(57)【要約】  本発明は、紫外線（ＵＶ）に過敏なヒトの皮膚を移植した皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデル、好ましくはヒト皮膚移植マウスモデルに関連するもので、非ヒト哺乳動物モデルの作成方法、さらにこのモデルを使った、紫外線照射によるヒト皮膚の急性および長期効果の研究や、局所または全身へ投与した薬物の皮膚損傷に対する予防、修復、回復能力の試験へのこのモデルの利用に関する。本マウスモデルは、色素性乾皮症（ＸＰ）またはゴーリン症候群（ＧＳ）の患者の皮膚細胞由来のヒト皮膚を移植した部分を含む。ＸＰおよびＧＳは、ヒトの稀な常染色体異常であり、臨床的に、紫外線、特に紫外線Ｂに過敏なことで特徴づけられ、皮膚の直射日光に曝された領域に皮膚癌を発症する確率が高い。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
紫外（ＵＶ）線に過敏なヒト皮膚を移植した領域を備える、皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデル。
【請求項２】
前記哺乳動物は齧歯類である、請求項１に記載の非ヒト哺乳動物モデル。
【請求項３】
前記哺乳動物は免疫不全マウスである、請求項１または２に記載の非ヒト哺乳動物モデル。
【請求項４】
前記哺乳動物は非遺伝子改変哺乳動物であり、好ましくは非遺伝子改変マウスである、請求項１から３のいずれか１つに記載の非ヒト哺乳動物モデル。
【請求項５】
前記ヒト皮膚の一部は、作成された人工皮膚を前記免疫不全哺乳動物、好ましくは免疫不全マウスに移植後再生されたものである、請求項１から４のいずれか１つに記載の非ヒト哺乳動物モデル。
【請求項６】
前記ヒト皮膚の一部は、色素性乾皮症（ＸＰ）またはゴーリン症候群（ＧＳ）の患者の皮膚細胞を基にしたものである、請求項１から５のいずれか１つに記載の非ヒト哺乳動物モデル。
【請求項７】
前記人工皮膚の少なくともケラチノサイトと線維芽細胞は、ＸＰまたはＧＳ患者の皮膚生検から得られたものである、請求項５または６に記載の非ヒト哺乳動物モデル。
【請求項８】
前記移植されたヒト皮膚の一部は紫外線に過敏なヒト皮膚である、請求項１から７のいずれか１つに記載の非ヒト哺乳動物モデル。
【請求項９】
請求項１から８に記載の、紫外（ＵＶ）線、好ましくは紫外線Ｂに過敏なヒト皮膚が移植された領域を備える、皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデルを作成する方法であって、
１．色素性乾皮症（ＸＰ）またはゴーリン症候群（ＧＳ）の患者であるヒトから採取した皮膚細胞を使い人工皮膚を作成し、
２．前記人工皮膚と好ましくは同所的に一致する哺乳動物の指定された領域へ、作成した前記人工皮膚の一部を移植し、
３．前記移植された人工皮膚を、前記ヒト皮膚が再生するまで、非ヒト哺乳動物から採取して失活した皮膚で保護する、皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデルを作成する
方法。
【請求項１０】
前記移植は無菌状態で行われる、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記人工皮膚の作成には、好ましくはＸＰまたはＧＳ患者の前記生検皮膚から採取した皮膚細胞から得られた少なくとも前記ケラチノサイトと前記線維芽細胞を使用する、請求項９または１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記人工皮膚の作成には、前記線維芽細胞を加えたフィブリン基質を前記人工真皮として作成し、前記ケラチノサイトを植え付けて前記非ヒト哺乳動物に移植するための前記人工皮膚の表皮層を形成する、請求項９から１１のいずれか１つに記載の方法。
【請求項１３】
請求項１から８に記載された皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデルに紫外線を照射することで、ヒト皮膚の紫外線照射の効果を研究する方法。
【請求項１４】
前記紫外線が紫外線Ｂである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
紅斑、日焼け、日光皮膚炎、および／または免疫抑制を含む急性作用を研究する、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
