(57)【要約】  本発明は、ペプチドが結合された安定化ビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩、前記ビタミンＣ誘導体の製造方法、およびこれを含む組成物に関するものである。
2009541306.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
下記の化学式１で表されるビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩。
［化学式１］
【化１】
2009541306.tif 000051
（前記式で、Ｒ１およびＲ２は各々相異して、−ＯＨまたは
【化２】
2009541306.tif 000052
であり、
Ｘは−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）−であり、
【化３】
2009541306.tif 000053
は、グリシン、リジン、ヒスチジン、セリン、プロリン、ヒドロキシプロリン、スレオニン、グルタミン酸、メチオニン、グルタミン、およびアルギニンからなる群の中から選択された同一または相異したアミノ酸残基がアミド結合されたペプチドであり、
Ｒは前記アミノ酸残基の側鎖であり、
ｎは３乃至１０の整数であり、
ｍは２乃至５の整数であり、
Ｗは
【化４】
2009541306.tif 000054
またはグルコースであり、
Ｒ３は−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＮＨＣＨ２Ｃ６Ｈ５、およびＯＨからなる群の中から選択されたものである。）
【請求項２】
前記Ｒ１は
【化５】
2009541306.tif 000055
であり、前記Ｒ２は−ＯＨである、請求項１に記載のビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項３】
前記ｎは３乃至６の整数であり、前記ｍは２である、請求項１に記載のビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項４】
前記
【化６】
2009541306.tif 000056
は、グリシン−ヒスチジン−リジン、グリシン−リジン−ヒスチジン、グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン、リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン、およびグルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニンから選択されるペプチドである、請求項３に記載のビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項５】
前記Ｒ３はジメチルアミンまたは水酸基である、請求項１に記載のビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項６】
前記ビタミンＣ誘導体は、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−（スクシニル−リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−（スクシニル−リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−（スクシニル−グリシン−リジン−ヒスチジン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−（スクシニル−グリシン−リジン−ヒスチジン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−（スクシニル−グリシン−ヒスチジン−リジン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−（スクシニル−グリシン−ヒスチジン−リジン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−（スクシニル−グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−（スクシニル−グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−（スクシニル−グルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニン）アスコルビン酸、および２−ホスホ−５−（スクシニル−グルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニン）アスコルビン酸からなる群の中から選択されたものである、請求項１に記載のビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項７】
下記の化学式２で表されるビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩。
［化学式２］
【化７】
2009541306.tif 000057
（前記式で、Ｒ４およびＲ５は各々相異して、−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｐＣＨ３または
【化８】
2009541306.tif 000058
であり、
Ｘは−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）−であり、
【化９】
2009541306.tif 000059
は、グリシン、リジン、ヒスチジン、セリン、プロリン、ヒドロキシプロリン、スレオニン、グルタミン酸、メチオニン、グルタミン、およびアルギニンからなる群の中から選択された同一または相異したアミノ酸残基がアミド結合されたペプチドであり、
Ｒは前記アミノ酸残基の側鎖であり、
ｎは３乃至１０の整数であり、
ｍは２乃至５の整数であり、
ｐは１０乃至２０の整数であり、
Ｗは
【化１０】
2009541306.tif 000060
またはグルコースであり、
Ｒ３は−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＮＨＣＨ２Ｃ６Ｈ５、およびＯＨからなる群の中から選択されたものである。）
【請求項８】
前記Ｒ４は−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｐＣＨ３であり、前記Ｒ５は
【化１１】
2009541306.tif 000061
である、請求項７に記載のビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項９】
前記ｎは３乃至６の整数であり、前記ｍは２であり、ｐは１４である、請求項７に記載のビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１０】
前記
【化１２】
2009541306.tif 000062
は、グリシン−ヒスチジン−リジン、グリシン−リジン−ヒスチジン、グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン、リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン、およびグルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニンからなる群の中から選択されたペプチドである、請求項７に記載のビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１１】
前記Ｒ３はジメチルアミンおよび水酸基からなる群の中から選択されたものである、請求項７に記載のビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１２】
前記ビタミンＣ誘導体は、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−パルミチル−６−（スクシニル−リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−パルミチル−６−（スクシニル−リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−パルミチル−６−（スクシニル−グリシン−リジン−ヒスチジン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−パルミチル−６−（スクシニル−グリシン−リジン−ヒスチジン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−パルミチル−６−（スクシニル−グリシン−ヒスチジン−リジン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−パルミチル−６−（スクシニル−グリシン−ヒスチジン−リジン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−パルミチル−６−（スクシニル−グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−パルミチル−６−（スクシニル−グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−パルミチル−６−（スクシニル−グルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニン）アスコルビン酸、および２−ホスホ−５−パルミチル−６−（スクシニル−グルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニン）アスコルビン酸からなる群の中から選択されたものである、請求項７に記載のビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩。
【請求項１３】
ビタミンＣの２’位の水酸基にグルコース、リン酸基、または下記の化学式６のリン酸誘導体を導入するステップと、
ビタミンＣの５’位または６’位のうちのいずれか１つに水酸基を生成させ、および他の１つには下記の化学式８のジカルボン酸をエステル結合させるステップと、
グリシン、リジン、ヒスチジン、セリン、プロリン、ヒドロキシプロリン、スレオニン、グルタミン酸、メチオニン、グルタミン、およびアルギニンからなる群の中から選択されたアミノ酸残基３乃至１０個を有するペプチドをアミド結合させるステップと、
を含む、請求項１乃至請求項６のうちのいずれか一項で定義される化学式１で表されるペプチドが結合された安定化ビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩の製造方法。
［化学式１］
【化１３】
2009541306.tif 000063
［化学式６］
【化１４】
2009541306.tif 000064
［化学式８］
ＨＯＯＣ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ
（前記式で、
Ｒ３’はジメチルアミン、ジエチルアミン、プロピルアミン、およびベンジルアミンからなる群の中から選択されたものであり、
Ｙは塩素、臭素、フッ素、およびヨウ素からなる群の中から選択されたものであり、
ｍは２乃至５の整数である。）
【請求項１４】
前記ペプチド内のアミノ酸残基は３乃至６個であり、ｍは２であり、Ｙは塩素である、請求項１３に記載のビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩の製造方法。
【請求項１５】
前記Ｒ３’はジメチルアミンである、請求項１３に記載のビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩の製造方法。
【請求項１６】
ビタミンＣの２’位の水酸基にグルコース、リン酸基、または下記の化学式６のリン酸誘導体を導入するステップと、
ビタミンＣの５’位または６’位のうちのいずれか１つの水酸基に下記の化学式１１の脂肪酸を結合させ、および他の１つの水酸基に下記の化学式８のジカルボン酸をエステル結合させるステップと、
グリシン、リジン、ヒスチジン、セリン、プロリン、ヒドロキシプロリン、スレオニン、グルタミン酸、メチオニン、グルタミン、およびアルギニンからなる群の中から選択されたアミノ酸残基３乃至１０個を有するペプチドとアミド結合させるステップと、
を含む、請求項７項乃至請求項１２のうちのいずれか一項で定義される化学式２で表されるペプチドが結合した、安定化ビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩の製造方法。
[化学式２]
【化１５】
2009541306.tif 000065
［化学式６］
【化１６】
2009541306.tif 000066
［化学式８］
ＨＯＯＣ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ
［化学式１１］
ＣＨ３（ＣＨ２）ｐＣＯＯＨ
（前記式で、
Ｒ３’はジメチルアミン、ジエチルアミン、プロピルアミン、およびベンジルアミンからなる群の中から選択されたものであり、
Ｙは塩素、臭素、フッ素、およびヨウ素からなる群の中から選択されたものであり、
ｍは２乃至５の整数であり、
ｐは１０乃至２０の整数である。）
【請求項１７】
前記ペプチド内のアミノ酸残基は３乃至６個であり、前記ｍは２であり、前記Ｙは塩素である、請求項１６に記載のビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩の製造方法。
【請求項１８】
前記Ｒ３’はジメチルアミンである、請求項１６に記載のビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩の製造方法。
【請求項１９】
下記の化学式９または化学式１２で表される化合物を含む、ペプチドまたはタンパク質のアシル化剤。
［化学式９］
【化１７】
2009541306.tif 000067
［化学式１２］
【化１８】
2009541306.tif 000068
（前記式で、
Ｒ３’はジメチルアミン、ジエチルアミン、プロピルアミン、またはベンジルアミンであり、
Ｒ１’およびＲ２’は各々相異して、−ＯＨまたは−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｒ１’およびＲ２’が同時に−ＯＨまたは−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＯＨではなく、
Ｒ４’およびＲ５’は各々相異して、−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｐＣＨ３または−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｒ４’およびＲ５’が同時に−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｐＣＨ３または−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＯＨではなく、
ｍは２乃至５の整数であり
ｐは１０乃至２０の整数である。）
【請求項２０】
下記の化学式９または化学式１２で表される化合物を使用する、ペプチドまたはタンパク質のアシル化方法。
［化学式９］
【化１９】
2009541306.tif 000069
［化学式１２］
【化２０】
2009541306.tif 000070
（前記式で、
Ｒ３’はジメチルアミン、ジエチルアミン、プロピルアミン、またはベンジルアミンであり、
Ｒ１’およびＲ２’は各々相異して、−ＯＨまたは−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｒ１’およびＲ２’が同時に−ＯＨまたは−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＯＨではなく、
Ｒ４’およびＲ５’は各々相異して、−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｐＣＨ３または−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｒ４’およびＲ５’が同時に−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｐＣＨ３または−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＯＨではなく、
ｍは２乃至５の整数であり
ｐは１０乃至２０の整数である。）
【請求項２１】
請求項１乃至請求項１２のうちのいずれか一項で定義されるビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩からなる群の中から選択された１種以上を有効成分として含む、皮膚老化防止用組成物。
【請求項２２】
請求項１乃至請求項１２のうちのいずれか一項で定義されるビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩からなる群の中から選択された１種以上を有効成分として含む、皮膚シワ改善用組成物。
【請求項２３】
請求項１乃至請求項１２のうちのいずれか一項で定義されるビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩からなる群の中から選択された１種以上を有効成分として含む、皮膚美白用組成物。
【請求項２４】
ビタミンＣの２’位の水酸基にグルコース、リン酸基、または下記の化学式６のリン酸誘導体を導入するステップと、
下記の化学式８のジカルボン酸を介して、ビタミンＣの５’位または６’位のうちのいずれか１つにグリシン、リジン、ヒスチジン、セリン、プロリン、ヒドロキシプロリン、スレオニン、グルタミン酸、メチオニン、グルタミン、およびアルギニンからなる群の中から選択されたアミノ酸残基３乃至１０個を有するペプチド分子を結合させる段階を含む、ビタミンＣの安定化方法。
［化学式６］
【化２１】
2009541306.tif 000071
［化学式８］
