(57)【要約】  式（Ｉ）【化１】2009534358.tif 000030〔式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は本明細書に定義のとおりである〕の化合物、ならびにそれらの製造および医薬としての使用。
2009534358.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
遊離形または塩形の式Ｉ
【化１】
2009534358.tif 000019
〔式中、
Ｒ１は１〜４個の環窒素原子を含み、そして所望により酸素および硫黄から成る群から選択される１〜４個の他のヘテロ原子を含むＮ−結合３−〜１２−員ヘテロ環式基であり、当該基は所望により、オキソ、Ｃ１−Ｃ８−アルコキシ、Ｃ６−Ｃ１０−アリール、Ｒ１ａまたは所望によりＯＨで置換されたＣ１−Ｃ８−アルキルで置換されているか、または
Ｒ１は−ＮＨ−Ｃ１−Ｃ８−アルキルカルボニル、−ＮＨ−Ｃ３−Ｃ８−シクロアルキルカルボニル、−ＮＨ−ＳＯ２−Ｃ１−Ｃ８−アルキル、−ＮＨ−Ｃ７−Ｃ１４−アラルキルカルボニル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−３−〜１２−員ヘテロ環式基、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ６−Ｃ１０−アリールまたは所望によりＲ１ａで置換された−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｃ１−Ｃ８−アルキルであり、ここでＲ１ａは窒素、酸素および硫黄から成る群から選択される少なくとも１個の環ヘテロ原子を３−〜１２−員ヘテロ環式基であり、当該３−〜１２−員ヘテロ環式は所望により、ハロ、シアノ、オキソ、ＯＨ、カルボキシ、アミノ、ニトロ、Ｃ１−Ｃ８−アルキル、Ｃ１−Ｃ８−アルキルスルホニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ８−アルキルカルボニルまたは所望によりアミノカルボニルで置換されたＣ１−Ｃ８−アルコキシで置換されており；
Ｒ２はＣ１−Ｃ８−アルキル、Ｒ−およびＳ−１−フェニルエチル、非置換ベンジル基、および１個以上の位置でＣ１−Ｃ８−アルキル、アミノ、ハロ、Ｃ１−Ｃ８−ハロアルキル、ニトロ、ＯＨ、アセトアミド、Ｃ１−Ｃ８−アルコキシおよびスルホから成る群から選択される置換基で置換されたフェニルエチルもしくはベンジル基から成る群から選択されるか、または
Ｒ２は
【化２】
2009534358.tif 000020
（式中、
Ｒ２ａはハロ、トリフルオロメチル、シアノ、Ｃ１−Ｃ８−アルキル、Ｃ１−Ｃ８−アルキルオキシ、エテニルまたはエチニルであり；
Ｄはオキシ、チオ、ＮＨ、Ｃ１−Ｃ８−アルキルオキシ、Ｃ１−Ｃ８−アルキルチオまたは−ＣＯ−アルキルアミノであり；そして
Ｇは所望により酸素、硫黄および窒素から成る群から選択される１〜３個のヘテロ原子を有する部分飽和、完全飽和または完全不飽和５−〜８−員環、または所望により酸素、硫黄および窒素から成る群から選択される１〜４個のヘテロ原子を独立して有する２個の縮合部分飽和、完全飽和または完全不飽和３−〜６−員環から成る二環式環であり；ここで当該Ｇは所望により独立して、ハロ、Ｃ１−Ｃ８−アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、シアノ、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、ヒドロキシまたはＣ１−Ｃ８−アルコキシでモノ−、ジ−またはトリ−置換されているか、または
Ｇはシアノ、Ｃ１−Ｃ８−アルコキシカルボニル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルコキシカルボニル、Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、Ｃ（Ｓ）ＮＲ４Ｒ５、Ｃ（ＮＨ）ＮＲ４ＮＲ５、Ｃ（Ｎ（Ｃ１−Ｃ３）アルキル）ＮＲ４Ｒ５またはＣ（Ｎ（Ｃ３−Ｃ１０）シクロアルキル）ＮＲ４Ｒ５である）
であり、
Ｒ３はＨ、ハロ、所望によりハロもしくはＯＨで置換されたＣ１−Ｃ８−アルキル、Ｃ１−Ｃ８−アルコキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ８−アルキルアミノ、Ｃ２−Ｃ１０−アルケン、所望によりＣ１−Ｃ８−アルキルで置換されたＣ２−Ｃ１０−アルキン、所望によりＣ１−Ｃ８−アルキルもしくはＯＨで置換されたアリール、チオおよびＣ１−Ｃ８−アルキルチオから選択され；
Ｒ４は結合、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ１０−アルコキシ、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルコキシ、または所望によりＣ１−Ｃ８−アルキルと結合しており、所望により酸素、硫黄および窒素から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する部分飽和、完全飽和または完全不飽和５−〜８−員環、または二環式環もしくは所望によりＣ１−Ｃ８−架橋を有する二環式環であって、当該二環式環または架橋二環式環は所望により窒素、硫黄および窒素から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有しており、ここで前記Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ１−Ｃ１０−アルコキシ、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルコキシまたはＲ４環は所望により独立して、ハロ、Ｃ１−Ｃ８−アルキル、トリフルオロメチル、ニトロ、シアノ、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、ＯＨまたはＣ１−Ｃ８−アルコキシでモノ−、ジ−またはトリ−置換されており；
Ｒ５は結合、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８−アルキルまたはＣ１−Ｃ１０−シクロアルキルであり、そして
Ｒ４とＲ５はそれらが結合している窒素と一体となって、完全飽和または部分不飽和４〜９員環を形成し、当該環は所望により架橋されており、所望により酸素、硫黄および窒素から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有しており、当該環は所望により独立して、オキソ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ８−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ８−アルキル、アミノ、モノ−Ｎ−もしくはジ−Ｎ，Ｎ−Ｃ１−Ｃ８−アルキルアミノカルボニル、モノ−Ｎ−もしくはジ−Ｎ，Ｎ−Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキルアミノカルボニル、Ｎ−Ｃ１−Ｃ８−アルキル−Ｎ−Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキルアミノカルボニル、モノ−Ｎ−もしくはジ−Ｎ，Ｎ−Ｃ１−Ｃ８−アルキルアミノ、モノ−Ｎ−もしくはジ−Ｎ，Ｎ−Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキルアミン、Ｎ−Ｃ１−Ｃ８−アルキル−Ｎ−Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキルアミノ、ホルミルアミノ、Ｃ１−Ｃ８−アルキルカルボニルアミノ、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキルカルボニルアミノ、Ｃ１−Ｃ８−アルコキシカルボニルアミノ、Ｎ−Ｃ１−Ｃ８−アルコキシカルボニル−Ｎ−Ｃ１−Ｃ８−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ８−スルファモイル、Ｃ１−Ｃ８−アルキルスルホニルアミノ、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキルスルホニルアミノまたは所望によりＣ１−Ｃ８−アルキルと結合しており、所望により酸素、硫黄および窒素から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する部分飽和、完全飽和または完全不飽和５−〜８−員環、または所望によりＣ１−Ｃ８−アルキルと結合しており、所望により酸素、硫黄および窒素から成る群から選択される１〜４個のヘテロ原子を独立して有し、所望によりハロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｃ１−Ｃ８−アルキルもしくはＣ１−Ｃ８−アルコキシでモノ−もしくはジ−置換されている２個の縮合部分飽和、完全飽和または完全不飽和３−〜６−員環から成る二環式環でモノ−もしくはジ−置換されている〕
の化合物。
【請求項２】
Ｒ１が１〜４個の環窒素原子を含み、そして所望により酸素および硫黄から成る群から選択される１〜４個の他のヘテロ原子を含むＮ−結合３−〜１２−員ヘテロ環式基を意味するか、または
Ｒ１が−ＮＨ−Ｃ１−Ｃ８−アルキルカルボニルであり；
Ｒ２がＣ１−Ｃ８−アルキルまたは所望によりハロゲンで置換されたベンジルであるか、または
Ｒ２が
【化３】
2009534358.tif 000021
（式中、
Ｒ２ａがハロ、トリフルオロメチル、シアノ、Ｃ１−Ｃ８−アルキル、Ｃ１−Ｃ８−アルキルオキシ、エテニルまたはエチニルであり；
Ｄがオキシ、チオ、ＮＨ、Ｃ１−Ｃ８−アルキルオキシ、Ｃ１−Ｃ８−アルキルチオまたは−ＣＯ−アルキルアミノであり；そして
Ｇが所望により酸素、硫黄および窒素から成る群から選択される１〜３個のヘテロ原子を有する部分飽和、完全飽和または完全不飽和５−〜８−員環、または所望により酸素、硫黄および窒素から成る群から選択される１〜４個のヘテロ原子を独立して有する２個の縮合部分飽和、完全飽和または完全不飽和３−〜６−員環から成る二環式環であり；ここで当該Ｇが所望により独立してＣ１−Ｃ８−アルキルでモノ−、ジ−またはトリ−置換されている）
であり、
Ｒ３がＨ、ハロ、所望によりハロもしくはＯＨで置換されたＣ１−Ｃ８−アルキル、Ｃ１−Ｃ８−アルコキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ８−アルキルアミノ、Ｃ２−Ｃ１０−アルケン、所望によりＣ１−Ｃ８−アルキルで置換されたＣ２−Ｃ１０−アルキン、所望によりＣ１−Ｃ８−アルキルもしくはＯＨで置換されたアリール、チオおよびＣ１−Ｃ８−アルキルチオから選択される、
請求項１の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が１〜４個の環窒、酸素および硫黄から成る群から選択される少なくとも１個の環ヘテロ原子を含む結合５−〜１２−員ヘテロ環式基であるか、または
Ｒ１が−ＮＨ−Ｃ１−Ｃ８−アルキルカルボニルであり；
Ｒ２が
【化４】
2009534358.tif 000022
