(57)【要約】  本発明は、特にヒト患者における、疾患の治療に有用な新規な治療用タンパク質に関する。本発明者の結果は、自己免疫疾患又は脱髄疾患、特に多発性硬化症（ＭＳ）等の疾患の処置における、可溶性ＩＬ−１８Ｒαの使用を強く支持する。したがって、本発明は、自己免疫疾患又は脱髄疾患、特にＭＳの処置における使用のための可溶性ＩＬ−１８Ｒαを提供する。本発明は、患者、好ましくはヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患、特にＭＳの症状を、治療的有効量の上述の可溶性ＩＬ−１８Ｒαを患者に対して投与することによって処置する、予防する、又は寛解させる方法をさらに提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬ−１８Ｒα又はその変異体の細胞外ドメインのすべて又は一部を含む可溶性受容体。
【請求項２】
前記ＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインのすべて又は一部は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はその変異体の細胞外ドメインのすべて又は一部である請求項１に記載の可溶性受容体。
【請求項３】
配列番号２のアミノ酸残基１９〜１３２及び／又は配列番号２のアミノ酸残基１２２〜２１９及び／又は配列番号２のアミノ酸残基２１３〜３２９及び／又は前記アミノ酸残基の変異体を含む請求項１又は２に記載の可溶性受容体。
【請求項４】
配列番号２のアミノ酸残基１９〜２１９並びに／又は配列番号２のアミノ酸残基１２２〜３２９並びに／又はペプチド結合によって連結された配列番号２のアミノ酸残基１９〜１３２及び２１３〜３２９並びに／又は前記アミノ酸残基の変異体を含む請求項１から３までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項５】
配列番号２のアミノ酸残基１９〜３２９及び／又は前記アミノ酸残基の変異体を含む請求項１から４までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項６】
前記アミノ酸残基の前記変異体は、前記アミノ酸残基と少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドである請求項３から５までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項７】
配列番号２のアミノ酸残基１９〜１３２並びに／又は配列番号２のアミノ酸残基１２２〜２１９並びに／又は配列番号２のアミノ酸残基２１３〜３２９並びに／又は配列番号２のアミノ酸残基１９〜２１９並びに／又は配列番号２の１２２〜３２９並びに／又はペプチド結合によって連結された配列番号２のアミノ酸残基１９〜１３２及び２１３〜３２９並びに／又は配列番号２のアミノ酸残基１９〜３２９並びに／又は前記アミノ酸残基の変異体からなる少なくとも２つのサブユニットを融合タンパク質として同じタンパク質骨格上に含む請求項３から６までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項８】
前記アミノ酸残基の前記変異体は、前記アミノ酸残基と少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドである請求項７に記載の可溶性受容体。
【請求項９】
少なくとも２つのサブユニットは同じである請求項８に記載の可溶性受容体。
【請求項１０】
さらなるアミノ酸ドメインに作動可能に連結された、請求項１から９までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項１１】
請求項１から１０までのいずれか一項に記載の可溶性受容体の多量体、特に二量体。
【請求項１２】
ＩＬ−１８Ｒβの細胞外ドメインのすべて又は一部を含む少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒβサブユニットをさらに含む請求項１から１０までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項１３】
ＩＬ−１ＲａｃＰの細胞外ドメインのすべて又は一部を含む少なくとも１つのＩＬ−１ＲａｃＰサブユニットをさらに含む請求項１から１０までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項１４】
ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２の細胞外ドメインのすべて又は一部を含む少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２サブユニットをさらに含む請求項１から１０までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項１５】
Ｔ１／ＳＴ２の細胞外ドメインのすべて又は一部を含む少なくとも１つのＴ１／ＳＴ２サブユニットをさらに含む請求項１から１０までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項１６】
ＩＬ−１Ｒ−１の細胞外ドメインのすべて又は一部を含む少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−１サブユニットをさらに含む請求項１から１０までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項１７】
医薬としての使用のための請求項１から１６までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項１８】
自己免疫疾患又は脱髄疾患の処置のための医薬の製造における請求項１から１６までのいずれか一項に記載の可溶性受容体の使用。
【請求項１９】
前記脱髄疾患は多発性硬化症である請求項１８に記載の使用。
【請求項２０】
患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患の症状を処置する、予防する、又は寛解させる方法であって、前記患者に、治療的有効量の、請求項１から１６までのいずれか一項に記載の可溶性受容体を投与することを含む方法。
【請求項２１】
前記患者はヒトである請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記脱髄疾患は多発性硬化症である請求項２０又は２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記患者は、再発寛解型（ＲＲ）多発性硬化症、二次進行型（ＳＰ）多発性硬化症、一次進行型（ＰＰ）多発性硬化症、又は進行再発型（ＰＲ）多発性硬化症に冒されている請求項１８から２２までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項２４】
前記可溶性受容体は、ＭＳを処置する又は予防するための第２の治療薬と共に投与される請求項１８から２３までのいずれか一項に記載の方法又は使用。
【請求項２５】
前記可溶性受容体は、コルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンと共に投与される請求項２４に記載の方法又は使用。
【請求項２６】
前記可溶性受容体は、インターフェロン−ベータと、好ましくはインターフェロンベータ−１ａと、より好ましくはＲｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ社）と共に投与される請求項２５に記載の方法又は使用。
【請求項２７】
哺乳動物患者、好ましくはヒト患者のＭＳの治療における同時の、別個の、又は順次の使用のための、請求項１から１６までのいずれかに記載の可溶性受容体及び併用調製物としてコルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンを含む製品。
【請求項２８】
前記インターフェロンは、インターフェロン−ベータ、好ましくはインターフェロンベータ−１ａ、より好ましくはＲｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ社）である請求項２７に記載の製品。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、特にヒト患者における疾患の処置に有用な新規な治療用タンパク質に関する。
【０００２】
本明細書に説明されるように、本発明者の結果は、自己免疫疾患又は脱髄疾患、特に多発性硬化症（ＭＳ）等の疾患の処置における、可溶性ＩＬ−１８Ｒαの使用を強く支持する。したがって、本発明は、自己免疫疾患又は脱髄疾患、特にＭＳの処置における使用のための可溶性ＩＬ−１８Ｒαを提供する。本発明は、ヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患、特にＭＳの症状を、治療的有効量の上述の可溶性ＩＬ−１８Ｒαを患者に対して投与することによって処置する、予防する、又は寛解させる方法をさらに提供する。
【背景技術】
【０００３】
脱髄疾患は、神経系の髄鞘における異常を伴う病状のグループである。多くの先天性代謝障害は、主にＣＮＳにおける発達中の髄鞘を冒し、脱髄は、多くの神経障害の特徴となる。
【０００４】
ヒトにおける中枢神経系の最も知られている慢性炎症性脱髄疾患は、多発性硬化症である。多発性硬化症（ＭＳ）の発症は、２０歳〜４０歳の間に典型的に起こる。女性は、男性よりも約２倍の頻度で冒される。長い間にわたって、ＭＳは、様々な神経障害の蓄積をもたらす可能性がある。ＭＳにおける臨床的障害は、ミエリン及び軸索の続く損失を伴い、組織萎縮につながる、度重なる炎症性損傷の結果であると推定される。
【０００５】
ＭＳは、身体症状（再発及び障害進行）、中枢神経系（ＣＮＳ）炎症、脳萎縮、及び認知機能障害において顕在化される。主症状は、限局性の感覚消失、限局性の脱力、視覚的問題、平衡失調、及び疲労を含む。性機能障害及び括約筋機能不全が起こる可能性がある。ＭＳを有する患者の約半分は、認知機能障害又はうつ病を経験する可能性がある。
【０００６】
ＭＳは、現在、多面的な疾患であると考えられており、臨床的な静止状態（寛解）の期間は、増悪の間に起こる。寛解は、長さが変動し、数年間続く可能性があるが、まれに永久的となる。
【０００７】
疾患の４つの経過は、個別に扱われる：再発寛解型（ＲＲ）多発性硬化症、二次進行型（ＳＰ）多発性硬化症、一次進行型（ＰＰ）多発性硬化症、及び進行再発型（ＰＲ）多発性硬化症。ＭＳを有する８０％を超える患者は、最初は、神経症状の臨床的増悪と共にＲＲ経過を呈し、完全である可能性のある又は完全でない可能性のある回復が後に続く（Ｌｕｂｌｉｎ及びＲｅｉｎｇｏｌｄ，Ｎｅｕｒｏｌｏｇｙ，１９９６，４６：９０７−９１１）。
【０００８】
ＲＲＭＳの間、障害の蓄積は、再発からの不完全な回復に起因する。ＲＲＭＳを有する患者の約半分は、病気の発症の１０年後に、ＳＰＭＳと呼ばれる進行型経過に移る。ＳＰ期の間、障害の悪化は、増悪の後の残存症状の蓄積に起因するが、増悪の間の潜行性の進行にも起因する（上記のＬｕｂｌｉｎ及びＲｅｉｎｇｏｌｄ）。ＭＳ患者の１０％は、疾患発症からの、症状の潜行性の進行によって特徴づけられるＰＰＭＳを有する。患者の５％未満は、ＰＲＭＳを有し、ＰＰＭＳと同じ予後を有すると考えられることが多い。別の病原性機構が、異なる患者サブグループに関与する可能性があり、疾患分類に対して広範な影響を有することが示唆されている（Ｌａｓｓｍａｎｎら，２００１，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｍｏｌ．Ｍｅｄ．，７，１１５−１２１；Ｌｕｃｃｈｉｎｅｔｔｉら，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．，２００１，１４，２５９−２６９）。
【０００９】
ＭＳ発症は、ＣＮＳ機能不全といった第１の神経症状の出現によって定義される。脳脊髄液（ＣＳＦ）分析及び磁気共鳴画像法（ＭＲＩ）における進歩は、診断プロセスを単純化し、早期診断を容易にした（Ｎｏｓｅｗｏｒｔｈｙら，Ｔｈｅ  Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，２０００，３４３，１３，９３８−９５２）。ＭＳの診断に関する国際パネルは、ＭＳの診断を容易にし、且つ臨床診断法及び臨床外診断法と共にＭＲＩを含む改訂基準を発行した（Ｍｃ  Ｄｏｎａｌｄら，２００１，Ａｎｎ．Ｎｅｕｒｏｌ．，５０：１２１−１２７）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
多発性硬化症の処置のための今のところ利用可能な処置は、疾患の症状に対して実際のところ作用するものである。その結果として、患者への、改善された臨床的利点を提供する代替治療に対する強い要望がある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
本発明は、ヒト患者における新規な治療処置又は予防処置に関する。本明細書に開示される結果は、自己免疫疾患又は脱髄疾患、特に多発性硬化症（ＭＳ）等の疾患の処置における、可溶性ＩＬ−１８Ｒαの使用を強く支持する。したがって、本発明は、自己免疫疾患又は脱髄疾患、特にＭＳの処置における使用のための可溶性ＩＬ−１８Ｒαを提供する。本発明は、ヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患、特にＭＳの症状を、治療的有効量の上述の可溶性ＩＬ−１８Ｒαを患者に対して投与することによって処置する、予防する、又は寛解させる方法をさらに提供する。
【００１２】
特定の態様では、本発明は、ＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインのすべて又は一部を含む、特にヒトＩＬ−１８Ｒα又はその変異体の細胞外ドメインのすべて又は一部を含む可溶性受容体に関する。
【００１３】
他の態様では、本発明は、配列番号２のアミノ酸残基１９〜１３２及び／又は配列番号２のアミノ酸残基１２２〜２１９及び／又は配列番号２のアミノ酸残基２１３〜３２９及び／又は上述のアミノ酸残基の変異体を含む、上記に定義される可溶性受容体に関する。
【００１４】
他の態様では、本発明は、配列番号２のアミノ酸残基１９〜２１９並びに／又は配列番号２のアミノ酸残基１２２〜３２９並びに／又はペプチド結合によって連結された配列番号２のアミノ酸残基１９〜１３２及び２１３〜３２９並びに／又は上述のアミノ酸残基の変異体を含む、上記に定義される可溶性受容体に関する。
【００１５】
他の態様では、本発明は、配列番号２のアミノ酸残基１９〜３２９及び／又は上述のアミノ酸残基の変異体を含む、上記に定義される可溶性受容体に関する。
【００１６】
他の態様では、本発明は、上記に定義される可溶性受容体に関し、上述のアミノ酸残基の上述の変異体は、上述のアミノ酸残基と少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドである。
【００１７】
本発明は、配列番号２のアミノ酸残基１９〜１３２並びに／又は配列番号２のアミノ酸残基１２２〜２１９並びに／又は配列番号２のアミノ酸残基２１３〜３２９並びに／又は配列番号２のアミノ酸残基１９〜２１９並びに／又は配列番号２の１２２〜３２９並びに／又はペプチド結合によって連結された配列番号２のアミノ酸残基１９〜１３２及び２１３〜３２９並びに／又は配列番号２のアミノ酸残基１９〜３２９並びに／又は上述のアミノ酸残基の変異体からなる少なくとも２つのサブユニットを融合タンパク質として同じタンパク質骨格上に含む、上記に定義される可溶性受容体にさらに関する。特定の実施形態では、上述のアミノ酸残基の上述の変異体は、上述のアミノ酸残基と少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドである。他の特定の実施形態では、少なくとも２つのサブユニットは同じである。
【００１８】
本発明は、さらなるアミノ酸ドメインに作動可能に連結された、上記に定義される可溶性受容体にさらに関する。
【００１９】
他の態様では、本発明は、上記に定義される可溶性受容体の多量体、特に二量体に関する。
【００２０】
他の態様では、本発明は、ＩＬ−１８Ｒβの細胞外ドメインのすべて若しくは一部を含む少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒβサブユニット又はＩＬ−１ＲａｃＰの細胞外ドメインのすべて若しくは一部を含む少なくとも１つのＩＬ−１ＲａｃＰサブユニット又はＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２の細胞外ドメインのすべて若しくは一部を含む少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２サブユニット又はＴ１／ＳＴ２の細胞外ドメインのすべて若しくは一部を含む少なくとも１つのＴ１／ＳＴ２サブユニット又はＩＬ−１Ｒ−１の細胞外ドメインのすべて若しくは一部を含む少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−１サブユニットをさらに含む、上記に定義される可溶性受容体に関する。
【００２１】
他の態様では、本発明は、医薬としての使用のための上記に定義される可溶性受容体に関する。
【００２２】
本発明は、自己免疫疾患又は脱髄疾患の処置のための医薬の製造における、上記に定義される可溶性受容体の使用にさらに関する。特定の実施形態では、上述の脱髄疾患は、多発性硬化症である。
【００２３】
他の態様では、本発明は、患者における、特にヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患の症状を処置する、予防する、又は寛解させる方法であって、患者に、治療的有効量の上記に定義される可溶性受容体を投与することを含む方法に関する。特定の実施形態では、上述の脱髄疾患は、多発性硬化症である。
【００２４】
本発明は、上記に定義される方法又は使用にさらに関し、患者は、再発寛解型（ＲＲ）多発性硬化症、二次進行型（ＳＰ）多発性硬化症、一次進行型（ＰＰ）多発性硬化症、又は進行再発型（ＰＲ）多発性硬化症に冒されている。
【００２５】
本発明は、上記に定義される方法又は使用にさらに関し、可溶性受容体は、ＭＳを処置する又は予防するための第２の治療薬と共に投与される。特定の実施形態では、可溶性受容体は、コルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンと共に投与される。他の特定の実施形態では、可溶性受容体は、インターフェロン−ベータ、好ましくはインターフェロンベータ−１ａ、さらに好ましくはＲｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ社）と共に投与される。
【００２６】
本発明は、哺乳動物患者、好ましくはヒト患者のＭＳの治療における同時の、別個の、又は順次の使用のための、上記に定義される可溶性受容体及び併用調製物としてのコルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンを含む産物にさらに関する。特定の実施形態では、インターフェロンは、インターフェロン−ベータ、好ましくはインターフェロンベータ−１ａ、さらに好ましくはＲｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ社）である。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２７】
本明細書に説明されるように、本発明者の結果は、自己免疫疾患又は脱髄疾患、特に多発性硬化症（ＭＳ）等の疾患の処置における、可溶性ＩＬ−１８Ｒαの使用を強く支持する。したがって、本発明は、自己免疫疾患又は脱髄疾患、特にＭＳの処置における使用のための可溶性ＩＬ−１８Ｒαを提供する。本発明は、ヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患、特にＭＳの症状を、治療的有効量の上述の可溶性ＩＬ−１８Ｒαを患者に対して投与することによって処置する、予防する、又は寛解させる方法をさらに提供する。
【００２８】
ＩＬ−１８受容体は、リガンド結合ＩＬ−１８Ｒαサブユニット（文献中ではＩＬ−１Ｒｒｐ又はＩＬ−１  Ｒ５とも命名されている）及びシグナル伝達ＩＬ−１８Ｒβサブユニットからなるヘテロ二量体として記載されてきた。ＩＬ−１８Ｒの下流シグナル伝達は、ＴＬＲ経路の下流シグナル伝達と同様に、ＩＲＡＫ４及びＭｙＤ８８を活性化する。ＩＬ−１８Ｒαは、リンパ球上に発現し、より最近では、アクセサリー細胞上に発現することが発見された（Ｋａｓｅｒ，Ａ．ら  Ｂｌｏｏｄ  １０３，６４８−６５５（２００４），Ｔｏｍｕｒａ，Ｍ．ら  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０，３７５９−３７６５（１９９８），Ｘｕ，Ｄ．ら  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１８８，１４８５−１４９２（１９９８），Ｙｏｓｈｉｍｏｔｏ，Ｔ．ら  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１，３４００−３４０７（１９９８））。
【００２９】
ＩＬ−１８がＩＬ−１８Ｒ複合体に結合することができることが確証されているが、ＩＬ−１８Ｒαのみへのその親和性は、弱い親和性にすぎない（Ｂｏｒａｓｃｈｉ，Ｄ．ら  Ｅｕｒ．Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｎｅｔｗ．９，２０５−２１２（１９９８），Ｔｏｒｉｇｏｅ，Ｋ．ら  Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，２５７３７−２５７４２（１９９７））。ＩＬ−１８は、Ｔ細胞によるＩＦＮ−γの産生を刺激するようＩＬ−１２と共に共同して働き、またＮＫ細胞の細胞傷害性活性を単独で刺激することができる。ＩＬ−１８及びＩＬ−１２は、ＴＨ１サイトカイン応答に向けてＴ細胞を極性化するために相乗的に作用し、これは、脳炎誘発に対する必要条件であると考えられた。
【００３０】
ＩＬ−１８−／−マウスは、ＥＡＥ抵抗性であるとして記載されてきた、またＩＬ−１８−／−マウスにおける不十分なＮＫ細胞活性化は、脳炎誘発性の免疫応答を生成することができない原因であると考えられた（Ｓｈｉ，Ｆ．Ｄ．，ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５，３０９９−３１０４（２０００））。それにもかかわらず、ＩＬ−１２の明らかな防御活性を考慮すれば、ＥＡＥにおけるＩＬ−１８の提唱された役割は、ジレンマを引き起こす（Ｃｕａ，Ｄ．Ｊ．ら  Ｎａｔｕｒｅ  ４２１，７４４−７４８（２００３），Ｂｅｃｈｅｒ，Ｂ．ら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ  １１０，４９３−４９７（２００２））。
【００３１】
本発明者は、ＥＡＥに対するＩＬ−１８−／−マウスの感受性によって推定されるように、以前に公表されたデータとは対照的に、ＩＬ−１８が、ＥＡＥにおいて明白な病原性の影響を及ぼさないことをこれから実証する。しかしながら、その提唱される受容体（ＩＬ−１８Ｒα）の欠失は、ＥＡＥ誘発に対する完全な抵抗性をもたらし、これは、脳炎誘発性の特性を有する代替リガンド（ＩＬ−１８ＲＬ）の存在を示唆する。ＩＬ−１８Ｒαに対するＩＬ−１８の親和性は、かなり乏しく、親和性の増加のためにＩＬ−１８Ｒβとのヘテロ三量体化を必要とするので、ＩＬ−１８Ｒαに対するより高い親和性を有する他のリガンドがある可能性は非常に強い。ＩＬ−１Ｒスーパーファミリー内には多くのオーファン受容体があり、これらの受容体サブユニットが互いにヘテロ二量体を形成する事実を考慮すれば、おそらく、ＩＬ−１８Ｒαは、異なる結合パートナーを有するだけではなく、異なるリガンドもまた有していそうである。
【００３２】
本発明者は、抗ＩＬ−１８Ｒα抗体を使用して、ＩＬ−１８−／−マウスにおける疾患発生を著しく減衰させることにより、本明細書でこの推定上のリガンドの性能を実証する。承認されているＩＬ−１８ＲαリガンドであるＩＬ−１８は、これらのマウス中に存在せず、それらの細胞構成要素は、抗体の注射の結果として冒されなかったことを考慮すれば、これらの結果は、上記代替ＩＬ−１８Ｒαリガンドの実在についての実質的証拠を提供する。
【００３３】
ＥＡＥの間のＴ細胞の重要性にもかかわらず、本発明者は、ＩＬ−１８Ｒαの欠失が、増大に関するＴ細胞プライミング及びＴｈ１極性化に影響を及ぼさないことを本明細書で示す。その代わりに、マイトジェンＣｏｎＡを用いて刺激した場合、ＩＬ−１８及びＩＬ−１８Ｒαは、共に、効率的なＴ細胞活性化に必要であり、これは、様々な細菌及びウイルス感染モデルにおいて観察されるように、ＩＬ−１８−／−マウスがＩＦＮγ分泌の刺激に欠陥を有するという発見に一致する。Ｔ細胞活性化のレベルでの障害の欠如に一致して、本発明者は、ｗｔ（野生型）樹状細胞、ＩＬ−１８−／−樹状細胞、又はＩＬ−１８Ｒα−／−樹状細胞（ＤＣ）と共に培養された場合にＴｃＲ  Ｔｇ  Ｔ細胞が同じ程度まで増殖したように、ＩＬ−１８Ｒα破壊が、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の活性化機能に影響を及ぼさないことを本明細書で示す。
【００３４】
ＥＡＥの終点でのＣＮＳ中の炎症細胞の不在とは対照的に、本発明者は、疾患の発症の前に、ＩＬ−１８Ｒα−／−ＣＮＳ中で、比較に値するＣＤ４＋Ｔ細胞浸潤を検出することができた。他の炎症細胞もまた、ｗｔマウス及びＩＬ−１８−／−マウスと同じ程度までＣＮＳを浸潤した。したがって、ＩＬ−１８Ｒα欠損は、ＣＮＳ中への免疫細胞の侵入に影響を及ぼさないが、存続するためのそれらの能力に影響を及ぼすにちがいない。興味深いことには、随伴性ＥＡＥ感受性を伴わない、ＩＬ−１８Ｒα−／−ＣＮＳ中の炎症性浸潤物の存在は、ＩＬ−２３−／−マウスにおいて起こる応答に似ている。
【００３５】
本発明者は、ＩＬ−１８Ｒα−／−ＫＬＨリコールリンパ球によるＩＬ−１７産生を分析し、ＲＮＡ及びタンパク質の両レベルでＩＬ−１７の産生における著しい減少が実際にあることを実証する。したがって、ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスのＥＡＥに対する抵抗性は、ＴＨＩＬ−１７発生が不十分である結果として説明することができるかもしれない。
【００３６】
ＴＨＩＬ−１７細胞の欠如は、Ｔ細胞のこの亜集団上のＩＬ−１８Ｒα発現の不在に起因したように思われた。しかしながら、ＢＭ−キメラの生成により、ＲＡＧ−／−ＢＭ細胞の存在下でのみ、ＩＬ−１８Ｒα−／−マウス（ＲＡＧ−／−＋ＩＬ−１８Ｒα−／−＞ｗｔ）のＥＡＥに対する感受性をよみがえらせることができたことを実証したように、これは事実ではなかった。ＩＬ−１８Ｒα−／−＞ｗｔマウスは、他方、疾患誘発に対して抵抗性であった。したがって、ＩＬ−１８Ｒαの存在は、非リンパ球白血球上で必要とされ、前ＴＨＩＬ−１７細胞上に直接位置しない。さらに、アクセサリー細胞上のＩＬ−１８Ｒαの重要性は、脳炎誘発性ｗｔ  Ｔ細胞が、ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスにおいてＥＡＥを誘発することができなかった養子移入実験において強められた。
【００３７】
要約すると、本発明者は、ＥＡＥにおけるＩＬ−１８の非病原性の役割を実証することにより、ＭＳ及びＥＡＥのＴＨ１仮説を反駁する証拠を示す。しかしながら、対照的に、いわゆるＩＬ−１８Ｒαは、ＥＡＥの発生にとって決定的であり、したがって代替ＩＬ−１８Ｒα結合リガンドの存在を暗示するものであり、これを、本発明者は、抗ＩＬ−１８Ｒα抗体を用いてＩＬ−１８−／−マウスを処置し、それによってＥＡＥ重症度を減じることにより、確認することができた。あるいは、本発明者は、ＩＬ−１８Ｒαシグナル伝達が脳炎誘発性ＴＨＩＬ−１７細胞の発生にとって決定的なことを示し、それによって、ＭＯＧ３５−５５に誘発されるＥＡＥに対するＩＬ−１８Ｒα−／−マウスの抵抗性を説明する。
【００３８】
本明細書に説明されるように、本発明の発明者は、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストが疾患を処置するためにｉｎ  ｖｉｖｏで有効であることを発見した。さらに、ＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストはまた、ＭＳのマウスモデルにおいて既に確立された疾患の進行をも阻害した。
【００３９】
上記本明細書及び本出願の実施例で開示される結果は、本発明にとって、部分的に基礎となる。これらの結果は、自己免疫疾患又は脱髄疾患、特にＭＳの処置における可溶性ＩＬ−１８Ｒαの使用を強く支持する。したがって、本発明は、自己免疫疾患又は脱髄疾患、特にＭＳの処置における使用のための可溶性ＩＬ−１８Ｒαを提供する。本発明は、ヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患、特にＭＳの症状を、治療的有効量の上述の可溶性ＩＬ−１８Ｒαを患者に対して投与することによって処置する、予防する、又は寛解させる方法をさらに提供する。
【００４０】
本明細書に使用されるように、化合物の「治療的有効量」は、自己免疫疾患又は脱髄疾患、特にＭＳ又はその症状を処置する、寛解させる、又は予防するのに有効な、化合物の最小限の量を意味する。本発明は、さらに、自己免疫疾患又は脱髄疾患、特にＭＳの処置のための医薬の製造における、上述の可溶性ＩＬ−１８Ｒαの使用に関する。
【００４１】
本発明のいくつかの実施形態では、処置するための疾患は、再発寛解型（ＲＲ）ＭＳ、二次進行型（ＳＰ）ＭＳ、一次進行型（ＰＰ）ＭＳ、又は進行再発型（ＰＲ）ＭＳである。
【００４２】
本明細書に説明されるように、本発明の発明者は、ＩＬ−１８Ｒαのアンタゴニストが疾患を処置するためにｉｎ  ｖｉｖｏで有効であることを発見した。本発明者によって得られたデータは、ＩＬ−１８Ｒαの阻害が、ＩＬ−１８に無関係の様式で、自己免疫疾患又は脱髄疾患、特にＭＳを処置するのに有効であることを強く支持する。したがって、本発明の実施形態では、自己免疫疾患又は脱髄疾患、特にＭＳを処置するために使用される本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒαは、単にＩＬ−１８活性を阻害するものではない。ＩＬ−１８結合タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ、ＰＣＴ国際公開第９９／０９０６３号に記載される）は、本発明による可溶性ＩＬ−１８Ｒαと考えられない。
【００４３】
本発明は、さらに、医薬としての使用のための上記又は下記の可溶性ＩＬ−１８Ｒαのいずれかに関する。
【００４４】
本発明の特定の実施形態では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒαは、抗原提示細胞中の、より具体的には単核食細胞、多核食細胞、樹状細胞、及びナチュラルキラー細胞からなる群から選択される抗原提示細胞中のＩＬ−１８Ｒαの活性を阻害することができる。
【００４５】
本発明の実施形態では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒαは、ＩＬ−１７産生ＴＨ細胞の発生を阻害することができる。
【００４６】
ヒトＩＬ−１８ＲαをコードするｃＤＮＡは、配列番号１に示される。このｃＤＮＡは、５４１個のアミノ酸長のタンパク質（配列番号２）をコードし、このタンパク質は、１８個のアミノ酸のシグナルペプチド（配列番号２の残基１〜１８）を含む、３２９個のアミノ酸の細胞外ドメイン（配列番号２の残基１〜３２９）、２１個のアミノ酸の膜貫通領域（配列番号２の残基３３０〜３５０）、及び配列番号２のアミノ酸３５１〜５４１からの細胞質ドメインを含む。
【００４７】
１）可溶性ＩＬ−１８Ｒα：
本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒαは、ＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインのすべて又は一部を含む可溶性受容体である。特に、本発明の可溶性受容体は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はその変異体の細胞外ドメインのすべて又は一部を含む可溶性受容体である。上記可溶性受容体は、患者、好ましくはヒト患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患、特にＭＳの症状を処置する、予防する、又は寛解させるために使用される。
【００４８】
「可溶性受容体」は、細胞膜に結合しない受容体ポリペプチドである。可溶性受容体は、膜貫通ドメインの一部又はすべてを欠き、また細胞表面でのポリペプチドの保持を引き起こすであろう、たとえばグリコホスホイノシトール（ｇｐｉ）を介した細胞膜に対する他の結合を欠く、最も共通した受容体ポリペプチドである。可溶性受容体は、ポリペプチドが、ポリペプチドを産生する細胞から分泌される限り、膜貫通ドメインの一部及び／又は細胞質ドメインのすべて若しくは一部を含むものであってもよい。可溶性受容体は、後に本明細書で記載されるように、ポリペプチドの精製を提供する若しくは基質に対するポリペプチドの付着のための部位を提供する、親和性タグ等のさらなるアミノ酸残基、又は免疫グロブリン定常領域配列を含むことができる。可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体は、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。
【００４９】
ＩＬ−１８Ｒαは、いわゆるＩＬ−１Ｒファミリーのメンバーであり、３つの免疫グロブリン様ドメイン（Ｉｇドメイン）を含む細胞外ドメインを所有する。
【００５０】
ＩＬ−１８Ｒαサブユニット及びその変異体（後に本明細書で「Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）」と命名される）：
一態様では、本発明の可溶性受容体（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα））は、配列番号２のアミノ酸残基１９〜３２９又は上述のポリペプチドの変異体を含む又はそれからなる可溶性ＩＬ−１８Ｒαである。通常、変異体ポリペプチドは、少なくとも２７５個のアミノ酸長であり、少なくとも３００個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも３１１個のアミノ酸長であることがより多い。変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号２の残基１９〜３２９）と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドとして定義される。より好ましくは、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号２の残基１９〜３２９）と、５個だけ、より好ましくは４個だけ、さらに好ましくは３個だけ、さらに好ましくは２個だけ、最も好ましくは１個だけアミノ酸が異なっている。本発明のいくつかの特定の態様では、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号２の残基１９〜３２９）と、Ｎ末端及び／又はＣ末端で、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個のアミノ酸の欠如分だけ異なっている。遺伝子コードを使用する当業者は、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを容易に決定することができる。参考のポリペプチド配列に関しての「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、いかなる保存的置換をも配列同一性の一部として考えないで、配列を整列させ、必要ならば、最大の配列同一性パーセントを達成するために、ギャップを導入した後、参考の配列のアミノ酸残基と同一である、配列候補中のアミノ酸残基の百分率として定義される。アミノ酸配列同一性パーセントを決定する目的のためのアラインメントは、当分野の技術の範囲内にある様々な方法で、たとえば、ＢＬＡＳＴ等の公的に入手可能なコンピュータソフトウェアを使用して達成することができる（Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ＳＦ，Ｇｉｓｈ  Ｗ，Ｍｉｌｌｅｒ  Ｗ，Ｍｙｅｒｓ  ＥＷ，Ｌｉｐｍａｎ  ＤＪ．Ｊ  Ｍｏｔ  Ｂｉｏｌ．（１９９０）．２１５（３）：４０３−４１０）。当業者は、比較されている配列の完全長に対する最大のアラインメントを達成するために必要とされる任意のアルゴリズムを含む、アラインメントを判断するための適切なパラメータを決定することができる。
【００５１】
他の実施形態では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）は、配列番号２のアミノ酸残基１９〜２１９若しくは１２２〜３２９若しくはペプチド結合によって連結された１９〜１３２及び２１３〜３２９を含む若しくはそれからなるポリペプチド又は上述のポリペプチドの変異体である。通常、変異体ポリペプチドは、少なくとも１８０個のアミノ酸長であり、少なくとも２０１個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも２０８個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも２３１個のアミノ酸長であることがより多い。変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号２の残基１９〜２１９又は１２２〜３２９又はペプチド結合によって連結された１９〜１３２及び２１３〜３２９）と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドとして定義される。より好ましくは、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号２の残基１９〜２１９又は１２２〜３２９又はペプチド結合によって連結された１９〜１３２及び２１３〜３２９）と、５個だけ、より好ましくは４個だけ、さらに好ましくは３個だけ、さらに好ましくは２個だけ、最も好ましくは１個だけアミノ酸が異なっている。本発明のいくつかの特定の態様では、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号２の残基１９〜２１９又は１２２〜３２９又はペプチド結合によって連結された１９〜１３２及び２１３〜３２９）と、Ｎ末端及び／又はＣ末端で、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個のアミノ酸の欠如分だけ異なっている。遺伝子コードを使用する当業者は、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを容易に決定することができる。「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、本明細書で上記のように定義される。
【００５２】
他の実施形態では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）は、配列番号２のアミノ酸残基１９〜１３２若しくは１２２〜２１９若しくは２１３〜３２９を含む若しくはそれからなるポリペプチド又は上述のポリペプチドの変異体である。通常、変異体ポリペプチドは、少なくとも９０個のアミノ酸長であり、少なくとも９８個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも１１４個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも１１７個のアミノ酸長であることがより多い。変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号２の残基１９〜１３２又は１２２〜２１９又は２１３〜３２９）と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドとして定義される。より好ましくは、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号２の残基１９〜１３２又は１２２〜２１９又は２１３〜３２９）と、５個だけ、より好ましくは４個だけ、さらに好ましくは３個だけ、さらに好ましくは２個だけ、最も好ましくは１個だけアミノ酸が異なっている。本発明のいくつかの特定の態様では、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号２の残基１９〜１３２又は１２２〜２１９又は２１３〜３２９）と、Ｎ末端及び／又はＣ末端で、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個のアミノ酸の欠如分だけ異なっている。遺伝子コードを使用する当業者は、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを容易に決定することができる。「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、本明細書で上記のように定義される。
【００５３】
同じタンパク質骨格上に少なくとも２つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット又はその変異体を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα（「Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ」と後に本明細書で命名される）：
本発明の特定の態様では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体は、少なくとも２つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット又はその変異体（つまり、本明細書で上記に定義される少なくとも２つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット）を融合タンパク質として同じタンパク質骨格上に含む可溶性受容体である。特定の実施形態では、融合タンパク質は、２つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニットを含む。他の特定の実施形態では、少なくとも２つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニットは、同じであり（つまり、融合タンパク質はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）のホモ多量体であり）、特定の実施形態では、融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）のホモ二量体である。
【００５４】
少なくとも２つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα））は、互いに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、サブユニットがペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」を介して結びつけられることを示す。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。サブユニットは、直接又は「ペプチドリンカー」を介して連結される。ペプチドリンカーは、サブユニット間に導入された１〜３個のアミノ酸残基長ほどの短いものとすることができる（好ましくは、グリシン、セリン、トレオニン、又はアラニン等の小さなアミノ酸からなる）又はより長く、たとえば１３、１５、若しくは１６個のアミノ酸残基長とすることができる。好ましくは、ペプチドリンカーは、免疫学的に非活性であるペプチドである。上述のリンカーは、配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチド（配列番号１３）、たとえば、Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔからなる１３個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１４）、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１５）、ＧＧＳＧＧ  ＳＧＧＧＧ  ＳＧＧＧＧ  Ｓからなる１６個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１６）、又はヒトＩｇＧ（たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のヒンジ領域であってもよい。
【００５５】
融合タンパク質としての可溶性ＩＬ−１８Ｒα（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）：
本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体は、融合タンパク質を含む。したがって、本発明は、さらに、さらなるアミノ酸ドメインに作動可能に連結された、本明細書で上記に記載される少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニットまたその変異体を含むタンパク質（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）に関する。さらなるアミノ酸ドメインは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘの配列の上流に（Ｎ末端）又は下流に（Ｃ末端）位置させてもよい。さらなるドメインは、たとえば融合タンパク質の安定性、ターゲティング、若しくは生物学的利用能の増加を提供する、精製若しくは産生を容易にする、又は分子にさらなる生物活性を付与する任意の機能領域を含んでいてもよい。上記のさらなるアミノ酸配列の特定の例は、ＧＳＴ配列、Ｈｉｓタグ配列、多量体化ドメイン、免疫グロブリン分子の定常領域、又は米国特許第６，１９３，９７２号に記載されるヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）等のヘテロ二量体タンパク質ホルモンを含む。用語「作動可能に連結された」は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ及びさらなるアミノ酸ドメインが、ペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。また、必要な場合、融合タンパク質中に含まれるさらなるアミノ酸配列は、産生／精製プロセスの終了時に又はｉｎ  ｖｉｖｏで、たとえば適切なエンド／エキソペプチダーゼによって取り除かれてもよい。たとえば、融合タンパク質に含まれるスペーサー配列は、ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで、酵素の開裂によって、さらなるアミノ酸ドメインから所望のポリペプチド変異体を分離するために使用することができる、エンドペプチダーゼ（カスパーゼ等）のための認識部位を含んでいてもよい。
【００５６】
Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘの多量体：
本発明の特定の態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ（本明細書で上記に定義される）は、多量体として産生される。多量体の各サブユニットは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘを含む又はそれからなる。これらの多量体は、ホモ二量体可溶性受容体、ヘテロ二量体可溶性受容体、又は多量体可溶性受容体であってもよく、多量体受容体は、一般に、９個を超えるサブユニットを含まない、好ましくは６個を超えるサブユニットを含まない、さらに好ましくは３個を超えるサブユニットを含まない、最も好ましくは２個を超えるサブユニットを含まない。好ましくは、これらの多量体可溶性受容体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘのホモ二量体である。一実施形態では、多量体のサブユニットは、共有結合を介して連結される。サブユニットは、架橋試薬又はポリペプチドリンカーを介する等での任意の適した手段によって共有結合で連結されてもよい。他の実施形態では、サブユニットは、非共有結合を介して連結される。
【００５７】
一実施形態では、サブユニットは、サブユニットの多量体化を提供するさらなるアミノ酸ドメインに作動可能に連結される（特に、さらなるドメインは、サブユニットの二量体化を提供する任意の機能領域を含む）。用語「作動可能に連結された」は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ及びさらなるアミノ酸ドメインが、ペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。さらなるアミノ酸ドメインは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘの配列の上流に（Ｎ末端）又は下流に（Ｃ末端）位置させてもよい。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。これらの実施形態では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）成分及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ成分並びに二量体等の高次構造を形成するために他の融合タンパク質中に存在する多量体形成成分と相互作用することができる多量体形成成分を含有する融合タンパク質の多量体である。この種類の融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）配列及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ配列（上記に定義される）を、二量体、三量体等の形成を可能にする、他のタンパク質から単離されたドメインに作動可能に連結することにより調製されてもよい。本発明のＩＬ−１８Ｒα可溶性受容体の多量体化を可能にするタンパク質配列についての例は、免疫グロブリン、ｈＣＧ（国際公開第９７／３０１６１号）、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【００５８】
特定の態様では、多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘの二量体であり、サブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）は、免疫グロブリンに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ並びに免疫グロブリンが、ペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。この実施形態では、サブユニットは、免疫グロブリン、詳細にはヒト免疫グロブリン、さらに詳細にはヒト免疫グロブリンのＦｃ部分のすべて又は一部に作動可能に連結される。典型的に、ヒト免疫グロブリンのＦｃ部分は、２つの定常領域ドメイン（ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン）及び１つのヒンジ領域を含有するが、可変領域を欠く（たとえば米国特許第６，０１８，０２６号及び第５，７５０，３７５号を参照されたい）。免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ並びに任意のサブクラス又はアイソタイプ、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４；ＩｇＡ−１及びＩｇＡ−２を含む免疫グロブリンの主要なクラスのいずれかから選択されてもよい。一実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ４であり、ヒトＩｇＧ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。他の実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ１である。Ｆｃ部は、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異させてもよい。普通、サブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）は、同じ免疫グロブリンに作動可能に連結される（詳細にはヒト免疫グロブリン、たとえばヒトＩｇＧ４又はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に対して）。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。上記融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡ及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて細胞を形質移入し、同じ細胞中で二量体を発現させることにより調製することができる。特定の実施形態では、サブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘは、各単量体に関して同じである（つまり二量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘのホモ二量体である）。さらに詳細には、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘのサブユニットは、同じ免疫グロブリンに作動可能に連結される（詳細にはヒト免疫グロブリン、たとえばヒトＩｇＧ４又はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に対して）。上記融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡ又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて細胞を形質移入し、同じ細胞中で二量体を発現させることにより調製することができる。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシ��ナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。たとえばＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌ．４，ｐａｇｅｓ  １０．１９．１−１０．１９．１１，１９９２中のＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈ及びＡｒｕｆｆｏ「免疫グロブリン融合タンパク質の構築」（Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）又は国際公開第０１／０３７３７号に記載されている方法等の、免疫グロブリン融合タンパク質を作製するための方法は、当技術分野でよく知られている。
【００５９】
あるいは、本発明のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘの二量体は、受容体サブユニットのうちの一方を免疫グロブリン重鎖の定常領域に作動可能に連結し、他方の受容体サブユニットを免疫グロブリン軽鎖の定常領域に作動可能に連結することによって調製することができる。用語「作動可能に連結された」は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ並びに免疫グロブリンが、ペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。たとえば、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３領域に作動可能に連結することができ、別の又は同じＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、Ｉｇカッパ軽鎖のＣカッパ領域に作動可能に連結することができる。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。免疫グロブリン軽鎖融合タンパク質及び免疫グロブリン重鎖融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質移入された細胞は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットをそれぞれ含有する重鎖／軽鎖ヘテロ二量体を発現する。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。特定の実施形態では、サブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘは、各単量体に関して同じである（つまり二量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘのホモ二量体である）。
【００６０】
本発明の他の特定の態様では、多量体Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘのサブユニット（本明細書で上記に定義される）は、非共有結合を介して連結される。サブユニットの非共有結合は、その生物活性（つまりＭＳの症状を低下させるためのその能力）を妨害しない任意の適した手段によって達成されてもよい。特定の態様では、これらの多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘの二量体であり、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘのうちの一方のサブユニットは、第１の化合物に作動可能に連結され、別の又は同じサブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘは、第１の化合物に非共有結合するであろう第２の化合物に作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。上記化合物の例は、ビオチン及びアビジンである。Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘの二量体は、受容体サブユニットのうちの一方をビオチンに作動可能に連結し、他方の受容体サブユニットをアビジンに作動可能に連結することにより調製することができる。したがって、受容体は、アビジンとのビオチンの非共有相互作用を通して形成される。他の例は、ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットを含む。これらの実施形態では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘの一方のサブユニットをコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンの一方のサブユニットをコードするＤＮＡ構築物に対して融合され、他方のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットをコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンの他方のサブユニットをコードするＤＮＡに対して融合される（米国特許第６，１９３，９７２号に開示されるように）。これらのＤＮＡ構築物は、同じ細胞中で同時発現され、各同時発現する配列が、発現に際してヘテロ二量体を形成するように、対応するホルモンサブユニットを含有するので、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘヘテロ二量体受容体融合タンパク質の発現につながる。ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンに由来するアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。特定の実施形態では、サブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘは、各単量体に関して同じである（つまり二量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘのホモ二量体である）。
