(57)【要約】  本発明は、2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルの新規な薬学的に許容しうる塩、それらの製造方法、上記塩を含有する医薬製剤、及び治療における上記活性塩の使用、そして特にGSK3関連障害に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
メシレート、エシレート、エジシル酸塩、リン酸塩、フマル酸塩又はマレイン酸塩である、式(Ｉ)
【化１】
2009528344.tif 000003
の化合物の薬学的に許容しうる塩。
【請求項２】
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル メシレートである、請求項１に記載の薬学的に許容しうる塩。
【請求項３】
Ｘ線粉末回折により12.7(vs)、6.4(s)、4.53(m)、4.09(s)及び3.33(s)Åのｄ値及び相対強度を特徴とする、請求項２に記載の塩。
【請求項４】
実質的に結晶形態である、請求項１〜３のいずれか１項に記載の塩。
【請求項５】
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル エシレートである、請求項１に記載の薬学的に許容しうる塩。
【請求項６】
Ｘ線粉末回折により12.6(s)、6.3(m)、4.47(m)、4.16(s)、4.12(s)、及び3.41(s)Åのd値及び相対強度を特徴とする、請求項５に記載の塩。
【請求項７】
実質的に結晶形態である、請求項１、５、６のいずれか１項に記載の塩。
【請求項８】
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル エジシル酸塩である、請求項１に記載の薬学的に許容しうる塩。
【請求項９】
Ｘ線粉末回折により15.3(s)、11.3(m)、5.6(s)、4.32(s)、4.12(s)及び4.08(s)Åのｄ値及び相対強度を特徴とする、請求項８に記載の塩。
【請求項１０】
実質的に結晶形態である、請求項１、８、９のいずれか１項に記載の塩。
【請求項１１】
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル リン酸塩である、請求項１に記載の薬学的に許容しうる塩。
【請求項１２】
Ｘ線粉末回折により15.2(m)、7.6(w)、5.1(w)及び4.12(vw)Åのｄ値及び相対強度を特徴とする、請求項１１に記載の塩。
【請求項１３】
実質的に結晶形態である、請求項１、１１、１２のいずれか１項に記載の塩。
【請求項１４】
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル フマル酸塩である、請求項１に記載の薬学的に許容しうる塩。
【請求項１５】
Ｘ線粉末回折により16.5(m)、13.1(m)、12.7(m)、6.8(m)及び3.26(s)Åのｄ値及び相対強度を特徴とする、請求項１４に記載の塩。
【請求項１６】
実質的に結晶形態である、請求項１、１４、１５のいずれか１項に記載の塩。
【請求項１７】
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル マレイン酸塩である、請求項１に記載の薬学的に許容しうる塩。
【請求項１８】
Ｘ線粉末回折により12.7(s)、6.8(s)、6.1(m)、4.58(s)及び3.05(m)Åのｄ値及び相対強度を特徴とする、請求項１７に記載の塩。
【請求項１９】
実質的に結晶形態である、請求項１、１７、１８のいずれか１項に記載の塩。
【請求項２０】
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルを溶媒中でメタンスルホン酸と反応させることからなる、請求項１〜４のいずれか１項に記載の、2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル メシレートを製造する方法。
【請求項２１】
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルを溶媒中でエタンスルホン酸と反応させることからなる、請求項１、５〜７のいずれか１項に記載の2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル エシレートを製造する方法。
【請求項２２】
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルを、溶媒中で1,2−エタンジスルホン酸と反応させることからなる、請求項１、８〜１０のいずれか１項に記載の2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル エジシル酸塩を製造する方法。
【請求項２３】
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルを溶媒中でｏ−リン酸と反応させることからなる、請求項１、１１〜１３のいずれか１項に記載の2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル リン酸塩を製造する方法。
【請求項２４】
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルを溶媒中にてフマル酸と反応させることからなる、請求項１、１４〜１６のいずれか１項に記載の2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル フマル酸塩を製造する方法。
【請求項２５】
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルを溶媒中でマレイン酸と反応させることからなる、請求項１７〜１９のいずれか１項に記載の2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル マレイン酸塩を製造する方法。
【請求項２６】
使用される溶媒が、エーテル類、アルコール類、ケトン類、酢酸エステル類若しくは有機酸、若しくは水、又はこれらの混合物を含む群より選択される、請求項２０〜２５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項２７】
溶媒が、1,4−ジオキサン、ジエチルエーテル、メタノール、エタノール、プロパノール、アセトン、イソブチルメチルケトン、酢酸エチル、酢酸ブチル、酢酸、水、又はこれらの混合物である、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
溶媒が、エタノール、水又はエタノールと水との混合物である、請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
−５℃と＋100℃との間の温度範囲で行われる、請求項２０〜２８のいずれか１項に記載の方法。
【請求項３０】
活性成分として治療有効量の請求項１〜１９のいずれか１項に記載の塩を、場合により希釈剤、賦形剤又は不活性担体と共に含む、医薬製剤。
【請求項３１】
治療における使用のための、請求項１〜１９のいずれか１項に規定される塩。
【請求項３２】
グリコーゲン合成酵素キナーゼ−３に関連する状態の予防及び／又は処置のための医薬の製造における、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の塩の使用。
【請求項３３】
認知障害の予防及び／又は処置のための医薬の製造における、請求項１〜１９のいずれか１項に規定される塩の使用。
【請求項３４】
認知障害が、痴呆、統合失調症における認知的欠陥(CDS)、軽度認知機能障害(MCI)、加齢に伴う記憶障害(AAMI)、加齢性認知機能低下(ARCD)又は痴呆のない認知機能障害(CIND)である、請求項３３に記載の使用。
