(57)【要約】  本発明は、水性の製薬学的に許容され得る担体中に懸濁されたＮＮＲＴＩ化合物ＴＭＣ２７８のマイクロ−もしくはナノ粒子を含んでなる、筋肉内又は皮下注入を介する投与のための製薬学的組成物ならびにＨＩＶ感染の処置及び予防におけるそのような製薬学的組成物の使用に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
筋肉内又は皮下注入による投与のための製薬学的組成物であって：
（ａ）表面に吸着した表面改質剤を有するマイクロ−もしくはナノ粒子の形態におけるＴ
ＭＣ２７８、その塩、立体異性体又は立体異性体混合物；及び
（ｂ）中にＴＭＣ２７８活性成分が懸濁されている製薬学的に許容され得る水性担体
を含んでなるマイクロ−もしくはナノ粒子の懸濁液の形態におけるＴＭＣ２７８、その塩、立体異性体又は立体異性体混合物の治療的に有効な量を含んでなる製薬学的組成物。
【請求項２】
ＴＭＣ２７８が塩形態のＥ−異性体として存在する請求項１に従う組成物。
【請求項３】
表面改質剤がポロキサマー、α−トコフェリルポリエチレングリコールスクシネート、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル及び負に帯電したリン脂質の塩の群から選ばれる請求項１又は２に従う組成物。
【請求項４】
表面改質剤がＰｌｕｒｏｎｉｃＴＭ  Ｆ１０８、ビタミンＥ  ＴＧＰＳ、ＴｗｅｅｎＴＭ  ８０及びＬｉｐｏｉｄＴＭ  ＥＰＧから選ばれる請求項１又は２に従う組成物。
【請求項５】
ＴＭＣ２７８マイクロ−もしくはナノ粒子の平均有効粒度が約５０μｍより小さい、特に約２００ｎｍより小さい請求項１〜４のいずれかに従う組成物。
【請求項６】
ＴＭＣ２７８マイクロ−もしくはナノ粒子の平均有効粒度が約１３０ｎｍである請求項１〜４のいずれかに従う組成物。
【請求項７】
組成物の合計体積に基づく重量により：
（ａ）３％〜５０％（ｗ／ｖ）又は１０％〜４０％（ｗ／ｖ）又は１０％〜３０％（ｗ／
ｖ）のＴＭＣ２７８；
（ｂ）０．５％〜１０％又は０．５％〜２％（ｗ／ｖ）の湿潤剤；
（ｃ）０％〜１０％又は０％〜５％又は０％〜２％又は０％〜１％の１種もしくはそれよ
り多い緩衝剤；
（ｄ）０％〜１０％又は０％〜６％（ｗ／ｖ）の等張化剤、
（ｅ）０％〜２％（ｗ／ｖ）の防腐剤；及び
（ｆ）１００％とするのに十分な注入用水
を含んでなる請求項１又は２に従う組成物。
【請求項８】
ＨＩＶ感染の処置用又はＨＩＶに感染する危険にある患者におけるＨＩＶ感染の予防用の薬剤の製造のための請求項１〜７のいずれかに定義される製薬学的組成物の使用。
【請求項９】
薬剤がＨＩＶ感染の長期処置用又はＨＩＶに感染する危険にある患者におけるＨＩＶ感染の長期予防用である請求項８の使用。
【請求項１０】
薬剤が筋肉内又は皮下注入による投与用であり；ここで組成物を１週間〜２年の時間間隔で断続的に投与する請求項８に従う使用。
【請求項１１】
製薬学的組成物を少なくとも１ヶ月〜１年の間隔で投与する請求項８に従う使用。
【請求項１２】
製薬学的組成物を１週間〜１ヶ月の範囲内又は１ヶ月〜３ヶ月の範囲内又は３ヶ月〜６ヶ月の範囲内又は６ヶ月〜１２ヶ月の範囲内又は１２ヶ月〜２４ヶ月の範囲内である時間間隔で投与する請求項８に従う使用。
【請求項１３】
製薬学的組成物を２週間毎に１回又は１ヶ月毎に１回又は３ヵ月毎に１回投与する請求項８に従う使用。
【請求項１４】
（ａ）超微粉砕された形態でＴＭＣ２７８を得；
（ｂ）超微粉砕されたＴＭＣ２７８を液体媒体に加えて予備混合物／予備分散系を形成せ
しめ；そして
（ｃ）予備混合物を磨砕媒体の存在下で機械的手段に供して、平均有効粒度を減じる
ことを含んでなる請求項１〜７のいずれかで定義された製薬学的組成物の調製方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、水性の製薬学的に許容され得る担体中に懸濁されたＮＮＲＴＩ化合物ＴＭＣ２７８のマイクロ−もしくはナノ粒子を含んでなる、筋肉内又は皮下注入を介する投与のための製薬学的組成物ならびにＨＩＶ感染の処置及び予防におけるそのような製薬学的組成物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）の原因として知られるヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）感染の処置は、大きな医学的挑戦であり続けている。ＨＩＶは免疫学的圧力を逃れることができ、多様な細胞型及び成長条件に適応することができ、且つ現在利用できる薬剤治療に対する耐性を発現することができる。現在利用できる薬剤治療にはヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＲＴＩｓ）、非−ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＮＲＴＩｓ）、ヌクレオチド逆転写酵素阻害剤（ＮｔＲＴＩｓ）、ＨＩＶ−プロテアーゼ阻害剤（ＰＩｓ）及びもっと最近の融合阻害剤が含まれる。
【０００３】
これらの薬剤のそれぞれはＨＩＶの抑制に有効であるが、単独で用いられると耐性突然変異体の発現に直面する。これは、通常は異なる活性側面を有するいくつかの抗−ＨＩＶ薬の組み合わせ治療の導入に導いた。特に「ＨＡＡＲＴ」（高度に活性な抗−レトロウイルス治療）の導入は、抗−ＨＩＶ治療における顕著な向上を生じ、ＨＩＶ−関連罹病率及び死亡率の劇的な低下に導いた。抗レトロウイルス治療のための現在の指針は、初期処置のためにさえ、そのような三重組み合わせ治療管理を薦めた。しかしながら、現在利用できる薬剤治療のいずれも、完全にＨＩＶを根絶することはできない。ＨＡＡＲＴでさえ、しばしば抗レトロウイルス治療への非−指示順守及び非−持続（ｎｏｎ−ａｄｈｅｒｅｎｃｅ  ａｎｄ  ｎｏｎ−ｐｅｒｓｉｓｔｅｎｃｅ  ｗｉｔｈ  ａｎｔｉｒｅｔｒｏｖｉｒａｌ  ｔｈｅｒａｐｙ）のために、耐性の発現に直面し得る。これらの場合、その成分の１つを他の種類の１つで置き換えることにより、ＨＡＡＲＴを再度有効とすることができる。ＨＡＡＲＴ組み合わせを用いる処置は、正しく適用されれば、ウイルスがもうＡＩＤＳの発病を引き起こし得ないレベルまで、最高で何十年の多年に及んでウイルスを抑制することができる。
【０００４】
ＨＡＡＲＴにおいて頻繁に用いられるＨＩＶ薬の１つの種類はＮＮＲＴＩｓの種類であり、その複数が現在市販されており、いくつかの他のものが開発の種々の段階にある。現在開発中のＮＮＲＴＩは、ＴＭＣ２７８とも呼ばれる化合物４−［［４−［［４−（２−シアノエテニル）−２，６−ジメチルフェニル］−アミノ］−２−ピリミジニル］−アミノ］−ベンゾニトリルである。この化合物は野生型ＨＩＶに対するのみでなく、突然変異したその変異体の多くに対しても顕著な活性を示す。化合物ＴＭＣ２７８、その薬理学的活性ならびにその製造のための複数の方法は、特許文献１に記載されている。錠剤、カプセル、滴剤、座薬、経口用溶液及び注入可能な溶液を含む種々の通常の製薬学的投薬形態物がその中に例示されている。
【０００５】
現在用いられている抗−ＨＩＶ薬は、それらの薬物動態学的性質及び血漿レベルを最低レベルより高く保つ必要性のために、比較的高い投薬量の頻繁な投与を必要とする。投与されるべき投薬形態物の数及び／又は体積は、通常「薬剤負荷量（ｐｉｌｌ  ｂｕｒｄｅｎ）」と呼ばれる。高い薬剤負荷量は、多くの場合に大きな投薬形態物を飲み込まなければならない不便さと一緒になった摂取の頻度ならびに多数又は大きな体積の丸剤を保存し
、且つ運ぶ必要性のような多くの理由のために望ましくない。高い薬剤負荷量は、患者が彼らの投薬量全部を摂取せず、それにより処方される投薬管理に従い損なう危険を増加させる。これは処置の有効性を低下させると共に、ウイルス耐性の発現にも導く。高い薬剤負荷量と関連する問題は、患者が多数の異なる抗−ＨＩＶ薬を摂取しなければならない抗−ＨＩＶ治療において顕著である。
【０００６】
従って、ＨＩＶ阻害治療が比較的小さい寸法の投薬形態物の投与を含み、さらに頻繁な投薬を必要としない点で、薬剤負荷量を減少させるＨＩＶ阻害治療を提供することが望ましい。１週間か又はそれより長いか、あるいは１ヶ月か又はそれより長くさえあるような長い時間間隔における投薬形態物の投与を含む抗−ＨＩＶ治療を提供することは、魅力的である。
