(57)【要約】ＶＬＡ−４に結合する化合物が開示される。特定のこれらの化合物はまた、白血球の接着を、特にＶＬＡ−４により媒介される白血球の接着を阻害する。このような化合物は、ヒトまたは動物の被験体における炎症性疾患、例えば、喘息、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、ＡＩＤＳ痴呆、糖尿病、炎症性腸疾患、クローン病、関節リウマチ、組織移植、腫瘍転移および心筋虚血の治療に有用である。前記化合物はまた、多発性硬化症のような炎症性脳疾患の治療のために投与できる。2009528296.tif 000047
2009528296.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式Ｉの化合物：
【化１】
2009528296.tif 000036
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１からＣ４のアルキルおよびＣ１からＣ４のハロアルキルからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｃ１からＣ４のアルキル、Ｃ２からＣ４のアルケニル、Ｃ２からＣ４のアルキニル、およびＣ３からＣ６のシクロアルキルからなる群から選択される］
または薬学的に許容されるその塩もしくはエステル。
【請求項２】
Ｒ１がＣ１からＣ２のアルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１がメチルまたはトリフルオロメチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ１がメチルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２がＣ１からＣ４のアルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２がＣ１からＣ３のアルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２がメチルまたはエチルである、請求項６に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ２がイソプロピルである、請求項６に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ２がＣ３からＣ６のシクロアルキルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ２がシクロペンチルである、請求項９に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ２がＣ２からＣ４のアルケニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
Ｒ２がアリルである、請求項１１に記載の化合物。
【請求項１３】
Ｒ２がＣ２からＣ４のアルキニルである、請求項１に記載の化合物。
【請求項１４】
Ｒ２がプロパルギルである、請求項１３に記載の化合物。
【請求項１５】
式ＩＩの化合物：
【化２】
2009528296.tif 000037
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１からＣ４のアルキルおよびＣ１からＣ４のハロアルキルからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｃ１からＣ４のアルキル、Ｃ２からＣ４のアルケニル、Ｃ２からＣ４のアルキニル、およびＣ３からＣ６のシクロアルキルからなる群から選択される］
または薬学的に許容されるその塩もしくはエステル。
【請求項１６】
Ｒ１がＣ１からＣ２のアルキルである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１７】
Ｒ１がメチルまたはトリフルオロメチルである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１８】
Ｒ１がメチルである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項１９】
Ｒ２がＣ１からＣ４のアルキルである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項２０】
Ｒ２がＣ１からＣ３のアルキルである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項２１】
Ｒ２がメチルまたはエチルである、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２２】
Ｒ２がイソプロピルである、請求項２０に記載の化合物。
【請求項２３】
Ｒ２がＣ３からＣ６のシクロアルキルである、請求項１６に記載の化合物。
【請求項２４】
Ｒ２がシクロペンチルである、請求項２３に記載の化合物。
【請求項２５】
Ｒ２がＣ２からＣ４のアルケニルである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項２６】
Ｒ２がアリルである、請求項２５に記載の化合物。
【請求項２７】
Ｒ２がＣ２からＣ４のアルキニルである、請求項１５に記載の化合物。
【請求項２８】
Ｒ２がプロパルギルである、請求項２７に記載の化合物。
【請求項２９】
以下からなる群から選択される化合物：
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチル−１，１，１−トリフルオロメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（５−（Ｎ−シクロペンチルメチルスルホンアミド）−２−（ジエチルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−（プロプ−２−イニル）メチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチルメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（５−（Ｎ−アリルメチルスルホンアミド）−２−（ジエチルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチルブチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）−プロパン酸；
（Ｓ）−２−（５−（３−クロロ−Ｎ−エチルプロピルスルホンアミド）−２−（ジエチルアミノ）−ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（５−（３−クロロ−Ｎ−メチルプロピル−スルホンアミド）−２−（ジエチルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチル−３，３，３−トリフルオロプロピルスルホンアミド）−ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸；
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチルプロピルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）−プロパン酸；および
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチル−２−メチルプロピルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）−フェニル）プロパン酸；
ならびに、これらの薬学的に許容される塩またはエステル。
【請求項３０】
薬学的に許容される担体、および請求項１に記載の１種または複数の化合物の治療有効量を含む医薬組成物。
【請求項３１】
患者における、α４インテグリンにより少なくとも部分的に媒介される疾患を治療する方法であって、請求項３０に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項３２】
哺乳動物患者における疾患の炎症要素を減少する、および／または妨げるための方法であって、該哺乳動物に請求項３０に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項３３】
哺乳動物患者における自己免疫反応を減少する、および／または妨げるための方法であって、該哺乳動物に請求項３０に記載の医薬組成物を投与することを含む方法。
【請求項３４】
前記疾患が、喘息、多発性硬化症および炎症性腸疾患から選択される、請求項３１に記載の方法。
【請求項３５】
前記疾患がクローン病である、請求項３１に記載の方法。
【請求項３６】
前記疾患が関節リウマチである、請求項３１に記載の方法。
【請求項３７】
式Ｉの化合物：
【化３】
2009528296.tif 000038
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１からＣ４のアルキルおよびＣ１からＣ４のハロアルキルからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｃ１からＣ４のアルキル、Ｃ２からＣ４のアルケニル、Ｃ２からＣ４のアルキニル、およびＣ３からＣ６のシクロアルキルからなる群から選択される］
または薬学的に許容されるその塩もしくはエステルの調製方法であって、
（ａ）式ＩＩＩの化合物：
【化４】
2009528296.tif 000039
［Ｐｇはカルボキシル保護基である］
を、還元的アミノ化条件下で、Ｃ１からＣ４のアルデヒドまたはケトン、Ｃ２からＣ４のアルケニルアルデヒドまたはアルケニルケトン、Ｃ２からＣ４のアルキニルアルデヒドまたはアルキニルケトン、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルケトンおよびベンズアルデヒドに接触させて、式ＩＶの化合物：
【化５】
2009528296.tif 000040
を得ること、
（ｂ）化合物ＩＶを、式Ｖの化合物：
【化６】
2009528296.tif 000041
を生成する条件下で、式Ｒ１ＳＯ２Ｚ（Ｚはハロである）のスルホニルハライドに接触させること、および
（ｃ）カルボキシル保護基を除去して、式Ｉの化合物を得ること
を含む方法。
【請求項３８】
式Ｉの化合物：
【化７】
2009528296.tif 000042
［式中、
Ｒ１は、Ｃ１からＣ４のアルキルおよびＣ１からＣ４のハロアルキルからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｃ１からＣ４のアルキル、Ｃ２からＣ４のアルケニル、Ｃ２からＣ４のアルキニル、およびＣ３からＣ６のシクロアルキルからなる群から選択される］
または薬学的に許容されるその塩もしくはエステルの調製方法であって、
（ａ）式ＶＩの化合物：
【化８】
2009528296.tif 000043
［Ｐｇはカルボキシル保護基である］
を、過剰のＲ’ＳＯ２Ｘに接触させて、式ＶＩＩの化合物：
【化９】
2009528296.tif 000044
を得ること、
（ｂ）式ＶＩＩの化合物から１つの−ＳＯ２Ｒ’基を選択的に除去して、式ＶＩＩＩの化合物：
【化１０】
2009528296.tif 000045
を得ること、
（ｃ）式ＶＩＩＩの化合物を、式Ｒ２−Ｘ（Ｘはハロである）を有するアルキル化剤、またはＲ２がメチルである時は硫酸ジメチルに接触させて、式ＩＸの化合物を生成させること、および
【化１１】
2009528296.tif 000046
（ｄ）カルボキシル保護基を除去して、式Ｉの化合物を得ること
を含む方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の背景）
本願は、２００６年２月２７日出願の米国仮特許出願第６０／７７７,５９５号からの優先権を主張し、この開示はその全体において本明細書中で参考として援用される。
【０００２】
（発明の分野）
本発明は、白血球の接着を、特にα４インテグリンによって媒介される白血球の接着を阻害する化合物に関し、ここで、α４インテグリンは好ましくはＶＬＡ−４である。本発明はまた、このような化合物を含む医薬組成物、さらには、本発明の化合物または医薬組成物のいずれかを用いる、例えば、炎症の治療方法にも関する。
【０００３】
（参照）
１  Ｈｅｍｌｅｒ  ａｎｄ  Ｔａｋａｄａ，欧州特許出願公開第３３０，５０６号，１９８９年８月３０日公開
２  Ｅｌｉｃｅｓ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃｅｌｌ，  ６０：５７７  ５８４  （１９９０）
３  Ｓｐｒｉｎｇｅｒ，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３４６：４２５  ４３４  （１９９０）  
４  Ｏｓｂｏｒｎ，  Ｃｅｌｌ，  ６２：３  ６  （１９９０）
５  Ｖｅｄｄｅｒ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｕｒｇｅｒｙ，  １０６：５０９  （１９８９）
６  Ｐｒｅｔｏｌａｎｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．，  １８０：７９５  （１９９４）
７  Ａｂｒａｈａｍ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．，  ９３：７７６  （１９９４）
８  Ｍｕｌｌｉｇａｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  １５０：２４０７  （１９９３）
９  Ｃｙｂｕｌｓｋｙ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２５１：７８８  （１９９１）
１０  Ｌｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｒｔｅｒｉｏｓｃｌｅｒ．  Ｔｈｒｏｍｂ．，  １３：１９７  （１９９３）
１１  Ｓａｓｓｅｖｉｌｌｅ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈ．，  １４４：２７  （１９９４）
１２  Ｙａｎｇ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （ＵＳＡ），  ９０：１０４９４  （１９９３）
１３  Ｂｕｒｋｌｙ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｉａｂｅｔｅｓ，  ４３：５２９  （１９９４）
１４  Ｂａｒｏｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．，  ９３：１７００  （１９９４）
１５  Ｈａｍａｎｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  １５２：３２３８  （１９９４）
１６  Ｙｅｄｎｏｃｋ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｎａｔｕｒｅ，  ３５６：６３  （１９９２）
１７  Ｂａｒｏｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．，  １７７：５７  （１９９３）
１８  ｖａｎ  Ｄｉｎｔｈｅｒ−Ｊａｎｓｓｅｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  １４７：４２０７  （１９９１）
１９  ｖａｎ  Ｄｉｎｔｈｅｒ−Ｊａｎｓｓｅｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ａｎｎａｌｓ．  Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ  Ｄｉｓ．，  ５２：６７２  （１９９３）
２０  Ｅｌｉｃｅｓ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．，  ９３：４０５  （１９９４）
２１  Ｐｏｓｔｉｇｏ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｃｌｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔ．，  ８９：１４４５  （１９９１）
２２  Ｐａｕｌ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｔｒａｎｓｐｌ．  Ｐｒｏｃｅｅｄ．，  ２５：８１３  （１９９３）
２３  Ｏｋａｒｈａｒａ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｃａｎ．  Ｒｅｓ．，  ５４：３２３３  （１９９４）
２４  Ｐａａｖｏｎｅｎ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎ．，  ５８：２９８  （１９９４）
２５  Ｓｃｈａｄｅｎｄｏｒｆ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊ．  Ｐａｔｈ．，  １７０：４２９  （１９９３）
２６  Ｂａｏ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｄｉｆｆ．，  ５２：２３９  （１９９３）
２７  Ｌａｕｒｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ，  ６８：８６２  （１９９３）
２８  Ｋａｗａｇｕｃｈｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，  ８３：１３０４  （１９９２）
２９  Ｋｏｎｒａｄｉ，  ｅｔ  ａｌ．，  ＰＣＴ／ＵＳ００／０１６８６，  ｆｉｌｅｄ，  Ｊａｎｕａｒｙ  ２１，  ２０００。
【０００４】
上記の公開はすべて本明細書中でそれぞれ個別の公開がその全体を参考として援用することを特別におよび個別に示される程度に、その全体を参考として援用する。
【背景技術】
【０００５】
（技術水準）
ＶＬＡ−４（α４β１インテグリン、ＣＤ４９ｄ／ＣＤ２９とも呼ばれる）は、最初、ＨｅｍｌｅｒおよびＴａｋａｄａ１により確認され、細胞表面受容体のβ１インテグリンファミリー（ファミリーの各々は２つのサブユニット、α鎖およびβ鎖を含む）の成員である。ＶＬＡ−４は、α４鎖およびβ１鎖を含む。少なくとも９種のβ１インテグリンがあり、全ては同じβ１鎖を共有し、各々が異なるα鎖を有する。これらの９種の受容体は全て、様々な細胞マトリックス分子、例えば、フィブロネクチン、ラミニン、およびコラーゲンの異なる相補的部分に結合する。ＶＬＡ−４は、例えば、フィブロネクチンに結合する。ＶＬＡ−４また、内皮細胞および他の細胞により発現される非マトリックス分子にも結合する。これらの非マトリックス分子にはＶＣＡＭ−１が含まれ、これは、培養されているサイトカイン活性化ヒト臍帯静脈内皮細胞に発現される。ＶＬＡ−４の別個のエピトープがフィブロネクチンおよびＶＣＡＭ−１結合活性を担っており、各々の活性は独立に阻害されることが示された２。
【０００６】
ＶＡＬ−４および他の細胞表面受容体により媒介される細胞間接着は、かなりの数の炎症反応に関連する。傷害部位または他の炎症刺激部位では、活性化された血管内皮細胞が白血球に接着する分子を発現する。内皮細胞への白血球接着のメカニズムは、１つには、内皮細胞上の対応する細胞表面分子に対する、白血球細胞表面受容体の認識および結合を含む。一旦結合すると、白血球は血管壁を通して移動して、損傷部位に入り、感染に抗するケミカルメディエータを放出する。免疫系の接着受容体の概説については、例えば、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ３およびＯｓｂｏｒｎ４を参照。
【０００７】
炎症性脳障害、例えば、実験的自己免疫性脳脊髄炎（ＥＡＥ）、多発性硬化症（ＭＳ）および髄膜炎は、内皮／白血球の接着メカニズムが他の点では健康な脳組織の破壊を起こす中枢神経系障害の例である。多数の白血球が、これらの炎症性疾患を有する患者における血管脳関門（ＢＢＢ）を通して移動する。白血球は、神経伝達を損傷し、麻痺を生ずる広範な組織障害を引き起こす毒性メディエータを放出する。
【０００８】
他の器官系において、組織損傷はまた、白血球の移動または活性化を生じる接着メカニズムを通じて起こる。例えば、心臓組織に対する心筋虚血の後の初期傷害は、傷害組織に白血球が入り、さらなる傷害を引き起こすことによってさらに悪化し得ることが示された（Ｖｅｄｄｅｒ他）５。接着メカニズムにより媒介される他の炎症性または治療を要する病気には、例として、喘息６〜８、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症９〜１０、ＡＩＤＳ痴呆１１、糖尿病１２〜１４（急性若年型糖尿病が含まれる）、炎症性腸疾患１５（潰瘍性大腸炎およびクローン病が含まれる）、多発性硬化症１６〜１７、関節リウマチ１８〜２１、組織移植２２、腫瘍転移２３〜２８、髄膜炎、脳炎、脳卒中、および他の脳外傷、腎炎、網膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血、および白血球介在急性肺傷害（例えば、成人呼吸窮迫症候群で起こるもの）が含まれる。
【０００９】
置換アミノピリミジンは、１つの化学類として、ＶＣＡＭ−１へのＶＬＡ−４の結合を阻害するとして開示されており、それゆえに、抗炎症性を示す２９。これらの化合物はこのような結合に対するアンタゴニスト性を有するが、これらの化合物の生体利用能の向上はそれらの効能を増大させるであろう。
【特許文献１】欧州特許出願公開第３３０，５０６号明細書
