(57)【要約】  式１Ａ〔式中、Ｘ1及びＸ2は、Ｈ又はヒドロキシ保護基から独立して選択される〕で示される化合物を含む、化合物又は組成物が提供される。また提供されるものは、被験者に投与された後に式１Ａの化合物を形成する化合物である。【化１】2009511433.tif 000016
2009511433.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式１Ａ：
【化１】
2009511433.tif 000010
〔式中、
Ｘ1及びＸ2は、Ｈ若しくはヒドロキシ保護基から独立して選択される〕で示される化合物、又は投与後に被験者において式１Ａの化合物を形成する化合物を含む、化合物又は組成物。
【請求項２】
Ｘ1及びＸ2が両方ともヒドロキシ保護基である、請求項１記載の化合物又は組成物。
【請求項３】
Ｘ1及びＸ2が両方ともｔ−ブチルジメチルシリル基である、請求項２記載の化合物又は組成物。
【請求項４】
Ｘ1及びＸ2が両方ともＨであり、それによって化合物が式１Ｂ：
【化２】
2009511433.tif 000011
を有する、請求項１記載の化合物又は組成物。
【請求項５】
請求項１記載の化合物と薬学的に許容されるキャリアとを含む医薬製剤。
【請求項６】
医薬製剤中の化合物の量が、医薬製剤の１グラムあたり約０．０１μg〜約１mgの範囲である、請求項５記載の医薬製剤。
【請求項７】
医薬製剤中の化合物の量が、医薬製剤の１グラムあたり約０．１μg〜約５００μgの範囲である、請求項６記載の医薬製剤。
【請求項８】
Ｘ1及びＸ2が両方ともＨであり、それによって化合物が式１Ｂ：
【化３】
2009511433.tif 000012
を有する、請求項５記載の医薬製剤。
【請求項９】
生物学的障害に罹患している被験者を処置する方法であって、請求項１記載の化合物若しくは組成物又は請求項１記載の化合物と薬学的に許容されるキャリアとを含む医薬製剤の有効量を被験者に投与することを含む方法。
【請求項１０】
化合物、組成物又は医薬製剤が、被験者に経口的、非経口的、直腸内、経皮的又は局所的に投与される、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
化合物、組成物又は医薬製剤が、エアゾールで化合物、組成物又は医薬製剤を送達することによって投与される、請求項９記載の方法。
【請求項１２】
生物学的状態が、乾癬；白血病；結腸癌；乳癌；前立腺癌；多発性硬化症；狼瘡；真性糖尿病；宿主対移植片反応；臓器移植の拒絶反応；リウマチ様関節炎、喘息、湿疹若しくは炎症性腸疾患から選択される炎症性疾患；しわ、皮膚の適切な張りの欠如、真皮の適切な水和の欠如若しくは不十分な皮脂の分泌から選択される皮膚の状態；又は続発性副甲状腺機能亢進症から選択される、請求項９記載の方法。
【請求項１３】
生物学的状態が皮膚の状態である、請求項９記載の方法。
【請求項１４】
皮膚の状態が、しわ、皮膚の適切な張りの欠如、真皮の適切な水和の欠如、湿疹、乾癬又は不十分な皮脂の分泌から選択される、請求項１２記載の方法。
【請求項１５】
Ｘ1及びＸ2が両方ともＨであり、それによって化合物が式１Ｂ：
【化４】
2009511433.tif 000013
を有する、請求項９記載の方法。
【請求項１６】
治療に使用される、式１Ａ：
【化５】
2009511433.tif 000014
〔式中、
Ｘ1及びＸ2は、Ｈ若しくはヒドロキシ保護基から独立して選択される〕で示される化合物、又は投与後に被験者において式１Ａの化合物を形成する化合物を含む、化合物又は組成物。
【請求項１７】
治療における使用が、乾癬；白血病；結腸癌；乳癌；前立腺癌；多発性硬化症；狼瘡；真性糖尿病；宿主対移植片反応；臓器移植の拒絶反応；リウマチ様関節炎、喘息、湿疹若しくは炎症性腸疾患から選択される炎症性疾患；しわ、皮膚の適切な張りの欠如、真皮の適切な水和の欠如若しくは不十分な皮脂の分泌から選択される皮膚の状態；又は続発性副甲状腺機能亢進症の処置のためである、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
Ｘ1及びＸ2が両方ともＨであり、それによって化合物が式１Ｂ：
【化６】
2009511433.tif 000015
を有する、請求項１６記載の化合物。
【請求項１９】
乾癬；白血病；結腸癌；乳癌；前立腺癌；多発性硬化症；狼瘡；真性糖尿病；宿主対移植片反応；臓器移植の拒絶反応；リウマチ様関節炎、喘息、湿疹若しくは炎症性腸疾患から選択される炎症性疾患；しわ、皮膚の適切な張りの欠如、真皮の適切な水和の欠如若しくは不十分な皮脂の分泌から選択される皮膚の状態；又は続発性副甲状腺機能亢進症を処置するための薬剤の調製における、請求項１〜４のいずれか１項記載の化合物又は組成物の使用。
【請求項２０】
薬剤が皮膚の状態を処置するためのものである、請求項１９記載の使用。
【請求項２１】
皮膚の状態が、しわ、皮膚の適切な張りの欠如、真皮の適切な水和の欠如、湿疹、乾癬又は不十分な皮脂の分泌から選択される、請求項２０記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、１９，２３，２４，２５，２６，２７−ヘキサノール−１α−ヒドロキシビタミンＤ3及びその類似体のような１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の１９−ノル類似体、並びにこの化合物又はその類似体を含む医薬製剤に関する。本発明は、また、皮膚の状態のような多様な疾患を処置するのに使用される薬剤の調製における化合物及びその混合物の使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
エルゴステロールシリーズにおける、天然のホルモンである１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（１α，２５−ジヒドロキシコレカルシフェロール及びカルシトリオールとも呼ばれる）並びにその類似体、すなわち１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ2は、動物及びヒトにおけるカルシウムホメオスタシスの極めて強力なレギュレーターであることが知られており、細胞分化におけるそれらの活性も確立されている（Ostrem et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 84, 2610 (1987））。１α−ヒドロキシビタミンＤ3、１α−ヒドロキシビタミンＤ2、多様な側鎖ビタミン同族体及びフッ素化類似体を含む、これらの代謝産物の多くの構造類似体が調製され、試験されてきた。これらの化合物のうちの幾つかは、細胞分化及びカルシウム調節において興味深い活性の区分けを示す。この活性における差は、腎性骨異栄養、ビタミンＤ抵抗性くる病、骨粗鬆症、乾癬及び特定の悪性腫瘍のような多様な疾患の処置に有用であることができる。１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の構造及びこの化合物における炭素原子を意味するために使用される番号付けシステムを下記に示す。