紫外線による老化、および／または皮膚癌を含む長期作用を研究する、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１から８に記載された皮膚ヒト化哺乳動物モデルに紫外線を照射することで、ヒト皮膚の紫外線照射の前記急性作用および／または長期作用を、予防、修復および、および／または回復させるために局所的に投与した薬物の効果を試験する方法。
【請求項１８】
前記薬物はクリームやジェル、ローション、またはボディミルクのような局所製剤の一成分として試験される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１から８に記載された皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデルに紫外線を照射することで、ヒト皮膚の紫外線照射の急性作用および／または長期作用を、予防、修復、および／または回復させるために全身に投与した薬物の能力を試験する方法。
【請求項２０】
請求項１から８に記載の前記皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデルを使い、紫外線照射前、照射中、または照射後の、ヒト皮膚の紫外線照射による老化および／または皮膚癌を、予防、修復および／または回復させるために全身に投与した前記薬物の能力を試験する、請求項１９に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、紫外線（ＵＶ）に過敏なヒトの皮膚を移植した皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデル、好ましくはヒト皮膚移植マウスモデルに関連するもので、非ヒト哺乳動物モデルの作成方法、さらにこのモデルを使った、紫外線照射によるヒト皮膚の急性および長期作用の研究や、局所または全身へ投与した薬物の皮膚損傷に対する予防、修復、回復能力の試験へのこのモデルの利用に関する。
【背景技術】
【０００２】
皮膚、特にヒトの皮膚は、太陽光による紫外線（ＵＶ）照射に過剰に曝されると、紅斑、日焼け、日光皮膚炎、免疫抑制を含む重度の急性障害の原因となるだけでなく、紫外線による老化や、基底細胞癌、有棘細胞癌、メラノーマ皮膚癌を含む皮膚癌といった慢性障害の原因となることが知られている。
【０００３】
同時に、人体を使った紫外線照射の体内作用の研究は倫理上及び技術的な理由から禁止されていることも周知の事実である。
【０００４】
そこで、ヒト皮膚への紫外線暴露による急性作用およびいわゆる長期作用を研究できるだけでなく、紫外線照射からその影響が発現するまでの平均時間を劇的に短縮するので、紫外線への曝露後適度な時間をおいてすぐにこれらの研究を行うことも可能な、信頼性のある動物モデルが必要である。
【０００５】
さらに、紫外線照射によるヒトの皮膚障害の予防、修復、および／または回復のための薬物をテストするだけでなく、上記理由と同様に、紫外線への曝露後適度な時間をおいてすぐにこれらの研究を行うことが可能な信頼性のある動物モデルもまた必要である。つまり、紫外線曝露の影響をある種の早回し的な方法で研究できる信頼性のある動物モデルが必要とされている。
【発明の開示】
【０００６】
本発明は、紫外線に過敏なヒト皮膚を移植した皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデルを提供することで、上記必要性を満たすものである。
【０００７】
好ましくは、非ヒト哺乳動物は齧歯類であり、より好ましくはマウスである。本発明による非ヒト哺乳動物は、遺伝子改変哺乳動物ではない。
【０００８】
上記条件を満たすため、本発明による皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデルは、色素性乾皮症（ＸＰ）またはゴーリン症候群（ＧＳ）の患者の皮膚細胞由来のヒト皮膚を移植した部分を含む。ＸＰおよびＧＳは、ヒトの稀な常染色体異常であり、臨床的に、紫外線に過敏なことで特徴づけられ、直射日光に曝された皮膚領域に皮膚癌を発症する確率が高い。
【０００９】
ＸＰまたはＧＳ患者の皮膚細胞から得たヒト皮膚は、紫外線、特に紫外線Ｂに対して過敏性を示す。
【００１０】
紫外線に過敏なヒト皮膚を移植した皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデルは、以下の手順で作成される。
１．ＸＰまたはＧＳ患者から取った皮膚細胞を用いて皮膚同等物を生体工学的に生成する。
