(57)【要約】  サイトカインに結合することが可能な抗体を投与すること、または抗体と複合体化したサイトカインを投与すること、またはサイトカイン受容体と複合体化したサイトカインを、それを必要とする哺乳動物対象に投与することによって、サイトカインもしくはリンフォカインの生物学的活性を増加させるための方法、および新生物疾患、自己免疫疾患、もしくは感染性疾患を処置する方法、および造血細胞集団を拡大するための方法が提供される。
2009527500.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
サイトカインに結合することが可能な抗体を哺乳動物対象に投与し、それによって、前記哺乳動物対象における前記サイトカインの生物学的活性を増加させることを含んでなる、前記哺乳動物対象における免疫機能を改善するための方法。
【請求項２】
前記哺乳動物対象における標的細胞への前記サイトカインの提示を増加させることをさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記投与の前に前記抗体と前記サイトカインとを複合体化すること、および前記サイトカイン抗体複合体を前記哺乳動物対象に投与すること、をさらに含んでなる、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
Ｆｃ部分を含んでなるモノクローナル抗体が前記サイトカインに結合する、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
前記サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、またはＩＦＮ−γである、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
前記サイトカインがインターロイキン−２である、請求項５に記載の方法。
【請求項７】
前記サイトカインがインターロイキン−７である、請求項５に記載の方法。
【請求項８】
前記サイトカインの生物学的活性を増加することは、造血細胞の集団を拡大する、請求項１に記載の方法。
【請求項９】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、もしくはＮＫ細胞、またはそれらの組み合わせの集団を拡大するものである、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大するものである、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、ＣＤ８＋Ｔ細胞を拡大するものである、請求項９に記載の方法。
【請求項１２】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大し、そしてＣＤ８＋Ｔ細胞の拡大を阻止するものである、請求項９に記載の方法。
【請求項１３】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、生来のＴ細胞もしくはメモリーＴ細胞、またはそれらの組み合わせを拡大するものである、請求項９に記載の方法。
【請求項１４】
非造血細胞に対するＩ型インターフェロンまたはＩＩ型インターフェロンの生物学的活性を増加させることが、哺乳動物対象における免疫機能を改善するものである、請求項１に記載の方法。
【請求項１５】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることは、エクスビボで前記細胞集団を拡大するものである、請求項９に記載の方法。
【請求項１６】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、インビボで前記細胞集団を拡大するものである、請求項９に記載の方法。
【請求項１７】
サイトカインおよびその天然の受容体を哺乳動物対象に投与し、それによって、前記哺乳動物対象における前記サイトカインの生物学的活性を増加することを含んでなる、哺乳動物対象における免疫機能を改善するための方法。
【請求項１８】
前記哺乳動物対象における免疫機能を改善するために、標的細胞へのサイトカインの提示を増加することをさらに含んでなる、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記受容体は、前記サイトカインに結合するＦｃ部分をさらに含んでなる、請求項１７に記載の方法。
【請求項２０】
前記投与の前に前記サイトカインと前記天然の受容体とを複合体化すること、および前記サイトカイン／受容体複合体を前記哺乳動物対象に投与すること、をさらに含んでなる、請求項１７に記載の方法。
【請求項２１】
前記サイトカインがインターロイキン−１５であり、そして前記受容体がインターロイキン−１５受容体αである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、造血細胞の集団を拡大するものである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２３】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、もしくはＮＫ細胞、またはそれらの組み合わせの集団を拡大するものである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、ＣＤ８＋Ｔ細胞を拡大するものである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２５】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、生来のＴ細胞もしくはメモリーＴ細胞、またはそれらの組み合わせを拡大するものである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２６】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、エクスビボで前記細胞集団を拡大するものである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２７】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、インビボで前記細胞集団を拡大するものである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２８】
前記哺乳動物対象が、年齢の進行により減弱した免疫系を有する、請求項２１に記載の方法。
【請求項２９】
増加した生物学的活性が、前記哺乳動物対象における新生物疾患もしくは感染性疾患を減少させるかまたはなくすか、あるいはその発症または再発を防止するための治療効果を有するものである、請求項２１に記載の方法。
【請求項３０】
増加した生物学的活性が、造血細胞集団を拡大するか、あるいは放射線もしくは細胞毒性薬処置、または前記哺乳動物対象における一次もしくは二次免疫不全、または前記哺乳動物対象における加齢から生じる細胞涸渇からの造血細胞回復を改善するための治療効果を有するものである、請求項２１に記載の方法。
【請求項３１】
哺乳動物対象における自己免疫疾患を防止または処置するための方法であって、
サイトカインに結合することが可能な抗体を、前記自己免疫疾患を減少させるかもしくはなくすか、またはその発症もしくは再発を防止するのに有効な量で前記哺乳動物対象に投与すること、
を含んでなる方法。
【請求項３２】
抗体と複合体化したサイトカインを前記哺乳動物対象に投与することをさらに含んでなる、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることをさらに含んでなる、請求項３１に記載の方法。
【請求項３４】
Ｆｃ部分を含んでなるモノクローナル抗体が前記サイトカインに結合する、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、またはＩＦＮ−γである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
前記自己免疫疾患が関節リウマチ、多発性硬化症、糖尿病、炎症性腸疾患、乾癬、全身性エリテマトーデス、アレルギー疾患、または喘息である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３７】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、造血細胞の集団を拡大するものである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３８】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、もしくはＮＫ細胞、またはそれらの組み合わせの集団を拡大するものである、請求項３７に記載の方法。
【請求項３９】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大するものである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４０】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、ＣＤ８＋Ｔ細胞を拡大するものである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４１】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大し、そしてＣＤ８＋Ｔ細胞の拡大を阻止するものである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４２】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、生来のＴ細胞もしくはメモリーＴ細胞、またはそれらの組み合わせを拡大するものである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４３】
非造血細胞に対するＩ型インターフェロンまたはＩＩ型インターフェロンの生物学的活性を増加させることが、哺乳動物対象における免疫機能を改善するものである、請求項３１に記載の方法。
【請求項４４】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、エクスビボで前記細胞集団を拡大するものである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４５】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、インビボで前記細胞集団を拡大するものである、請求項３８に記載の方法。
【請求項４６】
哺乳動物対象における新生物疾患を防止または処置するための方法であって、
サイトカインに結合することが可能な抗体を、前記新生物疾患を減少させるかもしくはなくすか、またはその発症もしくは再発を防止するのに有効な量で前記哺乳動物対象に投与すること、
を含んでなる方法。
【請求項４７】
前記新生物疾患が癌、固形腫瘍、肉腫、黒色腫、癌腫、白血病、またはリンパ腫である、請求項４６に記載の方法。
【請求項４８】
抗体と複合体化したサイトカインを前記哺乳動物対象に投与することをさらに含んでなる、請求項４６に記載の方法。
【請求項４９】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることをさらに含んでなる、請求項４６に記載の方法。
【請求項５０】
Ｆｃ部分を含んでなるモノクローナル抗体が前記サイトカインに結合する、請求項４６に記載の方法。
【請求項５１】
前記サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、またはＩＦＮ−γである、請求項４６に記載の方法。
【請求項５２】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、造血細胞の集団を拡大するものである、請求項４９に記載の方法。
【請求項５３】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、Ｔ細胞、Ｂ細胞、もしくはＮＫ細胞、またはそれらの組み合わせの集団を拡大するものである、請求項５２に記載の方法。
【請求項５４】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大するものである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５５】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、ＣＤ８＋Ｔ細胞を拡大するものである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５６】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大し、そしてＣＤ８＋Ｔ細胞の拡大を阻止するものである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５７】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、生来のＴ細胞もしくはメモリーＴ細胞、またはそれらの組み合わせを拡大するものである、請求項５３に記載の方法。
【請求項５８】
非造血細胞に対するＩ型インターフェロンまたはＩＩ型インターフェロンの生物学的活性を増加させることが、哺乳動物対象における免疫機能を改善するものである、請求項４６に記載の方法。
【請求項５９】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、エクスビボで前記細胞集団を拡大するものである、請求項５３に記載の方法。
【請求項６０】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、インビボで前記細胞集団を拡大するものである、請求項５３に記載の方法。
【請求項６１】
サイトカインに結合することが可能な抗体を哺乳動物対象に投与し、それによって前記哺乳動物対象において拡大した造血細胞集団の治療効果を提供することを含んでなる、哺乳動物対象において造血細胞集団を拡大するための方法。
【請求項６２】
抗体と複合体化したサイトカインを前記哺乳動物対象に投与することをさらに含んでなる、請求項６１に記載の方法。
【請求項６３】
Ｆｃ部分を含んでなるモノクローナル抗体が前記サイトカインに結合する、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
前記サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、またはＩＦＮ−γである、請求項６１に記載の方法。
【請求項６５】
治療効果を提供するために、前記サイトカインの生物学的活性を増加させることをさらに含んでなる、請求項６１に記載の方法。
【請求項６６】
前記造血細胞集団がＴ細胞、Ｂ細胞、もしくはＮＫ細胞、またはそれらの組み合わせを含んでなる、請求項６１に記載の方法。
【請求項６７】
前記Ｔ細胞集団がＣＤ８＋Ｔ細胞集団もしくはＣＤ４＋制御性Ｔ細胞集団、またはそれらの組み合わせである、請求項６６に記載の方法。
【請求項６８】
ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大することをさらに含んでなる、請求項６７に記載の方法。
【請求項６９】
ＣＤ８＋Ｔ細胞を拡大することをさらに含んでなる、請求項６７に記載の方法。
【請求項７０】
ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大し、そしてＣＤ８＋Ｔ細胞の拡大を阻止することをさらに含んでなる、請求項６７に記載の方法。
【請求項７１】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、生来のＴ細胞もしくはメモリーＴ細胞、またはそれらの組み合わせを拡大するものである、請求項６７に記載の方法。
【請求項７２】
前記ＮＫ細胞集団を拡大することをさらに含んでなる、請求項６６に記載の方法。
【請求項７３】
前記Ｂ細胞集団を拡大することをさらに含んでなる、請求項６６に記載の方法。
【請求項７４】
放射線もしくは細胞毒性薬処置、または前記哺乳動物対象における一次もしくは二次免疫不全から生じる造血細胞涸渇からの造血細胞回復を改善するために、サイトカイン抗体複合体の治療効果を提供することをさらに含んでなる、請求項６１に記載の方法。
【請求項７５】
前記造血細胞集団をエクスビボで拡大することをさらに含んでなる、請求項６６に記載の方法。
【請求項７６】
前記造血細胞集団をインビボで拡大することをさらに含んでなる、請求項６６に記載の方法。
【請求項７７】
哺乳動物対象における感染性疾患を防止または処置するための方法であって、
サイトカインに結合することが可能な抗体を、感染性疾患を減少させるかもしくはなくすか、またはその発症もしくは再発を防止するのに有効な量で前記哺乳動物対象に投与すること、
を含んでなる方法。
【請求項７８】
免疫応答を増加させ、そしてワクチン効果を増強するために、ワクチンを投与することをさらに含んでなる、請求項７７に記載の方法。
【請求項７９】
抗体と複合体化したサイトカインを前記哺乳動物対象に投与することをさらに含んでなる、請求項７７に記載の方法。
【請求項８０】
Ｆｃ部分を含んでなるモノクローナル抗体が前記サイトカインに結合する、請求項７９に記載の方法。
【請求項８１】
前記サイトカインが、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、またはＩＦＮ−γである、請求項７７に記載の方法。
【請求項８２】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることをさらに含んでなる、請求項７７に記載の方法。
【請求項８３】
前記生物学的活性が、Ｔ細胞、Ｂ細胞、もしくはＮＫ細胞、またはそれらの組み合わせを含んでなる造血細胞集団を増加する、請求項８２に記載の方法。
【請求項８４】
前記Ｔ細胞集団がＣＤ８＋Ｔ細胞集団もしくはＣＤ４＋制御性Ｔ細胞集団、またはそれらの組み合わせである、請求項８３に記載の方法。
【請求項８５】
ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大することをさらに含んでなる、請求項８４に記載の方法。
【請求項８６】
ＣＤ８＋Ｔ細胞を拡大することをさらに含んでなる、請求項８４に記載の方法。
【請求項８７】
ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大し、そしてＣＤ８＋Ｔ細胞の拡大を阻止することをさらに含んでなる、請求項８４に記載の方法。
【請求項８８】
前記サイトカインの生物学的活性を増加させることが、生来のＴ細胞もしくはメモリーＴ細胞、またはそれらの組み合わせを拡大するものである、請求項８４に記載の方法。
【請求項８９】
非造血細胞に対するＩ型インターフェロンまたはＩＩ型インターフェロンの生物学的活性を増加させることが、前記哺乳動物対象における免疫機能を改善するものである、請求項８２に記載の方法。
【請求項９０】
前記ナチュラルキラー細胞集団を拡大することをさらに含んでなる、請求項８３に記載の方法。
【請求項９１】
前記Ｂ細胞集団を拡大することをさらに含んでなる、請求項８３に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連出願の相互参照
本出願は、２００６年２月１６日に出願されたU.S.Provisional Application No.60/773,924（本明細書においてその全体が参照により援用される）の利益を主張する。
【０００２】
政府助成に関する陳述
本発明は、Ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ認可番号ＡＩ２４１８７、ＡＩ４６７１０、ＣＡ３８３５５、ＡＩ４５８０９、ＡＩ００７２４４、ＡＧ００１７４３、およびＡＧ２０１８９による政府助成によってなされたものである。政府は、本発明において所定の権利を有する。
【０００３】
分野
本発明は、サイトカインに結合することが可能な抗体を投与することによってか、または抗体と複合体化したサイトカインを投与することによってか、またはサイトカイン受容体と複合体化したサイトカインを、それを必要とする哺乳動物対象に投与することによって、サイトカインもしくはリンフォカインの生物学的活性を増加するための方法に関する。本発明はさらに、新生物疾患、自己免疫疾患、もしくは感染性疾患を処置する方法、または抗体と複合体化したサイトカインを処置することによってか、もしくはサイトカイン受容体と複合体化したサイトカインを、それを必要とする哺乳動物対象に投与することによって、造血細胞集団を拡大するための方法に関する。
【背景技術】
【０００４】
背景
所定のサイトカイン、とりわけ、ＩＬ−２、ＩＬ−７およびＩＬ−１５との接触は、生来およびメモリーＴ細胞の生存を維持する。非特許文献１；非特許文献２；非特許文献３；非特許文献４；非特許文献５。ＩＬ−２およびＩＬ−１５に対する応答は、主として、β鎖（ＣＤ１２２）および共通γ鎖（γｃ）を含む共有される二量体受容体によって、制御される。非特許文献２；非特許文献６；非特許文献７。ＣＤ１２２発現は、規定の抗原に対して惹起される「メモリー」ＣＤ８＋細胞において、およびまた類似の表現型を伴うＣＤ８＋細胞の天然に存在する集団において特に高い。これらの後者のＣＤ１２２ｈｉｇｈ（ｈｉ）メモリー表現型（ＭＰ）ＣＤ８＋細胞は、インビトロでＩＬ−２またはＩＬ−１５に応答して増殖し、そしてＩＬ−１５はまた、インビボでそれらの生存および周期的増殖（ターンオーバー）を制御する。非特許文献１；非特許文献８；非特許文献４。ＩＬ−７に対する応答は、α鎖（ＣＤ１２７）およびγｃ鎖を含む二量体受容体によって制御され；ＩＬ−７受容体は、生来およびメモリーＴ細胞の両方において高度に発現される。非特許文献９；非特許文献１０；非特許文献１１。
【０００５】
ＩＬ−２はまた、インビボにおけるＣＤ４＋Ｔｒｅｇｓの生存に極めて重要である。非特許文献１２；非特許文献１３。これらの後者の細胞は、細胞が高い親和性の三量体αβγｃ受容体（ＩＬ−２Ｒαβγｃ）を発現することを可能にするＩＬ−２Ｒα（ＣＤ２５）の強力な構成性発現によって特徴付けられ、それによって低いレベルのＩＬ−２を利用する。ＩＬ−２に対するそれらの依存性を反映して、ＣＤ４＋Ｔｒｅｇｓは、抗ＩＬ−２モノクローナル抗体（ＩＬ−２ｍＡｂ）の注入後、消失する。非特許文献１４；非特許文献１５。
【０００６】
ＩＬ−１５は、ＩＬ−１５Ｒαに結合する細胞関連サイトカインとして、通常、インビボで提示される。ＩＬ−１５Ｒαは、内因性ＩＬ−１５を提示するのに必須の役割を果たす。それ故、おそらく、ＩＬ−１５Ｒ−／−マウスにおいて合成されるＩＬ−１５は、細胞質から離れることができないため、ＩＬ−１５−／−マウス（非特許文献１６）と同様に、ＩＬ−１５Ｒα−／−マウスは、ＣＤ１２２ｈｉＣＤ８＋細胞およびＮＫ細胞を欠く（非特許文献１７）。それにもかかわらず、ＩＬ−２Ｒβγｃ＋細胞は、ＩＬ−１５Ｒαの非存在下でＩＬ−１５の可溶性組み換え形態に応答して、増殖することができる（非特許文献１８）。さらに、所定の条件下で、ＩＬ−１５Ｒαは阻害的であり得る。それ故、ＩＬ−１５Ｒαの可溶性形態をマウスに注入することは、ＮＫ細胞増殖（非特許文献１９）、およびインビボで所定のＴ依存的免疫応答（非特許文献２０；非特許文献２１；非特許文献２２；非特許文献２３）を抑制することが報告されており、そしてインビトロでｓＩＬ−１５Ｒαを添加することは、ＩＬ−１５に対する細胞系統の応答を阻止することができる（非特許文献２０；非特許文献２１；非特許文献２２；非特許文献２３；非特許文献２４；非特許文献２５；非特許文献２６）。これらの所見にもかかわらず、ｓＩＬ−１５Ｒα（非特許文献２７）、およびまたＩＬ−１５Ｒαの可溶性スシドメイン（非特許文献２８）がヒト細胞系統のＩＬ−１５応答を増強することができるという他の報告も認められる。当該分野において、哺乳動物対象における免疫機能を改善するための治療、およびサイトカインの哺乳動物対象への投与による自己免疫疾患、新生物疾患、または感染性疾患のような疾患を処置するための改善された方法が必要とされている。
【非特許文献１】Smith,Science240:1169,1988
【非特許文献２】Waldmann,Annu Rev Biochem58:875,1989
【非特許文献３】Ku et al.,Science288:675,2000
【非特許文献４】Sprent et al.,Annu Rev Immunol20:551,2002
【非特許文献５】Schluns et al.,Nat Rev Immunol3:269,2003
【非特許文献６】Takeshita et al.,Science257:379,1992
【非特許文献７】Nakamura et al.,Nature369:330,1994
【非特許文献８】Zhang et al.,Immunity8:591,1998
【非特許文献９】Goodwin et al.,Cell60:941,1990
【非特許文献１０】Sudo et al.,Proc.Natl.Acad Sci.90:9125,1993
【非特許文献１１】Tan et al.J.Exp.Med.195:1523,2002
【非特許文献１２】Malek et al.,Nat Rev Immunol4:665,2004
【非特許文献１３】Fontenot et al.,Nat Immunol6:331,2005
【非特許文献１４】Murakami et al.,Proc Natl Acad Sci U S A99:8832,2002
【非特許文献１５】Setoguchi et al.,J Exp Med 201:723,2005
【非特許文献１６】Kennedy et al.,J Exp Med191:771-80,2000
【非特許文献１７】Lodolce et al.,Immunity9:669-76,1998
【非特許文献１８】Lodolce et al.,J Exp Med194:1187-94,2001
【非特許文献１９】Nguyen et al.,J Immunol169:4279-87,2002
【非特許文献２０】Ruckert et al.,Eur J Immunol33:3493-3503,2003
【非特許文献２１】Ruckert et al.,J Immunol174:5507-15,2005
【非特許文献２２】Wei et al.,J Immunol167:577-82,2001
【非特許文献２３】Ruchatz et al.,J Immunol160:5654-5660,1998
【非特許文献２４】Budagian et al.,J Biol Chem 279:40368-75,2004
【非特許文献２５】Mortier et al.,J Immunol173:1681-1688,2004
【非特許文献２６】Eisenman et al,.Cytokine20:121-29,2002
【非特許文献２７】Giron-Michel et al.,Blood106:2302-10,2005
【非特許文献２８】Mortier et al.,J Biol Chem,2005、印刷に先立つ電子版
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【０００７】
概要
本発明は、一般的に、サイトカインに結合することが可能な抗体を含んでなる組成物、またはサイトカインおよびサイトカインに対する受容体を含んでなる組成物を、それを必要とする哺乳動物対象に投与することによって疾患を処置するための方法に関する。本発明はさらに、投与前に抗体とサイトカインとを複合体化すること、およびサイトカイン抗体複合体を哺乳動物対象に投与することによって、疾患を処置するための方法に関する。本発明はさらに、投与前にサイトカインとサイトカイン受容体とを複合体化すること、およびサイトカイン／サイトカイン受容体複合体を哺乳動物対象に投与することによって、疾患を処置するための方法に関する。サイトカインに結合することが可能な抗体または抗体と複合体化したサイトカインを含んでなる組成物を投与し、それによって哺乳動物対象におけるサイトカインの生物学的活性を増加することによって哺乳動物対象における免疫機能を改善するための方法が提供される。サイトカイン受容体と複合体化したサイトカインを含んでなる組成物を投与し、それによって哺乳動物対象におけるサイトカインの生物学的活性を増加することによって哺乳動物対象における免疫機能を改善するための方法が提供される。病態として、新生物疾患、自己免疫疾患、感染性疾患、あるいは放射線もしくは細胞毒性薬処置、または一次もしくは二次免疫不全、または加齢から生じる造血細胞涸渇が挙げられるが、これらに限定されない。サイトカイン抗体複合体は、サイトカインおよびサイトカインに結合する抗体、例えば、モノクローナル抗体であり得る。サイトカイン／サイトカイン受容体複合体は、例えば、インターロイキン１５／インターロイキン−１５受容体α複合体であり得る。抗体と複合体化したサイトカインまたはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体を投与することによってサイトカインの生物学的活性を増加するための方法は、造血細胞またはＴ細胞のサブ集団の拡大、例えば、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の拡大、またはＣＤ８＋Ｔ細胞の拡大、またはＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の拡大の結果として生じ得る一方、ＣＤ８＋Ｔ細胞の拡大、あるいは生来のＴ細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の両方）もしくはメモリーＴ細胞、またはそれらの組み合わせの拡大を阻止する。
【０００８】
サイトカインに結合することが可能な抗体を哺乳動物対象に投与し、それによって、哺乳動物対象におけるサイトカインの生物学的活性を増加させることを含んでなる、哺乳動物対象における免疫機能を改善するための方法が提供される。サイトカイン受容体に結合するサイトカインを哺乳動物対象に投与し、それによって、哺乳動物対象におけるサイトカインの生物学的活性を増加させることを含んでなる、哺乳動物対象における免疫機能を改善するための方法が提供される。免疫機能を改善するための方法は、哺乳動物対象における標的細胞へのサイトカインの提示を増加することに起因し得る。方法は、前記投与の前に抗体とサイトカインとを複合体化すること、およびサイトカイン抗体複合体を哺乳動物対象に投与することをさらに含んでなる。１つの態様では、Ｆｃ部分を含んでなるモノクローナル抗体は、サイトカインに結合する。サイトカインとして、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、またはＩＦＮ−γが挙げられるが、これらに限定されない。サイトカイン受容体は、サイトカインの天然の受容体、例えば、インターロイキン−１５に結合することが可能なインターロイキン−１５受容体αであり得る。
【０００９】
方法の多くの変形が想定される。例えば、１つの変形では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、造血細胞の集団を拡大する。さらなる変形では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、もしくはＮＫ細胞、またはそれらの組み合わせの集団を拡大する。さらなる変形では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大する。別の態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＣＤ８＋Ｔ細胞を拡大する。さらなる態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＣＤ４＋Ｔ細胞を拡大する。さらなる態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大し、そしてＣＤ８＋Ｔ細胞の拡大を阻止する。別の態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、生来のＴ細胞もしくはメモリーＴ細胞、またはそれらの組み合わせを拡大する。方法の変形では、非造血細胞に対するＩ型インターフェロンまたはＩＩ型インターフェロンの生物学的活性を増加することは、哺乳動物対象における免疫機能を改善する。別の態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、エクスビボで細胞集団を拡大する。さらなる態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、インビボで細胞集団を拡大する。
【００１０】
サイトカインに結合することが可能な抗体を哺乳動物対象に投与し、それによって、哺乳動物対象におけるサイトカインの生物学的活性を増加することを含んでなる、哺乳動物対象における免疫機能を改善するための方法が提供される。１つの態様では、サイトカインはインターロイキン−２であり得る。さらなる態様では、サイトカインはインターロイキン−７であり得る。免疫機能を改善するための方法は、哺乳動物対象における標的細胞へのサイトカインの提示を増加することに起因し得る。方法は、前記投与の前に抗体とサイトカインとを複合体化すること、およびサイトカイン抗体複合体を哺乳動物対象に投与することをさらに含んでなる。方法は、前記投与の前にサイトカインとそのサイトカイン受容体とを複合体化すること、およびサイトカイン／サイトカイン受容体複合体を哺乳動物対象に投与することをさらに含んでなる。１つの態様では、Ｆｃ部分を含んでなるモノクローナル抗体またはサイトカイン受容体は、サイトカインに結合する。さらなる態様では、哺乳動物対象の年齢の進行により、哺乳動物対象は減弱した免疫系を有する。方法の１つの態様では、免疫機能を改善するためにサイトカインの標的細胞への提示を増加することは、生来のＴ細胞もしくはメモリーＴ細胞、またはそれらの組み合わせを拡大する。方法は、哺乳動物対象における新生物疾患、自己免疫疾患、もしくは感染性疾患を減少させるかまたはなくすか、あるいはその発症または再発を防止する治療効果を提供することができる。方法は、造血細胞集団を拡大するか、あるいは放射線もしくは細胞毒性薬処置、または哺乳動物対象における一次もしくは二次免疫不全、または加齢から生じる細胞涸渇からの造血細胞回復を改善する治療効果を提供することができる。
【００１１】
哺乳動物対象に、サイトカインに結合することが可能な抗体を、自己免疫疾患を減少させるかもしくはなくすか、またはその発症または再発を防止するのに有効な量で投与することを含んでなる、哺乳動物対象における自己免疫疾患を防止または処置するための方法が提供される。方法は、前記投与の前に抗体とサイトカインとを複合体化すること、およびサイトカイン抗体複合体を哺乳動物対象に投与することをさらに含んでなる。方法は、前記投与の前にサイトカインとそのサイトカイン受容体とを複合体化すること、およびサイトカイン／サイトカイン受容体複合体を哺乳動物対象に投与することをさらに含んでなる。１つの態様では、Ｆｃ部分を含んでなるモノクローナル抗体は、サイトカインに結合する。サイトカインとして、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、またはＩＦＮ−γが挙げられるが、これらに限定されない。自己免疫疾患として、関節リウマチ、多発性硬化症、糖尿病、炎症性腸疾患、乾癬、全身性エリテマトーデス、アレルギー疾患、または喘息が挙げられるが、これらに限定されない。
【００１２】
方法の多くの変形が想定される。さらなる態様では、方法は、サイトカインの生物学的活性を増加させることを含んでなる。例えば、１つの変形では、サイトカインの生物学的活性を増加させることは、造血細胞の集団を拡大する。さらなる変形では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、もしくはＮＫ細胞、またはそれらの組み合わせの集団を拡大する。さらなる変形では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大する。別の態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＣＤ８＋Ｔ細胞を拡大する。さらなる態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＣＤ４＋Ｔ細胞を拡大する。さらなる態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大し、そしてＣＤ８＋Ｔ細胞の拡大を阻止する。別の態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、生来のＴ細胞もしくはメモリーＴ細胞、またはそれらの組み合わせを拡大する。方法の変形では、非造血細胞に対するＩ型インターフェロンまたはＩＩ型インターフェロンの生物学的活性を増加することは、哺乳動物対象における免疫機能を改善する。別の態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、エクスビボで細胞集団を拡大する。さらなる態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、インビボで細胞集団を拡大する。
【００１３】
哺乳動物対象に、サイトカインに結合することが可能な抗体を、新生物疾患を減少させるかもしくはなくすか、またはその発症または再発を防止するのに有効な量で投与することを含んでなる、哺乳動物対象における新生物疾患を防止または処置するための方法が提供される。新生物疾患として、癌、固形腫瘍、肉腫、黒色腫、癌腫、白血病、またはリンパ腫が挙げられるが、これらに限定されない。方法は、前記投与の前に抗体とサイトカインとを複合体化すること、およびサイトカイン抗体複合体を哺乳動物対象に投与することをさらに含んでなる。方法は、前記投与の前にサイトカインとそのサイトカイン受容体とを複合体化すること、およびサイトカイン／サイトカイン受容体複合体を哺乳動物対象に投与することをさらに含んでなる。１つの態様では、Ｆｃ部分を含んでなるモノクローナル抗体またはＦｃ部分を含んでなるサイトカイン受容体は、サイトカインに結合する。サイトカインとして、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、またはＩＦＮ−γが挙げられるが、これらに限定されない。
【００１４】
方法はさらに、サイトカインの生物学的活性を増加することを提供する。方法の多くの変形が想定される。例えば、１つの変形では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、造血細胞の集団を拡大する。さらなる変形では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、もしくはＮＫ細胞、またはそれらの組み合わせの集団を拡大する。さらなる変形では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大する。別の態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＣＤ８＋Ｔ細胞を拡大する。さらなる態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＣＤ４＋Ｔ細胞を拡大する。さらなる態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大し、そしてＣＤ８＋Ｔ細胞の拡大を阻止する。別の態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、生来のＴ細胞もしくはメモリーＴ細胞、またはそれらの組み合わせを拡大する。方法の変形では、非造血細胞に対するＩ型インターフェロンまたはＩＩ型インターフェロンの生物学的活性を増加することは、哺乳動物対象における免疫機能を改善する。別の態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、エクスビボで細胞集団を拡大する。さらなる態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、インビボで細胞集団を拡大する。
【００１５】
インターロイキン−１５およびインターロイキン−１５受容体αを哺乳動物対象に投与し、それによって、哺乳動物対象におけるインターロイキン−１５の生物学的活性を増加することを含んでなる、哺乳動物対象における免疫機能を改善するための方法が提供される。方法は、哺乳動物対象における免疫機能を改善するために、標的細胞へのインターロイキン−１５の提示を増加することをさらに含んでなり得る。方法は、前記投与前にインターロイキン−１５とインターロイキン−１５受容体αとを複合体化すること、およびインターロイキン−１５／インターロイキン−１５受容体α複合体を哺乳動物対象に投与することをさらに含んでなり得る。方法の１つの態様では、免疫機能を改善するためにインターロイキン−１５の標的細胞への提示を増加することは、生来のＴ細胞もしくはメモリーＴ細胞、またはそれらの組み合わせを拡大する。増加した生物学的活性は、哺乳動物対象における新生物疾患もしくは感染性疾患を減少させるかまたはなくすか、あるいはその発症または再発を防止するための治療効果を有し得る。増加した生物学的活性は、造血細胞集団を拡大するか、あるいは放射線もしくは細胞毒性薬処置、または哺乳動物対象における一次もしくは二次免疫不全、または哺乳動物対象における加齢から生じる細胞涸渇からの造血細胞回復を改善するための治療効果を有し得る。さらなる態様では、哺乳動物対象の年齢の進行により、哺乳動物対象は減弱した免疫系を有する。
【００１６】
