(57)【要約】  可溶性ｆｍｓ様チロシンキナーゼ１（ｓＦｌｔ−１）のレベル、肥満因子および場合によっては１以上の追加的因子（これらは生理的パラメーターまたは生物マーカーでありうる。）を含む複数の因子の測定結果に基づいて、子癇前症を含む種々の高血圧状態の１つを有するものとして被験者が診断されるのを可能にする方法を提供する。該方法は、妊娠に関連した又は抗血管新生薬物療法に関連した高血圧状態を診断するために用いられうる。したがって、該方法は、妊婦および抗血管新生治療（例えば、化学療法）を受けている患者の高血圧状態を診断するために有用である。
2009543066.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
被験者の高血圧状態を診断するための方法であって、
（ａ）該被験者に関する第１因子（該第１因子は該被験者からのサンプル中のｓＦｌｔ−１のレベルである。）の測定結果を第１予備決定値と比較し、それにより、第１高血圧障害の存在または非存在を決定し、
（ｂ）該被験者に関する第２因子（該第２因子は、高血圧状態に関連した身体的パラメーターである。）の測定結果を第２予備決定値と比較し、それにより、第２高血圧障害の存在または非存在を決定し、
（ｃ）該第１および第２高血圧障害の存在または非存在に基づいて該被験者の高血圧状態を診断する工程を含んでなる該方法。
【請求項２】
該身体的パラメーターが肥満の指標である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
該肥満の指標が、体重、体型指数（ＢＭＩ）、ウエスト対ヒッブ比、ウエスト周囲長、円錐指数（ｃｏｎｉｃｉｔｙ  ｉｎｄｅｘ）、腹高（ａｂｄｏｍｉｎａｌ  ｈｅｉｇｈｔ）または体脂肪量である、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
該肥満の指標が体型指数（ＢＭＩ）である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
該第１高血圧障害が子癇前症である、請求項１から４のいずれかに記載の方法。
【請求項６】
該第２高血圧障害が慢性高血圧である、請求項１から５のいずれかに記載の方法。
【請求項７】
該高血圧状態が子癇前症、非子癇前症または慢性高血圧付加子癇前症である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
該ｓＦｌｔ−１のレベルが遊離ｓＦｌｔ−１のレベルである、請求項１から７のいずれかに記載の方法。
【請求項９】
該被験者が妊婦である、請求項１から８のいずれかに記載の方法。
【請求項１０】
該被験者が、抗血管新生薬物療法を受けている患者である、請求項１から８のいずれかに記載の方法。
【請求項１１】
該サンプルが血液サンプルである、請求項１から１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１２】
該サンプルが血漿または血清サンプルである、請求項１から１０のいずれかに記載の方法。
【請求項１３】
該方法が更に、１以上の他の身体的パラメーターまたは生物マーカーまたはそれらの組合せの測定結果を対応予備決定値と比較し、それにより、該第１高血圧障害または該第２高血圧障害の存在または非存在を確認することを含む、請求項１から１２のいずれかに記載の方法。
【請求項１４】
該方法が更に、第３因子（該第３因子は血圧である。）の測定結果を第３予備決定値と比較し、それにより、該第１高血圧障害または該第２高血圧障害の存在または非存在を確認することを含む、請求項１から１３のいずれかに記載の方法。
【請求項１５】
該第３因子が収縮期血圧である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
該第３因子が仰臥位収縮期血圧である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
該第１高血圧障害が子癇前症であり、該第２高血圧障害が慢性高血圧であり、第３因子の該測定結果と第３予備決定値との比較が慢性高血圧の存在または非存在を証明する、請求項１４に記載の方法。
【請求項１８】
抗高血圧薬での治療から被験者が利益を得るかどうかの評価方法であって、
（ａ）該被験者に関する第１因子（該第１因子は該被験者からのサンプル中のｓＦｌｔ−１のレベルである。）の測定結果を第１予備決定値と比較し、それにより、第１高血圧障害の存在または非存在を決定し、
（ｂ）該被験者に関する第２因子（該第２因子は、高血圧状態に関連した身体的パラメーターである。）の測定結果を第２予備決定値と比較し、それにより、第２高血圧障害の存在または非存在を決定し、
（ｃ）該第１および第２高血圧障害の存在または非存在に基づいて該被験者の高血圧状態を診断する工程を含んでなり、
該被験者の高血圧状態が、該被験者が抗高血圧薬での治療から利益を得るかどうかの指標となる、該方法。
【請求項１９】
該被験者が妊婦である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
該被験者が、抗血管新生薬物療法を受けている患者である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
被験者の高血圧状態を診断するための装置であって、
高血圧状態を有する複数の参照被験者のそれぞれに関して決定された複数の因子（該複数の因子は、Ｆｌｔ−１のレベル、および高血圧に関連した身体的パラメーターを含む。）と、該参照被験者のそれぞれにおける高血圧状態の発生との相関関係、
および該被験者に関して決定された因子の同一セットを該相関関係にマッチング（合致）させて該被験者の高血圧状態を診断するための手段を含んでなる該装置。
【請求項２２】
該身体的パラメーターが肥満の指標である、請求項２１に記載の装置。
【請求項２３】
該肥満の指標が、体重、体型指数（ＢＭＩ）、ウエスト対ヒッブ比、ウエスト周囲長、円錐指数（ｃｏｎｉｃｉｔｙ  ｉｎｄｅｘ）、腹高（ａｂｄｏｍｉｎａｌ  ｈｅｉｇｈｔ）または体脂肪量である、請求項２２に記載の装置。
【請求項２４】
該肥満の指標が体型指数（ＢＭＩ）である、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
該複数の因子が血圧を更に含む、請求項２１から２４のいずれかに記載の装置。
【請求項２６】
該装置がコンピューターソフトウェア製品である、請求項２１から２５のいずれかに記載の装置。
【請求項２７】
該装置が、該相関関係の図式的表示が配置された固体支持体を含む、請求項２１から２６のいずれかに記載の装置。
【請求項２８】
該図式的表示がノモグラム表示手段を含み、該ノモグラム表示手段がｓＦｌｔ−１レベル目盛、該身体的パラメーターに関する目盛および診断用目盛を含み、該ｓＦｌｔ−１目盛上の値および該身体的パラメーターに関する目盛上の値が、診断用目盛に相関されて該被験者の高血圧状態の診断をもたらしうるよう、該固体表面上に配置される、請求項２７に記載の装置。
【請求項２９】
該図式的表示が決定樹を含む、請求項２７に記載の装置。
【請求項３０】
被験者の高血圧状態の診断に有用な因子を特定するための方法であって、
（ａ）参照集団（該参照集団は、正常血圧の高血圧状態または高血圧障害をそれぞれが有する被験者を含む。）の各メンバーに関する高血圧に関連した複数の因子の測定結果を含むデータセットを得、
（ｂ）該データセットに多変量解析を適用して該測定結果を該被験者の高血圧状態と相関させ、それにより、被験者の高血圧状態の診断に有用な因子を特定することを含んでなる該方法。
【請求項３１】
該高血圧障害が子癇前症、慢性高血圧、または慢性高血圧を伴う子癇前症である、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
該多変量解析が主成分分析を含む、請求項３０または３１に記載の方法。
【請求項３３】
高血圧に関連した複数の因子と被験者の高血圧状態との間の相関関係の機能的表示を作成するための方法であって、
（ａ）参照集団（該参照集団は、正常血圧の高血圧状態または高血圧障害をそれぞれが有する被験者を含む。）の各メンバーに関する高血圧に関連した複数の因子の測定結果を含むデータセットを得、
（ｂ）該データセットに多変量解析を適用して該測定結果と該被験者の高血圧状態との間の相関関係を得、
（ｃ）該相関関係の機能的表示を作成することを含んでなる該方法。
【請求項３４】
該高血圧障害が子癇前症、慢性高血圧、または慢性高血圧を伴う子癇前症である、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
該多変量解析が主成分分析を含む、請求項３３または３４に記載の方法。
【請求項３６】
該機能的相関関係がノモグラムまたは決定樹である、請求項３３から３５のいずれかに記載の方法。
【請求項３７】
妊娠被験者の高血圧状態を子癇前症、非子癇前症または慢性高血圧付加子癇前症として診断する方法であって、
（ａ）該妊娠被験者に関する第１因子（該第１因子は該被験者からのサンプル中のｓＦｌｔ−１のレベルである。）の測定結果を第１予備決定値と比較し、それにより、子癇前症の存在または非存在を決定し、
（ｂ）該妊娠被験者に関する第２因子（該第２因子は肥満の指標である。）の測定結果を第２予備決定値と比較し、それにより、慢性高血圧の存在または非存在を決定し、
（ｃ）子癇前症および慢性高血圧の存在または非存在に基づいて、該妊娠被験者の高血圧状態を子癇前症、非子癇前症または慢性高血圧付加子癇前症と診断する工程を含んでなる該方法。
【請求項３８】
該肥満の指標が体型指数（ＢＭＩ）である、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
該ｓＦｌｔ−１のレベルが遊離ｓＦｌｔ−１のレベルである、請求項３７または３８に記載の方法。
【請求項４０】
該方法が更に、第３因子（該第３因子は血圧である。）の測定結果を第３予備決定値と比較し、それにより、慢性高血圧の存在または非存在を確認することを含む、請求項３７から３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
該第３因子が収縮期血圧である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４２】
該第３因子が仰臥位収縮期血圧である、請求項３９に記載の方法。
【請求項４３】
被験者の高血圧状態を診断するための装置であって、高血圧状態を有する複数の参照被験者のそれぞれに関して決定された複数の因子（該複数の因子は、Ｆｌｔ−１のレベル、および高血圧に関連した身体的パラメーターを含む。）と、該参照被験者のそれぞれにおける高血圧状態の発生との相関関係を含んでなり、該被験者に関して決定された因子の同一セットを該相関関係にマッチング（合致）させて該被験者の高血圧状態を診断することを可能にするよう設計された該装置。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、医学的診断の分野、特に、子癇前症の診断方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
高血圧は妊娠の最も一般的な医学的障害であり、ヒトに特有の妊娠高血圧障害（ＨＤＰ）である子癇前症による母体および胎児に対する最も高いリスクを伴うものである。Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ，Ｌｕｎｇ  ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＨＬＢＩ）は、ＨＤＰを、妊娠高血圧（ＧＨ）、子癇前症／子癇症（ＰＥ）、既存慢性高血圧（ＣＨＴＮ）および慢性高血圧付加子癇前症（ｓｕｐｅｒｉｍｐｏｓｅｄ  ｐｒｅ−ｅｃｌａｍｐｓｉａ  ｏｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）（ＰＥ＋ＣＨＴＮ）として分類している（Ｒｏｂｅｒｔｓら，（２００３）Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ４１（３）：４３７−４５を参照されたい）。根底にある高血圧、腎疾患または代謝疾患に子癇前症が付加している高リスク女性においては特に、本態性または妊娠性高血圧から子癇前症を臨床的に鑑別することは困難である。母体および胎児に対するＨＤＰのリスクの増加のほとんどは子癇前症に関連しているため、この障害を慢性高血圧または妊娠性（非タンパク尿）高血圧から鑑別することが重要である。根本リスク因子を伴わないこれまでのところ健康な初妊女性の９０％以上においては、子癇前症の臨床診断は正確である傾向にあるが、子癇前症と臨床診断された経妊婦のうち、高血圧およびタンパク尿のいずれかの他の原因を伴わないでこの障害を有する者は５０％に過ぎない。さらに、子癇前症の臨床症状はそれ自体が不均質であり、高血圧およびタンパク尿の発現開始の間には様々な遅れが存在する。子癇前症は高血圧およびタンパク尿の消散（一般に分娩後２６週間以内）により回顧的に真に診断されうるに過ぎない。
