(57)【要約】  植物材料からリグナン抽出物を得る製法が開示される。リグナン抽出物を含む組成物ならびにリグナン抽出物の使用もまた開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
５０パーセント未満のセコイソラリシレシノールジグルコシド量を有する第１のリグナン抽出物と、
５０パーセント超のセコイソラリシレシノールジグルコシド量を有する第２のリグナン抽出物とを含む組成物。
【請求項２】
前記組成物が、５０〜６００ｍｇのセコイソラリシレシノールジグルコシドを含む請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記組成物が、食物、飲料、カプセル、錠剤、及びカプレットからなる群から選択される請求項１又は請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
ステロール、イソフラボン、甘味剤、タンパク質単離物、タンパク質濃縮物、非栄養甘味剤、可溶性繊維、非可溶性繊維、スタチン、ビタミンＥ、プロアントシアニジン、ノコギリヤシ抽出物、ピジウム抽出物、亜麻油、魚油、ビタミンＢ、ビタミンＣ、トコフェロール、フィトステロール、ポリフェノール、カテキン、アントシアニン、アスタキサンチン、グルコサミン、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される化合物をさらに含有する請求項１〜３のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項５】
２０〜４５％のセコイソラリシレシノールジグルコシドを有するリグナン抽出物を含む組成物であって、
１００ｇの組成物当り５０ｍｇ以下の青酸グリコシドを含む組成物。
【請求項６】
前記組成物が、３００〜６００ｍｇのセコイソラリシレシノールジグルコシドを含む請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
請求項１〜６のいずれか一項に記載の組成物を含む容器であって、当該組成物の推奨使用量を使用者に指示する表示を有する容器。
【請求項８】
前記第１のリグナン抽出物が、３０から４０パーセントのセコイソラリシレシノールジグルコシドであり、前記第２のリグナン抽出物が、少なくとも９０パーセントのセコイソラリシレシノールジグルコシドである請求項１に記載の組成物。
【請求項９】
コレステロールレベルの減少、良性前立腺肥厚化の治療、心疾患の治療、高コレステロール血症アテローム硬化症の予防、心疾患の軽減、血中コレステロールの低下、虚血性損傷の軽減、内皮細胞中の酸化窒素発現の増加、マクロファージ中のシクロオキシゲナーゼ活性の抑制、糖尿病に関連する症状の緩和、糖尿病の発症予防又は遅延、血中グルコース濃度の調節、骨密度の増加、骨密度喪失の軽減、関節炎に関連する症状の緩和、前立腺癌の危険性の軽減、転移危険性の軽減、転移の遅延、月経発症に関連する症状の緩和、閉経発症に関連する症状の緩和、血圧の低下、毛髪喪失又は男性型脱毛症を軽減させるための薬剤の製造において請求項１〜６又は８のいずれか一項に記載の組成物の使用。
【請求項１０】
４６〜８９パーセントのセコイソラリシレシノールジグルコシドを含むリグナン抽出物。
【請求項１１】
コレステロールレベルの減少、良性前立腺肥厚化の治療、心疾患の治療、高コレステロール血症アテローム硬化症の予防、心疾患の軽減、血中コレステロールの低下、虚血性損傷の軽減、内皮細胞中の酸化窒素発現の増加、マクロファージ中のシクロオキシゲナーゼ活性の抑制、糖尿病に関連する症状の緩和、糖尿病の発症予防又は遅延、血中グルコース濃度の調節、骨密度の増加、骨密度喪失の軽減、関節炎に関連する症状の緩和、前立腺癌の危険性の軽減、転移危険性の軽減、転移の遅延、月経発症に関連する症状の緩和、閉経発症に関連する症状の緩和、血圧の低下、毛髪喪失又は男性型脱毛症を軽減させるための薬剤の製造において請求項１０に記載のリグナン抽出物の使用。
【請求項１２】
請求項１〜６又は請求項８のいずれか一項に記載の組成物、又は請求項１０に記載のリグナン抽出物を対象に投与することを含む、コレステロールレベルの減少、良性前立腺肥厚化の治療、心疾患の治療、高コレステロール血症アテローム硬化症の予防、心疾患の軽減、血中コレステロールの低下、虚血性損傷の軽減、内皮細胞中の酸化窒素発現の増加、マクロファージ中のシクロオキシゲナーゼ活性の抑制、糖尿病に関連する症状の緩和、糖尿病の発症予防又は遅延、血中グルコース濃度の調節、骨密度の増加、骨密度喪失の軽減、関節炎に関連する症状の緩和、前立腺癌の危険性の軽減、転移危険性の軽減、転移の遅延、月経発症に関連する症状の緩和、閉経発症に関連する症状の緩和、血圧の低下、毛髪喪失又は男性型脱毛症を軽減させる方法。
【請求項１３】
少なくとも１００,０００の分子量を有するリグナン複合体を含む組成物を、対象に投与することを含むコレステロールレベルの減少、良性前立腺肥厚化の治療、心疾患の治療、高コレステロール血症アテローム硬化症の予防、心疾患の軽減、血中コレステロールの低下、虚血性損傷の軽減、内皮細胞中の酸化窒素発現の増加、マクロファージ中のシクロオキシゲナーゼ活性の抑制、糖尿病に関連する症状の緩和、糖尿病の発症予防又は遅延、血中グルコース濃度の調節、骨密度の増加、骨密度喪失の軽減、関節炎に関連する症状の緩和、前立腺癌の危険性の軽減、転移危険性の軽減、転移の遅延、月経発症に関連する症状の緩和、閉経発症に関連する症状の緩和、血圧の低下、毛髪喪失又は男性型脱毛症を軽減させる方法。
【請求項１４】
少なくとも１００,０００の分子量を有するリグナン複合体を対象に投与することを含む良性前立腺肥厚化を治療する方法。
【請求項１５】
少なくとも１００,０００の分子量を有するリグナン複合体を対象に投与することを含むヒトの血中コレステロールを減少させる方法。
【請求項１６】
少なくとも１００,０００の分子量を有するリグナン複合体を対象に投与することを含む血圧を低下させる方法。
【請求項１７】
リグナン複合体を対象に投与することを含む国際前立腺症状スコアを低下させる方法。
【請求項１８】
前記対象がヒトである請求項１２〜１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
前記投与が経口的に実施される請求項１２〜１８のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２０】
リグナンを含有する植物材料を抽出溶媒に接触させることによって抽出液を形成することと、
密度基準分離装置により前記抽出液からリグナン濃縮フラクションを分離することと、
前記リグナン濃縮フラクションを水溶液により洗浄することと、
前記リグナン濃縮フラクションを乾燥させることを含むリグナン抽出物を製造する製法。
【請求項２１】
前記抽出液の一部を、前記リグナン濃縮フラクションからデカントすることをさらに含む請求項２０に記載の製法。
【請求項２２】
前記水溶液が、水性クエン酸緩衝溶液を含む請求項２０又は２１に記載の製法。
【請求項２３】
前記抽出溶媒の一部を前記抽出液から除去することをさらに含む請求項２０〜２２のいずれか一項に記載の製法。
【請求項２４】
前記抽出溶媒の一部を前記抽出液から除去することが、抽出溶媒を蒸発させることと、蒸発した抽出溶媒を再使用することを、さらに含む請求項２３に記載の製法。
【請求項２５】
前記抽出溶媒がアルコールを含む請求項２０〜２４のいずれか一項に記載の製法。
【請求項２６】
前記リグナン濃縮フラクションを粉砕することをさらに含む請求項２０〜２５のいずれか一項に記載の製法。
【請求項２７】
前記リグナン濃縮フラクションを包装することをさらに含む請求項２０〜２６のいずれか一項に記載の製法。
【請求項２８】
前記リグナン濃縮フラクションを、食品、カプセル、錠剤、カプレット、又は飲料に入れることをさらに含む請求項２０〜２７のいずれか一項に記載の製法。
【請求項２９】
前記リグナン濃縮フラクションが、少なくとも３５重量パーセントのセコイソラリシレシノールジグルコシドを含有する請求項２０〜２８のいずれか一項に記載の製法。
【請求項３０】
前記リグナン濃縮フラクションが、当該リグナン濃縮フラクション１００ｇ当り５０ｍｇ以下の青酸グリコシドを含んでいる請求項２０〜２９のいずれか一項に記載の製法。
【請求項３１】
前記密度基準分離装置が、連続分離機(hydroclone)、沈降タンク、遠心分離機及びフィルターからなる群から選択される請求項２０〜３０のいずれか一項に記載の製法。
【請求項３２】
前記リグナン濃縮フラクションの乾燥は、真空ベルト乾燥機、マイクロ波乾燥機、高周波乾燥機、及び凍結乾燥機からなる群から選択される乾燥機中で行う請求項２０〜３１のいずれか一項に記載の製法。
【請求項３３】
前記リグナン含有植物材料をふるい分けすることと、前記リグナン含有植物材料を吸引することと、又はそれらの組み合わせからなる群から選択される作用をさらに含む請求項２０〜３２のいずれか一項に記載の製法。