【０００３】
【化１】
2009511433.tif 000003
【０００４】
別の部類のビタミンＤ類似体、すなわち、いわゆる１９−ノル−ビタミンＤ化合物は、ビタミンＤ系では典型的なＡ環の環外メチレン基（炭素１９）が２個の水素原子で代えられていることによって特徴づけられる。そのような１９−ノル−類似体（例えば、１α，２５−ジヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3）の生物学的試験は、細胞分化を誘発するのに極めて強力であり、非常に低いカルシウム移動活性を有する、選択的活性プロフィールを明らかにした。したがって、これらの化合物は、悪性腫瘍の処置又は多様な皮膚障害の処置のための治療剤として潜在的に有用である。そのような１９−ノル−ビタミンＤ類似体の２つの異なる合成方法が記載されている（Perlman et al., Tetrahedron Lett. 31, 1823 (1990); Perlman et al., Tetrahedron Lett. 32, 7663 (1991)及びDeLuca et al., U.S. Patent No. 5,086,191）。
【０００５】
１α，２５−ジヒドロキシ−１９−ノル−ビタミンＤ3の多様な２−置換類似体も合成されており、すなわち、ヒドロキシ又はアルコキシ基により（DeLuca et al.、米国特許第５，５３６，７１３号）、２−アルキル基により（DeLuca et al.、米国特許第５，９４５，４１０号）及び２−アルキリデン基により（DeLuca et al.、米国特許第５，８４３，９２８号）２位置で置換されている化合物であり、これらは興味深い選択的活性プロフィールを示す。これらの研究は、全て、ビタミンＤレセプターにおける結合部位が、合成されたビタミンＤ類似体のＣ−２位置で異なる置換基を収容できることを示す。
【０００６】
米国特許第４，６６６，６３４号は、骨粗鬆症を処置するのに使用される及び抗腫瘍剤として使用される潜在的な薬剤として、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の２β−ヒドロキシ及びアルコキシ（例えば、ＥＤ−７１）類似体を開示する。Okano et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 163, 1444 (1989)も参照すること。１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の他の（ヒドロキシアルキル、例えばＥＤ−１２０及びフルオロアルキル基による）２−置換Ａ環類似体が調製され、試験されている（Miyamoto et al., Chem. Pharm. Bull. 41, 1111 (1993); Nishii et al., Osteoporosis Int. Suppl. 1, 190 (1993); Posner et al., J. Org. Chem. 59, 7855 (1994)及びJ. Org. Chem. 60, 4617 (1995)）。
【０００７】
１９−ノルの部類の薬理学的に重要なビタミンＤ化合物を探求する継続的な努力において、炭素１０（Ｃ−１０）から炭素２（Ｃ−２）への環Ａ環外メチレン基の転位により特徴づけられるこれらの類似体、すなわち２−メチレン−１９−ノル−ビタミンＤ化合物が最近合成され、試験されている（Sicinski et al., J. Med. Chem., 41, 4662 (1998); Sicinski et al., Steroids 67, 247 (2002); DeLuca et al.、米国特許第５，８４３，９２８号、同第５，９３６，１３３号及び同第６，３８２，０７１号）。これらの類似体に対して実施された分子力学研究は、環Ａ配座の変化が、シクロヘキサンジオール環の「平たん化」をもたらすことが期待できることを示した。これらの化合物の分子力学的計算及びＮＭＲ研究から、Ａ環配座平衡は、エカトリアル１α−Ｈを有する配座異性体に優位に約６：４で確率された。１９−ノル−ビタミンＤ炭素骨格への２−メチレン基の導入は、その（１α−及び３β−）Ａ環ヒドロキシ基の性質を変化させ、これらは、天然ホルモンの１α，２５−（ＯＨ）2Ｄ3における（生物学的活性において重要である）１α−ヒドロキシル基と同様に、今度は両方ともアリル位置になる。１α，２５−ジヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノルビタミンＤ類似体は、「非天然」（２０Ｓ）配座により化合物において増強される有意な生物学的潜在能力によって特徴づけられる。
【０００８】
１９−ノルの部類の薬理学的に重要なビタミンＤ化合物を探求する継続的な努力において、炭素２（Ｃ−２）におけるメチレン置換基、炭素１（Ｃ−１）におけるヒドロキシル基及び炭素２０（Ｃ−２０）に結合している短側鎖の存在により特徴づけられる類似体も合成され、試験されてきた。１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−プレグナカルシフェロールは、米国特許第６，５６６，３５２号に記載されており、一方、１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−（２０Ｓ）−ホモプレグナカルシフェロールは、米国特許第６，５７９，８６１号に、１α−ヒドロキシ−２−メチレン−１９−ノル−ビスホモプレグナカルシフェロールは、米国特許第６，６２７，６２２号に記載されている。これらの３つの化合物は、全て、ビタミンＤレセプターに対して比較的高い結合活性及び比較的高い細胞分化活性を有するが、１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3と比較して、カルシウム血症活性は、たとえあったとしてもごく僅かしかない。これらの生物学的活性は、これらの化合物を第’３５２号、第’８６１号及び第’６２２号の特許に記載されているように、多様な医薬用途のための優れた候補にする。
【０００９】
炭素２０に結合している短側鎖を有する１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の１９−ノル類似体である、本明細書に記載されているようなビタミンＤの生物学的に活性な新たな類似体の必要性が存在する。
【発明の開示】
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明は、１９，２３，２４，２５，２６，２７−ヘキサノール−１α−ヒドロキシビタミンＤ3及びその類似体のような短側鎖を有する１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の１９−ノル類似体、この化合物を含む医薬製剤又は薬剤、並びに治療における及び多様な疾患状態を処置するのに使用される薬剤の調製におけるこれらの化合物又はその混合物の使用を提供する。
【００１１】
したがって、一つの態様において、本発明は、下記に示す式１Ａ：
【００１２】
【化２】
2009511433.tif 000004