ＨＯＯＣ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ
（前記式で、Ｙは、塩素、臭素、フッ素、およびヨードからなる群の中から選択されたものであり、
ｍは２乃至５の整数である。）
【請求項２５】
前記ペプチド分子は、グリシン−ヒスチジン−リジン、グリシン−リジン−ヒスチジン、グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン、リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン、およびグルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニンからなる群の中から選択されたものである、請求項２４に記載のビタミンＣの安定化方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、２００６年６月２２日付けで出願された大韓民国特許出願第２００６−００５６５８０号の優先権を主張し、前記出願明細書は、本明細書に参照事項として含まれる。
【背景技術】
【０００２】
本発明は、ペプチド分子を有する安定化ビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩、ビタミンＣ誘導体の製造方法、およびこれを含む組成物に関する。
【０００３】
皮膚は、保護機能、障壁機能、温度調節機能、排泄機能、呼吸機能などを行う器官であって、表皮、真皮、下皮からなる。表皮は、最も薄い層で、ケラチン生成細胞およびメラニン細胞からなる。真皮は、皮膚の約９５％を占めて、皮膚の保湿および保護をする層である。真皮は、皮膚の弾力（シワ）に重要な役割を果たすタンパク質繊維であるコラーゲン、エラスチンを含む。真皮は、血管、神経、アレルギー反応に関与する肥満細胞およびＮａ−ＰＣＡまたはヒアルロン酸などの天然保湿因子も含んでいる。下皮は、表皮および真皮への栄養の供給、体型の決定、体温の維持、外部的衝撃の吸収、および下皮下の細胞の保護などの役割を果たす。
【０００４】
皮膚は年をとるのに伴って、内因性または外因性の原因によって皮膚機能が急激に低下する。老化の進行に伴い、皮膚の構成成分である表皮、真皮、および下皮の厚さが薄くなり、ならびにコラーゲンおよびエラスチンが薄くなって弾力が低下して、シワができる。また、皮膚の障壁機能を担う脂質障壁（Ｌｉｐｉｄ ｂａｒｒｉｅｒ）の脂質組成および含有量が変化して、皮膚の水分含有量が低下して、皮膚が乾燥するなどの生理的変化が結果として生じる。また、しみ、そばかす、色素沈着、その他の多様な皮膚病変が誘発される。
【０００５】
このような皮膚の老化による問題を解決するために、皮膚改善効果を有する多様な有効成分およびこれを含む組成物が研究されている。
【０００６】
ビタミンＣ、ビタミンＥ、ベータカロチンなどの抗酸化ビタミンは、皮膚の老化を抑制するのに使用されている。このうちのビタミンＣは、皮膚のシワの改善、しみ／そばかす／肝斑などの色素沈着改善、紫外線（ＵＶ）遮断による免疫体系強化、坑酸化活性、コラーゲンの形成促進などに効果があることが知られている。ビタミンＣの体内での機能は、下記の通りである。
【０００７】
ビタミンＣは、紫外線、特にＵＶ Ａに対する遮断機能が優れている（Ｄａｒｒ，Ｄ．ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ａｃｔａ Ｄｅｒｍ．Ｖｅｎｅｒｅｏｌ．（Ｓｔｒｃｋｈ）．７６：２６４−２６８；Ｂｌａｃｋ，Ｈ．Ｓ．ｅｔａｌ．，１９７５，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．６５：４１２−４１４）。また、ビタミンＣは、ＵＶ Ｂによって誘発される皮膚の損傷を保護する役割を果たす。ＵＶ Ｂの照射前にビタミンＣを豚および人間の皮膚に塗布して、ここにＵＶ Ｂを照射した場合、紅斑および日焼け現象が防止される（Ｄａｒｒ，Ｄ．ｅｔａｌ．，１９９２，Ｂｒｉｔ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｉｌ．１２７：２４７−２５３；Ｍｕｒｒｙ，Ｊ．ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．９６：５８７）。
【０００８】
ビタミンＣは、皮膚、血液、およびその他の組織で、化学的汚染、喫煙、特に紫外線（ＵＶ）によって産生される活性酸素種（ＲＯＳ）を中和させる強力な生体抗酸化剤として作用する。このような作用は、ビタミンＣが２つの電子を受け入れてデヒドロ−Ｌ−アスコルビン酸に容易に酸化する構造であることに起因するものである。ビタミンＣは、皮膚の非酵素的抗酸化剤防御システムの重要な要素である。ビタミンＣが高濃度で存在する場合に、一重項酸素（ｓｉｎｇｌｅｔ ｏｘｙｇｅｎ）、スーパーオキシド陰イオン（ｓｕｐｅｒｏｘｉｄｅ ａｎｉｏｎ）、ヒドロキシラジカル（ｈｙｄｒｏｘｙ ｒａｄｉｃａｌ）などのＲＯＳがタンパク質、核酸、細胞膜脂質または他の体成分を酸化または変成させる前に、これらを中和させる役割を果たす（Ｂｕｅｔｔｎｅｒ，Ｇ．Ｒ．ｅｔａｌ．１９９６．Ｃａｄｅｎａｓ，Ｅ．，Ｐａｃｋｅｒ，Ｌ．，ｅｄｓ．Ｈａｎｄｂｏｏｋ ｏｆ ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔｓ．ｐｐ．９１−１１５）。
【０００９】
ビタミンＣを角質層に経皮的に供給した場合、ビタミンＣによってコラーゲンの合成が促進されるため、皮膚光沢、皮膚色、シワおよび皮膚の弾力を改善する（米国特許第４，９８３，３８２号）。コラーゲンポリペプチドの１０％程度を占めるヒドロキシプロリンは、プロリンヒドロキシラーゼ（ｐｒｏｌｉｎｅ ｈｙｄｒｏｘｙｌａｓｅ）によって生合成されるが、この酵素の補助因子（ｃｏｆａｃｔｏｒ）としてビタミンＣが作用する（Ｔｏｍｉｔａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．７５（５）：３７９−３８２）。つまり、ビタミンＣは、プロリンヒドロキシラーゼの活性を促進して、ヒドロキシプロリンの合成を促進することによって、三重螺旋構造のコラーゲンの生合成を促進して、皮膚のシワの減少および皮膚状態を改善する。
【００１０】
ビタミンＣはメラニンの形成に重要なチロシナーゼ（ｔｙｒｏｓｉｎａｓｅ）の活性およびメラニンの形成を抑制するため、優れた美白効果を提供する（Ｔｏｍｉｔａ，Ｙ．ｅｔ ａｌ．，１９８０，Ｊ．Ｉｎｖｓｅｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．７５（５）；３７９−３８２）。
【００１１】
また、ビタミンＣは、アレルギー反応物質であるヒスタミンの細胞膜での放出を抑制することにより免疫系を増強する。ビタミンＣは、抗原に曝露されたネズミにおいて、紫外線誘導された免疫抑制および耐性から保護されることが証明された（Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｔ．ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１０９：２０−２４）。また、ビタミンＣは、白血球の食菌作用を助けて、感染が展開される間の白血球の移動を促進して感染を抑制し、ウイルス増殖抑制物質であるインターフェロンの生合成を増加させる作用をし、多様な感染性疾患に対する生体抵抗性を上昇させる。さらに、ビタミンＣは、生体内の葉酸の代謝およびアミノ酸の代謝過程にも関与する。
【００１２】
ビタミンＣは、Ｃ６Ｈ８Ｏ６の化学式を有する水溶性の物質である。ビタミンＣは、Ｃ−２、Ｃ−３、Ｃ−５、Ｃ−位の炭素の水酸基によって親水性を示す。水などの中性のｐＨでは、特にＣ−２位およびＣ−３位の水酸基が陰の電荷を有するようになるため、水溶液に迅速および完全に溶解するようになる。しかしながら、水溶液でない皮膚などの有機的な環境では、ビタミンＣは完全に溶解しない。また、ビタミンＣは、例えばグリセリン、プロピレングリコール、多様な脂肪などの外用剤に通常使用される有機溶媒に溶解されにくく、ビタミンＣの経皮到達は制限される。つまり、非イオン化状態では、ビタミンＣが皮膚障壁を容易に通過して吸収されるためにはｐＨは４．２以下に維持されていなければならない。
【００１３】
ビタミンＣの皮膚蓄積量は、経皮（外部）投与した場合、経口投与より２０倍乃至４０倍高いことが知られている。紫外線遮断、坑酸化、コラーゲン産生促進によるシワの改善、しみ／そばかす／肝斑などの色素沈着の改善、免疫系増強のための外用剤は、有効物質が皮膚の角質層を通過して表皮にある細胞まで到達する必要があるので、有効物質の経皮吸収率が高くなければならない。一般に、ある物質の皮膚浸透率は、その物質の親油性と関係がある。皮膚の親油性と類似した物質は、皮膚への分配係数が大きくなって、容易に経皮吸収されること知られている。これに対して、ビタミンＣは、親水性が高く、皮膚への分配係数が小さいため、容易に経皮吸収されない。
【００１４】
ビタミンＣの安全性、安定性、経皮吸収を改善するための多くの研究が進められてきた。
【００１５】
いくつかのビタミンＣ誘導体型が示唆されている。第１の誘導体型は、リン酸化されたアスコルビン酸またはリン酸化されたアスコルビン酸の金属塩である。この誘導体は、アスコルビン酸のＣ−２位およびＣ−３位の水酸基をリン酸基とエステル結合で連結して、各々アスコルビル−２−リン酸またはアスコルビル−３−リン酸を形成することで得られる。他の誘導体に比べて、これらの誘導体は人体に使用することができるＬ−アスコルビン酸に容易に転換される。しかしながら、これらは陰の電荷を有しているため、容易に経皮吸収されない。
【００１６】
第２の誘導体型は、脂肪酸が結合したアスコルビン酸である。米国特許第５，４０９，６９３号は、例えばアスコルビルパルミテート、アスコルビルラウレート、アスコルビルミリステート、アスコルビルステアレートなどのアスコルビン酸の脂溶性脂肪酸エステル形態のビタミンＣ誘導体を開示している。このうち、アスコルビル−６−パルミテートが最も幅広く使用される。アスコルビル−６−パルミテートは、皮膚に容易に吸収されるが、Ｌ−アスコルビン酸への転換が困難である。アスコルビル−６−パルミテートは、ネズミの皮膚において光酸化から保護するのに失敗したという報告がされている（Ｂｉｓｓｅｔｔ，Ｄ．ｅｔａｌ．，１９９０，Ｐｈｏｔｏｄｅｒｍａｔｏｌ Ｐｈｏｔｏｉｍｍｕｎｏｌ Ｐｈｏｔｏｍｅｄ ７：５６−６２）。１０ｗｔ％のアスコルビル−６−パルミテートを含む血清で皮膚を処理した場合、アスコルビン酸の顕著な増加をもたらさなかったという報告がされている（Ｐｉｎｎｅｌｌ，Ｓ．Ｒ．ｅｔａｌ．，２００１．Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｉｃ Ｓｕｒｇｅｒｙ．２７（２）：１３７−１４２）。
【００１７】
第３の誘導体型は、例えばグリコシル化、マンノシル化、プロクトシル化、フコシル化、ガラクトシル化、Ｎ−アセチルグリコースアミン化、Ｎ−アセチルムラミン化された誘導体などの、単糖を有するアスコルビン酸である。しかしながら、これら誘導体の生体内での生理活性に対する具体的で正確な評価は、まだ行われていない。
【００１８】
第４の誘導体型は、コラーゲン産生ペプチドが結合したアスコルビン酸である。韓国特許第０４５９６７９号は、アスコルビン酸のＣ−５位またはＣ−６位置の水酸基にスクシノイル基をエステル結合で連結して、コラーゲン産生ペプチドとイミド結合して得られた誘導体を開示している。このアスコルビン酸誘導体は、アスコルビン酸より優れた性能を示すが、安定性がない。
【００１９】
コラーゲンは、皮膚、血管、内臓、骨などで非常に多く見つけられる。コラーゲンは皮膚中の真皮の７０％はを占める。筋肉を囲んでいる筋膜はコラーゲンで構成されている。生体タンパク質総重量の３０％を占めるコラーゲンは、皮膚の機械的堅固性の提供、結合組織の抵抗力および組織の結合力の付与、細胞接着の支持、ならびに成長または傷の治癒時の細胞分裂および分化誘導をする。コラーゲンは、線維芽細胞で生合成される。コラーゲンの量は自然老化および光老化によって減少する。コラーゲンの量は、２０才から８０才に達する間に６５％が減少することが知られている（ＳｈｕｓｔｅｒＳ．，１９７５，Ｂｒｉｔｉｓｈ ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｄｅｔｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，９３（６）：６３９−６４３）。
【００２０】
生体内のコラーゲンの合成が活発になると、真皮基質成分が増加して、傷の治癒、弾力増加、シワ改善などの効果を期待することができることが明らかにされたことから、コラーゲンは化粧品、食品、医薬品などに使用されている。コラーゲン中に存在するこのような１０個以下のオリゴペプチドは最小の活性単位である。これらは、メッセンジャー、刺激剤、神経伝達剤としての役割、および成長調節、授乳、免疫、消化、血圧、治癒などの生理代謝作用とも関連がある。特に、皮膚再生効果が明らかになったペプチドは、フランス特許第２，６６８，２６５号、米国特許第４，６６５，０５４号、国際公開ＷＯ９１／３４８８、国際公開ＷＯ９１／７４３１などに開示されている。しかし、このようなペプチドの場合、沈澱が形成されて、製品の安定度が大きく低下する。
【００２１】
したがって、安全性および安定性が改善されて、皮膚浸透力が優れているビタミンＣ誘導体を得るための技術開発が必要とされている。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００２２】
このような必要を満たすため、本発明は、ビタミンＣにリン酸誘導体およびペプチド、特にコラーゲン産生ペプチドを導入して、、改善された安全性、安定性、および優れた皮膚浸透力を有するビタミンＣ誘導体を提供することを目的とする。
【課題を解決するための手段】
【００２３】
本発明のより完全な評価およびそれに伴う多くの利点は、以下の詳細な説明を参考にして、容易に明らかになるのと同時に、よりよく理解される。
【図面の簡単な説明】
【００２４】
【図１】本発明の化合物、ビタミンＣ、アスコビルリン酸マグネシウム、スクシノイルアスコビルペンタペプチド、およびパルミトイルペンタペプチドを使用して、コラーゲン生合成能を比較した結果を示したものである。
【図２】本発明の化合物、ビタミンＣ、アスコビルリン酸マグネシウム、スクシノイルアスコビルペンタペプチド、およびパルミトイルペンタペプチドを使用して、細胞毒性を比較した結果を示したものである。
【発明を実施するための形態】
【００２５】
本発明は、ペプチドが結合された安定化ビタミンＣ誘導体またはその薬学的に許容可能な塩、ビタミンＣ誘導体の製造方法およびこれを含む組成物に関するものである。
【００２６】
本発明は、ビタミンＣのＣ−２位にリン酸基誘導体が、およびＣ−５位またはＣ−６位にペプチド、好ましくはコラーゲン産生ペプチドが導入された、安定化ビタミンＣ誘導体およびその薬学的に許容可能な塩に関する。
【００２７】
１つの態様において、本発明は、下記の化学式１で表されるペプチドを含む安定化ビタミンＣ誘導体、およびその薬学的に許容可能な塩に関するものである。
【００２８】
［化学式１］
【化１】
2009541306.tif 000003
前記式で、Ｒ１およびＲ２は各々相異して、−ＯＨまたは
【化２】
2009541306.tif 000004
であり、Ｘは−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）−であり、
【化３】
2009541306.tif 000005
は、グリシン、リジン、ヒスチジン、セリン、プロリン、ヒドロキシプロリン、スレオニン、アルギニン、グルタミン、メチオニン、およびグルタミン酸からなる群から選択された、同一または相異したアミノ酸残基がアミド結合されたペプチドであり、
Ｒは前記アミノ酸残基の側鎖であり、
ｎは３乃至１０の整数であり、
ｍは２乃至５の整数であり、
Ｗは、
【化４】
2009541306.tif 000006
またはグルコースであり、
Ｒ３は−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＮＨＣＨ２Ｃ６Ｈ５、およびＯＨからなる群の中から選択されたものである。
【００２９】
本発明の特定の態様において、前記化学式１で表される化合物は、下記の化学式１ａ、１ｂ、１ｃ、または１ｄで表される化合物である。
［化学式１ａ］
【化５】
2009541306.tif 000007
［化学式１ｂ］
【化６】
2009541306.tif 000008
［化学式１ｃ］
【化７】
2009541306.tif 000009
［化学式１ｄ］
【化８】
2009541306.tif 000010
【００３０】
本発明の好ましい形態において、前記化学式１のうちの
【化９】
2009541306.tif 000011
は、グリシン、リジン、ヒスチジン、セリン、プロリン、ヒドロキシプロリン、スレオニン、アルギニン、グルタミン、メチオニン、およびグルタミン酸からなる群の中から選択された同一または相異したアミノ酸残基がアミド結合されたペプチドであり、
Ｒは前記アミノ酸残基の側鎖であり、
ｎは３乃至７の整数である。
【００３１】
より好ましい態様において、前記ペプチド
【化１０】
2009541306.tif 000012
は、ｎが３乃至６の整数のトリ、テトラまたはヘプタペプチドであり、特にペプチドは、グリシン−リジン−ヒスチジン、グリシン−ヒスチジン−リジン、グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン、リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン、およびグルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニンからなる群から選択されたペプチドである。
【００３２】
Ｘは−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）−であり、ｍは２乃至４の整数、より好ましくは２または３である。
【００３３】
特に好ましくは、前記Ｘは、ｍが２であるスクシニル基である。
【００３４】
また他の態様において、本発明は、下記の化学式２で表されるペプチドを有する安定化ビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩に関するものである。