サイトカインに結合することが可能な抗体を哺乳動物対象に投与し、それによって哺乳動物対象において拡大した造血細胞集団の治療効果を提供することを含んでなる、哺乳動物対象において造血細胞集団を拡大するための方法が提供される。方法は、前記投与の前に抗体とサイトカインとを複合体化すること、およびサイトカイン抗体複合体を哺乳動物対象に投与することをさらに含んでなる。方法は、前記投与の前にサイトカインとそのサイトカイン受容体とを複合体化すること、およびサイトカイン／サイトカイン受容体複合体を哺乳動物対象に投与することをさらに含んでなる。１つの態様では、Ｆｃ部分を含んでなるモノクローナル抗体またはＦｃ部分を含んでなるサイトカイン受容体は、サイトカインに結合する。サイトカインとして、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、またはＩＦＮ−γが挙げられるが、これらに限定されない。
【００１７】
方法はさらに、サイトカインの生物学的活性を増加することを提供する。方法の多くの変形が想定される。例えば、１つの変形では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、造血細胞の集団を拡大する。さらなる変形では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、もしくはＮＫ細胞、またはそれらの組み合わせの集団を拡大する。さらなる変形では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大する。別の態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＣＤ８＋Ｔ細胞を拡大する。さらなる態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＣＤ４＋Ｔ細胞を拡大する。さらなる態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大し、そしてＣＤ８＋Ｔ細胞の拡大を阻止する。別の態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、生来のＴ細胞もしくはメモリーＴ細胞、またはそれらの組み合わせを拡大する。さらなる態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＮＫ細胞集団を拡大することがきるか、またはＢ細胞集団を拡大することができる。さらなる態様では、サイトカイン抗体複合体の治療効果は、放射線もしくは細胞毒性薬処置、または哺乳動物対象における一次もしくは二次免疫不全から生じる造血細胞涸渇からの造血細胞回復を改善することができる。別の態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、エクスビボで細胞集団を拡大する。さらなる態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、インビボで細胞集団を拡大する。
【００１８】
哺乳動物対象に、サイトカインに結合することが可能な抗体を、感染性疾患を減少させるかもしくはなくすか、またはその発症または再発を防止するのに有効な量で投与することを含んでなる、哺乳動物対象における感染性疾患を防止または処置するための方法が提供される。方法は、前記投与の前に抗体とサイトカインとを複合体化すること、およびサイトカイン抗体複合体を哺乳動物対象に投与することをさらに含んでなる。方法は、前記投与の前にサイトカインとそのサイトカイン受容体とを複合体化すること、およびサイトカイン／サイトカイン受容体複合体を哺乳動物対象に投与することをさらに含んでなる。さらなる態様では、抗体または抗体と複合体化したサイトカイン、またはその受容体と複合体化したサイトカインは、ワクチンと共に投与されて、免疫応答を増加し、ワクチン効果を増強する。１つの態様では、Ｆｃ部分を含んでなるモノクローナル抗体は、サイトカインに結合する。サイトカインとして、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、またはＩＦＮ−γが挙げられるが、これらに限定されない。
【００１９】
方法はさらに、サイトカインの生物学的活性を増加することを提供する。方法の多くの変形が想定される。例えば、１つの変形では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、造血細胞の集団を拡大する。さらなる変形では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、Ｔ細胞、Ｂ細胞、もしくはＮＫ細胞、またはそれらの組み合わせの集団を拡大する。さらなる変形では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大する。別の態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＣＤ８＋Ｔ細胞を拡大する。さらなる態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＣＤ４＋Ｔ細胞を拡大する。さらなる態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大し、そしてＣＤ８＋Ｔ細胞の拡大を阻止する。別の態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、生来のＴ細胞もしくはメモリーＴ細胞、またはそれらの組み合わせを拡大する。方法の変形では、非造血細胞に対するＩ型インターフェロンまたはＩＩ型インターフェロンの生物学的活性を増加することは、哺乳動物対象における免疫機能を改善する。さらなる態様では、サイトカインの生物学的活性を増加することは、ナチュラルキラー細胞集団を拡大するか、またはＢ細胞集団を拡大する。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２０】
本発明は、一般的に、サイトカインに結合することが可能な抗体を含んでなる組成物、またはサイトカインおよびサイトカインに対する受容体を含んでなる組成物を、それを必要とする哺乳動物対象に投与することによって疾患を処置するための方法に関する。本発明はさらに、投与前に抗体とサイトカインとを複合体化すること、およびサイトカイン抗体複合体を哺乳動物対象に投与することによって、疾患を処置するための方法に関する。本発明はさらに、投与前にサイトカインとサイトカイン受容体とを複合体化すること、およびサイトカイン／サイトカイン受容体複合体を哺乳動物対象に投与することによって、疾患を処置するための方法に関する。サイトカインに結合することが可能な抗体または抗体と複合体化したサイトカインを投与し、それによって哺乳動物対象におけるサイトカインの生物学的活性を増加することによって哺乳動物対象における免疫機能を改善するための方法が提供される。サイトカイン受容体と複合体化したサイトカインを含んでなる組成物を投与し、それによって哺乳動物対象におけるサイトカインの生物学的活性を増加することによって哺乳動物対象における免疫機能を改善するための方法が提供される。病態を処置する方法が提供され、ここで、病態として、新生物疾患、自己免疫疾患、感染性疾患、あるいは放射線もしくは細胞毒性薬処置、または一次もしくは二次免疫不全、または加齢から生じるリンパ球涸渇が挙げられるが、これらに限定されない。サイトカイン抗体複合体は、サイトカインおよびサイトカインに結合する抗体、例えば、モノクローナル抗体であり得る。サイトカイン／サイトカイン受容体複合体は、例えば、インターロイキン１５／インターロイキン−１５受容体α複合体であり得る。
【００２１】
サイトカインの生物学的活性を増加することによって哺乳動物対象における免疫機能を改善する方法は、１つの態様では、哺乳動物対象における造血細胞の集団、例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞、もしくはＮＫ細胞、またはそれらの組み合わせを拡大する。インターロイキン−２に結合することが可能な抗体または抗体と複合体化したインターロイキン−２を、それを必要とする哺乳動物対象に投与することによって病態を処置する方法が提供される。抗体はモノクローナル抗体であり得る。インターロイキン−２の生物学的活性の増加は、本明細書において記載のように、疾患の処置に有用である。増加したインターロイキン−２活性は、Ｔ細胞集団、Ｂ細胞集団、もしくはＮＫ細胞集団を拡大することができるか、またはより具体的には、ＣＤ８＋Ｔ細胞の集団を拡大するか、もしくはＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の集団を拡大するか、もしくはＣＤ４＋制御性Ｔ細胞の集団を拡大し、そしてＣＤ８＋Ｔ細胞の拡大を阻止する。造血細胞拡大は、哺乳動物対象のインビボまたはエクスビボで行うことができる。
【００２２】
サイトカインに結合することが可能な抗体または抗体と複合体化したサイトカインを、それを必要とする哺乳動物対象に投与することによって病態を処置する方法が提供される。抗体はモノクローナル抗体であり得る。サイトカインの生物学的活性の増加は、本明細書において記載のように、疾患の処置に有用である。増加したサイトカイン活性は、Ｔ細胞集団、Ｂ細胞集団、もしくはＮＫ細胞集団を拡大することができるか、あるいはより具体的には、サイトカインの生物学的活性は、生来のＴ細胞（生来のＣＤ４Ｔ細胞およびＣＤ８Ｔ細胞の両方）もしくはメモリーＴ細胞（生来のＣＤ４Ｔ細胞およびＣＤ８Ｔ細胞の両方）、またはそれらの組み合わせを拡大することができる。
【００２３】
インターロイキン−２（ＩＬ−２）、Ｔリンパ球の増殖因子もまた、時には阻害的であり得る。本発明は、ＣＤ８＋Ｔ細胞のインビボでの増殖がＩＬ−２に特異的なモノクローナル抗体（ＩＬ−２ｍＡｂ）の注入後に増加するという事実の説明を提供する。本発明は、免疫複合体の形成を介して既存のＩＬ−２の生物学的活性を増加することによって、ＩＬ−２ｍＡｂがＣＤ８＋細胞の増殖を増大することを実証する。組み換えＩＬ−２と結合される場合、いくつかのＩＬ−２／ＩＬ−２ｍＡｂ複合体は、インビボでＣＤ８＋細胞の大規模（＞１００倍）な拡大を引き起こす一方、他のものは選択的にＣＤ４＋Ｔｒｅｇｓを刺激する。それ故、異なるサイトカイン／抗体複合体は、免疫応答を選択的に促進または阻害するために使用することができ、そして病態の処置に有用である。
【００２４】
本明細書において使用する用語「約」は、量、時間幅などのような測定値を指す場合、特定された値から±２０％または±１０％、より好ましくは±５％、さらにより好ましくは±１％、そしてなおより好ましくは±０．１％のばらつきを包含することを意味し、その時のそのようなばらつきは開示された方法を実施するのに適切である。
【００２５】
他で規定されない限り、本明細書において使用するすべての技術的および科学的用語は、本発明が関連する当該分野における当業者によって一般的に理解されるのと同じ意味を有する。本明細書に記載のものと類似または等価なあらゆる方法および材料が、本発明の試験のために実際に使用することができるが、本明細書では好適な材料および方法を記載している。本発明について説明し、そして特許請求の範囲を記載する際に、以下の用語を使用する。
【００２６】
「疾患を減少させるかまたはなくすかあるいはその発症もしくは再発を防止するのに有効な量」は、患者試験データ、生存率データ、腫瘍マーカーレベルの上昇または抑制、遺伝的プロファイルもしくは環境因子への暴露に基づく減少した感受性によって測定されるような病態、例えば、新生物疾患、自己免疫疾患、細胞減少性放射線もしくは化学療法、または感染性疾患のための処置後の患者の結果または生存率を改善する治療化合物の量を指す。
【００２７】
「リンパ球」は、Ｔ細胞、Ｂ細胞、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含むがこれらに限定されない循環における細胞の集団を指す。
【００２８】
「Ｔ細胞増殖」は、サイトカインまたはリンフォカインによって提供される細胞シグナルに応答するＴ細胞の１つ以上のサブ集団の成長および拡大を指す。Ｔ細胞増殖はインビボまたはエクスビボで生じ得る。Ｔ細胞のサブ集団として、ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＣＤ４制御性Ｔ細胞（Ｔｒｅｇ細胞）、またはナチュラルキラー（ＮＫ）細胞が挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】
「サイトカイン抗体複合体」またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体」は、抗体−抗原におけるような静電荷相互作用もしくはリガンド−受容体結合相互作用のいずれかによって、抗体またはそのサイトカイン受容体に結合するサイトカインあるいはリンフォカインを指す。抗体分子は、ＩｇＧ分子またはそのフラグメントであり得る。抗体フラグメントは、抗体分子の少なくともＦｃ部分を含み得る。
【００３０】
「サイトカイン」は、免疫系の細胞間の多くの極めて重要な相互作用を制御する可溶性メディエーターを指す。サイトカインは、多様なグループの細胞内シグナル伝達ペプチドおよび糖タンパク質を含んでなる。ほとんどが、遺伝子上および構造上相互に類似する。それぞれのサイトカインは、さまざまな刺激に応答する特定の細胞タイプによって分泌され、そして標的細胞の成長、移動、分化、および／または機能に対する特徴的効果を生成する。包括的に、サイトカインは、免疫および炎症系を調節するだけでなく、創傷治癒、造血、血管新生、および他の多くのプロセスにも関与する。用語は、それらの構造にかかわらない多様なサイトカインのすべて、および一般的に使用される呼称を包含することが意図される。例えば、用語は、「リンフォカイン」（即ち、リンパ球によって産生されるサイトカイン）、ならびに「モノカイン」（即ち、単球によって産生されるサイトカイン）を包含することが意図される。サイトカインは、細胞に対してさまざまな効果を及ぼす多くの因子のいずれか１つ、例えば、成長または増殖を誘導することを指す。本発明の実践において単独または組み合わせで使用することができるサイトカインの非限定的例として、インターロイキン−１（ＩＬ−１）、インターロイキン−２（ＩＬ−２）、インターロイキン３（ＩＬ−３）、インターロイキン−４（ＩＬ−４）、インターロイキン−６（ＩＬ−６）、インターロイキン−７（ＩＬ−７）、インターロイキン−９（ＩＬ−９）、インターロイキン１２（ＩＬ−１２）、インターロイキン−１５（ＩＬ−１５）、インターロイキン−２１（ＩＬ−２１）、Ｉ型インターフェロン、インターフェロン−α、インターフェロン−β、ＩＩ型インターフェロン、インターフェロン−γ、幹細胞因子（ＳＣＦ）、顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）、顆粒球マクロファージ−コロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）、インターロイキン−１α（ＩＬ−１α）、インターロイキン−１１（ＩＬ−１１）、ＭＩＰ−１ａ、白血病阻害因子（ＬＩＦ）、ｃ−ｋｉｔリガンド、トロンボポイエチン（ＴＰＯ）およびｆｌｔ３リガンドが挙げられる。本発明はまた、医薬的組成物を含み、ここで、１つ以上のサイトカイン、もしくはサイトカインに結合することが可能な１つ以上の抗体、またはそれらの組み合わせ。サイトカインは、例えば、Ｇｅｎｚｙｍｅ（Ｆｒａｍｉｎｇｈａｍ、マサチューセッツ州）、Ｇｅｎｅｎｔｅｃｈ（Ｓｏｕｔｈ  Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ、カリフォルニア州）、Ａｍｇｅｎ（Ｔｈｏｕｓａｎｄ  Ｏａｋｓ、カリフォルニア州）、またはＲ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ミネソタ州）のようないくつかの業者から市販されている。常に明示しているわけではないが、野生型または精製されたサイトカインに類似の生物学的活性を有する分子（例えば、組み換えにより産生されるもしくはその変異タンパク質）が本発明の趣旨および範囲内で使用されることが意図される。
【００３１】
「サイトカイン受容体」は、サイトカインを認識し、そして結合する受容体分子を指す。用語は、可溶性サイトカイン受容体、ならびに細胞結合型であるサイトカイン受容体を包含することが意図される。いくつかの実施態様では、用語は、インターロイキン−１５に結合するインターロイキン−１５受容体αを指す。用語はまた、サイトカイン受容体アミノ酸および／または核酸配列に対する置換、欠失、ならびに／あるいは付加を伴う分子を含む改変されたサイトカイン受容体分子（即ち、「変種のサイトカイン受容体」）を包含することが意図される。それ故、用語は、野生型、ならびに組み換え、合成的に生成される、および変種のサイトカイン受容体を包含することが意図される。「サイトカイン受容体」は、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−３、ＩＬ−４、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−９、ＩＬ−１０、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７、ＩＬ−２１、Ｉ型インターフェロン、ＩＩ型インターフェロン、ＩＦＮ−α、ＩＦＮ−β、またはＩＦＮ−γの受容体を含むが、これらに限定されない以下に規定される１つ以上のサイトカインに結合する当該分野の範囲内のすべてのヒトサイトカイン受容体を指す。
【００３２】
「哺乳動物対象における免疫機能を改善すること」は、哺乳動物対象における疾患を首尾よく減少させるかまたはなくすか、あるいはその発症もしくは再発を防止するための本発明の組成物による処置の能力を指す。疾患として、新生物疾患、自己免疫疾患、または感染性疾患が挙げられるが、これらに限定されず、あるいはここで、改善された免疫機能は、造血細胞集団を拡大するための治療効果を提供するか、または放射線もしくは細胞毒性薬処置、または哺乳動物対象における一次もしくは二次免疫不全、または加齢から生じる細胞涸渇からの造血細胞回復を改善する。例えば、新生物疾患を処置または防止するために使用される組成物および製剤として、サイトカインに対する抗体またはサイトカイン抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体が挙げられ、それらは、腫瘍誘導を妨害する；免疫機能を維持または改善する、例えば、全般的もしくは化学療法中の造血細胞の集団を増加させる；および例えば、腫瘍浸潤リンパ球の活性を増強する；ならびに／あるいは癌対象におけるＮＫ細胞のおよびリンフォカインにより活性化されるキラー細胞の細胞毒性およびリンパ球有糸分裂反応の化学療法誘導性抑制を減少する役割を果たすことができる。
【００３３】
本発明のサイトカイン／抗体複合体組成物またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物に関して、「生物学的活性を増加すること」および「生物学的に活性な」は、造血細胞集団、例えば、Ｔ細胞集団に特異的に結合し、そしてこの細胞集団においてシグナル伝達して、Ｔ細胞集団のサブセットを拡大するサイトカインまたはリンフォカイン分子の能力を指す。「生物学的活性を増加すること」はまた、非造血細胞集団、例えば、上皮細胞もしくは肝臓細胞に特異的に結合し、そしてこの細胞集団においてシグナル伝達するサイトカイン分子、例えば、Ｉ型インターフェロンまたはＩＩ型インターフェロンを指し得る。本発明のサイトカイン抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体によってサイトカインの生物学的活性を増加することは、Ｔ細胞集団を拡大する能力を含み、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大すること、ＣＤ８＋Ｔ細胞を拡大すること、あるいはＣＤ４＋制御性Ｔ細胞を拡大し、そしてＣＤ８＋Ｔ細胞の拡大を阻止するか、もしくはＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞を拡大すること、あるいは生来のＴ細胞（ＣＤ４＋Ｔ細胞およびＣＤ８＋Ｔ細胞の両方）もしくはメモリーＴ細胞、またはそれらの組み合わせを拡大することを含むが、これらに限定されない。従って、本発明の化合物または薬剤の投与は、哺乳動物対象における新生物疾患、自己免疫疾患、細胞涸渇性放射線もしくは化学療法、または感染性疾患に関連する徴候または症状の発達を防止または遅延するか、緩和するか、あるいは停止または阻害することができる。
【００３４】
インターフェロン分子は、サイトカインの異種のファミリーに分類され、本来、ウイルス感染に対する細胞耐性を誘導するそれらの能力に基づいて同定される（Diaz et al.,J.Interferon Cytokine Res.,16:179-180,1996)。「Ｉ型インターフェロン」、例えば、インターフェロンα／βは、インターフェロンαファミリー（インターフェロンα１、α２、ω、およびτ）の多くのメンバーならびにインターフェロンβを含む。「ＩＩ型インターフェロン」、例えば、インターフェロンγは、その産生を調節するその特定の機構においてＩ型とは異なる。インターフェロンα／βの産生は、ウイルス感染において多くのタイプの細胞において最も効率的に誘導されるが、インターフェロン−γは、刺激時に、Ｔ細胞またはナチュラルキラー細胞のような造血系の細胞において、それぞれ抗原またはサイトカインによって、主に産生される。これらの２つのインターフェロン系は、疾患の処置および抗ウイルス防御宿主において機能的に重複しない。
【００３５】
ＩＬ−１５の受容体は３つの鎖、α、βおよびγｃからなり、α鎖はＩＬ−１５の専用であるが、β（ＣＤ１２２）およびγｃ（ＣＤ１３２）鎖はＩＬ−２の受容体との共有である（Kovanen and Leonard., Immunol Rev202:67-83,2004）。ＣＤ１２２は、正常なマウスのＭＰ  ＣＤ８細胞の大部分（約７０％）においては最も高いレベルで、そして生来のＣＤ８およびＭＰ  ＣＤ４細胞においては、低いがしかし有意なレベルで発現される；事実上、生来のＣＤ４細胞においてＣＤ１２２は発現されない（Zhang et al.,Immunity8(5):591-99,1998）。ＣＤ１２２の発現パターンを反映して、ＩＬ−１５は、ＣＤ１２２ｈｉＭＰ  ＣＤ８細胞のターンオーバーおよび生存に必須であることが明らかになった。それ故、ＩＬ−１５−マウスの作製により、これらのマウスはＣＤ１２２ｈｉＭＰ  ＣＤ８細胞を欠くことが示された（Kennedy et al.,J Exp Med191(5):771-780,2000）。ＩＬ−１５−マウスに養子移入されたＣＤ１２２ｈｉＭＰ  ＣＤ８細胞は増殖することができず、そして迅速に消失した（Judge et al.,J Exp Med196(7):935-46,2002）ため、ＣＤ１２２ｈｉＭＰ  ＣＤ８細胞の不在は、発達欠損よりむしろ細胞生存の欠如を反映するようであった。ＣＤ１２２ｈｉであるＮＫ細胞はまた、生存のためにＩＬ−１５に強く依存することが見出されたことを言及すべきである。それ故、ＣＤ１２２ｈｉＭＰ  ＣＤ８細胞と同様に、ＮＫ細胞は、ＩＬ−１５−マウスにおいて顕著に減少する（Kennedy,et al.J.Exp.Med.191:771-780,2000）。ＩＬ−１５−マウスはまた生来のＣＤ８細胞数の５０％減少を示し、ＩＬ−１５は生来のＣＤ８細胞の生存を持続するのに重要な役割を果たすことを示す（Kennedy et al.,J Exp Med191(5):771-780,2000;Berard et al.,J Immunol 170(10):5018-26,2003）。ＣＤ８細胞とは異なり、生来およびＭＰ  ＣＤ４細胞の恒常性は、ＩＬ−１５−マウスにおいてそれほど影響を受けない（Kennedy et al.,J Exp Med 191(5):771-780,2000）。
【００３６】
メモリーＣＤ８細胞に対するＩＬ−１５の直接的役割はまた、ＩＬ−１５トランスジェニックマウスにおけるようなＩＬ−１５の過剰発現がＣＤ１２２ｈｉＭＰ  ＣＤ８細胞の全体数を増加するという所見によっても示される（Marks-Konczalik et al.,Proc Natl Acad Sci USA97(21):11445-50,2000;Fehniger et al.,J Exp Med193(2):219-31,2001）。γｃ受容体を介してシグナル伝達する他のサイトカインについて、ＩＬ−１５は、おそらく、Ｂｃｌ−２のような抗アポトーシス分子をアップレギュレートすることによってメモリーＣＤ８細胞の生存を支持する。ＩＬ−１５によって誘発されるシグナル伝達経路は、ＳＴＡＴ５を介して伝達されるようであり、そしてＳＯＣＳ−１によってネガティブにモジュレートされる。それ故、増加した数のＭＰ  ＣＤ８細胞は、ＳＴＡＴ５の構成的に活性化された形態を発現するトランスジェニックマウスにおいて（Burchill et al.,J Immunol171(11):5853-64,2003）、およびＩＦＮγ−ＳＯＣＳ−１−マウスにおけるようにＳＯＣＳ−１のネガティブな効果が停止されるマウスにおいてなおより顕著に（Ilangumaran et al.,J Immunol171(5):2435-45）存在する。両方の場合において、生来のＣＤ８細胞は、これらの細胞に自発的増殖およびその後のＭＰ細胞への分化を経験させるＩＬ−１５に対して増加した感受性を示すように思われ、この伝達は、自己ペプチド／ＭＨＣリガンドとの接触から生じるＴＣＲシグナル伝達に依存するIlangumaran et al.,J Immunol171(5):2435-45;Davey et al.,J Exp Med202(8):1099-108,2005）。
【００３７】
可溶性サイトカインＩＬ−１５を考えてみても、インビボ条件下で、ＩＬ−１５Ｒα鎖に結合した細胞会合形態で提示される。ＩＬ−１５の提示のためのＩＬ−１５Ｒαの必須の役割は、ヒト細胞系統で最初に観察された（Dubois et al.,Immunity17(5):537-47,2002）。マウスにおける以後の研究により、ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒαは両方とも同じ細胞によって合成される必要があることが示され、これは、ＩＬ−１５が細胞表面上での発現の前に、細胞質においてＩＬ−１５Ｒα鎖と予め会合されることを示す（Burkett et al.,J Exp Med200(7):825-34,2004）。提示のこのような独特な態様により、ＩＬ−１５Ｒα−マウスに移入されたＭＰ  ＣＤ８細胞は、ポリＩ：Ｃに応答するバイスタンダー（ｂｙｓｔａｎｄｅｒ）増殖を経験することができないというパラドックスが説明される（Lodolce et al.,J Exp Med194(8):1187-94,2001）。この態様により、ＩＬ−１５Ｒα−マウスがＭＰ  ＣＤ８細胞を欠く理由が説明され、そしてＩＬ−１５ＲαがＩＬ−１５の認識に必要であるという著者らの本来の示唆が確認される（Lodolce et al., Immunity9(5):669-76,1998）。ＩＬ−１５Ｒα鎖がＴ細胞およびＡＰＣを含む多くの細胞タイプにおいて発現され、そしてこれらの細胞の活性化に対して容易にアップレギュレートされるが、非Ｔ細胞のみがＩＬ−１５を合成するようであることに注目すべきである（Doherty et al.,J Immunol156(2):735-41,1996）。ＩＬ−１５の提示のためのＡＰＣ上のＩＬ−１５Ｒα発現の不可欠な役割は明らかであるが、ＣＤ８細胞がＩＬ−１５Ｒαを発現する理由については不明確である。それ故、ＩＬ−１５ＲαのＴ細胞発現は、主として、ＣＤ８細胞によるＩＬ−１５の認識に必要ではなく、そしてＩＬ−１５に対するメモリーＣＤ８細胞の正常な応答には、ＣＤ８細胞上のＩＬ−１５Ｒのβおよびγ鎖のみの発現で十分である（Lodolce et al.,J Exp Med194(8):1187-94,2001;Burkett et al.,Proc Natl Acad Sci USA100(8):4724-9,2003）。ＣＤ８細胞に対するＩＬ−１５Ｒαの機能は、依然として解明されていないが、しかし、それは、他のＴ細胞への可溶性ＩＬ−１５のトランスでの提示（Dubois et al.,Immunity17(5):537-47,2002）またはおそらく、ＡＰＣの活性化を増大すること（Budagian et al.,J Biol Chem279(40):42192-201,2004）に関与し得る。
【００３８】
正常な条件下では、ＩＬ−１５の基底レベルは、おそらく、ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒαの両方を合成するＤＣによるＩＬ−１５の構成性産生によって確立される（Burkett et al.,J Exp Med 200(7):825-34,2004）。ＩＬ−１５の産生は、ＩＦＮ、特に、ＩＦＮ−Ｉによって効率的に誘導されるため、ＩＦＮ−Ｉのバックグランド産生は、ＩＬ−１５の基底レベルを維持するかどうかという疑問が生じる。この考えを裏付けるものとして、ＩＦＮ−Ｉ受容体欠損マウスは、正常Ｂ６マウスにおいて見出されるＣＤ１２２ｈｉＭＰ  ＣＤ８細胞の半数未満しか所有せず、そしてＳＴＡＴ−１−マウスにおいて認められるＣＤ１２２ｈｉＭＰ  ＣＤ８細胞のさらなる涸渇も存在し、これは、ＩＦＮ−ＩおよびＩＦＮ−γの両方に非応答性である。
【００３９】
造血系は、個別の機能を実施する異なる細胞タイプからなる。その多様な機能の多くは、イオンチャンネル、細胞−細胞相互作用を調和するための付着表面分子、およびサイトカイン受容体を含む細胞表面受容体の調和された運動を必要とする。それらの多様な機能的活動にもかかわらず、すべての造血細胞は、多能性骨髄造血幹細胞から発達すると考えられる。そのような幹細胞は、ＣＤ３４と呼ばれる表面マーカーを発現することが示されている。分化中、幹細胞は、いくつかの特異的造血細胞系統のそれぞれにおいて前駆細胞を生じる。次いで、前駆細胞は、一連の形態的および機能的変化を経験して、成熟な機能が決定された造血細胞を産生する。
【００４０】
造血細胞によって実施される機能のうち、所定の細胞タイプが免疫に排他的に関与する。例えば、Ｔ細胞、Ｂ細胞およびナチュラルキラー（ＮＫ）細胞を含むリンパ球は、免疫応答におけるエフェクターである。単球および顆粒球（即ち、好中球、好塩基球および好酸球）は、非特異的形態の防御において役割を果たす。リンパ球、単球および顆粒球は、包括的に白血球（ｗｈｉｔｅ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ）または白血球（ｌｅｕｋｏｃｙｔｅ）と称される。一方、他の造血細胞は、免疫系に関連しない機能を実施する。例えば、赤血球はガス輸送に関与し、そして血小板系の細胞は血液凝固に関与する。
【００４１】
Ｔ細胞およびＢ細胞は抗原を認識し、そして免疫応答を生じる。Ｔ細胞は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）と呼ばれるヘテロ二量体表面受容体によって抗原を認識する。ＴＣＲは、包括的にＣＤ３複合体と称される一連のポリペプチドと会合する。Ｂ細胞は、分泌分子でもある表面免疫グロブリン（Ｉｇ）によって抗原を認識する。さらに、多くの副刺激表面受容体がＴ細胞およびＢ細胞において同定されており、これらは抗原誘導性活性化中の細胞活性化を増大する。
【００４２】
Ｔ細胞抗原受容体／ＣＤ３複合体（ＴＣＲ／ＣＤ３）の他に、活性化シグナルを仲介するＴ細胞によって発現される他の分子として、ＣＤ２、ＣＤ４、ＣＤ５、ＣＤ６、ＣＤ８、ＣＤ１８、ＣＤ２７、ＣＤ２８、ＣＤ４３、ＣＤ４５、ＣＤ１５２（ＣＴＬＡ−４）、ＣＤ１５４、ＭＨＣクラスＩ、ＭＨＣクラスＩＩ、ＣＤｗ１３７（４−１ＢＢ）、ＣＤｗ１５０などが挙げられるが、これらに限定されない（Barclay et al.,The Leucocyte Antigen Facts Book,1997,Second edition,Academic Press;Leucocyte Typing,1984, Bernard et al.(eds.),Springer-Verlag;Leukocyte Typing II,1986,Reinherz et al.(eds.),Springer-Verlag;Leukocyte Typing III,1987,McMichael(ed.),Oxford University Press;Leukocyte Typing IV,1989,Knapp et al.(eds.),Oxford University Press;CD Antigens, 1996,VI Internet Workshop and Conference on Human Leukocyte Differentiation Antigens。ＴＣＲ／ＣＤ３と共に作用する細胞表面抗原は、しばしば、当該分野において、共受容体と称される。
【００４３】
特異的抗体は、上記のＴ細胞表面抗原のすべてに対して作製されている。上記のＴ細胞表面受容体に結合する他の分子として、可変ドメインのような抗原結合性抗体誘導体、ペプチド、スーパー抗原、ならびにＣＤ２に対するＣＤ５８（ＬＦＡ−３）、ＣＤ４に対するＨＩＶｇｐ１２０、ＣＤ２７に対するＣＤ２７Ｌ、ＣＤ２８またはＣＤ１５２に対するＣＤ８０またはＣＤ８６、ＣＤ１１ａ／ＣＤ１８に対するＩＣＡＭ１、ＩＣＡＭ２およびＩＣＡＭ３、ＣＤｗ１３７に対する４−１ＢＢＬのようなそれらの天然のリガンドが挙げられる。
【００４４】
Ｂ細胞によって発現される活性化分子として、表面Ｉｇ、ＣＤ１８、ＣＤ１９、ＣＤ２０、ＣＤ２１、ＣＤ２２、ＣＤ２３、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ８０、ＣＤ８６およびＩＣＡＭ１が挙げられるが、これらに限定されない。同様に、これらの分子の天然のリガンドおよびそれらに対して指向される抗体ならびに抗体誘導体を使用して、活性化シグナルをＢ細胞に送達することができる。
【００４５】
「新生物疾患」、「癌」、「悪性腫瘍」、「固形腫瘍」または「過剰増殖性障害」は同義語として使用され、そして細胞の制御されない異常な増殖、局所的または血流およびリンパ系を介して身体の他の部分に広がる（即ち、転移する）罹患細胞の能力、ならびに多くの特徴的な構造上および／または分子上の特色のいずれかによって特徴付けられる多くの疾患のいずれかを指す。「癌」もしくは「悪性腫瘍細胞」または「固形腫瘍細胞」は、分化を欠き、そして浸潤および転移が可能である特定の構造的特性を有する細胞として理解される。「新生物疾患」または「癌」は、癌腫、肉腫、リンパ腫および白血病を含む哺乳動物において見出されるすべてのタイプの癌もしくは新生物または悪性腫瘍を指す。例として、胸部、肺、胃、ならびに食道、脳および神経系、頭頚部、骨、肝臓、胆嚢、膵臓、結腸、尿生殖器系、膀胱、泌尿器系、腎臓、精巣、子宮、卵巣、前立腺、皮膚および皮膚突起、黒色腫、中皮腫、内分泌系の癌がある。（DeVita,et al.,(eds.),2001,Cancer Principles and Practice of Oncology,6th.Ed.,Lippincott Williams&Wilkins,Philadelphia,PAを参照のこと；本参考文献は、すべての目的のために、本明細書においてその全体が参照により援用される）。
【００４６】
「転移性」は、他の器官または同じ器官の遠位部位に広がる上記で規定されるような腫瘍細胞を指す。
【００４７】
「癌関連」は、核酸およびその発現、またはその欠如、あるいはタンパク質およびそのレベルもしくは活性、またはその欠如の対象細胞における悪性腫瘍の発症に対する関係を指す。例えば、癌は、正常で健康な細胞では発現されないか、またはより低いレベルで発現される特定の遺伝子の発現に関連し得る。逆に言えば、癌関連遺伝子は、悪性細胞では（もしくは形質転換を経験する細胞では）発現されないか、または正常で健康な細胞で発現されるレベルより悪性細胞ではより低いレベルで発現される遺伝子であり得る。
【００４８】
癌に関して、用語「形質転換」は、正常細胞が悪性になる時に正常細胞が経験する変化を指す。真核生物では、用語「形質転換」は、細胞培養における正常細胞の悪性細胞への変換を説明するために使用される。
【００４９】
「増殖細胞」は、活発に細胞分裂を経験し、そして指数的に成長している細胞である。「細胞増殖制御の消失」は、細胞分裂の適切な制限を正常に確実にする細胞周期の制御を消失している細胞の特性を指す。そのような制御を消失している細胞は、刺激シグナルを伴わずに通常より速い速度で増殖し、そして阻害シグナルには応答しない。
【００５０】
「進行癌」は、原発腫瘍部位にはもはや局在しない癌、または米国対癌合同委員会（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｉｎｔ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｏｎ  Ｃａｎｃｅｒ）（ＡＪＣＣ）によりステージＩＩＩもしくはＩＶである癌を意味する。
【００５１】
「忍容性が良好」は、処置の結果として生じる健康状態の有害な変化の不在を指し、処置の決定に影響を及ぼす。
【００５２】
「転移性」は、免疫欠損マウスの乳腺脂肪体および／または循環への注入時に免疫欠損マウスの肺、肝臓、骨または脳において続発性腫瘍病巣を確立することが可能である腫瘍細胞、例えば、ヒト固形腫瘍または尿生殖器悪性腫瘍を指す。
【００５３】
癌処置
サイトカイン抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体は、疾患、例えば、新生物疾患を処置する方法において有用である。「固形腫瘍」として、肉腫、黒色腫、癌腫、または他の固形腫瘍癌が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５４】
「肉腫」は、胚性結合組織のような物質からなる腫瘍を指し、そして一般的に、線維性または均質な物質に包埋される密接に詰め込まれた細胞からなる。肉腫として、軟骨肉腫、線維肉腫、リンパ肉腫、黒肉腫、粘液肉腫、骨肉腫、アベメティ（Ａｂｅｍｅｔｈｙ）肉腫、脂肪肉腫（ａｄｉｐｏｓｅ  ｓａｒｃｏｍａ）、脂肪肉腫（ｌｉｐｏｓａｒｃｏｍａ）、胞巣状軟部肉腫、エナメル上皮肉腫、ブドウ状肉腫、緑色腫（ｃｈｌｏｒｏｍａ  ｓａｒｃｏｍａ）、絨毛癌（ｃｈｏｒｉｏ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、胎児性肉腫、ウィルムス腫瘍肉腫、子宮内膜肉腫、間質肉腫、ユーイング肉腫、筋膜肉腫（ｆａｓｃｉａｌ  ｓａｒｃｏｍａ）、線維芽細胞肉腫（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｉｃ  ｓａｒｃｏｍａ）、巨細胞肉腫、顆粒球性肉腫、ホジキン肉腫、特発性多発性色素性出血性肉腫、Ｂ細胞の免疫芽球性肉腫、リンパ腫、Ｔ細胞の免疫芽球性肉腫、ジェンセン（Ｊｅｎｓｅｎ）肉腫、カポジ肉腫、クッパー細胞肉腫、血管肉腫、白血肉腫（ｌｅｕｋｏｓａｒｃｏｍａ）、悪性間葉肉腫（ｍａｌｉｇｎａｎｔ  ｍｅｓｅｎｃｈｙｍｏｍａ  ｓａｒｃｏｍａ）、傍骨肉腫、赤血球肉腫、ラウス肉腫、漿液嚢胞性肉腫（ｓｅｒｏｃｙｓｔｉｃ  ｓａｒｃｏｍａ）、滑膜肉腫、および血管拡張性肉腫（ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｔｉｃ  ｓａｒｃｏｍａ）が挙げられるが、これらに限定されない。
【００５５】
「黒色腫」は、皮膚および他の器官のメラノサイト系から生じる腫瘍を指す。黒色腫として、例えば、末端黒子型黒色腫、無色素性黒色腫、良性若年性黒色腫、クラウドマン黒色腫、Ｓ９１黒色腫、ハーディング−パセー黒色腫、若年性黒色腫、悪性黒子型黒色腫、悪性黒色腫、結節型黒色腫、爪下黒色腫（ｓｕｂｕｎｇａｌ  ｍｅｌａｎｏｍａ）、および表在拡大型黒色腫が挙げられる。
【００５６】
「癌腫」は、周囲組織に浸潤し、そして転移を生じる傾向がある上皮細胞からなる悪性の新たな成長を指す。例示的癌腫として、例えば、小葉癌（ａｃｉｎａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、小葉癌（ａｃｉｎｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、腺様嚢胞癌（ａｄｅｎｏｃｙｓｔｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、腺様嚢胞癌（ａｄｅｎｏｉｄ  ｃｙｓｔｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、腺癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ａｄｅｎｏｍａｔｏｓｕｍ）、副腎皮質の癌腫、肺胞上皮癌、肺胞細胞癌、基底細胞癌（ｂａｓａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、基底細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｂａｓｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、類基底細胞癌、基底扁平細胞癌、細気管支肺胞細胞癌、細気管支癌、気管支癌、脳様癌、胆管細胞癌、絨毛癌、膠様癌、コメド癌、子宮体部癌、篩状癌、よろい癌、皮膚癌、円柱細胞癌（ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、円柱細胞癌（ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａｌ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、導管癌、硬性癌、胎児性癌、脳様癌、類表皮癌、腺様上皮癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｅ  ａｄｅｎｏｉｄｅｓ）、外方増殖性癌、潰瘍癌、線維癌、ゼラチン様癌、膠様癌、巨細胞癌（ｇｉａｎｔ  ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、巨細胞癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｇｉｇａｎｔｏｃｅｌｌｕｌａｒｅ）、腺癌、顆粒膜細胞癌、毛床癌、血様癌、肝細胞癌、ヒェルトル細胞癌、硝子状癌、副腎癌（ｈｙｐｅｍｅｐｈｒｏｉｄ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、小児胎児性癌、インサイチュにおける癌腫、表皮内癌、上皮内癌、クロムペッケル癌、クルチッキー細胞癌、大細胞癌、レンズ状癌（ｌｅｎｔｉｃｕｌａｒ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、レンズ状癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｌｅｎｔｉｃｕｌａｒｅ）、脂肪腫様癌、リンパ上皮癌、髄様癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｍｅｄｕｌｌａｒｅ）、髄様癌（ｍｅｄｕｌｌａｒｙ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、黒色癌（ｍｅｌａｎｏｔｉｃ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、軟性癌、粘液癌、粘液分泌癌、粘液細胞癌、粘表皮癌、粘液癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｍｕｃｏｓｕｍ）、粘液癌（ｍｕｃｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、粘液腫状癌、鼻咽腔癌（ｎａｓｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、燕麦細胞癌、類骨癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｏｓｓｉｆｉｃａｎｓ）、類骨癌（ｏｓｔｅｏｉｄ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、乳頭癌、門脈周囲癌、上皮内癌、棘細胞癌、粥状癌、腎細胞癌、予備細胞癌、肉腫様癌、シュナイダー癌、硬癌、陰嚢癌、印環細胞癌、単純癌、小細胞癌、馬鈴薯状癌、球状細胞癌、紡錘形細胞癌、海綿様癌、扁平上皮癌、扁平上皮細胞癌腫、単線癌、血管拡張癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔａｔｉｃｕｍ）、血管拡張癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｔｅｌａｎｇｉｅｃｔｏｄｅｓ）、移行上皮癌、結節癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｔｕｂｅｒｏｓｕｍ）、結節癌（ｔｕｂｅｒｏｕｓ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ）、疣状癌、および絨毛癌（ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｖｉｆｌｏｓｕｍ）が挙げられる。
