説明されるように、比較的極性のある分子であるＮ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドは、驚くほど高度の膜透過性を示し、さらに、強いＣＣＲ２結合能、並びに優れたイオンチャネル選択性を維持する。
【００５４】
したがって、本発明は、炎症性、アレルギー性、自己免疫、代謝、癌および／または循環器疾患の治療に有用であることが期待される改善された薬理学的特徴を有する新しいケモカイン修飾因子を提供する。
【００５５】
態様
一つの態様において、本開示は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド、およびその医薬的に許容される塩に関する。
【００５６】
別の態様は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基の結晶形である。
【００５７】
別の態様は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基の結晶形であり、該結晶形にはＮ−２型が含まれる。
【００５８】
別の態様は、結晶が約＋２２℃（室温）の温度であり、下表：
2009544758.tif 000009
に実質的に等しい単位格子パラメータの特徴を有するＮ−２型である。
【００５９】
別の態様は、約２２℃の温度で、７．２、８．７、９．７、１２．５、１２．８、１３．３、１６．０、１６．６、１８．２、および１８．８から選択される３つ以上の２θ値（ＣｕＫα λ＝１．５４１Å）を含む粉末Ｘ線回折パターンの特徴を有するＮ−２型である。
【００６０】
別の態様は、約２２℃の温度で、７．２、８．７、９．７、１２．５、１２．８、１３．３、１６．０、１６．６、１８．２、および１８．８からなる群から選択される４つ以上の２θ値（ＣｕＫα λ＝１．５４１Å）をさらに含む粉末Ｘ線回折パターンの特徴を有するＮ−２型である。
【００６１】
別の態様は、実質的に表７に記載される部分原子座標(fractional atomic coordinate)の特徴を有するＮ−２型である。
【００６２】
別の態様は、実質的に図２の粉末Ｘ線回折パターンの特徴を有するＮ−２型である。
【００６３】
別の態様は、
表１に見られる単位格子パラメータ；
表１０から選択される３もしくは４つ以上の２θ値（ＣｕＫα λ＝１．５４１Å）；
実質的に表２に記載される部分原子座標、および／または
実質的に図１に従った粉末Ｘ線回折パターン
の特徴を有するＮ−１型を含む、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドのジベンゼンスルホン酸塩の結晶形である。
【００６４】
別の態様は、
表１に見られる単位格子パラメータ；
表１０から選択される３もしくは４つ以上の２θ値（ＣｕＫα λ＝１．５４１Å）；
実質的に表５に記載される部分原子座標、および／または
実質的に図３に従った粉末Ｘ線回折パターン
の特徴を有するＥ−１型（モノエタノール付加物）を含む、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基の結晶形である。
【００６５】
別の態様は、
表１に見られる単位格子パラメータ；
表１０から選択される３もしくは４つ以上の２θ値（ＣｕＫα λ＝１．５４１Å）；
実質的に表９に記載される部分原子座標、および／または
実質的に図４に従った粉末Ｘ線回折パターン
の特徴を有するＨ４−１型（四水和物）を含む、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドのＨＣｌ塩の結晶形である。
【００６６】
別の態様は、
表１に見られる単位格子パラメータ；
表１０から選択される３もしくは４つ以上の２θ値（ＣｕＫα λ＝１．５４１Å）；
実質的に表６に記載される部分原子座標、および／または
実質的に図５に従った粉末Ｘ線回折パターン
の特徴を有するＡ−１型（モノアセトン溶媒和物）を含む、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基の結晶形パターンである。
【００６７】
別の態様は、
表１に見られる単位格子パラメータ；
表１０から選択される３もしくは４つ以上の２θ値（ＣｕＫα λ＝１．５４１Å）；
実質的に表３に記載される部分原子座標、および／または
実質的に図６に従った粉末Ｘ線回折パターン
の特徴を有するＤＣ−１型（モノジクロロメタン溶媒和物）を含む、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基の結晶形である。
【００６８】
別の態様は、
表１に見られる単位格子パラメータ；
表１０から選択される３もしくは４つ以上の２θ値（ＣｕＫα λ＝１．５４１Å）；
実質的に表８に記載される部分原子座標、および／または
実質的に図７に従った粉末Ｘ線回折パターン
の特徴を有するＡＮ−３型（モノアセトニトリル溶媒和物）を含む、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基の結晶形である。
【００６９】
別の態様は、
表１に見られる単位格子パラメータ；
表１０から選択される３もしくは４つ以上の２θ値（ＣｕＫα λ＝１．５４１Å）；および／または
実質的に表４に記載される部分原子座標
の特徴を有するＴＨＯＯ−１型（モノテトラヒドロフラン溶媒和物）を含む、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基の結晶形である。
【００７０】
別の態様は、医薬的に許容される担体および実施例の化合物を含む医薬組成物である。
【００７１】
別の態様は、実施例の化合物の治療上の有効量を治療が必要な患者に投与することを特徴とする、ケモカインまたはケモカイン受容体活性の調節方法である。
【００７２】
別の態様は、実施例の化合物の治療上の有効量を治療が必要な患者に投与することを特徴とする、ＣＣＲ−２受容体活性の調節方法である。
【００７３】
別の態様は、実施例の化合物の治療上の有効量を治療が必要な患者に投与することを特徴とする、ＣＣＲ２受容体を介するＭＣＰ−１、ＭＣＰ−２、ＭＣＰ−３およびＭＣＰ−４、並びにＭＣＰ−５活性の調節方法である。
【００７４】
別の態様は、実施例の化合物の治療上の有効量を治療が必要な患者に投与することを特徴とする、ＭＣＰ−１活性の調節方法である。
【００７５】
別の態様は、実施例の化合物の治療上の有効量を治療が必要な患者に投与することを特徴とする障害の治療方法であって、前記障害が、糖尿病、肥満症、メタボリックシンドローム、脳卒中、神経因性疼痛、虚血性心筋症、乾癬、高血圧症、強皮症、骨関節炎、動脈瘤、発熱、循環器疾患、クローン病、うっ血性心不全、自己免疫疾患、ＨＩＶ感染、ＨＩＶ関連痴呆、乾癬、突発性肺線維症、移植動脈硬化症、物理的もしくは化学的に誘発した頭部外傷、炎症性腸疾患、肺胞炎、大腸炎、全身性エリテマトーデス、腎毒性血清腎炎、糸球体腎炎、喘息、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、血管炎、不安定プラーク、関節リウマチ、再狭窄、静脈新生内膜過形成、透析−移植新生内膜過形成、動静脈シャント内膜過形成、臓器移植、慢性移植腎症、および癌から選択される方法である。
【００７６】
別の態様は、実施例の化合物の治療上の有効量を治療が必要な患者に投与することを特徴とする障害の治療方法であって、前記障害が、糖尿病、肥満症、クローン病、乾癬、突発性肺線維症、移植動脈硬化症、物理的もしくは化学的に誘発した頭部外傷、炎症性腸疾患、肺胞炎、大腸炎、全身性エリテマトーデス、腎毒性血清腎炎、糸球体腎炎、喘息、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、および関節リウマチ、再狭窄、臓器移植、並びに癌から選択される方法である。
【００７７】
別の態様は、実施例の化合物の治療上の有効量を治療が必要な患者に投与することを特徴とする障害の治療方法であって、前記障害が、糖尿病、肥満症、クローン病、全身性エリテマトーデス、糸球体腎炎、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、および臓器移植から選択される方法である。
【００７８】
別の態様は、実施例の化合物の治療上の有効量を治療が必要な患者に投与することを特徴とする障害の治療方法であって、前記障害が、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、クローン病、および糖尿病から選択される方法である。
【００７９】
別の態様は、実施例の化合物の治療上の有効量を治療が必要な患者に投与することを特徴とする障害の治療方法であって、前記障害が、再狭窄、臓器移植、および癌から選択される方法である。
【００８０】
別の態様は、実施例の化合物の治療上の有効量を治療が必要な患者に投与することを特徴とする、糖尿病の治療方法である。
【００８１】
別の態様は、実施例の化合物の治療上の有効量を治療が必要な患者に投与することを特徴とする、クローン病の治療方法である。
【００８２】
別の態様は、実施例の化合物の治療上の有効量を治療が必要な患者に投与することを特徴とする、多発性硬化症の治療方法である。
【００８３】
別の態様は、実施例の化合物の治療上の有効量を治療が必要な患者に投与することを特徴とする、アテローム性動脈硬化症の治療方法である。
【００８４】
別の態様は、実施例の化合物の治療上の有効量を治療が必要な患者に投与することを特徴とする、再狭窄の治療方法である。
【００８５】
別の態様は、実施例１の化合物の治療上の有効量を治療が必要な患者に投与することを特徴とする、臓器移植の治療方法である。
【００８６】
別の態様は、実施例１の化合物の治療上の有効量を治療が必要な患者に投与することを特徴とする、癌の治療方法である。
【００８７】
別の態様は、乳癌、肝臓癌、前立腺癌およびメラノーマから選択される癌の治療方法である。
【００８８】
別の態様は、炎症性疾患、アレルギー性、自己免疫、代謝、癌および／または循環器疾患の治療方法であって、実施例１の化合物の治療上の有効量を治療が必要な患者に投与することを特徴とする方法である。
【００８９】
別の態様は、ＣＣＲ−２を少なくとも部分的に介する疾患の治療方法であって、実施例１の化合物の治療上の有効量を治療が必要な患者に投与することを特徴とする方法である。
【００９０】
別の態様は、実施例１の化合物の治療上の有効量を治療が必要な患者に投与することを特徴とする、ＣＣＲ２活性の調節方法である。
【００９１】
別の態様は、糖尿病、肥満症、メタボリックシンドローム、脳卒中、神経因性疼痛、虚血性心筋症、乾癬、高血圧症、強皮症、骨関節炎、動脈瘤、発熱、循環器疾患、クローン病、うっ血性心不全、自己免疫疾患、ＨＩＶ感染、ＨＩＶ関連痴呆、乾癬、突発性肺線維症、移植動脈硬化症、物理的もしくは化学的に誘発した頭部外傷、炎症性腸疾患、肺胞炎、大腸炎、全身性エリテマトーデス、腎毒性血清腎炎、糸球体腎炎、喘息、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、血管炎、不安定プラーク、関節リウマチ、再狭窄、静脈新生内膜過形成、透析−移植新生内膜過形成、動静脈シャント内膜過形成、臓器移植、慢性移植腎症、および癌の治療剤の製造における実施例１の化合物である。
【００９２】
別の態様は、治療法に使用するための実施例の化合物である。
【００９３】
本発明は、その精神または本質的な特性からはずれることなく、他の特定の形態に具体化されてもよい。この発明にはまた、本明細書に示される本発明の他の態様のすべての組合せも含まれる。いずれのおよびすべての態様も、本発明の別の態様を記載するために、いずれの他の態様とも併用されうることが理解される。さらに、態様のいずれの要素も、別の態様を記載するために、いずれの態様からのいずれのおよびすべての他の要素とも併用されるものと意図される。
【００９４】
方法の実施形態
第１の実施形態では、本開示は、以下の工程を含む、式ＩＶの化合物またはその塩を調製する方法を提供する：
【化７】
2009544758.tif 000010
式ＩＩのβ−アミノエステルまたはその塩を、式ＩＩＩの適切に保護されたキラルα−アミノ酸とカップリングさせてアミドＩＶを得る工程（国際公開公報ＷＯ２００５０２１５００号参照）；
［式中、
ＲaおよびＲbは、独立して、Ｃ1〜6アルコキシであるか；
または、ＲaおよびＲbは、それらがどちらも付着している炭素と一緒に合わさって、カルボニル、チオカルボニル、環状アセタールもしくは環状チオアセタールを形成し、環状アセタールもしくは環状チオアセタールは、−Ｏ−Ｚ−Ｏ−および−Ｓ−Ｚ−Ｓ−から選択され、Ｚは、−（ＣＴ1Ｔ2）2−、−（ＣＴ1Ｔ2）3−、もしくは
【化８】
2009544758.tif 000011
であり、Ｔ1、Ｔ2およびＴ3は各々、独立して、水素、Ｃ1〜4アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、ＣＦ3、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＣＦ3、Ｃ（＝Ｏ）Ｃ1〜4アルキル、およびＣＯ2Ｃ1〜4アルキルから選択され（好ましくは、Ｔ1、Ｔ2およびＴ3はそれぞれ水素である）；
Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、独立して、水素、またはカルボベンジルオキシ（Ｃｂｚ）基、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣ）基、ベンジル（Ｂｎ）基、およびｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）基から選択されるアミン保護基であり（好ましくは、アミン保護基はＣｂｚ、ＢｎもしくはＢＯＣ、特にＣｂｚもしくはＢｎである）；
Ｒ4は、低級Ｃ1〜6アルキル、またはＣ1〜4アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、ＣＦ3、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＣＦ3、およびＣ（＝Ｏ）Ｃ1〜4アルキルによって適宜置換されたベンジルであり；
Ｙは、ハロゲン、ＳＲ12またはＯＳＯ2Ｒ13であり；
Ｘは、ＯＨ、ハロゲンまたはＯＣＯＲ14であり；
Ｒ12は、Ｃ1〜6アルキル、−（ＣＨ2）Ｃ（Ｏ）ＯＲ13、または−（ＣＨ2）Ｃ（Ｏ）Ｒ13であり；
Ｒ13は各々、Ｃ1〜6アルキル、またはＣ1〜4アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、ＣＦ3、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＣＦ3、およびＣ（＝Ｏ）Ｃ1〜4アルキルによって適宜置換されたベンジルであり；
Ｒ14は各々、水素、Ｃ1〜6アルキル、またはＣ1〜4アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、ＣＦ3、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＣＦ3、およびＣ（＝Ｏ）Ｃ1〜4アルキルによって適宜置換されたベンジルである］。
本明細書中で使用する適宜置換されたベンジルとは、そのメチレン基（−ＣＨ2−）によって連結され、メチレン基に付着したフェニル環上で適宜置換されたベンジル基を指す。
【００９５】
第２の実施形態では、本開示は、式ＩＶの生成物またはその塩を形成する方法を提供する：
［式中、
ＲaおよびＲbは、それらがどちらも付着している炭素原子と一緒に合わさって、カルボニルまたは１，３−ジオキソラン基を形成し（好ましくはＲaおよびＲbは、それらがどちらも付着している炭素原子と一緒に合わさって、１，３−ジオキソラン基を形成する）；
Ｒ1は水素であり；
Ｒ2はＣｂｚであり；
Ｒ3は水素であり；
Ｒ4はＣ1〜6アルコキシであり；
ＹはＳ（Ｍｅ）であり；
ＸはＯＨである］。
【００９６】
第３の実施形態では、本開示は、式ＩＩのβ−アミノエステルがトルエンスルホン酸塩または臭化水素酸塩である方法を提供する。式ＩＩのβ−アミノエステルの好ましい塩は、
【化９】
2009544758.tif 000012
のトルエンスルホン酸塩である。
【００９７】
第４の実施形態では、本開示は、カップリングを、窒素またはアルゴン（好ましくは窒素）などの不活性雰囲気下、プロピオニトリル、酢酸イソプロピル、酢酸ｎ−ブチル、酢酸ｔｅｒｔ−ブチルまたはアセトニトリル（特にアセトニトリルおよび／または酢酸エチル）などの非プロトン性溶媒中で実施する、式ＩＶの化合物またはその塩を形成する方法を提供する。
【００９８】
第５の実施形態では、本開示は、カップリングを、式ＩＩのβ−アミノエステルを、ジイミドカップリング試薬と、活性化剤、式ＩＩの保護されたβ−アミノエステル、および第三級アミン塩基の存在下で、接触させることによって達成する、式ＩＶの化合物またはその塩を形成する方法を提供する。ジイミドカップリング試薬には、たとえばＥＤＡＣなどの試薬が含まれる。活性化剤の例には、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ；前記用語にはその水和物が含まれる）およびＮ’，Ｎ’−４−ジメチルアミノ−ピリジンが含まれる。第三級アミン塩基には、たとえば、トリエチルアミン、Ｎ−Ｎ−ジイソプロピル−Ｎ−エチルアミンおよびトリ−ｎ−プロピルアミンなどのトリアルキルアミンが含まれる。
【００９９】
第６の実施形態では、本開示は、ジイミドカップリング試薬がＥＤＡＣであり、活性化剤がＨＯＢｔであり、第三級アミン塩基がトリエチルアミンまたはＮ−Ｎ−ジイソプロピル−Ｎ−エチルアミンである、式ＩＶの化合物またはその塩を形成する方法を提供する。
【０１００】
第７の実施形態では、本開示は、式ＩＩのアミノエステル：ジイミドカップリング試薬：活性化剤：第三級アミンのモル比が、それぞれ１：約０．９０〜１．５０：約０．９５〜１．５０：約２．００〜３．００である、式ＩＶの化合物またはその塩の式の方法を提供する。前記モル比は、好ましくは、それぞれ１：約０．９５〜１．０５：約０．９５〜１．１０：約２．１０〜２．３０である。
【０１０１】
第８の実施形態では、本開示は、以下の工程を含む、式Ｖの化合物またはその塩を調製する方法を提供する：
【化１０】
2009544758.tif 000013
ａ）式ＩＶの化合物をアルキル化剤でアルキル化して活性化合物を形成する工程と；
ｂ）活性化合物をインサイツで環化して式ＩＶａの化合物を得る工程。
【０１０２】
第９の実施形態では、本開示は、工程ａ）のアルキル化剤がＣ1〜6ハロゲン化アルキルなどの硫黄アルキル化剤であり、活性化合物が化合物ＩＶのスルホニウム塩であり、ＹがＳ+（Ｃ1〜6アルキル）Ｒ12である、式Ｖの化合物またはその塩を調製する方法を提供する。好ましくは、アルキル化剤はヨウ化メチルであり、ＹはＳ+（ＣＨ3）2である。
【０１０３】
第１０の実施形態では、本開示は、環化工程が、活性化合物またはその塩を、塩基と、溶媒の存在下で合わせることを含む、式Ｖの化合物またはその塩を形成する方法を提供する。塩基は、炭酸セシウム、炭酸水素セシウム、炭酸カリウム、ｔｅｒｔ−酪酸ナトリウム、またはナトリウムヘキサメチルジシラジドから選択される（好ましくは、塩基は炭酸セシウム）。
【０１０４】
第１１の実施形態では、本開示は、環化工程を、窒素またはアルゴンなどの不活性雰囲気下、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ＤＭＡ、Ｎ−メチルピロリドン、およびスルホランから選択される溶媒中で実施する、式Ｖの化合物またはその塩を形成する方法を提供する。好ましくは、不活性雰囲気は窒素であり、溶媒はＤＭＳＯおよび／またはＤＭＦから選択される。
【０１０５】
式ＩＶａの化合物がアセタール部分を有する、すなわち、ＲaおよびＲbが、独立してＣ1〜6アルコキシを有するか、またはＲaおよびＲbが、それらが付着している原子と一緒に合わさって環状アセタールもしくは環状チオアセタールを形成する、第１２の実施形態では、本開示は、アセタール部分を有する式ＩＶａの化合物を加水分解して式Ｖの化合物を形成する工程をさらに含む、式Ｖの化合物またはその塩を形成する方法を提供する：
【化１１】
2009544758.tif 000014
加水分解工程は、当業者に知られている、アセタール基を加水分解する手順に従って実施することができる。たとえば、加水分解工程は、式ＩＶａの化合物を、アセトン、ブタノン、アセトニトリルおよびイソプロパノールなどの溶媒、またはその水溶液中で、酸で処理することを含み得る。加水分解工程は、好ましくは、式ＩＶａの化合物をアセトン水溶液中で、塩酸で処理することを含む。
【０１０６】
第１３の実施形態では、本開示は、以下の工程を含む、エステル部分を有する式ＶＩの化合物またはその塩を調製する方法を提供する：
【化１２】
2009544758.tif 000015
式Ｖの化合物を式ＮＨ（Ｒ8）（Ｒ9）を有するアミンで還元性アミノ化して、式Ｖａのイミン／エナミンが得られ、Ｒ8およびＲ9は、独立して、水素およびＣ1〜6アルキルから選択される。好ましくは、Ｒ8およびＲ9は、独立して、Ｃ1〜6アルキルから選択される。より好ましくは、アミンはＮ−メチル−Ｎ−イソプロピルアミンである。
【０１０７】
第１４の実施形態では、本開示は、以下の還元性アミノ化工程を含む、式ＶＩの生成物を形成する方法を提供する：
（ａ）式ＮＨ（Ｒ8）（Ｒ9）のアミンおよび脱水剤を、式Ｖの化合物に、非プロトン性溶媒中、約−２０°〜約＋５０℃の温度で加えて、式Ｖａのイミン／エナミンを形成する工程と；
（ｂ）式Ｖａのイミン／エナミンおよび白金触媒、５％のＰｔ／Ｓ／Ｃの溶液を、一定圧力の水素ガスで処理して、式ＶＩの化合物を得る工程。
【０１０８】
第１５の実施形態では、本開示は、工程ａ）の脱水剤がルイス酸／ブレンステッド酸であり（好ましくはチタンテトライソプロポキシド）、非プロトン性溶媒がジクロロエタン、ジクロロメタン、アセトニトリル、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、およびＮ−メチル−ピロリジノンから選択される（好ましくはジクロロメタン）、式ＶＩの化合物またはその塩を形成する方法を提供する。
【０１０９】
第１６の実施形態では、本開示は、工程ｂ）で、５％のＰｔ／Ｓ／Ｃ触媒が化合物Ｖａに対して約０．５〜５０％（ｗｔ／ｗｔ）で存在する、式ＶＩの化合物またはその塩を形成する方法を提供する。好ましくは、水素ガスは約１５〜約３５ｐｓｉｇの圧力である。
【０１１０】
第１７の実施形態では、本発明は、以下の工程を含む、式ＶＩＩの化合物またはその塩を調製する方法を提供する：
【化１３】
2009544758.tif 000016
式ＶＩのエステル化合物を加水分解して式ＶＩＩの酸化合物を得る工程。約４０℃〜約１００℃の温度範囲（約５０℃〜約７０℃の温度範囲が最も好ましい）。酸は、硫酸、トルエンスルホン酸、硝酸、メタンスルホン酸、臭化水素酸および塩酸から選択される。塩酸が最も好ましい。好ましくは、加水分解工程を塩酸水溶液中で行って式ＶＩＩの化合物を得る。
【０１１１】
第１８の実施形態では、本開示は、塩基を、式ＶＩＩの酸化合物の溶液と、所望によりインサイツで、混合する工程をさらに含む、式ＶＩＩの化合物の塩を調製する方法を提供する。塩基は、好ましくはアルカリ水酸化物、たとえば水酸化ナトリウムである。
【０１１２】
第１９の実施形態では、本開示は、以下の工程を含む、式ＶＩＩＩのカルバメート化合物またはその塩を調製する方法を提供する：
【化１４】
2009544758.tif 000017
ａ）式ＶＩＩの酸化合物を式ＶＩＩａのイソシアネート化合物へと変換する工程と；
ｂ）式ＶＩＩａのイソシアネート化合物を式Ｒ15ＯＨのアルコールと反応させて式ＶＩＩＩのカルバメート化合物を得る工程であって；
式中、Ｒ15は、Ｃ1〜6アルキル、またはＣ1〜4アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、ＣＦ3、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＣＦ3、およびＣ（＝Ｏ）Ｃ1〜4アルキルによって適宜置換されたベンジルである工程。Ｒ15は、好ましくはｔｅｒｔ−ブチルまたは未置換のベンジルである。
【０１１３】
第２０の実施形態では、本開示は、式ＶＩＩの化合物のナトリウム塩を、アジド試薬（好ましくはジフェニルホスホリルアジド）と、トルエンを含む溶媒（好ましくはｔｅｒｔ−ブチルアルコール）中、熱転位の始動点より高い温度で接触させることを含むクルチウス転位によって、式ＶＩＩＩの化合物またはその塩を調製する方法を提供する。温度は好ましくは５０℃より高い。
【０１１４】
第２１の実施形態では、本開示は、以下の工程を含む、式ＩＸの化合物またはその塩を調製する方法を提供する：
【化１５】
2009544758.tif 000018
ａ）式ＶＩＩＩのカルバメート化合物を遊離アミン中間体へと変換する工程と；
ｂ）遊離アミン中間体をインサイツで試薬Ｒ10Ｃ（Ｏ）Ｗを用いてアシル化して、式ＩＸの化合物を得る工程であって；
式中：
Ｒ10は、独立して、Ｃ1〜6アルキル、またはＣ1〜4アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、ＣＦ3、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＣＦ3、およびＣ（＝Ｏ）Ｃ1〜4アルキルによって適宜置換されたベンジルであり；
Ｗは、ハロゲンまたはＲ10Ｃ（Ｏ）−である工程。
好ましくは、Ｒ10Ｃ（Ｏ）Ｗは無水酢酸である。
【０１１５】
第２２の実施形態では、本開示は、変換工程が以下の工程を含む、式ＩＸの化合物またはその塩を調製する方法を提供する：
ａ）式ＶＩＩＩの化合物の溶液を酸で処理する工程と；
ｂ）塩基を溶液に加えて遊離アミン中間体を得る工程。
好ましくは、酸は、硫酸、トルエンスルホン酸、硝酸、メタンスルホン酸、臭化水素酸および塩酸から選択され、より好ましくはメタンスルホン酸である。好ましくは、塩基はトリアルキルアミン、好ましくはトリエチルアミンである。
【０１１６】
第２３の実施形態では、本開示は、以下の方法を含む、式ＩＸの化合物またはその塩を調製する代替方法を提供する：
【化１６】
2009544758.tif 000019
式ＶＩＩａのイソシアネート化合物を、所望によりインサイツで、アシル化剤（Ｒ10Ｃ（Ｏ））2Ｏに、その対応する酸Ｒ10Ｃ（Ｏ）ＯＨの存在下で加える工程であって、式中、Ｒ10は、独立して、Ｃ1〜6アルキル、またはＣ1〜4アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、ＣＦ3、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＣＦ3、およびＣ（＝Ｏ）Ｃ1〜4アルキルによって適宜置換されたベンジルである工程。好ましくは、Ｒ10はＣ1〜6アルキル、特にメチルである。
【０１１７】
第２４の実施形態では、本開示は、以下のプロセスを含む、式Ｘの化合物またはその塩を調製する方法を提供する：
【化１７】
2009544758.tif 000020
式ＩＸの保護されたアミン化合物を脱保護して式Ｘの化合物を提供する工程。好ましくは、Ｒ2がＣｂｚである場合、脱保護は、パラジウム触媒の存在下における水素化よって達成する。パラジウム触媒は好ましくは１０％のＰｄ／Ｃである。
【０１１８】
第２５の実施形態では、本開示は、以下の工程を含む、式Ｉの化合物を調製する方法を提供する：
【化１８】
2009544758.tif 000021
式Ｘの化合物を式：
【化１９】
2009544758.tif 000022
の化合物とカップリングさせて式Ｉの化合物を得る工程；
［式中：
ＨＥＴは、環の少なくとも１つにおいてＮ、ＯまたはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子（好ましくは１〜３個のヘテロ原子、特に１〜２個の窒素原子）を有する適宜置換された３〜１４員環のヘテロ環またはヘテロアリール環であり（ＨＥＴは、好ましくは６−置換のキナゾリン−４−イル、より好ましくは６−トリフルオロメチル−キナゾリン−４−イルである）；
ＬＧは、ハロゲンまたはＯＳＯ2Ｒ16から選択される脱離基であり（ＬＧは、好ましくはハロゲン、より好ましくはクロロである）、Ｒ16は、すべて適宜置換された、Ｃ1〜6アルキル、フェニル、Ｎ、Ｓ、もしくはＯから選択される１つもしくは複数の原子を有する５〜７員環のヘテロアリール、または３〜７員環のシクロアルキルである（好ましくは、Ｒ16の所望による置換基は、ハロゲン、ＣＦ3およびＣ1〜6アルキルから選択される１〜３個の基である）］。
【０１１９】
第２６の実施形態では、本発明は、以下の工程を含む、式ＶＩＩＩの化合物またはその塩を調製する新規方法を提供する：
【化２０】
2009544758.tif 000023
以下の工程を含む、式Ｖの化合物を式ＮＨ（Ｒ8）（Ｒ9）のアミンで還元性アミノ化して、式ＶＩの化合物を得る工程と：
（ａ）アミンおよび脱水剤を、式Ｖの化合物に、非プロトン性溶媒中、約−２０°〜約＋５０℃の温度で加えて、式Ｖａのイミン／エナミン化合物を形成する工程と；
（ｂ）式Ｖａのイミン／エナミン化合物および白金触媒、５％のＰｔ／Ｓ／Ｃの溶液を、一定圧力の水素ガスで処理して、式ＶＩのエステル化合物を得る工程；
式ＶＩのエステル化合物を加水分解して式ＶＩＩの酸化合物を得る工程と；
式ＶＩＩの酸化合物を式ＶＩＩａのイソシアネート化合物へと変換する工程と；
式ＶＩＩａのイソシアネート化合物を式Ｒ15ＯＨのアルコールと反応させて式ＶＩＩＩのカルバメート化合物を得る工程；
［式中：
Ｒ1およびＲ2は、独立して、水素、またはカルボベンジルオキシ（Ｃｂｚ）基、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣ）基、ベンジル（Ｂｎ）基、およびｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）基から選択されるアミン保護基であり（好ましくは、アミン保護基はＣｂｚ、ＢｎもしくはＢＯＣ、特にＣｂｚもしくはＢｎである）；
Ｒ4は、低級Ｃ1〜6アルキル、またはＣ1〜4アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、ＣＦ3、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＣＦ3、およびＣ（＝Ｏ）Ｃ1〜4アルキルによって適宜置換されたベンジルであり；
Ｒ8およびＲ9は、独立して、水素またはＣ1〜6アルキルであり；
Ｒ15は、Ｃ1〜6アルキル、またはＣ1〜4アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、ＣＦ3、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＣＦ3、およびＣ（＝Ｏ）Ｃ1〜4アルキルによって適宜置換されたベンジルであり（Ｒ15は、好ましくはｔｅｒｔ−ブチルまたは未置換のベンジル、より好ましくはｔｅｒｔ−ブチルである）；
ＨＥＴは、環の少なくとも１つにおいてＮ、ＯまたはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子（好ましくは１〜３個のヘテロ原子、特に１〜２個の窒素原子）を有する適宜置換された３〜１４員環のヘテロ環またはヘテロアリール環であり（ＨＥＴは、好ましくは６−置換のキナゾリン−４−イル、より好ましくは６−トリフルオロメチル−キナゾリン−４−イルである）；
ＬＧは、ハロゲンまたはＯＳＯ2Ｒ16から選択される脱離基であり（ＬＧは、好ましくはハロゲン、より好ましくはクロロである）、Ｒ16は、すべて適宜置換された、Ｃ1〜6アルキル、フェニル、Ｎ、Ｓ、もしくはＯから選択される１つもしくは複数の原子を有する５〜７員環のヘテロアリール、または３〜７員環のシクロアルキルである（好ましくは、Ｒ16の所望による置換基は、ハロゲン、ＣＦ3およびＣ1〜6アルキルから選択される１〜３個の基である）］。
【０１２０】
第２７の実施形態では、本発明は、以下の工程を含む、式Ｉの化合物またはその塩を調製する新規方法を提供する：
【化２１】
2009544758.tif 000024
以下の工程を含む、式Ｖの化合物を式ＮＨ（Ｒ8）（Ｒ9）のアミンで還元性アミノ化して、式ＶＩの化合物を得る工程と：
（ａ）アミンおよび脱水剤を、式Ｖの化合物に、非プロトン性溶媒中、約−２０°〜約＋５０℃の温度で加えて、式Ｖａのイミン／エナミン化合物を形成する工程と；
（ｂ）式Ｖａのイミン／エナミン化合物および白金触媒、５％のＰｔ／Ｓ／Ｃの溶液を、一定圧力の水素ガスで処理して、式ＶＩのエステル化合物を得る工程；
式ＶＩのエステル化合物を加水分解して式ＶＩＩの酸化合物を得る工程と；
式ＶＩＩの酸化合物を式ＶＩＩａのイソシアネート化合物へと変換する工程と；
式ＶＩＩａのイソシアネート化合物を式Ｒ15ＯＨのアルコールと反応させて式ＶＩＩＩのカルバメート化合物を得る工程と；
式ＶＩＩＩのカルバメート化合物を遊離アミン中間体へと変換する工程と；
遊離アミン中間体をインサイツで試薬Ｒ10Ｃ（Ｏ）Ｗを用いてアシル化して、式ＩＸの保護されたアミン化合物を得る工程と；
式ＩＸの保護されたアミン化合物を脱保護して式Ｘの化合物を得る工程と；
式Ｘの化合物を式
【化２２】
2009544758.tif 000025
の化合物とカップリングさせて式Ｉの化合物を得る工程；
［式中：
Ｒ1およびＲ2は、独立して、水素、またはカルボベンジルオキシ（Ｃｂｚ）基、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣ）基、ベンジル（Ｂｎ）基、およびｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）基から選択されるアミン保護基であり（好ましくは、アミン保護基はＣｂｚ、ＢｎもしくはＢＯＣ、特にＣｂｚもしくはＢｎである）；
Ｒ4は、低級Ｃ1〜6アルキル、またはＣ1〜4アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、ＣＦ3、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＣＦ3、およびＣ（＝Ｏ）Ｃ1〜4アルキルによって適宜置換されたベンジルであり；
Ｒ8およびＲ9は、独立して、水素またはＣ1〜6アルキルであり；
Ｒ10は、独立して、Ｃ1〜6アルキル、またはＣ1〜4アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、ＣＦ3、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＣＦ3、およびＣ（＝Ｏ）Ｃ1〜4アルキルによって適宜置換されたベンジルであり（好ましくはＣ1〜6アルキル、より好ましくはメチルである）；
Ｗは、ハロゲンまたはＲ10Ｃ（Ｏ）−であり；
Ｒ15は、Ｃ1〜6アルキル、またはＣ1〜4アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、ＣＦ3、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＣＦ3、およびＣ（＝Ｏ）Ｃ1〜4アルキルによって適宜置換されたベンジルであり（Ｒ15は、好ましくはｔｅｒｔ−ブチルまたは未置換のベンジル、より好ましくはｔｅｒｔ−ブチルである）；
