(57)【要約】本発明は、特定の臨床的障害（高血糖、２型糖尿病、関節炎、および多発性硬化症など）を処置する方法に関する。本発明はまた、生体分子に及ぼす可変の生物学的効果または治療効果の同時誘発および別の時点での生体分子の相対的標準化によって一部特徴づけられる薬物を同定および特徴づける方法を提供する。化合物には、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールまたはアンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオールが含まれ、これらを、かかる候補薬物の評価および特徴づけを容易にするための参照基準として使用することができる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
２型糖尿病、高血糖、関節リウマチ、変形性関節症、多発性硬化症、または骨喪失状態の予防または処置のための組成物であって、該組成物が１つ以上の賦形剤および以下の構造：
【化１】
2009534427.tif 000040
（式中、
一方のＲ１は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ１は、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルであり；
一方のＲ２は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ２は、−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルであるか、両方のＲ２が一緒になって＝ＮＯＨであり；
一方のＲ３は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ３は、−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、Ｃ１−８エーテル、または必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであるか、両方のＲ３が一緒になって＝ＮＯＨであり；
一方のＲ４は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ４は、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルであり；
Ｒ５は、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、または−ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒ６は、−Ｈ、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、または−ＣＨ２ＯＨであり；
一方のＲ７は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ７は、−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルであり；
Ｒ９は、−Ｏ−または−Ｃ（Ｒ１２）（Ｒ１２）−であり、式中、一方のＲ１２は、−Ｈ、−Ｆ、−Ｂｒ、または必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ１２は、−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ２−２０エステル、Ｃ１−２０エーテル、または必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであるか、両方のＲ１２が一緒になって＝Ｏ、＝ＮＯＨ、または＝ＮＯＣＨ３であり；
Ｒ１０は、−Ｈまたは−Ｆであり；
一方のＲ１１は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ１１は、−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、Ｃ１−８エーテル、または必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、ここで、（１）少なくとも一方のＲ２は、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルであり、Ｒ７、Ｒ１１、およびＲ１２のうちの１つは、独立して、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルであるか、（２）一方のＲ４は、Ｃ１−８置換アルキルまたは必要に応じて置換されたＣ２−８アルキニルであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ７、Ｒ１１、およびＲ１２のうちの少なくとも１つは、独立して、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルであるか、（３）Ｒ２、Ｒ３、Ｒ７、Ｒ１１、およびＲ１２のうちの少なくとも２つは、独立して、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルである）
を有する化合物を含む、組成物。
【請求項２】
前記化合物が、構造：
【化２】
2009534427.tif 000041
（式中、
一方のＲ１は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−４アルキルであり、他方のＲ１は、−ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、または−ＯＣＨ３であり；
一方のＲ２は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−４アルキルであり、他方のＲ２は、−ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、または−ＯＣＨ３であり；
一方のＲ３は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−４アルキルであり、他方のＲ３は、−ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、または−ＯＣＨ３であり；
一方のＲ４は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−４アルキルであり、他方のＲ４は、−ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、または−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３である）
を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
２型糖尿病の予防または処置のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記化合物が、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７α，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，１１β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，１１β，１６α，１７β−テトラオール、３β，１１β，１６β，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，１１β，１６β，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−２β，３α，１６α，１７β−テトラオール、あるいはこれらの化合物のいずれかのＣ２−４モノエステルまたはＣ２−４ジエステルアナログであり、必要に応じて、該モノエステルが３位または１７位でアセテートであるか、該ジエステルが３位および１７位でアセテートである、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
多発性硬化症の予防または処置のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記化合物が、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７α，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，１１β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，１１β，１６α，１７β−テトラオール、３β，１１β，１６β，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，１１β，１６β，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−２β，３α，１６α，１７β−テトラオール、あるいはこれらの化合物のいずれかのＣ２−４モノエステルまたはＣ２−４ジエステルアナログであり、必要に応じて、該モノエステルが３位または１７位でアセテートであるか、該ジエステルが３位および１７位でアセテートである、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
高血糖の予防または処置のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記化合物が、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７α，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，１１β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，１１β，１６α，１７β−テトラオール、３β，１１β，１６β，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，１１β，１６β，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−２β，３α，１６α，１７β−テトラオール、あるいはこれらの化合物のいずれかのＣ２−４モノエステルまたはＣ２−４ジエステルアナログであり、必要に応じて、該モノエステルが３位または１７位でアセテートであるか、該ジエステルが３位および１７位でアセテートである、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
変形性関節症の予防または処置のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
関節リウマチの予防または処置のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記化合物が、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７α，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−２β，３α，１６α，１７β−テトラオール、あるいはこれらの化合物のいずれかのＣ２−４モノエステルまたはＣ２−４ジエステルアナログであり、必要に応じて、（ａ）該Ｃ２−４モノエステルが３位または１７位でアセテートであるか、（ｂ）該Ｃ２−４ジエステルが３位および１７位でアセテートである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
骨喪失状態の予防または処置のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記骨喪失状態が、骨粗鬆症、骨折、熱傷、放射線熱傷、化学熱傷、または高い天然糖質コルチコイドレベルの存在、もしくは合成糖質コルチコイド、必要に応じて、デキサメタゾンの存在である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記骨喪失状態が骨粗鬆症であり、前記化合物が、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７α，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−２β，３α，１６α，１７β−テトラオール、あるいはこれらの化合物のいずれかのＣ２−４モノエステルまたはＣ２−４ジエステルアナログであり、必要に応じて、（ａ）該Ｃ２−４モノエステルが３位または１７位でアセテートであるか、（ｂ）該Ｃ２−４ジエステルが３位および１７位でアセテートである、請求項１３に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
発明の分野
本発明は、炎症、代謝障害、および本明細書中に記載の他の状態を調節するための方法およびアンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオールなどの化合物に関する。炎症を調節する化合物を使用して、２型糖尿病、高血糖、肺炎状態（例えば、嚢胞性線維症、急性または慢性喘息、急性呼吸急迫症候群（ＡＲＤＳ）または慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））、および自己免疫疾患（多発性硬化症、関節炎、またはエリテマトーデスなど）などの状態を処置するか、改善するか、防止するか、進行を遅延することができる。
【背景技術】
【０００２】
発明の背景
多数の因子が、多数の慢性自己免疫および炎症性障害の確立および維持に寄与する。しばしば、かかる障害の原因は、十分に理解されていない。腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦα）は、主に、多数の免疫賦活剤に応答した単核食細胞によって放出されるサイトカインである。動物またはヒトに投与した場合、炎症、発熱、心血管への影響、出血、凝固、ならびに急性感染症およびショック状態で認められる応答に類似する急性期反応を引き起こす。したがって、過剰または調整されていないＴＮＦα産生は、多数の病状に関与する。これらには、内毒素血症および／または中毒性ショック症候群（例えば、非特許文献１および非特許文献２）、悪液質（例えば、非特許文献３）、およびＡＲＤＳ（ＡＲＤＳ患者由来の肺吸引液中に高濃度のＴＮＦαが検出された場合）（例えば、非特許文献４）が含まれる。
【０００３】
ＴＮＦαはまた、骨吸収病（関節炎が含まれる）に関与するようである。活性化された場合、白血球は、骨吸収（ＴＮＦαが寄与し得る活性）を行うことができる（例えば、Ｂｅｒｔｏｌｉｎｉら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１９：５１６−５１８（１９８６）およびＪｏｈｎｓｏｎら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ  １２４（３）：１４２４−１４２７（１９８９））。ＴＮＦαはまた、骨吸収を刺激し、破骨細胞形成の刺激および骨芽細胞機能の阻害と組み合わせた活性化によってインビトロおよびインビボで骨形成を阻害することが示されている。モノクローナル抗ＴＮＦα抗体でのＴＮＦαのブロッキングは、関節リウマチ（Ｅｌｌｉｏｔら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃ．１７（２）：１４１−１４５  １９９５）およびクローン病（ｖｏｎ  Ｄｕｌｌｅｍｅｎら、Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，１０９（１）：１２９−１３５  ２００５）で有利であることが示されている。
【０００４】
核因子κＢ（ＮＦ−κＢ）分子は、多数の病態における炎症メディエータである。デキサメタゾン、プレドニゾン、またはヒドロコルチゾールなどの炎症を処置するために使用されるいくつかの治療薬は、糖質コルチコイド受容体（ＧＲ）アゴニストであり、これらは、ＧＲ活性の増加によってＮＦ−κＢを間接的に阻害する（例えば、Ｈ．Ｈａｒｋｏｎａｒｓｏｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２５：７６１−７７１，２００１）。しかし、天然ＧＲアゴニスト濃度の上昇および薬理学的レベルの合成ＧＲアゴニストは、通常、望ましくない毒性（重大な免疫抑制および骨量低下または骨減少症が含まれる）を示す（例えば、Ｔ．Ｌ．Ｐｏｐｐｅｒら、Ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ａｇｅｎｔｓ：Ａｎｔｉ−ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｓｔｅｒｏｉｄｓ，ＲＡ．Ｓｃｈｅｒｅｒ  ＆  Ｍ．Ｗ．Ｗｈｉｔｅｈｏｕｓｅ，ｅｄｉｔｏｒｓ，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｃｈａｐｔｅｒ  ９，ｖｏｌｕｍｅ  １，ｐａｇｅｓ  ２４５−２９４，１９７４）。糖質コルチコイドに関連する多数の望ましくない毒性は、ＧＲの活性化によって生じる。したがって、ＧＲの活性化によってこれらの毒性を引き起こすことなくＮＦ−κＢ活性を阻害することができる化合物の同定により、炎症および関連症状（疼痛、発熱、または倦怠など）を処置するために使用することができる薬剤クラスを示す。
【０００５】
望ましくないか有害な炎症は、多数の慢性または急性状態（例えば、ＡＲＤＳ、ＣＯＰＤ、および敗血症）で起こる。活性化された単球および好中球は、炎症関連病変の媒介で役割を果たす。活性化好中球が特に重要であり、これは、ＮＦκ−Ｂ転写調節因子の核内への蓄積を増大させ、炎症誘発性サイトカインの産生を増大させる。好中球は、毒性酸素種の供給源でもあり、その生成は、少なくとも部分的に、敗血症で認められる器官の損傷および不全に必要であり得る活性化マクロファージによる腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）分泌を媒介する。
【０００６】
炎症に関連するシグナル伝達は、異なる経路を介して起こり、これは、罹患細胞中のＮＦ−κＢ活性を増加させることができる。腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）によるＮＦ−κＢ活性化は、細胞膜でのＴＮＦ−αのＴＮＦ−α受容体への結合から開始され、その後に一連のシグナル伝達因子（ＭＡＰキナーゼが含まれる）が活性化される。細胞質中でのＮＦ−κＢの活性化により、核に転位置し、そのプロモーター中にＮＦ−κＢ応答エレメントを含む遺伝子を活性化する。細菌リポ多糖（ＬＰＳ）による細胞質ＮＦ−κＢの活性化によって細胞表面上でのＬＰＳのＴｏｌｌ様受容体４への結合が開始され、その後に細胞内シグナル伝達因子（ホスファチジルイノシトール−３−キナーゼが含まれる）が活性化される。ＴＮＦ−αおよびＬＰＳは共にインビボおよびインビトロにおける細胞での強い炎症反応を誘導することが知られている。かかる炎症誘発性シグナルに応答する細胞には、マクロファージ、単球、および他の免疫細胞型が含まれる。
【０００７】
種々のＴ細胞サブユニットは、一定の病状の進展で役割を持つようである。免疫の種々の局面の媒介における個別のＴ細胞集団（調節Ｔ細胞および／または抑制Ｔ細胞が含まれる）の重要な役割が示唆されている（例えば、Ｅ．Ｓｕｒｉ−Ｐａｙｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６０（３）：１２１２−１２１８，１９９８；Ｊ．Ｓｈｉｍｉｚｕら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６３（１０）：５２１１−５２１８，１９９９；Ｍ．Ｉｔｏｈら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６２（９）：５３１７−５３２６，１９９９；Ａ．Ｍ．Ｍｉｌｌｅｒら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１７７：７３９８−７４０５，２００６）。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞は、いくつかの免疫応答の抑制で役割を果たすことができる。
【０００８】
動物モデルにおけるこれらのＴ細胞サブユニットのうちのいくつかの研究は、例えば、特許文献１に記載されている。例えば、ヒト自己免疫状態の研究のための役割を、ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄ  ＣＤ４＋ＣＤ４５Ｒｂｈｉモデルで試験した。この動物モデルを使用して、炎症状態などの無調節な免疫応答を研究し、実験薬物および治療プロトコールを評価している（例えば、Ｋ．Ｈｏｎｇら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６２：７４８０−７４９１，１９９９；Ｐｏｗｒｉｅら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１８３（６）：２６６９−２６７４，１９９６）。
【０００９】
胸腺上皮によって誘導されるＦｏｘｐｒｏ３遺伝子は、Ｔ細胞によるＣＤ４＋ＣＤ２５＋またはＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ（Ｔｒｅｇまたは調節Ｔ細胞）表現型の発生の誘導で役割を果たし得る。ＣＤ２５表面抗原は、ＩＬ−２受容体α鎖である。自己免疫疾患のいくつかの動物モデルでは、Ｆｏｘｐｒｏ３遺伝子の欠損は、自己免疫疾患の発症に関連する（例えば、特許文献２）。この遺伝子の修復により、自己免疫異常が軽減するようである。ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞の種々の試薬またはアッセイプロトコールは、例えば、Ｈ．Ｙａｇｉら、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１６（１１）：１６４３−１６５６，２００４；Ｗ．Ｒ．Ｇｏｄｆｒｅｙら、Ｂｌｏｏｄ，１０５（２）７５０−７５８，２００５）に記載されている。
【００１０】
耐糖能障害被験体におけるインスリン抵抗性は、長い間認識されている。Ｒｅａｖｅｎら（Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，６０（１）：８０−８８，１９７６）は、グルコースおよびインスリンの連続注入（インスリン／グルコースクランプ技術）および耐糖能試験を使用して、インスリン抵抗性が多様な非肥満性非ケトン性被験体群に存在することを証明した。これらの被験体は、境界性から顕性の空腹時高血糖までの範囲の耐糖能を示した。これらの研究における糖尿病群は、インスリン依存性（ＩＤＤＭ）被験体およびインスリン非依存性（ＮＩＤＤＭ）被験体を含んでいた。
【００１１】
持続性インスリン抵抗性は、より容易に決定される高インスリン血症と一致し、被験体の血漿中の循環血漿インスリン濃度の正確な決定によって測定することができる。高インスリン血症は、インスリン抵抗性の結果として生じるか（肥満および／または糖尿病（ＮＩＤＤＭ）被験体および／または耐糖能障害被験体など）、膵臓内分泌部によるホルモンの通常の生理学的放出と比較したインスリンの過剰注入の結果としてＩＤＤＭ被験体で生じる。
【００１２】
高インスリン血症の肥満および大血管の虚血性疾患（例えば、アテローム性動脈硬化症）との関連は、実験的研究、臨床研究、および疫学研究によって説明されている（Ｓｔｏｕｔ，Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，３４：７，１９８５；Ｐｙｏｒａｌａら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ／Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，３：４６３，１９８７）。経口グルコース負荷の１および２時間後の統計的に有意な血漿インスリンの上昇は、冠状動脈性心臓病のリスクの増大と相関する。
【００１３】
１つのヒト糖尿病モデルは、ｄｂ／ｄｂマウスである。ｄｂ／ｄｂマウスモデルは、例えば、Ｄ．Ｋｏｙａら、Ｔｈｅ  ＦＡＳＥＢ  Ｊｏｕｒｎａｌ，１４：４３９−４４７，２０００；Ｋ．Ｋｏｂａｙａｓｈｉら、Ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，４９（１）：２２−３１，２０００；Ｊ．Ｂｅｒｇｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７４（１０）：６７１８−６７２５，１９９９）に記載されている。ｄｂ／ｄｂマウスは、特に、Ｃ５７ＢＬ／Ｋｓ遺伝的背景の動物が長期にわたってその機能的膵臓β細胞集団が破壊されるにつれて、レプチン受容体をコードする遺伝子が変異し、この変異により、過食、肥満、インスリン抵抗性、および糖尿病に特徴づけられる表現型が付与される。ｄｂ／ｄｂマウスは、典型的には、約３〜４週齢で肥満を同定できるようになり、１０〜１４日目で血漿インスリンが上昇し始める。血糖の上昇は、４〜８週齢で認められ、血糖が無制御に上昇し、膵島のインスリン産生β細胞が重篤に枯渇し、約１０月齢で死亡する。このモデルを使用して、薬物候補が糖尿病の進展および維持に関連するパラメータ（例えば、高血糖および体重増加）の発生または進行速度に影響を与える能力が特徴づけられている。
【００１４】
ＰＰＡＲ−γアゴニストでの糖尿病の治療は、心臓肥大または心臓重量の増加に関連している。マレイン酸ロシグリタゾン（ＰＰＡＲ−γアゴニスト）での治療は、患者が液体貯留および体積関連事象（浮腫および鬱血性心不全など）を経験し得ることを示す。ＰＰＡＲ−γアゴニスト治療に関連する心臓肥大を、典型的には、治療の中断によって処置する。
【００１５】
コルチゾールの生理学的影響は、インスリンに対するその拮抗作用である。肝臓中の高濃度のコルチゾールにより、その器官でのインスリン感受性を減少させることができ、それにより、糖新生を増加し、血糖値を上昇させる傾向がある（Ｍ．Ｆ．Ｄａｌｌｍａｎら、Ｆｒｏｎｔ  Ｎｅｕｒｏｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，１４：３０３−３４７，１９９３）。この影響により、耐糖能異常または真性糖尿病が悪化する。過剰な循環濃度のコルチゾールによって引き起こされるクッシング症候群では、インスリンの拮抗作用によって感受性個体で真性糖尿病を引き起こし得る（Ｅ．Ｊ．Ｒｏｓｓら、Ｌａｎｃｅｔ，２：６４６−６４９，１９８２）。
【００１６】
１１ｂ−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ酵素の１１ｂ−デヒドロゲナーゼ活性によって、体内でコルチゾールをコルチゾンに変換することができる。逆反応（不活性コルチゾンの活性コルチゾールへの変換）を、一定の器官中で、これらの酵素の１１ｂ−レダクターゼ活性によって行う。この活性は、コルチコステロイド１１ｂ−レダクターゼ活性としても公知である。１１ｂ−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼには、少なくとも２つの個別のアイソザイムが存在する。一定範囲の細胞株における１１β−ＨＳＤ１型の発現により、双方向性酵素または支配的１１β−レダクターゼのいずれかを生成し、それにより、別の不活性な親１１−ケトステロイドから１１β−ヒドロキシステロイドを再生することができる。
【００１７】
ミトコンドリアホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（ＰＥＰＣＫ−ミトコンドリア、ＰＥＰＣＫ−Ｍ、ＰＣＫ２、およびｍｔＰＥＰＣＫとしても公知）は、種々のヒト組織、主に、肝臓、腎臓、膵臓、腸、および線維芽細胞中に発現する（Ｍｏｄａｒｅｓｓｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．，３３３：３５９−３６６，１９９８）。ＰＥＰＣＫ−ミトコンドリア欠損は、十分に報告されていないが、発育不全、低血糖、および肝臓異常に関連している。細胞質型（ＰＥＰＣＫ−Ｃ）と異なり、ミトコンドリア形態（ＰＥＰＣＫ−ミトコンドリア）は、構造的に発現し、ホルモン刺激によって調節されない（Ｈａｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｐａｔｅｌ，Ａｄｖ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．Ｒｅｌａｔ．Ａｒｅａｓ  Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．，６９：２０３−２８１，１９９４）。２つの形態は、個別の染色体上に存在し、染色体１４ｑ１１および染色体２０ｑ１１上のＰＥＰＣＫ−Ｃ残基に局在している（Ｓｔｏｆｆｅｌら、Ｈｕｍ．Ｍｏｌ．Ｇｅｎｅｔ，２：１−４，１９９３）。
【００１８】
多発性硬化症（ＭＳ）は、中枢神経系の炎症性疾患である自己免疫疾患である（Ｂａｒ−Ｏｒ，Ａ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．１００：２５２−２５９，１９９９）。最近、免疫調節−免疫抑制化合物（インターフェロン（ＩＦＮ）−β、コポリマー、シクロホスファミド、およびミトキサントロンなど）での治療によって疾患の自然経過が改善されたが（Ｈａｆｌｅｒ，Ｄ．Ａ．ａｎｄ  Ｗｅｉｎｅｒ，Ｈ．Ｌ．，Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １４４：７５，１９９５；Ｇｏｏｄｋｉｎ，Ｄ．Ｅ．，Ｌａｎｃｅｔ  ３５２：１４８６，１９９８）、これらの薬物は疾患の進行を遮断することができず、これらのいくつかは副作用が重篤であり、その長期使用は制限される。さらに、再発性弛張性ＭＳおよび二次進行性ＭＳの両方を罹患した相当数の患者は、ＩＦＮ−βに対する応答が不十分である。したがって、単独または治療法との組み合わせが、例えば、その進行の遅延によって一連のＭＳを改善する新規の化合物が必要である。
【特許文献１】米国特許第６，５９３，５１１号明細書
【特許文献２】米国特許出願公開第２００６／０１１１３１６号明細書
【非特許文献１】Ｔｒａｃｅｙら、Ｎａｔｕｒｅ  ３３０：６６２−６６４（１９８７）
【非特許文献２】Ｈｉｎｓｈａｗら、Ｃｉｒｃ．Ｓｈｏｃｋ  ３０：２７９−２９２（１９９０）
【非特許文献３】Ｄｅｚｕｂｅら、Ｌａｎｃｅｔ，３３５（８６９０）：６６２（１９９０）
【非特許文献４】Ｍｉｌｌａｒら、Ｌａｎｃｅｔ  ２（８６６５）：７１２−７１４（１９８９）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１９】
現在、上記状態の治療でより有効な費用効果のある医薬品または治療方法が必要である。本発明は、１つ以上のこれらの状態を処置するための治療薬および治療方法を提供する。したがって、薬剤および方法は、本明細書中に記載の状態に関連する１つ以上の症状の軽減に有用である。また、本発明の薬剤および方法の使用を、これらの障害のための１つ以上の従来の治療と組み合わせることができる。
【課題を解決するための手段】
【００２０】
発明の説明
発明の実施形態の概要。本発明は、その必要がある哺乳動物において、望ましくない炎症状態、自己免疫疾患、または代謝障害、またはその症状を処置するか、防止するか、進行を遅延するか、改善するための化合物または組成物であって、必要に応じて、哺乳動物はヒトまたは非ヒト霊長類であり、組成物は、式１の化合物：
【００２１】
【化３】
2009534427.tif 000002
式中、一方のＲ１は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたアルキルであり、他方のＲ１は、−Ｈ、−ＯＨ、エステル、またはエーテルであるか、両方のＲ１が一緒になって＝Ｏまたは＝ＮＯＨもしくは＝ＮＯＣＨ３などのオキシム、エステル、またはエーテルであり；一方のＲ２は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたアルキルであり、他方のＲ２は、−Ｈ、−ＯＨ、エステル、またはエーテルであるか、両方のＲ２が一緒になって＝Ｏまたは＝ＮＯＨもしくは＝ＮＯＣＨ３などのオキシムであり；一方のＲ３は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたアルキルであり、他方のＲ３は、−Ｈ、−ＯＨ、エステル、エーテル、必要に応じて置換されたアルキルであるか、両方のＲ３が一緒になって＝Ｏまたは＝ＮＯＨもしくは＝ＮＯＣＨ３などのオキシムであり；一方のＲ４は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたアルキルであり、他方のＲ４は、−ＯＨ、エステル、またはエーテルであるか、両方のＲ４が一緒になって＝Ｏまたは＝ＮＯＨもしくは＝ＮＯＣＨ３などのオキシムであり；Ｒ５は、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、および−ＣＨ２ＯＨから必要に応じて選択された必要に応じて置換されたアルキルであり；Ｒ６は、−Ｈまたは−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、および−ＣＨ２ＯＨから必要に応じて選択された必要に応じて置換されたアルキルであり；一方のＲ７は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたアルキルであり、他方のＲ７は、−Ｈ、−ＯＨ、エステル、またはエーテルであるか、４位に二重結合が存在する場合、両方のＲ７が一緒になって＝Ｏまたは＝ＮＯＨもしくは＝ＮＯＣＨ３などのオキシムであり；Ｒ９は、−Ｏ−または−Ｃ（Ｒ１２）（Ｒ１２）−であり、式中、一方のＲ１２は、−Ｈ、−Ｆ、−Ｂｒ、または必要に応じて置換されたアルキルであり、他方のＲ１２は、−Ｈ、−ＯＨ、エステル、エーテル、必要に応じて置換されたアルキルであるか、両方のＲ１２が一緒になって＝Ｏまたは＝ＮＯＨもしくは＝ＮＯＣＨ３などのオキシムであり；Ｒ１０は、−Ｈまたは−Ｆまたは−Ｃｌなどのハロゲンであり；そして、一方のＲ１１は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたアルキルであり、他方のＲ１１は、−Ｈ、−ＯＨ、エステル、エーテル、必要に応じて置換されたアルキルであるか、両方のＲ１１が一緒になって＝Ｏ、または＝ＮＯＨもしくは＝ＮＯＣＨ３などのオキシムである）を含む、化合物または組成物を提供する。これらの化合物の実施形態には、化合物：式中、（ｉ）Ｒ２、Ｒ７、Ｒ１１、およびＲ１２のうちの１つ、２つ、または３つが独立して−ＯＨ、Ｃ２−８エステル，Ｃ１−８エーテル、または＝Ｏであり、（ｉｉ）Ｒ１、Ｒ７、Ｒ１１、およびＲ１２のうちの１つまたは２つが、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルであり、（ｉｉｉ）Ｒ１、Ｒ２、Ｒ７、Ｒ１１、およびＲ１２のうちの１つまたは２つが＝Ｏまたは＝ＮＯＨであり、他のうちの１つ、２つ、または３つが、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルである；を含む。５位の水素原子は、存在する場合、αまたはβ配置であり得る。４位に二重結合が存在する場合、一方のＲ７部分は存在しない。
【００２２】
本発明はまた、哺乳動物において代謝障害を治療または改善する可能性のある化合物の生物活性を同定する、または特徴づける方法であって、（ｉ）インビトロでヒト細胞または哺乳動物細胞中のＰＰＡＲ−α、ＰＰＡＲ−γ、およびＰＰＡＲ−δの１つ、２つ、または３つを、インビトロでの適切な陰性対照ヒト細胞または哺乳動物細胞と比較した場合に約３０％を超えて活性化させず、（ｉｉ）インビトロでの適切な陰性対照ヒト細胞または哺乳動物細胞と比較した場合にインビトロでのヒト細胞または哺乳動物細胞においてＮＦ−κＢの転写活性またはレベルを約２０〜８０％阻害または減少し、（ｉｉｉ）適切な陰性対照または正常対照と比較した場合、高血糖を減少させるか、高血糖の進行を遅延させるかその発症を遅延させるか、インスリン感受性を増大させるか、耐糖能障害を減少させるか、β−島細胞の数またはそのインスリン分泌能力の進行または喪失速度を遅延させるか、膵臓β−島細胞の数またはそのインスリン分泌能力を増加させるか、食事誘導性または食事関連肥満に罹患したｄｂ／ｄｂマウスまたは被験体の体重増加速度を遅延させるか、上昇したトリグリセリドレベルを減少させるか、上昇した総血中コレステロールレベルまたは血清コレステロールレベルを減少させるか、血中または血清中の正常または上昇したＬＤＬ、ＶＬＤＬ、アポＢ−１００、またはアポＢ−４８レベルを減少させるか、血中または血清中の正常または低レベルのＨＤＬまたはアポＡ１を増加させるか、血中または血清中の上昇したフィブリノゲンレベルを減少させ、そして（ｉｖ）必要に応じて、インビトロでのヒト細胞または哺乳動物細胞中の１つ以上の糖質コルチコイド受容体、ミネラルコルチコイド受容体、プロゲステロン受容体、アンドロゲン受容体、エストロゲン受容体−α、エストロゲン受容体−β、またはこれらの任意の生体分子の生物学的に活性な変異型を、インビトロでの適切な陰性対照ヒト細胞または哺乳動物細胞と比較して、約３０％を超えて活性化しない化合物を選択する工程を含む方法を提供する。本方法により、ヒトまたは別の哺乳動物の代謝障害を治療または改善する可能性のある化合物を同定または特徴づけることを可能にする。
【００２３】
実施形態には、自己免疫状態、望ましくない炎症状態、または代謝障害、あるいはこれらの任意の状態の症状の予防または処置のための式１の化合物を含む組成物も含まれる。
【００２４】
他の実施形態は、他の箇所（本明細書中に記載の実施形態が含まれる）に記載の通りである。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２５】
定義。本明細書中で使用され、他で記載または暗示しない限り、本明細書中で使用される用語は、ここに定義の意味を有する。記載の実施形態および実施例の記載は本発明を例示し、これらは本発明を制限することを決して意図しない。他で禁止または暗示しない限り（例えば、互いに矛盾する要素または選択対象が含まれる）、これらの定義および本明細書全体で、用語「ａ」および「ａｎ」は、１つ以上を意味し、用語「または」は、および／または、を意味する。
【００２６】
「処方物」などは、被験体（例えば、ヒトまたは動物）に投与することができる組成物を意味する。処方物は、ヒトまたは動物への適用に適切であり、典型的には、処方物は、期待される特性を有する（例えば、ヒト用の非経口処方物は、通常、滅菌された溶液または懸濁液である）。
【００２７】
「賦形剤」「担体」、「薬学的に許容可能な担体」、または類似の用語は、本発明の組成物または処方物の他の成分と適合し、処方物が投与される患者、動物、組織、または細胞に過度に有毒でないという意味で許容可能な１つ以上の構成要素または成分を意味する。
【００２８】
「被験体」は、ヒトまたは動物を意味する。通常、動物は、哺乳動物（すなわち、非ヒト霊長類、げっ歯類、ウサギ目、家畜、または狩猟動物など）である。霊長類には、チンパンジー、カニクイザル、クモザル、およびマカクザル（例えば、アカゲザルまたはパン属）が含まれる。げっ歯類およびウサギ目には、マウス、ラット、ウッドチャック、フェレット、ウサギ、およびハムスターが含まれる。
【００２９】
「アルキル」は、本明細書中で使用される場合、結合した直鎖、第二級、第三級、または環状の炭素原子（すなわち、直鎖、分岐、環状、またはこれらの任意の組み合わせ）を意味する。アルキル部分は、本明細書中で使用する場合、飽和であっても不飽和であっても良い（すなわち、この部分は、１つ、２つ、またはそれを超える独立して選択された二重結合または三重結合を含むことができる）。不飽和アルキル部分には、下記のアルケニル部分およびアルキニル部分について記載の部分が含まれる。アルキル基またはアルキル部分中の炭素原子数は、他で特定しない限り、１〜約５０個（例えば、約１〜３０個または約１〜２０個）である（例えば、Ｃ１−８アルキルは、１、２、３、４、５、６、７、または８個の炭素原子を含むアルキル部分を意味する）。アルキル基を特定する場合、種には、メチル、エチル、１−プロピル（ｎ−プロピル）、２−プロピル（ｉ−プロピル、−ＣＨ（ＣＨ３）２）、１−ブチル（ｎ−ブチル）、２−メチル−１−プロピル（ｉ−ブチル、−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−ブチル（ｓ−ブチル、−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、２−メチル−２−プロピル（ｔ−ブチル、−Ｃ（ＣＨ３）３）、１−ペンチル（ｎ−ペンチル）、２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、２−メチル−１−ブチル（−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、１−ヘキシル、２−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−ヘキシル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３））、２−メチル−２−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３）、３−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ３）、４−メチル−２−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ３）ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３−メチル−３−ペンチル（−Ｃ（ＣＨ３）（ＣＨ２ＣＨ３）２）、２−メチル−３−ペンチル（−ＣＨ（ＣＨ２ＣＨ３）ＣＨ（ＣＨ３）２）、２，３−ジメチル−２−ブチル（−Ｃ（ＣＨ３）２ＣＨ（ＣＨ３）２）、３，３−ジメチル−２−ブチル（−ＣＨ（ＣＨ３）Ｃ（ＣＨ３）３）、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシル、シクロヘプチル、シクロオクチル、−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＣＨ３）ｍ−（ＣＨ２）ｏ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨＣ２Ｈ５）ｍ−（ＣＨ２）ｏ−ＣＨ３（式中、ｎ、ｍ、およびｏは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、または８である）が含まれ得る。
【００３０】