【００６１】
Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットの二量体化を可能にするタンパク質配列についての他の例は、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【００６２】
本発明の特定の態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘの多量体は、組換え抗体である。組換え抗体の技術は、たとえば米国特許第６，０１８，０２６号に記載される。その場合、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘの多量体は、第１のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖並びに第２のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖を含む多量体ポリペプチド融合物であり、第１のポリペプチド鎖は、免疫グロブリン重鎖定常領域に作動可能に連結され、第２のポリペプチド鎖は、免疫グロブリン軽鎖定常領域に作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ並びに免疫グロブリン重鎖又は軽鎖定常領域が、ペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。一実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域ドメイン及び免疫グロブリン軽鎖定常領域ドメインは、ヒト免疫グロブリン定常領域である。一実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域ドメインは、α、γ、μ、δ、又はεヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域からなる群から選択される。好ましくは、上述の定常領域は、γ１、γ２、γ３、又はγ４ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である。好ましい実施形態では、免疫グロブリン軽鎖定常領域ドメインは、κ又はλヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域からなる群から選択される。免疫グロブリンからのアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。免疫グロブリン軽鎖融合タンパク質及び免疫グロブリン重鎖融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質移入された細胞は、抗体の構造を有する融合タンパク質：Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の重鎖定常領域及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘに作動可能に連結された２つの同一の軽鎖定常領域からなるタンパク質を発現する。抗体に関しては、重鎖及び軽鎖は、ジスルフィドで連結され（鎖間ジスルフィド結合）、重鎖どうしは、ジスルフィドで連結される（鎖間ジスルフィド結合）。したがって、結果として生じる分子は、２つのヘテロ二量体から構成されるホモ二量体であり、これらのヘテロ二量体のそれぞれは、
−第１のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン重鎖定常領域及び
第２のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン軽鎖定常領域から構成される。
両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。特定の実施形態では、サブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘは、軽鎖及び重鎖上で同じである（つまり組換え抗体は、同じである４つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットから構成される）。
一実施形態では、定常重鎖は、ヒトγ４であり、ヒトγ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。他の実施形態では、定常重鎖は、ヒトγ１である。定常重鎖は、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異させてもよい。
【００６３】
１．一実施形態では、本発明の組換え抗体は、
−  ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに作動可能に連結された、γ１、γ２、γ３、又はγ４ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である２つの同一の重鎖定常領域及び
−  ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに作動可能に連結された、κ又はλヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域である２つの同一の軽鎖定常領域を含む又はそれらからなる。一実施形態では、天然抗体に関しては、重鎖及び軽鎖は、ジスルフィドで連結され（鎖間ジスルフィド結合）、重鎖どうしは、ジスルフィドで連結される（鎖間ジスルフィド結合）。
【００６４】
２．他の実施形態では、本発明は、上記第１項に定義される組換え抗体に関し、重鎖の定常領域は、γ１ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である。
【００６５】
３．他の実施形態では、本発明は、上記第１又は２項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖の定常領域は、κヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域である。
【００６６】
４．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、又は３項に定義される組換え抗体に関し、重鎖に作動可能に連結されたヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインは、本明細書で上記に定義される配列番号２のアミノ酸残基１９〜３２９又は上述のポリペプチドの変異体からなる。
【００６７】
５．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、又は４項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖に作動可能に連結されたヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインは、本明細書で上記に定義される配列番号２のアミノ酸残基１９〜３２９又は上述のポリペプチドの変異体からなる。
【００６８】
６．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、又は５項に定義される組換え抗体に関し、重鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに対して、ペプチド結合を通して直接結びつけられる。
【００６９】
７．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４，５、又は６項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに対して、ペプチド結合を通して直接結びつけられる。
【００７０】
８．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、又は５項に定義される組換え抗体に関し、重鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに対して、ペプチドリンカーを介して、ペプチド結合を通して結びつけられる。ペプチドリンカーは、サブユニット間に導入された１〜３個のアミノ酸残基長ほどの短いものとすることができる（好ましくは、グリシン、セリン、トレオニン、又はアラニン等の小さなアミノ酸からなる）又はより長く、たとえば１３、１５、若しくは１６個のアミノ酸残基長とすることができる。好ましくは、ペプチドリンカーは、免疫学的に非活性であるペプチドである。上述のリンカーは、配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチド（配列番号１３）、たとえば、Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔからなる１３個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１４）、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１５）、ＧＧＳＧＧ  ＳＧＧＧＧ  ＳＧＧＧＧ  Ｓからなる１６個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１６）、又はヒトＩｇＧ（たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のヒンジ領域であってもよい。一実施形態では、上述のペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列である（配列番号１５）。
【００７１】
９．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、又は８項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに対して、ペプチドリンカーを介して、ペプチド結合を通して結びつけられる。ペプチドリンカーは、サブユニット間に導入された１〜３個のアミノ酸残基長ほどの短いものとすることができる（好ましくは、グリシン、セリン、トレオニン、又はアラニン等の小さなアミノ酸からなる）又はより長く、たとえば１３、１５、若しくは１６個のアミノ酸残基長とすることができる。好ましくは、ペプチドリンカーは、免疫学的に非活性であるペプチドである。上述のリンカーは、配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチド（配列番号１３）、たとえば、Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔからなる１３個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１４）、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１５）、ＧＧＳＧＧ  ＳＧＧＧＧ  ＳＧＧＧＧ  Ｓからなる１６個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１６）、又はヒトＩｇＧ（たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のヒンジ領域であってもよい。一実施形態では、上述のペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列である（配列番号１５）。
【００７２】
１０．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、又は９項に定義される組換え抗体に関し、定常重鎖は、ヒトγ４であり、ヒトγ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。
【００７３】
１１．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、又は９項に定義される組換え抗体に関し、定常重鎖は、ヒトγ１であり、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異される。
【００７４】
１２．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、又は１１項に定義される組換え抗体に関し、重鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインのＣ末端又はＮ末端、好ましくはＣ末端に対して作動可能に連結される。
【００７５】
１３．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインのＣ末端又はＮ末端、好ましくはＣ末端に対して作動可能に連結される。
【００７６】
１４．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、又は１３項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインは、重鎖定常領域のＣ末端又はＮ末端、好ましくはＮ末端に対して作動可能に連結される。
【００７７】
１５．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインは、軽鎖定常領域のＣ末端又はＮ末端、好ましくはＮ末端に対して作動可能に連結される。
【００７８】
また、必要な場合、本明細書に記載される融合タンパク質は、精製又は産生を容易にする任意の機能領域を含んでいてもよい。上記のさらなるアミノ酸配列の特定の例は、ＧＳＴ配列又はＨｉｓタグ配列を含む。
【００７９】
２）少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）並びに少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒβサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα：
本発明の特定の態様では、自己免疫疾患又は脱髄疾患の症状、特にＭＳを処置する、予防する、又は寛解させるために使用される可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体は、少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（本明細書で上記に定義されるＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）並びに後に本明細書で定義される少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒβサブユニットを含む可溶性受容体である。用語「可溶性受容体」は、上記に定義される。
【００８０】
ＩＬ−１８Ｒβ（文献中でＡｃＰＬ、ＩＬ−１８ＲαｃＰ、ＩＬ−１ＲａｃＰＬ、又はＩＬ−１Ｒ７とも命名される）は、ＩＬ−１受容体ファミリーのメンバーであり、３つの免疫グロブリン様ドメイン（Ｉｇドメイン）を含む細胞外ドメインを所有する。ヒトＩＬ−１８ＲβをコードするｃＤＮＡは、配列番号３に示される。このｃＤＮＡは、５９９個のアミノ酸長のタンパク質（配列番号４）をコードし、このタンパク質は、１９個のアミノ酸のシグナルペプチド（配列番号４の残基１〜１９）を含む、３５６個のアミノ酸の細胞外ドメイン（配列番号４のＮ末端からＣ末端までの残基１〜３５６）、２１個のアミノ酸の膜貫通領域（残基３５７〜３７７）、及び２２２個のアミノ酸の細胞質ドメイン（残基３７８〜５９９）を含む。
【００８１】
２．１  ＩＬ−１８Ｒβサブユニット及びその変異体（「Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）」と後に本明細書で命名される）：
一態様では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体のＩＬ−１８Ｒβサブユニットは、ＩＬ−１８Ｒβの細胞外ドメインのすべて又は一部、特にヒトＩＬ−１８Ｒβ又はその変異体の細胞外ドメインのすべて又は一部を含むポリペプチドである。
【００８２】
一態様では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体のＩＬ−１８Ｒβサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ））は、配列番号４のアミノ酸残基２０〜３５６を含む若しくはそれからなるポリペプチド又は上述のポリペプチドの変異体である。通常、変異体ポリペプチドは、少なくとも３００個のアミノ酸長であり、少なくとも３２５個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも３３７個のアミノ酸長であることがより多い。変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号４の残基２０〜３５６）と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドとして定義される。より好ましくは、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号４の残基２０〜３５６）と、５個だけ、より好ましくは４個だけ、さらに好ましくは３個だけ、さらに好ましくは２個だけ、最も好ましくは１個だけアミノ酸が異なっている。本発明のいくつかの特定の態様では、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号４の残基２０〜３５６）と、Ｎ末端及び／又はＣ末端で、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個のアミノ酸の欠如分だけ異なっている。遺伝子コードを使用する当業者は、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを容易に決定することができる。「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、本明細書で上記のように定義される。
【００８３】
他の実施形態では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）は、配列番号４のアミノ酸残基２０〜２５０若しくは１４０〜３５６若しくはペプチド結合によって連結された２０〜１４８及び２３６〜３５６を含む若しくはそれからなるポリペプチド又は上述のポリペプチドの変異体である。通常、変異体ポリペプチドは、少なくとも２００個のアミノ酸長であり、少なくとも２１７個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも２３１個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも２５０個のアミノ酸長であることがより多い。変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号４の残基２０〜２５０又は１４０〜３５６又はペプチド結合によって連結された２０〜１４８及び２３６〜３５６）と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドとして定義される。より好ましくは、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号４の残基２０〜２５０又は１４０〜３５６又はペプチド結合によって連結された２０〜１４８及び２３６〜３５６）と、５個だけ、より好ましくは４個だけ、さらに好ましくは３個だけ、さらに好ましくは２個だけ、最も好ましくは１個だけアミノ酸が異なっている。本発明のいくつかの特定の態様では、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号４の残基２０〜２５０又は１４０〜３５６又はペプチド結合によって連結された２０〜１４８及び２３６〜３５６）と、Ｎ末端及び／又はＣ末端で、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個のアミノ酸の欠如分だけ異なっている。遺伝子コードを使用する当業者は、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを容易に決定することができる。「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、本明細書で上記のように定義される。
【００８４】
他の実施形態では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）は、配列番号４のアミノ酸残基２０〜１４８若しくは１４０〜２５０若しくは２３６〜３５６を含む若しくはそれからなるポリペプチド又は上述のポリペプチドの変異体である。通常、変異体ポリペプチドは、少なくとも１００個のアミノ酸長であり、少なくとも１１１個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも１２１個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも１２９個のアミノ酸長であることがより多い。変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号４の残基２０〜１４８又は１４０〜２５０又は２３６〜３５６）と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドとして定義される。より好ましくは、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号４の残基２０〜１４８又は１４０〜２５０又は２３６〜３５６）と、５個だけ、より好ましくは４個だけ、さらに好ましくは３個だけ、さらに好ましくは２個だけ、最も好ましくは１個だけアミノ酸が異なっている。本発明のいくつかの特定の態様では、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号４の残基２０〜１４８又は１４０〜２５０又は２３６〜３５６）と、Ｎ末端及び／又はＣ末端で、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個のアミノ酸の欠如分だけ異なっている。遺伝子コードを使用する当業者は、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを容易に決定することができる。「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、本明細書で上記のように定義される。
【００８５】
２．２  同じタンパク質骨格上に少なくとも２つのＩＬ−１８Ｒβサブユニット又はその変異体を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒβ（後に本明細書で「Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ」と命名される）：
後に本明細書で記載されるように、本発明は、他の態様の中で、少なくとも２つのＩＬ−１８Ｒβサブユニット（少なくとも２つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ））を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体に関する。少なくとも２つのＩＬ−１８Ｒβサブユニット（つまり本明細書で上記に定義される少なくとも２つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）サブユニット）を含むこれらの可溶性ＩＬ−１８Ｒβは、融合タンパク質として同じタンパク質骨格上にあり、後に本明細書で「Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ」と命名される。特定の実施形態では、融合タンパク質は、２つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）サブユニットを含む。他の特定の実施形態では、少なくとも２つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）サブユニットは、同じであり（つまり融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）のホモ多量体であり）、特定の実施形態では、融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）のホモ二量体である。
【００８６】
少なくとも２つのＩＬ−１８Ｒβサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ））は、互いに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、サブユニットがペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」を介して結びつけられることを示す。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。サブユニットは、直接又は「ペプチドリンカー」を介して連結される。ペプチドリンカーは、サブユニット間に導入された１〜３個のアミノ酸残基長ほどの短いものとすることができる（好ましくは、グリシン、セリン、トレオニン、又はアラニン等の小さなアミノ酸からなる）又はより長く、たとえば１３、１５、若しくは１６個のアミノ酸残基長とすることができる。好ましくは、ペプチドリンカーは、免疫学的に非活性であるペプチドである。上述のリンカーは、配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチド（配列番号１３）、たとえば、Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔからなる１３個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１４）、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１５）、ＧＧＳＧＧ  ＳＧＧＧＧ  ＳＧＧＧＧ  Ｓからなる１６個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１６）、又はヒトＩｇＧ（たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のヒンジ領域であってもよい。
【００８７】
２．３  少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒβサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα：
本明細書で上記に開示されるように、本発明は、他の態様の中で、少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（本明細書で上記に定義されるＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒβサブユニット（本明細書で上記に定義されるＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体に関する。
【００８８】
２．３．１  同じタンパク質骨格上に少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒβサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα（後に本明細書で「Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ」と命名される）：
本発明の一態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘは、融合タンパク質として同じタンパク質骨格上にある（これらの可溶性受容体は、後に本明細書で「Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ」と命名されることとなる）。この実施形態によれば、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニットに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、サブユニットがペプチド連結を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニットに対して、上流に（タンパク質のＮ末端に対してより近くに）又は下流に（タンパク質のＣ末端に対してより近くに）位置させることができる。サブユニットは、直接又は「ペプチドリンカー」を介して連結される。特定の実施形態では、融合タンパク質は、本明細書に定義される１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット及び１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）サブユニットを含む。
【００８９】
２．３．２  少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒβサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８β）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ）を融合タンパク質として同じタンパク質骨格上に含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ）：
他の特定の態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニットを含む融合タンパク質（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ）は、それ自体、さらなるアミノ酸ドメインに「作動可能に連結される」。用語「作動可能に連結された」は、さらなるアミノ酸ドメインが、ペプチド結合を通して、直接又は本明細書で上記に定義される「ペプチドリンカー」を介して結びつけられることを示す。この様式では、この融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。さらなるアミノ酸ドメインは、（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ）に対して、上流（Ｎ末端）又は下流（Ｃ末端）に位置させてもよい。この実施形態では、さらなるアミノ酸ドメインは、たとえば融合タンパク質の安定性、ターゲティング、若しくは生物学的利用能の増加を提供する、精製若しくは産生を容易にする、又は分子にさらなる生物活性を付与する任意の機能領域を含む。上記のさらなるアミノ酸配列の特定の例は、ＧＳＴ配列、Ｈｉｓタグ配列、免疫グロブリン分子の定常領域、又は米国特許第６，１９３，９７２号に記載されるヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）等のヘテロ二量体タンパク質ホルモンを含む。また、必要な場合、融合タンパク質中に含まれるさらなるアミノ酸配列は、産生／精製プロセスの終了時に又はｉｎ  ｖｉｖｏで、たとえば適切なエンド／エキソペプチダーゼによって取り除かれてもよい。たとえば、融合タンパク質に含まれるスペーサー配列は、ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで、酵素の開裂によって、さらなるアミノ酸ドメインから所望のポリペプチド変異体を分離するために使用することができる、エンドペプチダーゼ（カスパーゼ等）のための認識部位を含んでいてもよい。この実施形態の特定の態様では、（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ）は、本明細書で上記に定義される１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット及び１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）サブユニットを含む。
【００９０】
２．３．３  Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘの多量体：
特定の態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ可溶性受容体は、多量体として産生される。多量体の各サブユニットは、１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘを含む。これらの多量体は、ホモ二量体可溶性受容体、ヘテロ二量体可溶性受容体、又は多量体可溶性受容体であってもよく、多量体受容体は、一般に、９個を超えるサブユニットを含まない、好ましくは６個を超えるサブユニットを含まない、さらに好ましくは３個を超えるサブユニットを含まない、最も好ましくは２個を超えるサブユニットを含まない。好ましくは、これらの多量体可溶性受容体は、本明細書で上記に定義されるＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘのホモ二量体である。一実施形態では、多量体のサブユニットは、共有結合を介して連結される。サブユニットは、架橋試薬又はポリペプチドリンカーを介する等での任意の適した手段によって共有結合で連結されてもよい。他の実施形態では、サブユニットは、非共有結合を介して連結される。
【００９１】
一実施形態では、各Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニットは、サブユニットの多量体化を提供するさらなるアミノ酸ドメインに作動可能に連結される（特に、さらなるドメインは、サブユニットの二量体化を提供する任意の機能領域を含む）。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。さらなるアミノ酸ドメインは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニットの配列の上流に（Ｎ末端）又は下流に（Ｃ末端）位置させてもよい。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。これらの実施形態では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体は、二量体等の高次構造を形成するために他の融合タンパク質中に存在する多量体形成成分と相互作用することができる多量体形成成分に作動可能に連結されたＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニットを含有する融合タンパク質の多量体である。この種類の融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニット配列を二量体、三量体等の形成を可能にする、他のタンパク質から単離されたドメインに作動可能に連結することにより調製されてもよい。本発明のＩＬ−１８Ｒα可溶性受容体の多量体化を可能にするタンパク質配列についての例は、免疫グロブリン、ｈＣＧ（国際公開第９７／３０１６１号）、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【００９２】
特定の態様では、多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘの二量体であり、サブユニットは、免疫グロブリンに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。この実施形態では、サブユニットは、免疫グロブリン、詳細にはヒト免疫グロブリン、さらに詳細にはヒト免疫グロブリンのＦｃ部分のすべて又は一部に作動可能に連結される。典型的に、ヒト免疫グロブリンのＦｃ部分は、２つの定常領域ドメイン（ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン）及び１つのヒンジ領域を含有するが、可変領域を欠く（たとえば米国特許第６，０１８，０２６号及び第５，７５０，３７５号を参照されたい）。免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ並びに任意のサブクラス又はアイソタイプ、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４；ＩｇＡ−１及びＩｇＡ−２を含む免疫グロブリンの主要なクラスのいずれかから選択されてもよい。一実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ４であり、ヒトＩｇＧ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。他の実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ１である。Ｆｃ部は、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異させてもよい。普通、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニットは、同じ免疫グロブリンに作動可能に連結される（詳細にはヒト免疫グロブリン、たとえばヒトＩｇＧ４又はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に対して）。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。上記融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡ及び／又は他方のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて細胞を形質移入し、同じ細胞中で二量体を発現させることにより調製することができる。特定の実施形態では、サブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘは、各単量体に関して同じである（つまり二量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘのホモ二量体である）。さらに詳細には、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘのサブユニットは、同じ免疫グロブリンに作動可能に連結される（詳細にはヒト免疫グロブリン、たとえばヒトＩｇＧ４又はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に対して）。上記融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて細胞を形質移入し、同じ細胞中で二量体を発現させることにより調製することができる。サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。たとえばＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌ．４，ｐａｇｅｓ  １０．１９．１−１０．１９．１１，１９９２中のＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈ及びＡｒｕｆｆｏ「免疫グロブリン融合���ンパク質の構築」（Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）又は国際公開第０１／０３７３７号に記載されている方法等の、免疫グロブリン融合タンパク質を作製するための方法は、当技術分野でよく知られている。
【００９３】
あるいは、本発明のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘの二量体は、受容体サブユニットのうちの一方を免疫グロブリン重鎖の定常領域に作動可能に連結し、他方の受容体サブユニットを免疫グロブリン軽鎖の定常領域に作動可能に連結することによって調製することができる。用語「作動可能に連結された」は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ及び免疫グロブリンが、ペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。たとえば、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニットは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３領域に作動可能に連結することができ、別の又は同じＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニットは、Ｉｇカッパ軽鎖のＣカッパ領域に作動可能に連結することができる。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。免疫グロブリン軽鎖融合タンパク質及び免疫グロブリン重鎖融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質移入された細胞は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニットをそれぞれ含有する重鎖／軽鎖ヘテロ二量体を発現する。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。特定の実施形態では、サブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘは、各単量体に関して同じである（つまり二量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘのホモ二量体である）。
【００９４】
本発明の他の特定の態様では、多量体Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ（本明細書で上記に定義される）は、非共有結合を介して連結される。サブユニットの非共有結合は、その生物活性（つまりＭＳの症状を低下させるためのその能力）を妨害しない任意の適した手段によって達成されてもよい。特定の態様では、これらの多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘの二量体であり、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘのうちの一方のサブユニットは、第１の化合物に作動可能に連結され、別の又は同じサブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘは、第１の化合物に非共有結合するであろう第２の化合物に作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。上記化合物の例は、ビオチン及びアビジンである。Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘの二量体は、受容体サブユニットのうちの一方をビオチンに作動可能に連結し、他方のサブユニットをアビジンに作動可能に連結することにより調製することができる。したがって、受容体は、アビジンとのビオチンの非共有相互作用を通して形成される。他の例は、ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットを含む。これらの実施形態では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘの一方のサブユニットをコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットをコードするＤＮＡ構築物に対して融合され、他方のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニットをコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンの他方のサブユニットをコードするＤＮＡに対して融合される（米国特許第６，１９３，９７２号に開示されるように）。これらのＤＮＡ構築物は、同じ細胞中で同時発現され、各同時発現する配列が、発現に際してヘテロ二量体を形成するように、対応するホルモンサブユニットを含有するので、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘヘテロ二量体受容体融合タンパク質の発現につながる。ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンに由来するアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。特定の実施形態では、サブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘは、各単量体に関して同じである（つまり二量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘのホモ二量体である）。
【００９５】
Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニットの二量体化を可能にするタンパク質配列についての他の例は、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【００９６】
また、必要な場合、本明細書に記載される融合タンパク質は、精製又は産生を容易にする任意の機能領域を含んでいてもよい。上記のさらなるアミノ酸配列の特定の例は、ＧＳＴ配列又はＨｉｓタグ配列を含む。
【００９７】
２．３．４  ヘテロ多量体として、少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒβサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα：
特定の態様では、少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒβサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ）を含む本発明の可溶性受容体は、ヘテロ多量体である。ヘテロ多量体の各サブユニットは、
−  少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）又は
−  少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒβサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ）を含む。
これらのヘテロ多量体は、一般に、９個を超えるサブユニット、好ましくは６個を超えるサブユニット、さらに好ましくは３個を超えるサブユニット、最も好ましくは２個を超えるサブユニットを含まない。好ましくは、これらのヘテロ多量体可溶性受容体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ（上記に定義される）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ（上記に定義される）からなる１つのサブユニットを含むヘテロ二量体である。一実施形態では、ヘテロ多量体のサブユニットは、共有結合を介して連結される。サブユニットは、架橋試薬を介する等での任意の適した手段によって共有結合で連結されてもよい。他の実施形態では、サブユニットは、非共有結合を介して連結される。
【００９８】
一実施形態では、ヘテロ多量体の各サブユニットは、サブユニットの多量体化を提供するさらなるアミノ酸ドメインに作動可能に連結される（特に、さらなるドメインは、サブユニットの二量体化を提供する任意の機能領域を含んでいてもよい）。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。さらなるアミノ酸ドメインは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット（複数可）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット（複数可）の配列の上流（Ｎ末端）又は下流（Ｃ末端）（好ましくは下流（Ｃ末端））及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）サブユニット（複数可）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニット（複数可）の配列の上流（Ｎ末端）又は下流（Ｃ末端）（好ましくは下流（Ｃ末端））に位置させてもよい。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。これらの実施形態では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体は、二量体等の高次構造を形成するために他の融合タンパク質中に存在する多量体形成成分と相互作用することができる多量体形成成分に作動可能に連結されたＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘからなる１つのサブユニットを含有する融合タンパク質のヘテロ多量体である。この種類の融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット配列又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット配列及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）サブユニット配列又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニット配列を、二量体、三量体等の形成を可能にする、他のタンパク質から単離されたドメインに作動可能に連結することにより調製されてもよい。本発明のＩＬ−１８Ｒα可溶性受容体の多量体化を可能にするタンパク質配列についての例は、免疫グロブリン、ｈＣＧ（国際公開第９７／３０１６１号）、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【００９９】
特定の態様では、ヘテロ多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘからなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘからなる１つのサブユニットを含むヘテロ二量体である。他の特定の態様では、ヘテロ二量体の２つのサブユニットは、免疫グロブリンに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。これらの実施形態では、サブユニットは、免疫グロブリン、詳細にはヒト免疫グロブリン、さらに詳細にはヒト免疫グロブリンのＦｃ部分のすべて又は一部に作動可能に連結される。典型的に、ヒト免疫グロブリンのＦｃ部分は、２つの定常領域ドメイン（ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン）及び１つのヒンジ領域を含有するが、可変領域を欠く（たとえば米国特許第６，０１８，０２６号及び第５，７５０，３７５号を参照されたい）。免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ並びに任意のサブクラス又はアイソタイプ、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４；ＩｇＡ−１及びＩｇＡ−２を含む免疫グロブリンの主要なクラスのいずれかから選択されてもよい。一実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ４であり、ヒトＩｇＧ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。他の実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ１である。Ｆｃ部は、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異させてもよい。普通、２つのサブユニットは、同じ免疫グロブリンに作動可能に連結される（詳細にはヒト免疫グロブリン、たとえばヒトＩｇＧ４又はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に対して）。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、サブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。上記融合タンパク質は、第１のサブユニット：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡ及び／又は他方のサブユニット：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて細胞を形質移入し、同じ細胞中で二量体を発現させることにより調製することができる。サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。たとえばＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌ．４，ｐａｇｅｓ  １０．１９．１−１０．１９．１１，１９９２中のＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈ及びＡｒｕｆｆｏ「免疫グロブリン融合タンパク質の構築（Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）」又は国際公開第０１／０３７３７号に記載されている方法等の、免疫グロブリン融合タンパク質を作製するための方法は、当技術分野でよく知られている。
【０１００】
あるいは、本発明のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘからなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘからなる１つのサブユニットを含むヘテロ二量体は、受容体サブユニットのうちの一方を免疫グロブリン重鎖の定常領域に作動可能に連結し、他方の受容体サブユニットを免疫グロブリン軽鎖の定常領域に作動可能に連結することによって調製することができる。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。たとえば、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３領域に作動可能に連結することができ、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）サブユニットは、Ｉｇカッパ軽鎖のＣカッパ領域に作動可能に連結することができ（逆もまた同様）、又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３領域に作動可能に連結することができ、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニットは、Ｉｇカッパ軽鎖のＣカッパ領域に作動可能に連結することができる（逆もまた同様）。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、サブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。免疫グロブリン軽鎖融合タンパク質及び免疫グロブリン重鎖融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質移入された細胞は、サブユニットをそれぞれ含有する重鎖／軽鎖ヘテロ二量体を発現する。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。
【０１０１】
本発明の他の特定の態様では、ヘテロ多量体のサブユニットは、非共有結合を介して連結される。サブユニットの非共有結合は、その生物活性（つまりＭＳの症状を低下させるためのその能力）を妨害しない任意の適した手段によって達成されてもよい。特定の態様では、これらのヘテロ多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘからなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘからなる１つのサブユニットを含むヘテロ二量体であり、一方のサブユニットは、第１の化合物に作動可能に連結され、他方は、第１の化合物に非共有結合するであろう第２の化合物に作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。上記化合物の例は、ビオチン及びアビジンである。これらのヘテロ二量体は、受容体サブユニットのうちの一方をビオチンに作動可能に連結し、他方のサブユニットをアビジンに作動可能に連結することにより調製することができる。したがって、受容体は、アビジンとのビオチンの非共有相互作用を通して形成される。他の例は、ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットを含む。これらの実施形態では、１つのサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）をコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットをコードするＤＮＡ構築物に対して融合され、他方のサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ）をコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンの他方のサブユニットをコードするＤＮＡに対して融合される（米国６，１９３，９７２に開示される）。これらのＤＮＡ構築物は、同じ細胞中で同時発現され、各同時発現する配列が、発現に際してヘテロ二量体を形成するように、対応するホルモンサブユニットを含有するので、ヘテロ二量体受容体融合タンパク質の発現につながる。ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンに由来するアミノ酸配列は、サブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。
【０１０２】
Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニットの二量体化を可能にするタンパク質配列についての他の例は、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【０１０３】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット及び少なくとも１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニットを含むヘテロ多量体は、組換え抗体である。組換え抗体の技術は、たとえば米国特許第６，０１８，０２６号に記載される。その場合、１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘの多量体は、第１のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖及び第２のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘポリペプチド鎖を含む多量体ポリペプチド融合物であり、一方のポリペプチド鎖は、免疫グロブリン重鎖定常領域に作動可能に連結され、他方のポリペプチド鎖は、免疫グロブリン軽鎖定常領域に作動可能に連結される。一実施形態では、第１のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖は、免疫グロブリン重鎖定常領域に作動可能に連結され、第２のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘポリペプチド鎖は、免疫グロブリン軽鎖定常領域に作動可能に連結される。他の実施形態では、第１のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖は、免疫グロブリン軽鎖定常領域に作動可能に連結され、第２のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘポリペプチド鎖は、免疫グロブリン重鎖定常領域に作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘ並びに免疫グロブリン重鎖又は軽鎖定常領域が、ペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。一実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域ドメイン及び免疫グロブリン軽鎖定常領域ドメインは、ヒト免疫グロブリン定常領域である。一実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域ドメインは、α、γ、μ、δ、又はεヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域からなる群から選択される。好ましくは、上述の定常領域は、γ１、γ２、γ３、又はγ４ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である。好ましい実施形態では、免疫グロブリン軽鎖定常領域ドメインは、κ又はλヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域からなる群から選択される。免疫グロブリンからのアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に対して連結されてもよい。免疫グロブリン軽鎖融合タンパク質及び免疫グロブリン重鎖融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質移入された細胞は、抗体の構造を有する融合タンパク質を発現する。得られた、結果として生じるタンパク質は、