ＨＥＴは、環の少なくとも１つにおいてＮ、ＯまたはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子（好ましくは１〜３個のヘテロ原子、特に１〜２個の窒素原子）を有する適宜置換された３〜１４員環のヘテロ環またはヘテロアリール環であり（ＨＥＴは、好ましくは６−置換のキナゾリン−４−イル、より好ましくは６−トリフルオロメチル−キナゾリン−４−イルである）；
ＬＧは、ハロゲンまたはＯＳＯ2Ｒ16から選択される脱離基であり（ＬＧは、好ましくはハロゲン、より好ましくはクロロである）、Ｒ16は、すべて適宜置換された、Ｃ1〜6アルキル、フェニル、Ｎ、Ｓ、もしくはＯから選択される１つもしくは複数の原子を有する５〜７員環のヘテロアリール、または３〜７員環のシクロアルキルである（好ましくは、Ｒ16の所望による置換基は、ハロゲン、ＣＦ3およびＣ1〜6アルキルから選択される１〜３個の基である）］。
【０１２１】
第２８の実施形態では、本発明は、以下の工程を含む式Ｉの化合物またはその塩を調製する代替新規方法を提供する：
【化２３】
2009544758.tif 000026
以下の工程を含む、式Ｖの化合物を式ＮＨ（Ｒ8）（Ｒ9）のアミンで還元性アミノ化して、式ＶＩの化合物を得る工程と：
（ａ）アミンおよび脱水剤を、式Ｖの化合物に、非プロトン性溶媒中、約−２０°〜約＋５０℃の温度で加えて、式Ｖａのイミン／エナミン化合物を形成する工程と；
（ｂ）式Ｖａのイミン／エナミン化合物および白金触媒、５％のＰｔ／Ｓ／Ｃの溶液を、一定圧力の水素ガスで処理して、式ＶＩのエステル化合物を得る工程；
式ＶＩのエステル化合物を加水分解して式ＶＩＩの酸化合物を得る工程と；
式ＶＩＩの酸化合物を式ＶＩＩａのイソシアネート化合物へと変換する工程と；
式ＶＩＩａのイソシアネート化合物を、所望によりインサイツで、アシル化剤（Ｒ10aＣ（Ｏ））2Ｏに、その対応する酸Ｒ10aＣ（Ｏ）ＯＨの存在で加えて、式ＩＸの保護されたアミン化合物を得る工程と；
式ＩＸの保護されたアミン化合物を脱保護して式Ｘの化合物を得る工程と；
式Ｘの化合物を式
【化２４】
2009544758.tif 000027
の化合物とカップリングさせて式Ｉの化合物を得る工程；
［式中：
Ｒ1およびＲ2は、独立して、水素、またはカルボベンジルオキシ（Ｃｂｚ）基、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣ）基、ベンジル（Ｂｎ）基、およびｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）基から選択されるアミン保護基であり（好ましくは、アミン保護基はＣｂｚ、ＢｎもしくはＢＯＣ、特にＣｂｚもしくはＢｎである）；
Ｒ4は、低級Ｃ1〜6アルキル、またはＣ1〜4アルキル、Ｃ2〜4アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、ＣＦ3、ＯＣ1〜4アルキル、ＯＣＦ3、およびＣ（＝Ｏ）Ｃ1〜4アルキルによって適宜置換されたベンジルであり；
Ｒ8およびＲ9は、独立して、水素またはＣ1〜6アルキルであり；
Ｒ10aは、独立して、Ｃ1〜6アルキルまたは適宜置換されたベンジルであり（好ましくは、Ｒ10aはメチルである）；
ＨＥＴは、環の少なくとも１つにおいてＮ、ＯまたはＳから選択される１〜４個のヘテロ原子（好ましくは１〜３個のヘテロ原子、特に１〜２個の窒素原子）を有する適宜置換された３〜１４員環のヘテロ環またはヘテロアリール環であり（ＨＥＴは、好ましくは６−置換のキナゾリン−４−イル、より好ましくは６−トリフルオロメチル−キナゾリン−４−イルである）；
ＬＧは、ハロゲンまたはＯＳＯ2Ｒ16から選択される脱離基であり（ＬＧは、好ましくはハロゲン、より好ましくはクロロである）、Ｒ16は、すべて適宜置換された、Ｃ1〜6アルキル、フェニル、Ｎ、Ｓ、もしくはＯから選択される１つもしくは複数の原子を有する５〜７員環のヘテロアリール、または３〜７員環のシクロアルキルである（好ましくは、Ｒ16の所望による置換基は、ハロゲン、ＣＦ3およびＣ1〜6アルキルから選択される１〜３個の基である）］。
【０１２２】
第２９の実施形態では、本開示は、
式Ｖの化合物が
【化２５】
2009544758.tif 000028
またはその塩であり；
式ＶＩの化合物が
【化２６】
2009544758.tif 000029
またはその塩であり；
式ＶＩＩの化合物が
【化２７】
2009544758.tif 000030
またはその塩であり（好ましくはナトリウム塩）；
式ＶＩＩＩのカルバメート化合物が
【化２８】
2009544758.tif 000031
またはその塩であり；
式ＩＸの保護されたアミン化合物が
【化２９】
2009544758.tif 000032
または塩であり、
脱保護された式Ｘの化合物が
【化３０】
2009544758.tif 000033
またはその塩であり；式Ｉの化合物がＮ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドまたはその塩である、
前述の実施形態のうちの任意のものに従った方法を提供する。
【０１２３】
第３０の実施形態では、本開示は、式Ｖの化合物またはその塩を提供する：
【化３１】
2009544758.tif 000034
［式中：
Ｒ1およびＲ2は、水素またはＢＯＣ、Ｃｂｚ、もしくはベンジルから選択されるアミン保護基であり；
Ｒ4は低級Ｃ1〜6アルキルである］。
好ましい式Ｖの化合物は、
【化３２】
2009544758.tif 000035
またはその塩である。
【０１２４】
第３１の実施形態では、本開示は、式ＶＩの化合物またはその塩を提供する：
【化３３】
2009544758.tif 000036
［式中：
Ｒ1およびＲ2は、独立して、水素またはＢＯＣ、Ｃｂｚ、もしくはベンジルから選択されるアミン保護基であり；
Ｒ4はＣ1〜6アルキルであり；
Ｒ8およびＲ9は、独立して、水素またはＣ1〜6アルキルから選択される］。
好ましい式ＶＩの化合物は、
【化３４】
2009544758.tif 000037
またはその塩である。
【０１２５】
第３２の実施形態では、本開示は、式ＶＩＩの化合物またはその塩を提供する：
【化３５】
2009544758.tif 000038
［式中：
Ｒ1およびＲ2は、独立して、水素またはＢＯＣ、Ｃｂｚ、もしくはベンジルから選択されるアミン保護基であり；
Ｒ8およびＲ9は、独立して、水素またはＣ1〜6アルキルから選択される］。
好ましい式ＶＩＩの化合物は、
【化３６】
2009544758.tif 000039
またはその塩である。好ましいその塩には、式ＶＩＩの化合物のナトリウム塩などのアルカリ塩が含まれる。
【０１２６】
第３３の実施形態では、本開示は、式ＶＩＩの化合物またはその塩を提供する：
【化３７】
2009544758.tif 000040
［式中：
Ｒ1およびＲ2は、独立して、水素またはＢＯＣ、Ｃｂｚ、もしくはベンジルから選択されるアミン保護基であり；
Ｒ8およびＲ9は、独立して、水素またはＣ1〜6アルキルから選択され；
Ｒ10は、Ｃ1〜6アルキルまたはベンジルである］。
好ましい式ＶＩＩＩの化合物は、
【化３８】
2009544758.tif 000041
またはその塩である。
【０１２７】
第３４の実施形態では、本開示は、式ＩＸの化合物またはその塩を提供する：
【化３９】
2009544758.tif 000042
［式中：
Ｒ1およびＲ2は、独立して、水素またはＢＯＣ、Ｃｂｚ、もしくはベンジルから選択されるアミン保護基であり；
Ｒ8およびＲ9は、独立して、水素またはＣ1〜6アルキルから選択され；
Ｒ10は、Ｃ1〜6アルキルまたは適宜置換されたベンジルである］。
好ましい式ＩＸの化合物は、
【化４０】
2009544758.tif 000043
またはその塩である。
【０１２８】
第３５の実施形態では、本開示は、式Ｘの化合物またはその塩を提供する：
【化４１】
2009544758.tif 000044
［式中：
Ｒ1は、独立して、水素またはＢＯＣ、Ｃｂｚ、もしくはベンジルから選択されるアミン保護基であり；
Ｒ8およびＲ9は、独立して、水素またはＣ1〜6アルキルから選択され；
Ｒ10は、Ｃ1〜6アルキルまたは適宜置換されたベンジルである］。
好ましい式Ｘの化合物は、
【化４２】
2009544758.tif 000045
またはその塩である。
【０１２９】
第３６の実施形態では、本開示は、式ＩＩの化合物またはその塩を提供する：
【化４３】
2009544758.tif 000046
［式中：
ＲaおよびＲbは、それらがどちらも付着している炭素原子と一緒に合わさって、カルボニルまたは１，３−ジオキソラン基を形成し（好ましくはＲaおよびＲbは、それらがどちらも付着している炭素原子と一緒に合わさって、１，３−ジオキソラン基を形成する）；
Ｒ1は水素であり；
Ｒ2はＣｂｚであり；
Ｒ3は水素であり；
Ｒ4はＣ1〜6アルコキシである］。
好ましい式ＩＩの化合物は、
【化４４】
2009544758.tif 000047
またはその塩である。好ましい塩は、トルエンスルホン酸塩または臭化水素酸塩、特にトルエンスルホン酸塩である。
【０１３０】
第４６の態様において、該開示によって、式Ｉの化合物が、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド、またはその塩である方法が提供される。
【０１３１】
本発明は、その精神または本質的な特性からはずれることなく、他の特定の形態に具体化されてもよい。したがって、上記の態様は、限定的なものとみなされるべきではない。いずれのおよびすべての本発明の態様も、別の態様を記載するために、いずれの他の態様とも併用されうる。本態様の各々の個々の要素（例えば、好ましいまたは特別の態様）は、それ自身、独立した態様である。さらに、態様のいずれの要素も、別の態様を記載するために、いずれの態様からのいずれのおよびすべての他の要素とも併用されるものと意図される。また、本発明には、本明細書に記載された本発明の異なる態様の組合せ、態様の一部、定義、説明、および実施例が含まれる。
【０１３２】
定義
以下は、本明細書および添付の特許請求の範囲で使用する用語の定義である。別段に指定しない限りは、本明細書中で基または用語について提供する最初の定義が、個別にまたは別の基の一部として、本明細書および特許請求の範囲の全体にわたって、その基または用語に適用される。
【０１３３】
用語「アルキル」とは、１〜１２個の炭素原子、好ましくは１〜６個の炭素原子を有する、直鎖または分枝鎖状の炭化水素基をいう。数字が記号「Ｃ」の後に下付き文字で表示されている場合、下付き文字は、特定の基が含み得る炭素原子の数をより具体的に定義する。たとえば、「Ｃ1〜6アルキル」とは、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチルなどの、１〜６個の炭素原子を有する直鎖および分枝鎖状のアルキル基をいう。下付き文字「０」とは、結合をいう。したがって、用語ヒドロキシ（Ｃ0〜2）アルキルまたは（Ｃ0〜2）ヒドロキシアルキルには、ヒドロキシ、ヒドロキシメチルおよびヒドロキシエチルが含まれる。アルキル基は、（Ｃ1〜6）アルキル、（Ｃ2〜6）アルケニル、ヒドロキシ、ハロゲン、シアノ、ニトロ、ＣＦ3、Ｏ（Ｃ1〜6アルキル）、ＯＣＦ3、Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ1〜6アルキル）、ＣＯ2Ｈ、ＣＯ2（Ｃ1〜6アルキル）、ＮＨＣＯ2（Ｃ1〜6アルキル）、−Ｓ（Ｃ1〜6アルキル）、ＮＨ2、ＮＨ（Ｃ1〜6アルキル）、Ｎ（Ｃ1〜6アルキル）2、Ｎ（ＣＨ3）3+、ＳＯ2（Ｃ1〜6アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ1〜4アルキレン）ＮＨ2、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ1〜4アルキレン）ＮＨ（アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ1〜4アルキレン）Ｎ（Ｃ1〜4アルキル）2、Ｃ3〜7シクロアルキル、フェニル、ベンジル、フェニルエチル、フェニルオキシ、ベンジルオキシ、ナフチル、４〜７員環のヘテロシクロ、および／または５〜６員環のヘテロアリールから選択される、１〜３個の基で置換されていてよい。置換アルキルがアリール、ヘテロシクロ、シクロアルキル、またはヘテロアリール基で置換されている場合、前記環系は以下に定義するとおりであり、したがって、やはり以下に定義する０、１、２、または３個の置換基を有し得る。
【０１３４】
用語「アルキル」を「アリールアルキル」などのように別の基と一緒に使用した場合、この組合せは、置換アルキルが含む置換基の少なくとも１つをより具体的に定義する。たとえば、「アリールアルキル」とは、ベンジルなどの、置換基の少なくとも１つがアリールである上記定義した置換アルキル基をいう。したがって、用語アリール（Ｃ0〜4）アルキルには、少なくとも１つのアリール置換基を有する置換低級アルキルが含まれる、また、別の基と直接結合したアリール、すなわちアリール（Ｃ0）アルキルも含まれる。
【０１３５】
用語「アルケニル」とは、２〜１２個の炭素原子および少なくとも１つの二重結合を有する、直鎖または分枝鎖状の炭化水素基をいう。１つの二重結合を有する２〜６個の炭素原子のアルケニル基が最も好ましい。アルケニル基は、アルキル基について上述したように置換し得る。
【０１３６】
用語「アルキニル」とは、２〜１２個の炭素原子および少なくとも１つの三重結合を有する、直鎖または分枝鎖状の炭化水素基をいう。１つの三重結合を有する２〜６個の炭素原子のアルキニル基が最も好ましい。アルキニル基は、アルキル基について上述したように置換し得る。
【０１３７】
用語「アルキレン」とは、１〜１２個の炭素原子、好ましくは１〜８個の炭素原子を有する二価の直鎖または分枝鎖状の炭化水素基、たとえば、｛−ＣＨ2−｝n［式中、ｎは１〜１２、好ましくは１〜８である］をいう。低級アルキレン基、すなわち、１〜８個の炭素原子のアルキレン基が最も好ましい。用語「アルケニレン」および「アルキニレン」とは、それぞれ、上記定義のアルケニルおよびアルキニル基の二価の基をいう。アルケニレン基は、アルキル基について上述したように置換し得る。
【０１３８】
用語「アルコキシ」とは、本明細書中に定義したアルキルによって置換された酸素原子をいう。たとえば、用語「アルコキシ」には、基−Ｏ−Ｃ1〜6アルキルが含まれる。
【０１３９】
下付き文字をアルコキシ、チオアルキルまたはアミノアルキルに言及して使用する場合、下付き文字は、基がヘテロ原子に加えて含み得る炭素原子の数をいう。
【０１４０】
たとえば、アルコキシ、チオアルキル、およびアミノアルキルを含めたすべての基の選択は、安定な化合物が提供されるように当業者によって行われることを理解されたい。
【０１４１】
用語「カルボニル」とは、二価のカルボニル基−Ｃ（＝Ｏ）−をいう。
【０１４２】
用語「アシル」とは、有機基、より詳細には基Ｃ（＝Ｏ）Ｒeと連結したカルボニル基、および有機基と連結した二価基−Ｃ（＝Ｏ）Ｒe−をいう。基Ｒeは、本明細書中に定義したアルキル、アルケニル、アルキニル、シクロアルキル、ヘテロシクロ、アリール、もしくはヘテロアリール、または適切な場合は、対応する二価基、たとえばアルキレンから選択することができる。
【０１４３】
用語「シクロアルキル」とは、３〜９個、好ましくは３〜７個の炭素原子の、完全に飽和したおよび部分的に不飽和の炭化水素環をいう（したがって「シクロアルケニル環」が含まれる）。用語「シクロアルキル」には、（Ｃ1〜4）アルキル、（Ｃ2〜4）アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、ＣＦ3、Ｏ（Ｃ1〜4アルキル）、ＯＣＦ3、Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ1〜4アルキル）、ＣＯ2Ｈ、ＣＯ2（Ｃ1〜4アルキル）、ＮＨＣＯ2（Ｃ1〜4アルキル）、Ｓ（Ｃ1〜4アルキル）、ＮＨ2、ＮＨ（Ｃ1〜4アルキル）、Ｎ（Ｃ1〜4アルキル）2、Ｎ（Ｃ1〜4アルキル）3+、ＳＯ2（Ｃ1〜4アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ1〜4アルキレン）ＮＨ2、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ1〜4アルキレン）ＮＨ（アルキル）、および／またはＣ（＝Ｏ）（Ｃ1〜4アルキレン）Ｎ（Ｃ1〜4アルキル）2から選択される０、１、２、または３個の置換基を有する環が含まれる。用語「シクロアルキル」には、第２の環がそれに融合している環（たとえば、ベンゾ、ヘテロシクロ、もしくはヘテロアリール環を含む）または３〜４個の炭素原子の炭素−炭素架橋を有する環も含まれる。
【０１４４】
用語「ハロ」または「ハロゲン」とは、クロロ、ブロモ、フルオロおよびヨードをいう。
【０１４５】
用語「ハロアルキル」とは、１つまたは複数のハロ置換基を有する置換アルキルを意味する。たとえば、「ハロアルキル」には、モノ、ビ、およびトリフルオロメチルが含まれる。
【０１４６】
用語「ハロアルコキシ」とは、１つまたは複数のハロ置換基を有するアルコキシ基を意味する。たとえば、「ハロアルコキシ」にはＯＣＦ3が含まれる。
【０１４７】
用語「ヘテロ原子」には、酸素、硫黄および窒素が含まれる。
【０１４８】
用語「アリール」とは、フェニル、ビフェニル、フルオレニル、１−ナフチルおよび２−ナフチルをいう。用語「アリール」には、（Ｃ1〜4）アルキル、（Ｃ2〜4）アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、ＣＦ3、Ｏ（Ｃ1〜4アルキル）、ＯＣＦ3、Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ1〜4アルキル）、ＣＯ2Ｈ、ＣＯ2（Ｃ1〜4アルキル）、ＮＨＣＯ2（Ｃ1〜4アルキル）、Ｓ（Ｃ1〜4アルキル）、ＮＨ2、ＮＨ（Ｃ1〜4アルキル）、Ｎ（Ｃ1〜4アルキル）2、Ｎ（Ｃ1〜4アルキル）3+、ＳＯ2（Ｃ1〜4アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ1〜4アルキレン）ＮＨ2、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ1〜4アルキレン）ＮＨ（アルキル）、および／またはＣ（＝Ｏ）（Ｃ1〜4アルキレン）Ｎ（Ｃ1〜4アルキル）2から選択される０、１、２または３個の置換基を有する環が含まれる。
【０１４９】
用語「ヘテロシクロ」または「ヘテロ環」とは、１〜４個のヘテロ原子を有する、置換および無置換の非芳香族（部分的にまたは完全に飽和していてもよい）の３〜１５員環をいう。そのような環は、３〜７員環の単環基、７〜１１員環の二環基、および１０〜１５員環の三環基であることができる。ヘテロ原子を含むヘテロシクロ基のそれぞれの環は、それぞれの環中のヘテロ原子の合計数が４以下であり、さらに、環が少なくとも１つの炭素原子を含む限りは、１もしくは２個の酸素もしくは硫黄原子および／または１〜４個の窒素原子を含むことができる。二環および三環基を完全なものにする融合環は炭素原子のみを含んでいてよく、飽和、部分的に飽和、または不飽和であり得る。窒素および硫黄原子は所望により酸化されていてよく、窒素原子は所望により第四級化されていてよい。ヘテロシクロ基は、任意の利用可能な窒素または炭素原子で付着していてよい。ヘテロシクロ環は、（Ｃ1〜4）アルキル、（Ｃ2〜4）アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、ＣＦ3、Ｏ（Ｃ1〜4アルキル）、ＯＣＦ3、Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ1〜4アルキル）、ＣＯ2Ｈ、ＣＯ2（Ｃ1〜4アルキル）、ＮＨＣＯ2（Ｃ1〜4アルキル）、Ｓ（Ｃ1〜4アルキル）、ＮＨ2、ＮＨ（Ｃ1〜4アルキル）、Ｎ（Ｃ1〜4アルキル）2、Ｎ（Ｃ1〜4アルキル）3+、ＳＯ2（Ｃ1〜4アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ1〜4アルキレン）ＮＨ2、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ1〜4アルキレン）ＮＨ（アルキル）、および／またはＣ（＝Ｏ）（Ｃ1〜4アルキレン）Ｎ（Ｃ1〜4アルキル）2から選択される０、１、２または３個の置換基を含み得る。例示的なヘテロ環基には、アゼチジニル、ピロリジニル、オキセタニル、イミダゾリニル、オキサゾリジニル、イソオキサゾリニル、チアゾリジニル、イソチアゾリジニル、テトラヒドロフラニル、ピペリジル、ピペラジニル、２−オキソピペラジニル、２−オキソピペリジル、２−オキソピロロジニル、２−オキソアゼピニル、アゼピニル、４−ピペリドニル、テトラヒドロピラニル、モルホリニル、チアモルホリニル、チアモルホリニルスルホキシド、チアモルホリニルスルホン、１，３−ジオキソラン、キヌクリジニルおよびテトラヒドロ−１，１−ジオキソチエニルなどが含まれる。
【０１５０】
用語「ヘテロアリール」とは、環の少なくとも１つ中にＯ、Ｓ、またはＮから選択される１〜４個のヘテロ原子を有する、置換および無置換の芳香族３〜１４員環をいう。前記環は、５または６員環の単環基、９または１０員環の二環基、および１１〜１４員環の三環基であることができる。ヘテロ原子を含むヘテロアリール基それぞれの環は、それぞれの環中のヘテロ原子の合計数が４以下であり、それぞれの環が少なくとも１つの炭素原子を有する限りは、１もしくは２個の酸素もしくは硫黄原子および／または１〜４個の窒素原子を含むことができる。二環および三環基を完全なものにする融合環は炭素原子のみを含んでいてよく、飽和、部分的に飽和、または不飽和であり得る。窒素および硫黄原子は所望により酸化されていてよく、窒素原子は所望により第四級化されていてよい。二環または三環であるヘテロアリール基には少なくとも１つの完全に芳香族の環が含まれていなければならないが、他の融合環は芳香族または非芳香族であり得る。ヘテロアリール基は、任意の環の任意の利用可能な窒素または炭素原子で付着していてよい。ヘテロアリール環系は、（Ｃ1〜4）アルキル、（Ｃ2〜4）アルケニル、ハロゲン、ヒドロキシ、シアノ、ニトロ、ＣＦ3、Ｏ（Ｃ1〜4アルキル）、ＯＣＦ3、Ｃ（＝Ｏ）Ｈ、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ1〜4アルキル）、ＣＯ2Ｈ、ＣＯ2（Ｃ1〜4アルキル）、ＮＨＣＯ2（Ｃ1〜4アルキル）、Ｓ（Ｃ1〜4アルキル）、ＮＨ2、ＮＨ（Ｃ1〜4アルキル）、Ｎ（Ｃ1〜4アルキル）2、Ｎ（Ｃ1〜4アルキル）3+、ＳＯ2（Ｃ1〜4アルキル）、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ1〜4アルキレン）ＮＨ2、Ｃ（＝Ｏ）（Ｃ1〜4アルキレン）ＮＨ（アルキル）、および／またはＣ（＝Ｏ）（Ｃ1〜4アルキレン）Ｎ（Ｃ1〜4アルキル）2から選択される０、１、２または３個の置換基を含み得る。
【０１５１】
例示的なヘテロアリール基には、ピロリル、ピラゾリル、ピラゾリニル、イミダゾリル、オキサゾリル、イソオキサゾリル、チアゾリル、チアジアゾリル、イソチアゾリル、フラニル、チエニル、オキサジアゾリル、ピリジル、ピラジニル、ピリミジニル、ピリダジニル、トリアジニル、インドリル、ベンゾチアゾリル、ベンゾジオキソリル、ベンゾオキサゾリル、ベンゾチエニル、キノリニル、テトラヒドロイソキノリニル、イソキノリニル、ベンズイミダゾリル、ベンゾピラニル、インドリジニル、ベンゾフラニル、クロモニル、クマリニル、ベンゾピラニル、シンノリニル、キノキサリニル、インダゾリル、ピロロピリジル、フロピリジル(furopyridyl)、ジヒドロイソインドリル、テトラヒドロキノリニルなどが含まれる。特定のヘテロアリール基には、たとえば、６−置換のキナゾリン−４−イルおよび６−トリフルオロメチル−キナゾリン−４−イルが含まれる。
【０１５２】
基が適宜置換されている場合、それには、置換および無置換基が含まれる。
【０１５３】
本明細書中に記載した化合物は不斉中心を有し得る。非対称的に置換された原子を含む本発明の化合物は、光学活性を有する型またはラセミ体で単離し得る。ラセミ体の分割によってまたは光学活性を有する出発物質からの合成によってなど、どのように光学活性型を調製するかは当分野で周知である。オレフィン、Ｃ＝Ｎ二重結合などの多くの幾何異性体も本明細書中に記載した化合物中に存在することができ、そのような安定な異性体すべてが本発明で企図される。本発明の化合物のシスおよびトランス幾何異性体を記載し、これは異性体の混合物または分離した異性体として単離し得る。具体的な立体化学または異性体を具体的に示さない限りは、すべてのキラル体、ジアステレオマー体、ラセミ体および構造の幾何異性体が意図される。
【０１５４】
本明細書中に開示する化合物の一方の鏡像異性体が、他方と比較して優れた活性を示し得る。したがって、すべての立体化学が本発明の一部であるとみなされる。必要な場合は、ラセミ物質の分離は、Steven D. Young, et al.、Antimicrobial Agents and Chemotherapy、1995、2602〜2605に記載のように、キラルカラムを用いたＨＰＬＣによってまたはショウノウクロライドなどの分割剤を用いた分割によって達成することができる。
【０１５５】
本明細書中で用いる語句「医薬上許容される」とは、健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー性応答、または他の問題もしくは合併症なしに人間および動物の組織と接触させて使用することに適しており、適切な利益／危険性の比が釣り合っている、化合物、物質、組成物、および／または剤形をいう。
【０１５６】
本明細書中で使用する「医薬上許容される塩」とは、親化合物を、その酸または塩基の塩を作製することによって改変する、開示する化合物の誘導体をいう。医薬上許容される塩の例には、それだけには限定されないが、アミンなどの塩基性残基の鉱酸または有機酸の塩；カルボン酸などの酸性残基のアルカリまたは有機の塩等が含まれる。医薬上許容される塩には、たとえば、無毒性の無機または有機酸から形成した、親化合物の慣用の無毒性塩または第四級アンモニウム塩が含まれる。たとえば、そのような慣用の無毒性の塩には、塩酸、ベンゼンスルホン酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などの無機酸に由来するもの；酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２−アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸などの有機酸から調製した塩が含まれる。
【０１５７】
本発明の医薬上許容される塩は、塩基性または酸性部分を含む親化合物から、慣用の化学的方法によって合成することができる。一般に、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基の形態を、水もしくは有機溶媒、または２つの混合物中の、理論量の適切な塩基または酸と反応させることによって調製することができる；一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルなどの非水性媒体が好ましい。適切な塩の記載は、どのκ指示が本明細書中に参考として取り込まれている、レミントンの医薬科学(Remington’s Pharmaceutical Sciences)、第17版、Mack Publishing Company、ペンシルバニア州Easton、1985、1418ページに見つかる。
【０１５８】
プロドラッグは、医薬品の数々の望ましい性質（たとえば、溶解度、生体利用度、製造など）を増強することが知られているので、本発明の化合物をプロドラッグ形態で送達し得る。したがって、本発明は、本発明で特許請求する化合物のプロドラッグ、上記を送達する方法および上記を含む組成物にわたる。「プロドラッグ」には、そのようなプロドラッグを哺乳動物対象に投与した際に、本発明の活性親薬物をインビボで放出する、任意の共有結合した担体が含まれることを意図する。本発明におけるプロドラッグは、化合物中に存在する官能基を修飾することによって調製し、これは、修飾物がルーチン操作またはインビボのどちらかで切断されて親化合物となるように行う。プロドラッグには、ヒドロキシ、アミノ、またはスルフヒドリル基が任意の基と結合しており、本発明のプロドラッグを哺乳動物対象に投与した際、切断されてそれぞれ遊離ヒドロキシル、遊離アミノ、または遊離スルフヒドリル基が形成される、本発明の化合物が含まれる。プロドラッグの例には、それだけには限定されないが、本発明の化合物のアルコールおよびアミン官能基の酢酸、ギ酸および安息香酸誘導体が含まれる。
【０１５９】
「安定な化合物」および「安定な構造」とは、反応混合物から有用な度合の純度まで単離して、有効な治療剤へと配合する間残存するように十分に頑強な化合物を示すことを意味する。本発明は、安定な化合物を具体化することを意図する。
【０１６０】
「治療上有効な量」には、本明細書で論じるように、ＭＣＰ−１を阻害するために有効または障害を治療もしくは予防するために有効な、本発明の化合物の単独での量または特許請求した化合物の組合せの量または他の活性成分と組み合わせた本発明の化合物の量が含まれることを意図する。
【０１６１】
本明細書中で使用する「治療すること」または「治療」とは、哺乳動物、特にヒトにおける疾患状態の治療に及び、（ａ）疾患状態が哺乳動物で生じることを予防すること（特にそのような哺乳動物が疾患状態を患いやすくなっているが、未だそれに罹患していると診断されていない場合）；（ｂ）疾患状態を阻害すること、すなわち、その発生を停止させること；および／または（ｃ）疾患状態を緩和させること、すなわち、病状の回帰を引き起こすことが含まれる。
【０１６２】
特定の結晶形を指定するために本明細書中で使用する名称、たとえば「Ｎ−２」は、類似または同一の物理的および化学的特徴を保有する任意の他の物質に関して、限定するものとみなされるべきではなく、むしろ、これらの命名は、やはり本明細書中に提示する、特徴づけ情報に従って解釈されるべき単なる識別子であると理解されるべきである。
【０１６３】
本発明は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基の結晶形を、新規物質として、具体的には医薬上許容される形として、提供する。特定の好ましい実施形態では、遊離塩基の結晶形は、実質的に純粋な結晶形である。遊離塩基の好ましい実施形態は、Ｎ−２、ＤＣ−１、ＴＨＯＯ−１、Ｅ−１、Ａ−１、およびＡＮ−３として実施例に開示されている。
【０１６４】
本発明はまた、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの塩の結晶形も、新規物質として、特に、医薬的に許容される形態で提供する。特定の好ましい態様において、該塩の結晶形は、実質的に純粋な形態である。該塩の好ましい態様は、Ｎ−１型のジベンゼンスルホン酸塩およびＨ４−１型のＨＣｌ塩として実施例に開示されている。
【０１６５】
本明細書中で使用する「多型体」とは、同じ化学組成を有するが、結晶を形成する分子、原子、および／またはイオンが異なる空間配置を有する結晶形をいう。
【０１６６】
本明細書中で使用する「溶媒和物」とは、溶媒または複数の溶媒の分子をさらに結晶構造内に取り込んで含む、分子、原子、および／またはイオンの結晶形をいう。溶媒和物中の溶媒分子は、規則的な配置および／または規則的でない配置で存在し得る。溶媒和物は、化学量論的量または非化学量論的量の溶媒分子のどちらかを含み得る。たとえば、非化学量論的量の溶媒分子を有する溶媒和物は、溶媒和物から溶媒を部分的に損失した結果であり得る。
【０１６７】
本明細書中で使用する「非晶質」とは、結晶性でない、分子、原子、および／またはイオンの固形形態をいう。非晶質の固形物は、決定的なＸ線回折パターンを示さない。
【０１６８】
結晶形に関して本明細書中で使用する「実質的に純粋」とは、化合物の重量に基づいて９０重量％を超える純度を有する化合物を意味し、９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８および９９重量％を超える純度が含まれ、化合物Ｉの約１００重量％に等しい純度も含まれる。残りの物質は、その調製から生じる化合物の他の結晶形および／または反応不純物および／またはプロセス不純物を含む。たとえば、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基または塩の結晶形は、現在知られており当分野で一般に受け入れられている手段によって測定して９０重量％を超える純度を有する場合に実質的に純粋とみなしてもよく、残りの１０重量％未満の物質は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基または塩の他の結晶形および／または反応不純物および／またはプロセス不純物を含む。
【０１６９】
結晶形の試料は、優勢な量の単一の結晶形および所望により少量の１つまたは複数の他の結晶形の存在を示す、実質的に純粋な相均一性で提供し得る。試料中に複数の結晶形が存在することは、粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）または固体核磁気共鳴分光分析（ＳＳＮＭＲ）などの技術によって決定し得る。たとえば、実験測定したＰＸＲＤパターンと模擬ＰＸＲＤパターンとの比較において余分なピークが存在することは、試料中の複数の結晶形を示し得る。模擬ＰＸＲＤは、単一の結晶Ｘ線データから計算し得る。Smith, D. K.、「粉末X線回析パターンを計算するためのFORTRANプログラム(A FORTRAN Program for Calculating X-Ray Powder Diffraction Patterns)」、Lawrence Radiation Laboratory、カリフォルニア州Livermore、UCRL-7196 (1963年4月)を参照されたい。
【０１７０】
好ましくは、結晶形は、模擬ＰＸＲＤパターンには存在しない余分なピークから生じる実験測定したＰＸＲＤパターンが全ピーク面積の１０％未満、好ましくは５％未満、より好ましくは２％未満であることによって示されるように、実質的に純粋な相均一性を有する。模擬ＰＸＲＤパターンには存在しない余分なピークから生じる実験測定したＰＸＲＤパターンが全ピーク面積の１％未満である、実質的に純粋な相均一性を有する結晶形が最も好ましい。
【０１７１】
結晶形を調製する手順は当分野で知られている。結晶形は、たとえば、適切な溶媒からの結晶化または再結晶化、昇華、融解物からの成長、別の相からの固体転移、超臨界流体からの結晶化、およびジェット噴霧を含めた様々な方法によって調製し得る。溶媒混合物から結晶形を結晶化または再結晶化させる技術には、たとえば、溶媒の蒸発、溶媒混合物の温度の低下、分子および／または塩の過飽和溶媒混合物に種結晶を接種すること、溶媒混合物の凍結乾燥、ならびに逆溶媒（カウンター溶媒）を溶媒混合物に加えることが含まれる。
