(57)【要約】可逆性夜盲症の原因となる化合物は、視覚サイクルの過程で蓄積する廃棄物の過剰生産に関連した眼科的状態を治療するために利用することができる。例えば黄斑変性およびジストロフィーを治療するためにまたはそのような眼科的状態に関連した症状を緩和するために、そのような化合物およびそれらの誘導体を使用する方法および組成物を提供する。そのような化合物およびそれらの誘導体は、単剤療法として使用することができ、または他の作用因子もしくは療法と併用することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物の眼における眼科的状態を治療するための方法であって、該方法は、該哺乳動物の眼内の網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節する作用因子の有効量を該哺乳動物に投与することを含む、方法。
【請求項２】
前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーが、メガリンまたはメガリン関連タンパク質である、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーが、レチノイド結合タンパク質受容体である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性が、ビタミン結合タンパク質、リポタンパク質、免疫およびストレス関連タンパク質、ステロイドホルモン結合タンパク質、ホルモンおよび前駆体、ペプチド、酵素および酵素阻害剤、アルブミン、ラクトフェリン、ヘモグロビン、臭気物質結合タンパク質、トランスサイレチン；多塩基性薬物および毒素、ＲＡＰ、カルシウム（Ｃａ２＋）、ならびにシトクロムｃから成る群より選択される第二の作用因子への該ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性が、レチノール、レチノール−ＲＢＰ複合体、レチノール−ＲＢＰ−ＴＴＲ複合体、光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）、レチノール−ＩＲＢＰ複合体、トランスコバラミン−ビタミンＢ１２、トランスコバラミン−ビタミンＢ１２結合タンパク質、ビタミン−Ｄ−結合タンパク質、アポリポタンパク質Ｂ、アポリポタンパク質Ｅ、アポリポタンパク質Ｊ／クラステリン、アポリポタンパク質Ｈ；免疫グロブリン軽鎖、ＰＡＰ−１、β２−ミクログロブリン；性ホルモン結合タンパク質−エストロゲン、アンドロゲン結合タンパク質−アンドロゲン；副甲状腺ホルモン、インスリン、上皮増殖因子、プロラクチン、サイログロブリン；プラスミノゲンアクチベーターインヒビター−１（ＰＡＩ−１）、ウロキナーゼ−ＰＡＩ−１、ｔＰＡ−ＰＡＩ−１、プロ−ウロキナーゼ、リポタンパク質リパーゼ、プラスミノゲン、β−アミラーゼ、β１−ミクログロブリン、リゾチーム；アルブミン、ラクトフェリン、ヘモグロビン、臭気物質結合タンパク質、トランスサイレチン；アミノグリコシド、ポリミキシンＢ、アプロチニン、トリコサンチン；ゲンタマイシン；ＲＡＰ、Ｃａ２＋、ならびにシトクロムｃから成る群より選択される第二の作用因子への該ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性が、レチノール、レチノール−ＲＢＰ複合体、またはレチノール−ＲＢＰ−ＴＴＲ複合体への該ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性が、レチノイド結合タンパク質への該ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である、請求項１に記載の方法。
【請求項８】
前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性が、ビタミン結合タンパク質、リポタンパク質、免疫およびストレス関連タンパク質、ステロイドホルモン結合タンパク質、ホルモンおよび前駆体、ペプチド、酵素および酵素阻害剤、アルブミン、ラクトフェリン、ヘモグロビン、臭気物質結合タンパク質、トランスサイレチン；多塩基性薬物および毒素、ＲＡＰ、カルシウム（Ｃａ２＋）、ならびにシトクロムｃから成る群より選択される第二の作用因子のトランスサイトーシスである、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性が、レチノール、レチノール−ＲＢＰ複合体、レチノール−ＲＢＰ−ＴＴＲ複合体、光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）、レチノール−ＩＲＢＰ複合体、トランスコバラミン−ビタミンＢ１２、トランスコバラミン−ビタミンＢ１２結合タンパク質、ビタミン−Ｄ−結合タンパク質、アポリポタンパク質Ｂ、アポリポタンパク質Ｅ、アポリポタンパク質Ｊ／クラステリン、アポリポタンパク質Ｈ；免疫グロブリン軽鎖、ＰＡＰ−１、β２−ミクログロブリン；性ホルモン結合タンパク質−エストロゲン、アンドロゲン結合タンパク質−アンドロゲン；副甲状腺ホルモン、インスリン、上皮増殖因子、プロラクチン、サイログロブリン；プラスミノゲンアクチベーターインヒビター−１（ＰＡＩ−１）、ウロキナーゼ−ＰＡＩ−１、ｔＰＡ−ＰＡＩ−１、プロ−ウロキナーゼ、リポタンパク質リパーゼ、プラスミノゲン、β−アミラーゼ、β１−ミクログロブリン、リゾチーム；アルブミン、ラクトフェリン、ヘモグロビン、臭気物質結合タンパク質、トランスサイレチン；アミノグリコシド、ポリミキシンＢ、アプロチニン、トリコサンチン；ゲンタマイシン；ＲＡＰ、Ｃａ２＋、ならびにシトクロムｃから成る群より選択される第二の作用因子のトランスサイトーシスである、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
前記作用因子が、レチノール結合タンパク質に結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項１１】
前記作用因子が、トランスサイレチンに結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項１２】
前記作用因子が、光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）に結合する、請求項１に記載の方法。
【請求項１３】
前記作用因子が、前記網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの発現を調節する、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記作用因子が、抗体、ポリペプチド、核酸、ポリ核酸、ポリマー、受容体関連タンパク質（ＲＡＰ）またはそのフラグメント、低分子量有機化合物、ビタミン結合タンパク質、リポタンパク質、免疫およびストレス関連タンパク質、ステロイドホルモン結合タンパク質、ホルモンおよび前駆体、ペプチド、酵素および酵素阻害剤、アルブミン、ラクトフェリン、ヘモグロビン、臭気物質結合タンパク質、トランスサイレチン；多塩基性薬物および毒素、ＲＡＰ、カルシウム（Ｃａ２＋）、カルシウムスカベンジャー、還元剤およびシトクロムｃから成る群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記作用因子が、抗体、ポリペプチド、核酸、ポリ核酸、ポリマー、受容体関連タンパク質（ＲＡＰ）またはそのフラグメント、低分子量有機化合物、レチノール、レチノール−ＲＢＰ複合体、レチノール−ＲＢＰ−ＴＴＲ複合体、光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）、レチノール−ＩＲＢＰ複合体、トランスコバラミン−ビタミンＢ１２、トランスコバラミン−ビタミンＢ１２結合タンパク質、ビタミン−Ｄ−結合タンパク質、アポリポタンパク質Ｂ、アポリポタンパク質Ｅ、アポリポタンパク質Ｊ／クラステリン、アポリポタンパク質Ｈ；免疫グロブリン軽鎖、ＰＡＰ−１、β２−ミクログロブリン；性ホルモン結合タンパク質−エストロゲン、アンドロゲン結合タンパク質−アンドロゲン；副甲状腺ホルモン、インスリン、上皮増殖因子、プロラクチン、サイログロブリン；プラスミノゲンアクチベーターインヒビター−１（ＰＡＩ−１）、ウロキナーゼ−ＰＡＩ−１、ｔＰＡ−ＰＡＩ−１、プロ−ウロキナーゼ、リポタンパク質リパーゼ、プラスミノゲン、β−アミラーゼ、β１−ミクログロブリン、リゾチーム；アルブミン、ラクトフェリン、ヘモグロビン、臭気物質結合タンパク質、トランスサイレチン；アミノグリコシド、ポリミキシンＢ、アプロチニン、トリコサンチン、ゲンタマイシン；ＲＡＰ、ＲＡＰフラグメント、Ｃａ２＋、カルシウムスカベンジャー、還元剤およびシトクロムｃから成る群より選択される、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
前記作用因子の有効量の反復投与をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１７】
投与間隔の少なくとも１期間が、少なくとも１週間である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
投与間隔の少なくとも１期間が、少なくとも１日である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
酸化窒素生産の誘導物質、抗炎症剤、生理的に許容される抗酸化物質、生理的に許容される無機質、負電荷を有するリン脂質、カロチノイド、スタチン、血管新生阻害剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、１３−シス−レチノイン酸、または式（Ａ）の構造を有する化合物：
【化２８】
2009541357.tif 000031
（式中、
Ｘ１は、ＮＲ２、Ｏ、Ｓ、ＣＨＲ２から成る群より選択され、
Ｒ１は、（ＣＨＲ２）Ｘ−Ｌ１−Ｒ３であり、ここで、
ｘは、０、１、２または３であり、Ｌ１は、単結合または−Ｃ（Ｏ）−であり、
Ｒ２は、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、Ｆ、（Ｃ１〜Ｃ４）フルオロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミン、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４）フルオロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミン、および−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシから成る群より選択される部分であり、ならびに
Ｒ３は、Ｈであるか、（Ｃ２〜Ｃ７）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ７）アルキニル、アリール、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、（Ｃ５〜Ｃ７）シクロアルケニル、および複素環から成る群より選択される、１〜３個の独立して選択された置換基で随意に置換されている、部分である）
から成る群より選択される少なくとも１つの追加の作用因子の投与をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２０】
前記式（Ａ）の構造を有する化合物が、
【化２９】
2009541357.tif 000032
あるいはその活性代謝産物、または医薬的に許容されるプロドラッグもしくは溶媒和物である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記化合物が、４−ヒドロキシフェニルレチナミド、４−メトキシフェニルレチナミド、あるいはその代謝産物または医薬的に許容されるプロドラッグもしくは溶媒和物である、請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
体外レオフェレーシス、限定網膜移動術、光ダイナミック療法、ドルーゼンレーザー処置、黄斑円孔手術、黄斑移動手術、ファイ運動、プロトンビーム療法、網膜剥離および硝子体手術、強膜折込み術、黄斑下手術、経瞳孔温熱療法、光化学系Ｉ療法、微弱電流刺激、ＲＮＡ干渉、眼科薬、例えばヨウ化ホスホリンまたはエコチオフェートまたは炭酸脱水酵素阻害剤、の投与、マイクロチップ移植、幹細胞療法、遺伝子置換療法、リボザイム遺伝子療法、光受容体／網膜細胞移植、レーザー光凝固術、ならびに鍼術から成る群より選択される療法を哺乳動物に施すことをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２３】
網膜変性のための追加の治療をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項２４】
前記哺乳動物が、ヒトである、請求項１に記載の方法。
【請求項２５】
前記ヒトが、シュタルガルト病、劣性網膜色素変性症、劣性錐体−杆体ジストロフィー、乾燥型加齢性黄斑変性、滲出性加齢性黄斑変性、錐体−杆体ジストロフィー、網膜色素変性症、リポフスチンに基づく網膜変性、光受容体変性、および地図状萎縮から成る群より選択される眼科的状態または素質を有する、請求項２４に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
相互参照
この出願は、２００６年６月２２日に出願された米国仮出願第６０／８０５，５８６号（これは、参考として本明細書に援用される）の利益を主張する。
【背景技術】
【０００２】
脊椎動物網膜は、２つのタイプの光受容体細胞−杆体および錐体−を含有する。杆体は、低光条件下での視覚に特化されている。錐体は、さほど感度は高くなく、高い時間および空間分解能で視覚を提供し、色覚をもたらす。昼光条件下、杆体反応は飽和し、視覚は完全に錐体によって媒介される。両方の細胞タイプは、多量の膜様円板の積層体を含む外節と呼ばれる構造を含有する。視覚伝達反応は、これらの円板の表面で発生する。視覚の第一段階は、発色団の１１−シスから全トランスへの異性体化を伴う、オプシン−色素分子（ロドプシン）による光子の吸収である。光感受性を回復するには、結果として生じた全トランス−レチナールが、網膜色素上皮（ＲＰＥ）、網膜に隣接する細胞の単層、において発生する多酵素プロセスで、もとの１１−シス−レチナールに転化されなければならない。
【０００３】
現在、眼科的状態、特に、網膜および／または黄斑に係わる眼科的状態のための治療の選択肢は限られている。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００４】
要旨
哺乳動物の眼内の網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節する作用因子の有効量を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物の眼における眼科的状態を治療するための方法および組成物を本明細書に記載する。
【０００５】
１つの実施形態において、前記眼内の網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、メガリン、メガリン関連タンパク質、ＬＲＰまたはＬＲＰ関連タンパク質である。別の実施形態において、前記眼内の網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、メガリンまたはメガリン関連タンパク質である。さらなる実施形態において、前記眼内の網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、メガリンである。さらなる実施形態において、前記眼内の網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、ＬＲＰ、またはＬＲＰ関連タンパク質である。さらなる実施形態において、前記眼内の網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、ＬＲＰである。１つの実施形態において、前記眼内の網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、メガリン関連タンパク質である。さらなる実施形態において、前記眼内の網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、ＬＲＰ関連タンパク質である。別の実施形態において、前記眼内の網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、図３に列挙するペプチド配列を含むタンパク質である。
【０００６】
１つの実施形態において、前記哺乳動物の眼内の網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、レチノイド結合タンパク質受容体である。別の実施形態において、前記哺乳動物の眼内の網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、ＲＢＰおよび／またはＩＲＢＰ受容体である。別の実施形態において、前記哺乳動物の眼内の網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、ＳＴＲＡ６またはＳＴＲＡ６関連タンパク質である。別の実施形態において、前記哺乳動物の眼内の網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、ＳＴＲＡ６である。別の実施形態において、前記哺乳動物の眼内の網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、ＳＴＲＡ６関連タンパク質である。
【０００７】
前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、眼内のＲＰＥ細胞の基底膜および頂端膜上に存在する。一部の実施形態において、ＲＰＥ細胞の基底膜上の受容体は、眼内のＲＰＥ細胞の頂端膜上の受容体と同じでない。一部の実施形態において、ＲＰＥ細胞の基底膜上の受容体は、ＲＰＥ細胞の頂端膜上の受容体と同じである。一部の実施形態において、作用因子は、前記眼内のＲＰＥ細胞の基底膜上のＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節する。一部の実施形態において、作用因子は、前記眼内のＲＰＥ細胞の頂端膜上のＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節する。一部の実施形態において、作用因子は、前記ＲＰＥ細胞の基底膜上のＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節し、前記ＲＰＥ細胞の頂端膜上のＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節しない。一部の実施形態において、作用因子は、前記ＲＰＥ細胞の基底膜上のＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節し、前記ＲＰＥ細胞の頂端膜上のＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節する。
【０００８】
一部の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、ビタミン結合タンパク質、リポタンパク質、免疫およびストレス関連タンパク質、ステロイドホルモン結合タンパク質、ホルモンおよび前駆体、ペプチド、酵素および酵素阻害剤、アルブミン、ラクトフェリン、ヘモグロビン、臭気物質結合タンパク質、トランスサイレチン；薬物および毒素、ＲＡＰ、カルシウム（Ｃａ２＋）、またはシトクロムｃへの前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。
【０００９】
一部の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、ビタミン結合タンパク質、担体タンパク質、リポタンパク質、免疫およびストレス関連タンパク質、ステロイドホルモン結合タンパク質、ホルモンおよび前駆体、ペプチド、酵素および酵素阻害剤、アルブミン、ラクトフェリン、ヘモグロビン、臭気物質結合タンパク質、トランスサイレチン；薬物および毒素、ＲＡＰ、カルシウム（Ｃａ２＋）、またはシトクロムｃへの前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。
【００１０】
一部の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、ビタミン結合タンパク質、リポタンパク質、免疫およびストレス関連タンパク質、ステロイドホルモン結合タンパク質、ホルモンおよび前駆体、ペプチド、酵素および酵素阻害剤、アルブミン、ラクトフェリン、ヘモグロビン、臭気物質結合タンパク質、トランスサイレチン；多塩基性薬物および毒素、ＲＡＰ、カルシウム（Ｃａ２＋）、またはシトクロムｃへの前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。
【００１１】
１つの実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、レチノール、レチナール、レチノール−ＲＢＰ複合体、レチノール−ＲＢＰ−ＴＴＲ複合体、光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）、レチノール−ＩＲＢＰ複合体、レチナール−ＩＲＢＰ複合体、トランスコバラミン−ビタミンＢ１２、トランスコバラミン−ビタミンＢ１２結合タンパク質、ビタミン−Ｄ−結合タンパク質、アポリポタンパク質Ｂ、アポリポタンパク質Ｅ、アポリポタンパク質Ｊ／クラステリン（ｃｌｕｓｔｅｒｉｎ）、アポリポタンパク質Ｈ；免疫グロブリン軽鎖、ＰＡＰ−１、β２−ミクログロブリン；性ホルモン結合タンパク質−エストロゲン、アンドロゲン結合タンパク質−アンドロゲン；副甲状腺ホルモン、インスリン、上皮増殖因子、プロラクチン、サイログロブリン；プラスミノゲンアクチベーターインヒビター−１（ＰＡＩ−１）、ウロキナーゼ−ＰＡＩ−１、ｔＰＡ−ＰＡＩ−１、プロ−ウロキナーゼ、リポタンパク質リパーゼ、プラスミノゲン、β−アミラーゼ、β１−ミクログロブリン、リゾチーム；アルブミン、ラクトフェリン、ヘモグロビン、臭気物質結合タンパク質、トランスサイレチン；アミノグリコシド、ポリミキシンＢ、アプロチニン、トリコサンチン；ゲンタマイシン；ＲＡＰ、Ｃａ２＋、またはシトクロムｃへの前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。
【００１２】
１つの実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、薬物および毒素への前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。１つの実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、多塩基性薬物および毒素への前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。別の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、カチオン性薬物および毒素への前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。別の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、カチオン性アミン薬物および毒素への前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。１つの実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、抗菌剤、抗精神病薬、抗うつ薬、抗不整脈薬、抗狭心症薬、食欲抑制薬、またはコレステロール低下剤への前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。
【００１３】
１つの実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、アミノグリコシドへの前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。別の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、アルベカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、パラマイシン、リボスタマイシン、リビドマイシン、アミカシン、ジベカシン、ブタカシン、トブラマイシン、ストレプトマイシン、ジヒドロストレプトマイシン、シソマイシン、ベルダマイシン、ネチルミシン、またはブチカシンへの前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。別の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、アルベカシン、ゲンタマイシンまたはカナマイシンへの前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。別の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、ゲンタマイシンへの前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。
【００１４】
別の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、抗マラリア薬、抗生物質、抗結核薬、抗真菌薬、ＣＮＳ薬、心臓血管薬、抗新生物薬、外皮用薬、抗炎症薬、免疫調節薬、経口避妊薬、ホルモン、デフェロキサミン、ナイアシン、ワルファリン、または交感神経様作用薬への前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。
【００１５】
別の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、クロロキン、キニン、アミノグリコシド、スパルソマイシン、クリオキノール、エタンブトール、ミコナゾール、フェノチアジン、クロルプロマジン、アミトリプチリン、リセルギド、ニフェジピン、アミオダロン、５−フルオロウラシル、タモキシフェン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、ミトタン、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ドキソルビシン、エトレチナート、カンタキサンチン、イソトレチノイン、コルチコステロイド、イブプロフェン、インドメタシン、フェニルブタゾン、チロロン（抗ウイルス性）アルファインターフェロン、経口避妊薬、クロミフェン、デフェロキサミン、ナイアシン、ワルファリン、ジピベフリン、フェニレフリン、またはエピネフリンへの前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。
【００１６】
別の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、ビタミン結合タンパク質への前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。別の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、レチノイド結合タンパク質への前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。さらなる実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、レチノール、ＲＢＰ、レチノール−ＲＢＰ複合体、レチノール−ＲＢＰ−ＴＴＲ複合体、ＩＲＢＰ、またはレチノール−ＩＲＢＰ複合体への前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。さらなる実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、レチノール、レチノール−ＲＢＰ複合体、またはレチノール−ＲＢＰ−ＴＴＲ複合体への前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。さらなる実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、ＩＲＢＰまたはレチノール−ＩＲＢＰ複合体への前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。さらなる実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、ＩＲＢＰ、レチノール−ＩＲＰＢ複合体、またはレチナール−ＩＲＢＰ複合体への前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの結合である。
【００１７】
１つの実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、ビタミン結合タンパク質、リポタンパク質、免疫およびストレス関連タンパク質、ステロイドホルモン結合タンパク質、ホルモンおよび前駆体、ペプチド、酵素および酵素阻害剤、アルブミン、ラクトフェリン、ヘモグロビン、臭気物質結合タンパク質、トランスサイレチン；薬物および毒素、ＲＡＰ、カルシウム（Ｃａ２＋）、またはシトクロムｃのトランスサイトーシスである。
【００１８】
１つの実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、ビタミン結合タンパク質、リポタンパク質、免疫およびストレス関連タンパク質、ステロイドホルモン結合タンパク質、ホルモンおよび前駆体、ペプチド、酵素および酵素阻害剤、アルブミン、ラクトフェリン、ヘモグロビン、臭気物質結合タンパク質、トランスサイレチン；多塩基性薬物および毒素、ＲＡＰ、カルシウム（Ｃａ２＋）、またはシトクロムｃのトランスサイトーシスである。
【００１９】
別の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、レチノール、レチノール−ＲＢＰ複合体、レチノール−ＲＢＰ−ＴＴＲ複合体、光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）、レチノール−ＩＲＢＰ複合体、トランスコバラミン−ビタミンＢ１２、トランスコバラミン−ビタミンＢ１２結合タンパク質、ビタミン−Ｄ−結合タンパク質、アポリポタンパク質Ｂ、アポリポタンパク質Ｅ、アポリポタンパク質Ｊ／クラステリン、アポリポタンパク質Ｈ；免疫グロブリン軽鎖、ＰＡＰ−１、β２−ミクログロブリン；性ホルモン結合タンパク質−エストロゲン、アンドロゲン結合タンパク質−アンドロゲン；副甲状腺ホルモン、インスリン、上皮増殖因子、プロラクチン、サイログロブリン；プラスミノゲンアクチベーターインヒビター−１（ＰＡＩ−１）、ウロキナーゼ−ＰＡＩ−１、ｔＰＡ−ＰＡＩ−１、プロ−ウロキナーゼ、リポタンパク質リパーゼ、プラスミノゲン、β−アミラーゼ、β１−ミクログロブリン、リゾチーム；アルブミン、ラクトフェリン、ヘモグロビン、臭気物質結合タンパク質、トランスサイレチン；アミノグリコシド、ポリミキシンＢ、アプロチニン、トリコサンチン；ゲンタマイシン；ＲＡＰ、Ｃａ２＋、またはシトクロムｃのトランスサイトーシスである。
【００２０】
１つの実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、薬物および毒素のトランスサイトーシスである。１つの実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、多塩基性薬物および毒素のトランスサイトーシスである。別の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、カチオン性薬物および毒素のトランスサイトーシスである。別の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、カチオン性アミン薬物および毒素のトランスサイトーシスである。１つの実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、抗菌剤、抗精神病薬、抗うつ薬、抗不整脈薬、抗狭心症薬、食欲抑制薬、またはコレステロール低下剤のトランスサイトーシスである。
【００２１】
１つの実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、アミノグリコシドのトランスサイトーシスである。別の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、アルベカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、パラマイシン、リボスタマイシン、リビドマイシン、アミカシン、ジベカシン、ブタカシン、トブラマイシン、ストレプトマイシン、ジヒドロストレプトマイシン、シソマイシン、ベルダマイシン、ネチルミシン、またはブチカシンのトランスサイトーシスである。別の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、アルベカシン、ゲンタマイシン、またはカナマイシンのトランスサイトーシスである。別の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、ゲンタマイシンのトランスサイトーシスである。
【００２２】
別の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、抗マラリア薬、抗生物質、抗結核薬、抗真菌薬、ＣＮＳ薬、心臓血管薬、抗新生物薬、外皮用薬、抗炎症薬、免疫調節薬、経口避妊薬、ホルモン、デフェロキサミン、ナイアシン、ワルファリン、または交感神経様作用薬のトランスサイトーシスである。別の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、抗生物質のトランスサイトーシスである。
【００２３】
別の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、クロロキン、キニン、アミノグリコシド、スパルソマイシン、クリオキノール、エタンブトール、ミコナゾール、フェノチアジン、クロルプロマジン、アミトリプチリン、リセルギド、ニフェジピン、アミオダロン、５−フルオロウラシル、タモキシフェン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、ミトタン、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ドキソルビシン、エトレチナート、カンタキサンチン、イソトレチノイン、コルチコステロイド、イブプロフェン、インドメタシン、フェニルブタゾン、チロロン（抗ウイルス性）アルファインターフェロン、経口避妊薬、クロミフェン、デフェロキサミン、ナイアシン、ワルファリン、ジピベフリン、フェニレフリン、またはエピネフリンのトランスサイトーシスである。
【００２４】
１つの実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、レチノール、レチノール−ＲＢＰ複合体、レチノール−ＲＢＰ−ＴＴＲ複合体、またはレチノール−ＩＲＢＰ複合体のトランスサイトーシスである。
【００２５】
１つの実施形態において、前記トランスサイトーシスは、エキソサイトーシスである。別の実施形態において、前記トランスサイトーシスは、エンドサイトーシスである。
【００２６】
別の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、少なくとも１つの網膜色素上皮細胞の上皮を横断する、レチノール、レチノール−ＲＢＰ複合体、レチノール−ＲＢＰ−ＴＴＲ複合体、またはレチノール−ＩＲＢＰ複合体の輸送である。
【００２７】
１つの実施形態において、前記作用因子は、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を増加させる。別の実施形態において、前記作用因子は、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を減少させる。
【００２８】
１つの実施形態において、前記作用因子は、網膜色素上皮細胞の基底膜上のＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに結合する。別の実施形態において、前記作用因子は、網膜色素上皮細胞の頂端膜上のＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに結合する。
【００２９】
１つの実施形態において、前記作用因子は、レチノール結合タンパク質に結合する。別の実施形態において、前記作用因子は、トランスサイレチンに結合する。別の実施形態において、前記作用因子は、光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）に結合する。
【００３０】
１つの実施形態において、前記作用因子は、網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの発現を調節する。他の実施形態において、前記作用因子は、網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの発現を減少させる。他の実施形態において、前記作用因子は、網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの発現を増加させる。
【００３１】
１つの実施形態において、前記作用因子は、抗体、ポリペプチド、核酸、ポリ核酸、ポリマー、受容体関連タンパク質（ＲＡＰ）（細胞内受容体の生合成および細胞内輸送を助けるように特別に設計されているタイプのシャペロン）またはそのフラグメント、低分子量有機化合物、ビタミン結合タンパク質、リポタンパク質、免疫およびストレス関連タンパク質、ステロイドホルモン結合タンパク質、ホルモンおよび前駆体、ペプチド、酵素および酵素阻害剤、アルブミン、ラクトフェリン、ヘモグロビン、臭気物質結合タンパク質、トランスサイレチン；多塩基性薬物および毒素、ＲＡＰ、カルシウム（Ｃａ２＋）、カルシウムスカベンジャー、還元剤およびシトクロムｃの中から選択される。１つの実施形態において、前記作用因子は、抗体、ポリペプチド、核酸、ポリ核酸、ポリマー、受容体関連タンパク質（ＲＡＰ）またはそのフラグメント、低分子量有機化合物、ビタミン結合タンパク質、リポタンパク質、免疫およびストレス関連タンパク質、ステロイドホルモン結合タンパク質、ホルモンおよび前駆体、ペプチド、酵素および酵素阻害剤、アルブミン、ラクトフェリン、ヘモグロビン、臭気物質結合タンパク質、トランスサイレチン；薬物および毒素、ＲＡＰ、カルシウム（Ｃａ２＋）、カルシウムスカベンジャー、還元剤およびシトクロムｃの中から選択される。別の実施形態において、前記作用因子は、抗体、ポリペプチド、核酸、ポリ核酸、ポリマー、受容体関連タンパク質（ＲＡＰ）またはそのフラグメント、低分子量有機化合物、レチノール、レチノール−ＲＢＰ複合体、レチノール−ＲＢＰ−ＴＴＲ複合体、光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）、レチノール−ＩＲＢＰ複合体、トランスコバラミン−ビタミンＢ１２、トランスコバラミン−ビタミンＢ１２結合タンパク質、ビタミン−Ｄ−結合タンパク質、アポリポタンパク質Ｂ、アポリポタンパク質Ｅ、アポリポタンパク質Ｊ／クラステリン、アポリポタンパク質Ｈ；免疫グロブリン軽鎖、ＰＡＰ−１、β２−ミクログロブリン；性ホルモン結合タンパク質−エストロゲン、アンドロゲン結合タンパク質−アンドロゲン；副甲状腺ホルモン、インスリン、上皮増殖因子、プロラクチン、サイログロブリン；プラスミノゲンアクチベーターインヒビター−１（ＰＡＩ−１）、ウロキナーゼ−ＰＡＩ−１、ｔＰＡ−ＰＡＩ−１、プロ−ウロキナーゼ、リポタンパク質リパーゼ、プラスミノゲン、β−アミラーゼ、β１−ミクログロブリン、リゾチーム；アルブミン、ラクトフェリン、ヘモグロビン、臭気物質結合タンパク質、トランスサイレチン；アミノグリコシド、ポリミキシンＢ、アプロチニン、トリコサンチン、ゲンタマイシン；ＲＡＰ、ＲＡＰフラグメント、Ｃａ２＋、カルシウムスカベンジャー、還元剤またはシトクロムｃである。
【００３２】
１つの実施形態において、前記作用因子は、抗体である。別の実施形態において、前記作用因子は、ポリペプチドである。別の実施形態において、前記作用因子は、核酸である。別の実施形態において、前記作用因子は、ポリ核酸である。別の実施形態において、前記作用因子は、ポリマーである。別の実施形態において、前記作用因子は、アミノグリコシドまたはその誘導体である。別の実施形態において、前記作用因子は、ＲＡＰまたはそのフラグメントである。さらなる実施形態において、前記作用因子は、低分子量有機化合物である。
【００３３】
別の実施形態において、前記作用因子は、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーのドメインである。別の実施形態において、前記作用因子は、メガリンのドメインである。別の実施形態において、前記作用因子は、レチノイド結合タンパク質のフラグメントである。別の実施形態において、前記作用因子は、メガリンのフラグメントである。
【００３４】
１つの実施形態において、前記作用因子の有効量は、哺乳動物に全身投与される。別の実施形態において、前記作用因子の有効量は、哺乳動物に経口投与される。別の実施形態において、前記作用因子の有効量は、哺乳動物に静脈内投与される。さらなる実施形態において、前記作用因子の有効量は、哺乳動物に眼科的に投与される。さらなる実施形態において、前記作用因子の有効量は、イオン導入法によって投与される。別の実施形態において、前記作用因子の有効量は、哺乳動物に注射によって投与される。
【００３５】
１つの実施形態において、前記哺乳動物は、ヒトである。
【００３６】
別の実施形態において、哺乳動物の眼内の網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節する作用因子の有効量を哺乳動物に投与することを含む、眼における眼科的状態を治療するための方法は、前記作用因子の有効量の多回投与を含む。別の実施形態において、多回投与の期間は、少なくとも１週間である。別の実施形態において、多回投与の期間は、少なくとも１日である。さらなる実施形態において、前記化合物は、哺乳動物に毎日投与される。
【００３７】
１つの実施形態において、前記方法は、酸化窒素生産の誘導物質、抗炎症剤、生理的に許容される抗酸化物質、生理的に許容される無機質、負電荷を有するリン脂質、カロチノイド、スタチン、血管新生阻害剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、１３−シス−レチノイン酸、または式（Ａ）の構造を有する化合物：
【００３８】
【化１】
2009541357.tif 000002
（式中、
Ｘ１は、ＮＲ２、Ｏ、Ｓ、ＣＨＲ２から成る群より選択され、
Ｒ１は、（ＣＨＲ２）Ｘ−Ｌ１−Ｒ３であり、ここで、
ｘは、０、１、２または３であり、Ｌ１は、単結合または−Ｃ（Ｏ）−であり、
Ｒ２は、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、Ｆ、（Ｃ１〜Ｃ４）フルオロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミン、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４）フルオロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミン、および−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシから成る群より選択される部分であり、ならびに
Ｒ３は、Ｈであるか、（Ｃ２〜Ｃ７）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ７）アルキニル、アリール、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、（Ｃ５〜Ｃ７）シクロアルケニル、および複素環から成る群より選択される、独立して選択された１〜３個の置換基で随意に置換されている部分である）
から成る群より選択される少なくとも１つの追加の作用因子の投与をさらに含む。
【００３９】
１つの実施形態において、式（Ａ）の化合物は、両方のｘが０であり、Ｌ１が単結合であるとき、Ｒ３はＨでないという条件付きであるか、その活性代謝産物または医薬的に許容されるプロドラッグもしくは溶媒和物である。１つの実施形態において、前記追加の作用因子は、酸化窒素生産の誘導物質である。１つの実施形態において、前記酸化窒素生産の誘導物質は、シトルリン、オルニチン、ニトロソ化Ｌ−アルギニン、ニトロシル化Ｌ−アルギニン、ニトロソ化Ｎ−ヒドロキシ−Ｌ−アルギニン、ニトロシル化Ｎ−ヒドロキシ−Ｌ−アルギニン、ニトロソ化Ｌ−ホモアルギニンおよびニトロシル化Ｌ−ホモアルギニンの中から選択される。
【００４０】
１つの実施形態において、前記追加の作用因子は、抗炎症剤である。別の実施形態において、前記追加の作用因子は、非ステロイド系抗炎症薬、リポキシゲナーゼ阻害剤、プレドニゾン、デキサメタゾン、およびシクロオキシゲナーゼ阻害剤の中から選択される抗炎症剤である。
