(57)【要約】  パクリタキセル、並びにラパマイシン、その類似体、誘導体、塩及びエステルなどの第２の薬物を備えるシステム及び組成物、並びに送達方法が開示され、これらの薬物は、互いに補完する効果を有する。医薬として許容可能な担体又は賦形剤を含むか、又は支持することのできる支持構造を備える医療デバイスであり、担体又は賦形剤は、１種又は複数種の治療剤又は治療物質を含むことができ、この担体は、好ましくはその表面に被膜を含んでおり、この被膜は、例えば薬物などの治療物質を含んでいる。本発明で使用するのに適した、医療デバイス用の支持構造として、冠血管ステント、末梢ステント、カテーテル、動静脈移植片、バイパス移植片及び脈管構造において用いられる薬物送達バルーンが挙げられる。これらの組成物及びシステムは、抗増殖剤、抗血小板剤、抗炎症剤、抗血栓剤、細胞毒性薬、サイトカイン又はケモカイン結合を阻害する薬剤、細胞脱分化阻害剤、抗リパエデミック（ａｎｔｉ−ｌｉｐａｅｄｅｍｉｃ）剤、基質メタロプロテイナーゼ阻害剤、細胞増殖抑制薬、又はこれら及び他の薬物の組合せを含めた、他の薬物と組み合わせて用いることができる。【選択図】  図１６
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
医薬として許容可能な担体又は賦形剤を備えることのできる支持構造と；
タキサン、又はその誘導体、そのプロドラッグ若しくは塩、及び
第２の治療薬、又はその誘導体、そのプロドラッグ若しくは塩、を含む、
前記支持構造に付随する複数の治療薬と；
を備え、
対象の血管の管腔に植え込まれる場合、対照システムと比較したとき、新生内膜過形成が低減される、
薬物送達システム。
【請求項２】
前記対照システムと比較したとき、新生内膜過形成が≧１０％低減される、請求項１に記載のシステム。
【請求項３】
前記対照システムと比較したとき、新生内膜過形成が≧１５％低減される、請求項１に記載のシステム。
【請求項４】
前記対照システムと比較したとき、新生内膜過形成が≧２０％低減される、請求項１に記載のシステム。
【請求項５】
過形成の低減が、新生内膜面積測定、新生内膜厚測定及び面積狭窄率測定からなる群から選択される、少なくとも１つの技法によって測定される、請求項２〜４のいずれか一項に記載のシステム。
【請求項６】
前記対象がブタである、請求項１に記載のシステム。
【請求項７】
前記対象がヒトである、請求項１に記載のシステム。
【請求項８】
前記タキサンが、パクリタキセルを含み、第２の薬物が、相加的効果を発揮する、パクリタキセル：第２の薬物の比、ｒで存在する、請求項１に記載のシステム。
【請求項９】
パクリタキセル：第２の薬物の重量比、ｒが、１０：０．０１≧ｒ≧０．０１：１０である、請求項８に記載のシステム。
【請求項１０】
ｒ＝１０：１である、請求項９に記載のシステム。
【請求項１１】
前記タキサン及び第２の薬物が、相加的効果を発揮する、タキサン：第２の薬物の比、ｒで存在する、請求項１に記載のシステム。
【請求項１２】
タキサン：第２の薬物の重量比、ｒが１０：０．０１≧ｒ≧０．０１：１０である、請求項１に記載のシステム。
【請求項１３】
ｒ＝１０：１である、請求項１２に記載のシステム。
【請求項１４】
第３の治療薬をさらに備える、請求項１に記載のシステム。
【請求項１５】
前記第２の薬物及び／又は第３の薬物が、ラパマイシン、ラパマイシンの誘導体、ラパマイシン類似体、又はそれらの誘導体、プロドラッグ若しくは塩であり、但し、ラパマイシン類似体がゾタロリムスではない、請求項１４に記載のシステム。
【請求項１６】
前記薬物送達システムが医療デバイスを備える、請求項１に記載のシステム。
【請求項１７】
前記薬物送達システムがステントを備える、請求項１に記載のシステム。
【請求項１８】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療物質が、抗増殖剤、抗血小板剤、抗炎症剤、抗高脂血症剤、抗血栓剤、血栓溶解剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項１４に記載のシステム。
【請求項１９】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、抗増殖剤、抗血小板剤、抗炎症剤、抗高脂血症剤、抗血栓剤、血栓溶解剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せから選択される、請求項１４に記載のシステム。
【請求項２０】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、モメタゾン、ベクロメタゾン、シクレソニド、ベデソニド、トリアムシノロン、クロベタゾール、フルニソリド、ロテプレドノール、ブデソニド、フルチカゾンからなる群を含むグルココルチコステリオド、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せである、請求項１４に記載のシステム。