「アルケニル」は、本明細書中で使用される場合、１つ以上の二重結合（例えば、−ＣＨ＝ＣＨ−）（例えば、１、２、３、４、５、６個、またはそれを超える、典型的には、１個または２個）を含む結合した直鎖、第二級、第三級、または環状の炭素原子（すなわち、直鎖、分岐、環状、またはこれらの任意の組み合わせ）を含む部分を意味する。アルケニル基またはアルケニル部分中の炭素原子数は、他で指定しない限り、２〜約５０個（例えば、約２〜３０個または約２〜２０個である（例えば、Ｃ２−８アルケニルまたはＣ２−８アルケニルは、２、３、４、５、６、７、または８個の炭素原子を含むアルケニル部分を意味する）。アルケニル基を指定する場合、種には、ビニル、アリル、−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨ＝ＣＨ）−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＣＨ３＝ＣＨ）−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ３、−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨ＝ＣＣＨ３）−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｎ−（ＣＨ＝ＣＨ）０−１−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ２ＣＨ＝ＣＨ２（式中、ｎおよびｍは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、または８である）が含まれ得る。
【００３１】
「アルキニル」は、本明細書中で使用される場合、１つ以上の三重結合（例えば、−Ｃ≡Ｃ−）（例えば、１、２、３、４、５、６個、またはそれを超える、典型的には、１個または２個の三重結合）を含み、必要に応じて、１、２、３、４、５、６、またはそれを超える二重結合を含み、残りの結合が単結合である、結合した直鎖、第二級、第三級、または環状の炭素原子（すなわち、直鎖、分岐、環状、またはこれらの任意の組み合わせ）を含む部分を意味する。アルケニル基またはアルケニル部分中の炭素原子数は、他で指定しない限り、２〜約５０個（例えば、約２〜３０個または約２〜２０個である（例えば、Ｃ２−８アルキニルまたはＣ２−８アルキニルは、２、３、４、５、６、７、または８個の炭素原子を含むアルキニル部分を意味する）。アルキニル基を指定する場合、基および種には、−ＣＣＨ、−ＣＣＣＨ３、−ＣＣＣＨ２ＣＨ３、−ＣＣＣ３Ｈ７、−ＣＣＣＨ２Ｃ３Ｈ７、−（ＣＨ２）ｎ−（Ｃ≡Ｃ）−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ３、および−（ＣＨ２）ｎ−（Ｃ≡Ｃ）０−１−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ２Ｃ≡ＣＨ（式中、ｎおよびｍは、独立して、０、１、２、３、４、５、６、７、または８である）が含まれ得る。
【００３２】
「置換アルキル」、「置換アルケニル」、および「置換アルキニル」などは、置換基を有するか、水素原子と置換されて炭素原子に結合する置換基または炭素原子鎖に割り込む置換基を含む、本明細書中に定義のアルキル、アルケニル、アルキニル、または別の基もしくは部分を意味する。置換基には、１、２、３、４、５、６個、またはそれを超える独立して選択された−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−ＯＲＰＲ、−ＳＨ、−ＳＣＨ３、−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＨ−、−Ｃ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＰＲ、−ＣＨＯ、−ＣＨ２ＳＨ、−Ｃ＝Ｎ−、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＰＲ、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ３（式中、ＲＰＲは、独立して、水素、保護基であるか、ＲＰＲは両方とも水素であるか、合わさって保護基である）が含まれる。
【００３３】
「ハロゲン」は、フッ素、塩素、臭素、またはヨウ素を意味する。
【００３４】
「エステル」は、−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−構造を含む部分を意味する。典型的には、エステルは、本明細書中で使用される場合、約１〜５０個の炭素原子（例えば、約２〜２０個の炭素原子）および独立して選択された０〜約１０個のヘテロ原子（例えば、Ｏ、Ｓ、Ｎ、Ｐ、Ｓｉ）を含む有機部分を含み、有機部分は、例えば、Ｒ１またはＲ２で−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−構造を介して式１のステロイド核に結合する（例えば、有機部分−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−ステロイドまたは有機部分−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ステロイド）。有機部分は、通常、１つ以上の上記の有機基のいずれかを含む（例えば、Ｃ１−２０アルキル部分、Ｃ２−２０アルケニル部分、Ｃ２−２０アルキニル部分、アリール部分、Ｃ２−９複素環、またはこれらのいずれかの置換誘導体（例えば、１、２、３、４個、またはそれを超える置換基を含む）（式中、各置換基は、独立して選択される）。エステルには、コハク酸、ジカルボン酸、およびアミノ酸のエステル（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−ＯＲＰＲ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−ＮＨＲＰＲ、および−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｃ（Ｏ）−ＯＲＰＲ（式中、ｎは、１、２、３、４、５、６、７、または８であり、ＲＰＲは、−ＨまたはＣ１−４アルキルなどの保護基である）など）が含まれる。エステルには、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｈおよび−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−Ｈなどの構造も含まれる。
【００３５】
これらの有機基中の水素原子または炭素原子についての例示的置換基は、置換アルキル部分について上記の通りであり、１、２、３、４、５、６個、またはそれを超える、通常、１、２、または３個の−Ｏ−、−Ｓ−、−ＮＲＰＲ−（−ＮＨ−が含まれる）、−Ｃ（Ｏ）−、−ＣＨＯ、−ＣＨＳ、−Ｃ＝ＮＨ、−Ｃ（Ｓ）、＝Ｏ、＝Ｓ、−Ｎ（ＲＰＲ）２（−ＮＨ２が含まれる）、−Ｃ（Ｏ）ＯＲＰＲ（−Ｃ（Ｏ）ＯＨが含まれる）、−ＯＣ（Ｏ）ＲＰＲ（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｈが含まれる）、−ＯＲＰＲ（−ＯＨが含まれる）、−ＳＲＰＲ（−ＳＨが含まれる）、−ＮＯ２、−ＣＮ、−ＳＣＮ、−Ｃ６Ｈ５、−ＣＨ２Ｃ６Ｈ５、−ＮＨＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ−、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−、−Ｏ−Ａ８、−Ｓ−Ａ８、−Ｃ（Ｏ）−Ａ８、−ＯＣ（Ｏ）−Ａ８、−Ｃ（Ｏ）Ｏ−Ａ８、＝Ｎ−、−Ｎ＝、＝Ｎ−ＯＨ、−ＯＰＯ３（ＲＰＲ）２、−ＯＳＯ３Ｈ２、またはハロゲン部分または原子（式中、各ＲＰＲは、−Ｈ、独立して選択される保護基であるか、両方のＲＰＲが一緒になって保護基を含み、Ａ８は、Ｃ１−８アルキル、Ｃ２−８アルケニル、Ｃ２−８アルキニル、Ｃ１−４アルキル−アリール（例えば、ベンジル）、アリール（例えば、フェニル）、またはＣ０−４アルキル−Ｃ２−９複素環である）が含まれる。置換基は、独立して選択される。有機部分には、Ｒ４変数（ｖａｒｉａｂｌｅ）によって定義された化合物が含まれる。有機部分は、不安定な部分が本明細書中に記載の１つ以上の用途（式１または他の化合物の合成が含まれる）で化学的に十分に安定である化合物を作製するために使用することができる過渡種（ｔｒａｎｓｉｅｎｔ  ｓｐｅｃｉｅ）である場合を除き、明らかに不安定な部分（例えば、−Ｏ−Ｏ−）を排除する。上記列挙の置換は、典型的には、１つ以上の炭素原子（例えば、−Ｏ−または−Ｃ（Ｏ）−）または１つ以上のハロゲン原子（例えば、ハロゲン、−ＮＨ２、または−ＯＨ）に置換するために使用することができる置換基である。例示的エステルには、１つ以上の、独立して選択されたアセテート、エナンテート、プロピオネート、イソプロピオネート、シクロプロピオネート、イソブチレート、ｎ−ブチレート、バレレート、カプロエート、イソカプロエート、ヘキサノエート、ヘプタノエート、オクタノエート、ノナノエート、デカノエート、ウンデカノエート、フェニルアセテート、またはベンゾエートが含まれ、典型的には、ヒドロキシルエステルである。エステルには、アミノ酸、カーボネート、またはカルバメート（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−ＮＨＲＰＲ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２ＣＨ２−ＮＨＲＰＲ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨＲＰＲ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２ＣＨ（ＣＨ３）−ＮＨＲＰＲ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（ＮＨＲＰＲ）−ＣＨ（ＯＲＰＲ）−ＣＨ３、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（ＣＨ２）ｍ−Ｈ、および−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｍ−Ｈ（式中、ＲＰＲは、−Ｈ、Ｃ１−４アルキル（−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−Ｃ３Ｈ７など）または−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ３もしくは−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３などの保護基であり、ｍは、０、１、２、３、４、５、または６である）が含まれる）も含まれる。エステルには、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−���ＣＦ２）ｎ−ＣＦ３、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨ３、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ（ＣＨ３）−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨ３、および−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｃ（ＣＨ３）２−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨ３（式中、ｎは、０、１、２、３、４、５、または６である）も含まれる。
【００３６】
「エーテル」は、１、２、３、４個、またはそれを超える−Ｏ−部分（通常１または２個）を含む、エステルについて記載の有機基を意味する。いくつかの実施形態では、−Ｏ−基は、種々の基（Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、またはＲ１１など）でステロイド核に結合する（例えば、有機部分−Ｏ−ステロイド）。有機部分は、上記のエステルについて記載の通りである。エーテルには、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨ３、−Ｏ−ＣＨ２（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−ＣＨ３、−Ｏ−ＣＨ２（ＣＨ２）ｎ−Ｓ−ＣＨ３、および−Ｏ−ＣＨ（ＣＨ３）−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨ３（式中、０、１、２、３、４、５、または６）が含まれる。
【００３７】
式１の化合物。いくつかの実施形態では、式１の化合物は、３、４、または５個のヒドロキシル基を有し、必要に応じて、１、２、またはそれを超えて、同一または異なるエステル基とエステル化される。これらの実施形態のいくつかでは、ヒドロキシル基またはエステルは、３、４、１６、および１７位に存在し、ここで、３、４、および１６位のヒドロキシル基またはエステルは、それぞれ、β，β，α、β，β，β、α，β，α、α，β，β、β，α，α、β，α，β、α，α，α、またはα，α，β配置である。１７位のヒドロキシルまたはエステルは、典型的には、β配置であるが、α配置であってもよい。これらの化合物中のＲ１０は、典型的には、−Ｈまたはハロゲン（−Ｆなど）であり、Ｒ５は、必要に応じて、−ＣＨ３または−Ｃ２Ｈ５であり、Ｒ６は、必要に応じて、−Ｈまたは−ＣＨ３である。これらの化合物のいくつかについて、β配置またはα配置中の７位または１１位にさらなるヒドロキシルまたはエステルが存在することができる。
【００３８】
式１の化合物について、置換されたＣ１−８アルキル部分には、−ＣＨ２Ｆ、−ＣＦ３、−ＣＨ２ＯＨ、および−Ｃ２Ｆ５が含まれる。必要に応じて置換されたＣ２−８アルキニル部分には、−ＣＣＨ、−ＣＣＣＨ３、−ＣＣＣＨ２ＯＨ、−ＣＣＣＨ２Ｃｌ、および−ＣＣＣＨ２Ｂｒが含まれる。
【００３９】
例示的な式１の化合物には、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，７β，１６α，１７β−ペンタオールおよび１つまたは２つのヒドロキシル基がエピマー化されたこの化合物のエピマー（例えば、アンドロスタ−５−エン−３α，４β，７β，１６α，１７β−ペンタオール、アンドロスタ−５−エン−３β，４α，７α，１６α，１７β−ペンタオール、およびアンドロスタ−５−エン−３β，４β，７α，１６β，１７β−ペンタオール）。他の式１の化合物には、独立して選択された５つの−ＯＨ、エステル、またはエーテル部分が存在する化合物（例えば、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１１β，１６α，１７β−ペンタオール）および１つまたは２つのヒドロキシル基がエピマー化されたこの化合物のエピマー（例えば、アンドロスタ−５−エン−３α，４β、１１β，１６α，１７β−ペンタオール、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１１β，１６α，１７α−ペンタオール、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１１α，１６α，１７β−ペンタオール、およびアンドロスタ−５−エン−３β，４α，１１β，１６β，１７β−ペンタオール）が含まれる。かかる化合物について、５つのヒドロキシル基のうちの１つ、２つ、またはそれを超えるヒドロキシル基を、例えば、エステルまたはエーテルに誘導体化することができる（メトキシ、エトキシ、アセトキシ、プロピオノオキシ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）３−Ｈ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）４−Ｈ、または−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）５−Ｈ誘導体など）。他のエステルには、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨ２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）２−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）３−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）４−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）５−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、および−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）６−Ｃ（Ｏ）ＯＨが含まれる。
【００４０】
これらの実施形態のいくつかでは、独立して選択された４つのヒドロキシル、エステル、またはエーテルは、式１の化合物中の２、３、４、７、１１、１６、および１７位に存在する。かかる置換基を、例えば、２、３、１６、および１７位、２、３、７、および１７位、２、３、１１、および１７位、３、４、７、および１７位、３、４、１１、および１７位、３、７、１６、および１７位、３、４、１６、および１７位、または３、１１、１６、および１７位に結合することができる。ヒドロキシル、エステル、またはエーテルは、４位に二重結合が存在しない場合、それぞれ、２−および／または３−β，β，β，β−１７、２−および／または３−β，β，β，α−１７、２−および／または３−β，β，α，β−１７、２−および／または３−β，α，β，β−１７、２−および／または３−α，β，β，β−１７、２−および／または３−β，β，α，α−１７、２−および／または３−β，α，β，α−１７、または２−および／または３−α，β，β，α−１７配置であり得る。用語「２−および／または３−β，β，β，β−１７」は、２位が必要に応じて置換され、３および１７位がヒドロキシル、エステル、またはエーテルと置換されていることを意味する。ヒドロキシル、エステル、またはエーテルは、４位に二重結合が存在しない場合、それぞれ、２−および／または３−β，α，α，β−１７、２−および／または３−α，β，α，β−１７、２−および／または３−α，α，β，β−１７、２−および／または３−β，α，α，α−１７、２−および／または３−α，β，α，α−１７、２−および／または３−α，α，β，α−１７、２−および／または３−α，α，α，β−１７、２−および／または３−β，α，α，α−１７配置であり得る。これらの化合物中のＲ１０は、典型的には、−Ｈまたは−Ｆであり、Ｒ５は、必要に応じて、−ＣＨ３または−Ｃ２Ｈ５であり、Ｒ６は、必要に応じて、−Ｈ、−ＣＨ３、−ＣＨ２ＯＨ、−ＣＣＨ、または−ＣＣＣＨ３である。これらの化合物に関して、２、３、４、７、１１、１６、および１７位のうち１つ、２つ、またはそれより多くが、−Ｈまたは必要に応じて置換されたアルキル（−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＨ２＝ＣＨ２、−ＣＣＨ、−ＣＦ３、または−Ｃ２Ｆ５）と置換されている。
【００４１】
式１の化合物のいくつかの実施形態では、５つの、独立して選択されたヒドロキシル、エスエル、および／またはエーテル部分が存在し得る。これらの化合物について、ヒドロキシル、エステル、および／またはエーテル部分は、通常、３および１７位および３つの他の位置に存在する。これらの置換基は、２、３、７、１１、および１７位、２、３、７、１６、および１７位、または２、３、１１、１６、および１７位に存在し得る。独立して選択されたヒドロキシル、エステル、および／またはエーテル部分は、３、４、７、１１、および１７位、３、４、１１、１６、および１７位、３、４、７、１６、および１７位、または３、７、１１、１６、１７位に存在し得る。これらの化合物について、各部分は、４位に二重結合が存在しない場合、α配置またはβ配置であり得る。したがって、これらの化合物中の置換基は、それぞれ、２−および／または３−β，β，β，β，β−１７、２−および／または３−β，β，β，β，α−１７、２−および／または３−β，β，β，α，β−１７、２−および／または３−β，β，α，β，β−１７、２−および／または３−β，α，β，β，β−１７、２−および／または３−α，β，β，β，β−１７、２−および／または３−β，β，β，α，α−１７、２−および／または３−β，β，α，β，α−１７、２−および／または３−β，α，β，β，α−１７、２−および／または３−α，β，β，β，α−１７、２−および／または３−β，β，α，α，β−１７、２−および／または３−β，α，β，α，β−１７、２−および／または３−α，β，β，α，β−１７、２−および／または３−β，α，α，β，β−１７、２−および／または３−α，β，α，β，β−１７，２−および／または３−α，α，β，β，β−１７、または２−および／または３−β，β，α，α，α−１７配置であり得る。これらの化合物中の置換基はまた、それぞれ、２−および／または３−β，α，β，α，α−１７、２−および／または３−β，α，α，β，α−１７、２−および／または３−β，α，α，α，β−１７、２−および／または３−α，β，β，α，α−１７、２−および／または３−α，β，α，β，α−１７、２−および／または３−α，β，α，α，β−１７、２−および／または３−α，α，β，β，α−１７、２−および／または３−α，α，β，α，β−１７、２−および／または３−α，α，α，β，β−１７、２−および／または３−β，α，α，α，α−１７、２−および／または３−α，β，α，α，α−１７、２−および／または３−α，α，β，α，α−１７、２−および／または３−α，α，α，β，α−１７、２−および／または３−α，α，α，α，β−１７、または２−および／または３−α，α，α，α，α−１７配置であり得る。
【００４２】
本明細書中に記載の式１の化合物について、１６位は、非置換であり得る（すなわち、一方または両方のＲ３は−Ｈであり、第２のＲ４は、１７位に二重結合が存在しない場合、１７位にα配置またはβ配置で存在し得る。かかる第２のＲ４部分には、必要に応じて置換されたＣ１−８アルキル（−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、−ＣＦ３、−Ｃ２Ｆ５、−Ｃ＝ＣＨ２、−ＣＣＨ、−ＣＣＣＨ３、または−ＣＣＣＨ２ＯＨなど）が含まれる。
【００４３】
これらの化合物のうちのいずれかについて、２位は、非置換であり得る（すなわち、Ｒ９は−ＣＨ２−である）。いくつかの実施形態では、Ｒ９は置換されている（例えば、−Ｏ−、−ＣＨ（ＯＨ）−、−ＣＨ（エステル）−、または−ＣＨ（エーテル）−（式中、ヒドロキシル、エステル、またはエーテル部分は、α配置またはβ配置である）。例示的Ｒ９部分は、−ＣＨ（α−ＯＨ）−、−ＣＨ（β−ＯＨ）−、−Ｃ（β−ＣＨ３）（α−ＯＨ）−、−Ｃ（α−ＣＨ３）（β−ＯＨ）−、−ＣＨ（α−ＯＣＨ３）−、−ＣＨ（β−ＯＣＨ３）−、−ＣＨ（α−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３）−、および−ＣＨ（β−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３）−である。他のＲ９部分は、−ＣＨ（α−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３）−、−ＣＨ（β−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３）−、−ＣＨ（α−ＯＣＨ２ＣＨ３）−、−ＣＨ（β−ＯＣＨ２ＣＨ３）−、−Ｃ（β−ＣＨ３）（α−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３）−、および−Ｃ（α−ＣＨ３）（β−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３）−である。
【００４４】
生物力学化合物。上記のように、生物力学化合物を同定するか特徴づける方法を行うことができる。本方法は、必要に応じて、試験化合物がインビトロでのアッセイにおいて、急性生物学的応答のメディエータの活性またはレベルを約２０％または約２５％〜約７０％または約７５％調節するかどうかを決定するためのプロトコールを行なう工程をさらに含み、必要に応じて、試験化合物は、糖質コルチコイド受容体（例えば、デキサメタゾンまたはコルチゾール）の適切な参照の活性化因子またはアンタゴニストと比較した場合に約１０％、約２０％、または約３０％を超えて糖質コルチコイド受容体を活性化または拮抗しない。これらの実施形態では、急性の刺激または生物学的損傷は、十分量の電離放射線または炎症誘発性シグナル、化合物、または組成物への被験体の曝露であり得、必要に応じて、炎症誘発性シグナル、化合物、または組成物は、細菌ＬＰＳまたはＴＮＦαであり、そして／または、必要に応じて、急性生物学的応答のメディエータは、ＮＦ−κＢまたはＩκＢである。
【００４５】
急性刺激または生物学的損傷は、十分な数の薬物処置マウスおよび十分な数のビヒクル対照マウスへの十分な細菌ＬＰＳの投与、および（ｉ）腹腔内注射による細菌ＬＰＳの投与から必要に応じて約１．５時間後（例えば、約７０〜１１０分後または７５〜１０５分後）に急性応答が最大または最大付近である場合、および（ｉｉ）十分な細菌ＬＰＳの投与前および／または投与後の１つまたは２つの他の時点（必要に応じて、十分な細菌ＬＰＳの投与前の一方の時点および急性応答が最大または最大付近となった後の時点、必要に応じて、腹腔内注射による細菌ＬＰＳの投与から約２．０時間後または２．５時間後）での急性生物学的応答のメディエータに及ぼす試験化合物の影響の測定であり得る。ここで、必要に応じて、急性生物学的応答のメディエータがＮＦ−κＢまたはＩκＢである。
【００４６】
十分な細菌ＬＰＳの投与を、必要に応じて、本明細書中に記載の方法またはその適切な変形例に本質的に従って行なうことができ、必要に応じて、化合物が急性生物学的応答のメディエータのレベルまたは活性を部分的に調節する能力を、本明細書中に記載の方法またはその適切な変形例に本質的に従って達成する。
【００４７】
分析することができる他の刺激または生物学的損傷には、虚血および１つ以上の虚血組織の再潅流、比較的低いか、中程度か、高い重症度の熱傷または化学熱傷、または他の毒素もしくは毒物への曝露が含まれる。生物学的損傷の影響を、種々の組織または器官（例えば、脾臓、血液、骨髄、肺、脳、肝臓、腸、結腸、または心臓）で評価することができる。
【００４８】
評価することができる変数には、典型的には、被験体が所与の生物学的損傷に対して最大に応答する時間または期間が含まれるであろう。一般に、急性生物学的損傷は、被験体の損傷への曝露の最初の３０分〜４８時間以内に最大の生物学的応答を誘発するであろう。所与の生体分子による急性生物学的損傷に対する最大応答は、一般に、約１５分〜約２時間持続するが、いくつかの応答は、所与の期間で開始され、数日またはそれを超えた期間にわたって構築されるであろう。最大生物学的応答期間は、その時点で薬物候補の有効性または作用機構を評価するのに都合のよい期間である。
【００４９】
１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールが一過性であるが非常に強力な効果を発揮し、次第に弱まって通常の機能に戻る能力を、本明細書中で、生物力学応答という（実施例９を参照のこと）。「生物力学因子」（１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールなど）によって誘発された生物力学応答は、「生物静力学（ｂｉｏｓｔａｔｉｃ）応答」に対比する。生物静力学応答は、デキサメタゾンなどの化合物が糖質コルチコイド受容体またはＮＦ−κＢなどのそのエフェクター生体分子に対して誘発され、この化合物が糖質コルチコイド受容体の活性化を介して間接的に阻害する応答である。生物静力学応答は、本質的に、「四六時中」の応答であり、デキサメタゾンなどの「生物静力学因子」の生物学的効力は、標的細胞または組織において所与の濃度では変形例を相対的にほとんど有さない。
【００５０】
したがって、生物静力学因子の薬力学的効果は、主に、その濃度または薬物動態学的性質によって変化する。対して、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールなどの生物力学因子は、標的細胞または組織でのその濃度と基本となる生物学的刺激の性質および強度との組み合わせによって影響を受ける薬力学的効果によって特徴づけられる。したがって、生物学的刺激は、例えば、潜在的致死量の電離放射線（γ線またはＸ線）への曝露または細菌ＬＰＳ、ＴＮＦα、または炎症のメディエータを活性化または阻害することができる別の薬剤（ＮＦ−κＢ、ＩκＢ、ＩＬ−６、Ｃ反応性タンパク質など）への曝露によって誘発される。これに関して、生物力学薬は、薬物動態学的効果と薬力学的効果との間の相関が、生物静力学薬で一般に観察される相関と比較して、より低いか有意でない相関を示し得る。
【００５１】
生物力学薬の１つの態様は、少なくとも一部が同一または類似の標的生体分子の調節によって作用することができる生物静力学薬に関連する全身毒性を減少させるその潜在能力である。デキサメタゾンなどの生物静力学薬を臨床的に使用して、広範な炎症状態を処置することができるが、「四六時中の」生物活性によって有毒になり得る。ＮＦ−κＢ阻害の場合、その活性の一定且つ比較的完全な阻害（例えば、長期間（例えば、１、２、または４時間〜約１、２、３日間またはそれを超える期間にわたるほとんどまたは全ての組織における約７５％、８０％、８５％、９０％、９５％、または本質的に１００％の阻害）により、観察可能な望ましくない副作用をもたらす可能性があり、このことは、ほとんどの組織における正常な生物学的機能にいくらかの基本レベルのＮＦ−κＢ活性が必要であるからである。デキサメタゾンなどの糖質コルチコイドの使用に関連する公知の毒性は、少なくとも一部が、ＮＦ−κＢなどの罹患生体分子の比較的完全な遮断から生じる可能性が高い。対して、生物力学薬はより一過性の応答を発揮することができ、それにより、観察可能な有毒な副作用を改善または減少させることができる。
【００５２】
生物力学薬の別の態様は、組織特異的様式で治療効果を潜在的に発揮するその能力である。したがって、潜在的致死量の細菌ＬＰＳまたは一過性虚血後の罹患組織の再潅流などの生物学的損傷への曝露などの攻撃誘発に対する動物の応答を、種々の組織中の種々の程度のＮＦ−κＢ活性化によって明らかにすることができる。生物力学薬は、動物の応答が比較的大きい組織（例えば、マウスの脾臓または心臓組織）で作用することができる一方で、他の組織（例えば、脳）ではＮＦ−κＢ機能に比較的影響を及ぼさないままであり、生物学的損傷に対する応答は、生物学的損傷に対する応答を少なくとも部分的に媒介する標的生体分子に対して比較的低い。
【００５３】
生物力学薬は、標的生体分子を部分的に阻害する能力によって部分的に作用することができる。実施例７に記載のように、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールおよび本明細書中に記載のいくつかの他の化合物は、インビトロで細胞中のＮＦ−κＢの活性化を部分的に阻害したが、いかなる濃度においても完全な阻害は決して観察されなかった。これは、十分に高い濃度でＮＦ−κＢ活性を完全に阻害した生物静力学薬デキサメタゾンの活性と対照的であった。インビトロでのＮＦ−κＢ活性のこの部分的阻害は、本実施例に記載の活性を部分的に反映するようである。したがって、少なくともいくつかの場合、生物力学薬は、実施例７に記載のインビトロアッセイなどの系で標的生体分子を部分的に阻害または活性化する能力を有することによって特徴づけられる。ＮＦ−κＢの阻害は、間接的なようである。何故なら、現在、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールおよび本明細書中に記載の他の化合物が細胞質または核内でＮＦ−κＢに直接結合すると考えられないからである。
【００５４】
本実施例に記載のプロトコールまたはその適切な変形例を使用して、インビボでのＮＦ−κＢなどの分子の調節（検出可能な活性化または検出可能な拮抗もしくは阻害）によって生物力学因子または生物静力学因子として作用する能力について他の化合物を特徴づけることができる。化合物を、実施例７に記載のアッセイなどのインビトロアッセイで分析して、その作用機構をさらに特徴づけることもできる。本実施例に記載のインビボプロトコールの適切な変形例には、試験化合物の種々の投薬量および種々の投与経路（例えば、約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約３５０ｍｇ／ｋｇの用量範囲の経口、口腔内、舌下、または非経口への投与（皮内、皮下、静脈内、または筋肉内への注射など）または鼻道、鼻鋤骨器官、肺胞、肺胞に至る気道（例えば、気管支または細気管支）への鼻腔内または吸入による）への投与が含まれる。適切な試験投薬量は、典型的には、約１〜１５０ｍｇ／ｋｇであろう。ＩκＢ、キナーゼ（ｓｒｃキナーゼ、ｍａｐキナーゼなど）、または本明細書中に記載の他のシグナルメディエータなどのインビボで測定することができる生体分子。かかる特徴づけ方法を、１つ以上の一定範囲の被験体（げっ歯類（例えば、ラット）、イヌ、非ヒト霊長類（アカゲザルまたはカニクイザル）など）で行なうことができる。約３〜１２匹／群（例えば、４〜８匹／群）からなる動物群を、適切なビヒクルまたは偽薬対照、潜在的な生物力学薬である試験化合物、生物力学薬の陽性対照（１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールなど）、生物静力学薬の陽性対照（デキサメタゾンなど）と共に使用することができ、これらの群について、異なる細胞集団または組織中での試験化合物の応答を、１つ以上の対照群（例えば、ビヒクル対照、生物力学薬の陽性または陰性対照または生物静力学薬の陽性または陰性対照）と比較する。
【００５５】
かかる分析をヒトに適用する場合、実験オプションの範囲は、他の動物と比較して必然的に減少するであろう。血液、骨髄、または肺洗浄液などのヒトの組織またはサンプルは、侵襲的技術によって得る必要がある脾臓または肝臓などの他の組織型よりも容易に分析に利用可能であろう。したがって、一般に、ヒト応答の評価前または評価と同時に動物研究を行なうであろう。
【００５６】
炎症の治療。式１の化合物の活性の１つの態様は、ＮＦ−κＢ、ＩＬ−６、またはＴＮＦαなどの炎症のメディエータに影響を及ぼすことによって炎症を軽減することができるということである。ＮＦ−κＢ分子は、しばしば、炎症の重要なメディエータである。ＮＦ−κＢ活性の増加は、一定範囲の炎症性疾患および自己免疫状態に関連する。
【００５７】
式１の化合物を使用して、炎症に関連する症状（疼痛、発熱、疲労など）、子宮内膜癌；発熱；線維筋痛；糸球体腎炎；移植片対宿主疾患、臓器または組織の移植片拒絶（例えば、腎臓、肺、骨髄、または肝臓の移植）；出血性ショック；線維筋痛；痛覚過敏；炎症性腸疾患；胃炎；過敏性腸症候群；潰瘍性大腸炎；消化性潰瘍；ストレス潰瘍；出血性潰瘍；胃酸過多症；消化不良；胃不全麻痺；胃食道逆流疾患；関節の炎症状態（変形性関節症、乾癬性関節炎、および関節リウマチが含まれる）；例えば、角膜移植に関連し得る炎症性眼疾患；虚血（脳虚血（例えば、外傷、癲癇、出血、または卒中（それぞれ、神経変性を引き起こし得る）の結果としての脳損傷が含まれる））；川崎病；学習障害；肺疾患（例えば、ＡＲＤＳ）；多発性硬化症；筋障害（例えば、特に敗血症における筋タンパク質代謝）；神経毒性（例えば、ＨＩＶによって誘導）；骨粗鬆症；疼痛（癌関連疼痛）；パーキンソン病；アルツハイマー病；歯周疾患；早期陣痛；乾癬；再灌流障害；敗血症性ショック；放射線療法由来の副作用；一過性顎関節疾患；アルコール誘導性肝外傷（アルコール肝硬変が含まれる）；リウマチ熱；サルコイドーシス；強皮症；慢性疲労症候群；冠状動脈の状態および適応症（鬱血性心不全、冠状動脈再狭窄、心筋梗塞、心筋機能障害（例えば、敗血症関連性）、および冠状動脈バイパス移植が含まれる）；睡眠障害；ブドウ膜炎；血清反応陰性多発性関節炎；強直性脊椎炎；ライター症候群および反応性関節炎；スティル病；乾癬性関節炎；腸疾患に基づく関節炎；多発性筋炎；皮膚筋炎；強皮症；全身性硬化症；脈管炎（例えば、川崎病）；例えば、挫傷、捻挫、または軟骨損傷に起因する炎症；創傷治癒；菲薄皮膚または脆弱な皮膚；点状出血または斑状出血；紅斑；および外傷など）を治療または改善することができる。外傷には、創傷、化学熱傷、熱傷、放射線熱傷、および整形外科手術または腹部外科手術などの手術に関連する組織または器官の損傷が含まれる。
【００５８】
炎症状態には、再灌流障害、血管形成術後の再狭窄、心筋梗塞、または脳硬塞が含まれ得る。望ましくない炎症状態または症状には、肺炎状態（例えば、嚢胞性線維症、急性喘息、慢性喘息、ステロイド抵抗性喘息、急性気管支炎、慢性気管支炎、気腫、乾癬、湿疹、成人呼吸急迫症候群（ＡＲＤＳ）、または慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））が含まれる。
【００５９】
自己免疫状態。本明細書中に記載の式１の化合物（Ｆ１Ｃ）および組成物を使用して、１型糖尿病、クローン病、関節炎、接触皮膚炎、狼瘡、および多発性硬化症（ＭＳ）状態などの自己免疫状態を処置するか、防止するか、または進行を遅延させることができる。ＭＳ状態には、再発寛解型ＭＳおよび二次進行型ＭＳが含まれる。狼瘡状態には、全身性エリテマトーデス、エリテマトーデス関連関節炎、エリテマトーデス関連皮膚変化、エリテマトーデス関連血液異常、エリテマトーデス関連腎臓障害、エリテマトーデス関連心臓疾患または肺疾患、エリテマトーデス関連神経精神変化、エリテマトーデス関連組織炎症、円板状エリテマトーデス、亜急性皮膚エリテマトーデス、および薬剤誘発性エリテマトーデスが含まれる。関節炎および関連状態には、関節リウマチ、変形性関節症、線維筋痛、原発性変形性関節症、続発性変形性関節症、乾癬性関節炎、エリテマトーデス関連関節炎、急性または慢性の炎症性腸疾患または大腸炎に関連する関節炎、強直性脊椎炎に関連する関節炎、関節炎関連組織炎症、関節痛、関節硬直、関節運動障害、関節腫脹、関節の炎症、および滑膜の炎症が含まれる。
【００６０】
Ｆ１ＣまたはＦ１Ｃおよび１つ以上の賦形剤を含む組成物を使用して、強直性脊椎炎、乾癬、湿疹、大腸炎、クローン病、急性または慢性の炎症性腸疾患、自己免疫性腎損傷、および肝外傷などの状態を処置するか、防止するか、発症を遅延するか、または進行を遅延することができる。Ｆ１Ｃを、肺および気道の状態（喘息状態（ステロイド非依存性喘息、重症喘息、アトピー性喘息、急性喘息、慢性喘息など）、アレルギー性鼻炎、慢性気管支炎、急性気管支炎、嚢胞性線維症、気腫、肺線維症、肺気道過敏症、慢性閉塞性肺疾患、肺水腫、および急性呼吸急迫症候群が含まれる）の治療で使用することができる。
【００６１】
実験的自己免疫性能脊髄炎（ＥＡＥ）は、ヒトＭＳに類似の臨床的、組織病理学的、および免疫学的特長を有する動物における実験条件であり、ＭＳと同様に、Ｔ細胞および単球のＣＮＳへの浸潤を示す。ＥＡＥを、感受性マウスにおいて、適切なアジュバント中のプロテオリピドリポタンパク質（ＰＬＰ）での免疫化によって誘導することができる。ＥＡＥ動物モデルは、ＭＳの病理学的機構を研究し、新規のＭＳ治療薬を特徴づけるために使用されるインビボヒトＭＳモデルである。
【００６２】
代謝障害の治療。式１の化合物を使用して、代謝障害（１型糖尿病、２型糖尿病、Ｘ症候群、高コレステロール血症、高血糖、インスリン抵抗性（例えば、肥満関連）、耐糖能障害、高トリグリセリド血症、高リポタンパク質血症、脂肪異栄養症状態、Ｘ症候群、動脈硬化、アテローム性動脈硬化症、および肥満など）を処置するか、防止するか、進行を遅延することができる。Ｘ症候群（代謝症候群が含まれる）を、異常症（高インスリン血症（ｈｙｐｅｒｉｎｓｕｌｅｍｉａ）、肥満、トリグリセリド、尿酸、フィブリノゲン、高密度小ＬＤＬ粒子（ｓｍａｌｌ  ｄｅｎｓｅ  ＬＤＬ  ｐａｒｔｉｃｌｅ）、および高レベルのプラスミノゲン活性化因子阻害剤１（ＰＡＩ−Ｉ）、ならびにＨＤＬ−ｃレベルの低下が含まれる）２つ以上の集合と定義する。インスリン抵抗性を示すが２型糖尿病を発症していない多数の患者は、Ｘ症候群とも呼ばれる代謝症候群、インスリン抵抗性症候群、または多代謝症候群（ｐｌｕｒｉｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）の発症リスクもある。Ｘ症候群は、典型的には、患者が、高脂血症、高インスリン血症、肥満、インスリン抵抗性、２型糖尿病およびその糖尿病性合併症を引き起こすインスリン抵抗性（すなわち、インスリン抵抗性が病態生理学の一部である疾患）の２つ以上を有する場合に起こる。
【００６３】
非依存性危険因子は、Ｆ１Ｃで処置することができる代謝障害に関連する心血管疾患に関連している。これらの危険因子には、高血圧症、フィブリノゲンレベルの上昇、高レベルのトリグリセリド、ＬＤＬコレステロールの上昇、総コレステロールの上昇、および低レベルのＨＤＬコレステロールが含まれる。治療により、膵臓β細胞が刺激されてより多くのインスリンを分泌し、そして／または糖尿病患者または肥満患者で長期にわたって起こり得る膵臓β細胞の喪失速度を遅くすることができる。
【００６４】
式１の化合物での代謝障害の治療を、他の治療と組み合わせることができる。糖尿病を、式１の化合物および１つ以上の種々の治療薬（インスリン抵抗性改善薬（グリタゾンなどのＰＰＡＲ−γアゴニストなど）；ビグアニド；タンパク質チロシンホスファターゼ−１Ｂ阻害剤；ジペプチジルペプチダーゼＩＶ阻害剤；インスリン；インスリン模倣物；スルホニル尿素；メグリチニド；α−グルコシドヒドロラーゼ阻害剤；およびα−アミラーゼ阻害剤が含まれる）で処置することができる。メルホルミン、フェンホルミン、アカルボース、およびロシグリタゾンは、いくつかの糖尿病型を処置するために使用されている薬剤である。
【００６５】
上記のように、Ｆ１Ｃを含む組成物を使用して、インスリン抵抗性またはその症状を処置するか、防止するか、進行を遅延させることができる。インスリン抵抗性は、インスリンが広範な濃度でその生物学的作用を発揮する能力を低下させ、予想されるよりも生物学的効果が低くなる。インスリン抵抗性の人は、グルコースを適切に代謝する能力が低下し、インスリン療法を行なっても不十分に応答する。インスリン抵抗性の症状には、筋肉におけるグルコースの取り込み、酸化、および貯蔵の不十分なインスリン活性化、脂肪組織における脂肪分解ならびに細胞におけるグルコースの産生および分泌の不適切なインスリン抑制が含まれる。インスリン抵抗性は、多嚢胞性卵巣症候群（ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ  ｏｖａｒｉａｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ）、耐糖能異常、妊娠糖尿病、高血圧症、肥満、およびアテローム性動脈硬化症を生じるかこれらに寄与し得る。Ｆ１Ｃ組成物を使用して、インスリン抵抗性患者におけるトリグリセリドレベルを低下させることができる。