２．この皮膚同等物を所定の部位、好ましくはマウスのような非ヒト哺乳動物の背部に、好ましくは同所移植する。
３．移植された皮膚同等物は、非ヒト哺乳動物の皮膚上に再生するまで、切りだされ失活した非ヒト哺乳動物の皮膚のよって覆われ、保護される。
【００１１】
移植処理は無菌状態で行う必要があり、皮膚ヒト化動物モデルは病原菌の無い環境で飼育する必要がある。
【００１２】
皮膚同等物を作成するために、ＸＰまたはＧＳ患者の皮膚の生体検査（生検）を行う。これらの生体標本を２つの酵素（トリプシンとコラゲナーゼ）で処理し、紫外線に過敏なヒトケラチノサイトおよびヒト皮膚線維芽細胞を得る。これらの一次ケラチノサイトは、通常の方法により培養される。同様の生体検査で得られた皮膚線維芽細胞もまた、通常の方法により培養される。
【００１３】
移植用に作成された皮膚構成体としては、上記の培養ヒト皮膚線維芽細胞を含むフィブリン基質か、または線維芽細胞が埋め込まれたヒト血漿ベースの基質が使用される。
【００１４】
このフィブリン基質は、塩化カルシウムやトロンビンなどの公知の作用物質をフィブリン基質ゲルに加えることで固体化するフィブリノゲン溶液（ヒト血液の寒冷沈降物由来）に上記ヒト皮膚線維芽細胞を加えることで作成できる。
【００１５】
このような皮膚基質の作成に関する詳細は、Ｍｅａｎａ  Ａ，  ｌｇｌｅｓｉａｓ  Ｊ１  Ｄｅｌ  Ｒｉｏ  Ｍ，  ｅｔ  ａｌ．の“Ｌａｒｇｅ  ｓｕｒｆａｃｅ  ｏｆ  ｃｕｌｔｕｒｅｄ  ｈｕｍａｎ  ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ  ｏｂｔａｉｎｅｄ  ｏｎ  ａ  ｄｅｒｍａｌ  ｍａｔｒｉｘ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｌｉｖｅ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｆｉｂｒｉｎ  ｇｅｌｓ”  ＢＵＲＮＳ  １９９８；  ２４：  ６２１．  に公開されている。この皮膚基質の作成とヒトケラチノサイトの成長に関する公開内容は、その内容を参照によって本願明細書に引用したものとし、本明細書の一部とする。
【００１６】
また、別の方法として、皮膚の生体検査を受けた同一の人から採取したヒト血漿をベースとした皮膚基質を使用することも可能である。そのような皮膚基質では、皮膚細胞生検由来のヒト線維芽細胞は、凝固したヒト血漿ベースの基質に埋め込まれる。
【００１７】
このような皮膚基質の作成については、Ｓａｒａ  Ｇ．  Ｌｌａｍｅｓ，  Ｍａｒｃｅｌａ  Ｄｅｌ  Ｒｉｏ，  Ｆｅｒｎａｎｄｏ  Ｌａｒｃｈｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．“Ｈｕｍａｎ  ｐｌａｓｍａ  ａｓ  ａ  ｄｅｒｍａｌ  ｓｃａｆｆｏｌｄ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  ｃｏｍｐｌｅｔｅｌｙ  ａｕｔｏｌｏｇｏｕｓ  ｂｉｏｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  ｓｋｉｎ”、“ＴＲＡＮＳＰＬＡＮＴＡＴＩＯＮ”，  ＶｏＩ  ．７７，  ３５０−３５５，  Ｎｏ．  ３，  Ｆｅｂｒｕａｒｙ  １５，  ２００４．に公開されている。
【００１８】
この皮膚基質の作成に関する公開内容は、その内容を参照によって本願明細書に引用したものとし、本明細書の一部とする。
【００１９】
３次元骨格の役割を果たすヒト血漿ベースの基質上、あるいはＸＰまたはＧＰの患者から得た線維芽細胞を加えた上記フィブリン基質上のどちらかに、同じＸＰまたはＧＰの患者の皮膚生検由来の培養されたケラチノサイトを、人工皮膚の表皮層を形成するように植え付け、人工皮膚の部分は、非ヒト哺乳動物、好ましくはマウスに移植される。培養培地は、好ましくは支持細胞層に一次ケラチノサイトを培養するときに使用されるものと同じものが良い。通常、培養は、少なくとも基質ゲル上に成長するケラチノサイトがコンフルエントに達するまで続ける。
【００２０】
このようにして生体工学的に生成された（人工）皮膚は、非ヒト哺乳動物に移植することができる。生体工学的に生成された皮膚の一部は好ましくは適切な接着剤でガーゼに固定し、培養皿からはがす。移植皮膚と同じ大きさの創傷が作られた非ヒト哺乳動物、好ましくはマウス、さらに好ましくはヌードマウスの好ましくは背部に、好ましくは同所性に生体工学的に生成された皮膚が移植される。皮膚移植の過程では、生体工学的に生成された皮膚は、移植のために取り除かれ失活した非ヒト哺乳動物の皮膚により覆われ保護される。