【請求項２１】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、エストラジオールを含めたステロイドホルモン並びにそれらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せである、請求項１４に記載のシステム。
【請求項２２】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、炎症性サイトカイン活性を低減する小分子及び生物製剤からなる群のメンバーである、請求項１４に記載のシステム。
【請求項２３】
前記第２の薬物及び／又は第３の薬物が、抗ＴＮＦα療法、アダリムマブ、抗ＭＣＰ−１療法、ＣＣＲ２受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１８療法、抗ＩＬ−１療法、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される、抗サイトカイン療法を含む、請求項１４に記載のシステム。
【請求項２４】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、シクロホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、カルムスチン及びロムスチンを含めたアルキル化剤、メトトレキセート、フルオロウラシル、シタラビン、メルカプトプリン及びペントスタチンを含めた抗代謝産物、ビンブラスチン及びビンクリスチンを含めたビンカアルカロイド、ドキソルビシン、ブレオマイシン及びマイトマイシンを含めた抗生物質、シスプラチン、プロカルバジン、エトポシド及びテニポシドを含めた抗増殖剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗増殖剤を含む、請求項１４に記載のシステム。
【請求項２５】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、アブシキシマブ、エプチフィバチド及びチロフィバンを含めた糖タンパク質ＩＩＢ／ＩＩＩＡ阻害剤、ジピリダモールを含めたアデノシン再取り込み阻害剤、クロピドグレル及びチクロピジンを含めたＡＤＰ阻害剤、アセチルサリチル酸を含めたシクロオキシゲナーゼ阻害剤、並びにシロスタゾールを含めたホスホジエステラーゼ阻害剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗血小板剤を含む、請求項１４に記載のシステム。
【請求項２６】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、フルチカゾン、クロベタゾール、モメタゾン及びエストラジオールを含めたステロイド、並びにアセトアミノフェン、イブプロフェン、ナプロキセン、スリンダク、ピロキシカム、メファナム酸を含めた非ステロイド系抗炎症剤、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８及びＴＮＦに対する抗体を含めた、サイトカイン又はケモカインの受容体への結合を阻害することによって、炎症促進性シグナルを阻害するもの、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗炎症剤を含む、請求項１４に記載のシステム。
【請求項２７】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、未分画ヘパリン並びにクリバリン、ダルテパリン、エノキサパリン、ナドロパリン及びチンザパリンを含めた低分子量ヘパリンを含めたヘパリン、アルガトロバン、ヒルジン、ヒルログ、ヒルゲンを含めた直接トロンビン阻害剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗血栓剤を含む、請求項１４に記載のシステム。
【請求項２８】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、ニコチン酸、プロブコール；メバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチンを含めたＨＭＧ  ＣｏＡ還元酵素阻害剤；フェノフィブラート、クロフィブラート、ゲムフィブロジルを含めたフィブリン酸誘導体；それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗高脂血症剤を含む、請求項１４に記載のシステム。
【請求項２９】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼや、アルテプラーゼ、レテプラーゼ、テネクタプラーゼを含めた組織プラスミノーゲンアクチベーター、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される血栓溶解剤を含む、請求項１４に記載のシステム。
【請求項３０】
前記第３の治療物質が抗体を含む、請求項１４に記載のシステム。
【請求項３１】
血管における新生内膜過形成を治療又は阻害するための薬物の、制御放出送達を提供するためのシステムであって、
タキサン、又はその塩、プロドラッグ若しくは誘導体、及び