【００１３】
〔式中、
Ｘ1及びＸ2は、Ｈ又はヒドロキシ保護基から独立して選択される〕を有する化合物を含む、化合物及び組成物を提供する。本発明は、また、被験者に投与された後に式１Ａの化合物を形成する化合物を含む。
【００１４】
幾つかの実施態様において、Ｘ1及びＸ2は、両方ともシリル基のようなヒドロキシ保護基である。幾つかのそのような実施態様において、Ｘ1及びＸ2は、両方ともｔ−ブチルジメチルシリル基である。
【００１５】
幾つかの実施態様において、Ｘ1及びＸ2は、両方ともＨであり、それによって化合物は、下記に示される式１Ｂ：
【００１６】
【化３】
2009511433.tif 000005
【００１７】
を有する。
【００１８】
幾つかの実施態様において、実施例のいずれかの化合物は、精製された形態で存在することができる。他の実施態様において、組成物中の化合物は、混合物として存在することができる。
【００１９】
上記の化合物を試験して、ビタミンＤレセプターへ結合する能力に関して、望ましい、極めて有益な生物学的活性のパターンを示すことが見出された。したがって、この化合物では、癌、皮膚の状態及び自己免疫性障害を処置するような治療における使用を見出すことができる。したがって、幾つかの実施態様において、これらの化合物又は本発明の１つ以上の化合物を含む医薬製剤を、癌、自己免疫性疾患、皮膚の状態及び続発性副甲状腺機能亢進症のような疾患又は障害の処置のための治療剤として用いることができる。幾つかの実施態様において、処置は経皮的、経口的又は非経口的であることができる。
【００２０】
本発明の化合物は、また、免疫系の平衡失調により特徴づけられるヒトの疾患、例えば、多発性硬化症、狼瘡、真性糖尿病、宿主対移植片反応及び臓器移植の拒絶反応を含む自己免疫性疾患の処置及び予防、並びに追加的にリウマチ様関節炎及び喘息のような炎症性疾患の処置、また、骨折の治癒の改善及び骨移植の改善に特に適切でありうる。ざ瘡、脱毛症、乾燥肌（真皮の水和の欠如）、過度の皮膚の弛み（不十分な皮膚の張り）、不十分な皮脂の分泌及びしわのような皮膚の状態、並びに高血圧が、本発明の化合物で処置されうる他の状態である。
【００２１】
本明細書に記載される化合物も試験され、中程度の細胞分化活性が見出された。したがって、これらの化合物を、乾癬の処置のための治療剤として、及び／又は特に白血病、結腸癌、乳癌及び前立腺癌に対する抗癌剤として使用することもできる。いくかの実施態様において、本発明の化合物及び組成物は、乾癬；白血病；結腸癌；乳癌；前立腺癌；多発性硬化症；狼瘡；真性糖尿病；宿主対移植片反応；臓器移植の拒絶反応；リウマチ様関節炎、喘息、湿疹若しくは炎症性腸疾患から選択される炎症性疾患；しわ、皮膚の適切な張りの欠如、真皮の適切な水和の欠如若しくは不十分な皮脂の分泌から選択される皮膚の状態；又は続発性副甲状腺機能亢進症から選択される生物学的状態を処置するために使用される。本発明の化合物は、特に美容用途における使用が見出され、したがって、本明細書に記載されている皮膚の状態のいずれかを処置するのに特に適している。
【００２２】
本発明の化合物を使用して、化合物を含む又は本発明の化合物と薬学的に許容されるキャリアとを組み合わせた混合物を含む医薬製剤又は薬剤を調製することができる。幾つかの実施態様において、化合物は、プロピレングリコールのようなグリコール化合物を含むことができるエアゾールを調製するのに使用される。そのような医薬製剤及び薬剤を使用して、本明細書に記載されているような多様な生物学的障害を処置することができる。そのような障害を処置する方法には、典型的には化合物の有効量又は化合物を含む医薬製剤若しくは薬剤の適切な量を、生物学的障害に罹患している被験者に投与することが含まれる。幾つかの実施態様において、被験者は哺乳動物である。幾つかのそのような実施態様において、哺乳動物は、齧歯類、霊長類、ウシ、ウマ、イヌ、ネコ、クマ、ブタ、ウサギ又はモルモットから選択される。幾つかのそのような実施態様において、哺乳動物は、ラット又はマウスである。幾つかの実施態様において、被験者は、例えばヒトのような霊長類である。幾つかの実施態様において、化合物は、プロピレングリコールのようなグリコール化合物を含むことができるエアゾールを調製するのに使用される。
【００２３】
本発明の方法の幾つかの実施態様において、化合物又は医薬組成物は、経口的、直腸内、非経口的、経皮的又は局所的に被験者に投与される。他の実施態様において、化合物又は医薬製剤は、エアゾールで投与され、これは吸入器又は噴霧器を使用して実施することができる。
【００２４】
化合物は、上記の疾患及び障害を処置する組成物において、組成物の約０．０１μg／gm〜約１mg／gm、好ましくは組成物の約０．１μg／gm〜約５００μg／gmの量で存在することができ、約０．０１μg／日〜約１mg／日、好ましくは約０．１μg／日〜約５００μg／日の投与量で本明細書に記載されているいずれかの経路によって投与することができる。
【００２５】
本発明の更なる目的、特徴及び利点は、以下の詳細な記載によって明白となる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
一般に、本発明は、１９，２３，２４，２５，２６，２７−ヘキサノール−１α−ヒドロキシビタミンＤ3及びその類似体のような短側鎖を有する１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3の１９−ノル類似体、この化合物を含む医薬製剤又は薬剤、並びに多様な疾患状態を処置するのに使用される薬剤の調製におけるこれらの化合物又はその混合物の使用を提供する。
【００２７】
したがって、一つの態様において、本発明は、下記に示す式１Ａ：
【００２８】
【化４】
2009511433.tif 000006
【００２９】
〔式中、
Ｘ1及びＸ2は、Ｈ又はヒドロキシ保護基から独立して選択される〕を有する化合物を含む、化合物及び組成物を提供する。本発明は、また、被験者に投与された後に式１Ａの化合物を形成する化合物を含む。
【００３０】
幾つかの実施態様において、Ｘ1及びＸ2は、両方ともシリル基のようなヒドロキシ保護基である。幾つかのそのような実施態様において、Ｘ1及びＸ2は、両方ともｔ−ブチルジメチルシリル基である。
【００３１】
幾つかの実施態様において、Ｘ1及びＸ2は、両方ともＨであり、それによって化合物は、下記に示される式１Ｂ：
【００３２】
【化５】
2009511433.tif 000007
【００３３】
を有する。
【００３４】
幾つかの実施態様において、実施例のいずれかの化合物は、精製された形態で存在することができる。他の実施態様において、組成物中の化合物は、混合物として存在することができる。
【００３５】
