(57)【要約】本発明は、少なくとも１つの鉄キレート化合物および少なくとも１つの抗真菌剤を含む組成物を提供する。この組成物は、鉄キレート化合物であるデフェリプロンまたはデフェラシロクスを含み得る。この組成物中に含まれる抗真菌剤には、ポリエン抗真菌剤、アゾール抗真菌剤またはエキノキャンディン抗真菌剤が挙げられる。本発明はまた、真菌症を治療または予防する方法を提供する。この方法は、真菌症を有するかまたは真菌症に感染し易い個体に、治療有効量の少なくとも１つの鉄キレート化合物を真菌症の重症度を減少させるのに十分な時間にわたって投与することを含み、この鉄キレート化合物は、真菌症に対する非シデロフォアまたは非異種シデロフォアを含む。
2009543788.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
少なくとも１つの鉄キレート化合物またはその医薬上許容され得る塩および少なくとも１つの抗真菌剤またはその医薬上許容され得る塩を含む、組成物。
【請求項２】
前記鉄キレート化合物が、デフェリプロンまたはデフェラシロクスを含む、請求項１記載の組成物。
【請求項３】
前記抗真菌剤が、ポリエン抗真菌剤、アゾール抗真菌剤またはエキノキャンディン抗真菌剤を含む、請求項１記載の組成物。
【請求項４】
前記ポリエン抗真菌剤が、アンホテリシンＢデオキシコール酸塩、リポソームアンホテリシンＢ、アンホテリシンＢ脂質複合体またはアンホテックから選択される、請求項３記載の組成物。
【請求項５】
前記アゾール抗真菌剤が、ポサコナゾール、ボリコアゾール（ｖｏｒｉｃｏａｚｏｌｅ）、フルコナゾールまたはイトラコナゾールから選択される、請求項３記載の組成物。
【請求項６】
前記エキノキャンディン抗真菌剤が、カスポファンギン酢酸塩またはミカファンギンから選択される、請求項３記載の組成物。
【請求項７】
２つまたはそれ以上の鉄キレート化合物をさらに含む、請求項１記載の組成物。
【請求項８】
前記２つまたはそれ以上の鉄キレート化合物が、デフェリプロンおよびデフェラシロクスを含む、請求項７記載の組成物。
【請求項９】
２つまたはそれ以上の抗真菌剤をさらに含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１０】
前記２つまたはそれ以上の抗真菌剤が、ポリエン抗真菌剤、アゾール抗真菌剤またはエキノキャンディン抗真菌剤から選択される、請求項９記載の組成物。
【請求項１１】
前記抗真菌剤が、アンホテリシンＢデオキシコール酸塩、リポソームアンホテリシンＢ、アンホテリシンＢ脂質複合体、アンホテック、ポサコナゾール、ボリコアゾール、フルコナゾール、イトラコナゾール、カスポファンギン酢酸塩またはミカファンギンから選択される、請求項１０記載の組成物。
【請求項１２】
治療有効量の前記鉄キレート化合物、前記抗真菌剤またはそれらの両方をさらに含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１３】
医薬上許容され得る媒体をさらに含む、請求項１記載の組成物。
【請求項１４】
真菌症を治療または予防する方法であって、真菌症を有するかまたは真菌症に感染し易い個体に、治療有効量の少なくとも１つの鉄キレート化合物を真菌症の重症度を減少させるのに十分な時間にわたって投与することを含み、該鉄キレート化合物が、該真菌症に対する非シデロフォアまたは非異種シデロフォアを含む、方法。
【請求項１５】
前記真菌症が、接合真菌症、アスペルギルス症、クリプトコッカス症、カンジダ症、ヒストプラズマ症、コクシジオイデス症、パラコクシジオイデス症、フザリウム症（ヒアロヒホ真菌症）、ブラストミセス症、ペニシリウム症またはスポロトリクス症を含む、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
前記接合真菌症が、ムコール症をさらに含む、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
前記ムコール症が、脳型ムコール症、肺ムコール症、胃腸ムコール症、播種性ムコール症、骨ムコール症、縦隔ムコール症、気管ムコール症、腎臓ムコール症、腹膜ムコール症、上大静脈ムコール症または外耳炎ムコール症を含む、請求項１６記載の方法。
【請求項１８】
前記ムコール症が、ケカビ目内の感染性因子に関連する、請求項１７記載の方法。
【請求項１９】
前記ケカビ目内の因子が、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ）、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｍｉｃｒｏｐｏｒｕｓ変種ｒｈｉｚｏｐｏｄｉｆｏｒｍｉｓ、Ａｂｓｉｄｉａ  ｃｏｒｙｍｂｉｆｅｒａ、Ａｐｏｐｈｙｓｏｍｙｃｅｓ  ｅｌｅｇａｎｓ、Ｍｕｃｏｒ種、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｐｕｓｉｌｌｕｓおよびＣｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ種（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ科）からなるＲｈｉｚｏｐｕｓ種から選択される、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
前記カンジダ症が、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａおよびＣａｎｄｉｄａ  ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓからなるCandida種から選択される感染性因子に関連する、請求項１５記載の方法。
【請求項２１】
前記アスペルギルス症が、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓおよびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｃｌａｖａｔｕｓからなるＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種から選択される感染性因子に関連する、請求項１５記載の方法。
【請求項２２】
前記鉄キレート化合物が、デフェリプロンまたはデフェラシロクスを含む、請求項１４記載の方法。
【請求項２３】
２つまたはそれ以上の鉄キレート化合物をさらに含み、各鉄キレート化合物が、前記真菌症に対する非シデロフォアまたは非異種シデロフォアを含む、請求項１４記載の方法。
【請求項２４】
前記２つまたはそれ以上の鉄キレート化合物が、デフェリプロンおよびデフェラシロクスを含む、請求項２３記載の方法。
【請求項２５】
前記予防が、前記真菌症の発症の前に、前記少なくとも１つの鉄キレート化合物を予防的に投与することを含む、請求項１４記載の方法。
【請求項２６】
真菌症を治療または予防する方法であって、真菌症を有するかまたは真菌症に感染し易い個体に、治療有効量の少なくとも１つの鉄キレート化合物および少なくとも１つの抗真菌剤を真菌症の重症度を減少させるのに十分な時間にわたって投与することを含み、該鉄キレート化合物が、該真菌症に対する非シデロフォアまたは非異種シデロフォアを含む、方法。
【請求項２７】
前記真菌症が、接合真菌症、アスペルギルス症、クリプトコッカス症、カンジダ症、ヒストプラズマ症、コクシジオイデス症、パラコクシジオイデス症、フザリウム症（ヒアロヒホ真菌症）、ブラストミセス症、ペニシリウム症またはスポロトリクス症を含む、請求項２６記載の方法。
【請求項２８】
前記接合真菌症が、ムコール症をさらに含む、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
前記ムコール症が、脳型ムコール症、肺ムコール症、胃腸ムコール症、播種性ムコール症、骨ムコール症、縦隔ムコール症、気管ムコール症、腎臓ムコール症、腹膜ムコール症、上大静脈ムコール症または外耳炎ムコール症を含む、請求項２８記載の方法。
【請求項３０】
前記ムコール症が、ケカビ目内の感染性因子に関連する、請求項２９記載の方法。
【請求項３１】
前記ケカビ目内の因子が、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ）、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｍｉｃｒｏｐｏｒｕｓ変種ｒｈｉｚｏｐｏｄｉｆｏｒｍｉｓ、Ａｂｓｉｄｉａ  ｃｏｒｙｍｂｉｆｅｒａ、Ａｐｏｐｈｙｓｏｍｙｃｅｓ  ｅｌｅｇａｎｓ、Ｍｕｃｏｒ種、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｐｕｓｉｌｌｕｓおよびＣｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ種（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ科）からなるＲｈｉｚｏｐｕｓ種種から選択される、請求項３０記載の方法。
【請求項３２】
前記カンジダ症が、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａおよびＣａｎｄｉｄａ  ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓからなるCandida種から選択される感染性因子に関連する、請求項２７記載の方法。
【請求項３３】
前記アスペルギルス症が、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔｅｒｒｅｕｓ、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓおよびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｃｌａｖａｔｕｓからなるＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種から選択される感染性因子に関連する、請求項２７記載の方法。
【請求項３４】
前記鉄キレート化合物が、デフェリプロンまたはデフェラシロクスを含む、請求項２６記載の方法。
【請求項３５】
前記抗真菌剤が、ポリエン抗真菌剤、アゾール抗真菌剤またはエキノキャンディン抗真菌剤から選択される、請求項２６記載の方法。
【請求項３６】
前記ポリエン抗真菌剤が、アンホテリシンＢデオキシコール酸塩、リポソームアンホテリシンＢ、アンホテリシンＢ脂質複合体またはアンホテックから選択される、請求項３５記載の方法。
【請求項３７】
前記アゾール抗真菌剤が、ポサコナゾール、ボリコアゾール（ｖｏｒｉｃｏａｚｏｌｅ）、フルコナゾールまたはイトラコナゾールから選択される、請求項３５記載の方法。
【請求項３８】
前記エキノキャンディン抗真菌剤が、カスポファンギン酢酸塩またはミカファンギンから選択される、請求項３５記載の方法。
【請求項３９】
２つまたはそれ以上の鉄キレート化合物をさらに含み、各鉄キレート化合物が、前記真菌症に対する非シデロフォアまたは非異種シデロフォアを含む、請求項２６記載の方法。
【請求項４０】
前記２つまたはそれ以上の鉄キレート化合物が、デフェリプロンまたはデフェラシロクスを含む、請求項３９記載の方法。
【請求項４１】
２つまたはそれ以上の抗真菌剤をさらに含む、請求項２６記載の方法。
【請求項４２】
前記２つまたはそれ以上の抗真菌剤が、ポリエン抗真菌剤、アゾール抗真菌剤またはエキノキャンディン抗真菌剤から選択される、請求項４１記載の方法。
【請求項４３】
前記抗真菌剤が、アンホテリシンＢデオキシコール酸塩、リポソームアンホテリシンＢ、アンホテリシンＢ脂質複合体、アンホテック、ポサコナゾール、ボリコアゾール、フルコナゾール、イトラコナゾール、カスポファンギン酢酸塩またはミカファンギンから選択される、請求項４２記載の方法。
【請求項４４】
前記予防が、前記真菌症の発症の前に、前記少なくとも１つの鉄キレート化合物および少なくとも１つの抗真菌剤を予防的に投与することを含む、請求項２６記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、概して、感染症の治療に関し、より詳細には、日和見性真菌症の有効な治療に関する。
【背景技術】
【０００２】
ムコール症は、接合菌網ケカビ目の菌類により引き起こされる、生命を脅かす感染症である。ケカビ目に属する菌類は、６つの科に分類され、その全てがムコール症を引き起こし得る（非特許文献１；非特許文献２および非特許文献３）。しかしながら、ケカビ科に属する菌類、および特にＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ属（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ）は、圧倒的に感染症の最も一般的な原因である（非特許文献３）。増加しているムコール症の症例はまた、Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ科のＣｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ種への感染に起因するものと報告されている（Ｃｏｈｅｎ−Ａｂｂｏら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  １７：１７３−７７（１９９３）；Ｋｏｎｔｏｙｉａｎｉｓら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  １８：９２５−２８（１９９４）；Ｋｗｏｎ−Ｃｈｕｎｇら、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ６４：５４４−４８（１９７５）、およびＶｅｎｔｕｒａら、Ｃａｎｃｅｒ  ５８：１５３４−３６（１９８６））。ケカビ目の残りの４つの科は、疾患のそれほど多くはない原因である（Ｂｅａｒｅｒら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ３２：１８２３−２４（１９９４）；Ｋａｍａｌａｍ  ａｎｄ  Ｔｈａｍｂｉａｈ，Ｓａｂｏｕｒａｕｄｉａ  １８：１９−２０（１９８０）；Ｋｅｍｎａら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ３２：８４３−４５（１９９４）；Ｌｙｅら、Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ  ２８：３６４−６５（１９９６）、および非特許文献３）。
【０００３】
ムコール症の病原体は、免疫低下した宿主にほぼ一律に影響を与える日和見病原性菌である（Ｓｐｅｌｌｂｅｒｇら、Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．１８：５５６−６９（２００５））。糖尿病性ケトアシドーシスの患者は、比類なくムコール症に感染し易く、他の菌類による感染症よりもこれらの感染症を発症することが多い。一方、好中球減少および副腎皮質ステロイド療法などの、ムコール症を発症する他の免疫低下症状に罹患している患者の顔では、ムコール症はカンジダおよびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種により引き起こされるような他の日和見性真菌症よりも発症が少ない。全体として、最近の人口に基づく研究は、ムコール症の発生率は１年間で１００万人当たり１．７症例であると概算しており、これはアメリカ合衆国で１年間当たり約５００症例に換算される（Ｒｅｅｓら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  ２７：１１３８−４７（１９９８））。それにもかかわらず、同種間骨髄移植を受けた患者などのよりハイリスクな患者においては、ムコール症の有病率は２〜３％もの高さであると記載されている（Ｍａｅｒｔｅｎｓら、Ｂｏｎｅ  Ｍａｒｒｏｗ  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ２４：３０７−１２（１９９９）；Ｍａｒｔｙら、Ｎ  Ｅｎｇｌ  Ｊ  Ｍｅｄ  ３５０：９５０−５２（２００４））。さらに、最近の総説は、過去２０年間にわたってムコール症の発症率が著明に増加したことを見出した（Ｇｌｅｉｓｓｎｅｒら、Ｌｅｕｋ  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  ４５：１３５１−６０（２００４））。同様の増加は、主要な幹細胞移植センターによっても報告されている。例えば、報告は、過去２０年間にわたってムコール症の発症率が倍増したことを記載している（Ｍａｒｒら、Ｃｌｉｎ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  ３４：９０９−１７（２００２）；Ｋｏｎｔｏｙｉａｎｉｓら、Ｃｌｉｎ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  ３０：８５１−５６（２０００））。加齢したアメリカ合衆国の人口において糖尿病、癌および臓器移植の有病率が増加していることを考慮すると、ムコール症の発症率は、予測可能な将来もずっと変わらないことが予測される。
【０００４】
浸潤性ムコール症に利用可能な治療としては、根底にある病因の逆行、緊急の広範な感染領域の外科手術的デブリードマン、および補助的な抗真菌療法を試みることが挙げられる（Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｊ．，Ｊｒ．，Ｚｙｇｏｍｙｃｏｓｉｓ，ｐ．１１９２−１１９９．Ｉｎ  Ｐ．Ｈｏｅｐｒｉｃｈ  ａｎｄ  Ｍ．Ｊｏｒｄａｎ（ｅｄ．），Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ，４ｔｈ  ｅｄ．Ｊ．Ｂ．Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｃｏ．，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９８９）；非特許文献１；非特許文献２；非特許文献４）。アンホテリシンＢ（ＡｍＢ）は、浸潤性ムコール症の治療用に認可された唯一の抗真菌剤である（同上）。菌類は、相対的にＡｍＢに抵抗性であるので、高投与量が必要とされ、このことは、しばしば、腎毒性および他の有害事象の原因となる（非特許文献４）。また、感染した病巣の外科的除去（例えば、脳型ムコール症（ｒｉｎｏｃｅｒｅｂｒａｌ  ｍｕｃｏｒｍｙｃｏｓｉｓ）の患者における眼の切除）がない場合、抗真菌療法のみが効くことはまれである（Ｅｄｗａｒｄｓ，Ｊ．（１９８９）、上述；非特許文献１）。外科的デブリードマンを高投与量のＡｍＢと併用した場合でさえも、ムコール症に関連する死亡率は５０％を超える（非特許文献４）。伝播性疾患を有する患者の死亡率は１００％に近い（Ｈｕｓａｉｎ  ｅｔ  ａｈ，Ｃｌｉｎ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  ３７：２２１−２９（２００３））。この容認し難い高い死亡率、および非常に外観を損なう外科手術療法の極度の罹患率のために、浸潤性ムコール症を治療および予防するための新しい戦略の開発が急がれてきた。
