(57)【要約】  本発明は、治療的に活性である１，３−ジオキソランヌクレオシド類似体の特定の不飽和脂肪酸誘導体及びそれらを含有する医薬処方物に関する。ここでは該誘導体は、”式（Ｉ）の化合物”という。式（Ｉ）の化合物は、がん性疾患の治療で使用されうる。固形腫瘍及び血液がん（白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫など）の両方の治療が挙げられる。  【化１】2009518393.tif 000017
2009518393.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式（Ｉ）：
【化１】
2009518393.tif 000012
（（式中、Ｒ1は、
【化２】
2009518393.tif 000013
であり、Ｒ3は、水素、メチル、トリフルオロメチル、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素からなる群から選択され；
Ｘ及びＹは、ＣＨ又はＮ原子（少なくともＸ又はＹの１つがＮ）でありえ、Ｚ及びＷは、各々独立してＢｒ、Ｃｌ、Ｉ、Ｆ、ＯＲ4又はＮＨＲ4（少なくともＺ及びＷの１つが、ＯＲ4又はＮＨＲ4である。）であり、
Ｒ4は、Ｈ又はＲ5Ｃ（Ｏ）、Ｒ5ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）又はＲ5ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）（式中、Ｒ5は一般式
ＣＨ3−（ＣＨ2）n−（ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2）m−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ2）4−  （ＩＩ）
のＣ7〜23アルケニルであり、式中、ｍは０〜２の数であり、ｎは０〜１０の数である。）である。）、
（Ｒ2は、Ｈ又はＲ5Ｃ（Ｏ）、Ｒ5ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）又はＲ5ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）（式中、Ｒ5は一般式
ＣＨ3−（ＣＨ2）n−（ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2）m−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ2）4−  （ＩＩ）
のＣ7〜23アルケニルであり、式中、ｍは０〜２の数であり、ｎは０〜１０の数である。）である。）（ただし、Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4は、同時に水素でありえない。））を有する化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、式中Ｒ1は、シトシン類似体、
【化３】
2009518393.tif 000014
（（式中、Ｒ2は、Ｈ又はＲ5Ｃ（Ｏ）、Ｒ5ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）又はＲ5ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）であり、Ｒ4は、Ｈ又はＲ5Ｃ（Ｏ）、Ｒ5ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）又はＲ5ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）（式中Ｒ5は、一般式
ＣＨ3−（ＣＨ2）n−（ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2）m−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ2）4−  （ＩＩ）
のＣ7〜23アルケニルであり、式中、ｍは０〜２の数であり、ｎは１〜１０の数である。）である。）（ただし、Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4は、同時に水素でありえない。））である、該化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩。
【請求項３】
【化４】
2009518393.tif 000015
（（式中、Ｒ2は、Ｈ又はＲ5Ｃ（Ｏ）、Ｒ5ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）又はＲ5ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）であり、Ｒ4は、Ｈ又はＲ5Ｃ（Ｏ）、Ｒ5ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）又はＲ5ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）（式中、Ｒ5は、一般式
ＣＨ3−（ＣＨ2）n−（ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2）m−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ2）4−  （ＩＩ）
のＣ7〜23アルケニルであり、式中、ｍは０〜２の数であり、ｎは１〜１０の数である。）である。）（ただしＲ2、Ｒ3、及びＲ4は、同時に水素でありえない。））と定義される、請求項１又は２に記載の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩。
【請求項４】
【化５】