−  Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の重鎖定常領域及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）サブユニット若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の軽鎖定常領域又は
−  Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）サブユニット若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の重鎖定常領域及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の軽鎖定常領域からなる。
抗体に関しては、重鎖及び軽鎖は、ジスルフィドで連結され（鎖間ジスルフィド結合）、重鎖どうしは、ジスルフィドで連結される（鎖間ジスルフィド結合）。
したがって、結果として生じる分子は、２つのヘテロ二量体から構成されるホモ二量体であり、これらのヘテロ二量体のそれぞれは、
−  Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン重鎖定常領域及び
Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン軽鎖定常領域から構成される。又はホモ二量体は、２つのヘテロ二量体から構成され、これらのヘテロ二量体のそれぞれは、
−  Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒβ）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン重鎖定常領域及び
Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン軽鎖定常領域から構成される。
両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。一実施形態では、定常重鎖は、ヒトγ４であり、ヒトγ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。他の実施形態では、定常重鎖は、ヒトγ１である。定常重鎖は、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異させてもよい。
【０１０４】
１．一実施形態では、本発明の組換え抗体は、
−  ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに作動可能に連結された、γ１、γ２、γ３、又はγ４ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である２つの同一の重鎖定常領域及び
−  ヒトＩＬ−１８Ｒβの細胞外ドメインに作動可能に連結された、κ又はλヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域である２つの同一の軽鎖定常領域を含む又はそれらからなる。一実施形態では、天然抗体に関しては、重鎖及び軽鎖は、ジスルフィドで連結され（鎖間ジスルフィド結合）、重鎖どうしは、ジスルフィドで連結される（鎖間ジスルフィド結合）。
【０１０５】
２．他の特定の実施形態では、本発明の組換え抗体は、
−  ヒトＩＬ−１８Ｒβの細胞外ドメインに作動可能に連結された、γ１、γ２、γ３、又はγ４ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である２つの同一の重鎖定常領域及び
−  ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに作動可能に連結された、κ又はλヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域である２つの同一の軽鎖定常領域を含む又はそれらからなる。一実施形態では、天然抗体に関しては、重鎖及び軽鎖は、ジスルフィドで連結され（鎖間ジスルフィド結合）、重鎖どうしは、ジスルフィドで連結される（鎖間ジスルフィド結合）。
【０１０６】
３．他の実施形態では、本発明は、上記第１又は２項に定義される組換え抗体に関し、重鎖の定常領域は、γ１ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である。
【０１０７】
４．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、又は３項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖の定常領域は、κヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域である。
【０１０８】
５．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、又は４項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインは、本明細書で上記に定義される配列番号２のアミノ酸残基１９〜３２９又は上述のポリペプチドの変異体からなる。
【０１０９】
６．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、又は５項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１８Ｒβの細胞外ドメインは、本明細書で上記に定義される配列番号４のアミノ酸残基２０〜３５６又は上述のポリペプチドの変異体からなる。
【０１１０】
７．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、又は６項に定義される組換え抗体に関し、重鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１８Ｒβの細胞外ドメインに対して、ペプチド結合を通して直接結びつけられる。
【０１１１】
８．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、又は７項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１８Ｒβの細胞外ドメインに対して、ペプチド結合を通して直接結びつけられる。
【０１１２】
９．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、又は６項に定義される組換え抗体に関し、重鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１８Ｒβの細胞外ドメインに対して、ペプチドリンカーを介して、ペプチド結合を通して結びつけられる。ペプチドリンカーは、サブユニット間に導入された１〜３個のアミノ酸残基長ほどの短いものとすることができる（好ましくは、グリシン、セリン、トレオニン、又はアラニン等の小さなアミノ酸からなる）又はより長く、たとえば１３、１５、若しくは１６個のアミノ酸残基長とすることができる。好ましくは、ペプチドリンカーは、免疫学的に非活性であるペプチドである。上述のリンカーは、配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチド（配列番号１３）、たとえば、Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔからなる１３個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１４）、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１５）、ＧＧＳＧＧ  ＳＧＧＧＧ  ＳＧＧＧＧ  Ｓからなる１６個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１６）、又はヒトＩｇＧ（たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のヒンジ領域であってもよい。一実施形態では、上述のペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列である（配列番号１５）。
【０１１３】
１０．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、又は９項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１８Ｒβの細胞外ドメインに対して、ペプチドリンカーを介して、ペプチド結合を通して結びつけられる。ペプチドリンカーは、サブユニット間に導入された１〜３個のアミノ酸残基長ほどの短いものとすることができる（好ましくは、グリシン、セリン、トレオニン、又はアラニン等の小さなアミノ酸からなる）又はより長く、たとえば１３、１５、若しくは１６個のアミノ酸残基長とすることができる。好ましくは、ペプチドリンカーは、免疫学的に非活性であるペプチドである。上述のリンカーは、配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチド（配列番号１３）、たとえば、Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔからなる１３個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１４）、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１５）、ＧＧＳＧＧ  ＳＧＧＧＧ  ＳＧＧＧＧ  Ｓからなる１６個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１６）、又はヒトＩｇＧ（たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のヒンジ領域であってもよい。一実施形態では、上述のペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列である（配列番号１５）。
【０１１４】
１１．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０項に定義される組換え抗体に関し、定常重鎖は、ヒトγ４であり、ヒトγ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。
【０１１５】
１２．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０項に定義される組換え抗体に関し、定常重鎖は、ヒトγ１であり、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異させる。
【０１１６】
１３．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２項に定義される組換え抗体に関し、重鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１８Ｒβの細胞外ドメインのＣ末端又はＮ末端、好ましくはＣ末端に対して作動可能に連結される。
【０１１７】
１４．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、又は１３項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１８Ｒβの細胞外ドメインのＣ末端又はＮ末端、好ましくはＣ末端に対して作動可能に連結される。
【０１１８】
１５．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１８Ｒβの細胞外ドメインは、重鎖定常領域のＣ末端又はＮ末端、好ましくはＮ末端に対して作動可能に連結される。
【０１１９】
１６．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１８Ｒβの細胞外ドメインは、軽鎖定常領域のＣ末端又はＮ末端、好ましくはＮ末端に対して作動可能に連結される。
【０１２０】
また、必要な場合、本明細書に記載される融合タンパク質は、精製又は産生を容易にする任意の機能領域を含んでいてもよい。上記のさらなるアミノ酸配列の特定の例は、ＧＳＴ配列又はＨｉｓタグ配列を含む。
【０１２１】
３）少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）並びに少なくとも１つのＩＬ−１ＲＡｃＰサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα：
本発明の特定の態様では、自己免疫疾患又は脱髄疾患の症状、特にＭＳを処置する、予防する、又は寛解させるために使用される可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体は、少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（本明細書で上記に定義されるＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）並びに後に本明細書で定義される少なくとも１つのＩＬ−１ＲＡｃＰサブユニットを含む可溶性受容体である。用語「可溶性受容体」は、上記に定義される。
【０１２２】
ＩＬ−１ＲＡｃＰ（文献中でＩＬ１ＲＡＰ、ＦＬＪ３７７８８、又はＩＬ１Ｒ３とも命名される）は、ＩＬ−１受容体ファミリーのメンバーであり、３つの免疫グロブリン様ドメイン（Ｉｇドメイン）を含む細胞外ドメインを所有する。ヒトＩＬ−１ＲＡｃＰをコードするｃＤＮＡは、配列番号５に示される。このｃＤＮＡは、５７０個のアミノ酸長のタンパク質（配列番号６）をコードし、このタンパク質は、２０個のアミノ酸のシグナルペプチド（配列番号６の残基１〜２０）を含む、３６７個のアミノ酸の細胞外ドメイン（配列番号６のＮ末端からＣ末端までの残基１〜３６７）、２１個のアミノ酸の膜貫通領域（残基３６８〜３８８）、及び１８２個のアミノ酸の細胞質ドメイン（残基３８９〜５７０）を含む。
【０１２３】
３．１  ＩＬ−１ＲＡｃＰサブユニット及びその変異体（「Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）」と後に本明細書で命名される）：
一態様では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体のＩＬ−１ＲＡｃＰサブユニットは、ＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外ドメインのすべて又は一部、特にヒトＩＬ−１ＲＡｃＰ又はその変異体の細胞外ドメインのすべて又は一部を含むポリペプチドである。
【０１２４】
一態様では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体のＩＬ−１ＲＡｃＰサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ））は、配列番号６のアミノ酸残基２１〜３６７を含む若しくはそれからなるポリペプチド又は上述のポリペプチドの変異体である。通常、変異体ポリペプチドは、少なくとも３００個のアミノ酸長であり、少なくとも３２５個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも３４７個のアミノ酸長であることがより多い。変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号６の残基２１〜３６７）と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドとして定義される。より好ましくは、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号６の残基２１〜３６７）と、５個だけ、より好ましくは４個だけ、さらに好ましくは３個だけ、さらに好ましくは２個だけ、最も好ましくは１個だけアミノ酸が異なっている。本発明のいくつかの特定の態様では、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号６の残基２１〜３６７）と、Ｎ末端及び／又はＣ末端で、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個のアミノ酸の欠如分だけ異なっている。遺伝子コードを使用する当業者は、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを容易に決定することができる。「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、本明細書で上記のように定義される。
【０１２５】
他の実施形態では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）は、配列番号６のアミノ酸残基２１〜２４１若しくは１２９〜３６７若しくはペプチド結合によって連結された２１〜１４０及び２３１〜３６７を含む若しくはそれからなるポリペプチド又は上述のポリペプチドの変異体である。通常、変異体ポリペプチドは、少なくとも２００個のアミノ酸長であり、少なくとも２２１個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも２３９個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも２５７個のアミノ酸長であることがより多い。変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号６の残基２１〜２４１又は１２９〜３６７又はペプチド結合によって連結された２１〜１４０及び２３１〜３６７）と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドとして定義される。より好ましくは、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号６の残基２１〜２４１又は１２９〜３６７又はペプチド結合によって連結された２１〜１４０及び２３１〜３６７）と、５個だけ、より好ましくは４個だけ、さらに好ましくは３個だけ、さらに好ましくは２個だけ、最も好ましくは１個だけアミノ酸が異なっている。本発明のいくつかの特定の態様では、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号６の残基２１〜２４１又は１２９〜３６７又はペプチド結合によって連結された２１〜１４０及び２３１〜３６７）と、Ｎ末端及び／又はＣ末端で、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個のアミノ酸の欠如分だけ異なっている。遺伝子コードを使用する当業者は、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを容易に決定することができる。「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、本明細書で上記のように定義される。
【０１２６】
他の実施形態では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）は、配列番号６のアミノ酸残基２１〜１４０若しくは１２９〜２４１若しくは２３１〜３６７を含む若しくはそれからなるポリペプチド又は上述のポリペプチドの変異体である。通常、変異体ポリペプチドは、少なくとも１００個のアミノ酸長であり、少なくとも１１３個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも１２０個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも１３７個のアミノ酸長であることがより多い。変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号６の残基２１〜１４０又は１２９〜２４１又は２３１〜３６７）と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドとして定義される。より好ましくは、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号６の残基２１〜１４０又は１２９〜２４１又は２３１〜３６７）と、５個だけ、より好ましくは４個だけ、さらに好ましくは３個だけ、さらに好ましくは２個だけ、最も好ましくは１個だけアミノ酸が異なっている。本発明のいくつかの特定の態様では、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号６の残基２１〜１４０又は１２９〜２４１又は２３１〜３６７）と、Ｎ末端及び／又はＣ末端で、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個のアミノ酸の欠如分だけ異なっている。遺伝子コードを使用する当業者は、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを容易に決定することができる。「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、本明細書で上記のように定義される。
【０１２７】
３．２  同じタンパク質骨格上に少なくとも２つのＩＬ−１ＲＡｃＰサブユニット又はその変異体を含む可溶性ＩＬ−１ＲＡｃＰ（後に本明細書で「Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ」と命名される）：
後に本明細書で記載されるように、本発明は、他の態様の中で、少なくとも２つのＩＬ−１ＲＡｃＰサブユニット（少なくとも２つのＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ））を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体に関する。少なくとも２つのＩＬ−１ＲＡｃＰサブユニット（つまり本明細書で上記に定義される少なくとも２つのＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）サブユニット）を含むこれらの可溶性ＩＬ−１ＲＡｃＰは、融合タンパク質として同じタンパク質骨格上にあり、後に本明細書で「Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ」と命名される。特定の実施形態では、融合タンパク質は、２つのＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）サブユニットを含む。他の特定の実施形態では、少なくとも２つのＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）サブユニットは、同じであり（つまり、融合タンパク質はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）のホモ多量体であり）、特定の実施形態では、融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）のホモ二量体である。
【０１２８】
少なくとも２つのＩＬ−１ＲＡｃＰサブユニットは、互いに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、サブユニットがペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」を介して結びつけられることを示す。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。サブユニットは、直接又は「ペプチドリンカー」を介して連結される。ペプチドリンカーは、サブユニット間に導入された１〜３個のアミノ酸残基長ほどの短いものとすることができる（好ましくは、グリシン、セリン、トレオニン、又はアラニン等の小さなアミノ酸からなる）又はより長く、たとえば１３、１５、若しくは１６個のアミノ酸残基長とすることができる。好ましくは、ペプチドリンカーは、免疫学的に非活性であるペプチドである。上述のリンカーは、配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチド（配列番号１３）、たとえば、Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔからなる１３個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１４）、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１５）、ＧＧＳＧＧ  ＳＧＧＧＧ  ＳＧＧＧＧ  Ｓからなる１６個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１６）、又はヒトＩｇＧ（たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のヒンジ領域であってもよい。
【０１２９】
３．３  少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１ＲＡｃＰサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）又はＳｏＩ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα：
本明細書で上記に開示されるように、本発明は、他の態様の中で、少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（本明細書で上記に定義されるＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１ＲＡｃＰサブユニット（本明細書で上記に定義されるＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体に関する。
【０１３０】
３．３．１  同じタンパク質骨格上に少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１ＲＡｃＰサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα（後に本明細書で「Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ」と命名される）：
本発明の一態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘは、融合タンパク質として同じタンパク質骨格上にある（これらの可溶性受容体は、後に本明細書で「Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ」と命名されることとなる）。この実施形態によれば、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏ１（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニットに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、サブユニットがペプチド連結を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニットに対して、上流に（タンパク質のＮ末端に対してより近くに）又は下流に（タンパク質のＣ末端に対してより近くに）位置させることができる。サブユニットは、直接又は「ペプチドリンカー」を介して連結される。特定の実施形態では、融合タンパク質は、本明細書に定義される１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット及び１つのＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）サブユニットを含む。
【０１３１】
３．３．２  少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１ＲＡｃＰサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ）を融合タンパク質として同じタンパク質骨格上に含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ）：
他の特定の態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ）を含む融合タンパク質は、それ自体、さらなるアミノ酸ドメインに「作動可能に連結され」ている。用語「作動可能に連結された」は、さらなるアミノ酸ドメインが、ペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。この様式では、この融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。さらなるアミノ酸ドメインは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘに対して、上流（Ｎ末端）又は下流（Ｃ末端）に位置させてもよい。この実施形態では、さらなるアミノ酸ドメインは、たとえば融合タンパク質の安定性、ターゲティング、若しくは生物学的利用能の増加を提供する、精製若しくは産生を容易にする、又は分子にさらなる生物活性を付与する任意の機能領域を含む。上記のさらなるアミノ酸配列の特定の例は、ＧＳＴ配列、Ｈｉｓタグ配列、免疫グロブリン分子の定常領域、又は米国特許第６，１９３，９７２号に記載されるヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）等のヘテロ二量体タンパク質ホルモンを含む。また、必要な場合、融合タンパク質中に含まれるさらなるアミノ酸配列は、産生／精製プロセスの終了時に又はｉｎ  ｖｉｖｏで、たとえば、適切な、エンド／エキソペプチダーゼによって取り除かれてもよい。たとえば、融合タンパク質に含まれるスペーサー配列は、ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで、酵素の開裂によって、さらなるアミノ酸ドメインから所望のポリペプチド変異体を分離するために使用することができる、エンドペプチダーゼ（カスパーゼ等）のための認識部位を含んでいてもよい。この実施形態の特定の態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘは、本明細書で上記に定義される１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット及び１つのＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）サブユニットを含む。
【０１３２】
３．３．３  Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘの多量体：
特定の態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ可溶性受容体は、多量体として産生される。多量体の各サブユニットは、１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘを含む。これらの多量体は、ホモ二量体可溶性受容体、ヘテロ二量体可溶性受容体、又は多量体可溶性受容体であってもよく、多量体受容体は、一般に、９個を超えるサブユニットを含まない、好ましくは６個を超えるサブユニットを含まない、さらに好ましくは３個を超えるサブユニット、最も好ましくは２個を超えるサブユニットを含まない。好ましくは、これらの多量体可溶性受容体は、本明細書で上記に定義されるＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘのホモ二量体である。一実施形態では、多量体のサブユニットは、共有結合を介して連結される。サブユニットは、架橋試薬又はポリペプチドリンカーを介する等での任意の適した手段によって共有結合で連結されてもよい。他の実施形態では、サブユニットは、非共有結合を介して連結される。
【０１３３】
一実施形態では、各Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニットは、サブユニットの多量体化を提供するさらなるアミノ酸ドメインに作動可能に連結される（特に、さらなるドメインは、サブユニットの二量体化を提供する任意の機能領域を含む）。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。さらなるアミノ酸ドメインは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニットの配列の上流に（Ｎ末端）又は下流に（Ｃ末端）位置させてもよい。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。これらの実施形態では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体は、二量体等の高次構造を形成するために他の融合タンパク質中に存在する多量体形成成分と相互作用することができる多量体形成成分に作動可能に連結されたＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニットを含有する融合タンパク質の多量体である。この種類の融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニット配列を、二量体、三量体等の形成を可能にする、他のタンパク質から単離されたドメインに作動可能に連結することにより調製されてもよい。本発明のＩＬ−１８Ｒα可溶性受容体の多量体化を可能にするタンパク質配列についての例は、免疫グロブリン、ｈＣＧ（国際公開第９７／３０１６１号）、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【０１３４】
特定の態様では、多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘの二量体であり、サブユニットは、免疫グロブリンに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。この実施形態では、サブユニットは、免疫グロブリン、詳細にはヒト免疫グロブリン、さらに詳細にはヒト免疫グロブリンのＦｃ部分のすべて又は一部に作動可能に連結される。典型的に、ヒト免疫グロブリンのＦｃ部分は、２つの定常領域ドメイン（ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン）並びに１つのヒンジ領域を含有するが、可変領域を欠く（たとえば米国特許第６，０１８，０２６号及び第５，７５０，３７５号を参照されたい）。免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ並びに任意のサブクラス又はアイソタイプ、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４；ＩｇＡ−１及びＩｇＡ−２を含む免疫グロブリンの主要なクラスのいずれかから選択されてもよい。一実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ４であり、ヒトＩｇＧ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。他の実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ１である。Ｆｃ部は、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異させてもよい。普通、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニットは、同じ免疫グロブリンに作動可能に連結される（詳細にはヒト免疫グロブリン、たとえばヒトＩｇＧ４又はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に対して）。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。上記融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡ及び／又は他方のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて細胞を形質移入し、同じ細胞中で二量体を発現させることにより調製することができる。特定の実施形態では、サブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘは、各単量体に関して同じである（つまり二量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘのホモ二量体である）。さらに詳細には、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘのサブユニットは、同じ免疫グロブリンに作動可能に連結される（詳細にはヒト免疫グロブリン、たとえばヒトＩｇＧ４又はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に対して）。上記融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて細胞を形質移入し、同じ細胞中で二量体を発現させることにより調製することができる。サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。たとえばＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌ．４，ｐａｇｅｓ  １０．１９．１−１０．１９．１１，１９９２中のＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈ及びＡｒｕ���ｆｏ「免疫グロブリン融合タンパク質の構築」（Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）又は国際公開第０１／０３７３７号に記載されている方法等の、免疫グロブリン融合タンパク質を作製するための方法は、当技術分野でよく知られている。
【０１３５】
あるいは、本発明のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘの二量体は、受容体サブユニットのうちの一方を免疫グロブリン重鎖の定常領域に作動可能に連結し、他方の受容体サブユニットを免疫グロブリン軽鎖の定常領域に作動可能に連結することによって調製することができる。用語「作動可能に連結された」は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ及び免疫グロブリンが、ペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。たとえば、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニットは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３領域に作動可能に連結することができ、別の又は同じＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニットは、Ｉｇカッパ軽鎖のＣカッパ領域に作動可能に連結することができる。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。免疫グロブリン軽鎖融合タンパク質及び免疫グロブリン重鎖融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質移入された細胞は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニットをそれぞれ含有する重鎖／軽鎖ヘテロ二量体を発現する。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。特定の実施形態では、サブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘは、各単量体に関して同じである（つまり二量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘのホモ二量体である）。
【０１３６】
本発明の他の特定の態様では、多量体Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ（本明細書で上記に定義される）のサブユニットは、非共有結合を介して連結される。サブユニットの非共有結合は、その生物活性（つまりＭＳの症状を低下させるためのその能力）を妨害しない任意の適した手段によって達成されてもよい。特定の態様では、これらの多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘの二量体であり、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘのうちの一方のサブユニットは、第１の化合物に作動可能に連結され、別の又は同じサブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘは、第１の化合物に非共有結合するであろう第２の化合物に作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。上記化合物の例は、ビオチン及びアビジンである。Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘの二量体は、受容体サブユニットのうちの一方をビオチンに作動可能に連結し、他方のサブユニットをアビジンに作動可能に連結することにより調製することができる。したがって、受容体は、アビジンとのビオチンの非共有相互作用を通して形成される。他の例は、ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットを含む。これらの実施形態では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘの一方のサブユニットをコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットをコードするＤＮＡ構築物に対して融合され、他方のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニットをコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンの他方のサブユニットをコードするＤＮＡに対して融合される（米国特許第６，１９３，９７２号に開示されるように）。これらのＤＮＡ構築物は、同じ細胞中で同時発現され、各同時発現する配列が、発現に際してヘテロ二量体を形成するように、対応するホルモンサブユニットを含有するので、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘヘテロ二量体受容体融合タンパク質の発現につながる。ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンに由来するアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。特定の実施形態では、サブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘは、各単量体に関して同じである（つまり二量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘのホモ二量体である）。
【０１３７】
Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニットの二量体化を可能にするタンパク質配列についての他の例は、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【０１３８】
また、必要な場合、本明細書に記載される融合タンパク質は、精製又は産生を容易にする任意の機能領域を含んでいてもよい。上記のさらなるアミノ酸配列の特定の例は、ＧＳＴ配列又はＨｉｓタグ配列を含む。
【０１３９】
３．３．４  ヘテロ多量体として、少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１ＲＡｃＰサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα：
特定の態様では、少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１ＲＡｃＰサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ）を含む本発明の可溶性受容体は、ヘテロ多量体である。ヘテロ多量体の各サブユニットは、
−  少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）又は
−  少なくとも１つのＩＬ−１ＲＡｃＰサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ）を含む。
これらのヘテロ多量体は、一般に、９個を超えるサブユニット、好ましくは６個を超えるサブユニット、さらに好ましくは３個を超えるサブユニット、最も好ましくは２個を超えるサブユニットを含まない。好ましくは、これらのヘテロ多量体可溶性受容体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ（上記に定義される）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ（上記に定義される）からなる１つのサブユニットを含むヘテロ二量体である。一実施形態では、ヘテロ多量体のサブユニットは、共有結合を介して連結される。サブユニットは、架橋試薬を介する等での任意の適した手段によって共有結合で連結されてもよい。他の実施形態では、サブユニットは、非共有結合を介して連結される。
【０１４０】
一実施形態では、ヘテロ多量体の各サブユニットは、サブユニットの多量体化を提供するさらなるアミノ酸ドメインに作動可能に連結される（特に、さらなるドメインは、サブユニットの二量体化を提供する任意の機能領域を含んでいてもよい）。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。さらなるアミノ酸ドメインは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット（複数可）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット（複数可）の配列の上流（Ｎ末端）又は下流（Ｃ末端）（好ましくは下流（Ｃ末端））及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）サブユニット（複数可）又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニット（複数可）の配列の上流（Ｎ末端）又は下流（Ｃ末端）（好ましくは下流（Ｃ末端））に位置させてもよい。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。これらの実施形態では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体は、二量体等の高次構造を形成するために他の融合タンパク質中に存在する多量体形成成分と相互作用することができる多量体形成成分に作動可能に連結されたＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘからなる１つのサブユニットを含有する融合タンパク質のヘテロ多量体である。この種類の融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット配列及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニット配列を二量体、三量体等の形成を可能にする、他のタンパク質から単離されたドメインに作動可能に連結することにより調製されてもよい。本発明のＩＬ−１８Ｒα可溶性受容体の多量体化を可能にするタンパク質配列についての例は、免疫グロブリン、ｈＣＧ（国際公開第９７／３０１６１号）、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【０１４１】
特定の態様では、ヘテロ多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘからなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘからなる１つのサブユニットを含むヘテロ二量体である。他の特定の態様では、ヘテロ二量体の２つのサブユニットは、免疫グロブリンに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。これらの実施形態では、サブユニットは、免疫グロブリン、詳細にはヒト免疫グロブリン、さらに詳細にはヒト免疫グロブリンのＦｃ部分のすべて又は一部に作動可能に連結される。典型的に、ヒト免疫グロブリンのＦｃ部分は、２つの定常領域ドメイン（ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン）及び１つのヒンジ領域を含有するが、可変領域を欠く（たとえば米国特許第６，０１８，０２６号及び第５，７５０，３７５号を参照されたい）。免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ並びに任意のサブクラス又はアイソタイプ、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４；ＩｇＡ−１及びＩｇＡ−２を含む免疫グロブリンの主要なクラスのいずれかから選択されてもよい。一実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ４であり、ヒトＩｇＧ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。他の実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ１である。Ｆｃ部は、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異させてもよい。普通、２つのサブユニットは、同じ免疫グロブリンに作動可能に連結される（詳細にはヒト免疫グロブリン、たとえばヒトＩｇＧ４又はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に対して）。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、サブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。上記融合タンパク質は、第１のサブユニット：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡ及び他方のサブユニット：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて細胞を形質移入し、同じ細胞中で二量体を発現させることにより調製することができる。サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。たとえばＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌ．４，ｐａｇｅｓ  １０．１９．１−１０．１９．１１，１９９２中のＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈ及びＡｒｕｆｆｏ「免疫グロブリン融合タンパク質の構築」（Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）又は国際公開第０１／０３７３７号に記載されている方法等の、免疫グロブリン融合タンパク質を作製するための方法は、当技術分野でよく知られている。
【０１４２】
あるいは、本発明のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘからなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘからなる１つのサブユニットを含むヘテロ二量体は、受容体サブユニットのうちの一方を免疫グロブリン重鎖の定常領域に作動可能に連結し、他方の受容体サブユニットを免疫グロブリン軽鎖の定常領域に作動可能に連結することによって調製することができる。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。たとえば、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３領域に作動可能に連結することができ、Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）サブユニットは、Ｉｇカッパ軽鎖のＣカッパ領域に作動可能に連結することができ（逆もまた同様）、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３領域に作動可能に連結することができ、Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニットは、Ｉｇカッパ軽鎖のＣカッパ領域に作動可能に連結することができる（又は逆もまた同様）。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、サブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。免疫グロブリン軽鎖融合タンパク質及び免疫グロブリン重鎖融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質移入された細胞は、サブユニットをそれぞれ含有する重鎖／軽鎖ヘテロ二量体を発現する。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。
【０１４３】
本発明の他の特定の態様では、ヘテロ多量体のサブユニットは、非共有結合を介して連結される。サブユニットの非共有結合は、その生物活性（つまりＭＳの症状を低下させるためのその能力）を妨害しない任意の適した手段によって達成されてもよい。特定の態様では、これらのヘテロ多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘからなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘからなる１つのサブユニットを含むヘテロ二量体であり、一方のサブユニットは、第１の化合物に作動可能に連結され、他方は、第１の化合物に非共有結合するであろう第２の化合物に作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。上記化合物の例は、ビオチン及びアビジンである。これらのヘテロ二量体は、受容体サブユニットのうちの一方をビオチンに作動可能に連結し、他方のサブユニットをアビジンに作動可能に連結することにより調製することができる。したがって、受容体は、アビジンとのビオチンの非共有相互作用を通して形成される。他の例は、ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットを含む。これらの実施形態では、１つのサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）をコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットをコードするＤＮＡ構築物に対して融合され、他方のサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ）をコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンの他方のサブユニットをコードするＤＮＡに対して融合される（米国６，１９３，９７２に開示される）。これらのＤＮＡ構築物は、同じ細胞中で同時発現され、各同時発現する配列が、発現に際してヘテロ二量体を形成するように、対応するホルモンサブユニットを含有するので、ヘテロ二量体受容体融合タンパク質の発現につながる。ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンに由来するアミノ酸配列は、サブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。
【０１４４】
Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニットの二量体化を可能にするタンパク質配列についての他の例は、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【０１４５】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット及び１つのＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニットを含むヘテロ多量体は、組換え抗体である。組換え抗体の技術は、たとえば米国特許第６，０１８，０２６号に記載される。その場合、１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘの多量体は、第１のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖及び第２のＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘポリペプチド鎖を含む多量体ポリペプチド融合物であり、ポリペプチド鎖の一方は、免疫グロブリン重鎖定常領域に作動可能に連結され、他方のポリペプチド鎖は、免疫グロブリン軽鎖定常領域に作動可能に連結される。一実施形態では、第１のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖は、免疫グロブリン重鎖定常領域に作動可能に連結され、第２のＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘポリペプチド鎖は、免疫グロブリン軽鎖定常領域に作動可能に連結される。他の実施形態では、第１のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖は、免疫グロブリン軽鎖定常領域に作動可能に連結され、第２のＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘポリペプチド鎖は、免疫グロブリン重鎖定常領域に作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘ並びに免疫グロブリン重鎖又は軽鎖定常領域が、ペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。一実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域ドメイン及び免疫グロブリン軽鎖定常領域ドメインは、ヒト免疫グロブリン定常領域である。一実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域ドメインは、α、γ、μ、δ、又はεヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域からなる群から選択される。好ましくは、上述の定常領域は、γ１、γ２、γ３、又はγ４ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である。好ましい実施形態では、免疫グロブリン軽鎖定常領域ドメインは、κ又はλヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域からなる群から選択される。免疫グロブリンからのアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に対して連結されてもよい。免疫グロブリン軽鎖融合タンパク質及び免疫グロブリン重鎖融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質移入された細胞は、抗体の構造を有する融合タンパク質を発現する。得られた、結果として生じるタンパク質は、