本明細書で使用されるとき、用語「ヒドロキシ保護基」は、これらに限定されないが、アルコキシカルボニル、アシル、アルキルシリル又はアルキルアリールシリル基（本明細書以降、単に「シリル」基と呼ぶ）及びアルコキシアルキル基のような、ヒドロキシ（−ＯＨ）官能基の一時的な保護のために慣用的に使用される任意の基を意味する。アルコキシカルボニル保護基は、メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、プロポキシカルボニル、イソプロポキシカルボニル、ブトキシカルボニル、イソブトキシカルボニル、tert−ブトキシカルボニル、ベンジルオキシカルボニル又はアリルオキシカルボニルのようなアルキル−Ｏ−ＣＯ−基である。用語「アシル」は、１〜６個の炭素のアルカノイル基、その全ての異性体形態、又はオキサリル、マロニル、スクシニル、グルタリル基のような１〜６個の炭素のカルボキシアルカノイル基、又はベンゾイルのような芳香族アシル基、又はハロ、ニトロ若しくはアルキル置換ベンゾイル基を意味する。アルコキシアルキル保護基は、メトキシメチル、エトキシメチル、メトキシエトキシメチル又はテトラヒドロフラニル及びテトラヒドロピラニルのような基である。好ましいシリル保護基は、トリメチルシリル、トリエチルシリル、ｔ−ブチルジメチルシリル、ジブチルメチルシリル、ジフェニルメチルシリル、フェニルジメチルシリル、ジフェニル−ｔ−ブチルシリル及び類似のアルキル化シリルラジカルである。用語「アリール」は、フェニル−、又はアルキル−、ニトロ−若しくはハロ置換フェニル基を特定する。ヒドロキシ官能基のための保護基の広範囲なリストを、Protective Groups in Organic Synthesis, Greene, T.W.; Wuts, P. G. M., John Wiley & Sons, New York, NY, (3rd Edition, 1999)において見出すことができ、これに記載されている手順を使用してこれらを付加又は除去することができ、その全体及び全ての目的は、あたかも本明細書に完全に記載されているように参照として本明細書に組み込まれる。
【００３６】
「保護ヒドロキシ」基は、ヒドロキシ官能基の一時的な又は永久的な保護に慣用的に使用される上記の基、例えば、前記で定義されたシリル、アルコキシアルキル、アシル又はアルコキシカルボニル基のいずれかによって誘導体化又は保護されるヒドロキシ基である。
【００３７】
本発明の化合物は、本明細書に記載された方法を使用して調製した。式１Ａ及び１Ｂの化合物、特に１９，２３，２４，２５，２６，２７−ヘキサノール−１α−ヒドロキシビタミンＤ3の調製についての詳細な説明において、以下の記載、並びにスキーム１及び２を参照するべきである。
【００３８】
実施例
多様な１９−ノルビタミンＤ類似体の合成及び特徴は、米国特許第５，８４３，９２８号、米国特許第５，６１６，７５９号、米国特許第５，５９７，９３２号、米国特許第５，２８１，７３１号、米国特許第６，６２７，６２２号、米国特許第６，５７９，８６１号、米国特許第５，０８６，１９１号、米国特許第５，５８５，３６９号及び米国特許第６，５３７，９８１号を含む多数の米国特許に記載されている。
【００３９】
融点（未補正）は、Thomas-Hoover毛細管融点装置を使用して決定した。紫外線（ＵＶ）吸収スペクトルは、エタノール中でPerkin-Elmer Lambda 3B UV-VIS分光光度計を用いて記録した。1Ｈ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、ＣＤＣｌ3中でBruker Instruments DMX-400及びDMX-500 Avanceコンソールスペクトロメーターを使用して、４００及び５００MHzで記録した。13Ｃ核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルは、ＣＤＣｌ3中でBruker Instruments DMX-500 Avanceコンソールスペクトロメーターを用いて１２５MHzで記録した。化学シフト（δ）は、内部Ｍｅ4Ｓｉ（δ０．００）から低磁場で報告される。電子衝撃（ＥＩ）質量スペクトルは、Micromass AutoSpec (Beverly, MA)機器から得た。高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）は、Model 6000A溶媒送達システム、Model U6K Universal注入器及びModel 486同調可能吸光検出器を備えたWaters Associates液体クロマトグラフィーで実施した。ＴＨＦは、使用前に、新たにナトリウムベンゾフェノンケチルからアルゴン下で蒸留した。
【００４０】
スキーム１及び２は、下記に詳細に記載された合成手順を概説する。
【００４１】
【化６】
2009511433.tif 000008
【００４２】
（２０Ｓ）−Ｄｅ−Ａ，Ｂ−８β−ヒドロキシ−２０−（ヒドロキシメチル）プレグナン（１）の調製
オゾンを、メタノール（２５０mL）及びピリジン（２．４４ｇ、２．５mL、３１mmol）中のビタミンＤ2（３ｇ、７．６mmol）の溶液中、−７８℃で５０分間通過させた。次に反応混合物を酸素で１５分間フラッシュして、残留オゾンを除去し、溶液をＮａＢＨ4（０．７５ｇ、２０mmol）で処理した。２０分後、ＮａＢＨ4の第２の部分（０．７５ｇ、２０mmol）を加え、混合物を室温に温めた。次にＮａＢＨ4の第３の部分（０．７５ｇ、２０mmol）を加え、反応混合物を１８時間撹拌した。反応を水（４０mL）で停止させ、溶液を減圧下で濃縮した。残渣を酢酸エチル（３×８０mL）で抽出し、合わせた有機相を１M  ＨＣｌ水溶液で洗浄し、飽和ＮａＨＣＯ3水溶液で洗浄し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で濃縮した。残渣を、ヘキサン／酢酸エチル（７５：２５）を用いるシリカゲルのクロマトグラフィーに付して、生成物１（１．２１ｇ、収率７５％）を白色の結晶として得た。
1:  融点106-108°C; [α]D +30.2° (c 1.46, CHCl3); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.08 (1H, d, J = 2.0 Hz, 8α-H), 3.63 (1H, dd, J = 10.5, 3.1 Hz, 22-H), 3.38 (1H, dd, J = 10.5, 6.8 Hz, 22-H), 1.99 (1H, br.d, J = 13.2 Hz), 1.03 (3H, d, J = 6.6 Hz, 21-H3), 0.956 (3H, s, 18-H3); 13C NMR (100 MHz) δ 69.16 (d, C-8), 67.74 (t, C-22), 52.90 (d), 52.33 (d), 41.83 (s, C-13), 40.19 (t), 38.20 (d), 33.53 (t), 26.62 (t), 22.54 (t), 17.36 (t), 16.59 (q, C-21), 13.54 (q, C-18); MS (EI) m/z 212 (2, M+), 194 (34, M+ - H2O), 179 (33, M+ - H2O - CH3), 163 (18, M+ - CH2OH - H2O), 135 (36), 125 (54), 111 (100), 95 (63), 81 (67); C13H22O (M+ - H2O)で計算した正確な質量 194.1671, 実測値 194.1665.