2009518393.tif 000016
又はそれらの医薬的に許容可能な塩である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
請求項１に定義される式（Ｉ）又はそれらの医薬的に許容可能な塩である、がん治療用化合物。
【請求項６】
がん治療用の医薬製剤を調製するための、請求項１で定義される式（Ｉ）の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩の使用。
【請求項７】
固形腫瘍の治療のための請求項６に記載の使用。
【請求項８】
血液がんの治療のための請求項６に記載の使用。
【請求項９】
血液がんは、白血病、リンパ腫及び多発性骨髄腫からなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
がん治療を必要としている被験者における、請求項１に定義される式（Ｉ）の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩を治療上有効な量を該被験者に投与することを含む、がん治療方法。
【請求項１１】
請求項１に定義される式（Ｉ）の化合物、並びに医薬的に許容可能な賦形剤、希釈剤及び／又は担体を含む、医薬製剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、治療的に活性である１，３−ジオキソランヌクレオシド類似体の特定の不飽和脂肪酸誘導体及びそれらを含有する医薬処方物に関する。ここでは、該誘導体を、「式Ｉの化合物」と言う。化合物Ｉは、がん性疾患の治療に使用されうる。固形腫瘍及び血液がん（白血病、リンパ腫、多発性骨髄腫など）の両方の治療が挙げられる。
【背景技術】
【０００２】
このような化合物が抗結核剤として評価されてからは初期段階であるが、ＤＮＡ及びＲＮＡの構成要素として見出された天然ヌクレオシド類の誘導体であるヌクレオシド類似体は、ヒトのがん又はウイルス性疾患の臨床治療において効果的である。上記の化合物は、４０年以上の間、市場に登録され、約３５の製品が、現在日常的に使用されている。以下の図に示された天然ヌクレオシド類は、アデニン及びグアニンにより例示されたプリン類、及びチミン、ウラシル及びシトシンにより例示されたピリミジン類の２種の窒素塩基から、及びリボース又はデオキシリボースモノサッカリドから構成される。
【０００３】
【化１】
2009518393.tif 000003
【０００４】
天然ヌクレオシドは、すべて以下の式Ａに示されたようないわゆるβ−Ｄ配置で存在している。糖環の窒素塩基及びヒドロキシ−メチル側鎖は、両方とも糖環の面の同側（ｃｉｓ）にある。
【０００５】
【化２】
2009518393.tif 000004
【０００６】
仮に２つの基が、両側（ｔｒａｎｓ）にある場合は、α異性体と言う。抗がん又は抗ウイルス活性を有するヌクレオシド誘導体を得るために、窒素塩基及び／又はモノサッカリドのいずれかにおける化学修飾がなされていた。例えば、ハロゲン元素の付加、ＯＨ基を他の官能基との置換、又はリボースからアラビノースへの立体化学変化は、潜在的な治療利益を有する生成物をもたらす。多くの生成物において、モノサッカリド環は維持される一方で、他ではその糖環を側鎖に変化される。ヌクレオシド類似体は、かなり優れた水溶解度を有する小分子である。
【０００７】
世界中のエイズまん延によるヌクレオシド類似体の分野で行われている広範囲な探究及び開発努力が、作用のメカニズムの基本的な知識及び理解、化学修飾などによる、またがん治療分野に関連した活性プロフィールの変更を改善する。
【０００８】
ヌクレオシド類似体を包含する多くの薬剤の一般的な弱点は、問題になっている実際の疾患の治療に対する低い活性及び劣性の特異性である。それらの問題のいくつかは、薬剤物質自体の固有の活性に関連しうるし、特定の耐性メカニズム（患者の固有のあるいは治療中の後天性、例えばがん治療におけるＭＤＲ）に関連しうる問題もある。特定の劣性輸送又は細胞取り込み及び活性化メカニズムに関連しうる問題もある。急速な不活性化及び／又は薬剤の排出に関連しうる問題もある。
【０００９】
ヌクレオチド類似体の薬効は、それらの天然ヌクレオシドに類似する能力にかなりの程度依存し、従ってウイルス及び／又は細胞酵素と相互作用し、核酸の代謝での重要な工程を干渉又は阻害する。それらの抗ウイルス及び抗がん活性を発揮するために、ヌクレオシド類似体は、ウイルス及び細胞キナーゼの活性を介して、それらのモノ−及びジ−リン酸を経て、対応するトリ−リン酸に変換される。一般則として、トリ−リン酸は活性剤であるが、ある製品、例えばゲンシタビンはジーリン酸でさえも有意な臨床効果を与えうる。  
【００１０】
病的がん又はウイルスに感染した細胞又は組織に到達するために、腸内あるいは非口径投与後、ヌクレオシド類似体は有益な薬物動態的特徴を有するべきである。投与された薬物の急速な排出に加えて、多くのヌクレオチド類似体は、血流及び組織中で失活しうる。例えば、シトシン誘導体は、モノ−リン酸レベルでさえもデアミナーゼと呼ばれる種類の酵素の活性を介して急速に脱アミノ化され、不活性なウラシル誘導体になり得る。多くのヌクレオチド類似体の細胞取り込みひいては優れた治療効果は、膜結合型ヌクレオシド輸送タンパク質（濃度及び平衡ヌクレオシド輸送体）に強く依存している。従って、上記の特異的取り込みのメカニズムに依存しない化合物が、追求される。さらに他の活性制限因子（特に抗がん分野内での）は細胞修復メカニズムにある。抗がんヌクレオシド類似体のモノ−リン酸が、細胞ＤＮＡに組み込まれる際に、ｐ５３タンパク質に関連したエキソヌクレアーゼによって細胞ＤＮＡから除去されるべきではない。しかしながら、正常細胞ＤＮＡからのヌクレオチド類似体の除去は、薬剤の副作用を制限するのに役立つ。
【００１１】