［化学式２］
【化１１】
2009541306.tif 000013
前記式で、Ｒ４およびＲ５は各々相異して、−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｐＣＨ３または
【化１２】
2009541306.tif 000014
であり、Ｘは−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）−であり、
【化１３】
2009541306.tif 000015
は、グリシン、リジン、ヒスチジン、セリン、プロリン、ヒドロキシプロリン、スレオニン、アルギニン、グルタミン、メチオニン、およびグルタミン酸からなる群から選択された、同一または相異したアミノ酸残基がアミド結合されたペプチドであり、
Ｒは前記アミノ酸残基の側鎖であり、
ｎは３乃至１０の整数であり、
ｍは２乃至５の整数であり、
ｐは１０乃至２０の整数であり、
Ｗは、
【化１４】
2009541306.tif 000016
またはグルコースであり、
Ｒ３は−Ｎ（ＣＨ３）２、−Ｎ（ＣＨ２ＣＨ３）２、−ＮＨＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３、−ＮＨＣＨ２Ｃ６Ｈ５、およびＯＨからなる群の中から選択されたものである。
【００３５】
本発明の具体的な例において、化学式２で表される化合物は、下記の化学式２ａ、２ｂ、２ｃ、または２ｄで表される化合物である。
［化学式２ａ］
【化１５】
2009541306.tif 000017
［化学式２ｂ］
【化１６】
2009541306.tif 000018
［化学式２ｃ］
【化１７】
2009541306.tif 000019
［化学式２ｄ］
【化１８】
2009541306.tif 000020
【００３６】
発明の好ましい態様において、前記化学式２の
【化１９】
2009541306.tif 000021
は、グリシン、リジン、ヒスチジン、セリン、プロリン、ヒドロキシプロリン、スレオニン、アルギニン、グルタミン、メチオニン、およびグルタミン酸からなる群から選択された、同一または相異したアミノ酸残基がアミド結合されたペプチドであり、
Ｒは前記アミノ酸残基の側鎖であり、
ｎは３乃至７の整数である。
【００３７】
より好ましくは、前記ペプチド
【化２１】
2009541306.tif 000022
は、ｎが３乃至６の整数であるトリ、テトラ、ペンタまたはヘプタペプチドであり、特に好ましくは、グリシン−リジン−ヒスチジン、グリシン−ヒスチジン−リジン、グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン、リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン、およびグルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニンからなる群の中から選択されたものである。
【００３８】
また、化学式２のＸは−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）−であり、ｍは２乃至４、より好ましくは２または３の整数である。
【００３９】
特に好ましくは、前記Ｘは、ｍが２のスクシニル基である。
【００４０】
また、前記−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｐＣＨ３は、ｐが１０乃至２０の整数、より好ましくは１２乃至１６の整数の脂肪酸であり、特に好ましくは、ｐが１４のパルミテートである。
【００４１】
本発明の好ましい具体例において、前記化学式１および化学式２で表される安定化ビタミンＣ誘導体は、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−（スクシニル−リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−６−（スクシニル−リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−（スクシニル−リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン）アスコルビン酸、２−ホスホ−６−（スクシニル−リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−（スクシニル−グリシン−リジン−ヒスチジン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−６−（スクシニル−グリシン−リジン−ヒスチジン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−（スクシニル−グリシン−リジン−ヒスチジン）アスコルビン酸、２−ホスホ−６−（スクシニル−グリシン−リジン−ヒスチジン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−（スクシニル−グリシン−ヒスチジン−リジン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−６−（スクシニル−グリシン−ヒスチジン−リジン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−（スクシニル−グリシン−ヒスチジン−リジン）アスコルビン酸、２−ホスホ−６−（スクシニル−グリシン−ヒスチジン−リジン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−（スクシニル−グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−６−（スクシニル−グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−（スクシニル−グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン）アスコルビン酸、２−ホスホ−６−（スクシニル−グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−（スクシニル−グルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−６−（スクシニル−グルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−（スクシニル−グルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニン）アスコルビン酸、２−ホスホ−６−（スクシニル−グルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−（スクシニル−リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン）−６−パルミチルアスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−パルミチル−６−（スクシニル−リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−（スクシニル−リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン）−６−パルミチルアスコルビン酸、２−ホスホ−５−パルミチル−６−（スクシニル−リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−（スクシニル−グリシン−リジン−ヒスチジン）−６−パルミチルアスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−パルミチル−６−（スクシニル−グリシン−リジン−ヒスチジン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−（スクシニル−グリシン−リジン−ヒスチジン）−６−パルミチルアスコルビン酸、２−ホスホ−５−パルミチル−６−（スクシニル−グリシン−リジン−ヒスチジン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−（スクシニル−グリシン−ヒスチジン−リジン）−６−パルミチルアスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−パルミチル−６−（スクシニル−グリシン−ヒスチジン−リジン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−（スクシニル−グリシン−ヒスチジン−リジン）−６−パルミチルアスコルビン酸、２−ホスホ−５−パルミチル−６−（スクシニル−グリシン−ヒスチジン−リジン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−（スクシニル−グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン）−６−パルミチルアスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−パルミチル−６−（スクシニル−グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−（スクシニル−グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン）−６−パルミチルアスコルビン酸、２−ホスホ−５−パルミチル−６−（スクシニル−グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−（スクシニル−グルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニン）−６−パルミチルアスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−パルミチル−６−（スクシニル−グルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−（スクシニル−グルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニン）−６−パルミチルアスコルビン酸、２−ホスホ−５−パルミチル−６−（スクシニル−グルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニン）アスコルビン酸、およびこれらの薬学的に許容可能な塩からなる群の中から選択されたものである。
【００４２】
本発明の最も好ましい具体的な例において、前記化学式１および化学式２で表される安定化ビタミンＣ誘導体は、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−（スクシニル−リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−（スクシニル−リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−（スクシニル−グリシン−リジン−ヒスチジン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−（スクシニル−グリシン−リジン−ヒスチジン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−（スクシニル−グリシン−ヒスチジン−リジン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−（スクシニル−グリシン−ヒスチジン−リジン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−（スクシニル−グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−（スクシニル−グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−（スクシニル−グルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−（スクシニル−グルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−パルミチル−６−（スクシニル−リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−パルミチル−６−（スクシニル−リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−パルミチル−６−（スクシニル−グリシン−リジン−ヒスチジン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−パルミチル−６−（スクシニル−グリシン−リジン−ヒスチジン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−パルミチル−６−（スクシニル−グリシン−ヒスチジン−リジン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−パルミチル−６−（スクシニル−グリシン−ヒスチジン−リジン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−パルミチル−６−（スクシニル−グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−パルミチル−６−（スクシニル−グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン）アスコルビン酸、２−テトラメチルホスホロジアミディック−５−パルミチル−６−（スクシニル−グルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニン）アスコルビン酸、２−ホスホ−５−パルミチル−６−（スクシニル−グルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニン）アスコルビン酸、およびこれらの薬学的に許容可能な塩からなる群の中から選択されたものである。
【００４３】
本明細書において、「天然アミノ酸」は、アラニン、バリン、ロイシン、イソロイシン、プロリン、フェニルアラニン、トリプトファン、メチオニン、グリシン、セリン、スレオニン、システイン、チロシン、アスパラギン、グルタミン、リジン、アルギニン、ヒスチジン、アスパラギン酸、およびグルタミン酸からなる群の中から選択されたα−アミノ酸を意味する。また、「非天然アミノ酸」は、核酸コドンによって暗号化されないアミノ酸を意味する。その例としては、前記の天然α−アミノ酸のＤ−異性体、Ａｉｂ（アミノブチル酸）、ｂＡｉｂ（３−アミノイソブチル酸）、Ｎｖａ（ノルバリン）、β−Ａｌａ、Ａａｄ（２−アミノアジピン酸）、ｂＡａｄ（３−アミノアジピン酸）、Ａｂｕ（２−アミノブチル酸）、Ｇａｂａ（γ−アミノブチル酸）、Ａｃｐ（６−アミノカプロ酸）、Ｄｂｕ（２，４−ジアミノブチル酸）、α−アミノピメリン酸、ＴＭＳＡ（トリメチルシリル−Ａｌａ）、ａｌｌｅ（アロイソロイシン）、Ｎｌｅ（ノルロイシン）、３級−Ｌｅｕ、Ｃｉｔ（シトルリン）、Ｏｒｎ、Ｄｐｍ（２，２´−ジアミノピメリン酸）、Ｄｐｒ（２，３−ジアミノプロピオン酸）、α−またはβ−Ｎａｌ、Ｃｈａ（シクロヘキシル−Ａｌａ）、ヒドロキシプロリン、Ｓａｒ（サルコシン）など、環状アミノ酸、例えばＭｅＧｌｙ（Ｎα−メチルグリシン）、ＥｔＧｌｙ（Ｎ α−エチルグリシン）、およびＥｔＡｓｎ（Ｎα−エチルアスパラギン）などのＮα−アルキル化アミノ酸、、およびα−炭素が２個の側鎖置換体を有するアミノ酸などが含まれる。
【００４４】
また、本明細書において、「ペプチド」とは、アミド結合（またはペプチド結合）で連結された１０個以下、好ましくは３乃至１０個のアミノ酸残基で構成されるポリマーを意味する。前記ペプチドは、生体内のタンパク質を抽出してタンパク質分解酵素で処理して低分子量化させたもの、または遺伝子組換えおよびタンパク質発現システムを利用して合成されたものである。好ましくは、ペプチドは、ペプチド合成器などによって試験管内で合成されたものである。ペプチドは、特定の原子または原子団が水酸基などに置換された誘導体である。以下、ペプチドのＣＯＯＨ末端をＣ末端、ＮＨ２末端をＮ末端とする。
【００４５】
本発明において、ペプチドは、特にコラーゲン産生ペプチドを含む。前記「コラーゲン産生ペプチド」とは、コラーゲンタンパク質の断片であって、コラーゲンの合成を促進および、コラーゲンタンパク質の構成要素として使用されるペプチドを意味する。例えば、本発明の実施例で使用可能なグリシン−リジン−ヒスチジン、グリシン−ヒスチジン−リジン、グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン、リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン、およびグルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニンからなる群の中から選択されたトリ、テトラ、ペンタ、およびヘプタペプチドは、真皮の内部でコラーゲンおよびグリコサミノグリカンの合成を促進させて、水分保有効率を高め、真皮の弾力を増加させることによって、シワを改善する。特に、ペンタペプチドであるリジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリンは、皮膚結合組織、シワの形成、および保湿と関連して重要なコラーゲンタイプＩのＣ末端断片である。このペプチドは、コラーゲンタイプＩとＩＩＩの、およびコラーゲンを生合成する細胞である線維芽細胞の細胞培養中での、細胞間情報伝達が補助するフィブロネクチン、ならびに成長因子であるβ−ＴＧＦの合成を促進して（Ｋｏｕ Ｋａｔａｙａｍａｅｔａｌ．，１９９１，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ３０：７０９７−７１０４）、コラーゲン遺伝子のプロモーターに結合して、その転写を促進すると報告されている（Ｋｏｕ Ｋａｔａｙａｍａ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｔｈｅｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ ２６８（１４）：９９４１−９９４４）。