【０００３】
最高リスクの女性の亜群を検出するため及び子癇前症を他のＨＤＰから鑑別するための特有のスクリーニング試験を特定するために、相当な研究が行われている。しかし、最近、世界保健機関（ＷＨＯ）の“Ｇｌｏｂａｌ  Ｐｒｏｇｒａｍ  ｔｏ  Ｃｏｎｑｕｅｒ  Ｐｒｅ−ｅｃｌａｍｐｓｉａ”は子癇前症の予測における臨床的、生物物理的および生化学的試験の有用性を評価しており、子癇前症に関する費用効果的または信頼しうるスクリーニング試験は現在存在しないと結論づけている（Ｃｏｎｄｅ−Ａｇｕｄｅｌｏら，（２００４）  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ  １０４（６）：１３６７−  １３９１を参照されたい）。
【０００４】
ＰＥの診断に関して評価されている生物マーカーには、可溶性ｆｍｓ様チロシンキナーゼ（ｓＦｌｔ−１；ｓＶＥＧＦＲ１とも称される。）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）および胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）が含まれる。抗血管新生性ｓＦｌｔ−１は、循環血管新生性ＶＥＧＦおよびＰｌＧＦに対する天然に存在するアンタゴニストである。ＰＥを有する患者において、ｓＦｌｔ−１のレベルの増加が示されており（Ｌａｍら，（２００５）Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ４６：１０７７−１０８５；Ｍａｙｎａｒｄら，（２００３）Ｊ．Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．１１１：６４９−６５８；Ｃｈａｉｗｏｒａｐｏｎｇｓａら，（２００４）Ａｍ  Ｊ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ  １９０：１５４１−１５４７；Ｃｈａｉｗｏｒａｐｏｎｇｓａら，（２００５）Ｊ  Ｍａｔｅｒｎａｌ−Ｆｅｔａｌ  ａｎｄ  Ｎｅｏｎａｔａｌ  Ｍｅｄ  １７：３−１８）、子癇前症を有する女性においては臨床症状の発現開始の数週間前に循環ｓＦｌｔ−１濃度が上昇し始める（Ｌｅｖｉｎｅら，（２００４）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５０：６７２−６８３；Ｈｅｒｔｉｇら，（２００４）．Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  ５０（９）：１７０２−３；Ｌｅｖｉｎｅら，（２００４）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５０（７）：６７２−６８３；Ｃｈａｉｗｏｒａｐｏｎｇｓａら，（２００５）Ｊ  Ｍａｔｅｒｎ  Ｆｅｔａｌ  Ｎｅｏｎａｔａｌ  Ｍｅｄ  １７（１）：３−１８）。
【０００５】
ｓＦｌｔ−１の測定に基づく子癇前症および子癇の発生の予測方法は既に記載されている。例えば、米国特許出願番号１０／６２４８０９（公開番号２００４０１２６８２８）は、ｓＦｌｔ−１を単独で又はＰｌＧＦもしくはＶＥＧＦと組合せて使用する子癇前症および子癇の診断方法を記載している。診断マーカーとしてのｓＦｌｔ−１の有効性を判定するための種々の研究も報告されている（Ｒｏｄｒｉｇｏら，（２００５）Ａｍ  Ｊ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ  １９３：１４８６−１４９１；Ｈｅｒｔｉｇら，（２００４）Ｃｌｉｎ  Ｃｈｅｍ  ５０：１７０２−１７０３；Ｌｅｖｉｎｅら，（２００６）Ａｍ  Ｊ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ  １９４：１０３４−１０４１を参照されたい）。
【０００６】
ｓＦｌｔ−１のアンタゴニスト作用に合致して、発症時および臨床症状の発現開始前でさえも、子癇前症の女性においては遊離（未結合）ＶＥＧＦおよび遊離ＰｌＧＦの濃度が減少し、したがって、ＶＥＧＦおよびＰｌＧＦも、子癇前症の診断のための潜在的な生物マーカーとして評価されている（Ｌｅｖｉｎｅら，（２００４）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５０（７）：６７２−６８３を参照されたい）。ＰｌＧＦの測定に基づく子癇前症および子癇の発生の予測方法は既に記載されている。例えば、米国特許出願番号１０／４１５７１２（公開番号２００４００３８３０５）は、ＰｌＧＦ、プラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−１（ＰＡＩ−１）およびプラスミノーゲンアクチベーターインヒビター−２（ＰＡＩ−２）から選ばれる２以上のマーカーのレベルを測定することによる子癇前症の予測方法を記載している。また、米国特許出願番号１１／０１９５５９（公開番号２００５０１７０４４４）は、ＰｌＧＦを単独で又はｓＦｌｔ−１もしくはＶＥＧＦと組合せて使用する子癇前症の診断方法を記載している。
【０００７】
ｓＦｌｔ−１／ＰｌＧＦの比は、いずれかの生物マーカーのみより良好な（感度および特異度に基づく）子癇前症の予測因子であることが最近報告された（Ｌｅｖｉｎｅら，（２００４）Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５０（７）：６７２−６８３；Ｂｕｈｉｍｓｃｈｉら，（２００５）Ａｍ  Ｊ  Ｏｂｓｔｅｔ  Ｇｙｎｅｃｏｌ  １９２（３）：７３４−４１を参照されたい）。しかし、前記方法はいずれも、子癇前症を他のＨＤＰから鑑別できていない。
【０００８】
また、子癇前症においてレニンおよびアンジオテンシンＩＩ（ＡｎｇＩＩ）のレベルが比較的低い場合であっても循環アゴニスト性自己抗体（ＡＧＴＲ１−ＡＡ）が検出されているため、アンジオテンシンＩＩ型１受容体（ＡＧＴＲ１）の活性化の促進は子癇前症の血管収縮に寄与しうることを、研究は示している（Ｘｉａら，（２００３）Ｊ  Ｓｏｃ  Ｇｙｎｅｃｏｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  １０（２）：８２−９３；Ｗａｌｌｕｋａｔら，（２００３）Ｃａｎ  Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ  ８１（２）：７９−８３；Ｄｅｃｈｅｎｄら，（２００３）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １０７（１２）：１６３２−９を参照されたい）。
【０００９】
米国特許出願番号１１／２３５５７７（公開番号２００６００６７９３７）は、可溶性エンドグリンのみ又はｓＦｌｔ−１、ＶＥＧＦもしくはＰｌＧＦとの組合せのレベルまたは生物活性を測定することによる妊娠関連高血圧障害または妊娠関連高血圧障害の素因の診断方法を記載している。
【００１０】
抗血管新生薬物療法を受けている患者において「子癇前症様症候群」（ＰＬＳ）が生じることが現在公知である（Ｓｉｃａ（２００６）Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ２４（９）：１３２９−３１を参照されたい）。これらの場合には、患者は、タンパク尿および／または子癇前症の他の症状を伴いうる抗血管新生誘発性高血圧を示すことが観察される。抗血管新生薬物療法を受けている患者の２０から５０％において高血圧およびタンパク尿が観察されており、凝固障害、神経障害および疲労を含む子癇前症様症状も生じうる（Ｊａｉｎら，（２００６）Ｎａｔ  Ｃｌｉｎ  Ｐｒａｃｔ  Ｏｎｃｏｌ  ３（１）：２４−４０；Ｓｃｈｏｆｆｓｋｉら，（２００６）Ａｎｎ  Ｏｎｃｏｌ  Ｊａｎ  １７；［Ｅｐｕｂ  ａｈｅａｄ  ｏｆ  ｐｒｉｎｔ］；Ｇｉｌｌｅら，（２００６）Ｅｘｐ  Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  １５：１７５−１８６を参照されたい）。そのような子癇前様症状は抗血管新生療法中の益々重大な問題となりつつあり、そのような障害を診断または治療するための明らかな方法は現在存在しない。
【００１１】
この背景的情報は、本発明に対する可能な関連性を有すると出願人が信じる情報を知らせる目的で記載されている。前記情報のいずれかが本発明に対する先行技術であることを必ずしも自認するものではなく、また、そのように解釈されるべきではない。
【発明の開示】
【００１２】
（発明の概要）
本発明の目的は、子癇前症を診断するための方法および装置を提供することである。本発明の１つの態様においては、被験者の高血圧状態を診断するための方法であって、該被験者に関する第１因子（該第１因子は該被験者からのサンプル中のｓＦｌｔ−１のレベルである。）の測定結果を第１予備決定値と比較し、それにより、第１高血圧障害の存在または非存在を決定し、該被験者に関する第２因子（該第２因子は、高血圧状態に関連した身体的パラメーターである。）の測定結果を第２予備決定値と比較し、それにより、第２高血圧障害の存在または非存在を決定し、該第１および第２高血圧障害の存在または非存在に基づいて該被験者の高血圧状態を診断する工程を含んでなる方法を提供する。
【００１３】
本発明のもう１つの態様においては、抗高血圧薬での治療から被験者が利益を得るかどうかの評価方法であって、該被験者に関する第１因子（該第１因子は該被験者からのサンプル中のｓＦｌｔ−１のレベルである。）の測定結果を第１予備決定値と比較し、それにより、第１高血圧障害の存在または非存在を決定し、該被験者に関する第２因子（該第２因子は、高血圧状態に関連した身体的パラメーターである。）の測定結果を第２予備決定値と比較し、それにより、第２高血圧障害の存在または非存在を決定し、該第１および第２高血圧障害の存在または非存在に基づいて該被験者の高血圧状態を診断する工程を含んでなり、該被験者の高血圧状態が、該被験者が抗高血圧薬での治療から利益を得るかどうかの指標となる、方法を提供する。
【００１４】
本発明のもう１つの態様においては、被験者の高血圧状態を診断するための装置であって、高血圧状態を有する複数の参照被験者のそれぞれに関して決定された複数の因子（これらの複数の因子は、Ｆｌｔ−１のレベル、および高血圧に関連した身体的パラメーターを含む。）と、該参照被験者のそれぞれにおける高血圧状態の発生との相関関係、および該被験者に関して決定された因子の同一セットを該相関関係にマッチング（合致）させて該被験者の高血圧状態を診断するための手段を含んでなる装置を提供する。
【００１５】
本発明のもう１つの態様においては、被験者の高血圧状態の診断に有用な因子を特定するための方法であって、参照集団（該参照集団は、正常血圧の高血圧状態または高血圧障害をそれぞれが有する被験者を含む。）の各メンバーに関する高血圧に関連した複数の因子の測定結果を含むデータセットを得、該データセットに多変量解析を適用して該測定結果を該被験者の高血圧状態と相関させ、それにより、被験者の高血圧状態の診断に有用な因子を特定することを含んでなる方法を提供する。
【００１６】
本発明のもう１つの態様においては、高血圧に関連した複数の因子と被験者の高血圧状態との間の相関関係の機能的表示を作成するための方法であって、参照集団（該参照集団は、正常血圧の高血圧状態または高血圧障害をそれぞれが有する被験者を含む。）の各メンバーに関する高血圧に関連した複数の因子の測定結果を含むデータセットを得、該データセットに多変量解析を適用して該測定結果と該被験者の高血圧状態との間の相関関係を得、該相関関係の機能的表示を得ることを含んでなる方法を提供する。