【０１７２】
結晶形は、単一結晶のＸ線回折を用いて特徴づけおよび識別を行ってよく、これは、固定した分析温度における、結晶形の単一結晶の単位格子の測定に基づいている。単位格子の詳細な説明は、本明細書中に参考として組み込まれている、StoutおよびJensen、X線構造決定:実用的指針(X-Ray Structure Determination: A Practical Guide)、Macmillan Co.、ニューヨーク (1968)、第3章に提供されている。あるいは、結晶格子内で空間的関係にある原子の独特な配置は、観察された部分原子座標に従って特徴づけ得る。結晶構造を特徴づける別の手段は、実験によるまたは観察された回折プロフィールを純粋な粉末物質を表す模擬プロフィールと、どちらも同じ分析温度で行って比較し、目的の結晶形の測定値を一連の２θ値として特徴づける、粉末Ｘ線回折分析によるものである。
【０１７３】
該形態を評価する他の方法、例えば固体核磁気共鳴（ＳＳＮＭＲ）、示差走査熱量測定および熱重量分析が用いられてもよい。これらのパラメータはまた、目的の結晶形を評価するためにも併用されうる。
【０１７４】
本明細書中で使用する、ＴＧＡによって特徴づけられる用語「無視できる重量損失」とは、ニートな（非溶媒和の）結晶形の存在を示す。
【０１７５】
本明細書中で使用する、水分吸着等温線によって特徴づけられる用語「無視できる％水分取り込み」とは、試験した結晶形が非吸湿性であることを示す。
【０１７６】
本発明の一実施形態では、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基または塩の結晶形を実質的に純粋な形態で提供する。この結晶形は、たとえば賦形剤、担体、および他の活性医薬成分の１つまたは異なる分子構造の活性化学部分からなる群から選択される１つまたは複数の他の構成成分が所望により含まれ得る、医薬組成物において使用し得る。
【０１７７】
好ましくは、結晶形は、模擬ＰＸＲＤパターンには存在しない余分なピークから生じる実験測定したＰＸＲＤパターンが全ピーク面積の１０％未満、好ましくは５％未満、より好ましくは２％未満であることによって示されるように、実質的に純粋な相均一性を有する。模擬ＰＸＲＤパターンには存在しない余分なピークから生じる実験測定したＰＸＲＤパターンが全ピーク面積の１％未満である、実質的に純粋な相均一性を有する結晶形が最も好ましい。
【０１７８】
別の実施形態では、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基または塩の結晶形から本質的になる組成物を提供する。本実施形態の組成物は、この結晶形を、組成物中のその重量に基づいて少なくとも９０重量％含み得る。
【０１７９】
反応不純物および／またはプロセス不純物の存在は、たとえば、クロマトグラフィ、核磁気共鳴分光分析、質量分析または赤外線分光分析などの、当分野で知られている分析技術によって決定し得る。
【０１８０】
結晶形は、たとえば、適切な溶媒からの結晶化または再結晶化、昇華、融解物からの成長、別の相からの固体転移、超臨界流体からの結晶化、およびジェット噴霧を含めた様々な方法によって調製し得る。溶媒混合物から結晶形を結晶化または再結晶化させる技術には、たとえば、溶媒の蒸発、溶媒混合物の温度の低下、分子および／または塩の過飽和溶媒混合物に種結晶を接種すること、溶媒混合物の凍結乾燥、ならびに逆溶媒（カウンター溶媒）を溶媒混合物に加えることが含まれる。高スループット結晶化技術を用いて多型体を含めた結晶形を調製し得る。
【０１８１】
多型体を含めた薬物の結晶、調製方法、および薬物結晶の特徴づけは、薬物の固体化学(Solid-State Chemistry of Drugs)、S. R. Byrn、R. R. Pfeiffer、およびJ. G. Stowell、第2版、SSCI、インディアナ州West Lafayette (1999)に記載されている。
【０１８２】
溶媒を用いる結晶化技術では、溶媒の選択は、典型的には、化合物の溶解度、結晶化技術、および溶媒の蒸気圧などの１つまたは複数の要素に依存する。溶媒の組合せを用い得る；たとえば、化合物を第１の溶媒に溶かして溶液を得て、続いて、溶液中の化合物の溶解度を低下させて結晶の形成を得るために逆溶媒を加えてもよい。「逆溶媒」とは、化合物が低い溶解度を有する溶媒である。結晶を調製するための適切な溶媒には、極性および非極性溶媒が含まれる。
【０１８３】
結晶を調製する一方法では、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基もしくは塩を適切な溶媒中で懸濁させるおよび／または撹拌してスラリーを得て、溶解を促進するためにこれを加熱し得る。本明細書中で使用する用語「スラリー」とは、飽和溶液を意味し、これは、追加の量の固形物を含んで、所定の温度で異種混合物をもたらし得る。この観点から、適切な溶媒には、たとえば、本明細書中に開示する極性非プロトン性溶媒および極性プロトン性溶媒、ならびにこれらの２つ以上の混合物が含まれる。
【０１８４】
結晶化を促進するために種結晶を任意の結晶化混合物に加え得る。当業者には明らかなように、接種は、特定の結晶形の成長を制御する手段として、または結晶生成物の粒子径分布を制御する手段として用いる。したがって、必要な種の量の計算は、たとえば、「バッチ晶析装置のプログラム冷却(Programmed cooling of batch crystallizers)」、J. W. MullinおよびJ. Nyvlt、Chemical Engineering Science (1971) 26:369〜377に記載のように、利用可能な種の大きさおよび平均生成物粒子の所望する大きさに依存する。一般に、バッチの結晶の成長を有効に制御するためには、小さな大きさの種が必要である。小さな大きさの種は、より大きな結晶を篩過、粉砕、もしくは微粒子化することによって、または溶液の微結晶化させることによって作製し得る。結晶の粉砕または微粒子化により、所望の結晶形からの結晶化度の変化（すなわち、非晶質または別の多型体への変化）がもたらさないように、注意すべきである。
【０１８５】
冷却した混合物を真空下で濾過してよく、単離された固形物を冷たい再結晶化溶媒などの適切な溶媒で洗浄し、窒素パージ下で乾燥させて所望の結晶形を得てもよい。生成物の好ましい結晶形が形成されたことを保証するために、単離された固形物をＳＳＮＭＲ、ＤＳＣ、ＰＸＲＤなどの適切な分光または分析技術によって分析し得る。生じた結晶形は、典型的には、約７０重量％を超える単離収率の量で生成されるが、結晶化手順で最初に用いたＮ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基または塩の重量に基づいて９０重量％を超えることが好ましい。必要な場合は、生成物の塊を崩すために、生成物を同時粉砕するか、またはメッシュスクリーンを通してもよい。
【０１８６】
結晶形は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基または塩を調製する最終プロセス工程の反応媒体から直接調製し得る。これは、たとえば、最終プロセス工程中に、化合物をそれから結晶化させ得る溶媒または溶媒の混合物を用いることによって、達成し得る。あるいは、結晶形は、蒸留または溶媒添加技術によって得られ得る。この目的のために適切な溶媒には、アルコールなどのプロトン性極性溶媒、およびケトンなどの非プロトン性極性溶媒を含めた、本明細書中に記載の溶媒のうちの任意のものが含まれる。
【０１８７】
一般的な手引きとして、反応混合物を濾過して望ましくない不純物、無機塩などをすべて除去し、続いて反応溶媒または結晶化溶媒で洗浄し得る。生じた溶液を濃縮して過剰な溶媒またはガス構成成分を除去し得る。蒸留を用いる場合、収集される留出物の最終的な量は、たとえば、容器の大きさ、撹拌性能などを含めたプロセス要素に応じて変化し得る。一般的な手引きとして、反応溶液を最初の容量の約１／１０まで蒸留した後、溶媒の交換を実施し得る。標準のプロセス技術に従って、反応の程度および生成物の重量％を決定するために、反応のサンプリングおよびアッセイを行い得る。所望する場合は、反応濃度を最適化するために、さらなる反応溶媒を加えるか、または除去し得る。好ましくは、最終濃度を約５０重量％に調節し、この時点で典型的にはスラリーが生じる。
【０１８８】
反応混合物を蒸留せずに溶媒を反応器に直接加えることが好ましい場合がある。この目的のために好ましい溶媒は、溶媒交換に関連して上述したように、最終的に結晶格子に参加し得るものである。最終濃度は所望の純度、回収率などに応じて変化し得るが、溶液中の遊離塩基の最終濃度は、好ましくは約４％〜約７％である。反応混合物は、溶媒の添加後に撹拌し、同時に温めてもよい。例示として、反応混合物を約７０℃まで温めながら約１時間撹拌し得る。反応は、好ましくは熱い状態で濾過し、反応溶媒、加えた溶媒またはそれらの組合せのいずれかで洗浄する。種結晶を任意の結晶化溶液に加えて結晶化を開始させ得る。
【０１８９】
本明細書中に記載した様々な結晶形は、当業者に知られている様々な分析技術を使用することで互いに識別可能であり得る。そのような技術には、それだけには限定されないが、粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）、示差走査熱量測定（ＤＳＣ）および／または熱重量分析（ＴＧＡ）が含まれる。あるいは、結晶形は、単一結晶のＸ線回折を用いて特徴づけおよび識別を行ってよく、これは、固定した分析温度における、結晶形の単一結晶の単位格子の測定に基づいている。単位格子の詳細な説明は、本明細書中に参考として組み込まれている、StoutおよびJensen、X線構造決定:実用的指針(X-Ray Structure Determination: A Practical Guide)、Macmillan Co.、ニューヨーク (1968)、第3章に提供されている。具体的には、結晶格子内で空間的関係にある原子の独特な配置は、観察された部分原子座標に従って特徴づけ得る。結晶構造を特徴づける別の手段は、観測された回折プロフィールを、単結晶構造データから作成した模擬プロフィールと比較する、粉末Ｘ線回折分析によるものである。目的の結晶形についての粉末Ｘ線回折の測定値を、一連の２θ値（通常は４以上）として特徴づける。
【０１９０】
固体核磁気共鳴（ＳＳＮＭＲ）分光分析、示差走査熱量（ＤＳＣ）、サーモグラフィーおよび結晶または非晶質の形態学の肉眼検査などの、結晶形を特徴づける他の手段を使用し得る。また、これらのパラメータは、目的の結晶形を特徴づけるために組み合わせて使用してもよい。
【０１９１】
当業者には、Ｘ線回折パターンは、用いた測定条件に依存する測定誤差を含んで得られ得ることが理解されよう。特に、Ｘ線回折パターンの強度は、用いた測定条件および結晶の形状または形態学に応じて変動し得ることが一般に知られている。さらに、相対強度も実験条件に応じて変化する場合があり、したがって、強度の正確な順序は考慮に入れるべきでないことも理解されたい。さらに、慣用のＸ線回折パターンの回折角度の測定誤差は、典型的には約０．２°の２θ値以下、好ましくは約０．１°の２θ値であり（本明細書以下に記載する）、前述の回折角度に関してはそのような測定誤差の度合を考慮すべきである。したがって、本発明の結晶形は、本明細書中に開示する添付の図面に示すＸ線回折パターンと完全に同一のＸ線回折パターンを提供する結晶形に限定されないことを理解されたい。添付の図面に開示するものと実質的に同一のＸ線回折パターンを提供する任意の結晶形が、本発明の範囲内にある。Ｘ線回折パターンが実質的に何であるかを確認する能力は、当業者の能力範囲内にある。
【０１９２】
合成
スキーム１：アミドＩＶの調製
【化４５】
2009544758.tif 000048
式ＩＩのβ−アミノエステルまたはトルエンスルホン酸塩もしくは臭化水素酸塩を含めたその塩を、適切に保護された式ＩＩＩのキラルα−アミノ酸とカップリングさせて、当分野で知られている方法を用いてアミドＩＶを与える。たとえば、国際公開公報ＷＯ２００５０２１５００号の調製を参照されたい。カップリング反応は、ジイミド試薬を用いて、活性化剤の存在で、および第三級アミン塩基を用いて、窒素またはアルゴン（好ましくは窒素）などの不活性雰囲気下、プロピオニトリル、酢酸イソプロピル、酢酸ｎ−ブチル、酢酸ｔｅｒｔ−ブチルまたはアセトニトリル（特にアセトニトリルおよび／または酢酸エチル）などの非プロトン性溶媒中で行い得る。ジイミドカップリング試薬には、たとえばＥＤＡＣなどの試薬が含まれる。活性化剤の例には、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（ＨＯＢｔ；前記用語にはその水和物が含まれる）およびＮ’，Ｎ’−４−ジメチルアミノ−ピリジンが含まれる。第三級アミン塩基には、たとえば、トリエチルアミン、Ｎ−Ｎ−ジイソプロピル−Ｎ−エチルアミンおよびトリ−ｎ−プロピルアミンが含まれる。式ＩＩのアミノエステル：ジイミドカップリング試薬：活性化剤：第三級アミンのモル比は、それぞれ１：約０．９０〜１．５０：約０．９５〜１．５０：約２．００〜３．００である。前記モル比は、好ましくは、それぞれ１：約０．９５〜１．０５：約０．９５〜１．１０：約２．１０〜２．３０である。
【０１９３】
β−アミノエステルは、ＲaおよびＲbがアルコキシもしくはアルキルチオレート基であるか、またはそれらが付着している炭素原子と一緒になって、カルボニルを形成するか、または環状もしくは非環状アセタールもしくはチオアセタール、好ましくは１，３−ジオキソラン基を形成するように選択する。Ｒ4は、Ｃ1〜6アルキル、好ましくはエチル基である。
【０１９４】
式ＩＩＩのキラルα−アミノ酸は、官能化可能な末端残基Ｙを取り込んでおり、これは、Ｙが付着している側鎖の遠位炭素の、アミド窒素上への後の環化に適したアルキル化基を表すか、またはそれ内に同化されることができる。したがって、Ｙは、ハロゲン、ＳＭｅ、またはＯＳＯ2Ｒ12などの基から選択することができる［式中、Ｒ12は、Ｃ1〜6アルキル、−（ＣＨ2）Ｃ（Ｏ）ＯＲ13、または−（ＣＨ2）Ｃ（Ｏ）Ｒ13であり；Ｒ13は各々Ｃ1〜6アルキルである］。Ｘは、ＯＨ、ハロゲンまたはＯＣＯＲ14である［式中、Ｒ14はＣ1〜6アルキルである］。式ＩＩＩのキラルα−アミノ酸の適切な保護基Ｒ1およびＲ2は、独立して、水素または標準の条件下で加水分解もしくは水素化分解によって除去することができるアミン保護基から選択される。そのような基には、それだけには限定されないが、カルボベンジルオキシ（Ｃｂｚ）基、ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル（ＢＯＣ）、フルオレニルメチルオキシカルボニル（ＦＭＯＣ）基、ベンジル（Ｂｎ）基またはｐ−メトキシベンジル（ＰＭＢ）基が含まれる。好ましい基はＣｂｚ、ＢＯＣ、またはＢｎ基である。Ｃｂｚが最も好ましい。
【化４６】
2009544758.tif 000049
【０１９５】
式Ｖの化合物は、アルキル化部分Ｙをアミド窒素上に環化してピロリジノン環を形成することによって調製し、この変換中、Ｙは脱離基として役割を果たす。好ましい実施形態では、アルキル化部分は、当分野で周知の硫黄アルキル化剤、たとえばＣ1〜6アルキルまたはハロゲン化ベンジル、好ましくはヨウ化メチルを用いたメチオニン由来のアミドＩＶ（Ｙ＝ＳＭｅ）の活性化によって生じる、スルホニウム塩を表す（Ｙ＝Ｓ+（Ｍｅ）Ｒ13、式中、Ｒ13は、Ｃ1〜6アルキル、ベンジルまたは置換ベンジルであり、メチルが最も好ましい）。たとえばFreidinger et al.、J. Org. Chem.、1982、47、10を参照されたい。
【０１９６】
環化は、窒素またはアルゴン（好ましくは窒素）などの不活性雰囲気下、溶媒中で、化合物ＩＶまたはその塩を、塩基と、非プロトン性溶媒の存在で接触させることによって実施する。そのような塩基は、たとえば、それだけには限定されないが、炭酸セシウム、炭酸水素セシウム、炭酸カリウム、ｔｅｒｔ−酪酸ナトリウム、またはナトリウムヘキサメチルジシラジド、特に炭酸セシウムであり得る。非プロトン性溶媒には、たとえば、それだけには限定されないが、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、ＤＭＡ、Ｎ−メチルピロリジノン（ＮＭＰ）、およびスルホラン、好ましくはＤＭＳＯおよび／またはＤＭＦが含まれる。
【０１９７】
ＲaおよびＲbが、独立してＣ1〜6アルコキシであるか、または、ＲaおよびＲbそれらが付着している原子と一緒に合わさって環状もしくは非環状アセタールもしくはチオアセタールを形成する場合は、アセタール基を当分野で周知の方法に従った脱保護によって除去して、カルボニルを形成する。アセタールでは、脱保護は加水分解によって実施してよく、好ましくはアセトン、ブタノン、アセトニトリルおよびイソプロパノールなどの溶媒、またはその水溶液中で実施し、好ましくはアセトン水溶液中で実施する。前記アセタール脱保護がプロトン酸、たとえば硫酸、トルエンスルホン酸、硝酸、メタンスルホン酸、臭化水素酸または塩酸を必要とする場合は、塩酸が最も好ましい。
【化４７】
2009544758.tif 000050
【０１９８】
化合物ＶＩは、（ａ）アミンＮＨ（Ｒ8）（Ｒ9）および脱水剤を、式Ｖの溶液に、非プロトン性溶媒中で加え、−２０°〜＋５０℃の温度で混合して、式Ｖａのイミン／エナミンを形成する工程と；（ｂ）式Ｖａのイミン／エナミンの溶液を白金触媒、好ましくは硫黄などの脱活性化剤を含むもの、好ましくは５％のＰｔ／Ｃ／Ｓで、一定圧力の水素ガス下で処理する工程とによる２つの工程で、式Ｖの化合物を還元性アミノ化することによって調製する。アミン置換基Ｒ8およびＲ9は、独立して、水素およびＣ1〜6アルキルから選択される。式ＮＨ（Ｒ8）（Ｒ9）のアミンは、好ましくはＮ−メチル−Ｎ−イソプロピルアミンである。脱水剤は、それだけには限定されないが、チタン試薬が含まれるルイス酸／ブレンステッド酸脱水促進剤、好ましくは四塩化チタンもしくはチタンテトライソプロポキシドまたはその混合物である（特にチタンテトライソプロポキシド）。たとえば、R. Mattson et al.、J. Org. Chem.、1990、55、2552〜2554を参照されたい。非プロトン性溶媒は、それだけには限定されないが、ジクロロエタン、ジクロロメタン、アセトニトリル、ＤＭＳＯ、ＤＭＦ、およびＮ−メチル−ピロリジノン（好ましくはジクロロメタン）などの溶媒から選択され得る。好ましくは、中間体イミン／エナミンＶａのジクロロメタン中の溶液を、１５〜３５ｐｓｉｇの圧力の水素ガスおよび化合物Ｖに対して約０．５〜５０％（ｗｔ／ｗｔ）の５％のＰｔ／Ｓ／Ｃで処理する。最も好ましい範囲は５〜１０％（ｗｔ／ｗｔ）である。
【化４８】
2009544758.tif 000051
【０１９９】
式ＶＩの化合物のエステルを加水分解して、式ＶＩＩの対応する酸またはその塩を得る。加水分解を、当分野で一般的に知られている方法を用いた塩基加水分解によって、または酸水溶液を用いて高温で行って、式ＶＩＩの対応するγ−アミノ酸が得られ得る。酸加水分解が最も好ましい。約４０℃〜約１００℃の温度範囲（約５０℃〜約７０℃の温度範囲が最も好ましい）。酸は、それだけには限定されないが、硫酸、トルエンスルホン酸、硝酸、メタンスルホン酸、臭化水素酸または塩酸から選択される。塩酸が最も好ましい。所望により、式ＶＩＩの化合物をそのカルボン酸塩に変換し得る。好ましくは、ＶＩＩをそのナトリウム塩に変換する。
【化４９】
2009544758.tif 000052
【０２００】
式ＶＩＩＩのカルバメートは、式ＶＩＩのγ−アミノ酸を、式ＶＩＩａを有するイソシアネートへと変換し；イソシアネートを式Ｒ15ＯＨのアルコールと反応させて式ＶＩＩＩのカルバメートを得ることによって調製する。変数Ｒ15は、カルバメートが、標準の加水分解または水素化分解条件下で除去可能なアミン保護基を形成するように選択する。そのようなアミン保護基は、好ましくは、Ｎ−ＣＯ2−ｔｅｒｔ−ブチル（Ｒ15＝ｔｅｒｔ−ブチルから）、またはＮ−ＣＯ2−ベンジル（Ｒ15＝ベンジルから）、またはＮ−ＣＯ2−置換ベンジル（Ｒ15＝置換ベンジルから）である。好ましいアルコールはｔｅｒｔ−ブチルアルコールである。
【０２０１】
ＶＩＩからイソシアネートＶＩＩａへの変換は、いくつかの方法、すなわち、クルチウス、ホフマン、またはシュミット−ロッセン転位のうちの１つによって実施し得る。好ましくは、クルチウス転位は、γ−アミノ酸ＶＩＩ（またはその塩）をジフェニルホスホリルアジドと、アルコール系溶媒（好ましくはｔｅｒｔ−ブチルアルコール）、好ましくはそれだけには限定されないがトルエンを含むもの、または他の適切な非プロトン性共溶媒中、イソシアネートへの熱転位の始動点より高い温度で（好ましくは５０℃以上）で、接触させることによって行う。
【化５０】
2009544758.tif 000053
【０２０２】
式ＩＸの化合物は、式ＶＩＩＩの化合物中のカルバメート部分を脱保護し、次いで遊離アミンを式Ｒ10Ｃ（Ｏ）Ｗの試薬［式中、ＷはハロゲンまたはＲ10Ｃ（Ｏ）である］でアシル化して、式ＩＸの化合物を得ることによって調製する。カルバメート脱保護は、当分野で一般的に知られている方法によって行う（たとえば、Ｒ10＝ｔｅｒｔ−ブチルには、酸の脱保護は、硫酸、トルエンスルホン酸、硝酸、メタンスルホン酸、臭化水素酸または塩酸を用いて行うことができ、メタンスルホン酸が最も好ましい）。その後、塩基（好ましくはトリエチルアミン）を加え、遊離アミンを式Ｒ10Ｃ（Ｏ）Ｗの化合物［式中、ＷはハロゲンまたはＲ10Ｃ（Ｏ）である］と接触させて、構造ＩＸの化合物を得る。
【化５１】
2009544758.tif 000054
【０２０３】
式ＩＸの化合物の代替調製方法は、アシル化剤Ｒ10aＣ（Ｏ）Ｗ［式中、ＷはＲ10aＣ（Ｏ）である］を、その対応する酸（Ｗ＝水素）の存在下で、所望によりインサイツで添加することによる、中間体イソシアネートＶＩＩａの直接のアシル化からなる（上記スキーム５を参照）。好ましくは、アシル化は、イソシアネートを酢酸および無水酢酸の混合物（Ｒ10aがメチルであり、Ｗが水素である）内に導入して式ＶＩＩａのイソシアネートにして、式ＩＸの化合物を得ることによって実施する。
【化５２】
2009544758.tif 000055
【０２０４】
式ＩＸの化合物中のＲ2基を脱保護によって除去して式Ｘの化合物を提供する。好ましくは、Ｒ2がＣｂｚである場合、脱保護は、パラジウム触媒、好ましくは１０％のＰｄ／Ｃの存在下における水素化によって達成する。
【化５３】
2009544758.tif 000056
【０２０５】
式Ｉの化合物は、式Ｘの脱保護されたアミンを式：
【化５４】
2009544758.tif 000057
の化合物とカップリングさせて、式Ｉの化合物を得ることによって調製する。そのようなカップリング反応およびそれらを実施する条件は、当業者に知られている。ＨＥＴとは、Ｎ、ＯまたはＳから選択される１つまたは複数のヘテロ原子（好ましくは１〜３個のヘテロ原子、特に１〜２個の窒素原子）を有する、適宜置換された３〜１４員環のヘテロ環またはヘテロアリール環である。好ましいヘテロアリール基には、それだけには限定されないが、６−置換のキナゾリン−４−イル、より好ましくは６−トリフルオロメチル−キナゾリン−４−イルが含まれる。本明細書中で使用する脱離基（ＬＧ）には、それだけには限定されないが、ハロゲン、Ｃ1〜6アルコキシ、メシレート、ノナフレート、スルホネート、トシレートおよびトリフレートなどの基が含まれる。好ましくは、ＬＧは、ハロゲンまたはＯＳＯ2Ｒ16から選択される脱離基であり、Ｒ16は、すべてハロゲン、ＣＦ3およびＣ1〜6アルキルから選択される１〜３個の基によって適宜置換されている、フェニル、Ｎ、Ｓ、もしくはＯから選択される１つもしくは複数の原子を有する５〜７員環のヘテロアリール、Ｃ1〜6アルキル、または３〜７員環のシクロアルキルである。好ましい脱離基は、ハロゲン、特にクロライドである。
【０２０６】
本発明の方法では、出発物質は、市販されているか、または当業者が容易に調製することができる。溶媒、温度、圧力、所望の基を有する出発物質、および他の反応条件は、必要に応じて当業者によって選択され得る。方法は、商業用製造施設などにおいて、より大量の式Ｉの化合物を調製するためにスケールアップすることができる。
【０２０７】
実施例
以下の実施例は、本発明の化合物および出発物質の態様を説明するものであり、特許請求の範囲を限定するよう意図されてはいない。
【０２０８】
必要に応じて、反応は、乾燥窒素（またはアルゴン）の雰囲気下で行われた。無水反応について、ＥＭからのＤｒｉ−Ｓｏｌｖ溶媒が用いられた。他の反応について、試薬用またはＨＰＬＣ用溶媒を利用した。特に断りがなければ、すべての市販品として入手した試薬をそのまま用いた。
【０２０９】
島津 ＨＰＬＣ／Ｗａｔｅｒｓ ＺＱ シングル四重極質量分析計ハイブリッドシステムを用いて、ＬＣ／ＭＳ測定値を得た。興味深いピークについてのデータは、ポジティブモードエレクトロスプレーイオン化から報告される。典型的には、ブルカーまたはＪＥＯＬ４００ＭＨｚおよび５００ＭＨｚ装置において、示された溶媒中で、ＮＭＲ（核磁気共鳴）スペクトルを得た。すべての化学シフトは、内部標準として溶媒共鳴値を用いてテトラメチルシランからのｐｐｍで報告される。1Ｈ−ＮＭＲスペクトルデータは、典型的には、以下のように報告される：化学シフト、多重度（ｓ＝一重線、ｂｒ ｓ＝幅広い一重線、ｄ＝二重線、ｄｄ＝二重線の二重線、ｔ＝三重線、ｑ＝四重線、ｓｅｐ＝七重線、ｍ＝多重線、ａｐｐ＝見かけ上(apparent)）、カップリング定数（Ｈｚ）、および積分。
【０２１０】
当業者は、ここで利用される標準的な略語を認識している。参照しやすいように、略語には、必ずしもこれらに限らないが、以下が含まれる：
ｓａｔ．＝飽和、ＨＰＬＣ＝高速液体クロマトグラフィ、ＡＰ＝面積百分率、ＫＦ＝カール・フィッシャー、ＲＴ＝室温（特に断りがなければ、室温は約２２℃の温度である）、ｍｍｏｌ＝ミリモル、ＨＲＭＳ＝高分解能質量分析、ＴＢＴＵ＝Ｏ−ベンゾトリアゾール−２−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウム テトラフルオロホウ酸塩、ＭＴＢＥ＝ＴＢＭＥ＝ｔｅｒｔ−ブチルメチルエーテル、ＥＤＡＣ＝Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド塩酸塩、ＥＤＣ＝Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチルカルボジイミド、ＴＥＡ＝トリエチルアミン、ＤＰＰＡ＝ジフェニルホスホリルアジド、ＩＰＡ＝イソプロピルアルコール、ＴＦＡ＝トリフルオロ酢酸、ＤＣＭ＝ジクロロメタン、ＴＨＦ＝テトラヒドロフラン、ＤＭＦ＝Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、ＢＯＰ＝ヘキサフルオロリン酸（ベンゾトリアゾール−１−イルオキシ）トリス（ジメチルアミノ）ホスホニウム、ＥｔＯＡｃ＝酢酸エチル、ＤＭＳＯ＝ジメチルスルホキシド、℃＝摂氏度、ｅｑ＝当量、ｇ＝グラム、ｍｇ＝ミリグラム、ｍＬ（もしくはｍｌ）＝ミリリットル、ｈ＝時間、Ｍ＝モル濃度(molar)、Ｎ＝規定、ｍｉｎ＝分、ＭＨｚ＝メガヘルツ、ｔｌｃ＝薄層クロマトグラフィ、ｖ／ｖ＝容積対容積の比。
【０２１１】
「α」、「β」、「Ｒ」および「Ｓ」は、当業者によく知られている立体化学の記号表示である。
【０２１２】
実施例１
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド
【化５５】
2009544758.tif 000058
実施例１、段階１：（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−７−オキソ−６−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−６−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（８９．６ｇ、０．２４ｍｏｌ、Ｐ．Ｈ．カーターらのＰＣＴ出願 ＷＯ２００５／０２１５００を参照）を酢酸エチル（１．５Ｌ）に溶解し、生じた溶液を飽和ＮａＨＣＯ3（２×０．４５Ｌ）および飽和ＮａＣｌ（１×０．４５Ｌ）で洗浄した。溶液を乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、次いで３Ｌの３つ口丸底フラスコの中に直接濾過した。溶液を直接の窒素注入でパージし、次いで窒素雰囲気下で１０％ Ｐｄ／Ｃ（１３．６５ｇ）を入れた。フラスコから気体を抜き、水素を再び入れ(back-filled)；これをさらに２回繰り返した。水素を溶液に通して３０分間バブリングし、次いで反応液をＨ2（１ａｔｍ）下で１８時間攪拌した。フラスコから気体を抜き、窒素を再び入れ、新たな触媒（６ｇの１０％ Ｐｄ／Ｃ）を入れ。水素を溶液に通して３０分間バブリングし、次いで反応液をＨ2（１ａｔｍ）下で１８時間攪拌した。フラスコから気体を抜き、窒素を再び入れた。セライトを通して混合物を濾過し；次いでフィルターパッドを酢酸エチルで洗浄した。濾液（〜１．６Ｌ ＥｔＯＡｃの容積）をアセトニトリル（０．３Ｌ）で希釈し、Ｌ−Ｎ−Ｃｂｚ−メチオニン（６８ｇ、０．２４ｍｏｌ）、ＴＢＴＵ（７７ｇ、０．２４ｍｏｌ）、およびＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４２ｍＬ、０．２４ｍｏｌ）を連続して入れた。反応液を室温で４時間攪拌し、その間に、それは懸濁液から透明な溶液に変化した。反応液を飽和ＮＨ4Ｃｌ（０．７５Ｌ）および水（０．１５Ｌ）の添加でクエンチし；混合物をＥｔＯＡｃ（０．７５Ｌ）でさらに希釈した。相を混合し、分離し、有機相を飽和Ｎａ2ＣＯ3（２×０．９Ｌ）および飽和ＮａＣｌ（１×０．７５Ｌ）で洗浄した。溶液を乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、減圧濃縮して、（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−２−（（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−４−（メチルチオ）ブタンアミド）−７−オキソ−６−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−６−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチルを油として得て、それをさらに精製することなく次の段階に用いた。主要なピークについてのＬＣ／ＭＳ： [M-Boc+H]+ = 406.3; [M+Na]+ = 528.3.  1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH):  δ 7.36 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 4.32 (m, 1H), 4.2 (m, 1H), 4.0 (m, 1H), 2.5 - 2.7 (m, 3H), 2.25 (m, 1H), 2.11 (s, 3H), 2.05 (m, 4H), 1.9 (m, 1H), 1.7 (m, 2H), 1.54 (s, 9H).  ＥｔＯＡｃ[1.26 (t), 2.03 (s), 4.12 (q)]およびＮ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトラメチル尿素[2.83 (s)]もまた存在している。
【０２１３】
実施例１、段階２：（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−２−（（Ｓ）−２−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−４−（メチルチオ）ブタンアミド）−７−オキソ−６−アザ−ビシクロ［３．２．１］オクタン−６−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（推定０．２４ｍｏｌ；先の方法を参照）の試料をヨードメタン（１，２５０ｇ）に溶解し、室温で４８時間攪拌した。反応液を減圧濃縮した。残渣をジクロロメタンに溶解し、減圧濃縮した。これをさらに２回繰り返した。生じたスラッジをジクロロメタン（０．４Ｌ）に溶解し、ＭＴＢＥ（４．０Ｌ）の速く攪拌した溶液に注いだ。生じた黄色固形物を吸引濾過で集め、高真空下で乾燥して、スルホニウム塩（１７９ｇ）を得た。この物質をさらに精製することなく次の段階に用いた。主要なピークについてのＬＣ／ＭＳ：[M-Me2S+H]+ = 458.4; [M]+ = 520.4.  1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH):  δ 7.35 (m, 5H), 5.09 (s, 2H), 4.33 (m, 1H), 4.28 (m, 1H), 3.98 (m, 1H), 3.3 - 3.45 (m, 2H), 2.97 (s, 3H), 2.94 (s, 3H), 2.78 (m, 1H), 2.0 - 2.3 (m, 4H), 1.7 (m, 2H), 1.52 (s, 9H).  ＭＴＢＥ[1.18 (s), 3.2 (s)]および微量のＮ，Ｎ，Ｎ，Ｎ−テトラメチル尿素[2.81 (s)]もまた存在している。
【０２１４】
実施例１、段階３：先の段階からのすべてのスルホニウム塩（推定０．２４ｍｏｌ）をＤＭＳＯ（２．０Ｌ）に溶解した。生じた溶液を窒素下、室温で攪拌し、炭酸セシウム（２１６ｇ）を何回かに分けて入れた。懸濁液を室温で３時間攪拌し、次いで濾過して、固形物を除去した。溶液を部分（〜０．２２Ｌ）に分割し、以下のようにワークアップした：反応混合物（〜０．２２Ｌ）を酢酸エチル（１．５Ｌ）で希釈し、水（３×０．５Ｌ）および食塩水（１×０．３Ｌ）で連続して洗浄した。有機相を乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、減圧濃縮した。目的の（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−オキソピロリジン−１−イル）−７−オキソ−６−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−６−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（９０．８ｇ、８３％）を、不純物のテトラメチル尿素を含まない微結晶性の泡として得た。主要なピークについてのＬＣ／ＭＳ：[M-Boc+H]+ = 358.4; [M+Na]+ = 480.4.  1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH):  δ 7.35 (m, 5H), 5.12 (s, 2H), 4.35 (m, 2H), 4.2 (m, 1H), 3.6 (m, 1H), 3.3 (m, 1H), 2.64 (m, 1H), 2.28 - 2.42 (m, 2H), 2.15 (m, 1H), 1.7 - 2.0 (m, 5H), 1.55 (s, 9H).  
