(57)【要約】  本発明は、血小板減少症を患っている被験者における出血症状を治療するための方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
血小板減少症を患っている被験者における出血症状を治療するための医薬の製造のための、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの使用。
【請求項２】
前記第ＶＩＩ因子ポリペプチドの活性と配列番号：１に示される野生型第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの活性との間の比率が少なくとも約１．２５である、請求項１に記載の使用。
【請求項３】
医薬が、骨髄における血小板の生成低下、血流及び／又は脾臓及び／又は肝臓における血小板の破壊増大、及び／又は血液希釈による血小板減少症を患っている被験者の治療用である、請求項１又は２に記載の使用。
【請求項４】
医薬が、貧血、例えば再生不良性貧血、白血病、骨髄内の癌、骨髄に発症する感染症、アルコール誘発性血小板減少症、免疫性血小板減少性紫斑病(ＩＴＰ)、薬剤誘発性免疫性血小板減少症(例えば、ヘパリンが原因)、薬剤誘発性非免疫性血小板減少症(例えば、抗癌剤が原因)、血栓性血小板減少性紫斑病、輸血誘発性血小板減少症、原発性血小板血症、播種性血管内凝固症候群(ＤＩＣ)、脾機能亢進(例えば、硬変)、溶血性尿毒症症候群、発作性夜間血色素尿症、免疫性血小板減少症(例えば、ＬＥＤ又はＲＡにおける血小板減少症)、心臓バイパス、大量のＲＢＣ輸血及び輸液療法からなる列挙から選択される、特定の兆候による血小板減少症を患っている被験者の治療用である、請求項１ないし３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
前記野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドがＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａである、請求項１ないし４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
(ｉ)野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有する医薬；及び
(ｉｉ)ａ．少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０、例えば少なくとも約１００μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有する第１の用量を、治療開始時に投与し；
ｂ．場合によっては、少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有する第２の用量を、治療の開始１ないし２４時間後に投与すべき；
と記載された使用説明書；
を含む、血小板減少症を患っている患者における出血症状を治療するためのキット。
【請求項７】
血小板減少症を患っている被験者における出血症状を治療する方法であって、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを、該治療に有効な量、該治療を必要とする患者に投与することを含む方法。
【請求項８】
血小板減少症が、骨髄における血小板の生成低下、血流及び／又は脾臓及び／又は肝臓における血小板の破壊増大、及び／又は血液希釈によるものである、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
医薬が、貧血、例えば再生不良性貧血、白血病、骨髄内の癌、骨髄に発症する感染症、アルコール誘発性血小板減少症、免疫性血小板減少性紫斑病(ＩＴＰ)、薬剤誘発性免疫性血小板減少症(例えば、ヘパリンが原因)、薬剤誘発性非免疫性血小板減少症(例えば、抗癌剤が原因)、血栓性血小板減少性紫斑病、輸血誘発性血小板減少症、原発性血小板血症、播種性血管内凝固症候群(ＤＩＣ)、脾機能亢進(例えば、硬変)、溶血性尿毒症症候群、発作性夜間血色素尿症、免疫性血小板減少症(例えば、ＬＥＤ又はＲＡにおける血小板減少症)、心臓バイパス、大量のＲＢＣ輸血及び輸液療法からなる列挙から選択される、特定の兆候による血小板減少症を患っている被験者の治療用である、請求項７又は８に記載の方法。
【請求項１０】
血小板減少症を患っている多くの被験者における出血症状を治療するための方法であって、(ｉ)野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを、前記治療に有効な量、出血のある血小板減少症を患っている被験者群に投与し；(ｉｉ)野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを受容していない同様の被験者群で予期される臨床的指標のレベルと比較して、該被験者群における出血症状の一又は複数の臨床的指標の低減度合いを観察することを含む方法。
【請求項１１】
前記野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドがＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａである、請求項７ないし１０のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、血小板減少症を患っている被験者における出血症状のある後期合併症の防止、重症度の最小化を含む、血小板減少症を患っているかかる被験者における出血症状を治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
止血とは、最終的に出血停止に至る複雑な生理的プロセスである。これは、３つの主要な要素：血管(特に内皮膜)、凝固因子、及び血小板に固有の機能に依存する。止血血栓が形成されてすぐ、線維素溶解系が適時に活性化されることは、さらなる不必要な止血活性の防止には等しく重要である。(止血成分の数の減少、又は分子の機能不全、又は線維素溶解成分の活性増加のために)この系に何らかの機能不全があると、臨床的出血、例えば様々な重症度の出血性素因に至るおそれがある。
ほとんどの生理学的状況では、止血は、損傷部位にＴＦが暴露された後に、循環している活性化された第ＶＩＩ凝固因子(ＦＶＩＩａ)が組織因子(ＴＦ)と相互作用することにより誘発される。内因性ＦＶＩＩａは、ＴＦと複合体を形成した後にのみ、タンパク質分解的に活性になる。通常、ＴＦは血管壁の深層で発現され、損傷後に暴露される。これにより、凝固の高度の局在化が担保され、散在性凝固が防止される。またＴＦは、不活性形態、いわゆる暗号化ＴＦで存在するようである。暗号化対活性ＴＦの調節は、今だ知られていない。
【０００３】
活性化した組換えヒト第ＶＩＩ因子(ｒＦＶＩＩａ)は、第ＶＩＩＩ因子又は第ＩＸ因子に対するインヒビターと共に、血友病Ａ又はＢ患者における出血症状の治療に対する効能が示されている。高(薬理学的)用量で投与された場合、ｒＦＶＩＩａは、ＴＦとは関係なく、活性化血小板に結合し、最初の止血血栓の形成にとって重要な局所トロンビン生成を開始させうる。
【０００４】
血小板減少症とは、血小板(thrombocyte)数が減少することに対する用語である。それは、血小板が作製される骨髄から交換可能な程度よりも、血小板が素早く循環されて失われる時に生じる。血小板は止血に必須であり、よってかかる血小板減少症の症状には異常で重篤な出血がしばしば伴っている。
【０００５】
循環血液中の血小板数は、通常、血液１リットル当たり１５０〜４００×１０９、つまり１５０〜４００×１０９血小板／Ｌである。
組換え野生型ＦＶＩＩａを用いた血小板減少症の治療法は、血小板レベルが５０×１０９血小板／Ｌ未満であると、効果が乏しいことが以前に示されている。Pihusch, Mら, 2005 Thromb Haemostasis, 3(9):1935-1944は、出血スコアの変化に対する組換え野生型ＦＶＩＩａでの治療の全体的な効果を示すことができなかった。
よって、血小板減少症の治療、並びに血小板減少症に起因する後期合併症の予防及び減弱化のための改善された方法及び組成物が必要とされている。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、血小板減少症を患っている被験者における出血症状を治療するための医薬の製造における、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａ等の、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの使用を提供する。
また本発明は、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａ等の、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩポリペプチドを、予防又は減弱化に有効な量、被験者に投与することにより実施される、血小板減少症を患っている患者における出血症状の兆候を予防又は減弱化するための方法を提供する。
【０００７】
いくつかの実施態様では、有効な量には、少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドが含まれる。いくつかの実施態様では、有効量には、少なくとも約１００μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドが含まれる。いくつかの実施態様では、少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの第１の量が、治療開始時に投与され、少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの第２の量が、治療開始の一又は複数時間後に、被験者に投与される。いくつかの実施態様では、少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの第３の量が、その後、例えば第２の治療の開始後、少なくとも約１時間後に投与される。投与されるＦＶＩＩポリペプチドの正確な量は、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの活性の特定の増加度合い、及び治療される特定の血小板減少症の兆候に応じて変わりうることが理解されなければならない。
【０００８】
いくつかの実施態様では、本方法は、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａ等の、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドによる治療度合いを増強する量で第２の凝固剤を被験者に投与することをさらに含む。好ましくは、第２の凝固剤は凝固因子(限定されるものではないが、第Ｖ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩＩ因子、フィブリノーゲン、トロンビン、ＴＡＦＩ；抗線溶剤、例えばＰＡＩ-１、アプロチニン、イプシロン-アミノカプロン酸、又はトラネキサム酸、種々の抗栓血治療、並びに血小板、ＲＢＣ、ＦＦＰ、酸素キャリアの輸血、種々のバイパス剤、及び輸液療法(コロイド／クリスタロイド)、又は任意のそれらの組合せである。
【０００９】
また本発明は：
(ｉ)野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有する医薬；及び
(ｉｉ)ａ．少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０、例えば少なくとも約１００μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有する第１の用量を、治療開始時に投与し；
ｂ．場合によっては、少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有する第２の用量を、治療の開始１ないし２４時間後に投与すべき；