【請求項３４】
２枚のワイヤメッシュスクリーンが、前記リグナン含有植物材料をふるい分けするために使用される請求項３３に記載の製法。
【請求項３５】
前記２枚のワイヤメッシュスクリーンが、５００ミクロンスクリーン及び２５００ミクロンスクリーンを含む請求項３４に記載の製法。
【請求項３６】
前記リグナン濃縮フラクションと、ステロール、イソフラボン、甘味剤、タンパク質単離物、タンパク質濃縮物、非栄養甘味剤、可溶性繊維、非可溶性繊維、スタチン、ビタミンＥ、プロアントシアニジン、ノコギリヤシ抽出物、ピジウム抽出物、亜麻油、魚油、ビタミンＢ、ビタミンＣ、トコフェロール、フィトステロール、ポリフェノール、カテキン、アントシアニン、アスタキサンチン、グルコサミン、及びそれらの任意の組み合わせからなる群から選択される化合物とを混合することを、さらに含む請求項２０〜３５のいずれか一項に記載の製法。
【請求項３７】
請求項２０〜３６のいずれか一項に記載の製法により製造された製造物。
【請求項３８】
コレステロールレベルの減少、良性前立腺肥厚化の治療、心疾患の治療、高コレステロール血症アテローム硬化症の予防、心疾患の軽減、血中コレステロールの低下、虚血性損傷の軽減、内皮細胞中の酸化窒素発現の増加、マクロファージ中のシクロオキシゲナーゼ活性の抑制、糖尿病に関連する症状の緩和、糖尿病の発症予防又は遅延、血中グルコース濃度の調節、骨密度の増加、骨密度喪失の軽減、関節炎に関連する症状の緩和、前立腺癌の危険性の軽減、転移危険性の軽減、転移の遅延、月経発症に関連する症状の緩和、閉経発症に関連する症状の緩和、血圧の低下、毛髪喪失又は男性型脱毛症を軽減させるための請求項３７に記載の製造物の使用。
【請求項３９】
コレステロールレベルの減少、良性前立腺肥厚化の治療、心疾患の治療、高コレステロール血症アテローム硬化症の予防、心疾患の軽減、血中コレステロールの低下、虚血性損傷の軽減、内皮細胞中の酸化窒素発現の増加、マクロファージ中のシクロオキシゲナーゼ活性の抑制、糖尿病に関連する症状の緩和、糖尿病の発症予防又は遅延、血中グルコース濃度の調節、骨密度の増加、骨密度喪失の軽減、関節炎に関連する症状の緩和、前立腺癌の危険性の軽減、転移危険性の軽減、転移の遅延、月経発症に関連する症状の緩和、閉経発症に関連する症状の緩和、血圧の低下、毛髪喪失又は男性型脱毛症を軽減させるための薬剤の製造のための請求項３８に記載の製造物の使用。
【請求項４０】
クエン酸、エチレンジアミンテトラアセテート、酢酸、フマル酸、乳酸及び任意のこれらの組み合わせからなる群から選択される化合物により亜麻抽出物を洗浄することを含む、亜麻抽出物から青酸グリコシドを除去する方法。
【請求項４１】
前記化合物が、ｐＨ３．０〜６．０の間のｐＨを有する請求項４０に記載の方法。
【請求項４２】
請求項１〜６又は８のいずれか一項に記載の組成物、もしくは請求項３７に記載の製造物における組成物の有効量を対象に投与することを含む、対象の血漿中のエンテロラクトン、エンテロジオール又はそれらの組み合わせを上昇させる方法。
【請求項４３】
請求項１〜６又は８のいずれか一項に記載の組成物、もしくは請求項３７に記載の製造物における組成物を３００ｍｇ／日〜６００ｍｇ／日、対象に投与することにより、対象の血漿中のエンテロラクトン、エンテロジオール又はそれらの組み合わせを上昇させる方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、植物材料からリグナン抽出物を得る製法に関する。本発明はまた、本明細書に記載された製法から得られるリグナン抽出物を含有する組成物ならびにリグナン抽出物を含む組成物を用いる方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
リグナン類は、フェニルプロパノイド経路を経てシキミ酸から産生される二次的植物代謝物である。それらは、フラボノイド前駆体から創出され、病原菌及び捕食者に対して植物に耐性を付与する原因となる。リグナン類は、２，３−ジベンジルブタン構造を有する化合物であると定義され、マタイレシノール、セコイソラリシレシノール、ラリシレシノール、イソラリシレシノール、ノルジヒドログアイアレチン酸、ピノレシノール、オリビル及び他の化合物、ならびにジグルコシド類を含むそれらの修飾物が挙げられる。
【０００３】
亜麻仁（Ｌｉｎｕｍ  ｕｓｉｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ）は、潜在的に植物エストロゲンリグナン類の最も豊富な供給源である。亜麻仁に見られる一次リグナンは、植物中の天然状態で複合体セコイソラリシレシノールジグルコシド(ＳＤＧ)として蓄えられている２，３−ビス（３−メトキシ−４−ヒドロキシベンジル）ブタン−１，４−ジオール（セコイソラリシレシノール）である。亜麻仁は、任意の他の植物食品よりも７５〜８００倍大きな濃度でこれら植物エストロゲンを含有する。カテコール性ノルジヒドログアイアレチン酸（ｃａｔｅｃｈｏｌｉｃ  ｎｏｒｄｉｈｙｄｒｏｇｕａｉａｒｅｔｉｃ）の植物リグナンは、かつて食品産業で使用されていた強力な抗酸化剤である。
【０００４】
植物フェノール性化合物は、遊離モノマー類として、又は他の植物化学物質と組み合わせて生じ、それによってエステル類又はグリコシド類を形成する。フェノール酸は、抗酸化活性を有することが知られている。亜麻仁の主要なフェノール性構成成分は、クマル酸（４−グリコシル−桂皮酸）、カフェー酸（３−ヒドロキシ−４−グルコシル桂皮酸）、フェルラ酸（３−メトキシ−４−グルコシル桂皮酸）及びヒドロキシメチルグルタル酸であることが報告されている。これらの化合物は、抗酸化性及び高コレステロール血症性を有する。
【０００５】
文献中の多数の報告により、亜麻仁リグナン類の植物化学物質の利益が文書化されている。Ｒｉｃｋａｒｄらは、５パーセントの亜麻仁食餌レベルで精製リグナンを摂取させることにより、動物において大腸癌及び乳癌発生を有意に軽減することを報告した（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ５７ｔｈ  Ｆｌａｘ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｕｎｉｔｅｄ  Ｓｔａｔｅｓ，（ファーゴ、ノースダコタ州(Ｆａｒｇｏ，Ｎ．Ｄ．））：８−１３頁（１９９８））。Ｄｅｍａｒｋ−Ｗａｈｎｅｆｒｉｅｄらはまた、亜麻仁の補給が、前立腺癌生物学に対して有益な効果を有し得ることを報告した（Ｄｅｍａｒｋ−Ｗａｈｎｅｆｒｉｅｄら、Ａｄｕｌｔ  Ｕｒｏｌｏｇｙ５８（１）：４７−５２頁（２００１））。
【０００６】
さらに、リグナン類は、潜在的な抗酸化性（Ｍｏｌ．＆  Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２０２：９１−１００頁（１９９９））及び抗癌性（Ａｎｔｉｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １８：１４０５−１４０８頁（１９９８））に対する多数の報告書と共に、Ｉ型及びＩＩ型糖尿病の発症を７１パーセント予防し（Ｐｒａｓａｄ，Ｋ．Ｐｒｏｃ．ｏｆ  ｔｈｅ  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ、（１９９９））、心拍数に影響を及ぼすことなく血圧を下げる能力を有する降圧剤として作用し（米国特許第６，４９８，１４５号明細書）、狼瘡腎炎に対する利益を提供し（米国特許第５，８２７，２５６号明細書）、動物における高コレステロール血症アテローム硬化症の発症を軽減すること（Ａｔｈｅｒｏｓｃｌｅｒｏｓｉｓ  １３２：６９−７６頁（１９９７））が報告されている。
【０００７】
全体が粉砕形態又は脱脂形態の亜麻仁は、動物飼料及びパン、クッキー、ベーグル及びマフィンなどの食品に取り込まれている。それはまた、肉製品の繊維量を補給するために使用されている（国際公開第００／１９８４２号パンフレット）。しかしながら、使用できる量は、亜麻の高含量油及び粘質物が、過剰カロリー摂取及び便通の一因になることから調節される（国際公開第９６／３０４６８号パンフレット）。
【０００８】
