(57)【要約】抗悪性腫瘍薬及び／又は抗ウィルス剤であるＡｋｔ阻害剤としての４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールもしくはその薬理学的に許容できる塩、又はその化合物の水和物もしくはその塩、並びに当該化合物を含んでなる組成物及び当該化合物を用いる方法。【特許請求の範囲】
【請求項１】
４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールである化合物もしくはその薬理学的に許容できる塩、又は当該化合物の水和物もしくはその塩。
【請求項２】
４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
医薬品として用いるための、請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
多発性骨髄腫、非小細胞肺癌、グリア芽細胞腫、ニューロブラストーマ、メラノーマ、もしくは前立腺、乳房、子宮、一次性胃、腸管型、子宮内膜、甲状腺、膵、肺又は膀胱の新生物を治療する医薬品の製造のための、請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項６】
多発性骨髄腫、非小細胞肺癌、グリア芽細胞腫、もしくは前立腺、乳房、又は子宮の新生物を治療する医薬品の製造のための、請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項７】
非小細胞肺癌、又はグリア芽細胞腫を治療する医薬品の製造のための、請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項８】
Ｃ型肝炎、風疹、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎、又はヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）を治療する医薬品の製造のための、請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項９】
請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物の有効量を投与することを含んでなる、これを必用とする患者において多発性骨髄腫、非小細胞肺癌、グリア芽細胞腫、ニューロブラストーマ、メラノーマ、もしくは前立腺、乳房、子宮、一次性胃、腸管型、子宮内膜、甲状腺、膵臓、肺、又は膀胱の新生物を治療する方法。
【請求項１０】
請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物の有効量を投与することを含んでなる、これを必用とする患者において多発性骨髄腫、非小細胞肺癌、グリア芽細胞腫、もしくは前立腺、乳房、又は子宮の新生物を治療する方法。
【請求項１１】
請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物の有効量を投与することを含んでなる、これを必用とする患者において非小細胞肺癌又はグリア芽細胞腫を治療する方法。
【請求項１２】
請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物の有効量を投与することを含んでなる、これを必用とする患者においてＣ型肝炎、風疹、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎、又はヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）を治療する方法。
【請求項１３】
請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物、及び薬理学的に許容できる担体、希釈剤又は賦形剤を含んでなる医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物、及び薬理学的に許容できる担体、希釈剤又は賦形剤を含んでなる凍結乾燥した医薬組成物であって、前記組成物のｐＨは水溶性希釈剤で希釈したときに４．２未満であり２．０より大きい、前記医薬組成物。
【請求項１５】
前記ｐＨは３．２未満であり２．０より大きい、請求項１４に記載の凍結乾燥した医薬組成物。
【請求項１６】
前記ｐＨは２．８未満であり２．０より大きい、請求項１５に記載の凍結乾燥した医薬組成物。
【請求項１７】
請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物、及び薬理学的に許容できる担体、希釈剤又は賦形剤を溶液中に含んでなる医薬組成物であって、前記組成物のｐＨは４．２未満であり２．０より大きい、前記医薬組成物。
【請求項１８】
前記ｐＨは３．２未満であり２．０より大きい、請求項１７に記載の医薬組成物。
【請求項１９】
前記組成物のｐＨは２．８未満であり２．０より大きい、請求項１８に記載の医薬組成物。
【請求項２０】
結晶形態において２θ＝４．９，１４．８，及び１０．２に強度ピークのあるＸ線粉末回折パターンを有する４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一酸０．５水和物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明はＡｋｔの阻害剤である化合物、当該化合物を含んでなる組成物、及び当該化合物を用いる方法を提供する。
【背景技術】
【０００２】
プロテインキナーゼは成長因子、ホルモン及び他の細胞制御分子を、正常及び病理学的状況下で、細胞の成長、生存及び代謝に連結する情報伝達経路に関与する。このようなプロテインキナーゼの１つであるプロテインキナーゼＢ（Ａｋｔとしても知られる）は、広範な細胞種の増殖及び生存の促進に中心的役割を担い、これによりアポトーシス（プログラムされた細胞死）から細胞を防御するセリン／スレオニンキナーゼである。
【０００３】
多くのプロテインキナーゼ及び脱リン酸化酵素がＡｋｔの活性を制御する。例えば、Ａｋｔの活性はホスファチジルイノシトール３−キナーゼ（ＰＩ３−Ｋ）により媒介され、これはＡｋｔのプレクストリンホモロジ（ＰＨ）結合ドメインへの第２のメッセンジャリン脂質の結合をイニシエートする。この結合はプラズマ膜へＡｋｔを定着させ、その結果この酵素のリン酸化及び活性化が生じる。ＰＩ３−Ｋの触媒サブユニットであるｐ１１０αの増幅、又はＰＩ３−Ｋ制御サブユニットであるｐ８５αにおける変異は、様々な種類のヒトのがんにおいてＡｋｔの活性化を導く。最近の研究でも、多数のウィルスのライフサイクルにおけるＰＩ３−Ｋ／ＡＫＴ経路の役割が示されてきた。
【０００４】
国際公開第０１／９１７５４号パンフレットはプロテインキナーゼ阻害剤に関する。国際公開第２００５／０１１６９７号パンフレットはプロテインキナーゼＡ及びＢ阻害剤を含む。国際公開第２００５／０５４２０２号パンフレットはＡＫＴ阻害剤に関する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
細胞生存の制御における中心的役割であることから、Ａｋｔは種々の障害、特にがん及びウィルス感染を効果的に治療するための新規な治療目標を備えている。しかしながら、このような治療には、強力、選択的、生物利用可能なＡｋｔ阻害剤が必用である。代替Ａｋｔ阻害剤への必要性が存在する。従って、本発明は、作用強度、選択性及び／又は生物利用可能性が増した新規なＡｋｔ阻害剤、当該化合物を含んでなる組成物、及び当該化合物を使用する方法を提供する。
【０００６】
加えて、希釈時又は溶液中において新規なＡｋｔ阻害剤を含有する組成物医薬組成物は、患者への提供を目的とするために必然的に無沈澱でなければならない。本発明は、そうした沈澱のない特定のｐＨ範囲で新規なＡｋｔ阻害剤を含んでなる医薬組成物を提供する。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明は４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールもしくはその薬理学的に許容できる塩又は当該化合物の水和物もしくはその塩を提供する。
【０００８】
本発明は４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸も提供する。
【０００９】
更に、本発明は４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物を提供する。
【００１０】
本発明は、医薬品として用いるために、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸又は４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物を含む、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールもしくはその薬理学的に許容できる塩、又は当該化合物の水和物もしくはその塩も提供する。
【００１１】
加えて、本発明は、多発性骨髄腫、非小細胞肺癌、グリア芽細胞腫、ニューロブラストーマ、メラノーマ、もしくは前立腺、乳房、子宮、一次性胃、腸管型、子宮内膜、甲状腺、膵、肺又は膀胱の新生物を治療する医薬品の製造のために、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸又は４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物を含む、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールもしくはその薬理学的に許容できる塩、又は当該化合物の水和物もしくはその塩の使用を提供する。
【００１２】
本発明は、多発性骨髄腫、非小細胞肺癌、グリア芽細胞腫、もしくは前立腺、乳房、又は子宮の新生物を治療する医薬品の製造のために、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸又は４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物を含む、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールもしくはその薬理学的に許容できる塩、又は当該化合物の水和物もしくはその塩の使用も提供する。