必要に応じて、ＭＴＢＥ（容積１）に溶解し、ヘプタン（容積３．３）に加え、生じた沈殿を集めることによって、この物質を固形物として単離してもよい。
【０２１５】
実施例１、段階４：（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−オキソピロリジン−１−イル）−７−オキソ−６−アザビシクロ［３．２．１］オクタン−６−カルボン酸ｔｅｒｔ−ブチル（１０８ｇ、０．２３６ｍｏｌ）のＴＨＦ攪拌溶液（１Ｌ）に、水酸化リチウム一水和物（２１．７４ｇ、０．５１９ｍｏｌ）を入れた。温度が２０℃を超えないように、水（０．３Ｌ）をゆっくりと加えた。反応液を室温で終夜攪拌し、揮発物を減圧留去した。１Ｎ ＨＣｌ（４５０ｍＬ）およびＮａＨ2ＰＯ4の添加によって、ｐＨを〜４に調整した。生じた白色沈殿を濾過によって集め、水（２×１Ｌ）で洗浄した。固形物をジクロロメタン（１．５Ｌ）および水（〜１Ｌ）に溶解した。有機層を乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、減圧濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（０．７Ｌ）に溶解し、生じた溶液を１時間加熱還流した。室温に冷却した後、固形物を分離し、濾過によって集めた。イソプロパノール中で再結晶することによって、これらの固形物を精製して、目的の（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−オキソピロリジン−１−イル）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキサンカルボン酸を白色固形物として得た（１０４．５ｇ、収率９３％）。主要なピークについてのＬＣ／ＭＳ：[M-tBu+H]+ = 420.2; [M-Boc+H]+ = 376.2; [M+H]+ = 476.2.  1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH):  δ 7.35 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 4.35 (m, 2H), 3.71 (m, 1H), 3.45 - 3.6 (m, 2H), 2.99 (m, 1H), 2.41 (m, 1H), 2.15 (m, 1H), 2.0 (m, 2H), 1.6 - 1.9 (m, 4H), 1.46 (s, 9H).
【０２１６】
実施例１、段階５：３Ｌの丸底フラスコに、（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−オキソピロリジン−１−イル）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキサンカルボン酸（７５．５ｇ、０．１５８ｍｏｌ）、ＥＤＣ・ＨＣｌ（３３．５ｇ、０．１７５ｍｏｌ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール（２３．６ｇ、０．１７５ｍｏｌ）、およびジクロロメタン（１Ｌ）を入れた。反応液を室温で２時間攪拌し、その間に、それは白色懸濁液から透明な溶液に変化した。ｐＨが強い塩基性（紙）になるまで、アンモニア（気体）を溶液中にバブリングし、反応液を１０分間攪拌し；このアンモニアの添加を繰り返し、反応液をさらに１０分間攪拌した。水を加えた。有機相を飽和ＮａＨＣＯ3、ＮａＨ2ＰＯ4、および食塩水で洗浄し、次いで減圧濃縮した。残渣をアセトニトリル（０．５Ｌ）でスラリーにし、次いで濃縮して、（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−オキソピロリジン−１−イル）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキサンカルボキサミドを白色固形物として得て（７５．９ｇ、〜１００％）、それをさらに精製することなく次の段階に用いた。主要なピークについてのＬＣ／ＭＳ：[M-Boc+H]+ = 375.3; [M+H]+ = 475.4; [M-tBu+H]+ = 419.3.  1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH):  δ 7.35 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 4.25 (m, 2H), 3.70 (m, 1H), 3.6 (m, 1H), 3.45 (m, 1H), 2.91 (m, 1H), 2.38 (m, 1H), 2.12 (m, 1H), 1.9 - 2.05 (m, 2H), 1.65 - 1.9 (m, 4H), 1.46 (s, 9H). 
【０２１７】
実施例１、段階６：反応を３つの均等量に分けて行い、水によるワークアップ(aqueous workup)のために合わせた。５Ｌの３つ口丸底フラスコに、（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−オキソピロリジン−１−イル）−５−（ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）シクロヘキサンカルボキサミド（２５．３ｇ、５３ｍｍｏｌ）、アセトニトリル（１．９Ｌ）、および２．６Ｌの水／氷を入れた。混合物を攪拌し、０℃に冷却した。ヨードベンゼンジアセテート（２５．７７ｇ、８０ｍｍｏｌ）を加え、反応液を２時間攪拌し；別のヨードベンゼンジアセテート（０．５当量）を加えた。反応液を９時間攪拌した（反応温度＜１０℃）。混合物にＮ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（８当量）および無水酢酸（２当量）を入れた。次の３０分の間、反応が進行して完了するまで（ＨＰＬＣ）、Ｎ，Ｎ−ジイソプロピルエチルアミン（４当量）および無水酢酸（２当量）を１０分ごとに加えた。アセトニトリルを減圧留去し；少しの固形物を残渣から分離し、これを濾過によって集めた。残存する残渣をジクロロメタン（３Ｌ、次いで１Ｌ）で抽出した。有機相を水、飽和ＮａＨＣＯ3、および食塩水で連続して洗浄した。集めた固形物を有機相に加え、並びに活性炭（１５ｇ）を加えた。混合物を４０℃で３０分間攪拌し、次いで濾過し、減圧濃縮した。残渣をＥｔＯＡｃ（１Ｌ）に溶解し、生じた溶液を７５℃で１時間攪拌し、次いで室温に冷却した。固形物を分離し、濾過によって集めた。この固形物を再結晶でさらに精製し：それを最初にＣＨ2Ｃｌ2（０．５Ｌ）に溶解し、次いで減圧濃縮し、次いでＥｔＯＡｃ（１Ｌ）から再結晶し；これを３回繰り返した。上記の母液から得た固形物を、同じ方法を用いて３回再結晶した。固形物を合わせて、アセトニトリル（０．７Ｌ）からさらに２回再結晶して、６６ｇ（８４％）の（１Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−アセトアミド−４−（（Ｓ）−３−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−オキソピロリジン−１−イル）シクロヘキシルカルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルを得た（ＨＰＬＣにより純度＞９９．５％）。主要なピークについてのＬＣ／ＭＳ：[M+H]+ = 489.4; [M-tBu+H]+ = 433.3.  1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH):  δ 7.3 - 7.4 (m, 5H), 5.11 (s, 2H), 4.35 (m, 1H), 4.15 (m, 1H), 4.04 (m, 1H), 3.8 (m, 1H), 3.6 (m, 2H), 2.44 (m, 1H), 2.12 (m, 1H), 1.87 - 2.05 (m, 4H), 1.87 (s, 3H), 1.55 - 1.7 (m, 2H), 1.46 (s, 9H).
図１に示されるように、ホフマン転位の立体化学的な適合度(stereochemical fidelity)を、この化合物のＸ線結晶構造解析を通して確認した。
【０２１８】
実施例１、工程７：ジクロロメタン（２１６ｍＬ）中のｔｅｒｔ−ブチル（１Ｒ，３Ｒ，４Ｓ）−３−アセトアミド−４−（（Ｓ）−３−（ベンジルオキシカルボニルアミノ）−２−オキソピロリジン−１−イル）シクロヘキシルカルバメート（６６ｇ、０．１３５ｍｏｌ）の撹拌溶液に、トリフルオロ酢酸（２１６ｍＬ）を入れた。反応を２時間、室温で撹拌し、真空下で濃縮した。残渣をメタノールに溶かし、生じた溶液を真空下で濃縮した；これを１回繰り返した。ベンジル（Ｓ）−１−（（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−２−アセトアミド−４−アミノシクロヘキシル）−２−オキソピロリジン−３−イルカルバメートが油状物として得られ、以下の工程８で直接使用した。LC/MS 実測値 [M + H]+ = 389.4.  1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH):  δ 7.3 - 7.4 (m, 5H), 5.12 (s, 2H), 4.41 (br. s, 1H), 4.15 (m, 1H), 4.00 (t, J = 9.3 Hz, 1H), 3.81 (t, J = 9.1 Hz, 1H), 3.65 (q, J = 8.4 Hz, 1H), 3.3 - 3.4 (m, 1H), 2.45 (m, 1H), 1.95 - 2.24 (m, 5H), 2.00 (s, 3H), 1.6 - 1.8 (m, 2H).
【０２１９】
実施例１、工程８：メタノール（６７５ｍＬ）中のベンジル（Ｓ）−１−（（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−２−アセトアミド−４−アミノシクロヘキシル）−２−オキソピロリジン−３−イルカルバメート（約０．１３５ｍｏｌ）の撹拌溶液に、アセトン（３７．８ｇ、４当量）、酢酸ナトリウム（３３．２ｇ、３当量）、およびシアノボロ水素化ナトリウム（１６．９ｇ、２当量）を逐次的に入れた。混合物を室温で６時間撹拌し、濾過した。濾液をジクロロメタン（１Ｌ）に溶かし；この溶液を１ＮのＮａＯＨ（１Ｌ）で洗浄した。濾過中に収集された固形物を１ＮのＮａＯＨ（１Ｌ）に０℃で溶かし、その後、ジクロロメタン（１Ｌ）で抽出した。有機抽出液を合わせ、ＨＣｌ水溶液（２００ｍＬの１ＮのＨＣｌ＋８００ｍＬの水）で抽出した。水相を飽和ＮａＨＣＯ3（５００ｍＬ）、その後、１ＮのＮａＯＨ（１００ｍＬ）で、ｐＨ１１まで塩基性化した。水相をジクロロメタン（２Ｌ）で抽出した。有機抽出液を合わせ、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、真空下で濃縮して、ベンジル（Ｓ）−１−（（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−２−アセトアミド−４−（イソプロピルアミノ）シクロヘキシル）−２−オキソピロリジン−３−イルカルバメートが油状物として得られた。LC/MS 実測値 [M + H]+ = 431.45.  1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH):  δ 7.3 - 7.4 (m, 5H), 5.12 (s, 2H), 4.31 (m, 1H), 4.24 (t, J = 9.4 Hz, 1H), 4.11 (m, 1H), 3.61 (t, J = 9.1 Hz, 1H), 3.52 (q, J = 8.6 Hz, 1H), 3.04 (br. s, 1H), 2.96 (sep, J = 6.3 Hz, 1H), 2.40 (m, 1H), 2.15 (m, 1H), 1.92 (s, 3H), 1.7 - 1.9 (m, 5H), 1.65 (m, 1H), 1.12 (ほぼ dd, J = 6.3, 1.1 Hz, 6H).
【０２２０】
実施例１、工程９（以下の代替工程９を参照）：ジクロロメタン（６００ｍＬ）中のベンジル（Ｓ）−１−（（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−２−アセトアミド−４−（イソプロピルアミノ）シクロヘキシル）−２−オキソピロリジン−３−イルカルバメート（約１１５ｍｍｏｌ）の撹拌溶液を０℃まで冷却し、ホルムアルデヒド（１８．６ｇ、３７ｗｔ％の溶液）、トリエチルアミン（２３ｍＬ）、およびトリアセトキシ水素化ホウ素ナトリウム（２８．７ｇ）を逐次的に入れた。混合物を室温で３０分間撹拌し、ジクロロメタンで希釈した（１．２Ｌまで）。この溶液を５００ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ3＋ＮａＯＨ（飽和ＮａＨＣＯ3、１ＮのＮａＯＨでｐＨ１１まで）で３回洗浄した。有機層をＨＣｌ水溶液（２００ｍＬの１ＮのＨＣｌ＋６００ｍＬの水）で抽出した。水相を飽和ＮａＨＣＯ3（５００ｍＬ）、その後、１ＮのＮａＯＨ（１００ｍＬ）でｐＨ１１まで塩基性化した。水相をジクロロメタン（１．２Ｌ）で抽出した。有機抽出液を合わせ、乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、真空下で濃縮して、ベンジル（Ｓ）−１−（（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−２−アセトアミド−４−（イソプロピル（メチル）アミノ）シクロヘキシル）−２−オキソピロリジン−３−イルカルバメートが油状物として得られ、これを以下の工程１０で直接使用した。LC/MS 実測値 [M + H]+ = 445.4.  1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH):  δ 7.3 - 7.4 (m, 5H), 5.12 (s, 2H), 4.33 (br s, 1H), 4.25 (t, J = 9.2 Hz, 1H), 4.11 (br s, 1H), 3.5 - 3.6 (m, 2H), 2.77 (v br s, 2 H), 2.41 (m, 1H), 2.26 (s, 3H), 2.0 - 2.1 (m, 2H), 1.92 (s, 3H), 1.7 - 1.9 (m, 5H), 1.10 (ほぼ dd, J = 17, 6.4 Hz, 6H).
【０２２１】
実施例１、工程１０：メタノール（６００ｍＬ）中のベンジル（Ｓ）−１−（（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−２−アセトアミド−４−（イソプロピル（メチル）アミノ）−シクロヘキシル）−２−オキソピロリジン−３−イルカルバメート（約０．１１５ｍｏｌ）の溶液に、１０％のＰｄ／Ｃ（６ｇの５０％の湿触媒）を加えた。フラスコを排気し、水素で埋め戻した。混合物を１ａｔｍのＨ2下で２時間撹拌し、触媒を、セライトを通す濾過によって除去した。濾液を真空下で濃縮して、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−アミノ−２−オキソピロリジン−１−イル）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）シクロヘキシル）アセトアミドが油状物として提供された、これをさらに精製せずに次の工程に用いた。LC/MS 実測値 [M + H]+ = 311.47.  1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH):  δ 4.39 (br s, 1H), 4.00 (m, 1H), 3.3 - 3.5 (m, 4H), 2.73 (m, 1H), 2.38 (m, 1H), 2.25 (s, 3H), 2.0 - 2.2 (m, 3H), 1.94 (s, 3H), 1.6 - 1.75 (m, 4H), 1.07 (ほぼ dd, J = 21, 6.4 Hz, 6H).
【０２２２】
実施例１、工程１１：イソプロパノール（６００ｍＬ）中のＮ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−アミノ−２−オキソピロリジン−１−イル）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）シクロヘキシル）アセトアミド（約３５ｇ、０．１１５ｍｏｌ）の溶液に、４−クロロ−６−（トリフルオロメチル）キナゾリン（３２ｇ、０．１３８ｍｏｌ、１．２当量、Ｐ．Ｈ．Ｃａｒｔｅｒ他、ＰＣＴ出願国際公開公報ＷＯ２００５／０２１５００号を参照）を加えた。混合物を室温で終夜撹拌した後、トリエチルアミン（４６ｇ、０．４６ｍｏｌ、４当量）を入れた。混合物を６０℃で１０時間撹拌した。溶媒を減圧下で除去して、油状物が得られた。イソプロパノールとの共沸蒸留を２回行った。残渣をジクロロメタン（６００ｍＬ）に溶かし、水（２５０ｍＬ、４当量の酢酸を含む）で抽出した。ジクロロメタン（６００ｍＬ）を合わせた水性洗浄液に加え、混合物を０℃まで冷却した。ｐＨが１１に達するまで、撹拌しながらＮａＯＨ水溶液（５０重量％）を加えた。水層をジクロロメタンで２回（２×６００ｍＬ）抽出した。合わせた有機抽出液を乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、真空下で濃縮して、表題化合物の非晶質遊離塩基が得られた（ＨＰＬＣによって９９％の純度）。LC/MS 実測値 [M+H]+ = 507.3.  1H-NMR (400 MHz, d4-MeOH):  δ 8.82 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 8.05 (dd, J = 8.8, 1.8 Hz, 1H), 7.9 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 5.28 (t, J = 8.6 Hz, 1H), 4.58 (br s, 1H), 4.06 (m, 1H), 3.52 - 3.68 (m, 2H), 3.43 (m, 1H), 2.76 (br s, 1H), 2.55 (m, 1H), 2.28 (s, 3H), 2.1 - 2.3 (m, 3H), 2.0 (s, 3H), 2.0 (m, 1H), 1.65 - 1.8 (m, 3H), 1.09 (ほぼ dd, J = 24, 6.4 Hz, 6 H).
実施例１、代替工程９
【化５６】
2009544758.tif 000059
【０２２３】
実施例１、代替工程９ａi：ハイドロジェネーターに、エチル（７Ｒ，８Ｓ）−８−（（Ｓ）−１−フェニル−エチルアミノ）−１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカン−７−カルボキシレート４−トルエンスルホン酸塩１Ａ（１４１７ｇ、２．８モル、国際公開公報ＷＯ２００４０９８５１６号を参照、米国特許第６，８３５，８４１号と同様に調製）、エタノール（アルコール度数２００、１１．４Ｌ）、および１０％のＰｄ／Ｃ触媒（５０％の湿、２８４ｇ）を入れた。混合物を窒素で不活性化し、その後、水素ガス（４５ｐｓｉｇ）で加圧し、出発物質が消費されるまで約４０℃で激しく撹拌した（ＨＰＬＣ）。懸濁液を冷却し、窒素ガスでパージし、不活性化されている間に触媒を濾過によって除去した。消費された触媒をエタノール（４．３Ｌ）で洗浄した。濾液および洗浄液を合わせ、バッチを４０°〜６０℃に維持しながら２〜３Ｌの容量まで真空下で濃縮した。酢酸イソプロピル（５Ｌ）を入れ、ほとんどのエタノールが除去され（＜０．５％）、残留水分含有率が＜１，０００ｐｐｍとなるまで、混合物を約２Ｌの容量まで濃縮した。酢酸イソプロピルを加えることによってバッチの容量を約７．５Ｌに調節した。混合物を透明になるまで８０℃まで加熱し、その後、６５°〜７０℃に冷却した。１の種結晶（５ｇ）を加え、バッチを５０℃まで２時間かけて冷却し、その後、２０℃まで４時間かけてさらに冷却し、約１０時間保った。生じたスラリーを濾過し、ケークを酢酸イソプロピル（２Ｌ）で洗浄した。生成物を、真空下、約３５℃で、揮発物が約１％未満に低下するまで乾燥させた（ＬＯＤ）。エチル（７Ｒ，８Ｓ）−８−アミノ−１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカン−７−カルボキシレート４−トルエンスルホン酸塩１が白色の結晶固形物として得られた（９３６ｇ、８３％の収率；ＨＰＬＣ純度：９９．８％）。1H-NMR: (300MHz, CDCl3) 8.14-7.89 (brs, 3H), 7.75 (d, J 9.0Hz, 2H), 7.15 (d, J 8.0Hz, 2H), 4.22-4.04 (m, 2H), 4.01-3.77 (m, 4H), 3.55-3.43 (m, 1H,), 3.20-3.13 (m, 1H), 2.40-2.27 (m, 4H), 2.21-1.94 (m, 2H), 1.81-1.51 (m, 3H), 1.23 (t, J 7.0Hz, 3H);
ＨＰＬＣ：Ｗａｔｅｒｓ  Ｘｔｅｒｒａ  ＭＳ  Ｃ１８  ４．６ｍｍ×１５０ｍｍの内径、３．５μｍの粒子径、０．０５％のＮＨ４ＯＨ（５％のＡＣＮ、９５％のＨ2Ｏ、溶媒Ａ）から０．０５％のＮＨ4ＯＨ（９５％のＡＣＮ、５％のＨ2Ｏ、溶媒Ｂ）まで、１０分間で５％のＢから２０％のＢまで、２５分間で９５％のＢに変更、その後、１分間で５％のＢに変更；１１．１分（アミノエステル１）。
【化５７】
2009544758.tif 000060
実施例１、代替工程９ａii：アミノエステル１（６３ｇ、０．１６Ｍ、１当量；既知の化合物の還元性脱保護の生成物（たとえば、Ｒ．Ｊ．Ｃｈｅｒｎｅｙ、国際公開公報ＷＯ２００４／０９８５１６号ならびにＧ．Ｖ．ＤｅｌｕｃｃａおよびＳ．Ｓ．Ｋｏ、国際公開公報ＷＯ２００４／１１０９９３号を参照）を丸底フラスコ内に入れ、ＭｅＣＮ（５００ｍＬ）を加えた。その後、ＥＤＡＣ（３３．１ｇ、０．１７Ｍ、１．１当量）、ＨＯＢｔ・Ｈ２Ｏ（２１．２ｇ、０．１６Ｍ、１．０当量）およびＮ−Ｃｂｚ−Ｌ−メチオニン（４６．７ｇ、０．１７Ｍ、１．０５当量）を加え、次いでＴＥＡ（４８．０ｍＬ、０．３５Ｍ、２．２当量）を加えた。３８℃までの発熱が観察された。反応マスを室温で撹拌した。３０分後、ＨＰＬＣにより完全な変換が示された。反応マスをＥｔＯＡｃ（２．５Ｌ）で希釈し、ＫＨＣＯ3（４×５００ｍＬ、２０ｗｔ％の水溶液）およびブライン（５００ｍＬ）で洗浄した。有機相を分離し、ＭｇＳＯ4で乾燥させ、濃縮した。残渣をＴＢＭＥに溶かし、再度濃縮して、エチル（７Ｒ，８Ｓ）−８−｛（２Ｓ）−２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリル−アミノ｝−１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカン−７−カルボキシレート２が粘着性の半固形物として得られた（７６．２ｇ、９８％の収率、９３ＡＰ純度）。1H-NMR: (300MHz, CDCl3) δ 7.36-7.30 (m, 5H), 7.03 (d, J 9.0Hz, 1H), 5.66 (d, J 8.0Hz, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.35-4.25 (m, 2H),  4.19-4.04 (m, 2H,), 3.98-3.86 (m, 4H), 2.87-2.80 (m, 1H), 2.55-2.45 (m, 2H), 2.18 (dd, J 14.0Hz, 7.0Hz, 1H), 2.08 (s, 3H), 2.05-1.67 (m, 6H), 1.26 (t, J 7.0Hz, 3H).ＨＰＬＣ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｐｒｏ  Ｃ１８  ５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、０．０５％のＴＦＡ（２０％のＭｅＯＨ、８０％のＨ2Ｏ）から０．０５％のＴＦＡ（２０％のＭｅＯＨ、８０％のＭｅＣＮ）まで、０〜１００％の１０分間の勾配。１０．０１分（化合物２、９３．１ＡＰ）。HRMS: m/z 495.2166   [計算値: C24H35N2O7S 495.2165].
【化５８】
2009544758.tif 000061
【０２２４】
実施例１、代替工程９ｂ：メチオニンアミド２（７５．０ｇ、０．１５Ｍ）をＭｅＩ（２２５ｍＬ、３ｍＬ／ｇ）溶かした。ある程度のガス発生が見られたが、発熱はなかった。反応マスを暗所で１６．５時間撹拌した。この時間の後、濃厚な薄黄色沈殿物が形成された。その後、フラスコを２００ｍｍＨｇまで排気し、ＭｅＩの一部を除去した。残りの物質をＴＢＭＥ（５００ｍＬ）中でスラリー化し、３０分間の撹拌後、スラリーを濾過し、ケークをＴＢＭＥ（５００ｍＬ）で洗浄した。この物質のＮＭＲ分析により少量のＭｅＩが残っていたことが示された。ケークをＴＢＭＥ（５００ｍＬ）中で再度スラリー化し、濾過し、ＴＢＭＥ（５００ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥させて、［（３Ｓ）−３−ベンジルオキシカルボニルアミノ−３−｛（７Ｒ，８Ｓ）−７−エトキシカルボニル−１，４−ジ−オキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イルカルバモイル｝−プロピル］−ジメチルスルホニウムヨウ化物３が昜流動性のオフホワイト色固形物として得られた（９３．５ｇ、９７％、９９面積％の純度）。1H-NMR: (300MHz, CDCl3) δ 7.75 (d, J 9.0Hz, 1H), 7.38-7.27 (m, 5H), 6.40 (d, J 7.0Hz, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.76-4.65 (m, 1H), 4.48-4.39 (m, 1H), 4.14-3.85 (m, 6H), 3.84-7.73 (m, 1H), 3.68-3.55 (m, 1H), 3.21 (s, 3H), 3.12 (s, 3H), 2.90-2.83 (s, 1H), 2.52-1.55 (m, 8H), 1.24 (t, J 7.0Hz, 3H).ＨＰＬＣ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｐｒｏ  Ｃ１８  ５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、０．０５％のＴＦＡ（２０％のＭｅＯＨ、８０％のＨ2Ｏ）から０．０５％のＴＦＡ（２０％のＭｅＯＨ、８０％のＭｅＣＮ）まで、０〜１００％の１０分間の勾配。２．４５分（Ｉ−）、８．１４分（化合物３、４３．６ＡＰ、Ｉ-５４．６ＡＰ）。HRMS: m/z 509.2341   [計算値: C25H37N2O7S 509.2321].
【化５９】
2009544758.tif 000062
【０２２５】
実施例１、代替工程９ｃ：Ｃｓ2ＣＯ3（６１．５ｇ、０．１９Ｍ、１．５当量）を丸底フラスコ内に入れ、無水ＤＭＳＯ（２．４Ｌ）を加えた。その後、スルホニウム塩３（８０．０ｇ、０．１３Ｍ、１．０当量）を少量ずつ加えた。添加が完了した後、反応マスを暗所で２０時間撹拌した。その後、反応マスを半分に分割し、それぞれの半分を別々に後処理した。反応マスをＥｔＯＡｃ（２．０Ｌ）で希釈し、ブライン（２Ｌ）で洗浄し、有機相をブライン（５００ｍＬ）で洗浄した。その後、合わせた水層をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）で洗浄した。その後、合わせた有機相をブライン（３×７５０ｍＬ）で洗浄した。反応マスの第２の半分を同一の様式で処理し、合わせた有機物をＭｇＳＯ4で乾燥させ、濃縮して、エチル（７Ｒ，８Ｓ）−８−｛（３Ｓ）−３−ベンジルオキシカルボニルアミノ−２−オキソ−ピロリジン−１−イル｝−１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカン−７−カルボキシレート４が薄い色の油状物として得られた（５６．５ｇ、０．１３Ｍ、約１００面積％の純度）ＮＭＲ分析によって純粋。1H-NMR: (300MHz, CDCl3) δ 7.38-7.30 (m, 5H), 5.37 (br d, J 4.0Hz, 1H), 5.11 (s, 2H), 4.27-4.18 (m, 1H), 4.17-3.82 (m, 8H), 3.32 (td, J 10.0Hz, 60.0Hz, 1H), 3.23 (q, J 5.0Hz, 1H), 2.63-2.57 (m, 1H), 2.42-2.25 (m, 2H), 1.94-1.68 (m, 5H), 1.25 (t, J 7.0Hz, 3H).ＨＰＬＣ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｐｒｏ  Ｃ１８  ５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、０．０５％のＴＦＡ（２０％のＭｅＯＨ、８０％のＨ2Ｏ）から０．０５％のＴＦＡ（２０％のＭｅＯＨ、８０％のＭｅＣＮ）まで、０〜１００％の１０分間の勾配。８．９９分（化合物５、カラムで生成、４．２ＡＰ）、９．４８（化合物４、７４．３ＡＰ）。HRMS: m/z 447.2127   [計算値: C23H31N2O7 447.2131].
【化６０】
2009544758.tif 000063
【０２２６】
実施例１、代替工程９ｄ：ピロリジノン４（５０．０ｇ、０．１１Ｍ）をアセトン（５００ｍＬ）に溶かし、１ＮのＨＣｌ（５００ｍＬ）を加えた。その後、反応マスを６５℃まで加熱した。２０分後、ＨＰＬＣにより反応の完了が示された。反応マスを室温まで冷まし、アセトンをロータリーエバポレーターで除去した。この蒸留中、生成物が溶液から白色固形物として沈殿した。これを濾過によって単離し、ケークを水で洗浄した。その後、トルエン（３×３００ｍＬ）との共沸によってケークを乾燥させて、エチル（１Ｒ，２Ｓ）−２−（（３Ｓ）−３−ベンジルオキシカルボニルアミノ−２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−５−オキソ−シクロヘキサンカルボキシレート５が白色固形物として得られた（３９．８ｇ、８８％、９７面積％の純度）。1H-NMR: (300MHz, CDCl3) δ 7.37-7.32 (m, 5H), 6.65 (br d, J 4.0Hz, 1H), 5.12 (s, 2H), 4.54-4.47 (m, 1H), 4.34-4.26 (m, 1H), 4.18 (dq, J 11.0Hz, 7.0Hz, 1H), 4.09 (dq, J 11.0Hz, , 7.0Hz, 1H), 3.36-3.20 (m, 3H), 2.70-2.35 (m, 6H), 2.05-1.96 (m, 1H), 1.81 (quin., J 11.0Hz, 1H), 1.24 (t, J 7.0Hz, 3H).ＨＰＬＣ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｐｒｏ  Ｃ１８  ５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、０．０５％のＴＦＡ（２０％のＭｅＯＨ、８０％のＨ2Ｏ）から０．０５％のＴＦＡ（２０％のＭｅＯＨ、８０％のＭｅＣＮ）まで、０〜１００％の１０分間の勾配。８．９５分（化合物５）。HRMS: m/z 403.1864   [計算値: C21H27N2O6 403.1869].
