(57)【要約】  本発明は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）‐１８の１若しくは２種類以上の初期ポリペプチド、又はＨＰＶ‐１８の１若しくは２種類以上の初期ポリペプチドをコードする核酸を含んでなる組成物の、ＨＰＶ‐１８以外の少なくとも１種類のパピローマウイルスに起因する感染若しくは病理状態を予防又は治療する薬剤を製造するための使用に関する。本発明が特に対象とするのは免疫療法であり、特に、子宮頚部上皮内腫瘍（ＣＩＮ）へ、そして最終的には子宮頚癌へ至る可能性のあるＨＰＶの持続感染の予防及び治療である。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＨＰＶ‐１８の１若しくは２種類以上の初期ポリペプチド、又はＨＰＶ‐１８の１若しくは２種類以上の初期ポリペプチドをコードする核酸を含んでなる組成物の、ＨＰＶ‐１８以外の少なくとも１種類のパピローマウイルスに起因する感染若しくは病理状態を予防又は治療する薬剤を製造するための使用。
【請求項２】
ＨＰＶ‐１８の１若しくは２種類以上の初期ポリペプチド、又はＨＰＶ‐１８の１若しくは２種類以上の初期ポリペプチドをコードする核酸を含んでなる組成物の、ＨＰＶ‐１８以外の少なくとも１種類のヒトパピローマウイルスに起因する感染若しくは病理状態を治療する薬剤を製造するための使用。
【請求項３】
ＨＰＶ‐１８の１若しくは２種類以上の初期ポリペプチド、又はＨＰＶ‐１８の１若しくは２種類以上の初期ポリペプチドをコードする核酸を含んでなる組成物の、ＨＰＶ‐１８以外の少なくとも１種類のヒトパピローマウイルスに対する免疫反応を誘発するための使用。
【請求項４】
前記のＨＰＶ‐１８以外の少なくとも１種類のヒトパピローマウイルスが、ＨＰＶ‐３９、ＨＰＶ‐４５、ＨＰＶ‐５１、ＨＰＶ‐５６、ＨＰＶ‐５９、ＨＰＶ‐６８、ＨＰＶ‐７０、及びＨＰＶ‐８５から成る群より選択される、請求項１乃至３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５】
前記の１若しくは２種類以上のＨＰＶ‐１８初期ポリペプチドが、Ｅ６ポリペプチド、Ｅ７ポリペプチド、又はＥ６ポリペプチド及びＥ７ポリペプチドの両方である、請求項１乃至４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項６】
前記のＨＰＶ‐１８ Ｅ６及び／又はＥ７ポリペプチドが、非発癌性変異体である、請求項５に記載の使用。
【請求項７】
前記のＨＰＶ‐１８ Ｅ６ポリペプチドの非発癌性変異体が、配列番号１に示すアミノ酸配列と相同的又は同一であるアミノ酸配列を含んでなる、請求項６に記載の使用。
【請求項８】
前記のＨＰＶ‐１８ Ｅ７ポリペプチドの非発癌性変異体が、配列番号２に示すアミノ酸配列と相同的又は同一であるアミノ酸配列を含んでなる、請求項６に記載の使用。
【請求項９】
前記のＨＰＶ‐１８ Ｅ６及び／又はＥ７ポリペプチドが、細胞膜へアンカーされるように、膜アンカー配列及び分泌配列を組み込むことによって修飾される、請求項５乃至８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１０】
前記の膜アンカー配列及び／又は分泌配列が、狂犬病ウイルス糖タンパク質、ＨＩＶウイルス外被糖タンパク質、又は麻疹ウイルスＦタンパク質から得られる、請求項９に記載の使用。
【請求項１１】
前記のＨＰＶ‐１８ Ｅ６ポリペプチドが、配列番号３に示すアミノ酸配列と相同的又は同一であるアミノ酸配列を含んでなる、請求項１０に記載の使用。
【請求項１２】
前記のＨＰＶ‐１８ Ｅ７ポリペプチドが、配列番号４に示すアミノ酸配列と相同的又は同一であるアミノ酸配列を含んでなる、請求項１０に記載の使用。
【請求項１３】
前記の組成物が、サイトカイン又はサイトカインをコードする核酸をさらに含んでなる、請求項１乃至１２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１４】
前記のサイトカインがＩＬ‐２である、請求項１３に記載の使用。
【請求項１５】
前記の１若しくは２種類以上のＨＰＶ‐１８初期ポリペプチドをコードする核酸が、ベクター内に含まれる、請求項１乃至１４のいずれか１項に記載の使用。
【請求項１６】
前記のベクターがワクシニアベクターである、請求項１５に記載の使用。
【請求項１７】
前記のワクシニアベクターがＭＶＡベクターである、請求項１６に記載の使用。
【請求項１８】
前記のＭＶＡベクターが、７．５Ｋプロモーターの支配下に置かれたＨＰＶ‐１８ Ｅ６ポリペプチドをコードする核酸、７．５Ｋプロモーターの支配下に置かれたＨＰＶ‐１８ Ｅ７ポリペプチドをコードする核酸、及びＨ５Ｒプロモーターの支配下に置かれたヒトＩＬ‐２遺伝子を含んでなる、請求項１７に記載の使用。
【請求項１９】
前記のＨＰＶ‐１８ Ｅ６ポリペプチド、前記のＨＰＶ‐１８ Ｅ７ポリペプチド、及び前記のヒトＩＬ‐２遺伝子をコードする核酸が、ＭＶＡゲノムの欠失部位ＩＩＩへ挿入される、請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
前記の病理状態が、ＨＰＶの持続感染、前癌若しくは癌状態である、請求項１乃至１９のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２１】
前記のＨＰＶと関連する癌状態が、子宮頚癌、肛門癌、又は口腔癌である、請求項２０に記載の使用。
【請求項２２】
前記のＨＰＶと関連する前癌状態が、子宮頚部上皮内腫瘍（ＣＩＮ）のグレード１、２、又は３である、請求項２０に記載の使用。
【請求項２３】
前記の組成物が、皮下経路又は筋肉内経路から投与される、請求項１乃至２２のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２４】
前記の組成物が、５×１０５ｐｆｕ乃至５×１０７ｐｆｕのワクシニアベクターを含んでなる用量で投与される、請求項２０乃至２３のいずれか１項に記載の使用。
【請求項２５】
前記の組成物が、請求項１７、１８、又は１９に記載のようにＭＶＡベクターを含んでなり、５×１０５ｐｆｕ乃至５×１０７ｐｆｕの用量で、１週間の間隔をおいて皮下経路から３回投与される、請求項２４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）‐１８の１若しくは２種類以上の初期ポリペプチド、又はＨＰＶ‐１８の１若しくは２種類以上の初期ポリペプチドをコードする核酸を含んでなる組成物の、ＨＰＶ‐１８以外の少なくとも１種類のパピローマウイルスに起因する感染若しくは病理状態を予防又は治療する薬剤を製造するための使用に関する。本発明が特に対象とするのは免疫療法であり、特に、子宮頚部上皮内腫瘍（ＣＩＮ）へ、そして最終的には子宮頚癌へ、至る可能性のあるＨＰＶの持続感染の予防及び治療である。
【背景技術】
【０００２】
パピローマウイルスは、ヒトを含む数多くの高等生物中で確認されている、小さなＤＮＡウイルスである（例えば、Ｐｆｉｓｔｅｒ，１９８７，ｉｎ Ｔｈｅ ｐａｐｏｖａｖｉｒｉｄａｅ： Ｔｈｅ Ｐａｐｉｌｌｏｍａｖｉｒｕｓｅｓ， Ｓａｌｚｍａｎ ａｎｄ Ｈｏｗｌｅｙ ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，ｐ １‐３８、参照）。このウイルスは、良性腫瘍から悪性腫瘍にわたる病理状態と関連している。良性腫瘍においては、ウイルスゲノムはエピソームであるが、一方、悪性腫瘍においては、ＨＰＶのＤＮＡは宿主染色体へ組み込まれる（Ｓｔｏｌｅｒ，２０００，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｐａｔｈ．１９，１６‐２８）。
【０００３】
パピローマウイルスは、カプシドタンパク質に囲まれた塩基対約７９００の二本鎖環状ＤＮＡを有する。ゲノムは、Ｅ１乃至Ｅ７のリーディングフレームを含む初期（Ｅ）領域、及び後期（Ｌ）領域を有する。後期領域は、ウイルスカプシドを形成する構造タンパク質Ｌ１及びＬ２をコードし、一方、初期遺伝子は、核内で主に見られる制御タンパク質をコードする。Ｅ１は、ウイルスゲノムの維持と複製に重要である２種類のタンパク質をコードする。Ｅ２は、Ｅ６及びＥ７の転写を指令するウイルスプロモーターを制御する活性化タンパク質及び抑制タンパク質をコードする（Ｂｅｃｈｔｏｌｄ ｅｔ ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７７，２０２１‐２０２８）。Ｅ４にコードされたタンパク質は、細胞質内のケラチンネットワークに結合してこれを分断し、ウイルスの成熟化に際して重要な役割を担うことができる。Ｅ５タンパク質の役割に関しては依然として議論の余地があり、その発現は、ウイルスが宿主染色体へ組み込まれる際に失われることが多い。癌関連ＨＰＶ遺伝子型のＥ６及びＥ７にコードされた遺伝子産物は、感染細胞の癌化に関与しており（Ｋａｎｄａ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６２，６１０‐６１３；Ｖｏｕｓｄｅｎ ｅｔ ａｌ．，１９８８，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ Ｒｅｓ．３，１‐９；Ｂｅｄｅｌｌ ｅｔ ａｌ．，１９８７，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６１，３６３５‐３６４０）、これは、これらのウイルスタンパク質が、各々、細胞腫瘍抑制遺伝子産物であるｐ５３、及び網膜芽細胞腫（Ｒｂ）と結合できる能力によるものと推定される。ＨＰＶ‐１６の天然Ｅ６ポリペプチドのｐ５３との結合に関与するアミノ酸残基は、１１８乃至１２２の残基（１番目のＭｅｔ残基を＋１とした場合、又は、好適に用いられるように、２番目のＭｅｔ残基から始めた場合は、１１１乃至１１５の残基）であることが明らかにされており（Ｃｒｏｏｋ ｅｔ ａｌ．，１９９１，Ｃｅｌｌ ６７，５４７‐５５６）、ＨＰＶ‐１６の天然Ｅ７ポリペプチドのＲｂとの結合に関与するアミノ酸残基は、２１乃至２６の残基に位置する（Ｍｕｎｇｅｒ ｅｔ ａｌ．，１９８９，ＥＭＢＯ Ｊ．８，４０９９‐４１０５；Ｈｅｃｋ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９，４４４２‐４４４６）。これらの結合領域は、ＨＰＶ‐１８のＥ６及びＥ７においても保存される（Ｐｉｍ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ９，１８６９‐１８７６；Ｈｅｃｋ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９，４４４２‐４４４６）。
【０００４】