【００４３】
Ｄｅ−Ａ，Ｂ−２０−メチル−プレグナン−８β−オール（２）の調製
無水塩化メチレン（２５ml）中のジオール１（１ｇ、４．７mmol）、ＤＭＡＰ（５０mg、０．４mmol）及びＥｔ3Ｎ（１．９６mL、１．４２ｇ、１４．１mmol）の撹拌溶液に、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（１．０７ｇ、５．６mmol）を０℃で加えた。反応混合物を０℃で２２時間撹拌した。塩化メチレン（６０mL）を加え、混合物を水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で濃縮した。残渣を、ヘキサン／酢酸エチル（９：１、次に８５：１５）を用いるシリカゲルのクロマトグラフィーに付して、トシレート（１．７２ｇ、収率１００％）を無色の油状物として得た。
【００４４】
水素化アルミニウムリチウム（３６０mg、９．５mmol）を、無水ＴＨＦ（２５mL）中のトシレート（１．７２ｇ、４．７mmol）の溶液に０℃で加えた。冷却浴を取り外し、反応混合物を室温で５時間撹拌した。過剰量の水素化物を、メタノールの０℃での注意深い連続的な添加により停止させた。酒石酸の飽和水溶液を加え、混合物を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相を水で洗浄し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で濃縮した。残渣を、ヘキサン／酢酸エチル（９：１、８：２）を用いるシリカゲルのクロマトグラフィーに付して、アルコール２（８１１mg、８８％）を得た。
2:  [α]D +25.3° (c 1.48, CHCl3); 1H NMR (400 MHz, CDCl3 + TMS) δ 4.07 (1H, d, J = 2.2 Hz, 8α-H), 1.98 (1H, br.d, J = 13.4 Hz), 0.928 (3H, s, 18-H3), 0.92 及び 0.84 (各3H, 各d, 各J = 6.6 Hz, 21-H3 及び 22-H3); 13C NMR (100 MHz) δ 69.39 (d, C-8), 58.72 (d), 52.57 (d), 41.80 (s, C-13), 40.24 (t), 33.52 (t), 30.52 (d), 27.34 (t), 23.02 (q, C-21 又は C-22), 22.51 (t), 22.34 (q, C-21 又は C-22), 17.40 (t), 13.61 (q, C-18); MS (EI) m/z 196 (24, M+), 181 (30, M+ - CH3), 163 (11, M+ - H2O - CH3), 135 (20, M+ - H2O - C3H7), 125 (26), 111 (100), 97 (33), 82 (57); C13H24O (M+)で計算した正確な質量 196.1827, 実測値 196.1821.
【００４５】
Ｄｅ−Ａ，Ｂ−２０−メチル−プレグナン−８−オン（３）の調製
ピリジニウムジクロメート（７２０mg、１．９mmol）を、無水塩化メチレン（６mL）中のアルコール２（９４mg、０．４８mmol）及びピリジニウムｐ−トルエンスルホネート（５mg、２０μmol）の溶液に加えた。得られた懸濁液を室温で４時間撹拌した。反応混合物を、WatersシリカSep-Pakカートリッジ（２ｇ）で濾過し、それをＣＨ2Ｃｌ2で更に洗浄した。溶媒を除去した後、ケトン３（８６mg、収率９２％）を、無色の油状物として得た。
3:  [α]D -28.8° (c 1.09, CHCl3); 1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ2.43 (1H, dd, J = 11.5, 7.6 Hz), 0.95 及び 0.86 (各3H, 各d, 各J = 6.5 Hz, 21-H3 及び 22-H3), 0.617 (3H, s, 18-H3); 13C NMR (100 MHz) δ 212.11 (s, C-8), 61.93 (d), 58.61 (d), 49.90 (s, C-13), 40.90 (t), 38.82 (t), 30.70 (d), 27.60 (t), 24.03 (t), 22.95 及び 22.45 (各q, C-21 及び C-22), 19.02 (t), 12.51 (q, C-18); MS (EI) m/z 194 (63, M+), 179 (74, M+ - CH3), 151 (100, M+ - C3H7), 133 (22), 125 (58), 111 (48), 96 (85), 81 (80); C13H22O (M+)で計算した正確な質量 194.1671, 実測値 194.1664.