【００５７】
「白血病」は、血液を形成する器官の進行性の悪性疾患を指し、そして一般的に、白血球ならびに血液および骨髄におけるそれらの前駆体の歪曲した増殖および発達によって特徴付けられる。白血病は、一般的に、（１）疾患の期間および特質−急性または慢性；（２）関与する細胞のタイプ；骨髄（骨髄性）、リンパ球（リンパ性）、または単球性；ならびに（３）血中の異常細胞の数の増加または非増加−白血病性または非白血性（亜白血性）に基づいて、臨床的に分類される。白血病として、例えば、急性非リンパ性白血病、慢性リンパ性白血病、急性顆粒球性白血病、慢性顆粒球性白血病、急性前骨髄球性白血病、成人Ｔ細胞白血病、非白血性白血病、白血性白血病、好塩基球性白血病（ｂａｓｏｐｈｙｌｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、幹細胞性白血病（ｂｌａｓｔ  ｃｅｌｌ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、ウシ白血病、慢性骨髄性白血病、皮膚白血病、幹細胞性白血病（ｅｍｂｒｙｏｎａｌ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、好酸球性白血病、グロス白血病、毛様細胞白血病、幹細胞性白血病（ｈｅｍｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、幹細胞性白血病（ｈｅｍｏｃｙｔｏｂｌａｓｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、組織芽球性白血病、幹細胞白血病、急性単球性白血病、白血球減少性白血病、リンパ性白血病（ｌｙｍｐｈａｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、リンパ芽球性白血病、リンパ性白血病（ｌｙｍｐｈｏｃｙｔｉｃ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、リンパ性白血病（ｌｙｍｐｈｏｇｅｎｏｕｓ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、リンパ性白血病（ｌｙｍｐｈｏｉｄ  ｌｅｕｋｅｍｉａ）、リンパ肉腫細胞性白血病、肥満細胞性白血病、巨核球性白血病、小骨髄芽球性白血病、単球性白血病、骨髄芽細胞性白血病、骨髄細胞性白血病、骨髄性白血病、骨髄組織球性白血病、ネーゲリ白血病、形質細胞白血病、形質球性白血病、前骨髄球性白血病、リーダー細胞性白血病、シリング白血病、幹細胞白血病、亜白血性白血病、および未分化細胞性白血病が挙げられる。
【００５８】
さらなる癌として、例えば、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、多発性骨髄腫、神経芽腫、乳癌、卵巣癌、肺癌、横紋筋肉腫、原発性血小板増多症、原発性マクログロブリン血症、小細胞肺腫瘍、原発性脳腫瘍、胃癌、大腸癌、悪性膵頭部インスリノーマ（ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｉｎｓｕｌａｎｏｍａ）、悪性カルチノイド、膀胱癌、前癌皮膚病巣、精巣癌、リンパ腫、甲状腺癌、神経芽腫、食道癌、尿生殖路癌、悪性高カルシウム血症、頚部癌、子宮内膜癌、副腎皮質癌、および前立腺癌が挙げられる。
【００５９】
抗体サイトカイン複合体の治療応用
当該分野において良好に理解されているように、生体特異的捕捉試薬として、抗体、サイトカインまたはリンフォカインに結合する抗体の結合性フラグメント（例えば、完全長の重および軽鎖を有する完全な抗体分子、もしくはその任意のフラグメントまたはアフィボディ（Ａｆｆｉｂｏｄｙ，Ｔｅｋｎｉｋｒｉｎｇｅｎ３０，Ｂｏｘ７００  ０４，Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ  ＳＥ−１００４４，Ｓｗｅｄｅｎ；U.S.Patent No.5,831,012（本明細書においてその全体がすべての目的のために参照により援用される）を参照のこと）が挙げられる。目的とする方法に依存して、それらはまた、別の生体分子に特異的に結合する受容体および他のタンパク質を含むことができる。
【００６０】
「抗体」は、抗原に特異的に結合し、そして認識する、免疫グロブリン遺伝子またはそのフラグメント由来のフレームワーク領域を含んでなるポリペプチドを指す。認識される免疫グロブリン遺伝子は、κ、λ、α、γ、δ、εおよびμ定常領域遺伝子、ならびに多種多様な免疫グロブリン可変領域遺伝子を含む。軽鎖は、κまたはλのいずれかに分類される。重鎖は、γ、μ、α、δ、またはεに分類され、それぞれこの順で、免疫グロブリンクラス、ＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤ、およびＩｇＥを規定する。典型的に、抗体の抗原−結合領域は、結合の特異性および親和性において最も重要である。
【００６１】
ハイブリッド抗体ならびにハイブリッド抗体フラグメントは、完全長の重および軽鎖、またはその任意のフラグメント、例えば、Ｆｃ領域を含む抗体フラグメントを有する完全な抗体分子を含む。本明細書に記載の可変領域および多様な種由来の定常領域を有するキメラ抗体もまた、適切である。例えば、U.S.Application No.20030022244を参照のこと。
【００６２】
はじめに、抗体が惹起され得る予め決定された標的対象物を選択する。標的対象物に対して指向されるモノクローナル抗体を作製するための技術は、当業者に周知である。そのような技術として、ディスプレイライブラリー、ｘｅｎｏまたはｈｕｍａｂマウス、ハイブリドーマなどに関与するものが挙げられるが、これらに限定されない。標的対象物は、抗原性を示すことが可能な任意の物質を含み、そして通例、タンパク質またはタンパク質多糖である。例として、受容体、酵素、ホルモン、増殖因子、ペプチドなどが挙げられる。本開示内容に従う使用に適切な天然に存在する抗体だけではなく、予め決定された対象物に対して指向される操作された抗体および抗体フラグメントもまた適切であることが理解されるべきである。
【００６３】
本明細書に記載の技術に供することができる抗体（Ａｂ）として、モノクローナルおよびポリクローナル抗体、ならびにファージもしくはファージミドディスプレイ技術から誘導されるダイアボディ（ｄｉａｂｏｄｉｅｓ）、抗体軽鎖、抗体重鎖および／または抗体フラグメントのようなＦｃ領域を含む抗体フラグメントを含む。まず第１に、起源となる種から最初の抗体を入手する。より詳細には、標的抗原に対して特異性を有する起源となる種の抗体の軽鎖、重鎖もしくは両方の可変部分の核酸またはアミノ酸配列が必要である。起源となる種は、抗体または抗体ライブラリーを作製するために使用された任意の種、例えば、ラット、マウス、ウサギ、ニワトリ、サル、ヒトなどである。モノクローナル抗体を作製およびクローニングするための技術は、当業者に周知である。所望される抗体が得られた後、ＣＤＲのあらゆる可能な定義（例えば、Ｋａｂａｔ単独、Ｃｈｏｔｈｉａ単独、ＫａｂａｔおよびＣｈｏｔｈｉａの組み合わせ、ならびに当業者に公知の他の任意のもの）を使用して、可変領域（ＶＨおよびＶＬ）を、コンポーネント部分（即ち、フレームワーク（ＦＲ）およびＣＤＲ）に分離する。一旦それが入手されたら、適切な標的種のフレームワークの選択が必要である。１つの実施態様は、起源となる種の抗体配列由来のそれぞれ個々のフレームワーク領域と標的種由来の可変アミノ酸配列または遺伝子配列とのアラインメントに関与する。アラインメントを検索するためのプログラムは当該技術分野において周知であり、例えば、ＢＬＡＳＴなどがある。例えば、標的種がヒトである場合、そのようなアミノ酸配列または遺伝子配列（生殖細胞系統もしくは再配列された（ｒｅａｒｒａｎｇｅｄ）抗体配列）の供給源は、Ｇｅｎｂａｎｋ、ＮＣＢＩタンパク質データバンク（ｈｔｔｐ：／／ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＢＬＡＳＴ／）、ＶＢＡＳＥ、ヒト抗体遺伝子のデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｍｒｃ−ｃｐｅ．ｃａｍ．ａｃ．ｕｋ／ｉｍｔ−ｄｏｃ）、および免疫グロブリンのＫａｂａｔデータベース（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｍｍｕｎｏ．ｂｍｅ．ｎｗｕ．ｅｄｕ）などの任意の適切な参照データベースまたはその翻訳産物において見出すことができる。アラインメントがヌクレオチド配列に基づいて行われる場合、選択される遺伝子を解析して、当該サブセットのどの遺伝子が、起源となる種の抗体に最も近いアミノ酸相同性を有するかを決定すべきである。データベースの他の配列と比較してより高い程度の相同性に近づくアミノ酸配列または遺伝子配列は、本明細書に記載の手順に従って利用および操作することができることが考えられる。さらに、より少ない相同性を有するアミノ酸配列または遺伝子が、本明細書に記載の手順に従って操作および選択される場合に、予め決定された標的抗原に対する特異性を示す産物をコードする場合、それらを利用することができる。所定の実施態様では、相同性の許容可能な範囲は約５０％を超える。標的種はヒト以外であり得ることが理解されるべきである。
【００６４】
「処置する」は、癌の処置または改善または防止における成功の任意の指標を指し、鎮静；寛解；徴候の減少もしくは疾患症状を患者に対してより忍容性にすること；変性もしくは減衰の速度を遅延すること；または変性の最終的なポイントをより衰弱化しないことのようなあらゆる他覚的あるいは自覚的パラメータを含む。徴候の処置または改善は他覚的または自覚的パラメータに基づくことができ；医師による検査の結果を含む。従って、用語「処置する」は、疾患、例えば、新生物疾患、自己免疫疾患、細胞涸渇性放射線もしくは化学療法、または感染性疾患に関連する徴候または症状の発達を防止または遅延するか、緩和するか、あるいは停止または阻害するための本発明の化合物または薬剤の投与を含む。用語「治療効果」は、対象における疾患、疾患の徴候、もしくは疾患の副作用の減少、排除、または防止を指す。
【００６５】
「との組み合わせで」、「組み合わせ療法」および「組み合わせ製品」は、所定の実施態様において、第１の治療薬および本明細書において使用される化合物の患者への同時投与を指す。組み合わせて投与する場合、それぞれの成分を、同時または異なる時点の任意の順序で連続的に投与することができる。それ故、それぞれの成分は、所望される治療効果が提供されるように、個別ではあるが、十分に近い時間に投与することができる。既知の癌治療薬剤または自己免疫治療薬剤と本発明の医薬的組成物との「同時投与」とは、既知の薬剤および本発明の組成物の両方が治療効果を有するような時間における薬剤および抗体もしくはサイトカイン抗体複合体組成物またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物の投与を意味する。そのような同時投与は、本発明の化合物の投与に対する癌治療薬剤または自己免疫治療薬剤の同時（即ち、同じ時間における）、前、もしくは後の投与に関与し得る。当業者であれば、特定の薬剤および本発明の組成物の投与の適切な時機、順序および用量を決定することは困難ではないであろう。
【００６６】
本発明の方法を使用して、疾患、例えば、新生物疾患、自己免疫疾患、細胞涸渇性放射線もしくは化学療法、または感染性疾患を「処置する」あるいは該疾患の「処置」は、疾患の危険性が高くあり得るが、感染の徴候を未だ経験していないか、または示していない対象における徴候の発症を防止すること、感染の徴候を阻害すること（その発達を遅延もしくは停止すること）、感染の徴候または副作用に対して軽減を施すこと（緩和処置を含む）、および感染の徴候を軽減すること（軽快させること）を含む。
【００６７】
「用量単位」は、処置しようとする特定の個体の単位用量として適切な物理的に個別の単位である。各単位は、必要とされる医薬担体と組み合わせて、所望される治療効果を生じさせるために算出された予め決定された量の有効化合物を含有することができる。用量単位形態の仕様は、（ａ）有効化合物の独特な特徴および達成しようとする特定の治療効果、ならびに（ｂ）調合するそのような有効化合物の当該分野において固有の限界値によって決定され得る。
【００６８】
２つ以上の核酸またはポリペプチド配列に関して、「同一な」または「同一性」パーセントは、同じであるか、あるいは以下に記載のデフォルトパラメータを伴うＢＬＡＳＴもしくはＢＬＡＳＴ２．０配列比較アルゴリズムを使用するか、または手動アラインメントおよび目視検査（例えば、ＮＣＢＩウェブサイトを参照のこと）によって測定されるのと同じであるアミノ酸残基もしくはヌクレオチドの特定された百分率（即ち、比較ウィンドウまたは指定領域にわたり比較および整列、最大一致（ｍａｘｉｍｕｍ  ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｅｎｃｅ）について調べたとき、特定された領域（例えば、本明細書に記載のサイトカイン、抗体、もしくはサイトカイン受容体をコードするヌクレオチド配列、または本明細書に記載のサイトカイン、抗体、もしくはサイトカイン受容体のアミノ酸配列）について約６０％同一性、好ましくは、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、もしくはそれ以上の同一性）を有する２つ以上の配列またはサブ配列を指す。その場合、そのような配列を「実質的に同一」と言う。この用語はまた、試験配列の賛辞を指すか、またはそれに当てはめることができる。用語はまた、欠失および／または付加を有する配列ならびに、置換を有するものを含む。以下に記載のように、好適なアルゴリズムは、ギャップなどを説明することができる。好ましくは、同一性は、少なくとも約２５アミノ酸もしくはヌクレオチド長である領域にわたって、またはより好ましくは、５０〜１００アミノ酸もしくはヌクレオチド長である領域にわたって存在する。
【００６９】
配列比較のため、典型的に、１つの配列は、試験配列を比較する参照配列として作用する。配列比較アルゴリズムを使用する場合、試験および参照配列をコンピュータに入力し、必要であればサブ配列候補を設計し、そして配列アルゴリズムプログラムパラメータを指定する。好ましくは、デフォルトプログラムパラメータを使用することができ、またはそれ以外のパラメータを指定することができる。次いで、配列比較アルゴリズムは、プログラムパラメータに基づく参照配列に対する試験配列の配列同一性パーセントを算出する。
【００７０】
本明細書において使用する「比較ウィンドウ」は、２０〜６００、通例では、約５０〜約２００、さらに通例では、約１００〜約１５０からなる群から選択される隣接位置の数のいずれか１つのセグメントに対する照合を含み、ここでは、ある配列と、同数の隣接位置の参照配列とを最適に整列した後、２つの配列を比較することができる。比較のための配列のアラインメント方法は、当該分野において周知である。比較のための配列の最適なアラインメントは、例えば、Smith and Waterman, Adv.Appl.Math,2:482,1981の局所相同性アルゴリズムによって、Needleman and Wunsch,J.Mol.Biol,48:443,1970の相同性アラインメントアルゴリズムによって、Pearson and Lipman,Proc.Nat’l.Acad.Sci.USA,85:2444,1988の類似性検索方法によって、これらのアルゴリズム（Ｗｉｓｃｏｎｓｉｎ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｓｏｆｔｗａｒｅ  Ｐａｃｋａｇｅ，Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒｏｕｐ，５７５  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｄｒ．，Ｍａｄｉｓｏｎ，ＷＩにおけるＧＡＰ、ＢＥＳＴＦＩＴ、ＦＡＳＴＡ、およびＴＦＡＳＴＡ）のコンピュータによる実行によって、または手動によるアラインメントおよび目視検査（例えば、Ausubel et al.,eds.,Current Protocols in Molecular Biology.1995supplementを参照のこと）によって行うことができる。
【００７１】
配列同一性および配列類似性パーセントを決定するのに適切である好適なアルゴリズムの一例として、ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ２．０アルゴリズムがあり、これらは、Altschul et al.,Nuc.Acids Res,25:3389-3402,1977およびAltschul et al.,J.Mol.Biol,215:403-410,1990にそれぞれ記載されている。ＢＬＡＳＴおよびＢＬＡＳＴ２．０は、本発明の実施態様として、核酸およびタンパク質の配列同一性パーセントを決定するために、本明細書に記載のパラメータと共に使用される。ＢＬＡＳＴ解析を実施するためのソフトウェアは、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ（ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／）を介して公的に入手することができる。このアルゴリズムは、データベース配列中の同じ長さのワードと共に整列する場合、ある正の値の閾値スコアＴと一致するかまたはこれを満たす問い合わせ配列中の長さＷの短いワードを同定することによって、高スコア配列対（ＨＳＰ）を最初に同定することに関与する。Ｔは、隣接ワードスコア閾値と称される（Altschul et al.、上掲）。これらの初期隣接ワードのヒットは、それらを含有するより長いＨＳＰを見出すための検索を開始するためのシードとして作用する。ワードヒットは、累積アラインメントスコアが増加し得る限り、各配列に沿って両方向において拡張される。累積スコアは、ヌクレオチド配列のために、パラメータＭ（一致する残基の対に対する報酬スコア；常に＞０）およびＮ（一致する残基に対するペナルティスコア；常に＜０）を使用して、算出する。アミノ酸配列では、スコアリングマトリックスを使用して、累積スコアを算出する。各方向におけるワードのヒットの延長は、次の場合停止される：累積アラインメントスコアが、その最大限に達成された値から量Ｘだけ低下する場合；１つ以上のネガティブスコアリング残基アラインメントの蓄積のため累積スコアが０もしくはそれ以下になる場合；いずれかの配列の末端に達する場合。ＢＬＡＳＴアルゴリズムパラメータＷ、ＴおよびＸは、アラインメントの感度および速度を決定する。（ヌクレオチド配列のための）ＢＬＡＳＴＮプログラムは、デフォルトとして、１１のワード長（Ｗ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、および両鎖の比較を使用する。アミノ酸配列については、ＢＬＡＳＴＰプラグラムは、デフォルトとして、３のワード長、および１０の期待値（Ｅ）、および５０のＢＬＯＳＵＭ６２スコアリングマトリックス（Henikoff and Henikoff,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:10915,1989を参照のこと）アラインメント（Ｂ）、１０の期待値（Ｅ）、Ｍ＝５、Ｎ＝−４、および両鎖の比較を使用する。
【００７２】
「ポリペプチド」、「ペプチド」および「タンパク質」は同義的に使用され、アミノ酸残基の高分子を指す。該用語は、１つ以上のアミノ酸残基が対応する天然に存在するアミノ酸の人工的化学擬似物であるアミノ酸高分子、ならびに天然に存在するアミノ酸高分子および天然に存在しないアミノ酸高分子に当てはまる。
【００７３】
「アミノ酸」は、天然に存在するおよび合成アミノ酸、ならびに天然に存在するアミノ酸に類似の様式で機能するアミノ酸アナログおよびアミノ酸擬似物を指す。天然に存在するアミノ酸は、遺伝子暗号によってコードされるもの、ならびに後に改変される該アミノ酸、例えば、ヒドロキシプロリン、γ−カルボキシグルタミン酸、およびＯ−ホスホセリンである。アミノ酸アナログは、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造、即ち、水素に結合しているα炭素、カルボキシル基、アミノ基、およびＲ基を有する化合物、例えば、ホモセリン、ノルロイシン、メチオニンスルホキシド、メチルメチオニンスルホニウムを指す。そのようなアナログは、改変されたＲ基（例えば、ノルロイシン）または改変されたペプチド骨格を有するが、天然に存在するアミノ酸と同じ基本化学構造を保持する。アミノ酸擬似物は、アミノ酸の一般化学構造とは異なる構造を有するが、天然に存在するアミノ酸に類似の様式で機能する化学化合物を指す。
【００７４】
アミノ酸は、それらの一般に公知の３文字記号またはＩＵＰＡＣ−ＩＵＢ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ  Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎによって推奨される１文字記号のいずれかによって、呼称することができる。同様に、ヌクレオチドは、それらの一般に許容される１文字コードによって呼称することができる。
【００７５】
「保存的に改変された変種」は、アミノ酸および核酸配列の両方に当てはまる。特定の核酸配列に関して、保存的に改変された変種は、同一もしくは本質的に同一なアミノ酸配列をコードする該核酸を指し、または核酸がアミノ酸配列をコードしない場合、本質的に同一な配列を指す。遺伝子暗号の縮重のため、多くの機能的に同一な核酸が任意の所定のタンパク質をコードする。例えば、コドンＧＣＡ、ＧＣＣ、ＧＣＧおよびＧＣＵはすべてアミノ酸のアラニンをコードする。それ故、アラニンがコドンによって特定されるすべての位置において、コドンは、コードされるポリペプチドを変更することなく、記載の対応するコドンのいずれかに変更することができる。そのような核酸の変動は、保存的に修飾された変動の１つの種である「サイレント変動」である。ポリペプチドをコードする本明細書におけるあらゆる核酸配列はまた、核酸の可能なあらゆるサイレント変動を説明する。当業者は、核酸におけるそれぞれのコドン（但し、通常、メチオニンのための唯一のコドンであるＡＵＧ、および通常、トリプトファンのための唯一のコドンＴＧＧを除く）を、機能的に同一の分子を産出するために改変することができることを理解するであろう。従って、ポリペプチドをコードする核酸のそれぞれのサイレント変動が、記載されるそれぞれの配列に内在するが、これは発現産物に関連することであって、実際のプローブ配列には関連しない。
【００７６】
アミノ酸配列に関して、当業者は、コードされた配列における単一のアミノ酸または小さな百分率のアミノ酸を変更、付加、もしくは欠失する、核酸、ペプチド、ポリペプチドまたはタンパク質配列への個々の置換、欠失もしくは付加が、「保存的に改変された変種」であって、ここで、変更は、化学的に類似のアミノ酸によるアミノ酸の置換を生じることを認識するであろう。機能的に類似するアミノ酸を提供する保存的置換の表は、当該分野において公知である。そのような保存的に改変された変種は、本発明の実施態様として、多型変種、種間ホモログ、および対立遺伝子に加えられ、そしてそれらを排除しない。
【００７７】
次の８つのグループはそれぞれ、相互の保存性置換であるアミノ酸を含有する：１）アラニン（Ａ）、グリシン（Ｇ）；２）アスパラギン酸（Ｄ）、グルタミン酸（Ｅ）；３）アスパラギン（Ｎ）、グルタミン（Ｑ）；４）アルギニン（Ｒ）、リジン（Ｋ）；５）イソロイシン（Ｉ）、ロイシン（Ｌ）、メチオニン（Ｍ）、バリン（Ｖ）；６）フェニルアラニン（Ｆ）、チロシン（Ｙ）、トリプトファン（Ｗ）；７）セリン（Ｓ）、スレオニン（Ｔ）；および８）システイン（Ｃ）、メチオニン（Ｍ）（例えば、Creighton,Proteins(1984)を参照のこと）。
【００７８】
ポリペプチド構造のような巨大分子構造については、多様なレベルの編制として説明することができる。この編制の一般的考察については、例えば、Alberts et al.,Molecular Biology of the Cell,3rd ed.,1994)およびCantor and Schimmel,Biophysical Chemistry Part I:The Conformation of Biological Macromolecules,1980を参照のこと。「一次構造」は、特定のペプチドのアミノ酸配列を指す。「二次構造」は、局所的に指示されるポリペプチド内の三次元構造を指す。これらの構造は、一般に、ドメイン、例えば、酵素ドメイン、細胞外ドメイン、膜貫通ドメイン、ポアドメイン、および細胞質尾部ドメインとして公知である。ドメインは、ポリペプチドのコンパクトな単位を形成するポリペプチドの部分であり、そして典型的に、１５〜３５０アミノ酸長である。例示的ドメインとして、酵素活性、例えば、キナーゼドメインを伴うドメインが挙げられる。典型的なドメインは、β−シートおよびα−ヘリックスのストレッチのようなより少ない編制のセクションからなる。「三次構造」は、ポリペプチドのモノマーの完全な三次元構造を指す。「四次構造」は、独立した三次単位の非共有的会合により形成される三次元構造を指す。異方性に関する用語はまた、エネルギーに関する用語として公知である。
【００７９】
特定の核酸配列はまた、「スプライス変種」を暗黙に包含する。同様に、核酸によりコードされる特定のタンパク質は、該核酸のスプライス変種によりコードされる任意のタンパク質を暗黙に包含する。その名が示唆するように「スプライス変種」は、遺伝子のオルタナティブスプライシングの産物である。転写後、最初の核酸転写物は、異なる（代替的）核酸スプライス産物が異なるポリペプチドをコードするようにスプライスされ得る。スプライス変種の産生機構は変動するが、エキソンのオルタナティブスプライシングを含む。読み過ごし転写を介して同じ核酸から誘導される代替的ポリペプチドもまた、この定義に包含される。組換え形態のスプライス産物を含むスプライシング反応の任意の産物が、この定義に含まれる。
【００８０】
例えば、細胞、または核酸、タンパク質、またはベクターに関して使用される場合の「組換え」は、細胞、核酸、タンパク質またはベクターが、異種核酸もしくはタンパク質の導入または生来の核酸またはタンパク質の改変によって改変されていること、あるいは、細胞が、そのようにして改変された細胞から誘導されることを示す。従って、例えば、組換え細胞は、この細胞の生来の（非組換え）形態内において見出されない遺伝子を発現するか、または他の点で異常に発現されるか、不十分に発現されるか、もしくは全く発現されない生来の遺伝子を発現する。
【００８１】
語句「ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」は、典型的に、核酸の複雑な混合物において、プローブがその標的サブ配列にハイブリダイズするが、他の配列にはハイブリダイズしない条件を指す。ストリンジェントな条件は配列依存的であり、そして異なる環境において異なる。配列が長いほど、より高い温度で特異的にハイブリダイズする。核酸のハイブリダイゼーションに対する広範な指針は、Tijssen,“Techniques in Biochemistry and Molecular Biology--Hybridization with Nucleic Probes,”Overview of principles of hybridization and the strategy of nucleic acid assays,1993において見出される。一般的に、ストリンジェントな条件は、規定されたイオン強度ｐＨにおける特異的配列の熱融点（Ｔｍ）より約５〜１０℃低く選択される。Ｔｍは、平衡時に標的に相補的なプローブの５０％が標的配列にハイブリダイズする（標的配列が過剰に存在する場合、Ｔｍで、平衡時にプローブの５０％が占有される）温度（規定されたイオン強度、ｐＨ、および核酸濃度下において）である。ストリンジェントな条件はまた、ホルムアミドのような脱安定化剤の添加によっても達成することができる。選択的または特異的ハイブリダイゼーションについては、ポジティブなシグナルは、バックグラウンドの少なくとも２倍、好ましくはバックグラウンドハイブリダイゼーションの１０倍である。例示的なストリンジェントなハイブリダイゼーション条件は次のとおりであり得る：５０％ホルムアミド、５×ＳＳＣ、および１％ＳＤＳ、４２℃でインキュベートする、または５×ＳＳＣ、１％ＳＤＳ、６５℃でインキュベートする、０．２×ＳＳＣ、および０．１％ＳＤＳ中、６５℃での洗浄を伴う。
【００８２】
ストリンジェントな条件下で相互にハイブリダイズしない核酸は、それらがコードするポリペプチドが実質的に同一である場合、実質的になお同一である。このことは、例えば、核酸のコピーが、遺伝子暗号によって可能になる最大コドン縮重を使用して作製される場合に生じる。そのような場合、核酸は典型的に中程度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下でハイブリダイズする。例示的な「中程度にストリンジェントなハイブリダイゼーション条件」は、４０％ホルムアミド、１Ｍ  ＮａＣｌ、１％ＳＤＳの緩衝液中、３７℃でのハイブリダイゼーション、および１×ＳＳＣ中４５℃での洗浄を含む。ポジティブハイブリダイゼーションはバックグランドの少なくとも２倍である。当業者は、代替的ハイブリダイゼーションおよび洗浄条件を利用して、類似のストリンジェンシーの条件を提供することができることを容易に認識するであろう。ハイブリダイゼーションパラメータを決定するためのさらなる指針が、多くの参考文献、例えば、Ausubel et al、上掲において提供されている。
【００８３】
ＰＣＲでは、約３６℃の温度は低いストリンジェンシーの増幅に典型的であるが、アニーリング温度はプライマーの長さに依存して、約３２℃〜４８℃の間で変動することができる。高いストリンジェンシーＰＣＲ増幅では約６２℃の温度が典型的であるが、高いストリンジェンシーのアニーリング温度は、プライマーの長さおよび特異性に依存して、約５０℃〜約６５℃の範囲であり得る。高いおよび低いストリンジェンシーな増幅の両方のための典型的なサイクル条件は、９０℃〜９５℃、３０秒間〜２分間の変性相、３０秒間〜２分間継続するアニーリング相、および約７２℃、１〜２分間の伸長相を含む。低いおよび高いストリンジェンシーの増幅反応のプロトコルならびに指針は、例えば、Innis et al.,PCR Protocols,A Guide to Methods and Applications,Academic Press,Inc.N.Y.,1990において提供されている。
【００８４】
「医薬的に許容可能な賦形剤」は、一般的に、安全な、非毒性、および所望される医薬的組成物を調製するのに有用である賦形剤を意味し、そして獣医学的用途ならびにヒト医薬的用途に適切である賦形剤を含む。そのような賦形剤は、固体、液体、半固体、またはエアゾル組成物の場合、気体であり得る。
【００８５】
「医薬的に許容可能な塩およびエステル」は、医薬的に許容可能であり、そして所望される薬理学的特性を有する塩およびエステルを意味する。そのような塩として、化合物中に存在する酸性プロトンが無機または有機塩基と反応することが可能である場合に形成され得る塩が挙げられる。適切な無機塩として、アルカリ金属、例えば、ナトリウムおよびカリウム、マグネシウム、カルシウム、ならびにアルミニウムと共に形成されるものが挙げられる。適切な有機塩として、アミン塩基、例えば、エタノールアミン、ジエタノールアミン、トリエタノールアミン、トロメタミン、Ｎメチルグルカミンなどのような有機塩基とともに形成されるものが挙げられる。そのような塩としてまた、無機酸（例えば、塩酸および臭化水素酸）ならびに有機酸（例えば、酢酸、クエン酸、マレイン酸、ならびにメタンスルホン酸およびベンゼンスルホン酸のようなアルカン−およびアレーン−スルホン酸）と共に形成される酸付加塩が挙げられる。医薬的に許容可能なエステルとして、化合物中に存在するカルボキシ、スルホニルオキシ、およびホスホノオキシ基から形成されるエステル、例えば、Ｃ１−６アルキルエステルが挙げられる。２つの酸性基が存在する場合、医薬的に許容可能な塩またはエステルは、モノ酸−モノ塩もしくはエステルまたはジ塩もしくはエステルであり得；そして同様に、２を超える酸性基が存在する場合、そのような基のいくつかまたはすべては、塩化またはエステル化し得る。本発明において命名される化合物は、非塩化もしくは非エステル化形態、または塩化および／あるいはエステル化形態で存在することができ、そしてそのような化合物の命名は、本来の（非塩化および非エステル化）化合物ならびにその医薬的に許容可能な塩およびエステルの両方を含むことが意図される。また、本発明において命名される所定の化合物は、１を超える立体異性体形態で存在することができ、そしてそのような化合物の命名は、すべての単一の立体異性体およびそのような立体異性体のすべての混合物（ラセミでまたはそれ以外のいずれであれ）を含むことが意図される。
【００８６】
「医薬的に許容可能な」、「薬理学的に忍容性の」およびその文法的活用形は、それらが組成物、担体、希釈剤および試薬を指す場合、同義的に使用され、そして組成物の投与を阻止する程度の好ましくない生理学的効果の生成を伴うことなく、材料は、ヒトへもしくはヒトに対しての投与が可能であることを表す。
【００８７】
「治療有効量」は、疾患を処置するために対象に投与される場合、当該疾患の処置を行うのに十分である量を意味する。
【００８８】
明記する場合を除いて、「対象」または「患者」は同義的に使用され、そしてヒト患者および非ヒト霊長類のような哺乳動物、ならびにウサギ、ラット、およびマウスのような実験動物、ならびに他の動物を指す。従って、本明細書において使用する用語「対象」または「患者」は、組成物を投与することができる任意の哺乳動物患者または対象を意味する。本発明のいくつかの実施態様では、患者は、新生物疾患、自己免疫疾患、細胞涸渇性放射線もしくは化学療法、感染性疾患、または疾患に対して低減された耐性を生じる症状、例えば、ＨＩＶを患う。本発明の例示的実施態様では、方法に従って、１つ以上のサイトカイン抗体複合体を含んでなる医薬的組成物による処置のための非験体患者を同定するために、許容されるスクリーニング方法を用いて、対象における現存の疾患または病態の状態、または標的化された、もしくは疑わしい疾患または症状に関連する危険因子を決定する。これらのスクリーニング方法として、例えば、どの対象が疾患を患っているかを決定するための試験が挙げられる。これらおよび他の日常的方法は、臨床医が治療を必要する対象を選択することを可能にする。
【００８９】
同じファミリーおよび／または同じファミリーメンバーから適切なフレームワーク領域を選択した後、起源となる種由来のＣＤＲをハイブリッドフレームワーク領域にグラフト化することによって、重および軽鎖可変領域のいずれか一方または両方を生成する。上記の態様のいずれかに関してハイブリッド可変鎖領域を有するハイブリッド抗体またはハイブリッド抗体フラグメントの集成は、当業者に既知の従来の方法を使用して達成することができる。例えば、本明細書に記載のハイブリッド可変ドメインをコードするＤＮＡ配列（即ち、標的種および起源となる種由来のＣＤＲに基づくフレームワーク）は、オリゴヌクレオチド合成および／またはＰＣＲによって生成することができる。ＣＤＲ領域をコードする核酸はまた、適切な制限酵素を使用して起源となる種の抗体から単離し、そして適切な連結酵素で連結することによって、標的種のフレームワークに連結することができる。あるいは、起源となる種の抗体の可変鎖のフレームワーク領域は、部位特異的変異誘発によって変更することができる。
【００９０】
ハイブリッドは各フレームワーク領域に対応する複数の候補の間の選択物から構築されるため、本明細書に記載の原理に従って、構築に従う配列の多くの組み合わせが存在する。従って、異なる組み合わせの個々のフレームワーク領域を伴うメンバーを有するハイブリッドのライブラリーを集成することができる。そのようなライブラリーは、配列の電子データベースコレクションまたはハイブリッドの物理的コレクションであり得る。
【００９１】
物理的な抗体または抗体フラグメントライブラリーの集成は、好ましくは、合成オリゴヌクレオチドを使用して達成される。１つの例では、オリゴヌクレオチドがアニーリングし、そしてポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）を伴うようなポリメラーゼによって充填され得るように、重複領域を有するようにオリゴヌクレオチドを設計する。ＶＬおよびＶＨ遺伝子挿入を作製するために、重複伸長の複数の工程を実施する。フラグメントが重複伸長によって融合され得、完全長の軽鎖およびＦｄ重鎖フラグメントを生成するように、ヒト定常ドメインと重複する領域を伴う当該フラグメントを設計する。軽および重Ｆｄ鎖領域を、重複伸長によって共に連結して、ディスプレイベクターにクローニングすべき単一のＦａｂライブラリー挿入物を作製することができる。ヒト化ライブラリー遺伝子の集成のための代替的方法もまた、使用することができる。例えば、リガーゼ連鎖反応（ＬＣＲ）アプローチを使用して、重複オリゴヌクレオチドからライブラリーを集成することができる。Chalmers et al.,Biotechniques,30-2:249-252,2001。
【００９２】
多様な形態の抗体フラグメントを作製し、そして適切なベクターにクローニングして、ハイブリッド抗体ライブラリーまたはハイブリッド抗体フラグメントライブラリーを作製することができる。例えば、フレーム内に必要な定常ドメインの残留部分を含有するベクターに、可変遺伝子をクローニングすることができる。クローニングすることができるさらなるフラグメントの例として、軽鎖全体、重鎖のＦｃ部分、または軽鎖および重鎖の両方のＦｃコード配列を含有するフラグメントが挙げられる。
【００９３】
任意の選択ディスプレイシステムは、本開示内容に従うライブラリーと共に使用することができる。大きなライブラリーの所望されるメンバーを単離するための選択プロトコルは、ファージディスプレイ技術によって象徴されるように、当該技術分野において公知である。多様なペプチド配列が糸状バクテリオファージの表面上にディスプレイされるそのようなシステムは、標的抗原に結合する特異的抗体フラグメントのインビトロでの選択および増幅のための抗体フラグメント（およびそれらをコードするヌクレオチド配列）のライブラリーを作製するのに有用であることが証明されている。Scott et al.,Science,249:386,1990。ＶＨおよびＶＬ領域をコードするヌクレオチド配列は、それらを大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のペリプラズム空間に指令するリーダーシグナルをコードする遺伝子フラグメントに連結され、その結果として、得られる抗体フラグメントは、典型的に、バクテリオファージコートタンパク質（例えば、ｐＩＩＩまたはｐＶＩＩＩ）に対する融合として、バクテリオファージの表面上にディスプレイされる。あるいは、抗体フラグメントは、λファージまたはＴ７カプシド（ファージボディ）の外部にディスプレイされる。ファージに基づくディスプレイシステムの利点は、それらが生物系であるため、選択されたライブラリーメンバーは、細菌細胞において選択されたライブラリーメンバーを含有するファージを増殖させることによって、簡便に増幅することができることである。さらに加えて、ポリペプチドライブラリーメンバーをコードするヌクレオチド配列はファージまたはファージミドベクターに含有されるため、配列決定、発現およびそれ以後の遺伝子操作は比較的簡単である。バクテリオファージ抗体ディスプレイライブラリーおよびλファージ発現ライブラリーの構築のための方法は、当該技術分野において周知である。McCafferty et al.,Nature,348:552,1990;Kang et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.,88:4363,1991。