【００２１】
この生体包帯は、好ましくはヒト皮膚が見えるようになるまでそのままにしておく。すべての処理は無菌状態で行う必要があり、皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物は病原菌の無い環境で飼育する必要がある。
【００２２】
本発明のさらなる目的は、上記の通りこれまでにない皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデルを作成する方法を提供することである。
【００２３】
本発明による皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデルは、紫外線に過敏なヒトの皮膚の一部が移植されているため、ヒトの皮膚を紫外線に曝露した際の作用を研究するには理想的なモデルである。さらに、移植されたヒト皮膚は紫外線に過敏であることから、移植された皮膚への影響発現は、通常のヒト皮膚よりも非常に短時間の紫外線曝露によって起こるため、研究の時間効率が非常に高い。つまり、本発明によるモデルでは、紅斑、日焼け、日光皮膚炎、免疫抑制を含む重度の急性障害を非常に効果的かつ信頼性のある方法で研究できるだけでなく、紫外線による老化や、基底細胞癌、有棘細胞癌、メラノーマ皮膚癌を含む皮膚癌といった慢性障害として知られる障害についても研究できる。紫外線照射から皮膚症状が現れるまでに通常かかる時間の数分の一の時間で、本発明のモデル動物の皮膚には同様の障害が現れる。
【００２４】
当該技術分野における当業者は、表皮構造の反応、ケラチノサイトの増殖および分化の変化、ＤＮＡの障害などの、紫外線、特に紫外線Ｂの曝露による作用をどのように決定できるかを知っている。
【００２５】
そのため、本発明のさらなる目的は、皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデル、好ましくは本発明による皮膚ヒト化マウスモデルを使って、紫外線、特に紫外線Ｂへの曝露による上記ヒト皮膚への作用を研究するための方法を提供することである。
【００２６】
本発明による動物モデルはまた、上記のような紫外線に曝露したヒト皮膚の急性作用および／または長期作用に対する局所的な塗布薬の予防、修復および／または回復能力を試験するのに効果的かつ信頼性のあるモデルである。したがって、局所的に、好ましくはクリーム、ジェル、ローション、またはボディミルクのような局所製剤の形状で投与される薬物を、本発明による皮膚ヒト化モデルを用いて、特に本発明のモデルのヒト皮膚移植部分に対して投与することにより、上記のような紫外線、特に紫外線Ｂ照射によるヒト皮膚への影響を予防、修復、および／または回復能力をテストする方法は、本発明のさらなる目的である。
【００２７】
本発明による皮膚ヒト化モデルはまた、紫外線、特に紫外線Ｂへの曝露によるヒト皮膚における急性作用および／または長期作用として知られる効果に対する、全身投与薬による予防、修復、および／または回復能力を試験することも可能である。よって、本発明による皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデル、好ましくはマウスモデルにおいて、全身投与薬による上記ヒト皮膚への傷害を予防、修復、および／または回復能力を試験する方法は、本発明のさらなる態様の１つである。
【実施例】
【００２８】
皮膚ヒト化マウスの作成方法（紫外線に過敏なヒト皮膚移植領域を含む）
１．細胞培養
紫外線に非常に過敏なヒトケラチノサイトは、色素性乾皮症（ＸＰ）患者の生検皮膚標本を酵素処理して得た。一次ケラチノサイトを、致死的な量の放射線を浴びた３Ｔ３細胞の支持細胞層上で培養した。この同じ皮膚生検からヒト皮膚線維芽細胞を得て、１０％のウシ胎仔血清（ＦＣＳ）を含むＤＭＥＭで培養した。細胞は５％のＣＯ２を含む湿度のある環境で、３７℃で培養された。培養培地は２日ごと取り換えた。
【００２９】
２．フィブリンベースの人工皮膚の作成