【００１７】
本発明のもう１つの態様においては、妊娠被験者の高血圧状態を子癇前症、非子癇前症または慢性高血圧付加子癇前症（ｐｒｅ−ｅｃｌａｍｐｔｉｃ  ｓｕｐｅｒｉｍｐｏｓｅｄ  ｏｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）として診断する方法であって、該妊娠被験者に関する第１因子（該第１因子は該被験者からのサンプル中のｓＦｌｔ−１のレベルである。）の測定結果を第１予備決定値と比較し、それにより子癇前症の存在または非存在を決定し、該妊娠被験者に関する第２因子（該第２因子は肥満の指標である。）の測定結果を第２予備決定値と比較し、それにより慢性高血圧の存在または非存在を決定し、子癇前症および慢性高血圧の存在または非存在に基づいて該妊娠被験者の高血圧状態を子癇前症、非子癇前症または慢性高血圧付加子癇前症と診断する工程を含んでなる方法を提供する。
【００１８】
本発明のこれら及び他の特徴は、添付図面を参照しながら説明する後記の詳細な説明において、より明らかとなるであろう。
【００１９】
（発明の詳細な説明）
本発明は、可溶性ｆｍｓ様チロシンキナーゼ１（ｓＦｌｔ−１）のレベル、生理的パラメーターおよび場合によっては１以上の追加的因子（これらは生理的パラメーターまたは生物マーカーでありうる。）を含む因子の組合せの測定結果に基づいて、子癇前症を含む種々の高血圧障害の１つを有するものとして被験者が診断されるのを可能にする方法を提供する。該方法は、妊娠に関連した又は抗血管新生薬物療法に関連した高血圧障害を診断するために用いられうる。したがって、該方法は、妊婦の及び抗血管新生治療（例えば、化学療法）を受けている患者の高血圧状態を診断するために有用である。
【００２０】
被験者の高血圧状態の決定は、高血圧障害の発生に関連した有りうるリスク（例えば、痙攣、心血管疾患および卒中）を考慮した該被験者のための適当な治療計画を医師が作成するのを可能にする。
【００２１】
その最も単純な実施形態において、本発明の方法は、僅か２つの因子、すなわち、可溶性ｆｍｓ様チロシンキナーゼ１（ｓＦｌｔ−１）および肥満因子の測定に基づいて、子癇前症（ＰＥ）、慢性高血圧（ＣＨＴＮ）または慢性高血圧付加子癇前症（ｐｒｅ−ｅｃｌａｍｐｓｉａ  ｓｕｐｅｒｉｍｐｏｓｅｄ  ｏｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）（ＰＥ＋ＣＨＴＮ）の高血圧状態を有するものとしての被験者の診断を提供する。もう１つの実施形態において、本発明の方法は更に、１以上の追加的因子の測定を含み、ＰＥ、ＣＨＴＮ、ＰＥ＋ＣＨＴＮまたは正常血圧（すなわち、正常）の高血圧状態を有するものとしての被験者の診断を提供する。もう１つの実施形態において、該方法はｓＦｌｔ−１のレベルおよび生理的パラメーターを測定することを含み、子癇前症（ＰＥ）または慢性高血圧（ＣＨＴＮ）の高血圧状態を有するものとしての被験者の診断を提供する。
【００２２】
本発明は更に、種々の高血圧障害の１つを有するものとして被験者を診断するためのノモグラムを含んでなる装置を提供する。
【００２３】
本明細書に記載のとおり、本発明の診断方法は、子癇前症に関連した生物マーカーおよび生理的パラメーターの測定のための多変量解析技術の適用に基づく。したがって、もう１つの態様において、本発明は、妊婦および／または抗血管新生治療（例えば、化学療法）を受けている患者の高血圧状態の診断に有用な因子を特定するための多変量解析方法を提供する。多変量解析方法は、子癇前症の診断を可能にする種々の因子の間の相関関係の機能的表示、例えばノモグラムまたは決定樹を得るためにも用いられうる。
【００２４】
定義
特に示さない限り、本明細書中で用いる全ての科学技術用語は、本発明に関連する分野の当業者に一般に理解されているのと同じ意義を有する。
【００２５】
本明細書中で用いる「高血圧状態」なる語は、高血圧障害、例えば慢性高血圧、妊娠に関連した高血圧障害（ＨＤＰ）または抗血管新生薬物療法に関連した高血圧障害の存在または非存在に関する、被験者の状態を意味する。
【００２６】
本明細書中で用いる「子癇前症」なる語は、妊娠中に観察される多系障害（タンパク尿および／または子癇前症の他の症状の発現開始に伴う又は該発現開始前の高血圧により特徴づけられる（後記を参照されたい））、および抗血管新生治療（例えば、薬物療法）に関連した「子癇前症様症候群」（ＰＬＳ）の両方を意味する。「子癇前症」なる語は、「子癇前症／子癇」のＮＨＬＢＩ  ＨＤＰ名称（後記を参照されたい）、および軽度、中等度および重度の子癇前症を含む、該障害の種々の臨床形態を包含する。「子癇前症」は、溶血、肝臓酵素レベルの上昇および低い血小板数を伴う重度の子癇前症の変異型であるＨＥＬＬＰ症候群をも含む。
【００２７】
「子癇前症様症候群（ＰＬＳ）」なる語は、タンパク尿および考えられうる子癇前症の他の症状の存在下または非存在下の高血圧の新たな発現開始により特徴づけられる抗血管新生治療（例えば、化学療法）中に観察される多系障害を意味する（後記を参照されたい）。
【００２８】
「子癇前症の症状」なる語は、高血圧（妊娠２０週の後の収縮期血圧（ＢＰ）＞１４０ｍｍＨｇおよび拡張期ＢＰ＞９０ｍｍＨｇ）を含む、患者の身体的および分析的所見ならびに病訴の両方；タンパク尿の新たな発現開始（尿検査の際のディップスティックにより１＋、２４時間の蓄尿においてタンパク質＞３００ｍｇ、または随時尿タンパク／クレアチニン比＞０．３）、ならびに分娩後２６週間までの又は抗血管新生療法の中断の際の高血圧およびタンパク尿の消散を意味する。子癇前症の症状には、腎不全、糸球体内皮症、浮腫、神経障害、凝固障害および／または疲労も含まれうる。
【００２９】
「妊娠の高血圧障害（ＨＤＰ）」は、本明細書中では、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｒｔ，Ｌｕｎｇ  ａｎｄ  Ｂｌｏｏｄ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ（ＮＨＬＢＩ）により定義されている状況において用いられる（Ｒｏｂｅｒｔｓら，（２００３）Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  ４１（３）：４３７−４５を参照されたい）。ＮＨＬＢＩはＨＤＰを以下の４つの範疇に分類している。
・妊娠２０週より後において血圧（ＢＰ）＞１４０／９０；＞３００ｍｇ／２４時間タンパク尿として定義される子癇前症（ＰＥ）。
・妊娠前または妊娠２０週より前においてＢＰ＞１４０／９０として定義される慢性高血圧（ＣＨＴＮ）。
・妊娠２０週より後の既存の慢性高血圧を有する女性における新たに増加したタンパク尿の発生として定義される慢性高血圧付加子癇前症（Ｓｕｐｅｒｉｍｐｏｓｅｄ  ｐｒｅ−ｅｃｌａｍｐｓｉａ  ｏｎ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ）（ＰＥ＋ＣＨＴＮ）。
・２０週より後においてタンパク尿を伴わない高血圧として定義される妊娠高血圧（ＧＨ）。
【００３０】
本発明においては、「因子」なる語は、被験者の高血圧状態に関連している測定可能な生理的パラメーターまたは生物マーカーを意味する。具体例には、限定的なものではないが、生理的パラメーター（生物シグナル）、例えば、肥満の指標（例えば、体重、体型指数（ＢＭＩ）、体脂肪量、ウエスト対ヒップ比など）、血圧（収縮期および拡張期）、脈圧、平均動脈圧、心拍出量、大動脈硬化、微小血管抵抗、全身血管抵抗（ＳＶＲ）、心拍数変動性（ＨＲＶ）および心拍数乱流（ＨＲＴ）；ならびに種々の生物マーカー、例えば可溶性Ｆｌｔ−１（ｓＦｌｔ−１）、胎盤増殖因子（ＰｌＧＦ）、可溶性エンドグリン（ｓＥＮＧ）、血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）、アクチビン、アンジオテンシンＩＩ（ａｎｇ  ＩＩ）、アンジオテンシンＩＩ型１受容体アゴニスト性自己抗体（ＡＧＴＲ１−ＡＡ）、インターロイキン（例えば、ＩＬ−６およびＩＬ−８）、および酸化ストレスの指標（例えば、グルタチオンペルオキシダーゼ（ＧＰＸ）、スーパーオキシドジスムターゼ（ＳＯＤ）およびマロンジアルデヒド（ＭＤＡ））が含まれる。
【００３１】
本明細書中で用いる「体型指数（ボディ・マス・インデックス）」または「ＢＭＩ」なる語は、身長に応じて基準化（ｓｃａｌｅｄ）された、被験者の体重の尺度を意味する。該指数は、以下の式を用いて、被験者の体重および身長から計算されうる。
【００３２】
【数１】
2009543066.tif 000003
【００３３】
あるいは、ＢＭＩは、以下の式を用いて、インペリアル単位を用いて計算されうる。
【００３４】
【数２】
2009543066.tif 000004
【００３５】
本明細書中で用いる「多変量解析」なる語は、２以上の統計変数を同時に観察し解析することを含む方法を意味し、正準相関分析、回帰分析、主成分分析（ＰＣＡ）、判別関数（または正準変数）分析、多次元尺度法、線形判別尺度法、ロジスティック回帰、多変量分散解析（ＭＡＮＯＶＡ）および人工的ニューラルネットワークのようなモデルを含み、これらのモデルの種々の組合せが当技術分野において公知である。
【００３６】
本明細書中で用いる「可溶性Ｆｌｔ−１（ｓＦｌｔ−１）」なる語は、Ｆｌｔ−１受容体の可溶性形態（ｓＶＥＧＦ−Ｒ１としても公知である。）を意味し、これは、ｓＦｌｔ−１の生物活性を有する、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｕ０１１３４［配列番号１］（図８）により定められるタンパク質と実質的に同一である。ｓＦｌｔ−１ポリペプチドの生物活性は、種々の標準的な方法を用いて、例えば、ＶＥＧＦまたはＰｌＧＦへのｓＦｌｔ−１の結合をアッセイすることによりアッセイされうる。本明細書中で用いるｓＦｌｔ−１には、任意のｓＦｌｔ−１ファミリーメンバーまたはアイソフォームが含まれる。ｓＦｌｔ−１は、Ｆｌｔ−１受容体の酵素切断により生成した、ｓＦｌｔ−１生物活性を維持している分解産物または断片をも意味しうる。
【００３７】
本明細書中で用いる「胎盤増殖因子（胎盤成長因子）（ＰｌＧＦ）」なる語は、ＰｌＧＦの生物活性を有する、ＧｅｎＢａｋアクセッション番号Ｐ４９７６３［配列番号２］（図９）により定められるタンパク質と実質的に同一である哺乳類増殖因子を意味する。ＰｌＧＦは、ＶＥＧＦファミリーに属するグリコシル化ホモ二量体であり、選択的スプライシングメカニズムによる２つの異なるアイソフォーム（ＰｌＧＦ−ＩおよびＰｌＧＦ−ＩＩ）（これらは共に、本明細書中で用いる「ＰｌＧＦ」なる語に含まれる。）として見出されうる。
【００３８】
本明細書中で用いる「血管内皮増殖因子（ＶＥＧＦ）」なる語は、ＶＥＧＦの生物活性を有する、ＶＥＧＦの公知アイソフォーム（ＶＥＧＦ−Ａ、ＶＥＧＦ−Ｂ、ＶＥＧＦ−Ｃ、ＶＥＧＦ−Ｄ、ＶＥＧＦ−Ｅ、ＶＥＧＦ１８９、ＶＥＧＦ１６５またはＶＥＧＦ１２１）の１つと実質的に同一である哺乳類増殖因子を意味する。天然ＶＥＧＦの生物活性には、血管内皮細胞または臍帯静脈内皮細胞の選択的増殖の促進ならびに血管新生の誘導が含まれる。
【００３９】
本明細書中で用いる「エンドグリン」なる語は、エンドグリンの生物活性を有する、ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ ０００１０９［配列番号３］（図１０）、Ｐ１７８１３またはＣＡＡ５０８９１により定められるタンパク質（ＣＤ１０５としても公知である。）と実質的に同一である哺乳類増殖因子を意味する。エンドグリンは、それらの細胞質尾部において４７アミノ酸異なる２つの異なるアイソフォーム（ＬおよびＳ）の１つとして見出されうる。どちらのアイソフォームも、本明細書中で用いるエンドグリンなる語に含まれる。当技術分野で公知の方法によりアッセイされうるエンドグリンの生物活性には、ＴＧＦ−ベータファミリーメンバー、例えばアクチビン−Ａ、ＢＭＰ２、ＢＭＰ−７、ＴＧＦ−ベータ１およびＴＧＦ−ベータ３への結合；血管新生、細胞増殖の調節、接着、遊走、浸潤の誘導；ならびに内皮細胞の活性化が含まれる。「可溶性エンドグリン」（ｓＥＮＧ）は、該タンパク質の細胞外部分の少なくとも一部分（例えば、アミノ酸１−４３７を含む部分）を含む、エンドグリンの循環非膜結合形態を意味する。可溶性エンドグリンには、エンドグリンの生物活性を維持している、エンドグリンの酵素切断により生成した循環分解産物または断片も含まれうる。