−  Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の重鎖定常領域及びＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）サブユニット若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の軽鎖定常領域又は
−  Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）サブユニット若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の重鎖定常領域及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の軽鎖定常領域からなる。
抗体に関しては、重鎖及び軽鎖は、ジスルフィドで連結され（鎖間ジスルフィド結合）、重鎖どうしは、ジスルフィドで連結される（鎖間ジスルフィド結合）。
したがって、結果として生じる分子は、２つのヘテロ二量体から構成されるホモ二量体であり、これらのヘテロ二量体のそれぞれは、
−  Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン重鎖定常領域及び
Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン軽鎖定常領域から構成される。
又はホモ二量体は、２つのヘテロ二量体から構成され、これらのヘテロ二量体のそれぞれは、
−  Ｓｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１ＲＡｃＰ）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン重鎖定常領域及び
Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン軽鎖定常領域から構成される。
両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。一実施形態では、定常重鎖は、ヒトγ４であり、ヒトγ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。他の実施形態では、定常重鎖は、ヒトγ１である。定常重鎖は、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異させてもよい。
【０１４６】
１．一実施形態では、本発明の組換え抗体は、
−  ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに作動可能に連結された、γ１、γ２、γ３、又はγ４ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である２つの同一の重鎖定常領域及び
−  ヒトＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外ドメインに作動可能に連結された、κ又はλヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域である２つの同一の軽鎖定常領域を含む又はそれらからなる。一実施形態では、天然抗体に関しては、重鎖及び軽鎖は、ジスルフィドで連結され（鎖間ジスルフィド結合）、重鎖どうしは、ジスルフィドで連結される（鎖間ジスルフィド結合）。
【０１４７】
２．他の特定の実施形態では、本発明の組換え抗体は、
−  ヒトＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外ドメインに作動可能に連結された、γ１、γ２、γ３、又はγ４ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である２つの同一の重鎖定常領域及び
−  ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに作動可能に連結された、κ又はλヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域である２つの同一の軽鎖定常領域を含む又はそれらからなる。一実施形態では、天然抗体に関しては、重鎖及び軽鎖は、ジスルフィドで連結され（鎖間ジスルフィド結合）、重鎖どうしは、ジスルフィドで連結される（鎖間ジスルフィド結合）。
【０１４８】
３．他の実施形態では、本発明は、上記第１又は２項に定義される組換え抗体に関し、重鎖の定常領域は、γ１ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である。
【０１４９】
４．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、又は３項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖の定常領域は、κヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域である。
【０１５０】
５．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、又は４項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインは、本明細書で上記に定義される配列番号２のアミノ酸残基１９〜３２９又は上述のポリペプチドの変異体からなる。
【０１５１】
６．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、又は５項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外ドメインは、本明細書で上記に定義される配列番号６のアミノ酸残基２１〜３６７又は上述のポリペプチドの変異体からなる。
【０１５２】
７．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、又は６項に定義される組換え抗体に関し、重鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外ドメインに対して、ペプチド結合を通して直接結びつけられる。
【０１５３】
８．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、又は７項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外ドメインに対して、ペプチド結合を通して直接結びつけられる。
【０１５４】
９．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、又は６項に定義される組換え抗体に関し、重鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外ドメインに対して、ペプチドリンカーを介して、ペプチド結合を通して結びつけられる。ペプチドリンカーは、サブユニット間に導入された１〜３個のアミノ酸残基長ほどの短いものとすることができる（好ましくは、グリシン、セリン、トレオニン、又はアラニン等の小さなアミノ酸からなる）又はより長く、たとえば１３、１５、若しくは１６個のアミノ酸残基長とすることができる。好ましくは、ペプチドリンカーは、免疫学的に非活性であるペプチドである。上述のリンカーは、配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチド（配列番号１３）、たとえば、Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔからなる１３個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１４）、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１５）、ＧＧＳＧＧ  ＳＧＧＧＧ  ＳＧＧＧＧ  Ｓからなる１６個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１６）、又はヒトＩｇＧ（たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のヒンジ領域であってもよい。一実施形態では、上述のペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列である（配列番号１５）。
【０１５５】
１０．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、又は９項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外ドメインに対して、ペプチドリンカーを介して、ペプチド結合を通して結びつけられる。ペプチドリンカーは、サブユニット間に導入された１〜３個のアミノ酸残基長ほどの短いものとすることができる（好ましくは、グリシン、セリン、トレオニン、又はアラニン等の小さなアミノ酸からなる）又はより長く、たとえば１３、１５、若しくは１６個のアミノ酸残基長とすることができる。好ましくは、ペプチドリンカーは、免疫学的に非活性であるペプチドである。上述のリンカーは、配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチド（配列番号１３）、たとえば、Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔからなる１３個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１４）、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１５）、ＧＧＳＧＧ  ＳＧＧＧＧ  ＳＧＧＧＧ  Ｓからなる１６個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１６）、又はヒトＩｇＧ（たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のヒンジ領域であってもよい。一実施形態では、上述のペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列である（配列番号１５）。
【０１５６】
１１．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０項に定義される組換え抗体に関し、定常重鎖は、ヒトγ４であり、ヒトγ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。
【０１５７】
１２．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０項に定義される組換え抗体に関し、定常重鎖は、ヒトγ１であり、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異される。
【０１５８】
１３．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２項に定義される組換え抗体に関し、重鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外ドメインのＣ末端又はＮ末端、好ましくはＣ末端に対して作動可能に連結される。
【０１５９】
１４．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、又は１３項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外ドメインのＣ末端又はＮ末端、好ましくはＣ末端に対して作動可能に連結される。
【０１６０】
１５．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外ドメインは、重鎖定常領域のＣ末端又はＮ末端、好ましくはＮ末端に対して作動可能に連結される。
【０１６１】
１６．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１ＲＡｃＰの細胞外ドメインは、軽鎖定常領域のＣ末端又はＮ末端、好ましくはＮ末端に対して作動可能に連結される。
【０１６２】
また、必要な場合、本明細書に記載される融合タンパク質は、精製又は産生を容易にする任意の機能領域を含んでいてもよい。上記のさらなるアミノ酸配列の特定の例は、ＧＳＴ配列又はＨｉｓタグ配列を含む。
【０１６３】
４）少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）並びに少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２サブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα：
本発明の特定の態様では、自己免疫疾患又は脱髄疾患の症状、特にＭＳを処置する、予防する、又は寛解させるために使用される可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体は、少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（本明細書で上記に定義されるＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）並びに後に本明細書で定義される少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２サブユニットを含む可溶性受容体である。用語「可溶性受容体」は、上記に定義されている。
【０１６４】
ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２（文献中でＩＬ１ＲＲＰ２とも命名される）は、ＩＬ−１受容体ファミリーのメンバーであり、３つの免疫グロブリン様ドメイン（Ｉｇドメイン）を含む細胞外ドメインを所有する。ヒトＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２をコードするｃＤＮＡは、配列番号７に示される。このｃＤＮＡは、５７５個のアミノ酸長のタンパク質（配列番号８）をコードし、このタンパク質は、１９個のアミノ酸のシグナルペプチド（配列番号８の残基１〜１９）を含む、３３５個のアミノ酸の細胞外ドメイン（配列番号８のＮ末端からＣ末端までの残基１〜３３５）、２１個のアミノ酸の膜貫通領域（残基３３６〜３５６）、及び２１９個のアミノ酸の細胞質ドメイン（残基３５７〜５７５）を含む。
【０１６５】
４．１  ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２サブユニット及びその変異体（「Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）」と後に本明細書で命名される）：
一態様では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体のＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２サブユニットは、ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２の細胞外ドメインのすべて又は一部、特にヒトＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２又はその変異体の細胞外ドメインのすべて又は一部を含むポリペプチドである。
【０１６６】
一態様では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体のＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２サブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２））は、配列番号８のアミノ酸残基２０〜３３５を含む若しくはそれからなるポリペプチド又は上述のポリペプチドの変異体である。通常、変異体ポリペプチドは、少なくとも２８０個のアミノ酸長であり、少なくとも３００個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも３１６個のアミノ酸長であることがより多い。変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号８の残基２０〜３３５）と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドとして定義される。より好ましくは、変異体は、参考の配列（配列番号８の残基２０〜３３５）と、５個だけ、より好ましくは４個だけ、さらに好ましくは３個だけ、さらに好ましくは２個だけ、最も好ましくは１個だけアミノ酸が異なっている。本発明のいくつかの特定の態様では、変異体は、参考の配列（配列番号８の残基２０〜３３５）と、Ｎ末端及び／又はＣ末端で、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個のアミノ酸の欠如分だけ異なっている。遺伝子コードを使用する当業者は、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを容易に決定することができる。「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、本明細書で上記のように定義される。
【０１６７】
他の実施形態では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）は、配列番号８のアミノ酸残基２０〜２２１若しくは１１２〜３３５若しくはペプチド結合によって連結された２０〜１２５及び２１２〜３３５を含む若しくはからなるポリペプチド又は上述のポリペプチドの変異体である。通常、変異体ポリペプチドは、少なくとも１８０個のアミノ酸長であり、少なくとも２０２個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも２２４個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも２３０個のアミノ酸長であることがより多い。変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号８の残基２０〜２２１又は１１２〜３３５又はペプチド結合によって連結された２０〜１２５及び２１２〜３３５）と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドとして定義される。より好ましくは、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号８の残基２０〜２２１又は１１２〜３３５又はペプチド結合によって連結された２０〜１２５及び２１２〜３３５）と、５個だけ、より好ましくは４個だけ、さらに好ましくは３個だけ、さらに好ましくは２個だけ、最も好ましくは１個だけアミノ酸が異なっている。本発明のいくつかの特定の態様では、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号８の残基２０〜２２１又は１１２〜３３５又はペプチド結合によって連結された２０〜１２５及び２１２〜３３５）と、Ｎ末端及び／又はＣ末端で、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個のアミノ酸の欠如分だけ異なっている。遺伝子コードを使用する当業者は、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを容易に決定することができる。「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、本明細書で上記のように定義される。
【０１６８】
他の実施形態では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）は、配列番号８のアミノ酸残基２０〜１２５若しくは１１２〜２２１若しくは２１２〜３３５を含む若しくはからなるポリペプチド又は上述のポリペプチドの変異体である。通常、変異体ポリペプチドは、少なくとも９５個のアミノ酸長であり、少なくとも１０６個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも１１０個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも１２４個のアミノ酸長であることがより多い。変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号８の残基２０〜１２５又は１１２〜２２１又は２１２〜３３５）と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドとして定義される。より好ましくは、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号８の残基２０〜１２５又は１１２〜２２１又は２１２〜３３５）と、５個だけ、より好ましくは４個だけ、さらに好ましくは３個だけ、さらに好ましくは２個だけ、最も好ましくは１個だけアミノ酸が異なっている。本発明のいくつかの特定の態様では、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号８の残基２０〜１２５又は１１２〜２２１又は２１２〜３３５）と、Ｎ末端及び／又はＣ末端で、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個のアミノ酸の欠如分だけ異なっている。遺伝子コードを使用する当業者は、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを容易に決定することができる。「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、本明細書で上記のように定義される。
【０１６９】
４．２  同じタンパク質骨格上に少なくとも２つのＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２サブユニット又はその変異体を含む可溶性ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２（「Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ」と後に本明細書で命名される）：
後に本明細書で記載されるように、本発明は、他の態様の中で、少なくとも２つのＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２サブユニット（少なくとも２つのＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２））を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体に関する。少なくとも２つのＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２サブユニット（つまり本明細書で上記に定義される少なくとも２つのＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）サブユニット）を含むこれらの可溶性ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２は、融合タンパク質として同じタンパク質骨格上にあり、後に本明細書で「Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ」と命名される。特定の実施形態では、融合タンパク質は、２つのＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）サブユニットを含む。他の特定の実施形態では、少なくとも２つのＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）サブユニットは、同じであり（つまり、融合タンパク質はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）のホモ多量体であり）、特定の実施形態では、融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）のホモ二量体である。
【０１７０】
少なくとも２つのＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２サブユニットは、互いに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、サブユニットがペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」を介して結びつけられることを示す。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。サブユニットは、直接又は「ペプチドリンカー」を介して連結される。ペプチドリンカーは、サブユニット間に導入された１〜３個のアミノ酸残基長ほどの短いものとすることができる（好ましくは、グリシン、セリン、トレオニン、又はアラニン等の小さなアミノ酸からなる）又はより長く、たとえば１３、１５、若しくは１６個のアミノ酸残基長とすることができる。好ましくは、ペプチドリンカーは、免疫学的に非活性であるペプチドである。上述のリンカーは、配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチド（配列番号１３）、たとえば、Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔからなる１３個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１４）、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１５）、ＧＧＳＧＧ  ＳＧＧＧＧ  ＳＧＧＧＧ  Ｓからなる１６個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１６）、又はヒトＩｇＧ（たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のヒンジ領域であってもよい。
【０１７１】
４．３少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２サブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα：
本明細書で上記に開示されるように、本発明は、他の態様の中で、少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（本明細書で上記に定義されるＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２サブユニット（本明細書で上記に定義されるＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体に関する。
【０１７２】
４．３．１  同じタンパク質骨格上に少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２サブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα（後に本明細書で「Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ」と命名される）：
本発明の一態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏ１（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）又はＳｏ１（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘは融合タンパク質として同じタンパク質骨格上にある（これらの可溶性受容体は、後に本明細書で「Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ」と命名されることとなる）。この実施形態によれば、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏ１（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニットに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、サブユニットがペプチド連結を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニットに対して、上流に（タンパク質のＮ末端に対してより近くに）又は下流に（タンパク質のＣ末端に対してより近くに）位置させることができる。サブユニットは、直接又は「ペプチドリンカー」を介して連結される。特定の実施形態では、融合タンパク質は、本明細書に定義される１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット及び１つのＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）サブユニットを含む。
【０１７３】
４．３．２  少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２サブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ）を融合タンパク質として同じタンパク質骨格上に含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ）：
他の特定の態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ）を含む融合タンパク質は、それ自体、さらなるアミノ酸ドメインに「作動可能に連結され」ている。用語「作動可能に連結された」は、さらなるアミノ酸ドメインが、ペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。この様式では、この融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。さらなるアミノ酸ドメインは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘに対して、上流（Ｎ末端）又は下流（Ｃ末端）に位置させてもよい。この実施形態では、さらなるアミノ酸ドメインは、たとえば融合タンパク質の安定性、ターゲティング、若しくは生物学的利用能の増加を提供する、精製若しくは産生を容易にする、又は分子にさらなる生物活性を付与する任意の機能領域を含む。上記のさらなるアミノ酸配列の特定の例は、ＧＳＴ配列、Ｈｉｓタグ配列、免疫グロブリン分子の定常領域、又は米国特許第６，１９３，９７２号に記載されるヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）等のヘテロ二量体タンパク質ホルモンを含む。また、必要な場合、融合タンパク質中に含まれるさらなるアミノ酸配列は、産生／精製プロセスの終了時に又はｉｎ  ｖｉｖｏで、たとえば適切なエンド／エキソペプチダーゼによって取り除かれてもよい。たとえば、融合タンパク質に含まれるスペーサー配列は、ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで、酵素の開裂によって、さらなるアミノ酸ドメインから所望のポリペプチド変異体を分離するために使用することができる、エンドペプチダーゼ（カスパーゼ等）のための認識部位を含んでいてもよい。この実施形態の特定の態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘは、本明細書で上記に定義される１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット及び１つのＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）サブユニットを含む。
【０１７４】
４．３．３  Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘの多量体：
特定の態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ可溶性受容体は、多量体として産生される。多量体の各サブユニットは、１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘを含む。これらの多量体は、ホモ二量体可溶性受容体、ヘテロ二量体可溶性受容体、又は多量体可溶性受容体であってもよく、多量体受容体は、一般に、９個を超えるサブユニットを含まない、好ましくは６個を超えるサブユニットを含まない、さらに好ましくは３個を超えるサブユニット、最も好ましくは２個を超えるサブユニットを含まない。好ましくは、これらの多量体可溶性受容体は、本明細書で上記に定義されるＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘのホモ二量体である。一実施形態では、多量体のサブユニットは、共有結合を介して連結される。サブユニットは、架橋試薬又はポリペプチドリンカーを介する等での任意の適した手段によって共有結合で連結されてもよい。他の実施形態では、サブユニットは、非共有結合を介して連結される。
【０１７５】
一実施形態では、各Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニットは、サブユニットの多量体化を提供するさらなるアミノ酸ドメインに作動可能に連結される（特に、さらなるドメインは、サブユニットの二量体化を提供する任意の機能領域を含む）。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。さらなるアミノ酸ドメインは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニットの配列の上流に（Ｎ末端）又は下流に（Ｃ末端）位置させてもよい。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。これらの実施形態では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体は、二量体等の高次構造を形成するために他の融合タンパク質中に存在する多量体形成成分と相互作用することができる多量体形成成分に作動可能に連結されたＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニットを含有する融合タンパク質の多量体である。この種類の融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２Ｐ）ｘサブユニット配列を二量体、三量体等の形成を可能にする、他のタンパク質から単離されたドメインに作動可能に連結することにより調製されてもよい。本発明のＩＬ−１８Ｒα可溶性受容体の多量体化を可能にするタンパク質配列についての例は、免疫グロブリン、ｈＣＧ（国際公開第９７／３０１６１号）、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【０１７６】
特定の態様では、多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘの二量体であり、サブユニットは、免疫グロブリンに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。この実施形態では、サブユニットは、免疫グロブリン、詳細にはヒト免疫グロブリン、さらに詳細にはヒト免疫グロブリンのＦｃ部分のすべて又は一部に作動可能に連結される。典型的に、ヒト免疫グロブリンのＦｃ部分は、２つの定常領域ドメイン（ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン）及び１つのヒンジ領域を含有するが、可変領域を欠く（たとえば米国特許第６，０１８，０２６号及び第５，７５０，３７５号を参照されたい）。免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ並びに任意のサブクラス又はアイソタイプ、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４；ＩｇＡ−１及びＩｇＡ−２を含む免疫グロブリンの主要なクラスのいずれかから選択されてもよい。一実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ４であり、ヒトＩｇＧ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。他の実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ１である。Ｆｃ部は、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異させてもよい。普通、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニットは、同じ免疫グロブリンに作動可能に連結される（詳細にはヒト免疫グロブリン、たとえばヒトＩｇＧ４又はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に対して）。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。上記融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡ及び／又は他方のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて細胞を形質移入し、同じ細胞中で二量体を発現させることにより調製することができる。特定の実施形態では、サブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘは、各単量体に関して同じである（つまり二量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘのホモ二量体である）。さらに詳細には、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘのサブユニットは、同じ免疫グロブリンに作動可能に連結される（詳細にはヒト免疫グロブリン、たとえばヒトＩｇＧ４又はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に対して）。上記融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて細胞を形質移入し、同じ細胞中で二量体を発現させることにより調製することができる。サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。たとえばＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌ．４，ｐａｇｅｓ  １０．１９．１−１０．１９．１１，１９９２中のＨｏｌｌｅｎｂａ���ｇｈ及びＡｒｕｆｆｏ「免疫グロブリン融合タンパク質の構築」（Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）又は国際公開第０１／０３７３７号に記載されている方法等の、免疫グロブリン融合タンパク質を作製するための方法は、当技術分野でよく知られている。
【０１７７】
あるいは、本発明のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘの二量体は、受容体サブユニットのうちの一方を免疫グロブリン重鎖の定常領域に作動可能に連結し、他方の受容体サブユニットを免疫グロブリン軽鎖の定常領域に作動可能に連結することによって調製することができる。用語「作動可能に連結された」は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ及び免疫グロブリンが、ペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。たとえば、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニットは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３領域に作動可能に連結することができ、別の又は同じＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニットは、Ｉｇカッパ軽鎖のＣカッパ領域に作動可能に連結することができる。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。免疫グロブリン軽鎖融合タンパク質及び免疫グロブリン重鎖融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質移入された細胞は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニットをそれぞれ含有する重鎖／軽鎖ヘテロ二量体を発現する。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。特定の実施形態では、サブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘは、各単量体に関して同じである（つまり二量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘのホモ二量体である）。
【０１７８】
本発明の他の特定の態様では、多量体Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘのサブユニット（本明細書で上記に定義される）は、非共有結合を介して連結される。サブユニットの非共有結合は、その生物活性（つまりＭＳの症状を低下させるためのその能力）を妨害しない任意の適した手段によって達成されてもよい。特定の態様では、これらの多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘの二量体であり、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘのうちの一方のサブユニットは、第１の化合物に作動可能に連結され、別の又は同じサブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘは、第１の化合物に非共有結合するであろう第２の化合物に作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。上記化合物の例は、ビオチン及びアビジンである。Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘの二量体は、受容体サブユニットのうちの一方をビオチンに作動可能に連結し、他方のサブユニットをアビジンに作動可能に連結することにより調製することができる。したがって、受容体は、アビジンとのビオチンの非共有相互作用を通して形成される。他の例は、ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットを含む。これらの実施形態では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘの一方のサブユニットをコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットをコードするＤＮＡ構築物に対して融合され、他方のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニットをコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンの他方のサブユニットをコードするＤＮＡに対して融合される（米国特許第６，１９３，９７２号に開示されるように）。これらのＤＮＡ構築物は、同じ細胞中で同時発現され、各同時発現する配列が、発現に際してヘテロ二量体を形成するように、対応するホルモンサブユニットを含有するので、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘヘテロ二量体受容体融合タンパク質の発現につながる。ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンに由来するアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。特定の実施形態では、サブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘは、各単量体に関して同じである（つまり二量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘのホモ二量体である）。
【０１７９】
Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニットの二量体化を可能にするタンパク質配列についての他の例は、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【０１８０】
また、必要な場合、本明細書に記載される融合タンパク質は、精製又は産生を容易にする任意の機能領域を含んでいてもよい。上記のさらなるアミノ酸配列の特定の例は、ＧＳＴ配列又はＨｉｓタグ配列を含む。
【０１８１】
４．３．４  ヘテロ多量体として、少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２サブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα：
特定の態様では、少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２サブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ）を含む本発明の可溶性受容体は、ヘテロ多量体である。ヘテロ多量体の各サブユニットは、
−  少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）又は
−  少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２サブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ）を含む。
これらのヘテロ多量体は、一般に、９個を超えるサブユニット、好ましくは６個を超えるサブユニット、さらに好ましくは３個を超えるサブユニット、最も好ましくは２個を超えるサブユニットを含まない。好ましくは、これらのヘテロ多量体可溶性受容体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ（上記に定義される）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ（上記に定義される）からなる１つのサブユニットを含むヘテロ二量体である。一実施形態では、ヘテロ多量体のサブユニットは、共有結合を介して連結される。サブユニットは、架橋試薬を介する等での任意の適した手段によって共有結合で連結されてもよい。他の実施形態では、サブユニットは、非共有結合を介して連結される。
【０１８２】
一実施形態では、ヘテロ多量体の各サブユニットは、サブユニットの多量体化を提供するさらなるアミノ酸ドメインに作動可能に連結される（特に、さらなるドメインは、サブユニットの二量体化を提供する任意の機能領域を含んでいてもよい）。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。さらなるアミノ酸ドメインは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット（複数可）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット（複数可）の配列の上流（Ｎ末端）又は下流（Ｃ末端）（好ましくは下流（Ｃ末端））及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）サブユニット（複数可）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニット（複数可）の配列の上流（Ｎ末端）又は下流（Ｃ末端）（好ましくは下流（Ｃ末端））に位置させてもよい。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。これらの実施形態では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体は、二量体等の高次構造を形成するために他の融合タンパク質中に存在する多量体形成成分と相互作用することができる多量体形成成分に作動可能に連結されたＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘからなる１つのサブユニットを含有する融合タンパク質のヘテロ多量体である。この種類の融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット配列又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット配列及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）サブユニット配列又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニット配列を二量体、三量体等の形成を可能にする、他のタンパク質から単離されたドメインに作動可能に連結することにより調製されてもよい。本発明のＩＬ−１８Ｒα可溶性受容体の多量体化を可能にするタンパク質配列についての例は、免疫グロブリン、ｈＣＧ（国際公開第９７／３０１６１号）、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【０１８３】
特定の態様では、ヘテロ多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘからなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘからなる１つのサブユニットを含むヘテロ二量体である。他の特定の態様では、ヘテロ二量体の２つのサブユニットは、免疫グロブリンに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。これらの実施形態では、サブユニットは、免疫グロブリン、詳細にはヒト免疫グロブリン、さらに詳細にはヒト免疫グロブリンのＦｃ部分のすべて又は一部に作動可能に連結される。典型的に、ヒト免疫グロブリンのＦｃ部分は、２つの定常領域ドメイン（ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン）及び１つのヒンジ領域を含有するが、可変領域を欠く（たとえば米国特許第６，０１８，０２６号及び第５，７５０，３７５号を参照されたい）。免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ並びに任意のサブクラス又はアイソタイプ、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４；ＩｇＡ−１及びＩｇＡ−２を含む免疫グロブリンの主要なクラスのいずれかから選択されてもよい。一実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ４であり、ヒトＩｇＧ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。他の実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ１である。Ｆｃ部は、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異させてもよい。普通、２つのサブユニットは、同じ免疫グロブリンに作動可能に連結される（詳細にはヒト免疫グロブリン、たとえばヒトＩｇＧ４又はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に対して）。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、サブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。上記融合タンパク質は、第１のサブユニット：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡ及び／又は他方のサブユニット：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて細胞を形質移入し、同じ細胞中で二量体を発現させることにより調製することができる。サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。たとえばＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌ．４，ｐａｇｅｓ  １０．１９．１−１０．１９．１１，１９９２中のＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈ及びＡｒｕｆｆｏ「免疫グロブリン融合タンパク質の構築」（Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）又は国際公開第０１／０３７３７号に記載されている方法等の、免疫グロブリン融合タンパク質を作製するための方法は、当技術分野でよく知られている。
【０１８４】
あるいは、本発明のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット、及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘからなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘからなる１つのサブユニットを含むヘテロ二量体は、受容体サブユニットのうちの一方を免疫グロブリン重鎖の定常領域に作動可能に連結し、他方の受容体サブユニットを免疫グロブリン軽鎖の定常領域に作動可能に連結することによって調製することができる。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。たとえば、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３領域に作動可能に連結することができ、Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）サブユニットは、Ｉｇカッパ軽鎖のＣカッパ領域に作動可能に連結することができ（逆もまた同様）、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３領域に作動可能に連結することができ、Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニットは、Ｉｇカッパ軽鎖のＣカッパ領域に作動可能に連結することができる（又は逆もまた同様）。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、サブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。免疫グロブリン軽鎖融合タンパク質及び免疫グロブリン重鎖融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質移入された細胞は、サブユニットをそれぞれ含有する重鎖／軽鎖ヘテロ二量体を発現する。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。
【０１８５】
本発明の他の特定の態様では、ヘテロ多量体のサブユニットは、非共有結合を介して連結される。サブユニットの非共有結合は、その生物活性（つまりＭＳの症状を低下させるためのその能力）を妨害しない任意の適した手段によって達成されてもよい。特定の態様では、これらのヘテロ多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘからなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘからなる１つのサブユニットを含むヘテロ二量体であり、一方のサブユニットは、第１の化合物に作動可能に連結され、他方は、第１の化合物に非共有結合するであろう第２の化合物に作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。上記化合物の例は、ビオチン及びアビジンである。これらのヘテロ二量体は、受容体サブユニットのうちの一方をビオチンに作動可能に連結し、他方のサブユニットをアビジンに作動可能に連結することにより調製することができる。したがって、受容体は、アビジンとのビオチンの非共有相互作用を通して形成される。他の例は、ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットを含む。これらの実施形態では、１つのサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）をコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットをコードするＤＮＡ構築物に対して融合され、他方のサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ）をコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンの他方のサブユニットをコードするＤＮＡに対して融合される（米国特許第６，１９３，９７２号に開示される）。これらのＤＮＡ構築物は、同じ細胞中で同時発現され、各同時発現する配列が、発現に際してヘテロ二量体を形成するように、対応するホルモンサブユニットを含有するので、ヘテロ二量体受容体融合タンパク質の発現につながる。ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンに由来するアミノ酸配列は、サブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。
【０１８６】
Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニットの二量体化を可能にするタンパク質配列についての他の例は、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【０１８７】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット及び１つのＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニットを含むヘテロ多量体は、組換え抗体である。組換え抗体の技術は、たとえば米国特許第６，０１８，０２６号に記載される。その場合、１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘの多量体は、第１のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖及び第２のＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘポリペプチド鎖を含む多量体ポリペプチド融合物であり、ポリペプチド鎖の一方は、免疫グロブリン重鎖定常領域に作動可能に連結され、他方のポリペプチド鎖は、免疫グロブリン軽鎖定常領域に作動可能に連結される。一実施形態では、第１のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖は、免疫グロブリン重鎖定常領域に作動可能に連結され、第２のＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘポリペプチド鎖は、免疫グロブリン軽鎖定常領域に作動可能に連結される。他の実施形態では、第１のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖は、免疫グロブリン軽鎖定常領域に作動可能に連結され、第２のＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘポリペプチド鎖は、免疫グロブリン重鎖定常領域に作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘ並びに免疫グロブリン重鎖又は軽鎖定常領域が、ペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。一実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域ドメイン及び免疫グロブリン軽鎖定常領域ドメインは、ヒト免疫グロブリン定常領域である。一実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域ドメインは、α、γ、μ、δ、又はεヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域からなる群から選択される。好ましくは、上述の定常領域は、γ１、γ２、γ３、又はγ４ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である。好ましい実施形態では、免疫グロブリン軽鎖定常領域ドメインは、κ又はλヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域からなる群から選択される。免疫グロブリンからのアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に対して連結されてもよい。免疫グロブリン軽鎖融合タンパク質及び免疫グロブリン重鎖融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質移入された細胞は、抗体の構造を有する融合タンパク質を発現する。得られた、結果として生じるタンパク質は、
−  Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の重鎖定常領域及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）サブユニット若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の軽鎖定常領域又は
−  Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）サブユニット若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の重鎖定常領域及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の軽鎖定常領域からなる。
抗体に関しては、重鎖及び軽鎖は、ジスルフィドで連結され（鎖間ジスルフィド結合）、重鎖どうしは、ジスルフィドで連結される（鎖間ジスルフィド結合）。
したがって、結果として生じる分子は、２つのヘテロ二量体から構成されるホモ二量体であり、これらのヘテロ二量体のそれぞれは、
−  Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン重鎖定常領域及び
Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン軽鎖定常領域から構成される。
又はホモ二量体は、２つのヘテロ二量体から構成され、これらのヘテロ二量体のそれぞれは、
−  Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン重鎖定常領域及び
Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン軽鎖定常領域から構成される。
両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。一実施形態では、定常重鎖は、ヒトγ４であり、ヒトγ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。他の実施形態では、定常重鎖は、ヒトγ１である。定常重鎖は、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異させてもよい。
【０１８８】
１．一実施形態では、本発明の組換え抗体は、
−  ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに作動可能に連結された、γ１、γ２、γ３、又はγ４ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である２つの同一の重鎖定常領域及び
−  ヒトＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２の細胞外ドメインに作動可能に連結された、κ又はλヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域である２つの同一の軽鎖定常領域を含む又はそれらからなる。一実施形態では、天然抗体に関しては、重鎖及び軽鎖は、ジスルフィドで連結され（鎖間ジスルフィド結合）、重鎖どうしは、ジスルフィドで連結される（鎖間ジスルフィド結合）。
【０１８９】
２．他の特定の実施形態では、本発明の組換え抗体は、
−  ヒトＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２の細胞外ドメインに作動可能に連結された、γ１、γ２、γ３、又はγ４ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である２つの同一の重鎖定常領域及び
−  ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに作動可能に連結された、κ又はλヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域である２つの同一の軽鎖定常領域を含む又はそれらからなる。一実施形態では、天然抗体に関しては、重鎖及び軽鎖は、ジスルフィドで連結され（鎖間ジスルフィド結合）、重鎖どうしは、ジスルフィドで連結される（鎖間ジスルフィド結合）。
【０１９０】
３．他の実施形態では、本発明は、上記第１又は２項に定義される組換え抗体に関し、重鎖の定常領域は、γ１ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である。
【０１９１】
４．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、又は３項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖の定常領域は、κヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域である。
【０１９２】
５．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、又は４項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインは、本明細書で上記に定義される配列番号２のアミノ酸残基１９〜３２９又は上述のポリペプチドの変異体からなる。
【０１９３】
６．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、又は５項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２の細胞外ドメインは、本明細書で上記に定義される配列番号８のアミノ酸残基２０〜３３５又は上述のポリペプチドの変異体からなる。
【０１９４】
７．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４，５、又は６項に定義される組換え抗体に関し、重鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２の細胞外ドメインに対して、ペプチド結合を通して直接結びつけられる。
【０１９５】
８．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、又は７項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２の細胞外ドメインに対して、ペプチド結合を通して直接結びつけられる。
【０１９６】
９．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４，５、又は６項に定義される組換え抗体に関し、重鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２の細胞外ドメインに対して、ペプチドリンカーを介して、ペプチド結合を通して結びつけられる。ペプチドリンカーは、サブユニット間に導入された１〜３個のアミノ酸残基長ほどの短いものとすることができる（好ましくは、グリシン、セリン、トレオニン、又はアラニン等の小さなアミノ酸からなる）又はより長く、たとえば１３、１５、若しくは１６個のアミノ酸残基長とすることができる。好ましくは、ペプチドリンカーは、免疫学的に非活性であるペプチドである。上述のリンカーは、配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチド（配列番号１３）、たとえば、Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔからなる１３個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１４）、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１５）、ＧＧＳＧＧ  ＳＧＧＧＧ  ＳＧＧＧＧ  Ｓからなる１６個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１６）、又はヒトＩｇＧ（たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のヒンジ領域であってもよい。一実施形態では、上述のペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列である（配列番号１５）。
【０１９７】
１０．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、又は９項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２の細胞外ドメインに対して、ペプチドリンカーを介して、ペプチド結合を通して結びつけられる。ペプチドリンカーは、サブユニット間に導入された１〜３個のアミノ酸残基長ほどの短いものとすることができる（好ましくは、グリシン、セリン、トレオニン、又はアラニン等の小さなアミノ酸からなる）又はより長く、たとえば１３、１５、若しくは１６個のアミノ酸残基長とすることができる。好ましくは、ペプチドリンカーは、免疫学的に非活性であるペプチドである。上述のリンカーは、配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチド（配列番号１３）、たとえば、Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔからなる１３個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１４）、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１５）、ＧＧＳＧＧ  ＳＧＧＧＧ  ＳＧＧＧＧ  Ｓからなる１６個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１６）、又はヒトＩｇＧ（たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のヒンジ領域であってもよい。一実施形態では、上述のペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列である（配列番号１５）。
【０１９８】
１１．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０項に定義される組換え抗体に関し、定常重鎖は、ヒトγ４であり、ヒトγ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。
【０１９９】
１２．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０項に定義される組換え抗体に関し、定常重鎖は、ヒトγ１であり、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異される。
【０２００】
１３．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２項に定義される組換え抗体に関し、重鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２の細胞外ドメインのＣ末端又はＮ末端、好ましくはＣ末端に対して作動可能に連結される。
【０２０１】
１４．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、又は１３項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２の細胞外ドメインのＣ末端又はＮ末端、好ましくはＣ末端に対して作動可能に連結される。
【０２０２】
１５．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２の細胞外ドメインは、重鎖定常領域のＣ末端又はＮ末端、好ましくはＮ末端に対して作動可能に連結される。
【０２０３】
１６．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２の細胞外ドメインは、軽鎖定常領域のＣ末端又はＮ末端、好ましくはＮ末端に対して作動可能に連結される。
【０２０４】
また、必要な場合、本明細書に記載される融合タンパク質は、精製又は産生を容易にする任意の機能領域を含んでいてもよい。上記のさらなるアミノ酸配列の特定の例は、ＧＳＴ配列又はＨｉｓタグ配列を含む。
【０２０５】
５）少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）並びに少なくとも１つのＴ１／ＳＴ２サブユニット（Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）及び／又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα：
本発明の特定の態様では、自己免疫疾患又は脱髄疾患の症状、特にＭＳを処置する、予防する、又は寛解させるために使用される可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体は、少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（本明細書で上記に定義されるＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）並びに後に本明細書で定義される少なくとも１つのＴ１／ＳＴ２サブユニットを含む可溶性受容体である。用語「可溶性受容体」は、上記に定義されている。
【０２０６】
Ｔ１／ＳＴ２（文献中でＤＥＲ４、ＦＩＴ−１、ＭＧＣ３２６２３、ＳＴ２Ｌ、又はＳＴ２Ｖとも命名される）は、ＩＬ−１受容体ファミリーのメンバーであり、３つの免疫グロブリン様ドメイン（Ｉｇドメイン）を含む細胞外ドメインを所有する。ヒトＴ１／ＳＴ２をコードするｃＤＮＡは、配列番号９に示される。このｃＤＮＡは、５５６個のアミノ酸長のタンパク質（配列番号１０）をコードし、このタンパク質は、１８個のアミノ酸のシグナルペプチド（配列番号１０の残基１〜１８）を含む、３２８個のアミノ酸の細胞外ドメイン（配列番号１０のＮ末端からＣ末端までの残基１〜３２８）；２１個のアミノ酸の膜貫通領域（残基３２９〜３４９）、及び２０７個のアミノ酸の細胞質ドメイン（残基３５０〜５５６）を含む。
【０２０７】
５．１  Ｔ１／ＳＴ２サブユニット及びその変異体（「Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）」と後に本明細書で命名される）：
一態様では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体のＴ１／ＳＴ２サブユニットは、Ｔ１／ＳＴ２の細胞外ドメインのすべて又は一部、特にヒトＴ１／ＳＴ２又はその変異体の細胞外ドメインのすべて又は一部を含むポリペプチドである。
【０２０８】
一態様では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体のＴ１／ＳＴ２サブユニット（Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２））は、配列番号１０のアミノ酸残基１９〜３２８を含む若しくはそれからなるポリペプチド又は上述のポリペプチドの変異体である。通常、変異体ポリペプチドは、少なくとも２８０個のアミノ酸長であり、少なくとも３００個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも３１０個のアミノ酸長であることがより多い。変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号１０の残基１９〜３２８）と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドとして定義される。より好ましくは、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号１０の残基１９〜３２８）と、５個だけ、より好ましくは４個だけ、さらに好ましくは３個だけ、さらに好ましくは２個だけ、最も好ましくは１個だけアミノ酸が異なっている。本発明のいくつかの特定の態様では、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号１０の残基１９〜３２８）と、Ｎ末端及び／又はＣ末端で、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個のアミノ酸の欠如分だけ異なっている。遺伝子コードを使用する当業者は、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを容易に決定することができる。「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、本明細書で上記のように定義される。
【０２０９】
他の実施形態では、Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）は、配列番号１０のアミノ酸残基１９〜２１１又は１０４〜３２８又はペプチド結合によって連結された１９〜１１３及び１９８〜３２８を含む若しくはそれからなるポリペプチド又は上述のポリペプチドの変異体である。通常、変異体ポリペプチドは、少なくとも１８０個のアミノ酸長であり、少なくとも１９３個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも２２５個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも２２６個のアミノ酸長であることがより多い。変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号１０の残基１９〜２１１又は１０４〜３２８又はペプチド結合によって連結された１９〜１１３及び１９８〜３２８）と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドとして定義される。より好ましくは、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号１０の残基１９〜２１１又は１０４〜３２８又はペプチド結合によって連結された１９〜１１３及び１９８〜３２８）と、５個だけ、より好ましくは４個だけ、さらに好ましくは３個だけ、さらに好ましくは２個だけ、最も好ましくは１個だけアミノ酸が異なっている。本発明のいくつかの特定の態様では、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号１０の残基１９〜２１１又は１０４〜３２８又はペプチド結合によって連結された１９〜１１３及び１９８〜３２８）と、Ｎ末端及び／又はＣ末端で、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個のアミノ酸の欠如分だけ異なっている。遺伝子コードを使用する当業者は、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを容易に決定することができる。「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、本明細書で上記のように定義される。
【０２１０】
他の実施形態では、Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）は、配列番号１０のアミノ酸残基１９〜１１３若しくは１０４〜２１１若しくは１９８〜３２８を含む若しくはそれからなるポリペプチド又は上述のポリペプチドの変異体である。通常、変異体ポリペプチドは、少なくとも８５個のアミノ酸長であり、少なくとも９５個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも１０８個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも１３１個のアミノ酸長であることがより多い。変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号１０の残基１９〜１１３又は１０４〜２１１又は１９８〜３２８）と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドとして定義される。より好ましくは、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号１０の残基１９〜１１３又は１０４〜２１１又は１９８〜３２８）と、５個だけ、より好ましくは４個だけ、さらに好ましくは３個だけ、さらに好ましくは２個だけ、最も好ましくは１個だけアミノ酸が異なっている。本発明のいくつかの特定の態様では、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号１０の残基１９〜１１３又は１０４〜２１１又は１９８〜３２８）と、Ｎ末端及び／又はＣ末端で、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個のアミノ酸の欠如分だけ異なっている。遺伝子コードを使用する当業者は、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを容易に決定することができる。「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、本明細書で上記のように定義される。
【０２１１】
５．２  同じタンパク質骨格上に少なくとも２つのＴ１／ＳＴ２サブユニット又はその変異体を含む可溶性Ｔ１／ＳＴ２（「Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ」と後に本明細書で命名される）：
後に本明細書で記載されるように、本発明は、他の態様の中で、少なくとも２つのＴ１／ＳＴ２サブユニット（少なくとも２つのＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２））を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体に関する。少なくとも２つのＴ１／ＳＴ２サブユニット（つまり本明細書で上記に定義される少なくとも２つのＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）サブユニット）を含むこれらの可溶性Ｔ１／ＳＴ２は、融合タンパク質として同じタンパク質骨格上にあり、後に本明細書で「Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ」と命名される。特定の実施形態では、融合タンパク質は、２つのＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）サブユニットを含む。他の特定の実施形態では、少なくとも２つのＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）サブユニットは同じであり（つまり融合タンパク質は、Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）のホモ多量体であり）、特定の実施形態では、融合タンパク質は、Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）のホモ二量体である。
【０２１２】
少なくとも２つのＴ１／ＳＴ２サブユニットは、互いに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、サブユニットがペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」を介して結びつけられることを示す。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。サブユニットは、直接又は「ペプチドリンカー」を介して連結される。ペプチドリンカーは、サブユニット間に導入された１〜３個のアミノ酸残基長ほどの短いものとすることができる（好ましくは、グリシン、セリン、トレオニン、又はアラニン等の小さなアミノ酸からなる）又はより長く、たとえば１３、１５、若しくは１６個のアミノ酸残基長とすることができる。好ましくは、ペプチドリンカーは、免疫学的に非活性であるペプチドである。上述のリンカーは、配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチド（配列番号１３）、たとえば、Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔからなる１３個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１４）、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１５）、ＧＧＳＧＧ  ＳＧＧＧＧ  ＳＧＧＧＧ  Ｓからなる１６個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１６）、又はヒトＩｇＧ（たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のヒンジ領域であってもよい。
【０２１３】
５．３  少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＴ１／ＳＴ２サブユニット（Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα：
本明細書で上記に開示されるように、本発明は、他の態様の中で、少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（本明細書で上記に定義されるＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＴ１／ＳＴ２サブユニット（本明細書で上記に定義されるＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体に関する。
【０２１４】
５．３．１  同じタンパク質骨格上に少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＴ１／ＳＴ２サブユニット（Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα（「Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ」と後に本明細書で命名される）：
本発明の一態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘは、融合タンパク質として同じタンパク質骨格上にある（これらの可溶性受容体は、後に本明細書で「Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ」と命名されることとなる）。この実施形態によれば、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）サブユニット又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニットに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、サブユニットがペプチド連結を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）サブユニット又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニットに対して、上流に（タンパク質のＮ末端に対してより近くに）又は下流に（タンパク質のＣ末端に対してより近くに）位置させることができる。サブユニットは、直接又は「ペプチドリンカー」を介して連結される。特定の実施形態では、融合タンパク質は、本明細書に定義される１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット及び１つのＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）サブユニットを含む。
【０２１５】
５．３．２  少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＴ１／ＳＴ２サブユニット（Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ）を融合タンパク質として同じタンパク質骨格上に含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ）：
他の特定の態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）サブユニット又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ）を含む融合タンパク質は、それ自体、さらなるアミノ酸ドメインに「作動可能に連結され」ている。用語「作動可能に連結された」は、さらなるアミノ酸ドメインが、ペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。この様式では、この融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。さらなるアミノ酸ドメインは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘに対して、上流（Ｎ末端）又は下流（Ｃ末端）に位置させてもよい。この実施形態では、さらなるアミノ酸ドメインは、たとえば融合タンパク質の安定性、ターゲティング、若しくは生物学的利用能の増加を提供する、精製若しくは産生を容易にする、又は分子にさらなる生物活性を付与する任意の機能領域を含む。上記のさらなるアミノ酸配列の特定の例は、ＧＳＴ配列、Ｈｉｓタグ配列、免疫グロブリン分子の定常領域、又は米国特許第６，１９３，９７２号に記載されるヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）等のヘテロ二量体タンパク質ホルモンを含む。また、必要な場合、融合タンパク質中に含まれるさらなるアミノ酸配列は、産生／精製プロセスの終了時に又はｉｎ  ｖｉｖｏで、たとえば適切なエンド／エキソペプチダーゼによって取り除かれてもよい。たとえば、融合タンパク質に含まれるスペーサー配列は、ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで、酵素の開裂によって、さらなるアミノ酸ドメインから所望のポリペプチド変異体を分離するために使用することができる、エンドペプチダーゼ（カスパーゼ等）のための認識部位を含んでいてもよい。この実施形態の特定の態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘは、本明細書で上記に定義される１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット及び１つのＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）サブユニットを含む。
【０２１６】
５．３．３  Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘの多量体：
特定の態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ可溶性受容体は、多量体として産生される。多量体の各サブユニットは、１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘを含む。これらの多量体は、ホモ二量体可溶性受容体、ヘテロ二量体可溶性受容体、又は多量体可溶性受容体であってもよく、多量体受容体は、一般に、９個を超えるサブユニットを含まない、好ましくは６個を超えるサブユニットを含まない、さらに好ましくは３個を超えるサブユニット、最も好ましくは２個を超えるサブユニットを含まない。好ましくは、これらの多量体可溶性受容体は、本明細書で上記に定義されるＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘのホモ二量体である。一実施形態では、多量体のサブユニットは、共有結合を介して連結される。サブユニットは、架橋試薬又はポリペプチドリンカーを介する等での任意の適した手段によって共有結合で連結されてもよい。他の実施形態では、サブユニットは、非共有結合を介して連結される。
【０２１７】
一実施形態では、各Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニットは、サブユニットの多量体化を提供するさらなるアミノ酸ドメインに作動可能に連結される（特に、さらなるドメインは、サブユニットの二量体化を提供する任意の機能領域を含む）。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。さらなるアミノ酸ドメインは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニットの配列の上流に（Ｎ末端）又は下流に（Ｃ末端）位置させてもよい。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。これらの実施形態では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体は、二量体等の高次構造を形成するために他の融合タンパク質中に存在する多量体形成成分と相互作用することができる多量体形成成分に作動可能に連結されたＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニットを含有する融合タンパク質の多量体である。この種類の融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニット配列を二量体、三量体等の形成を可能にする、他のタンパク質から単離されたドメインに作動可能に連結することにより調製されてもよい。本発明のＩＬ−１８Ｒα可溶性受容体の多量体化を可能にするタンパク質配列についての例は、免疫グロブリン、ｈＣＧ（国際公開第９７／３０１６１号）、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【０２１８】
特定の態様では、多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘの二量体であり、サブユニットは、免疫グロブリンに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。この実施形態では、サブユニットは、免疫グロブリン、詳細にはヒト免疫グロブリン、さらに詳細にはヒト免疫グロブリンのＦｃ部分のすべて又は一部に作動可能に連結される。典型的に、ヒト免疫グロブリンのＦｃ部分は、２つの定常領域ドメイン（ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン）及び１つのヒンジ領域を含有するが、可変領域を欠く（たとえば米国特許第６，０１８，０２６号及び第５，７５０，３７５号を参照されたい）。免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ並びに任意のサブクラス又はアイソタイプ、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４；ＩｇＡ−１及びＩｇＡ−２を含む免疫グロブリンの主要なクラスのいずれかから選択されてもよい。一実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ４であり、ヒトＩｇＧ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。他の実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ１である。Ｆｃ部は、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異させてもよい。普通、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニットは、同じ免疫グロブリンに作動可能に連結される（詳細にはヒト免疫グロブリン、たとえばヒトＩｇＧ４又はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に対して）。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。上記融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡ及び／又は他方のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて細胞を形質移入し、同じ細胞中で二量体を発現させることにより調製することができる。特定の実施形態では、サブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘは、各単量体に関して同じである（つまり二量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘのホモ二量体である）。さらに詳細には、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘのサブユニットは、同じ免疫グロブリンに作動可能に連結される（詳細にはヒト免疫グロブリン、たとえばヒトＩｇＧ４又はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に対して）。上記融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて細胞を形質移入し、同じ細胞中で二量体を発現させることにより調製することができる。サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。たとえばＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌ．４，ｐａｇｅｓ  １０．１９．１−１０．１９．１１，１９９２中のＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈ及びＡｒｕｆｆｏ「免疫グロブリン融合タンパク質の���築」（Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）又は国際公開第０１／０３７３７号に記載されている方法等の、免疫グロブリン融合タンパク質を作製するための方法は、当技術分野でよく知られている。
【０２１９】
あるいは、本発明のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘの二量体は、受容体サブユニットのうちの一方を免疫グロブリン重鎖の定常領域に作動可能に連結し、他方の受容体サブユニットを免疫グロブリン軽鎖の定常領域に作動可能に連結することによって調製することができる。用語「作動可能に連結された」は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ及び免疫グロブリンが、ペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。たとえば、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニットは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３領域に作動可能に連結することができ、別の又は同じＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニットは、Ｉｇカッパ軽鎖のＣカッパ領域に作動可能に連結することができる。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。免疫グロブリン軽鎖融合タンパク質及び免疫グロブリン重鎖融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質移入された細胞は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニットをそれぞれ含有する重鎖／軽鎖ヘテロ二量体を発現する。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。特定の実施形態では、サブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘは、各単量体に関して同じである（つまり二量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘのホモ二量体である）。
【０２２０】
本発明の他の特定の態様では、多量体Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘのサブユニット（本明細書で上記に定義される）は、非共有結合を介して連結される。サブユニットの非共有結合は、その生物活性（つまりＭＳの症状を低下させるためのその能力）を妨害しない任意の適した手段によって達成されてもよい。特定の態様では、これらの多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘの二量体であり、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘのうちの一方のサブユニットは、第１の化合物に作動可能に連結され、別の又は同じサブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘは、第１の化合物に非共有結合するであろう第２の化合物に作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。上記化合物の例は、ビオチン及びアビジンである。Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘの二量体は、受容体サブユニットのうちの一方をビオチンに作動可能に連結し、他方のサブユニットをアビジンに作動可能に連結することにより調製することができる。したがって、受容体は、アビジンとのビオチンの非共有相互作用を通して形成される。他の例は、ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットを含む。これらの実施形態では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘの一方のサブユニットをコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットをコードするＤＮＡ構築物に対して融合され、他方のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニットをコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンの他方のサブユニットをコードするＤＮＡに対して融合される（米国特許第６，１９３，９７２号に開示されるように）。これらのＤＮＡ構築物は、同じ細胞中で同時発現され、各同時発現する配列が、発現に際してヘテロ二量体を形成するように、対応するホルモンサブユニットを含有するので、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘヘテロ二量体受容体融合タンパク質の発現につながる。ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンに由来するアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。特定の実施形態では、サブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘは、各単量体に関して同じである（つまり二量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘのホモ二量体である）。
【０２２１】
Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニットの二量体化を可能にするタンパク質配列についての他の例は、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【０２２２】
また、必要な場合、本明細書に記載される融合タンパク質は、精製又は産生を容易にする任意の機能領域を含んでいてもよい。上記のさらなるアミノ酸配列の特定の例は、ＧＳＴ配列又はＨｉｓタグ配列を含む。
【０２２３】
５．３．４  ヘテロ多量体として、少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＴ１／ＳＴ２サブユニット（Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα：
特定の態様では、少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＴ１／ＳＴ２サブユニット（Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ）を含む本発明の可溶性受容体は、ヘテロ多量体である。ヘテロ多量体の各サブユニットは、
−  少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）又は
−  少なくとも１つのＴ１／ＳＴ２サブユニット（Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）若しくはＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ）を含む。
これらのヘテロ多量体は、一般に、９個を超えるサブユニット、好ましくは６個を超えるサブユニット、さらに好ましくは３個を超えるサブユニット、最も好ましくは２個を超えるサブユニットを含まない。好ましくは、これらのヘテロ多量体可溶性受容体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ（上記に定義される）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ（上記に定義される）からなる１つのサブユニットを含むヘテロ二量体である。一実施形態では、ヘテロ多量体のサブユニットは、共有結合を介して連結される。サブユニットは、架橋試薬を介する等での任意の適した手段によって共有結合で連結されてもよい。他の実施形態では、サブユニットは、非共有結合を介して連結される。
【０２２４】
一実施形態では、ヘテロ多量体の各サブユニットは、サブユニットの多量体化を提供するさらなるアミノ酸ドメインに作動可能に連結される（特に、さらなるドメインは、サブユニットの二量体化を提供する任意の機能領域を含んでいてもよい）。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。さらなるアミノ酸ドメインは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット（複数可）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット（複数可）の配列の上流（Ｎ末端）又は下流（Ｃ末端）（好ましくは下流（Ｃ末端））及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）サブユニット（複数可）又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニット（複数可）の配列の上流（Ｎ末端）又は下流（Ｃ末端）（好ましくは下流（Ｃ末端））に位置させてもよい。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。これらの実施形態では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体は、二量体等の高次構造を形成するために他の融合タンパク質中に存在する多量体形成成分と相互作用することができる多量体形成成分に作動可能に連結されたＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）若しくはＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘからなる１つのサブユニットを含有する融合タンパク質のヘテロ多量体である。この種類の融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット配列又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット配列及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）サブユニット配列又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニット配列を二量体、三量体等の形成を可能にする、他のタンパク質から単離されたドメインに作動可能に連結することにより調製されてもよい。本発明のＩＬ−１８Ｒα可溶性受容体の多量体化を可能にするタンパク質配列についての例は、免疫グロブリン、ｈＣＧ（国際公開第９７／３０１６１号）、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【０２２５】
特定の態様では、ヘテロ多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘからなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘからなる１つのサブユニットを含むヘテロ二量体である。他の特定の態様では、ヘテロ二量体の２つのサブユニットは、免疫グロブリンに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。これらの実施形態では、サブユニットは、免疫グロブリン、詳細にはヒト免疫グロブリン、さらに詳細にはヒト免疫グロブリンのＦｃ部分のすべて又は一部に作動可能に連結される。典型的に、ヒト免疫グロブリンのＦｃ部分は、２つの定常領域ドメイン（ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン）及び１つのヒンジ領域を含有するが、可変領域を欠く（たとえば米国特許第６，０１８，０２６号及び第５，７５０，３７５号を参照されたい）。免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ並びに任意のサブクラス又はアイソタイプ、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４；ＩｇＡ−１及びＩｇＡ−２を含む免疫グロブリンの主要なクラスのいずれかから選択されてもよい。一実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ４であり、ヒトＩｇＧ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。他の実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ１である。Ｆｃ部は、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異させてもよい。普通、２つのサブユニットは、同じ免疫グロブリンに作動可能に連結される（詳細にはヒト免疫グロブリン、たとえばヒトＩｇＧ４又はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に対して）。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、サブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。上記融合タンパク質は、第１のサブユニット：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡ及び／又は他方のサブユニット：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて細胞を形質移入し、同じ細胞中で二量体を発現させることにより調製することができる。サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。たとえばＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌ．４，ｐａｇｅｓ  １０．１９．１−１０．１９．１１，１９９２中のＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈ及びＡｒｕｆｆｏ「免疫グロブリン融合タンパク質の構築」（Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）又は国際公開第０１／０３７３７号に記載されている方法等の、免疫グロブリン融合タンパク質を作製するための方法は、当技術分野でよく知られている。
【０２２６】
あるいは、本発明のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘからなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘからなる１つのサブユニットを含むヘテロ二量体は、受容体サブユニットのうちの一方を免疫グロブリン重鎖の定常領域に作動可能に連結し、他方の受容体サブユニットを免疫グロブリン軽鎖の定常領域に作動可能に連結することによって調製することができる。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。たとえば、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３領域に作動可能に連結することができ、Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）サブユニットは、Ｉｇカッパ軽鎖のＣカッパ領域に作動可能に連結することができ（逆もまた同様）、又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３領域に作動可能に連結することができ、Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）サブユニットは、Ｉｇカッパ軽鎖のＣカッパ領域に作動可能に連結することができる（逆もまた同様）。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、サブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。免疫グロブリン軽鎖融合タンパク質及び免疫グロブリン重鎖融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質移入された細胞は、サブユニットをそれぞれ含有する重鎖／軽鎖ヘテロ二量体を発現する。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。
【０２２７】
本発明の他の特定の態様では、ヘテロ多量体のサブユニットは、非共有結合を介して連結される。サブユニットの非共有結合は、その生物活性（つまりＭＳの症状を低下させるためのその能力）を妨害しない任意の適した手段によって達成されてもよい。特定の態様では、これらのヘテロ多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘからなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘからなる１つのサブユニットを含むヘテロ二量体であり、一方のサブユニットは、第１の化合物に作動可能に連結され、他方は、第１の化合物に非共有結合するであろう第２の化合物に作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。上記化合物の例は、ビオチン及びアビジンである。これらのヘテロ二量体は、受容体サブユニットのうちの一方をビオチンに作動可能に連結し、他方のサブユニットをアビジンに作動可能に連結することにより調製することができる。したがって、受容体は、アビジンとのビオチンの非共有相互作用を通して形成される。他の例は、ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットを含む。これらの実施形態では、一方のサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）をコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットをコードするＤＮＡ構築物に対して融合され、他方のサブユニット（Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ）をコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンの他方のサブユニットをコードするＤＮＡに対して融合される（米国６，１９３，９７２に開示される）。これらのＤＮＡ構築物は、同じ細胞中で同時発現され、各同時発現する配列が、発現に際してヘテロ二量体を形成するように、対応するホルモンサブユニットを含有するので、ヘテロ二量体受容体融合タンパク質の発現につながる。ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンに由来するアミノ酸配列は、サブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。
【０２２８】
Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニットの二量体化を可能にするタンパク質配列についての他の例は、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【０２２９】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット及び少なくとも１つのＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニットを含むヘテロ多量体は、組換え抗体である。組換え抗体の技術は、たとえば米国特許第６，０１８，０２６号に記載される。その場合、１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘの多量体は、第１のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖及び第２のＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘポリペプチド鎖を含む多量体ポリペプチド融合物であり、ポリペプチド鎖の一方は、免疫グロブリン重鎖定常領域に作動可能に連結され、他方のポリペプチド鎖は、免疫グロブリン軽鎖定常領域に作動可能に連結される。一実施形態では、第１のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖は、免疫グロブリン重鎖定常領域に作動可能に連結され、第２のＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘポリペプチド鎖は、免疫グロブリン軽鎖定常領域に作動可能に連結される。他の実施形態では、第１のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖は、免疫グロブリン軽鎖定常領域に作動可能に連結され、第２のＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘポリペプチド鎖は、免疫グロブリン重鎖定常領域に作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘ並びに免疫グロブリン重鎖又は軽鎖定常領域が、ペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。一実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域ドメイン及び免疫グロブリン軽鎖定常領域ドメインは、ヒト免疫グロブリン定常領域である。一実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域ドメインは、α、γ、μ、δ、又はεヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域からなる群から選択される。好ましくは、上述の定常領域は、γ１、γ２、γ３、又はγ４ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である。好ましい実施形態では、免疫グロブリン軽鎖定常領域ドメインは、κ又はλヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域からなる群から選択される。免疫グロブリンからのアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）サブユニット又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に対して連結されてもよい。免疫グロブリン軽鎖融合タンパク質及び免疫グロブリン重鎖融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質移入された細胞は、抗体の構造を有する融合タンパク質を発現する。得られた、結果として生じるタンパク質は、
−  Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の重鎖定常領域及びＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）サブユニット若しくはＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の軽鎖定常領域又は
−  Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）サブユニット若しくはＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の重鎖定常領域及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の軽鎖定常領域からなる。
抗体に関しては、重鎖及び軽鎖は、ジスルフィドで連結され（鎖間ジスルフィド結合）、重鎖どうしは、ジスルフィドで連結される（鎖間ジスルフィド結合）。
したがって、結果として生じる分子は、２つのヘテロ二量体から構成されるホモ二量体であり、これらのヘテロ二量体のそれぞれは、
−  Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン重鎖定常領域及び
Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン軽鎖定常領域から構成される。
又はホモ二量体は、２つのヘテロ二量体から構成され、これらのヘテロ二量体のそれぞれは、
−  Ｓｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（Ｔ１／ＳＴ２）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン重鎖定常領域及び
Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン軽鎖定常領域から構成される。
両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。一実施形態では、定常重鎖は、ヒトγ４であり、ヒトγ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。他の実施形態では、定常重鎖は、ヒトγ１である。定常重鎖は、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異させてもよい。
【０２３０】
１．一実施形態では、本発明の組換え抗体は、
−  ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに作動可能に連結された、γ１、γ２、γ３、又はγ４ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である２つの同一の重鎖定常領域及び
−  ヒトＴ１／ＳＴ２の細胞外ドメインに作動可能に連結された、κ又はλヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域である２つの同一の軽鎖定常領域を含む又はそれらからなる。一実施形態では、天然抗体に関しては、重鎖及び軽鎖は、ジスルフィドで連結され（鎖間ジスルフィド結合）、重鎖どうしは、ジスルフィドで連結される（鎖間ジスルフィド結合）。
【０２３１】
２．他の特定の実施形態では、本発明の組換え抗体は、
−  ヒトＴ１／ＳＴ２の細胞外ドメインに作動可能に連結された、γ１、γ２、γ３、又はγ４ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である２つの同一の重鎖定常領域及び
−  ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに作動可能に連結された、κ又はλヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域である２つの同一の軽鎖定常領域を含む又はそれらからなる。一実施形態では、天然抗体に関しては、重鎖及び軽鎖は、ジスルフィドで連結され（鎖間ジスルフィド結合）、重鎖どうしは、ジスルフィドで連結される（鎖間ジスルフィド結合）。
【０２３２】
３．他の実施形態では、本発明は、上記第１又は２項に定義される組換え抗体に関し、重鎖の定常領域は、γ１ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である。
【０２３３】
４．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、又は３項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖の定常領域は、κヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域である。
【０２３４】
５．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、又は４項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインは、本明細書で上記に定義される配列番号２のアミノ酸残基１９〜３２９又は上述のポリペプチドの変異体からなる。
【０２３５】
６．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、又は５項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＴ１／ＳＴ２の細胞外ドメインは、本明細書で上記に定義される配列番号１０のアミノ酸残基１９〜３２８又は上述のポリペプチドの変異体からなる。
【０２３６】
７．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、又は６項に定義される組換え抗体に関し、重鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＴ１／ＳＴ２の細胞外ドメインに対して、ペプチド結合を通して直接結びつけられる。
【０２３７】
８．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、又は７項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＴ１／ＳＴ２の細胞外ドメインに対して、ペプチド結合を通して直接結びつけられる。
【０２３８】
９．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、又は６項に定義される組換え抗体に関し、重鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＴ１／ＳＴ２の細胞外ドメインに対して、ペプチドリンカーを介して、ペプチド結合を通して結びつけられる。ペプチドリンカーは、サブユニット間に導入された１〜３個のアミノ酸残基長ほどの短いものとすることができる（好ましくは、グリシン、セリン、トレオニン、又はアラニン等の小さなアミノ酸からなる）又はより長く、たとえば１３、１５、若しくは１６個のアミノ酸残基長とすることができる。好ましくは、ペプチドリンカーは、免疫学的に非活性であるペプチドである。上述のリンカーは、配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチド（配列番号１３）、たとえば、Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔからなる１３個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１４）、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１５）、ＧＧＳＧＧ  ＳＧＧＧＧ  ＳＧＧＧＧ  Ｓからなる１６個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１６）、又はヒトＩｇＧ（たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のヒンジ領域であってもよい。一実施形態では、上述のペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列である（配列番号１５）。
【０２３９】
１０．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、又は９項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＴ１／ＳＴ２の細胞外ドメインに対して、ペプチドリンカーを介して、ペプチド結合を通して結びつけられる。ペプチドリンカーは、サブユニット間に導入された１〜３個のアミノ酸残基長ほどの短いものとすることができる（好ましくは、グリシン、セリン、トレオニン、又はアラニン等の小さなアミノ酸からなる）又はより長く、たとえば１３、１５、若しくは１６個のアミノ酸残基長とすることができる。好ましくは、ペプチドリンカーは、免疫学的に非活性であるペプチドである。上述のリンカーは、配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチド（配列番号１３）、たとえば、Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔからなる１３個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１４）、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１５）、ＧＧＳＧＧ  ＳＧＧＧＧ  ＳＧＧＧＧ  Ｓからなる１６個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１６）、又はヒトＩｇＧ（たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のヒンジ領域であってもよい。一実施形態では、上述のペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列である（配列番号１５）。
【０２４０】
１１．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０項に定義される組換え抗体に関し、定常重鎖は、ヒトγ４であり、ヒトγ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。
【０２４１】
１２．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０項に定義される組換え抗体に関し、定常重鎖は、ヒトγ１であり、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異される。
【０２４２】
１３．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２項に定義される組換え抗体に関し、重鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＴ１／ＳＴ２の細胞外ドメインのＣ末端又はＮ末端、好ましくはＣ末端に対して作動可能に連結される。
【０２４３】
１４．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、又は１３項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＴ１／ＳＴ２の細胞外ドメインのＣ末端又はＮ末端、好ましくはＣ末端に対して作動可能に連結される。
【０２４４】
１５．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＴ１／ＳＴ２の細胞外ドメインは、重鎖定常領域のＣ末端又はＮ末端、好ましくはＮ末端に対して作動可能に連結される。
【０２４５】
１６．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＴ１／ＳＴ２の細胞外ドメインは、軽鎖定常領域のＣ末端又はＮ末端、好ましくはＮ末端に対して作動可能に連結される。
【０２４６】
また、必要な場合、本明細書に記載される融合タンパク質は、精製又は産生を容易にする任意の機能領域を含んでいてもよい。上記のさらなるアミノ酸配列の特定の例は、ＧＳＴ配列又はＨｉｓタグ配列を含む。
【０２４７】
６）少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）並びに少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−１サブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα：
本発明の特定の態様では、自己免疫疾患又は脱髄疾患の症状、特にＭＳを処置する、予防する、又は寛解させるために使用される可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体は、少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（本明細書で上記に定義されるＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）及び／又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）並びに後に本明細書で定義される少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−１サブユニットを含む可溶性受容体である。用語「可溶性受容体」は、上記に定義されている。
【０２４８】
ＩＬ−１Ｒ−１（文献中でインターロイキン−１受容体Ｉ型、ＩＬ−１ＲＴ１、ＩＬ−１Ｒ−アルファ、ｐ８０、又はＣＤ１２１ａ抗原とも命名される）は、ＩＬ−１受容体ファミリーのメンバーであり、３つの免疫グロブリン様ドメイン（Ｉｇドメイン）を含む細胞外ドメインを所有する。ヒトＩＬ−１Ｒ−１をコードするｃＤＮＡは、配列番号１７に示される。このｃＤＮＡは、５６９個のアミノ酸長のタンパク質（配列番号１８）をコードし、このタンパク質は、１７個のアミノ酸のシグナルペプチド（配列番号１８の残基１〜１７）を含む、３３６個のアミノ酸の細胞外ドメイン（配列番号１８のＮ末端からＣ末端までの残基１〜３３６）、２０個のアミノ酸の膜貫通領域（残基３３７〜３５６）、及び２１３個のアミノ酸の細胞質ドメイン（残基３５７〜５６９）を含む。
【０２４９】
６．１  ＩＬ−１Ｒ−１サブユニット及びその変異体（「Ｓｏｌ」（ＩＬ−１Ｒ−１）と後に本明細書で命名される）：
一態様では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体のＩＬ−１Ｒ−１サブユニットは、ＩＬ−１Ｒ−１の細胞外ドメインのすべて又は一部、特にヒトＩＬ−１Ｒ−１又はその変異体の細胞外ドメインのすべて又は一部を含むポリペプチドである。
【０２５０】
一態様では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体のＩＬ−１Ｒ−１サブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１））は、配列番号１８のアミノ酸残基１８〜３３６を含む若しくはからなるポリペプチド又は上述のポリペプチドの変異体である。通常、変異体ポリペプチドは、少なくとも２９０個のアミノ酸長であり、少なくとも３１０個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも３１９個のアミノ酸長であることがより多い。変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号１８の残基１８〜３３６）と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドとして定義される。より好ましくは、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号１８の残基１８〜３３６）と、５個だけ、より好ましくは４個だけ、さらに好ましくは３個だけ、さらに好ましくは２個だけ、最も好ましくは１個だけアミノ酸が異なっている。本発明のいくつかの特定の態様では、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号１８の残基１８〜３３６）と、Ｎ末端及び／又はＣ末端で、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個のアミノ酸の欠如分だけ異なっている。遺伝子コードを使用する当業者は、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを容易に決定することができる。「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、本明細書で上記のように定義される。
【０２５１】
他の実施形態では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）は、配列番号１８のアミノ酸残基１８〜２２５若しくは１１１〜３３６若しくはペプチド結合によって連結された１８〜１１７及び２１１〜３３６を含む若しくはからなるポリペプチド又は上述のポリペプチドの変異体である。通常、変異体ポリペプチドは、少なくとも１００個のアミノ酸長であり、少なくとも１２６個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも２０８個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも２２６個のアミノ酸長であることがより多い。変異体は、参考の配列（本明細書で、配列番号１８のアミノ酸残基１８〜２２５若しくは１１１〜３３６若しくはペプチド結合によって連結された１８〜１１７及び２１１〜３３６）と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドとして定義される。より好ましくは、変異体は、参考の配列（配列番号１８のアミノ酸残基１８〜２２５若しくは１１１〜３３６若しくはペプチド結合によって連結された１８〜１１７及び２１１〜３３６）と、５個だけ、より好ましくは４個だけ、さらに好ましくは３個だけ、さらに好ましくは２個だけ、最も好ましくは１個だけアミノ酸が異なっている。本発明のいくつかの特定の態様では、変異体は、参考の配列（配列番号１８のアミノ酸残基１８〜２２５若しくは１１１〜３３６若しくはペプチド結合によって連結された１８〜１１７及び２１１〜３３６）と、Ｎ末端及び／又はＣ末端で、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個のアミノ酸の欠如分だけ異なっている。遺伝子コードを使用する当業者は、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを容易に決定することができる。「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、本明細書で上記のように定義される。
【０２５２】
他の実施形態では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）は、配列番号１８のアミノ酸残基１８〜１１７若しくは１１１〜２２５若しくは２１１〜３３６を含む若しくはからなるポリペプチド又は上述のポリペプチドの変異体である。通常、変異体ポリペプチドは、少なくとも９０個のアミノ酸長であり、少なくとも１００個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも１１５個のアミノ酸長であることが多く、少なくとも１２６個のアミノ酸長であることがより多い。変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号１８の残基１８〜１１７又は１１１〜２２５又は２１１〜３３６）と、少なくとも８０％のアミノ酸配列同一性、好ましくは少なくとも９０％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性、より好ましくは少なくとも９８％のアミノ酸配列同一性、最も好ましくは少なくとも９９％のアミノ酸配列同一性を有するポリペプチドとして定義される。より好ましくは、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号１８の残基１８〜１１７又は１１１〜２２５又は２１１〜３３６）と、５個だけ、より好ましくは４個だけ、さらに好ましくは３個だけ、さらに好ましくは２個だけ、最も好ましくは１個だけアミノ酸が異なっている。本発明のいくつかの特定の態様では、変異体は、参考の配列（本明細書で配列番号１８の残基１８〜１１７又は１１１〜２２５又は２１１〜３３６）と、Ｎ末端及び／又はＣ末端で、２０、１５、１０、９、８、７、６、５、４、３、２、又は１個のアミノ酸の欠如分だけ異なっている。遺伝子コードを使用する当業者は、上記ポリペプチドをコードするポリヌクレオチドを容易に決定することができる。「アミノ酸配列同一性パーセント（％）」は、本明細書で上記のように定義される。
【０２５３】
６．２  同じタンパク質骨格上に少なくとも２つのＩＬ−１Ｒ−１サブユニット又はその変異体を含む可溶性ＩＬ−１Ｒ−１（「Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ」と後に本明細書で命名される）：
後に本明細書で記載されるように、本発明は、他の態様の中で、少なくとも２つのＩＬ−１Ｒ−１サブユニット（少なくとも２つのＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１））を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体に関する。少なくとも２つのＩＬ−１Ｒ−１サブユニット（つまり本明細書で上記に定義される少なくとも２つのＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）サブユニット）を含むこれらの可溶性ＩＬ−１Ｒ−１は、融合タンパク質として同じタンパク質骨格上にあり、「Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ」と後に本明細書で命名される。特定の実施形態では、融合タンパク質は、２つのＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）サブユニットを含む。他の特定の実施形態では、少なくとも２つのＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）サブユニットは、同じであり（つまり融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）のホモ多量体であり）、特定の実施形態では、融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）のホモ二量体である。
【０２５４】
少なくとも２つのＩＬ−１Ｒ−１サブユニットは、互いに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、サブユニットがペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」を介して結びつけられることを示す。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。サブユニットは、直接又は「ペプチドリンカー」を介して連結される。ペプチドリンカーは、サブユニット間に導入された１〜３個のアミノ酸残基長ほどの短いものとすることができる（好ましくは、グリシン、セリン、トレオニン、又はアラニン等の小さなアミノ酸からなる）又はより長く、たとえば１３、１５、若しくは１６個のアミノ酸残基長とすることができる。好ましくは、ペプチドリンカーは、免疫学的に非活性であるペプチドである。上述のリンカーは、配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチド（配列番号１３）、たとえば、Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔからなる１３個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１４）、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１５）、ＧＧＳＧＧ  ＳＧＧＧＧ  ＳＧＧＧＧ  Ｓからなる１６個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１６）、又はヒトＩｇＧ（たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のヒンジ領域であってもよい。
【０２５５】
６．３  少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−１サブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα：
本明細書で上記に開示されるように、本発明は、他の態様の中で、少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（本明細書で上記に定義されるＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び１つのＩＬ−１Ｒ−１サブユニット（本明細書で上記に定義されるＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体に関する。
【０２５６】
６．３．１  同じタンパク質骨格上に少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−１サブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα（「Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ」と後に本明細書で命名される）：
本発明の一態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏ１（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ、及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）又はＳｏ１（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘは融合タンパク質として同じタンパク質骨格上にある（これらの可溶性受容体は、後に本明細書で「Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ」と命名されることとなる）。この実施形態によれば、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏ１（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニットに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、サブユニットがペプチド連結を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニットに対して、上流に（タンパク質のＮ末端に対してより近くに）又は下流に（タンパク質のＣ末端に対してより近くに）位置させることができる。サブユニットは、直接又は「ペプチドリンカー」を介して連結される。特定の実施形態では、融合タンパク質は、本明細書に定義される１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット及び１つのＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）サブユニットを含む。
【０２５７】
６．３．２  少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−１サブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ）を融合タンパク質として同じタンパク質骨格上に含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ）：
他の特定の態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ）を含む融合タンパク質は、それ自体、さらなるアミノ酸ドメインに「作動可能に連結され」ている。用語「作動可能に連結された」は、さらなるアミノ酸ドメインが、ペプチド結合を通して、直接又は本明細書で上記に定義される「ペプチドリンカー」を介して結びつけられることを示す。この様式では、この融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。さらなるアミノ酸ドメインは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘに対して、上流（Ｎ末端）又は下流（Ｃ末端）に位置させてもよい。この実施形態では、さらなるアミノ酸ドメインは、たとえば融合タンパク質の安定性、ターゲティング、若しくは生物学的利用能の増加を提供する、精製若しくは産生を容易にする、又は分子にさらなる生物活性を付与する任意の機能領域を含む。上記のさらなるアミノ酸配列の特定の例は、ＧＳＴ配列、Ｈｉｓタグ配列、免疫グロブリン分子の定常領域、又は米国特許第６，１９３，９７２号に記載されるヒト絨毛性ゴナドトロピン（ｈＣＧ）等のヘテロ二量体タンパク質ホルモンを含む。また、必要な場合、融合タンパク質中に含まれるさらなるアミノ酸配列は、産生／精製プロセスの終了時に又はｉｎ  ｖｉｖｏで、たとえば適切なエンド／エキソペプチダーゼによって取り除かれてもよい。たとえば、融合タンパク質に含まれるスペーサー配列は、ｉｎ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏで、酵素の開裂によって、さらなるアミノ酸ドメインから所望のポリペプチド変異体を分離するために使用することができる、エンドペプチダーゼ（カスパーゼ等）のための認識部位を含んでいてもよい。この実施形態の特定の態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘは、本明細書で上記に定義される１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット及び１つのＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）サブユニットを含む。
【０２５８】
６．３．３  Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘの多量体：
特定の態様では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ可溶性受容体は、多量体として産生される。多量体の各サブユニットは、１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘを含む。これらの多量体は、ホモ二量体可溶性受容体、ヘテロ二量体可溶性受容体、又は多量体可溶性受容体であってもよく、多量体受容体は、一般に、９個を超えるサブユニットを含まない、好ましくは６個を超えるサブユニットを含まない、さらに好ましくは３個を超えるサブユニット、最も好ましくは２個を超えるサブユニットを含まない。好ましくは、これらの多量体可溶性受容体は、本明細書で上記に定義されるＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘのホモ二量体である。一実施形態では、多量体のサブユニットは、共有結合を介して連結される。サブユニットは、架橋試薬又はポリペプチドリンカーを介する等での任意の適した手段によって共有結合で連結されてもよい。他の実施形態では、サブユニットは、非共有結合を介して連結される。
【０２５９】
一実施形態では、各Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニットは、サブユニットの多量体化を提供するさらなるアミノ酸ドメインに作動可能に連結される（特に、さらなるドメインは、サブユニットの二量体化を提供する任意の機能領域を含む）。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。さらなるアミノ酸ドメインは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニットの配列の上流に（Ｎ末端）又は下流に（Ｃ末端）位置させてもよい。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。これらの実施形態では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体は、二量体等の高次構造を形成するために他の融合タンパク質中に存在する多量体形成成分と相互作用することができる多量体形成成分に作動可能に連結されたＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニットを含有する融合タンパク質の多量体である。この種類の融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニット配列を二量体、三量体等の形成を可能にする、他のタンパク質から単離されたドメインに作動可能に連結することにより調製されてもよい。本発明のＩＬ−１８Ｒα可溶性受容体の多量体化を可能にするタンパク質配列についての例は、免疫グロブリン、ｈＣＧ（国際公開第９７／３０１６１号）、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【０２６０】
特定の態様では、多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘの二量体であり、サブユニットは、免疫グロブリンに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。この実施形態では、サブユニットは、免疫グロブリン、詳細にはヒト免疫グロブリン、さらに詳細にはヒト免疫グロブリンのＦｃ部分のすべて又は一部に作動可能に連結される。典型的に、ヒト免疫グロブリンのＦｃ部分は、２つの定常領域ドメイン（ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン）及び１つのヒンジ領域を含有するが、可変領域を欠く（たとえば米国特許第６，０１８，０２６号及び第５，７５０，３７５号を参照されたい）。免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ並びに任意のサブクラス又はアイソタイプ、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４；ＩｇＡ−１及びＩｇＡ−２を含む免疫グロブリンの主要なクラスのいずれかから選択されてもよい。一実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ４であり、ヒトＩｇＧ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。他の実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ１である。Ｆｃ部は、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異させてもよい。普通、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニットは、同じ免疫グロブリンに作動可能に連結される（詳細にはヒト免疫グロブリン、たとえばヒトＩｇＧ４又はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に対して）。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。上記融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡ及び／又は他のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて細胞を形質移入し、同じ細胞中で二量体を発現させることにより調製することができる。特定の実施形態では、サブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘは、各単量体に関して同じである（つまり二量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘのホモ二量体である）。さらに詳細には、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘのサブユニットは、同じ免疫グロブリンに作動可能に連結される（詳細にはヒト免疫グロブリン、たとえばヒトＩｇＧ４又はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に対して）。上記融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて細胞を形質移入し、同じ細胞中で二量体を発現させることにより調製することができる。サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。たとえばＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌ．４，ｐａｇｅｓ  １０．１９．１−１０．１９．１１，１９９２中のＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈ及びＡｒｕｆｆｏ「免疫グロブリン���合タンパク質の構築」（Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）又は国際公開第０１／０３７３７号に記載されている方法等の、免疫グロブリン融合タンパク質を作製するための方法は、当技術分野でよく知られている。
【０２６１】
あるいは、本発明のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘの二量体は、受容体サブユニットのうちの一方を免疫グロブリン重鎖の定常領域に作動可能に連結し、他方の受容体サブユニットを免疫グロブリン軽鎖の定常領域に作動可能に連結することによって調製することができる。用語「作動可能に連結された」は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ及び免疫グロブリンが、ペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。たとえば、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニットは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３領域に作動可能に連結することができ、別の又は同じＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニットは、Ｉｇカッパ軽鎖のＣカッパ領域に作動可能に連結することができる。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。免疫グロブリン軽鎖融合タンパク質及び免疫グロブリン重鎖融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質移入された細胞は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニットをそれぞれ含有する重鎖／軽鎖ヘテロ二量体を発現する。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。特定の実施形態では、サブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘは、各単量体に関して同じである（つまり二量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘのホモ二量体である）。
【０２６２】
本発明の他の特定の態様では、多量体Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘのサブユニット（本明細書で上記に定義される）は、非共有結合を介して連結される。サブユニットの非共有結合は、その生物活性（つまりＭＳの症状を低下させるためのその能力）を妨害しない任意の適した手段によって達成されてもよい。特定の態様では、これらの多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘの二量体であり、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘのうちの一方のサブユニットは、第１の化合物に作動可能に連結され、別の又は同じサブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘは、第１の化合物に非共有結合するであろう第２の化合物に作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。上記化合物の例は、ビオチン及びアビジンである。Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘの二量体は、受容体サブユニットのうちの一方をビオチンに作動可能に連結し、他方のサブユニットをアビジンに作動可能に連結することにより調製することができる。したがって、受容体は、アビジンとのビオチンの非共有相互作用を通して形成される。他の例は、ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットを含む。これらの実施形態では、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘの一方のサブユニットをコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットをコードするＤＮＡ構築物に対して融合され、他方のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニットをコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンの他方のサブユニットをコードするＤＮＡに対して融合される（米国特許第６，１９３，９７２号に開示されるように）。これらのＤＮＡ構築物は、同じ細胞中で同時発現され、各同時発現する配列が、発現に際してヘテロ二量体を形成するように、対応するホルモンサブユニットを含有するので、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘヘテロ二量体受容体融合タンパク質の発現につながる。ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンに由来するアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。特定の実施形態では、サブユニットＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘは、各単量体に関して同じである（つまり二量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘのホモ二量体である）。
【０２６３】
Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニットの二量体化を可能にするタンパク質配列についての他の例は、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【０２６４】
また、必要な場合、本明細書に記載される融合タンパク質は、精製又は産生を容易にする任意の機能領域を含んでいてもよい。上記のさらなるアミノ酸配列の特定の例は、ＧＳＴ配列又はＨｉｓタグ配列を含む。
【０２６５】
６．３．４  ヘテロ多量体として、少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−１サブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ）を含む可溶性ＩＬ−１８Ｒα：
特定の態様では、少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）及び少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−１サブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ）を含む本発明の可溶性受容体は、ヘテロ多量体である。ヘテロ多量体の各サブユニットは、
−  少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒαサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）又は
−  少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−１サブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ）を含む。
これらのヘテロ多量体は、一般に、９個を超えるサブユニット、好ましくは６個を超えるサブユニット、さらに好ましくは３個を超えるサブユニット、最も好ましくは２個を超えるサブユニットを含まない。好ましくは、これらのヘテロ多量体可溶性受容体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ（上記に定義される）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ（上記に定義される）からなる１つのサブユニットを含むヘテロ二量体である。一実施形態では、ヘテロ多量体のサブユニットは、共有結合を介して連結される。サブユニットは、架橋試薬を介する等での任意の適した手段によって共有結合で連結されてもよい。他の実施形態では、サブユニットは、非共有結合を介して連結される。
【０２６６】
一実施形態では、ヘテロ多量体の各サブユニットは、サブユニットの多量体化を提供するさらなるアミノ酸ドメインに作動可能に連結される（特に、さらなるドメインは、サブユニットの二量体化を提供する任意の機能領域を含んでいてもよい）。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。さらなるアミノ酸ドメインは、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット（複数可）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット（複数可）の配列の上流（Ｎ末端）又は下流（Ｃ末端）（好ましくは下流（Ｃ末端））及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）サブユニット（複数可）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニット（複数可）の配列の上流（Ｎ末端）又は下流（Ｃ末端）（好ましくは下流（Ｃ末端））に位置させてもよい。この様式では、融合タンパク質は、同じ物をコードする核酸分子の宿主細胞中での直接的な発現によって、組換えで産生することができる。これらの実施形態では、本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体は、二量体等の高次構造を形成するために他の融合タンパク質中に存在する多量体形成成分と相互作用することができる多量体形成成分に作動可能に連結されたＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘからなる１つのサブユニットを含有する融合タンパク質のヘテロ多量体である。この種類の融合タンパク質は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット配列又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット配列及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）サブユニット配列又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニット配列を二量体、三量体等の形成を可能にする、他のタンパク質から単離されたドメインに作動可能に連結することにより調製されてもよい。本発明のＩＬ−１８Ｒα可溶性受容体の多量体化を可能にするタンパク質配列についての例は、免疫グロブリン、ｈＣＧ（国際公開第９７／３０１６１号）、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【０２６７】
特定の態様では、ヘテロ多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘからなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘからなる１つのサブユニットを含むヘテロ二量体である。他の特定の態様では、ヘテロ二量体の２つのサブユニットは、免疫グロブリンに作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。これらの実施形態では、サブユニットは、免疫グロブリン、詳細にはヒト免疫グロブリン、さらに詳細にはヒト免疫グロブリンのＦｃ部分のすべて又は一部に作動可能に連結される。典型的に、ヒト免疫グロブリンのＦｃ部分は、２つの定常領域ドメイン（ＣＨ２ドメイン及びＣＨ３ドメイン）及び１つのヒンジ領域を含有するが、可変領域を欠く（たとえば米国特許第６，０１８，０２６号及び第５，７５０，３７５号を参照されたい）。免疫グロブリンは、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧ、及びＩｇＭ並びに任意のサブクラス又はアイソタイプ、たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、及びＩｇＧ４；ＩｇＡ−１及びＩｇＡ−２を含む免疫グロブリンの主要なクラスのいずれかから選択されてもよい。一実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ４であり、ヒトＩｇＧ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。他の実施形態では、Ｆｃ部分は、ヒトＩｇＧ１である。Ｆｃ部は、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異させてもよい。普通、２つのサブユニットは、同じ免疫グロブリンに作動可能に連結される（詳細にはヒト免疫グロブリン、たとえばヒトＩｇＧ４又はヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に対して）。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、サブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。上記融合タンパク質は、第１のサブユニット：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡ及び／又は他方のサブユニット：Ｆｃ融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて細胞を形質移入し、同じ細胞中で二量体を発現させることにより調製することができる。サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。たとえばＣｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，Ｓｕｐｐｌ．４，ｐａｇｅｓ  １０．１９．１−１０．１９．１１，１９９２中のＨｏｌｌｅｎｂａｕｇｈ及びＡｒｕｆｆｏ「免疫グロブリン融合タンパク質の構築」（Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｆｕｓｉｏｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ）又は国際公開第０１／０３７３７号に記載されている方法等の、免疫グロブリン融合タンパク質を作製するための方法は、当技術分野でよく知られている。
【０２６８】
あるいは、本発明のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘからなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘからなる１つのサブユニットを含むヘテロ二量体は、受容体サブユニットのうちの一方を免疫グロブリン重鎖の定常領域に作動可能に連結し、他方の受容体サブユニットを免疫グロブリン軽鎖の定常領域に作動可能に連結することによって調製することができる。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。たとえば、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３領域に作動可能に連結することができ、Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）サブユニットは、Ｉｇカッパ軽鎖のＣカッパ領域に作動可能に連結することができ（逆もまた同様）、又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットは、ヒトＩｇＧ１のＣＨ１−ヒンジ−ＣＨ２−ＣＨ３領域に作動可能に連結することができ、Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニットは、Ｉｇカッパ軽鎖のＣカッパ領域に作動可能に連結することができる（逆もまた同様）。免疫グロブリンに由来するアミノ酸配列は、サブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。免疫グロブリン軽鎖融合タンパク質及び免疫グロブリン重鎖融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質移入された細胞は、サブユニットをそれぞれ含有する重鎖／軽鎖ヘテロ二量体を発現する。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。
【０２６９】
本発明の他の特定の態様では、ヘテロ多量体のサブユニットは、非共有結合を介して連結される。サブユニットの非共有結合は、その生物活性（つまりＭＳの症状を低下させるためのその能力）を妨害しない任意の適した手段によって達成されてもよい。特定の態様では、これらのヘテロ多量体は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）からなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）からなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘからなる１つのサブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘからなる１つのサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘからなる１つのサブユニットを含むヘテロ二量体であり、一方のサブユニットは、第１の化合物に作動可能に連結され、他方は、第１の化合物に非共有結合するであろう第２の化合物に作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、本明細書で上記に定義されるとおりである。上記化合物の例は、ビオチン及びアビジンである。これらのヘテロ二量体は、受容体サブユニットのうちの一方をビオチンに作動可能に連結し、他方のサブユニットをアビジンに作動可能に連結することにより調製することができる。したがって、受容体は、アビジンとのビオチンの非共有相互作用を通して形成される。他の例は、ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットを含む。これらの実施形態では、一方のサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ）をコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンのサブユニットをコードするＤＮＡ構築物に対して融合され、他方のサブユニット（Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ）をコードするＤＮＡ構築物は、ｈＣＧ等のヘテロ二量体タンパク質性ホルモンの他方のサブユニットをコードするＤＮＡに対して融合される（米国特許第６，１９３，９７２号に開示される）。これらのＤＮＡ構築物は、同じ細胞中で同時発現され、各同時発現する配列が、発現に際してヘテロ二量体を形成するように、対応するホルモンサブユニットを含有するので、ヘテロ二量体受容体融合タンパク質の発現につながる。ヘテロ二量体タンパク質性ホルモンに由来するアミノ酸配列は、サブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に連結されてもよい。両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。