【０００７】
ＨＩＶは完全には根絶され得ず、ＨＩＶに感染した人は他者を感染させる継続的な危険を呈している。初期感染の後、ＡＩＤＳの第１の症状の発病までに長期間を要する。人々は感染したまま、ウイルスを他者にさらに移す危険に気付かずに、感染の治療の効果を経験することなく何年も生存し得る。従ってＨＩＶ伝染の予防は重要である。現在予防は、特に感染している危険にある集団におけるコンドームの使用により、性的接触による伝染を避けること、ＨＩＶの存在に関して血液試料を注意深く監視すること、ならびに感染した可能性のある患者の血液との接触を避けることに焦点を当てている。
【０００８】
これらの手段にかかわらず、ＨＩＶ感染者と接触している者が感染する差し迫った危険が常にある。これは特に感染患者又は感染している危険にある患者に医療を与える者、例えば医師、看護士又は歯科医の場合にそうである。危険にある者の別の群は、特に母乳育児に代わるものがあまり明白でない未開発国における、母親が感染したか又は感染する危険にある母乳で育てられている乳児である。
【０００９】
従って、ＨＩＶの伝染に対する予防を与えるさらなる手段が必要である。適用が容易である有効な予防手段が特に必要である。そのような予防手段の提供は、本発明の別の目的である。
【特許文献１】国際公開第０３／１６３０６号パンフレット
【発明の開示】
【００１０】
今回、化合物ＴＭＣ２７８をマイクロ−もしくはナノ粒子に調製できること、ならびにそのような調製物を、ＨＩＶ感染の処置ならびにＨＩＶの伝染に対する予防において用途を見出すことができるデポ剤調製物（ｄｅｐｏｔ  ｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎｓ）として使用できることが見出された。ナノ粒子は先行技術において既知であり、例えば欧州特許出願第０  ４９９  ２９９号明細書（ＥＰ−Ａ−０  ４９９  ２９９）に記載されている。そのような粒子はミクロン以下の範囲内の平均粒度を有し、それらの表面上に吸着した表面改質剤を有する結晶性薬剤物質の粒子から成る。ナノ粒子は、水溶性が劣った活性成分の調製に用いられてきた。
【００１１】
本発明はさらに、１週間かもしくはそれより長い時間間隔におけるこれらのマイクロ−もしくはナノ粒子調製物の断続的投与に関し、それはＨＩＶの成長の抑制に十分であり得る血漿レベルを生ずる。これは投与の回数を減少させることを可能にし、それにより薬剤負荷量及び患者の薬剤コンプライアンスの点で有益である。従って本発明のＴＭＣ２７８のマイクロ−又はナノ粒子調製物は、ＨＩＶ感染の長期処置において有用であり得る。
【００１２】
１週間かもしくはそれより長い時間間隔におけるＴＭＣ２７８のマイクロ−もしくはナノ粒子調製物の断続的投与は、さらにＨＩＶの伝染に対する予防を与えるのに十分であり
得る血漿レベルを生ずる。この場合も、必要な投与の回数は減少し、それはやはり薬剤負荷量及び感染の危険にある人の薬剤コンプライアンスの点で有利である。
【００１３】
発明の概略
本発明は筋肉内又は皮下注入による投与のための製薬学的組成物であって：
（ａ）表面に吸着した表面改質剤を有するマイクロ−もしくはナノ粒子の形態におけるＴＭＣ２７８、その塩、立体異性体又は立体異性体混合物；及び
（ｂ）中にＴＭＣ２７８活性成分が懸濁されている製薬学的に許容され得る水性担体
を含んでなるマイクロ−もしくはナノ粒子の懸濁液の形態におけるＴＭＣ２７８、その塩、立体異性体又は立体異性体混合物の治療的に有効な量を含んでなる製薬学的組成物に関する。
【００１４】
本発明は、さらに、ＨＩＶに感染した患者の処置方法に関し、該方法は上記又は下記に規定される抗−ＨＩＶ有効量の製薬学的組成物を筋肉内又は皮下注入により投与することを含んでなる。あるいはまた、本発明はＨＩＶ感染の処置用の薬剤の製造のための上記又は下記で規定される製薬学的組成物の使用に関する。１つの態様において、組成物はＨＩＶ感染の長期処置用である。
【００１５】
他の側面において、ＨＩＶに感染した患者の長期処置のための方法を提供し、該方法は筋肉内もしくは皮下注入による投与のための上記又は下記で規定される製薬学的組成物の有効量を投与することを含んでなり；ここで組成物は１週間〜１年又は１週間〜２年の範囲内である時間間隔で断続的に投与されるか又は投与されることになる。あるいはまた、本発明はＨＩＶに感染した患者の長期処置のための筋肉内もしくは皮下注入による投与用の薬剤の製造のための上記又は下記で規定される製薬学的組成物の使用に関し、ここで組成物は１週間〜１年又は１週間〜２年の範囲内である時間間隔で断続的に投与されるか又は投与されることになる。
【００１６】
本発明は、さらに、ＨＩＶに感染する危険にある患者におけるＨＩＶ感染の予防方法に関し、該方法は上記で規定されるか又はさらに下記で規定される製薬学的組成物のＨＩＶ感染の予防において有効な量を、該患者に投与することを含んでなる。あるいはまた本発明は、ＨＩＶに感染する危険にある患者におけるＨＩＶ感染の予防用の薬剤の製造のための、上記で規定されるか又はさらに下記で規定される製薬学的組成物の使用に関する。
【００１７】
他の側面において、本発明はＨＩＶに感染する危険にある患者におけるＨＩＶ感染の長期予防のための方法に関し、該方法は上記で規定されるか又はさらに下記で規定される製薬学的組成物の有効量を該患者に投与することを含んでなり、ここで組成物は１週間〜１年又は１週間〜２年の範囲内である時間間隔で断続的に投与されるか又は投与されることになる。
【００１８】
本発明は、さらに、ＨＩＶに感染する危険にある患者におけるＨＩＶ感染の長期予防用の薬剤の製造のための上記で規定されるか又は下記でさらに規定される製薬学的組成物の使用に関し、ここで組成物は１週間〜１年又は１週間〜２年の範囲内である時間間隔で断続的に投与されるか又は投与されることになる。
【００１９】
１つの態様において本発明は、製薬学的組成物が１週間〜１ヶ月の範囲内又は１ヶ月〜３ヶ月の範囲内又は３ヶ月〜６ヶ月の範囲内又は６ヶ月〜１２ヶ月の範囲内又は１２ヶ月〜２４ヶ月の範囲内である時間間隔で投与されるかもしくは投与されることになる、本明細書で規定される使用又は方法に関する。
【００２０】
他の態様において本発明は、製薬学的組成物が２週間毎に１回又は１ヶ月毎に１回又は
３ヵ月毎に１回投与されるかもしくは投与されることになる本明細書で規定される使用又は方法に関する。
【００２１】
さらなる製薬学的組成物、処置又は予防方法ならびにこれらの組成物に基づく薬剤の製造のための使用を下記に記載し、それは本発明の一部であるものとする。
【００２２】
発明の詳細な記述
本発明で用いられる化合物は、化合物ＴＭＣ２７８（Ｒ２７８４７４又はリルピビリン（ｒｉｌｐｉｖｉｒｉｎｅ）とも呼ばれる）あるいは４−［［４−［［４−（２−シアノエテニル）−２，６−ジメチルフェニル］アミノ］−２−ピリミジニル］アミノ］ベンゾニトリルである。
【００２３】
ＴＭＣ２７８を塩基形態で、又は適した製薬学的に許容され得る付加塩の形態、例えば酸付加塩の形態として用いることができる。製薬学的に許容され得る付加塩は、治療的に活性な無−毒性の塩の形態を含むものとする。塩基形態を無機酸、例えばハロゲン化水素酸、例えば塩酸、臭化水素酸など；硫酸；硝酸；リン酸など；あるいは有機酸、例えば酢酸、プロパン酸、ヒドロキシ酢酸、２−ヒドロキシプロパン酸、２−オキソプロパン酸、シュウ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、リンゴ酸、酒石酸、２−ヒドロキシ−１，２，３−プロパントリカルボン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、４−メチルベンゼンスルホン酸、シクロヘキサンスルファミン酸、２−ヒドロキシ安息香酸、４−アミノ−２−ヒドロキシ安息香酸などのような適した酸を用いて処理することにより、酸付加塩の形態を得ることができる。１つの態様において、用いられるＴＭＣ２７８活性成分はＴＭＣ２７８の塩基形態である。
【００２４】
「付加塩」という用語は、化合物ＴＭＣ２７８が形成することができる製薬学的に許容され得る水和物及び溶媒付加形態も含む。そのような形態の例は、例えば水和物、アルコラートなどである。
【００２５】