現在、１００を超す種類のヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）遺伝子型がクローン化され、配列決定されている（Ｓｔｏｌｅｒ，２０００，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．Ｐａｔｈ １９，１６‐２８）。性器粘膜に感染するＨＰＶ遺伝子型は４０種類のみであり、そのうちの約１５種類が、女性に生殖器の悪性腫瘍を起こす危険をもたらす。より詳細には、最も蔓延している２種類の遺伝子型であるＨＰＶ‐１６及びＨＰＶ‐１８は、浸潤性子宮頚癌の７０％超で検出され、一方、ＨＰＶ‐３１、ＨＰＶ‐３３、及びＨＰＶ‐４５が合わせて、この症例の１０％を占めている（Ｃｏｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００５，Ｓｃｉｅｎｃｅ ３０８，６１８‐６２１）。
【０００５】
子宮頚部をスクリーニングするプログラムは存在するが、国際癌研究機関のデータによると、世界中で毎年約５０万人の女性が子宮頚癌と診断され、死亡者数は２７万人を超えている。従来からの手法は依然として手術及び放射線療法であるが、最近の１５年の間に、例えばペプチド主体のワクチン（Ｆｅｌｔｋａｍｐ ｅｔ ａｌ．，１９９３，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２３，２２４２‐２２４９）、ウイルス様粒子（ＶＬＰ）ワクチン、ＤＮＡワクチン（Ｏｓｅｎ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｖａｃｃｉｎｅ １９，４２７６‐４２８６；Ｓｍａｈｅｌ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２８１，２３１‐２３８）、及びウイルスベクターワクチン（ＥＰ４６２，１８７，Ｄａｅｍｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｇｅｎｅ Ｔｈｅｒ．７：１８５９‐１８６６； Ｈｅ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ２７０，１４６‐１６１；Ｂｏｒｙｓｉｅｗｉｃｚ ｅｔ ａｌ．，１９９６，Ｌａｎｃｅｔ ３４７，１５２３‐１５２７）など、新しくワクチンを用いた方策も設計されてきた。
【０００６】
概念上、ＨＰＶワクチンには、予防及び治療という２つの手法がある。予防的手法では、ウイルス感染の防止、すなわち、主に中和抗体の誘発によってウイルスが宿主細胞へ侵入する前にこれを阻止することを目的とする。通常、予防ワクチンは、ウイルス表面で発現されるカプシドタンパク質を標的とする。ワクチンのほとんどは、遺伝子組換えによって作製されたＬ１タンパク質のＶＬＰ、又は最も蔓延しているＨＰＶ種のＶＬＰ混合物に基づいている。ＭｅｒｃｋとＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ（ＧＳＫ）は、最近、フェーズＩＩＩの臨床試験に成功し、種特異的な子宮頚部感染の予防効力が１００％であったとの報告を発表した。ＨＰＶ‐１６及びＨＰＶ‐１８のＶＬＰの混合物を投与した後の、発癌性のＨＰＶ‐３１及びＨＰＶ‐４５遺伝子型に対する干渉効果が報告されている（ＷＯ２００４／０５６３８９）。しかし、ＶＬＰを主体とする予防ワクチンは、ＨＰＶ感染によって発症した病理状態の軽減を引き起こすことは期待されない。
【０００７】
治療的手法は、主に細胞免疫反応を誘発することにより、発症したＨＰＶ感染を治療し、ＨＰＶに関連する前癌及び癌の病理状態の軽減を引き起こすことを目的とする。通常、治療的方策は、ＨＰＶに起因する腫瘍細胞によって発現されるＥ６及び／又はＥ７腫瘍性タンパク質に対する免疫化に基づいている。現在までのところ、Ｅ６及びＥ７ＨＰＶ抗原によってもたらされる免疫は遺伝子型に特異的であると考えられており、現在、臨床又は前臨床開発段階の治療ワクチンは、主に、最も蔓延している発癌性のＨＰＶ‐１６に、及びそれよりは小さな規模でＨＰＶ‐１８に焦点が当てられている。
【０００８】
しかし、理想的な治療ワクチンは、最も蔓延しているＨＰＶ遺伝子型だけでなく、残りの３０％の子宮頚癌に関与しているその他の蔓延度の低いＨＰＶ遺伝子型に対しても防御効果を発揮することが可能であるべきである。これは、各発癌性ＨＰＶ遺伝子型に対する代替的なワクチン候補の開発によって達成することができる。しかし、この方策は、蔓延度の低いＨＰＶ遺伝子型に曝露した患者の数が限られているのに対して、監督官庁が求める臨床及び前臨床開発にかかるコストを考えた場合、あまり魅力的ではないと思われる。
【０００９】
ＨＰＶは、その感染の慢性的かつ持続的な特性、高い蔓延性、及びＨＰＶに誘発された癌の著しい罹患率のため、何年にもわたって地球規模での健康に対する重大な脅威であり続けることが考えられる。従って、より広い適用範囲を有し、ＨＰＶ‐１８に加えて、その他の蔓延度の低い潜在的に発癌性であるＨＰＶ遺伝子型を含む複数のＨＰＶ遺伝子型に対して防御及び／又は治療を行うことが可能なワクチンの開発が求められている。
【発明の開示】
【００１０】
従って、本発明は、工業国並びに発展途上国において、パピローマウイルス感染又はパピローマウイルスに関連する前悪性及び悪性病変の予防と治療の改善についての著しい進歩に関する。
【００１１】
本技術的課題は、請求項で明示する態様を提供することによって解決される。
【００１２】
本発明のその他の及びさらなる局面、特徴、及び利点は、以下に述べる本発明の現時点で好ましい態様から明らかとなるであろう。これらの態様は、開示の目的で示されるものである。
【００１３】
従って、第一の局面では、本発明は、ＨＰＶ‐１８以外の少なくとも１種類のパピローマウイルスに起因する感染若しくは病理状態を予防又は治療する薬剤を製造するための、ＨＰＶ‐１８の１若しくは２種類以上の初期ポリペプチド、又はＨＰＶ‐１８の１若しくは２種類以上の初期ポリペプチドをコードする核酸を含んでなる組成物の使用を提供する。
【００１４】
より詳細には、本発明は、ＨＰＶ‐１８の１若しくは２種類以上の初期ポリペプチド、又はＨＰＶ‐１８の１若しくは２種類以上の初期ポリペプチドをコードする核酸を含んでなる組成物の、ＨＰＶ‐１８以外の少なくとも１種類のヒトパピローマウイルスに起因する感染若しくは病理状態を治療する薬剤を製造するための使用に関する。本発明はさらに、ＨＰＶ‐１８以外の少なくとも１種類のヒトパピローマウイルスに起因する感染若しくは病理状態を治療する方法にも関し、その方法には、ＨＰＶ‐１８の１若しくは２種類以上の初期ポリペプチド、又はＨＰＶ‐１８の１若しくは２種類以上の初期ポリペプチドをコードする核酸を含んでなる組成物を宿主生物へ投与することを含んでなる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１５】
この全出願を通して本明細書で用いる「１の（ａ）」及び「１の（ａｎ）」という用語は、状況に応じて特に他の意味を示さない限りにおいて、「少なくとも１の」、「少なくとも第一の」、「１若しくは２以上の」、又は「複数の」示された化合物若しくは工程、という意味で用いる。例えば、「１個の細胞（ａ  ｃｅｌｌ）」という用語には、混合物を含む複数個の細胞が含まれる。より詳細には、少なくとも１の」、及び「１若しくは２以上の」は、１又は１よりも大きい数を意味し、特に１、２、又は３が好ましい。
【００１６】
本明細書で用いる「及び／又は」という用語は、「及び」、「又は」、及び「該用語で接続された要素の全て若しくはその他のいずれかの組み合わせ」という意味を含む。
【００１７】
本明細書で用いる「約」又は「おおよそ」という用語は、与えられた値又は範囲の２０％以内、好ましくは１０％以内、そしてより好ましくは５％以内であるということを意味する。
【００１８】
「アミノ酸」及び「残基」という用語は同意である。これらの用語は、天然の、非天然の、及び／又は合成のアミノ酸を意味し、光学異性体であるＤ体又はＬ体、修飾アミノ酸、及びアミノ酸類似体を含む。
【００１９】
「ポリペプチド」、「ペプチド」、及び「タンパク質」という用語は、本明細書において交換可能に用いられ、ペプチド結合によって結合した９若しくは１０個以上のアミノ酸を含んでなるアミノ酸残基のポリマーを意味する。このポリマーは、直鎖状、分岐鎖状、又は環状であってよく、天然のアミノ酸及び／又はアミノ酸類似体を含んでよく、非アミノ酸で区切られていてもよい。一般的な表記として、アミノ酸ポリマーが長鎖である場合（例：５０個超のアミノ酸残基）、ポリペプチド又はタンパク質と称することが好ましい。
【００２０】
本発明に関連する範囲内において、「核酸」、「核酸分子」、「ポリヌクレオチド」、及び「ヌクレオチド配列」という用語は、交換可能に用いられ、ポリデオキシリボヌクレオチド（ＤＮＡ）（例：ｃＤＮＡ、ゲノムＤＮＡ、プラスミド、ベクター、ウイルスゲノム、単離ＤＮＡ、プローブ、プライマー、及びこれらのいずれかの組み合わせ）、若しくはポリリボヌクレオチド（ＲＮＡ）分子（例：ｍＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ）、又は混合したポリリボヌクレオチド‐ポリデオキシリボヌクレオチドのいかなる長さでもよいポリマーを意味する。これらは、一本鎖若しくは二本鎖、直鎖状若しくは環状、天然若しくは合成のポリヌクレオチドを包含する。さらに、ポリヌクレオチドは、メチル化ヌクレオチド及びヌクレオチド類似体などの非天然ヌクレオチドを含んでいてもよく（修飾の例として、ＵＳ５，５２５，７１１、ＵＳ４，７１１，９５５、ＥＰＡ３０２１７５、を参照）、非ヌクレオチド成分で区切られていてもよい。ヌクレオチドの修飾は、存在する場合は、重合の前に付与しても後に付与してもよい。
【００２１】
本明細書で用いる「含んでなる（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、生成物、組成物、及び方法の定義に用いる場合、その生成物、組成物、及び方法が、示された化合物又は工程を有するが、それ以外も除外しない、という意味であることを意図している。「から本質的になる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｅｓｓｅｎｔｉａｌｌｙ  ｏｆ）」とは、その他の化合物又は工程で重要な意味を持つものは含まない、ということを意味するものとする。従って、列挙された化合物から本質的になる組成物は、微量不純物及び薬理学的に許容される担体は除外しない。「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ  ｏｆ）」とは、微量成分であるその他の化合物又はわずかな構成要素であるその他の工程も、それ以上のものも除外する、ということを意味するものとする。例えば、ポリペプチドがアミノ酸配列「からなる」とは、そのポリペプチドが示されたアミノ酸配列以外のいかなるアミノ酸も含まない場合のことである。ポリペプチドがアミノ酸配列「から本質的になる」とは、そのアミノ酸配列に共に存在する追加的なアミノ酸残基が、数個、通常は約１乃至５０個程度だけである場合のことである。ポリペプチドがアミノ酸配列を「含んでなる」とは、そのアミノ酸配列が、ポリペプチドの最終的なアミノ酸配列の少なくとも一部である場合のことである。そのようなポリペプチドは、数個から数百個の追加的なアミノ酸残基を有することができる。そのような追加的なアミノ酸残基は、とりわけ、ポリペプチドの輸送を担ったり、ポリペプチドの産生若しくは精製を促進したり、半減期を伸ばしたりすることなどができる。ヌクレオチド配列についても同じことが言える。