食品中の亜麻の使用に関連する別の問題は、亜麻仁に存在する青酸グリコシドに関連する毒性である。青酸グリコシドは、長時間に亘り過剰に消費される場合、甲状腺腫誘発問題、ヒト臓器に対する損傷、シアニド毒性又は甲状腺の可能なチオシアネート作用をもたらす窒素性二次的植物代謝物である。これらのグリコシド類は、動物及びヒト双方の栄養において重要な天然毒物である。それらは、摂取セレンの毒性効果に対して動物を保護する亜麻仁のユニークな性質に関連している（Ｓｍｉｔｈら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．、４５：５０７−５１０頁（１９８０））。亜麻仁に存在する主要な青酸グリコシドは、リヌスタチン、ネオリヌスタチン及びリナマリンであり、リヌスタチンは、総青酸グリコシド含量の５４〜７６パーセントを占める。ヘキサンによる亜麻荒粉の脱脂により、荒粉中の等しい重量に基づく個々の青酸グリコシド全ての高濃度化が起きることが知られている（Ｍａａｚａ  ＆  Ｏｏｍａｈ、Ｆｌａｘｓｅｅｄ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ、Ｃｕｎｎａｎｅ  ＆  Ｔｈｏｍｓｏｎ編、ＡＯＣＳ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃｈａｍｐａｉｇｎ，ＩＩＩ．１９９５年）。したがって、亜麻に存在する他の化合物から青酸グリコシドを分離することは重要である。
【０００９】
リグナン類及び他のフェノール性化合物の調製法は文献に報告されている。１９５６年、Ｂａｋｋｅ及びＫｌｏｓｔｅｒｍａｎは、メタノール−ジオキサンを用いて脱脂亜麻からリグナンを抽出する製法を記載した（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｎｏｒｔｈ  Ｄａｋｏｔａ  Ａｃａｄｅｍｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  １０：１８−２２頁（１９５６））。しかしながら、リグナン類は、桂皮酸グルコシド及び他の化合物と亜麻中の「複合体」として生じることが知られている。それゆえ、リグナン類は、元々亜麻中の「ポリマー」と称されている。ナトリウム及びバリウムメトキシドは、他の化合物から遊離のリグナン類を放出するメタノリシスのために使用される（Ｂｌａｋｅ及びＫｌｏｓｔｅｒｍａｎ；Ｔｈｏｍｐｓｏｎら、Ｎｕｔｒ．Ｃａｎｃｅｒ  ２６：５９−１６５頁（１９９６））。亜麻仁に存在するリグナン類の殆ど全ては、可溶性エステル結合複合体の成分として生じ、遊離グリコシド又はアグリコンとして生じない（Ｍｕｉｒら、Ｐｒｏｃ．ｏｆ  ｔｈｅ  ５８ｔｈ  Ｆｌａｘ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ  ｏｆ  ｔｈｅ  ＵＳ、ファーゴ、ノースダコタ州、１９９９年）。リグナン及び桂皮酸を抽出する種々の方法の詳細なレビューは、Ｍｕｉｒ、上記文献に見ることができる。米国特許第５，７０５，６１８号明細書及びＰＣＴ出願国際公開第９６／３０４６８号パンフレット及び国際公開第００／７８７７１号パンフレットもまた、複合体を含有するリグナンを調製する方法を記載している。しかしながら、これらの製法は、酢酸エチル／水など複雑な溶媒系を含むことなく所望の分離及び純度を達成することが困難なため、工業化のためにスケールアップできず、クロマトグラフィ技法を用いて分離するか、又はサイズ排除クロマトグラフィなど高価な方法を使用することが困難であるという欠点がある。米国特許第６，７６７，５６５号明細書は、膜及び樹脂クロマトグラフィ製法を用いるリグナン類の精製のための製法を記載している。しかしながら、この製法は、エタノール中安定性に乏しい高価な樹脂及び膜を使用する。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
したがって、リグナン類ならびにこれらのリグナン類を含む組成物を単離するためにより効率的な製法の必要性がある。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
一の実施形態において、組成物は、２０〜４５パーセントのセコイソラリシレシノールジグルコシドを有するリグナン抽出物を含む。組成物はまた、組成物の１００グラム当り５０ｍｇ以下の青酸グリコシドを含む。
【００１２】
別の実施形態において、組成物は、５０パーセント未満であるセコイソラリシレシノールジグルコシド量を有する第一のリグナン抽出物及び５０パーセント超であるセコイソラリシレシノールジグルコシド量を有する第二のリグナン抽出物を含む。
【００１３】
さらなる実施形態において、リグナン抽出物を製造する製法は、リグナンを含有する植物材料を抽出溶媒と接触させることによって抽出液を形成することを含む。この製法はまた、密度基準分離装置により前記抽出液からリグナン濃縮フラクションを分離することと、前記リグナン濃縮フラクションを水溶液により洗浄することとを含む。この製法はさらに、前記リグナン濃縮フラクションを乾燥することを含み得る。
【００１４】
コレステロールレベルの減少、良性前立腺肥厚化の治療、心疾患の治療、高コレステロール血症アテローム硬化症の予防、心疾患の軽減、血中コレステロールの低下、虚血性損傷の軽減、内皮細胞中の酸化窒素発現の増加、マクロファージ中のシクロオキシゲナーゼ活性の抑制、糖尿病に関連する症状の緩和、糖尿病の発症予防又は遅延、血中グルコース濃度の調節、骨密度の増加、骨密度喪失の軽減、関節炎に関連する症状の緩和、前立腺癌の危険性の軽減、転移危険性の軽減、転移の遅延、月経発症に関連する症状の緩和、閉経発症に関連する症状の緩和、血圧の低下、毛髪喪失又は男性型脱毛症を軽減させるための組成物又はリグナン抽出物の使用もまた開示されている。これらの病態を処置するための薬剤を製造するために組成物又は抽出物の使用がさらに記載されている。
【００１５】
本発明のさらなる態様は、上記製法から得られたリグナン成分を含有する組成物及び製剤、ならびに組成物及び製剤を用いる方法に関する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１６】
リグナン抽出物を単離又は精製する研究が継続されている。Ａｒｃｈｅｒ  Ｄａｎｉｅｌｓ  Ｍｉｄｌａｎｄ社（デケーター、イリノイ州（Ｄｅｃａｔｕｒ，Ｉｌｌｉｎｏｉｓ））に譲渡された米国特許第６，７６７，５６５号明細書（その内容全体が参照として本明細書に組み込まれている）は、亜麻仁からリグナン抽出物を得るために膜及び樹脂の使用を記載している。本発明は、リグナン抽出物を単離するか、又は精製するために製法の改善に関する。種々の実施形態において、本発明は、リグナン抽出物を得る製法ならびにリグナン抽出物を含む組成物及びそれらの使用を開示する。
【００１７】
一の実施形態において、製法としては、リグナン含有抽出物及び抽出溶媒を含んでなる抽出液を得るためにリグナン含有植物材料と抽出溶媒とを接触させることと、抽出液から植物材料固体を分離させることと、抽出液中の微生物成分含量を減少させることと；抽出液から０〜１００パーセントの抽出溶媒を除去するが、同時に抽出液に水性希釈剤を添加することとを含むことができ；それらからリグナンが得られる。
【００１８】
別の一の実施形態において、リグナンを得る製法としては、リグナン含有抽出物及び抽出溶媒を含む抽出液を得るためにリグナン含有植物材料と抽出溶媒とを接触させることと、抽出液から植物固体源を分離させることと；抽出液中の微生物成分含量を減少させることと；抽出液と吸着樹脂とを接触させることと；吸着リグナン含有抽出物を水性希釈剤で洗浄することと；リグナン含有抽出物を溶出させることと；それによってリグナン含有化合物を得ることと；任意に乾燥前に放出リグナンのｐＨを調整することとを含むことができる。
【００１９】
さらなる実施形態において、製法はまた、リグナン含有抽出物及び抽出溶媒を含む抽出液を得るために、リグナン含有植物材料と抽出溶媒とを接触させることと、抽出液から植物材料固体を分離させることと；抽出液中の微生物成分含量を減少させることと；抽出液から０から１００パーセントの抽出溶媒を除去するが、同時に抽出液に水性希釈剤を添加することと、を含む、植物材料からリグナンを得る方法を含むことができ、それらからリグナンが得られる。
【００２０】
一の実施形態において、亜麻、亜麻仁又は脱脂亜麻などの植物材料は、粉砕、破砕及び／又は細切などの任意の好適な手段により粉末化できる。粉末植物材料は、アルコールなどの好適な抽出溶媒で抽出できる。このアルコールは、水性アルコールであっても水性脂肪族アルコールであってもよい。好適なアルコールは、メタノール、エタノール、イソプロパノール又は任意のそれらの組み合わせから選択できる。別の実施形態において、アセトン水溶液が使用できる。アルコール濃度は、Ｗｅｓｔｃｏｔｔ及びＭｕｉｒの「Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｌｉｇｎａｎｓ  ｆｒｏｍ  Ｆｌａｘ  Ｓｅｅｄ」、Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ  ａｎｄ  Ｐｈｙｔｏ−ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ、ＡＯＣＳ  Ｐｒｅｓｓ、Ｃａｍｐａｉｇｎ，ＩＩＩ．、２０００年により記載されているように、５０〜８０容量パーセントの範囲である必要があり、６０〜７０容量パーセントであってもよい。
【００２１】