【００４１】
１つの実施形態において、前記追加の作用因子は、少なくとも１つの生理的に許容される抗酸化物質である。別の実施形態において、前記追加の作用因子は、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ベータ−カロチン、コエンザイムＱ、および４−ヒドロキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペラジン−Ｎ−オキシルの中から選択される生理的に許容される抗酸化物質である。
【００４２】
１つの実施形態において、前記追加の作用因子は、少なくとも１つの生理的に許容される無機質である。別の実施形態において、前記追加の作用因子は、亜鉛（ＩＩ）化合物、銅（ＩＩ）化合物、およびセレン（ＩＩ）化合物の中から選択される生理的に許容される無機質である。
【００４３】
１つの実施形態において、前記追加の作用因子は、負電荷を有するリン脂質である。別の実施形態において、前記負電荷を有するリン脂質は、ホスファチジルグリセロールである。
【００４４】
別の実施形態において、前記追加の作用因子は、カロチノイドである。別の実施形態において、前記追加の作用因子は、ルテインおよびゼアキサンチンの中から選択されるカロチンである。
【００４５】
別の実施形態において、前記追加の作用因子は、スタチンである。別の実施形態において、前記追加の作用因子は、ロバスタチン、ピチバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、セリバスタチン、メバスタチン、ベロスタチン、フルバスタチン、コンパクチン、ロバスタチン、ダルバスタチン、フルインドスタチン、アトルバスタチン、アトルバスタチンカルシウム、およびジヒドロコンパクチンの中から選択されるスタチンである。
【００４６】
１つの実施形態において、前記追加の作用因子は、血管新生阻害薬である。１つの実施形態において、前記追加の作用因子は、Ｒｈｕｆａｂ  Ｖ２、トリプトファニル−ｔＲＮＡシンセターゼ、抗ＶＥＧＦ  ＥＰＧ化アプタマー、スクアラミン、酢酸アネコルタブ、コンブレタスタチンＡ４プロドラッグ、Ｍａｃｕｇｅｎ（商標）、ミフェプリストン、サブテノン  トリアムシノロンアセトニド、硝子体内結晶質トリアムシノロンアセトニド、ＡＧ３３４０、フルオシノロンアセトニド、およびＶＥＧＦ−Ｔｒａｐの中から選択される血管新生阻害薬である。ベガプタニブナトリウム注射は、湿潤型ＡＭＤの治療用にＦＤＡによって認可されている抗ＶＥＧＦ阻害剤であり、商品名Ｍａｃｕｇｅｎ（商標）で販売されている。
【００４７】
別の実施形態において、前記追加の作用因子は、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤である。別の実施形態において、前記追加の作用因子は、メタロプロテイナーゼ、α２−マクログロブリン、テトラサイクリン、ヒドロキサメート、キレート剤、合成ＭＭＰフラグメント、スクシニルメルカプトプリン、ホスホンアミデートおよびヒドロキサム酸の組織阻害剤の中から選択されるマトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤である。
【００４８】
１つの実施形態において、前記追加の作用因子は、１３−シス−レチノイン酸である。
【００４９】
１つの実施形態において、前記追加の作用因子は、式（Ａ）の構造を有する：
【００５０】
【化２】
2009541357.tif 000003
（式中、
Ｘ１は、ＮＲ２、Ｏ、Ｓ、ＣＨＲ２の中から選択され、
Ｒ１は、（ＣＨＲ２）Ｘ−Ｌ１−Ｒ３であり、ここで、
ｘは、０、１、２または３であり、Ｌ１は、単結合または−Ｃ（Ｏ）−であり、
Ｒ２は、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、Ｆ、（Ｃ１〜Ｃ４）フルオロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミン、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４）フルオロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミン、および−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシの中から選択される部分であり、ならびに
Ｒ３は、Ｈであるか、（Ｃ２〜Ｃ７）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ７）アルキニル、アリール、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、（Ｃ５〜Ｃ７）シクロアルケニル、および複素環から成る群より選択される、独立して選択された１〜３個の置換基で随意に置換されている部分である）。
【００５１】
別の実施形態において、式（Ａ）の化合物は、両方のｘが０であり、Ｌ１が単結合であるとき、Ｒ３はＨでないという条件付きであるか、その活性代謝産物または医薬的に許容されるプロドラッグもしくは溶媒和物である。別の実施形態において、Ｘ１は、ＮＲ２であり、この場合のＲ２は、Ｈまたは（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルである。別の実施形態において、ｘは、０である。さらなる実施形態において、ｘは、１であり、Ｌ１は、−Ｃ（Ｏ）−である。別の実施形態において、Ｒ３は、随意に置換されているアリールである。さらに別の実施形態において、Ｒ３は、随意に置換されているヘテロアリールである。さらなる実施形態において、Ｘ１は、ＮＨであり、Ｒ３は、随意に置換されているアリールである。さらなる実施形態において、前記アリール基は、１つの置換基を有する。尚、さらなる実施形態において、前記置換基は、ハロゲン、ＯＨ、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、ＮＨ（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、Ｏ（Ｃ１〜Ｃ４）フルオロアルキル、およびＮ［（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル］２の中から選択される部分である。さらなる実施形態において、前記置換基は、ＯＨである。別の実施形態において、前記アリールは、フェニルである。
【００５２】
１つの実施形態において、前記追加の作用因子は、
【００５３】
【化３】
2009541357.tif 000004
あるいはその活性代謝産物または医薬的に許容されるプロドラッグもしくは溶媒和物である。
【００５４】
別の実施形態において、前記追加の作用因子は、４−ヒドロキシフェニルレチナミド、４−メトキシフェニルレチナミド、あるいはそれらの代謝産物または医薬的に許容されるプロドラッグもしくは溶媒和物である。
【００５５】
さらなる実施形態において、２つ以上の前記作用因子が、一緒に投与される。さらなる実施形態において、２つ以上の前記作用因子が、別々に投与される。一部の実施形態において、２つ以上の前記作用因子が、同じ医薬組成物で投与される。一部の実施形態において、２つ以上の前記作用因子が、別々の医薬組成物で投与される。一部の実施形態において、本明細書に記載する方法は、前記追加の作用因子の前投与を含む。一部の実施形態において、本明細書に記載する方法は、前記追加の作用因子の後投与を含む。一部の実施形態において、本明細書に記載する方法は、前記追加の作用因子の前投与と後投与の両方を含む。
【００５６】
別の実施形態において、前記方法は、体外レオフェレーシス、限定網膜移動術（ｌｉｍｉｔｅｄ  ｒｅｔｉｎａｌ  ｔｒａｎｓｌｏｃａｔｉｏｎ）、光ダイナミック療法、ドルーゼンレーザー処置、黄斑円孔手術、黄斑移動手術、ファイ運動（ｐｈｉ  ｍｏｔｉｏｎ）、プロトンビーム療法、網膜剥離および硝子体手術、強膜折込み術、黄斑下手術、経瞳孔温熱療法、光化学系Ｉ療法、微弱電流刺激、ＲＮＡ干渉、眼科薬、例えばヨウ化ホスホリンまたはエコチオフェートまたは炭酸脱水酵素阻害剤、の投与、マイクロチップ移植、幹細胞療法、遺伝子置換療法、リボザイム遺伝子療法、光受容体／網膜細胞移植、レーザー光凝固術、ならびに鍼術の中から選択される療法を哺乳動物に施すことをさらに含む。
【００５７】
１つの実施形態において、前記方法は、哺乳動物の眼におけるドルーゼンの形成のモニタリングをさらに含む。さらなる実施形態において、前記方法は、自己蛍光による哺乳動物の眼におけるリポフスシンのレベルの測定をさらに含む。さらなる実施形態において、前記方法は、哺乳動物の眼における視力の測定をさらに含む。別の実施形態において、前記方法は、哺乳動物の眼に対する視野検査の実施を含む。１つの実施形態において、前記視野検査は、視野試験である。
【００５８】
別の実施形態において、前記方法は、哺乳動物の眼におけるＮ−レチニリデン−ホスファチジルエタノールアミン、ジヒドロ−Ｎ−レチニリデン−Ｎ−レチニル−ホスファチジルエタノールアミン、Ｎ−レチニリデン−Ｎ−レチニル−ホスファチジルエタノールアミン、ジヒドロ−Ｎ−レチニリデン−Ｎ−レチニル−エタノールアミン、および／またはＮ−レチニリデン−ホスファチジルエタノールアミンの自発蛍光の測定をさらに含む。
【００５９】
１つの実施形態において、前記眼科的状態は、黄斑変性である。別の実施形態において、前記黄斑変性は、若年性黄斑変性である。別の実施形態において、前記若年性黄斑変性は、シュタルガルト病である。別の実施形態において、前記黄斑変性は、乾燥型加齢性黄斑変性である。さらに別の実施形態において、前記黄斑変性は、錐体−杆体ジストロフィーである。
【００６０】
１つの実施形態において、前記眼科的状態は、薬物関連または薬物誘発性網膜症である。
【００６１】
１つの実施形態において、前記ヒトは、シュタルガルト病の突然変異体ＡＢＣＡ４対立遺伝子の保有者であるか、突然変異体ＥＬＯＶ４遺伝子を有する。
【００６２】
別の実施形態において、前記方法は、その哺乳動物が、突然変異体ＡＢＣＡ４対立遺伝子の保有者であるかどうか、またはシュタルガルト病の突然変異体ＥＬＯＶ４対立遺伝子を有するかどうかの判定を含む。
【００６３】
１つの実施形態において、前記作用因子の投与は、その哺乳動物の眼を光誘発性損傷から保護する。
【００６４】
別の実施形態において、前記眼科的状態は、地図状萎縮および／または光受容体変性の拡大である。
【００６５】
別の実施形態において、本明細書に記載する方法は、網膜変性の追加の治療を含む。
【００６６】
別の実施形態において、前記ヒトは、シュタルガルト病、劣性網膜色素変性症、劣性錐体−杆体ジストロフィー、乾燥型加齢性黄斑変性、滲出性加齢性黄斑変性、錐体−杆体ジストロフィー、網膜色素変性症、リポフスチンに基づく網膜変性、光受容体変性、および地図状萎縮の中から選択される眼科的状態または素質を有する。
【００６７】
１つの実施形態において、本明細書に記載する方法は、哺乳動物の読書速度および／または読書視力の測定をさらに含む。別の実施形態において、本明細書に記載する方法は、哺乳動物の眼の暗点の数および／またはサイズの測定をさらに含む。さらに別の実施形態において、本明細書に記載する方法は、哺乳動物の眼における地図状萎縮病変のサイズおよび／または数の測定をさらに含む。
【００６８】
１つの実施形態において、前記眼内の網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、網膜色素上皮からのリポフスチンの除去である。別の実施形態において、メガリンの活性は、網膜色素上皮からのリポフスチンの除去である。さらなる実施形態において、前記作用因子は、網膜色素上皮からのリポフスチンの除去を増加させる。
【００６９】
別の実施形態において、哺乳動物の眼内の網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節する作用因子の有効量と医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物を、本明細書に記載する。別の実施形態において、哺乳動物の眼内の網膜色素上皮細胞におけるメガリンの活性を調節する作用因子の有効量と医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物を、本明細書に記載する。さらなる実施形態において、前記医薬組成物は、眼科的投与に適切である医薬的に許容される担体を含む。
【００７０】
本明細書に記載する方法および組成物の他の目的、特徴および利点は、以下の詳細な説明から明らかになるだろう。しかし、この詳細な説明および特定の実施例は、特定の実施形態を示しているが、単に説明として与えられていると解釈すべきである。この詳細な説明から、当業者には、本発明の精神および範囲内の様々な変更および変形が明らかになるからである。
【００７１】
特許、特許出願および出版物をはじめとする、本明細書において引用するすべての参考文献は、それら全体が本明細書に参照として取り入れられている。
【図面の簡単な説明】
【００７２】
【図１】ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーの代表メンバーを図示する。
【図２】ヒトおよびラット眼組織におけるＬＤＬ受容体、メガリン、の検出を図示する。（Ａ）精製されたメガリン（ラット腎臓からのもの）に対して産生させた抗体を使用して、ラットおよびヒト組織から調製した抽出物中のメガリン−免疫反応性タンパク質を検出した。ラット腎臓から調製したタンパク質抽出物をこの研究のための陽性対照として使用した。免疫ブロット分析は、ラット腎臓における適切な分子サイズのバンド（Ｒａｔ  Ｋ、６μｇ、レーン１）、ならびにラット網膜（Ｒｅｔ、６０μｇ、レーン２）、ラットＲＰＥ（４６μｇ、レーン３）およびヒトＲＰＥ（２０μｇ、レーン４）における同一分子サイズの対応するバンドを示している。二量体（Ｍｒ  〜６７０ｋＤａ）と単量体（Ｍｒ  〜３３５ｋＤａ）の両方で存在するサイログロブリンをサイズ標準物質として使用した。（Ｂ）ＲＴ−ＰＣＲ分析によるラットＲＰＥおよび網膜におけるメガリンの相対発現の判定。ラットＲＰＥおよび網膜の２つの独立した標本を分析して、組織汚染の可能性を未然に回避した。それぞれの標本の中で、４つのサンプルを分析した（１サンプルにつき１〜２μｇの全ＲＮＡを使用した）。そのデータは、ＲＰＥにおけるメガリンの発現が、網膜におけるものより〜１５倍高いことを示している。
【図３】Ｎ−グリコシダーゼＦ（ＰＮＧａｓｅ  Ｆ）による処理に基づく眼メガリンの分子サイズの減少を図示する。メガリンが重度にグリコシル化されることは公知である。ＰＮＧａｓｅ  Ｆでのメガリンの治療は、会合したグリカンがタンパク質から除去されるので、そのタンパク質のサイズを減少させることが証明された。ラット眼杯組織のサンプルをＰＮＧａｓｅ  Ｆで処理した（パネルＡにおいて「＋」により示すもの）。対照サンプルは、未処理で放置した（パネルＡにおいて「−」により示すもの）。それらのサンプルを抗メガリンＩｇＧでプローブした。ラット腎臓組織を対照として使用した。そのデータは、ＰＮＧａｓｅ  Ｆ処理後のメガリンの分子サイズの減少を示している。処理したサンプルと未処理のサンプルの両方からのバンドを制限タンパク質分解に付し、その後、ペプチド配列決定を行った。これら２つのサンプルのペプチドプロフィールは、同一であった（パネルＢ）。これらのペプチドの一方についてのＭＳ／ＭＳ分析は、メガリンに特有の配列を示した（パネルＣ）。
【図４】ラットＲＰＥにおけるメガリン−免疫反応性タンパク質のペプチド配列決定を図示する。図３において同定されたメガリン免疫反応性タンパク質をアクリルアミドゲルから切り出し、トリプシンでの処理による制限タンパク質分解に付した。結果として得られたペプチドを液体クロマトグラフィーによって分離し、エレクトロスプレー質量分析計を用いて衝突誘起開裂によって分析する。配列決定されたペプチドにより、そのタンパク質は、メガリンとしても知られている低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質２と同定された（アクセッション：ＮＨ  ０３０８２７．１、ＧＩ：１３５６２１１８）。
【図５】メガリンの細胞内局在化を判定するためにならびに受容体遮断実験においてホロ−レチノイド結合タンパク質の取り込みにおけるメガリンおよび他のリポタンパク質受容体の役割を決定するために使用したヒトＲＰＥ細胞培養システムを図示する。ヒトＲＰＥ細胞を培養するために使用した装置の概略図をパネルＡに示す。ＲＰＥ細胞を、円筒形容器の底に位置する透過性のラミニン含有膜に接種する。この容器の一番上の開口部により、頂端部培地を通してそのＲＰＥ細胞単層の上面に接触することができる。このユニットを、基底部培地を通してそのＲＰＥの底面に接触できる、より大きな円筒形容器の中に配置する。電子顕微鏡による分析は、この手法で培養したＲＰＥ細胞が、頂端チャンバへの頂端プロセスに固有の偏光を明示することを示す（パネルＢ）。
【図６】ヒトＲＰＥにおけるメガリンの細胞内局在化を図示する。ヒトＲＰＥの培養物におけるメガリン免疫反応性の正面共焦点画像を示す。メガリン免疫反応性は、緑色蛍光として現われる。これらのパネルは、頂端ＲＰＥ細胞表面（上方、左）で開始し、基底面（下方、右）で終わる、連続した１μｍ切片を示すものである。この染色パターンは、メガリンの頂端−側方局在化を示している。Ｚ軸分布の再構成により、支配的な頂端−側方の局在化が確認される（一番下のパネル）。基底面で観察されるメガリンは殆どない。
【図７】ヒトＲＰＥにおけるＲＢＰ−レチノールのメガリン媒介取り込みを図示する。ＲＰＥ細胞は、基本的に血液循環からＲＢＰ−レチノールを取り込む。加えて、ＲＰＥ細胞が、ＲＢＰを合成し、それをその細胞の頂極を越えて分泌することも公知である。抗体遮断実験を行って、メガリンがこれらのプロセスにおいて一定の役割を果たすかどうかを判定した。メガリン特異的抗体を、ＲＰＥ細胞培養物の頂端チャンバに添加した。対照サンプルには、当量濃度の免疫前ウサギＩｇＧを施した。この抗体処理期間（４℃で２時間）の後、ＲＢＰ−レチノール（１０μＭ）を、頂端部培地（パネルＡおよびＢ）または基底部培地（パネルＣおよびＤ）のいずれかに添加した。ＲＢＰ−レチノール取り込み度を、細胞内全トランスレチニルエステル（ａｔＲＥ）および全トランスレチノール（ａｔＲＯＬ）のＨＰＬＣ定量によって評価した。溶離ピークのＵＶ−ｖｉｓ分光分析により、ａｔＲＥおよびａｔＲＯＬの同定を確認した（挿入図、パネルＡ）。頂端部培地からのＲＢＰ−レチノールの取り込みは、基底部からの取り込みより〜３．５倍、高かった（パネルＥの黒棒と赤棒を比較すること）。メガリン特異的抗体でのＲＰＥ細胞の前処理は、頂端（パネルＢ）と基底（パネルＤ）、両方のＲＢＰ−レチノール取り込みを阻害した（それぞれ、４０％および６０％、パネルＥ）。これらのデータにより、メガリンは、ＲＰＥ細胞におけるＲＢＰ−レチノールの取り込みに関係付けられる。
【図８】低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質（ＬＲＰ）およびメガリンによる光受容体間レチノール結合タンパク質（ＩＲＢＰ）の取り込みを図示する。ＬＲＰの重鎖（Ｍｒ  〜５８５ｋＤａ）に特異的な抗体を使用して、ヒトＲＰＥにおける発現についてプローブした。免疫細胞化学研究は、主としてＲＰＥ細胞の頂端面でのＬＲＰ発現を示した（パネルＡ）。免疫ブロット分析は、ＬＲＰおよびメガリン抗体が互いに交差反応しないことを明示した（パネルＢ）。メガリンおよびＬＲＰの頂端局在化（それぞれ、図６および８を参照のこと）が、これらのタンパク質がＩＲＢＰ−レチノールの取り込みにおいて一定の役割を果たし得るかどうかを判定する原動力となった。ＲＰＥ細胞培養物を、２時間、４℃で、免疫前ウサギＩｇＧ（パネルＣ）、メガリンＩｇＧ（パネルＤ）、またはＬＲＰ  ＩｇＧ（パネルＥ）のいずれかで前処理し、その後、ＩＲＢＰ−レチノール（１０μＭ）を頂端部に適用した。ＩＲＢＰ−レチノール取り込み度を、細胞内全トランスレチニルエステル（ａｔＲＥ）のＨＰＬＣ定量によって評価し、これを、ｕｖ−ｖｉｓ分光分析によって確認した（挿入図、パネルＣ）。そのデータは、メガリンとＬＲＰ  ＩｇＧの両方によるＩＲＢＰ−レチノールの有意な阻害を示している（それぞれ、３０％および４０％阻害、パネルＦ）。
【図９】ヒトＲＰＥにおける受容体関連タンパク質（ＲＡＰ）の細胞内局在化を図示する。ＲＡＰは、メガリンをはじめとするＬＤＬ受容体ファミリーの幾つかのメンバーについての分子シャペロンとして機能する、〜３９ｋＤａ小胞体（ＥＲ）定住タンパク質である。ヒトＲＡＰに対して産生させた抗体を使用して、ヒトＲＰＥの培養物における他のＬＤＬ受容体の発現についてプローブした。頂端ＲＰＥ細胞表面（上方、左）から基底面（下方、右）への連続切片は、ＲＰＥの全表面でのＲＡＰ免疫反応性（緑色蛍光）を示す。ＲＰＥ細胞単層の断面は、ＲＰＥ細胞質膜上での強いＲＡＰ−免疫反応性を示す。ＲＡＰは、ＥＲ内に局在しており（ＲＰＥ細胞内での免疫反応性を意味する）、従って、基底ＲＡＰ−免疫反応性の発見は、その基底ＲＰＥ表面のＲＡＰ関連ＬＤＬ受容体の存在を示す。
【図１０】ＲＰＥにおける新規低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質の同定およびペプチド配列決定を図示する。ヒトＲＡＰに対して産生させた抗体（これは、メガリンとの交差反応性も明示する）を使用して、ラットＲＰＥにおける追加のＬＤＬ受容体の発現についてプローブした。免疫ブロットは、ラットＲＰＥにおいて２つのタンパク質を示した（パネルＡ、レーン２）。分子量が高いほうのタンパク質が、メガリンと一致する（ラット腎臓におけるメガリン、レーン１、と比較すること）。分子量が低いほうのタンパク質（パネルＡにおける赤色アスタリスク）をペプチド配列決定のために使って、その素性を得た。フルスキャン質量分析法によってペプチド（ＭＨ＋＝１６５０）を検出し、それを質量分析装置で単離してフラグメント化した（パネルＢ）。このペプチドから生じたＹ−およびＢ−イオン系列は、ＬＤＬファミリーメンバー全体にわたって高度に保存される配列を生成した（ＦＷＴＤ、パネルＣ）。ＹＷＴＤおよびＦＷＴＤモチーフは、ＬＤＬ受容体において多数の縦列反復配列として見出され、ならびにこれらのタンパク質のベータ−プロペラ構造を構成すると予測された。メガリンの位相図を一例として提供する（パネルＤ）。これらの結果は、タンパク質データベースに対するダイジェストからの全ＭＳ／ＭＳスペクトルのスクリーニングにより、その切り出されたタンパク質が、３７０ｋＤａの質量を有する低密度リポタンパク質受容体関連タンパク質２アイソフォーム（アクセッション：ＸＭ  １３０３０８．３）と同定されたことを示している。ヒトＲＡＰに対して産生させた抗体を使用する免疫細胞化学分析を用いて、ヒトＲＰＥにおけるメガリンアイソフォームの細胞内局在化を判定した。そのデータは、主として基底外側局在を示す（パネルＥにおいて矢印によって示す）。パネルＥにおける逆三角形は、ＲＰＥの頂極でのメガリン発現を示す。
【図１１】ＲＡＰによるヒトＲＰＥにおけるＲＢＰ−レチノールの基底取り込みの阻害を図示する。循環からのＲＢＰ−レチノールの取り込みは、ＲＰＥの基底面で発生する。基底ＲＰＥ細胞質膜上のＲＡＰ関連ＬＤＬ受容体を示した細胞内局在化研究が、これらの受容体がＲＢＰ−レチノールの基底取り込みにおいて一定の役割を果たし得るかどうかを判定する原動力となった。ＲＡＰは、これらの受容体上に存在するリガンド結合ドメインに結合することにより、ＬＤＬ受容体についてのシャペロンとして作用する。従って、ＲＡＰは、リガンド結合アンタゴニストとしても利用することができる。ＲＡＰをＲＰＥ細胞培養物の基底チャンバに添加した。対照サンプルには、当量濃度の免疫前ウサギＩｇＧを施した。この抗体処理期間（４℃で２時間）の後、ＲＢＰ−レチノール（１０μＭ）をその基底部培地に添加した。ＲＢＰ−レチノール取り込み度を、細胞内全トランスレチニルエステル（ａｔＲＥ）および（ａｔＲＯＬ）のＨＰＬＣ定量によって評価した。溶離ピークのＵＶ−ｖｉｓ分光分析により、ａｔＲＥおよびａｔＲＯＬの素性を確認した（挿入図、パネルＡ）。免疫前ＩｇＧで処理したＲＰＥ細胞は、活発な取り込みおよびａｔＲＯＬのエステル化を示した（パネルＡ）。対照的に、ＲＡＰで前処理したＲＰＥ細胞（パネルＢ）は、ＲＢＰ−レチノール取り込みの有意な減少を明示した。これらのデータの定量は、ＲＡＰによるＲＢＰ−レチノール取り込みの４７％阻害を示す（パネルＣ）。
【図１２】異なる血清ＲＢＰ−レチノールレベルを有するマウスからの眼杯におけるメガリンタンパク質レベルを図示する。ＬＤＬ受容体は、ＲＰＥにＲＢＰ−レチノールを取り込むように機能する。ＲＢＰノックアウトマウスおよびＭＰＲ治療マウスは、より低い血清ＲＢＰ−レチノールレベルを有する。これらのマウスからの眼杯におけるメガリンの発現を免疫ブロットによって試験した。マウス眼杯の膜画分を、野生型マウス（ＷＴ）、ＲＢＰノックアウトマウス（ＲＢＰ−／−）、ＡＢＣＲヌル（ａｂｃｒ−／−）およびＭＰＲ治療マウス（ＭＰＲ）から作製した。２つの免疫反応性バンドが検出された（図中に白矢印によって示す）。これらのデータは、同年齢の野生型およびａｂｃｒノックアウトマウスと比較して、ＲＢＰノックアウトマウスおよびＭＰＲ治療マウスにおける両方のタンパク質の発現が減少していることを示す。
【図１３】ヒトＲＰＥへのＲＢＰ−およびＩＲＢＰ−レチノールの取り込みを図示する。ホロＲＢＰおよびＩＢＰを蛍光プローブ（Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４８８）で共有結合標識した。それらの標識タンパク質（ＲＢＰ＊およびＩＲＢＰ＊）を、ＲＰＥ細胞培養システムの基底区画（ＲＢＰ＊）または頂端区画（ＩＲＢＰ＊）のいずれかに添加した。３７℃で１時間のインキュベーション後、培地を除去し、細胞を入念に洗浄し、組織サンプルを蛍光顕微鏡によって分析した。それらのデータは、ＲＰＥ細胞へのＲＢＰ＊とＩＲＢＰ＊の両方の著しい取り込みを示し、これは、エンドサイトーシスメカニズムの存在を示す。
【図１４】ＲＡＰが、ＲＢＰ−レチノールの基底取り込みおよびＩＲＢＰ−レチノールの頂端取り込みを阻害することを図示する。ＲＰＥ細胞によるＩＲＢＰ＊およびＲＢＰ＊の取り込みを、ＬＤＬ受容体アンタゴニスト、ＲＡＰ、での処理前（それぞれ、パネルＡおよびＢ）および後（それぞれ、パネルＤおよびＥ）にモニターした。ＲＡＰ処理は、ＲＢＰ＊の基底取り込みおよびＩＲＢＰ＊の頂端取り込みを完全に抑制した。これらのデータは、この取り込みプロセスがＬＤＬ受容体によって媒介されることを示す。レチノールがＲＰＥ細胞へも取り込まれることを保障するために、それらの細胞を洗浄し、回収し、ＨＰＬＣによってレチノイド含有量について分析した。ＲＰＥ細胞へのレチノールの取り込みに起因して急速なエステル化が生じ、その結果、レチニルエステルが形成される。レチニルエステルの定量は、ＲＰＥ細胞が実はレチノールを内在化し、それをレチニルエステルへとエステル化することを示した（パネルＣ）。ＲＡＰ前処理は、レチニルエステル含有量によって測定して、レチノール取り込みの〜５０％減少を生じさせた（パネルＦ）。
【図１５】ＩＲＢＰ−レチノールからＣＲＢＰへのレチノールの転移は、ＲＢＰ−レチノールからより大きな速度で進行することを図示する。ＲＢＰ−レチノールと比較して、ＩＲＢＰ−レチノールからのレチノール取り込みのこの高速度（図１４、パネルＣ参照）は、ＩＲＢＰ−レチノールから細胞内レチノール受容体、細胞レチノール結合タンパク質（ＣＲＢＰ）、へのレチノール転移が、より大きな速度で進行し得ることを示唆していた。この可能性に取り組むために、本発明者らは、ＩＲＢＰ−レチノールまたはＲＢＰ−レチノールを当モル濃度のＣＲＢＰ（１０μＭ）と共にインキュベートし、参照スペクトルとして信頼できるＣＲＢＰ−レチノールを使用してスペクトルシフトをモニターした。ＣＲＢＰ−レチノールの励起スペクトル（パネルＡおよびＢにおける破線）は、ＩＲＢＰ−レチノール（パネルＡにおける赤色トレース）またはＲＢＰ−レチノール（パネルＢにおける緑色トレース）のものとは異なる。３７℃で１分のインキュベーション後、ＩＲＢＰ−レチノールの励起スペクトルの明白なシフトがあり、これは、ＩＲＢＰからＣＲＢＰへのレチノールの転移を示す。対照的に、ＲＢＰ−レチノールの励起スペクトルでは、ＣＲＢＰとの２時間のインキュベーションの後でさえ、シフトは観察されなかった。
【図１６】ＲＢＰ−レチノールおよびＩＲＢＰ−レチノールの取り込みについての仮説モデルを図示する。基底ＲＰＥからのＲＢＰ−レチノールの取り込み、およびＣＲＢＰとのその後の会合には、リソソーム経路によるＲＢＰタンパク質の分解が必要である。対照的に、ＩＲＢＰレチノールからのレチノールのＣＲＢＰへの会合は、レチノールがＩＲＢＰから直接ＣＲＢＰに転移されるので、タンパク質分解前に進行し得る。
【発明を実施するための形態】
【００７３】
発明の詳細な説明
光覚弁は、脊椎動物視野の２つの基本プロセス（光受容体細胞内での光シグナルの化学変化への変換および網膜色素上皮細胞（ＲＰＥ）が関与する変性プロセス）によって維持されている。視覚色素の発色団（１１−シスレチナールから全トランスレチナールへ）の異性体化は、総称して光伝達と呼ばれる１セットの反応を誘発する。光感受性を回復するには、結果として生じた全トランス−レチナールが、オプシンアポタンパク質から解離し、１１−シス−レチナールへと異性体化しなければならない。その光分解産物、全トランスレチナール、は、先ず、光受容体において全トランスレチノールへと還元され、その後、視覚サイクルと呼ばれる酵素的プロセスでＲＰＥにおいてもとの１１−シスレチナールに転化される（Ｒａｎｄｏ，Ｒ．Ｒ．Ｔｈｅ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｖｉｓｕａｌ  Ｃｙｃｌｅ．Ｃｈｅｍ．Ｒｅｖ．１０１，１８８１−１８９６，２００１）。光受容体は、光受容体間マトリックス（ＩＰＭ）と呼ばれる特殊細胞外マトリックスを含有する網膜下空間によって、ＲＰＥの頂端面から隔てられている。ＩＰＭは、付着、食作用、外節安定性、栄養素交換、発達、および視覚サイクルにおけるビタミンＡ輸送をはじめとする、光受容体とＲＰＥの間の重要な相互作用を媒介する。
【００７４】
ビタミンＡは、血液で循環し、全トランスレチノールの形態で眼に入る。この形態は、全トランスレチノールを全トランスレチニルエステルに酵素的に転化させる網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞の基底膜によって循環から取り込まれる。ＲＰＥは、全トランスレチノールエステルの１１−シスレチナールへの転化に必要な酵素的機構を含有する。後者のレチノイドは、ＲＰＥから網膜内の光受容体外節（ＰＯＳ）に輸送され、そこでオプシンと会合してロドプシンを形成する。
【００７５】
ＲＰＥと光受容体の間で発生する重要な相互作用は、視覚サイクルにおけるレチノイドの交換である。光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）、光受容体分泌糖タンパク質、は、ＩＰＭ内でレチノイドを可溶化することにより、全トランスレチノールの送達をＲＰＥにターゲッティングすることにより、ＲＰＥからの１１−シスレチナールの放出を促進することにより、およびその送達を外節にターゲッティングすることにより、視覚サイクルに関与する。ＩＲＢＰは、約１４０ｋＤａの分子量の糖タンパク質である。そのアミノ酸配列およびｃＤＮＡは公知である。ＲＰＥとＩＰＭの間のレチノイドの輸送は、受容体媒介トランスサイトーシスによって媒介される。ＩＲＢＰおよび／またはＩＲＰＢ−レチノール複合体および／またはＩＲＢＰ−レチナール複合体は、ＲＰＥ細胞の頂端膜上の受容体タンパク質、例えばＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーなど、に結合する。一部の実施形態において、ＩＲＢＰおよび／またはＩＲＰＢ−レチノール複合体および／またはＩＲＢＰ−レチナール複合体に結合する前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、例えば、メガリンまたはメガリン関連タンパク質である。
【００７６】
ＲＰＥは、網膜血液関門の一部を構成し、およびまた、光受容体細胞の機能を支持する。ＲＰＥ細胞層は、栄養素および排出物輸送、ならびにＲＰＥ細胞の（酸性）リソソーム器官内での脱離ＰＯＳに対する食作用およびその食作用を受けたＰＯＳの変性／プロセッシングなどの機能を果たす光受容体の支持体としての役割を果たす。しかし、このプロセッシングは、網膜の酸化促進環境によって乱されることとなり、ならびにリポフスチン（過酸化脂質とタンパク質残留物の複合ポリマー）のリソソーム内形成および蓄積の原因となる。ＲＰＥにおける酸化的事象は、加齢性黄斑変性（ＡＭＤ）などの疾病状態に関連付けられている。
【００７７】
ＡＭＤの発症と、ＲＰＥ内および周囲での複合および毒性生化学物質（毒素）ならびにＲＰＥ内のリポフスシンの蓄積との相関関係は立証されている。眼内でのこれらの網膜毒性化合物の蓄積は、ＡＭＤの病因の中で最も重要な公知危険因子である。少なくとも一部の形態の黄斑変性において、ＲＰＥにおけるリポフスシンの蓄積は、杆体細胞の使用済み外節の食作用に、一部、起因する。網膜毒性化合物は、杆体光受容体外節の円板内に形成される。その円板内の網膜毒性化合物がＲＰＥにもたらされ、そこでそれらはＰＯＳのさらなる食作用を損なわせ、ＲＰＥのアポトーシスを引き起こす。昼間の視野に必須の錐体細胞を含めて、光受容体細胞は、ＲＰＥ支持体を喪失し、死滅する。
【００７８】
杆体外節の円板内で形成される網膜毒性化合物の１つは、Ｎ−レチニリデン−Ｎ−レチニルエタノールアミン（Ａ２Ｅ）であり、これは、網膜毒性リポフスシンの重要な成分である。通常、Ａ２Ｅは、食作用によってＲＰＥ機能を損なわないような少量でだが、前記円板内で形成される。しかし、一定の病的状態では、外節が食作用を受けたときにＲＰＥの「作用を損なわせる」ほど多くのＡ２Ｅが前記円板内に蓄積し得る。Ａ２Ｅがリソソーム内ｐＨを上昇させることによりＲＰＥ細胞のリソソーム分解機能を損なわせることはインビトロで証明されている。
【００７９】
Ａ２Ｅは、全トランス−レチナール（杆体細胞視覚サイクルの中間体の１つ）から生産される。正常な視覚サイクル中に、全トランス−レチナールは、杆体外節円板内で生産される。全トランス−レチナールは、ホスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）（前記円板の膜の一成分）と反応することができ、Ｎ−レチニリデン−ＰＥを形成する。その後、Ｒｉｍタンパク質（ＲｍＰ）（杆体外節円板の膜内に位置するＡＴＰ結合カセット輸送体）が、全トランス−レチナールおよび／またはＮ−レチニリデン−ＰＥをその円板から杆体外節細胞質へと輸送する。そこでの環境は、Ｎ−レチニリデン−ＰＥの加水分解に好適である。全トランス−レチナールは、その杆体細胞質において全トランス−レチノールへと還元される。その後、その全トランス−レチノールは、杆体外節細胞質膜を横断して細胞外空間へと進み、ＲＰＥの細胞によって取り込まれる。全トランス−レチノールは、一連の反応によって１１−シス−レチナールに転化され、これが、光受容体に戻り、視覚サイクルにおいて継続される。
【００８０】
ＲｍＰの欠失は、前記円板からの全トランス−レチナールの除去を妨げることにより、視覚サイクルを破壊することがある。シュタルガルト病と呼ばれる劣性形の黄斑変性では、ＲｍＰをコードする遺伝子（ａｂｃｒ）が突然変異を受け、その輸送体が機能しない。結果として、全トランス−レチナールおよび／またはＮ−レチニリデン−ＰＥは、前記円板内に捕捉された状態となる。その後、そのＮ−レチニリデン−ＰＥは、別の全トランス−レチナール分子と反応してＡ２Ｅを形成し得る。上で述べたように、一部のＡ２Ｅは、正常な状態のもとであっても形成される。しかしながら、その生産は、不完全な輸送体に起因してその前駆体が円板内部に蓄積すると大きく増加され、その結果、黄斑変性を引き起こす場合がある。
【００８１】
リポフスシン蓄積を生じさせる病状に起因して、他の形の黄斑変性が生ずる場合もある。第６染色体連鎖型常染色体優性黄斑ジストロフィーとして知られている、優性形のシュタルガルト病は、極長鎖脂肪酸延長−４（ＥＬＯＶ４）をコードする遺伝子における突然変異によって生じる。
【００８２】
光受容体外節の高度に組織化された膜様円板は、それらの形成にリポタンパク質、コレステロールおよびリン脂質を必要とする。ＲＰＥは、網膜におけるこれらの脂質、リポタンパク質およびコレステロールの恒常性に関与し得る。ＲＰＥは、リポタンパク質および脂質ならびに損傷した／過酸化されたリポタンパク質および脂質（例えば、ビタミンＥ欠乏中にＲＰＥおよび大動脈内皮内にまたはアテローム発生中にマクロファージ内に蓄積するもの）を取り込む受容体タンパク質、例えば、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを有する（Ｈａｙｅｓら，Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｐｉｇｍｅｎｔ  Ｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ  Ｐｏｓｓｅｓｓｅｓ  Ｂｏｔｈ  ＬＤＬ  ａｎｄ  Ｓｃａｖｅｎｇｅｒ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ．ＩＯＶＳ，ｖｏｌ．３０，ｎｏ．２，２２５−２３２，１９８９）。過酸化リポタンパク質の取り込みは、正常なＲＰＥ機能性の崩壊を強めるおよび／または加速する場合があり、ＡＭＤの病因の一因となり得る。酸化低密度リポタンパク質がＲＰＥ細胞における光受容体外節食作用を阻害することは証明されている（Ｇｏｒｄｉｙｅｎｋｏら，ＲＰＥ  ｃｅｌｌｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｌｉｚｅ  Ｌｏｗ−Ｄｅｎｓｉｔｙ  Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ（ＬＤＬ）ａｎｄ  Ｏｘｉｄｉｘｅｄ  ＬＤＬ（ｏｘＬＤＬ）ｉｎ  Ｌａｒｇｅ  Ｑｕａｎｔｉｔｉｅｓ  ｉｎ  ｖｉｔｒｏ  ａｎｄ  ｉｎ  ｖｉｖｏ．ＩＯＶＳ，ｖｏｌ．４５，ｎｏ．８，２８２２−２８２９，２００４）。ＲＰＥは、インビボでＬＤＬを内在化し、ＬＤＬ沈着物を蓄積させることができる。血漿ＬＤＬが、例えばビタミンＥなどの他の分子ならびに酸化されたＬＤＬを携えて、非常に効率的にＲＰＥに入り込むことができることも証明されている。ＬＤＬが、Ａ２ＥのＲＰＥのリソソームへの輸送ビヒクルであることも証明されている（Ｓｃｈｕｔｔら，ＩＯＶＳ，ｖｏｌ．４１，ｎｏ．８，２３０３−２３０８，２０００）。酸化リポタンパク質の内在化は、例えばＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーなどの受容体タンパク質による該酸化リポタンパク質表面での酸化リン脂質の認知および結合によっても発生し得る。１つの実施形態には、哺乳動物の眼内の網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節する作用因子の有効量を哺乳動物に投与することを含む、哺乳動物の眼における眼科的状態を治療するための方法および組成物があり、この場合、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性は、リポタンパク質および／または酸化リポタンパク質の取り込みである。
【００８３】
脊椎動物の眼の解剖学的構成、ロドプシンの再生のための視覚サイクル、およびＡ２Ｅ−オキシランの生物発生に関するさらなる情報は、２００５年６月１０日出願の米国特許出願番号１１／１５０，６４１、２００５年８月１７日出願のＰＣＴ特許出願番号ＵＳ  ２００５／２９４５５、２００５年１０月２５日出願の米国特許出願番号１１／２５８，５０４、２００５年１２月８日出願の米国特許出願番号１１／２９６，９０９、および２００５年１１月４日出願の米国特許出願番号１１／２６７，３９５に提供されており、これらの内容は、それら全体が参照として取り入れられている。
【００８４】
黄斑または網膜変性およびジストロフィー
黄斑変性（網膜変性とも呼ばれる）は、黄斑（網膜の中心部分）の変質を伴う眼の疾患である。黄斑変性の症例のうちの約８５％から９０％は、「乾燥」（萎縮または非血管新生）型である。乾燥型黄斑変性の場合、網膜の変質は、黄斑下の小さな黄色い沈着物（ドルーゼンとして知られている）の形成に関連しており、加えて、ＲＰＥにおけるリポフスシンの蓄積が、光受容体変性および地図状萎縮をもたらす。この現象は、黄斑の薄化および乾燥をもたらす。網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節する少なくとも１つの作用因子（例えば、メガリン調節剤など）の哺乳動物への投与により、その哺乳動物の眼における光受容体変性および／または地図状萎縮、の形成を減少させる、または拡大を制限することができる。
【００８５】
「湿潤型」黄斑変性の場合、新しい血管が生じて（すなわち、新生血管形成）、網膜組織、特に、黄斑（鮮明な中心視覚の責任を負う網膜部分）の下の網膜組織への血液供給を増進する。これらの新しい血管は、容易に損傷し、時には破裂して、出血および周辺組織に対する傷害を引き起こす。湿潤型黄斑変性は、すべての黄斑変性の症例のうちの約１０％の割合でしか起こらないが、これは、黄斑変性関連失明の約９０％を占める。血管内皮増殖因子、すなわちＶＥＧＦ、と呼ばれる増殖促進タンパク質が、眼におけるこの異常な血管増殖の誘発のターゲットにされている。研究により、抗ＶＥＧＦ剤を使用して異常な血管増殖を阻止および防止できることが証明された。そのような抗ＶＥＧＦ剤は、ＶＥＧＦ刺激を停止または阻害するので、血管の増殖が少なくなる。そのような抗ＶＥＧＦ剤は、血管新生阻害、または網膜の下の血管増殖を誘導するＶＥＧＦの能力の遮断、ならびに血管漏出の阻止においても成果をあげることができる。網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節する少なくとも１つの作用因子（例えば、メガリン調節剤など）の哺乳動物への投与により、その哺乳動物の眼における湿潤型加齢性黄斑変性、の形成を減少させる、または拡大を制限することができる。同様に、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）は、哺乳動物の眼の脈絡膜新生血管形成および黄斑の下の異常な血管の形成を治療するために使用することができる。
【００８６】
シュタルガルト病は、小児期に発症する劣性形の黄斑変性として表れる黄斑ジストロフィーである。Ｒｉｍタンパク質（ＲｍＰ）に関するヒトＡＢＣＡ４遺伝子における突然変異が、シュタルガルト病の原因である。組織学的には、シュタルガルト病は、ＲＰＥ細胞におけるリポフスシン色素顆粒の沈着と関連付けられる。ＡＢＣＡ４における突然変異は、劣性網膜色素変性症、劣性錐体−杆体ジストロフィー、および非滲出性加齢性黄斑変性にも関係しているが、ＡＭＤにおけるＡＢＣＡ４突然変異の罹患率は、未だ不明である。シュタルガルト病と同様に、これらの疾病は、遅延型杆体暗順応も随伴する。ＲＰＥ細胞におけるリポフスシン沈着は、ＡＭＤ、および網膜色素変性症の一部の症例においても顕著に観察される。加えて、常染色体優性形のシュタルガルト病は、ＥＬＯＶ４遺伝子における突然変異によって引き起こされる。
【００８７】
加えて、小児、ティーンエイジャー、または成人を罹患させるいくつかの型の黄斑変性が存在しており、これらは、早期発症黄斑変性または若年性黄斑変性として一般的に知られている。これらの型の多くは遺伝性であり、ならびに黄斑変性ではなく黄斑ジストロフィーと考えられている。黄斑ジストロフィーのいくつかの例としては、錐体−杆体ジストロフィー、角膜ジストロフィー、フックスジストロフィー、ソーズビー黄斑ジストロフィー、ベスト病、および若年性網膜分離症、ならびにシュタルガルト病が挙げられる。
【００８８】
眼組織におけるレチノール吸収
レチノイド（ビタミンＡおよびその類似体）は、正常な生殖、正常な免疫、正常な成長および細胞分化、ならびに正常な視力をはじめとする多数の欠くことのできない生理プロセスを維持するために必要とされる。体内に存在するすべてのレチノイドは、食物から得なければならない。ビタミンＡが豊富な食事を他の食事脂質と共に消費すると、食事レチノイド（レチニルエステルとして修飾されたもの）がカイロミクロンに内包され、肝臓星状細胞内に保管される。
【００８９】
身体のレチノイドに対する要求を満たすために、肝臓は、２１ｋＤａタンパク質に結合したレチノール（レチノール結合タンパク質（ＲＢＰ））を循環に分泌する。レチノール−ＲＢＰは、５５ｋＤａタンパク質（トランスサイレチン（ＴＴＲ））との１：１モルの複合体で見出される。レチノール−ＲＢＰホロタンパク質が、肝外ターゲット組織、例えば眼、に送達されるには、トランスサイレチン（ＴＴＲ）と結合しなければならない。（Ｚａｎｏｔｔｉ  ａｎｄ  Ｂｅｍｉ，Ｖｉｔａｍ．Ｈｏｒｍ．，６９：２７１−９５（２００４））。この第二の複合体は、レチノールを循環内で長期間維持することを可能にしうる。ＴＴＲとの会合は、肝細胞からのＲＢＰ放出を助長し、ならびにＲＢＰの糸球体濾過および腎臓異化作用を防止する。
【００９０】
トランスサイレチンが欠損したマウス系統は、生育可能であり、繁殖可能であるが、有意に低下したレベルの血清レチノール、レチノール結合タンパク質、および甲状腺ホルモンを示し、このことから、循環血漿中のこれらの代謝産物の正常なレベルを維持する上でのトランスサイレチンの役割が確認される（Ｅｐｉｓｋｏｐｏｕら，Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ，１９９３，９０，２３７５−２３７９）。さらに、腎臓によるトランスサイレチン再吸収は、リポタンパク質受容体メガリンによって媒介される（Ｓｏｕｓａら，Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ，２０００，２７５，３８１７６−３８１８１）。この再吸収は、尿へのホルモン喪失を防止する手段として役立つ。