（式中、
Ｒ２ａがハロゲンであり；
ＤがＣ１−Ｃ８−アルコキシであり；そして
Ｇがメチル基で置換された５−員ヘテロ環式環である）
であるか、または
Ｒ２がハロゲンで置換されたベンジルであるか、または
Ｒ２がＣ１−Ｃ８−アルキルであり；そして
Ｒ３がＨ、ハロ、または所望によりＣ１−Ｃ８−アルキルで置換されたＣ２−Ｃ１０−アルキンである、
請求項１の化合物。
【請求項４】
Ｒ１、Ｒ２およびＲ３が
【表１】
2009534358.tif 000023
である、請求項１の式Ｉ
【化５】
2009534358.tif 000024
の化合物。
【請求項５】
医薬として使用するための、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物。
【請求項６】
請求項１〜４のいずれかに記載の化合物を含む医薬組成物。
【請求項７】
アデノシンＡ３受容体の活性化によって介在される状態の処置用医薬の製造における、請求項１〜４のいずれかに記載の化合物の使用。
【請求項８】
アデノシンＡ３受容体の活性化によって介在される状態がリウマチ性関節炎である、請求項７に記載の化合物の使用。
【請求項９】
式（Ｉ）
【化６】
2009534358.tif 000025
〔式中、Ｒ１、Ｒ２およびＲ３は上記定義のとおりである〕
の化合物の製造方法であって：
（ｉ）（Ａ）式（Ｉ）の化合物の製造のために、式（Ｉａ）
【化７】
2009534358.tif 000026
〔式中、Ｒ２およびＲ３は上記定義のとおりである〕
の化合物をアセチルクロライドと塩基の存在下で反応させる工程；
（Ｂ）Ｒ３がＣ２−Ｃ８−アルキニルである式（Ｉ）の化合物の製造のために、式（Ｉｂ）
【化８】
2009534358.tif 000027
〔式中、Ｘは脱離基である〕
の化合物を式
【化９】
2009534358.tif 000028
〔式中、ＲはＣ１−Ｃ６−アルキルであり得る〕
の化合物と反応させる工程；
（Ｃ）式（Ｉ）の化合物の製造のために、式（Ｉｃ）
【化１０】
2009534358.tif 000029
〔式中、Ｒ１およびＲ３は上記定義のとおりであり；そして
Ｘは脱離基である〕
の化合物を、式Ｈ２Ｎ−Ｒ２（式中、Ｒ２は上記定義のとおりである）の化合物と塩基の存在下で反応させる工程；そして
（ｉｉ）得られた式（Ｉ）の化合物を遊離形または薬学的に許容される塩形で回収する工程；
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、有機化合物、それらの製造および医薬としての使用に関する。
【発明の開示】
【０００２】
１つの局面において本発明は、遊離形または塩形の式（Ｉ）
【化１】
2009534358.tif 000003
〔式中、
Ｒ１は１〜４個の環窒素原子を含み、そして所望により酸素および硫黄から成る群から選択される１〜４個の他のヘテロ原子を含むＮ−結合３−〜１２−員ヘテロ環式基であり、当該基は所望により、オキソ、Ｃ１−Ｃ８−アルコキシ、Ｃ６−Ｃ１０−アリール、Ｒ１ａまたは所望によりＯＨで置換されたＣ１−Ｃ８−アルキルで置換されているか、または
Ｒ１は−ＮＨ−Ｃ１−Ｃ８−アルキルカルボニル、−ＮＨ−Ｃ３−Ｃ８−シクロアルキルカルボニル、−ＮＨ−ＳＯ２−Ｃ１−Ｃ８−アルキル、−ＮＨ−Ｃ７−Ｃ１４−アラルキルカルボニル、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−３−〜１２−員ヘテロ環式基、−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ６−Ｃ１０−アリールまたは所望によりＲ１ａで置換された−ＮＨ−Ｃ（＝Ｏ）−Ｃ（＝Ｏ）−ＮＨ−Ｃ１−Ｃ８−アルキルであり、ここでＲ１ａは窒素、酸素および硫黄から成る群から選択される少なくとも１個の環ヘテロ原子を３−〜１２−員ヘテロ環式基であり、当該３−〜１２−員ヘテロ環式は所望により、ハロ、シアノ、オキソ、ＯＨ、カルボキシ、アミノ、ニトロ、Ｃ１−Ｃ８−アルキル、Ｃ１−Ｃ８−アルキルスルホニル、アミノカルボニル、Ｃ１−Ｃ８−アルキルカルボニルまたは所望によりアミノカルボニルで置換されたＣ１−Ｃ８−アルコキシで置換されており；
【０００３】
Ｒ２はＣ１−Ｃ８−アルキル、Ｒ−およびＳ−１−フェニルエチル、非置換ベンジル基、および１個以上の位置でＣ１−Ｃ８−アルキル、アミノ、ハロ、Ｃ１−Ｃ８−ハロアルキル、ニトロ、ＯＨ、アセトアミド、Ｃ１−Ｃ８−アルコキシおよびスルホから成る群から選択される置換基で置換されたフェニルエチルもしくはベンジル基から成る群から選択されるか、または
Ｒ２は
【化２】
2009534358.tif 000004
（式中、
Ｒ２ａはハロ、トリフルオロメチル、シアノ、Ｃ１−Ｃ８−アルキル、Ｃ１−Ｃ８−アルキルオキシ、エテニルまたはエチニルであり；
Ｄはオキシ、チオ、ＮＨ、Ｃ１−Ｃ８−アルキルオキシ、Ｃ１−Ｃ８−アルキルチオまたは−ＣＯ−アルキルアミノであり；そして
Ｇは所望により酸素、硫黄および窒素から成る群から選択される１〜３個のヘテロ原子を有する部分飽和、完全飽和または完全不飽和５−〜８−員環、または所望により酸素、硫黄および窒素から成る群から選択される１〜４個のヘテロ原子を独立して有する２個の縮合部分飽和、完全飽和または完全不飽和３−〜６−員環から成る二環式環であり；ここで当該Ｇは所望により独立して、ハロ、Ｃ１−Ｃ８−アルキル、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、ニトロ、シアノ、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、ヒドロキシまたはＣ１−Ｃ８−アルコキシでモノ−、ジ−またはトリ−置換されているか、または
Ｇはシアノ、Ｃ１−Ｃ８−アルコキシカルボニル、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルコキシカルボニル、Ｃ（Ｏ）ＮＲ４Ｒ５、Ｃ（Ｓ）ＮＲ４Ｒ５、Ｃ（ＮＨ）ＮＲ４ＮＲ５、Ｃ（Ｎ（Ｃ１−Ｃ３）アルキル）ＮＲ４Ｒ５またはＣ（Ｎ（Ｃ３−Ｃ１０）シクロアルキル）ＮＲ４Ｒ５である）
であり、
【０００４】
Ｒ３はＨ、ハロ、所望によりハロもしくはＯＨで置換されたＣ１−Ｃ８−アルキル、Ｃ１−Ｃ８−アルコキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ８−アルキルアミノ、Ｃ２−Ｃ１０−アルケン、所望によりＣ１−Ｃ８−アルキルで置換されたＣ２−Ｃ１０−アルキン、所望によりＣ１−Ｃ８−アルキルもしくはＯＨで置換されたアリール、チオおよびＣ１−Ｃ８−アルキルチオから選択され；
Ｒ４は結合、Ｈ、Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ１０−アルコキシ、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルコキシ、または所望によりＣ１−Ｃ８−アルキルと結合しており、所望により酸素、硫黄および窒素から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する部分飽和、完全飽和または完全不飽和５−〜８−員環、または二環式環もしくは所望によりＣ１−Ｃ８−架橋を有する二環式環であって、当該二環式環または架橋二環式環は所望により窒素、硫黄および窒素から独立して選択される１〜４個のヘテロ原子を有しており、ここで前記Ｃ１−Ｃ１０−アルキル、Ｃ１−Ｃ１０−アルコキシ、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルコキシまたはＲ４環は所望により独立して、ハロ、Ｃ１−Ｃ８−アルキル、トリフルオロメチル、ニトロ、シアノ、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキル、ＯＨまたはＣ１−Ｃ８−アルコキシでモノ−、ジ−またはトリ−置換されており；
Ｒ５は結合、Ｈ、Ｃ１−Ｃ８−アルキルまたはＣ１−Ｃ１０−シクロアルキルであり、そして
【０００５】
Ｒ４とＲ５はそれらが結合している窒素と一体となって、完全飽和または部分不飽和４〜９員環を形成し、当該環は所望により架橋されており、所望により酸素、硫黄および窒素から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有しており、当該環は所望により独立して、オキソ、ヒドロキシ、Ｃ１−Ｃ８−アルコキシ、Ｃ１−Ｃ８−アルキル、アミノ、モノ−Ｎ−もしくはジ−Ｎ，Ｎ−Ｃ１−Ｃ８−アルキルアミノカルボニル、モノ−Ｎ−もしくはジ−Ｎ，Ｎ−Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキルアミノカルボニル、Ｎ−Ｃ１−Ｃ８−アルキル−Ｎ−Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキルアミノカルボニル、モノ−Ｎ−もしくはジ−Ｎ，Ｎ−Ｃ１−Ｃ８−アルキルアミノ、モノ−Ｎ−もしくはジ−Ｎ，Ｎ−Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキルアミン、Ｎ−Ｃ１−Ｃ８−アルキル−Ｎ−Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキルアミノ、ホルミルアミノ、Ｃ１−Ｃ８−アルキルカルボニルアミノ、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキルカルボニルアミノ、Ｃ１−Ｃ８−アルコキシカルボニルアミノ、Ｎ−Ｃ１−Ｃ８−アルコキシカルボニル−Ｎ−Ｃ１−Ｃ８−アルキルアミノ、Ｃ１−Ｃ８−スルファモイル、Ｃ１−Ｃ８−アルキルスルホニルアミノ、Ｃ３−Ｃ１０−シクロアルキルスルホニルアミノまたは所望によりＣ１−Ｃ８−アルキルと結合しており、所望により酸素、硫黄および窒素から独立して選択される１〜３個のヘテロ原子を有する部分飽和、完全飽和または完全不飽和５−〜８−員環、または所望によりＣ１−Ｃ８−アルキルと結合しており、所望により酸素、硫黄および窒素から成る群から選択される１〜４個のヘテロ原子を独立して有し、所望によりハロ、トリフルオロメチル、トリフルオロメトキシ、Ｃ１−Ｃ８−アルキルもしくはＣ１−Ｃ８−アルコキシでモノ−もしくはジ−置換されている２個の縮合部分飽和、完全飽和または完全不飽和３−〜６−員環から成る二環式環でモノ−もしくはジ−置換されている〕
の化合物を提供する。
【０００６】
他の局面において本発明は、
遊離形または塩形の式（Ｉ）
【化３】
2009534358.tif 000005
〔式中、
Ｒ１が１〜４個の環窒素原子を含み、そして所望により酸素および硫黄から成る群から選択される１〜４個の他のヘテロ原子を含むＮ−結合３−〜１２−員ヘテロ環式基を意味するか、または
Ｒ１が−ＮＨ−Ｃ１−Ｃ８−アルキルカルボニルであり；
【０００７】
Ｒ２がＣ１−Ｃ８−アルキルまたは所望によりハロゲンで置換されたベンジルであるか、または
Ｒ２が
【化４】
2009534358.tif 000006
（式中、
Ｒ２ａがハロ、トリフルオロメチル、シアノ、Ｃ１−Ｃ８−アルキル、Ｃ１−Ｃ８−アルキルオキシ、エテニルまたはエチニルであり；
Ｄがオキシ、チオ、ＮＨ、Ｃ１−Ｃ８−アルキルオキシ、Ｃ１−Ｃ８−アルキルチオまたは−ＣＯ−アルキルアミノであり；そして