と記載された使用説明書；
を含む、血小板減少症を患っている被験者における出血症状を治療するための、キットを提供する。
【００１０】
また本発明は、血小板減少症を患っている多くの被験者における出血症状を治療するための方法を提供するものであって、該方法は(ｉ)野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを、前記治療に有効な量、出血のある血小板減少症を患っている被験者群に投与し；(ｉｉ)野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを受容していない同様の被験者群で予期される臨床的指標のレベルと比較して、該被験者群における出血症状の一又は複数の臨床的指標の低減度合いを観察することを含む。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
血小板減少症は、血小板数が低減することと定義されており、多くの場合、次の３つの主要クラスに分けられる：
１）骨髄における血小板の生成低下；
２）血流(血管内)又は脾臓又は肝臓(血管外)における血小板の破壊増大；及び
３）希釈
【００１２】
骨髄における生成低下を含む典型的な疾患には：
ａ）ある種の貧血、例えば再生不良性貧血；
ｂ）白血病；
ｃ）骨髄内の癌；
ｄ）骨髄に発症する感染症；
ｅ）アルコール誘発性血小板減少症；
が含まれる。
【００１３】
血小板の破壊を含む典型的な疾患には：
ａ）免疫性血小板減少性紫斑病(ＩＴＰ)；
ｂ）薬剤誘発性免疫性血小板減少症(例えば、ヘパリンが原因)；
ｃ）薬剤誘発性非免疫性血小板減少症(例えば、抗癌剤が原因)；
ｄ）血栓性血小板減少性紫斑病；
ｅ）輸血誘発性血小板減少症；
ｆ）原発性血小板血症；
ｇ）播種性血管内凝固症候群(ＤＩＣ)；
ｈ）脾機能亢進(例えば、硬変)；
ｉ）溶血性尿毒症症候群；
ｊ）発作性夜間血色素尿症；及び
ｋ）免疫性血小板減少症(例えば、ＬＥＤ又はＲＡにおける血小板減少症)；
が含まれる。
【００１４】
血小板の希釈を含む典型的な疾患には：
ａ）心臓バイパス；及び
ｂ）大量のＲＢＣ輸血又は輸液療法；
が含まれる。
【００１５】
第１の態様では、本発明は、血小板減少症を患っている被験者における出血症状を治療するための医薬の製造における、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの使用に関する。
【００１６】
第２の態様では、本発明は：
(ｉ)野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有する医薬；及び
(ｉｉ)ａ．少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０、例えば少なくとも約１００μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有する第１の用量を、治療開始時に投与し；
ｂ．場合によっては、少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有する第２の用量を、治療の開始１ないし２４時間後に投与すべき；
と記載された使用説明書；
を含む、血小板減少症を患っている被験者における出血症状を治療するための、キットに関する。
【００１７】
第３の態様では、本発明は、血小板減少症を患っている被験者における出血症状を治療するための方法に関し、該方法は、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを、該治療に有効な量、該治療を必要とする被験者に投与することを含む。
【００１８】
さらなる態様では、本発明は、血小板減少症を患っている被験者における出血症状を治療するための方法に関し、該方法は、血小板減少症を患っている被験者における出血症状を治療する目的で、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを、該治療に有効な量、該治療を必要とする被験者に意図的に投与することを含む。
【００１９】
さらなる態様では、本発明は、血小板減少症を患っている多くの被験者における出血症状を治療するための方法に関し、該方法は(ｉ)野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを、前記治療に有効な量、出血のある血小板減少症を患っている被験者群に投与し；(ｉｉ)野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを受容していない同様の被験者群で予期される臨床的指標のレベルと比較して、該被験者群における出血症状の一又は複数の臨床的指標の低減度合いを観察することを含む。
【００２０】
本発明の一態様は、手術を受けた血小板減少症を患っている被験者における、手術前の輸血必要性を低減するための、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの使用に関する。一連の実施態様では、本発明の被験者の治療により、１０％、例えば２０％、例えば４０％、例えば６０％、例えば８０％、例えば１００％、手術前の輸血必要性が低減する結果となる。
【００２１】
「出血症状（出血エピソード）」なる用語は、制御されない過度の出血を含むことを意味する。出血症状は、手術及び組織損傷の他の形態の双方に関連した主たる問題でもあり得るし、血小板減少症を患っている被験者においては自然発生的なものでもあり得る。制御されない過度の出血は、血小板減少症とは別に、さらなる凝固又は出血疾患を患っている被験者で生じ得る。ここで使用される場合、「出血疾患」なる用語は、出血として表れる、細胞又は分子由来の任意の欠損、先天的、獲得又は誘発されるものを表す。具体例は凝固因子欠損症(例えば、血友病Ａ及びＢ、又は第ＸＩ又はＶＩＩ凝固因子の欠損)、凝固因子インヒビター、血小板機能欠損、又はフォンウィルブランド病である。
【００２２】
また過度の出血は、正常に機能している血液凝固カスケード(凝固因子欠損がないか又は凝固因子のいずれかに対しても凝固インヒビターがない)の被験者でも生じ、血小板機能欠損、又はフォンウィルブランド病に起因する場合もある。かかる場合、血友病におけるように、止血システムを欠いているか、又は主な出血の原因である異常な必須凝固「化合物」(例えば、フォンウィルブランド因子タンパク質)を有しているために、出血は、血友病に起因する出血に例えられる。
【００２３】
手術に関連した広範囲の組織損傷又は大きな外傷を経験した被験者において、正常な止血メカニズムは速効型止血の要求に圧倒されており、正常な止血メカニズムにもかかわらず、出血が生じる可能性がある。また、満足のいく止血が達成されても、外科的止血の可能性が制限される脳、内耳領域及び目等の器官に出血が生じた場合は問題である。同様の問題は種々の器官(肝臓、肺、腫瘍組織、胃腸管)からバイオプシーを取り出すプロセスにおいて、並びに腹腔鏡下手術において生じるおそれがある。これら全ての状況に共通しているのは、出血が拡散しているケース(出血性胃炎、及び大量の子宮出血)では、外科的手法(縫合、クリップ等)による止血が困難であるということである。また、急性の大量出血は、不完全止血が付与された治療により誘発され、抗凝固療法中の被験者においても生じ得る。このような被験者には、抗凝固効果が急速に反作用しているケースにおいて、外科的治療は必要であり得る。根治的な恥骨後式前立腺摘除術は、局所的前立癌を患っている患者にとって一般的に実施されている手順である。手術は、時折は大量の失血により、しばしばかなり複雑になる。前立腺切除術中のかなりの失血は、主として、外科的止血を容易に使用できない種々の高密度に血管新生化された部位を伴う、複雑な解剖学的状況に関連しており、広い領域からの拡散性出血に帰するおそれがある。不十分な止血のケースにおいて問題を引き起こすおそれのある他の状況は、正常な止血メカニズムを有する被験者に、血栓塞栓病を防止するための抗凝固療法が付与された場合である。このような療法には、ヘパリン、他の形態のプロテオグリカン、ワルファリン、又は他の形態のビタミンＫ-アンタゴニスト、並びにアスピリン、及び他の血小板凝集抑制剤が含まれる。
【００２４】
特に、血小板数が１ｍｌ当たり１０００万以下に低下すると、自発的に出血する危険性が高まる。よって、本発明の一実施態様では、出血は血小板減少症のために自然発生的である。
【００２５】
一実施態様では、出血は、皮膚、例えば針で刺したような出血(紫斑病)、過度の挫傷(出血斑)、小さな外傷で見られる。
一実施態様では、出血は粘膜にあり、例えば鼻及び／又は歯茎からの出血である。
一実施態様では、出血は膣にある。
一実施態様では、出血は眼、例えば網膜からのものである。
一実施態様では、出血は泌尿生殖器にある。
一実施態様では、出血は、術後、歯の治療又は外傷に続く、過度の出血である。
一実施態様では、出血は頭蓋内にある。一実施態様では、出血は胃腸内にある。
【００２６】
本発明の一実施態様では、出血は血友病に関連している。他の実施態様では、出血は、後天性インヒビターに関連している。他の実施態様では、出血はフォンウィルブランド病に関連している。他の実施態様では、出血は重度の組織損傷に関連している。他の実施態様では、出血は重度の外傷に関連している。他の実施態様では、出血は外科手術に関連している。他の実施態様では、出血は腹腔鏡下手術に関連している。他の実施態様では、出血は出血性胃炎に関連している。他の実施態様では、出血は大量の子宮出血である。他の実施態様では、出血は機械的止血の可能性が制限された器官において生じる。他の実施態様では、出血は、脳、内耳領域又は眼において生じる。他の実施態様では、出血は、バイオプシーを取り出すプロセスに関連している。他の実施態様では、出血は抗凝固療法に関連している。
【００２７】
本記載において、「治療」なる用語は、出血を抑制又は最小化する目的で、既に生じている出血の調節、外科手術等の予期される重度の出血の予防の双方を含むことを意味している。よって、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの予防的投与も、「治療」なる用語に含まれる。
ここで使用される場合、「被験者」なる用語は、任意の動物、特にヒト等の哺乳動物を意味することを意図しており、適切な場合は、「患者」なる用語と交換可能に使用されてよい。
【００２８】
本発明は、血小板減少症を患っている被験者における出血症状を治療するのに、有利に使用可能な方法及び組成物を提供する。
本方法は、治療に有効な方式で、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを、血小板減少症を患っている被験者に投与することによって実施される。治療に有効な方式は、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを予定量投与する、及び／又は特定の投与計画、処方、投与方式、他の治療との併用等を利用することを含む。血小板減少症を患っている患者の出血症状の治療における本発明の方法の有効性は、損傷の即時結果及び／又は後期合併症の従来から使用されている一又は複数のパラメータを使用して評価されてよい。即時結果には、例えば失血及びショックの兆候が含まれ；後期合併症には、限定されるものではないが、肺塞栓症(ＰＥ)、急性呼吸促迫症候群(ＡＲＤＳ)、播種性血管内凝固(ＤＩＣ)、急性心筋梗塞(ＡＭＩ)、脳血栓(ＣＴ)、全身性炎症反応症候群(ＳＩＲＳ)、感染、敗血症、多臓器不全(ＭＯＦ)、及び急性肺損傷(ＡＬＩ)、一又は複数のこれらの症候群により引き起こされる死が含まれる。
【００２９】