【０００５】
ＡｍＢの腎毒性は、腎毒性がＡｍＢよりも少なく、より高い投与量で、かつより長期間にわたって投与され得るＡｍＢの脂質製剤の使用を臨床医が実際に採用することを促進した（非特許文献１）。ムコール症を有する患者のいくつかの症例の報告は、１５ｍｇ／ｋｇ／日までのアンホテリシンの脂質製剤を用いた治療に成功したと記載している（Ｃａｇａｔａｙら、ＢＭＣ  Ｉｎｆｅｃｔ  Ｄｉｓ  １：２２（２００１）；Ｅｒｉｃｓｓｏｎら、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ  １６：５８５−５６（１９９３）；Ｗａｌｓｈら、Ａｎｔｉｍｉｃｒｏｂ  Ａｇｅｎｔｓ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  ４５：３４８７−９６（２００１））。それにもかかわらず、アンホテリシンの脂質製剤で治療された患者の死亡率は高いままであり、このことは、この致命的な疾患の新しい治療薬が必要とされていることを強調する。
【０００６】
鉄は、実質的に全ての病原性微生物に、増殖および病原性のため必要とされる（Ｈｏｗａｒｄ，Ｄ．Ｈ．，Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｒｅｖ  １２：３９４−４０４（１９９９））。哺乳類の宿主では、微生物が利用可能な血清鉄は非常に少ないが、これは、血清鉄がトランスフェリンなどの担体タンパク質に高度に結合するからである（Ａｒｔｉｓら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ３１：１１０９−１４．（１９８２））。血清鉄の隔離は、特にＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅに対する主要な宿主防御機構である（Ａｒｔｉｓら、上述）。生物体は血清中での増殖が不十分であり、外来性の鉄が添加されたときにこの増殖抑制は無効になる（Ａｒｔｉｓら、上述；Ｂｏｅｌａｅｒｔら、Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｉｏｎ  ９１：１９７９−８６（１９９３））。
【０００７】
利用可能な血清鉄のレベルが上昇した患者は、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅおよび他の接合菌類による感染症には独特に感染し易いが、カンジダまたはアスペルギルスなどの他の病原性菌類に対しては感染の程度がより低い（非特許文献１；非特許文献４）。例えば、鉄キレート剤であるデフェロキサミンで治療した患者は、浸潤性ムコール症の発症率上昇が著明であるが、このことは、これらの患者における死亡率が８０％を超えることと関連する（Ｂｏｅｌａｅｒｔら、Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ４５：６６７−７１（１９９４））。デフェロキサミンは、ヒト宿主に対して鉄キレート剤として作用するが、そのＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅに対する効果は全く逆であるように思われる。デフェロキサミンは、シデロフォアとして作用することにより、患者をＲｈｉｚｏｐｕｓ種感染症に罹患させ、このことにより、以前に利用不可能な鉄を菌類に提供する（Ｂｏｅｌａｅｒｔら、（１９９３）、上述）。Ｒｈｉｚｏｐｕｓ種は、還元された鉄の細胞内輸送により、デフェロキサミンの内部移行なしに鉄−デフェロキサミン複合体から鉄を得る（ｄｅ  Ｌｏｃｈｔら、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ４７：１８４３−５０（１９９４））。この輸送は、おそらく、高親和性の鉄透過酵素により仲介されている。従って、増加した利用可能な血清鉄は、ムコール症病変形成の危険因子である。しかしながら、鉄キレート化合物は、病原体のシデロフォアとして作用し得るので、通常は治療上の処置に適用可能ではあり得ないであろう。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Ｉｂｒａｈｉｍら、（Ｗ．Ｅ．Ｄｉｓｍｕｋｅｓ，Ｐ．Ｇ．ＰａｐｐａｓおよびＪ．Ｄ．Ｓｏｂｅｌ（編））「Ｚｙｇｏｍｙｃｏｓｉｓ」、Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｙｃｏｌｏｇｙ，Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（２００３）ｐ．２４１−２５１
【非特許文献２】Ｋｗｏｎ−Ｃｈｕｎｇ，Ｋ．Ｊ．およびＪ．Ｅ．Ｂｅｎｎｅｔｔ「Ｍｕｃｏｒｍｙｃｏｓｉｓ」、Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｙｃｏｌｏｇｙ，Ｌｅａ  ＆  Ｆｅｂｉｇｅｒ，Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ（１９９２）ｐ．５２４−５５９
【非特許文献３】Ｒｉｂｅｓら、Ｚｙｇｏｍｙｃｅｔｅｓ  ｉｎ  Ｈｕｍａｎ  Ｄｉｓｅａｓｅ，Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  Ｒｅｖ（２０００）１３：２３６−３０１
【非特許文献４】Ｓｕｇａｒ，Ａ．Ｍ．（Ｇ．Ｍａｎｄｅｌｌ，Ｊ．ＢｅｎｎｅｔｔおよびＲ．Ｄｏｌｉｎ（編））「Ａｇｅｎｔ  ｏｆ  Ｍｕｃｏｒｍｙｃｏｓｉｓ  ａｎｄ  Ｒｅｌａｔｅｄ  Ｓｐｅｃｉｅｓ」、Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅｓ  ｏｆ  Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓ  Ｄｉｓｅａｓｅｓ、第４版、Ｃｈｕｒｃｈｉｌｌ  Ｌｉｖｉｎｇｓｔｏｎｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９５）ｐ．２３１１−２３２１
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
従って、ムコール症の病変形成の危険を減少させ得、かつ有効な治療上の処置を提供し得る化合物および方法が必要とされている。本発明は、この必要性を満足させ、かつ関連する利点を提供する。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
要旨
本発明は、少なくとも１つの鉄キレート化合物および少なくとも１つの抗真菌剤を含む、組成物を提供する。組成物は、鉄キレート化合物であるデフェリプロンまたはデフェラシロクスを含み得る。組成物に含まれる抗真菌剤には、ポリエン抗真菌剤、アゾール抗真菌剤またはエキノキャンディン抗真菌剤が挙げられ得る。本発明はまた、真菌症（ｆｕｎｇａｌ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）を治療または予防する方法を提供する。方法は、真菌症を有するかまたは真菌症に感染し易い個体に、治療有効量の少なくとも１つの鉄キレート化合物を真菌症の重症度を減少させるのに十分な時間にわたって投与することを含み、鉄キレート化合物は、真菌症に対する非シデロフォアまたは非異種シデロフォアを含む。本発明により提供される真菌症を治療または予防する方法はまた、真菌症を有するかまたは真菌症に感染し易い個体に、治療有効量の少なくとも１つの鉄キレート化合物および少なくとも１つの抗真菌剤を投与することを含み得る。本発明によれば、真菌症の発症の前に、少なくとも１つの鉄キレート化合物または少なくとも１つの鉄キレート化合物および少なくとも１つの抗真菌剤を予防的に投与することを含む方法がさらに提供される。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１は、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅに感染したＤＫＡマウスのＤｅｆと鉄と生存率との関係を示す。マウス（各処置においてｎ＞２０）を、デフェリプロン（Ｄｅｆ）またはＤｅｆおよびＦｅＣｌ３（６０ｍｇ／ｋｇ）で処置して、鉄キレート化の効果を無効にした。ＬＡｍＢ処置アームがコントロールとして含まれた。処置は、感染の２４時間後に開始した。＊感染未処置または非感染未処置およびＦｅＣｌ３と比較してｐ＜０．００３。
【図２】図２は、Ｅｘｊａｄｅ（登録商標）（デフェラシロクス）が、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅに感染した糖尿病性ケトアシドーシスマウスの生存率を改善することを示す。マウス（プラセボについてｎ＝６およびＥｘｊａｄｅ（登録商標）についてｎ＝７）を、２．２×１０４個のＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ９９−８９２の胞子（感染被検体の肺から得た臨床単離物）を尾静脈注射することにより感染させた。感染の２４時間後、マウスを、連続した７日間にわたって、プラセボ、１、３または１０ｍｇ／ｋｇのＥｘｊａｄｅ（登録商標）１日２回の経口経管栄養により処置した。＊プラセボと比較してｐ＜０．０５。
【図３】図３は、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅに感染させ、かつ異なるＤｅｆの治療計画により処置したＤＫＡマウスの生存率を示す。マウス（１群当たりｎ＝６）を、毎日（ｑｄ）または隔日（ｑｏｄ）で５０、１００または２００ｍｇ／ｋｇのＤｅｆを合計４回投与することにより感染させ、２４時間後に処置した。＊感染未処置と比較してｐ＜０．０５。
【図４】図４は、実験的ムコール症の、ＤｅｆとＬＡｍＢとの組み合わせでの処置を示す。マウス（感染未処置およびＤｅｆについてｎ＝１１、ならびにＬＡｍＢおよびＤｅｆ＋ＬＡｍＢについてｎ＝６）をＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅに感染させ、次いで、２４時間後、Ｄｅｆ、ＬＡｍＢまたは両方の薬物の組み合わせを合計４回投与することにより処置した。＊未処置感染マウスと比較してｐ＜０．０５。
【図５】図５は、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅに感染させ、かつＤｅｆ、ＬＡｍＢまたは両方で予防した好中球減少性マウスの生存率を示す。マウス（ｎ＝９）を、第１日目に、Ｄｅｆ  ｑｏｄ、ＬＡｍＢ  ｑｄまたは両方を合計４回投与することにより処置した。＊ＬＡｍＢまたはＬＡｍＢ＋Ｄｅｆについて、感染未処置と比較してＰ＜０．０５。
【図６】図６は、デフェリプロン、ＬＡｍＢまたはプラセボで処置したＤＫＡマウス（ｎ＝６）の脳Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ負荷を示す。マウスを、３．８×１０３個の胞子に感染させ、いずれかの薬物での処置の２回の投与の５４時間後に、脳を回収した。データを、中央値および四分位範囲として表示する。ｙ軸は、アッセイの検出の下限を反映する。＊多重比較のためのＳｔｅｅｌ検定により、プラセボに対してＰ＜０．０３６。
【図７】図７は、銀メタンアミンで染色した壊死性鼻粘膜の凍結切片を示し、ケカビ目に一致する広いリボン様の中隔のある菌糸を有する菌類を示す。倍率８４０倍。
【図８】図８は、デフェラシロクスがＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅにおいてｒＦＴＲｌ遺伝子発現を誘発することを示す。特に、図８（ａ）は、ＲＴ  ＰＣＲで検出された、鉄富化、鉄キレート（デフェラシロクス）または鉄キレートの無効化（塩化第二鉄で飽和させたデフェラシロクス）条件においてインキュベートされたＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ菌糸由来のｒＦＴＲｌ遺伝子の発現を示す。１８ｓ  ｒＤＮＡの発現は、ＲＮＡ抽出の質を検証するために含まれた。図８（ｂ）は、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅＧＦＰ発現ベクターを構築するための戦略を示す略図である。プロモータは、ｒＦｔｒｌｐまたはＡｃｔｌｐのいずれかで表示する。図８（ｃ）は、鉄富化、デフェラシロクスまたは塩化第二鉄で飽和させたデフェラシロクスを含む培地で増殖させたＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅの、ｒＦｔｒｌｐまたはＡｃｔｌｐ（共焦点顕微法およびフローサイトメトリにより決定された）により駆動されるＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅにおけるＧＦＰ発現を示す。ＧＦＰ発現は、共焦点顕微法により、緑色蛍光性細胞によって明らかになり、蛍光性細胞のチャネルＦＬｌ（ｙ軸）における百分率は、フローサイトメトリによって明らかにされた。
【図９】図９（ａ）は、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ９９−８９２（２．２×１０４個）に感染させ、かつ異なる投与量のデフェラシロクスで処置した糖尿病性ケトアシドーシスマウス（１群当たりｎ＞７）の生存率を示す。マウスは、プラセボ（ヒドロキシプロピルセルロースキャリア）、デフェラシロクス、または鉄キレート化の効果を無効にするためのデフェラシロクスおよび鉄（ＦｅＣｌ３，１０ｍｇ／ｋｇ）で処置した。＊生存率に対してＰ＜０．０５。図９（ｂ）は、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ９９−８８０（平均１．３×１０３個の胞子を接種）に感染させ、かつ２４時間後に１０ｍｇ／ｋｇのデフェラシロクス１日２回で７日間処置した糖尿病性ケトアシドーシスマウス（同様の結果を有する３つの別々の実験からｎ＝２４）の生存率を示す。プラセボと比較して＊Ｐ＜０．００３。
【図１０】図１０（ａ）は、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ９９−８９２（４．２×１０４個の胞子）に感染させ、かつプラセボ、デフェラシロクス（１０ｍｇ／ｋｇ、１日２回）またはデフェラシロクスおよび鉄で処置した糖尿病性ケトアシドーシスマウス（群当たりｎ＝１１）の脳および腎臓の真菌負荷を示す。３日間の処置を受けた４日後に、器官を回収した。データを、中央値±四分位範囲として表示する。ｙ軸は、アッセイの検出の下限を反映する。図１０（ｂ）は、１０（ａ）で述べたようにＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ９９−８９２に感染させ、かつデフェラシロクス、デフェラシロクスおよび塩化第二鉄、またはプラセボで処置した糖尿病性ケトアシドーシスマウスのヘマトキシリンおよびエオシンで染色された腎臓切片である。矢印は、組織中のＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ菌糸を示す。倍率４００倍。＊プラセボまたはデフェラシロクスおよび塩化第二鉄と比較した組織の真菌負荷についてＰ＜０．００２。
【図１１】図１１は、鉄キレートが、鉄過剰マウスと比べて、脾臓Ｔｈ１およびＴｈ２細胞リンパ球頻度を増加させ、かつ炎症促進性サイトカインのレベルを増加させることを示す。特に、図１１（ａ）は、３．１×１０４個のＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ９９−８９２の胞子に感染させ、かつ、２４時間後に、プラセボ、デフェラシロクスまたはデフェラシロクスおよび塩化第二鉄で処置した糖尿病性ケトアシドーシスマウス（ｎ＝１１）における脾臓Ｔｈ１およびＴｈ２細胞リンパ球頻度を示す。図１１（ｂ）は、１１（ａ）で述べたのと同じマウス（ｎ＝１１、感染の４日後に犠牲にし、脾臓および腎臓を回収した）のＣｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｂｅａｄ  Ａｒｒａｙ（登録商標）による全器官サイトカイン分析の結果を示す。１１（ａ）および（ｂ）の両方におけるデータは、中央値±四分位範囲で表示する。＊プラセボまたはデフェラシロクスおよび塩化第二鉄に対してＰ＜０．０２。＊＊デフェラシロクスに対してＰ＜０．０５および￥塩化第二鉄に対してＰ＜０．０７。
【図１２】図１２は、デフェラシロクス単独、ＬＡｍＢ単独ならびにデフェラシロクスとＬＡｍＢとの組み合わせについてのムコール症に対する効力を示す。この図は、特に、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ９９−８８０（平均１．５×１０３個の胞子を接種）に感染させ、かつデフェラシロクス単独、ＬＡｍＢ単独ならびにデフェラシロクス（１０ｍｇ／ｋｇ  １日２回、７日間）およびＬＡｍＢ（１５ｍｇ／ｋｇ、４日間）の組み合わせで処置した糖尿病性ケトアシドーシスマウス（同様の結果を有する２つの別々の実験でｎ＞１６）の生存率を示す。
【図１３】図１３は、デフェラシロクス単独、ＬＡｍＢ単独ならびにデフェラシロクスおよびＬＡｍＢの組み合わせについて、標的の臓器感染の減少における効力を示す。より詳細には、図は、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ９９−８８０に感染したマウス（ｎ＞７）の脳および腎臓における組織のＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ負荷を示す。これらのマウスでは、処置は、感染の２４時間後に開始し、プラセボ、デフェラシロクス（１０ｍｇ／ｋｇ、１日２回）、ＬＡｍＢ（１５ｍｇ／ｋｇ／日）または両方の薬物の組み合わせから構成された。器官を、２回の毎日の処置を受けた３日後に回収した。データは、中央値±四分位範囲として表示する。ｙ軸は、アッセイの検出の下限を反映する。＊プラセボと比較してＰ＜０．００３。＊＊プラセボ、デフェラシロクスまたはＬＡｍＢと比較してＰ＜０．００３。＊プラセボまたはデフェラシロクスと比較してＰ＜０．０１。
【図１４】図１４は、好中球減少性マウスでのＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ感染の処置における効力を示す。シクロホスファミドで処置したマウス（同様の結果を有する２つの別々の実験からｎ＝１９）を、２．７×１０３個のＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ９９−８９２の胞子に感染させた。感染の２４時間後、マウスを、プラセボまたはデフェラシロクス（１０ｍｇ／ｋｇ）を毎日（ｑｄ）または隔日（ｑｏｄ）で合計５回投与することにより処置した。プラセボと比較して＊Ｐ＝０．０３７。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
発明の詳細な説明