【００２２】
本明細書で述べる、「単離された」という用語は、その天然の環境から精製若しくは取り出されたタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、又は核酸のことである。「精製された」という用語は、天然に共存する少なくとも１種類のその他の成分から分離されたタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、又は核酸のことである。
【００２３】
「宿主細胞」という用語は、限定することなく、広い意味で理解されるべきであり、組織、器官、又は単離された細胞における特定の構成物に関する。このような細胞は、特有の種類の細胞、又は異なる種類の細胞の集団であってよく、培養細胞系、一次細胞、及び増殖性細胞を包含する。「宿主生物」という用語は、脊椎動物、特に、哺乳類種に属する種類のことであり、特に、家畜、スポーツ用動物、及びヒトを含む霊長類のことである。
【００２４】
「ＨＰＶ」は、「ヒトパピローマウイルス」を意味する。その分類は、ゲノムの関連性に基づいている。現在のところ１００を超える数のＨＰＶ遺伝子型が確認されており、単離された時系列順に従って番号が付与されている。慣例的に、オープンリーディングフレームＥ６、Ｅ７、及びＬ１を有するゲノムの約２０００ヌクレオチドの長さの部分での互いの同一性が９０％未満となる場合、２個の単離物は異なった種類から成る。入手可能なヌクレオチド配列を並べ合わせることによって、系統樹が構築された（Ｖａｎ Ｒａｎｓｔ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．７３，２６５３；Ｄｅ Ｖｉｌｌｉｅｒｓ ｅｔ ａｌ．，２００４，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ ３２４，１７‐２７）。
【００２５】
本明細書で用いる「初期ポリペプチド」という用語は、好ましくはＥ１、Ｅ２、Ｅ３、Ｅ４、Ｅ５、Ｅ６、及びＥ７ポリペプチドから成る群より選択される、本技術分野で認識される非構造タンパク質のことである。本発明に関連して、本発明に従って用いられる組成物に含まれるか、又はその組成物に含まれる核酸によってコードされる１若しくは２種類以上の初期ポリペプチドは、ＨＰＶ‐１８由来のものである。「由来する」という用語は、単離された、クローン化された、誘導体化された、又は関連した、という意味である。従って、本発明によると、１若しくは２種類以上のＨＰＶ‐１８初期ポリペプチドは、天然初期ＨＰＶ‐１８ポリペプチド由来であってもよく、その誘導体由来であってもよい。「天然初期ＨＰＶ‐１８ポリペプチド」という用語は、自然源で見られる若しくはそこから単離することができるタンパク質、ポリペプチド、又はペプチドのことであり、実験室で人の手によって人工的に修飾又は変性されたものとは異なる。そのような自然源としては、生物サンプル（例：ＨＰＶ‐１８の感染患者からの血液、血漿、血清、膣内液及び子宮頚管液、組織切片、生体組織、婦人科サンプル）、培養細胞、並びに組換え物質（例：ＨＰＶ‐１８ウイルス又はゲノム、ゲノムライブラリー又はｃＤＮＡライブラリー、ＨＰＶ‐１８ゲノムの断片を含むプラスミド、組換え初期ＨＰＶ‐１８ポリペプチド、など）が挙げられる。従って、「天然初期ＨＰＶ‐１８ポリペプチド」という用語は、天然由来の初期ＨＰＶ‐１８ポリペプチド及びその断片を含むであろう。断片は、少なくとも９アミノ酸残基であることが好ましく、少なくとも１個の免疫原性エピトープ、特にはＴエピトープを含んでなる。このような断片は、単独で、又は組み合わせて（例：融合して）用いることができる。ＨＰＶ‐１８初期遺伝子／ポリペプチドのヌクレオチド配列及びアミノ酸配列は文献に記載されており、専門のデータバンク、例えばＧｅｎｂａｎｋにおいて、各々、ＮＣ＿００１３５７及びＸ０５０１５の受託番号で入手可能である。しかし、天然初期ＨＰＶ‐１８ポリペプチドはこれらの典型的な配列に限定されない。実際、アミノ酸配列は、別々のＨＰＶ‐１８の単離物間で異なる場合があり、この自然の遺伝的変異の範囲も、本発明の範囲に含まれる。
【００２６】
初期ＨＰＶ‐１８ポリペプチドの誘導体は、天然ＨＰＶ‐１８初期ポリペプチドに対して、以下に示すような１若しくは２箇所以上の修飾（改変）を含む。修飾は、変異及び／若しくは化学部分の付加（例：アルキル化、アセチル化、アミド化、リン酸化など）という方法、又は一部分の標識という方法によって行うことができる。変異としては、１若しくは２個以上のアミノ酸残基の欠失、置換、若しくは付加、又はこれらの可能性のいずれかの組み合わせが挙げられる。いくつかの修飾を意図する場合は、連続する残基及び／又は非連続の残基を対象にすることができる。修飾は、部位特異的変異誘発（例：フランス、Ｌｅｓ Ｕｌｌｉｓ、ＡｍｅｒｓｈａｍのＳｃｕｌｐｔｏｒ（商標）インビトロ変異誘発システムを用いる）、ＰＣＲ変異誘発、及びＤＮＡシャフリングなど、当業者に公知である数多くの方法で行なうことができる。
【００２７】
修飾された初期ＨＰＶ‐１８ポリペプチドは、有利に、その完全長アミノ酸配列、又はそのより短い断片（例：少なくとも９、２０、３０、４０、５０、１００アミノ酸の長さ）にわたって、対応する天然初期ＨＰＶ‐１８ポリペプチドに対して高度のアミノ酸配列同一性を保持し、それは７５％超、有利には８０％超、望ましくは８５％超、好ましくは９０％超、より好ましくは９５％超、さらにより好ましくは９７％超（例：配列同一性１００％）である。２個のポリペプチド間の同一性パーセントは、これらの配列が共有する同一部位の数の関数であり、最適なアラインメントのために導入する必要があるギャップの数と各ギャップの長さが考慮されている。本技術分野において、アミノ酸配列間の同一性パーセントを算出する様々なコンピュータプログラム及び数学アルゴリズムが入手可能であり、例えば、ＮＣＢＩで入手可能なＷ２Ｈ ＨＵＳＡＲソフトウェア及びＢｌａｓｔプログラム（例：Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｎｕｃｌｅｉｃ Ａｃｉｄｓ Ｒｅｓ．２５，３３８９‐３４０２；Ａｌｔｓｃｈｕｌ ｅｔ ａｌ．，２００５，ＦＥＢＳ Ｊ．２７２，５１０１‐５１０９）などがある。
【００２８】
本発明に従って使用する修飾された初期ＨＰＶ‐１８ポリペプチドは、細胞性免疫反応を刺激する能力などの、天然初期ＨＰＶ‐１８ポリペプチドの免疫原性作用を保持することが望ましい。
【００２９】
一つの態様では、組成物を用いて、ＨＰＶ‐１８以外の少なくとも１種類のＨＰＶ遺伝子型に起因する、特に肛門生殖器の管部、皮膚、若しくは口腔におけるＨＰＶの感染及び／又は病理状態を治療する。一つの局面では、少なくとも１種類のヒトパピローマウイルスのゲノムは、ＨＰＶ‐１８ゲノムのＥ６又はＥ７ポリペプチドをコードする部分とのヌクレオチド配列の同一性が、９０％未満であり、有利には８７％未満、そして望ましくは８６％未満であるが、５０％超であり、有利には５５％超であり、そして望ましくは６０％超である。完全なＨＰＶ‐１８ Ｅ６又はＥ７のＯＲＦに対して、おおよそ６１％乃至おおよそ８６％の同一性を共有することが好ましい。ＨＰＶゲノムの部分間の同一性パーセントは、これらの２個の配列が共有する同一部位の数の関数であり、最適なアラインメントのために導入する必要があるギャップの数と各ギャップの長さが考慮されている。本技術分野において、ヌクレオチド配列間の同一性パーセントを算出する様々なコンピュータプログラム及び数学アルゴリズムが入手可能である。そのようなＨＰＶ遺伝子型の代表例としては、ＨＰＶ‐１３、ＨＰＶ‐１８、ＨＰＶ‐３０、ＨＰＶ‐３２、ＨＰＶ‐３９、ＨＰＶ‐４０、ＨＰＶ‐４２、ＨＰＶ‐４４、ＨＰＶ‐４５、ＨＰＶ‐５１、ＨＰＶ‐５６、ＨＰＶ‐５９、ＨＰＶ‐６１、ＨＰＶ‐６４、ＨＰＶ‐６８、ＨＰＶ‐７０、及びＨＰＶ‐８５が挙げられるが、これらに限定されない。
【００３０】
ＨＰＶ‐１８以外の少なくとも１種類のヒトパピローマウイルスとしては、ＨＰＶ‐３９、ＨＰＶ‐４５、ＨＰＶ‐５１、ＨＰＶ‐５６、ＨＰＶ‐５９、ＨＰＶ‐６８、ＨＰＶ‐７０、及びＨＰＶ‐８５から成る群、又はこれらの可能な組み合わせから選択されることが好ましく、特にＨＰＶ‐４５が好ましい。これらのＨＰＶ遺伝子型のヌクレオチド及びアミノ酸配列は文献に記載されており、表１に示すように、専門のデータバンクで入手可能である。
【００３１】
表１：Ｇｅｎｂａｎｋアクセション番号
【表１】
2009534331.tif 000002
【００３２】
別の態様では、本発明に従って使用される組成物は、ＨＰＶ‐１８ Ｅ６ポリペプチド、ＨＰＶ‐１８ Ｅ７ポリペプチド、若しくはＨＰＶ‐１８ Ｅ６ポリペプチド及びＨＰＶ‐１８ Ｅ７ポリペプチドの両方を、含んでなるか、又はコードする。上記で取り上げたＥ６及びＥ７ポリペプチドの形質変化力に関する報告を考慮すると、各々、細胞腫瘍抑制遺伝子産物であるｐ５３及びＲｂとの相互作用に関与する領域において変異された非発癌性の変異体である修飾されたＨＰＶ‐１８ Ｅ６及び／又はＥ７ポリペプチドを用いることが好ましい。本発明は、ｐ５３への結合性が変性されたか若しくは少なくとも著しく低減されたＨＰＶ‐１８ Ｅ６ポリペプチドの使用、及び／又は、Ｒｂへの結合性が変性されたか若しくは少なくとも著しく低減されたＨＰＶ‐１８ Ｅ７ポリペプチド（Ｐｉｍ ｅｔ ａｌ．，１９９４，Ｏｎｃｏｇｅｎｅ ９，１８６９‐１８７６；Ｈｅｃｋ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ８９，４４４２‐４４４６）の使用を包含する。本発明の目的に適した非発癌性であるＨＰＶ‐１８ Ｅ６変異体は、おおよそ１１３位乃至おおよそ１１７位（天然ＨＰＶ‐１８ Ｅ６ポリペプチドの第一番目のメチオニン残基から始めて）に位置する１若しくは２個以上のアミノ酸残基が欠失しており、１１３乃至１１７の残基が完全に欠失していることが特に好ましい（ＮＰＡＥＫ）。最も好ましい非発癌性であるＨＰＶ‐１８ Ｅ６ポリペプチド変異体は、配列番号１に示すアミノ酸配列と相同的若しくは同一であるアミノ酸配列を含んでなるか、又は別の選択肢として本質的にそれからなるか、又は別の選択肢としてそれからなるものである。本発明の目的に適した非発癌性であるＨＰＶ‐１８ Ｅ７変異体は、おおよそ２４位乃至おおよそ２８位（＋１を天然ＨＰＶ‐１８ Ｅ７ポリペプチドの第一番目のアミノ酸とする）に位置する１若しくは２個以上のアミノ酸残基が欠失しており、２４乃至２８の残基が完全に欠失していることが特に好ましい（ＤＬＬＣＨ）。最も好ましい非発癌性であるＨＰＶ‐１８ Ｅ７ポリペプチド変異体は、配列番号２に示すアミノ酸配列と相同的若しくは同一であるアミノ酸配列を含んでなるか、又は別の選択肢として本質的にそれからなるか、又は別の選択肢としてそれからなるものである。
【００３３】