長年、多くのヌクレオシド類似体は、いくつか、又は多くの活性制限特性を広範囲で克服するために開発されてきた。例として、アシクロビル（ＡＣＶ）を、高い特異性を有する化合物として立証されている。ＡＣＶ−モノ−リン酸はウィルスキナーゼによって形成されるのみで、これはＡＶＣが非感染細胞では活性化できないことを意味する。この事実にもかかわらず、ＡＣＶは、特別な活性生成物ではない。ヌクレオチド類似体の活性における頻繁な律速段階を回避するために、ヌクレオシド類似体モノ−リン酸、シドフォビルなどの種々のフォスフォン酸塩、又は同等のモノ−リン酸生成物の細胞内生成が、開発されている。体内での経口吸収を促進及び薬物動態を確保するために、ヘプセラなどの特定プロドラッグが作られている。
【００１２】
増進した臨床的有用性を促進するためにヌクレオシド類似体になされた構造変化に加え、活性を改善するために、更なる修飾が行われる。本発明の出願者（米国第６，１５３，５９４明細書、米国特許第６，５４８，４８６明細書、米国特許第６，３１６，４２５明細書、米国特許６，３８４，０１９号明細書）及びいくつかの他のグループは、脂質部分の付加を介してヌクレオシド類似体を修飾している（欧州特許公開第５６２６５号公報、欧州特許公開第３９３９２０号公報、国際特許公開第９９／２６９５８号パンフレット）。これは、例えば、エステル、アミド、炭酸塩、又はカルバミン酸の結合を介して脂肪酸の連結により得られる。より精巧な生成物が作られた。（たとえばヌクレオシド類似物のリン脂質誘導体（Eur J Phaem Sci (２０００) １１ｂ ２巻；p１５〜２７、欧州特許第５４５９６６号公報、カナダ特許公開第２４６８０９９号公報、米国特許第６，３７２，７２５号明細書、米国特許第６，６７０，３４１号明細書））。そのような類似体は、特にＤＮＡ、ＲＮＡ又はレトロウイルスにより引き起こされた感染の治療及び予防に適切な抗ウイルス活性を有していることが開示されている。それらは、悪性腫瘍治療にも適している。ヌクレオシド類似体脂質誘導体は、いくつかの目的を果たしうる。それらは、デアミナーゼに対する基質でないプロドラッグとして考えられうるため、その結果、血流中で輸送中に失活からヌクレオシド類似体を保護している。また脂質誘導体は細胞膜を効率よく通過することもでき、その結果、ヌクレオシド類似体の増進した細胞間の濃度をもたらす。脂質誘導体は、腫瘍ターゲットのために考案された皮膚調剤、経口製剤（米国特許第６，５７６，６３６号明細書、国際特許公開第０１／１８０１３号パンフレット）又はリポソームなどの特定製剤で使用するのにより適してもいる。
【００１３】
これまで、本発明のある発明者は、モノサッカライド環の保存β−Ｄ配置を有するヌクレオシド類似物、又は非環状側鎖有するヌクレオシド類似物に関して、抗ウイルス又は抗がん活性が、ω−９Ｃ１８及びＣ２０モノ−不飽和脂質誘導体の形成を介してより改善されうることを立証した。（Antimicrobial Agents and Chemotherapy, Jan.1999, p.53-61、Cancer Research 59, 2944-2949, June 15, 1999、Gene Therapy (1998) 5, 419-426、Antiviral Research 45 (2000) 157-167、Biochemical Pharmacology 67 (2004) 503-511）。ポリ−不飽和対照物より活性があるばかりでなく、好ましいモノ−不飽和誘導体は、脂質側鎖の酸化に対して結晶性及び化学的により安定であり、それゆえ化学及び医薬品製造の観点から、より有益な化合物である。また、本発明の出願者は、そのω−９Ｃ１８及びＣ２０モノ−不飽和脂肪酸が、非常に多くの非ヌクレオシド生物活性化合物の治療活性の改善に適していることを立証した（欧州特許第０９７７７２５号公報）。
【００１４】
ヌクレオシド類似体の比較的新規なサブグループは、いわゆる１，３−ジオキソラン誘導体である。この種類の化合物において、天然ヌクレオシドの中から見出されたモノサッカリド類似体の５員環は維持されるが、３位のＣＨ2基は、以下の式Ｂで示すようにＯ原子に置換される。
【００１５】
【化３】
2009518393.tif 000005
【００１６】
１，３−ジオキソラン類の中のいくつかの各生成物は、インビトロ及びインビボで有望な抗ウイルス及び抗がん活性を示している。選択された化合物に関して、増進した非ヌクレオシド輸送体依存性細胞取り込み、及び削減された脱アミノ化（不活性化）率の双方が示されている。
【００１７】
上記の１，３−ジオキソラン生成物のような、ポリ−不飽和及びモノー不飽和のω−９  Ｃ１８及びＣ２０脂肪酸エステル及びアミドが知られている（米国特許第５，８１７，６６７号明細書、米国特許公開第２００１／００２００２６号公報及び米国特許公開第２００３／００１３６６０号公報）。これらの参考文献は、上記の脂質誘導体をつくることにより見込める有利性についての一般的な教示及び疾患及びメカニズムモデルにおける同様に関連する活性の特異的な利益双方を提供している。特に、以下の脂肪酸（オレイン酸（ｃｉｓ−９−オクタデセン酸）、エライジン酸（ｔｒａｎｓ−９−オクタデセン酸）、及びリノレン酸（ｃｉｓ−９，１２−オクタデカジエン酸））で作られた（−）−β−Ｌ−ジオキソラン−シチジン（トロキサシタビン）Ｎ4−アミドのインビトロ抗がん活性が、各細胞株で比較されている。３つの生成物は、全く同等の活性を有し、オレインアミド誘導体は、エライジン酸対照物よりわずかによい（２〜５倍）。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１８】
（発明の記載）