【００９１】
ｇｐ３３０としても知られているメガリンは、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーであり、ならびに近位尿細管細胞におけるエンドサイトーシス経路内に位置する。メガリンは、尿細管液からのタンパク質の吸収のためのスカベンジャー受容体としての役割を果たす、（そのグリコシル化形態で）６００ｋＤａの膜結合型エンドサイトーシス性タンパク質である（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎら，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１０：２２２４−２２３６，１９９９）。高い親和性でメガリンに結合するリガンドには、例えば、レチノイド結合タンパク質（例えば、レチノール結合タンパク質（ＲＢＰ）および光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）など）などのビタミン担体タンパク質がある。メガリンは、近位尿細管細胞におけるエンドサイトーシス経路内で最も豊富なエンドサイトーシス性受容体タンパク質であり、ならびに糸球体濾過からのＲＢＰをはじめとするタンパク質のエンドサイトーシス性取り込みの責任を負う。
【００９２】
レチノール−ＲＢＰ−ＴＴＲ複合体は、ターゲット組織に送達され、そこでレチノールは吸収され、様々な細胞プロセスに利用される。ＲＢＰ−ＴＴＲ複合体による循環を通したレチノールの細胞への送達は、細胞および組織がレチノールを獲得する主経路である。体内の他の組織とは異なり、眼での食後のレチノールの取り込みは非常に劣る。眼は、正常な視覚色素形成に必要なレチノイドを得るために、その主要手段としてＲＢＰに結合したレチノールに依存しなければならない（Ｖｏｇｅｌら，Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００２，４１，１５３６０−１５３６８）。
【００９３】
レチノール結合タンパク質（ＲＢＰ）
レチノール結合タンパク質、すなわちＲＢＰ、は、約２１ｋＤａの分子量を有する、１本のポリペプチド鎖である。ＲＢＰは、クローニングされ、配列決定されており、そのアミノ酸配列は決定されている。Ｃｏｌａｎｔｕｎｉら、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１１：７７６９−７７７６（１９８３）。ＲＢＰの三次元構造は、脂溶性ビタミン・レチノールに結合し、それを保護するように設計された特殊な疎水性ポケットを示す。血漿では、血漿ＲＢＰのうちの約９５％が、１：１モル／モル比でトランスサイレチン（ＴＴＲ）と会合しており、その血漿ビタミンＡの本質的にすべてが、ＲＢＰに結合している。ＴＴＲは、５４，９８０の分子量を有する、４つの同一サブユニットからなる十分に特徴付けられた血漿タンパク質である。Ｘ線回折によって解明された完全な三次元構造は、四面体状に配置された広範なβ−シートを示す。Ｂｌａｋｅら、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１２１：３３９−３５６（１９７８）。ＲＢＰ−レチノールへのＴＴＲの複合体化は、レチノールの糸球体濾過を減少させ、その結果、血漿中のレチノールおよびＲＢＰの半減期を約３倍増加させると考えられる。
【００９４】
複合体化したレチノール−ＲＢＰ−ＴＴＲ形から細胞中へのレチノール取り込みは、ターゲット細胞上の細胞受容体、例えばＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーなどへのＲＢＰの結合によって生ずる。一部の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、メガリンまたはメガリン関連タンパク質である。一部の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、メガリンである。この相互作用は、ＲＢＰ−受容体複合体のエンドサイトーシス、およびその後の前記複合体からのレチノール放出をもたらし、または細胞レチノール結合タンパク質（ＣＲＢＰ）へのレチノールの結合、およびその後のそれらの細胞による血漿中へのアポＲＢＰの放出をもたらす。他の経路により、細胞へのレチノール単独の取り込みをはじめとする、細胞へのレチノールの侵入のための代替メカニズムが考えられる。概説はＢｌｏｍｈｏｆｆ（１９９４）を参照のこと。
【００９５】
腎臓において、ＲＢＰは、ＢＩＡｃｏｒｅ実験により精製メガリンに結合すること、ならびにレチノイド結合タンパク質およびレチノイドは、メガリン欠損マウスの尿中で見出されるが、対照マウスには不在であるであることが証明された（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎ  ＥＩ．ら，Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１０：６８５−６９５，１９９９）。内因性ＲＢＰは、免疫細胞化学により、対照マウスの近位尿細管において見出されたが、メガリンノックアウトマウスには不在であった。他の組織、例えば、網膜およびＲＰＥなども、メガリンまたはメガリン関連タンパク質を発現し、ＲＢＰに結合することができ、ＲＢＰを内在化することができる。
【００９６】
加齢性黄斑変性およびシュタルガルト病をはじめとする、黄斑変性もしくは黄斑ジストロフィーまたは網膜変性もしくは網膜ジストロフィーでは、視覚サイクルレチノイド（Ａ２Ｅの前駆体である、全トランス−レチナールアルデヒド）の過剰産生に起因して、Ａ２Ｅ（リポフスシンの主蛍光体）が形成される。従って、網膜およびＲＰＥにおけるビタミンＡ、１１−シス−レチナールおよび全トランスレチナールの量の減少は、Ａ２Ｅおよびリポフスチンの蓄積を減少させる際、および加齢性黄斑変性の治療の際、有益であろう。
【００９７】
血清レチノールレベルの減少は、眼疾患を治療するために考えられる１つのアプローチである。眼疾患を治療するための別のアプローチは、レチナールの眼組織への取り込みの調節である。１つのアプローチでは、網膜および／またはＲＰＥ細胞において発現されるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を、レチノール、レチノール−ＲＢＰ、および／またはレチノール−ＲＢＰ−ＴＴＲ複合体が該受容体（単数または複数）へ結合するのを防止し、それによってレチノイドのＲＰＥおよび／または網膜への侵入を阻害するように、作用因子で調節する。
【００９８】
別のアプローチでは、網膜および／またはＲＰＥ細胞において発現されるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を、レチノール、レチノール−ＲＢＰ、レチノール−ＲＢＰ−ＴＴＲおよび／またはレチノール−ＩＲＢＰ複合体が該受容体（単数または複数）へ結合するのを防止するように、作用因子で調節する。網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーへのレチノール、レチノール−ＲＢＰ、レチノール−ＲＢＰ−ＴＴＲおよび／またはレチノール−ＩＲＢＰ複合体の結合の阻害は、視覚サイクルを破壊する場合がある。一定の眼科的状態では、視覚サイクルの破壊によって、網膜および／またはＲＰＥ内に存在する毒性化学物質の量または蓄積が減少する場合がある。
【００９９】
網膜および網膜色素上皮（ＲＰＥ）細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーに属する受容体タンパク質をここで特定する。１つの実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーに属する受容体タンパク質は、レチノイド結合タンパク質受容体である。一部の実施形態において、前記受容体タンパク質は、メガリンである。一部の実施形態において、前記受容体タンパク質は、メガリン関連タンパク質である。一部の実施形態において、前記受容体タンパク質は、ＬＲＰである。一部の実施形態において、前記受容体タンパク質は、ＬＲＰ関連タンパク質である。一部の実施形態において、前記受容体は、ＳＴＲＡ６またはＳＴＲＡ６関連タンパク質である。一部の実施形態において、前記受容体タンパク質は、ＳＴＲＡ６である。一部の実施形態において、前記受容体タンパク質は、ＳＴＲＡ６関連タンパク質である。ＳＴＲＡ６は、レチノール結合タンパク質のための膜受容体として同定されており、ならびにＳＴＲＡ６がビタミンＡの細胞取り込みを媒介し得るという証拠が示されている。ＳＴＲＡ６に関する追加情報は、米国特許第７，１７３，１１５号、Ｋａｗａｇｕｃｈｉ  Ｒら，Ｓｃｉｅｎｃｅ  ３１５：８２０−２５、およびＢｌａｎｅｒ  Ｗ．２００７，Ｃｅｌｌ  Ｍｅｔａｂｌｉｓｍ  ５：１６４−６６において見出すことができ、これらは、すべて、それら全体が参照として取り入れられている。ＳＴＲＡ６関連タンパク質に関する追加情報は、特許出願ＵＳ  ２００７／０１２８１８８、ＵＳ  ２００３／００２１７８８およびＵＳ  ２００２／０１５６２５２において見出すことができ、これらは、すべて、それら全体が参照として取り入れられている。
【０１００】
ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーに属する網膜およびＲＰＥ細胞におけるトランスサイトーシス性受容体の活性に拮抗する、該活性を作動させる、および／または該活性を調節することにより、視覚欠損を予防、治療または治癒する方法を本明細書において提供する。一部の事例では、ＲＰＥの基底膜上のＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーに属する受容体に、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリー結合剤で拮抗し、そのようにして、ＲＢＰ−レチノール、ＲＢＰ−レチノール−ＴＴＲ、またはレチノールのＲＰＥへの結合および取り込みを防止する。他の事例では、ＲＰＥの頂端膜上のＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーに属する受容体に、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリー結合剤で拮抗し、そのようにして、レチノール、レチナール、ＩＲＢＰ−レチノール、ＩＲＢＰ−レチナール、またはＩＲＢＰの、ＲＰＥ細胞への結合およびＲＰＥへのまたはＲＰＥからのトランスサイトーシスを防止する。
【０１０１】
薬物および毒素の毒性効果
様々な眼の疾患または状態は、薬物および毒素での治療の結果である。例えば、アミノグリコシドなどの抗生物質は、眼科学では細菌感染を治療または予防するためによく使用される。これらの抗生物質が耳毒性、腎毒性ならびに網膜毒性であることは公知である（Ｄ’Ａｍｉｃｏら，Ｒｅｔｉｎａｌ  Ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｏｆ  Ｉｎｔｒａｖｉｔｒｅａｌ  Ｇｅｎｔａｍｉｃｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．２５：５６４−５７２，１９８４；Ｃａｍｐｏｃｈｉａｒｏら，Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１１３（３）：２６２−２６３，１９９５；Ｇｒｉｚｚａｒｄ，Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．１１２（１）：４８−５３，１９９４）。例えば、アルベカシン、ゲンタマイシン、カナマイシン、ネオマイシン、パラマイシン、リボスタマイシン、リビドマイシン、アミカシン、ジベカシン、ブタカシン、トブラマイシン、ストレプトマイシン、ジヒドロストレプトマイシン、シソマイシン、ベルダマイシン、ネチルミシン、およびブチカシンなどのアミノグリコシドが、眼組織内に蓄積すること、および／または眼において毒性効果を発揮することは証明されている。１つの実施形態において、ある作用因子は、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーへの抗生物質の結合を防止する。別の実施形態において、本明細書において提供する作用因子は、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーによる抗生物質の結合およびトランスサイトーシスを防止する。
【０１０２】
眼の他の疾患は、眼毒性を提示する薬物に関係している。一定の医薬は、眼内の網膜および／またはＲＰＥ細胞に蓄積する。一定の事例において、治療薬は、例えば眼内の網膜および／またはＲＰＥ細胞などの眼組織において代謝される。染色体Ｐ４５０およびミエロペルオキシダーゼを十分に有する網膜は、非生体物質を酸化体に活性化する役割を果たし、その結果、眼の傷害を生じさせる場合がある。これらの活性化された作用因子は、網膜付加体を直接形成する場合があり、または眼の還元グルタチオン濃度を減少させる場合がある（Ｔｏｌｅｒ，Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．Ｍｅｄ．２２９：６０７−６１５，２００４）。１つの実施形態において、網膜および／またはＲＥＰ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーへの治療薬の結合の阻害は、該治療薬の使用に関連した眼毒性を減少させる。別の実施形態において、網膜およびＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーによる治療薬の結合およびトランスサイトーシスは、本明細書に記載する作用因子によって阻害される。
【０１０３】
網膜症は、単純または非増殖性網膜症と増殖性網膜症という２つの大きなカテゴリーに分けられる。単純網膜症は、血管壁の膨隆によって、眼への出血によって、綿状滲出（ｃｏｔｔｏｎ  ｗｏｏｌ  ｅｘｕｄａｔｅｓ）と呼ばれる死滅した網膜細胞の小さな集塊によって、および閉鎖した血管によって特定される欠陥を含む。この形の網膜症は、軽症と見なされる。増殖（すなわち重症）形の網膜症は、新たに増殖した血管によって、眼内に形成された瘢痕組織によって、損傷の著しい遮断された血管によって、および栄養を与える血管網から離れる網膜破壊（網膜剥離）によって特定される欠陥を含む。
【０１０４】
様々な治療薬誘発網膜系効果が、薬物療法の過程で観察されている（ＬｅＢｌａｎｃら，Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔｏｘｉｃｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ２８，１２４−１３２，１９９８）。様々な療法クラスの薬物が、眼において何らかの毒性効果を示した。何らかの薬物誘発網膜系効果を示した薬物としては、次のものが挙げられる：
−  抗マラリア薬、例えば、クロロキン、キニンなど；
−  抗生物質、例えば、アミノグリコシド、スパルソマイシン、クリオキノールなど；
−  抗結核薬、例えば、エタンブトールなど；
−  抗真菌薬、例えば、ミコナゾールなど；
−  ＣＮＳ薬、例えば、フェノチアジン（例えば、クロルプロマジン、アミトリプチリン、リセルギドなど）など；
−  心臓血管薬、例えば、ニフェジピン、アミオダロンなど；
−  抗新生物薬、例えば、５−フルオロウラシル、タモキシフェン、カルムスチン、クロラムブシル、シスプラチン、ミトタン、ナイトロジェンマスタード、ニトロソウレア、ビンブラスチン、ビンクリスチン、ドキソルビシンなど；
−  外皮用薬、例えば、エトレチネート、カンタキサンチン、イソトレイノインなど；
−  抗炎症薬、例えば、コルチコステロイド、イブプロフェン、インドメタシン、フェニルブタゾンなど；
−  免疫調節薬、例えば、チロロン（抗ウイルス性）アルファインターフェロンなど；
−  経口避妊薬；
−  ホルモン、例えば、クロミフェンなど；
−  その他、例えば、デフェロキサミン、ナイアシン、ワルファリンなど；
−  交感神経様作用薬、例えば、ジピベフリン、フェニルエフリン、エピネフリンなど。
【０１０５】
ＲＰＥは毛細血管壁と共に血液−レチナール関門を構成する。眼内の網膜および／またはＲＰＥ細胞への治療薬の侵入は、受容体媒介トランスサイトーシスによって遂行される。一部の実施形態において、治療薬は、眼内の網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに結合し、受容体媒介トランスサイトーシスを受ける。治療薬に起因する網膜毒性副作用の治療および／または予防のための方法および組成物を本明細書において提供する。１つの実施形態では、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーへの、眼毒性を示す治療薬の結合をＬＤＬ受容体遺伝子ファミリー結合剤（例えば、メガリン結合剤など）によって阻害する。別の実施形態では、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリー結合剤で拮抗し、そのようにして、網膜および／またはＲＰＥ細胞への治療薬の結合および取り込みを防止する。１つの実施形態において、前記治療薬は、抗生物質である。別の実施形態において、前記治療薬は、アミノグリコシドである。一部の実施形態において、前記網膜毒性治療薬をリポタンパク質または担体タンパク質（例えば、アルブミンまたはラクトフェリンなど）に結合させる。網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーへの担体タンパク質またはリポタンパク質の結合は、網膜および／またはＲＰＥ細胞への網膜毒性治療薬の侵入のための別の手段となる。１つの実施形態では、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリー結合剤で拮抗し、そのようにして、網膜および／またはＲＰＥ細胞への担体タンパク質またはリポタンパク質の結合および取り込みを防止する。
【０１０６】
ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリー
個々のタンパク質は、１つ以上の別個のモノマードメインを有することができる。これらのタンパク質は、多くの場合、モザイクタンパク質と呼ばれる。例えば、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）−受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、４つの主構造ドメインを含有する。すなわち、システインリッチＡ−ドメイン反復配列、上皮増殖因子前駆体様反復配列、膜貫通ドメイン、および細胞質ドメインである。このＬＤＬ−受容体遺伝子ファミリーは、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体、超低密度リポタンパク質受容体（ＶＬＤＬ−Ｒ）、アポリポタンパク質Ｅ受容体２、ＬＤＬ受容体関連タンパク質（ＬＲＰ）およびメガリンを含む。ファミリーメンバーは、次の特徴を有する。１）細胞表面発現、２）Ａ−ドメイン反復配列から成る細胞外リガンド結合、３）リガンド結合のためのカルシウムの要求、４）受容体関連タンパク質およびアポリポタンパク質（ａｐｏ）Ｅの認識、５）ＹＷＴＤ反復配列を含有する上皮増殖因子（ＥＧＦ）前駆体相同ドメイン、６）単一膜貫通領域、および７）様々なリガンドの受容体媒介エンドサイトーシス。Ｈｕｓｓａｉｎら，Ｔｈｅ  Ｍａｍｍａｌｉａｎ  Ｌｏｗ−Ｄｅｎｓｉｔｙ  Ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  Ｆａｍｉｌｙ，（１９９９）Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｎｕｔｒ．１９：１４１−７２を参照のこと。さらに、前記メンバーは、幾つかの構造的に似ていないリガンドに結合する。
【０１０７】
低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体遺伝子ファミリーのタンパク質（Ｎｅｅｌｄｓ，Ｊ．Ｇ．ら，Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ  Ｐｒｏｔｅｏｌｙｓｉｓ  １２，２１９−２４０，１９９８）は、類似した構造の関連モザイク膜貫通型受容体の１グループであり、それらのエクトドメインにおける多種多様なタンパク質リガンドに結合する。前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーのいずれかに結合したリガンドは、典型的なエンドサイトーシスによって内在化される（Ｃｈｅｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６５，３１１６−３１２３，１９９０）。ヒトにおける公知ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのグループとしては、例えば、ＬＤＬ受容体（Ｒｕｓｓｅｌｌ，Ｄ．ら，Ｃｅｌｌ  ３７，５７７−５８５，１９８４）、ＬＤＬ受容体関連タンパク質（ＬＲＰ）（Ｈｅｒｚ，Ｊ．ら，ＥＭＢＯ  Ｊ．７，４１１９−４１２７，１９８８；Ｋｒｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｔ．ら，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．２７６，１５１−１５５，１９９０）、超低密度リポタンパク質受容体（ＶＬＤＬＲ）（Ｗｅｂｂ，Ｊ．Ｃ．ら，Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ．３，５３１−５３７，１９９４）、アポＥ受容体２（ａｐｏＥＲ２）（Ｋｉｍら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１，８３７３−８３８０，１９９６）、メガリン／ｇｐ３３０／ＬＲＰ２（Ｈｊａｌｍ，Ｇ．ら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈａｍ．２３９，１３２−１３７，１９９６）、ＬＲＰ６（Ｂｒｏｗｎら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ，２４８，８７９−８８８，１９９８）およびＬＲＰ７（Ｈｅｙ，Ｐ．Ｊ．ら，Ｇｅｎｅ（Ａｍｓｔ．）２１６，１０３−１１１，１９９８；Ｄｏｎｇ，Ｙ．ら，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．２５１，７８４  ７９０，１９９８）が挙げられる。図１を参照のこと。
【０１０８】
ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、エンドサイトーシス経路による細胞への様々なタンパク質カーゴの取り込みを媒介するファミリーの単回通過型Ｉ（ｓｉｎｇｌｅ−ｐａｓｓ  ｔｙｐｅ  Ｉ）膜タンパク質である（Ｋｒｉｅｇｅｒ，Ｍ．ａｎｄ  Ｈｅｒｚ，Ｊ．Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｌｉｇａｎｄ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ；ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｓｃａｖｅｎｇｅｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ  ａｎｄ  ＬＤＬ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＬＲＰ）．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６３，６０１−６３７，１９９４）。それぞれの受容体が多数の異なるカーゴタンパク質に結合し、細胞表面におよび細胞表面から継続的に再循環する。一部のリガンドは、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーの異なるメンバーに結合することができる。一部のリガンドは、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーの１つのメンバーだけに結合することができる。一部の実施形態において、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーの一部のメンバーは、同じリガンドに結合することができる。他の実施形態において、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーの１つのメンバーだけが、特定のリガンドに結合することができる。他の実施形態において、異なる組織タイプにおいて発現されるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーが、同じリガンドに結合する。他の実施形態において、異なる組織タイプにおいて発現されるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、同じリガンドに結合しない。一部の実施形態において、細胞の異なる部分において発現されるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーが、同じリガンドに結合する。他の実施形態において、細胞の異なる部分で発現されるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーが、同じリガンドに結合する。一部の実施形態において、ＲＰＥ細胞の基底膜上に存在するＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、ＲＰＥ細胞の頂端膜上に存在するＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーにも結合する同じリガンドに結合する。一部の実施形態において、ＲＰＥ細胞の基底膜上に存在するＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、ＲＰＥ細胞の頂端膜上に存在するＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーにも結合する同じリガンドに結合しない。
【０１０９】
前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、次の５つの共通構造モチーフを有することを特徴とする：
−  ａ）リガンド結合（補体）型システインリッチ反復配列；
−  ｂ）上皮増殖因子（ＥＧＦ）受容体様システインリッチ反復配列；
−  ｃ）チロシン−トリプトファン−トレオニン−アスパラギン酸（ＹＷＴＤ）ドメイン；
−  ｄ）単一膜貫通セグメント；および
−  ｅ）１〜３個のＮＰｘＹモチーフを含む、細胞質テール。
【０１１０】
前記アミノ酸末端領域は、リガンド結合型反復配列（３つの内部ジスルフィド結合をそれぞれが特徴として有する、アミノ酸数約４０の伸長部）を、２個と１１個の間の個々の反復配列から成るクラスターの状態で含有する。これらの受容体のリガンドの大部分が、これらのリガンド結合ドメインと相互作用する。多数のリガンド結合ドメインの存在は、受容体へのリガンドの様々な結合モードをもたらす。前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーの一部メンバーには、様々なリガンドのための多数の独立した結合部位が存在する。一部のリガンドについては、前記受容体上に単一の高親和性結合部位しか存在しない。一部の事例では、異なる結合部位を有する２つ以上の異なるリガンドが、前記受容体に同時に結合できる場合がある。一部の事例では、受容体タンパク質内の多数のリガンド結合型反復配列の存在、ならびにそれぞれの反復配列についての固有の等値曲面および電荷分布の結果として、およびリガンドと受容体の間の多数の相互作用から、受容体タンパク質が、非常に多数の構造的に異なるリガンドに高親和性で結合する場合がある。一部のリガンドは、これらの反復配列の異なる組み合わせを逐次的に認識することができるが、他のものは、別個のクラスターから反復配列を認識するように見える。ＲＡＰは受容体タンパク質メガリン上の２つの結合部位を占有するという報告がある（Ｂｅｅｇ，ＥＪ．Ｂｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．３９，５９７−６０３，１９９５）が、メガリンタンパク質１個につき低分子量有機化合物ゲンタマイシンの約６０〜１００個の分子が結合するという報告もある（Ｓｃｈｍｉｔｚ，Ｃ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２２７，６１８−６２２，２００２）。
【０１１１】
リガンド結合（補体）型システインリッチ反復配列は、カチオン性リガンドに結合することができる負電荷を有する残基を多数含有する（例えば、ＵＳ  ２００３／０２０２９７４を参照のこと。これは、参照として取り入れられている）。一部の実施形態において、このカチオンリガンドへの結合は、受容体タンパク質とのイオン性相互作用によって遂行される。
【０１１２】
リガンド結合ドメインの後に、システインプアなスペーサー領域によって隔てられた、システインリッチな上皮成長因子（ＥＧＦ）前駆体型反復配列が続く。前記スペーサー領域は、エンドソーム区画におけるリガンドのｐＨ依存性放出の責任を負うＹＷＴＤモチーフを含有する。ＥＧＦ前駆体型反復配列に隣接するＹＷＴＤモチーフは、ＥＧＦ前駆体相同ドメインと呼ばれる。ＬＲＰおよびｇｐ３３０では、ＥＧＦ前駆体相同ドメインの後に別のリガンド結合ドメインまたはスペーサー領域が続く。
【０１１３】
それらの細胞外ドメインとは対照的に、異なる受容体の細胞質テールは、エンドサイトーシスの前に被覆小窩におけるＬＤＬ受容体のクラスター形成を媒介することが証明されている（Ｗｉｌｌｎｏｗ  Ｔ．Ｅ．ら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ  １，Ｅ１５７−Ｅ１６２，１９９９）コンセンサス配列ＮＰｘＹ（これは、４アミノ酸モチーフ・アスパラギン−プロリン−Ｘ−チロシン（この場合、Ｘは、任意のアミノ酸を表す）を示す）を特徴とする短いアミノ酸モチーフを除いて、配列類似性を殆ど共有しない。
【０１１４】
前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーの一部のメンバー、例えば、ＬＤＬ受容体およびＶＬＤＬ受容体は、単一膜貫通セグメントに隣接する細胞外空間内にＯ結合型糖ドメインを含有する。
【０１１５】
前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバー、例えば次のものなどは、配列決定されている。
【０１１６】
ＬＲＰ（ＬＤＬ受容体関連タンパク質：アルファ−２−マクログロブリン受容体）
ｃＤＮＡ：Ｘ１３９１６ＮＭ＿００２３３２
遺伝子：ＡＨ００３３２４
ＬＲＰ２（メガリン；ｇｐ３３０；ｇｐ６００）
ｃＤＮＡ：Ｕ３３８３７
遺伝子：ＮＴ＿００２１７６
アポリポタンパク質Ｅ受容体２（アポＥ受容体２；ＬＲＰ８）
ｃＤＮＡ：Ｄ５０６７８
遺伝子：ＳＥＧ＿Ｄ８６３８９Ｓ
超低密度リポタンパク質受容体（ＶＬＤＬ受容体）
ｃＤＮＡ：Ｄ１６４９３
遺伝子：ＳＥＧ＿ＨＵＭＶＬＤＬＲ
ＬＲＰ１Ｂ
ｃＤＮＡ：ＮＭ＿０１８５５７
ＭＧＥＦ−７
ｃＤＮＡ：ＡＢ０１１５４０
ＬＤＬ受容体
細胞は、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）のエンドサイトーシスにより、ＬＤＬ受容体を用いて、血液からコレステロールを取り込む。それらのリガンドに結合した後、ＬＤＬ受容体は、細胞質膜内の被覆小窩においてクラスターを形成する。その後、これに、エンドサイトーシス性小胞の形成および内在化、リソソームにおけるそれらのエンドサイトーシスを受けたリポタンパク質の加水分解、ならびにそれらの脂質の細胞質への放出が続く（Ｂｒｏｗｎら，Ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｐａｔｈｗａｙ  ｆｏｒ  ｃｈｏｌｅｓｔｅｒｏｌ  ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．Ｓｃｉｅｎｃｅ．２３２，３４−４７（１９８６））。前記ＬＤＬ受容体は、リポタンパク質を含有するアポリポタンパク質Ｂおよび／またはアポリポタンパク質Ｅ（アポＥ）の細胞内在化を媒介することにより、コレステロール恒常性に関する重要な役割を果たす。前記ＬＤＬ受容体は、この受容体をクラスリン−被覆小窩にターゲッティングするＮＰｘＹ（Ａｓｎ−Ｐｒｏ−ｘ−Ｔｙｒ、この場合、ｘは、任意のアミノ酸を表す）配列を含有する残基数５０の細胞質ドメインを有する。その細胞外部分は、Ｏ結合型糖ドメインと、システインリッチ反復配列の２つのクラスターとを含有する。前記Ｏ結合型糖ドメインに隣接した位置にある第一のシステインリッチクラスターは、１つの反復配列の５つのコピー（それぞれが、共通のテトラペプチド、チロシン−トリプトファン−トレオニン−アスパラギン酸（ＹＷＴＤ）を含有する）によって隔てられている上皮成長因子様反復配列との相同性を有する。この上皮増殖因子相同性は、ＬＤＬ受容体が、エンドソーム内のリガンドを放出する（それによって、占有されていない受容体をもとの細胞表面に再循環させることができる）酸依存性配座変化を受けるために必要であるようである。第二のシステインリッチクラスターは、リガンドをアポリポタンパク質ＢおよびＥに結合させる責任を負う、７つの補体様反復配列を含有する。
【０１１７】
ＬＤＬ−受容体関連タンパク質（ＬＲＰ）
ＬＤＬ受容体関連タンパク質（ＬＲＰ）は、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーの他のメンバーより大きいが、構造的にはそれらに類似している。（Ｈｅｒｚら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０８：７７９−７８４，２００１；Ｗｉｌｌｎｏｗら，Ｎａｔｕｒｅ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｌ．１，Ｅ１５７−Ｅ１６２，１９９９；Ｋｒｅｉｇｅｒら，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ  ａｎｄ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｍｕｌｔｉｌｉｇａｎｄ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ：ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ  ｓｃａｖｅｎｇｅｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｄ  ＬＤＬ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ（ＬＲＰ）．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６３：６０１−６３７（１９９４））。ＬＲＰは、６００ｋＤａ前駆体（ＬＲＰ  ６００）として合成され、それが切断されて、アミノ末端５１５ｋＤａフラグメント（ＬＲＰ  ５１５）およびカルボキシル末端８５ｋＤａフラグメント（ＬＲＰ  ８５）が生じる。ＬＲＰ  ５１５は、すべて公知のリガンド結合部位を有し、ＬＲＰ  ８５（これは、膜アンカーおよび細胞質ドメインを含有する）と非共有結合的に会合したままである。
【０１１８】
本明細書において用いる場合、「ＬＲＰ」は、そのｃＤＮＡコーディング配列がｃＤＮＡ：Ｘ１３９１６ＮＭ＿００２３３２：遺伝子：ＡＨ００３３２４との少なくとも７５％の同一性を有するタンパク質を指す。
【０１１９】
本明細書において用いる場合、「ＬＲＰ関連タンパク質」は、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーに属し、ＬＲＰとの５０％より大きい相同性を有するタンパク質；または抗ＬＲＰ抗体（特定のもの）と高い特異性で反応するタンパク質を指す。
【０１２０】
ＬＤＬ受容体は、リポタンパク質代謝において単独で作用するようであるが、ＬＲＰおよびこのファミリーの他のメンバーは、他の別個の機能を有するようである。ＬＲＰの多数の機能の中で、カイロミクロンがＬＲＰのエンドサイトーシス作用によって肝臓に吸収されることは証明されている。他のＬＲＰ結合リガンドとしては、次のものが挙げられる。
【０１２１】
−  プロテイナーゼと阻害剤の複合体：例えば、α２Ｍ−プロテイナーゼ複合体、妊娠帯タンパク質（ＰＺＰ）−プロテイナーゼ複合体、ｔ−ＰＡ、ｕ−ＰＡ、ｔ−ＰＡ：ＰＡＩ−１、ｕ−ＰＡ：ＰＡＩ−１、ｕＰＡ：プロテイナーゼネキシン１、組織因子経路阻害剤、エラスターゼ−α１−アンチトリプシン、α１−アンチトリプシン、Ｃ１阻害剤など；
−  リポタンパク質：例えば、アポＥ、アポＥ富化β−ＶＬＤＬ、リポタンパク質リパーゼ、リポタンパク質リパーゼ富化ＶＬＤＬ、リポタンパク質リパーゼ富化β−ＶＬＤＬ、肝性リパーゼなど；
−  血液凝固または凝血剤：例えば、第ＩＸａ因子、第ＶＩＩＩａ因子、第ＶＩＩａ因子／ＴＦＰＩ、アンチトロンビンＩＩＩ、ＴＨＰＩ、ヘパリン補因子ＩＩなど；
−  シャペロンタンパク質：例えば、ＨＳＰ−９６、ＲＡＰなど；
−  マトリックスタンパク質：例えば、トロンボスポンジン−１、トロンボスポンジン−２など；
−  他の分子：例えば、緑膿菌外毒素Ａ、ラクトフェリン、ＲＡＰ、α２−マクログロブリン、カイロミクロンレムナント、補体Ｃ３、スフィンゴ脂質活性化タンパク質（ＳＡＰ）、ライノウイルス、ＨＩＶ−Ｔａｔタンパク質、ＭＭＰ−１３、ＭＭＰ−９、ホルモン・サイロトロピン、補因子コバラミンおよびリソソームタンパク質サポシン；ＲＢＰおよびｉＲＢＰなど。
【０１２２】
メガリン
ｇｐ３３０またはＬＲＰ２としても知られているメガリンは、腎臓近位尿細管、内耳の蝸牛、および眼の毛様体上皮をはじめとする人体の多くの上皮表面において発現される、そのグリコシル化形で６００ｋＤａの細胞表面タンパク質である（Ｃｈｒｉｓｔｅｎｓｅｎら，Ｅｓｓｅｎｔｉａｌ  Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｍｅｇａｌｉｎ  ｉｎ  Ｒｅｎａｌ  Ｐｒｏｘｉｍａｌ  Ｔｕｂｌｅ  ｆｏｒ  Ｖｉｔａｍｉｎ  Ｈｏｍｅｏｓｔａｓｉｓ．Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１０：２２２４−２２３６，１９９９）。本明細書において示すように、少なくともメガリンタンパク質または少なくとも１つのメガリン関連タンパク質は、眼内の網膜およびＲＰＥ細胞においても発現される。
【０１２３】
ラットおよびヒトメガリンに由来する推定ｃＤＮＡ配列は、約６００ｋＤａのタンパク質をコードしており、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのエンドサイトーシス性受容体のすべての特徴を示す。メガリンは、単一の膜通過ドメインを有するタイプ１細胞表面トランスサイトーシス受容体である。メガリンは、低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）受容体遺伝子ファミリーに属する。メガリンは、単一の膜貫通ドメインと、短い細胞質テールと、細胞外空間に伸びる大きなアミノ酸末端部分とを有する、タイプ１細胞表面エンドサイトーシス受容体である。前記アミノ末端領域は、アミノ酸数約４０の伸長部である、リガンド結合（補体）型システインリッチ反復配列を含有し、これらのそれぞれが、３つの内部ジスルフィド結合を特徴として有する。これらの反復配列は、リガンドのための結合部位を構成し、ならびに幾つかのリガンドがリガンド結合反復配列の第二のクラスター内の同じ部位または密接に関連した部位に結合することが立証されている（Ｏｒｌａｎｄｏ  ＲＡ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：２３６８−２３７３，１９９７）。さらに、メガリンは、システインプアなスペーサー領域によって隔てられた、システインリッチな上皮増殖因子（ＥＧＦ）前駆体型反復配列を有する。前記スペーサー領域は、エンドソーム区画におけるリガンドのｐＨ依存性放出の責任を負うＹＷＴＤモチーフを含有する。メガリンの前記細胞質テールは、受容体を被覆小窩に向けるＮＰｘＹの３つのコピーを有する。メガリンは、例えばＬＤＬ受容体およびＶＬＤＬ受容体などのこの遺伝子ファミリーの一部の受容体において見出されるＯ結合型糖ドメインを含有しない。
【０１２４】
メガリンおよびＬＲＰの細胞外部分は、ＬＤＬ受容体ドメインの多数のコピーに似ている。メガリンと他のファミリーメンバーの間の全アミノ酸配列同一性は、３０％と５０％の間で様々である。
【０１２５】
メガリン受容体についての配列を次のとおり示す：
−  ｃＤＮＡ：Ｕ３３８３７
−  遺伝子：ＮＴ＿００２１７６。
【０１２６】
ヒトメガリン遺伝子は、染色体２ｑ２４〜ｑ３１上に位置する（Ｋｏｒｅｎｂｅｒｇ  ＪＲ．ら，Ｇｅｎｏｍｉｃｓ  ２２：８８−９３，１９９４）。
【０１２７】
コレステロール負荷リポタンパク質の細胞取り込みを媒介することがその主たる役割であるＬＤＬ受容体とは異なり、メガリン、ＬＲＰ、およびＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーの他のメンバーは、構造的に異なる様々なリガンドに高親和性で結合する、および／または構造的に異なる様々なリガンドを認識する。メガリンが、その受容体を発現する組織へのタンパク質、脂溶性ビタミンおよびステロイドホルモンの取り込みに主として関与する無差別スカベンジャー受容体として機能することは証明されている。メガリン結合リガンドは、多くの多様なタンパク質および化学物質を含む。
【０１２８】
メガリン結合リガンドとしては、次のものが挙げられる。
【０１２９】
−  ビタミン結合タンパク質（例えば、トランスコバラミン−ビタミンＢ１２、ビタミン−Ｄ結合タンパク質、レチノール結合タンパク質、光受容体間レチノイド結合タンパク質が挙げられる）；
−  リポタンパク質（例えば、アポリポタンパク質Ｂ、アポリポタンパク質Ｅ、アポリポタンパク質Ｊ／クラステリン、アポリポタンパク質Ｈ／β２−糖タンパク質−Ｉが挙げられる）；
−  免疫およびストレス関連タンパク質（例えば、免疫グロブリン軽鎖、ＰＡＰ−１、β２−ミクログロブリンが挙げられる）；
−ステロイドホルモン結合タンパク質（例えば、性ホルモン結合タンパク質−エストロゲン、アンドロゲン結合タンパク質−アンドロゲンが挙げられる）；
−  ホルモンおよび前駆体（例えば、副甲状腺ホルモン、インスリン、上皮増殖因子、プロラクチン、サイログロブリンが挙げられる）；
−  酵素および酵素阻害剤（例えば、ＰＡＩ−１、ＰＡＩ−１−ウロキナーゼ、ＰＩＡ−１−ｔＰＡ、プロ−ウロキナーゼ、リポタンパク質リパーゼ、プラスミノゲン、β−アミラーゼ、β１−ミクログロブリン、リゾチーム、アプロチニンが挙げられる）；
−  他の担体タンパク質（例えば、アルブミン、ラクトフェリン、ヘモグロビン、臭気物質結合タンパク質、トランスサイレチンが挙げられる）；
−  低分子量ペプチドおよびホルモン（例えば、ＰＴＨ、インスリン、β２−ミクログロブリン、上皮増殖因子、プロラクチン、リゾチーム、シトクロムｃが挙げられる）；
−  薬物および毒素（例えば、アミノグリコシド、ゲンタマイシン、ポリミキシンＢ、アプロチニン、トリコサンチンが挙げられる）；
−  抗生物質（例えば、抗メガリン抗体、ウサギ抗ラットメガリン抗体、ウサギ免疫前ＩｇＧが挙げられる）；
−  他のリガンド（例えば、ＲＡＰ、Ｃａ２＋、シトクロムｃ、レチノール、レチナール、ＥＤＴＡ、サイログロブリン、プラスミノゲン、アルブミン、ラクトフェリンが挙げられる）。
【０１３０】
メガリンは、その受容体の細胞外ドメインを通してそのリガンドと相互作用する。結合は、複雑なタンパク質−タンパク質相互作用によって生ずる（リガンドが、タンパク質である場合）か、補体型反復配列内の負電荷を有するアミノ酸のアレイと正電荷を有する物質との単純なイオン性相互作用によって生ずる（リガンドが、化合物である場合）。脂溶性ビタミンおよびステロイドホルモンのメガリンへの結合は間接的であり、その受容体と、血漿中のこれらの物質を輸送する特定の担体タンパク質、例えばレチノール結合タンパク質または光受容体間レチノイド結合タンパク質など、との相互作用によって媒介される。
【０１３１】
本明細書において用いる場合、「メガリン」は、哺乳動物の網膜または網膜色素上皮細胞において発現されるタンパク質であって、そのｃＤＮＡコーディング配列が、Ｋｏｒｅｎｂｅｒｇ，Ｊ．Ｒ．ら（Ｇｅｎｏｍｉｃｓ．１９９４  Ｊｕｌ  １；２２（１）：８８−９３，１９９４）に開示されている遺伝子アクセッション番号Ｕ０４４４１、Ｈｊａｌｍ，Ｇ．ら（Ｅｕｒ  Ｊ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．２３９（１）：１３２−７，１９９６）に開示されている遺伝子アクセッション番号Ｕ３３８３７を有するヒトメガリンｃＤＮＡ配列、またはＳａｉｔｏら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９１：９７２５−９７２９，１９９４）に開示されている遺伝子アクセッション番号Ｌ３４０４９を有するラットメガリンｃＤＮＡ配列と少なくとも７５％のヌクレオチド同一性を有するタンパク質を指す。