【非特許文献１】Ｃｅｌｌ，  ６０：５７７  ５８４  （１９９０）
【非特許文献２】Ｎａｔｕｒｅ，  ３４６：４２５  ４３４  （１９９０）
【非特許文献３】Ｃｅｌｌ，  ６２：３  ６  （１９９０）
【非特許文献４】Ｓｕｒｇｅｒｙ，  １０６：５０９  （１９８９）
【非特許文献５】Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．，  １８０：７９５  （１９９４）
【非特許文献６】Ｓｃｉｅｎｃｅ，  ２５１：７８８  （１９９１）
【非特許文献７】Ａｍ．  Ｊ．  Ｐａｔｈ．，  １４４：２７  （１９９４）
【非特許文献８】Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉｅｎｃｅ  （ＵＳＡ），  ９０：１０４９４  （１９９３）
【非特許文献９】Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  １５２：３２３８  （１９９４）
【非特許文献１０】Ｎａｔｕｒｅ，  ３５６：６３  （１９９２）
【非特許文献１１】Ｊ．  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ，  １４７：４２０７  （１９９１）
【非特許文献１２】Ｔｒａｎｓｐｌ．  Ｐｒｏｃｅｅｄ．，  ２５：８１３  （１９９３）
【非特許文献１３】Ｃａｎ．  Ｒｅｓ．，  ５４：３２３３  （１９９４）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１０】
本発明は、ＶＡＬ−４媒介疾患を治療するための化合物、それらの薬学的に許容される塩およびエステル、それらの組成物、それらの合成、ならびに方法を提供する。本発明のこれらの化合物についてのｉｎ  ｖｉｖｏデータ（これらの化合物はそのように評価された）に基づいて、これらの化合物は、通常の曲線下面積（ａｒｅａ  ｕｎｄｅｒ  ｔｈｅ  ｃｕｒｖｅ、ＡＵＣ）分析によって判定すると、経口投与された時、生体利用能の改善を示すと想定される。
【課題を解決するための手段】
【００１１】
一実施形態において、本発明は、式Ｉの化合物：
【００１２】
【化１２】
2009528296.tif 000003
または薬学的に許容されるその塩もしくはエステルを提供し、
式中、
Ｒ１は、Ｃ１からＣ４のアルキルおよびＣ１からＣ４のハロアルキルからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｃ１からＣ４のアルキル、Ｃ２からＣ４のアルケニル、Ｃ２からＣ４のアルキニル、およびＣ３からＣ６のシクロアルキルからなる群から選択される。
【００１３】
いくつかの実施形態において、Ｒ１はＣ１からＣ２のアルキルである。別の実施形態において、Ｒ１はメチルまたはトリフルオロメチルである。さらに別の実施形態において、Ｒ１はメチルである。
【００１４】
いくつかの実施形態において、Ｒ２はＣ１からＣ４のアルキルである。別の実施形態において、Ｒ２はＣ１からＣ３のアルキルである。さらに別の実施形態において、Ｒ２はメチル、エチル、イソプロピルまたはｎ−プロピルである。別の実施形態において、Ｒ２はメチルまたはエチルであり、さらに別の実施形態において、Ｒ２はイソプロピルである。
【００１５】
いくつかの実施形態において、Ｒ２はＣ３からＣ６のシクロアルキルである。別の実施形態において、Ｒ２はシクロペンチルである。
【００１６】
いくつかの実施形態において、Ｒ２はＣ２からＣ４のアルケニルである。別の実施形態において、Ｒ２はアリルである。
【００１７】
いくつかの実施形態において、Ｒ２はＣ２からＣ４のアルキニルである。別の実施形態において、Ｒ２はプロパルギルである。
【００１８】
本発明の化合物の例には、表１に列挙されるＲ１およびＲ２基を有するものが含まれる（これらの薬学的に許容される塩、またはエステルを含めて）。
【００１９】
【表１】
2009528296.tif 000004
別の実施形態において、本発明は式ＩＩの化合物：
【００２０】
【化１３】
2009528296.tif 000005
または薬学的に許容されるその塩もしくはエステルを提供し、
式中、
Ｒ１は、Ｃ１からＣ４のアルキルおよびＣ１からＣ４のハロアルキルからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｃ１からＣ４のアルキル、Ｃ２からＣ４のアルケニル、Ｃ２からＣ４のアルキニル、およびＣ３からＣ６のシクロアルキルからなる群から選択される。
【００２１】
いくつかの実施形態において、Ｒ１はＣ１からＣ２のアルキルである。別の実施形態において、Ｒ１はメチルまたはトリフルオロメチルである。さらに別の実施形態において、Ｒ１はメチルである。
【００２２】
いくつかの実施形態において、Ｒ２はＣ１からＣ４のアルキルである。別の実施形態において、Ｒ２はＣ１からＣ３のアルキルである。さらに別の実施形態において、Ｒ２は、メチル、エチル、イソプロピルまたはｎ−プロピルである。別の実施形態において、Ｒ２はメチルまたはエチルであり、さらに別の実施形態において、Ｒ２はイソプロピルである。
【００２３】
いくつかの実施形態において、Ｒ２はＣ３からＣ６のシクロアルキルである。別の実施形態において、Ｒ２はシクロペンチルである。
【００２４】
いくつかの実施形態において、Ｒ２はＣ２からＣ４のアルケニルである。別の実施形態において、Ｒ２はアリルである。
【００２５】
いくつかの実施形態において、Ｒ２はＣ２からＣ４のアルキニルである。別の実施形態において、Ｒ２はプロパルギルである。
【００２６】
本発明の化合物の例には、表２に列挙されるＲ１およびＲ２基を有するものが含まれる（これらの薬学的に許容される塩、またはエステルを含めて）。
【００２７】
【表２】
2009528296.tif 000006
フェニル環上のピロリジニルカルボニルオキシ基のオルトおよびメタ置換もまた本発明の範囲内にある。
【００２８】
本発明はまた、表３の化合物、さらには薬学的に許容されるこれらの塩、またはエステルを提供する。
【００２９】
【表３−１】
2009528296.tif 000007
【００３０】
【表３−２】
2009528296.tif 000008
【００３１】
【表３−３】
2009528296.tif 000009
別の態様において、本発明は、薬学的に許容される担体、および本明細書に定義される１種または複数の化合物の治療有効量を含む医薬組成物を提供する。
【００３２】
その方法の態様の１つにおいて、本発明は、患者における、α４インテグリン、好ましくはＶＬＡ−４により少なくとも部分的に媒介される疾患を治療するための方法を対象とし、この方法は、薬学的に許容される担体、および本発明の１種または複数の化合物の治療有効量を含む医薬組成物を投与することを含む。
【００３３】
本発明の化合物および医薬組成物は、α４インテグリンにより少なくとも部分的に媒介される病状を治療するのに有用であり、ここで、α４インテグリンは好ましくはＶＬＡ−４または白血球接着性である。このような病状には、例として、喘息、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、ＡＩＤＳ痴呆、糖尿病（急性若年型糖尿病が含まれる）、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎およびクローン病が含まれる）、多発性硬化症、関節リウマチ、組織移植、腫瘍転移、髄膜炎、脳炎、脳卒中、および他の脳外傷、腎炎、網膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血および白血球介在急性肺傷害（例えば、成人呼吸窮迫症候群で起こるもの）が含まれる。
【００３４】
他の病状には、これらに限らないが、炎症性の病気、例えば、結節性紅斑、アレルギー性結膜炎、視神経炎、ブドウ膜炎、アレルギー性鼻炎、強直性脊椎炎、乾癬性関節炎、血管炎、ライター症候群、全身性エリテマトーデス、進行性全身性硬化症、多発性筋炎、皮膚筋炎、ウェゲナー肉芽腫症、大動脈炎、サルコイドーシス、リンパ球減少症、側頭動脈炎、心膜炎、心筋炎、鬱血性心不全、結節性多発動脈炎、過敏症症候群、アレルギー、好酸球増多症候群、チャーグ−ストラウス症候群、慢性閉塞性肺疾患、過敏性肺臓炎、慢性活動性肝炎、間質性膀胱炎、自己免疫内分泌不全、原発性胆汁性肝硬変、自己免疫再生不良性貧血、慢性持続性肝炎、および甲状腺炎が含まれる。
【００３５】
一実施形態において、α４インテグリンにより媒介される病状は炎症性疾患である。
【００３６】
別の実施形態において、病状は自己免疫疾患である。
【００３７】
いくつかの実施形態において、疾患は、喘息、多発性硬化症および炎症性腸疾患から選択される。別の実施形態において、疾患はクローン病である。さらに別の実施形態において、疾患は関節リウマチである。
【００３８】
別の態様において、本発明は、式Ｉの化合物：
【００３９】
【化１４】
2009528296.tif 000010
または薬学的に許容されるその塩もしくはエステルの調製方法を提供し、
式中、
Ｒ１は、Ｃ１からＣ４のアルキルおよびＣ１からＣ４のハロアルキルからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｃ１からＣ４のアルキル、Ｃ２からＣ４のアルケニル、Ｃ２からＣ４のアルキニル、およびＣ３からＣ６のシクロアルキルからなる群から選択され、
この方法は、
（ａ）式ＩＩＩの化合物：
【００４０】
【化１５】
2009528296.tif 000011
［Ｐｇはカルボキシル保護基である］
を、還元的アミノ化条件下で、Ｃ１からＣ４のアルデヒドまたはケトン、Ｃ２からＣ４のアルケニルアルデヒドまたはアルケニルケトン、Ｃ２からＣ４のアルキニルアルデヒドまたはアルキニルケトン、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキルケトンおよびベンズアルデヒドに接触させて、式ＩＶの化合物：
【００４１】
【化１６】
2009528296.tif 000012
を得ること、
（ｂ）化合物ＩＶを、式Ｖの化合物：
【００４２】
【化１７】
2009528296.tif 000013
を生成する条件下で、式Ｒ１ＳＯ２Ｚ（Ｚはハロである）のスルホニルハライドに接触させること、および
（ｃ）カルボキシル保護基を除去して、式Ｉの化合物を得ること
を含む。
【００４３】
別の態様において、本発明は、式Ｉの化合物：
【００４４】
【化１８】
2009528296.tif 000014
または薬学的に許容されるその塩もしくはエステルの調製方法を提供し、
式中、
Ｒ１は、Ｃ１からＣ４のアルキルおよびＣ１からＣ４のハロアルキルからなる群から選択され；
Ｒ２は、Ｃ１からＣ４のアルキル、Ｃ２からＣ４のアルケニル、Ｃ２からＣ４のアルキニル、およびＣ３からＣ６のシクロアルキルからなる群から選択され、
この方法は、
（ａ）式ＶＩの化合物：
【００４５】
【化１９】
2009528296.tif 000015
［Ｐｇはカルボキシル保護基である］
を、過剰のＲ’ＳＯ２Ｘに接触させて、式ＶＩＩの化合物：
【００４６】
【化２０】
2009528296.tif 000016
を得ること、
（ｂ）式ＶＩＩの化合物から１つの−ＳＯ２Ｒ’基を選択的に除去して、式ＶＩＩＩの化合物：
【００４７】
【化２３】
2009528296.tif 000017
を得ること、
（ｃ）式ＶＩＩＩの化合物を、式Ｒ２−Ｘ（Ｘはハロである）を有するアルキル化剤、またはＲ２がメチルである時は硫酸ジメチルに接触させて、式ＩＸの化合物を生成させること、および
【００４８】
【化２４】
2009528296.tif 000018
（ｄ）カルボキシル保護基を除去して、式Ｉの化合物を得ること
を含む。
【発明を実施するための最良の形態】
【００４９】
前記のように、本発明は、白血球の接着を、特に、α４インテグリン、好ましくはＶＬＡ−４により少なくとも部分的に媒介される白血球の接着を阻害する化合物に関する。しかし、本発明をさらに詳細に説明する前に、まず、次の用語を定義する。
【００５０】
定義
特に断らなければ、明細書および特許請求の範囲において用いられる次の用語は、下に記載の意味を有する。
【００５１】
本明細書において、特に断らなければ、「アルキル」は、１から４個の炭素原子、好ましくは１から３個の炭素原子を有する線状または分岐状の１価の炭化水素基を表す。この用語は、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソ−プロピル、ｎ−ブチル、イソ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、およびｔ−ブチルのような基によって例示される。
【００５２】
「アルケニル」は、少なくとも１つ、好ましくは１つのビニル（＞Ｃ＝Ｃ＜）不飽和部分を有する、２から４個の炭素原子、好ましくは２から３個の炭素原子の線状または分岐状の１価の炭化水素基を表す。このようなアルケニル基の例には、ビニル（−ＣＨ＝ＣＨ２）、アリル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２）、ｎ−プロペン−１−イル（−ＣＨ＝ＣＨＣＨ３）、ｎ−ブテン−２−イル（−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨＣＨ３）などが含まれる。この用語には、シスおよびトランス異性体またはこれらの異性体の混合物が含まれる。
【００５３】
「アルケニル」は、少なくとも１つ、好ましくは１つのアセチレン性不飽和（−Ｃ≡Ｃ−）部分を有し、２から４個の炭素原子、好ましくは２から３個の炭素原子を有する線状または分岐状の１価の炭化水素基を表す。このようなアルケニル基の例には、アセチレニル（−Ｃ≡ＣＨ）、プロパルギル（−ＣＨ２≡ＣＨ）、ｎ−プロピン−１−イル（−ＣＨ≡ＣＨＣＨ３）などが含まれる。
【００５４】
「ハロ」または「ハロゲン」は、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨードを表し、好ましくは、フルオロまたはクロロのいずれかである。
【００５５】
「ハロアルキル」は、１から５個のハロ基を有するアルキル基を表す。好ましくは、このような基は１から３個のハロ基および１から２個の炭素原子を有する。ハロアルキル基の例には、ハロメチル（例えば、フルオロメチル）、ジハロメチル（例えば、ジフルオロメチル）、トリハロメチル（例えば、トリフルオロメチル）、ハロエチル（例えば、２−クロロエト−１−イル）、トリハロエチル（例えば、２，２，２−トリフルオロエト−１−イル）、ハロプロピル（例えば、３−クロロプロプ−１−イル）およびトリハロプロピル（例えば、３，３，３−トリフルオロプロプ−１−イル）が含まれる。
【００５６】
「薬学的に許容される担体」は、一般的に、安全で毒性がなく、生物学的にも他の点でも望ましくなくはない医薬組成物を調製するのに有用な担体を意味し、ヒトの医薬用途だけでなく獣医薬用途にも許容される担体を含む。本明細書および特許請求の範囲において用いられる「薬学的に許容される担体」には、このような担体の１種および２種以上のどちらも含まれる。
【００５７】
「薬学的に許容される塩」は、本発明の化合物の生物学的効果および性質を保持し、生物学的にも他の点でも望ましくなくはない塩を表す。多くの場合、本発明の化合物は、アミノおよび／またはカルボキシル基あるいはこれらに似た基の存在のおかげで、酸および／または塩基の塩を生成できる。
【００５８】
薬学的に許容される塩基付加塩は、無機および有機の塩基から調製できる。無機塩基から誘導される塩には、単に例としてであるが、ナトリウム、カリウム、リチウム、アンモニウム、カルシウム、およびマグネシウムの塩が含まれる。有機塩基から誘導される塩には、これらに限らないが、第１級、第２級、および第３級アミン、例えば、アルキルアミン、ジアルキルアミン、トリアルキルアミン、置換アルキルアミン、ジ（置換アルキル）アミン、トリ（置換アルキル）アミン、アルケニルアミン、ジアルケニルアミン、トリアルケニルアミン、置換アルケニルアミン、ジ（置換アルケニル）アミン、トリ（置換アルケニル）アミン、シクロアルキルアミン、ジ（シクロアルキル）アミン、トリ（シクロアルキル）アミン、置換シクロアルキルアミン、ジ置換シクロアルキルアミン、トリ置換シクロアルキルアミン、シクロアルケニルアミン、ジ（シクロアルケニル）アミン、トリ（シクロアルケニル）アミン、置換シクロアルケニルアミン、ジ置換シクロアルケニルアミン、トリ置換シクロアルケニルアミン、アリールアミン、ジアリールアミン、トリアリールアミン、ヘテロアリールアミン、ジヘテロアリールアミン、トリヘテロアリールアミン、複素環アミン、ジ複素環アミン、トリ複素環アミン、混合ジ−およびトリ−アミン（そのアミンの置換基の少なくとも２つが異なり、アルキル、置換アルキル、アルケニル、置換アルケニル、シクロアルキル、置換シクロアルキル、シクロアルケニル、置換シクロアルケニル、アリール、ヘテロアリール、複素環などからなる群から選択される）の塩が含まれる。やはり含まれるのは、２つまたは３つの置換基が、アミノ窒素と一緒に、複素環式またはヘテロアリール基を形成するアミンである。
【００５９】
適切なアミンの例には、単に例としてであるが、イソプロピルアミン、トリメチルアミン、ジエチルアミン、トリ（イソ−プロピル）アミン、トリ（ｎ−プロピル）アミン、エタノールアミン、２−ジメチルアミノエタノール、トロメタミン、リシン、アルギニン、ヒスチジン、カフェイン、プロカイン、ヒドラバミン、コリン、ベタイン、エチレンジアミン、グルコサミン、Ｎ−アルキルグルカミン、テオブロミン、プリン類、ピペラジン、ピペリジン、モルホリン、Ｎ−エチルピペリジンなどが含まれる。他のカルボン酸誘導体、例えば、カルボン酸アミド（カルボキサミド、低級アルキルカルボキサミド、ジアルキルカルボキサミド、などが含まれる）は、本発明の実施において有用であると思われることもまた理解されるべきである。
【００６０】
薬学的に許容される酸付加塩は、無機および有機の酸から調製され得る。無機酸から誘導される塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸の塩などが含まれる。有機酸から誘導される塩には、酢酸、プロピオン酸、グリコール酸、ピルビン酸、シュウ酸、リンゴ酸、マロン酸、コハク酸、マレイン酸、フマル酸、酒石酸、クエン酸、安息香酸、ケイ皮酸、マンデル酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ｐ−トルエン−スルホン酸、サリチル酸などの塩が含まれる。
【００６１】
「薬学的に許容される陽イオン」という用語は、薬学的に許容される塩の陽イオンを表す。
【００６２】
本明細書において定義されている置換基の全てにおいて、それら自体に対するさらなる置換基を有する置換基を定義することにより（例えば、それ自体置換アリール基により置換されている置換アリール基を、置換基として有する置換アリール、など）到達するポリマーは、本明細書では、含めると意図されていない。このような場合、このような置換基の最大数は３つである。すなわち、上の定義の各々は、例えば、置換アリール基は、−置換アリール−（置換アリール）−（置換アリール）までに限定されるという制限によって制約されている。
【００６３】
疾患を「治療すること」またはその「治療」は、
（１）疾患を防止すること、すなわち、疾患に曝される、または罹り易くなっているかもしれないが、まだ疾患の症状を経験していない、または示していない哺乳動物において、疾患の臨床症状を示さないようにすること、
（２）疾患を抑制すること、すなわち、疾患またはその臨床徴候の進展を阻む、または弱めること、あるいは、
（３）疾患を和らげること、すなわち、疾患またはその臨床徴候を軽減すること
を含む。
【００６４】
「治療有効量」は、疾患を治療するために哺乳動物に投与された時、その疾患に対するこのような治療を達成するのに十分である、化合物の量を意味する。「治療有効量」は、化合物、疾患およびその重篤度、ならびに治療される哺乳動物の年齢、体重などに応じて変わるであろう。
【００６５】
インテグリンは、大部分の細胞外マトリックスタンパク質、例えば、コラーゲン、フィブロネクチン、およびラミニンに結合する、動物細胞上の主な受容体である、膜貫通相同リンカータンパク質の大きなファミリーである。インテグリンは、α鎖およびβ鎖からなるヘテロダイマーである。今日まで、９種の異なるαサブユニットおよび１４種の異なるβサブユニットから作られる、２０種の異なるインテグリンヘテロダイマーが確認されている。「α４インテグリン」という用語は、βサブユニットのいずれかと対になったα４サブユニットを含む種類のヘテロダイマーで酵素連結型細胞表面受容体を表す。ＶＬＡ−４は、α４インテグリンの例であり、α４とβ１サブユニットとのヘテロダイマーであり、α４β１インテグリンとも呼ばれる。
【００６６】
化合物調製
本発明の化合物は、容易に入手できる出発物質から、次の一般的方法および手順を用いて調製できる。典型的な、または好ましいプロセス条件（すなわち、反応温度、時間、反応物のモル比、溶媒、圧力など）が記載されるが、特に断らなければ、他のプロセス条件もまた用いられ得ることが理解されるであろう。最適な反応条件は、用いられる特定の反応物または溶媒により変わり得るが、このような条件は、当業者により、慣例となっている最適化手順によって決定され得る。
【００６７】
さらに、当業者には明らかであろうが、特定の官能基が望ましくない反応を受けることを防ぐために、一般に用いられている保護基が必要であり得る。様々な官能基に対する適切な保護基、さらには特定の官能基を保護し、脱保護するための適切な条件は、当技術分野においてよく知られている。例えば、多数の保護基が、Ｔ．  Ｗ．  Ｇｒｅｅｎｅ、およびＧ．  Ｍ．  Ｗｕｔｓ、「Ｐｒｏｔｅｃｔｉｎｇ  Ｇｒｏｕｐｓ  ｉｎ  Ｏｒｇａｎｉｃ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ」、第２版、Ｗｉｌｅｙ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９９１年、およびそれに引用されている参考文献に記載されている。