よって、いくつかの態様では、本発明は、損傷の即時結果及び／又は後期合併症の危険性を低減する方法に関し、該方法は、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを、前記治療に有効な量、該治療を必要とする被験者に投与することを含む。一実施態様では、本発明は、肺塞栓症(ＰＥ)、急性呼吸促迫症候群(ＡＲＤＳ)、播種性血管内凝固(ＤＩＣ)、急性心筋梗塞(ＡＭＩ)、脳血栓(ＣＴ)、全身性炎症反応症候群(ＳＩＲＳ)、感染、敗血症、多臓器不全(ＭＯＦ)、及び急性肺損傷(ＡＬＩ)、一又は複数のこれらの症候群により引き起こされる死からなる列挙から選択される、損傷の即時結果及び／又は後期合併症の危険性を低減する方法に関し、該方法は、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを、前記治療に有効な量、該治療を必要とする被験者に投与することを含む。一実施態様では、後期合併症は多臓器不全(ＭＯＦ)である。一実施態様では、後期合併症は急性呼吸促迫症候群(ＡＲＤＳ)である。一実施態様では、後期合併症は急性肺損傷(ＡＬＩ)である。一実施態様では、後期合併症は敗血症である。
【００３０】
外傷における凝固障害は、凝固及び線維素溶解の全身活性化により引き起こされる、凝固異常に似たＤＩＣ；幾ばくかの外傷のある被験者において初日に明白なる可能性のある過度の線維素溶解；及び過度の流体投与により引き起こされる希釈性凝固障害を含む多因子性である。いくつかの流体、例えばヒドロキシエチルスターチ(ＨＥＳ)調製物は、凝固を直接損なわせる可能性がある。大量の輸血症候群は凝固因子の枯渇及び血小板機能障害に帰する。低体温は、凝固カスケードの酵素活性の遅延化、及び血小板の機能障害を引き起こす。代謝異常、例えばアシドーシスは、特に低体温に関連する場合に、凝固を損なわせる。
【００３１】
本発明の治療が必要な被験者の非限定的例には、次の：
・凝固及び線維素溶解の全身活性化により引き起こされる、凝固異常に似たＤＩＣ
・過度の線維素溶解
・限定されるものではないが、正常な保管血液の血小板数及び血小板活性と比較して、血小板数が制限された、及び／又は血小板機能が損なわれることを含む、過度の流体治療により引き起こされる希釈性凝固障害
・ヒドロキシエチルスターチ(ＨＥＳ)調製物の受容
・約３７℃以下、例えば約３６℃以下、例えば約３５℃以下、又は約３４℃以下の体温を有することを含む低体温
・限定されるものではないが、約７．５以下、例えば約７．４以下、約７．３以下、約７．２以下、又は約７．１以下の血液ｐＨを有するアシドーシスを含む、代謝異常を少なくとも一の兆候
の一又は複数を示す被験者が含まれる。
【００３２】
一連の実施態様では、本発明で治療される被験者は、全血(ＷＢ)、濃縮赤血球(ｐＲＢＣ)、又は新鮮凍結血漿(ＦＦＰ)を、例えば出血時間と野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの投与時間の間に、例えば約２ユニット以上、５ユニット、又は約８ユニット以上で輸血が必要な被験者である。１ユニットのＷＢは、典型的には約４５０ｍｌの血液と、６３ｍｌの従来からの抗凝固剤／防腐剤(３６-４４％のヘマトクリットを有する)を含有する。１ユニットのｐＲＢＣは、典型的には２００-２５０ｍｌの赤血球、血漿、及び従来からの抗凝固剤／防腐剤(７０-８０％のヘマトクリットを有する)を含有する。
【００３３】
野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチド：
本発明の実施においては、血小板減少症を患っている被験者の出血症状を治療するのに有効な、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する任意の第ＶＩＩ因子ポリペプチドが使用され得る。
「第ＶＩＩ因子」なる用語は、それらの未切断(チモーゲン)形態にある第ＶＩＩ因子ポリペプチド、並びに第ＶＩＩａ因子と命名される、タンパク質分解的にプロセシングされて、それぞれの生物活性形態を生じるものを含むことを意図している。典型的には、第ＶＩＩ因子は残基１５２と１５３の間が切断されて、第ＶＩＩａ因子を生じる。
ここで使用される場合、「野生型ヒトＦＶＩＩａ」とは、米国特許第4,784,950号に開示されているアミノ酸配列を有するポリペプチドである。
【００３４】
野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドには、限定されるものではないが、ヒト第ＶＩＩａ因子に対して化学的に修飾された、及び／又はヒト第ＶＩＩａ因子に対して配列変更したアミノ酸を一又は複数含有する、第ＶＩＩａ因子ポリペプチドが含まれる。また、このような第ＶＩＩ因子ポリペプチドは、活性とは別に、安定性、リン脂質結合性等を含む、ヒト第ＶＩＩａ因子に対して、他の異なる特性を示す。これには、ＦＶＩＩ変異体、第ＶＩＩ因子-関連ポリペプチド、第ＶＩＩ因子誘導体、及び第ＶＩＩ因子コンジュゲートで、野生型ヒト第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を示すものが含まれる。
【００３５】
ここで使用される場合、「第ＶＩＩ因子誘導体」なる用語は、野生型第ＶＩＩａ因子に対して増加した活性を示すＦＶＩＩポリペプチドを命名することを意図しており、親ペプチドの一又は複数のアミノ酸は、例えばアルキル化、グリコシル化、ＰＥＧイル化、アシル化、エステル形成又はアミド形成等、遺伝的及び／又は化学的及び／又は酵素的に修飾される。限定されるものではないが、これにはＰＥＧイル化されたヒト第ＶＩＩａ因子、システイン-ＰＥＧイル化ヒト第ＶＩＩａ因子、及びそれらの変異体が含まれる。
【００３６】
「増加した活性」なる用語は、ｉ）組換え野生型ヒト第ＶＩＩａ因子と比較して増加したタンパク質分解活性を有するＦＶＩＩポリペプチド、又はｉｉ）組換え野生型ヒト第ＶＩＩａ因子と比較して増加したＴＦ結合活性を有するＦＶＩＩポリペプチド、又はｉｉｉ）組換え野生型ヒト第ＶＩＩａ因子と比較して増加した血漿中半減期を有するＦＶＩＩポリペプチドを意味する。「ＰＥＧイル化ヒト第ＶＩＩａ因子」なる用語は、ヒト第ＶＩＩａ因子ポリペプチドにコンジュゲートしたＰＥＧ分子を有するヒト第ＶＩＩａ因子を意味する。ＰＥＧ分子は、第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの任意のアミノ酸残基又は炭水化物部分を含む、第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの任意の部分に結合していてよい。「システイン-ＰＥＧイル化ヒト第ＶＩＩａ因子」とは、ヒト第ＶＩＩａ因子に導入されたシステインのスルフヒドリル基にコンジュゲートしたＰＥＧ分子を有する第ＶＩＩａ因子を意味する。
【００３７】
本発明の目的のために、米国特許第5,997,864号に記載されているように、第ＶＩＩ因子-欠損血漿とトロンボプタスチンを使用し、血液凝固を促進させる調製物の能力を測定することにより、第ＶＩＩａ因子のタンパク質分解活性を定量してもよい。このアッセイにおいて、タンパク質分解活性は、対照サンプルに対する、凝固時間の低減度合いとして表され、１ユニット／ｍｌの第ＶＩＩ因子活性を含有する、プールされたヒト血清標準体と比較することにより、「第ＶＩＩ因子ユニット」に換算される。また、第ＶＩＩａ因子のタンパク質分解活性は、(ｉ)Ｘ因子及び脂質膜に包埋されたＴＦを含有するシステムにおいて、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの、第Ｘａ因子を生成する能力を測定し(Perssonら, J. Biol. Chem. 272:19919-19924, 1997)；(ｉｉ)水系における第Ｘ因子の加水分解度合いを測定し(「In Vitro Proteolysis Assay」、以下実施例３を参照)；(ｉｉｉ)表面プラスモン反応をベースにした機器を使用し、ＴＦに対する、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの物理的結合性を測定し(Persson, FEBS Letts. 413:359-363, 1997)；(ｉｖ)野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドによる、合成基質の加水分解度合いを測定する(「In Vitro Hydrolysis Assay」、以下実施例２を参照)ことによって定量されてもよい。
【００３８】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドは、第ＶＩＩ因子ポリペプチドの活性と配列番号：１に示される野生型第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの活性との間の比率が少なくとも約１．２５のポリペプチドである。一実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドの活性と配列番号：１に示される野生型第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの活性との間の比率は、少なくとも約２．０である。さらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドの活性と配列番号：１に示される野生型第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの活性との間の比率は、少なくとも約４．０である。
【００３９】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドは、第ＶＩＩ因子ポリペプチドの活性と配列番号：１に示される野生型第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの活性との間の比率が、第ＶＩＩａ因子活性アッセイでテストした場合に少なくとも１．２５のポリペプチドである。一実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドの活性と配列番号：１に示される野生型第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの活性との間の比率は、第ＶＩＩａ因子活性アッセイでテストした場合に少なくとも約２．０である。さらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドの活性と配列番号：１に示される野生型第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの活性との間の比率は、第ＶＩＩａ因子活性アッセイでテストした場合に少なくとも約４．０である。第ＶＩＩａ因子の活性は、実施例２又は３に記載したアッセイにより測定されてよい。
【００４０】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドは、第ＶＩＩ因子ポリペプチドの活性と配列番号：１に示される野生型第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの活性との間の比率が、「インビトロ加水分解アッセイ」でテストした場合に少なくとも約１．２５のポリペプチドである。一実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドの活性と配列番号：１に示される野生型第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの活性との間の比率が、「インビトロ加水分解アッセイ」でテストした場合に少なくとも約２．０である。さらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドの活性と配列番号：１に示される野生型第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの活性との間の比率は、「インビトロ加水分解アッセイ」でテストした場合に少なくとも約４．０である。