【００６６】
上記のように、本発明の実施形態は、ヒトまたは別の哺乳動物における代謝障害またはその症状を処置するか、進行を遅延させるか、発症を遅延させるか、改善する可能性を有する化合物（または「試験化合物」）を同定する方法を含む。典型的にはインビボ所見から得られる１つ以上の記載の活性（例えば、高血糖発症の遅延または既存の糖尿病状態の進行の遅延）を有する本方法によって同定された化合物は、一般に、インビトロでのＰＰＡＲの非活性化因子およびインビトロでの不完全なＮＦ−κＢ阻害剤と説明されている。これらの特徴を有する化合物は、これらの障害を処置するための薬剤として評価することができる新規の化合物クラスである。
【００６７】
これらの実施形態では、本方法は、（ｉ）インビトロでヒト細胞または哺乳動物細胞中のＰＰＡＲ−α、ＰＰＡＲ−γ、およびＰＰＡＲ−δの１つ、２つ、または３つを、インビトロでの適切な陰性対照ヒト細胞または哺乳動物細胞と比較した場合に約１０％、約２０％、約３０％、または約４０％を超えて活性化せず、（ｉｉ）インビトロでの適切な陰性対照ヒト細胞または哺乳動物細胞と比較した場合にインビトロでのヒト細胞または哺乳動物細胞においてＮＦ−κＢの転写活性またはレベルを約２０〜８０％、約２５〜７５％、約３０〜７０％、または約３５〜６５％阻害するか減少させ、（ｉｉｉ）適切な陰性対照または正常対照と比較した場合、高血糖を減少させるか、高血糖の進行を遅延させるかその発症を遅延させるか、インスリン感受性を増大させるか、耐糖能障害を減少させるか、β−島細胞の数またはそのインスリン分泌能力の進行または喪失速度を遅延させるか、膵臓β−島細胞の数またはそのインスリン分泌能力を増加させるか、ｄｂ／ｄｂマウスまたは食事誘導性肥満を罹患したマウスの体重増加速度を遅延させるか、上昇したトリグリセリドレベルを減少させるか、上昇した総血中コレステロールレベルまたは血清コレステロールレベルを減少させるか、血中または血清中の正常または上昇したＬＤＬ、ＶＬＤＬ、アポＢ−１００、またはアポＢ−４８レベルを減少させるか、血中または血清中の正常または低レベルのＨＤＬまたはアポＡ１を増加させるか、血中または血清中の上昇したフィブリノゲンレベルを減少させ、そして（ｉｖ）必要に応じて、インビトロでのヒト細胞または哺乳動物細胞中の１つ以上の糖質コルチコイド受容体、アンドロゲン受容体、エストロゲン受容体−α、エストロゲン受容体−β、ミネラルコルチコイド受容体、プロゲステロン受容体、あるいはこれらの任意の生体分子の生物学的に活性な変異型またはイソ型を、インビトロでの適切な陰性対照ヒト細胞または哺乳動物細胞と比較して、約５％、約１０％、約２０％、または約３０％を超えて活性化しない試験化合物を選択する工程を含む。これにより、哺乳動物の代謝障害を治療または改善する可能性のある化合物を同定するか部分的に特徴づけることが可能である。
【００６８】
いくつかの実施形態では、試験化合物の活性を、式１の化合物などの適切な参照化合物と比較することができる。式１の化合物を、本方法で得られる特徴に適合する陽性対照または正の参照基準として本方法で使用することができる。かかる化合物には、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールおよびアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオールが含まれる。他の式１の化合物を、３つの必要な特徴を示さないか、そのうちの１つまたは２つを示し得る陰性対照または参照基準として使用することができる。かかる化合物には、１６α−ブロモエピアンドロステロン，１６α−ブロモ−３β，１７β−ジヒドロキシアンドロスタ−５−エン、および１６α−ヒドロキシエピアンドロステロンが含まれる。
【００６９】
本発明の実施形態は、代謝障害または代謝性疾患に関連する１つ以上の状態または症状に及ぼす試験化合物の影響の決定を含む。典型的には、かかる決定を、適切な陰性対照、正常対照、または適切な陽性対照と比較し、インビボにてヒトまたは動物で決定するが、時折、細胞全体または細胞溶解物においてインビトロで決定することができる。
【００７０】
高血糖の減少を、血中または血清中のグルコースレベルの正常な空腹時範囲への減少として観察することができる。正常な空腹時範囲は、少なくとも２歳のヒトでは、約７０ｍｇ／ｄＬ〜１０５ｍｇ／ｄＬまたは１１５ｍｇ／ｄＬであり、約１３５ｍｇ／ｄＬまたは約１４０ｍｇ／ｄＬ〜２００ｍｇ／ｄＬ、３００ｍｇ／ｄＬまたは３５０ｍｇ／ｄＬの空腹時血糖値で高血糖である。約４００ｍｇ／ｄＬを超える血糖値は、生命にかかわる。食後の血中または血清中のグルコースを、典型的には、炭水化物摂取（ヒトで少なくとも７５ｇ）から２時間後に測定し、その後に採血してグルコースを測定する。食後の血中または血清中の１４０ｍｇ／ｄＬ〜２００ｍｇ／ｄＬのヒト血糖値は、高血糖状態を示し、２００ｍｇ／ｄＬを超える血糖値でヒト真性糖尿病と同定される。ヒトについて、典型的には、７０〜１１５ｍｇ／ｄＬの正常ａＮ空腹時血糖値の患者では、血液を使用した経口耐糖能試験（ＯＧＴＴ）を行なうことができる。ヒトについてのＯＧＴＴでは、ピーク血糖値（典型的には、摂取後３０分または１時間）および２時間後の炭水化物値が２回またはそれを超えて２００ｍｇ／ｄＬを超える場合、患者は真性糖尿病を罹患していることを示す。
【００７１】
ヒト血糖の代替物は、例えば、糖尿病治療をモニタリングするために使用されるグリコシル化ヘモグロビンまたはＨｂＡ１ｃの測定である。ＨｂＡ１ｃの測定により、試験前に１００〜１２０日間にわたって血糖または糖値を評価することが可能であり、この測定は、少し前の食事または空腹状態などの短期間の変動に感受性を示す。成人で２．２〜４８％のＨｂＡ１ｃレベルが正常である一方で、２．５〜５．９％のレベルが良好な糖尿病制御を示し、６〜８％のレベルがかなりの糖尿病制御を示し、８％を超えるＨｂＡ１ｃレベルは糖尿病状態の不十分な制御を示す。これらおよび関連するプロトコールを実施および解釈する手順は、例えば、Ｋ．Ｄ．Ｐａｇａｎａ  ａｎｄ  Ｔ．Ｊ．Ｐａｇａｎａ，Ｍｏｓｂｙ’ｓ  Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  ａｎｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｔｅｓｔ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，５ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，２００１，Ｍｏｓｂｙ  Ｉｎｃ．，ｐａｇｅｓ  ４４１−４４８，４５１−４５８，５０７−５０９に記載されている。式１の化合物での治療を使用してＨｂＡ１ｃを減少させ、この減少は、糖尿病の制御または治療の改善と相関する。
【００７２】
本明細書中に記載の方法の使用により、グルコース、グルコース代替物のレベルまたは他の値（相反応性タンパク質または脂質成分（総コレステロールなど）のレベルなど）を標準化する（例えば、正常限度もしくは正常範囲または正常限度付近もしくは正常範囲付近に戻す）ことができる。グルコースまたは代替物の値の標準化は、典型的には、上昇したグルコースまたは代替物レベルの正常な血糖値の約１％、約２％、約３％、または約５％以内または正常なグルコース代替物の値の約５％または約８％以内への減少として認められる。他の種の血糖値が説明されており、これらの種についての類似の測定またはアッセイを、本発明の方法で使用することができる。他の値の標準化は、典型的には、異常に高いか低いレベルの被験体種の正常範囲の値の上限または下限の約２％または約４％〜約６％、約１０％、または約１２％以内への回復として認められる。
【００７３】
本発明の方法によって同定された化合物を使用して、高血糖の進行を遅延させるか発症を遅延させるか、インスリン抵抗性におけるインスリン感受性を増大させることができる（これらの疾患が存在するか発症すると妥当に予想される場合）。化合物の他の影響には、耐糖能障害の軽減、膵島ｂ−細胞数もしくはそのインスリンを分泌する能力の進行もしくは喪失速度の遅延、または膵島ｂ−細胞数もしくはそのインスリンを分泌する能力の増加が含まれる。
【００７４】
いくつかの実施形態では、本方法を、肥満被験体で行なうことができる。ヒトの肥満または「過体重」は、本明細書中で使用される場合、一般に、（１）体型指数が約２６ｋｇ／ｍ２、２７ｋｇ／ｍ２、２８ｋｇ／ｍ２、２９ｋｇ／ｍ２、３０ｋｇ／ｍ２、３１ｋｇ／ｍ２、３２ｋｇ／ｍ２、またはそれを超えるヒト成人男性および体型指数が少なくとも約２６ｋｇ／ｍ２、２７ｋｇ／ｍ２、２８ｋｇ／ｍ２、２９ｋｇ／ｍ２、３０ｋｇ／ｍ２、３１ｋｇ／ｍ２、３２ｋｇ／ｍ２、またはそれを超えるヒト成人女性、または（２）医師または看護師などの医療提供者（ｈｅａｌｔｈ  ｃａｒｅ  ｐｒｏｖｉｄｅｒ）によって評価された肥満または過体重をいう。例えば、ヒトの肥満の決定には、体脂肪の含有量および分布を考慮することができる。これは、体型指数の高い者には、脂肪または脂肪組織の代わりの筋肉組織量が高いか、腹部以外の身体の領域（例えば、臀部または骨盤）の体脂肪または脂肪がかなり高いために技術的に肥満とすることができない者もいるからである。肥満および体型指数については、例えば、Ｇ．Ａ．Ｃｏｌｄｉｔｚ，Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．Ｓｐｏｒｔｓ  Ｅｘｅｒｃ，３１（１１），Ｓｕｐｐｌ．，ｐｐ．Ｓ６６３−Ｓ６６７，１９９９，Ｆ．Ｊ．Ｎｉｅｔｏ−Ｇａｒｃｉａら、Ｅｐｉｄｅｍｉｏｌｏｇｙ，１（２）：１４６−１５２，１９９０，Ｒ．Ｈ．Ｅｃｋｅｌ，Ｃｉｒｃｕｌａｔｉｏｎ，９６：３２４８−３２５０，１９９９に記載されている。
【００７５】
いくつかの実施形態では、本発明の方法によって同定された化合物は、インビトロでヒト細胞または哺乳動物細胞中の１つ以上のミネラルコルチコイド受容体，プロゲステロン受容体、糖質コルチコイド受容体、アンドロゲン受容体、エストロゲン受容体−α、エストロゲン受容体−β、またはこれらの生体分子のいずれかの生物学的に活性な変異型を、典型的には、アッセイおよびインビトロアッセイで決定したところ、適切な陰性対照ヒト細胞または哺乳動物細胞と比較した場合に約１０％、約２０％、または約３０％を超えて有意に活性化しない。これらの活性の測定方法は、例えば、米国特許第５，２９８，４２９号に記載されている。１つの例示的法表では、試験化合物がホルモン受容体タンパク質またはその機能的に操作もしくは修飾された形態のための機能的リガンドであるかどうかを評価するためのアッセイは、（ａ）ホルモン受容体タンパク質またはその機能的に操作もしくは修飾された形態を発現する非内因性ＤＮＡおよびレポーター遺伝子に連結した操作ホルモン応答エレメントをコードするＤＮＡを含む細胞を培養する工程であって、ホルモン受容体タンパク質またはその機能的に操作もしくは修飾された形態のリガンドまたはモジュレータとして機能する能力の決定を追求すべき少なくとも１つの試験化合物の存在下で培養を行なう、培養工程、および（ｂ）細胞中のレポーター遺伝子の転写の証拠をアッセイする工程を含む。このアッセイを、典型的には、哺乳動物細胞（例えば、ＣＶ−１細胞またはＣＯＳ細胞）を使用して行なうであろう。レポーター遺伝子は、非内因性ＤＮＡがホルモン受容体タンパク質を発現するレポータープラスミド中に含まれ得るか、その機能的な修飾形態が発現プラスミドに含まれ、前記レポータープラスミドおよび発現プラスミドはＳＶ−４０の複製起点も含む。また、レポーター遺伝子をレポータープラスミドに含めることができ、ホルモン受容体タンパク質またはその機能的な修飾形態を発現する非内因性ＤＮＡを発現プラスミドに含めて、前記レポータープラスミドおよび発現プラスミドは選択マーカーも含む。例えば、エストロゲン受容体−β（ＥＲβ−ＵＡＳ−ｂｌａ  ＧｒｉｐＴｉｔｅ（商標）細胞ベースアッセイ、カタログ番号Ｋ１０９１、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）、エストロゲン受容体−α（ＥＲα−ＵＡＳ−ｂｌａ  ＧｒｉｐＴｉｔｅ（商標）２９３細胞ベースアッセイ、カタログ番号Ｋ１０９０、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）、アンドロゲン受容体（ＡＲ−ＵＡＳ−ｂｌａ  ＧｒｉｐＴｉｔｅ（商標）２９３ＭＳＲ細胞ベースアッセイ、カタログ番号Ｋ１０８２、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）、またはプロゲステロン受容体（プロゲステロン受容体−ＵＡＳ−ｂｌａ  ＨＥＫ２９３Ｔアッセイ、カタログ番号Ｋ１１０３、Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  Ｃｏｒｐ．）について記載のように、関連アッセイは、検出可能なレポーター遺伝子で安定にトランスフェクトされた細胞を使用することができる。
【００７６】
本発明の実施形態は、（ｉ）インビトロでヒト細胞または哺乳動物細胞中のＰＰＡＲ−α、ＰＰＡＲ−γ、およびＰＰＡＲ−δの１つ、２つ、または３つを、インビトロでの適切な陰性対照ヒト細胞または哺乳動物細胞と比較した場合に約３０％を超えて活性化せず、（ｉｉ）インビトロでの適切な陰性対照ヒト細胞または哺乳動物細胞と比較した場合にインビトロでのヒト細胞または哺乳動物細胞においてＮＦ−κＢの転写活性またはレベルを約２０〜８０％阻害するか減少させ、（ｉｉｉ）適切な陰性対照または正常対照と比較した場合、高血糖を減少させるか、高血糖の進行を遅延させるかその発症を遅延させるか、インスリン感受性を増大させるか、耐糖能障害を減少させるか、β−島細胞の数またはそのインスリン分泌能力の進行または喪失速度を遅延させるか、膵臓β−島細胞の数またはそのインスリン分泌能力を増加させるか、食事誘導性または食事関連肥満を罹患したｄｂ／ｄｂマウスまたは被験体の体重増加速度を遅延させるか、上昇したトリグリセリドレベルを減少させるか、上昇した総血中コレステロールレベルまたは血清コレステロールレベルを減少させるか、血中または血清中の正常または上昇したＬＤＬ、ＶＬＤＬ、アポＢ−１００、またはアポＢ−４８レベルを減少させるか、血中または血清中の正常または低レベルのＨＤＬまたはアポＡ１を増加させるか、血中または血清中の上昇したフィブリノゲンレベルを減少させ、そして（ｉｖ）必要に応じて、インビトロでのヒト細胞または哺乳動物細胞中の１つ以上の糖質コルチコイド受容体、ミネラルコルチコイド受容体、プロゲステロン受容体、アンドロゲン受容体、エストロゲン受容体−α、エストロゲン受容体−β、またはこれらの任意の生体分子の生物学的に活性な変異型を、インビトロでの適切な陰性対照ヒト細胞または哺乳動物細胞と比較して、約３０％を超えて活性化せず、そして（ｖ）インビトロで肝細胞または肝臓由来細胞中またはインビボで肝臓の細胞または組織から得た肝臓の細胞または組織中でホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（ＰＥＰＣＫ）または１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ（１１β−ＨＳＤ）、必要に応じて、１１β−ＨＳＤ１型または１１β−ＨＳＤ２型のレベルまたは活性またはＰＥＰＣＫまたは１１β−ＨＳＤをコードするｍＲＮＡレベルを必要に応じて阻害する化合物を選択する工程を含む、哺乳動物の代謝障害を治療または改善する可能性のある化合物の生物活性を同定するか特徴づける方法を含む。本方法により、ヒトまたは別の哺乳動物の代謝障害を治療または改善する可能性のある化合物を同定または特徴づけることが可能である。ＰＥＰＣＫ酵素は、細胞質ゾルまたはミトコンドリア起源であり得る。
【００７７】
骨喪失状態（ｂｏｎｅ  ｌｏｓｓ  ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ）。Ｆ１Ｃおよび１つ以上の賦形剤を含む組成物を使用して、本明細書中に記載の骨喪失または骨減少障害（例えば、骨粗鬆症の状態（原発性骨粗鬆症、閉経後または１型骨粗鬆症、退行期または２型骨粗鬆症、特発性骨粗鬆症、続発性骨粗鬆症（糖質コルチコイド関連骨喪失状態および外傷（１度、２度、または３度の熱傷、化学熱傷、または放射線熱傷など）に関連する骨喪失など）など）を処置するか、防止するか、発症を遅延させるか、進行を遅延させることができる。Ｆ１Ｃ治療により、骨喪失、骨密度、骨密度、および／または骨強度を改善することができる。
【００７８】
製剤（ｄｒｕｇ  ｐｒｏｄｕｃｔ）。いくつかの実施形態では、本発明は、炎症状態の治療用製剤を提供する。製剤は、典型的には、（ａ）例えば、経口投与または非経口投与に適切な固体または液体の処方物などの投薬形態の薬物を含む。薬物および／または添付文書のための包装またはラベルは、薬物の有効性、作用機構、意図する患者集団、投薬量、投薬計画、投与経路、薬物を使用して処置することができる生物学的損傷の毒性または損傷の重症度（これが知られている場合）に関する情報を有する。生物学的損傷が放射線被曝である場合、添付文書またはラベルは、製剤を使用することができるか承認されている線量または用量範囲に関する情報を含むことができる。製剤は、必要に応じて、患者が薬物の使用日時および使用方法または薬物の使用中または使用後に薬物使用者がどのような症状または薬物効果を経験したかを記録するためのダイアリーまたは使用説明書を含むことができる。これを使用して、薬物の有効性または副作用の第ＩＶ相分析または市販後分析に役立てることができる。製剤の他の実施形態は、本明細書中に記載の他の実施形態に記載の通りである。
【００７９】
製剤は、本明細書中で使用される場合、販売または医学的使用についての申請を調査または承認するための規制機関または規制当局（例えば、米国食品医薬品局、欧州医薬品庁、または欧州医薬品審査庁）によって市場取引または販売について調査および承認された製品を意味する。製剤の使用には、その市場取引または販売および販売または購入の検討の申し入れが含まれる。これらの活動は、典型的には、市場取引、販売、購入、または製品の取り扱いに影響を及ぼすか規定することができる規制認可規約を順守するであろう。製剤中の薬物は、新薬、後発薬、これらのいずれかの使用のための生物学的、医学的デバイスまたはプロトコールであり得る。製剤は、通常、米国食品医薬品局または欧州医薬品審査庁による米国または非米国新薬申請（新薬申請、生物学的製剤承認申請、または医療機器販売申請と略す）の市場取引許可に由来する。製剤の使用には、米国国防総省、米国エネルギー省、米国保健社会福祉省などの公的もしくは私的な購入者または私的な薬物購入者または販売業者への販売が含まれる。他の使用には、表示または承認された病状を処置するための薬物の使用、医師が承認した使用、または承認適応症外使用が含まれる。承認前製剤は、本発明の他の態様であり、本明細書中に記載の製剤と本質的に同一であるが、市場取引または市場取引承認前の法的調査のための薬物を調製するために使用することができる。
【００８０】
製剤によって同定された意図する患者集団は、排除集団を特定することもできる（存在する場合、患児または高齢患者などに適用することができる）。投薬量に関する情報は、典型的には、薬物の１日量を特定する一方で、投与計画は薬物の投与または摂取の頻度および期間を記載する。投与経路は、薬物使用に適切な１つ以上の経路を特定するが、典型的には、所与の処方物は、１つの投与経路のみについて承認されるであろう。包装またはラベルによって識別することができる投薬量、投与計画、および投与経路を、本明細書中の他の場所に記載している。
【００８１】
１つの実施形態では、製剤は、本明細書中に記載の炎症状態または別の状態の治療、防止、または改善のためであり、疾患または状態が診断されたか、そうでなければ認められた後に開始される連続した１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０日間またはそれを超えた日数の１日量が０．５ｍｇ、１ｍｇ、４ｍｇ、５ｍｇ、１０ｍｇ、２０ｍｇ、２５ｍｇ、５０ｍｇ、１００ｍｇ、１５０ｍｇ、１７５ｍｇ、２００ｍｇ、２２５ｍｇ、２５０ｍｇ、３００ｍｇ、３５０ｍｇ、４００ｍｇ、４５０ｍｇ、または５００ｍｇである式１の化合物の投与を記載した添付文書またはラベルと共に経口投与または非経口投与（例えば、筋肉内、皮下、または皮下への注射）のための１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれを超える賦形剤を用いて処方した式１の化合物などの化合物を含む処方物を含む。添付文書またはラベルが含むことができる情報には、薬物または治療計画に対する生物学的応答に関する情報が含まれる。情報には、１つ以上の（ａ）ヒトまたは哺乳動物（非ヒト霊長類など）における薬物の使用に関連する１つ以上の副作用または毒性、（ｂ）炎症または他の状態に及ぼすその影響、（ｃ）デキサメタゾンまたは他の糖質コルチコイドなどのさらなる治療薬の薬物との使用のためのプロトコールまたは説明、および（ｄ）最良または公知の治療上の利点を得るために薬物投与を開始すべき時間または期間の説明が含まれ得る。
【００８２】
いくつかの態様では、本発明は、（ｉ）インビトロでヒト細胞または哺乳動物細胞中の１つ以上の糖質コルチコイド受容体，アンドロゲン受容体、エストロゲン受容体−α、エストロゲン受容体−β、またはこれらの生体分子のいずれかの生物学的に活性な変異型を、インビトロでの適切な対照ヒト細胞または哺乳動物細胞と比較した場合に約３０％を超えて活性化または阻害せず、（ｉｉ）分子量が約１００〜１０００ダルトン、必要に応じては、分子量が約２５０〜８５０ダルトンであり、（ｉｉｉ）適切な陰性対照または正常対照と比較した場合、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋調節Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１０３＋調節Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１０３＋調節Ｔ細胞、またはＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ調節Ｔ細胞の数または活性を適切なアッセイにおいて２０％を超えて増加または減少させ、そして（ｉｖ）必要に応じて、インビトロでの適切な陰性対照ヒト細胞または哺乳動物細胞と比較した場合に、インビトロでのヒト細胞または哺乳動物細胞においてＮＦ−κＢの転写活性またはレベルを約２０〜８０％阻害するか減少させる化合物を選択する工程を含む、哺乳動物においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋調節Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１０３＋調節Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１０３＋調節Ｔ細胞、またはＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ調節Ｔ細胞の数または活性を検出可能に調節する可能性のある化合物を同定する方法を提供する。本質的に以下の実施例２０または２１に記載のように、式１の化合物および他の化合物を、これらの実施形態で使用することができる。
【００８３】
ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＴ細胞などの一定のＴ細胞小集団の活性または数を増加または減少させるインビトロまたはインビボ化合物は、自己免疫状態、癌、神経学的外傷、または虚血などの外傷後のニューロン喪失などの障害、Ｉ型糖尿病などの代謝性疾患、アテローム性動脈硬化症、自家移植における細胞、臓器、または組織の拒絶および移植片対宿主疾患をこれらの状態が存在するか起こり得る状況で処置するか発症または進行を遅延させるための候補である。治療を、創傷治癒の改善，再灌流障害、狭窄症、血管形成術後の再狭窄、心筋梗塞、または脳梗塞の治療のために使用することができる。実施形態は、分子量が約２，０００ダルトン未満、約１，０００ダルトン未満、または約５００ダルトン未満の化合物を含む。１つの化合物群の分子量は、約２８５または２９０〜約５００または６５０ダルトンである。Ｔｒｅｇ細胞応答は、適切な陰性対照と比較して、化合物で処置した被験体またはインビトロアッセイにおけるＴｒｅｇ細胞、典型的には、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ細胞またはＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＴ細胞の数の約５％、約１０％、約１５％、約２０％、約２５％、約３０％、約３５％、約４０％、約４５％、約５０％、約６０％、約７０％、約８０％、約１００％、約２００％、約４００％、約６００％、約１０００％、約２０００％、約５０００％、約１００００％またはそれを超える増加または減少として認められる。これらの変化は、循環血液中またはインビトロもしくはインビボでの細胞中のＴｒｅｇ細胞の数またはその活性の増加または減少として観察され得る。
【００８４】
Ｔ細胞プロフィールなどの小集団細胞プロフィールの分析方法を、種々の方法（フローサイトメトリー（ＦＡＣＳ）が含まれる）のうちのいずれかによって得ることができる（例えば、Ｌｅｖｙら、Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．３５：３２８，１９８５）。ＦＡＣＳ分析では、種々の小集団細胞に対するモノクローナル抗体は、細胞上に存在する表現型表面抗原に結合して識別する。これらのマーカーの存在を検出することができる市販の抗体が存在し、それにより、一般に、抗体を調製する必要はない。同一または密接に関連した抗原マーカーを識別する抗体は、類似の診断結果が得られると予想されるであろう。したがって、マーカー抗原を、これが結合する特定のモノクローナル抗体（例えば、ＣＤ４またはＣＤ２５）を参照して本明細書中または特許請求の範囲で指定する場合、かかる指定には、同定で異なるモノクローナル抗体を使用する場合でさえ、このマーカーが含まれる。目的の表現型マーカーには、種々の小集団細胞型の一般的マーカー（総Ｔ細胞についてはＣＤ３、Ｔヘルパー細胞／インデューサー細胞についてはＣＤ４、Ｔサプレッサー細胞／細胞傷害性細胞についてはＣＤ８、ＮＫ細胞についてはＣＤ１６／５６）、ＣＤ８発現小集団マーカー（Ｔサプレッサー細胞についてはＣＤ１１ｂ、活性化Ｔサプレッサー細胞／細胞傷害性細胞についてはＣＤ３８、活性化Ｔサプレッサー細胞／細胞傷害性細胞についてはＨＬＡ−ＤＲ、およびＣＤ５７など）、およびＣＤ４発現マーカー（Ｔヘルパー細胞／インデューサー細胞（Ｔｒｅｇ細胞が含まれる）についてはＣＤ２５およびＨＬＡ−ＤＲなど）が含まれる。
【００８５】
投与プロトコールまたは投与方法。本明細書中に開示の状態または症状のいずれかの治療では、式１の化合物を、状態または症状を罹患しているか感受性を示す被験体に連続的（毎日）または断続的に投与することができる。式１の化合物での本明細書中に開示の炎症状態または別の状態などの状態の治療では、断続的投与により、通常は不連続の投与に関連する望ましくない態様のいくつかを回避または改善することができる。かかる望ましくない態様には、患者または被験体の毎日行なう投与計画の順守の失敗、糖質コルチコイドなどの他の治療薬の投薬量の減少、および／または骨喪失または吸収などのその関連する望ましくない副作用または毒性が含まれる。
【００８６】
いくつかの実施形態では、典型的には、慢性状態のために、疾患または症状が明らかである限り、毎日投与し続けるであろう。他の実施形態では、１、２、３、４、５、６、７、８、９、または１０日間連続して毎日投与し、その後に、再度投与が必要になるまで投与しない。これらの実施形態は、典型的には、時折再発するかわからない急性状態の治療を含むであろう。慢性状態の治療は、典型的には、長期間にわたる連続した毎日の投与を含むであろう。
【００８７】
任意の連続的（毎日）または断続的投与計画または本明細書中に記載の疾患、状態、もしくは症状の治療では、式１の化合物を、１つ以上の適切な経路（例えば、経口、口腔内、舌下、局所、筋肉内、皮下、皮下、静脈内、皮内、またはエアゾール）によって投与することができる。
【００８８】
１日量は、通常、約０．０５ｍｇ／ｋｇ／日〜約２００ｍｇ／ｋｇ／日である。典型的な用量範囲は、約０．１〜約１００ｍｇ／ｋｇ／日（約０．２ｍｇ／ｋｇ／日、０．５ｍｇ／ｋｇ／日、約１ｍｇ／ｋｇ／日、約２ｍｇ／ｋｇ／日、約４ｍｇ／ｋｇ／日、約５ｍｇ／ｋｇ／日、約６ｍｇ／ｋｇ／日、約８ｍｇ／ｋｇ／日、約１０ｍｇ／ｋｇ／日、約２０ｍｇ／ｋｇ／日、約４０ｍｇ／ｋｇ／日、または約１００ｍｇ／ｋｇ／日が含まれる）である。より高い投薬量（例えば、約２５０ｍｇ／ｋｇ／日、約３００ｍｇ／ｋｇ／日、または約３５０ｍｇ／ｋｇ／日）を、例えば、動物への適用で利用することもできる。式１の化合物を、約２〜約５０ｍｇ／ｋｇ／日または約２〜４０ｍｇ／ｋｇ／日を使用して、経口または非経口投与によって投与することができる。かかる投与により、典型的には、式１の化合物の血清レベルが、約４ｎｇ／ｍＬまたは約８ｎｇ／ｍＬ〜約１２５ｎｇ／ｍＬまたは約２５０ｎｇ／ｍＬ（例えば、約１５ｎｇ／ｍＬ〜約１２０ｎｇ／ｍＬまたは約２０ｎｇ／ｍＬ〜約１００ｎｇ／ｍＬ）になるであろう。かかる血清レベルは一過性であり得（例えば、約３０分または約６０分〜約２時間または約８時間持続する）、血清レベルは化合物を投与した日またはデポー処方物についてはより後の時点で生じ得るであろう。
【００８９】
連続的な毎日の投与を通常使用して、本明細書中に記載の慢性状態を処置する。１日量を通常は単回用量で投与するが、１日量を２回または３回にさらに分割することができる。断続的投与プロトコールは、式１の化合物の１日おきまたは３日おきの適切な期間の投与を含む。血球欠損症を処置する場合、通常、被験体が放射線被曝などの短寿命骨髄機能廃絶事象を経験した日に投与を開始するであろう。より長い持続事象（例えば、癌化学療法）のために、式１の化合物の投与を、被験体への化学療法薬の投与から約１２時間後、約１日後、約２日後、または約３日後に開始することができる。毎日の投与を、所定の期間継続することができ、その後、固定した期間または種々の期間投与しない。これらの実施形態では、多発性硬化症、関節炎、喘息、大腸炎、またはクローン病の再燃などの疾患の再燃を、３〜１４日間または５〜１０日間の連続投与およびその後の別の再燃が生じるか開始されるまでさらに処置しないことによって処置することができる。
【００９０】
病態および臨床症状。本明細書中に記載の化合物および方法は、本明細書中に記載の状態および／または１つ以上のその症状を処置するか、改善するか、防止するか、進行を遅延させるのに有用である。かかる用途には、骨吸収の阻害、化学療法（例えば、抗炎症性糖質コルチコイド）に関連するかこれに起因する望ましくない副作用の減少、骨粗鬆症および骨折の治療、防止、または遅延、血管再狭窄の阻害、ならびに糖尿病性網膜症、黄斑変性、炎症、＊＊１＊＊、望ましくない炎症状態または症状（肺炎状態（例えば、嚢胞性線維症、急性または慢性の喘息、気管支喘息、アトピー性喘息、ＡＲＤＳ、またはＣＯＰＤ）、または自己免疫疾患（変形性関節症、関節リウマチなど）、膵炎（自己免疫性膵炎など）、全身性エリテマトーデス、エリテマトーデス関連組織炎症、エリテマトーデス関連関節炎、エリテマトーデス関連皮膚変化、エリテマトーデス関連血液異常、エリテマトーデス関連腎臓障害、エリテマトーデス関連心臓疾患または肺疾患、および望ましくないエリテマトーデス関連神経精神変化または神経変化など）の治療が含まれる。
【００９１】
処置することができる状態の症状には、発熱、関節痛（関節痛）、関節炎、および漿膜炎（胸膜炎または心包炎）が含まれる。他の薬剤の投与を、本発明で使用することもできる。したがって、疼痛を、非ステロイド性抗炎症薬（アスピリン、サリシレート（ｓａｌｉｓｙｌａｔｅ）、イブプロフェン、ナプロキセン、クリノリル、オキサプロジン、およびトルメチンなど）を使用して処置することができる。全身性狼瘡（ｓｙｓｔｅｍｉｃ  ｌｕｐｕｓ）の皮膚の特徴を、抗マラリア薬（ヒドロキシクロロキン、クロロキン、およびキナクリンなど）で処置することができる。トレチノインおよびエトレチネートなどのレチノイドを本明細書中に記載の化合物と組み合わせて使用して、皮膚症状を処置することもできる。臓器傷害を、通常、経口または静脈内に投与されるコルチコステロイドで処置することができる。使用することができるコルチコステロイドには、ヒドロコルチゾン（コルチゾール）、コルチコステロン、アルドステロン、ＡＣＴＨ、トリアムシノロンおよび誘導体（トリアムシノロンジアセテート、トリアムシノロンヘキサアセトニド、およびトリアムシノロンアセトニドなど）、ベタメタゾンおよび誘導体（ベタメタゾンジプロピオネート、ベタメタゾンベンゾエート、リン酸ベタメタゾンナトリウム、ベタメタゾンアセテート、およびベタメタゾンバレレートなど）、フルニソリド、プレドニゾンおよびその誘導体、フルオシノロンおよび誘導体（フルオシノロンアセトニドなど）、ジフロラゾンおよび誘導体（ジフロラゾンジアセテートなど）、ハルシノニド、デキサメタゾンおよび誘導体（デキサメタゾンジプロピオネートおよびデキサメタゾンバレレートなど）、デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｉｍｅｔａｓｏｎｅ）（デスオキシメタゾン（ｄｅｓｏｘｙｍｅｔｈａｓｏｎ））、ジフルコルトロンおよび誘導体（ジフルコルトロンバレレートなど）、フルクロロンアセトニド、フルオシノニド、フルオコルトロン、フルプレドニデン、フルランドレノリド、クロベタゾール、クロベタゾンおよび誘導体（クロベタゾンブチレートなど）、アルクロメタゾン、フルメタゾン、およびフルオコルトロンが含まれる。
【００９２】
コルチコステロイドの経口投与が不十分である場合、静脈内メチルプレドニゾロンおよび療法（高用量）を使用して、ループス腎炎および他の重篤な非腎臓発症（溶血性貧血、中枢神経系の炎症（脳炎）、低血小板数、および重症心胸膜炎など）を処置することができる。
【００９３】
式１の化合物を使用して、骨粗鬆症または骨折を処置するか、防止するか、進行を遅延させることができる。被験体の治療により、骨が強化されそして／または骨量または骨無機質の喪失が軽減し、それにより、骨折耐性を増加することができる。本明細書中で使用される場合、「治療」条件（本明細書中に記載の条件など）は、治療により、状態を改善するか、防止するか、または進行を遅延させ、そして／またはかかる状態の１つ以上の症状を改善するか、防止するか、進行を遅延させることができることを意味する。
【００９４】
式１の化合物を使用して、代謝性疾患（Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、高血糖、インスリン抵抗性、耐糖能障害、高コレステロール血症、高トリグリセリド血症、高リポタンパク質血症、脂肪異栄養症、Ｘ症候群、およびアテローム性動脈硬化症など）を処置するか、防止するか、進行を遅延するか、発症を遅延することができる。
【００９５】
処方物および処方物調製のための組成物。本発明の実施形態は、本明細書中または本開示の他の場所に記載の処方物を含む。式１の化合物を単独で投与することが可能であるが、通常は処方物にする。動物およびヒトの両方で使用するための処方物は、１つ以上の賦形剤および必要に応じて１つ以上のさらなる治療成分と共に少なくとも１つの式１の化合物を含む。
【００９６】
処方物は、１つ、２つ、３つ、４つ、またはそれを超える薬学的に許容可能な賦形剤または担体を含む組成物を含む。組成物を使用して、ヒトまたは動物への使用に適切な処方物を調製する。処方物に適切な投与経路には、経口、直腸、鼻腔内、局所（口腔内および舌下が含まれる）、膣内、直腸、および非経口（皮下、筋肉内、静脈内、皮内、髄腔内、眼内、および硬膜外が含まれる）が含まれる。一般に、水溶液および非水性溶液またはクリームの処方物を、非経口、経口、または局所経路によって送達する。他の実施形態（本発明の断続的投与方法など）では、式１の化合物は、本明細書中に開示の任意の経路（例えば、経口、局所、口腔内、舌下、非経口、吸入エアゾール、またはデポー（皮下デポー、腹腔内デポー、または筋肉内デポーなど））による投与に適切な水性または非水性液体処方物または固体処方物として提供することができる。好ましい経路は、例えば、被験体の病的状態または体重、式１の化合物を使用した療法または使用されるか環境に適切な他の療法に対する被験体の応答によって変化し得ると認識されるであろう。
【００９７】
処方物には、上記投与経路に適切な処方物が含まれる。処方物は、単位投薬形態で都合よく提供することができ、薬学分野で公知の任意の方法によって調製することができる。技術、賦形剤、および処方物は、一般に、例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．，Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ  １９８５，１７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｎｅｍａら、ＰＤＡ  Ｊ．Ｐｈａｒｍ．Ｓｃｉ．Ｔｅｃｈ．１９９７  ５１：１６６−１７１，Ｇ．Ｃｏｌｅ，ら、ｅｄｉｔｏｒｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｃｏａｔｉｎｇ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，１９９５，Ｔａｙｌｏｒ  ＆  Ｆｒａｎｃｉｓ，ＩＳＢＮ  ０  １３６６２８９１５，Ｈ．Ａ．Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ，ら、ｅｄｉｔｏｒｓ，Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ，１９９２  ２ｎｄ  ｒｅｖｉｓｅｄ  ｅｄｉｔｉｏｎ，ｖｏｌｕｍｅｓ  １  ａｎｄ  ２，Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ，ＩＳＢＮ  ０８２４７９３８７０，Ｊ．Ｔ．Ｃａｒｓｔｅｎｓｅｎ．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｐｒｅｆｏｒｍｕｌａｔｉｏｎ，１９９８，ｐａｇｅｓ  １−３０６，Ｔｅｃｈｎｏｍｉｃ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．ＩＳＢＮ  １５６６７６６９０７に見出される。処方物のための例示的賦形剤には、乳化蝋、没食子酸プロピル、クエン酸、乳酸、ポリソルベート８０、塩化ナトリウム、パルミチン酸イソプロピル、グリセリン、白色ワセリン、および本明細書中に開示の他の賦形剤が含まれる。
【００９８】
本明細書中に開示の経路による投与に適切な処方物または処方物を作製するために使用される本明細書中に開示の組成物の平均粒子サイズは、必要に応じて、約０．０１〜約５００ミクロン、約０．１〜約１００ミクロン、または約０．５〜約７５ミクロンの範囲である。平均粒子サイズには、０．０１ミクロンと５００ミクロンとの間の範囲、０．０５ミクロン、０．１ミクロン、または他の増加量（ｉｎｃｒｅｍｅｎｔｓ）（例えば、約０．０５、０．１、０．５、１、１．５、２．０、２．５、３．０、３．５、４．０、４．５、５．０、５．５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７５、８５、１００、１２０ミクロンなどの平均粒子サイズ）が含まれる。式１の化合物または式１の化合物を含む組成物を、処方物を作製するための中間体として使用する場合、これらは、１つ、２つ、３つ、またはそれを超えるこれらの平均粒子サイズまたはサイズ範囲を含むことができる。本明細書中に開示され、式１の化合物（および必要に応じて１つ以上の賦形剤）を含む組成物または処方物のいずれかの調製では、必要に応じて化合物または組成物を磨砕するか、篩にかけるか、そうでなければ粒状にして、所望の粒子サイズを得ることができる。
【００９９】
いくつかの実施形態では、使用される式１の化合物を、明らかな男性化の欠如によって特徴づける。これらの実施形態では、式１の化合物を、適切な陽性対照および／または陰性対照を使用した適切なアッセイで測定したところ、アンドロゲン（テストステロン、テストステロンプロプリオネート、ジヒドロテストステロン、またはジヒドロテストステロンプロプリオネートなど）の男性化の約３０％以下、約２０％以下、約１０％以下、または約５％以下であることによって特徴づける。種々の化合物の男性化に適切なアッセイは、例えば、Ｊ．Ｒ．Ｂｒｏｏｋｓ，ら、Ｐｒｏｓｔａｔｅ  １９９１，１８：２１５−２２７，Ｍ．Ｇｅｒｒｉｔｙら、Ｉｎｔ．Ｊ．Ａｎｄｒｏｌ．１９８１  ４：４９４−５０４，Ｓ．Ｓ．Ｒａｏら、Ｉｎｄｉａｎ  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．１９６９  ７：２０−２２，Ｏ．Ｓｕｎａｍｉら、Ｊ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｓｃｉ．２０００  ２５：４０３−４１５，Ｇ．Ｈ．Ｄｅｃｋｅｒｓら、Ｊ．Ｓｔｅｒｏｉｄ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２０００  ７４：８３−９２に記載されている。式１の化合物の男性化を、必要に応じて、１つ以上のこれらのアッセイまたは任意の他のアッセイに記載または本質的に記載のように決定する。
【０１００】
したがって、１つのかかる実施形態は、有効量の式１の化合物を必要とする被験体に投与するか、有効量の式１の化合物を被験体の組織に送達させる工程を含み、例えば、上記引例に記載の適切なアッセイで測定したところ、式１の化合物が、アンドロゲン（テストステロン、テストステロンプロプリオネート、ジヒドロテストステロン、またはジヒドロテストステロンプロプリオネートなど）の男性化の約３０％以下、約２０％以下、約１０％以下、または約５％以下である、本明細書中に記載の状態を処置する方法を含む。かかる方法の実施では、被験体または哺乳動物（例えば、げっ歯類、ヒト、または霊長類）を、必要に応じて、疾患、状態、または症状の改善、防止、または重症度の軽減についてモニタリングする。かかるモニタリングは、必要に応じて、例えば、本明細書中または引用文献に記載の１つ以上のサイトカイン（例えば、ＴＮＦα、ＩＬ−１３、ＩＬ−１β）、ＷＢＣ、血小板、顆粒球、好中球、ＲＢＣ、ＮＫ細胞、マクロファージ、または他の免疫細胞型の適切な時間（例えば、治療開始前のベースラインおよび式１の化合物での治療後の種々の時点（式１の化合物の治療終了後から約２〜４５日）での循環中での測定を含むことができる。
【０１０１】