【００６８】
さらに、本発明の化合物は通常、１つまたは複数のキラル中心を含むであろう。したがって、望まれる場合、このような化合物は、純粋な立体異性体として、すなわち、個々のエナンチオマーまたはジアステレオマーとして、あるいは立体異性体濃縮（ｅｎｒｉｃｈｅｄ）混合物として、調製または分離できる。このような立体異性体（および濃縮混合物）の全ては、特に断らなければ、本発明の範囲内に含まれる。純粋な立体異性体（または濃縮混合物）は、例えば、光学活性出発物質、または当技術分野においてよく知られている立体選択的な試薬を用いて調製され得る。別法として、このような化合物のラセミ混合物は、例えば、キラルカラムクロマトグラフィー、キラル分割試薬などを用いて分離できる。
【００６９】
本発明のほとんどの化合物は、ＣｈｅｍＤｒａｗ  ｖ．１０．０（Ｃａｍｂｒｉｄｇｅｓｏｆｔ（１００  Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ  Ｐａｒｋ  Ｄｒｉｖｅ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、ＭＡ  ０２１４０）から入手可能）を用いて命名された。
【００７０】
一実施形態において、本発明の化合物は、スキーム１として下に記載されるようにして調製でき、このスキームでは、単に例示の目的で、Ｒ１はメチルであり、Ｒ２はイソプロピルである。
【００７１】
【化２５】
2009528296.tif 000019
ここで、Ｐｇは、ベンジル、ｔ−ブチルなどのようなカルボキシル保護基である。
【００７２】
スキーム１は、Ｒ２がアルキルまたはシクロアルキルである化合物の調製に特に有用である。
【００７３】
スキーム１において、５−アミノピリミジン出発中間体（化合物１．１）は、米国特許第７０２６３８４号Ｂ１に詳細に記載され、例示のみのために、このスキームでは、４−置換フェニルアラニン誘導体として示されている。言うまでもなく、２−および３−置換フェニルアラニン誘導体は同様の反応経路に従うであろうことが理解される。
【００７４】
具体的には、スキーム１において、５−アミノ−２−ジエチルアミノ−４−置換ピリミジン（化合物１．１）（５重量％Ｐｄ／Ｃまたは５重量％ＰｔＯ２による還元によって、対応する５−ニトロ−ピリミジンから調製される）が、通常の還元的アミノ化条件下で、僅かに過剰のＣ１〜Ｃ４アルデヒドまたはケトン（スキーム１ではアセトンにより例示されている）と反応させられる。スキーム１では、化合物１．１の５−アミノ基が中間体イミン（示されていない）を生成し、これが、通常の還元剤（例えば、シアノ水素化ホウ素ナトリウム、水素化ホウ素ナトリウム、ＰｔＯ２のような適切な触媒上の水素など）によって、対応するアミン（化合物１．２）にｉｎ  ｓｉｔｕで還元される。反応は、テトラヒドロフラン、塩化メチレンなどのような適切な不活性稀釈剤中で実施される。反応は、反応が実質的に完了するまで（これは、通常、約０．５から１６時間以内に起こる）、約０℃から約３０℃に保たれる。反応が完了すると、化合物１．２は、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めて、通常の方法によって回収されるか、あるいは別法として、精製および／または分離なしに次のステップで用いられる。
【００７５】
対応するアルキルスルホニルアミド基（化合物１．３）への化合物１．２のアミン基の変換は、通常の方法により進行する。例えば、１つの方法では、化合物１．２は、生成する酸を捕捉するための適切な塩基、例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなどの存在下に、僅かに過剰のアルカンスルホニルハライド、例えばメタンスルホニルクロリドに接触させられる。反応は、好ましくは、テトラヒドロフラン、ジオキサン、クロロホルムなどのような適切な不活性溶媒中で実施される。反応は、好ましくは、約−５℃から−３０℃で実施され、反応が実質的に完了するまで（これは、通常、０．５から１６時間で起こる）続けられる。反応が完了すると、化合物１．３は、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めて、通常の方法によって回収できる、あるいは別法として、精製および／または分離なしに次のステップで用いられる。
【００７６】
アルキルスルホニルハライドは、知られている化合物か、または通常の合成手順によって調製できる化合物のいずれかである。このような化合物は通常、対応するスルホン酸から、すなわち、式Ｒ１−ＳＯ３Ｈ（Ｒ１は上で定義された通りである）の化合物から、三塩化リンおよび五塩化リンを用いて調製される。スルホニルクロリドを得るために、反応は通常、溶媒無しかまたは不活性溶媒（例えば、ジクロロメタン）中のいずれかで、０℃から約８０℃の範囲の温度で、約１から約４８時間、スルホン酸を約２から５モル当量の三塩化リンまたは五塩化リンに接触させることによって実施される。別法として、スルホニルクロリドは、対応するチオール化合物から、すなわち、式Ｒ１−ＳＨ（Ｒ１は上で定義された通りである）の化合物から、このチオールを通常の反応条件下で塩素（Ｃｌ２）および水により処理することによって調製できる。
【００７７】
本発明において使用されるスルホニルクロリドの例には、これらに限らないが、メタンスルホニルクロリド、エタンスルホニルクロリド、２−プロパンスルホニルクロリド、１−ブタンスルホニルクロリド、トリフルオロメタンスルホニルクロリド、２，２，２−トリフルオロエタンスルホニルクロリドなどが含まれる。
【００７８】
次いで、化合物１．３のカルボキシル保護基は、通常の条件により外されて、式Ｉの化合物である化合物１．４が得られる。一実施形態において、ｔ−ブチル保護基は、ギ酸との接触により外すことができる。別の実施形態において、ベンジル保護基は、高い水素の圧力の下で、通常メタノールのようなプロトン性溶媒中、（パラジウム／カーボン）触媒の存在下に水素に接触させることにより外すことができる。反応が完了すると、化合物１．４は、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めて、通常の方法によって回収できる。
【００７９】
別の実施形態において、本発明の化合物は、下にスキーム２として記載されるようにして調製できる。
【００８０】
【化２６】
2009528296.tif 000020
ここで、Ｒ１およびＲ２は本明細書で定義された通りであり、Ｐｇはカルボキシル保護基であり、Ｘはハロである。
【００８１】
スキーム２において、５−アミノピリミジン出発中間体（化合物１．１）は、米国特許第７０２６３８２号Ｂ１に詳細に記載されており、例示のみのために、このスキームでは、４−置換フェニルアラニン誘導体として示されている。言うまでもなく、２−および３−置換フェニルアラニン誘導体は同様の反応経路に従うであろうことが理解される。
【００８２】
具体的には、スキーム２において、５−アミノ−２−ジエチルアミノ−４−置換ピリミジン（化合物１．１）（５重量％Ｐｄ／Ｃまたは５重量％ＰｔＯ２による還元によって、対応する５−ニトロ−ピリミジンから調製される）が、生成する酸を捕捉するために適切な塩基（例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなど）の存在下に、僅かに過剰のＲ１−スルホニルハライド（例えばメタンスルホニルクロリド）と反応させられる。反応は、好ましくは、適切な不活性溶媒（例えば、テトラヒドロフラン、ジオキサン、ジクロロメタン、クロロホルムなど）中で実施される。反応は、好ましくは、約−５℃から３０℃で実施され、反応が実質的に完了するまで（これは、通常、０．５から１６時間で起こる）続けられる。反応が完了すると、化合物１．５は、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めて、通常の方法によって回収できる、あるいは別法として、精製および／または分離なしに次のステップで用いられる。
【００８３】
化合物１．５からの１つのＲ１ＳＯ２−基の選択的除去は、通常の条件下で進行する。例えば、任意選択でＴＨＦなどの存在の下での、メタノール、エタノール、または水のようなプロトン性溶媒（例えば、メタノール／テトラヒドロフランの１：１混合物、または水／テトラヒドロフランの１：１混合物）中での化合物１．５と塩基との反応は、化合物１．６を与える。反応混合物は、過剰の適切な塩基（例えば、炭酸カリウム、炭酸ナトリウムなど）を含み、反応は、好ましくは、２０℃から６０℃のような高温に保たれる。反応は、実質的に完了するまで（これは、通常、２４〜１４４時間で起こる）続けられる。反応が完了すると、化合物１．６は、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めて、通常の方法によって回収できる、あるいは別法として、精製および／または分離なしに次のステップで用いられる。
【００８４】
化合物１．６と、過剰のアルキルハライド、硫酸ジアルキル、アルケニルハライド、アルキニルハライド、またはシクロアルキルハライド（すなわち、Ｘ−Ｒ２  −  「ハライド化合物」）との反応は、通常の条件下で進行して、化合物１．７を与える。この反応は通常、不活性稀釈剤（例えば、アセトン、クロロホルム、塩化メチレンなど）中で、反応の間に生成する酸を捕捉するための塩基（例えば、炭酸カリウム、トリエチルアミンなど）の存在下に、化合物１．６と、約１．１から２０当量程のハライド化合物とを接触させることによって実施される。反応は、好ましくは、約２０℃から６０℃で実施され、実質的に完了するまで（これは、通常、０．１から１６時間で起こる）続けられる。反応が完了すると、化合物１．６は、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めて、通常の方法によって回収できる、あるいは別法として、精製および／または分離なしに次のステップで用いられる。
【００８５】
次いで、化合物１．７のカルボキシ保護基は通常の条件により外されて、化合物１．８（式Ｉの化合物）が得られる。一実施形態において、ｔ−ブチル保護基は、ギ酸との接触により外すことができる。別の実施形態において、ベンジル保護基は、高い水素の圧力の下で、通常メタノールのようなプロトン性溶媒中、（パラジウム／カーボン）触媒の存在下に水素に接触させることにより外すことができる。反応が完了すると、化合物１．８は、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めて、通常の方法によって回収できる。
【００８６】
さらに別の実施形態において、本発明の化合物は、下にスキーム３として記載されるようにして調製できる。
【００８７】
【化２７】
2009528296.tif 000021
ここで、Ｒ１は上で定義された通りであり、Ｐｇは、ベンジル、ｔ−ブチルなどのようなカルボキシル保護基であり、Ｒ２’は、ヨード基に結合したＣＨ２部分を有する、アルキル、アルケニル、アルキニル、またはフェニルアルキレン基である。
【００８８】
スキーム１において、５−アミノピリミジン出発中間体（化合物１．１）は、米国特許第７０２６３８２号Ｂ１に詳細に記載されており、例示のみのために、このスキームでは、４−置換フェニルアラニン誘導体として示されている。言うまでもなく、２−および３−置換フェニルアラニン誘導体は同様の反応経路に従うであろうことが理解される。
【００８９】
具体的には、スキーム１において、５−アミノ−２−ジエチルアミノ−４−置換ピリミジン（化合物１．１）（５重量％Ｐｄ／Ｃまたは５重量％ＰｔＯ２による還元によって、対応する５−ニトロ−ピリミジンから調製される）が、通常の方法によって、対応するトリフルオロアセトアミド（化合物１．８）に変換される。例えば、僅かに過剰のトリフルオロ酢酸無水物が、化合物１．１と、適切な不活性稀釈剤（例えば、テトラヒドロフラン、塩化メチレン、ピリジンなど）中で、一緒にされる。この反応は、反応が実質的に完了するまで（これは、通常、０．５から２４時間以内に起こる）約０℃から３０℃に保たれる。反応が完了すると、化合物１．８は、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めて、通常の方法によって回収されるか、あるいは別法として、精製および／または分離なしに次のステップで用いられる。
【００９０】
対応するＮ（Ｒ２’），Ｎ−トリフルオロアセトアミドピリミジン（化合物１．９）への化合物１．８の変換は、やはり、通常の技法により進行する。例えば、過剰のハライド（Ｒ２’−Ｉ）が、過剰の適切な塩基（例えば、炭酸カリウム）の存在下に、化合物１．８と、適切な不活性稀釈剤（例えば、ＤＭＦ）中で一緒にされる。一実施形態において、ほぼ２当量のＲ２’−Ｉおよび炭酸カリウムが用いられる。反応は密封容器中で雰囲気条件下で保たれ、反応が実質的に完了するまで（これは、通常、２０〜７２時間で起こる）続けられる。反応が完了すると、化合物１．９は、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過を含めて、通常の方法によって回収されるか、あるいは別法として、精製および／または分離なしに次のステップで用いられる。
【００９１】
次いで、トリフルオロアセチル基は除去されて、対応するアミン（化合物１．１０）が得られる。この実施形態において、トリフルオロアセチル基は、アミン保護基としての役割を果たす。上のように、この反応は、例えば、化合物１．９と大過剰の適切な塩基（例えば、炭酸カリウム）とを、水とプロトン性溶媒（例えば、メタノール）の混合物中で接触させることによって、通常の通り進行する。反応は、４０℃から６０℃のような高温で実施され、反応が実質的に完了するまで続けられる。反応が完了すると、化合物１．１０は、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過を含めて、通常の方法によって回収されるか、あるいは別法として、精製および／または分離なしに次のステップで用いられる。
【００９２】
次に、対応するアルキルスルホニルアミド基（化合物１．１１）への化合物１．１０のアミン基の変換は、通常の方法により進行する。例えば、１つの方法では、化合物１．１０が、生成する酸を捕捉するために適切な塩基（例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミンなど）の存在下に、僅かに過剰のアルキルスルホニルハライドに接触させられる。反応は、好ましくは、適切な不活性溶媒（例えば、テトラヒドロフラン、ジオキサン、クロロホルムなど）中で実施される。反応は、好ましくは、０℃から３０℃で実施され、反応が実質的に完了するまで（これは、通常、２〜４８時間で起こる）続けられる。反応が完了すると、化合物１．１１は、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過を含めて、通常の方法によって回収できる、あるいは別法として、精製および／または分離なしに次のステップで用いられる。
【００９３】
化合物１．１１のカルボキシル保護基は、通常の条件により除去でき、化合物１．１２（式Ｉの化合物）が得られる。一実施形態において、ｔ−ブチル保護基は、ギ酸との接触により外すことができる。別の実施形態において、ベンジル保護基は、高い水素の圧力の下で、通常メタノールのようなプロトン性溶媒中、（パラジウム／カーボン）触媒の存在下に水素に接触させることにより外すことができる。反応が完了すると、化合物１．１２は、中和、蒸発、抽出、沈殿、クロマトグラフィー、濾過などを含めて、通常の方法によって回収できる。
【００９４】
本発明はまた本発明の化合物のエステルも含む。エステルの調製は、上に記載された様々なスキームに、例えば、スキーム１（化合物１．３）、スキーム２（化合物１．７）、およびスキーム３（化合物１．１１）に例示されている。さらに、実施例１は、（Ｓ）−４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）−ピリミジン−４−イルアミノ）−３−オキソプロピル）フェニルピロリジン−１−カルボキシレートの調製を記載し、実施例４は、（Ｓ）−４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−（プロプ−２−イニル）メチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−オキソプロピル）フェニルピロリジン−１−カルボキシレートの調製を記載する。本発明の酸のエステルは、また、当技術分野においてよく知られている方法によって、酸から調製できる。例えば、アミノ酸のメチルエステルは、Ｂｒｅｎｎｅｒ  ａｎｄ  Ｈｕｂｅｒ、Ｈｅｌｖ．  Ｃｈｉｍ．  Ａｃｔａ  １９５３年、３６、１１０９頁の方法を用いて調製できる。
【００９５】
医薬製剤
医薬として用いられる時、本発明の化合物は、通常、医薬組成物の形で投与される。これらの化合物は、経口、直腸、経皮、皮下、静脈内、筋肉内、および鼻腔内を含めて、様々な経路によって投与できる。これらの化合物は、注射および経口組成物のどちらとしても効果的である。このような組成物は、製薬技術においてよく知られている仕方で調製され、少なくとも１種の活性化合物を含む。
【００９６】
本発明はまた、活性成分として上の式Ｉ〜ＩＩの化合物の１種または複数を、薬学的に許容される担体と共に含む医薬組成物も含む。本発明の組成物の製造では、活性成分は通常、賦形剤と混合され、賦形剤により希釈される、あるいは、カプセル、サシェ、紙または他の入れ物の形態であり得る担体内に包まれる。用いられる賦形剤は、通常、ヒトの患者または他の哺乳動物に投与するのに適する賦形剤である。賦形剤が稀釈剤としての役目を果たす時、それは、活性成分のビヒクル、担体、媒体の機能を果たす、固体、半固体、または液体の物質であり得る。こうして、本発明の組成物は、錠剤、丸剤、粉末、薬用ドロップ、サシェ、カシェ剤、エリキシル剤、懸濁液、エマルジョン、溶液、シロップ、エアロゾル（固体として、または液体媒体における）、例えば１０重量％までの活性化合物を含む軟膏、ソフトおよびハードゼラチンカプセル、坐薬、滅菌注射液、ならびにパッケージ化滅菌粉末の形態であり得る。
【００９７】
製剤の調製において、活性化合物を、他の成分と一緒にする前に、粉砕して適切な粒径にする必要があり得る。活性化合物が実質的に不溶である場合、それは通常、２００メッシュ未満の粒径に粉砕される。活性化合物が実質的に水溶性である場合、粒径は通常、製剤において実質的に均一な分布が得られるように、粉砕により、例えば約４０メッシュに調整される。
【００９８】
適切な賦形剤のいくつかの例には、ラクトース、デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン類、アカシアゴム、リン酸カルシウム、アルギン酸塩、トラガカント、ゼラチン、ケイ酸カルシウム、マイクロクリスタリンセルロース、ポリビニルピロリドン、セルロース、水、シロップ、およびメチルセルロースが含まれる。製剤は、さらに、滑剤、例えば、タルク、ステアリン酸マグネシウム、およびミネラルオイル；湿潤剤；乳化剤および懸濁剤；保存剤、例えば、ヒドロキシ安息香酸メチルおよびプロピル；甘味料；ならびに香味料を含み得る。本発明の組成物は、当技術分野において知られている手順を用いることによって、患者に投与された後、活性成分を速放、持続または遅延放出させるように製剤できる。
【００９９】
静脈内製剤による治療剤の投与は、製薬業界においてよく知られている。静脈内製剤は、単に治療剤が可溶である組成物であること以外に、特定の品質を有しているべきである。例えば、製剤は（複数の）活性成分の全体としての安定性を高めるべきであり、また、製剤の製造は費用効率の高いものであるべきである。これらの要素の全てが、最終的に、静脈内製剤の全体としての成功および有用性を決める。
【０１００】
本発明の化合物の医薬製剤に含められ得る他の補助的な添加剤は、次の通りである：溶媒：エタノール、グリセロール、プロピレングリコール；安定剤：エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、クエン酸；殺菌性保存剤：ベンジルアルコール、メチルパラベン、プロピルパラベン；緩衝剤：クエン酸／クエン酸ナトリウム、酒石酸水素カリウム、酒石酸水素ナトリウム、酢酸／酢酸ナトリウム、マレイン酸／マレイン酸ナトリウム、フタル酸水素ナトリウム、リン酸／リン酸二水素カリウム、リン酸／リン酸水素二ナトリウム；および張性調整剤（ｔｏｎｉｃｉｔｙ  ｍｏｄｉｆｉｅｒ）：塩化ナトリウム、マンニトール、デキストロース。
【０１０１】
緩衝剤の存在は、約４から約８の範囲、より好ましくは約４から約６の範囲に水溶液のｐＨを保つために必要であり得る。緩衝系は、一般的に、弱酸とその可溶性塩の混合物、例えば、クエン酸ナトリウム／クエン酸；あるいは、二塩基酸のモノカチオンまたはジカチオン塩、例えば、酒石酸水素カリウム、酒石酸水素ナトリウム、リン酸／リン酸二水素カリウム、およびリン酸／リン酸水素二ナトリウムである。
【０１０２】
使用される緩衝系の量は、（１）所望のｐＨ；および（２）薬剤の量に依存する。一般的に、使用される緩衝系の量は、４から８の範囲のｐＨに保つために、製剤の緩衝剤：薬剤のモル比で（緩衝剤のモル数は、緩衝剤成分、例えば、クエン酸ナトリウムおよびクエン酸を合わせたモル数と見なされている）０．５：１から５０：１であり、通常、緩衝剤（合わせた）と存在する薬剤とのモル比で１：１から１０：１が用いられる。
【０１０３】
本発明において有用な１つの緩衝剤は、組成物の水溶液のｐＨを４〜６に保つのに十分な、１ｍＬ当たり１から１５ｍｇのクエン酸に対して、１ｍＬ当たり５から５０ｍｇのクエン酸ナトリウムの範囲のクエン酸ナトリウム／クエン酸である。
【０１０４】