ＴＭＣ２７８は立体異性体において、さらに特定的にＥ−及びＺ−異性体として存在する。本発明において両方の異性体を用いることができる。本明細書でＴＭＣ２７８に言及する時は、常に、Ｅ−又はＺ−形態ならびに両形態の混合物が含まれるものとする。本発明で用いるのに好ましいＴＭＣ２７８の形態はＥ−異性体、すなわち（Ｅ）−４−［［４−［［４−（２−シアノエテニル）−２，６−ジメチルフェニル］−アミノ］−２−ピリミジニル］−アミノ］−ベンゾニトリルであり、それをＥ−ＴＭＣ２７８と称することがある。ＴＭＣ２７８のＺ−異性体、すなわち（Ｚ）−４−［［４−［［４−（２−シアノエテニル）−２，６−ジメチルフェニル］−アミノ］−２−ピリミジニル］−アミノ］−ベンゾニトリルも用いることができ、それをＺ−ＴＭＣ２７８と称することがある。
【００２６】
本明細書でＴＭＣ２７８のＥ−形態（すなわちＥ−ＴＭＣ２７８）に言及する時は常に、純粋なＥ−異性体又はＥ−形態が優勢に存在するＥ−及びＺ−形態の異性体混合物、すなわち５０％より多く、又は特に８０％より多くのＥ−形態、あるいは９０％よりも多くのＥ−形態を含有する異性体混合物を含むものとする。特に興味深いのは、実質的にＺ−形態を含まないＥ−形態である。これに関して、実質的に含まないは、全くもしくはほとんどＺ−形態を有していないＥ−Ｚ−混合物、例えば９０％、特に９５％又は９８％もしくは９９％もの多くのＥ−形態を含有する異性体混合物を指す。同様に、本明細書でＴＭＣ２７８のＺ−形態（すなわちＺ−ＴＭＣ２７８）に言及する時は常に、純粋なＺ−異性体又はＺ−形態が優勢に存在するＺ−及びＥ−形態の異性体混合物、すなわち５０％より多く、又は特に８０％より多くのＺ−形態、あるいは９０％よりも多くのＺ−形態を含有する異性体混合物を含むものとする。実質的にＥ−形態を含まないＺ−形態を用いることもできる。これに関して、実質的に含まないは、全くもしくはほとんどＥ−形態を有していないＥ−Ｚ−混合物、例えば９０％、特に９５％又は９８％もしくは９９％もの多くのＺ−形態を含有する異性体混合物を指す。１つの態様において、用いられるＴＭＣ２７８活性成分は、ＴＭＣ２７８のＥ−形態、特にＴＭＣ２７８塩基のＥ−形態である。
【００２７】
本発明における使用のために、ＴＭＣ２７８の立体異性体の塩、特にＺ−ＴＭＣ２７８又はＥ−ＴＭＣ２７８の上記で挙げた塩も含まれるものとする。
【００２８】
本明細書で用いられる場合は常に、「ＴＭＣ２７８」という用語は、塩基形態と同様にその製薬学的に許容され得る酸−付加塩を指し、ならびにまたＴＭＣ２７８の立体異性体ならびに該立体異性体の製薬学的に許容され得る酸−付加塩を指す。特に「ＴＭＣ２７８」という用語はＴＭＣのＥ−異性体ならびにその製薬学的に許容され得る酸−付加塩を指す。「ＴＭＣ２７８」という用語は、ＴＭＣ２７８のＥ−異性体の塩基形態も指すことができる。
【００２９】
ＴＭＣ２７８の物理−化学的性質は、ＨＩＶ感染の長期処置のためならびにＨＩＶ感染の長期予防において用いることができ、この目的のために必要な薬剤投与の回数は限られているという点で独特な薬物動態学的性質を有するマイクロ−もしくはナノ粒子懸濁液の製造を可能にすることが見出された。これは、薬剤負荷量ならびに処方される投薬管理への患者のコンプライアンスの点で有益である。
【００３０】
本明細書で用いられる場合、「ＨＩＶ感染の処置」という用語は、ＨＩＶに感染している患者の処置に関する。「ＨＩＶ感染の処置」という用語は、ＨＩＶ感染に関連する疾患、例えばＡＩＤＳ又は血小板減少症、カポジ肉腫ならびに痴呆、進行性構語障害、運動失調及び見当識障害のような症状を生ずる進行性脱髄を特徴とする中枢神経系の感染を含むＨＩＶ感染と関連する他の状態ならびにやはりＨＩＶ感染が関連する他の状態、例えば末梢ニューロパシー、進行性全身性リンパ節症（ＰＧＬ）及びＡＩＤＳ−関連症候群（ＡＲＣ）の処置にも関する。
【００３１】
「ＨＩＶ感染の予防」という用語は、患者がＨＩＶに感染するのを予防するか又は避けることに関する。感染の源はＨＩＶを含有する種々の材料、特にＨＩＶを含有する体液、例えば血液又は精液あるいはＨＩＶに感染している他の患者であり得る。ＨＩＶ感染の予防は、ＨＩＶを含有する材料から又はＨＩＶ感染患者から未感染の人へのウイルスの伝染の予防に関するか、あるいはウイルスが未感染の人から体内に入るのを妨げることに関する。ＨＩＶウイルスの伝染は、性的伝染によるか又は感染患者の血液との接触、例えば感染患者に医療を与える医療スタッフによるようなＨＩＶ転移のいずれの既知の原因によることもできる。ＨＩＶの転移は、例えば血液試料を取り扱う時のＨＩＶ感染血液との接触によるか又は輸血とともにも起こり得る。それは例えばＨＩＶ感染細胞を用いる実験室実験を行なう場合の感染細胞との接触によることもあり得る。
【００３２】
「ＨＩＶ感染の処置」、「抗−ＨＩＶ治療」という用語ならびに類似の用語は、ＨＩＶのウイルス負荷（特定の体積の血清中のウイルスＲＮＡのコピーの数として表される）を減少させる処置を指す。処置が有効であるほど、ウイルス負荷は低い。好ましくは、ウイルス負荷は可能な限り低いレベルまで、例えばｍｌ当たり約２００コピーより低い、特にｍｌ当たり約１００コピーより低い、さらに特定的にｍｌ当たり５０コピーより低い、可能ならウイルスの検出限界より低いレベルまで下げられるべきである。１、２又は３桁ものウイルス負荷の低下（例えば約１０〜約１０２又はそれより大きい、例えば約１０３のオーダー（ｏｒｄｅｒ）における低下）は、処置の有効性の指標である。抗−ＨＩＶ処置の有効性を測定するための他のパラメーターはＣＤ４カウントであり、それは正常の成人においてμｌ当たり５００〜１５００個の細胞の範囲である。低くなったＣＤ４カウントはＨＩＶ感染の指標であり、μｌ当たり約２００個の細胞より低くなるとＡＩＤＳが発症
し得る。例えばμｌ当たり約５０、１００、２００個か又はそれより多くの細胞でのＣＤ４カウントの増加も、抗−ＨＩＶ処置の有効性の指標である。ＣＤ４カウントは特にμｌ当たり約２００個の細胞より高いか又はμｌ当たり約３５０個の細胞より高いレベルまで増加するべきである。ウイルス負荷又はＣＤ４カウントあるいは両方を用いてＨＩＶ感染の程度を診断することができる。
【００３３】
「ＨＩＶの有効な処置」という用語及び類似の用語は、上記の通りウイルス負荷を低下させるか、ＣＤ４カウントを増加させるか、又は両方である処置を指す。「ＨＩＶの有効な予防」という用語及び類似の用語は、ＨＩＶを含有する材料又はＨＩＶ感染患者のようなＨＩＶ感染の源と接触している集団において、新しく感染する患者の相対的数が減少する状況を指す。例えばＨＩＶ感染者及び非−感染者の混合集団において、本発明の製薬学的組成物を用いて処置された非−感染者と未処置の非−感染者を比較する時に、新しく感染した者の相対的数が減少しているかどうかを測定することにより、有効予防を測定することができる。この減少は、与えられる集団における時間を経ての感染及び非−感染者の数の統計的分析により測定することができる。
【００３４】
「治療的に有効な量」、「ＨＩＶ感染の予防において有効な量」という用語及び類似の用語は、有効な血漿レベルを生ずる活性成分ＴＭＣ２７８の量を指す。「有効な血漿レベル」を用いて、ＨＩＶ感染の有効な処置又は有効な予防を与えるＨＩＶ阻害剤ＴＭＣ２７８の血漿レベルを意味する。
【００３５】
「患者」という用語は、特に人間に関する。
【００３６】
「マイクロ−もしくはナノ粒子」という用語は、マイクロメーター又はナノメーター範囲内の粒子を指す。粒子の寸法は、それを超えると皮下もしくは筋肉内注入による投与が損なわれるか又はもはや不可能となる最大寸法より小さくなければならない。該最大寸法は、例えば針の直径により、又は大粒子への体の不利な反応により、あるいは両方により課せられる制限に依存する。１つの態様において、本発明の製薬学的組成物はナノ粒子形態におけるＴＭＣ２７８を含む。
【００３７】