現在驚くことに、１，３−ジオキソランヌクレオシド誘導体の活性は、カルボニル炭素原子から数えて６位の少なくとも１つの二重結合を有する特定の不飽和長鎖脂肪酸誘導体構造（通常、Δ6不飽和脂肪酸と認識されている）を介した先行技術化合物と比較すると著しく増大されうることを見出した。１，３−ヌクレオシド類似体のモノ−Δ６−不飽和脂肪酸エステル及びアミド双方を、試験し、いずれも試験し、ここでは先行技術化合物である特定のトロキサシタビンと共に実証して、比較した。詳細には、ペトロセリン酸（ｃｉｓ−６−オクタデセン酸)エステル及びアミド誘導体、ペトロセライジン酸（ｔｒａｎｓ−６−オクタデセン酸）エステル及びアミド誘導体、γ−リノレン酸（ｃｉｓ−６，９，１２−オクタデカトリエン酸）エステル及びアミド誘導体、並びにエライジン酸アミドは、先行技術比較化合物としてテストされる。ペトロセライジン酸誘導体が最も強力であった。それらは、等しく活性で、わずかにガンマーリノレン酸誘導体より良く、先行技術生成物であるトロキサシタビン−Ｎ4−エライジン酸アミドよりも２０倍以上の活性であった。
【００１９】
別の実験において、ペトロセリン酸アミド誘導体のインビトロ抗がん活性が、乳がん株ＭａＴｕ及びそれのアドリアマイシン耐性の副株ＭａＴｕ／Ａｄｒで先行技術の生成物であるトロキサシタビン−Ｎ4−エライジン酸アミドと比較された。意外にも、それらは、ＭａＴｕにおいてトロキサシタビン−ペトロセリン酸アミドの優れた活性が、ＭａＴｕ／Ａｄｒで変化しないことが見出され、一方でトロキサシタビン−Ｎ4−エライジン酸アミドに対して６の耐性因子を観測した。
【００２０】
本発明の化合物は、一般式（Ｉ）によって特徴付けられる：
【００２１】
【化４】
2009518393.tif 000006
式中、１，３−ジオキソラン環の２及び５位の置換基は、５員環の面に対し上側又は下側になる可能性を有する。置換基は、ｃｉｓあるいはｔｒａｎｓ配置になりうる。Ｒ2は、水素原子又は不飽和脂肪酸アシル基Ｒ5Ｃ（Ｏ）、Ｒ5ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）、又はＲ5ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）（式中、Ｒ5は一般式
ＣＨ3−（ＣＨ2）n−（ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2）m−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ2）4−  （ＩＩ）
のＣ7〜23アルケニル残基である（式中、ｍは、０〜２の数であり、ｎは０〜１０の数である）を表わす。Ｒ1は、アルコール又はアミノ基などの官能基を場合により有する任意に置換された窒素塩基であり、前記基は不飽和脂肪酸と任意にアシル化される。
より具体的には、Ｒ1は
【００２２】
【化５】
2009518393.tif 000007
であり、Ｒ3は、水素、メチル、トリフルオロメチル、フッ素、塩素、臭素、ヨウ素から選択され；Ｚ及びＷは、各々独立してＢｒ、Ｃｌ、Ｉ、Ｆ、ＯＲ4又はＮＨＲ4であり、Ｚ及びＷの少なくとも１つは、ＯＲ4又はＮＨＲ4であり、Ｒ4はＨ又はＲ5Ｃ（Ｏ）、Ｒ5ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）、又はＲ5ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）（式中Ｒ5は、一般式ＩＩＣ7〜23アルケニル）である。Ｘ及びＹは、ＣＨ又はＮ原子で、Ｘ又はＹの少なくとも１つはＮでありうる。
【００２３】
本発明において、意図されるΔ6不飽和脂肪酸は、二重結合のｃｉｓ及びｔｒａｎｓ立体化学のどちらもありうることに留意する。
【００２４】
本発明の特に好ましい実施形態として、トロキサシタビン−２’−ヒドロキシメチル−トランス−６−オクタデセン酸エステル、トロキサシタビン−Ｎ4−トランス−６−オクタデセン酸アミド、トロキサシタビン−２’−ヒドロキシメチル−ガンマ−リノレノ酸エステル、及びトロキサシタビン−Ｎ4−シス６−オクタデセン酸アミドが例示されるが、これに制限されない。
【００２５】
【化６】
2009518393.tif 000008
【実施例】
【００２６】
＜実施例１＞  
子宮頸がん細胞株ＨｅＬａ／ｍｕｔを９６−ウェルプレートに１ウェルにつき、５×１０3細胞で接種した。培地は、２ｍＭグルタミン及び１０％ウシ胎仔血清を加えたＲＭＰＩ１６４０である。２４時間後、試験化合物を６つの濃度で添加した。細胞を４日間インキュベートした。ＭＴＴ溶液を各ウェルに添加し、４時間インキュベートした。サンプルを、５４０ｎｍでＥＬＩＳＡリーダーにより読み取った。ＩＣ５０値を増加曲線から決定した。試験化合物は、トロキサシタビンエライジン酸アミド（elaidic-amide）、トロキサシタビンペトロセライドエート（petroselaidoate）、トロキサシタビンペトロセライジン酸アミド（petroselaicic amide）、及びトロキサシタビンγ-リノレノエート（linolenoate）である。驚くことに、トロキサシタビンペトロセライドエート及びトロキサシタビンペトロセライジン酸アミドの活性は、トロキサシタビンエライジン酸アミドより２０倍以上あった。
【００２７】
【表１】
2009518393.tif 000009
【００２８】
＜実施例２＞
ヒト子宮頸がん細胞株ＨｅＬａ／ｍｕｔ及びアドリアマイシン耐性細胞株ＨａＬａ／ｍｕｔ／Ａｄｒを、９６−ウェルプレートに１ウェルにつき５×１０3細胞で接種した。培地は、２ｍＭグルタミン及び１０％ウシ胎仔血清を加えたＲＭＰＩ１６４０である。２４時間後、試験化合物を６つの異なる濃度で細胞に最終量２０μＬで添加した。細胞を、４日間インキュベートした。ＭＴＴ溶液を各ウェルに添加し、４時間インキュベートした。サンプルを、５４０ｎｍでＥＬＩＳＡリーダーにより読み取った。ＩＣ５０値を増加曲線から決定した。耐性因子はＨｅＬａ／ｍｕｔ／ＡｄｒのＩＣ５０対ＨｅＬａ／ｍｕｔのＩＣ５０である。試験化合物は、トロキサシタビンエライジン酸アミド及びトロキサシタビンペトロセリジン酸アミドである。驚くことに、本発明者らは、トロキサシタビンペトロセリジン酸アミドが、アドリアマイシン耐性と無関係であり、トロキサシタビンエライジン酸アミドの耐性因子の５．８と比較して、１．０を有することを見出した。