【００４６】
【化７】
2009511433.tif 000009
【００４７】
１９，２３，２４，２５，２６，２７−ヘキサノール−１α−ヒドロキシビタミンＤ3（６）の調製
無水ＴＨＦ（１mL）中のホスフィンオキシド４（２５０mg、０．４４mmol）の溶液に、２０℃で、ＰｈＬｉ（シクロヘキサン−エーテル中１．３M、４００μL、０．５２mmol）をアルゴン下、撹拌しながらゆっくりと加えた（Perlman et al., Tetrahedron Lett. 32, 7663 (1991)及びDeLuca et al.に対して発行された米国特許第５，６１６，７５９号を参照すること（両方ともその全体があたかも本明細書に完全に記載されているように参照として本明細書に組み込まれる））。溶液は深橙色になった。３０分後、混合物を−７８℃に冷却し、無水ＴＨＦ（６００＋２００μL）中のケトン３（８６mg、０．４４mmol）の予冷（−７８℃）溶液をゆっくりと加えた。混合物をアルゴン下、−７８℃で６時間、０℃で１８時間撹拌した。酢酸エチルを加え、有機相をブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、蒸発させた。残渣をヘキサンに溶解し、WatersシリカSep-Pakカートリッジ（５ｇ）に適用した。カートリッジをヘキサン及びヘキサン／酢酸エチル（９９．５：０．５）で洗浄して、１９ノルビタミン誘導体５（１８０mg、０．３３mmol、収率９２％）を得た。次に、Sep-Pakをヘキサン／酢酸エチル（９６：４）で洗浄して、未変化Ｃ，Ｄ−環ケトン３（１５mg、０．０８mmol）を回収し、酢酸エチルで洗浄して、ジフェニルホスフィンオキシド４（５２mg）を回収した。
5:  UV (ヘキサン) λmax 261.7, 252.0, 243.2 nm; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.18及び5.83 (1H 及び 1H, 各d, J = 11.2 Hz, 6- 及び 7-H), 4.10 (2H, m, 1β- 及び3α-H), 2.82 (1H, br d, J = 12.4 Hz, 9-H), 2.38 (2H, m, 4-H 及び 10-H), 2.27 (1H, br d, J = 13.5 Hz, 10-H), 2.11 (1H, dd, J = 12.8, 8.1 Hz, 4-H), 1.99 (2H, m), 0.96 (3H, d, J = 6.5 Hz, 21- or 22-H3), 0.887 (9H, s, Si-t-Bu), 0.874 (9H, s, Si-t-Bu), 0.87 (3H, d, J = 6.5 Hz, 21- or 22-H3), 0.547 (3H, s, 18-H3), 0.069, 0.063, 0.059 及び 0.058 (各3H, 各s, 4 x Si-CH3); 13C NMR (100 MHz) δ 140.73 (s, C-8), 133.52 (s, C-5), 121.77 (d, C-6), 116.12 (d, C-7), 68.10 及び 67.96 (each d, C-1 及び C-3), 58.61 (d), 56.25 (d), 46.00 (t), 45.61 (s, C-13), 43.73 (t), 40.51 (t), 36.80 (t), 31.34 (d), 28.67 (t), 27.83 (t), 25.85 (q, 2 x SiCMe3), 23.41 (t), 23.14 及び 22.66 (各q, C-21 及び C-22), 22.23 (t), 18.09 (s, 2 x SiCMe3), 12.14 (q, C-18), -4.66 (q, SiCMe), -4.76 (q, SiCMe), -4.83 (q, SiCMe), -4.90 (q, SiCMe); MS (EI) m/z 546 (46, M+), 489 (28, M+ - t-Bu), 414 (100, M+ - t-BuMe2SiOH), 357 (48, M+ - t-BuMe2SiOH - t-Bu), 301 (21), 135 (20), 73 (91); C33H62O2Si2 (M+)で計算した正確な質量 546.4288, 実測値 546.4295.
【００４８】
保護ビタミン５（１８０mg、０．３３mmol）を、ＴＨＦ（３mL）及びアセトニトリル（２mL）に溶解した。アセトニトリル（１：９比、５mL）中の水性４８％ＨＦの溶液を０℃で加え、得られた混合物を室温で３時間撹拌した。飽和ＮａＨＣＯ3水溶液を加え、反応混合物を酢酸エチルで抽出した。合わせた有機相をブラインで洗浄し、乾燥し（Ｎａ2ＳＯ4）、減圧下で濃縮した。残渣を２mLのヘキサン／酢酸エチル（９５：５）で希釈し、WatersシリカSep-Pakカートリッジ（５ｇ）に適用した。ヘキサン／酢酸エチル（１：１）での溶離によって、粗生成物６（１０２mg）を得た。ビタミン６を、ストレート相（straight phase）ＨＰＬＣ〔２０×２５０mm Zorbax Pro-10 SILカラム、１４mL／分、ヘキサン／２−プロパノール（８５：１５）溶媒系、Ｒt＝１０．００分〕、後に逆相ＨＰＬＣ〔３０×２５０mm Luna 5u C18(2)カラム、１５mL／分、メタノール／水（９７：３）溶媒系、Ｒt＝１４．８２分〕により更に精製して、無色の油状物（７０．７２mg、収率６７％）を得た。
6:  UV (EtOH) λmax 260.8, 251.2, 242.6 nm; 1H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 6.30 及び 5.85 (1H 及び 1H, 各d, J = 11.2 Hz, 6- 及び 7-H), 4.11 (1H, m, 3α-H), 4.04 (1H, m, 1β-H), 2.79 (1H, dd, J = 12.2, 4.0 Hz, 9-H), 2.73 (1H, dd, J = 13.2, 3.7 Hz, 10-H), 2.48 (1H, dd, J = 13.3, 3.3 Hz, 4-H), 2.21 (2H, m, 4-H 及び 10-H), 0.94 (3H, d, J = 6.6 Hz, 21- 又は 22-H3), 0.86 (3H, d, J = 6.6 Hz, 21- 又は 22-H3), 0.534 (3H, s, 18-H3); 13C NMR (125 MHz) δ 142.55 (s, C-8), 131.56 (s, C-5), 123.28 (d, C-6), 115.27 (d, C-7), 67.03 及び 66.71 (各d, C-1 及び C-3), 58.46 (d), 56.15 (d), 45.61 (s, C-13), 44.27 (t), 41.88 (t), 40.22 (t), 36.83 (t), 31.20 (d), 28.77 (t), 27.66 (t), 23.37 (t), 23.01 及び 22.52 (各q, C-21 及び C-22), 22.17 (t), 12.05 (q, C-18).  MS (EI) m/z 318 (100, M+), 303 (6, M+ - Me), 275 (41, M+ - C3H7), 257 (15, M+ - C3H7 - H2O), 239 (19, M+ - C3H7 - 2H2O), 221 (23), 203 (18), 189 (39), 177 (58), 147 (33), 135 (46), 123 (39), 105 (36), 95 (55); C21H34O2 (M+)で計算した正確な質量 318.2559, 実測値 318.2547.