【００４０】
アミノ酸配列に関して本明細書中で用いる「実質的に同一」なる語は、例えば後記の方法を用いて最適にアライン（整列）された場合に、該アミノ酸配列が、定められた第２のアミノ酸配列（または「参照配列」）に対して少なくとも７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％または１００％の配列同一性を有することを意味する。「実質的同一性」は、完全長配列、生物学的に活性な断片または機能ドメインのような種々の型および長さの配列に関して用いられうる。２つのポリペプチドの間の同一性の割合（％）は、は、当技術分野で公知の種々の方法により、例えば、公に入手可能なコンピューターソフトウェア、例えばＳｍｉｔｈ  Ｗａｔｅｒｍａｎ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ（Ｓｍｉｔｈ，Ｔ．Ｆ．およびＭ．Ｓ．Ｗａｔｅｒｍａｎ（１９８１）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  １４７：１９５−７）；ＧｅｎｅＭａｔｃｈｅｒ  Ｐｌｕｓ（商標）（ＳｃｈｗａｒｚおよびＤａｙｈｏｆ（１９７９）Ａｔｌａｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ，Ｄａｙｈｏｆ，Ｍ．Ｏ．編，ｐｐ３５３−３５８）内に組み込まれた「ＢｅｓｔＦｉｔ」（Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｗａｔｅｒｍａｎ，Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈｅｍａｔｉｃｓ，４８２−４８９（１９８１））；ＢＬＡＳＴプログラム（Ｂａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ）（Ａｌｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．，Ｗ．Ｇｉｓｈら，（１９９０）Ｊ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２１５：４０３−１０）、ＢＬＡＳＴ−２、ＢＬＡＳＴ−Ｐ、ＢＬＡＳＴ−Ｎ、ＢＬＡＳＴ−Ｘ、ＷＵ−ＢＬＡＳＴ−２、ＡＬＩＧＮ、ＡＬＩＧＮ−２、ＣＬＵＳＴＡＬまたはＭｅｇａｌｉｇｎ（ＤＮＡＳＴＡＲ）ソフトウェアを用いて決定されうる。また、当業者は、比較する配列の長さにわたって最大アライメントを達成するために必要なアルゴリズムを含む、アライメントを測定するための適当なパラーメーターを容易に決定することが可能である。一般に、タンパク質の場合、比較配列の長さは少なくとも１０アミノ酸である。実際の長さは、比較する配列の全長に左右され、少なくとも２０、３０、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１１０、１２０、１３０、１４０、１５０、２００、２５０、３００、３５０または４００アミノ酸でありうる、あるいはそれは該アミノ酸配列の完全長でありうる、と当業者は理解するであろう。
【００４１】
本明細書中で互換的に用いる「被験者」および「患者」なる語は、高血圧状態が決定されることになる個体を意味する。
【００４２】
本明細書中で用いる「約」なる語は、正常値からの＋／−１０％の変動を意味する。そのような変動は常に、明記されているかどうかにかかわらず本明細書に記載の任意の与えられた値に含まれる、と理解されるべきである。
【００４３】
診断の方法
本発明の方法は、少なくとも１つの生物マーカーと少なくとも１つの生理的パラメーターとの組合せの測定による被験者の高血圧状態の診断を提供する。一般に、該方法は少なくとも、被験者からの血液のサンプル中のｓＦｌｔ−１のレベルを測定すること、および該被験者に関する生理的パラメーターを測定することを含む。これらの測定結果と、予め決定された値（予備決定値）との比較は、被験者の高血圧状態の決定、例えば、子癇前症と慢性高血圧との鑑別を可能にする。
【００４４】
本発明の最も単純な実施形態においては、該方法は前記工程を含み、子癇前症（ＰＥ）、慢性高血圧（ＣＨＴＮ）または慢性高血圧付加子癇前症（ＰＥ＋ＣＨＴＮ）としての、被験者の高血圧状態の診断を提供する。本発明のこの実施形態は、図１に記載の流れ図に大まかに示されている。例えば、未知高血圧状態を有する被験者（１００）に関して、ｓＦｌｔ−１のレベルを決定し、ついで予備決定値と比較する。１０２において、ｓＦｌｔ−１のレベルが予備決定値より低い場合には、該被験者は、子癇前症を有さないものとして分類され（１０４）、一方、ｓＦｌｔ−１のレベルが予備決定値より高い場合には、該被験者は、子癇前症を有するものとして分類される（１０６）。被験者が、子癇前症を有さないものとして分類され（１０４）、１０８において肥満因子が予備決定値より高い場合には、該被験者は、慢性高血圧を有するものとして分類される（１１０）。被験者が、子癇前症を有するものとして分類され（１０６）、１１２において肥満因子が予備決定値より高い場合には、該被験者は、慢性高血圧付加子癇前症を有するものとして分類され（１１４）、一方、１１２において肥満因子が予備決定値より低い場合には、該被験者は、子癇前症のみを有するものとして分類される（１１６）。
【００４５】
他の実施形態においては、該方法は、１以上の他の因子の測定を含み、被験者の高血圧状態が更に詳細に決定されることを可能にする。種々の実施形態においては、１以上の追加的因子は血圧、血管抵抗、心拍数変動、ＰｌＧＦのレベル、可溶性エンドグリンのレベルまたはそれらの組合せである。
【００４６】
したがって、本発明のもう１つの実施形態においては、該方法は、子癇前症を有さないと（例えば図１に大まかに示されている方法に従い）診断された被験者の血圧を測定し、血圧測定結果を予備決定値と比較して、該被験者が既存の慢性高血圧を有するかどうかを決定する、図２に記載の論理図に大まかに示されている追加工程を含む。図２において、子癇前症を有さないと分類された被験者に関して（２０４）、肥満因子を測定し、予備決定値と比較する。２０８において、測定した肥満因子が予備決定値より高い場合には、該被験者は、慢性高血圧（ＣＨＴＮ）を有すると分類され（２１０）、一方、２０８において、測定した肥満因子が予備決定値より低い場合には、該被験者は正常またはＣＨＴＮでありうる（２１２）。正常またはＣＨＴＮでありうる被験者に関して（２１２）、仰臥位血圧を測定し、予備決定値と比較する。２１４において、測定した血圧が予備決定値より高い場合には、該被験者はＣＨＴＮとして分類され（２１６）、一方、２１４において、測定した血圧が予備決定値より低い場合には、該被験者は正常として分類される（２１８）。
【００４７】
本発明のもう１つの実施形態においては、該方法は、被験者からの血液のサンプル中のｓＦｌｔ−１のレベルを測定し、該被験者の血圧を測定し、これらの測定結果を予備決定値と比較して、子癇前症（ＰＥ）または慢性高血圧（ＣＨＴＮ）を有するものとしての該被験者の高血圧状態の診断を得ることを含む。もう１つの実施形態においては、該血圧測定結果は収縮期血圧である。該方法は更に、１以上の他の生物マーカーまたは生理的パラメーターの測定を含みうる。
【００４８】
因子
本発明の目的においては、因子は、被験者の高血圧状態に関連している測定可能な生理的パラメーターまたは生物マーカーである。多数の測定可能な生理的パラメーターおよび生物マーカーが高血圧および／または子癇前症の存在に関連していることが、当技術分野において公知であり、したがって、それらは、本発明の方法での利用に適している。
【００４９】
生理的パラメーター
本発明の方法に従い測定されうる適当な生理的パラメーター（生物シグナル）には、限定的なものではないが、肥満の種々の指標、ならびに非侵襲的に測定されうる他の生理的パラメーター、例えば体温、血圧（収縮期および拡張期）、脈圧、平均動脈圧、パルスオキシメトリー、心拍出量、大動脈硬化、微小血管抵抗、全身血管抵抗（ＳＶＲ）、心電図検査（ＥＣＧ）、心拍数変動性（ＨＲＶ）、心拍数乱流（ＨＲＴ）および駆出分画、ならびに侵襲的測定を伴う生理的パラメーター、例えば肺楔入圧（ＰＣＷＰ）、心指数（ＣＩ）が含まれる。
【００５０】
本発明の１つの実施形態においては、該方法において測定される生理的パラメーターは、非侵襲的に測定されうるパラメーターである。もう１つの実施形態においては、本発明の方法は肥満の指標の測定を含む。種々の生理的因子が肥満の測定可能な指標であることが、当技術分野において公知である。具体例には、限定的なものではないが、体重、体型指数（ボディ・マス・インデックス）（ＢＭＩ）、ウエスト対ヒッブ比、ウエスト周囲長、円錐指数（ｃｏｎｉｃｉｔｙ  ｉｎｄｅｘ）、腹高（ａｂｄｏｍｉｎａｌ  ｈｅｉｇｈｔ）（または矢状直径）、および体脂肪を測定するための水中体重測定用タンクまたは皮脂層（カリパスまたは「ピンチ（つまみ）」）試験の利用が含まれる。当技術分野で公知のとおり、妊娠被験者の場合、肥満の最も有用な指標は、ウエスト測定値または腹高に左右されないものである。１つの実施形態においては、体重、皮脂層試験またはＢＭＩが妊婦のための肥満の指標として用いられる。
【００５１】
ＢＭＩの計算は、被験者の身長および体重が判明すれば、容易に達成されうる。ＢＭＩを計算するための標準式は前記に示されている。３０以上のＢＭＩを有する被験者は一般には肥満であるとみなされる。しかし、この値は個体の特徴に応じて様々となりうる。例えば、６５歳を超える女性では、２５の「カットオフ」値が推奨されている。
【００５２】
ウエスト対ヒップ比およびウエスト周囲長も肥満の指標となりうる。ウエスト対ヒップ比は、ウエストの周囲長をヒップの周囲長で割り算することにより計算される。女性および男性に関して、１．０を超えるウエスト対ヒップ比が肥満とみなされる。一般に、４０インチを超えるウエスト測定値を有する男性、および３５インチ以上のウエスト測定値を有する女性は肥満とみなされる。
【００５３】
肥満を判定するために、体脂肪の測定も用いられうる。体脂肪は、皮脂層試験および全身水浸のような標準的な技術を用いて測定されうる。皮脂層は、皮下脂肪パターン化の評価のために体幹および四肢において測定される。典型的には、腕の二頭筋および三頭筋皮脂層ならびに体幹の腸骨上、肩甲骨下および傍臍皮脂層が用いられる。
【００５４】
腹高は、被験者が仰向けに寝た場合に腹が胴より上に上がっている高さを意味する。円錐指数（ｃｏｎｉｃｉｔｙ  ｉｎｄｅｘ）は、身長および体重に対するウエスト周囲長を評価するものであり、以下の式により計算される。
円錐指数＝ウエスト周囲長（ｍ）／（０．１０９×体重（ｋｇ）の平方根／身長（ｍ））
【００５５】
本発明の１つの実施形態においては、該方法は肥満の指標としてＢＭＩを用いる。
【００５６】
被験者の高血圧状態に関連した他の因子、例えば血圧、脈圧、心拍出量、大動脈硬化、血管抵抗および心拍数変動の測定方法は当技術分野でよく知られている。収縮期または拡張期血圧または収縮期および拡張期の両方の組合せが測定されうる。大動脈硬化および血管抵抗は、標準的な技術、例えば脈波分析およびストレインゲージ容積変動測定により測定されうる。心拍数変動は、例えばＥＣＧまたは神経内微小電極の使用により測定されうる。
【００５７】
これらの因子の多くは、被験者を立位、坐位または背臥位にして、測定されうる。妊婦における血圧は非常に不安定であることが公知であるため、被験者を背臥位にしてそのような測定を行うことは、これらの被験者に関する測定結果の変動を減少させるのを助けうる。
【００５８】
本発明の１つの実施形態においては、該方法は、被験者の血圧を測定することを含む。もう１つの実施形態においては、血圧測定は収縮期血圧である。もう１つの実施形態においては、血圧測定は背臥位の被験者に対して行われる。
【００５９】
生物マーカー