【００４１】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドは、第ＶＩＩ因子ポリペプチドの活性と配列番号：１に示される野生型第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの活性との間の比率が、「インビトロタンパク質分解アッセイ」でテストした場合に少なくとも約１．２５のポリペプチドである。一実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドの活性と配列番号：１に示される野生型第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの活性との間の比率は、「インビトロタンパク質分解アッセイ」でテストした場合に少なくとも約２．０である。さらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドの活性と配列番号：１に示される野生型第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの活性との間の比率は、「インビトロタンパク質分解アッセイ」でテストした場合に少なくとも約４．０である。さらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドの活性と配列番号：１に示される野生型第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの活性との間の比率は、「インビトロタンパク質分解アッセイ」でテストした場合に少なくとも約８．０である。
【００４２】
野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの具体例は、限定されるものではないが、野生型ヒト第ＶＩＩａ因子、Ｌ３０５Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｍ３０６Ｄ／Ｄ３０９Ｓ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｉ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｐ-ＦＶＩＩ、Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｌ３０５Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｋ１５７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｋ-ＦＶＩＩ、及びＳ３３６Ｇ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｋ３１６Ｈ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｋ３１６Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ��０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｓ３１４Ｅ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｈ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０���Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｋ３１６Ｑ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｅ２９６Ｖ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｓ３１４Ｅ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｍ２９８��／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｋ３３７Ａ／Ｅ２９６Ｖ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｓ３１４Ｅ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｓ３１４Ｅ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｅ２９６Ｖ／Ｓ３１４Ｅ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ／
Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｆ３７４Ｙ／Ｌ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｓ５２Ａ-ＶＩＩ因子、Ｓ６０Ａ-ＶＩＩ因子；Ｒ１５２Ｅ-ＶＩＩ因子、Ｓ３４４Ａ-ＶＩＩ因子、Ｇｌａドメインを欠く第ＶＩＩａ因子；及びＰ１１Ｑ／Ｋ３３Ｅ-ＦＶＩＩ、Ｔ１０６Ｎ-ＦＶＩＩ、Ｋ１４３Ｎ／Ｎ１４５Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｖ２５３Ｎ-ＦＶＩＩ、Ｒ２９０Ｎ／Ａ２９２Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｇ２９１Ｎ-ＦＶＩＩ、Ｒ３１５Ｎ／Ｖ３１７Ｔ-ＦＶＩＩ、Ｋ１４３Ｎ／Ｎ１４５Ｔ／Ｒ３１５Ｎ／Ｖ３１７Ｔ-ＦＶＩＩ；及び２３３Ｔｈｒから２４０Ａｓｎのアミノ酸配列に、置換、付加又は欠失を有するＦＶＩＩ、３０４Ａｒｇから３２９Ｃｙｓのアミノ酸配列に、置換、付加又は欠失を有するＦＶＩＩである。
【００４３】
第ＶＩＩ因子等価物の他の例には、限定されるものではないが、Ｓ５２Ａ-ＦＶＩＩａ、Ｓ６０Ａ-ＦＶＩＩａ(Linoら, Arch. Biochem. Biophys. 352: 182-192, 1998)を含む、野生型第ＶＩＩ因子と実質的に同様の生物活性を有する第ＶＩＩ因子等価物；米国特許第5,580,560号に開示されたような、増加したタンパク質分解安定性を示すＦＶＩＩａ等価物；残基２９０と２９１の間、又は残基３１５と３１６の間が、タンパク質分解的に切断された第ＶＩＩａ因子(Mollerupら, Biotechnol. Bioeng. 48:501-505, 1995)；第ＶＩＩａ因子の酸化形態(Kornfeltら, Arch. Biochem. Biophys. 363:43-54, 1999)；国際公開第02/29025号に開示されているＦＶＩＩ等価物；及び国際公開第02/38162号に開示されたような、増加したタンパク質分解安定性を示すＦＶＩＩ等価物(Scripps Research Institute)；国際公開第99/20767号、国際公開第00/66753号、国際公開第02/02764号、及び米国特許出願第20030211094号(ミネソタ大学)に開示されたような、高められた膜結合性を示し、修飾されたＧｌａ-ドメインを有するＦＶＩＩ等価物；及び国際公開第01/04287号、国際公開第01/58935号、国際公開第03/93465号、及び米国特許出願第20030165996号(Maxygen ApS)に開示されたようなＦＶＩＩ等価物が含まれる。
【００４４】
第ＶＩＩ因子等価物の他の例には。国際公開第03/31464号、及び米国特許出願第20040043446号、米国特許第20040063911号、米国特許第20040142856号、米国特許第20040137557号、及び米国特許第20040132640号(Neose Technologies, Inc.)に開示されたような、グリコペグ化ＦＶＩＩ誘導体が含まれる。
【００４５】
野生型ＦＶＩＩａと比較して増加した生物活性を有するＦＶＩＩ変異体の非限定的例には、国際公開第01/83725号、国際公開第02/22776号、国際公開第02/077218号、国際公開第03/027147号、国際公開第04/029090号、国際公開第05/075635号、出願番号05108713.8を有する欧州特許出願(Novo Nordisk A/S)、国際公開第02/38162号(Scripps Research Institute)；及び日本国特許第2001061479号(Chemo-Sero-Therapeutic Res Inst.)に開示されているような高められた活性を有するＦＶＩＩａ変異体が含まれる。
【００４６】
本発明の一実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＫ３３７Ａ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｄ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドは  Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＭ２９８Ｑ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｔ-ＦＶＩＩである。
【００４７】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＳ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩである。
【００４８】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＫ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＫ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩである。
【００４９】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＫ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＫ３３７Ａ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＫ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｄ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩである。
【００５０】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＥ２９６Ｖ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
【００５１】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＳ３１４Ｅ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＥ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩである。
【００５２】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
【００５３】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
【００５４】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＫ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＫ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＫ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＫ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩである。
【００５５】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＫ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＫ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＫ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＫ３３７Ａ／Ｍ２９８Ｑ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＫ３３７Ａ／Ｅ２９６Ｖ／Ｖ１５８Ｄ-ＦＶＩＩである。