Ｇが所望により酸素、硫黄および窒素から成る群から選択される１〜３個のヘテロ原子を有する部分飽和、完全飽和または完全不飽和５−〜８−員環、または所望により酸素、硫黄および窒素から成る群から選択される１〜４個のヘテロ原子を独立して有する２個の縮合部分飽和、完全飽和または完全不飽和３−〜６−員環から成る二環式環であり；ここで当該Ｇが所望により独立してＣ１−Ｃ８−アルキルでモノ−、ジ−またはトリ−置換されている）
であり、
【０００８】
Ｒ３がＨ、ハロ、所望によりハロもしくはＯＨで置換されたＣ１−Ｃ８−アルキル、Ｃ１−Ｃ８−アルコキシ、アミノ、Ｃ１−Ｃ８−アルキルアミノ、Ｃ２−Ｃ１０−アルケン、所望によりＣ１−Ｃ８−アルキルで置換されたＣ２−Ｃ１０−アルキン、所望によりＣ１−Ｃ８−アルキルもしくはＯＨで置換されたアリール、チオおよびＣ１−Ｃ８−アルキルチオから選択される〕
の化合物を提供する。
【０００９】
式（Ｉ）において、Ｒ１は好適には窒素、酸素および硫黄から成る群から選択される少なくとも１個の環ヘテロ原子を含む５−〜１２−員ヘテロ環式環である。好ましくはＲ１はトリアゾールのような５−〜６−員ヘテロ環式環である。
【００１０】
式（Ｉ）において、Ｒ１はまた、好適には−ＮＨ−Ｃ１−Ｃ８−アルキルカルボニルである。−ＮＨ−Ｃ１−Ｃ８−アルキルカルボニルは好ましくは−ＮＨＣ（Ｏ）ＣＨ３である。
【００１１】
式（Ｉ）において、Ｒ２は好適には、
【化５】
2009534358.tif 000007
〔式中、
Ｒ２ａは好適にはハロゲン、例えば塩素であり；
Ｄは好適にはＣ１−Ｃ８−アルコキシであり；そして
Ｇは好適には５−員ヘテロ環式基、例えばメチル基でモノ−置換されたイソキサゾールである〕
である。
【００１２】
式（Ｉ）において、Ｒ２はまた好適には、ハロゲンでモノ−置換されたベンジルである。好ましくはハロゲンはヨウ素である。
【００１３】
式（Ｉ）において、Ｒ２はまた好適には、Ｃ１−Ｃ８−アルキル、好ましくはメチルである。
【００１４】
式（Ｉ）において、Ｒ３は好適には、Ｈ、ハロまたは所望によりＣ１−Ｃ８−アルキルで置換されたＣ２−Ｃ１０−アルキンである。
【００１５】
定義
定義
本明細書において使用されている用語は、下記の意味を有する：
「所望により置換された」は、１個以上の位置で、列挙した基の何れか１個または任意の組合せで置換されていてもよい基を意味する。
「ハロ」または「ハロゲン」は、本明細書において使用するとき、フッ素、塩素、臭素またはヨウ素であり得る。好ましくはハロは塩素である。
「ヒドロキシ」は、本明細書において使用するとき、ＯＨである。
【００１６】
「Ｃ１−Ｃ８−アルキル」は、本明細書において使用するとき、１〜８個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルキルを意味する。好ましくはＣ１−Ｃ８−アルキルはＣ１−Ｃ４−アルキルである。
「Ｃ１−Ｃ８−アルコキシ」は、本明細書において使用するとき、１〜８個の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖アルコキシ、例えばＯ−Ｃ１−Ｃ８−アルキルを意味する。好ましくはＣ１−Ｃ８−アルコキシはＣ１−Ｃ４−アルコキシである。
【００１７】
「Ｃ１−Ｃ８−アルキルアミノ」および「ジ（Ｃ１−Ｃ８−アルキル）アミノ」は、本明細書において使用するとき、それぞれ１または２個の、同一または異なっていてもよい上記定義のＣ１−Ｃ８−アルキル基で置換されているアミノを意味する。
「Ｃ１−Ｃ８−アルキルカルボニル」および「Ｃ１−Ｃ８−アルコキシカルボニル」は、本明細書において使用するとき、カルボニル基に炭素原子で結合している上記定義のＣ１−Ｃ８−アルキルまたはＣ１−Ｃ８−アルコキシをそれぞれ意味する。
【００１８】
「Ｃ６−Ｃ１０−アリール」、本明細書において使用するとき、６−１０個の炭素原子を含む１価炭素環式芳香族性基を意味し、これは例えば、単環式基、例えばフェニル；または二環式基、例えばナフチルであり得る。
「Ｃ７−Ｃ１４−アラルキル」は、本明細書において使用するとき、上記定義のＣ６−Ｃ１０−アリールで置換されたアルキル、例えばＣ１−Ｃ４−アルキルを意味する。好ましくは、Ｃ７−Ｃ１４−アラルキルはＣ７−Ｃ１０−アラルキル、例えばフェニル−Ｃ１−Ｃ４−アルキルである。
【００１９】
「Ｃ１−Ｃ８−アルキルアミノカルボニル」および「Ｃ３−Ｃ８−シクロアルキルアミノカルボニル」は、本明細書において使用するとき、カルボニル基と炭素原子で結合している上記定義のＣ１−Ｃ８−アルキルアミノおよびＣ３−Ｃ８−シクロアルキルアミノをそれぞれ意味する。好ましくはＣ１−Ｃ８−アルキルアミノカルボニルおよびＣ３−Ｃ８−シクロアルキル−アミノカルボニルは、それぞれＣ１−Ｃ４−アルキルアミノカルボニルおよびＣ３−Ｃ８−シクロアルキルアミノカルボニルである。
【００２０】
「Ｃ３−Ｃ１５−炭素環式基」は、本明細書において使用するとき、３〜１５個の環炭素原子を有する炭素環式基、例えば芳香族性または非芳香族性単環式基、例えばシクロプロピル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチルもしくはフェニル；または二環式基、例えばビシクロオクチル、ビシクロノニル、ビシクロデシル、インダニルもしくはインデニルを意味し、これらはいずれも、１個以上、通常１または２個のＣ１−Ｃ４−アルキル基で置換されていてもよい。
【００２１】
「窒素、酸素および硫黄から成る群から選択される少なくとも１個の環ヘテロ原子を含む３−〜１２−員ヘテロ環式環」は、本明細書において使用するとき、例えばフラン、ピロール、ピロリジン、ピラゾール、イミダゾール、トリアゾール、イソトリアゾール、テトラゾール、チアジアゾール、イソチアゾール、オキサジアゾール、ピリジン、ピペリジン、ピラジン、オキサゾール、イソキサゾール、ピラジン、ピリダジン、ピリミジン、ピペラジン、ピロリジン、モルホリノ、トリアジン、オキサジンまたはチアゾールである。好ましいヘテロ環式環には、ピペラジン、ピロリジン、モルホリノ、イミダゾール、イソトリアゾール、ピラゾール、テトラゾール、チアゾール、トリアゾール、チアジアゾール、ピリジン、ピペリジン、ピラジン、フラン、オキサゾール、イソキサゾール、オキサジアゾールおよびアゼチジンが含まれる。３−〜−１２−員ヘテロ環式環は、置換または非置換であり得る。
【００２２】
本明細書および特許請求の範囲において、文脈がそうでないことを要求しない限り、「含む」なる用語またはその変形、例えば「含んで成る」または「含有」は、記載の整数もしくは工程、または整数もしくは工程の群を含むが、あらゆる他の整数もしくは工程、または整数もしくは工程の群を排除しないことを意図していると理解される。当業者に理解されるとおり、化学的に可能である置換基の組合せのみが本発明の態様である。
【００２３】
とりわけ好ましい特定の式（Ｉ）の化合物は、下記実施例に記載のものである。
【００２４】
立体異性体は不斉炭素原子が存在する化合物である。当該化合物は個々の光学的に活性な異性体形態、またはそれらの混合物、例えばジアステレオマー混合物として存在する。本発明は、個々の光学的に活性なＲおよびＳ異性体、ならびにそれらの混合物をいずれも包含する。個々の異性体を、当業者に周知の方法、例えばキラル高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）で分割することができる。
互変異性体は、平衡状態で存在し、容易に一方の異性体形態から他方に変換することができる２個またはそれ以上の構造異性体の１個である。
【００２５】
本発明の化合物は、非溶媒和物形態および溶媒和物形態のいずれでも存在し得る。「溶媒和物」なる用語は、本明細書において、本発明の化合物と１種以上の薬学的に許容される溶媒分子、例えばエタノールを含む分子複合体を説明するために使用する。「水和物」なる用語は、前記溶媒が水であるときに使用される。
【００２６】
合成
本発明はまた、他の局面において、遊離形または塩形の式（Ｉ）の化合物の製造方法であって：
（ｉ）（Ａ）式（Ｉ）の化合物の製造のために、式（Ｉａ）
【化６】
2009534358.tif 000008
〔式中、Ｒ２およびＲ３は上記定義のとおりである〕
の化合物をアセチルクロライドと塩基の存在下で反応させる工程；
【００２７】
（Ｂ）Ｒ３がＣ２−Ｃ８−アルキニルである式（Ｉ）の化合物の製造のために、式（Ｉｂ）
【化７】
2009534358.tif 000009
〔式中、Ｘは脱離基である〕
の化合物を式
【化８】
2009534358.tif 000010
〔式中、ＲはＣ１−Ｃ６−アルキルであり得る〕
の化合物と反応させる工程；
【００２８】
（Ｃ）式（Ｉ）の化合物の製造のために、式（Ｉｃ）
【化９】
2009534358.tif 000011
〔式中、Ｒ１およびＲ３は上記定義のとおりであり；そして
Ｘは脱離基である〕
の化合物を、式Ｈ２Ｎ−Ｒ２（式中、Ｒ２は上記定義のとおりである）の化合物と塩基の存在下で反応させる工程；そして
（ｉｉ）得られた式（Ｉ）の化合物を遊離形または薬学的に許容される塩形で回収する工程；
を含む方法を提供する。
【００２９】
式（Ｉ）の化合物を、例えば以下および実施例に記載の反応および技術を用いて製造することができる。反応を、使用する試薬および物質に適した、そして変換を行うのに好適な溶媒中で行うことができる。分子に存在する官能性を目的の変換に一致させるべきであることが当業者に理解されよう。これには、目的の本発明の化合物を得るために、合成工程の順序を修正するか、またはある具体的な方法スキームを他のものに修正する判断が必要であろう。
【００３０】
下記反応スキームに示す合成中間体および最終生成物の様々な置換基は、当業者に理解されるとおり必要である場合には保護基と共に、十分に合成終了した形態で、または後に当業者に周知の方法で最終生成物に合成することができる前駆体形態で存在していてもよい。置換基はまた、合成シーケンスの間または合成シーケンスの完了後に加えることができる。多くの場合、一般的に使用される官能基の操作を用いてある中間体を他の中間体に、あるいはある式（Ｉ）の化合物を他の式（Ｉ）の化合物に変換することができる。かかる操作の例は、エステルまたはケトンのアルコールへの変換；エステルのケトンへの変換；エステル、酸およびアミドの相互変換；アルコールおよびアミンのアルキル化、アシル化およびスルホニル化；ならびにその他多くのものである。一般的な反応、例えばアルキル化、アシル化、ハロゲン化または酸化を用いて置換基を加えることもできる。かかる操作は当業者に周知であり、多くの参考文献がかかる操作の手順および方法をまとめている。多くの官能基操作、ならびに有機合成の分野で一般的に使用される他の変換についての有機合成の基本的な文献の例および言及が存在する文献は、以下のものである：March’s Organic Chemistry, 5th Edition, Wiley and Chichester, Eds. (2001); Comprehensive Organic Transformations, Larock, Ed., VCH (1989); Comprehensive Organic Functional Group Transformations, Katritzky et al. (series editors), Pergamon (1995);および Comprehensive Organic Synthesis, Trost and Fleming (series editors), Pergamon (1991)。