【請求項３５】
疾患が統合失調症における認知的欠陥である、請求項３４に記載の使用。
【請求項３６】
痴呆が神経細線維もつれ病理に関連する、請求項３４に記載の使用。
【請求項３７】
痴呆が、前頭側頭型痴呆(FTD)、前頭側頭型痴呆パーキンソン型(FTDP)、進行性核上性麻痺(PSP)、ピック病、ニーマン−ピック病、皮質基底核変性、外傷性脳損傷(TBI)又はボクサー痴呆である、請求項３４に記載の使用。
【請求項３８】
痴呆が、アルツハイマー病(AD)、ダウン症候群、血管性痴呆、パーキンソン病(PD)、脳炎後パーキンソン症候群、レヴィー体を伴う痴呆、HIV痴呆、ハンティングトン病、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、運動ニューロン疾患(MND)、クロイツフェルト・ヤコブ病又はプリオン病である、請求項３４に記載の使用。
【請求項３９】
疾患がアルツハイマー病である、請求項３８に記載の使用。
【請求項４０】
アルツハイマー病の疾患増悪の遅延における使用である、請求項３９に記載の使用。
【請求項４１】
注意欠陥障害(ADD)、注意欠陥過活動性障害(ADHD)又は情動障害の予防及び／又は処置のための医薬の製造における、請求項１〜１９のいずれか１項に規定される塩の使用。
【請求項４２】
情動障害が、躁的興奮、双極性うつ病、双極性維持を含む双極性障害、抑うつ、大うつ病、気分安定を含む大うつ病性障害(MDD)、統合失調症を含む統合失調性感情障害、又は気分変調である、請求項４１に記載の使用。
【請求項４３】
Ｉ型糖尿病、II型糖尿病、糖尿病性ニューロパシー、脱毛又は炎症性疾患の予防及び／又は処置のための医薬の製造における、請求項１〜１９のいずれか１項に規定される化合物の使用。
【請求項４４】
哺乳動物における骨関連障害又は状態の予防及び／又は処置のための医薬の製造における、請求項１〜１９のいずれか１項に規定される化合物の使用。
【請求項４５】
哺乳動物における骨粗しょう症の予防及び／又は処置のための医薬の製造における、請求項１〜１９のいずれか１項に規定される化合物の使用。
【請求項４６】
哺乳動物における骨形成を増大させるための医薬の製造における、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項４７】
哺乳動物における海綿質骨形成及び／又は新骨形成を増大させるための医薬の製造における、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項４８】
哺乳動物における、骨ミネラル濃度を増大させるための医薬の製造における、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項４９】
哺乳動物における骨折の発生率を低減するための医薬の製造における、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項５０】
哺乳動物における骨折治癒を増進するための医薬の製造における、請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物の使用。
【請求項５１】
哺乳動物がヒトである、請求項４４〜５０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５２】
哺乳動物が動物である、請求項４４〜５０のいずれか１項に記載の使用。
【請求項５３】
グリコーゲン合成酵素キナーゼ−３に関連する状態の予防及び／又は処置の方法であって、該予防及び／又は処置を必要とする、ヒトを含む哺乳動物に、治療有効量の請求項１〜１９のいずれか１項に規定される塩を投与することからなる、方法。
【請求項５４】
認知障害の予防及び／又は処置の方法であって、該予防及び／又は処置を必要とする、ヒトを含む哺乳動物に、治療有効量の請求項１〜１９のいずれか１項に規定される塩を投与することからなる、方法。
【請求項５５】
認知障害が、痴呆、統合失調症における認知的欠陥(CDS)、軽度認知機能障害(MCI)、加齢に伴う記憶障害(AAMI)、加齢性認知機能低下(ARCD)又は痴呆のない認知機能障害(CIND)である、請求項５４に記載の方法。
【請求項５６】
疾患が統合失調症における認知的欠陥である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５７】
痴呆が、神経細線維もつれ病理に関連する、請求項５５に記載の方法。
【請求項５８】
痴呆が、前頭側頭型痴呆(FTD)、前頭側頭型痴呆パーキンソン型(FTDP)、進行性核上性麻痺(PSP)、ピック病、ニーマン−ピック病、皮質基底核変性、外傷性脳損傷(TBI)又はボクサー痴呆である、請求項５５に記載の方法。
【請求項５９】
痴呆が、アルツハイマー病(AD)、ダウン症候群、血管性痴呆、パーキンソン病(PD)、脳炎後パーキンソン症候群、レヴィー体を伴う痴呆、HIV痴呆、ハンティングトン病、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、運動ニューロン疾患(MND、クロイツフェルト・ヤコブ病又はプリオン病である、請求項５５に記載の方法。
【請求項６０】
疾患がアルツハイマー病である、請求項５９に記載の方法。
【請求項６１】
処置が、アルツハイマー病の疾患進行の遅延における処置である、請求項６０に記載の方法。
【請求項６２】
注意欠陥障害(ADD)、注意欠陥過活動性障害(ADHD)又は情動障害の予防及び／又は処置の方法であって、該予防及び／又は処置を必要とする、ヒトを含む哺乳動物に、治療有効量の請求項１〜１９のいずれか１項に規定される塩を投与することからなる、方法。
【請求項６３】
情動障害が、躁的興奮、双極性うつ病、双極性維持を含む双極性障害、抑うつ、大うつ病、気分安定化を含む大うつ病性障害(MDD)、統合失調症を含む統合失調性感情障害、又は気分変調である、請求項６２に記載の方法。
【請求項６４】
Ｉ型糖尿病、II型糖尿病、糖尿病性ニューロパシー、脱毛又は炎症性疾患の予防及び／又は処置の方法であって、該予防及び／又は処置を必要とする、ヒトを含む哺乳動物に、治療有効量の請求項１〜１９のいずれか１項に規定される塩を投与することからなる、方法。
【請求項６５】
骨関連障害又は状態の予防及び／又は処置の方法であって、該予防及び／又は処置を必要とする、ヒトを含む哺乳動物に、治療有効量の請求項１〜１９のいずれか１項に規定される塩を投与することからなる、方法。
【請求項６６】
骨粗しょう症の予防及び／又は処置の方法であって、該予防及び／又は処置を必要とする哺乳動物に、治療有効量の請求項１〜１９のいずれか1項に記載の化合物を投与することからなる、方法。
【請求項６７】
骨形成を増大させる方法であって、その予防及び／又は処置を必要とする哺乳動物に、治療有効量の請求項１〜１９のいずれか1項に記載の化合物を投与することからなる、方法。
【請求項６８】
海綿質骨形成及び／又は新骨形成を増大させる方法であって、その予防及び／又は処置を必要とする哺乳動物に、治療有効量の請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物を投与することからなる、方法。
【請求項６９】
骨ミネラル濃度を増大させる方法であって、その予防及び／又は処置を必要とする哺乳動物に、治療有効量の請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物を投与することからなる、方法。
【請求項７０】
骨折の発生率を低減する方法であって、その予防及び／又は処置を必要とする哺乳動物に、治療有効量の請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物を投与することからなる、方法。
【請求項７１】