【００１３】
加えて、本発明は、非小細胞肺癌、又はグリア芽細胞腫を治療する医薬品の製造のために、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸又は４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物を含む、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールもしくはその薬理学的に許容できる塩、又は当該化合物の水和物もしくはその塩の使用を提供する。
【００１４】
更に、本発明はＣ型肝炎、風疹、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎、又はヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）を治療する医薬品の製造のために、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸又は４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物を含む、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールもしくはその薬理学的に許容できる塩、又は当該化合物の水和物もしくはその塩の使用を提供する。
【００１５】
加えて、本発明は、発性骨髄腫、非小細胞肺癌、グリア芽細胞腫、ニューロブラストーマ、メラノーマ、もしくは前立腺、乳房、子宮、一次性胃、腸管型、子宮内膜、甲状腺、膵臓、肺、又は膀胱の新生物を治療するための、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸又は４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物を含む、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールもしくはその薬理学的に許容できる塩、又は当該化合物の水和物もしくはその塩を提供する。
【００１６】
本発明は、多発性骨髄腫、非小細胞肺癌、グリア芽細胞腫、もしくは前立腺、乳房、又は子宮の新生物を治療するための、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸又は４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物を含む、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールもしくはその薬理学的に許容できる、塩又は当該化合物の水和物もしくはその塩も提供する。
【００１７】
加えて、本発明は、非小細胞肺癌又はグリア芽細胞腫を治療するための、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸又は４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物を含む、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールもしくはその薬理学的に許容できる塩、又は当該化合物の水和物もしくはその塩を提供する。
【００１８】
更に、本発明は、Ｃ型肝炎、風疹、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎、又はヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）を治療するための、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸又は４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物を含む、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールもしくはその薬理学的に許容できる塩、又は当該化合物の水和物もしくはその塩を提供する。
【００１９】
加えて、本発明は、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸又は４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物を含む、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールもしくはその薬理学的に許容できる塩、又は当該化合物の水和物もしくはその塩の有効量を投与することを含んでなる、これを必用とする患者における多発性骨髄腫、非小細胞肺癌、グリア芽細胞腫、ニューロブラストーマ、メラノーマ、もしくは前立腺、乳房、子宮、一次性胃、腸管型、子宮内膜、甲状腺、膵臓、肺、又は膀胱の新生物を治療する方法を提供する。
【００２０】
本発明は、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸又は４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物を含む、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールもしくはその薬理学的に許容できる塩、又は当該化合物の水和物もしくはその塩の有効量を投与することを含んでなる、これを必用とする患者において多発性骨髄腫、非小細胞肺癌、グリア芽細胞腫、もしくは前立腺、乳房、又は子宮の新生物を治療する方法を提供する。
【００２１】
加えて、本発明は、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸又は４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物を含む、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールもしくはその薬理学的に許容できる塩、又は当該化合物の水和物もしくはその塩の有効量を投与することを含んでなる、これを必用とする患者において非小細胞肺癌又はグリア芽細胞腫を治療する方法を提供する。
【００２２】
更に、本発明は、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸又は４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物を含む、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールもしくはその薬理学的に許容できる塩、又は当該化合物の水和物もしくはその塩の有効量を投与することを含んでなる、これを必用とする患者においてＣ型肝炎、風疹、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎、又はヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）を治療する方法を提供する。
【００２３】
本発明は、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸又は４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物を含む、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールもしくはその薬理学的に許容できる塩、又は当該化合物の水和物もしくはその塩、及び薬理学的に許容できる担体、希釈剤又は賦形剤を含んでなる医薬組成物も提供する。
【００２４】
加えて、本発明は、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸又は４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物を含む、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールもしくはその薬理学的に許容できる塩、又は当該化合物の水和物もしくはその塩、及び薬理学的に許容できる担体、希釈剤又は賦形剤を含んでなる凍結乾燥した医薬組成物を提供し、ここに前記組成物のｐＨは水溶性希釈剤で希釈したときに４．２未満であり２．０より大きく、３．２未満であり２．０より大きく、又は２．８未満であり２．０より大きい。
【００２５】
本発明は、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸又は４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物を含む、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールもしくはその薬理学的に許容できる塩、又は当該化合物の水和物もしくはその塩、及び薬理学的に許容できる担体、希釈剤又は賦形剤を含んでなる凍結乾燥した医薬組成物を提供し、ここに前記組成物のｐＨは４．２未満であり２．０より大きく、３．２未満であり２．０より大きく、又は２．８未満であり２．０より大きい。
【００２６】
更に、本発明は、結晶形態において２θ＝４．９，１４．８，及び１０．２に強度ピークのあるＸ線粉末回折パターンを有する４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物を提供する。
【００２７】
本発明は、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール又はその薬理学的に許容できる塩又はその水和物も提供する。
【発明の効果】
【００２８】
本発明の化合物はＡｋｔ阻害剤であり、Ａｋｔ活性に関連する障害の治療に有用であると考えられる。従って、本発明の化合物は抗悪性腫瘍剤及び／又は抗ウィルス剤である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２９】