【００５６】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｄ／Ｓ３１４Ｅ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｄ／Ｓ３１４Ｅ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩである。
【００５７】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ／Ｅ２９６Ｖ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＥ２９６Ｖ／Ｓ３１４Ｅ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＥ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
【００５８】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
【００５９】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩである。
【００６０】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
【００６１】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩである。
【００６２】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｔ／Ｅ２９６Ｖ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＥ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
【００６３】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ-ＦＶＩＩである。
【００６４】
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｖ１５８Ｔ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
本発明のさらなる実施態様では、第ＶＩＩ因子ポリペプチドはＬ３０５Ｖ／Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ／Ｋ３３７Ａ／Ｓ３１４Ｅ-ＦＶＩＩである。
【００６５】
調製物及び製剤：
本発明は、第ＶＩＩａ因子調製物を含有する製剤を使用することにより達成される、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの治療的投与を含む。ここで使用される場合、「第ＶＩＩ因子調製物」なる用語は、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチド合成するようプログラムされた組換え細胞又は起始細胞であろうとなかろうと、それらが合成された細胞から分離された変異体及び化学的に修飾された形態を含む、複数の第ＶＩＩａ因子ポリペプチドを意味する。
【００６６】
起始細胞からのポリペプチドの分離は、限定されるものではないが、接着細胞培養からの所望する生成物を含有する細胞培養培地の除去；非接着細胞を取り除くための遠心分離又は濾過等を含む、当該技術で公知の任意の方法により達成され得る。
【００６７】
場合によっては、第ＶＩＩ因子ポリペプチドは、さらに精製されてよい。精製は、限定されるものではないが、例えば、抗-第ＶＩＩ因子抗体カラムにおけるアフィニティークロマトグラフィー(例えば、Wakabayashiら, J. Biol. Chem. 261:11097, 1986; 及びThimら, Biochem. 27:7785, 1988を参照)；疎水性相互作用クロマトグラフィー；イオン交換クロマトグラフィー；サイズ排除クロマトグラフィー；電気泳動手順(例えば調製用の電点電気泳動(ＩＥＦ)、微分溶解度(例えば、硫酸アンモニウム沈降)、又抽出等を含む、当該技術で公知の任意の方法を使用して達成され得る。一般的には、Scopes, Protein Purification, Springer-Verlag, New York, 1982; 及びProtein Purification, J.-C. Janson及びLars Ryden, editors, VCH Publishers, New York, 1989を参照。精製後、調製物は、好ましくは約１０重量％未満、さらに好ましくは約５重量％未満、最も好ましくは約１重量％未満の、宿主細胞から誘導された非-第ＶＩＩ因子タンパク質を含有する。
【００６８】
第ＶＩＩ因子及び第ＶＩＩ因子-関連ポリペプチドは、第ＸＩＩａ因子、又はトリプシン様特異性を有する他のプロテアーゼ、例えば第ＩＸａ因子、カリクレイン、第Ｘａ因子、及びトロンビンを使用し、タンパク質分解的切断により活性化させてもよい。例えば、Osterudら, Biochem. 11:2853 (1972); Thomas, 米国特許第4,456,591号;及びHednerら, J. Clin. Invest. 71:1836 (1983)を参照。また、第ＶＩＩ因子は、イオン交換カラム、例えばMono Q(登録商標)(Pharmacia)等に通すことによって、活性化されてもよい。ついで、得られた活性化第ＶＩＩ因子は処方されて、以下に記載するようにして投与されてよい。
【００６９】
本発明で使用される製薬用調製物又は処方物は、好ましくは製薬的に許容可能な担体、特に水性担体又は希釈液に溶解され、組み合わされて、第ＶＩＩａ因子調製物を含有する。多様な水性担体、例えば水、緩衝水、０．４％の生理食塩水、０．３％のグリシン等を使用してもよい。また、本発明の調製物は、損傷部位に送達する又は標的とするリポソーム調製物に処方することもできる。リポソーム調製物は、一般的に、例えば米国特許第4,837,028号、同4,501,728号、及び同4,975,282号に記載されている。組成物は、従来からよく知られている滅菌技術により滅菌されてもよい。得られた水溶液は、無菌条件下で濾過されるか、又は使用のために包装され、凍結乾燥されてよく、凍結乾燥された調製物は、投与の前に滅菌水溶液と組合せられる。
【００７０】
組成物は、製薬的に許容可能な補助物質又はアジュバントを含有していてもよく、限定されるものではないが、ｐＨ調節及び緩衝剤及び／又は浸透圧調節剤、例えば酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウム、塩化ナトリウム、塩化カリウム、塩化カルシウム等が含まれる。
【００７１】
治療計画：
本発明の実施において、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドは、血小板減少症に関連した出血をを治療するのに単一用量で有効な量含有する単一用量、又は血小板減少症に関連した出血を治療するのに有効な量含有する一連の段階的用量で、被験者に投与され得る。野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの有効量(以下参照)は、単一用量又は複数用量の凝集体で投与される、又は任意の他の種類の定められた治療計画の一環としてなされる場合、血小板減少症に関連した出血に係る少なくとも一の臨床的指標に、測定可能な程度の改善が見られる程度の、第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの量を意味する。異なる活性を有する第ＶＩＩａ因子ポリペプチドが投与された場合、有効量は、公知の第ＶＩＩａ因子ポリペプチドのものと、新規の第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの凝固活性を比較することにより決定され、公知の第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの予め定められた有効量と比例させて投与されるように、該量は調節される。
【００７２】
本発明の野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの投与は、血小板減少症に関連した出血の発生後、好ましくは約６時間以内、例えば約４時間、約２時間、又は約１時間以内に開始される。また、投与は、外科手術の必要な被験者において、外科手術前の任意の時間、例えば外科手術前の約６時間以内、例えば約４時間以内、約２時間以内、又は約１時間以内、例えば外科手術の直前に開始されてもよい。
【００７３】
単一用量で投与とは、約５分未満の期間で、ボーラスとして、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを、全用量投与することを含む。いくつかの実施態様においては、約２．５分未満の期間、いくつかでは約１分未満の期間で投与が行われる。典型的には、単一用量の有効量には、少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有するヒト第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約５０μｇ／ｋｇ、７５μｇ／ｋｇ、又は９０μｇ／ｋｇ、又は少なくとも約１５０μｇ／ｋｇの第ＶＩＩａ因子が含まれる。
【００７４】
いくつかの実施態様では、本発明の野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを単一用量で投与した後、被験者は、少なくとも約３０分の間隔、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドをさらに受容しない。いくつかの実施態様では、投与後間隔は、少なくとも約４５分、例えば少なくとも約１時間、少なくとも約１．５時間、又は少なくとも約２時間である。
【００７５】
他の実施態様では、被験者は、次の計画に従い、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを受容する：(ｉ)被験者は、少なくとも約１μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有する、第１の量の野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを受容し；(ｉｉ)少なくとも約３０分の期間後、少なくとも約１μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有する量で、第２の量の野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを投与し；(ｉｉｉ)第２の用量の投与から少なくとも３０分の期間後、少なくとも約１μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有する量で、第３の量の野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを投与する。第３の量の投与から少なくとも３０分の期間後、被験者は、少なくとも約１μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有する、さらなる(第４の)量の野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを受容してもよい。
【００７６】