【００３１】
当該分野におけるあらゆる合成経路の設計における他の主要な考慮点は、本発明に記載の化合物に存在する反応性官能基の保護に用いる保護基の正しい選択である。保護基が同じ分子内の他の保護基の除去なしに除去することができるか、あるいは複数の保護基を同じ反応工程を用いて除去することができるように、目的とする結果に依存して同じ分子内で複数の保護基を選択することができる。熟練した技術者に多くの他の方法を開示している権威ある文献は、Protective Groups In Organic Synthesis, Greene and Wuts, Eds., Wiley and Sons (1999)である。化学的に可能である置換基の組合せのみが本発明の態様であることが当業者に理解される。
【００３２】
薬理学的活性および使用
式（Ｉ）の化合物およびそれらの薬学的に許容される塩は、医薬として有用である。とりわけ、それらはアデノシンＡ３受容体を活性化し、すなわちそれらはＡ２Ａ受容体アゴニストとして作用する。それらのＡ３アゴニストとしての特性は、ＷＯ  ０５／０６３２４６、ＷＯ  ０２／０５５０８５、ＷＯ  ９５／０２６０４およびＷＯ  ０６／０１１１３０に記載されている。
【００３３】
下記実施例の化合物は、下記アッセイにおいて５．０μＭ未満のＫｉ値およびＥＣ５０値を有する。例えば、実施例１の化合物はＫｉ結合アッセイにおいて０．９１ｎＭのＫｉ値を、そしてＡ３［３５Ｓ］−ＧＴＰガンマＳ機能的アッセイにおいて１１．０ｎＭのＥＣ５０値を有する。
【００３４】
Ａ３結合アッセイプロトコル
略語一覧
【表１】
2009534358.tif 000012
【００３５】
導入
広い範囲の生物学的機能の内因性調節剤であるアデノシンは、Ａ１、Ａ２Ａ、Ａ２ＢおよびＡ３（これらは全てＧタンパク質と共役する）として分類される少なくとも４つの細胞表面受容体サブタイプと相互作用する。Linden, Annu Rev Pharmacol Toxicol, Vol. 41, pp. :775-787 (2001)参照。
【００３６】
近年まで、アデノシンのほとんどの抗炎症作用はＡ２Ａ受容体を通じて産生されていると考えられていた。しかし、Ａ３サブタイプは、炎症および神経変性［Kohno et al., Biochem Biophys Res Commun, Vol. 219, pp. 904-910 (1996)参照］および喘息［Jacobson et al., Neuropharmacology, Vol. 36, pp. 1157-1165 (1997)参照］のような様々な病理において基本的な役割を有している可能性がある。
【００３７】
アデノシン誘導体である４−アミノベンジル−５’−Ｎ−メチル−カルボキサミドアデノシン（ＡＢ−ＭＥＣＡ）は強力なＡ３受容体選択的アゴニストであり、これを参照化合物として使用する。Varani et al., Life Sci, Vol. 63, No. 5, pp. 81-87 (1998)参照。
【００３８】
本発明の化合物をＡ３結合アッセイにおいて、ヨウ化リガンド［１２５Ｉ］−ＡＢ−ＭＥＣＡとヒトＡ３受容体を安定して発現するＣＨＯ細胞から製造した膜を用いて試験した。
【００３９】
方法
材料
・  ＣＨＯアデノシンＡ３膜
・  [125I]-AB-MECA：Amersham Pharmacia Biotech (Cat# TRK)
・  CGS21680：Tocris (1063)
・  Unifilter GF/B ９６ウェルプレート：Perkin Elmer (Cat# 6005174)
・  ９６ウェルＵ底ポリプロピレンプレート：Greiner (Cat# 650201)
・  TopSeal：Canberra Packard (Cat# 6005185)
・  ＢＳＡ：Sigma Cat# A-6003
・  アデノシンデアミナーゼ(1000U/mL)： Roche Diagnostics Limited (Cat# 102121)
・  Microscint-20(1 L)：Perkin Elmer (Cat# 6013611)
・  全ての他の化学物質は、Sigmaからであった。
【００４０】
Ａ３膜製造
バッファー
・  バッファーＡ  １０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．９％  ＮａＣｌ、０．２％  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４
・  バッファーＢ  １０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４
・バッファー  Ｃ  １０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４
・  Ａ３培養培地：Glutamax (Cat# 31980-022、Invitogen)、50mL FCS （熱不活性化）(cat#10108-157、Invitrogen)、5mL HEPES (1 M)(Cat# 15630-056、Invitrogen)を含むIscoves Modified DMEM  ５００ｍＬ
【００４１】
製造プロトコル
・  Ａ３  ＣＨＯ細胞をローラーボトル中で、９５％コンフルエントに達するまで３７℃、５％ＣＯ２で培養した。
・  氷冷バッファーＡ（リフティングバッファー）４０ｍＬを加え、ローラーボトルをインキュベーターに１０分間戻した。
・  細胞をボトル表面から、滅菌掻器を用いて取得し、氷上の５０ｍＬ  Ｆａｌｃｏｎチューブに移した。
・  ローラー表面をバッファーＡ  １０ｍＬで洗浄した。これをＦａｌｃｏｎチューブに移し、これを５００ｇで５分間、４℃で遠心分離した。
・  上清を除去し、氷冷バッファーＢ（溶解バッファー）２５ｍＬをペレットに加えた。
【００４２】
・  ペレットを氷上で、ポリトロン（４バースト５秒、各バースト間で２０秒間隔）を用いてホモジナイズした。
・  ホモジナイズした後、チューブを３９，０００×ｇ、２５分間、４℃で、Beckman Avanti J-251 Ultracentrifugeを用いて遠心分離した。
・  上清を除去し、氷冷バッファーＣ（凍結バッファー）２０ｍＬをチューブに加えた。
・  ペレットを再度、氷上でポリトロンを用いてホモジナイズし、３９，０００ｇ、２５分間、４℃で、Beckman Avanti J-251 Ultracentrifugeで遠心分離した。
・  上清を除去し、ペレットを氷冷バッファー１ｍＬ中に再懸濁した。
・  タンパク質定量を、ウシ血清アルブミンを標準として用いてBradford Protein Micro-アッセイ(BioRad（登録商標）)で測定した。
・  膜濃度を調節し、バッファーＣを用いて必要に応じて等分し、スナップ凍結させて−８０℃で貯蔵した。
【００４３】
結合アッセイ
バッファー
・  アッセイバッファー。５０ｍＭ  トリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＥＤＴＡおよび０．１％  ｗ／ｖ  ＢＳＡ。４℃で貯蔵し、ＢＳＡを加えると１週間保存した。
・  洗浄バッファー。５０ｍＭ  トリス−ＨＣｌ、ｐＨ７．４および０．９％  ＮａＣｌ。４℃で貯蔵。
【００４４】
化合物製造
参照および試験化合物の１０ｍＭ溶液を、ＤＭＳＯで製造した。原液を４％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯを含むアッセイバッファーで希釈して、最終濃度４０μＭとした。
【００４５】
Ｋｄ測定
ＣＨＯ  Ａ３膜と放射リガンドの結合を、放射性ラベル化アゴニスト［１２５Ｉ］−ＡＢ−ＭＥＣＡを用いて０．００２−５ｎＭの濃度範囲で行って、飽和結合を得た。結合実験を２連で、２．５μｇの膜を用いて全体積２００μＬのアッセイバッファー中で行った。非特異的結合を、アゴニストＩ−ＡＢ−ＭＥＣＡ  １０μＭの存在下で測定した。
【００４６】
結合アッセイ
アッセイを最終体積２００μＬ／ウェルで、Ｕ底ポリプロピレン９６ウェルプレートで行った。アッセイ成分を下記の通り加えた：
・  ４％（ｖ／ｖ）ＤＭＳＯを含むアッセイバッファー中試験化合物５０μＬ。全結合をビークル５０μＬを用いて測定した。４０μＭ  Ｉ−ＡＢ−ＭＥＣＡ  ５０μＬを用いて非特異的結合を測定して、最終アッセイ濃度１０μＭとした。
・  濃度１ｎＭ（４×）の［１２５Ｉ］−ＡＢ−ＭＥＣＡ  ５０μＬを最終アッセイ濃度０．２５μＭとした。
・  ２５μｇ／ｍＬの濃度のＣＨＯ  Ａ３膜  １００μＬを、４Ｕ／ｍＬ  アデノシンデアミナーゼ（ＡＤＡ）（最終アッセイ濃度２Ｕ／ｍＬ）を含むアッセイバッファー中で、最終アッセイ濃度２．５μｇ／ウェルとした。
【００４７】
化合物希釈物をBiomek 2000で製造して、４０−０．００２μＭ（４×）の１０濃度のシリーズを得た。各濃度の５０μＬをDynex ９６ウェルプレートに、Tomtec Quadraを用いて移した。全結合をＩ−ＡＢ−ＭＥＣＡの非存在下で測定し、そして非特異的結合を１０μＭ  Ｉ−ＡＢ−ＭＥＣＡの存在下で測定した。ＣＨＯ  Ａ３膜を使用の直前に解凍し、アデノシンデアミナーゼを４Ｕ／ｍＬ（２×）で含むアッセイバッファーで２５μｇ／ｍＬの濃度に希釈した。懸濁液を使用まで氷上に保った。放射性リガンド［１２５Ｉ］−ＡＢ−ＭＥＣＡを希釈し、５０μＬを９６ウェルプレートの全ウェルに加えて、採集法社製リガンド濃度０．２５ｎＭとした。１００μＬの希釈膜製造物を各ウェルに加えて全タンパク質濃度２．５μｇ／ウェルとした後、アッセイバッファー  ５０μＬを各ウェルに加えた。９６ウェルプレートを短時間攪拌し、１２０分間室温でインキュベートした。
【００４８】
このアッセイプレートからサンプルを、Unifilter GF/B プレート（０．５％（ｗ／ｖ）ポリエチレンイミン  ５０μＬを全ウェルに加えた）に自動Tomtec 9600収穫機を用いて収穫した。Unifilter GF/B プレートを３時間５０℃で、または一晩室温でインキュベートしてフィルターを乾燥させた。裏打ちフィルムをUnifilter GF/B プレートに適用し、Microscint-20を各ウェルに加え、プレートをTopSeal-Sを用いて製造業者の指示に従ってシールした。Unifilter GF/B プレートを、Packard TopCount（１２５Ｉ−Scintillation、１分／ウェル）を用いて計測した。１分あたりの計測数（ｃｐｍ）を用いてＩＣ５０を決定し、これらからＫｉを、下記式を用いて決定した。Cheng and Prusoff, Biochem Pharmacol, Vol. 22, pp.  3099-3018 (1973)参照。
【数１】
2009534358.tif 000013
（式中、
Ｃ＝放射リガンドの濃度；および
Ｋｄ＝リガンドの解離定数
【００４９】
Ａ３［３５Ｓ］−ＧＴＰガンマＳ結合機能的アッセイ
略語一覧
【表２】
2009534358.tif 000014
【００５０】