本発明のマイクロ−もしくはナノ粒子の平均有効粒度は約５０μｍより小さいか、又は約２０μｍより小さいか、又は約１０μｍより小さいか、又は約１０００ｎｍより小さいか、又は約５００ｎｍより小さいか、又は約４００ｎｍより小さいか、又は約３００ｎｍより小さいか、又は約２００ｎｍより小さいことができる。平均有効粒度の下限は低いことができ、例えば約１００ｎｍのように低いか又は約５０ｎｍのように低いことができる。１つの態様において、平均有効粒度は約５０ｎｍ〜約５０μｍ、又は約５０ｎｍ〜約２０μｍ、又は約５０ｎｍ〜約１０μｍ、又は約５０ｎｍ〜約１０００ｎｍ、約５０ｎｍ〜約５００ｎｍ又は約５０ｎｍ〜約４００ｎｍ、又は約５０ｎｍ〜約３００ｎｍ、又は約５０ｎｍ〜約２５０ｎｍ、又は約１００ｎｍ〜約２５０ｎｍ、又は約１５０ｎｍ〜約２２０ｎｍ、又は１００〜２００ｎｍ、又は約１５０ｎｍ〜約２００ｎｍの範囲内、例えば約１３０ｎｍ又は約１５０ｎｍである。
【００３８】
本明細書で用いられる場合、平均有効粒度という用語は、当該技術分野における熟練者に既知のその通常の意味を有し、当該技術分野において既知の粒度測定法、例えば沈降フィールドフローフラクショネーション、光子相関分光分析（ｐｈｏｔｏｎ  ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ  ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ）、レーザー回折又はディスク遠心分離（ｄｉｓｋ  ｃｅｎｔｒｉｆｕｇａｔｉｏｎ）により測定され得る。本明細書で言及される平均有効粒度を、粒子の体積分布と関連付けることができる。その場合、「約５０μｍより小さい有効平均粒度」により、粒子の体積の少なくとも５０％が５０μｍの有効平均より小さい粒度を有することを意味し、言及される他の有効粒度に同じことが当てはまる。同様のやり方で、平均有効粒度を粒子の重量分布と関連付けることができるが、通常これは平均有効粒度に関する値と同じか又は大体同じ値を生ずるであろう。
【００３９】
本発明の製薬学的組成物は長時間に及ぶ活性成分ＴＭＣ２７８の放出を与え、従ってそれらを持続もしくは遅延放出組成物とも呼ぶことができる。投与の後、本発明の組成物は体内に留まり且つ一定してＴＭＣ２７８を放出し、長時間患者の系内でこの活性成分のそのようなレベルを保ち、それにより該期間、抗−ＨＩＶ治療又はＨＩＶ感染の予防を与える。本発明の製薬学的組成物が体内に留まり且つ一定してＴＭＣ２７８を放出するということのために、それらをデポ剤調製物として適した製薬学的組成物と呼ぶことができる。
【００４０】
本明細書で用いられる場合、「長時間」という用語を用い、１週間〜１年もしくは２年の範囲内であることができる期間（又は時間）、あるいは１〜２週間又は２〜３週間又は３〜４週間の範囲内の期間、あるいは１〜２ヶ月又は２〜３ヶ月又は３〜４ヶ月又は３〜６ヶ月又は６ヶ月〜１２ヶ月又は１２ヶ月〜２４ヶ月の範囲内の期間、あるいは数日、例えば７、１０又は１２日あるいは数週間、例えば２、３又は４週間、あるいは１ヶ月又は数ヶ月、例えば２、３、４、５又は６ヶ月あるいはもっと長く、例えば７、８、９又は１２ヶ月の範囲内である期間を意味する。
【００４１】
本発明の製薬学的組成物をＨＩＶ感染の長期処置又は長期予防において適用することができるか、あるいは言い換えると、それらを長時間の間、ＨＩＶ感染の処置において、又はＨＩＶ感染の予防において用いることができる。本発明の組成物は長時間、例えば少なくとも約１週間かもしくはそれより長く、又は約１ヶ月かもしくはそれより長く、抗−ＨＩＶ治療において、又はＨＩＶ感染の予防において有効である。「少なくとも約１週間かもしくはそれより長く有効」という表現により、活性成分、ＴＭＣ２７８の血漿レベルが閾値より高くなければならないことを意味する。治療的適用の場合、該閾値は、ＴＭＣ２７８がＨＩＶ感染の有効な処置を与える最低の血漿レベルである。ＨＩＶ感染の予防における適用の場合、該閾値は、ＨＩＶ感染の伝染の予防においてＴＭＣ２７８が有効である最低の血漿レベルである。
【００４２】
例えば「ＨＩＶ感染の長期予防」又は「ＨＩＶ感染の長期処置」あるいは類似の用語と関連して用いられる「長期」を用い、１週間〜１年もしくは２年の範囲内又はそれより長く、例えば５もしくは１０年であることができる期間を意味する。特にＨＩＶ感染の処置の場合、そのような期間は１〜数年のオーダーで（ｉｎ  ｔｈｅ  ｏｒｄｅｒ  ｏｆ）長いであろう。特に予防の場合、そのような期間は比較的短いこともできる。比較的短い期間は数日、例えば７、１０又は１２日あるいは数週間、例えば２、３又は４週間、あるいは１ヶ月又は数ヶ月、例えば２、３、４、５又は６ヶ月あるいはもっと長く、例えば７、８、９又は１２ヶ月の期間である。１つの態様において、本発明に従う方法及び使用は、１ヶ月又は数ヶ月、例えば２、３、４、５もしくは６ヶ月あるいはもっと長く、例えば７、８、９又は１２ヶ月の間のＨＩＶ感染の予防のためである。
【００４３】
本発明の製薬学的組成物を種々の時間間隔で投与することができる。ＨＩＶ感染の予防において用いる場合、本発明の製薬学的組成物を１回又は限られた回数のみ、例えば２、３、４、５もしくは６回又はそれより多数回投与することができる。感染の危険がある期間のような限られた時間の間、予防が必要である場合に、これを薦めることができる。
【００４４】
本発明の製薬学的組成物を上記の時間間隔で、例えば１週間〜１ヶ月の範囲内又は１ヶ月〜３ヶ月の範囲内又は３ヶ月〜６ヶ月の範囲内又は６ヶ月〜１２ヶ月の範囲内である時間間隔で投与することができる。１つの態様において、製薬学的組成物を２週間毎に１回又は１ヶ月毎に１回又は３ヵ月毎に１回投与することができる。他の態様において、時間間隔は１〜２週間又は２〜３週間又は３〜４週間の範囲内であるか、あるいは時間間隔は１〜２ヶ月又は２〜３ヶ月又は３〜４ヶ月又は３〜６ヶ月又は６ヶ月〜１２ヶ月又は１２ヶ月〜２４ヶ月の範囲内である。時間間隔は少なくとも１週間であることができるが、数週間、例えば２、３、４、５又は６週間、あるいは１ヶ月又は数ヶ月、例えば２、３、４、５又は６ヶ月又はそれより長く、例えば７、８、９もしくは１２ヶ月の時間間隔であることもできる。１つの態様において、本発明の製薬学的組成物は１、２又は３ヶ月の時間間隔で投与される。本発明の製薬学的組成物の各投与の間のこれらの比較的長い期間は、薬剤負荷量及びコンプライアンスの点でさらなる向上を与える。さらにコンプライアンスを向上させるために、週に１回のスケジュールで組成物が投与される場合には、週のある決められた曜日に、あるいは１ヶ月に１回のスケジュールの場合には月のある決められた日に彼らの薬剤を摂取するように、患者を指導することができる。
【００４５】
本発明の組成物の各投与の間の時間間隔の長さは、多様であることができる。例えば該時間間隔を血漿レベルの関数として選ぶことができる。ＴＭＣ２７８の血漿レベルが低すぎるとみなされる場合、例えばこれらが下記で規定される最低血漿レベルに近い場合、間隔はより短いことができる。ＴＭＣ２７８の血漿レベルが高すぎるとみなされる場合、間隔はより長いことができる。１つの態様において、本発明の組成物は等しい時間間隔で投与される。組成物を、中間の追加の投与なしで投与することができるか、又は言い換えると、多様なもしくは等しい長さの時間で、例えば少なくとも１週間の時間又は本明細書で規定される他の時間で互いに隔てられた特定の時点に組成物を投与することができ、その間、さらなるＴＭＣ２７８は投与されない。同じ長さの時間間隔を有することは、投与スケジュールが単純である、例えば投与が週の同じ曜日に、又は月の同じ日に行なわれるという利点を有する。従って、そのような投与スケジュールは限られた「薬剤負荷量」を含み、それにより処方される投薬管理への患者のコンプライアンスに有益に寄与する。
【００４６】
ＴＭＣ２７８で処置される患者血漿中のＴＭＣ２７８の濃度（又は「Ｃ」）は、一般に単位体積当たりの質量、典型的にはミリリットル当たりのナノグラム（ｎｇ／ｍｌ）として表される。簡単のために、この濃度を本明細書で「血漿薬剤濃度」又は「血漿濃度」と呼ぶことができる。
【００４７】
投与されるＴＭＣ２７８の投薬量（又は量）は、本発明の製薬学的組成物中のＴＭＣ２７８の量あるいは投与される与えられる組成物の量に依存する。より高い血漿レベルが望まれる場合、より高いＴＭＣ２７８濃度の組成物又は与えられる組成物のより多くのいずれかあるいは両方を投与することができる。より低い血漿レベルが望まれる場合には、これが逆に適用される。多様な時間間隔及び多様な投薬の組み合わせを選んで、ある所望の血漿レベルに達することもできる。
【００４８】