使用される原材料が脱脂亜麻荒粉である一定の実施形態において、粉末材料をふるい分けして、吸引して、製法により創製された微粉ならびに抽出器に入れる際にばらばらに落下する微粉から、より大きな粒子を除去することができる。このような微粉は、引き続く抽出ステップにおいて幾つかの問題を生じ得る。スクリーニングは、リグナン抽出物の製造に使用される中間部分と２つの異なるポアサイズスクリーンとの組み合わせを用いて達成できる。ふるい分けは、脱脂亜麻荒粉に存在するきょう雑物、凝集微粉及び油脂の脂肪塊を含有し得る粗材料を除去する。一の実施形態において、脱脂亜麻荒粉をスクリーンするために、６００ミクロンの第一のスクリーンに加えて２５００ミクロンの第二のスクリーンを使用できる。２つのスクリーン間で保持される脱脂亜麻荒粉部分は、リグナン抽出物の製造のために使用できる。微細スクリーンもまた、抽出器を詰まらせ、透過速度を減じる微粒子を除去するために使用できる。中間シフトレバーカットにより、吸引して、「軽量物」フラクションを採取できる。アスピレータの「軽量物」フラクションは、典型的に空気の動きに対してより抵抗性を与えるものであり、したがって気流により運搬される。時には二重の吸引もまた実施される。軽量物フラクションにおいて採取された不規則形状の種皮片は、また気流に対してより少ない抵抗性を与えるより高密度の粒子に比してＳＤＧがより高く、「重量」フラクションとして取り出される。不規則形状の種皮片もまた、密接に充填することにより抽出器のケークを防ぐ。この製法の製造物は、抽出溶媒を排出するために使用されるスクリーンを詰まらせることなく液体−固体抽出器（Ｃｒｏｗｎ  Ｉｒｏｎｗｏｒｋｓ、ミネアポリス、ミネソタ州から入手できるものなど）中で十分に浸出する。吸引条件は、当業者により容易に判定でき、より高密度／空気抵抗のより低い粒子からより低密度／空気抵抗のより高いフラクションの除去を確保する必要がある。
【００２２】
一定の他の実施形態において、リグナン抽出物を得るために使用される植物材料は、カボチャ種子；例えば、限定はしないが、コムギ、オオムギ又はエンバクを含む穀物などの繊維に富む植物；マメ、レンチル又はダイズなどのマメ科植物；及びニンニク、アスパラガス、ブロッコリー又はニンジンなどの野菜からなる群から選択できる。
【００２３】
抽出は、潜在的に有害な微生物化合物の増殖を最少にし、植物材料からリグナン複合体の抽出を容易にするために好適な温度で実施できる。微生物の増殖を最少にするための好適な温度は、４０℃〜７０℃の間又は５０℃〜６０℃の間など、室温から溶媒の沸点の間の範囲である。
【００２４】
抽出溶媒対粉末植物材料の比率は、混合物の攪拌を可能にするのに好適である必要がある。この比率は、粉末植物材料の１グラム当り１：１ｍｌから８：１ｍｌの溶媒であり得る。別の比率は、粉末植物材料の１グラム当り２：１ｍｌから６：１ｍｌの溶媒である。
【００２５】
抽出処理時間は、約４時間〜８時間である。別の実施形態において、抽出は、約５時間〜７時間の間で実施できる。高温が使用される場合、６時間の抽出時間が適用し得る。別の実施形態において、この処理は、通常の当業者により解されるように、流動式又は向流式の連続方式で実施できる。滞留時間は、亜麻荒粉から最も好適な抽出を得るために変えることができる。このような時間は、時間、温度及び粉末植物材料に対する抽出溶媒の比率によって決定できる。抽出時間は、０．１時間から１０時間まで変えることができる。別の実施形態において、０．７５時間の滞留時間は、向流抽出器において適用し得る。
【００２６】
抽出処理は、所望のリグナン成分、及び固体植物材料を含有する抽出溶媒を含んでなるスラリーの形態を生じる。抽出処理が完了後、所望のリグナン複合体を含有する生じたスラリーの液体フラクション（その後、抽出液）は、固体植物材料から分離できる。分離は、液体から固体を除去するために公知の任意の好適な様式で実施できる。好適な技法の例としては、限定はしないが、ろ過、沈殿、沈降、凝固、遠心分離、及びそれらの任意の組み合わせが挙げられる。ろ過が使用される場合、膜、フィルター、又はスクリーンのポア又はメッシュサイズは、除去される材料のサイズに基づいて選択される。選択される膜フィルターのタイプは、抽出処理に使用される溶媒と膜フィルターの適合性に基づいている。
【００２７】
植物材料が亜麻である場合、亜麻が抽出中に膨張し、その結果、抽出終了時に大量の溶媒を吸収することが観察されている。したがって、固形植物材料成分内から水性アルコール抽出物を取り出すために、スラリーは、こし取るか、及び／又はプレスできる湿潤荒粉ケークを形成する。このように一の実施形態において、湿潤荒粉ケークは、抽出液を得るためにスクリュープレスなどでプレスされ得る。これは、亜麻湿潤荒粉ケークから得られるリグナン複合体の収量を実質的に増加させる。
【００２８】
抽出液の収量をさらに増加させるために、例えば、ろ過、沈殿、沈降、凝固、及び／又は遠心分離が分離技法として使用される抽出液から植物材料固体の分離を行った後にもスクリュープレスを使用できる。
【００２９】
生じた抽出液は、溶液中に存在する微生物成分レベルを減少させるために、及び／又は最初の分離から除去されなかったあらゆる残留固体を除去するために、膜フィルターを通すことによりさらに浄化できる。この浄化のための膜フィルターの１つのタイプは、ナイロンフィルターであろう；しかし任意の好適なタイプのフィルターを使用してもよい。一の実施形態において、微生物含量の減少パーセントは、約９０パーセント〜１００パーセント、９０パーセント、９５パーセントであるが、一方、９８〜１００パーセントが可能であり、９９．９パーセントもまた可能である。  
【００３０】
ナイロン膜フィルターは、０．１〜１０μｍ又は０．２〜１０μｍのポアサイズを有し得る。同様のポアサイズ定格を有する膜カートリッジフィルターも使用できる。生じた浄化抽出液は、限定はしないが、下記の実施形態のうちの１つに従ってさらに処理され得る。
【００３１】
アルコール性抽出溶媒は、蒸発によるなど、浄化抽出液から除去（すなわち、揮散）できる。蒸発による抽出液の濃縮は、急速に集合して沈降する濃厚な粘性層の形成を生じることにより観察されている。
【００３２】
抽出溶媒の蒸発作用を避け、所望の抽出物の有利な処理を可能にするために、抽出溶媒の蒸発／揮散中に抽出液を希釈する水性希釈剤を添加できる。一の実施形態において、水性希釈剤は水であり得る。したがって、所望ならば、抽出液に存在する抽出溶媒の大部分を除去できる。この方法で、抽出物の所望の希釈は、蒸発／揮散中に水の添加により維持できる。
【００３３】
一の実施形態において、生じた水性抽出液（すなわち、水性上澄液層）は、粉末を得るために乾燥できる。乾燥は、限定はしないが、蒸発、真空乾燥、凍結乾燥、スプレー乾燥又は任意のそれらの組み合わせなど、任意の好適な方法により実施できる。
【００３４】
別の実施形態において吸湿性の低い製造物を得るために、希釈及び／又は蒸発により浄化抽出液中のアルコール含量の減少を行った後、生じた抽出液は、それに存在する糖類（例えば、青酸グリコシド）を除去するために、限外ろ過に供することができる。限外ろ過は、青酸グリコシド及び他の望ましくない化合物を除去するために、少なくとも２つのフィルター容量の水性希釈剤を用いて実施できる。一の実施形態において、水性希釈剤は水であり得る。
【００３５】
好適な限外ろ過膜フィルターとしては、ポリスルホン、ポリアクリロニトリル、セルロースアセテートなどの有機ポリマー類又はコポリマー類、もしくはジルコニア、アルミナ又はセラミック材料などの無機材料が挙げられる。所望のリグナン製造物の分子量分布に基づいて、５，０００未満の分子量カットオフ（ＭＷＣＯ）を有する膜フィルターを使用できるか、又は別の実施形態において、１，０００ＭＷＣＯ膜フィルターを使用できる。
【００３６】
高濃度アルコール液中、ポリマー膜の安定性が乏しいため（Ｓｈｕｋｌａ，Ｒ，Ｐｈ．Ｄ．論文、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｉｌｌｉｎｏｉｓ  ａｔ  Ｕｒｂａｎａ−Ｃｈａｍｐａｉｇｎ、２０００年）、水による希釈又は蒸発によるなどのアルコールの揮散よりアルコール濃度を低下させることも可能であり得る。このように、生じたアルコール含量減少抽出液は、膜フィルターの性能に対して負の作用を有さない。
【００３７】
生じた限外ろ過濃縮水は、実質的に青酸発生性糖類が無く、比較的精製された形態で所望のリグナン抽出物を含有する。限外ろ過濃縮水は、直接乾燥できるか、又は１つ以上の以下の技法：真空乾燥機、マイクロ波乾燥機、高周波乾燥機、及び／又は凍結乾燥機による蒸発によりさらに濃縮した後乾燥できる。真空乾燥は、例えば、５〜２０ミリバールの絶対圧力、２５〜４０分の滞留時間及び９５〜１１５°Ｆの蒸発温度で達成できる。これらの条件下の乾燥は、真空ベルト乾燥機により達成できる。
【００３８】