【０１３２】
本明細書において用いる場合、「メガリン関連タンパク質」は、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーに属し、メガリンとの５０％より大きい相同性を有するタンパク質、または抗メガリン抗体（特定のもの）と高い特異性で反応するタンパク質を指す。
【０１３３】
「メガリン結合リガンド」は、（１）メガリンと結合する物質、（２）メガリンによって媒介されるメカニズムによってエンドサイトーシスにより細胞に組み込まれる物質、または（３）この定義の（１）もしくは（２）に記載した物質にそれ自体が結合する物質を意味する。
【０１３４】
用語「内因性メガリン結合リガンド」は、哺乳動物体内で産出または生産されるメガリン結合リガンドを意味する。
【０１３５】
「ヌクレオチド同一性」は、別のヌクレオチド配列、例えばヒトメガリンのヌクレオチド配列、に対して計算されるヌクレオチド配列の配列アラインメントを意味する。具体的に言うと、この用語は、標準的なアルゴリズムを用いてアラインされた少なくとも２つのヌクレオチド配列間の残基マッチ率を指す。そのようなアルゴリズムは、配列内にギャップを挿入し、標準化された再現可能な方法でそれらを比較して、配列間のアラインメントを最適化することができ、その結果、より意味のある比較を達成することができる。好ましくは、ヌクレオチド配列間の同一パーセントは、ＭＥＧＡＬＩＧＮ（商標）配列アラインメントプログラムのバージョン５に組み込まれているようなＣＬＵＳＴＡＬ  Ｗ  アルゴリズムのデフォルトパラメータを用いて決定する。このプログラムは、一式の分子生物分析プログラム、ＬＡＳＥＲＧＥＮＥ（商標）（ウィスコンシン州、マディソンのＤＮＡＳＴＡＲ）の一部である。ＣＬＵＳＴＡＬ  Ｗは、Ｔｈｏｍｐｓｏｎ  １９９４に記載されている。
【０１３６】
「ヌクレオチド配列」および「ポリヌクレオチド」は、１本鎖形態であれ、２本鎖形態であれ、ＤＮＡまたはＲＮＡを指す。用語「相補的ヌクレオチド配列」は、グアニジンヌクレオチド（Ｇ）とシチジンヌクレオチド（Ｃ）およびアデノシンヌクレオチド（Ａ）とチミジンヌクレオチド（Ｔ）の対合に従って別のヌクレオチド配列にアニール（結合）するヌクレオチド配列を指すが、但し、ＲＮＡの場合は、Ｔがウリジンヌクレオチド（Ｕ）で置換され、そのため、ＵがＡと結合する。
【０１３７】
ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、異なる組織タイプにおいて発現される。ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、網膜およびＲＰＥ細胞において、ならびに腎臓において発現される。メガリンは、眼内の網膜およびＲＰＥ細胞において、ならびに腎臓において発現される。
【０１３８】
キュブリン
キュブリン（一部の組織タイプにおいてメガリンと共局在化する４６０ｋＤａの膜関連タンパク質）は、細胞表面のリガンドを封鎖すること（その後、そのキュブリンと結合したリガンドが、メガリンの媒介によって内在化される）ことにより、エンドサイトーシスプロセスを助長することができる。前記リガンドは、キュブリンに結合する場合もあり、メガリンに直接結合する場合もある。しかし、キュブリンは、それ自体に対するエンドサイトーシスを媒介することはできないようであり、メガリンが、キュブリンと物理的に会合し、その内在化を媒介し得る。
【０１３９】
キュブリンの配列を次のとおり示す：
−  ｃＤＮＡ−ＸＭ＿０１１９０４
−  遺伝子：ＮＴ＿００８６８２（人類染色体１０  ワーキングドラフト配列セグメント）
受容体関連タンパク質（ＲＡＰ）
ＬＲＰ、メガリン、およびＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーの他のメンバーの正常なプロセッシングには、ＲＡＰ（３９ｋＤａタンパク質）の存在が必要である（Ｂｕ，Ｇ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７１，２２２１８−２２２２４，１９９６；Ｓｔｒｉｃｋｌａｎｄ，Ｄ．Ｋ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６，１３３６４−１３３６９，１９９１）。ＲＡＰは、３つの相同ドメインから成るようであり（Ｂｕ，Ｇ．ら，ＥＭＢＯ  Ｊ．１４，２２６９−２２８０，１９９５；Ｅｌｌｇａａｒｄ，Ｌ．ら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２４４，５４４−５５１，１９９７；Ｒａｉｌ，Ｓ．Ｃ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３，２４１５２−２４１５７，１９９８；Ｍｅｄｖｅｄ，Ｌ．Ｖ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，７１７−７２７，１９９９）、それらのうちのドメイン１は３ヘリックスバンドルから成ることが証明されている（Ｎｉｅｌｓｅｎ，Ｐ．Ｒ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．９４，７５２１−７５２５，１９９７）。ＲＡＰは、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのすべてのメンバーと相互作用し、すべての受容体／リガンド相互作用に対する万能アンタゴニストである。ＲＡＰドメイン１および３（ＲＡＰｄ３）は、両方とも、受容体結合性である（Ｗａｒｓｈａｗｓｋｙ，Ｉ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，２２０４６−２２０５４，１９９３）が、細胞内でのＲＡＰのシャペロン様機能を模倣するために十分なのはドメイン３のみである（Ｏｂｅｒｍｏｅｌｌｅｒ，Ｌ．Ｍ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７２，１０７６１−１０７６８，１９９７；Ｓａｖｏｎｅｎ，Ｒ．ら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，２５８７７−２５８８２，１９９９）。ＲＡＰドメイン２は、ｃＡＭＰ依存性プロテインキナーゼである（Ｐｅｔｅｒｓｅｎ，ＣＭ．ら，ＥＭＢＯ  Ｊ．１５，４１６５−４１７３，１９９６）が、ＲＡＰドメイン１および３と比較してＬＲＰおよびメガリンに対して非常に低い親和性しか有さない（Ｔａｕｒｉｓ，Ｊ．ら，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．４２９，２７−３０，１９９８）。ヒトＲＡＰの自律領域としては、ドメイン１（アミノ酸位置１８〜１１２）、ドメイン２（アミノ酸位置１１３〜２１８）およびドメイン３（アミノ酸位置２１９〜３２３）が挙げられる。
【０１４０】
ＲＡＰは、ＸＭ＿００３３１５、遺伝子：ＡＨ００６９４９に示されている配列を有することが証明されている。ＲＡＰは、高い親和性でＬＲＰに結合し（ＫＤ＝４ｎＭ）、この受容体のリガンド結合特性に拮抗して、リガンドの細胞内在化の媒介を防止する（Ｗｉｌｌｉａｍｓら，Ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｆｏｒ  ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  ｔｈｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  α２−ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ／ｌｏｗ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  ｓｉｔｅｓ  ｆｏｒ  ３９−ｋＤａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７，９０３５−９０４０，１９９２）。ＬＲＰは、それぞれが独立してＲＡＰによって調節される多数のリガンド結合部位を含有する。ＲＡＰは、高い親和性でｇｐ３３０（ＫＤ＝８ｎＭ）（Ｋｏｕｎｎａｓら，Ｔｈｅ  ３９ｋＤａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｉｎｔｅｒａｃｔｓ  ｗｉｔｈ  ｔｗｏ  ｍｅｍｂｅｒｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｌｏｗ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｆａｍｉｌｙ，α２−ｍａｃｒｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎｄ  ｇｌｙｃｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｇｐ３３０．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７，２１１６２−２１１６６，１９９２）およびＶＬＤＬ受容体（ＫＤ＝０．７ｎＭ）（Ｂａｔｔｅｙら，Ｔｈｅ  ３９ｋＤａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ−ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ｌｉｇａｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｖｅｒｙ  ｌｏｗ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９，２３２６８−２３２７３，１９９４）にも結合するが、ＬＤＬ受容体にはより低い親和性で結合し（ＫＤ＝５００ｎＭ）、ならびにこれらの受容体のリガンド結合特性にも拮抗する。内因的に追加されたＲＡＰまたはＲＰＡの過発現の両方が、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を阻害する（Ｗｉｌｌｎｏｗら，  Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｙｌｏｍｉｃｒｏｎ  ｒｅｍｎａｎｔ  ｕｐｔａｋｅ  ｂｙ  ｇｅｎｅ  ｔｒａｎｓｆｅｒ  ｏｆ  ａ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ａｎａｔａｇｏｎｉｓｔ．Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６４，１４７１−１４７４，１９９４）。外因性ＲＡＰがＲＰＥ細胞におけるＲＢＰ−レチノールの取り込みを阻害することを示す図１０も参照のこと。
【０１４１】
受容体結合および阻害の最小機能性ドメインを有し、それ故、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーのアンタゴニストとしても機能するＲＡＰの最小ドメイン、例えばペプチド、を単離することができる。１つの実施形態において、ＲＡＰ由来物質は、多くとも１０４のアミノ酸、好ましくは２０から６０のアミノ酸を有する最小機能性ドメインを含むペプチドである。詳細には、それらは、最小機能性タンパク質ドメインである。これらのペプチドは、多くとも１０４のアミノ酸、好ましくは２０から６０のアミノ酸を有する。好ましいドメインは、ＲＰＡのアミノ酸位置２１９〜３２３である。別の好ましいドメインは、ＲＡＰのアミノ酸位置１８〜１１２である。
【０１４２】
遺伝子ノックアウト研究により、ＲＡＰを欠く細胞は、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの発現の減少を示すことが証明された（おそらく、ＲＡＰが、新たに合成されたリガンドのＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーへの時期尚早な結合、および小胞体（ＥＲ）内でのその受容体の沈殿を防止するためである）。ＲＡＰ遺伝子欠損を誘導したマウスモデル（ノックアウトマウス）では、治療薬の取り込みが、ＲＡＰ遺伝子欠損を有さないマウスモデルと比較して５０％以下減少される。（Ｗｉｌｌｎｏｗら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｄ．９２：４５３７−４５４１，１９９５）。１つの実施形態において、網膜およびＲＰＥにおけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーが、ここで考えているリガンドおよび／または作用因子の細胞取り込みの責任を負うかどうかを評価する方法は、以下を含む。
【０１４３】
−  ＲＡＰ遺伝子欠損マウス（ノックアウトマウス）へのリガンドまたは作用因子の投与
−  （ＲＡＰ遺伝子欠損を有さない）野生型マウスへのリガンドまたは作用因子の投与
−  前記動物モデルおよび対照動物の網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるリガンドまたは作用因子の量の評価。
【０１４４】
このモデルにおいて、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーによって行われる網膜および／またはＲＰＥ細胞へのリガンドまたは作用因子の取り込みに責任を負うプロセスの寄与を定量することができる。ＲＡＰが十分なマウスと比較した、ＲＡＰ遺伝子欠損マウスにおけるリガンドまたは作用因子の細胞内蓄積の量は、その細胞内蓄積メカニズムが、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーによって媒介されるのか、または何らかの他のメカニズムによって媒介されるのかを示す。
【０１４５】
上述の実験は、メガリン遺伝子欠損を誘導したマウスモデル（ノックアウトマウス；Ｎｙｋｊａｅｒら，Ｃｅｌｌ，９６，５０７−５１５）を使用して行うこともできる。これらの動物モデルにおいて、網膜およびＲＰＥ細胞へのリガンドまたは作用因子取り込みに対するメガリンまたは他の受容体媒介または受容体依存性プロセスの寄与を試験することができる。十分なメガリンを有する対照と比較した、リガンドまたは作用因子の細胞内蓄積量は、その細胞内蓄積メカニズムが、メガリン結合によるのか、または何らかの他のメカニズムによるのかを示す。
【０１４６】
一部の実施形態において、前記リガンドは、レチノール、ＲＢＰ−レチノール複合体、またはＲＢＰ−レチノール−ＴＴＲ複合体である。一部の実施形態において、前記リガンドは、ＩＲＢＰ、ＩＲＢＰ−レチノール、またはＩＲＢＰ−レチナールである。一部の実施形態において、前記リガンドは、薬物または毒素である。別の実施形態において、前記リガンドは、抗生物質である。別の実施形態において、前記リガンドは、アミノグリコシドである。
【０１４７】
一部の実施形態において、網膜およびＲＰＥ細胞に関連した疾病および状態の診断、予防または治療の際、ここで考えられる作用因子を、ＲＡＰまたはＲＡＰポリペプチドにコンジュゲートさせることができる。例えば、ＵＳ  ２００６００２９６０９（これは、参照として取り入れられている）を参照のこと。
【０１４８】
化学および生化学用語
別様に定義していない限り、ここで用いるすべての技術および科学用語は、本特許請求の範囲に記載する主題が属する技術分野の技術者が一般に理解しているのと同じ意味を有する。別様に述べていない限り、ここで用いるクレーム用語および化学用語は、２００５年６月１０日出願の米国特許出願番号１１／１５０，６４１に定義されているとおりである（前記特許出願は、そのために本明細書に参照として取り入れられている）。本明細書における全開示を通して参照するすべての特許、特許出願、公開出願および公報、Ｇｅｎｂａｎｋ配列、ウェブサイトおよび他の出版物は、特に別様に述べていない限り、それら全体が参照として取り入れられている。万一、ここでの用語に多数の定義が存在する場合、このセクションにおけるものが勝る。ＵＲＬまたは他のそのような識別子もしくはアドレスを参照する場合、そのような識別子は変わる場合があり、インターネット上の特定の情報は移り変わる場合があるが、インターネットを検索することによって等価の情報を見つけることができると思われる。それらの参照は、そのような情報の利用可能性および一般普及の証拠となる。
【０１４９】
上述の一般的な説明と後続の詳細な説明は、両方とも、単に例示および説明のためのものであり、特許請求の範囲に記載する主題を制限するためのものでないと解釈すべきである。本出願において、単数形の使用は、特に別様に述べていない限り、複数形を包む。本出願において、「または」の使用は、別様の述べていない限り、「および／または」を意味する。さらに、用語「含む（現在分詞）（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」ならびに他の形、例えば、「含む（三人称現在単数形）（ｉｎｃｌｕｄｅｓ）」および「含む（過去分詞）（ｉｎｄｌｕｄｅｄ）」の使用は、制限されない。
【０１５０】
本明細書において用いるセクション表題は、単に構成のためのものであり、記載する主題を限定するものと解釈すべきでない。特許、特許出願、論説、本、マニュアルおよび論文をはじめとする（しかし、これらに限定されない）、本出願に引用するすべての文献、または文献の部分は、あらゆる目的でそれら全体が参照として本明細書に特に取り入れられている。
【０１５１】
用語「保護基」は、一部またはすべての反応性部分をブロックし、その保護基を除去するまでそのような基の化学反応への参加を防止する化学的部分を指す。それぞれの保護基を異なる手段によって除去できることが好ましい。完全に異なる反応条件下で切断される保護基は、差別的除去の要件を満たす。保護基は、酸、塩基、および水素化分解によって除去することができる。トリチル、ジメトキシトリチル、アセタールおよびｔ−ブチルジメチルシリルなどの基は、酸不安定性であり、水素化分解によって除去することができるＣｂｚ基で保護されたアミノ基および塩基不安定性であるＦｍｏｃ基の存在下、カルボキシおよびヒドロキシ反応性部分を保護するために使用することができる。カルボン酸およびヒドロキシ反応性部分は、ｔ−ブチルカルバメートなどの酸不安定性の基でブロックされた、または酸安定性でもあり、塩基安定性でもあるが、加水分解によって除去することができるカルバメートでブロックされたアミンの存在下、塩基不安定性の基、例えば、メチル、エチルおよびアセチル（これらに限定されない）でブロックすることができる。
【０１５２】
カルボン酸およびヒドロキシ反応性部分は、加水分解によって除去することができる保護基、例えばベンジル基、でブロックすることもでき、一方、酸と水素結合し得るアミン基は、Ｆｍｏｃなどの塩基不安定性の基でブロックすることができる。カルボン酸反応性部分は、本明細書において例示するような単純エステル誘導体への転化によって保護することができ、または酸化によって除去することができる保護基、例えば、２，４−ジメトキシベンジルでそれらをブロックすることができ、一方、共存するアミノ基をフッ化物不安定性シリルカルバメートでブロックすることができる。
【０１５３】
アリルブロッキング基は、酸保護基および塩基保護基の存在下で有用である。前者は、安定であり、後に金属またはπ酸触媒によって除去することができるからである。例えば、アリルでブロックされたカルボン酸は、酸不安定性ｔ−ブチルカルバメートまたは塩基不安定性酢酸アミン保護基の存在下、Ｐｄ０−触媒反応で脱保護することができる。保護基のさらに別の形態は、化合物または中間体を取り付けることができる樹脂である。前記残基が、前記樹脂に付いている限り、その官能基はブロックされ、反応することができない。前記樹脂から開放されると、その官能基を反応に利用できる。
【０１５４】
一般に、ブロッキング／保護基は、以下から選択することができる：
【０１５５】
【化４】
2009541357.tif 000005
他の保護基は、Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓ，Ｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ，３ｒｄ  Ｅｄ．，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，ＮＹ，１９９９（これは、その全体が本明細書に参照として取り入れられている）に記載されている。
【０１５６】
用語「随意に置換されている」は、参照する基が、アルキル、シクロアルキル、アリール、ヘテロアリール、ヘテロ脂肪族環、ヒドロキシ、アルコキシ、アリールオキシ、メルカプト、アルキルチオ、アリールチオ、シアノ、ハロ、カルボニル、チオカルボニル、イソシアナト、チオシアナト、イソチオシアナト、ニトロ、過ハロアルキル、過フルオロアルキル、シリルおよびアミノ（一および二置換アミノ基を含む）ならびにこれらの保護誘導体から個々におよび独立して選択される１つ以上の追加の基で置換されている場合があることを意味する。上の置換基の保護誘導体を形成することができる保護基は、当業者に公知であり、上記Ｇｒｅｅｎｅ  ａｎｄ  Ｗｕｔｓなどの参考文献において見つけることができる。
【０１５７】
本明細書に提示する化合物は、１つ以上のキラル中心を有する場合があり、それぞれの中心は、ＲまたはＳ配置で存在し得る。本明細書に提示する化合物は、ジアステレオマー形、エナンチオマー形およびエピマー形ならびにこれらの適切な混合物、すべてを含む。所望される場合には、例えば、キラルクロマトグラフカラムによる立体異性体の分離のような、当該技術分野において公知の方法により、立体異性体を得ることができる。
【０１５８】
本明細書に記載する方法および調合は、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を修飾する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）のＮ−オキシド、結晶形（多形体としても知られている）または医薬的に許容される塩、ならびに同じタイプの活性を有するこれらの化合物の活性代謝産物の使用を含む。一部の状況では、化合物が互変異性体として存在することもある。すべての互変異性体は、本明細書に提示する化合物の範囲に含まれる。加えて、本明細書に記載するＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子は、非溶媒和形で存在する場合もあり、ならびに水、エタノールなどのような医薬的に許容される溶媒との溶媒和形で存在する場合もある。本明細書に提示する化合物の溶媒和形も本明細書に開示されていると見なされる。
【０１５９】
本明細書中に出てくる様々なアミノ酸配列の中に存在するアミノ酸は、本明細書において用いる場合、それらの周知の三文字または一文字略語に従って識別される。様々なＤＮＡフラグメントの中に存在するヌクレオチドは、当該技術分野において常用されている標準一文字表示で示される（表１を参照のこと）。
【０１６０】
本明細書において用いる場合、アミノ酸残基は、ポリペプチドのそのペプチド結合での化学的消化（加水分解）によって形成されたアミノ酸を指す。本明細書に記載するアミノ酸残基は、一定の実施形態では、「Ｌ」異性体形である。所望の機能特性がそのポリペプチドによって維持されるのであれば、任意の「Ｌ」アミノ酸残基の代わりに「Ｄ」異性体形の残基を用いることができる。ＮＨ２は、ポリペプチドのアミノ末端に存在する遊離アミノ基を指す。ＣＯＯＨは、ポリペプチドのカルボキシル末端に存在する遊離カルボキシ基を指す。Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ．，２４３：３５５２  ５９（１９６９）に記載されている、および３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．§§１．８２１−１．８２２に記載されている標準ポリペプチド命名法に準拠して、アミノ酸残基の略語を下の表に示す：
【０１６１】
【表１】
2009541357.tif 000006
すべてのアミノ酸残基配列が、アミノ酸末端からカルボキシル末端への従来の方向で左から右の配向を有する式によって本明細書に表されていることに留意しなければならない。加えて、「アミノ酸残基」というフレーズは、上記対応表に載せたアミノ酸ならびに修飾されたおよび通常でないアミノ酸、例えば、３７  Ｃ．Ｆ．Ｒ．§§１．８２１−１．８２２において参照されているものおよび本明細書に参照として取り入れられているものを包含するように、広く定義する。さらに、アミノ酸残基配列の始まりまたは終わりのダッシュ記号が、１つ以上のアミノ酸残基のさらなる配列への、またはＮＨ２などのアミノ末端基への、またはＣＯＯＨなどのカルボキシル末端基へのペプチド結合を示すことに留意しなければならない。
【０１６２】
ペプチドまたはタンパク質において、アミノ酸の適する保存的置換は、当業者に公知であり、一般に、結果として得られる分子の生物活性を改変することなく行うことができる。一般に、ポリペプチドの非必須領域における単一アミノ酸置換が生物活性を実質的に改変しないことは、当業者に認知されている（例えば、Ｗａｔｓｏｎら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ，４ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９８７，Ｔｈｅ  Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｒｎｉｎｇｓ  Ｐｕｂ．ｃｏ．，ｐ２２４を参照のこと）。
【０１６３】
そのような置換は、以下の表２に示すものに従って行うことができる：
【０１６４】
【表２】
2009541357.tif 000007
他の置換も許容可能であり、経験的にまたは公知の保存的置換に従って決定することができる。
【０１６５】
本明細書において用いる場合、用語「選択的結合化合物」は、１つ以上のターゲット受容体の任意の部分に選択的に結合する作用因子を指す。
【０１６６】
本明細書において用いる場合、用語「選択的に結合する」は、非ターゲット受容体に結合するより大きな親和性でターゲット受容体に結合する選択的結合剤の能力を指す。一定の実施形態において、特異的結合は、非ターゲットに対する親和性より少なくとも１０、５０、１００、２５０、５００、１０００倍またはそれ以上大きい親和性でのターゲットへの結合を指す。
【０１６７】
本明細書において用いる場合、「ターゲット受容体」は、選択的結合化合物によって結合され得る受容体のまたは受容体の部分を指す。一定の実施形態において、ターゲット化合物は、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーである。一部の実施形態において、前記ターゲット受容体は、レチノイド結合タンパク質受容体である。一部の実施形態において、前記レチノイド結合タンパク質受容体は、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーである。
【０１６８】
本明細書において用いる場合、「作用因子」は、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーと相互作用することができ、その結果、前記受容体タンパク質の活性を調節することができる任意の物質を指す。
【０１６９】
本明細書において用いる場合、用語「モジュレーター」は、分子の活性を改変する化合物を指す。例えば、モジュレーターは、例えばＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーなどの分子の一定の活性の大きさを、そのモジュレーターが不在の状態でのその活性の大きさと比較して、増加させる場合もあり、減少させる場合もある。一定の実施形態において、モジュレーターは、分子の１つ以上の活性の大きさを減少させる阻害剤である。一定の実施形態において、阻害剤は、分子の１つ以上の活性を完全に防止する。一定の実施形態において、モジュレーターは、分子の少なくとも１つの活性の大きさを増加させるアクチベーターである。一定の実施形態において、モジュレーターの存在は、そのモジュレーターが不在の状態では発生しない活性を生じさせる結果となる。
【０１７０】
ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーなどの対象ペプチドの生物活性を調節する作用因子は、適切な対照と比較して、その活性を少なくとも約１０％、少なくとも約１５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約１００％、または少なくとも約２倍、少なくとも約５倍、もしくは少なくとも約１０倍増加または減少させる。
【０１７１】
用語「リガンド」は、例えばＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーなどの別の分子上の特定部位に結合する任意の分子を指す。
【０１７２】
用語「内因性リガンド」または「内因性結合リガンド」は、哺乳動物体内で産生または生産されるリガンドを意味する。
【０１７３】
用語「調節する」は、適切な対照と比較したときの、測定される活性の増加もしくは減少、刺激、阻害または遮断を包含する。
【０１７４】
細胞における「核酸の発現レベルを調節する」作用因子は、候補作用因子との細胞の接触後、その作用因子を欠く対照と比較して、ｍＲＮＡおよび／またはポリペプチドのレベル（すなわち、量）の少なくとも約１．２５倍、少なくとも約１．５倍、少なくとも約２倍、少なくとも約５倍、少なくとも約１０倍、またはそれ以上の増加または減少を生じさせるものである。
【０１７５】
網膜およびＲＰＥ細胞においてＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに結合する作用因子は、一般に、例えばレチノイド結合タンパク質などの天然リガンドより、受容体タンパク質に対して、大きな親和性を有するであろう。前記作用因子は、レチノイド結合タンパク質より、網膜およびＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに対して、少なくとも２倍大きな親和性を有するであろう。別の実施形態において、前記作用因子は、レチノイド結合タンパク質より、網膜およびＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに対して、少なくとも５倍大きな親和性を有するであろう。別の実施形態において、前記作用因子は、レチノイド結合タンパク質より、網膜およびＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに対して、少なくとも１０倍大きな親和性を有するであろう。前記受容体に対する親和性は、当該技術分野において公知の標準的な方法によって測定される。
【０１７６】
本明細書において用いる場合、「レチノイド結合タンパク質」は、レチノイドに結合することができる任意の担体タンパク質を指す。特定のレチノイド結合タンパク質が具体的に指定されていない限り、レチノイド結合タンパク質は、例えば、レチノール結合タンパク質（ＲＢＰ）、間質レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）、レチナールアルデヒド結合タンパク質（ＲＡＬＢＰ）、細胞レチノール結合タンパク質（ＣＲＢＰ）、および細胞レチナールアルデヒド結合タンパク質（ＣＲＡＬＢＰ）を含む。
【０１７７】
本明細書において用いる場合、「光受容体間レチノイド結合タンパク質」および「間質レチノール結合タンパク質」は、交換可能に用いており、同じタンパク質を指す。
【０１７８】
ここで用いる場合、用語「受容体媒介活性」は、受容体へのリガンドの結合の結果として直接または間接的に生ずる任意の生物活性を指す。
【０１７９】
本明細書において用いる場合、用語「アゴニスト」は、その存在が、その受容体についての天然リガンドの存在の結果として生ずる生物活性と同じである、受容体の生物活性を生じさせる結果となる化合物を指す。
【０１８０】
ここで用いる場合、用語「部分アゴニスト」は、その存在が、その受容体についての天然リガンドの存在の結果として生ずる活性とタイプは同じだが、大きさはそれより小さい、受容体の生物活性を生じさせる結果となる化合物を指す。
【０１８１】
本明細書において用いる場合、用語「アンタゴニスト」は、その存在が、受容体の生物活性の大きさを減少させる結果となる化合物を指す。一定の実施形態において、アンタゴニストの存在は、受容体の生物活性の完全阻害を生じさせる結果となる。
【０１８２】
本明細書において用いる場合、ＩＣ５０は、アンドロゲン受容体活性の調節などの最大応答の５０％阻害をそのような応答を測定するアッセイにおいて達成する、特定の試験化合物の量、濃度または用量を指す。
【０１８３】
本明細書において用いる場合、ＥＣ５０は、その特定の試験化合物によって誘導、誘発または強化される特定の応答の最大発現の５０％の用量依存性応答を惹起する、特定の試験化合物の用量、濃度または量を指す。
【０１８４】
本明細書において交換可能に用いる用語「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は、天然アミノ酸、コードされたおよびコードされていないアミノ酸、化学的にまたは生化学的に修飾された、誘導体化された、またはデザイナーアミノ酸、アミノ酸類似体、ペプチド模倣体、およびデプシペプチド、ならびに修飾された、環式、二環式、デプシ環式、またはデプシ二環式ペプチド骨格を有するポリペプチドを包含し得る、任意の長さのアミノ酸の重合体形を指す。この用語は、コンジュゲートしたタンパク質、融合タンパク質（ＧＳＴ融合タンパク質、非相同アミノ酸配列を有する融合タンパク質、非相同および相同リーダー配列を有する融合タンパク質、Ｎ末端メチオニン残基を有するまたは有さない融合タンパク質を含むが、これらに限定されない）、ＰＥＧ化タンパク質、および免疫標識タンパク質も包含する。天然タンパク質の異形もこの用語に包含され、そのような異形は、その天然タンパク質ならびに異なる種からの対応する相同体と相同であるか、実質的に類似している。ポリペプチド配列の変異体は、その対象ポリペプチドと比較して挿入、付加、欠失または置換を含む。この用語は、ペプチドアプタマーも包含する。
【０１８５】
ここで用いる場合、用語「組織選択的」は、ある作用因子が、ある組織における生物活性を、それが別の組織における生物活性を調節するより大きなまたは小さな程度に、調節できることを指す。異なる組織における生物活性は、同じであることもあり、または異なることもある。異なる組織における生物活性が同じタイプのターゲット受容体によって媒介されることもある。例えば、一定の実施形態において、組織選択的化合物は、ある組織ではＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに関連した生物活性を調節することができ、別の組織タイプではＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに関連した生物活性を調節できないか、より少ない程度に調節することができる。
【０１８６】
「活性フラグメント」は、天然分子の構造的、調節または生化学的機能、または代謝もしくは生理プロセスに関連または付随する任意の機能を有するフラグメントである。例えば、フラグメントは、それがある分子と別の分子の相互作用に関与するとき、それが疾病状態を緩和する点で治療的価値を有するとき、またはそれが疾病の発生を予防もしくは減少させる点で予防的価値を有するとき、またはそれが分子に対する免疫応答を誘導するとき、活性を示す。活性ポリペプチドフラグメントは、本明細書に記載するポリペプチドの活性と必ずしも同一でないが、それに類似した活性を示すものを含む。前記活性としては、改善された望ましい活性、または減少された望ましくない活性を挙げることができる。
【０１８７】
核酸分子の「発現」は、遺伝子産物への情報の変換を指す。遺伝子産物は、遺伝子の直接転写産物（例えば、ｍＲＮＡ、ｔＲＮＡ、ｒＲＮＡ、アンチセンスＲＮＡ、リボザイム、構造ＲＮＡ、もしくは任意の他のタイプのＲＮＡ）である場合もあり、またはｍＲＮＡの翻訳によって生産されたタンパク質である場合もある。遺伝子産物は、例えばキャッピング、ポリアデニル化、メチル化および編集などのプロセスによって修飾されているＲＮＡ、ならびに例えばメチル化、アセチル化、リン酸化、ユビキチン化、ＡＤＰ−リボシル化、ミリスチル化およびグリコシル化によって修飾されているタンパク質も含む。
【０１８８】
本開示のための「遺伝子」は、遺伝子産物をコードするＤＮＡ領域、ならびにその遺伝子産物の生産を調節するすべてのＤＮＡ領域（そのような調節配列がコーディングおよび／または転写配列に隣接していようと、いなかろうと）を包含する。従って、遺伝子は、プロモーター配列、ターミネーター、翻訳調節配列（例えば、リボソーム結合部位および内部リボソーム侵入部位）、エンハンサー、サイレンサー、絶縁体、境界要素、複製起点、マトリックス付着部位、および遺伝子座制御領域を含むが、必ずしもこれらに限定されない。
【０１８９】
用語「抗体」は、特定の抗原を認識することができ、それに結合することができる、免疫系によって産生されたタンパク質を指す。抗体、および抗体を作る方法は、当該技術分野において一般に公知である。
【０１９０】
ここで用いる場合、用語「抗体」は、ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体製剤、ならびにハイブリッド抗体、改変抗体、キメラ抗体およびヒト化抗体を含む製剤、ならびにハイブリッド（キメラ）抗体分子；Ｆ（ａｂ’）２およびＦ（ａｂ）フラグメント；Ｆｖ分子（一価ヘテロ二量体）；１本鎖Ｆｖ分子（ｓＶｖ）；二量体および三量体抗体フラグメント構築物；ミニボディー；ヒト化抗体分子；およびそのような分子から得られる任意の機能性フラグメント（この場合、そのようなフラグメントは、特異的結合を維持する）を包含する。
【０１９１】
「抗原」は、免疫応答を誘発する物質である。
【０１９２】
「エピトープ」は、抗体が結合する抗原性分子の部位である。
【０１９３】
「アゴニスト抗体」は、アゴニストが相互作用する分子の機能を模倣する、強化する、刺激する、または活性化するものである。
【０１９４】
「アンタゴニスト抗体」は、アンタゴニストが相互作用する分子の活性と競合する、該活性を阻害する、または該活性に干渉するものである。例えば、アンタゴニスト抗体は、活性応答を誘導することなく受容体に結合することができる。
【０１９５】
「抗原結合フラグメント（Ｆａｂフラグメント）」は、ジスルフィド連結ヘテロ二量体であり、そのそれぞれの鎖は、１つの免疫グロブリン定常領域（Ｃ）ドメインおよび１つの可変領域（Ｖ）ドメインを含有し、そのＶドメインの並置が抗原結合部位を構成する。無損傷免疫グロブリン分子の２つのＦａｂフラグメントがその２つのアームに相当し、それらは、一般に、重鎖のＶおよびＣ１ドメインと対合した軽鎖を含有する。
【０１９６】
「フラグメント結晶化可能フラグメント（Ｆｃフラグメント）」は、エフェクター分子および細胞と相互作用する抗体分子の部分である。それは、免疫グロブリン重鎖のカルボキシ末端部分を含む。重鎖アイソタイプ間の機能の違いは、主としてＦｃフラグメントにある。
【０１９７】
抗体の「定常領域」は、エフェクター領域であり、その抗体の機能クラスを決める。重および軽鎖の定常領域は、カルボキシル末端にまたはカルボキシ末端の近くに位置する。
【０１９８】
抗体の「可変領域」は、抗原に結合する領域であり、それが抗体特異性をもたらす。重および軽鎖の可変領域は、アミノ末端にまたはアミノ末端の近くに位置する。「ＶＨ」フラグメントは、重鎖の可変領域を含有し、「ＶＬ」フラグメントは、軽鎖の可変領域を含有する。
【０１９９】
「免疫グロブリン」は、抗体分子である。
【０２００】
「重鎖」は、協力して免疫グロブリンを形成するポリペプチド鎖の２つクラスのうちの大きなほうのものである。この重鎖のクラスが、その免疫グロブリンのクラス、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＡ、ＩｇＥ、ＩｇＤまたはＩｇＭを決める。
【０２０１】
「軽鎖」は、協力して免疫グロブリン分子を形成するポリペプチド鎖の２つのクラスのうちの小さいほうのものである。一般に、軽鎖は、それらの定常領域の構造の違いに基づいて２つのクラス、カッパおよびラムダ、に分類される。
【０２０２】
「相補性決定領域（ｃｄｒ）」は、抗原特異性をもたらす抗体の三次元構造である。
【０２０３】
「フレームワークフラグメント」は、比較的不変な配列を含有し、超可変領域間にある、可変ドメインの領域である。フレームワーク領域は、超可変領域のタンパク質骨格となる。
【０２０４】
「ヒト化」抗体は、ヒト免疫グロブリン配列を主として含有する抗体である。この用語は、ヒト配列の部分を組み込むように修飾された非ヒト免疫グロブリンを指すために一般には用いられており、完全にヒト免疫グロブリン配列を含有するヒト抗体を含む場合もある。
【０２０５】
「１本鎖抗体」は、ペプチドによって軽鎖のＶドメインに連結された重鎖のＶドメインのみを含むＦａｂフラグメントである。
【０２０６】
「ポリクローナル抗体」は、様々な抗原またはエピトープに対する免疫処置を施した動物の血清におけるような、異なる特異性の抗体の混合物である。
【０２０７】
「モノクローナル抗体」は、均一抗体集団を有する抗体組成物である。この用語は、抗体の種および源に関して限定されず、それを作る手法によっても限定されない。この用語は、全免疫グロブリンおよび免疫グロブリンフラグメントを包含する。
【０２０８】
ポリクローナル抗体およびモノクローナル抗体を作る方法は、当該技術分野において公知である。ポリクローナル抗体は、適する動物（例えば、マウス、ラット、ウサギ、ヒツジまたはヤギ）を対象となる抗原（例えば、抗原をコードする遺伝子で形質転換された幹細胞）で免疫することによって産生される。免疫原性を強化するために、免疫前に抗原を担体に連結させてもよい。適する担体は、一般に、大きな、ゆっくりと代謝される高分子、例えば、タンパク質、多糖類、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、高分子アミノ酸、アミノ酸コポリマー、脂質凝集物（例えば、油滴またはリポソーム）および不活性ウイルス粒子である。そのような担体は、通常の当業者に周知である。さらに、抗原は、細菌トキソイド、例えばジフテリア、破傷風、コレラなどからのトキソイド、とコンジュゲートさせて、その免疫原性を強化することができる。
【０２０９】
抗体結合の文脈での用語「特異的に結合する」は、抗体の、特定のポリペプチドに対する、またはより正確には、特定のポリペプチドのエピトープに対する、高い結合力および／または高い親和性での結合を指す。ポリペプチド上のそのようなエピトープへの抗体の結合は、任意の他のエピトープ、特に、対象となるポリペプチドに関連した分子中または対象となるポリペプチドと同じサンプル中に存在し得る他のエピトープ、への同抗体の結合より強いはずである。例えば、抗体が、あるエピトープに別のエピトープより強く結合するとき、結合条件を調整することにより、特定のエピトープにほぼ排他的に結合し、同じポリペプチド上の他のいかなるエピトープにも結合せず、およびそのエピトープを含まない他のいかなるポリペプチドにも結合しない抗体を得ることができる。対象ポリペプチドに特異的に結合する抗体は、検出可能であるが弱いレベル（例えば、対象となるポリペプチドに示される結合の１０％以下）で他のポリペプチドに結合できる場合もある。そのような弱い結合、すなわちバックグラウンド結合は、適切な対照の使用により、対象ポリペプチド特異的抗体結合と容易に見分けることができる。一般に、本発明の抗体は、１０−７Ｍ以上（例えば、１０−８Ｍ、１０−９Ｍ、１０−１０Ｍ、１０−１１Ｍ、など）の結合親和性で特定のポリペプチドに結合する。
【０２１０】
「疾病」は、生物の病的な、異常な、および／または有害な状態である。この用語は、状態、症候群および疾患を包含する。
【０２１１】
本明細書において用いる場合、「治療」、「治療すること」などは、所望の薬理学的および／または生理的効果を得ることを指し、ヒトをはじめとする哺乳動物における病的状態または疾患の任意の治療を包含する。前記効果は、疾患もしくはその症候群を完全にもしくは部分的に予防する点で予防的である場合もあり、ならびに／または疾患および／もしくはその疾患に起因し得る有害効果についての部分的もしくは完全な治癒という点で治療的である場合もある。すなわち、「治療」は、（１）その疾患の素因を有するかもしれないが、まだそれに罹患したと診断されていない被験者においてその疾患が発生もしくは再発するのを予防すること、（２）その疾患の抑制、例えば、その発現の阻止、（３）宿主がもはや疾患もしくはその症状に罹患しないように、例えば、喪失した、失われたもしくは欠如した機能を回復もしくは修復することにより、または効率の悪いプロセスを刺激することにより、その疾患もしくはその症状の退行を生じさせるような、その疾患もしくは少なくともそれに随伴する症状の停止もしくは終結、または（４）その疾患もしくはそれに随伴する症状を軽減、緩和もしくは改善すること（この場合の改善は、広義で、パラメータの大きさが少なくとも低減することを指す）を含む。
【０２１２】
ここで用いる場合、「フラグメント」は、無損傷完全長タンパク質配列および構造の一部のみから成るポリペプチド、例えばタンパク質ドメイン、と解釈する。このフラグメントは、天然ポリペプチドのＣ末端欠失、Ｎ末端欠失および／または内部欠失を含む場合がある。タンパク質のフラグメントは、一般に、その完全長分子の少なくとも約５〜１０の連続するアミノ酸残基、好ましくは、その完全長分子の少なくとも約１５〜２５の連続するアミノ酸残基、および最も好ましくは、その完全長分子の少なくとも約２０〜５０もしくはそれ以上の連続するアミノ酸残基、または５アミノ酸とその完全長配列の間の任意の整数のアミノ酸を含む。
【０２１３】