【化６１】
2009544758.tif 000064
【０２２７】
実施例１、代替工程９ｅ：シクロヘキサノン５（２２．５ｇ、０．０６Ｍ、１当量）、ＤＭＳＯ（３０ｍＬ）およびＴｉ（Ｏ−ｉＰｒ）4（３３．７ｍＬ、０．１１Ｍ、２．０４当量）を丸底フラスコ内に入れた。その後、Ｎ−イソプロピル−Ｎ−メチルアミン（１１．６ｍＬ、０．１１Ｍ、２．０当量）を一度に加えた。混合物を３０分間室温で撹拌した後、氷／水中で＜３℃まで冷却した。その後、ＭｅＯＨ（３０ｍＬ）を加え、次いでＮａＢＨ4（４．３３ｇ、０．１１Ｍ、２．０４当量）を少量ずつ加え、温度は＜８℃に保った。添加が完了した３０分後、反応マスを塩化メチレン（３００ｍＬ）、その後、ＮａＯＨ（１Ｎ、４０ｍＬ）で希釈した。生じたスラリーを、セライトを通して濾過し、ケークを塩化メチレン（１００ｍＬ）で洗浄した。生じた液体を減圧下で濃縮し、残渣をＥｔＯＡｃ（５００ｍＬ）に溶かした。この溶液を１ＮのＨＣｌ（２×４００ｍＬ）で抽出し、その後、合わせた水層をＮａ2ＣＯ3で塩基性化した。ＥｔＯＡｃ（４×２５０ｍＬ）を用いた抽出により、無色透明の有機相が提供され、これをＮａ2ＳＯ4で乾燥させ、濃縮して、白色粉末が得られた（２４．６ｇ、９６％、７：１ｄ．ｒ．）。その後、この物質を終夜ヘキサン（６７０ｍＬ）中でスラリー化した。固形物を濾過によって単離し、減圧下で乾燥させて、エチル（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−２−（（３Ｓ）−３−ベンジルオキシカルボニルアミノ−２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−５−（イソプロピル−メチル−アミノ）−シクロヘキサンカルボキシレート６が白色固形物として得られた（２０．９ｇ、８１％、２４：１ｄ．ｒ．）。1H-NMR: (300MHz, CDCl3) δ 7.37-7.28 (m, 5H), 5.55 (d, J 4.5, 1H), 5.10 (s, 2H), 4.42 (q, J 4.5, 1H), 4.23-4.12 (m, 1H), 4.08 (dq, J 10.5, 7.0, 1H), 4.02 (dq, J 10.5, 7.0, 1H), 3.84 (t, J 9.0, 1H), 3.46-3.36 (m, 1H), 3.04 (七重線, J 6.5, 1H), 2.86-2.80 (m, 1H), 2.63-2.48 (m, 2H), 2.17 (s, 3H, Me), 2.10-1.63 (m, 7H), 1.22 (t, J 7.0, 3H), 1.00 (d, J 6.5, 3H), 0.97 (d, J 6.5, 3H).ＨＰＬＣ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｐｒｏ  Ｃ１８  ５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、０．０１ＭのＮＨ4ＯＡｃ（ＭｅＯＨ：水２０：８０）から０．０１ＭのＮＨ4ＯＡｃ（ＭｅＯＨ：水：ＭｅＣＮ２０：５：７５）まで、１０〜１００％の１５分間の勾配。８．２３（化合物６）、８．８８（５−エピ−化合物６）。HRMS: 460.2798   [計算値: C25H38N3O5 460.2811].
【化６２】
2009544758.tif 000065
【０２２８】
実施例１、代替工程９ｆ：アミノエステル６（９．７６ｇ、２．１２ｍｍｏｌ）を２ＮのＨＣｌ（８０ｍＬ）に溶かし、その後、不活性雰囲気下で約５５℃まで加熱した。反応を２０時間撹拌し、その後、室温まで冷却した。反応溶液をトルエン（２５ｍＬ部分）で２回洗浄し、ＫＯＨペレットを加えることによってｐＨ６〜７まで中和し、その後、塩化メチレン（１００ｍＬ部分）で８回抽出した。合わせた抽出液を乾燥させ（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過し、５０ｍＬの全容量まで減圧下で濃縮した。その後、濃縮した溶液をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（３００ｍＬ）に、ゆっくりと１５分間かけて、添加漏斗中で、激しく撹拌しながら加えた。生じた白色スラリーを周囲温度で１時間撹拌し、その後、０℃まで冷却し、１時間撹拌した。生成物を濾過し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２５ｍＬ部分）で２回洗浄した。湿ケークからの水を、アセトニトリル（３００ｍＬ）との共沸蒸留によって除去した。生成物を減圧下で乾燥させて、（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−２−（（３Ｓ）−３−ベンジルオキシカルボニルアミノ−２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−５−（イソプロピル−メチル−アミノ）−シクロヘキサンカルボン酸７、（７．６９ｇ、８４％の収率）が白色泡沫として得られた。1H-NMR: (400 MHz, 50℃, CDCl3) δ 7.44-7.32 (m, 5H), 6.10 (広幅 s, 1H), 5.19 (ほぼ s, 2H), 4.42 (dd, J = 15.6, 7.8 Hz, 1H), 4.29-4.23 (m, 1H), 3.68-3.60 (m, 2H), 3.33-3.27 (m, 2H), 3.20 (広幅 s, 1H), 2.99 (広幅 s, 1H), 2.51 (s, 3H), 2.49-2.45 (m, 3H), 2.33-2.31 (m, 1H), 2.00 (ddd, J = 9.0, 8.6, 3.9 1H), 1.95-1.78 (m, 2H), 1.36-1.21 (m, 6H). LCMS:  m/z 432.20 [計算値: C23H34N3O5 432.25].
【化６３】
2009544758.tif 000066
【０２２９】
実施例１、代替工程９ｇ：アミノ酸７（６．３ｇ、１４．７ｍｍｏｌ、１．０当量）をＮ2下でＴＨＦ（８０ｍＬ）に溶かし、ＮａＨ（５８４ｍｇ、１４．７ｍｍｏｌ、１．０当量、６０ｗｔ％の鉱物油中の分散液）を少量ずつ加えた。添加が完了し、ガスの発生が停止した後、反応マスを減圧下で濃縮し、生じた固形物をトルエン（５０ｍＬ）と共沸させて白色固形物を得た（ＫＦ  ０．５９ｗｔ％）。この固形物をトルエン（１００ｍＬ）中に、Ｎ2下でスラリー化し、９０℃まで加熱した。ＤＰＰＡ（３．３２ｍＬ、１５．３ｍｍｏｌ、１．０５当量）を約２分間かけて滴下した。約５分後、すべての固形物が溶け、１０分後に白色固形物の沈殿が観察された。３０分後、ＨＰＬＣ分析により反応の完了が示された。反応マスを室温まで冷ました後、濾過し、ケークをトルエンで洗浄した。その後、液体をＡｃＯＨ／Ａｃ2Ｏ（８０／２０、１６８ｍＬ）溶液に９０℃でゆっくりと加えた。４５分後、ＨＰＬＣにより一部のイソシアネートがまだあることが示された。１．１５時間で、反応マスを室温まで冷却し、トルエン（１００ｍＬ）および水（１００ｍＬ）で希釈した。有機層を除去し、トルエンを１ＮのＨＣｌ（１００ｍＬ）で洗浄した。その後、温度を２０℃未満に保ったまま、合わせた水相をＫ2ＣＯ3で塩基性化し、ＮａＯＨ（１０Ｎ）でｐＨ１２にした。その後、水層を塩化メチレン（４×１５０ｍＬ）で抽出し、合わせた有機層をＫ2ＣＯ3で乾燥させ、濃縮して、ベンジル（Ｓ）−１−（（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−２−アセトアミド−４−（イソプロピル（メチル）アミノ）シクロヘキシル）−２−オキソピロリジン−３−イルカルバメート８が白色泡沫として得られた（４．５ｇ、７０％、９４ＡＰ純度）。1Ｈ−ＮＭＲは、上述の経路（実施例１、工程９）から得られた物質のものと同一であった。ＨＰＬＣ：ＹＭＣ−Ｐａｃｋ  Ｐｒｏ  Ｃ１８  ５μｍ、４．６×１５０ｍｍ、０．０５％のＴＦＡ（２０％のＭｅＯＨ、８０％のＨ2Ｏ）から０．０５％のＴＦＡ（２０％のＭｅＯＨ、８０％のＭｅＣＮ）まで、０〜１００％の１０分間の勾配。７．２０分（化合物８）、７．８５分（尿素二量体）。ＨＲＭＳ：４４５．２８０９［計算値：Ｃ24Ｈ37Ｎ4Ｏ4、４４５．２８１５］。
実施例１の代替調製方法
【化６４】
2009544758.tif 000067
【０２３０】
実施例１、代替調製方法、工程１：エチル（７Ｒ，８Ｓ）−８−アミノ−１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカン−７−カルボキシレート４−トルエンスルホン酸塩１（４５０．１ｇ）を、１−エチル−３−（３−ジメチル−アミノ−プロピル）カルボ−ジイミドヒドロクロリド（２３６．３ｇ）、１−ヒドロキシベンゾトリアゾール水和物（１７１．９ｇ）、Ｎ−カルボベンジルオキシ−Ｌ−メチオニン（３３３．４ｇ）およびアセトニトリル（３．１Ｌ）と合わせた。撹拌した混合物に、トリエチルアミン（２４９．５ｇ）を３０℃未満で加えた。反応が完了した後（ＨＰＬＣ）、混合物を酢酸エチル（８．２Ｌ）で希釈し、２５％の炭酸水素カリウム水溶液（２×４．５Ｌ）、次いで水（４．５Ｌ）で洗浄した。有機相を分離し、減圧下で濃縮して、エチル（７Ｒ，８Ｓ）−８−（（Ｓ）−２−ベンジルオキシカルボニルアミノ−４−メチルスルファニル−ブチリルアミノ）−１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカン−７−カルボキシレート２（１．４Ｌ）の溶液が得られた。ヨウ化メチル（２．３９ｋｇ）を加え、容器を光から遮断し、混合物をゆっくりと撹拌しながら約２４時間保った。濃厚な黄色沈殿物にメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２．７Ｌ）を加え、混合物を約１時間保った。生成物を濾過によって単離し、ケークをメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（２×１．４Ｌ）で洗浄し、その後、真空下で乾燥させて、［（Ｓ）−３−ベンジルオキシ−カルボニルアミノ−３−（（７Ｒ，８Ｓ）−７−エトキシカルボニル−１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカ−８−イルカルバモイル）−プロピル］−ジメチルスルホニウムヨウ化物３（６７１．４ｇ、約９４％の収率）がオフホワイト色固形物として得られた（ＨＰＬＣ純度９９．９％）。
【化６５】
2009544758.tif 000068
【０２３１】
実施例１、代替調製方法、工程２：スルホニウム塩３（６１９．４ｇ）、炭酸セシウム（４１６．８ｇ）および無水ジメチルスルホキシド（６．２Ｌ）を、揮発性スルフィドを中和するためにスクラバーを備えた反応器中で合わせた。変換の完了が得られるまで激しい撹拌を維持した（ＨＰＬＣ）。酢酸エチル（１２．４Ｌ）を加え、次いで２０％のブライン（３Ｌ）を加えた。有機相を分離し、ブライン（２×３Ｌ）で２回洗浄し、蒸発させて、酢酸エチル（約０．８Ｌ）中のエチル（７Ｒ，８Ｓ）−８−（（Ｓ）−３−ベンジルオキシカルボニルアミノ−２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−１，４−ジオキサ−スピロ［４．５］デカン−７−カルボキシレート４の溶液が得られた。アセトン（２．５５Ｌ）を加え、次いで０．５Ｍの塩酸水溶液（２．３Ｌ）を加えた。十分に混合しながら、４からエチル（１Ｒ，２Ｓ）−２−（（Ｓ）−３−ベンジルオキシカルボニルアミノ−２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−５−オキソ−シクロヘキサンカルボキシレート５への変換が完了するまで（ＨＰＬＣ）、溶液を５０〜６０℃まで加熱した。混合物を減圧下で、４０℃未満で濃縮し、約３０℃まで冷却し、水（４．１Ｌ）を加えた。生じたスラリーを５〜１０℃まで冷却し、約１時間撹拌した。生成物を濾過し、ケークを水（２×２．５Ｌ）で洗浄した。液化後、ケークを一定重量まで４０℃で、真空オーブン内で乾燥させた。シクロヘキサノン５（２７２ｇ、７０％の収率）が得られた（ＨＰＬＣ純度９８．７％）。
【化６６】
2009544758.tif 000069
【０２３２】
実施例１、代替調製方法、工程３：シクロヘキサノン５（２０６ｇ）をジクロロメタン（１．１Ｌ）に溶かし、ハイドロジェネーターに入れた。チタンテトライソプロポキシド（２１８．２ｇ）およびＮ−イソプロピルＮ−メチルアミン（６３．６４ｇ）を加え、混合物を周囲温度（２３〜２５℃）で少なくとも５時間撹拌した。白金触媒（５％のＰｔ／Ｓ／Ｃ、１５ｇ、５に対して約７．５％）を加え、約３０ｐｓｉｇで少なくとも６時間水素化を行って、エチル（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−ベンジルオキシカルボニルアミノ−２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−５−（イソプロピル−メチル−アミノ）−シクロヘキサンカルボキシレート６およびその５−エピ−異性体（約７％）の混合物が得られた。触媒を濾過によって除去し、濾液を約６００ｍＬまで減圧下で濃縮した。湿酢酸エチル（約３％の水、２．０Ｌ）を少なくとも１．５時間の間激しく撹拌しながら加えた。少なくともさらに６時間撹拌を続けた。スラリーを濾過した。濾過ケークを酢酸エチル（１．０Ｌ）で洗浄し、廃棄した。合わせた濾液および洗浄液を約４００ｍＬまで濃縮した。トルエン（２．０Ｌ）を加え、溶液を２Ｍの塩酸水溶液（２×４００ｍＬ）で洗浄した。水層を５０°〜６０℃まで、約２０時間または６の加水分解が完了したとみなされるまで（ＨＰＬＣ）温めた。ｐＨ約１０まで調節するために水酸化ナトリウム水溶液を加え、混合物をトルエン（３×６００ｍＬ）で抽出した。有機相を廃棄し、塩酸水溶液を加えることによってｐＨを約６まで再度調節した。水相を減圧下で約６００ｍＬまで濃縮し、塩化メチレン（少なくとも３×２．０Ｌ）で抽出した。合わせた塩化メチレン層を減圧下で蒸発させ、ＴＨＦで連続的に置き換えて、ＴＨＦ（約４Ｌ）中の（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−ベンジルオキシカルボニルアミノ−２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−５−（イソプロピル−メチル−アミノ）−シクロヘキサンカルボン酸７（約１４８ｇ）の溶液が得られた。８の種結晶を加え、次いでメタノール（８１．２４ｇ）中の２５％のナトリウムメトキシドの溶液を２５℃未満で加えた。スラリーを少なくともさらに１６時間撹拌しながら保った。生成物を濾過によって単離し、ケークをＴＨＦ（４×２００ｍＬ）で洗浄し、真空下、３０℃未満で一定重量まで乾燥させた。乾燥（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−ベンジルオキシカルボニル−アミノ−２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−５−（イソプロピル−メチル−アミノ）−シクロヘキサン−カルボキシレートナトリウム塩８が得られた（１３９ｇ、５から約６０％の収率）。
【化６７】
2009544758.tif 000070
【０２３３】
実施例１、代替調製方法、工程４：アミノエステルナトリウム塩８（１００ｇ）、ジフェニルホスフェート（３．８６ｇ）、ｔｅｒｔ−ＢｕＯＨ（１２７５ｍＬ）およびトルエン（２２５ｍＬ）を合わせ、減圧下で加熱還流した。約５００ｍＬの留出物を収集し、ｔｅｒｔ−ＢｕＯＨ中のトルエンの溶液で連続的に置き換えながら廃棄した。真空を取り除き、モレキュラーシーブを満たしたカラムによって留出物を浸出液に交換し、容器に戻ることを可能にした。乾燥が完了した後、ＤＰＰＡ（５２．４ｍＬ；６０ｍＬのトルエンに溶かした）をゆっくりとスラリーに８０℃で加えた。変換が完了した後（ＨＰＬＣ）、真空蒸留によってｔｅｒｔ−ＢｕＯＨを除去し、トルエンで連続的に置き換えた。混合物を室温まで冷却し、１０％のＫ2ＨＰＯ4水溶液（１×８００ｍＬ、１×４００ｍＬ）および水（４００ｍＬ）で２回洗浄した。有機相を加熱し、真空下で約２７０ｍＬまで濃縮した。真空を取り除き、ヘプタン（１．１Ｌ）をゆっくりと約８０℃で加え、次いで９の種（約１ｇ）を加えた。スラリーをゆっくりと室温まで冷却し、ベンジル｛（Ｓ）−１−［（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−２−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ−４−（イソプロピル−メチル−アミノ）−シクロ−ヘキシル］−２−オキソ−ピロリジン−３−イル｝−カルバメート９が濾過によって白色固形物として単離された（８６．７６ｇ、７８％の収率）。
【化６８】
2009544758.tif 000071
【０２３４】
実施例１、代替調製方法、工程５：ｔｅｒｔ−ブチルカルバメート９（５０ｇ）をトルエン（５００ｍＬ）およびｉ−ＰｒＯＨ（１５０ｍＬ）に溶かした。その後、生じた溶液を６０℃まで加熱した。メタンスルホン酸（１９．６ｍＬ）を６５℃未満で加えた。反応が完了した後（ＨＰＬＣ）、混合物を室温まで冷却し、トリエチルアミン（６９．４ｍＬ）をゆっくりと２５℃未満で加えた。その後、無水酢酸を２５℃未満で加えた。１時間後、酢酸（２５０ｍＬ）を２５℃未満で加えた。トルエン相を廃棄し、２−メチル−ＴＨＦ（５００ｍＬ）を水相に加えた。混合物を激しく撹拌し、ＮａＯＨ（２５％の水溶液）でｐＨ１２まで塩基性化した。水相を廃棄し、有機層をブライン（２５０ｍＬ）で洗浄した。有機層を減圧下で濃縮し、ｉ−ＰｒＯＨで連続的に置き換えた。溶液を冷却し、濾過して、ｉ−ＰｒＯＨ溶液中のベンジル｛（Ｓ）−１−［（１Ｓ，２Ｒ，４Ｒ）−２−アセチルアミノ−４−（イソプロピル−メチル−アミノ）−シクロヘキシル］−２−オキソ−ピロリジン−３−イル｝−カルバメート１０が提供され、これを水素化で直接使用した。
【０２３５】
実施例１、代替調製方法、工程６：ｉ−ＰｒＯＨ（約６２５ｍＬ）中にアセトアミド１０（約６１ｇ）を含む溶液に、１０％のＰｄ／Ｃ湿触媒（２．５ｇ）を加え、懸濁液を３０ｐｓｉｇおよび約２５℃で少なくとも２時間水素化した。完了した後（ＨＰＬＣ）、触媒を濾過によって除去し、濾液を約５５０ｍＬまで濃縮した。水（８．８ｍＬ）を加え、次いでｉ−ＰｒＯＨ溶液（６９．５ｍＬ）中の５．６Ｎの塩酸を加えた。生じたスラリーを室温で終夜保った。生成物を濾過によって単離し、ケークをｉ−ＰｒＯＨ（２×１００ｍＬ）ですすぎ、真空下で一定重量まで約５０℃で乾燥させて、Ｎ−［（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−２−（（Ｓ）−３−アミノ−２−オキソ−ピロリジン−１−イル）−５−（イソプロピル−メチル−アミノ）−シクロヘキシル］−アセトアミド１１（５５．６ｇ、９７％の収率）がその塩酸塩として得られた（７３．６％の遊離塩基アッセイ、ＨＰＬＣ）。
【化６９】
2009544758.tif 000072
【０２３６】
実施例１、代替調製方法、工程７：ＭｅＣＮ（４００ｍＬ）中の６−トリフルオロメチル−キナゾリン−４−オール１２（２０．１ｇ）に、メタノール（１７．０ｍＬ）中の５．５Ｍのナトリウムメトキシドの溶液を加えた。生じた懸濁液を減圧下で蒸留し、ＭｅＣＮによって連続的に置き換えてメタノールを除去した。スラリーにＤＭＦ（１．４ｇ）を加え、次いで塩化オキサリル（１３．０ｍＬ）を５０℃未満で加えた。反応が完了した後（ＨＰＬＣ）、過剰な試薬を減圧下で除去して、約４００ｍＬのスラリーが得られた。混合物を室温まで冷却し、１０％のＫ2ＨＰＯ4水溶液（１×１．０Ｌ、１×０．５Ｌ）で洗浄して、約４５０ｍＬの湿ＭｅＣＮ溶液中の４−クロロ−６−トリフルオロメチル−キナゾリン１３（約２１．２ｇ）が得られ、これを続くカップリング反応で直接使用した（ＨＰＬＣ純度９９．８％）。
【０２３７】
実施例１、代替調製方法、工程８：アセトアミド１１（２８．５ｇ、ＨＣｌ塩、７３．６％の遊離塩基アッセイ）、アセトニトリル（１００ｍＬ）、Ｎ，Ｎ，−ジ−イソプロピル−Ｎ−エチルアミン（６１ｍＬ）の混合物に、室温で、ＭｅＣＮ（約４５０ｍＬ）中の１３（約２１．２ｇ）の溶液を加えた。均一な混合物を終夜保った。反応が完了した後（ＨＰＬＣ）、混合物を真空下で約１２５ｍＬまで濃縮した。９．５％の酢酸水溶液（２４０ｍＬ）を加え、水相を塩化メチレンで抽出した。水相を分離し、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（４５０ｍＬ）を加え、次いで２Ｎの水酸化リチウム水溶液を加えてｐＨ＞１１．５に調節した。有機層を分離し、水で洗浄し、濾過した。エーテル相の約半分をメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（約２５０ｍＬ）で希釈し、真空下で濃縮した。ヘプタン（４５ｍＬ）をゆっくりと６０℃未満で加え、次いで実施例１の種結晶（０．４ｇ）を加えた。さらなるヘプタン（１２５ｍＬ）を加え、混合物をゆっくりと室温まで冷却し、生じたスラリーを終夜保った。生成物を濾過によって単離し、ケークをヘプタンで洗浄し、真空下で一定重量まで乾燥させて、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピルアミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）−キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド１４が得られた（１５．０ｇ、８５％の収率）。
実施例１の結晶化手順
【０２３８】
実施例１、ビス−ＢＳＡ塩の生成物および精製：実施例１、工程１１からの非晶質遊離塩基の全体をメタノール（６００ｍＬ）に溶かした。生じた溶液を６０℃で加熱し、ベンゼンスルホン酸（２．５当量）を入れた。混合物を室温まで冷却し、生じた白色固形物を濾過によって収集して、表題化合物のビス−ベンゼンスルホン酸塩が得られた（９５ｇ、８６％）。この物質はＨＰＬＣによって＞９９％純粋であった。この物質を８０／２０のＥｔＯＨ／Ｈ2Ｏからの再結晶化によってさらに精製し、これにより、残留メタノールを全く含まない塩が提供された。ＨＰＬＣ純度＝９９．８％。1H NMR (500 MHz, D2O) δ ppm 8.75 (1 H, s), 8.66 (1 H, s), 8.25 (1 H, d, J=8.80 Hz), 7.90 (1 H, d, J=8.80 Hz), 7.75 (4 H, d, J=8.25 Hz), 7.43 - 7.57 (6 H, m), 5.42 (1 H, t), 4.33 - 4.44 (1 H, m), 4.09 - 4.19 (1 H, m), 3.83 - 3.91 (1 H, m), 3.74 - 3.83 (2 H, m), 3.61 (1 H, t, J=11.55 Hz), 2.75 (3 H, d, J=6.60 Hz), 2.61 - 2.70 (1 H, m), 2.31 - 2.44 (1 H, m), 2.20 - 2.27 (1 H, m), 2.17 (2 H, d, J=12.10 Hz), 1.94 - 2.04 (1 H, m, J=12.65 Hz), 1.90 - 1.95 (3 H, m), 1.72 - 1.91 (2 H, m), 1.37 (3 H, d, J=6.05 Hz), 1.29 (3 H, d, J=6.60 Hz).示差走査熱量では１０℃／分の加熱速度を利用し、２９７．６℃の開始温度および２９９．１℃のピーク温度の融解／分解吸熱が示された。
【０２３９】
実施例１、遊離塩基の結晶化：Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド（１ｇ）の非晶質遊離塩基の試料を、ジクロロメタン（５ｍＬ）に溶かした。溶液にヘプタン（３０ｍＬ）を入れ、その後、ジクロロメタンを蒸留するために温めた。溶液を４０℃まで冷却し；白色固形物が沈殿した。懸濁液を９０℃まで加熱し、２時間撹拌した。懸濁液を室温まで冷却し、濾過して、表題化合物の純粋な遊離塩基が提供された。1Ｈ−ＮＭＲでは、明らかな残留溶媒は見られなかった。
【０２４０】
実施例２
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの結晶形
遊離塩基および塩形態、ならびにその溶媒和物を含めた、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの様々な結晶形を調製し、以下に記載のように特徴づけた。
【０２４１】
結晶形の評価手順
単結晶データ
データは、Ｂｒｕｋｅｒ−Ｎｏｎｉｕｓ（BRUKER AXS, Inc.、5465 East Cheryl Parkway、ウィスコンシン州Madison、53711、米国）のＣＡＤ４シリアル回折計で収集した。単位格子のパラメータは、２５個の高角度の反射の実験回折計設定の最小二乗分析によって得た。強度は、Ｃｕ  Ｋα照射（λ＝１．５４１８Å）を使用して、一定温度でθ〜２θの可変走査技術を用いて測定し、ローレンツ偏光因子についてのみ補正した。バックグラウンド計数は、走査の時間の半分で、走査の極端で収集した。あるいは、単一結晶データを、Ｂｒｕｋｅｒ−Ｎｏｎｉｕｓ  κＣＣＤ２０００システムで、Ｃｕ  Ｋα照射（λ＝１．５４１８Å）を用いて収集した。測定した強度データの指数化および処理は、Ｃｏｌｌｅｃｔプログラムスイート中のＨＫＬ２０００ソフトウェアパッケージを用いて実施した（Otwinowski, Z. およびMinor, W. (1997)、巨大分子の結晶構造解析(Macromolecular Crystallography)、Eds. Carter, W. C. JrおよびSweet, R. M. (Academic、ニューヨーク)、第276巻、ページ307〜326）。（Ｃｏｌｌｅｃｔ  Ｄａｔａの収集および処理のユーザインターフェース：Ｃｏｌｌｅｃｔ：Ｄａｔａ収集ソフトウェア、R. Hooft、Nonius B. V.、1998。）あるいは、単一結晶データは、Ｂｒｕｋｅｒ−ＡＸＳ  ＡＰＥＸ２  ＣＣＤシステムで、Ｃｕ  Ｋα照射（λ＝１．５４１８Å）を用いて収集した。測定した強度データの指数化および処理は、ＡＰＥＸ２ソフトウェアパッケージ／プログラムスイートを用いて実施した（APEX2 Dataの収集および処理のユーザインターフェース:APEX2ユーザマニュアル、バージョン1.27；BRUKER AXS, Inc.、5465 East Cheryl Parkway、ウィスコンシン州Madison、53711、米国）。
【０２４２】
指定した場合、結晶は、データの収集中、Ｏｘｆｏｒｄクリオシステムの冷流で冷却した（Oxford Cryosystems Cryostreamクーラー: J. CosierおよびA. M. Glazer、J. Appl. Cryst.、1986、19、105）。
【０２４３】
構造は、軽微な局所的変更を加えたＳＤＰ（SDP、構造決定パッケージ(Structure Determination Package)、Enraf-Nonius、ニューヨーク州Bohemia、11716。ＳＤＰソフトウェア中のｆ’およびｆ”を含めた散乱係数は、「結晶構造解析の国際表(International Tables for Crystallography)」、Kynoch Press、英国Birmingham、1974；第IV巻、表2.2Aおよび2.3.1から採った）ソフトウェアパッケージまたは結晶学的パッケージＭＡＸＵＳ（maXus解析および洗練ソフトウェアスイート: S. Mackay、C. J. Gilmore、C. Edwards、M. Tremayne、N. Stewart、K. Shankland. maXus:回析データからの結晶構造を解析および洗練するためのコンピュータプログラムまたはSHELXTL4）のどちらかを用いて、直接方法によって解析して、観察された販社に基づいて洗練した。誘導された原子パラメータ（座標および温度因子）は、完全マトリックス最小二乗によって洗練した。洗練において最小化された関数は、Σw（｜Ｆo｜−｜Ｆc｜）2であった。Σ｜｜Ｆo｜−｜Ｆc｜｜／Σ｜Ｆo｜と定義される一方で、Ｒw＝［Σw（｜Ｆo｜−｜Ｆc｜）2／Σw｜Ｆo｜2］1/2［式中、ｗは、観察された強度における誤差に基づいた適切な計量関数である］と定義される。差異マップは洗練のすべての段階で検査した。等方性温度因子を用いて水素を理想的な位置に導入したが、水素パラメータはどれも変化しなかった。
【０２４４】
粉末Ｘ線回折データ（ＰＸＲＤ）
ＰＸＲＤデータはＢｒｕｋｅｒ  Ｃ２  ＧＡＤＤＳを用いて得た。照射はＣｕ  Ｋα（４０ＫＶ、５０ｍＡ）であった。試料と検出器の距離は１５ｃｍであった。粉末試料を直径１ｍｍ以下の密閉したガラス毛細管に入れた；毛細管はデータ収集中に回転させた。データを３≦２θ≦３５°で、少なくとも２０００秒間の試料曝露時間で収集した。生じた二次元の回折弧を積分して、３〜３５°２θの範囲の範囲で０．０２°２θのステップサイズを用いて、伝統的な一次元ＰＸＲＤパターンを作成した。フィリップス粉末Ｘ線回折（ＰＸＲＤ）試料保持器の中に、約２００ｍｇを詰めた。試料をフィリップスＭＰＤユニット（４５ＫＶ、４０ｍＡ、Ｃｕ Ｋα）に移した。２〜３２の２θの範囲内で、室温でデータを集めた（連続走査モード、走査速度０．０３度／秒、オートダイバージェンス(auto divergence)および散乱防止スリット(anti scatter slit)、受光スリット(receiving slit)：０．２ｍｍ、試料スピナー(sample spinner)：ＯＮ）。
【０２４５】
示差走査熱量（ＤＳＣ）
【０２４６】
ＤＳＣ実験は、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（商標）モデルＱ１０００または２９２０で行った。試料（約２〜６ｍｇ）をアルミニウムパン内で秤量し、１００分の１ミリグラムまで正確に記録し、ＤＳＣに移した。装置に窒素ガスを５０ｍＬ／分でパージした。データは、室温〜３００℃で、１０℃／分の加熱速度で収集した。プロットは、吸熱ピークが下を向くように行った。
【０２４７】
熱重量分析（ＴＧＡ）
ＴＧＡ実験は、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ（商標）モデルＱ５００または２９５０で行った。試料（約１０〜３０ｍｇ）を事前に風袋測定した白金パンに入れた。試料の重量を正確に測定し、装置によって１０００分の１ミリグラムまで記録した。炉に窒素ガスを１００ｍＬ／分でパージした。データは、室温〜３００℃で、１０℃／分の加熱速度で収集した。
【０２４８】
結晶形の調製および分析
これらの実施例の単位格子のデータおよび他の特性を表１に表す。単位格子のパラメータは、単一結晶Ｘ線結晶学的分析から得た。単位格子の詳細な説明は、StoutおよびJensen、X線構造決定:実用ガイド(X-Ray Structure Determination: a Practical Guide)、(MacMillian、1968)の第3章に見つかる。
【０２４９】
実施例２ａ、ｂ、ｃ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、およびｈの部分原子座標を、それぞれ表２、３、４、５、６、７、８および９に表す。
【０２５０】
さらに、実施例２ａ、ｂ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、およびｈの室温での特徴的な粉末Ｘ線回折ピーク位置（２θ±０．１度）を表１０に表し、これらはすべて、ＮＩＳＴの他の適切な標準物質で較正した２θを用いて、回転毛細管を用いて回折計（ＣｕＫα）で収集した高品質パターンに基づいている。
【０２５１】
最後に、図１、２、３、４、５、６、および７は、それぞれ実施例２ａ、ｂ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇおよびｈのＸＲＰＤパターンを表す。図８および９は、それぞれ実施例２ａのＤＳＣおよびＴＧＡを開示し、図１０、１１、および１２は、それぞれ実施例２ｆのＤＳＣ、ＴＧＡ、および吸湿等温線スペクトルを開示する。
【０２５２】
結晶形の製造、ＸＲＤ、ＤＳＣおよびＴＧＡの特徴づけ
実施例２ａ、Ｎ−１形、ジベシル酸塩：