本発明の化合物はＰＴＥＮに欠損が表れる悪性腫瘍、ＰＩ３−キナーゼ活性が調節解除された悪性腫瘍、又はＡｋｔ活性が上昇した悪性腫瘍の治療に有用である。Ａｋｔ阻害剤は多発性骨髄腫（Ｈｓｕら、Ｂｌｏｏｄ（２００１）、９８（９）、２８５３−２８５５）；非小細胞肺癌（Ｂａｌｓａｒａ、Ｃａｒｃｉｎｏｇｅｎｅｓｉｓ（２００４）、２５（１１）、２０５３−２０５９）；グリア芽細胞腫（Ｋｏｕｌら、Ｍｏｌ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ．（２００６）、５：６３７−６４４）；ニューロブラストーマ（Ｌｉら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００５）、６５（６）、２０７０−２０７５）；メラノーマ（Ｄａｉら、Ｊ．ｏｆ  Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（２００５）、２３（７）、１４７３−１４８２）並びに、前立腺（Ｍａｊｕｍｄｅｒら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２００５）、２４、７４６５−７４７４）；乳房  （Ｔｏｋｕｎａｇａら、Ｊ．ｏｆ  Ｃｌｉｎ．Ｏｎｃｏｌｏｇｙ（Ｍｅｅｔｉｎｇ  Ａｂｓｔｒａｃｔｓ）（２００５）、２３（１６Ｓ）、９５００）；子宮（Ｃｈｅｕｎｇら、ＰＮＡＳ（１９９２）、８９、９２６７−９２７１；Ｙｕａｎら、（２０００）；Ｈｕら、（２０００））；一次性胃又は腸管型（Ａｎｇら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｌｅｔｔ．（２００５）、２２５（１）、５３−５９）；子宮内膜（Ｊｉｎら、Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ（２００４）、９１、１８０８−１８１２）；甲状腺（Ｒｉｎｇｅｌら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２００１）、６１（１６）、６１０５−６１１１；Ｄｅ  Ｖｉｔａら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．（２０００）、６０、３９１６−３９２０）；膵臓（Ｓｃｈｌｉｅｍｅｎら、Ｂｒｉｔ．Ｊ．ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ（２００３）、８９、２１１０−２１１５）；肺（Ｍａｓｓｉｏｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．（２００４）、１７０、１０８８−１０９４）；又は膀胱（Ｒｉｅｇｅｒ−Ｃｈｒｉｓｔら、Ｏｎｃｏｇｅｎｅ（２００４）、２３（２７）、４７４５−４７５３）の新生物の治療に有用と考えられる。Ａｋｔ阻害剤は、Ｃ型肝炎及びＣ型肝炎のＮＳ５Ａ（Ｍａｎｎｏｖａら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．（２００５）、７９（１４）、８７４２−８７４９；Ｈｅら、（２００２））；風疹（Ｃｏｏｒａｙら、Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  Ｊ．（２００５）、２（１）、１−１２）；ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）のＴａｔタンパク（Ｂｏｒｇａｔｔｉら、（１９９７））；Ｂ型肝炎のプロテインＸ（Ｌｅｅら、（２００１））、又はヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）（Ｊｏｈｎｓｏｎら、（２００１））等のウィルス治療にも有用と考えられる。
【００３０】
４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールは、例えば薬理化学にしばしば用いられる薬理学的に許容できる塩と共に、薬理学的に許容できる酸付加塩を生成する。このような塩も本発明の一部である。薬理学的に許容できる塩及びこれを調製する一般的な方法論もまた当業者に周知である。例えば、Ｐ．Ｓｔａｈｌら、“医薬塩ハンドブック：特性、選択及び使用”、（ＶＣＨＡ／Ｗｉｌｅｙ−ＶＣＨ、２００２）；Ｓ．Ｍ．Ｂｅｒｇｅら、“Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓａｌｔｓ”、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｖｏｌ．６６、Ｎｏ．１、Ｊａｎｕａｒｙ  １９７７を参照されたい。
【００３１】
４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールのための好適な塩には、一塩酸塩及び二塩酸塩が含まれる。
【００３２】
本願明細書に記載の中間体は塩を生成しうる。塩に加えて、本発明の化合物及び本願明細書に記載の中間体は、水和物又は薬理学的に許容できる塩の水和物を生成しうる。
【００３３】
好適な化合物は、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールである。また別の好適な化合物は、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸である。更に好適な化合物は、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物である。
【００３４】
本願明細書に用いる用語「患者」は、Ａｋｔ活性上昇に伴う１以上の障害に苦しむ哺乳類を指す。もっとも好適な患者はヒトであると理解されよう。本発明は特に哺乳類のＡｋｔ／ＰＫＢ阻害に関すると理解されたい。
【００３５】
「治療」「治療する」「治療している」及び同等の用語は、新生物の成長、Ａｋｔ１、Ａｋｔ２及び／又はＡｋｔ３の増幅及び／又は過剰発現、細胞増殖、生存及び／又はウィルス複製を減少すること及び／又は阻害することを含む。
【００３６】
本願明細書に用いる用語「有効量」は、薬理学的効果が表れる程度にＡｋｔを阻害する量を指す。
【００３７】
本発明は、４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール、又はその薬理学的に許容できる塩、又はその水和物、及び薬理学的に許容できる担体、希釈剤、又は賦形剤を含んでなる医薬組成物も提供する。本発明のための医薬組成物は、凍結乾燥等の希釈前の形態、及び患者に直ちに投与するための希釈後の形態を含む。この医薬組成物のｐＨは約４．２未満から約２．０を超える。より好適には、このｐＨは約３．２未満から約２．０を超える。もっとも好適には、このｐＨは約２．８未満から約２．０を超える。「薬理学的に許容できる担体、希釈剤、又は賦形剤」は、例えば哺乳類、好適にはヒトである患者への輸送のために当業において一般的に許容される媒質である。このような担体、希釈剤、又は賦形剤は、一般的に当業者が決定及び考慮すべき十分な範囲内における多くの要因に従って処方される。これらには、処方される活性薬剤の種類及び性質、薬剤含有組成物を投与すべき対象、意図する組成物の投与経路、及び標的となる治療上の兆候を挙げられるが、限定しない。薬理学的に許容できる担体及び賦形剤には、水溶性及び非水溶性の液体媒質、並びに種々の固体及び半固体の服用形態が挙げられる。このような担体、希釈剤、又は賦形剤は活性薬剤に加えて多くの異なる成分及び添加物を含むことが可能であり、そうした添加成分、例えば当業者に周知である活性薬剤の安定剤等が多くの理由から処方に含まれる。薬理学的に許容できる適切な担体、希釈剤、又は賦形剤、及びそれらの選択のための要因は、直ちに利用可能な種々の情報源に記載が見られる。例えば、レミントン（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ）、“調剤の科学と実践（Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ）”、（Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏら編集、第１９版、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、１９９５年）を参照されたい。
【００３８】
本発明の化合物は、従来の非毒性で薬理学的に許容できる担体、希釈剤、又は賦形剤を含有する医薬組成物の服用ユニット処方で、静脈内（大量瞬時投与又は点滴等）等の全身に投与してもよい。
【００３９】
４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールの医薬組成物については、活性成分は、通常、組成物の全重量を基準として約０．５〜９５重量％の量で存在する。食味の向上又は吸着の遅延のために適切なコーティングを塗布してもよい。
【００４０】
本願明細書に記載の障害の患者を治療するための本発明の化合物の治療上有効量は、当業者に公知の種々の方法で決定しうる。しかしながら、任意の特定の患者に対する服用レベルの特定は、使用する特定の化合物の活性、年齢、体重、一般的健康、性別、食事制限、投与時間、投与経路、及び排出速度、薬剤の組合せ及び特定の疾患の重篤さを含む種々の要因に依存すると理解されたい。用いる化合物及び治療する特定の疾患に依存して、服用の頻度を変えてもよい。例えば、典型的な１日の服用量は約１ｍｇから約１ｇの活性成分を含有してもよい。
【００４１】
本発明の化合物は、文献公知又は実験手順に例示の他の標準的な操作に加え、本願明細書に提供される情報を用いて調製してもよい。
【００４２】
本願明細書に使用の用語及び略語は、特に指定のない限り、通常の意味を有する。例えば、“ＬＣ”は液体クロマトグラフィを指し、“ｄｐｐｂ”はビス（ジフェニルホスフィノ）ブタンを指し、Ｐｄ（ＯＡｃ）２は酢酸パラジウムを指し、“ＤＭＦ”はＮ，Ｎ−ジメチルホルミアミドを指し、“ＤＭＳＯ”はジメチルスルホキシドを指し、“Ｅｔ２Ｏ”はジエチルエーテルを指し、“ＥｔＯＡｃ”は酢酸エチルを指し、“ＴＦＡ”はトリフロロ酢酸を指し、ＭｅＯＨはメタノールを指す。
【００４３】
（調製）
（調製１）
２−［７−（４−メトキシ−フェニル）−イソキノリン−５−スルホニル］−エチルアミン二塩酸