上で述べたように、「生物活性の」実体、または「生物活性」を有する実体は、天然分子の構造的、調節もしくは生化学的機能、または代謝もしくは生理プロセスに関連もしくは随伴する任意の機能を有するものである。生物活性ポリペプチドフラグメントは、完全長ポリペプチドの活性と必ずしも同一でないが、それに類似した活性を示すものである。前記生物活性としては、改善された望ましい活性、または減少された望ましくない活性を挙げることができる。例えば、ある実体は、それがある分子と別の分子の相互作用に関与するとき、またはそれが疾病状態を緩和するという点で治療的価値を有するとき、またはそれがその分子の免疫応答を誘導する点で予防的価値を有するとき、またはそれがその分子の存在を決定する点で診断的価値を有するとき、生物活性を示す。生物活性ポリペプチドまたはそのフラグメントとしては、生物学的反応に関与することができるもの、例えば、転写の開始のために他の転写因子と協力する転写因子など、または免疫応答、例えば抗体の生産、を刺激するためにエピトープもしくは免疫原としての役割を果たすことができるもの、または細胞内にもしくは細胞から分子を輸送することができるもの、または触媒活動、例えば重合もしくはヌクレアーゼ活動、を行うことができるもの、または受容体、タンパク質もしくは核酸、活性化酵素もしくは物質に結合することによってシグナル伝達に関与することができるものが挙げられる。
【０２１４】
「単離された」、「精製された」、もしくは「実質的に単離された」ポリペプチド、または「実質的に純粋な形態」の、「実質的に精製された形態」の、「実質的に純粋」である、もしくは「単離体」としてのポリペプチドは、天然ではそれに随伴する材料が、または対象ポリペプチドの配列もしくはフラグメントを含まない他のポリペプチド配列が実質的にないものである。実質的にないとは、その組成の約９０％未満、約８０％未満、約７０％未満、約６０％未満、または約５０％未満が、その単離されたポリペプチド以外の材料で構成されていることを意味する。全高分子の少なくとも約９９％が単離されたポリペプチドである場合、そのポリペプチドは、少なくとも約９９％の純度であり、その組成は、約１％未満の不純物を含む。そのような単離されたポリペプチドは、起源のためまたは操作により、天然ではそれらに随伴する材料のすべてもしくは一部分を随伴しない、それらが自然で連結しているもの以外の分子に連結している、または天然では発生しない、組換えポリペプチド、修飾、標識および融合ポリペプチド、ならびに化学的に合成されたポリペプチドである場合もある。
【０２１５】
本明細書において提供する検出方法は、定性的である場合もあり、または定量的である場合もある。従って、本明細書において用いる場合、用語「検出すること」、「同定すること」、「判定すること」などは、定性的判定と定量的判定の両方を指し、「測定すること」を包含する。例えば、検出方法としては、生体サンプル中のポリヌクレオチドまたはポリペプチドの存在および／またはレベルを検出するための方法、ならびにサンプル中のポリヌクレオチドまたはポリペプチドの生物活性の存在および／またはレベルを検出するための方法が挙げられる。
【０２１６】
本明細書において用いる場合、「生体サンプル」は、生物学的液体、例えば、血液、血清、血漿、尿、脳脊髄液、涙、唾液、リンパ液、透析液、洗浄液、精液、および生物起源の他の液体サンプルまたは組織を含む。それは、細胞またはそこから誘導された細胞およびそれらの子孫（培養での細胞を含む）、細胞上清、ならびに細胞溶解産物を含む。それは、臓器または組織培養由来の液体、組織生検サンプル、腫瘍生検サンプル、糞便サンプル、および生理組織から抽出された液体を含む。固形組織から解離した細胞、組織切片、および細胞溶解産物を含む。この定義は、それらの獲得後に何らかの方法で、例えば、試薬での処理、可溶化、またはポリヌクレオチドもしくはポリペプチドなどの一定の成分についての富化により、操作されたサンプルも含む。生体サンプルの誘導体および画分もこの用語に包含される。生体サンプルは、診断アッセイまたはモニタリングアッセイにおいて使用することができる。
【０２１７】
本明細書において用いる場合、用語「核酸」は、１本鎖および／または２本鎖ポリヌクレオチド、例えば、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）およびリボ核酸（ＲＮＡ）、ならびにＲＮＡまたはＤＮＡの類似体または誘導体を指す。核酸分子は、３’，５’ホスホジエステル連結によって連結されたヌクレオチドの線状ポリマーである。ＤＮＡ、デオキシリボ核酸、において、糖基は、デオキシリボースであり、ヌクレオチドの塩基は、アデニン、グアニン、チミジンおよびシトシンである。ＲＮＡ、リボ核酸、は、糖としてリボースを有し、ウラシルがチミジンに取って代わる。核酸の類似体、例えば、ペプチド核酸（ＰＮＡ）、ホスホロチオエートＤＮＡ、および他のそのような類似体および誘導体またはそれらの組み合わせも、この用語「核酸」に包含される。
【０２１８】
ここで用いる場合、用語「ポリヌクレオチド」は、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）、リボ核酸（ＲＮＡ）、および例えばヌクレオチド類似体またはホスホジエステル結合以外の「骨格」結合（例えば、ホスホトリエステル結合、ホスホラミデート結合、メチルホスホン酸ジエステル結合、ホスホロチオエート結合、チオエステル結合もしくはペプチド結合（ペプチド核酸））を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ誘導体をはじめとする、少なくとも２つの連結されたヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体を含有するオリゴマーまたはポリマーを指す。本明細書では「ポリヌクレオチド」と本質的に同義で用語「オリゴヌクレオチド」も用いるが、当業者は、オリゴヌクレオチド、例えばＰＣＲプライマー、が、一般に、ヌクレオチド数約５０未満から１００の長さであることを認識している。
【０２１９】
ポリヌクレオチドは、切断に対して比較的耐性である１つ以上の結合を含有する場合もあり、例えば、キメラオリゴヌクレオチドプライマーは、ペプチド核酸結合によって連結されたヌクレオチドを含むことができ、且つ、ホスホジエステル結合などによって連結されており、ポリメラーゼによって伸長され得る少なくとも１つのヌクレオチドをその３’末端に含むことができる。ペプチド核酸配列は、周知の方法（例えば、Ｗｅｉｌｅｒら（１９９７）Ｎｕｃｌｅｉｃ  ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：２７９２−２７９９を参照のこと）を用いて作製することができる。
【０２２０】
ポリヌクレオチドは、より大きな核酸分子の一部分、例えば、多形領域を含有し得る遺伝子の一部分、または染色体の遺伝子外領域の一部分、例えば、短鎖縦列反復配列（ＳＴＲ）遺伝子座、高変異反復配列（ＶＮＴＲ）遺伝子座、マイクロサテライト遺伝子座またはミニサテライト遺伝子座などのヌクレオチド反復配列の一領域の一部分である場合もある。ポリヌクレオチドは、１本鎖もしくは２本鎖である場合もあり（例えば、ＤＮＡ−ＲＮＡハイブリッドを含む）、または３本鎖もしくは４本鎖である場合もある。ポリヌクレオチドが２本鎖ＤＮＡである場合、それは、Ａ、Ｂ、ＬまたはＺ配置であり得、１本鎖ポリヌクレオチドは、そのような配置の組み合わせを含み得る。
【０２２１】
ここで用いる場合、ＤＮＡまたは核酸相同体は、前もって選択された保存ヌクレオチド配列、例えば、治療用ポリペプチドをコードする配列、を含む核酸を指す。用語「実質的に相同性の」とは、それとの少なくとも８０％、少なくとも９０％もしくは少なくとも９５％の相同性またはより低い割合の相同性もしくは同一性および保存された生物活性または機能を有することを意味する。
【０２２２】
用語「相同性」および「同一性」は、多くの場合、交換可能に用いている。これに関して、相同性または同一性パーセントは、例えば、ＧＡＰコンピュータプログラムを用いて配列情報を比較することにより、決定することができる。ＧＡＰプログラムは、ＳｍｉｔｈおよびＷａｔｅｒｍａｎ（Ａｄｖ．Ａｐｐｌ．Ｍａｔｈ．２：４８２（１９８１））によって修正されたような、ＮｅｅｄｌｅｍａｎおよびＷｕｎｓｃｈのアラインメント方法（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．４８：４４３（１９７０））を利用する。簡単に言うと、ＧＡＰプログラムは、類似性を、類似しているアラインされた記号（例えば、ヌクレオチドまたはアミノ酸）の数をその２つの配列のうち短いほうの配列内の記号の総数で割ったものとして定義する。ＧＡＰプログラムのデフォルトパラメータとしては、（１）単項比較行列（同一であることの１および同一でないことの０の値を含む）およびＳｃｈｗａｒｔｚ  ａｎｄ  Ｄａｙｈｏｆｆ，ｅｄｓ．，ＡＴＬＡＳ  ＯＦ  ＰＲＯＴＥＩＮ  ＳＥＱＵＥＮＣＥ  ＡＮＤ  ＳＴＲＵＣＴＵＲＥ，Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ，ｐｐ．３５３−３５８（１９７９）によって記載されたような、Ｇｒｉｂｓｋｏｖ  ａｎｄ  Ｂｕｒｇｅｓｓ，Ｎｕｃｌ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１４：６７４５（１９８６）の重みつき比較行列、（２）それぞれのギャップについての３．０のペナルティー、およびそれぞれのギャップ内のそれぞれの記号について追加の０．１０のペナルティー、および（３）末端ギャップについてはペナルティーなし、を挙げることができる。
【０２２３】
任意の２つの核酸分子が、少なくとも８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％「同一」であるヌクレオチド配列を有するかどうかは、例えば「ＦＡＳＴＡ」プログラムなどの公知のコンピュータアルゴリズムを使用し、例えば、Ｐｅａｒｓｏｎ  ａｎｄ  Ｌｉｐｍａｎ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：２４４４（１９９８）におけるようなデフォルトパラメータを用いて判定することができる。あるいは、米国国立生物工学情報センター（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ）データベースのＢＬＡＳＴ機能を使用して同一性を判定することができる。
【０２２４】
一般に、配列は、最高度のマッチが得られるようにアラインされる。「同一性」それ自体は、当該技術分野において認知されている意味を有し、出版物に記載されている技術を用いて計算することができる。（例えば、Ｃｏｍｐｕｔａｔｉｏｎａｌ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｌｅｓｋ，Ａ．Ｍ．，ｅｄ．，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９８８；Ｂｉｏｃｏｍｐｕｔｉｎｇ：Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｃｓ  ａｎｄ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ｐｒｏｊｅｃｔｓ，Ｓｍｉｔｈ，Ｄ．Ｗ．，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９３；Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ｄａｔａ，Ｐａｒｔ  Ｉ，Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ａ．Ｍ．，ａｎｄ  Ｇｒｉｆｆｉｎ，Ｈ．Ｇ．，ｅｄｓ．，Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｊｅｒｓｅｙ，１９９４；Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，ｖｏｎ  Ｈｅｉｎｊｅ，Ｇ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９８７；およびＳｅｑｕｅｎｃｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｐｒｉｍｅｒ，Ｇｒｉｂｓｋｏｖ，Ｍ．ａｎｄ  Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．，ｅｄｓ．，Ｍ．Ｓｔｏｃｋｔｏｎ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，１９９１を参照のこと）。２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列間の同一性を測定する方法は多数存在しており、用語「同一性」は、当業者に周知である（Ｃａｒｉｌｌｏ，Ｈ．＆  Ｌｉｐｔｏｎ，Ｄ．，ＳＩＡＭ  Ｊ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ  ４８：１０７３（１９８８））。２配列間の同一性または類似性を判定するために一般に利用される方法としては、Ｇｕｉｄｅ  ｔｏ  Ｈｕｇｅ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒｓ，Ｍａｒｔｉｎ  Ｊ．Ｂｉｓｈｏｐ，ｅｄ．，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，１９９４、およびＣａｒｉｌｌｏ，Ｈ．＆  Ｌｉｐｔｏｎ，Ｄ．，ＳＩＡＭ  Ｊ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｍａｔｈ  ４８：１０７３（１９８８）に開示されているものが挙げられるが、これらに限定されない。同一性および類似性を判定するための方法は、コンピュータプログラムで体系化される。２配列間の同一性および類似性を判定するためのコンピュータプログラム法としては、ＧＣＧプログラムパッケージ（Ｄｅｖｅｒｅｕｘ，Ｊ．ら，Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  １２（Ｉ）：３８７（１９８４））、ＢＬＡＳＴＰ、ＢＬＡＳＴＮ、ＦＡＳＴＡ（Ａｔｓｃｈｕｌ，Ｓ．Ｆ．ら，Ｊ．Ｍｏｌｅｃ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３（１９９０）が挙げられるが、これらに限定されない。
【０２２５】
従って、本明細書において用いる場合、用語「同一性」は、試験ポリペプチドまたはポリヌクレオチドと参照ポリペプチドまたはポリヌクレオチドとの比較を表す。例えば、試験ポリペプチドは、参照ポリペプチドと９０％以上同一である任意のポリペプチドと定義することができる。
【０２２６】
本明細書において用いる場合、少なくとも「９０％同一の」という用語は、参照ポリペプチドに関して９０から９９．９９の同一性パーセントを指す。９０％以上のレベルでの同一性は、例示を目的として、アミノ酸数１００の試験および参照ポリペプチド長を比較すると仮定して、試験ポリペプチド中の１０％（例えば、１００のうち１０）以下が、参照ポリペプチドのものと異なることを示す。同様の比較を試験ポリヌクレオチドと参照ポリヌクレオチドの間で行うことができる。このような相違は、アミノ酸配列の全長にわたってランダムに分布している点突然変異として表される場合もあり、または、許容可能最大値、例えば１０／１００のアミノ酸の相違（約９０％の同一性）までの様々な長さで１つ以上の位置に集中発生している場合もある。相違は、核酸またはアミノ酸の置換または欠失と定義する。
【０２２７】
実質的に同一または実質的に相同または類似のという用語は、当業者に理解されているようにその文脈によって変化し、一般には、少なくとも６０％または７０％を意味し、好ましくは、少なくとも８０％、８５％、またはさらに好ましくは、少なくとも９０％、および最も好ましくは、少なくとも９５％の同一性を意味する。
【０２２８】
本明細書において用いる場合、実質的に純粋な、はそのような純度を評価するために当業者が用いる標準的な分析法、例えば、薄層クロマトグラフィー（ＴＬＣ）、ゲル電気泳動法、高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）および質量分析（ＭＳ）による判定により容易に検出できる不純物がないように見えるような十分に同質の、またはさらなる精製がその物質の物理的および化学的特性、例えば酵素的活性および生物活性、を検出可能に変化させないような十分に純粋な、を意味する。実質的に化学的に純粋な化合物を生成するために化合物を精製するための方法は、当業者に公知である。しかし、実質的に化学的に純粋な化合物が、立体異性体の混合物である場合もある。そのような場合、さらなる精製によってその化合物の特定の活性を増加させてもよい。
【０２２９】
ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節する一定の作用因子の合成
ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバー、例えばレチノイド結合タンパク質、の活性を調節する作用因子の合成は、当業者に公知の標準的な合成技術を用いて、または当該技術分野において公知の方法と本明細書に記載する方法を併用して、合成することができる。例えば、米国特許出願公開第２００４／０１０２６５０号、Ｕｍ，Ｓ．Ｊ．ら，Ｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．，５２：５０１−５０６（２００４）を参照のこと。加えて、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節する作用因子の幾つかは、様々な市場の供給業者から購入することができる。さらなるガイドとして、以下の合成方法も利用することができる。
【０２３０】
一部の実施形態において、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、類似したリガンドに結合する。一部の実施形態において、異なる組織または細胞において発現されるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、同じリガンドまたは作用因子に結合することができる。一部の実施形態において、網膜および／またはＲＰＥ細胞以外の組織または細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーと相互作用する作用因子は、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーとも相互作用することができる。ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーと相互作用することができる作用因子は、当該技術分野において公知であり、ここで意図されている。例えば、ＵＳ  ２００３／０２０２９７４、ＷＯ  ０６／０３７３３５、ＷＯ  ０３／０８０１０３、ＵＳ  ２００４／０１９８７０５、ＷＯ  ０４／０８４８７６、ＵＳ  ２００６／００２９６０９、ＵＳ  ２００５／００２６８２３、ＵＳ  ２００５／０１００９８６、ＵＳ  ２００５／００８９９３２、ＵＳ  ２００５／００４２２２７、ＵＳ  ２００４／０２０４３５７、ＵＳ  ２００４／０１９８７０５、ＵＳ  ２００４／００４９０１０、ＵＳ  ２００３／０２０２９７４、ＵＳ  ２００３／０１８１６６０、ＵＳ  ２００３／００８２６４０、ＵＳ  ２００３／０１５７５６１およびＵＳ  ２００３／００７７６７２（すべて、参照として取り入れられている）。
【０２３１】
眼内の網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節する作用因子は、好ましくは、本明細書において概説する方法によって同定される。前記作用因子は、例えば、抗生物質、ポリペプチド、核酸、ポリ核酸、ポリマー、内因性結合リガンド、低分子量有機化合物、Ｃａ２＋スカベンジャー、還元剤、ならびにこれらのうちのいずれかのフラグメントおよび誘導体であり得る。
【０２３２】
１つの実施形態において、前記作用因子は、レチノールとレチノール結合タンパク質（ＲＢＰ）の、またはレチノールと光受容体間レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）の結合もしくは複合体形成を競合的に阻害する。そのような化合物は、例えば、レチノール化合物と、またはレチノイド結合タンパク質と、または光受容体間レチノイド結合タンパク質とのさらなる会合を立体的に阻害するように、レチノール化合物と、またはレチノール結合タンパク質と、または光受容体間レチノイド結合タンパク質と特異的に相互作用する化合物であり得る（例えば、参照として取り入れられている、米国特許公開第２００６／００９４０６３号を参照のこと）。
【０２３３】
別の実施形態において、前記作用因子は、網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーへのレチノイド結合タンパク質または光受容体間レチノイド結合タンパク質の結合を競合的に阻害する。そのような作用因子は、例えば、レチノイド結合タンパク質または光受容体間レチノイド結合タンパク質のいずれかと、網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーとの会合またはさらなる会合を立体的に阻害するように、レチノイド結合タンパク質もしくは光受容体間レチノイド結合タンパク質と、または網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーと特異的に相互作用する化合物であり得る。
【０２３４】
別の実施形態において、前記作用因子は、網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの共受容体へのレチノイド結合タンパク質の結合を競合的に阻害する。
【０２３５】
別の実施形態において、前記作用因子は、その受容体タンパク質の十分な量の結合部位をブロックすることにより、ならびに／またはレチノイド結合タンパク質を、正常な治療効果を維持するが、網膜および／もしくはＲＰＥ細胞における受容体タンパク質への結合を阻害するようにブロックすることにより、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーへのレチノイド結合タンパク質の結合を阻害する。一部の実施形態において、前記作用因子は、網膜および／またはＲＰＥ細胞における受容体タンパク質上の十分な結合部位に結合することができ、それによって、網膜および／またはＲＰＥ細胞における受容体タンパク質へのレチノイド結合タンパク質の結合を阻害することができる。一部の実施形態において、前記作用因子は、網膜および／またはＲＰＥ細胞における受容体タンパク質に結合することができ、従って、その受容体タンパク質へのレチノイド結合タンパク質の結合を阻害することができる。一部の実施形態において、前記作用因子は、レチノイド結合タンパク質に結合することができ、それによって、それが網膜および／またはＲＰＥ細胞における受容体タンパク質に結合するのを防止することができる。
【０２３６】
別の実施形態において、前記作用因子は、網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーへの治療薬の結合を競合的に阻害する。別の実施形態において、前記作用因子は、網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーへの抗生物質薬の結合を競合的に阻害する。別の実施形態において、前記作用因子は、網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーへのアミノグリコシド薬の結合を競合的に阻害する。
【０２３７】
尚、さらなる実施形態において、前記作用因子は、網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるレチノイドの取り込みを増加させる。さらなる実施形態において、前記作用因子は、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーへのＲＢＰまたはＩＲＢＰの結合を増加させる。
【０２３８】
別の実施形態において、前記作用因子は、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーへのレチノール、ＲＢＰ、ＲＢＰ−レチノール複合体、ＩＲＢＰ、ＩＲＢＰ−レチノール、ＴＴＲまたはＲＢＰ−レチノール−ＴＴＲの結合を防止する。別の実施形態において、前記作用因子は、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるレチノイドの取り込みを防止する。
【０２３９】
別の実施形態において、前記作用因子は、網膜および／またはＲＰＥ細胞における治療薬の取り込みを防止する。別の実施形態において、前記作用因子は、網膜および／またはＲＰＥ細胞における抗生物質薬の取り込みを防止する。別の実施形態において、前記作用因子は、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるアミノグリコシド薬の取り込みを防止する。別の実施形態において、前記作用因子は、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるゲンタマイシンの取り込みを防止する。
【０２４０】
さらに別の実施形態において、前記作用因子は、網膜および／または網膜色素上皮細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの発現を改変する潜在能力を有する。例えば、前記作用因子は、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの発現を、そうしたＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを正常に発現する細胞において減少させることができ、あるいは、前記作用因子は、細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの発現を増加させることができる。例えば、ＭＰＲが血清中のレチノールおよびＲＢＰレベルを低下させることは公知である。ＭＰＲでのマウスの長期治療は、結果として、ＲＢＰのトランスサイトーシスの責任を負うＲＰＥにおける同定ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリータンパク質の発現を減少させることができ、従って、ＲＰＥにおけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリータンパク質と血清ＲＢＰ−レチノールとの関係を確立する。
【０２４１】
ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの発現を改変するための他の方法は、当該技術分野において公知である。例えば、核酸配列を用いて、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの発現を改変することができる。例えば、ＵＳ  ２００４／０１９８７０５、パラグラフ［０１７６］から［０１８６］、およびＷＯ  ２００５／０７０９６５を参照のこと。
【０２４２】
さらに、前記作用因子は、細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの共受容体の発現を改変する可能性を有し得る。例えば、前記作用因子は、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの共受容体の発現を、そのようなＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを正常に発現する細胞において減少させることができ、あるいは、前記作用因子は、細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの共受容体の発現を増加させることができる。
【０２４３】
ここで考えられている作用因子は、結合の改変についてランダムに試験する天然および合成化合物のライブラリから選択することができる。
【０２４４】
ポリペプチドおよびタンパク質
１つの実施形態において、前記作用因子は、ポリペプチドである。例えば、そのようなポリペプチドは、ＲＢＰ結合タンパク質受容体ドメインおよびそれらのフラグメント、ＲＢＰ結合タンパク質共受容体ドメインおよびそれらのフラグメント、ＬＤＬ遺伝子のメンバーに結合する内因性リガンド、修飾レチノイド結合タンパク質またはそれらのフラグメント、レチノイド結合タンパク質のフラグメント、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーアンタゴニスト、例えば受容体関連タンパク質（ＲＡＰ）、ならびにこれらのうちのいずれかの機能的相同体から成る群より選択することができる。
【０２４５】
１つの実施形態において、前記作用因子は、レチノイド結合タンパク質に結合することができるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーのドメインである。好ましくは、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーのドメインは、レチノイド結合タンパク質、例えば、ＲＢＰまたはＩＲＢＰに結合することができる。１つの実施形態において、前記ドメインは、メガリンドメインである。１つの実施形態において、前記ドメインは、ＬＲＰドメインである。
【０２４６】
ＬＲＰの補体型反復配列がタンパク質指定ＲＡＰに結合できることは証明されている。さらに具体的には、負電荷を有するアミノ酸を欠く点で他のものと異なる反復配列８を除き、ＬＲＰのクラスター１１の８つの補体型反復配列のいずれもがＲＡＰに結合できる（Ａｎｄｅｒｓｏｎら，２０００、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：２１０１７−２１０２４）。
【０２４７】
従って、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーのドメインは、少なくとも１つの補体型反復配列、さらに好ましくは、少なくとも２つの補体型反復配列を含むことが好ましい。例えば、２つの補体型反復配列、３つの補体型反復配列、４つの補体型反復配列、６つの補体型反復配列、７つの補体型反復配列、８つの補体型反復配列、９つの補体型反復配列、１０の補体型反復配列、１１の補体型反復配列、または１１より多くの補体型反復配列を含むＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのドメインなどのＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーの他のドメインが考えられる。好ましい実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーのドメインは、２つの補体型反復配列を含む。ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの具体的なドメインについては、例えば、ＵＳ  ２００４／０１９８７０５、パラグラフ［０１４３］から［０１６４］を参照のこと。
【０２４８】
別の実施形態において、前記ポリペプチドは、レチノイド結合タンパク質のフラグメントである。好ましくは、そのようなフラグメントは、網膜およびＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーと会合することができる。さらに、そのようなレチノイド結合タンパク質のフラグメントは、例えばレチノールなどのレチノイドと結合または会合することができる。このような場合、レチノイド結合タンパク質のフラグメントは、網膜および／またはＲＰＥにおけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに結合することができ、それによって、レチノール−ＲＢＰ複合体またはレチノール−ＲＢＰ−ＴＴＲ複合体と前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーとの結合を阻害することができる。
【０２４９】
１つの実施形態において、前記作用因子は、レチノイド結合タンパク質に結合することができる網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーと会合することができるＲＡＰのフラグメントである。
【０２５０】
別の実施形態において、前記作用因子は、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーのいずれかに対する内因性リガンドである。ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーが共通の内因性リガンドを共有することは公知である（上記参照）。ＬＲＰおよびメガリンなどのＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに対する内因性リガンドの例は、上に提示した。
【０２５１】
１つの実施形態において、前記ポリペプチドは、軽鎖である（Ｋｌａｓｓｅｎら，Ｌｉｇｈｔ  Ｃｈａｉｎｓ  ａｒｅ  ａ  Ｌｉｇａｎｄ  ｆｏｒ  Ｍｅｇａｌｉｎ．Ｊ．Ａｐｐｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．９８：２５７−２６３，２００５）。
【０２５２】
１つの実施形態において、前記ポリペプチドは、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに対するアンタゴニストである。ポリペプチドを、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節するそれらの能力についてスクリーニングすることができる。１つの実施形態では、前記ポリペプチドを、ＲＰＥ細胞へのレチノイドの取り込みを阻害するそれらの能力についてスクリーニングする。別の実施形態では、前記ポリペプチドを、ＲＰＥ細胞へのＩＲＢＰ−レチノールおよび／またはＲＢＰ−レチノールの取り込みを阻害するそれらの能力についてスクリーニングする。別の実施形態では、前記ポリペプチドを、網膜および／またはＲＰＥ細胞への治療薬の取り込みを阻害するそれらの能力についてスクリーニングする。別の実施形態では、前記ポリペプチドを、網膜および／またはＲＰＥ細胞への例えばアミノグリコシド薬などの抗生物質薬の取り込みを阻害するそれらの能力についてスクリーニングする。
【０２５３】
核酸
１つの実施形態において、前記作用因子は、核酸配列である。好ましくは、そのような核酸配列は、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの発現を改変する可能性を秘めている。１つの実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、レチノイド結合タンパク質受容体である。
【０２５４】
１つの実施形態において、核酸配列は、網膜およびＲＰＥ細胞内に存在するＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーのアンチセンスＲＮＡもしくは低分子干渉ＲＮＡ（ｓｉＲＮＡ）をコードするＤＮＡ配列を含み、または前記核酸配列は、網膜およびＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーのアンチセンスＲＮＡである。それらの相同体も本開示の範囲内である。一部の実施形態において、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーは、レチノイド結合タンパク質である。
【０２５５】
さらに、前記核酸配列は、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーをコードする遺伝子とハイブリダイズすることができ、それによって前記遺伝子の転写を阻害することができる、アンチジーン核酸配列を含むことができる。前記アンチジーン核酸配列は、前記遺伝子の任意の部分に、例えば、前記遺伝子のプロモーターに、および／またはイントロンに、および／またはエキソンに、ハイブリダイズすることができる。前記アンチジーン核酸は、任意の種類の核酸、例えば、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＬＮＡまたはＰＮＡまたはｓｉＲＮＡであり得る。
【０２５６】
ここで用いる場合、用語「アンチセンスＲＮＡ」は、網膜および／もしくはＲＮＡ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの非コーディングＤＮＡ鎖から転写されたＲＮＡ配列、またはストリンジェントな条件下でＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーｍＲＮＡのメンバーもしくはそのフラグメントにハイブリダイズすることができるＲＮＡ配列を包含すると解釈する。
【０２５７】
前記核酸配列が、網膜および／もしくはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーのアンチセンスＲＮＡをコードするＤＮＡ配列またはその相同体である場合、そのようなヌクレオチド配列は、好ましくは、本明細書に開示する特定の実施形態の細胞において前記ＤＮＡ配列の転写を命令するヌクレオチド配列に作動可能に連結されている。
【０２５８】
別の実施形態において、前記核酸配列は、網膜および／もしくはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーをコードする配列またはそれらの相同体またはそれらのフラグメントを含む。そのような核酸配列は、好ましくは、本発明の特定の実施形態の細胞において前記ＤＮＡ配列の転写を命令するヌクレオチドに作動可能に連結されている。
【０２５９】
ＤＮＡ配列の転写を命令する様々なヌクレオチド配列が当業者に公知であり、そのような配列は、個々の事例の具体的な要求に従って選択すべきである。例えば、そのような配列は、原核生物、真核生物もしくはウイルス起源のプロモーター配列およびエンハンサー配列であってもよく、または合成配列であってもよい。
【０２６０】
前記核酸配列をベクターの中に含めることができ、当業者に公知の任意の適するベクターを利用することができる。ベクターは、核酸分子を宿主細胞に送達することができる。そのようなベクターは、天然では、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの核酸配列の付近で見出されない核酸配列を含有する。
【０２６１】
ベクターは、ある生物から別の生物にＤＮＡ配列を伝達するために使用することができるプラスミドである。ベクターは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、ＬＮＡおよびＰＮＡをはじめとする任意の核酸であり得る複製可能な構築体である。適する宿主に形質転換されると、そのベクターは複製し、宿主ゲノムとは無関係に機能し、または随意に、そのゲノム自体に組み込まれる。
【０２６２】
一般に、ベクターは、ウイルス由来ベクター、レトロウイルス由来ベクター、ファージ、プラスミド、コスミド、組込み可能ＤＮＡフラグメント（すなわち、組換えによって宿主ゲノムに組込みことができる）、細菌または真核細胞である。
【０２６３】
低分子量有機化合物
一部の実施形態において、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節する作用因子は、低分子量有機化合物である。一部の実施形態において、前記低分子量有機化合物は、正電荷を有する。一部の実施形態において、前記低分子量有機化合物は、１より大きな正電荷を有する。一部の実施形態において、前記低分子量有機化合物は、２の正電荷を有する。一部の実施形態において、前記低分子量有機化合物は、３の正電荷を有する。一部の実施形態において、前記低分子量有機化合物は、４の正電荷を有する。一部の実施形態において、前記低分子量有機化合物は、５の正電荷を有する。一部の実施形態において、前記低分子量有機化合物は、１，２，３，４、または４より大きな正電荷を有する。正電荷を有する低分子量有機化合物を選択することにより、前記受容体タンパク質上の十分な数の結合部位をブロックすることができる。ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーにおける結合部位が、カチオン種と相互作用することができるアニオン性アミノ酸残基を含有することは公知である（上記参照）。
【０２６４】
一部の実施形態において、本明細書において提供する低分子量化合物は、アミノ基を有する。一部の実施形態において、前記低分子量化合物は、２つのアミノ基を有する。一部の実施形態において、前記低分子量化合物は、１つより多くのアミノ基を有する。一部の実施形態において、前記低分子量化合物は、プロトンを受容することができる官能基（基）を有する。一部の実施形態において、前記低分子量化合物は、プロトンを受容することができる１つより多くの官能基（基）を有する。一部の実施形態において、前記低分子量化合物は、１つより多くのプロトンを受容することができる１つより多くの官能基（基）を有する。プロトンを受容することができる適切な官能基は、アミノ基である。
【０２６５】
一部の実施形態において、前記低分子量有機化合物は、式（Ｉ）、ならびにその医薬的に許容される塩、医薬的に許容されるＮ−オキシド、医薬的に活性な代謝産物、医薬的に許容されるプロドラッグ、および医薬的に許容される溶媒和物の構造を有する。
【０２６６】
【化５】
2009541357.tif 000008
（式中、
Ｌは、結合、アリール、０〜３個のＮ原子を含有するヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８カルボシクロアルキル、０〜３個のＮ原子を含有するＣ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキルであり、この場合、前記アリール、ヘテロアリール、カルボシクロアルキルまたはヘテロシクロアルキルは、Ｏ（オキソ）、ＯＨ、フェニル、ハライド、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニル、Ｃ２〜Ｃ４アルキニル、ヘテロアリール、アリール−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ヘテロアリール−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、ヘテロシクロアルキル−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、シクロアルキルアルキル、Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｏ（ＣＯＲ１０）、−ＣＯ２Ｈ、−ＣＯ２Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−ＣＯＮ（Ｒ１０）２、−ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｃ（ＯＨ）（Ｒ１０）２、テトラゾリル、−Ｃ（Ｏ）ＮＨＳＯ２Ｒ１０、−ＣＨＯＨＣＦ３、−ＣＯＣＦ３、−ＳＯ２ＮＨＣ（Ｏ）Ｒ１０、または−Ｎ（Ｒ１０）２で随意に置換されており、ここで、それぞれのＲ１０は、独立して、Ｈであるか、低級アルキル、低級フルオロアルキル、低級アルケニル、低級アルキニル、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル、フェニルまたはベンジルから選択される随意に置換されている基であり、
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立して、結合およびＣ１〜Ｃ１０アルキルから選択され、この場合、前記Ｃ１〜Ｃ１０アルキルは、Ｏ、ＯＨ、フェニル、アミン（ＮＨ２）、イミン（ＮＨ）、ハロゲン、アルキル、アルケニルもしくはアルキニル、置換低級アルキル、置換低級アルケニルもしくはアルキニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アリール−（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキル、ヘテロシクリル−（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキル、アルコキシ、カルボニル、トリフルオロメチル、シアノ、アミノまたはニトロの中から選択される置換基で少なくとも１回、随意に置換されており、この場合、前記Ｃ１〜Ｃ１０アルキル中の任意の炭素が、酸素、窒素、硫黄またはケイ素で、随意に置換されており、