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド、ジ−ベンゼンスルホン酸塩を、酢酸エチル、エタノール、メタノールおよびアセトンから晶出させた。Ｎ−１形、ジベシル酸塩は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド、ジ−ベンゼンスルホン酸塩のニート（水または溶媒の分子なし）の形態である。Ｎ−１形のジベシレートは、単一結晶構造データから作成された模擬パターンに一致するＸＲＤパターンによって特徴づけられていた。Ｎ−１形のジベシレートは、典型的には約２９６℃の開始の融解／分解吸熱を有するＤＳＣ温度記録によって特徴づけられていた。Ｎ−１形、ジベシレートは、約２８０℃までで無視できる重量損失を有するＴＧＡ熱曲線によって特徴づけられていた（非溶媒和形態と一致）。
【０２５３】
実施例２ｂ、ＤＣ−１形：
ＢＳＡ塩の試料から抽出した後の、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド（約０．５ｇ）の油状のゲル様（非晶質）遊離塩基の試料を、ジクロロメタン（約３ｍＬ）に溶かした。溶液に約５ｍｌのヘプタンを加え、生じた油状の混合物を、磁気撹拌子によって開口ビーカー内、２０〜２５℃で激しく撹拌した。溶媒を蒸発させた後に白色固形物が得られた。固形物を約５ｍｌのヘプタンおよび０．２ｍｌのジクロロメタンの混合物に再懸濁させ、２５℃で７日間撹拌した。生じたスラリーを濾過し、空気乾燥させて、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基、ＤＣ−１形が提供された。ＤＣ−１形は、１モルのＮ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基あたり１モルのジクロロメタンによって特徴づけられている。ＤＣ−１形は、単一結晶構造データから作成された模擬パターンに一致するＸＲＤパターンによって特徴づけられていた。
【０２５４】
実施例２ｃ、ＴＨＯＯ−１形：
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基、１ｍｇを、８０ｕＬのＴＨＦに溶かした。溶媒を、高真空下、２２℃で１６時間、Ｓｐｅｅｄ−ｖａｃ（ＳｐｅｅｄＶａｃ  Ｐｌｕｓ、ＳＣ２５０ＤＤＡ、Ｓａｖａｎｔ／ＴｈｅｒｍｏＥｌｅｃｔｒｏｎ  Ｃｏｒｐ）によって除去した。合計１００ｕＬのＭＩＢＫ／ヘプタン（容量で１／２）をこのウェル内に入れた。２週間、周囲温度（２０〜２５℃）で保った後、このウェル内で結晶が観察された。ＴＨＯＯ形は、１モルのＮ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基あたり１モルのＴＨＦによって特徴づけられている。
【０２５５】
実施例２ｄ、Ｅ−１形：
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基を、エタノールおよびヘプタンの溶液から晶出させた。Ｅ−１形は、１モルのＮ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基あたり１モルのエタノールによって特徴づけられている。Ｅ−１形は、単一結晶構造データから作成された模擬パターンに一致するＸＲＤパターンによって特徴づけられていた。
実施例２ｅ、Ａ−１形：
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基を、アセトン中に過剰量の１５０ｍｇ／ｍＬの濃度で懸濁させた。懸濁液を室温で平衡化させて、ある程度希薄な懸濁液が提供された。懸濁液の一部を濾過し、濾液および懸濁液をどちらも５℃で冷蔵して、モノアセトン溶媒和物の結晶が提供された（Ａ−１）。Ａ−１形は、１モルのＮ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基あたり１モルのアセトンによって特徴づけられている。Ａ−１形遊離塩基は、単一結晶構造データから作成された模擬パターンに一致するＸＲＤパターンによって特徴づけられていた。
【０２５６】
実施例２ｆ、Ｎ−２形：
ＢＳＡ塩の試料から抽出した、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド（約０．５ｇ）の油状のゲル様（非晶質）遊離塩基の試料を、ヘプタン（約５ｍＬ）に懸濁させた。フラスコを金属ヘラで掻き、懸濁液を２５℃で磁気撹拌子によって激しく撹拌した。２４時間の撹拌後に結晶粒子の白色スラリーが得られた。スラリーを濾過し、湿ケークを真空下で乾燥させて（４０℃）、遊離塩基の純粋なＮ−２形が提供された（ＰＸＲＤによって確認）。Ｎ−２形は、単一結晶構造データから作成された模擬パターンに一致するＸＲＤパターンによって特徴づけられていた。Ｎ−２形は、Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基のニート（溶媒和分子または水もしくは溶媒の分子なし）の形態である。Ｎ−２形は、典型的には約１５８℃〜約１６２℃の融解の吸熱の開始を有するＤＳＣ温度記録によって特徴づけられていた。Ｎ−２形は、約１４５℃までで無視できる重量損失を有するＴＧＡ熱曲線によって特徴づけられており、これは単一結晶構造データと一致していた。重量損失は外来性の溶媒に対応していた。水分吸着等温線は、２５℃で約２５％〜約７５％のＲＨの範囲の０．１５％の増量によって特徴づけられており、これは、Ｎ−２形が僅かに吸湿性であることを示している（非常に僅かにまたは非吸湿性である思われる）。
【０２５７】
実施例２ｇ、ＡＮ−３形：
約２００ｍｇ／ｍＬのＮ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基の懸濁液をアセトニトリル中で調製し、室温で平衡化させて、ある程度希薄な懸濁液が提供された。懸濁液の一部を濾過し、濾液および懸濁液をどちらも５℃で冷蔵して、アセトニトリル溶媒和物の結晶が提供された（ＡＮ−３）。ＡＮ−３形は、１モルのＮ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドの遊離塩基あたり１モルのアセトニトリルによって特徴づけられている。ＡＮ−３形は、単一結晶構造データから作成された模擬パターンに一致するＸＲＤパターンによって特徴づけられていた。
【０２５８】
実施例２ｈ、Ｈ４−１形、ＨＣｌ：
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド（約０．２ｇ）の遊離塩基の試料を、エタノール（約１ｍＬ）に溶かした。遊離塩基溶液に、約３１０μｌのエタノール中のＨＣｌ溶液を加えた（約１．２５Ｍの濃度）。溶液に少量のＨＣｌ塩の結晶スラリーを接種した。生じたかすみがかった溶液に３ｍｌのヘプタンを加えた。２０〜２５℃で撹拌しながら、白色スラリーが１〜２時間にわたって徐々に生じた。スラリーを２０℃でさらに１２時間撹拌し、濾過し、ヘプタンで洗浄した。湿ケークを真空下で乾燥させて（４０℃）、ＨＣｌ塩四水和物、Ｈ４−１形、ＨＣｌが提供された。Ｈ４−１形、ＨＣｌは、１モルのＮ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド、塩酸塩あたり４モルの水によって特徴づけられている。Ｈ４−１形のＨＣｌ塩四水和物は、単一結晶構造データから作成された模擬パターンに一致するＳＲＤパターンによって特徴づけられていた。
【０２５９】
表１
単位格子パラメータ
【表１−１】
2009544758.tif 000073
表１（続き）
単位格子パラメータ
【表１−２】
2009544758.tif 000074
表１に用いられる可変記号(variable)は、以下で定義される：
Ｔ＝結晶学的データについての摂氏温度（ＲＴは、約＋２２℃の室温である）
Ｖ＝単位格子の体積
Ｚ’＝非対称ユニットあたりの薬物分子の数
Ｖｍ＝Ｖ（単位格子）／（格子あたりのＺ薬物分子）
ｓｇ＝空間群
ｄｃａｌｃ＝計算された結晶密度
表２
実施例２ａ，Ｎ−１型，ジベシル酸塩についての原子座標
【表２−１】
2009544758.tif 000075
【表２−２】
2009544758.tif 000076
表３
実施例２ｂ，ＤＣ−１型についての原子座標
【表３−１】
2009544758.tif 000077
【表３−２】
2009544758.tif 000078
表４
実施例２ｃ，ＴＨＯＯ−１型についての原子座標
【表４−１】
2009544758.tif 000079
【表４−２】
2009544758.tif 000080
表５
実施例２ｄ，Ｅ−１型についての原子座標
【表５−１】
2009544758.tif 000081
【表５−２】
2009544758.tif 000082
表６
実施例２ｅ，Ａ−１型についての原子座標
【表６−１】
2009544758.tif 000083
【表６−２】
2009544758.tif 000084
表７
実施例２ｆ，Ｎ−２型についての原子座標
【表７−１】
2009544758.tif 000085
【表７−２】
2009544758.tif 000086
【表７−３】
2009544758.tif 000087
表８
実施例２ｇ，ＡＮ−３型についての原子座標
【表８−１】
2009544758.tif 000088
【表８−２】
2009544758.tif 000089
表９
実施例２ｈ，Ｈ４−１型，ＨＣｌについての原子座標
【表９−１】
2009544758.tif 000090
【表９−２】
2009544758.tif 000091
【０２６０】
表１０
実施例２ａ、ｂ、ｄ、ｅ、ｆ、ｇ、およびｈについての、室温での特徴的な粉末Ｘ線回折ピーク位置（２θ±０．１度）は、回転キャピラリー(spinning capillary)を有する回折計（ＣｕＫα）で収集した質の高いパターンに基づいており、２θはＮＩＳＴ 他の適当な基準で較正する。
【表１０】
2009544758.tif 000092
【０２６１】
薬理学的特徴の比較
実施例１および国際公開公報ＷＯ２００５０２１５００号（米国特許第７，１６３，９３７号に対応、本出願に与えられている）中に見つかる化合物の薬理学的特徴を比較するアッセイおよびデータを以下に表す。
【０２６２】
ヒト末梢血単核細胞結合（「ＣＣＲ２結合」）
Yoshimura, et al.、J. Immunol.、1990、145、292もまた参照されたい。ヒトＣＣＲ２結合アッセイを、125Ｉ−ヒトＭＣＰ−１をトレーサーリガンドとして用いて、ヒト末梢血単核細胞（ｈＰＢＭＣ）を用いて確立させた。ｈＰＢＭＣを、ヒトｌｅｕｋｏｐａｋ（Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｐｅｃｉａｌｔｙ  Ｉｎｃ．）から、フィコール−Ｈｙｐａｑｕｅ（Ｍｅｄｉａｔｅｃｈ  Ｃｅｌｌｇｒｏ）を用いて、標準のプロトコルを使用して単離した。単離したｈＰＢＭＣを洗浄し、結合バッファー（ＲＰＭＩ−１６４０、０．１％ＢＳＡ、２０ｍＭのＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．４）中で１×１０7個／ｍｌまで希釈した。125Ｉ−ＭＣＰ−１（ＮＥＮ／Ｐｅｒｋ  Ｅｌｍｅｒ）を結合バッファー中で０．４５ｎＭまで希釈した。化合物を結合バッファー中で、結合アッセイで使用する最終濃度の３倍で希釈した。結合アッセイは、９６ウェルフィルタープレート（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて行った。全125Ｉ−ＭＣＰ−１結合は以下のように評価した：１５０μｌの全容量のそれぞれの反応に、５×１０5個の細胞、０．１５ｎＭの125Ｉ−ＭＣＰ−１、および最終濃度の範囲が０〜１００ｎＭとなる化合物を加えた。プレートを室温で３０分間インキュベーションし、次いで、真空多岐管濾過（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いてＲＰＭＩ−１６４０、０．１％のＢＳＡ、０．４ＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．４で３回洗浄した。洗浄後、プレートを６０分間室温で空気乾燥させた。次いで、２５μｌのＭｉｃｒｏｓｃｉｎｔ  ２０をそれぞれのウェルに加えた。プレートを密閉し、Ｔｒｉｌｕｘで１分間計数した。非特異的結合は、３００ｎＭの冷ＭＣＰ−１（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ  Ｉｎｃ．）の存在下で決定した。特異的125Ｉ−ＭＣＰ−１は、全結合と非特異的結合との差として計算した。すべての条件を２つ組で試験した。ＩＣ５０とは、特異的結合を５０％低下させるために必要な競合化合物の濃度と定義される。
【０２６３】
ｈＥＲＧ流束
ｈＥＲＧチャネルを安定して発現しているＨＥＫ２９３細胞を、１０％のＳｉｇｍａウシ胎児血清、非必須アミノ酸、２ｍＭのＬ−グルタミンおよび５００μｇ／ｍｌのＧ４１８を添加したダルベッコ変法イーグル培地中、インキュベーターで増殖させた（３７℃、５％のＣＯ2）。細胞解離バッファーを用いて細胞をフラスコから抽出し、その後、これを、３８４ウェルのＣｏｒｎｉｎｇポリ−Ｄ−リシンでコーティングした黒色／透明プレートに、１０％の血清培地中に２×１０4個の細胞／ウェルの密度（２０μｌ）で播種し、１５〜２４時間、３７℃、５％のＣＯ2インキュベーター内で、コンフルエントな細胞の単層が得られるまでインキュベーションした。
【０２６４】
ＢＴＣ−ＡＭ色素（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ、オレゴン州Ｅｕｇｅｎｅ）の２ｍＭのストックを１００％のＤＭＳＯ中で調製し、アッセイの日に、ＤＭＳＯ中に１０％（ｗ／ｖ）のｐｌｕｒｏｎｉｃ酸に１：１で加えた。その後、色素をｈＥＲＧ外部ＥＰバッファー（１４０ｍＭのＮａＣｌ、４．０ｍＭのＫＣｌ、１．８ｍＭのＣａＣｌ2、１．０ｍＭのＭｇＣｌ2、１０ｍＭのＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．３および１０ｍＭのグルコース；すべてのバッファー構成成分はＳｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌから入手した）中で希釈した。このＢＴＣ色素混合物（３０μｌ）を細胞に加え、２．５μＭの最終ロード濃度が生じた。細胞を２１℃で４５分間インキュベーションする。
【０２６５】
試験化合物を６０μｌ中に１０ｍＭのＤＭＳＯまで希釈した。その後、これらの化合物を、ＤＭＳＯ中に１：２の比で、３８４ウェルプレートのカラム１〜１０および１１〜２０内で段階希釈した。アッセイの準備ができたプレートは、ＤＭＳＯで段階希釈したプレートから２．５μｌをスタンプすることによって作製し、これは、Ｖｅｌｏｃｉｔｙ  １１  ＢｉｏＣｅｌ上で調製した。４８μｌのＥＰバッファーを加えることによって水性プレートを作製し、その後、アッセイをＦＬＩＰＲで読み取る３０〜４５分間前に希釈した。色素を載せた後、水性希釈した化合物を３つ組プレートの細胞に加え（１０μｌ）、８０μＭ〜０．１５６ｎＭの十点濃度範囲が得られた。アッセイ中の最終ＤＭＳＯ濃度は１％である。アッセイの準備ができた水性プレートを調製し、Ｃｙｂｉｏ液体ハンドラーで希釈した。
【０２６６】
色素を載せた細胞を、アルゴンレーザーの４８８ｎｍ系を用いて色素を励起させるＦＬＩＰＲ３８４（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ、カリフォルニア州Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ）で読み取った。発光は、５４０±３０ｎｍの帯域通過フィルターを用いてフィルタリングした。６６ｍＭのＫ2ＳＯ4および１．３ｍＭのＴｌ2ＳＯ4（Ｓｉｇｍａ／Ａｌｄｒｉｃｈ）を含む２０μｌ／ウェルのＥＰバッファーを加えることによって、ｈＥＲＧチャネルが開くように刺激した。それぞれのプレートについて、データを１２秒間の間、毎秒収集し、この時点でＴｌ+含有刺激バッファーを加えた。データ収集を４８秒間の間、毎秒継続し、その後、さらに２分間、３秒毎に続けた。
【０２６７】
アッセイの動作範囲をブランクおよび全ウェルから決定した。全ウェル（カラム２１および２２）は、プレートの最大ｈＥＲＧ活性化を定義し（試験化合物が存在しない）、ブランクのウェル（カラム２３および２４）は１００％のｈＥＲＧ阻害を定義する。ブランクのウェルは、４００ｎＭの標準のｈＥＲＧ阻害剤ドフェチリド（Ficker, et al.、1998）またはＥ−４０３１のどちらかを含む。オンラインＦＬＩＰＲソフトウェアを用いて、それぞれの試料ウェルの生データ点を、最初に細胞／シグナルのばらつき、陰性対照（ブランク）バックグラウンドについて補正し、陽性対照（全ウェル）に対して正規化した。その後、Ｅｘｃｅｌ  Ｆｉｔ（ＩＤ  Ｂｕｓｉｎｅｓｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎｓ  Ｌｉｍｉｔｅｄ、英国Ｓｕｒｒｅｙ）を使用して、単点ロジスティック方程式、Ｙ＝Ａ＋（（Ｂ−Ａ）／１＋（（Ｃ／Ｘ）＾Ｄ）））［式中、Ａ＝最大阻害］を用いて、ｈＥＲＧ  Ｔｌ+流束データの試験化合物の濃度応答曲線を当てはめた。データは、試験化合物の所定の条件についてＴｌ+流束の蛍光の変化の最大振幅を当てはめることによって、分析した。化合物の効力（ＩＣ50値）は、３つ組ウェルの平均から計算した。
【０２６８】
ナトリウムチャネル、部位２結合アッセイ
W. A. Catterall, et al.、J. Biol. Chem.、1981、256、8922も参照されたい。標準の結合バッファーは、５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１３０ｍＭの塩化コリン、５．４ｍＭのＫＣｌ、０．８ｍＭのＭｇＣｌ2、５．５ｍＭのグルコース、４０μｇ／ｍＬのＬｑＴを含んでいた。結合反応は、シナプトソーム（ウィスターラットの脳から調製）を、標準の結合バッファー中に５ｎＭの［3Ｈ］−バトラコトキシンおよび望ましい濃度の試験する化合物を含む反応混合物に加えることによって、開始させた。その後、試料を混合し、３７℃で６０分間インキュベーションした。５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、５０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１．８ｍＭのＣａＣｌ2、０．８ｍＭのＭｇＣｌ2および１ｍｇ／ｍＬのウシ血清アルブミンを含む氷冷洗浄バッファーを加えることによって反応を停止させた。シナプトソームをすぐにガラスファイバーフィルター上に回収し、洗浄バッファーで３回洗浄した。液体シンチレーション分光計を用いて、フィルター上に残った［3Ｈ］−バトラコトキシンの放射活性を計数した。
【０２６９】
平行人工膜透過性アッセイ（ＰＡＭＰＡ）
平行人工膜透過性アッセイ（ＰＡＭＰＡ）は、胃腸管（ＧＩＴ）脂質と呼ばれる特別に配合したレシチン系の脂質の組合せからなる。ＧＩＴ脂質を用いて、Ｃａｃｏ−２アッセイで用いるものに類似のサンドイッチプレートアセンブリに膜を形成する。ＧＩＴ脂質は、ヒトにおいて受動的に吸収されることが知られている標準の化合物によって測定すると、インビボの膜の組成および性能に非常に似ている。ＰＡＭＰＡは、発見化合物の透過性スクリーニングのインビトロモデルとして幅広く使用されている。ＰＡＭＰＡ膜を通る化合物の通過速度を用いて、化合物のインビボの受動的透過性と関連させることができる透過性係数（Ｐｃ）を決定する。
【０２７０】
特定の化合物の透過性係数（Ｐｃ）はｐＨ依存性の設定で検査し、頂点および側底のｐＨは７．４である。すべての実験は３つ組の決定で実施する。
【０２７１】
化合物（１００％のＤＭＳＯ中に１０ｍＭのストック）を、ｐＨ７．４のドナーウェルバッファー（ｐＩＯＮカタログ番号１１０１５１）中で１：１００に希釈し、１％のＤＭＳＯ中の１００μＭのアッセイ溶液がもたらされた。ドナーウェルバッファー中で希釈した化合物をＷｈａｔｍａｎ  Ｕｎｉｆｉｌｔｅｒプレートに移し、濾過した後、２００μｌをアッセイプレート（ｐＩＯＮカタログ番号１１０１６３）のドナーウェルに分注した。ＰＡＭＰＡ膜は、４μｌの脂質溶液（ｐＩＯＮカタログ番号１１０１６９）をフィルタープレート（ＶＷＲ  カタログ番号１３５０３）上にピペットで操作することによって形成した。その後、膜を２００μｌのアクセプターウェルバッファー、ｐＨ７．４（ｐＩＯＮカタログ番号１１０１３９）で覆った。ＰＡＭＰＡアッセイプレート（ドナー側およびアクセプター側）を合わせ、室温で４時間インキュベーションさせた。その後、プレートを分解し、分光光度計プレート（ＶＷＲ  カタログ番号６５５８０１）を満たした（１５０μｌ／ウェル）。ドナー、アクセプター、参照、およびブランクのプレートを、ＳｐｅｃｔｒａＭａｘ  ＵＶプレートリーダーで読み取った。データは、スペクトルおよび生じたＰｃ値を解析するｐＩＯＮソフトウェアで収集した。
【０２７２】
ＣＣＲ２の化学走性
ヒトＣＣＲ２の化学走性アッセイは、ヒト単球細胞系ＴＨＰ−１で実施した。最初に、ＴＨＰ−１細胞を、フェノールレッドを含まないＢＳＡを含まないＲＰＭＩ−１６４０（ｐＨ７．４）中の蛍光色素カルセイン−ＡＭで、３７℃で３０分間、１５分毎に穏やかに混合しながら標識した。その後、標識した細胞を洗浄し、化学走性バッファー（フェノールレッドを含まないＲＰＭＩ−１６４０、０．１％のＢＳＡ、ｐＨ７．４）中に１×１０5個／ｍｌで再懸濁させた。最終アッセイ濃度の範囲が０．０１ｎＭ〜１μＭとなるように、試験化合物を化学走性バッファー中で希釈した。リガンドＭＣＰ−１（ＰｅｐｒｏＴｅｃｈ  Ｉｎｃ．）を化学走性バッファーで２０ｎＭまで希釈した。アッセイを行うために、等容量の試験化合物希釈液を等容量の標識したＴＨＰ−１細胞と混合し（混合物１）、等容量の試験化合物希釈液を等容量の希釈したＭＣＰ−１リガンドと混合した（混合物２）。どちらの混合物も、３７℃で１０分間、独立してインキュベーションし、次いで穏やかに混合した。その後、５０μｌの混合物１を上部チャンバに入れ、２２５μｌの混合物２を下部チャンバに入れることによって、ＭＣＰ−１誘導性化学走性を化学走性プレート（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）中で測定した。プレートに蓋をし、３７℃で３０分間インキュベーションした。３０分後、プレートをＣｙｔｏｆｌｕｏｒで読み取った。すべての条件は２つ組で試験した。シグナル対ノイズの決定には、５０μｌの標識したＴＨＰ−１細胞を単独で上部チャンバに入れ（５×１０4個／ウェル）、２２５μｌのリガンドＭＣＰ−１を単独で下部チャンバに入れた（最終濃度１０ｎＭ）。段階的な濃度の試験化合物によって達成される阻害を、化合物を含まないＭＣＰ−１対照の割合として計算した。ＩＣ５０とは、細胞の化学走性の５０％の阻害に達するために必要な試験化合物の濃度と定義される。
【０２７３】
ｈＥＲＧパッチクランプ
全細胞パッチクランプを用いて、クローニングしたｈＥＲＧカリウムチャネルαサブユニットを安定して発現しているＨＥＫ−２９３細胞におけるｈＥＲＧ電流を直接測定した。化合物は、ｐＨ７．４の水性バッファー中、室温で試験した。反復試験パルス（０．０５Ｈｚ）を−８０ｍＶ〜＋２０ｍＶの保持電位で２秒間適用し、電位を−６５ｍＶまでステップさせることによって、試験パルス後にテール電流を誘発した。化合物からの効果は、ピークテール電流の阻害を測定することによって計算した。
【０２７４】
ナトリウムチャネルパッチクランプ
全細胞パッチクランプを用いて、ヒト心臓ナトリウムチャネルＳＣＮ５Ａを発現しているＨＥＫ−２９３細胞における内向ナトリウム電流を直接測定した。化合物は、タンパク質を含まない水性バッファーで試験した。定常状態阻害を決定するために、以下の電位プロトコルを用いてナトリウム電流を５秒毎に誘発した：細胞を−９０ｍＶの電位に保持し、−２０ｍＶまで６０ｍｓステップさせた。効果は、−２０ｍＶまでの試験パルス中のピーク電流の阻害を測定することによって計算した。速度依存性の阻害は、１Ｈｚおよび４Ｈｚの周波数での刺激によって評価した。
【０２７５】
ラットにおける単一用量薬物動態学
オスのスプラーグ−ドーリーラット（２５０〜３００ｇ）を薬物動態学研究に用いた。ＰＯ投薬前にラットを終夜絶食させ、投薬の４時間後に給餌した。血液試料（約０．３ｍＬまで）を頸静脈からＫ2ＥＤＴＡ含有チューブ内に採取し、その後、４℃で遠心分離して（１５００〜２０００×ｇ）血漿が得られた。経口生体利用度の研究では、２群の動物（Ｎ＝２〜３／群）に、頸静脈からの静脈内（ＩＶ）インフュージョン（１０分間にわたる）として、または経口胃管栄養法によって試験化合物を与えた。一連の血液試料が、投薬の０．１７（ＩＶのみ）、０．２５、０．５、０．７５、１、２、４、６、８、および２４時間後に得られた。４℃での遠心分離（１５００〜２０００×ｇ）によって得られた血漿試料は、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって分析するまで−２０℃で保管した。
【０２７６】
サルにおける単一用量薬物動態学
様々な試験化合物の薬物動態学を、オスのカニクイザルにおいてクロスオーバーの設計で評価した。ＰＯ投薬前にサルを終夜絶食させ、投薬の４時間後に給餌した。１〜３匹の動物（３〜５ｋｇ）の群に、大腿静脈からのＩＶインフュージョン（１０分間にわたる）によって、および経口胃管栄養法によって化合物を与え、処置間に１週間の洗い流しを用いた。一連の血液試料（約０．３ｍＬまで）を、大腿動脈から、投薬の０．１７（ＩＶのみ）、０．２５、０．５、０．７５、１、２、４、６、８、および２４時間後に採取し、４℃で遠心分離して（１５００〜２０００×ｇ）血漿が得られた。試料は、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳによって分析するまで−２０℃で保管した。
【０２７７】
薬物動態学アッセイ用のデータ分析
薬物動態学パラメータは、血漿濃度対時間データの非区画分析によって得た（ＫＩＮＥＴＩＣＡ（商標）ソフトウェア、バージョン４．２、ＩｎｎａＰｈａｓｅ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ、ペンシルバニア州Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ）。ピーク濃度（Ｃｍａｘ）およびＣｍａｘの時間は、実験観察から直接記録した。時間０から最後のサンプリング時間までの曲線下面積（ＡＵＣ（０〜Ｔ））は、直線およびログ台形総和の組合せを用いて計算した。全血漿クリアランス（ＣＬＴｐ）、定常状態分布容量（Ｖｓｓ）、見かけ上の排出半減期（Ｔ１／２）および平均滞留時間（ＭＲＴ）を、ＩＶ投与後に推定した。Ｔ１／２の推定は、定量可能な濃度を有する最低３つの時点を用いて行った。絶対経口生体利用度（Ｆ）は、経口およびＩＶ投薬後の、用量で正規化したＡＵＣ値の比として推定した。
【０２７８】
以下に、上述したアッセイで測定されたそれぞれの化合物のデータが見つかる。
【表１１】
2009544758.tif 000093
【表１２−１】
2009544758.tif 000094
【表１２−２】
2009544758.tif 000095
【表１２−３】
2009544758.tif 000096
【０２７９】
有用性
実施例の代表的な化合物は、当業者によって知られているアッセイを用いて、ケモカイン受容体活性のモジュレーターであることが示されている。本セクションでは、そのようなアッセイを記載し、その参考文献を与える。さらなるアッセイは、本明細書中に、上記の題名「薬理学的特徴の比較」のセクションに記載されている。ＭＣＰ−１拮抗のこれらのアッセイにおいて活性を示すことによって、実施例の化合物は、ケモカインおよびその同族受容体に関連するヒトの疾患の治療に有用であることが期待される。これらのアッセイにおける活性の定義とは、特定のアッセイで測定した場合に３０μＭ以下の濃度のＩＣ50を実証する化合物である。
【０２８０】
ヒトＰＢＭＣに対するＭＣＰ−１の結合の拮抗
（Yoshimura et al.、J. Immunol.、1990、145、292）
実施例中に記載する少なくとも１つの化合物が、本明細書中に記載するヒトＰＢＭＣ（ヒト末梢血単核細胞）に対するＭＣＰ−１の結合の拮抗において活性を有する。
【０２８１】
Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅフィルタープレート（＃ＭＡＢＶＮ１２５０）を、１００μｌの結合バッファー（ＲＰＭＩ１６４０培地中に０．５％のウシ血清アルブミン、２０ｍＭのＨＥＰＥＳバッファーおよび５ｍＭの塩化マグネシウム）で、３０分間、室温で処理する。結合を測定するために、既知の濃度の化合物を含むまたは含まない５０μｌの結合バッファーを、５０μｌの125−Ｉで標識したヒトＭＣＰ−１（１５０ｐＭの放射性リガンドの最終濃度を得るため）および５×１０5個の細胞を含む５０μｌの結合バッファーと合わせる。そのような結合アッセイに用いる細胞には、フィコール−Ｈｙｐａｑｕｅ勾配遠心分離によって単離したヒト末梢血単核細胞、ヒト単球（Weiner et al.、J. Immunol. Methods.、1980、36、89）、または内在性受容体を発現するＴＨＰ−１細胞系が含まれることができる。化合物、細胞および放射性リガンドの混合物を、室温で３０分間インキュベーションする。プレートを真空の多岐管上に置き、真空を適用し、プレートを、０．５ＭのＮａＣｌを含む結合バッファーで３回洗浄する。プラスチックスカートをプレートから取り外し、プレートを空気乾燥させ、ウェルを打ち抜いて計数する。任意の競合化合物が存在しない場合に得られる合計数および試験化合物の代わりに１００ｎＭのＭＣＰ−１を加えることによって決定されるバックグラウンド結合を用いて、結合の％阻害を計算する。
【０２８２】
ＭＣＰ−１誘導性のカルシウム流入の拮抗
(Sullivan, et al.、Methods Mol. Biol.、114、125〜133 (1999)
実施例中に記載する少なくとも１つの化合物が、本明細書中に記載するＭＣＰ−１誘導性のカルシウム流入アッセイの拮抗において活性を有する。
【０２８３】
カルシウム動員は、蛍光Ｃａ2+指示薬色素Ｆｌｕｏ−３を用いて測定する。細胞を、８×１０5個の細胞／ｍｌで、０．１％のウシ血清アルブミン、２０ｍＭのＨＥＰＥＳバッファー、５ｍＭのグルコース、１％のウシ胎児血清、４μＭのＦｌｕｏ−３ＡＭおよび２．５ｍＭのプロベネシドを含むリン酸緩衝生理食塩水中、６０分間３７℃でインキュベーションする。そのようなカルシウムアッセイで使用する細胞には、Weiner et al.、J. Immunol. Methods、36、89〜97 (1980)によって記載されているように単離したヒト単球、またはＴＨＰ−１およびＭｏｎｏＭａｃ−６などの内在性ＣＣＲ２受容体を発現する細胞系が含まれることができる。その後、細胞を、０．１％のウシ血清アルブミン、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、５ｍＭのグルコースおよび２．５ｍＭのプロベネシドを含むリン酸緩衝生理食塩水で３回洗浄する。細胞を、０．５％のウシ血清アルブミン、２０ｍＭのＨＥＰＥＳおよび２．５ｍＭのプロベネシドを含むリン酸緩衝生理食塩水に、２〜４×１０6個の細胞／ｍｌの最終濃度で再懸濁させる。細胞を９６ウェルの黒色壁のマイクロプレートに播種し（１００μｌ／ウェル）、プレートを２００×ｇで５分間遠心分離する。様々な濃度の化合物をウェルに加え（５０μｌ／ウェル）、５分後、５０μｌ／ウェルのＭＣＰ−１を加えて１０ｎＭの最終濃度が得られる。カルシウム動員は、蛍光イメージングプレートリーダーを用いることによって検出する。細胞単層をアルゴンレーザー（４８８ｎＭ）で励起させ、細胞に関連する蛍光を３分間測定する（最初の９０秒間は毎秒、次の９０秒間は１０秒毎）。データは任意の蛍光単位として生じ、それぞれのウェルの蛍光の変化を最大−最小の差異として決定する。化合物依存性の阻害は、ＭＣＰ−１単独での応答と比較して計算する。
【０２８４】
ＭＣＰ−１誘導性のヒトＰＢＭＣ化学走性の拮抗
（Bacon et al.、Brit. J. Pharmacol.、1988、95、966）
実施例中に記載する少なくとも１つの化合物が、本明細書中に記載のＭＣＰ−１誘導性のヒトＰＢＭＣ化学走性アッセイの拮抗において活性を有する。
【０２８５】