本発明においては、該方法は、被験者から得たサンプル中のｓＦｌｔ−１のレベルの測定を含む。該方法は、場合によっては、子癇前症に関連していることが当技術分野で公知である１以上の他の生物マーカーの測定をも含みうる。適当な具体例には、限定的なものではないが、ＰｌＧＦ、可溶性エンドグリン、ＶＥＧＦ、アクチビンおよびアンジオテンシンＩＩ型１受容体が含まれる。
【００６０】
一般に、選択された生物マーカーのレベルは体液のサンプル、例えば血液サンプル（例えば、全血、血漿または血清サンプル）、尿、唾液、羊水または脳脊髄液において測定される。しかし、当業者は、他のタイプのサンプル、例えば組織サンプル、例えば胎盤組織サンプルも適していると理解するであろう。本発明の１つの実施形態においては、該サンプルは血液、尿または羊水サンプルである。もう１つの実施形態においては、該サンプルは血清サンプルである。該サンプルは、被験者から得たままのものを直接的に、あるいはサンプルの特徴を修飾するための前処理の後で使用されうる。したがって、生物学的サンプルは、例えば、血液から血漿または血清を調製すること、細胞を破壊すること、固体物質から液体を調製すること、粘性液を希釈すること、液体を濾過すること、液体を蒸留すること、液体を濃縮すること、阻害成分を不活性化すること、試薬を添加することなどにより、使用前に前処理されうる。
【００６１】
生物マーカーのレベルの測定方法は当技術分野で公知であり、一般には、例えばモノクローナル抗体または他の適当な結合パートナーを使用してタンパク質のレベルを測定すること、あるいは例えば適当なポリヌクレオチドプライマーおよび／またはプローブを使用してタンパク質をコードするｍＲＮＡのレベルを測定することを含む。適当な結合パートナーには、天然および合成リガンド、受容体、受容体の断片、または十分な強度および特異性で対象タンパク質に結合する他の分子が含まれる。血清アンジオテンシンＩＩ型１受容体のレベルを決定するために、自己抗体の測定も用いられうる（例えば、Ｄｅｃｈｅｎｄ  Ｒら，（２００３）Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ  １０７：１６３２−１６３９；Ｘｉａら，（２００３）Ｊ  Ｓｏｃ  Ｇｙｎｅｃｏｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ  １０：８２−９３を参照されたい）。
【００６２】
タンパク質の検出方法には、例えばＥＬＩＳＡ、ウエスタンブロット法、イムノアッセイ、例えばサンドイッチアッセイ、逆サンドイッチアッセイおよび修飾サンドイッチアッセイなどが含まれ、これらは全般的にはＣｏｌｉｇａｎら（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１）およびＣｏｌｉｇａｎら（Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１）に記載されている。核酸（例えば、ｍＲＮＡ）の検出方法、例えばノーザンブロット分析、ＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ハイブリダイゼーション分析（例えば、分子ビーコンまたはＴａｑＭａｎプローブを使用するもの）などが当技術分野において公知である（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｗｉｌｅｙ  Ｉｎｔｅｒｓｃｉｅｎｃｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，２００１を参照されたい）。
【００６３】
例えば、ｓＦｌｔ−１、ＰｌＧＦ、エンドグリンおよびＶＥＧＦのレベルは、商業的に入手可能なキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ，ＭＮ）を使用するＥＬＩＳＡにより測定されうる。遊離（すなわち、未結合）ｓＦｌｔ−１、結合ｓＦｌｔ−１または全ｓＦｌｔ−１のレベルは、当技術分野で公知のとおりに測定されうる（例えば、Ｂｅｌｇｏｒｅら，（２００１）Ｃｌｉｎ  Ｓｃｉ（Ｌｏｎｄ）１００（５）：５６７−７５を参照されたい）。遊離ｓＦｌｔ−１を測定するためには、例えば、抗ＶＥＧＦ捕捉抗体をまず、ＶＥＧＦで処理する。ついで抗ＶＥＧＦ：ＶＥＧＦ複合体を、サンプル中の遊離ｓＦｌｔ−１に結合させるための捕捉リガンドとして使用する。ついで、該捕捉リガンドに結合する該サンプルからのｓＦｌｔ−１を、標識抗ｓＦｌｔ−１抗体を使用して検出することが可能である。
【００６４】
あるいは、結合ｓＦｌｔ−１および遊離ｓＦｌｔ−１の両方に結合する抗体を捕捉抗体として使用することが可能であり、ついで、該抗体に結合した遊離ｓＦｌｔ−１の量を、標識ＶＥＧＦまたはＰｌＧＦを使用して検出することが可能である（本明細書に記載の実施例に示されているとおり）。このアッセイにおいて使用する適当なサンプルには、ヘパリンを含有しない血清および血漿サンプルが含まれる。サンプルは、使用前に遠心分離されうる。
【００６５】
１つの実施形態においては、サンプル中の全ｓＦｌｔ−１のレベルが測定される。もう１つの実施形態においては、遊離ｓＦｌｔ−１のレベルが測定される。
【００６６】
本発明のもう１つの実施形態においては、該方法は、サンプル中のＰｌＧＦのレベルを測定することを含む。遊離（すなわち、未結合）ＰｌＧＦ、結合ＰｌＧＦまたは全ＰｌＧＦのレベルが用いられうる。
【００６７】
もう１つの実施形態においては、該方法は、サンプル中の可溶性エンドグリンのレベルを測定することを含む。遊離エンドグリン、結合エンドグリンまたは全エンドグリンのレベルが用いられうる。
【００６８】
患者
前記のとおり、本発明の方法は、妊婦である患者または抗血管新生薬での治療を受けている患者（例えば、癌患者）の高血圧状態を診断するために用いられうる。場合によっては、該方法は、抗血管新生薬での治療を受けている妊婦の高血圧状態を診断するために用いられうる。
【００６９】
本発明の方法は、妊娠中の種々の段階の妊婦の高血圧状態を評価するために用いられうる。１つの実施形態においては、患者は妊娠２０週以降である。
【００７０】
ＰＬＳは、ベバシズマブ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）（ＢＥＶまたはＡｖａｓｔｉｎ（登録商標））、ＳＵ１１２４８（Ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ）、ＡＢＴ−８６９、ＢＡＹ  ４３−９００６、Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ、ＰＴＫ  ７８７（バタラニブ（Ｖａｔａｌａｎｉｂ））、ＡＧ  ０１３７３６およびイマチニブ（Ｉｍａｔｉｎｉｂ）（ＳＴＩ−５７１、グリベック（Ｇｌｉｖｅｃ）、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））を含む（これらに限定されるものではない）現在使用されている多数の抗血管新生薬に関連している。したがって、これらの薬物の１以上での治療（例えば、化学療法）を受けている患者は本発明の方法から利益を受けうる。多数の他の抗血管新生薬または治療計画も現在利用可能または開発中であり、本発明の方法は、これらの薬物または薬物計画での治療を受けている患者の高血圧状態を決定するためにも用いられうる。具体例には、限定的なものではないが、ＺＤ６４７４（Ｚａｃｔｉｍａ（商標））、ＡＥＥ  ７８８、ゲフィチニブ（Ｇｅｆｉｔｉｎｉｂ）（Ｉｒｅｓｓａ（商標））、エルロチニブ（Ｅｒｌｏｔｉｎｉｂ）（Ｔａｒｃｅｖａ（商標））、ＡＥ−９４１（Ｎｅｏｖａｓｔａｔ（商標））、バタラニブ（Ｖａｔａｌａｎｉｂ）＋ＦＯＬＦＯＸ−４、バタラニブ（Ｖａｔａｌａｎｉｂ）＋ＦＯＬＦＩＲＩ、ソマキサニブ（Ｓｏｍａｘａｎｉｂ）、ソマキサニブ（Ｓｏｍａｘａｎｉｂ）＋シスプラチン（ｃｉｓｐｌａｔｉｎ）／ゲンシタビン（ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ）、ＳＵ  ６６６８、ＡＤＺ  ２１７１、ＡＥＥ７８８、ドセタキセル（Ｄｏｃｅｔａｘｅｌ）＋ＺＤ６４７４およびＡＧ−０１３７３６が含まれる。抗血管新生薬は、癌、ならびに種々の他の疾患、例えば糖尿病性網膜症、乾癬および慢性関節リウマチ（これらに限定されるものではない）を治療するために使用される。
【００７１】
１つの実施形態においては、患者は、受容体チロシンキナーゼインヒビターである抗血管新生薬での治療を受けている又は受けようとしているところである。もう１つの実施形態においては、患者は、抗血管新生薬ベバシズマブ（Ｂｅｖａｃｉｚｕｍａｂ）（ＢＥＶまたはＡｖａｓｔｉｎ（登録商標））、ＳＵ１１２４８（スニチニブ（Ｓｕｎｉｔｉｎｉｂ））、ＡＢＴ−８６９、ＢＡＹ  ４３−９００６、ソラフェニブ（Ｓｏｒａｆｅｎｉｂ）、ＰＴＫ  ７８７（バタラニブ（Ｖａｔａｌａｎｉｂ））、ＡＧ  ０１３７３６またはイマチニブ（Ｉｍａｔｉｎｉｂ）（ＳＴＩ−５７１、Ｇｌｉｖｅｃ（登録商標）、Ｇｌｅｅｖｅｃ（登録商標））での治療を受けている又は受けようとしているところである。
【００７２】
さらにもう１つの実施形態においては、本発明の方法は、例えば抗血管新生薬での治療を受けている患者の又は妊婦の高血圧患者の治療の有効性を評価するために用いられうる。
【００７３】
予備決定値
本発明の方法は、被験者に関して決定された因子のレベルまたは量を予備決定値（予め決定された値）と比較することを含む。ある与えられた因子に関する予備決定値は、参照集団における同じ因子のレベルまたは量の測定結果を含むデータを用いる標準的な分析技術により決定される。予備決定値は様々な形態をとりうる。例えば、それは単一カットオフ値でありうる。あるいは、例えば、参照集団が同等（または非同等）に群、例えば低リスク群、中リスク群および高リスク群に、あるいは四分群（ｑｕａｄｒａｎｔ）（最低四分群は、最低リスクを有する個体群であり、最高四分群は、最高リスクを有する個体群である。）に、あるいは子癇前症の重症度（すなわち、軽度、中等度または重度）に基づく群または四分群に分けられる場合、それは範囲（レンジ）の形態をとりうる。また、例えば、１つの一定の群におけるリスクがもう１つの一定の群におけるリスクの２倍である場合、予備決定値は、比較群に基づいて確立されることも可能である。
【００７４】
予備決定値の実際の数値または範囲は、選択した個々の参照集団（例えば、サイズおよび／または内容）および用いるアッセイ方法によって様々となりうる。例えば、女性の低リスク参照集団（子癇前症に関連した家族歴も他のリスク因子も有さない）は、高リスク参照集団、または低リスク個体および高リスク個体の両方を含む集団とは異なる予備決定値を与えうる。したがって、望ましい場合には、選択される予備決定値は、個体が含まれる「範疇」を考慮したものとなりうる。本発明の方法に含まれる因子のそれぞれに関する予備決定値は標準的な分析技術により容易に決定されることが可能であり、当業者による単なる通常の実験により、適当な参照集団が選択されうる。
【００７５】
本発明の１つの実施形態においては、該方法に含まれる因子に関する予備決定値は多変量解析により決定される。
【００７６】
多変量解析
本発明は更に、妊婦および／または抗血管新生治療（例えば、化学療法）を受けている患者の高血圧状態の予測または診断に有用な因子を特定するための多変量解析方法を提供する。多変量解析方法は、子癇前症の診断を可能にする種々の因子の間の相関関係の機能表示、例えばノモグラムまたは決定樹を得るために用いられうる。
【００７７】
多変量解析方法は一般には、高血圧状態を有する複数の被験者（「参照集団」）のそれぞれに関して決定された因子の組合せに多変量統計解析を適用して、高血圧状態の評価に関連した因子を決定し、各関連因子に関する適当な予備決定（カットオフ）値を決定することを含む。本発明の１つの実施形態においては、該多変量解析方法において用いる因子の組合せは少なくとも１つの生物マーカーおよび少なくとも１つの身体的パラメーターを含む。該多変量解析方法は、診断の精密化を可能にする追加的因子を特定することにより、高血圧状態を決定するための前記の診断方法を更に精密化するために、例えば、子癇前症を他の高血圧状態から鑑別するための因子の最適な組合せを特定するために、および新たなデータが入手可能になるにつれて該方法を更新（アップデート）するためにも用いられうる。