本発明の化合物の機能的応答を確立するために、アッセイを行って、アデノシンＡ３受容体を安定して発現するＣＨＯ細胞から製造した膜において［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ結合のＡ３アゴニスト刺激を測定した。［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳと活性化Ｇタンパク質の結合のアゴニスト誘導性刺激を、アデノシン受容体を含む様々な受容体の機能的アッセイとして用いた。Lorenzen et al., Mol Pharmacol, Vol. 49, pp. 915-926 (1996);および Jacobson et al., Drug Dev Res, Vol. 37, p. 131 (1996)参照。
【００５１】
［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ結合アッセイを行うときには多くのことを考慮しなければならない。第１に、ＧＤＰがアッセイに含まれており、Ｇタンパク質不活性化を促進する。過剰のＧＤＰはＧタンパク質活性化の触媒速度を減少させ、高効率アゴニストの受容性が低下し得る。低効率アゴニストは、高濃度のＧＤＰが存在するとき、応答誘発と競合し得る。なぜ高効率アゴニストがＧＤＰブロックを克服することができるかという１つの可能性のある理論は、それらが受容体コンホメーションを変化を誘導または安定化することである。第２に、高濃度のナトリウムイオンがアッセイの基本活性を低下させるのに必要であり、結果として高親和性結合が損なわれ得る。第３に、αサブユニットのβγサブユニットからの解離にはＭｇ２＋イオンが必要であり、これはあるアゴニストの結合能に作用し得る。Ｍｇ２＋の存在はまたＧＴＰγＳの不可逆的結合を引き起こし、したがって非平衡状態を引き起こし得る。最後に、［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ結合アッセイにおいて、ＧＴＰγＳは全てのＧタンパク質と結合し、すなわちこれは異なるＧタンパク質間で区別せず、そして他の膜タンパク質アッセイと同様、プロテアーゼによるタンパク質分解に受容性でもある。
【００５２】
Lorenzenら（１９９６、前出）に記載の常套のＧＴＰγＳ結合アッセイは、濾過を利用する方法であり、したがって分離工程が必要である；本発明者らはこの方法を修飾して、半自動および均一フォーマットで用いることができるようにＳＰＡフォーマットとして行った。ＳＰＡアッセイにおいて、膜をコムギ胚芽凝集素（ＷＧＡ）ＳＰＡビーズによって、ＷＧＡと膜表面の橙タンパク質の糖残基の特異的相互作用を介して捕捉した。受容体刺激によって、［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳはＧタンパク質のアルファサブユニットと特異的に結合し、したがって［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳをＳＰＡビーズと近接させる。［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ由来の放射β粒子は、ビーズにおいて発光を励起し、光を生じる。溶液中の遊離［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳはＳＰＡビーズに近接せず、したがって発光を活性化させず、したがって光を生じない。
【００５３】
方法
材料
・  ＣＨＯアデノシンＡ３細胞
・  Ｎ−２−ヒドロキシエチルピペラジン−Ｎ’−２−エタンスルホン酸（ＨＥＰＥＳ）(Invitogen, Cat# 15630-056)
・  ＢＳＡ（本質的に脂肪酸を含まない）(Sigma, Cat# A-6003)
・  トリス(BDH Biochemicals, Cat# 443864E)
・  エチレンジアミン−テトラ−酢酸（ＥＤＴＡ）(Sigma, Cat# E-5391)
・  ＭｇＣｌ２（無水）(Sigma, Cat# M-8266)
・  ＧＤＰ（ナトリウム塩）(Sigma, Cat# G-7127)
・  ＧＴＰγＳ（テトラリチウム塩）(Sigma, Cat# G-8634)
・  ［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ(Amersham SJ1320, 1μCi/μL)
・  ＷＧＡ  ＳＰＡビーズ(Amersham International, Cat# SPQ0031)
・  ポリプロピレン９６ウェルプレート(Greiner, Cat# 650201)
・  白色非結合表面９６ウェルOptiplate： Packard Cat# 6005190
・  TopSeal -(Canberra Packard counter Cat# 6005185)
【００５４】
Ａ３膜製造
バッファー
・  バッファーＡ  １０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．９％  ＮａＣｌ、０．２％  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４
・  バッファーＢ  １０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４
・  バッファーＣ  １０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ、０．１ｍＭ  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４
・  Ａ３培養培地：Glutamax (Cat# 31980-022、Invitogen)、50mL FCS （熱不活性化）(cat#10108-157、Invitrogen)、5mL HEPES (1 M)(Cat# 15630-056、Invitrogen)を含むIscoves Modified DMEM  ５００ｍＬ
【００５５】
製造プロトコル
・  Ａ３  ＣＨＯ細胞をローラーボトル中で、９５％コンフルエントに達するまで３７℃、５％ＣＯ２で培養した。
・  氷冷バッファーＡ（リフティングバッファー）４０ｍＬを加え、ローラーボトルをインキュベーターに１０分間戻した。
・  細胞をボトル表面から、滅菌掻器を用いて取得し、氷上の５０ｍＬ  Ｆａｌｃｏｎチューブに移した。
・  ローラー表面をバッファーＡ  １０ｍＬで洗浄した。これをＦａｌｃｏｎチューブに移し、これを５００ｇで５分間、４℃で遠心分離した。
・  上清を除去し、氷冷バッファーＢ（溶解バッファー）２５ｍＬをペレットに加えた。
【００５６】
・  ペレットを氷上で、ポリトロン（４バースト５秒、各バースト間で２０秒間隔）を用いてホモジナイズした。
・  ホモジナイズした後、チューブを３９，０００×ｇ、２５分間、４℃で、Beckman Avanti J-251 Ultracentrifugeを用いて遠心分離した。
・  上清を除去し、氷冷バッファーＣ（凍結バッファー）２０ｍＬをチューブに加えた。
・  ペレットを再度、氷上でポリトロンを用いてホモジナイズし、３９，０００ｇ、２５分間、４℃で、Beckman Avanti J-251 Ultracentrifugeで遠心分離した。
・  上清を除去し、ペレットを氷冷バッファー１ｍＬ中に再懸濁した。
・  タンパク質定量を、ウシ血清アルブミンを標準として用いてBradford Protein Micro-アッセイ(BioRad（登録商標）)で測定した。
・  膜濃度を調節し、バッファーＣを用いて必要に応じて等分し、スナップ凍結させて−８０℃で貯蔵した。
【００５７】
ビーズ貯蔵バッファー
・  ５０ｍＭ  トリス−ＨＣｌ（７．８８ｍｇ／ｍＬ）、ｐＨ７．４。
・  溶液を４℃で貯蔵した。
【００５８】
アッセイバッファー
・  ２０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ（４．７６６ｇ／Ｌ）
・  １０ｍＭ  ＭｇＣｌ２（２．０３３ｇ／Ｌ）
・  １００ｍＭ  ＮａＣｌ（５．８４４ｇ／Ｌ）
・  １ｍＭ  ＥＤＴＡ（０．４５２ｇ／Ｌ）
・  ｐＨ７．４
・  ％ＢＳＡ（１ｇ／Ｌ）
【００５９】
ＷＧＡ  ＰＶＴ  ＳＰＡビーズをアッセイバッファー中２５０ｍｇ／ｍＬとして、４℃で最大１週間貯蔵した。
［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ原液の［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ−濃度を、下記方法で当日に測定した：
【数２】
2009534358.tif 000015
【００６０】
実施例：  ５日目の活性は０．９６１μＣｉ／μＬであるから（Amershamカタログの後ろに添付の［３５Ｓ］の放射活性減衰の表から入手、参照＝１μＣｉ／μＬ）、したがって特異的活性１０８２Ｃｉ／ｍｍｏｌを有する［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳのバッチについて：
モル濃度(mCi/mmol)は
【数３】
2009534358.tif 000016
である。
【００６１】
アッセイプロトコル
アッセイを最終体積２５０μＬ／ウェルで、白色非結合表面９６ウェルOptiplateで行った。アッセイ成分を下記の通り加えた：
・  アッセイバッファー２５μＬを９６ウェルOptiplateの全ウェルに加えた。
・  １０μＭ  ＧＤＰ  ２５μＬを各ウェルに加えた。
・  Ａ１からＤ１、およびＥ１２からＨ１２の各ウェルに１０％  ＤＭＳＯ／アッセイバッファー  ２５μＬを加えた−基本的応答を測定する対照。
・  ウェルＥ１からＨ１およびＡ１２からＤ１２に、１０％  ＤＭＳＯ／アッセイバッファー中１００ｎＭ  Ｉ−ＡＢ−ＭＥＣＡ  ２５μＬを加えた−最大刺激を測定するための対照。
・  化合物をBiomek上で、チップを交換しながら希釈し（３回希釈で１回、１０％  ＤＭＳＯ／アッセイバッファー中）、２５μＬをOptiplateに２連で移した。
・  ［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳを１．２５ｎＭ（上記参照）に希釈し、２５μＬを各ウェルに加えて最終アッセイ濃度０．１２５ｎＭ［３５Ｓ］−ＧＴＰγＳ／ウェルを得た。
【００６２】
・  膜をアッセイバッファーで２５μｇ／ｍＬに希釈した。
・  ＳＰＡビーズの原液をアッセイバッファーで希釈して、５ｍｇ／ｍＬの濃度とした。
・  プレートに加える直前に（使用の２０分前以内）、ビーズを膜と１：２の比で（５０μＬ  ビーズ：１００μＬ  膜）混合した。
・  ビーズと膜の混合物  １５０μＬを各ウェルに加えた。
・  プレートをTopSealで密封し、室温で４０〜１７０分間インキュベートした。
・  プレートを８５０×ｇで１０分間、室温で遠心分離し（Jouan B4i）、Packard Topcount、プログラム［３５Ｓ−ｄｐｍ］で１分／ウェルについて速やかに読み込んだ。
【００６３】
したがって、本発明の薬剤はアデノシンＡ３受容体の活性化によって介在される状態の処置に有用であり得る。
【００６４】
例えば、本発明はＷＯ  ０４／０４５６２７に記載のリウマチ性関節炎の処置に使用することができる。
【００６５】