本発明は、真菌症を治療するかまたは重症度を減少させるための鉄キレート化合物の使用に関する。鉄キレート化合物は、標的の真菌症に対して低いシデロフォアまたは異種シデロフォア活性を有するように選択される。いくつかの実施態様では、鉄キレート化合物は、標的の真菌症に対してシデロフォアまたは異種シデロフォア活性を実質的に有しないように選択される。対照的に、以前には利用不可能であった鉄を菌類に供給するシデロフォアまたは異種シデロフォアとして作用する鉄キレート剤、非シデロフォアおよび非異種シデロフォア鉄キレート化合物は、そのような促進または輸送活性を有しない。従って、本発明の鉄キレート剤は、周囲環境から鉄を除去するのに用いられ得る。抗真菌療法のための鉄キレートの１つの利点は、それが多くの病原性微生物の増殖および／または病原性に必要とされる重要な無機質の利用可能性を減少させることである。
【００１３】
１つの実施態様では、本発明は、鉄キレート化合物および抗真菌剤を含む治療用組成物に関する。鉄キレート化合物は、デフェリプロン（１，２  ジメチル−３−ヒドロキシピリジ−４−ル）またはデフェラシロクス（４−［３，５−ビス（２−ヒドロキシフェニル）−１Ｈ−１，２，４−トリアゾール−１−イル］安息香酸）であり得る。デフェリプロンおよびデフェラシロクスのいずれも、鉄過剰症の治療のための治療上の設定に用いられてきたものであるので、真菌症の治療または予防のための鉄キレート療法に安全かつ有効である。該分野で公知の抗真菌剤は、本発明の鉄キレート剤との組み合わせのために選択され得る。組み合わせは、真菌症の治療または予防において有利である。
【００１４】
他の実施態様では、本発明は、真菌症の治療または予防の方法に関する。方法は、標的とする真菌の種に対して非シデロフォアまたは非異種シデロフォア鉄キレート化活性を示す個別の１つまたはそれ以上の鉄キレート化合物を投与することを含む。この方法はまた、鉄キレート剤単独と比較して効力の増強を達成するための抗真菌剤の同時投与を含み得る。鉄キレート化合物は、デフェリプロン、デフェラシロクスであり得るか、または該分野で公知の他の鉄キレート化合物から選択され得る。本発明の方法は、治療的および予防的処置に特に有利であるが、これは、鉄キレートが、真菌の病変形成のための重要な無機質の除去を標的とするからである。
【００１５】
本発明は、少なくとも１つの鉄キレート化合物および少なくとも１つの抗真菌剤を含む組成物を提供する。
【００１６】
鉄は、ほとんどの真菌の系で、増殖、生存および／または病原性のために必要とされる。菌類は、この重要な金属の十分な供給を確実にするための獲得、取り込みおよび貯蔵方法の種々のメカニズムを発達させてきた。本発明の組成物は、この重要な無機質を宿主環境から除去して真菌病原体を中和することを標的とする。本発明の組成物は、利用可能な鉄を枯渇させて真菌病原体の増殖、生存および／または病原性を抑制するための鉄キレート化合物を含む。
【００１７】
本発明の組成物は、少なくとも１つの鉄キレート化合物と、少なくとも１つの抗真菌剤との組み合わせを含む。鉄キレート化合物および抗真菌剤の両方を包含することにより、菌類が増殖、生存および／または病原性のために使用する２つの異なる経路を標的とする抗真菌活性が組み合わせられる。２つまたはそれ以上の異なる真菌の経路を標的とすることにより、真菌症の有効な治療上の処置が提供されるが、これは、両方の標的経路の病原的回避の見込みが低いからである。
【００１８】
本明細書中で用いられる用語「鉄キレート化合物」または「鉄キレート剤」は、キレート環（単数または複数）を形成するために、２つまたはそれ以上の別の結合部位の間で鉄を結合する化合物を意味することを意図する。鉄と結合または複合体化した鉄キレート化合物を、本明細書中で鉄キレートという。鉄キレート化合物は、２つの別の結合部位を用いて鉄を結合する二座であり得る。本発明の鉄キレート化合物はまた、それぞれ、鉄を３つ、４つまたはそれ以上の別の結合部位で結合する三座、四座または高次多座鉄キレート化合物であり得る。本発明の鉄キレート化合物は、鉄の全ての酸化状態（例えば、鉄（−ＩＩ）状態、鉄（−Ｉ）状態、鉄（０）状態、鉄（Ｉ）状態、鉄（ＩＩ）状態（二価鉄）、鉄（ＩＩＩ）状態（三価鉄）、鉄（ＩＶ）状態（四価鉄）および／または鉄（Ｖ）が挙げられる）に結合し得るキレート化合物を含む。鉄キレート療法は、鉄がその有毒な効果または有害な生理的活性を失うように、インビボで鉄と結合して鉄キレートを形成する鉄キレート剤を用いることを意味する。あるいは、キレート鉄は、感染性生物体に利用不可能になる。
【００１９】
本発明の組成物に有用な鉄キレート化合物には、標的の菌類（単数または複数）による鉄の利用を結合および予防し得る任意のキレート剤または他の分子が挙げられ得る。本発明の組成物に含まれる鉄キレート化合物の具体例には、例えば、デフェリプロンおよびデフェラシロクスが挙げられる。これらの鉄キレート化合物の例は、特に有用であるが、これは、それらが真菌症に無関係の治療上の徴候について多数の国で承認されているので、ヒトにおいて安全かつ無毒性であることが十分に特徴づけられているからである。
【００２０】
本明細書中で用いられる用語「デフェリプロン」は、１，２−ジメチル−３−ヒドロキシピリジ−４−ルの構造を有する鉄キレート化合物を意味することを意図する。デフェリプロン（Ｄｅｆ）はまた、Ｌｌ、ＣＰ２０、ＦｅｒｒｉｐｒｏｘまたはＫｅｌｆｅｒとしても該分野で公知である。デフェリプロンは、鉄キレート剤のα−ケトヒドロキシピリジンクラスのメンバーであり、例えば、Ａｐｏｔｅｘ，Ｉｎｃ（Ｗｅｓｔｏｎ，Ｏｎｔａｒｉｏ，Ｃａｎａｄａ）から市販で入手可能である。
【００２１】
本明細書中で用いられる用語「デフェラシロクス」は、４−［３，５−ビス（２−ヒドロキシフェニル）−ｌＨ−ｌ，２，４−トリアゾール−ｌ−イル］安息香酸構造および３７３．４ダルトンの分子量を有する鉄キレート化合物を意味することを意図する。デフェラシロクスはまた、Ｅｘｊａｄｅ（登録商標）またはＩＣＬ  ６７０としても該分野で公知であり、Ｎ−置換ビスヒドロキシフェニルトリアゾールと呼ばれる三座鉄キレート剤のクラスのメンバーである。デフェラシロクスは、例えば、Ｎｏｖａｒｔｉｓ，Ｃｏｒｐ．（Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）から、例えば、登録商標Ｅｘｊａｄｅで入手可能である。本発明によれば、用語「デフェラシロクス」、「ＩＣＬ６７０」、「Ｅｘｊａｄｅ（登録商標）」は、活性成分である４−［３，５−ビス（２−ヒドロキシフェニル）−ｌＨ−ｌ，２，４−トリアゾール−１−イル］安息香酸、例えば、４−［３，５−ビス（２−ヒドロキシフェニル）−ｌＨ−ｌ，２，４−トリアゾール−ｌ−イル］安息香酸またはその医薬上許容され得る塩を意味する。デフェラシロクス、その製造方法およびその用途は、例えば、米国特許第６，４６５，５０４Ｂｌ号および同第６，５９５，７５０  Ｂ２号、ならびに欧州特許第ＥＰ０９１４１１８号に記載されている。４−［３，５−ビス（２−ヒドロキシフェニル）−ｌＨ−ｌ，２，４−トリアゾール−１−イル］安息香酸またはその医薬上許容され得る塩を含む医薬製剤は、例えば、国際特許出願第ＷＯ２００４／０３５０２６号に記載されている。
【００２２】
他の鉄キレート化合物もまた、本発明の組成物に含まれ得る。このような他の鉄キレート化合物は、該分野で周知であり、例えば、以下に記載するような天然に存在するシデロフォアおよび異種シデロフォア、ならびにデフェリプロンおよびデフェラシロクスなどの天然に存在しない化合物が挙げられる。
【００２３】
天然に存在しない鉄キレート化合物は、デフェリプロンなどのキレート剤のヒドロキシピリジン−４−オン（ＨＰＯ）クラスのメンバー、デフェラシロクス、ジエチレントリアミン六酢酸（ＤＴＰＡ）およびデフェロキサミンなどのキレート剤のＮ−置換ビスヒドロキシフェニルトリアゾールクラスのメンバーにより例示される。デフェリプロン、デフェラシロクスおよび上記の例示された鉄キレート化合物のいずれか、ならびに該分野で周知の他のものもまた、本発明の鉄キレート化合物含有組成物に含まれ得る。
【００２４】
シデロフォアおよび異種シデロフォアには、例えば、ヒドロキサマートおよびポリカルボキシラートが挙げられる。ヒドロキサマートは、Ｎ−δ−ヒドロキシオルニチン部分を含み、一般に４つのファミリーの例に分類される。１つのカテゴリーには、ロドトルリン酸が挙げられ、これはＮ−δ−アセチル−Ｌ−Ｎ−δ−ヒドロキシオルニチンのジケトピペラジンである。このカテゴリーには、ジメルム酸（ｄｉｍｅｒｕｍ  ａｃｉｄ）と命名されたジヒドロキサマートなどの誘導体が含まれる。第２のカテゴリーには、コプロゲンが挙げられ、これはＮ−δ−アシル−Ｎ−δ−ヒドロキシ−Ｌ−オルニチン部分を含む。コプロゲンはまた、直線構造を有するロドトルリン酸のトリヒドロキサマート誘導体であると考えられ得る。第３のカテゴリーには、フェリクロームが挙げられ、これはＮ−δ−アシル−Ｎ−δ−ヒドロキシオルニチンのトリペプチドおよびグリシン、セリンまたはアラニンの組み合わせを含む環状ペプチドからなる。第４のカテゴリーの例は、フサリニン（フシゲンとも呼ばれる）が含まれ、これは直線的または環状ヒドロキサマートのいずれかであり得る。フサリニンは、無水メバロニン酸によるＮ−ヒドロキシオルニチンのＮアシル化により特徴づけられる化合物である。
【００２５】
ポリカルボキシラートは、リゾフェリンと呼ばれるクエン酸含有ポリカルボキシラートからなる。分子は、ジアミノブタンに結合した２つのクエン酸単位を含む。リゾフェリンは、接合菌類門のメンバーに広く分布しており、ケカビ目およびエントモフトラ目において観察されてきた。本発明の組成物において鉄キレート化合物として有用なシデロフォアの他のカテゴリーには、例えば、シデロフォアのフェノラート−カテコラートクラス、ヘミンおよびβ−ケトアルデヒド植物毒素が挙げられる。
【００２６】
本発明の組成物に含まれる鉄キレート化合物の量は、異なり得るが、一般には、治療有効量、あるいは治療有効量に再構成または希釈され得る量であろう。例えば、本発明の鉄キレート化合物の有効量は、本発明の方法を参照しながらさらに以下に記載される。１つの、いくつかのまたは全ての鉄キレート化合物の量は、これらの例示的な有効量に一致するように、本発明の組成物中に製剤され得る。
【００２７】
鉄キレート化合物はまた、短期または長期貯蔵のいずれかのために、治療有効量より多い量で本発明の組成物中に製剤され得、消費者は、製剤を、使用の前に所望の治療有効量に希釈し得る。あるいは、本発明の組成物に含まれる鉄キレート化合物は、凍結乾燥され得るか、あるいは粉末または他の固形剤型で製造され得、消費者は、乾燥製剤を、使用の前に所望の治療有効量に希釈し得る。
【００２８】
乾燥または濃縮製剤、あるいは有効量の成分を含む製剤は、鉄キレート化合物および抗真菌剤を単独で、または任意の所望の賦形剤、界面活性剤、等張化剤（ｔｏｎｉｃｉｆｉｅｒｓ）、塩または緩衝液と共に含み得る。希釈または再構成は、製剤を少なくとも１つの鉄キレート化合物および少なくとも１つの抗真菌剤の所望の治療有効量に調整し、かつ任意の追加の賦形剤、界面活性剤、等張化剤、塩または緩衝液を含む医薬上許容され得る媒体中で行われ得る。医薬製剤は周知であり、製剤で実施されている。任意のこのような周知の製剤および医薬製剤成分は、本発明の組成物と共に用いるために適用可能である。医薬製剤、賦形剤、それらの用途、処方および特徴は該分野で周知であり、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、上述；Ｗｉｌｌｉａｍｓら、Ｆｏｙｅ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００２）；Ａｌｌｅｎら、Ａｎｓｅｌｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，８ｔｈ  Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００４）に記載されていることを見出し得る。同様に、界面活性剤、それらの用途、製剤および特徴は該分野で周知であり、例えば、Ｈｏｌｍｂｅｒｇら、Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ  ａｎｄ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｉｎ  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ、上述；Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｋ．Ｒｏｂｅｒｔ  Ｌａｎｇｅ，ｅｄ．、上述、およびＶｏｇｅｌ，Ａ．Ｉ．，Ｖｏｇｅｌ’ｓ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、上述、に記載されていることを見出し得る。
【００２９】
本発明の組成物はまた、少なくとも１つの抗真菌剤を含む。本明細書中で用いられる用語「抗真菌剤」または「抗真菌」は、菌類を破壊するか、あるいは真菌の増殖、生存および／または病原性を抑制または予防する薬剤を意味する。抗真菌剤のカテゴリーの例には、ポリエン抗真菌剤、アゾール抗真菌剤およびエキノキャンディン抗真菌剤が挙げられる。ポリエン抗真菌剤の具体例には、アンホテリシンＢデオキシコール酸塩、リポソームアンホテリシンＢ、アンホテリシンＢ脂質複合体およびアンホテック（ａｍｐｈｏｔｅｃ）が挙げられる。アゾール抗真菌剤の具体例には、ポサコナゾール、ボリコアゾール、フルコナゾールおよびイトラコナゾールが挙げられる。エキノキャンディン抗真菌剤の具体例には、カスポファンギン酢酸塩およびミカファンギンが挙げられる。多数の他の抗真菌剤が該分野で周知であり、かつ、本明細書中で用いられる用語の意味の範囲に含まれる。
【００３０】
少なくとも１つの鉄キレート化合物と少なくとも１つの抗真菌剤との組み合わせは、標的とする真菌症に基づいて選択されるであろう。例えば、アンホテリシンＢ脂質複合体は、例えば、接合真菌症、（ムコール症）、アスペルギルス症および／またはカンジダ症に対して良好な抗真菌剤であり得、デフェリプロンまたはデフェラシロクスなどの鉄キレート化合物と併用され得る。同様に、上記に例示した抗真菌剤のうちの１つまたは該分野で公知の他の１つは、他の標的とする症状に対して有効または治療的に望ましくあり得、このような他の抗真菌剤のうちの１つを鉄キレート化合物と併用して、本発明の組成物を製造し得る。従って、本発明の組成物は、その鉄キレート化合物成分および成分抗真菌剤成分の両方において適応性を有し、少なくとも１つの鉄キレート化合物および併用される少なくとも１つの抗真菌剤の任意の全ての組み合わせおよび置換を、例えば、単一の製剤にすることを可能にする。
【００３１】
従って、１つの実施態様では、本発明は、少なくとも１つの鉄キレート化合物および少なくとも１つの抗真菌剤を含む組成物を提供する。鉄キレート化合物は、例えば、デフェリプロンなどのキレート剤のヒドロキシピリジン−４−オン（ＨＰＯ）クラスのメンバーにより例示される上記の天然に存在しない鉄キレート化合物、デフェラシロクス、ジエチレントリアミンペンタ酢酸（ＤＴＰＡ）およびデフェロキサミンなどのキレート剤のＮ−置換ビスヒドロキシフェニルトリアゾールクラスのメンバーから選択され得る。鉄キレート化合物はまた、例えば、上記のヒドロキサマート、ポリカルボキシラート、シデロフォアのフェノラート−カテコラートクラス、ヘミンまたはβ−ケトアルデヒド植物毒素により例示されるシデロフォアおよび／または異種シデロフォアから選択され得る。
【００３２】
抗真菌剤は、例えば、アンホテリシンＢデオキシコール酸塩、リポソームアンホテリシンＢ、アンホテリシンＢ脂質複合体またはアンホテックなどのポリエン抗真菌剤から選択され得る。抗真菌剤はまた、例えば、ポサコナゾール、ボリコアゾール、フルコナゾールまたはイトラコナゾールなどのアゾール抗真菌剤から選択され得る。抗真菌剤は、さらに、例えば、カスポファンギン酢酸塩またはミカファンギンなどのエキノキャンディン抗真菌剤から選択され得る。少なくとも１つの鉄キレート化合物として１つの鉄キレート化合物を有し、かつ少なくとも１つの抗真菌剤として１つの抗真菌剤を有する本発明の組成物の例は、デフェラシロクスおよびアムホテリシオン（ａｍｐｈｏｔｅｒｉｃｉｏｎ）Ｂ脂質複合体であり得る。
【００３３】
本発明の組成物の範囲内に含まれる鉄キレート化合物の量については、含まれる抗真菌剤の量はまた異なり得るが、一般的には、治療有効量、あるいは治療有効量に再構成または希釈され得る量である。例えば、本発明の抗真菌剤の有効量は、さらに以下に記載され、ポリエン抗真菌剤を参照しながら例示される。１つの、いくつかのまたは全ての抗真菌剤の量は、本発明の組成物中、ポリエン抗真菌剤の例示的な有効量に一致するように、あるいはアゾール抗真菌剤またはエキノキャンディン抗真菌剤などの他の抗真菌剤の周知の有効量に一致するように製剤され得る。同様に、および本発明の組成物に含まれる鉄キレート化合物について上述したように、抗真菌剤はまた、短期または長期貯蔵のいずれかのための濃縮形態で本発明の組成物に製剤され得、消費者は、製剤を使用の前に所望の治療有効量に希釈し得る。さらに、本発明の組成物に含まれる抗真菌剤は、凍結乾燥、粉末または他の固形剤型で製造され得、消費者は、乾燥製剤を使用の前に所望の治療有効量に再構成し得る。
【００３４】
乾燥または濃縮製剤、あるいは有効量の成分を含む製剤は、鉄キレート化合物および抗真菌剤を単独で、または任意の所望の賦形剤、界面活性剤、等張化剤、塩または緩衝液と共に含み得る。希釈または再構成は、上述したように、またはＲｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ、上述；Ｗｉｌｌｉａｍｓら、Ｆｏｙｅ’ｓ  Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，５ｔｈ  Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００２）；Ａｌｌｅｎら、Ａｎｓｅｌｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，８ｔｈ  Ｅｄ．，Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ（２００４）；Ｈｏｌｍｂｅｒｇら、Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ  ａｎｄ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｉｎ  Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ、上述；Ｓｕｒｆａｃｔａｎｔｓ：Ａ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｈａｎｄｂｏｏｋ，Ｋ．Ｒｏｂｅｒｔ  Ｌａｎｇｅ，ｅｄ．、上述，ａｎｄ  Ｖｏｇｅｌ，Ａ．Ｉ．，Ｖｏｇｅｌ’ｓ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｐｒａｃｔｉｃａｌ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、上述、に例示されるように達成され得る。
【００３５】