【００９４】
本発明はさらに、本発明のサイトカインまたはリンフォカインに特異的に結合する抗体およびＴ細胞抗原受容体（ＴＣＲ）に関する。本発明の抗体として、ＩｇＧ（ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、およびＩｇＧ４を含む）、ＩｇＡ（ＩｇＡ１およびＩｇＡ２を含む）、ＩｇＤ、ＩｇＥ、またはＩｇＭ、およびＩｇＹが挙げられる。本明細書において使用する用語「抗体」（Ａｂ）は、一本鎖抗体全体、およびその抗原結合フラグメントを含む抗体全体を含むことが意図される。最も好ましくは、抗体は、本発明のヒト抗原結合抗体フラグメントであり、そして一本鎖抗体、ジスルフィド結合Ｆｖｓ（ｓｄＦｖ）、Ｆｃドメインを含んでなるフラグメント、およびＶＬまたはＶＨドメインのいずれかを含んでなるフラグメントを含むが、これらに限定されない。抗体は、トリおよび哺乳動物を含む任意の動物起源由来であり得る。好ましくは、抗体は、ヒト、マウス、ウサギ、ヤギ、モルモット、ラクダ、ウマ、またはニワトリである。
【００９５】
一本鎖抗体を含む抗原結合抗体フラグメントは、可変領域を単独でまたは次のものの全体もしくは部分：ヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインとの組み合わせで含んでなることができる。また、本発明には、可変領域およびヒンジ領域、ＣＨ１、ＣＨ２、およびＣＨ３ドメインの任意の組み合わせが含まれる。本発明はまた、本発明のポリペプチドに特異的に結合するモノクローナル、ポリクローナル、キメラ、ヒト化、ならびにヒトモノクローナルおよびヒトポリクローナル抗体を含む。本発明は、本発明の抗体に対して抗イディオタイプである抗体を含む。
【００９６】
本発明の抗体は、単一特異性、二重特異性、三重特異性またはそれを超える多重特異性であり得る。多重特異性抗体は、本発明のポリペプチドの異なるエピトープに特異的であり得るか、または本発明のポリペプチド、ならびに異種ポリペプチドもしくは固相支持体材料のような異種の組成物の両方に特異的であり得る。例えば、WO93/17715;WO92/08802;WO91/00360;WO92/05793;Tutt et al.,J.Immunol.147:60-69,1991;U.S.Pat.Nos.5,573,920;4,474,893;5,601,819;4,714,681;4,925,648、それぞれ、本明細書においてその全体がすべての目的のために参照により援用される；Kostelny et al.,J.Immunol.148:1547-1553,1992を参照のこと。
【００９７】
本発明の抗体は、抗体が認識するかまたは特異的に結合する本発明のエピトープもしくはポリペプチドの部分について、説明あるいは特定することができる。エピトープまたはポリペプチド部分は、本明細書に記載のように、例えば、Ｎ末端およびＣ末端部分、隣接するアミノ酸残基のサイズによって特定することができる。また、本発明の任意のエピトープまたはポリペプチドに特異的に結合する抗体を除外しておくこともできる。従って、本発明は、本発明のポリペプチドに特異的に結合する抗体を含むが、この抗体の除外も可能である。
【００９８】
本発明の抗体はまた、それらの交差反応性について説明または特定することができる。本発明のポリペプチドの他の任意のアナログ、オーソログ、またはホモログに結合しない抗体が含まれる。本発明のポリペプチドに対して（当該技術分野において公知および本明細書に記載の方法を使用して算出されるように）９５％未満、９０％未満、８５％未満、８０％未満、７５％未満、７０％未満、６５％未満、６０％未満、５５％未満、および５０％未満の同一性を伴うポリペプチドに結合しない抗体もまた、本発明に含まれる。さらに、（本明細書に記載のように）ストリンジェントなハイブリダイゼーション条件下で本発明のポリヌクレオチドにハイブリダイズするポリヌクレオチドによってコードされるポリペプチドにのみ結合する抗体も本発明に含まれる。本発明の抗体はまた、それらの結合親和性について説明または特定することができる。好適な結合親和性として、５×１０−６Ｍ、１０−６Ｍ、５×１０−７Ｍ、１０−７Ｍ、５×１０−８Ｍ、１０−８Ｍ、５×１０−９Ｍ、１０−９Ｍ、５×１０−１０Ｍ、１０−１０Ｍ、５×１０−１１Ｍ、１０−１１Ｍ、５×１０−１２Ｍ、１０−１２Ｍ、５×１０−１３Ｍ、１０−１３Ｍ、５×１０−１４Ｍ、１０−１４Ｍ、５×１０−１５Ｍ、および１０−１５Ｍ未満の解離定数またはＫｄを伴うものが挙げられる。
【００９９】
サイトカイン抗体複合体を形成するサイトカインに対する抗体は、インビトロならびにインビボでの診断および治療方法の両方を含む本発明のポリペプチドを精製、検出、および標的化するための当該技術分野において公知の方法を含むがこれらに限定されない用途を有する。例えば、抗体は、生物学的サンプル中の本発明のポリペプチドを定量的および定性的に測定するためのイムノアッセイにおける用途を有する。例えば、Harlow and Lane、上掲（本明細書においてその全体がすべての目的のために参照により援用される）を参照のこと。
【０１００】
本発明の抗体は、単独でまたは他の組成物との組み合わせで使用することができる。抗体は、さらに、ＮもしくはＣ末端において異種ポリペプチドに組み換えにより融合するか、またはポリペプチドもしくは他の組成物に化学的にコンジュゲート（共有および非共有コンジュゲーションを含む）することができる。例えば、抗体は、サイトカインもしくはリンフォカイン分子に組み換えにより融合またはコンジュゲートすることができる。例えば、本発明の抗体は、検出アッセイにおける標識物として有用な分子および異種ポリペプチド、薬剤、もしくは毒素のようなエフェクター分子に組み換えにより融合またはコンジュゲートすることができる。例えば、WO92/08495;WO91/14438;WO89/12624;U.S.Pat.No.5,314,995;およびEP0396387（それぞれ、本明細書においてその全体がすべての目的のために参照により援用される）を参照のこと。
【０１０１】
本発明のサイトカインまたはリンフォカインに対する抗体は、当該分野において既知の適切な任意の方法によって調製することができる。例えば、ポリクローナル抗体を含有する血清の産生を誘導するために、本発明のサイトカインもしくはリンフォカインまたはその抗原性フラグメントを動物に投与することができる。用語「モノクローナル抗体」は、ハイブリドーマ技術を介して産生される抗体に限定されない。用語「モノクローナル抗体」は、真核生物クローン、原核生物クローンまたはファージクローンを含む単一のクローンから誘導される抗体を指し、それが産生される方法を指すものではない。モノクローナル抗体は、ハイブリドーマ、組換え体、およびファージディスプレイ技術の使用を含む当該分野において公知のさまざまな技術を使用して調製することができる。
【０１０２】
ハイブリドーマ技術には、当該分野において公知であり、そしてHarlow and Lane、上掲;Hammerling et al.,Monoclonal Antibodies and T-Cell Hybridomas, 563-681,1981（前記文献は、それらの全体が参照により援用される）において教示されるものが含まれる。（Ｆａｂフラグメントを産生するために）パパインまたは（Ｆ（ａｂ’）２フラグメントを産生するために）ペプシンといった酵素を使用して、タンパク質分解切断によりＦａｂおよびＦ（ａｂ’）２フラグメントを産生することができる。
【０１０３】
あるいは、サイトカインまたはリンフォカインに対する抗体は、組み換えＤＮＡおよびファージディスプレイ技術の適用または当該技術分野において公知の方法を使用する合成化学を介して、産生することができる。例えば、本発明の抗体は、当該分野において公知の多様なファージディスプレイ方法を使用して、調製することができる。ファージディスプレイ方法では、機能的抗体ドメインが、それらをコードするポリヌクレオチド配列を担持するファージ粒子の表面上にディスプレイされる。所望される結合性特性を伴うファージは、抗原、典型的には、固相表面またはビーズに結合または捕捉される抗原で直接選択することによって、（例えば、ヒトもしくはマウスの）レパートリーあるいはコンビナトリアル抗体ライブラリーから選択される。これらの方法の中で使用されるファージは、典型的には、Ｆａｂ、Ｆｖまたはジスルフィドで安定化されたＦｂ抗体ドメインがファージ遺伝子ＩＩＩまたは遺伝子ＶＩＩＩタンパク質のいずれかに組換えにより融合された状態のｆｄおよびＭ１３を含む糸状ファージである。本発明の抗体を作製するために使用することができるファージディスプレイ方法の例として、Brinkman et al.,J.Immunol.Methods182:41-50,1995;Ames et al.,J.Immunol.Methods 184:177-186,1995;Kettleborough et al.,Eur.J.Immunol.24:952-958,1994;Persic et al.,Gene 187:9-18,1997;Burton et al.,Advances in Immunology 57:191-280,1994;PCT/GB91/01134;WO90/02809;WO91/10737;WO92/01047;WO92/18619;WO93/11236;WO95/15982;WO95/20401;およびU.S.Pat.Nos.5,698,426;5,223,409;5,403,484;5,580,717;5,427,908;5,750,753;5,821,047;5,571,698;5,427,908;5,516,637;5,780,225;5,658,727および5,733,743（それぞれ、本明細書においてその全体がすべての目的のために参照により援用される）において開示されたものが挙げられる。
【０１０４】
上記の参考文献に記載のように、ファージ選択後、ファージ由来の抗体コーディング領域を、単離し、そしてヒト抗体を含む抗体全体、または他の任意の所望される抗原結合性フラグメントを作製するために使用し、そして哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母、および細菌を含む任意の所望される宿主において発現させることができる。例えば、抗体のＦｃ領域を含む抗体フラグメントを組み換えにより産生させるための技術を、当該技術分野において公知の方法を使用して用いることができる。例えば、WO92/22324;Mullinax et al.,BioTechniques12:864-869,1992;およびSawai et al.,AJRI34:26-34,1995;およびBetter et al.,Science240:1041-1043,1988において開示されているもののような当該分野において公知の方法を使用して、Ｆａｂ、Ｆａｂ’およびＦ（ａｂ’）２フラグメントを組換えにより産生させるための技術を用いることができる。
【０１０５】
一本鎖Ｆｖｓおよび抗体を産生するのに使用することができる技術の例として、U.S.Pat.Nos.4,946,778および5,258,498（それぞれ、本明細書においてその全体がすべての目的のために参照により援用される）；Huston et al.,Methods in Enzymology,203:46-88,1991;Shu,L.et al.,PNAS90:7995-7999,1993;およびSkerra et al.,Science240:1038-1040,1988に記述されているものが挙げられる。ヒトにおける抗体のインビボでの使用およびインビトロ検出アッセイを含むいくつかの用途においては、キメラ、ヒト化またはヒト抗体を使用することが好適であり得る。キメラ抗体を産生させるための方法は、当該分野において公知である。例えば、Morrison,Science229:1202,1985;Oi et al.,BioTechniques4:214,1986;Gillies et al.,J.Immunol.Methods,125:191-202,1989;およびU.S.Pat.No.5,807,715を参照のこと。抗体は、ＣＤＲグラフト化（EP0239400;WO91/09967;ならびにU.S.Pat.Nos.5,530,101および5,585,089）、ベニアリング（ｖｅｎｅｅｒｉｎｇ）または表面置換（ｒｅｓｕｒｆａｃｉｎｇ）（EP0592106;EP0519596;Padlan E.A.,Molecular Immunology,28:489-498,1991;Studnicka et al.,Protein Engineering7:805-814,1994;Roguska et al.,PNAS91:969-973,1994）、およびチェインシャフリング（ｃｈａｉｎ  ｓｈｕｆｆｌｉｎｇ）（U.S.Pat.No.5,565,332）を含むさまざまな技術を使用して、ヒト化することができる。ヒト抗体は、上記のファージディスプレイ方法を含む当該技術分野において公知のさまざまな方法によって作製することができる。また、U.S.Pat.Nos.4,444,887;4,716,111;5,545,806;および5,814,318;ならびにWO98/46645;WO98/50433;WO98/24893;WO98/16654;WO96/34096;WO96/33735;およびWO91/10741（それぞれ、本明細書においてその全体がすべての目的のために参照により援用される）を参照のこと。
【０１０６】
さらに、本発明のサイトカインもしくはリンフォカインに組換えにより融合されたか、または化学的にコンジュゲートされた（共有および非共有コンジュゲーションの両方を含む）抗体も本発明に含まれる。抗体は、本発明のサイトカインまたはリンフォカイン以外の抗原に特異的であり得る。例えば、本発明のポリペプチドを、特定の細胞表面受容体に特異的な抗体に融合またはコンジュゲートすることによって、インビトロもしくはインビボのいずれかで特定の細胞型に対して本発明のサイトカインまたはリンフォカインを標的化するために、抗体を使用することができる。本発明のポリペプチドに融合またはコンジュゲートされた抗体はまた、当該分野において公知の方法を使用するインビトロ免疫アッセイおよび精製方法においても使用することができる。例えば、Harbor et al.、上掲、およびWO93/21232;EP0439095;Naramura et al.,Immunol.Lett.39:91-99,1994;U.S.Pat.No.5,474,981（本明細書においてその全体がすべての目的のために参照により援用される）；Gillies et al.,PNAS89:1428-1432,1992;Fell et al.,J.Immunol.146:2446-2452,1991を参照のこと。
【０１０７】
本発明はさらに、抗体Ｆｃ領域の抗体ドメイン、もしくはその部分に融合またはコンジュゲートされた本発明のサイトカインあるいはリンフォカインを含んでなる組成物を含む。本発明のポリペプチドに融合された抗体部分は、ヒンジ領域、ＣＨ１ドメイン、ＣＨ２ドメイン、およびＣＨ３ドメインまたはそのドメイン全体もしくはその部分のあらゆる組合せを含んでなることができる。本発明のサイトカインもしくはリンフォカインは、ポリペプチドのインビボでの半減期を増加させるためか、または当該分野において公知の方法を使用する免疫アッセイにおける使用のために上記の抗体部分に融合あるいはコンジュゲートすることができる。ポリペプチドはまた、多量体を形成するために上記の抗体部分に融合またはコンジュゲートさせることもできる。例えば、本発明のポリペプチドに融合されたＦｃ部分は、Ｆｃ部分間のジスルフィド結合を介して二量体を形成することができる。より高度の多量体形態は、ＩｇＡおよびＩｇＭの部分にポリペプチドを融合することによって作製することができる。本発明のサイトカイン抗体複合体を抗体部分に融合またはコンジュゲートするための方法は、当該分野において公知である。例えば、U.S.Pat.Nos.5,336,603;5,622,929;5,359,046;5,349,053;5,447,851;5,112,946;EP0307434、EP0367166;WO96/04388;およびWO91/06570(それぞれ、本明細書においてその全体がすべての目的のために参照により援用される);Ashkenazi et al.,PNAS,88:10535-10539,1991;Zheng et al.,J.Immunol.,154:5590-5600,1995;ならびにVil et al.,PNAS,89:11337-11341,1992を参照のこと。
【０１０８】
本発明はさらに、本発明のサイトカインまたはリンフォカインのアゴニストとして作用する抗体に関する。例えば、本発明は、サイトカインまたはリンフォカインの受容体を活性化する抗体を含む。これらの抗体は、リガンド仲介受容体活性化による影響を受ける生物学的活性のすべてか、またはそれより少ない生物学的活性のいずれかに対するアゴニストとして作用することができる。抗体は、本明細書において開示される特定の活性を含んでなる生物学的活性を対象としたアゴニストとして特定することができる。上記の抗体アゴニストは、当該分野において公知の方法を使用して作製することができる。例えば、WO96/40281;U.S.Pat.No.5,811,097（それぞれ、本明細書においてその全体がすべての目的のために参照により援用される）；Deng et al.,Blood92:1981-1988,1998;Chen,et al.,Cancer Res.,58:3668-3678,1998;Harrop et al.,J.Immunol.161:1786-1794,1998;Zhu et al.,Cancer Res.,58:3209-3214,1998;Yoon,et al.,J.Immunol.,160:3170-3179,1998;Prat et al.,J.Cell.Sci.,111:237-247,1998;Pitard et al.,J.Immunol.Methods,205:177-190,1997;Liautard et al.,Cytokinde,9:233-241,1997;Carlson et al.,J.Biol.Chem.,272:11295-11301,1997;Taryman et al.,Neuron,14:755-762,1995;Muller et al.,Structure,6:1153-1167,1998;Bartunek et al.,Cytokinem,8:14-20,1996を参照のこと。上記で考察した通り、転移性（ｍｅｔａｔｓｔａｔｉｃ）細胞上のサイトカインまたはリンフォカインに対する抗体は、次いで、当業者に周知の技術を使用して、本発明の実施態様のようなポリペプチドを「模倣」する抗イディオタイプ抗体を作製するために利用することができる。（例えば、Greenspan et al.,FASEB J.7:437-444,1989およびNissinoff,J.Immunol.147:2429-2438,1991を参照のこと）。例えば、結合し、そしてポリペプチド多量体化および／または本発明の実施態様のようなポリペプチドのリガンドへの結合を競合的に阻害する抗体を使用して、ポリペプチド多量体化および／または結合ドメインを「模倣」する抗イディオタイプを作製し、その結果、ポリペプチドおよび／またはそのリガンドを中和することができる。抗イディオタイプまたはそのような抗イディオタイプのＦａｂフラグメントのそのような中和は、ポリペプチドリガンドを中和するための治療レジメンに使用することができる。例えば、そのような抗イディオタイプ抗体は、本発明の実施態様のようなポリペプチドに結合させるか、またはそのリガンド／受容体に結合させ、かくしてその生物学的活性を阻止するのに使用することができる。
【０１０９】
転移性細胞もしくは感染細胞上のサイトカイン受容体、またはマクロファージ細胞上のＦｃ受容体の「インヒビター」、「アクチベーター」、および「モジュレーター」は、受容体結合性もしくはシグナル伝達のためのインビトロおよびインビボアッセイを使用して同定される、それぞれ、阻害、活性化、またはモジュレート分子、例えば、リガンド、アゴニスト、アンタゴニスト、ならびにそれらのホモログおよび擬似物を指すために使用される。
【０１１０】
「モジュレーター」はインヒビターおよびアクチベーターを含む。インヒビターは、例えば、結合して、部分的もしく全体的に刺激を阻止するか、活性化を減少、防止、遅延するか、細胞受容体上のサイトカインまたはリンフォカインの活性を不活化、脱感作、あるいはダウンレギュレートする薬剤、例えば、アンタゴニストである。アクチベーターは、例えば、結合して、活性化を刺激、増加、開放、活性化、容易化、増強するか、細胞受容体上のサイトカインもしくはリンフォカインの活性を感作またはアップレギュレートする薬剤、例えば、アゴニストである。モジュレーターは、例えば、サイトカインまたはリンフォカイン受容体と：アクチベーターもしくはインヒビター、受容体に結合するタンパク質との相互作用を変更する薬剤を含み、タンパク質、ペプチド、脂質、炭水化物、多糖、または上記の組み合わせ、例えば、リポタンパク質、糖タンパク質などが含まれる。モジュレーターは、例えば、活性の変更された天然に存在するサイトカインまたはリンフォカインの遺伝子改変バージョン、ならびに天然に存在するおよび合成のリガンド、アンタゴニスト、アゴニスト、小さな化学分子などを含む。インヒビターおよびアクチベーターのためのそのようなアッセイは、例えば、サイトカインまたはリンフォカイン受容体を発現する細胞に推定モジュレーター化合物を適用し、次いで、本明細書に記載のサイトカインまたはリンフォカインシグナル伝達に対する機能的効果を決定することを含む。活性化または阻害の程度を調べるために、潜在的アクチベーター、インヒビター、もしくはモジュレーターにより処置される受容体を含んでなるサンプルまたはアッセイは、インヒビター、アクチベーター、もしくはモジュレーターを伴わないコントロールサンプルと比較される。コントロールサンプル（インヒビターで処置されていない）は、１００％の相対的受容体活性値を割り当てることができる。コントロールに対する受容体活性値が約８０％、任意に５０％または２５〜０％である場合、受容体の阻害が達成される。コントロールに対する受容体活性値が１１０％、任意に１５０％、任意に２００〜５００％、または１０００〜３０００％高い場合、受容体の活性化が達成される。
【０１１１】
サイトカインまたはリンフォカイン受容体に結合する分子の能力は、例えば、アッセイプレート上にコートされる活性化受容体イムノアドヘシンに結合する推定リガンドの能力によって決定することができる。結合性の特異性は、非活性化受容体に対する結合性を比較することによって決定することができる。
【０１１２】
１つの実施態様では、サイトカインまたはリンフォカイン受容体に結合する抗体は、リガンドもしくは受容体のいずれかを固定化することによって、アッセイすることができる。例えば、アッセイは、Ｈｉｓタグに融合されたサイトカインまたはリンフォカイン受容体をＮｉ活性化ＮＴＡ樹脂ビーズに固定化することを含み得る。抗体は、適切な緩衝液で添加することができ、そしてビーズは、ある期間、所定の温度でインキュベートすることができる。非結合型材料を取り出すための洗浄後、結合型タンパク質を、例えば、ＳＤＳ、高いｐＨを伴う緩衝液などで遊離させ、そして分析することができる。
【０１１３】
組み換え抗体および受容体の発現
サイトカインまたはリンフォカインに対するキメラ、ヒト化およびヒト抗体ならびに受容体、例えば、サイトカイン抗体複合体およびサイトカイン受容体複合体は、典型的に、組み換え発現によって産生される。組み換えポリヌクレオチド構築物は、典型的に、天然関連または異種のプロモーター領域を含む抗体鎖のコード配列に作動可能に連結された発現制御配列を含む。好ましくは、発現制御配列は、真核宿主細胞を形質転換またはトランスフェクトすることが可能なベクター中の真核生物のプロモーター系である。一旦、ベクターが適切な宿主に組み入れられたら、宿主は、ヌクレオチド配列の高レベルの発現、ならびに交差反応する抗体の回収および精製に適切な条件下で維持される。U.S.Application No.20020199213（本明細書においてその全体がすべての目的のために参照により援用される）を参照のこと。
【０１１４】
これらの発現ベクターは、典型的に、エピソームまたは宿主染色体ＤＮＡの組み込み部分のいずれかとして、宿主生物体において複製可能である。一般に、発現ベクターは、所望されるＤＮＡ配列で形質転換されたそれらの細胞の検出を可能にする選択マーカー、例えば、アンピシリン耐性またはハイグロマイシン耐性を含有する。
【０１１５】
大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）は、本発明のＤＮＡ配列をクローニングするのに特に有用な１つの原核生物宿主である。酵母のような微生物もまた、発現に有用である。サッカロマイセス（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ）は、所望される発現制御配列、複製開始点、終結配列などを有する適切なベクターを伴う好適な酵母宿主である。典型的なプロモーターとして、３−ホスホグリセリン酸キナーゼおよび他の糖分解酵素が挙げられる。誘導性酵母プロモーターとして、とりわけ、アルコールデヒドロゲナーゼ、イソシトクロムＣ、ならびにマルトースおよびガラクトース利用を担う酵素由来のプロモーターが挙げられる。
【０１１６】
哺乳動物細胞は、免疫グロブリンおよびサイトカイン受容体またはそれらのフラグメントをコードするヌクレオチドセグメントを発現するための好適な宿主である。Winnacker, From Genes To Clones,VCH Publishers,NY,1987を参照のこと。無傷（ｉｎｔａｃｔ）な異種タンパク質を分泌することが可能な多くの適切な宿主細胞系統は、当該分野において開発されており、そしてチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞系統、多様なＣＯＳ細胞系統、ヒーラ（ＨｅＬａ）細胞、Ｌ細胞および骨髄腫細胞系統を含む。好ましくは、細胞は非ヒトである。これらの細胞の発現ベクターとして、複製開始点、プロモーター、エンハンサーのような発現制御配列、ならびにリボゾーム結合部位、ＲＮＡスプライス部位、ポリアデニル化部位、および転写ターミネーター配列のような必要なプロセシング情報部位を挙げることができる。Queen et al.,Immunol.Rev.89:49,1986。好適な発現制御配列は、内因性遺伝子、サイトメガロウイルス、ＳＶ４０、アデノウイルス、ウシパピローマウイルスなど由来のプロモーターである。Co,et al.,J Immunol.148:1149,1992。
【０１１７】
あるいは、抗体ならびにサイトカイン受容体コード配列は、トランスジェニック動物のゲノムへの導入および以後のトランスジェニック動物の乳汁における発現のために導入遺伝子に組み入れることができる。例えば、U.S.Pat.Nos.5,741,957;5,304,489;および5,849,992（それぞれ、本明細書においてその全体がすべての目的のために参照により援用される）を参照のこと。適切な導入遺伝子は、作動可能な連結で、カゼインまたはβラクトグロブリンのような乳腺特異的遺伝子由来のプロモーターおよびエンハンサーを伴う軽ならびに／あるいは重鎖のコード配列を含む。
【０１１８】
目的のＤＮＡセグメントを含有するベクターは、細胞宿主のタイプに依存する周知の方法によって、宿主細胞にトランスファーすることができる。例えば、塩化カルシウムトランスフェクションは一般に原核細胞のために利用される一方、リン酸カルシウム処理、エレクトロポレーション、リポフェクション、バイオリスティックスまたはウイルス性トランスフェクション（ｖｉｒａｌ−ｂａｓｅｄ  ｔｒａｎｓｆｅｃｔｉｏｎ）をその他の細胞宿主のために利用することができる。哺乳動物細胞を形質転換するために使用される他の方法として、ポリブレン（ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ）、プロトプラスト融合、リポソーム、エレクトロポレーション、およびマイクロインジェクションの使用が挙げられる（一般的に、Sambrook et al.,Molecular Cloningを参照のこと）。トランスジェニック動物の生成では、導入遺伝子を受精卵母細胞にマイクロインジェクトすることができるか、または胚性幹細胞のゲノム、および脱核卵母細胞にトランスファーされたそのような細胞の核に組み入れることができる。
【０１１９】
一旦、発現したら、抗体および受容体の回収物を培養培地および宿主細胞から精製する。抗体および受容体は、ＨＰＬＣ精製、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などを含む当該分野の標準的な手順に従って精製することができる。通常、抗体鎖はシグナル配列を伴って発現され、それ故、培養培地に放出される。しかし、抗体鎖が天然では宿主細胞によって分泌されない場合、穏やかな界面活性剤による処置によって、抗体鎖を放出させることができる。次いで、硫酸アンモニウム沈殿、固定化された標的に対するアフィニティークロマトグラフィー、カラムクロマトグラフィー、ゲル電気泳動などを含む従来の方法によって、抗体鎖を精製することができる（一般的に、Scopes,Protein Purification,Springer-Verlag,N.Y.,1982を参照のこと）。
【０１２０】
上記の方法により、選択した標的に特異的な親和性を有する抗体鎖をコードする核酸配列のライブラリーが生じる。核酸のライブラリーは、典型的に、少なくとも５、１０、２０、５０、１００、１０００、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、または１０９の異なるメンバーを有する。通常、ライブラリーの全配列のうちの２５または５０％を超えて構成する単一のメンバーは存在しない。典型的に、ライブラリーメンバーの少なくとも２５、５０％、７５、９０、９５、９９または９９．９％は、標的分子に対して特異的親和性を伴う抗体鎖をコードする。二本鎖抗体ライブラリーの場合、重および軽鎖のそれぞれをコードする核酸セグメントの対がライブラリーメンバーとみなされる。核酸ライブラリーは、任意のベクターの成分として遊離形態で存在するか、またはベクターの成分として宿主細胞にトランスフェクトされ得る。
【０１２１】
核酸ライブラリーを発現させて、標的に対して特異的親和性を有する抗体のポリクローナルライブラリーを作製することができる。そのようなライブラリーの組成は、ヌクレオチドライブラリーの組成から決定される。それ故、そのようなライブラリーは、典型的に、異なるアミノ酸組成を伴う少なくとも５、１０、２０、５０、１００、１０００、１０４、１０５、１０６、１０７、１０８、または１０９のメンバーを有する。通常、ライブラリーの全ポリヌクレオチドのうちの２５または５０％を超えて構成する単一のメンバーは存在しない。標的に対して特異的親和性を有する抗体鎖ライブラリーにおける抗体鎖の百分率は、典型的に、抗体鎖をコードする対応する核酸の百分率より低い。この差異は、適切なフォールディングを支持するのに適切な一次アミノ酸配列を有するにもかかわらず、すべてのポリペプチドが結合に適切な構造に折り畳まれるわけではないという事実による。いくつかのライブラリーでは、少なくとも２５、５０、７５、９０、９５、９９または９９．９％の抗体鎖が、標的分子に対して特異的親和性を有する。さらに、多重鎖抗体のライブラリーでは、（Ｆａｂまたは無傷（ｉｎｔａｃｔ）な抗体のような）各抗体がライブラリーメンバーとみなされる。異なる抗体鎖は、結合特異性および標的に対する親和性の点で相互に異なる。そのようないくつかのライブラリーは、同じ抗原上の異なるエピトープに結合するメンバーを含んでなる。そのようないくつかのライブラリーは、相互に競合しない同じ抗原に結合する少なくとも２つのメンバーを含んでなる。
【０１２２】
上記の方法から生じるヒト抗体のポリクローナルライブラリーは、本ライブラリーでは高い親和性のバインダーが高い百分率で存在すること、および本ライブラリーは、典型的に、天然の集団において存在する抗体とは同じ多様性を示さないことの両方の点で、ヒト抗体の天然の集団とは区別される。本ライブラリーにおいて多様性が減少するのは、非ヒトトランスジェニック動物により提供される供給源材料がすべてのヒト免疫グロブリン遺伝子を含んでいるわけではないためである。例えば、いくつかのポリクローナル抗体ライブラリーは、λ軽鎖を有する抗体を含まない。本発明の実施態様としてのいくつかのポリクローナル抗体ライブラリーは、１０、２０、３０または４０より少ないＶＨ遺伝子によってコードされる抗体重鎖を有する。本発明の実施態様としてのいくつかのポリクローナル抗体ライブラリーは、１０、２０、３０または４０より少ないＶＬ遺伝子によってコードされる抗体軽鎖を有する。
【０１２３】
改変された抗体および受容体
Ｔ細胞集団を増加するためおよび疾患の処置のためのサイトカインまたはリンフォカインに対する改変された抗体ならびにサイトカインまたはリンフォカインに対する受容体もまた、本発明に含まれる。
【０１２４】
「改変された抗体」は、親和性、安定性、もしくは結合価を増強するための分子進化から誘導されるダイアボディ、トリアボディ（ｔｒｉａｂｏｄｉｅｓ）あるいは二重特異性抗体、ＰＥＧ化された誘導体、変種を含むが、これらに限定されない化学的にかまたは異なる形式への分子操作によって最適化された抗体および抗体フラグメントを指す。改変された抗体はまた、例えば、抗体の部分を欠失、付加、または置換することによって改変されているモノクローナル抗体、キメラ抗体、およびヒト化抗体のような形式を含む。例えば、抗体は、定常領域を欠失し、そしてそれを、抗体の半減期、例えば、血清中半減期、安定性または親和性を増加するように意図された定常領域に置き換えることによって、改変することができる。
【０１２５】
サイトカイン／抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体を使用して、（例えば、エフェクター細胞をリクルートするために）所定の生物学的応答を改変するか、もしくは生物学的応答を作製することができる。薬剤部分は、古典的な化学療法剤に限定されるものとは解釈されない。例えば、薬剤部分は、所望される生物学的活性を所有するタンパク質またはポリペプチドであり得る。そのようなタンパク質として、例えば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）外毒素、もしくはジフテリア毒素のような酵素的に活性な毒素、またはその活性なフラグメント；腫瘍壊死因子もしくはインターフェロン−αのようなタンパク質；あるいは例えば、リンフォカイン、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン−２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン−４（「ＩＬ−４」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」）、インターロイキン−７（「ＩＬ−７」）、インターロイキン−１５（「ＩＬ−１５」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」）、または他の増殖因子のような生物学的応答調節物質（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｍｏｄｉｆｉｅｒ）を挙げることができる。他の誘導体として、ＴＲＡＩＬ、腫瘍壊死因子関連アポトーシス誘導性リガンドのようなアポトーシス誘導性部分、ならびに腫瘍量ならびにマイクロおよびマクロ転移を伴う部位への有効搭載量の（ｐａｙ−ｌｏａｄ）分子の非侵襲的画像化もしくは標的化された送達のためのルシフェラーゼまたは蛍光プローブならびにナノ粒子のようなレポーター分子を伴う抗体融合タンパク質が挙げられる。
【０１２６】
本発明の所定の実施態様では、サイトカイン／抗体複合体あるいはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体は、例えば、１つ以上の治療もしくは細胞毒性部分に結合またはコンジュゲートすることができる。本明細書において使用する「細胞毒性部分」とは、単純に、細胞の近くに存在するかもしくは細胞によって吸収される場合、細胞増殖を阻害するか、または細胞死を促進する部分を意味する。これに関する適切な細胞毒性分子として、放射性の薬剤または同位元素（放射性核種）、分化誘導物質、インヒビターおよび小化学毒性薬剤のような化学毒性薬剤、毒素タンパク質およびその誘導体、ならびにヌクレオチド配列（もしくはそれらのアンチセンス配列）が挙げられる。従って、細胞毒性部分には、非限定的例として、化学療法剤、光活性化毒素または放射性の薬剤があり得る。
【０１２７】
一般に、治療用薬剤は、薬剤動態的安定性および患者に対する全体的毒性の減少の必要性を適切に考慮して、任意の適切な技術によって、サイトカイン／抗体複合体もしくはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物、例えば、サイトカイン抗体複合体に単独で、または別の治療用薬剤との組み合わせで、コンジュゲートすることができる。「単独でまたは治療用薬剤との組み合わせで」は、直接的または間接的のいずれかで（例えば、リンカー基を介して）適切な抗体部分に結合することができる。サイトカインまたはリンフォカインと抗体との間の直接反応は、それぞれが他と反応することが可能な官能基を所有する場合、可能である。例えば、アミノまたはスルフヒドリル基のような求核基は、無水物もしくは酸ハロゲン化物のようなカルボニル含有基、または良好な脱離基（例えば、ハロゲン化物）を含有するアルキル基と反応することが可能であり得る。あるいは、適切な化学リンカー基を使用することができる。リンカー基は、結合能の妨害を回避するために、抗体を薬剤から距離を置いて配置するスペーサーとして機能することができる。リンカー基はまた、部分または抗体上の置換基の化学反応性を増加し、それ故に、結合効率を増加する役割を果たすことができる。化学反応性の増加はまた、部分、または部分上の官能基の使用を容易にすることができ、また、反応性の増加がなければこの使用は不可能であろう。
【０１２８】
適切な連結化学として、マレイミジルリンカーおよびアルキルハロゲン化物リンカー（抗体部分上のスルフヒドリルと反応する）ならびにスクシンイミジルリンカー（抗体部分上の第一級アミンと反応する）が挙げられる。いくらかの第一級アミンおよびスルフヒドリル基は、免疫グロブリン上に存在し、そしてさらなる基を、組み換え免疫グロブリン分子に設計することができる。さまざまな二官能性または多官能性試薬（ホモ官能性およびヘテロ官能性の両方）（例えば、Chemical Co.,Rockford,Illのカタログに記載されるもの）が、リンカー基として用いられ得ることは、当業者に明らかである。結合は、例えば、アミノ基、カルボキシル基、スルフヒドリル基または酸化した炭水化物基を介してもたらされ得る（例えば、U.S.Pat.No.4,671,958を参照のこと）。
【０１２９】
代替的結合方法として、U.S.Pat.Nos.5,057,313および5,156,840に記載のように、例えば、グリコシル化部位の酸化した炭水化物基を介して、細胞毒性薬剤を、抗体ならびに本発明の実施態様のようなサイトカイン抗体複合体に結合させることができる。抗体および抗体組成物を細胞毒性または画像化部分に結合するなお別の代替的方法は、ストレプトアビジン／ビオチン、またはアビジン／ビオチンのような非共有結合対の使用による。これらの実施態様では、対の一方のメンバーは抗体部分に共有結合され、そして結合対の他方のメンバーは細胞毒性または画像化部分に共有結合される。
【０１３０】
サイトカイン、リンフォカイン、または細胞毒性部分が、本発明のイムノコンジュゲートの抗体部分が存在しない場合により強力であるならば、細胞への内在化中もしくは内在化時に切断可能であるか、または細胞外環境において経時的に漸次切断可能であるリンカー基を使用することが所望され得る。異なる多くの切断可能なリンカー基が説明されている。これらのリンカー基からの細胞毒性部分の細胞内放出の機構として、ジスルフィド結合の還元（例えば、U.S.Pat.No.4,489,710）、感光性結合への照射（例えば、U.S.Pat.No.4,625,014）、誘導体化されたアミノ酸側鎖の加水分解（例えば、U.S.Pat.No.4,638,045）、血清中補体により仲介される加水分解（例えば、U.S.Pat.No.4,671,958）、および酸触媒加水分解（例えば、U.S.Pat.No.4,569,789）による切断が挙げられる。
【０１３１】
１つを超える治療用サイトカイン、リンフォカイン、あるいは細胞毒性および／または画像化部分を、サイトカイン／抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物に結合することが所望され得る。抗体をポリ誘導体化することによって、いくらかの治療および／または細胞障害ストラテジーを同時に行うことができるか、いくらかの可視化技術のための造影剤として有用な抗体を作製することができるか、または可視化技術による追跡のために治療用抗体を標識することができる。１つの実施態様では、細胞毒性部分の複数の分子を１つの抗体分子に結合する。別の実施態様では、１つを超えるタイプの部分を１つの抗体に結合することができる。例えば、サイトカインまたはリンフォカインのような治療部分を、化学毒性または放射性毒性部分と共に抗体にコンジュゲートし、化学または放射性毒性治療の有効性を増加すること、ならびに所望される治療効果を得るのに必要な必要とされる用量を低下させることができる。特定の実施態様にもかかわらず、１つを超える部分を伴うイムノコンジュゲートを、さまざまな方法で調製することができる。例えば、１つを超える部分を抗体分子に直接結合することができるか、または結合のための複数の部位を提供するリンカー（例えば、デンドリマー）を使用することができる。あるいは、１つを超える細胞毒性部分を保持する能力を伴う担体を使用することができる。
【０１３２】
上記で説明したように、担体は、直接的かまたはリンカー基を介するかのいずれかである共有結合、および非共有的会合を含む、さまざまな方法で試薬を担持することができる。適切な共有結合担体として、アルブミン（例えば、U.S.Pat.No.4,507,234）のようなタンパク質、ペプチド、およびアミノデキストラン（例えば、U.S.Pat.No.4,699,784）のような多糖（それらのそれぞれは、部分の結合のための複数の部位を有する）が挙げられる。担体はまた、非共有結合のような非共有的会合またはリポソームベシクル内のようなカプセル化によって薬剤を担持することができる（例えば、U.S.Pat.Nos.4,429,008および4,873,088）。カプセル化担体は、それらが、治療用組成物が経時的に漸次に化学毒性部分を放出することを可能にすることができる一方、標的細胞の近傍においてそれを濃縮する場合、化学毒性治療の実施態様において特に有用である。