骨折治癒を増進する方法であってその予防及び／又は処置を必要とする哺乳動物に、治療有効量の請求項１〜１９のいずれか１項に記載の化合物を投与することからなる、方法。
【請求項７２】
哺乳動物がヒトである、請求項５３〜７１のいずれか１項に記載の方法。
【請求項７３】
哺乳動物が動物である、請求項５３〜７１のいずれか１項に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルの新規な薬学的に許容しうる塩、それらの製造方法、上記塩を含有する医薬製剤及び上記活性塩の治療における使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
その遊離塩基及び塩酸塩としての2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルは、WO 03/082853に記載されている。この化合物は、GSK3に対する阻害作用を示すことによる薬理活性を有するので有用である(WO 03/082853)。この化合物は、アルツハイマー病、痴呆、慢性及び急性の神経変性疾患、双極性障害、統合失調症、糖尿病、脱毛、骨関連障害並びにWO 03/082853（これは参照により本明細書に加入される）に記載される列挙された全ての障害を処置するために使用され得る。
【０００３】
グリコーゲン合成酵素キナーゼ３ (GSK3)は、二つのアイソフォーム（αおよびβ）から構成されるセリン／トレオニンタンパク質キナーゼであり、これらは異なる遺伝子によりコードされるが、触媒ドメイン内で高度に相同性である。GSK3は中枢および抹消神経系で高度に発現される。GSK3は、タウ、β−カテニン、グリコーゲン合成酵素、ピルビン酸脱水素酵素および延長開始因子２ｂ（eIF2b）を含む幾つかの基質をリン酸化する。インスリンおよび成長因子はプロテインキナーゼＢを活性化し、これはGSK3をセリン９残基上でリン酸化し、それを不活性化する。
【０００４】
アルツハイマー病（ＡＤ）痴呆およびタウパシー（taupathies）
ＡＤは、認知機能低下、コリン作動性機能不全（cholinergic dysfunction）および神経細胞死、神経原線維のもつれ、並びにアミロイド−β沈着からなる老人斑を特徴とする。ＡＤにおけるこれらの事象の順序は不明であるが、関連していると考えられている。グリコーゲン合成酵素キナーゼ３β（GSK3β）またはタウリン酸化キナーゼは、ＡＤ脳内の過剰リン酸化された部位で、ニューロン中の微小管結合タンパク質タウを選択的にリン酸化する。過剰リン酸化されたタウは微小管に対して低い親和性を有し、そして対となったらせんフィラメントとして蓄積し、これらはＡＤ脳内の神経原線維のもつれおよびニューロピルスレッド（neuropil threads）を構成する主成分である。これは、軸索の溯行変性（dying back）および神経炎性ジストロフィーをもたらす微小管の解重合を生じる。神経原線維のもつれは、ＡＤ、筋萎縮性側索硬化症、グアム（Gaum）のパーキンソン症候群−痴呆、皮質基底核変性、ボクサー痴呆および頭部外傷、ダウン症候群、脳炎後（postencephalatic）パーキンソン症候群、進行性核上性麻痺、ニーマン−ピック病およびピック病のような疾患に一貫して見られる。海馬初代培養物にアミロイド−βを添加すると、GSK3β活性の誘導を介してタウの過剰リン酸化および対となったらせんフィラメント様状態が生じ、次いで軸索輸送の途絶および神経細胞死を引き起こす(Imahori及びUchida., J. Biochem 121:179−188, 1997)。GSK3βは神経原線維のもつれを優先的に標識し、そしてＡＤ脳内のもつれる前のニューロンにおいて活性であることが示されている。GSK3タンパク質レベルもＡＤ患者からの脳組織において５０％だけ増加する。さらに、GSK3βは、解糖経路における重要な酵素であるピルビン酸脱水素酵素をリン酸化し、そしてピルビン酸のアセチル−Co−Aへの変換を阻止する(Hoshi et al., PNAS 93:2719−2723, 1996)。アセチル−Co−Aは、認知機能を伴う神経伝達物質であるアセチルコリンの合成にとって重要である。アミロイド−βの蓄積は、ADにおける初期の事象である。GSK Tgマウスは、増加したレベルの脳内アミロイド−βを示す。また、リチウムを与えられたPDAPPマウスは、海馬における減少したアミロイド−βレベル、及び減少したアミロイド斑領域を示す(Su et al., Biochemistry 2004, 43:6899−6908)。従って、GSK3βの阻害は、アルツハイマー病および他の上で言及した疾患の進行、さらにこれらの疾患に関連する認知的欠陥において有益な効果を有し得る。
【０００５】
慢性および急性の神経変性性疾患
PI3K /Akt経路の成長因子により媒介される活性化は、ニューロンの生存において主要な役割を果たすことが示されている。この経路の活性化はGSK3βの阻害を生じる。最近の研究(Bhat et. al., PNAS 97:11074−11079 (2000))は、脳虚血のような神経変性の、または成長因子遮断後の細胞モデルおよび動物モデルにおいて、GSK3β活性が増加することを示す。例えば、活性部位のリン酸化は、認知障害、アルツハイマー病、パーキンソン病、筋萎縮性側索硬化症、ハンチントン病およびHIV性痴呆、並びに頭部外傷のような慢性および急性神経変性性疾患において；そして虚血性脳卒中でも発生すると一般的に考えられている細胞死の１種であるアポトーシスに対して脆弱なニューロンで増加した。リチウムは、細胞内および脳内でのアポトーシスの阻害において、GSK3βの阻害を生じた用量で神経保護的であった。従って、GSK3β阻害剤は、神経変性疾患の進行を弱めるのに有用であり得る。
【０００６】
双極性障害（ＢＤ）
双極性障害は、躁病エピソードおよびうつ病エピソードを特徴とする。リチウムは、その気分の安定化効果に基づいて、ＢＤを処置するために使用されてきた。リチウムの欠点は、狭い治療濃度域、およびリチウム中毒を生じ得る過剰投与の危険である。リチウムがGSK3を治療的濃度で阻害するという発見は、この酵素が脳内でのリチウムの作用の主要な標的に相当するという可能性を提示した(Stambolic et al., Curr. Biol. 6:1664−1668,
1996; Klein and Melton; PNAS 93:8455−8459, 1996; Gould et al., Neuropsychopharmacology, 1:32−8, 2004)。GSK3阻害剤は、強制水泳試験（抑うつ行動を評価するためのモデル）において不動時間を減少させることが示された(O’Brien et al., J Neurosci 2004, 24:66791−6798) GSK3は、双極性II型障害において見られる多型と関連していた(Szczepankiewicz et al., Neuropsychobiology. 2006;5 3(1):51−6)。従って、GSK3βの阻害は、ＢＤ、さらには感情障害を有するＡＤ患者の処置において治療的に適切であり得る。
【０００７】
統合失調症
蓄積する証拠より、GSK3の異常な活性は気分障害及び統合失調症に関与すると見られる。GSK3は、多数の細胞過程、特に神経の発達の間のシグナル伝達カスケードに関与する。Kozlovskyら(Am J Psychiatry 2000 May; 157(5):831−3)は、GSK3βレベルが比較被験体よりも統合失調症患者において41％低いことを見出した。この研究は、統合失調症が神経発達病理を伴うこと、および異常なGSK3調節が統合失調症において役割を果たし得ることを示している。さらに、低下したβ−カテニンレベルが、統合失調症を示す患者において報告されている(Cotter et al., Neuroreport 9:1379−1383 (1998))。オランザピン、クロザピン、クエチアピン、及びジプラシドンのような非定型抗精神病薬は、ser9リン酸化を増加することによりGSK3を阻害し、抗精神病薬がGSK3阻害を介してそれらの有益な効果を及ぼし得ることを示唆している (Rosborough et al., Int J Neuropsychopharmacol, 4:1−13 2006)。