無水ＭｅＯＨ（１５０ｍＬ）中｛２−［７−（４−メトキシ−フェニル）−イソキノリン−５−スルホニル］−エチル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１１．００ｇ、２４．８５ｍｍｏｌ）スラリーに、ジオキサン（３５０ｍＬ）中４Ｎ  ＨＣｌを加えた。反応生成物を室温で終夜かき混ぜ、次いで真空中で１／２の容積に濃縮し、過剰のＥｔＯＡｃを加えると黄色の固体が沈澱した。Ｎ２雰囲気下の真空ろ過により生成固体を回収し、ＥｔＯＡｃで洗浄し、真空下で乾燥（Ｎ２雰囲気下）して、表題化合物（１０．２３ｇ、収率９９％）を黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ）：ｍ／ｚ３４３．０（Ｍ＋＋Ｈ）。
【００４４】
（調製２）
７−ブロモ−イソキノリン−５−スルホン酸
発煙Ｈ２ＳＯ４（２０００ｍＬ、２１．３３ｍｏｌ、２６−２９．５％、ＳＯ３フリー）を、メカニカルスターラ、還流コンデンサ、Ｎ２ライン、及び温度計を備えた５Ｌ丸底フラスコに加えた。氷／アセトン浴中、発煙Ｈ２ＳＯ４を１０℃に冷却し、次いで７−ブロモイソキノリンＨＣｌ（５００．００  ｇ、２．０４ｍｏｌ）を、反応混合物が約１５−２０℃以下の温度を保つよう少量ずつ加えた。７−ブロモイソキノリンＨＣｌの添加終了後、生成反応混合物を約１００℃に終夜加熱した。反応混合物を室温に冷却し、次いでかき混ぜた氷水の溶液中にゆっくりと注入した。真空ろ過により生成沈殿物を回収し、Ｈ２Ｏ次いでＥｔ２Ｏで洗浄し、真空ろ過にて乾燥した後、約３５℃減圧下の乾燥オーブン中で乾燥して、表題化合物（５０１．４２ｇ、収率８５％）を灰色がかった固体として得た。ＴＯＦ−ＭＳ［ＥＳ＋；ｍ／ｚ］２８７．９３３１／２８７．９３３０。
【００４５】
（調製３）
７−（４−（メトキシ−フェニル）−イソキノリン−５−スルホン酸
ＤＭＦ（１４００ｍＬ）及びＭｅＯＨ（３７５ｍＬ）中７−ブロモ−イソキノリン−５−スルホン酸（１５０．００ｇ、０．５２０ｍｏｌ）及び４−メトキシフェニルホウ酸（９０．８７ｇ、０．５９８ｍｏｌ）を２Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３水溶液（６５２ｍＬ）で処理した。生成スラリーをＮ２で３回脱酸素し、次いでＰｄ（ＯＡｃ）２（２．３３ｇ、０．０１０４ｍｏｌ）及びｄｐｐｂ（５．５４ｇ、０．０１３０ｍｏｌ）を加えた。生成反応混合物を約７０℃で３時間加熱し、次いで終夜室温に冷却させた。反応混合物をＨ２Ｏ（４０００ｍＬ）で希釈し、５Ｎ  ＨＣｌ水溶液にてｐＨを約２に調節した。生成スラリーを室温で３０分間かき混ぜ、次いで真空ろ過により褐色固体を回収し、Ｈ２Ｏで洗浄して真空ろ過にて乾燥した。褐色固体をＤＭＦ（１０００ｍＬ）及び２Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３水溶液（６５０ｍＬ）に溶解し、生成溶液をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）パッドを通じてろ過し、ＤＭＦ（４００ｍＬ）／Ｈ２Ｏ（４００ｍＬ）で洗浄した。５Ｎ  ＨＣｌ水溶液を用いて、ろ過液のｐＨを約２に調節した。生成スラリーを室温で３０分かき混ぜ、次いで真空ろ過により固体を回収し、Ｈ２Ｏで洗浄して真空ろ過にて終夜乾燥した。再び固体をＤＭＦ（１０００ｍＬ）及び２Ｍ  Ｎａ２ＣＯ３水溶液（１０００ｍＬ）に溶解し、生成溶液をＣｅｌｉｔｅ（登録商標）で処理してスラリーとした。生成スラリーを室温で４０分かき混ぜ、次いでＣｅｌｉｔｅ（登録商標）パッドを通じてろ過し、Ｈ２Ｏで洗浄した。５Ｎ  ＨＣｌ水溶液を用いて、ろ過液のｐＨを約２に調節した。生成スラリーを室温で３０分かき混ぜ、次いで真空ろ過により固体を回収し、Ｈ２Ｏで洗浄して真空ろ過にて終夜乾燥した。固体を破砕し、次いでＥｔＯＡｃで洗浄し、終夜真空乾燥した後、約３５℃で、減圧下の乾燥オーブン中で乾燥して、表題化合物（１３６．７９ｇ、収率８３％）を黄色固体として得た。ＴＯＦ−ＭＳ［ＥＳ＋；ｍ／ｚ］３１６．０６２４／３１６．０６４３。Ａｎａｌ．Ｃａｌｃｄ．Ｆｏｒ  Ｃ１６Ｈ１３ＮＯ４Ｓ：Ｃ  ６０．９４；Ｈ  ４．１５；Ｎ  ４．４４；Ｓ  １０．１６．Ｆｏｕｎｄ  Ｃ  ６０．７６；Ｈ  ４．１３；Ｎ  ４．５０；Ｓ  ９．９０
【００４６】
（調製４）
７−（４−メトキシ−フェニル）−イソキノリン−５−スルホニルクロリド
１，２−ジクロロエタン（２００ｍＬ）及びＤＭＦ  （２．９９ｍＬ、３８．５ｍｍｏｌ）中７−（４−メトキシ−フェニル）−イソキノリン−５−スルホン酸（１２．１３ｇ、３８．５ｍｍｏｌ）のスラリーにオキザリルクロリド（２６．８ｍＬ、３０８ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。６０−６５℃で４時間加熱する間、窒素雰囲気下でスラリーを機械的にかき混ぜた。スラリーを−１０℃に冷却した。３０分静置した後にろ過した。黄色固体を２０％エーテル／ジクロロメタンで洗浄し、窒素雰囲気下で乾燥して表題化合物（１４．８ｇ）を黄色粉末として得た。
【００４７】
（調製５）
７−（４−メトキシ−フェニル）−イソキノリン−５−チオールナトリウム塩
Ａ．ジオキサン（４０ｍＬ）中７−（４−メトキシ−フェニル）−イソキノリン−５−スルホニルクロリド（４．０ｇ、１２ｍｍｏｌ）にトリカルボキシエチルホスフィン塩酸塩（１３．７３ｇ、４８ｍｍｏｌ）及び水（１０ｍＬ）を加えた。混合物を１００℃に加熱して３時間かき混ぜた。氷浴中で混合物を冷却し、ピペットでＮａＯＨ（５Ｎ、６０ｍＬ）をゆっくり加えた。淡黄色の沈殿物をろ過、空気乾燥して表題化合物（３．２ｇ、９５％）を得た。質量スペクトル（ＬＣＭＳ）ｍ／ｚ＝２６６．２（Ｍ−Ｎａ＋）
【００４８】
代替として、表題化合物を以下のように作成できる。
Ｂ．（ｉ）無水トルエン（２５００ｍＬ）中７−（４−メトキシ−フェニル）−イソキノリン−５−スルホン酸（１００．００ｇ、０．３１７ｍｏｌ）溶液をＮ２で３回脱酸素し、次いでＰｈ３Ｐ（３３２．５８ｇ、１．２６８ｍｏｌ）、Ｉ２（８０．４６ｇ、０．３１７ｍｏｌ）、及びＢｕ３Ｎ（１５２．００ｍＬ、０．６３８ｍｏｌ）で処理した。生成反応混合物をＮ２雰囲気下で１時間かき混ぜ、次いで反応混合物に空気をバブリングしながら室温に終夜冷却した。反応混合物を１Ｎ  ＮａＯＨ水溶液（５００ｍＬ）で処理し、次いで反応混合物に空気をバブリングしながら室温で終夜かき混ぜた。生成した黄褐色沈殿物を真空ろ過により回収した。ＴＨＦ／Ｅｔ２Ｏの１／１溶液で洗浄し、次いで真空ろ過で乾燥してビス−（７−（４−メトキシ−フェニル）−イソキノリン−５）−ジスルフィド（７２．５０ｇ、収率８６％）を淡褐色の固体として得た。１Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ，ＤＭＳＯ）δ９．３９（ｓ，２Ｈ），８．５１（ｄ，２Ｈ），８．４１（ｓ，２Ｈ），８．１１（ｄ，２Ｈ），８．００（ｄ，２Ｈ），７．５３（ｄ，４Ｈ），６．９４（ｄ，４Ｈ），３．７８（ｓ，６Ｈ）
【００４９】
Ｂ．（ｉｉ）無水ＴＨＦ（８５０ｍＬ）中ビス−（７−（４−メトキシ−フェニル）−イソキノリン−５）−ジスルフィドのスラリーをＮａＢＨ４（２．８４ｇ、７５．０７ｍｍｏｌ）で処理した。生成反応混合物をＮ２下、約３５℃で１時間加熱し、次いでＮ２下、約４５℃で１時間加熱した。
【００５０】
（調製６）
７−（４−メトキシ−フェニル）−イソキノリン−５−スルフィン酸ナトリウム
水（１０ｍＬ）中７−（４−メトキシ−フェニル）−イソキノリン−５−スルホニルクロリド（１．４８ｇ、４ｍｍｏｌ）にＮａ２ＳＯ３（１．０１ｇ、８ｍｍｏｌ）及びＮａＨＣＯ３（１．０１ｇ、１２ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を１００℃に加熱して１時間かき混ぜた。反応混合物を室温に冷却し、減圧下で水を除去した。残留物にメタノール（４０ｍＬ）を加えて１０分かき混ぜた。白色固体をろ過し、メタノールで洗浄してろ過液を合わせた。濃縮して表題化合物（１．１ｇ）を得た。
【００５１】
（調製７）
（３，５−ジクロロ−ベンジリデン）−（２，２−ジエトキシ−エチル）−アミン
２，２−ジエトキシ−エチルアミン（１８５２．５ｇ；１．００当量；１３．６３モル）、３，５−ジクロロ−ベンズアルデヒド（２４５３ｇ；１．００当量；１３．６０モル）、及びトルエン（１２Ｌ）を、Ｄｅａｎ  Ｓｔａｒｋトラップ、コンデンサ、窒素インレット、オーバーヘッドスターラ、及び熱電対を備える２２Ｌフラスコに入れた。薄い黄色反応物を還流するために暖めた。溶液は８８℃で蒸留し始めた。全量約６５０ｍＬの蒸留物（約２４０ｍＬの水）を集めた。蒸留中、温度を１１４℃に上げた。還流２時間後のＮＭＲに生成物が示された。２．５時間後に加熱を中止した。溝付きろ紙を通じて大型ガラスびんに溶液を重力ろ過して少量の微粒子（３，５−ジクロロ−ベンズアルデヒド由来と思われるガラス管の小部分を含む）を除去した。ろ過した溶液を、４５℃水浴でＢｕｃｈｉフラスコを用いて濃縮した。溶媒が上昇停止してから、最大真空度で温度を７０℃に上げて約１．５時間維持し、すべての残存トルエンを除去した。（３，５−ジクロロ−ベンジリデン）−（２，２−ジエトキシ−エチル）−アミンの重量は４０５９．３ｇ（理論値の１０２．９％）であった。質量スペクトル（ＬＣＭＳ）ｍ／ｚ＝２９１．２）（Ｍ＋Ｈ＋）
【００５２】
（調製８）
５，７−ジクロロ−イソキノリン塩酸塩