他の実施態様では、第１の量の野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドは、少なくとも約１μg／ｋｇ、例えば少なくとも約１０μg／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μg／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約１００μｇ／ｋｇ、又は少なくとも約１５０μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有し；他の実施態様においては、第２の量の野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドは、少なくとも約７５μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約９０μｇ／ｋｇ含有し；他の実施態様では、第３(及び場合によっては第４)の量の野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドは、少なくとも約７５μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約９０μｇ／ｋｇ含有する。
【００７７】
一実施態様では、第１の用量は約２００μｇ／ｋｇ、第２の用量は約１００μｇ／ｋｇ、及び第３(及び場合によっては第４)の用量は約１００μｇ／ｋｇ含有する。
【００７８】
他の実施態様では、被験者は、第１の投与から少なくとも約４５分、例えば少なくとも約１時間、少なくとも約１．５時間、少なくとも約２時間、少なくとも約２．５時間、又は少なくとも約３時間の期間後、第２の量の野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを受容する。
【００７９】
他の実施態様では、被験者は、先の投与から少なくとも約４５分、例えば少なくとも約１時間、少なくとも約１．５時間、少なくとも約２時間、少なくとも約２．５時間、又は少なくとも約３時間の期間後、第３(及び場合によっては第４)の量の野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを受容する。
【００８０】
一実施態様では、被験者は、約２００μｇ／ｋｇを含有する第１の用量を受容し；約１時間の期間後、被験者は、約１００μｇ／ｋｇを含有する第２の用量を受容し；第１の投与から約３時間の期間後、被験者は、約１００μｇ／ｋｇを含有する第３の用量を受容する。
【００８１】
次の表に、種々の本発明の非限定的実施態様を例証する：
2009543841.tif 000002
【００８２】
野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチド、並びに全体的な投与計画の有効量は、被験者の止血状態に応じて変えてよく、例えば循環凝固因子の相対レベル；失血量；出血速度；ヘマトクリット等を含む、一又は複数の臨床的指標を反映するものであってよいと理解されるであろう。有効量は、マトリックス値及びマトリックスにおける種々のテストポイントを構築することにより、常套的な実験方法で、当業者により決定されてよいことも、さらに理解されるであろう。
【００８３】
例えば、一連の実施態様では、本発明は、(ｉ)第１の用量の野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを投与し、(ｉｉ)予定時間後、被験者の凝固状態を評価し；及び(ｉｉｉ)評価に基づき、必要であるならば、さらなる用量の野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを投与することを含む。工程(ｉｉ)及び(ｉｉｉ)は、満足のいく止血が達成されるまで繰り返してよい。
【００８４】
本発明において、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドは、限定されるものではないが、静脈内、筋肉内、皮下、粘膜、及び肺への投与経路を含む、任意の有効な経路により投与されてよい。好ましくは、投与は静脈内経路になされる。
【００８５】
併用治療：
本発明は、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドと組合せた、付加的な薬剤の併用投与を含む。いくつかの実施態様では、付加的な薬剤には、限定されるものではないが、血液凝固剤、特に凝固因子、例えば第Ｖ因子(例えばPCT/DK02/00736を参照)、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子(例えば、国際公開第02/062376号を参照)、第Ｘ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩＩ因子(例えば、国際公開第01/85198号を参照)、フィブリノーゲン、トロンビン、ＴＡＦＩ(例えば、PCT/DK02/00734を参照)、抗線溶剤、例えばＰＡＩ-１、アプロチニン、イプシロン-アミノカプロン酸、又はトラネキサム酸(例えば、PCT/DK02/00735; PCT/DK02/00742; PCT/DK02/00751; PCT/DK02/00752を参照)；種々の抗栓血治療、並びに血小板、ＲＢＣ、ＦＦＰ、酸素キャリアの輸血、種々のバイパス剤、及び輸液療法(コロイド／クリスタロイド)、又は任意のそれらの組合せ；組織因子経路インヒビター(ＴＦＰＩインヒビター)(例えば、国際公開第01/85199号を参照)；プロテインＣインヒビター(例えば、PCT/DK02/00737を参照)；トロンボモジュリン(例えば、PCT/DK02/00738を参照)；プロテインＳインヒビター(例えば、PCT/DK02/00739を参照)；組織プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター(例えば、PCT/DK02/00740を参照)；α２-抗プラスミン剤(例えば、PCT/DK02/00741を参照)が含まれる。
【００８６】
他の薬剤と第ＶＩＩａ因子との組合せ投与を含む実施態様では、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの用量は、それ自体が、有効量を含有するものであってよいし、付加的な薬剤(類)は、被験者への治療的利点をさらに増大させるものであってもよい。また、第ＶＩＩａ因子又は等価物と第２の薬剤との組合せを、血小板減少症に関連した出血の治療に有効な量、共に含有していてもよい。また、有効量は、投与のタイミング及び数、投与方式、処方物等を含む、特定の治療計画において定められるとも理解されるであろう。
【００８７】
本発明は、以下の実施例によりさらに例証されるが、本発明の範囲を制限すると解釈されるものではない。上述の記載及び以下の実施例に開示された特徴は、双方が別々又はその任意の組合せにおいて、その様々な形態で本発明を実現するための要素である。
【図面の簡単な説明】
【００８８】
【図１Ａ】図１Ａ−Ｂは、天然(野生型)ヒト第ＶＩＩ凝固因子の全長アミノ酸配列(配列番号：１)を示す。
【図１Ｂ】図１Ａ−Ｂは、天然(野生型)ヒト第ＶＩＩ凝固因子の全長アミノ酸配列(配列番号：１)を示す。
【実施例】
【００８９】
実施例１
次の実施例で使用されるアミノ酸置換についての用語法を以下の通りである。第１の文字は配列番号：１の位置に天然に存在するアミノ酸を表す。次の数は配列番号：１の位置を表す。第２の文字は天然アミノ酸に対して置換された(置き換えられた)異なるアミノ酸を表す。具体例はＭ２９８Ｑであり、配列番号：１の２９８位にあるメチオニンがグルタミンに置き換わったものである。他の例Ｖ１５８Ｔ／Ｍ２９８Ｑにおいては、同じ第ＶＩＩ因子ポリペプチドにおいて、配列番号：１の１５８位にあるバリンがスレオニンに置き換わっており、配列番号：１の２９８位にあるメチオニンがグルタミンに置き換わっている。
【００９０】
本発明で使用される、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有するＦＶＩＩａポリペプチドは、公開されている国際特許出願、例えば国際公開第01/83725号、国際公開第02/22776号、国際公開第02/077218号、国際公開第03/027147号、国際公開第04/029090号、国際公開第05/075635号、出願番号05108713.8を有する欧州特許出願(Novo Nordisk A/S)、国際公開第02/38162号、及び日本国特許第2001061479号に従い調製されてよい。
【００９１】
実施例２
インビトロ加水分解アッセイ
天然(野生型)第ＶＩＩａ因子及び第ＶＩＩａ因子変異体(以後、双方とも「第ＶＩＩａ因子」と称する)を平行してアッセイし、それぞれの特異的な活性を直接比較する。アッセイはマイクロタイタープレート(MaxiSorp, Nunc, Denmark)において実施する。色素生産性基質Ｄ-Ｉｌｅ-Ｐｒｏ-Ａｒｇ-ｐ-ニトロアニリド(S-2288, Chromogenix, Sweden)、最終濃度１ｍＭを、０．１ＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ２、及び１ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミンを含有する、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．４において、第ＶＩＩａ因子(最終濃度１００ｎＭ)に添加する。４０５ｎｍでの吸光度を、SpectraMaxＴＭ340プレートリーダー(Molecular Devices, USA)にて、連続的に測定する。２０分のインキュベート中に発生し、酵素を含有しないブランクウェルの吸光度を引いた後の吸光度を使用し、変異体と野生型第ＶＩＩａ因子の活性の比率を算出する。
比率＝(４０５ｎｍでの第ＶＩＩａ因子変異体)／(４０５ｎｍでの野生型第ＶＩＩａ因子)
【００９２】
実施例３
インビトロタンパク質分解アッセイ
天然(野生型)第ＶＩＩａ因子及び第ＶＩＩａ因子変異体(以後、双方とも「第ＶＩＩａ因子」と称する)を平行してアッセイし、それぞれの特異的な活性を直接比較する。アッセイはマイクロタイタープレート(MaxiSorp, Nunc, Denmark)において実施する。０．１ＭのＮａＣｌ、５ｍＭのＣａＣｌ２、及び１ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミンを含有する、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．４、１００マイクロＬに、第ＶＩＩａ因子(１０ｎＭ)及び第Ｘ因子(０．８マイクロＭ)が入ったものを、１５分インキュベートする。ついで、０．１ＭのＮａＣｌ、２０ｍＭのＥＤＴＡ、及び１ｍｇ／ｍｌのウシ血清アルブミンを含有する、５０ｍＭのＨｅｐｅｓ、ｐＨ７．４、５０マイクロＬを添加することにより、第Ｘ因子切断を停止させる。生成した第Ｘａ因子の量を、色素生産性基質Ｚ-Ｄ-Ａｒｇ-Ｇｌｙ-Ａｒｇ-ｐ-ニトロアニリド(S-2765, Chromogenix, Swe-den)、最終濃度０．５ｍＭを添加することにより測定する。４０５ｎｍでの吸光度を、SpectraMaxＴＭ340プレートリーダー(Molecular Devices, USA)にて、連続的に測定する。ＦＶＩＩａを含有しないブランクウェルの吸光度を引いた後、１０分間で発生した吸光度を使用し、変異体と野生型第ＶＩＩａ因子のタンパク質分解活性の比率を算出する。
比率＝(４０５ｎｍでの第ＶＩＩａ因子変異体)／(４０５ｎｍでの野生型第ＶＩＩａ因子)
【００９３】
実施例４
２０×１０９血小板／Ｌ未満の血小板を含有する、幹細胞輸血を受けた被験者から得られた血液における、 Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａ等の増加した活性を有するＦＶＩＩａアナログ、並びに組換え野生型ＦＶＩＩａ(ｒｗｔＦＶＩＩａ)の効果を研究し、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａが、ＳＣＴ被験者から得られたＷＢにおいて、エキソビボでは、等モル濃度のｒｗｔＦＶＩＩａよりかなり優れており、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａが、低血小板数にもかかわらず、顕著な効果を有することが示された。