また、本発明はＡ３アデノシン受容体アゴニスト（Ａ３ＲＡｇ）の投与によってＷＯ  ０５／０６３２４６に記載の多発性硬化症の症状が緩解されるという驚くべき知見に基づいている。
【００６６】
本発明は、１つの態様において、ヒト対象における多発性硬化症（ＭＳ）の処置方法であって、かかる処置を必要とする個人に有効量のＡ３ＲＡｇを投与することを含む方法に関する。
【００６７】
「多発性硬化症」（ＭＳ）なる用語は、本発明の文脈において、神経を被覆する髄鞘が部分的に失われて様々な病的症状をもたらすＣＮＳの炎症性疾患を意味する。ＭＳには様々なタイプの疾患、例えば再発／緩解型（ＲＲＭＳ）、二次進行型（ＳＰＭＳ）、進行性再発型（ＰＲＭＳ）および一次進行型（ＰＰＭＳ）が含まれる。
【００６８】
「処置」または「神経痛保護」なる用語は、本発明の文脈において、疾患の臨床的症状のあらゆる改善、および／またはＭＳ患者の悪化速度もしくは再発率の減少、ならびに患者の健康のあらゆる改善を意味する。例えば、改善は下記の１つ以上によって明らかとなり得る：筋肉弱化の減少、筋肉けいれんの減少、痙直の減少、バランスの改善および記憶の改善。
【００６９】
本発明はまた、アデノシン受容体アゴニストがＷＯ  ０２／０５５０８５に記載の細胞内ウイルス複製を阻害するという知見に基づいている。したがって、本発明によって、細胞内でのウイルス複製を阻害する方法であって、細胞に有効量の少なくとも１種のＡ３ＲＡｇを与えることを含む方法を提供する。
【００７０】
本発明のアゴニストは、アデノシンＡ３受容体の完全または部分アゴニストである。本明細書において使用するとき、アデニル酸シクラーゼ（Ａ３）を完全に阻害することができる化合物はアデノシンＡ３受容体の「完全アゴニスト」であり、アデニル酸シクラーゼ（Ａ３）を部分的に阻害することができる化合物はアデノシンＡ３受容体の「部分アゴニスト」である。
【００７１】
本発明によってまた、有効量の少なくとも１種のＡ３ＲＡｇを含む、細胞内ウイルス複製を阻害するための医薬組成物、ならびにかかる医薬組成物の製造のための前記有効成分（すなわちＡ３ＲＡｇ）の使用を提供する。
【００７２】
本発明はとりわけ、これに限定されないが、ヒト細胞におけるＨＩＶウイルスの複製阻害に有用である。
【００７３】
本発明の方法は、ＷＯ  ９５／０２６０４に記載の通り、インビボ適用に有用であり得る。例えばＷＯ  ９５／０２６０４に記載の通り、Ａ３アデノシン受容体アゴニストはイノシトール−１、４，５−３リン酸（ＩＰ３）、ジアシルグリセロール（ＤＡＧ）およびフリーラジカルの放出、ならびに続くアラキドン酸カスケードに関与するあらゆる疾患状態または状態の処置に有用であり得る。したがって、高血圧、運動高進、高血圧、急性低酸素症、鬱病および不妊症を、上記化合物の１種を即座に、例えば症状の発生または認識の約数分から約１時間以内に投与する本発明の方法によって処置することができる。当該方法はまた、慢性疾患状態および状態、とりわけ上記化合物の１種の慢性予防的または治療的投与によって症状の発生を予防するかまたは回復時間が減少されるであろう状態および疾患状態の処置に有用である。本発明の方法によって慢性的に処置され得る疾患状態および状態の例には、炎症性障害、例えば血管炎症および関節炎、アレルギー、喘息、創傷治癒、卒中、心不全、急性脊髄損傷、急性頭部損傷または外傷、発作、新生児低酸素症（脳性麻痺；予防的処置には胎盤循環血行による慢性曝露が含まれる）、動静脈奇形による慢性低酸素症、および閉塞性脳動脈疾患、興奮毒素に関与する重度の神経学的障害、パーキンソン病、ハンチントン舞踏病、および中枢神経系（ＣＮＳ）の他の疾患、心臓疾患、腎臓疾患および不妊が含まれる。
【００７４】
さらに、上記化合物は基本または全身的血圧を上昇させ、したがってこれらの化合物の投与が悪性低血圧の処置に使用することができることを見出した。例えば、ＩＢ−ＭＥＣＡの投与によって、基本または全身的血圧の（例えば、約７０ｍｍＨｇから約９０ｍｍＨｇ）の顕著な上昇（例えば約１０−３０ｔ）が得られる。
【００７５】
かかる化合物はまた、顕著な脳保護剤であることを見出した。上記化合物それ自体を様々な障害、例えば発作、一時的虚血性ショック、卒中、血栓または脳出血に由来する局所的虚血、心停止に由来する広範囲の虚血、外傷、新生児痙攣、乏血性ショック、気管支拡張症に対する処置および／または保護のために、睡眠促進剤として、脱髄性疾患、例えば多発性硬化症の処置薬剤として、および例えば脳出血性傷害、脊髄虚血−再灌流障害、高血糖および関連神経症の神経保護剤として使用することができる。上記化合物、とりわけ例えばＩＢ−ＭＥＣＡはまた、認識向上効果を有しており、従ってかかる効果の誘発によって例えばアルツハイマー病および他の認知症および認識傷害の処置に有用であると示されるであろう障害の処置に有用であり得る。
【００７６】
ＷＯ  ０６／０１１１３０によると、ヒト対象にＡ３ＲＡｇを投与するコトニヨッテ、ショーグレン症候群（ＳＳ）の症状が緩解された。
【００７７】
したがって、本発明は１つの態様によって、ヒト対象におけるＳＳの処置方法であって、かかる処置を必要とする個人に有効量のＡ３ＲＡｇを投与することを含む方法を提供する。１つの好ましい態様において、Ａ３Ｒａｇを局所的に、例えば目または皮膚に投与することができる。他の好ましい態様において、Ａ３Ｒａｇを経口的に投与する。
【００７８】
「ＳＳ」なる用語は、本発明の文脈において、免疫細胞が涙および唾液を産生する腺を攻撃および破壊するＫＣＳを引き起こす自己免疫性障害を意味する。本発明の１つの態様において、当該用語は二次的ＳＳと分類される障害を意味する。好ましい態様において、二次的ＳＳはリウマチ性状態からもたらされる。障害の症状には、目、口、皮膚、鼻および膣の乾燥が含まれ、そして腎臓、血管、肺、肝臓、膵臓および脳を含む体の他の臓器に作用し得る。
【００７９】
本発明の方法は、ＳＳを含むドライアイにおける眼臨床症状および徴候の処置または予防を意図する。ＳＳにおける眼臨床症状には、これらに限定されないが、異物感、火照りおよび痒みが含まれ；そしてＳＳにおける眼臨床徴候には、これらに限定されないが、フルオレセインおよびローズベンガルによって染色される角膜および結膜浸食（erosion）、ならびに涙液膜崩壊時間（tear film break-up time）が含まれる。
【００８０】
本発明の薬剤は、ＷＯ  ０１／２３３９９、ＷＯ  ９５／０２６０４、ＷＯ  ０５／０６３２４６、ＷＯ  ０２／０５５０８５およびＷＯ  ０６／０１１１３０に記載の他の活性薬剤との組合せで使用することができる。
【００８１】
本発明の薬剤を、あらゆる適当な経路、例えば経口的に、例えば錠剤またはカプセル剤の形態で；非経腸的に、例えば静脈内に；吸入によって、またはＷＯ  ０１／２３３９９、ＷＯ  ９５／０２６０４、ＷＯ  ０５／０６３２４６、ＷＯ  ０２／０５５０８５およびＷＯ  ０６／０１１１３０に記載の通りに、投与することができる。
【００８２】
さらなる局面において本発明はまた、遊離形または薬学的に許容される塩形の式（Ｉ）の化合物を、所望により薬学的に許容される希釈剤または担体と共に含む医薬組成物を提供する。組成物は、上記記載の共治療薬剤、例えば抗炎症剤、気管支拡張剤、抗ヒスタミン剤または抗咳剤を含んでいてもよい。かかる組成物を常套の希釈剤または担体、そして製剤分野で既知の技術を用いて製造することができる。したがって、経口投与形態には、錠剤およびカプセル剤が含まれ得る。局所投与製剤は、クリーム、軟膏、ゲルまたは経皮送達システム、例えばパッチの形態を取り得る。吸入組成物は、エアロゾルまたは他の微粉化製剤、または乾燥粉末製剤が含まれ得る。他の製剤はＷＯ  ０１／２３３９９、ＷＯ  ９５／０２６０４、ＷＯ  ０５／０６３２４６、ＷＯ  ０２／０５５０８５およびＷＯ  ０６／０１１１３０に記載されている通りである。
【００８３】
本発明を実施するときに使用される式（Ｉ）の化合物の投与量は、例えば処置する具体的な状態、所望の効果および投与形態に依存して、ＷＯ  ０１／２３３９９、ＷＯ  ９５／０２６０４、ＷＯ  ０５／０６３２４６、ＷＯ  ０２／０５５０８５およびＷＯ  ０６／０１１１３０に記載の通り当然に変化する。
【００８４】
本発明を、下記実施例によって説明する。
【実施例】
【００８５】
実施例１−５
式Ｉ
【化１０】
2009534358.tif 000017
【表３】
2009534358.tif 000018
の化合物。
【００８６】
実施例１
（１Ｓ，４Ｒ）−４−（２，６−ジクロロ−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エノール
２，６−ジクロロプリン（１０ｇ、５２．９０ｍｍｏｌ）、（１Ｓ，４Ｒ）−シス４−アセトオキシ−２−シクロペンテン−１−オール（１０ｇ、７０．４０ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（３．２０ｇ、３．５０ｍｍｏｌ）およびポリマー支持トリフェニルホスフィン（３ｍｍｏｌ／ｇ、１１．６０ｇ、３５．００ｍｍｏｌ）をオーブン乾燥フラスコにアルゴン雰囲気下で入れる。無水脱酸素ＴＨＦ（８０Ｌ）を加え、反応混合物をゆっくりと５分間攪拌する。トリエチルアミン（２０ｍＬ）を加え、反応混合物を５０℃で攪拌する。反応はＬＣＭＳによって１時間後に終了を示す。反応混合物を冷却させ、濾過し、溶媒を真空下で除去する。フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ、ジクロロメタン：メタノール  ２５：１）で精製して表題化合物を得る。
1H nmr (CDCl3, 400 MHz); 8.30(s, 1H), 6.40(m, 1H), 5.90(m, 1H), 5.50(m, 1H), 4.95(m, 1H), 3.05(m, 1H), 2.10(m, 1H), MS (ES+) m/e  271 (MH+).
【００８７】
炭酸（１Ｓ，４Ｒ）−４−（２，６−ジクロロ−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エニルエステルエチルエステル
（１Ｓ，４Ｒ）−４−（２，６−ジクロロ−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エノール（９．５ｇ、３５．０５ｍｍｏｌ）をオーブン乾燥フラスコにアルゴン雰囲気下で入れる。無水ＴＨＦ（２００ｍＬ）、次に無水ピリジン（５．５４ｇ、７０．１ｍｍｏｌ）を加える。温度が４０℃を超えないようにエチルクロロホルメート（１５．２１ｇ、１４０．２ｍｍｏｌ）をゆっくりと加え、反応混合物を室温で攪拌する。反応はＬＣＭＳによって１時間後に終了を示す。溶媒を真空下で除去し、残渣をジクロロメタン（２００ｍＬ）と水（２００ｍＬ）で分配する。有機層を水（１５０ｍＬ）および塩水（１５０ｍＬ）で洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥させ、濾過し、溶媒を真空下で除去する。メタノールから結晶化して表題化合物を得る。
1H NMR (CDCl3, 400 MHz); 8.20(s, 1H), 6.45(m, 1H), 6.25(m, 1H), 5.75(m, 1H), 5.70(m, 1H), 4.25(q, 2H), 3.20(m, 1H), 2.05(m, 1H), 1.35(t, 3H), MS (ES+) m/e  343 (MH+).