トリフリック酸（２．９７Ｌ；３３．５２モル；５．０３  ｋｇ）をＤｅａｎ  Ｓｔａｒｋトラップ、オーバーヘッドスターラ、コンデンサ、窒素インレット、３Ｌ滴下漏斗（フラスコとの間にコンデンサを介して）、及び熱電対を備えた１２Ｌフラスコに入れた。トリフリック酸を１２０℃に加熱した。（３，５−ジクロロ−ベンジリデン）−（２，２−ジエトキシ−エチル）−アミン（１３５０．５ｇ；１．００当量；４．６５モル）をジクロロメタン（１３５０ｍＬ）で溶解し、滴下漏斗に入れた。温度１１９℃で添加を開始した。９０分以上、温度を１２０℃に保って添加を完了した。添加期間に約１５００ｍＬの蒸留物を回収した。添加後約４５分でＨＰＬＣ面積％が完了し、９４．１４％生成物及び４．８６％（３，５−ジクロロ−ベンジリデン）−（２，２−ジエトキシ−エチル）−アミンを示した。１．５時間後に加熱を中止した。反応物を約８０℃に冷却した。この時点でフラスコを氷浴中に置いて更に冷却した。メタノール（２．７Ｌ）を９℃で反応物に加えた。この添加は６０分以上かけて完了した。最高温度は２７℃だった。メタノール添加中にいくらかの固体を生成した。このスラリーを２Ｌ滴下漏斗に少しずつ移し、２２Ｌフラスコ内の水酸化アンモニウム（５．１Ｌ；３６．６７モル；４．５９ｋｇ）及び水（５．１Ｌ）の溶液に加え、氷浴中で＜２℃に冷した。滴下漏斗は、フラスコ壁に固着して油のような固体になりがちな材料が、フラスコ側面を降下しないようにするためにＴｅｆｌｏｎ（登録商標）延長チューブを有する。滴下漏斗が固体により塞がらないように、材料は小さいスラッグ状で添加した。フラスコ及び滴下漏斗のメタノール（９００ｍＬ）洗浄を含めて、３５分以上かけて滴下を完了した。最高温度は２６℃だった。褐色固体を生成した。スラリーを１４℃に冷却した。固体をポリプロピレンパッド上でろ過した。固体を水４Ｌで２回及び２Ｌで１回洗浄した。次いで乾燥補助のために固体をヘプタン２Ｌで洗浄した。固体は５０℃で真空乾燥し、重量９９９．０ｇ（理論値の１０８．４％）となった。５，７−ジクロロ−イソキノリン（９９７ｇ；１．００当量；５．０３モル）及びエタノール（１４．９７Ｌ）を、滴下漏斗、窒素インレット、オーバーヘッドスターラ、及び熱電対を備えた２２Ｌフラスコに入れた。褐色スラリーを環境温度（２２℃）でかき混ぜた。塩化アセチル（１１８０ｍＬ；１６．５８モル；１．３０ｋｇ）を滴下漏斗に入れた。これをフラスコに滴下して加えた。褐色スラリーが暗色化した。１００−２００ｍＬの塩化アセチルを加えることにより固体はほとんど溶解したように見えた。完全な溶液は生成しなかった。添加を継続すると固体が再び現れた。添加は４５以上かけて完了した。最高温度は４３℃であり、これは添加の約半分で到達し、バス中の冷水でその温度を維持した。塩化アセチルの約３／４を添加した後に、ＮＭＲ様に反応物の試料を取り出した。試料は塩のように思われたため、過剰の塩化アセチルは必用なさそうだった。スラリーをかき混ぜ、冷却した。４０分後には温度は３０℃だった。スラリーを＜２℃に冷却し、氷浴中で１．５時間保持した。スラリーをろ過した。固体を冷エタノール１．３Ｌで２回洗浄した。湿��た固形物の重量は８１１．４ｇだった。固体を５０℃で真空乾燥した。乾燥重量は６４８．４ｇだった。これは収率６１．０％であることを表していた。質量スペクトル（ＬＣＭＳ）ｍ／ｚ＝１９９．０５）（Ｍ＋Ｈ＋）
【００５３】
（調製９）
［２−（７−クロロ−イソキノリン−５−イルスルファニル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
カルバミン酸カリウム（１９５２ｇ；１４．１２モル）を、オーバーヘッドスターラ、滴下漏斗、窒素インレット、及び熱電対を備えた２２Ｌフラスコに入れた。ジメチルホルムアミド（４Ｌ）を加えた。５，７−ジクロロ−イソキノリン塩酸塩（６４６．１ｇ；１．００当量；２．７６モル）をＤＭＦ（３３０ｍＬ）と共に少しずつ加えた。Ｂｏｃ−システアミン（５１４ｇ；１．０５当量；２．９０モル）をジメチルホルムアミド（１５２０ｍＬ）に溶解して滴下漏斗に入れた。混合物を６０℃に暖めた。混合物を暖める間にヘッドスペースを通じて１５分間窒素パージした。Ｂｏｃ−システアミン溶液を６０℃で２時間１５分かけて添加した。添加後１時間２０分して行ったＨＰＬＣでは、出発材料２８．１％、生成物６７．２６％、異性体４．２２％、及びビス体０．２５％を示した。反応物を７５℃に暖めた。表ＡのＨＰＬＣデータは７５℃で収集した。
【００５４】
【表１】
2009541335.tif 000002
【００５５】
１．５時間後にマントルヒータを冷却バスに入れ替えた。反応物を２０−２５℃に冷却した。固体をろ過してＤＭＦ（８１０ｍＬ、２回）で洗浄した。ＤＭＦ溶液をＭＴＢＥ（５．１５Ｌ）及び５％ＬｉＣｌ（５．１５Ｌ）で希釈した。５０Ｌ底部出口付きフラスコ内でかき混ぜた後、層を分離した。水層をＭＴＢＥ（２．９Ｌ）で抽出した。ＭＴＢＥ層を合わせ、５％ＬｉＣｌで洗浄した（２．９Ｌ、２回）。ＭＴＢＥ層を溝付きろ紙を通じて重力ろ過し、３５℃に設定した水浴付きのＢｕｃｈｉフラスコを用いて濃縮し、８９２．７ｇ（理論値の９５．６％、無補正）の［２−（７−クロロ−イソキノリン−５−イルスルファニル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。質量スペクトル（ＬＣＭＳ）ｍ／ｚ＝３３９．８５）（Ｍ＋Ｈ＋）
【００５６】
（調製１０）
［２−（７−クロロ−イソキノリン−５−スルホニル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
［２−（７−クロロ−イソキノリン−５−イルスルファニル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（７００ｇ；１．００当量；２．０７モル）を、５０℃に設定した水浴付きＢｕｃｈｉフラスコ上で回転してイソプロピルアルコール（１０．５３Ｌ）に溶解した。メキノール（１２．２９ｇ；９８．０１ｍモル；１２．２９ｇ）、タングステン酸ナトリウム二水和物（３１．４ｇ；９５．２０ｍモル）、［２−（７−クロロ−イソキノリン−５−イルスルファニル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル溶液、イソプロピルアルコール（２．７７Ｌ）、水（３．３８Ｌ）、及び酢酸（１２３ｍＬ；２．１５モル；１２８．９０ｇ）を、コンデンサ、窒素インレット、オーバーヘッドスターラ、滴下漏斗、及び熱電対を備えた２２Ｌフラスコに入れた。水の添加により褐色溶液はわずかに乳状の外観となった。温水浴を用いて反応物を５０℃に暖めた。過酸化水素（６０７ｍＬ；５．９４モル；６７３．７７ｇ）を１時間かけて添加した。添加中、過酸化水素の添加速度及び必用に応じて冷水又は温水を水浴に加えて、温度を５０−５５℃に維持した。反応物は乳状褐色のままだった。反応温度は添加終了時に５４℃であり、温水浴を用いて５３−５７℃に維持した。添加後１０分のＨＰＬＣでは２．８９分に２４．６９％のピークが現れ、生成物６５．５７％、異性体５．０３％、ビス体４．３３％であり、３．０５分においてピークは０．１８％だった。添加後２時間のＨＰＬＣではスルホキシド０．０６％、３．０４６分に１．２７％のピーク、生成物８８．１０％、異性体４．６１％、及びビス体５．７９％だった。反応物を冷却するために、水浴を排出して氷浴と入れ替えた。反応温度が２７℃に達したときに、９％亜硫酸水素ナトリウム溶液（２５０ｍＬ）を加えて過酸化物をクエンチした。温度上昇は全く見られなかった。過酸化物試験片及びヨードデンプン紙は過酸化物が残存していないことを示した。１５−２０分かけて水（５．６４Ｌ）を加えた。添加中、温度は１８から２４℃に上昇した。環境温度で終夜混合物をかき混ぜた。氷浴中、＜５℃までスラリーを冷却して保持した。上清の定量的ＨＰＬＣでは、＜５℃において１．５時間後に結晶化が完了したことを示した。固体をろ過し、水洗した（２Ｌ、２回）。湿った固形物の重量は８３１ｇだった。固体を５０℃で真空乾燥した。乾燥［２−（７−クロロ−イソキノリン−５−スルホニル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルの重量は５３１ｇ（理論値の６９．３１％、無補正）だった。質量スペクトル（ＬＣＭＳ）、ｍ／ｚ＝３７１．８５）（Ｍ＋Ｈ＋）
【００５７】
（調製１１）
（２−｛７−［４−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−フェニル］−イソキノリン−５−スルホニル｝−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
６０Ｌの反応容器に、ＰＥＰＰＳＩ（登録商標）（ピリジン強化した前触媒調製安定及びイニシエーション（Ｐｙｒｉｄｉｎｅ−Ｅｎｈａｎｃｅｄ  Ｐｒｅｃａｔａｌｙｓｔ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ｓｔａｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｉｎｉｔｉａｔｉｏｎ）；５１．０ｇ；７４．９ｍモル）、［２−（７−クロロ−イソキノリン−５−スルホニル）−エチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１．３８３ｋｇ；３．７２９モル）、フェニルホウ酸（８９５ｇ；４．０３モル）、Ｋ２ＣＯ３（１．０３９ｋｇ；７．５１８モル）、及びエタノール（１５Ｌ）を窒素パージ下で入れた。最初にエタノール１２Ｌを反応容器に加え、残りの３Ｌは他の材料を洗い流すために用いた。反応物を還流するために暖めた（７８℃）。ＨＰＬＣは１／２時間後に反応完了を示した。Ｈｕｂｅｒ（登録商標）サーキュレータを用いて反応物を５９℃に冷却した。１８分かけて反応物に水（８．７Ｌ）を加えた。水の添加中に温度は５９℃から４２℃に低下した。Ｈｕｂｅｒ（登録商標）サーキュレータを用い、１時間かけて反応物を４２℃から０℃に冷却した。スラリーを１時間０℃に保持した。ポリプロピレンパッドを用いて固体をろ過し、１：１のエタノール：水（３．７Ｌ；冷蔵）で洗浄した。固体をフィルタ上で終夜乾燥した。次いで固体を６０℃で２２時間真空乾燥した。固体の乾燥重量は２．１７１ｋｇだった。粗製２−｛７−［４−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−フェニル］−イソキノリン−５−スルホニル｝−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル中のＰｄレベルは２１９６μｇ／ｇであり、固体はＫＦ法によると、６．９％の水を含有していた。５０Ｌの底部出口付きフラスコにジクロロメタン（４Ｌ）を入れた。粗製２−｛７−［４−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−フェニル］−イソキノリン−５−スルホニル｝−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを５０Ｌフラスコに入れ、ジクロロメタン（１Ｌ）ですすいだ。Ｎａ２ＳＯ４（１．