【００４６】
また、本明細書において、「薬学的に許容可能な塩」とは、薬学的に許容される無機酸、有機酸、または塩基由来の塩を含む。薬学的に許容可能な酸由来の塩の例としては、塩酸、臭素酸、硫酸、硝酸、過塩素酸、フマル酸、マレイン酸、リン酸、グリコール酸、乳酸、サリチル酸、コハク酸、トルエン−ｐ−スルホン酸、酒石酸、酢酸、クエン酸、メタンスルホン酸、ギ酸、安息香酸、マロン酸、ナフタレン−２−スルホン酸、ベンゼンスルホン酸からなる群から選択され得る。薬学的に許容可能な塩基由来の塩の例としては、ナトリウムなどのアルカリ金属、マグネシウムなどのアルカリ土金属、およびアンモニウムなどである。
【００４７】
また、本発明において、「アスコルビン酸」とは、「ビタミンＣ」と同一な意味を持つ。
【００４８】
本発明のビタミンＣ誘導体は、既存のビタミンＣが坑酸化活性、皮膚美白、皮膚再生などの皮膚状態改善効果は優れているが、安定性が低いという問題を解決するために発明した。安定性は、ビタミンＣのＣ−２位にリン酸誘導体またはグルコースを導入して安定性が改善されたものであり、さらにＣ−５位またはＣ−６位に所定のペプチドを導入して安定性がより改善される。特にペプチドがコラーゲン産生ペプチドである場合には、コラーゲンによるシワの改善、弾力増加などの付加的な皮膚状態改善効果を得ることができる。
【００４９】
また他の態様において、本発明は、ビタミンＣのＣ−２位にリン酸誘導体またはグルコースを導入して、ビタミンＣのＣ−２位の水酸基を置換するステップと、Ｃ−５位またはＣ−６位のうちのいずれか１つに−ＯＨまたは炭素数１２乃至２２の脂肪酸エステルを導入し、他の１つにアミノ酸残基３乃至１０個を有するペプチドを導入するステップと、を含む、安定化ビタミンＣ誘導体の製造方法を提供する。
【００５０】
本発明の１つの態様において、本発明の安定化ビタミンＣ誘導体の製造方法は、下記の化学式６にグルコース、リン酸基、を導入し、またはビタミンＣのＣ−２位の水酸基を置換するステップ（この時、任意にＣ−３位の水酸基にベンジル基などの保護基を導入する段階を追加的に含む）と、ビタミンＣのＣ−５位またはＣ−６位のうちのいずれか１つに水酸基を生成させ、他の１つにはジカルボン酸ＨＯＯＣ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ（ｍは２乃至５の整数）をエステル結合させるステップと、およびジカルボン酸とアミノ酸残基を３乃至１０個を有するペプチドとをアミド結合させるステップとを含む、化学式１で表されるペプチド分子を有する安定化ビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩の製造方法である。
【００５１】
本発明の一つの態様において、化学式１で表されるビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩の製造方法は、
下記の化学式３で表される５，６−イソプロピルリジエン−アスコルビン酸を化学式４で表されるベンジルハロゲン化合物と反応させて、５，６−イソプロピルリジエン−アスコルビン酸のＣ−３位の水酸基にベンジル基を導入させて、化学式５で表されるベンジル基が導入された５，６−イソプロピルリジエン−アスコルビン酸を得るステップと、
化学式５の構造で表されるアスコルビン酸誘導体をの化学式６で表されるホスホロジアミドハロゲン化合物と反応させて、Ｃ−２位の水酸基にホスホロジアミドを導入させて、化学式７で表されるベンジル基およびホスホロジアミド基が導入された５，６−イソプロピリデン(ｉｓｏｐｒｏｐｙｌｉｄｉｅｎｅ)−アスコルビン酸を得るステップと、
化学式７で表されるアスコルビン酸誘導体を開環させた後、Ｃ−５位またはＣ−６位のうちのいずれか１つに水酸基を生成させ、他の１つに化学式８で表されるジカルボキシル酸を導入させて、化学式９で表されるジカルボキシル酸とエステル結合されたアスコルビン酸誘導体を得るステップと、
化学式９で表されるアスコルビン酸誘導体を下記の化学式１０で表されるペプチドとアミド結合させるステップ、およびベンジル基を除去するステップと、
を含むが、これらに限定されない。
［化学式３］
【化２１】
2009541306.tif 000023
［化学式４］
【化２２】
2009541306.tif 000024
［化学式５］
【化２３】
2009541306.tif 000025
［化学式６］
【化２４】
2009541306.tif 000026
［化学式７］
【化２５】
2009541306.tif 000027
［化学式８］
ＨＯＯＣ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ
［化学式９］
【化２６】
2009541306.tif 000028
［化学式１０］
【化２７】
2009541306.tif 000029
（前記式で、ｍは２乃至５の整数であり、Ｂｎはベンジルであり、Ｙは塩素、臭素、フッ素、またはヨウ素であり、Ｒ３’はジメチルアミン、ジエチルアミン、プロピルアミン、またはベンジルアミンであり、Ｒ１’およびＲ２’は各々相異して、−ＯＨまたは−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｒ１’およびＲ２’が同時に−ＯＨまたは−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＯＨではなく、Ｒは保護された、または保護されていない天然または非天然アミノ酸残基の側鎖であり、ｎは３乃至１０の整数である。）
【００５２】
より好ましい形態において、化学式１で表されるビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩は、下記のように製造される。
【００５３】
まず、化学式３の５，６−イソプロピルリジエン−アスコルビン酸に化学式４のベンジルハロゲン化合物、好ましくは塩化ベンジル（Ｙ＝塩素）を添加して、３乃至５時間、好ましくは４時間、４乃至５０℃、好ましくは２０乃至３０℃、特に好ましくは２５℃で反応させて、アスコルビン酸（ビタミンＣ）のＣ−３位の水酸基にベンジル基を導入させる。続いて、化学式６のホスホロジアミドハロゲン化合物、好ましくはＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルホスホロジアミド塩化物にＣ−３位の水酸基にベンジル基が導入された化学式５の生成物を添加して、５乃至７時間、好ましくは６時間、４乃至７０℃、好ましくは２０乃至３０℃、特に好ましくは２５℃で反応させて、アスコルビン酸のＣ−３位の水酸基にベンジル基が導入され、Ｃ−２位の水酸基にＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルホスホロジアミド基が導入された、化学式７で表される生成物を得る。
【００５４】
前記生成物に酸、好ましくはトリフルオロ酢酸を添加して、３乃至５時間、好ましくは４時間反応させて、５，６−イソプロピリジエン環を開環させる。続いて、化学式８のジカルボキシル酸、好ましくはコハク酸を添加して、１５乃至１７時間、好ましくは１６時間、４乃至７０℃、好ましくは２０乃至３０℃、特に好ましくは２５℃でアスコルビン酸とエステル結合させて、化学式９で表される化合物を形成させる。その後、樹脂上で通常の固体合成法によって保護されたペプチドＮ末端のＮＨ２を前記ジカルボキシル酸にアミド結合させた後、保護基を除去する（脱保護）。
【００５５】
前記反応は、無水条件下、例えば無水有機溶媒を使用して行うことができる。前記無水有機溶媒としては、例えばジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリジノン、ジクロロメタンなどの通常の無水有機溶媒を使用することができ、好ましくはジメチルホルムアミドを使用することができる。さらに、例えば、ＤＣＣ（Ｎ，Ｎ´−ジクロロヘキシルカルボイミド）、ＨＯＢＴ（Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール）、ＥＤＣ［Ｎ−（３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル−カルボジイミド］、ＰｙＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノホスホニウム−ヘキサフルオロホスフェート）、ＨＢＴＵ［２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，３，３−テトラメチルウロニウム ヘキサフルオロホスフェート］などの縮合剤を前記反応において使用することができる。
【００５６】
本発明のさらなる態様において、本発明の安定化ビタミンＣ誘導体の製造方法は、
ビタミンＣのＣ−２位の水酸基にグルコース、リン酸基、または下記の化学式６で表されるリン酸誘導体を導入する（この時、必要に応じてＣ−３位の水酸基にベンジル基などの保護基を導入する段階を追加的に含む）ステップと、
およびビタミンＣのＣ−５位またはＣ−６位のうちのいずれか１つの水酸基に炭素数１２乃至２２の脂肪酸エステルを導入し、および他の１つの水酸基にはジカルボン酸ＨＯＯＣ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ（ｍは２乃至５の整数）をエステル結合させた後、アミノ酸残基を３乃至１０個有するペプチドとアミド結合させるステップと、
を含む、化学式２で表される、ペプチド分子を有する安定化ビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩の製造方法である。
【００５７】
本発明の態様において、前記化学式２で表されるビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩の製造方法は、
化学式３で表される５，６−イソプロピリジエン−アスコルビン酸を、化学式４で表されるベンジルハロゲン化合物と反応させて、５，６−イソプロピリジエン−アスコルビン酸のＣ−３位の水酸基にベンジル基を導入させて、化学式５で表される５，６−イソプロピリジエン−アスコルビン酸を得るステップと、
化学式５で表されるアスコルビン酸誘導体を化学式６で表されるホスホロジアミドハロゲン化合物と反応させて、Ｃ−２位の水酸基にホスホロジアミドを導入させて、化学式７で表されるベンジル基およびホスホロジアミドで置換されたされた５，６−イソプロピリジエン−アスコルビン酸を得るステップと、
化学式７で表されるアスコルビン酸誘導体を開環させた後、Ｃ−５位またはＣ−６位の水酸基のうちのいずれか１つは化学式１１で表される脂肪酸と反応させ、他の１つは化学式８で表されるジカルボキシル酸と反応させて、化学式１２で表される脂肪酸およびジカルボキシル酸がエステル結合されたアスコルビン酸誘導体を得るステップと、
化学式９で表されるアスコルビン酸誘導体に化学式１０のペプチドを反応させて、ジカルボン酸とアミド結合させるステップと、
ベンジル基を除去するステップと、
を含むが、これに限定されない。
［化学式３］
【化２８】
2009541306.tif 000030
［化学式４］
【化２９】
2009541306.tif 000031
［化学式５］
【化３０】
2009541306.tif 000032
［化学式６］
【化３１】
2009541306.tif 000033
［化学式７］
【化３２】
2009541306.tif 000034
［化学式８］
ＨＯＯＣ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ
［化学式１０］
【化３３】
2009541306.tif 000035
［化学式１１］
ＣＨ３（ＣＨ２）ｐＣＯＯＨ
［化学式１２］
【化３４】
2009541306.tif 000036
（前記式で、ｍは２乃至５の整数であり、Ｂｎはベンジルであり、Ｙは塩素、臭素、フッ素、またはヨウ素であり、Ｒ３’はジメチルアミン、ジエチルアミン、プロピルアミン、またはベンジルアミンであり、Ｒ４’およびＲ５’は各々相異して、−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｐＣＨ３または−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｒ４’およびＲ５’が同時に−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｐＣＨ３または−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＯＨではなく、Ｒは保護された、または保護されていない天然または非天然アミノ酸残基の側鎖であり、ｎは３乃至１０の整数であり、およびｐは１０乃至２０の整数である。）
【００５８】
より好ましい形態において、本発明の化学式２で表されるビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩は、以下のように製造される。
【００５９】
まず、化学式３で表されるアスコルビン酸誘導体に化学式４のベンジルハロゲン化合物、好ましくは塩化ベンジル（Ｙ＝塩素）を添加して、３乃至５時間、好ましくは４時間、４乃至７０℃、好ましくは２０乃至３０℃、特に好ましくは２５℃で反応させて、アスコルビン酸のＣ−３位の水酸基がベンジル基に置換された化学式５のアスコルビン酸誘導体を得る。得られたアスコルビン酸誘導体にホスホロジアミドハロゲン化合物、好ましくはＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルホスホロジアミド塩化物を添加して、５乃至７時間、好ましくは６時間、４乃至７０℃、好ましくは２０乃至３０℃、特に好ましくは２５℃で反応させて、アスコルビン酸のＣ−３位の水酸基にベンジル基が導入され、Ｃ−２位の水酸基にＮ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルホスホロジアミドが導入された化学式７のアスコルビン酸誘導体を得る。アスコルビン酸誘導体に酸、好ましくはトリフルオロ酢酸を添加して、３乃至５時間、好ましくは４時間反応させて、５，６−イソプロピルリジエン環を開環させる。その後、化学式１１の脂肪酸、好ましくはパルミチン酸を添加して、１５乃至１７時間、好ましくは１６時間、４乃至７０℃、好ましくは２０乃至３０℃、特に好ましくは２５℃で反応させて、前記開環されたアスコルビン酸誘導体のＣ−５位またはＣ−６位の水酸基とエステル結合させる。続いて、化学式８のジカルボキシル酸、好ましくはコハク酸を添加して、１５乃至１７時間、好ましくは１６時間、４乃至７０℃、好ましくは２０乃至３０℃、特に好ましくは２５℃で反応させて、開環されたアスコルビン酸のＣ−５位またはＣ−６位の水酸基のうちの脂肪酸と結合しない水酸基とエステル結合させて、化学式１２のアスコルビン酸誘導体を得る。得られたアスコルビン酸誘導体を樹脂上で通常の固体合成法によって保護されたペプチドのＮ末端のＮＨ２を前記ジカルボキシル酸とアミド結合させた後、保護基を除去する。
【００６０】
反応は、無水条件下、例えば無水有機溶媒を使用して行うことができる。前記無水有機溶媒としては、全て使用可能で、例えばジメチルホルムアミド、ジメチルスルホキシド、Ｎ−メチルピロリジノン、ジクロロメタンなどの通常の無水有機溶媒を使用することができ、好ましくはジメチルホルムアミドを使用することができる。さらに、例えば、ＤＣＣ（Ｎ，Ｎ’−ジクロロヘキシルカルボイミド）、ＨＯＢＴ（Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール）、ＥＤＣ［Ｎ−（３−３−ジメチルアミノプロピル）−Ｎ’−エチル−カルボジイミド］、ＰｙＢＯＰ（ベンゾトリアゾール−１−イル−オキシ−トリス−ピロリジノホスホニウム  ヘキサフルオロリン酸）、ＨＢＴＵ［２−（１Ｈ−ベンゾトリアゾール−１−イル）−１，３，３−ｔテトラメチルウロニウム ヘキサフルオロリン酸］などの縮合剤を前記反応において使用することができる。
【００６１】
本発明で使用することができる縮合剤、触媒、および溶媒などは、反応に悪影響を与えない範囲内で、当業界で通常使用される全てのものを使用することができる。
【００６２】
得られた化学式１および化学式２で表される本発明のペプチドを含む安定化ビタミンＣ誘導体は、例えば再結晶またはカラムクロマトグラフィーなどの通常の分離および精製方法を使用して精製することができる。
【００６３】
前記化学式１または化学式２で表される化合物を製造するための本発明の製造方法において、水酸基がベンジル基に保護されたアスコルビン酸と連結したペプチドは、固体合成法で製造される。例えば、各々のアスコルビン酸の水酸基を保護した後、保護されない水酸基に選択的にスクシニル基を導入する。その後、スクシニル基が導入されたアスコルビン酸は、樹脂上で通常の固体合成法によって合成されたペプチドのＮ末端にと反応させて、アスコルビン酸およびペプチドの保護基を除去する。
【００６４】
以下の反応式は、固相または溶相での化学式１または化学式２で表されるビタミンＣ誘導体化合物の合成方法を例示したものである。反応式１は、特に化学式１ａおよび化学式１ｃの化合物の製造工程を示し、反応式２は、特に化学式１ｂおよび化学式１ｄの化合物の製造工程を示し、反応式３は、特に化学式２ｂおよび化学式２ｄの化合物の製造工程を示し、反応式４は、特に化学式２ａおよび化学式２ｃの化合物の製造工程を示す。
【００６５】
［反応式１］
【化３５】
2009541306.tif 000037
ａ．ＢｎＣｌ、Ｋ２ＣＯ３、ＤＭＦ、２５℃、４時間
ｂ．Ｐ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）２Ｃｌ、ＤＭＡＰ、ＤＣＭ、２５℃、６時間
ｃ．ＴＦＡ、ＤＣＭ、２５℃、４時間
ｄ．ＴｒｔＣｌ、ＴＥＡ、ＤＣＭ、２５℃、２４時間
ｅ．無水コハク酸、ＤＭＡＰ、ＤＣＭ、２５℃、１６時間
ｆ．固相合成
ｇ．ＴＦＡ、２５℃、３時間
ｈ．１０％Ｐｄ/Ｃ、ＭｅＯＨ、Ｈ２、２５℃、１時間
ｉ．Ｄｏｗｅｘ ５０ｗ−８ｘ、Ｈ２Ｏ、２５℃、２４時間