投与されるＴＭＣ２７８の投薬量（又は量）は、投与の頻度（すなわち各投与の間の時間間隔）にも依存する。通常、投与があまり頻繁でない場合、投薬量はより高いであろう。すべてのこれらのパラメーターを用い、血漿レベルを所望の値に向けることができる。
【００４９】
投薬管理は、ＨＩＶ感染の予防が意図されているか又はその処置が意図されているかにも依存する。治療の場合、投与されるＴＭＣ２７８の投薬量又は投薬の頻度あるいは両方は、ＴＭＣ２７８の血漿濃度が最低血漿レベルより高く保たれるように選ばれる。このような関係において、「最低血漿レベル」（又はＣｍｉｎ）という用語は、ＨＩＶの有効な処置を与えるＴＭＣ２７８の血漿レベルを指す。特に、ＴＭＣ２７８の血漿レベルは、約１０ｎｇ／ｍｌの最低血漿レベルより高いか、又は約１５ｎｇ／ｍｌより高いか、又は約２０ｎｇ／ｍｌより高いか、又は約４０ｎｇ／ｍｌより高いレベルに保たれる。ＴＭＣ２７８の血漿レベルを、より高い最低血漿レベルより高く、例えば約５０ｎｇ／ｍｌより高くか、又は約９０ｎｇ／ｍｌより高くか、又は約２７０ｎｇ／ｍｌより高くか、又は約５４０ｎｇ／ｍｌより高く保つことができる。１つの態様において、ＴＭＣ２７８の血漿レベルは約１３．５ｎｇ／ｍｌのレベルより高く保たれるか、あるいは約２０ｎｇ／ｍｌのレベルより高く保たれる。あるいはＴＭＣ２７８の血漿レベルをある範囲内に、特に上記のレベルから選ばれる最低血漿レベルから始まって上記のレベルから選ばれる、ならびに５００ｎｇ／ｍｌ及び１０００ｎｇ／ｍｌから選ばれるもっと高い血漿レベルで終わる範囲内（例えば約１０ｎｇ／ｍｌ〜約１５ｎｇ／ｍｌ、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌ、約１０ｎｇ／ｍｌ〜約４０ｎｇ／ｍｌなど、あるいは約１５ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌ又は約１５ｎｇ／ｍｌ〜約４０ｎｇ／ｍｌ又は約１５ｎｇ／ｍｌ〜約９０ｎｇ／ｍｌなど、あるいは約２０ｎｇ／ｍｌ〜約４０ｎｇ／ｍｌ、約２０ｎｇ／ｍｌ〜約９０ｎｇ／ｍｌ又は約２０ｎｇ／ｍｌ〜約２７０ｎｇ／ｍｌなど、あるいは約４０ｎｇ／ｍｌ〜約９０ｎｇ／ｍｌ、約４０ｎｇ／ｍｌ〜約２７０ｎｇ／ｍｌ又は約４０ｎｇ／ｍｌ〜約５４０ｎｇ／ｍｌなど）に保つことができる。１つの態様において、該範囲は約１０ｎｇ／ｍｌ〜約２０ｎｇ／ｍｌ、約２０ｎｇ／ｍｌ〜約９０ｎｇ／ｍｌ、約９０ｎｇ／ｍｌ〜約２７０ｎｇ／ｍｌ、約２７０ｎｇ／ｍｌ〜約５４０ｎｇ／ｍｌ、約５４０ｎｇ／ｍｌ〜約１０００ｎｇ／ｍｌである。
【００５０】
ＴＭＣ２７８の血漿レベルは、上記の最低血漿レベルより高く保たれるべきであり、それは、それより低いレベルにおいてはウイルスをもはや十分に抑制することができず、それが増殖して突然変異の発現の危険を追加するからである。
【００５１】
ＨＩＶ予防の場合、「最低血漿レベル」（又はＣｍｉｎ）という用語は、ＨＩＶ感染の有効な予防を与えるＴＭＣ２７８の最低血漿レベルを指す。ＨＩＶを含有する材料から又はＨＩＶに感染した患者からのＨＩＶに感染していない人へのＨＩＶの伝染の場合、これは該伝染を妨げるのに有効である最低血漿レベルである。
【００５２】
特に、ＨＩＶ予防の場合、ＴＭＣ２７８の血漿レベルを治療に関して上記であげた最低血漿レベルより高いレベルに保つことができる。しかしながら予防において、ＴＭＣ２７８の血漿レベルをもっと低いレベルに、例えば約４ｎｇ／ｍｌ、又は約５ｎｇ／ｍｌ、又は約８ｎｇ／ｍｌより高いレベルに保つことができる。ＴＭＣ２７８の血漿レベルは、好ましくはこれらの最低血漿レベルより高く保たれるべきであり、それは、もっと低いレベルにおいては、薬剤がもはや有効であり得ず、それによりＨＩＶ化感染の伝染の危険を増すからである。ＴＭＣ２７８の血漿レベルを、安全性の余裕を持つためにいくらかより高いレベルに保つことができる。そのようなより高いレベルは約５０ｎｇ／ｍｌかもしくはそれより高くから始まる。ＴＭＣ２７８の血漿レベルを、治療に関して上記で上げた範囲内であるレベルに保つことができるが、ここで下限は約４ｎｇ／ｍｌ、又は約５ｎｇ／ｍｌ、又は約８ｎｇ／ｍｌの血漿レベルを含む。
【００５３】
ＴＭＣ２７８の利点は、有意な副作用なしで比較的高い血漿レベルまでそれを用いることができることである。ＴＭＣ２７８の血漿濃度は比較的高いレベルに達することができるが、いずれの薬剤の場合とも同様に、ＴＭＣ２７８が有意な副作用を引き起こす血漿レベルである最高血漿レベル（又はＣｍａｘ）を超えてはならない。本明細書で用いられる場合、「有意な副作用」という用語は、関連する患者集団において、副作用が患者の正常な機能に影響与える程度まで副作用が存在することを意味する。ＴＭＣ２７８に関するＣｍａｘは、細胞アッセイにおける試験データの外挿から、あるいは臨床試験の評価から決定され得、好ましくは約５００ｎｇ／ｍｌ又は１０００ｎｇ／ｍｌの値を超えてはならない。１つの態様において、投与されるべきＴＭＣ２７８の量及び投与の頻度は、血漿濃度が長期間、最高血漿レベル（又は上記で規定したＣｍａｘ）と最低血漿レベル（上記で規定したＣｍｉｎ）の間に含まれるレベルに保たれるように選ばれる。
【００５４】
ある場合には、ＴＭＣ２７８の血漿レベルを比較的低いレベルに、例えば本明細書で規
定される最低血漿レベルに可能な限り近いレベルに保つことが望ましいかも知れない。これは、投与の頻度及び／又は各投与で投与されるＴＭＣ２７８の量を減少させることを可能にするであろう。それは望ましくない副作用を避けることも可能にし、それは感染する危険にある健康な人々であり、従って副作用を耐える傾向が比較的低い、標的とされる集団群のほとんどにおける投薬形態物の受容性に寄与するであろう。予防の場合には、ＴＭＣ２７８の血漿レベルを比較的低いレベルに保つことができる。１つの態様は、ＴＭＣ２７８の最低血漿レベルが本明細書で規定される通りであり、最高血漿レベルが、やはり本明細書で規定されるＲＴ阻害剤を治療的に作用させる最低血漿レベルに大体等しい、上記又は下記で規定されるＨＩＶ感染の予防のための使用又は方法に関する。
【００５５】
他の態様において、ＴＭＣ２７８の血漿レベルは約１０ｎｇ／ｍｌ、さらに特定的に約１５ｎｇ／ｍｌ、さらにもっと特定的に約２０ｎｇ／ｍｌ、さらにずっと特定的に約４０ｎｇ／ｍｌの比較的低い最高血漿レベルより低いレベルに保たれる。特定の態様において、ＴＭＣ２７８の血漿レベルは約１３．５ｎｇ／ｍｌのレベルより低く保たれる。１つの態様において、ＴＭＣ２７８の血漿レベルは、上記で規定した比較的低い最高血液レベル及び予防に関して言及した最低血漿レベルの間隔内に保たれる。例えばＴＭＣ２７８の血漿レベルは、約１０ｎｇ／ｍｌより低く且つ約４ｎｇ／ｍｌの最低レベルより高く保たれる。
【００５６】
別の場合、例えば高い感染の危険があり、且つ比較的頻繁な及び／又はより高い投薬量が問題でない場合、ＴＭＣ２７８の血漿レベルを比較的高いレベルに保つのが望ましいかも知れない。これらの場合、最低血漿レベルは、本明細書に挙げられる特定のレベルのような、ＨＩＶの有効な処置を与えるＴＭＣ２７８の最低血漿レベルに等しいことができる。
【００５７】
予防の場合、投与されるべき投薬量は、約０．２ｍｇ／日〜約５０ｍｇ／日又は０．５ｍｇ／日〜約５０ｍｇ／日又は約１ｍｇ／日〜約１０ｍｇ／日又は約２ｍｇ／日〜約５ｍｇ／日、例えば約３ｍｇ／日に基づいて計算されねばならない。これは、約１．５ｍｇ〜約３５０ｍｇ、特に約３．５ｍｇ〜約３５０ｍｇ、特に約７ｍｇ〜約７０ｍｇ又は約１４ｍｇ〜約３５ｍｇ、例えば３５ｍｇの１週間の投薬量あるいは６ｍｇ〜約３０００ｍｇ、特に約１５ｍｇ〜約１，５００ｍｇ、さらに特定的に約３０ｍｇ〜約３００ｍｇ又は約６０ｍｇ〜約１５０ｍｇ、例えば約１５０ｍｇの１ヶ月の投薬量に相当する。１日の投薬量に各投与の間の日数を乗じることにより、他の投薬管理のための投薬量を容易に計算することができる。
【００５８】
治療の場合、投与されるべき投薬量はいくらかより高くなければならず、約１ｍｇ／日〜約１５０ｍｇ／日又は約２ｍｇ／日〜約１００ｍｇ／日又は約５ｍｇ／日〜約５０ｍｇ／日又は約１０ｍｇ／日〜約２５ｍｇ／日、例えば約１５ｍｇ／日に基づいて計算されるべきである。対応する１週間又は１ヶ月の投薬量は、上記に示した通りに計算することができる。予防における適用のために、投薬量はもっと低いことができるが、治療的適用の場合と同じ投薬量を用いることができる。