９ｋｇ）を入れてジクロロメタン（０．１Ｌ）ですすいだ。Ｄａｒｃｏ  Ｇ−６０（登録商標）（３．８ｋｇ）を２０ＬのＢｕｃｈｉフラスコに入れてジクロロメタン（１２Ｌ）でスラリー化した。このスラリーを５０Ｌフラスコに移してジクロロメタン（４．９Ｌ）ですすいだ。混合物を環境温度で２時間かき混ぜた。５０ｃｍステンレスフィルタにポリプロピレンパッド及びＨｙｆｌｏ  Ｓｕｐｅｒ  Ｃｅｌ（登録商標）（１．７ｋｇ）を装着した。Ｈｙｆｌｏ  Ｓｕｐｅｒ  Ｃｅｌ（登録商標）パッドをジクロロメタン（２Ｌ）ですすいだ。５０Ｌフラスコの内容物をＨｙｆｌｏ  Ｓｕｐｅｒ  Ｃｅｌ（登録商標）パッド上でろ過した。フラスコ及びフィルタ固形物をジクロロメタン（２２Ｌ）ですすいだ。ろ過液は０．４５ミクロンカートリッジフィルタを通じて６０Ｌ反応容器に入れた。反応容器の内容物を暖め、低真空（約６４０ｍｍＨｇ）で蒸留して濃縮した。３５−３７℃で２時間かけて蒸留物を約３３Ｌ集めた。エタノール（１０Ｌ）を加えた。蒸留を継続しながら、真空をゆっくり調節して２８０ｍｍＨｇまで低下させた。真空到達後、温度を上昇して蒸留を維持した。反応容器中の容積が約１０Ｌに���した時点で、溶媒を留出させながら反応容器内の容積を同じに維持する速度でエタノール（６．５Ｌ）を加えた。エタノールを全て添加した時点で蒸留を停止した。最終容積は約１０Ｌだった。蒸留終了時の温度は５６℃だった。溶媒交換中に生成したスラリーを２０℃に冷却して終夜保持した。スラリーをろ過した。固体を１：１のエタノール：水（１．８Ｌ）で洗浄した。湿った固形物の重量は１．８７８ｋｇだった。固体を５０℃で真空乾燥して１．２３０６ｋｇ（収率６４．３６％）の（２−｛７−［４−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−フェニル］−イソキノリン−５−スルホニル｝−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。質量スペクトル（ＬＣＭＳ）ｍ／ｚ＝５１３．６２）（Ｍ＋Ｈ）
【実施例】
【００５８】
（実施例１）
４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸塩
【化１】
2009541335.tif 000003
Ａ．｛２−［７−（４−メトキシ−フェニル）−イソキノリン−５−イルスルファニル］−エチル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
アセトン（１０ｍＬ）中７−（４−メトキシ−フェニル）−イソキノリン−５−チオールナトリウム塩（０．２９ｇ、１ｍｍｏｌ）に、（２−ブロモ−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．２２ｇ、１ｍｍｏｌ）及び炭酸カリウム（０．１４ｇ、１ｍｍｏｌ）を加えた。混合物を室温で４時間かき混ぜ、次いでシリカゲルカラムに乗せ、ヘキサン中６５％酢酸エチルで溶出して表題化合物（０．３５ｇ、８６％）を得た。質量スペクトル（ＬＣＭＳ）ｍ／ｚ＝３５５．２（Ｍ＋Ｈ＋）
【００５９】
Ｂ．｛２−［７−（４−メトキシ−フェニル）−イソキノリン−５−スルホニル］−エチル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
｛２−［７−（４−メトキシ−フェニル）−イソキノリン−５−イルスルファニル］−エチル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．３５ｇ、０．８５ｍｍｏｌ）の酢酸（８ｍＬ）溶液に水（２ｍＬ）を加えた。混合物を氷浴中で０℃に冷却した。ＫＭｎＯ４（０．２７ｇ、１．７ｍｍｏｌ）の水（２ｍＬ）溶液を５分間かけて滴下して加えた。添加後に反応混合物を０℃で３０分かき混ぜた。Ｈ２Ｏ２（３０％水溶液）を、褐色の色が消失するまで滴下して加えた。酢酸エチル（５０ｍＬ）及び飽和重炭酸ナトリウム（４０ｍＬ）で混合物を分離した。有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥し、ろ過して濃縮した。残留物をシリカゲルカラム上でヘキサン中６６％酢酸エチルでクロマトグラフ展開し、表題化合物（０．２４５ｇ）を白色固体として得た。質量スペクトル（ＬＣＭＳ）ｍ／ｚ＝４３３．２（Ｍ＋Ｈ＋）
【００６０】
Ｃ．４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸
ジクロロエタン（１０ｍＬ）中２−［７−（４−メトキシ−フェニル）−イソキノリン−５−スルホニル］−エチル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（０．２２ｇ、０．５１ｍｍｏｌ）に−２０℃でＢＢｒ３（ジクロロメタン中１．０Ｍ、３．０ｍＬ）を加えた。添加後に反応混合物を−２０℃で２時間かき混ぜ、ゆっくりと室温まで暖め、室温で２時間かき混ぜた。メタノール（５ｍＬ）を加えて過剰のＢＢｒ３をクエンチした。減圧下で溶媒を蒸発させ、逆相ＨＰＬＣ（０．０１％  ＴＦＡ含有０−１００％アセトニトリル：水）で残留物を精製して４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールをＴＦＡ塩（０．１８ｇ）として得た。次いで、ＴＦＡ塩０．１２ｇの二塩酸塩への変換は、ＴＦＡ塩に飽和重炭酸ナトリウム水溶液２ｍＬを加え、ＴＦＡ塩をフリー塩基に変換するために終夜かき混ぜた。フリー塩基をろ過した。フリー塩基を、最初に水、次いでジエチルエーテルで洗浄した。固体を乾燥した。次いで固体をＭｅＯＨ中に懸濁した。０．２ｍＬ濃縮ＨＣｌ水溶液を加えて１時間かき混ぜた。溶液を減圧下で濃縮して二塩酸塩（０．１０ｇ）を生成した。質量スペクトル（ＬＣＭＳ）ｍ／ｚ＝３２９．０（Ｍ＋Ｈ＋）
【００６１】
（実施例２）
４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール
ジクロロメタン（１Ｌ）中｛２−［７−（４−メトキシ−フェニル）−イソキノリン−５−スルホニル］−エチル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２５．００ｇ、５６．４９ｍｍｏｌ）に０℃で４０分かけてオーバーヘッドスターラで激しくかき混ぜながら、ＢＢｒ３（ジクロロメタン中１．０Ｍ、２００ｍＬ、２００ｍｍｏｌ）を加えた。冷却浴を外し、室温で終夜かき混ぜた。０℃に冷却してメタノール（５００ｍＬ）を１時間かけて滴下して加えた。生成スラリーをろ過し、フラスコをジクロロメタン（１００ｍＬ）ですすぎ、このすすぎ液で固体を洗浄した。固体を追加のジクロロメタン（１５０ｍＬ）で洗浄し、真空ろ過で乾燥した。固体をメタノール（４００ｍＬ）中でかき混ぜながらスラリー化し、次いで真空下で濃縮して薄いペーストとした。メタノール（４００ｍＬ）を追加し、かき混ぜて固体を更にスラリー化した。このスラリーを真空下で乾燥するまで濃縮し、真空下で終夜乾燥した。固体を砕いて粉末とし、メタノール（１Ｌ）中でスラリー化した。Ａｍｂｅｒｌｙｓｔ（登録商標）Ａ−２１樹脂（７５ｇ）を加え、粉末が溶解するまでかき混ぜた。樹脂をろ過し、ろ過した樹脂をメタノール（２２０ｍＬ）中でスラリー化し、再度樹脂をろ過してろ液を合わせた。ろ過した樹脂をメタノール（１００ｍＬ）で洗浄し、この洗浄液をろ液に加えた。ろ液にエタノール（２００ｍＬ）を合わせて混合物を真空下で濃縮し、約２００ｍＬの容積としてスラリーを得た。エタノール（４００ｍＬ）を加え、スラリーを５０℃で約１５分間暖め、次いで真空下で濃縮して容積を約２００ｍＬとした。スラリーを室温に冷却し、ろ過し、エタノール（１５ｍＬ、２回）でろ過固形物をすすぎ、次いで真空乾燥して表題化合物（１０．２２ｇ、５５％）を黄褐色の固体として得た。質量スペクトル（ＬＣＭＳ）ｍ／ｚ＝３２９．０（Ｍ＋Ｈ＋）
【００６２】
（実施例３）
４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール
氷／Ｈ２Ｏ浴で無水ＣＨ２Ｃｌ２（４００ｍＬ）中２−［７−（４−メトキシ−フェニル）−イソキノリン−５−スルホニル］−エチルアミン二塩酸（９．５５０４ｇ、２２．９９ｍｍｏｌ）を約５℃に冷却し、次いで冷却スラリーにＣＨ２Ｃｌ２中ＢＢｒ３１．０Ｍ溶液（９２．００ｍＬ、９２．００ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。ＢＢｒ３添加完了時点で氷浴を外し、生成反応混合物を室温Ｎ２下で終夜かき混ぜた。生成反応混合物をＭｅＯＨでクエンチし、次いで真空濃縮して残留物を得た。生成した残留物をＭｅＯＨ（２００ｍＬ）に溶解し、真空濃縮して残留物を得た。上記を３回繰り返し、次いで残留物をＥｔ２Ｏ（３００ｍＬ）でスラリー化し、飽和ＮａＨＣＯ３水溶液を約ｐＨ７に達するまで加えた。生成固体を真空ろ過により回収し、次いでＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨの３／１溶液に溶解した。ろ過液をＮａＣｌで飽和し、次いでＣＨＣｌ３／ＭｅＯＨの３／１溶液（２回それぞれ４００ｍＬ）で抽出した。合わせた有機層をＭｇＳＯ４上で乾燥し、ろ過し、次いで真空乾燥して固体／残留物を得た。少量のメタノール（２０ｍＬ）及び過剰ヘキサンで固体／残留物をスラリー化し、次いで生成固体を真空ろ過で回収し、ヘキサンで洗浄して真空ろ過で乾燥し、淡黄色の固体（７．６０ｇ）を得た。無水ＣＨ２Ｃｌ２（４００ｍＬ）中で淡黄色固体（７．６０ｇ）をスラリー化し、氷／Ｈ２Ｏ浴で約５℃に冷却し、次いでＣＨ２Ｃｌ２中１．０ＭのＢＢｒ３溶液（７０．００ｍＬ、７０．００ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。ＢＢｒ３添加完了時点で氷浴を外し、生成反応混合物を室温Ｎ２下で４時間かき混ぜた。追加のＣＨ２Ｃｌ２中１．０ＭのＢＢｒ３溶液（７０．００ｍＬ、７０．００ｍｍｏｌ）を滴下して反応混合物に加え、次いでＮ２下で生成反応混合物を終夜室温でかき混ぜた。反応物を約４０℃に１時間加熱し、次いで追加のＣＨ２Ｃｌ２中１．０ＭのＢＢｒ３溶液（２３．００ｍＬ、２３．００ｍｍｏｌ）を滴下して加えた。生成反応混合物を約４０℃で約２時間加熱し、次いでＭｅＯＨでクエンチして真空濃縮し、残留物を得た。生成残留物をＭｅＯＨ（２００ｍＬ）に溶解し真空濃縮して黄色の残留物を得た。上記を３回繰り返した。黄色の残留物に飽和ＮａＨＣＯ３を加えてｐＨを約７に調整し、次いで真空ろ過により生成固体を回収した。固体をシリカゲルに前もって吸収させ、次いでカラムクロマトグラフィ（３３０ｇ  ＩＳＣＯシリカゲル、無希釈ＣＨ２Ｃｌ２から、５％のＣＨ２Ｃｌ２中２Ｎ  ＮＨ４／ＭｅＯＨ、１０％のＣＨ２Ｃｌ２中２Ｎ  ＮＨ４／ＭｅＯＨまで）により半精製して固体を得た。固体をシリカゲルに前もって吸収させ、次いでカラムクロマトグラフィ（３３０ｇ  ＩＳＣＯシリカゲル、無希釈ＣＨ２Ｃｌ２から、５％のＣＨ２Ｃｌ２中２Ｎ  ＮＨ４／ＭｅＯＨ、１０％のＣＨ２Ｃｌ２中２Ｎ  ＮＨ４／ＭｅＯＨまで）により再精製して固体を得た。固体をシリカゲルに前もって吸収させ、次いでカラムクロマトグラフィ（３３０ｇ  ＩＳＣＯシリカゲル、無希釈ＣＨ２Ｃｌ２から５％ＣＨ２Ｃｌ２中２Ｎ  ＮＨ４／ＭｅＯＨ、１０％ＣＨ２Ｃｌ２中２Ｎ  ＮＨ４／ＭｅＯＨ、１５％ＣＨ２Ｃｌ２中２Ｎ  ＮＨ４／ＭｅＯＨまで）により再精製して固体を得た。固体をシリカ���ルに前もって吸収させ、次いでカラムクロマトグラフィ（３３０ｇ  ＩＳＣＯシリカゲル、５％のＣＨＣｌ３中ＭｅＯＨから、１０％のＣＨＣｌ３ＭｅＯＨ、２０％のＣＨＣｌ３中ＭｅＯＨ、３０％のＣＨＣｌ３中ＭｅＯＨまで）により再精製して表題化合物（６．８５ｇ、収率９０．８％）を黄色固体として得た。ＭＳ（ＥＳ＋，ｍ／ｚ）：３２９．０（Ｍ＋１）