【０００８】
糖尿病
インスリンは、グリコーゲン合成酵素の脱リン酸化、ひいては活性化を介して、骨格筋におけるグリコーゲン合成を刺激する。休止状態において、GSK3はグリコーゲン合成酵素をリン酸化、そして脱リン酸化を介して不活性化する。GSK3はまた、II型糖尿病患者からの筋肉において過剰発現される(Nikoulina et al., Diabetes 2000 Feb; 49(2):263−71)。GSK3の阻害はグリコーゲン合成酵素の活性を増大させ、それによりグルコースをグリコーゲンに変換することによってグルコースレベルを低下させる。糖尿病の動物モデルにおいて、GSK3阻害剤は、血漿グルコースレベルを50％まで低下させた(Cline et al., Diabetes, 2002, 51:2903−2910; Ring et at., Diabetes 2003, 52:588−595)。従って、ＧＳＫ３の阻害は、I型およびII型糖尿病ならびに糖尿病性ニューロパシーの処置において治療的に適切であり得る。
【０００９】
脱毛症
GSK3はβ−カテニンをリン酸化して分解する。β−カテニンはケラトニン（keratonin）合成経路のエフェクタである。β−カテニンの安定化は毛髪発達の増進をもたらし得る。GSK3によりリン酸化された部位の突然変異によって安定化β−カテニンを発現するマウスは、新たな毛髪形態形成と類似する過程を受ける(Gat et al., Cell 1998 Nov 25;95 (5):605−14))。新たな毛包は、通常は胚形成においてのみ確認されていた脂腺および真皮乳頭を形成した。従って、GSK3の阻害は、禿頭症の処置を提供し得る。
【００１０】
骨関連障害及び状態
GSK3阻害剤は、骨関連障害又は新しくかつ増加した骨形成の必要性を伴う他の状態の処置のために使用され得る。骨格の再造形は、連続的な過程であり、副甲状腺ホルモン(PTH)のような全身性ホルモン、局所因子(例えばプロスタグランジンE2)、サイトカイン及び他の生物学的に活性な物質により制御される。２つの細胞型が決定的に重要である: 骨芽細胞(骨形成に関与)及び破骨細胞(骨吸収に関与）。RANK、RANKリガンド、及びオステオプロテゲリン調節系を介して、これら２つの細胞型が相互作用して正常な骨ターンオーバーを維持する(Bell NH, Current Drug Targets − Immune, Endocrine & Metabolic Disorders, 2001, 1:93−102)。
【００１１】
骨粗しょう症は、低い骨量及び骨の微小構造（microarchitecture）の劣化が増加した骨の脆弱性及び骨折の危険性をもたらす骨格障害である。骨粗しょう症を処置するための２つの主な方策は、骨吸収を抑制するか又は骨形成を刺激することのいずれかである。骨粗しょう症の処置のための現在販売されている薬物の大部分は、破骨細胞性骨吸収を抑制することにより骨量を増加させるように作用する。骨形成を増加させる能力を有する薬物が骨粗しょう症の処置において高い価値があり、さらに患者において骨折治癒を増進させる可能性を有することが認められている。
【００１２】
原発性及び続発性の骨粗しょう症におけるGSK3阻害剤の使用、ここで原発性骨粗しょう症は、閉経後（postmenaupausal）骨粗しょう症並びに男性及び女性の両方における老年性骨粗しょう症を含み、そして続発性骨粗しょう症は、コルチゾン誘発骨粗しょう症、さらにあらゆる他の種類の誘発性の続発性骨粗しょう症を含む。これに加えて、GSK3阻害剤は、骨髄腫の処置においても使用され得る。GSK3阻害剤は、これらの状態を処置するために、様々な処方計画（formulation regimes）で局所投与されても全身投与されてもよい。
【００１３】
炎症性疾患
GSK3阻害剤が抗炎症性作用をもたらすという発見は、炎症性疾患における治療的介入のためにGSK3阻害剤を使用するという可能性を提示した。(Martin et al., Nat Immunol 2005, 6:777−784; Jope et al., Neurochem Res 2006, Aug 30における総説)。炎症は、アルツハイマー病及び気分障害を含む広範囲の状態に共通の特徴である。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１４】
発明の詳細な説明
本発明の目的は、GSK3での選択的阻害作用、良好なバイオアベイラビリティ、良好な溶解性及び医薬製剤への製剤化に適切となる低い吸湿性を有する、2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルの化合物(化合物(Ｉ))
【化１】
2009528344.tif 000002
の新規な塩を提供することである。これらの新規な塩は、2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルのメシレート、エシレート、エジシル酸塩、リン酸塩、フマル酸塩及びマレイン酸塩である。
【課題を解決するための手段】
【００１５】
本発明のさらなる局面は、
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル メシレート、
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル エシレート、
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル エジシル酸塩、
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル リン酸塩、
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル フマル酸塩、及び
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル マレイン酸塩
に関する。
【００１６】
本発明による式(Ｉ)の化合物のこれらの塩は、WO 03/082853に記載されるように製造された2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルの塩酸塩よりも改善された化学的安定性を示すことが見いだされ、これにより上記塩は、医薬製剤へと製剤化されるのに特に適切になる。
【００１７】
医薬製剤の製剤化において、薬学的に許容しうる化合物（活性薬物化合物）が都合良く取り扱いされて加工され得る形態であることが重要である。このことは、商業的に実現可能な製造プロセスを得るという観点からだけではなく、活性薬物化合物を含む医薬製剤の続けて行う製造という観点からも重要である。
【００１８】
活性成分の化学的安定性、固体状態の安定性、及び「貯蔵寿命」もまた非常に重要な因子である。薬物化合物及びそれを含有する製剤は、相当な期間にわたって、活性成分の物理化学的特性、例えばその化学組成、密度、吸湿性及び溶解性において有意な変化を示すことなく有効に貯蔵され得るべきである。
【００１９】
用語「化学的安定性」は、その化合物が単離された形態、又は薬学的に許容しうる担体、希釈剤若しくはアジュバントと混合されて提供される製剤の形態（例えば、錠剤、カプセル剤などのような経口投薬形態）で、通常の貯蔵条件下で、ほとんどまたは全く化学的劣化又は分解なく貯蔵することができることを意味する。
【００２０】
従って、商業的に実現可能で薬学的に許容しうる薬物製剤の製造において、可能な限り、実質的に結晶性で安定な形態の薬物化合物を提供することが重要である。