【００８８】
ジ−Ｂｏｃ−［（１Ｓ，４Ｒ）−４−（２，６−ジクロロ−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エニル］−アミン
炭酸（１Ｓ，４Ｒ）−４−（２，６−ジクロロ−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エニルエステルエチルエステル（２．５ｇ、７．２９ｍｍｏｌ）、ジ−ｔ−ブチルイミノジカルボキシレート（１．７４ｇ、８．０２ｍｍｏｌ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（０．３３ｇ、０．３６ｍｍｏｌ）およびトリフェニルホスフィン（０．２９ｇ、１．０９ｍｍｏｌ）をオーブン乾燥フラスコにアルゴン雰囲気下で入れる。無水脱酸素ＴＨＦ（３０ｍＬ）を加え、反応混合物を室温で攪拌する。反応はＬＣＭＳによって３時間後に終了を示す。溶媒を真空下で除去し、フラッシュカラムクロマトグラフィー（シリカ、酢酸エチル：イソヘキサン  ４：１）で精製して表題化合物を得る。
1H NMR (CDCl3, 400 MHz); 8.70(s, 1H), 6.20(m, 1H), 5.85(m, 1H), 5.80(m, 1H), 5.40(m, 1H), 3.20(m, 1H), 2.15(m, 1H), 1.55(s, 18H), MS (ES+) m/e  470 (MH+).
【００８９】
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）−３−（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−（２，６−ジクロロ−プリン−９−イル）−シクロペンタン−１，２−ジオール
三塩化ルテニウム３水和物（６０ｍｇ、０．２９ｍｍｏｌ）を水（５ｍＬ）に、過ヨウ素酸ナトリウム（６８２ｍｇ、３．１９ｍｍｏｌ）と共に溶解させてルテニウムテトロドキシドの濃赤／橙色水溶液を製造し、（１Ｓ，４Ｒ）−１−（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−４−（２，６−ジクロロプリン−９−イル）−シクロペント−２−エン（１．００ｇ、２．１２ｍｍｏｌ）の酢酸エチル：アセトニトリル  １：１（３０ｍＬ）冷温溶液（氷／水バスで０℃に）に１回で加えた。得られた曇褐色混合物を氷／水上で１０分間攪拌し、メタ重亜硫酸ナトリウム飽和水溶液（２５ｍＬ）を加えてクエンチし、１時間攪拌した。混合物を酢酸エチル（７５ｍＬ）を加えて希釈し、水（２×２５ｍＬ）および塩水（２０ｍＬ）で連続的に洗浄し、その後硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過し、揮発性成分を減圧下で除去して所望の生成物を淡黄色固体として得て、これをさらに精製することなく使用した。
【００９０】
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）−３−（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−［２−クロロ−６−（３−ヨードベンジルアミノ）−プリン−９−イル］−シクロペンタン−１，２−ジオール
３−ヨードベンジルアミン（５００ｍｇ、２．１５ｍｍｏｌ）およびトリエチルアミン（４００μＬ、２９１ｍｇ、２．９ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（５ｍＬ）に溶解させ、（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）−３−（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−（２，６−ジクロロ−プリン−９−イル）−シクロペンタン−１，２−ジオール（１．０７ｇ、２．１２ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（２０ｍＬ）溶液を加えた。反応物を周囲温度で４日間攪拌し、その後揮発性成分を減圧下で除去した。粗残渣からフラッシュカラムクロマトグラフィーで、Argonaut Flashmaster Personal系を用いて所望の生成物を精製した。残渣を最少量のジクロロメタン中で、予めイソヘキサンで飽和した７０ｇ  Varian Megabond Elut Flash Siカートリッジにロードした。イソヘキサン（２５０ｍＬ）、次に１：１  酢酸エチル：イソヘキサン（１Ｌ）で溶出して生成物を精製し；純粋な分画を合併し、溶媒を減圧下で除去して生成物をベージュ色泡状物として得た（６１０ｍｇ；収率４１％）。LC-MS: MH+ 701.49.
【００９１】
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）−３−アミノ−５−［２−クロロ−６−（３−ヨード−ベンジルアミノ）−プリン−９−イル］−シクロペンタン−１，２−ジオール
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）−３−（ジ−ｔｅｒｔ−ブトキシカルボニルアミノ）−５−［２−クロロ−６−（３−ヨードベンジルアミノ）−プリン−９−イル］−シクロペンタン−１，２−ジオール（５９０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）をメタノール（１０ｍＬ）に溶解させ；１，４−ジオキサン（１０ｍＬ）中４．０Ｍ  塩化水素を加え、淡黄色溶液を周囲温度で１時間攪拌したところ、その後反応はＬＴＣで完了を示した。揮発性成分を減圧下で除去して、ベージュ色固体を得た（４５０ｍｇ、定量的収率）。LC-MS: MH+ 501.15.
【００９２】
Ｎ−｛（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−４−［２−クロロ−６−（３−ヨードベンジルアミノ）−プリン−９−イル］−２，３−ジヒドロキシシクロペンチル｝−アセトアミド
（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，５Ｒ）−３−アミノ−５−［２−クロロ−６−（３−ヨード−ベンジルアミノ）−プリン−９−イル］−シクロペンタン−１，２−ジオール（４５０ｍｇ、０．８４ｍｍｏｌ）をジクロロメタン（１０ｍＬ）に、トリエチルアミン（３８０μＬ、２７５ｍｇ、２．７３ｍｍｏｌ）と共に懸濁した。アセチルクロライド（６５μＬ、７２ｍｇ、０．９１ｍｍｏｌ）を加え、得られた淡黄色溶液を周囲温度で１時間攪拌した。メタノール（５ｍＬ）を加えて残余のアセチルクロライドをクエンチし、全揮発性成分を減圧下で除去して、褐色泡状物を得た。生成物を最初にフラッシュカラムクロマトグラフィーで、Argonaut Flashmaster Personal系を用いて精製した。褐色泡状物をジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶解させ、シリカ（３ｇ）に吸着させた。これを予め酢酸エチルで飽和させた２０ｇ  Isolute Flash Siカートリッジにロードした。生成物を酢酸エチル中５％メタノールで溶出させ、精製した生成物を含む分画から減圧下で溶媒を除去して無色固体を得た。メタノールから結晶化して、無色結晶固体を得た（２１０ｍｇ、収率４６％）。LC-MS: MH+ 543.17
【００９３】
実施例２
２，６−ジクロロ−９−（（１Ｒ，４Ｓ）−４−［１，２，３］トリアゾール−２−イル−シクロペント−２−エニル）−９Ｈ−プリン
炭酸（１Ｓ，４Ｒ）−４−（２，６−ジクロロ−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エニルエステルエチルエステル（１．０ｇ、２．９１ｍｍｏｌ）無水脱酸素ＴＨＦ（２０ｍＬ）にアルゴン下で溶解させた。トリフェニルホスフィン（１１５ｍｇ、０．４４ｍｍｏｌ、０．１５当量）、［１，２，３］トリアゾール（２００μＬ、２３８ｍｇ、３．４５ｍｍｏｌ）およびＰｄ２（ｄｂａ）３（１３３ｍｇ、０．１４６ｍｍｏｌ、５ｍｏｌ％）を連続的に加えた。反応混合物を５０℃で２時間攪拌し、室温に冷却させた後、揮発性成分を減圧下で除去した。生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィーでArgonaut Flashmaster Personalを用いて精製した。残渣をジクロロメタン（５ｍＬ）に再懸濁させた後、予めイソヘキサンで飽和させた２５ｇ  Isolute Flash Si カートリッジにロードした。イソヘキサン（５００ｍＬ）、イソヘキサン：酢酸エチル  ４：１（２５０ｍＬ）およびイソヘキサン：酢酸エチル  １：１（７５０ｍＬ）で生成物を溶出させた。溶媒を純粋な生成物を含む分画から減圧下で除去し、生成物を酢酸エチルから再結晶化させてベージュ色固体を得る（２８０ｍｇ、収率３０％）。LC-MS MH+ 321.80
【００９４】
（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｓ）−３−（２，６−ジクロロ−プリン−９−イル）−５−［１，２，３］トリアゾール−２−イル−シクロペンタン−１，２−ジオール
２，６−ジクロロ−９−（（１Ｒ，４Ｓ）−４−［１，２，３］トリアゾール−２−イル−シクロペント−２−エニル）−９Ｈ−プリン（１当量）をＴＨＦ（０．１Ｍ）に、Ｎ−メチルモルホリン−Ｎ−オキシド（２当量）と共に溶解させた。オスミウムテトロドキシドを４％水溶液（１０ｍｏｌ％）として加え、反応物を室温で２４時間攪拌し、その後さらに４％  ＯｓＯ４（ａｑ）（１０ｍｏｌ％）を加えてさらに２４時間攪拌した。反応物を酢酸エチルで希釈し、０．２Ｍ  ＨＣｌ（ａｑ）、塩水で洗浄し、硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過し、溶媒を減圧下で除去して粗生成物を得て、これをフラッシュカラムクロマトグラフィー／結晶化で精製した。
【００９５】
（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｓ）−３−［２−クロロ−６−（３−ヨード−ベンジルアミノ）−プリン−９−イル］−５−［１，２，３］トリアゾール−２−イル−シクロペンタン−１，２−ジオール
３−ヨードベンジルアミン（１当量）およびトリエチルアミン（１．１当量）をジクロロメタン（３−ヨードベンジルアミンについて〜０．４Ｍに）に溶解させ、（１Ｒ，２Ｓ，３Ｒ，５Ｓ）−３−（２，６−ジクロロプリン−９−イル）−５−［１，２，３］トリアゾール−２−イル−シクロペンタン−１，２−ジオールのジクロロメタン（１当量；０．１Ｍ）溶液に加えた。反応物を室温で一晩攪拌し、揮発性成分を減圧下で除去した。所望の生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー／結晶化で精製した。
【００９６】
実施例３
（１Ｓ，４Ｒ）−４−（６−クロロ−２−ヨード−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エノール
６−クロロ−２−ヨード−プリン（Taddei et al., Org Biomol Chem, Vol. 2, pp. 665-670 (2004)参照；１当量）、（１Ｓ，４Ｒ）−シス−４−アセトオキシ−シクロペント−２−エノール（１．３３当量）およびポリマー結合性トリフェニルホスフィン（０．６６当量）を混合し、真空下、室温で２４時間置いた。新たに蒸留した、脱酸素ＴＨＦ（（１Ｓ，４Ｒ）−シス−４−アセトオキシ−シクロペント−２−エノールについて１．０Ｍ）、次にＰｄ２（ｄｂａ）３（５ｍｏｌ％）を加えた。混合物を１５分間室温で攪拌した後、トリエチルアミン（水酸化カリウムで乾燥させた）を加えた（３当量）。反応混合物を１時間５０℃で攪拌し、室温に冷却させ、濾過した。揮発性成分を減圧下で除去し、生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー／結晶化で精製した。
【００９７】
炭酸（１Ｓ，４Ｒ）−４−（６−クロロ−２−ヨード−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エニルエステルエチルエステル
ピリジン（３当量）を（１Ｓ，４Ｒ）−４−（６−クロロ−２−ヨード−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エノール（１当量）の無水ＴＨＦ  ０．２Ｍ溶液に加えた。反応温度が４０℃を超えないようにエチルクロロホルメート（４当量）をゆっくりと加えた。添加を終えた後、反応物を室温で、完了まで攪拌した。沈殿を濾過で除去し、揮発性成分を減圧下で除去した。残渣をジクロロメタン中に取り、０．１Ｍ  塩酸、水（×２）および塩水で連続的に洗浄し、その後硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過し、溶媒を減圧下で除去した後、フラッシュカラムクロマトグラフィー／結晶化で精製して所望の生成物を得た。
【００９８】
アセチル−［（１Ｓ，４Ｒ）−４−（６−クロロ−２−ヨード−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エニル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
炭酸（１Ｓ，４Ｒ）−４−（６−クロロ−２−ヨード−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エニルエステルエチルエステル（１当量）、アセチル−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（Tanaka et al., Chem Pharm Bull, Vol. 36, No. 8, pp. 3215-3129 (1988)参照；１．１５当量）およびトリフェニルホスフィン（０．１５当量）をオーブン乾燥フラスコ内でアルゴン雰囲気下で混合した。無水脱酸素ＴＨＦ（炭酸（１Ｓ，４Ｒ）−４−（６−クロロ−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エニルエステルエチルエステルについて０．３Ｍに）、次にＰｄ２（ｄｂａ）３（５ｍｏｌ％）を加えた。反応混合物を５０℃で１時間攪拌し、室温に冷却させ、その後揮発性成分を減圧下で除去して生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー／結晶化で精製した。
