(57)【要約】  本発明は、抗原提示細胞の機能を調節するシャペロニン１０の使用に関する。より詳細には、本発明は、ＨＬＡなどのＭＨＣ分子の細胞表面発現の調節に属する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つのＭＨＣ分子の細胞表面発現のレベルを調節することによって、被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において免疫応答を調節するための方法であって、前記方法は、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む、方法。
【請求項２】
前記方法が、少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルを調節することによって、被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において免疫応答を調節する工程をさらに含む方法であって、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
少なくとも１つのＭＨＣ分子の細胞表面発現のレベルを調節することによって、被験体において疾患または状態を処置または予防するための方法であって、前記方法は、該被験体に有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む、方法。
【請求項４】
前記方法が、少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルを調節することによって、被験体において疾患または状態を処置または予防する工程をさらに含む方法であって、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において、少なくとも１つのＭＨＣ分子の細胞表面発現のレベルを調節するための方法であって、前記方法は、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む、方法。
【請求項６】
前記方法が、被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において、少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルを調節する工程をさらに含む方法であって、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記他の細胞表面分子が、共刺激分子である、請求項２、４または６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項８】
前記ＭＨＣ分子が、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子および非古典的ＭＨＣ分子を含む群から選択される、請求項１〜７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項９】
前記ＭＨＣクラスＩＩ分子が、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰおよびＨＬＡ−ＤＱを含む群から選択される、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記細胞表面発現が、抗原提示細胞の細胞表面発現である、請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１１】
前記抗原提示細胞が、マクロファージ、樹状細胞およびＢ細胞を含む群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記シャペロニン１０が、天然由来のシャペロニン１０、組換えで生成されたシャペロニン１０または合成的に生成されたシャペロニン１０である、請求項１〜１１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１３】
シャペロニン１０が、真核生物起源である、請求項１〜１２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１４】
シャペロニン１０が、哺乳動物起源である、請求項１〜１３のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１５】
前記シャペロニン１０が、ヒトシャペロニン１０である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記シャペロニン１０が、配列表の配列番号：１、配列表の配列番号：２または配列表の配列番号：３に示されるようなポリペプチド配列を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記シャペロニン１０が、アセチル化されているか、またはアセチル化されていない、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記シャペロニン１０が、シャペロニン１０をコードするポリヌクレオチドの形態で投与される、請求項１〜１７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１９】
前記シャペロニン１０をコードするポリヌクレオチドが、プロモーターに作動可能に連結された遺伝的構築物内に位置する、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記ポリヌクレオチドが、配列表の配列番号：４に示されるような配列を含む、請求項１８または請求項１９のいずれかに記載の方法。
【請求項２１】
被験体またはその少なくとも１つの組織もしくは器官において抗原提示細胞の機能を調節するための方法であって、前記方法は、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む、方法。
【請求項２２】
前記抗原提示細胞が、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択される、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記機能が、リンパ節への移動、Ｔ細胞の活性化またはＴ細胞の増殖を含む群から選択される、請求項２１または２２のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２４】
疾患または状態の処置または予防に使用されるときの組成物であって、前記組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤または補助剤とともにシャペロニン１０を含み、該シャペロニン１０は、少なくとも１つのＭＨＣ分子の細胞表面発現のレベルを調節する、組成物。
【請求項２５】
前記シャペロニン１０が、さらに、少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルを調節する、請求項２４に記載の組成物。
【請求項２６】
前記他の細胞表面分子が、共刺激分子である、請求項２５に記載の組成物。
【請求項２７】
前記ＭＨＣ分子が、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子および非古典的ＭＨＣ分子を含む群から選択される、請求項２４〜２６のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項２８】
前記ＭＨＣクラスＩＩ分子が、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰおよびＨＬＡ−ＤＱを含む群から選択される、請求項２７に記載の組成物。
【請求項２９】
前記細胞表面発現が、抗原提示細胞の細胞表面発現である、請求項２４〜２８のいずれか１項に記載の組成物。
【請求項３０】
前記抗原提示細胞が、マクロファージ、樹状細胞およびＢ細胞を含む群から選択される、請求項２９に記載の組成物。
【請求項３１】
疾患または状態の処置または予防に使用されるときの組成物であって、前記組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤または補助剤とともにシャペロニン１０を含み、該シャペロニン１０は、被験体またはその少なくとも１つの組織もしくは器官において抗原提示細胞の機能を調節する、組成物。
【請求項３２】
前記抗原提示細胞が、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択される、請求項３１に記載の組成物。
【請求項３３】
前記機能が、リンパ節への移動、Ｔ細胞の活性化またはＴ細胞の増殖を含む群から選択される、請求項３１または請求項３２のいずれかに記載の組成物。
【請求項３４】
疾患または状態の処置または予防のための薬物を製造するためのシャペロニン１０の使用であって、該シャペロニン１０は、少なくとも１つのＭＨＣ分子の細胞表面発現のレベルを調節する、使用。
【請求項３５】
前記シャペロニン１０が、さらに、少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルを調節する、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
前記他の細胞表面分子が、共刺激分子である、請求項３５に記載の使用。
【請求項３７】
前記ＭＨＣ分子が、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子および非古典的ＭＨＣ分子を含む群から選択される、請求項３４〜３６のいずれか１項に記載の使用。
【請求項３８】
前記ＭＨＣクラスＩＩ分子が、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰおよびＨＬＡ−ＤＱを含む群から選択される、請求項３７に記載の使用。
【請求項３９】
前記細胞表面発現が、抗原提示細胞の細胞表面発現である、請求項３４〜３８のいずれか１項に記載の使用。
【請求項４０】
前記抗原提示細胞が、マクロファージ、樹状細胞およびＢ細胞を含む群から選択される、請求項３９に記載の使用。
【請求項４１】
疾患または状態の処置または予防のための薬物を製造するためのシャペロニン１０の使用であって、該シャペロニン１０は、被験体またはその少なくとも１つの組織もしくは器官において抗原提示細胞の機能を調節する、使用。
【請求項４２】
前記抗原提示細胞が、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択される、請求項４１に記載の使用。
【請求項４３】
前記機能が、リンパ節への移動、Ｔ細胞の活性化またはＴ細胞の増殖を含む群から選択される、請求項４１または請求項４２のいずれかに記載の使用。
【請求項４４】
被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において、１つあるいはそれ以上の免疫調節因子の細胞内での産生、局在性および／または細胞表面発現を調節するための方法であって、前記方法は、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含み、該シャペロニン１０は、少なくとも１つのＭＨＣ分子または少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルを調節する、方法。
【請求項４５】
前記他の細胞表面分子は、共刺激分子である、請求項４４に記載の方法。
【請求項４６】
前記ＭＨＣ分子が、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子および非古典的ＭＨＣ分子を含む群から選択される、請求項４４または４５に記載の方法。
【請求項４７】
前記ＭＨＣクラスＩＩ分子が、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰおよびＨＬＡ−ＤＱを含む群から選択される、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
前記細胞表面発現が、抗原提示細胞の細胞表面発現である、請求項４４〜４７のいずれか１項に記載の方法。
【請求項４９】
前記抗原提示細胞が、マクロファージ、樹状細胞およびＢ細胞を含む群から選択される、請求項４８に記載の方法。
【請求項５０】
免疫応答を調節する化合物を同定するためのプロセスであって、前記プロセスは：
（ａ）Ｃｐｎ１０の存在下で、細胞または細胞抽出物を候補化合物と接触させる工程；および
（ｂ）前記細胞の表面上での少なくとも１つのＭＨＣ分子の発現が、前記候補化合物と接触することで調節されるかを判定する工程
を含む、プロセス。
【請求項５１】
前記プロセスが：
（ｃ）前記細胞の表面上での少なくとも１つの他の細胞表面分子の発現が、前記候補化合物と接触することで調節されるかを判定する工程
をさらに含む、請求項５０に記載のプロセス。
【請求項５２】
免疫応答を調節する化合物を同定する複数の化合物をスクリーニングするためのプロセスであって、前記プロセスは：
（ａ）Ｃｐｎ１０の存在下で、細胞または細胞抽出物を前記複数の化合物と接触させる工程；および
（ｂ）前記細胞の表面上での少なくとも１つのＭＨＣ分子の発現が、前記複数の化合物と接触することで調節されるかを判定する工程
を含む、プロセス。
【請求項５３】
前記プロセスが：
（ｃ）前記細胞の表面上での少なくとも１つの他の細胞表面分子の発現が、前記複数の化合物と接触することで調節されるかを判定する工程
をさらに含む、請求項５２に記載のプロセス。
【請求項５４】
被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において、少なくとも１つのＭＨＣ分子の細胞表面発現のレベルの調節を誘導するためのプロセスであって、前記プロセスは、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む、プロセス。
【請求項５５】
前記プロセスが、被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において、少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルの調節をさらに含む方法であって、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む、請求項５４に記載のプロセス。