【００２１】
本明細書で使用される場合、用語「実質的に結晶性」は、少なくとも約50％の結晶性、そして100％までの範囲の結晶性を意味する。本発明は、形の上では少なくとも約50％の結晶性、少なくとも約60％の結晶性、少なくとも約70％の結晶性、少なくとも約80％の結晶性、少なくとも約90％の結晶性、少なくとも約95％の結晶性、少なくとも約98％の結晶性、又は約100％の結晶性である2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル塩を提供する。
【００２２】
医薬製剤
本発明の一局面によれば、グリコーゲン合成酵素キナーゼ−3に関連する状態の予防及び／又は処置における使用のための、化合物(Ｉ)、2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルのメシレート、エシレート、エジシル酸塩、リン酸塩、フマル酸塩又はマレイン酸塩を含む医薬製剤が提供される。
【００２３】
製剤は、経口投与に適した形態（例えば錠剤）、滅菌液剤又は懸濁剤としての非経口注射に適した形態、体腔又は骨空洞における局所投与に適した形態（例えば、滅菌液剤又は懸濁剤として）であり得る。
【００２４】
一般に、上記の製剤は製薬担体又は希釈剤を使用して従来のやり方で製造され得る。ヒトを含む哺乳動物の処置における式(Ｉ)の化合物の塩の適切な日用量は、経口投与で約0.01〜250mg／体重１kg及び非経口投与で約0.001〜250mg／体重１kgである。活性成分の典型的な日用量は、広い範囲内で変動し、種々の要因、例えば関連適応症（relevant indication）、投与経路、年齢、患者の体重及び性別に依存し、そして医師により決定され得る。
【００２５】
獣医学的用途については、種々の成分の量、投薬形態及び医薬の用量は変動し得、種々の要因、例えば処置される動物の個々の要件に依存する。
【００２６】
式(Ｉ)の化合物の薬学的に許容しうる塩は、それ自体で使用することができるが、通常は式(Ｉ)の化合物の塩(活性成分)が薬学的に許容しうる希釈剤、賦形剤又は不活性担体と共に医薬製剤の形態で投与される。投与様式によって、医薬製剤は0.05〜99％w (質量パーセント)、例えば0.10〜50％wの活性成分を含み得る（全ての質量パーセンテージは総組成に基づく）。
【００２７】
希釈剤又は担体としては、水、水性ポリ(エチレングリコール)、炭酸マグネシウム、ステアリン酸マグネシウム、タルク、糖(例えばラクトース)、ペクチン、デキストリン、デンプン、トラガカント、微結晶性セルロース、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウム又はカカオ脂が挙げられる。
【００２８】
本発明の製剤は、錠剤又は注入可能形態であり得る。錠剤はさらに崩壊剤を含み得、かつ／又は(例えば腸溶性コーティングで、又はヒドロキシプロピルメチルセルロースのようなコーティング剤でコーティングされてもよい）コーティングされていてもよい。
【００２９】
本発明はさらに、本発明の医薬製剤を製造するための方法を提供し、該方法は、本明細書で以前に定義される式(Ｉ)の化合物の薬学的に許容しうる塩を、薬学的に許容しうる希釈剤、賦形剤又は不活性担体と混合することからなる。
【００３０】
本発明の医薬製剤の例は、本明細書で以前に定義される式(Ｉ)の化合物の薬学的に許容しうる塩、及び滅菌水、並びに必要ならば最終製剤のpHを約pH ５にするための水酸化ナトリウム又は塩酸のいずれか、そして場合により溶解を補助するための界面活性剤を含む（conprising）注射液剤である。
【００３１】
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルのメシレート、エシレート、エジシル酸塩、リン酸塩、フマル酸塩又はマレイン酸塩を5.0％mg／mL含み、純水に溶解して100％とした液剤。
【００３２】
医療用途
本発明において定義される新規な塩、2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルのメシレート、エシレート、エジシル酸塩、リン酸塩、フマル酸塩又はマレイン酸塩は、グリコーゲン合成酵素キナーゼ−3 (GSK3)の阻害に適していることが見いだされた。従って、本発明の上記化合物は、グリコーゲン合成酵素キナーゼ−3活性に関連する状態の予防及び／又は処置において有用であると期待され、すなわち、これらの化合物は、上記予防及び／又は処置を必要とする、ヒトを含む哺乳動物においてGSK3の阻害作用を生じるために使用され得る。
【００３３】
GSK3は、中枢および末梢神経系ならびに他の組織で高度に発現される。従って、本発明の化合物は、中枢および末梢神経系におけるグリコーゲン合成酵素キナーゼ−３に関連する状態の予防および／または処置に適していると期待される。特に、本発明の化合物は、認知障害及び前痴呆状態に関連する状態、特に、痴呆、アルツハイマー病(AD)、統合失調症における認知的欠陥(CDS)、軽度認知機能障害(MCI)、加齢に伴う記憶障害(AAMI)、加齢性認知機能低下(ARCD)及び痴呆のない認知機能障害(CIND)、神経細線維もつれ病理に関連する疾患、前頭側頭型痴呆(FTD)、前頭側頭型痴呆パーキンソン型(FTDP)、進行性核上性麻痺(PSP)、ピック病、ニーマン−ピック病、皮質基底核変性(CBD)、外傷性脳損傷(TBI)又はボクサー痴呆の予防及び／又は処置に適していると期待される。
【００３４】
本発明の一実施態様は、アルツハイマー病の予防及び／又は処置、特にアルツハイマー病の疾患増悪の遅延における使用に関する。
【００３５】
他の状態は、ダウン症候群、血管性痴呆、パーキンソン病(PD)、脳炎後（postencephelatic）パーキンソン症候群、レヴィー体を伴う痴呆、HIV痴呆、ハンティングトン病、筋萎縮性側索硬化症(ALS)、運動ニューロン疾患(MND、クロイツフェルト・ヤコブ（Creuztfeld−Jacob）病及びプリオン病からなる群より選択される。
【００３６】
他の状態は、注意欠陥障害(ADD)、注意欠陥過活動性障害(ADHD)及び情動障害からなる群より選択され、ここで情動障害は、躁的興奮、双極性うつ病、双極性維持（maintenance）を含む双極性障害、抑うつ、大うつ病、気分安定化を含む大うつ病性障害(MDD)、統合失調症を含む統合失調性感情障害、及び気分変調である。
【００３７】
他の状態は、Ｉ型糖尿病、II型糖尿病、糖尿病性ニューロパシー、脱毛及び炎症性疾患からなる群より選択される。
【００３８】
本発明の一実施態様は、哺乳動物における骨関連障害の予防及び／又は処置に関する。
【００３９】
本発明の別の局面は、2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルのメシレート、エシレート、エジシル酸塩、リン酸塩、フマル酸塩及びマレイン酸塩の、哺乳動物における骨粗しょう症の予防及び／又は処置における使用に関する。
【００４０】
本発明の一局面は、2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルのメシレート、エシレート、エジシル酸塩、リン酸塩、フマル酸塩及びマレイン酸塩の、哺乳動物における骨形成を促進及び／又は増大させるための使用に関する。
【００４１】
本発明の一局面は、2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルのメシレート、エシレート、エジシル酸塩、リン酸塩、フマル酸塩及びマレイン酸塩の、哺乳動物における骨ミネラル濃度を増大させるための使用に関する。
【００４２】
本発明の別の局面は、2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルのメシレート、エシレート、エジシル酸塩、リン酸塩、フマル酸塩及びマレイン酸塩の、哺乳動物における骨折率を低減し、かつ／又は骨折治癒速度を増進するための使用に関する。