好ましい局面では、本発明で用いる１若しくは２種類以上のＨＰＶ‐１８初期ポリペプチドは、ＭＨＣクラスＩ及び／若しくはＭＨＣクラスＩＩによる提示を改善するために、並びに／又は、抗ＨＰＶ免疫を刺激するために、さらに修飾される。ＨＰＶ‐１８ Ｅ６及びＥ７ポリペプチドは核タンパク質であり、対応するＨＰＶ‐１６のポリペプチドの治療効果は、膜提示（ｍｅｍｂｒａｎｅ  ｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ）によって向上されることがすでに示されている（例えば、ＷＯ９９／０３８８５を参照）。従って、少なくとも１種類のＨＰＶ‐１８初期ポリペプチドを修飾して細胞膜にアンカーされるようにすることが得策であろう。膜へのアンカリングは、膜アンカー配列（ｍｅｍｂｒａｎｅ‐ａｎｃｈｏｒｉｎｇ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）をＨＰＶ‐１８初期ポリペプチドへ組み込むことによって容易に達成され、天然ポリペプチドがそれを有さない場合は、分泌配列（すなわち、シグナルペプチド）が組み込まれる。ＨＰＶ‐１８ Ｅ６及び／又はＥ７ポリペプチドは、膜アンカー配列及び分泌配列を組み込むことによって修飾されることが好ましい。膜アンカー配列及び分泌配列は本技術分野で公知である。簡単に述べると、分泌配列は、膜提示された、又は分泌されたポリペプチドのＮ末端に存在し、その小胞体（ＥＲ）への移行を開始させる。配列は通常１５乃至３５の実質的に疎水性であるアミノ酸を含んでなるが、これらは、次に、ＥＲに存在する特定のエンドペプチダーゼによって除去され、成熟ポリペプチドを生成する。膜アンカー配列は、通常、疎水性が高いという性質を持ち、ポリペプチドを細胞膜へアンカーする働きを有する（例えば、Ｂｒａｎｄｅｎ ａｎｄ Ｔｏｏｚｅ，１９９１，ｉｎ Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｔｏ Ｐｒｏｔｅｉｎ Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ｐ．２０２‐２１４，ＮＹ Ｇａｒｌａｎｄ）。
【００３４】
本発明に関連して用いることができる膜アンカー配列及び分泌配列の選択肢は膨大である。これらの配列は、狂犬病ウイルスの糖タンパク質、ＨＩＶウイルスの外被糖タンパク質、麻疹ウイルスのＦタンパク質など、その配列を含んでなる、膜へアンカーされた及び／又は分泌されたいかなるポリペプチド（例：細胞ポリペプチド又はウイルスポリペプチド）からも得ることができ、あるいは合成されたものでもよい。本発明に従って用いられる初期ＨＰＶ‐１８ポリペプチドの各々に挿入された膜アンカー配列及び／又は分泌配列の由来は、共通であっても異なっていてもよい。分泌配列の挿入部位は、翻訳開始コドンの下流側のＮ末端が好ましく、膜アンカー配列の挿入部位は、例えば停止コドンのすぐ上流側などのＣ末端が好ましい。さらに、リンカーペプチドを用いて、本発明に用いる初期ＨＰＶ‐１８ポリペプチドへ分泌配列を結合することができ、又は、初期ＨＰＶ‐１８ポリペプチドを膜アンカー配列へ結合することもできる。リンカーペプチドは本技術分野で公知である。通常、リンカーペプチドは２乃至２０個のアミノ酸を含み、アラニン、グリシン、プロリン、及び／又はセリンを含む。
【００３５】
本発明で用いるＨＰＶ‐１８ Ｅ６ポリペプチドは、麻疹ウイルスのＦタンパク質の分泌シグナル及び膜アンカーシグナルを挿入することによって修飾されることが好ましく、特に、配列番号３に示すアミノ酸配列と相同的若しくは同一であるアミノ酸配列を含んでなるか、又は別の選択肢として本質的にそれからなるか、又は別の選択肢としてそれからなるポリペプチドが好ましい。任意に、若しくは組み合わせて、本発明で用いるＨＰＶ‐１８ Ｅ７ポリペプチドは、狂犬病ウイルスの糖タンパク質の分泌シグナル及び膜アンカーシグナルを挿入することによって修飾されることが好ましく、特に、配列番号４に示すアミノ酸配列と相同的若しくは同一であるアミノ酸配列を含んでなるか、又は別の選択肢として本質的にそれからなるか、又は別の選択肢としてそれからなるポリペプチドが好ましい。
【００３６】
別の、そしてより好ましい局面では、１若しくは２種類以上の免疫賦活薬であるポリペプチド、又はそのような免疫賦活薬であるポリペプチドをコードする１若しくは２種類以上の核酸を用いることによって、本発明で用いる組成物の治療効果を向上させることもできる。例えば、ＨＰＶ‐１８初期ポリペプチドを、カルレティキュリン（Ｃｈｅｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００１，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０８，６６９‐６７８）、マイコバクテリウム  ツベルクローシス（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）熱ショックタンパク質７０（ＨＳＰ７０）（Ｃｈｅｎ ｅｔ ａｌ．，２０００，Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６０，１０３５‐１０４２）、ユビキチン（Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ ｅｔ ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１，８４９７‐８５０３）、又はシュードモナス  エルジノーサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）外毒素Ａの転座領域（ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ ｄｏｍａｉｎ）（ＥＴＡ（ｄＩＩＩ））（Ｈｕｎｇ ｅｔ ａｌ．，２００１ Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．６１，３６９８‐３７０３）などの細菌性毒素、などといったポリペプチドと結合させることが有利である場合もある。別の選択肢として、本発明で用いる組成物は、サイトカイン、又はサイトカインをコードする核酸をさらに含んでなることができる。適切なサイトカインとしては、これらに限定されないが、（ＩＬ）‐２、ＩＬ‐７、ＩＬ‐１５、ＩＬ‐１８、ＩＬ‐２１、及びＩＦＮｇが挙げられ、特にＩＬ‐２が好ましい。
【００３７】
別の、そして好ましい態様によると、本発明に従って用いる組成物は、上記で示すように、１又は２種類以上のＨＰＶ‐１８初期ポリペプチドをコードする核酸を含んでなる。好ましくは：
配列番号１若しくは配列番号３に示すアミノ酸配列と相同的若しくは同一であるアミノ酸配列を含んでなるか、又は別の選択肢として本質的にそれからなるか、又は別の選択肢としてそれからなるＨＰＶ‐１８ Ｅ６ポリペプチド；及び、
配列番号２若しくは配列番号４に示すアミノ酸配列と相同的若しくは同一であるアミノ酸配列を含んでなるか、又は別の選択肢として本質的にそれからなるか、又は別の選択肢としてそれからなるＨＰＶ‐１８ Ｅ７ポリペプチド、
を少なくともコードする核酸である。
【００３８】
必要に応じて、本発明に用いる核酸分子は、例えばヒト宿主細胞若しくは人体など、特定の宿主細胞若しくは生物中でのＨＰＶ‐１８初期ポリペプチドの発現が高レベルとなるように最適化することができる。通常、哺乳類宿主細胞中であまり使われないコドンに対応する１若しくは２個の「天然の」（例：ＨＰＶ）コドンを、同じアミノ酸をコードするより頻繁に使用される１若しくは２個のコドンで置換することによってコドン最適化を行う。これは、従来の変異誘発又は化学合成技術（例：合成核酸を得る結果となる）によって達成することができる。一部分の置換でも発現の増加を達成することができるため、あまり使われないコドンに対応する天然コドンすべてを置換する必要はない。さらに、制限部位の導入に適応するために、最適化コドンの使用に厳密に沿った方法からの若干の変形も可能である。
【００３９】
本発明で用いるＨＰＶ‐１８初期ポリペプチドをコードする核酸は、宿主細胞又は生物中での発現に適した形態であることが好ましく、このことは、Ｅ６ポリペプチドをコードする核酸配列及び／又はＥ７ポリペプチドをコードする核酸配列が、宿主細胞又は生物中での発現に必要な１若しくは２種類以上の調節エレメントの支配下に置かれることを意味している。本明細書で用いる「調節エレメント」という用語は、複製、重複化、転写、スプライシング、翻訳、安定化、及び／又は核酸若しくはその誘導体の一つの（すなわち、ｍＲＮＡ）の宿主細胞への輸送を含む、任意の宿主細胞中での核酸の発現を可能にしたり、又はこれに寄与したり、又はこれを調節したりするいかなる配列をも意味する。調節エレメントの選択が、宿主細胞、ベクター、及び所望の発現レベルなどの要因に依存し得ることは、当業者には理解されるであろう。
【００４０】
プロモーターは特に重要であり、本発明は、多くの種類の宿主細胞中で核酸の発現を指令する構成的プロモーター、及び特定の宿主細胞中のみでの発現、又は特定の現象若しくは外的要因（例：温度、栄養添加剤、ホルモン、又はその他のリガンド）に反応しての発現だけを指令する構成的プロモーターの使用を包含する。適切なプロモーターは文献に広く記載されており、より詳細には、ＲＳＶ（ラウス肉腫ウイルス）、ＳＶ４０（サルウイルス４０）、ＣＭＶ（サイトメガロウイルス）、及びＭＬＰ（主要後期プロモーター）プロモーターなどのウイルスプロモーターを挙げることができる。ポックスベクターに用いられる好ましいプロモーターとしては、これらに限定されないが、ワクシニアプロモーターである７．５Ｋ、Ｈ５Ｒ、ＴＫ、ｐ２８、ｐ１１、及びＫ１Ｌ、初期及び後期ポックスウイルスプロモーターの間であるキメラプロモーター、並びに、Ｃｈａｋｒａｂａｒｔｉ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７，  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ２３，  １０９４‐１０９７）、Ｈａｍｍｏｎｄ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７，Ｊ．Ｖｉｒｏｌｏｇｉｃａｌ Ｍｅｔｈｏｄｓ  ６６，１３５‐１３８）、及び、Ｋｕｍａｒ ａｎｄ Ｂｏｙｌｅ（１９９０，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ １７９，１５１‐１５８）、に記載のものなどの合成プロモーターが挙げられる。
【００４１】
当業者であれば、核酸の発現を制御する調節エレメントが、宿主細胞又は生物中の、転写（例：ポリＡ転写終結配列）、ｍＲＮＡ輸送（例：核移行シグナル配列）、プロセッシング（例：スプライシングシグナル）、安定化（例：イントロン、並びに非コード５’及び３’配列）、及び翻訳（例：三連リーダー配列（ｔｒｉｐａｒｔｉｔｅ  ｌｅａｄｅｒ  ｓｅｑｕｅｎｃｅ）、リボソーム結合部位、シャイン‐ダルガノ配列、など）の適切な開始、調節、及び／又は終結のための追加的なエレメントをさらに含んでなることができることは理解されるであろう。
【００４２】