上記の方法で得られた生きたヒト線維芽細胞を加えたフィブリン基質を人工皮膚の皮膚構成体として使用した。フィブリン基質は以下の方法で作成した。３ｍｌのフィブリノゲン溶液（ヒト血液ドナーによる寒冷沈降物から得た）を、上記１の方法で培養した５×１０５皮膚線維芽細胞を含む１０％ＦＣＳのＤＭＥＭ１２ｍｌと、５００ＩＵのウシアプロチニン（Ｔｒａｓｙｌｏｌ、バイエル薬品）に加える。その直後に、この溶液に１１ＩＵのウシトロンビン（Ｓｉｇｍａ）と１ｍｌ（０．００２５ｍＭ）のＣａＣｌ２（Ｓｉｇｍａ、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、Ｍｏ）を加える。最後に、混合液は６ウェル培養皿（Ｔｒａｎｓｗｅｌｌ、Ｃｏａｓｔａｒ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，ＭＡ）のポリカーボネート製の内皿（４ミクロンの多孔）に入れ、３７℃で２時間かけて凝固させた。上記１の通りに培養したヒトケラチノサイトは、次に人工皮膚の表皮層を形成するためにフィブリン基質に植え付けられた。組織培養は、ケラチノサイトがコンフルエントになるまで培養液に完全に浸して成長させ、その後、下層のみ培養液に浸した。培養は空気と液体二相の環境で７日間行い、移植による上皮の成層化および分化を強化した。
【００３０】
３．２で生体工学的に生成した皮膚の移植
２で作成した皮膚は機械的に培養皿から切り離され、ＮＯＤ／ＳＣＩＤまたはヌードマウスの背部に局所的に配置された。マウスは毛を剃り、事前に無菌状態にした。各マウスの背部には、皮膚同等物を移植するための全厚１２ｍｍの円形の傷を作った。傷を作るために取り除いたマウスの皮膚は、凍結融解サイクルを３回繰り返して失活させ、移植中の生体工学的に生成した皮膚を保護し位置がずれないように構造に固定され、ニュースキン（Ｍｅｄｔｅｃｈ、Ｊａｃｋｓｏｎ、ＷＹ）で覆われた状態で、生体包帯として使用された。失活したマウス皮膚は移植後通常７日以内にはがれて、再生したヒト皮膚が現れた。移植は無菌状態で行われ、実験期間中、常に病原菌の無い環境で飼育された。マウスは個別に換気されたＩＩタイプのケージで飼育され、１時間に２５回の換気を行い、ガンマ線を照射した針葉樹ペレット１０ｋｇが敷かれた。
【００３１】
図１は上記ヒト化皮膚マウスの作成方法を示している。
【００３２】
４．単一紫外線Ｂ照射後の皮膚損傷の研究
皮膚ヒト化マウスは、フィリップスＴＬ２０Ｗ／１２蛍光灯を用いて単一紫外線Ｂ照射を行った。急性損傷は、照射２４時間後に評価した。
【００３３】
紫外線ＢによるＤＮＡ損傷を研究するために、一般的な皮膚形態と日光皮膚炎細胞の形成を典型的な組織学により観察した。さらに免疫染色は、紫外線Ｂ照射後のＤＮＡ損傷とｐ５３の誘導のそれぞれを検出するために、シクロブタンピリミジンダイマーおよびｐ５３に対するモノクローナル抗体を用いて行った。免疫染色は脱パラフィン化した切片に対してＨ３（１０）マウスモノクローナル抗体を用いて行った。ｐ５３タンパク質の発現もまた脱パラフィン化した切片に対して抗ヒトｐ５３抗体を用いて調べられた（クローンＤ０７  Ｄａｋｏ４）。
【００３４】
表皮１ｍｍごとのｐ５３陽性ケラチノサイト数は各スライドから任意に選択した少なくとも５つのフィールドで数えた（各動物から、各動物は各グループの照射および非照射の少なくとも５匹の動物の中から選択）。紫外線の照射、非照射間で、ケラチノサイトの数は有意に差が出た。（Ｓｔｕｄｅｎｔ’ｓ  ｆ−ｔｅｓｔ  でｐ＜０．００１。照射皮膚では、７５．１±１３．０陽性ケラチノサイトで、非照射皮膚では０．７±０．２陽性ケラチノサイト）。
【００３５】
紫外線Ｂ線照射後２４時間で、照射マウスのｐ５３誘導は、非照射マウスの約１００倍高かった。
【図面の簡単な説明】
【００３６】
【図１】上記ヒト化皮膚マウスの作成方法を示している。
【図１】
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【手続補正書】
【提出日】平成19年10月2日(2007.10.2)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
紫外（ＵＶ）線に過敏なヒト皮膚を移植した部分を備える、皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデル。
【請求項２】
前記哺乳動物は齧歯類である、請求項１に記載の非ヒト哺乳動物モデル。
【請求項３】
前記哺乳動物はマウスである、請求項１または２に記載の非ヒト哺乳動物モデル。
【請求項４】
前記哺乳動物は非遺伝子改変哺乳動物であり、好ましくは非遺伝子改変マウスである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の非ヒト哺乳動物モデル。