第２の薬物、又はその塩、プロドラッグ若しくは誘導体、を含む、
複数の治療薬を備え、
前記タキサンが前記第２の薬物の活性を補完し、前記第２の薬物が前記タキサンの活性を補完する、
システム。
【請求項３２】
第３の薬物をさらに備え、前記タキサン又は前記第２の薬物が、前記第３の薬物の活性を補完し、前記第３の薬物が、前記タキサン又は前記第２の薬物の活性を補完する、請求項３１に記載のシステム。
【請求項３３】
第３の薬物をさらに備え、前記タキサンがパクリタキセルを含み、パクリタキセル又は前記第２の薬物が、前記第３の薬物の活性を補完し、前記第３の薬物が、パクリタキセル又は前記第２の薬物の活性を補完する、請求項３１に記載のシステム。
【請求項３４】
前記第２の薬物が、ラパマイシン、ラパマイシンの誘導体、ラパマイシン類似体、又はそれらの誘導体、プロドラッグ若しくは塩であり、但し、ラパマイシン類似体がゾタロリムスではない、請求項３１に記載のシステム。
【請求項３５】
前記治療薬が医療デバイスに付随する、請求項３１に記載のシステム。
【請求項３６】
前記医療デバイスがステントを備える、請求項３１に記載のシステム。
【請求項３７】
前記ステントが、表面上に被膜をさらに備える、請求項３６に記載のシステム。
【請求項３８】
前記被膜がポリマーを含む、請求項３７に記載のシステム。
【請求項３９】
前記ポリマーがホスホリルコリンポリマーを含む、請求項３８に記載のシステム。
【請求項４０】
前記ポリマーが、フルオロポリマー、ポリ（アクリレート、シリコーン、樹脂、ナイロン、及びポリ（アミド）からなる群から選択される、請求項３８に記載のシステム。
【請求項４１】
前記治療薬が前記被膜に付随する、請求項３１に記載のシステム。
【請求項４２】
パクリタキセル及び前記第２の薬物が、相加的効果を発揮する比、ｒで存在する、請求項３３に記載のシステム。
【請求項４３】
パクリタキセル：第２の薬物の重量比が、１０：０．０１≧ｒ≧０．０１：１０である、請求項３３に記載のシステム。
【請求項４４】
ｒ＝１０：１である、請求項３３に記載のシステム。
【請求項４５】
前記薬物送達システムが医療デバイスを備える、請求項３１に記載のシステム。
【請求項４６】
前記薬物送達システムがステントを備える、請求項３１に記載のシステム。
【請求項４７】
第３の治療薬をさらに備える、請求項３１に記載のシステム。
【請求項４８】
前記第２の薬物及び／又は第３の薬物が、ラパマイシン、ラパマイシンの誘導体、ラパマイシン類似体、又はそれらの誘導体、プロドラッグ若しくは塩であり、但し、ラパマイシン類似体がゾタロリムスではない、請求項４７に記載のシステム。
【請求項４９】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療物質が、抗増殖剤、抗血小板剤、抗炎症剤、抗高脂血症剤、抗血栓剤、血栓溶解剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される、請求項４７に記載のシステム。
【請求項５０】
前記抗炎症剤が、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、エストラジオール、アセトアミノフェン、イブプロフェン、ナプロキセン、フルチカゾン、クロベタゾール、アダリムマブ、スリンダク、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せからなる群から選択されるものである、請求項４７に記載のシステム。
【請求項５１】
前記第２の薬物及び／又は第３の薬が、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、モメタゾン、ベクロメタゾン、シクレソニド、ベデソニド、トリアムシノロン、クロベタゾール、フルニソリド、ロテプレドノール、ブデソニド、フルチカゾンからなる群を含むグルココルチコステリオド、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せである、請求項４７に記載のシステム。
【請求項５２】
前記第２の薬物及び／又は第３の薬が、エストラジオールを含めたステロイドホルモン、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せである、請求項４７に記載のシステム。
【請求項５３】
前記第２の薬物及び／又は第３の薬が、炎症性サイトカイン活性を低減する小分子及び生物製剤からなる群のメンバーである、請求項４７に記載のシステム。
【請求項５４】
前記第２の薬物及び／又は第３の薬物が、抗ＴＮＦα療法、アダリムマブ、抗ＭＣＰ−１療法、ＣＣＲ２受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１８療法、抗ＩＬ−１療法、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される、抗サイトカイン療法を含む、請求項４７に記載のシステム。
【請求項５５】
前記第３の治療物質が抗体を含む、請求項４７に記載のシステム。
【請求項５６】
タキサン、又はその塩、プロドラッグ若しくは誘導体、及び