真空ベルト又はバンド乾燥機は、加熱プレート上で乾燥させるために製造物を運搬するための一体型コンベヤベルトを有するハウジングを含む。自動ベルト制御により、正確なベルト操作を確保する。このような乾燥機は、Ｍｅｒｋ  Ｐｒｏｃｅｓｓ（ラウフェンベルグ、独国）から入手できる。これらのベルトは、互いに平行に走行し、振動適用ノズルを有する計量ポンプは、各々個々に制御されたベルトに割り当てられている。減圧沸点下のシフトは、低蒸発温度、すなわち温和な製造物温度を提供する。
ポンプ輸送可能な製造物は、通常、製造物中蒸気発泡の形成をもたらし得る乾燥処理中の高粘性でしばしば粘着性相、ならびに乾燥処理終了時に対してベルト上に残される乾燥ケークにより操作される。製造物が乾燥処理中に供される温度は、製造物の品質に対して重要な影響を有する。これらのベルトは、多くの加熱ゾーン上及び終了時の冷却ゾーン上を走行する。蒸気、加圧水又は熱油は加熱用に使用でき、各ゾーンは、個別に制御でき、加熱表面温度を乾燥される製造物の特定の要件に適合させることができる。このような乾燥機の利用は、製造物の品質喪失を減少させ、望ましくない着色形成を減少させ、ならびに易流動性の高安定性製造物を提供する。
【００３９】
別の実施形態において、抽出液は、抽出溶媒を留去する代わりに水性希釈剤で希釈でき、希釈抽出液を、糖類及び他の不純物を除去するために限外ろ過に供することができる。
【００４０】
別の実施形態において、本発明は、リグナン含有抽出物及び抽出溶媒を含む抽出液を得るためにリグナン含有植物材料と抽出溶媒とを接触させることと、抽出液から植物固体源を分離させることと、抽出液中の微生物成分含量を減少させることと、抽出液と吸着樹脂とを接触させることと、吸着リグナン含有抽出物を水性希釈剤で洗浄することと、リグナン含有抽出物を溶出させることと、それによってリグナン含有化合物を得ることと、任意に乾燥前に分離リグナンのｐＨを調整することと、を含むリグナン抽出物を得る製法を開示する。
【００４１】
別の実施形態において、精製抽出液を、バッチ中の吸着樹脂又は連続カラムクロマトグラフィタイプの製法で処理できる。青酸発生性糖類及び他の不純物を除去するために、抽出物を吸着樹脂を利用して水性希釈剤で洗浄する。水性希釈剤は水であり得る。
【００４２】
樹脂上の吸着リグナン複合体は、傾斜又は単一パーセンテージの製法で水性アルコール（２５〜８５℃で２０〜１００容量パーセント）で溶出できる。アルコールは、限定はしないが、メタノール、エタノール、イソプロパノール又は任意のそれらの組み合わせから選択できる。生じた材料は、例えば、蒸発、真空乾燥、凍結乾燥、スプレー乾燥又はそれらの組み合わせにより乾燥して、重量−重量基準で凡そ２０〜４５パーセントのリグナンの製造物を製造できる。クロマトグラフィ分離の製造物のｐＨを調整することにより、リグナン複合体を分解することなく、むしろ製造物の乾燥を促進することが知られている。ｐＨは、任意の好適な酸又はアルカリ試薬で調整できる。一の実施形態において、ｐＨ調整作用としては、製造物を乾燥する前に約３．０〜約９．０の間に分離リグナン複合体のｐＨを調整することを挙げることができる。別の実施形態において、ｐＨは、約７．５〜約８．０の間に調整できる。
【００４３】
使用できる好適な樹脂は、限定はしないが、ポリメタクリレート、エチルビニルベンゼン（ｅｔｈｙｌｖｉｎｙｌｂｅｎｚｅｎe）−ジビニルベンゼン、スチレン−ジビニルベンゼン、ポリスチレン又はフェノールホルムアルデヒドポリマー類から選択され、イオン性であっても非イオン性であってもよい。
【００４４】
別の実施形態において、抽出液は、吸着樹脂との処理に先立って水性希釈剤で希釈できる。水性希釈剤は水であり得る。
【００４５】
別の実施形態において、抽出液のｐＨは、約３．０〜約９．０の間の値に調整することが望ましいと言える。一の実施形態において、ｐＨは、約７．５〜約８．０の間である。したがって、任意の好適な酸又はアルカリ試薬によるｐＨ調整により、リグナン複合体を分解することなく、むしろ引き続くリグナン製造物の乾燥を促進することが分かっている。
【００４６】
別の実施形態において、リグナン抽出物は、図２のフローチャートに記載されるように製造される。脱脂亜麻仁荒粉は、ヘキサン抽出を用いて粉砕亜麻仁（Ｌｉｎｕｍ  ｕｉｓｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ）から油を除去することにより得られた。脱溶媒脱脂亜麻仁荒粉は、粒度／粒子形状を最適にするために任意に機械的に（すなわち、物理的に）分類することができる。このような分類は、本明細書に記載された分離及び吸引の組み合わせにより達成できる。脱溶媒、及び任意に分類された脱脂亜麻仁荒粉は、４５〜７５℃で６０〜９５容量パーセントで水性エタノールと混合できる。エタノール／亜麻仁荒粉混合物は、不溶性物を除去するためにろ過すると、エタノール可溶性抽出物を得ることができる。
【００４７】
エタノール可溶性抽出物は、実質的に全てのエタノールを留去するために減圧蒸発することにより濃縮できる。この蒸発を実施する温度に依存して、エタノールの留去を可能にするために真空度を調整できる。リグナン複合体を含有する蒸発させた可溶性抽出物を、可溶性及び懸濁可溶性不純物から分離できる。一の実施形態において、可溶性及び懸濁可溶性不純物（すなわち、非リグナン物質）からのリグナン複合体の分離は、密度基準分離装置又は遠心分離装置（例えば、ヒドロクローン（ｈｙｄｒｏｃｌｏｎｅ）又は連続遠心分離機）により実施されて、リグナン複合体に富んだ粘性液体を凝集及び／又は沈降させることができ、これを、遠心分離装置による分離により上澄液からデカントできる。このような製法は、沈降凝集とも称することができる。
【００４８】
別の実施形態において、可溶性及び懸濁可溶性不純物からのリグナン複合体の分離は、リグナン複合体の沈殿、沈降又は凝集により実施できる。沈殿又は沈降タンクの使用は、機械的パーツが含まれないので、遠心分離又はヒドロクローンタイプのシステムと比較して、よりコスト効率が良い。さらに、沈殿、沈降又は凝集の簡便性は、製造物を製造するために、より低コスト基準を提供する。沈殿、沈降又は凝集は、蒸発可溶性抽出物をポンプによりタンクに輸送し、リグナン複合体をタンクの底に沈降、凝集又は沈殿させることによって実施できる。他の実施形態において、リグナン複合体の沈殿、沈降又は凝集は、ｐＨを調整することによって促進させることができる。さらに別の実施形態において、可溶性及び懸濁可溶性不純物からリグナン複合体の分離は、フィルターを用いて実施することができる。当業界に公知の任意のこのようなフィルターとしては、限定はしないが、ポリマー又は無機フィルターなどを使用できる。このようなフィルターのポアサイズは、０．０１ミクロンから１００ミクロンの範囲であり得る。
【００４９】
リグナン複合体を含有する製法中間体は、この製法中間体を水性クエン酸緩衝液と接触させることによって洗浄できる。この製法中間体を洗浄する作用は、濃縮リグナン複合体（すなわち、製法中間体）から青酸グリコシドを除去する。クエン酸緩衝液は、約ｐＨ５の０．１パーセントのクエン酸緩衝液を含むことができるか、又は約１０パーセントのクエン酸緩衝液まであり得る。青酸グリコシドの除去を最大にし、可溶性リグナンの損失を最小にするために、ｐＨは、３．０から６．０までなど酸性範囲内で変わり得る。他の実施形態において、リグナン複合体の洗浄作用はまた、中性ｐＨ条件下の水、あるいは限定はしないが、エチレンジアミンテトラアセテート（すなわち、ＥＤＴＡ）などのキレート剤により実施できる。
【００５０】
洗浄された濃縮リグナン複合体は、前加熱の有り無しの任意に減圧下で乾燥できる。
乾燥濃縮リグナン複合体は、特定のサイズに機械的に（すなわち、Ｆｉｔｚｍｉｌｌ、ハンマーミル又は他の同様のデバイス）粉砕でき、運送のために複数裏打ちされた複数ドラムに包装するか、食品に入れるか、又はカプセルもしくは錠剤に入れることができる。一の実施形態において、濃縮リグナン複合体は、少なくとも９０パーセントの濃縮リグナンが４２５μｍ（マイクロメーター）又はそれ以下になるように粉砕できる。蒸発エタノールは、エタノール蒸発からの濃縮蒸気を組み合わせることにより、所望ならば、エタノール液の検査を調整することにより精留せずにリサイクル又は再使用できる。
【００５１】
さらなる実施形態において、食品添加物、飲料添加物、錠剤、カプセル、多成分栄養サプリメント又はそれらの任意の組み合わせなど、対象に対する経口投与のためにリグナン抽出物は構成される。例えば、リグナン抽出物を、ヒト摂取用に亜麻仁油サプリメント、魚油サプリメント、オメガ−３脂肪酸サプリメント又は他の食物サプリメントに添加できる。リグナン抽出物は、食品添加物として直接使用できるか、又は食品添加物、食品組成物、飲料添加物又は飲料組成物として使用するために摂取可能な担体と共に混合できる。食品の非限定例としては、限定はしないが、栄養バー、穀物、スナック、チップ、クラッカー、クッキー、ベークド品、乳製品、食品バー、ヌガー又は任意の他の食品が挙げられる。リグナン抽出物はまた、ヒト摂取用、家畜又は動物飼料用の食品組成物など、摂取可能な食品中に又はその食品と併せて混合できる。