【００７８】
適当な参照集団は、該解析の結果の、意図される用途に基づいて、当業者により容易に選択されうる。例えば、該解析から、妊婦の高血圧状態を決定するための手段を得ようとする場合には、適当な参照集団は、種々の高血圧状態に関して全体を通じて及び妊娠後に監視（モニター）されている複数の女性であって、関心のある因子の適当な測定が可能な複数の女性となろう。例えば、適当な参照集団には、正常被験者、および妊娠の高血圧障害（すなわち、ＣＨＴＮ、子癇前症、妊娠高血圧または付加子癇前症）の１つを有する被験者が含まれるであろう。これらの群の１つに被験者を割り当てるために用いられうる典型的な加入基準は以下のとおりである（子癇前症の臨床診断は、分娩後１２から２６週以内に高血圧およびタンパク尿が消散した際に、回顧的に証明される。）。
【００７９】
正常妊娠：  正常血圧（血圧（ＢＰ）＜１４０／９０）；心血管疾患の病歴を有さない；いずれかの器官機能不全の物理的または既知検査証拠を有さない；処方投薬を伴わない（鉄、葉酸および／または出生前ビタミン以外）。
【００８０】
慢性高血圧：  妊娠前または妊娠１２週より前に認められる、高血圧（ＢＰ＞１４０／９０ｍｍＨｇ）、または抗高血圧薬の必要性が実証されている；妊娠中に初めて高血圧と診断され、分娩後にもそれが消散しない。
【００８１】
子癇前症：  新たなタンパク尿（２４時間尿＞３００ｍｇ／２４時間または尿ディップスティック２＋）を伴う妊娠血圧上昇（受胎前に正常血圧であったことが判明している被験者においてＢＰ＞１４０／９０ｍｍＨｇ）；被験者は妊娠前または妊娠後２６週以内に正常血圧であると実証される；高血圧（タンパク尿を伴う又は伴わない）に頭痛、霧視および腹痛の徴候および症状、ならびに異常な検査結果、特に低い血小板数および異常な肝臓酵素または新たな高尿酸血症が伴う場合には子癇前症が疑われる。
【００８２】
妊娠高血圧：  分娩時に子癇前症が存在せず、分娩後１２週以内に血圧が正常に戻る（回顧的診断）、妊娠の一過性高血圧。
【００８３】
同様に、抗血管新生療法を受けている被験者の高血圧状態を決定する手段を得るための解析のための適当な参照集団の一例は、抗血管新生薬物療法計画を現在受けており種々の高血圧状態に関して該計画の全体にわたって及び可能な場合には該計画の終了後も監視されている複数の患者であって、関心のある因子の適当な測定が可能な複数の患者であろう。本発明の１つの実施形態においては、抗血管新生療法を受けている被験者の高血圧状態を決定する手段を得るための解析のための参照集団に含まれる被験者には、１以上の既知子癇前症リスク因子を有する、治療計画（例えば、化学療法計画）の一部として抗血管新生薬の投与を受けている被験者、および既知子癇前症リスク因子を有さない、治療計画（例えば、化学療法計画）の一部として抗血管新生薬の投与を受けている被験者が含まれる。子癇前症リスク因子の具体例には、限定的なものではないが、人種、高齢（例えば、＞６５歳）、肥満、糖尿病、慢性高血圧、過去の子癇前症（女性の場合）、子癇前症の家族歴、第Ｖ因子ライデン（Ｌｅｉｄｅｎ）欠損症および腎疾患が含まれる。
【００８４】
参照集団は、ある望ましい特徴、あるいは一定の基準、例えば、被験者の高血圧状態に関連した症状の重症度、病歴および／または家族歴、過去の妊娠、妊娠の段階、これまでの化学療法、抗血管新生療法の周期などに基づいて選択されることも可能である。
【００８５】
同様に、本発明は、生物マーカーおよび身体的パラメーター以外の特徴が該多変量解析方法に含まれうることを想定している。そのような特徴には、他の既知リスク因子、患者の年齢、性別（適当な場合）、民族性、社会経済学的背景、過去の療法などが含まれ、それらを用いて、特定の用途のために結果を精密化し又は「適合」させることが可能である。例えば、多変量解析方法には、表１に大まかに示されている妊娠中の子癇前症に関する既知リスク因子の１以上が含まれうる。
【００８６】
【表１】
2009543066.tif 000005
【００８７】
本発明の１つの実施形態においては、該多変量解析に含まれる因子の組合せの少なくとも２つはｓＦｌｔ−１のレベルおよび肥満の指標（例えば、ＢＭＩ）である。もう１つの実施形態においては、該多変量解析に含まれる因子の組合せの少なくとも２つはｓＦｌｔ−１のレベルおよび血圧である。該多変量解析は、検査中の被験者の高血圧状態が更に精密化されるのを可能にする追加的因子を特定するためにも用いられうる。例えば、本発明の１つの実施形態においては、ｓＦｌｔ−１のレベルおよび肥満の指標と共にＰｌＧＦのレベルが該多変量解析に含まれる。もう１つの実施形態においては、ｓＦｌｔ−１のレベルおよび肥満因子と共に可溶性エンドグリンのレベルが該多変量解析に含まれる。追加的因子の追加は、例えば、被験者がＰＥを発症しうる相対リスクが種々の妊娠段階において決定されることを可能にしうる。
【００８８】
他の実施形態においては、心拍数変動性（ＨＲＶ）、ストレインゲージ容積変動測定（ＦＶＲ）および／または脈波分析測定が該多変量解析方法に含まれる。
【００８９】
本発明の多変量解析方法は、高血圧状態を有する複数の被験者（参照集団）のそれぞれに関して決定された複数の因子を、該高血圧状態の発生と相関させて、該相関関係の機能表示、例えばノモグラムまたは決定樹を得るためにも用いることが可能であり、ここで、複数の因子の少なくとも２つはｓＦｌｔ−１のレベルおよび身体的パラメーターである。所望により、該多変量解析方法は、追加的なデータが得られ次第、該ノモグラムまたは決定樹を定期的に更新するためにも用いられうる。したがって、本発明の１つの実施形態は、「自己学習」系の一部分としての該多変量解析方法の使用を提供する。
【００９０】
もう１つの実施形態においては、本発明は、抗血管新生薬の投与中の被験者の高血圧状態を診断するために（例えば、ＣＨＴＮを子癇前症から鑑別するために）、ノモグラムまたは決定樹を得るための、多変量解析方法の使用を提供する。
【００９１】
当技術分野で公知の標準的な多変量解析技術が用いられうる（例えば、Ａｒｍｉｔａｇｅら，（（２００２）．Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ  ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｉｎ：Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ．Ｍａｉｄｅｎ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ｐｐ４５５−４８４；Ｂｒｅｉｍａｎ，Ｌ．，Ｆｒｉｅｄｍａｎ，Ｊ．Ｈ．，Ｏｌｓｈｅｎ，Ｒ．Ａ．およびＳｔｏｎｅ．，Ｃ．Ｊ．（１９８３）．“Ｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｇｒｅｓｓｉｏｎ  Ｔｒｅｅｓ．”  Ｗａｄｓｗｏｒｔｈを参照されたい）。
【００９２】
本発明の１つの実施形態においては、多変量解析方法は、主成分分析（ＰＣＡ）による因子の解析（分析）を含む。主成分分析（ＰＣＡ）は、データセットを単純化するための多変量統計手法である。それは、データを新たな座標系に変換する一次変換であり、それにより、データのいずれかの射影演算による最大分散が第１座標（または第１主成分）上に、２番目に大きい分散が第２座標（第２主成分）上に（以下同様）位置するようになる。ＰＣＡは、より低い次元の主成分を維持し、より高い次元の主成分を無視することにより、データセットの分散に最も寄与する該データセットの特徴を保有させたままでデータセットの次元を減少させるために用いられうる。用途に応じて一概には言えないが、そのような低次元成分は、しばしば、データの、より重要な態様を含有する。
【００９３】
本発明のもう１つの実施形態においては、該多変量解析方法は更に、判別関数分析（ＤＦＡ）および／またはニューラルネットワーク分析を含む。
【００９４】
装置
本発明は更に、被験者の高血圧状態を診断するための装置を提供する。該装置は、高血圧状態を有する複数の被験者のそれぞれに関して決定された複数の因子と、該被験者のそれぞれにおける高血圧状態の発生との相関関係を含む。適当な因子は前記に示されている。該相関関係は、例えばノモグラムの形態でありうる。該装置は更に、関心のある被験者に関して決定された因子の同一セットを該相関関係にマッチング（合致）させて、該被験者の高血圧状態を診断するための（すなわち、それが可能となるよう設計される。）手段を含む。
【００９５】
１つの実施形態においては、複数の因子は２以上の因子を含む。もう１つの実施形態においては、複数の因子は３以上の因子を含む。さらにもう１つの実施形態においては、複数の因子の少なくとも２つはｓＦｌｔ−１のレベルおよび肥満の指標（例えば、ＢＭＩ）である。
【００９６】
該装置は種々の形態の１つをとりうる。例えば、該相関関係およびマッチング手段は、例えばＰａｌｍ（Ｔｒｅｏ  ６００を含む。）、Ｐｏｃｋｅｔ  ＰＣまたはＦｌａｓｈ  ６．０フォーマットにおけるコンピュータープログラムとして提供されることが可能であり、そのような場合、該装置はコンピューターソフトウェア製品、手持型装置、例えばＰａｌｍ  ＰｉｌｏｔまたはＢｌａｃｋｂｅｒｒｙであることが可能であり、あるいはそれはワールド・ワイド・ウェブ（ＷＷＷ）ページであることが可能であり、あるいはそれはコンピューター装置であることが可能である。あるいは、該装置は、容易に運搬可能であり使用が簡単な、カードまたはホイール上に提供される、ノモグラムのような、該相関関係の単なる機能表示でありうる。例えば、該装置は積層カードまたはホイールの形態でありうる。したがって、該相関関係は図式的表示であることが可能であり、いくつかの実施形態においては、それは、データベースまたはメモリー、例えばランダムアクセスメモリー、読取り専用メモリー、ディスク、仮想メモリーまたはプロセッサー内に記憶される。当技術分野公知の他の適当な表示、写真、描写図または謄本も使用されうる。
【００９７】
該装置は更に、相関関係またはノモグラムを記憶するための記憶手段、被験者に関して決定された因子の同一セットの、該装置内への入力を可能にする入力手段、および該被験者の高血圧状態を表示するための表示手段を含みうる。該記憶手段は、例えば、ランダムアクセスメモリー、読取り専用メモリー、ディスク、仮想メモリー、データベースまたはプロセッサーでありうる。該入力手段は、例えば、キーパッド、キーボード、記憶データ、タッチスクリーン、音声起動システム、ダウンロード可能なプログラム、ダウンロード可能なデータ、デジタルインターフェース、手持型装置または赤外シグナル装置でありうる。該表示手段は、例えば、コンピューターモニター、陰極線管（ＣＲＴ）、デジタルスクリーン、発光ダイオード（ＬＥＤ）、液晶表示装置（ＬＣＤ）、Ｘ線、圧縮デジタル化イメージ、ビデオイメージまたは手持型装置でありうる。該装置は更に、因子の相関関係を記憶し使用者に利用可能なデータベースを含むことが可能である。
【００９８】
本発明の１つの実施形態は、例えばノモグラムの形態の相関関係の図式的表示が配置された固体支持体を含む単純な手動形態の装置を提供する。該図式的表示は、例えば、複数の因子のそれぞれに関する目盛および診断用目盛を含むノモグラム表示手段を含みうる。例えば、ノモグラム表示手段は、ｓＦｌｔ−１レベル目盛、肥満因子目盛および診断用目盛を含みうる。該因子目盛は、被験者の高血圧状態を診断するためにこれらの目盛上の値が診断用目盛に相関されうるよう、固体表面上に配置される。例えば、直定規を因子目盛上の判明値に合わせることにより診断用目盛から診断が読み取られうるよう、該目盛は、固体表面上に配置された線の形態をとりうる。あるいは、各因子に関する判明値が適当な因子目盛上で「ダイアル」され診断目盛から診断が読み取られうるよう、該装置は、複数の重ね合わされた円形固体表面の形態をとりうる。本発明で意図されるもう１つの代替態様は、例えば図３に示す実施形態のような、決定樹の形態の図式的表示である。他の適当な表示、写真および描写図は当技術分野で公知である。
【００９９】
本発明のもう１つの実施形態においては、該装置は、機械により読取り可能なシグナルを記憶するための、固体または流体伝送媒体、磁気または光学ワイヤ、テープまたはディスク、記憶スティックなどのようなコンピュータープログラム製品である。