【００９４】
我々は、血栓弾性率測定(TEG 5000分析器、Haemoscope corporation)を使用し、２０×１０９／Ｌ以下の血小板数を有する７人のＳＣＴ患者から得られた全血(ＷＢ)における、ｒｗｔＦＶＩＩａ(２５ｎＭ?９０μｇ／ｋｇ、１００ｎＭ?３６０μｇ／ｋｇ)及びｒＦＶＩＩａアナログ(２５ｎＭ?９０μｇ／ｋｇ)の影響を研究した。凝固は少量の組織因子(Innovin、最終希釈度１：５００００)を用いて開始させ、血餅安定性をｔＰＡ(１．８ｎＭ)を添加することにより評価した。凝固時間(Ｒ-時間、秒)、血餅形成速度(ＣＦＲ、α-角度)、最大機械的強度(ＭＡ、ｍｍ)、及びＭＡ(ＡＵＣ、ｍｍ×秒)から算出された線維素溶解曲線下の領域として定められる線維素溶解に対する耐性を、全て記録した。データは平均として表し、統計的分析を２元式分散分析モデルにより実施した。Ｐ＜０．０５は統計的に有意であるとみなされる。
【００９５】
７人の被験者のうち２人のみが、対照サンプル中で血餅を形成した。７人の被験者のうち５人は、２５ｎＭのｒＦＶＩＩａでスパイクされたエキソビボで反応したが、１００ｎｍのｒｗｔＦＶＩＩａ及び２５ｎＭのＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａで、それぞれスパイクされた全ての被験者においては、効果は観察されなかった。Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａ(２５ｎＭ)及びｒｗｔＦＶＩＩａ(２５ｎＭ、１００ｎＭ)では、Ｒ-時間、ＭＡ、及びＣＦＲがかなり改善された(Ｒ：バッファー＝２７８９、２５ｎＭのｒｗｔＦＶＩＩａ＝１７１３、１００ｎＭのｒｗｔＦＶＩＩａ＝１０３５、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａ＝５４９；ＭＡ：バッファー＝０．７、２５ｎＭのｒｗｔＦＶＩＩａ＝３．８、１００ｎＭのｒｗｔＦＶＩＩａ＝７．２、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａ＝１２．３；ＣＦＲ：バッファー＝１．４、２５ｎＭのｒｗｔＦＶＩＩａ＝５．８、１００ｎＭのｒｗｔＦＶＩＩａ＝１０．４、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａ＝２５．３）が、ＡＵＣは除かれ、ここでの治療では、２５ｎＭのｒｗｔＦＶＩＩａと２５ｎＭのＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａとを比較しても、あまり差異はなかった(ＡＵＣ：バッファー＝２３９、２５ｎＭのｒｗｔＦＶＩＩａ＝３７８、１００ｎＭのｒｗｔＦＶＩＩａ＝７２７、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａ＝１０３１）。しかしながら、２５ｎＭと１００ｎＭのｒｗｔＦＶＩＩａは、正常なドナーの範囲内で、ＴＥＧ値を得るのに十分ではなかったのに対し、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａでは、Ｒ-時間(５人の被験者）、ＣＦＲ及びＭＡ(３人の被験者）に関して、これらのＴＥＧ値が得られた。
【００９６】
Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａは、２０×１０９血小板／Ｌ以下の血小板を有する、幹細胞輸血を受けた被験者から得られた全血において、ｒｗｔＦＶＩＩａにより得られた効果と比較して、有意、かつ優れた効果を示した。
本データは、増加した活性を有するＦＶＩＩアナログが、２０×１０９血小板／Ｌ以下を有する、幹細胞輸血(ＳＣＴ)を受けた被験者から得られた血液において、止血対ｒｗｔＦＶＩＩａにて優れた影響を有する。
【００９７】
実施例５
血小板減少性ラットの尾部出血における野生型ヒトＦＶＩＩａ及びＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａの効果
血小板減少症は、根底にある多くの病気に原因があり、制御できない出血の原因でもありうる。現在、血小板減少性出血に対する標準的な治療は血小板輸血である。本研究の目的は、抗体-誘発性血小板減少症を患ったラットにおける、強度の増した効力を有するｒＦＶＩＩａ-アナログ、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａ、及び野生型ヒトＦＶＩＩａの効果を調査することである。
ラットは、ポリクローナルウサギ抗-ラット血小板抗体の皮下注射を受容した。
(Accurate Chemicals, Westbury, NY)。２４時間後、尾部切断を実施した時、血小板数は最初の値(５８９±１８５〜４６±２１×１０９／ｌ；ｎ＝５８；平均±ＳＤ)の９０％以上が低減していた。出血の５分後、野生型ヒトＦＶＩＩａ(５又は１０ｍｇ／ｋｇ)、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａ(１０ｍｇ／ｋｇ)又はビヒクルを用いてラットを治療し、その後出血を１８００秒観察した。
【００９８】
2009543841.tif 000003
データは平均±ＳＥＭである。出血時間のデータは、マンホイットニーのＵ字検定(Ａ-Ｂ)又はダンポストテストを用いたKruskall-Wallisテスト(Ｂ-Ｅ)を使用して分析したものである。失血データは、スチューデントt-検定(Ａ-Ｂ)又はボンフェローニポスト-テストを用いた一元性分散分析(Ｂ-Ｅ)を使用し、ｌｏｇ(ｘ＋１)変換後に分析したのものである。星印は統計的有意を示す：＊＊：ｐ＜０．０１、及び＊＊＊：ｐ＜０．００１、＃検出限界以下。
【００９９】
野生型ヒトＦＶＩＩａ(１０ｍｇ／ｋｇ)は出血時間をかなり低減させるが、失血における数的低減度合いは統計的有意には達しなかった(表２)。Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａは、出血時間及び失血度合いとも、かなり低減させた。実際、ヘモグロビン濃度として検出される失血は、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａで治療された動物では検出されず、観察した出血時間、赤血球よりも、血小板成分が漏出したためであることが示された。
【０１００】
結論として、野生型ヒトＦＶＩＩａ及びＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａの双方は、正常な血小板数の１０％未満である血小板減少症のラットにおける尾部出血に効果を有する。この研究により、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａは、血小板レベルがかなり低減することにより引き起こされる出血症状の治療において、有益な効果を有することが示された。
【０１０１】
実施例７
ラットのクロピドグレル-誘発性出血における野生型ヒトＦＶＩＩａ及びＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａの効果
クロピドグレル(Plavix; Sanofi Aventis)は不可逆的なＡＤＰレセプターアンタゴニストであり、血小板凝固を効果的に阻害する。クロピドグレルは心筋梗塞等、血栓塞栓発症を防止するために、幅広く使用されている。クロピドグレル治療後の可能性のある有害事象の一つは、例えば緊急の外科的治療が必要な場合、出血を制御できないことである。現在、クロピドグレル用の有効な解毒剤は存在しない。
【０１０２】
本研究の仮説は、インヒビター−複合性血友病における出血に対して使用されると登録されている野生型ヒトＦＶＩＩａが、クロピドグレルに起因する出血を治療するのに使用できるということである。よって、野生型ヒトＦＶＩＩａ及びＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａ、新規の強力なｒＦＶＩＩａ-アナログの効果を、クロピドグレルを用いて前治療されたラットにおける尾部-出血モデルにおいてテストした。
【０１０３】
ラットに、１０ｍｇ／ｋｇのクロピドグレルを経口的に投与した。４時間後、尾部切断を実施した。出血開始の５分後、野生型ヒトＦＶＩＩａ(５、１０、２０ｍｇ／ｋｇ)、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａ(２、５、１０ｍｇ／ｋｇ)又はビヒクルでラットを治療し、その後、失血度合いを次の３０分で測定した。
【０１０４】
2009543841.tif 000004
データは平均±ＳＥＭである。データは、スチューデントt-検定(Ａ-Ｂ)又はボンフェローニポスト-テストを用いた一元性分散分析(Ｂ-Ｆ)を使用し、平方根変換後のものである。星印は統計的有意を示す：＊＊：ｐ＜０．０１、及び＊＊＊：ｐ＜０．００１。ｎｄ：測定なし。£：ｎ＝８；＄：ｎ＝９。
【０１０５】
クロピドグレルは、正常なラットと比較して、失血度合いをかなり増加させた(ｐ＜０．００１)。失血におけるこの増加度合いは有意であり、野生型ヒトＦＶＩＩａ及びＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａにより、用量依存式に低減した。用量反応曲線はＳ字型曲線に適合し、野生型ヒトＦＶＩＩａと比較してＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａがより強力であることが示された。野生型ヒトＦＶＩＩａと比較して、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａの観察された高い最大効果は、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａのより高い有効性を示しうる。
【０１０６】
実施例８
ラットの低分子量ヘパリン-誘発性出血における野生型ヒトＦＶＩＩａ及びＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａの効果
本実験の目的は、２つの異なる用量のチンザパリンを用いて抗凝固されたラットにおける、強度の増した効力を有するｒＦＶＩＩａ-アナログ、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａ、及び野生型ヒトＦＶＩＩａの効果を比較することである。よって、ラットは静脈内に、５００又は１８００ＩＵ／ｋｇのチンザパリンを受容する。１０分後、尾部切断を実施し、さらに５分後、２０ｍｇ／ｋｇの野生型ヒトＦＶＩＩａ、１０ｍｇ／ｋｇのＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａ又はビヒクルを用いてラットを治療し、その後出血を１８００秒観察した。
【０１０７】
2009543841.tif 000005
データは平均±ＳＥＭである。データは、マンホイットニーのＵ字検定(Ａ-Ｂ)又はダンポストテストを用いたKruskall-Wallisテスト(Ｂ-Ｄ)を使用して分析したものである。星印は統計的有意を示す：＊：ｐ＜０．０５及び＊＊＊：ｐ＜０．００１。＃観察期間１８００秒。
【０１０８】
2009543841.tif 000006
データは平均±ＳＥＭである。データは、スチューデントt-検定(Ａ-Ｂ)又はボンフェローニポスト-テストを用いた一元性分散分析(Ｂ-Ｅ)を使用し、ｌｏｇ(ｘ＋１)変換後に分析したのものである。星印は統計的有意を示す：＊：ｐ＜０．０５及び＊＊＊：ｐ＜０．００１。＃：検出限界以下。ＮＳ：有意ではない。
【０１０９】
野生型ヒトＦＶＩＩａ(２０ｍｇ／ｋｇ)は、５００ＩＵ／ｋｇのチンザパリンにより誘発される出血中の出血時間及び失血量をかなり低減させ(表５及び６、左欄)、一方、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａは、出血時間及び失血量の双方を正常化させることができた。