（ＢｎＣｌ：塩化ベンジル；Ｋ２ＣＯ３：炭酸カリウム；ＤＭＦ：ジメチルホルムアミド；Ｐ（Ｏ）Ｎ（ＣＨ３）２Ｃｌ：￥テトラメチルホスホロジアミド塩化物；ＤＭＡＰ：ジメチルアミノピリジン；ＴｒｔＣｌ：塩酸トリフェニルメチル；ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；ＤＣＭ：ジクロロメタン；ＴＥＡ：トリエチルアミン；ＭｅＯＨ：メタノール；Ｄｏｗｅｘ５０ｗ−８ｘ：陽イオン交換樹脂）
【００６６】
［反応式２］
【化３６】
2009541306.tif 000038
ａ．（ｔ−Ｂｏｃ）２Ｏ、ＴＥＡ、ＤＣＭ、２５℃、１２時間
ｂ．Ｄｏｗｅｘ ５０ｗ−８ｘ、ＭｅＯＨ、６０℃、２４時間
ｃ．無水コハク酸、ＤＭＡＰ、ＤＣＭ、２５℃、１６時間
ｄ．固相合成
ｅ．ＴＦＡ、室温、３時間
ｆ．１０％Ｐｄ／Ｃ、ＭｅＯＨ、Ｈ２、２５℃、１時間
ｇ．Ｄｏｗｅｘ ５０ｗ−８ｘ、Ｈ２Ｏ、２５℃、２４時間
（（ｔ−Ｂｏｃ）２Ｏ：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカルバメート；ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；ＤＣＭ：ジクロロメタン；ＴＥＡ：トリエチルアミン；ＭｅＯＨ：メタノール；Ｄｏｗｅｘ ５０ｗ−８ｘ：陽イオン交換樹脂）
【００６７】
［反応式３］
【化３７】
2009541306.tif 000039
ａ．ＣＨ３（ＣＨ２）１４Ｃ（Ｏ）Ｃｌ、ＴＥＡ、２５℃、１６時間
ｂ．Ｄｏｗｅｘ ５０ｗ−８ｘ、ＭｅＯＨ、６０℃、２４時間
ｃ．無水コハク酸、ＤＭＡＰ、ＤＣＭ、２５℃、１６時間
ｄ．固相合成
ｅ．ＴＦＡ、室温、３時間ｒ
ｆ．１０％Ｐｄ／Ｃ、ＭｅＯＨ、Ｈ２、２５℃、１時間
ｇ．Ｄｏｗｅｘ ５０ｗ−８ｘ、Ｈ２Ｏ、２５℃、２４時間
（ＣＨ３（ＣＨ２）１４Ｃ（Ｏ）Ｃｌ：塩化パルミトイル；ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；ＤＣＭ：ジクロロメタン；ＴＥＡ：トリエチルアミン；ＭｅＯＨ：メタノール；Ｄｏｗｅｘ ５０ｗ−８ｘ：陽イオン交換樹脂）
【００６８】
［反応式４］
【化３８】
2009541306.tif 000040
ａ．（ｔ−Ｂｏｃ）２Ｏ、ＴＥＡ、ＤＣＭ、２５℃、１２時間
ｂ．Ｄｏｗｅｘ ５０ｗ−８ｘ、ＭｅＯＨ、６０℃、２４時間
ｃ．ＣＨ３（ＣＨ２）１４Ｃ（Ｏ）Ｃｌ、ＴＥＡ、２５℃、１６時間
ｄ．Ｄｏｗｅｘ ５０ｗ−８ｘ、ＭｅＯＨ、６０℃、４８時間
ｅ．無水コハク酸、ＤＭＡＰ、ＤＣＭ、２５℃、１６時間
ｆ．固相合成
ｇ．ＴＦＡ、室温、３時間
ｈ．１０％Ｐｄ／Ｃ、ＭｅＯＨ、Ｈ２、２５℃、１時間
ｉ．Ｄｏｗｅｘ ５０ｗ−８ｘ、Ｈ２Ｏ、２５℃、２４時間
（（ｔ−Ｂｏｃ）２Ｏ：ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−ジカルバメート；ＣＨ３（ＣＨ２）１４Ｃ（Ｏ）Ｃｌ：塩化パルミトイル；ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；ＤＣＭ：ジクロロメタン；ＴＥＡ：トリエチルアミン；ＭｅＯＨ：メタノール；Ｄｏｗｅｘ ５０ｗ−８ｘ：陽イオン交換樹脂）
【００６９】
また、他の態様において、本発明は、下記の化学式９または化学式１２で表される化合物を含むアシル化剤、またはこれを使用するアシル化方法を提供する。
［化学式９］
【化３９】
2009541306.tif 000041
［化学式１２］
【化４０】
2009541306.tif 000042
（前記式で、Ｒ３’はジメチルアミン、ジエチルアミン、プロピルアミン、またはベンジルアミンであり、Ｒ１’およびＲ２’は各々相異して、−ＯＨまたは−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｒ１’およびＲ２’が同時に−ＯＨまたは−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＯＨではなく、Ｒ４’およびＲ５’は各々相異して、−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｐＣＨ３または−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＯＨであり、Ｒ４’およびＲ５’が同時に−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｐＣＨ３または−ＯＣ（Ｏ）（ＣＨ２）ｍＣ（Ｏ）ＯＨではない。）
【００７０】
上記で説明したように、化学式９または化学式１２で表される化合物は、アシル基と置換可能な官能基を有する化合物をアシル化するのに使用され得る。例えば、化学式９または化学式１２で表される化合物を、アミノ基を有する化合物と反応させて、アミド結合を生成させることができる。アミノ基を有する化合物は、本明細書に定義されたようなペプチド、またはタンパク質である。
【００７１】
前記製造された本発明のペプチドが結合された安定化ビタミンＣ誘導体、またはその薬学的に許容可能な塩は、優れた坑酸化、抗老化、皮膚のシワの改善、美白効果を示すだけでなく、皮膚刺激、感作性、および光毒性などを示さない。さらに、本発明のビタミンＣ誘導体は皮膚と類似した親油性を有するので、皮膚浸透力が優れている。また、コラーゲン産生ペプチドが結合した場合、このビタミンＣ誘導体は、皮膚のシワの改善の面で上昇的な効果を示すことができる。また、本発明のビタミンＣ誘導体は、リン酸誘導体と結合しており、安定性の面でも顕著に改善された効果を有する。
【００７２】
したがって、本発明の別の態様において、本発明は、有効成分として化学式１で表される化合物、化学式２で表される化合物、およびこれらの薬学的に許容可能な塩からなる群の中から選択された１種以上を含む、皮膚改善用組成物を提供する。好ましくは、この組成物は経皮投与のために皮膚外用に適用される。有効成分の優れた経皮吸収性および安定性によって、皮膚老化防止、シワの改善、皮膚あれの改善、美白、保湿などにおいて優れた効果を示し、優れた皮膚状態の改善および皮膚状態悪化抑制効果を有する。
【００７３】
本明細書において、前記「皮膚外用」という用語は、皮膚の保湿効果、美白効果、シワ抑制効果、皮膚あれの改善効果、経皮吸収促進効果などの多様な効果を示し、皮膚の状態を改善および皮膚の状態の悪化を抑制するために使用されるものを意味する。本発明の皮膚外用剤は、化粧品、医薬品、特に軟膏などの外用医薬品などに使用される。好ましくは、本発明の皮膚外用剤は化粧品として使用され、形態は特に限定されない。
【００７４】
本発明による組成物において、有効成分または化学式１で表される化合物、化学式２で表される化合物、およびこれらの薬学的に許容可能な塩からなる群の中から選択された１種以上の物質の含有量は、組成物の適用用途、形態、および目的などによって適切に決定される。有効成分の組成物内の含有量が０．００１％未満である場合には、実質的な皮膚改善効果を得ることができないので、有効成分の組成物内の含有量は０．００１％以上であるのが好ましい。本発明の好ましい具体例において、本発明の皮膚改善用組成物は、前記有効成分を０．００１乃至５０％（ｗ／ｗ）、好ましくは０．００１乃至５％（ｗ／ｗ）、より好ましくは０．０１乃至３％（ｗ／ｗ）の量で含むものである。
【００７５】
また、本発明の皮膚改善用組成物は、適用される形態に通常含まれる溶媒を含むものであり、例えばエタノール、グリセリン、ブチレングリコール、プロピレングリコール、グリセレス−２６、メチルグリセス−２０、ミスチリン酸イソセチル、ミスチリン酸イソセチル、ミスチリン酸オクチルドデシル、オクチルドデカノール、イソステアリン酸イソステアレート、オクタン酸セチル、およびジカプリン酸ネオペンチルグリコールからなる群の中から選択された１種以上を含む。このような溶媒を使用して本発明の組成物を作製する場合、個々の化合物および溶媒の混合比によって溶媒に対する化合物の溶解度が多少異なる。しかしながら、本発明が属する技術分野の当業者であれば、製品の特性によって使用する溶媒の種類および使用量を適切に選択して適用することができる。また、本発明の皮膚改善用組成物は、適用される形態によって適切な香料、色素、防腐剤、賦形剤などの添加剤を含むことができる。
【００７６】
本発明の皮膚改善用組成物は、皮膚用軟膏、皮膚軟化剤、栄養分を含んだローション、栄養クリーム、マッサージクリーム、エッセンス、パックなどの多様な形態に製品化される。例えば、皮膚用軟膏に使用される場合、有効成分もしくは前記化学式１または化学式２の化合物以外に、５０．０乃至９７．０重量％のワセリンおよび０．１乃至５．０重量％のリン酸ポリオキシエチレノールレール−エーテルを含むことができる。皮膚軟化剤に適用される場合、１．０乃至１０．０重量％のプロピレングリコール、グリセリンなどの多価アルコール類および０．０５乃至２．０重量％のポリエチレンオレイルエーテル、ポリオキシエチレン硬化ひまし油などの界面活性剤を含むように製造されることができる。さらに、栄養分を含んだローションまたは栄養クリームに適用される場合、有効成分に加えて、５．０乃至２０．０重量％のスクアラン、ワセリン、オクチルドデカノールなどのオイル類および３．０乃至１５．０重量％のエタノール、ステアリルアルコール、蜜蝋などのワックス成分を含むように製造されることができる。また、エッセンスに適用される場合、５．０乃至３０．０重量％のグリセリン、プロピレングリコールなどの多価アルコール類を含むことができる。また、マッサージクリームに適用される場合、有効成分に加えて、３０．０乃至７０．０重量％の流動パラフィン、ワセリン、イソノニルイソナノエートなどのオイルを含むことができる。パックに適用される場合には、５．０乃至２０．０重量％のポリビニルアルコールを含むピールオフパック、または５．０乃至３０．０重量％の一般使用目的の乳液化粧品およびカオリン、タルク、酸化亜鉛、二酸化チタンなどの顔料を含むウォッシュオフパックに製造されることができる。
【００７７】
また、本発明の皮膚改善用組成物は、例えば油分、水、界面活性剤、保湿剤、低級アルコール、増粘剤、キレート剤、色素、防腐剤、香料などの一般化粧品に配合される通常の成分を必要なだけ適用して配合することが可能である。
【００７８】
別の態様において、本発明はビタミンＣを安定化する方法を提供する。本方法は、
化学式６で表されるグルコースまたはリン酸基またはリン酸誘導体で、ビタミンＣのＣ−２位の水酸基を置換するステップと、
グリシン、リジン、ヒスチジン、セリン、プロリン、ヒドロキシプロリン、スレオニン、グルタミン酸、メチオニン、グルタミン、およびアルギニンからなる群から選択されるアミノ酸残基を３乃至１０個有するペプチド分子を、化学式８で表されるジカルボン酸を介してビタミンＣのＣ−５位またはＣ−６位に結合するステップと、
を含む。
［化学式６］
【化４１】
2009541306.tif 000043
［化学式８］
ＨＯＯＣ（ＣＨ２）ｍＣＯＯＨ
（ここで、Ｙおよびｍは上記で定義したものと同じである）
【００７９】
ペプチド分子はグリシン−ヒスチジン−リジン、グリシン−リジン−ヒスチジン、グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン、リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン、およびグルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニンから選択されうる。
【００８０】
以下で、本発明を実施例を挙げて、より詳細に説明する。これらの例は、しかしながら、いかなる場合も本発明の範囲を限定するものでない。
【実施例】
【００８１】
実施例１：３−Ｏ−ベンジル−２−Ｏ−テトラメチルホスホロジアミディク−６−Ｏ−トリフェニルメチル−５−Ｏ−スクシニル−アスコルビン酸の合成
下記の反応式に示されたように、３−Ｏ−ベンジル−２−Ｏ−テトラメチルホスホロジアミディク−６−Ｏ−トリフェニルメチル−５−Ｏ−スクシニル−アスコルビン酸を作成した。
【化４２】
2009541306.tif 000044
【００８２】
（ａ）ベンジル基による保護化
５，６−イソプロピリジエン−Ｌ−アスコルビン酸（２９０ｇ、１．３４ｍｏｌ）をジメチルホルムアミド２Ｌに溶解した後、固体の炭酸カリウム（９２．７ｇ、０．６７ｍｏｌ）を添加した。この溶液に塩化ベンジル（１１５ｇ、０．６７ｍｍｏｌ）を添加した後、２５℃で４時間攪拌した。減圧下で前記溶液中のジメチルホルムアミドを除去した。ここで得られた溶液を酢酸エチル２Ｌに溶解させて、水２Ｌを添加した。分液ロートを用いて有機層を抽出した。この工程を３回繰り返して、水溶性の不純物を除去した。抽出された有機層に無水硫酸ナトリウム５００ｇを添加して、水分を除去した。得られた溶液を減圧下で濃縮して、Ｃ−３位の水酸基がベンジル基に保護化された、５，６−イソプロピリジエン−Ｌ−アスコルビン酸を３００ｇ得た。
【００８３】
（ｂ）リン酸誘導体の導入
得られた化合物３００ｇおよびジメチルアミノピリジン１２０ｇをジクロロメタン２Ｌに溶解した。その後、塩化テトラメチルホスホロジアミディク１８０ｇを添加して、２５℃で６時間攪拌した。減圧下で溶液中のジクロロメタンを除去した。ここで得られた溶液を酢酸エチル２Ｌに溶解させて、５％の硫酸水素ナトリウム溶液２Ｌを添加した。分液ロートを用いて有機層を抽出した。この抽出物に無水硫酸ナトリウム５００ｇを添加して、水分を除去した。得られた溶液を減圧下で濃縮して、Ｃ−２位にテトラメチルホスホロジアミド基が導入された５，６−イソプロピリジエン−Ｌ−アスコルビン酸を３００ｇ得た。
【００８４】
（ｃ）酸の添加による開環
得られた化合物３００ｇをジクロロメタン８００ｍｌに溶解した後、２０％（ｖ／ｖ）のトリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）２００ｍｌを添加した。２５℃で４時間攪拌した。減圧下で溶液中のジクロロメタンおよびＴＦＡを除去した後、再結晶化して、淡黄色で半固体状態の、開環されたアスコルビン酸誘導体２５０ｇを得た。
【００８５】
（ｄ）Ｃ−６位の水酸基の保護化
得られた化合物２５０ｇおよびトリエチルアミン６４ｇをジクロロメタン１Ｌに溶解した後、塩化トリフェニルメチル１８０ｇを添加した。２５℃で２４時間攪拌した。減圧下で溶液中のジクロロメタンを除去した。ここで得られた溶液を酢酸エチル２Ｌに溶解させて、５％の硫酸水素ナトリウム溶液２Ｌを添加した。分液ロートを用いて有機層を抽出した。抽出した有機層に無水硫酸ナトリウム５００ｇを添加して、水分を除去した。得られた溶液を減圧下で濃縮して、Ｃ−６位の水酸基が塩化トリフェニルメチルで保護化されたアスコルビン酸誘導体を２４０ｇ得た。
【００８６】
（ｅ）Ｃ−５位にコハク酸が導入されたアスコルビン酸誘導体の合成
得られた化合物２４０ｇをジクロロメタン２Ｌに溶解させて、ジメチルアミノピリジン（１．１ｅｑ．）およびコハク酸（１．２ｅｑ．）を添加した。２５℃で１６時間攪拌した。減圧下で前記溶液中のジクロロメタンを除去した。得られた溶液を酢酸エチル２Ｌに溶解させて、５％の硫酸水素ナトリウム溶液２Ｌを添加した。分液ロートを用いて有機層を抽出した。抽出した有機層に無水硫酸ナトリウム５００ｇを添加して、水分を除去した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。濃縮された溶液をシリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて、淡黄色の半固体状態の化合物を２７０ｇ得た（全体収率：２７．１％）。ここで得られた化合物が３−Ｏ−ベンジル−２−Ｏ−テトラメチルホスホロジアミディク−６−Ｏ−トリフェニルメチル−５−Ｏ−スクシニル−アスコルビン酸であることをＮＭＲ分析で確認した。
【００８７】
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：２．６３（ｔｔ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）、２．７（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）、５．５３（ｄｄ、２Ｈ、Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ）、７．３３（ｍ、２０Ｈ、Ａｒ−Ｈ）
【００８８】
実施例２：３−Ｏ−ベンジル−２−Ｏ−テトラメチルホスホロジアミディック−５−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−６−Ｏ−スクシニル−アスコルビン酸の合成
下記の反応式に示されたように、３−Ｏ−ベンジル−２−Ｏ−テトラメチルホスホロジアミディック−５−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−６−Ｏ−スクシニル−アスコルビン酸を作成した。
【化４３】
2009541306.tif 000045
【００８９】
（ａ）Ｃ−５位の水酸基の保護化
３−Ｏ−ベンジル−２−Ｏ−テトラメチルホスホロジアミディク−６−Ｏ−トリフェニルメチル−アスコルビン酸（１００ｇ、０．１５５６ｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１８ｇ）をジクロロメタン１Ｌに溶解した。この溶液にジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカバーメイト（３７ｇ）を添加して、２５℃で１２時間攪拌した。減圧下で溶液中のジクロロメタンを除去した。ここで得られた濃縮された溶液を酢酸エチル１Ｌに溶解した後、５％の硫酸水素ナトリウム溶液１Ｌを添加した。分液ロートを用いて有機層を抽出した。この工程を３回繰り返して、水に溶解される不純物を除去した。抽出された有機層に無水硫酸ナトリウム３００ｇを添加して、水分を除去した。濾液を減圧下で濃縮して、Ｃ−５位の水酸基がｔｅｒｔ−ブチロキシカルボニル基に保護化された３−Ｏ−ベンジル−２−Ｏ−テトラメチルホスホロジアミディック−５−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−６−Ｏ−トリフェニルメチル−アスコルビン酸を１０４ｇ得た。
【００９０】
（ｂ）Ｃ−６位の脱保護化