別の好ましい態様によると、本発明に従って用いられる核酸は、ベクター中に含まれる。本明細書で用いる「ベクター」という用語は、ウイルスベクター並びに非ウイルスベクター（例：プラスミドＤＮＡ）を意味し、染色体外ベクター（例：エピソーム）、多コピーベクター、及び組み込みベクター（すなわち、宿主染色体に組み込まれるベクター）を含む。本発明に関連して特に重要であるのは、遺伝子治療ベクター（すなわち、核酸を宿主生物へ送達することができるベクター）、並びに種々の発現系に用いられる発現ベクターである。適切な非ウイルスベクターとしては、ｐＲＥＰ４、ｐＣＥＰ４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎｅ）、ｐＣＩ（Ｐｒｏｍｅｇａ）。ｐＣＤＭ８（Ｓｅｅｄ，１９８７，Ｎａｔｕｒｅ  ３２９，８４０）、ｐＶＡＸ、及びｐｇＷｉｚ（Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｉｎｃ．；Ｈｉｍｏｕｄｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７６，１２７３５‐１２７４６）などのプラスミドが挙げられる。適切なウイルスベクターは、種々の異なるウイルス（例：レトロウイルス、アデノウイルス、ＡＡＶ、ポックスウイルス、ヘルペスウイルス、麻疹ウイルス、泡沫状ウイルス、など）から誘導することができる。本明細書で用いる「ウイルスベクター」という用語は、ベクターＤＮＡ並びにそれから産生されたウイルス粒子を包含する。ウイルスベクターは自己複製型であっても、又は遺伝子的な無能化による複製欠損型若しくは複製障害型であってもよい。本発明で用いる「自己複製型」という用語は、複製性の向上又は特定の宿主細胞中（例：腫瘍細胞）での選択的な複製のために遺伝子操作された選択的複製型、及び条件複製型のウイルスベクターを包含する。
【００４３】
一つの局面では、本発明で用いるベクターは、アデノウイルスベクターである（概説として、”Ａｄｅｎｏｖｉｒａｌ  ｖｅｃｔｏｒｓ  ｆｏｒ  ｇｅｎｅ ｔｈｅｒａｐｙ”，２００２，Ｅｄ  Ｄ．Ｃｕｒｉｅｌ  ａｎｄ  Ｊ．Ｄｏｕｇｌａｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓを参照）。このベクターは、種々のヒト又は動物源から誘導することができ、アデノウイルス血清型１乃至５１のいずれの血清型も用いることができる。特に好ましいのは、ヒトアデノウイルス２型（Ａｄ２）、５型（Ａｄ５）、６型（Ａｄ６）、１１型（Ａｄ１１）、２４型（Ａｄ２４）、及び３５型（Ａｄ３５）である。このようなアデノウイルスは、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ、メリーランド州、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ）から入手可能であり、数多くの刊行物の主題としてその配列、構成、及び作製方法が述べられており、当業者はこれらを利用することができる（例えば、ＵＳ６，１３３，０２８；ＵＳ６，１１０，７３５；ＷＯ０２／４０６６５；ＷＯ００／５０５７３；ＥＰ１０１６７１１；Ｖｏｇｅｌｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００３，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７７，８２６３‐８２７１、を参照）。
【００４４】
本発明で用いるアデノウイルスベクターは、自己複製型であってよい。自己複製型アデノウイルスの数多くの例が、当業者には容易に入手可能である（Ｈｅｒｎａｎｄｅｚ‐Ａｌｃｏｃｅｂａ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．１１，２００９‐２０２４；Ｎｅｍｕｎａｉｔｉｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．８，７４６‐７５９；Ａｌｅｍａｎｙ  ｅｔ  ａｌ．，２０００，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ １８，７２３‐７２７）。例えば、Ｅ１Ａ ＣＲ２領域中の欠失（例：ＷＯ００／２４４０８）、並びに／又は、天然Ｅ１及び／若しくはＥ４プロモーターの組織特異的、腫瘍特異的、若しくは細胞状態に特異的なプロモーターによる置換により、野生型アデノウイルスゲノムから遺伝子操作することができる（例：ＵＳ５，９９８，２０５、ＷＯ９９／２５８６０、ＵＳ５，６９８，４４３、ＷＯ００／４６３５５、ＷＯ００／１５８２０、及びＷＯ０１／３６６５０）。
【００４５】
別の選択肢として、本発明で用いるアデノウイルスベクターは、複製欠損型である（例えば、ＷＯ９４／２８１５２；Ｌｕｓｋｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７２，２０２２‐２０３２参照）。好ましい複製欠損型のアデノウイルスベクターは、Ｅ１欠失がおおよそ４５９位乃至３３２８位、又はおおよそ４５９位乃至３５１０位にわたる（受託番号Ｍ７３２６０でＧｅｎｅＢａｎｋに、及びＣｈｒｏｂｏｃｚｅｋ  ｅｔ  ａｌ．，１９９２，Ｖｉｒｏｌ．１８６，２８０‐２８５に開示されるヒトアデノウイルス５型の配列を基準にして）Ｅ１欠損型である（例：ＵＳ６，１３６，５９４、及びＵＳ６，０１３，６３８）。アデノウイルスゲノムの一部（非必須のＥ３領域、又は他の必須であるＥ２、Ｅ４領域の全部若しくは一部）をさらに欠失させることによって、クローニング能力をさらに向上させることができる。核酸の挿入は、Ｃｈａｒｔｉｅｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７０，４８０５‐４８１０）に記載のように、アデノウイルスゲノムのいずれかの部位における相同組換えによって行うことができる。例えば、ＨＰＶ‐１８ Ｅ６ポリペプチドをコードする核酸をＥ１領域に置き換えて、及びＨＰＶ‐１８ Ｅ７ポリペプチドをコードする核酸をＥ３領域に置き換えて挿入することができ、又はその逆も可能である。
【００４６】
別の、そして好ましい局面では、本発明で用いるベクターは、ポックスウイルスベクターである（例えば、Ｃｏｘ  ｅｔ  ａｌ．ｉｎ ”Ｖｉｒｕｓｅｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ”Ｅｄ．Ｊ．Ｍ．Ｈｏｓ，Ｃａｒｏｌｉｎａ  Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓを参照）。ポックスウイルス科に属するいかなる種類からも得ることができるが、特に、カナリアポックス、鶏痘、及びワクシニアウイルスであり、後者が好ましい。適切なワクシニアウイルスとしては、これらに限定されないが、コペンハーゲン株（Ｇｏｅｂｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｖｉｒｏｌ．１７９，２４７‐２６６  ａｎｄ  ５１７‐５６３；Ｊｏｈｎｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９９３，Ｖｉｒｏｌ．１９６，３８１‐４０１）、ワイス株（Ｗｙｅｔｈ  ｓｔｒａｉｎ）、及び非常に弱毒化された修飾アンカラ（Ａｎｋａｒａ）（ＭＶＡ）株（Ｍａｙｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９７５，Ｉｎｆｅｃｔｉｏｎ  ３，６‐１６）である。ＭＶＡゲノムの完全な配列の同定及びコペンハーゲンゲノムとの比較により、ＭＶＡゲノム中で７箇所の欠失（ＩからＶＩＩ）が発生していることが正確に識別されており（Ａｎｔｏｉｎｅ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｖｉｒｏｌｏｇｙ  ２４４，３６５‐３９６）、そのいずれをも用いて、ＨＰＶ‐１８初期ポリペプチドをコードする核酸を挿入することができる。
【００４７】
発現に必要な核酸及び関連する調節エレメントをポックスウイルスゲノムへ挿入する基本技術は、数多くの文献に記載されており、当業者が入手可能である（Ｐａｕｌ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｃａｎｃｅｒ  ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．９，４７０‐４７７；Ｐｉｃｃｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８７，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ  １５３，５４５‐５６３；ＵＳ４，７６９，３３０；ＵＳ４，７７２，８４８；ＵＳ４，６０３，１１２；ＵＳ５，１００，５８７、及びＵＳ５，１７９，９９３）。通常は、ウイルスゲノムと挿入核酸を有するプラスミドとの両方に存在するオーバーラップ配列間の相同組換え（すなわち、所望の挿入部位を隣接させる）によって行われる。
【００４８】
核酸は、組換えポックスウイルスが生存し、感染性を保持するように、ポックスウイルスゲノムの非必須遺伝子座位に挿入することが好ましい。非必須領域は、非コード遺伝子間領域か、又は、不活性化若しくは欠失がウイルスの増殖、複製、若しくは感染性を著しく悪化させることのない遺伝子である。例えば、ポックスウイルスゲノムの欠失された配列に対応する相補配列を有するヘルパー細胞系を用いることなどによって、欠損した機能がウイルス粒子産生の途中で提供されるのであれば、必須ウイルス遺伝子座位への挿入も考慮してよい。
【００４９】
コペンハーゲンワクシニアウイルスを用いる場合、ＨＰＶ‐１８初期ポリペプチドをコードする核酸をチミジンキナーゼ遺伝子（ｔｋ）中へ挿入することが好ましい（Ｈｒｕｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８０，３４１１‐３４１５；Ｗｅｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８３，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４６，５３０‐５３７）。しかし、適切な挿入部位は他にもあり、例えば、赤血球凝集素遺伝子（Ｇｕｏ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３，４１８９‐４１９８）、Ｋ１Ｌ遺伝子座位、ｕ遺伝子（Ｚｈｏｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．７１，２１８５‐２１９０）、又は種々の自然欠失若しくは人工欠失が文献で報告されているワクシニアウイルスゲノムの左末端（Ａｌｔｅｎｂｕｒｇｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ａｒｃｈｉｖｅｓ  Ｖｉｒｏｌ．１０５，１５‐２７；Ｍｏｓｓ  ｅｔ  ａｌ．１９８１，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４０，３８７‐３９５；Ｐａｎｉｃａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．３７，１０００‐１０１０；Ｐｅｒｋｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９８９，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３，３８２９‐３８３６；Ｐｅｒｋｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９０，Ｖｉｒｏｌ．１７９，２７６‐２８６；Ｐｅｒｋｕｓ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｖｉｒｏｌ．１８０，４０６‐４１０）などである。