１８００ＩＵ／ｋｇのチンザパリンを用いた重度の抗凝固後も、ビヒクルの対照グループと比較して、１０ｍｇ／ｋｇのＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａ(１０ｍｇ／ｋｇ)のかなりの効果は、出血時間及び失血量において保持されている(表５及び６、右欄)。これに対し、２倍の高用量の野生型ヒトＦＶＩＩａ(２０ｍｇ／ｋｇ)は、出血時間又は失血量にあまり影響を与えないが、数的低減度合いは双方の変数に観察された。Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａ及び野生型ヒトＦＶＩＩａの間の効果におけるこの差は、出血時間並びに失血量においては、統計的有意に達した。
結論として、野生型ヒトＦＶＩＩａ及びＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａの双方は、ラットにおけるチンザパリン-誘発性出血には効果があるが、重度の抗凝固動物においては、Ｖ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａは、野生型ヒトＦＶＩＩａよりも効果的であると思われる。
【０１１０】
［発明の実施態様］
１．血小板減少症を患っている被験者における出血症状を治療するための医薬の製造のための、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの使用。
２．前記第ＶＩＩ因子ポリペプチドの活性と配列番号：１に示される野生型第ＶＩＩａ因子ポリペプチドの活性との間の比率が少なくとも約１．２５である、実施態様１の使用。
３．前記比率が少なくとも約２．０、例えば少なくとも約４．０、例えば少なくとも約６、例えば少なくとも約１０である、実施態様２の第ＶＩＩ因子ポリペプチド。
【０１１１】
４．医薬が、少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約１００μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有している、実施態様１ないし３のいずれか一つの使用。
５．医薬が、少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有する第１の用量として投与され、続いて治療の開始１ないし２４時間後に、約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有する第２の用量で投与されるものである、実施態様１ないし４のいずれか一つの使用。
６．少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有する第３の用量が、第２の治療の開始後、少なくとも約１時間で投与される、実施態様５の使用。
【０１１２】
７．医薬が、骨髄における血小板の生成低下による血小板減少症を患っている被験者の治療用である、実施態様１ないし６のいずれか一つの使用。
８．医薬が、血流及び／又は脾臓及び／又は肝臓における血小板の破壊増大による血小板減少症を患っている被験者の治療用である、実施態様１ないし７のいずれか一つの使用。
９．医薬が、血液希釈による血小板減少症を患っている被験者の治療用である、実施態様１ないし８のいずれか一つの使用。
【０１１３】
１０．医薬が、貧血、例えば再生不良性貧血、白血病、骨髄内の癌、骨髄に発症する感染症、アルコール誘発性血小板減少症、免疫性血小板減少性紫斑病(ＩＴＰ)、薬剤誘発性免疫性血小板減少症(例えば、ヘパリンが原因)、薬剤誘発性非免疫性血小板減少症(例えば、抗癌剤が原因)、血栓性血小板減少性紫斑病、輸血誘発性血小板減少症、原発性血小板血症、播種性血管内凝固症候群(ＤＩＣ)、脾機能亢進(例えば、硬変)、溶血性尿毒症症候群、発作性夜間血色素尿症、免疫性血小板減少症(例えば、ＬＥＤ又はＲＡにおける血小板減少症)、心臓バイパス、大量のＲＢＣ輸血及び輸液療法からなる列挙から選択される、特定の兆候による血小板減少症を患っている被験者の治療用である、実施態様１ないし９のいずれか一つの使用。
【０１１４】
１１．血小板レベルが、血液１リットル当たり１５０×１０９以下の血小板、例えば血液１リットル当たり１００×１０９以下の血小板、例えば血液１リットル当たり７５×１０９以下の血小板、例えば血液１リットル当たり５０×１０９以下の血小板、例えば血液１リットル当たり４０×１０９以下の血小板である、実施態様１ないし１１のいずれか一つの使用。
【０１１５】
１２．医薬が、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドによる予防又は減弱を増大させる量の第２の凝固剤をさらに含有する、実施態様１ないし１１のいずれか一つの使用。
１３．前記第２の凝固剤が、凝固因子及び抗線溶剤からなる群から選択される、実施態様１２の使用。
１４．前記凝固因子が、第Ｖ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩＩ因子、フィブリノーゲン、トロンビン、ＴＡＦＩ、ＰＡＩ-１、アプロチニン、イプシロン-アミノカプロン酸、又はトラネキサム酸、種々の抗栓血治療、並びに血小板、ＲＢＣ、ＦＦＰ、酸素キャリアの輸血、種々のバイパス剤、及び輸液療法(コロイド／クリスタロイド)からなる群から選択される、実施態様１３の使用。
１５．前記野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドがＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａである、実施態様１ないし１４のいずれか一つの使用。
【０１１６】
１６．(ｉ)野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有する医薬；及び
(ｉｉ)ａ．少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０、例えば少なくとも約１００μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有する第１の用量を、治療開始時に投与し；
ｂ．場合によっては、少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有する第２の用量を、治療の開始１ないし２４時間後に投与すべき；
と記載された使用説明書；
を含む、血小板減少症を患っている患者における出血症状を治療するためのキット。
【０１１７】
１７．少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含有する任意の第３の用量が、第２の治療の開始後、少なくとも約１時間で被験者に投与されうる、実施態様１６のキット。
【０１１８】
１８．血小板減少症を患っている被験者における出血症状を治療する方法であって、該方法が、野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを、該治療に有効な量、該治療を必要とする患者に投与することを含む方法。
１９．血小板減少症が骨髄における血小板の生成低下によるものである、実施態様１８の方法。
２０．血小板減少症が、血流及び／又は脾臓及び／又は肝臓における血小板の破壊増大によるものである、実施態様１８又は１９の方法。
２１．血小板減少症が血液希釈によるものである、実施態様１８ないし２０のいずれか一つの方法。
【０１１９】
２２．医薬が、貧血、例えば再生不良性貧血、白血病、骨髄内の癌、骨髄に発症する感染症、アルコール誘発性血小板減少症、免疫性血小板減少性紫斑病(ＩＴＰ)、薬剤誘発性免疫性血小板減少症(例えば、ヘパリンが原因)、薬剤誘発性非免疫性血小板減少症(例えば、抗癌剤が原因)、血栓性血小板減少性紫斑病、輸血誘発性血小板減少症、原発性血小板血症、播種性血管内凝固症候群(ＤＩＣ)、脾機能亢進(例えば、硬変)、溶血性尿毒症症候群、発作性夜間血色素尿症、免疫性血小板減少症(例えば、ＬＥＤ又はＲＡにおける血小板減少症)、心臓バイパス、大量のＲＢＣ輸血及び輸液療法からなる列挙から選択される、特定の兆候による血小板減少症を患っている被験者の治療用である、実施態様１８ないし２のいずれか一つの方法。
【０１２０】
２３．血小板レベルが、血液１リットル当たり１５０×１０９以下の血小板、例えば血液１リットル当たり１００×１０９以下の血小板、例えば血液１リットル当たり７５×１０９以下の血小板、例えば血液１リットル当たり５０×１０９以下の血小板、例えば血液１リットル当たり４０×１０９以下の血小板である、実施態様１８ないし２２のいずれか一つの方法。
【０１２１】
２４．有効量が、少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約１００μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを含む、実施態様１８ないし２３のいずれか一つの方法。
２５．少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの第１の用量が治療開始時に投与され、少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの第２の用量が、治療の開始１ないし２４時間後に被験者に投与される、実施態様１８ないし２４のいずれか一つの方法。
２６．少なくとも約１μｇ／ｋｇの第ＶＩＩ因子ポリペプチド、例えば少なくとも約１０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約２０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約４０μｇ／ｋｇ、例えば少なくとも約８０μｇ／ｋｇの野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドの第３の用量が、第２の治療の開始後、少なくとも約１時間で投与されることを含む、実施態様２５の方法。
【０１２２】
２７．野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドによる治療を増大させる量で、第２の凝固剤を被験者に投与することをさらに含む、実施態様１８ないし２６のいずれか一つの方法。
２８．前記第２の凝固剤が、凝固因子及び抗線溶剤からなる群から選択される、実施態様２７の方法。
２９．前記凝固因子が、第Ｖ因子、第ＶＩＩＩ因子、第ＩＸ因子、第Ｘ因子、第ＸＩ因子、第ＸＩＩＩ因子、フィブリノーゲン、トロンビン、ＴＡＦＩ、ＰＡＩ-１、アプロチニン、イプシロン-アミノカプロン酸、又はトラネキサム酸、種々の抗栓血治療、並びに血小板、ＲＢＣ、ＦＦＰ、酸素キャリアの輸血、種々のバイパス剤、及び輸液療法(コロイド／クリスタロイド)からなる群から選択される、実施態様２８の方法。
【０１２３】
３０．血小板減少症を患っている多くの被験者における出血症状を治療するための方法であって、該方法が(ｉ)野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを、前記治療に有効な量、出血のある血小板減少症を患っている被験者群に投与し；(ｉｉ)野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドを受容していない同様の被験者群で予期される臨床的指標のレベルと比較して、該被験者群における出血症状の一又は複数の臨床的指標の低減度合いを観察することを含む方法。
３１．前記野生型第ＶＩＩａ因子と比較して増加した活性を有する第ＶＩＩ因子ポリペプチドがＶ１５８Ｄ／Ｅ２９６Ｖ／Ｍ２９８Ｑ-ＦＶＩＩａである、実施態様１８ないし３０のいずれか一つの方法。
【図１Ａ】
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【図１Ｂ】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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