得られた化合物１０４ｇをメチルアルコール１Ｌに溶解した後、陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ５０ｗ−８ｘを添加して、６０℃で２４時間攪拌した。この反応物を濾過して、減圧下でメチルアルコールを除去した。得られた溶液を酢酸エチル１Ｌに溶解した後、５％の炭酸水素ナトリウム溶液１Ｌを添加した。分液ロートを用いて有機層を抽出した。この抽出物に無水硫酸ナトリウム３００ｇを添加して、水分を除去した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮して、Ｃ−６位が脱保護化されて水酸基を有する、アスコルビン酸誘導体を６３ｇ得た。
【００９１】
（ｃ）Ｃ−６位にコハク酸が結合したアスコルビン酸誘導体の合成
得られた化合物６３ｇをジクロロメタン１Ｌに溶解させて、ジメチルアミノピリジン（１．１ｅｑ．）およびコハク酸（１．２ｅｑ．）を添加した。２５℃で１６時間攪拌した。減圧下で溶液中のジクロロメタンを除去した。得られた溶液を酢酸エチル１Ｌに溶解した後、５％の硫酸水素ナトリウム溶液１Ｌを添加した。分液ロートを用いて有機層を抽出した。この抽出物に無水硫酸ナトリウム３００ｇを添加して、水分を除去した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて、濃縮された溶液より淡黄色の半固体状態の化合物を６８ｇ得た（全体収率：２５％）。ここで得られた化合物３−Ｏ−ベンジル−２−Ｏ−テトラメチルホスホロジアミディック−５−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル−６−Ｏ−スクシニル−アスコルビン酸をＮＭＲ分析した結果は下記の通りでる。
【００９２】
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：１．４２（ｓ、９Ｈ、ＯＣ（ＣＨ３）３）、２．６３（ｔｔ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）、２．７（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）、５．５３（ｄｄ、２Ｈ、Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ）、７．３３（ｍ、５Ｈ、Ａｒ−Ｈ）
【００９３】
実施例３：３−Ｏ−ベンジル−２−Ｏ−テトラメチルホスホロジアミディック−５−Ｏ−パルミトイル−６−Ｏ−スクシニル−アスコルビン酸の合成
下記の反応式に示されたように、３−Ｏ−ベンジル−２−Ｏ−テトラメチルホスホロジアミディック−５−Ｏ−パルミトイル−６−Ｏ−スクシニル−アスコルビン酸を製造した。
【化４４】
2009541306.tif 000046
【００９４】
（ａ）Ｃ−５位へのパルミトイル基の導入
３−Ｏ−ベンジル−２−Ｏ−テトラメチルホスホロジアミディック−６−Ｏ−トリフェニルメチル−アスコルビン酸１０ｇおよびトリエチルアミン２ｇをジクロロメタン１００ｍｌに溶解した後、塩化パルミトイル５ｇを添加した。２５℃で１６時間攪拌した。減圧下で溶液中のジクロロメタンを除去した。得られた溶液を酢酸エチル１００ｍｌに溶解した後、５％の硫酸水素ナトリウム溶液１００ｍｌを添加した。分液ロートを用いて有機層を抽出した。この抽出物に無水硫酸ナトリウム３０ｇを添加して、水分を除去した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮して、Ｃ−５位にパルミトイル基が導入されたアスコルビン酸誘導体を１０ｇ得た。
【００９５】
（ｂ）Ｃ−６位の脱保護化
得られた化合物１０ｇをメチルアルコール１００ｍｌに溶解した後、陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ５０ｗ−８ｘを添加した。６０℃で２４時間攪拌した。濾過後、減圧下でメチルアルコールを除去した。このように得られた濃縮された溶液を酢酸エチル１００ｍｌに溶解した後、５％の炭酸水素ナトリウム溶液１００ｍｌを添加した。分液ロートを用いて有機層を抽出した。この抽出物に無水硫酸ナトリウム３０ｇを添加して、水分を除去した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮して、Ｃ−６位が脱保護化されて水酸基を有するアスコルビン酸誘導体を５ｇ得た。
【００９６】
（ｃ）Ｃ−６位へのコハク酸の導入
前記で得られた化合物５ｇをジクロロメタン５０ｍｌに溶解させて、ジメチルアミノピリジン（１．１ｅｑ．）およびコハク酸（１．２ｅｑ．）を添加した。２５℃で１６時間攪拌した。減圧下で前記溶液中のジクロロメタンを除去した。得られた溶液を酢酸エチル５０ｍｌに溶解した後、５％の硫酸水素ナトリウム溶液５０ｍｌを添加した。分液ロートを用いて有機層を抽出した。この抽出物に無水硫酸ナトリウム１０ｇを添加して、水分を除去した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて、濃縮された溶液から淡黄色の半固体状態の化合物を５ｇ得た（全体収率：１３．３％）。ここで得られた化合物３−Ｏ−ベンジル−２−Ｏ−テトラメチルホスホロジアミディク−５−Ｏ−パルミトイル−６−Ｏ−スクシニル−アスコルビン酸をＮＭＲ分析した結果は下記の通りである。
【００９７】
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、２．５９（ｔｔ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）、２．７（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）、５．５３（ｄｄ、２Ｈ、Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ）、７．３３（ｍ、５Ｈ、Ａｒ−Ｈ）
【００９８】
実施例４：３−Ｏ−ベンジル−２−Ｏ−テトラメチルホスホロジアミディック−６−Ｏ−パルミトイル−５−Ｏ−スクシニル−アスコルビン酸の合成
下記の反応式に示されたように、３−Ｏ−ベンジル−２−Ｏ−テトラメチルホスホロジアミディック−６−Ｏ−パルミトイル−５−Ｏ−スクシニル−アスコルビン酸を作成した。
【化４５】
2009541306.tif 000047
【００９９】
（ａ）Ｃ−５位の水酸基の保護化
３−Ｏ−ベンジル−２−Ｏ−テトラメチルホスホロジアミディック−６−Ｏ−トリフェニルメチル−アスコルビン酸（１０ｇ、１５、５６ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（１．８ｇ）をジクロロメタン１００ｍｌに溶解した後、この溶液にジ−ｔｅｒｔ−ブチルジカルバミン酸（３．７ｇ）を添加した。２５℃で１２時間攪拌した。減圧下で前記溶液中のジクロロメタンを除去した。ここで得られた溶液を酢酸エチル１００ｍｌに溶解した後、５％の硫酸水素ナトリウム溶液１００ｍｌを添加した。分液ロートを用いて有機層を抽出した。この工程を３回繰り返して、水に溶解される不純物を除去した。抽出された有機層に無水硫酸ナトリウム３０ｇを添加して、水分を除去した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮して、Ｃ−５位の水酸基がｔｅｒｔ−ブチルオキシカルボニル基に保護化された３−Ｏ−ベンジル−２−Ｏ−テトラメチルホスホロジアミディック−５−Ｏ−ｔｅｒｔ−ブチロキシカルボニル−６−Ｏ−トリフェニルメチル−アスコルビン酸を１０ｇ得た。
【０１００】
（ｂ）Ｃ−６位の脱保護化
得られた化合物１０ｇをメチルアルコール１００ｍｌに溶解した後、陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ５０ｗ−８ｘを添加した。６０℃で２４時間攪拌した。濾過後、減圧下でメチルアルコールを除去した。このように得られた濃縮された溶液を酢酸エチル１００ｍｌに溶解した後、５％の炭酸水素ナトリウム溶液１００ｍｌを添加した。分液ロートを用いて有機層を抽出した。この抽出物に無水硫酸ナトリウム３０ｇを添加して、水分を除去した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮して、Ｃ−６位が脱保護化されて水酸基を有するアスコルビン酸誘導体を６．３ｇ得た。
【０１０１】
（ｃ）Ｃ−６位へのパルミトイル基の導入
得られた化合物６．３ｇおよびトリエチルアミン２ｇをジクロロメタン１００ｍｌに溶解した後、塩化パルミトイル５ｇを添加した。２５℃で１６時間攪拌した。減圧下で前記溶液中のジクロロメタンを除去した。濃縮された溶液を酢酸エチル１００ｍｌに溶解した後、５％の硫酸水素ナトリウム溶液１００ｍｌを添加した。分液ロートを用いて有機層を抽出した。この抽出物に無水硫酸ナトリウム３０ｇを添加して、水分を除去した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮して、Ｃ−６位にパルミトイル基が導入されたアスコルビン酸誘導体を１０ｇ得た。
【０１０２】
（ｄ）Ｃ−５位の脱保護化
得られた化合物１０ｇをメチルアルコール１００ｍｌに溶解した後、陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ５０ｗ−８ｘを添加した。６０℃で４８時間攪拌した。この反応物をろ過して、減圧下でメチルアルコールを除去した。得られた溶液を酢酸エチル１００ｍｌに溶解した後、５％の炭酸水素ナトリウム溶液１００ｍｌを添加した。分液ロートを用いて有機層を抽出した。この抽出物に無水硫酸ナトリウム３０ｇを添加して、水分を除去した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮して、Ｃ−５位が脱保護化されて水酸基を有するアスコルビン酸誘導体を５ｇ得た。
【０１０３】
（ｅ）Ｃ−５位へのコハク酸の導入
前記で得られた化合物５ｇをジクロロメタン５０ｍｌに溶解させて、ジメチルアミノピリジン（１．１ｅｑ．）およびコハク酸（１．２ｅｑ．）を添加した。２５℃で１６時間攪拌した。減圧下で溶液中のジクロロメタンを除去した。濃縮された溶液を酢酸エチル５０ｍｌに溶解した後、５％の硫酸水素ナトリウム溶液５０ｍｌを添加した。分液ロートを用いて有機層を抽出した。この抽出物に無水硫酸ナトリウム１０ｇを添加して、水分を除去した。濾過後、濾液を減圧下で濃縮した。シリカゲルカラムクロマトグラフィーを用いて、濃縮された溶液より淡黄色の半固体状態の化合物を４．８ｇ得た（全体収率：１２％）。ここで得られた化合物３−Ｏ−ベンジル−２−Ｏ−テトラメチルホスホロジアミディック−６−Ｏ−パルミトイル−５−Ｏ−スクシニル−アスコルビン酸をＮＭＲ分析した結果は下記の通りである。
【０１０４】
１ＨＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、２．５９（ｔｔ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＯＨ）、２．７（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）、５．５３（ｄｄ、２Ｈ、Ｏ−ＣＨ２−Ｐｈ）、７．３３（ｍ、５Ｈ、Ａｒ−Ｈ）
【０１０５】
実施例５：ペプチドの合成
本発明に使用される多様な種類のペプチドの合成は、Ｆｍｏｃ（９−フルオレニルメトキシカルボニル）をＮα−アミノ酸の保護基として使用する固体法によって合成した。ＨＯＢｔ−ＤＣＣ（Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール−ジシクロヘキシルカルボジイミド（ｃａｒｏｄｉｉｍｉｄｅ））法によってペプチドを延長した（Ｗａｎｇ Ｃ．Ｃｈａｎ，Ｐｅｒｔｅｒ Ｄ．ｗｈｉｔｅ，“Ｆｍｏｃ ｓｏｌｉｄ ｐｈａｓｅ ｐｅｐｔｉｄｅ ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ”Ｏｘｆｏｒｄ）。グリシン−ヒスチジン−リジン（ＧＨＫ）、グリシン−リジン−ヒスチジン（ＧＫＨ）、グリシン−プロリン−ヒドロキシプロリン（ＧＰＯ）、リジン−スレオニン−スレオニン−リジン−セリン（ＫＴＴＫＳ）、グルタミン酸−グルタミン酸−メチオニン−グルタミン−アルギニン−アルギニン（ＥＥＭＱＲＲ）ペプチドを合成した。
【０１０６】
実施例６：ペプチドが結合した安定化ビタミンＣ誘導体の合成
６−１：化学式１ａの化合物の合成
Ｎ末端のアミノ酸までカップリングされた、実施例５で合成されたペプチド（１ｍｍｏｌ）に、２０％のピペリジン／Ｎ−メチルピロリドン溶液５０ｍｌを添加してＦｍｏｃ基を除去した。Ｎ−メチルピロリドンおよびジクロロメタンで洗浄した後、実施例１で合成されたビタミンＣ誘導体をカップリングさせた。カップリング終了後、Ｎ−メチルピロリドンおよびジクロロメタンで数回洗浄後、窒素ガスで乾燥させた。ここに、トリフルオロ酢酸５０ｍｌを添加して、２５℃で３時間反応させて、ペプチド保護基およびビタミンＣのＣ−６位に結合されたアルコール基を保護しているトリフェニルメチル基を除去した。レジンからペプチドが結合された安定化ビタミンＣ誘導体を分離させた後、ジエチルエーテルでペプチドを沈殿させた。
【０１０７】
ビタミンＣのＣ−３位に結合されたアルコール基を保護しているベンジル基を除去するために、１０％のＰｄ／Ｃ０．１ｇをメタノール５０ｍｌに添加して、水素雰囲気下、２５℃で約１時間攪拌した。セライトを使用してＰｄ／Ｃを除去して得られた濾液を減圧濃縮した。得られたビタミンＣ誘導体は、０．１％のトリフルオロ酢酸およびセライトが含まれるアセトニトリルを用いて、逆相高速液体クロマトグラフィーカラム（Ｚｏｂａｘ、Ｃ８３００Å、２１．１ｍｍ×２５ｃｍ）で精製することによって、化学式１ａで表される、ペプチドが結合された安定化ビタミンＣ誘導体を０．５ｇ得た（下記の表１の化合物番号Ｉａ−１乃至Ｉａ−５の化合物）。
【０１０８】
６−２：化学式１ｂの化合物の合成
Ｎ末端のアミノ酸までカップリングされた、実施例５で合成されたペプチド（１ｍｍｏｌ）に２０％のピペリジン／Ｎ−メチルピロリドン溶液５０ｍｌを添加して、Ｆｍｏｃ基を除去した。Ｎ−メチルピロリドンおよびジクロロメタンで洗浄した後、実施例２で合成されたビタミンＣ誘導体をカップリングさせた。カップリング終了後、Ｎ−メチルピロリドンおよびジクロロメタンで数回洗浄した後、窒素ガスで乾燥させた。その後、トリフルオロ酢酸５０ｍｌを添加して、２５℃で３時間反応させて、ペプチド保護基およびビタミンＣのＣ−５位に結合されたアルコール基を保護しているｔｅｒｔブチロキシカルボニル基を除去した。レジンからペプチドが結合された安定化ビタミンＣ誘導体を分離させた後、ジエチルエーテルでペプチドを沈殿させた。
【０１０９】
ビタミンＣのＣ−３位に結合されたアルコール基を保護しているベンジル基を除去するために、１０％のＰｄ／Ｃ０．１ｇをメタノール５０ｍｌに添加して、水素雰囲気下、２５℃で約１時間攪拌した。セライトを使用してＰｄ／Ｃを除去した後、得られた濾液を減圧濃縮した。得られたビタミンＣ誘導体は、０．１％のトリフルオロ酢酸およびセライトが含まるアセトニトリルを用いて、逆相高速液体クロマトグラフィーカラム（Ｚｏｂａｘ、Ｃ８３００Å、２１．１ｍｍ×２５ｃｍ）で精製することによって、化学式１ｂで表される、ペプチドが結合された安定化ビタミンＣ誘導体を０．５ｇ得た（下記の表１の化合物番号Ｉｂ−１乃至Ｉｂ−５の化合物）。
【０１１０】
６−３：化学式１ｃの化合物の合成
実施例６−１で合成した化学式１ａの化合物０．５ｇを３次精製水５０ｍｌに溶解した後、陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ５０ｗ−８ｘ０．５ｇを添加した。２５℃で２４時間攪拌した。濾過後、濾液にエタノール５００ｍｌを添加することで固体を生成、濾過および真空乾燥することによって、化学式１ｃで表される、ペプチドが結合された安定化ビタミンＣ誘導体を０．４ｇ合成した（下記の表１の化合物番号Ｉｃ−１乃至Ｉｃ−５の化合物）。
【０１１１】
６−４：化学式１ｄの化合物の合成
実施例６−２で合成した化学式１ｂの化合物０．５ｇを３次精製水５０ｍｌに溶解した後、陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ５０ｗ−８ｘ０．５ｇを添加した。２５℃で２４時間攪拌した。濾過後、濾液にエタノール５００ｍｌを添加することで固体を生成、濾過および真空乾燥することによって、化学式１ｄで表される、ペプチドが結合された安定化ビタミンＣ誘導体０．４ｇを合成した（下記の表１の化合物番号Ｉｄ−１乃至Ｉｄ−５の化合物）。
【０１１２】
６−５：化学式２ａの化合物の合成
Ｎ末端のアミノ酸までカップリングされた前記実施例５で合成されたペプチド（１ｍｍｏｌ）に２０％のピペリジン／Ｎ−メチルピロリドン溶液５０ｍｌを添加して、Ｆｍｏｃ基を除去した。Ｎ−メチルピロリドンおよびジクロロメタンで洗浄した後、実施例３で合成されたビタミンＣ誘導体をカップリングさせた。カップリング終了後、Ｎ−メチルピロリドンおよびジクロロメタンで数回洗浄した後、窒素ガスで乾燥させた。その後、トリフルオロ酢酸５０ｍｌを添加して、２５℃で３時間反応させて、ペプチド保護基を除去した。レジンからペプチドが結合された安定化ビタミンＣ誘導体を分離させた後、ジエチルエーテルにペプチドを沈殿させた。
【０１１３】
ビタミンＣのＣ−３位に結合されたアルコール基を保護しているベンジル基を除去するために、１０％のＰｄ／Ｃ０．１ｇをメタノール５０ｍｌに添加して、水素雰囲気下、２５℃で約１時間攪拌した。セライトを使用してＰｄ／Ｃを除去した後、得られた濾液を減圧濃縮した。得られたビタミンＣ誘導体は、０．１％のトリフルオロ酢酸およびセライトが含まれるアセトニトリルを用いて、逆相高速液体クロマトグラフィーカラム（Ｚｏｂａｘ、Ｃ８３００Å、２１．１ｍｍ×２５ｃｍ）で精製することによって、化学式２ａで表される、ペプチドが結合された安定化ビタミンＣ誘導体を０．６ｇ得た（下記の表１の化合物番号ＩＩａ−１乃至ＩＩａ−５の化合物）。
【０１１４】
６−６：化学式２ｂの化合物の合成
Ｎ末端のアミノ酸までカップリングされた前記実施例５で合成されたペプチド（１ｍｍｏｌ）に２０％のピペリジン／Ｎ−メチルピロリドン溶液５０ｍｌを添加して、Ｆｍｏｃ基を除去した。Ｎ−メチルピロリドンおよびジクロロメタンで洗浄した後、実施例４で合成されたビタミンＣ誘導体をカップリングさせた。カップリング終了後、Ｎ−メチルピロリドンおよびジクロロメタンで数回洗浄した後、窒素ガスで乾燥させた。その後、トリフルオロ酢酸５０ｍｌを添加して、２５℃で３時間反応させて、ペプチド保護基を除去した。レジンからペプチドが結合された安定化ビタミンＣ誘導体を分離させた後、ジエチルエーテルにペプチドを沈殿させた。