【００２９】
【表２】
2009518393.tif 000010
【００３０】
＜実施例３＞
Ｕ９３７及びＴＨＰ−１細胞株を９６−ウェルプレートに１ウェルにつき２０，０００細胞で接種した。５０μＬの培地を各ウェルに添加した。同時に、試験化合物を５つの異なる濃度で添加し、４８時間インキュベートした。ＣｅｌｌＴｉｔｅｒ（登録商標）非放射性細胞増殖アッセイ（Promega）は、それらの細胞における細胞毒性試験の研究で使用される。このアッセイは、増殖中の生存細胞数を決定するための比色法又は化学的感受性アッセイである。それは新規テトラゾイル化合物（３−（４，５−ジメチルチアゾール−２−イル）−５−（３−カルボキシメトキシフェニル）−２−（４−スルフォフェニル）−２Ｈ−テトラゾリウム，内塩；ＭＴＳ）及び電子カップリング試薬（フェナジンメトスルフェート；ＰＭＳ）の溶液からなる。ＭＴＳは、細胞中で、組織培養培地に溶け込むフォルマザン産物に生還元される。４９０ｎｍでのフォルマザンの吸光度は、追加工程なしで直接９６ウェルアッセイプレートから測定しうる。４９０ｎｍの吸光度量によって測定されたフォルマザン産物の定量は、培養中の生存細胞数に直接比例する（ＩＣ５０値）。試験化合物は、トロキサシタビン−５’−エライジン酸エステル、α−トロキサシタビンＮ4−エライジン酸アミド、トロキサシタビン−５’−ペトロセライドエート、トロキサシタビン−５’−オレート、トロキサシタビンＮ4−ペトロセライジン酸アミド、トロキサシタビンＣ５’−６，９，１２−リノレノエート、トロキサシタビンＮ4−６，９，１２−リノレン酸アミド、トロキサシタビン−５’−ペトロセリノエート（petroselinoate）、及びトロキサシタビンＮ4−ペトロセリン酸アミド（petroselinic acid amide）である。両方の細胞株において、すべての化合物は細胞に重度の細胞毒性をもたらし、トロキサシタビン−５’−ペトロセリノエート、トロキサシタビンＮ4−６，９，１２−リノレノエート、トロキサシタビンＮ4−ペトロセリン酸アミドは、他の化合物（予想されたようにα−トロキサシタビンＮ4−エライジン酸アミドを除いて、これらも高い活性を生じるが）よりもさらに高い活性であった。
【００３１】
【表３】
2009518393.tif 000011
【００３２】
＜実施例４＞
トロキサシタビンＮ4−エライジン酸アミド（比較化合物）
乾燥ＤＣＭ／ＤＭＦ（５ｍｌ／２ｍｌ）中のトロキサシタビン（１５０ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）、ＴＥＡ（０．１ｍｌ、０．７４ｍｍｏｌ）及びＤＭＡＰ（９０ｍｇ、０．７０ｍｍｏｌ）をＤＣＭ中の塩化エライドイルに添加した。酸塩化物は、トルエン（１０ｍｌ）中のエライジン酸（２０９ｍｇ、０．７４ｍｍｏｌ）、オキサリル酸（０．４ｍｇ、２．９６ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（触媒量）を２時間、環境温度で攪拌し、その後蒸発乾固して調製した。ＮＨ4Ｃｌの飽和水溶液を添加し、室温で２２時間攪拌後、その相を分離した。水相をＤＣＭ（３×）で抽出し、その混合有機抽出物を飽和塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過、及び真空下でエバポレートした。生成物は、シリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（２５：９７５）に続いてＭｅＯＨ／ＤＣＭ（５：９５）で溶出）で精製し、無色結晶の目的とする生成物２０８ｍｇを得た。  
【００３３】
1Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ4）；δ８．５１（１Ｈ，ｄ）、７．４３（１Ｈ，ｄ）、６．２１（１Ｈ，ｍ）、５．３９（２Ｈ，ｍ）、５．１８（ｍ、１Ｈ）、４．４０−４．１２（ｍ，２Ｈ）、４．０１（ｍ，２Ｈ）、２．４４（ｔ，２Ｈ）、２．２−１．９（ｍ，６Ｈ）、１．８−１．１（ｍ，２２Ｈ）、０．９６（ｔ，３Ｈ）
ＭＳ（エレクトロスプレー）；５００［Ｍ＋Ｎａ］+
ＨＰＬＣ：９９．４％
【００３４】
＜実施例５＞
トロキサシタビン−２’−ヒドロキシメチル−ペトロセライドエート
乾燥ＤＭＦ（１０ｍｌ）中のトロキサシタビン（０．５ｇ、２．４ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１．３Ｍ，２．２ｍｌ，２．８ｍｏｌ）におけるＨＣｌ溶液に加えた（これは、ＤＭＦを通過した気泡ＨＣｌガスにより調製された）。数秒後、無色固体が溶液から沈殿した。生じた混合物を３０分間攪拌し、その後、ＤＭＦ（５ｍｌ）中の塩化ペトロセライドイルに添加した。酸塩化物は、ＤＣＭ（３０ｍｌ）中のペトロセリジン酸（１．０ｇ、３．５ｍｍｏｌ）、塩化オキサリル（１．９ｍｌ、１４ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（触媒量）を前もって１時間環境温度で攪拌し、その後蒸発乾固して調製した。室温で６４時間攪拌した後、混合物を水に注ぎ込み、ＤＣＭ（３×）で抽出した。その混合有機抽出物をＮａＨＣＯ3飽和水溶液で洗浄し、塩水に浸し、乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過、及び真空下でエバポレートした。生成物は、シリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（５：９５）で溶出）で精製し、無色結晶の目的とする生成物０．５２ｇ（４６％）を得た。