緩衝剤はまた、ガラス容器またはゴム栓から浸出するか、あるいは普通の水道水に存在し得る、溶解した金属イオン（例えば、Ｃａ、Ｍｇ、Ｆｅ、Ａｌ、Ｂａ）による、可溶性金属の錯体生成による薬剤の沈殿を防ぐためにも存在し得る。緩衝剤は、薬剤との競合的錯化剤として働き、望ましくない微粒子の生成に至る、可溶性金属の錯体を生成し得る。
【０１０５】
さらに、添加剤、例えば、ヒトの血液と同じ値に張性を調節するための約１〜８ｍｇ／ｍＬの量の塩化ナトリウムの存在は、静脈内製剤の投与で、吐き気または下痢のような望ましくない副作用に、また可能性として関連する血液障害に至り得る、赤血球の膨張または収縮を避けるために必要であり得る。一般に、製剤の張性は、２８２から２８８ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲にあるヒトの血液のそれに合致し、一般に、２８５ｍＯｓ／ｋｇであり、この値は、塩化ナトリウムの０．９％溶液に対応する浸透圧に等しい。
【０１０６】
静脈内製剤は、直接の静脈内注射（ｉ．ｖ．ボーラス）によって投与できる、あるいは、０．９％塩化ナトリウム注射液または他の適合する注入溶液のような適当な注入溶液に加えることにより、注入によって投与できる。
【０１０７】
本発明の組成物は、好ましくは、経口の単位投与形態として製剤され、各投与は、約１から約２５０ｍｇ、より普通には約５から約１００ｍｇ、例えば約１０から約３０ｍｇの活性成分を含む。「単位投薬形態」という用語は、ヒトの患者または他の哺乳動物に対して、一体化した投与として適する物理的に分離している単位を表し、各単位は、所望の治療効果を生ずるように計算された予め決められた量の活性物質を、適切な医薬賦形剤と共に含む。
【０１０８】
活性化合物は広い投与量範囲に渡って効果があり、通常、薬学的に有効な量で投与される。しかし、実際に投与される化合物の量は、治療される病状、選択される投与経路、投与される実際の化合物、個々の患者の年齢、体重、および反応、患者の症状の重篤度などを含めて、関連する状況を考慮に入れて、医師により決められることが理解されるであろう。
【０１０９】
錠剤のような固体組成物の調製では、活性主成分は、本発明の化合物の均質な混合物を含む固体予備製剤組成物を生成するために、医薬賦形剤と混合される。これらの予備製剤組成物を均質であると言う場合、活性成分が組成物の全体に一様に分散しているので、組成物が、錠剤、丸剤およびカプセルのような、等しく効果的な単位投与形態に容易に小分割できることを意味する。次いで、この固体予備製剤は、例えば０．１から約５００ｍｇの本発明の活性成分を含む、前記のタイプの単位投与形態に小分割される。
【０１１０】
本発明の錠剤または丸剤は、長期作用の利点をもたらす投与形態とするために、コーティングされても、あるいは別の仕方で構成されてもよい。例えば、錠剤または丸剤は、内側投与部分および外側投与部分を備え、後者が前者を覆う外皮の形態になっていてもよい。この２つの部分は溶腸性の層によって隔てることができ、この層は、胃における崩壊に抗し、内側部分がそのまま十二指腸に入るか、または遅れて放出されるように働く。様々な材料が、このような腸溶性の層またはコーティングのために使用でき、このような材料には、かなりの数のポリマー酸、ならびにポリマー酸とセラック、セチルアルコール、およびセルロースアセテートのような材料との混合物が含まれる。
【０１１１】
本発明の新規組成物が経口投与または注射による投与のために組み入れられ得る液体の形態には、水溶液、適切に香味付けされたシロップ、水性または油性懸濁液、および食用オイル（例えば、綿実油、ゴマ油、ココナッツオイル、またはピーナッツオイル）、さらにはエレキシル剤および類似の医薬ビヒクルにより香味付けされたエマルジョンが含まれる。
【０１１２】
吸入または通気のための組成物には、薬学的に許容される水性溶媒または有機溶媒の溶液および懸濁液、あるいはこれらの混合物、ならびに粉末が含まれる。液体または固体の組成物は、前記の薬学的に許容される適切な賦形剤を含み得る。好ましくは、本発明の組成物は、局部的または全身的効果のために、経口または鼻による呼吸器経路によって投与される。好ましくは薬学的に許容される溶媒中の組成物は、不活性ガスの使用によって霧状にされ得る。霧状にされた溶液は、霧化装置から直接吸い込まれてもよい、あるいは、霧化装置がフェイステントマスク（ｆａｃｅ  ｍａｓｋｓ  ｔｅｎｔ）または間欠的な陽圧呼吸器に取り付けられていてもよい。溶液、懸濁液、または粉末の組成物は、適切なやり方で製剤を送り届ける装置から、好ましくは経口または経鼻で、投与され得る。
【０１１３】
次の製剤例は、本発明の医薬組成物を例示する。
【０１１４】
製剤例１
次の成分を含むハードゼラチンカプセルが調製される。
【０１１５】
成分                量（ｍｇ／カプセル）
活性成分                    ３０．０
デンプン                  ３０５．０
ステアリン酸マグネシウム      ５．０
上の成分は、混合され、３４０ｍｇの量でハードゼラチンカプセルに充填される。
【０１１６】
製剤例２
錠剤製剤が下の成分を用いて調製される。
【０１１７】
成分                              量（ｍｇ／錠剤）
活性成分                                ２５．０
セルロース、マイクロクリスタリン      ２００．０
コロイド状二酸化ケイ素                  １０．０
ステアリン酸                              ５．０
成分はブレンドされ、錠剤とするために圧縮され、各２４０ｍｇの重さである。
【０１１８】
製剤例３
次の成分を含む、吸入器用の乾燥粉末製剤が調製される。
【０１１９】
成分                重量％
活性成分              ５
ラクトース          ９５
活性成分はラクトースと混合され、混合物は乾燥粉末吸入器具に入れられる。
【０１２０】
製剤例４
錠剤（各３０ｍｇの活性成分を含む）が次の通り調製される。
【０１２１】
成分                              量（ｍｇ／錠剤）
活性成分                            ３０．０ｍｇ
デンプン                            ４５．０ｍｇ
マイクロクリスタリンセルロース      ３５．０ｍｇ
ポリビニルピロリドン                  ４．０ｍｇ
（滅菌した水に１０％溶液として）
デンプングリコール酸ナトリウム        ４．５ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム              ０．５ｍｇ
タルク                                １．０ｍｇ。
【０１２２】
活性成分、デンプン、およびセルロースは、Ｎｏ．２０メッシュのＵ．Ｓ．篩に通され、十分に混合される。得られた粉末とポリビニルピロリドンの溶液が混合され、次いで、１６メッシュのＵ．Ｓ．篩に通される。こうして生成した顆粒は、５０℃から６０℃で乾燥され、１６メッシュのＵ．Ｓ．篩に通される。デンプングリコール酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、およびタルクは、前もってＮｏ．３０メッシュのＵ．Ｓ．篩に通され、次いで、前記顆粒に加えられ、混合した後、打錠機で圧縮されて、各１２０ｍｇの重さの錠剤を生じる。
【０１２３】
製剤例５
カプセル（各４０ｍｇの薬剤を含む）が次の通り製造される。
【０１２４】
成分                    量（ｍｇ／カプセル）
活性成分                      ４０．０ｍｇ
デンプン                    １０９．０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム        １．０ｍｇ
合計                        １５０．０ｍｇ
活性成分、デンプンおよびステアリン酸マグネシウムがブレンドされ、Ｎｏ．２０メッシュのＵ．Ｓ．篩に通され、１５０ｍｇの量でハードゼラチンカプセルに充填される。
【０１２５】
製剤例６
坐薬（各２５ｍｇの活性成分を含む）が次の通り製造される。
【０１２６】
成分                              量
活性成分                          ２５ｍｇ
飽和脂肪酸グリセリド        ２，０００ｍｇになるまで
活性成分が、Ｎｏ．６０メッシュのＵ．Ｓ．篩に通され、必要とされるできるだけ少ない熱を用いて前もって融解された飽和脂肪酸グリセリドに懸濁される。次いで、この混合物は、２．０ｇの公称容量の坐薬型に注がれ、放冷される。
【０１２７】
製剤例７
懸濁液（５．０ｍｌの用量当たり、各々５０ｍｇの薬剤を含む）が次の通り製造される。
【０１２８】
成分                                            量
活性成分                                    ５０．０ｍｇ
キサンタンガム                                ４．０ｍｇ
カルボキシメチルセルロースナトリウム
（１１％）
マイクロクリスタリンセルロース（８９％）      ５０．０ｍｇ
スクロース                                    １．７５ｍｇ
安息香酸ナトリウム                            １０．０ｍｇ
香味料および着色剤                                  十分量
精製水                                        ５．０ｍＬになるまで。
【０１２９】
活性成分、スクロールおよびキサンタンガムはブレンドされ、Ｎｏ．１０メッシュのＵ．Ｓ．篩に通され、次いで、前もって調製したマイクロクリスタリンセルロースおよびカルボキシメチルセルロースナトリウムの水溶液と混合される。安息香酸ナトリウム、香味料、および着色剤は、いくらかの水により希釈され、撹拌しながら添加される。次いで、必要とされる体積となるように十分な量の水が添加される。
【０１３０】
製剤例８
成分                                量
（ｍｇ／カプセル）
活性成分                    １５．０ｍｇ
デンプン                  ４０７．０ｍｇ
ステアリン酸マグネシウム      ３．０ｍｇ
合計                      ４２５．０ｍｇ
活性成分、デンプン、およびステアリン酸マグネシウムはブレンドされ、Ｎｏ．２０メッシュのＵ．Ｓ．篩に通され、４２５．０ｍｇの量でハードゼラチンカプセルに充填される。
【０１３１】
製剤例９
皮下製剤は次の通り調製できる。
【０１３２】
成分                                量
活性成分                        ５．０ｍｇ
トウモロコシ油                  １．０ｍＬ
製剤例１０
静脈内製剤は次の通り調製できる。
【０１３３】
成分                            量
活性成分                      ２５０ｍｇ
等張生理食塩水              １０００ｍＬ。
【０１３４】
本発明の方法において用いられる別の製剤は、経皮デリバリーデバイス（「パッチ」）を用いる。このような経皮パッチは、制御された量で本発明の化合物を連続的または不連続的に注入するために使用され得る。薬剤のデリバリーのための経皮パッチの作製および使用は、当技術分野においてよく知られている。例えば、１９９１年６月１１日に発行された米国特許第５０２３２５２号（本明細書に参照を通じて組み込まれる）を参照。このようなパッチは、薬剤の連続的、脈動的、または要求に応じたデリバリーのために作製され得る。
【０１３５】
しばしば、医薬組成物を脳に、直接または間接的かのいずれかで、導入することが望ましい、または必要であろう。直接的な技法は通常、血液脳関門を避けて迂回するために、薬剤デリバリーカテーテルを患者の脳室系に配置することを含む。身体の特定の解剖学的部位に生体因子を運ぶために使用される、このような埋め込み型デリバリーシステムの１つは、米国特許第５０１１４７２号に記載されており、この特許は、参照を通じて本明細書に組み込まれる。
【０１３６】
間接的な技法は通常、親水性薬剤を脂溶性薬剤に変換することによって薬剤を潜伏化（ｌａｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ）するように、組成物を処方することを含む。潜伏化は、一般的に、薬物をより脂溶性にし、そして血液脳関門を横切って運ばれ易くするために、その薬物上に存在するヒドロキシル基、カルボニル基、硫酸基、および第一アミン基をブロッキングすることを通じて達成される。別法として、親水性薬剤のデリバリーは、血液脳関門を一時的に開くことができる高張液の動脈内注入により向上され得る。
【０１３７】
本発明において使用される他の適切な配合は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ、第１７版（１９８５年）に見出すことができる。
【０１３８】
上で注意したように、本明細書に記載されている化合物は、前記の様々なドラッグデリバリーシステムに使用するのに適する。さらに、投与された化合物のｉｎ  ｖｉｖｏ血清中半減期を増大させるために、化合物は、コロイドとして調製されるリポソームの内腔に、包み込まれ、導入されてもよく、あるいは、化合物の血清中半減期を延ばす他の通常の技法が用いられてもよい。例えば、Ｓｚｏｋａらの米国特許第４２３５８７１号、米国特許第４５０１７２８号、および米国特許第４８３７０２８号（これらの特許の各々は参照を通じて本明細書に組み込まれる）に記載のように、様々な方法がリポソームを調製するために利用できる。
【０１３９】
所望の生体活性を有する化合物は、改善された薬理学的性質（例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏでの安定性、生体利用能）のような所望の性質、あるいは、診断用途では被検出能をもつように、必要に応じて修飾され得る。安定性は、様々なやり方で、例えば、ペプチダーゼあるいはヒトの血漿または血清と共にインキュベートしている間のタンパク質の半減期を求めることによって評価分析できる。かなりの数のこのようなタンパク質安定性アッセイが記載されている（例えば、Ｖｅｒｈｏｅｆら、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．、１９９０年、１５（２）：８３〜９３頁を参照）。
【０１４０】
本発明のコンジュゲート（ｃｏｎｊｕｇａｔｅ）は、ＶＬＡ−４のアンタゴニストであり、非コンジュゲート化合物に比べてｉｎ  ｖｉｖｏでの保持が向上していると考えられる。体内でのコンジュゲートのこのような保持の向上により、薬剤の必要な投与量は減少し、このため、転じて、副作用が少なくなり、毒性の可能性が低下する。さらに、薬剤製剤は、同様の、または改善された治療効果を達成しながら、より少ない頻度で患者に投与され得る。
【０１４１】
本発明のコンジュゲートは、ＶＬＡ−４への競合的結合によって、ＶＬＡ−４により媒介される、内皮細胞への白血球の接着の阻害をｉｎ  ｖｉｖｏで示すと予想される。好ましくは、本発明の化合物は、ＶＬＡ−４または白血球の接着により媒介される疾患の治療のための静脈内製剤に使用できる。このような疾患には、哺乳動物患者における炎症性疾患、例えば、喘息、アルツハイマー病、アテローム性動脈硬化症、ＡＩＤＳ痴呆、糖尿病（急性若年型糖尿病が含まれる）、炎症性腸疾患（潰瘍性大腸炎およびクローン病が含まれる）、多発性硬化症、関節リウマチ、組織移植、腫瘍転移、髄膜炎、脳炎、脳卒中、および他の脳外傷、腎炎、網膜炎、アトピー性皮膚炎、乾癬、心筋虚血、および急性白血球介在肺傷害（例えば、成人呼吸窮迫症候群で起こるもの）が含まれる。本発明の製剤は、クローン病のような炎症性腸疾患、多発性硬化症および関節リウマチの治療に特に有用である。
【０１４２】
炎症性の病気の治療における効能を実証するための適切なｉｎ  ｖｉｖｏモデルには、マウス、ラット、モルモットまたは霊長類におけるＥＡＥ（実験的自己免疫性脳脊髄炎）、さらには、α４インテグリンに依存する他の炎症モデルが含まれる。
【０１４３】
炎症性腸疾患または「ＩＢＤ」は、腹部の激痛および疼痛、下痢、体重低下ならびに腸内出血を含む症状により一般的に現れる、腸に炎症を起こさせる１群の障害を表す。ＩＢＤは、２つの似た疾患である潰瘍性大腸炎（「ＵＣ」）およびクローン病（「ＣＤ」）に対する全体語である。
【０１４４】
クローン病（「ＣＤ」）は、消化（ＧＩ）管に炎症を生ずる慢性的自己免疫障害である。ＧＩ管のどの部分も関係し得るが、最も普通には、ＣＤは、小腸および／または結腸を冒す。クローン病では、腸の全ての重なりが関係し得るし、正常で健康な腸が、病んだ腸の断片の間に存在し得る。ＣＤは、線維症、狭窄症および裂傷（ｆｉｓｓｕｒｉｎｇ）、疾患路と、隣接構造体（すなわち、膀胱、他の腸セグメント、皮膚）との間の瘻孔ならびに膿瘍と関連する。ＣＤ患者は通常、下痢、腹痛および体重低下と共存している。腹痛は通常、一見無害であるが実は有害で、柔らかい、炎症性の塊を伴い得る。熱、体重低下、口内炎、肛門周囲瘻孔および／または裂傷、関節炎、ならびに結節性紅斑が全て、一般的に見られる。ＣＤに関連するかなりの死亡率が、特に、現在入手できる薬剤によって制御されない疾患を有する患者において、ある。中程度または重篤な疾患を有する患者の７５％までは手術を必要とし、これらの患者の７５％までは、手術後の疾患の再発を１０年以内に経験し、５０％までは、２０年以内に再手術を受けるであろう。この高い再発率は、活動期疾患および疾患寛解の維持の両方のための新しい効果的な治療が必要であることを示す。
【０１４５】
潰瘍性大腸炎または「ＵＣ」は、出血性下痢に特徴がある、大腸および直腸の慢性的、一時的、炎症性疾患である。潰瘍性大腸炎は、大部分は結腸粘膜および粘膜下層に限定された炎症反応である。潰瘍性大腸炎は位置によって分類できる：「直腸炎」は、直腸だけに関係し、「直腸Ｓ状結腸炎」は直腸およびＳ状結腸を冒し、「左側大腸炎」は大腸の左側全体を含み、「全大腸炎」は結腸全体に炎症を起こす。リンパ球およびマクロファージは、炎症性腸疾患の病変部に非常にたくさんあり、炎症傷害に寄与し得る。炎症性腸疾患（ＩＢＤ）の例示的動物モデルは、ＨＬＡ−Ｂ２７トランスジェニックラットで実施される。これらのラットは、脊椎関節症（骨格に影響を及ぼす１群の炎症性の病気）に関連するヒトＨＬＡ−Ｂ２７分子（重鎖およびベータグロブリン遺伝子）を過剰発現する。骨格の炎症性の変化の発症前に、これらの動物は、小腸に非肉芽腫炎を示し、結腸に陰窩膿瘍をびまんさせる（ヒトのクローン病の病変に似た病変）。効能の研究は、下の実施例Ｊに記載するように、本発明の化合物を用いて、ＨＬＡ−Ｂ２７トランスジェニックラットＩＢＤモデルで実施した。
【０１４６】
喘息は、気管支気道の発作的狭窄を助長する様々な刺激に対する気管−気管支樹の反応性の増大により特徴付けられる疾患である。前記刺激は、ＩｇＥで被覆されたマスト細胞からの様々な炎症メディエータ（ヒスタミン、好酸球および好中球遊走因子、ロイコトリエン、プロスタグランジンおよび血小板活性化因子が含まれる）の放出を引き起こす。これらの因子の放出は、好塩基球、好酸球および好中球を補充し、これらが炎症傷害を引き起こす。
【０１４７】
喘息のｉｎ  ｖｉｖｏ研究のための適切ないくつかの動物モデルには、ラット喘息モデル、マウス喘息モデル、および実施例Ｅに記載のヒツジモデルが含まれ得る。
【０１４８】
アテローム性動脈硬化症は、動脈（例えば、冠状動脈、頸動脈、大動脈および腸骨動脈）の疾患である。基本的な病変部であるアテロームは、内膜内に盛り上がった病巣プラーク（脂質のコアと被覆している繊維性の皮膜とを有する）からなる。アテロームは動脈血流を危険に曝し、冒された動脈を弱くする。心筋および脳梗塞は、この疾患の主な結果である。マクロファージおよび白血球は、アテロームに補充され、炎症傷害に寄与する。
【０１４９】
関節リウマチは、関節の損傷および破壊を主に引き起こす、慢性、再発性の炎症性疾患である。関節リウマチは、最初、手および足の小関節を冒すが、次いで、手首、肘、足首および膝に影響を及ぼし得る。関節炎は、骨膜細胞と、関節の骨膜表層に循環から浸潤する白血球との相互作用により生じる。例えば、Ｐａｕｌ、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（３版、Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、１９９３年）参照。時間が経つと、骨びらん、軟骨の破壊、および関節の一体性の完全な喪失が起こり得る。いつかは、多数の器官系が冒され得る。
【０１５０】
関節リウマチにおける関節損傷は、可能性として自己免疫または感染による、引金となる偶発事象の後で、滑膜マクロファージおよび線維芽細胞の増殖で始まる。リンパ球は血管周辺部分に浸潤し、内皮細胞が増殖する。次いで、血管新生が起こる。冒された関節の血管は、炎症細胞の小さな凝塊（ｃｌｏｔ）により塞がれるようになる。時間が経つと、炎症を起こした滑膜組織が不規則に成長し始め、侵食性パンヌス組織を生成する。パンヌスは、軟骨および骨を侵食し、破壊する。多種多様なサイトカイン、インターロイキン、プロテイナーゼ、および成長因子が放出され、関節のさらなる破壊、および全身合併症の進展を引き起こす。Ｆｉｒｅｓｔｅｉｎ  Ｇ．Ｓ．「Ｅｔｉｏｌｏｇｙ  ａｎｄ  ｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓ  ｏｆ  ｒｈｅｕｍａｔｏｉｄ  ａｒｔｈｒｉｔｉｓ」、Ｒｕｄｄｙ  Ｓ，  Ｈａｒｒｉｓ  ＥＤ、Ｓｌｅｄｇｅ  ＣＢ、Ｋｅｌｌｅｙ  ＷＮ編「Ｋｅｌｌｅｙ’ｓ  Ｔｅｘｔｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ」、第７版、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ：Ｗ．Ｂ．  Ｓａｕｎｄｅｒｓ、２００５年：９９６〜１０４２頁を参照。