上記のように、いくつかの実施形態では、式１の化合物での治療を、コルチコステロイドまたは糖質コルチコイドと組み合わせる。コルチコステロイドを多数の臨床的症状で使用して、例えば、急性または慢性の関節リウマチ、急性または慢性の変形性関節症、大腸炎状態（潰瘍性大腸炎など）、急性または慢性の喘息、気管支喘息、乾癬、全身性エリテマトーデス、肝炎、肺線維症、Ｉ型糖尿病、ＩＩ型糖尿病、または悪液質などの状態の炎症または免疫反応の再燃またはエピソードの強度または頻度を減少させる。しかしながら、多数のコルチコステロイドは、重大な副作用または毒性を有し、その使用または有効性が制限され得る。式１の化合物は、コルチコステロイドの全ての所望の治療能力を無効にすることなくかかる副作用または毒性を中和するのに有用である。これにより、副作用または毒性を強化するかコルチコステロイドの投薬量を減少させることなく、コルチコステロイドを連続的に使用することが可能であるか、投薬量を改変することが可能である（例えば、投薬量を増加する）。治療、防止、改善、または減少させることができる副作用または毒性には、１つ以上の骨喪失、骨成長の減少，骨吸収の増強、骨粗鬆症、免疫抑制、完成に対する感受性の増加、気分または人格の変化、鬱病、頭痛、めまい、高血圧または高血圧症、筋力低下、疲労、嘔気、倦怠、消化性潰瘍、膵炎、菲薄皮膚または脆弱な皮膚、幼児または前成人期の被験体の成長抑制、血栓塞栓症、白内障、および浮腫が含まれる。式１の化合物の投薬量、投与経路、および投与プロトコールは、本質的に本明細書中に記載の通りであろう。約０．５〜約２０ｍｇ／ｋｇ／日の例示的用量の式１の化合物を期間中に投与し、その間にコルチコステロイドを、必要に応じて、コルチコステロイド投与終了から約１週間〜約６ヶ月以上の期間にわたって投与する。コルチコステロイドを、本質的に、公知の投薬量、投与経路、および投与プロトコールを使用して投与する（例えば、Ｐｈｙｓｉｃｉａｎｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ  ５４ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，２０００，ｐａｇｅｓ  ３２３−２７８１，ＩＳＢＮ  １−５６３６３−３３０−２，Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｅｃｏｎｏｍｉｃｓ  Ｃｏ．，Ｉｎｃ．，Ｍｏｎｔｖａｌｅ，ＮＪを参照のこと）。しかし、コルチコステロイドの投薬量を、必要に応じて、調整することができる（例えば、コルチコステロイドに関連する対応する全ての副作用または毒性が増加しない通常の投薬量の約１０％〜約３００％超の増加）。かかる増加を、十分な期間にわたって被験体の臨床症状に応じて漸増させるであろう（例えば、コルチコステロイドの１日量を、約２週間から１年間にわたって約１０％〜約２０％から最大約３００％まで増加させる）。
【０１０２】
治療方法を使用して、急性外傷（心筋梗塞など）、出血（脳出血または卒中）、骨折、骨粗鬆症、または過剰または望ましくない骨吸収または骨喪失を治療、防止、または改善することができる。治療を使用して、損傷が存在する条件下で（例えば、化学熱傷もしくは熱傷、変形性関節症、関節リウマチ、肝硬変、骨粗鬆症、骨折、心筋梗塞、卒中、または頭部外傷）、皮膚、粘膜、軟骨、肝臓、心臓の組織、骨、またはＣＮＳもしくは神経の組織の損傷または傷害の修復を容易にすることができる。治療を使用して、療法（例えば、狼瘡状態または炎症性腸疾患、クローン病、急性または慢性の大腸炎、腎臓障害（急性または慢性の腎不全など）、または自己免疫性腎損傷を罹患した患者における糖質コルチコイド療法）に起因する骨喪失を軽減することもできる。
【０１０３】
以下の実施形態は、本発明の１つ以上の態様を記載する。
【０１０４】
１．生物力学化合物を同定する、または特徴づける方法であって、急性刺激または生物学的損傷に対する検出可能な応答を誘発する急性刺激または生物学的損傷への被験体の曝露後に被験体における試験化合物の生物学的応答をインビボで測定する工程を含み、該試験化合物は、（ｉ）急性応答が最大または最大付近であるか、（ｉｉ）急性応答が長期間の急性生物学的応答で増加する時間または期間で刺激または生物学的損傷に対する急性生物学的応答のメディエータの好ましい治療応答を誘発し、時間（ｉ）または（ｉｉ）での好ましい治療応答は、１つ、２つ、３つ、またはそれを超えるより早いかより遅い時間または期間での急性生物学的応答のメディエータに及ぼす影響が異なり、より早いかより遅い時間または期間でのかかる影響は、同一または本質的に同一のより早いかより遅い時間または期間での適切なビヒクルまたは偽薬対照と比較した場合の急性生物学的応答のメディエータのレベルまたは活性の約５０％未満の増加または減少であり、それにより、急性生物学的応答のメディエータに対する好ましい治療応答および１つ、２つ、３つ、またはそれを超えるより早いかより遅い時間または期間での急性生物学的応答のメディエータに及ぼす影響が時間（ｉ）または（ｉｉ）で異なる好ましい治療応答を誘発する化合物を、生体力学化合物と同定する方法。
【０１０５】
２．インビトロアッセイで、試験化合物が急性生物学的応答のメディエータの活性またはレベルを約２５％〜約７５％調整するかどうかを決定するためのプロトコールを実施する工程をさらに含み、必要に応じて、糖質コルチコイド受容体の適切な参照の活性化因子またはアンタゴニストと比較した場合、試験化合物が糖質コルチコイド受容体を、約２０％を超えて活性化または拮抗しない、実施形態１の方法。
【０１０６】
３．急性刺激または生物学的損傷が、十分な量の電離放射線または炎症誘発性シグナル、化合物、または組成物への被験体の曝露であり、必要に応じて、炎症誘発性シグナル、化合物、または組成物が細菌ＬＰＳまたはＴＮＦαであり、そして／または必要に応じて、急性生物学的応答のメディエータがＮＦ−κＢまたはＩκＢである、実施形態１または２の方法。
【０１０７】
４．急性刺激または生物学的損傷が、十分な数の薬物処置マウスおよび十分な数のビヒクル対照マウスへの十分な細菌ＬＰＳの投与、ならびに、（ｉ）腹腔内注射による細菌ＬＰＳの投与から必要に応じて約１．５時間後に急性応答が最大または最大付近である場合、および（ｉｉ）十分な細菌ＬＰＳの投与前および／または投与後の１つまたは２つの他の時点（必要に応じて、十分な細菌ＬＰＳの投与前の一方の時点および急性応答が最大または最大付近となった後の時点、必要に応じて、腹腔内注射による細菌ＬＰＳの投与から約２．０時間後または２．５時間後）の急性生物学的応答のメディエータに及ぼす試験化合物の影響の測定であり、ここで、必要に応じて、急性生物学的応答のメディエータがＮＦ−κＢまたはＩκＢである、実施形態１、２、または３の方法。
【０１０８】
５．十分な細菌ＬＰＳの投与を、実施例９に記載の方法またはその適切な変形形態に本質的に従って行い、必要に応じて、化合物が急性生物学的応答のメディエータのレベルまたは活性を部分的に調節する能力を、実施例７に記載の方法またはその適切な変形形態に本質的に従って達成する、実施形態４の方法。
【０１０９】
６．試験化合物の相対的効力または有効性を評価するために生物力学薬の陽性対照、必要に応じて１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールを含める工程、必要に応じて、試験化合物の相対的効力または有効性を評価するために生物静力学薬対照を含める工程を含む、実施形態１、２、３、４、または５の方法。
【０１１０】
７．有効性、作用機構、または臨床用途の情報の少なくとも一部を、実施形態１、２、３、４、または５の方法を含む特徴づけ方法から得た、薬物の有効性、作用機構、または臨床用途についての情報を含む添付文書またはラベルと共に投薬形態の薬物および薬物のための包装を含む製剤または承認前製剤。
【０１１１】
８．有効性、作用機構、または臨床用途の情報の少なくとも一部を、（ａ）細胞を十分な量のＮＦ−κＢ活性の活性化因子とインビトロで十分な時間接触させる工程であって、細胞は、細胞中のＮＦ−κＢのレベルまたは活性の検出可能な増加によってＮＦ−κＢの活性化因子に応答することができる、接触工程、（ｂ）細胞を十分な量の薬物とインビトロで十分な時間接触させる工程であって、薬物は、適切な対照と比較してＮＦ−κＢ活性の活性化を検出可能に阻害する、接触工程、および（ｃ）必要に応じて、薬物のＮＦ−κＢ活性化を阻害する能力を参照化合物と比較する工程であって、参照化合物は、特徴づけ方法においてＮＦ−κＢの活性化を約２５％〜約７５％検出可能に阻害する能力を有する本明細書中に記載の式１の化合物であり、薬物は、特徴づけ方法においてＮＦ−κＢ活性化を約２５％〜約７５％阻害し、必要に応じて、参照化合物または薬物は、糖質コルチコイド受容体に検出可能または有意に直接結合しないか、必要に応じて、参照化合物または薬物は、糖質コルチコイド受容体を検出可能または有意に刺激せず、必要に応じて、薬物は、適切なアゴニスト対照と比較して、糖質コルチコイド受容体を、約２０％を超えて刺激しない、比較工程を含む特徴づけ方法から得た、薬物の有効性、作用機構、または臨床用途についての情報を含む添付文書またはラベルと共に投薬形態の薬物および薬物のための包装を含む製剤または承認前製剤。
【０１１２】
９．投薬形態が、経口、非経口、局所、または吸入のための処方物を含む、実施形態７または８の製剤。
【０１１３】
１０．参照化合物または薬物が、特徴づけ方法において、ＮＦ−κＢの活性化を約３５％〜約７０％または約４０％〜約６５％阻害する、実施形態８または９の製剤。
【０１１４】
１１．細胞中のＮＦ−κＢが、１つ、２つ、３つ、またはそれを超えるＴＮＦ−α、ＴＮＦ−β、ＴＧＦ−β、ＩＬ−１、上皮成長因子、細菌ＬＰＳ、細菌ペプチドグリカン、酵母ザイモサン、細菌リポタンパク質、細菌またはウイルスの抗原または遺伝子産物、紫外線照射、加熱または温度増加、リンホカインまたはオキシダントフリーラジカル、またはＨ２Ｏ２によって活性化される、実施形態８、９、または１０の製剤。
【０１１５】
１２．参照化合物または薬物が、適切な結合アッセイにおいて、１０μＭ超のｋｄで糖質コルチコイド受容体に直接結合するか、参照化合物または薬物が、糖質コルチコイド受容体媒介遺伝子発現の活性化または増加を検出するのに適切なアッセイにおいて、約１０μＭ以上の濃度で糖質コルチコイド受容体を検出可能に刺激しない、実施形態８、９、１０、または１１の製剤。
【０１１６】
１３．インビトロでの細胞が、ヒトＴＨＰ−１細胞、ラットＲＡＷ細胞、マクロファージ、単球、Ｔ−リンパ球、Ｂ−リンパ球、樹状細胞、グリア細胞、Ｋｕｐｆｅｒ細胞、肝細胞、好中球、白血球、および全血由来の細胞からなる群から必要に応じて選択される哺乳動物、げっ歯類、またはヒトの細胞である、実施形態８、９、１０、１１、または１２の製剤。
【０１１７】
１４．薬物の有効性、作用機構、または臨床用途についての情報が、製剤の商業的利用または市場取引を調査または承認する権限を有する規制機関または調査団体への提出物中に含まれる、実施形態７または８の製剤。
【０１１８】
１５．哺乳動物の炎症状態または自己免疫疾患を処置する方法であって、実施形態１、２、３、４、５、または６の方法によって同定した有効量の生物力学化合物を被験体に投与するか被験体の組織に送達させる工程を含み、正の生物力学化合物を標準試料として使用するか、生物力学化合物が、インビトロでの適切なアッセイにおいて急性生物学的応答のメディエータを部分的に阻害し、適切なインビトロアッセイは、実施例７の方法またはその適切な変形形態に本質的に従う方法。
【０１１９】
１６．以下の構造：
【０１２０】
【化４】
2009534427.tif 000003
（式中、
一方のＲ１は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ１は、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルであり；
一方のＲ２は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ２は、−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルであり；
一方のＲ３は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ３は、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、Ｃ１−８エーテル、または必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり；
一方のＲ４は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ４は、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルであり；
Ｒ５は、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、または−ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒ６は、−Ｈ、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、または−ＣＨ２ＯＨであり；
一方のＲ７は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ７は、−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルであり；
Ｒ１０は、−Ｈまたはハロゲンであり、
一方のＲ１１は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ１１は、−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、Ｃ１−８エーテル、または必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルである）を有する精製化合物。
【０１２１】
１７．１つ、２つ、または３つのＲ２、Ｒ７、またはＲ１１は−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、Ｃ１−８エーテル、＝Ｏ、または＝ＮＯＨである、実施形態１６に記載の精製化合物。
【０１２２】
１８．１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７α，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，１１β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，１１β，１６α，１７β−テトラオール、３β，１１β，１６β，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，１１β，１６β，１７β−テトラオール、あるいはこれらの化合物のいずれかのＣ２−４モノエステルまたはＣ２−４ジエステルアナログから選択され、必要に応じて、（１）Ｃ２−４モノエステルが３位または１７位でアセテートまたはプロピオネートであるか、（２）Ｃ２−４ジエステルが３位および１７位でアセテートまたはプロピオネートである、実施形態１７に記載の精製化合物。
【０１２３】
１９．化合物が、（ａ）少なくとも純度８０％、少なくとも純度９５％、または少なくとも純度９８％の粉末または顆粒、または（ｂ）少なくとも純度８０％、少なくとも純度９５％、または少なくとも純度９８％の溶液または懸濁液である、実施形態１７または１８に記載の精製化合物。これらの化合物には、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，１１β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオールおよびこれらの化合物のエピマーが含まれ、１つまたは２つのヒドロキシルの配置が、α−からβ−またはβ−からα−に変化する（例えば、１７β−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７α−トリオール、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７α−テトラオール、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３α，７β，１７β−トリオール、またはアンドロスタ−５−エン−３α，４β，１６α，１７β−テトラオール）。
【０１２４】
２０．化合物の純度が、約８０％、約８５％、約９０％、約９５％、約９７％、約９８％〜約９９．５％、または約９９．９％であり、必要に応じて、化合物は、粉末または顆粒の形態であり、必要に応じて、粉末の平均粒子サイズは、光散乱などの適切なアッセイで測定したところ、約５０ｎｍまたは約１００ｎｍ〜約５μｍ、約１０μｍ、または約２５μｍである、実施形態１７、１８、または１９に記載の精製化合物。
【０１２５】
２１．哺乳動物においてＣＤ４＋ＣＤ２５＋調節Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１０３＋調節Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１０３＋調節Ｔ細胞、またはＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ調節Ｔ細胞の数または活性を検出可能に調節する可能性のある化合物を同定する方法であって、（ｉ）インビトロでヒト細胞または哺乳動物細胞中の１つ以上の糖質コルチコイド受容体，アンドロゲン受容体、エストロゲン受容体−α、エストロゲン受容体−β、またはこれらの生体分子のいずれかの生物学的に活性な変異型を、インビトロでの適切な対照ヒト細胞または哺乳動物細胞と比較した場合に約３０％を超えて活性化または阻害せず、（ｉｉ）分子量が約１００〜１０００ダルトン、必要に応じては、分子量が約２５０〜８５０ダルトンであり、（ｉｉｉ）適切な陰性対照または正常対照と比較した場合、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋調節Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１０３＋調節Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１０３＋調節Ｔ細胞、またはＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ調節Ｔ細胞の数または活性を適切なアッセイにおいて２０％を超えて増加または減少させ、そして（ｉｖ）必要に応じて、インビトロでの適切な陰性対照ヒト細胞または哺乳動物細胞と比較した場合に、インビトロでのヒト細胞または哺乳動物細胞においてＮＦ−κＢの転写活性またはレベルを約２０〜８０％阻害するか減少させる化合物を選択し、それにより、化合物が同定される工程を含む方法。
【０１２６】
２２．哺乳動物がげっ歯類またはヒトである、実施形態２１の方法。
【０１２７】
２３．ＣＤ４＋ＣＤ２５＋調節Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１０３＋調節Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１０３＋調節Ｔ細胞、またはＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ調節Ｔ細胞の数または活性を、１つ、２つ、または３つの（ａ）実施例２０の方法またはその適切な変形形態、（ｂ）実施例２１の方法またはその適切な変形形態、または（ｃ）本明細書中に引用した参考文献中の方法またはその適切な変形形態を含むプロトコールによって決定し、適切な変形形態により、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋調節Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１０３＋調節Ｔ細胞、ＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈＣＤ１０３＋調節Ｔ細胞、またはＣＤ４＋ＣＤ２５ｈｉｇｈ調節Ｔ細胞の数または活性を評価することを可能にする、実施形態２１または２２の方法。
【０１２８】
２４．化合物が、必要に応じて、関節炎状態（変形性関節症（原発性または続発性変形性関節症）、関節リウマチ，脊椎炎（強直性脊椎炎）に関連する関節炎など）、多発性硬化症、アルツハイマー病、腱滑膜炎、狼瘡状態（全身性エリテマトーデスまたは円板状エリテマトーデスなど）、腱炎、滑液包炎，肺炎状態（喘息、気腫、慢性閉塞性肺疾患、肺線維症、嚢胞性線維症、急性成人呼吸急迫症候群、慢性気管支炎、急性気管支炎、細気管支炎、線維閉塞性細気管支炎、器質化肺炎を伴う閉塞性細気管支炎など）である自己免疫疾患または望ましくない炎症状態の治療または予防のためのものである、実施形態２１、２２、２３の方法。化合物は、本明細書中に記載の式１の化合物であり得る。
【０１２９】
これらの実施形態の変形形態および改変ならびにこの開示の他の部分は、本明細書の読後に当業者に明らかであろう。かかる変形形態および改変は、本発明の範囲内である。本明細書中に引用した全ての引例または参考文献は、ここでまたはこの段落に続くさらなる段落でその全体が本明細書中に参考により組み込まれる。
【実施例】
【０１３０】
以下の実施例は、本発明をさらに例証し、決して本発明を制限することを意図しない。
（実施例１）
実施例１．肺炎の治療。（Ｄ．Ａｕｃｉら、Ａｎｎ．Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．１０５１：７３０−７４２  ２００５、新規に引用）に本質的に記載のように、３つの化合物３β，１６α−ジヒドロキシ−１７−オキソアンドロスタン、３α，１６β，１７β−トリヒドロキシアンドロスタン、および３α，１６α，１７α−トリヒドロキシアンドロスタンを使用して、マウスの炎症を処置した。５〜８週齢のＣＤ１雄マウス（Ｃｈａｒｌｅｓ  Ｒｉｖｅｒ，Ｃａｌｃｏ，Ｉｔａｌｙ）を、研究に使用した。動物を、制御環境下に収容し、標準的なげっ歯類用固形飼料および水を与えた。動物のケアは、適用可能な動物愛護に関する規則を順守した。マウスを、以下の群の１つに割り当てた：（１）２％カラギーナン−λを含む生理食塩水で処置したマウス（カラギーナン−λ処置対照群），（２）カラギーナン−λ投与の２４時間前および１時間前に皮下（ｓ．ｃ．）注射によって０．１ｍｇ、０．０１ｍｇ、または０．００１ｍｇの３β，１６α−ジヒドロキシ−１７−オキソアンドロスタンで処置したマウス、（３）カラギーナンの２４時間および１時間前にｓ．ｃ．注射によって０．１ｍｇ、０．０１ｍｇ、または０．００１ｍｇの３α，１６α，１７α−トリヒドロキシアンドロスタンで処置したマウス、（４）カラギーナン−λ投与の２４時間前および１時間前にｓ．ｃ．注射によって０．１ｍｇ、０．０１ｍｇ、または０．００１ｍｇの３α，１６β，１７β−トリヒドロキシアンドロスタンで処置したマウス、（５）カラギーナン−λ投与の２４時間前および１時間前にｓ．ｃ．にてビヒクル（０．１％カルボキシメチルセルロース、０．９％生理食塩水、２％ｔｗｅｅｎ８０、０．０５％フェノール）で処置したマウス、（６）カラギーナン−λ投与の２４時間前および１時間前に腹腔内ボーラスとしてウサギ抗マウスポリクローナル抗ＴＮＦ−α抗体（２００μｇ）で処置したマウス（陽性対照群）、および（７）カラギーナン−λで処置しなかった偽操作マウス。各群は、１０匹のマウスからなる。全処置を、最終体積１００μＬで与えた。肺（胸膜腔）炎を以下のように誘導した。マウスをイソフルランで麻酔し、左第６肋間隙の高さで皮膚を切開した。下層にある筋肉を切り裂き、０．１ｍＬ生理食塩水（対照）または２％λ−カラギーナンを含む０．１ｍＬ生理食塩水のいずれかを胸膜腔に注射した。カラギーナン−λは、炎症の強力な誘発因子であり、本プロトコールにおいて胸膜腔中の流動物および好中球の蓄積によって炎症が現れる。縫合糸で切開部を閉じ、動物を回復させた。
【０１３１】
カラギーナン−λ注射から４時間後、動物を、ＣＯ２への曝露によって安楽死させた。胸部を慎重に開き、胸膜腔を、ヘパリン（５Ｕ／ｍＬ）およびインドメタシン（１０μｇ／ｍＬ）を含む１ｍＬの生理食塩水でリンスした。吸引によって滲出液および洗浄液を取り出し、総体積を測定した。血液で汚染した滲出液を破棄した。滲出液の量を、回収した総胸膜腔体積から注射した１ｍＬを引くことによって計算した。滲出液中の好中球を、リン酸緩衝化生理食塩水に懸濁し、トリパンブルー染色後にＢｕｒｋｅｒチャンバにて光学顕微鏡を使用して計数した。結果を、一元ＡＮＯＶＡおよびその後の多重比較のためのボンフェローニの事後検定によって分析した。０．０５未満のｐ値を有意と見なした。統計分析のために、各群を、カラギーナン−λで攻撃し、他の未処置の対照マウス群と比較した。
【０１３２】
カラギーナン−λで攻撃し、未処置で放置した全てのマウスが急性胸膜炎を発症し、混濁滲出液を産生し、胸膜の好中球数が増加した。ビヒクルで処置したマウスの胸膜中の滲出液の体積および白血球数の増加は、カラギーナン−λで攻撃した、未処置の対照マウスと類似していた。これら２つの対照マウス群と比較して、３β，１６α−ジヒドロキシ−１７−オキソアンドロスタンで処置した動物は、０．１ｍｇ、０．０１ｍｇの用量で胸膜中の好中球数および胸膜滲出液の体積が有意に減少した一方で、より低い０．００１ｍｇの用量では不活性であった。０．１ｍｇの用量の３β，１６α−ジヒドロキシ−１７−オキソアンドロスタンでの処置における胸膜滲出液の体積は有意に減少したが、より低い用量の０．０１ｍｇおよび０．００１ｍｇでは有意に減少しなかった。３α，１６α，１７α−トリヒドロキシアンドロスタンで処置した動物は、０．１ｍｇおよび０．０１ｍｇの用量で、胸膜中の好中球数が有意に減少した。３α，１６β，１７β−トリヒドロキシアンドロスタンでの処置も、０．１ｍｇおよび０．０１ｍｇの用量で胸膜中の好中球数が有意に減少した。３α，１６α，１７α−トリヒドロキシアンドロスタンおよび３α，１６β，１７α−トリヒドロキシアンドロスタンの効力は、ポリクローナル抗ＴＮＦ−α抗体対照で観察された効力と類似していた一方で、３β，１６α−ジヒドロキシ−１７−オキソアンドロスタンはより強度が低かった。
【０１３３】
以下の表は、カラギーナン−λに曝露したが、他に処置を行なわなかった非処置対照動物（陰性対照群）と比較した処置動物群由来の好中球数を記載している。陰性対照群の好中球数を１００％とし、他の群をこれと比較した。抗ＴＮＦ−α抗体で処置した動物群（陽性対照群）は、陰性対照群が有する好中球数の２９％を有し、これは、抗体がカラギーナン−λ曝露に対して抗炎症効果を有することを示す。ビヒクル対照群は、陰性対照群と比較して好中球数が有意には減少せず（９１％）、ビヒクルのみでは有意な抗炎症効果がないことを示す。
【０１３４】
【化５】
2009534427.tif 000004
このモデルで統計的に有意な抗炎症活性を有した他の化合物は、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール（経口強制飼養によって投与した１ｍｇおよび０．１ｍｇ）および１７β−アミノアンドロスタ−５−エン−３β−オール（経口強制飼養によって投与した４０ｍｇ／ｋｇ、約０．５ｍｇ／マウス）であった。これらの化合物は、ビヒクル対照として使用したマウス群と比較して活性であった。
【０１３５】
本明細書中に記載の他の式１の化合物をこの様式で使用して、その相対的な炎症を治療または改善する能力を特徴づけることができる。これらの化合物には、３β，１６β，１７β−トリヒドロキシアンドロスタン、３β，１６α，１７α−トリヒドロキシアンドロスタン、３β，１６β，１７α−トリヒドロキシアンドロスタン、３β，１６β−ジヒドロキシアンドロスタ−５−エン−１７−オキシム、３β，１６α−ジヒドロキシアンドロスタ−５−エン−１７−オキシム、３α，１６α−ジヒドロキシアンドロスタ−５−エン−１７−オキシム、３β，１６α−ジヒドロキシアンドロスタン−１７−オキシム、ならびに（１）α配置またはβ配置の７位にヒドロキシル基および／または（２）５位または４位に二重結合を含むこれらのアナログ、および／または（３）これらのいずれかのエステル、エーテル、アミノ酸、カルバメート、またはオキシム（＝ＮＯＨ）誘導体、接合体、またはアナログが含まれる。
（実施例２）
実施例２．免疫応答の分析。化合物３α，１６α，１７α−トリヒドロキシアンドロスタンは、化合物を喘息などの炎症状態を処置するための薬剤としてより優れさせる生物学的性質を有することが見出された。具体的には、化合物の使用は、デキサメタゾンなどの抗炎症性糖質コルチコイド化合物の公知の副作用であるＩＬ−１３の回復を伴わなかった。糖質コルチコイド後に回復したＩＬ−１３により、喘息患者がその後に急性に再発する傾向がより高くなるので、これを伴わない抗炎症薬は有利であろう。このＩＬ−１３回復の欠如は予想外であった。
【０１３６】
３α，１６α，１７α−トリヒドロキシアンドロスタンが好酸球負荷を制限し、重要な炎症メディエータ（ＩＬ−５、ＩＬ−１３、システイニルロイコトリエン）を減少させる能力が、オボアルブミン（ＯＶＡ）感作マウス喘息モデルで認められた。ＢＡＬＢ／ｃマウスを、１日目および１２日目のＯＶＡ（ミョウバンアジュバント中）での腹腔内注射によって感作した。ＯＶＡまたは生理食塩水の肺への送達によって、２８日目および３０日目に、気道をＯＶＡで攻撃した。３１日目に、６匹のマウスに生理食塩水を与え、ＯＶＡで攻撃した６匹のマウスを屠殺し、肺組織を分析した。残りの動物を、６つの群に分けた（６匹／群）。マウス群を、以下のように皮下注射によって１日１回処置した。第１群：ビヒクル対照（０．１％カルボキシメチルセルロース、０．９％生理食塩水、２％  ｔｗｅｅｎ８０、０．０５％フェノール）。第２群：デキサメタゾン（５ｍｇ／ｋｇ）。第３群：３α，１６α，１７α−トリヒドロキシアンドロスタン（１ｍｇ／マウス）。第１群〜第３群中の３匹の動物を３５日目に最終処置から１時間後に屠殺し、第１群〜第３群中の残りの３匹を３８日目に屠殺した。
【０１３７】
以下の表に示すように、３α，１６α，１７α−トリヒドロキシアンドロスタンは、デキサメタゾンで処置した動物で認められたＩＬ−１３の増加は認められなかった。
【０１３８】
【化６】
2009534427.tif 000005
攻撃後に回復したＩＬ−１３の３８日目の減少に加えて、３α，１６α，１７α−トリヒドロキシアンドロスタンで処置した動物は、デキサメタゾン処置群（１４５ｐｇ／ｍＬ）と比較して、肺組織中のＩＬ−５レベルが減少した（９０ｐｇ／ｍＬ）。ビヒクル対照群中のＩＬ−５レベルは、３８日目で７５ｐｇ／ｍＬであった。本明細書中に記載の他の式１の化合物をこの様式で使用して、ＩＬ−１３および／またはＩＬ−５回復効果を発揮することなく炎症を治療または改善する能力を同定した（３β，１６β，１７β−トリヒドロキシアンドロスタン、３β，１６α，１７α−トリヒドロキシアンドロスタン、３β，１６β，１７α−トリヒドロキシアンドロスタン、アンドロスタ−５−エン−２α，３β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、および１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールが含まれる）。これらの結果は、Ｆ１Ｃを使用して肺炎または喘息をインビボで処置することができることを示す。
【０１３９】
別のプロトコールでは、以下のように、肥満細胞集団をマウス骨髄から培養した。簡潔に述べれば、Ｂａｌｂ／Ｃマウス由来の骨髄を、ＰＢＳおよび２７ｇの針を使用して、大腿骨から洗い流した。細胞を、１９％ＦＢＳを含む２／３  ＲＰＭＩ−１６４０とＩＬ−３を分泌した細胞との混合物中で培養した。実験で使用する前に、骨髄細胞を、ＩＬ−３含有混合物中で１８〜２５日間分化させた。この様式で培養した骨髄細胞は、粘膜肥満細胞と類似の表現型を有し、これを、骨髄由来肥満細胞（ＢＭＭＣ）と呼ぶ。
【０１４０】
インビトロ増殖肥満細胞の均一性を、従来のフローサイトメトリー技術および細胞型特異的マーカーの染色によってチェックした。増殖１４〜２１日目に、成熟肥満細胞を採取し、試験培養のために調製した。肥満細胞刺激関連分解に及ぼすデヒドロエピアンドロステロンなどの化合物の影響を評価することを目的とした。調製した肥満細胞を、１×１０７細胞／ｍＬの密度で試験培養ウェルに分注した。対照培養では、肥満細胞を、ＩｇＥ受容体のＩｇＥ抗原−抗体複合体との架橋後に脱顆粒するように誘導した。並行培養群では、肥満細胞を、種々の用量のデヒドロエピアンドロステロンとプレインキュベートし、抗ｌｇＥ抗体を使用して活性化した。刺激の不在下での細胞の細胞質貯蔵顆粒からのβ−グルクロニダーゼの放出によって測定したところ、肥満細胞は検出可能に脱顆粒されなかった。培養物への抗ｌｇ−Ｅ受容体抗体の導入により、β−グルクロニダーゼが有意に放出された。肥満細胞をデヒドロエピアンドロステロンのみに曝露した場合、測定可能な脱顆粒は認められなかった。しかし、抗ＩｇＥ抗原−抗体複合体での活性化前に５〜１０分間１００μＭのデヒドロエピアンドロステロンに予め曝露した肥満細胞は、脱顆粒の約７０％阻害を示した。より低いレベルのデヒドロエピアンドロステロンでは、脱顆粒を阻害する能力が比例して低かった。類似のプロトコールでは、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、またはアンドロスタ−５−エン−３α，７β，１６α，１７β−テトラオールなどのＦ１Ｃは、デヒドロエピアンドロステロンより１０〜１０００倍強力であった。
（実施例３）
実施例３．致死性炎症／ショックの治療。２つの化合物１６α−ブロモエピアンドロステロン（３β−ヒドロキシ−１６α−ブロモアンドロスタン−１７−オン）および３β，１６α−ジヒドロキシ−１７−オキソアンドロスタンを、致死性ショックプロトコールで使用した。１つのプロトコールでは、３ｍｇの１６α−ブロモエピアンドロステロンを経口強制飼養によって１つの動物群に投与した一方で、別の群に皮下注射によって３ｍｇの１６α−ブロモエピアンドロステロンを投与した。対照動物群に、偽薬対照を投与した。このプロトコールでは、致死量の細菌リポ多糖（ＬＰＳ）の投与の２４時間前および１時間後に、マウスに１６α−ブロモエピアンドロステロンを投与した。観察期間の終了までに（ＬＰＳ投与の７２時間後）、ビヒクル処置偽薬対照動物は生存しなかったが、経口投与によって１６α−ブロモエピアンドロステロンを投与した動物の６５％が生存した。皮下注射によって１６α−ブロモエピアンドロステロンを投与した動物の５０％が生存した。７２時間生存した全動物を、ＬＰＳ曝露から回復させた。
【０１４１】
第２のアッセイでは、致死量のＬＰＳの投与の２４時間前および１時間後に、１６α−ブロモエピアンドロステロンまたは３β，１６α−ジヒドロキシ−１７−オキソアンドロスタンを、経口強制飼養によってマウスに投与した。ビヒクル処置動物群を、偽薬対照として使用した。７２時間後、偽薬対照マウスの２５％が生存し、３β，１６α−ジヒドロキシ−１７−オキソアンドロスタンで処置したマウスの５０％および１６α−ブロモエピアンドロステロンで処置したマウスの８０％が生存した。
【０１４２】
別のアッセイでは、１６α−ブロモエピアンドロステロンおよび３β，１６α−ジヒドロキシ−１７−オキソアンドロスタンがマウスにおいて亜致死量のＬＰＳへの曝露によって誘導された肺損傷から防御する能力を示した。このアッセイでは、軽度の麻酔下の動物の器官および肺への１００μｇのＬＰＳの投与の２４時間前および１時間後に、化合物、滅菌生理食塩水（陰性対照）、またはビヒクル（ビヒクル対照）を、５匹のマウス群に経口強制飼養によって投与した。４８時間後、動物を屠殺し、細気管支肺胞洗浄液（ＢＡＬ）によって動物の肺からサンプルを得た。ＢＡＬ液中の細胞数を計数し、高い細胞数は、肺の炎症および損傷を示す。このアッセイでは、炎症および肺損傷を媒介する細胞は、ＬＰＳの存在に応答して肺に浸潤する。陰性対照群およびビヒクル対照群では、ＢＡＬ液は、約６×１０７細胞／ｍＬを含んでいた。１６α−ブロモエピアンドロステロン（ｐ＝０．０２）または３β，１６α−ジヒドロキシ−１７−オキソアンドロスタン（ｐ＝０．０４）で処置した動物群における細胞数は、ＢＡＬ液中の細胞数を有意に減少させた（約４．４×１０７細胞／ｍＬ）。この結果は、化合物が、肺傷害または損傷が制御されないまたは過剰な炎症に関連する喘息またはＣＯＰＤなどの臨床症状で活性を有することを示す。他の化合物（例えば、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールまたは１７β−アミノアンドロスタ−５−エン−３β−オール）を、類似の様式で特徴づけることができる。
（実施例４）
実施例４．肺組織からの細菌の排除。１６α−ブロモエピアンドロステロンが肺組織から緑膿菌感染を排除する能力を、以前に公開されたプロトコールを使用して示した（Ａ．ｖａｎ  Ｈｅｅｃｋｅｒｅｎら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．，１００（１１）：２８１０−２８１５  １９７７；Ａ．ｖａｎ  Ｈｅｅｃｋｅｒｅｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｃｒｉｔ．Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．，１６１：２７１−２７９  ２０００）。ヒト嚢胞性線維症の動物モデルとして使用されるＣＦＴＲマウスにおいてプロトコールを行なった（Ｓ．Ｄ．Ｆｒｅｅｄｍａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９６（２４）：１３９９５−１４０００  １９９９；Ｗ．Ｚｅｎｇら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．２７３：Ｃ４４２−Ｃ４５５  １９９７）。細菌（約６．１×１０４ＣＦＵ／動物を含む５０μＬ）を含むアガロースビーズを使用した慢性力膿菌感染の確立は、以前に公開されていた（Ｊ．Ｒ．Ｓｔａｒｋｅら、Ｐｅｄｉａｔｒ．Ｒｅｓ．，２２：６９８−７０２  １９８７）。２つのマウス群（各群あたりｎ＝９）を、４０ｍｇ／ｋｇの１６α−ブロモエピアンドロステロンまたはビヒクル（対照）で処置し、動物の肺への細菌負荷を、肺へのアガロースビーズの導入から１０日後に決定した。１０日後に、ビヒクル対照動物の肺への細菌負荷は、６×１０６ＣＦＵ／動物である一方で、１６α−ブロモエピアンドロステロンで処置した動物は細菌負荷が減少した（ｐ＝＜０．０４）。この結果は、１６α−ブロモエピアンドロステロンが抗炎症性を示すだけでなく、これを使用して、肺感染を治療または軽減することができることを示す。これは、炎症および感染が共存し得る嚢胞性線維症などの状態を処置するために使用される薬剤の望ましい特性である。
（実施例５）
実施例５．インビトロでのヒト細胞における抗炎症活性。１６α−ブロモエピアンドロステロンおよび３β，１６α−ジヒドロキシ−１７−オキソアンドロスタンがインビトロでのヒト細胞の炎症を軽減する能力を、ＬＰＳに曝露したヒト全血を使用して証明した。ＬＰＳのみ（陽性対照）または化合物を含まないビヒクル（ジメチルスルホキシド）（ビヒクル対照）に曝露した細胞と比較して、１６α−ブロモエピアンドロステロン（１００ｎｇ／ｍＬ）および３β，１６α−ジヒドロキシ−１７−オキソアンドロスタンの存在下では、細胞によるγ−インターフェロン産生の減少が認められた。ＬＰＳの存在下で細胞を２４時間インキュベートした成長媒体中のγ−インターフェロン量を測定した。
（実施例６）
実施例６．自己免疫性神経変性の治療。３つの化合物１７β−アミノアンドロスタ−５−エン−３β−オール、１７β−ジメチルアミノアンドロスタ−５−エン−３β−オール、および１７β−メチルアミノアンドロスタ−５−エン−３β−オールを、マウスにおける実験的アレルギー性脳脊髄炎（ＥＡＥ）を改善する能力について特徴づけた。この脱髄状態は、ヒトの多発性硬化症および多発性硬化症の治療のための新規の療法の試験のためのモデルとして広く使用されている（例えば、Ｂ．Ｆ．Ｂｅｂｏ  Ｊｒ．ら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ．Ｒｅｓ．５２：４２０−４２６  １９９８；Ｒ．Ｒ．Ｖｏｓｋｕｈｌら、Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｔｉｓｔ，７：２５８−２７０  ２００１；Ｈ．Ｏｆｆｎｅｒら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．，１３０：１２８−１３９  ２００２）。このモデルの活性は、試験化合物がＥＡＥ疾患の進行に関連するニューロンの死滅を防止するか死滅速度を遅延する能力を示す。
【０１４３】
このプロトコールでは、化合物を、病徴の発生時に経口強制飼養によって雌ＳＪＬ／Ｊマウスに投与した。抗原を使用して、マウスのＥＡＥ状態を開始させた。能動免疫化のために使用した抗原は、マウスプロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）１３９−１５１（ＨＣＬＧＫＷＬＧＨＰＤＫＦ）であった。このペプチド抗原での免疫化により、中枢神経系の自己免疫Ｔｈ１媒介脱髄疾患が発症される。抗原を、固相合成によって調製し、高速液体クロマトグラフィによって精製した。２００μｇの結核菌を含むフロイント不完全アジュバント中の１５０μｇのＰＬＰ１３９−１５１ペプチドでの免疫化によって、雌ＳＪＬ／ＪマウスにＥＡＥ状態を起こさせた。免疫化プロトコールは、０日目の後部側腹部の４つの部位への皮下注射であった。免疫化後、マウスを、以下のスケールを使用して、ＥＡＥの臨床徴候について毎日評価した：０＝臨床徴候または臨床症状なし；１＝びっこ引き（ｌｉｍｐ  ｔａｉｌ）；２＝軽度の後肢の脆弱およびびっこ引き；３＝中等度の後肢の脆弱およびびっこ引きまたは軽度の運動失調；４＝重篤な後肢の脆弱および中等度の運動失調を伴う軽度の前腕の脆弱；５＝中等度の前肢脆弱しか伴わない対麻痺；６＝重篤な前肢の脆弱、重篤な運動失調、または瀕死状態を伴う対麻痺。
【０１４４】
ビヒクル対照群のマウスは、ＰＬＰ抗原での免疫化から約１０〜１１日後に観察可能なＥＡＥの症状（ＥＡＥ疾患モデルに典型的）を示し始めた。１７β−アミノアンドロスタ−５−エン−３β−オール、１７β−ジメチルアミノアンドロスタ−５−エン−３β−オール、または１７β−メチルアミノアンドロスタ−５−エン−３β−オールを、１日目（免疫化の１日後）から開始する経口強制飼養によって動物に毎日投与した。３つの全化合物は、５ｍｇ／ｋｇの用量で活性であり、化合物は、観察終了時に２６日間を通して認められた症状の臨床的重症度を軽減した。化合物の治療活性は、マウスにおいて約１０ｎｇ／ｍＬの血中レベルで認められた。これらの結果は、化合物がこの慢性自己免疫性神経変性疾患の治療で生物学的に活性であることを示した。
（実施例７）