【０１００】
本発明のもう１つの実施形態においては、該装置は、例えば、演算処理装置、メモリーおよび記憶装置を含むコンピューターまたは手持型装置の形態の計算手段である。該計算装置は、揮発性メモリーおよび不揮発性（持久）メモリー、取外し可能な記憶装置および／または取外し不可能な記憶装置のような種々のコンピューター読取り可能媒体を含む計算環境を含むか又はそれに対するアクセスを有する。コンピューター記憶装置には、例えば、ＲＡＭ、ＲＯＭ、ＥＰＲＯＭ  ＆  ＥＥＰＲＯＭ、フラッシュメモリーまたは他の記憶技術、ＣＤ  ＲＯＭ、デジタル汎用ディスク（ＤＶＤ）または他の光学ディスク記憶装置、磁気カセット、磁気テープ、磁気ディスク記憶装置または他の磁気記憶装置、あるいはコンピューターで読取り可能な命令を記憶しうることが当技術分野で公知の他の媒体が含まれる。該計算装置はまた、入力装置、出力装置および／または通信接続を含む計算環境を含みうるか又はそれに対するアクセスを有しうる。該入力装置は、１個または数個の装置、例えばキーボード、マウス、タッチスクリーンまたはスタイラスでありうる。該出力装置も、１個または数個の装置、例えばビデオディスプレイ、プリンター、音声出力装置、接触刺激（ｔｏｕｃｈ  ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ）出力装置またはスクリーン読取り出力装置でありうる。所望により、該計算装置は、１以上の遠隔コンピューターに接続するための通信接続を使用するネットワーク環境において作動するよう設計されうる。該通信接続は、例えば、ローカル・エリア・ネットワーク（ＬＡＮ）、ワイド・エリア・ネットワーク（ＷＡＮ）または他のネットワークであることが可能であり、有線ネットワーク、無線ラジオ周波数ネットワークおよび／または赤外ネットワーク上で作動しうる。
【０１０１】
場合によっては、該装置は、生物マーカーのレベルの測定を行うための手段への遠隔アクセスの一部分であるか又はそれを有しうる。
【０１０２】
方法および装置の用途
本発明の方法および装置は、例えば、医師により、患者の高血圧状態を彼または彼女の責任において診断するために、あるいは患者により、自己診断のために使用されうる。
【０１０３】
例えば、妊婦に関して、女性の高血圧の正確な診断、特に、子癇前症、ＣＨＴＮおよびＣＨＴＮ付加子癇前症の間の鑑別診断は、抗血圧薬の投与に関する決定（時機、薬物のタイプなど）、適当な床上安静、早期産、分娩前後のマグネシウムの投与および他の治療選択肢に関する決定を導くのを助けうる。例えば、該方法および装置は、抗高血圧療法を開始すべきかどうかを医師が決定するのを可能にしうる。一般に使用される抗高血圧薬を表２に示す。非経口ヒドラジン、ラベタロール（ｌａｂｅｔａｌｏｌ）および短時間作用性経口ニフェジピン（ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ）は、重度の子癇症の緊急治療のための最も一般に使用される薬物であり、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｐｅｄｉａｔｒｉｃｓは、これらの薬剤が母乳栄養法に適合しうるとみなしている［Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｄｒｕｇｓ，１９９４  ＃１９８３７］。
【０１０４】
【表２】
2009543066.tif 000006
【０１０５】
同様に、抗血管新生薬物療法を受けている又はそれが検討されている患者の高血圧状態の正確な診断は、抗血管新生薬物療法を開始すべきかどうか、進行中の抗血管新生投薬計画を改変または中止すべきかどうか、抗高血圧薬のような追加的な薬物を該計画に加えるべきかどうかなどに関する決定を促進しうる。
【０１０６】
適当な治療経過の選択において医師および／または患者を補助することに加えて、本発明の方法および装置は、妊娠に関連した子癇前症および抗血管新生薬物療法に関連した子癇前症を含む種々の高血圧状態を治療または処置するための療法を評価する臨床治験の設計においても有用であり、例えば、治験に加えるのに適した患者を特定するのに、およびランダム化の有効性を実証するのに、およびサンプルサイズ要件を減少させるのに、および研究間の比較を促進するのに有用である。同様に、該方法および装置は、抗血管新生剤の開発に関連した治験中の患者を評価またはモニター（監視）するために用いられうる。
【０１０７】
分娩前後の抗高血圧療法に関する治療指針は、一般に、高血圧につながる障害の具体的な診断を伴う高血圧の妊婦を種々のレベルの血圧対照にランダム化する臨床治験ではなく、メタアナリシスの結果および専門家の合意を反映する。したがって、種々のＨＤＰの鑑別を可能にする本発明の方法は、そのような臨床治験に参加する患者を選択し、分類し、および／またはランダム化するのに有用であろう。
【０１０８】
つぎに、具体的な実施例により本発明を説明することとする。以下の実施例は、本発明の実施形態を記載することを意図したものであり、本発明を何ら限定するものではないと理解される。
【０１０９】
実施例
【実施例１】
【０１１０】
子癇前症、ＣＨＴＮおよびＣＨＴＮ付加子癇前症を鑑別するための決定樹の作成
研究設計：  これは、妊娠２０から４０週の１８から５０歳の正常血圧および高血圧妊婦よりなる前向き多施設（Ｗａｓｈｉｎｇｔｏｎ  Ｈｏｓｐｉｔａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ（ＷＨＣ）  ＆  Ｇｅｏｒｇｅｔｏｗｎ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（ＧＵＨ））非ランダム化非盲検オープンラベル（ｏｐｅｎ−ｌａｂｅｌ）診断（無介入）パイロット研究であった。被験者は、彼女らの診療所において、またはＷＨＣおよびＧＵＨに位置する分娩室において、彼女らの医師により招集された。加入基準は、ＮＨＬＢＩ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐ  ｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  ｏｎ  Ｈｙｐｅｒｔｅｎｓｉｏｎ  Ｄｕｒｉｎｇ  Ｐｒｅｇｎａｎｃｙ診断ガイドライン（前記のとおり）に基づいている。
【０１１１】
生物シグナル：  毎週行った、および分娩後の１回の診察（ｓｅｓｓｉｏｎ）（子癇前症が臨床診断であることを確証するために、分娩後の診察は分娩後２６週以内に行われるよう予定に組み込んだ）の際に行った非侵襲的脈波分析（ＰＷＡ、ＡｔＣｏｒ）、心拍数変動（ＨＲＶ、ＡｔＣｏｒ）およびストレインゲージ容積変動測定（ＳＧＰ、Ｈｏｋａｎｓｏｎ）。
【０１１２】
被験者：  完全な生物シグナルおよび生物マーカー分析を伴う４０人の女性を研究対象とした。彼女らを正常、ＣＨＴＮ、ＰＥまたはＰＥ＋ＣＨＴＮに分類して、前記のとおり、これらの臨床診断が生物シグナルおよび血清生物マーカー診断から鑑別されるようにした。それらの４０人の女性から合計８５個の血清サンプルを（すべて、異なる妊娠週において）採取した。被験者の特徴を以下の表３に要約する［注）この表は、血清または尿サンプルを伴わない女性を含む、４６人の女性を含むものであり、彼女らを更に糖尿病（ＤＭ）群（ＧＤＭ＝妊娠糖尿病）に分類している。該データの、異なるサブセットを使用したため、観察例数は様々となりうる。これは、多変量データ解析では、該解析のその具体的な状況に関して用いた変数のいずれかにおける観察を欠く患者（またはサンプル）を該解析のその部分から除外する必要があったことによるものである］。
【０１１３】
採血予定および技術：  最初の検査時、ついで、分娩前および分娩後に検査される女性に関しては毎週、５ｍｌの血液サンプルを採取した。各採血物は５ｍｌの全血（＜３時間氷上で保存されたＲｅｄ−Ｔｏｐ  Ｔｕｂｅ）よりなるものであり、それを遠心沈降させて２ｍｌの血清を得、ついで凍結させ（−８０℃＜２年間）、ついで使用前に解凍した。尿サンプルも同じ間隔で採取した。
【０１１４】
【表３】
2009543066.tif 000007
【０１１５】
方法
生物シグナル分析：血圧（収縮期および拡張期）を標準的な方法により測定した。体型指数は以下の式により計算した。
【０１１６】
【数３】
2009543066.tif 000008
【０１１７】
連続的アプラネーショントノメトリーを用いて橈骨動脈部位と頸動脈部位との間の脈波速度（ＰＷＶ）を計算し、頸動脈波形（Ｃｏｒｔｅｚ−Ｃｏｏｐｅｒら，（２００３）Ａｍ  Ｊ  Ｃａｒｄｉｏｌ  ９１（１２）：１５１９−２２，Ａ９）および脈圧を用いて促進指数（ａｕｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ）（ＡＩｘ）を求めた。ＰＷＶは、頸および橈骨部位間の距離を脈波伝達時間（ＤＰＷＴＴ）の変化で割り算することにより計算される（Ｃｈｉｕら（１９９１）Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｈｅａｒｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ  １２１（５）：１４６０−９を参照されたい）。促進指数（ＡＩｘ）は脈圧に対する促進頸動脈収縮期圧（中央圧波形における後期収縮期ピークによるもの）の比であり、大動脈機能に関連した因子の組合せの尺度を表す。ミラー（Ｍｉｌｌａｒ）動脈感知トノメーターは末梢脈圧波形を測定し、該波形から、「一般化可能伝達関数（ｇｅｎｅｒａｌ  ｉｚａｂｌｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ）」アルゴリズム（Ｔｓａｉら，（２００１）Ｈｅａｒｔ  Ｌｕｎｇ  ３０（６）：４３７−４４）を用いて、中枢（ｃｅｎｔｒａｌ）血行力学的パラメーターが計算される。
【０１１８】
以下のとおりに被験者に体位を変えてもらうことにより、血圧（血圧計）、ＰＷＶおよびＡＩｘに対する圧反射の効果を達成する。血行力学的平衡が得られるよう、大動脈大静脈圧迫を避けるために最初は被験者に左側臥位の楽な体位を１０分間とってもらう。この時間中、被験者に特異的な情報をコンピューターのデータベースに入力し、胸骨切痕から橈骨動脈および頸動脈の脈部位までの距離（ｍｍ）の表面測定を行う。動脈波形を検出するために、それぞれの触知可能な脈上に該トノメーターを配置する。３つの末梢四肢誘導（±２胸誘導）からゲート化（ｇａｔｅｄ）ＥＣＧ測定を行いながら、トノメトリー測定の反復により脈波速度を決定する。被験者が両脚をベッドの横に下ろして上体を直立させるよう、被験者を補助する。平衡を再確立するまで５分間待った後、すべての測定を反復する。
【０１１９】
ストレインゲージ容積変動測定（ＳＧＰ）：  Ｈｏｋａｎｓｏｎ  Ｐｌｅｔｈｙｓｍｏｇｒａｐｈ  ＥＣ５Ｒと共にＨｏｋａｎｓｏｎ  Ｓｉｌａｓｔｉｃストレインゲージを使用する前腕静脈血流プロトコールにより、微小血管機能を評価した（Ｇａｍｂｌｅら，（１９９３）Ｊ  Ｐｈｙｓｉｏｌ  ４６４：４０７−４２２を参照されたい）。ＳＧＰは、四肢の周囲長を測定することにより血液容量における変化を間接的に測定するストレインゲージを使用する。なぜなら、カフ（ｃｕｆｆ）は急速に膨張および収縮するからである。抵抗の増加はゲージにわたる電圧を減少させる。これを、コンピューターディスプレイまたはストリップチャート記録装置（容量脈記録とも称される。）により、容量変化を反映するよう較正する。妊娠子宮による外的または大静脈圧迫はＳＰＧの感度に影響を及ぼす可能性がある。したがって、被験者を左側臥位にして、ＳＧＧ尺度を得る（Ｒｕｍｗｅｌｌら，（２０００）．Ｐａｒｔ  ＩＩＩ：Ｖｅｎｏｕｓ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ．Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：Ａｎ  Ｉｌｌｌｕｓｔｒａｔｅｄ  Ｒｅｖｉｅｗ．Ｐａｓａｄｅｎａ，ＣＡ，Ｄａｖｉｅｓ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ：１６９−２１４）。ストレインゲージ（Ｈｏｋａｎｓｏｎ  Ｉｎｃ．）を前腕に装着し、Ｈｏｋａｎｓｏｎ  Ｐｌｅｔｈｙｓｍｏｇｒａｐｈに接続し、右心房の高さより上に維持した。血流の測定中の四肢循環を排除するために、カフを収縮期血圧より５０ｍｍＨｇ高い圧力まで膨張させる。周期性カフ・インフレーター（ｐｅｒｉｏｄ  ｃｕｆｆ  ｉｎｆｌａｔｏｒ）（手動またはＨｏｋａｎｓｏｎ  ＥＣ−２０カフ・インフレーターによるもの）で四肢からの静脈流出を遮断するために、四肢の鬱血カフをそれぞれ１５秒間の周期で４０ｍｍＨｇまで７秒間膨張させた。血流出力シグナルをシグナルプロセッサーを介してプリンターまたはコンピューターに送り、ｍｌ／分／１００ｍｌ四肢容積として表す（Ｆｅｈｌｉｎｇら，（１９９９）Ｉｎｔ  Ｊ  Ｓｐｏｒｔｓ  Ｍｅｄ  ２０（８）：５５５−．を参照されたい）。