【００４３】
本発明の別の局面は、2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルのメシレート、エシレート、エジシル酸塩、リン酸塩、フマル酸塩及びマレイン酸塩の、哺乳動物における海綿質骨形成及び／又は新骨形成を増大させるための使用に関する。
【００４４】
特定の疾患の治療的処置又は予防的処置に必要とされる用量は、処置される宿主、投与経路及び処置される疾患の重篤度に依存して必然的に変動する。
【００４５】
本発明はまた、2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルのメシレート、エシレート、エジシル酸塩、リン酸塩、フマル酸塩及びマレイン酸塩の、グリコーゲン合成酵素キナーゼ−3に関連する状態の予防及び／又は処置のための医薬の製造における使用に関する。
【００４６】
本発明の文脈において、用語「治療」は、別に具体的な指示がなければ「予防」も含む。用語「治療的」及び「治療的に」はそれに応じて解釈されるべきである。
【００４７】
本発明はまた、グリコーゲン合成酵素キナーゼ−３に関連する状態の処置及び／又は予防の方法を提供し、該方法は、上記処置及び／又は予防を必要とする、ヒトを含む哺乳動物に、治療有効量の2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルのメシレート、エシレート、エジシル酸塩、リン酸塩、フマル酸塩及びマレイン酸塩を投与することからなる、方法。
【００４８】
塩形成の方法
式(Ｉ)の化合物の所望の塩の形成、2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルのメシレート、エシレート、エジシル酸塩、リン酸塩、フマル酸塩又はマレイン酸塩は、2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルを、溶媒の存在下で適切な酸と混合することにより製造され得る。適切な酸の当量は、0.5モル当量と１モル当量との間で変動し得る。反応は溶媒中で行われ、適切な溶媒はエーテル類、例えば1,4−ジオキサン、ジエチルエーテル、若しくはアルコール類、例えばメタノール、エタノール、プロパノール、若しくはケトン類、例えばアセトン、イソブチルメチルケトン、若しくは酢酸エステル類、例えば酢酸エチル、酢酸ブチル、若しくは有機酸、例えば酢酸、若しくは水又はこれらの混合物である。使用される溶媒の総体積は、出発物質の重量あたり１(v/w)から100(v/w)体積部の間、好ましくは出発物質の重量あたり10(v/w)体積部と45(v/w)体積部との間で変動し得る。反応の温度は、−30℃と150℃との間、好ましくは−５℃と100との間であり得る。
【００４９】
式(Ｉ)、2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルのメシレート、エシレート、エジシル酸塩、リン酸塩、フマル酸塩又はマレイン酸塩の純粋な化合物は、適切な溶媒中で添加物と共に又は添加物なしで結晶化させて、約95％、好ましくは約98％の純度を有する結晶性固体を得ることにより得られ得る、
本発明の別の目的は、上記のような塩形成のための方法である。
【実施例】
【００５０】
以下の実施例は、本発明を説明するが限定しない。
【００５１】
実施例１
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル メシレート
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル (0.6145ｇ)をエタノール (6.1ml)及びメタンスルホン酸(0.11ml)中に懸濁させた。この溶液を40℃に14時間加熱し、次いで２時間で室温まで冷却した。結晶をろ過し、エタノール(２ml)で洗浄し、そして40℃で47時間真空乾燥した。0.6690ｇの2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル メシレートを乾燥後に得た。
1H (500 MHz, DMSO−d6): 14.75 (1H, br s), 10.97 (1H, s), 9.92 (1H, br s), 8.25 (1H, s), 8.00 (1H, s), 7.89 (2H, br m), 7.33 (1H, dd), 7.03 (1H, d), 4.30 (2H, br s), 3.98 (2H, br s), 3.66 (2H, br s), 3.37 (2H, br s), 3.12 (2H, br s), 2.38 (3H, s)。
【００５２】
結晶をＸ線粉末回折(XRPD)により分析した。ディフラクトグラムは以下のｄ値（オングストロームで示される)及び相対強度を示す:12.7(vs), 9.0(w), 7.3(vw), 6.4(s), 5.8(vw), 5.7(vw), 5.3(w), 4.93(w), 4.80(m), 4.72(m), 4,53(m), 4.46(m), 4.31(m), 4.24(m), 4.09(s), 3.96(m), 3.79(m), 3.33(s), 3.21(m), 2.94(w), 2.73(w), 2.47(w)Å。
【００５３】
重要なｄ値（オングストロームで示される)及び相対強度は: 12.7(vs), 6.4(s), 4.53(m), 4.09(s), 3.33(s)Åである。
【００５４】
相対強度(％相対強度)は、信頼性がより低く、数値の代わりに以下の定義が使用される:
vs (非常に強い): ＞ 83
s (強い): 60−83
m (中程度): 17−60
w (弱い): ７−17
vw (非常に弱い): ＜７
【００５５】
実施例２
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル エシレート
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル (0.5006ｇ)をエタノール(５ml) 及びエタンスルホン酸(0.12ml)中に懸濁させた。この溶液を40℃に14時間加熱し、次いで２時間で室温まで冷却した。結晶をろ過し、エタノール (２ml)で洗浄し、そして40℃で47時間真空乾燥した。0.5487ｇの2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル エシレートを乾燥後に得た。
1H (500 MHz, DMSO−d6): 14.72 (1H, br s), 10.98 (1H, s), 9.85 (1H, br s), 8.25 (1H, s), 8.00 (1H, s), 7.88 (2H, dd), 7.34 (1H, d), 7.03 (1H, d), 4.32 (2H, br s), 4.00 (2H, br d), 3.64 (2H, br t), 3.37 (2H, br s), 3.13 (2H, bd s), 2.40 (2H, q), 1.07 (3H, t)。
【００５６】
結晶をＸ線粉末回折(XRPD)により分析した。ディフラクトグラムは以下のｄ値（オングストロームで示される)及び相対強度を示す: 15.3(m), 12.6(s), 9.1(m), 7.6(vw), 7.4(m), 6.3(m), 5.9(w), 5.5(w), 5.2(vw), 5.0(w), 4.87(m), 4.74(m), 4.47(m), 4.32(m), 4.16(s), 4.12(s), 4.04(m), 3.85(m), 3.41(s), 3.19(m), 2.92(vw), 2.72(w)Å。
【００５７】
重要なｄ値（オングストロームで示される)及び相対強度は: 12.6(s), 6.3(m), 4.47(m), 4.16(s), 4.12(s), 3.41(s)Åである。