【０１３３】
細胞毒性部分として使用のための好適な放射性核種は、薬理学的投与に適切である放射性核種である。そのような放射性核種として、１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、９０Ｙ、２１１Ａｔ、６７Ｃｕ、１８６Ｒｅ、１８８Ｒｅ、２１２Ｐｂ、および２１２Ｂｉが挙げられる。ヨウ素およびアスタチンの同位元素は、それらの使用について多数の文献が蓄積されているため、本発明の治療用組成物における使用においてより好適な放射性核種である。数ミリメートルの有効範囲を有する他のβ放射線放出核種である１３１Ｉが特に好適である。１２３Ｉ、１２５Ｉ、１３１Ｉ、または２１１Ａｔは、ロドゲン（ｌｏｄｏｇｅｎ）、Ｎ−スクシンイミジル３−［２１１Ａｔ］アスタトベンゾエート、Ｎ−スクシンイミジル３−［１３１Ｉ］ヨードベンゾエート（ＳＩＢ）、およびＮ−スクシンイミジル５−［１３１Ｉ］ヨード（ｉｏｄｏｂ）−３−ピリジンカルボキシレート（ＳＩＰＣ）を含むいくらかの既知のコンジュゲーション試薬のいずれかを利用して、組成物および方法における使用のために抗体にコンジュゲートすることができる。任意のヨウ素同位元素を、列挙したヨード−試薬において利用することができる。核医学分野における当業者に公知の適切なキレート剤によって、他の放射性核種を、サイトカイン／抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物にコンジュゲートすることができる。
【０１３４】
好適な化学毒性薬剤として、メトトレキサート、ならびにピリミジンおよびプリンアナログのような小分子薬剤が挙げられる。好適な化学毒性分化誘導物質として、ホルボールエステルおよび酪酸が挙げられる。化学毒性部分は、化学リンカーを介して、サイトカイン／抗体複合体もしくはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物に直接コンジュゲートすることができるか、または担体（後に、サイトカイン／抗体複合体もしくはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物に結合される）にカプセル化することができる。
【０１３５】
細胞毒性部分としての使用に好適な毒素タンパク質として、リシン、アブリン、ジフテリア毒素、コレラ毒素、ゲロニン、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）外毒素、赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ）毒素、ヨウシュヤマゴボウ抗ウイルスタンパク質、および医薬生化学分野において公知の他の毒素タンパク質が挙げられる。これらの毒素薬剤は、特に、血管内に注入される場合、患者において好ましくない免疫応答を引き起こすため、好適には、サイトカイン／抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物に結合させるために、それらは、担体中にカプセル化される。
【０１３６】
イムノトキシンの細胞毒性部分は、細菌または植物由来の細胞毒性薬もしくは酵素的に活性な毒素、あるいはそのような毒素の酵素的に活性なフラグメント（「Ａ鎖」）であり得る。使用される酵素的に活性な毒素およびそのフラグメントは、ジフテリアＡ鎖、ジフテリア毒素の非結合性の活性なフラグメント、外毒素Ａ鎖（シュードモナス・エアルギノサ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ  ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ）由来）、リシンＡ鎖、アブリンＡ鎖、モデクシンＡ鎖、α−サルシン、シナアブラギリ（Ａｌｅｕｒｉｔｅｓ  ｆｏｒｄｉｉ）タンパク質、ジアンシンタンパク質、ヨウシュヤマゴボウ（Ｐｈｙｔｏｌａｃｃａ  ａｍｅｒｉｃａｎａ）タンパク質（ＰＡＰＩ、ＰＡＰＩＩ、およびＰＡＰ−Ｓ）、ツルレイシインヒビター、クルシン、クロチン、サパオナリア・オフィシナリス（ｓａｐａｏｎａｒｉａ  ｏｆｆｉｃｉｎａｌｉｓ）インヒビター、ゲロニン、ミトゲリン（ｍｉｔｏｇｅｌｌｉｎ）、レストリクトシン（ｒｅｓｔｒｉｃｔｏｃｉｎ）、フェノマイシン（ｐｈｅｎｏｍｙｃｉｎ）、およびエノマイシン（ｅｎｏｍｙｃｉｎ）である。別の実施態様では、抗体は小分子の抗癌薬にコンジュゲートされる。モノクローナル抗体およびそのような細胞毒性部分のコンジュゲートは、さまざまな二官能性タンパク質結合剤を使用して作製される。そのような試薬の例として、ＳＰＤＰ、ＩＴ、アジプイミド酸ジメチルＨＣｌのようなイミドエステルの二官能性誘導体、スベリン酸ジスクシンイミジルのような活性エステル類、グルタルアルデヒドのようなアルデヒド類、ビス（ｐ−アジドベンゾイル）ヘキサンジアミンのようなビス−アジド化合物、ビス−（Ｐ−ジアゾニウムベンゾイル）−エチレンジアミンのようなビス−ジアゾニウム誘導体、トリレン−２，６−ジイソシアネートのようなジイソシアネート類、および１，５−ジフルオロ−２，４−ジニトロベンゼンのようなビス−活性フッ素化合物である。毒素の溶解性部分は、抗体のＦａｂフラグメントに接合させることができる。
【０１３７】
有利なことに、サイトカインもしくは抗体の外部ドメインに特異的に結合するサイトカイン／抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物は、リシンＡ鎖にコンジュゲートさせることができる。最も有利には、リシンＡ鎖は脱グリコシル化され、そして組み換え手段を介して産生される。リシンイムノトキシン（ｒｉｃｉｎ  ｉｍｍｕｎｏｔｏｘｉｎ）を作製する有利な方法については、Vitetta et al.,Science 238,1098,1987（その全体が参照により援用される）に記載されている。
【０１３８】
用語「接触される」は、細胞に適用される場合、抗体、抗体組成物、細胞毒性薬剤もしくは部分、遺伝子、タンパク質および／またはアンチセンス配列が標的細胞に送達されるか、あるいは標的細胞の直近に配置されるプロセスを説明するために、本明細書において使用される。この送達は、インビトロまたはインビボであり得、そして組み換えベクター系の使用に関与し得る。
【０１３９】
別の態様では、本発明は、細胞毒素、薬剤（例えば、免疫抑制薬）もしくは放射性毒素のような治療部分にコンジュゲートされたサイトカイン／抗体複合体もしくはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体、またはそのフラグメントを特徴とする。そのようなコンジュゲートは、本明細書において「イムノコンジュゲート」と称される。１つ以上の細胞毒性を含むイムノコンジュゲートは、「イムノトキシン」と称される。細胞毒素または細胞毒性薬剤は、細胞に有害である（例えば、死滅させる）任意の薬剤を含む。例として、タキソール、サイトカラシンＢ、グラミシジンＤ、エチジウムブロマイド、エメチン、マイトマイシン、エトポシド、テノポシド（ｔｅｎｏｐｏｓｉｄｅ）、ビンクリスチン、ビンブラスチン、コルヒチン（ｃｏｌｃｈｉｃｉｎ）、ドキソルビシン、ダウノルビシン、デュオカルマイシン、サポリン、ジヒドロキシアントラシンジオン（ｄｉｈｙｄｒｏｘｙ  ａｎｔｈｒａｃｉｎ  ｄｉｄｎｅ）、ミトキサントロン、ミトラマイシン、アクチノマイシンＤ、１−デヒドロテストステロン、グルココルチコイド、プロカイン、テトラカイン、リドカイン、プロプラノロール、およびピューロマイシン、ならびにそのアナログまたはホモログが挙げられる。
【０１４０】
適切な治療剤として、代謝拮抗物質（例えば、メトトレキサート、６−メルカプトプリン、６−チオグアニン、シタラビン、５−フルオロウラシルデカルバジン）、アルキル化剤（例えば、メクロレタミン、チオテパ（ｔｈｉｏｅｐａ）、クロラムブシル、メルファラン、カルムスチン（ＢＳＮＵ）およびロムスチン（ＣＣＮＵ）、シクロトスファミド（ｃｙｃｌｏｔｈｏｓｐｈａｍｉｄｅ）、ブスルファン、ジブロモマンニトール、ストレプトゾトシン、マイトマイシンＣ、およびシス−ジクロロジアミン白金（ＩＩ）（ＤＤＰ）（シスプラチン）、アントラサイクリン系薬剤（例えば、ダウノルビシン（旧ダウノマイシン）およびドキソルビシン）、抗生物質（例えば、ダクチノマイシン（旧アクチノマイシン）、ブレオマイシン、ミトラマイシン、およびアントラマイシン（ＡＭＣ））、ならびに抗分裂剤（例えば、ビンクリスチンおよびビンブラスチン）が挙げられるが、これらに限定されない。好適な実施態様では、治療用薬剤は細胞毒性薬剤または放射性毒性薬剤である。別の実施態様では、治療用薬剤は免疫抑制薬である。なお別の実施態様では、治療用薬剤はＧＭ−ＣＳＦである。さらなる実施態様では、治療用薬剤は、ドキソルビシン（アドリアマイシン）、シスプラチン、硫酸ブレオマイシン、カルムスチン、クロラムブシル、シクロホスファミド、ヒドロキシ尿素またはリシンＡである。
【０１４１】
サイトカイン／抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物はまた、放射性毒素、例えば、放射性ヨウ素にコンジュゲートして、例えば、癌を処置するための細胞毒性放射性製剤を作製することができる。サイトカイン／抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体を使用して、所定の生物学的応答を改変することができ、そして薬剤部分は、古典的な化学療法剤に限定されるものとは解釈されない。例えば、薬剤部分は、所望される生物学的活性を所有するタンパク質またはポリペプチドであり得る。そのようなタンパク質として、例えば、アブリン、リシンＡ、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ）外毒素、もしくはジフテリア毒素のような酵素的に活性な毒素、またはその活性なフラグメント；腫瘍壊死因子もしくはインターフェロン−γのようなタンパク質；あるいは例えば、リンフォカイン、インターロイキン−１（「ＩＬ−１」）、インターロイキン−２（「ＩＬ−２」）、インターロイキン−４（「ＩＬ−４」）、インターロイキン−６（「ＩＬ−６」）、インターロイキン−７（「ＩＬ−７」）、インターロイキン−１５（「ＩＬ−１５」）、顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（「ＧＭ−ＣＳＦ」）、顆粒球コロニー刺激因子（「Ｇ−ＣＳＦ」）、または他の増殖因子のような生物学的応答調節物質（ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｍｏｄｉｆｉｅｒ）を挙げることができる。
【０１４２】
そのような治療的部分を抗体にコンジュゲートするための技術は、周知である。例えば、Arnon et al.,“Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy”,in Reisfeld et al.,eds.,Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy,Alan R. Liss, Inc.,pp.243-56,1985);Hellstrom et al.,“Antibodies For Drug Delivery”,in Controlled Drug Delivery 2nd Ed.,Marcel Dekker, Inc.,Robinson et al.,eds.,pp.623-53,1987;Thorpe,“Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review”,in Monoclonal Antibodies84:Biological And Clinical Applications,Pinchera et al.,eds.,pp.475-506,1985;“Analysis,Results,And Future Prospective Of The Therapeutic Use Of Radiolabeled Antibody In Cancer Therapy”,in Monoclonal Antibodies For Cancer Detection And Therapy,Baldwin et al.,eds.,Academic Press, pp.303-16 1985、およびThorpe et al.,“The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-Toxin Conjugates”,Immunol.Rev.,62:119-58,1982を参照のこと。
【０１４３】
サイトカイン／抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物の使用
サイトカイン／抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物、例えば、本明細書において同定されるＴ細胞集団の発現を刺激するサイトカイン抗体複合体のそれぞれは、多数の方法で使用することができる。以下の説明は、例示であるとみなされるべきであり、既知の技術を使用する。
【０１４４】
抗体に基づく技術を使用して生物学的サンプル中のタンパク質レベルをアッセイするために、サイトカイン／抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物を使用することができる。例えば、古典的な免疫組織学的方法によって、組織におけるタンパク質発現について研究することができる。Jalkanen et al.,J.Cell.Biol.101:976-985,1985;Jalkanen et al.,J.Cell.Biol.105:3087-3096,1987。タンパク質遺伝子発現を検出するのに有用な他の抗体に基づく方法として、酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）およびラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ）のようなイムノアッセイが挙げられる。適切な抗体アッセイ標識物は当該技術分野において公知であり、そしてグルコースオキシダーゼのような酵素標識、ならびに放射性同位元素またはヨウ素（１２５Ｉ、１２１Ｉ）、炭素（１４Ｃ）、イオウ（３５Ｓ）、トリチウム（３Ｈ）、インジウム（１１２Ｉｎ）、およびテクネチウム（９９ｍＴｃ）のような他の放射性薬剤、ならびにフルオレセインおよびローダミンのような蛍光標識、ならびにビオチンを含む。
【０１４５】
生物学的サンプルにおける分泌型タンパク質レベルをアッセイすることに加えて、タンパク質または抗体組成物もまた、画像化によってインビボで検出することができる。タンパク質のインビボでの画像化のための抗体標識物またはマーカーとして、Ｘ放射線写真法、ＮＭＲもしくはＥＳＲによって検出可能なものが挙げられる。Ｘ線放射線写真法では、適切な標識物として、検出可能な放射線を引き出すが、対象に対して、公然とは有害ではないバリウムまたはセシウムのような放射性同位元素が挙げられる。ＮＭＲおよびＥＳＲの適切なマーカーとして、関連するｓｃＦｖクローンの栄養物の標識化によって抗体に組み入れることができる重水素のような検出可能な特徴的なスピンを伴うものが挙げられる。
【０１４６】
放射性同位元素（例えば、１３１Ｉ、１１２Ｉｎ、９９ｍＴｃ）のような適切な検出可能な画像化部分、放射線不透過性物質、または核磁気共鳴により検出可能な材料で標識されているタンパク質特異的抗体あるいは抗体フラグメントが、哺乳動物に（例えば、非経口的、皮下、もしくは腹腔内に）導入される。対象および使用される画像化システムの大きさが、診断画像を生じるのに必要とされる画像化部分の量を決定することが、当該分野で理解される。放射性同位元素部分の場合、ヒト対象については、注入される放射能の量は、通常、約５〜２０ミリキュリーの９９ｍＴｃの範囲である。次いで、標識された抗体または抗体フラグメントは、特異的タンパク質を含有する細胞の位置に優先的に蓄積する。インビボでの腫瘍画像化は、Burchiel et al.,Tumor Imaging:The Radiochemical Detection of Cancer 13,1982に記載されている。
【０１４７】
さらに、サイトカイン／抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物を使用して、疾患を処置することができる。例えば、Ｔ細胞集団の拡大を増強するか、ポリペプチドの活性（例えば、癌遺伝子）を阻害するか、（例えば、受容体に結合することによって）ポリペプチドの活性を活性化するか、遊離のリガンドに対し膜結合型受容体（例えば、炎症を減少する際に使用される可溶性ＴＮＦ受容体）と競合することによって、膜結合型受容体の活性を減少するか、所望される応答（例えば、血管成長）を生じさせようとして、本発明のサイトカイン抗体複合体組成物を患者に投与することができる。
【０１４８】
同様にまた、サイトカイン／抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物を使用して、疾患を処置することもできる。例えば、本発明のポリペプチドに対して指向された抗体の投与は、結合し、そしてポリペプチドの過剰産生を減少することができる。同様に、抗体の投与は、例えば、膜受容体に結合したポリペプチドに結合することによって、ポリペプチドを活性化することができる。
【０１４９】
処置レジメン
本発明は、医薬的に許容可能な担体と共に処方される疾患、例えば、新生物疾患、自己免疫疾患、細胞涸渇性照射もしくは化学療法、または感染性疾患の処置のためのサイトカイン／抗体複合体あるいはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物を含んでなる医薬的組成物を提供する。いくつかの組成物は、複数（例えば、２つ以上）のサイトカイン／抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物の組み合わせを含む。
【０１５０】
予防適用では、疾患または症状（例えば、新生物疾患、自己免疫疾患、細胞涸渇性放射線もしくは化学療法、または感染性疾患）にかかりやすいか、あるいはそうでなければその危険性にある患者に、疾患もしくは症状の再発の危険性を排除または減少させるか、重症度を低減するか、あるいは疾患の生化学的、組織学的および／または行動的徴候、その合併症ならびに疾患の発達中に提示される中間的病理学的表現型を含む疾患の発症を遅延させるのに十分な量で、医薬的組成物または医薬品が投与される。治療適用では、そのような疾患が疑わしいか、またはそのような疾患を既に患っている患者に、その合併症、および疾患の発達中における中間的病理学的表現型を含む疾患（生化学的、組織学的および／または行動的）の徴候を治癒するか、あるいは少なくとも部分的に停止するのに十分な量で、組成物または医薬品が投与される。治療または予防処置を達成するのに適切な量は、治療または予防有効量として規定される。予防および治療レジメンの両方において、十分な抗増殖性応答が達成されるまで、薬剤は、通常、いくつかの用量で投与される。典型的に、抗増殖性応答がモニターされ、そして抗増殖応答が衰微し始める場合、反復投与される。
【０１５１】
有効量
疾患、例えば、本明細書に記載の新生物疾患、自己免疫疾患、細胞涸渇性放射線もしくは化学療法、または感染性疾患の処置のためのサイトカイン／抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物、例えば、サイトカインもしくはリンフォカインに対する抗体の有効量は、投与手段、標的部位、患者の生理学的状態、患者がヒトであるかもしくは動物であるか、投与される他の医薬品、および処置が予防的であるかもしくは治療的であるかを含む、異なる多くの要因に依存して変動する。通常、患者はヒトであるが、トランスジェニック哺乳動物を含む非ヒト哺乳動物を処置することもできる。処置用量については、安全性および有効性を最大にするために力価測定する必要がある。
【０１５２】
抗体を伴う投与では、用量は、宿主体重の約０．０００１〜１００ｍｇ／ｋｇ、より通常には、０．０１〜５ｍｇ／ｋｇの範囲である。例えば、用量は１ｍｇ／ｋｇ体重もしくは１０ｍｇ／ｋｇ体重または１〜１０ｍｇ／ｋｇの範囲内であり得る。例示的な処置レジメンは、２週間ごとに１回、または１月に１回、３〜６箇月ごとに１回の投与を伴う。いくつかの方法では、異なる結合特異性を伴う２つ以上のモノクローナル抗体が同時に投与され、この場合、投与される各抗体の用量は、示される範囲内にある。抗体は、通常、複数回投与される。単回投与間の間隔は、週、月または年単位であり得る。間隔は不規則であり得、患者における抗体の血中レベルを測定することによって示される。ある方法では、用量は、１〜１０００μｇ／ｍｌの血漿中抗体濃度を達成するために調整され、そしてある方法では、２５〜３００μｇ／ｍｌである。あるいは、抗体は徐放性製剤として投与することができ、この場合、より少ない回数の投与が必要とされる。用量および回数は、患者における抗体の半減期に依存して変動する。一般に、ヒト抗体は最も長い半減期を示し、それにヒト化抗体、キメラ抗体、および非ヒト抗体が続く。投与の用量および回数は、処置が予防的であるかまたは治療的であるかに依存して変動し得る。予防的適用では、相対的に低い用量が、長期にわたって、相対的に少ない間隔で投与される。患者によっては、彼らのその後の生涯にわたって、継続して処置を受ける。治療的適用では、時には、疾患の進行が減少するかまたは終結するまで、好ましくは、患者が疾患の徴候の部分的または完全な改善を示すまで、比較的短い間隔の比較的高い用量が必要とされる。その後、患者には、予防レジメンを投与することができる。
【０１５３】
免疫原をコードする核酸の用量は、患者１例あたり約１０ｎｇ〜１ｇ、１００ｎｇ〜１００ｍｇ、１μｇ〜１０ｍｇ、または３０〜３００μｇのＤＮＡの範囲である。感染性ウイルスベクターの用量は、１用量あたり１０〜１００、またはそれ以上のビリオンまで変動する。
【０１５４】
投与経路
免疫応答を誘導するためのサイトカイン／抗体複合体あるいはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物、例えば、疾患、例えば、新生物疾患、自己免疫疾患、細胞涸渇性放射線もしくは化学療法、または感染性疾患の処置のためのサイトカイン／抗体複合体あるいはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体は、非経口的、局所的、静脈内、経口的、皮下、動脈内、頭蓋内、腹腔内、鼻腔内もしくは筋肉内手段によって、脳病巣を標的化する抗体製剤の吸入薬として予防のため、および／または治療処置のために、投与することができる。サイトカイン抗体複合体組成物の最も典型的な投与経路は皮下であるが、他の経路も同様に有効である。次に最も一般的な経路は筋肉内注入である。このタイプの注入は、最も一般的には、腕または脚の筋肉において実施される。いくつかの方法では、薬剤は、沈着物が蓄積している特定の組織に直接注入される（例えば、頭蓋内注入）。筋肉内注入または静脈内輸注は、抗体の投与に好適である。いくつかの方法では、特定の治療用抗体は、頭蓋に直接注入される。いくつかの方法では、抗体は、徐放性組成物、またはＭｅｄｉｐａｄＴＭデバイスのようなデバイスとして投与される。
【０１５５】
サイトカイン／抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物は、場合により、多様な免疫関連疾患を含む多様な疾患を処置するのに少なくとも部分的に有効である他の薬剤との組み合わせで投与することができる。脳への腫瘍転移の場合、薬剤はまた、血液脳関門（ＢＢＢ）を横切る薬剤の通過を増加する他の薬剤と共に投与することもできる。
【０１５６】
製剤
疾患、例えば、新生物疾患、自己免疫疾患、細胞涸渇性放射線もしくは化学療法、または感染性疾患の処置のために免疫応答を誘導するためのサイトカイン／抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物は、しばしば、即ち、有効な治療用薬剤、およびさまざまな他の医薬的に許容可能な成分を含んでなる医薬的組成物として投与される。（Remington’s Pharmaceutical Science,15th ed.,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1980を参照のこと）。好適な形態は、投与および治療適用の意図される態様に依存する。組成物はまた、所望される製剤に依存して、動物またはヒト投与のための医薬的組成物を処方するために一般に使用されるビヒクルとして規定される医薬的に許容可能な非毒性の担体または希釈剤を含むこともできる。希釈剤は、組み合わせの生物学的活性に影響を及ぼさないように選択される。そのような希釈剤の例には、蒸留水、リン酸緩衝生理食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、およびハンク溶液がある。さらにまた、医薬的組成物または製剤として、他の担体、アジュバント、または非毒性、非治療性、非免疫原性な安定剤などを挙げることができる。
【０１５７】
また、医薬的組成物として、大きな、緩徐に代謝される巨大分子、例えば、タンパク質、多糖、例えば、キトサン、ポリ乳酸、ポリグリコール酸およびコポリマー（例えば、ラテックス機能化ＳｅｐｈａｒｏｓｅＴＭ、アガロース、セルロースなど）、高分子アミノ酸、アミノ酸コポリマー、および脂質集合体（例えば、油滴またはリポソーム）を挙げることができる。さらに、これらの担体は、免疫刺激剤（即ち、アジュバント）として機能することができる。
【０１５８】
非経口投与では、本発明の実施態様である組成物を、水、オイル、食塩水、グリセロール、もしくはエタノールなどの滅菌液体であり得る医薬担体を伴う生理学的に許容可能な希釈液中の物質の溶液または懸濁液の注射用調剤として投与することができる。さらに、湿潤または乳化剤、界面活性剤、ｐＨ緩衝物質などのような補助物質が治療組成物に存在することができる。医薬的組成物の他の成分は、石油、動物、植物、または合成用原料の成分、例えば、ピーナツ油、ダイズ油、および鉱油である。一般に、プロピレングリコールまたはポリエチレングリコールのようなグリコールは、特に、注射用溶液に好適な液体担体である。抗体は、有効成分の徐放を可能にするような様式で処方され得る蓄積注射またはインプラント調製物の形態で投与することができる。例示的組成物は、５０ｍＭ  Ｌ−ヒスチジン、１５０ｍＭ  ＮａＣｌからなり、ＨＣｌでｐＨ６．０に調整した水性緩衝液において処方されるモノクローナル抗体を５ｍｇ／ｍＬで含んでなる。
【０１５９】
典型的に、組成物は、液体溶液または懸濁液のいずれかとして注入可能な物質として調製され；また、注入前に、液体ビヒクルへの溶解または懸濁に適切な固体形態を調製することもできる。調製物はまた、アジュバント効果の増強のために、リポソームまたは微粒子、例えば、ポリラクチド、ポリグリコリド、もしくはコポリマーにおいて乳化あるいはカプセル化することもでき、上記において考察されている。Langer,Science249:1527,1990およびHanes,Advanced Drug Delivery Reviews28:97-119,1997。本発明の薬剤は、有効成分の徐放または脈状注入を可能にするような様式で処方され得る蓄積注射またはインプラント調製物の形態で投与することができる。
【０１６０】
他の投与形態に適切なさらなる製剤として、経口、経鼻、および経肺製剤、坐剤、および経皮適用が挙げられる。
【０１６１】
坐剤については、バインダーおよび担体として、例えば、ポリアルキレングリコールまたはトリグリセリド類が挙げられ；そのような坐剤は、０．５％〜１０％、好ましくは、１％〜２％の範囲で有効成分を含有する混合物から形成することができる。経口用製剤は、賦形剤、例えば、製剤用のマンニトール、ラクトース、デンプン、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、セルロース、および炭酸マグネシウムを含む。これらの組成物は、溶液、懸濁液、錠剤、丸剤、カプセル、徐放性製剤、または散剤の剤形であり、１０％〜９５％、好ましくは、２５％〜７０％の有効成分を含有する。
【０１６２】
局所適用は、経皮または皮内送達を生じることができる。局所投与は、コレラ毒素または解毒された誘導体もしくはそのサブユニットあるいは他の類似の細菌毒素を伴う薬剤の同時投与によって、容易にすることができる。Glenn et al.,Nature391:851,1998。同時投与は、混合物もしくは化学架橋によって得られる連結された分子としての成分を使用して達成することができる。
【０１６３】
あるいは、経皮送達は、皮膚パッチまたはトランスフェロソーム（ｔｒａｎｓｆｅｒｏｓｏｍｅ）を使用して達成することができる。Paul et al.,Eur.J.Immunol.25:3521-24,1995;Cevc et al.,Biochem.Biophys.Acta1368:201-15,1998。
【０１６４】
医薬的組成物は、一般的に、滅菌、実質的に等張性として、米国食品医薬品局（Ｕ．Ｓ．Ｆｏｏｄ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ）のすべての医薬品の製造管理および品質管理に関する基準（ＧＭＰ）に十分に従って処方される。
【０１６５】
毒性
好ましくは、本明細書に記載の治療有効量のサイトカイン／抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物は、実質的な毒性を生じることなく、治療効果を提供する。
【０１６６】
明細書に記載のタンパク質の毒性は、細胞培養または実験動物における標準的医薬的手順によって、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対する致死用量）またはＬＤ１００（集団の１００％に対する致死用量）を決定することによって決定することができる。毒性効果と治療効果との間の用量比は、治療係数である。これらの細胞培養アッセイおよび動物研究から得られるデータは、ヒトにおける使用に毒性ではない用量の範囲を処方するのに使用することができる。本明細書に記載のタンパク質の用量は、好ましくは、毒性をほとんどまたは全く伴わない有効量を含む広範な循環濃度内にある。用量は、用いられる剤形および利用される投与経路に依存してこの範囲内で変動することができる。正確な処方、投与経路および用量は、患者の症状の観点から個々の医師によって選択することができる。（例えば、Fingl et al.,1975,In:The Pharmacological Basis of Therapeutics,Ch.1を参照のこと。
【０１６７】
キット
サイトカイン／抗体複合体またはサイトカイン／サイトカイン受容体複合体組成物（例えば、モノクローナル抗体、ヒト配列抗体、ヒト抗体、多重特異性および二重特異性分子）ならびに取扱説明書を含んでなるキットもまた、本発明の範囲内にある。キットは、少なくとも１つのさらなる試薬、または１つ以上のさらなるヒト抗体（例えば、第１のヒト抗体とは異なる抗原におけるエピトープに結合する相補的活性を有するヒト抗体）をさらに含有することができる。キットは、典型的に、キットの内容物の意図される使用を示すラベルを含む。ラベルという用語は、キット上またはキットに伴って供給されるか、そうでなければキットに添付される任意の文書、もしくは記録された材料を含む。
【実施例】
【０１６８】
例示的実施態様
実施例１
組み換えマウスＩＬ−２の注入後のマウスにおけるＴ細胞増殖
左記の研究により、インビボでのＭＰ  ＣＤ８＋細胞のターンオーバーは、ＩＬ−２またはＩＬ−２ｍＡｂのいずれかを注入することによって、増加され得ることが示されている（図１）。ＩＬ−２では、染料ＣＦＳＥの希釈（図１Ａ、Ｂ）の希釈またはブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）の組み入れ（図２）によって測定されるインビボでのＣＤ８＋細胞の増殖は、組み換えマウスＩＬ−２（ｒｍＩＬ−２）の注入後に顕著であり、宿主および養子移入した精製ＣＤ８＋細胞の両方について、主として、ＭＰ  ＣＤ８＋細胞に制限された。対照的に、ＣＤ１２２およびＣＤ４４の低い発現によって規定される生来のＴ細胞の刺激は最小であった（図２）。ＩＬ−２ｍＡｂの注入後に、なおより大きな増殖が抗マウスＩＬ−２ｍＡｂ  Ｓ４Ｂ６によって特異的に生じ（図１および２）、先の所見が確認された。Ku et al.,Science288:675,2000;Kamimura et al.,J Immunol173:6041,2004。この効果はまた、ＩＬ−１５−／−宿主においても認められ、そしてＣＤ１２２ｍＡｂによって阻止された（図１Ａ）ことから、増殖のためのエフェクターサイトカインはＩＬ−１５ではないが、それにもかかわらず、ＣＤ１２２を介して刺激することが確認された。Ku et al.,Science288:675,2000;Kamimura et al.,J Immunol173:6041,2004。
【０１６９】
図１は、ＩＬ−２またはＩＬ−２ｍＡｂによるインビボでのＭＰ  ＣＤ８＋細胞の刺激を示す。ＣＦＳＥ標識された精製Ｔｈｙ１．１ＭＰ（ＣＤ４４ｈｉＣＤ１２２ｈｉ）ＣＤ８＋Ｔ細胞を、（Ａ）野生型（ＷＴ）またはＩＬ−１５−／−マウス（後に、ＰＢＳ、ｒｍＩＬ−２、Ｓ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂ、もしくはＩＬ−２ｍＡｂ＋ＣＤ１２２ｍＡｂの連日腹腔内（ｉｐ）注入を施した）、あるいは（Ｂ）ＷＴ、ＩＬ−２＋／−またはＩＬ−２−／−マウス（続いて、Ｓ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂもしくはコントロールｍＡｂの連日注入した）の静脈内（ｉｖ）に移入した。７日目に、ドナー細胞をフローサイトメトリーにより分析した。数字は、分けられた（ＣＦＳＥｌｏ）ドナーＴｈｙ１．１＋ＣＤ８＋細胞の百分率を示す。この図および以後の図におけるすべてのデータは、少なくとも２つの個別の実験の代表である。
【０１７０】
図２は、ＩＬ−２またはＩＬ−２ｍＡｂへの応答におけるインビボでのＭＰ  ＣＤ８＋細胞の増殖を示す。（Ａ）精製したＴｈｙ１．１でマークされたＭＰ  ＣＤ４４ｈｉＣＤ１２２ｈｉＣＤ８＋Ｔ細胞を、正常Ｂ６（Ｔｈｙ１．２）マウスの静脈内（ｉｖ）に移入した。続いて、宿主マウスに、ＰＢＳ、１．５μｇのｒｍＩＬ−２、または０．５ｍｇのＳ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂの連日腹腔内（ｉｐ）注入を１週間施した。Ｔ細胞ターンオーバーを測定するために、最後の３日間、飲料水にＢｒｄＵを付与した。リンパ節（ＬＮ）および脾臓細胞を７日後に単離し、そしてフローサイトメトリーによって分析した。数字は、ドナーＴｈｙ１．１＋ＣＤ８＋細胞（頂部の行）またはＢｒｄＵ＋細胞（下方の行）の百分率を示す。
【０１７１】
実施例２
サイトカイン抗体複合体に応答するＴ細胞増殖はＩＬ−２−／−マウスにおいて停止される（Abolished）か、またはＩＬ−２＋／−マウスにおいて減少する
養子移入におけるＩＬ−２ｍＡｂによるＭＰ  ＣＤ８＋細胞の刺激がＩＬ−２−／−宿主において停止され、そしてＩＬ−２＋／−宿主においてかなり減少したことは、予想外の所見であった（図１Ｂ）。従って、その報告されたインビトロでの中和機能にもかかわらず、Ｓ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂは、おそらく、免疫複合体の形成を介する既存のＩＬ−２の生物学的活性を増加することによって、インビボで機能することが示唆される。Zurawski et al.,J Immunol 137:3354,1986。この可能性を評価するために、本発明者らは、ＩＬ−２およびＩＬ−２ｍＡｂの連日注入のレジメンを使用した。養子移入したおよび宿主ＭＰ  ＣＤ８＋細胞の得られる増殖は、単回のＩＬ−２またはＩＬ−２ｍＡｂ投与で認められる増殖よりも劇的に増強され（図３Ａ）、そして、７日目に脾臓およびＬＮにおけるＭＰ  ＣＤ８＋細胞の合計数の大量（＞１００倍）の増加をもたらし、これらの器官が顕著に肥大した（図３Ｂ）。ＩＬ−２およびＩＬ−２ｍＡｂを組み合わせたレジメンはまた、別のＣＤ１２２ｈｉ集団、即ち、ＮＫ（ＣＤ３−ＮＫ１．１＋ＤＸ５＋）細胞の合計数の顕著な（２０〜３０倍の）増加を生じたが、ＭＰ  ＣＤ４４ｈｉＣＤ４＋細胞およびＢ２２０＋Ｂ細胞を含む他の細胞に対しては最小の影響しか及ぼさなかった（図３Ａ、３Ｂ）。移入された生来のＣＤ８＋細胞の増殖は相対的に低く、ＩＬ−２／ＩＬ−２ｍＡｂ組み合わせは、生来のＣＤ１２２ｌｏ前駆体に対するよりも、主として既存のＣＤ１２２ｈｉ細胞に対して作用していたことが示唆された（図４Ａ）。ＩＬ−１５−／−宿主への移入により匹敵するデータが認められたため、増殖はＩＬ−１５に非依存的であった（図４Ｂ）。強力な刺激プライム化ウイルス特異的ＣＤ８＋細胞もまた存在した（図３Ｃ）ことから、ＣＤ１２２ｈｉＣＤ８＋細胞の増殖は、規定された抗原（Ａｇ）特異的メモリー細胞ならびにＭＰ細胞にも当てはまることが示された。後者について、増殖は、ＣＤ２５のアップレギュレーションを生じず、そしてＣＤ２５−／−ＭＰ  ＣＤ８＋細胞では減弱しなかったことから、刺激はＩＬ−２Ｒβγ（ＣＤ１２２）のみを介して生じ、ＩＬ−２Ｒαβγでは生じなかったことが示された（図５）。
【０１７２】
図３は、ＩＬ−２およびＩＬ−２ｍＡｂの組み合わせによるインビボでのＭＰならびに抗原（Ａｇ）特異的メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の顕著な選択的拡大を示す。（Ａ）ＣＦＳＥ標識ＭＰ  ＣＤ８＋Ｔ細胞をＢ６マウスに移入し、ＰＢＳ、ｒｍＩＬ−２、Ｓ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂまたはｒｍＩＬ−２＋ＩＬ−２ｍＡｂの連日ｉｐ注入を施した。リンパ節（ＬＮ）由来のドナーおよび宿主細胞を、７日目に認められたマーカーについて調べた。脾臓細胞では匹敵する結果が得られた。（Ｂ）（Ａ）におけるマウス由来のドナーならびに宿主ＣＤ４４ｈｉＴ細胞の全脾臓およびＬＮ細胞数（＋ＳＤ、２マウス／グループ）。注入されたマウス由来の２つの代表的な脾臓およびＬＮの写真を右側に示す。（Ｃ）ＣＦＳＥ標識Ａｇ（ＬＣＭＶ）特異的メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞をＢ６マウスに移入し、続いて、上記のような連日注入を施した。７日目に、ドナー細胞をフローサイトメトリーにより分析した。数字は、分けられた（ＣＦＳＥｌｏ）細胞の百分率を示す（Ａ左側カラム、Ｃ）。
【０１７３】
図４は、ＩＬ−２／ＩＬ−２ｍＡｂ複合体に対するＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖が主としてＣＤ１２２ｈｉＭＰ細胞に制限され、そしてＩＬ−１５依存的であることを示す。ＣＦＳＥ標識された精製ＭＰＣＤ８＋Ｔ細胞（Ａ左側カラム、およびＢ）または生来のＣＤ４４ｌｏＣＤ８＋Ｔ細胞（Ａ右側カラム）を調製し、そしてＷＴマウス（Ａ）またはＩＬ−１５−／−マウス（Ｂ）に移入した。次いで、ＰＢＳ、１．５μｇのｒｍＩＬ−２、５０μｇのＳ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂまたは１．５μｇのｒｍＩＬ−２＋５０μｇのＩＬ−２ｍＡｂの連日注入をｉｐで投与した。７日目に、ドナー細胞をフローサイトメトリーにより分析した。数字は、分けられた（ＣＦＳＥｌｏ）細胞の百分率を示す。
【０１７４】
図５は、ＩＬ−２／ＩＬ−２ｍＡｂ複合体に対するインビボでのＭＰ  ＣＤ８＋細胞の増殖がＣＤ２５を必要としないことを示す。（Ａ）ＷＴ  Ｂ６マウス由来の精製したＴｈｙ１．１でマークされたＭＰ  ＣＤ１２２ｈｉＣＤ４４ｈｉＣＤ８＋Ｔ細胞をＣＦＳＥで標識し、そして正常Ｂ６（Ｔｈｙ１．２）マウスに移入し、次いで、１．５μｇのｒｍＩＬ−２＋５０μｇのＳ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂの１日おきのｉｐ注入を施した。養子移入後７日目に、ＬＮおよび脾臓細胞を、全ＣＤ３＋（左）、ドナーＴｈｙ１．１＋ＣＤ３＋（中央）、および宿主Ｔｈｙ１．１−ＣＤ３＋細胞（右）に対するＣＤ２５の発現について、フローサイトメトリーによって分析した。（Ｂ）ＷＴ（左側カラム）またはＣＤ２５−／−（右側カラム）マウス由来の精製したＴｈｙ１．２でマークされたＭＰ  ＣＤ８＋Ｔ細胞を、ＣＦＳＥで標識し、そしてＴｈｙ１．１でマークされた正常Ｂ６．ＰＬマウスに移入し、次いで、ＰＢＳ、１．５μｇのｒｍＩＬ−２、５０μｇのＳ４Ｂ６  ＩＬ−２ｍＡｂまたは１．５μｇのｒｍＩＬ−２＋５０μｇのＩＬ−２ｍＡｂを、ｉｐにて１日おきに注入した。養子移入の７日後、ＬＮおよび脾臓細胞をフローサイトメトリーによって分析した。数字は、分けられた（ＣＦＳＥｌｏ）細胞の百分率を示す。
【０１７５】
実施例３
モノクローナル抗体に特異的なサイトカイン抗体複合体に応答するＴ細胞サブセットの増殖
ＣＤ１２２ｈｉＣＤ８＋細胞のほぼ最適な拡大は、ＩＬ−２対ＩＬ−２ｍＡｂの予め混合された２：１のモル比での１週間の連日注入で生じた（図７Ａの矢印、図７Ｂ）。この比で、ＩＬ−２／ＩＬ−２ｍＡｂ複合体の単回注入でもＣＤ１２２ｈｉＣＤ８＋細胞のかなりの拡大を生じた（図７Ｃ）。Ｔ細胞移入前の多様な時間でのＩＬ−２／ＩＬ−２ｍＡｂ複合体の注入の結果に基づいて、ＩＬ−２／ＩＬ−２ｍＡｂ複合体の生物学的半減期は、相対的に短い、即ち、＜４時間であることが決定された（図７Ｄ）。
【０１７６】
Ｓ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂに加えて、本発明者らはまた、別の抗マウスＩＬ−２ｍＡｂ、ＪＥＳ６−５Ｈ４（ＪＥＳ６−５）、およびｒｍＩＬ−２（図６Ａ）ならびに抗ヒトＩＬ−２ｍＡｂ、ＭＡＢ６０２、および組み換えヒトＩＬ−２（ｒｈＩＬ−２）（図６Ｂ）による等価な増殖を観察した。ＩＬ−２と複合体化した場合、これらの３つのｍＡｂ（Ｓ４Ｂ６、ＪＥＳ６−５およびＭＡＢ６０２）のそれぞれは、養子移入においてＣＤ１２２ｈｉＣＤ８＋細胞の顕著な拡大（図６Ａ、６Ｂ）およびＭＰ  ＣＤ８＋細胞およびＮＫ細胞の両方を含む宿主ＣＤ１２２ｈｉ細胞の強力かつ選択的拡大を生じた。