【請求項５６】
前記他の細胞表面分子が、共刺激分子である、請求項５１、５３または５５のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項５７】
前記ＭＨＣ分子が、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子および非古典的ＭＨＣ分子を含む群から選択される、請求項５０〜５６のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項５８】
前記ＭＨＣクラスＩＩ分子が、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰおよびＨＬＡ−ＤＱを含む群から選択される、請求項５７に記載のプロセス。
【請求項５９】
前記細胞表面発現が、抗原提示細胞の細胞表面発現である、請求項５０〜５８のいずれか１項に記載のプロセス。
【請求項６０】
前記抗原提示細胞が、マクロファージ、樹状細胞およびＢ細胞を含む群から選択される、請求項５９に記載のプロセス。
【請求項６１】
免疫応答を調節する化合物を同定するためのプロセスであって、前記プロセスは：
（ａ）Ｃｐｎ１０の存在下で細胞または細胞抽出物を候補化合物と接触させる工程；および
（ｂ）前記細胞のリンパ節への移動、または、Ｔ細胞の増殖を活性化する能力および／もしくは引き起こす能力が、前記候補化合物と接触することで調節されるかを判定する工程
を含む、プロセス。
【請求項６２】
免疫応答を調節する化合物を同定する複数の化合物をスクリーニングするためのプロセスであって、前記プロセスは：
（ａ）Ｃｐｎ１０の存在下で細胞または細胞抽出物を前記複数の化合物と接触させる工程；および
（ｂ）前記細胞のリンパ節への移動、または、Ｔ細胞の増殖を活性化する能力および／もしくは引き起こす能力が、前記複数の化合物と接触することで調節されるかを判定する工程
を含む、プロセス。
【請求項６３】
前記細胞が、抗原提示細胞である、請求項６１または請求項６２に記載のプロセス。
【請求項６４】
前記抗原提示細胞が、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択される、請求項６３に記載のプロセス。
【請求項６５】
被験体またはその少なくとも１つの組織もしくは器官において、抗原提示細胞の機能を調節するためのプロセスであって、前記プロセスは、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む、プロセス。
【請求項６６】
前記抗原提示細胞が、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択される、請求項６５に記載のプロセス。
【請求項６７】
前記機能が、リンパ節への移動、Ｔ細胞の活性化またはＴ細胞の増殖を含む群から選択される、請求項６５または請求項６６に記載のプロセス。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、一般に抗原提示細胞（ＡＰＣ）の機能の調節による免疫応答の制御に関する。特に、本発明は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）分子、例えば、ＨＬＡの細胞表面発現などのＡＰＣ機能の調節におけるシャペロニン１０の使用、ならびに、疾患を処置するための関連方法、使用および組成物、ならびに、ＡＰＣ機能の修飾因子をスクリーニングするためのプロセスに関する。
【背景技術】
【０００２】
細菌およびウイルスの病原体の侵入に対する宿主防御システムの中心的要素は、免疫系の刺激を引き起こすシグナル伝達カスケードを誘導する細胞レセプターによる病原体またはその構成要素の認識の成功を伴う。この系に必須の局面は、主要組織適合遺伝子複合体（ＭＨＣ）−ペプチド複合体のＴ細胞認識である。
【０００３】
ＣＤ４＋Ｔ細胞は、病原体由来ペプチドがＭＨＣクラスＩＩ分子（最初に小胞体において構築されるα鎖およびβ鎖から構成される）とともに提示されるとき、そのようなペプチドを認識することができる。これらのα鎖およびβ鎖は、ペプチド結合溝を保護し、エンドソーム区画へのＭＨＣクラスＩＩ分子の輸送を促進するインバリアント鎖（Ｉｉ）と会合する。そのエンドソーム区画において、Ｉｉは除去され、結合溝にペプチド（ＣＬＩＰ）が残される。シャペロン分子ＨＬＡ−ＤＭは、ＣＬＩＰと抗原ペプチドとの置換を促進する。次いで、抗原ペプチドを有する成熟ＭＨＣクラスＩＩ分子は、細胞表面に移動し、それらをＣＤ４＋Ｔ細胞に提示することができる。
【０００４】
この抗原のプロセシングおよび成熟ＭＨＣクラスＩＩ分子の提示のシステムは、ナイーブＴ細胞を刺激することができ、かつ、主要な免疫応答を誘導することができる唯一のＡＰＣである樹状細胞（ＤＣ）において生じる。従って、ＤＣは、抗原提示および適応免疫の誘導において中心的役割を果たす。ＤＣが免疫応答を誘導する能力は、その成熟状態に左右される。未成熟ＤＣは、末梢において、細胞表面捕捉抗原上でＭＨＣおよびＴ細胞共刺激分子（例えば、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８３およびＣＤ８６）を低レベルで発現していると考えられている。そして、それらは、二次リンパ組織に移動し、成熟プロセスを受ける。成熟すると、ＭＨＣ分子は、細胞内の区画から細胞表面に再分配され、抗原を提示する能力が上昇する。同時に、Ｔ細胞の活性化を増強する共刺激分子の表面発現がアップレギュレートされる。ＤＣによって分泌されるサイトカインのプロファイルもまた、その成熟状態に左右される。成熟ＤＣによって産生されるサイトカインとしては、ＩＬ−１２、ＩＬ−１α／β、ＩＬ−１８、ＩＦＮ−α／β、ＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１０およびＴＧＦ−βが挙げられる。ＤＣサイトカインプロファイルは、免疫応答のＴｈ１／Ｔｈ２の成果を最終的に決定する。つまり、ＤＣによるＩＬ−１２の分泌を誘導する抗原は、Ｔｈ１分化を誘導するのに対し、ＩＬ−１２産生を誘導しない抗原は、Ｔｈ２分化を促進する。
【０００５】
ＤＣの成熟に関する制御プロセスの多くは、不明なままである。特に、ＭＨＣクラスＩＩ分子が、未成熟ＤＣとしてエンドソーム構造体に存在する段階から成熟ＤＣとして原形質膜に存在する段階へと局在が変化するときに関連する分子シグナル伝達経路の多くは、不確かなままである。
【０００６】
シャペロニン１０（Ｃｐｎ１０）は、タンパク質のフォールディングにおいて必須の役割を果たす、高度に保存されたミトコンドリアのシャペロンである。Ｃｐｎ１０はまた、多くの免疫調節性活性、例えば、インビトロとインビボの両方における、核因子κＢ（ＮＦ−κＢ）活性化の阻害および炎症誘発性サイトカインの産生に関連することが示されている。本発明は、ＭＨＣ分子の細胞内の区画からＤＣの細胞表面への再分配およびＴ細胞のＡＰＣ媒介性の活性化をはじめとしたＡＰＣ機能を調節する能力をＣｐｎ１０が有するという、驚くべき予想外の知見に基づくものである。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の第１の局面によれば、少なくとも１つのＭＨＣ分子の細胞表面発現のレベルを調節することによって、被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において免疫応答を調節するための方法が提供され、前記方法は、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む。
【０００８】
上記方法は、少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルを調節することによって被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において免疫応答を調節する工程をさらに含み得る方法であり、この方法は、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む。
【０００９】
上記ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子または非古典的ＭＨＣ分子であり得る。このＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡであり得る。このＨＬＡは、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰまたはＨＬＡ−ＤＱであり得る。
【００１０】
上記細胞表面発現は、抗原提示細胞の細胞表面発現であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【００１１】
上記シャペロニン１０は、天然由来のシャペロニン１０、組換えで生成されたシャペロニン１０または合成的に生成されたシャペロニン１０であり得る。このシャペロニン１０は、真核生物起源であり得る。このシャペロニン１０は、哺乳動物起源であり得る。このシャペロニン１０は、ヒトシャペロニン１０であり得る。
【００１２】
上記シャペロニン１０は、配列表の配列番号：１、配列表の配列番号：２または配列表の配列番号：３に示されるようなポリペプチド配列を含み得る。このシャペロニン１０は、アセチル化されていてもよいし、アセチル化されていなくてもよい。
【００１３】
上記シャペロニン１０は、シャペロニン１０をコードするポリヌクレオチドの形態で投与され得る。このシャペロニン１０をコードするポリヌクレオチドは、プロモーターに作動可能に連結された遺伝的構築物内に位置し得る。このポリヌクレオチドは、配列表の配列番号：４に示されるような配列を含み得る。
【００１４】
本発明の第２の局面によれば、少なくとも１つのＭＨＣ分子の細胞表面発現のレベルを調節することによって、被験体において疾患または状態を処置または予防するための方法が提供され、前記方法は、その被験体に有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む。
【００１５】
上記方法は、少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルを調節することによって、被験体において疾患または状態を処置または予防する工程さらに含み得る方法であり、この方法は、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む。
【００１６】
上記ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子または非古典的ＭＨＣ分子であり得る。このＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡであり得る。このＨＬＡは、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰまたはＨＬＡ−ＤＱであり得る。
【００１７】
上記細胞表面発現は、抗原提示細胞の細胞表面発現であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【００１８】
上記疾患または状態は、ウイルスまたは細菌の病原体による被験体の感染から生じ得るか、または別途それらと関連し得る。この疾患または状態は、癌、自己免疫障害、炎症、アレルギー、喘息または感染症であり得る。
【００１９】
上記シャペロニン１０は、天然由来のシャペロニン１０、組換えで生成されたシャペロニン１０または合成的に生成されたシャペロニン１０であり得る。このシャペロニン１０は、真核生物起源であり得る。このシャペロニン１０は、ヒトシャペロニン１０であり得る。
【００２０】
上記シャペロニン１０は、配列表の配列番号：１、配列表の配列番号：２または配列表の配列番号：３に示されるようなポリペプチド配列を含み得る。このシャペロニン１０は、アセチル化されていてもよいし、アセチル化されていなくてもよい。
【００２１】
上記シャペロニン１０は、シャペロニン１０をコードするポリヌクレオチドの形態で投与され得る。このシャペロニン１０をコードするポリヌクレオチドは、プロモーターに作動可能に連結された遺伝的構築物内に位置し得る。このポリヌクレオチドは、配列表の配列番号：４に示されるような配列を含み得る。
【００２２】
本発明の第３の局面によれば、被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において、少なくとも１つのＭＨＣ分子の細胞表面発現のレベルを調節するための方法が提供され、前記方法は、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む。
【００２３】
上記方法は、被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルを調節する工程をさらに含み得る方法であり、この方法は、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む。
【００２４】
上記ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子または非古典的ＭＨＣ分子であり得る。このＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡであり得る。このＨＬＡは、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰまたはＨＬＡ−ＤＱであり得る。
【００２５】
上記細胞表面発現は、抗原提示細胞の細胞表面発現であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【００２６】
本発明の第４の局面によれば、被験体またはその少なくとも１つの組織もしくは器官において、抗原提示細胞の機能を調節するための方法が提供され、前記方法は、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む。
【００２７】
上記抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【００２８】
上記機能は、リンパ節への移動、Ｔ細胞の活性化またはＴ細胞の増殖を含む群から選択され得る。
【００２９】