【００５８】
相対強度(％相対強度)は、信頼性がより低く、数値の代わりに以下の定義が使用される:
s (強い): ＞ 50
m (中程度): 12−50
w (弱い): ８−12
vw (非常に弱い): ＜８
【００５９】
実施例３
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル エジシル酸塩
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル (0.6568ｇ)を、エタノール (6.55ml)及び1,2−エタンジスルホン酸(0.3471ｇ中に懸濁させた。この溶液を40℃に14時間加熱し、次いで２時間で室温まで冷却した。結晶をろ過し、エタノール (２ml)で洗浄し、そして40℃で47時間真空乾燥した。0.7797ｇの2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル エジシル酸塩を乾燥後に得た。
1H (500 MHz, DMSO−d6): 14.74 (1H, br s), 10.98 (1H, s), 9.87 (1H, br s), 8.27 (1H, s), 8.00 (1H, d), 7.89 (2H, br m), 7.33 (1H, dd), 7.03 (1H, d), 4.33 (2H, s), 4.00 (2H, d), 3.65 (2H, t), 3.39 (2H, d), 3.14 (2H, br q), 2.74 (4H, s)。
【００６０】
結晶をＸ線粉末回折(XRPD)により分析した。ディフラクトグラムは以下のｄ値（オングストロームで示される)及び相対強度を示す: 19.9(m), 18.1(w), 15.3(s), 13.2(vw), 11.3(m), 9.0(vw), 8.2(w), 8.0(w), 7.6(w), 7.4(w), 6.8(w), 6.6(m), 6.3(m), 6.0(w), 5.6(s), 5.4(m), 5.2(m), 5.1(m), 5.0(m), 4.85(m), 4.32(s), 4.24(m), 4.17(w), 4,12(s), 4.08(s), 3.90(w), 3.82(w), 3.66(w), 3.53(m), 3.35(m), 3.27(m), 3.00(vw)Å。
【００６１】
重要なｄ値（オングストロームで示される)及び相対強度は: 15.3(s), 11.3(m), 5.6(s), 4.32(s), 4.12(s), 4.08(s)Åである。
【００６２】
相対強度(％相対強度)は、信頼性がより低く、数値の代わりに以下の定義が使用される:
s (強い): ＞55
m (中程度): 24−55
w (弱い): 13−24
vw (非常に弱い): ＜13
【００６３】
実施例４
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル リン酸塩
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル (0.5919ｇ)をエタノール (5.9ml)及びo−リン酸(0.1ml中に懸濁させた。この溶液を40℃に14時間加熱し、次いで２時間で室温まで冷却した。結晶をろ過し、エタノール(２ml)で洗浄し、そして40℃で47時間真空乾燥した。0.6666ｇの2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル リン酸塩を乾燥後に得た。
1H (500 MHz, DMSO−d6): 14.78 (1H, br s), 10.90 (1H, s), 8.12 (1H, s), 7.91 (1H,
s), 7.85 (1H, br d), 7.81 (1H, dd), 7.29 (1H, dd), 7.01 (1H, d), 3.60 (4H, br t), 3.46 (2H, s), 2.45 (4H, br s)。
【００６４】
結晶をＸ線粉末回折(XRPD)により分析した。ディフラクトグラムは以下のｄ値（オングストロームで示される)及び相対強度を示す: 15.2(m), 7.6(w), 5.1(w), 4.12(vw), 2.29(vw)Å。
【００６５】
重要なｄ値（オングストロームで示される)及び相対強度は: 15.2(m), 7.6(w), 5.1(w), 4.12(vw)Åである。
【００６６】
相対強度(％相対強度)は、信頼性がより低く、数値の代わりに以下の定義が使用される:
m (中程度): 50
w (弱い): 15−50
vw (非常に弱い): ＜15
【００６７】
実施例５
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル フマル酸塩
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル (0.5765ｇ)をエタノール(5.7ml)及びフマル酸(0.1893ｇ)中に懸濁させた。この溶液を40℃に14時間加熱し、次いで２時間で室温まで冷却した。結晶をろ過し、エタノール (２ml)で洗浄し、そして40℃で47時間真空乾燥した。0.6316ｇの2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル フマル酸塩を乾燥後に得た。
1H (500 MHz, DMSO−d6): 14.78 (1H, br s), 10.89 (1H, s), 8.11 (1H, br s), 7.91 (1H, br s), 7.85 (1H, br d), 7.80 (1H, br dd), 7.28 (1H, dd), 7.00 (1H, d), 6.63 (2H, s), 3.59 (4H, br t), 3.42 (2H, s), 2.42 (4H, br s)。
【００６８】
結晶をＸ線粉末回折(XRPD)により分析した。ディフラクトグラムは以下のｄ値（オングストロームで示される)及び相対強度を示す: 19.8(w), 16.5(m), 15.3(w), 13.1(m), 12.7(m), 12.0(w), 10.5(w), 9.1(w), 7.6(w), 6.8(m), 6.5(w), 6.3(w), 6.2(w), 6.0(m), 5.6(w), 5.5(w), 5.2(w), 5.1(w), 4.94(w), 4.86(m), 4.71(w), 4.63(w), 4.55(m), 4.38(m), 4.23(w), 4.12(w), 3.58(m), 3.40(m), 3.26(s), 3.12(m)Å。
【００６９】
重要なｄ値（オングストロームで示される)及び相対強度は: 16.5(m), 13.1(m), 12.7(m), 6.8(m), 3.26(s)Åである。
【００７０】
相対強度(％相対強度)は、信頼性がより低く、数値の代わりに以下の定義が使用される:
s (強い): ＞75
m (中程度): 33−75
w (弱い): ＜33
【００７１】
実施例６
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル マレイン酸塩
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル (0.5473ｇ)をエタノール(5.47ml)及びマレイン酸(0.1719ｇ)中に懸濁させた。この溶液を40℃に14時間加熱し、次いで２時間で室温まで冷却した。結晶をろ過し、エタノール (２ml)で洗浄し、そして40℃で47時間加熱した。0.5902ｇの2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル リン酸塩を乾燥後に得た。
1H (500 MHz, DMSO−d6): 14.75 (1H, br s), 10.94 (1H, s), 8.19 (1H, s), 7.96 (1H,