実施例７．インビトロでのＮＦ−κＢの阻害。多数の化合物を使用して、インビトロでのヒト細胞におけるＴＮＦ−αまたはＬＰＳによるＮＦ−κＢの活性化を阻害した。ＮＦ−κＢの活性化により、炎症を媒介する多数の遺伝子の発現が増加する。このプロトコールは、ヒトＴＨＰ−１細胞（単球表現型を有するヒト単核血球）を使用した。ＮＦ−κＢ−ｂｌａ  ＴＨＰ−１と呼ばれる細胞株は、ＮＦ−ｋＢ応答エレメント（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，ＣｅｌｌＳｅｎｓｏｒ（商標），製品番号Ｋ１１７６）の制御下でβ−ラクタマーゼレポーター遺伝子を含んでいた。この細胞株では、β−ラクタマーゼレポーター遺伝子をＴＨＰ−１細胞に安定に組み込む。この細胞株を使用して、ＮＦ−κＢシグナル伝達のアゴニストまたはアンタゴニストを検出した。これらのＮＦ−κＢ−ｂｌａ  ＴＨＰ−１細胞は、β−ラクタマーゼレポーター遺伝子発現の増加によって、腫瘍壊死因子α（ＴＮＦα）または細菌リポ多糖（ＬＰＳ）の存在に応答する。β−ラクタマーゼ酵素活性レベルを、蛍光共鳴エネルギー転移のレシオメトリック検出によって測定した。ＴＮＦαおよびＬＰＳの両方は、ＴＨＰ１細胞中でＮＦ−κＢを活性化する強力な炎症誘導因子である。このアッセイでは、ＴＮＦαまたはＬＰＳの存在下でＮＦ−κＢ活性を減少させる化合物（従って、β−ラクタマーゼ）は、抗炎症活性を発揮する。
【０１４５】
ＮＦ−κＢ−ｂｌａ  ＴＨＰ−１細胞を、必要に応じた継代または栄養補給によって維持した。懸濁液中で成長する細胞を、２×１０５細胞／ｍＬと２×１０６細胞／ｍＬとの間の密度で維持した。ＮＦ−κＢを活性化させるための１０ｎｇ／ｍＬのＴＮＦαまたは０．２ｎｇ／ｍＬのＬＰＳのいずれかを添加する２４時間前に、細胞を、壁が黒色で底が透明な３８４ウェルのアッセイプレート（Ｃｏｓｔａｒ＃  ３７１２−ＴＣ低蛍光バックグラウンドプレート）に２０，０００細胞／ウェルの密度でプレートした。ＮＦ−κＢの活性化についての陽性対照アッセイでは、β−ラクタマーゼ基質インキュベーションから１時間後のＴＮＦαのＥＣ５０濃度は０．２０ｎｇ／ｍＬであった。ＬＰＳのＥＣ５０は、０．１５ｎｇ／ｍＬであった。このアッセイにおけるＴＮＦ−αまたはＬＰＳのＥＣ５０濃度は、ＮＦ−κＢの最大活性化を引き起こすＴＮＦ−αまたはＬＰＳの濃度の５０％をいう。合成糖質コルチコイドであるデキサメタゾン（強力な抗炎症薬）により、このアッセイにおいて０．４７ｎＭのＥＣ５０（５アッセイの平均）でＴＮＦαの影響を減少させる。デキサメタゾンの類似の生物活性は、他のインビトロ細胞アッセイで報告されており、ＮＦ−κＢ活性化の完全な阻害は、約１ｎＭのＩＣ５０で認められた（Ｍ．Ｋ．Ａ．Ｂａｕｅｒら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．２４３：７２６−７３１，１９７７）。
【０１４６】
このアッセイを使用して、ＬＰＳ刺激後のＮＦ−κＢ−ｂｌａ  ＴＨＰ−１細胞におけるＮＦ−κＢ活性化を阻害するための化合物のＩＣ５０を以下に示す。このアッセイで使用した化合物のＩＣ５０濃度は、化合物が誘導することができるＮＦ−κＢ活性化の最大阻害の５０％を引き起こす化合物の濃度をいう。アッセイを、通常、各化合物について２〜４回行ない、以下に示した値は、各化合物の平均である。以下の表１中のデータは、これらの多数の化合物が非常に低いレベルでこれらのヒトマクロファージ細胞中でＮＦ−κＢを阻害することができることを示す。
【０１４７】
【表１】
2009534427.tif 000006
このプロトコールで抗炎症活性を示した他の化合物は、３α−ペンタフルオロエチルアンドロスタ−４−エン−３β，１７β−ジオール（ＩＣ５０  ３．１ｎＭ）、３α−ペンタフルオロエチルアンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオール（ＩＣ５０  １７ｎＭ；最大ＮＦ−κＢ阻害は５０％であった）、３α／β，１７α−エチニルアンドロスタン−３α／β，１７β−ジオール（ＩＣ５０  ２００ｐＭ）、１７α−トリフルオロメチルアンドロスタン−３α，１７β−ジオール（ＩＣ５０  １９０ｎＭ），１７β−グリシルアンドロスタン−３β−オール（ＩＣ５０  ０．４２ｐＭ）、３β−グリシルアンドロスタン−１７β−オール（ＩＣ５０  １ｎＭ）、アンドロスタン−３β，１６β−ジオール−１７−オキシム（ＩＣ５０  １．９ｆＭ）、１７α−エチニルアンドロスタ−４−エン−３−オン−１７β−オール（ＩＣ５０  ２．９ｆＭ；最大ＮＦ−κＢ阻害は８０％であった）、１６α−フルオロアンドロスタ−５−エン−１７−オン（ＩＣ５０  ３０ｐＭ）、１６β−フルオロアンドロスタ−５−エン−７β−オール−１７−オン（ＩＣ５０  １．５ｎＭ）、アンドロスタン−３α，１６α，１７β−トリオール（ＩＣ５０  ６．９ｆＭ）、アンドロスタン−３α，１６β，１７β−トリオール（ＩＣ５０  １９ｆＭ）、アンドロスタ−５−エン−３β−オール−１７β−スクシニルエステル（ＩＣ５０  ０．２ｎＭ）、３β−アセトキシ−７β，１７β−ジヒドロキシ−１１−オキソアンドロスタ−５−エン（ＩＣ５０  １ｆＭ；最大ＮＦ−κＢ阻害は６５％であった）であった。これらの化合物によるＮＦ−κＢの最大阻害は、約２５％〜８０％であった。これは、このプロトコールにおいて合成糖質コルチコイドであるデキサメタゾンによるＮＦ−κＢ活性化の１００％阻害と異なった。
【０１４８】
２つの化合物は、このプロトコールにおいてＮＦ−κＢ活性を増加させた（アンドロスタ−５−エン−３β，７α，１６α−トリオール−１７−オン（ＩＣ５０  １．３ｎＭ；対照細胞と比較して１４０％ＮＦ−κＢ活性）および３β，１７α−ジメチルアンドロスタン−３α，１７β−ジオール（ＩＣ５０  ４０Ｍ）。
【０１４９】
このプロトコールで抗炎症活性を示さなかった化合物は、３α，１７α−メチルアンドロスタン−３β，１７β−ジオール、３β−アセトキシアンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオール、１７α−メチルアンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオール−７−オン、１６α−フルオロアンドロスタ−５−エン−７β−オール−１７−オン、１６α−フルオロアンドロスタ−５−エン−７α−オール−１７−オン、１７α−メチルアンドロスタン−３β，７α，１７β−トリオール、アンドロスタ−５−エン−３β，１１β，１７β−トリオール、１６α−フルオロアンドロスタン−１７−オン、アンドロスタ−５−エン−３α，１７β−ジオール、アンドロスタン−２β，３α，１６α，１７β−テトラオール、およびアンドロスタン−３α，１６α，１７α−トリオール（全て、ＩＣ５０＞１０μＭ）であった。
【０１５０】
化合物が低レベルでＮＦ−κＢ活性を減少させる能力は、化合物を使用して、特に、ＮＦ−κＢによって媒介される過剰なレベルまたは核転写活性が疾患または状態の病理学で有意な役割を果たす状況で炎症を処置することができることを示す。
【０１５１】
上記のアッセイでは、デキサメタゾン、１６α−ブロモエピアンドロステロン、および１６β−ブロモエピアンドロステロンによるＮＦ−κＢの最大阻害は１００％であり、これらの化合物のＩＣ５０を超えるこれらの化合物の濃度で検出可能なＮＦ−κＢ活性化は認められなかった。対して、他の化合物（例えば、３β，７β，１６α，１７β−テトラヒドロキシアンドロスタ−５−エン、３α，７β，１６α，１７β−テトラヒドロキシアンドロスタ−５−エン、または３β，７β，１７β−トリヒドロキシ−１７α−メチルアンドロスタ−５−エン）によるＮＦ−κＢの最大阻害は、約８０％未満であり、そのＩＣ５０レベルを超える漸増量の化合物によってＮＫ−κＢ活性化に対するさらなる有意な阻害活性は得られなかった。これらの化合物のほとんどについて、このアッセイにおけるＮＦ−κＢの最大阻害は約２５〜８０％、主に約３０〜６５％または約３０〜７０％であった。これらの結果は、３β，７β，１６α，１７β−テトラヒドロキシアンドロスタ−５−エンなどの化合物がその生物活性を完全に防止することができない機構によってＮＦ−κＢ活性化を阻害することを示した。
【０１５２】
表１中のいくつかの化合物は、インビトロ細胞アッセイで抗炎症活性を発揮する検出可能な能力は認められなかった。試験し、アッセイで活性が認められなかった（ＩＣ５０＞１０μＭ）他の化合物には、３β，１７α−ジヒドロキシアンドロスタ−５−エン、デヒドロエピアンドロステロン（３β−ヒドロキシアンドロスタ−５−エン−１７−オン）、３β−ヒドロキシアンドロスタン−７，１７−ジオン、１６α−ブロモ−３β，１７β−ジヒドロキシアンドロスタ−５−エン、および１６β−ブロモ−３β−ヒドロキシアンドロスタ−５−エン−１７−オンが含まれた。それにもかかわらず、このインビトロ細胞アッセイで不活性であったいくつかの化合物（例えば、１６α−ヒドロキシエピアンドロステロン）は、インビボにて動物で抗炎症性を示すことが見出された。この結果は、化合物が異なる機構を介して作用することができることか、その活性が１つを超える細胞株由来の細胞を必要とすることを示す。インビボでのかかる化合物由来の抗炎症活性は、例えば、プロスタグランジン合成および肝臓における他の活性の誘発から生じ、それにより、全身抗炎症反応を引き起こすことができる。あるいは、かかる化合物の抗炎症活性は、化合物がＬＰＳ以外の供給源から生じるＮＦ−κＢ活性の刺激を阻害する能力から生じる。多数の異なる材料は、ＮＦ−κＢを活性化することができ、この材料には、ＬＰＳ、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１、一定のウイルスまたは細菌の遺伝子産物の存在、Ｂ細胞またはＴ細胞の活性化、細胞の紫外線への曝露が含まれる。全ての細胞がこれらの各刺激に応答に必要があるシグナル伝達機構を発現するわけではないので、全て細胞型がこれらの全ての刺激に応答することができるわけではない。ほとんどの細胞型は、１つまたは少数のこれらのシグナルに応答することができるが、所与の細胞型が全てに応答することができるのは稀である。本明細書中で使用したアッセイでは、ＮＦ−κＢの活性化は、細菌ＬＰＳ誘導性刺激から生じるので、ＬＰＳシグナル伝達経路を阻害する能力が制限された化合物は、このアッセイにおいてＮＦ−κＢ活性を減少させる能力が制限されると予想されるであろう。
【０１５３】
本発明に記載されており、本発明の実施に組み込むか使用することができるＮＦ−κＢの調節方法には、以下の刊行物に記載の方法が含まれる：米国特許第５，９８９，８３５号明細書、同第６，４１０，５１６号明細書、同第６，５４５，０２７号明細書、同第６，８３１，０６５号明細書、および同第６，９９８，３８３号明細書。ＮＦ−κＢ活性の他の態様は説明されており、本発明の方法に組み込むこともできる（例えば、Ａ．Ｓ．Ｂａｌｄｗｉｎ，Ａｎｎｕａｌ  Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４：６４９−６８３  １９９６；Ｍ．Ｍｕｌｌｅｒら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．２２（（４）１０６０−１０７２  ２００２；Ｐ．Ａ．Ｂａｅｕｅｒｌｅ，Ｃｅｌｌ  ９５：７２９−７３１  １９９８．）。
（実施例８）
実施例８．選択された化合物がマウスにおけるＬＰＳ誘導性ショック／炎症を処置する能力を、上記プロトコールに類似のプロトコールによって実験した。約３０ｇの３匹のＩＣＲマウスからなる５つの群を、それぞれ、腹腔内注射によって１２０μＬビヒクル（３０％スルホブチルエーテル−シクロデキストリン水溶液）、アンドロスタ−５−エン−３α，７β，１６α，１７β−テトラオールを含むビヒクル、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオールを含むビヒクル、または４β−アセトキシアンドロスタ−５−エン−３β，１６α，１７β−トリオールを含むビヒクルで処置した。全ての薬物およびビヒクル処方物は、溶液であり、懸濁液ではなかった。スルホブチルエーテル−シクロデキストリンを購入した（Ｃａｐｔｉｓｏｌ（商標）、ｗｗｗ．ｃｙｄｅｘｉｎｃ．ｃｏｍ）。２つのビヒクル対照が存在し、一方の群はビヒクルのみを投与し、他方の群はビヒクルおよびＬＰＳを投与した。ビヒクルまたは薬物を、ＬＰＳ（約ＬＤ５０／２４の用量、すなわち、ＬＰＳ投与の２４時間後に５０％死亡）投与の２４時間前および１時間後に腹腔内注射によってマウスに投与した。薬物を、約４０ｍｇ／ｋｇ（各薬物投与について１．２ｍｇ薬物／動物）で投与した。ＬＰＳ注射の１．５時間後に動物から脾臓を採取し、脾臓を溶解し、脾臓細胞から核を単離し、溶解した核由来のＮＦ−κＢを測定することによって活性化ＮＦ−κＢについてアッセイした。結果は、３つ全ての化合物がＬＰＳ＋ビヒクル対照群と比較してＮＦ−κＢ活性化レベルを約５０％減少させることを示した。ＬＰＳを使用せずビヒクルで処置した動物由来の脾臓細胞中の活性化ＮＦ−κＢレベルは、薬物処置動物由来の脾臓細胞中の活性化ＮＦ−κＢと本質的に同一であった。対照動物と比較した薬物処置動物での活性化ＮＦ−κＢの減少によって示されるように、これらの結果は、動物における強力な抗炎症効果を示した。
【０１５４】
ＬＰＳ攻撃から１．５時間後のＮＦ−κＢまたはＴＮＦαの分析と類似のプロトコールで使用した他の化合物は、アンドロスタン−３α，１６α，１７β−トリオール、アンドロスタン−３α，１７β−ジオール−１６−オン、１７α−トリフルオロメチルアンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオール、アンドロスタ−５−エン−３α，１７β−ジオール、アンドロスタ−５−エン−３α，１６α，１７β−トリオール、３α−トリフルオロメチルアンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオール、アンドロスタン−３α，１７β−ジオール−１６−オキシム、およびアンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオール−７−オンであった。これらの化合物の全てを、化合物のスルホブチルエーテル−シクロデキストリン水溶液との溶液として投与した。これらの化合物を、ＬＰＳ（ＰＬＳ）攻撃の２４時間前およびＬＰＳ攻撃と同時に（上記のＬＰＳ攻撃の１時間後の代わり）動物に投与し、ＬＰＳ攻撃の１．５時間後に脾臓中のＮＦ−κＢまたは血液中のＴＮＦαを分析した。化合物を４０ｍｇ／ｋｇで投与し、３α−トリフルオロメチルアンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオールについては４ｍｇ／ｋｇ、０．１ｍｇ／ｋｇ、および０．０５ｍｇ／ｋｇで投与した。ＮＦ−κＢおよびＴＮＦαの阻害は、ビヒクル対照と比較してこれらの化合物の全てについて認められた。３α−トリフルオロメチルアンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオールについて、ＮＦ−κＢおよびＴＮＦαの最大阻害は、０．１ｍｇ／ｋｇの用量レベルで処置した動物で認められた。
（実施例９）
実施例９．インビボでのＮＦ−κＢ阻害の動態解析。マウスにおける細菌ＬＰＳ注射後のＮＦ−κＢ阻害の動態を試験して、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール（実施例７に記載のように、インビトロでの免疫細胞（マクロファージまたは単球）におけるＬＰＳまたはＴＮＦαによって誘導されるＮＦ−κＢの活性化の一部しか阻害しない）などの化合物の作用機構をさらに探索した。この研究では、マウスを、化合物を含む実施例８に記載のビヒクル溶液（懸濁液ではない）の腹腔内注射によって、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール（約４０ｍｇ／ｋｇ、約１．２ｍｇ／動物）で処置した。細菌ＬＰＳ（約ＬＤ５０／２４）の腹腔内注射の２４時間前に、薬物を注射した。研究では、１２匹の動物からなる２つの群を使用し、ＬＰＳ攻撃の２４時間前にビヒクル対照または薬物を投与した。ＬＰＳ攻撃の直前およびＬＰＳ投与の１．５、２．０、および２．５時間後に、両群由来の３匹の動物から脾臓を採取した。脾臓細胞を採取し、活性化ＮＦ−κＢレベルを、実施例８に記載のように、本質的には核内のＮＦ−κＢアッセイによって測定した。
【０１５５】
ＬＰＳ投与後の最大ＮＦ−κＢ活性化は、ビヒクル対照で１．５時間後に起こり、活性化ＮＦ−κＢのプレＬＰＳレベルの４倍であった。結果を以下に示す。ビヒクル対照および薬物処置動物についての値は、脾臓細胞由来の核内のＮＦ−κＢのＥＬＩＳＡ測定による相対光学密度単位である。
【０１５６】
【化７】
2009534427.tif 000007
１．５時間の時点でのＮＦ−κＢが著しく阻害され、他の時点でＮＦ−κＢが相対的に正常レベルであることは、化合物がＬＰＳ曝露後の臨界期（ｃｒｉｔｉｃａｌ  ｐｅｒｉｏｄ）でＬＰＳ誘導外傷に一過性であるが強力な阻害を発揮することを示した。他の研究における類似のアッセイは、ビヒクル対照マウスにおけるＬＰＳ注射の３０分後および６０分後の活性化ＮＦ−κＢレベルが本研究のプレＬＰＳ時点に類似することを示した。この結果は、このモデルにおいて、脾臓細胞中のＮＦ−κＢ活性化に及ぼすＬＰＳの影響がＬＰＳ攻撃の約１．５時間後に最大であることを示す。この時点は、抗炎症薬候補の活性を、インビボで評価することができる都合のよい時間または枠（すなわち、ＬＰＳ攻撃の約７５分〜約１０５分後）を示す。枠は、生物学的損傷の投与経路に応じて変化し得る（例えば、腹腔内注射によって投与したＬＰＳまたはＴＮＦαと皮下注射もしくは筋肉内注射によって投与したＬＰＳまたはＴＮＦαとで異なる）。同様に、生物学的損傷は、他の事項であり得る（例えば、約５０〜６０ｃＧｙ／分での電離放射線への被験体の曝露と約５００〜１０００ｃＧｙ／分または約５〜１０ｃＧｙ／分での電離放射線への被験体の曝露とで異なる）。
【０１５７】
マウスにおけるＬＰＳ誘導性ＴＮＦα発現の分析により、ＬＰＳ攻撃（腹腔内注射によって投与された５００μｇのＬＰＳ）の１．５時間後にＴＮＦαレベルがピークになることが示され、ＬＰＳ攻撃の１〜２時間後で最も高いレベルのＴＮＦαが認められた。ＬＰＳから３０分後および２．５時間後のＴＮＦαレベルはより低かった。
【０１５８】
生物力学薬として作用する能力について分析することができる他の化合物には、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，７β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７α，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，４α，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，４β，１６α，１７β−テトラオール、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７α，１７β−トリオール、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，１７β−トリオール−７−オン、およびこれらの化合物のいずれかの薬学的に許容可能なアナログ（例えば、１つ、２つ、またはそれを超えるヒドロキシル基でのヒドロキシルエステルまたはエーテル誘導体であるアナログ）が含まれる。適切なエステルおよびエーテルには、アセテート、ｎ−プロピオネート、ｉ−プロピオネート、スクシネート、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨ２Ｒ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨ２Ｒ、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＮＨ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨ２Ｒ、グリシンおよびアラニンなどのアミノ酸（−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−ＣＨＣＨ３−ＣＯＯＨ）、ヒドロキシエステル、メチル、エチル、ｎ−プロピル、ｉ−プロピル−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨ２Ｒ、−Ｏ−（ＣＨ２）ｎ−Ｏ−ＣＨ２Ｒ（例えば、−Ｏ−ＣＨ２ＣＨ２−Ｏ−ＣＨ３）エーテル，（式中、ｎは、１、２、３、４、５、または６であり、Ｒは、−Ｈ、−Ｆ、−Ｃｌ、−Ｂｒ、−Ｉ、−ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ（または許容可能な塩（例えば、ナトリウム塩またはカリウム塩））、−Ｃ（Ｏ）ＯＣＨ３、−Ｃ（Ｏ）ＯＣ２Ｈ５が含まれる。
（実施例１０）
実施例１０．式１の化合物が受動的（ｐａｓｓｉｖｅ）コラーゲン誘導性関節炎モデルにおける一連の関節炎に影響を及ぼす能力を、本質的に以前に記載のように試験した（Ｅ．Ｓｉｍｅｌｙｔｅら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ，５２（６）：１８７６−１８８４，２００５；Ｚ．Ｈａｎら、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ  ４６（３）：８１８−８２３．２００２：Ｈ．Ｍｉｙａｈａｒａら、Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  Ｉｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ．，６９（１）：６９−７６．１９９３）。このプロトコールでは、抗ＩＩ型コラーゲン抗体の投与によって、ＤＢＡ／１マウスに受動的コラーゲン誘導性関節炎を誘導した。これにより、動物の関節組織に対して免疫応答が誘導される。この関節炎モデルにおける有効性は、主に炎症に対する有効性を示し、関節炎を操作する細胞の影響から隔離して評価される。関節炎の重症度を、半定量的臨床スコアリングシステムを使用して評価した。群あたり８匹からなる群を、経口強制飼養によって、４０ｍｇ／ｋｇ／日の１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールで１４日間またはビヒクルで１４日間処置した。ビヒクルは、３０％シクロデキストリン−スルホブチルエーテル水溶液であり、薬物溶液は、２０ｍｇ／ｍＬの薬物を含むビヒクルであった。
【０１５９】
動物を、足関節の厚さの測定および関節炎スコア（脚あたり４箇所）によって試験した。この試験は、スコアが高いほど関節炎がより重篤であることを示す。約１４日後に試験を終了し、組織学および遺伝子発現の測定を行なった。組織学について、左後足を採取し、１０％ホルマリンで２４時間固定し、脱灰し、パラフィンに包埋した。組織切片を、サフラニンＯ−ファーストグリーンのためにヘマトキシリンおよびエオシンで染色して、プロテオグリカン含有量を決定した。半定量的スコアリングシステムを使用して、滑膜炎，関節外炎症、びらん、およびプロテオグリカン喪失を評価した。
【０１６０】
抗体の投与後に化合物での処置を開始した。プロトコールにより、関節炎進行に及ぼす処置の影響を観察した。結果は、７〜１４日目に第４群の動物と比較して第１群の動物のコラーゲン誘導性関節炎が減少することを示した。ビヒクル処置動物における最大臨床スコアは、７日目の第１群の動物における最大臨床スコア５．１と比較して８日目で１０．２であった。１４日目のプロトコール終了後、４．１であった対照群のスコアと比較して、ビヒクル処置群の臨床スコアは７．８であった。７〜１４日目の臨床スコアの相違は処置動物で明白であり、このことは、ビヒクル対照動物群と比較して、処置動物に存在する炎症レベルが減少したことを示した。１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールでの処置効果は、デキサメタゾンでの処置と類似し、この動物モデルにおける関節炎の炎症を阻害し、重症度を低下させる。１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールが関節炎の重症度を低下させる能力は、この関節炎モデルでほとんど有効性を示さないメトトレキサートまたは抗ＴＮＦα薬などの細胞媒介免疫のサプレッサーと対照的である。
（実施例１１）
実施例１１．式１の化合物がマウスのＬＰＳ誘導性肺損傷に影響を及ぼす能力を調査した。ＬＰＳ誘導性肺損傷モデルは、急性肺損傷（ＡＬＩ）、急性成人呼吸急迫症候群（ＡＲＤＳ）、および内毒素性ショックまたは敗血症に対する治療を評価するために以前より使用されている（Ｍｅｔｚら、Ｃ．，Ｃｈｅｓｔ  １００（４）：１１１０−９，１９９１；Ｗｉｎｄｓｏｒ，Ａ．Ｃ．ら、Ａｎｎ．Ｊ．Ｍｅｄ．Ｓｃｉ．３０６（２）：１１１−６，１９９３；Ｂｒｉｇｈａｍ  Ｋ．Ｌ．ら、Ａｍ．Ｒｅｖ．Ｒｅｓｐｉｒ．Ｄｉｓ．１３３（５）：９１３−２７，１９８６）。
【０１６１】
プロトコールを、本質的にＳｕ，Ｘ．ら、Ｉｎｔｅｎｓｔｉｖｅ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ．３０：１３３−１４０，２００４に記載のように行なった。Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，ＭＥ）から入手した６〜８週齢のＣ５７／ＢＬ６雌マウス（平均体重２５ｇ）を、７つの群に無作為に分類し、標準的なハウジングおよび飼料で維持した。群は、（１）生理食塩水およびＬＰＳで処置したマウス、（２）ビヒクルおよびＬＰＳで処置したマウス、（３）１２５μｇデキサメタゾンで処置したマウス、（４）４０ｍｇ／Ｋｇアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオールおよびＬＰＳで処置したマウス、（５）４０ｍｇ／Ｋｇ  ５α−アンドロスタン−３β，１６α−ジオール−１７−オンおよびＬＰＳで処置したマウス、（６）４０ｍｇ／Ｋｇ  ５α−アンドロスタン−３β，１７β−ジヒドロキシ−１６−オキシムで処置したマウス、および（７）４０ｍｇ／Ｋｇ  アンドロスタ−５−エン−３α，７β，１６α，１７β−テトラオールで処置したマウスであった。
【０１６２】
−１日目に、マウスを化合物またはビヒクルで前処置した。０日目に、マウスを、第２の用量の化合物またはビヒクルで処置した。０日目＋６０分で、マウスを、直接観察しながら軽い麻酔下で気管を１００μｇの大腸菌ＬＰＳ（Ｓｉｇｍａ）で攻撃した。２日目に（すなわち、ＬＰＳ攻撃の４８時間後）、マウスを屠殺し、ＢＡＬを得た（細胞数およびＴＮＦα／ＩＬ６レベルを測定した）。肺を採取し、細かく刻み、ミエロペルオキシダーゼ（ＭＰＯ）研究のために使用した。５０ｍｇ  ＬＰＳ（大腸菌  ０１１１：Ｂ４，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を含む１００ｍＬ  ＰＢＳを直接観察しながら軽度に麻酔した（イソフルラン）気管に点滴注入することによってＬＰＳ誘導性急性肺炎を予め形成させた。４８時間後、マウスを屠殺した。この後、下頸部の気管の曝露後に気管切開を行なった。先端の丸い（ｂｌｕｎｔ  ｅｎｄｅｄ）２０ゲージの針を、露呈した気管に挿入し、次いで、結紮し、これを使用して気管支肺胞洗浄（ＢＡＬ）を行なった。気道の出血および外傷を最小にするために、０．５ｍＬの滅菌ＰＢＳ×３を使用してＢＡＬを行う。典型的には、全部で１３００ｍＬをこの過程から回収する。血球計を使用して、ＢＡＬ液（ＢＡＬＦ）中の白血球分画を決定する。８０〜１００個の細胞に対して分画を実施する。ＢＡＬを得た後、胸腔を切開し、心臓／肺を、右心室穿刺によって３ｍＬの滅菌生理食塩水で潅流した。次いで、全肺組織を採取し、ＭＰＯアッセイのために調製した。このアッセイのために、肺を、リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．０、０．５％ヘキサデシルトリメチルアンモニウムブロミドを含む）中に個別に均質化する。遠心分離後（１４，０００×ｇ、１０分、４℃）、５０μＬの上清を、０．２ｍｇ／ｍＬ  ｏ−ジアニシジン二塩酸塩（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）および０．００００２％過酸化水素を含む９５０μＬリン酸カリウム緩衝液に添加した。４６０ｎｍの吸光度の変化を測定する。ＥＬＩＳＡによって、ＢＡＬＦ無細胞上清（２００×ｇ、１０分、４℃）中のサイトカインレベル（市販のＥＬＩＳＡを使用したＴＮＦα、ＩＬ−６（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ））を決定する。アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオールについての結果が特に際立っており、ビヒクル処置動物と比較して、この化合物で経口処置した動物は、ＢＡＬ中のＭＰＯ、ＴＮＦα、およびＩＬ−６レベルが減少することが見出された。ＭＰＯ（肺内の好中球負荷の基準）および炎症誘発性サイトカインＴＮＦαに及ぼす影響が特に顕著であった。これにより、化合物が炎症誘発性細胞の炎症組織への移動を遮断する能力および炎症誘発性サイトカインのシグナル伝達を減少させる能力が示唆される。このモデルでは、急性炎は、恐らく、先天免疫成分のＬＰＳ刺激によって駆動される。これらの同一のメディエータの多くが増加し、いくつかの障害（嚢胞性線維症、慢性閉塞性肺疾患、急性および慢性の気管支炎が含まれる）および結核のようなさらなる一定の感染症に関連する肺炎に関与すると考えられる。アンドロソスタ（ａｎｄｒｓｏｓｔ）−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオールでの処置によって４８時間でＢＡＬＦ中のＭＰＯおよび炎症誘発性サイトカインレベルが劇的に減少したという所見は、慢性炎症の疾患特異的モデル（ＥＡＥが含まれる）におけるアンドロソスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオールについて本明細書中に報告した抗炎症活性と一致している。
（実施例１２）
実施例１２．ヒト混合リンパ球反応（ＭＬＲ）。３β，１６α−ジヒドロキシ−１７−オキソアンドロスタン、３β，１７β−ジヒドロキシ−１６−オキソアンドロスタン、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール、および１７β−アミノアンドロスタ−５−エン−３β−オールが抗原特異的刺激に影響を及ぼし、ヒトＴリンパ球が特定の外来抗原（主要組織適合性複合体）に応答する能力。ＭＬＲを、遅延型過敏応答のインビトロモデルとして使用し、化合物がインビボでのヒト抗原特異的Ｔ細胞応答に及ぼす化合物が有することができる影響を示す。化合物によるＭＬＲの阻害は、リンパ球に及ぼす化合物の免疫抑制効果を示す。ＭＬＲを阻害しない化合物は、応答するリンパ球の抗原特異的活性化に免疫抑制性を示さない。
【０１６３】
２３〜３１歳の３人（男性２人、女性１人）の絶食した健康なヒトボランティアから血液サンプルを得た。被験体は、免疫調節薬、抗アレルギー薬、または抗生物質を研究３ヶ月前から使用していなかった。リンパ球のインビトロ応答に影響を及ぼし得るホルモンまたはサイトカインの循環レベルが変動する可能性を制限するために、午前９時と午前１０時との間に被験体から採血した。末梢血単核球（ＰＢＭＣ）を、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ（密度１．０７７、Ｂｉｏｃｈｒｏｍ  ＡＧ，Ｂｅｒｌｉｎ，Ｇｅｒｍａｎｙ）勾配での遠心分離によって単離し、培養媒体（２ｍＭ  Ｌ−グルタミン、ペニシリン（１００Ｕ／ｍＬ）、およびストレプトマイシン（１００ｍｇ／ｍＬ）を捕捉したＲＰＭＩ１６４０（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ  ｓ．ｒｌ．，Ｍｉｌａｎ，Ｉｔａｌｙ））に再懸濁した。自己（レスポンダー）不活性化血漿を、１０％で使用した。５００，０００個のレスポンダーＰＢＭＣ（ＰＢＭＣｒ）および５００，０００個の同種照射（３０Ｇｙ）刺激因子ＰＢＭＣ（ＰＢＭＣ）を、２００μＬ媒体中で１：１の比率で混合し、４つの各化合物について３００ｎＭまたは３０ｎＭの濃度にて平底９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ，Ｒｏｓｋｉｌｄｅ，Ｄｅｎｍａｒｋ）中で６日間培養した。化合物をエタノールに溶解し、培養培地で所望の濃度に希釈して、０．０１％のエタノールを含む最終溶液を得た。このビヒクルを、対照として使用した。対照は、個別に培養したＰＢＭＣｒおよびＰＢＭＣも含んでいた。培養期間の最後の８時間に、ＰＢＭＣを１μＣｉ／ウェルの［３Ｈ］チミジン（Ａｍｅｒｓｈａｍ，Ｍｉｌａｎ，Ｉｔａｌｙ）でパルスした。次いで、細胞を採取し、βセルカウンタを使用して放射能取り込みを測定した。四連のウェルの平均ｃｐｍを計算した。Ｔ細胞の増殖を、刺激指数：ＳＩ＝ｃｐｍ（ＰＭＢＣｓ×ＰＢＭＣｒ）／ｃｐｍ（ＰＢＭＣｒ）＋ｃｐｍ（ＰＢＭＣ）として示した。スチューデントｔ検定を使用して、統計分析を行なった。四連の各試験サンプルから得たｃｐｍを、ビヒクルの存在下で培養した対照ＰＢＭＣｒおよびＰＢＭＣで得た増殖応答と比較した。相違は、ｐ＜０．０５で有意と見なした。
【０１６４】
結果は、３００ｎＭの１７β−アミノアンドロスタ−５−エン−３β−オールを除いて、４つの化合物のいずれによってもＭＬＲの阻害は認められなかった。これは、対照反応と比較して、３β，１６α−ジヒドロキシ−１７−オキソアンドロスタン、３β，１７β−ジヒドロキシ−１６−オキソアンドロスタン、および１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールはこのアッセイにて３００ｎＭまたは３０ｎＭであまり免疫抑制性を示さず（ｐ＞０．０５）、１７β−アミノアンドロスタ−５−エン−３β−オールは３００ｎＭで中程度の免疫抑制性を示す（ｐ＜０．０５）ことを示した。これらの結果は、３β，１６α−ジヒドロキシ−１７−オキソアンドロスタン、３β，１７β−ジヒドロキシ−１６−オキソアンドロスタン、および１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールは、おそらくインビボのヒトでリンパ球に免疫抑制性を示さないことを示す。これらの結果は、化合物が免疫抑制性を示さない抗炎症薬となる能力と一致する（例えば、実施例７を参照のこと）。
（実施例１３）
実施例１３．免疫抑制の分析。糖質コルチコイドステロイド（デキサメタゾンまたはヒドロコルチゾンなど）は、典型的には免疫抑制性を示し、その使用に関して有意な毒性を有する。以前に記載のように、本質的には、マウスにおけるレポーター抗原膝窩リンパ節アッセイで免疫抑制を試験した（Ｃ．Ｇｏｅｂｅｌら、Ｉｎｆｌａｍｍ．Ｒｅｓ．，４５（Ｓｕｐｐｌ．２）：Ｓ８５−Ｓ９０，１９９６；Ｒ．Ｐｉｅｔｅｒｓら、Ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔａｌ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅｓ  １０７（Ｓｕｐｐｌ．５）：６７３−６７７，１９９９）。このプロトコールを使用して、膝窩リンパ節（ＰＬＮ）アッセイで１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールの活性を分析して、化合物がインビボで免疫抑制性をあまり示さないことを示した。このプロトコールでは、ビヒクルは、０．１％カルボキシメチルセルロース、０．９％生理食塩水、２％  ｔｗｅｅｎ８０、および０．０５％フェノールであり、薬物処置動物においては懸濁液中に１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールを含めた。活性の評価は、（１）膝窩リンパ節細胞中のリンパ球、抗原特異的ＩｇＭ、ＩｇＧ１、およびＩｇＧ２ａ抗体分泌細胞（ＡＳＣ）の総数の測定（ＥＬＩＳＰＯＴアッセイ）；（２）懸濁液中の生細胞のフローサイトメトリーによる細胞表面マーカー（ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１９、Ｆ４８０、ＣＤ８０、ＣＤ８６）発現の分析、および（３）インビトロでのリンパ球によるＩＬ−４、ＴＮＦα、およびＩＦＮγの産生（ＥＬＩＳＡ）を含んでいた。
【０１６５】
特定の病原体を含まないＢＡＬＢ／Ｃマウス群（ｎ＝５／群）を使用した。陽性対照群を、ビヒクル（経口強制飼養）で処置し、免疫抑制を誘導するために皮下注射によって５μｇ／日のデキサメタゾンで処置した。ビヒクル対照動物（陰性対照）を、ビヒクルのみで処置した（経口強制飼養）。一つの動物群を、経口強制飼養によって０．１ｍｇ／日の１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールで処置した。別の群を、経口強制飼養で動物に投与することによって１ｍｇ／日の１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールで処置した。結果を、等分散を使用した両側スチューデントｔ検定によって分析した。動物の右後足の足蹠に５０μＬの新たに調製した感作用量のＴＮＰ−ＯＶＡを注射した。デキサメタゾン（リン酸デカドロン注射；リン酸デキサメタゾンナトリウム）を、皮下注射によって首筋に毎日投与し、その直後にＴＮＰ−ＯＶＡで感作した。その直後に１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールを、強制飼養によって投与した。ＴＮＰ−ＯＶＡ注射の５日後に、眼窩穿刺によって採血し、マウスを、頸部脱臼によって安楽死させ、膝窩リンパ節を取り出し、癒着性の脂肪組織から分離した。単一細胞懸濁液を調製し、１ｍＬ  ＰＢＳ−ＢＳＡ（１％）に再懸濁し、計数した。細胞数、ＩＬ−４、ＩＬ−５、およびＩＦＮγを測定した。
【０１６６】
ビヒクル対照群由来のＰＬＮ中の平均リンパ球数は、デキサメタゾン処置動物群の２．９×１０６／リンパ節と比較して、７．８×１０６／リンパ節であった。このリンパ球数の減少は、デキサメタゾンまたは他の糖質コルチコイド化合物を使用して典型的に認められる顕著な免疫抑制を明確に示した。対して、１ｍｇ／日の１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールで処置した群は、８．２×１０６リンパ球／リンパ節であり、０．１ｍｇ／日の１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールで処置した群は、１１．１×１０６リンパ球／リンパ節であった。結果は、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールは免疫抑制性ではなく免疫増強性を示した。１．０ｍｇ／日および０．１ｍｇ／日での１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール処置により、ビヒクル対照群と比較して、ＩＦＮγ、ＩＬ−４、およびＩＬ−５レベルを増加させ、免疫増強も示した。０．１ｍｇ／日の１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールのＩＦＮγ、ＩＬ−４、およびＩＬ−５レベルに及ぼす影響は、１．０ｍｇ／日で処置した群よりも高かった。対して、ＩＦＮγ、ＩＬ−４、およびＩＬ−５レベルは、ビヒクル対照群またはいずれかの薬物で処置した群と比較して、デキサメタゾン処置群で減少した。
（実施例１４）
実施例１４．免疫抑制の分析。いくつかの化合物を、免疫応答に影響を及ぼす能力について特徴づけた。このプロトコールは、標準的な免疫アッセイにおいて化合物の免疫効果を試験した。オボアルブミン（ＯＶＡ）特異的免疫応答アッセイは、既往性（細胞性および抗体媒介性の両方）免疫応答を測定するための十分に確立された系である。ＢＡＬＢ／ｃマウスを、０日目および７日目に、ミョウバン（２５ｍｇ／ｍＬ）を含む生理食塩水で沈殿させた１００μｇ  ＯＶＡでの腹腔内注射（総体積２００μＬ）によって免疫化した。マウス（ｎ＝５／群）を、化合物で２０日間毎日（経口強制飼養、４０ｍｇ／ｋｇ、約１ｍｇ／動物）処置した。２０日目に、採血し、ＯＶＡに対する抗体力価についてＥＬＩＳＡで試験した。試験した化合物は、３β，１６α−ジヒドロキシ−１７−オキソアンドロスタン、１６α−ブロモエピアンドロステロン、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール、３β，１６α−ジヒドロキシアンドロスタン−１７−オキシム、１７β−アミノアンドロスタ−５−エン−３β−オール、および３α，１６α，１７β−トリヒドロキシアンドロスタンであった。これらの化合物は、顕著な免疫抑制を示さず、ＯＶＡ抗体力価はビヒクル対照群と類似していた。
（実施例１５）
実施例１５．グルコース低下およびインスリン抵抗性の改善。グルコース低下の影響およびインスリン抵抗性の改善を、ヒト糖尿病およびインスリン抵抗性の糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスモデルで評価した。これらの研究では、約８〜１０週齢のｄｂ／ｄｂ  Ｃ５７ＢＬ／Ｋｓマウスを、それぞれ１０匹からなる群に分け、経口強制飼養によってビヒクル対照（薬物なし）または１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールで処置した。化合物を、２０ｍｇ／ｋｇ／日（１０ｍｇ／ｋｇの用量を１日２回投与する）、４０ｍｇ／ｋｇ／日（２０ｍｇ／ｋｇの用量を１日２回投与する）、または８０ｍｇ／ｋｇ／日（４０ｍｇ／ｋｇの用量を１日２回投与する）で１日に２回、２８日目まで投与した。血糖値を、血糖計のストリップによってグルコース濃度を測定するための少量の血液（尾部の切り込みによる出血（ｎｉｃｋ  ｔａｉｌ  ｂｌｅｅｄ））を使用して、投与期間中に１週間に２回モニタリングした。投与期間中の特定の時期に（１４日目および２８日目）、標準的な経口用量である１ｇ／ｋｇグルコース（４０ｍｇマウスで約４０ｍｇ）の投与によって経口グルコース負荷試験（ＯＧＴＴ）も行い、次いで、血糖値の変動を、グルコース投与から１５、３０、６０、および１２０分後に迅速にモニタリングした。薬物処理群では、高血糖性の血糖値の約４０％の減少がｄｂ／ｄｂマウスで認められた。血糖はビヒクル対照群で３８０ｍｇ／ｄＬの血糖値に近づき、薬物処置群では投与から少なくとも１０日後に２３０ｍｇ／ｄＬ未満になった。８０ｍｇ／ｋｇ  ｂ．ｉ．ｄ．で２８日間薬物での処置により、ピーク血糖可動域（ｐｅａｋ  ｇｌｙｃｅｍｉｃ  ｅｘｃｕｒｓｉｏｎ）が、ビヒクル処置動物で認められた経口グルコース投与から３０分後の約４００ｍｇ／ｄＬから薬物処置群における２００ｍｇ／ｄＬ未満に減少した。
（実施例１６）