【０１５１】
関節リウマチの研究のための適切な動物モデルには、本明細書の実施例ＧおよびＨに記載のアジュバント誘発関節炎（「ＡＩＡ」）およびコラーゲン誘発関節炎（「ＣＩＡ」）が含まれ得る。
【０１５２】
本発明の化合物が望まれる別の徴候は、ＶＬＡ−４により媒介される器官または移植片の拒絶の治療においてである。ここ数年に渡って、皮膚、腎臓、肝臓、心臓、肺、膵臓および骨髄のような組織および器官を移植するための外科技術の有効性がかなり改善された。恐らく、残っている主な問題は、移植された同種移植片または器官に対する受容者の免疫寛容を誘発させる、満足のいく薬剤の無いことである。同種細胞または器官が宿主に移植される時（すなわち、提供者および受容者が同じ種の異なる個人である）、宿主の免疫系は、移植体の外来抗原に免疫反応を仕掛けると思われ（宿主対移植片病）、移植された組織は破壊される。ＣＤ８＋細胞、ＣＤ４細胞および単球は全て、移植組織の拒絶に関与している。α−４インテグリンに結合する本発明の化合物は、とりわけ、受容者における、アロ抗原に誘発される免疫反応を阻止して、このような細胞が、移植された組織または器官の破壊に関与することを防ぐのに有用である。例えば、Ｐａｕｌら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  ９、４２０〜４２５頁（１９９６年）；Ｇｅｏｒｃｚｙｎｓｋｉら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ８７、５７３〜５８０頁（１９９６年）；Ｇｅｏｒｃｙｚｎｓｋｉら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  ３、５５〜６１頁（１９９５年）；Ｙａｎｇら、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  ６０、７１〜７６（１９９５年）；Ａｎｄｅｒｓｏｎら、ＡＰＭＩＳ  １０２、２３〜２７頁（１９９４年）を参照。
【０１５３】
ＶＬＡ−４に結合する本発明の化合物に関連する用途は、「移植片対宿主」病（「ＧＶＨＤ」）に関与する免疫反応を修飾することにある。Ｓｃｈｌｅｇｅｌら、Ｊ，  Ｉｎａｍｕｎｏｌ．  １５５、３８５６〜３８６５（１９９５年）を参照。ＧＶＨＤは、免疫能のある細胞が同種受容体に移された時に起こる、命に関わる可能性のある疾患である。この状況では、提供者の免疫能細胞が、受容者の組織を攻撃し得る。皮膚、腸管上皮および肝臓の組織は、よくある標的であり、ＧＶＨＤの進行の間に破壊され得る。この疾患は、骨髄移植におけるような、免疫組織が移植されている時に、特に重大な問題を生じる；しかし、心臓および肝臓移植を含めて他の場合に同様に、重篤でないＧＶＨＤもまた報告されている。本発明の治療剤は、とりわけ、提供者のＴ細胞の活性化を阻止して、宿主の標的細胞を溶解させるそれらの能力を阻むために使用される。
【０１５４】
本発明の化合物のさらなる用途は、腫瘍転移を抑制することである。いくつかの腫瘍細胞は、ＶＬＡ−４を発現すると報告されており、ＶＬＡ−４に結合する化合物は、このような細胞が内皮細胞に接着することを阻止する。Ｓｔｅｉｎｂａｃｋら、Ｕｒｏｌ．  Ｒｅｓ．  ２３、１７５〜８３頁（１９９５年）；Ｏｒｏｓｚら、Ｉｎｔ．  Ｊ．  Ｃａｎｃｅｒ  ６０、８６７〜７１頁（１９９５年）；Ｆｒｅｅｄｍａｎら、Ｌｅｕｋ．  Ｌｙｍｐｈｏｍａ  １３、４７〜５２頁（１９９４年）；Ｏｋａｈａｒａ  ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ５４、３２３３〜６（１９９４年）。
【０１５５】
本発明の化合物のさらなる用途は、多発性硬化症の治療にある。多発性硬化症は、米国で、２５０，０００から３５０，０００と見積もられる人々を襲う進行性の神経系自己免疫疾患である。多発性硬化症は、特定の白血球がミエリン（神経線維を包む絶縁性の鞘）を攻撃し、その破壊を開始する特殊な自己免疫反応の結果であると考えられる。多発性硬化症の動物モデルでは、ＶＬＡ−４に対するネズミ（ｍｕｒｉｎｅ）モノクローナル抗体は、内皮への白血球の接着を阻止し、こうして動物における中枢神経系の炎症と、それに続く麻痺を防ぐことが示された１６。
【０１５６】
本発明の医薬組成物は、様々な薬剤デリバリーシステムに用いるのに適している。本発明において使用される適切な製剤は、「Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ」、Ｍａｃｅ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ、ＰＡ、第１７版（１９８５年）に見出される。
【０１５７】
患者に投与される量は、投与されているもの、投与の目的（例えば、予防または治療）、患者の状態、投与方式などに応じて変わるであろう。治療目的では、組成物は、すでに疾患を患っている患者に、疾患の症状およびその併発症を治すか、またはその進行を少なくとも部分的に止めるのに十分な量で投与される。これを達成するための適量は、「治療に有効な用量」として定義される。この使用での有効な量は、本明細書に記載のもののような適切な動物モデルでのデータを参照して、治療されている病状、さらには、炎症の重篤度、患者の年齢、体重および一般的状態などのような要素に依存する、担当医の判断により決まるであろう。このようなデータに基づいて、適切なヒトへの投与量を見積もる方法は、当技術分野において知られている（例えば、Ｗａｇｎｅｒ，  Ｊ．Ｇ．「Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｔｉｓｔ」、Ｔｅｃｈｎｏｍｉｃ，  Ｉｎｃ．、Ｌａｎｃａｓｔｅｒ、ＰＡ、１９９３年を参照）。
【０１５８】
患者に投与される組成物は、前記の医薬組成物の形態としてである。これらの組成物は、通常の滅菌技術によって滅菌されても、あるいは、滅菌濾過されてもよい。得られる水溶液は、そのまま使用されるようにパッケージ化されても、あるいは凍結乾燥されてもよく、凍結乾燥された調製剤は、投与の前に、滅菌水性担体と一緒にされる。
【０１５９】
所望の生体活性を有する化合物は、改善された薬理学的性質（例えば、ｉｎ  ｖｉｖｏでの安定性、生体利用能）のような所望の性質、あるいは、診断用途では被検出能をもつように、必要に応じて修飾され得る。安定性は、様々なやり方で、例えば、ペプチダーゼあるいはヒトの血漿または血清と共にインキュベートしている間のタンパク質の半減期を求めることによって評価分析できる。かなりの数のこのようなタンパク質安定性アッセイが記載されている（例えば、Ｖｅｒｈｏｅｆら、Ｅｕｒ．  Ｊ．  Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．、１９９０年、１５（２）：８３〜９３頁を参照）。
【０１６０】
本発明の化合物の治療のための投与量は、例えば、治療がなされる特定の使用、化合物の投与の仕方、患者の健康および状態、処方する医師の判断に応じて変わるであろう。例えば、静脈内投与では、容量は通常、体重１ｋｇ当たり約２０μｇから約２０００μｇ、好ましくは約２０μｇから約５００μｇ、より好ましくは、体重１ｋｇ当たり約１００μｇから約３００μｇの範囲にあるであろう。鼻腔内投与での適切な投与量範囲は、通常、体重１ｋｇ当たり約０．１ｐｇから約１ｍｇである。有効な用量は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏの、または動物モデルの試験系から得られる用量−反応曲線から外挿できる。
【０１６１】
本発明の化合物はまた、α４β１、およびα４β７インテグリンに結合できる、またはこれらの作用を遮断できる。したがって、本発明の化合物はまた、これらのインテグリンが各々のリガンドに結合することにより誘発される症状、障害または疾患を防止するまたは回復に向かわせるのにも有用である。
【０１６２】
本発明の別の態様において、本明細書に記載の化合物および組成物は、例えば多発性硬化症の場合における中枢神経系への、あるいは炎症誘発ミエリン破壊を生じる部分への、血流からの免疫細胞の移動を抑制するために使用できる。好ましくは、これらの作用剤は、脱ミエリン化を抑制し、さらに再ミエリン化を促進し得る様に、免疫細胞の移動を抑制する。作用剤はまた、浸潤する免疫細胞が、主にＣＮＳにおける、ミエリンの鞘の成長に悪影響を与える先天的代謝障害で、中枢神経系の脱ミエリン化を防ぎ、再ミエリン化を促進し得る。作用剤はまた、脱ミエリン化による疾患または病気により誘発される麻痺を有する患者に投与される時に、好ましくは、麻痺を軽減する。
【０１６３】
本明細書に開示の組成物、化合物および方法による治療に含められる炎症性疾患には、脱ミエリンに関係する病気が広く含まれる。組織学的には、ミエリン異常は、脱ミエリン化または異常ミエリン化のいずれかである。脱ミエリン化はミエリンの破壊を意味する。異常ミエリン化は、オリゴデンドロサイトの機能異常により生じる、欠陥のあるミエリンの形成または保持を表す。好ましくは、本明細書に開示の組成物および方法は、脱ミエリン、および再ミエリンによる補助に関連する疾患および病気を治療すると想定される。治療されると想定されるさらなる疾患および病気には、髄膜炎、脳炎および脊髄傷害、ならびに広く炎症反応の結果として脱ミエリンを誘発する病気が含まれる。
【０１６４】
本明細書に開示の組成物、化合物およびカクテルは、脱ミエリン化に関連する病気および疾患の治療に使用されると想定される。脱ミエリン化が関与する疾患および状態には、これらに限らないが、多発性硬化症、先天性代謝障害（例えば、フェニルケトン尿症（ＰＫＵ）、テイ−サックス病、ニーマン−ピック病、ゴーシェ病、ハーラー症候群、クラッベ病、および成長している鞘に影響を与える他の白質ジストロフィー）、異常ミエリン化による神経障害（例えば、ギランバレー症候群、慢性免疫脱ミエリン化多発ニューロパチー（ｃｈｒｏｎｉｃ  ｉｍｍｕｎｅ  ｄｅｍｙｅｌｉｎａｔｉｎｇ  ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ、ＣＩＤＰ）、多巣性ＣＩＤＰ、多巣性運動ニューロパチー（ＭＭＮ）、抗ＭＡＧ（ミエリン結合糖タンパク質）症候群、ＧＡＬＯＰ（Ｇａｉｔ  ｄｉｓｏｒｄｅｒ、Ａｕｔｏａｎｔｉｂｏｄｙ、Ｌａｔｅ−ａｇｅ、Ｏｎｓｅｔ、Ｐｏｌｙｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ、歩行障害、自己抗体、晩期、発症、多発ニューロパチー）症候群、抗スルファチド抗体症候群、抗ＧＭ２抗体症候群、ＰＯＥＭＳ（多発ニューロパシー、臓器腫大、内分泌異常、Ｍタンパク質および皮膚症状）症候群（クロウ−フカセ症候群および高月病としても知られる）、神経周囲炎、ＩｇＭ抗ＧＤ１ｂ抗体症候群、薬剤に関連する脱ミエリン化（例えば、クロロキン、ＦＫ５０６、ペルヘキシリン、プロカインアミド、およびジメルジンの投与により生じる）、他の遺伝性脱ミエリン病（例えば、糖鎖欠損糖タンパク質、コケイン症候群、先天性ミエリン形成不全、先天性筋ジストロフィー、ファーバー病、マリネスコ−シェーグレン症候群、異染性白質ジストロフィー、ペリツェウス−メルツバッヘル病、レフサム病、プリオン関連病、およびサラ病）、ならびに、他の脱ミエリン病（例えば、髄膜炎、脳炎（急性散在性脳脊髄炎（ＡＤＥＭ）としても知られる）、または脊髄傷害）あるいは疾患が含まれる。
【０１６５】
これらの疾患をｉｎ  ｖｉｖｏで研究するために使用できる様々な疾患モデルが存在する。例えば、動物モデルには、以下が含まれるが、これらに限らない。
【０１６６】
【表４】
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最も普通の脱ミエリン化疾患は、多発性硬化症（「ＭＳ」）であるが、他の多くの代謝および炎症障害が欠陥のある、または異常なミエリン化を生じる。ＭＳは慢性神経疾患であり、これは、成人初期に現れ、大抵の場合、かなりの身体障害に進展する。米国だけで約３５０，０００のＭＳの事例がある。外傷以外で、ＭＳは成人初期および中期における最も多い神経学的身体障害の原因である。
【０１６７】
ＭＳの原因はこれから決定されようとしている。ＭＳは、慢性炎症、脱ミエリン化およびグリオーシス（瘢痕）により特徴付けられる。脱ミエリン化は軸索伝導に負または正のどちらかの影響を生じ得る。正の伝導異常には、軸索伝導の遅延、高い−低くない−周波数のインパルス列の存在下に起こる変動する伝導遮断（ｂｌｏｃｋ）、または完全な伝導遮断が含まれる。正の伝導異常には、異所性インパルスの発生、自発的または引き続く機械的ストレス、および脱ミエリン化軸索（ｅｘｏｎ）の間の異常な「混線」が含まれる。
【０１６８】
ミエリンタンパク質（ミエリン塩基性タンパク質（ＭＢＰ）またはミエリンプロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）のいずれか）に対して反応性のＴ細胞が、実験的アレルギー性脳脊髄炎においてＣＮＳの炎症を媒介することが観察された。患者のＣＮＳ免疫グロブリン（Ｉｇ）のレベルが高まることもまた確認された。ＭＳにおいて認められる組織損傷のいくらかは、活性化Ｔ細胞、マクロファージまたはアストロサイトのサイトカイン産生物によって媒介される。
【０１６９】
今日、ＭＳと診断された患者の８０％が病気の発症後２０年生存する。ＭＳを取り扱う治療には、（１）急性増悪の治療を含めて疾患の推移の変更を目的とし、疾患の長期の抑制に向けられる治療；（２）ＭＳの症状の治療；（３）内科治療の合併症の防止および治療；および（４）個人的および社会的な２次的問題の処理；が含まれる。
【０１７０】
ＭＳの発症は、劇的であることも、あるいは、患者が治療を求めようとしないほど穏やかなこともある。最も共通する症状には、１つまたは複数の四肢の衰弱、視神経炎による視覚のかすみ、感覚障害、複視および運動失調が含まれる。疾患の推移は、３つの一般的区分に階層化され得る：（１）再発型ＭＳ、（２）慢性進行性ＭＳ、および（３）静止状態ＭＳ。再発型ＭＳは、周期的に起こる神経機能障害の発症により特徴付けられる。ＭＳの発症は通常、数日から数週間に渡って進展し、その後は、完全に、または部分的に回復するか、あるいは全く回復しないこともある。発症からの回復は、通常、症状のピークから数週間ないし数ヶ月以内に起こるが、まれに、回復に２年以上かかることもある。
【０１７１】
慢性進行性ＭＳでは、安定化または寛解の期間なしに、徐々に悪化が進行する。この形態は、再発型ＭＳの前歴のある患者（患者の２０％で、再発を思い起こすことができないが）で進展する。急性の再発はまた進行する経過の間に起こり得る。
【０１７２】
第３の形態は静止状態のＭＳである。静止状態のＭＳは、様々な度合いの一定の神経学的欠損により特徴付けられる。静止状態ＭＳのほとんどの患者は、再発型ＭＳの前歴を有する。
【０１７３】
疾患の推移はまた、患者の年齢にも依存する。例えば、良好な予後要素には、早期発症（幼少期を含めて）、再発型の推移、および発症後５年で残存する身体障害がほとんどないことが含まれる。対照的に、悪い予後は、高齢（すなわち、４０歳以上）での発症、および進行性の推移に関連している。慢性進行性ＭＳは再発型ＭＳより高齢で始まる傾向があるので、これらの変数は相互に依存している。慢性進行性ＭＳによる身体障害は、通常、患者の進行性対麻痺または四肢麻痺（麻痺）のせいである。本発明の一態様において、患者が疾患の再発段階にあるよりもむしろ寛解期にある時に、好ましくは、患者は治療されるであろう。
【０１７４】
副腎皮質刺激ホルモンまたは経口コルチコステロイド（例えば、経口プレドニゾンまたは静脈内メチルプレドニゾロン）のいずれかの短期間の使用は、ＭＳの急性増悪患者を治療するための単なる特別な治療手段である。
【０１７５】
より新しいＭＳの治療法には、インターフェロンβ−１ｂ、インターフェロンβ−１ａ、およびコパキソン（登録商標）（以前はコポリマー１として知られていた）による患者の治療が含まれる。これらの３種の薬剤は、疾患の再発率をかなり低下させることが示された。これらの薬剤は、筋肉内または皮下に自己投与される。
【０１７６】
しかし、現行の治療薬剤使用法のどれも、自発的な再ミエリン化を促進、または許容しない、あるいは麻痺を軽減しないだけでなく、脱ミエリンを抑制しない。本発明の一態様は、本明細書に開示の薬剤により、単独で、または他の標準的な治療薬剤使用法と組み合わせて、ＭＳを治療することを想定する。
【０１７７】
放射線もまた脱ミエリン化を誘発し得る。放射線による中枢神経系（ＣＮＳ）毒は、（１）管構造に対する損傷、（２）オリゴデンドロサイト−２とアストロサイトの前駆細胞および成熟オリゴデンドロサイトの消失、（３）海馬、小脳および大脳皮質における神経幹細胞集団の消失、およびサイトカイン発現の全身での変化、により引き起こされると考えられている。ほとんどの放射線損傷は、特定の癌の治療の間に施される放射線療法により生じる。総説には、Ｂｅｌｋａら、２００１年、Ｂｒ．  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ８５：１２３３〜９頁を参照。しかし、放射線暴露はまた、宇宙飛行士にとって（Ｈｏｐｅｗｅｌｌ、１９９４年、Ａｄｖ．  Ｓｐａｃｅ  Ｒｅｓ．  １４：４３３〜４２頁）、さらには、放射性物質への暴露という事態においても問題である。
【０１７８】
これらの病状および疾患もまた、一時的に緩和するか、または改善する治療に適すると想定されている。
【実施例】
【０１７９】
以下の合成および生物学的実施例は、本発明を例示するために提供されており、如何なる仕方においても、本発明の範囲を限定すると解釈されるべきでない。特に断らなければ、全ての温度は摂氏度である。下の実施例では、次の省略形は以下の意味を有する。省略形が定義されていない場合、それは一般的に受け入れられている意味を有する。
【０１８０】
Å                    ＝オングストローム
ｂｒ  ｓ              ＝ブロードシングレット
ＢＳＡ                ＝ウシ血清アルブミン
ｄ                    ＝ダブレット
ｄｄ                  ＝ダブルダブレット
ｄｑ                  ＝ダブルカルテット
ｄｓｅｘｔｅｔ        ＝ダブルセクステット
ＤＭＦ                ＝ジメチルホルムアミド
ＥＣ５０                ＝所望の反応が集団の５０パーセントにある投与量
ＥＤＴＡ              ＝エチレンジアミン四酢酸
ＥｔＯＡｃ            ＝酢酸エチル
ＥｔＯＨ              ＝エタノール
Ｅｔ３Ｎ              ＝トリエチルアミン
ＥＭ                  ＝発光波長（ｎｍ）
ＥＸ                  ＝励起波長（ｎｍ）
ｇ                    ＝グラム
ＨＢＳＳ              ＝ハンクス平衡塩溶液
ＨＥＰＥＳ            ＝４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸
ＨＰＬＣ              ＝高速液体クロマトグラフィー
ｈｒｓまたはｈ        ＝時間
ＩＣ５０                ＝ｉｎ  ｖｉｖｏで酵素の５０％阻害に必要とされる阻害剤の濃度
ｉｎ．                ＝インチ
ｉ．ｐ．              ＝腹腔内に
ｉ−ＰｒＯＨ          ＝イソ−プロパノール
ｋｇ                  ＝キログラム
Ｌ                    ＝リットル
ＬＣ／ＭＳ            ＝液体クロマトグラフィー／質量分析
ｍ                    ＝マルチプレット
ｍ２                  ＝平方メートル
Ｍ                    ＝モル（ｍｏｌａｒ）
ｍｂａｒ              ＝ミリバール
ｍｇ                  ＝ミリグラム
ＭＨｚ                ＝メガヘルツ
ｍｉｎ．            ＝分
ｍＬ                  ＝ミリリットル
ｍｍ                  ＝ミリメートル
ｍＭ                  ＝ミリモル
ｍｍｏｌ              ＝ミリモル
ｍＯｓｍ              ＝ミリオスモル
ＭＴＢＥ              ＝メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル
ｍ／ｚまたはＭ／Ｚ    ＝質量と電荷の比
Ｎ                    ＝規定度
ｎｇ                  ＝ナノグラム
ｎｍ                  ＝ナノメートル
ＮＭＲ                ＝核磁気共鳴
ＰＢＳ                ＝リン酸緩衝化生理食塩水
ＰＢＳ＋＋            ＝カルシウムおよびマグネシウムを含むＰＢＳ
ｐｐｍ                ＝百万分率
ｐｓｉ                ＝ポンド／平方インチ
ｐ．ｏ．              ＝口からの（ｐｅｒ  ｏｓ）、文字通りに「口によって」、経口胃管投与（ｏｒａｌ  ｇａｖａｇｅ）を含む
ｑ                    ＝カルテット
ｑ．ｓ．              ＝十分量
Ｒｆ                  ＝保持因子（物質が移動した距離／溶媒最前部が移動した距離の比）
ｒｐｍ                ＝回転数／分
ｒｔまたはＲＴ        ＝室温
Ｒｔ                  ＝保持時間
ｓ                    ＝シングレット
ｔ                    ＝トリプレット