【０１７７】
興味深いことに、第３の抗マウスＩＬ−２ｍＡｂ、ＪＥＳ６−１Ａ１２（ＪＥＳ６−１）による結果は、まったく異なる（図６Ａ）。ＩＬ−２／ＪＥＳ６−１複合体は、ＩＬ−２単独より低いＣＤ１２２ｈｉＣＤ８＋細胞の増殖を生じ、ＪＥＳ６−１がＩＬ−２に対するインビボでの応答を阻止したことが示された。しかし、ＪＥＳ６−１＋ＩＬ−２注入は、異なるＩＬ−２応答性集団、即ち、ＣＤ２５＋ＣＤ４＋細胞（図６Ｃ、Ｄ）の中等度の増殖をもたらした。これらの細胞は、顕著にＦｏｘｐ３＋であり、それ故Ｔｒｅｇｓに類似する。これらの細胞の拡大はまた、他のＩＬ−２ｍＡｂの注入によっても認められたが、この効果は、ＣＤ１２２ｈｉＣＤ８＋細胞の極めて大きな拡大によって妨げられた（図６Ｅ）。
【０１７８】
図６は、異なるＩＬ−２／ＩＬ−２ｍＡｂ複合体によるＴ細胞サブセットの選択的刺激を示す。ＣＦＳＥ標識ＭＰ  ＣＤ８＋Ｔ細胞をＢ６マウスに移入し、続いて、図３Ａに示されるように、（Ａ、Ｂ）コントロールｍＡｂ、ＩＬ−２（ＡにおいてｒｍＩＬ−２、ＢにおいてｒｈＩＬ−２）、ＩＬ−２ｍＡｂまたはＩＬ−２＋ＩＬ−２ｍＡｂの連日ｉｐ注入を施した。使用したＩＬ−２ｍＡｂは、（Ａ）抗マウスＳ４Ｂ６、ＪＥＳ６−５もしくはＪＥＳ６−１、または（Ｂ）抗ヒトＭＡＢ６０２であった。（Ｃ）ＭＰ  ＣＤ８＋Ｔ細胞をＢ６マウスに移入し、上記のようにコントロールｍＡｂ、ｒｍＩＬ−２、ＩＬ−２ｍＡｂ、またはｒｍＩＬ−２＋ＩＬ−２ｍＡｂの連日注入を施した。脾臓由来のドナーおよび宿主細胞を、７日目に認められたマーカーについて調べた。最後の３日間、（Ｄ）（Ｃ）のように処置したマウスに、飲料水中ＢｒｄＵを与えた。ＢｒｄＵ＋（＋ＳＤ、２マウス／グループ）であったＣＤ３＋ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｆｏｘｐ３ｈｉ細胞の百分率を示す。（Ｅ）（Ｃ）におけるマウス由来の脾臓におけるＣＤ４＋ＣＤ２５＋およびＭＰ  ＣＤ８＋細胞の全細胞数。バーの頂部の数字は、ＭＰ  ＣＤ８＋対ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞の比を示す。マウスを７日目に分析した（Ａ〜Ｅ）。数字は、分けられた（ＣＦＳＥｌｏ）細胞の百分率を示す（Ａ、Ｂ、Ｃ左側カラム、Ｃ）。
【０１７９】
図７は、ＭＰ  ＣＤ８＋細胞をインビボにおいてＩＬ−２／ＩＬ−２ｍＡｂ複合体で刺激するための要件を示す。（Ａ）精製したＴｈｙ１．１でマークされたＭＰ  ＣＤ８＋Ｔ細胞をＣＦＳＥで標識し、そしてＢ６マウスに移入し、次いで、力価測定した用量（０〜１０００μｇ）のＳ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂ＋一定濃度（１．５μｇ）のｒｍＩＬ−２の連日注入を施した。養子移入後の７日目、ＬＮおよび脾臓細胞をフローサイトメトリーによって分析した。矢印は、ＩＬ−２対ＩＬ−２ｍＡｂの２：１のモル比（即ち、ここで、いずれの試薬も過剰ではない）の注入で観察された増殖を示す。（Ｂ）精製されたＣＦＳＥ標識ＭＰ  ＣＤ８＋細胞のレシピエントに、ｒｍＩＬ−２／Ｓ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂ複合体の２：１モル比の力価測定した用量（１．５μｇのｒｍＩＬ−２＋８μｇのＳ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂから開始し、５倍ずつの希釈で力価低減した）を連日与えた。養子移入後の７日目、ＬＮおよび脾臓細胞をフローサイトメトリーによって分析した。（Ｃ）精製したＣＦＳＥ標識ＭＰ  ＣＤ８＋細胞のレシピエントに、養子移入後の多様な時間ポイント：０、ｒｍＩＬ−２＋Ｓ４Ｂ６なし；１、０日目にｒｍＩＬ−２＋Ｓ４Ｂ６；２、０および４日目にｒｍＩＬ−２＋Ｓ４Ｂ６；３、０、２および４日目にｒｍＩＬ−２＋Ｓ４Ｂ６；７、ｒｍＩＬ−２＋Ｓ４Ｂ６の連日注入で、１．５μｇのｒｍＩＬ−２＋８μｇのＳ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂのｉｐ注入を与えた。養子移入後の７日目にすべてのマウスを屠殺し、ＬＮおよび脾臓細胞をフローサイトメトリーによって分析した。（Ｄ）精製したＣＦＳＥ標識ＭＰ  ＣＤ８＋細胞のレシピエントに対し、Ｔ細胞の養子移入の７２時間、４８時間、２４時間、４時間もしくは３０分前、または時間ポイント０の養子細胞移入と同時に、１．５μｇのｒｍＩＬ−２（●）または１．５μｇのｒｍＩＬ−２＋５０μｇのＳ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂ（■）の単回注入を与えた。この図のすべてのデータを、最大増殖に対するパーセントとして表現し、ここで、最大増殖は１００％と設定し、そして他の値をそれに対して算出した。
【０１８０】
実施例４
ＩＬ−２の異なる部位に結合し得るモノクローナル抗体
上記の結果は、Ｓ４Ｂ６および関連ｍＡｂは、ＪＥＳ６−１ではなく、ＩＬ−２の異なる部位に結合し得ることを示唆した。ＩＬ−２／ＩＬ−２ｍＡｂサンドイッチＥＬＩＳＡアッセイは、この可能性について直接支持した（図９）。インビボの場合、ＪＥＳ６−１は、ＣＤ１２２（ＩＬ−２Ｒβγ）を介するインビトロでのＩＬ−２に対する正常およびＣＤ２５−／−ＭＰ  ＣＤ８＋細胞の両方の応答を完全に阻止した（図８Ａ、８Ｂ）。しかし、インビボでのＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇｓに関して、ＪＥＳ６−１／ＩＬ−２複合体は、高い親和性ＩＬ−２Ｒαβγを発現する細胞、即ち、ＣＤ２５＋ＣＤ３により活性化される生来のＣＤ８＋細胞の脆弱であるが重要なインビトロ刺激を誘導することが可能であった（図１０）；これらの細胞は、ＩＬ−２に対して極めて感受性であり、そしてＣＤ２５ｍＡｂによって容易に阻害された。それ故、ＪＥＳ６−１ｍＡｂは、ＣＤ１２２との相互作用に極めて重要であるが、ＣＤ２５（ＩＬ−２Ｒαβγ）への結合にはそれほど重要ではないＩＬ−２部位に、見かけ上結合する。対照的に、Ｓ４Ｂ６は、インビトロでのＭＰ  ＣＤ８＋細胞のＩＬ−２への応答を阻害する（または増強する）ことができなかった（図８Ａ、８Ｂ）が、ＣＤ３により活性化されるＣＤ８＋細胞のＩＬ−２応答を強力に阻害した（図１０）。従って、Ｓ４Ｂ６は、ＣＤ２５への結合を部分的に妨げるが、ＣＤ１２２への結合を妨げないＩＬ−２部位に結合する。特に、外因性のＩＬ−２と複合体化しない場合、ＪＥＳ６−１およびＳ４Ｂ６ｍＡｂの混合物は、ＭＰ  ＣＤ８＋細胞およびＴｒｅｇｓの両方について、インビボでのＴ細胞増殖をほとんど停止した（図１１）ことから、Ｓ４Ｂ６およびＪＥＳ６−１は、ＩＬ−２上の異なる部位を認識することがさらに示唆された。
【０１８１】
図８は、サイトカイン／ｍＡｂ複合体によるＴ細胞刺激の特徴を示す。（Ａ、Ｂ）ＷＴ（Ａ）またはＣＤ２５−／−（Ｂ）マウス由来の精製したＭＰ  ＣＤ８＋細胞を、ｒｍＩＬ−２＋Ｓ４Ｂ６ｍＡｂ（Ｓ４Ｂ６、■）、もしくはｒｍＩＬ−２＋ＪＥＳ６−１ｍＡｂ（ＪＥＳ６−１、▲）の２：１モル比の力価測定した濃度と共に、３日間培養した；可溶性ＩＬ−２＋関連性のないｍＡｂをコントロールとして使用した（コントロール、●）。増殖は、［３Ｈ］−チミジンを少なくとも１６時間添加することによって測定した。（Ｃ）精製したＣＦＳＥ標識ＭＰ  ＣＤ８＋細胞をＢ６マウスに移入し、次いで、１日おきに、コントロールｍＡｂ、ｒｍＩＬ−４、ＩＬ−４ｍＡｂ（ＭＡＢ４０４もしくは１１Ｂ１１）またはｒｍＩＬ−４＋ＩＬ−４ｍＡｂのｉｐ注入を施した。マウスを７日目に分析した。数字は、分けられた（ＣＦＳＥｌｏ）細胞の百分率を示す。（Ｄ）Ｂ６マウスに、１０００ｃＧｙを照射し、そして非分離型対Ｔ涸渇Ｂ６ＢＭ細胞をｉｖにて注入し、続いて、ＰＢＳ、ｒｍＩＬ−２、Ｓ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂまたはｒｍＩＬ−２＋Ｓ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂの連日ｉｐ注入を施した。養子移入の８日後、脾臓細胞をフローサイトメトリーによって分析した。非分離型ＢＭのレシピエント由来のＣＤ３＋ＣＤ４＋およびＣＤ３＋ＣＤ８＋細胞の平均細胞数を示す（＋ＳＤ、２マウス／グループ）。Ｔ涸渇ＢＭの注入では、Ｔ細胞数の回復は生じなかった。
【０１８２】
図９は、ＪＥＳ６−５およびＳ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂが、ＪＥＳ６−１の結合部位とは別のＩＬ−２上の類似の部位に結合することを示す。（Ａ）力価測定した濃度のｒｍＩＬ−２（２００ｐｇ／ｍｌから開始し、４倍ずつの希釈で力価低減した）を検出するために、捕捉ｍＡｂとしてのプレート結合非コンジュゲート型ＪＥＳ６−１および検出ｍＡｂとしてのビオチン化ＪＥＳ６−５による標準的なＩＬ−２サンドイッチＥＬＩＳＡを使用した。検出ｍＡｂの結合を、ストレプトアビジンコンジュゲート西洋ワサビペルオキシダーゼを基質ｏ−フェニレンジアミンと共に使用して定量し、そして４５０ｎｍで吸光度を測定した（材料および方法を参照のこと）。（Ｂ）（Ａ）におけるＥＬＩＳＡアプローチを、捕捉ｍＡｂとしてのＪＥＳ６−１＋一定濃度（２００ｐｇ／ｍｌ）のｒｍＩＬ−２を使用して改変した。次いで、精製した非コンジュゲート型競合ｍＡｂを、力価測定した濃度（１００μｇ／ｍｌから開始して５倍ずつ希釈）でウェルに添加し、これらのｍＡｂがビオチン化ＪＥＳ６−５検出ｍＡｂの結合を阻止し得るかどうかについて検出した。使用した競合ｍＡｂは、コントロールｍＡｂ、ＪＥＳ６−１、ＪＥＳ６−５、またはＳ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂであった。次いで、サンプルを上記のように測定した。
【０１８３】
図１０は、ＩＬ−２／ＩＬ−２ｍＡｂ複合体のインビトロでの効果を示す。Ｂ６マウス由来の精製ＭＰ  ＣＤ８＋細胞（Ａ左側カラム）、またはプレート結合抗ＣＤ３ｍＡｂ（ＣＤ３活性ＣＤ８＋；Ａ右側カラム、およびＢ）によって活性化される全ＣＤ８＋細胞を、ｒｍＩＬ−２＋Ｓ４Ｂ６ｍＡｂ（Ｓ４Ｂ６／ＩＬ−２、中央の行）、またはｒｍＩＬ−２＋ＪＥＳ６−１ｍＡｂ（ＪＥＳ６−１／ＩＬ−２、底部）の２：１モル比の力価測定した濃度と共に、３日間、培養した；可溶性ＩＬ−２＋関連性のないｍＡｂをコントロールとして使用した（ＩＬ−２、上の図）。一定濃度（１０μｇ／ｍｌ）の関連性のないコントロールｍＡｂ（＋コントロール、●）、ＣＤ２５ｍＡｂ（＋ＣＤ２５、■）、またはＣＤ１２２ｍＡｂ（＋ＣＤ１２２、▲）もまた、ウェルに添加した。（Ｂ）（Ａ）のように調製したＣＤ３活性ＣＤ８＋細胞を、ｒｍＩＬ−２＋Ｓ４Ｂ６ｍＡｂ（Ｓ４Ｂ６、■）、もしくはｒｍＩＬ−２＋ＪＥＳ６−１ｍＡｂ（ＪＥＳ６−１、▲）の２：１モル比の力価測定した濃度と共に、３日間培養した；可溶性ＩＬ−２＋関連性のないｍＡｂをコントロールとして使用した（コントロール、●）。増殖は、［３Ｈ］−チミジンを少なくとも１６時間添加することによって測定した。
【０１８４】
図１１は、Ｓ４Ｂ６およびＪＥＳ６−１ＩＬ−２ｍＡｂの混合物を注入することは、ＭＰ  ＣＤ８＋細胞およびＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞の両方の増殖を阻止することを示す。（Ａ）ＷＴ  Ｂ６マウス由来の精製したＴｈｙ１．１でマークされたＭＰ  ＣＤ１２２ｈｉＣＤ４４ｈｉＣＤ８＋Ｔ細胞をＣＦＳＥで標識し、そして正常Ｂ６（Ｔｈｙ１．２）マウスに移入し、次いで、それらに、ＰＢＳ、５０μｇのＳ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂ、５０μｇのＪＥＳ６−１ＩＬ−２ｍＡｂ、または５０μｇの濃度のＳ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂを５０μｇのＪＥＳ６−１ＩＬ−２ｍＡｂと共に、毎日ｉｐで注入した。養子移入後の７日目、ＬＮおよび脾臓細胞をフローサイトメトリーによって分析した。数字は、分けられた（ＣＦＳＥｌｏ）細胞の百分率を示す。（Ｂ）（Ａ）のように処置したマウスを７日後に屠殺し、そして（内因性）ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞をフローサイトメトリーによって分析（左）し、そして定量（右）した。数字は、４分割中のＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞の百分率を示す。右側のデータは、ＣＤ２５ｈｉであったＣＤ４＋細胞のパーセントを指す。
【０１８５】
実施例５
ＩＬ−２＋Ｆ（ａｂ’）２モノクローナル抗体フラグメントの複合体は、ＩＬ−２＋無傷（Ｉｎｔａｃｔ）なモノクローナル抗体の複合体ほど刺激性ではない
ＩＬ−２／ＩＬ−２ｍＡｂ複合体がインビボで何故それほど強力であるかについては明らかではない。抗体への結合は、ＩＬ−２、およびまたＩＬ−４のインビボでの半減期を増加することができることが先に報告されたが、ＮＫ細胞により仲介される腫瘍拒絶の中等度の増加を誘導すること以外、ＩＬ−２／ＩＬ−２ｍＡｂ複合体のＴ細胞に対する効果はモニターされなかった。Sato et al.,Biotherapy6:225,1993;Finkelman et al.,J Immunol151:1235,1993;Courtney et al.,Immunopharmacology28:223,1994。抗ＩＬ−２ｍＡｂのＦｃ部分を取り出すことは、ＩＬ−２の半減期の増加を変更せず、そしてＮＫ細胞仲介抗腫瘍活性の増加を縮小しなかったことも報告された。Sato et al.,Biol Pharm Bull17:1101,1994。対照的に、ここで報告されたＣＤ１２２ｈｉＭＰＣＤ８＋細胞の顕著な拡大について、Ｆ（ａｂ’）２ｍＡｂフラグメントは、無傷（ｉｎｔａｃｔ）なｍＡｂほど刺激性ではなかった（図１２）ことから、複合体は、ｍＡｂＦｃ領域を介して細胞に結合してきたことが示唆された。そのような提示は、非常に有効であり、そして何故ＩＬ−２／ＩＬ−２ｍＡｂ複合体がインビボにおいてインビトロよりはるかに刺激性であるかを説明し得る。
【０１８６】
図１２は、ＩＬ−２ｍＡｂのＦ（ａｂ’）２フラグメントが、ＩＬ−２ｍＡｂ全体ほど効率的ではないことを示す。（Ａ）Ｂ６マウス由来の精製したＴｈｙ１．１でマークされたＭＰ  ＣＤ１２２ｈｉＣＤ４４ｈｉＣＤ８＋Ｔ細胞をＣＦＳＥで標識し、そして正常なＢ６（Ｔｈｙ１．２）マウスに移入し、次いで、ＰＢＳ、１．５μｇのｒｍＩＬ−２、５０μｇのＳ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂ全体、１．５μｇのｒｍＩＬ−２＋５０μｇのＳ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂ全体、５０μｇのＦ（ａｂ’）２Ｓ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂ、または１．５μｇのｒｍＩＬ−２＋５０μｇのＦ（ａｂ’）２Ｓ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂのｉｐ注入を１日おきに施した。７日後、ＬＮおよび脾臓細胞をフローサイトメトリーによって分析した。数字は、分けられた（ＣＦＳＥｌｏ）細胞の百分率を示す。（Ｂ）ＩＬ−２感受性細胞系統ＣＴＬＬ−２のｒｍＩＬ−２駆動性増殖を阻害するその能力について、Ｆ（ａｂ’）２Ｓ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂを、インビトロでＳ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂ全体と比較した。ＣＴＬＬ−２細胞、２×１０４細胞／ウェルを、４８時間、一定の濃度（１００ｎｇ／ｍｌ）のｒｍＩＬ−２および力価測定した用量のＦ（ａｂ’）２Ｓ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂ（■）またはＳ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂ全体（●）のいずれかの存在下で、培養した。ＩＬ−２ｍＡｂ結合部位対ｒｍＩＬ−２分子の比を示す。１μｇのＦ（ａｂ’）２Ｓ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂ（ＭＷ約１００ｋＤ）は、ＩＬ−２結合部位について、１．５μｇのＳ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂ全体（ＭＷ約１５０ｋＤ）に等しい。増殖は、［３Ｈ］−チミジンを、少なくとも２４時間の培養期間、添加することによって測定した。
【０１８７】
ＩＬ−２／ＩＬ−２ｍＡｂ複合体の刺激効果はまた、ＩＬ−４およびＩＬ−４ｍＡｂ（図８Ｃ）ならびにＩＬ−７およびＩＬ−７ｍＡｂ（図１６）の複合体に適用した。それ故、これらのサイトカイン／ｍＡｂ複合体の注入後のＣＤ８＋細胞の増殖は、サイトカインまたはｍＡｂ単独よりもかなり高かった。
【０１８８】
Ｓ４Ｂ６および関連抗体では、ＩＬ−２／ＩＬ−２ｍＡｂ複合体を注入することは、腫瘍免疫療法、および骨髄（ＢＭ）移植後にＴ細胞数を拡大するのに臨床的に有用であり得る。この後者の考えを支持して、照射されたマウスに非分離型ＢＭ細胞を与え、次いで、ＩＬ−２／Ｓ４Ｂ６注入のコースは、移入１週間後に早くも成熟Ｔ細胞数、特に、ＣＤ８＋細胞の迅速な回復を示した（図８Ｄ）。逆に、ＩＬ−２およびＪＥＳ６−１または関連ｍＡｂによるＣＤ４＋Ｔｒｅｇｓの拡大は、自己免疫疾患を処置するのに有用であり得る。
【０１８９】
実施例６
ＩＬ−２／ＩＬ−２ｍＡｂ複合体は、共有結合したＩＬ−２Ａｂ組み換え融合タンパク質より有意に高い生物学的活性を示す
９０年代初期にそれらが紹介されたときは、おそらく、Ａｂに共有結合したサイトカインからなる組み換え融合タンパク質と同時に出現したため、それ以来、サイトカイン／ｍＡｂ複合体は、ごく僅かしか注目されていない（Davis and Gillies,Cancer Immunol Immunother52:297-308,2003;Cruz et al.,Clin Exp Med4:57-64,2004）。サイトカイン／ｍＡｂ複合体の増加した生物学的活性は、主として、サイトカインの半減期の増加を反映すると考えられたため、産生におけるそれらの簡便性および汎用性により、組み換え融合タンパク質の方が好まれた。それ故、融合タンパク質が構築され、それによって、ＩＬ−２、ＧＭ−ＣＳＦまたはＩＬ−１２が、インビボでの長期寿命を促進するための抗ハプテンｍＡｂか、または腫瘍抗原に反応性であり、それ故、サイトカインを腫瘍部位に指向するｍＡｂのいずれかに共有結合された（Davis and Gillies,Cancer Immunol Immunother52:297-308,2003;Cruz et al.,Clin Exp Med4:57-64,2004;Lode et al.,Pharmacol Ther 80:277-292,1998）。少なくとも２つのＡｂ−ＩＬ−２融合タンパク質が作製され、そして過去１３年間、研究された（Davis and Gillies,Cancer Immunol Immunother52:297-308,2003;Cruz et al.,Clin Exp Med4:57-64,2004;Lode et al.,Pharmacol Ther 80:277-292,1998）。マウスにおける研究により、これらの融合タンパク質は、Ａｂもしくはサイトカイン単独かまたは共有結合を伴わない混合物としてのいずれかより有意に良好な殺腫瘍活性を示したことが明らかにされた（Davis and Gillies,Cancer Immunol Immunother52:297-308,2003;Cruz et al.,Clin Exp Med4:57-64,2004;Lode et al.,Pharmacol Ther80:277-292,1998）。しかし、殺腫瘍活性がＣＤ８細胞およびＮＫ細胞を必要としたことを示した以外、Ｔ細胞サブセットに対する融合タンパク質の直接的インビボ効果は、主として見落とされた。
【０１９０】
融合タンパク質の生物学的活性がインビボ条件下のサイトカイン／ｍＡｂ複合体の活性と同一であることが予想され得るが、これらの構築物は未だ直接比較されていない。このため、本発明者らは、最近、ＩＬ−２／ｍＡｂ複合体との比較のために、シェリエ・モリソン（Ｓｈｅｒｉｅ  Ｍｏｒｒｉｓｏｎ）博士（ＵＣＬＡ、カリフォルニア州）からＡｂ−ＩＬ−２融合タンパク質を入手した。抗ＤＮＳ−ＩｇＧ３−ＩＬ−２と呼ばれる組み換え融合タンパク質は、ハプテン、ダンシル（５−ジメチルアミノナフタレン１−塩化スルホニル、ＤＮＳ）に特異的なマウス可変領域を伴うヒトＩｇＧ３定常領域を含有するキメラＡｂのＦｃ末端に共有結合したヒトＩＬ−２からなる（Harvill et al.,J Immunol157:3165-3170,1996）。ＤＮＳはマウスにおいて見出されないため、この融合タンパク質は、サイトカイン／ｍＡｂ複合体に類似して、体系的に持続すべきである。マウスにおける抗ＤＮＳ−ＩｇＧ３−ＩＬ−２融合タンパク質のインビボ半減期は、約７時間と測定され（Harvill et al.,J Immunol157:3165-3170,1996）、これはＩＬ−２／ｍＡｂ複合体の半減期に類似し（Sato et al.,Biotherapy6:225-231,1993）、そして他のＡｂ−ＩＬ−２融合タンパク質ｃｈ１４．１８−ＩＬ−２より若干長い（Kendra et al.,Cancer Immunol Immunother48:219-229,1999）。インビトロ条件下で、これらのすべての試薬は、遊離のｒＩＬ−２に類似のＩＬ−２活性を示した（Gillies et al.,Proc Natl Acad Sci USA 89:1428-32;Harvill and Morrison,Mol Immunol33:1007-1014,1996）。
【０１９１】
ＩＬ−２／ＩＬ−２ｍＡｂ複合体に対し、抗ＤＮＳ−ＩｇＧ３−ＩＬ−２融合タンパク質の生物学的活性を直接比較するために、Ｂ６．ＰＬマウス由来のＣＦＳＥ標識ＭＰ  ＣＤ８細胞を精製し、非照射Ｂ６マウスのグループに注入し、次いで、ＰＢＳ、ｒｈＩＬ−２、融合タンパク質または複合体のいずれかをモル等量用量で注入した。融合タンパク質はヒトＩＬ−２を伴って構築されたため、複合体を、ｒｈＩＬ−２と抗ヒトＩＬ−２ｍＡｂ（ＭＡＢ６０２）とを結合することによって作製し、本発明者らは、これがマウスＭＰ  ＣＤ８細胞の増殖を誘導するのに極めて有効であることを示した（図６Ｂ）。顕著に、コントロールｒｈＩＬ−２／ＭＡＢ６０２複合体によって誘導される効率的なドナー細胞増殖とは異なり、予想されるＩＬ−２活性を示す抗ＤＮＳ−ＩｇＧ３−ＩＬ−２融合タンパク質は、ドナー細胞増殖を促進するのに必要最小限に有効であった；事実、融合タンパク質は、新鮮ｒｈＩＬ−２より良好ではなかった（図１３）。この所見は、ＩＬ−２／ｍＡｂ複合体が類似の融合タンパク質より有意に高いインビボ生物学的活性を示すことを強く示唆する。
【０１９２】
図１３は、ＩＬ−２／ｍＡｂ複合体がＡｂ−ＩＬ−２融合タンパク質より有意に強力であることを示す。ＣＦＳＥ標識Ｔｈｙ−１．１メモリー表現型（ＭＰ）ＣＤ８細胞を正常Ｂ６マウスに移入し、次いで、ＰＢＳ、１μｇのｒｈＩＬ−２、１μｇのｒｈＩＬ−２＋５μｇのＭＡＢ６０２またはモル等量の（約１０μｇ）の抗ＤＮＳ−ＩｇＧ３−ＩＬ−２融合タンパク質のいずれかを１日おきに注入し、次いで、宿主ＬＮにおけるドナーＣＤ８細胞のＣＦＳＥプロファイルを実験開始の７日後に分析した（左側）。ＣＴＬＬ−２細胞をモル等量の力価測定濃度のｒｈＩＬ−２または抗ＤＮＳ−ＩｇＧ３−ＩＬ−２融合タンパク質と共にインキュベートすることによって、ＩＬ−２活性を測定した（右側）。
【０１９３】
実施例７
生来の対のＴ細胞を拡大するＩＬ−７／ＩＬ−７モノクローナル抗体複合体の能力
ＩＬ−７は、ＩＬ−２、−４、−９、−１５および−２１のような同じファミリーのサイトカインに属する小さな（ＭＷ：約２５Ｋｄ）Ｉ型サイトカインである（Fry and Mackall,J Immunol174:6571-76,2005;Sugamura et al.,Annu Rev Immunol14:179-205.1996）。ＩＬ−７は、Ｂ細胞の祖先の増殖を支持するその能力について１９８８年に最初に発見され、そして遺伝子が骨髄（ＢＭ）間質細胞系統からクローニングされた（Namen et al.,Nature333:571-73,1988;Namen et al.,J Exp Med167:988-1002,1988）。続いて、ＩＬ−７が胸腺におけるαβおよびγδＴＣＲサブセットの両方のＴ細胞の祖先の増殖および分化を促進するという所見（Conlon et al.,Blood74:1368-73,1989;Watanbe et al.,Int Immunol3:1067-75,1991）、ならびにＩＬ−７およびＩＬ−７受容体（Ｒ）欠損マウスの作製に伴うこれらの役割の確認（Peschon et al.,J Exp Med180:1955-60,1994;vonFreeden-Jeffry et al.,J Exp Med181:1519-26,1995）から開始して、ＩＬ−７のＴ細胞指向性機能が理解された。これらの変異マウスにおけるＢおよびＴ細胞発達の両方における重度の損傷から、ＢおよびＴリンパ球新生におけるＩＬ−７の非冗長的役割が実証された。それにもかかわらず、欠損ＩＬ−７Ｒを伴う免疫不全ヒト患者はＴ細胞を重度に欠損するが、正常な数のＢ細胞を所有するため、異なる種間のＩＬ−７に依存するばらつきが認められる（vonFreeden-Jeffry et al.,J Immunol161:5673-5680,1998;Puel et al.,Nat Genet20:394-97,1998;vonFreeden-Jeffry et al.,Immunity7:147-154,1997;Schluns et al.,Nature Immunol1:426-32,2000;Tan et al.,Proc Natl Acad Sci USA98:8732-37,2001）。δ
【０１９４】
成熟Ｔ細胞プールの全体的サイズおよび組成は、恒常性機構によって調節される。Surh et al.,Sem.Immunol.17:183,2005;Schluns et al.,Nat Rev Immunol.3:269,2003;Jameson Nat Rev Immunol.2:547,2002。一定数の生来のＴ細胞の生存には、自己ＭＨＣ／ペプチドリガンドおよびＩＬ−７との接触から生じるシグナルを必要とするが、ＩＬ−７およびＩＬ−１５との接触から生じるシグナルは、一定数のメモリーＴ細胞の生存に必要である。Surh et al.,Sem.Immunol.17:183,2005;Schluns et al.,Nat Rev Immunol.3:269,2003;Jameson Nat Rev Immunol.2:547,2002。Ｔ細胞プールの全体的サイズを調節する恒常性機構の存在は、Ｔ細胞が、Ｔ細胞（Ｔ）欠損に応答して自発的な「恒常性」拡大を経験する能力を有するという所見によって、明らかである。Ernst et al.,Immunity11:173,1999;Goldrath et al.,Immunity11:183,1999。さらに、Ｔ細胞の恒常性拡大は、ＩＬ−７およびＩＬ−１５に依存する。それ故、ＩＬ−７の非存在下では、生来のＴ細胞の恒常性拡大は発生し得ず、そしてＩＬ−７およびＩＬ−１５メモリーＴ細胞の両方の非存在下では、恒常性拡大を経験することができない。Schluns et al.,Nat Immunol1:426,2000;Tan et al.,Proc Natl Acad Sci98:8732,2001;Tan et al.,J Exp Med195:1523,2002;Goldrath et al.,J Exp Med195:1515,2002。これらの所見は、構成的に産生される基底レベルのＩＬ−７およびＩＬ−１５が有限数のＴ細胞の生存を支持し、そしてＴ細胞涸渇時は、利用されないためにＩＬ−７およびＩＬ−１５の基底濃度が増加し、そして残留するＴ細胞を駆動して、恒常性拡大を経験させるという現在のパラダイムを包括的にもたらしている。Surh et al.,Sem.Immunol.17:183,2005。生来のＴ細胞の生存および恒常性拡大はＩＬ−７にほとんど排他的に依存しているが、メモリーＴ細胞の生存および恒常性増殖は、ＩＬ−７またはＩＬ−１５のいずれか、しかし、最適には、ＩＬ−７およびＩＬ−１５の両方によって支持され得ることが強調されるべきである。Surh et al.,Sem.Immunol.17:183,2005;Schluns et al.,Nat Rev Immunol.3:269,2003;Jameson Nat Rev Immunol.2:547,2002。
【０１９５】
インビボで有効であるために、ＩＬ−７は、大量に注入されるべきである。例えば、血中レベルを１０〜１００倍上昇させるのに十分な量で、３週間、ＩＬ−７を注入しても、ヒトではＴ細胞数が僅か３〜７倍にしか増加しなかった［Rosenberg,2006#1889］。従って、おそらく、短い半減期またはリンパ組織の適切な部位に到達することができないことのため、投与されたＩＬ−７の多くは、生物学的活性を制限し得る。前者に関しては、ＩＬ−７を含むいくらかのγｃサイトカインの半減期が、特異的抗サイトカインｍＡｂに結合することによって、増加され得ることが数年前に示された［Sato,1993#1805;Courtney,1994#1895;Finkelman,1993#1775;Valenzona,1998#1896;Klein,1995#1876］。しかし、ＩＬ−２について、本発明者らは、最近、サイトカイン半減期の増加のみを原因とし得る場合より、ＩＬ−２ｍＡｂとの会合がインビボでサイトカイン活性に対するよりさらに劇的な効果を有することを示した［Boyman,2006#1835;Kamimura,2006#1840］。この報告では、本発明者らは、ＩＬ−７／ＩＬ−７ｍＡｂ複合体が、プレＢ細胞、およびプレＴ細胞の拡大を引き起こすのに遊離のＩＬ−７よりはるかに優れていることを示している。これらの複合体はまた、成熟ＣＤ４＋およびＣＤ８＋Ｔ細胞に強力に作用し、そして正常なＴ細胞充満条件（Ｔ  ｃｅｌｌ−ｒｅｐｌｅｔｅ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ）下で、生来のおよびメモリーＴ細胞の両方に効率的な恒常性拡大を経験させる。
【０１９６】
ＩＬ−７／ＩＬ−７ｍＡｂ複合体は、サイモポイエシス（ｔｈｙｍｏｐｏｉｅｓｉｓ）を増大または回復することができる。ｒｈＩＬ−７／ＩＬ−７ｍＡｂ（Ｍ２５）複合体を注入したＢ６マウスの胸腺は、ほとんどの場合、ＣＤ４／ＣＤ８二重陽性（ｄｏｕｂｌｅ  ｐｏｓｉｔｉｖｅ）（ＤＰ）細胞の数の増加から、ＰＢＳ注入Ｂ６マウスから１５〜２０％高い細胞性を有した（図１４）。サイモポイエシスに対する効果をより良好に評価するために、極めて小さな胸腺（１０、１１）を有するＩＬ−７−／−マウスのグループに、ｒｈＩＬ−７／Ｍ２５複合体、ｒｈＩＬ−７単独またはＰＢＳを注入した。３日間の間隔を置いた１．５μｇのｒｈＩＬ−７＋１５μｇのＭ２５の２回の注入により、ＩＬ−７−／−マウスの胸腺は顕著に肥大し、７日までに５０〜１００倍の細胞性の増加が示された；対照的に、１．５μｇのｒｈＩＬ−７単独の注入は、相対的に少ない２〜３倍の細胞数の増加しか誘導しなかった（図１４）。胸腺細胞のＣＤ４−ＣＤ８−（ＤＮ）集団の分析により、ｒｈＩＬ−７／Ｍ２５複合体の注入は、ＩＬ−７−／−マウスにおいて重度に欠損したＣＤ２５＋ＣＤ４４−ＤＮ３およびＣＤ２５−ＣＤ４４−ＤＮ４細胞の選択的出現を誘導したことが示された；これらの細胞は、１．５μｇのｒｈＩＬ−７単独の注入では回復しなかった（図１４Ａ）。注入したＩＬ−７−／−マウスの胸腺は、複合体の注入の３週間後までに低細胞状態に復帰したため、ｒｈＩＬ−７／Ｍ２５複合体によって誘導されるサイモポイエシスの回復は一過的であった（図１４Ｂ、左）。胸腺に対する顕著な影響とは対照的に、ｒｈＩＬ−７／Ｍ２５複合体の注入により、ＩＬ−７−／−マウスの脾臓細胞性は僅か２倍しか増加しなかったことが述べられるべきである。
【０１９７】
ｒｈＩＬ−７／Ｍ２５複合体の相対的生物学的活性を評価するために、ＩＬ−７−／−マウスに、中等度用量（１＋５μｇ）のｒｈＩＬ−７／Ｍ２５複合体対力価測定した用量（１、１０および１００μｇ）の遊離のｒｈＩＬ−７を７日間に２回注入した。顕著な所見は、Ｍ２５に結合した１μｇのｒｈＩＬ−７によって誘導される胸腺の肥大が、１００μｇの遊離のｒｈＩＬ−７を注入することによって引き起こされる胸腺のサイズに等価であったことである（図１４Ｂ、右）。
【０１９８】
図１５〜１８は、ＩＬ−７より増加したＩＬ−７／ＩＬ−７ｍＡｂ複合体の生物学的活性のさらなる証拠を提供する。図１５は、ＩＬ−７／ＩＬ−７ｍＡｂ（Ｍ２５）複合体が生来のＴ細胞の恒常性増殖を誘導することを示す。ＩＬ−７／Ｍ２５複合体が成熟Ｔ細胞の拡大を誘導する能力を評価するために、ＣＦＳＥ標識ＣＤ４５コンジェニックＢ６．ＣＤ４５．１ＬＮ細胞を、照射されていない正常Ｂ６マウスに養子移入した。次いで、これらの宿主に、ｒｈＩＬ−７／Ｍ２５複合体を注入（１．５＋７．５μｇ、７日間で３回）し、そしてドナー細胞の運命を分析した；コントロール宿主にＰＢＳのみ、ｒｈＩＬ−７またはＭ２５を施した。特に、ドナーＢおよびＴ細胞は、コントロール宿主において増殖しない一方、ｒｈＩＬ−７／Ｍ２５複合体の注入は、ほとんどのドナーＣＤ８＋細胞の４〜５ラウンドまでの増殖、ドナーＣＤ４＋細胞の約半分の１ラウンドの増殖、およびドナーＢ２２０＋Ｂ細胞のほとんど認められない増殖を誘導した（（図１５Ａ）。緩徐な速度の増殖を考慮すると、ｒｈＩＬ−７／Ｍ２５複合体は、正常Ｔ細胞充満宿主（Ｔ  ｃｅｌｌ−ｒｅｐｌｅｔｅ  ｈｏｓｔｓ）中にあるにもかかわらず、自己ＭＨＣ／ペプチドリガンドに応答して、ドナーＴ細胞の「恒常性」増殖を生じる可能性がある。この見解に一致して、ｒｈＩＬ−７／Ｍ２５誘導性増殖、試験した２つの系統の生来のＴＣＲトランスジェニックＣＤ８＋細胞（Ｐ１４およびＯＴ−１）、ならびに生来のＣＤ８＋細胞の増殖は、主として、ＭＨＣクラスＩ分子の非存在下、即ち、ＴＡＰ−１−／−宿主において停止された。さらに、ｒｈＩＬ−７／Ｍ２５複合体の注入により、生来のＴ細胞は、恒常性増殖性ドナー生来Ｔ細胞を支持しないＩＬ−７−／−宿主において恒常性増殖を経験した（図１５Ｂ）。ここで、等価用量のｒｈＩＬ−７単独のコントロール注入は、ドナーＴ細胞増殖を引き起こすことができなかった（図１５Ｂ）。最終的に、抗ＩＬ−７ＲαｍＡｂ  Ａ７Ｒ３４を複合体と同時注入した場合、増殖が完全に停止されたため、ｒｈＩＬ−７／Ｍ２５は、ＩＬ−７Ｒを直接活動させることによってドナーＴ細胞の増殖を誘導した。
【０１９９】
リンパ球減少性（ｌｙｍｐｈｏｐｅｎｉｃ）宿主（１２、１３）における内因性ＩＬ−７に対する恒常性増殖について、ｒｈＩＬ−７／Ｍ２５複合体の注入により、ＣＤ８＋細胞よりかなり弱いＣＤ４＋細胞の増殖が生じた。マウス（ｍ）ＩＬ−７Ｒは、ｒｍＩＬ−７より僅かに低い親和性でｒｈＩＬ−７に結合するため、本発明者らは、ＣＤ４＋細胞に対するｒｍＩＬ−７／Ｍ２５複合体の効果について調べた。特に、ｒｍＩＬ−７／Ｍ２５複合体は、ｒｈＩＬ−７／Ｍ２５複合体より２〜３倍大きな生物学的活性を示し、そして正常Ｂ６宿主における細胞のドナーＣＤ４＋およびＣＤ８＋サブセットの両方の効率的な増殖を有意に誘導した（図１５Ｃ）。これらの複合体をより高い用量で注入する場合、ＣＤ４＋およびＣＤ８＋細胞サブセットの両方増殖はまた、ｒｈＩＬ−７／Ｍ２５複合体でも認められた。これらの宿主における生来のＴ細胞プールのサイズが約３倍増かしたため、拡大はまた、宿主Ｔ細胞についても適用した。Ｂ細胞前駆体の大規模な増大が、先に報告されたように、ＩＬ−７＋Ｍ２５複合体を注入したマウスの脾臓および骨髄において観察された。Finkelman et al.,J Immunol151:1235,1993。
【０２００】
図１６は、ｒｈＩＬ−７＋Ｍ２５（ＩＬ−７／ｍＡｂ）複合体が、生来およびメモリーＴ細胞の両方の拡大を駆動することができることを示す。ＩＬ−７／ｍＡｂ複合体は、メモリー（ＣＤ４４ｈｉ）ＣＤ８細胞を拡大するのにＩＬ−２／ｍＡｂ複合体とほとんど同程度に効率的であるが、ＩＬ−７／ｍＡｂは、生来の（ＣＤ４４ｌｏ）ＣＤ８細胞の拡大を誘導するのにＩＬ−２／ｍＡｂよりかなり効率的である。ＩＬ−７／ｍＡｂ複合体はまた、生来およびメモリーＣＤ４細胞の恒常性増殖を誘導するが、但し、ＣＤ８細胞より低い速度で誘導することを見出した（図１５Ｃ）。実験手順では、ＣＦＳＥ標識Ｂ６．Ｔｈｙ−１．１生来の（ＣＤ４４ｌｏ）および精製メモリー（ＣＤ４４ｈｉ）ＣＤ８細胞を正常Ｂ６マウスに注入し、次いで、宿主に、ＰＢＳ、ＩＬ−７＋Ｍ２５（１．５＋１５μｇ）、またはＩＬ−２＋Ｓ４Ｂ６（１．５＋１５μｇ）を１日おきに注入した。細胞注入の７日後、Ｔｈｙ−１．１、およびＣＤ８について宿主脾臓細胞を染色した後、フローサイトメトリーによって、ドナーＴ細胞を分析した。ゲートされたドナーＣＤ８細胞のＣＦＳＥプロファイルを示す。ＬＮからも同様のデータが得られた。
【０２０１】
図１７は、抗ＩＬ−７ｍＡｂ  Ｍ２５のＦｃ部分が、ＩＬ−７に対して複合体化される場合、その増強効果が必要であることを示す。Ｍ２５からＦｃ部分を取り出すと、生来のＴ細胞の拡大を誘導するＩＬ−７＋Ｍ２５複合体の能力のほとんどが破壊される。実験手順では、ＣＦＳＥ標識Ｂ６．Ｔｈｙ−１．１ＬＮ細胞を正常Ｂ６マウスに注入し、次いで、宿主に、ＰＢＳ、ＩＬ−７＋Ｍ２５（１．５＋１５μｇ／注入）、またはＩＬ−７＋Ｍ２５  Ｆａｂ（１．５＋１５μｇ／注入）を１日おきに注入した。細胞注入の７日後、Ｔｈｙ−１．１、ＣＤ４およびＣＤ８について宿主ＬＮ細胞を染色した後、フローサイトメトリーによって、ドナーＴ細胞を分析した。ゲートされたドナーＣＤ４およびＣＤ８細胞のＣＦＳＥプロファイルを示す。脾臓からも同様のデータが得られた。
【０２０２】
図１８は、年齢の進行に伴って認められる生来のＴ細胞の恒常性の欠損を回復するＩＬ−７／ｍＡｂ複合体の能力を示す。若齢個体における成熟Ｔ細胞プールは、ほとんど生来の細胞からなる。加齢は、全数およびＣＤ４＋対ＣＤ８＋細胞の比を有意に変更しないが、生来の細胞の補償的減少に伴いメモリー細胞の割合が漸次増加することに関連する。Hodes Immunol.Rev.160:5,1997;Miller Vaccine18:1654,2000;Linton et al.,Nat.Immunol.5:133,2004。生来およびメモリー細胞の提示の加齢に関連する移行の正確な原因は不明であるが、最も単純に考えると、これは、生涯を通して生来の細胞のメモリー細胞への継続的な抗原駆動性変換と組み合わされた生来の細胞の胸腺の出力の減少を反映する。しかし、加齢による生来のＴ細胞の消失に寄与するおそらく複数の機構が存在するため、この見解は、あまりに単純な措置である可能性がある。１つの可能性のある寄与因子は、生存および成熟Ｔ細胞プールの全体的サイズを調節する恒常性機構の欠損であり得る。本発明者らは、最近、加齢が、生来のＴ細胞の恒常性を支持する先天的能力の重度の低下に関連する証拠を見出した。この欠損は、関連するＩＬ−７であるようであるが、ＩＬ−７の産生の低下によるものではない。むしろ、Ｔ細胞に対するＩＬ−７の提示に問題があるように思われる。この欠損の根底にある原因は未だ同定されていないが、本発明者らは、生来のＴ細胞の恒常性を支持する能力の加齢誘導性低下を反転する新規の方法について説明する。
【０２０３】
図１８は、外因性の遊離のＩＬ−７が非効率的であるが、ＩＬ−７／ｍＡｂ複合体は加齢したマウスの恒常性欠損を効率的に回復することができることを示す。加齢が生来のＴ細胞の恒常性を支持する能力の欠損と関連するという事実を、図１８Ａに示す。ここで、リンパ球減少性宿主が恒常性拡大を指示する能力は、約１歳の年齢から開始して低下し、そして１６箇月齢まで重度に損傷されることが示される。老齢マウスが生来のＴ細胞の恒常性拡大を指示することができないことを回復できるかどうかを決定するために遊離のＩＬ−７およびＩＬ−７／ｍＡｂ複合体の注入の効果を試験した。図１８Ｂに示されるように、ＩＬ−７／ｍＡｂ複合体の注入は、老齢宿主における欠損を完全に回復することが可能であったが、遊離のＩＬ−７を注入することは非効率的であった。
【０２０４】
図１８は、加齢が、生来のＴ細胞の恒常性増殖を支持する能力の重度の低下に関連し、そしてこれは、抗ＩＬ−７ｍＡｂ複合体との組み合わせでＩＬ−７を使用して回復させることができることを示す。（Ａ）生来のＴ細胞の恒常性を支持する能力は、加齢と共に低下する。多様な加齢（１．５〜２２箇月）のＢ６マウスグループに、照射（６００ｃＧｙ）し、そして若齢（２箇月）Ｂ６．Ｔｈｙ１．１マウス由来の１×１０６個のＣＦＳＥ標識ＬＮ細胞を注入し、そしてドナーＴ細胞のＣＦＳＥプロファイルを７日後に分析した。宿主ＬＮ由来の結果を示す；類似のデータが宿主脾臓から得られた。２〜３匹のマウスからなる各グループ。（Ｂ）ＩＬ−７−ｍＡｂ複合体を使用する恒常性欠損の効果的な回復。ＦＡＣＳソートされた生来の（ＣＤ４４ｌｏ）Ｂ６．Ｔｈｙ−１．１Ｔ細胞は、ＣＦＳＥ標識し、そして照射した若齢（２箇月）および老齢（１６箇月）Ｂ６マウスに注入した。マウスにｒｈＩＬ−７またはｒｈＩＬ−７＋Ｍ２５（抗ｈＩＬ−７ｍＡｂ）複合体のいずれかを１日おきに注入し、そして細胞注入後７日目にドナーＴ細胞のＣＦＳＥプロファイルを分析した。１．５μｇの用量のｒｈＩＬ−７を１匹のマウスあたりに注入し；同じ用量のｒｈＩＬ−７を１５μｇのＭ２５と共に少なくとも３０分間インキュベートし、そしてｒｈＩＬ−７＋Ｍ２５複合体として共に注入した。各グループにおいて２〜３匹のマウスを伴う３つの独立した実験の代表的ＣＦＳＥプロファイルを示す。
【０２０５】
実施例８
可溶性ＩＬ−１５Ｒαに結合させることによって、ＩＬ−１５をスーパーアゴニストに変換する
ＩＬ−１５は、ＩＬ−１５Ｒαに結合する細胞関連サイトカインとして、通常、インビボで提示される。本発明者らは、ここで、可溶性ＩＬ−１５の生物学的活性が組み換え可溶性ＩＬ−１５Ｒαとの相互作用後、かなり改善されること；注入後、可溶性ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体は、メモリー表現型ＣＤ８＋細胞およびＮＫ細胞の強力かつ選択的拡大を迅速に誘導することを示す。これらの所見は、ＩＬ−１５ＲαのＩＬ−１５への結合がＴ細胞上のβγｃ受容体によるＩＬ−１５認識を増強するコンフォメーション変化を作製し得ることを示唆する。ＩＬ−１５Ｒα結合の増強効果は、何故ＩＬ−１５が、通常、細胞関連サイトカインとして機能するかを説明し得る。重要なことに、ＩＬ−２、可溶性サイトカインによる結果はまったく異なり；それ故、ＩＬ−２機能は、可溶性ＩＬ−２Ｒαに結合することによって顕著に阻害される。