【００３５】
1Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）；δ７．７４（ｄ，１Ｈ）、６．２７（ｍ，１Ｈ）、５．８７（ｄ，１Ｈ）、５．４０（ｍ，２Ｈ）、５．２２（ｍ，１Ｈ）、４．６−４．２（ｍ，４Ｈ）、２．４２（ｔ，２Ｈ）、２．００（ｍ，４Ｈ）、１．６５（ｍ，２Ｈ）、１．５−１．２（ｍ，２２Ｈ）、０．８７（ｔ，３Ｈ）
ＭＳ（エレクトロスプレー）；４７８［Ｍ＋Ｈ］+、５００［Ｍ＋Ｎａ］+
ＨＰＬＣ：９３．７％
【００３６】
＜実施例６＞
トロキサシタビンＮ4−ペトロセライジン酸アミド
ＤＣＭ（２０ｍｌ）中のペテロセライジン酸（６６２ｍｇ，２．３５ｍｍｏｌ）をＴＥＡ（０．３３ｍｇ，２．３５ｍｍｏｌ）に加え、続いてＴＢＴＵ（７５３ｍｇ，２．３５ｍｍｏｌ）を添加し、室温で４０分間攪拌して、ＤＭＦ（２ｍｌ）中のトロキサシタビン（０．５ｇ，２．３５ｍｍｏｌ）を添加した。２２時間攪拌した後、ＮＨ4Ｃｌ飽和水溶液を添加し、その相を分離した。水相をＤＣＭ（３×）で抽出し、その混合有機抽出物を飽和ＮａＨＣＯ3で洗浄し、塩水に浸し、乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過、及び真空下でエバポレートした。生成物は、シリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（２５：９７５）で溶出）で精製し、無色結晶の目的とする生成物６５０ｍｇ（５８％）を得た。
【００３７】
1Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ； ＣＤＣｌ3）； δ８．５７（ｄ，１Ｈ）、７．４７（ｄ，１Ｈ）、６．２１（ｄ，１Ｈ）、５．４２（ｍ，２Ｈ）、５．１６（ｓ，１Ｈ）、４．４−４．２（ｍ，２Ｈ）、４．０１（ｍ，２Ｈ）、２．４９（ｔ，２Ｈ）、２．０２（ｍ，４Ｈ）、１．７１（ｍ，２Ｈ）、１．５−１．２（ｍ，２２Ｈ）、０．８７（ｔ，３Ｈ）
ＭＳ（エレクトロスプレー）；４７８［Ｍ＋Ｈ］+、５００［Ｍ＋Ｎａ］+
ＨＰＬＣ：９３．８％
【００３８】
＜実施例７＞
トロキサシタビン２’−ヒドロキシメチル−６，９，１２−リノレノエート
乾燥ＤＭＦ（１７ｍｌ）中のトロキサシタビン（０．５０３ｇ、２．３６ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１．３Ｍ，３．０ｍｌ，３．９ｍｍｏｌ）におけるＨＣｌ溶液（これはＤＭＦを通過した気泡ＨＣｌガスにより調製された）に加えた。数秒後、無色固体が、溶液から沈殿した。生じた混合物を３０分間攪拌し、その後、ＤＭＦ（４ｍｌ）中の酸塩化物を添加した。酸塩化物は、ＤＣＭ（５０ｍＬ）中のＧＬＡ（２．１９ｍｇ、７．９ｍｍｏｌ）、塩化オキサリル（２．６６ｍＬ、３１．４ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（触媒量）を前もって３時間気温で攪拌し、その後蒸発乾固して調製した。室温で４８時間攪拌した後、混合物をＮａＨＣＯ3水溶液に注ぎ込み、ＤＣＭ（３×）で抽出した。その混合有機抽出物を塩水で洗浄、乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過、及び真空下でエバポレートした。生成物は、シリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（３：１００）で溶出）で精製し、淡黄色結晶の目的とする生成物０．８５ｇ（５４％）を得た。
【００３９】
1Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）；δ７．７８（ｄ，１Ｈ）、６．３０（ｍ，１Ｈ）、６．８５（ｄ，１Ｈ）、５．６−５．１（ｍ，７Ｈ）、４．６−４．１（ｍ，５Ｈ）、２．９−２．７（ｍ，４Ｈ）、２．４（ｔ，２Ｈ）、２．２−２．０（ｍ，３Ｈ）、１．８−１．２（ｍ，１０Ｈ）、０．９５（ｔ，３Ｈ）
ＭＳ（エレクトロスプレー）；４９６［Ｍ＋Ｎａ］+
ＨＰＬＣ；９３．９％
【００４０】
＜実施例８＞
トロキサシタビンＮ4−ペトロセリジン酸アミド
ＤＣＭ（２０ｍｌ）中のペテロセリジン酸（６６６ｍｇ，２．３６ｍｍｏｌ）をＴＥＡ（０．３３ｍｇ，２．３７ｍｍｏｌ）に添加し、続いてＴＢＴＵ（７５３ｍｇ，２．３５ｍｍｏｌ）に添加し、室温で４０分間攪拌した後、ＤＭＦ（２ｍｌ）中のトロキサシタビン（０．５ｇ，２．３５ｍｍｏｌ）を添加した。２２時間攪拌した後、ＮＨ4Ｃｌ飽和水溶液を添加し、その相を分離した。その水相をＤＣＭ（３×５０ｍＬ）で抽出し、混合有機抽出物を飽和ＮａＨＣＯ3（２５ｍＬ）で洗浄し、塩水（２５ｍＬ）に浸し、乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）、濾過、及び真空下でエバポレートした。生成物は、シリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（２５：９７５−５０：９５０）で溶出）で精製し、無色結晶の目的とする生成物５９９ｍｇ（５３％）を得た。
【００４１】
1Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）；δ８．４８（ｂｓ，１Ｈ)、８．４２（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）、７．３９（ｄ，Ｊ＝７．５Ｈｚ，１Ｈ）、６．１（ｄ，Ｊ＝４．７Ｈｚ，１Ｈ）、５．３１（ｍ，２Ｈ）、５．０９（ｓ，１Ｈ）、４．１８−４．３３（ｍ，２Ｈ）、３．９４（ｄ，Ｊ＝４．８Ｈｚ，２Ｈ）、２．４０（ｔ，Ｊ＝７．３Ｈｚ，２Ｈ）、２．０２（ｍ，４Ｈ）、１．６３（ｍ，２Ｈ）、１．２３−１．４４（ｍ，２１Ｈ）、０．８４（ｔ，Ｊ＝６．０Ｈｚ，３Ｈ）