【００６３】
（実施例４）
４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸、未知の水和物状態
４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール（１７１．８ｍｇ）を１５ｍＬの９５％ＥｔＯＨと共にバイアルに入れた。溶液をかき混ぜて化合物を溶解間、バイアルを８０℃に設定したホットプレート上に置いた。溶解はほとんど又は全く起きなかったので、１モル当量のＨＣｌ（１Ｎ  ＨＣｌ水溶液０．５２ｍＬ）を加えて固体を溶解し、明るい黄色の溶液を生成した。ＨＣｌ添加の１分以内に固体生成が始まり、時間と共に増加した。８０℃で約２時間後に試料を熱源から外し、室温で終夜かき混ぜた。真空ろ過を用い、ろ紙を通じて固体を収集した。終夜空気乾燥し、表題化合物１０７．８ｍｇを回収した（収率６３％）。Ｘ線粉末回折：２θ角（％強度）：１１．８（１００．０）；１６．６（５２．９）；８．２（４３．４）
【００６４】
（実施例５）
４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物
Ａ．種材料の調製。エタノール（５ｍＬ）中４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール（０．２５０９ｇ、０．７６４ｍｍｏｌ）にＨＣｌ水溶液（１Ｍ、０．７６５ｍＬ、０．７６５ｍｍｏｌ）を加えた。生成混合物を加熱し、終夜還流した。室温に冷却し、スラリーを真空ろ過した。固体をエタノールですすぎ、真空ろ過で乾燥して黄色固体０．１８４２ｇを得た。
【００６５】
Ｂ．４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物
エタノール（３５ｍＬ）中４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール（１．７５ｇ、５．３３ｍｍｏｌ）のスラリーにＨＣｌ水溶液（１Ｍ、５．３３ｍＬ、５．３３ｍｍｏｌ）を加えた。生成混合物を加熱還流し、水（２．５ｍＬ）を加えて溶液とした。この溶液を６０℃に冷却し、上述のＡから得られた約２ｍｇの黄色固体の種を入れ、スラリーとした。室温に冷却して終夜かき混ぜた。スラリーを真空ろ過してエタノールでろ過固形物をすすぎ、次いで真空ろ過で乾燥して表題化合物１．３３１ｇ（６７％）を黄色固体として得た。質量スペクトル（ＬＣＭＳ）ｍ／ｚ＝３２９．０（Ｍ＋Ｈ＋）．カールフィッシャー：３．００％．Ｘ線粉末回折：２θ角（％強度）：４．９（４７．３）；１４．８（５５．８）；１０．２（４５．５）
【００６６】
（実施例６）
４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸塩
メタノール（５００ｍＬ）で４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール（１６．５７ｇ、５０．４５ｍｍｏｌ）をスラリー化した。別個に、メタノール（１６５ｍＬ）に塩化アセチル（１２．６０ｍＬ、１７７．０５ｍｍｏｌ）を加えてメタノール中ＨＣｌ溶液を調製した。ＨＣｌメタノール溶液を室温で３０分かけてメタノール中４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールのスラリーに滴下して加えた。３０分かき混ぜ、次いで酢酸エチル（６００ｍＬ）を１時間かけて滴下して加えた。３０分かき混ぜ、次いで固体をろ過して酢酸エチルで洗浄した（１００ｍＬ、２回）。５０℃で固体を真空乾燥し、次いで更に室温で窒素をゆっくり加えて真空乾燥して表題化合物を得た（１８．３ｇ、９０％）。質量スペクトル（ＬＣＭＳ）ｍ／ｚ＝３２９．０（Ｍ＋Ｈ＋）
【００６７】
（実施例７）
４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸塩
６０Ｌ反応容器にエタノール（２４Ｌ）及び（２−｛７−［４−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−フェニル］−イソキノリン−５−スルホニル｝−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（２．６５２ｋｇ；５．１７３モル）を入れた。（２−｛７−［４−（テトラヒドロ−ピラン−２−イルオキシ）−フェニル］−イソキノリン−５−スルホニル｝−エチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルをエタノール（２．６Ｌ）ですすいだ。塩酸水溶液（３１．９％；１７８０ｇ；１５．６モル）を水（１．４２Ｌ）で希釈した。このＨＣｌ溶液を反応容器に入れて水（０．２Ｌ）ですすいだ。反応物を７０℃に暖めた。約３０℃で黄色固体が生成し、７０℃付近で黄色スラリーが再生成した。反応物を７０℃に１／２時間保持し、次いで還流するまで昇温した（７８℃）。ＨＰＬＣは還流１．５時間後に反応の完了を示した。水（１４．５Ｌ）を１３分かけて反応物に加えた。温度は６９℃に低下した。還流するために反応物を再加熱（８０℃）すると溶液が生成した。反応物を６８℃に冷却すると固体が生成し始めた。反応物を１／２時間６８℃に保持し、次いで１．５時間かけて２℃に冷却した。スラリーを１時間１−２℃に保持した。固体をろ過してエタノール（４．６Ｌ）で洗浄した。湿った固形物重量は３．２３６ｋｇだった。固体を５０℃で真空乾燥して２．１０６ｋｇ（理論値の１０１．４％）の４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸塩を得た。質量スペクトル（ＬＣＭＳ）ｍ／ｚ＝４０２．３１）（Ｍ＋Ｈ）
【００６８】
（実施例８）
４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物
この実施例に用いるエタノール及び水酸化ナトリウム溶液は０．２２ミクロンカートリッジフィルタを通じてろ過した。使用する水はエンドトキシンを規制した精製水である。
【００６９】
エタノール（８Ｌ）及び４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸塩（８４１．６ｇ；２．０９７モル）を、オーバーヘッドスターラ、コンデンサ、窒素インレット、マントルヒータ、熱電対、及び滴下漏斗を備えた２２Ｌフラスコに入れた。４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸塩をエタノール（３．２８Ｌ）ですすいだ。反応物を５５℃に暖めた。水酸化ナトリウム溶液（１１００ｍＬ；１．９１Ｎ；２．１０モル）を７分かけて反応物に加えると、その間に温度は６２℃に上昇した。還流するために反応物を加熱し（７８℃）、１時間保持した。水（１．９６Ｌ）を一度に反応物に加えた。温度は６８℃に低下した。還流するために反応物を再加熱（７９℃）すると溶液が生成した。Ｄａｒｃｏ  Ｇ−６０（登録商標）（４３８ｇ）を反応物に加えた。反応物を１．２５時間還流した。高温のＤａｒｃｏ  Ｇ−６０（登録商標）スラリーをＧＦＦペーパーうぃ通じてろ過し、別の２２Ｌフラスコに入れた。淡黄色の液体が生成した。最初のフラスコ及びＤａｒｃｏ  Ｇ−６０（登録商標）ろ過固形物を高温エタノール（２．５Ｌ）ですすいだ。すすぐ間に、ろ液中に固体が生成し始めた。ろ液及び洗浄液を含有する２２Ｌフラスコにオーバーヘッドスターラ、窒素インレット、及び熱電対を備えた。スラリーをかき混ぜて環境温度に冷却した。固体をろ過してエタノール（２Ｌ）で洗浄した。湿った固形物重量は６７２ｇだった。固体を５０℃で真空乾燥して５４０ｇ（収率６８．９％）の４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物を得た。質量スペクトル（ＬＣＭＳ）ｍ／ｚ＝３２９．３）（Ｍ＋Ｈ＋）
【００７０】
例示の化合物はＡｋｔ活性の阻害剤である。これらの化合物の阻害活性は、以下の方法により説明しうる。
【００７１】
（Ａｋｔ１リン酸化アッセイ）
このアッセイは、競合蛍光偏光イムノアッセイ（ＦＰＩＡ）によりＰＫＣアルファ偽性基質ペプチドを測定する。このアッセイは、リン酸ペプチド生成物によりリン酸特異的抗体から脱離した時の、蛍光ラベルされた標識ペプチドから放出される偏光強度の変化を測定することにより、反応物中に生成されるホスホペプチド生成物の濃度を間接的に測定する。標準カーブで校正することにより定量的な結果を得る。
【００７２】
（酵素及び基質）
Ｓｆ９昆虫細胞から精製した活性ヒト遺伝子組換えＡｋｔ１（全長）をＵｐｓｔａｔｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｉｎｃ社から入手した。ペプチド基質（分子量１５６１）は購入した。
【００７３】
（標準アッセイ溶液）