【０１１５】
ビタミンＣのＣ−３位に結合されたアルコール基を保護しているベンジル基を除去するために、１０％のＰｄ／Ｃ０．１ｇをメタノール５０ｍｌに添加して、水素雰囲気下、２５℃で約１時間攪拌した。セライトを使用してＰｄ／Ｃを除去した後、得られた濾液を減圧濃縮した。得られたビタミンＣ誘導体は、０．１％のトリフルオロ酢酸およびセライトが含まれるアセトニトリルを用いて、逆相高速液体クロマトグラフィーカラム（Ｚｏｂａｘ、Ｃ８３００Å、２１．１ｍｍ×２５ｃｍ）で精製することによって、化学式２ｂで表される、ペプチドが結合された安定化ビタミンＣ誘導体を０．６ｇ得た（下記の表１の化合物番号ＩＩｂ−１乃至ＩＩｂ−５の化合物）。
【０１１６】
６−７：化学式２ｃの化合物の合成
実施例６−５で合成した化学式２ａの化合物０．５ｇを３次精製水５０ｍｌに溶解した後、陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ５０ｗ−８ｘ０．５ｇを添加した。２５℃で２４時間攪拌した。濾過後、濾液にエタノール５００ｍｌを添加することで固体を生成、濾過および真空乾燥することによって、化学式２ｃで表される、ペプチドが結合された安定化ビタミンＣ誘導体を０．５ｇ得た（下記の表１の化合物番号ＩＩｃ−１乃至ＩＩｃ−５の化合物）。
【０１１７】
６−８：化学式２ｄの化合物の合成
実施例６−２で合成した化学式１ｂの化合物０．５ｇを３次精製水５０ｍｌに溶解した後、陽イオン交換樹脂Ｄｏｗｅｘ５０ｗ−８ｘ０．５ｇを添加した。２５℃で２４時間攪拌した。濾過後、濾液にエタノール５００ｍｌを添加することで固体を生成、濾過および真空乾燥することによって、化学式２ｄで表されるペプチドが結合された安定化ビタミンＣ誘導体を０．５ｇ合成した（下記の表１の化合物番号ＩＩｄ−１乃至ＩＩｄ−５の化合物）。
【０１１８】
【表１】
2009541306.tif 000048
2009541306.tif 000049
【０１１９】
表１で、化合物番号Ｉａ、Ｉｂ、Ｉｃ、Ｉｄ、ＩＩａ、ＩＩｂ、ＩＩｃ、およびＩＩｄは各々化学式１ａ、１ｂ、１ｃ、１ｄ、２ａ、２ｂ、２ｃ、および２ｄの化合物を示す。
【０１２０】
化合物Ｉａ−１に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．９５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．７０（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．２１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１２１】
化合物Ｉａ−２に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．９３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．６６（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．７０（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．１７（ｍ、ペプチド−Ｈ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．０８（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１２２】
化合物Ｉａ−３に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．９３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．６６（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．７０（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．１７（ｍ、ペプチド−Ｈ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．０８（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１２３】
化合物Ｉａ−４に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：２．０１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．７０（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、３．５１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．０９（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．４０（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１２４】
化合物Ｉａ−５に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．９１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．１３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．４２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．６１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．７０（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．５３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１２５】
化合物Ｉｂ−１に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．９５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．７０（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．２１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１２６】
化合物Ｉｂ−２に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．９３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．６６（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．７０（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．１７（ｍ、ペプチド−Ｈ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．０８（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１２７】
化合物Ｉｂ−３に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．９３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．６６（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．７０（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．１７（ｍ、ペプチド−Ｈ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．０８（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１２８】
化合物Ｉｂ−４に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：２．０１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．７０（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、３．５１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．０９（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．４０（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１２９】
化合物Ｉｂ−５に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．９１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．１３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．４２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．６１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．７０（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．５３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１３０】
化合物Ｉｃ−１に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．９５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．２１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１３１】
化合物Ｉｃ−２に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．９３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．６６（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、３．１７（ｍ、ペプチド−Ｈ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．０８（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１３２】
化合物Ｉｃ−３に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．９３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．６６（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、３．１７（ｍ、ペプチド−Ｈ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．０８（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１３３】
化合物Ｉｃ−４に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：２．０１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、３．５１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．０９（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．４０（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１３４】
化合物Ｉｃ−５に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．９１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．１３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．４２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．６１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．５３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１３５】
化合物Ｉｄ−１に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．９５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．２１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１３６】
化合物Ｉｄ−２に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．９３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．６６（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、３．１７（ｍ、ペプチド−Ｈ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．０８（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１３７】
化合物Ｉｄ−３に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．９３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．６６（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、３．１７（ｍ、ペプチド−Ｈ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．０８（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１３８】
化合物Ｉｄ−４に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：２．０１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、３．５１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．０９（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．４０（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１３９】
化合物Ｉｄ−５に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．９１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．１３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．４２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．６１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．５３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１４０】
化合物ＩＩａ−１に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、０．９５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、２．７０（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．２１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１４１】
化合物ＩＩａ−２に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、０．９３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．６６（ｍ、ｐｅｐｔｉｄｅ−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、２．７０（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．１７（ｍ、ペプチド−Ｈ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．０８（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１４２】
化合物ＩＩａ−３に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、０．９３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．６６（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、２．７０（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．１７（ｍ、ペプチド−Ｈ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．０８（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１４３】