ＴＦＡ                ＝トリフルオロ酢酸
ＴＨＦ                ＝テトラヒドロフラン
ＴＬＣ                ＝薄層クロマトグラフィー
ＵＶ                  ＝紫外
ｗｔ／ｗｔ            ＝重量と重量の比
ｗ／ｖ                ＝重量と体積の比
μｇ                  ＝マイクログラム
μｍ                  ＝ミクロン
μＭ                  ＝マイクロモル。
【０１８１】
（実施例１）
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸の調製
下に示すスキーム４に、実施例１で用いた合成プロトコルを要約する。
【０１８２】
【化２８】
2009528296.tif 000023
スキーム４において、化合物４は、５−ニトロピリジン化合物１から、次々と３ポットで調製した。スキーム４の合成プロトコルは、次の１つまたは複数によって、この化合物の調製をかなり簡単にする。
【０１８３】
１）相当に速くなったニトロ基還元ステップ；
２）同一溶媒および同一触媒により同一フラスコ中で実施されるので、操作の数が減り、酸素に弱い生成物の空気への暴露が最少化される、簡素化された還元／還元的アミノ化の連鎖；
３）還元的アミノ化ステップの条件が、ビスイソプロピルアミノピリミジン副生成物の生成を最少化し、こうして化合物３のクロマトグラフィーによる精製の必要を無くする；
４）モノイソプロピルアミノピリミジン中間体（化合物２）の精製を、対応するＬ−酒石酸塩の液中粉砕（ｔｒｉｔｕｒａｔｉｏｎ）によって、可能にする条件が記載される（化合物２のこの別個の精製の必要もまた、還元的アミノ化ステップの改良によって不必要となったが）；
５）ＭＴＢＥ−ヘキサンまたはＭＴＢＥ−シクロヘキサンからの結晶化による化合物３の別個の精製条件が確立された。
【０１８４】
スキーム４の反応ステップにおいて、Ｂｉｏｔａｇｅ  Ｆｌａｓｈ  ７５Ｌを用い、８００ｇのＫＰ−Ｓｉｌシリカカートリッジ（３２〜６３μＭ、６０オングストローム、５００〜５５０ｍ２／ｇ）を用いて、フラッシュクロマトグラフィーを実施した。Ｒｆは、順相で、ＥＭ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｓｉｌｉｃａ  Ｇｅｌ  ６０  Ｆ（２５４）、厚さ２５０μＭのプレートを用いる分析薄層クロマトグラフィーについて報告する。ＮＭＲスペクトルは、Ｖａｒｉａｎ  Ｇｅｍｉｎｉ  ３００ＭＨｚスペクトロメーター（１Ｈスペクトルでは３００ＭＨｚ、１３Ｃスペクトルでは７５ＭＨｚ）で得た。分析ＨＰＬＣは、Ｐｈｅｎｏｍｅｎｅｘ  Ｌｕｎａ  ３μｍ、Ｃ−１８、３０×４．６ｍｍカラムを有する、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｓｅｒｉｅｓ  ＨＰＬＣで実施した。検出器はＵＶ（２１０ｎｍ）であった。溶媒は、０．１％のＴＦＡを含む水、および０．１％のＴＦＡを含むアセトニトリルであった。標準流量は１．５ｍＬ／ｍｉｎであり、標準的方法は、２０％ＣＨ３ＣＮから７０％ＣＨ３ＣＮまで、２．３３分で変わる溶媒の勾配を有し、Ｍ１と名づけた。別の方法は、Ｍ２と名づけ、２ｍＬ／ｍｉｎの流量、および２０％ＣＨ３ＣＮから７０％ＣＨ３ＣＮまで１．７５分で変わる勾配を有していた。方法Ｍ１５は、１．５ｍＬ／ｍｉｎの流量を有し、溶媒組成は２０％ＣＨ３ＣＮから７０％ＣＨ３ＣＮまで１０分で変わり、７０％で２分間保持し、次いで、９５％まで１分で上昇させ、９５％で２分間保持した。ＬＣ／ＭＳは、エレクトロスプレーイオン化（化学イオン化と特に指示しなければ）により、Ａｇｉｌｅｎｔ  １１００  Ｓｅｒｉｅｓ  ＨＰＬＣ／Ｓｅｒｉｅｓ  １１００ＭＳＤで実施した。カラムおよび条件は独立したＨＰＬＣに一致させた。
【０１８５】
ステップ１：（Ｓ）−４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（イソプロピルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−オキソプロピル）フェニルピロリジン−１−カルボキシレート（２）の調製
【０１８６】
【化２９】
2009528296.tif 000024
ニトロピリミジン−カルバメート１（１００ｇ、１８９ｍｍｏｌ）およびＰｔＯ２（６．３３ｇ、２７．８５ｍｍｏｌ）を３６０ｍＬの含水ＴＨＦ（５％のＨ２Ｏ）に懸濁させた。混合物を水素（６０ｐｓｉｇ）の下で、室温で撹拌した。３時間後に、ＴＬＣ（シリカゲル、５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）は、ニトロ基の完全な還元を示した（ＥｔＯＡｃを用いるシリカでのＴＬＣ分析は、アミノピリミジンに対してＲｆ＝０．２（筋状）、出発ニトロピリミジン−カルバメートに対してＲｆ＝０．８６を示した）。これに関して、この２ステッププロセスにおける両ステップにＰｔＯ２を使用することにより、１ポット反応が可能になり、ニトロ基の還元速度が劇的に速まるという前記の付加的な特徴を有する。いずれにしても、アミノピリミジン生成物は酸化される傾向があるので、空気／酸素に対する暴露は最少化するように注意が払われるべきである。
【０１８７】
エタノール（２００ｍＬ）、アセトン（２１ｍＬ、１．５当量）、および氷酢酸（３．０ｍＬ、０．２８当量）を水素化フラスコ内のアミノピリミジン溶液に加えた。排気およびパージングの後、フラスコをＨ２（６０ｐｓｉｇ）で加圧した。還元的アミノ化を、一夜、進行させた。ＥｔＯＡｃを溶離液として用いるシリカでのＴＬＣは、イソプロピルアミノ−ピリミジンに対してＲｆ＝０．４１（筋状）、出発アミノピリミジン−カルバメートに対してＲｆ＝０．１１を示した。ＴＬＣおよびＬＣ／ＭＳのいずれも、生成したビスイソプロピルアミノピリミジンを実質的に含まない、完全な反応を確証した。必用であれば、反応の進行を追跡するための別の手段としてＨＰＬＣを用いることができる。粗反応溶液をＥｔＯＡｃ（１Ｌ）により希釈し、塩基性アルミナ（４００ｍＬ）のパッドを通して濾過した。ＥｔＯＡｃ（２００ｍＬ）およびＥｔＯＨ（２００ｍＬ）によりアルミナを洗い、合わせた有機溶液を真空濃縮した。フラスコにＮ２を入れた。粘性のあるオイルを無水トルエン（７００ｍＬ）に再溶解し、濃縮した。フラスコに窒素を入れた後、さらに４００ｍＬのトルエンを共沸除去することにより、生成物を再び乾燥させた。粘性のある赤みを帯びた茶色のオイルを得た。
【０１８８】
ＬＣ／ＭＳにより明白に示されるように、ビス−イソプロピルアミノピリミジンカルバメート不純物をクロマトグラフィーにより除去する必要があった先行技術に比べて、この手順により、非常に少量のビス−イソプロピルアミノピリミジンカルバメート不純物が生成した。
【０１８９】
モノ−イソプロピルアミノピリミジン２の型どおりの精製ステップが必要である場合、それを、ＴＨＦ／エーテルから、（Ｌ）−酒石酸塩として析出させ、液中粉砕することができる。小規模での例は次の通り：（５．０９ｇ、９９．６％の収率）Ｌ−酒石酸（１．４２ｇ）を高温ＴＨＦ（４５ｍＬ）に溶かした。この高温の酒石酸溶液を、ゴム状のイソプロピルアミノ−ピリミジン２（５．１ｇ）に加えた。均質になるまで混合物をぐるぐるかき混ぜて、温めた。溶液は、ピンク−紫色から黄褐色（ｔａｎ）に変わった。溶液を真空濃縮して、黄褐色のゴム状物を得た。エーテル（約１５０ｍＬ）を加え、その際に、油状化が見られた。エーテル混合物を真空濃縮した。アセトン（約２０ｍＬ）、次いで、エーテル（約２００ｍＬ）を加え、ゴム状オイルの生成が再び見られた。混合物に３回目の濃縮をした。塩化メチレン（５〜１０ｍＬ）を、その後、エーテル（約８０ｍＬ）を加えた。明るいオレンジ−ピンク色の上澄みの下に、黄褐色の沈殿の生成が見られた。混合物を濾過した。沈殿をエーテル（５０ｍＬ）により、次いで、再び、アセトン（約６０ｍＬ）とエーテルの混合物（１：１）により洗った。沈殿を一夜、真空乾燥して、クリーム色に着色した固体を得た（４．９ｇ、７６％の収率）。固体酒石酸塩の少量のアリコートを、ｉ−ＰｒＯＨおよびＥｔＯＨに溶かし、塩基性アルミナの小さなプラグに通して、遊離塩基を得た。遊離塩基のアリコートを、ＴＬＣおよびＬＣ／ＭＳによって分析した。残りの塩は、ＣＨ２Ｃｌ２（２５０ｍｌ）と１ＮのＮａＨＣＯ３（１５０ｍＬ）の混合物に懸濁させた。混合といくらかのバブリングにより、溶けた固体および遊離塩基アミンを有機層に抽出した。水性相をＥｔＯＡｃ（１５０ｍＬ）によりもう一度抽出し、有機抽出物を合わせ、ＭｇＳＯ４（約１５０ｇ）で乾燥した。乾燥した有機溶液を、塩基性アルミナ（約１００ｇ）に通して、薄いピンク色の溶液を得て、それを真空濃縮して、黄褐色／ピンク色のゴム状物を得た（３．２８ｇ、出発ニトロカルバメートから６４％の収率）。
【０１９０】
モノイソプロピルアミノピリミジンカルバメート２と塩を生成させる試みの中で、いくつかの他の酸を調べた。ｐ−トルエンスルホン酸およびメタンスルホン酸はオイルを生じた。固体の塩はＨＣｌおよびＨ３ＰＯ４により生成できたが、酒石酸により最も好ましい溶解特性が得られると思われた。ＨＣｌおよびリン酸の塩は、ＣＨ２Ｃｌ２、ｉ−ＰｒＯＨ、およびアセトンに容易に溶けるように見えたが、他方、酒石酸塩は、ＣＨ２Ｃｌ２におおかた不溶で、他の溶媒には部分的にのみ溶けるように見えた。
【０１９１】
ステップ２：（Ｓ）−４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−オキソプロピル）フェニルピロリジン−１−カルボキシレート（３）の調製
【０１９２】
【化３０】
2009528296.tif 000025
ステップ１によるイプロピルアミノピリミジンカルバメート２（１８９ｍｍｏｌと仮定する）を、ピリジン（６８０ｍＬ）に溶かし、溶液をＮ２下に０℃に冷却した。メタンスルホニルクロリド（４４ｍＬ、３．０当量）を、イプロピルアミノピリミジンカルバメートの冷却したピリジン溶液に、２０分間かけてシリンジポンプにより加えた。氷浴を取り除き、溶液をＲＴまで温めた。溶液を６時間撹拌した。少量のアリコートを取り出し、小規模のワークアップを実施した（ＥｔＯＡｃにより希釈し、５％のＫＨ２ＰＯ４、塩水（ｂｒｉｎｅ）により洗い、次いで、ＭｇＳＯ４で乾燥）。ＴＬＣによる分析は、反応が完了し、概ね清浄であることを示した（残留ピリジンによるベースラインスポット以外に１スポットだけ）。本体の反応溶液を濃縮した。６５０ｍＬの留出物を捕集した時、血のように赤いオイルを、ＥｔＯＡｃ（２Ｌ）により希釈した。有機溶液を、５％のＫＨ２ＰＯ４（１Ｌおよび７５０ｍＬ）、０．２Ｎのクエン酸（１Ｌ）、ならびに塩水（１Ｌ）により洗った。有機溶液をＭｇＳＯ４（１５０ｇ）で乾燥した。乾燥した有機溶液を、シリカゲル（１Ｌ）のパッドに通して濾過して、緑−黒色の溶液を得た。フラスコおよびシリカゲルをＥｔＯＡｃ（１．５Ｌ）により洗い、有機溶液の全体積を３．５Ｌとした。溶液を、塩基性アルミナ（３００ｍＬ）のパッドに通して濾過して、深い緑色の溶液を得た。この溶液を真空濃縮した。赤みを帯びたゴム状物（１５０ｇ）を得た。
【０１９３】
フラスコを窒素でフラッシングし、栓をし、冷蔵庫に入れると、赤−茶色の固体を生成した。ＬＣ／ＭＳは、許容される純度を示したが、ＴＬＣ分析は、明るい赤のベースラインスポット、さらには２つから３つの非常にぼやけた不純物を示した。ピリジンの臭いはまだ存在していた。赤−茶色の固体を、ＣＨ２Ｃｌ２（１００ｍＬ）、ＴＨＦ（２００ｍＬ）、およびエーテル（８００ｍＬ）の混合物に溶かした。この溶液をシリカゲル（１Ｌ）のパッドに通して濾過／溶離し、シリカをエーテル（３Ｌ）で洗った。ほとんどの着色したベースライン不純物はシリカゲルに保持された。溶液を濃縮して、赤色のオイルを得て、それを乾燥してピンク色の発泡固体（１００ｇ）とし、それをＬＣ／ＭＳにより分析すると９４．７％の純度であった。次いで、この物質を、ＣＨ２Ｃｌ２（３Ｌ）、ＣＨ２Ｃｌ２およびエーテル（１：１；４Ｌ）、エーテル（４Ｌ）、エーテル：ＴＨＦ（１：１；４Ｌ）、ならびに、５％のＥｔ３Ｎおよび２％のＥｔＯＨを含むＥｔＯＡｃ（４Ｌ）により溶離させるシリカゲル（２Ｌ）でのクロマトグラフィーにかけた。ＣＨ２Ｃｌ２：エーテルの溶離液は、赤色オイルの混合フラクション（１２．４ｇ；フラクションＡ）を与え、エーテル溶離液は、黄褐色のオイル（１３ｇ；フラクションＢ）を与え、それは概ね純粋であった。物質の大部分は、カラムに残り、所望の生成物がカラムで結晶化したことが分かった。エーテル：ＴＨＦ、およびＥｔＯＡｃ（５％のＥｔ３Ｎおよび２％のＥｔＯＨを含む）による溶離は、生成物を再溶解させ、濃厚な中心部（ｐｌｕｇ）（フラクションＣ）として溶離させた。フラクションＡおよびＢは合わせて、一緒に濃縮した。フラクションＣは、別に濃縮した。濃縮および乾燥により、どちらのフラクションでも結晶が生成した。さらなる調査により、その固体は、メチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）、シクロヘキサン、エーテル−ヘキサン（１：１）、ＭＴＢＥ−ヘキサン類、またはシクロヘキサン−ヘキサン類から再結晶できることを見出した。ＡおよびＢを合わせたフラクション、ならびにフラクションＣは、各々、ＭＴＢＥ−ヘキサン類から再結晶して、白色固体としてｔｅｒｔ−ブチルエステル３（全体で５７．７５ｇ、純度＞９９％）、および赤色の濾液／母液を得た。母液を濃縮して、赤色のオイル（２４ｇ）得た。母液オイルは、Ｂｉｏｔａｇｅ  ７５でクロマトグラフィーにかけ、ＣＨ２Ｃｌ２中４％ＴＨＦ（１２Ｌ）により溶離させて、高濃度化したフラクションを得て、次いで、それを濃縮し、再結晶して、さらに１４ｇの精製ｔｅｒｔ−ブチルエステルを得た。
【０１９４】
方法Ｍ２によるＬＣ／ＭＳは、ｔＲ＝１．９７分を与え、所望の生成物に対する［Ｍ＋１］＋でＭ／Ｚ＝６１９であった。
【０１９５】
方法Ｍ１５によるＬＣ／ＭＳは、ｔＲ＝６．０９分を与え、所望の生成物に対する［Ｍ＋１］＋でＭ／Ｚ＝６１９であった。
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤＣｌ３，  ３００  ＭＨｚ）  δ，  ｐｐｍ：    ０．８８  （ｄ，  ｊ  ＝  ６  Ｈｚ，  １．４Ｈ），  １．０４  （ｄ，  ｊ  ＝  ６  Ｈｚ，  ２Ｈ），  １．２０  （ｍ，  １０Ｈ），  １．３７  （ｓ，  ４．８Ｈ），  １．３９  （ｓ，  ４．８Ｈ），  １．９３  （ＡＡ’ＢＢ’，  ４Ｈ），  ２．８０  （ｓ，  １．７Ｈ），  ２．９  （ｓ，  １．６Ｈ），  ３．１８  （ｍ，  ２．４Ｈ），  ３．４−３．７  （ｍ  ２つの見掛け上トリプレットの重なり，  ８．３Ｈ），  ４．４０  （セクステット，  ｊ  ＝  ６  Ｈｚ，  １．１Ｈ），  ４．８  （セクステット，  １Ｈ），  ５．６４  （ｄ，  ｊ  ＝  ６．５  Ｈｚ，  ０．５Ｈ），  ５．７０  （ｄ，  ｊ  ＝  ６．５  Ｈｚ，  ０．５Ｈ），  ７．０３  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．１８  （見掛け上ｄｄ，  ２Ｈ），  ７．８０  （ｄ，  ｊ  ＝  ４  Ｈｚ，  １Ｈ）。１Ｈ  ＮＭＲは複数のロータマーを示す。
【０１９６】
メタンスルホニルクロリドによる処理は、ＴＨＦ中で、さらなる塩基はほとんど、または全く無しになされると想定される。塩基が用いられる場合、トリエチルアミンまたはジイソプロピルエチルアミンのような塩基が用いられるべきである。
【０１９７】
ステップ３：（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−イソプロピルメチル−スルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸（４）の調製
【０１９８】
【化３１】
2009528296.tif 000026
ステップ２によるｔ−ブチルエステル（５７．７５ｇ、０．０９３ｍｏｌ）のギ酸（１．５Ｌ）溶液を、５０℃で一夜加熱し、次いで、真空濃縮した。別法として、この反応はまた、７０℃または８０℃で、６０〜９０分間でも実施できる。
【０１９９】
水（約１００ｍＬ）を粗生成物に加え、混合物を濃縮乾燥した。残留物を高真空下に乾燥した。この粗生成物を１．０ＮのＨＣｌ（２５０ｍＬおよび２００ｍＬ）に２回、溶解し、濃縮した。生成物を２回、高温ＴＨＦに溶かし、濃縮乾燥して、発泡固体を得た。発泡固体を高真空下に６５℃で２時間乾燥した。この固体をフラスコからこすり取り、真空オーブンで一夜乾燥して（６０℃、２８ｉｎ．Ｈｇ）、（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−イソプロピルメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸−４の塩酸塩（５０．９ｇ；９８．３％の純度）を得た。
【０２００】
Ｍ１５の方法によるＬＣ／ＭＳは、ｔＲ＝１．９６分、Ｍ／Ｚ＝５６３を与えた。
【０２０１】
Ｍ２の方法によるＬＣ／ＭＳは、ｔＲ＝１．４３分、Ｍ／Ｚ＝５６３を与えた。
１Ｈ  ＮＭＲ  （ＣＤ３ＯＤ，  ３００  ＭＨｚ）  δ，  ｐｐｍ：    ０．８０  （ｄ，  ｊ  ＝  ６  Ｈｚ，  １．４Ｈ），  １．０２  （ｄ，  ｊ  ＝  ６  Ｈｚ，  １．６Ｈ），  １．２３  （ｍ，  ９．２Ｈ），  １．８０−２．０  （ＡＡ’ＢＢ’  ＋  ｍ，  ５．２Ｈ），  ２．９９  （ｄ，  ３．２Ｈ），  ３．２−３．４５  （ｍ，  ４．５Ｈ），  ３．４５−３．８  （ｍ，  ７．６Ｈ），  ４．４０  （セクステット，  １Ｈ），  ４．９０  （ｍ，  ３Ｈ），  ７．００  （ｄ，  ２Ｈ），  ７．２３  （ｄ，  ２Ｈ），  ７．６０  （ｄ，  ０．２５Ｈ），  ７．７５  （ｄ，  １Ｈ），  ７．８３  （ｄ，  ０．２５Ｈ）．
１３Ｃ  ＮＭＲ  （ＣＤ３ＯＤ，  ７５  ＭＨｚ）  δ，  ｐｐｍ：    ６．５，  １４．７，  １４．８，１５．４，  １５．５，  １９．４，  ２０．０，  ２０．２，  ２９．９１，  ３０．４４，  ３３．９５，  ３４．１５，  ４１．０３，  ４１．０８，  （４１．７１，  ４１．９９，  ４２．２８，  ４２．６，  ４２．８，  ４３．１  −溶媒ピーク），  ４７．２１，  ４７．３６，  ５０．０１，  ５０．４２，  ６２．４３，  １０２．１１，  １０２．２３，  １１６．７８，  １２４．９，  １２５．１９，  １２８．５４，  １２９．０１，  １３８．４９，  １３９．０２，  １４５．５３，  １４５．６０，  １４５．７８，  １４８．６８，  １５６．７７，  １５６．８６，  １６６．９１，  １６７．０７。
【０２０２】
（実施例２）
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチルメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸（７）の調製
【０２０３】
【化３２】
2009528296.tif 000027
ステップ１：（Ｓ）−４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−ニトロピリミジン−４−イルアミノ）−３−オキソプロピル）フェニルピロリジン−１−カルボキシレート（６）の１ポット還元／還元エチル化
【０２０４】
【化３３】
2009528296.tif 000028
ニトロ−カルバメート（化合物５、１０．８ｇ、２０ｍｍｏｌ）をＴＨＦ（３５ｍＬ）でスラリー化し、水（１ｍＬ、３ｖｏｌ％）を加えた。この溶液を撹拌し、アダムズ触媒（０．３６０ｇ、６モル％）を加え、排気（５０ｍｍＨｇ）および乾燥窒素による再充填（１０ｐｓｉ）の３サイクルにより溶液を脱酸素した。最後に、反応容器を水素により加圧し（６０ｐｓｉ）、反応混合物を９０分間、激しく撹拌した。必要であるか、または望まれる場合、水素化反応の進行はＴＬＣ（シリカゲル、ジクロロメタン：メタノール（９５：５）により溶離）により追跡できる。ニトロカルバメートのＲｆは０．９５、第１級アミン＝０．１６である。
【０２０５】
水素を乾燥窒素に置き換えた（排気および窒素による再充填の３サイクル）。エタノール（２５ｍＬ）、酢酸（０．３ｍＬ）およびアセトアルデヒド（１．２ｍＬ、２１ｍｍｏｌ、１．０５当量）を加え、揮発性アセトアルデヒドの損失を最少化するように低圧（約１５０ｍｍＨｇ）で容器をある程度排気し、窒素により再充填し（１０ｐｓｉ）、反応混合物を５０分間激しく撹拌した。この時間の最後に、２回のある程度の排気と水素による再加圧によって、窒素を水素（６０ｐｓｉ）に置き換えた。混合物をさらに４５分間撹拌した。還元的アミノ化の進行は、ＴＬＣ（シリカゲル、ジクロロメタン：メタノール（９５：５）により溶離）により追跡できる。第１級アミンのＲｆ＝０．１６、第２級アミン−０．３２、および第３級アミン＝０．４３。プロセスの終わりに、排気および窒素による再充填の３サイクルによって水素を除き、セライト床で触媒を濾別し、メタノールを用いて洗い、濾液をストリッピングし乾燥して琥珀色のオイル（１１．９ｇ）を得た。この生成物は酸素に弱く、その結果、かなり暗色化し、ＴＬＣで低Ｒｆの物質が現れた。全ての取扱いは適切な事前の対策をもってなされるべきである。
【０２０６】
反応生成物は、ジクロロメタン：メタノールの混合物（９７：３、０．３％の水酸化アンモニウムを含む）を用いるフラッシュクロマトグラフィーにより精製した。Ｎ−エチル生成物を含むフラクションを一緒にして、７．９ｇの化合物６を琥珀色のオイルとして得た（９８．５％の純度；７３％の収率）。この粗生成物の純度は、多くの目的にとって、特に、予想される次の反応の生成物が結晶性であると知られている場合、適切であると思われる。