【００５９】
投与されると、ＴＭＣ２７８の血漿レベルは大体（ｍｏｒｅ  ｏｒ  ｌｅｓｓ）安定である、すなわちそれらは限られた余裕内で変動することが見出された。血漿レベルは、長時間の間に、大体定常状態モードに達するか、あるいは大体ゼロ次放出速度に近づくことが見出された。「定常状態」により、患者の血漿中に存在する薬剤の量が長時間に及んで大体同じレベルに留まる状態を意味する。ＴＭＣ２７８の血漿レベルは一般に、薬剤が有効である最低血漿レベルより下への下降を示さない。「大体同じレベルに留まる」という用語は、許容され得る範囲内の血漿濃度の小さい変動、例えば約＋／−３０％又は約＋／−２０％又は約＋／−１０％又は約＋／−１０％の範囲内の変動があり得ることを排除し
ない。
【００６０】
いくつかの場合、投与の後に初期血漿濃度ピークがあり得、その後血漿レベルは下記に言及する「定常−状態」に達する。
【００６１】
本発明の組成物は、優れた局所的耐性（ｌｏｃａｌ  ｔｏｌｅｒａｎｃｅ）及び投与の容易さを示す。優れた局所的耐性は、注入の部位における最小の刺激及び炎症に関し；投与の容易さは、特定の薬剤調製物のある投薬量の投与のために必要な針の寸法及び時間の長さを指す。さらに、本発明の組成物は優れた安定性を示し、許容され得る保存寿命を有する。
【００６２】
本発明のマイクロ−又はナノ粒子は、その表面上に吸着した表面改質剤を有する。表面改質剤の機能は、湿潤剤ならびにコロイド懸濁液の安定剤として働くことである。
【００６３】
１つの態様において、本発明の組成物中のマイクロ−又はナノ粒子は、主に結晶性ＴＭＣ２７８又はその塩；ならびに表面改質剤を含み、それらの合わされた量は、マイクロ−又はナノ粒子の少なくとも約５０％又は少なくとも約８０％又は少なくとも約９０％又は少なくとも約９５％又は少なくとも約９９％を構成することができる。
【００６４】
さらに別の側面において、本発明は、筋肉内又は皮下注入による投与のための製薬学的組成物であって、本質的に：
（１）表面に吸着した表面改質剤を有するマイクロ−もしくはナノ粒子の形態におけるＴＭＣ２７８又はその立体異性体もしくは立体異性体混合物；及び
（２）中に活性成分が懸濁されている製薬学的に許容され得る水性担体
より成る粒子の懸濁液の形態におけるＴＭＣ２７８又はその立体異性体もしくは立体異性体混合物の治療的に有効な量を含んでなる製薬学的組成物に関する。
【００６５】
適した表面改質剤は、種々のポリマー、低分子量オリゴマー、天然産物及び界面活性剤を含む既知の有機及び無機製薬学的賦形剤から選ばれることができる。特定の表面改質剤には非イオン性及びアニオン性界面活性剤が含まれる。表面改質剤の代表的な例にはゼラチン、カゼイン、レシチン、負に帯電したリン脂質の塩又はその酸形態（例えばホスファチジルグリセロール、ホスファチジルイノサイト、ホスファチジルセリン、ホスファチジン酸（ｐｈｏｓｐｈａｔｉｃ  ａｃｉｄ）及びそれらの塩、例えばアルカリ金属塩、例えばそれらのナトリウム塩、例えば卵ホスファチジルグリセロールナトリウム、例えばＬｉｐｏｉｄＴＭ  ＥＰＧの商品名の下に入手可能な製品）、アラビアゴム、ステアリン酸、ベンズアルコニウムクロリド、ポリオキシエチレンアルキルエーテル、例えばマクロゴルエーテル、例えばセトマクロゴル  １０００、ポリオキシエチレンヒマシ油誘導体；ポリオキシエチレンステアレート、コロイド二酸化ケイ素、ドデシル硫酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースナトリウム、胆汁塩、例えばタウロコール酸ナトリウム、デソキシタウロコール酸ナトリウム、デソキシコール酸ナトリウム；メチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、マグネシウムアルミネートシリケート、ポリビニルアルコール（ＰＶＡ）、エチレンオキシドとプロピレンオキシドのブロックコポリマーであるポロキサマー、例えばＰｌｕｒｏｎｉｃＴＭ  Ｆ６８、Ｆ１０８及びＦ１２７；チロキサポル（ｔｙｌｏｘａｐｏｌ）；ビタミンＥ−ＴＧＰＳ（α−トコフェリルポリエチレングリコールスクシネート、特にα−トコフェリルポリエチレングリコール  １０００  スクシネート）；ポロキサミン、例えばエチレンジアミンへのエチレンオキシドとプロピレンオキシドの逐次付加（ｓｅｑｕｅｎｔｉａｌ  ａｄｄｉｔｉｏｎ）から誘導される四官能基性ブロックコポリマーであるＴｅｔｒｏｎｉｃＴＭ  ９０８（Ｔ９０８）；デキストラン；レシチン；ナトリウムスルホコハク酸のジオクチルエステル、例えばＡｅｒｏｓｏｌ  ＯＴＴＭ（ＡＯＴ）の商品名の下に販売されている製品；ラウリル硫酸ナトリウム（ＤｕｐｏｎｏｌＴＭ  Ｐ）；ＴｒｉｔｏｎＴＭ  Ｘ−２００の商品名の下に入手可能なアルキルアリールポリエーテルスルホネート；ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（ＴｗｅｅｎＴＭ  ２０、４０、６０及び８０）；脂肪酸のソルビタンエステル（ＳｐａｎＴＭ  ２０、４０、６０及び８０又はＡｒｌａｃｅｌＴＭ  ２０、４０、６０及び８０）；ポリエチレングリコール（例えばＣａｒｂｏｗａｘＴＭ  ３５５０及び９３４の商品名の下に販売されているもの）；スクロースステアレート及びスクロースジステアレート混合物、例えばＣｒｏｄｅｓｔａＴＭ  Ｆ１１０又はＣｒｏｄｅｓｔａＴＭ  ＳＬ−４０の商品名の下に入手可能な製品；ヘキシルデシルトリメチルアンモニウムクロリド（ＣＴＡＣ）；ポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）が含まれる。望ましければ、２種もしくはそれより多い表面改質剤を組み合わせて用いることができる。
【００６６】
特定的な表面改質剤は、ポロキサマー、α−トコフェリルポリエチレングリコールスクシネート、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル及び負に帯電したリン脂質の塩又はその酸形態から選ばれる。さらに特定的に、表面改質剤はＰｌｕｒｏｎｉｃＴＭ  Ｆ１０８、ビタミンＥ  ＴＧＰＳ、ＴｗｅｅｎＴＭ  ８０及びＬｉｐｏｉｄＴＭ  ＥＰＧから選ばれる。これらの表面改質剤の１種もしくはそれより多くを用いることができる。ＰｌｕｒｏｎｉｃＴＭ  Ｆ１０８はポロキサマー３３８に相当し、それはポリオキシエチレン、ポリオキシプロピレンブロックコポリマーであり、それは一般に、式ＨＯ−［ＣＨ２ＣＨ２Ｏ］ｘ−［ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２Ｏ］ｙ−［ＣＨ２ＣＨ２Ｏ］ｚ−Ｈに従い、ここでｘ、ｙ及びｚの平均値はそれぞれ１２８、５４及び１２８である。ポロキサマー３３８の他の商品名はＨｏｄａｇ  ＮｏｎｉｏｎｉｃＴＭ  １１０８−Ｆ及びＳｙｎｐｅｒｏｎｉｃＴＭ  ＰＥ／Ｆ１０８である。１つの態様において、表面改質剤はポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル及びホスファチジルグリセロール塩（特に卵ホスファチジルグリセロールナトリウム）の組み合わせを含んでなる。
【００６７】
表面改質剤に対するＴＭＣ２７８の最適な相対的量は、選ばれる表面改質剤、平均有効粒度とＴＭＣ２７８濃度により決定されるＴＭＣ２７８懸濁液の比表面積、表面改質剤がミセルを形成する場合には表面改質剤の臨界ミセル濃度などに依存する。ＴＭＣ２７８対表面改質剤の相対的な量（ｗ／ｗ）は、好ましくは１：２〜約２０：１の範囲内、特に１：１〜約１０：１の範囲内、例えば約４：１である。
【００６８】
本発明の粒子は、機械的手段による超微粉砕／粒度減少／ナノ化により、及び過飽和溶液からの制御された沈降により、あるいはＧＡＳ法（「ガスアンチ−ソルベント（ｇａｓ
ａｎｔｉ−ｓｏｌｖｅｎｔ）」）におけるような超臨界流体の使用により、あるいはそのような方法の組み合わせにより調製することができる。１つの態様において、ＴＭＣ２７８を液体分散媒中に分散させ、磨砕媒体の存在下で機械的手段を適用し、ＴＭＣ２７８の粒度を約５０μｍより小さい、特に約１，０００ｎｍより小さい平均有効粒度まで減じる段階を含んでなる方法を用いる。表面改質剤の存在下で粒子の寸法を減じることができる。