ＭＳ（エレクトロスプレー，ポジ．）；５００［Ｍ＋Ｎａ］+
ＭＳ（エレクトロスプレー，ネガ．）；４７７［Ｍ＋］+
ＨＰＬＣ；９３％
【００４２】
＜実施例９＞
トロキサシタビン−２’−ヒドロキシメチル−ペトロセリノエート
乾燥ＤＭＦ（７ｍｌ）中のトロキサシタビン（０．５０３ｇ、２．３６ｍｍｏｌ）を、ＤＭＦ（１．３Ｍ，２．２ｍｌ、２．８６ｍｍｏｌ）におけるＨＣｌ溶液（これはＤＭＦを通過した気泡ＨＣｌガスにより調製される）に加えた。数秒後、無色固体が、溶液から沈殿した。生じた混合物を３０分間攪拌し、その後、ＤＭＦ（５ｍｌ）中の塩化ペトロセライドイルを添加した。酸塩化物は、トルエン（３５ｍＬ）中のペトロセリジン酸（１．５９ｍｇ、５．６ｍｍｏｌ）、塩化オキサリル（４．５ｍＬ、３５ｍｍｏｌ）及びＤＭＦ（触媒量）を前もって２時間気温で攪拌して、その後蒸発乾固して調製した。室温で４３時間攪拌した後、混合物を水（５０ｍＬ）に注ぎ込み、ＤＣＭ（３×１００ｍＬ）で抽出した。その混合有機抽出物をＮａＨＣＯ3飽和水溶液（５０ｍＬ）で洗浄、乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）、塩水、濾過、及び真空下でエバポレートした。生成物は、シリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（２５：９７５−５０：９５０）で溶出）で精製し、淡黄色結晶の目的とする生成物０．６８６ｇ（６２％）を得た。
【００４３】
1Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）；δ７．６９（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）、６．２１（ｍ，１Ｈ）、５．７０（ｄ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，１Ｈ）、５．３０（ｍ，２Ｈ）、５．１６（ｍ，１Ｈ）、４．４５（ｄｄ，Ｊ＝３．４Ｈｚ １２．３Ｈｚ，１Ｈ）、４．１６−４．２８（ｍ，３Ｈ）、２．３４（ｔ，Ｊ＝７．４Ｈｚ，２Ｈ）、１．９９（ｍ，４Ｈ）、１．６８（ｍ，２Ｈ）、１．２２−１．３８（ｍ，２２Ｈ）、０．８４（ｔ，Ｊ＝６．４Ｈｚ，３Ｈ）
ＭＳ（エレクトロスプレー，ポジ．）；５００［Ｍ＋Ｎａ］+
ＭＳ（エレクトロスプレー，ネガ．）；４７７［Ｍ＋］+
ＨＰＬＣ；９４％
【００４４】
＜実施例１０＞
トロキサシタビンＮ4−６，９，１２−リノレン酸アミド
ＤＣＭ（４ｍｌ）に溶解させたγ−リノレン酸（ＧＬＡ）（０．３８ｇ，１．８ｍｍｏｌ）をＴＥＡ（２４５ｕｇ，１．８ｍｍｏｌ）及びＴＢＴＵ（０．５７ｇ，１．８ｍｍｏｌ）に添加した。溶液は、室温で３０分間攪拌した後、ＤＣＭ（２ｍｌ）中のトロキサシタビン（０．３８ｇ、１．８ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、室温で７０時間攪拌させ、ＮＨ4Ｃｌ飽和水溶液を添加し、その混合物をＤＣＭ（３×）で抽出した。混合有機抽出物を塩水で洗浄し、乾燥（Ｎａ2ＳＯ4）、塩水、濾過、及び真空下でエバポレートした。目的とする生成物は、シリカゲルでのフラッシュカラムクロマトグラフィー（ＭｅＯＨ／ＤＣＭ（３：２００）で溶出）で単離し、淡黄色結晶の表題化合物０．３０ｇ（３５％）を得た。
【００４５】
1Ｈ−ＮＭＲ（２００ＭＨｚ；ＣＤＣｌ3）;δ８．５（ｄ，１Ｈ）、７．４５（ｄ，１Ｈ）、６．２０（ｄ，１Ｈ）、６．６−６．３（ｍ，６Ｈ）、５．１５（ｓ，１Ｈ）、４．３（ｍ，２Ｈ）、４．０（ｓ，２Ｈ）、２．８（ｍ，５Ｈ）、３．５（ｍ，３Ｈ）、２．１（ｍ，４Ｈ）、１．７（ｍ，２Ｈ）、１．４（ｍ，６Ｈ）、０．９５（ｍ，３Ｈ）
ＭＳ（エレクトロスプレー）；４９６［Ｍ＋Ｎａ］+
ＨＰＬＣ；９７．０％
【００４６】
ＨＰＬＣ−パラメーター：
ＨＰＬＣ−システム：Ａｇｉｌｅｎｔ１１００
カラム：Ｃｒｏｍｏｌｉｔｈ Ｓｐｅｅｄｒｏｄ ＲＰ−Ｃ１８ｅ ５０×４．６ｍｍ
分析時間：１５分
流速：２ｍｌ／分
移動相：Ａ：リン酸緩衝液入り ５％ＭｅＯＨ水溶液（ｐＨ＝６）
Ｂ：リン酸緩衝液入り ＭｅＯＨ（ｐＨ＝６）
温度：４０℃
検出器：ＵＶ ４０〜３００ｎｍ
【手続補正書】
【提出日】平成20年2月6日(2008.2.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００１９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００１９】
別の実験において、ペトロセリン酸アミド誘導体のインビトロ抗がん活性が、子宮頸がん細胞株ＨｅＬａ／ｍｕｔ及びそれのアドリアマイシン耐性の副株ＨｅＬａ／ｍｕｔ／Ａｄｒで先行技術の生成物であるトロキサシタビン−Ｎ4−エライジン酸アミドと比較された。意外にも、それらは、ＨｅＬａ／ｍｕｔ株においてトロキサシタビン−ペトロセリン酸アミドの優れた活性が、ＨｅＬａ／ｍｕｔ／Ａｄｒ副株で変化しないことが見出され、一方でトロキサシタビン−Ｎ4−エライジン酸アミドに対して６の耐性因子を観測した。
【手続補正書】
【提出日】平成20年3月25日(2008.3.25)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下の式（Ｉ）：
【化１】
2009518393.tif 000018
（（式中、Ｒ1は、
【化２】
2009518393.tif 000019
であり、Ｒ3は、水素、メチル、トリフルオロメチル、フッ素、塩素、臭素、又はヨウ素からなる群から選択され；
Ｘ及びＹは、ＣＨ又はＮ原子（少なくともＸ又はＹの１つがＮ）でありえ、Ｚ及びＷは、各々独立してＢｒ、Ｃｌ、Ｉ、Ｆ、ＯＲ4又はＮＨＲ4（少なくともＺ及びＷの１つが、ＯＲ4又はＮＨＲ4である。）であり、