本発明の第５の局面によれば、疾患または状態の処置または予防に使用されるときの組成物が提供され、前記組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤または補助剤とともにシャペロニン１０を含み、このシャペロニン１０は、少なくとも１つのＭＨＣ分子の細胞表面発現のレベルを調節する。
【００３０】
上記シャペロニン１０は、さらに、少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルを調節し得る。上記ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子または非古典的ＭＨＣ分子であり得る。このＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡであり得る。このＨＬＡは、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰまたはＨＬＡ−ＤＱであり得る。
【００３１】
上記細胞表面発現は、抗原提示細胞の細胞表面発現であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【００３２】
本発明の第６の局面によれば、疾患または状態の処置または予防に使用されるときの組成物が提供され、前記組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤または補助剤とともにシャペロニン１０を含み、このシャペロニン１０は、被験体またはその少なくとも１つの組織もしくは器官において抗原提示細胞の機能を調節する。
【００３３】
上記抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。上記機能は、リンパ節への移動、Ｔ細胞の活性化またはＴ細胞の増殖を含む群から選択され得る。
【００３４】
本発明の第７の局面によれば、疾患または状態の処置または予防のための薬物を製造するためのシャペロニン１０の使用が提供され、ここで、シャペロニン１０は、少なくとも１つのＭＨＣ分子の細胞表面発現のレベルを調節する。
【００３５】
上記シャペロニン１０は、さらに、少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルを調節し得る。
【００３６】
上記ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子または非古典的ＭＨＣ分子であり得る。このＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡであり得る。このＨＬＡは、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰまたはＨＬＡ−ＤＱであり得る。
【００３７】
上記細胞表面発現は、抗原提示細胞の細胞表面発現であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【００３８】
本発明の第８の局面によれば、疾患または状態の処置または予防のための薬物を製造するためのシャペロニン１０の使用が提供され、ここで、シャペロニン１０は、被験体またはその少なくとも１つの組織もしくは器官において抗原提示細胞の機能を調節する。
【００３９】
上記抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【００４０】
上記機能は、リンパ節への移動、Ｔ細胞の活性化またはＴ細胞の増殖を含む群から選択され得る。
【００４１】
本発明の第９の局面によれば、被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において、１つあるいはそれ以上の免疫調節因子の細胞内での産生、局在性および／または細胞表面発現を調節するための方法が提供され、前記方法は、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含み、シャペロニン１０は、少なくとも１つのＭＨＣ分子または少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルを調節する。
【００４２】
上記ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子または非古典的ＭＨＣ分子であり得る。このＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡであり得る。このＨＬＡは、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰまたはＨＬＡ−ＤＱであり得る。
【００４３】
上記細胞表面発現は、抗原提示細胞の細胞表面発現であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【００４４】
本発明の第１０の局面によれば、免疫応答を調節する化合物を同定するためのプロセスが提供され、前記プロセスは：
（ａ）Ｃｐｎ１０の存在下で、細胞または細胞抽出物を候補化合物と接触させる工程；および
（ｂ）前記細胞の表面上での少なくとも１つのＭＨＣ分子の発現が、前記候補化合物と接触することで調節されるかを判定する工程
を含む。
【００４５】
上記プロセスは：
（ｃ）前記細胞の表面上での少なくとも１つの他の細胞表面分子の発現が、前記候補化合物と接触することで調節されるかを判定する工程
をさらに含み得る。
【００４６】
上記ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子または非古典的ＭＨＣ分子であり得る。このＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡであり得る。このＨＬＡは、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰまたはＨＬＡ−ＤＱであり得る。
【００４７】
上記細胞表面発現は、抗原提示細胞の細胞表面発現であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【００４８】
本発明の第１１の局面によれば、免疫応答を調節する化合物を同定する複数の化合物をスクリーニングするためのプロセスが提供され、前記プロセスは：
（ａ）Ｃｐｎ１０の存在下で、細胞または細胞抽出物を前記複数の化合物と接触させる工程；および
（ｂ）前記細胞の表面上での少なくとも１つのＭＨＣ分子の発現が、前記複数の化合物と接触することで調節されるかを判定する工程
を含む。
【００４９】
上記プロセスは：
（ｃ）前記細胞の表面上での少なくとも１つの他の細胞表面分子の発現が、前記複数の化合物と接触することで調節されるかを判定する工程
をさらに含み得る。
【００５０】
上記ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子または非古典的ＭＨＣ分子であり得る。このＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡであり得る。このＨＬＡは、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰまたはＨＬＡ−ＤＱであり得る。
【００５１】
上記細胞表面発現は、抗原提示細胞の細胞表面発現であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【００５２】
本発明の第１２の局面によれば、被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において、少なくとも１つのＭＨＣ分子の細胞表面発現のレベルの調節を誘導するためのプロセスが提供され、前記プロセスは、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む。
【００５３】
上記プロセスは、被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルの調節をさらに含み得るプロセスであり、このプロセスは、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む。
【００５４】
上記ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子または非古典的ＭＨＣ分子であり得る。このＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡであり得る。このＨＬＡは、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰまたはＨＬＡ−ＤＱであり得る。
【００５５】
上記細胞表面発現は、抗原提示細胞の細胞表面発現であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【００５６】
本発明の第１３の局面によれば、免疫応答を調節する化合物を同定するためのプロセスが提供され、前記プロセスは：
（ａ）Ｃｐｎ１０の存在下で、細胞または細胞抽出物を候補化合物と接触させる工程；および
（ｂ）前記細胞のリンパ節への移動、または、Ｔ細胞の増殖を活性化する能力および／もしくは引き起こす能力が、前記候補化合物と接触することで調節されるかを判定する工程
を含む。
【００５７】
上記細胞は、抗原提示細胞であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【００５８】
本発明の第１４の局面によれば、免疫応答を調節する化合物を同定する複数の化合物をスクリーニングするためのプロセスが提供され、前記プロセスは：
（ａ）Ｃｐｎ１０の存在下で、細胞または細胞抽出物を前記複数の化合物と接触させる工程；および
（ｂ）前記細胞のリンパ節への移動、または、Ｔ細胞の増殖を活性化する能力および／もしくは引き起こす能力が、前記複数の化合物と接触することで調節されるかを判定する工程
を含む。
【００５９】
上記細胞は、抗原提示細胞であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【００６０】
本発明の第１５の局面によれば、被験体またはその少なくとも１つの組織もしくは器官において、抗原提示細胞の機能を調節するためのプロセスが提供され、前記プロセスは、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む。
【００６１】
上記抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【００６２】
上記機能は、リンパ節への移動またはＴ細胞の活性化を含む群から選択され得る。
【発明を実施するための最良の形態】
【００６３】
（定義）
本明細書の文脈において、用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」とは、「必ずしも単独ではないが、もっぱら含む」を意味する。さらに、「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅ）」および「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ）」などの用語「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」の変化形は、同様に変化した意味を有する。
【００６４】
本明細書中で使用されるとき、用語「処置」、「処置する」およびそれらの変化形は、疾患状態または症状を治療するか、疾患の定着を予防するか、または任意の方法で別途、疾患もしくは他の望ましくない症状の進行を予防、妨害、遅延もしくは逆転させる、任意およびすべての用法のことをいう。
【００６５】
本明細書中で使用されるとき、用語「有効量」は、薬剤または化合物が所望の治療的作用または予防的作用をもたらすのに無毒性であるが十分な量の意味の中に入る。必要とされる正確な量は、処置される種、被験体の年齢および全般的な状態、処置される状態の重症度、投与される特定の薬剤ならびに投与様式などの因子に応じて被験体ごとに異なる。従って、正確な「有効量」を明記することはできない。しかしながら、所与の任意の場合について、適切な「有効量」は、単なる日常的な実験を使用して、当業者によって決定され得る。
【００６６】
用語「ポリペプチド」は、ペプチド結合によって互いに結合したアミノ酸から生成されたポリマーを意味する。用語「ポリペプチド」および「タンパク質」は、本明細書中で交換可能に使用されるが、本発明において、「ポリペプチド」は、完全長タンパク質の一部を構成し得る。
【００６７】
用語「ポリヌクレオチド」とは、本明細書中で使用されるとき、デオキシリボヌクレオチド、リボヌクレオチド塩基または公知のアナログもしくは天然のヌクレオチドあるいはそれらの混合物の一本鎖ポリマーまたは二本鎖ポリマーのことをいう。
【００６８】
本明細書中で使用されるとき、用語「調節する（ｍｏｄｕｌａｔｉｎｇ）」、「調節する（ｍｏｄｕｌａｔｅｓ）」およびそれらの変化形は、本発明の特定の調節性の分子または薬剤の非存在下におけるある分子の活性、産生、分泌または他の機能のレベルと比べて、その調節性の分子または薬剤の存在下におけるその分子の活性、産生、分泌または機能のレベルを上昇または低下させることをいう。これらの用語は、上昇または低下の数量化を意味しない。この調節は、所望の結果をもたらすのに十分な任意の規模であり得、また、直接的であってもよいし、間接的であってもよい。
【００６９】
用語「免疫調節因子」とは、本明細書中で使用されるとき、免疫応答の活性化、維持、成熟、阻害、抑制または増強において関与する分子介在物質（メディエーター）のこという。
【００７０】
用語「ＭＨＣ分子」とは、主要組織適合複合体の一部と複合体化しているか、その一部と会合しているか、またはその一部を形成している任意の分子のことをいう。ゆえに、「ＭＨＣ分子」は、あらゆる記述のヒト白血球抗原（ＨＬＡ）（例えば、ＨＬＡ−ＤＲ（ＭＨＣクラスＩＩ）、ＭＨＣクラスＩ分子または非古典的ＭＨＣ分子（例えば、ＣＤ１ａ、ＣＤ１ｂまたはＣＤ１ｃ）が挙げられるがこれらに限定されない）を含み得る。
【００７１】
用語「他の細胞表面分子」とは、細胞表面上に発現している任意の分子のことをいい、共刺激分子を含んでもよいし、含まなくてもよい。用語「共刺激分子」とは、ＭＨＣ分子が関与するシグナルの伝達に直接的または間接的に寄与することができる任意の分子のことをいう。