本発明の組成物は、さらに、２つまたはそれ以上の鉄キレート化合物を含み得る。２つまたはそれ以上の鉄キレート化合物を含むことにより、複数の真菌症を標的化することおよび／または組成物の鉄キレート剤成分における広範な鉄親和性を含むことが可能になる。鉄への異なる親和性を有する鉄キレート化合物の包含は、真菌病原体の回避をさらに予防するのに治療上有利であり得る。
【００３６】
本発明の組成物は、一般に、約１〜８個、詳細には約２〜７個、より詳細には約３〜６個、またはさらにより詳細には約４〜５個の鉄キレート化合物を含む。これらの範囲より多数のまたはこれらの範囲の間の鉄キレート化合物もまた本発明の組成物で用いられ得る。例えば、本発明の組成物は、任意の所望の数、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２あるいはそれ以上の異なる鉄キレート化合物を必須として含む組成物を生じ得る。
【００３７】
本発明の組成物は、さらに、２つまたはそれ以上の抗真菌剤を含み得る。２つまたはそれ以上の鉄キレート化合物を含むことについて、２つまたはそれ以上の抗真菌剤を含むことはまた、複数の真菌症の標的化を可能にし、かつ／または、増殖、生存または病原性に用いられる異なる真菌の機構の標的化を提供する。複数の抗真菌剤を包含することも同様に、真菌病原体の回避をさらに予防するために、治療上有利であり得る。
【００３８】
同様に、本発明の組成物は、一般に、約１〜８、詳細には約２〜７、より詳細には約３〜６、またはさらにより詳細には約４〜５の抗真菌剤を含む。これらの範囲より多数のまたはこれらの範囲の間の抗真菌剤が本発明の組成物で用いられ得る。従って、本発明の組成物は、例えば、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２あるいはそれ以上の任意の所望の数の異なる抗真菌剤を必須として含む組成物を生じ得る。
【００３９】
組成物の例には、デフェラシロクス、およびアンホテリシンＢデオキシコール酸塩、リポソームアンホテリシンＢ、アンホテリシンＢ脂質複合体、アンホテック、ポサコナゾール、ボリコアゾール、フルコナゾール、トラコナゾール、カスポファンギン酢酸塩またはミカファンギンのいずれかの１つまたはそれ以上が挙げられる。デフェラシロクスおよびデフェリプロン、ならびにアンホテリシンＢデオキシコール酸塩、リポソームアンホテリシンＢ、アンホテリシンＢ脂質複合体、アンホテック、ポサコナゾール、ボリコアゾール、フルコナゾール、トラコナゾール、カスポファンギン酢酸塩またはミカファンギンのいずれかの１つまたはそれ以上。特に有用な組成物には、例えば、デフェラシロクスおよび／またはデフェリプロン、ならびにポリエン抗真菌剤、アゾール抗真菌剤およびエキノキャンディン抗真菌剤に一致するそれぞれのカテゴリーから選択される１つ、２つまたは３つまたはそれ以上の抗真菌剤が挙げられる。従って、本発明は、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個またはそれ以上の鉄キレート化合物の任意の組み合わせを、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１または１２個またはそれ以上の抗真菌剤の任意の組み合わせと共に提供する。複数の鉄キレート化合物および／または複数の抗真菌剤を含むこのような組成物は、上記したように処方され得る。
【００４０】
本発明の組成物はまた、医薬上許容され得る媒体を含み得る。本明細書中で用いられる用語「医薬上許容され得る媒体」は、本発明の鉄キレート化合物と混合される媒体が、ヒトに使用するのに十分な純度および質を有することを意味することを意図する。医薬上許容され得る媒体には、汚染する粒子および生物体を実質的に含まない製剤が挙げられる。従って、該用語は、本発明の鉄キレート化合物と適合性であり、かつヒトに投与される際に安全かつ無毒である媒体を包含することを意図する。このような医薬上許容され得る媒体は、該分野で周知である。
【００４１】
本発明はまた、真菌症を治療または予防する方法を提供する。方法は、真菌症を有するかまたは真菌症に感染し易い個体に、治療有効量の少なくとも１つの鉄キレート化合物を真菌症の重症度を減少させるのに十分な時間にわたって投与することを含み、鉄キレート化合物は、真菌症に対する非シデロフォアまたは非異種シデロフォアを含む。
【００４２】
本発明はさらに、真菌症を治療または予防する方法であって、真菌症を有するかまたは真菌症に感染し易い個体に、治療有効量の少なくとも１つの鉄キレート化合物および少なくとも１つの抗真菌剤を真菌症の重症度を減少させるのに十分な時間にわたって投与することを含み、鉄キレート化合物は、真菌症に対する非シデロフォアまたは非異種シデロフォアを含む、方法を提供する。
【００４３】
本発明の方法は、鉄キレート療法単独または抗真菌療法と併用される鉄キレート療法を含む。前者の方法では、少なくとも１つの鉄キレート化合物を含む製剤を投与する。後者の方法では、少なくとも１つの鉄キレート化合物および少なくとも１つの抗真菌剤を含む製剤を投与する。このような製剤は、本発明の組成物に関して上記したように選択および製造される。従って、本発明の組成物は、鉄キレート療法単独に用いるために少なくとも１つの抗真菌剤なしで製造され得るか、または鉄キレート化および抗真菌の併用療法に用いるために、少なくとも１つの抗真菌剤と共に製造され得る。第１の本発明の組成物はまた、少なくとも１つの抗真菌剤なしで製造され得、第２の本発明の組成物は、鉄キレート化合物なしで製造され得る。次いで、第１および第２の調製物を同時に、経時的にまたは鉄キレート化および抗真菌剤の併用療法の代わりに用いられ得る。従って、本発明の組成物に関して上記した教示およびガイダンスは、同様に、少なくとも１つの鉄キレート化合物を単独で含む製剤、少なくとも１つの抗真菌剤を単独で含む製剤、または両方を含む製剤の選択および製造に用いられ得る。
【００４４】
本発明の方法に用いるため、少なくとも１つの鉄キレート化合物を含む製剤中の鉄キレート化合物、少なくとも１つの鉄キレート化合物を含む第１または第２の製剤および／または本発明の組成物は、真菌症または該症状の原因となる真菌病原体に対する非シデロフォアまたは非異種シデロフォアを含むように選択される。
【００４５】
本明細書中で用いられる用語「シデロフォア」は、生物体による鉄の会合を促進する鉄キレート剤を意味することを意図する。例えば、鉄不足の条件下では、多くの菌類は、鉄の結合および取り込みによる鉄の会合に作用するシデロフォアを合成する。シデロフォアは、一般に、低分子化合物（例えば、約２，０００ＭＷ未満）であり、細胞の取り込み作用および／または鉄の貯蔵作用のいずれかまたは両方を示し得る。シデロフォアは、利用する生物体により合成される。一般に生物体または種特異性を参照することなく用いられる用語「鉄キレート剤」と比較して、本明細書中で用いられる用語「シデロフォア」は、シデロフォアを産生しかつ利用する生物体または種に関連する、またはこれに対する鉄キレート剤をいう。従って、鉄キレートシデロフォアは、それが鉄の取り込みを促進し、かつ、病原体に使用されるために細胞外環境からの鉄レベルを結合および減少させるが、シデロフォアを産生する生物体により引き起こされる症状を標的とした鉄キレート療法に用いた場合、治療上の価値が低下する。シデロフォアの合成および用途は、例えば、Ｈｏｗａｒｄ，Ｄ．Ｈ．，Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １２：３９４−４０４（１９９９）に記載されていることを見出し得る。
【００４６】
本明細書中で用いられる用語「異種シデロフォア」は、菌類または生物体の利用により産生されないシデロフォアを意味することを意図する。用語「異種シデロフォア」は、異種シデロフォアを利用する生物体または種と関連する、またはこれに対する鉄キレート剤を意味する。シデロフォアと同様に、異種シデロフォアは、利用しない生物体により引き起こされる症状を標的とする鉄キレート療法に用いられる場合、治療上の価値を示す。シデロフォアおよび異種シデロフォアの合成および使用は、例えば、Ｈｏｗａｒｄ，Ｄ．Ｈ．，ＦＥＭＳ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ  ４０：９５−１００（２００４）に記載されていることを見出し得る。
【００４７】
従って、標的の真菌症に対する非シデロフォアまたは非異種シデロフォアに対応する鉄キレート化合物は、真菌症を引き起こす真菌病原体により産生または利用されないシデロフォア、または真菌症を引き起こす真菌病原体に利用されない異種シデロフォアを意味する。
【００４８】
本発明の、第１のおよび第２の成分製剤を含む、鉄キレート化製剤、組成物ならびに方法は、真菌症を、治療、重症度減少、予防および治癒するのに適用可能である。本発明の鉄キレート化製剤、組成物および方法の特に有用な用途には、真菌症の発症の前の予防的な投与が挙げられる。
【００４９】
本明細書中で用いられる用語「治療する」または「治療」は、真菌症を示す臨床症状を緩和することを意味することを意図する。臨床症状の緩和は、例えば、治療される個体の真菌症の少なくとも１つの症状を、処理前のレベルと比較して、または真菌症を有する個体と比較して、減少または低減させることを含む。用語「治療する」はまた、真菌症に関連する病理学的症状、慢性合併症または日和見性真菌症の重症度を減少させることを含むことを意図する。このような病理学的症状、慢性合併症または日和見感染を、ムコール症を参照しながら以下に例示する。ムコール症および他のこのような病理学的症状、慢性合併症および日和見感染はまた、Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｉｘｔｅｅｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９２およびＳｐｅｌｌｂｅｒｇら、Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ．Ｒｅｖ．１８：５５６−６９（２００５）に記載されていることを見出し得る。
【００５０】
本発明の方法により緩和され得る真菌症の症状には、例えば、発熱、悪寒、寝汗、食欲不振、体重減少、倦怠感、抑うつおよび肺、皮膚または他の病変が挙げられる。他の症状または特徴的徴候には、例えば、原発性、急性または亜急性症状からの伝播、進行性肺炎、真菌血症、肺外伝播の徴候、慢性髄膜炎、網内系（肝臓、脾臓、骨髄）の一般化な関与としての進行性伝播性ヒストプラズマ症および単一のまたは複数の皮膚病変としてのブラストミセス症が挙げられる。例えば、真菌症を有する個体の有効な治療は、治療される個体における１つまたはそれ以上のこのような症状の減少を結果としてもたらすであろう。真菌症の多数の他の臨床症状が該分野で周知であり、本明細書中に記載の本発明の方法を用いる緩和または重症度の減少の指標として用いられ得る。
【００５１】
真菌症の診断は、原因である菌類を、例えば、痰、尿、血液、骨髄または感染組織由来の検体を単離することにより確認し得る。例えば、真菌症は、侵入する菌類の特有の形態的特徴に基づいておよび／または抗原の同定に選択的な免疫組織化学などにより、高度な信頼性で病理組織学的に診断され得る。感染症の活性の評価はまた、多くの異なる部位から採取した培地、発熱、白血球数、特定の関与する器官に関連する臨床および研究室でのパラメータ（例えば、肝機能検査）、および免疫血清学的試験に基づき得る。陽性喀痰培養の臨床的意義もまた、組織侵襲の確認により実証され得る。このような実証はまた、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓなどの共生生物体またはアスペルギルス属などの周囲で流行する生物体について特に有益である。
【００５２】
本明細書中で用いられる用語「予防する」または「予防」は、真菌症を示す臨床症状の未然の予防を意図することを意味する。このような未然の予防には、例えば、症状の顕性症状の発症前に、または症状の診断の前に、菌類（単数または複数）による感染のリスクのある個体において正常な生理的指標を維持することが挙げられる。従って、用語「予防する」は、個体を予防的に処置して真菌症の発症から防護することを含む。個体における真菌症の予防はまた、真菌症の発症の抑制または抑止を含むことを意図する。症状の発症の抑制または抑止には、例えば、上記のおよび／または該分野で周知の異常な生理的指標または臨床症状の出現を抑制または抑止することを含む。従って、真菌症の有効な予防には、真菌症に罹患した個体において、正常な体温、体重、心理学的状態を維持すること、ならびに上記の病変または他の病理学的徴候がないことが含まれるであろう。真菌症に罹患した個体には、例えば、ＡＩＤＳ、高窒素血症、糖尿病、気管支拡張症、肺気腫、結核、リンパ腫、白血病または熱傷を有する個体、あるいは真菌症に感染し易い病歴を有する個体が挙げられる。症状の発症の抑制または抑止にはまた、例えば、真菌症に関連する１つまたはそれ以上の病理学的症状の進行、慢性合併症または日和見感染への感染し易さの抑制または抑止が挙げられる。
【００５３】
本発明の方法は、広範な多様な真菌症の治療および／または予防に有用である。本明細書中で用いられる用語「真菌症」は、真菌感染により引き起こされる異常な症状を意味することを意図する。真菌感染、すなわちヒトおよび動物の真菌症には、例えば、皮膚の外層に影響する表在性真菌症；Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓにより引き起こされるような、口（鵞口瘡）、腟および肛門領域などの粘膜の真菌感染、ならびに重大な、しばしば致死的疾病を引き起こし得る皮膚および内部器官のより深部の層に影響する真菌感染が挙げられる。真菌感染は該分野で周知であり、例えば、接合真菌症、アスペルギルス症、クリプトコッカス症、カンジダ症、ヒストプラズマ症、コクシジオイデス症、パラコクシジオイデス症、フザリウム症（ヒアロヒホ真菌症）、ブラストミセス症、ペニシリウム症またはスポロトリクス症が挙げられる。これらおよび他の真菌症は、Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ，Ｓｉｘｔｅｅｎｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，１９９２およびＳｐｅｌｌｂｅｒｇら、Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏ．Ｒｅｖ．１８：５５６−６９（２００５）に記載されていることを見出し得る。上記の真菌症の例を、以下にさらに説明する。
【００５４】
本明細書中で用いられる用語「接合真菌症」は、ケカビ目およびエントモフトラ目などの接合菌網の菌類により引き起こされる真菌症を意味することを意図する。エントモフトラ目は、発展途上国で免疫適格性の宿主が主に罹患する、エントモフトラ症として知られる皮下および皮膚粘膜感染の原因である。
【００５５】
本明細書中で用いられる用語「ムコール症」は、ケカビ目の菌類により引き起こされる真菌症を意味することを意図する。ムコール症は、発展途上国または先進工業国のいずれかで免疫が低下した宿主をほぼ一律に襲う、生命を脅かす真菌感染である。ケカビ目に所属する菌類は、６つの科に分類され、その全てが皮膚および深層の感染の原因となり得る。ケカビ科に属する種は、他のいずれの科よりも頻繁に、ムコール症を有する患者から単離される。ケカビ科の中でも、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ（Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ａｒｒｈｉｚｕｓ）は、感染の一般的な原因である。感染の同様のスペクトルを引き起こすケカビ科の他の種の例には、例えば、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｍｉｃｒｏｐｏｒｕｓ変種ｒｈｉｚｏｐｏｄｉｆｏｒｍｉｓ、Ａｂｓｉｄｉａ  ｃｏｒｙｍｂｉｆｅｒａ、Ａｐｏｐｈｙｓｏｍｙｃｅｓ  ｅｌｅｇａｎｓ、Ｍｕｃｏｒ種、Ｒｈｉｚｏｍｕｃｏｒ  ｐｕｓｉｌｌｕｓおよびＣｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ種（Ｃｕｎｎｉｎｇｈａｍｅｌｌａ科）が挙げられる。ムコール症は該分野で周知であり、例えば、脳型ムコール症、肺ムコール症、胃腸ムコール症、播種性ムコール症、骨ムコール症、縦隔ムコール症、気管ムコール症、腎臓ムコール症、腹膜ムコール症、上大静脈ムコール症または外耳炎ムコール症（ｅｘｔｅｒｎａｌ  ｏｔｉｔｉｓ  ｍｕｃｏｒｍｙｃｏｓｉｓ）が挙げられる。
【００５６】
本明細書中で用いられる用語「カンジダ症」は、カンジダ属の菌類により引き起こされる真菌症を意味することを意図する。カンジダ症は、特に免疫低下した状態の個体において、口、気道および／または腟の皮膚および粘膜で起こり得るか、あるいは血流に侵入し得る。カンジダ症はまた、該分野でカンジダ症またはモニリア症としても知られている。カンジダ属の種の例には、例えば、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｋｒｕｓｅｉ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｔｒｏｐｉｃａｌｉｓ、Ｃａｎｄｉｄａ  ｇｌａｂｒａｔａおよびＣａｎｄｉｄａ  ｐａｒａｐｓｉｌｏｓｉｓが挙げられる。
【００５７】
本明細書中で用いられる用語「アスペルギルス症」は、アスペルギルス属により引き起こされる疾患の群を意味することを意図する。症状には、例えば、発熱、咳、胸痛および／または息切れが挙げられる。免疫系が弱まった患者または肺疾患に罹患した患者は、特にアスペルギルス症に罹り易い。この真菌症の形態の例には、喘息、嚢胞性線維症および副鼻腔炎の患者に影響するアレルギー性アスペルギルス症；癌患者、化学療法を受けた患者およびＡＩＤＳ患者などの免疫が弱まった患者において発生率の上昇を示す急性浸潤性アスペルギルス症；身体全体に広範に広がる伝播性浸潤性アスペルギルス症、および耳および他の器官の炎症および病変により特徴付けられる日和見性アスペルギルス感染症が挙げられる。アスペルギルスは、約２００の菌類の属である。浸潤性疾患を引き起こすＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種には、例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓおよびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｌａｖｕｓが挙げられる。アレルギー性疾患の原因となるＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ種には、例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｆｕｍｉｇａｔｕｓおよびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｃｌａｖａｔｕｓが挙げられる。他のアスペルギルス感染性種の例には、例えば、Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｔｅｒｒｅｕｓおよびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ  ｎｉｄｕｌａｎｓが挙げられる。