１Ｈ−ＮＭＲ，  ＣＤＣｌ３，  （δ）：  ７．６０  （ｓ，  １Ｈ），  ７．１７  （ｄ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ，  ２Ｈ），  ７．０５  （ｄ，  Ｊ＝８．４Ｈｚ，  ２Ｈ），  ５．７５  （ｄ，  Ｊ＝７．５Ｈｚ，  １Ｈ），  ４．８４  （ｑ，  Ｊ＝６．６Ｈｚ，  １Ｈ），  ３．６４−３．４６  （ｍ，  ８Ｈ），  ３．１９  （ｄ，  Ｊ＝６．３Ｈｚ，  ２Ｈ），  ２．８６  （ｑ，  Ｊ＝７．２Ｈｚ，  ２Ｈ），  １．９４  （ｍ，  ４Ｈ），  １．３９  （ｓ，  ９Ｈ），  １．２０−１．１１  （ｍ，  ９Ｈ）．
１３Ｃ−ＮＭＲ，  ＣＤＣｌ３，  （δ）：  １７１．７，  １５７．７，  １５７．５，  １５３．１，  １５０．３，  １４５．８，  １３３．７，  １３０．２，  １２１．５，  １１７．４，  ８１．８，  ５４．７，  ４６．４，  ４６．３，  ４２．４，  ４１．７，  ３７．４，  ２８．０，  ２５．８，  ２４．９，  １５．５，  １３．５．
ＭＳ  （ｍ／ｚ）：  ５２７．３  ［Ｍ＋１］。
【０２０７】
ステップ２および３：（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチルメチルスルホンアミド）−ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸（７）
実施例１のステップ２および３の手順に従って、化合物６を、対応する（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−エチルメチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸（７）に変換し、この化合物を次の通り特性評価した。
１Ｈ−ＮＭＲ，  ＣＤＣｌ３，  （δ）：  ８．１７  （ｓ，  １Ｈ），  ７．７７  （ｓ，  １Ｈ），  ７．２６−７．２３  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．００−６．９８  （ｄ，  ２Ｈ），  ４．８５−４．８２  （ｍ，  １Ｈ），  ３．５８−３．５１  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．４３−３．３９  （ｍ，  ３Ｈ），  ２．９６−２．８４  （ｍ，  ３Ｈ），  ２．０１−１．９１  （ｍ，  ４Ｈ），  １．２９−０．９７  （ｍ，  ９Ｈ）；  
１３Ｃ−ＮＭＲ，  ＣＤＣｌ３，  （δ）：１７５．６，  １６５．７，  １５７．２，  １５５．２，  １５２．０，  １５１．８，  １５１．７，  １５１．３，  １３６．０，  １３５．９，  １３１．５，  １２３．０，  １１０．５，  ５６．７，  ４３．８，  ３９．４，  ３９．２，  ３７．４，  ２６．７，  ２５．８，  １４．４，  １３．３；および
ＭＳ：Ｍ（＋Ｈ）  ５４９。
【０２０８】
（実施例３）
（Ｓ）−２−（５−（Ｎ−シクロペンチルメチルスルホンアミド）−２−（ジエチルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸（８）の調製
【０２０９】
【化３４】
2009528296.tif 000029
実施例１の手順に従い、アセトン  （実施例１）またはアセトアルデヒド  （実施例２）の代わりにシクロペンタノンを用い、（Ｓ）−２−（５−（Ｎ−シクロペンチルメチルスルホンアミド）−２−（ジエチルアミノ）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸８を調製し、次の通り特性評価した。
１Ｈ−ＮＭＲ，  ＣＤＣｌ３，  （δ）：    ７．７４−７．７１  （ｄ，  １Ｈ），  ７．２８−７．２４  （ｍ，  ２Ｈ），  ７．０４−７．００  （ｍ，  ２Ｈ），  ５．００−４．９５  （ｍ，  １Ｈ），  ４．３７−４．２７  （ｍ，  １Ｈ），  ３．６０−３．３７  （ｍ，  ９Ｈ），  ３．００−２．９７  （ｄ，  ３Ｈ），  ２．０３−１．７８  （ｍ，  ６Ｈ），  １．６７−１．４０  （ｍ，  ６Ｈ），  １．３１−１．２３  （ｍ，  ６Ｈ）；
１３Ｃ−ＮＭＲ，  ＣＤＣｌ３，  （δ）：  １７３．６，  １７３．４，  １６３．１，  １５５．１，  １５２．４，  １５２．０，  １４５．３，  １４４．７，  １３５．５，  １３５．１，  １３１．６，  １３１．４，  １２３．２，  １０９．６，  １０９．４，  ６２．５，  ６２．３，  ５６．７，  ５６．５，  ４８．１，  ４０．３，  ４０．１，  ３６．８，  ３６．４，  ３１．２，  ３０．５，  ２６．７，  ２５．８，  ２３．２，  ２３．１，  １２．７；および
ＭＳ：  Ｍ（＋Ｈ）  ５８９。
【０２１０】
（実施例４）
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−（プロプ−２−イニル）メチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸（１３）の調製
下に示すスキーム６に、実施例４において用いた合成プロトコルを要約する。
【０２１１】
【化３５】
2009528296.tif 000030
ステップ１：（Ｓ）−４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−（メチルスルホニル）−メチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−オキソプロピル）フェニルピロリジン−１−カルボキシレート（１０）
アミノピリミジン（２．０ｇ、４．０ｍｍｏｌ−化合物９）（化合物１の還元により調製）を、ジクロロメタン（１０ｍＬ）に溶かした。ＴＨＦ（１０ｍＬ）およびトリエチルアミン（２．８ｍＬ、２０ｍｍｏｌ）を加え、反応物を氷浴で冷却した。メタンスルホニルクロリド（１．１ｍＬ、１４ｍｍｏｌ）を加え、反応物を１８時間、室温に温めた。反応混合物を真空濃縮し、残留物を酢酸エチルに溶かし取った。この溶液を０．２Ｎのクエン酸、水、飽和ＮａＨＣＯ３、および塩水により洗った。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空濃縮して、粗生成物を茶色発泡体として得た。この残留物をフラッシュクロマトグラフィー（２：３  酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、２．２ｇ（７３％）のジ−スルホニル化物を黄色発泡体として得た（化合物１０）。
【０２１２】
ステップ２：（Ｓ）−４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（メチルスルホンアミド）−ピリミジン−４−イルアミノ）−３−オキソプロピル）フェニルピロリジン−１−カルボキシレート（１１）
化合物１０（２．２ｇ、３．４ｍｍｏｌ）をメタノール（５ｍＬ）およびＴＨＦ（５ｍＬ）に溶かした。１．０ＭのＫ２ＣＯ３（１０ｍＬ）を加え、反応混合物を４０℃で９６時間加熱した。反応混合物を、２ＮのＨＣｌによりｐＨ３まで酸性化し、酢酸エチルで抽出した。有機層を塩水により洗い、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空濃縮して、１．６８ｇ（８６％）の生成物をベージュ色発泡体として得た（化合物１１）。この粗物質を精製なしに用いた。
【０２１３】
ステップ３：（Ｓ）−４−（３−ｔｅｒｔ−ブトキシ−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−プロプ−２−イニル）メチルスルホンアミド）ピリミジン−４−イルアミノ）−３−オキソプロピル）フェニルピロリジン−１−カルボキシレート（１２）
化合物１１（０．２０ｇ、０．３５ｍｍｏｌ）、Ｋ２ＣＯ３（０．０７３ｇ、０．５３ｍｍｏｌ）、およびアセトン（３ｍＬ）を、封管に入れ、室温で１時間撹拌した。プロパルギルクロリド（０．２６ｍＬ、３．５ｍｍｏｌ）を加え、反応物を密封し、４８時間加熱還流した。反応混合物を真空濃縮し、残留物を酢酸エチルに溶かし取った。この溶液を水および／または塩水により洗った。有機層をＮａ２ＳＯ４で乾燥し、濾過し、真空濃縮して、粗生成物をオレンジ色のフィルムとして得た。この残留物をフラッシュクロマトグラフィー（１：１  酢酸エチル／ヘキサン）により精製して、０．１１ｇ（５１％）の化合物１２を透明フィルムとして得た。
ＭＳ  （ｍ／ｚ）  ６１５，  （Ｍ＋Ｈ）＋。
【０２１４】
ステップ４：（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−（プロプ−２−イニル）メチルスルホンアミド）−ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸（１３）
ギ酸（２ｍＬ）を、ｔ−ブチルエステル（１００ｍｇ）に加え、４０℃で一夜、撹拌した。減圧下にギ酸を除去して、化合物１３を定量的収率で得て、次の通り特性評価した。
１Ｈ−ＮＭＲ，  ＣＤＣｌ３，  （δ）：    ８．１３  （ｓ，  １Ｈ），  ７．９７  （ｓ，  １Ｈ），  ７．２６−７．２４  （ｄ，  ２Ｈ），  ７．０２−６．９９  （ｄ，  ２Ｈ），  ４．５９−４．４４  （ｍ，  １Ｈ），  ４．０４−３．７９  （ｍ，  １Ｈ），  ３．６４−３．５３  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．４５−３．３９  （ｔ，  ３Ｈ），  ３．０８−２．８４  （ｍ，  ４Ｈ），  ２．８４−１．８９  （ｍ，  ４Ｈ）１．２２−１．１７  （ｔ，  ６Ｈ）；  
１３Ｃ−ＮＭＲ，  ＣＤＣｌ３，  （δ）：  １６５．３，  １５５．３，  １５１．８，  １３６．１，  １３１．５，  １２３．０，  ７６．１，  ７６．０，  ５６．８，  ４９．９，  ４８．１，  ４３．８，  ４１．２，  ４０．２，  ３７．４，  ２６．７，  ２５．９，  １３．３；および
ＭＳ：Ｍ（＋Ｈ）  ５５９。
【０２１５】
（実施例５）
（Ｓ）−２−（２−（ジエチルアミノ）−５−（Ｎ−メチルメチルスルホンアミド）−ピリミジン−４−イルアミノ）−３−（４−（ピロリジン−１−カルボニルオキシ）フェニル）プロパン酸（１４）の調製
【０２１６】
【化３６】
2009528296.tif 000031
実施例４の手順に従い、プロパルギルクロリドの代わりに硫酸ジメチルを用い、標題の化合物を調製し、次の通り特性評価した。
１Ｈ−ＮＭＲ，  ＣＤＣｌ３，  （δ）：  ８．１４  （ｓ，  １Ｈ），  ７．８３  （ｓ，  １Ｈ），  ７．２６−７．２３  （ｄ，  ２Ｈ），  ７．０１−６．９８  （ｄ，  ２Ｈ），  ４．８４−４．８１  （ｍ，  １Ｈ），  ３．６０−３．５３  （ｍ，  ６Ｈ），  ３．４３−３．３８  （ｍ，  ３Ｈ），  ３．０９  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．９４  （ｓ，  ３Ｈ），  ２．００−１．９１  （ｍ，  ４Ｈ），  １．２２−１．１８  （ｔ，  ６Ｈ）；
１３Ｃ−ＮＭＲ，  ＣＤＣｌ３，  （δ）：１７５．５，  １６５．４，  １６０．７，  １５６．３，  １５５．３，  １５１．８，  １４９．１，  １３６．０，  １３１．６，  １２３．０，  １１３．４，  ５６．９，  ４３．９，  ３８．８，  ３８．１，  ３７．４，  ２６．７，  ２５．８，  １３．２；および
ＭＳ：Ｍ（＋Ｈ）  ５３５。
【０２１７】
（実施例Ａ）
α４β１インテグリン接着アッセイ：ヒト血漿フィブロネクチンへのＪｕｒｋａｔ（商標）細胞の接着
手順
９６ウェルプレート（Ｃｏｓｔｅｒ  ３５９０  ＥＩＡプレート）を、ヒトフィブロネクチン（Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬ  ｃａｔ＃３３０１６−０２３）により、１０μｇ／ｍＬの濃度で、４℃で一夜、コーティングした。次いで、プレートを、ウシ血清アルブミンの生理食塩水溶液（ＢＳＡ；０．３％）によりブロックした。Ｊｕｒｋａｔ（商標）細胞（対数増殖期に保った）を、製造者の教示に従ってカルセインＡＭにより標識し、Ｈｅｐｅｓ／生理食塩水／ＢＳＡに、２×１０６個の細胞／ｍＬの濃度で懸濁させた。次いで、細胞を試験および対照化合物に室温で３０分間曝し、その後、フィブロネクチンをコーティングしたプレートの個々のウェルに移した。３７℃で３５分間、接着させた。次いで、ウェルを、穏やかな吸引と、新鮮な生理食塩水によるピペッティングにより洗った。残って付着している細胞に付随する蛍光を、蛍光プレートリーダーを用い、ＥＸ４８５／ＥＭ５３０で計測した。
【０２１８】
３日目にアッセイを実施するために、定常期のＪｕｒｋａｔ（商標）細胞を、１日目に１：１０に、２日目に１：２に最初に分割することによって細胞培養を準備した。１日目に１：１０に分割した細胞は、４日目のアッセイのために３日目に１：４に分割した。
【０２１９】
アッセイプレートは、最初に、Ｇｉｂｃｏ／ＢＲＬヒトフィブロネクチン（ｃａｔ＃３３０１６−０２３）のＰＢＳ＋＋作業溶液を１０μｇ／ｍＬで作ることによって調製した。
【０２２０】
次いで、Ｃｏｓｔｅｒ  ３５９０  ＥＩＡプレートを、室温で２時間、５０μＬ／ウェルでコーティングした（しかし、それはまた、４℃で一夜放置してもよい）。最後に、プレートを吸引し、Ｈｅｐｅｓ／生理食塩水の緩衝液（１００μＬ／ウェル）により、ｒｔで１時間ブロックし、その後、１５０μＬのＰＢＳ＋＋により３回洗った。
【０２２１】
化合物の希釈は、化合物の１：３の段階希釈液を次の様に調製することによって実施した。各プレート（４つの化合物／プレート）で、６００μＬを、Ｔｉｔｅｒｔｕｂｅラックの４つのＢｉｏ−Ｒａｄ  Ｔｉｔｅｒｔｕｂｅに入れた。当技術分野においてよく知られている方法を用いて、２Ｘ濃度を与えるように、十分な化合物を各々の適切な管に入れた。Ｆａｌｃｏｎ  Ｆｌｅｘｉｐｌａｔｅを用いて、１００μＬのＨｅｐｅｓ／生理食塩水緩衝液またはヒト血清を、列ＢからＧまでに入れた。ピペッターで一様な間隔の４つのチップを有する、１８０μＬに設定したマルチチャネルピペッターを用いた。各々の組の４つの管を５回混合し、１８０μＬの２Ｘ化合物を、列Ｂの各化合物希釈の最初の段に移し、列Ａは空で残した。１８０μＬを列Ａの他のウェルに入れた。段階希釈は、５０μＬを次の希釈液に移し、プレートを５回混合し、混合後に毎回チップを交換することによって、プレートを下って実施した。希釈は列Ｆで止めた。列Ｇには化合物は存在しなかった。
【０２２２】
２１／６抗体の２０μｇ／ｍＬ溶液（ＨＥＰＥＳ／生理食塩水緩衝液またはヒト血清中）は、陽性対照であり、細胞懸濁プレートに加えるために、試薬槽（ｔｒｏｕｇｈ）にとっておいた。
【０２２３】
細胞染色は、最初に、対数増殖期のＪｕｒｋａｔ（商標）細胞を、５０ｍＬの管で遠心することによって（１，１００ｒｐｍ、５分間）採取することにより実施した。これらの細胞を、５０ｍＬのＰＢＳ＋＋に再懸濁し、遠心し、２０ｍＬのＰＢＳ＋＋に再懸濁した。細胞は、２０μＬのカルセインＡＭをＲＴで３０分間加えることによって染色した。体積を、ＨＥＰＥＳ／生理食塩水緩衝液により５０ｍＬにし、細胞を数え、遠心し、ＨＥＰＥＳ／生理食塩水緩衝液またはヒト血清に、２×１０６個の細胞／ｍＬになるように再懸濁した。
【０２２４】
化合物は次の手順を用いてインキュベートした。新しいｆｌｅｘｉｐｌａｔｅに、列ＢからＨまで、６５μＬの染色した細胞を入れた。次いで、６５μＬの２Ｘ化合物を、プレートを組み上げた後、適切な列に入れ、３回混合した。６５μＬの２Ｘ−２１／６抗体を列Ｈに入れ、３回混合した。最後に、プレートを室温で３０分間、インキュベートした。
【０２２５】
フィブロネクチンの接着は、次のワークアップ手順の後、蛍光プレートリーダーを用い、ＥＸ４８５／ＥＭ５３０で測定した。インキュベーションの後、細胞を３回混合し、１００μＬを、フィブロネクチンでコーティングしたプレートに移し、３７℃で約３５分間、インキュベートした。各プレートを、列毎に、１００μＬのＲＴ  ＰＢＳ＋＋をウェルの側面にピペットで穏やかに落とし、吸引のためにプレートを９０度回転することによって洗った。全部で３回の洗浄で、この手順を繰り返した。各ウェルは、洗浄後、ウェルの側面にピペットで落とすことにより、１００μＬにより満たした。
【０２２６】
ＩＣ５０の値を、ヒト血清の存在する場合と、ヒト血清の存在しない場合の両方で、各化合物について計算した。ＩＣ５０は、増殖または活性が５０％だけ抑制される濃度である。本明細書に開示の化合物は、全て、フィブロネクチンアッセイに従って試験した時、０．１μＭ未満のＩＣ５０を有することが見出された。
【０２２７】
（実施例Ｂ）
α４β１への候補化合物の結合を評価するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏ飽和アッセイ
対数増殖期のＪｕｒｋａｔ（商標）細胞を、２０μｇ／ｍＬの１５／７抗体を含む正常動物血漿で洗い、それに再懸濁させた（Ｙｅｄｎｏｃｋら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、（１９９５年）２７０（４８）：２８７４０頁）。
【０２２８】
標準曲線のための標準的な１２点段階希釈を用い、６６μＭから０．０１μＭの範囲の様々な濃度で候補化合物の既知量を含む正常血漿試料、あるいは、候補化合物で処理した動物の末梢血から得た血漿試料のいずれかに、Ｊｕｒｋａｔ（商標）細胞を２倍希釈した。
【０２２９】
次いで、細胞を室温で３０分間インキュベートし、結合していない１５／７抗体を除去するために、２％のウシ胎児血清および各々１ｍＭの塩化カルシウムおよび塩化マグネシウムを含むリン酸緩衝化生理食塩水（「ＰＢＳ」）（アッセイ媒体）により２回洗った。
【０２３０】
次いで、細胞を、フィコエリスリン結合ヤギＦ（ａｂ’）２抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ、Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ、ＭＥ）（これは、研究されている動物種からの５％の血清との共インキュベーションにより、何らかの非特異的交差反応のために吸着された）に、１：２００で曝し、暗所で、４℃で３０分間インキュベートした。
【０２３１】
細胞を、アッセイ媒体により２回洗い、それに再懸濁した。次いで、Ｙｅｄｎｏｃｋら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、（１９９５年）２７０：２８７４０頁に記載の標準的蛍光活性化セルソーター（「ＦＡＣＳ」）分析により、細胞を分析した。
【０２３２】
次いで、データを、例えば、通常の用量−反応の様式で、蛍光ｖｓ．用量としてグラフ化した。曲線の上側平坦部を生じる用量レベルは、ｉｎ  ｖｉｖｏモデルにおいて効能を得るために必要とされるレベルを表す。
【０２３３】
α４依存ｉｎ  ｖｉｔｒｏ効能アッセイの結果は、本発明の特定の化合物は、このアッセイで試験した時、２０μｇ／ｍＬ未満のＥＣ５０でα４β１インテグリンの阻害を示したことを表す。
【０２３４】
（実施例Ｃ）
ＶＬＡ−４への化合物の結合を評価するためのｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイ
ｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイを、α４β１インテグリンへの候補化合物の結合を評価するために用いた。このアッセイにおいて結合する化合物は、通常のアッセイ（例えば、競合アッセイ）により生体試料におけるＶＣＡＭ−１のレベルを評価するために使用できる。このアッセイは、約１μＭのように低いＩＣ５０値に対して高精度である。
【０２３５】
α４β１インテグリンの活性を、可溶性ＶＣＡＭ−１と、高レベルのα４β１を発現するヒトＴ細胞系であるＪｕｒｋａｔ（商標）細胞（例えば、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｔｙｐｅ  Ｃｕｌｔｕｒｅ  Ｃｏｌｌｅｃｔｉｏｎ  Ｎｏ．ＴＩＢ  １５２、Ｔ１Ｂ  １５３、およびＣＲＬ  ８１６３）との相互作用により求めた。ＶＣＡＭ−１は、細胞表面と、α４β１インテグリンに依存する仕方で相互作用する（Ｙｅｄｎｏｃｋら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．、（１９９５年）２７０：２８７４０頁）。
【０２３６】
組換え体可溶性ＶＣＡＭ−１を、Ｎ末端にＶＣＡＭ−１の７つの細胞外ドメインと、Ｃ末端にヒトＩｇＧ１重鎖定常部を含むキメラ融合タンパク質として発現させた。このＶＣＡＭ−１融合タンパク質を、前掲のＹｅｄｎｏｃｋにより記載されているやり方で作り、精製した。
【０２３７】
Ｊｕｒｋａｔ（商標）細胞は、前掲のＹｅｄｎｏｃｋにより記載されているように、１０％のウシ胎児血清、ペニシリン、ストレプトマイシンおよびグルタミンを追加したＲＰＭＩ  １６４０で増殖した。
【０２３８】
Ｊｕｒｋａｔ（商標）細胞を、１．５ｍＭのＭｎＣｌおよび５μｇ／ｍＬの１５／７抗体により氷の上で３０分間インキュベートした。Ｍｎ２＋は、受容体を活性化してリガンドの結合を増し、１５／７は、α４β１の活性化されたリガンド結合コンホメーションを認識し、このコンホメーションに分子を固定して、ＶＣＡＭ−１／α４β１インテグリンの相互作用を安定化するモノクローナル抗体である。Ｙｅｄｎｏｃｋら、前掲。１５／７抗体に類似の抗体は他の研究者により調製され（Ｌｕｑｕｅら、１９９６年、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７１：１１０６７頁）、このアッセイに使用され得る。
【０２３９】