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ６は、個々に、水素、ＯＨ、トリフルオロメチル、Ｃ（ＮＨ）ＮＨ２、シアノ、アミノ、ニトロ、随意に置換されている基の中から選択され、前記随意に置換されている基は、アルキル、ヘテロアルキル、アルケニル、アルキニル、フェニル、ベンジル、アリール、ヘテロシクロアルキル、ヘテロアリール、アリール−（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキル、ヘテロシクリル−（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキルの中から選択され、この場合、前記随意に置換されている基は、Ｈ、Ｏ（オキソ）、ＯＨ、フェニル、イミン（ＮＨ）、ハロゲン、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、Ｃ２〜Ｃ４アルケニルもしくはＣ２〜Ｃ４アルキニル、アリール、ヘテロシクリル、ヘテロアリール、アリール−（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキル、ヘテロアリール−（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキル、ヘテロシクリル−（Ｃ１〜Ｃ４）−アルキル、シクロアルキルアルキル、シクロアルキル、アルコキシ、カルボキシ、トリフルオロメチル、シアノ、アミノおよびまたはニトロの中から選択される置換基を有し、または
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ５のうちの１つ以上は、Ｌへの結合であり、または
Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５およびＲ５のうちの１つ以上は、別のＲ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ｒ６および／もしくはＬへの連結であり、それによって環を形成しており、
Ｎ’およびＮ’’は、取り付けることによって第四アンモニウム塩を形成することができる、さらなる基を有する）。
【０２６７】
一部の実施形態において、Ｎ’およびＮ’’は、少なくとも４つの原子によって隔てられている。
【０２６８】
一部の実施形態において、Ｌは、シクロペンチル、フラン、チエニル、ピロール、イミダゾール、オキサゾール、ピロリジン、テトラヒドロフラン、およびテトラヒドロチオフェンの中から選択される。一部の実施形態において、Ｌは、フランまたはピロールである。一部の実施形態において、Ｌは、テトラヒドロフランである。一部の実施形態において、Ｌは、ピリジン、ピリミジン、テトラヒドロピラン、ピペリジン、ピペラジン、シクロヘキシル、およびフェノールの中から選択される。一部の実施形態において、Ｌは、シクロヘキシルまたはフェノールである。一部の実施形態において、Ｌは、結合である。
【０２６９】
一部の実施形態において、前記低分子量有機化合物は、式（ＩＩＩ）の構造を有する。
【０２７０】
【化６】
2009541357.tif 000009
（式中、
それぞれのＲ９は、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｏ（ＣＯＲ１０）、ハライド、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）−アミノ、−Ｎ（Ｒ１０）２およびアリールの中から選択され、および
他の可変項は、本明細書において記載するとおりである）。
【０２７１】
一部の実施形態において、前記低分子量有機化合物は、式（ＩＩＩ）の構造を有する。
【０２７２】
【化７】
2009541357.tif 000010
（式中、
それぞれのＲ９は、独立して、Ｈ、ＯＨ、Ｏ−（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）、Ｏ（ＣＯＲ１０）、ハライド、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、（Ｃ１〜Ｃ４アルキル）−アミノ、−Ｎ（Ｒ１０）２およびアリールの中から選択され；および
他の可変項は、本明細書において記載するとおりである）。
【０２７３】
一部の実施形態において、前記低分子量有機化合物は、式（ＩＶ）の構造を有する。
【０２７４】
【化８】
2009541357.tif 000011
（式中、
それぞれｎは、独立して、０、１、２または３であり、および
他の可変項は、本明細書において記載するとおりである）。
【０２７５】
一部の実施形態において、前記低分子量有機化合物は、式（Ｖ）の構造を有する。
【０２７６】
【化９】
2009541357.tif 000012
（式中、
Ｒ１２は、Ｈまたは
【０２７７】
【化１０】
2009541357.tif 000013
であり、
それぞれｎは、独立して、０、１、２または３であり、および
他の可変項は、本明細書において記載するとおりである）。
【０２７８】
一部の実施形態において、それぞれのｎは、１である。
【０２７９】
一部の実施形態において、前記低分子量有機化合物は、１，２−ジアミノエタン；１，３−ジアミノプロパン；１，４−ジアミノブタン；１，５−ジアミノペンタン；１，６−ジアミノへキサン；１，７−ジアミノヘプタン；１，８−ジアミノオクタン；３−メチルアミノ−１−（４−メチルピペラジノ）−プロパン−２−オール；４−ピペラジノアニリン；二塩酸１−（３−クロロフェニル）ピペラジン；ピペラジン−２−オン・ＨＣｌ；２−［４−（２−アミノエチル）−ピペラジン−１−イル］−エチルアミン；ピペラジン；２，４−ジアミノ−６−フェニル−１，３，５−トリアジン；３，５−ジアミノ−１，２，４−トリアゾール；マロンアミド；アルギニン・ＨＣｌ；ピペリジン；２，５−ピペラジンジオン；無水ピペラジン；ピペラジン−２−オン・ＨＣｌ；および二塩酸１−（２−ピリミジル）ピペラジン；ならびにこれらの医薬的に許容される塩の中から選択される。
【０２８０】
一部の実施形態において、前記低分子量有機化合物は、２−［４−（２−アミノエチル）−ピペラジン−１−イル］−エチルアミン；３−メチルアミノ−１−（４−メチルピペラジノ）−プロパン−２−オール；およびピペラジンの中から選択される。
【０２８１】
一部の実施形態において、前記低分子量有機化合物は、ピペラジンである。
【０２８２】
一部の実施形態において、前記低分子量有機化合物は、１，２−ジアミノエタン；１，３−ジアミノプロパン；１，４−ジアミノブタン；１，５−ジアミノペンタン；１，６−ジアミノへキサン；１，７−ジアミノヘプタン；および１，８−ジアミノオクタンの中から選択される。
【０２８３】
一部の実施形態において、前記低分子量有機化合物は、１，２−ジアミノエタン；１，３−ジアミノプロパン；１，４−ジアミノブタン；１，５−ジアミノペンタン；１，６−ジアミノへキサン；および１，７−ジアミノヘプタンの中から選択される。
【０２８４】
一部の実施形態において、前記低分子量有機化合物は、１，６−ジアミノへキサンである。
【０２８５】
１つの実施形態において、前記作用因子は、
【０２８６】
【化１１】
2009541357.tif 000014
【０２８７】
【化１２】
2009541357.tif 000015
【０２８８】
【化１３】
2009541357.tif 000016
の中から選択される。
【０２８９】
別の実施形態において、前記作用因子は、
【０２９０】
【化１４】
2009541357.tif 000017
【０２９１】
【化１５】
2009541357.tif 000018
の中から選択される。
【０２９２】
１つの実施形態において、前記作用因子は、
【０２９３】
【化１６】
2009541357.tif 000019
の中から選択される。
【０２９４】
１つの実施形態において、前記作用因子は、
【０２９５】
【化１７】
2009541357.tif 000020
の中から選択される。
【０２９６】
１つの実施形態において、前記作用因子は、（２Ｒ，３Ｓ，４Ｓ，５Ｒ）−２，５−ビス（アミノメチル）−テトラヒドロフラン−３，４−ジオール・二塩酸塩
【０２９７】
【化１８】
2009541357.tif 000021
である。
【０２９８】
１つの実施形態において、前記作用因子は、
【０２９９】
【化１９】
2009541357.tif 000022
；および２，６−ジアリル−１，２，３，５，６，７−ヘキサヒドロピロロ［３，４−ｆ］イソインドール・二塩酸塩
【０３００】
【化２０】
2009541357.tif 000023
の中から選択される。
【０３０１】
１つの実施形態において、前記作用因子は、
【０３０２】
【化２１】
2009541357.tif 000024
の中から選択される。
【０３０３】
１つの実施形態において、前記作用因子は、
【０３０４】
【化２２】
2009541357.tif 000025
の中から選択される。
【０３０５】
１つの実施形態において、前記作用因子は、（２Ｒ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−１，６−ジアミノヘキサン−２，３，４，５−テトラオール・二塩酸塩
【０３０６】
【化２３】
2009541357.tif 000026
；（２Ｓ，３Ｒ，４Ｒ，５Ｒ）−１，６−ジアミノヘキサン−２，３，４，５−テトラオール・二塩酸塩
【０３０７】
【化２４】
2009541357.tif 000027
；および（２Ｓ，３Ｒ，４Ｓ，５Ｒ）−１，６−ジアミノヘキサン−２，３，４，５−テトラオール・二塩酸塩
【０３０８】
【化２５】
2009541357.tif 000028
の中から選択される。
【０３０９】
別の実施形態において、前記作用因子は、トランス１，４−ジアミノシクロヘキサン；１，３−ビス（アミノメチル）−シクロヘキサン；１，４−ビス（アミノメチル）−シクロヘキサン；ｐ−キシリレンジアミン；ｍ−キシリレンジアミン；１−（４−ピリド−４−イル）−ピペラジン；２，５−ジメチル−１，４−キシリレン−ジアミン・二塩酸塩；α，α’−（ジメチルアミノ）−ｐ−キシレン・二臭化水素酸塩；および
【０３１０】
【化２６】
2009541357.tif 000029
（Ｓｉｇｍａ／Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｓ１１１３３３）の中から選択される。
【０３１１】
１つの実施形態において、前記化合物は、トランス１，４−ジアミノシクロヘキサン；１，３−ビス（アミノメチル）−シクロヘキサン；１，４−ビス（アミノメチル）−シクロヘキサン；ｐ−キシリレンジアミン；ｍ−キシリレンジアミン；２，５−ジメチル−１，４−キシリレン−ジアミン・二塩酸塩；α，α’−（ジメチルアミノ）−ｐ−キシレン・二臭化水素酸塩の中から選択される。
【０３１２】
別の実施形態において、前記化合物は、トランス１，４−ジアミノシクロヘキサン；ｐ−キシリレンジアミン；ｍ−キシリレンジアミン；２，５−ジメチル−１，４−キシリレン−ジアミン・二塩酸塩；１−（ピリド−４−イル）−ピペラジン；α，α’−（ジメチルアミノ）−ｐ−キシレン・二臭化水素酸塩の中から選択される。
【０３１３】
別の実施形態において、前記化合物は、ｐ−キシリレンジアミン；１−（ピリド−４−イル）−ピペラジン；α，α’−（ジメチルアミノ）−ｐ−キシレン・二臭化水素酸塩の中から選択される。
【０３１４】
別の実施形態において、前記化合物は、トランスｐ−キシリレンジアミンおよびα，α’−（ジメチルアミノ）−ｐ−キシレン・二臭化水素酸塩の中から選択される。
【０３１５】
１つの実施形態において、前記低分子量有機化合物は、ＲＰＥ細胞へのレチノイドの取り込みを阻害する。別の実施形態において、前記低分子量有機化合物は、ＲＰＥ細胞へのＲＢＰ−レチノールおよび／またはＩＲＢＰ−レチノールの取り込みを阻害する。別の実施形態において、前記低分子量有機化合物は、ＲＰＥ細胞への網膜毒性治療薬の取り込みを阻害する。
【０３１６】
アミノグリコシドの誘導体
別の実施形態において、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節する作用因子は、アミノグリコシドの誘導体である。アミノグリコシドがＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに結合することは証明されている。例えば、ＷＯ  ２００４／０８４８７６を参照のこと。アミノグリコシドの誘導体がＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーのアンタゴニストとしての可能性を有することは証明されている。例えば、ＷＯ  ２００４／０８４７８６を参照のこと。１つの実施形態において、前記作用因子は、ゲンタマイシン、ポリミキシンＢ、アプロチニン、トリコサンチン、アミカシン、カナマイシン、ネオマイシン、ネチルミシン、パロモマイシン、ストレプトマイシン、トブラマイシンまたはアプラマイシンの誘導体である。１つの実施形態において、前記作用因子は、ゲンタマイシン、ポリミキシンＢ、アプロチニン、またはトリコサンチンの誘導体である。別の実施形態において、前記作用因子は、ゲンタマイシンの誘導体である。別の実施形態において、前記作用因子は、ガロースアミン（ｇａｒｏｓｅａｍｉｎｅ）、プルポサミン（ｐｕｒｐｏｓａｍｉｎｅ）、および２−デオキシストレプタミンから選択されるゲンタマイシンの誘導体である。
【０３１７】
Ｃａ２＋スカベンジャー
ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーが、受容体安定性に寄与し、受容体をその天然配座で維持する（これは、一定のリガンドの受容体への結合にとって非常に重要である）と考えられているＣａ２＋に結合することは公知である（Ａｎｄｅｒｓｏｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｖｏｌ  ２７５，ｎｏ．２８，２１０１７−２１０２４，２０００）。一定のタンパク質リガンド、例えば、ＲＢＰ、ＩＲＢＰおよびＲＡＰなどは、受容体タンパク質にその天然の配座で結合する。一部の実施形態において、前記作用因子は、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節するために使用されるＣａ２＋スカベンジャーである。一部の実施形態において、Ｃａ２＋スカベンジャーは、前記受容体タンパク質の安定性を減少させる。一部の実施形態において、Ｃａ２＋スカベンジャーは、ＥＤＴＡである。一部の実施形態において、Ｃａ２＋スカベンジャーは、第二の作用因子と共に添加される。
【０３１８】
ジスルフィド還元剤
ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバー中に存在するリガンド結合（補体）型システインリッチ反復配列は、その受容体タンパク質の三次元構造に寄与する多数のジスルフィド架橋を含有する（Ａｎｄｅｒｓｏｎら，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．Ｖｏｌ  ２７５，ｎｏ．２８，２１０１７−２１０２４，２０００）。一定のタンパク質リガンド、例えば、ＲＢＰおよびＩＲＢＰなどは、その受容体タンパク質がその天然の形態であるときにしかＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを認識せず、それらに結合しない。ジスルフィド架橋の還元は、受容体タンパク質の天然配座を破壊し、タンパク質リガンドの結合を有意に阻害する（例えば、ＵＳ  ２００３／０２０２９７４を参照のこと）。１つの実施形態において、前記作用因子は、還元剤である。別の実施形態において、前記作用因子は、受容体タンパク質中のジスルフィド基を還元する。
【０３１９】
ポリマー
一部の実施形態において、前記作用因子は、ポリマーである。一部の実施形態において、前記ポリマーは、少なくとも１の正電荷を有する。一部の実施形態において、前記ポリマーは、１より大きな正電荷を有する。１つの実施形態において、前記ポリマーは、ポリリシンである。別の実施形態において、前記ポリマーは、ポリリシンの誘導体である。ここで考えられる他のポリマーとしては、ＷＯ  ２００４／０８４８７６およびＷＯ  ２００６／０３７３３５に開示されているものが挙げられる。本明細書に開示する任意のペプチドまたはタンパク質のポリマーも考えられる。
【０３２０】
抗体
一部の実施形態において、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節するためにここで用いる作用因子は、抗体である。網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを特異的に認識する抗体、および抗体を作る方法を本明細書に開示する。抗体は、市場の供給業者、例えば、Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．（マサチューセッツ州、コンコード）、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（カリフォルニア州、サンタクルーズ）、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉａｃｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ミシガン州、オックスフォード）などを通して入手することができる。あるいは、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに特異的な抗体を、当該技術分野において公知の方法によって得ることができる。
【０３２１】
適切な抗体を生産するための免疫原としては、網膜および／もしくはＲＰＥ細胞において発現されるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーの全メンバー、もしくはそれらのフラグメントおよび誘導体、または網膜および／もしくはＲＰＥ細胞の表面において発現されるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを挙げることができる。免疫原としては、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの１つのすべてまたは一部が挙げられ、この場合、これらのアミノ酸は、天然ターゲットタンパク質で見出される後翻訳修飾、例えばグリコシル化を含む。タンパク質細胞外ドメインを含む免疫原は、当該技術分野において公知の様々な方法、例えば、従来の組換え法を用いるクローン化遺伝子の発現、または腫瘍細胞培養物上清からの単離などで、生産される。前記免疫原は、宿主動物に導入された免疫原性ペプチドをコードするポリヌクレオチドからインビボで発現させることもできる。
【０３２２】
ここで考えられる抗体分子としては、免疫グロブリン分子が挙げられ、これらは重鎖おび軽鎖から一般に成り、そのそれぞれの鎖が、他の免疫グロブリン分子との類似性を示す定常領域と、特定の抗原に対する特異性を伝える可変領域とを有する。大部分の免疫グロブリンは、重鎖定常領域内の抗原決定基に基づいてクラス、例えば、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＥおよびＩｇＤに割り当てられ、それぞれのクラスが免疫応答に関して異なる役割を果たす。
【０３２３】
抗体は、測定される活性に関する刺激、阻害または遮断を適切な対照と比較して増加または減少させることにより生物活性を調節するために使用することができる。
【０３２４】
抗体モジュレーターとしては、シグナル伝達を開始させる受容体−リガンド結合のように、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに特異的に結合し、そのタンパク質受容体を活性化する抗体、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに特異的に結合し、そのポリペプチドへの別の分子の結合を阻害し、そのようにしてシグナル伝達経路の活性化を防止する抗体、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに結合して転写を調節する抗体、およびＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに結合して翻訳を調節する抗体が挙げられる。ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバー、またはそのポリヌクレオチドの生物活性を調節する抗体は、その活性または結合を、適切な対照と比較して、少なくとも約１０％、少なくとも約５％、少なくとも約２０％、少なくとも約２５％、少なくとも約５０％、少なくとも約１００％、または少なくとも約２倍、少なくとも約５倍もしくは少なくとも約１０倍またはそれ以上増加または減少させる。１つの実施形態において、抗体は、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性に特異的に干渉する。さらに具体的には、前記抗体は、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの細胞外ドメインに特異的に結合する。
【０３２５】
１つの実施形態において、前記作用因子は、細胞内発現抗体である。前記細胞内発現抗体は、細胞内のターゲット分子に特異的に結合しそれらを不活性化するように設計された１本鎖抗体分子を細胞内で発現する。細胞内発現抗体は、細胞アッセイにおいておよび全生物において使用されている（Ｃｈｅｎら，Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．５：５９５（１９９４）；Ｈａｓｓａｎｚａｄｅｈら，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔ．４３７：７５（１９９８））。誘導性発現ベクターは、網膜および／またはＲＰＥ細胞において発現されるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーに属するタンパク質受容体と特異的に反応する細胞内発現抗体を用いて構築することができる。これらのベクターを宿主細胞およびモデル生物に導入することができる。
【０３２６】
１つの実施形態において、前記作用因子は、「人工」抗体、例えば、インビトロで生産および選択された抗体および抗体フラグメントである。一部の実施形態において、これらの抗体は、上で説明したように、バクテリオファージまたは他のウイルス粒子の表面に提示される。他の実施形態において、人工抗体は、Ｍ１３遺伝子ＩＩＩタンパク質をはじめとする（しかし、これに限定されない）ウイルスまたはバクテリオファージ構造タンパク質との融合タンパク質として存在する。そのような人工抗体を生産する方法は、当該技術分野において公知である（米国特許第５，５１６，６３７号、同第５，２２３，４０９号、同第５，６５８，７２７号、同第５，６６７，９８８号、同第５，４９８，５３８号、同第５，４０３，４８４号、同第５，５７１，６９８号、および同第５，６２５，０３３号）。例えば、ＵＳ  ５，１１６，９６４またはＷＯ  ９９／６１６３０に記載されているように、例えば選択された抗原へのファージの結合に基づいて、選択された人工抗体を、治療薬として使用するために免疫グロブリンのＦｃフラグメントに融合させることができる。抗体を使用して、細胞の生物活性を直接または間接的に調節することができる。ある対象抗体は、それが第一に相互作用するターゲット細胞の活性を調節することができ、またはそれは、第二の効果を発揮することによって、すなわち、第一のターゲットが他の細胞と相互作用または交信するときに、他の細胞の活性を調節することができる。本明細書において提供する抗体は、特に、ヒトにおける治療および／または診断を目的として、哺乳動物に投与することができる。
【０３２７】
１つの実施形態において、前記作用因子は、抗体である。別の実施形態において、前記抗体は、ヒトまたはヒト化抗体である。別の実施形態において、前記抗体は、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、１本鎖抗体、アゴニスト抗体、アンタゴニスト抗体、中和抗体、またはそれらの活性フラグメントである。１つの実施形態において、前記抗体の活性フラグメントは、抗原またはエピトープに特異的に結合するフラグメントである。１つの実施形態において、前記活性フラグメントは、抗原結合フラグメント、Ｆｃフラグメント、ｃｄｒフラグメント、ＶＨフラグメント、ＶＬフラグメントまたはフレームワークフラグメントである。１つの実施形態において、前記抗体は、免疫グロブリンの可変領域、免疫グロブリンの定常領域、免疫グロブリンの重鎖、免疫グロブリン軽鎖、および免疫グロブリンの抗原結合部位から選択される少なくとも１つのドメインを含む。１つの実施形態において、前記抗体は、免疫グロブリンの少なくとも１つの軽鎖を含む。
【０３２８】
ペプチドアプタマー
網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節するためのもう１つの適切な作用因子は、ペプチドアプタマーである。ペプチドアプタマーは、タンパク質機能の最も有力な阻害剤として作用するペプチドまたは小さなポリペプチドである。ペプチドアプタマーは、ターゲットタンパク質に特異的に結合して、それらの機能能力を遮断する（Ｋｏｌｏｎｉｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９５：１４２６６（１９９８））。ペプチドアプタマーの高選択的性質のため、特定のタンパク質にターゲッティングするためばかりでなく、所定のタンパク質の特定の機能（例えば、シグナリング機能）にターゲッティングするためにもそれらを使用することができる。さらに、ペプチドアプタマーは、一時的に、空間的にまたは誘導可能に発現を制御するプロモーターの使用により、制御された様式で発現させることができる。ペプチドアプタマーは最も有力に作用し、従って、それらを使用して、機能喪失突然変異体を利用することができないタンパク質を分析することができる。
【０３２９】
ターゲットタンパク質に高い親和性および特異性で結合するペプチドアプタマーを、当該技術分野において公知の様々な技術によって単離することができる。酵母ツー・ハイブリッド・スクリーンによってランダムペプチドライブラリからペプチドアプタマーを単離することができる（Ｘｕら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｉ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：１２４７３（１９９７））。ファージライブラリ（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ４：１（１９９８））または化学的に生産されたペプチド／ライブラリからそれらを単離することもできる。
【０３３０】
ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに対する内因性結合リガンド
上で説明したように、用語「内因性結合リガンド」は、メガリンおよびメガリン様タンパク質をはじめとするＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに結合する内因性第一物質、ならびに前記第一結合物質がＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに結合されるとそのＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの第一結合リガンドに結合する、第二の内因性物質を含むものとする。検出および測定される特定の内因性結合リガンドが、例えば、網膜および／またはＲＰＥ細胞に取り込まれると容易に検出可能となるそのリガンドの能力をはじめとする、多数の要因に依存するであろうことは、本説明に基づいて、当業者には理解されるであろう。例えば上に挙げたものをはじめとする様々なメガリン結合リガンドが存在することは公知である（Ｃｈｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｉ．Ｌ．ａｎｄ  Ｗｉｌｌｎｏｗ，Ｔ．Ｅ．Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１０，２２２４−２２３６，１９９９も参照のこと）。本明細書において提示するように、好ましい内因性メガリン結合リガンドとしては、レチノイド結合タンパク質および光受容体間レチノイド結合タンパク質が挙げられる。追加の内因性メガリン結合リガンドは、Ｃｈｉｓｔｅｎｓｅｎら（１９９２），Ｃｈｉｓｔｅｎｓｅｎ，Ｉ．Ｌ．ａｎｄ  Ｗｉｌｌｎｏｗ，Ｔ．Ｅ．（１９９９）Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１０，２２２４−２２３６；Ｃｕｉ，Ｓ．ら（１９９６）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２７１，Ｆ９００−Ｆ９０７；Ｇｂｕｒｅｋ，Ｊ．ら（２００２）Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１３，４２３−４３０；Ｈｉｌｐｅｒｔら（１９９９），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，５６２０−５６２５；Ｋａｎａｌａｓ，Ｊ．Ｊ．ａｎｄ  Ｍａｋｋｅｒ，Ｓ．Ｐ．（１９９１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６，１０８２５−１０８２９；Ｋｏｕｎｎａｓ，Ｍ．Ｚ．ら（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７，２１１６２−２１１６６；Ｋｏｕｎｎａｓ，Ｍ．Ｚ．ら（１９９３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，１４１７６−１４１８１；Ｋｏｕｎｎａｓ，Ｍ．Ｚ．ら（１９９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０，１３０７０−１３０７５；Ｍｏｅｓｔｒｕｐ，Ｓ．Ｋ．ら（１９９３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，１６５６４−１６５７０；Ｍｏｅｓｔｒｕｐ，Ｓ．Ｋ．ら（１９９５）Ｊ．Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ  ９６，１４０４−１４１３；Ｍｏｅｓｔｒｕｐ，Ｓ．Ｋ．ら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３，８６１２−８６１７；Ｍｏｅｓｔｒｕｐ，Ｓ．Ｋ．ら（１９９８）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０２，９０２−９０９；Ｎｙｋｊａｅｒ，Ａ．ら（１９９９）Ｃｅｌｌ  ９６，５０７−５１５；Ｏｒｌａｎｄｏ，Ｒ．Ａ．ら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９，６６９８−６７０２；Ｏｒｌａｎｄｏ，Ｒ．Ａ．ら（１９９８）Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．９，１７５９−１７６６；Ｓｔｅｆａｎｓｓｏｎ，Ｓ．ら（１９９５−Ａ）Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．１０８，２３６１−２３６８；Ｓｔｅｆａｎｓｓｏｎ，Ｓ．ら（１９９５−Ｂ）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０，１９４１７−１９４２１；Ｗｉｌｎｏｗ，Ｔ．Ｅ．ら（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７，２６１７２−２６１８０；Ｗｉｌｎｏｗ，Ｔ．Ｅ．ら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３，８４６０−８４６４；およびＺｈｅｎｇ，Ｇ．ら（１９９８）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １３９，１４６２−１４６５に記載されている方法のうちの１つ以上によって特定することができる。
【０３３１】
内因性メガリンリガンドの検出および定量方法が、多数の利用可能な分析ツールのいずれかを含む場合があることは、本説明に基づいて、当業者には理解されるであろう。例えば、そのような方法としては、ＨＰＬＣ、ＮＭＲの使用、または当該技術分野において公知の標準的な免疫アッセイを使用することによるものを挙げることができる。そのような免疫アッセイとしては、ＲＩＡ、ＥＬＩＳＡ、「サンドイッチ」イムノアッセイ、免疫放射定量測定法、ゲル内核酸沈降反応、免疫拡散アッセイ、インサイチューイムノアッセイ（例えば、コロイド状金標識、酵素標識または放射性同位体標識を使用するもの）、ウエスタンブロット、２次元ゲル分析、沈降反応、免疫蛍光アッセイ、プロテインＡアッセイおよび免疫電気泳動アッセイなどの技術を用いる、競合および非競合アッセイシステムが挙げられるが、これらに限定されない。
【０３３２】
リガンド結合領域の同定
ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーの中の補体型リガンド結合反復配列は、リガンドの認識の責任を負う（Ｈｅｒｚら，ＬＲＰ：ａ  ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｓｃａｖｅｎｇｅｒ  ａｎｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，ｖｏｌ  １０８，ｎｏ．６，ｐｐ７７９−７８４，２００１）。ここで同定するＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのリガンド認識特性は、当該技術分野において公知の方法によって獲得することができる。簡単に言うと、単なる例として、多数のリガンドに結合する責任を負う領域を、以下の方法を用いて獲得することができる。リガンド結合反復配列の様々なクラスターをその受容体の膜貫通ドメインおよび細胞質ドメインに融合させ、細胞での発現後、リガンドの細胞内在化を媒介するそれらの能力を測定することにより、同定受容体の「ミニ受容体（ｍｉｎｉｒｅｃｅｐｔｏｒ）」を作製することができる。（Ｗｉｌｌｎｏｗら，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｄｉｓｓｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｌｉｇａｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｓｉｔｅｓ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｌｏｗ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ｌｉｐｏｐｏｒｔｅｉｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｒｅｌａｔｅｄ  ｐｒｏｔｅｉｎ．Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：１５８２７−１５８３２，１９９４）。別のアプローチは、受容体内のそれぞれのクラスターを代表する可溶性組換え受容体フラグメントを、インビトロで様々なリガンドに結合する能力について試験することを含む（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，ＴＡ．Ａｎ  ｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ  ｂｅｔａ−ｐｒｏｐｅｌｌａｒ  ｍｏｄｕｌｅ  ｐｒｅｄｉｃｔｅｄ  ｉｎ  ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｓｃａｖｅｎｇｅｒ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，ｔｙｒｏｓｉｎｅ  ｋｉｎａｓｅｓ，ｅｐｉｄｅｒｍａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｐｒｅｃｕｒｓｏｒ，ａｎｄ  ｅｘｔｒａ  ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｍａｔｒｉｘ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ．Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２８３：８３７−８６２，１９９８）。
【０３３３】
非常に多数の構造的に異なるリガンドの高い親和性での結合は、受容体中の多数のリガンド結合型反復配列の存在から、それぞれの反復配列についての固有の等値曲面および電荷分布から、およびリガンドと受容体の両者の間の多数の相互作用から生ずる。一部のリガンドは、逐次的に異なる反復単位を認識することができ、一方、他のものは、別個のクラスターから反復単位を認識するように見える（Ｈｅｒｚ  ら，ＬＲＰ：ａ  ｍｕｌｔｉｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ  ｓｃａｖｅｎｇｅｒ  ａｎｄ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ．Ｔｈｅ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ，ｖｏｌ  １０８，ｎｏ．６，ｐｐ７７９−７８４，２００１）。
【０３３４】
アッセイ
作用因子が、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーに結合するかどうか、または網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節するかどうかを判定する方法は、当該技術分野において公知である。例えば、当該技術分野において説明されているアッセイとしては、ＵＳ  ２００３／０２０２９７４、ＷＯ  ０６／０３７３３５、ＷＯ  ０３／０８０１０３、ＵＳ  ２００４／０１９８７０５、ＷＯ  ０４／０８４８７６、ＵＳ  ２００６／００２９６０９、ＵＳ  ２００５／００２６８２３、ＵＳ  ２００５／０１００９８６、ＵＳ  ２００５／００８９９３２、ＵＳ  ２００５／００４２２２７、ＵＳ  ２００４／０２０４３５７、ＵＳ  ２００４／０１９８７０５、ＵＳ  ２００４／００４９０１０、ＵＳ  ２００３／０２０２９７４、ＵＳ  ２００３／０１８１６６０、ＵＳ  ２００３／００８２６４０、ＵＳ  ２００３／０１５７５６１、ＵＳ  ２００３／００７７６７２、Ｃｈｉｓｔｅｎｓｅｎら，（１９９９）Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１０，２２２４−２２３６；Ｃｕｉ，Ｓ．ら（１９９６）Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２７１，Ｆ９００−Ｆ９０７；Ｇｂｕｒｅｋ，Ｊ．ら（２００２）Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．１３，４２３−４３０；Ｈｉｌｐｅｒｔら（１９９９），Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４，５６２０−５６２５；Ｋａｎａｌａｓ，Ｊ．Ｊ．ａｎｄ  Ｍａｋｋｅｒ，Ｓ．Ｐ．（１９９１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６６，１０８２５−１０８２９；Ｋｏｕｎｎａｓ，Ｍ．Ｚ．ら（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７，２１１６２−２１１６６；Ｋｏｕｎｎａｓ，Ｍ．Ｚ．ら（１９９３）Ｊ  ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，１４１７６−１４１８１；Ｋｏｕｎｎａｓ，Ｍ．Ｚ．ら（１９９５）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０，１３０７０−１３０７５；Ｍｏｅｓｔｒｕｐ，Ｓ．Ｋ．ら（１９９３）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６８，１６５６４−１６５７０；Ｍｏｅｓｔｒｕｐ，Ｓ．Ｋ．ら（１９９５）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．９６，１４０４−１４１３；Ｍｏｅｓｔｒｕｐ，Ｓ．Ｋ．ら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３，８６１２−８６１７；Ｍｏｅｓｔｒｕｐ，Ｓ．Ｋ．ら（１９９８）Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０２，９０２−９０９；Ｎｙｋｊａｅｒ，Ａ．ら（１９９９）Ｃｅｌｌ  ９６，５０７−５１５；Ｏｒｌａｎｄｏ，Ｒ．Ａ．ら（１９９２）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８９，６６９８−６７０２；Ｏｒｌａｎｄｏ，Ｒ．Ａ．ら（１９９８）Ｊ．Ａｍ．Ｓｏｃ．Ｎｅｐｈｒｏｌ．９，１７５９−１７６６；Ｓｔｅｆａｎｓｓｏｎ，Ｓ．ら（１９９５−Ａ）Ｊ．Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉ．１０８，２３６１−２３６８；Ｓｔｅｆａｎｓｓｏｎ，Ｓ．ら（１９９５−Ｂ）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７０，１９４１７−１９４２１；Ｗｉｌｎｏｗ，Ｔ．Ｅ．ら（１９９２）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７，２６１７２−２６１８０；Ｗｉｌｎｏｗ，Ｔ．Ｅ．ら（１９９６）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９３，８４６０−８４６４；およびＺｈｅｎｇ，Ｇ．ら（１９９８）Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ���ｇｙ  １３９，１４６２−１４６５に概説されているものが挙げられる。
【０３３５】
網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーと相互作用する（すなわち、前記メンバーに結合するおよび／または前記メンバーの活性を調節する）作用因子の同定は、任意の公知方法を用いて検出することができる。適する方法としては、酵素ツー・ハイブリッド・システム（Ｚｈｕら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：１３，０６３（１９９７）；Ｆｉｅｌｄｓら，Ｎａｔｕｒｅ  ３４０：２４５（１９８９）；米国特許第５，２８３，１７３号；Ｃｈｉｅｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：９５７８（１９９１））、哺乳動物細胞ツー・ハイブリッド法、蛍光共鳴エネルギー移動（ＦＲＥＴ）アッセイ：生物発光共鳴エネルギー移動（ＢＲＥＴ）アッセイ、蛍光消光アッセイ、蛍光異方性アッセイ（Ｊａｍｅｓｏｎら，Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．２４６：２８３（１９９５）、免疫学的アッセイ、および検出可能に標識されたタンパク質の固定化タンパク質への結合を伴うアッセイが挙げられる。
【０３３６】
生体サンプル中のＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの存在および生物活性を検出する方法は公知である。用いられるアッセイは、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーの特定のメンバーの生物活性に適するものであろう。従って、例えば、生物活性が、第二の高分子への結合である場合、そのアッセイは、適宜、周知のアッセイを用いて、タンパク質−タンパク質結合、タンパク質−ＤＮＡ結合、タンパク質−炭水化物結合、またはタンパク質−脂質結合を検出する。生物活性が、シグナル伝達（例えば、細胞外から細胞内へのシグナルの伝達）または輸送である場合、適切なアッセイ、例えば、細胞内カルシウムイオン濃度の測定、膜コンダクタンス変化の測定または細胞内カリウムイオン濃度の測定を用いる。
【０３３７】
特異的抗体を使用して、生体サンプル中のＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーに属する正常または異常レチノイド結合タンパク質受容体の存在を検出するかまたはレベルを測定するための方法を本明細書において提供する。一般に、前記方法は、サンプルを特異的抗体と接触させること、およびその抗体とそのサンプルの分子との結合を検出することを含む。特異的な抗体結合は、適切な対照と比較して、対象となるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーがそのサンプル中に存在することの指標となる。
【０３３８】
特異的抗体−抗原相互作用を検出するための様々な方法（例えば、標準的な免疫組織学的方法、免疫沈降法、酵素イムノアッセイおよびラジオイムノアッセイ）が、当該技術分野において公知である。簡単に言うと、抗体を細胞サンプルに添加し、そのエピトープへの結合を可能にする十分な期間、通常は少なくとも約１０分、にわたってインキュベートする。放射性同位体、酵素、蛍光剤、化学発光物質、または直接検出用の他の標識で抗体を標識してもよい。あるいは、例えば、上で説明したように検出可能に標識されている第２期抗体または試薬を伴う、特異的結合ペアを使用してもよい。そのような試薬およびそれらの使用方法は、当該技術分野において周知である。
【０３３９】
ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの生物活性を調節する試薬の同定方法は、公知である。一般に、前記方法は、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーなどの対象ポリペプチドを含有するサンプルと試験作用因子を接触させること、およびその試験作用因子の存在下でのＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーの対象メンバーの生物活性をアッセイすることを含む。適切な対照（例えば、試験作用因子が不在の状態でＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーの対象メンバーを含むサンプル）における活性と比較した、アッセイする生物活性の増加または減少は、その物質がその対象ポリペプチドの生物活性を調節することの指標となる。成分の混合物を、必要な相互作用を規定する任意の順序で添加する。
【０３４０】
作用因子、特に、細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの核酸の発現レベルを調節する生物活性作用因子、を同定するための方法は、公知である。前記方法は、試験すべき候補作用因子とＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーをコードする核酸を含む細胞とを合わせること、およびそのＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの発現に対するその作用因子の効果を判定することを含む。
【０３４１】
網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの生物活性を減少させる作用因子は、その分子の生物活性に関連した状態または疾患を治療する際に使用することができる。例えば、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの発現の調節は、眼科的疾患を治療するために用いることができる。網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの発現レベル低下は、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを正常に発現する網膜および／またはＲＰＥ細胞に取り込まれるレチノール、レチノール−ＲＢＰ、および／またはレチノール−ＲＢＰ−ＴＴＲの量を減少させ得る。網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの発現レベル低下は、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを正常に発現する網膜および／またはＲＰＥ細胞に取り込まれる治療薬（すなわち、望ましくない眼毒性副作用を生じさせるもの）の量を減少させ得る。網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの発現レベル低下は、前記ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを正常に発現する網膜および／またはＲＰＥ細胞に取り込まれる抗生物質、例えば、アミノグリコシドなどの量を減少させ得る。
【０３４２】
あるいは、一部の実施形態は、生物活性を増加させる作用因子を検出するであろう。
【０３４３】
１つの実施形態において、ＲＰＥ細胞を、ＲＢＰ−レチノールおよび／またはＩＲＢＰ−レチノールと本明細書に提示する作用因子とで処理する。一定期間の後、それらの細胞を単離し、レチノール含有量（ＲＢＰおよびＩＲＢＰ含有量を含む）についてアッセイする。対照（ＲＢＰ−レチノールおよび／またはＩＲＢＰ−レチノールで処理し、本明細書に提示する作用因子で処理していないＲＰＥ細胞）と比較した、ＲＰＥ細胞中で見出されるレチノールの量は、受容体媒介活性に対するその作用因子の効果（すなわち、ＲＢＰ−レチノールまたはＩＲＢＰ−レチノール受容体媒介トランスサイトーシスの阻害）の指標をもたらすこととなる。
【０３４４】
別の実施形態において、ＲＰＥ細胞を、治療薬、例えば抗生物質などと、本明細書において提示する薬剤とで処理する。前記治療薬は、眼組織、例えば、網膜および／またはＲＰＥ細胞などにおける毒性作用の一因となるであろう。一定期間の後、それらの細胞を単離し、治療薬含有量についてアッセイする。対照（治療薬で処理し、本明細書に提示する作用因子で処理していない網膜および／またはＲＰＥ細胞）と比較した、網膜および／またはＲＰＥ細胞中で見出される治療薬の量は、受容体媒介活性に対するその作用因子の効果（すなわち、治療薬受容体媒介トランスサイトーシスの阻害）の指標をもたらすこととなる。
【０３４５】
網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの生物活性を増加させる作用因子は、その生物活性の欠損に関連した眼科的状態を治療する際に使用することができる。例えば、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの生物活性増加は、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるトランスサイトーシス増加につながり、従って、前記細胞中のレチノイド濃度を増加させるかまたは前記細胞におけるレチノイドおよび／もしくは毒性化学物質の蓄積を防止する。
【０３４６】
様々な異なる候補作用因子を上の方法によってスクリーニングすることができる。候補作用因子は、上で説明したように非常に多くの化学的クラスを包含する。
【０３４７】
候補作用因子は、合成または天然化合物のライブラリをはじめとする多種多様な源から得られる。無作為化されたオリゴヌクレオチドおよびオリゴペプチドの発現をはじめとする、多種多様な有機化合物および生体分子のランダムおよび定方向合成のために、非常に多くの手段を利用することができる。例えば、酵母ツー・ハイブリッド・スクリーンによって得られるランダムペプチドライブラリ（Ｘｕら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９４：１２４７３（１９９７））、ファージライブラリ（Ｈｏｏｇｅｎｂｏｏｍら，Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  ４：１（１９９８））、または化学的に生成されたライブラリ。
【０３４８】
あるいは、細菌、真菌、植物および動物抽出物の形態での天然化合物のライブラリは、入手可能であり、または対象ポリペプチドもしくはそのフラグメントでのまたはそのコード化オリゴヌクレオチドでの免疫処置に基づいて生産される抗体を含めて、容易に生産される。加えて、天然または合成生産ライブリおよび化合物を、従来の化学的、物理的、生化学的手段によって容易に修飾することができ、ならびにそれらを用いて、コンビナトリアルライブラリを生成することができる。さらに、公知の薬物を定方向またはランダム化学修飾、例えば、アシル化、アルキル化、エステル化およびアミド化などに付して、構造的類似体を生産することができる。
【０３４９】
１つの実施形態において、作用因子が、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節しているかどうかを評価するための方法は、動物モデルを用いて行われる。
【０３５０】
医薬組成物
別の態様は、例えばメガリン調節剤などの網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節する作用因子と医薬的に許容される希釈剤、賦形剤または担体とを含む医薬組成物である。
【０３５１】
別の態様は、メガリン調節剤と医薬的に許容される希釈剤、賦形剤または担体とを含む医薬組成物である。
【０３５２】
用語「医薬組成物」は、例えばメガリン調節剤などの網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節する作用因子と、他の化学成分、例えば、担体、安定剤、希釈剤、分散剤、懸濁化剤、増粘剤、および／または賦形剤との混合物を指す。医薬組成物は、その化合物の生物への投与を助長する。静脈内、経口、エーロゾル、非経口、眼科的、肺および局所投与をはじめとする（しかし、これらに限定されない）化合物の投与のための多数の技術が、当該技術分野には存在する。
【０３５３】
用語「担体」は、細胞または組織への化合物の組込みを助長する比較的非毒性の化合物または作用因子を指す。
【０３５４】
用語「希釈剤」は、送達する前に対象となる化合物を希釈するために使用される化合物を指す。希釈剤は、より安定な環境をもたらすことができるので、化合物を安定させるために使用することもできる。リン酸緩衝食塩溶液をはじめとする（しかし、これに限定されない）、緩衝溶液に溶解した塩が、当該技術分野では希釈剤として利用される（これは、ｐＨ制御または維持をもたらすこともできる）。
【０３５５】
用語「生理的に許容される」は、その化合物の生物活性または特性を無効にせず、且つ、非毒性である、担体または希釈剤などの材料を指す。
【０３５６】
用語「医薬的に許容される塩」は、それを投与する生物に有意な刺激をもたらさず、且つ、その化合物の生物活性および特性を無効にしない、化合物の調合物を指す。医薬的に許容される塩は、例えばメガリン調節剤などの網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子と、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、サリチル酸などのような酸とを反応させることによって得ることができる。医薬的に許容される塩は、例えばメガリン調節剤などの網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子と、アンモニウム塩、アルカリ金属塩（例えば、ナトリウムもしくはカリウム塩）、アルカリ土類金属塩（例えば、カルシウムもしくはマグネシウム塩）、有機塩基（例えば、ジシクロヘキシルアミン、Ｎ−メチル−Ｄ−グルカミン、トリス（ヒドロキシメチル）メチルアミン）の塩、およびアミノ酸（例えば、アルギニン、リシン）の塩などのような塩を形成する塩基とを反応させることによって、または当該技術分野において公知の方法によって得ることもできる。
【０３５７】
本明細書に開示する化合物の「代謝産物」は、その化合物が代謝されると形成される、その化合物の誘導体である。用語「活性代謝産物」は、その化合物が代謝されると形成される、化合物の生物活性誘導体を指す。用語「代謝された」は、生物が特定の物質を変化させるプロセス（加水分解反応および酵素によって触媒される反応を含むが、これらに限定されない）の総和を指す。例えば、酵素は、化合物に対する特定の構造変化を生じさせ得る。例えば、シトクロムＰ４５０は、様々な酸化および還元反応を触媒し、一方、ウリジン２リン酸グルクロニルトランスフェラーゼは、芳香族アルコール、脂肪族アルコール、カルボン酸、アミンおよび遊離スルフヒドリル基への活性化グルクロン酸分子の転移を触媒する。代謝に関するさらなる情報は、Ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｂａｓｉｓ  ｏｆ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，９ｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，ＭｃＧｒａｗ−Ｈｉｌｌ（１９９６）から得ることができる。
【０３５８】
本明細書に開示する化合物の代謝産物は、宿主への化合物の投与およびその宿主からの組織サンプルの分析によって、またはインビトロでの化合物と肝細胞のインキュベーションおよび結果として得られた化合物の分析によって、同定することができる。両方の方法が当該技術分野において周知である。
【０３５９】
「プロドラッグ」は、インビボで親薬物に転化される作用因子を指す。プロドラッグは、一部の状況ではそれらのほうが親薬物より投与しやすいので、有用であることが多い。それらは、例えば、経口投与によってバイオアベイラブルであるが、親薬物はバイオアベイラブルでない。プロドラッグは、親薬物に勝るほど改善された医薬組成物への可溶性をも有することがある。プロドラッグの一例（それに限定されない）は、水溶性が移動にとって有害である細胞膜を横断する送達を助長するためにエステル（「プロドラッグ」）として投与されるが、その後、水溶性が有益である細胞内に入ると、カルボン酸、活性の実体、に代謝によって加水分解される、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）であろう。プロドラッグのさらなる例は、酸基に結合された短いペプチド（ポリアミノ酸）であり得、この場合、そのペプチドが代謝されてその活性部分を現す。
【０３６０】
本明細書に記載する網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーの活性を調節する作用因子は、それら自体で、またはそれらが他の活性成分（例えば併用療法の場合）または適する担体（単数もしくは複数）もしくは賦形剤（単数もしくは複数）と混合されている医薬組成物で、ヒトに投与することができる。本出願の化合物の調合および投与のための技術は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ」，２０ｔｈ  ｅｄ．（２０００）において見つけることができる。
【０３６１】
投与経路
適する投与経路としては、例えば、経口、直腸内、経粘膜、経皮、肺、眼科的または腸管投与、筋肉内、皮下、静脈内、骨髄内注射をはじめとする非経口送達、ならびに膜下、直接心室内、腹腔内、鼻腔内または眼内注射を挙げることができる。
【０３６２】
あるいは、例えば、多くの場合、デポーまたは徐放製剤で、直接、器官に化合物を注射することにより、全身的にではなく局所的に化合物を投与することができる。さらに、ターゲッティングされた薬物送達システムで、例えば、器官特異的抗体で被覆されたリポソームで、薬物を送達することができる。それらのリポソームは、器官にターゲッティングされ、その器官に選択的に取り込まれることとなる。加えて、薬物を、即時放出製剤の形態で、長期放出製剤の形態で、または中間型放出製剤の形態で提供することができる。
【０３６３】
組成物／調合
網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）を含む医薬組成物は、それ自体公知である方法で、例えば、従来の混合、溶解、顆粒形成、糖衣丸製造、研和、乳化、カプセル化、捕捉または圧縮プロセスによって、製造することができる。
【０３６４】
医薬組成物は、医薬的に使用することができる製剤への活性化合物の加工を助長する賦形剤および助剤を含む１つ以上の生理的に許容される担体を使用して、従来の方法で調合することができる。適切な調合は、選択される投与経路に依存する。適宜、および当該技術分野において理解されているとおり、例えば、上のＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓにおけるように、任意の周知技術、担体および賦形剤を用いることができる。
【０３６５】
網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）は、眼への局所送達のすべての形態を含む、様々な方法で、投与することができる。加えて、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）は、全身投与、例えば、経口投与または静脈内投与することができる。網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）は、眼に局所的に投与することができ、および様々な局所投与可能な眼科組成物、例えば、溶液、懸濁液、ゲルまたは軟膏に調合することができる。従って、「眼科的投与」は、眼内注射、網膜下注射、硝子体内注射、目周囲への投与、結膜下注射、球後注射、眼房内注射（前眼房または後眼腔への注射を含む）、テノン嚢下注射またはインプラント、眼科用液剤、眼科様懸濁液剤、眼軟膏、眼内インプラントおよび眼内挿入物、眼内溶液、イオン導入法の使用、外科手術用洗浄溶液への添合、およびパック（単なる例として、円蓋に挿入される飽和させた外科用綿撒糸）を包含するが、これらに限定されない。
【０３６６】
眼への組成物の投与は、一般に、投与された作用因子の少なくとも一部が通過する角膜とその作用因子との直接接触を生じさせる。多くの場合、前記組成物は、約２から約２４時間、さらに一般的には約４から約２４時間、および最も一般的には約６から約２４時間の眼内での有効滞留時間を有する。
【０３６７】
網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）を含む組成物は、例示として、前記作用因子が溶液、懸濁液、または両方の状態で存在する液体の形態をとることがある。一般に、前記組成物が溶液または懸濁液として投与されるとき、前記作用因子の第一の部分は、溶液の状態で存在し、前記作用因子の第二の部分は、液体マトリックス中の懸濁液の中に粒状形態で存在する。一部の実施形態において、液体組成物は、ゲル製剤を含むことがある。他の実施形態において、前記液体組成物は、水性である。あるいは、前記組成物は、軟膏の形態をとることがある。
【０３６８】
有用な組成物は、水溶液、水性懸濁液、または水溶液／水性懸濁液であり得、これらを点眼剤の形態で提供することができる。望ましい用量を眼への既知の回数の滴下によって投与することができる。例えば、２５μＬの液滴容量については、１〜６滴の投与によって２５〜１５０μＬの組成物が送達されることとなる。水性組成物は、一般的には約０．０１％から約５０％、さらに一般的には約０．１％から約２０％、さらにいっそう一般的には約０．２％から約１０％、および最も一般的には約０．５％から約５％、重量／容量の、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）を含有する。
【０３６９】
一般に、水性組成物は、眼科的に許容されるｐＨおよび重量オスモル濃度を有する。製剤、組成物または成分に関して、「眼科的に許容される」は、治療される眼もしくはその機能性に対して、または治療される被験者の総合的健康状態に対して持続的有害作用を有さないことを意味する。ちょっとした刺激または「ヒリヒリする」感じなどの一時的な作用は、薬剤の眼科的投与にはありがちであり、問題の製剤、組成物または成分が「眼科的に許容される」ことと矛盾しない。
【０３７０】
有用な水性懸濁液は、懸濁化剤として１つ以上のポリマーも含有することがある。有用なポリマーとしては、水溶性ポリマー、例えばセルロース系ポリマー（例えば、ヒドロキシプロピルセルロース）、および水不溶性ポリマー、例えば架橋カルボキシル含有ポリマーが挙げられる。有用な組成物は、例えば、カルボキシメチルセルロース、カルボマー（アクリル酸ポリマー）、ポリ（メチルメタクリレート）、ポリアクリルアミド、ポリカルボフィル、アクリル酸／ブチルアクリレートコポリマー、アルギン酸ナトリウムおよびデキストランから選択される、眼科的に許容される粘膜付着性ポリマーも含むことがある。
【０３７１】
有用な組成物は、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）の溶解性を助長するために、眼科的に許容される可溶化剤も含むことがある。用語「可溶化剤」は、一般に、前記作用因子のミセル溶液または真溶液を形成する結果となる作用因子を含む。一定の眼科的に許容される非イオン性界面活性剤、例えばポリソルベート８０は、可溶化剤として有用であり得、眼科的に許容されるグリコール、ポリグリコール、例えばポリエチレングリコール４００、およびグリコールエーテルも可溶化剤として有用であり得る。
【０３７２】
有用な組成物は、例えば、酢酸、ホウ酸、クエン酸、乳酸、リン酸および塩酸のような酸、例えば、水酸化ナトリウム、リン酸ナトリウム、ホウ酸ナトリウム、クエン酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、乳酸ナトリウムおよびトリスヒドロキシメチルアミノメタンのような塩基、ならびに例えば、クエン酸塩／デキストロース、重炭酸ナトリウムおよび塩化アンモニウムのような緩衝剤をはじめとする、１つ以上の眼科的に許容されるｐＨ調整剤または緩衝剤も含むことがある。そのような酸、塩基および緩衝剤は、眼科的に許容される範囲内にその組成物のｐＨを維持するために必要な量で含まれる。
【０３７３】
有用な組成物は、その組成物の重量オスモル濃度を眼科的に許容される範囲内にするために必要な量で１つ以上の眼科的に許容される塩も含むことがある。そのような塩としては、ナトリウムカチオン、カリウムカチオンまたはアンモニウムカチオンおよび塩化物アニオン、クエン酸アニオン、アスコルビン酸アニオン、ホウ酸アニオン、リン酸アニオン、重炭酸アニオン、硫酸アニオン、チオ硫酸アニオンまたは重亜硫酸アニオンが挙げられ、適切な塩としては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、チオ硫酸ナトリウム、重亜硫酸ナトリウムおよび硫酸アンモニウムが挙げられる。
【０３７４】
他の有用な組成物は、微生物の活性を阻害するために１つ以上の眼科的に許容される保存薬も含むことがある。適する保存薬としては、水銀含有物質、例えば、メルフェンおよびチオメルサール、安定化二酸化塩素、ならびに第四アンモニウム化合物、例えば、塩化ベンズアルコニウム、臭化セチルトリメチルアンモニウムおよび塩化セチルピリジニウムが挙げられる。
【０３７５】
さらに他の有用な組成物は、物理的安定性を強化するために、または他の目的で、１つ以上の眼科的に許容される界面活性剤を含むことがある。適切な非イオン性界面活性剤としては、ポリオキシエチレン脂肪酸グリセリドおよび植物油、例えばポリオキシエチレン（６０）硬化ヒマシ油、ならびにポリオキエチレンアルキルエーテルおよびアルキルフェニルエーテル、例えばオクトキシノール１０、オクトキシノール４０が挙げられる。
【０３７６】
さらに他の有用な組成物は、必要な場合には化学的安定性を強化するために１つ以上の抗酸化物質を含むことがある。適する抗酸化物質としては、単なる例として、アスコルビン酸およびメタ重亜硫酸ナトリウムが挙げられる。
【０３７７】
水性懸濁液組成物は、単回投与用再封不能容器に包装することができる。あるいは、多回投与用再封可能容器を使用することができ、この場合はその組成物に保存薬を含めるのが一般的である。
【０３７８】
眼科用組成物は、眼と眼瞼の間または結膜嚢内に挿入することができる（そこで作用因子を放出する）固体物品の形態をとることもある。放出は、一般に前記固形物品が密着している角膜の表面をぬらす涙液への放出、または該角膜それ自体への直接放出である。そのような様式での眼への内植に適する固体物品は、一般に、主としてポリマーから成り、ならびに生体分解性である場合もあり、生体分解性でない場合もある。
【０３７９】
静脈内注射のための、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）は、水溶液中、好ましくは、生理的に適合性の緩衝液、例えば、ハンクス溶液、リンガー溶液または生理食塩緩衝液中で調合することができる。経粘膜投与については、浸透すべき関門に適する浸透剤を調合の際に使用する。そのような浸透剤は、当該技術分野において一般に公知である。他の非経口注射に適する製剤は、水溶液または非水系溶液を、好ましくは生理的に適合性の緩衝剤または賦形剤とともに含むことがある。そのような賦形剤は、当該技術分野において一般に公知である。
【０３８０】
経口投与のための、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）は、当該技術分野において周知の医薬的に許容される担体または賦形剤と活性化合物を合わせることにより、容易に調合することができる。そのような担体によって、本明細書に記載する作用因子を、治療すべき患者が経口摂取するための錠剤、粉末、ピル、糖衣丸、カプセル、液体、ゲル、シロップ、エリキシル、スラリー、懸濁液などに調合することができる。経口使用のための医薬製剤は、１つ以上の固体賦形剤と本明細書に記載の１つ以上の作用因子とを混合し、随意に、その結果として得られた混合物を粉砕し、そして錠剤または糖衣丸のコアを得るために、所望される場合には、適する助剤を添加した後、その顆粒混合物を加工することによって得ることができる。適する賦形剤は、特に、フィラー、例えば、ラクトース、スクロース、マンニトールもしくはソルビトールをはじめとする糖、セルロース製剤、例えば、トウモロコシデンプン、小麦デンプン、米デンプン、馬鈴薯デンプン、ゼラチン、トラガカントゴム、メチルセルロース、微結晶性セルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムなど、またはその他、例えば、ポリビニルピロリドン（ＰＶＰもしくはポビドン）もしくはリン酸カルシウムである。所望される場合には、崩壊剤、例えば、架橋クロスカルメロースナトリウム、ポリビニルピロリドン、寒天、またはアルギン酸もしくはその塩、例えばアルギン酸ナトリウムを添加してもよい。
【０３８１】
糖衣丸コアに適切なコーティングを施す。このために、濃縮糖溶液を使用することができ、これは、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、カルボポールゲル、ポリエチレングリコール、ならびに／または二酸化チタン、ラッカー溶液、および適する有機溶媒もしくは溶媒混合物を随意に含有することがある。同定のため、または活性化合物用量の異なる組み合わせを特性付けするために、染料または色素を錠剤もしくは糖衣丸コーティングに添加してもよい。
【０３８２】
経口使用することができる医薬製剤としては、ゼラチンで作られたプッシュフィットカプセル、ならびにゼラチンおよび可塑剤、例えばグリセロールまたはソルビトールで作られたソフト密封カプセルが挙げられる。プッシュフィットカプセルは、ラクトースなどのフィラー、デンプンなどの結合剤、および／またはタルクもしくはステアリン酸マグネシウムなどの滑沢剤、および随意に安定剤との混合物で、活性成分を含有することができる。ソフトカプセルの場合、活性化合物を適切な液体、例えば、脂肪油、液体パラフィンまたは液体ポリエチレングリコールに溶解または懸濁させることができる。加えて、安定剤を添加してもよい。経口投与用のすべての調合は、そのような投与に適する用量での調合でなければならない。
【０３８３】
口腔内または舌下投与のための組成物は、従来の方法で調合された錠剤、ロゼンジまたはゲルの形態をとり得る。
【０３８４】
網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）の投与のための別の有用な調合は、経皮送達用具（「パッチ」）を利用する。そのような経皮パッチを使用して、制御された量での本発明の化合物の継続的または非継続的注入をもたらすことができる。医薬の送達のための経皮パッチの構成および使用は、当該技術分野において周知である。例えば、米国特許第５，０２３，２５２号を参照のこと。そのようなパッチは、医薬の継続的送達、拍動性送達、または要求あり次第の送達用に構成することができる。尚、さらに、前記薬剤の経皮送達は、イオン導入パッチなどによって遂行することができる。経皮パッチは、化合物の制御送達をもたらすことができる。速度制御膜を使用することにより、またはポリマーマトリックスもしくはゲルの中に化合物を捕捉することにより、吸収速度を遅らせることができる。逆に、吸収増進剤を使用して、吸収を増加させることができる。経皮投与に適する製剤は、個別のパッチとして提供することができ、親油性エマルジョンまたは緩衝水溶液である場合もあり、ポリマーまたは粘着材に溶解および／または分散させることもできる。経皮パッチは、眼の上をはじめとする、患者の身体の種々の部分の上に配置することができる。
【０３８５】
網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）の眼投与に使用することができる追加のイオン導入用具は、Ｏｐｔｉｓ  Ｆｒａｎｃｅ  Ｓ．Ａ．が考案し、特許を取得したＥｙｅｇａｔｅアプリケーター、およびＩｏｍｅｄ，Ｉｎｃ．が開発したＯｃｕｐｈｏｒ（商標）Ｏｃｕｌａｒ  ｉｏｎｔｏｐｈｏｒｅｓｉｓ  ｓｙｓｔｅｍである。
【０３８６】
吸入による投与のための、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）は、適する噴射剤、例えば、ジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロテトラフルオロエタン、二酸化炭素または他の適切なガスを使用して、加圧パックまたはネブライザーからのエーロゾルスプレー押し出しの形態で従来どおり送達される。加圧エーロゾルの場合、その投薬単位は、計量された量を送達するための弁を設けることによって決定することができる。前記化合物と、適する粉末基剤、例えばラクトースまたはデンプンとのパウダーミックスを含有する、吸入器または注入器において使用するための、例えばゼラチンの、カプセルまたはカートリッジを作製してもよい。
【０３８７】
前記化合物は、注射による、例えばボーラス注射または持続注入による、非経口投与用に調合することができる。注射用の製剤は、例えばアンプル内または多回投与用容器内の単位剤形で添加保存薬とともに提供することができる。前記組成物は、油性または水性ビヒクル中の懸濁液、溶液またはエマルジョンなどの形態をとることができ、ならびに懸濁化剤、安定剤および／または分散剤などの調合用作用因子を含有することがある。
【０３８８】
非経口投与用の医薬製剤としては、水溶性形態の活性化合物の水溶液が挙げられる。加えて、活性化合物の懸濁液を、適切な油性注射用懸濁液として調製することができる。適切な親油性溶媒またはビヒクルとしては、脂肪油、例えばゴマ油、または合成脂肪酸エステル、例えばオレイン酸エチルもしくはトリグリセリド、またはリポソームが挙げられる。水性注射用懸濁液は、懸濁液の粘度を上昇させる物質、例えば、カルボキシメチルセルロース、ソルビトールまたはデキストランを含有することがある。随意に、前記懸濁液は、高濃度の溶液の調製を可能にするために、適する安定剤、またはその化合物の溶解度を上昇させる作用因子も含有することがある。
【０３８９】
あるいは、活性成分は、安定なビヒクル、例えば発熱物質不含滅菌水、で使用前に構成するための粉末形態であり得る。
【０３９０】
前記化合物は、例えばカカオ脂または他のグリセリドなどの従来の坐薬基剤を含有する、直腸用ゲル、直腸用フォーム、直腸用エーロゾル、坐薬または停留浣腸などの直腸用組成物に調合することもできる。前記化合物は、膣坐薬または尿道坐薬（ブージー剤）、薬用タンポンおよび膣錠をはじめとする、膣用または尿道用組成物に調合することもできる。
【０３９１】
前に説明した製剤に加えて、本化合物は、デポー製剤として調合することもできる。そのような長時間作用型製剤は、内植によって（例えば、皮下的にもしくは筋肉内的に）、または筋肉内注射によって、投与することができる。従って、例えば、前記化合物は、適切なポリマー材料もしくは疎水性材料を用いて（例えば、許容される油中のエマルジョンとして）、またはイオン交換樹脂を用いて、または例えば低溶解性塩のような低溶解性誘導体として調合することができる。
【０３９２】
生体分解性ポリマー中の、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）のマイクロカプセル化材料（マイクロカプセルマトリックスとしても知られている）を形成することによって、注射用デポー形態を作ることができる。薬物のポリマーに対する比率、および利用する特定のポリマーの性質に依存して、薬物放出速度を制御することができる。デポー注射用製剤は、リポソームまたはマイクロエマルジョン中に薬物を捕捉することによって調製することもできる。単なる例として、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）の１つの投与方法として、後強膜近傍（ｐｏｓｔｅｒｉｏｒ  ｊｕｘｔａｓｃｌｅｒａｌ）デポー剤を使用してもよい。強膜は、大部分の脊椎動物の眼を包囲する高規則性コラーゲン網から成る、薄い無血管層である。強膜は、無血管性であるので、注射された材料が眼から急速に除去および一掃されることがない天然保管貯蔵所としてそれを利用することができる。眼の強膜層への化合物の投与に用いられる製剤は、強膜層への注射に適する小さな径を有するカニューレでの注射による強膜への適用に適するいずれの形態であってもよい。注射可能な適用形態の例は、溶液、懸濁液またはコロイド状懸濁液である。
【０３９３】
あるいは、疎水性医薬化合物のための他の送達システムを利用してもよい。リポソームおよびエマルジョンは、疎水性薬物のための送達ビヒクルまたは担体の周知の例である。一定の有機溶媒、例えば、Ｎ−メチルピロリドンを利用することができるが、通常は、より大きな毒性という犠牲をはらう。加えて、治療薬を含有する固体疎水性ポリマーの半透過性マトリックスなどの持続放出システムを使用して、前記化合物を送達することができる。様々な持続放出材料が確立されており、当業者に周知である。持続放出性カプセルは、それらの化学的性質に依存して、数週間から１００日以上にわたって化合物を放出することができる。治療用試薬の化学的性質および生体安定性に依存して、追加のタンパク質安定化戦略を利用してもよい。
【０３９４】
本明細書に記載するすべての製剤は、抗酸化物質、金属キレート剤、チオール含有化合物、および他の一般的な安定剤の恩恵を受け得る。そのような安定剤の例としては、次のものが挙げられるが、それらに限定されない。すなわち、（ａ）約０．５％から約２％  ｗ／ｖ  グリセロール、（ｂ）約０．１％から約１％  ｗ／ｖ  メチオニン、（ｃ）約０．１％から約２％  ｗ／ｖ  モノチオグリセロール、（ｄ）約１ｍＭから約１０ｍＭ  ＥＤＴＡ、（ｅ）約０．０１％から約２％  ｗ／ｖ  アスコルビン酸、（ｆ）約０．００３％から約０．０２％  ｗ／ｖ  ポリソルベート８０、（ｇ）約０．００１％から約０．０５％  ｗ／ｖ  ポリソルベート２０、（ｈ）アルギニン、（ｉ）ヘパリン、（ｊ）硫酸デキストラン、（ｋ）シクロデキストリン、（ｌ）ペントサン多硫酸塩および他のヘパリノイド、（ｍ）二価カチオン、例えば、マグネシウムおよび亜鉛、または（ｎ）これらの組み合わせ、である。
【０３９５】
前記作用因子の多くは、医薬適合性の対イオンとの塩として供給することができる。医薬適合性の塩は、塩酸、硫酸、酢酸、乳酸、酒石酸、リンゴ酸、コハク酸などをはじめとする（しかし、これらに限定されない）多くの酸を用いて形成することができる。塩は、対応する遊離酸または塩基形態より、水性または他のプロトン性溶媒によく溶ける傾向がある。
【０３９６】
診断用の蛍光化合物検出方法
例えば黄斑変性および／または黄斑ジストロフィーなどの、網膜疾患の早期診断は、迅速な治療的介入を開始するために重要である。眼組織における蛍光化合物の存在の検出および／または測定は、参照として取り入れている米国特許公開第２００６／００９９７１４号に提供されている。眼組織において例えば酸化リン脂質および／または酸化脂肪酸などの毒性蛍光化合物を検出するための技術および方法を本明細書において提供する。
【０３９７】
リン脂質および脂肪酸は、網膜および／またはＲＰＥ細胞において豊富に見出され、ＲＰＥおよび網膜細胞が適切に機能するために不可欠である。網膜および／またはＲＰＥ細胞における毒性化合物の存在および蓄積は、例えば黄斑変性および／または黄斑ジストロフィーなどの、眼疾患のもとになる。眼組織におけるそのような毒性化合物の早期検出は、迅速な治療介入を開始するために重要である。ＲＰＥおよび／または網膜細胞における酸化リン脂質および／または脂肪酸の存在と眼疾患との相関関係は立証されている。リン脂質および脂肪酸は、網膜および／またはＲＰＥ細胞において光誘発および／または化学物質誘発酸化を受け得る。酸化リン脂質および／または酸化脂肪酸は、蛍光分光分析によって検出することができる蛍光化合物である。眼組織において蛍光化合物を検出するための方法は、参照として取り入れている米国特許公開第２００６／００９９７１４号に提示されている。
【０３９８】
酸化リン脂質および酸化脂肪酸は、例えばＮ−レチニリデン−ホスファチジルエタノール、ジヒドロ−Ｎ−レチニリデン−Ｎ−レチニル−ホスファチジルエタノールアミン、Ｎ−レチニリデン−Ｎ−レチニル−ホスファチジルエタノールアミン、ジヒドロ−Ｎ−レチニリデン−Ｎ−レチニル−エタノールアミン、およびＮ−レチニリデン−ホスファチジルエタノールアミンなどの他の網膜毒性化合物とは異なる蛍光放射を有する。
【０３９９】
１つの実施形態において、眼組織における酸化リン脂質（酸化ホスファチジルセリンを含む）および酸化脂肪酸（酸化されたドコサヘキサン酸を含む）の存在および／または量の測定を含む、例えば黄斑変性および／または黄斑ジストロフィーなどの網膜疾患の早期診断のための方法を本明細書において提供する。
【０４００】
１つの実施形態において、サンプル中の酸化リン脂質および／または脂肪酸の存在を測定するための方法を本明細書において提供する。一部の実施形態において、サンプル中の酸化リン脂質および／または脂肪酸の存在は、３００ｎｍと４００ｎｍの間の波長を有する光線でそのサンプルを照明し、そのサンプルからの４００ｎｍと５００ｎｍの間の放射蛍光を測定することによって決定する。
【０４０１】
リン脂質および脂肪酸は、ＲＰＥ細胞によってゆっくりと取り込まれる。しかし、酸化リン脂質および酸化脂肪酸は、酸化されていないリン脂質および脂肪酸の約１０倍の速度で取り込まれる。酸化リン脂質および酸化脂肪酸は、受容体媒介トランスサイトーシスによってＲＰＥ細胞に取り込まれる。１つの実施形態において、酸化リン脂質および酸化脂肪酸は、ＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーによってＲＰＥ細胞に取り込まれる。
【０４０２】
治療方法、用量および併用療法
用語「哺乳動物」は、ヒトを含むすべての哺乳動物を意味する。哺乳動物としては、単なる例として、ヒト、非ヒト霊長類、ウシ、イヌ、ネコ、ヤギ、ヒツジ、ブタ、ラット、マウスおよびウサギが挙げられる。
【０４０３】
本明細書において用いる場合、用語「有効量」は、治療する疾病、状態および疾患の症状の１つ以上を、ある程度、緩和するであろう、投与する化合物の量を指す。
【０４０４】
本明細書に記載する化合物（単数または複数）を含有する組成物は、予防的および／または治療的処置のために投与することができる。用語「治療すること」は、予防的および／または治療的処置のいずれかを指す。治療的適用の場合、前記組成物は、疾病、状態または疾患に既に罹患している患者に、その疾病、疾患または状態の症状を治癒するまたは少なくとも部分的に阻止するために十分な量で、投与される。この使用に有効な量は、その疾病、疾患または状態の重症度および経過、その患者の健康状態および薬物への応答、ならびに治療する医師の判断に依存するであろう。常用実験（例えば、用量漸増臨床試験）によってそのような治療有効量を決定することは、十分当該技術分野における技術の範囲内であると考えられる。
【０４０５】
予防的適用において、本明細書に記載する、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）を含有する組成物は、特定の疾病、疾患または状態に罹患しやすい、または別様に特定の疾病、疾患または状態の危険を有する患者に投与される。そのような量を「予防有効量または予防用量」と定義する。この使用の場合、正確な量は、その患者の健康状態、体重などにも依存する。常用実験（例えば、用量漸増臨床試験）によってそのような予防有効量を決定することは、十分当該技術分野における技術の範囲内であると考えられる。
【０４０６】
用語「強化する」または「強化すること」は、所望の効果を効力または継続期間の点で増加または延長することを意味する。従って、治療薬の効果を強化することに関して、用語「強化すること」は、その系に対する他の治療薬の効果を、効力または継続期間の点で、増加または延長できることを指す。本明細書において用いる場合、「強化有効量」は、所望の系における別の治療薬の効果を強化するために妥当な量を指す。患者において用いるとき、この使用に有効な量は、その疾病、疾患または状態の重症度および経過、以前の療法、その患者の健康状態および薬物への応答、ならびに治療する医師の判断に依存するであろう。
【０４０７】
患者の状態が改善されない場合、その患者の疾病または状態の症状を改善するか別様に制御または制限するために、医師の自由裁量により、前記化合物の投与は、長期的に、すなわち、長期間にわたって（患者の生存期間全体にわたる場合を含む）行われることもある。
【０４０８】
患者の状態が改善された場合、医師の自由裁量により、前記化合物の投与は、継続的に施されることもあり、または一定の期間（「休薬期間」）一時的に中止されることもある。
【０４０９】
患者の状態が改善され始めたら、必要に応じて維持用量が投与される。その後、投与の用量もしくは頻度、または両方を、改善された疾病、疾患または状態が保持されるレベルに、それらの症状の関数として、減少させることができる。しかし、患者は、何らかの症状再発に基づいて、長期での間欠的治療を必要とする場合がある。
【０４１０】
そのような量に対応するであろう所与の薬剤の量は、特定の化合物、疾病状態およびその重症度、治療が必要な被験者または宿主の素性（例えば、体重）などの要因に依存して変わるであろうが、それでもやはり、例えば、投与する具体的な作用因子、投与経路、治療する状態、および治療する被験者または宿主を含む、その症例を取り巻く特定の状況に従って当該技術分野において公知の方法で常例的に決定することができる。しかし、一般に、成人治療に利用される用量は、１日に０．０２〜５０００ｍｇ、好ましくは１日１〜１５００ｍｇの範囲であろう。望ましい用量を、単一用量で、あるいは同時に（もしくは短期間に）または適切な間隔で投与される分割用量として、例えば１日に２回、３回、４回またはそれ以上のサブ用量で、都合良く提供することができる。
【０４１１】
一定の事例では、本明細書に記載する、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）（または医薬的に許容される塩、エステル、アミド、プロドラッグもしくは溶媒和物）の少なくとも１つを別の治療薬と併用で投与することが適切なこともある。単なる例として、本明細書における化合物の１つを受けたときに患者が経験した副作用の１つが炎症である場合には、最初の治療薬と併用で抗炎症薬を投与することが適切であり得る。または、単なる例として、本明細書に記載する、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子のうちの１つ（例えば、メガリン調節剤など）の治療有効性を、アジュバントの投与によって強化することができる（すなわち、アジュバントそれ自体は最小の治療恩恵しか有することができないが、別の治療薬との併用により患者への総治療恩恵は増加する）。または、単なる例として、本明細書に記載する、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子のうちの１つ（例えば、メガリン調節剤など）を、別の治療薬（これもまた、治療レジメンを含み、治療恩恵を有する）と共に投与することよって、患者が経験する恩恵を増加させることができる。単なる例として、本明細書に記載する、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子のうちの１つ（例えば、メガリン調節剤など）を投与することを含む黄斑変性の治療において、黄斑変性のための他の治療薬または療法を患者に施すことによっても、治療恩恵を増加させることができる。治療する疾病、疾患または状態にかかわらず、いずれの場合も、患者が経験する総合的恩恵は、２つの治療薬の単なる相加的恩恵である場合もあり、または患者が相乗的恩恵を経験する場合もある。
【０４１２】
可能な併用療法の特定の、非限定的な例としては、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する少なくとも１つの作用因子（例えば、メガリン調節剤など）と、酸化窒素（ＮＯ）誘導物質、スタチン、負電荷を有するリン脂質、抗酸化物質、鉱物、抗炎症薬、血管新生阻害剤、マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤、カロチノイド、１３−シス−レチノイン酸、または式（Ａ）の構造を有する化合物：
【０４１３】
【化２７】
2009541357.tif 000030
（式中、
Ｘ１は、ＮＲ２、Ｏ、Ｓ、ＣＨＲ２から成る群より選択され、
Ｒ１は、（ＣＨＲ２）Ｘ−Ｌ１−Ｒ３であり、ここで、
ｘは、０、１、２または３であり、Ｌ１は、単結合または−Ｃ（Ｏ）−であり、
Ｒ２は、Ｈ、（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、Ｆ、（Ｃ１〜Ｃ４）フルオロアルキル、（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ２、−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミン、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４）フルオロアルキル、−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４）アルキルアミン、および−Ｃ（Ｏ）−（Ｃ１〜Ｃ４）アルコキシから成る群より選択される部分であり、ならびに
Ｒ３は、Ｈであるか、（Ｃ２〜Ｃ７）アルケニル、（Ｃ２〜Ｃ７）アルキニル、アリール、（Ｃ３〜Ｃ７）シクロアルキル、（Ｃ５〜Ｃ７）シクロアルケニル、および複素環から成る群より選択される、１〜３個の独立して選択された置換基で随意に置換されている、部分である）
の使用が挙げられる。
【０４１４】