【００６９】
本発明の粒子の調製のための一般的な方法は、
（ａ）超微粉砕された形態でＴＭＣ２７８を得；
（ｂ）超微粉砕されたＴＭＣ２７８を液体媒体に加えて予備混合物／予備分散系を形成
し；そして
（ｃ）予備混合物を磨砕媒体の存在下で機械的手段に供して、平均有効粒度を減じる
ことを含んでなる。
【００７０】
超微粉砕された形態のＴＭＣ２７８は、当該技術分野において既知の方法を用いて調製される。予備分散系中のＴＭＣ２７８活性薬剤の平均有効粒度は、篩別試験（ｓｉｅｖｅ
ａｎａｌｙｓｉｓ）により決定される約１００μｍより小さいのが好ましい。超微粉砕されたＴＭＣ２７８の平均有効粒度が約１００μｍより大きい場合、ＴＭＣ２７８化合物の粒子の寸法を１００μｍより小さく減じるのが好ましい。
【００７１】
次いで超微粉砕されたＴＭＣ２７８を、本質的にＴＭＣ２７８が不溶性である液体媒体に加え、予備分散系を形成することができる。液体媒体中のＴＭＣ２７８の濃度（重量パーセンテージ）は広く変ることができ、選ばれる表面改質剤及び他の因子に依存する。組成物中のＴＭＣ２７８の適した濃度は、約０．１％〜約６０％又は約１％〜約６０％又は約１０％〜約５０％又は約１０％〜約３０％、例えば約１０％、２０％又は３０％で変る（この節におけるそれぞれの％はｗ／ｖに関する）。
【００７２】
予備混合物を機械的手段に供して分散系における有効平均有効粒度を２，０００ｎｍより小さく減じることにより、予備混合物を直接用いることができる。磨砕のためにボールミルが用いられる場合、予備混合物を直接用いるのが好ましい。あるいはまた、ＴＭＣ２７８及び場合により表面改質剤を、適した攪拌、例えばローラーミルを用い、均一な分散系が得られるまで液体媒体中に分散させることができる。
【００７３】
ＴＭＣ２７８の有効平均有効粒度を減じるために適用される機械的手段は、簡便に分散ミルの形態をとることができる。適した分散ミルにはボールミル、磨砕機／磨砕ミル、振動ミル、遊星型ミル、媒体ミル（ｍｅｄｉａ  ｍｉｌｌｓ）、例えばサンドミル及びビーズミルが含まれる。媒体ミルは、粒度における所望の減少を与えるのに必要な比較的より短い磨砕時間の故に、好ましい。ビーズは、好ましくはＺｒＯ２ビーズである。
【００７４】
粒度減少段階のための磨砕媒体は、好ましくは３ｍｍより小さい、そしてより好ましくは１ｍｍより小さい（２００μｍのように小さいビーズ）平均寸法を有する球形又は粒子形の硬質の媒体から選ばれることができる。そのような媒体は、望ましくはより短い加工時間で本発明の粒子を与えることができ、且つ磨砕装置に与える磨耗がより少ない。磨砕媒体の例はＺｒＯ２、例えばマグネシアで安定化されたか又はイットリウムで安定化された９５％ＺｒＯ２、ケイ酸ジルコニウム、ガラス磨砕媒体、ポリマービーズ、ステンレススチール、チタニア、アルミナなどである。好ましい磨砕媒体は、２．５ｇ／ｃｍ３より高い密度を有し、マグネシアで安定化された９５％ＺｒＯ２及びポリマービーズを含む。
【００７５】
磨砕時間は広く変り得、主に選ばれる特定の機械的手段及び加工条件に依存する。ロールミルの場合、最高で２日かもしくはそれより長い加工時間が必要であり得る。
【００７６】
ＴＭＣ２７８化合物を有意に分解しない温度で、粒子の寸法を減じなければならない。３０℃未満〜４０℃の加工温度が通常好ましい。望ましければ、通常の冷却装置を用いて加工装置を冷却することができる。方法は周囲温度の条件下で、且つ安全で磨砕法のために有効な加工圧において簡便に行なわれる。
【００７７】
本発明に従う製薬学的組成物は、好ましくは製薬学的に許容され得る水性担体を含有する。該水性担体は、場合により他の製薬学的に許容され得る成分と混合されていることができる無菌水を含む。他の製薬学的に許容され得る成分は、注入可能な調製物中で使用するためのいずれの成分をも含む。これらの成分は、懸濁化剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤、防腐剤、等張化剤などの成分の１つもしくはそれより多くから選ばれることができる。１つの態様において、該成分は懸濁化剤、緩衝剤、ｐＨ調整剤ならびに場合により防腐剤及び等張化剤の１つもしくはそれより多くから選ばれる。特別な成分は、これらの薬剤の２つもしくはそれより多くとして同時に機能することができ、例えば防腐剤及び緩衝剤のように挙動するか、又は緩衝剤及び等張化剤のように挙動する。
【００７８】
適した緩衝剤及びｐＨ調整剤は、分散系を中性から非常にわずかに塩基性（ｐＨ８．５まで）、好ましくは７〜７．５のｐＨ範囲内とするのに十分な量で用いられなければならない。特定的な緩衝剤は弱酸の塩である。加えることができる緩衝剤及びｐＨ調整剤は、これらの混合物を含んで酒石酸、マレイン酸、グリシン、乳酸ナトリウム／乳酸、アスコルビン酸、クエン酸ナトリウム／クエン酸、酢酸ナトリウム／酢酸、重炭酸ナトリウム／炭酸、コハク酸ナトリウム／コハク酸、安息香酸ナトリウム／安息香酸、リン酸ナトリウム、トリス（ヒドロキシメチル）アミノメタン、重炭酸ナトリウム／炭酸ナトリウム、水酸化アンモニウム、ベンゼンスルホン酸、ベンゾエートナトリウム／酸（ｂｅｎｚｏａｔｅ  ｓｏｄｉｕｍ／ａｃｉｄ）、ジエタノールアミン、グルコノデルタラクトン、塩酸、臭化水素、リシン、メタンスルホン酸、モノエタノールアミン、水酸化ナトリウム、トロメタミン、グルコン酸、グリセリン酸、グルタル酸（ｇｌｕｒａｔｉｃ）、グルタミン酸、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、トリエタノールアミンから選ばれることができる。
【００７９】
防腐剤は抗微生物剤及び酸化防止剤を含んでなり、それらは安息香酸、ベンジルアルコール、ブチル化ヒドロキシアニソール（ＢＨＡ）、ブチル化ヒドロキシトルエン（ＢＨＴ）、クロルブトル、ガレート、ヒドロキシベンゾエート、ＥＤＴＡ、フェノール、クロロクレゾール、メタクレゾール、ベンズエトニウムクロリド、ミリスチル−γ−ピコリニウムクロリド、フェニル水銀アセテート及びチメロサルより成る群から選ばれることができる。ラジカル掃去剤にはＢＨＡ、ＢＨＴ、ビタミンＥ及びパルミチン酸アスコルビルならびにそれらの混合物が含まれる。酸素掃去剤にはアスコルビン酸ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、Ｌ−システイン、アセチルシステイン、メチオニン、チオグリセロール、アセトンナトリウムビサルファイト、イソアスコルビン酸、ヒドロキシプロピルシクロデキストリンが含まれる。キレート化剤にはクエン酸ナトリウム、ナトリウムＥＤＴＡ及びリンゴ酸が含まれる。
【００８０】
等張化剤又は等張剤（ｉｓｏｔｏｎｉｆｉｅｒ）は、本発明の製薬学的組成物の等張性を保証するために存在することができ、糖類、例えばグルコース、デスキトロース、スクロース、フルクトース、トレハロース、ラクトース；多価糖アルコール、好ましくは三価もしくはそれより高い糖アルコール、例えばグリセリン、エリトリトール、アラビトール、キシリトール、ソルビトール及びマンニトールが含まれる。あるいはまた、塩化ナトリウム、硫酸ナトリウム又は他の適した無機塩を用いて溶液を等張にすることができる。これらの等張剤を単独で又は組み合わせて用いることができる。懸濁液は、簡便には０〜１０％（ｗ／ｖ）、特に０〜６％の等張化剤を含む。興味深いのは非イオン性等張剤、例えばグルコースであり、それは、電解質がコロイドの安定性に影響し得るからである。
【００８１】
本発明の製薬学的組成物に関する望ましい特徴は、投与の容易さに関連する。本発明の製薬学的組成物の粘度は、注入による投与を可能にするのに十分に低くなければならない。特にそれらは、それらを容易にシリンジ中に採取し（例えばバイアルから）、長すぎない時間内に微細な針（例えば２０Ｇ  １ 1/2、２１Ｇ  １ 1/2、２２Ｇ  ２又は２２Ｇ  １ 1/4針）を介して注入できるように設計されねばならない。１つの態様において、本発明の組成物の粘度は約７５ｍＰａ・ｓより低いか又は６０ｍＰａ・ｓより低い。そのような粘度かもしくはもっと低い粘度の水性懸濁液は、通常上記の基準を満たす。
【００８２】