【００９９】
アセチル−［（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−４−（６−クロロ−２−ヨード−プリン−９−イル）−２，３−ジヒドロキシ−シクロペンチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
アセチル−［（１Ｓ，４Ｒ）−４−（６−クロロ−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エニル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１当量）、メタンスルホンアミド（１当量）およびＡＤ−ｍｉｘ−α（１．５ｇ／ｍｍｏｌ  基質）をｔｅｒｔ−ブタノール：水  １：１（アセチル−［（１Ｓ，４Ｒ）−４−（６−クロロ−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エニル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルについて０．１Ｍに）中で混合した。オスミウムテトロドキシド（５ｍｏｌ％、４％水溶液として）を加え、反応混合物を激しく一晩攪拌した。完了後、反応物を酢酸エチルと水で分配し、有機相を新鮮な水（×２）および塩水で連続的に洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過し、揮発性成分を減圧下で除去して所望の生成物を得た。
【０１００】
アセチル−［（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−ヨード−６−メチルアミノ−プリン−９−イル）−シクロペンチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
アセチル−［（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−４−（６−クロロ−２−ヨード−プリン−９−イル）−２，３−ジヒドロキシ−シクロペンチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルを大過剰の液体メチルアミンに−２０℃で加え、３０分間攪拌し、室温に温めた。所望の生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー／結晶化で精製した。
【０１０１】
Ｎ−［（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−ヨード−６−メチルアミノ−プリン−９−イル）−シクロペンチル］−アセトアミド
アセチル−［（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−ヨード−６−メチルアミノ−プリン−９−イル）−シクロペンチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルをジクロロメタン（〜０．１Ｍ）に溶解させ、氷／水で０℃に冷却した。十分なトリフルオロ酢酸を加えて２０％溶液を得て、反応物を氷上で完了まで攪拌した。揮発性成分を減圧下で除去し、生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー／結晶化で精製した。
【０１０２】
Ｎ−［（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−４−（２−ヘキシ−１−イニル−６−メチルアミノ−プリン−９−イル）−２，３−ジヒドロキシ−シクロペンチル］−アセトアミド
Ｎ−［（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−（２−ヨード−６−メチルアミノ−プリン−９−イル）−シクロペンチル］−アセトアミド（１当量）の無水ＤＭＣとトリエチルアミンの７：２混合物  ０．０５Ｍ溶液を製造した。これにヨウ化銅（Ｉ）（１当量）およびビス（トリフェニルホスフィン）パラジウムジクロライド（２ｍｏｌ％）、次に１−ヘキシン（６当量）を加えた。得られた混合物を室温で完了まで攪拌し、揮発性成分を減圧下で除去した。生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー／結晶化で精製した。
【０１０３】
実施例４
（１Ｓ，４Ｒ）−４−（６−クロロ−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エノール
６−クロロプリン（１当量）、（１Ｓ，４Ｒ）−シス−４−アセトオキシ−シクロペント−２−エノール（１．３３当量）およびポリマー結合性トリフェニルホスフィン（０．６６当量）を混合し、真空下、室温で２４時間置いた。新たに蒸留した脱酸素ＴＨＦ（（１Ｓ，４Ｒ）−シス−４−アセトオキシ−シクロペント−２−エノールについて１．０Ｍに）、次にＰｄ２（ｄｂａ）３（５ｍｏｌ％）を加えた。混合物を１５分間室温で攪拌し、その後トリエチルアミン（水酸化カリウムで乾燥）を加えた（３当量）。反応混合物を１時間５０℃で攪拌し、室温に冷却させ、濾過した。揮発性成分を減圧下で除去し、生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー／結晶化で精製した。
【０１０４】
炭酸（１Ｓ，４Ｒ）−４−（６−クロロ−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エニルエステルエチルエステル
ピリジン（３当量）を（１Ｓ，４Ｒ）−４−（６−クロロ−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エノール（１当量）の無水ＴＨＦ  ０．２Ｍ溶液に加えた。反応温度が４０℃を超えないようにエチルクロロホルメート（４当量）をゆっくりと加えた。添加終了後、反応物を室温で完了まで攪拌した。沈殿を濾過で除去し、揮発性成分を減圧下で除去した。残渣をジクロロメタン中に取り、０．１Ｍ  塩酸、水（×２）および塩水で連続的に洗浄し、その後硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過し、溶媒を減圧下で除去した後、フラッシュカラムクロマトグラフィー／結晶化で精製して所望の生成物を得た。
【０１０５】
アセチル−［（１Ｓ，４Ｒ）−４−（６−クロロ−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エニル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
炭酸（１Ｓ，４Ｒ）−４−（６−クロロ−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エニルエステルエチルエステル（１当量）、アセチル−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（Taddei et al., Org Biomol Chem, Vol. 2, pp. 665-670 (2004)参照；１．１５当量）およびトリフェニルホスフィン（０．１５当量）をオーブン乾燥フラスコ内でアルゴン雰囲気下で混合した。無水脱酸素ＴＨＦ（（１Ｓ，４Ｒ）−シス−４−アセトオキシ−シクロペント−２−エノールについて０．３Ｍに）、次にＰｄ２（ｄｂａ）３（５ｍｏｌ％）を加えた。反応混合物を１時間５０℃で攪拌し、室温に冷却させ、その後揮発性成分を減圧下で除去し、生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー／結晶化で精製した。
【０１０６】
アセチル−［（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−４−（６−クロロ−プリン−９−イル）−２，３−ジヒドロキシ−シクロペンチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
アセチル−［（１Ｓ，４Ｒ）−４−（６−クロロ−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エニル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル（１当量）、メタンスルホンアミド（１当量）およびＡＤ−ｍｉｘ−α（１．５ｇ／ｍｍｏｌ  基質）をｔｅｒｔ−ブタノール：水  １：１（アセチル−［（１Ｓ，４Ｒ）−４−（６−クロロ−プリン−９−イル）−シクロペント−２−エニル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルについて０．１Ｍに）中で混合した。オスミウムテトロドキシド（５ｍｏｌ％、４％水溶液として）を加え、反応混合物を激しく一晩攪拌した。完了後、反応物を酢酸エチルと水で分配し；有機相を新鮮な水（×２）および塩水で連続的に洗浄した後、硫酸マグネシウムで乾燥させた。濾過し、揮発性成分を減圧下で除去して、所望の生成物を得た。
【０１０７】
アセチル−｛（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−［６−（３−ヨード−ベンジルアミノ）−プリン−９−イル］−シクロペンチル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
３−ヨードベンジルアミン（１当量）およびトリエチルアミン（１．１当量）をジクロロメタン（３−ヨードベンジルアミンについて〜０．４Ｍに）に溶解させ、アセチル−［（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−４−（６−クロロ−プリン−９−イル）−２，３−ジヒドロキシシクロペンチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルのジクロロメタン（１当量；０．１Ｍ）溶液に加えた。反応物を加熱しながら一晩攪拌した後、揮発性成分を減圧下で除去した。所望の生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー／結晶化で精製した。
【０１０８】
Ｎ−｛（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−［６−（３−ヨード−ベンジルアミノ）−プリン−９−イル］−シクロペンチル｝−アセトアミド
アセチル−｛（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−２，３−ジヒドロキシ−４−［６−（３−ヨード−ベンジルアミノ）−プリン−９−イル］−シクロペンチル｝−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルをジクロロメタン（〜０．１Ｍ）に溶解させ、氷／水で０℃に冷却した。十分なトリフルオロ酢酸を加えて２０％溶液を得て、反応物を氷上で完了まで攪拌した。揮発性成分を減圧下で除去し、生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー／結晶化で精製した。
【０１０９】
実施例５
アセチル−（（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−４−｛６−［５−クロロ−２−（３−メチル−イソキサゾール−５−イルメトキシ）−ベンジルアミノ］−プリン−９−イル｝−２，３−ジヒドロキシ−シクロペンチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステル
５−クロロ−２−（３−メチルイソキサゾール−５−イルメトキシ）ベンジルアミン（DeNinno, et al., J Med Chem, Vol. 46, pp. 353-355 (2003)参照、補助物質；１当量）およびトリエチルアミン（１．１当量）をジクロロメタンに溶解させ（３−ヨードベンジルアミンについて〜０．４Ｍ）、アセチル−［（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−４−（６−クロロ−プリン−９−イル）−２，３−ジヒドロキシシクロペンチル］−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルのジクロロメタン（１当量；０．１Ｍ）溶液に加えた。反応物を加熱しながら一晩攪拌し、その後揮発性成分を減圧下で除去した。所望の生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー／結晶化で精製した。
【０１１０】
Ｎ−（（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−４−｛６−［５−クロロ−２−（３−メチル−イソキサゾール−５−イルメトキシ）−ベンジルアミノ］−プリン−９−イル｝−２，３−ジヒドロキシ−シクロペンチル）−アセトアミド
アセチル−（（１Ｓ，２Ｒ，３Ｓ，４Ｒ）−４−｛６−［５−クロロ−２−（３−メチル−イソキサゾール−５−イルメトキシ）−ベンジルアミノ］−プリン−９−イル｝−２，３−ジヒドロキシ−シクロペンチル）−カルバミン酸ｔｅｒｔ−ブチルエステルをジクロロメタン（〜０．１Ｍ）に溶解させ、氷／水で０℃に冷却した。十分なトリフルオロ酢酸を加えて２０％溶液を得て、反応物を氷上で完了まで攪拌した。揮発性成分を減圧下で除去し、生成物をフラッシュカラムクロマトグラフィー／結晶化で精製した。
【国際調査報告】
2009534358.tif 000031
2009534358.tif 000032
2009534358.tif 000033