神経プローブＭＢＡ９６の９６ウェル化学走性チャンバ、Ｐｏｌｙｆｉｌｔｒｏｎｉｃｓ  ＭＰＣ  ９６ウェルプレート、および神経プローブポリビニルピロリドンを含まないポリカーボネートＰＦＤ５の８ミクロンフィルターを、３７℃のインキュベーター内で温める。標準のフィコール密度分離方法によって新鮮なものを単離したヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）（Boyum et al.、Scand. J. Clin. Lab Invest. Suppl.、1968、97、31）を、ＤＭＥＭ中に１×１０7個の細胞／ｍｌで懸濁させ、３７℃で温める。ヒトＭＣＰ−１の６０ｎＭの溶液も３７℃で暖める。試験化合物の希釈液を、ＤＭＥＭ中に必要な濃度の２×で作製する。ＰＢＭＣ懸濁液および６０ｎｍのＭＣＰ−１溶液を、予熱したＤＭＥＭを含むポリプロピレンチューブ内で、試験化合物を希釈してまたは希釈せずに、１：１で混合する。これらの混合物は、３７℃チューブ加温器内で温める。アッセイを開始するためには、ＭＣＰ−１／化合物の混合物を、神経プローブ化学走性チャンバの下部分内に入れたＰｏｌｙｆｉｌｔｒｏｎｉｃｓ  ＭＰＣ  ９６ウェルプレートのウェルに加える。概ねの容量はそれぞれのウェルに４００μｌであり、分注後に正メニスカスがあるはずである。８ミクロンのフィルターを９６ウェルプレートの上に穏やかに置き、ゴムのガスケットを上部チャンバの底部に装着し、チャンバを組み立てる。細胞懸濁液／化合物の混合物の２００μｌ容量を上部チャンバの適切なウェルに加える。上部チャンバをプレートシーラーで覆い、組み立てたユニットを３７℃のインキュベーター内に４５分間置く。インキュベーション後、プレートシーラーを取り外し、残った細胞懸濁液をすべて吸引して除去する。チャンバを分解し、フィルターを穏やかに取り外す。フィルターを９０°の角度に保ちながら、穏やかな流れのリン酸緩衝生理食塩水を用いて遊走しなかった細胞を洗浄して除去し、フィルターの上部をゴムスキージの先端で拭う。この洗浄をさらに２回繰り返す。フィルターを空気乾燥させ、その後、Ｗｒｉｇｈｔ  Ｇｅｉｍｓａ染色に４５秒間、完全に浸す。その後、蒸留水に７分間浸し、その後、１５秒間新鮮な蒸留水でさらに洗浄することによって、フィルターを洗浄する。フィルターを再度空気乾燥させる。フィルター上の遊走した細胞を視覚的顕微鏡観察によって定量する。
【０２８６】
哺乳動物ケモカイン受容体は、ヒトなどの哺乳動物において免疫細胞機能に干渉するまたはそれを促進するための標的を提供する。ケモカイン受容体の機能を阻害または促進する化合物が、治療目的のための免疫細胞機能の変調に特に有用である。したがって、本発明は、喘息およびアレルギー性疾患、病原性微生物（定義によりウイルスが含まれる）による感染症、ならびに関節リウマチおよびアテローム性動脈硬化症などの自己免疫病理を含めた、様々な炎症性、感染性、および免疫調節性の障害および疾患の予防および／または治療に有用な化合物に向けられている。
【０２８７】
たとえば、哺乳動物ケモカイン受容体（たとえばヒトケモカイン受容体）の１つまたは複数の機能を阻害する本発明の化合物を、炎症または感染症を阻害（すなわち、軽減または予防）するために投与し得る。その結果、白血球の遊出、接着、化学走性、開口分泌（たとえば酵素ヒスタミンの）または炎症伝達物質の放出などの、１つまたは複数の炎症プロセスが阻害される。
【０２８８】
同様に、哺乳動物ケモカイン受容体（たとえばヒトケモカイン）の１つまたは複数の機能を促進する本発明の化合物は、白血球の遊出、接着、化学走性、開口分泌（たとえば酵素ヒスタミンの）または炎症伝達物質の放出などの免疫または炎症反応を刺激（誘発または増強）させるために投与し、これは、炎症プロセスの有益な刺激をもたらす。たとえば、寄生生物感染症と戦うために好酸球を動員することができる。さらに、前述の炎症性、アレルギー性および自己免疫性の疾患の治療も、ケモカイン受容体の内部移行の誘導によって細胞上の受容体発現の損失を引く起こすために十分な化合物のデリバリー、または細胞遊走の誤った指示をもたらす様式の化合物デリバリーを企図する場合は、哺乳動物ケモカイン受容体の１つまたは複数の機能を促進する本発明の化合物について企図することができる。
【０２８９】
ヒトなどの霊長類に加えて、様々な他の哺乳動物を、本発明の方法に従って治療することができる。たとえば、それだけには限定されないが、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、モルモット、ラットまたは他のウシ科動物、ヒツジ科動物、ウマ科動物、イヌ科動物、ネコ科動物、げっ歯類もしくはネズミ種を含めた哺乳動物を治療することができる。しかし、本方法は、トリ種などの他の種でも実施することができる。上記方法で治療した対象は、ケモカイン受容体活性の変調が所望される、オスまたはメスの哺乳動物である。本明細書中で使用する「変調」とは、拮抗、アゴニズム、部分的拮抗および／または部分的アゴニズムを包含することを意図する。
【０２９０】
ＣＣＲ５結合および機能的アッセイ
細胞誘導体化および細胞培養：内在性ＣＣケモカイン受容体５（ＣＣＲ５）を安定して発現しているＨＴ１０８０細胞のプールを、Ｈａｒｒｉｎｇｔｏｎ、Ｓｈｅｒｆ、およびＲｕｎｄｌｅｔｔによって概要が示された方法を用いて開発した（米国特許ＵＳ６，３６１，９７２号およびＵＳ６，４１０，２６６号を参照）。最も高発現のクローンを、反復フローサイトメトリー、次いでサブクローニングを用いて単離した。その後、これらの細胞を、６ウェルの皿中、３×１０5個の細胞／ウェルで培養し、キメラのＨＡタグ付けしたＧタンパク質Ｇｑｉ５を含むＤＮＡベクターで形質移入した（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ；１５マイクロＬのＦｅｒｍｅｎｔｅｓのＥｘ−Ｇｅｎ中に５マイクログラムの直鎖状にしたベクターＤＮＡを形質移入に用いた）。形質移入の２日後、ウェルを合わせ、Ｐ１００プレートに播種した。播種の７日後、コロニーを拾い、拡大させ、ウエスタンブロットによってＧｑｉ５含有量について分析した。高発現のＧｑｉ５（形質移入から）およびＣＣＲ５（内在性）を有するクローン（３５５９．１．６と呼ぶ）を選択し、以下に記載の実験で用いた。ＨＴ１０８０細胞（クローン３５５９．１．６）を、１０％の透析ウシ胎児血清、２％のペニシリン／ストレプトマイシン／グルタミン、および５００マイクログラム／ｍＬのハイグロマイシンＢ（最終濃度）を添加したα−ＭＥＭを用いて、３７℃、５％のＣＯ2で、加湿雰囲気中で培養した。
【０２９１】
膜の調製：１×１０8個のＨＴ１０８０細胞（クローン３５５９．１．６）含む細胞ペレットを、５ｍＬの氷冷膜調製バッファー（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、５ｍＭのＭｇＣｌ2、１ｍＭのＣａＣｌ2）に再懸濁させ、Ｐｏｌｙｔｒｏｎホモジナイザーで、高速で２０秒間、氷上でホモジナイズした。ホモジネートをさらに２５ｍＬの膜調製バッファーで希釈し、１２分間遠心分離した（４８，０００×ｇ、４℃）。細胞ペレットを５ｍＬの膜調製バッファーに再懸濁させた後、既に記載したように再度ホモジナイズした。ホモジネートを５ｍＬの膜調製バッファーで希釈し、ＣＣＲ５タンパク質濃度についてアッセイした。
【０２９２】
結合アッセイ：上述の膜の調製からの新しく調製したホモジネートを、結合バッファー（５０ｍＭのＨＥＰＥＳ、５ｍＭのＭｇＣｌ2、１ｍＭのＣａＣｌ2、０．１％のＢＳＡ；アッセイ前に１個の完全なプロテアーゼ阻害剤錠剤を加えた）中で希釈して、１０マイクログラム／ウェル（Ｃｏｒｎｉｎｇ，Ｉｎｃ．の無地の白色９６ウェルプレート）の最終タンパク質濃度を達成した。この膜調製物をＷＧＡ−ＳＰＡビーズ（Ａｍｅｒｈｓａｍ；結合バッファーに事前に浸した）と混合して、２００マイクログラム／ウェルの濃度が得られた。その後、膜／ＳＰＡビーズ混合物（１００マイクロリットル／ウェル）を、様々な濃度の被験物質を含む２マイクロリットルのＤＭＳＯ（陰性対照には純粋なＤＭＳＯ；被験物質には様々な濃度の本発明の実施例；陽性対照として５００ｎＭのＭＩＰ−１β）で事前にドットしたプレートに加えた。結合アッセイは、５０マイクロリットルの［125Ｉ］−ＭＩＰ−１β（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ；物質は、５０マイクロリットル／ウェルを加えることによって０．１ｎＭの最終濃度の［125Ｉ］−ＭＩＰ−１βが得られるように結合バッファー中で希釈した）を加えることで開始した。プレートを密閉し、室温で４〜６時間静置した後、Ｐａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔで計数した。それぞれの実験のウィンドウを定義するために陰性および陽性対照を使用して、被験物質の％結合を計算した。
【０２９３】
蛍光イメージングプレートリーダー（ＦＬＩＰＲ）に基づいた機能的アッセイ：ＨＴ１０８０細胞（クローン３５５９．１．６）を、１０，０００個の細胞／ウェル（３０マイクロリットル）で、３８４ウェルプレート（黒色／透明の底部のＢｉｏｃｏａｔ  ＰＤＬ、Ｂｅｃｋｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）に播種し、３０マイクロリットル／ウェルのＦｌｕｒｏ−４ＡＭ蛍光色素（１ｍｇのＦｌｕｒｏ−４ＡＭを４４０マイクロリットルのＤＭＳＯに溶かし、１００マイクロリットルのｐｌｕｒｏｎｉｃ溶液で希釈した後、１０ｍＬのハンクスバッファーでさらに希釈することによって調製）を入れた。細胞を、３７℃、５％のＣＯ2で３０分間インキュベーションした後、３回洗浄し、アッセイバッファー（２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１．２ｍＭのＣａＣｌ2、５ｍＭのＭｇＣｌ2、２．５ｍＭのプロベネシド、０．５％のＢＳＡ、１×ハンクス）に懸濁させた。被験物質をＤＭＳＯ中で段階希釈し、その後、アッセイバッファーで１：１０に希釈した後、細胞に加えた（１０マイクロリットル／ウェル）。ＦＬＩＰＲを用いて、流束（すなわち作用活性）の導入についてプレートを読み取った（１０〜７０秒間）。その後、細胞に作用剤溶液をさらに入れ（３０マイクロリットル／ウェル；３０マイクロリットルの１００マイクロモーラーのＭＩＰ−１βを１００ｍＬのアッセイバッファーで希釈することによって調製；このプロトコルにより、アッセイにおいて５ｎＭのＭＩＰ−１βの最終濃度がデリバリーされる）、ＦＬＩＰＲを用いてプレートを１分間読み取った。被験物質の拮抗活性は、０．４％のＤＭＳＯ／バッファーの陰性対照と比較して決定した。
【０２９４】
ケモカイン受容体の機能の阻害剤で治療することができるヒトまたは他の種疾患または状態には、それだけには限定されないが、喘息、アレルギー性鼻炎、過敏症肺疾患、過敏性肺炎、好酸球性蜂窩織炎（たとえばウェルズ症候群）、好酸球性肺炎（たとえば、レフラー症候群、慢性好酸球性肺炎）、好酸球性筋膜炎（たとえばシュルマン症候群）、遅延型過敏症、間質性肺疾患（ＩＬＤ）（たとえば、特発性肺線維症、または関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強直性脊椎炎、全身性硬化症、シェーグレン症候群、多発性筋炎もしくは皮膚筋炎に関連するＩＬＤ）などの呼吸アレルギー性疾患；全身性アナフィラキシーまたは過敏症応答、薬物アレルギー（たとえば、ペニシリン、セファロスポリンに対する）、汚染トリプトファンの摂取による好酸球増加症−筋痛症候群、昆虫刺傷アレルギー；関節リウマチ、乾癬性関節炎、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、重症筋無力症、若年発症糖尿病などの自己免疫疾患；糸球体腎炎、自己免疫甲状腺炎、ベーチェット病；同種移植片拒絶または移植片対宿主病を含めた移植片拒絶（たとえば移植における）；クローン病および潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患；脊髄関節症；強皮症；乾癬（Ｔ細胞媒介性乾癬を含む）および皮膚炎、湿疹、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触皮膚炎、蕁麻疹などの炎症性皮膚疾患；血管炎（たとえば、壊死性、皮膚、および過敏症の血管炎）；好酸球性筋炎、好酸球性筋膜炎；皮膚または器官の白血球浸潤を伴う癌を含めた、炎症性またはアレルギー性の疾患および状態が含まれる。それだけには限定されないが、血管炎、不安定プラーク、静脈新生内膜過形成再灌流傷害、透析−移植新生内膜過形成、動静脈シャント内膜過形成、アテローム性動脈硬化症、特定の血液悪性疾患、サイトカイン誘発毒性（たとえば、敗血症性ショック、内毒素ショック）、多発性筋炎、皮膚筋炎を含めた、望ましくない炎症反応を阻害すべき他の疾患または状態を治療することができる。ケモカイン受容体の機能の阻害剤で治療することができるヒトまたは他の種の感染症または状態には、それだけには限定されないが、ＨＩＶが含まれる。
【０２９５】
ケモカイン受容体の機能のプロモーターで治療することができるヒトまたは他の種の疾患または状態には、それだけには限定されないが：ＡＩＤＳまたは他のウイルス感染症などに罹患している個体、免疫抑制を引き起こす、放射線療法、化学療法、自己免疫疾患の治療または薬物療法（たとえばコルチコステロイド治療）を受けている個体などにおける免疫抑制；受容体の機能の先天性欠損または他の原因による免疫抑制；および、それだけには限定されないが、線形動物（線虫）；（鞭虫、蟯虫、回虫、鈎虫、糞線虫、旋毛虫、糸状虫）；吸虫（ｔｒｅｍａｔｏｄｅ）（吸虫（ｆｌｕｋｅ））（住血吸虫症、肝吸虫症）、条虫（ｃｅｓｔｏｄｅ）（条虫（ｔａｐｅ  ｗｏｒｍ））（エキノコックス、無鉤条虫、嚢虫）；内臓虫（ｖｉｓｃｅｒａｌ  ｗｏｒｍ）、内臓幼虫移行症（たとえばトキソカラ）、好酸球性胃腸炎（たとえば、アニサキスｓｐ．、フォカネマ（Ｐｈｏｃａｎｅｍａ）ｓｐ．）、皮膚幼虫移行症（ブラジル鉤虫、イヌ鉤虫）などの蠕虫感染症を含めた寄生虫疾患等の感染症疾患が含まれる。したがって、本発明の化合物は、様々な炎症性、感染性および免疫調節性の障害および疾患の、予防および治療に有用である。
【０２９６】
さらに、前述の炎症性、アレルギー性および自己免疫性の疾患の治療も、ケモカイン受容体の内部移行の誘導によって細胞上の受容体発現の損失を引き起こすために十分な化合物のデリバリー、または細胞遊走の誤った指示をもたらす様式の化合物デリバリーを企図する場合は、ケモカイン受容体の機能のプロモーターについて企図することができる。
【０２９７】
別の態様では、本発明を用いて、Ｇタンパク質共役型受容体の推定上の特異的作用剤または拮抗剤を評価し得る。本発明は、ケモカイン受容体の活性を変調する化合物のスクリーニングアッセイの調製および実行における、これらの化合物の使用に向けられている。さらに、本発明の化合物は、他の化合物とケモカイン受容体との結合部位を、たとえば競合的阻害によって確立もしくは決定するため、または、その既知の活性を、未知の活性を有する化合物と比較するアッセイにおける参照として、有用である。新しいアッセイまたはプロトコルを開発する際、本発明による化合物を用いて、その有効性を試験することができる。具体的には、そのような化合物を、市販のキット、たとえば、前述の疾患に関連する医薬研究で使用するためのキット中に提供し得る。また、本発明の化合物は、ケモカイン受容体の推定上の特異的モジュレーターの評価にも有用である。さらに、本発明の化合物は、結合しない化合物の例として、または、相互作用の特異的部位の定義に役立ち得る、これらの受容体に対して活性を有する化合物の構造的変異体として役割を果たすことによって、ケモカイン受容体でないと考えられているＧタンパク質共役型受容体の特異性を検査するために利用することができる。
【０２９８】
本明細書中に開示する化合物は、関節リウマチ、骨関節炎、敗血症性ショック、アテローム性動脈硬化症、動脈瘤、発熱、心血管作用、血行動態ショック、敗血症症候群、虚血後再灌流障害、マラリア、クローン病、炎症性腸疾患、マイコバクテリア感染症、髄膜炎、乾癬、鬱血性心不全、線維性疾患、悪液質、移植片拒絶、自己免疫疾患、皮膚炎症性疾患、多発性硬化症、放射線損傷、過酸素症肺胞傷害、ＨＩＶ、ＨＩＶ認知症、インスリン非依存性真性糖尿病、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、特発性肺線維症、水疱性類天疱瘡、寄生蠕虫感染症、アレルギー性大腸炎、湿疹、結膜炎、移植、家族性好酸球増加症、好酸球性蜂窩織炎、好酸球性肺炎、好酸球性筋膜炎、好酸球性胃腸炎、薬物誘導好酸球増加症、嚢胞性線維症、チャーグ−ストラウス症候群、リンパ腫、ホジキン病、結腸癌、フェルティ症候群、サルコイドーシス、ブドウ膜炎、アルツハイマー、糸球体腎炎、および全身性エリテマトーデス、食道扁平細胞癌、神経因性疼痛、ならびに肥満症から選択される障害の治療または予防に有用である。
【０２９９】
別の態様では、化合物は、関節リウマチ、骨関節炎、アテローム性動脈硬化症、動脈瘤、発熱、心血管作用、クローン病、炎症性腸疾患、乾癬、鬱血性心不全、多発性硬化症、自己免疫疾患、皮膚炎症性疾患から選択される炎症性障害の治療または予防に有用である。
【０３００】
別の態様では、化合物は、関節リウマチ、骨関節炎、アテローム性動脈硬化症、クローン病、炎症性腸疾患、および多発性硬化症から選択される炎症性障害の治療または予防に使用する。
【０３０１】
別の態様では、本明細書中に開示する実施例は、それだけには限定されないが、以下を含めた様々な癌の治療に有用であり得る：
膀胱（加速および転移性膀胱癌を含む）、乳房、結腸（結腸直腸癌を含む）、腎臓、肝臓、肺（小細胞や非小細胞肺癌、および肺腺癌を含む）、卵巣、前立腺、精巣、尿生殖路、リンパ系、直腸、喉頭、膵臓（外分泌膵癌を含む）、食道、胃、胆嚢、子宮頸部、甲状腺、ならびに皮膚（扁平細胞癌を含む）を含めた癌；
白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、有毛細胞リンパ腫、組織球性リンパ腫、およびバーケットリンパ腫を含めたリンパ系統の造血腫瘍；
急性および慢性の骨髄性白血病、脊髄形成異常症候群、骨髄性白血病、ならびに前骨髄急性白血病を含めた骨髄系統の造血腫瘍；
星細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、およびシュワン腫を含めた中枢および末梢神経系の腫瘍；
線維肉腫、横紋筋肉腫、および骨肉腫を含めた間葉起源の腫瘍；
黒色腫、色素性乾皮症、ケラトアカントーマ、精上皮腫、甲状腺濾胞性癌、および奇形癌を含めた他の腫瘍。
【０３０２】
別の実施形態では、本発明は、乳癌、肝臓癌、前立腺癌、および黒色腫から選択される癌を治療する方法を開示する。さらに、本明細書中に開示する化合物は、卵巣癌および多発性骨髄腫の治療に有用であり得る。
【０３０３】
本発明は、様々な非癌性増殖性疾患を治療する方法を提供する。
【０３０４】
喘息およびアレルギー性疾患、ならびに関節リウマチやアテローム性動脈硬化症などの自己免疫病理および上述の病理を含めた、炎症性、感染性および免疫調節性の障害および疾患を予防および治療するための組合せ治療は、本発明の化合物と、そのような利用が知られている他の化合物との組合せによって例示される。たとえば、炎症の治療または予防では、本発明の化合物は、オピエート作用剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、シクロオキシゲナーゼ−２阻害剤、インターロイキン−１阻害剤などのインターロイキン阻害剤、腫瘍壊死因子阻害剤、ＮＭＤＡ拮抗剤、一酸化窒素の阻害剤または一酸化窒素の合成の阻害剤、非ステロイド性抗炎症剤、ホスホジエステラーゼ阻害剤、あるいはサイトカイン抑制抗炎症剤などの抗炎症剤または鎮痛剤と併せて、たとえばアセトアミノフェン、アスピリン、コデイン、フェンタニル、イブプロフェン、インドメタシン、ケトロラック、モルヒネ、ナプロキセン、フェナセチン、ピロキシカム、ステロイド鎮痛剤、スフェンタニル、サンリンダック（ｓｕｎｌｉｎｄａｃ）、インターフェロンαなどの化合物と併せて、使用し得る。同様に、本発明の化合物は、疼痛緩和剤；カフェイン、Ｈ２−拮抗剤、シメチコン、水酸化アルミニウムまたはマグネシウムなどの増強剤；フェニレフリン、フェニルプロパノールアミン、プソイドフェドリン、オキシメタゾリン、エピネフリン、ナファゾリン、キシロメタゾリン、プロピルヘキセドリン、またはレボデスオキシ（ｌｅｖｏｄｅｓｏｘｙ）−エフェドリンなどの鬱血除去剤；およびコデイン、ヒドロコドン、カラミフェン、カルベタペンタン、またはデキストラメトルファン（ｄｅｘｔｒａｍｅｔｈｏｒｐｈａｎ）などの鎮咳剤；利尿剤；ならびに鎮静性または非鎮静性抗ヒスタミン剤と共に投与し得る。同様に、本明細書中に開示する化合物は、本発明の化合物が有用な疾患または状態の治療／予防／抑制または寛解に用いられている他の薬物と組み合わせて使用し得る。そのような他の薬物は、それについて一般的に使用されている経路および量で、本発明の化合物と同時にまたは逐次的に投与し得る。化合物を１つまたは複数の他の薬物と同時に使用する場合、本発明の化合物に加えてそのような他の薬物を含む医薬組成物を使用し得る。したがって、医薬組成物には、本開示の化合物に加えて１つまたは複数の他の活性成分も含むものが含まれる。
【０３０５】
本発明の化合物と組み合わせ得る、別々にまたは同じ医薬組成物中で投与する他の活性成分の例には、それだけには限定されないが：（ａ）セレクチン、ＩＣＡＭおよびＶＬＡ−４に対するものなどのインテグリン拮抗剤；（ｂ）ベクロメタゾン、メチルプレドニゾロン、ベータメタゾン、プレドニゾン、デキサメタゾン、およびヒドロコルチゾンなどのステロイド；（ｃ）シクロスポリン、タクロリムス、ラパマイシンおよび他のＦＫ−５０６型免疫抑制剤などの免疫抑制剤；（ｄ）ブロモフェニラミン、クロルフェニルアミン、デキスクロルフェニルアミン、トリプロリジン、クレマスチン、ジフェンヒドラミン、ジフェニルピラリン、トリペレナミン、ヒドロキシジン、メトジラジン、プロメタジン、トリメプラジン、アザタジン、シプロヘプタジン、アンタゾリン、フェニラミンピリラミン、アステミゾール、テルフェナジン、ロラタジン、セチリジン、フェキソフェナジン、デスカルボエトキシロラタジンなどの抗ヒスタミン剤（Ｈ１−ヒスタミン拮抗剤）；（ｅ）ｂ２−作用剤（テルブタリン、メタプロテレノール、フェノテロール、イソエタリン、アルブテロール(albuteral)、ビトルテロール、およびピルブテロール）、テオフィリン、クロモリンナトリウム、アトロピン、臭化イプラトロピウム、ロイコトリエン拮抗剤（ザフィルルカスト、モンテルカスト、プランルカスト、イラルカスト、ポビルカスト、ＳＫＢ−１０２，２０３）、ロイコトリエン生合成阻害剤（ジロートン、ＢＡＹ−１００５）などの非ステロイド性抗喘息剤；（ｆ）プロピオン酸誘導体（アルミノプロフェン、ベノキサプロフェン、ブクロキシン酸、カルプロフェン、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドプロフェン、ケトプロフェン、ミロプロフェン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピルプロフェン、プラノプロフェン、スプロフェン、チアプロフェン酸、およびチオキサプロフェン）、酢酸誘導体（インドメタシン、アセメタシン、アルクロフェナク、クリダナク、ジクロフェナク、フェンクロフェナク、フェンクロジン酸、フェンチアザク、フロフェナク、イブフェナック、イソキセパク、オクスピナク、スリンダク、チオピナク、トルメチン、ジドメタシン、およびゾメピラック）、フェナム酸誘導体（フルフェナム酸、メクロフェナム酸、メフェナム酸、ニフルム酸およびトルフェナム酸）、ビフェニルカルボン酸誘導体（ジフルニサルおよびフルフェニサル）、オキシカム（イソキシカム、ピロキシカム、スドキシカムおよびテノキシカム）、サリチレート（アセチルサリチル酸、スルファサラジン）ならびにピラゾロン（アパゾン、ベズピペリロン、フェプラゾン、モフェブタゾン、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン）などの非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）；（ｇ）シクロオキシゲナーゼ−２（ＣＯＸ−２）阻害剤；（ｈ）ＩＶ型ホスホジエステラーゼ（ＰＤＥ−ＩＶ）の阻害剤；（ｉ）ケモカイン受容体の他の拮抗剤；（ｊ）ＨＭＧ−ＣＯＡレダクターゼ阻害剤（ロバスタチン、シンバスタチンやプラバスタチン、フルバスタチン、アトルバスタチン、および他のスタチン）、金属イオン封鎖剤（コレスチラミンおよびコレスチポール）、ニ���チン酸、フェノフィブリン酸誘導体（ゲムフィブロジル、クロフィブラート、フェノフィブラートおよびベンザフィブラート）、ならびにプロブコールなどのコレステロール低下剤；（ｋ）インスリン、スルホニル尿素、ビグアニド（メトホルミン）、ａ−グルコシダーゼ阻害剤（アカルボース）およびグリタゾン（トログリタゾンおよびピオグリタゾン）などの抗糖尿病剤；（ｌ）インターフェロン調製物（インターフェロンα−２ａ、インターフェロン−２Ｂ、インターフェロンα−Ｎ３、インターフェロンβ−１ａ、インターフェロンβ−１ｂ、インターフェロンγ−１ｂ）；（ｍ）エファビレンツ、ネビラピン、インジナビル、ガンシクロビル、ラミブジン、ファムシクロビル、およびザルシタビンなどの抗ウイルス化合物；（ｏ）５−アミノサリチル酸およびそのプロドラッグなどの他の化合物、アザチオプリンおよび６−メルカプトプリンなどの代謝拮抗剤、ならびに細胞毒性がある癌化学療法剤が含まれる。本発明の化合物と第２の活性成分との重量比は変化してもよく、それぞれの成分の有効用量に依存する。
【０３０６】
一般に、それぞれの有効用量を使用する。したがって、たとえば、化合物をＮＳＡＩＤと組み合わせる場合、本発明の化合物対ＮＳＡＩＤの重量比は、一般に約１０００：１〜約１：１０００の範囲、または約２００：１〜約１：２００の範囲である。本発明の化合物と他の活性成分との組合せも、一般に前述の範囲内にあるが、それぞれの場合について、有効用量のそれぞれの活性成分を使用すべきである。
【０３０７】
癌の治療では、化学療法剤および／または他の治療（たとえば放射線療法）の組合せが多くの場合有利である。第２の（または第３の）薬剤は、第１の治療剤と同じまたはそれと異なる作用機構を有し得る。投与する２つ以上の薬物が異なる様式で、もしくは細胞周期の異なる段階で作用する、および／または２つ以上の薬物が重複する毒性もしくは副作用を有する、および／または患者が現す特定の病状の治療において組み合わせる薬物の有効性がそれぞれ実証されている、細胞毒性がある薬物の組合せを用いることが特に有用であり得る。
【０３０８】
したがって、本明細書中に開示する化合物（または本明細書中に開示する他の式）を、他の抗癌および細胞毒性剤ならびに癌または他の増殖性疾患の治療に有用な治療と組み合わせて投与し得る。本明細書中の本発明は、癌を治療する医薬品の調製における本明細書中の化合物（または本明細書中に開示する他の式）の使用をさらに含む、かつ／または、本明細書中の化合物と化合物を他の抗癌もしくは細胞毒性剤および癌を治療するための治療と組み合わせて使用するという指示書とのパッケージを含む。本発明はさらに、化合物と１つまたは複数の追加の薬剤との組合せをキット形態で含み、たとえば、一緒に梱包されているか、またはキットとして一緒に販売する別々のパッケージに入れられている、または一緒に配合するように梱包されている。
【０３０９】
第２の（またはそれ以上の）抗癌剤は、以下のうちの任意の１つまたは複数から選択し得る：
アルキル化剤（窒素マスタード、アルキルスルホネート、ニトロソ尿素、エチレンイミン誘導体、およびトリアゼンを含む）；抗血管形成（マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤を含む）；代謝拮抗剤（アデノシンデアミナーゼ阻害剤、葉酸拮抗剤、プリン類似体、およびピリミジン類似体を含む）；抗生物質または抗体（モノクローナル抗体、ＣＴＬＡ−４抗体、アントラサイクリンを含む）；アロマターゼ阻害剤；
細胞周期応答調節剤；酵素；ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；
ホルモン剤および抗ホルモン剤ならびにステロイド（合成類似体、糖質コルチコイド、エストロゲン／抗エストロゲン［たとえばＳＥＲＭ］、アンドロゲン／抗アンドロゲン、プロゲスチン、プロゲステロン受容体作用剤、および黄体形成ホルモン放出［ＬＨＲＨ］作用剤および拮抗剤を含む）；インスリン様成長因子（ＩＧＦ）／インスリン様成長因子受容体（ＩＧＦＲ）系モジュレーター（ＩＧＦＲ１阻害剤を含む）；インテグリン−シグナル伝達阻害剤；キナーゼ阻害剤（ＳｒｃキナーゼもしくはＳｒｃ／ａｂｌの複数キナーゼ阻害剤および／もしくは阻害剤、サイクリン依存性キナーゼ［ＣＤＫ］阻害剤を含む、ｐａｎＨｅｒ、Ｈｅｒ−１およびＨｅｒ−２抗体、抗ＶＥＧＦ抗体を含めたＶＥＧＦ阻害剤、ＥＧＦＲ阻害剤、マイトジェン活性化タンパク質［ＭＡＰ］阻害剤、ＭＥＫ阻害剤、オーロラキナーゼ阻害剤、ＰＤＧＦ阻害剤、ならびに他のチロシンキナーゼ阻害剤またはセリン／スレオニンキナーゼ阻害剤；
エクチナサイジンまたはその類似体および誘導体などの微小管撹乱剤；タキサン、天然に存在するエポチロンならびにその合成および半合成類似体などの微小管安定化剤；
微小管結合の不安定化剤（ビンカアルカロイドを含む）；
トポイソメラーゼ阻害剤；プレニル−タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；白金配位複合体；シグナル伝達阻害剤；ならびに生物学的応答調節剤、成長因子、および免疫変調剤などの抗癌剤および細胞毒性剤として使用される他の薬剤。
【０３１０】
さらに、本発明の化合物は、前述の状態に関連する副作用に対処することにおける、その特定の有用性について選択される他の治療剤と共に配合するか、または同時投与することができる。たとえば、本発明の化合物は、制吐剤などの嘔気、過敏症および胃の不快感を予防する薬剤、ならびにＨ1およびＨ2抗ヒスタミン剤と共に配合し得る。
上記の他の治療剤は、本発明の化合物と組み合わせて用いる場合、たとえば、医師用卓上参考書(Physicians’ Desk Reference、PDR)に示された量または他の方法で当業者によって決定される量で用いることができる。
【０３１１】
化合物は、治療上有効な量で哺乳動物に投与する。「治療上有効な量」とは、単独でまたは追加の治療剤と組み合わせて哺乳動物に投与した場合に、病状または疾患の進行の予防または寛解に有効である、本開示の化合物の量を意味する。
【０３１２】
用量および配合物
本開示の化合物は、錠剤、カプセル（これらのそれぞれに持続放出または徐放性配合物が含まれる）、丸薬、散剤、顆粒、エリキシル、チンキ剤、懸濁液、シロップ、および乳剤などの経口剤形で投与することができる。また、これらを静脈内（ボーラスもしくはインフュージョン）、腹腔内、皮下、または筋肉内の形態で投与してもよく、これにはすべて医薬分野の技術者に周知の剤形を用いる。これらは単独で投与することができるが、一般に、選択した投与経路および標準の医薬の実施に基づいて選択される医薬担体と共に投与する。
【０３１３】
本発明の化合物の投薬レジメンは、もちろん、特定の薬剤の薬力学的特徴およびその投与の機構や経路；レシピエントの種、年齢、性別、健康、病状、および重量；症状の性質および程度；併用治療の種類；治療頻度；投与経路、患者の腎臓および肝臓機能、ならびに所望する効果などの、既知の要素に応じて変動する。医師または獣医師は、障害の進行を予防、対抗、または停止させるために必要な有効量の薬物を決定および処方することができる。
【０３１４】
一般的な指針として、それぞれの活性成分の１日経口用量は、示した効果のために使用した場合、約０．００１〜１０００ｍｇ／体重１ｋｇ、または約０．０１〜１００ｍｇ／体重１ｋｇ／日、あるいは、約１．０〜２０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲である。静脈内では、用量は、一定測度のインフュージョン中約１〜約１０ｍｇ／ｋｇ／分の範囲である。本発明の化合物は、単一の１日用量で投与するか、または合計１日用量を１日２、３、もしくは４回の分割用量で投与し得る。一実施形態では、活性成分の１日経口用量は、１日１回投与するか、または分割用量で１日２回投与する、３〜６００ｍｇである。あるいは、活性成分は、１日２回投与する１０〜２０ｍｇまたは１日１回投与する４０〜１００ｍｇの用量で投与し得る。あるいは、活性成分は、１日２回の１２．５ｍｇまたは１日１回の７５ｍｇの用量で投与し得る。あるいは、活性成分は、１日１回または２回投与する３、１０、３０、１００、３００、および６００ｍｇの用量で投与し得る。