第２の薬物、又はその塩、プロドラッグ若しくは誘導体、を含み、
タキサン：第２の薬物の比、ｒが、重量で、１０：０．０１≧ｒ≧０．０１：１０であり、
対象に、医療デバイスで血管中に投与され、前記システムが対象の血管の管腔に植え込まれる場合、対照システムと比較したとき、新生内膜過形成が低減され、
対象への局所送達用に製剤化される、
医薬組成物。
【請求項５７】
ｒ＝１０：１である、請求項５６に記載の組成物。
【請求項５８】
前記タキサンがパクリタキセルである、請求項５６に記載の組成物。
【請求項５９】
前記組成物が前記医療デバイスに付随する、請求項５６に記載の組成物。
【請求項６０】
前記医療デバイスがステントを備える、請求項５９に記載の組成物。
【請求項６１】
前記ステントが、表面上に被膜を備え、前記組成物が前記被膜に付随する、請求項５９に記載の組成物。
【請求項６２】
前記第２の薬物が、ラパマイシン、ラパマイシンの誘導体、ラパマイシン類似体、又はそれらの誘導体、エステル若しくは塩であり、但し、ラパマイシン類似体がゾタロリムスではない、請求項５６に記載の組成物。
【請求項６３】
前記対象がヒトである、請求項５６に記載の組成物。
【請求項６４】
タキサン、又はその塩、プロドラッグ若しくは誘導体、及び
第２の薬物、又はその塩、プロドラッグ若しくは誘導体、を含み、
タキサン：第２の薬物の比、ｒが、重量で、１０：０．０１≧ｒ≧０．０１：１０であり、
対象に、医療デバイスで血管中に投与され、前記システムが対象の血管の管腔に植え込まれる場合、対照システムと比較したとき、新生内膜過形成が低減され、
前記投与方法が、経口、経直腸、非経口、大槽内、膣内、腹腔内、局所、口腔内、静脈内の、動脈内の、筋肉内の、腹腔内の、胸骨内の、皮下の、関節内の注射、注入及び配置からなる群から選択される、
医薬組成物。
【請求項６５】
前記組成物が、
パクリタキセル、又はその塩、プロドラッグ若しくは誘導体、及び
第２の薬物、又はその塩、プロドラッグ若しくは誘導体、を含み、
パクリタキセル：第２の薬物の比、ｒが、重量で、１０：０．０１≧ｒ≧０．０１：１０であり、
局所的に投与される場合、前記パクリタキセルの効果が前記第２の薬物の活性を補完し、前記第２の薬物がパクリタキセルの活性を補完する、
請求項６４に記載の組成物。
【請求項６６】
ｒ＝１０：１である、請求項６４に記載の組成物。
【請求項６７】
第３の治療薬又は治療物質をさらに備える、請求項６４に記載のシステム。
【請求項６８】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、抗増殖剤、抗血小板剤、抗炎症剤、抗高脂血症剤、抗血栓剤、血栓溶解剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せから選択される、請求項６７に記載のシステム。
【請求項６９】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、モメタゾン、ベクロメタゾン、シクレソニド、ベデソニド、トリアムシノロン、クロベタゾール、フルニソリド、ロテプレドノール、ブデソニド、フルチカゾンからなる群を含むグルココルチコステリオド、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せである、請求項６７に記載のシステム。
【請求項７０】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、エストラジオールを含めたステロイドホルモン並びにそれらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せである、請求項６７に記載のシステム。
【請求項７１】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、炎症性サイトカイン活性を低減する小分子及び生物製剤からなる群のメンバーである、請求項６７に記載のシステム。
【請求項７２】
前記第２の薬物及び／又は第３の薬物が、抗ＴＮＦα療法、アダリムマブ、抗ＭＣＰ−１療法、ＣＣＲ２受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１８療法、抗ＩＬ−１療法、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される、抗サイトカイン療法を含む、請求項６７に記載のシステム。
【請求項７３】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、シクロホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、カルムスチン及びロムスチンを含めたアルキル化剤、メトトレキセート、フルオロウラシル、シタラビン、メルカプトプリン及びペントスタチンを含めた抗代謝産物、ビンブラスチン及びビンクリスチンを含めたビンカアルカロイド、ドキソルビシン、ブレオマイシン及びマイトマイシンを含めた抗生物質、シスプラチン、プロカルバジン、エトポシド及びテニポシドを含めた抗増殖剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗増殖剤を含む、請求項６７に記載のシステム。