Ｒ4は、Ｈ又はＲ5Ｃ（Ｏ）、Ｒ5ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）又はＲ5ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）（式中、Ｒ5は一般式
ＣＨ3−（ＣＨ2）n−（ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2）m−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ2）4−  （ＩＩ）
のＣ7〜23アルケニルであり、式中、ｍは０〜２の数であり、ｎは０〜１０の数である。）である。）、
（Ｒ2は、Ｈ又はＲ5Ｃ（Ｏ）、Ｒ5ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）又はＲ5ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）（式中、Ｒ5は一般式
ＣＨ3−（ＣＨ2）n−（ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2）m−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ2）4−  （ＩＩ）
のＣ7〜23アルケニルであり、式中、ｍは０〜２の数であり、ｎは０〜１０の数である。）である。）（ただし、Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4は同時に水素でありえず、かつ２−ヒドロキシメチル−４−（チミン−１’−イル）−１，３−ジオキソランは除かれる。））を有する化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩。
【請求項２】
請求項１に記載の化合物であって、式中Ｒ1は、シトシン類似体、
【化３】
2009518393.tif 000020
（（式中、Ｒ2は、Ｈ又はＲ5Ｃ（Ｏ）、Ｒ5ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）又はＲ5ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）であり、Ｒ4は、Ｈ又はＲ5Ｃ（Ｏ）、Ｒ5ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）又はＲ5ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）（式中Ｒ5は、一般式
ＣＨ3−（ＣＨ2）n−（ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2）m−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ2）4−  （ＩＩ）
のＣ7〜23アルケニルであり、式中、ｍは０〜２の数であり、ｎは１〜１０の数である。）である。）（ただし、Ｒ2、Ｒ3、及びＲ4は、同時に水素でありえない。））である、該化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩。
【請求項３】
【化４】
2009518393.tif 000021
（（式中、Ｒ2は、Ｈ又はＲ5Ｃ（Ｏ）、Ｒ5ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）又はＲ5ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）であり、Ｒ4は、Ｈ又はＲ5Ｃ（Ｏ）、Ｒ5ＣＨ2ＯＣ（Ｏ）又はＲ5ＣＨ2ＮＨＣ（Ｏ）（式中、Ｒ5は、一般式
ＣＨ3−（ＣＨ2）n−（ＣＨ＝ＣＨ−ＣＨ2）m−ＣＨ＝ＣＨ−（ＣＨ2）4−  （ＩＩ）
のＣ7〜23アルケニルであり、式中、ｍは０〜２の数であり、ｎは１〜１０の数である。）である。）（ただしＲ2、Ｒ3、及びＲ4は、同時に水素でありえない。））と定義される、請求項１又は２に記載の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩。
【請求項４】
【化５】
2009518393.tif 000022
又はそれらの医薬的に許容可能な塩である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の化合物。
【請求項５】
請求項１に定義される式（Ｉ）又はそれらの医薬的に許容可能な塩である、がん治療用化合物。
【請求項６】
がん治療用の医薬製剤を調製するための、請求項１で定義される式（Ｉ）の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩の使用。
【請求項７】
固形腫瘍の治療のための請求項６に記載の使用。
【請求項８】
血液がんの治療のための請求項６に記載の使用。
【請求項９】
血液がんは、白血病、リンパ腫及び多発性骨髄腫からなる群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
がん治療を必要としている被験者における、請求項１に定義される式（Ｉ）の化合物又はそれらの医薬的に許容可能な塩を治療上有効な量を該被験者に投与することを含む、そがん治療方法。
【請求項１１】
請求項１に定義される式（Ｉ）の化合物、並びに医薬的に許容可能な賦形剤、希釈剤及び／又は担体を含む、医薬製剤。
【国際調査報告】
2009518393.tif 000023
2009518393.tif 000024
2009518393.tif 000025
2009518393.tif 000026
2009518393.tif 000027
2009518393.tif 000028
2009518393.tif 000029
2009518393.tif 000030
2009518393.tif 000031