【０２７０】
Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ−（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニットの二量体化を可能にするタンパク質配列についての他の例は、コラーゲンＸ（国際公開第０４／３３４８６号）、Ｃ４ＢＰ（国際公開第０４／２０６３９号）、Ｅｒｂタンパク質（国際公開第９８／０２５４０号）、又はコイルドコイルペプチド（国際公開第０１／００８１４号）等のタンパク質から単離されたドメインである。
【０２７１】
一実施形態では、本発明の少なくとも１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット及び少なくとも１つのＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニットを含むヘテロ多量体は、組換え抗体である。組換え抗体の技術は、たとえば米国特許第６，０１８，０２６号に記載される。その場合、１つのＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘの多量体は、第１のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖及び第２のＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘポリペプチド鎖を含む多量体ポリペプチド融合物であり、ポリペプチド鎖の一方は、免疫グロブリン重鎖定常領域に作動可能に連結され、他方のポリペプチド鎖は、免疫グロブリン軽鎖定常領域に作動可能に連結される。一実施形態では、第１のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖は、免疫グロブリン重鎖定常領域に作動可能に連結され、第２のＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘポリペプチド鎖は、免疫グロブリン軽鎖定常領域に作動可能に連結される。他の実施形態では、第１のＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖は、免疫グロブリン軽鎖定常領域に作動可能に連結され、第２のＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘポリペプチド鎖は、免疫グロブリン重鎖定常領域に作動可能に連結される。用語「作動可能に連結された」は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘ及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘ並びに免疫グロブリン重鎖又は軽鎖定常領域が、ペプチド結合を通して、直接又は「ペプチドリンカー」（本明細書で上記に定義される）を介して結びつけられることを示す。一実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域ドメイン及び免疫グロブリン軽鎖定常領域ドメインは、ヒト免疫グロブリン定常領域である。一実施形態では、免疫グロブリン重鎖定常領域ドメインは、α、γ、μ、δ、又はεヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域からなる群から選択される。好ましくは、上述の定常領域は、γ１、γ２、γ３、又はγ４ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である。好ましい実施形態では、免疫グロブリン軽鎖定常領域ドメインは、κ又はλヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域からなる群から選択される。免疫グロブリンからのアミノ酸配列は、Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニット及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）サブユニット又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニットのＣ末端又はＮ末端に、好ましくはＣ末端に対して連結されてもよい。免疫グロブリン軽鎖融合タンパク質及び免疫グロブリン重鎖融合タンパク質をコードするＤＮＡを用いて形質移入された細胞は、抗体の構造を有する融合タンパク質を発現する。得られた、結果として生じるタンパク質は、
−  Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の重鎖定常領域及びＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）サブユニット若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の軽鎖定常領域又は
−  Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）サブユニット若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の重鎖定常領域及びＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）サブユニット若しくはＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘサブユニットに作動可能に連結された２つの同一の軽鎖定常領域からなる。
抗体に関しては、重鎖及び軽鎖は、ジスルフィドで連結され（鎖間ジスルフィド結合）、重鎖どうしは、ジスルフィドで連結される（鎖間ジスルフィド結合）。
したがって、結果として生じる分子は、２つのヘテロ二量体から構成されるホモ二量体であり、これらのヘテロ二量体のそれぞれは、
−  Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン重鎖定常領域及び
Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン軽鎖定常領域から構成される。
又はホモ二量体は、２つのヘテロ二量体から構成され、これらのヘテロ二量体のそれぞれは、
−  Ｓｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１Ｒ−１）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン重鎖定常領域及び
Ｓｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ポリペプチド鎖又はＳｏｌ（ＩＬ−１８Ｒα）ｘポリペプチド鎖に作動可能に連結された免疫グロブリン軽鎖定常領域から構成される。
両サブユニットは、細胞からの分泌を促進するために、最初に合成された時に本来の又は異種のシグナルペプチドを有利には含むが、シグナル配列は、分泌に際して開裂される。一実施形態では、定常重鎖は、ヒトγ４であり、ヒトγ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。他の実施形態では、定常重鎖は、ヒトγ１である。定常重鎖は、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異させてもよい。
【０２７２】
１．一実施形態では、本発明の組換え抗体は、
−  ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに作動可能に連結された、γ１、γ２、γ３、又はγ４ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である２つの同一の重鎖定常領域及び
−  ヒトＩＬ−１Ｒ−１の細胞外ドメインに作動可能に連結された、κ又はλヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域である２つの同一の軽鎖定常領域を含む又はそれらからなる。一実施形態では、天然抗体に関しては、重鎖及び軽鎖は、ジスルフィドで連結され（鎖間ジスルフィド結合）、重鎖どうしは、ジスルフィドで連結される（鎖間ジスルフィド結合）。
【０２７３】
２．他の特定の実施形態では、本発明の組換え抗体は、
−  ヒトＩＬ−１Ｒ−１の細胞外ドメインに作動可能に連結された、γ１、γ２、γ３、又はγ４ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である２つの同一の重鎖定常領域及び
−  ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインに作動可能に連結された、κ又はλヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域である２つの同一の軽鎖定常領域を含む又はそれらからなる。一実施形態では、天然抗体に関しては、重鎖及び軽鎖は、ジスルフィドで連結され（鎖間ジスルフィド結合）、重鎖どうしは、ジスルフィドで連結される（鎖間ジスルフィド結合）。
【０２７４】
３．他の実施形態では、本発明は、上記第１又は２項に定義される組換え抗体に関し、重鎖の定常領域は、γ１ヒト免疫グロブリン重鎖の定常領域である。
【０２７５】
４．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、又は３項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖の定常領域は、κヒト免疫グロブリン軽鎖の定常領域である。
【０２７６】
５．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、又は４項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインは、本明細書で上記に定義される配列番号２のアミノ酸残基１９〜３２９又は上述のポリペプチドの変異体からなる。
【０２７７】
６．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、又は５項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１Ｒ−１の細胞外ドメインは、本明細書で上記に定義される配列番号１８のアミノ酸残基１８〜３３６又は上述のポリペプチドの変異体からなる。
【０２７８】
７．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４，５、又は６項に定義される組換え抗体に関し、重鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１Ｒ−１の細胞外ドメインに対して、ペプチド結合を通して直接結びつけられる。
【０２７９】
８．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、又は７項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１Ｒ−１の細胞外ドメインに対して、ペプチド結合を通して直接結びつけられる。
【０２８０】
９．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４，５、又は６項に定義される組換え抗体に関し、重鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１Ｒ−１の細胞外ドメインに対して、ペプチドリンカーを介して、ペプチド結合を通して結びつけられる。ペプチドリンカーは、サブユニット間に導入された１〜３個のアミノ酸残基長ほどの短いものとすることができる（好ましくは、グリシン、セリン、トレオニン、又はアラニン等の小さなアミノ酸からなる）又はより長く、たとえば１３、１５、若しくは１６個のアミノ酸残基長とすることができる。好ましくは、ペプチドリンカーは、免疫学的に非活性であるペプチドである。上述のリンカーは、配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチド（配列番号１３）、たとえば、Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔからなる１３個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１４）、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１５）、ＧＧＳＧＧ  ＳＧＧＧＧ  ＳＧＧＧＧ  Ｓからなる１６個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１６）、又はヒトＩｇＧ（たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のヒンジ領域であってもよい。一実施形態では、上述のペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列である（配列番号１５）。
【０２８１】
１０．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、又は９項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１Ｒ−１の細胞外ドメインに対して、ペプチドリンカーを介して、ペプチド結合を通して結びつけられる。ペプチドリンカーは、サブユニット間に導入された１〜３個のアミノ酸残基長ほどの短いものとすることができる（好ましくは、グリシン、セリン、トレオニン、又はアラニン等の小さなアミノ酸からなる）又はより長く、たとえば１３、１５、若しくは１６個のアミノ酸残基長とすることができる。好ましくは、ペプチドリンカーは、免疫学的に非活性であるペプチドである。上述のリンカーは、配列Ｅ−Ｆ−Ｍ（Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔ）のトリペプチド（配列番号１３）、たとえば、Ｇｌｕ−Ｐｈｅ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｇｌｙ−Ｌｅｕ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｐｈｅ−Ｍｅｔからなる１３個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１４）、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１５）、ＧＧＳＧＧ  ＳＧＧＧＧ  ＳＧＧＧＧ  Ｓからなる１６個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１６）、又はヒトＩｇＧ（たとえばＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、又はＩｇＧ４）のヒンジ領域であってもよい。一実施形態では、上述のペプチドリンカーは、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列である（配列番号１５）。
【０２８２】
１１．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０項に定義される組換え抗体に関し、定常重鎖は、ヒトγ４であり、ヒトγ４は、溶液中で安定しており、補体活性化活性をほとんど又はまったく有していない。
【０２８３】
１２．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、又は１０項に定義される組換え抗体に関し、定常重鎖は、ヒトγ１であり、補体結合、Ｆｃ受容体に対する結合等のような不要な活性を予防するために突然変異される。
【０２８４】
１３．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、又は１２項に定義される組換え抗体に関し、重鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１Ｒ−１の細胞外ドメインのＣ末端又はＮ末端、好ましくはＣ末端に対して作動可能に連結される。
【０２８５】
１４．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、又は１３項に定義される組換え抗体に関し、軽鎖定常領域は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１Ｒ−１の細胞外ドメインのＣ末端又はＮ末端、好ましくはＣ末端に対して作動可能に連結される。
【０２８６】
１５．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、又は１４項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１Ｒ−１の細胞外ドメインは、重鎖定常領域のＣ末端又はＮ末端、好ましくはＮ末端に対して作動可能に連結される。
【０２８７】
１６．他の実施形態では、本発明は、上記第１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２、１３、１４、又は１５項に定義される組換え抗体に関し、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はヒトＩＬ−１Ｒ−１の細胞外ドメインは、軽鎖定常領域のＣ末端又はＮ末端、好ましくはＮ末端に対して作動可能に連結される。
【０２８８】
また、必要な場合、本明細書に記載される融合タンパク質は、精製又は産生を容易にする任意の機能領域を含んでいてもよい。上記のさらなるアミノ酸配列の特定の例は、ＧＳＴ配列又はＨｉｓタグ配列を含む。
【０２８９】
７）本発明の可溶性受容体の調製：
本明細書に開示される可溶性ＩＬ−１８Ｒα受容体は、組換え技術、化学合成、クローニング、ライゲーション、又はその組み合わせによって等の当技術分野でそれ自体知られている任意の技術によって産生されてもよい。特定の実施形態では、本発明の可溶性受容体は、組換え技術によって、たとえば適した宿主細胞中での対応する核酸の発現によって産生される。産生されたポリペプチドは、グリコシル化されていてもよく若しくはされていなくてもよく又は使用される宿主細胞型に依存して他の翻訳後修飾を含有していてもよい。Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓによって出版されたシリーズ「実践的なアプローチ（Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ）」中のいくつかのタイトル（「ＤＮＡクローニング２：発現系（ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ２：Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）」、１９９５；「ＤＮＡクローニング４：哺乳動物系（ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ４：Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）」、１９９６；「タンパク質発現（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）」、１９９９；「タンパク質精製技術（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ）」、２００１）等の、多くの書籍及び検討が、ベクター及び原核生物又は真核生物の宿主細胞を使用して、組換えタンパク質をクローニングし、産生する方法についての教示を提供する。
【０２９０】
したがって、本発明のさらなる対象は、本明細書で上記若しくは下記に記載される可溶性受容体のいずれかをコードする単離された核酸分子又はその相補鎖若しくは縮重配列である。この点に関して、用語「核酸分子」は、すべての異なる種類の核酸を包含し、限定を伴うことなくデオキシリボ核酸（たとえばＤＮＡ、ｃＤＮＡ、ｇＤＮＡ、合成ＤＮＡ等）、リボ核酸（たとえばＲＮＡ、ｍＲＮＡ等）、及びペプチド核酸（ＰＮＡ）を含む。好ましい実施形態では、核酸分子は、二本鎖ＤＮＡ分子又はｃＤＮＡ分子等のＤＮＡ分子である。用語「単離された」は、同定され、核酸分子が天然源において通常関連している少なくとも１つの混在核酸分子から分離された核酸分子を意味する。単離された核酸分子は、核酸分子が自然界において発見される形態又は環境以外のものである。したがって、特定の核酸分子が天然の細胞中に存在すると、単離された核酸分子は、特定の核酸分子と区別される。縮重配列は、参考のヌクレオチド配列と同じアミノ酸配列をコードする任意のヌクレオチド配列を示すが、遺伝子コード縮重の結果として、別のヌクレオチド配列を含む。
【０２９１】
本発明のさらなる対象は、上記又は下記に記載される可溶性受容体のいずれかをコードするＤＮＡを含むベクターである。ベクターは、任意の原核細胞又は真核細胞において機能的な、組込み又は自己複製の任意のクローニングベクター又は発現ベクターであってもよい。特に、ベクターは、プラスミド、コスミド、ウイルス、ファージ、エピソーム、人工染色体等であってもよい。ベクターは、プロモーター、ターミネーター、エンハンサー、選択マーカー、複製起点等のような調節エレメントを含んでいてもよい。上記ベクターの特定の例は、下記に論じられるように、ｐＢＲプラスミド、ｐＵＣプラスミド、又はｐｃＤＮＡプラスミド等の原核生物のプラスミド；レトロウイルスベクター、アデノウイルスベクター、又はＡＡＶベクターを含むウイルスベクター；バクテリオファージ；バキュロウイルス；ＢＡＣ又はＹＡＣ等を含む。適切な核酸配列は、種々の手順によってベクターに挿入されてもよい。一般に、ＤＮＡは、当技術分野で知られている技術を使用して、適切な制限酵素部位（複数可）に挿入される。１つ又は複数のこれらの成分を含有する適したベクターの構築は、当業者に知られている標準のライゲーション技術を用いる。
【０２９２】
本発明の他の態様は、組換え宿主細胞であり、上述の細胞は、上記に定義される核酸分子又はベクターを含む。宿主細胞は、原核細胞又は真核細胞であってもよい。原核細胞の例は、大腸菌等の細菌を含む。真核細胞の例は、酵母菌、植物細胞、哺乳動物細胞、及び昆虫細胞であり、任意の初代細胞培養系又は樹立細胞系を含む（たとえば３Ｔ３、Ｖｅｒｏ、ＨＥＫ２９３、ＴＮ５等）。グリコシル化タンパク質の発現に適した宿主細胞は、多細胞生物に由来する。無脊椎動物細胞の例は、ショウジョウバエＳ２及びヨトウガＳｆ９等の昆虫細胞並びに植物細胞を含む。有用な哺乳動物宿主細胞系の例は、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞及びＣＯＳ細胞を含む。より特定の例は、ＳＶ４０によって形質転換したサル腎臓ＣＶ１系（ＣＯＳ−７、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５１）、ヒト胎児腎臓系（２９３又は浮遊培養での成長のためにサブクローニングした２９３細胞、Ｇｒａｈａｍら，Ｊ．Ｇｅｎ  Ｖｉｒｏｌ．，３６：５９（１９７７））、チャイニーズハムスター卵巣細胞／−ＤＨＦＲ（ＣＨＯ、Ｕｒｌａｕｂ及びＣｈａｓｉｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ，Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，７７：４２１６（１９８０））、マウスセルトリ細胞（ＴＭ４、Ｍａｔｈｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．，２３：２４３−２５１（１９８０））、ヒト肺細胞（Ｗ１３８、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ７５）、ヒト肝細胞（Ｈｅｐ  Ｇ２、ＨＢ  ８０６５）、並びにマウス乳癌（ＭＭＴ  ０６０５６２、ＡＴＣＣ  ＣＣＬ５１）を含む。詳細には、本発明の好ましい哺乳動物細胞は、ＣＨＯ細胞である。
【０２９３】
本明細書で上記に開示されるように、本発明の可溶性受容体は、組換え技術、化学合成、クローニング、ライゲーション、又はその組み合わせによって等の、当技術分野でそれ自体知られている任意の技術によって産生されてもよい。特定の実施形態では、可溶性受容体は、組換え技術によって、たとえば適した宿主細胞中での対応する核酸の発現によって産生される。したがって、本発明の他の対象は、本発明の可溶性受容体を産生する方法であって、方法は、核酸分子の発現を可能にする条件下で、本発明の組換え宿主細胞を培養すること及び産生されたポリペプチドを回収することを含む。産生されたポリペプチドは、グリコシル化されていてもよく若しくはされていなくてもよく又は使用される宿主細胞型に依存して他の翻訳後修飾を含有していてもよい。Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓによって出版されたシリーズ「Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ」中のいくつかのタイトル（「ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ２：Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」、１９９５；「ＤＮＡ  Ｃｌｏｎｉｎｇ  ４：Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」、１９９６；「Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ」、１９９９；「Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」、２００１）等の、多くの書籍及び検討が、ベクター及び原核生物又は真核生物の宿主細胞を使用して、組換えタンパク質をクローニングし産生する方法についての教示を提供する。
【０２９４】
本発明による可溶性受容体を産生する方法で使用されることになるベクターは、エピソームベクター又は非／相同組込みベクターとすることができ、ベクターは、任意の適した手段によって適切な宿主細胞中に導入することができる（形質転換、形質移入、接合、プロトプラスト融合、電気穿孔、リン酸カルシウム沈殿、直接的な微量注射等）。特定のプラスミドベクター、ウイルスベクター、又はレトロウイルスベクターを選択する重要な因子は、次のものを含む：ベクターを含有するレシピエント細胞を、認識し、且つベクターを含有しないそれらのレシピエント細胞から選択する容易性；特定の宿主における所望の、ベクターのコピーの数；及び異なる種の宿主細胞間をベクターが「シャトル」し得ることが望ましいかどうか。ベクターは、原核生物又は真核生物の宿主細胞中での本発明のポリペプチド又は融合タンパク質の発現を、適切な転写開始／終了調節配列の制御の下で可能にするはずであり、ベクターは、上述の細胞中で恒常的に活性又は誘発性であるよう選ばれる。次いで、上記細胞中で実質的に豊富な細胞系は、安定した細胞系を準備するために単離することができる。
【０２９５】
宿主細胞は、タンパク質産生のための、本明細書に記載される発現ベクター又はクローニングベクターを用いて形質移入又は形質転換し、プロモーターを誘発する、形質転換体を選択する、又は所望の配列をコードする遺伝子を増幅するのに適切なように修飾した従来の培養液中で培養する。培地、温度、ｐＨ等のような培養条件は、不必要な実験作業を伴うことなく当業者によって選択することができる。一般に、細胞培養物の生産性を最大にするための原理、プロトコール、及び実践的技術は、Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ：ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ａｐｐｒｏａｃｈ，Ｍ．Ｂｕｔｌｅｒ編（ＩＲＬ  Ｐｒｅｓｓ，１９９１）及びＳａｍｂｒｏｏｋら、前掲に見い出すことができる。
【０２９６】
真核生物の宿主細胞（たとえば酵母、昆虫、又は哺乳動物細胞）については、異なる転写調節配列及び翻訳調節配列が宿主の性質に依存して用いられてもよい。それらは、アデノウイルス、パピローマウイルス、シミアンウイルス等のようなウイルス源に由来していてもよく、調節シグナルは、高度なレベルの発現を有する特定の遺伝子に関連する。例としては、ヘルペスウイルスのＴＫプロモーター、ＳＶ４０初期プロモーター、酵母ｇａ１４遺伝子プロモーター等である。遺伝子の発現を調整することができるように、抑制及び活性化を考慮に入れる転写開始調節シグナルが選択されてもよい。導入されたＤＮＡによって安定して形質転換された細胞は、発現ベクターを含有する宿主細胞の選択を考慮に入れる１つ又は複数のマーカーをさらに導入することにより選択することができる。マーカーにより、栄養要求性宿主に対する光合成栄養、たとえば抗生物質又は銅等の重金属の殺生物剤に対する抵抗性等を提供してもよい。選択マーカー遺伝子は、発現されることになるＤＮＡ配列に直接連結する（たとえば同じベクター上）又は同時形質移入によって同じ細胞中に導入することができる。さらなる要素もまた、本発明のタンパク質の最適な合成のために必要とされてもよい。
【０２９７】
詳細には、適した原核細胞は、組換えのバクテリオファージ、プラスミド、又はコスミドＤＮＡ発現ベクターを用いて形質転換した細菌（枯草菌又は大腸菌等）を含む。上記細胞は、Ｎ末端メチオニン残基を含むタンパク質を典型的に産生する。本発明で使用されることになる好ましい細胞は、真核生物の宿主細胞、たとえばヒト細胞、サル細胞、マウス細胞、及びチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞等の哺乳動物細胞であり、何故なら、それらは、正確なフォールディング又は正確な部位でのグリコシル化を含む、タンパク質分子に対する翻訳後修飾を提供するからである。適した哺乳動物宿主細胞の例は、アフリカミドリザル腎臓細胞（Ｖｅｒｏ；ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １５８７）、ヒト胎児腎臓細胞（２９３−ＨＥＫ；ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １５７３）、ベビーハムスター腎臓細胞（ＢＨＫ−２１、ＢＨＫ−５７０；ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  ８５４４、ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １０３１４）、イヌ腎臓細胞（ＭＤＣＫ；ＡＴＣＣ  ＣＣＬ  ３４）、チャイニーズハムスター卵巣細胞（ＣＨＯ−Ｋ１；ＡＴＣＣ  ＣＣＬ６１；ＣＨＯ  ＤＧ４４（Ｃｈａｓｉｎら，Ｓｏｍ．Ｃｅｌｌ．Ｍｏｌｅｃ．Ｇｅｎｅｔ．１２：５５５，１９８６））、ラット下垂体細胞（ＧＨ１；ＡＴＣＣ  ＣＣＬ８２）、ＨｅＬａＳ３細胞（ＡＴＣＣ  ＣＣＬ２．２）、ラット肝癌細胞（Ｈ−４−ＩＩ−Ｅ；ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １５４８）、ＳＶ４０で形質転換したサル腎臓細胞（ＣＯＳ−１；ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５０）、Ｂｏｗｅｓメラノーマ及びヒト肝細胞癌（たとえばＨｅｐ  Ｇ２）、ネズミ胚細胞（ＮＩＨ−３Ｔ３；ＡＴＣＣ  ＣＲＬ  １６５８）、及び多くの他の細胞系を含む。代替の真核生物の宿主細胞は、酵母発現ベクターを用いて形質転換された酵母菌（たとえばサッカロミセス、クルイベロミセス等）である。さらに、酵母菌は、グリコシル化を含む翻訳後ペプチド修飾を実行することができる。強いプロモーター配列及び酵母中での所望のタンパク質の産生のために利用することができる、高コピー数のプラスミドを利用する多くの組換えＤＮＡ戦略が存在する。酵母菌は、クローニングされた哺乳動物遺伝子産物中のリーダー配列を認識し、リーダー配列を持つポリペプチド（つまりプレペプチド）を分泌する。
【０２９８】
組換えポリペプチドの長期的高収率産生については、安定した発現が好まれる。たとえば、興味のあるポリペプチドを安定して発現する細胞系は、同じ又は別個のベクター上にウイルス複製起点及び／又は内在性発現要素並びに選択マーカー遺伝子を含有していてもよい発現ベクターを使用して形質転換されてもよい。ベクターの導入の後で、細胞は、選択培地に移す前に、強化培地中で１〜２日間成長させてもよい。選択マーカーの目的は、選択に対する抵抗性を付与することであり、その存在が、導入された配列をうまく発現する細胞の成長及び回収を可能にする。安定して形質転換された細胞の抵抗性クローンは、細胞型に適切な組織培養技術を使用して増殖させてもよい。次いで、上記細胞中で実質的に豊富な細胞系は、安定した細胞系を準備するために単離することができる。
【０２９９】
本発明の組換えポリペプチドの高収率産生の特に好ましい方法は、米国特許第４，８８９，８０３号に記載されるＤＨＦＲ欠損ＣＨＯ細胞中でのジヒドロ葉酸還元酵素（ＤＨＦＲ）増幅の使用を通しての、レベルが連続的に増加するメトトレキセートの使用によるものである。得られたポリペプチドは、グリコシル化形態であってもよい。
【０３００】
本明細書に開示される可溶性受容体はまた、トリ細胞、菌類細胞、昆虫細胞、酵母細胞、又は植物細胞等の他の真核細胞中で発現させることもできる。バキュロウイルス系は、クローニングされた遺伝子を昆虫細胞中に導入するための効率的な手段を提供する。バキュロウイルス／昆虫細胞発現系のための材料は、とりわけＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社からのキット形態で市販で入手可能である。
【０３０１】
組換えＤＮＡ技術に加えて、本発明の可溶性受容体は、化学合成技術によって調製されてもよい。化学合成技術の例は、固相合成及び液相合成である。固相合成として、たとえば、合成されることになるポリペプチドのカルボキシ末端に対応するアミノ酸は、有機溶媒中で不溶性の担体に結合され、反応の交互の繰り返しによって（たとえば適切な保護基を用いて保護されたそれらのアミノ基及び側鎖官能基を有するアミノ酸の順次の縮合によって）、ポリペプチド鎖が伸長する。固相合成法は、使用される保護基の種類に依存して、ｔＢｏｃ法及びＦｍｏｃ法に大きく分類される。完全合成タンパク質が、文献中で開示されている（Ｂｒｏｗｎ  Ａら，１９９６）。
【０３０２】
本発明の可溶性受容体は、使用及び／又は産生の所望の方法に従って好まれ得る他の代替形態で、産生する、製剤する、投与する、又は一般的に使用することができる。本発明のタンパク質は、たとえばグリコシル化によって、翻訳後に修飾することができる。本発明のポリペプチド又はタンパク質は、単離された（又は精製された）生物学的活性形態で又はその前駆体、誘導体、及び／若しくは塩として提供することができる。用語「生物学的活性」は、上記ポリペプチドが、ＭＳの症状を低下させる能力を有することを意味する。
【０３０３】
有用な抱合体又は複合体もまた、薬剤送達効果の点から作用物質を改善するために生成することができる。この目的のために、本明細書に記載される可溶性受容体は、ポリエチレングリコール及び他の天然ポリマー又は合成ポリマー等の分子を有する活性抱合体又は活性複合体の形態とすることができる（Ｈａｒｒｉｓ  ＪＭ及びＣｈｅｓｓ  ＲＢ，２００３；Ｇｒｅｅｎｗａｌｄ  ＲＢら，２００３；Ｐｉｌｌａｉ  Ｏ及びＰａｎｃｈａｇｎｕｌａ  Ｒ，２００１）この点に関して、本発明は、本明細書に開示される化学的に修飾されたポリペプチド及びタンパク質を企図し、ポリペプチド又はタンパク質は、ポリマーと連結される。典型的に、ポリマーは、抱合体が生理学的環境等の水性環境において沈殿しないように、水溶性である。適したポリマーの例は、アシル化のための活性エステル又はアルキル化のためのアルデヒド等の単一の反応基を有するよう修飾されたポリマーである。このようにして、重合度をコントロールすることができる。反応性アルデヒドの例は、ポリエチレングリコールプロピオンアルデヒド、そのモノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシ誘導体、又はアリールオキシ誘導体である（たとえばＨａｒｒｉｓら，米国特許第５，２５２，７１４号を参照されたい）。ポリマーは、分枝又は非分枝であってもよい。さらに、ポリマーの混合物は、抱合体を産生するために使用することができる。治療に使用される抱合体は、薬学的に許容し得る水溶性ポリマー部分を含むことができる。適した水溶性ポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、モノメトキシＰＥＧ、モノ（Ｃ１〜Ｃ１０）アルコキシＰＥＧ、アリールオキシＰＥＧ、ポリ（Ｎ−ビニルピロリドン）ＰＥＧ、トレシルモノメトキシＰＥＧ、ＰＥＧプロピオンアルデヒド、ビス−スクシンイミジルカーボネートＰＥＧ、プロピレングリコールホモポリマー、ポリプロピレンオキシド／エチレンオキシドコポリマー、ポリオキシエチル化ポリオール（たとえばグリセロール）、ポリビニルアルコール、デキストラン、セルロース、又は他の炭水化物ベースのポリマーを含む。適したＰＥＧは、たとえば、５，０００、１２，０００、２０，０００、及び２５，０００を含む約６００〜約６０，０００までの分子量を有していてもよい。抱合体はまた、上記水溶性ポリマーの混合物を含むこともできる。
【０３０４】
抱合体の例は、本明細書で上記に開示される可溶性受容体のいずれか及び上述の可溶性受容体のＮ末端に対して付着されたポリアルキルオキシド部分を含む。ＰＥＧは、１つの適したポリアルキルオキシドである。説明として、本明細書で上記に開示される可溶性受容体のいずれかは、「ペグ化」として知られているプロセスで、ＰＥＧを用いて修飾することができる。ペグ化は、当技術分野で知られているペグ化反応のいずれかによって実行することができる（たとえば、欧州特許第０１５４３１６号、Ｄｅｌｇａｄｏら，Ｃｒｉｔｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ｉｎ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  ９：２４９（１９９２）、Ｄｕｎｃａｎ及びＳｐｒｅａｆｉｃｏ，Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．２７：２９０（１９９４）、並びにＦｒａｎｃｉｓら，Ｉｎｔ  Ｊ  Ｈｅｍａｔｏｌ  ６８：１（１９９８）を参照されたい）。たとえば、ペグ化は、反応性ポリエチレングリコール分子を用いたアシル化反応又はアルキル化反応によって行うことができる。代替アプローチでは、抱合体は、活性化ＰＥＧを縮合することにより形成され、ＰＥＧの末端の水酸基又はアミノ基は、活性化リンカーと交換される（たとえばＫａｒａｓｉｅｗｉｃｚら，米国特許第５，３８２，６５７号を参照されたい）。好ましくは、これらのすべての修飾が、ＭＳの症状を低下させる可溶性受容体の能力に著しく影響を及ぼすわけではない。
【０３０５】
本明細書で上記に記載される可溶性受容体は、さらなるＮ末端アミノ酸残基、好ましくはメチオニンを含んでいてもよい。実際に、発現系及び条件に依存して、ポリペプチドは、開始メチオニンを用いて組換え宿主細胞中で発現させてもよい。次いで、このさらなるアミノ酸は、結果として生じる組換えタンパク質中で維持される又は文献に開示される方法に従ってメチオニンアミノペプチダーゼ等のエキソペプチダーゼによって取り除かれてもよい（Ｖａｎ  Ｖａｌｋｅｎｂｕｒｇｈ  ＨＡ及びＫａｈｎ  ＲＡ，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．（２００２）３４４：１８６−９３；Ｂｅｎ−Ｂａｓｓａｔ  Ａ，Ｂｉｏｐｒｏｃｅｓｓ  Ｔｅｃｈｎｏｌ．（１９９１）１２：１４７−５９）。
【０３０６】
８）本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒαの薬学的使用：
特定の態様では、本発明は、医薬としての使用のための、上記又は下記に記載される可溶性ＩＬ−１８Ｒαのいずれかに関する。好ましくは、上記又は下記に記載される可溶性ＩＬ−１８Ｒαのいずれかは、自己免疫疾患又は脱髄疾患、特にＭＳの症状を低下させるための能力を有する。したがって、好ましくは、本明細書に記載される可溶性ＩＬ−１８Ｒαに対するすべての修飾が、ＭＳの症状を低下させるそれらの能力に著しく影響を及ぼすわけではない。さらに好ましくは、本明細書に記載される可溶性ＩＬ−１８Ｒαに対する修飾は、ＭＳの症状を低下させるそれらの能力を増強する（たとえばそれらの半減期を増強することによって等）。
【０３０７】
本発明は、ヒト患者におけるＭＳの症状を、有効量の可溶性ＩＬ−１８Ｒαを患者に対して投与することによって処置する、予防する、又は寛解させる方法にさらに関する。本発明の方法は、本明細書に記載される可溶性ＩＬ−１８Ｒαを、ＭＳに罹患した個人に対して、患者の状態における持続性の改善を誘発するのに十分な期間投与することを含む。本発明は、部分的に、ＭＳの処置のための医薬の製造における、可溶性ＩＬ−１８Ｒαの使用をさらに提供する。いくつかの実施形態では、可溶性ＩＬ−１８Ｒαは、本明細書で上記に開示される可溶性ＩＬ−１８Ｒαである。いくつかの実施形態では、処置するための疾患は、再発寛解型（ＲＲ）ＭＳ、二次進行型（ＳＰ）ＭＳ、一次進行型（ＰＰ）ＭＳ、又は進行再発型（ＰＲ）ＭＳである。
【０３０８】
上記本明細書及び本出願の実施例で開示される結果は、本発明にとって、部分的に基礎となる。これらの結果は、ＭＳの処置における、可溶性ＩＬ−１８Ｒαの使用を強く支持する。対象となる方法は、その生物活性を予防することによる等で、有効量の内在性生物学的活性ＩＬ−１８Ｒαを低下させることができる可溶性ＩＬ−１８Ｒαを患者に対して投与することを含む。上記可溶性ＩＬ−１８Ｒαは、本明細書で上記に開示される可溶性ＩＬ−１８Ｒαを含む。
【０３０９】
本発明の好ましい一実施形態では、本明細書で上記に記載される可溶性ＩＬ−１８Ｒαの徐放性形態が使用される。開示される方法での使用に適した徐放性形態は、上記ポリマーと混合された、徐々に溶解する生体適合性ポリマー中にカプセル化された及び／又は生体適合性半浸透性インプラント中に包まれた可溶性ＩＬ−１８Ｒαを含むが、これらに限定されない。分解性ポリマーマイクロスフェアは、治療用タンパク質の高度な全身性のレベルを維持するよう設計されてきた。マイクロスフェアは、ポリ（ラクチドコグリコリド）（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（オルトエステル）、非生物分解性酢酸エチルビニルポリマー等の分解性ポリマーから調製され、タンパク質は、ポリマー中に閉じ込められる（Ｇｏｍｂｏｔｚ及びＰｅｔｔｉｔ，Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．６：３３２（１９９５）；Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｒａｎａｄｅ及びＨｏｌｌｉｎｇｅｒ（編），ｐａｇｅｓ  ５１−９３（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ  １９９５）中のＲａｎａｄｅ，「薬物送達におけるポリマーの役割（Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ）」；Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｓａｎｄｅｒｓ及びＨｅｎｄｒｅｎ（編），ｐａｇｅｓ  ４５−９２（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ  １９９７）中のＲｏｓｋｏｓ及びＭａｓｋｉｅｗｉｃｚ，「タンパク質送達に有用な分解性放出制御系（Ｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｕｓｅｆｕｌ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ）」；Ｂａｒｔｕｓら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８１：１１６１（１９９８）；Ｐｕｔｎｅｙ及びＢｕｒｋｅ，Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １６：１５３（１９９８）；Ｐｕｔｎｅｙ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２：５４８（１９９８））。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）にコーティングされたナノスフェアもまた、治療用タンパク質の静脈内投与のためのキャリアを提供することができる。（たとえばＧｒｅｆら，Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：１６７（１９９７）を参照されたい）。さらに、可溶性ＩＬ−１８Ｒαは、その血清半減期を延長する又はタンパク質送達を増強するために、ポリエチレングリコールと抱合することができる（ペグ化）。
【０３１０】
ＭＳを処置するために、可溶性ＩＬ−１８Ｒα、特に本明細書で上記に開示される可溶性ＩＬ−１８Ｒαは、疾患の重症度を反映する少なくとも１つの指標において持続性の改善を誘発するのに十分な量及び時間で、患者に対して投与される。改善度は、徴候又は症状に基づいて決定され、クオリティオブライフ質問表等の、患者に対して行われる質問表を用いてもよい。可溶性ＩＬ−１８Ｒαの治療的有効量は、上記持続性の改善を達成するのに十分な量である。
【０３１１】
改善は、患者が、選ばれた１つ又は複数の指標についてのベースラインに対する改善を顕在化させるまで、ある用量の可溶性ＩＬ−１８Ｒαを繰り返し投与することにより誘発されるかもしれない。処置の後の、患者の病気の程度は、１つ又は複数の指標に従って改善されたように思われる可能性があるが、処置は、同じレベルで又は用量若しくは頻度を低下させて、無期限に継続してもよい。一度処置が減らされ又は中止され、症状が再発すれば、処置は、後に、最初のレベルで再開されてもよい。
【０３１２】
本発明の方法で使用される医薬組成物は、活性成分としての可溶性ＩＬ−１８Ｒαと組み合わせて、動物に対する投与に適した、適した薬学的に許容し得る希釈剤、キャリア、生物学的適合性媒体、及び添加剤（たとえば生理食塩水）を含有していてもよく、薬学的に使用することができる調製物中への活性化合物の処理を容易にする助剤（賦形剤、安定剤、又はアジュバントのような）を任意選択で含んでいてもよい。医薬組成物は、投与のモードの必要性を満たすために、任意の許容し得る方法で製剤されてもよい。たとえば、薬剤送達のための生体材料及び他のポリマーの使用、その上、投与の特定のモードを有効にするための異なる技術及びモデルが文献に開示されている（Ｌｕｏ  Ｂ及びＰｒｅｓｔｗｉｃｈ  ＧＤ，２００１；Ｃｌｅｌａｎｄ  ＪＬら，Ｃｕｒｒ  Ｏｐｉｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．（２００１），１２（２）：２１２−９）。「薬学的に許容し得る」は、活性成分の生物活性の有効性を妨害せず、且つ投与される宿主にとって有毒ではない任意のキャリアを包含することを意味する。たとえば非経口投与については、上記の活性成分は、食塩水、デキストロース溶液、血清アルブミン、及びリンゲル液等の媒体中での注射のために、単位剤形で製剤されてもよい。キャリアはまた、デンプン、セルロース、タルク、グルコース、ラクトース、スクロース、ゼラチン、麦芽、米、小麦粉、チョーク、シリカゲル、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸ナトリウム、グリセロールモノステアレート、塩化ナトリウム、脱脂粉乳、グリセロール、プロピレングリコール、水、エタノール、及び石油、動物、植物、又は合成起源の油を含む様々な油（落花生油、大豆油、鉱油、ゴマ油）から選択することができる。
【０３１３】
医薬組成物は、液体形態又は凍結乾燥形態であってもよく、様々なｐＨ価及びイオン強度を有する希釈剤（Ｔｒｉｓ、クエン酸塩、酢酸塩、又はリン酸緩衝液）、Ｔｗｅｅｎ又はポリソルベート等の可溶化剤、ヒト血清アルブミン又はゼラチン等のキャリア、チメロサール、パラベン、ベンジルアルコニウムクロリド、又はベンジルアルコール等の防腐剤、アスコルビン酸又はメタ重亜硫酸ナトリウム等の酸化防止剤、及びリシン又はグリシン等の他の成分を含む。特定の組成物の選択は、処置されている状態、投与の経路、及び所望される薬物動態パラメータを含む多くの因子に依存するであろう。医薬組成物に適した成分に関するより大規模な調査は、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，第１８版  Ａ．Ｒ．Ｇｅｎｎａｒｏ編  Ｍａｃｋ，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ（１９８０）に見い出される。
【０３１４】
好ましい実施形態では、可溶性ＩＬ−１８Ｒαは、精製された組換えタンパク質を含む生理学的に許容し得る組成物の形態で、生理学的に許容し得るキャリア、賦形剤、又は希釈剤と共に投与される。上記キャリアは、用いられる投与量及び濃度で、レシピエントにとって有毒でない。通常、上記組成物の調製は、緩衝液、アスコルビン酸等の酸化防止剤、低分子量ポリペプチド（１０個未満のアミノ酸を有するポリペプチド等）、タンパク質、アミノ酸、グルコース、スクロース、又はデキストリン等の炭水化物、ＥＤＴＡ、グルタチオン、及び他の安定剤等のキレート剤、並びに賦形剤と可溶性ＩＬ−１８Ｒαを組み合わせることを要する。中性緩衝食塩水又は同種の血清アルブミンと混合した食塩水は、例示的な適切な希釈剤である。可溶性ＩＬ−１８Ｒαは、希釈剤としての適切な賦形剤溶液（たとえばスクロース）を使用して、凍結乾燥物として好ましくは製剤される。適切な投与量は、標準の投薬試験で決定することができ、投与の選ばれた経路に従って変動してもよい。適切な業界基準に従って、ベンジルアルコール等の防腐剤もまた追加されてもよい。もちろん、投与の量及び頻度は、処置されている徴候の重症度、所望の応答、患者の年齢及び状態等のような因子に依存するであろう。
【０３１５】
投与の任意の承認されたモードは、活性成分の所望の血中濃度を確立するために当業者によって使用し、且つ決定することができる。たとえば、投与は、皮下経路、静脈内経路、皮内経路、筋肉内経路、腹腔内経路、鼻腔内経路、経皮的経路、直腸経路、口腔経路、又は頬側経路等の様々な非経口経路によるものであってもよい。好ましくは、本発明の医薬組成物は、皮下又は静脈内に注射によって投与される。最終的に選ばれた投与の経路は、多くの因子に依存するであろう、そして当業者によって確認されてもよい。
【０３１６】
本発明の方法で使用される医薬組成物はまた、蓄積注射、浸透圧ポンプ等を含む徐放性剤形態又は放出制御剤形態で、可溶性ＩＬ−１８Ｒαの長期投与について、所定の速度で、好ましくは正確な投与量の単一の投与に適した単位剤形で投与することができる。
【０３１７】
非経口投与は、大量注射又は長い間にわたっての緩やかな灌流によるものとすることができる。非経口投与のための調製物は、無菌の水性溶液又は非水性溶液、懸濁液、及び乳濁液を含み、これらは、当技術分野で知られている補助的作用物質又は賦形剤を含有していてもよく、ルーチン的な方法に従って調製することができる。さらに、適切な油性注射懸濁液としての活性化合物の懸濁液が投与されてもよい。適した親油性の溶媒又は媒体は、脂肪油、たとえばゴマ油又は合成脂肪酸エステル、たとえばゴマ油又は合成脂肪酸エステル、たとえばオレイン酸エチル又はトリグリセリドを含む。懸濁液の粘度を増加させる物質を含有していてもよい水性注射懸濁液は、たとえば、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、ソルビトール、及び／又はデキストランを含む。任意選択で、懸濁液はまた、安定剤を含有していてもよい。医薬組成物は、注射による投与に適した溶液を含み、約０．０１〜９９．９９パーセント、好ましくは約２０〜７５パーセントの活性化合物を賦形剤と共に含有する。
【０３１８】
投与される投与量は、レシピエントの年齢、性別、健康状態、及び体重、併用処置の種類、それがもしあれば処置の頻度、並びに所望される効果の性質に依存性であろうということが理解される。投与量は、当業者によって理解され、決定できるように、個々の患者に適合されるであろう。各処置に必要な全用量は、複数回用量によって又は単一用量で投与されてもよい。
【０３１９】
本発明の一実施形態では、本明細書で上記に開示される可溶性ＩＬ−１８Ｒαは、ＭＳを処置するために１週間当たり１回投与され、他の実施形態では、１週間当たり少なくとも２回投与され、他の実施形態では、１日当たり少なくとも１回投与される。注射される場合、本明細書で上記に定義される可溶性ＩＬ−１８Ｒαの成人（１８歳以上である人）用量当たりの有効量は、１〜２００ｍｇ／ｍ２又は１〜４０ｍｇ／ｍ２若しくは約５〜２５ｍｇ／ｍ２の範囲である。あるいは、均一用量が投与されてもよく、その量は、２〜４００ｍｇ／用量、２〜１００ｍｇ／用量、又は約１０〜８０ｍｇ／用量の範囲であってもよい。用量が１週間当たり１回以上投与されることになる場合、例示的な用量範囲は、先に記載される用量範囲と同じ又はそれより低い。好ましくは、上記可溶性ＩＬ−１８Ｒαは、１用量範囲当たり２５〜１００ｍｇ／用量で、１週間当たり２回以上投与される。本発明の一実施形態では、ＭＳは、本明細書で上記に定義される可溶性ＩＬ−１８Ｒαを含有する又はその代わりに１用量当たり８０ｍｇを８０〜１００ｍｇ／用量で含有する、注射に対して許容し得る調製物を投与することにより処置される。
【０３２０】
注射以外の可溶性ＩＬ−１８Ｒαの投与の経路が使用される場合、用量は、標準の医療行為に合わせて適切に合わせられる。たとえば、投与の経路が吸入である場合、投薬は、１０ｍｇ／用量〜１用量当たり５０ｍｇの用量範囲で、１週間当たり１〜７回であってもよい。
【０３２１】
多くの場合、より長い期間の処置が、所望の改善度を誘発するのに必要である可能性があるが、患者の状態における改善は、少なくとも３週間の期間にわたり１週間当たり１〜３回、本明細書で上記に開示される可溶性ＩＬ−１８Ｒαの約１００ｍｇまでの用量を注射することにより得られるであろう。レジメンは無期限に継続されてもよい。
【０３２２】
９）併用治療：
いくつかの実施形態では、本明細書で上記に定義される可溶性ＩＬ−１８Ｒαは、ＭＳを処置する又は予防するための第２の治療薬と共に投与される。たとえば、可溶性ＩＬ−１８Ｒαは、たとえばコルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンを含む、ＭＳに対する標準の処置薬のいずれかと共にも投与されてもよい。
【０３２３】
本発明の一実施形態では、本明細書で上記に定義される可溶性ＩＬ−１８Ｒαは、コルチコステロイドと共に投与される。「コルチコステロイド」は、コレステロールに由来し、水素化されたシクロペンタノペルヒドロフェナントレン環構造によって特徴づけられ得る任意の自然発生ステロイドホルモン又は合成ステロイドホルモンが意味される。自然発生コルチコステロイドは、副腎皮質によって一般に産生される。合成コルチコステロイドは、ハロゲン化されてもよい。コルチコステロイドは、グルココルチコイド活性及び／又は鉱質コルチコイド活性を有していてもよい。
【０３２４】
例示的なコルチコステロイドは、たとえばデキサメタゾン、ベータメタゾン、トリアムシノロン、トリアムシノロンアセトニド、酢酸トリアムシノロン、トリアムシノロンヘキサアセトニド、ベクロメタゾン、ジプロピオナート、ジプロピオン酸ベクロメタゾン一水化物、フルメタゾンピバレート、酢酸ジフロラゾン、フルオシノロンアセトニド、フルオロメトロン、酢酸フルオロメトロン、プロピオン酸クロベタゾール、デソキシメタゾン、フルオキシメステロン、フルプレドニソロン、ヒドロコルチゾン、酢酸ヒドロコルチゾン、酪酸ヒドロコルチゾン、リン酸ヒドロコルチゾンナトリウム、コハク酸ヒドロコルチゾンナトリウム、ヒドロコルチゾンシピオネート、ヒドロコルチゾンプロブテート（ｈｙｄｒｏｃｏｒｔｉｓｏｎｅ  ｐｒｏｂｕｔａｔｅ）、吉草酸ヒドロコルチゾン、酢酸コルチゾン、酢酸パラメタゾン、メチルプレドニソロン、酢酸メチルプレドニゾロン、コハク酸メチルプレドニゾロンナトリウム、プレドニゾロン、酢酸プレドニゾロン、リン酸プレドニゾロンナトリウム、プレドニゾロンテブテート、ピバル酸クロコルトロン、フルオシノロン、酢酸デキサメタゾン２１、吉草酸ベータメタゾン１７、イソフルプレドン、９−フロオロコルチゾン、６−ヒドロキシデキサメタゾン、ジクロリゾン、メクロリゾン（ｍｅｃｌｏｒｉｓｏｎｅ）、フルプレジデン、ドキシベタソール、ハロプレドン、ハロメタゾン、クロベタゾン、ジフルコルトロン、イソフルプレドンアセテート、フルオロヒドロキシアンドロステンジオン、ベクロメタゾン、フルメタゾン、ジフロラゾン、フルオシノロン、クロベタゾール、コルチゾン、パラメタゾン、クロコルトロン、プレドニゾロン２１−ヘミスクシネート遊離酸、メタスルホ安息香酸プレドニゾロン、プレドニゾロンテルブテート（ｐｒｅｄｎｉｓｏｌｏｎｅ  ｔｅｒｂｕｔａｔｅ）、及びトリアムシノロンアセトニド２１−パルミテートを含む。
【０３２５】
本明細書で上記に定義される可溶性ＩＬ−１８Ｒαと共に投与されるコルチコステロイドの好ましい例は、プレドニゾン及び／又はＩＶメチルプレドニソロンである。
【０３２６】
本発明の一実施形態では、本明細書で上記に定義される可溶性ＩＬ−１８Ｒαは、免疫抑制剤と共に投与される。本発明の実施形態では、免疫抑制剤は、メトトレキセート、アザチオプリン、シクロホスファミド、及びクラドリビンからなる群から選ばれ、これらは、脱髄疾患の重篤な進行型形態に一般に使用される。
【０３２７】
本発明の他の実施形態では、本明細書で上記に定義される可溶性ＩＬ−１８Ｒαは、神経保護薬と共に投与される。本発明の一実施形態では、神経保護薬は、経口ミエリン、コパクソン（Ｔｅｖａ社製の酢酸グラチラマー）、タイサブリ（Ｂｉｏｇｅｎ社／Ｅｌａｎ社）、ノバントロン（Ｓｅｒｏｎｏ社）、テリフルノミド（Ａｖｅｎｔｉｓ社）、クラドリビン（Ｓｅｒｏｎｏ社／ＩＶＡＸ社）、ＧＳＫ社／田辺製薬の６８３６９９（Ｔ−００４７）、ダクリズマブ（Ｒｏｃｈｅ社）、ラキニモド（Ａｃｔｉｖｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈ社）、及びＺＫ−１１７１３７（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ  ＡＧ社）からなる群から選ばれる。これらの化合物はすべて、販売されている又はＭＳを処置するための臨床試験の最中である。
【０３２８】
本発明の他の実施形態では、本明細書で上記に定義される可溶性ＩＬ−１８Ｒαは、免疫調節剤と共に投与される。この点で、本発明での使用のための特定の免疫調節剤は、ＦＴＹ７２０（２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、フィンゴリモド）を含む。ＭＳを処置するためのＩＩ期でのＦＴＹ７２０（Ｎｏｖａｒｔｉｓ社）は、以下の化学式を有する。
【化１】
2009527535.tif 000002
【０３２９】
ＦＴＹ７２０は、ミリオシンの化学的修飾によって得られた、経口的に活性の免疫抑制剤（たとえば国際公開第９４／０８９４３号；国際公開第９９／３６０６５号を参照されたい）として同定された。本発明での使用のための他の免疫調節剤は、ＦＴＹ７２０の誘導体を含む。ＦＴＹ７２０の誘導体は、国際公開第９４／０８９４３号に記載される、以下の化学式を有する２−アミノ−１，３−プロパンジオール化合物及びその任意の薬学的に許容し得る塩を含み、
【化２】
2009527535.tif 000003