【０２０６】
マウスでは、所定の細胞、即ち、メモリー表現型（ＭＰ）ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＮＫ細胞は、ＩＬ−１５に高度に感受性である（Kennedy et al.,J Exp Med191:771-80,2000;Judge et al.,J Exp.Med196:935-46,2002;Fehniger and Caligiuri,Blood97:14-32,2001;Becker et al,J Exp Med195:1541-48,2002;Zhang et al.,Immunity8:591-99,1998;Waldmann,T.A.,J Clin Immunol22:51-56,2002;Zeng et al.,J Exp Med 201:139-48,2005;Van Belle and Grooten,Arch Immunol Ther Exp(Warz)53:115-26,2005;Schluns et al.,Int J Biochem Cell Biol37:1567-71,2005）。ＭＰ  ＣＤ８＋細胞は、高レベルのＣＤ４４を示し、そしてＮＫ細胞と同様に、また、高発現のＣＤ１２２（ＩＬ−２Ｒβ）、ＩＬ−１５およびＩＬ−２の両方の受容体の成分を示す（Waldmann,T.A.,J Clin Immunol22:51-56,2002）。休止細胞では、これらの２つのサイトカインの応答性が、β鎖（ＣＤ１２２）＋共通γ鎖、細胞内シグナル伝達を制御するγｃからなる二本鎖受容体、βγｃによって制御される。
【０２０７】
ＩＬ−１５は、通常、可溶性形態で分泌されない（Van Belle and Grooten,Arch Immunol Ther Exp(Warz)53:115-26,2005;Schluns et al.,Int J Biochem Cell Biol37:1567-71,2005;Nguyen et al.,J Immunol169:4279-87,2002）が、独特な受容体、ＩＬ−１５Ｒαに結合した細胞表面、特に、樹状細胞（ＤＣ）上に保持される（Dubois et al.,Immunity17:597-47,2002;Burkett et al.,J Exp Med200:825-34,2004;Burkett et al.,Proc Natl Acad Sci USA100:4724-29,2003;Schluns et al.,Blood103:988-994,2004;Zaft et al.,J Immunol175:6428-35,2005;Sandau et al.,J Immunol173:6537-6541,2004）。次いで、細胞結合ＩＬ−１５は、Ｔ細胞およびＮＫ細胞に対しトランスで提示され、そしてこれらの細胞上のβγｃ受容体によって認識される；そのような認識は細胞生存および断続的増殖を維持する。
【０２０８】
ＩＬ−１５Ｒαは、内因性ＩＬ−１５を提示するのに必須の役割を果たす。それ故、おそらく、ＩＬ−１５Ｒ−／−マウスにおいて合成されるＩＬ−１５は、細胞質から離れることができないため、ＩＬ−１５−／−マウスと同様に、ＩＬ−１５Ｒα−／−マウスは、ＣＤ１２２ｈｉＣＤ８＋細胞およびＮＫ細胞を欠く（Lodolce et al.,Immunity9:669-76,1998）。それにもかかわらず、ＩＬ−２Ｒβγｃ＋細胞は、ＩＬ−１５Ｒαの非存在下でＩＬ−１５の可溶性組み換え形態に応答して、増殖することができる（Lodolce et al.,J Exp Med194:1187-94,2001）。さらに、所定の条件下で、ＩＬ−１５Ｒαは阻害的であり得る。それ故、ＩＬ−１５Ｒαの可溶性形態をマウスに注入することは、ＮＫ細胞増殖（Nguyen et al.,J Immunol169:4279-87,2002）、およびインビボで所定のＴ依存的免疫応答（Ruckert et al.,Eur J Immunol33:3493-3503,2003;Ruckert et al.,J Immunol174:5507-15,2005;Wei et al.,J Immunol167:577-82,2001;Ruchatz et al.,J Immunol160:5654-5660,1998）を抑制することが報告されており、そしてインビトロでｓＩＬ−１５Ｒαを添加することは、ＩＬ−１５に対する細胞系統の応答を阻止することができる（Ruckert et al.,J Immunol174:5507-15,2005;Wei et al.,J Immunol 167:577-82,2001;Ruchatz et al.,J Immunol 160:5654-5660,1998;Budagian et al.,J Biol Chem279:40368-75,2004;Mortier et al.,J Immunol173:1681-1688,2004;Eisenman et al,.Cytokine 20:121-29,2002）。これらの所見にもかかわらず、ｓＩＬ−１５Ｒα（Giron-Michel et al., Blood106:2302-10,2005）、およびまたＩＬ−１５Ｒαの可溶性スシドメイン（Mortier et al.,J Biol Chem,2005、印刷に先立つ電子版）がヒト細胞系統のＩＬ−１５応答を増強することができるという他の報告も認められる。
【０２０９】
実施例９
ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα複合体によるインビトロでの刺激
可溶性ＩＬ−１５の刺激機能がｓＩＬ−１５Ｒαへの結合によって改変されるかどうかを調べるために、精製ＭＰ  ＣＤ４４ｈｉＣＤ１２２ｈｉＣＤ８＋細胞を、ヒトＩｇＧ１のＦｃ部分に共有結合されたマウスＩＬ−１５±マウスｓＩＬ−１５Ｒα（ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ）と共にインビトロで培養した。ＩＬ−１５単独では、半最大応答に約３０ｎｇ／ｍｌを必要とし、そして応答は＜１０ｎｇ／ｍｌではごく僅かであった（図１９Ａ、１９Ｂ）。ここで、注目すべき所見は、低濃度のＩＬ−１５、例えば、５ｎｇ／ｍｌをｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃと共に補充すると、ＣＦＳＥ希釈（図１９Ａ）または［３Ｈ］−チミジン組み入れ（図１９Ｂ）のいずれかによって測定されるように、ＭＰ  ＣＤ８＋細胞の強力な増殖性応答がもたらされたことであった。ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ単独では増殖の発生は認められず（図１９Ｂ）、そしてｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの添加により、異なるサイトカイン、ＩＬ−２に対するＭＰ  ＣＤ８＋細胞の応答を改変することはできなかった（データ示さず）。ＩＬ−１５では、本発明者らは、ＩＬ−１５の半減期をインビトロで増強することによって、ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃに作用が及ぶ証拠を見出すことができなかった（図２５）。
【０２１０】
制限濃度のサイトカインでは、ＩＬ−１５応答は、ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの添加により、一般的に６〜９倍まで改善された。ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの添加はまた、ＣＤ１２２ｈｉＮＫ細胞のＩＬ−１５応答をかなり改善した（図１９Ｃ）が、中間レベルのＣＤ１２２を発現するＭＰ（ＣＤ４４ｈｉ）ＣＤ４＋細胞に対しては、相対的に効果的ではなかった（図１９Ｃ）。意外にも、ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ＋ＩＬ−１５は、典型的に生来のＣＤ４４ｌｏＣＤ１２２ｌｏＣＤ８＋細胞の有意な増殖をもたらしたが、高濃度のＩＬ−１５のみでは認められなかった（図１９Ｃ）。
【０２１１】
ＭＰ  ＣＤ８＋細胞では、可溶性ＩＬ−１５単独およびＩＬ−１５＋ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの両方に対する応答は、βγｃ受容体のみを介して仲介された。それ故、応答は、ＣＤ１２２ｍＡｂの添加によって停止され（図１９Ｄ）、そしてＩＬ−１５Ｒα−／−マウス由来のＭＰ  ＣＤ８＋細胞では、正常ＭＰ  ＣＤ８＋細胞と同程度に高かった（図１９Ｅ）。
【０２１２】
二量体分子であるため、ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃは、架橋形態でこのサイトカインを提示することによって、ＩＬ−１５活性を増強し得る。しかし、ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの酵素切断モノマーフラグメントは、ＩＬ−１５応答を増大するのに、二量体分子ほど強力ではなかった（図１９Ａ、１９Ｂ）。実際、制限条件下では、応答は、Ｆｃ二量体より受容体モノマーの方がかなり高かった（図１９Ｂ）。何故、受容体モノマーが二量体より効果的であるかについては明らかではないが、立体空間的理由のため、モノマー／ＩＬ−１５複合体は、より効果的にβγｃ受容体に結合し得る。
【０２１３】
図１９Ａ、１９Ｂ、１９Ｃ、１９Ｄ、および１９Ｅは、可溶性ＩＬ−１５ＲαがインビトロでＩＬ−１５仲介リンパ球増殖を増大することを示す。（Ａ）精製したＭＰ（ＣＤ４４ｈｉ）ＣＤ８＋Ｔ細胞をＣＦＳＥで標識し、そして５×１０４細胞／ウェルにおいて５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１５を伴って培養した。示されるように、１μｇ／ｍｌのｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ（二量体）またはｓＩＬ−１５Ｒα（モノマー）のいずれかを、培養物に添加した。ＣＦＳＥ希釈を４日目に評価した。代表的データを示す。（Ｂ）精製したＭＰ  ＣＤ８＋Ｔ細胞を、力価測定した量のＩＬ−１５＋一定濃度の可溶性受容体（１μｇ／ｍｌ）（頂部）または力価測定した量の可溶性受容体＋一定濃度のＩＬ−１５（１０ｎｇ／ｍｌ）（底部）のいずれかを伴って培養した。データは、３日目の平均レベルの［３Ｈ］−チミジン組み入れ（±ＳＤ）を、３回反復培養で示す。（Ｃ）精製した生来の（ＣＤ４４ｌｏ）ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＭＰ  ＣＤ８＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、またはＭＰ  ＣＤ４＋Ｔ細胞を、指示に従ってＩＬ−１５を伴って培養した。可溶性ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃを、１μｇ／ｍｌで添加した。ＣＦＳＥ希釈を３日目に評価した。（Ｄ）（Ｂ）のとおりであったが、但し、指示に従って１０μｇ／ｍｌの抗ＣＤ１２２抗体を添加した。（Ｅ）野生型Ｌｙ５．２およびＩＬ−１５Ｒα−／−／Ｌｙ５．１マウス由来のＭＰ  ＣＤ８＋Ｔ細胞を、指示に従って共に混合し、ＣＦＳＥで標識し、そして培養した。Ｌｙ５．１−（野生型）およびＬｙ５．１＋（ＩＬ−１５Ｒα−／−）細胞に対するＣＦＳＥ希釈を、３日目に測定した。
【０２１４】
上記のデータは、マウスＩＬ−１５およびマウス可溶性ＩＬ−１５Ｒαを指す。かなり類似のデータがヒトＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒαに当てはまる。それ故、ヒトまたはマウスＩＬ−１５のいずれかに対するマウスＭＰ  ＣＤ８＋細胞の応答は、ヒトｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの添加によりかなり増強された（図２６）。ヒトＩＬ−１５Ｒαモノマーの添加はさらになお効果的である。マウスＩＬ−２Ｒβγｃ応答につては、ヒトＩＬ−１５は、マウスＩＬ−１５よりかなり弱いことに留意されたい（Eisenman et al,.Cytokine20:121-29,2002）。
【０２１５】
図２５Ａおよび２５Ｂは、インビトロにおけるＩＬ−１５の生存を示す。（Ａ）精製したＣＦＳＥ標識ＭＰ  ＣＤ８＋Ｔ細胞を、ＩＬ−１５単独を５ｎｇ／ｍｌ（頂部、灰色）、１００ｎｇ／ｍｌ（底部）で、または５ｎｇ／ｍｌのＩＬ−１５＋１μｇ／ｍｌのｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ（頂部、実線）を含有する培養物に添加した。これらの培養物は、新たに調製したもの（新鮮）か、またはＴ細胞の添加前に４８時間、３７℃で放置したもの（４８時完全培養物）のいずれかであった。（Ｂ）、Ｔ細胞を、「４８時間前培養」から採取した上清（上清）ｖｓ洗浄せずに上清を空にした後者の培養物（ウェル底部）を伴って培養したことを除いて、（Ａ）のとおりであった。解釈：実験は、ＩＬ−１５（単独で培養した）の生物学的活性が、４８時間、３７℃での培養中に、有意に低下しなかったため、それ故、ＩＬ−１５の半減期を単純に延長することによって、ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃに作用が及ぶ可能性はないことを示す。さらに加えて、空のウェル（ウェル底部）に移した細胞の増殖が認められなかったことから、可溶性受容体の増強活性は、ウェルのプラスチック底部に受容体を介して結合したＩＬ−１５の架橋された提示を反映しなかったことを示唆する。
【０２１６】
図２６は、ヒトｓＩＬ−１５Ｒα−ＦｃがマウスおよびヒトＩＬ−１５の両方に対するマウスＭＰ  ＣＤ８＋細胞の応答を増強することを示す。ＣＦＳＥ標識された精製ＭＰ  ＣＤ８＋Ｔ細胞を、５×１０４細胞／ウェルで、１００ｎｇ／ｍｌのヒトＩＬ−１５または５ｎｇ／ｍｌのマウスＩＬ−１５のいずれかを伴って培養した。指示に従って、１μｇ／ｍｌのヒトｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃを培養物に添加した。ＣＦＳＥ希釈を、３日間の培養後に評価した。（ＩＬ−１５Ｒα＋βγｃを発現する）ＣＴＬＬとは正反対に、マウスＭＰ  ＣＤ８＋細胞は、ヒトＩＬ−１５に対するよりもマウスＩＬ−１５に対してより良好に応答することに留意されたい。Eisenman,J.,et al.,Cytokine20:121-129,2002。
【０２１７】
実施例１０
インビボでの応答
ＣＦＳＥ標識ＭＰ  ＣＤ８＋細胞のｉｖ注入後にマウスにＩＬ−１５をｉｐで注入すると、ドナー細胞の約５０％が１〜２回分裂し（図２０Ａ）、先の所見（Judge et al.,J Exp.Med196:935-46,2002;Zhang et al.,Immunity8:591-99,1998）が確認された。しかし、ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃとの共同では、実際上すべてのドナー細胞が分裂し、そして（ＩＬ−１５が単独で注入された場合の＜５％と比較すると）＞９５％の細胞が３回以上分裂した；対照的に、ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ単独の注入は、増殖に対して効果を及ぼさなかった。ＩＬ−１５に対するＭＰ  ＣＤ８＋細胞の応答を増強するｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの能力はまた、抗原特異的メモリーＣＤ８＋細胞、即ち、抗原プライム化Ｐ１４  ＴＣＲトランスジェニックＣＤ８＋細胞にも当てはまった（図２０Ｂ、上の図）。ＭＰ  ＣＤ４＋細胞に対するＩＬ−１５応答の増強もまた認められた（図２０Ｂ、下の図）。
【０２１８】
ＭＰ  ＣＤ８＋細胞について、ＩＬ−１５滴定実験は、制限用量のＩＬ−１５をｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃと共に同時注入した場合、ＩＬ−１５に対するインビボ応答が約５０倍増加したことを示した（図２０Ｃ、２０Ｄ）。ＩＬ−１５Ｒα−／−宿主へのＴ細胞移入では類似のデータが当てはまるため、内因性ＩＬ−１５Ｒαは必要ではなかった（図２７）。
【０２１９】
上記のデータは、ＣＦＳＥ標識ドナー細胞に当てはまる。宿主細胞について、ＩＬ−１５またはｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ単独の注入は、細胞数にほとんど影響を及ぼさなかった。対照的に、ＩＬ−１５＋ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの２回の注入は、最初の注入後３日目までに宿主ＭＰ  ＣＤ８＋細胞およびＮＫ細胞の全数の顕著な増加を生じ、そして脾臓が明らかに肥大した（図２１Ａ、２１Ｂ）。同様に、ＢｒｄＵ組み入れによって測定される増殖は、ＩＬ−１５＋ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの注入の方がＩＬ−１５単独よりかなり高かった（図２１Ｃ）。
【０２２０】
おそらく、ＩＬ−１５Ｒαが存在しないと、内因性ＩＬ−１５の提示が排除されるため、ＩＬ−１５Ｒα−／−マウスはＣＤ１２２ｈｉ  ＭＰ  ＣＤ８＋細胞およびＮＫ細胞を欠く（Lodolce et al.,Immunity9:669-76,1998）。図２１Ｄに示されるように、ＩＬ−１５Ｒα−／−マウスに、ＩＬ−１５およびｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの混合物を注入すると、宿主ＮＫ１．１＋ＤＸ５＋ＮＫ細胞およびＣＤ１２２ｈｉ  ＭＰ  ＣＤ８＋細胞の数が迅速に回復した；使用した用量において、ＩＬ−１５単独は有効ではなかった。
【０２２１】
上記のインビボ効果は、二量体ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃと複合体化したＩＬ−１５に当てはまる。Ｆｃ成分が必要であるかどうかを決定するために、Ｆｃを欠くモノマーＩＬ−１５Ｒαで作製したＩＬ−１５複合体がＭＰ  ＣＤ８＋細胞の増殖を誘導する能力について、インビボ条件下で試験した。顕著に、インビトロ条件下では、モノマーＩＬ−１５／ｓＩＬ−１５Ｒα複合体の方が、二量体ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ複合体より高いＭＰ  ＣＤ８＋細胞の増殖を誘導した（図１９Ａ）一方、インビボ条件下では逆である（図２２）。それ故、二量体ＩＬ−１５／ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ複合体の強力な活性とは対照的に、Ｆｃ部分を涸渇したモノマーＩＬ−１５／ｓＩＬ−１５Ｒα複合体は、遊離のＩＬ−１５よりごく僅かに良好なインビボ活性を示した（図２２）。従って、受容体のＦｃ部分は、複合体のインビボ活性に重要であるようである。
【０２２２】
図２０Ａ、２０Ｂ、２０Ｃ、および２０Ｄは、可溶性ＩＬ−１５ＲαがインビボでＩＬ−１５仲介ドナーリンパ球増殖を増大することを示す。（Ａ）ＣＦＳＥ標識Ｔ細胞を、Ｃ５７ＢＬ／６（Ｂ６）レシピエントにｉｖで移入した。移入後１日および２日目、レシピエントに、ＰＢＳ、ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ単独（７μｇ）、ＩＬ−１５単独（１．５μｇ）、またはｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ＋ＩＬ−１５（それぞれ７μｇおよび１．５μｇであり、１：２モル比を示す）のｉｐ注入を与えた。ドナー細胞のＣＦＳＥ希釈を、４日目に脾臓において測定した。ゲートされたＭＰ  ＣＤ８＋細胞の代表的データを示す。（Ｂ）移入した細胞はＬＣＭＶ免疫マウス（上の図）対正常マウス（下の図）由来であったことを除いて、（Ａ）のとおりであった。（Ｃ）ＣＦＳＥ標識ＭＰ  ＣＤ８＋Ｔ細胞を、正常Ｂ６宿主に移入した；１日後、宿主に指示用量のＩＬ−１５を、ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃを伴うまたは伴わずに注入した；ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの用量は、ＩＬ−１５対ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの２：１モル比が注入されるように変動させた。注入２日後の脾臓におけるドナーＭＰ  ＣＤ８＋細胞のＣＦＳＥプロファイルを示す。（Ｄ）（Ｃ）由来のデータの編集。Ａ、Ｂ、およびＣでは、示されるデータは、グループあたり２匹のマウスの代表であり、そしてまた、２つの独立した実験の代表である。
【０２２３】
図２１Ａ、２１Ｂ、２１Ｃ、および２１Ｄは、可溶性ＩＬ−１５ＲαがＩＬ−１５仲介宿主リンパ球増殖を増大することを示す。（Ａ）図２０Ａについて記載のとおり、正常Ｂ６マウスに、１日および２日目に、ＰＢＳ、ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ単独、ＩＬ−１５単独、またはｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ／ＩＬ−１５をｉｖで注入した。３日目に脾臓から回収したＣＤ８＋ＭＰ  Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＭＰ  Ｔ細胞、およびＮＫ細胞の全数を示す。（Ｂ）指示に従って、（Ａ）由来の脾臓を写真撮影した。（Ｃ）マウスにまた、１日目にＢｒｄＵのｉｖ注入を与え、そして屠殺するまで飲料水中のＢｒｄＵを摂取するように配置したことを除いて、（Ａ）におけるようにマウスを処置した。ＭＰ  ＣＤ８＋、生来のＣＤ８＋、ＭＰ  ＣＤ４＋、およびＮＫ細胞に対するＢｒｄＵ染色を示す。（Ｄ）ＩＬ−１５Ｒα−／−マウスに、１、３、５、および７日目に、ＰＢＳ、ＩＬ−１５（０．６μｇ）、またはＩＬ−１５（０．６μｇ）／ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ（１μｇ）のいずれかをｉｖで注入した。データは、９日目の脾臓細胞の染色を示す。Ｂ、Ｃ、Ｄについては、代表的データを示す。すべてのデータは、少なくとも２つの独立した実験の代表である。
【０２２４】
図２２は、ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ（二量体）がインビボ条件下でｓＩＬ−１５Ｒα（モノマー）より良好であることを示す。ＣＦＳＥ標識Ｔｈｙ−１．１ＭＰ  ＣＤ８細胞を、正常Ｂ６宿主に注入し、そして１μｇのＩＬ−１５、１μｇのＩＬ−１５＋５μｇのｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ、または１μｇのｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ＋１０μｇのｓＩＬ−１５Ｒαを注入し、次いで、３日目に分析した。宿主脾臓から回収したドナーＣＤ８細胞に対するＣＦＳＥプロファイルを示す。
【０２２５】
図２７は、ＩＬ−１５Ｒα−／−宿主におけるＩＬ−１５／ｓＩＬ−１５−Ｒα−Ｆｃ複合体による刺激を示す。精製したＣＦＳＥ標識ＭＰ  ＣＤ８＋Ｔ細胞を、ＩＬ−１５Ｒα−／−レシピエントにｉｖで移入した。移入後１日目に、レシピエントマウスに、ＰＢＳ、ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ単独（１０μｇ）、ＩＬ−１５単独（２μｇ）、またはｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ＋ＩＬ−１５（それぞれ１０μｇおよび２μｇ）のｉｐ注入を与えた。移入後３日目に、脾臓細胞を回収し、そしてＣＦＳＥ希釈をフローサイトメトリー分析によって評価した。
【０２２６】
実施例１１
ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃは内因性ＩＬ−１５の提示を阻止することができない
マウスにＬＰＳを注入すると、非Ｔ細胞によるインビボでの内因性ＩＬ−１５（およびＩＬ−１５Ｒα）合成の僅かな増加を生じ、結果として、ＩＬ−１５応答性ＣＤ１２２ｈｉＭＰ  ＣＤ８＋細胞の増殖速度が一過的に増加することが公知である。Mattei et al.,J Immunol167:1179,2001;Tough et al.,J Exp Med 185:2089,1997。そのようなＬＰＳ誘導性バイスタンダー増殖を図２３Ａに例示する（ここで、ほとんどのドナーＭＰ  ＣＤ８＋細胞は、正常Ｂ６宿主におけるＬＰＳへの暴露後３日目までに、１〜２回の細胞分裂を経験したが、これは、ＩＬ−１５Ｒα−／−宿主で増殖が認められないことと対照的であった）。重要なことに、ＬＰＳ注入後にｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃを注入すると、たとえｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ（１０μｇ／注入）の連日注入を伴っても、増殖を減少することができなかった。従って、ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの注入は、内因性ＩＬ−１５Ｒαに結合した内因性ＩＬ−１５とのＴ細胞接触を阻止することができなかった。また、おそらく、後者はＩＬ−１５を細胞表面に搬送するのに必須であるため、ＩＬ−１５Ｒα−／−宿主では、ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃは、明らかに、内因性ＩＬ−１５Ｒαの欠如を補償することができなかった。
【０２２７】
同様の所見がインビトロの系に当てはまり、ここで、まずｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃでコートし、次いで、ＩＬ−１５でパルスし、続いて、徹底的に洗浄して、非結合型サイトカインを取り出したウェルでＭＰ  ＣＤ８＋細胞を培養した（図２３Ｂ）。それ故、結合型ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ／ＩＬ−１５複合体によって引き起こされる増殖性応答は、ブロッキング試薬としての可溶性（非結合型）ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの添加によって阻害することができなかった。対照的に、ＩＬ−１５に対するポリクローナル抗体の添加は、増殖を停止した。
【０２２８】
上記の所見に基づいて、ＩＬ−１５分子は、ＩＬ−１５Ｒαとの相互作用のための唯一の単一な結合部位を有する。一旦、この部位が閉塞されると、インビボで細胞上の内因性ＩＬ−１５Ｒαまたはインビトロでプラスチックに付着したＩＬ−１５Ｒαのいずれかに結合することによって、外因性ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃとの相互作用が生じることができず、そしてＩＬ−１５のＴ細胞への提示が妨害されない。このシナリオは、何故ｓＩＬ−１５ＲαがＩＬ−１５に対する細胞系統の応答を阻止することができるかを説明するものではない（（Ruckert et al.,J Immunol174:5507-15,2005;Wei et al.,J Immunol167:577-82,2001;Ruchatz et al.,J Immunol160:5654-5660,1998;Budagian et al.,J Biol Chem279:40368-75,2004;Mortier et al.,J Immunol173:1681-1688,2004;Eisenman et al,.Cytokine20:121-29,2002）。ここで、これらの研究は、ヒトまたはサルＩＬ−１５を使用し、本発明者らの研究におけるようにマウスＩＬ−１５を使用しなかったことが関連し得、ＩＬ−１５における異なる種間差の可能性が生じている。この考えを選好して、本発明者らは、ＭＰ  ＣＤ８＋細胞に関して、マウスＩＬ−１５に対するマウスＣＴＬＬ細胞の応答が、マウスｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃによって増強されることを見出した（図２８Ａ）。対照的に、ヒトＩＬ−１５に対するＣＴＬＬ細胞の高度な応答（Eisenman et al,.Cytokine20:121-29,2002）がマウスｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃによって強度に阻害された（図２８Ｂ）ことから、他の所見（Ruckert et al.,J Immunol 174:5507-15,2005;Wei et al.,J Immunol167:577-82,2001;Ruchatz et al.,J Immunol160:5654-5660,1998;Budagian et al.,J Biol Chem279:40368-75,2004）が確認された。コントロールとしてのＩＬ−２に対するＣＴＬＬ応答は、ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃを添加することによる影響を受けなかった（図２８Ｃ）。
【０２２９】
上記の所見は、マウスｓＩＬ−１５Ｒα構築物がＮＫ細胞増殖（Nguyen et al.,J Immunol169:4279-87,2002）およびインビボでの抗原駆動性Ｔ細胞応答（Ruckert et al.,Eur J Immunol33:3493-3503,2003;Ruckert et al.,J Immunol174:5507-15,2005;Wei et al.,J Immunol167:577-82,2001;Ruchatz et al.,J Immunol160:5654-5660,1998）に対して阻害的であるという報告を説明するものではない。この矛盾は未だ解決されていないが、インビボでの特異的ペプチドに対する生来のＯＴ−１ＴＣＲトランスジェニックＣＤ８＋細胞の抗原特異的増殖性応答は、ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの同時注入によって阻止されず、そしてｓＩＬ−１５ＲおよびＩＬ−１５の混合物を注入する場合、応答がかなり増強されたことは興味深い（図２８Ｄ）。今までのところ、本発明者らは、インビボ応答を阻止するのに必要とされる極めて大用量のｓＩＬ−１５Ｒα、即ち、ＮＫ細胞増殖に対する４００μｇ／注入（Nguyen et al.,J Immunol169:4279-87,2002)を使用していない。また、インビボでｓＩＬ−１５Ｒαによる阻害を示す研究では、細菌において増殖させた構築物が使用されたが、本発明者らの構築物は、哺乳動物細胞において増殖させたことがおそらく関連する。
【０２３０】
図２３Ａおよび２３Ｂは、ＩＬ−１５Ｒαによって固定化されるＩＬ−１５に対する増殖が、可溶性ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃによって阻止され得ることを示す。（Ａ）ＣＦＳＥ標識Ｔ細胞を、Ｔｈｙ１コンジェニックＢ６またはＩＬ−１５Ｒα−／−宿主にｉｖで注入した。１日後、マウスにＰＢＳまたは５００ｎｇのＬＰＳをｉｐで注入した。また、指示に従って、マウスを、ＬＰＳ注入の日から開始して連日で１０μｇのｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃによりｉｐで処置した。ＬＰＳ注入の３日後、マウスを屠殺し、そしてＭＰＣＤ８＋Ｔ細胞のＣＦＳＥ希釈を評価した。（Ｂ）９６ウェルプレートを、１晩、１０μｇ／ｍｌのｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃでプレコートした。次いで、プレートを洗浄し、そして１μｇ／ｍｌのＩＬ−１５と共に１時間、３７℃でインキュベートした。以後、プレートを洗浄し、そして５×１０４ＭＰ  ＣＤ８＋Ｔ細胞を、１）１０μｇ／ｍｌのｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ、２）１０μｇ／ｍｌのポリクローナル抗ＩＬ−１５抗体、または３）コントロール媒体と共に添加した；さらなるコントロールとして、遊離のＩＬ−１５（３２ｎｇ／ｍｌ）をいくつかのウェルに添加した。データは、３日目の平均レベルの［３Ｈ］−チミジン組み入れ（ＳＤ）を、３回反復培養で示す。
【０２３１】
図２８Ａ、２８Ｂ、および２８Ｃは、マウス対ヒトＩＬ−１５に対する応答についてのｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの阻止効果を示す。（Ａ、Ｂ、Ｃ）ＣＴＬＬ−２細胞を、２日間、（Ａ）マウスＩＬ−１５、（Ｂ）ヒトＩＬ−１５、または（Ｃ）マウスＩＬ−２のいずれかと共に培養した。指示に従って、培養物に、１μｇ／ｍｌのマウスｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃを補充した。培養の最後の２４時間中に添加される［３Ｈ］−チミジン。データは、平均レベルの［３Ｈ］−チミジン組み入れ（±ＳＤ）を、３回反復培養で示す。（Ｄ）１００万個のＯＴ−１細胞（Ｔｈｙ１．１コンジェニック）を、−１日目にＢ６レシピエントマウスに養子移入した。０日目に、マウスに、１００万個のＳＩＩＮＦＥＫＬパルスした樹状細胞をｉｖでワクチン接種した。１〜７日目に、レシピエントマウスに、ＰＢＳ、ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ単独（５μｇ）、ＩＬ−１５単独（１μｇ）、またはｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ＋ＩＬ−１５（それぞれ５μｇおよび１μｇ）の連日ｉｐ注入を与えた。８日目、脾臓を回収し、計数し、そしてドナーＯＴ−１細胞についてフローサイトメトリー分析により評価した。データは、サイトカインまたは受容体処置を伴わないワクチン化に対するＯＴ−１細胞の絶対数の増加倍率を示す。すべてのデータは、少なくとも２つの独立した実験の代表である。
【０２３２】
実施例１２
ＩＬ−２＋ＩＬ−２Ｒαによる刺激
可溶性ＩＬ−１５Ｒαに結合させることによってＩＬ−１５の生物学的活性が増強されたという観察から、匹敵する所見がＩＬ−２およびＩＬ−２Ｒα（ＣＤ２５）に当てはまるかどうかという疑問を惹起した。図２４に示されるように、これは明らかに否定された。それ故、インビトロでのマウスＩＬ−２に対するＭＰ  ＣＤ８＋細胞の増殖的応答は、可溶性マウスＩＬ−２Ｒαの添加によって顕著に阻害された（図２４Ａ左、２４Ｂ）。類似の阻害が、ヒトＩＬ−２および可溶性ヒトＩＬ−２Ｒαに応答するＭＰ  ＣＤ８＋細胞（マウス）に当てはまった（図２４Ａ右）。
【０２３３】
それ故、可溶性ＩＬ−１５ＲαはＩＬ−１５の機能を増強したが、可溶性ＩＬ−２Ｒαは、ＩＬ−２の機能を阻止した。
【０２３４】
図２４Ａおよび２４Ｂは、可溶性ＩＬ−２ＲαがＩＬ−２仲介増殖を阻害することを示す。（Ａ）精製したＣＦＳＥ標識ＭＰ  ＣＤ８＋Ｔ細胞を、示された濃度のマウスＩＬ−２またはヒトＩＬ−２のいずれかと共に培養した。指示に従って、２．５μｇ／ｍｌの可溶性マウスＩＬ−２Ｒαまたは可溶性ヒトＩＬ−２Ｒαを培養物に添加した。ＣＦＳＥ希釈を３日目に評価した。代表的データを示す。（Ｂ）精製したＭＰ  ＣＤ８＋Ｔ細胞を、力価測定した量のマウスＩＬ−２と共に、可溶性ｍＩＬ−２Ｒα（２．５μｇ／ｍｌ）を伴うまたは伴わずに、培養した。データは、３日目の平均レベルの［３Ｈ］−チミジン組み入れ（±ＳＤ）を、３回反復培養で示す。
【０２３５】
実施例１３
ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒαの可溶性複合体は、可溶性ＩＬ−１５単独より刺激性である
上記の実験の主な結論は、ＩＬ−１５およびＩＬ−１５Ｒαの可溶性複合体がインビボおよびインビトロの両方において可溶性ＩＬ−１５単独よりかなり刺激性であることである。ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα相互作用に関する構造的研究を伴わなければ、何故およびどのようにしてこの相互作用がＩＬ−１５機能を増強するかについて、推測することしかできない。いくらかの可能性が存在する。
【０２３６】
第１に、ＩＬ−１５に対するＩＬ−１５Ｒαの結合は、Ｔ細胞によるＩＬ−１５内在化を損傷し、従って、βγｃ受容体を介するシグナル伝達を強化し得る。この考えは、所定のサイトカイン、例えば、ＩＬ−２の内在化が受容体シグナル伝達を減ずるのに役立つという報告と一致する（Chang et al.,J Biol Chem271:13349-55,1996）。しかし、本発明者らは、２つの理由によりこの可能性を選好しない。第１に、ＩＬ−１５／ｓＩＬ−１５Ｒα複合体による強力な刺激がＩＬ−１５内在化の減少を反映する場合、ＣＤ１２２、ＩＬ−１５の受容体の内在化においてパラレルな減少が認められることが予想される。しかし、細胞表面からのダウンレギュレーションによって測定されるように、逆のこと、即ち、ＩＬ−１５単独よりもＩＬ−１５／ｓＩＬ−１５Ｒα複合体によるＣＤ１２２のより大きなダウンレギュレーションが適用する（データ示さず）。ＩＬ−１５内在化を妨げるＩＬ−１５／ｓＩＬ−１５Ｒα複合体に対する第２の考察は、これが該当する場合、本発明者らは、ＩＬ−２／ｓＩＬ−２Ｒαを伴う類似の所見について調べるべきであったということであるが、これはそうではなかった。それ故、ＩＬ−２／ｓＩＬ−２Ｒα複合体は、可溶性ＩＬ−２単独ほど刺激的ではなく、ＩＬ−１５単独より刺激的であるＩＬ−１５Ｒα／ＩＬ−１５複合体と明らかに対照的であった。
【０２３７】
どのようにしてｓＩＬ−１５ＲαがＩＬ−１５活性を増強するかについての第２の可能性は、ｓＩＬ−１５ＲαがＩＬ−１５の分解を防止し得ることである。ＩＬ−１５機能に対するｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの増強効果がインビトロよりインビボにおいてより明確に表明されたため、この概念は、考慮する価値がある。ここで、抗体または可溶性受容体に対する所定のサイトカインの結合は、サイトカインのインビボでの生存を延長することができることが重要である（Finkelman et al.,J Immunol151:1235-44,1993; Ma et al.,J Pharmacol Exp Ther279:340-50, 1996;Peters et al.,J Exp Med183:1399-1406,1996;Rosenblum et al.,Cancer Res45:2421-24,1985;Peleg-Shulman et al.,J Biol Chem279:18046-18053,2004;Kobayashi et al.,Cytokine11:1065-75,1999）。従って、ＩＬ−１５に結合するｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃは、インビボでＩＬ−１５の半減期を増加し得る。しかし、特に、本発明者らは、インビトロでＩＬ−１５半減期の増加を観察することはできなかった。
【０２３８】
上記を考慮して、本発明者らは、第３の可能性、即ち、ＩＬ−１５Ｒαが、βγｃ受容体との相互作用を増大し、それ故に、ＩＬ−１５をアゴニストからスーパーアゴニストに変更するＩＬ−１５のコンフォメーション変化を誘導することによって、ＩＬ−１５の機能を改善することを選好する。このモデルは、ＩＬ−２／ＩＬ−２Ｒα相互作用よりはるかに高いＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒα相互作用の親和性と一致し（Fehniger and Caligiuri,Blood97:14-32,2001;VanBelle and Grooten,Arch Immunol Ther Exp(Warz)53:115-26,2005）し、そして何故、ＩＬ−２とは異なり、ＩＬ−１５が細胞関連サイトカインのように良好に機能するかを説明している。この考えを直接試験するには、明らかに、構造研究が必要である。この点に関して、ＩＬ−１５とＩＬ−１５Ｒαとの間の相互作用は、他のサイトカイン／サイトカイン受容体複合体では見いだされないイオン相互作用の独特なネットワークに関与することが重要である（Lorenzen et al.,J Biol Chem,2005、印刷に先立つ電子版）。この独特な相互作用がＩＬ−１５のコンフォメーション変化を生じるかどうかについては、未だ決定されていない。
【０２３９】
ＩＬ−１５は、Ｔ細胞生存およびメモリー作製に対して有益な効果を有し、そしてまた、照射および他の形態の細胞減少後のＴ細胞プールを回復する可能性を有する蓄積された証拠が存在する（Becker et al,J Exp Med195:1541-48,2002;Zhang et al.,Immunity8:591-99,1998;Waldmann,T.A.,J Clin Immunol22:51-56,2002;Zeng et al.,J Exp Med201:139-48,2005;Van Belle and Grooten,Arch Immunol Ther Exp(Warz)53:115-26,2005;Schluns et al.,Int J Biochem Cell Biol 37:1567-71,2005;Lodolce et al.,J Exp Med194:1187-94,2001;Rubinstein et al.,J Immunol169:4928-35,2002;Diab et al,Cytotherapy 7:23-35,2005）。ここで示されるように、治療試薬としてのＩＬ−１５の生物学的活性は、予め形成された可溶性ＩＬ−１５／ＩＬ−１５Ｒ複合体を投与することによって、かなり増強され得る。
【０２４０】
実施例１４
材料および方法