【００７２】
本発明者らは、蛍光色素標識タンパク質を用いて、Ｃｐｎ１０が、抗原提示細胞、主に樹状細胞と強く相互作用することを示した。一連のＴＬＲリガンドで刺激する前に骨髄性の樹状細胞（ＤＣ）またはＰＢＭＣ由来の形質細胞様樹状細胞が特異的に枯渇していたというインビトロでの実験のデータから、Ｃｐｎ１０の存在下においてサイトカイン産生の動態がかなり変化することが示された。さらに、本発明者らは、Ｃｐｎ１０とともに成熟した単球由来ＤＣが、ＨＬＡ−ＤＲおよび他の共刺激分子を細胞内の区画から細胞表面へ低下したレベルで再分配することを証明した。このＭＨＣクラスＩＩ分子発現の下方調節および抗原提示能力の低下は、Ｃｐｎ１０の抗炎症性作用全体に寄与し得る。
【００７３】
特に、ＤＣの成熟に対するＣｐｎ１０の作用を評価するために、本発明者らは、これまでに広く特徴づけされている単球由来ＤＣを使用した（Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．１９９４；１７９：１１０９；Ｂｌｏｏｄ  ２００２；９９：９９３；ＰＮＡＳ  １９９６；９３：２５８８；Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．２００４；１６：７６７）。単球由来未成熟ＤＣは、ＣＤ１４−ＨＬＡ−ＤＲ＋ＣＤ１ａ＋細胞である。それらは、ＬＰＳによる活性化において、ＨＬＡ−ＤＲをアップレギュレートし、Ｔ細胞に対する刺激性リガンドを細胞表面上に発現させる。本明細書中では、Ｃｐｎ１０が、インビトロにおいてＤＣ成熟の程度を調節することを示す。
【００７４】
そこで、本発明者らは、Ｃｐｎ１０が、細胞表面におけるＨＬＡ−ＤＲのＬＰＳ誘導性発現をダウンレギュレートすることを示した。このＨＬＡ−ＤＲ発現の低下の結果、ＤＣの成熟によるＩＦＮ−γ産生が低下し得る（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９８９；１４３：３７８１に記載）。他方で、Ｃｐｎ１０誘導性のＨＬＡ−ＤＲのダウンレギュレーションは、抗原を保持したＭＨＣクラスＩＩ分子を細胞表面に輸送するエンドサイトーシス経路の効率の変化を反映し得る。しかしながら、本明細書中に示されるデータは、ＤＣ成熟の阻害ならびにＤＣおよびＢ細胞の抗原提示能力の低下が、自己免疫疾患の回復におけるＣｐｎ１０の有望な作用様式であるという明らかな証拠をもたらす。
【００７５】
従って、本発明は、少なくとも１つのＭＨＣ分子の細胞表面発現のレベルを調節することによって、被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において免疫応答を調節するための方法を提供し、ここで、前記方法は、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む。
【００７６】
上記方法は、少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルを調節することによって、被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において免疫応答を調節する工程をさらに含み得る方法であり、この方法は、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む。
【００７７】
上記ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子または非古典的ＭＨＣ分子であり得る。このＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡであり得る。このＨＬＡは、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰまたはＨＬＡ−ＤＱであり得る。
【００７８】
上記細胞表面発現は、抗原提示細胞の細胞表面発現であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【００７９】
上記シャペロニン１０は、天然由来のシャペロニン１０、組換えで生成されたシャペロニン１０または合成的に生成されたシャペロニン１０であり得る。このシャペロニン１０は、真核生物起源であり得る。このシャペロニン１０は、哺乳動物起源であり得る。このシャペロニン１０は、ヒトシャペロニン１０であり得る。
【００８０】
上記シャペロニン１０は、配列表の配列番号：１、配列表の配列番号：２または配列表の配列番号：３に示されるようなポリペプチド配列を含み得る。このシャペロニン１０は、アセチル化されていてもよいし、アセチル化されていなくてもよい。
【００８１】
上記シャペロニン１０は、シャペロニン１０をコードするポリヌクレオチドの形態で投与され得る。このシャペロニン１０をコードするポリヌクレオチドは、プロモーターに作動可能に連結された遺伝的構築物内に位置し得る。このポリヌクレオチドは、配列表の配列番号：４に示されるような配列を含み得る。
【００８２】
本発明はまた、ＭＨＣ分子の少なくとも１つの細胞表面発現のレベルを調節することによって、被験体において疾患または状態を処置または予防するための方法を提供し、ここで、前記方法は、被験体に有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む。
【００８３】
上記方法は、少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルを調節することによって、被験体において疾患または状態を処置または予防する工程を含み得る方法であり、この方法は、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む。上記ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子または非古典的ＭＨＣ分子であり得る。このＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡであり得る。このＨＬＡは、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰまたはＨＬＡ−ＤＱであり得る。
【００８４】
上記細胞表面発現は、抗原提示細胞の細胞表面発現であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【００８５】
上記疾患または状態は、ウイルスまたは細菌の病原体による被験体の感染から生じ得るか、または別途それらと関連し得る。この疾患または状態は、癌、自己免疫障害、炎症、アレルギー、喘息または感染症であり得る。
【００８６】
上記シャペロニン１０は、天然由来のシャペロニン１０、組換えで生成されたシャペロニン１０または合成的に生成されたシャペロニン１０であり得る。このシャペロニン１０は、真核生物起源であり得る。このシャペロニン１０は、ヒトシャペロニン１０であり得る。
【００８７】
上記シャペロニン１０は、配列表の配列番号：１、配列表の配列番号：２または配列表の配列番号：３に示されるようなポリペプチド配列を含み得る。このシャペロニン１０は、アセチル化されていてもよいし、アセチル化されていなくてもよい。
【００８８】
上記シャペロニン１０は、シャペロニン１０をコードするポリヌクレオチドの形態で投与され得る。シャペロニン１０をコードするポリヌクレオチドは、プロモーターに作動可能に連結された遺伝的構築物内に位置し得る。このポリヌクレオチドは、配列表の配列番号：４に示されるような配列を含み得る。
【００８９】
本発明は、さらに、被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において少なくとも１つのＭＨＣ分子の細胞表面発現のレベルを調節するための方法を提供し、ここで、前記方法は、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む。
【００９０】
上記方法は、被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において、少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルを調節する工程を含み得る方法であり、この方法は、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む。
【００９１】
上記ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子または非古典的ＭＨＣ分子であり得る。このＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡであり得る。このＨＬＡは、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰまたはＨＬＡ−ＤＱであり得る。
【００９２】
上記細胞表面発現は、抗原提示細胞の細胞表面発現であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【００９３】
本発明は、さらに、被験体またはその少なくとも１つの組織もしくは器官において、抗原提示細胞の機能を調節するための方法を提供し、ここで、前記方法は、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む。
【００９４】
上記抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【００９５】
上記機能は、リンパ節への移動、Ｔ細胞の活性化またはＴ細胞の増殖を含む群から選択され得る。
【００９６】
本発明は、さらに、疾患または状態の処置または予防に使用されるときの組成物を提供し、ここで、前記組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤または補助剤とともにシャペロニン１０を含み、このシャペロニン１０は、少なくとも１つのＭＨＣ分子の細胞表面発現のレベルを調節する。
【００９７】
上記シャペロニン１０は、さらに、少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルを調節し得る。
【００９８】
上記ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子または非古典的ＭＨＣ分子であり得る。このＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡであり得る。このＨＬＡは、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰまたはＨＬＡ−ＤＱであり得る。
【００９９】
上記細胞表面発現は、抗原提示細胞の細胞表面発現であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【０１００】
本発明はまた、疾患または状態の処置または予防に使用されるときの組成物を提供し、ここで、前記組成物は、少なくとも１つの薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤または補助剤とともにシャペロニン１０を含み、このシャペロニン１０は、被験体またはその少なくとも１つの組織もしくは器官において、抗原提示細胞の機能を調節する。
【０１０１】
上記抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【０１０２】
上記機能は、リンパ節への移動、Ｔ細胞の活性化またはＴ細胞の増殖を含む群から選択され得る。
【０１０３】
本発明は、さらに、疾患または状態の処置または予防のための薬物を製造するためのシャペロニン１０の使用を提供し、ここで、シャペロニン１０は、少なくとも１つのＭＨＣ分子の細胞表面発現のレベルを調節する。
【０１０４】
上記シャペロニン１０は、さらに、少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルを調節し得る。
【０１０５】
上記ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子または非古典的ＭＨＣ分子であり得る。このＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡであり得る。このＨＬＡは、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰまたはＨＬＡ−ＤＱであり得る。
【０１０６】
上記細胞表面発現は、抗原提示細胞の細胞表面発現であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【０１０７】
本発明は、さらに、疾患または状態の処置または予防のための薬物を製造するためのシャペロニン１０の使用を提供し、ここで、シャペロニン１０は、被験体またはその少なくとも１つの組織もしくは器官において、抗原提示細胞の機能を調節する。
【０１０８】
上記抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【０１０９】
上記機能は、リンパ節への移動、Ｔ細胞の活性化またはＴ細胞の増殖を含む群から選択され得る。
【０１１０】
本発明は、さらに、被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において、１つあるいはそれ以上の免疫調節因子の細胞内での産生、局在性および／または細胞表面発現を調節するための方法を提供し、ここで、前記方法は、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含み、シャペロニン１０は、少なくとも１つのＭＨＣ分子または少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルを調節する。
【０１１１】
上記ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子または非古典的ＭＨＣ分子であり得る。このＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡであり得る。このＨＬＡは、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰまたはＨＬＡ−ＤＱであり得る。
【０１１２】