溶液（Ａ）：２０％ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）又は２０％ＤＭＳＯ中化合物又は５００ｍＭ  ＥＤＴＡ；溶液（Ｂ）：アッセイバッファ混合物：７５μＭペプチド基質、３８ｍＭ  ＭｇＣｌ２、７０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（登録商標）、及び５０μＭ  ＡＴＰ（アデノシン三リン酸）；溶液（Ｃ）：Ａｋｔキナーゼ混合物：７０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４、１ｍＭ  ＤＴＴ（ジチオスレイトール）、０．０１％Ｔｒｉｔｏｎ−Ｘ−１００（登録商標）、及びＡｋｔ１酵素。
【００７４】
（ＦＰＩＡ手順）
最初に５μＬの溶液（Ａ）を１０μＬの溶液（Ｂ）と混ぜた。この混合物に１０μＬの溶液（Ｃ）を加えて酵素反応をイニシエートした。（２５μＬ混合物中の最終濃度又は量：４％ＤＭＳＯ（最小阻害ウェル）又は４％ＤＭＳＯ中の種々の化合物濃度、又は１００ｍＭ  ＥＤＴＡ（最大阻害ウェル）；３０μＭペプチド基質；１５ｍＭ  ＭｇＣｌ２；７０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、ｐＨ７．４；２０μＭ  ＡＴＰ；０．４ｍＭ  ＤＴＴ；０．０１％  Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（登録商標））。反応は、黒色ハーフエリア平底９６ウェルマイクロタイタープレート中で実施した。
【００７５】
室温６０分後に、２６０ｍＬ  ＥＤＴＡ、３．４ｎＭフルオレセイントレーサ、及び７．５ｎＭ抗ホスホセリン抗体を含有する２５μＬのクエンチ／検出ミックスを加えて反応を終了した。プレートは室温で３時間以上、暗黒中でインキュベートし、次いでＴｅｃａｎ  Ｕｌｔｒａプレートリーダを用いて蛍光偏光（λｅｘ＝４８５ｎｍ、λｅｘ＝５３０ｎｍ）を読み取った。ウェルあたりのリン酸化生成物濃度を、調製ペプチド競合希釈系列を標準カーブとして用い、ミリ偏光（ｍＰ）単位で計算した。本発明の例示化合物は、１μＭ以下のＩＣ５０値でＡｋｔ１リン酸化を阻害した。実施例１の化合物はこのアッセイ中、４５±１７ｎＭ（ｎ＝３）のＩＣ５０値でＡｋｔ１リン酸化を阻害した。
【００７６】
（Ｐｈｏｓｐｈｏ−ＧＳＫ３ｂ（ｐＧＳＫ３ｂ）検出用の細胞系ＥＬＩＳＡ（ｃＥＬＩＳＡ））
（細胞内Ａｋｔの標的）
ヒトグリア芽細胞腫由来の指数関数的に成長するＵ８７ＭＧ細胞を９６ウェルプレートに蒔き、５％ＣＯ２にて終夜３７℃でインキュベートした。実施例１の化合物の１０個の濃度を、４ｍＭストック（１００％ＤＭＳＯ中）から培地中に１：２希釈系列で調製した。希釈系列のそれぞれの等体積を細胞に直接添加した。２時間後に処理を停止した。処理終了時に培地を除き、細胞を氷冷リン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）で１回洗浄した。ベンダーの手順に従って細胞をＰＲＥＦＥＲに固定した後、ＰＢＳ／０．１％ＳＤＳ及びＰＢＳ／０．１％Ｔｒｉｔｏｎ  Ｘ−１００（登録商標）ですすぎ、次いでＳＥＡ  Ｂｌｏｃｋブロッキング緩衝液で終夜インキュベートした。ブロッキングステップに続き、ｐＧＳＫ３ｂ／Ｓｅｒ９に対するウサギ抗体、その後ヤギ抗ウサギＩｇＧと共に、細胞を終夜インキュベートした。ベンダーの手順に従い、ＳｕｐｅｒＳｉｇｎａｌ  ＥＬＩＳＡ  ＦｅｍｔｏによりｐＧＳＫ３ｂを検出した。実施例１の化合物はこのアッセイ中、２．０４±０．６８μＭ（ｎ＝８）のＩＣ５０値でｐＧＳＫ３ｂを阻害した。
【００７７】
（インビボ標的阻害試験）
（単一ＩＶ注射によるインビボ標的阻害）
ヒトグリア芽細胞腫由来の指数関数的に成長するＵ８７ＭＧ細胞をヌードマウスの後方側面に皮下インプラントした。腫瘍サイズが２００−２５０ｍｍ３に達したときに、服用反応試験又は経時試験における単一ＩＶ注射により動物に化合物を投与した。各処置の最後に動物をＣＯ２で窒息させた。腫瘍を外科切除により回収し、すぐに液体窒素凍結し、分析まで−８０℃で保存した。心臓穿刺により心臓から回収した血液から血清を調製し、分析まで−８０℃で保存した。
【００７８】
試料分析：
血清からアセトニトリル／メタノールでＡｋｔ阻害剤を抽出し、内部標準と共にＬＣ／ＭＳ／ＭＳで分析した。Ｐｏｗｅｒｇｅｎ１２５ホモジナイザで２５ｍＭ  Ｔｒｉｓ（ｐＨ７．５）、Ｒｏｃｈｅコンプリートプロテアーゼ阻害剤、及び１ｍＭバナジン酸を含有する溶解バッファ２容積中に腫瘍をホモジナイズし、次いで１８ゲージ針及び２３ゲージ針を逐次通過させた。可溶化液を２００００ｇで３０分間遠心分離した後、上澄画分から可溶性の細胞質抽出物を収集した。細胞質抽出物中のタンパク濃度をＢＣＡキットで計測した。可溶化抽出物中のＰｈｏｓｐｈｏ−ＧＳＫ３ｂ（ｐＧＳＫ３ｂ）をＥＬＩＳＡキットで分析した。
【００７９】
このアッセイ中のグリア芽細胞腫に対して、実施例１の化合物は２５ｍｇ／ｋｇの単一ＩＶ注射を用いて１時間にｐＧＳＫ３ｂを７６％阻害した。
【００８０】
（インビボ腫瘍成長阻害試験）
指数関数的に成長するヒトグリア芽細胞腫由来のＵ８７ＭＧ細胞、又はヒト非小細胞肺癌由来のＨ１１５５細胞を、ヌードマウスの後方側面に皮下インプラントした。腫瘍細胞インプラントの３日後に、顕微手術を実施し、頸静脈を介する連続注入のためのカテーテルをカニューレ処置した。次いで実施例１を、種々の濃度でＤ５Ｗ（水中５％出来ストロース）で処方し、翌日、毎時４０μＬで４日間マウスに注入した。通常は最初のインプラント後の２４日目に試験を終了するまで、腫瘍を週２回測定した。処置群の平均腫瘍体積をビヒクル処置群のもので割ることにより腫瘍成長阻害を計算した。
【００８１】
グリア芽細胞腫に対して、実施例１の化合物は、アッセイ最終時の測定で２７ｍｇ／ｋｇ／日の連続注入により、腫瘍成長を５０％阻害した。
【００８２】
非小細胞肺癌に対して、実施例１の化合物は、アッセイ最終時の測定で２４ｍｇ／ｋｇ／日の連続注入により、腫瘍成長を６３％阻害した。
【００８３】
（医薬組成物試験）
４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物の医薬組成物は、非還元糖及びｐＨ調節剤を含んでなる。可溶化試験ではマンニトールは４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物の溶解度に影響を示さないようだった。しかしながら、半水和物の溶解度はｐＨに依存し、ｐＨ≦３．９１において＞１９ｍｇ／ｍＬであった。同様に沈澱の生じる速度はｐＨ依存性だった。
表１：沈澱速度（ｐｐｔ）への初期溶液ｐＨの影響：全ての溶液はまず１ｍＬ当たり約１５ｍｇの４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物で調製し、室温で保存した。
【００８４】
【表２】
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【００８５】
再溶解した沈澱のＬＣ／ＭＳ分析により、これはアンモニア欠失後の２つの４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール分子（４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールの質量スペクトル（ＬＣＭＳ）ｍ／ｚ＝３２９．１（Ｍ＋Ｈ＋））から形成された“２量体様”分子（質量スペクトル（ＬＣＭＳ）ｍ／ｚ＝６４０．２（Ｍ＋Ｈ＋））であることが示された。加えて、沈澱は、より低溶解度の固体形態への変化が原因であるようには見えなかった。
【手続補正書】
【提出日】平成20年12月25日(2008.12.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノールである化合物もしくはその薬理学的に許容できる塩、又は当該化合物の水和物もしくはその塩。
【請求項２】
４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール二塩酸である、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物である、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
多発性骨髄腫、非小細胞肺癌、グリア芽細胞腫、ニューロブラストーマ、メラノーマ、もしくは前立腺、乳房、子宮、一次性胃、腸管型、子宮内膜、甲状腺、膵、肺又は膀胱の新生物を治療する ための、請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物を含有する医薬組成物。
【請求項５】
Ｃ型肝炎、風疹、ヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）、Ｂ型肝炎、又はヒトサイトメガロウイルス（ＨＣＭＶ）を治療する ための、請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物を含有する医薬組成物。
【請求項６】
請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物、及び薬理学的に許容できる担体、希釈剤又は賦形剤を含んでなる医薬組成物。
【請求項７】
請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物、薬理学的に許容できる担体、希釈剤又は賦形剤を含んでなる凍結乾燥した医薬組成物であって、前記組成物のｐＨは水溶性希釈剤で希釈したときに４．２未満であり２．０より大きい、前記医薬組成物。
【請求項８】
請求項１から３のいずれか１項に記載の化合物、薬理学的に許容できる担体、希釈剤又は賦形剤を溶液中に含んでなる医薬組成物であって、前記組成物のｐＨは４．２未満であり２．０より大きい、前記医薬組成物。
【請求項９】
結晶形態において２θ＝４．９，１４．８，及び１０．２に強度ピークのあるＸ線粉末回折パターンを有する４−［５−（２−アミノ−エタンスルホニル）−イソキノリン−７−イル］−フェノール一塩酸０．５水和物。
【国際調査報告】
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