【０３１５】
本発明の化合物は、適切な鼻腔内ビヒクルの局所的使用によって鼻腔内で、または経皮皮膚パッチを用いた経皮経路によって投与することができる。経皮デリバリー系の形態で投与した場合、投薬は、もちろん、投薬レジメン全体にわたって間欠的ではなく連続的である。
【０３１６】
化合物は、典型的には、意図する投与形態、すなわち、経口錠剤、カプセル、エリキシル、シロップなどに関して適切であるように選択し、かつ慣用の医薬の実施に矛盾しない、適切な医薬的希釈剤、賦形剤、または担体（本明細書中で医薬担体と総称する）と混合して投与する。
【０３１７】
たとえば、錠剤またはカプセルの形態での経口投与では、活性薬物構成成分を、ラクトース、デンプン、スクロース、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、ソルビトールなどの、経口の無毒性の医薬上許容される不活性担体と組み合わせることができ；液体形態での経口投与では、経口薬構成成分を、エタノール、グリセロール、水などの、任意の経口の無毒性の医薬上許容される不活性担体と組み合わせることができる。さらに、所望する場合または必要な場合は、適切な結合剤、潤滑剤、崩壊剤、および着色料も混合物内に取り込むことができる。適切な結合剤には、デンプン、ゼラチン、グルコースまたはβ−ラクトースなどの天然の糖、トウモロコシ甘味料、アカシア、トラガカント、またはアルギン酸ナトリウムなどの天然および合成のゴム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックス等が含まれる。これらの剤形で使用する潤滑剤には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが含まれる。崩壊剤には、それだけには限定されないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが含まれる。
【０３１８】
また、本発明の化合物は、小単層ベシクル、大単層ベシクル、および多重膜小胞などのリポソームデリバリー系の形態で投与することもできる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンなどの様々なリン脂質から形成することができる。
【０３１９】
また、本発明の化合物は、標的化可能な薬物担体などの可溶性ポリマーとカップリングさせてもよい。そのようなポリマーには、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルトアミドフェノール、またはパルミトイル残基で置換したポリエチレンオキシド−ポリリシンが含まれることができる。さらに、本発明の化合物は、薬物の徐放性を達成するために有用な生分解性ポリマーのクラス、たとえば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸のコポリマー、ポリεカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアシレート、およびヒドロゲルの架橋結合または両親媒性ブロックコポリマーとカップリングさせてもよい。
【０３２０】
投与に適した剤形（医薬組成物）は、単位用量あたり約１ミリグラム〜約１００ミリグラムの活性成分を含み得る。これらの医薬組成物中では、活性成分は通常、組成物の全重量に基づいて約０．５〜９５重量％の量で存在する。
【０３２１】
ゼラチンカプセルは、活性成分およびラクトース、デンプン、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸などの粉末担体を含み得る。同様の希釈剤を用いて圧縮錠剤を作製することができる。錠剤およびカプセルはどちらも、一定期間にわたって医薬品の連続的放出を提供するために、持続放出生成物として製造することができる。圧縮錠剤は、任意の不快な味を覆い隠し、錠剤を大気から保護するために糖もしくはフィルムでコーティングするか、または胃腸管内での選択的分解のために腸溶コーティングすることができる。
【０３２２】
経口投与のための液体剤形は、患者の許容性を高めるために、着色料および香料を含むことができる。
【０３２３】
一般に、水、適切な油、生理食塩水、デキストロース水溶液（グルコース）、ならびに関連する糖溶液およびプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどのグリコールが、非経口液剤の適切な担体である。非経口投与のための液剤は、活性成分の水溶性の塩、適切な安定化剤、および必要な場合は干渉物質を含み得る。単独または組み合わせた、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、またはアスコルビン酸などの抗酸化剤が、適切な安定化剤である。また、クエン酸およびその塩ならびにナトリウムＥＤＴＡも使用される。さらに、非経口液剤は、塩化ベンザルコニウム、メチル−またはプロピル−パラベン、およびクロロブタノールなどの保存料を含むことができる。
【０３２４】
適切な医薬担体は、当分野の標準の参考テキストである、レミントンの医薬科学(Remington’s Pharmaceutical Sciences)、Mack Publishing Companyに記載されている。
【０３２５】
本発明の化合物を投与するための代表的な有用な医薬用量形態は、以下のように例示することができる。
【０３２６】
カプセル
標準のツーピース硬ゼラチンカプセルに、それぞれ１００ミリグラムの粉末活性成分、１５０ミリグラムのラクトース、５０ミリグラムのセルロース、および６ミリグラムのステアリン酸マグネシウムを満たすことによって、多数の単位カプセルを調製することができる。
【０３２７】
軟ゼラチンカプセル
ダイズ油、綿実油またはオリーブ油などの消化可能な油中の活性成分の混合物を調製し、容積式ポンプによってゼラチン内に注入して、１００ミリグラムの活性成分を含む軟ゼラチンカプセルを形成し得る。カプセルを洗浄し、乾燥させるべきである。
【０３２８】
錠剤
錠剤は、単位用量が１００ミリグラムの活性成分、０．２ミリグラムのコロイド状二酸化ケイ素、５ミリグラムのステアリン酸マグネシウム、２７５ミリグラムの結晶セルロース、１１ミリグラムのデンプンおよび９８．８ミリグラムのラクトースであるように、慣用の手順によって調製し得る。嗜好性を増加させるまたは吸収を遅延させるために、適切なコーティングを塗布し得る。
【０３２９】
注射液
１．５重量％の活性成分を１０容量％のプロピレングリコールおよび水中で撹拌することによって、注射による投与に適した非経口組成物を調製し得る。液剤は、塩化ナトリウムで等張にし、滅菌するべきである。
【０３３０】
懸濁液
それぞれの５ｍＬが１００ｍｇの微粉活性成分、２００ｍｇのカルボキシメチルセルロースナトリウム、５ｍｇの安息香酸ナトリウム、１．０ｇのソルビトール溶液、Ｕ．Ｓ．Ｐ．、および０．０２５ｍＬのバニリンを含むように、経口投与のための水性懸濁液を調製することができる。
【０３３１】
本発明の化合物を他の抗凝血剤と組み合わせる場合、たとえば、１日用量は、患者の体重１キログラムあたり約０．１〜１００ミリグラムの式Ｉの化合物および約１〜７．５ミリグラムの第２の抗凝血剤であり得る。錠剤剤形には、本発明の化合物は、一般に単位用量あたり約５〜１０ミリグラムの量、第２の抗凝血剤は単位用量あたり約１〜５ミリグラムの量で存在し得る。
【０３３２】
前述の第２の治療剤のうちの２つ以上を実施例の化合物と共に投与する場合、一般に、典型的な１日用量および典型的な剤形中のそれぞれの構成成分の量は、組み合わせて投与した場合の治療剤の相加効果または相乗効果を考慮して、単独で投与した場合の薬剤の通常の用量と比較して減少させ得る。
【０３３３】
特に、単一の単位用量として提供する場合、組み合わせた活性成分の間に化学的相互作用の潜在性が存在する。そのため、実施例の化合物と第２の治療剤とを単一の単位用量中で組み合わせた場合、これらは、活性成分を単一の単位用量で組み合わせているが、活性成分間の物理的接触が最小限となる（すなわち減少される）ように配合する。たとえば、１つの活性成分を腸溶コーティングし得る。活性成分の１つを腸溶コーティングすることによって、組み合わせた活性成分間の接触を最小限にすることが可能になるだけでなく、これらの構成成分の１つが胃内ではなく腸管内で放出されるように、胃腸管におけるこれらの構成成分の１つの放出を制御することも可能となる。また、活性成分の１つを、胃腸管全体にわたる持続放出をもたらし、かつ組み合わせた活性成分間の物理的接触を最小限にする役割を果たす物質でコーティングし得る。さらに、持続放出される構成成分を、この構成成分の放出が腸管内のみで起こるように、さらに腸溶コーティングすることができる。さらに別の手法は、活性構成成分をさらに分離するために、１つの構成成分を持続放出および／または腸内放出ポリマーでコーティングし、他方の構成成分も低粘度グレードのヒドロキシプロピルメチルセルロース（ＨＰＭＣ）などのポリマーまたは当分野で知られている他の適切な物質でコーティングする、組合せ生成物の配合を含む。ポリマーコーティングは、他の構成成分との相互作用に対するさらなる障壁を形成する役割を果たす。
【０３３４】
本発明の組合せ生成物の構成成分間の接触を最小限にするこれらおよび他の方法は、単一の剤形で投与するか、または別々の形態であるが同じ様式で同時に投与するかにかかわらず、本開示で備えれば、当業者には容易に明らかであろう。
【０３３５】
さらに、本明細書中に開示する特定の化合物は、他の化合物の代謝物として有用であり得る。したがって、一実施形態では、化合物は、後に医薬組成物内に取り込んでもよい実質的に純粋な化合物として有用であるか、またはその化合物のプロドラッグの投与後に生じる代謝物として有用であり得る。一実施形態では、化合物は、本明細書中に記載の障害の治療に有用であることによって、代謝物として有用であり得る。
【０３３６】
本明細書中で使用する「実質的に純粋」には、約９０、９１、９２、９３、９４、９５、９６、９７、９８、９９、および１００％を含めた、約９０重量％を超える純度を有する化合物が含まれることを意図する。
【０３３７】
一例として、本明細書中に開示する化合物は、約９０（重量）％を超える純度を有することで実質的に純粋であり得、物質の残りの約１０％未満は、化合物の他の代謝物、化合物のプロドラッグ、および／またはその調製から生じる反応および／またはプロセス不純物を含む。
【０３３８】
明らかに、上記教示に鑑みて、本発明の数々の変更および変形が可能である。したがって、添付の特許請求の範囲内で、本明細書中に具体的に記載した方法以外で本発明を実施し得ることが理解されよう。
【０３３９】
インビボアッセイおよび有効性
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド（「実施例１」とも呼ぶ）を、以下に記載する以下のインビボアッセイで評価した。
セクション１．カニクイザルにおける皮内（ＩＤ）ＭＣＰ−１誘発モデル
方法
【０３４０】
ＭＣＰ−１の皮内注射は、注射部位への単核細胞の浸潤をもたらす。このモデルは、ヒトＭＣＰ−１を注射した皮膚組織への単核細胞の浸潤に対するＣＣＲ２拮抗剤の阻害効果を評価するために、最初に開発された。
【０３４１】
以下に詳述するように、それぞれのサルに、実施例１またはそのビヒクル対照（０．５％の［ｗ／ｖ］カルボキシメチルセルロース）を、１日１回、３日間投薬した。３日目の投薬直後に、すべての動物に、少なくとも２回の皮内注射による１０μｇ（５０μＬ／注射）のヒトＭＣＰ−１（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）および少なくとも２回の皮内注射によるそのＤＰＢＳ対照（５０μｌ／注射）を、背側胸部の別々の部位に与えた。ＭＣＰ−１（またはＤＰＢＳ）誘発の約１８時間後に、すべての部位の皮膚生検を得た。生検を、半定量的な組織学的評価用に処理した。皮膚試料から選択した代表的なものを光学顕微鏡観察によって検査し、微視的な病変および細胞浸潤を記述し、その発生率を表にした。
【０３４２】
研究１では、実施例１を、０、６．５、１３、または２６ｍｇ／ｋｇの用量で、３匹のカニクイザルの群（１群あたり各性別１または２匹）に経口投与した。研究２では、ナイーブ動物を用いて、２〜４匹の動物の群（ビヒクルを投薬した群では１匹／性別；実施例１を投薬した群では２匹／性別）で、実施例１を０、１０、または３０ｍｇ／ｋｇの用量で評価した。
【０３４３】
どちらの研究でも、生検分析に加えて、血液を採取し、全血算および細胞差異について評価した。また、化合物濃度について血漿試料を評価し、全身炎症伝達物質レベルについて血清試料を評価した。
結果
【０３４４】
第１の研究では、ＭＣＰ−１誘導性の、ビヒクルで処置した対照動物の皮膚への単核細胞の動員は２．７±０．３であった（０〜４のスケール、表１３）。２６ｍｇ／ｋｇでは、実施例１は浸潤を阻害した（５６％）。１３および６．５ｍｇ／ｋｇの２つのより低い用量では、より低い阻害レベルが達成された。この化合物は、好酸球および好中球などの他の細胞種の浸潤も阻害した。１８時間での化合物の血漿濃度ならびに阻害のレベルおよびカニクイザル化学走性ＩＣ９０値とのその関係性を、表１３に要約する。
【０３４５】
２つの方法を用いて、インビトロ化学走性アッセイにおける実施例１の阻害効力を決定した。第１の方法ではサルＰＢＭＣを用いる一方で、第２の方法ではカニクイザルＣＣＲ２が安定して形質移入されたＬ１．２細胞を用いる。前者は高度に変動することが見い出され（ＩＣ５０＝５．５±１０ｎＭ）、後者ではより高い平均値が得られたが、より一貫していた（ＩＣ５０＝１１．４±８ｎＭ）。この第２の値に基づいて、２６ｍｇ／ｋｇの用量により、化学走性ＩＣ９０の２倍の、投薬後１８時間の遊離血漿濃度がもたらされた（表１３）。
【表１３】
2009544758.tif 000097
aカニクイザルのＰＢＭＣに基づいた化学走性
bカニクイザルＣＣＲ２を安定して発現しているＬ１．２細胞を用いた化学走性
【０３４６】
第２の研究はナイーブサルで実行した。第１の研究と比較して、実施例１は、３０ｍｇ／ｋｇ（高用量）で単核細胞浸潤をより高い度合で阻害し（９１％）、１０ｍｇ／ｋｇで８７％の阻害をもたらした（表１４）。
【表１４】
2009544758.tif 000098
aカニクイザルのＰＢＭＣに基づいた化学走性アッセイ
bカニクイザルＣＣＲ２を安定して発現しているＬ１．２細胞を用いた化学走性アッセイ
【０３４７】
どちらの研究でも、血清炎症伝達物質の変化の評価により、ビヒクル対照と比較して実施例１で処置した群で、ＭＣＰ−１レベルの増加（約３倍まで）が示された。さらに、全血算（ＣＢＣ）分析により、ビヒクル対照と比較して実施例１で処置した群で、好中球の増加（約３倍まで）が示された。
【０３４８】
ｈＣＣＲ２  ＫＩマウス研究を、細胞示差的計数に基づいた方法およびフローサイトメトリーに基づいた方法を用いて、チオグリコレート（ＴＧ）腹膜炎モデルにおける単球／マクロファージ浸潤に対する実施例１の効果を評価するために実施した。
セクション２．ヒトＣＣＲ２ノッキング（ｈＣＣＲ２  ＫＩ）マウスの特徴づけ
方法
【０３４９】
マウスＣＣＲ２遺伝子をヒトＣＣＲ２のコード配列で置き換えることによって、ｈＣＣＲ２  ＫＩマウスを遺伝子操作した。マウスは、カリフォルニア大学サンフランシスコ校のグラッドストーン心血管病施設（Ｇｌａｄｓｔｏｎｅ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ）から入手した。
【０３５０】
標準のＰＣＲ（遺伝子特異的および定量的）方法を、野生型（マウスＣＣＲ２遺伝子）を標的対立遺伝子（ヒトＣＣＲ２遺伝子）から識別するため、ならびに耳または尾部の試料を用いてヒトＣＣＲ２遺伝子のコピー数およびマウスＣＣＲ２遺伝子のコピー数を決定するために用いた。血液白血球から単離した全ＲＮＡのＲＴ−ＰＣＲ分析も、ヒトおよびマウスＣＣＲ２のｍＲＮＡの発現レベルを決定するために実施した。フローサイトメトリー分析を用いて、血液単球上のヒトまたはマウスＣＣＲ２のタンパク質の表面発現を決定した。ＴＧ誘発腹膜炎モデルの腹膜腔における単球／マクロファージ蓄積のＦＡＣＳ分析（セクション３参照）を用いて、これらのマウスにおけるヒトＣＣＲ２の機能性を決定した。
結果
【０３５１】
マウスＣＣＲ２遺伝子をヒトＣＣＲ２のコード配列で置き換えることによって、ｈＣＣＲ２  ＫＩマウスを遺伝子操作した。これらの動物を実施例１のインビボ評価で使用する前に、これらのマウスの遺伝型および表現型の特徴づけをどちらも実施した。耳または尾部の試料のＰＣＲに基づいた遺伝型の研究（遺伝子特異的および定量的）により、２個のコピーのヒトＣＣＲ２遺伝子および０〜２個のコピーのマウスＣＣＲ２遺伝子の存在を示唆する様々な量のＰＣＲ生成物が検出された。これらＫＩマウスの血液白血球から単離した全細胞ＲＮＡを用いて、相対定量的ＲＴ−ＰＣＲ分析により、ヒトＣＣＲ２のｍＲＮＡ、およびマウスＣＣＲ２のｍＲＮＡを検出するように設計したプライマー組を用いて限界レベルのＰＣＲ生成物が検出された。フローサイトメトリー分析を用いてＣＣＲ２  ＫＩマウスにおけるタンパク質発現を検出した場合、それぞれ特異的抗ヒトＣＣＲ２および抗マウスＣＣＲ２抗体を用いて全血細胞単離物を染色することによって、ヒトＣＣＲ２表面タンパク質は検出されたが、マウスＣＣＲ２表面タンパク質は検出されなかった。
【０３５２】
血漿安定状態レベルがヒトＣＣＲ２化学走性のＩＣ９０に及ぶ場合、ｈＣＣＲ２選択的拮抗剤は、これらのｈＣＣＲ２  ＫＩマウスにおいて単球浸潤を遮断し、野生型マウスでは遮断しないが、マウスＣＣＲ２の化学走性の阻害に必要なレベル未満である。さらに、ｈＣＣＲ２  ＫＩの設定（マウスＭＣＰ−１／ヒトＣＣＲ２）を模倣するインビトロアッセイでは、実施例１は、ｈＰＢＭＣを発現するヒトＣＣＲ２に対するマウスＭＣＰ−１の結合（ＩＣ５０＝２．２±１．２ｎＭ）およびマウスＭＣＰ−１誘導性／ヒトＣＣＲ２媒介性のＴＨＰ−１細胞の化学走性（ＩＣ５０＝０．６±０．３ｎＭ）を阻害する。
セクション３．ｈＣＣＲ２  ＫＩマウスにおける４８時間のチオグリコレート（ＴＧ）誘発腹膜炎モデル
方法
【０３５３】
ｈＣＣＲ２  ＫＩマウス（Ｃ５７ＢＬ／６−ＳＶＪ１２９）に１ｍｌのチオグリコレート（ＴＧ）を腹腔内注射した（Ｈａｒｄｙ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃｓ）。それぞれの研究について、１群あたり８匹のオスのマウスを使用した。実施例１をＴＧ注射の１時間前に経口投薬した。使用したビヒクルは、水中の０．０１ＮのＨＣｌであった。ＴＧ注射の４８時間後、５ｍｌのＰＢＳ／１０ｍＭのＥＤＴＡ／１０％のＢＳＡを腹膜腔内に注射することによって腹膜洗浄を行った。
【０３５４】
４８時間のＴＧ腹膜炎研究には、実施例１を１日２回投薬し、最初の投薬はＴＧ注射の１時間前に行った。全腹膜細胞計数は、単離した細胞で細胞計数器によって得た。示差的白血球計数を決定するためにサイトスピンを行った。細胞を、Ｗｒｉｇｈｔ−Ｇｉｅｍｓａ染色（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を用いて３分間染色し、その後、脱イオン水で５分間すすいだ。示差的計数は、１つの試料あたり合計２００個の細胞の計数に基づいて計算した。血液も、それぞれの研究の最後に眼窩後洞から、薬物濃度の決定のためにＥＤＴＡ中に採取した。
【０３５５】
フローサイトメトリー分析には、腹膜浸出液細胞（１×１０6個）をＦＡＣＳバッファー（ＰＢＳ／０．５％のＢＳＡ）で１回洗浄し、ＦＡＣＳバッファーに再懸濁させた。細胞をＦｃ遮断抗体（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）と共に氷上で１５分間インキュベーションし、次いで以下の抗体（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を加えた：ＰＥとコンジュゲートした抗Ｆ４／８０、ＦＩＴＣとコンジュゲートした抗Ｌｙ６Ｃ、およびＡｌｅｘａ６４７とコンジュゲートした抗ｈＣＣＲ２。氷上で４５分後、細胞をＢＤ  Ｃｙｔｏｆｉｘによって氷上で１５分間固定し、ＦＡＣＳバッファーで２回洗浄し、２００μｌのＦＡＣＳバッファーに再懸濁させた。細胞事象（４０，０００）をそれぞれの試料について獲得し、ＦｌｏＪｏソフトウェア（ＴｒｅｅＳｔａｒ）を用いてデータを分析した。ＦＳＣ／ＳＳＣゲートは、顆粒球を分析から排除する一方で、すべての単球が含まれるように設定した（低いＳＳＣ、より高いＦＳＣ）。その後、このゲートされた集団を、Ｌｙ６Ｃ（ＦＩＴＣ）、Ｆ４／８０（ＰＥ）の発現について分析した。細胞計数器によって得られた全腹膜細胞計数の乗算によって腹膜の単球／マクロファージ数を決定し、フローサイトメトリーからのＦ４／８０+細胞によって単球／マクロファージの割合を同定した。対にした両側ｔ検定を用いて、有意性０．０５未満のｐ値に設定して、平均間の差異の統計的有意性を分析した。
【０３５６】
結果
単球／マクロファージ浸潤の阻害におけるそのＥＣ５０を決定するために、実施例１をｈＣＣＲ２  ＫＩマウスＴＧ腹膜炎モデルで評価した。マウスにチオグリコレートを投与し、実施例１を１、５、または２５ｍｇ／ｋｇ、１日２回で経口投薬した。ＴＧ処置の４８時間後、細胞浸潤の分析のために腹膜洗浄液を得た。細胞計数器によって得られた腹膜の全白血球数における用量依存性の減少が、実施例１によって示された（図１５）。洗浄液試料の形態評価による示差的な白血球数に基づいて、実施例１は、単球／マクロファージ流入の用量依存性の阻害を示した。１、５、２５ｍｇ／ｋｇの用量によって、それぞれ２０％、６２％および６９％の阻害が得られた。５および２５ｍｇ／ｋｇで統計的に有意な阻害に達した（図１５）。２つの個別の研究から、単球／マクロファージ浸潤の阻害の平均ＥＣ５０は、３．０±０．９ｎＭであることが推定された。
【０３５７】
動員された単球／マクロファージ浸潤はまた、フローサイトメトリーによっても定量化された。動員された単球／マクロファージと常在のマクロファージおよび顆粒球とを識別するために、Ｆ４／８０およびＬｙ６Ｃ単球／マクロファージ表面マーカーの両方の染色を用いて動員された単球／マクロファージを明確にした。統計的に有意な阻害を示すすべての３つの用量を用いたこの方法によって、単球／マクロファージ浸潤における類似した用量依存性の阻害が観察された（図１６）。１、５、および２５ｍｇ／ｋｇの用量により、それぞれ３８％、７１％および８６％の阻害が得られた。２つの個別の研究から、この分析による単球／マクロファージ浸潤の阻害の平均ＥＣ５０は、２．２±０．５ｎＭであることが推定された。
【０３５８】
ｈＣＣＲ２  ノックインマウスを用いた４８時間のチオグリコレート腹膜炎モデルにおける、実施例１による受容体占有率のインビボレベルを評価するために、実施例１およびマウスＣＣＲ２リガンドＭＣＰ−１の両方の血漿レベルを測定した。この推定の注意点は、ＣＣＲ２およびその主要なリガンドＭＣＰ−１のみを考慮に入れたことである。競合的阻害剤の存在下におけるリガンドの受容体占有率は、ガダム（Ｇａｄｄｕｍ）方程式によって定義される：
2009544758.tif 000099
【０３５９】
実施例１はＣＣＲ２とＭＣＰ−１との結合の競合的阻害剤であるので、マウスＭＣＰ−１／ＣＣＲ２受容体の複合体および実施例１／ＣＣＲ２受容体の複合体の両方の量は、血漿中のマウスＭＣＰ−１およびタンパク質に未結合の実施例１の血清レベルを用いて決定することができる。マウスＭＣＰ−１とｈＣＣＲ２との結合のＫdは０．９１＋／−０．０８ｎＭ（ｎ＝８）であり、これは、125Ｉ−ヒトＭＣＰ−１を用いた冷競合リガンド結合実験で決定した。実施例１とｈＣＣＲ２との結合の平均Ｋiは１．２ｎＭである。マウスＭＣＰ−１／ＣＣＲ２受容体の複合体の割合は、上述の方程式の形態を用いて決定する。実施例１／ＣＣＲ２複合体の割合を決定するために、方程式を以下のように再定義する：
2009544758.tif 000100
最後に、遊離ＣＣＲ２の量は以下から決定する：
［ＣＣＲ２］全＝［ＣＣＲ２］遊離＋［マウスＭＣＰ−１／ＣＣＲ２］＋［実施例１／ＣＣＲ２］
【０３６０】
表１５に示すように、４８時間での腹膜内への単球／マクロファージ浸潤の％阻害は、実施例１／ＣＣＲ２受容体の複合体の割合を反映している（実施例１−占有されたＣＣＲ２）。
【表１５】
2009544758.tif 000101
a単球／マクロファージの全体のＦＡＣＳに基づく分析
【０３６１】
セクション４．慢性有効性研究
方法
多発性硬化症のＥＡＥ（実験的自己免疫脳脊髄炎）モデルに対する実施例１の効果を研究するために、１群あたり１０匹のマウスを用いた。０日目に、ｈＣＣＲ２  ＫＩマウスを、合計２００μｌの、不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）中の３００μｇのミエリンオリゴデンドロサイト糖タンパク質（ＭＯＧ）３５−５５（Ｇｅｎｅｍｅｄ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ）と１：１で混合した３００μｇのヒト結核菌（Ｈ３７Ｒａ）（Ｂｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ）を用いて、皮下で免疫化した。０日目（免疫化の２時間後）および２日目に、マウスに１００μｌの４００ｎｇの百日咳毒素を腹腔内注射した。臨床スコア付けは１０日目に開始し、研究全体にわたって週に３回続け、０〜５のスケールに基づいていた：０、疾患の徴候なし；０．５、部分的な尾部の衰弱；１、弱々しい尾部または尾部の弾力のある動揺性歩行；１．５、部分的な尾部の衰弱を伴った動揺性歩行；２、弱々しい尾部を伴った動揺性歩行（運動失調）；２．５（肢部麻痺を伴った運動失調；３、１つの肢部の完全麻痺；３．５、２つ目の肢部の部分麻痺を伴った１つの肢部の完全麻痺；４、２つの肢部の完全麻痺；４．５、瀕死；５、死亡。５５ｍｇ／ｋｇ（１日２回）の実施例１の経口投薬を１日目に開始した。
【０３６２】
結果
行われた３つの研究のうち２つにおいて、実施例１は臨床スコアを有意に低下させた（ｐ＜０．０５）（図１７）。ＩＣ５０は、実施例１で、ｈＣＣＲ２と結合する125Ｉ−マウスＭＣＰ−１を発現する細胞、ｈＰＢＭＣ（ｈＣＣＲ２  ＫＩの設定を模倣）において２．２ｎＭである。このＩＣ５０値に基づいて、５５ｍｇ／ｋｇの用量は、結合ＩＣ９０の〜２倍の遊離血漿トラフ濃度をもたらした。２２日目の脊髄の組織学的評価では、実施例１で処置したマウスとビヒクルとの間に、有意な全炎症細胞浸潤の差異が実証されなかった。顕著な好中球浸潤が、化合物で処置したマウスで観察された。
【図１】
2009544758.tif 000110
【図２】
2009544758.tif 000111
【図３】
2009544758.tif 000112
【図４】
2009544758.tif 000113
【図５】
2009544758.tif 000114
【図６】
2009544758.tif 000115
【図７】
2009544758.tif 000116
【図８】
2009544758.tif 000117
【図９】
2009544758.tif 000118
【図１０】
2009544758.tif 000119
【図１１】
2009544758.tif 000120
【図１２】
2009544758.tif 000121
【図１３】
2009544758.tif 000122
【図１４】
2009544758.tif 000123
【図１５】
2009544758.tif 000124
【図１６】
2009544758.tif 000125
【手続補正書】
【提出日】平成21年5月8日(2009.5.8)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミド化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項２】
Ｎ−（（１Ｒ，２Ｓ，５Ｒ）−５−（イソプロピル（メチル）アミノ）−２−（（Ｓ）−２−オキソ−３−（６−（トリフルオロメチル）キナゾリン−４−イルアミノ）ピロリジン−１−イル）シクロヘキシル）アセトアミドが結晶形である請求項１の化合物、またはその医薬的に許容される塩。
【請求項３】
Ｎ−２型を含む、請求項１〜２の結晶形。
【請求項４】
結晶が約＋２２℃の温度であり、下表：
2009544758.tif 000126
に実質的に等しい単位格子パラメータの特徴を有する、請求項１〜３の結晶形。
【請求項５】
約２２℃の温度で、７．２、８．７、９．７、１２．５、１２．８、１３．３、１６．０、１６．６、１８．２、および１８．８から選択される３つ以上の２θ値（ＣｕＫα λ＝１．５４１Å）を含む粉末Ｘ線回折パターンの特徴を有する、請求項１〜４の結晶形。
【請求項６】
約２２℃の温度で、７．２、８．７、９．７、１２．５、１２．８、１３．３、１６．０、１６．６、１８．２、および１８．８からなる群から選択される４つ以上の２θ値（ＣｕＫα λ＝１．５４１Å）を含む粉末Ｘ線回折パターンの特徴をさらに有する、請求項１〜５の結晶形。
【請求項７】
実質的に表７に記載される部分原子座標の特徴を有する、請求項１〜６の結晶形。
【請求項８】
実質的に図２の粉末Ｘ線回折パターンを有する、請求項１〜７の結晶形。
【請求項９】
請求項１〜８の化合物、および医薬的に許容される担体もしくは希釈剤を含む医薬組成物。
【請求項１０】
請求項１〜９の化合物の治療上の有効量を哺乳類に投与することを特徴とする、哺乳類における疾患の治療方法であって、該疾患が、糖尿病、肥満症、メタボリックシンドローム、脳卒中、神経因性疼痛、虚血性心筋症、乾癬、高血圧症、強皮症、骨関節炎、動脈瘤、発熱、循環器疾患、クローン病、うっ血性心不全、自己免疫疾患、ＨＩＶ感染、ＨＩＶ関連痴呆、乾癬、突発性肺線維症、移植動脈硬化症、物理的もしくは化学的に誘発した頭部外傷、炎症性腸疾患、肺胞炎、大腸炎、全身性エリテマトーデス、腎毒性血清腎炎、糸球体腎炎、喘息、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、血管炎、不安定プラーク、関節リウマチ、再狭窄、静脈新生内膜過形成、透析−移植新生内膜過形成、動静脈シャント内膜過形成、臓器移植、慢性移植腎症、および癌から選択される方法。
【請求項１１】
該疾患が、糖尿病、肥満症、クローン病、全身性エリテマトーデス、糸球体腎炎、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、および臓器移植から選択される、請求項１０の方法。
【請求項１２】
該疾患が、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、クローン病、および糖尿病から選択される、請求項１０〜１１の方法。
【請求項１３】
式（ＶＩ）：
【化１】
2009544758.tif 000127
を有する化合物、またはその塩の製造方法であって、式Ｖの化合物を式ＮＨ（Ｒ8）（Ｒ9）のアミンで還元的にアミノ化して、式ＶＩの化合物を得ることを特徴とする方法であって、還元的アミノ化が、
（ａ）  約−２０℃〜約＋５０℃の温度で、該アミンおよび脱水剤を、式Ｖの化合物の非プロトン溶媒溶液に加えて、式Ｖａのイミン／エナミン化合物を形成する段階：
【化２】
2009544758.tif 000128
；並びに
（ｂ）  式Ｖａのイミン／エナミン化合物および白金触媒である５％ Ｐｔ／Ｓ／Ｃの溶液を、水素ガスで処理して、式ＶＩのエステル化合物を得る段階
を含むことを特徴とする方法
［上記の式中、
Ｒ1およびＲ2は独立して、水素、またはＢＯＣ、Ｃｂｚ、もしくはベンジルから選択されるアミン保護基であり；
Ｒ4は、Ｃ1-6アルキルであり；並びに
Ｒ8およびＲ9は独立して、水素またはＣ1-6アルキルである］。
【請求項１４】
式Ｖの化合物が、
【化３】
2009544758.tif 000129
、またはその塩であり；
式Ｖａの化合物が、
【化４】
2009544758.tif 000130
、またはその塩であり、並びに
式ＶＩの化合物が、
【化５】
2009544758.tif 000131
、またはその塩である、請求項１３の方法。
【請求項１５】
（ｉ）
【化６】
2009544758.tif 000132
；または
（ｉｉ）  その（ｉ）の塩
から選択される化合物。
【国際調査報告】
2009544758.tif 000133
2009544758.tif 000134
2009544758.tif 000135
2009544758.tif 000136