上記細胞表面発現は、抗原提示細胞の細胞表面発現であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【０１１３】
本発明はまた、免疫応答を調節する化合物を同定するためのプロセスを提供し、ここで、前記プロセスは：
（ａ）Ｃｐｎ１０の存在下で、細胞または細胞抽出物を候補化合物と接触させる工程；および
（ｂ）前記細胞の表面上での少なくとも１つのＭＨＣ分子の発現が、前記候補化合物と接触することで調節されるかを判定する工程
を含む。
【０１１４】
上記プロセスは：
（ｃ）前記細胞の表面上での少なくとも１つの他の細胞表面分子の発現が、前記候補化合物と接触することで調節されるかを判定する工程
をさらに含み得る。
【０１１５】
上記ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子または非古典的ＭＨＣ分子であり得る。このＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡであり得る。このＨＬＡは、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰまたはＨＬＡ−ＤＱであり得る。
【０１１６】
上記細胞表面発現は、抗原提示細胞の細胞表面発現であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【０１１７】
本発明は、さらに、免疫応答を調節する化合物を同定する複数の化合物をスクリーニングするためのプロセスを提供し、ここで、前記プロセスは：
（ａ）Ｃｐｎ１０の存在下で、細胞または細胞抽出物を前記複数の化合物と接触させる工程；および
（ｂ）前記細胞の表面上での少なくとも１つのＭＨＣ分子の発現が、前記複数の化合物と接触することで調節されるかを判定する工程
を含む。
【０１１８】
上記プロセスは：
（ｃ）前記細胞の表面上での少なくとも１つの他の細胞表面分子の発現が、前記複数の化合物と接触することで調節されるかを判定する工程
をさらに含み得る。
【０１１９】
上記ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子または非古典的ＭＨＣ分子であり得る。このＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡであり得る。このＨＬＡは、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰまたはＨＬＡ−ＤＱであり得る。
【０１２０】
上記細胞表面発現は、抗原提示細胞の細胞表面発現であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【０１２１】
本発明は、さらに、被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において、少なくとも１つのＭＨＣ分子の細胞表面発現のレベルの調節を誘導するためのプロセスを提供し、ここで、前記プロセスは、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む。
【０１２２】
上記プロセスは、被験体またはその少なくとも１つの細胞、組織もしくは器官において少なくとも１つの他の細胞表面分子の細胞表面発現のレベルの調節をさらに含み得るプロセスであり、このプロセスは、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む。
【０１２３】
上記ＭＨＣ分子は、ＭＨＣクラスＩ分子、ＭＨＣクラスＩＩ分子または非古典的ＭＨＣ分子であり得る。このＭＨＣクラスＩＩ分子は、ＨＬＡであり得る。このＨＬＡは、ＨＬＡ−ＤＲ、ＨＬＡ−ＤＰまたはＨＬＡ−ＤＱであり得る。
【０１２４】
上記細胞表面発現は、抗原提示細胞の細胞表面発現であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【０１２５】
本発明は、さらに、免疫応答を調節する化合物を同定するためのプロセスが提供され、前記プロセスは：
（ａ）Ｃｐｎ１０の存在下で、細胞または細胞抽出物を候補化合物と接触させる工程；および
（ｂ）前記細胞のリンパ節への移動、または、Ｔ細胞の増殖を活性化する能力および／もしくは引き起こす能力が、前記候補化合物と接触することで調節されるかを判定する工程
を含む。
【０１２６】
上記細胞は、抗原提示細胞であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【０１２７】
本発明はまた、免疫応答を調節する化合物を同定する複数の化合物をスクリーニングするためのプロセスが提供され、前記プロセスは：
（ａ）Ｃｐｎ１０の存在下で、細胞または細胞抽出物を前記複数の化合物と接触させる工程；および
（ｂ）前記細胞のリンパ節への移動、または、Ｔ細胞の増殖を活性化する能力および／もしくは引き起こす能力が、前記候補化合物と接触することで調節されるかを判定する工程
を含む。
【０１２８】
上記細胞は、抗原提示細胞であり得る。この抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【０１２９】
本発明はさらに、被験体またはその少なくとも１つの組織もしくは器官において、抗原提示細胞の機能を調節するためのプロセスが提供され、前記プロセスは、有効量のシャペロニン１０を投与する工程を含む。
【０１３０】
上記抗原提示細胞は、マクロファージ、樹状細胞またはＢ細胞を含む群から選択され得る。
【０１３１】
上記機能は、リンパ節への移動、Ｔ細胞の活性化またはＴ細胞の増殖を含む群から選択され得る。
【０１３２】
当業者は、Ｃｐｎ１０が、本発明の方法に従って、単独または１つあるいはそれ以上のさらなる薬剤と組み合せて、投与され得ることを理解する。例えば、Ｃｐｎ１０は、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７およびＴＬＲ９の１つあるいはそれ以上を刺激することができる１つあるいはそれ以上のＴＬＲアゴニストとともに投与され得る。さらに、本発明は、疾患および障害の処置に対する他の治療的なアプローチと組み合わせて、Ｃｐｎ１０を使用する併用療法を企図する。例えば、Ｃｐｎ１０は、Ｉ型インターフェロン（例えば、ＩＦＮβまたはＩＦＮα）の治療に応答性であるウイルス性疾患の処置に有用であり得る。さらに、ＴＬＲ７およびＴＬＲ９のアゴニスト誘導性の活性化によって、放射線治療に対する腫瘍の応答性が増大することが以前に報告されているので、Ｃｐｎ１０は、癌を処置するために放射線治療と組み合わせて使用され得る。
【０１３３】
上記のような併用療法では、併用療法の各成分は、所望の効果をもたらすために、同時もしくは任意の順序で連続的に投与され得るか、または異なる時点で投与され得る。あるいは、それらの成分は、結合生成物として一緒に、単一の投薬単位に製剤化され得る。それらの成分が別々に投与されるとき、同じ投与経路によって投与することが好ましい場合があるが、必ずしもそうである必要はない。
【０１３４】
（Ｃｐｎ１０）
本発明の局面および実施形態によれば、処置する必要のある被験体に、有効量のＣｐｎ１０を投与する。特定の実施形態において、処置される被験体は、ヒトであり、ゆえに、Ｃｐｎ１０ポリペプチドは、ヒトＣｐｎ１０ポリペプチドである。当業者は、本発明に従って使用されるＣｐｎ１０の正確なアイデンティティーが、多くの因子、例えば、処置される種に応じて異なり得、Ｃｐｎ１０は、処置される種由来であるように選択され得ることを理解する。
【０１３５】
Ｃｐｎ１０は、天然Ｃｐｎ１０、天然由来Ｃｐｎ１０、組換えＣｐｎ１０または合成Ｃｐｎ１０であり得る。Ｍｏｒｔｏｎら，２０００（Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌ  ７８：６０３−６０７）、Ｒｙａｎら，１９９５（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７０：２２０３７−２２０４３）およびＪｏｈｎｓｏｎら，２００５（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８０：４０３７−４０４７）に記載されている方法は、組換えおよび合成のＣｐｎ１０タンパク質に適した生成方法の例であり、Ｓｏｍｏｄｅｖｉｌｌａ−Ｔｏｒｒｅｓら，２００３（Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ３２：２７６−２８７）、Ｒｙａｎら，１９９５（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７０：２２０３７−２２０４３）およびＺｈａｎｇら，２０００（Ｊ  Ｎｅｕｒｏｌ  Ｓｃｉ  １８２：５−１５）に記載されている方法は、天然および天然由来のＣｐｎ１０タンパク質に適した生成方法の例であるが、当業者は、本発明が、使用される精製方法または生成方法によって限定されないこと、ならびに、本発明の方法および本発明の組成物に従って使用するためのＣｐｎ１０を生成するために、他の任意の方法が使用され得ることを理解する。
【０１３６】
本発明に従って使用するためのＣｐｎ１０ポリペプチドおよびＣｐｎ１０ペプチドフラグメントは、標準的な組換え核酸技術を使用して得てもよいし、例えば、従来の液相または固相の合成技術を使用して、合成してもよい。Ｃｐｎ１０ペプチドは、１つあるいはそれ以上のプロテイナーゼ（例えば、ｅｎｄｏＬｙｓ−Ｃ、ｅｎｄｏＡｒｇ−Ｃ、ｅｎｄｏＧｌｕ−Ｃおよびｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  Ｖ８−プロテアーゼ）によるポリペプチドの消化によって生成され得る。消化されたペプチドフラグメントは、例えば、高速液体クロマトグラフィ（ＨＰＬＣ）技術によって精製され得る。
【０１３７】
本発明の実施形態はまた、Ｃｐｎ１０をコードするポリヌクレオチドの投与を企図する。そのような状況において、上記ポリヌクレオチドは、典型的には、被験体へのポリヌクレオチドの投与後に適切なポリペプチド配列が産生されるようにプロモーターに作動可能に連結されている。上記ポリヌクレオチドは、ベクター中に入った状態で被験体に投与され得る。このベクターは、プラスミドベクター、ウイルスベクターであり得るか、または、外来配列の挿入、それらの真核細胞への導入および導入配列の発現に適合した他の任意の適当なビヒクルであり得る。典型的には、上記ベクターは、真核生物の発現ベクターであり得、発現制御配列およびプロセシング配列（例えば、プロモーター、エンハンサー、リボソーム結合部位、ポリアデニル化シグナルおよび転写終結配列）を含み得る。投与される核酸構築物は、裸のＤＮＡを含み得るか、または１つあるいはそれ以上の薬学的に許容可能なキャリアを含む組成物の形態であり得る。
【０１３８】
Ｃｐｎ１０ポリペプチドは、配列表の配列番号：１に示されるようなアミノ酸配列を有し得る。Ｃｐｎ１０をコードするポリヌクレオチドのヌクレオチド配列は、配列表の配列番号：４に示されるとおりであり得るか、または配列表の配列番号：４の配列にハイブリダイズする配列に対して十分な配列同一性を示し得る。代替の実施形態では、上記ポリヌクレオチドのヌクレオチド配列は、配列表の配列番号：４に示される配列と、少なくとも３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％、８５％、９０％、９６％、９７％、９８％または９９％の同一性を共有し得る。
【０１３９】
フラグメントおよびそれらの変異体は、本明細書中で使用されるとき、用語「ポリペプチド」および「ポリヌクレオチド」の範囲内である。単なる例示であるが、ＷＯ９５／１５３３８（すなわち「Ｃｈａｐｅｒｏｎｉｎ  １０」ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＡＵ９４／００７４０）に記載されているようなＣｐｎ１０のペプチドフラグメントは、本発明の局面および実施形態に従って使用され得る。
【０１４０】
用語「フラグメント」とは、完全長Ｃｐｎ１０タンパク質の構成物をコードするか、または完全長Ｃｐｎ１０タンパク質の構成物である、核酸配列またはポリペプチド配列のことをいう。そのポリペプチドに関して、そのフラグメントは、完全長タンパク質と共通の質的な生物学的活性を有する。本発明に従って使用されるＣｐｎ１０の生物学的に活性なフラグメントは、典型的には、対応する完全長タンパク質の免疫調節性活性の少なくとも約５０％、より典型的には、そのような活性の少なくとも約６０％、より典型的には、そのような活性の少なくとも約７０％、より典型的には、そのような活性の少なくとも約８０％、より典型的には、そのような活性の少なくとも約９０％、そして、より典型的には、そのような活性の少なくとも約９５％を有し得る。
【０１４１】
用語「変異体」とは、本明細書中で使用されるとき、実質的に類似の分子のことをいう。一般に、核酸配列変異体は、共通の質的な生物学的活性を有するポリペプチドをコードする。一般に、ポリペプチド配列変異体はまた、共通の質的な生物学的活性を有する。さらに、これらのポリペプチド配列変異体は、少なくとも５０％、５５％、６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％の配列同一性を共有し得る。
【０１４２】
さらに、変異体ポリペプチドは、アナログを含み得、ここで、用語「アナログ」とは、Ｃｐｎ１０の誘導体（１つあるいはそれ以上のアミノ酸の付加、欠失、置換を含む）であるポリペプチドのことを意味し、そのポリペプチドは、天然のＣｐｎ１０と同一の機能を実質的に保持する。ポリペプチドの活性を変化させることなく、いくつかのアミノ酸がポリペプチド内で変化し得ること（保存的置換）は、当該分野で周知である。用語「保存的アミノ酸置換」とは、ポリペプチド鎖（タンパク質の１次配列）内のある１つのアミノ酸を、同様の特性を有する別のアミノ酸で置換するか、または置き換えることをいう。例えば、帯電したアミノ酸であるグルタミン酸（Ｇｌｕ）を、同様に帯電したアミノ酸であるアスパラギン酸（Ａｓｐ）で置換することは、保存的アミノ酸置換であり得る。アミノ酸付加は、Ｃｐｎ１０ポリペプチドまたはそのフラグメントと、ポリヒスチジンタグなどの第２のポリペプチドもしくはペプチドとの融合、マルトース結合タンパク質との融合、グルタチオンＳトランスフェラーゼとの融合、緑色蛍光タンパク質との融合、または、ＦＬＡＧもしくはｃ−ｍｙｃなどのエピトープタグの付加によって生じ得る。例えば、野生型ヒトＣｐｎ１０ポリペプチドは、Ｎ末端にさらなるＧＳＭトリペプチド部分を含み得るか（配列表の配列番号：２；例えば、ＷＯ９５／１５３３８（この開示は本明細書中で参照により援用される）を参照のこと）、またはＮ末端にさらなるアラニン（Ａ）残基を含み得るか（配列表の配列番号：３；ＷＯ２００４／０４１３００（すなわち「Ｃｈａｐｅｒｏｎｉｎ  １０  ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｏｎ」ＰＣＴ出願番号ＰＣＴ／ＡＵ２００３／００１４６７））（この開示は本明細書中で参照により援用される）、またはＮ末端にさらなるグリシン（Ｇ）残基を含み得る（配列表の配列番号：５；ＰＣＴ／ＡＵ２００６／００１２７８（「Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｃｈａｐｅｒｏｎｉｎ  １０」ＰＣＴ出願））（この開示は本明細書中で参照により援用される）。本発明は、そのような改変型のＣｐｎ１０をコードするポリヌクレオチドの使用も企図する。