【００５２】
コレステロールレベルの減少、良性前立腺肥厚化の治療、心疾患の治療、高コレステロール血症アテローム硬化症の予防、心疾患の軽減、血清中コレステロールの低下、虚血性損傷の軽減、内皮細胞中の酸化窒素発現の増加、マクロファージ中のシクロオキシゲナーゼ活性の抑制、糖尿病に関連する症状の緩和、糖尿病の発症予防又は遅延、血中グルコースレベルの調節、骨密度の増加、骨密度喪失の軽減、関節炎に関連する症状の緩和、前立腺癌の危険性の軽減、転移危険性の軽減、転移の遅延、月経発症に関連する症状の緩和、閉経発症に関連する症状の緩和、血圧の低下、毛髪喪失又は男性型脱毛症の軽減に関連する病態の処置を補助するための規則的な投与のために、リグナン抽出物をカプセル、錠剤、カプレット又は液体形態で調製できることもまた考慮されている。リグナン抽出物に富む飲料は、個体にリグナン類の既知の利益を利用させる目的などに対して調製できる。飲料としては、限定はしないが、アップルジュース、グレープジュース、グランベリージュース、オレンジジュース、エネルギードリンク、スポーツドリンク、食事代替飲料、他のフルーツジュース、任意の他のソフトドリンク、及びミルクなどの乳製品、アルコール性飲料又はそれらの任意の組み合わせが挙げられる。
【００５３】
なおさらなる実施形態において、リグナン抽出物は、ステロール、イソフラボン、甘味剤、タンパク質単離物、タンパク質濃縮物、非栄養甘味剤、可溶性繊維、非可溶性繊維、スタチン、ビタミンＥ、プロアントシアニジン、ノコギリヤシ抽出物、ピジウム抽出物、亜麻油、魚油、ビタミンＢ、ビタミンＣ、トコフェロール、フィトステロール、ポリフェノール、カテキン、アントシアニン、アスタキサンチン、グルコサミン、及びそれらの任意の組み合わせなどの任意の他の化合物又は食品添加物と組み合わせることができる。
【００５４】
なおさらなる実施形態において、本発明の製法の中の１つにより製造されたリグナン抽出物は、色素沈着を改善する試みにおいて化粧、皮膚又は表皮効果に対するなど化粧品に使用できる。化粧品は、本明細書に記載された経口送達又はローション、日焼け止め又は他の局所適用などのために構成できる。
【００５５】
以下の非限定的実施例は、本発明をさらに説明するために提供される。これら実施例の幾つかの変型が、本発明の精神内で可能であり、記載された製法における種々の作用が組み合わせて使用できることを、通常の当業者は認識するであろう。
【実施例】
【００５６】
実施例１
リグナン抽出物を、図２のフローチャートに記載されるように製造する。脱脂亜麻仁荒粉は、ヘキサン抽出を用いて粉砕亜麻仁（Ｌｉｎｕｍ  ｕｉｓｔａｔｉｓｓｉｍｕｍ）から油を除去することにより得られた。脱溶媒脱脂亜麻仁荒粉は、本明細書に記載された粒度／粒子形状を最適にするために任意に機械的に（すなわち、物理的に）分類することができる。脱溶媒、及び任意に分類された脱脂亜麻仁荒粉を、４５〜７５℃で６０〜９５容量パーセントの水性エタノールと混合した。あらゆる不溶性物を除去するためにエタノール／亜麻仁荒粉混合物を任意にろ過すると、エタノール可溶性抽出物を得ることができる。
【００５７】
また、エタノール可溶性抽出物は、減圧蒸発させて実質的に全てのエタノールを除去できる。沈殿又は沈降は、蒸発可溶性抽出物をポンプによりタンクに輸送し、リグナン複合体をタンクの底に凝集、及び／又は沈降又は沈殿させることによって実施できる。任意に、連続分離機又は遠心分離機などの密度基準分離装置もまた、分離を達成するために使用できる。リグナン複合体を含有する製法中間体（図２）は、製法中間体をクエン酸緩衝水溶液と接触させることにより洗浄できる。代わりの実施形態において、酢酸、フマル酸、乳酸、アスコルビン酸などの有機酸を含有する溶液を使用できる。洗浄された濃縮リグナン複合体は、任意に前加熱の有り無しの減圧下、又は任意に凍結乾燥機もしくは減圧ベルト乾燥機を用いて乾燥された。表１は、本実施例において製造されたリグナン抽出物の分析を提供する。
【００５８】
本明細書に記載された製法により得られたリグナン抽出物は、ＳＤＧ又はβ−Ｄ−グルコピラノシド、式Ｃ３２Ｈ４６Ｏ１６及び算出された分子量約６８６．７を有する（２Ｒ，３Ｒ）−２，３−ビス［（４−ヒドロキシ−３−メトキシフェニル）］メチル］−１，４−ブタンジイルビス−（９Ｃｌ）を含んでなる。このリグナン抽出物は粉末形態であり、褐色、「茶」の様な臭気及び味覚を有し、中性ｐＨで水に僅かに溶解し、７０パーセントのエタノールに中等度に溶解し、低吸湿特性を有し得る。
【００５９】
５つのバッチのリグナン抽出物を、本実施例の製法により調製した。５つのバッチのリグナン抽出物は、以下の性質を有した。
【００６０】
【表１】
2009518311.tif 000002
【００６１】
本実施例により製造されたリグナン抽出物はまた、本明細書に記載された方法を用いて青酸グリコシド濃度に関して分析（アッセイ）された。典型的に、ヒトにより摂取された青酸グリコシドは、約５０ｍｇ／成人／日未満であることが推奨される。表１に示されるように、リグナン抽出物は、リグナン抽出物の１００ｇ当り総青酸グリコシドを５０ｍｇ以下含有する。
【００６２】
種々のリグナン濃縮抽出物（すなわち、リグナン抽出物１〜６）を、実施例１の製法により製造し、分析した。種々の分析された製造物は、以下の性質を有することが測定された。
【００６３】
【表２】
2009518311.tif 000003
【００６４】
【表３】
2009518311.tif 000004
【００６５】
【表４】
2009518311.tif 000005
【００６６】
種々のリグナン濃縮抽出物（すなわち、リグナン抽出物７）を、実施例１の製法により製造し、亜麻仁全体、脱脂亜麻荒粉、分類された亜麻荒粉、及び２つの製法中間体を分析した。種々の分析製造物は、表３に示されるように以下の性質を有することが測定された。
【００６７】
【表５】
2009518311.tif 000006
【００６８】
【表６】
2009518311.tif 000007
【００６９】
【表７】
2009518311.tif 000008
【００７０】
分析された全ての化合物は分析に先立って加水分解され、リグナン及びフェノール性化合物はＨＰＬＣにより分析された。加水分解の作用は、０．１Ｍ  ＮａＯＨを含有する水中、５６パーセントメタノール溶液中に製造物を入れることと、６５℃で１時間加熱することと、ならびに希釈酢酸により中和することと、を含んだ。他の測定は、従来の分析法を用いて実施された。
【００７１】
実施例２
リグナン製造物を、上記の方法から得られたら、食物、飲料、機能性製剤又は製薬製剤に取り込むことができる。これらの製剤は、例えば、経口送達製剤など、ヒト又は動物に対する任意の投与経路用に調製できる。一の実施形態において、得られたリグナン抽出物を含んでなる製剤は、任意の上記方法から得られた１５〜２５重量パーセントのリグナン抽出物；６０〜８４重量パーセントの充填成分；及び１〜２５重量パーセントの食事サプリメント栄養剤を含むことができる。
【００７２】
他の実施形態において、食物又は他の組成物に入れられたリグナン抽出物は、リグナン抽出物の使用に依って約７から約９０重量パーセントのＳＤＧを含むことができる。
【００７３】
実施例３
リグナン抽出物は、対象への投与のためにカプセル又は錠剤に入れられる。カプセル又は錠剤は、リグナン抽出物の推奨投与量を使用者に指示する表示又は取扱い説明書を伴うボトルなどの容器に入れることができる。種々の実施形態において、推奨投与量は、１日当り約３０〜３００ｍｇのＳＤＧである１日当り約８６〜８６０ｍｇのリグナン抽出物であり得るか、又は別の実施形態において、１日当り約３０〜６００ｍｇのＳＤＧである１日当り約８６〜１７２０ｍｇのリグナン抽出物であり得る。このような量のリグナン抽出物を賦形剤、充填剤又は他の成分と組み合わせる場合、食事サプリメントの推奨投与量は、約２５０ｍｇ〜約１．５グラムであり得る。表示又は取扱い説明書はまた、食事サプリメント、又はリグナン抽出物が、リグナン抽出物の１００ｇ当り５０ｍｇ以下の総青酸グリコシドなど、少量の青酸グリコシドを含有することを使用者に示すために食事サプリメントを含有する容器に関連付けさせ得る。
【００７４】
本明細書に記載された種々の実施形態は、一定濃度のＳＤＧを含有することが示されているが、リグナン抽出物中のＳＤＧの濃度が変わり得ることは、通常の当業者にとって明白であろう。例えば、リグナン抽出物の起源となる植物材料の分析されたリグナン又はＳＤＧ含量は、限定はしないが、種々の植物材料、植物材料の所在地、植物材料の収穫年、リグナン抽出物を抽出するために使用された抽出方法、又はＳＤＧ含量を測定するために使用された加水分解法及び分析法など、多くの因子により変わり、影響を及ぼし得る。例えば、亜麻製造物中のＳＤＧ含量は、２９〜１０５５ｍｇ／種子１００ｇの間又は２００〜１３００ｍｇ／亜麻仁食物１００ｇの間を含有することが報告されている。さらにＳＤＧ含量は、異なる種類の亜麻中０．９６〜３．１５μｍｏｌｅｓ／ｇの範囲であることが報告されている。このように、本明細書に記載された種々の実施形態を用いて、約７〜８９パーセントのＳＤＧの任意の所望の濃度を有するリグナン抽出物又は組成物を得ることができ、本明細書に開示された方法を用いて食物、栄養補強性組成物、又は製薬組成物に取り込むことができる。