【請求項５】
前記哺乳動物は免疫不全哺乳動物であり、好ましくは免疫不全マウスである、請求項１〜３のいずれか１項に記載の非ヒト哺乳動物モデル。
【請求項６】
前記ヒト皮膚部分は、生体工学的に生成された皮膚同等物を前記非ヒト哺乳動物に移植した後、再生されたものである、請求項１〜５のいずれか１項に記載の非ヒト哺乳動物モデル。
【請求項７】
前記ヒト皮膚部分は、色素性乾皮症（ＸＰ）またはゴーリン症候群（ＧＳ）の患者の皮膚細胞由来である、請求項１〜６のいずれか１項に記載の非ヒト哺乳動物モデル。
【請求項８】
前記生体工学的に生成された皮膚同等物の少なくともケラチノサイトと線維芽細胞は、ＸＰまたはＧＳ患者の皮膚生検から得られたものである、請求項６または７に記載の非ヒト哺乳動物モデル。
【請求項９】
前記移植されたヒト皮膚部分が紫外線に過敏なヒト皮膚である、請求項１〜８のいずれか１項に記載の非ヒト哺乳動物モデル。
【請求項１０】
紫外（ＵＶ）線、好ましくは紫外線Ｂに過敏なヒト皮膚が移植された部分を備える、請求項１から９のいずれか１項に記載の皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデルの作製方法であって、
１．色素性乾皮症（ＸＰ）またはゴーリン症候群（ＧＳ）のヒト患者から単離した皮膚細胞を用いて生体工学的に皮膚同等物を生成するステップと、
２．前記生体工学的に生成された皮膚同等物を、適合する前記非ヒト哺乳動物の所定の部位へ、好ましくは同所的に、移植するステップと、
３．前記移植された皮膚同等物を、前記ヒト皮膚が再生するまで、前記非ヒト哺乳動物から採取して失活させた皮膚によって保護するステップと
を含む方法。
【請求項１１】
前記皮膚同等物の生成のために、単離した皮膚細胞から、好ましくはＸＰまたはＧＳ患者の前記生検皮膚から得られた少なくとも前記ケラチノサイトと前記線維芽細胞を使用する、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記皮膚同等物の生成のために、前記線維芽細胞を含むフィブリン基質を人工真皮として用意し、非ヒト哺乳動物に移植するための前記人工皮膚同等物の表皮層を形成するように前記ケラチノサイトを植え付ける、請求項１０または１１に記載の方法。
【請求項１３】
請求項１〜９のいずれか１項に記載された皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデルを使用することにより、ヒト皮膚への紫外線照射の影響を研究する方法。
【請求項１４】
前記紫外線が紫外線Ｂである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
紅斑、日焼け、日光皮膚炎、免疫抑制を含む急性作用を研究する、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１６】
紫外線による老化および／または皮膚癌を含む長期作用を研究する、請求項１３または１４に記載の方法。
【請求項１７】
請求項１〜９に記載された皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデルを用いて、紫外線照射に対するヒト皮膚の前記急性作用および／または長期作用を、予防、修復および／または治療するために局所的に投与された薬物の効果を試験する方法。
【請求項１８】
前記薬物は、クリーム、ジェル、ローションまたはボディミルクのような局所製剤の一成分として試験される、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
請求項１〜９に記載された皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデルを用いて、紫外線照射に対するヒト皮膚の前記急性作用および／または長期作用を、予防、修復および／または治療するために全身投与された薬物の効果を試験する方法。
【請求項２０】
紫外線照射による老化および／または皮膚癌を予防、修復および／または治療するための薬物の効果は、請求項１〜９のいずれか１項に記載の前記皮膚ヒト化非ヒト哺乳動物モデルに対する紫外線照射前、照射中または照射後に、前記薬物の全身投与により試験される、請求項１９に記載の方法。
【国際調査報告】
2009532020.tif 000004
2009532020.tif 000005
2009532020.tif 000006
2009532020.tif 000007