【０１４３】
Ｃｐｎ１０変異体は、当業者に周知の方法を使用して、Ｃｐｎ１０タンパク質の突然変異誘発、または、ランダム突然変異誘発もしくは部位特異的突然変異誘発などによるコード核酸の突然変異誘発によって、生成され得る。そのような方法は、例えば、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  Ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ（Ｃｈａｐｔｅｒ  ９），Ａｕｓｕｂｅｌら，１９９４，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（この開示は本明細書中で参照により援用される）に見られ得る。変異体およびアナログはまた、他の化学部分と複合体化したポリペプチド、融合タンパク質または別途、転移後に修飾されたポリペプチドも包含する。適当な修飾の例は、同時係属中の国際特許出願番号ＰＣＴ／ＡＵ２００５／００００４１（この開示は本明細書中で参照により援用される）に記載されている。
【０１４４】
さらに、Ｃｐｎ１０ポリペプチドまたはそのフラグメントは、側鎖修飾（例えば、当業者に公知であるような、アセチル化、アミジン化、カルバモイル化、還元的アルキル化および他の修飾）をはじめとした他の翻訳後修飾を有し得る。
組成物および投与経路
【０１４５】
一般に、本発明の方法に従った使用に適した組成物は、当業者に公知の方法および手順に従って調製され得、従って、それらには、薬学的に許容可能なキャリア、希釈剤および／または補助剤が含まれ得る。
【０１４６】
組成物は、標準的な経路によって投与され得る。一般に、組成物は、非経口（例えば、静脈内、髄腔内、皮下または筋肉内）、経口または局所的な経路によって投与され得る。投与は、全身性、領域性または局所性であり得る。任意の所与の状況において使用される特定の投与経路は、処置される状態の性質、その状態の重症度および程度、送達される特定の化合物の必要な用量ならびにその化合物の副作用の可能性をはじめとした多くの因子に左右される。
【０１４７】
一般に、適当な組成物は、当業者に公知の方法に従って調製され得、その組成物には、薬学的に許容可能な希釈剤、補助剤および／または賦形剤が含まれ得る。この希釈剤、補助剤および賦形剤は、その組成物の他の成分と適合可能であること、および、そのレシピエントに対して有害でないことに関して「許容可能」でなければならない。
【０１４８】
薬学的に許容可能なキャリアまたは希釈剤の例は、脱塩水または蒸留水；食塩水溶液；植物系油（例えば、ピーナッツ油、ベニバナ油、オリーブ油、綿実油、トウモロコシ油、ゴマ油（例えば、ピーナッツ油、ベニバナ油、オリーブ油、綿実油、トウモロコシ油、ゴマ油、ラッカセイ油およびやし油））；ポリシロキサン（例えば、メチルポリシロキサン、フェニルポリシロキサンおよびメチルフェニルポリソルポキサン）をはじめとしたシリコーン油；揮発性シリコーン；鉱油（例えば、液体パラフィン、軟パラフィンまたはスクアラン）；セルロース誘導体（例えば、メチルセルロース、エチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムまたはヒドロキシプロピルメチルセルロース）；低級アルカノール、例えば、エタノールまたはイソプロパノール；低級アラルカノール；低級ポリアルキレングリコールまたは低級アルキレングリコール、例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、エチレングリコール、プロピレングリコール、１，３−ブチレングリコールまたはグリセリン；脂肪酸エステル（例えば、パルミチン酸イソプロピル、ミリスチン酸イソプロピルまたはオレイン酸エチル）；ポリビニルピリドン；寒天；カラギナン；トラガカントゴムまたはアラビアゴムおよびワセリンである。典型的には、上記キャリア（単数または複数）は、組成物の１０重量％〜９９．９重量％を形成する。
【０１４９】
本発明の組成物は、注射による投与に適した形態、経口摂取に適した製剤の形態（例えば、カプセル、錠剤、カプレット、エリキシル剤）、局所的投与に適した軟膏、クリームまたはローションの形態、点眼剤としての送達に適した形態、鼻腔内吸入または経口吸入などの吸入による投与に適したエアロゾルの形態、非経口投与、すなわち、皮下、筋肉内もしくは静脈内注射に適した形態であり得る。
【０１５０】
注射可能な溶液または懸濁液としての投与について、無毒性の非経口的に許容可能な希釈剤またはキャリアとしては、リンガー溶液、等張性食塩水、リン酸緩衝食塩水、エタノールおよび１，２プロピレングリコールが挙げられ得る。経口用としての使用に適したキャリア、希釈剤、賦形剤および補助剤のいくつかの例としては、ピーナッツ油、液体パラフィン、カルボキシメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、アルギン酸ナトリウム、アラビアゴム、トラガカントゴム、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、ゼラチンおよびレシチンが挙げられる。さらにこれらの経口製剤は、適当な着香料および着色剤を含み得る。カプセルの形態で使用されるとき、そのカプセルは、崩壊を遅延させるモノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルなどの化合物でコーティングされ得る。
【０１５１】
補助剤としては、典型的には、緩和薬、乳化剤、増粘剤、保存剤、殺菌剤および緩衝剤が挙げられる。経口投与用の固体形態は、ヒトおよび獣医学薬務において許容可能な結合剤、甘味料、崩壊剤、希釈剤、着香料、コーティング剤、保存剤、潤滑剤および／または遅延剤を含み得る。適当な結合剤としては、アラビアゴム、ゼラチン、トウモロコシデンプン、トラガカントゴム、アルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロースまたはポリエチレングリコールが挙げられる。適当な甘味料としては、スクロース、ラクトース、グルコース、アスパルテームまたはサッカリンが挙げられる。適当な崩壊剤としては、トウモロコシデンプン、メチルセルロース、ポリビニルピロリドン、グアーゴム、キサンタンガム、ベントナイト、アルギン酸または寒天が挙げられる。適当な希釈剤としては、ラクトース、ソルビトール、マンニトール、デキストロース、カオリン、セルロース、炭酸カルシウム、ケイ酸カルシウムまたはリン酸二カルシウムが挙げられる。適当な着香剤としては、ペパーミント油、冬緑油、サクランボ、オレンジまたはラズベリーの着香料が挙げられる。適当なコーティング剤としては、アクリル酸および／またはメタアクリル酸ならびに／もしくはそれらのエステルのポリマーまたは共重合体、ろう、脂肪族アルコール、ゼイン、シェラックあるいはグルテンが挙げられる。適当な保存剤としては、安息香酸ナトリウム、ビタミンＥ、アルファ−トコフェロール、アスコルビン酸、メチルパラベン、プロピルパラベンまたは亜硫酸水素ナトリウムが挙げられる。適当な潤滑剤としては、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸、オレイン酸ナトリウム、塩化ナトリウムまたはタルクが挙げられる。適当な遅延剤としては、モノステアリン酸グリセリルまたはジステアリン酸グリセリルが挙げられる。
【０１５２】
経口投与用の液体の形態は、上記薬剤に加えて、液体キャリアを含み得る。適当な液体キャリアとしては、水、油（例えば、オリーブ油、ピーナッツ油、ゴマ油、ヒマワリ油、ベニバナ油、ラッカセイ油、やし油）、液体パラフィン、エチレングリコール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコール、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、グリセロール、脂肪族アルコール、トリグリセリドまたはそれらの混合物が挙げられる。
【０１５３】
経口投与用の懸濁液は、さらに、分散剤および／または懸濁剤を含み得る。適当な懸濁剤としては、カルボキシルメチルセルロースナトリウム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン、アルギン酸ナトリウムまたはアセチルアルコールが挙げられる。適当な分散剤としては、レシチン、ステアリン酸などの脂肪酸のポリオキシエチレンエステル、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトールもしくはジオレイン酸ポリオキシエチレンソルビトール、ステアリン酸ポリオキシエチレンソルビトールまたはラウリン酸ポリオキシエチレンソルビトール、モノオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタンもしくはジオレイン酸ポリオキシエチレンソルビタン、ステアリン酸ポリオキシエチレンソルビタンあるいはラウリン酸ポリオキシエチレンソルビタンなどが挙げられる。
【０１５４】
経口投与用のエマルジョンは、さらに、１つあるいはそれ以上の乳化剤を含み得る。適当な乳化剤としては、上で例示されたような分散剤または天然ゴム（例えば、グアーゴム、アラビアゴムまたはトラガカントゴム）が挙げられる。
【０１５５】
非経口的に投与可能な組成物を調製するための方法は、当業者には明らかであり、例えば、本明細書中に参照により援用されるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１５ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．に詳細に記載されている。
【０１５６】
本発明の局所用製剤は、１つあるいはそれ以上の許容可能なキャリアおよび必要に応じて他の任意の治療的な成分とともに活性成分を含む。局所的投与に適した製剤としては、処置が必要な部位に皮膚を通過して浸透させることに適した液体または半液体の調製物（例えば、リニメント剤、ローション、クリーム、軟膏またはペースト）および眼、耳または鼻への投与に適した液滴が挙げられる。
【０１５７】
本発明の液滴は、滅菌された水溶性または油性の溶液または懸濁液を含み得る。これらは、殺菌剤および／もしくは殺真菌剤ならびに／または他の任意の適当な保存剤の水溶液に活性成分を溶解し、必要に応じて界面活性剤を含めることによって調製され得る。次いで、得られた溶液を濾過により精製し、適当な容器に移し、滅菌し得る。滅菌は、オートクレーブすること、もしくは、９０℃〜１００℃で半時間維持すること、または、濾過によって達成され得、その後、無菌操作によって容器に移される。液滴中に含めるのに適した殺菌剤および殺真菌剤の例は、硝酸フェニル水銀または酢酸フェニル水銀（０．００２％）、塩化ベンザルコニウム（０．０１％）および酢酸クロルヘキシジン（０．０１％）である。油溶液の調製に適した溶媒としては、グリセロール、希アルコールおよびプロピレングリコールが挙げられる。
【０１５８】
本発明のローションは、皮膚または眼への適用に適したものを含む。眼用ローションは、必要に応じて殺菌薬を含んでいる滅菌水溶液を含み得、そして液滴の調製物に関して上で説明されたものと類似の方法によって調製され得る。皮膚への適用のためのローションまたはリニメント剤はまた、乾燥を速めるための薬剤および皮膚を冷却するための薬剤（例えば、アルコールまたはアセトン）および／あるいは保湿剤（例えば、グリセロールまたはひまし油もしくはラッカセイ油などの油）を含み得る。
【０１５９】
本発明のクリーム、軟膏またはペーストは、外用のための活性成分の半固体の製剤である。それらは、細かく分割された形態または粉末状の形態の活性成分を単独で、または、脂肪性もしくは非脂肪性の基剤とともに水溶液または非水溶液中の溶液または懸濁液中で、混合することによって作製され得る。その基剤は、アルコール（例えば、プロピレングリコールまたはマクロゴール）と一緒に、炭化水素（例えば、硬パラフィン、軟パラフィンまたは液体パラフィン）、グリセロール、蜜ろう、金属石鹸；粘滑剤；天然起源の油（例えば、アーモンド油、トウモロコシ油、ラッカセイ油、ひまし油またはオリーブ油）；羊毛脂もしくはその誘導体、または、脂肪酸（例えば、ステアリン酸またはオレイン酸）を含み得る。
【０１６０】
上記組成物は、任意の適当な界面活性物質（例えば、陰イオン性、陽イオン性または非イオン性の界面活性物質（例えば、それらのソルビタンエステルまたはポリオキシエチレン誘導体））を含み得る。懸濁剤（例えば、天然ゴム、セルロース誘導体または無機材料（例えば、ケイ素性のシリカおよび他の成分（例えば、ラノリン））もまた含まれ得る。
【０１６１】
上記組成物は、リポソームの形態でも投与され得る。リポソームは、一般に、リン脂質または他の脂質物質から誘導され、水性媒質中に分散される一重膜または多重膜の水和液晶によって形成される。リポソームを形成することができる、任意の無毒性で生理的に許容可能かつ代謝可能な脂質が使用され得る。リポソーム形態での組成物は、安定剤、保存剤、賦形剤などを含み得る。好ましい脂質は、天然と合成の両方のリン脂質およびホスファチジルコリン（レシチン）である。リポソームを形成する方法は、当該分野で公知であり、本明細書に関して特に：Ｐｒｅｓｃｏｔｔ，Ｅｄ．，Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌｕｍｅ  ＸＩＶ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．（１９７６），ｐ．３３  ｅｔ  ｓｅｑ．（この内容が本明細書中に参照により援用される）が参照される。