【００５８】
本明細書中で用いられる用語「クリプトコッカス症」は、クリプトコッカス属により引き起こされる真菌症を意味することを意図する。クリプトコッカス症はまた、Ｂｕｓｓｅ−Ｂｕｓｃｈｋｅ病としても知られ、一般に、肺、皮膚または他の身体の器官などの身体のいずれの器官にも影響し得る全身感染症としての症候を示すが、最も頻繁には、脳および髄膜などの中枢神経系で発症する。クリプトコッカス症は、ＡＩＤＳの日和見感染であるが、Ｈｏｄｇｋｉｎ病または他のリンパ腫またはサルコイドーシスを有する患者、あるいは長期の副腎皮質ステロイド療法を受けている患者もまたリスクが高い。症状には、例えば、胸痛、乾性咳嗽、腹部膨満、頭痛、霧視および錯乱が挙げられる。この真菌症の形態の例には、創傷において起こるような皮膚クリプトコッカス症、肺クリプトコッカス症およびクリプトコッカス髄膜炎が挙げられる。クリプトコッカス髄膜炎は、一般に免疫低下患者において観察されるかまたは評価されていない肺感染症のいずれかからのクリプトコッカス・ネオフォルマンスの伝播から生じ得る。クリプトコッカス・ガッティは、一般に、免疫適格性のヒトにおいて感染症を引き起こす。ＣＳＦ、痰および尿の培養によるクリプトコッカス抗原（莢膜物質）の検出は、１つの有用な診断方法を提供する。また、血液培養物も、重度の感染症で陽性であり得る。
【００５９】
本明細書中で用いられる用語「ヒストプラズマ症」は、ヒストプラズマ属により引き起こされる真菌症を意味することを意図し、ヒストプラズマ・カプスラーツムの胞子の吸入により引き起こされる感染症が挙げられる。ヒストプラズマ症はまた、該分野でＤａｒｌｉｎｇ病としても知られている。症状は無症候であり得るが、主に肺に影響する急性肺炎またはインフルエンザ様疾病にも進行し得る。ヒストプラズマ症はまた、身体の他の器官および系に伝播し得る。他の真菌症の伝播型と同様に、この伝播性ヒストプラズマ症も致死的であり得る。症状は、曝露後３〜１７日以内に起こり得る。しかしながら、非伝播型では、明らかな病気の影響を示さないことが感染者に共通し得る。急性呼吸器疾患は、呼吸器症状、一般的な具合の悪さ、発熱、胸痛および乾性咳嗽により特徴づけられ得る。明らかなパターンはまた、胸部Ｘ線でも観察され得る。慢性肺疾患は結核に類似し、数ヶ月から数年にわたって悪化し得る。
【００６０】
本明細書中で用いられる用語「コクシジオイデス症」は、コクシジオイデス属により引き起こされる真菌症を意味することを意図する。この用語の意味には、コクシジオイデス・イミチスまたはコクシジオイデス・ポサダシにより、特に胞子の吸入によって引き起こされ、発熱および多様な呼吸器症状により特徴づけられる感染性呼吸器疾患が含まれる。コクシジオイデスはまた、該分野でコクシジオイデス症およびｖａｌｌｅｙ熱としても知られている。全身性コクシジオイデス症は、気道から、例えば、皮膚、骨および中枢神経系に伝播し得る。症状の徴候は、症状の完全な非存在から、全身感染および死まで及ぶ。例えば、症候性感染症（症例の約４０％）は、発熱、咳、頭痛、発疹および筋肉痛（筋痛）を伴うインフルエンザ様疾患として現れ得る。幾人かの患者は、回復せず、慢性の肺感染症または広範な伝播性感染症（髄膜、軟部組織、関節および骨に影響する）を発症し得る。重篤な肺疾患は、例えば、ＨＩＶ感染したヒトおよび他の免疫低下したヒトにおいて発症し得る。
【００６１】
本明細書中で用いられる用語「パラコクシジオイデス症」は、パラコクシジオイデス属により引き起こされる真菌症を意味することを意図し、例えば、パラコクシジオイデス・ブラジリエンシスにより引き起こされる慢性真菌症が挙げられる。パラコクシジオイデス症は、多くの内部器官への伝播を有する肺の一次病巣により、頬および鼻の粘膜から皮膚へと広がる目立つ潰瘍性肉芽腫により、および全身性のリンパ管炎により、特徴づけられる。パラコクシジオイデス症はまた、該分野で、パラコクシジオイデス症、パラコクシジオイデス症、Ａｌｍｅｉｄａ病、Ｌｕｔｚ−Ｓｐｌｅｎｄｏｒｅ−Ａｌｍｅｉｄａ病、パラコクシジオ肉芽腫および南アメリカブラストミセス症としても知られている。
【００６２】
本明細書中で用いられる用語「フザリウム症」または「ヒアロヒホ真菌症」は、フサリウム属により引き起こされる真菌症を意味することを意図する。該症状を引き起こすフサリウム種には、例えば、フサリウム・ソラニ、フサリウム・オキシスポルムおよびフサリウム・モニリフォルメが挙げられる。感染症には、角膜炎、爪真菌症、ならびに時折腹膜炎および蜂巣炎が挙げられる。伝播性フザリウム症の危険因子には、重篤な免疫抑制（好中球減少、リンパ球減少、移植片対宿主病、副腎皮質ステロイド）、コロニーの形成および組織の損傷が挙げられる。免疫適格性患者では、組織崩壊（外傷、重篤な熱傷または異物により引き起こされるもの）がフザリウム症の危険因子である。臨床症状には、難治性発熱、皮膚病変および気道感染症が挙げられる。皮膚病変は、多くの患者において診断につながり得、真菌血症の約５日前に起こる。伝播性フザリウム症は、例えば、血液培養ならびに上記および下記の他の周知の方法により診断され得る。
【００６３】
本明細書中で用いられる用語「ブラストミセス症」は、一般に呼吸器感染症として発症し、通常、肺、骨および皮膚に伝播する、ブラストミセス属により引き起こされる真菌症を意味することを意図する。ブラストミセス症は、皮膚、粘膜または内部器官の複数の炎症性病変により特徴づけられる。ブラストミセス・デルマティティディスは、蔓延している原因種の１つである。ブラストミセス症の症状には、例えば、発熱、悪寒、筋肉痛、頭痛および乾性咳嗽を伴うインフルエンザ様疾病；高熱、悪寒、湿性咳嗽および胸膜炎の胸痛を伴う、細菌性肺炎に類似する急性疾病；低悪性度の発熱、湿性咳嗽、寝汗および体重減少を伴う結核または肺癌に似た慢性疾病；発熱、息切れ、頻呼吸、低酸素血症および拡散した肺浸潤を伴う急性呼吸促迫症候群として現れる、急速な、進行性のかつ重篤な疾患；皮膚病変；骨溶解性病変；前立腺炎および／または嗄声を引き起こす喉頭の関与が挙げられる。
【００６４】
本明細書中で用いられる用語「ペニシリウム症」は、ペニシリウム属により引き起こされる真菌症を意味することを意図する。種の例はペニシリウム・マルネフェイであり、これは免疫低下した個体における日和見性真菌症の蔓延した原因である。診断は、臨床検体由来の菌類の同定によりなされ得る。皮膚病変、リンパ結節および骨髄の組織診は、病理組織学における生物体の存在を実証し得る。症状には、例えば、発熱、皮膚病変、貧血、全身リンパ節腫脹および肝腫大が挙げられる。
【００６５】
本明細書中で用いられる用語「スポロトリクス症」は、スポロトリクス・シェンキイ種などのスポロトリクス属により引き起こされる真菌症を意味することを意図する。症状は、リンパ節および皮膚における小結節または潰瘍により特徴付けられる慢性感染として発現する。
【００６６】
スポロトリクス症感染は、血液から、例えば、関節、肺、眼ならびに尿生殖器系および中枢神経系などの他の領域へ伝播し得る。一般に、伝播性スポロトリクス症は、ＡＩＤＳ患者、癌患者、化学療法を受けた患者および免疫抑制療法中の移植レシピエントなどの免疫低下した個体において起こる。
【００６７】
本明細書中で用いられる用語「有効量」または「治療有効量」は、個体に投与した際に真菌症の伝播の程度、量または割合を減少させるのに必要とされる、本発明の鉄キレート化合物、抗真菌剤または鉄キレート化合物および抗真菌剤の両方の量を意味することを意図する。従って、鉄キレート化合物を参照して用いられる場合の有効量は、標的とする真菌症に関連する少なくとも１つの症状を緩和するのに十分な鉄キレート化合物の量を意味することを意図する。
【００６８】
治療上有効であるために必要とされる本発明の鉄キレート化合物、抗真菌剤または鉄キレート化合物および抗真菌剤の両方の投与量は、例えば、治療すべき真菌症、鉄キレート化合物の鉄への親和性、鉄の存在量および濃度のレベル、ならびに個体の体重および症状、ならびに以前のまたは同時に行っている療法に依存するであろう。この方法の特定の用途に有効投与量であると考えられる量は、本明細書中で提供するガイダンスを用いて、当業者により決定され得る。例えば、量は、以下に記載するインビトロまたはインビボアッセイから推定され得る。当業者は、患者の症状は療法の過程の最初から最後まで監視される必要があり、また、投与される組成物の量は、療法の応答に従って調整され得ることを認識するであろう。
【００６９】
鉄キレート化合物の有効量の例には、例えば、約０．３〜３．０μｇ／ｍｌの濃度範囲が挙げられるが、０．０１μｇ／ｍｌ以下の低い濃度および１０μｇ／ｍｌ以上の高い濃度も含み得る。投与すべき抗真菌剤の量は該分野で周知であり、用語「有効量」の意味の範囲内で本明細書中に包含される。
【００７０】
デフェラシロクスの前臨床研究では、例えば、鉄過剰のマモセットにおいて４００ｍｇ／ｋｇ／日までの投与量で実質的に毒性は観察されなかった（Ｎｉｃｋら、Ａｄｖ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｂｉｏｌ．５０９：１８５−２０３（２００２））。しかしながら、非鉄過剰のマモセットへの８０ｍｇ／ｋｇの投与量での慢性投与後に重篤な毒性が観察され、非鉄過剰宿主においては耐容性がいっそう少ないことを確認した（同上）。それにもかかわらず、非鉄過剰マモセットにおいてさえも、４０ｍｇ／ｋｇ／日までを用いた処置の３９週後に毒性は観察されず、亜急性処置（４週）の間、６５ｍｇ／ｋｇ／日までの投与量は、副作用がなく耐容性が良好であった。鉄過剰患者の臨床研究（Ｎｉｓｂｅｔ−Ｂｒｏｗｎら、Ｌａｎｃｅｔ  ３６１：１５９７−１６０２（２００３）；Ｇａｌａｎｅｌｌｏ  ｅｔ  ａｌ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．４３：５６５−５７２（２００３）；Ｃａｐｐｅｌｌｉｎｉら、Ｂｌｏｏｄ  １０７：３４５５−３４６２（２００６））では、デフェラシロクスは４０ｍｇ／ｋｇ／日までの投与量で１２日まで、慢性投与では数ヶ月から数年にわたって３０ｍｇ／ｋｇ／日までで、耐容性が良好であった。
【００７１】
一般に、鉄キレート化合物は、鉄キレート療法の製剤に含まれ、第１のまたは第２の成分製剤および／または本発明の組成物を、約０．０１〜１０μｇ／ｍｌ、約０．１〜８μｇ／ｍｌ、約０．２〜６μｇ／ｍｌ、詳細には約０．３〜３．０μｇ／ｍｌ、より詳細には約０．６〜２．０μｇ／ｍｌ、なおさらに詳細には約０．８〜１．０μｇ／ｍｌまたは約０．９μｇ／ｍｌの濃度で含むであろう。これらの範囲より少ない、多いまたはこれらの範囲内の鉄キレート化合物の濃度および／または量が、鉄キレート療法製剤、第１のまたは第２の成分製剤および／または本発明の組成物に用いられ得る。例えば、１つまたはそれ以上の鉄キレート化合物は、製剤または組成物内に含まれ得、約０．１μｇ／ｍｌ未満を占める。同様に、製剤または組成物は、特に貯蔵用に処方される場合、約１０μｇ／ｍｌより高い１つまたはそれ以上の鉄キレート化合物の濃度を含み得る。従って、本発明の方法に有用な製剤または組成物は、実質的に任意の所望の濃度または量、例えば、０．０１、０．０２、０．０３、０．０４、０．０５、０．０６、０．０７、０．０８、０．０９、０．１、０．２、０．３、０．４、０．５、０．６、０．７、０．８、０．９、１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１１、１２μｇ／ｍｌまたはそれ以上の１つまたはそれ以上の鉄キレート化合物を含むように製造され得る。
【００７２】
抗真菌剤の有効量の例には、例えば、ポリエン抗真菌剤に関して以下に例示した量が挙げられる。例えば、アンホテリシンＢデオキシコール酸塩は、通常、例えば、約１０ｍｇ／ｋｇ体重よりも少ない投与量で投与され、静脈内注射用には約０．２５〜１．０ｍｇ／ｋｇ／日の割合を含み得る。リポソームアンホテリシンＢ（Ｌ−ＡＭＢ）は、通常、１〜５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与される。リポソームアンホテリシンＢはまた、特に脳疾患において１５ｍｇ／ｋｇ／日の高い投与量で投与され得る。アンホテリシンＢ脂質複合体（ＡＢＬＣ）は、通常、５ｍｇ／ｋｇの投与量で投与されるが、約０．５〜１５ｍｇ／ｋｇの範囲内にあり得る。アンホテックは、通常、約５０〜１００ｍｇの単回投与量で投与される。同様に、鉄キレート化合物および抗真菌剤を用いる併用療法には、上記量が化合物および／または薬剤のいずれかまたは両方と共に投与され得るか、あるいは、薬剤の量は多くまたは少なく調節され得る。アゾール抗真菌剤およびエキノキャンディン抗真菌剤の有効量もまた当業者に周知であり、通常、上記範囲内の投与量を含む。
【００７３】
本明細書中に提供される教示およびガイダンスを考慮すれば、当業者は、上記に例示した有効量が、例えば、他の活性成分の形態および量に対して調節され得ることを理解するであろう。例えば、少なくとも１つの鉄キレート化合物の投与量が上記に例示した高い範囲内にある場合、所望であれば、有効量を得つつ、少なくとも１つまたはそれ以上の抗真菌剤の量を低減し得る。同様に、少なくとも１つの抗真菌剤の投与量が高い範囲にあるかまたは上記に例示したよりも高い場合、所望であれば、少なくとも１つまたはそれ以上の少なくとも鉄キレート化合物のうち１つまたはそれ以上の量を低減し得る。２つまたはそれ以上の鉄キレート化合物の投与量および／または２つまたはそれ以上の少なくとも１つの抗真菌剤の投与量はまた、互いに対して調節され得る。このような組み合わせた有効量の全ての他の調節は、本発明の方法において利用され得る。
【００７４】
本発明の種々の実施態様の活性に実質的に影響しない修飾もまた、本明細書中で提供される本発明の定義の範囲内に含まれることが理解される。従って、以下の実施例は、例示することを意図するが、本発明を限定することは意図しない。
【実施例】
【００７５】
（実施例Ｉ）
真菌症の重症度を減少させるための鉄キレート療法
本実施例は、デフェリプロンおよびＥｘｊａｄｅ（登録商標）がムコール症の病変形成を減少させ得ることを示す予備的研究を記載する。
【００７６】
動物モデルは、デフェロキサミンまたは遊離鉄の投与はＲｈｉｚｏｐｕｓ種に感染した動物の生存率を悪化させるが、Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓでは悪化の程度がより少ないことを実証したが、このことは、鉄がＲｈｉｚｏｐｕｓ種の病原性に特有に必要とされることを強調する（Ａｂｅら、Ｍｙｃｏｐａｔｈｏｌｏｇｉａ  １１０：８７−９１（１９９０）；Ｂｏｅｌａｅｒｔら、（１９９３）、上述；Ｂｏｅｌａｅｒｔら、（１９９４）、上述；Ｖａｎ  Ｃｕｔｓｅｍ  ａｎｄ  Ｂｏｅｌａｅｒｔ，Ｋｉｄｎｅｙ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ３６：１０６１−６８（１９８９））。さらに、デフェロキサミンから血清への放射標識された鉄の取り込みのインビトロでの研究は、リゾプスがアスペルギルス・フミガツスおよびＣａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓよりもそれぞれ８倍および４０倍もの多い量の鉄を蓄積することを示した（Ｂｏｅｌａｅｒｔら、（１９９３）、上述）。このＲｈｉｚｏｐｕｓ種による鉄取り込みの増加は、その血清中での増殖と直線的に相関した（Ｂｏｅｌａｅｒｔら、（１９９３）、上述）。血清中での増殖の増加は、接合菌類が血管から直接的に浸透および増殖し、結果として疾患の間に血栓症および組織壊死の性向をもたらすための特殊な親和性を説明し得る（Ｅｄｗａｒｄｓ，（１９８９）、上述；Ｉｂｒａｈｉｍら、（２００３）、上述；Ｖｅｎｔｕｒａら、上述）。
【００７７】
上記したように、糖尿病性ケトアシドーシスを有する患者はまた、脳性ムコール症を発症するリスクも高い。これらの患者はまた、利用可能な血清鉄のレベルを上昇させるが、これはおそらく、アシドーシスの存在下での結合タンパク質からの鉄の遊離によるであろう（Ａｒｔｉｓら、上述）。糖尿病性ケトアシドーシスを有する患者から回収した血清は、酸性ｐＨ（７．３〜６．８８）の存在下でＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅの増殖を支持するが、アルカリ性ｐＨ（７．７８〜８．３８）の存在下では支持しない。酸性ｐＨでＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅの増殖を支持しなかった血清では、真菌の増殖を支持する血清に比べて、利用可能な鉄が少ないことが見出された。さらに、外来性の鉄を血清に添加することにより、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅが酸性条件で大量に増殖することが可能であったが、水素イオン指数＞７．４では可能ではなかった。最後に、シミュレートされたアシドーシス症状は、正常なボランティアから回収した血清の鉄結合能を減少させたが、このことは、アシドーシスが、トランスフェリンが鉄を結合する能力を一時的に中断することを示唆する。従って、糖尿病性ケトアシドーシスを有する患者のムコール症への感染し易さの増加は、おそらく、糖尿病性ケトアシドーシスの間に利用可能な血清鉄が上昇することに少なくとも部分的に依存するであろう。
【００７８】
ムコール症の病変形成における鉄代謝の役割は、有効な鉄キレート剤を、補助的な抗真菌療法などの抗真菌療法に利用する可能性を可能にする。デフェロキサミンとは対照的に、他の鉄キレート剤は、生物体が鉄を取り込むことを可能にせず、インビトロで鉄存在下でのその増殖を支持しない（例えば、Ｂｏｅｌａｅｒｔら、（１９９４）、上述を参照のこと）。さらに、デフェロキサミンはモルモットにおいて伝播性Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ感染を顕著に悪化させるが、他のキレート剤の１つはインビボ感染に影響がなく、他のキレート剤は、感染モルモットの平均生存時間を２倍以上にした（表１）。
【００７９】
【表１】
2009543788.tif 000003
本明細書中に記載のインビトロおよびインビボデータは、デフェリプロンが、ムコール症感染を有効に治療するのに用いられ得ることを示す。表１は、予備的研究の結果を示し、ここで、デフェリプロンは、感染した動物の平均生存時間を有意に増加する。これらの予備的研究は、さらに、デフェリプロンがＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅに対してインビトロで高活性であったことを示したが、このことは、２４時間では静的効果があるが、インキュベーションの４８時間では殺菌効果を有する［４８時間後の両方について６．２５μｇ／ｍｌの最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）および最小殺真菌濃度（ＭＦＣ）］ことを示す。感染したＤＫＡマウスにおいて、ムコール症の一般的な療法であるリポソームアンホテリシンＢ（ＬＡｍＢ）、またはデフェリプロン（Ｄｅｆ）は、プラセボと比較して生存率を２８日改善した（Ｄｅｆについて３０％の生存率、プラセボについて０％の生存率に対し、ＬＡｍＢについて５２％の生存率、ＬＡｍＢまたはＤｅｆ対プラセボについてのログランク検定によりｐ＜０．００３；ＬＡｍＢ対Ｄｅｆについてｐ＝０．１５）。Ｄｅｆの効力は、マウスへのＦｅＣｌ３の投与により抑止されたが、このことは、Ｄｅｆが仲介する保護のメカニズムが鉄キレート化であることを確認した（図１）。この後者の薬剤デフェリプロンは、欧州およびインドで鉄キレート剤として臨床使用が承認され、アメリカ合衆国では鉄過剰に基づくコンパッショネート・ユースに利用可能である。