理想的には、本発明に従う水性懸濁液は、注入される体積を最小に保つために、許容され得る限り多くのＴＭＣ２７８、特に３〜４０％（ｗ／ｖ）又は３〜３０％（ｗ／ｖ）又は３〜２０％（ｗ／ｖ）又は１０〜３０％（ｗ／ｖ）のＴＭＣ２７８を含むであろう。１つの態様において、本発明の水性懸濁液は約１０％（ｗ／ｖ）のＴＭＣ２７８又は約１０％（ｗ／ｖ）のＴＭＣ２７８又は約３０％（ｗ／ｖ）のＴＭＣ２７８を含有する。
【００８３】
１つの態様において、水性懸濁液は組成物の合計体積に基づく重量により：
（ａ）３％〜５０％（ｗ／ｖ）又は１０％〜４０％（ｗ／ｖ）又は１０％〜３０％（ｗ／
ｖ）のＴＭＣ２７８；
（ｂ）０．５％〜１０％又は０．５％〜２％（ｗ／ｖ）の湿潤剤；
（ｃ）０％〜１０％又は０％〜５％又は０％〜２％又は０％〜１％の１種もしくはそれよ
り多い緩衝剤；
（ｄ）０％〜１０％又は０％〜６％（ｗ／ｖ）の等張化剤、
（ｅ）０％〜２％（ｗ／ｖ）の防腐剤；及び
（ｆ）１００％とするのに十分な注入用水
を含んでなることができる。
【００８４】
場合により懸濁液に、ｐＨを約ｐＨ７の値にする量の酸又は塩基を加えることができる。適した酸又は塩基は、生理学的に許容され得るもの、例えばＨＣｌ、ＨＢｒ、硫酸、アルカリ金属水酸化物、例えばＮａＯＨのいずれかである。
【００８５】
本発明におけるようなＴＭＣ２７８の投与は、ＨＩＶ感染の処置に十分であり得るが、複数の場合に、他のＨＩＶ阻害剤を共−投与するのが良いかも知れない。他のＨＩＶ阻害剤には、好ましくは他の種類のＨＩＶ阻害剤、特にＮＲＴＩｓ、ＰＩｓ及び融合阻害剤から選ばれるものが含まれる。１つの態様において、共−投与される他のＨＩＶ阻害剤はＰＩ阻害剤である。好適に共−投与することができるＨＩＶ阻害剤は、ＮＮＲＴＩを含んでなるＨＡＡＲＴ組み合わせにおいて用いられるものである。例えば２つのさらに別のＮＲＴＩｓ又は１つのＮＲＴＩ及びＰＩを共−投与することができる。そのような共−投与は経口的投与によるか又は非経口的であることができる。
【００８６】
ある場合には、ＨＩＶ感染の処置は、本発明に従うＴＭＣ２７８の組成物のみ、すなわちさらに別のＨＩＶ阻害剤の共−投与なしのモノテラピー（ｍｏｎｏｔｈｅｒａｐｙ）としての投与に限られ得る。例えばウイルス負荷が比較的低い場合、例えばウイルス負荷（特定の体積の血清中のウイルスＲＮＡのコピーの数として示される）が約２００コピー／ｍｌより低い、特に約１００コピー／ｍｌより低い、さらに特定的に５０コピー／ｍｌより低い、特別にウイルスの検出限界より低い場合に、この選択肢を薦めることができる。１つの態様において、この型のモノテラピーは、血漿中のウイルス負荷が前記で挙げた低いウイルスレベルに達するまでのある期間の間のＨＩＶ薬の組み合わせを用いる、特にＨＡＡＲＴ組み合わせのいずれかを用いる初期処置の後に適用される。
【００８７】
さらに別の側面において、本発明は、ＨＩＶに感染している患者の維持療法用の薬剤の製造のための、本発明に従うＴＭＣ２７８又はその製薬学的に許容され得る酸−付加塩の抗−ウイルス的に有効な量を含んでなる製薬学的組成物の使用に関し、ここで組成物は１週間〜１年又は１週間〜２年の範囲内である時間間隔で断続的に投与されるか又は投与されることになる。
【００８８】
かくしてさらに別の側面において、本発明はＨＩＶに感染している患者の長期処置のための方法を提供し、該方法は
（ｉ）  ＨＩＶ阻害剤の組み合わせを用いる該患者の処置；及び続く
（ｉｉ）本発明に従うＴＭＣ２７８又はその製薬学的に許容され得る酸−付加塩の抗−ウ
イルス的に有効な量を含んでなる製薬学的組成物の断続的投与
を含んでなり、ここで組成物は少なくとも１週間の時間間隔で投与される。
【００８９】
本発明は、ＨＩＶ感染の処置又は予防における薬剤として用いるための、前記に記載された製薬学的組成物にも関する。
【００９０】
さらに本発明は、ＨＩＶ感染の予防又は処置用の薬剤の製造のための、本明細書に記載される製薬学的組成物の使用に関する。
【００９１】
本発明はさらに、ＨＩＶに感染した患者の処置方法に関し、該方法は本明細書に記載される製薬学的組成物の治療的に有効な量を投与することを含んでなる。
【００９２】
本明細書で用いられる場合、「実質的に」という用語は「完全に」を排除せず、例えばＹを「実質的に含まない」組成物は、完全にＹを含まないことができる。必要な場合には、本発明の定義から「実質的に」という用語を省略することができる。数値と結びついた「約」という用語は、数値と関連する通常のその意味を有するものとする。必要なら、「約」という用語を数値±１０％又は±５％又は±２％又は±１％で置き換えることができる。本明細書で引用されるすべての文書は、引用することによりその記載事項全体が本明細書の内容となる。
【００９３】
以下の実施例は本発明を例示することを目的とし、本発明をそれに制限するとみなされるべきではない。
【実施例１】
【００９４】
実施例１：ナノ懸濁液の調製
２５０ｍｌのガラスビン及び磨砕媒体として用いられるＺｒＯ２ビーズをオートクレーブ中で滅菌した。５グラムの薬剤物質を、６０ｍｌの注射用水中の１．２５ｇのＰｌｕｒｏｎｉｃ  Ｆ１０８の溶液と一緒に２５０ｍｌのガラスビン中に入れた。５００μｍの平均粒度を有する３００グラムのＺｒＯ２−ビーズを加えた。ビンをローラーミル上に置いた。懸濁液を１００ｒｐｍで７２時間超微粉砕した。磨砕プロセスの最後に、濃厚ナノ懸濁液をシリンジで取り出し、バイアル中に充填した。得られる調製物は、以下の表中の調製物１である。ＨＰＬＣ／ＵＶにより、濃度の決定を行った。２５ｍｇ／ｍｌのＴＭＣ２７８の最終的濃度まで希釈を行なった。得られる懸濁液を光から保護した。
【００９５】
類似の方法を用い、調製物２、３及び４を調製した。これらを、水酸化ナトリウム１Ｎ溶液を用いて約７のｐＨに滴定した。調製物２、３及び４においては、ＬｉｐｏｉｄＴＭ
ＥＰＧをＴｗｅｅｎＴＭ  ８０中で可溶化した。
【００９６】
【表１】
2009541271.tif 000002
【実施例２】
【００９７】
実施例２：速度論的研究
本研究は、ナノ化されたＴＭＣ２７８又はそのＨＣｌ−塩の注入可能な調製物が長時間の間、安定な血漿レベルを生ずることを示す。この研究は、雄のビーグル犬において、ナ
ノ懸濁液（前実施例の調製物１）を５ｍｇ／ｋｇで１回、筋肉内（ＩＭ）又は皮下注入した後のＴＭＣ２７８塩基及び塩酸塩の血漿速度論を比較する。
【００９８】
研究の開始時に８〜１６ｋｇの範囲の体重を有する６匹の健康な雄のビーグル犬を用いた。各犬を耳の刺青の数字により同定した。２匹の犬に、左及び右大腿二頭筋（ｍ．ｂｉｃｅｐｓ  ｆｅｍｏｒｉｓ）において筋肉内に（ＩＭ）投薬した（処置群Ａ）。２匹の犬に、ＴＭＣ２７８．ＨＣｌをＩＭに投薬した（処置群Ｂ）。２匹の犬に、左及び右胸郭領域において皮下的に（ＳＣ）投薬した。注入体積は、すべての処置群において２ｘ０．１ｍｌ／ｋｇであった。２０Ｇ針を用いた。
【００９９】
０日に投薬−後０時間（投薬前）、２０分、１時間、３時間、８時間及び２４時間ならびにさらに２、３、６、８、１０、１３、１６、２０、２３、２７、２９、３６、４３、５０、５７、６４、７１、７８、８５及び９２日に大体午前８時に、すべての犬から３ｍｌの血液試料を左頸静脈から採取した。血液試料をＥＤＴＡ（ＥＤＴＡ  Ｖａｃｕｅｔｔｅ  Ｇｒｅｉｎｅｒ，Ｃａｔ．Ｎｏ．４５４０８６，Ｇｒｅｉｎｅｒ  Ｌａｂｏｒｔｅｃｈｎｉｋ  Ｎ．Ｖ．）上に置いた。血液試料採取から２時間以内に、試料を室温で約１９００ｘｇにおいて１０分間遠心し、血漿を分離した。すぐに血漿を第２の管に移し、遠心の開始から２時間後以内にフリーザー中に保存した。有効とされている（ｖａｌｉｄａｔｅｄ）ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ−法により、血漿試料をＴＭＣ２７８に関して個別に分析した。
【０１００】
【表２】
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【０１０１】
【表３】
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【０１０２】
【表４】
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【国際調査報告】
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