実施例１６．食事性肥満（ＤＩＯ）マウスの高血糖処置。薬物がインスリンに対する末梢感受性（ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ）を増強する効果を、動物に高脂肪食（総カロリー摂取の６０％）を少なくとも６週間与えることによってインスリン抵抗性状態を達成したマウスモデルで研究することができる。このモデルは、例えば、Ｊ．Ｎ．Ｔｈｕｐａｒｉら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９９（１４）：９４９８−９５０２，２００２，Ｈ．Ｘｕら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ，１１２：１８２１−１８３０，２００３，Ｈ．Ｔａｋａｈａｓｈｉら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２７８（４７）：４６６５４−４６６６０，２００３に記載されている。これらの食事条件下で、マウスは体重（＋３５ｇ）および耐糖能障害状態が増大し、この状態は、標準的なＯＧＴＴ（経口グルコース負荷試験）中の経口投与したグルコースのクリアランス時間の有意な遅延として示される。
【０１６７】
これらの研究のために、約４週齢の動物を、それぞれ１０匹からなる群に分け、次いで、経口強制飼養によってビヒクル対照（薬物なし）または１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールで処置した。１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールを、２０ｍｇ／ｋｇ、４０ｍｇ／ｋｇ、または８０ｍｇ／ｋｇにて１日２回、２８日間にわたって投与した。投与期間中の１４日目および２８日目に、ＯＧＴＴを行なった。このインスリン抵抗性のＤＩＯ−モデルでは、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールは、ＯＧＴＴ血糖可動域の有意な改善によって示されるように、ビヒクル対照動物と比較して耐糖能障害が顕著に減少した。これらの所見は、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールが末梢インスリン感受性または取り込みを増強し、これらの動物における耐糖能障害を改善することを示した。
（実施例１７）
実施例１７．実施例１５に記載のプロトコールと類似の処置プロトコールを、実施例１５に記載の動物よりも若いｄｂ／ｄｂマウスを使用して行なった。動物（ｎ＝８〜１０匹／群）を、経口強制飼養によって１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールまたはビヒクルを、４０ｍｇ／ｋｇ／日（２０ｍｇ／ｋｇの用量を１日２回投与する）および８０ｍｇ／ｋｇ／日（４０ｍｇ／ｋｇの用量を１日２回投与する）で１日に２回処置した。投与開始時に、動物は６週齢であり、血糖値上昇または高血糖の発症以前であった。ビヒクルまたは薬物の投与を３２日間維持して、動物の高血糖の発症および進行速度に及ぼす処置の影響を決定した。対照群では、高血糖の発症は投与から２５日後に認められ、悪化し続けた（すなわち、血糖値は、３２日の投与期間の終了まで正常値から完全な高血糖まで上昇した）。対して、両薬物処置群の血糖値は、３２日の投与期間の終了まで正常レベルをこえて上昇しなかった。これは、薬物処置により、一連のプロトコールにわたって高血糖の発症を遅延させたことを示した。
【０１６８】
８週齢の糖尿病ｄｂ／ｄｂマウスへの１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールの投与により、高血糖レベルの基本血糖値が顕著に抑制され、この効果は投与１０日後に明白になり始め、４０ｍｇ／ｋｇ用量群での１日に２回の連続処置によってさらに１８日間持続された。より若い６週齢の雄ｄｂ／ｄｂマウスでは、４０ｍｇ／ｋｇの１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールでの処置により、２５日間の投与後のビヒクル処置群で認められた動物の高血糖状態への進行が完全に遮断された。処置動物は、痩せたｄｂ／＋同腹仔由来の血糖値に匹敵する血糖値を維持した。さらに、処置動物モデルで実施したＯＧＴＴ由来の結果は、ビヒクル対照動物と比較して、耐糖能障害の有意な改善を示した。
（実施例１８）
実施例１８．８週齢のｄｂ／ｄｂ糖尿病マウスのグルコース低下。高インスリン血−正常血糖クランププロトコールを実施して、インビボでのインスリン感受性を測定した。この手順では、インスリンを投与してインスリン濃度を上昇させる一方で、グルコースを注入して正常血糖または固定された正常血糖値（約１８０ｍｇ／ｄＬ）を維持した。正常血糖の維持に必要なグルコース注入率（ｇｌｕｃｏｓｅ  ｉｎｆｕｓｉｏｎ  ｒａｔｅ）（ＧＩＲ）は、これらの動物におけるインスリン作用を示した。このプロトコールの目的は、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールおよびアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオールが高インスリン血−正常血糖クランプモデルにおいて全身性インスリン抵抗性を改善し、全身グルコース破棄（ｗｈｏｌｅ  ｂｏｄｙ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｄｉｓｐｏｓａｌ）を改善する能力を調査し、特徴づけることであった。骨格筋および肝臓インスリン感受性の程度ならびに組織特異的グルコース取り込みも評価した。動物に、経口強制飼養によって１４日間毎日投与した。処置１０日目に、頸動脈および頸静脈にカテーテルを埋め込んだ。クランプ日（１４日目）の午前７：３０に化合物を投与した。
【０１６９】
体重およびグルコース濃度を、処置の０、７、および１４日目に評価した。１４日目に、正常血糖高インスリン血クランプを行なった。７：３０の食事を抜き、１０：３０に［３−３Ｈ］−グルコース（０．０５μＣｉ／分）の連続注入を開始した。ベースライン血液サンプルを１２：５０（−１０分）に採取し、１：００（０分）に、１０ｍＵ／ｋｇ／分のインスリンの投与によって正常血糖高インスリン血症のクランプを開始した。グルコースを種々の速度で注入して、グルコース濃度を約１８０ｍｇ／ｄＬに固定した。研究終了時に［１４Ｃ］−２デオキシグルコースのボーラスを投与して、組織特異的グルコース取り込みを評価した。血漿１４Ｃ２−デオキシグルコースを、１２２、１２５、１３０、１３５、１４５分で評価した。次いで、動物を、ペントバルビタールナトリウムの静脈内注入によって麻酔し、選択した組織を取り出し、液体窒素中で直ちに凍結し、分析するまで−７０℃で保存した。
【０１７０】
以下のように分析を行なった。血漿サンプルを、Ｂａ（ＯＨ）２（０．３Ｎ）およびＺｎＳＯ４（０．３Ｎ）でタンパク質除去し、乾燥させ、シンチレーションカウンタ（Ｐａｃｋａｒｄ  ＴＲＩＣＡＲＢ  ２９００  ＴＲ，Ｍｅｒｉｄｅｎ，ＣＴ）で放射能を評価した。凍結組織サンプルを、０．５％過塩素酸中で均質化し、遠心分離し、中和した。第１の上清を直接計数して、［１４Ｃ］ＤＧおよび［１４Ｃ］ＤＧＰの両方由来の放射能を決定した。第２のアリコートを、Ｂａ（ＯＨ）２およびＺｎＳＯ４で処置して、１４Ｃ  ＤＧＰを除去し、任意のトレーサーをグリコーゲンに組み込み、計数して、遊離［１４Ｃ］ＤＧ（２）由来の放射能を決定した。［１４Ｃ］ＤＧＰを、２つのアリコート間の相違として計算した。［１４Ｃ］ＤＧＰの蓄積を、組織重量およびトレーサーボーラスに標準化した。Ｒｇ（組織特異的グルコース取り込みの指標）を、以前に記載のように計算した（Ｅ．Ｗ．Ｋｒａｅｇｅｎら、Ａｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．，２４８：Ｅ３５３−Ｅ３６２，１９８５）。全血グルコース代謝回転を、３Ｈグルコース注入率（ｄｐｍ／ｋｇ／分）と動脈血漿グルコース特異的活性（ｄｐｍ／ｍｇ）との比率として計算した。内因性グルコース産生を、全身グルコース代謝回転と外因性グルコース注入率との間の相違として計算した（Ｒ．Ｎ．Ｂｅｒｇｍａｎら、Ｅｎｄｏｃｒ．Ｒｅｖ．，６：４５−８６，１９８５）。処置群を、以下に示す表にまとめる。
【０１７１】
【化８】
2009534427.tif 000008
インスリン用量は、１０ｍＵ／ｋｇ／分であった。正常な動物では、血糖値を約１５０ｍｇ／ｄｌに維持するためにこのインスリン用量に約９０ｍｇ／ｋｇ／分のグルコースを注入する必要があり得る。全処置群における平均グルコース必要量は、正常群の約５０％であった。結果は、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールおよびアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオールの両方が、ビヒクル対照と比較してグルコース注入率を増加させることを示した。これは、Ｂ、Ｃ、Ｄ、およびＥ群でインスリン作用が改善したことを意味する。
【０１７２】
３−３Ｈグルコーストレーサーを使用して、基本期間中の肝臓グルコース産生率およびインスリンがクランプ中の肝臓グルコース産生を抑制する能力を計算した。重症インスリン抵抗性動物では、内因性グルコース産生は、使用したインスリン用量で約５０％減少するであろう。Ｃ、Ｄ、およびＥ群では、インスリンは、内因性グルコース産生を完全に抑制し（ｐ＜０．０５）、肝臓インスリン作用が改善を示した。
【０１７３】
末梢インスリン作用を評価するために、正常血糖高インスリン血症のクランプ中の組織特異的グルコース取り込みを、１４Ｃ−２−デオキシグルコースを使用して評価した。１２０分で１４Ｃ−２−デオキシグルコースのボーラスを投与した。２５分後に組織を回収した。組織を、１４Ｃ−２−デオキシグルコースホスフェートの全蓄積について分析した。このプロトコールでは、脳グルコース取り込みは、ほとんどの治療計画の影響を受けず、それにより、内部対照として役立つ。結果は、脳グルコース取り込みが全群間で類似していたことを示した。心臓および横隔膜では、グルコース取り込みは、ビヒクル対照群と比較して処置群でより高かった。アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオールおよびロシグリタゾンの両方は、腓腹筋での筋肉グルコース取り込みの増加により有効であった（ｐ＜０．０５）。非酸化性筋肉群である白色広筋（ｗｈｉｔｅ  ｖａｓｔｕｓ  ｍｕｓｃｌｅ）では、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオールとロシグリタゾンとの間を除いて相違は検出されなかった。
（実施例１９）
実施例１９．０．４５％ｗｔ／ｗｔのアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールを含む標準的な実験用固形飼料をラットに６日間自由に与え、その後、６日目に肝臓中のホスホエノールピルビン酸カルボキシキナーゼ（「ＰＥＰＣＫ」）および１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ（「１１β−ＨＳＤ」）のレベルについて肝臓組織を分析した。対照動物に通常の固形飼料を与え、６日目に肝臓をＲＴ−ＰＣＲによる伝令ＲＮＡ（ｍＲＮＡ）の測定によってＰＥＰＣＫおよび１１β−ＨＳＤレベルについて試験した。対照動物および処置動物の両方に水を自由に与えた。以下に示すように、化合物を含む固形飼料の６日間の投与により、肝臓組織中の１１β−ＨＳＤ  １型（「１１β−ＨＳＤ１」）およびＰＥＰＣＫのレベルの減少が見出された。これらの動物におけるＰＰＡＲα  ｍＲＮＡレベルは、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールの供給の影響を受けなかった。
【０１７４】
【化９】
2009534427.tif 000009
別の研究では、化合物１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールのマウスへの投与により、骨芽細胞中の１１β−ＨＳＤ１の発現が約５０％減少することが見出され、これは、化合物がデキサメタゾン（インビボで骨喪失を誘導する糖質コルチコイド）で処置したマウスにおいて骨スペアリング効果（ｂｏｎｅ−ｓｐａｒｉｇｎ  ｅｆｆｅｃｔ）を有するという所見と一致する。
【０１７５】
別の研究では、２０ｍｇ／ｋｇの１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールで処置した痩せたｄｂ／＋マウスまたは糖尿病ｄｂ／ｄｂマウス由来の生殖腺周囲の（ｐｅｒｉｇｏｎａｄａｌ）脂肪組織由来の総ＲＮＡを単離し、ｉＣｙｃｌｅｒ  ｉＱ多色リアルタイム検出システム（Ｂｉｏ−Ｒａｄ）の使用による単球化学誘引タンパク質−１（ＭＣＰ−１）に特異的なプライマーを使用した定量的ＲＴ／ＰＣＲのために処理した。ＲＮＡ発現レベルを、ビヒクル対照に関して標準化した。化合物は、単球化学誘引物タンパク質−１（ＭＣＰ−１）レベルを約５０％減少させることが見出された。この研究のために、年齢をマッチングした痩せたヘテロ接合性ｄｂ／＋マウス（ｎ＝７）の対照群にもビヒクルを投与した。
【０１７６】
１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７α，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，７β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，４β，１６α，１７β−テトラオールなどの他の化合物あるいはこれらの化合物のモノエステルまたはジエステル（例えば、３位または１７位に１つまたは２つのアセテートまたはプロピオネートを含む化合物）を、類似の様式で、肝細胞もしくは肝臓由来の細胞または他の組織もしくは細胞（腎臓、筋肉、骨の組織または細胞、脂肪の組織または細胞、またはＣＮＳの組織または細胞（例えば、ニューロンまたは神経膠）など）中のＰＥＰＣＫまたは１１β−ＨＳＤ（１１β−ＨＳＤ  １型または１１β−ＨＳＤ  ２型など）のレベルまたは活性を減少させる能力について試験する。
（実施例２０）
実施例２０．ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ調節細胞の生成の阻害またはインビボでのその活性。類遺伝子Ｂ６．ＳＪＬマウス（ＣＤ４５．１）由来の精製ＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞（５×１０６細胞）を、群あたり５匹の各Ｂ６マウス（ＣＤ４５．２）に順応して移入した。少なくとも２回のドナー細胞の蛍光励起細胞分取器（ＦＡＣＳ）によって、精製ＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞を得た。ビヒクル（０．１％カルボキシメチルセルロース、０．９％生理食塩水、２％  ｔｗｅｅｎ８０、０．０５％フェノール）または１６α−ブロモエピアンドロステロンを含むビヒクル（１ｍｇ／動物／日を含む１００μＬビヒクル）を、ＣＤ４５．１ドナー動物由来の細胞の移入前に皮下注射し、注射を１４日間毎日継続した。１５日目に、胸腺、リンパ節、および脾臓を、動物から採取した。脾臓、リンパ節、および脾臓のサンプルを個体から得、細胞を、ＣＤ４、ＣＤ２５、ＣＤ１０３、またはＦｏｘｐ３に結合する蛍光抗体で標識した。次いで、細胞をフローサイトメトリーによって分析して、種々の細胞型を計数した。各処置群のリンパ節および脾臓由来の残りの細胞をプールし、ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞を予め富化し、次いで、宿主（内因性ＣＤ４５．２細胞）およびドナー細胞（インビボで１５日間の存在（ｒｅｓｉｄｉｎｇ）後にＣＤ４＋ＣＤ２５−ドナー表現型をＣＤ４＋ＣＤ２５＋表現型に変換したＣＤ４５．１細胞）から生じたＣＤ４＋ＣＤ２５＋について分析した。細胞を、細胞分取器によって分析した。調節機能を試験するために、種々の数の精製した変換ＣＤ４５．１または内因性ＣＤ４５．２  ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞を、２０００  ＣＤ４＋ＣＤ２５−レスポンダー細胞、抗原提示細胞としての１×１０５個の照射脾臓細胞、および０．５ｍｇ／ｍｌの抗ＣＤ３抗体と同時培養した。新鮮なＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞を対照として使用した。培養開始から４日後の３Ｈ−チミジン取り込みの測定によって、増殖を決定した。
【０１７７】
結果は、薬物処置動物由来の脾臓中のドナーＣＤ４５．１  ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞数がビヒクル対照動物由来の脾臓中のＣＤ４５．１  ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞数より少なかったことを示した。平均ビヒクル対照ＣＤ４５．１ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞数は１．９７×１０５細胞であったのに対して、薬物処置動物由来のＣＤ４５．１ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞の平均は０．６２×１０５個であった。
【０１７８】
薬物処置動物由来の脾臓中の内因性ＣＤ４５．２  ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞数はまた、ビヒクル対照動物由来の脾臓中のＣＤ４５．１ＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞数より少なかった。平均ビヒクル対照ＣＤ４５．２ＣＤ４＋ＣＤ２５＋の細胞数は９．５４×１０６個であったのに対して、薬物処置されたＣＤ４５．２ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞の平均数は５．４９×１０６個であった。
【０１７９】
ビヒクル対照動物の胸腺中の平均内因性ＣＤ４５．２ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞は３．１０×１０５であったのに対して、薬物処置動物では１．５９×１０５個であった。
【０１８０】
薬物処置動物由来の脾臓中の総ドナーＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞と比較したドナーＣＤ４５．１  ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１０３＋細胞の比率は、ビヒクル対照動物由来の脾臓中の総ドナーＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞と比較したＣＤ４５．１  ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１０３＋Ｔｒｅｇ細胞数より低かった。脾臓中の内因性ＣＤ４５．２  ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１０３＋Ｔｒｅｇ細胞の比率は、ビヒクル対照動物（１３．８５％）と薬物処置動物（１３．４０％）と比較してほぼ同一であった。ビヒクル対照のドナーＣＤ４５．１  ＣＤ４＋ＣＤ２５＋ＣＤ１０３＋細胞の平均は２９．０６％であったのに対して、薬物処置動物中の平均は９．６３％であった。ＣＤ１０３表面抗原は、活性化Ｔｒｅｇ細胞によって発現される。これは、活性化ＣＤ４５．１  ＣＤ４＋ＣＤ２５＋細胞の相対比率が、ビヒクル対照よりも薬物処置動物で低く、これは、インビボでのドナー細胞のＴｒｅｇ細胞活性の阻害と一致する。
【０１８１】
このプロトコールの適切な変形形態には、（１）より多数のドナーＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞／動物（例えば、１×１０６／動物、１．５×１０６／動物、または２×１０６／動物）の使用、（２）薬物の異なる１日投薬量、（３）薬物の異なる投与経路、（４）薬物として異なる化合物、および（５）さらなる動物群（例えば、抗炎症性または免疫抑制性糖質コルチコイド（デキサメタゾンまたはコルチゾールなど）などの別の治療薬を投与する群）を含めることが含まれる。これらの変形形態のいくつかを、実施例３のプロトコールまたは引用した参考文献のいくつかに適用することができる。
（実施例２１）
実施例２１．インビボでのＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔ調節細胞の増加またはその活性。以前に記載のコラーゲン誘導性関節炎動物モデルに記載のように、化合物１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールをマウスに投与した。Ｈ．Ｏｆｆｎｅｒら、Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１１０：１８１−１９０，２００６。
【０１８２】
ＤＢＡ／１Ｌａｃ／Ｊマウスを研究に使用した。マウスを、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｈａｒｂｏｒ，ＭＡ）から入手し、適用される施設ガイドラインに従って収容した。ウシＩＩ型コラーゲン（ｂＣＩＩ）を使用して、８週齢のマウスを２００μｇ結核菌を含むＣＦＡ（１００μＬ；Ｄｉｆｃｏ，Ｄｅｔｒｏｉｔ，ＭＩ）と１：１で乳化した２００μｇのｂＣＩＩで免疫化することによってコラーゲン誘導性関節炎（ＣＩＡ）を誘導した。抗原を、尾部の付け根に皮内注射した。動物を４〜７週間モニタリングして、疾患後免疫化の発生および進行を観察した。関節炎の重症度を、以下のスケールに従った各脚の悪性度分類システムを使用して評価した：０＝潮紅または腫脹なし、１＝足関節のわずかな腫脹または足の潮紅、２＝進行した腫瘍および炎症ならびに足関節から足の中央までの潮紅、３＝足全体の腫脹および炎症、４＝つま先を含む足全体の腫瘍および炎症。
【０１８３】
免疫化後、マウスを、経口強制飼養によって４０ｍｇ／ｋｇ／日の薬物を含むビヒクルで処置した。この処置を観察可能な臨床的疾患の開始時に開始する（免疫化から約２６〜２７日後から開始する）。プロトコールに使用したビヒクルは、３０％シクロデキストリン−スルホブチルエーテル水溶液であてた。シクロデキストリン−スルホブチルエーテルを購入した（ｃｙｄｅｘｉｎｃ．ｃｏｍで入手可能なＣａｐｔｉｓｏｌ（商標））。製剤は、２０ｍｇ薬物／ｍＬを含むビヒクルであった。
【０１８４】
薬物処置動物から得た結果は、以下に示すように、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールの投与によって全脾臓細胞中のＦｏｘｐ３＋およびＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋発現細胞の頻度が増加することを示した。
【０１８５】
【化１０】
2009534427.tif 000010
細胞分取器分析は、対照動物（１．０％）と比較して薬物処置動物（１．４％）中のＦｏｘｐ３＋ＣＤ４＋細胞が増加することを示した。Ｆｏｘｐ３タンパク質は、ＣＤ４＋ＣＤ２５−Ｔ細胞のＣＤ４＋ＣＤ２５＋Ｔｒｅｇ細胞への分化または変換に関連し、Ｆｏｘｐ３を発現する細胞の数の増加は、Ｔｒｅｇ細胞のその前駆細胞からの発生の増加を示す。免疫化後、マウスを、経口強制飼養によって４０ｍｇ／ｋｇ／日の薬物を含むビヒクルで処置した。この処置を観察可能な臨床的疾患の開始時に開始する（免疫化から約２６〜２７日後から開始する）。薬物処置動物から得た結果は、以下に示すように、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールの投与によって全脾臓細胞中のＦｏｘｐ３＋およびＣＤ４＋Ｆｏｘｐ３＋発現細胞の頻度が増加することを示した。免疫化から４４〜４９日後にビヒクル対照と比較して薬物処置動物において統計的に改善された臨床スコアがこれと一致した。３４〜３９日目の間に、ビヒクル対照動物は６．８〜８の平均臨床スコアを示した一方で、薬物処置動物は、３４日目に約５の最大平均臨床スコアを示し、４９日目までの約３の平均スコアにゆっくり低下した。これらの結果は、ビヒクル対照動物と比較して、化合物が関節炎の進行を遅延させ、その最大重症度を低下させることを示した。
（実施例２２）
実施例２２．化合物の合成を以下に示す。
【０１８６】
アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α、１７β−テトラオール（７）。
【０１８７】
【化１１】
2009534427.tif 000011
５−アンドロステン−３β，１６α−ジオール−１７−オンジアセテート（３）。１６α−ブロモデヒドロエピアンドロステロン２を、臭化銅（ＩＩ）を含むメタノール中でのＤＨＥＡ（１）の還流によって調製した。１５．０ｇの２（４０．８ｍｍｏｌ）を含むピリジン（１２９ｍＬ）および水（３０９ｍＬ）を、１２０ｍＬの１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液に添加し、混合物を大気中で１５分間撹拌した。反応混合物を、塩化ナトリウムで飽和し、過剰な塩酸を含む氷水に注いだ。粗生成物を濾過し、中和するまで水で洗浄し、無水塩化カルシウムにて５５〜６０℃の真空下で乾燥させた。メタノールからの再結晶により、８．２１ｇの１６α−ヒドロキシ−ＤＨＥＡ（Ｍｐ１９４．４〜１９５．１℃）を得た。次いで、この生成物を、過剰な酢酸を含むピリジンでの処理によってジアセテート３に変換し、フラッシュクロマトグラフィによって精製した。
【０１８８】
５−アンドロステン−３β，１６α−ジオール−７，１７−ジオン（５）。セライト（６０ｇ）および二クロム酸ピリジニウム（７５ｇ）を含む３（２０．１ｇ、５１．７ｍｍｏｌ）のベンゼン溶液に、２２ｍＬの７０％ｔｅｒｔ−ブチル過酸化水素を添加した。室温で２日間の撹拌後、ジエチルエーテル（６００ｍＬ）を添加し、沈殿物を濾過し、エーテル（２×１００ｍＬ）で洗浄した。残渣を、フラッシュクロマトグラフィ（６０％酢酸エチルを含むヘキサン）によって精製し、再結晶して、プリズムとして１６．０ｇ（３９．８ｍｍｏｌ、７７％）の５を得た。Ｍｐ２０５．６〜２０６．２℃。
【０１８９】
５−アンドロステン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール（７）。０℃の５（１０．０ｇ、２４．８ｍｍｏｌ）を含むジクロロメタン（７５ｍＬ）およびメタノール（２５５ｍＬ）の溶液に、１．５ｇの水素化ホウ素ナトリウムを添加し、混合物を０℃で１時間撹拌した。酢酸（３．５ｍＬ）での反応停止後、反応混合物を、ジクロロメタンと水との間で分配した。有機層を、７αジアセテートテトラオールと７βジアセテートテトラオールとの混合物に濃縮した。この混合物を、フラッシュクロマトグラフィおよびＨＰＬＣによって精製して、２．９０ｇの７β−エピマー（９．５ｍｍｏｌ、３８％）を得た。Ｍｐ２１６．８〜２２０．８℃。メタノール（１００ｍＬ）中の１Ｎ水酸化ナトリウム（６０ｍＬ）を用いた室温で２日間の鹸化およびＨＰＬＣによる精製により、アセトニトリル水溶液から細針として７（１．４１ｇ、４．４ｍｍｏｌ、４６％）を得た。Ｍｐ２０２．１〜２０６．４℃；［ａ］Ｄ＋１．３５（メタノール，ｃ＝１）。選択した１Ｈ  ＮＭＲピーク（ＣＤ３ＯＤ）：ｄ０．７７（ｓ，３Ｈ），１．０１（ｓ，３Ｈ），３．３９（ｄ，１Ｈ），３．４６（ｍ，１Ｈ），３．７４（ｔ，１Ｈ），４．０４（ｍ，１Ｈ），５．５５（ｄｄ，１Ｈ）。
３α，７α，１７β−トリアセトキシアンドロスタ−５−エン−１６α−オール（８）、アンドロスタ−５−エン−３α，７α，１６α，１７β−テトラオール（９）。
【０１９０】
【化１２】
2009534427.tif 000012
１６α−ブロモ−５−アンドロステン−３α−オール−１７−オン（２）。５−デヒドロアンドロステロン（１）（１７．８ｇ、６１．７ｍｍｏｌ）のメタノール（１．３５Ｌ）溶液を、臭化銅（ＩＩ）（３６．４ｇ、１６３ｍｍｏｌ）で撹拌しながら１９時間還流した。冷却した反応混合物に、水（１．３５Ｌ）およびジクロロメタン（１．５Ｌ）を添加した。有機層を無水硫酸ナトリウムで濾過し、生成物をメタノールから細針として結晶化した（１６．７ｇ、４５．５ｍｍｏｌ、７４％）。Ｍｐ１９５〜２０７℃。
【０１９１】
３α，１６α−ジアセトキシ−５−アンドロステン−１７−オン（４）。２（１２．０ｇ、３２．７ｍｍｏｌ）を含むピリジン（１．０３２Ｌ）および水（０．２４７Ｌ）の溶液に、大気中で１Ｎ水酸化ナトリウム（９０ｍＬ）を添加し、混合物を室温で１５分間撹拌した。反応混合物を、１．２Ｌの１Ｎ塩酸を含む氷水混合物に添加した。塩化ナトリウムでの溶液の飽和後、酢酸エチル（２×１Ｌ）で抽出した。合わせた有機層を、ブライン（２５０ｍＬ）で洗浄し、無水硫酸ナトリウムで濾過し、濃縮した。粗５−アンドロステン−３α，１６α−ジオール−１７−オン（３）を、過剰な無水酢酸を含むピリジンにて室温で一晩処理し、カラムによって精製して、メタノールからプリズムとして４（７．４６ｇ、１９．２ｍｍｏｌ、５９％）を得た。Ｍｐ１７２．７〜１７３．７℃。
【０１９２】
５−アンドロステン−３α，１６α，１７β−トリオール３，１６−ジアセテート（５）。０℃のエンジオロンアセテート４（７．４６ｇ、１９．２ｍｍｏｌ）を含むジクロロメタン（４５ｍＬ）およびメタノール（１２０ｍＬ）の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（９５０ｍｇ）を添加した。溶液を、０℃で１時間撹拌した。過剰量の酢酸の添加後、反応混合物を、ジクロロメタンと水との間で分配した。有機層を無水硫酸ナトリウムで濾過し、濃縮して、１７α（副成分）エピマーと１７β（主成分）エピマーとの混合物を得た。この混合物をフラッシュクロマトグラフィ（２５％酢酸エチルを含むヘキサン）によって精製して、６．１ｇ（１５．６ｍｍｏｌ、８１％）の１７βエピマー５を得た。Ｍｐ１２６．９〜１２８．６℃。トリアセテート６を、過剰な無水酢酸を含むピリジンにて室温で一晩処理した５から作製し、カラムによって精製して、６．０ｇ（１３．９ｍｍｏｌ、８９％）を得た。
【０１９３】
５−アンドロステン−３α，１６α，１７β−トリオール−７−オントリアセテート（７）。トリアセテート６（６．０ｇ、１３．９ｍｍｏｌ）のベンゼン（２５５ｍＬ）溶液を、セライト（２５．５ｇ）、二クロム酸ピリジニウム（３１．５ｇ）、および７０％ｔｅｒｔ−ブチル過酸化水素（９．０ｍＬ）で処理し、室温で１９時間撹拌した。無水ジエチルエーテル（２５５ｍＬ）を添加し、反応混合物を氷浴中で１時間冷却した。得られた固体を濾取し、エーテル（２×５０ｍＬ）で洗浄した。合わせた有機部分を濃縮し、フラッシュクロマトグラフィ（２９％酢酸エチルを含むヘキサン）によって精製して、３．４５ｇの７（７．７ｍｍｏｌ、５５％）を得た。
【０１９４】
５−アンドロステン−３α，７α，１６α，１７β−テトラオール（９）。０℃の７（３．４５ｇ、７．７ｍｍｏｌ）を含むジクロロメタン（１５ｍＬ）およびメタノール（３０ｍＬ）の溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（１．０ｇ）を添加し、溶液を０℃で２時間撹拌した。過剰な酢酸（１．５ｍＬ）の添加後、反応混合物を、ジクロロメタンと水との間で分配した。有機層を無水硫酸ナトリウムで濾過し、濃縮して７α（副成分）エピマーと７β（主成分）エピマーとの混合物を得た。この混合物を、メタノール（１００ｍＬ）中で１Ｎ水酸化ナトリウム（６０ｍＬ）にて室温で一晩鹸化した。粗テトラオールを、鹸化混合物の酢酸エチルとブラインとの間の分配によって回収した。エピマーをＨＰＬＣによって分離して、２２０ｍｇの９（０．６８ｍｍｏｌ、９％）を得た。Ｍｐ２４３〜２４８．３℃。選択した選択した１Ｈ  ＮＭＲピーク（ＣＤ３ＯＤ）：δ０．７７（ｓ，３Ｈ），１．０２（ｓ，３Ｈ），２．１１（ｍ，１Ｈ），２．５７（ｍ，１Ｈ），３．３４（ｓ，１Ｈ），３．４４（ｄ，１Ｈ），３．７０（ｂｒ  ｔ，１Ｈ），４．０４（ｍ，２Ｈ），５．５５（ｄｄ，１Ｈ）。８のエピマーをＨＰＬＣによって分離して、精製された８およびその７β−アセテートエピマーを得た。
【０１９５】
アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１１β，１７β−テトラオール−３β−アセテート（８）、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１１β，１７β−テトラオール（９）、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−テトラオール−３β−アセテート−１１−オキシム（１０）。
【０１９６】
【化１３】
2009534427.tif 000013
Ｉ：１（４ｇ）の１５０ｍｌのＡｃ２Ｏ溶液に、ｐ−ＴｓＯＨの２．８ｇを室温で一晩添加し、７００ｍＬの氷水を徐々に添加し、固体が形成されるまで１時間撹拌し、濾取して白色固体生成物２（４．５５ｇ）を得た。
【０１９７】
ＩＩ：１．５ｇのＮａＢＨ４を含む３５ｍｌのＥｔＯＨおよび５ｍｌのＭｅＯＨの溶液に、２（１．２ｇ）を含む３０ｍｌのＥｔＯＨおよび１０ｍｌのクロロホルムの溶液を０℃でゆっくり添加した。溶液を、０℃で２時間、その後に室温で２時間撹拌し続けた。この後、４ｍｌの酢酸を添加して、ＮａＢＨ４によって反応停止させ、次いで、５０ｍｌの水を添加した。生成物を、ＥｔｏＡｃ（５０ｍｌ×３）での抽出によって単離し、真空下で溶媒を除去して粗生成物を得た。カラムクロマトグラフィによって精製して、３（２５０ｍｇ）を得た。
【０１９８】
ＩＩＩ：３（２００ｍｇ）の８ｍｌ  ＭｅＯＨ溶液に、０．３６ｇ  Ｈ５ＩＯ６の２ｍｌ水溶液を添加し、室温で１時間撹拌し、真空下で溶媒を除去し、水を添加し、ジクロロメタンで抽出した。カラムクロマトグラフィによって精製して、生成物４（６０ｍｇ）を得た。
【０１９９】
ＩＶ：４（０．４ｇ）のピリジン溶液（５ｍｌ）に、０．５ｍｌのアセテチルクロリド（ａｃｅｔｅｔｙｌ  ｃｈｌｏｒｉｄｅ）を０℃でゆっくり添加し、０℃で１５分間、次いで、室温で３０分間撹拌し続けた。反応物を２０ｍｌの水の添加によって反応停止させ、ＥｔｏＡｃ（１５ｍｌ×３）で抽出し、１Ｎ  ＨＣｌで洗浄し、ＮａＨＣＯ３、ブラインで飽和し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。真空濃縮により、５（５２０ｍｇ）を得た。
【０２００】
Ｖ：５（０．５ｇ）および０．１３ｇのＣｕＩの１５ｍｌアセトニトリル溶液に、３ｍｌ  ７０％ｔ−ＢｕＯＯＨをゆっくり添加し、１時間、その後に５０℃で２時間撹拌した。１２ｍｌの１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ５溶液を添加し、ＥｔＯＡｃで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を除去し、カラム運転して、６（８０ｍｇ）を得た。
【０２０１】
ＶＩ：６（５０ｍｇ）を含む１．５ｍｌのＴＨＦおよび３ｍｌのＭｅＯＨの溶液に、２６０ｍｇのＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏを添加し、次いで、７５ｍｇのＮａＢＨ４を０℃でゆっくり添加し、３０分間撹拌し、０．５ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌおよび５ｍｌ水を添加し、ＥｔｏＡｃ（５ｍｌ×３）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を除去して、７（４９ｍｇ）を得た。
【０２０２】
ＶＩＩ：３００ｍｇ  ＮａＢＨ４を含む４ｍｌ  ＥｔＯＨおよび１ｍｌ  ＭｅＯＨの溶液に、７（４０ｍｇ）を含む０．５ｍｌ  ＥｔＯＨおよび０．５ｍｌクロロホルムの溶液を添加し、０℃で８時間撹拌し、次いで、冷凍庫に一晩入れた。酢酸を添加して反応を停止させ、水を添加し、ＥｔｏＡｃで抽出して、８（３０ｍｇ）を得た。ｍｐ＞２５０℃；
【０２０３】
【化１４】
2009534427.tif 000014
ＶＩＩＩ：８（３０ｍｇ）のＭｅＯＨ溶液（１ｍＬ）に、ＮａＯＨ（５０ｍｇ）の０．２５ｍＬ水溶液を添加した。５０℃で１５分間撹拌し、次いで、１ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌ、水５ｍＬを添加し、ＥｔｏＡｃ（５ｍＬ×３）で抽出し、溶媒を除去して、９（２０ｍｇ）を得た。ｍｐ１７０〜１７２℃；
【０２０４】
【化１５】
2009534427.tif 000015
ＩＸ：２９ｍｇのＮＨ２ＯＨ・ＨＣｌおよび１７ｍｇのＮａＯＨを含む１ｍＬの加熱ＥｔＯＨ溶液に、９（５０ｍｇ）の１ｍＬの加熱ＥｔＯＨを添加し、１００℃で２時間還流し、塩を濾取し、ＥｔＯＨ／Ｈ２Ｏ中で再結晶して、１０（４０ｍｇ）を得た。ｍｐ＞２５０℃；
【０２０５】
【化１６】
2009534427.tif 000016
１７α−メチルアンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオール−３β−アセテート−７，１１−ジオン（７）、１７α−メチルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール−３β−アセテート−１１−オン（８）、メチルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール−１１−オン（９）。
【０２０６】
【化１７】
2009534427.tif 000017
Ｉ：１（４ｇ）のＡｃ２Ｏ溶液（１５０ｍｌ）に、ｐ−ＴｓＯＨ（２．８ｇ）を室温で一晩添加し、７００ｍＬ氷水を徐々に添加し、１時間撹拌し、固体を濾取して白色固体生成物２（４．５５ｇ）を得た。
【０２０７】
ＩＩ：１．５ｇのＮａＢＨ４を含む３５ｍｌのＥｔＯＨおよび５ｍｌのＭｅＯＨの溶液に、２（１．２ｇ）を含む３０ｍｌのＥｔＯＨおよび１０ｍＬのクロロホルムの溶液を０℃でゆっくり添加し、０℃で２時間、その後に室温で２時間撹拌し、４ｍＬ酢酸を添加してＮａＢＨ４によって反応停止させ、５０ｍＬ水を添加し、ＥｔｏＡｃ（５０ｍｌ×３）での抽出し、溶媒を除去して粗生成物を得た。カラムによって３（２５０ｍｇ）を得た。
【０２０８】
ＩＩＩ：３（２００ｍｇ）の８ｍｌ  ＭｅＯＨ溶液に、０．３６ｇ  Ｈ５ＩＯ６の２ｍｌ水溶液を添加し、室温で１時間撹拌し、真空下で溶媒を除去し、水を添加し、ＤＣＭで抽出し、次いで、カラムを運転して、生成物４（６０ｍｇ）を得た。
【０２０９】
ＩＶ：−７８℃で窒素下の４（２５０ｍｇ）を含む１．５ｍＬのＴＨＦおよび３．５ｍＬエーテルの溶液に、１ｍＬの２２％ＭｅＭｇＣｌを含むＴＨＦをゆっくり添加し、−７８℃で１．５時間、次いで、室温で１時間撹拌し、次いで、７５℃で１時間還流した。４ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌおよび１０ｍＬ水を０℃で添加した。ＥｔｏＡｃで抽出し、溶媒を除去して、粗生成物（２４９ｍｇ）を得た。カラム運転により、５（４６ｍｇ）を得た。
【０２１０】
Ｖ：５（１．０ｇ）の１５ｍＬピリジン溶液に、１．１ｍＬ塩化アセチルを０℃でゆっくり添加し、０℃で１５分間、次いで室温で３０分間撹拌し、５０ｍＬ水を添加し、ＥｔｏＡｃ（５０ｍＬ×３）で抽出し、１Ｎ  ＨＣｌで洗浄し、ＮａＨＣＯ３、ブラインで飽和し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を除去して、６（１．０２ｇ）を得た。
【０２１１】
ＶＩ：６（１．０ｇ）および０．３ｇのＣｕＩを含む４０ｍＬアセトニトリル溶液に、６ｍＬの７０％ｔ−ＢｕＯＯＨをゆっくり添加し、室温で１時間、次いで、５０℃で２時間撹拌した。２４ｍＬの１０％Ｎａ２Ｓ２Ｏ５溶液を添加し、ＥｔｏＡｃで抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を除去し、カラム運転して、７（２８５ｍｇ）を得た。ｍｐ＞２５０℃；
【０２１２】
【化１８】
2009534427.tif 000018
ＶＩＩ：７（４５ｍｇ）を含む１．５ｍＬのＴＨＦおよび３ｍＬのＭｅＯＨの溶液に、１５０ｍｇのＣｅＣｌ３・７Ｈ２Ｏを添加し、次いで、３０ｍｇのＮａＢＨ４を０℃でゆっくり添加し、１０分間撹拌し、０．５ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌおよび５ｍＬ水を添加し、ＥｔｏＡｃ（５ｍＬ×３）で抽出し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を除去して、８（４１ｍｇ）を得た。ｍｐ１０８〜１１０℃；
【０２１３】
【化１９】
2009534427.tif 000019
ＶＩＩＩ：８（２２ｍｇ）の１ｍＬのＭｅＯＨ溶液に、ＮａＯＨ（２３ｍｇ）の０．１ｍＬ水溶液を添加した。５０℃で１０分間撹拌し、次いで、１ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌ、水５ｍＬを添加し、ＥｔｏＡｃ（５ｍＬ×３）で抽出した。溶媒を除去して、９（１０ｍｇ）を得た。ｍｐ＞２５０℃；
【０２１４】
【化２０】
2009534427.tif 000020
１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール（８）、１７β−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７α−テトラオール（９）。
【０２１５】
【化２１】
2009534427.tif 000021
Ｉ：１（１．０ｇ）および０．５６ｇのイミダゾールを含む１５ｍｌのＤＭＦ溶液に、ＴＢＤＭＳ−Ｃｌ（１．２４ｇ）を室温で一晩添加し、５０ｍｌの水を徐々に添加し、固体が出現し、これを濾取して、白色固体生成物２（１．７５ｇ）を得た。
【０２１６】
ＩＩ：−７８℃に冷却した２（１．６４ｇ）のＴＨＦ溶液（５０ｍｌ）に、２．３ｍｌのＬＤＡを添加し、３０分後、０．６２ｍｌのＴＭＳＣｌをゆっくり添加し、−７８℃で３０分間撹拌し、室温に加温して１時間撹拌し、ここで、ＴＬＣがＲＸＮの完了を示し、エーテル（１５０ｍｌ×２）で抽出し、水およびブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて、黄色生成物３（１．８７ｇ）を得た。
【０２１７】
ＩＩＩおよびＩＶ：−２０℃に冷却した３（１０ｇ）のＴＨＦ溶液（２５０ｍｌ）に、ｍ−ＣＰＢＡの４．２ｇを添加し、３時間撹拌して４を形成し、次いで、２５０ｍｌのＭｅＯＨをゆっくり添加し、−２０℃で３０分間撹拌し、次いで、２００ｍｌのＮａ２ＳＯ３溶液を−２０℃でゆっくり添加し、１時間撹拌した。室温に加温し、エーテル（１５０ｍｌ×３）で抽出し、飽和ＮａＨＣＯ３、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させて、粗１１ｇを得て、生成物中のいくらかの過剰なｍ−ＣＰＢＡを除去し、短いカラム（１００％ヘキサン（５０ｍｌ×５）、次いで５０％ヘキサン／ＥｔｏＡｃ（１００ｍｌ×５））で運転して粗生成物５（８．５ｇ）を回収した。
【０２１８】
Ｖ：１０ｇの９０％リチウムアセチリド・エチレンジアミン複合体の乾燥ＴＨＦ溶液（２５０ｍｌ）に、５（５ｇ）の５０ｍＬ乾燥ＴＨＦ溶液をシリンジポンプで添加し、これに約８時間を要した。室温で一晩撹拌した。０℃で５００ｍＬの水を添加し、ＥｔｏＡｃ（１５０ｍＬ×３）で抽出し、２００ｍＬの０．１Ｎ  ＨＣＩ、１５０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３、１００ｍＬのブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させ、溶媒を除去して粗生成物５．５ｇを得、カラムを運転して２つの異性体（１７−β−ＯＨ（６（１．５ｇ））および１７−α−ＯＨ（７（１．２ｇ））を回収した。