【００８０】
他の鉄キレート剤であるＥｘｊａｄｅ（登録商標）（Ｎｏｖａｒｔｉｓ）は、アメリカ合衆国で鉄過剰患者における臨床使用が承認されている。この薬剤は、インビトロでＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅに対して、および糖尿病性ケトアシドーシスマウスモデルを用いる動物モデルにおいて試験された。致死量のＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅに感染させ、かつ１、３または１０ｍｇ／ｋｇの１日２回のＥｘｊａｄｅ（登録商標）で処置したマウスは、プラセボで処置したマウスよりも長く生存した［ログランク検定により、１ｍｇ／ｋｇのＥｘｊａｄｅ（登録商標）について２９％の生存率（ｐ＝０．０３）に対して、３ｍｇ／ｋｇのＥｘｊａｄｅ（登録商標）で処置したマウスが４０％の生存率（ｐ＝０．０４９）であったのに対して、１０ｍｇ／ｋｇのＥｘｊａｄｅ（登録商標）で処置したマウスが５７％の生存率（ｐ＝０．０１）であったのに対して、プラセボについての２８日間の生存日数は０％の生存率であった］（図２）。これらの研究は、ムコール症の治療におけるＥｘｊａｄｅ（登録商標）の使用の効力を実証する。これらの研究は、上記鉄キレート剤が、好中球減少個体におけるムコール症などの他の真菌症、ならびに伝播性カンジダ症およびアスペルギルス症などの他の感染症の治療に適用可能であり得ることをさらに示す。
【００８１】
（実施例ＩＩ）
ムコール症の治療のための鉄キレート療法
本実施例は、糖尿病性ケトアシドーシス（ＤＫＡ）マウスにおけるムコール症の治療または好中球減少性マウスにおけるムコール症の予防における、リポソームアンホテリシンＢ（ＬＡｍＢ）に対するデフェリプロンの効力の比較を示す。
【００８２】
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅは、ムコール症の一般的な原因である（Ｉｂｒａｈｉｍら、（２００３）、上述）。ケトアシドーシスの糖尿病患者などの利用可能な血清鉄が上昇した患者は、ムコール症感染症の発症リスクが高い（Ａｒｔｉｓら、上述）。さらに、デフェロキサミン鉄キレート療法は、患者をこれらの感染症に罹患させる。デフェロキサミンは、異種シデロフォアとして作用して、以前に利用不可能な鉄を菌類に供給する（Ｂｏｅｌａｅｒｔら、（１９９３）、上述）。従って、菌類が宿主から鉄を除去するのに利用され得ない鉄キレート剤の使用を、ムコール症に対する効力について評価した。Ｄｅｆは、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ種が鉄を除去するのに利用され得ない鉄キレート剤である（Ｂｏｅｌａｅｒｔら、（１９９４）、上述）。
【００８３】
まず、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅに対するデフェリプロンのインビボ活性を、この研究で評価した。簡便には、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ９９−８８０を、糖尿病患者の脳膿瘍から単離した。生物体を、ポテトデキストロースアガー（ＰＤＡ）上で、３７℃で３日間増殖させた。いくつかの実験では、１ｍＭのアスコルビン酸およびフェロジンの存在下でＰＤＡ上で増殖させることにより、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅを鉄不足にさせた。０．０１％Ｔｗｅｅｎ８０を含む内毒素非含有ＰＢＳ中で胞子嚢胞子を回収し、ＰＢＳで洗浄し、次いで、血球計数器で計数して、最終的な接種菌を調製した。感受性の試験のため、最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）および最小殺真菌濃度（ＭＦＣ）を、Ｅｓｐｉｎｅｌ−Ｉｎｇｒｏｆｆ（Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ  ３９：９５４（２００１））の方法により、Ｄｅｆおよびデフェロキサミンについて決定した。
【００８４】
結果を以下の表２に示す。デフェリプロンは、２４時間でＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅに対して静的であったが（ＭＩＣおよびＭＦＣ＝それぞれ３．１２および１００μｇ／ｍｌ）、４８時間のインキュベーションでは殺菌性が実証された（ＭＩＣおよびＭＦＣ＝６．２５μｇ／ｍｌ）。対照的に、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅに鉄を供給することが知られているデフェロキサミンは、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅの増殖を抑制せず（２４または４８時間後、１００μｇ／ｍｌ超のＭＩＣおよびＭＦＣ）、実際には、視覚での点検によれば、デフェロキサミンを含むウェル中での増殖は、増殖コントロールウェル（鉄キレート剤を含まない）中よりも多かった。
【００８５】
【表２】
2009543788.tif 000004
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅに対するそのインビトロ活性を確認したので、我々は、我々のＤＫＡマウスモデルを用いて、インビボでの伝播性Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ感染の治療におけるデフェリプロンの役割を評価した。簡便には、インビボ感染のために、２１０ｍｇ／ｋｇのストレプトゾトシンを真菌負荷の１０日前に単回で腹腔内注射することにより、ＢＡＬＢ／ｃ  雄性マウス（≧２０ｇ）を糖尿病にした。ストレプトゾトシン処置の７日後、全てのマウスで糖尿およびケトン尿を確認した。マウスを、尾静脈にＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅを適切に接種することにより感染させた。接種を確認するため、希釈物でＰＤＡプレート上に線を引き、室温での２４時間のインキュベーション期間後、コロニーを計数した。一次効力終点は、死亡した時間であった。二次終点としては、脳の真菌負荷（一次標的臓器）を、２ｍｌの生理食塩水を含むＷｈｉｒｌ−Ｐａｋ（登録商標）バッグ（Ｎａｓｃｏ，Ｆｏｒｔ  Ａｔｋｉｎｓｏｎ，ＷＩ）に入れた器官上でピペットを回転することによりホモジナイズすることにより、決定した。ホモジネートを０．８５％生理食塩水中で連続的に希釈し、次いでＰＤＡ上で定量的に培養した。値をｌｏｇ１０ｃｆｕｇ−１組織として表す。マウスに関連する全ての手順は、動物の飼育および世話に関する米国国立保健研究所の指針に従って、研究機関における動物の利用と世話に関する委員会（ｔｈｅ  ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  ａｎｉｍａｌ  ｕｓｅ  ａｎｄ  ｃａｒｅ  ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）により承認された。
【００８６】
薬物および治療計画については、５％デキストロース水で希釈したＬＡｍＢをＧｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓから得、１５ｍｇ／ｋｇ  ｑｄ（１日１回）で尾静脈から静脈内投与した。デフェリプロン（Ａｐｏｔｅｘ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｉｎｃ．）を鉄非含有水に溶解し、５０、１００または２００ｍｇ／ｋｇ  ｑｄまたはｑｏｄ（隔日）で腹腔内投与した。処置は感染２４時間後に開始し、合計４回の投与を続けた。対照群を、希釈液である５％デキストロース水で処置した。
【００８７】
いくつかの実験では、鉄キレート化の効力を無効にすることを試みて、飽和投与量の遊離鉄をデフェリプロンと共に投与した。デフェリプロンは、鉄とデフェリプロンの１：３の比で第二鉄（３＋Ｆｅ）と分子複合体を形成することが知られている。塩化第二鉄（ＦｅＣｌ３、分子量１６２．２２ｇ／ｍｏｌ）およびデフェリプロン（分子量１３９ｇ／ｍｏｌ）の既知の分子量に基づき、６０ｍｇ／ｋｇの投与量のＦｅＣｌ３を計算した結果、１８ｇのマウスに与えられた１００ｍｇ／ｋｇの投与量のデフェリプロンに対して、顕著に過剰の３＋Ｆｅが得られた：３＋Ｆｅのモル数＝（０．０６０ｇ／ｋｇ＊０．０１８ｋｇ［マウスの体重］／１６２．２２ｇ／ｍｏｌ）＝６．５×１０−６ｍｏｌに対し、デフェリプロンのモル数＝（０．１ｇ／ｋｇ＊０．０１８ｋｇ［マウスの体重］／１３９ｇ／ｍｏｌ）＝１．３×１０−５モル比＝１：２モルの３＋Ｆｅ対デフェリプロンであり、これは飽和した１：３の比を達成するのに必要とされるモル数よりも多い。
【００８８】
統計解析を、ノンパラメトリックなログランク検定を用いて行い、マウスの生存時間の差を決定した。感染した器官における組織真菌負荷の差を、多重比較のためのノンパラメトリックＳｔｅｅｌ検定により比較した。０．０５未満のＰ値を有意であると考えた。
【００８９】
最初に、投与量応答を、製造元からの未発表の知見に基づく投与量を用いて行った（５０、１００または２００ｍｇ／ｋｇのデフェリプロンを毎日または隔日投与した）。マウスを４．３×１０３個のＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅの胞子に感染させ、感染の２４時間後にデフェリプロン処置を開始し、合計４回の投与を続けた。結果を図３および１に示すが、これらは、デフェリプロンがＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ感染からＤＫＡマウスを保護することを示す。１００ｍｇ／ｋｇ  ｑｏｄのデフェリプロン投与は、プラセボと比較してＤＫＡマウスの生存率を改善した（ｐ＝０．０２７、図３）。１００ｍｇ／ｋｇ  ｑｄまたは２００ｍｇ／ｋｇ  ｑｄまたはｑｏｄなどのより高い投与量は、生存率を改善せず、５０ｍｇ／ｋｇのｑｄまたはｑｏｄの投与量も同様に改善しなかった。
【００９０】
実施例Ｉで上記したように、デフェリプロンの効力を、ムコール症の一般的な治療である高投与量ＬＡｍＢとも比較した。毎日投与されるＬＡｍＢの１５ｍｇ／ｋｇの投与量を選択したが、これは、我々が、この投与量は我々のＤＫＡマウスモデルにおいて１ｍｇ／ｋｇのアンホテリシンＢデオキシコール酸塩よりも保護することを実証したからである。さらに、デフェリプロンの保護のメカニズムが鉄のキレート化であったことを確認するため、デフェリプロンおよび飽和投与量（６０ｍｇ／ｋｇ）のＦｅＣｌ３の形態の遊離鉄の効力もまた評価した。デフェリプロンを動物に与えるたびに、ＦｅＣｌ３を毎回静脈内投与した。
【００９１】
ＬＡｍＢまたは１００ｍｇ／ｋｇ  ｑｏｄのデフェリプロンは、プラセボと比較して、生存率を２８日改善した（図１、Ｐ＜０．００３、ＬＡｍＢまたはデフェリプロン対プラセボのログランク検定による）。デフェリプロンで処置したマウスに対するＬＡｍＢで処置したマウスの生存率における統計的有意差はなかった（Ｐ＝０．１５）。デフェリプロンの効力は、塩化第二鉄の投与により完全に抑止された（図１）。
【００９２】
さらなる研究では、実験的ムコール症のＤｅｆとＬＡｍＢとの併用療法もまた評価した。簡便には、マウス（感染未処置およびＤｅｆについてｎ＝１１、ならびにＬＡｍＢおよびＤｅｆ＋ＬＡｍＢについてｎ＝６）をＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅに感染させ、次いで、２４時間後、Ｄｅｆ、ＬＡｍＢまたは両方の薬物の組み合わせで、合計４回の投与で処置した。結果を図４に示すが、これは両方の処置の組み合わせを用いて増強した効力を示す。（＊感染未処置マウスと比較してｐ＜０．００５）。
【００９３】
同様に、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅに感染しかつＤｅｆ、ＬＡｍＢまたは両方で予防した好中球減少性マウスの生存率もまた評価した。マウス（ｎ＝９）を、第１日目に、Ｄｅｆ  ｑｏｄ、ＬＡｍＢ  ｑｄまたは両方で、合計４回の投与量で処置した。これらの結果を図５に示すが、これらはまた、鉄キレートと併用した抗真菌療法の組み合わせを用いて増強した効力も示す。（＊感染未処置に対するＬＡｍＢまたはＬＡｍＢ＋Ｄｅｆについてｐ＜０．０５）。例えば、プラセボ処置したマウスにおける０％の生存率に対して、予防的Ｄｅｆは２２％の生存率を結果として生じる（ｐ＞０．０５）；ＬＡｍＢおよびＬＡｍＢ＋Ｄｅｆのいずれも、１００％の生存率を結果として生じる（両方について対プラセボｐ＜０．０５）。
【００９４】
脳はこの動物モデルの一次標的臓器であるので、効力のさらなるマーカーとして、デフェリプロン療法が脳真菌負荷に及ぼす影響もまた評価した。マウスを３．８×１０３個の胞子に感染させ、次いで、ＬＡｍＢ（毎日）またはデフェリプロン（隔日）での２回の投与により処置した。上記研究において、コントロールマウスは、第２の投与量のデフェリプロンが投与される前に死亡し始めた。組織の真菌負荷を測定する前のデフェリプロンの少なくとも２回の隔日での投与の試験を可能にするため、本研究では、デフェリプロンを、感染の３０分および４８時間後に投与し、一方、ＬＡｍＢは、感染の２４時間および４８時間後に与えた。脳を感染の約５４時間後に回収した。結果を図６に示すが、いずれの薬物もプラセボと比較して脳真菌負荷を減少させることを示す（Ｐ≦０．０３６）。
【００９５】
上記結果は、Ｄｅｆ鉄キレート療法が実験的マウスのムコール症を治療するのに有効であり、例えば、好中球減少性の設定において予防的効力を有し得ることを示す。特に、ＤｅｆはインビトロでＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅの増殖を抑制したが、デフェロキサミン投与は抑制しなかった。Ｄｅｆは、ＤＫＡモデルのムコール症の治療においてかなりの効力を有し、この効力は、ＬＡｍＢの高投与量療法に匹敵する。Ｄｅｆの効力は、おそらく、鉄をキレート化する能力によるものと思われるが、これは、遊離鉄がその保護を無効にするからである。Ｄｅｆ予防法は、ムコール症の好中球減少性マウスモデルにおいて保護効果を拮抗しないように思われた。
【００９６】
（実施例ＩＩＩ）
ムコール症の治療的処置のためのデフェラシロクス投与
本実施例は、脳型ムコール症のサルベージ療法としての鉄キレート薬であるデフェラシロクスの使用を示す。
【００９７】
デフェラシロクス（Ｅｘｊａｄｅ（登録商標））は、新規な、第１級の、経口的に利用可能な鉄キレート剤であって、最近、米国（ＵＳ）食品医薬品局（ＦＤＡ）により、輸血依存的貧血における鉄過剰の治療用に承認された。本研究は、最大の通常の抗真菌療法が効かない脳型ムコール症を有する脳型ムコール症患者のサルベージ療法としてのデフェラシロクスの使用を示す。
【００９８】
糖尿病性ケトアシドーシスを有する４０歳の男性が、多尿、多飲症、左眼球後疼痛および左脳神経（ＣＮ）Ｖｌ麻痺で外部の病院の救急部を受診した。頭部のコンピュータ断層撮影（ＣＴ）スキャンは、左楔形および篩骨洞炎のみを示した。患者は最初の２４時間で完全な左眼筋麻痺に進行した。脳型ムコール症が疑われ、彼はアンホテリシンＢ脂質複合体（ＡＢＬＣ）を５ｍｇ／ｋｇ／日を経験的抗菌薬と共に用いて、副鼻腔炎の治療を開始した。入院２日目、彼は内視鏡で蝶篩骨の探索を受けた。壊死組織または焼痂は見出されず、複数の組織診は非特異的な炎症を示した。真菌培養は陰性であり、特殊染色によって生物体は明らかにされなかった。細菌培養は、稀なエンテロバクター・アエロゲネスのみを増殖させた。
【００９９】
次の１２日間にわたり、患者は失明を発症し、かつ左眼の眼球突出が悪化した。彼はＡＢＬＣを続け、さらなる外科手術は行わなかった。眼窩および脳の連続的な磁気共鳴画像形成（ＭＲＩ）により、左側の汎副鼻腔炎の進行、ならびに左外眼筋の肥厚および異常な増強が明らかになった。
【０１００】
入院１４日目に、患者は、さらなる管理のため我々の施設に転送された。到着するとすぐに、彼は除核および広範な洞デブリードマンおよび切除による左眼窩の除去を受けた。手術中の知見には、外眼性筋の広範な周囲壊死を伴う虚血性眼球が含まれた。病理学的検体は、ケカビ目の証拠を示した（図７）；真菌培養は陰性であった。患者は、リポソームアンホテリシンＢ（ＬａｍＢ）１５ｍｇ／ｋｇ／日およびカスポファンギン７０ｍｇ／ｋｇ／日を開始した（ポリエン−エキノキャンディン相乗作用を実証する公開されたマウスのデータに基づく）。軌道除去の２日後に行った頭部ＣＴスキャンは、左海綿静脈洞血栓症を示した；この知見は、経過観察ＭＲＩで確認した。
【０１０１】
新しい神経学的知見は存在しなかったにもかかわらず、入院３６日目のＭＲＩは、左内部頚動脈に緩徐な流れを有する左海綿静脈洞血栓症の進行を示し、ＣＮＶの新たな増強は、進行性ムコール症と一致した。抗真菌療法を継続した。入院７１日目に、脳ＭＲＩは鞍上窩に新たな増強を示し、かつ、初めて、周囲に浮腫を有する橋に脳幹病変の発生を示した。橋の表在性側面における病変の位置を考慮して、１回投与量の窩内アンホテリシンが投与されたが、患者はさらなる投与を拒絶した。患者は臨床的におよび神経学的に不変のままであった。引き続く画像形成の安定化のため、彼は入院８６日目に退院し、外来でＬＡｍＢの単独療法を週３回続けた。
【０１０２】
彼の疾患は、数ヶ月にわたり、臨床でおよびＸ線検査で安定なままであった。腎不全の悪化のため（０．８のベースラインからＣｒ３．５〜４．０）、退院の１０週後、ＬＡｍＢの投与量を１０ｍｇ／ｋｇで週２回に減少させ、次いで、退院の４ヶ月後、徐々に週１回まで減少させた。１ヶ月後、繰り返しのＭＲＩは、左中央小脳脚の周囲の浮腫の新たな増強を示し、左小脳橋角は進行性疾患と一致した。
【０１０３】
実験的鉄キレート剤であるデフェリプロンからのデータ、およびマウスにおけるデフェラシロクスの未発表の知見に基づき、デフェラシロクスを１０００ｍｇｐｏの投与量で（経口で）毎日、７日間にわたって投与した。ＬＡｍＢを継続した。デフェラシロクス処置の最終日、患者は、躯幹および四肢に、予想される薬疹と一致する紅斑、わずかなそう痒、集密的斑点状丘疹の噴出を発症した。そう痒はジフェンヒドラミンで抑えた。他の有害事象は認められなかった。デフェラシロクスでの処置の１週間後の脳の反復ＭＲＩは、左小脳脚に浮腫の解像度を示した。５週間後の経過観察画像形成は、新たな病変を示さなかった。腎不全の悪化（Ｃｒ約５．５）、および反復画像形成におけるＸ線所見の安定性のために、ＬＡｍＢを中断した。初期診断の１０ヶ月後、患者は無症候かつ神経学的に無傷のままであった。
【０１０４】