s), 7.88 (1H, br d), 7.83 (1H, dd), 7.32 (1H, dd), 7.02 (1H, d), 6.11 (2H, s), 3.93 (2H, br s), 3.72 (4H, br s), 2.89 (4H, br s)。
【００７２】
結晶をＸ線粉末回折(XRPD)により分析した。ディフラクトグラムは以下のｄ値（オングストロームで示される)及び相対強度を示す: 20.1(w), 18.5(m), 15.3(w), 12.7(s), 10.3(m), 10.0(m), 9.0(m), 7.9(vw), 7.6(w), 7.4(w), 6.8(s), 6.5(w), 6.3(m), 6.1(m), 5.6(w), 5.3(w), 5.2(w), 4.78(m), 4.67(m), 4.58(s), 4.46(m), 4.36(m), 4.23(m), 3.98(w), 3.79(m), 3.14(w), 3.05(m), 2.94(w)Å。
【００７３】
重要なｄ値（オングストロームで示される)及び相対強度は: 12.7(s), 6.8(s), 6.1(m), 4.58(s), 3.05(m)Åである。
【００７４】
相対強度(％相対強度)は、信頼性がより低く、数値の代わりに以下の定義が使用される:
s (強い): ＞50
m (中程度): 14−50
w (弱い): ４−14
vw (非常に弱い): ＜４
【００７５】
結晶性2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリル塩を、Ｘ線粉末回折(XRPD)を以下のように使用して分析した:
Bragg式から算出したｄ値で同定されるピーク、及び強度を、結晶性塩のディフラクトグラムから抽出した。最も特徴的で、重要な、明確かつ／又は再現性のある主要ピークのみを集計したが、従来の方法を使用してディフラクトグラムから追加のピークを抽出することができる。再現性がありエラー限界内のこれらの主要なピークの存在は、大部分の状況について、上記結晶性塩の存在を証明するには充分である。
【００７６】
Ｘ線回折分析は、PANalytical X’Pert Pro MPD 回折計を使用して64分間１〜40°２θで内部標準基準を用いて、そして用いずに行った。２θ角を標準値に関して補正し、その後ｄ値への計算（距離値）を行った。ｄ値は小数点以下最後の桁で±２の範囲で変動し得る。サンプル調製は標準的方法、例えばGiacovazzo, C. et al (1995), Fundamentals of
Crystallography, Oxford University Press; Jenkins, R. and Snyder, R. L. (1996),
Introduction to X−Ray Powder Diffractometry, John Wiley & Sons, New York; Bunn, C. W. (1948), Chemical Crystallography, Clarendon Press, London or Klug, H. P. & Alexander, L. E.  (1974), X−ray Diffraction Procedures, John Wiley and Sons, New Yorkに記載される方法に従って行った。
【００７７】
薬理学
シンチレーション近接GSK3βアッセイにおけるATP競合の測定
GSK3βシンチレーション近接アッセイ。
競合実験を10種の異なる濃度の阻害剤を用いて透明底マイクロタイタープレート(Wallac, Finland)において二重反復で行った。ビオチン化ペプチド基質、ビオチン−Ala−Ala−Glu−Glu−Leu−Asp−Ser−Arg−Ala−Gly−Ser(PO3H2)−Pro−Gln−Leu (AstraZeneca, Lund)を１μMの最終濃度で、1mUの組換えヒトGSK3β(Dundee University, UK)、12mM モルホリンプロパンスルホン酸(MOPS)、pH 7.0、0.3mM EDTA、0.01％ β−メルカプトエタノール（mercaptorethanol）、0.004 ％ Brij 35 (天然界面活性剤)、0.5％ グリセロール及び0.5μg BSA／25μlを含有するアッセイ緩衝液中に加えた。0.04μCi [(−33P]ATP (Amersham, UK)及び非標識ATPを１μMの最終濃度及び25μlのアッセイ体積で加えることにより反応を開始した。20分間室温でインキュベーションした後、５mM EDTA、50μM ATP、0.1％ Triton X−100及び0.25mgストレプトアビジン被覆シンチレーション近接アッセイ(SPA)ビーズ(Amersham, UK)を含有する25μlの停止溶液を加えることにより各反応を終結させた。６時間後、放射活性を液体シンチレーションカウンタ(1450 MicroBeta Trilux, Wallac)で測定した。阻害曲線をGraphPad Prism, USAを使用して非線形回帰分析した。種々の化合物の阻害定数(Ki)を計算するために使用した、GSK3βに対するATPのKm値は20μMであった。
【００７８】
以下の略号を使用した:
MOPS    モルホリンプロパンスルホン酸
EDTA    エチレンジアミン四酢酸
BSA    ウシ（Bovin）血清アルブミン
ATP    アデノシン三リン酸
SPA    シンチレーション近接アッセイ
GSK3  グリコーゲン合成酵素キナーゼ3 
【００７９】
結果
本発明の2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルの新規な塩、メシレート、エシレート、エジシル酸塩、リン酸塩、フマル酸塩及びマレイン酸塩のKi値は、0.001nM〜300nMの範囲内であった。
【００８０】
吸湿性
動的蒸気吸収分析（Dynamic vapour sorption analysis）(DVS)
これらの研究は、動的蒸気吸収装置(DVS, Surface Measurement Systems, London UK)を使用して着手した。この装置は、温度制御キャビネット内に収容されたCahn微量天秤（micobalance）から構成される。全ての実験は25℃で行った。DVSを使用して様々な相対湿度(RH)における水分取り込み(％ w/w)を特徴付けした。サンプル(５−10mg)を直接DSVサンプルカップに秤量し、様々な相対湿度に暴露した。
【００８１】
結果
サンプル                    相対湿度(RH)        
４０％      ６０％      ８０％
ＨＣｌ          ８.７     １１.５     １３.０
メシレート      ０.７       １.１       １.６
エシレート      ０.５       ０.８       １.２
エジシル酸塩    ５.１       ６.６       ８.２
リン酸塩        ４.１       ６.６     １０.８
フマル酸塩      ３.８       ４.５       ５.１
マレイン酸塩    １.７       ２.２       ２.７
【００８２】
2−ヒドロキシ−3−[5−(モルホリン−4−イルメチル)ピリジン−2−イル]1H−インドール−5−カルボニトリルのメシレート、エシレート、エジシル酸塩、リン酸塩、フマル酸塩及びマレイン酸塩が、その塩酸塩よりも非常に低い吸湿性を示し、従って医薬製剤の製造により適していることが上記の結果から明らかである。
【国際調査報告】
2009528344.tif 000004
2009528344.tif 000005
2009528344.tif 000006
2009528344.tif 000007
2009528344.tif 000008