【０１６２】
上記組成物は、一連のポリエチレングリコール（ＰＥＧ）誘導体に結合体化され得る。タンパク質へのＰＥＧの付加（ＰＥＧ化）は、タンパク質の血漿クリアランス速度を低下させ、それによって、それらの有効性を増大させるための十分に確立された方法である（Ｎｕｃｃｉら，１９９１，Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌ，Ｒｅｖ．６：１３３）。ペグ化のさらなる利点としては、タンパク質の安定性の増大、免疫原性の低下、溶解性の増大およびタンパク質分解への感受性の低下が挙げられ得る（Ｓｈｅｆｆｉｅｌｄ  Ｗ．２００１，Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｈａｅｍａｔｏｌ  Ｄｉｓｏｒｄ．１：１−２２）。ＰＥＧ分子は、−（ＯＣＨ３ＣＨ２）ｎ−ＯＨという基本的な繰り返し構造を含み、それらの分子量によって分類される。ＰＥＧ誘導体は、流体力学的半径を増大させるためにタンパク質に結合体化され、一般に、半減期の延長は、結合しているＰＥＧ鎖のサイズに直接関係する（Ｓｈｅｆｆｉｅｌｄ  Ｗ．２００１，Ｃｕｒｒ  Ｄｒｕｇ  Ｔａｒｇｅｔｓ  Ｃａｒｄｉｏｖａｓｃ  Ｈａｅｍａｔｏｌ  Ｄｉｓｏｒｄ．１：１−２２）。
【０１６３】
上記組成物はまた、微小粒子の形態で投与され得る。ポリ乳酸（ＰＬＡ）、ポリ乳酸−コ−グリコリド（ＰＬＧＡ）およびイプシロン−カプロラクトン（−カプロラクトン）から形成される生分解性の微小粒子は、血漿半減期を延長し、それにより有効性を延ばす薬物キャリアとして広く使用されている（Ｒ．Ｋｕｍａｒ，Ｍ．，２０００，Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔ  Ｓｃｉ．３（２）２３４−２５８）。微小粒子は、ワクチン、抗生物質およびＤＮＡをはじめとした一連の薬物候補を送達するために製剤化されている。さらに、これらの製剤は、非経口の皮下注射、静脈内注射および吸入をはじめとした様々な送達経路用に開発されている。
【０１６４】
上記組成物は、ショ糖酢酸イソ酪酸エステル（ＳＡＩＢ）および有機溶媒または有機溶媒の混合物から構成される徐放性マトリックスを含み得る。さらに、粘度を高めるためおよび放出速度を低下させるためにポリマー添加物を放出調節因子としてビヒクルに加えられ得る。ＳＡＩＢは、周知の食品添加物である。ＳＡＩＢは、非常に疎水性で、２つの酢酸基に対して６つのイソ酪酸基という名目上の比で完全にエステル化されたスクロース誘導体である。混合エステルとして、ＳＡＩＢは、結晶化しないが、透明の粘稠性の液体として存在する。ＳＡＩＢと、エタノールまたはベンジルアルコールなどの薬学的に許容される有機溶媒とを混合することによって、混合物の粘度を注射可能な程度に十分に低下させる。活性な薬学的成分が、ＳＡＩＢ送達ビヒクルに加えられ、ＳＡＩＢ溶液製剤またはＳＡＩＢ懸濁液製剤を形成し得る。その製剤が、皮下に注射されるとき、その溶媒は、マトリックスから拡散し、ＳＡＩＢ−薬物またはＳＡＩＢ−薬物ポリマー混合物が生体内形成デポーを構築することが可能となる。
【０１６５】
本発明の目的で、分子および薬剤は、治療的または予防的に組成物として被験体に投与され得る。治療的な適用において、組成物は、すでに疾患に罹患している患者に、疾患およびその合併症を治癒するのに十分な量または少なくとも部分的に停止させるのに十分な量で投与される。
【０１６６】
上記組成物は、患者を効果的に処置するのに十分な量の分子または薬剤を提供するべきである。
【０１６７】
任意の特定の患者に対する治療的に有効な用量レベルは、医学分野で周知の他の関連する因子とともに、処置される障害およびその障害の重症度；使用される分子または薬剤の活性；使用される組成物；患者の年齢、体重、全般的な健康状態、性別および食事；投与時間；投与経路；分子または薬剤の隔離の速度；処置期間；処置と併用されるか、または同時に使用される薬物をはじめとした種々の因子に左右される。
【０１６８】
当業者は、ルーチンの実験によって、適応可能な疾患を処置するために必要な、薬剤または化合物の有効かつ無毒性の量を決定することができる。
【０１６９】
一般に、有効な用量は、約０．０００１ｍｇ〜約１０００ｍｇ／ｋｇ体重／２４時間；典型的には、約０．００１ｍｇ〜約７５０ｍｇ／ｋｇ体重／２４時間；約０．０ｌｍｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ体重／２４時間；約０．１ｍｇ〜約５００ｍｇ／ｋｇ体重／２４時間；約０．１ｍｇ〜約２５０ｍｇ／ｋｇ体重／２４時間；約１．０ｍｇ〜約２５０ｍｇ／ｋｇ体重／２４時間の範囲であると予想される。より典型的には、有効な用量の範囲は、約１．０ｍｇ〜約２００ｍｇ／ｋｇ体重／２４時間；約１．０ｍｇ〜約１００ｍｇ／ｋｇ体重／２４時間；約１．０ｍｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重／２４時間；約１．０ｍｇ〜約２５ｍｇ／ｋｇ体重／２４時間；約５．０ｍｇ〜約５０ｍｇ／ｋｇ体重／２４時間；約５．０ｍｇ〜約２０ｍｇ／ｋｇ体重／２４時間；約５．０ｍｇ〜約１５ｍｇ／ｋｇ体重／２４時間の範囲であると予想される。
【０１７０】
あるいは、有効な用量は、最大約５００ｍｇ／ｍ２であり得る。一般に、有効な用量は、約２５〜約５００ｍｇ／ｍ２、好ましくは、約２５〜約３５０ｍｇ／ｍ２、より好ましくは、約２５〜約３００ｍｇ／ｍ２、さらにより好ましくは、約２５〜約２５０ｍｇ／ｍ２、なおもより好ましくは、約５０〜約２５０ｍｇ／ｍ２、そしてさらになおもより好ましくは、約７５〜約１５０ｍｇ／ｍ２の範囲であると予想される。
【０１７１】
典型的には、治療的な適用において、上記処置は、疾患状態の持続期間の間に行われ得る。
【０１７２】
さらに、最適な量および個別の投薬の間隔が、処置される疾患状態の性質および程度、投与形態、投与経路および投与部位、ならびに処置される特定の個体の性質によって決定されることは、当業者には明らかである。また、そのような最適な条件は、従来の技術によって決定することができる。
【０１７３】
処置の最適なクール（例えば、限定された日数における１日あたりに投与される組成物の投薬回数）を、処置決定試験の従来のコースを用いて当業者が確認することができることもまた、当業者には明らかである。
【０１７４】
（Ｃｐｎ１０アゴニストおよびアンタゴニスト）
本発明はまた、Ｃｐｎ１０のアゴニストおよびアンタゴニストの使用、ならびに、そのようなアゴニストおよびアンタゴニストをスクリーニングおよび作製する方法も企図する。
【０１７５】
Ｃｐｎ１０アゴニストおよびアンタゴニストは、特異的に設計され得るか、またはそれらのＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７および／またはＴＬＲ９のシグナル伝達ならびに免疫調節因子分泌に対する効果に従ってスクリーニングされ得る。
【０１７６】
抗体は、Ｃｐｎ１０またはそのフラグメントもしくはアナログのアゴニストまたはアンタゴニストとして作用し得る。好ましくは、適当な抗体は、Ｃｐｎ１０ポリペプチドの不連続の領域またはフラグメント、特に、プロテアーゼ活性および／またはパートナーとの結合性もしくは基質との結合性をもたらす際に関与する領域またはフラグメントから作製される。抗原性のＣｐｎ１０ポリペプチドは、少なくとも約５アミノ酸、および好ましくは、少なくとも約１０アミノ酸を含む。
【０１７７】
適当な抗体を作製するための方法は、当業者によって十分に理解されている。例えば、典型的にはＦａｂ部分を含む抗Ｃｐｎ１０モノクローナル抗体は、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ−Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ，Ｈａｒｌｏｗ  ａｎｄ  Ｌａｎｅ，ｅｄｓ．，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｎ．Ｙ．（１９８８）に記載されているハイブリドーマ技術を使用して調製され得る。
【０１７８】
本質的には、Ｃｐｎ１０またはそのフラグメントもしくはアナログに特異的なモノクローナル抗体の調製において、連続的な培養細胞株による抗体分子の産生をもたらす任意の技術が使用され得る。これらとしては、Ｋｏｈｌｅｒら，１９７５，Ｎａｔｕｒｅ，２５６：４９５−４９７によって初めて開発されたハイブリドーマ法ならびにトリオーマ法、ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法（Ｋｏｚｂｏｒら，１９８３，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ，４：７２）およびヒトモノクローナル抗体を作製するためのＥＢＶ−ハイブリドーマ法（Ｃｏｌｅら，Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒａｐｙ，ｐｐ．７７−９６，Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ，Ｉｎｃ．，（１９８５））が挙げられる。不死の抗体産生細胞株は、融合以外の技術（例えば、発癌性ＤＮＡによるＢリンパ球の直接的な形質転換、または、エプスタイン・バーウイルスによるトランスフェクション）によって作製され得る。例えば、Ｍ．Ｓｃｈｒｅｉｅｒら，「Ｈｙｂｒｉｄｏｍａ  Ｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ」（１９８０）；Ｈａｍｍｅｒｌｉｎｇら，「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ａｎｄ  Ｔ−ｃｅｌｌ  Ｈｙｂｒｉｄｏｍａｓ」（１９８１）；Ｋｅｎｎｅｔｔら，「Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ」（１９８０）を参照のこと。
【０１７９】
手短に言えば、モノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ、ミエローマまたは他の自己永続的な細胞株を作製する手段は、認識因子と結合する部分もしくは認識因子またはその起源特異的なＤＮＡ結合部分で超免疫された哺乳動物の脾臓から得たリンパ球と融合する手段である。本発明の実施において有用なモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマは、それらが当該認識因子と免疫反応する能力および標的細胞において特定の転写活性を阻害する能力によって同定される。
【０１８０】
本発明の実施において有用なモノクローナル抗体は、適切な抗原特異性の抗体分子を分泌するハイブリドーマを含んでいる栄養培地を含むモノクローナルハイブリドーマ培養を開始することによって作製され得る。その培養を、ハイブリドーマが抗体分子を培地に分泌するのに十分な条件かつ期間において維持する。次いで、抗体含有培地を回収する。次いで、周知の技術によって、抗体分子をさらに単離することができる。
【０１８１】
同様に、ポリクローナル抗体を作製するために使用され得る様々な手順が、当該分野で公知である。抗Ｃｐｎ１０ポリクローナル抗体の作製では、Ｃｐｎ１０またはそのフラグメントもしくはアナログを注射することによって様々な宿主動物を免役することができ、その動物としては、ウサギ、ニワトリ、マウス、ラット、ヒツジ、ヤギなどが挙げられるがこれらに限定されない。さらに、Ｃｐｎ１０ポリペプチドまたはそのフラグメントもしくはアナログを、免疫原性のキャリア、例えば、ウシ血清アルブミン（ＢＳＡ）またはキーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）に結合体化することができる。また、様々なアジュバントを使用して、免疫学的応答を増大させてもよく、そのアジュバントとしては、フロイントアジュバント（完全および不完全）、水酸化アルミニウムなどの無機物ゲル、表面活性物質（例えば、リゾレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン）、ペプチド、オイルエマルジョン、キーホールリンペットヘモシアニン、ジニトロフェノールおよび潜在的に有用なヒトアジュバント（例えば、ＢＣＧ（カルメット・ゲラン桿菌）およびコリネバクテリウム・パルバム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｐａｒｖｕｍ））が挙げられるがこれらに限定されない。
【０１８２】
所望の抗体についてのスクリーニングは、当該分野で公知の種々の技術によっても達成され得る。抗体の免疫特異的な結合性についてのアッセイとしては、ラジオイムノアッセイ、ＥＬＩＳＡ（酵素結合免疫吸着測定法）、サンドイッチイムノアッセイ、イムノラジオメトリックアッセイ、ゲル内拡散沈降反応、免疫拡散アッセイ、インサイチュイムノアッセイ、ウエスタンブロット、沈降反応、凝集アッセイ、補体結合アッセイ、免疫蛍光アッセイ、プロテインＡアッセイおよび免疫電気泳動アッセイなどが挙げられ得るが、これらに限定されない（例えば、Ａｕｓｕｂｅｌら，ｅｄｓ，１９９４，Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｖｏｌ．１，Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋを参照のこと）。抗体の結合は、１次抗体上の検出可能な標識によって検出され得る。あるいは、抗体は、適切に標識された２次抗体または試薬との結合によって検出され得る。イムノアッセイにおいて結合を検出するための種々の方法が当該分野で公知であり、それは、本発明の範囲内である。
【０１８３】
Ｃｐｎ１０またはそのフラグメントもしくはアナログに対して作製された抗体（またはそのフラグメント）は、Ｃｐｎ１０に対する結合親和性を有する。好ましくは、その抗体（またはそのフラグメント）は、約１０５Ｍ−１超、より好ましくは、約１０６Ｍ−１超、さらにより好ましくは、約１０７Ｍ−１超、最も好ましくは、約１０８Ｍ−１超の結合親和性または親和力を有する。
【０１８４】