Ｒは、二重結合、三重結合、酸素、硫黄、スルフィニル基、スルホニル基、−Ｎ（Ｒ６）−からなる群から選択される結合、ヘテロ原子、又は基を鎖中で有していてもよく、Ｒ６は、水素、アルキル、アラルキル、アシル、又はアルコキシカルボニル、カルボニル、任意選択で置換されたアリーレン、任意選択で置換されたシクロアルキルエン、任意選択で置換されたヘテロアリーレン、及びその脂環式化合物（ａｌｉｃｙｃｌｅ）であり、且つ二重結合、三重結合、任意選択で置換されたアリル、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたヘテロアリル、又はその脂環式化合物；任意選択で置換されたアリル、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたヘテロアリル、又はその脂環式化合物によってその鎖端で置換されていてもよい任意選択で置換された直鎖状炭素鎖又は分枝炭素鎖であり、
Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、及びＲ５は、同じ又は異なり、それぞれは、水素、アルキル、アラルキル、アシル、又はアルコキシカルボニルを表し、又はＲ４及びＲ５は、アルキル、アリル、又はアラルキルによって置換されていてもよいアルキレン鎖を形成するよう結合していてもよい。
【０３３０】
上記の任意選択で置換された直鎖状炭素鎖又は分枝炭素鎖は、アルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アラルキルオキシ、アルキルエンジオキシ、アシル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アシルアミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アシルオキシ、アルキルカルバモイル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ニトロ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシイミノ、ヒドロキシ、カルボキシ、任意選択で置換されたアリル、任意選択で置換されたアリールオキシ、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたヘテロアリル、及びその脂環式化合物からなる群から選択される置換基を有してもよく、前述の任意選択で置換されたアリーレン、任意選択で置換されたシクロアルキレン、任意選択で置換されたヘテロアリーレン、及びその脂環式化合物は、アルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アラルキルオキシ、アルキルエンジオキシ、アシル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アシルアミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アシルオキシ、アルキルカルバモイル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ニトロ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、及びカルボキシからなる群から選択される置換基を有してもよく、任意選択で置換されたアリル、任意選択で置換されたアリールオキシ、任意選択で置換されたシクロアルキル、任意選択で置換されたヘテロアリル、及びその脂環式化合物は、アルキル、アルコキシ、アルケニルオキシ、アルキニルオキシ、アラルキルオキシ、アルキルエンジオキシ、アシル、アルキルアミノ、アルキルチオ、アシルアミノ、アルコキシカルボニル、アルコキシカルボニルアミノ、アシルオキシ、アルキルカルバモイル、ハロアルキル、ハロアルコキシ、ニトロ、ハロゲン、アミノ、ヒドロキシ、及びカルボキシからなる群から選択される置換基を有していてもよい。
【０３３１】
上記２−アミノ−１，３−プロパンジオール化合物の特定の例は、２−アミノ−２−［２−（４−ヘプチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ノニルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−デシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ウンデシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ドデシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−トリデシルフェニル）−エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−テトラデシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ヘキシルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ヘプチルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−オクチルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ノニルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−デシルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ウンデシルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ドデシルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−トリデシルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−（８−フルオロオクチル）フェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−（１２−フルオロドデシル）フェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−（７−フルオロヘプチルオキシ）フェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−（１１−フルオロウンデシルオキシ）フェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−（７−オクテニルオキシ）フェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ヘプチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ノニルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−デシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ウンデシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ドデシルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ヘプチルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−オクチルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ノニルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、２−アミノ−２−［２−（４−ウンデシルオキシフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、又は２−アミノ−２−［２−（４−（７−オクテニルオキシ）フェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール、及びその任意の薬学的に許容し得る塩を含む。
【０３３２】
本発明の他の実施形態では、本明細書で上記に定義される可溶性ＩＬ−１８Ｒαは、インターフェロンと共に投与される。この点で、本発明での使用のための特定のインターフェロンは、インターフェロン−ベータである。用語「インターフェロン（ＩＦＮ）」及び「インターフェロン−ベータ（ＩＦＮ−ベータ）」は、本明細書で使用されるように、体液からの単離によって得られた又は原核生物若しくは真核生物の宿主細胞からのＤＮＡ組換え技術によって得られた特にヒト起源の線維芽細胞インターフェロン並びにその塩、機能的誘導体、変異体、類似体、及び活性断片を含むことが意図される。特定の種類のインターフェロンベータは、インターフェロンベータ−１ａである。
【０３３３】
ヒト起源のインターフェロンの使用は、本発明で使用するのに好ましい。本発明で使用する適したＩＦＮ−ベータは、たとえばＲｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ社）、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）（Ｂｉｏｇｅｎ社）、又はＢｅｒｔａｓｅｒｏｎ／Ｂｅｔａｆｅｒｏｎ（登録商標）（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ社）として市販で入手可能である。Ｒｅｂｉｆ（登録商標）（組換えヒトインターフェロン）は、多発性硬化症（ＭＳ）のためのインターフェロン治療において最近開発されたものであり、これは処置における著しい進歩を表す。Ｒｅｂｉｆ（登録商標）は、哺乳動物細胞系から産生されたインターフェロン（ＩＦＮ）−ベータ１ａである。皮下に１週間当たり３回与えられたインターフェロンベータ−１ａは、再発寛解型多発性硬化症（ＲＲＡＭＳ）の処置において効果的であることが確立された。インターフェロンベータ−１ａは、再発の数及び重症度を低下させ、且つＭＲＩによって測定される疾患の負担及び疾患活性を低下させることによって、ＭＳの長期的経過にプラスの効果を有し得る。したがって本発明の方法での使用のための可溶性ＩＬ−１８Ｒαと共に投与されるインターフェロンの特定の例は、Ｒｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ社）、Ａｖｏｎｅｘ（登録商標）（Ｂｉｏｇｅｎ社）、又はＢｅｒｔａｓｅｒｏｎ／Ｂｅｔａｆｅｒｏｎ（登録商標）（Ｓｃｈｅｒｉｎｇ社）である。
【０３３４】
本発明の特定の態様は、上記処置を必要とする患者におけるＭＳ、特に再発寛解型（ＲＲ）ＭＳ、二次進行型（ＳＰ）ＭＳ、一次進行型（ＰＰ）ＭＳ、又は進行再発型（ＰＲ）ＭＳを処置する方法に関し、患者に、本明細書で上記に開示される可溶性ＩＬ−１８Ｒα及び本明細書で上記に開示されるコルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンの組み合わせの治療的有効量を投与することを含む。ある実施形態では、コルチコステロイドは、プレドニゾン又はＩＶメチルプレドニソロンである。ある実施形態では、免疫抑制剤は、メトトレキセート、アザチオプリン、シクロホスファミド、又はクラドリビンである。ある実施形態では、神経保護薬は、経口ミエリン、コパクソン、タイサブリ、ノバントロン、テリフルノミド、クラドリビン、６８３６９９（Ｔ−００４７）、ダクリズマブ、ラキニモド、又はＺＫ−１１７１３７である。ある実施形態では、免疫調節剤は、２−アミノ−２−［２−（４−オクチルフェニル）エチル］−１，３−プロパンジオール（ＦＴＹ７２０）である。ある実施形態では、インターフェロンは、インターフェロンベータ−１ａ（特にＲｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ社））である。
【０３３５】
本明細書で上記に定義される可溶性ＩＬ−１８Ｒα及び本明細書で上記に開示される第２の治療薬は、同時に、別々に、又は連続して投与されてもよい。たとえば、可溶性ＩＬ−１８Ｒαが最初に投与され、その後に第２の治療薬が投与されてもよい。その代わりに、第２の治療薬が最初に投与され、その後に可溶性ＩＬ−１８Ｒαが投与されてもよい。いくつかの場合では、可溶性ＩＬ−１８Ｒα及び第２の治療薬は、同じ製剤中で投与される。他の場合では、可溶性ＩＬ−１８Ｒα及び第２の治療薬は、異なる製剤中で投与される。可溶性ＩＬ−１８Ｒα及び第２の治療薬が異なる製剤中で投与される場合、それらの投与は、同時であってもよく又は順次であってもよい。
【０３３６】
本発明は、哺乳動物患者、好ましくはヒト患者におけるＭＳの治療での同時の、別個の、又は順次の使用のための、上記又は下記に記載される可溶性ＩＬ−１８Ｒαのいずれか及び併用調製物としての本明細書で上記に開示されるコルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンを含む産物にさらに関する。
【０３３７】
本明細書に引用されたすべての特許及び参考文献は、それらの全体が参照によって本明細書に含まれる。
【０３３８】
本発明の他の態様及び利点は、以下の実施例に開示されることとなり、説明的なものとしてのみ考えられるべきであり、本出願の範囲を限定しない。
【実施例】
【０３３９】
（実施例１）
ｐ３５−／−ＩＬ−１８−／−二重ノックアウトマウスはＥＡＥに対して感受性である
ＩＬ−１２ｐ３５の欠失は、マウスにおいて、ＭＯＧ（ミエリン乏突起膠細胞糖タンパク質）ペプチド誘発性実験的自己免疫脳脊髄炎（ＥＡＥ）に対してマウスを感受性過度にすることが以前に示された（Ｂｅｃｈｅｒ，Ｂ．ら  Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ  １１０，４９３−４９７（２００２））。ＩＬ−１８は、Ｔｈ１細胞（１型ヘルパーＴ細胞）を極性化するようＩＬ−１２と相乗作用で作用し、またＳｈｉらは、ＩＬ−１８が欠損したマウスはＥＡＥに対して抵抗性であることを実証する証拠を提示した（Ｓｈｉ，Ｆ．Ｄ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６５，３０９９−３１０４（２０００））。
【０３４０】
ＩＬ−１８がｐ３５−／−マウスにおけるＩＬ−１２の損失を代償し、したがってそれらのＥＡＥ感受性につながり得るかどうかを評価するために、我々は、ＩＬ−１２ｐ３５及びＩＬ−１８の両方が欠損したマウスを生成した（ｐ３５−／−×ＩＬ−１８−／−）。
【０３４１】
マウス（ｎ＝５マウス／グループ）を、ＣＦＡ（ＤＩＦＣＯ社、デトロイト、ＭＩ）中で乳化した、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社から得たＭＯＧ３５−５５ペプチド（アミノ酸配列：ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫ（配列番号１１））の２００μｇを用いて皮下に免疫した。マウスは、免疫時に及び４８時間後に、２００ｎｇ百日咳毒素（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）を腹腔内に受けた。
【０３４２】
マウスは、以下のように毎日スコア化した：０）検出可能なＥＡＥの徴候なし；０．５）末端の尾部がぐったりしている；１）全尾部がぐったりしている；２）片側の部分的な後肢の麻痺；２．５）両側の部分的な肢の麻痺；３）両側の全後肢の麻痺；３．５）全後肢の麻痺及び片側の前肢の麻痺；４）前肢及び後肢の全麻痺（スコア＞４は安楽死させる）；５）死。各時点で、各グループの平均疾患スコアを示す。統計的有意差は、独立スチューデントｔ検定を使用して評価した。
【０３４３】
ＣＦＡ中で乳化したＭＯＧ３５−５５を用いた免疫は、ｐ３５−／−×ＩＬ−１８−／−マウスがＥＡＥに対して完全に感受性であり、ｗｔで産生されるものに類似する疾患スコア及び疾患発生を有することを示した（図１ａを参照されたい）。したがって、ｐ３５−／−マウスにおけるＩＬ−１８欠失によって生成された、保護の欠如は、ＩＬ−１８が、ｐ３５−／−マウスにおけるＥＡＥ感受性を誘発する原因ではないことを示すが、ＩＬ−１８自体が、ＥＡＥ病因にほとんど又はまったく効果を有していないサイトカインであることをも示唆する。
【０３４４】
（実施例２）
ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスではなくＩＬ−１８−／−マウスがＥＡＥに対して感受性である
ｐ３５−／−×ＩＬ−１８−／−マウスにおける我々の実験は、ＥＡＥにおけるＩＬ−１８の、以前に提唱された病原性の役割に矛盾するように思われたので、我々は、ＭＯＧペプチド（実施例１に記載される）を用いてｗｔマウス及びＩＬ−１８−／−マウスを能動免疫し、ＩＬ−１８−／−マウスがＥＡＥに対して完全に感受性であり、実際に、ｗｔマウスに匹敵する臨床スコア及び疾患進行を有することを見い出した（図１ｂ及び表１を参照されたい）。
【０３４５】
ＩＬ−１８Ｒαが欠損したマウスは、ＩＦＮγ産生が低下するという点で、ＩＬ−１８−／−マウスに類似する表現型を有するとして記載された。興味深いことには、ｗｔマウス及びＩＬ−１８−／−マウスの両方と著しい対照をなして、ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスは、ＥＡＥ誘発に対して完全に抵抗性であった（図１ｂ及び表１を参照されたい）。
【０３４６】
ＥＡＥ誘発後に得られたｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスからの脊髄の組織学的分析は、ＣＮＳ中への白血球浸潤が、疾患の臨床的な重症度と十分に相互に関連することを実証した。
【０３４７】
そうするために、マウスを、ＣＯ２を用いて安楽死させ、その後、ＰＢＳを用いて灌流し、続いてＰＢＳ中４％パラホルムアルデヒド（ＰＦＡ）を用いて灌流した。脊柱を摘出し、ＰＢＳ中４％ＰＦＡ中で固定した。次いで、炎症細胞の浸潤を評価するためのヘマトキシリン＆エオシン又はＣＤ３抗体、Ｂ２２０抗体、及びＭＡＣ−３抗体（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ社）又は脱髄の程度を決定するためのルクソールファストブルーを用いて染色する前に、脊髄を解剖し、パラフィン包埋した。
【０３４８】
ＥＡＥ感受性のｗｔマウス及びＩＬ−１８−／−マウスは、Ｔ細胞（図２ｃ）、マクロファージ（図２ｅ）、及びＢ細胞（図２ｄ）等の炎症細胞の浸潤（図２ａ）及び脱髄（図２ｂ）によって特徴づけられる著しい炎症を有したが、ＥＡＥ抵抗性のＩＬ−１８Ｒα−／−マウスの脊髄中に炎症性浸潤物又は脱髄は存在しなかった（図２ａ〜ｅ）。
【０３４９】
ＩＬ−１８−／−マウスがＩＬ−１８を分泌することができないことを確認するために、我々は、ターゲティング戦略及びマウスの遺伝子型について広範囲に確認し、ＩＬ−１８−／−マウスがＩＬ−１８ｍＲＮＡ又はＩＬ−１８タンパク質を含有しないことを明確に立証することができた。我々はまた、我々が、ｗｔマウス及びＩＬ−１８−／−マウスに由来する活性化脾細胞から分泌されたＩＬ−１８を検出することができるかどうかを分析し、ＩＬ−１８−／−マウスが、ｗｔマウスとは対照的に、実際に、完全に、ＩＬ−１８欠損であることを示した（図３を参照されたい）。
【０３５０】
ＩＬ−１８の欠失がＩＦＮγ応答の不足を一貫してもたらすことが多くの実験系で観察されたので（Ｗｅｉ，Ｘ．Ｑ．ら  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６３，２８２１−２８２８（１９９９），Ｋｉｎｊｏ，Ｙ．ら  Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６９，３２３−３２９（２００２））、我々は、１６時間、レクチンコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）を用いて、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、未処置ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスに由来するリンパ球を刺激し、ＩＦＮ−γ産生を、ＥＬＩＳＡによって続いて測定した。
【０３５１】
そうするために、腋窩リンパ節及び鼠径リンパ節（ＬＮ）を未処置マウスから単離した。２×１０５細胞を三通り、９６ウェルプレート中に配置した。５μｇ／ｍｌ  ＣｏｎＡを１６時間の刺激のために使用し、ＩＦＮ−γ産生を、ＥＬＩＳＡ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ社、ラホーヤ、ＣＡ）によって続いて測定した。
【０３５２】
ＩＬ−１８がＩＦＮγ産生に影響を有するという原理と一致して、ＩＬ−１８−／−マウス及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスの両方からのＬＮ細胞は、ｗｔ  ＬＮ細胞とは対照的にＩＦＮγを分泌しなかった（図４ａ）。
【０３５３】
（実施例３）
ＩＬ−１８Ｒαのブロックは、ＩＬ−１８−／−マウスにおけるＥＡＥを予防する
ＥＡＥに関してのＩＬ−１８欠損マウス及びＩＬ−１８Ｒα欠損マウスの性質の不一致は、強力な脳炎誘発性特性を有するさらなるＩＬ−１８Ｒαリガンドを強く示すものである。ＩＬ−１８Ｒα及びＩＬ−１８が、無関係の生物学的機能を有するかどうかを評価するために、我々は、ＥＡＥ感受性のＩＬ−１８−／−マウスにおいてＩＬ−１８Ｒαをブロックした。
【０３５４】
マウス（ｎ＝５マウス／グループ）を、ＣＦＡ（ＤＩＦＣＯ社、デトロイト、ＭＩ）中で乳化した、ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社から得たＭＯＧ３５−５５ペプチド（アミノ酸配列：ＭＥＶＧＷＹＲＳＰＦＳＲＶＶＨＬＹＲＮＧＫ（配列番号１１））の２００μｇを用いて皮下に免疫した。マウスは、免疫時に及び４８時間後に、２００ｎｇ百日咳毒素（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ社）を腹腔内に受けた。モノクローナル抗ＩＬ−１８Ｒα抗体（クローン１１２６２４）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）を、免疫の１日前に（４５０μｇ／マウス）及びその後３日ごと（３００μｇ／マウス）若しくは疾患発症から始めて３日ごと（３００μｇ／マウス）投与した又はしなかった。
【０３５５】
マウスは、以下のように毎日スコア化した：０）検出可能なＥＡＥの徴候なし；０．５）末端の尾部がぐったりしている；１）全尾部がぐったりしている；２）片側の部分的な後肢の麻痺；２．５）両側の部分的な肢の麻痺；３）両側の全後肢の麻痺；３．５）全後肢の麻痺及び片側の前肢の麻痺；４）前肢及び後肢の全麻痺（スコア＞４は安楽死させる）；５）死。
【０３５６】
各時点で、各グループの平均疾患スコアを示す。統計的有意差は、独立スチューデントｔ検定を使用して評価した。
【０３５７】
免疫の１日前及びその後、実験の終了まで３日ごとに与えた抗ＩＬ−１８Ｒα  ｍＡｂを用いたＩＬ−１８−／−マウスの処置は、疾患発生を著しく低下させた（図５ａ）。抗ＩＬ−１８Ｒα  ｍＡｂの投与は、ＩＬ−１８Ｒα発現細胞の欠失につながりもせず、血液、ＬＮ、又は脾臓中の末梢白血球の組成を変えもしなかった（図１１を参照されたい）。
【０３５８】
ＩＬ−１８Ｒαアンタゴニストは、そのリガンドが遺伝子ターゲティングによって完全に除去されたマウスにおいてでさえＥＡＥを予防するという事実及びＩＬ−１８は、報告によれば、ＩＬ−１８Ｒαに対するほんの低い親和性しか有していないという事実を組み合わせて、我々は、他のリガンドが、ＩＬ−１８Ｒαによって媒介される結合、シグナル伝達、及び免疫発生の原因にちがいないと提唱する。
【０３５９】
興味深いことには、免疫後（ｐ．ｉ．１０日目）にアンタゴニストｍＡｂを用いた、ＩＬ−１８−／−マウスの処置もまた、ＥＡＥ進行を抑止し（図５ｂ）、これは、免疫前に投与されたＡｂと同じ程度まで起こり、ＩＬ−１８Ｒα結合は、ＥＡＥのエフェクター期の間の重要なイベントであることを示唆する。
【０３６０】
（実施例４）
Ａｇ駆動性ではなくマイトジェン駆動性の活性化は、Ｔｈ１極性化のためにＩＬ−１８を必要とする
ＥＡＥ感受性に関する、ＩＬ−１８−／−マウス及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウス間の対立的な分裂を考慮すれば、我々は、エフェクター表現型に向けて、未処置Ｔ細胞を正しくプライムし、且つ極性化する両マウスの能力を決定することを望んだ。ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスを、ＫＬＨを用いて皮下で免疫し、７日後、リンパ球を、単離し、続いて、ＫＬＨを用いてｉｎ  ｖｉｔｒｏで再刺激した。
【０３６１】
そうするために、ＣＦＡ中で乳化した１００μｇ／側腹部のキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）（Ｓｉｇｍａ社）を７日前に注射によってプライムしたマウスから腋窩リンパ節及び鼠径リンパ節を単離した。２×１０５細胞を三通り、９６ウェルプレート中に配置した。ＫＬＨリコール細胞を、５０μｇ／ｍｌ  ＫＬＨ、５μｇ／ｍｌ  ＣｏｎＡ、又は培地を用いて４８時間刺激し、０．５μＣｉ／ｍｌ  ３［Ｈ］−チミジンを、増殖応答を観察するために２４時間後に追加した。チミジン取り込みは、Ｆｉｌｔｅｒｍａｔｅ  Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ及びシンチレーション発光カウンターを使用して評価した。サイトカイン分析については、姉妹培養物の培養上清を、４８時間後に採取し、ＥＬＩＳＡ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ社、ラホーヤ、ＣＡ）によってＩＦＮγ産生を及びサイトカインアレイ（Ｒａｙｂｉｏｔｅｃｈ社）によって全体的なサイトカイン／ケモカイン分泌を分析した。
【０３６２】
驚いたことに、我々は、ＩＬ−１８−／−マウス及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスのＩＦＮγ産生能力においていかなる有意差をも観察しなかった、そして、ＩＬ−１８−／−マウス又はＩＬ−１８Ｒα−／−マウスに由来するリンパ球によって産生されたＩＦＮγのレベルは、ｗｔマウスから得られた細胞と同一であった（図４ｂ）。さらに、異なるマウス株間のＡｇ駆動性リンパ球の増殖能は、同一であった（図４ｃ）。ＩＬ−１８は、多クローン性に活性化された直後のＴ細胞の早期ＩＦＮγ応答のための決定的な共同因子である（図４ａ）が、Ａｇ駆動性Ｔｈ１極性化は、ＩＬ−１２に単独で、より依存性であり、したがってＩＬ−１８とは無関係であるという考えを我々のデータは支持する。
【０３６３】
ＴＨ１発生は、ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスにおいて影響されないように思われたが、我々は、次に、ＩＬ−１８Ｒα欠損抗原提示細胞（ＡＰＣ）が未処置Ｔ細胞をプライムする性能を評価することを望んだ。
【０３６４】
そうするために、我々は、成熟ＳＭＡＲＴＡペプチド（ｐ１１）パルスｗｔ、ＩＬ−１８−／−、及びＩＬ−１８Ｒα−／−ＢＭ（骨髄）由来樹状細胞（ＤＣ）をＳＭＡＲＴＡ−ＴｃＲトランスジェニックＣＤ４＋Ｔ細胞と同時培養し、チミジン取り込みによって増殖を測定した（図４ｄ）。
【０３６５】
使用したプロトコールは以下のとおりであった。
ＢＭ由来ＤＣの生成：ＢＭドナーマウスを、ＣＯ２を使用して安楽死させ、大腿骨及び脛骨を摘出した。ＢＭ細胞は、ＰＢＳを用いて骨を洗い流すことにより単離し、１００μｍ細胞濾過器を通して濾過した。細胞（１０ｍｌ中２〜２．５ｘ１０６）を、１０％ＧＭ−ＣＳＦを追加した完全ＲＰＭＩ中で培養した。少なくとも６日後に、ＢＭ由来ＤＣを、１０μｇ／ｍｌリポ多糖（ＬＰＳ）を用いて一晩成熟させたが、未成熟ＢＭ由来ＤＣは、ＧＭ−ＣＳＦ含有培地中に維持した。少なくとも７日目に、ＢＭ由来ＤＣを実験的に使用した。
トランスジェニック（Ｔｇ）Ｔ細胞増殖：トランスジェニックＴ細胞のｉｎ  ｖｉｔｒｏ増殖については、脾臓を、未処置ＴｃＲ  Ｔｇマウスから単離し、ＣＤ４＋Ｔ細胞を、ＢＤ  Ｂｉｏｍａｇ磁気ビーズを使用して精製した。Ｔ細胞単離の純度をＦＡＣＳ分析によって確認した。１×１０５  Ｓｍａｒｔａ  Ｔ細胞を、３００〜３０，０００の未成熟の又は成熟した骨髄由来の樹状細胞と共に９６ウェルプレート中で培養した。同時培養前に、ＢＭ由来ＤＣを、３時間、ＲＰＭＩ中で１μｇ／ｍｌ  ＳＭＡＲＴＡ  ｐ１１ペプチド（ＧＰＤＩＹＫＧＶＹＱＦＫＳＶＥＦＤ（配列番号１２））（ＧｅｎＳｃｒｉｐｔ社）を用いてパルスし、その後洗浄し、２０００ラドで照射した。非パルスＤＣは、単独で培養したＴ細胞と同様にコントロールとして使用した。細胞を４日間培養し、そして３［Ｈ］−チミジンを培養の最後の１８時間追加した。
【０３６６】
未成熟ＤＣがＳＭＡＲＴＡ  Ｔ細胞を活性化するために使用された場合でさえ、Ｔ細胞プライミングにおける有意差は観察されなかった。
【０３６７】
たとえＩＬ−１８Ｒα−／−ＤＣ及びＴ細胞が活性化される能力に欠損がないということを上記のデータが示唆しても、我々は、活性化マーカー発現のレベルで、両細胞型の活性化ステータスを確認することに決めた。我々は、ＦＡＣＳによって、ＬＰＳ成熟ＤＣ及びＫＬＨ再刺激Ｔ細胞上の発現マーカーを調べ、ＩＬ−１８Ｒα−／−ＤＣ上のＣＤ８０、ＣＤ８６、及びＣＤ４０のアップレギュレーションに差異がないこと、さらにＩＬ−１８Ｒα−／−Ｔ細胞によるＣＤ５、ＣＤ６２Ｌ、及びＣＤ４４の発現に、ｗｔ細胞及びＩＬ−１８−／−細胞と比較して差異がないことを示した（図６）。したがって、ＩＬ−１８Ｒα破壊は、Ｔ細胞又はＤＣの活性化に、少なくとも、適切な刺激に必要な表面マーカーのアップレギュレーションのレベルでは、影響を及ぼさない。
【０３６８】
（実施例５）
ＩＬ−１８Ｒα−／−  ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＥＡＥの間、ＣＮＳに侵入する
ＥＡＥは、疾患のピークでの、ＣＮＳ中への炎症細胞の大量の流入によって特徴づけられるが、免疫細胞はまた、臨床症状の発症前にもＣＮＳに侵入する（Ｈｉｃｋｅｙ，Ｗ．Ｆ．Ｂｒａｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ．１，９７−１０５（１９９１），Ｗｅｋｅｒｌｅ，Ｈ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．１３２，４３−５７（１９８７））。たとえば、ＣＮＳ中へのＣＤ４＋Ｔ細胞の動員は、ＥＡＥのエフェクター期の開始に決定的であるが、ＣＮＳ中への多形核白血球の浸潤は、これらのイベントを組織化することにおける役割を有するように思われる（ＭｃＣｏｌｌ，Ｓ．Ｒ．ら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６１，６４２１−６４２６（１９９８））。したがって、ＩＬ−１８Ｒα−／−炎症細胞が、症状発現前の疾患の時点でのＣＮＳに完全に不在であるかどうかを立証するために、我々は、マウスを免疫し、免疫後の５、７、及び９日目に炎症性浸潤物についてＣＮＳを分析した。
【０３６９】
ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスにおける疾患の終点での免疫細胞の欠如とは対照的に（図２ａ〜ｅ）、ＩＬ−１８Ｒα−／−  ＣＤ４＋Ｔ細胞は、フローサイトメトリーによって分析されたように、免疫後の５、７、及び９日目に、ｗｔマウス及びＩＬ−１８−／−マウスと同じ程度までＣＮＳ浸潤が可能であった（図７）。ＣＮＳ中に存在する、匹敵する数の顆粒球、マクロファージ、及びＢ細胞もあった。しかしながら、図２に見られるように、臨床的な疾患の時点での、ＣＮＳ中のＩＬ−１８Ｒα−／−炎症細胞の存在に有意差があり、したがって、それらが、ＥＡＥのエフェクター期中に存続することができないことを実証する。興味深いことには、これらの結果は、ＩＬ−２３ｐ１９−／−マウスで得られたデータを反映し、このマウスは、ＭＯＧ３５−５５誘発性ＥＡＥに対して抵抗性であり、このマウスにおいて、欠損は、免疫後７日目に観察されたように、ＣＮＳ中への炎症細胞の浸潤を予防するものではない（Ｌａｎｇｒｉｓｈ，Ｃ．Ｌ．ら，Ｊ  Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．２０１，２３３−２４０（２００５））。
【０３７０】
（実施例６）
ＩＬ−１８Ｒαの欠如がＩＬ−１７産生を予防する
ＣＮＳ中への随伴性炎症細胞侵入を伴う、ＥＡＥ抵抗性に関するＩＬ−１８Ｒα−／−マウス及びＩＬ−２３−／−マウス間の類似性は、我々のマウスにおける、ＩＬ−１７産生へのＩＬ−１８Ｒαの影響を評価するよう我々を駆り立てた。ＩＬ−１７産生ＴＨ細胞（ＴＨＩＬ−１７）は、自己免疫炎症の間の主な病原性集団であることが現在承認されている。サイトカイン分泌に関する、ＥＡＥ感受性ＩＬ−１８−／−マウス及びＥＡＥ抵抗性ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスの間の差異を定義するために、我々は、同系統のリコールＡｇに出会った際にリンパ球によって分泌された６２種の異なるサイトカインの同時分析を可能にするサイトカインタンパク質アレイ（Ｒａｙｂｉｏｔｅｃｈ社）を使用した。
【０３７１】
ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスをＫＬＨを用いて免疫し、７日後に、リンパ球を単離し、５０μｇ／ｍｌ  ＫＬＨを用いて再刺激した（図８を参照されたい）。
【０３７２】
ＩＬ−１８−／−リンパ球と比較して、ＩＬ−１８Ｒα−／−リンパ球は、ＩＬ−１７の産生が非常に少なかった。この調査結果を確かめるために、我々は、ＲＮＡレベル及びタンパク質レベルの両方でこのサイトカインのレベルを分析した。ＫＬＨを用いた再刺激の際にリンパ球から得られたＲＮＡのリアルタイムＰＣＲは、両方のＩＬ−１７  ｍＲＮＡの発現が、ｗｔ細胞及びＩＬ−１８−／−細胞と比較して、ＩＬ−１８Ｒα−／−細胞中で著しく減少することを示した（図８ａ）。これらの調査結果は、同じＫＬＨ再刺激細胞の上清を使用したＩＬ−１７  ＥＬＩＳＡによって確証を与えられた（図８ｂ）。
【０３７３】
（実施例７）
ＩＬ−１８Ｒα破壊は、アクセサリー細胞免疫区画中の細胞に影響を及ぼす
ＩＬ−１８Ｒαの欠如は、ＴＨＩＬ−１７発生の予防を介してＥＡＥの発生を完全に予防するが、その推定上のリガンドＩＬ−１８は無関係のように思われる。
【０３７４】
ＩＬ−１８Ｒαがその主要な影響を及ぼす細胞型は知られていないままである。これは、主に、ＩＬ−１８Ｒｓが様々な細胞型及び組織によって発現されるという事実によるものである。しかしながら、ＣＤ４＋Ｔ細胞上のＩＬ−１８Ｒαの存在が、ＴＨＩＬ−１７細胞の続く極性化に対して絶対的に決定的であると推定されそうである。ＥＡＥにおける、ＩＬ−１８Ｒα破壊の、細胞及び組織の位置を同定するために、我々は、照射骨髄（ＢＭ）キメラを使用して、白血球区画の細胞上にＩＬ−１８Ｒαを選択的に発現させた。
【０３７５】
照射骨髄（ＢＭ）キメラマウス：
ＢＭドナーマウスを、ＣＯ２を使用して安楽死させ、ＢＭ細胞を、リン酸塩緩衝液（ＰＢＳ）を用いて、大腿骨、脛骨、とう骨、及び寛骨を洗い流すことにより単離した。次いで、ＢＭ細胞を１００μｍ細胞濾過器に通過させ、細胞をＰＢＳを用いて洗浄した。レシピエントマウスを、１１００ラド（分割線量）で致死的に照射し、１２〜２５×１０６ＢＭ細胞をｉ．ｖ．注射する。移植は、８週間の回復の間に起こる。
【０３７６】
照射及び再形成の後で、レシピエントマウスの第２のリンパ組織中のＡＰＣ区画は、ドナーマウスに由来するＢＭ細胞で全体的に構成される（Ｂｅｃｈｅｒ，Ｂ．ら，Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９３，９６７−９７４（２００１））。
【０３７７】
我々は、４：１の比のＲＡＧ−／−ＢＭ及びＩＬ−１８Ｒα−／−ＢＭをｗｔレシピエント中に（ＲＡＧ−／−＋ＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔ）又はＩＬ−１８Ｒα−／−ＢＭのみをｗｔレシピエント中に（ＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔ）移入することによりＢＭキメラを生成した。ｗｔ−ＢＭは、コントロールとしてｗｔレシピエント中に移入した（ｗｔ→ｗｔ）（表２）。
【０３７８】
ＲＡＧ−／−マウスは、リンパ球を有さず、したがって、結果として生じるキメラ（ＲＡＧ−／−＋ＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔ）は、ＩＬ−１８Ｒα欠損リンパ球区画を有するが、大多数の他のすべての白血球は、非破壊ＩＬ−１８Ｒα対立遺伝子を有する。
【０３７９】
予想どおり、ＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔマウスは、ＭＯＧペプチドを用いた免疫の際にＥＡＥに対して抵抗性であった。その代わりに、Ｔ細胞又はＢ細胞を有さず、したがってリンパ球上ではなくアクセサリー細胞上のみにＩＬ−１８Ｒαを発現させる、ＲＡＧ−／−マウスからのＢＭの追加により、ＥＡＥに対するＩＬ−１８Ｒα−／−マウスの抵抗性を弱らせることができた（図９）。したがって、ＩＬ−１８Ｒαは、アクセサリー細胞（単核食細胞及び多核食細胞、ＤＣ＆ＮＫ細胞）区画中でその主要な影響を及ぼすにちがいない。さらに、ＩＬ−１８がＴ細胞及びＮＫ細胞にその影響を及ぼすと考えられていることを考慮すれば、この発見は、非常に予期せぬことであるが、これまでのところ我々の観察と完全に一致している。
【０３８０】
（実施例８）
宿主細胞上のＩＬ−１８Ｒαの欠如は、ＭＯＧ反応性Ｔ細胞の養子移入によって誘発されたＥＡＥ発生を予防する
上記のデータは、アクセサリー細胞上のＩＬ−１８Ｒαの欠如が、ＴＨ細胞のプライミング及び増大に影響を及ぼさないことを示す。さらに、ＲＡＧ−／−＋ＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔ混合ＢＭキメラは（図９）、ＩＬ−１８Ｒαの欠損が、ＥＡＥの発生に不可欠なアクセサリー細胞機能に障害を生じさせることを明確に実証する。我々は、ＥＡＥの間のアクセサリー細胞のＩＬ−１８Ｒシグナル伝達の役割及び機能を明らかにするために養子移入実験を続いて行った。そうするために、我々は、ｗｔレシピエントマウス及びＩＬ−１８Ｒα−／−レシピエントマウスの両方のグループ中にｗｔドナーマウスに由来する脳炎誘発性ＭＯＧ反応性Ｔ細胞を養子移入した。予想どおり、ｗｔマウスに由来する、十分にプライムされ、且つ活性化された脳炎誘発性Ｔ細胞は、ｗｔレシピエントマウスにおいてＥＡＥを誘発したが、それらは、ＩＬ−１８Ｒα欠損宿主において臨床的なＥＡＥを誘発することができなかった（図１０）。この発見は、ＩＬ−１８Ｒαの欠損が、ＥＡＥの発生に必須の、宿主の非リンパ球の白血球に、Ｔ細胞活性と無関係に障害を生じさせるということをさらに強調する。
【０３８１】
（実施例９）
本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒαのクローニング及び発現
ｈＩｇＧ１重鎖の可変領域は、マウスＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインと交換され、ヒトカッパ軽鎖の可変領域は、マウスＩＬ−１８Ｒβ、マウスＩＬ−１ＲａｃＰ、マウスＩＬ−１Ｒｒｐ２、マウスＴ１／ＳＴ２、又はマウスＩＬ−１Ｒ１の細胞外ドメインと交換された組換え抗体の発現を可能にするＤＮＡ構築物を産生した。
【０３８２】
ｈＩｇＧ１定常重鎖に融合されるマウスＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインをコードする配列は、ベクターｐＣＥＰ４（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カタログ番号Ｖ０４４−５０）中でクローニングした。このベクターは、ｈＩｇＧ１定常重鎖に融合したマウスＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインの発現を可能にする。上述のベクターの配列は、配列番号１９に与えられる。ヒトＤＥＣ２０５のシグナルペプチドを使用し、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１５）を、融合タンパク質の２つの部分の間にコードした。
【０３８３】
ヒトカッパ軽鎖の定常領域に融合するマウスＩＬ−１８Ｒβ、マウスＩＬ−１ＲａｃＰ、マウスＩＬ−ＩＲｒｐ２、マウスＴ１／ＳＴ２、又はマウスＩＬ−１Ｒ１の細胞外ドメインをコードする配列は、ベクターｐＣＥＰ４中でクローニングした（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ社、カタログ番号Ｖ０４４−５０）。ヒトカッパ軽鎖の定常領域に融合するマウスＩＬ−１８Ｒβ、マウスＩＬ−１ＲａｃＰ、マウスＩＬ−１Ｒｒｐ２、マウスＴ１／ＳＴ２、又はマウスＩＬ−１Ｒ１の細胞外ドメインの発現を可能にする上述のベクターの配列は、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、及び配列番号２４にそれぞれ与えられる。ヒトＤＥＣ２０５のシグナルペプチドを使用し、（Ｇ４Ｓ）３からなる１５個のアミノ酸リンカー配列（配列番号１５）を、融合タンパク質の２つの部分の間にコードした。
【０３８４】
下記の表に、マウスＩＬ−１８Ｒα、マウスＩＬ−１８Ｒβ、マウスＩＬ−１ＲａｃＰ、マウスＩＬ−ＩＲｒｐ２、マウスＴ１／ＳＴ２、及びマウスＩＬ−１Ｒ１をコードする配列のＧｅｎＢａｎｋ受託番号並びにタンパク質レベルでの細胞外ドメインに対応するアミノ酸（ＡＡ）を示す。
【表１】
2009527535.tif 000004
【０３８５】
ｈＩｇＧ１重鎖の可変領域は、マウスＩＬ−１８Ｒα細胞外ドメインの細胞外ドメインと交換され、ヒトカッパ軽鎖の可変領域は、マウスＩＬ−１８Ｒβの細胞外ドメインと交換された組換え抗体を産生した（たとえばＷａｒｄｅｍａｎｎ  Ｈら（Ｓｃｉｅｎｃｅ，２００３，ｖｏｌ．３０１（５６３８）：ｐ１３７４−７）によりに記載される技術を使用して）。
【０３８６】
この組換え抗体（「キャッチャーαβ」と命名）は、２９３細胞中で発現させ、ａｋｔａ  ｐｒｉｍｅを使用して、プロテインＡカラムで精製した。
【０３８７】
他のキャッチャー分子（本明細書に記載されるＡｃＰ、ＩＬ−１Ｒｒｐ２、Ｔ１／ＳＴ２、又はＩＬ−１Ｒ１と結びつけられたＩＬ−１８Ｒαの可溶性受容体）は、類似する技術を使用して産生することができる。
【０３８８】
組換え抗体（キャッチャーαβ）の活性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、ＩＬ−１８シグナル伝達を有するその干渉活性について試験した（図１２を参照されたい）。この分析では、野生型マウス脾細胞は、示したサイトカイン及び抗体を加えたＲＰＭＩ完全培地中で２４時間培養した。ＩＦＮγ分泌は、ＥＬＩＳＡによって検出した（メーカー指示に従って、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ社）。市販で入手可能なモノクローナル抗ＩＬ−１８Ｒα抗体（クローン１１２６２４）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）を表すＡＢ、アイソタイプのコントロール抗体であるラットＩｇＧ、及びキャッチャーαβ。この実験の結果は、キャッチャーαβの機能性についての非常に明らかな証拠を提供し、キャッチャーαβは、既に非常に低濃度でＩＮＦγの産生を著しく低下させ、これは、キャッチャーαβが、ＩＬ−１８に対する高度な親和性を有することを示唆する。
【０３８９】
（実施例１０）
本発明の可溶性ＩＬ−１８Ｒαの生物活性
本発明の可溶性受容体の生物活性は、実施例３に記載された分析を使用して確認することができる。
【０３９０】
手短かに言えば、ＩＬ−１８−／−マウスを、ＣＦＡ中で乳化したＭＯＧ３５−５５ペプチドを用いて皮下に免疫する。マウスは、免疫時に及び４８時間後に２００ｎｇ百日咳毒素を腹腔内に受ける。試験されることになる可溶性ＩＬ−１８Ｒαを、免疫の１日前及びその後３日ごと又は疾患発症から始めて３日ごとに投与した。
【０３９１】
マウスは、以下のように毎日スコア化する：０）検出可能なＥＡＥの徴候なし；０．５）末端の尾部がぐったりしている；１）全尾部がぐったりしている；２）片側の部分的な後肢の麻痺；２．５）両側の部分的な肢の麻痺；３）両側の全後肢の麻痺；３．５）全後肢の麻痺及び片側の前肢の麻痺；４）前肢及び後肢の全麻痺（スコア＞４は安楽死させる）；５）死。
【０３９２】
各時点で、各グループの平均疾患スコアを示す。統計的有意差は、独立スチューデントｔ検定を使用して評価する。
【表２】
2009527535.tif 000005
【表３】
2009527535.tif 000006
【図面の簡単な説明】
【０３９３】
【図１】ＩＬ−１８Ｒシグナル伝達は、ＩＬ−１８と無関係に、ＥＡＥ誘発に必要である。マウスは、ＣＦＡ中のＭＯＧ３５−５５を用いて能動免疫し、０日目及び２日目に百日咳毒素をｉ．ｐ．注射した。（ａ）ｐ３５−／−×ＩＬ−１８−／−二重ノックアウトマウス及びｗｔマウスにおけるＥＡＥ進行を示す図である。２回の実験のうちの一方の代表的実験を示す（ｎ＝５マウス／グループ）。（ｂ）ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスにおけるＥＡＥ進行を示す図である。３回の実験のうちの１つの代表的実験を示す（ｎ＝５マウス／グループ）。
【図２】ＩＬ−１８Ｒシグナル伝達は、ＩＬ−１８と無関係に、ＥＡＥ誘発に必要である。マウスは、ＣＦＡ中のＭＯＧ３５−５５を用いて能動免疫し、０日目及び２日目に百日咳毒素をｉ．ｐ．注射した。疾患に関する浸潤のスコアを示すｗｔ（スコア２）ＥＡＥマウス、ＩＬ−１８−／−（スコア２）ＥＡＥマウス、ＩＬ−１８Ｒα−／−（スコア０）ＥＡＥマウス、及び未処置マウスからのＰＦＡ固定脊髄の（ａ）Ｈ＆Ｅ染色、（ｂ）ＬＦＢ染色、（ｃ）ＣＤ３染色、（ｄ）ＭＡＣ３染色、及び（ｅ）Ｂ２２０染色を示す図である。
【図３】ＩＬ−１８−／−ＬＮ細胞は、それらの提唱される遺伝子型に一致してＩＬ−１８を産生しない。１μｇ／ｍｌ  ＬＰＳ、１００ユニット／ｍｌ  ＩＦＮγ、５μｇ／ｍｌコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）、及び２．５ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−１２の示す混合物を用いて１６時間刺激した未処置ｗｔ  ＬＮ細胞並びにＩＬ−１８−／−ＬＮ細胞によるＩＬ−１８分泌を評価するＥＬＩＳＡを示す図である。
【図４】ＩＬ−１８及びＩＬ−１８Ｒαは、マイトジェンに刺激されたＴ細胞活性化に必要であるが、Ｔｈ１発生に必要でない。（ａ）５μｇ／ｍｌコンカナバリンＡ（ＣｏｎＡ）を用いて１６時間刺激した未処置ｗｔ  ＬＮ細胞、ＩＬ−１８−／−ＬＮ細胞、及びＩＬ−１８Ｒα−／−ＬＮ細胞によるＩＦＮγ分泌を評価するＥＬＩＳＡを示す図である。（ｂ、ｃ）マウスを２００μｇ  ＫＬＨで免疫し、７日後、ＬＮを単離して再刺激した。（ｂ）４８時間、５０μｇ／ｍｌ  ＫＬＨ又は５μｇ／ｍｌ  ＣｏｎＡを用いて二通り再刺激したＫＬＨ免疫マウスからの上清中のＩＦＮγのＥＬＩＳＡを示す図である。（ｃ）４８時間、５０μｇ／ｍｌ  ＫＬＨ、５μｇ／ｍｌ  ＣｏｎＡ、又は培地を用いて三通り再刺激したＫＬＨ免疫マウスからのＬＮ細胞の増殖アッセイを示す図である。３Ｈ−チミジンを、カウント毎分（ＣＰＭ）で増殖を測定する２４時間前に培養物に追加した。（ｄ）ＢＭ由来ＤＣを、ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ１８Ｒ−／−マウスから生成し、ＬＰＳを用いて成熟させ、続いて１μｇ／ｍｌ  ＳＭＡＲＴＡペプチド、ｐ１１を用いてパルスした。ｐ１１特異的ＣＤ４＋Ｔ細胞を、未処置ＳＭＡＲＴＡ−Ｔｇマウスから得、増殖が、カウント毎分（ＣＰＭ）でチミジン取り込みによって評価された場合に、ペプチドパルスし、且つ照射（２０００ラド）したＤＣと共に７２時間同時培養した。
【図５】代替ＩＬ−１８Ｒα結合リガンドは、ＩＬ−１８−／−マウスにおいてＥＡＥを誘発する。（ａ）ＩＬ−１８−／−は、ＭＯＧ３５−５５を用いる免疫の１日前に、４５０μｇ抗ＩＬ−１８Ｒα抗体（白色の正方形）又はコントロールＩｇＧ（黒色の菱形）を用いて処置し、その後の３日ごとに３００μｇ抗体を用いて処置した。２回の実験のうちの一方の代表的実験を示す（ｎ＝５マウス／グループ）。（ｂ）ＩＬ−１８−／−マウス（ｎ＝６マウス／グループ）は、ＭＯＧ３５−５５を用いて免疫し、疾患の第１の徴候の時点で、３００μｇ抗ＩＬ−１８Ｒα抗体（白色の正方形）又はコントロールＩｇＧ（黒色の菱形）を用いて処置した。
【図６】ＩＬ−１８Ｒ−／−ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ｗｔ  ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＩＬ−１８−／−ＣＤ４＋Ｔ細胞に類似して活性化される。５０μｇ／ｍｌ  ＫＬＨ又は培地を用いて２日間、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで再刺激したＫＬＨ免疫ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒ−／−マウスに由来する脾細胞のＦＡＣＳを示す図である。２日後に、脾臓細胞を、ＣＤ４−ＦＩＴＣ及び（ａ）ＣＤ５−ＡＰＣ、（ｂ）ＣＤ６２Ｌ−ｂｉｏ−ＳＡ−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、又は（ｃ）ＣＤ４４−ＰＥを用いて染色した。
【図７】ＩＬ−１８Ｒα−／−ＣＤ４＋Ｔ細胞は、疾患発症前に、ｗｔ  ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＩＬ−１８−／−ＣＤ４＋Ｔ細胞と同じ程度までＣＮＳを浸潤する。ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスを、ＭＯＧ３５−５５を用いて能動免疫し、免疫７日後に、マウスをＰＢＳを用いて灌流し、ＣＮＳを単離した。勾配により小膠細胞を単離し、この部分における炎症細胞の浸潤をフローサイトメトリーによって評価した。細胞は、ＣＤ４５−ＰｅｒＣＰ及びＣＤ４−ＡＰＣを用いて染色した。ＩＬ−１８Ｒα−／−ＣＤ４＋Ｔ細胞は、ＣＮＳに侵入し、免疫７日後に、ｗｔ  ＣＤ４＋Ｔ細胞及びＩＬ−１８−／−ＣＤ４＋Ｔ細胞と同じように侵入する。
【図８】ＩＬ−１８Ｒα破壊は、ＩＬ−１７の産生及びＴＨＩＬ−１７細胞の発生に影響を及ぼす。ｗｔマウス、ＩＬ−１８−／−マウス、及びＩＬ−１８Ｒα−／−マウスを、ＫＬＨを用いて免疫し、７日後に、脾細胞を単離し、５０μｇ／ｍｌ  ＫＬＨを用いて再刺激した。（ａ）ＫＬＨを用いたｉｎ  ｖｉｔｒｏ再刺激の２日後の、ｗｔリンパ球、ＩＬ−１８−／−リンパ球、及びＩＬ−１８Ｒα−／−リンパ球によるＩＬ−１７  ｍＲＮＡ発現のリアルタイムＰＣＲ比較を示す図である。結果は、β−アクチン発現を基準に合わせ、二通り分析した。（ｂ）二通りｉｎ  ｖｉｔｒｏでＫＬＨを用いて２日間再刺激したリンパ球によるＩＬ−１７タンパク質発現のＥＬＩＳＡを示す図である。データは、１グループ当たり少なくとも２匹のマウスを組み合わせたものである。
【図９】ＩＬ−１８Ｒαの不在はＴ細胞又はＢ細胞に障害を生じさせない。ＢＭキメラマウスは、致死的に照射したｗｔマウス中に１２〜２５ｘ１０６ＢＭ細胞を移入することにより生成した。６週間後に、再形成したＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔ（灰色の三角形）、ＩＬ−１８Ｒα−／−＋ＲＡＧ−／−→ｗｔ（白色の正方形）、及びｗｔ→ｗｔ（黒色の菱形）骨髄キメラマウスは、ＭＯＧ３５−５５ペプチドを用いて能動免疫し、臨床スコアを評価した。ＲＡＧ−／−骨髄に由来する非Ｔ細胞及び非Ｂ細胞上のＩＬ−１８Ｒαの存在は、ＥＡＥに対する、ＩＬ−１８Ｒα−／−→ｗｔマウスの感受性をよみがえらせた。
【図１０】ＩＬ−１８Ｒα−／−マウスは、ＥＡＥの受身移入に対して抵抗性である。ＭＯＧ反応性リンパ球は、ｗｔマウスを能動免疫することにより生成し、１１日後に脾臓及びＬＮ細胞を単離し、それらを、４日間、ｉｎ  ｖｉｔｒｏで、２０μｇ／ｍｌ  ＭＯＧ３５−５５及び２．５ｎｇ／ｍｌ  ＩＬ−１２を用いて再刺激した。ＥＡＥは、ＩＬ−１８Ｒα−／−（灰色の三角形）マウス及びｗｔ（黒色の菱形）マウス中への２０〜３０×１０６ＭＯＧ反応性リンパ球の養子移入によってレシピエントマウスにおいて誘発された。２回の実験のうちの一方の代表的実験を示す（ｎ＝５マウス／グループ）。
【図１１】抗ＩＬ−１８ＲαＡｂ処置は、周辺の免疫細胞の組成を変えない。ＩＬ−１８−／−マウスは、ＭＯＧ３５−５５を用いる免疫の１日前に、３００μｇ抗ＩＬ−１８Ｒα抗体又はコントロールＩｇＧを用いて処置し、７日後に、脾臓を単離し、均質化して、免疫細胞組成をフローサイトメトリーによって評価した。細胞は、ＣＤ８−ＦＩＴＣ、ＣＤ４−ＡＰＣ、ＮＫ１．１−ｂｉｏ−ＳＡ−ＰｅｒＣＰ、及びＢ２２０−ＰＥ又はＣＤ１１ｂ−ＦＩＴＣ、ＣＤ１１ｃ−ＡＰＣ、及びＧＲ１−ｂｉｏ−ＳＡ−ＰｅｒＣＰについて染色した。抗ＩＬ−１８ＲαＡｂ処置ＩＬ−１８−／−マウスにおいて免疫細胞組成に差異はない。２匹のマウス／グループの一方の代表的なＦＡＣＳを示す。
【図１２】ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ＩＬ−１８シグナル伝達を有する組換え抗体（キャッチャーαβ）の干渉活性を示す図である。野生型マウス脾細胞を、示すサイトカイン及び抗体を用いた刺激の後にＩＦＮγ分泌について試験した。市販で入手可能なモノクローナル抗ＩＬ−１８Ｒα抗体（クローン  １１２６２４）（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ社）であるＡＢ、アイソタイプのコントロール抗体であるラットＩｇＧ、及びキャッチャーαβ。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【配列表】
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【手続補正書】
【提出日】平成20年12月18日(2008.12.18)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬ−１８Ｒα又はその変異体の細胞外ドメインのすべて又は一部を含む可溶性受容体。
【請求項２】
前記ＩＬ−１８Ｒαの細胞外ドメインのすべて又は一部は、ヒトＩＬ−１８Ｒα又はその変異体の細胞外ドメインのすべて又は一部である請求項１に記載の可溶性受容体。
【請求項３】
配列番号２のアミノ酸残基１９〜１３２及び／又は配列番号２のアミノ酸残基１２２〜２１９及び／又は配列番号２のアミノ酸残基２１３〜３２９及び／又は前記アミノ酸残基の変異体を含む請求項１又は２に記載の可溶性受容体。
【請求項４】
配列番号２のアミノ酸残基１９〜２１９並びに／又は配列番号２のアミノ酸残基１２２〜３２９並びに／又はペプチド結合によって連結された配列番号２のアミノ酸残基１９〜１３２及び２１３〜３２９並びに／又は前記アミノ酸残基の変異体を含む請求項１から３までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項５】
配列番号２のアミノ酸残基１９〜３２９及び／又は前記アミノ酸残基の変異体を含む請求項１から４までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項６】
前記アミノ酸残基の前記変異体は、前記アミノ酸残基と少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドである請求項３から５までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項７】
配列番号２のアミノ酸残基１９〜１３２並びに／又は配列番号２のアミノ酸残基１２２〜２１９並びに／又は配列番号２のアミノ酸残基２１３〜３２９並びに／又は配列番号２のアミノ酸残基１９〜２１９並びに／又は配列番号２の１２２〜３２９並びに／又はペプチド結合によって連結された配列番号２のアミノ酸残基１９〜１３２及び２１３〜３２９並びに／又は配列番号２のアミノ酸残基１９〜３２９並びに／又は前記アミノ酸残基の変異体からなる少なくとも２つのサブユニットを融合タンパク質として同じタンパク質骨格上に含む請求項３から６までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項８】
前記アミノ酸残基の前記変異体は、前記アミノ酸残基と少なくとも８０％の同一性を有するポリペプチドである請求項７に記載の可溶性受容体。
【請求項９】
少なくとも２つのサブユニットは同じである請求項８に記載の可溶性受容体。
【請求項１０】
さらなるアミノ酸ドメインに作動可能に連結された、請求項１から９までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項１１】
請求項１から１０までのいずれか一項に記載の可溶性受容体の多量体、特に二量体。
【請求項１２】
ＩＬ−１８Ｒβの細胞外ドメインのすべて又は一部を含む少なくとも１つのＩＬ−１８Ｒβサブユニットをさらに含む請求項１から１０までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項１３】
ＩＬ−１ＲａｃＰの細胞外ドメインのすべて又は一部を含む少なくとも１つのＩＬ−１ＲａｃＰサブユニットをさらに含む請求項１から１０までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項１４】
ＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２の細胞外ドメインのすべて又は一部を含む少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−ｒｐ２サブユニットをさらに含む請求項１から１０までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項１５】
Ｔ１／ＳＴ２の細胞外ドメインのすべて又は一部を含む少なくとも１つのＴ１／ＳＴ２サブユニットをさらに含む請求項１から１０までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項１６】
ＩＬ−１Ｒ−１の細胞外ドメインのすべて又は一部を含む少なくとも１つのＩＬ−１Ｒ−１サブユニットをさらに含む請求項１から１０までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項１７】
医薬としての使用のための請求項１から１６までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項１８】
自己免疫疾患又は脱髄疾患の処置のための請求項１から１６までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項１９】
前記脱髄疾患は多発性硬化症である請求項１８に記載の可溶性受容体。
【請求項２０】
患者における自己免疫疾患又は脱髄疾患の症状を処置する、予防する、又は寛解させるための請求項１から１６までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項２１】
前記患者はヒトである請求項２０に記載の可溶性受容体。
【請求項２２】
前記脱髄疾患は多発性硬化症である請求項２０又は２１に記載の可溶性受容体。
【請求項２３】
前記患者は、再発寛解型（ＲＲ）多発性硬化症、二次進行型（ＳＰ）多発性硬化症、一次進行型（ＰＰ）多発性硬化症、又は進行再発型（ＰＲ）多発性硬化症に冒されている請求項１８から２２までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項２４】
前記可溶性受容体は、ＭＳを処置する又は予防するための第２の治療薬と共に投与される請求項１８から２３までのいずれか一項に記載の可溶性受容体。
【請求項２５】
前記可溶性受容体は、コルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンと共に投与される請求項２４に記載の可溶性受容体。
【請求項２６】
前記可溶性受容体は、インターフェロン−ベータと、好ましくはインターフェロンベータ−１ａと、より好ましくはＲｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ社）と共に投与される請求項２５に記載の可溶性受容体。
【請求項２７】
哺乳動物患者、好ましくはヒト患者のＭＳの治療における同時の、別個の、又は順次の使用のための、請求項１から１６までのいずれかに記載の可溶性受容体及び併用調製物としてコルチコステロイド、免疫抑制剤、神経保護薬、免疫調節剤、又はインターフェロンを含む製品。
【請求項２８】
前記インターフェロンは、インターフェロン−ベータ、好ましくはインターフェロンベータ−１ａ、より好ましくはＲｅｂｉｆ（登録商標）（Ｓｅｒｏｎｏ社）である請求項２７に記載の製品。
【国際調査報告】
2009527535.tif 000019
2009527535.tif 000020
2009527535.tif 000021
2009527535.tif 000022