【０１２０】
生物マーカー分析：  遊離ｓＦｌｔ−１アッセイを評価するために、血清サンプルを反応容器内に導入し、ついで、結合ＰｌＧＦの存在下および非存在下でサンプル中のｓＦｌｔ−１の捕捉を可能にするｓＦｌｔ−１に対するモノクローナル抗体が結合している常磁性粒子を加えた。１８分後、該サンプルを取り出し、該粒子を、外部磁石の適用により該反応容器の側面に保持しながら洗浄した。ついで、アクリジニウムに結合したＰｌＧＦを加え、５分間インキュベートした。該アクリジン化（ａｃｒｉｄｉｎｙｌａｔｅｄ）ＰｌＧＦは、未占拠結合部位を有するｓＦｌｔ−１分子のみに結合する。ついで過剰の結合体を、該反応容器の外部から磁石により保持しながら洗い落とした。酸および過酸化水素の溶液を加え、ついで塩基を加えて光子の遊離を誘発した後、化学発光を測定した。光電子増倍管を使用して、遊離光子を測定した。種々の濃度の組換えｓＦｌｔ−１を使用して、該アッセイを較正した。結果はｐＭｏｌ／Ｌの単位で示されている。
【０１２１】
同様に、ＰｌＧＦをアッセイするために、ＰｌＧＦを含有するサンプルを、反応容器内に導入し、ついで、遊離ＰｌＧＦに特異的であり、したがってｓＦｌｔ−１と複合体を形成していない該サンプル中のＰｌＧＦのみを捕捉する、ＰｌＧＦに対するモノクローナル抗体でコーティングされた常磁性粒子を加えた。１８分後、該サンプルを取り出し、該粒子を、外部磁石の適用により該反応容器の側面に保持しながら洗浄した。ついで、アクリジニウムに結合したポリクローナルヤギ抗ＰｌＧＦ抗体を加え、５分間インキュベートした。ついで、該反応容器の外部から磁石で該粒子を保持しながら、過剰のコンジュゲート（結合体）を洗い落とした。前記のとおりに化学発光を測定した。種々の濃度の組換えｓＦｌｔ−１を使用して、該アッセイを較正する。
【０１２２】
統計分析：  Ａｒｍｉｔａｇｅら，（２００２）．Ｍｕｌｔｉｖａｒｉａｔｅ  ｍｅｔｈｏｄｓ．Ｉｎ：Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ．Ｍａｉｄｅｎ，Ｍａｓｓａｃｈｕｓｅｔｔｓ，ｐｐ  ４５５−４８４に全般的に記載されているとおりに、記述的および図式的方法を用いた。変数群を要約するために、記述的プロットおよび主成分分析を用いた。
【０１２３】
結果
初期臨床対生物マーカー診断
臨床および生物マーカー分析による該患者の診断を、以下の診断基準に基づいて比較した。
【０１２４】
臨床診断：  子癇前症（ＰＥ）＝高血圧およびタンパク尿が分娩後１２から２６週以内に消散する場合。ＣＨＴＮ＝妊娠２０週以前の既存の高血圧。（持続的な高血圧±タンパク尿は未診断の既存ＣＨＴＮまたは腎疾患を示唆しており、さらなる診断を要する。）。ＰＥ＋ＣＨＴＮ＝血圧上昇およびタンパク尿が分娩後２６週以内に慢性高血圧のレベルに回復・消散する。
【０１２５】
血清生物マーカー診断：  ＰＥ＝正規化血清遊離ｓＦｌｔ−１（ＦＲ）／ＰＬＧＦの比＞１（すなわち、ＦＲ＞２、ＰｌＧＦ＜２）。ＣＨＴＮ＝妊娠２０週以前の既存の高血圧、およびＦＲ／ＰｌＧＦ比＜１。ＰＥ＋ＣＨＴＮ＝妊娠２０週以前の既存の高血圧、およびＦＲ／ＰｌＧＦ＞１。
【０１２６】
結果を表４に示す。この結果は、臨床基準を用いるのか生物マーカー基準を用いるのかによって診断が異なってくることを示している。
【０１２７】
【表４】
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【０１２８】
身体的パラメーター（生物シグナル）の分析
種々の生物シグナルの主成分分析：  血圧（収縮期および拡張期）、脈圧、促進指数、体型指数および脈波分析は子癇前症（ＰＥ）をその他の妊娠高血圧障害（ＨＤＰ）から鑑別することができなかった。これは、脈圧、血圧および脈波分析に関する体位変化（仰向けおよび坐位）の測定を含むものであった。
【０１２９】
生物マーカーの分析
ｓＦｌｔ−１レベルおよびＰｌＧＦレベルの主成分分析は、ＰＥが非ＰＥから鑑別されうることを示した［図４を参照されたい。これは、ＰｌＧＦに対する遊離ｓＦｌｔ−１（ＦＲ）＋ＰｌＧＦ（ＦＲ ＴＯ ＰｌＧＦ）の第１主成分（ＰＣ）の散布図を示す。ＭＣ＝誤分類率／サンプルサイズ］。両方の因子の関係を１の限界まで設定した場合、ＰＥを非ＰＥから正確に鑑別する点に関して僅か２の誤分類（約２．３％）が存在することになろう。しかし、ＰＥ＋ＣＨＴＮはＰＥから鑑別できないであろう。
【０１３０】
遊離受容体濃度およびＰｌＧＦの主成分分析の結果を表５および６に示す。表５および６において、ＭＯＮＯ ＰＯＬＹおよび遊離 受容体は遊離受容体ｓＦｌｔ−１の測定の代替法を表し、表５において、ＰｌＧＦ１およびＰｌＧＦ２はＰｌＧＦの測定の代替法を表す。
【０１３１】
【表５】
2009543066.tif 000010
【０１３２】
表５および図５Ａから理解されうるとおり、第１主成分は該分散の＞８０％を説明している。第２主成分はそれほど有意ではない。
【０１３３】
【表６】
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【０１３４】
表６および図５Ｂから理解されうるとおり、第１主成分は該分散の＞８０％を説明している。第２主成分はそれほど有意ではない。
【０１３５】
身体的パラメーターおよび生物マーカーの分析
遊離ｓＦｌｔ−１およびＢＭＩの主成分分析は、正常血圧およびＣＨＴＮがＰＥおよびＰＥ＋ＣＨＴＮから鑑別されるのを可能にした［図６を参照されたい。これは、ＢＭＩに対する遊離ｓＦｌｔ−１の第１ＰＣ（ＰＣＡ Ｆ１血清）の散布図を示す。ＭＣ＝誤分類率／サンプルサイズ］。この結果は、簡便に使用され臨床的に有用である、ＰＥ、ＰＥ＋ＣＨＴＮおよび非ＰＥの間で鑑別するための決定樹またはノモグラムが可能であることを明らかに示している。
【０１３６】
決定樹の構築
ついで、決定樹を作成するために、判別関数分析（ＤＦＡ）およびニューラルネットワーク分析を用いた。Ｔｅｒｎｅａｕ  ＴＭ，Ａｔｋｉｎｓｏｎ  ＥＪ（１９９７）“Ａｎ  ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  ｒｅｃｕｒｓｉｖｅ  ｐａｒｔｉｔｉｏｎｉｎｇ  ｕｓｉｎｇ  ｔｈｅ  ＲＰＡＲＴ  ｒｏｕｔｉｎｅ．”（Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ  ６１，Ｍａｙｏ  Ｃｌｉｎｉｃ，Ｓｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｔａｔｉｓｔｉｃｓ）に記載されている方法およびソフトウェアを用いた。該ソフトウェアは“Ｉｎｓｉｇｈｔｆｕｌ  Ｍｉｎｅｒ（商標）（Ｉｎｓｉｇｈｔｆｕｌ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｓｅａｔｔｌｅ，ＷＡから入手可能）の一部である。
【０１３７】
特に、影響の因子の重要性により観察の全実体を階層的に亜群に分割するために、独立した方法として、該決定樹アプローチを選択した。影響の全因子の研究および最も影響のあるものの選択により２つの亜群に分離するために、（カットオフ点および）変数に関する最高水準のものを優先的に探索することにより、影響変数を決定した。亜群のサイズがそれ以上の分割を許容しなくなるまで、この方法を全亜群に対して継続した。
【０１３８】
交差検証工程は、信頼しうる分割のみが維持されたことを保証する。分割前および分割後の最小数の観察を、それぞれ、ｎ＝１０およびｎ＝５に設定した。分割樹群はエントロピー尺度であった。０．００１未満の複雑性限界を伴う終結規則（ｓｔｏｐ  ｒｕｌｅ）を選択した。異なるレベル（亜群）で同じ因子倍数回数（ｆａｃｔｏｒ  ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｔｉｍｅｓ）の小分割の反復を可能にする、影響の全潜在的因子が各レベルに含まれた。
【０１３９】
図７に示すとおり、３つの因子（ＢＭＩ、仰臥位収縮期血圧および遊離ｓＦｌｔ−１血清レベル）は、この決定樹を作成するのに十分であり、ＰＥ、ＣＨＴＮ、正常血圧およびＰＥ＋ＣＨＴＮの鑑別を可能にする。図６からも理解されうるとおり、２つの因子（ＢＭＩおよび遊離ｓＦｌｔ−１）は、非ＰＥからＰＥを、およびＰＥ＋ＣＨＴＮからＰＥ単独を鑑別するのに十分であった。
【０１４０】
このデータセットのための遊離ｓＦｌｔ−１血清カットオフレベルは１．９ｐＭｏｌ／Ｌである。しかし、この分析で用いたサンプルサイズは相当に小さいこと、および絶対カットオフは、サンプルサイズが増加するにつれて若干変化しうることを、当業者は理解するであろう。同様に、生物マーカーレベルを測定するために他のアッセイを用いる場合には、異なるカットオフが適用される。適当なカットオフは、前記方法および他の標準的な数学的手法に従い、当業者により容易に決定されうる。
【０１４１】
本明細書に記載されている全ての特許、刊行物（公開特許出願を含む。）およびデータベースエントリーを、それらのそのような個々の特許、刊行物およびデータベースエントリーが参照により本明細書に組み入れられると示されているのと同じ程度に、参照により本明細書に組み入れることとする。
【０１４２】
本発明は或る特定の実施形態に関して記載されているが、添付の特許請求の範囲に示されている本発明の精神および範囲から逸脱することなく、その種々の修飾が当業者に明らかであろう。
【図面の簡単な説明】
【０１４３】
【図１】図１は、本発明の子癇前症の診断方法の１つの実施形態を表す論理図を示す。
【図２】図２は、本発明のもう１つの実施形態における子癇前症の診断方法における追加工程を表す論理図を示す。
【図３】図３は、３つの因子［すなわち、体型指数（ボディ・マス・インデックス）、血圧および遊離ｓＦｌｔ−１血清レベル］が子癇前症患者、慢性高血圧（ＣＨＴＮ）患者、正常血圧（正常）患者および慢性高血圧付加子癇前症（ＰＥ＋ＣＨＴＮ）患者の鑑別を可能にする、本発明の１つの実施形態における決定樹を示す。
【図４】図４は、妊婦のサンプルに関する、ＰｌＧＦに対する遊離ｓＦｌｔ−１（ＦＲ）＋ＰｌＧＦの第１主成分（ＦＲ ＴＯ ＰｌＧＦ）の散布図を示す。
【図５】図５ＡからＢは、実施例１に記載の血清パラメーターの主成分分析の後の分散の比率（％）を示す。
【図６】図６は、妊婦のサンプルに関する、体型指数（ＢＭＩ）に対する遊離ｓＦｌｔ−１の第１主成分（ＰＣＡ Ｆ１血清）の散布図を示す。ＭＣ＝誤分類率／サンプルサイズ。
【図７】図７は、子癇前症患者、慢性高血圧（ＣＨＴＮ）患者、正常血圧（正常）患者および慢性高血圧付加子癇前症（ＰＥ＋ＣＨＴＮ）患者の鑑別を可能にする、主成分分析を用いて得られた決定樹を示す。
【図８】図８はｓＦｌｔ−１のアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｕ０１１３４）［配列番号１］を示す。
【図９】図９はＰｌＧＦのアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｐ４９７６３）［配列番号２］を示す。
【図１０】図１０はエンドグリンのアミノ酸配列（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号ＮＰ ０００１０９）［配列番号３］を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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