化合物ＩＩａ−４に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、２．０１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、２．７０（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、３．５１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．０９（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．４０（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１４４】
化合物ＩＩａ−５に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、０．９１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．１３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．４２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、２．６１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．７０（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．５３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１４５】
化合物ＩＩｂ−１に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、０．９５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、２．７０（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．２１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１４６】
化合物ＩＩｂ−２に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、０．９３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．６６（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、２．７０（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．１７（ｍ、ペプチド−Ｈ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．０８（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１４７】
化合物ＩＩｂ−３に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、０．９３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．６６（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、２．７０（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．１７（ｍ、ペプチド−Ｈ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．０８（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１４８】
化合物ＩＩｂ−４に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、２．０１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、２．７０（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、３．５１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．０９（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．４０（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１４９】
化合物ＩＩｂ−５に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、０．９１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．１３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．４２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、２．６１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．７０（ｍ、１２Ｈ、Ｐ（Ｏ）（Ｎ（ＣＨ３）２）２）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．５３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１５０】
化合物ＩＩｃ−１に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、０．９５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．２１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１５１】
化合物ＩＩｃ−２に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、０．９３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．６６（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、３．１７（ｍ、ペプチド−Ｈ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．０８（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１５２】
化合物ＩＩｃ−３に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、０．９３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．６６（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、３．１７（ｍ、ペプチド−Ｈ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．０８（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１５３】
化合物ＩＩｃ−４に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、２．０１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、３．５１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．０９（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．４０（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１５４】
化合物ＩＩｃ−５に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、０．９１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．１３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．４２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、２．６１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．５３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１５５】
化合物ＩＩｄ−１に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、０．９５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．２１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１５６】
化合物ＩＩｄ−２に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、０．９３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．６６（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、３．１７（ｍ、ペプチド−Ｈ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．０８（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１５７】
化合物ＩＩｄ−３に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、０．９３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．６６（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、３．１７（ｍ、ペプチド−Ｈ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．０８（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１５８】
化合物ＩＩｄ−４に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、２．０１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、３．５１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．０９（ｓ、２Ｈ、ペプチド−Ｈ）、４．４０（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１５９】
化合物ＩＩｄ−５に対する１Ｈ ＮＭＲ（Ｄ２Ｏ）：０．８８（ｔ、３Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、０．９１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、１．２８（ｍ、２６Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、１．５５（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．１３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．４２（ｍ、ペプチド−Ｈ）、２．５２（ｍ、４Ｈ、ＣＨ２ＣＨ２ＣＯＮＨ）、２．５３（ｔ、２Ｈ、Ｃ（Ｏ）ＣＨ２（ＣＨ２）１３ＣＨ３）、２．６１（ｍ、ペプチド−Ｈ）、３．３３（ｔｔ、２Ｈ、Ｃ−６−Ｈ２）、４．５３（ｍ、ペプチド−Ｈ）、４．９８（ｓ、１Ｈ、Ｃ−５−Ｈ）、５．４３（ｔ、Ｈ、Ｃ−４−Ｈ２）
【０１６０】
実験実施例１：コラーゲン生合成能
ヒト皮膚線維芽細胞に本発明の有効活性物質を添加して、細胞レベルでコラーゲン合成促進効果を試験した。
【０１６１】
生合成されたコラーゲンは、ＥＬＩＳＡアッセイ法で測定した。有効成分物質は対照群には添加しなかった。対照群を１００％にして、相対的なコラーゲン生成能を計算した。詳細な実験方法は、下記の通りである。
【０１６２】
３，０００個のヒト新生児皮膚線維芽細胞（Ｃａｍｂｒｅｘ）を、細胞培養用９６ウェルプレートに一定に分注して、０．１％のＦＢＳ（ウシ胎児血清）が含まれているＤＭＥＭ（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ'ｓ Ｍｏｄｉｆｉｅｄ Ｅａｇｌｅ Ｍｅｄｉａ、Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）中で、３７℃、５％ＣＯ２の条件下、インキュベーター中で２４時間培養した。０．１％のＦＢＳが含まれているＤＭＥＭ中に、試験物質を各々１０μＭの濃度で溶解させた。各々の２００μｌを細胞に処理した後、７２時間培養した。上清をｔｙｐｅ１コラーゲン抗体がコーティングされている９６ウェルプレートで処理した。常温で２時間反応させた後、上清を除去した。０．０５％のＴｗｅｅｎ２０が含まれているＰＢＳ（ＰＢＳＴ）で洗浄し、ビオチン結合２次抗体で９６ウェルプレートを常温で１時間反応させた。反応終了後、上清を除去した。ＰＢＳＴ洗浄後、結合したコラーゲンを測定するために、ＳＡ−ＨＲＰ（ストレプトアビジン−セイヨウワサビペルオキシターゼ、シグマ社製）を結合させた。ＴＭＢ（３，３’−５，５’ テトラメチルベンジジン、シグマ社製）で処理後、光を遮断して常温で１５分間反応させた。反応は１Ｎ硫酸で停止させて、４５０ｎｍで吸光度を測定した。
【０１６３】
結果を図１に示した。図１からわかるように、、本発明の化合物Ｉｃ−１は、ビタミンＣ（Ｖｃ）、アスコビルリン酸マグネシウム（ＭＡＰ）、スクシノイルアスコビルペンタペプチド（Ｖｃ−ＫＴＴＫＳ）、およびパルミトイルペンタペプチド（Ｐａｌ−ＫＴＴＫＳ）などの化合物よりはるかに優れたコラーゲン生合成能を示した。本発明の化合物Ｉｃ−２、Ｉｃ−３、Ｉｃ−４、およびＩｃ−５もまた、優れたコラーゲン生合成能を有することが確認された。よって、本発明の化合物Ｉｃ−１、Ｉｃ−２、Ｉｃ−３、Ｉｃ−４、およびＩｃ−５は、安定性の改善効果に加えて、優れたコラーゲン生合成能を有するという事実を立証するものである。
【０１６４】
実験実施例２：細胞毒性評価
化粧品に使用される原料としての１次安全性を検証するために、本発明の化合物Ｉｃ−１、Ｉｃ−２、Ｉｃ−３、Ｉｃ−４、およびＩｃ−５、およびビタミンＣ（Ｖｃ）、アスコビルリン酸マグネシウム（ＭＡＰ）、スクシノイルアスコビルペンタペプチド（Ｖｃ−ＫＴＴＫＳ）、およびパルミトイルペンタペプチド（Ｐａｌ−ＫＴＴＫＳ）の細胞毒性を確認した。細胞毒性確認のために、３，０００個のヒト新生児皮膚線維芽細胞（Ｃａｍｂｒｅｘ）を細胞培養用９６ウェルプレートに分注して、０．１％のＦＢＳが含まれているＤＭＥＭ（Ｇｉｂｃｏ ＢＲＬ）中で、３７℃、５％ＣＯ２の条件下、インキュベーター中２４時間で培養した。細胞毒性は、試験物質で処理して４８時間後に、ＭＴＴ アッセイ法（ＭｏｓｓｍａｎＴ．，１９８３，Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ６５，５５−６３）によって測定した。
【０１６５】
結果を図２に示した。図２からわかるように、本発明の化合物Ｉｃ−１は、ビタミンＣ（Ｖｃ）、スクシノイルアスコビルペンタペプチド（Ｖｃ−ＫＴＴＫＳ）、およびパルミトイルペンタペプチド（Ｐａｌ−ＫＴＴＫＳ）と比較する時、５ｍＭの濃度でも細胞毒性が現れなかった。さらに、本発明の他の化合物Ｉｃ−２、Ｉｃ−３、Ｉｃ−４、およびＩｃ−５も、５ｍＭで細胞毒性が現れなかった。よって、本発明の化合物が優れた安全性を有するということが立証された。
【０１６６】
実験実施例３：安定性の評価
本発明の化合物Ｉａ−１、Ｉｃ−１、ビタミンＣ、アスコビルリン酸マグネシウム、およびスクシノイルアスコビルペンタペプチドを各々１０μｇ／ｍｌになるように３次精製水に溶解させた。２５℃および５０℃で３０日間保管して、ＵＶ（２５４ｎｍ）での吸光度の変化によって、試験物質の安定性を評価した。
【０１６７】
【表２】
2009541306.tif 000050
【０１６８】
表２に示したように、本発明の化合物は、ビタミンＣおよびスクシノイルアスコビルペンタペプチドより優れた安定性を示した。その上、既存の最も安定したビタミンＣ誘導体として知られていたアスコビルリン酸マグネシウムと同等以上の安定性を示した。さらに、本発明の化合物は、優れたコラーゲン生合成能も示す。
【０１６９】
実験実施例１乃至３で得られた結果からわかるように、本発明のビタミンＣ誘導体化合物は、既存の最も安定したビタミンＣ誘導体として知られていた物質と同等以上の安定性および低い細胞毒性を示し、および優れたコラーゲン生合成能を有する。よって、本発明のビタミンＣ誘導体化合物は、皮膚状態の改善に使用しうる。
【０１７０】
上記の記載から明らかになったように、本発明のコラーゲン生成ペプチドが結合した安定化ビタミンＣ誘導体は、安定性、安全性、皮膚浸透力などが向上して、皮膚刺激などの毒性がない。皮膚状態の改善および悪化抑制に非常に効果的であるので、本発明のコラーゲン生成ペプチドが結合した安定化ビタミンＣ誘導体は、皮膚用薬品、化粧品などの産業分野に利用することができる。
【図１】
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【図２】
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【国際調査報告】
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