マウス。Ｃ５７ＢＬ／６（Ｂ６）、Ｂ６．Ｌｙ５．１、Ｂ６．Ｔｈｙ１．１、およびＯＴ−１マウスは、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、メイン州）から購入した。ＩＬ−１５Ｒα−／−マウス（Lodolce et al.,Immunity9:669-76,1998）は、Ａｖｅｒｉｌ  Ｍａ（Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  ｏｆ  Ｃａｌｉｆｏｒｎｉａ，Ｓａｎ  Ｆｒａｎｃｉｓｃｏ）からの贈呈であり、そしてＩＬ−７トランスジェニック（ｔｇ）マウス（Mertshing et al.,Int Immunol7:401-14,1995）は、Ｊ．Ａｎｄｅｒｓｓｏｎ（Ｂａｓｅｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ、瑞国）からの贈呈である。Ｐ１４ＴＣＲｔｇマウスは、Ｊ．Ｌｉｎｄｓａｙ  Ｗｈｉｔｔｏｎ（Ｓｃｒｉｐｐｓ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ）から贈与された。ＩＬ−１５Ｒα−／−、ＩＬ−７ｔｇ、Ｐ１４、およびＯＴ−１ＴＣＲｔｇマウスは、すべてＢ６バックグランドに対して維持され、そしていくつかの実験では、Ｂ６．Ｌｙ５．１またはＢ６．Ｔｈｙ１．１マウスのいずれかと交配させた。ＩＬ−１５Ｒα−／−マウスは、ＩＬ−７ｔｇマウスと交配させて、ＩＬ−７ｔｇ／ＩＬ−１５Ｒα−／−マウスを作製した。本発明者らが先にＩＬ−７ｔｇ／ＩＬ−１５−／−マウスにより説明した（Kieper et al.,J Exp Med195:1533-39,2002）ように、ＩＬ−７ｔｇ／ＩＬ−１５Ｒα−／−マウスは、ＩＬ−７ｔｇマウスと類似する多数のＣＤ１２２ｈｉＭＰ  ＣＤ８＋Ｔ細胞を有する。
【０２４１】
組み換えタンパク質。マウスｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ、ヒトｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ、およびヒトＩＬ−２Ｒαは、Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ミネソタ州）から購入した。モノマーｓＩＬ−１５ＲαおよびマウスＩＬ−２Ｒαは、プレリリース試薬としてＲ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓから購入した。モノマーｓＩＬ−１５Ｒαは、二量体ｓＩＬ−１５Ｒαの酵素消化によって作製した。本発明者らは、抗ＩＬ−１５Ｒαポリクローナル抗体（ＡＦ５５１およびＢＡＦ５５１、Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ）を使用するウエスタンブロットによって完全消化を確認した（データ示さず）。組み換えサイトカイン（マウスＩＬ−１５、ヒトＩＬ−１５、マウスＩＬ−２、ヒトＩＬ−２、マウスＩＬ−４、およびマウスＧＭ−ＣＳＦを含む）は、Ｅｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅおよび／またはＲ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓから購入した。
【０２４２】
Ｔ細胞の単離およびＣＦＳＥ標識化。適切な数の細胞を得るために、ほとんどの実験において、ＭＰ  ＣＤ８＋細胞を、ＩＬ−７トランスジェニックマウスから調製した。すべてのパラメータによって、ＩＬ−７ｔｇマウス由来の試験したＭＰ  ＣＤ８＋細胞は、正常マウス由来の細胞と同一である。さらに、ここで、ＩＬ−１５／ｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃ複合体についての主な所見はまた、インビボおよびインビトロの両方において正常マウスから調製した細胞でも観察された。インビトロまたは養子移入実験のいずれかについて使用されるＭＰ  ＣＤ８＋Ｔ細胞は、ＬＮおよび脾臓から単離し、そしてセルソーティングによって精製した。簡単に説明すると、単一の細胞懸濁液を、まず、マウスＴ細胞富化カラム（ＭＴＣＣ−２５，Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ，Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ミネソタ州）を使用して、ＣＤ３＋Ｔ細胞について富化した。富化したＴ細胞を、抗体で標識し、そしてＣＤ８＋ＣＤ４４ｈｉＴ細胞に対するセルソーティングによって精製した。いくつかの実験において、本発明者らは、類似のプロトコルを使用し、そしてＣＤ８＋ＣＤ４４ｌｏ、ＣＤ４＋ＣＤ４４ｈｉ、ＮＫ１．１＋／ＤＸ５＋細胞を単離した。セルソーティングは、ＢＤ  ＦＡＣＳＡｒｉａを使用して実施した。ソートされた細胞の純度は、日常的に試験され、そして９８％を超えた。いくつかの実験では、全Ｔ細胞またはＯＴ−１細胞を、ドナーリンパ球として使用した。これらの実験では、脾臓およびＬＮ由来の細胞は、マウスＴ細胞富化カラム（ＭＴＣＣ−２５）を使用して精製した。ＣＦＳＥ標識細胞を使用する実験では、Ｔ細胞を、製造者の指示に従い、１．５μｍ  ＣＦＳＥ（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ，Ｅｕｇｅｎｅ、オレゴン州）で標識した。
【０２４３】
抗原特異的ＣＤ８＋Ｔ細胞の作製。本発明者らは、（ＬＣＭＶｇｐ３３ペプチドを認識する）Ｐ１４ＴＣＲｔｇＣＤ８＋Ｔ細胞の養子移入およびＬＣＭＶ感染後、抗原特異的メモリーＴ細胞を作製した。簡単に説明すると、５×１０４個のＰ１４ＴＣＲトランスジェニックＣＤ８＋Ｔ細胞を、Ｔｈｙ１コンジェニックＩＬ−７ｔｇレシピエントマウスに養子移入した。２４時間後、マウスに、２×１０５プラーク形成単位のＬＣＭＶアームストロング（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ）株を施した。ウイルス感染の２箇月後、Ｔ細胞を、マウスＴ細胞富化カラム（ＭＴＣＣ−２５）を使用して単離し、ＣＦＳＥで標識し、そしてＬｙ５コンジェニックレシピエントマウスに養子移入した。ドナーＰ１４ＣＤ８＋Ｔ細胞（Ｔｈｙ１．１）は、１５〜２０％のドナーＣＤ８＋Ｔ細胞（Ｌｙ５．２）集団を示した。
【０２４４】
インビトロアッセイ。すべての培養は、１０％ＦＣＳ、グルタミン、２−ＭＥ、非必須アミノ酸、および抗生物質を補充したＲＰＭＩ１６４０において実施した。ＦＡＣＳ精製Ｔ細胞およびＮＫ細胞を、上記のように単離した。ＣＴＬＬ（ＣＴＬＬ−２）細胞はＡＴＣＣ（Ｍａｎａｓｓａｓ、バージニア州）から入手し、そしてマウスＩＬ−２を補充したＲＰＭＩ培地で培養した。ＦＡＣＳ精製リンパ球による実験では、２００μｌ中５×１０４個の細胞を、９６ウェルプレート中１ウェルあたりにプレート化した。サイトカインおよび／または可溶性受容体を、図または図の説明に記載の濃度で添加した。ＣＤ１２２ブロッキング実験では、本発明者らは、精製された抗ＣＤ１２２抗体（ＴＭ−β１（ＮＡ／ＬＥ）、ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を使用した。プレート結合ＩＬ−１５をブロックするための実験では、ポリクローナル抗ＩＬ−１５抗体（ＡＦ４４７，Ｒ＆Ｄｓｙｓｔｅｍｓ）を使用した。ＣＴＬＬ細胞による実験は、１ウェルあたり２×１０４個の細胞を使用することを除いて、ＦＡＣＳ精製リンパ球と同様にプレート化した。［３Ｈ］−チミジンによる増殖実験では、図面の説明に示されるように、１μＣｉ／ｍｌを添加した。細胞を３回反復のウェルで培養した。
【０２４５】
インビボアッセイ。養子移入された細胞の増殖を評価する実験では、Ｔ細胞を単離し、そして（上記のように）ＣＦＳＥで標識し、次いで、Ｌｙ５またはＴｈｙ１コンジェニックレシピエントマウスにｉｖ注入した。宿主細胞の増殖を測定するための実験では、マウスにＢｒｄＵ（２ｍｇ）をｉｐで注入し、次いで、先に記載の方法論（Judge et al.,J Exp.Med196:935-46,2002）を使用して、ＢｒｄＵ飲料水（０．８ｍｇ／ｍｌ）に対して維持した。サイトカインおよび可溶性受容体の注入のために、ＩＬ−１５およびｓＩＬ−１５Ｒα−ＦＣを、２０分間、３７℃で共にインキュベートした。次いで、サンプルを、マウスへの注入前に、５００μｌの容積まで、ＰＢＳにおいて、少なくとも１０倍希釈したコントロール条件では、サイトカインまたは受容体単独をまた、２０分間、３７℃でインキュベートした。ＬＰＳ（ＡＬＸ−５８１−００８，Ａｌｅｘｉｓ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、カリフォルニア州）を、ＰＢＳにおいてｉｐで注入した。ワクチン接種実験では、樹状細胞を、ＧＭ−ＣＳＦおよびＩＬ−４を伴う骨髄細胞の培養により、先に記載のように調製した（Rubinstein et al.,J Immunol169:4928-35,2002）。樹状細胞を、２時間、ＳＩＩＮＦＥＫＬペプチドにより、３７℃でパルスし、洗浄し、そしてｉｖで注入した。
【０２４６】
フローサイトメトリー分析。細胞を、標準的なプロトコルを使用するフローサイトメトリー分析によって分析した。簡単に説明すると、細胞を、１％ＦＣＳおよび２ｍＭ  ＥＤＴＡを含有するＦＡＣＳ緩衝液中で洗浄し、次いで、次の抗体の組み合わせで染色した：ＣＤ８−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、−ＡＰＣ、または−ＡＰＣ−Ｃｙ７（５３−６．７，ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、ＣＤ４９ｂ−ＰＥおよび−ＡＰＣ（ＤＸ５，ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＮＫ１．１−ＦＩＴＣおよび−ＰＥ（ＰＫ１３６，ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、ＣＤ３−ＰＥ、−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、−ＰＥ−Ｃｙ７、または−ＡＰＣ（１４５−２Ｃ１１，ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、ＣＤ３−Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｂｌｕｅ（５００Ａ２，ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、ＣＤ４−ＰＥ、ＰＥ−Ｃｙ７、または−ＡＰＣ（ＲＭ４−５，ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、Ｌｙ５．１−ＦＩＴＣ、−ＰＥ、−ＰＥ−Ｃｙ７、および−ＡＰＣ（Ａ２０，ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、Ｌｙ５．２−ＦＩＴＣ、−ＰＥ、−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５、および−ＡＰＣ（１０４，ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、Ｔｈｙ１．１−ＦＩＴＣ、ＰＥ、−ＰＥ−Ｃｙ７、および−ＡＰＣ（ＨＩＳ５１，ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、Ｔｈｙ１．２−ＦＩＴＣ、ＰＥ、および−ＡＰＣ（５３−２．１、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、ＣＤ４４−ＦＩＴＣ−ＡＰＣ、および−Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４０５（ＩＭ７，ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｃａｌｔａｇ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂｕｒｌｉｎｇａｍｅ、カリフォルニア州））、ＣＤ１２２−ＰＥ（ＴＭ−β１，ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、Ｂ２２０−ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５（ＲＡ３−６Ｂ２，ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）、およびＴＣＲ  Ｖα２−ＰＥ（Ｂ２０．１，ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）。製造者の指示に従って、ＦＩＴＣまたはＡＰＣ  ＢｒｄＵフローキット（５５９６１９および５５２５９８，ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）由来の試薬で、ＢｒｄＵ細胞内染色を実施した。フローサイトメトリーサンプルを、ＢＤ  ＬＳＲ  ＩＩデジタルフローサイトメーター（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、カリフォルニア州）を使用して、分析した。ＦｌｏｗＪｏソフトウェア（Ｔｒｅｅ  Ｓｔａｒ，Ｓａｎ  Ｃａｒｌｏｓ、カリフォルニア州）を使用して、データを解析した。
【０２４７】
実施例１５
材料および方法
マウス。Ｃ５７ＢＬ／６（Ｂ６）、Ｂ６．ＰＬ（Ｔｈｙ１．１−コンジェニック）、ＩＬ−２＋／およびＣＤ２５＋／マウス（すべてＢ６バックグランド上にある）は、Ｔｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  （Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、メイン州）から購入した。ＩＬ−７トランスジェニック（ｔｇ）マウスおよびＰ１４ｔｇマウス（両方ともＢ６バックグランド上にある）を、Ｔｈｙ１．１−コンジェニックバックグランドで飼育した。Kieper et al.,J Exp Med195:1533,2002;Pircher et al.,Nature351:482,1991。Ｂ６バックグランド上のＩＬ−１５−／−マウスを含むこれらのすべてのマウスを、本発明者らの動物施設において維持し、そして３〜６箇月齢で使用した。ＩＬ−２−／−およびＣＤ２５−／−マウスをヘテロ接合体ブリーダー（ｈｅｔｅｒｏｚｙｇｏｔｅ  ｂｒｅｅｄｅｒ）から飼育し、そしてＴｈｅ  Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙのウェブサイトにおいて提供される標準的なＰＣＲプロトコルによってスクリーニングした。Judge et al.,J Exp Med196:935,200。動物の使用に関与する実験は、ＴＳＲＩにおける動物管理使用委員会（Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）により承認された。
【０２４８】
フローサイトメトリーおよびセルソーティング。脾臓またはプールされた（鼠蹊、腋窩、頚部および腸間膜）ＬＮ細胞の懸濁液を、標準的なプロトコルに従って調製し、そして１％ＦＣＳおよび２ｍＭ  ＥＤＴＡを含有するＰＢＳを使用して、次のｍＡｂ（他で述べない限り、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ製）により、ＦＡＣＳ（登録商標）分析またはソーティングのために染色した：Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ  ４０５−コンジュゲートＢ２２０（ＲＡ３−６Ｂ２，Ｃａｌｔａｇ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）；ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５−コンジュゲートＣＤ３（１４５−２Ｃ１１）；Ａｌｅｘａ  Ｆｌｕｏｒ４０５−コンジュゲートＣＤ４（ＲＭ４−５，Ｃａｌｔａｇ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）；ＰｅｒＣＰ−Ｃｙ５．５−またはＡＰＣ−Ｃｙ７−コンジュゲートＣＤ８α（５３−６．７）；ＰＥ−コンジュゲートＣＤ８β（Ｈ３５−１７．２）；ＦＩＴＣ−またはＰＥ−コンジュゲートＣＤ２５（ＰＣ６１．５）；ＡＰＣ−コンジュゲートＣＤ４４（ＩＭ７，ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）；ＡＰＣ−コンジュゲートＣＤ９０．１（ＨＩＳ５１，  ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）；ＦＩＴＣ−またはＰＥ−コンジュゲートＣＤ１２２（ＴＭ−β１もしくは代替的に５Ｈ４）；ならびにＰＥ−コンジュゲートＦｏｘｐ３（ＦＪＫ−１６ｓ，ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）。細胞内Ｆｏｘｐ３染色を、製造者の推奨に従って実施した。簡単に説明すると、細胞を、細胞表面マーカーについてまず染色し、次いで、２％パラホルムアルデヒドを使用して固定化し、そして細胞内染色の前にサポニンを使用して浸透させた。フローサイトメトリーサンプルを、ＢＤ  ＬＳＲ  ＩＩデジタルフローサイトメーターを使用して分析した。セルソーティングは、ＢＤ  ＦＡＣＳ  Ａｒｉａを使用して実施した。ソーティング後、サンプルの純度は日常的に試験され、そして９８％を超えた。
【０２４９】
Ｔ細胞移入ならびにインビボでのサイトカインおよび抗体の投与。ＦＡＣＳ（登録商標）ソートされたメモリー表現型（ＭＰ）ＣＤ４４ｈｉＣＤ１２２ｈｉＣＤ８＋Ｔ細胞（＞９８％純度）を、野生型（ＷＴ）Ｂ６．ＰＬ、Ｔｈｙ１．１コンジェニックバックグランド上のＩＬ−７ｔｇマウス、あるいは指示があれば、ＣＤ２５−／−マウスの脾臓またはプールされたＬＮから入手した；試験したすべてのパラメータによって、ＩＬ−７ｔｇマウス由来のＭＰ  ＣＤ８＋細胞は、正常Ｂ６（もしくはＢ６．ＰＬ）マウスから調製したこれらの細胞の（かなり小さな）集団と区別できなかった。ソートされたＭＰ  ＣＤ８＋細胞を、１〜２×１０６細胞／マウスで静脈内（ｉｖ）に注入した。ｒｍＩＬ−２は、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅから購入し、製造者の推奨に従って貯蔵した。Ｓ４Ｂ６．１ハイブリドーマ（ラットＩｇＧ２ａ）は、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ（ＡＴＣＣ）から入手し、そして標準的な条件（以下を参照のこと）下でインビトロで培養し、そして分泌されたｍＡｂを培養上清から入手した。比較のために、Ｓ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂもまた、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから購入した。ＩＬ−２ｍＡｂ  ＪＥＳ６−１Ａ１２（ラットＩｇＧ２ａ）およびＪＥＳ６−５Ｈ４（ラットＩｇＧ２ｂ）を、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅから購入した。Ｓ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂのＦ（ａｂ’）２調製物は、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓから特別に注文し、消化を確認するために非還元条件下で１０％ＳＤＳ−ポリアクリルアミドゲル上で泳動させ、そしてｒｍＩＬ−２を中和するそれらの能力についてインビトロで試験した（図１２Ｂ）。
【０２５０】
養子細胞移入の日から開始して、加齢および性別の一致したマウスに、ＰＢＳ、アイソタイプ一致抗体（それぞれラットＩｇＧ２ａもしくはラットＩｇＧ２ｂ）、１．５μｇのｒｍＩＬ−２、Ｓ４Ｂ６（５０μｇ、図２を除く）、５０μｇのＳ４Ｂ６＋１０μｇのＣＤ１２２ｍＡｂ（ＴＭ−β１）、５０μｇのＪＥＳ６−１Ａ１２、５０μｇのＪＥＳ６−５Ｈ４、１．５μｇのｒｍＩＬ−２＋Ｓ４Ｂ６（５０μｇ、図８Ｄを除く）、１．５μｇのｒｍＩＬ−２＋５０μｇのＪＥＳ６−１Ａ１２、または１．５μｇのｒｍＩＬ−２＋５０μｇのＪＥＳ６−５Ｈ４の連日腹腔内（ｉｐ）注入を施した。組み換えヒトＩＬ−２（ｒｈＩＬ−２）を使用する実験では、ｒｈＩＬ−２およびヒトＩＬ−２ｍＡｂ（ＭＡＢ６０２、クローン５３５５）を、Ｒ＆ＤＳｙｓｔｅｍｓから購入した。ｒｍＩＬ−２について上記のように、マウスに、アイソタイプ一致コントロール抗体（マウスＩｇＧ２ａ）、１．５μｇ  ｒｈＩＬ−２、５０μｇのＭＡＢ６０２ｈＩＬ−２ｍＡｂまたは１．５μｇのｒｈＩＬ−２＋５０μｇのＭＡＢ６０２ｈＩＬ−２ｍＡｂの混合物をｉｐで連日注入した  ｒｍＩＬ−４を使用する実験では、ｒｍＩＬ−４は、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅから購入し、そして製造者の推奨に従って貯蔵した。抗マウスＩＬ−４ｍＡｂ  ＭＡＢ４０４（クローン３０３４０、ラットＩｇＧ１）は、Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓから入手し、第２の抗マウスＩＬ−４  ｍＡｂ  １１Ｂ．１１（ラットＩｇＧ１）は、ＮＣＩ  ＢＲＢ  Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｓｉｔｏｒｙ（Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、メリーランド州）から提供された。ＩＬ−２について上記のように、マウスに、アイソタイプ一致コントロール抗体（ラットＩｇＧ１）、１．５μｇのｒｍＩＬ−４、５０μｇのＩＬ−４ｍＡｂまたは１．５μｇのｒｍＩＬ−４＋５０μｇのＩＬ−４ｍＡｂの混合物を１日おきにｉｐで注入した。養子細胞移入の７日後、上記のように、脾臓およびＬＮ細胞を、フローサイトメトリーによって分析した。
【０２５１】
抗原特異的メモリーＣＤ８＋細胞の作製。リンパ球性脈絡髄膜炎ウイルス（ＬＣＭＶ）ｇｐ３３−４１エピトープを認識するＴＣＲｔｇＣＤ８＋細胞を有するＴｈｙ１．１でマークされたＰ１４マウスを、ドナーとして使用した。約９５％純度のＣＤ８＋Ｔｈｙ１．１＋細胞（約９０％Ｖα２＋およびそれ故ＴＣＲｔｇであった）を得るために、先に記載のように、これらのマウス由来の脾臓細胞を、補体＋熱安定性抗原（Ｊ１１ｄ）に対するｍＡｂ、ＣＤ４（ＲＬ１７２）、およびＭＨＣ−ＩＩｍＡｂ（２８−１６−８ｓ）で処置した。Kosaka et al.,J Exp Med176:1291,1992。次いで、これらの精製された細胞を、Ｂ６（Ｔｈｙ１．２）マウスに５×１０４細胞／マウス、ｉｖで養子移入し、細胞移入の１日後に、２×１０５プラーク形成単位のＬＣＭＶ株アームストロングｉｐ（Ａｒｍｓｔｒｏｎｇ  ｉｐ）を施した。次いで、マウスを＞２箇月間放置して、ＣＤ８＋メモリー細胞の作製を可能にした。その時、ＣＤ８＋細胞を、上記の補体＋ｍＡｂによってか、あるいは、ＣＤ１２２ｈｉＣＤ４４ｈｉＣＤ８＋細胞のＦＡＣＳ（登録商標）ソーティングによって、脾臓から精製した。次いで、約１６〜２０％Ｔｈｙ１．１＋Ｖα２＋ＬＣＭＶ特異的メモリーＴ細胞を含有する精製したＣＤ８＋細胞をＣＦＳＥ標識し、そして１０〜１５×１０６細胞／マウスでＢ６（Ｔｈｙ１．２）マウスに養子移入し、続いて、ＰＢＳ、１．５μｇのｒｍＩＬ−２、５０μｇのＳ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂまたは１．５μｇのｒｍＩＬ−２＋５０μｇのＩＬ−２ｍＡｂの連日ｉｐ注入を施した。養子細胞移入の７日後、上記のように、脾臓およびＬＮ細胞を、フローサイトメトリーによって分析した。
【０２５２】
インビボでの細胞ターンオーバーの測定。インビボでの細胞の増殖を、染料ＣＦＳＥの希釈または飲料水に付与したブロモデオキシウリジン（ＢｒｄＵ）（０．８ｍｇ／ｍｌ）の組み入れを使用して、測定した。Kieper et al.,J Exp Med195:1533,2002;Tough et al.,J Exp Med179:1127,1994。ＣＦＳＥ染色を、次のとおりに実施した：細胞を、１％ＦＣＳを含有するＰＢＳに、１０〜２０×１０６細胞／ｍｌで細懸濁し、そして１ミリリットルの細胞懸濁液あたり１μｌの５ｍＭ  Ｖｙｂｒａｎｔ  ＣＦＤＡ  ＳＥ  Ｃｅｌｌ  Ｔｒａｃｅｒキット（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ）で、１０分間、３７℃で染色し、次いで、１％ＦＣＳを含有する氷冷ＰＢＳで２回洗浄した。ＢｒｄＵの細胞内染色を、製造者の推奨に従い、ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ由来のＦＩＴＣ  ＢｒｄＵキットを使用して実施した。
【０２５３】
インビトロでの増殖。ＭＰ  ＣＤ８＋細胞を、フローサイトメトリーによって、Ｂ６またはＣＤ２５−／−マウスからソートした。ＣＤ３活性化細胞では、ＭＡＣＳ（登録商標）ＣＤ８＋Ｔ細胞単離キット（Ｍｉｌｔｅｎｙｉ  Ｂｉｏｔｅｃ）を使用して、若齢Ｂ６マウスのプールしたＬＮからＣＤ８＋細胞を精製した；これらの細胞は＞９５％ＣＤ８＋であり、そして約９０％ＣＤ４４ｌｏ生来の細胞よりなった。あるいは、ＦＡＣＳ（登録商標）を使用して細胞を精製し、＞９９％純度のＣＤ４４ｌｏＣＤ８＋細胞を得た。次いで、これらの精製されたＣＤ８＋細胞を、プレート結合型ＣＤ３ｍＡｂ（１４５−２Ｃ１１，ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）を使用して、活性化させた。指定のあるときは、細胞とＩＬ−２／ＩＬ−２ｍＡｂ複合体とを混合する前に、一定濃度（１０μｇ／ｍｌ）のアイソタイプ一致コントロールｍＡｂ、ＣＤ２５ｍＡｂ（ＰＣ６１．５，ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ）、またはＣＤ１２２ｍＡｂ（ＴＭ−β１，ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ）を、該細胞に添加した。９６ウェルプレート中１ウェルあたり５×１０４個の細胞で細胞を播種し、そしてｒｍＩＬ−２＋アイソタイプ一致コントロールｍＡｂ、ｒｍＩＬ−２＋Ｓ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂ、またはｒｍＩＬ−２＋ＪＥＳ６−１Ａ１２ＩＬ−２ｍＡｂの複合体の力価滴定された濃度をウェルに添加した。ｒｍＩＬ−２／ＩＬ−２ｍＡｂ複合体は、２つのいずれかの成分の過剰を回避するために、正確に２：１のモル比とした。細胞を、標準的な条件下（３７℃、７％ＣＯ２、加湿雰囲気）で３日間培養した。［３Ｈ］−チミジン（１μＣｉ／ｍｌ）を最後の１６時間添加し、そして液体シンチレーションカウンター（Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ  ９６，Ｔｏｍｔｅｃ）上で［３Ｈ］−チミジン組み入れを測定することによって、細胞増殖を評価した。
【０２５４】
骨髄再構成。正常Ｂ６マウスから骨髄（ＢＭ）細胞を入手し、そして非処置のまま放置したか、または補体＋ＣＤ４（ＲＬ１７２）およびＣＤ８（３．１６８）に対するｍＡｂを使用してＴ細胞を涸渇させた（ＢＭにおいて９５％を超える成熟Ｔ細胞を排除した）。それぞれ５〜１０×１０６個の非分離またはＴ細胞涸渇ＢＭ細胞のｉｖ注入前に、レシピエントＢ６マウスを、１０００ｃＧｙで照射した。続いて、ＰＢＳ、１．５μｇのｒｍＩＬ−２、８μｇのＳ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂまたは１．５μｇのｒｍＩＬ−２＋８μｇのＳ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂの連日注入をｉｐで与えた。養子移入の８日後、脾臓細胞を染色し、そしてフローサイトメトリーによって分析した。
【０２５５】
酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）。標準的なＩＬ−２サンドイッチＥＬＩＳＡを、製造者の推奨に従い、ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅマウスＩＬ−２ＥＬＩＳＡキットを使用して実施した。簡単に説明すると、平底９６ウェルプレートを、１晩、４℃、精製されたＪＥＳ６−１「捕捉」ｍＡｂでコートした。次いで、プレートを激しく洗浄し、その後、ｒｍＩＬ−２をウェルに添加し、そして２時間、室温でインキュベートした。続いて、プレートを激しく洗浄し、その後、ビオチン化ＪＥＳ６−５「検出」ｍＡｂを、１時間、室温で添加した。指示があれば、力価測定した濃度（１００μｇ／ｍｌから開始して５倍ずつ希釈）の精製コントロールｍＡｂ、精製ＪＥＳ６−１、精製ＪＥＳ６−５、または精製Ｓ４Ｂ６ＩＬ−２ｍＡｂを、検出ｍＡｂと共に添加した。続いて、ストレプトアビジン−コンジュゲート西洋ワサビペルオキシダーゼを３０分間、室温で添加する前に、プレートを激しく洗浄した。次いで、基質ｏ−フェニレンジアミンを使用して、サンプルを展開し、そして２Ｎ  Ｈ２ＳＯ４で反応を停止した後、ＥＬＩＳＡリーダー（Ｓｐｅｃｔｒａｍａｘ  Ｐｌｕｓ  ３８４，Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ）により４５０ｎｍで分析した。
【０２５６】
分子量のような物理特性、または化学式のような化学特性についての範囲が本明細書において使用される場合、範囲およびその中の特定の実施態様のすべての組み合わせ、ならびに部分的な組み合わせ（ｓｕｂｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ）も含まれるものとする。
【０２５７】
本書面において引用または記載されたそれぞれの特許、特許出願および刊行物の開示内容は、これらの引用または記載によってそれらの全体が本明細書において参照により援用される。
【０２５８】
当業者であれば、本発明の実施態様に多数の変更および改変を行うことができること、ならびにそのような変更および改変は、本発明の趣旨から逸脱することなく行うことができることを理解するであろう。従って、添付の特許請求の範囲は、本発明の真の趣旨および範囲内に当てはまるそのようなすべての等価な変形も含むものとする。
【図面の簡単な説明】
【０２５９】
【図１Ａ】ＩＬ−２またはＩＬ−２モノクローナル抗体によるインビボでのメモリー表現型（ＭＰ）ＣＤ８＋細胞の刺激を示す。
【図１Ｂ】ＩＬ−２またはＩＬ−２モノクローナル抗体によるインビボでのメモリー表現型（ＭＰ）ＣＤ８＋細胞の刺激を示す。
【図２】ＩＬ−２またはＩＬ−２モノクローナル抗体への応答におけるインビボでのＭＰ  ＣＤ８＋細胞の増殖を示す。
【図３Ａ】ＩＬ−２およびＩＬ−２モノクローナル抗体の組み合わせによるインビボでのＭＰならびに抗原（Ａｇ）特異的メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の顕著な選択的拡大を示す。
【図３Ｂ】ＩＬ−２およびＩＬ−２モノクローナル抗体の組み合わせによるインビボでのＭＰならびに抗原（Ａｇ）特異的メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の顕著な選択的拡大を示す。
【図３Ｃ】ＩＬ−２およびＩＬ−２モノクローナル抗体の組み合わせによるインビボでのＭＰならびに抗原（Ａｇ）特異的メモリーＣＤ８＋Ｔ細胞の顕著な選択的拡大を示す。
【図４Ａ】ＩＬ−２／ＩＬ−２モノクローナル抗体複合体に対するＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖が主としてＣＤ１２２ｈｉＭＰ細胞に制限され、そしてＩＬ−１５依存的であることを示す。
【図４Ｂ】ＩＬ−２／ＩＬ−２モノクローナル抗体複合体に対するＣＤ８＋Ｔ細胞の増殖が主としてＣＤ１２２ｈｉＭＰ細胞に制限され、そしてＩＬ−１５依存的であることを示す。
【図５Ａ】ＩＬ−２／ＩＬ−２モノクローナル抗体複合体に対するインビボでのＭＰ  ＣＤ８＋細胞の増殖がＣＤ２５を必要としないことを示す。
【図５Ｂ】ＩＬ−２／ＩＬ−２モノクローナル抗体複合体に対するインビボでのＭＰ  ＣＤ８＋細胞の増殖がＣＤ２５を必要としないことを示す。
【図６Ａ】異なるＩＬ−２／ＩＬ−２モノクローナル抗体複合体によるＴ細胞サブセットの選択的刺激を示す。
【図６Ｂ】異なるＩＬ−２／ＩＬ−２モノクローナル抗体複合体によるＴ細胞サブセットの選択的刺激を示す。
【図６Ｃ】異なるＩＬ−２／ＩＬ−２モノクローナル抗体複合体によるＴ細胞サブセットの選択的刺激を示す。
【図６Ｄ】異なるＩＬ−２／ＩＬ−２モノクローナル抗体複合体によるＴ細胞サブセットの選択的刺激を示す。
【図６Ｅ】異なるＩＬ−２／ＩＬ−２モノクローナル抗体複合体によるＴ細胞サブセットの選択的刺激を示す。
【図７Ａ】インビボにおいてＩＬ−２／ＩＬ−２モノクローナル抗体複合体でＭＰ  ＣＤ８＋細胞を刺激するための要件を示す。
【図７Ｂ】インビボにおいてＩＬ−２／ＩＬ−２モノクローナル抗体複合体でＭＰ  ＣＤ８＋細胞を刺激するための要件を示す。
【図７Ｃ】インビボにおいてＩＬ−２／ＩＬ−２モノクローナル抗体複合体でＭＰ  ＣＤ８＋細胞を刺激するための要件を示す。
【図７Ｄ】インビボにおいてＩＬ−２／ＩＬ−２モノクローナル抗体複合体でＭＰ  ＣＤ８＋細胞を刺激するための要件を示す。
【図８Ａ】サイトカイン／モノクローナル抗体複合体によるＴ細胞刺激の特徴を示す。
【図８Ｂ】サイトカイン／モノクローナル抗体複合体によるＴ細胞刺激の特徴を示す。
【図８Ｃ】サイトカイン／モノクローナル抗体複合体によるＴ細胞刺激の特徴を示す。
【図８Ｄ】サイトカイン／モノクローナル抗体複合体によるＴ細胞刺激の特徴を示す。
【図９Ａ】ＪＥＳ６−５およびＳ４Ｂ６ＩＬ−２モノクローナル抗体が、ＪＥＳ６−１の結合部位とは別のＩＬ−２上の類似の部位に結合することを示す。
【図９Ｂ】ＪＥＳ６−５およびＳ４Ｂ６ＩＬ−２モノクローナル抗体が、ＪＥＳ６−１の結合部位とは別のＩＬ−２上の類似の部位に結合することを示す。
【図１０Ａ】インビトロにおけるＩＬ−２／ＩＬ−２モノクローナル抗体複合体の効果を示す。
【図１０Ｂ】インビトロにおけるＩＬ−２／ＩＬ−２モノクローナル抗体複合体の効果を示す。
【図１１Ａ】Ｓ４Ｂ６およびＪＥＳ６−１  ＩＬ−２モノクローナル抗体の混合物を注入することは、ＭＰ  ＣＤ８＋細胞およびＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞の両方の増殖を阻止することを示す。
【図１１Ｂ】Ｓ４Ｂ６およびＪＥＳ６−１  ＩＬ−２モノクローナル抗体の混合物を注入することは、ＭＰ  ＣＤ８＋細胞およびＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞の両方の増殖を阻止することを示す。
【図１２Ａ】ＩＬ−２モノクローナル抗体のＦ（ａｂ’）２フラグメントがＩＬ−２モノクローナル抗体全体より効率的ではないことを示す。
【図１２Ｂ】ＩＬ−２モノクローナル抗体のＦ（ａｂ’）２フラグメントがＩＬ−２モノクローナル抗体全体より効率的ではないことを示す。
【図１３】ＩＬ−２／ＩＬ−２モノクローナル抗体複合体が、ＭＰ  ＣＤ８＋細胞の増殖を誘導する際に、ＩＬ−２−抗体融合タンパク質より有意に強力であることを示す。
【図１４Ａ】ＩＬ−７／ＩＬ−７モノクローナル抗体複合体が、胸腺におけるＴ細胞発達を効率的に誘導することができることを示す。
【図１４Ｂ】ＩＬ−７／ＩＬ−７モノクローナル抗体複合体が、胸腺におけるＴ細胞発達を効率的に誘導することができることを示す。
【図１５Ａ】ＩＬ−７／ＩＬ−７モノクローナル抗体複合体が、生来のＴ細胞の恒常的拡大を効率的に誘導することができることを示す。
【図１５Ｂ】ＩＬ−７／ＩＬ−７モノクローナル抗体複合体が、生来のＴ細胞の恒常的拡大を効率的に誘導することができることを示す。
【図１５Ｃ】ＩＬ−７／ＩＬ−７モノクローナル抗体複合体が、生来のＴ細胞の恒常的拡大を効率的に誘導することができることを示す。
【図１６】ＩＬ−７／ＩＬ−７モノクローナル抗体複合体が生来およびメモリーＴ細胞の両方の拡大を駆動することができることを示す。
【図１７】抗ＩＬ−７モノクローナル抗体のＦｃ部分がＩＬ−７／ＩＬ−７モノクローナル抗体複合体の増殖活性に必要であることを示す。
【図１８Ａ】加齢が、生来のＴ細胞の恒常性増殖を支持する能力の重度の低下に関連し、そしてこれは、ＩＬ−７／ＩＬ−７モノクローナル抗体複合体を使用して回復させることができることを示す。
【図１８Ｂ】加齢が、生来のＴ細胞の恒常性増殖を支持する能力の重度の低下に関連し、そしてこれは、ＩＬ−７／ＩＬ−７モノクローナル抗体複合体を使用して回復させることができることを示す。
【図１９Ａ】可溶性ＩＬ−１５ＲαがインビトロでＩＬ−１５仲介リンパ球増殖を増大することを示す。
【図１９Ｂ】可溶性ＩＬ−１５ＲαがインビトロでＩＬ−１５仲介リンパ球増殖を増大することを示す。
【図１９Ｃ】可溶性ＩＬ−１５ＲαがインビトロでＩＬ−１５仲介リンパ球増殖を増大することを示す。
【図１９Ｄ】可溶性ＩＬ−１５ＲαがインビトロでＩＬ−１５仲介リンパ球増殖を増大することを示す。
【図１９Ｅ】可溶性ＩＬ−１５ＲαがインビトロでＩＬ−１５仲介リンパ球増殖を増大することを示す。
【図２０Ａ】可溶性ＩＬ−１５ＲαがインビボでＩＬ−１５仲介ドナーリンパ球増殖を増大することを示す。
【図２０Ｂ】可溶性ＩＬ−１５ＲαがインビボでＩＬ−１５仲介ドナーリンパ球増殖を増大することを示す。
【図２０Ｃ】可溶性ＩＬ−１５ＲαがインビボでＩＬ−１５仲介ドナーリンパ球増殖を増大することを示す。
【図２０Ｄ】可溶性ＩＬ−１５ＲαがインビボでＩＬ−１５仲介ドナーリンパ球増殖を増大することを示す。
【図２１Ａ】可溶性ＩＬ−１５ＲαがＩＬ−１５仲介宿主リンパ球増殖を増大することを示す。
【図２１Ｂ】可溶性ＩＬ−１５ＲαがＩＬ−１５仲介宿主リンパ球増殖を増大することを示す。
【図２１Ｃ】可溶性ＩＬ−１５ＲαがＩＬ−１５仲介宿主リンパ球増殖を増大することを示す。
【図２１Ｄ】可溶性ＩＬ−１５ＲαがＩＬ−１５仲介宿主リンパ球増殖を増大することを示す。
【図２２】ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃがインビボ条件下でＩＬ−１５を増大する際にＩＬ−１５Ｒαより良好であることを示す。
【図２３Ａ】ＩＬ−１５Ｒαによって固定化されるＩＬ−１５に対する増殖が、可溶性ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃによって阻止され得ないことを示す。
【図２３Ｂ】ＩＬ−１５Ｒαによって固定化されるＩＬ−１５に対する増殖が、可溶性ＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃによって阻止され得ないことを示す。
【図２４Ａ】可溶性ＩＬ−２ＲαがＩＬ−２仲介増殖を阻害することを示す。
【図２４Ｂ】可溶性ＩＬ−２ＲαがＩＬ−２仲介増殖を阻害することを示す。
【図２５Ａ】インビトロにおけるＩＬ−１５の生存を示す。
【図２５Ｂ】インビトロにおけるＩＬ−１５の生存を示す。
【図２６】ヒトｓＩＬ−１５Ｒα−ＦｃがマウスおよびヒトＩＬ−１５の両方に対するマウスＭＰ  ＣＤ８＋細胞の応答を増強することを示す。
【図２７】ＩＬ−１５Ｒα−／−宿主におけるＩＬ−１５／ｓＩＬ−１５−Ｒα−Ｆｃ複合体による刺激を示す。
【図２８Ａ】マウス対ヒトＩＬ−１５に対する応答についてのｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの阻止効果を示す。
【図２８Ｂ】マウス対ヒトＩＬ−１５に対する応答についてのｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの阻止効果を示す。
【図２８Ｃ】マウス対ヒトＩＬ−１５に対する応答についてのｓＩＬ−１５Ｒα−Ｆｃの阻止効果を示す。
【図１】
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【図２】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図３Ｃ】
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【図４】
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【図５】
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【図６Ａ】
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【図６Ｂ】
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【図６Ｃ】
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【図６Ｄ】
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【図６Ｅ】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８Ａ】
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【図１８Ｂ】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４Ａ】
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【図２４】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８Ａ】
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【図２８Ｂ】
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【図２８Ｃ】
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【図２８Ｄ】
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【国際調査報告】
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