【０２１９】
ＶＩ：６（２６５ｍｇ）を含む４ｍＬのＭｅＯＨおよび３ｍＬのＴＨＦの溶液に、４ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌを室温で１．５時間添加した。１０ｍＬの飽和ＮａＨＣＯ３を添加し、室温で有機溶媒を除去し、１０ｍＬの水を添加し、冷凍庫で一晩保存して水を除去し、固体にＴＨＦを添加し、濾過し、ＴＨＦを除去して、白色固体生成物８（１３０ｍｇ）を得た。ｍｐ２１４〜２１６℃；
【０２２０】
【化２２】
2009534427.tif 000022
ＶＩＩ：７（５００ｍｇ）を含む８ｍＬのＭｅＯＨおよび６ｍＬのＴＨＦの溶液に、８ｍＬの１Ｎ  ＨＣｌを室温で１．５時間添加した。飽和ＮａＨＣＯ３を添加して溶液をｐＨ８に中和した。５０ｍｌの水を添加して白色固体を得、濾過し、水、ブラインで洗浄し、真空下で乾燥させて、白色固体生成物９（２２５ｍｇ）を得た。ｍｐ＞２５０℃；
【０２２１】
【化２３】
2009534427.tif 000023
４β−アセチルアンドロスタ−５−エン−３β，１６α，１７β−トリオール（７）、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオール（化合物８）。
【０２２２】
【化２４】
2009534427.tif 000024
工程１：化合物１（２４．０ｇ、０．０８３２ｍｏｌ）と臭化銅（５６．０ｇ、０．２０ｍｏｌ）との混合物を含む無水メタノール（８００ｍＬ）を１６時間還流した。真空下でほとんどの溶媒を除去し、水（５００ｍＬ）を添加した。得られた沈殿物を濾過によって回収し、水で洗浄した。固体をメタノール中で２回再結晶して、淡黄色固体として化合物２を得た（１９．７ｇ）。
【０２２３】
工程２：化合物２（２２．０ｇ、０．０６０ｍｏｌ）を含む２００ｍＬのＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミドの撹拌溶液に、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（６６ｍＬ、０．０６６ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、室温で１時間撹拌した。１Ｎ塩酸水溶液（８ｍＬ）および４００ｍＬの水を添加した。得られた沈殿物を濾過によって回収し、水で洗浄した。メタノールからの再結晶によってこの粗生成物を精製して、白色固体として化合物３（１１．８ｇ）を得た。
【０２２４】
工程３：化合物３（１１．８ｇ、０．０３８７ｍｏｌ）のピリジン（５０ｍＬ）溶液に、塩化アセチル（１１．８ｇ、０．１２８ｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を、０℃で１時間撹拌した。得られた混合物を室温に加温し、さらに１時間撹拌した。水を添加した。濾過によって沈殿物を回収し、水で洗浄した。固体を真空下で乾燥させて化合物４（１２．６ｇ）を得て、さらに精製することなく工程を続行した。
【０２２５】
工程４：水素化アルミニウムリチウム（１．１３ｇ、０．０３０ｍｏｌ）を、化合物２（３．１０ｇ、０．００９１６ｍｏｌ）を含む８０ｍＬの無水エーテルの冷却溶液（０℃）に窒素下で添加した。氷浴を除去し、得られた混合物を室温で０．５時間撹拌し、次いで、１時間還流した。６Ｎ塩酸水溶液の添加によって反応を停止させた。減圧下でエーテルを除去した。得られた固体を濾過し、水で洗浄した。粗生成物をメタノール中で再結晶して、白色固体として化合物５（１．１ｇ）を得た。
【０２２６】
工程５：５（９１４ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ）を含む２０ｍＬのクロロホルム溶液に、ブロミド（３０３ｍｇ、３．１６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、室温で２０分間撹拌した。減圧下で溶媒を除去して化合物６を得て、さらに精製することなく工程を続行した。
【０２２７】
工程６：４β−アセチルアンドロスタ−５−エン−３β，１６α，１７β−トリオール（７）の調製。
【０２２８】
化合物６を、３０ｍＬの無水エーテルおよび１０ｍＬの無水ピリジンに溶解した。酢酸銀（１．０３ｇ、１（９１４ｍｇ、２．９８ｍｍｏｌ）を含む５ｍＬの無水ピリジン溶液を添加した。反応混合物を、暗所で０．５時間撹拌した。深緑色の沈殿物が沈殿した。エーテル（５０ｍＬ）を添加し、沈殿物を濾取した。濾過物を真空下で乾燥させた。残渣を、酢酸エチル：ヘキサン比が５０：５０で溶離するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィによって精製して、白色固体として表題化合物７（１２４ｍｇ）を得た。選択した
【０２２９】
【化２５】
2009534427.tif 000025
工程７：アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオール（８）の調製。化合物７（５０ｍｇ、０．１３７ｍｍｏｌ）を、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（１ｍＬ）およびメタノール（５ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を１時間還流した。減圧下でメタノールを除去し、残渣を酢酸エチル（３×３０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、および真空下で濃縮して固体を得た。粗生成物を、再結晶によってメタノールから精製して、白色固体として表題化合物８（２３ｍｇ）を得た。選択した
【０２３０】
【化２６】
2009534427.tif 000026
アンドロスタ−５−エン−３β，４β，７β，１７β−テトラオール（１２）（方法２）、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリアセトキシ−４β−オール（１１）。
【０２３１】
【化２７】
2009534427.tif 000027
工程１：化合物９（５．０ｇ、０．０１３８ｍｏｌ）のピリジン（２０ｍＬ）溶液に、塩化アセチル（１１．８ｇ、０．１２８ｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を０℃で５時間撹拌し、次いで、ほとんどの溶媒を真空下で除去した。残留スラッジを、酢酸エチル（８０ｍｌ）と水（２０ｍｌ）との間で分配した。有機層を、１Ｎ塩酸水溶液、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、次いで、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて固体にした。粗生成物を、酢酸エチルおよびヘキサンから再結晶して、白色固体として化合物１０（４．８ｇ）を得た。
【０２３２】
工程２：化合物１０（７２０ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）を含むジオキサン（１５ｍＬ）および酢酸（１０ｍＬ）の溶液に、二酸化セレン（１８５ｍｇ、１．６６ｍｍｏｌ）を含む水（１．５ｍＬ）およびジオキサン（５ｍＬ）を添加した。反応混合物を、９５℃で３６時間加熱した。混合物を室温に冷却、酢酸エチルで希釈し、水、飽和重炭酸ナトリウム、およびブラインで連続的に洗浄し、次いで、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して乾燥させた。粗生成物を、３：２のヘキサン：酢酸エチル比で溶離するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィによって精製して、白色固体として化合物１１（１７４ｍｇ）を得た。
【０２３３】
工程３：化合物１１（１４８ｍｇ、０．３３ｍｍｏｌ）を、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（３ｍＬ）およびメタノール（１０ｍＬ）に溶解し、得られた溶液を１時間還流した。ほとんどのメタノールを、真空下で除去した。水を添加し、混合物を超音波処理し、濾過した。回収した固体を、真空下で乾燥させて、白色固体として１２（８２ｍｇ）を得た。選択された
【０２３４】
【化２８】
2009534427.tif 000028
（ＶＩ）１６α−ブロモアンドロスタ−５−エン−３β−オール−１１β−アセトキシ−１７−オン（ＶＩＩ）、（ＶＩＩＩ）、アンドロスタ−５−エン−３β，１１β，１６α−トリアセトキシ−１７−オン（ＩＸ）、アンドロスタ−５−エン−３β，１１β，１６α−トリアセトキシ−１７β−オール（Ｘ）、アンドロスタ−５−エン−３β，１１β，１６α，１７β−テトラオール（ＸＩ）
【０２３５】
【化２９】
2009534427.tif 000029
ＩＩ．化合物Ｉ（４．０ｇ、１１．４ｍｍｏｌ）を、１００ｍｌの無水１，４−ジオキサンに溶解した。ナトリウムメトキシド（３．０ｇ、５５．２ｍｍｏｌ）を添加し、ＨＰＬＣによってモニタリングしながら混合物を無水条件下で３時間還流した。１／３の体積まで溶媒を除去し、混合物を、２Ｎ  ＨＣｌ水溶液でｐＨ＝５〜６に酸性化した。混合物を、３×５０ｍｌ  ＤＣＭで抽出した。有機層を再度合わせ、５０ｍｌの飽和重炭酸ナトリウムおよび５０ｍｌのブラインで洗浄した。硫酸ナトリウムでの乾燥および溶媒の蒸発後、３．５６ｇの純度９５％の生成物を単離した。
【０２３６】
ＩＩＩ．化合物ＩＩ（１３．５ｇ）およびｐ−トルエンスルホン酸（２．４５ｇ）を、１７５ｍｌ無水酢酸中で１８時間撹拌した。次いで、混合物を８００ｇの氷に注ぎ、１時間撹拌した。短いシリカゲルプラグによる濾過により、３．１４ｇの化合物ＩＩＩを得た。
【０２３７】
ＩＶ．化合物ＩＩＩ（１００ｍｇ）を、１．５５ｍｌのエチレングリコールに溶解し、その後にオルトギ酸トリエチル（３．７７ｍＬ）およびｐ−トルエンスルホン酸（５０ｍｇ）を添加した。次いで、混合物を、１．５時間還流し、次いで、６ｍｌのメタノールと０．０８ｍｌのピリジンとの加熱混合物に注いだ。混合物を冷却し、１５ｍｌの水を添加した。混合物を３×３０ｍｌの酢酸エチルで抽出し、飽和重炭酸ナトリウム（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。硫酸ナトリウムでの乾燥および溶媒の蒸発により、５０ｍｇの純度９７％のＶを得た。
【０２３８】
Ｖ．５０ｍｇのＩＶのＤＭＦ溶液（２ｍｌ）に、室温で０．５ｍｌの水に溶解した２７ｍｇ水素化ホウ素ナトリウムの溶液を添加した。溶液を、強く撹拌しながら１００℃に１５分間加熱し、その後に室温に冷却した。反応物を、１８ｍｌの水に注ぎ、その後に０．２ｍｌの酢酸に注いだ。混合物を酢酸エチル（２×１０ｍＬ）で抽出し、飽和重炭酸ナトリウム（１０ｍｌ）およびブライン（１０ｍｌ）で洗浄した。硫酸ナトリウムでの乾燥および溶媒の蒸発により、３９ｍｇの化合物Ｖを得た。
【０２３９】
ＶＩ．化合物Ｖ（５０ｍｇ）およびｐ−トルエンスルホン酸（２ｍｇ）を、２ｍｌのアセトンと０．２１ｍｌの水との混合物に懸濁し、１．５時間還流した。アセトンの蒸発後、１０ｍｌの水を添加し、溶液から生成物を沈殿させた。濾過により、純度９５％の４２ｍｇの所望の生成物を得た。
【０２４０】
ＶＩＩ．化合物ＶＩ（３１５ｍｇ）およびＣｕＢｒ２（６１１ｍｇ）を、７ｍｌの無水メタノールに添加し、２４時間還流した。次いで、反応混合物を冷却し、１５ｍｌの熱水に注ぎ、粗生成物を濾取した。次いで、粗生成物を２５ｍｌのメタノール／ＴＨＦ（１：１）に溶解し、次いで、２００ｍｇの活性炭を添加した。溶液を１０分間ボイルし、炭素を濾取した。粗生成物をメタノールから再結晶して、純度７５％の４２６ｍｇの生成物を得た。
【０２４１】
ＶＩＩＩ．化合物ＶＩＩ（４２０ｍｇ）を、１８ｍｌのＤＭＦと７ｍｌの水との混合物に溶解した。撹拌しながら水酸化ナトリウム水溶液を添加した（１Ｎ、１．３１ｍｌ）。１０分後、溶液を、１．５ｍｌの１Ｍ  ＨＣｌを含む氷／水混合物に注いだ。溶液を、ＮａＣｌで飽和し、２×５ｍｌの酢酸エチルで抽出した。硫酸ナトリウムでの乾燥および溶媒の蒸発後、粗生成物をカラムクロマトグラフィによって精製して、純度９５％の３００ｍｇのＶＩＩＩを得た。
【０２４２】
ＩＸ．化合物ＶＩＩＩ（３００ｍｇ）を、６ｍｌのピリジンに溶解し、その後に０．３４ｍｌの塩化アセチルを添加した。反応物を１８時間撹拌し、次いで、３０ｍｌの冷水に注いだ。粗生成物を濾取し、カラムによって精製して、１８０ｍｇの純粋な生成物を得た。
【０２４３】
Ｘ．化合物ＩＸ（１２０ｍｇ）を、５ｍｌのメタノールに溶解し、氷浴中で冷却した。水素化ホウ素ナトリウム（１１．５ｍｇ）を５分間にわたって添加し、氷浴を除去した。１時間後、反応物を０．２ｍｌの酢酸で反応停止させ、１５ｍｌの水を添加した。混合物を、３×２０ｍｌの酢酸エチルで抽出し、飽和重炭酸ナトリウム（２０ｍＬ）およびブライン（２０ｍＬ）で洗浄した。硫酸ナトリウムでの乾燥およびその後のカラムクロマトグラフィにより、８６ｍｇの所望の生成物を得た。
【０２４４】
ＸＩ．化合物Ｘ（１８０ｍｇ）を、５ｍｌの乾燥エチルエーテルに溶解し、−７８℃に冷却した。メチルマグネシウムブロミドを滴下し（１．２ｍｌ、１Ｍエチルエーテル溶液）。反応物を室温に加温し、３時間還流した。次いで、反応物を冷却し、１Ｍ  ＨＣｌで中和した。沈殿した生成物を濾取し、メタノール／水からの再結晶を３回行なって、３６ｍｇの純粋なＸＩを得た。融点＝２２０．３〜２２１．６℃。選択されたＮＭＲシフト：
【０２４５】
【化３０】
2009534427.tif 000030
アンドロスタ−５−エン−３β，１６α−ジアセトキシ−７，１７−ジオン（４）、アンドロスタ−５−エン−３β，１６α−ジアセトキシ−７β，１７β−ジオール（ＨＥ３４６７）．
【０２４６】
【化３１】
2009534427.tif 000031
２の合成。１（３．４４ｇ、１０ｍｍｏｌ）およびＴＭＳ−Ｃｌ（２．１５ｍｌ、１６．５ｍｍｏｌ）を含む−７８℃に冷却したＴＨＦ（１００ｍｌ）溶液に、２．０ＭのＬＤＡ（７．５ｍｌ、１５ｍｍｏｌ）を滴下した。溶液を３０分間撹拌し、室温に加温した。反応混合物を、１００ｍｌの１：１のヘキサン／エーテルと１００ｍｌの水との間で分配した。有機層を、ブライン（３×３０ｍＬ）で洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒を除去した後に、黄色オイルを得た。粗生成物を、５〜２０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサンを使用したシリカゲルでクロマトグラフィを行ない、白色固体として１．９ｇの１および２（６００ｍｇ、１．５４ｍｍｏｌ）を回収した（収率３１％）。
【０２４７】
３の合成。０℃に冷却した、２（１００ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）のＴＨＦ（３ｍｌ）溶液に、ｍＣＰＢＡ（７７％、６２．２ｍｇ、０．２７ｍｍｏｌ）を添加し、室温に加温した。０．５Ｎ  ＨＣｌ（３ｍｌ）を添加し、２０分間撹拌し、エーテルで抽出した。抽出物を、飽和重炭酸ナトリウム、ブラインで洗浄し、Ｎａ２ＳＯ４で乾燥させた。溶媒除去後に生成物３を得た（９０ｍｇ、０．２６ｍｍｏｌ）（収率１００％）。
【０２４８】
４の合成。０℃に冷却した、３（７２１ｍｇ、２．０ｍｍｏｌ）のピリジン（１０ｍＬ）溶液に、塩化アセチルを滴下し、０℃で２時間撹拌した。水（３００ｍＬ）で反応を停止させ、１５分間撹拌した。固体が形成され、濾過によって回収した。固体を水、１Ｎ  ＨＣｌ、および水で洗浄し、真空下で乾燥させて、オフホワイトの固体４（７３７ｍｇ）（収率９０％）を得た。
【０２４９】
ＨＥ３４６７の合成。−１５℃に冷却した、４（３００ｍｇ、０．７５ｍｍｏｌ）を含む１：１の比のＭｅＯＨ／ＴＨＦ（１５ｍｌ）溶液に、１５分間にわたってＮａＢＨ４（４２．５ｍｇ、１．１２ｍｍｏｌ）を添加した。−１５℃に冷却した、塩化セリウム（３００ｍｇ、０．８１ｍｍｏｌ）のＭｅＯＨ溶液を添加し、２分間撹拌した。１Ｎ  ＨＣｌで反応を停止させ、次いで、９０ｍＬの水を注いだ。固体が形成され、濾過によって回収した。固体を、１Ｎ  ＨＣｌおよび水で洗浄し、真空下で乾燥させて、ＨＥ３４６７（１８３ｍｇ、０．４５ｍｍｏｌ）（収率６０％）を得た。
【０２５０】
【化３２】
2009534427.tif 000032
５α−アンドロスタン−２β，３α，１６α，１７β−テトラオール（２２）。
【０２５１】
【化３３】
2009534427.tif 000033
工程１：１３（５０．０ｇ、０．１７２ｍｏｌ）のピリジン（１５０ｍＬ）溶液に、ｐ−トルエンスルホニルクロリド（４７．０ｇ、０．２４ｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を０℃で２時間撹拌し、次いで、室温で一晩撹拌した。水を添加した。得られた沈殿物を濾過によって回収し、水で洗浄した。粗生成物を、メタノールからの再結晶によって精製して、白色固体として１４（７５．２ｇ）を得た。
【０２５２】
工程２：化合物１４（７５ｇ、０．１６９ｍｏｌ）を含む２，４，６コリジン（２００ｍＬ）の混合物を、５時間還流した。冷却後、水（５００ｍＬ）を添加し、得られた沈殿を濾過によって回収し、水で洗浄した。メタノール中で固体を再結晶して、粗生成物（４２．５ｇ）を得た。粗生成物（２０．０ｇ）をクロロホルム（１１３ｍＬ）および無水酢酸（３７ｍＬ）に溶解した。溶液に、濃硫酸（３ｍＬ）を含むクロロホルム（３７ｍＬ）および１３ｍＬの無水酢酸の溶液を０℃で添加した。反応混合物を、０℃で０．５時間撹拌し、次いで、７００ｍＬの水を添加し、室温で６時間撹拌した。得られた沈殿物を濾過によって回収し、水で洗浄し、真空下で乾燥させて、白色固体として１５（１７．２ｇ）を得た。
【０２５３】
工程３：１５（８．１７ｇ、０．０３０ｍｏｌ）および臭化銅（１０．８ｇ、０．０４６ｍｏｌ）の混合物を、無水メタノール（２２０ｍＬ）中で１８時間還流した。冷却後、真空下でほとんどの溶媒を除去し、水（１５０ｍＬ）を添加した。得られた沈殿物を濾過によって回収し、水で洗浄した。固体をメタノール中で再結晶して、白色固体として１６（６．７６ｇ）を得た。
【０２５４】
工程４：１６（６．６９ｇ、０．０１９ｍｏｌ）を含むＮ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（１８０ｍＬ）の撹拌溶液に、１Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（２２ｍＬ、０．０２２ｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、室温で０．５時間撹拌した。１Ｎ塩酸水溶液（３ｍＬ）および１００ｍｌの水を添加した。得られた溶液を、酢酸エチル（３×２５０ｍＬ）で抽出した。合わせた抽出物を、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、真空下で濃縮して、蝋様固体として１７（４．３７ｇ）を得た。
【０２５５】
工程５：１７（３．７４ｇ、０．０１３ｍｏｌ）のピリジン（２０ｍＬ）溶液に、塩化アセチル（２．１８，０．０２８ｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を、０℃で１時間撹拌した。得られた混合物を室温に加温し、さらに１時間撹拌した。水を添加した。沈殿物を濾過によって回収し、水で洗浄した。固体を真空下で乾燥させて、白色固体として１８（４．２５ｇ）を得た。
【０２５６】
工程６：１８（２．４ｇ、０．００７２ｍｏｌ）のメタノール（８０ｍＬ）溶液に、水素化ホウ素ナトリウム（１．２ｇ、０．０３１ｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を、０℃で１時間撹拌した。反応物を、酢酸（６ｍＬ）および水（１５ｍＬ）の添加によって反応停止した。ほとんどのメタノールを、減圧下で除去した。残存スラッジを、酢酸エチル（８０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）との間で分配した。有機層を、１Ｎ塩酸水溶液で洗浄し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で中和し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、白色固体として生成物１９（１．９２ｇ）を得た。
【０２５７】
工程７：１９（１．９ｇ、０．００５７ｍｏｌ）のピリジン（２０ｍＬ）溶液に、塩化アセチル（１ｍＬ、０．０１４ｍｏｌ）を０℃で添加した。反応混合物を、０℃で１時間撹拌した。得られた混合物を、室温に加温し、さらに１時間撹拌し、次いで、ほとんどの溶媒を真空下で除去した。残存スラッジを、酢酸エチル（８０ｍＬ）と水（２０ｍＬ）との間で分配した。有機層を、１Ｎ塩酸水溶液で洗浄し、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で中和し、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、粗生成物を得た。粗生成物を、１：１０の酢酸エチル：ヘキサン比で溶離するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィによって精製して、白色固体として化合物２０（１．４ｇ）を得た。
【０２５８】
工程８：２０（９８０ｍｇ、２．６１ｍｍｏｌ）のクロロホルム（２５ｍＬ）溶液に、ｍ−クロロ過安息香酸（３．６ｍｍｏｌ）を添加した。反応混合物を、室温で２時間撹拌した。有機層を、飽和重炭酸ナトリウム水溶液で洗浄し、水で洗浄し、次いで、硫酸マグネシウムで乾燥させ、濾過し、蒸発させて、粗生成物を得た。粗生成物を、１：１０の酢酸エチル：ヘキサン比で溶離するシリカゲルのフラッシュクロマトグラフィによって精製して、白色蝋様固体として化合物２１（７８０ｍｇ）を得た。
【０２５９】
工程９：２１（６２５ｍｇ、１．６１ｍｍｏｌ）の酢酸（８ｍＬ）溶液を、５時間還流した。冷却後、溶媒を真空下で除去してオイルを得て、これを真空下で一晩さらに乾燥させた。得られた蝋様固体を、２Ｎ水酸化ナトリウム水溶液（８ｍＬ）およびメタノール（１５ｍＬ）に溶解し、反応物を１時間還流した。真空下でメタノールを除去し、水を添加した。得られた沈殿物を濾過によって回収し、水および加熱アセトンで洗浄した。回収した固体を、真空下で乾燥させて、白色固体としてアンドロスタン−２β，３α，１６α，１７β−テトラオールまたは２２（２９５ｍｇ）を得た。選択された
【０２６０】
【化３４】
2009534427.tif 000034
明らかなように、上記の化合物を使用して、他の式１の化合物（例えば、これらの化合物の他のエステルまたはエーテル）を調製することができる。表題化合物の調製における中間体を、本明細書中に記載の方法で使用することもできる。
（実施例２３）
実施例２３．式１の化合物が多発性硬化症（ＭＳ）を処置する能力を、上の実施例６に本質的に記載の実験的自己免疫性能脊髄炎（ＥＡＥ）で評価した。ＥＡＥ動物モデルを実施するためのプロトコールは、（Ｄ．Ａｕｃｉら、Ａｎｎ．ＮＹ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１０５１：７３０−４２，２００５）に記載されている。Ｃｈａｒｌｅｓ−Ｒｉｖｅｒから入手した雌ＳＪＬマウス（６〜８週齢、平均体重２５ｇ）を、標準的な実験条件下（非特異的無菌）で飼料および水を自由に与えて維持し、実験開始前にその環境に１週間馴化させた。動物をそれぞれ７匹の動物からなる６つの群に無作為に選択し、動物は、（１）ビヒクルで処置したマウス、（２）ＳＵ５４１６（Ｚ−３−［（２，４−ジメチルピロール−５−イル）メチルインデニル］−２−インドリノン）で処置したマウス、（３）１７β−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７α−トリオールで処置したマウス、（４）アンドロスタ−５−エン−３α，７β，１６α，１７β−テトラオールで処置したマウス、（５）アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオールで処置したマウス、（６）３α−トリフルオロメチルアンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオールで処置したマウス、（７）１７α−トリフルオロメチル−アンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオールで処置したマウス、および（８）５α−アンドロスタン−３β，１７β−ジオール−１６−オキシムで処置したマウスであった。ＥＡＡを、フロイント完全アジュバント（ＣＦＡ）中、７５μｇのプロテオリピドタンパク質（ＰＬＰ）および６ｍｇ／ｍＬの結核菌Ｈ３７ＲＡの１：１乳濁液（２００μＬ）で誘導した。２００μＬを、補助部位（ａｕｘｉｌｌａｒｙ）および鼠径部リンパ節に流れ出る４つの部位に分けて注射した。百日咳毒素を、共アジュバントとして使用し、０日目および免疫化の２日後に２００ｎｇ／マウスでｉ．ｐ．投与した。群を、０．１ｍｇの化合物を含む１００μＬのビヒクルまたはビヒクルのみで１日１回経口で（経口強制飼養）処置した。この処置を、疾患の臨床的発症から開始し、免疫化から３０日後まで継続させた。臨床的発症を、２５％のマウスにおいて疾患の臨床症状が２〜３のグレードに分類される時間として定義する。以下の臨床的なグレード分類を、処置を知らされていない観察者によって行なった：０＝疾患無し、１＝弛緩した尾、２＝中等度対不全麻痺、３＝重症対不全麻痺、４＝瀕死状態、５＝死亡。臨床スコアの有意差についての統計分析を、対のないデータのＡＮＯＶＡおよびノンパラメトリックマン・ホイットニー検定によって行なった。０．０５未満のＰ値を統計的に有意と見なした。統計分析のために、ＥＡＥで死亡したマウスを、死亡日のみについて５に割り当て、実験群から削除した。
【０２６１】
予想通り、免疫化後１９日目以内でビヒクル処置マウスの８／８（１００％）でＥＡＥの古典的徴候が現れた。平均発症日数は、１５．５±３．９（ＳＤ）であった。この動物群では、疾患の持続期間は、１２．３±４．３日であった。１日目〜３０日目の平均累計スコアは、２４．８±７．８であり、３１日目〜５４日目（処置後）では２２．７±１５．８であった。ビヒクル処置マウスで認められたＥＡＥと非常に類似したＥＡＥの経過は、ＳＵ５４１６、アンドロスタ−５−エン−３α，７β，１６α，１７β−テトラオール、および５α−アンドロスタン−３β，１７β−ジオール−１６−オキシムで処置した動物で認められ、このようにして処置されたマウスは、対照と類似の累積罹患率、疾患の持続期間、および平均累積発症を示した。対照的に、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、３α−トリフルオロメチルアンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオール、または１７α−トリフルオロメチルアンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオールで処置したマウスは、ビヒクル処置マウスと比較した場合に有意に改善したＥＡＥの経過を示し、１つ以上の平均累積スコアおよび持続期間の両方の有意な減少を伴った。さらに対照的に、これらの３つの化合物はいずれもＥＡＥの累積罹患率または致死性に有意に影響を及ぼさなかった。最後に、１７β−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７α−トリオールのみが、ビヒクル処置マウスに対して累積スコアおよび持続期間が減少する傾向を示し、この効果は、生物学的に重要であると考えられた（１４．９±１７．６および７±７．９対２４．８±７．８および１２．３±４．３）。この化合物についての統計的有意性の欠如は、おそらく、観察期間を通して多数のマウスがスコア０に割り当てられ、それにより、標準偏差が高くなったためである。
【０２６２】
３０日目の治療終了時に、マウスを、さらに２４日間モニタリングした。ビヒクル処置マウスで疾患が慢性になり、累積スコアが処置期間に類似することが認められた。処置期間と比較した場合に追跡期間中の累積スコアの実質的な増加が認められ、ＳＵ５４１６では、平均累積スコアが２５．５±８．９から３５．５±１３．２になり、１７β−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７α−トリオールでは、平均累積スコアが１４．９±１７．６から１８．４±２０．６になり、より穏やかである。１７β−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７α−トリオールで処置したマウスでは、処置期間の終了時の５７．１％から累積期間の終了時の８５．７％にＥＡＥ罹患率の増加も認められた。他方では、他の化合物は、追跡期間で処置期間と類似の蓄積スコアを維持するようであった。これは、３α−トリフルオロメチルアンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオールで特に顕著であり、平均累積スコアは、処置期間中の１１．２±４．８から追跡期間終了時の１０．８±１０．３になった。
【０２６３】
これらの結果は、１７β−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７α−トリオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、３α−トリフルオロメチルアンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオール、および１７α−トリフルオロメチル−アンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオールが、ＳＪＬマウスのＥＡＥのＰＬＰ誘導モデルにおいて強力な抗炎症性を発揮したことを示す。これらの所見の臨床目的への変換では、２４％のマウスがＥＡＥの臨床徴候を既に発症している免疫化後の１２日目から開始したプロトコールで投与された場合でさえ、化合物がこのＥＡＥモデルで活性を示すという所見と特に関連する。ＳＵ５４１６がこの設定で無効であったという所見に特に留意されたい。ＳＵ５４１６がＥＡＥに有効であることが以前に報告されている（Ｌ．Ｂｏｕｅｒａｔら、Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４８：５４１２−５４１４，２００５）。しかし、この結果を得るために、ＳＵ５４１６化合物を、動物の免疫化と同時に投与した。対して、このプロトコールでは、病徴が明らかとなるまで１７β−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７α−トリオールなどの化合物を動物に投与しなかった。それにより、化合物を既存の疾患を有効に処置し、疾患の発症を防止または遅延させるために使用することができることを示す。
（実施例２５）
実施例２５．電離放射線曝露治療。致死的な放射線を浴びた雌Ｂ６Ｄ２Ｆ１マウスの生存に及ぼす選択されたＦ１Ｃの影響を、ビヒクルのみで処置した対照動物と比較した。動物を、１３７Ｃｓ源を使用して、２．５Ｇｙ／分での１０Ｇｙの全身被曝に曝露した。１２匹からなる群を全部で５群使用した。群１、２、３、および５について、被験対象を、１００μＬの体積で、皮下注射によって最初の投与を放射線照射から２〜４時間後として３日間連続して投与した。群４について、被験対象を、５０μＬの体積で、筋肉内注射によって３日間連続して投与した。処方物は、０．１％ｗ／ｖのカルボキシメチルセルロース、０．９％ｗ／ｖの塩化ナトリウム、および０．０５％ｖ／ｖのフェノールを含む懸濁液であった。シリンジング前に処方物を撹拌してＦ１Ｃを均一に懸濁し、シリンジ中での沈殿を防止するために、シリンジ内への吸入から数分以内に動物に注射した。
【０２６４】
動物群を、以下のように処置した。群１に、３日間連続した毎日の皮下注射によってビヒクルのみを投与した。群２に、０．６ｍｇの３β，１７β−ジヒドロキシアンドロスタ−５−エンの懸濁液（１００μＬ）を毎日の皮下注射によって３日間連続して投与した。群３に、３．０ｍｇの３β，１７β−ジヒドロキシアンドロスタ−５−エンの懸濁液（１００μＬ）を毎日の皮下注射によって３日間連続して投与した。群４に、０．６ｍｇの３β，１７β−ジヒドロキシアンドロスタ−５−エンの懸濁液（５０μＬ）を毎日の筋肉内注射によって３日間連続して投与した。群５に、０．６ｍｇの３β−ヒドロキシ−１７β−アミノアンドロスタ−５−エンの懸濁液（１００μＬ）を毎日の皮下注射によって３日間連続して投与した。動物の生存を、照射後２１日間モニタリングし、以下の結果を得た。６、７、１２、および２１日目の動物の生存数を示す。
【０２６５】
【化３５】
2009534427.tif 000035
（実施例２５）
実施例２５．胃腸炎の治療。炎症性腸疾患の動物モデルを使用して、式１の化合物が炎症または炎症の症状を制限または阻害する能力を示した。２，４−ジニトロベンゼンスルホン酸（ＤＮＢＳ）または生理食塩水攻撃前の２４時間絶食した３匹の雄Ｗｉｓｔａｒラット（１８０±２０グラム）からなる群を使用した。０．５ｍＬのＤＮＢＳのエタノール溶液（ＤＮＢＳを３０ｍｇ含む０．５ｍＬの３０％エタノールを含む生理食塩水）の結腸内点滴注入によって遠位大腸炎を誘導し、その後、カニューレによって２ｍＬの空気を注射して、確実に溶液を結腸内に留まらせた。使用した体積は、注射あたり０．１ｍＬ（２および２０ｍｇ／ｍＬの化合物（液体処方物のアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールなど）を含む）であり、これを、１日１回で６日間の皮下注射（０．２ｍｇ／動物／日または２．０ｍｇ／動物／日）によって投与した。処方物は、非水性懸濁液（例えば、２％ベンジルアルコールｗ／ｖ、０．１％Ｂｒｉｊ９６ｗ／ｖ、および同体積のＰＥＧ３００およびプロピレングリコール）中に１００ｍｇ／ｍＬの化合物を含んだ。２０ｍｇ／ｍＬの処方物を、化合物を欠くビヒクルで希釈することによって２ｍｇ／ｍＬおよび２０ｍｇ／ｍＬの濃度を得た。
【０２６６】
ＤＮＢＳ攻撃から３０分後に第１の投与を行なった。スルファサラジン（３０ｍｇ／ｍＬの２％  Ｔｗｅｅｎ８０を含む蒸留水）を、１日１回（１０ｍＬ／ｋｇ／日）で７日間経口（ＰＯ）投与し、最初の２回の投与を、ＤＮＢＳ攻撃誘発の２４時間前および２時間前に開始した。肛門領域の試験によって、下痢の存在を毎日記録した。動物は、屠殺に先立つ２４時間絶食した。７日目または８日目に動物を屠殺し、その結腸を取り出し、秤量した。結腸除去前に、結腸と他の器官との間の接着の徴候を記録する。また、各結腸の秤量後に潰瘍形成の存在を記録した。結腸体重（ＢＷ）比の「正味の」変化を、生理食塩水で攻撃したベースライン群に対して標準化する。「正味の」結腸体重比の２５〜３０％減少を、有意と見なした。結果は、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールは疾患の経過に及ぼす影響が小さい一方で（正味の結腸体重比の約１５〜２０％減少）、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールまたはアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオールでの処置は有効であった（正味の結腸体重比の約２５〜３５％減少）ことを示した。
【０２６７】
このプロトコールの変形形態には、上記用量レベルおよび／または１つ以上の０．０５ｍｇ／動物／日、０．１ｍｇ／動物／日、０．５ｍｇ／動物／日、および１．０ｍｇ／動物／日を使用した化合物を含む３０％スルホブチルエーテル−シクロデキストリン水溶液の投与が含まれる。
（実施例２６）
実施例２６．外傷および骨粗鬆症または骨喪失状態に関連するニューロン喪失の治療。免疫能（ｉｍｍｕｎｅ  ｃｏｍｐｅｔｅｎｃｅ）は、内因性糖質コルチコイド（ＧＣ）レベルの外傷誘導性の上昇後に強く損なわれ得る複雑な機能である。化合物５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオールを使用して、栄養活性または同化活性を発揮することによってこれらの免疫機能を保存した。スナネズミにおける両側頸動脈閉塞に続いて急性脳虚血性卒中を発症する動物モデルでは、５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオールでの処置により、卒中のみと比較した場合、認知能力が有意に改善された（ｐ＝０．０３）。したがって、各群における飼料検索反応時間（ｆｏｏｄ−ｓｅａｒｃｈｉｎｇ  ｌａｔｅｎｃｙ  ｐｅｒｉｏｄ）の測定値は、偽性疾患（ｓｈａｍ）については６．９±０．９秒（ｓｅｃ）であり、卒中のみついては４６．９±１３．６ｓｅｃであり、５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオールで処置した卒中については１４．８±４．８秒であった。同時に、卒中誘導性のＣＡ１海馬ニューロン数の喪失は、５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオールによって顕著に無効になった（偽＝３６２，２４７±６，８３９；卒中＝１５２，３５４±１１，５７５；および卒中＋５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオール＝２０７，８５４±４７，３３４）。
【０２６８】
骨喪失状態では、５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオールは、主要な骨構造（すなわち、皮質層および骨小柱層ならびに成長板）に影響を及ぼした。熱損傷マウス（総体表面積の２０％）を、５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオールで処置し、皮質（大腿骨）および骨小柱／海綿骨（脛骨）の骨量の喪失ならびに遠位脛骨の骨端成長板中の軟骨細胞増殖の抑制は全て、５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオール処置によって有意に防止された（ｐ＜０．０１）。大腿骨の皮質骨の組織形態計測により、骨形成速度の増加が示唆された。二重Ｘ線吸収法によって測定したところ、骨塩量の喪失の部分的防御が認められた。大腿骨灰分重量は、ビヒクル処置負荷マウスより有意に（ｐ＜０．０１）高く、５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオールが骨塩量を保存したことを示す。脳内の慢性的に高いＧＣレベルの炎症誘発効果により、ＧＣレベルの上昇が神経学的損傷の結果を悪化することが示唆される。副腎ステロイドＤＨＥＡ（５−アンドロステン−３β−ヒドロキシ−１７−オン）（５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオールの上流代謝前駆体）は、マウスにおいてデキサメタゾン誘導性胸腺退縮を防止することが証明されている（Ｋ．Ｌ．Ｂｌａｕｅｒら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１２９：３１７４，１９９１）。まとめると、これらの所見は、５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオールが熱傷後のＧＣ誘導性の機能的神経組織の喪失を抑制し、骨構造を保存することを示した。
【０２６９】
化合物（５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオール，１７α−エチニル−５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオール、および４−エストレン−３α，１７β−ジオールが含まれる）が骨成長における糖質コルチコイドの副作用を逆転する能力は、ヒトＭＧ−６３骨肉種細胞株で示された。ＭＧ−６３細胞は骨芽細胞であり、この細胞は、骨成長を媒介する細胞である。この細胞株は、骨生物学を研究し、骨喪失状態の治療のための化合物の生物活性を特徴づけるために広く使用されている（例えば、Ｂ．Ｄ．Ｂｏｙａｎら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６４（２０）：１１８７９−１１８８６，１９８９；Ｌ．Ｃ．Ｈｏｆｂａｕｅｒら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１４０（１０）：４３８２−４３８９，１９９９）。糖質コルチコイドレベルの上昇に関連する有毒性には、骨芽細胞（ＭＧ−６３細胞株が含まれる）によるＩＬ−６およびＩＬ−８産生の減少ならびに１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１型酵素（１１β−ＨＳＤ）発現の増加が含まれる。１１β−ヒドロキシステロイドデヒドロゲナーゼ１型酵素の増加により、内因性コルチゾンの活性コルチゾールへの変換によって内因性糖質コルチコイド活性レベルが増加し、これにより、骨成長が阻害される。１１β−ＨＳＤ酵素は、肝臓、脂肪組織、脳、および骨組織中に発現する。１１β−ＨＳＤ−１によって生成されたコルチゾールは、骨粗鬆症、インスリン抵抗性、２型糖尿病、異常脂質血症、肥満、中枢神経系障害（卒中など）、ニューロンの死滅、鬱病、およびパーキンソン病に寄与する。ＩＬ−６、ＩＬ−８、およびオステオプロテゲリンの減少は、骨芽細胞による骨成長の減少に関連する。パイロット研究により、デキサメタゾンによるＭＧ−６３細胞由来のＩＬ−６阻害のＩＣ５０が１０ｎＭであり、デキサメタゾンによるＭＧ−６３細胞の成長阻害のＩＣ５０が１５．３ｎＭであることが示された。
【０２７０】
このプロトコールでは、ＭＧ−６３細胞を、３０ｎＭの濃度の合成糖質コルチコイドであるデキサメタゾンの存在下または不在下および１０ｎＭの式１の化合物の存在下または不在下で成長させた。以下の表中の化合物１は５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオールであり、化合物２は１７α−エチニル−５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオールであり、化合物３は４−エストレン−３α，１７β−ジオールであった。これらの化合物についての結果を、以下に示す。
【０２７１】
【化３６】
2009534427.tif 000036