【００４９】
生物学的活性
ビタミンＤレセプター結合
試験材料
タンパク質供給源
完全長組み換えラットレセプターを、E. coli BL21(DE3) Codon Plus RIL細胞で発現させ、２つの異なるカラムクロマトグラフィー系を使用し精製して均一にした。最初の系は、このタンパク質のＣ末端ヒスチジン標識を利用するニッケル親和性樹脂であった。この樹脂から溶離したタンパク質を、イオン交換クロマトグラフィー（エス−セファロース・ファースト・フロー（S-Sepharose Fast Flow））を使用して更に精製した。精製したタンパク質のアリコートを液体窒素で瞬間冷凍し、使用するまで−８０℃で保存した。結合アッセイに使用するために、タンパク質を、０．１％Chaps洗剤を有するＴＥＤＫ50（５０mMトリス、１．５mM  ＥＴＤＡ、ｐＨ７．４、５mM  ＤＴＴ、１５０mM  ＫＣｌ）で希釈した。レセプタータンパク質及びリガンドの濃度を、加えた放射標識リガンドの２０％以下がレセプターに結合するように最適化した。
【００５０】
研究薬剤
非標識リガンドをエタノールに溶解し、濃度を、ＵＶ分光光度法（１，２５（ＯＨ）2Ｄ3：モル吸光係数＝１８，２００及びλmax＝２６５nm）を使用して決定した。放射標識リガンド（3Ｈ−１，２５（ＯＨ）2Ｄ3、約１５９Ci／mmol）を、最終濃度１nMでエタノールに加えた。
【００５１】
アッセイ条件
放射標識及び非放射標識リガンドを、１００mclの希釈タンパク質に、最終エタノール濃度≦１０％で加え、混合し、氷上で一晩インキュベートして、結合平衡を得た。翌日、１００mclのヒドロキシルアパタイトスラリー（５０％）を各管に加え、１０分間隔で３０分間混合した。ヒドロキシルアパタイトを遠心分離で収集し、次に０．５％トリトンＸ―１００を含有するトリス−ＥＤＴＡ緩衝液（５０mMトリス、１．５mM  ＥＤＴＡ、ｐＨ７．４）で３回洗浄した。最終洗浄の後、ペレットを、４mLのBiosafe IIシンチレーションカクテルを含有するシンチレーションバイアルに移し、混合し、シンチレーションカウンタに設置した。全ての結合を、放射標識リガンドのみを含有する管で決定した。
【００５２】
ＨＬ−６０分化
試験材料
研究薬剤
研究薬剤をエタノールに溶解し、ＵＶ分光光度法を使用して濃度を決定した。連続した希釈を、一連の薬剤濃度が、細胞培養に存在するエタノールの最終濃度（≦０．２％）を変えないで試験されるように調製した。
【００５３】
細胞
ヒト前骨髄球性白血病（ＨＬ６０）細胞を、１０％ウシ胎児血清を含有するＲＰＭＩ−１６４０培地で増殖させた。細胞を、５％ＣＯ2の存在下、３７℃でインキュベートした。
【００５４】
アッセイ条件
ＨＬ６０細胞を１．２×１０5細胞／mLで平板培養した。平板培養の１８時間後、複製細胞を薬剤で処理した。４日後、細胞を採取し、ニトロブルーテトラゾリウム還元アッセイを実施した（Collins et al., 1979; J. Exp. Med. 149:969-974）。分化した細胞の率を、合計で２００個の細胞を計数し、細胞内黒青ホルマザン沈着物を含有する数を記録することによって決定した。単球細胞への分化の確認は、食作用を測定することによって決定した。
【００５５】
インビトロ転写アッセイ
転写活性を、ルシフェラーゼレポーター遺伝子の上流で２４−ヒドロキシラーゼ（２４Ｏｈａｓｅ）遺伝子により安定して形質移入されたＲＯＳ１７／２．８（骨）細胞で測定した。細胞に一連の投与を行った。投与の１６時間後、細胞を採取し、ルシフェラーゼ活性を、照度計を使用して測定した。ＲＬＵ＝相対的ルシフェラーゼ単位。
【００５６】
拮抗作用を、最終エタノール濃度を同一に保持している同じウエル中の１，２５（ＯＨ）2Ｄ3と化合物の組み合わせを加えることによって試験した。
【００５７】
腸内カルシウム移動及び骨カルシウム動員
雄の離乳Sprague-Dawleラットを、食餌１１（Suda et al. J. Nutr. 100:1049, 1970）（Ｃａ  ０．４７％）食餌＋ビタミンＡＥＫに１週間、続いて食餌１１（Ｃａ  ０．０２％）＋ＡＥＫに３週間付した。次にラットを、１週間のＣａ  ０．４７％含有食餌、続いて２週間のＣａ  ０．０２％含有食餌に切り替えた。用量の投与は、カルシウム０．０２％食餌の最終週に始めた。４回の連続的な腹腔内投与を、およそ２４時間間隔で行った。最後の投与の２４時間後、血液を、切断した頸部から収集し、血清カルシウム濃度を、骨カルシウム動員の測度として決定した。また腸の最初の１０cmを、反転腸管法を使用して腸内カルシウム移動分析のために収集した。拮抗作用を、１，２５（ＯＨ）2Ｄ3と化合物の組み合わせを動物に同時に投与することによって試験した。
【００５８】
本発明の化合物は、上記に記載された方法を使用して研究及び調製した。化合物では、腸内カルシウム移動活性、骨からカルシウムを動員する能力及びビタミンＤレセプターに結合する能力に関して、望ましい極めて有益な生物学的活性のパターンを示すことが見出された。化合物では、中程度の細胞分化活性も見出された。
【００５９】
式１Ｂの化合物は、図１に示されているように、天然のホルモン１，２５−（ＯＨ）2Ｄ3ほど強力にビタミンＤレセプターに結合しない。式１Ｂの化合物は、ＨＬ−６０細胞の分化を誘発するのに１，２５−（ＯＨ）2Ｄ3と比較してより少ないが、依然として有意な活性を示す（図２）。式１Ｂの化合物は、図３に示されているように、１，２５−（ＯＨ）2Ｄ3と同じ程度に転写を引き起こす活性を示さない。最後に、式１Ｂの化合物は、測定可能な骨カルシウム動員活性又は腸内カルシウム移動活性を有さない（図４Ａ及び４Ｂ）。
【００６０】
処置の目的において、本発明の化合物を、無害溶媒中の液剤として、又は適切な溶媒若しくはキャリア中の乳剤、懸濁剤若しくは分散剤として、又は個体キャリアと一緒にした丸剤、錠剤若しくはカプセル剤として、当該技術に既知の従来の方法に従って医薬用途のために配合することができる。そのような製剤のいずれも、安定剤、酸化防止剤、結合剤、着色剤又は乳化若しくは味覚変更剤のような他の薬学的に許容され、非毒性の賦形剤を含有することもできる。薬学的に許容される賦形剤及びキャリアは、一般に当業者に知られており、したがって本発明に含まれる。そのような賦形剤及びキャリアは、例えば、“Remingtons Pharmaceutical Sciences” Mack Pub. Co., New Jersey (1991)に記載されており、これは、その全体及び全ての目的が、あたかも本明細書に完全に記載されているように参照として本明細書に組み込まれる。