次いで、標準的な５点段階希釈を用い、６６μＭから０．０１μＭの範囲の様々な濃度の候補化合物と共に、細胞を、室温で３０分間、インキュベートした。次いで、１５μＬの可溶性組換え体ＶＣＡＭ−１融合タンパク質を、Ｊｕｒｋａｔ（商標）細胞に加え、氷の上で３０分間インキュベートした。Ｙｅｄｎｏｃｋら、前掲。
【０２４０】
次に、細胞を２回洗い、ＰＥ結合ヤギＦ（ａｂ’）２抗マウスＩｇＧ  Ｆｃ（Ｉｍｍｕｎｏｔｅｃｈ、Ｗｅｓｔｂｒｏｏｋ、Ｍｅ．）に、１：２００で再懸濁し、暗所で３０分間、氷の上でインキュベートした。細胞を２回洗い、前掲のＹｅｄｎｏｃｋらに記載の標準的蛍光活性化セルソーター（「ＦＡＣＳ」）分析により、分析した。
【０２４１】
約１５μＭ未満のＩＣ５０を有する化合物は、α４β１に対する結合アフィニティを有する。
【０２４２】
このアッセイにより試験した時、上の実施例で調製した化合物は、１５μＭ以下のＩＣ５０を有する、または有すると予想される（あるいは、ｉｎ  ｖｉｖｏで活性であると予想される）。本アッセイで特定の化合物は、５μＭ未満のＩＣ５０を有していた。
【０２４３】
（実施例Ｄ）
生体利用能の決定のためのカセット投与および血清分析
経口での生体利用能を、ラットにカセット（すなわち、１つの投与溶液当たり６種の化合物の混合物）で投与することによってスクリーニングした。カセットは、１０ｍｇ／ｋｇの総用量で、５種の試験品および標準化合物を含む。各々の化合物／試験品は、等モルの１ＮのＮａＯＨによりナトリウム塩に変換し、水に、２ｍｇ／ｍＬで溶かした。カセットは、等容積の６種の溶液の各々を混合することによって調製した。カセット投与溶液は、十分に混合し、次いで、ｐＨを７．５〜９に調整した。投与溶液は研究の前日に調製し、室温で一夜、撹拌した。
【０２４４】
Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓからのオスのＳｐｒａｇｕｅ  Ｄａｗｌｅｙ（ＳＤ）ラット（６〜８週齢）をこのスクリーニングに用いた。ラットは少なくとも１日隔離し、食物と水にいつでもありつけた。カセットを投与する前の晩に、約１６時間ラットに餌を与えなかった。
【０２４５】
４匹のＳＤラットを、各カセットに割り当てた。単一用量の投与溶液を各ラットに経口投与した。投与容積（５ｍＬ／ｋｇ）および時間を記録し、投与後２ｈでラットに餌を与えた。
【０２４６】
血液試料を、心臓穿刺により次の時点で採取した：４ｈ、８ｈおよび１２ｈ。採血の直前に、ＣＯ２ガスにより１０〜２０秒以内でラットに麻酔をかけた。１２−ｈｏｕｒの試料を採取した後、ラットをＣＯ２による窒息と、その後の頸椎脱臼により安楽死させた。
【０２４７】
血液試料は、処理される前、ヘパリンで凝血防止されたマイクロテイナー（ｍｉｃｒｏｔａｉｎｅｒ）管に、雰囲気より低い温度（４℃）に保った。血液試料を遠心し（１０，０００ｒｐｍ、５分間）、血漿試料を取り出し、薬剤レベルを分析するまで、−２０℃の冷蔵庫に保管した。血漿中の薬剤レベルは、直接血漿沈殿法に対する次のプロトコルを用いて分析した。
【０２４８】
ｉｎ  ｖｉｖｏ血漿試料は、１．５ｍＬ  ９６ウェルプレートに、順番に、１００μＬの試験血漿、１５０μＬのメタノールを加え、その後、１０〜２０秒間の渦発生撹拌を行なうことにより調製した。１５０μＬの０．０５ｎｇ／μＬの内部標準（アセトニトリル中）を加え、３０秒間、渦発生撹拌した。
【０２４９】
標準曲線試料は、１．５ｍＬ  ９６ウェルプレートに、順番に、１００μＬの対照マウス血漿、その後、１５０μＬのメタノールを加え、１０〜２０秒間の渦発生撹拌を行なうことにより調製した。１５０μＬの０．０５ｎｇ／μＬの内部標準（アセトニトリル中）を加え、３０秒間、渦発生撹拌した。０．５ｎｇ／ｍＬから２，０００ｎｇ／ｍＬの標準曲線範囲を得るように、試料に０〜２００ｎｇ（１０濃度）の当該化合物（５０％メタノール中）を加えた。再び、試料を３０秒間、渦発生撹拌する。
【０２５０】
次いで、試料をＥｐｐｅｎｄｏｒｆ  ｍｉｃｒｏｆｕｇｅで、２０から３０分間、３、０００ｒｐｍで遠心し、その後、８０〜９０％の上澄みを清浄な９６ウェルプレートに移した。次に、試料が乾くまで有機溶媒を蒸発させた（Ｎ２下、４０℃／３０〜６０分（Ｚｙｍａｒｋ  Ｔｕｒｂｏｖａｐ））。
【０２５１】
次いで、残留物を２００〜６００Ｌの移動相（５０％ＣＨ３ＯＨ／０．１％ＴＦＡ）に溶かした。次に、ＬＣ／ＭＳ／ＭＳを、ＰＥ−Ｓｃｉｅｘ  ＡＰＩ−３０００三連四重極質量分析計（ＳＮ０７４９７０７）（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ）、Ｓｅｒｉｅｓ２００オートサンプラー、およびＳｈｉｍａｄｚｕ  １０Ａポンプを用いて行なった。ＰＥ−Ｓｃｉｅｘ  Ａｎａｌｙｓｔ（ｖ１．１）によりデータを取得し、データの分析および数量化は、ＰＥ−Ｓｃｉｅｘ  Ａｎａｌｙｓｔ（ｖ１．１）を用いて実施した。５〜５０μｌの容積の試料を逆相ＴｈｅｒｍｏＨｙｐｅｒｓｉｌ  ＤＡＳＨ−１８カラム（Ｋｅｙｓｔｏｎｅ  ２．０×２０ｍｍ、５μｍ、部品番号：８８２３０２５−７０１）に注入し、２５％ＣＨ３ＯＨ、０．１％ＴＦＡ→１００％ＣＨ３ＯＨ、０．１％ＴＦＡの移動相を用いた。約３００μＬ／分の流量で運転時間は約８分であった。
【０２５２】
曲線下面積（ＡＵＣ）を、ｔ＝０から最後の血漿濃度サンプリング時間ｔｘまで、一次台形公式を用いて計算した（「Ｈａｎｄｂｏｏｋ  ｏｆ  Ｂａｓｉｃ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ」、Ｗｏｌｆｇａｎｇ  Ａ．  Ｒｉｔｓｃｈｅｌ、Ｇｒｅｇｏｒｙ  Ｌ．  Ｋｅａｒｎｓ、第５版、１９９９年を参照）。
【０２５３】
ＡＵＣ０〜ｔｘ＝Σ０〜ｎ（（Ｃｎ＋Ｃｎ＋１）／２））・（ｔｎ＋１−ｔｎ）［（μｇ／ｍＬ）ｈ］
カセット投与方式の場合に、血管外投与後、４、８および１２ｈでの試料で、ＡＵＣは、ｔ＝０からｔ＝１２ｈまで計算した。
【０２５４】
上の実施例１〜５の化合物の各々は、このアッセイで試験した時、少なくとも５μｇｈ／ｍＬ（１０ｍｇ／ｋｇの用量での投与に規格化した場合）のＡＵＣを有していた。
【０２５５】
（実施例Ｅ）
喘息モデル（Ｅ１）
α４β１インテグリンにより媒介される炎症性の病気には、例えば、慢性喘息により起こる、好酸球流入（ｉｎｆｌｕｘ）、気道過敏および閉塞が含まれる。以下に、喘息治療に用いられる本発明の化合物のｉｎ  ｖｉｖｏでの作用を研究するために用いられる、喘息の動物モデルを記載する。
【０２５６】
ラット喘息モデル（Ｅ２）
Ｃｈａｐｍａｎら、Ａｍ  Ｊ．  Ｒｅｓｐ．  Ｃｒｉｔ．  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．、１５３〜４頁、Ａ２１９（１９９６年）、およびＣｈａｐｍａｎら、Ａｍ．  Ｊ．  Ｒｅｓｐ．  Ｃｒｉｔ．  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．  １５５：４、Ａ８８１（１９９７年）（これらはどちらも参照を通じて全体として組み込まれる）に記載の手順に従う。
【０２５７】
オバルブミン（ＯＡ；１０μｇ／ｍＬ）を、水酸化アルミニウム（１０ｍｇ／ｍＬ）と混合し、０日目にラット（Ｂｒｏｗｎ  Ｎｏｒｗａｙ）に注射する（ｉ．ｐ．）。アジュバントと一緒のＯＡの注射を、７日目および１４日目に繰り返した。２１日目に、感作動物をプラスチックチューブに拘束し、鼻だけ暴露される装置で、ＯＡのエアロゾル（１０ｍｇ／ｋｇ）に曝す（６０分間）。動物は７２時間後に、ペントバルビタール（２５０ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｐ．）により殺す。３アリコート（４ｍＬ）のＨａｎｋｓ液（ＨＢＳＳ×１０、１００ｍｌ；ＥＤＴＡ  １００ｍＭ、１００ｍＬ；ＨＥＰＥＳ  １Ｍ、２５ｍＬ；Ｈ２Ｏにより１Ｌにする）を用いて、気管カニューレにより肺を洗浄する。回収した細胞を貯め、回収した流体の全容積を、Ｈａｎｋｓ液の添加により１２ｍＬに調節する。全細胞を数え（Ｓｙｓｍｅｘ  ｍｉｃｒｏｃｅｌｌ  ｃｏｕｎｔｅｒ  Ｆ−５００、ＴＯＡ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｌｅｃｔｒｏｎｉｃｓ  Ｏｔｄ．、日本）、塗抹は、回収流体を希釈し（約１０６個の細胞／ｍＬに）、アリコート（１００μＬ）を遠心すること（Ｃｙｔｏｓｐｉｎ、Ｓｈａｎｄｏｎ，英国）によって作製した。塗抹を風乾し、堅牢性グリーンのメタノール溶液（２ｍｇ／ｍＬ）を用いて５秒間で固定し、好酸球、好中球、マクロファージおよび白血球を区別するために、エオシンＧ（５秒）およびチアジン（５秒）で染色した（Ｄｉｆｆ−Ｑｕｉｃｋ、Ｂｒｏｗｎｅ  Ｌｔｄ．、英国）。塗抹当たり合計５００個の細胞を、オイル浸漬下に、光学顕微鏡により数えた（×１００）。本発明の化合物は、０．５％カルボキシメチルセルロースおよび２％Ｔｗｅｅｎ  ８０に懸濁液として製剤し、アレルゲン（オバルブミン）に感作したラットに経口投与できる。能動感作したラット（Ｂｒｏｗｎ  Ｎｏｒｗａｙ）の気道におけるアレルゲン誘発白血球集積を抑制した化合物は、このモデルで活性であると見なされる。
【０２５８】
マウス喘息モデル（Ｅ３）
化合物はまた、Ｋｕｎｇら、Ａｍ  Ｊ．  Ｒｅｓｐｉｒ．  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、１３：３６０〜３６５頁（１９９５年）、およびＳｃｈｎｅｉｄｅｒら、（１９９９年）、  Ａｍ  Ｊ．  Ｒｅｓｐｉｒ．  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．  Ｂｉｏｌ．、２０：４４８〜４５７頁（１９９９年）（これらは各々参照を通じて全体として組み込まれる）により記載の手順に従って、急性肺炎のマウスモデルでも評価される。メスのＢｌａｃｋ／６匹のマウス（８〜１２週齢）を、２０μｇのｏｖａ（Ｇｒａｄｅ  ４、Ｓｉｇｍａ）および２ｍｇのｉｎｊｅｃｔ  Ａｌｕｍ（Ｐｉｅｒｃｅ）を含む、０．２ｍＬのｏｖａ／ａｌｕｍの混合物の腹腔内注射によって１日目に感作する。ブースター注射を、１４日目に投与する。マウスは、２８および２９日目に、エアロゾル化した１％ｏｖａ（０．９％生理食塩水中）により、２０分間攻撃される。マウスを安楽死させ、気管支肺胞洗浄試料（３ｍＬ）を３０日目（最初の攻撃から４８時間後）に捕集した。好酸球は、ＦＡＣＳ／ＦＩＴＣ染色法により計数した。本発明の化合物は、０．５％カルボキシメチルセルロースおよび２％Ｔｗｅｅｎ  ８０に懸濁液として製剤し、アレルゲン（オバルブミン）に感作したラットに経口投与される。能動感作したＣ５７ＢＬ／６マウスの気道におけるアレルゲン誘発白血球集積を抑制した化合物は、このモデルで活性であると見なされる。
【０２５９】
ヒツジ喘息モデル（Ｅ４）
このモデルは、Ａｂｒａｈａｍら、Ｊ．Ｃｌｉｎ，  Ｉｎｖｅｓｔ、９３：７７６〜７８７頁（１９９４年）、およびＡｂｒａｈａｍら、Ａｍ  Ｊ．  Ｒｅｓｐｉｒ．  Ｃｒｉｔ．  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．、１５６：６９６〜７０３頁（１９９７年）（これらのどちらも参照を通じて全体として組み込まれる）により記載の手順を用いる。本発明の化合物は、ブタ回虫抗原に過敏なヒツジへの、静脈内（生理食塩水溶液）、経口（２％Ｔｗｅｅｎ  ８０、０．５％カルボキシメチルセルロース）、およびエアロゾル投与によって評価される。早期抗原誘発気管支反応を減らす、および／または遅発型気道反応を阻止する（例えば、抗原誘発遅発反応および気道過敏（「ＡＨＲ」）に対する防御作用を有する）化合物が、このモデルにおいて活性であると見なされる。
【０２６０】
吸入したブタ回虫抗原に対して早期および遅発気管支反応の両方を発現することが示されたアレルギーヒツジを、気道への候補化合物の作用を研究するために用いる。２％リドカインによる鼻腔の局部麻酔の後、バルーンカテーテルを、１つの鼻孔を通して食道下部に進める。次いで、動物は、ガイドとして柔軟な気管支ファイバースコープを用い、他方の鼻孔を通して、カフ付き気管内チューブにより飼育される。
【０２６１】
胸膜内圧は、Ａｂｒａｈａｍ（１９９４年）に従って見積もる。エアロゾル（下の配合を参照）は、Ａｎｄｅｒｓｏｎカスケードインパクターにより求めると３．２μｍの空気動力学的粒径（ｍａｓｓ  ｍｅｄｉａｎ  ａｅｒｏｄｙｎａｍｉｃ  ｄｉａｍｅｔｅｒ）を有するエアロゾルを供給する使い捨ての医療用ネブライザーを用いて発生させる。ネブライザーは、ソレノイドバルブおよび圧縮空気（２０ｐｓｉ）源からなる薬量計装置に連結する。ネブライザーの吐出は、プラスチック製のＴ字管に向かい、その１つの端は、ピストン式呼吸器の吸気ポートに連結する。ソレノイドバルブを、呼吸器の吸気サイクルの始めに１秒間働かせる。エアロゾルは、５００ｍＬのＶＴで、２０回呼吸／分の速さで送り込む。単なる０．５％炭酸水素ナトリウム溶液を対照として用いる。
【０２６２】
気管支反応を評価するために、Ａｂｒａｈａｍ（１９９４年）に従って、カルバコールに対する累積濃度−反応曲線を作成する。気管支生検は、処置の開始前後、および抗原の攻撃後２４時間に行なう。気管支生検はＡｂｒａｈａｍ（１９９４年）に従って実施する。
【０２６３】
肺胞マクロファージのｉｎ  ｖｉｔｒｏでの接着研究もまた、Ａｂｒａｈａｍ（１９９４年）に従って実施でき、接着細胞のパーセンテージを計算できる。
【０２６４】
エアロゾル製剤
０．５％炭酸水素ナトリウム／生理食塩水（ｗ／ｖ）に、３０．０ｍｇ／ｍＬの濃度で、化合物溶液を、次の手順を用いて調製する。
【０２６５】
Ａ．０．５％炭酸水素ナトリウム／生理食塩水の保存溶液の調製：１００．０ｍＬ
【０２６６】
【表５】
2009528296.tif 000032
手順
１．０．５ｇの炭酸水素ナトリウムを１００ｍＬのメスフラスコに入れる。
【０２６７】
２．約９０．０ｍＬの生理食塩水を加え、溶けるまで超音波処理する。
【０２６８】
３．生理食塩水により１００．０ｍＬになるまで十分量を加え、十分に混合する。
【０２６９】
Ｂ．３０．０ｍｇ／ｍＬの化合物の調製：１０．０ｍＬ
【０２７０】
【表６】
2009528296.tif 000033
手順
１．０．３００ｇの化合物を１０．０ｍＬのメスフラスコに入れる。
【０２７１】
２．約９．７ｍＬの０．５％炭酸水素ナトリウム／生理食塩水保存溶液を入れる。
【０２７２】
３．化合物が完全に溶けるまで超音波処理する。
【０２７３】
４．０．５％炭酸水素ナトリウム／生理食塩水の保存溶液を１０．０ｍＬになるまで十分量を加え、十分に混合する。
【０２７４】
（実施例Ｆ）
アジュバント誘発関節炎
アジュバント誘発関節炎（「ＡＩＡ」）は、関節リウマチ（「ＲＡ」）の研究に有用な動物モデルであり、Ｌｅｗｉｓラットの尻尾の基部に結核菌を注射することによって誘発される。注射の後１０日と１５日の間に、動物は、重篤な進行性関節炎を発症する。
【０２７５】
一般的に、化合物は、ラットにおけるアジュバント誘発浮腫により生じる後足の腫れおよび骨損傷を直すそれらの能力で試験される。ＡＩＡにより生じる後足の腫れの抑制を正確に評価するために、２段階の炎症が定義される：（１）１次的および２次的、注射された後足、（２）２次的、注射されてない後足（これは、通常、注射された足における炎症の発生から約１１日で発症し始める）。後者のタイプの炎症の減少は、免疫抑制活性の徴候である。Ｃｈａｎｇ，  Ａｒｔｈ．  Ｒｈｅｕｍ．、２０、１１３５〜１１４１頁（１９７７年）と比較。
【０２７６】
ＡＩＡのような、ＲＡの動物モデルを用いると、疾患の初期段階に関与する細胞事象を研究できる。マクロファージおよび白血球でのＣＤ４４の発現は、アジュバント関節炎の発症初期の間に上向き調節されるが、ＬＦＡ  １の発現は、疾患の進展の中で、遅れて、上向き調節される。アジュバント関節炎の最初の段階での接着分子と内皮との間の相互作用を理解することで、ＲＡの治療において用いられる方法をかなり前進させることができるであろう。
【０２７７】
（実施例Ｇ）
ラットにおけるコラーゲン誘発関節炎
目的：炎症、軟骨破壊、およびラットにおけるＩＩ型コラーゲン関節炎の進展において起こる骨吸収の抑制のために、１日２回経口投与される（（−１日目）〜２０日目）本発明の代表的化合物（「化合物Ａ」）の効能を評価すること。
【０２７８】
動物：到着時、１２５〜１５０ｇの重さであった、５４匹のメスＬｅｗｉｓラット（Ｈａｒｌａｎ）（５０匹のレスポンダーを得るために、１０匹の６グループに対して、１０日目、１１日目、１２日目に、５０匹にコラーゲンを注射）。４〜５匹／籠で収容した動物（関節炎で１０匹／グループ、正常な対照体で４匹／グループ）を、４〜８日間、順応させた。動物には、３ｍｇ／ｋｇで１日２回経口、１０ｍｇ／ｋｇで１日２回経口、３０ｍｇ／ｋｇで１日２回経口で投与した。
【０２７９】
材料：ビヒクル中の作用剤または薬剤、ＩＩ型コラーゲン、フロイント不完全アジュバント、メトトレキサート（Ｓｉｇｍａ）、化合物Ａ。
【０２８０】
研究計画の概略
投与は、マイナス１日目に開始した。
【０２８１】
順応させた動物にイソフルランで麻酔をかけ、コラーゲンを注入した（０日目）。２回目のコラーゲン注入のために６日目に、それらに再び麻酔をかけた。コラーゲンは、０．０１Ｎ酢酸に４ｍｇ／ｍＬの溶液を作ることによって調製した。等しい体積のコラーゲンとフロイント不完全アジュバントを、この材料の一滴が水中に置かれた時、その形状を保つまで、手による混合によって乳化した。各動物は、背中の３箇所に塗られる毎に、３００μＬの混合物を与えられる。
【０２８２】
正常（発症前）の左および右の足首関節のカリパス測定を、９日目に行なった。１０〜１２日目に、関節炎の発症が起こった。
【０２８３】
ラットは、研究の（−）１、６、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、および２０日目に重さを測り、足首のカリパス測定は、９日目から始めて毎日行なった。最終の体重は、２０日目に測った。最終の体重測定の後、最後の血漿採取のために、動物に麻酔をかけ、次いで、安楽死させた。
【０２８４】
両方の後足および膝を取り出した。後足を秤量し、ホルマリンの中に（膝と共に）入れ、次いで、顕微鏡観察のために処理した。
【０２８５】
関節の処理
固定液に１〜２日間、次に、脱灰液に４〜５日間の後、足首関節を、縦に半分に切断し、膝を前頭面で半分に切断し、処理し、包埋し、薄片化し、トルイジンブルーにより染色した。
【０２８６】
化合物Ａは、足首炎症の治療を受けなかった対照に比べて、また試験された用量（３．０ｍｇ／ｋｇ、１０．０ｍｇ／ｋｇ、および３０．０ｍｇ／ｋｇ）での膝の組織病理学により、かなりの抑制を示した。
【０２８７】
（実施例Ｈ）
ＨＬＡ−Ｂ２７ラットにおける大腸炎の誘発
大腸炎を逆転させる本発明の化合物の効能を、ＨＬＡ−２７Ｂトランスジェニックラットで評価した。ＨＬＡ−２７Ｂトランスジェニックラットは、ヒトのクローン病を模した炎症性腸疾患の動物モデルとして用いられている。これらのラットは、ヒトＭＨＣクラスＩ  ＨＬＡ−Ｂ２７重鎖およびベータ−２ミクログロブリンタンパク質を過剰発現し、このため、結腸の炎症を含めて様々な自己免疫疾患を誘発する。
【０２８８】
大腸炎を消散させる、本発明の化合物Ａの治療効果は、ＨＬＢ−Ｂ２７トランスジェニックラットで評価した。病気に罹ったラットに、１００ｍｇ／ｋｇの本発明の化合物Ａを１日２回、１６日間、皮下投与した。１００ｍｇ／ｋｇの本発明の化合物Ａを投与された動物試料は、大腸炎の臨床的および組織学的な消散を示し、抗α４抗体ＧＧ５／３により処置した陽性対照グループと同様の効能を示した。
【０２８９】
疾患活動性指数（Ｄｉｓｅａｓｅ  Ａｃｔｉｖｉｔｙ  Ｉｎｄｅｘ、ＤＡＩ）の評価点は、１００ｍｇ／ｋｇの本発明の化合物Ａ、および１０ｍｇ／ｋｇのＧＧ５／３（陽性対照）を投与したラットでは、ビヒクルを投与したラットより、全体として改善された評価点を示した。化合物ＡおよびＧＧ５／３を投与したラットでの糞便硬度およびＦＯＢ評価点は、ビヒクルのグループとは統計的に差異があった。
【０２９０】
大腸炎の誘発
２０匹のＨＬＡ−Ｂ２７トランスジェニックラット（６〜９週齢）を、Ｔａｃｏｎｉｃに発注した。ラットは動物施設において１０週間順応させた。動物用床敷は、「汚れた」環境フロラを制御するために、１週間に１度、異なる籠で混ぜ合わせた。
【０２９１】
処置
ラットは登録し、重さおよびＤＡＩ評価点（ＦＣ≧３、ＦＯＢ≧２）に基づいて、４つのグループ（ｎ＝５）に無作為に選んだ。これらの実験グループに、１００ｍｇ／ｋｇ（ｐＨ２．８）で化合物Ａを１日２回、１６日間皮下投与し、次回投与の直前（ａｔ  ｔｒｏｕｇｈ）に終結させた。対照グループには、ビヒクル処理（ｐＨ３．２）グループ、および１０ｍｇ／ｋｇ（５ｍＬ／ｋｇ）で、０日目、３日目、および６日目に皮下投与し、８日目に投与直前に終結させたＧＧ５／３（マウス抗ラットα４インテグリン抗体）陽性対照グループが含まれていた（表Ｈ１）。化合物Ａおよびビヒクル処理剤は、５日毎に製剤した。
【０２９２】
表Ｈ１  ＩＢＤに対する研究計画
【０２９３】
【表７】
2009528296.tif 000034
エンドポイント情報（ｒｅａｄ−ｏｕｔｓ）
疾患活動性指数評価点、糞便硬度試験および便潜血検査を、１週間に４回行なって、生存中臨床評価点を得た。研究での主な情報源は、盲腸、近位結腸、中位結腸、および遠位結腸の組織病理学分析であった。ＩＢＤ評価システムを適用した（表Ｈ２）。
【０２９４】
表Ｈ２  ＩＢＤ評価システム
【０２９５】
【表８】
2009528296.tif 000035
疾患活動性指数（ＤＡＩ）評価点は、ビヒクルグループより、化合物ＡおよびＧＧ５／３（陽性対照）を投与したラットで低かった。化合物ＡおよびＧＧ５／３（陽性対照）投与グループに対する糞便硬度および便潜血検査ＡＵＣの評価点もまた、ビヒクルとは統計的に差異があった。
【０２９６】
本発明のいくつかの実施形態が例示され説明されたが、本発明の精神および範囲から逸脱することなく、それらに様々な変更がなされ得ることが理解されるであろう。
【国際調査報告】
2009528296.tif 000048
2009528296.tif 000049
2009528296.tif 000050