ここに記載した患者は、最大耐容量のＬａｍＢでの７ヶ月の処置後に進行性ムコール症と一致する新しいＸ線所見を示したので、高度な外科手術および数ヶ月にわたる抗真菌療法にもかかわらず、明らかに後の浸潤性ムコール症は治癒しなかった。しかしながら、デフェラシロクスでの７日間の処置後、実質的なＸ線検査の改善が認められた。２ヶ月後、デフェラシロクスを投与し、全ての抗真菌療法を中断した。患者は、病状悪化の徴候がなく、その後、臨床的に無症候およびＸ線検査で安定のままであった。患者は、キレート剤に起因し得る軽微な薬物反応を除き、デフェラシロクスへの耐容性が良好であった。
【０１０５】
ここでは、我々は、適切な外科手術の著明な遅れの後に脳幹および海綿静脈洞が関与する進行ムコール症の症例を、デフェラシロクスをサルベージ療法に用いた後に明らかに成功した結果と共に記載した。デフェラシロクスでの処置の正確な効果は、同時に行われるポリエンでの処置により幾分混同させられる。しかしながら、患者は、デフェラシロクスを添加する前の非常に積極的なポリエンでの処置に明らかに失敗した。本症例の有望な結果、ならびに現在の抗真菌療法にもかかわらず、ムコール症の選択肢が限定されかつ予後不良であることを考慮すると、ムコール症の治療における鉄キレート化のさらなる研究が必要とされる。
【０１０６】
（実施例ＩＶ）
インビトロでデフェラシロクスがケカビ目に及ぼす効果
本実施例は、デフェラシロクスがＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅの高親和性鉄透過酵素遺伝子（ｒＦＴＲｌ）の発現に及ぼす効果を示す。本実施例はまた、ケカビ目の複数の臨床単離物のデフェラシロクス感受性を示す。
【０１０７】
以下は、本実施例および引き続く実施例に記載の手順で用いられる物質および方法を記載する。
【０１０８】
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅおよび培養条件
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ９９−８８０は、糖尿病患者の脳膿瘍由来の臨床単離物である。Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ９９−８９２は、臨床上の肺単離物である。Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅＭ１６は、化学的変異原性によりＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ９９−８８０から産生したｐｙｒＦヌル変異体である（ｐｙｒＦは、ウラシル合成に必要とされる酵素であるオロチジン５’リン酸脱炭酸酵素をコードする）。この変異体は、プレーティングが１×１０９個の胞子を超えても、ウラシル栄養素要求性に対して安定な表現型を示す。生物体を、ポテトデキストロースアガー（ＰＤＡ）［処方／リットル；馬鈴薯デンプン４ｇ、デキストロース２０ｇ、アガー１５ｇ］上で、３７℃にて４日間増殖させた。Ｍ１６については、ＰＤＡに１００μｇ／ｍｌのウラシルを追加した。いくつかの実験では、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅを、ウラシル（ＣＳＭ−ＵＲＡ）を含まない完全追加培地を追加した酵母窒素ベース（ＹＮＢ）（ＹＮＢ＋ＣＳＭ−ＵＲＡ）（Ｄｉｆｃｏ／Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ，Ｓｐａｒｋｓ，ＭＤ）上、１ｍＭのアスコルビン酸およびフェロジンの存在下で増殖させることにより、鉄不足にした（ＹＮＢ＋ＣＳＭ−ＵＲＡ）［処方／ｌ００ｍｌ、１．７ｇのＹＮＢ（アミノ酸非含有）、２０ｇのグルコース、０．７７ｇのＣＳＭ−ＵＲＡ］。胞子嚢胞子を、０．０１％Ｔｗｅｅｎ  ８０を含む内毒素非含有ＰＢＳ中で回収し、ＰＢＳで洗浄し、血球計数器で計数して、最終的な接種体を調製した。
【０１０９】
Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅの高親和性鉄透過酵素遺伝子（ｒＦＴＲｌ）の発現分析
コンフルエントＰＤＡプレートから取り出したＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ９９−８８０プラグを、ポテトデキストロースブロス中で、振盪しながら３７℃で一晩増殖させた。菌糸を無菌的に回収し、鉄キレート化を試験するための３５０μＭの塩化第二鉄（ｒＦＴＲｌの発現を抑制するため）、３５０μＭの塩化第二鉄および２ｍＭのデフェラシロクス、または添加したデフェラシロクスを過飽和させるための２ｍＭのデフェラシロクスおよび６ｍＭの塩化第二鉄を含む、新鮮なＰＤＢフラスコに移した。フラスコを３７℃で１時間、振盪しながらインキュベートした。菌糸を濾過により回収し、乳鉢および乳棒を用いて液体窒素内で粉砕した。全ＲＮＡを、ＲＮｅａｓｙ  Ｐｌａｂｔ  Ｍｉｎｉ（登録商標）キット（Ｑｉａｇｅｎ（登録商標））を用いて、ＲＬＣ緩衝液で抽出した。ＲＮＡを、ＳｕｐｅｒＳｃｒｉｐｔ（登録商標）Ｆｉｒｓｔ−Ｓｔｒａｎｄ  Ｓｙｈｔｈｅｓｉｓ  Ｓｙｓｔｅｍ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ（登録商標））を用いてオリゴ（ｄＴ）プライマーで逆転写し、第１らせんｃＤＮＡを作製した。産物を希釈し、ＰＣＲ法で用いて、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅおよび１８ｓｒＤＮＡ遺伝子のＦＴＲ１の発現を検出した。ＰＣＲプライマーの配列は以下の通りである：ｒＦＴＲｌについてＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅを増幅するためのセンスプライマー５’−ＴＣＡＧＡＧＡＡＧＧＡＣＴＴＧＡＡＧＣ−３’およびアンチセンスプライマー５’−ＴＡＡＧＴＡＧＣＣＧＴＡＴＴＧＴＴＣＣ−３’；ならびに１８ｓｒＤＮＡ遺伝子についてセンスプライマー５’−ＣＡＴＧＧＴＴＧＡＧＡＴＴＧＴＡＡＧＡＴＡＧ−３’およびアンチセンスプライマー５’−ＡＧＴＣＡＡＴＧＧＡＣＧＴＧＧＡＧＴＣ−３’。ＰＣＲ産物を、０．１μｇ／ｍｌの臭化エチジウムを含む２％アガロースゲル上で分離した。両方のプライマーセットは、４００ｂｐバンドを増幅するように設計された。
【０１１０】
緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）レポーターアッセイ
ｒＦＴＲｌ  ＯＲＦの１．５ｋｂ断片上流を、以下のプライマー対を用いてＰＣＲ増幅した：センスプライマー５’−ＧＣＴＣＴＡＧＡＴＣＡＧＴＣＴＣＡＡＣＡＣＣＡＴＣＡＡＴＴ−３’；およびアンチセンスプライマー５’−ＴＧＣＧＧＣＣＧＴＧＣＴＴＴＴＴＡＧＴＴＣＴＣＣＴＴＧＧＡ−３’。コントロールとして用いるため、恒常的に発現したアクチンプロモータを含む２．１ｋｂフラグメントもまた、以下のプライマー対を用いてＰＣＲ増幅した：センス５’ＧＣＴＣＴＡＧＡＴＧＧＴＡＴＴＡＴＣＧＡＴＴＴＡＧＡ−３’；およびアンチセンス：５’ＴＡＣＧＧＣＣＧＣＡＴＡＣＣＧＧＡＡＣＣＧＴＴＡＴＣＧ−３。増幅した断片を、プラスミドｐｙｒ２２５ｂ（３５）のＸｂａＩおよびＥａｇＩ部位に連結した。ＧＦＰを、ｐＧＦＰＢ２１−４３．３１（３６）、およびいずれかのプロモータのクローン下流から、いずれかのプロモータのプラスミド下流のＥａｇＩ−ＳａｃＩ部位へと増幅した。最終的に、ｐｙｒＦのＯＲＦを表す２．１ｋｂ断片およびその未変性のプロモータをプラスミドのＳｐｅＩ−ＣｌａＩ部位にクローン化して、選択マーカーとして供した。ｒＦＴＲｌｐまたはＡＣＴＩｐのいずれかにより駆動されるＧＦＰを含むプラスミドを、微粒子銃（Ｂｉｏｒａｄ（登録商標））によりＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅＭ１６に形質転換した。形質転換体を、照射後３７℃で５〜７日間増殖したＹＮＢ＋ＣＳＭ−ＵＲＡプレート上で選択した。次いで、単離物を、ウラシル非含有最少培地を含むプレート上で継代形質転換し、プレートを３７℃でインキュベートすることにより、ウラシル栄養素要求性について試験した。ウラシル陰性プレート上で選択した精製された形質転換体を、サザンブロット法により分析した。
【０１１１】
ｒＦＴＲｌｐおよびＡＣＴＩｐの発現を、鉄充満培地（すなわち、ＹＮＢ＋ＣＳＭ−ＵＲＡ）中または鉄不足条件（すなわち、２ｍＭデフェラシロクスを追加したＹＮＢ＋ＣＳＭ−ＵＲＡ）で増殖させた形質転換体において研究した。さらに、デフェラシロクスの効果を無効にするため、形質転換体を、２ｍＭデフェラシロクスを追加したＹＮＢ＋ＣＳＭ−ＵＲＡ中で増殖させ、６ｍＭの塩化第二鉄で過飽和させた。最終的に、空のプラスミドで形質転換したＭ１６（ＧＦＰを有しないｐｙｒ２２５ｂ−ｐｙｒＦ）を、ネガティブコントロールとして用いた。胞子（１×１０４／ｍｌ）を上記培地に播種し、３７℃で一晩インキュベートした。１滴の培養物をスライドに載せ、ＧＦＰの発現を、Ｌｅｉｃａ  ＤＭＲＸＥ共焦点顕微鏡で、４８８ｎｍの励起波長を用いて、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅで可視化した。さらに、各培養物からの１ｍｌの試料もまた用いて、４８８ｎｍで発光するアルゴンレーザを備えたＦＡＣＳＣａｌｉｂｅｒ（登録商標）（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ（登録商標））装置を用いて、蛍光放出を定量した。胞子を前方および側方散乱によりゲートし、ＦＬｌで蛍光測定した。
【０１１２】
感受性試験
最小発育阻止濃度（ＭＩＣ）および最小殺真菌濃度（ＭＦＣ）を、鉄不足にしたＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ胞子を用いて、Ｅｓｐｉｎｅｌ−Ｉｎｇｒｏｆｆの方法（Ｅｓｐｉｎｅｌ−Ｉｎｇｒｏｆｆ（２００１）、上述）により、デフェラシロクスについて測定した。殺菌性は、ＭＩＣとＭＦＣとの間の４倍以上の差であると定義した。
【０１１３】
治療計画
デフェラシロクス（Ｎｏｖａｒｔｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｂａｓｅｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎｄ）を、０．５％ヒドロキシプロピルセルロース（Ｋｌｕｃｅｌ）に懸濁し、１、３または１０ｍｇ／ｋｇを２回（毎日）または１日おきに（隔日）経口経管栄養により投与した。感染の２４時間後に処置を開始し、合計５回または７回の投与まで継続した。コントロール群を、希釈液、５％デキストロース水および０．５％Ｋｌｕｃｅｌで処置した。いくつかの実験では、飽和投与量の遊離鉄を、デフェラシロクスと共に投与した。デフェラシロクスは、鉄とデフェラシロクスとの比１：２で、第二鉄（３＋Ｆｅ）と分子複合体を形成することが知られている。塩化第二鉄（ＦｅＣｌ３、分子量１６２．２２ｇ／ｍｏｌ）およびデフェラシロクス（分子量３７３．４ｇ／ｍｏｌ）の既知の分子量に基づき、２．８ｍｇ／ｋｇの投与量のＦｅＣｌ３を計算した結果、１８ｇのマウスに与えられた１０ｍｇ／ｋｇの投与量のデフェラシロクスに対して、３＋Ｆｅが顕著に過剰であった：３＋Ｆｅのモル数＝（０．００２８ｇ／ｋｇ＊０．０１８ｋｇ［マウスの体重］／１６２．２２ｇ／ｍｏｌ）＝３×１０−７ｍｏｌ対デフェラシロクスのモル数＝（０．０１ｇ／ｋｇ＊０．０１８ｋｇ［マウスの体重］／３７３．４ｇ／ｍｏｌ）＝５×１０−７モル比＝１：１．７ｍｏｌの３＋Ｆｅ対デフェラシロクス、これは飽和の１：２比を達成するのに必要とされるよりも多い。５％デキストロース水で希釈したＬＡｍＢを、Ｇｉｌｅａｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ（登録商標）（Ｆｏｓｔｅｒ  Ｃｉｔｙ，ＣＡ）から入手し、１日あたり１５ｍｇ／ｋｇ（ｑｄ）の投与量で、尾静脈から４日間投与した。
【０１１４】
統計解析
ノンパラメトリックログランク検定を用いて、マウスの生存時間の差を決定した。組織真菌負荷、脾臓のリンパ球頻度および感染した器官における全器官のサイトカインの差を、Ｍａｎｎ  Ｗｈｉｔｎｅｙ  Ｕ検定により比較した。０．０５未満のＰ値を、有意であると考えた。
【０１１５】
鉄不足は、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ中の高親和性鉄透過酵素遺伝子（ｒＦＴＲｌ）の急速な発現を引き起こし、ムコール症の最も一般的な原因であることが示されている（Ｆｕら、ＦＥＭＳ  Ｍｉｃｏｒｂｉｏｌ．Ｌｅｔｔ．２３５：１６９−１７６（２００４））。従って、デフェラシロクスがＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅから効果的に鉄をキレート化することを確認するため、我々は、インビトロでのデフェラシロクスのＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅへの曝露がｒＦＴＲｌの発現に及ぼす影響を定義した。Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ９９−８８０胞子を、ＰＤＢ中で一晩インキュベートした。次の日、菌糸を、３５０μＭの塩化第二鉄（鉄充満）、３５０μＭの塩化第二鉄および２ｍＭのデフェラシロクス（鉄枯渇）、または２ｍＭのデフェラシロクスおよび６ｍＭの過飽和塩化第二鉄を追加したＰＤＢに移した。リボ核酸を、各条件で３７℃にて１時間増殖させた胞子から抽出し、逆転写ＰＣＲを行って遺伝子発現を評価した。ｒＦＴＲｌ遺伝子はデフェラシロクスの存在下で発現したが、塩化第二鉄を追加した培地中、またはデフェラシロクスおよび過飽和塩化第二鉄の存在下では発現しなかった（図８ａ）。
【０１１６】
キレート化条件下でのｒＦＴＲｌｐの発現およびｒＦＴＲｌのプロモータ活性を確認するため、緑色蛍光タンパク質（ＧＦＰ）をコードする遺伝子をｒＦＴＲ１プロモータによりクローン化した（図８ｂ）。ｒＦＴＲｌ：：ＧＦＰ構築物またはＡＣＴｌｐ：：ＧＦＰ（恒常的ポジティブコントロール）で形質転換したＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅＭ１６胞子を、デフェラシロクス、デフェラシロクスおよび過飽和塩化第二鉄、または鉄富化の培地（鉄充満）で一晩インキュベートした。図８ｃは、増殖条件に関わりなく恒常的に発現したＡＣＴｌプロモータの制御下のＧＦＰとは対照的に、ｒＦＴＲｌプロモータの制御下のＧＦＰは、鉄キレート化条件（デフェラシロクス）の存在下でのみ発現するかまたは活性であった。共焦点顕微法により明らかなように、恒常的ＡＣＴｌｐ：：ＧＦＰ構築物で形質転換されたＭ１６は、増殖条件に関係なく蛍光性であった。対照的に、ｒＦＴＲｌｐ：：ＧＦＰで形質転換したＭ１６は、デフェラシロクスの存在下でのみ蛍光性であった。同様に、フローサイトメトリにより、鉄充満条件で増殖された、形質転換されなかったまたはｒＦＴＲｌｐ：：ＧＦＰで形質転換された胞子の１％未満は蛍光性であった。対照的に、ｒＦＴＲｌｐ：：ＧＦＰで形質転換されかつデフェラシロクスの存在下で増殖された胞子の４３％は蛍光性であった。まとめると、これらのデータは、デフェラシロクスがＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅにおいて鉄不足応答を誘発したことを確認した。
【０１１７】
我々は、次に、ケカビ目の複数の臨床単離物のデフェラシロクス感受性を決定した（表３）。デフェラシロクスのケカビ、非オリゼＲｈｉｚｏｐｕｓ種およびＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅのＭＩＣ９０は、３．１２〜６．２５μｇ／ｍｌであった。ＭＦＣはＭＩＣと同様であり、デフェラシロクスは２９の単離物のうち２８（９７％）に殺菌性であった。注目すべきは、デフェラシロクスが極度に高濃度であっても、最初の２４時間以内に軽微な増殖が観察されたことである。しかしながら、菌類は、デフェラシロクスが低濃度であっても２４時間で死滅し、このことは、デフェラシロクスの殺菌性が、濃度依存的ではなく時間依存的であることを示唆する。さらに、これらの単離物に対するデフェラシロクスのＭＩＣおよびＭＦＣは、ＦＤＡに承認された開始投与量（２０ｍｇ／ｋｇ／日）で投与した場合、定常状態で薬物が臨床的に達成可能なピーク（約３８μｇ／ｍｌ）およびトラフ血清レベル（約１７μｇ／ｍｌ）よりずっと少なかった。
【０１１８】
本実施例は、デフェラシロクスがＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅにおいて鉄不足応答を誘発することの実証に加えて、デフェラシロクスがケカビ科の２つの異なる属由来の複数の臨床単離物について殺菌性であったことを示した。
【０１１９】
【表３】
2009543788.tif 000005
（実施例Ｖ）
インビボでのＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅに対するデフェラシロクスの効力
本実施例は、ケカビ目に感染したマウスの治療におけるデフェラシロクスのインビボでの効力を示す。
【０１２０】
以下は、本実施例および引き続く実施例に記載の手順で用いられる物質および方法を記載する。
【０１２１】
マウスモデル
インビボ感染のため、０．２ｍｌクエン酸緩衝液中の２１０ｍｇ／ｋｇのストレプトゾトシンを、真菌負荷の１０日前に単回で腹腔内注射することにより、ＢＡＬＢ／ｃ雄性マウス（＞２０ｇ）を糖尿病にした。ストレプトゾトシン処置の７日後、全てのマウスで、糖尿およびケトン尿を確認した。好中球減少性マウスモデルについては、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅへの感染の２日前に、２００ｍｇ／ｋｇのシクロホスファミド（Ｂｒｉｓｔｏｌ  Ｍｙｅｒ  Ｓｑｕｉｂｂ）の単回の腹腔内投与量をマウスに注射した。この治療計画は、感染に対して第２日〜第５日に汎血球減少症を結果として生じたが、細胞数の回復は感染後第６日目に回復した。マウスを、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅを尾静脈から適切に接種することにより感染させた。接種を確認するため、０．１％トリトンを含むＰＤＡプレート上に希釈物で線を引き、３７℃での２４時間のインキュベーション期間後、コロニーを計数した。一次効力の終点は、死亡した時間であった。二次終点としては、脳の真菌負荷（一次標的臓器）を、１ｍｌの生理食塩水を含むＷｈｉｒｌ−Ｐａｋ（登録商標）バッグ（Ｎａｓｃｏ，Ｆｏｒｔ  Ａｔｋｉｎｓｏｎ，ＷＩ）に入れた器官上でピペットを回転することによってホモジナイズすることにより、決定した。ホモジネートを０．８５％生理食塩水中で連続的に希釈し、次いでＰＤＡ上で定量的に培養した。値をｌｏｇ１０  ｃｆｕ  ｇ−１組織として表した。最終的に、病理組織学的分析のため、感染した器官をマウスから回収し、１０％亜鉛ホルマリン中で固定した。固定された組織を、パラフィン中に包埋し、光学顕微法検査のために５ｍｍの切片をヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。マウスに関連する全ての手順は、動物の飼育および世話に関する米国国立保健研究所の指針に従って、研究機関における動物の利用と世話に関する委員会により承認された。