【００６１】
化合物を、経口的、局所的、非経口的、直腸内又は経皮的に投与することができる。化合物は、注射により、又は静脈内注入若しくは適切な無菌液剤により、又は消化管を介した液体又は固体投与形態で、又はクリーム剤、軟膏剤、パッチ剤若しくは経皮適用に適切な同様のビヒクルの形態で有利に投与される。幾つかの実施態様において、化合物の１日あたりの０．００１μg〜約１mgの用量が、処置の目的に適当である。幾つかのそのような実施態様において、適当であり有効な用量は、化合物の１日あたり０．０１μg〜１mgの範囲であることができる。他のそのような実施態様において、適当であり有効な用量は、化合物の１日あたり０．１μg〜５００μgの範囲であることができる。そのような用量は、処置される疾患又は状態の種類、疾患又は状態の重篤度及び被験者の反応に応じて調整され、このことは当該技術において十分に理解されている。化合物を、単独で又は他の活性ビタミンＤ化合物と一緒に適切に投与することができる。
【００６２】
本発明に使用される組成物は、活性成分又は複数の活性成分として実施態様のいずれかの化合物の有効量及び適切なキャリアを含む。本発明の幾つかの実施態様で使用される化合物又は複数の化合物の有効量は、一般に本明細書に記載されているような投与量であり、局所的、経皮的、経口的、鼻腔内、直腸内又は非経口的に投与することができる。
【００６３】
上記に記載された投与量は適切であるが、提示された量は、疾患の重篤度、並びに被験者の状態及び反応に従って調整されるべきであることが理解され、このことは当該技術において十分に理解されている。示したように、本発明の化合物は、２つ以上の化合物の混合物として存在することができる。幾つかの混合物において、混合物は、本発明の第１の化合物と本発明の第２の化合物を含むことができる。幾つかの実施態様において、混合物は、第１の化合物と第２の化合物を含み、第１の化合物と第２の化合物の比率は、５０：５０〜９９．９：０．１の範囲である。幾つかのそのような実施態様において、第１の化合物と第２の化合物の比率は、７０：３０〜９９．９：０．１、８０：２０〜９９．９：０．１、９０：１０〜９９．９：０．１、又は９５：５〜９９．９：０．１の範囲である。
【００６４】
化合物又は複数の化合物を、クリーム剤、ローション剤、軟膏剤、エアゾール剤、坐剤、局所パッチ剤、丸剤、カプセル剤若しくは錠剤で、又は薬学的に無害で許容される溶媒若しくは油中の液剤、乳剤、分散剤若しくは懸濁剤としての液体形態で配合することができ、そのような調合剤は、加えて、安定剤、酸化防止剤、乳化剤、着色剤、結合剤又は味覚変更剤のような他の薬学的に無害又は利益のある成分を含有することができる。
【００６５】
したがって本発明の製剤は、薬学的に許容されるキャリアと関連する活性成分及び任意に他の治療成分を含む。キャリアは、製剤の他の成分と適合性があり、かつ受容者に有害ではないという意味において「許容」されなければならない。
【００６６】
経口投与に適切な本発明の製剤は、それぞれ所定量の活性成分を含有するカプセル剤、サッシュ(sachet)剤、錠剤若しくはロゼンジ剤として別個の単位形態、粉末剤若しくは顆粒剤の形態、水性液体若しくは非水性液体中の液剤若しくは懸濁剤の形態、又は水中油乳剤若しくは油中水乳剤の形態であることができる。
【００６７】
直腸内投与用の製剤は、活性成分と、カカオ脂のようなキャリアとを組み込んだ坐剤の形態、又は浣腸の形態であることができる。
【００６８】
非経口投与に適切な製剤は、好ましくは受容者の血液と等張である活性成分の滅菌油状又は水性調合剤を都合良く含む。
【００６９】
局所投与に適切な製剤には、リニメント剤、ローション剤、塗布剤のような液体若しくは半液体調合剤、クリーム剤、軟膏剤若しくはペースト剤のような水中油若しくは油中水乳剤、又は滴剤のような液剤若しくは懸濁剤、又は噴霧剤が含まれる。
【００７０】
鼻腔内投与には、スプレー缶、ネブライザ又はアトマイザにより分配される粉末、自力噴射又は噴霧製剤の吸入を使用することができる。分配されたとき、製剤は、好ましくは１０〜１００ミクロンの範囲の粒径を有する。
【００７１】
製剤は投与単位形態で都合良く存在することができ、製薬技術において周知のあらゆる方法により調製することができる。用語「投与単位」とは、単位を意味し、すなわち、活性成分をそのまま含むか又は個体若しくは液体の医薬希釈剤若しくはキャリアとの混合物を含む、物理的及び化学的に安定している単位用量として患者に投与することができる単一用量を意味する。
【００７２】
本明細書に引用された全ての参考文献は、それらの全体及び全ての目的が、あたかも本明細書に完全に記載されているように参照として明確に組み込まれる。
【００７３】
本発明は、説明のために本明細書に記載された実施例に限定されず、実施例の範囲内に入るものとしてそのような形態を全て包含することが理解される。
【００７４】
図１〜４は、天然のホルモン１α，２５−ジヒドロキシビタミンＤ3（図において「１，２５（ＯＨ）2Ｄ3」として参照される）と比較した１９，２３，２４，２５，２６，２７−ヘキサノール−１α−ヒドロキシビタミンＤ3（図において「ＮＰ９」として参照される）の多様な生物学的活性を説明する。
【図面の簡単な説明】
【００７５】
【図１】完全長組み換えラットビタミンＤレセプターに対して〔3Ｈ〕−１，２５−（ＯＨ）2−Ｄ3と結合を競合する、ＮＰ９と１，２５（ＯＨ）2Ｄ3の相対的活性を比較するグラフである。
【図２】ＮＰ９と１，２５（ＯＨ）2Ｄ3の濃度の関数としてＨＬ−６０細胞分化の率を比較するグラフである。
【図３】ＮＰ９と１，２５（ＯＨ）2Ｄ3のインビトロ転写活性を比較するグラフである。
【図４Ａ】ＮＰ９と１，２５（ＯＨ）2Ｄ3の腸内カルシウム移動（４Ａ）及び骨カルシウム動員（４Ｂ）を比較するグラフである。
【図４Ｂ】ＮＰ９と１，２５（ＯＨ）2Ｄ3の腸内カルシウム移動（４Ａ）及び骨カルシウム動員（４Ｂ）を比較するグラフである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【国際調査報告】
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