【００５０】
ＭＶＡを用いる場合、ＨＰＶ‐１８初期ポリペプチドをコードする核酸は、識別されている欠失部位Ｉ乃至ＶＩＩのいずれか、並びにＤ４Ｒ遺伝子座位に挿入することができるが、欠失部位ＩＩ又はＩＩＩへの挿入が好ましい（Ｍｅｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．７２，１０３１‐１０３８；Ｓｕｔｔｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９９４，Ｖａｃｃｉｎｅ  １２，１０３２‐１０４０）。
【００５１】
鶏痘ウイルスを用いる場合、ＨＰＶ‐１８初期ポリペプチドをコードする核酸は、チミジンキナーゼ遺伝子内への挿入も考えられるが、ＯＲＦ７及び９の間に位置する遺伝子間領域へ導入することが好ましい（例えば、ＥＰ３１４５６９、及びＵＳ５，１８０，６７５を参照）。
【００５２】
上述のように、本発明で用いる組成物は、サイトカイン発現核酸をさらに含んでなることができる。その運搬体としては、１若しくは２種類以上のＨＰＶ‐１８初期ポリペプチドをコードするベクター、又は由来が同一であっても異なっていてもよい独立したベクターを用いることができる。
【００５３】
本発明の好ましい態様は、７．５Ｋプロモーターの支配下に置かれたＨＰＶ‐１８ Ｅ６ポリペプチド、７．５Ｋプロモーターの支配下に置かれたＨＰＶ‐１８ Ｅ７ポリペプチド、及びＨ５Ｒプロモーターの支配下に置かれたヒトＩＬ‐２遺伝子をコードするＭＶＡベクターを含んでなる組成物の使用に関する。好ましくは、ＨＰＶ‐１８ Ｅ６ポリペプチド、ＨＰＶ‐１８ Ｅ７ポリペプチド、及びヒトＩＬ‐２をコードする核酸は、ＭＶＡゲノムの欠失部位ＩＩＩに挿入される。
【００５４】
さらに、本発明で用いる組成物は、動物／ヒトの体内での分解を防ぐため、及び／又は、宿主細胞若しくは生物へのベクターのトランスフェクション／感染を促進するために、脂質（例：カチオン性脂質、リポソーム、ＷＯ９８／４４１４３に記載の脂質）、ヌクレアーゼ阻害剤、ハイドロゲル、ヒアルロニダーゼ（ＷＯ９８/５３８５３）、コラゲナーゼ、カチオン性ポリマー、多糖類、キレート化剤（ＥＰ８９０３６２）などの１若しくは２種類以上の安定化剤を含むことができる。このような安定化剤は、単独で用いても組み合わせて用いてもよい（例：カチオン性脂質と中性脂質）。
【００５５】
上述の核酸又はベクターを含んでなる感染性ウイルス粒子は、所定のプロセスで作製することができる。典型的なプロセスは：
（ａ）ウイルスベクターを適切な細胞系へ導入する工程と、
（ｂ）前記細胞系を適切な条件下で培養し、前記感染性ウイルス粒子を産生させる工程と、
（ｃ）産生されたウイルス粒子を前記細胞系の培養物から回収する工程と、
（ｄ）場合によっては、前記の回収された感染性ウイルス粒子を精製する工程と、
を含んでなる。
【００５６】
ウイルスベクターが複製欠損型である場合、感染性粒子は通常、トランス（ｉｎ  ｔｒａｎｓ）で非機能性ウイルス遺伝子を提供する補完細胞系（ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ）内で、又はヘルパーウイルスを用いることによって作製される。例えば、Ｅ１欠失アデノウイルスベクターを補完する適切な細胞系としては、２９３細胞（Ｇｒａｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｇｅｎ．Ｖｉｒｏｌ．３６，５９‐７２）、並びにＰＥＲ‐Ｃ６細胞（Ｆａｌｌａｕｘ  ｅｔ  ａｌ．，１９９８，Ｈｕｍａｎ  Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．９，１９０９‐１９１７）が挙げられる。ポックスウイルスベクターの増殖に適した細胞はトリの細胞であり、最も好ましいのは、受精卵から得られたニワトリ胚から調製された初代ニワトリ線維芽細胞（ＣＥＦ）である。
【００５７】
感染性ウイルス粒子は、培養上清から、又は溶解後の細胞から（例：化学的手法、凍結／解凍、浸透圧ショック、機械的ショック、超音波処理、などによる）回収することができる。ウイルス粒子は、プラーク精製を連続して行うことで単離し、その後、本技術分野の技術（クロマトグラフィー法、塩化セシウム若しくはショ糖勾配上での超遠心）を用いて精製することができる。
【００５８】
本発明は、特定の標的宿主細胞が優先的に標的とされるように修飾されたベクター又はウイルス粒子の使用も包含する（例えば、Ｗｉｃｋａｍ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．７１，８２２１‐８２２９；Ａｒｎｂｅｒｇ  ｅｔ  ａｌ．，１９９７，Ｖｉｒｏｌ．２２７，２３９‐２４４；Ｍｉｃｈａｅｌ  ｅｔ  ａｌ．，１９９５，Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐｙ  ２，６６０‐６６８；ＷＯ９４／１０３２３；ＷＯ０２／９６９３９、及びＥＰ１１４６１２５、参照）。標的化されたベクター及びウイルス粒子に特有の特徴は、その表面に、細胞特異的マーカー（例：ＨＰＶ感染細胞）、組織特異的マーカー（例：子宮頚部に特異的なマーカー）、並びにウイルス（例：ＨＰＶ）抗原などの表面に露出した細胞性成分を認識してこれに結合する能力を有するリガンドが存在することである。適切なリガンドの例としては、ＨＰＶの抗原性ドメインに対する抗体又はその断片が挙げられる。リガンドは、通常、ウイルス表面に存在するポリペプチド中（例：アデノウイルス線維、ペントン、ｐＩＸ、又はワクシニアｐ１４遺伝子産物）へ遺伝子的に挿入される。
【００５９】
本発明で用いる組成物は、適切ないかなる方法でも作製することができ、例えば、標準的な直接ペプチド合成技術（例：Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ，１９８４  ｉｎ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  ｐｅｐｔｉｄｅ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ‐Ｖｅｒｌａｇ）、及び適切な宿主細胞中での組換えＤＮＡ技術が挙げられる。例えば、ＨＰＶ‐１８ Ｅ６及びＥ７初期ポリペプチドをコードする核酸は、ＨＰＶ含有細胞、ｃＤＮＡ及びゲノムライブラリー、ウイルスゲノム、又はその核酸を含有することが公知の先行技術のいかなるベクターからも、従来の分子生物学又はＰＣＲ技術によって直接単離することができる。必要であれば、核酸はさらに、所定の変異誘発技術によって修飾することもできる。別の選択肢として、本発明で用いる核酸は、自動化プロセスによる化学合成によって作製することもできる（例：例えば、Ｅｄｇｅ，１９８１，Ｎａｔｕｒｅ  ２９２，７５６；Ｎａｍｂａｉｒ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２３，１２９９；Ｊａｙ  ｅｔ  ａｌ．，１９８４，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２５９，６３１１、に記載のように、重複合成オリゴヌクレオチド（ｏｖｅｒｌａｐｐｉｎｇ  ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ  ｏｌｉｇｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ）からの構築）。当業者であれば、ＨＰＶ‐１８初期ポリペプチドを適切な宿主細胞中で作製するのに使用可能な数多くの発現システム、及び宿主細胞へベクター又は感染性ウイルス粒子を導入する方法に精通している。
【００６０】
本発明に従う組成物の好ましい使用は、種々の疾患及び病理状態、特にその中でも、上記で挙げたＨＰＶ遺伝子型の少なくとも１種類に起因するＨＰＶ感染と関連するものを治療するための使用である。本発明は予防についても包含するが、特に治療に有用であり、例えば、ＨＰＶ持続感染の治療、ＨＰＶ感染患者に発症することのある前癌状態並びに癌状態の治療などである。ＨＰＶに関連する癌状態の例としては、子宮頚癌、肛門癌、及び口腔癌が挙げられる。ＨＰＶに関連する前癌状態は、子宮頚部上皮内腫瘍（ＣＩＮ）のグレード１、２、又は３を含む、軽度病変から重度病変に及ぶ。
【００６１】
本明細書で述べるモダリティに従った宿主生物への投与により、本発明の組成物は治療を受けた宿主生物へ治療上の利点をもたらす。治療上の利点は、治療前と比較することにより数多くの方法で立証することができ、例えば、集団レベルでは、ＨＰＶ感染の頻度の減少やＨＰＶ感染と通常関連する病理状態の進行の遅延（例：ＣＩＮ病変若しくは子宮頚癌の進行の遅延）によって、又は、個人レベルでは、ＨＰＶウイルス血症の減少、及び／若しくはウイルス遺伝子発現の阻害（例：ＨＰＶ Ｅ６若しくはＥ７を発現するＲＮＡの減少）、及び／若しくは臨床成績の改善（例：ＨＰＶに関連する病変の安定化、部分的若しくは完全な回復）、及び／若しくは液性であれ、細胞性であれ、若しくはその両方であれ、抗ＨＰＶ反応を高める結果となる免疫システムの刺激（例：抗ＨＰＶ抗体及び／若しくはＴ細胞性免疫の産生）、及び／若しくは、従来の治療に対するその宿主生物の反応の改善によって立証することができる。例えば、本発明に従って用いられる組成物は、ＨＰＶ陽性の女性への投与に続いて、（ｉ）１若しくは２回以上の陽性の検出に続いてＨＰＶ陰性が検出された場合、（ｉｉ）重度であるＣＩＮ２／３グレードの病変が軽度であるＣＩＮ１グレードへ軽減された場合、又は（ｉｉｉ）浸潤性子宮頚癌の安定化若しくは軽減が見られた場合に、利点をもたらすことになる。治療後は、少なくとも６ヶ月間にわたる患者の定期的な経過観察を行うことが望ましい。
【００６２】
ＨＰＶの存在は、生物学的液体中（例：膣内液又は子宮頚管液、血液、血清、血漿）、従来の子宮頚部サンプリングデバイスで採取した婦人科サンプル中、組織切片中において、及び生体組織中において確認することができる。サンプル中にあるＨＰＶのＤＮＡ及びＲＮＡの存在を評価する様々な方法が当業者にとって使用可能であり、例えば、ＬｉＰＡシステム（ＷＯ９９／１４３７７；  Ｌａｂｏ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  ｐｒｏｄｕｃｔｓ、オランダ）、Ｐｒｅ  Ｔｅｃｔ  ＨＰＶ  Ｐｒｏｏｆｅｒ（ＮｏｒＣｈｉｐ  ＡＳ、ノルウェイ）、Ｈｙｂｒｉｄ  Ｃａｐｔｕｒｅ  ＩＩシステム（Ｄｉｇｅｎｅ  Ｃｏｒｐ．、ＵＳＡ）、Ｔｈｉｎ  Ｐｒｅｐシステム（Ｃｙｔｙｃ  Ｃｏｒｐｏｒａｔｅ、マサチューセッツ州、Ｍａｒｌｂｏｒｏｕｇｈ）、及びＰＣＲ／ＲＴ‐ＰＣＲシステムなどである。適切なプライマーは、当業者に公知であり、又は対象であるＨＰＶ遺伝子型のヌクレオチド配列に基づいて容易に合成することができる。適切な抗体を用いた免疫原生アッセイ（例：ＥＬＩＳＡ）によって行ってもよい。ＨＰＶに起因する病変の軽減又は安定化は、一定の期間にわたって病変部の実際の大きさを測定することによって確認することができる。一定期間にわたる病変部の大きさは、直接観察（例：コルポスコピー）、放射線画像法、免疫画像法、又は超音波法を用いて評価することができる。さらに、種々のインビトロの方法を用いて宿主生物中のＨＰＶに関連する病変の安定化又は軽減を予測することができ、例えば、異型細胞の存在を推定する細胞学的解析、及び組織学的解析などである。抗ＨＰＶ免疫反応の刺激の推定は、免疫反応を誘発又は刺激するための組成物の使用に関連して下記で述べるような多くの通常の技術によって行うことができる。