【０１２２】
デフェラシロクスのインビトロ活性がインビボでの効力に変わるかどうかを決定するため、我々は、我々の播種性ムコール症のマウスモデルを糖尿病性ケトアシドーシスマウスに利用した。糖尿病性ケトアシドーシスマウスを、尾静脈経由で、２．２×１０４個のＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ９９−８９２の胞子に感染させた。マウスを、０．５％ヒドロキシプロピルセルロース（Ｋｌｕｃｅｌ）中１、３または１０ｍｇ／ｋｇのデフェラシロクスの経口経管栄養で、毎日２回（ｂｉｄ）、感染後の日から開始して７日間処置した。ネガティブコントロールマウスを、ヒドロキシプロピルセルロースキャリア（プラセボ）またはデフェラシロクスおよび飽和塩化第二鉄（皮下投与）で処置した。さらなるネガティブコントロールは、塩化第二鉄で処置した非感染マウスからなった。１、３または１０ｍｇ／ｋｇ  ｂｉｄのデフェラシロクスは、コントロールと比較して生存率を有意に改善した（図９ａ）。
【０１２３】
別の実験において、デフェラシロクスは、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅの第２の臨床単離物である９９−８８０単離物に対して有効であることが見出された。糖尿病性ケトアシドーシスマウスを、尾静脈経由で、より病原性が高いＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ９９−８８０の胞子１．３×１０３個に感染させ、１０ｍｇ／ｋｇ  ｂｉｄのデフェラシロクスまたはプラセボで７日間、上記のように処置した。デフェラシロクスは、プラセボと比較して、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅに感染したマウスの死亡の時間を有意に改善した（図９ｂ）。
【０１２４】
デフェラシロクスが組織真菌負荷に及ぼす影響を決定するため、糖尿病性ケトアシドーシスマウスを、尾静脈経由で、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ９９−８９２の胞子４．２×１０４個に感染させた。マウスを、デフェラシロクス（１０ｍｇ／ｋｇ  ｂｉｄ）、デフェラシロクスおよび飽和塩化第二鉄、またはプラセボで処置した。処置は感染の１６時間後に開始し、毎日３日間にわたって投与した。第４日目に腎臓および脳を取り出し、ホモジナイズし、定量的に培養した。デフェラシロクスは、プラセボまたはデフェラシロクスおよび飽和塩化第二鉄で処置したマウスと比較して、脳および腎臓の両方（一次標的臓器）で真菌負荷が１０倍超減少する結果となった（図１０ａ）。病理組織学では、デフェラシロクスで処置したマウスの腎臓は、可視的な菌糸（図１０ｂ中、矢印で示す）を有しなかったが、一方、プラセボまたはデフェラシロクスおよび飽和塩化第二鉄で処置したマウスの腎臓は、広範なフィラメント化した菌類を有した。さらに、飽和鉄で処置したマウスは、感染部位への好中球流入の著しい非存在を有したが、一方、好中球流入は、デフェラシロクスで処置したマウスの腎臓において顕著であった（図１０ｂ）。
【０１２５】
デフェラシロクスの直接の抗真菌性効果を示すことに加えて、本実施例は、デフェラシロクスの保護効果が遊離鉄の投与により無効にされ得ることを実証するが、このことは、この薬剤の保護のメカニズムが鉄キレート化を介することを確認する。
【０１２６】
（実施例ＶＩ）
鉄キレート化および過剰の鉄が宿主免疫応答に及ぼす影響
本実施例は、デフェラシロクスならびにデフェラシロクスおよび塩化第二鉄が宿主免疫応答に及ぼす影響の比較を示す。
【０１２７】
以下は、本実施例および引き続く実施例に記載の手順で用いられる物質および方法を記載する。
【０１２８】
脾臓リンパ球頻度および全器官サイトカインアッセイ
脾臓リンパ球頻度を、我々が上記したとおりに測定した（Ｓｐｅｌｌｂｅｒｇら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．７１：５７５６−５７６４（２００３））。簡便には、脾臓のホモジネートを７０μｍフィルタに通し、その後、０．１５Ｍ塩化アンモニウムで赤血球溶解させた。細胞を、Ｃｙｔｏｐｅｒｍ（登録商標）緩衝液（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で透過可能にしたＣｙｔｏｆｉｘ（登録商標）緩衝液（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（登録商標））で固定化し、１０μｇ／ｍｌのＦＩＴＣ複合体化抗マウスＣＤ４（クローンＲＭ４−５）、ＰＥ複合体化抗マウスＩＦＮ−γ（クローンＸＭＧ１．２）またはアイソタイプコントロール（クローンＲ−３４）、アロフィコシアニン（ＡＰＣ）複合体化抗マウスＩＬ−４（クローン１１Ｂ１１）またはアイソタイプコントロール（クローンＲ３−３４）あるいはＡＰＣ複合体化抗マウスＩＬ−１０（クローンＪＥＳ５−１６Ｅ３）またはアイソタイプコントロール（クローンＡ９５−１）（全てＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎから）で染色した。別々の実験において、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ｆｏｘｐ３＋Ｔ調節細胞の頻度を、Ｍｏｕｓｅ  Ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ  Ｔ  ｃｅｌｌ  Ｓｔａｉｎｉｎｇ（登録商標）キット（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ（登録商標））を製造者の推奨に従って用いることにより測定した。アポトーシスの頻度は、Ａｎｎｅｘｉｎ  ＦＩＴＣ  Ａｐｏｐｔｏｓｉｓ（登録商標）キット（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ（登録商標））を用いて決定した。
【０１２９】
細胞を洗浄し、三色フローサイトメトリを、ＣａｌｉＢＲＩＴＥ（登録商標）ビーズ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）で校正したＢｅｃｔｏｎ−Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ  ＦＡＣＳｃａｎ（登録商標）機器で、ＦＡＣＳＣｏｍｐ（登録商標）ソフトウェアを製造者の推奨に従って用いることにより行った。データ獲得の間に、ＣＤ４＋リンパ球を前方および側方散乱の連続、ならびにＦＩＴＣ−抗−ＣＤ４抗体の蛍光によりゲートした。各試料についてのデータを、１０，０００個のＣＤ４およびリンパ球が分析されるまで獲得した。
全器官サイトカインアッセイ
脾臓および腎臓を、１ｍｌのＰＢＳ中でホモジナイズした。ホモジネートを、最大速度でテーブルトップ遠心分離機で４℃にてペレット化した。上清を、Ｃｙｔｏｍｅｔｒｉｃ  Ｂｅａｄ  Ａｒｒａｙ  Ｍｕｒｉｎｅ  Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ（登録商標）キット（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）を製造者の指示に従って用いて、サイトカインについてアッセイした。
【０１３０】
飽和塩化第二鉄対鉄キレートで処置したマウスの腎臓で観察される炎症性細胞の流入の変化のため、本実施例では、我々は、デフェラシロクス療法が感染マウスのＴｈｌ／Ｔｈ２および炎症性サイトカイン応答に及ぼす影響を決定した。糖尿病性ケトアシドーシスマウスを、上記のように３．１×１０４個のＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ９９−８９２の胞子に感染させ、デフェラシロクス、デフェラシロクスおよび塩化第二鉄、またはプラセボで処置した。感染４日目に、脾臓および腎臓を、細胞内および全器官のサイトカインを決定するために加工した。デフェラシロクスは、Ｔｈ１およびＴｈ２の脾細胞頻度の両方において、飽和塩化第二鉄またはプラセボで処置したマウスと比較して有意な増加を結果として生じた（図１１ａ）。ＣＤ４＋ＩＬ−１０＋またはＣＤ４＋ＣＤ２５＋ｆｏｘｐ３＋脾細胞の頻度は、群間で有意に異ならなかった（データは示さない）。脾細胞アポトーシスの群間での有意差はなかった（データは示さない）。
【０１３１】
デフェラシロクス処置マウスは、基準の炎症誘発性サイトカイン、ＴＮＦおよびＩＦＮ−γの脾臓レベルが、飽和鉄またはプラセボで処置したマウスよりも有意に高かった（図１１ｂ）。デフェラシロクスで処置したマウスはまた、ＩＦＮ−γの腎臓レベルが有意により高かった（図１１ｂ）。
【０１３２】
本研究は、デフェラシロクスが、糖尿病性ケトアシドーシスマウスにおける抑制された炎症反応を非特異的に刺激し、Ｔｈ１およびＴｈ２リンパ球の両方の頻度、ならびに脾臓および腎臓の炎症性サイトカインレベルを増加させたことを示す。さらに、超飽和鉄投与量の投与によるキレート化の無効化は、感染した腎臓で観察される好中球の数を減少させた。
【０１３３】
（実施例ＶＩＩ）
マウスのムコール症の治療上の処置のためにリポソームアンホテリシンＢと併用されるデフェラシロクス（Ｅｘｊａｄｅ（登録商標））
本実施例は、ムコール症の治療のための、鉄キレート剤デフェラシロクス（Ｅｘｊａｄｅ（登録商標））およびリポソームアンホテリシンＢ（ＬＡｍＢ）を用いる併用療法の効果を示す。
【０１３４】
上述したように、臨床および動物モデルデータは、上昇した利用可能な血清鉄の存在が、宿主をムコール症に罹患させることを示す。上記実施例で例示したように、デフェラシロクス鉄キレート療法は、ムコール症の最も一般的な原因であるＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅに感染した糖尿病性ケトアシドーシスマウスの生存率を改善することが実証された。補助的療法におけるデフェラシロクスの効力を実証するため、動物モデルマウスのムコール症の治療について、ＬＡｍＢと併用されるデフェラシロクスの効力を、いずれかの薬剤単独と比較した。
【０１３５】
方法、動物の手順および試薬は、上記のように行ったおよび／または調製した。簡便には、ストレプトゾトシン誘発ＤＫＡを有するＢＡＬＢ／ｃマウスを、尾静脈経由で２．０×１０３個のＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ胞子に感染させた。感染２４時間後に、以下を用いて処置を開始した：（１）ＬＡｍＢ（１５ｍｇ／ｋｇ静脈投与）の１日１回、４回の投与；（２）デフェラシロクス（１０ｍｇ／ｋｇ腹腔内投与）の１日２回、７回投与、または（３）上記投与量を用いる、ＬＡｍＢおよびデフェラシロクスの両方。プラセボマウスは、ビヒクルコントロールを投与された。終点は、死亡時およびコロニー形成単位（ＣＦＵ）であった。
【０１３６】
上記研究の結果を、図１２および１３に示す。図１２は、ムコール症の治療におけるデフェラシロクス単独およびＬＡｍＢ単独の単独療法の効力、ならびにデフェラシロクスおよびＬＡｍＢの併用療法の効力を示す。結果は、両方の単独療法が、プラセボに比較して生存率を改善したことを示す（デフェラシロクスおよびＬＡｍＢについてそれぞれ２５％および２８％生存率、およびプラセボについて０％、Ｐ＜０．００３）。併用療法は、全ての他のグループと比較して、感染したＤＫＡマウス（群当たりｎ＞１６）の生存時間および全生存率の両方を著明に改善した（併用療法について７０％の生存率、全ての比較についてログランク検定でＰ＜０．００８）。
【０１３７】
標的臓器に関するこれらの処置の結果を、図１３に示す。結果は、単独の薬剤のいずれも、プラセボと比較して脳のＣＦＵ（一次標的臓器）を減少させることができなかったことを示す。しかしながら、デフェラシロクスおよびＬＡｍＢの両方での併用療法は、全ての他のアームと比較して、脳のＣＦＵを２ｌｏｇ超減少させた（Ｐ＜０．０４）。ＬＡｍＢのみおよび併用療法は、プラセボ処置マウスと比較して、腎臓のＣＦＵ（二次的な標的臓器）を減少させ得た（Ｐ＜０．０１）。
【０１３８】
本研究は、鉄キレート療法および高投与量のＬＡｍＢが、ＤＫＡにおける実験的ムコール症の治療に等しく効果的であり得ることを示す。ＬＡｍＢおよびデフェラシロクスでの併用療法は、いずれかの薬剤単独よりも効果的であった。これらのデータは、さらに、ムコール感染症の治療における、アンホテリシンＢの脂質製剤を用いた補助的療法としてのデフェラシロクスなどの鉄キレート化の使用の治療上の有効性を実証する。上記結果はさらに、動物モデルのムコール症の治療において、鉄キレート剤デフェラシロクス（Ｅｘｊａｄｅ（登録商標））とリポソームアンホテリシンＢとを併用した場合、結果として相乗効果を生じることを示す。
【０１３９】
（実施例ＶＩＩＩ）
好中球減少性感染マウスにおけるデフェラシロクスの効力
本実施例は、Ｒｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅに感染した好中球減少性マウスの治療におけるデフェラシロクスの効力を示す。
【０１４０】
デフェラシロクスが好中球減少の設定にもまた有効であるかどうかを決定するため、マウスをシクロホスファミドで骨髄除去した。２日後、マウスを尾静脈経由で２．７×１０３個のＲｈｉｚｏｐｕｓ  ｏｒｙｚａｅ９９−８９２胞子に感染させた。初期の投与量応答の研究は、我々が鉄キレート剤デフェリプロンについて上記したように、糖尿病性ケトアシドーシスモデルとは対照的に、至適な結果が毎日ではなく隔日のデフェラシロクスの投与により達成されたことを示唆した（データは示さない）。デフェラシロクス（感染２４時間後から開始して、２回の１０ｍｇ／ｋｇを隔日で５回投与）での処置は、プラセボと比較して、死亡時間を有意に改善した（図１４）。対照的に、毎日２回投与されたデフェラシロクスは、プラセボと比較して、死亡時間を有意に改善しなかった。
【０１４１】
この研究は、好中球減少性マウスにおけるデフェラシロクスの最大効力は、糖尿病性ケトアシドーシスマウスモデルにおける頻度よりも少ない頻度の投与を必要とし、かつ、デフェラシロクスは、好中球減少性マウスよりも糖尿病性ケトアシドーシスマウスモデルにおいて幾分より効果的であるように思われることを示す。
【０１４２】
（実施例ＩＸ）
好中球減少性マウスにおけるデフェラシロクスの特異的毒性の評価
本実施例は、デフェラシロクスの毎日の投与で処置した好中球減少性マウスにおける毒性評価の結果を示す。
【０１４３】
以下は、本実施例に記載の手順で用いられる物質および方法を記載する。
【０１４４】
デフェラシロクスの毒性の研究
好中球減少性マウスにおけるデフェラシロクスの毒性を評価した。マウスを上記のように好中球減少性にし、デフェラシロクス１０ｍｇ／ｋｇ２回で毎日または隔日、７日間処置した。３つの異なる群（すなわち、プラセボ、デフェラシロクスでの毎日の処置およびデフェラシロクスでの隔日の処置）からのマウスを第３日目または８日目に犠牲にし、血液を回収し、評価のためにＣｈａｒｌｅｓ  Ｌｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓに送付した。さらに、骨髄スメアを大腿骨から調製し、組織を回収し、亜鉛緩衝ホルマリン中に保存し、パラフィンに包埋し、５μｍに切断し、ヘマトキシリンおよびエオシンで染色した。得られたスライドは、Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｌｉｖｅｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓの認定された獣医学病理学者により検討された。
【０１４５】
好中球減少性モデルでは隔日でのデフェラシロクスの投与が至適であったので、我々は、好中球減少性マウスにおいてデフェラシロクスの毎日の投与により引き起こされる潜在的な毒性を同定することを試みた。マウスをシクロホスファミドを用いて上記のように好中球減少性にしたが、感染させなかった。マウスを、デフェラシロクス１０ｍｇ／ｋｇで毎日２回、７日間にわたって、１０ｍｇ／ｋｇ２回の隔日での４回の投与、またはプラセボで処置した。第３日目または第８日目に末端放血を行い、全血球数、血清化学および肝機能検査を測定した。病理組織学を、広範な器官のリスト（脳、心臓、肺、肝臓、胆嚢、脾臓、腎臓、胃腸管（胃、小腸および大腸を含む）および骨髄（両スメアおよび核心）を含む）について行った。白血球数、好中球絶対数、血小板数、ヘモグロビンレベル、血清化学（クレアチニン、血中尿素窒素，または電解質を含む）または肝機能検査（ＡＳＴ、ＡＬＴまたはビリルビンを含む）においては、いずれの時点でも、３つの群間での差異は認められなかった。病理組織学によれば、デフェラシロクスに起因し得る臓器特異的毒性は同定されず、造血の変化の証拠は含まれなかった。特に、化学療法による骨髄切除の増悪または骨髄切除から遅延した回復の証拠はなく、臨床検査による腎障害または肝障害のいかなる証拠もなく、また、病理組織学的評価によるいかなる特定の器官毒性もなかった。
【０１４６】
本研究は、毒性の証拠が見出されなかったので、好中球減少性マウスにおけるデフェラシロクスの毎日の投与で活性が減少したことが、このようなマウスにおけるデフェラシロクスの有毒な効果に起因し得ないであろうことを示す。
【０１４７】
本出願を通して、多様な刊行物が括弧内で参照されてきた。本発明が属する技術水準をより十分に説明するため、これらの刊行物の開示は、その全体が本出願で参照として本明細書中で援用される。
【０１４８】
本発明を、開示された実施態様を参照しながら説明してきたが、当業者は、上記に詳細に説明した具体的実施例および研究が本発明の例示にすぎないことを容易に理解するであろう。多様な改変が、本発明の趣旨から逸脱することなくなされ得ることが理解されるべきである。従って、本発明は、以下の特許請求の範囲によってのみ限定される。
【図１】
2009543788.tif 000006
【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
2009543788.tif 000014
【図１０】
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【図１１】
2009543788.tif 000016
【図１２】
2009543788.tif 000017
【図１３】
2009543788.tif 000018
【図１４】
2009543788.tif 000019
【手続補正書】
【提出日】平成21年3月30日(2009.3.30)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】追加
【補正の内容】
【配列表】
2009543788000001.app
【国際調査報告】
2009543788.tif 000020
2009543788.tif 000021
2009543788.tif 000022
2009543788.tif 000023
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