【００７５】
実施例４
別の実施形態において、遠心分離を用いて実施例１の製法により製造された抽出リグナンの効果は、臨床試験で詳細に検査された。この臨床試験では、無作為、プラセボ制御二重ブラインド様式を用いて高コレステロール血症対象（２０人の女性、３５人の男性、２８〜７９才）における血漿中脂質を８週間アッセイした。リグナン抽出物は、１日当り各対象に投与されるＳＤＧの以下の用量：０ｍｇのＳＤＧ（プラセボ）、３００ｍｇのＳＤＧ及び６００ｍｇのＳＤＧで食事サプリメント錠剤に製剤化された。総コレステロール（ＴＣ）及び低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬＣ）は、図３〜６に示されるように、プラセボと比較すると、３００ｍｇ及び６００ｍｇＳＤＧの処置により有意に減少した。高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬＣ）もまた、図７〜８に示されるように減少した。トリグリセリド（ＴＧ）濃度もまた、図９〜１０に示されるように減少した。対象におけるリグナン代謝物の血漿中濃度は、図１１に示される。
【００７６】
この臨床試験によりまた、クレアチニン、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及びガンマグルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）の濃度は、処置群間で同様であることが見られ、これらパラメータの全ては正常な範囲内にあることが示された。このデータは表４に示され、リグナン抽出物は、腎機能又は肝機能に対して注目すべき効果を有さなかったことを示している。
【００７７】
【表８】
2009518311.tif 000009
【００７８】
本実施例において、対象におけるエンテロリグナン類（すなわち、エンテロジオール及びエンテロラクトン）の血漿中濃度もまた分析（アッセイ）された。エンテロジオールの血漿中濃度は、表５に示されるように、補充期間の間、対象群の全ての対象において８．０ｎｇ／ｍｌの平均値であり、６００ｍｇのＳＤＧを受けた全ての対象において２２９．８ｎｇ／ｍｌ（２８倍の相違）であった。エンテロリグナン類の血漿中濃度について、遠心分離を用いて実施例１の製法により製造されたリグナン抽出物の投与により、ヒト対象におけるエンテロリグナン類及びエンテロジオール類の血中濃度を上昇させることが示唆される。
【００７９】
【表９】
2009518311.tif 000010
【００８０】
実施例５
さらなる実施形態において、遠心分離を用いて実施例１の製法により製造されたリグナン抽出物の効果は、臨床試験で試験された。良性前立腺肥厚化（ＢＰＨ）病態に患っている６０人の男性におけるＢＰＨ及び前立腺特異的抗原（ＰＳＡ）に対するリグナン抽出物の効果を判定するために、試験が実施された。無作為、プラセボ制御二重ブラインド様式を用いた。リグナン抽出物量は、１６週間毎日の用量で、０ｍｇリグナン抽出物（プラセボ）、リグナン抽出物中３００ｍｇのＳＤＧ又はリグナン抽出物中６００ｍｇのＳＤＧを提供するために食事サプリメントで製剤化された。クレアチニン、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及び血中ガンマグルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）の濃度は、０ヵ月目、２ヵ月目及び４ヵ月目に測定された。表６に示された結果に基づくと、本試験におけるリグナン抽出物の投与は、腎機能又は肝機能に影響を及ぼさなかった。
【００８１】
【表１０】
2009518311.tif 000011
【００８２】
一定のＢＰＨ症状に対する亜麻リグナンの顕著な軽減効果が見られた。クレアチニン、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及び血中ガンマグルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）の濃度は、０週目、８週目及び１６週目に測定され、処置群間及び処置群内で差異は見られなかった。本試験の結果はまた、リグナン抽出物が、表７に示されたようにバイオマーカーの正常なレベルに基づいて腎機能又は肝機能に対して悪影響を及ぼさないことを示した。
【００８３】
【表１１】
2009518311.tif 000012
【００８４】
【表１２】
2009518311.tif 000013
【００８５】
ライフの質（ＱＯＬ）、国際前立腺症状スコア（ＩＰＳＳ）、及び排尿ブロッキンググレードに対する要約結果は、表８〜９に示される。プラセボに比較して、６００ｍｇのＳＤＧ処置群は、ＱＯＬスコアに対して総合的に有意な改善効果を得た（ｐ＝０．０１１５）。３００ｍｇのＳＤＧ処置群に関して、ＱＯＬスコアは改善されたが、統計的な有意には達しなかった（ｐ＝０．１３７７）。ＱＯＬスコアのベースラインからの変化パーセントは、ＱＯＬスコア自体として同様の統計的結果を有した（プラセボと比較して、６００ｍｇ及び３００ｍｇのＳＤＧ処置に対して、それぞれｐ＝０．００８５及び＝０．１２４８）。対象内の有意な処置効果は、全ての群に見られた。しかしながら、ＳＤＧ処置群は、プラセボ群よりもＱＯＬスコアの低下に対して強い効果及び小さなｐ値を有した。
【００８６】
ＩＰＳＳのデータは、排尿の罹患経験に関連した７つの問題に基づいて採取された。  各問題は、ＢＰＨ患者によって経験された排尿症状を示した。各症状は、０から５までのスコアを付けられた。スコアがより高く表れると、症状はより重症であった。このように最悪のＩＰＳＳは３５であり得る。本試験において、ＩＰＳＳは、全ての群で有意に低下した。プラセボと比較して、処置群間で総合的に有意な効果に達しなかった。しかしながら、処置４ヵ月後、３００ｍｇ及び６００ｍｇのＳＤＧ処置群のＩＰＳＳは、プラセボ群よりも有意に低下した（それぞれｐ＝０．００２及び０．０１８）。ベースラインからの変化パーセントの統計的な結果は、ＩＰＳＳ変化と同様であった。ＩＰＳＳ低下効果パーセントは、３ヵ月目及び４ヵ月目のデータに関して３００ｍｇ及び６００ｍｇのＳＤＧ処置群の双方において幾らか有意であり（それぞれｐ＝０．０５６及び０．０８１）；低下効果は、４ヶ月目単独のデータに関して、２つの処置群において有意であった（それぞれｐ＝０．０４１４及び０．０４１２）。注目された有意性は主に、プラセボ群のＩＰＳＳ低下効果は、時間単位の期間後に減少したが、一方、ＳＤＧ処置群の低下効果は本試験を通して維持されたためであった。
【００８７】
群内の効果は、プラセボ及び治療群に現れた。ベースラインと比較して、ＩＰＳＳは、２ヵ月目、３ヵ月目、又は４ヵ月目に有意に低下した。ベースラインからＩＰＳＳの変化パーセントのデータを表８に示す。群内のＩＰＳＳ低下に対する極めて有意な効果は、プラセボ群ではなく、両処置群において得られた（表８）。
【００８８】
排尿ブロッキンググレードは、ＢＰＨ患者における排尿困難を特定するために使用される。排尿ブロッキンググレードは、ＩＰＳＳと同一の設定による排尿症状群のスコアを含む。ブロッキンググレードはまた、ＩＰＳＳの一部に役立つ。表９は、ブロッキンググレードに対する有意な治療効果が、４ヵ月目まで、プラセボと比較して、３００ｍｇ及び６００ｍｇのＳＤＧ処置群に関して得られたこと（それぞれｐ＝０．０１９及び０．０１２）を示している。有意性の到達は、主としてブロッキンググレード低下に対するプラセボ効果がベースラインに戻る一方、処置群の効果が残存するためであった。ブロッキンググレード低下に対する群内効果で、３００ｍｇ及び６００ｍｇのＳＤＧ群のデータは、２ヵ月目、３ヵ月目、又は４ヵ月目におけるベースラインと比較して全て有意に低下した（ｐ＞０．００５）。プラセボ群に関して、２ヵ月目及び３ヵ月目におけるデータのみが、有意なレベルに達した（ｐ＜０．０５）。ブロッキンググレード低下に対する有意な処置効果は、４ヵ月目のみに見られた（プラセボと比較して、３００ｍｇ及び６００ｍｇのＳＤＧ群に関してそれぞれｐ＝０．０２４及び０．０１３）。群内処置効果は、３００ｍｇ及び６００ｍｇのＳＤＧ処置群の双方において強力に示した（月ごとのデータに関してｐ＜０．００５）。プラセボ群に関して、３ヵ月目におけるデータのみが、有意な値に達した（ｐ＜０．０５）。
【００８９】
【表１３】
2009518311.tif 000014