【００６３】
適切に、本発明の組成物は薬理学的に許容される媒体（ｖｅｈｉｃｌｅ）をさらに含み、医薬組成物を提供する。本明細書で用いる「薬理学的に許容される媒体」とは、医薬投与に適合するあらゆる担体、溶媒、希釈剤、賦形剤、アジュバント、分散媒、被覆剤、抗菌剤及び抗真菌剤、並びに吸収遅延剤などを含むことを意図したものである。組成物に含まれる薬理学的に許容される媒体は、さらに、製造、及び凍結温度（例：−７０℃、−２０℃）、冷蔵温度（例：４℃）、若しくは室温（例：２０℃）における、又は凍結乾燥状態での長期保存（すなわち、少なくとも１ヶ月）の条件下でその安定性を保持させるものでなければならない。
【００６４】
本発明で用いる組成物は、ヒトへの使用に適するように生理的ｐＨ又はわずかに塩基性のｐＨ（例：約ｐＨ７乃至約ｐＨ９の間）に適切に緩衝される。適切なバッファーとしては、リン酸バッファー（例；ＰＢＳ）、重炭酸バッファー、及び／又はトリスバッファーが挙げられるが、これらに限定されない。
【００６５】
さらに、組成物は、ヒト又は動物への使用に適した希釈剤を含んでもよい。そのような希釈剤は、等張性、低張性、又は弱い高張性であることが好ましく、イオン強度は比較的低いことが好ましい。代表例としては、滅菌水、生理食塩水（例：塩化ナトリウム）、リンゲル液、グルコース、トレハロース、若しくはショ糖の溶液、ハンクス液、及びその他の生理的平衡塩類水溶液（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，Ａ．Ｇｅｎｎａｒｏ，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ＆Ｗｉｌｋｉｎｓ、の最新版を参照）が挙げられる。
【００６６】
組成物は、例えば、浸透圧モル濃度、粘度、透明性、色、無菌性、安定性、製剤溶解速度の改変又は維持、ヒト若しくは動物の生物内への放出若しくは吸収の改変又は維持、血液関門を通っての輸送若しくは特定の器官（例：肝臓）への透過の促進などを含む、所望の医薬的若しくは薬力学的特性を与えるために、その他の薬理学的に許容される賦形剤を含有してもよい。適切な賦形剤にはアミノ酸が含まれる。
【００６７】
さらに、組成物は、ヒトの全身若しくは粘膜投与に適した従来のアジュバントと組み合わせて使用してもよい。
【００６８】
組成物は、全身、局所、及び局部投与を含む種々の投与方法によって宿主生物へ投与することができる。適切な投与経路としては、これらに限定されないが、皮下、皮内、筋肉内、静脈内、腹腔内、腫瘍内、血管内、及び動脈内注射が挙げられる。注射による投与は、従来のシリンジと針により、又は本技術分野で使用可能なその他の適切ないかなるデバイスによっても行うことができる。別の選択肢として、経口／経消化管、経鼻、気管内、肺内、膣内、又は直腸内経路など、粘膜経路によって投与することもできる。局所投与は、経皮的手法で行うこともできる（例：パッチなど）。本発明に関連しては、筋肉内及び皮下投与が好ましい経路である。投与は、１回の用量で行ってもよく、又は１日乃至１年といった範囲の所定の間隔を置いて１回若しくは数回投与を繰り返す用量で行ってもよい。投与間隔は、１週間乃至１ヶ月程度が望ましい。
【００６９】
適切な投与量は、種々のパラメータ、特に、投与方法、使用する組成物、宿主生物の年齢、健康状態、及び体重、症状の性質及び程度、併用中の治療法の種類、治療の頻度、並びに／又は予防若しくは治療の必要性に応じて適応させることができる。適切な用量を決定するのに必要なさらに精密な計算は、関連する状況を考慮して、医師が日常的に行う。一般的な指針としては、ワクシニア含有組成物の適切な用量は、約１０４乃至１０９ｐｆｕ（プラーク形成単位）の範囲であり、約１０５乃至１０８ｐｆｕが望ましく、一方、アデノウイルス含有組成物の場合は、約１０５乃至１０１３ｉｕ（感染単位）の範囲であり、約１０７乃至１０１１ｉｕが望ましい。ベクタープラスミド主体の組成物は、１０μｇ及び２０ｍｇの間の用量で投与することができ、有利には、１００μｇ及び２ｍｇの間である。タンパク質組成物は、１０ｎｇ及び２０ｍｇの間の用量で投与することができ、特に好ましいのは、体重１ｋｇあたり約０．１μｇ乃至２ｍｇの用量である。
【００７０】
好ましい態様では、本発明で用いる組成物は、上述のＭＶＡベクターを含んでなり、５×１０５ｐｆｕ乃至５×１０７ｐｆｕの用量で、１週間の間隔で３回、皮下経路で投与される。
【００７１】
所望する場合、本発明は、１又は２種類以上の治療モダリティ（例：放射線、化学療法、及び／又は外科手術）と組み合わせて使用することができる。複合的な治療手法によって、より幅広い治療介入が患者に対して施される。一つの態様では、本発明の方法に先立って、又は好ましくはそれに続いて、ＨＰＶと関連する病変部位の外科切除を行うことができる（例：円錐切除）。別の態様では、本発明の方法に先立って、又はそれに続いて、放射線治療（例：ガンマ線）を行うことができる。当業者であれば、使用することができる適切な放射線治療のプロトコル及びパラメータを容易に構築することができる（例えば、Ｐｅｒｅｚ ａｎｄ Ｂｒａｄｙ，１９９２，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ ａｎｄ Ｐｒａｃｔｉｃｅ ｏｆ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，２ｎｄ Ｅｄ．ＪＢ Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ Ｃｏ．参照；当業者であれば容易に明らかであろう適切な適応及び変更を行う）。さらに別の態様では、本発明の方法又は使用は、ＨＰＶ感染やＨＰＶに関連する病理状態の治療又は予防に従来から用いられている１若しくは２種類以上の薬物を用いた化学療法と組み合わされる。
【００７２】
組成物は、１若しくは２種類以上の初期ＨＰＶ‐１６ポリペプチド、望ましくは、本技術分野で報告されているように、非発癌性に及び膜提示されるように修飾されることが好ましいＥ６及び／又はＥ７ ＨＰＶ‐１６ポリペプチド（ＷＯ９９／０３８８５参照）などの、その他のＨＰＶポリペプチドと組み合わせて使用することもできる。ＨＰＶ‐１６及びＨＰＶ‐１８のＥ６並びに／若しくはＥ７ポリペプチド、又はＨＰＶ‐１６及びＨＰＶ‐１８のＥ６並びに／若しくはＥ７ポリペプチドをコードする核酸を含んでなるこのような組成物は、ＨＰＶ‐３９、ＨＰＶ‐４５、ＨＰＶ‐５１、ＨＰＶ‐５６、ＨＰＶ‐５９、ＨＰＶ‐６８、ＨＰＶ‐７０、及びＨＰＶ‐８５のいずれかに加えて、ＨＰＶ‐３１、ＨＰＶ‐３３、ＨＰＶ‐３５、ＨＰＶ‐５２、及びＨＰＶ‐５８のいずれか、又はこれらの組み合わせ（例：ＨＰＶ‐３１とＨＰＶ‐４５）などの、ＨＰＶ‐１６及びＨＰＶ‐１８以外の少なくとも１種類のパピローマウイルスに起因する感染又は病理状態を治療するのに特に有用であり得る。
【００７３】
別の態様では、１若しくは２種類以上のプライミング組成物（初回組成物）（ｐｒｉｍｉｎｇ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）、及び１若しくは２種類以上のブースティング組成物（追加組成物）（ｂｏｏｓｔｉｎｇ ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ）の逐次投与を含んでなるプライム・ブースト治療モダリティ（ｐｒｉｍｅ  ｂｏｏｓｔ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｍｏｄａｌｉｔｙ）に従って、本発明が用いられる。通常、プライミング組成物及びブースティング組成物は、少なくとも一つの共通する免疫原性ドメインを含んでなるかコードする異なる媒体を使用する。プライミング組成物をまず宿主生物へ投与し、続いて、１日乃至１２ヶ月の範囲のある期間の後に、ブースティング組成物を投与する。さらに、プライミング組成物及びブースティング組成物は、同一の部位に投与してもよく、又は、同じ投与経路若しくは異なる投与経路により、別々の部位に投与してもよい。例えば、ＨＰＶ‐１８初期ポリペプチドを主体とするプライミング組成物を粘膜経路で投与することができ、一方、核酸ベクターを主体とするブースティング組成物を、好ましくは、例えばＭＶＡベクターの皮下注射、ＤＮＡプラスミド及びアデノウイルスベクターの筋肉内注射などの注射によって投与する。
【００７４】
本発明はさらに、ＨＰＶ‐１８以外の少なくとも１種類のヒトパピローマウイルスに対する免疫反応を誘発又は刺激するための、１若しくは２種類以上のＨＰＶ‐１８初期ポリペプチド又はＨＰＶ‐１８初期ポリペプチドをコードする核酸を含んでなる組成物の使用に関する。本発明はさらに、ＨＰＶ‐１８以外の少なくとも１種類のヒトパピローマウイルスに対する免疫反応を哺乳類中で誘発又は刺激するための方法に関し、その方法は、１若しくは２種類以上のＨＰＶ‐１８初期ポリペプチド又はＨＰＶ‐１８初期ポリペプチドをコードする核酸を含んでなる組成物を哺乳類に投与することを含んでなる。免疫反応は、ＨＰＶ初期ポリペプチドに対する細胞免疫反応であることが好ましく、ＣＤ４＋、ＣＤ８＋、又はＣＤ４＋とＣＤ８＋の両方が媒介する免疫反応が好ましい。
【００７５】
動物若しくはヒトである生物への投与によって抗ＨＰＶ免疫反応を誘発又は刺激する能力は、本技術分野において標準的な種々のアッセイを用いて、インビトロ若しくはインビボで評価することができる。免疫反応の発生及び刺激を評価するのに使用可能な技術に関する一般的な説明に関しては、例えば、Ｃｏｌｉｇａｎ ｅｔ ａｌ．（１９９２ ａｎｄ １９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ；ｅｄ．Ｊ．Ｗｉｌｅｙ ＆ Ｓｏｎｓ Ｉｎｃ．，Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ Ｈｅａｌｔｈ）を参照のこと。細胞免疫の測定は、ＣＤ４＋及びＣＤ８＋Ｔ細胞から誘導されるものを含む活性化されたエフェクター細胞によって分泌されるサイトカインプロファイルの測定（例：エリスポットによるＩＬ‐１０又はＩＦＮｇ産生細胞の定量）、免疫エフェクター細胞の活性化状態の測定（例：古典的な［３Ｈ］チミジン取り込み試験によるＴ細胞増殖のアッセイ）、感作された対象中での抗原特異的Ｔリンパ球のアッセイ（例：細胞毒性アッセイにおけるペプチド特異的な溶解）、例えば５１Ｃｒ放出アッセイによって測定されるリンパ球が媒介する抗腫瘍細胞溶解作用、によって行うことができる。体液性反応を刺激する能力は、抗体結合及び／若しくは結合の競争によって（例えば、Ｈａｒｌｏｗ，１９８９，Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｐｒｅｓｓを参照）、又はインビトロでの腫瘍特異的抗体の媒介による細胞増殖の阻害の発生（Ｇａｚｉｔ ｅｔ ａｌ．，１９９２，Ｃａｎｃｅｒ Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ ３５，１３５‐１４４）によって測定することができる。本発明の方法は、適切な腫瘍誘発剤（例：ＨＰＶ‐１８ Ｅ６及びＥ７を発現するＴＣ１細胞）を接種した動物モデルでの、抗ＨＰＶ免疫反応の誘発又は刺激を反映する抗腫瘍活性を測定することによって、さらに実証することもできる。