適当な量の本発明の抗体を得ることに関して、無血清培地を用いたバッチ発酵を使用して抗体が作製され得る。発酵後、クロマトグラフィおよびウイルスの不活化／除去工程を組み込んだ多段階の手順を介して、抗体を精製し得る。例えば、まず、抗体をプロテインＡアフィニティークロマトグラフィで分離し、次いで、溶媒／洗浄剤で処理することによって任意の脂質エンベロープを有するウイルスを不活化し得る。典型的には、陰イオン交換クロマトグラフィおよび陽イオン交換クロマトグラフィを使用してさらに精製することにより、残渣のタンパク質、溶媒／洗浄剤および核酸を除去し得る。精製された抗体は、ゲル濾過カラムを用いてさらに精製され、０．９％食塩水中に製剤化され得る。次いで、製剤化された大量の調製物は、滅菌され、ウイルス濾過され、分注され得る。
【０１８５】
抗体以外のアゴニストおよびアンタゴニストもまた企図される。候補のアゴニストまたはアンタゴニストは、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７またはＴＬＲ９、および、必要に応じてＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７もしくはＴＬＲ９アゴニストと、分子複合体を形成する能力によって同定され得る。さらに、候補アンタゴニストは、Ｃｐｎ１０と、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７またはＴＬＲ９、および、必要に応じてＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ７もしくはＴＬＲ９アゴニストを含んでいる分子複合体の形成を阻止または妨害する能力によって同定され得る。
【０１８６】
アゴニストおよびアンタゴニストを同定し、生成するための技術および手順は、当業者に周知であり、それらとしては、分子のライブラリー（例えば、コンビナトリアルライブラリーなどの合成化学ライブラリー）のスクリーニング、構造データベースのコンピュータ支援スクリーニング、コンピュータ支援のモデリングおよび／もしくは設計、または、分子結合相互作用を検出する従来型の生物物理学的な技術が挙げられる。
【０１８７】
ここで、以下の特定の実施例を参照することによって、本発明をさらに詳細に説明するが、これらの実施例は、本発明の範囲を限定すると決して解釈されるべきでない。
【実施例】
【０１８８】
組換えヒトＣｐｎ１０
以下の実施例に記載される実験では、Ｊｏｈｎｓｏｎら，２００５（Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２８０：４０３７−４０４７）に記載されているように、組換えヒトＣｐｎ１０（ＧｅｎＢａｎｋアクセッション番号Ｘ７５８２１）をＥ．ｃｏｌｉにおいて産生した。純度については、ＳＤＳ−ＰＡＧＥによって９７％を超えることを確認した。Ｃｐｎ１０の凍結アリコートを使用前に１回だけ解凍した。すべてのＣｐｎ１０バッチが、ＧｒｏＥＬ媒介性のロダネーゼリフォールディングアッセイにおけるＥ．ｃｏｌｉ  ＧｒｏＥＳと同じモル活性を示した（データ示さず）。
【０１８９】
実施例１−一般的な材料および方法
細胞培養および細胞シグナル伝達分子
すべての細胞培養実験において、５０μＭの２−メルカプトエタノール（２−ＭＥ）（Ｇｉｂｃｏ）および１％可欠アミノ酸（Ｇｉｂｃｏ）を含む補充ＲＰＭＩ（ＳＰＰ−０３６）を、組換えヒトＧＭ−ＣＳＦ（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，＃２１５−ＧＭ，Ｌｏｔ  Ｎｏ  ＡＲ１１５０２１）、組換えヒトＩＬ−４（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，＃２０４  ＩＬ，Ｌｏｔ  Ｎｏ  ＡＧ２３５０５１）、ＣＤ１４＋Ｍｉｃｒｏ  Ｂｅａｄｓ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  ＃１３０−０５０−２０１，Ｌｏｔ  Ｎｏ  ５０５０９２７００８）およびＥ．ｃｏｌｉ由来のＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ  ＃Ｌ６５２９，Ｌｏｔ  Ｎｏ  ０１５Ｋ４１０３）と様々な組み合わせで使用した。
【０１９０】
未成熟ＤＣ生成
ＰＢＭＣを健常志願者から調製した（ＬＴＰ−０６２．０２）。ＰＢＭＣ原液をクリオチューブ（ｃｒｙｏ−ｔｕｂｅ）内で液体窒素中に保存した（ＬＴＰ−０６３−０３）。ＣＤ１４＋ＭｉｃｒｏＢｅａｄｓを製造者の指示書に従って使用することによって単球を精製した。５×１０７個のＣＤ１４＋単球を、７５ｃｍ２フラスコ内の２−ＭＥおよび可欠アミノ酸を含む補充ＲＰＭＩの２０ｍｌ中に播種した。未成熟ＤＣを生成するために、ＧＭ−ＣＳＦ（１０μｇ／ｍｌ）＋ＩＬ−４（１０μｇ／ｍｌ）（ＧＭ−ＣＳＦ／ＩＬ−４−ＤＣ）を培養物に加えた。培養４日目に、１０ｍｌのサイトカイン含有新鮮培地を加えた。
【０１９１】
Ｃｐｎ１０の存在下または非存在下でのＤＣの成熟
未成熟ＤＣを５日目に回収、洗浄し、６ウェルプレートにおいて、３ｍｌの補充ＲＰＭＩ／ウェルに１×１０６細胞／ウェルの濃度で播種した。ＬＰＳ（０．１２ｎｇ／ｍｌ）によってＤＣの成熟を２０時間誘導した。ＬＰＳの添加の１時間前にＣｐｎ１０（１０μｇ／ｍｌ）を加えた。
【０１９２】
細胞表面のイムノフェノタイピング
成熟ＤＣを回収、洗浄し、そして、ＢＤ製の以下のＡＰＣ−Ｃｙ７結合体化モノクローナル抗体（ｍＡｂ）、ＰＥ結合体化ｍＡｂまたはＡＰＣ結合体化ｍＡｂ：ＣＤ１４−ＡＰＣ−Ｃｙ７、ＨＬＡ−ＤＲ−ＡＰＣ、ＣＤ１ａ−ＰＥ、ＣＤ１１ｃ−ＰＥ、ＣＤ８０−ＰＥ、ＣＤ８３−ＰＥ、ＣＤ８６−ＰＥおよびＣＤ４０−ＰＥを使用して、４℃で３０分間標識した。使用したアイソタイプコントロールは、ＩｇＧ１−ＡＰＣ−Ｃｙ７、ＩｇＧ１−ＡＰＣおよびＩｇＧ１−ＰＥであった。死細胞および残骸を、それらの光散乱特性に基づいて解析から除外した。ＢＤ  ＦＡＣＳ−Ａｒｒａｙフローサイトメーターにおいて解析を行った。
【０１９３】
ＤＣによるサイトカイン放出の解析
培養５日目にＤＣを回収、洗浄し、そして１×１０６／ｍｌで平底微量希釈プレートに播種した。ＬＰＳ（０．１５ｎｇ／ｍｌ）を用いてＤＣを２０時間成熟させた。ＤＣサイトカイン産生に対するＣｐｎ１０の効果を評価するために、ＬＰＳの添加の１時間前にＣｐｎ１０（０．１〜１０μｇ／ｍｌ）を加えた。上清を回収し、−２０℃で保存した。２０時間、ＤＣをＣｐｎ１０とインキュベーションした後の培養上清中のＴＮＦ−αの蓄積を、Ｒ＆Ｄ  ＤｕｏＳｅｔキットを製造者の指示書に従って使用してＥＬＩＳＡによって評価した。
【０１９４】
基礎的な混合白血球反応（ＭＬＲ）アッセイ
ＣＤ４Ｔ細胞単離キットＩＩ（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ，＃１３０−０９１−１５５，Ｌｏｔ  Ｎｏ  ５０６０９２８０５１）を製造者の指示書に従って使用することによって、ＣＤ４＋Ｔ細胞を新鮮血液から精製した。Ｔ細胞の純度は、フローサイトメトリーによってルーチンの方法で確認した。合計１×１０５個のＴ細胞を、Ｃｐｎ１０（０．１〜１０μｇ／ｍｌ）の存在下または非存在下で１×１０４個のＤＣと６日間共培養した。上清を回収し、そしてＩＦＮ−γ蓄積についてＥＬＩＳＡによって解析した。ＣｙＱＵＡＮＴ増殖アッセイキット（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ  ＃Ｃ３５００６，Ｌｏｔ  Ｎｏ  ４５１７９Ａ）を製造者の指示書に従って使用して、細胞増殖を評価した。
【０１９５】
実施例２−Ｃｐｎ１０は、インビトロにおいてＤＣ成熟を低下させる。
培養された単球由来ＤＣを使用して、Ｃｐｎ１０が、ＬＰＳに応答したＤＣ成熟を調節する能力を評価した。単球のＤＣへの変換を、ＣＤ１ａおよびＣＤ１４細胞表面発現のフローサイトメトリー解析によって確認した。ＣＤ１ａ＋ＣＤ１４−ＤＣを、成熟マーカーＨＬＡ−ＤＲ、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８３およびＣＤ８６の表面発現についてさらに解析した。ＬＰＳに応答したＨＬＡ−ＤＲの平均蛍光強度（ＭＦＩ）（図１）は、成熟期間の間にＣｐｎ１０を加えたとき、有意に減少した（ｐ＜０．０５）。対照的に、ＨＬＡ−ＤＲの発現は、アゴニストの非存在下でＣｐｎ１０とインキュベートした未成熟ＤＣ上では変化しなかった（図１は、独立した３回の実験の代表例である）。
【０１９６】
さらに、上清を試験する前に、単球由来のＤＣをＣｐｎ１０とともに２０時間インキュベートしたとき、細胞培養液中へのＴＮＦ−αの恒常的な放出が有意かつ用量依存的に減少したことが見出された。これらの結果は、Ｃｐｎ１０が細胞活性化を低減させる能力を反映し得る（図２、独立した４回の実験の代表例）。
【０１９７】
実施例３−ＤＣによるＴ細胞刺激のＣｐｎ１０調節
Ｃｐｎ１０が基礎的な混合白血球反応（ＭＬＲ）においてＤＣによるＴ細胞刺激を調節する能力は、リガンド（例えば、プロスタグランジンＥ２、ＩＬ−１β、ＩＬ−６およびＴＮＦ−αまたは可溶性ＣＤ４０Ｌ３量体）に応答したＤＣ成熟に対するＣｐｎ１０の影響の解析とともに調査され得る。図３に示されるように、培養された単球由来ＤＣを使用して、ＩＦＮ−γ産生について細胞培養上清を試験する前の６日間、同種ＣＤ４＋Ｔ細胞との共培養に応答してＣｐｎ１０がＴ細胞の活性化を調節する能力を評価した。図３に示されるデータ（独立した２回の実験の代表例）は、ＩＦＮ−γ蓄積が、Ｃｐｎ１０によって有意に低下したことを示唆している。図４に示されるデータは、ＣｙＱＵＡＮＴ細胞増殖アッセイによって測定するとき、Ｃｐｎ１０が基礎的なＭＬＲの間にＴ細胞の増殖に影響しないことを証明している（図３におけるデータは、独立した２回の実験の代表例である）。
【０１９８】
実施例４−処置用の組成物
本明細書中に提供される本発明を実施する最良の形態によれば、特定の好ましい組成物が以下に概説される。以下は、単なる例示的な組成物の例と解釈されるべきであり、本発明の範囲を限定すると決して解釈されるべきでない。
【０１９９】
実施例４（ａ）−非経口投与用の組成物
筋肉内注射用組成物は、１ｍｌの滅菌緩衝水および１ｍｇの適当な化合物を含むように調製され得る。同様に、静脈内点滴用組成物は、２５０ｍｌの滅菌リンガー溶液および５ｍｇの適当な化合物を含み得る。
【０２００】
実施例４（ｂ）−注射可能な非経口組成物
注射による投与に適した組成物は、１０体積％のプロピレングリコール中の、１重量％の適当な化合物および水とを混合することによって調製され得る。その溶液は、濾過によって滅菌される。
【０２０１】
実施例４（ｃ）−カプセル組成物
カプセルの形態に適した化合物の組成物は、標準的な２片の硬ゼラチンカプセルを、粉末状の５０ｍｇの薬剤または化合物、１００ｍｇのラクトース、３５ｍｇのタルクおよび１０ｍｇのステアリン酸マグネシウムで満たすことによって調製され得る。
【０２０２】
実施例４（ｄ）−点眼組成物
点眼剤として送達するための典型的な組成物を以下で概説する：
適当な化合物                ０．３ｇ
ヒドロキシ安息香酸メチル    ０．００５ｇ
ヒドロキシ安息香酸プロピル  ０．０６ｇ
精製水                      約１００．００ｍｌとなるように
【０２０３】
ヒドロキシ安息香酸メチルおよびヒドロキシ安息香酸プロピルを７０ｍｌの７５℃の精製水に溶解し、得られた溶液を冷却する。次いで、適当な化合物を加え、その溶液を、膜フィルター（０．２２μｍポアサイズ）で濾過することによって滅菌し、滅菌容器に無菌的に入れる。
【０２０４】
実施例４（ｅ）−吸入投与用の組成物
２０〜３０ｍｌの容量のエアロゾル容器の場合：１０ｍｇの適当な化合物と０．５〜０．８重量％の滑沢剤（例えば、ポリソルベート８５またはオレイン酸）との混合物をフレオンなどの噴霧剤中に分散し、そして鼻腔内投与または経口吸入投与のいずれかに適したエアロゾル容器に入れる。
【０２０５】
実施例４（ｆ）−軟膏組成物
軟膏として送達するための典型的な組成物は、１．０ｇの適当な化合物とともに、滑らかで均一な生成物を作製するために分散される白色軟パラフィンを１００．０ｇとなるまで含む。
【図面の簡単な説明】
【０２０６】
ここでは、非限定的な例示のみの目的で添付の図面を参照して本発明を説明する。
【図１】Ｃｐｎ１０は、ＤＣ上でのＨＬＡ−ＤＲ発現を有意に低下させる。５日間、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４の存在下で単球からヒトＤＣを分化させた。ＬＰＳによって単球がＤＣに変換したことは、ＣＤ１ａおよびＣＤ１４細胞表面発現のフローサイトメトリー解析によって確認した。成熟マーカーＨＬＡ−ＤＲの細胞表面発現について、ＣＤ１ａ＋ＣＤ１４−ＤＣをさらに解析した。培養された単球由来ＤＣを使用して、Ｃｐｎ１０がＬＰＳ誘導性のＤＣ成熟を調節する能力について評価した。ＨＬＡ−ＤＲの発現は、Ｃｐｎ１０とともにインキュベートした未成熟ＤＣ上では変化しなかった（Ａ）。しかしながら、ＨＬＡ−ＤＲ発現のＬＰＳ誘導性のアップレギュレーションは、Ｃｐｎ１０によって有意に低下した（Ａ対Ｂ，ｐ＝０．０４０８；Ａ対Ｃ，ｐ＝０．０３２４；Ａ対Ｄ，ｐ＝０．０１６１）（Ｂ）。独立した３回の実験の代表例である。
【図２】Ｃｐｎ１０は、ＤＣによる恒常的なＴＮＦ−α放出を低下させる。培養された単球由来のＤＣを使用して、Ｃｐｎ１０が恒常的なＴＮＦ−α放出を調節する能力を評価した。ＤＣを、ある濃度範囲のＣｐｎ１０と２０時間にわたってインキュベートした。培養上清中のＴＮＦ−α蓄積をＥＬＩＳＡによって測定した。示されるデータは、独立した４回の実験の代表例である。
【図３】Ｃｐｎ１０は、基礎的な混合白血球反応（ＭＬＲ）においてＩＦＮ−γ産生を減少させる。培養された単球由来のＤＣを使用して、Ｃｐｎ１０が基礎的な混合白血球反応（ＭＬＲ）においてＤＣによるＴ細胞の活性化を調節する能力を評価した。ＤＣを、同種ＣＤ＋Ｔ細胞と６日間共培養し、培養上清中のＩＦＮ−γ産生をＥＬＩＳＡによって測定した。ＩＦＮ−γ蓄積は、Ｃｐｎ１０によって有意に低下した。データは、独立した２回の実験の代表例である。
【図４】Ｃｐｎ１０は、基礎的な混合白血球反応（ＭＬＲ）においてＴ細胞の増殖に影響しない。培養された単球由来のＤＣと単離された同種ＣＤ４＋Ｔ細胞とを、Ｃｐｎ１０の存在下または非存在下で６日間、共培養した。製造者の指示書に従ってＣｙＱＵＡＮＴ細胞増殖アッセイキットを使用して、増殖を測定した。独立した２回の実験の代表例である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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