【００９０】
【表１４】
2009518311.tif 000015
【００９１】
実施例６
別の実施形態において、遠心分離を用いて実施例１の製法により製造されたリグナン抽出物の効果は、臨床試験で試験された。臨床試験は、２５人の男性及び１１人の女性における血中コレステロールの作用に対してフィトステロール単独の効果、又はリグナン抽出物と組み合わせた効果を試験するために８週間実施された。無作為、プラセボ制御二重ブラインド様式が、以下の処置群：プラセボ対照、１．３ｇのステロール、及び１．３ｇのステロール＋３００ｍｇのリグナン抽出物に対して被検者を割り当てるために使用された。クレアチニン、血中尿素窒素（ＢＵＮ）、アラニンアミノトランスフェラーゼ（ＡＬＴ）及び血中ガンマグルタミルトランスフェラーゼ（ＧＧＴ）の濃度は、０週目、２週目、４週目、６週目及び８週目に測定された。本実施形態において、処置群間及び処置群内のこれらバイオマーカーの濃度に差異はなく、表１０Ａに示されるように、亜麻リグナンは腎機能又は肝機能に悪影響を及ぼさないことを示した。表１０Ｂ〜１０Ｄに示されるように、このデータでは、リグナン抽出物と組み合わせたフィトステロール類は、総コレステロールを１３．５パーセント、ＬＤＬ−Ｃを１８．９パーセント低下させることを示している。
【００９２】
【表１５】
2009518311.tif 000016
【００９３】
【表１６】
2009518311.tif 000017
【００９４】
【表１７】
2009518311.tif 000018
【００９５】
【表１８】
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【００９６】
実施例７
さらなる実施形態において、リグナン抽出物中の一定量のＳＤＧを維持するために、本発明の方法により得られたリグナン抽出物などのリグナン抽出物の第一の量、すなわち約２０〜４５パーセントのＳＤＧは、実質的に純粋なリグナン抽出物、すなわち少なくとも９０パーセントのＳＤＧを有するリグナン抽出物などの第二のリグナン抽出物と混合される。９０パーセントＳＤＧを有するリグナン抽出物は、参照としてその内容全体が組み込まれている、Ｗｅｓｔｃｏｔｔらに対する米国特許第５，７０５，６１８号明細書に開示されている。
【００９７】
表１１は、約３５パーセントのＳＤＧを有する第一のリグナン抽出物と約９０パーセントのＳＤＧを有する第二のリグナン抽出物とを混合することにより製造される種々の濃度のＳＤＧ（３７．７５パーセント〜８８．８パーセントのＳＤＧ）を含んでなる組成物を開示している。
【００９８】
【表１９】
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【００９９】
実施例８
遠心分離を用いて実施例１の製法により製造されたリグナン製造物の分子量は、ゲル透過（サイズ排除）クロマトグラフィにより決定された。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ（トランス、カリフォルニア州（Ｔｏｒｒａｎｃｅ，ＣＡ））：ポリ（エチレングリコール）パート番号ＡＬ０−２７７４及びポリ（エチレンオキシド）パート番号ＡＬ０−２７７５から入手された標準的キットを用いた。Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  ＰｏｌｙＳｅｐ−ＧＦＣ−Ｐ４０００、３００×７．８ｍｍのゲル透過クロマトグラフィカラムを用いた。５０パーセントアセトニトリル／５０パーセント水の溶媒混液は、流速０．３５０ｍＬ／分での溶出のために使用された。標品は、蒸発光散乱検出により測定された。サンプルは、２８０ナノメートルでのＵＶ−可視検出により測定された。ＳＥＣ（サイズ排除クロマトグラフィ）パッケージと共にＳｈｉｍａｄｚｕ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  ＩｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓからのＣｌａｓｓ−ＶＰソフトウェアバージョン７．２．１ＳＰ１は、サンプルの分子量パラメータを算出するために使用された。これらのクロマトグラムは、図１Ａ〜１Ｄに示される。
【０１００】
実施例９
本発明の実施形態により製造された５つのリグナン抽出物を、それらの構成物に関して分析し、この結果を表１２に提供する。ロットＡ〜Ｃは、凝集／沈殿による実施例１の実施形態を用いて製造し、ロットＤ〜Ｅは、遠心分離を用いる実施例１の実施形態を用いて製造する。
【０１０１】
【表２０】
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【０１０２】
【表２１】
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【０１０３】
【表２２】
2009518311.tif 000023
【０１０４】
本明細書に述べられた全ての刊行物は、参照としてその全体が本明細書に組み込まれている。
【０１０５】
前述の本発明は、明瞭性及び理解目的のために幾つか詳細に記載されているが、形態及び詳細の種々の変更が、本発明及び添付の請求項の範囲から逸脱することなく成し得ることは、本開示の読み取りから当業者によって認識されるであろう。例えば、一定の植物種、抽出物、組成物、製法及びそれらの使用が記載されているが、例示的な実施形態のいずれかの種々の化学的置換又は修飾が、本発明の精神及び範囲から逸脱することなく成し得ることは、通常の当業者によって認識されるであろう。さらに、本発明の製法における任意の成分、化合物、組成物、又は作用は、組み合わせて成し得る。
【図面の簡単な説明】
【０１０６】
【図１Ａ】本発明の製法を用いて製造されるリグナン抽出物の分子量分布を示す図である。
【図１Ｂ】本発明の製法を用いて製造されるリグナン抽出物の分子量分布を示す図である。
【図１Ｃ】本発明の製法を用いて製造されるリグナン抽出物の分子量分布を示す図である。
【図１Ｄ】本発明の製法を用いて製造されるリグナン抽出物の分子量分布を示す図である。
【図２】本発明のリグナンを抽出する製法の一の実施形態における作用を示すフローチャートである。
【図３】本発明のリグナン抽出物の一の実施形態における総コレステロール（ＴＣ）の低下能力を示すグラフである。
【図４】本発明のリグナン抽出物の一の実施形態における総コレステロール（ＴＣ）の低下能力を示すグラフである。
【図５】本発明のリグナン抽出物の一の実施形態における低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬＣ）の低下能力を示すグラフである。
【図６】本発明のリグナン抽出物の一の実施形態における低密度リポタンパク質コレステロール（ＬＤＬＣ）の低下能力を示すグラフである。
【図７】本発明のリグナン抽出物の一の実施形態における高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬＣ）の上昇能力を示すグラフである。
【図８】本発明のリグナン抽出物の一の実施形態における高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬＣ）の上昇能力を示すグラフである。
【図９】本発明のリグナン抽出物の一の実施形態におけるトリグリセリド（ＴＧ）の低下能力を示すグラフである。
【図１０】本発明のリグナン抽出物の一の実施形態におけるトリグリセリド（ＴＧ）の低下能力を示すグラフである。
【図１１】本発明のリグナン抽出物の一の実施形態により処置された対象におけるリグナン代謝物の血漿レベルを示すチャートである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図６Ａ】
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【図７】
2009518311.tif 000031
【図７Ａ】
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【図８】
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【図８Ａ】
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【図９】
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【図９Ａ】
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【図１０】
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【国際調査報告】
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