これらの結果は、１０ｎＭの化合物が３０ｎＭのデキサメタゾンの副作用を部分的に逆転することを示した。このことは、化合物が骨成長を媒介する細胞である骨芽細胞中の糖質コルチコイドレベルの上昇に関連する複数の毒性を逆転させることができることを示す。関連するプロトコールでは、上記表に示すように、１ｎＭの化合物１７α−エチニル−５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオールも、３０ｎＭデキサメタゾンの存在下で７時間の細胞成長後のＭＧ−６３細胞によるオステオプロテゲリン合成の減少を感染に逆転させた。オステオプロテゲリンは骨成長に関連する因子であり、オステオプロテゲリン合成の減少は骨喪失に関連する。３０ｎＭのデキサメタゾンの存在下でのＭＧ−６３細胞によるオステオプロテゲリン合成の減少を完全または部分的に逆転した他の化合物は、１７α−トリフルオロメチル−５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオール（化合物またはデキサメタゾンを使用しないビヒクル対照と比較して、１μＭの化合物で正常または基本のオステオプロテゲリンレベル）、５−アンドロステン−３β，７β，１６α，１７β−トリオール（０．１μＭで正常なオステオプロテゲリンレベル）、３β，７α，１６α，１７β−テトラヒドロキシアンドロスタ−５−エン（１０ｎＭでほぼ正常なオステオプロテゲリンレベル）、３α，７β，１６α，１７β−テトラヒドロキシアンドロスタ−５−エン（１０ｎＭで正常なオステオプロテゲリンレベル）、１７α−メチルアンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオール−７−オン（１００ｎＭでオステオプロテゲリンレベルが増加）、１７α−メチルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−ジオール（１０ｎＭで正常なオステオプロテゲリンレベル）であった。３０ｎＭデキサメタゾンの存在下でオステオプロテゲリンの減少を部分的に逆転した他の化合物には、アンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオール−７−オキシムが含まれた。
【０２７２】
類似のプロトコールでは、化合物３α，１７β−ジヒドロキシアンドロスタ−４−エンは、ＭＧ−６３細胞によるＩＬ−８およびＩＬ−６のデキサメタゾン誘導性抑制の統計的に有意な逆転およびデキサメタゾン誘導性１１β−ＨＳＤ  ｍＲＮＡの統計的に有意な減少を示した。
【０２７３】
関連する影響がインビボで得ることができることを示すために、化合物１７α−エチニル−５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオールを、動物のオステオプロテゲリンレベルを減少させるために２３日間デキサメタゾンでも毎日処置したマウスに投与した。ビヒクルおよび１０μｇ／日のデキサメタゾンで処置したマウス（陽性対照群）中のオステオプロテゲリンレベルは３．３ｐｍｏｌ／Ｌオステオプロテゲリンであった一方で、ビヒクル、デキサメタゾン、および４ｍｇ／ｋｇ／日の１７α−エチニル−５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオールで処置した動物は６．４ｐｍｏｌ／Ｌオステオプロテゲリンであった（ｐ＜０．０５）。
【０２７４】
マウス椎骨におけるエストロゲン欠損に応じた骨芽細胞および骨細胞のアポトーシス度を試験した。Ｓｗｉｓｓ  Ｗｅｂｓｔｅｒマウス（４月齢）に対して卵巣摘出を行なった。２８日後、動物を屠殺し、脊椎を単離し、固定し、包埋し、メタクリレート中で非脱灰した。骨芽細胞および骨細胞アポトーシスの罹病率を、ＣｕＳＯ４増強を使用したＴＵＮＥＬ法によって決定し、エストロゲン欠損後に増加することが見出された。１７β−エストラジオールなどの参照化合物および４−エストレン−３α，１７β−ジオールおよび／または１７α−エチニル−５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオールなどのＦ１Ｃは、アポトーシスを軽減することが見出され、これは骨喪失の軽減と一致する。
【０２７５】
集合的に、本実施例に記載の結果は、１７α−エチニル−５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオールなどの化合物が骨成長の増加および骨喪失の阻害の両方によって骨組織に影響を及ぼすことを証明する。１７α−エチニル−５−アンドロステン−３β，７β，１７β−トリオールおよび５−アンドロステン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオールなどの化合物は、アンドロゲン受容体、エストロゲン受容体−α、またはエストロゲン受容体−βと相互作用せず、これは、望ましくない性ホルモン活性を発揮することなく骨喪失状態を処置する能力と一致する。
（実施例２７）
実施例２７．マウス耳組織を使用した熱傷モデルを使用して、温熱損傷に関連する炎症を処置する能力について化合物を特徴づけた。状態は、熱傷から２４〜７２時間後までに非処置マウスの曝露した耳における組織壊死に進行した最小の骨損傷であった。約９週齢のＢａｌｂ／ｃマウス群に識別マークを付け、対照亜群および治療亜群に分けた。熱水に浸漬させる耳の厚さを記録し、次いで、麻酔したマウスの耳全体を５２℃の湯に２４時間浸した。プロピレングリコールビヒクル（対照）または１００ｍｇの化合物を含むプロピレングリコールのいずれかの注射後に各マウスをケージに戻した。熱傷前および熱傷後の種々の時間における各マウスの耳腫脹の変化をモニタリングした。各マウスの耳腫脹の変化を、熱傷前ならびに熱傷から１、３、６、９、１２、１８、２４、および４８時間後にモニタリングした。動物を、プロピレングリコールに溶解した１００ｍｇのデヒドロエピアンドロステロン（ＤＨＥＡ）で処置した。対照およびＤＨＥＡ処置マウスにおける浮腫形成および分離の分析により、損傷から６時間後のＤＨＥＡ処置熱傷マウスおよび非処置熱傷マウスの両方で耳腫脹（浮腫の１つの指標）がピークになった。
【０２７６】
非処置対照群では、１２時間以内に腫れ範囲が減少し、その後の１２時間にわたって急速に減少し続けた。熱傷から２４時間後と４８時間後との間に、耳組織は、元の鬱血領域の微小血管閉塞の喪失を示した。化合物アンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオールおよび１６α−ブロモデヒドロエピアンドロステロンは、処置動物を耳への熱傷による虚血の大部分から防御した。化合物１６α−ヒドロキシデヒドロエピアンドロステロンは防御がより低く（すなわち、進行性虚血範囲を減少させるが完全ではない）、１６α−クロロデヒドロエピアンドロステロンは進行性虚血を僅かしか防御しなかった。
【０２７７】
出血性ショックおよび虚血に及ぼす化合物の影響を、別のプロトコールで試験した。６〜８月齢のＣＦ−１マウスを、メトキシフルラン（ｍｅｔｈｏｘｙｆｌｕｒｏｔｈａｎｅ）を使用して麻酔し、腹部外科のために調製した。各マウスを、呼吸レベル、瞬き反応、および皮膚つまみ（ｓｋｉｎ  ｐｉｎｃｈ）に対する反応について試験して、手術に適切な麻酔レベルを確保した。腹部外科の持続時間は、約２時間であり、その間に動物の血液容量の３５〜４０％を３０分間にわたって除去した。制御された様式での血液除去により、出血性ショックの影響を刺激する。除去された血液および２倍体積の蘇生液（ｒｅｓｕｓｃｉｔａｔｉｏｎ  ｆｌｕｉｄ）（ラクトリンゲル液）を中心静脈にゆっくり静脈内注入した。蘇生液に、２ｍｇのデヒドロエピアンドロステロン−３β−サルフェートまたは偽薬としての賦形剤を捕捉した。腹膜および覆っている皮膚を、個別に抱合した。動物を、完全に回復するまで３８℃〜３９℃で維持した。これらの条件下で、ほとんどの偽薬処置動物は、２４〜４８時間以内に死亡した。手術から４時間後、コロニー形成単位（ＣＦＵ）アッセイを行ない、従来の技術を使用して肝臓中のマロンジアルデヒドをアッセイした。腸間膜リンパ節（ＭＬＮ）を取り出し、血液寒天プレート上で培養し、培養後にＣＦＵを計数した。肝臓を取り出し、マロンジアルデヒド量を測定した。デヒドロエピアンドロステロン−３β−サルフェートでの処置により、１５／１５のマウスが生存し、１／１５のビヒクル対照マウスが生存した。
【０２７８】
出血性外傷のラットモデルの治療効果を試験した。２４匹のラットを、総血液容量の４０％を喪失させた。これは、外傷および出血を最小にするためのカテーテル留置および開腹術（軟組織損傷）からなる。出血から１時間後、晶質液および濃縮赤血球（ｐａｃｋｅｄ  ｒｅｄ  ｂｌｏｏｄ  ｃｅｌｌ）（ＰＲＢＣ）を使用して動物を蘇生した。１２匹の動物に、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールのメチルセルロース懸濁液を４０ｍｇ／ｋｇ体重且つ１００μＬ／ｋｇ体重の濃度で、出血開始から１時間後であるが、急速輸液前に１回皮下注射した。１２匹の動物に、１００μＬ／ｋｇ体重のメチルセルロース対照注射を皮下投与した。出血誘導から３日後、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールを投与した１２匹の動物の生存率は１００％であるのに対して、非処置群の死亡率は２５％であった（Ｐ＜０．０４、２つの二項分布の相違を使用した優位のＢａｒｂａｒｄ無条件検定）。
【０２７９】
血圧低下出血性外傷プロトコールも、第２の出血性外傷モデルとして行なった。このプロトコールでは、１５匹のラットを、上記のように約３５〜４０ｍｍＨｇの平均動脈圧まで出血させ、出血発症から１時間後に晶質およびＰＲＢＣを使用して蘇生した。７匹の動物に、出血開始から１時間後であるが、急速輸液前に１匹あたり４０ｍｇ／ｋｇ体重且つ１００μＬ／ｋｇ体重の濃度のアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオールのメチルセルロース懸濁液を１回皮下注射した。８匹の動物に、１００μＬ／ｋｇ体重のメチルセルロース対照皮下注射を行なった。出血誘導から２日後、非処置群（ｎ＝８）の死亡率は７５％であった。アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール処置動物の死亡率は４３％であった。このことにより、血圧が低下した出血性外傷の場合に化合物防御性を示すことが証明された。
（実施例２８）
実施例２８．代謝安定性。選択された化合物の代謝安定性を、以下のプロトコールに従って肝臓細胞から得たミクロソームを使用してインビトロで試験した。このプロトコール中のミクロソームは、ステロイド分子上のヒドロキシルおよびケトンを相互転換する水素化反応および酸化還元反応を行なうことができる。ミクロソームは、接合反応（例えば、３β−ヒドロキシル基の硫酸化または３α−ヒドロキシル基のグルクロン酸抱合）を媒介しない。
【０２８０】
プロトコールを以下のように行なった。（１）０．５ｍＭ化合物を含む３５：６５のアセトニトリル／水を調製する。アンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオールについて、０．１４５ｍｇ／ｍＬ、すなわち、２９．０μＬの１ｍｇ／ｍＬストック＋１７１μＬ溶媒で調製した。検量線について、０．５ｍＭストックの希釈物を使用して、１０μＭ、５μＭ、および１μＭのアンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオールを調製した。（２）サンプルを以下のように設定した。各アッセイは、アンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオール対照および１〜８の未知の化合物からなる。各化合物のための管は以下であった：１−０’  ２−０’  ３−０’  ４−０’＊  ５−０’＊  ６−５μＭ  ７−１μＭ  ８−３０’  ９−３０’  １０−３０’（式中、＊は、変性ミクロソーム陰性対照反応管を示す）。さらなる化合物について、１１、２１、３１などからナンバリングを開始した。（３）各管に３１５μＬのＰＢＳ（ｐＨ７．３〜７．５）を添加する。１０μＬの適切な被験対象溶液を各管に添加する。（４）内部標準／アセトニトリル溶液。（５）ＮＡＤＰＨ再生系（ＮＲＳ）は、１２５μＬ／管であった。ＰＢＳに、１．７ｍｇ／ｍｌのＮＡＤＰ、７．８ｍｇ／ｍｌのグルコース−６−ホスフェート、６単位／ｍＬのグルコース−６−ホスフェートデヒドロゲナーゼを添加した。各実験のために新鮮なＮＲＳを、使用するまで氷上で維持した。（６）各反応は、各管中で１２５μＬのＮＲＳを使用した。（７）−８０℃冷凍庫から肝臓ミクロソーム調製物を取り出し、室温の水浴中で解凍した。ミクロソーム調製物の濃度は２０ｍｇ／ｍｌであった。各反応は、０．２５ｍｇ／管を使用し、ＰＢＳで５ｍｇ／ｍｌの濃度（すなわち、４倍希釈）に希釈し、氷上で維持した。（８）ゼロ時間および変性ミクロソーム対照管について、−２０℃の５００μＬアセトニトリルを添加した。ゼロ時間に、管を氷上に移し、変性ミクロソーム対照を、３７℃で５分間プレインキュベートした。（９）ミクロソーム調製物を含むアッセイ管も、３７℃で５分間プレインキュベートした。（１０）各インキュベーション管のために、５０μＬのミクロソーム調製物を添加し、ボルテックスして混合することによって反応を開始させた。（１１）−２０℃での５００μＬのアセトニトリルの添加およびボルテックスによって各反応を停止させた。（１２）反応終了後、各反応管由来の１００μＬを新たな管に移し、２００μＬの水および１４００μＬのメチル−ｔ−ブチルエーテルを各管に添加した。管をボルテックスし、微量遠心機（ｍｉｃｒｏｆｕｇｅ）にて１３，０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。次いで、水層が凍結固体になるまで、管をドライアイス−メタノール浴上に置いた。（１３）メチル−ｔ−ブチルエーテルを各管から新鮮な管に移行し、溶媒を窒素下で蒸発させ、次いで、沈殿を３５：６５のアセトニトリル／水（１００μＬ）に再懸濁し、ＬＣＭＳによって分析した。以下に示すインキュベーション時間について結果を以下の表に示す。
【０２８１】
【化３７】
2009534427.tif 000037
結果は、テトラオール化合物が酸化還元反応に耐性を示すことを示し、このことは、アンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオール参照化合物と比較して代謝度が非常に減少することと一致する。４つの各ヒドロキシル基が潜在的にケトンに還元し得るが、実際は影響を受けなかったので、この所見は非常に予想外であった。試験した他の化合物には、アンドロスタ−５−エン−３β，１６α，１７β−トリオール，アンドロスタン−３β，１６α−ジオール−１７−オン、およびアンドロスタン−３α，１６α，１７α−トリオールが含まれ、これらは全てアンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオール参照化合物と類似の速度で、ミクロソームによって代謝された。
（実施例２９）
実施例２９．ＣａＣｏ−２細胞を用いた薬物吸収の測定。このプロトコールを使用して、ＣａＣｏ−２細胞単層を通過する化合物の流入を測定した。ＣａＣｏ−２細胞は、分極し、高度に分化したヒト細胞であり、腸管吸収表現型が証明されている（Ｊ．Ｈｕｎｔｅｒら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６８（２０）：１４９９１−１４９９７，１９９３）。この細胞株を使用して、種々の化合物が細胞単層を通過する速度を研究する。典型的には、ＣａＣｏ−２細胞のコンフルエントな単層を使用して腸上皮細胞をモデリングし、試験化合物の定常状態の流動から透過係数を得る。これにより、経口で生物学的に利用可能である化合物の可能性についての情報を得ることができる。
【０２８２】
このプロトコールでは、滅菌５０ｍｌ管中で１００μＬ／ウェルの加温媒体を使用して、細胞を３７℃の媒体中で維持した。ウェルあたり６００μＬの分化媒体を含む滅菌２４ウェルプレートで細胞を成長させた。ウェルは、ウェルあたり２つの区画が可能なトランスウェルインサートを含んでいた。１００μＬの分化媒体を各ウェルに慎重に添加し、ピペットでウェルの上部から側面に触れた。細胞を、３７℃、５％ＣＯ２、飽和湿度で４８時間インキュベートして、単層を形成させた。各プレートについて、側底側（ｂａｓｏｌａｔｅｒａｌ）ゼロ時点（Ｔ０）としての機能を果たすための側底側緩衝液について管１〜２４で管をナンバリングした。管２６〜４９は、頂端側（ａｐｉｃａｌ）Ｔ０としての機能を果たすために被験対象を含む頂端側緩衝液であった。管５１〜７４は、Ｔ２０測定点（２０分）であり、７６〜９９はＴ４０測定点であり、１０１〜１２４はＴ８０測定点であり、１２６〜１４９はＴ１２０測定点であり、１５１〜１７４はマスバランス決定のためのＴ１２０頂端側サンプルであった。管１７５〜１７９は、化合物１の５点検量線であり、管１８０〜１８４は化合物２の検量線であり、化合物１２の管２３０〜２３４まで続く。管１〜４９をラック１中の４列中に置き、５１〜９９をラック２に置き、１０１〜１４９をラック３に置き、１５１〜１７４をラック４に置き、１７５〜２３４をラック５および６に置いた。
【０２８３】
新鮮な１０００ｍＬボトルから１５０ｍＬの輸送緩衝液（１Ｎ  ＨＣｌでｐＨ７．４にする）を除去することによって緩衝液を調製した。この緩衝液は、「側底側」である。残りの８５０ｍＬのｐＨを、「頂端側」緩衝液のために１Ｎ  ＨＣｌを使用して、ｐＨ６．５に調整した。１５０ｍＬの頂端側緩衝液を、個別の容器に入れ、残りの７００ｍＬをリンスのために使用した。緩衝液を４℃で保存したが、プロトコールのために室温で使用した。
【０２８４】
分化媒体が室温に到達した後、約２０ｍＬをより小さなビーカーに注いだ。この媒体中でプローブを１５分間平衡化した。２４ウェルプレートを、インキュベータから取り出し、室温にした。各ウェルを、細胞単層に触れないウェルへのプローブの挿入よってプローブで測定し、プローブが媒体表面に近づいた時にＴＥＳＴボタンを押し、００００からプローブが表面に触れた数字までを読み取る。１０００Ωを超える読み取りが許容された。次いで、頂端側緩衝液をトランスウェルインサートから破棄し、プレート全体を、リンス緩衝液を含む１０００ｍＬビーカー中でリンスして、全分化緩衝液を除去した。次いで、トランスウェルをＴ２０プレートに入れた。１０μＭの試験化合物および対照（カラバマザピン（ｃａｒａｂａｍａｚａｐｉｎｅ）、ＭＷ２３６；ヒドロクロロチアジド、ＭＷ３５１）を、０．１μｍｏｌ（例えば、２９μｌの１ｍｇ／ｍｌアンドロスタ−５−エン−３β，１７β−ジオール参照溶液）を１０ｍＬの頂端側緩衝液に添加することによって頂端側緩衝液中に添加した。次いで、０．６ｍＬの側底側緩衝液を、全ウェルに添加した。
【０２８５】
内部標準としての５０μｇ／ｍｌの３α，７β，１６α，１７β−テトラヒドロキシアンドロスタ−５−エン溶液を、１５０μＬの化合物（１ｍｇ／ｍＬを含むエタノール）を１０ｍＬのアセトニトリル／水（２５：７５）に添加することによって作製した。各化合物のために、側底側緩衝液において検量線を作製した。側底側区画に移行する場合に１０μＭの頂端側緩衝液を６倍に希釈するので、濃度１／６の検量線を準備した。
【０２８６】
【化３８】
2009534427.tif 000038
６００μＬの側底側緩衝液を、Ｔ０対照のために管１〜２４に入れた。１００μＬの頂端側緩衝液および被験対象および５００μｌ頂端側緩衝液（濃度が検量線範囲内になるように）を、頂端側Ｔ０としての機能を果たすために管２６〜４９に添加した。１００μｌの頂端側緩衝液および化合物を頂端側に置いた。トランスウェルをプレート中に置いた時間を、時間ゼロ（Ｔ０）とした。Ｔ＝２０で、トランスウェルを、Ｔ４０プレートに移動し、Ｔ２０プレート由来の６００μｌのサンプルを適切な管に添加した。Ｔ＝４０で、トランスウェルをＴ８０プレートに移動し、６００μＬのサンプルを、Ｔ４０プレートから適切なプレートに取った。Ｔ＝８０で、トランスウェルをＴ１２０プレートに移動した。残りの測定点について、６００μｌのサンプルを、ピペットにてＴ８０プレートから適切な管などに取った。マスバランスのために、１００μｌの頂端側緩衝液を適切な管に添加した。サンプルを、即座に抽出し、冷凍庫に入れた。
【０２８７】
３００μＬの各サンプルを、管１５１〜１７４（１００μＬのみを含む）以外はアッセイ管からラベルした２ｍＬ管に移し、５０μｌのこれらのサンプルを移し、２５０μＬの側底側緩衝液に添加した（６倍希釈される）。２０μＬの３α，７β，１６α，１７β−テトラヒドロキシアンドロスタ−５−エン内部標準を各管に添加し、１５００μＬのメチル−ｔ−ブチルエーテルを各管に添加した。管をボルテックスし、微量遠心機中で１０分間遠心分離し、凍結するまでメタノール／ドライアイス浴に入れた。新たな管にラベルし、メチル−ｔ−ブチルエーテルを各凍結管から新たな管に静かに移した。次いで、メチル−ｔ−ブチルエーテルを窒素下で蒸発させ、１２０μＬのアセトニトリル／水（３５：６５）で再構成し、ＬＣＭＳによって分析した。以下の表では、化合物１は３β，７β，１６α，１７β−テトラヒドロキシアンドロスタ−５−エンであり、化合物２は１７α−エチニルアンドロスタ−５−３β，７β，１７β−トリオールであり、化合物３は３α，１７β−ジヒドロキシ−１７α−エチニルアンドロスタンであり、化合物４は３α，７β，１６α，１７β−テトラヒドロキシアンドロスタ−５−エンであり、化合物５は２β，３α，１６α，１７β−テトラヒドロキシアンドロスタンであり、化合物６は３β，１６α−ジアセトキシ−７β，１７β−ジヒドロキシアンドロスタ−５−エンであり、化合物７は３β−アセトキシ−１７α−エチニルアンドロスタ−５−７β，１７β−ジオールであり、化合物８は３β−アセトキシアンドロスタ−５−７β，１６α，１７β−トリオールであり、化合物９は１７α−エチニルアンドロスタ−５−３α，７β，１７β−トリオールであった。
【０２８８】
【化３９】
2009534427.tif 000039
ＣａＣｏ−２細胞株を使用した研究により、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオールなどのテトラオール化合物はあまり高度に透過しないことが示され、経口で生物学的に利用可能であると予想されないであろう。それにもかかわらず、化合物アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオールは、糖尿病処置モデルのマウスに経口投与した場合に上記のように活性を示した。他のプロトコールにより、テトラオール化合物（３β，７β，１６α，１７β−テトラヒドロキシアンドロスタ−５−エンおよび３α，７β，１６α，１７β−テトラヒドロキシアンドロスタ−５−エンなど）についての硫酸化度およびグルクロン酸抱合度がジオールと比較してテトラオール化合物に対して低いことを示した。この活性は、インビボでのテトラオール化合物の低い代謝から少なくとも部分的に生じ得る。
【手続補正書】
【提出日】平成20年12月22日(2008.12.22)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
２型糖尿病、高血糖、関節リウマチ、変形性関節症、多発性硬化症、炎症状態、または骨喪失状態の予防または処置のための組成物であって、該組成物が１つ以上の賦形剤および以下の構造：
【化１】
2009534427.tif 000042
（式中、
一方のＲ１は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ１は、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルであり；
一方のＲ２は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ２は、−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルであるか、両方のＲ２が一緒になって＝ＮＯＨであり；
一方のＲ３は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ３は、−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、Ｃ１−８エーテル、または必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであるか、両方のＲ３が一緒になって＝ＮＯＨであり；
一方のＲ４は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ４は、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルであり；
Ｒ５は、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、または−ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒ６は、−Ｈ、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５、または−ＣＨ２ＯＨであり；
一方のＲ７は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ７は、−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルであり；
Ｒ９は、−Ｏ−または−Ｃ（Ｒ１２）（Ｒ１２）−であり、式中、一方のＲ１２は、−Ｈ、−Ｆ、−Ｂｒ、または必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ１２は、−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ２−２０エステル、Ｃ１−２０エーテル、または必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであるか、両方のＲ１２が一緒になって＝Ｏ、＝ＮＯＨ、または＝ＮＯＣＨ３であり；
Ｒ１０は、−Ｈまたは−Ｆであり；
一方のＲ１１は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ１１は、−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、Ｃ１−８エーテル、または必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、ここで、（１）少なくとも一方のＲ２は、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルであり、Ｒ７、Ｒ１１、およびＲ１２のうちの１つは、独立して、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルであるか、（２）一方のＲ４は、Ｃ１−８置換アルキルまたは必要に応じて置換されたＣ２−８アルキニルであり、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ７、Ｒ１１、およびＲ１２のうちの少なくとも１つは、独立して、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルであるか、（３）Ｒ２、Ｒ３、Ｒ７、Ｒ１１、およびＲ１２のうちの少なくとも２つは、独立して、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルである）
を有する化合物を含む、組成物。
【請求項２】
前記化合物が、構造：
【化２】
2009534427.tif 000043
（式中、
一方のＲ１は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−４アルキルであり、他方のＲ１は、−ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、または−ＯＣＨ３であり；
一方のＲ２は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−４アルキルであり、他方のＲ２は、−ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、または−ＯＣＨ３であり；
一方のＲ３は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−４アルキルであり、他方のＲ３は、−ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、または−ＯＣＨ３であり；
一方のＲ４は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−４アルキルであり、他方のＲ４は、−ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、または−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３である）
を有する、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
２型糖尿病の予防または処置のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項４】
前記化合物が、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７α，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，１１β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，１１β，１６α，１７β−テトラオール、３β，１１β，１６β，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，１１β，１６β，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−２β，３α，１６α，１７β−テトラオール、あるいはこれらの化合物のいずれかのＣ２−４モノエステルまたはＣ２−４ジエステルアナログであり、必要に応じて、該モノエステルが３位または１７位でアセテートであるか、該ジエステルが３位および１７位でアセテートである、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
多発性硬化症の予防または処置のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項６】
前記化合物が、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７α，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，１１β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，１１β，１６α，１７β−テトラオール、３β，１１β，１６β，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，１１β，１６β，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−２β，３α，１６α，１７β−テトラオール、あるいはこれらの化合物のいずれかのＣ２−４モノエステルまたはＣ２−４ジエステルアナログであり、必要に応じて、該モノエステルが３位または１７位でアセテートであるか、該ジエステルが３位および１７位でアセテートである、請求項５に記載の組成物。
【請求項７】
高血糖の予防または処置のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項８】
前記化合物が、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７α，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，１１β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，１１β，１６α，１７β−テトラオール、３β，１１β，１６β，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，１１β，１６β，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−２β，３α，１６α，１７β−テトラオール、あるいはこれらの化合物のいずれかのＣ２−４モノエステルまたはＣ２−４ジエステルアナログであり、必要に応じて、該モノエステルが３位または１７位でアセテートであるか、該ジエステルが３位および１７位でアセテートである、請求項７に記載の組成物。
【請求項９】
変形性関節症の予防または処置のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１０】
関節リウマチの予防または処置のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１１】
前記化合物が、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７α，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−２β，３α，１６α，１７β−テトラオール、あるいはこれらの化合物のいずれかのＣ２−４モノエステルまたはＣ２−４ジエステルアナログであり、必要に応じて、（ａ）該Ｃ２−４モノエステルが３位または１７位でアセテートであるか、（ｂ）該Ｃ２−４ジエステルが３位および１７位でアセテートである、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
骨喪失状態の予防または処置のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１３】
前記骨喪失状態が、骨粗鬆症、骨折、熱傷、放射線熱傷、化学熱傷、または高い天然糖質コルチコイドレベルの存在、もしくは合成糖質コルチコイド、必要に応じて、デキサメタゾンの存在である、請求項１２に記載の組成物。
【請求項１４】
前記骨喪失状態が骨粗鬆症であり、前記化合物が、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７α，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−２β，３α，１６α，１７β−テトラオール、あるいはこれらの化合物のいずれかのＣ２−４モノエステルまたはＣ２−４ジエステルアナログであり、必要に応じて、（ａ）該Ｃ２−４モノエステルが３位または１７位でアセテートであるか、（ｂ）該Ｃ２−４ジエステルが３位および１７位でアセテートである、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
炎症状態の予防または処置のための、請求項１に記載の組成物。
【請求項１６】
前記化合物が、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１７β−トリオール、１７α−エチニルアンドロスタ−５−エン−３β，７β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，７α，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３β，１１β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，１１β，１６α，１７β−テトラオール、３β，１１β，１６β，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，１１β，１６β，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−２β，３α，１６α，１７β−テトラオール、またはこれらの化合物のＣ２−４モノエステルもしくはＣ２−４ジエステルであり、必要に応じて該モノエステルは３位または１７位でアセテートであるか、該ジエステルが３位または１７位でアセテートである、請求項１５に記載の組成物。
【請求項１７】
前記炎症状態が、炎症性腸疾患であり、必要に応じて、潰瘍性大腸炎、クローン病または過敏性腸疾患である、請求項１６に記載の組成物。
【請求項１８】
以下：
【化２−１】
2009534427.tif 000044
の構造を有する化合物であって、
一方のＲ１は−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ１は−ＯＨ、Ｃ２−８エステルまたはＣ１−８エーテルであり；
一方のＲ２は−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ２は−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、またはＣ１−８エーテルであるか、両方のＲ２が一緒になって＝ＮＯＨであり；
一方のＲ３は−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ３は−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、Ｃ１−８エーテルまたは必要に応じて置換されたアルキルＣ１−８であるか、両方のＲ３が一緒になって＝ＮＯＨであり；
一方のＲ４は−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ４は−ＯＨ、Ｃ２−８エステルまたはＣ１−８エーテルであり；
Ｒ５は−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５または−ＣＨ２ＯＨであり；
Ｒ６は−Ｈ、−ＣＨ３、−Ｃ２Ｈ５または−ＣＨ２ＯＨであり；
一方のＲ７は−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ７は−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ２−８エステルまたはＣ１−８  エーテルであり；
Ｒ９は−Ｏ−または−Ｃ（Ｒ１２）（Ｒ１２）−であり、式中、一方のＲ１２は−Ｈ、−Ｆ、−Ｂｒまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ１２は−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ２−２０エステル、Ｃ１−２０エーテル、または必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであるか、両方のＲ１２が一緒になって＝Ｏ、＝ＮＯＨまたは＝ＮＯＣＨ３であり；
Ｒ１０は−Ｈまたは−Ｆであり；
一方のＲ１１は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、他方のＲ１１は、−Ｈ、−ＯＨ、Ｃ２−８エステル、Ｃ１−８エーテル、または必要に応じて置換されたＣ１−８アルキルであり、ここで少なくとも２つのＲ３、Ｒ７、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、−ＯＨ、Ｃ２−８エステルまたはＣ１−８エーテルであるか、ここで少なくとも２つのＲ２、Ｒ７、Ｒ１１およびＲ１２は、独立して、−ＯＨ、Ｃ２−８エステルまたはＣ１−８エーテルである、
構造を有する化合物。
【請求項１９】
請求項１８に記載の化合物であって、以下の構造：
【化２−２】
2009534427.tif 000045
【化２−３】
2009534427.tif 000046
を有する、化合物。
【請求項２０】
請求項１８に記載の化合物であって、
一方のＲ１は−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−４アルキルであり、
他方のＲ１は−ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、または−ＯＣＨ３であり；
一方のＲ２は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−４アルキルであり、
他方のＲ２は、−ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、または−ＯＣＨ３であり；
一方のＲ３は、−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−４アルキルであり、
他方のＲ３は、−ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３、または−ＯＣＨ３であり；
一方のＲ４は−Ｈまたは必要に応じて置換されたＣ１−４アルキルであり、他方のＲ４は−ＯＨ、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ３または、−ＯＣ（Ｏ）ＣＨ２ＣＨ３である、化合物。
【請求項２１】
請求項１９に記載の化合物であって、該化合物が、アンドロスタ−５−エン−２β，３α，１６α，１７β−テトラオールまたは  Ｃ２−４モノエステルまたはＣ２−４ジエステルであり、必要に応じて該モノエステルが３位または１７位でアセテートであるか、該ジエステルが３位および１７位でアセテートである、化合物。
【請求項２２】
請求項１９に記載の化合物であって、該化合物が、アンドロスタ−５−エン−３β，４β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，４β，１６α，１７β−テトラオール、あるいはこれらの化合物のいずれかのＣ２−４モノエステルまたはＣ２−４ジエステルアナログであり、必要に応じて、該モノエステルが３位または１７位でアセテートであるか、該ジエステルが３位および１７位でアセテートである、化合物。
【請求項２３】
請求項１９に記載の化合物であって、該化合物が、アンドロスタ−５−エン−３β，１１β，１６α，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，１１β，１６α，１７β−テトラオール、３β，１１β，１６β，１７β−テトラオール、アンドロスタ−５−エン−３α，１１β，１６β，１７β−テトラオール、あるいはこれらの化合物のいずれかのＣ２−４モノエステルまたはＣ２−４ジエステルアナログであり、必要に応じて、該モノエステルが３位または１７位でアセテートであるか、該ジエステルが３位および１７位でアセテートである、化合物。
【請求項２４】
１つ以上の賦形剤、および請求項１８、１９または２０に記載の化合物を含む処方物。
【請求項２５】
請求項２４に記載の処方物であって、ここで前記化合物が以下の構造：
【化２−４】
2009534427.tif 000047
を有する、処方物。
【請求項２６】
請求項２４に記載の処方物であって、ここで前記化合物が以下の構造：
【化２−５】
2009534427.tif 000048
を有する、処方物。
【請求項２７】
請求項２４に記載の処方物であって、ここで前記化合物が以下の構造：
【化２−６】
2009534427.tif 000049
を有する、処方物。
【国際調査報告】
2009534427.tif 000050