【００７６】
本発明を実例を挙げる形で説明してきたが、使用した用語は、限定のためではなく説明のための言葉の性質を有するものであることを意図していることは理解されるべきである。上述の教示内容に照らして、本発明の多くの変更、及び変形が可能であることは明らかである。従って、添付の請求項の範囲内において、本発明が、本明細書で具体的に述べるものとは異なる方法で実施することが可能であることは理解されるべきである。
【００７７】
上記で引用したすべての特許、刊行物、及びデータベース入力事項の開示内容は、それらの特許、刊行物、又は入力事項の各々が参照することで組み入れられると特に個々に示されているのと同様に、その全てが参照することで本明細書に特に組み入れられる。
【００７８】
以下の例によって本発明を例証する。
【実施例】
【００７９】
実施例１：ＨＰＶ‐１８ Ｅ６及びＥ７ポリペプチドを発現するウイルスの構築
以下に述べる構築は、Ｍａｎｉａｔｉｓ ｅｔ ａｌ．（１９８９，Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ，Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉｎｇ Ｈａｒｂｏｒ ＮＹ）、に詳細が述べられている一般的な遺伝子操作及び分子クローニング技術、又は、市販のキットを用いる場合は製造元の推奨事項に従って実施する。ＰＣＲ増幅技術は当業者に公知である（ＰＣＲ ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ ‐Ａ ｇｕｉｄｅ ｔｏ ｍｅｔｈｏｄｓ ａｎｄ ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ，１９９０，ｐｕｂｌｉｓｈｅｄ ｂｙ Ｉｎｎｉｓ，Ｇｅｌｆａｎｄ，Ｓｎｉｎｓｋｙ ａｎｄ Ｗｈｉｔｅ，Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ）。遺伝子組換えワクシニアウイルスの構築は、本技術分野における従来の技術に従って実施し、上記で引用した文献、並びにＭａｃｋｅｔｔ ｅｔ ａｌ．（１９８２，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ ７９，７４１５‐７４１９）、及びＭａｃｋｅｔｔ ｅｔ ａｌ．（１９８４，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．４９，８５７‐８６４）に記載されている。大腸菌の選択遺伝子ｇｐｔ（キサンチングアニンホスホリボシルトランスフェラーゼ）（Ｆａｌｋｎｅｒ ａｎｄ Ｍｏｓｓ，１９８８，Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６２，１８４９‐１８５４）を用いて、遺伝子組換えワクシニアウイルスの選択を促進する。
【００８０】
ＨＰＶ‐１８ Ｅ６及びＥ７ポリペプチドの膜にアンカーされた非発癌性変異体（Ｅ６＊ＴＭＦ及びＥ７＊ＴＭＲ）を発現する遺伝子組換えＭＶＡウイルスは、ＷＯ９９／０３８８５及びＵＳ６，８８４，７８６（ＨＰＶ‐１６ Ｅ６及びＥ７ポリペプチドの膜にアンカーされた非発癌性変異体を発現するＭＶＡＴＧ８０４２について記載）に記載のようにして構築することができる。好ましくは、ＨＰＶ‐１８遺伝子配列は、両方がｐ７．５Ｋプロモーターの支配下に置かれ、ＭＶＡゲノムのｅｘｃｉｓｉｏｎ  ＩＩＩ領域中へ挿入される。構築物が免疫賦活遺伝子を含む場合、Ｈ５ＲプロモーターによってもたらされるＩＬ‐２遺伝子が好ましい。得られた構築物は、ＭＶＡ‐ＨＰＶ‐１８と称する。
【００８１】
ＭＶＡ‐ＨＰＶ‐１８ウイルス粒子は、従来の技術に従い、ＣＥＦ細胞中で作製することができる。ウイルスストックは、注射投与の日まで−８０℃で保存する。このウイルス懸濁液を急速解凍し、投与前に、例えば、ｐＨ８のＴｒｉｓ‐ＨＣｌを１０ｍＭ、ショ糖を５％（ｗ／ｖ）、及びＮａＣｌを５０ｍＭ含む適切なバッファーで希釈して、体積１００μｌ中のウイルス用量を５×１０７ｐｆｕとする。
【００８２】
実施例２：ＨＰＶ‐１８ Ｅ６及びＥ７ポリペプチドによってもたらされる交差反応性
交差反応性は、以下に示すように、ＭＶＡＴＧ ＨＰＶ‐１８で免疫されたマウスから採取した脾細胞でのＩＦＮｇエリスポット（ＥＬＩＳＰＯＴ）アッセイによって評価することができる。
【００８３】
異なるＨＰＶ遺伝子型からのＥ６及びＥ７アミノ酸配列は、ＨＵＳＡＲマルチプルアラインメントプログラム（ＣＬＵＳＴＡＬ）（ｈｔｔｐｓ：／／ｇｅｎｉｕｓ．ｅｍｂｎｅｔ．ｄｋｆｚ‐ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ．ｄｅ／ｍｅｎｕ／ｃｇｉ‐ｂｉｎ／ｗ２ｈ／ｗ２ｈ．ｓｔａｒｔ）を用いて整列する。
【００８４】
Ｔ細胞に認識されることが予想されるペプチド（Ｈ２ｂ制限（Ｈ２ｂ‐ｒｅｓｔｒｉｃｔｅｄ））は、インターネット上で公開されている、ペプチドの結合性に関するプログラムＢＩＭＡＳ（ｈｔｔｐ：／／ｂｉｍａｓ．ｄｃｒｔ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ｍｏｌｂｉｏ／ｈｌａ＿ｂｉｎｄ／）を用いて識別することができる。Ｅ７特異的ＣＴＬによって認識されると本技術分野で報告されている参照ペプチドから得られた結合スコアと同じ若しくはそれを超えるスコアを示すペプチドは、さらに分析される。ＨＰＶ‐１８ Ｅ６及びＥ７ポリペプチドのアミノ酸配列と比べて１又は２個のアミノ酸の違いを示すペプチドを選択して、この交差反応性分析にかける。選択されたペプチドは、従来の合成技術によって合成することができ、ＨＰＶ‐１８ Ｅ６及びＥ７ポリペプチドで免疫されたマウスから採取した脾細胞とのその交差反応能力を、以下のようにして測定することができる。
【００８５】
健康なメスのＳＰＦマウスＣ５７Ｂ１／６を市販業者より入手し、管理条件下で飼育する（一時間あたり少なくとも１１回の換気を行い、温度が１８乃至２２℃、相対湿度が４０乃至７０％の範囲になるよう空調された専用個室を使用。１２時間点灯、１２時間消灯の周期となるように照明を自動制御する。飼料及び水は実験期間を通して自由に与える）。
【００８６】
市販業者から入手し、上記で示した条件下で飼育した生後７週間の特定病原体除去（ＳＰＦ）マウスのメスＣ５７Ｂ１／６を、５×１０７ｐｆｕのＭＶＡＴＧＮ３３又はＭＶＡＴＧ ＨＰＶ‐１８により、第０日、第７日、及び第１４日の３回、皮下投与で免疫することができる。皮下注射は、各回ごとに、動物の右側腹部の異なる場所に行うことが好ましい。最後の免疫化後、第２４日に脾臓を採取することができる。新鮮な脾臓細胞を、本技術分野における従来の技術を用いて調製することができる。
【００８７】
９６ウェルのニトロセルロースプレートは、炭酸ナトリウムバッファー中の３μｇ／ｍｌのモノクローナルラット抗マウスＩＦＮｇ抗体（クローンＲ４‐６Ａ２；Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ、Ｃａｔ  Ｎｕｍｂｅｒ  ５５１２１６、１００μｌ／ウェル）でコーティングすることができる。プレートは、４℃で一晩、又は３７℃で１時間インキュベートすることができる。プレートは、１０％ＦＣＳ含有ＤＭＥＭで３回洗浄し、各ウェルあたり１００μｌの１０％ＦＣＳ含有ＤＭＥＭにより、３７℃で２時間浸漬することができる。脾細胞は、１０６細胞／１００μｌの濃度で播種することができる。ＩＬ‐２は、６Ｕ／５０μｌ／ウェルの濃度でウェルへ添加することができる（Ｒ＆Ｄ Ｓｙｓｔｅｍｓ；１０ｎｇ／ｍｌ）。ポジティブコントロールとしては、一般的にコンカナバリンＡが用いられる（５μｇ／ｍｌ）。
【００８８】
Ｔエピトープを有することが予想されたペプチドは合成することができ、ＤＭＳＯ中１０ｍｇ／ｍｌの濃度で得られ、４℃で保存する。ポジティブコントロールとしては、ＨＰＶ‐１８参照ペプチドを用い、無関係のペプチドをネガティブコントロールとして用いる。５μｇ／ｍｌの濃度で各ウェルにペプチドを添加し、５％ＣＯ２下、３７℃で４８時間インキュベートすることができる。
【００８９】
１Ｘ ＰＢＳで１回、０．０５％ＰＢＳ‐Ｔｗｅｅｎで５回の洗浄後、０．３μｇ／１００μｌ／ウェルの濃度でビオチン化抗マウスＩＦＮｇ（クローンＸＭＧ１．２、Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を添加し、ゆっくり攪拌しながら室温で２時間インキュベートすることができる。プレートは、０．０５％ＰＢＳ‐Ｔｗｅｅｎで５回の洗浄することができる。０．０５％ＰＢＳ‐Ｔｗｅｅｎ‐１％ＦＣＳ中の１／５０００に希釈したＥｘｔｒａｖｉｄｉｎ ＡＫＰ（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ミズーリ州）をウェルに添加することもできる（１００μｌ／ウェル）。プレートは、室温で４５分間インキュベートし、その後、０．０５％ＰＢＳ‐Ｔｗｅｅｎで５回洗浄することができる。ＩＦＮｇ分泌は、バイオラッドキット（Ｂｉｏｒａｄ  Ｋｉｔ）により確認することができる。各ウェルに１００μｌの基質（ＮＢＴ＋ＢＣＩＰ）を添加し、プレートを室温で０．５時間静置することができる。プレートは水で洗浄し、室温で一晩乾燥させることができる。スポットのカウントは、エリスポットリーダー、Ｂｉｏｒｅａｄｅｒ４０００Ｐｒｏ‐Ｘ（ＢＩＯＳＹＳ‐ＧＭＢＨ；Ｓｅｒｌａｂｏ、フランス）を用いて行うことができる。
【００９０】
ＨＰＶ‐１８参照ペプチドの存在下で、免疫化脾細胞の培養物はＩＦＮｇの産生を刺激し、一方、交差反応を行わないペプチド（無関係のペプチドなど）を脾細胞培養物中へ添加しても有意の影響は見られない（ＩＦＮｇ産生のレベルが基準以下）。交差反応性が表れるのは、非ＨＰＶ‐１８ペプチドが免疫化マウスのＣＴＬによって認識された時であり、このことは、ＨＰＶ‐１８ Ｅ６及び／若しくはＥ７ポリペプチド、又はこれらを発現するベクター（例：ＭＶＡＴＧ ＨＰＶ‐１８）によるワクチン接種が、その他のＨＰＶ遺伝子型による感染の治療にも効果を示す可能性があることを示唆している。
【配列表】
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【国際調査報告】
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