幾つかの事例において、適切な併用剤は、多数のカテゴリーに入る場合がある（単なる例として、ルテインは、抗酸化物質およびカロチノイドである）。さらに、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する前記作用因子（例えば、メガリン調節剤など）を、患者に恩恵をもたらすことができる追加の作用因子（単なる例として、シクロスポリンＡを含む）と共に投与することもできる。
【０４１５】
加えて、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する前記作用因子（例えば、メガリン調節剤など）を、患者に相加的または相乗的恩恵をもたらすことができる手順［単なる例として、体外レオフェレーシス（膜分別濾過としても知られている）の使用、内植可能な超小型テレスコープの使用、ドルーゼンのレーザー凝固、および微小刺激療法が挙げられる］と併用することもできる。
【０４１６】
抗酸化物質の使用が黄斑変性およびジストロフィーの患者に恩恵をもたらすことは証明されている。例えば、Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．，１１９：１４１７−３６（２００１）；Ｓｐａｒｒｏｗら，，Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７８：１８２０７−１３  （２００３）を参照のこと。網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）と併用することができる、適する抗酸化物質の例としては、ビタミンＣ、ビタミンＥ、ベータ−カロチンおよび他のカロチノイド、コエンザイムＱ、４−ヒドロキシ−２，２，６，６−テトラメチルピペリジン−Ｎ−オキシル（Ｔｅｍｐｏｌとしても知られている）、ルテイン、ブチル化ヒドロキシトルエン、レスベラトロール、トロロックス類似体（ＰＮＵ−８３８３６−Ｅ）、およびビルベリー抽出物が挙げられる。
【０４１７】
一定の鉱物の使用が黄斑変性およびジストロフィーの患者に恩恵をもたらすことも証明されている。例えば、Ａｒｃｈ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ，１１９：１４１７−３６（２００１）を参照のこと。網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する少なくとも１つの作用因子（例えば、メガリン調節剤など）と併用することができる、適切な鉱物の例としては、銅含有鉱物、例えば、酸化第二銅（単なる例として）、亜鉛含有鉱物、例えば、酸化亜鉛（単なる例として）、およびセレン含有化合物が挙げられる。
【０４１８】
負電荷を有する一定のリン脂質の使用が、黄斑変性およびジストロフィーの患者に恩恵をもたらすことは証明されている。例えば、Ｓｈａｂａｎ  ＆  Ｒｉｃｈｔｅｒ，Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，３８３：５３７−４５（２００２）；Ｓｈａｂａｎら，Ｅｘｐ．Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．，７５：９９−１０８（２００２）を参照のこと。網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する少なくとも１つの作用因子（例えば、メガリン調節剤など）と併用することができる、負電荷を有する適切なリン脂質の例としては、カルジオリピンおよびホスファチジルグリセロールが挙げられる。正電荷を有するおよび／または中性のリン脂質も、メガリン調節剤と併用したときに黄斑変性およびジストロフィーの患者に恩恵をもたらす場合がある。
【０４１９】
一定のカロチノイドの使用と、光受容体細胞において必要な光保護の維持との相関関係は立証されている。カロチノイドは、植物、藻類、細菌および一定の動物、例えば鳥および貝、において見出すことができるテルペノイド基の天然の黄色から赤色の色素である。カロチノイドは、分子の１つの大きなクラスであり、６００より多くの天然カロチノイドが同定されている。カロチノイドは、炭水化物（カロチン）およびそれらの酸素付加型アルコール誘導体（キサントフィル）を含む。それらとしては、アクチニオエリスロール、アスタキサンチン、カンタキサンチン、カプサンチン、カプソルビン、β−８’−アポ−カロチナール（アポ−カロチナール）、β−１２’−アポ−カロチナール、α−カロチン、β−カロチン、”カロチン”（α−カロチンとβ−カロチンの混合物）、γ−カロチン、β−クリプトキサンチン、ルテイン、リコピン、ビオレリトリン、ゼアキサンチン、およびこれらのヒドロキシ含有またはカルボキシ含有メンバーが挙げられる。カロチノイドの多くは、天然ではシス異性体形およびトランス異性体形として発生するが、合成化合物は、ラセミ混合物である場合が多い。
【０４２０】
人間の場合、網膜は、主として２つのカロチノイド（ゼアキサンチンおよびルテイン）を選択的に蓄積する。これらの２つのカロチノイドは、強力な抗酸化物質であり、青色光を吸収するため、網膜の保護を助けると考えられている。ウズラを用いた研究により、カロチン欠乏食で育った群は、低いゼアキサンチン濃度の網膜を有し、および非常に多数のアポトーシス光受容体細胞によって証明されるような重度の光損傷を受けていたが、高いゼアキサンチンン濃度を有する群は、最小限の損傷しか有さなかったことが確認されている。網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する少なくとも１つの作用因子（例えば、メガリン調節剤など）との併用に適するカロチノイドの例としては、ルテインおよびゼアキサンチン、ならびに上述した任意のカロチノイドが挙げられる。
【０４２１】
適切な酸化窒素誘導物質としては、インビボで内因性ＮＯを刺激するもしくは内因性内皮細胞由来弛緩因子（ＥＤＲＦ）のレベルを上昇させる化合物、または酸化窒素シンターゼのための基質である化合物が挙げられる。そのような化合物としては、例えば、Ｌ−アルギニン、Ｌ−ホモアルギニンおよびＮ−ヒドロキシ−Ｌ−アルギニン［これらのニトロソ化およびニトロシル化類似体（例えば、ニトロソ化Ｌ−アルギニン、ニトロシル化Ｌ−アルギニン、ニトロソ化Ｎ−ヒドロキシ−Ｌ−アルギニン、ニトロシル化Ｎ−ヒドロキシ−Ｌ−アルギニン、ニトロソ化Ｌ−ホモアルギニンおよびニトロシル化Ｌ−ホモアルギニン）を含む］、Ｌ−アルギニンの前駆体および／またはそれらの生理的に許容される塩（例えば、シトルリン、オルニチン、グルタミン、リシン、これらのアミノ酸の少なくとも１つを含むポリペプチドを含む）、酵素アルギナーゼの阻害剤（例えば、Ｎ−ヒドロキシ−Ｌ−アルギニンおよび２（Ｓ）−アミノ−６−ボロノヘキサン酸）および酸化窒素シンターゼのための基質、サイトカイン、アデノシン、ブラジキニン、カルレチクリン、ビサコジルならびにフェノールフタレインが挙げられる。ＥＤＲＦは、内皮によって分泌される血管弛緩因子であり、ならびに酸化窒素またはその密接に関連した誘導体として同定されている（Ｐａｌｍｅｒら，Ｎａｔｕｒｅ，３２７：５２４−５２６（１９８７）；Ｉｇｎａｒｒｏら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，８４：９２６５−９２６９（１９８７））。
【０４２２】
スタチンは、脂質低下剤および／または適切な一酸化窒素誘導物質として役立つ。加えて、スタチンの使用と黄斑変性の発症もしくは発現の遅延との間の関係が実証されている。Ｇ．ＭｃＧｗｉｎ，ら，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌｏｇｙ，８７：１１２１−２５（２００３）。従って、スタチンは、メガリン調節剤と併用で投与されたとき、眼科的状態（例えば、黄斑変性およびジストロフィー、ならびに網膜ジストロフィー）に罹患している患者に恩恵をもたらすことができる。適切なスタチンとしては、単なる例として、ロスバスタチン、ピチバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、セリバスタチン、メバスタチン、ベロスタチン、フルバスタチン、コンパクチン、ロバスタチン、ダルバスタチン、フルインドスタチン、アトルバスタチン、アトルバスタチンカルシウム（これは、アトルバスタチンのヘミカルシウム塩である）、およびジヒドロコンパクチンが挙げられる。
【０４２３】
網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）と共に使用することができる適切な抗炎症薬としては、単なる例として、アスピリンおよび他のサリチル酸塩、クロモリン、ネドクロミル、テオフィリン、ジロートン、ザフィルルーカスト、モンテルカスト、プランルカスト、インドメタシンおよびリポキシゲナーゼ阻害剤；非ステロイド系抗炎症薬（ＮＳＡＩＤ）（例えば、イブプロフェンおよびナプロキシン）；プレドニゾン、デキサメタゾン、シクロオキシゲナーゼ阻害剤（すなわち、ＣＯＸ−１阻害剤および／またはＣＯＸ−２阻害剤、例えば、Ｎａｐｒｏｘｅｎ（商標）またはＣｅｌｅｂｒｅｘ（商標））；スタチン（単なる例として、ロスバスタチン、ピチバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、セリバスタチン、メバスタチン、ベロスタチン、フルバスタチン、コンパクチン、ロバスタチン、ダルバスタチン、フルインドスタチン、アトルバスタチン、アトルバスタチンカルシウム（これは、アトルバスタチンのヘミカルシウム塩である）、およびジヒドロコンパクチン）；ならびに解離したステロイドが挙げられる。
【０４２４】
適切なマトリクスメタロプロテイナーゼ（ＭＭＰ）阻害剤を、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）と併用で投与して、黄斑変性または網膜変性に関連した眼科的状態または症状を治療することもできる。ＭＭＰが細胞外マトリクスの殆どの成分を加水分解することは公知である。これらのプロテイナーゼは、多くの生物学的プロセス、例えば、正常な組織リモデリング、胚発生、創傷治癒および血管新生において中心的な役割を果たす。しかし、黄斑変性をはじめとする多くの疾病状態において、ＭＭＰの過発現が観察されている。多くのＭＭＰが同定されており、これらのほとんどが、マルチドメイン亜鉛エンドペプチダーゼである。多数のメタロプロテイナーゼ阻害剤が公知である（例えば、Ｗｈｉｔｔａｋｅｒ  Ｍ．ら，Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  ９９（９）：２７３５−２７７６（１９９９）によるＭＭＰ阻害剤についての概説を参照のこと）。ＭＭＰ阻害剤の代表例としては、メタロプロテイナーゼの組織阻害剤（ＴＩＭＰ）（例えば、ＴＩＭＰ−１、ＴＩＭＰ−２、ＴＩＭＰ−３、またはＴＩＭＰ−４）、α２−マクログロブリン、テトラサイクリン（例えば、テトラサイクリン、ミノサイクリン、およびドキシサイクリン）、ヒドロキサメート（例えば、ＢＡＴＩＭＡＳＴＡＴ、ＭＡＲＩＭＩＳＴＡＴおよびＴＲＯＣＡＤＥ）、キレート剤（例えば、ＥＤＴＡ、システイン、アセチルシステイン、Ｄ−ペニシラミンおよび金の塩）、合成ＭＭＰフラグメント、スクシニルメルカプトプリン、ホスホンアミデートならびにヒドロキサム酸が挙げられる。網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）と併用することができるＭＭＰ阻害剤の例としては、単なる例として、上述した任意の阻害剤が挙げられる。
【０４２５】
血管新生阻害剤または抗−ＶＥＧＦ薬が黄斑変性およびジストロフィーの患者に恩恵をもたらすことも証明されている。網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する少なくとも１つの作用因子（例えば、メガリン調節剤など）と併用することができる適切な血管新生阻害剤または抗−ＶＥＧＦ薬の例としては、Ｒｈｕｆａｂ  Ｖ２（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ（商標））、トリプトファニル−ｔＲＮＡシンセテターゼ（ＴｒｐＲＳ）、Ｅｙｅ００１（抗−ＶＥＧＦ  ＰＥＧ化アプタマー）、スクアラミン、Ｒｅｔａａｎｅ（商標）１５ｍｇ（デポー懸濁液のための酢酸アネコルタブ；Ａｌｃｏｎ，Ｉｎｃ．）、コンブレタスタチンＡ４プロドラッグ（ＣＡ４Ｐ）、Ｍａｃｕｇｅｎ（商標）、Ｍｉｆｅｐｒｅｘ（商標）（ミフェプリストン−ｒｕ４８６）、テノン嚢下注射用トリアムシノロンアセトニド、硝子体内注射用結晶性トリアムシノロンアセトニド、プリノマスタット（ＡＧ３３４０−合成マトリクスプロテイナーゼ阻害剤、Ｐｆｉｚｅｒ）、フルオシノロンアセトニド（フルオシノロン眼内インプラントを含む、Ｂａｕｓｃｈ  ＆  Ｌｏｍｂ／Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ＶＥＧＦＲ阻害剤（Ｓｕｇｅｎ）、およびＶＥＧＦ−Ｔｒａｐ（Ｒｅｇｅｎｅｒｏｎ／Ａｖｅｎｔｉｓ）が挙げられる。
【０４２６】
視覚障害を緩和するために使用されている他の医薬療法を、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する少なくとも１つの作用因子（例えば、メガリン調節剤など）と併用することができる。そのような治療は、以下のような作用因子を含むが、これらに限定されない。非熱レーザーの使用を伴うＶｉｓｕｄｙｎｅ（商標）、ＰＫＣ  ４１２、Ｅｎｄｏｖｉｏｎ（Ｎｅｕｒｏ  Ｓｅａｒｃｈ  Ａ／Ｓ）、神経栄養因子（例として、グリア由来神経栄養性因子および毛様体神経栄養因子が挙げられる）、ジアタゼム（ｄｉａｔａｚｅｍ）、ドルゾールアミド（ｄｏｒｚｏｌａｍｉｄｅ）、Ｐｈｏｔｏｔｒｏｐ、９−シス−レチナール、ヨウ化ホスホリンまたはエコチオフェートまたは炭酸脱水素酵素阻害剤を含む眼の薬物療法（エコー治療を含む）、ＡＥ−９４１（ＡＥｔｅｒｎａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ，Ｉｎｃ．）、Ｓｉｒｎａ−０２７（Ｓｉｒｎａ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ，Ｉｎｃ．）、ペガプタニブ（ＮｅＸｓｔａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、ニューロトロフィン（単なる例として、ＮＴ−４／５、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈが挙げられる）、Ｃａｎｄ５（Ａｃｕｉｔｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、ラニビツマブ（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、ＩＮＳ−３７２１７（Ｉｎｓｐｉｒｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、インテグリンアンタゴニスト（Ｊｅｒｉｎｉ  ＡＧおよびＡｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからのものが挙げられる）、ＥＧ−３３０６（Ａｒｋ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  Ｌｔｄ．）、ＢＤＭ−Ｅ（ＢｉｏＤｉｅｍ  Ｌｔｄ．）、サリドマイド（例えば、ＥｎｔｒｅＭｅｄ，Ｉｎｃ．によって使用されている）、カルジオトロフィン−１（Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ）、２−メトキシエストラジオール（Ａｌｌｅｒｇａｎ／Ｏｃｕｌｅｘ）、ＤＬ−８２３４（東レ株式会社（Ｔｏｒａｙ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ））、ＮＴＣ−２００（Ｎｅｕｒｏｔｅｃｈ）、テトラチオモリブデート（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｈｉｇａｎ）、ＬＹＮ−００２（Ｌｙｎｋｅｕｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈ）、微細藻類化合物（Ａｑｕａｓｅａｒｃｈ／Ａｌｂａｎｙ，Ｍｅｒａ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、Ｄ−９１２０（Ｃｅｌｌｔｅｃｈ  Ｇｒｏｕｐ  ｐｉｃ）、ＡＴＸ−Ｓ１０（浜松ホトニクス株式会社（Ｈａｍａｍａｔｓｕ  Ｐｈｏｔｏｎｉｃｓ））、ＴＧＦ−ベータ２（Ｇｅｎｚｙｍｅ／Ｃｅｌｔｒｉｘ）、チロシンキナーゼ阻害剤（Ａｌｌｅｒｇａｎ，ＳＵＧＥＮ，Ｐｆｉｚｅｒ）、ＮＸ−２７８−Ｌ（ＮｅＸｓｔａｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ／Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｏｐｔ−２４（ＯＰＴＩＳ  Ｆｒａｎｃｅ  ＳＡ）、網膜細胞神経節神経保護薬（Ｃｏｇｅｎｔ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）、Ｎ−ニトロピラゾール誘導体（Ｔｅｘａｓ  Ａ  ＆  Ｍ    Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｓｙｓｔｅｍ）、ＫＰ−１０２（Ｋｒｅｎｉｔｓｋｙ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）、およびシクロスポリンＡ。米国特許出願公開第２００４００９２４３５号を参照のこと。
【０４２７】
いずれの場合にも、複数の治療薬（これらのうちの１つは、本明細書中に記載する、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子のうちの１つ（例えば、メガリン調節剤など）である）を任意の順序で投与することができ、または同時に投与することさえできる。同時に投与する場合、複数の治療薬を単一の一体化された形態で提供することができ、または複数形態で（単なる例として、単一のピルまたは２つの別個のピル、いずれかとして）提供することができる。それらの治療薬の一方を多回投与で与えてもよいし、または両方を多回用量として与えてもよい。同時に投与しない場合、多回投与間のタイミングは、０週間を超えて４週間未満まで様々であり得る。加えて、併用方法、組成物および製剤は、作用因子２つのみの使用に限定されず、本発明者らは、多数の治療の併用を考えている。単なる例として、メガリン調節剤を、少なくとも１つの抗酸化物質、および負電荷を有する少なくとも１つのリン脂質と共に提供することができ、または、網膜および／もしくはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）を、少なくとも１つの抗酸化物質および少なくとも１つの一酸化窒素生産誘導物質と共に提供することができ、または網膜および／もしくはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する作用因子（例えば、メガリン調節剤など）を、少なくとも１つの一酸化窒素生産誘導物質、および負電荷を有する少なくとも１つのリン脂質と共に提供することができる、等である。
【０４２８】
加えて、網膜および／またはＲＰＥ細胞におけるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーを調節する前記作用因子（例えば、メガリン調節剤など）を、患者に相加的または相乗的な恩恵をもたらすことができる上記手順と併用することができる。視覚障害を緩和することが知られている、視覚障害を緩和すると提唱されているまたは考えられる手順としては、以下のものが挙げられるが、これらに限定されない。すなわち、「限定網膜移動術」、光線力学療法［単なる例として、受容体をターゲットにしたＰＤＴ、Ｂｒｉｓｔｏｌ−Ｍｙｅｒｓ  Ｓｑｕｉｂｂ，Ｃｏ．；ＰＤＴに伴う注射用のポルフィマーナトリウム；ベルテポルフィン（ＱＬＴ  Ｉｎｃ．）；ＰＤＴに伴うロスタポルフィン（Ｍｉｒａｖｅｎｔ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ）；ＰＤＴに伴うタラポルフィンナトリウム（日本石油化学株式会社（Ｎｉｐｐｏｎ  Ｐｅｔｒｏｌｅｕｍ）、モテクサフィンルテチウム（Ｐｈａｒｍａｃｙｃｌｉｃｓ，Ｉｎｃ．）が挙げられる］、アンチセンスオリゴヌクレオチド［例として、Ｎｏｖａｇａｌｉ  Ｐｈａｒｍａ  ＳＡによって試験された製品、およびＩＳＩＳ−１３６５０（Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ）が挙げられる］、レーザー光凝固術、ドルーゼンレーザー処置、黄斑円孔手術、黄斑移動手術、内植可能な超小型テレスコープ、ファイ運動血管造影法（Ｐｈｉ−Ｍｏｔｉｏｎ  Ａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ）［マイクロレーザー療法および栄養血管治療（Ｆｅｅｄｅｒ  Ｖｅｓｓｅｌ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ）としても知られている］、プロトンビーム療法、微小刺激療法、網膜剥離および硝子体手術、強膜折込み術、黄斑下手術、経瞳孔温熱療法、光化学系Ｉ療法、ＲＮＡ干渉（ＲＮＡｉ）の使用、体外レオフェレーシス（膜分別濾過およびレオセラピー（Ｒｅｏｔｈｅｒａｐｙ）としても知られている）、マイクロチップ移植、幹細胞療法、遺伝子置換療法、リボザイム遺伝子療法［低酸素応答要素に対する遺伝子療法（Ｏｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａ）；Ｌｅｎｔｉｐａｋ（Ｇｅｎｅｔｉｘ）；ＰＤＥＦ遺伝子療法（ＧｅｎＶｅｃ）が挙げられる］、光受容体／網膜細胞移植［移植可能な網膜上皮細胞（Ｄｉａｃｒｉｎ，Ｉｎｃ．）；網膜細胞移植片（Ｃｅｌｌ  Ｇｅｎｅｓｙｓ，Ｉｎｃ．）を含む］、ならびに鍼術、である。
【０４２９】
個体に恩恵をもたらすために使用することができるさらなる併用は、その個体が、一定の眼科的状態と相関関係があることが知られている突然変異遺伝子の保有者であるかどうかを判定するための、遺伝子試験の使用を含む。単なる例とし、ヒトＡＢＣＡ４遺伝子の欠失は、シュタルガルト病、錐体−杆体ジストロフィー、加齢性黄斑変性および網膜色素変性症を含む５つの異なる網膜表現型に関連すると考えられる。加えて、常染色体優性形のシュタルガルト病は、ＬＥＯＶ４遺伝子における突然変異によって引き起こされる。Ｋａｒａｎら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．（２００５）を参照のこと。これらの突然変異のいずれかを有する患者は、本明細書に記載する方法において治療的および／または予防的恩恵を見出すと予想される。
【０４３０】
例示的実施例
ＲＰＥ培養物−ヒトＲＰＥ細胞を死後組織から回収し、添加物を有する、カルシウム不含のイーグル最小必須培地（ＥＭＥＭ；ミズーリ州、セントルイスのＳｉｇｍａ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ）中で、定住細胞が増殖し、集密に達し、培地に放出されるまで成長させた。これらの非付着細胞を回収し、マウスラミニン（マサチューセッツ州、ベッドフォードのＣｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ）でコーティングしたポリカーボネートフィルター（米国、マサチューセッツ州、ベッドフォードのＭｉｌｌｉｐｏｒｅ）を有するＭｉｌｌｉｃｅｌｌチャンバで成長させた。頂端培地区画と基底培地区画を分離することができるマルチウエルプレート内にそれらのＭｉｌｌｉｃｅｌｌチャンバを保持した。
【０４３１】
試薬−アール塩およびグルタミンを含有するＭＥＭ培地は、Ｃｅｌｌｇｒｏ（バージニア州、ハードン）からのものであった。ウサギ、抗ラットメガリンは、Ｄｒ．Ｍｉｃｈｅｌｅ  Ｍａｒｉｎｏ（イタリア、Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｐｉｓａ）からの寄贈品であった。ウサギ、抗ヒトｇｐ３３０は、Ｆｉｔｚｇｅｒａｌｄ  Ｉｎｄｕｓｔｒｉｅｓ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｎａｌ，Ｉｎｃ（マサチューセッツ州、コンコード）から入手した。ウサギ免疫前ＩｇＧは、Ｓａｎｔａ  Ｃｒｕｚ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ（カリフォルニア州、サンタクルーズ）から入手し、受容体関連タンパク質（ＲＡＰ）は、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｂｉｏｍｅｄｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（ミシシッピー州、オックスフォード）から入手した。ヒトレチノール結合タンパク質（ＲＢＰ）を大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）において発現させた。そのタンパク質を、レチノール（ミズーリ州、セントルイスのＳｉｇｍａ）の存在下での変性および再フォールディング後、イオン交換およびサイズ排除クロマトグラフィーよって精製した。ウシ間質レチノイド結合タンパク質（ＩＲＢＰ）は、凍結ウシ網膜から調製した。簡単に言うと、凍結網膜を等張緩衝液に入れ、一晩、４℃で穏やかに攪拌した。遠心分離によってそのホモジネートから可溶性タンパク質を除去し、一連のＣｏｎＡセファロースおよびイオン交換クロマトグラフィーによりその上清からＩＲＢＰを精製した。
【０４３２】
免疫細胞化学−共焦点顕微鏡検査のために、フィルター上のＲＰＥ培養物を４％パラホルムアルデヒドで固定し、逐次的にエタノール中で脱水し、Ｅｐｏｎに包埋した。一部のケースでは、固定後、細胞を−２０℃で、５分間、メタノールで透過可能にした。Ｌｅｉｃａレーザー走査型共焦点顕微鏡（ＴＣＳ−ＳＰ２、ペンシルバニア州、エクストンのＬｅｉｃａ）を使用して、切片を分析した。一連の１μｍ  ｘ−ｙ（正面）切片を採取した。染色されたＲＰＥ細胞培養物の個々のｘ−ｙ画像それぞれが、全光切片（スタック内のすべての画像の合計）の三次元投影像を表す。顕微鏡パネルは、ＡｄｏｂｅＰｈｏｔｏｓｈｏｐ  ５．５  Ｂａｒ＝４０μｍを使用して構成した。使用した抗体は、上で説明している。二次抗体は、ヤギ抗マウスおよびウサギＡｌｅｘａ  ４８８およびＡｌｅｘａ  ５９４（オレゴン州、ユージーンのＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）を含んだ。
【０４３３】
ヒトＲＰＥ細胞におけるレチノール結合タンパク質および間質レチノイド結合タンパク質のメガリン媒介取り込み−メガリン特異的抗体（０．２μｇ／ｍＬ）、またはＲＡＰ（０．５μｇ／ｍＬ）を、ＲＰＥ細胞培養物の基底または頂端区画のいずれかに添加し、それらのサンプルを２時間、４℃でインキュベートした。ＲＢＰ−レチノール（３０μＭ）またはＩＲＢＰ−レチノール（１０μＭ）のいずれかを適切な区画に添加し、再びインキュベーションを３７℃で１時間、続けた。インキュベーション後、培地を両方の区画から除去し、デカントした。フィルター支持体からＲＰＥ細胞を除去し、下で説明するとおり加工した。
【０４３４】
組織標本作製および抽出−５ｍＭのＥＤＴＡを含有する２５０マクロリットルのＰＢＳ（ｐＨ７．２）を頂端区画に添加し、それを利用して細胞を攪拌して細胞をフィルター挿入物から離した。その細胞懸濁液を１．５ｍＬ遠心管に移し、それらの細胞を１４，０００×ｇで５分間、遠心分離した。上清を廃棄し、細胞ペレットを追加の１００μＬのＰＢＳで洗浄した。第二の遠心分離の後、ＲＰＥ細胞ペレットを５０μＬのｄｄＨ２Ｏに懸濁させた。その後、細胞膜を１００μＬのＭｅＯＨおよび１０μＬのＮＨ２ＯＨで処理した。それらのサンプルを室温で５分間、インキュベートした。レチノイドを３００μＬのジクロロメタン（ＣＨ２Ｃｌ２）に抽出した。混合および遠心分離（１４，０００×ｇ、１分）後、上部（有機相）を除去し、デカントした。水性（低部）相をＣＨ２Ｃｌ２の３００μＬアリコートでさらに２回、再抽出した。有機相をプールし、溶媒を窒素ガス流のもとで乾燥させた。サンプル残留物を、ＨＰＬＣによる分析のために、２１０μＬのヘキサンに再懸濁させた。
【０４３５】
ＨＬＰＣ−シリカカラム（Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｒｘ−Ｓｉｌ  ４．６ｍｍ×２５０ｍｍ、カリフォルニア州、パロアルトのＡｌｉｇａｎｔ）および２ｍＬ／分の流量でのｎ−へキサン中のジオキサンの勾配を用いて、光ダイオードアレイ検出装置を装備したＡｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズの高速液体クロマトグラフ（ＨＰＬＣ）で、レチノイド抽出物を分析した。
【０４３６】
全組織からのメガリン富化膜の作製−スクロース密度勾配遠心分離を用いて、腎臓、網膜およびＲＰＥ−眼杯（ＲＰＥ＋脈絡膜および強膜）サンプルから膜成分を分離した。切り離した後、０．２５Ｍスクロースを含有する緩衝液（ｐＨ７．５）中で組織サンプルを均質化した。それらのホモジネートを２７，０００×ｇで２０分間、遠心分離した。上清画分を廃棄し、得られたペレット（Ｐ１）を、０．５％ＣＨＡＰＳを含有する緩衝液中で均質化した。遠心分離を繰り返して、不溶性ペレット（これは、廃棄した）およびＣＨＡＰＳ可溶性タンパク質画分（ＣＳ）を生じさせた。このＣＳ画分を、すべての免疫ブロット実験のためのタンパク質源として使用した。この画分は、電気泳動移動度に対する炭水化物除去の影響を調査するための脱グリコシル化研究（１μｇのタンパク質につき１ユニットのエンドグリコシダーゼＦで処理）においても使用した。一部の実験では、メガリン免疫反応性タンパク質を最適に免疫沈降させるために、Ｐ１を１％トリトンに再懸濁させた。
【０４３７】
ペプチド配列決定−メガリン免疫反応性タンパク質をＳＤＳ−ＰＡＧＥゲルから切り離し、シリコーン処理したエッペンドルフ管に入れた。それらのゲルサンプルを２００μＬの脱色溶液（Ｓｉｇｍａ）で脱色した。脱色後、それらのゲル片を乾燥させ、５ユニットのＰＮＧａｓｅ  Ｆ（Ｓｉｇｍａ）を添加し、その後、３７℃で３０分間、インキュベートした。それらのゲル片を覆うように水を添加し、１２〜１６時間、再び３７℃でのインキュベーションを続けた。そのインキュベーション溶液を廃棄し、ゲル片を水で洗浄し、室温で超音波処理した。ゲル片を真空下で乾燥させた。トリプシン（０．４μｇ、Ｓｉｇｍａ）を添加し、サンプルを３０分間、３７℃でインキュベートした。インキュベーション後、５０μＬのトリプシン反応バッファ（Ｓｉｇｍａ）をそのゲルサンプルに添加し、１２〜１６時間、再び３７℃でのインキュベーションを続けた。インキュベーション後、その反応溶液をデカントし、５０μＬのペプチド抽出溶液（Ｓｉｇｍａ）を添加して、ペプチドを溶離させた。３７℃での３０分のインキュベーションおよび断続的な激しい攪拌の後、そのペプチド含有溶液を除去し、デカントした反応溶液と併せた。そのサンプル体積を真空下での蒸発によって〜１０μＬに減少させた。このようにして調製したサンプルを、下で説明するようなエレクトロスプレーイオン化質量分析装置（ＥＳＩ−ＬＣ／ＭＳ）に連結したキャピラリー液体クロマトグラフでの質量分析によって分析した。
【０４３８】
ＥＳＩ−ＬＣ／ＭＳ−クロマトグラフィーには、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズのキャピラリー液体クロマトグラフを使用した。Ｚｏｒｂａｘ  ３００ＳＢ−Ｃ１８カラム（０．５×２５０ｍｍ）を使用して逆相クロマトグラフィーによりペプチドを分離した。０．２％酢酸と０．００５％ヘプタフルオロ酪酸とを含有するアセトニトリルの勾配を、５μＬ／分でそのカラムを通してポンプで送った。カラム温度を５０℃で維持した。そのカラム溶離物は、インラインエレクトロスプレーイオン化質量分析装置（ＬＣＱ  Ｄｅｃａ  ＸＰ  ｐｌｕｓ、カリフォルニア州、サンホゼのＴｈｅｒｍｏ）に送達された。前記ＥＳＩ源は、次のパラメータでプログラムした。スプレー電圧＝４．０４ｋＶ、キャピラリー電圧＝４２．３４Ｖ、キャピラリー温度＝２７５．２０℃、チューブレンズ＝２０Ｖ。ヘリウムフラグメンテーションエネルギーは、ペプチドフラグメントを最適に解離させるように、２５〜３０％の間で変動した。
【０４３９】
免疫ブロット分析−免疫ブロット分析のために使用するタンパク質サンプルをＳＤＳローディングバッファに懸濁させた。これらのサンプルを３〜８％Ｔｒｉｓ−アセテートゲル（カリフォルニア州、カールスバッドのＩｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）での電気泳動にかけ、その後、ＰＶＤＲ膜に移した。Ｔｒｉｓ緩衝食塩液（ＴＢＳＴ）に溶解した０．１％Ｔｗｅｅｎ  ２０中の５％ミルクでその膜をブロックし、その後、適切な一次抗体と共に４℃で１２〜１６時間、インキュベートした。ウエスタンブロットに使用した抗体は、ウサギ抗ラットメガリンポリクローナル抗体（５μｇ／ｍＬ）およびウサギ抗ヒトＲＡＰポリクローナル抗血清（１：５００希釈）を含んだ。ＴＢＳＴで４回洗浄した後、その膜をホースラディッシュペルオキシダーゼコンジュゲート型ヤギ抗ウサギＩｇＧ（１：１００，０００希釈）と共にインキュベートした。その膜を４回洗浄し、ＣｈｅｍｉＧｌｏｗ  Ｗｅｓｔ  Ｓｕｂｓｔｒａｔｅ（カリフォルニア州、サンリアンドロのＡｌｐｈａ  Ｉｎｎｏｔｅｃｈ）で現像し、その後、発光撮像装置（Ａｌｐｈａ  ＩｎｎｏｔｅｃｈからのＦｌｕｏｒＣｈｅｍ）によって可視化した。
【０４４０】
ＡＢＣＡ４ノックアウトマウス。ＡＢＣＡ４は、Ｒｉｍタンパク質（ＲｍＰ）［杆体および錐体光受容体の外節円板内のＡＴＰ結合カセット（ＡＢＣ）輸送体］をコードする。ＲｍＰのための輸送基質は、不明である。ａｂｃａ４遺伝子のノックアウト突然変異を伴って産生させたマウス（Ｗｅｎｇら，Ｃｅｌｌ，９８：１３−２３（１９９９）を参照のこと）は、ＲｍＰ機能の研究に、ならびに候補物質についての有効性のインビボスクリーニングに有用である。これらのマウスは、複合的な眼性表現型を顕示する。すなわち、（ｉ）遅い光受容体変性、（ｉｉ）光暴露後の杆体感受性の遅延回復、（ｉｉｉ）光漂白後の光受容体外節におけるａｔＲＡＬ上昇およびａｔＲＯＬ減少、（ｉｖ）外節におけるフォスファチジルエタノールアミン（ＰＥ）の構成的上昇、および（ｖ）ＲＰＥ細胞におけるリポフスシンの蓄積、である。Ｗｅｎｇら，Ｃｅｌｌ，９８：１３−２３（１９９９）を参照のこと。
【０４４１】
治療したおよび未治療の野生型およびａｂｃａ４−／−マウスにおいて、２つの技法により、光受容体変性速度をモニターすることができる。１つは、ＥＲＧ分析による異なる時間でのマウスの研究であり、臨床診断手順から採用される。Ｗｅｎｇら，Ｃｅｌｌ，９８：１３−２３（１９９９）を参照のこと。麻酔したマウスの角膜表面に電極を配置し、閃光に対する電気的応答を網膜から記録する。光受容体の光誘発過分極の結果として生ずるα波の振幅は、光受容体変性の高感度指標である。Ｋｅｄｚｉｅｒｓｋｉら，Ｉｎｖｅｓｔ．Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．Ｖｉｓ．Ｓｃｉ．，３８：４８９−５０９（１９９７）を参照のこと。生きている動物に対してはＥＲＧを行う。従って、同じマウスを経時的研究中に繰り返し分析することができる。光受容体変性を定量するための基準技法は、網膜切片の組織分析である。各時点での網膜中に残存する光受容体の数を、外顆粒層中の光受容体核の列を数えることによって決定することとなる。
【０４４２】
組織抽出−眼サンプルを１ｍＰのＰＢＳ（ｐＨ７．２）中、氷上で解凍し、Ｄｕａｌｌ  ｇｌａｓｓ−ガラスホモジナイザーを使用して手で均質化した。１ｍＬのクロロホルム／メタノール（２：１、ｖ／ｖ）の添加後、そのサンプルをさらに均質化した。サンプルをホウケイ酸塩管に移し、脂質を４ｍＬのクロロホルムに抽出した。その有機抽出物を３ｍＬのＰＢＳ（ｐＨ７．２）で洗浄し、その後、サンプルを３，０００×ｇで１０分、遠心分離した。クロロホルム相をデカントし、水性相を別の４ｍＬのクロロホルムで再抽出した。遠心分離後、クロロホルム相を合わせ、サンプルを窒素ガス下で乾燥させた。サンプル残留物を１００μＬのヘキサンに再懸濁させ、下で説明するとおりＨＰＬＣによって分析した。
【０４４３】
ＨＬＣ分析：蛍光およびダイオードアレイ検出装置を装備したＡｇｉｌｅｎｔ  １１００シリーズの液体クロマトグラフィーを使用して、Ａｇｉｌｅｎｔ  Ｚｏｒｂａｘ  Ｒｘ−Ｓｉｌ  Ｃｏｌｕｍｎ（５μｍ、４．６×２５０ｍｍ）でクロマトグラフ分離を達成した。移動相（ヘキサン／２−プロパノール／エタノール／２５ｍＭ  ＫＨ２ＰＯ４（ｐＨ７．０）／酢酸；４８５／３７６／１００／５０／０．２７５、ｖ／ｖ）を１ｍＬ／分で送達した。サンプルピーク同定は、信頼できる標準物質の滞留時間および吸収スペクトルに対する比較によって行った。データは、蛍光検出装置から得られたピーク蛍光（Ｌ．Ｕ．）として報告される。
【実施例】
【０４４４】
以下の実施例は、メガリン調節剤の有効性および安全性を試験する例示的方法を提供するものである。これらの実施例は、例示のみを目的として提供するものであり、ここに提供する特許請求の範囲を限定するためのものではない。
【０４４５】
（実施例１）
Ａ２Ｅ蓄積に対するメガリン調節剤の効果
マウスの実験群にはメガリン調節剤の投与およびマウスの対照群にはＤＭＳＯのみの投与を行い、Ａ２Ｅの蓄積についてアッセイする。実験群には、１日につき、１０〜２５μＬのＤＭＳＯ中の２．５から２０ｍｇ／ｋｇのメガリン調節剤を与える。５０ｍｇ／ｋｇの最高用量で効果が観察されなければ、より高い用量を試験する。対照群にはＤＭＳＯのみの１０〜２５μＬ注射を施す。１ヶ月を超えない様々な実験期間にわたって腹腔内（ｉ．ｐ．）注射により実験物質または対照物質のいずれかをマウスに投与する。
【０４４６】
ａｂｃａ４−／−マウスにおけるＡ２Ｅの蓄積についてアッセイするために、１日につき２．５から２０ｍｇ／ｋｇのメガリン調節剤を、週齢２ヶ月のａｂｃａ４−／−マウスにｉ．ｐ．注射によって与える。１ヵ月後、実験マウスと対照マウスの両方を殺し、ＲＰＥにおけるＡ２ＥのレベルをＨＰＬＣによって判定する。加えて、ＵＶ／Ｖｉｓ分光計を使用して、Ｎ−レチニリデン−ホスファチジルエタノールアミン、ジヒドロ−Ｎ−レチニリデン−Ｎ−レチニル−ホスファチジルエタノールアミン、Ｎ−レチニリデン−Ｎ−レチニル−ホスファチジルエタノールアミン、ジヒドロ−Ｎ−レチニリデン−Ｎ−レチニル−エタノールアミン、および／またはＮ−レチニリデン−ホスファチジルエタノールアミンの自己蛍光または吸収スペクトルをモニターすることができる。
【０４４７】
（実施例２）
リポフスシン蓄積に対するメガリン調節剤の効果
マウスの実験群にはメガリン調節剤の投与およびマウスの対照群にはＤＭＳＯのみの投与を行い、リポフスシンの蓄積についてアッセイする。実験群には、１日につき、１０〜２５μＬのＤＭＳＯ中の２．５から２０ｍｇ／ｋｇのメガリン調節剤を与える。５０ｍｇ／ｋｇの最高用量で効果が観察されなければ、より高い用量を試験する。対照群にはＤＭＳＯのみの１０〜２５μＬ注射を施す。１ヶ月を超えない様々な実験期間、ｉ．ｐ．注射により、実験物質または対照物質のいずれかをマウスに投与する。あるいは、１ヶ月を超えない様々な実験期間にわたって０．２５μＬ／時の速度で実験または対照物質のいずれかを送達するポンプをマウスに内植することができる。
【０４４８】
治療したまたは未治療のａｂｃａ４−／−マウスにおけるリポフスシンの形成に対するメガリン調節剤の効果についてアッセイするために、電子または蛍光分光計によって眼を検査してもよい。
【０４４９】
（実施例３）
杆体細胞死または杆体機能障害に対するメガリン調節剤の効果
マウスの実験群にはメガリン調節剤の投与およびマウスの対照群にはＤＭＳＯのみの投与を行い、杆体細胞死または杆体機能障害に対するメガリン調節剤の効果についてアッセイする。実験群には、１日につき、１０〜２５μＬのＤＭＳＯ中の２．５から２０ｍｇ／ｋｇのメガリン調節剤を与える。５０ｍｇ／ｋｇの最高用量で効果が観察されなければ、より高い用量を試験する。対照群にはＤＭＳＯのみの１０〜２５μＬ注射を施す。１ヶ月を超えない様々な実験期間、ｉ．ｐ．注射により、実験物質または対照物質のいずれかをマウスに投与する。あるいは、１ヶ月を超えない様々な実験期間にわたって０．２５μＬ／時の速度で実験または対照物質のいずれかを送達するポンプをマウスに内植することができる。
【０４５０】
約８週間、１日に２．５から２０ｍｇ／ｋｇのメガリン調節剤で治療するマウスを、ＥＲＧ記録のモニタリングおよび網膜組織学の実施によって、杆体細胞死または杆体機能障害に対するメガリン調節剤の効果についてアッセイすることができる。
【０４５１】
（実施例４）
光損傷からの保護についての試験
以下の試験はＳｉｅｖｉｎｇ，Ｐ．Ａ．ら，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９８：１８３５−４０（２００１）によるものである。長期光暴露研究のために、週齢７週の雄Ｓｐｒａｇｕｅ−Ｄａｗｌｅｙアルビノラットを、５ルクスの蛍光白色光の１２：１２時間の明／暗サイクルで収容する。２０〜５０ｍｇ／ｋｇのメガリン調節剤の注射を、０．１８ｍＬ  ＤＭＳＯのｉ．ｐ．注射により、１日３回、８週間にわたって慢性ラットに施す。対照は、０．１８ｍＬのＤＭＳＯをｉ．ｐ．注射によって受ける。最終注射の２日後にラットを殺す。５０ｍｇ／ｋｇの最高用量で効果が観察されなければ、より高い用量を試験する。
【０４５２】
急性光暴露研究については、ラットを一晩、暗順応させ、０．１８ｍＬ  ＤＭＳＯ中の２０〜５０ｍｇ／ｋｇのメガリン調節剤の単回ｉ．ｐ．注射を薄暗い赤色光のもとで施し、１時間、暗闇で保持した後、漂白光に暴露し、その後、ＥＲＧ測定を行う。２，０００ルクス白色蛍光灯に、４８時間、ラットを暴露する。ＥＲＧを７日後に記録し、直ぐに組織学的検査を実施する。
【０４５３】
ラットを安楽死させ、眼を除去する。外顆粒層厚および杆体外節（ＲＯＳ）長の柱細胞カウントを両半球にわたって２００μｍごとに測定し、それらの数を平均して、全網膜にわたる細胞変化の測度を得る。４および８週間治療した時点で慢性ラットからのＥＲＧを記録する。急性の齧歯動物の場合は、錐体寄与を惹起しない刺激を用いて、暗順応ＥＲＧにより、漂白光からの杆体回復をトラッキングする。明順応ＥＲＧを用いて錐体回復をトラッキングする。ＥＲＧの前に、動物たちを薄暗い赤色光の中で準備し、麻酔する。瞳孔を広げ、金線網膜用ループを使用して同時に両眼からのＥＲＧを記録する。
【０４５４】
（実施例５）
メガリン調節剤およびフェンレチニドを含む併用療法
追加の２つのアームを用いるが、実施例１〜４において説明した方法でマウスおよび／またはラットを試験する。追加のアームの１つでは、１日に５ｍｇ／ｋｇから１日に５０ｍｇ／ｋｇの漸増用量のフェンレチニドで、マウスおよび／またはラットの群を治療する。第二の追加のアームでは、１日に２０ｍｇ／ｋｇのメガリン治療剤と１日に５ｍｇ／ｋｇから１日に５０ｍｇ／ｋｇの漸増用量のフェンレチニドの併用剤で、マウスおよび／またはラットの群を治療する。併用療法の恩恵を、実施例１〜４において説明したとおりアッセイする。
【０４５５】
（実施例６）
ＲＰＥ細胞におけるレチノールおよびＲＢＰレベルに対するメガリン調節剤の効果
実施例１〜４において説明した方法でマウスおよび／またはラットを試験するが、ＲＰＥ細胞におけるレチノール（またはレチニルエステル）およびＲＢＰのレベルをＨＰＬＣ分析によって決定する。この実験によって、問題の作用因子に起因する調節活性の量が決定される。実験群と対照群の間のＲＰＥ細胞におけるレチノールおよびＲＢＰレベルの直接比較によって、ＲＰＥ細胞において発現されるＬＤＬ受容体遺伝子ファミリーのメンバーへのレチノール、レチノール−ＲＢＰまたはレチノール−ＲＢＰ−ＴＴＲの結合および取り込みの阻害の要因である作用因子への直接相関が得られる。
【０４５６】
本明細書において開示し、特許請求の範囲に記載する方法のすべては、本開示に鑑みて過度な実験を伴わずに構成および実行することができる。本発明の概念、精神および範囲を逸脱することなく、本明細書に記載する方法および方法の段階または段階の順序を変えることができることは、当業者には明らかであろう。より具体的には、化学的にも生理的にも関連のある一定の作用因子を、本明細書に記載する作用因子の代わりに用いることができ、そして同じまたは類似の結果を達成するであろうことは、明らかである。当業者に明らかであるすべてのこのような類似の代用および修飾は、添付の特許請求の範囲によって定義するとおりの本発明の精神、範囲および概念の範囲内であると考える。
【図１】
2009541357.tif 000033
【図２】
2009541357.tif 000034
【図３】
2009541357.tif 000035
【図４】
2009541357.tif 000036
【図５】
2009541357.tif 000037
【図６】
2009541357.tif 000038
【図７】
2009541357.tif 000039
【図８】
2009541357.tif 000040
【図９】
2009541357.tif 000041
【図１０】
2009541357.tif 000042
【図１１】
2009541357.tif 000043
【図１２】
2009541357.tif 000044
【図１３】
2009541357.tif 000045
【図１４】
2009541357.tif 000046
【図１５】
2009541357.tif 000047
【図１６】
2009541357.tif 000048
【配列表】
2009541357000001.app
【国際調査報告】
2009541357.tif 000049