【請求項７４】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、アブシキシマブ、エプチフィバチド及びチロフィバンを含めた糖タンパク質ＩＩＢ／ＩＩＩＡ阻害剤、ジピリダモールを含めたアデノシン再取り込み阻害剤、クロピドグレル及びチクロピジンを含めたＡＤＰ阻害剤、アセチルサリチル酸を含めたシクロオキシゲナーゼ阻害剤、シロスタゾールを含めたホスホジエステラーゼ阻害剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗血小板剤を含む、請求項６７に記載のシステム。
【請求項７５】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、フルチカゾン、クロベタゾール、モメタゾン及びエストラジオールを含めたステロイド、アセトアミノフェン、イブプロフェン、ナプロキセン、スリンダク、ピロキシカム、メファナム酸を含めた非ステロイド系抗炎症剤、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８及びＴＮＦに対する抗体を含めた、サイトカイン又はケモカインの受容体への結合を阻害することによって、炎症促進性シグナルを阻害するもの、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗炎症剤を含む、請求項６７に記載のシステム。
【請求項７６】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、未分画ヘパリン並びにクリバリン、ダルテパリン、エノキサパリン、ナドロパリン及びチンザパリンを含めた低分子量ヘパリンを含めたヘパリン、アルガトロバン、ヒルジン、ヒルログ、ヒルゲンを含めた直接トロンビン阻害剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗血栓剤を含む、請求項６７に記載のシステム。
【請求項７７】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、ニコチン酸、プロブコール；メバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチンを含めたＨＭＧ  ＣｏＡ還元酵素阻害剤；フェノフィブラート、クロフィブラート、ゲムフィブロジルを含めたフィブリン酸誘導体；それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される抗高脂血症剤を含む、請求項６７に記載のシステム。
【請求項７８】
前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼや、アルテプラーゼ、レテプラーゼ、テネクタプラーゼを含めた組織プラスミノーゲンアクチベーター、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される血栓溶解剤を含む、請求項６７に記載のシステム。
【請求項７９】
請求項１又は３１に記載のシステムを血管に配置することを含む、対象を治療する方法。
【請求項８０】
請求項５６又は６４に記載の組成物を投与することを含む、対象を治療する方法。
【請求項８１】
請求項１又は３１に記載のシステムを備えるキット。
【請求項８２】
請求項５６又は６４に記載の組成物を備えるキット。
【発明の詳細な説明】
【発明の詳細な説明】
【０００１】
［０１］［関連出願の相互参照］
［０２］本願は、１９９７年９月２６日に出願された、米国特許出願第６０／０６０１０５号明細書に対して優先権を主張し、現在は、米国特許第６０１５８１５号明細書となっている、１９９８年９月２４日に出願された米国特許出願第０９／１５９９４５号明細書の分割である、現在は米国特許第６３２９３８６号明細書となっている、１９９９年１１月２日に出願された米国特許出願第０９／４３３００１号明細書の部分継続である、現在は米国特許第６８９０５４６号明細書となっている、２００１年９月１０日に出願された米国特許出願第０９／９５０３０７号明細書の部分継続である、２００２年９月６日に出願された米国特許出願第１０／２３５５７２号明細書の部分継続であり、本願はまた、２００５年３月２３日に出願された米国特許出願第６０／６６４３２８号明細書、２００５年１０月１４日に出願された米国特許出願第６０／７２７０８０号明細書、２００５年１０月１４日に出願された米国特許出願第６０／７２６８７８号明細書、２００５年１０月１７日に出願された米国特許出願第６０／７３２５７７号明細書、２００５年３月１８日に出願された米国特許出願第１１／０８４１７２号明細書の仮出願である、２００４年３月１９日に出願された米国特許出願第６０／５５４７３０号明細書、及び２００５年１０月１４日に出願された米国特許出願第６０／７２７１９６号明細書に対して優先権を主張し、上記すべての全体が、参照により本明細書に組み込まれている。
【０００２】
［０３］［連邦支援の研究又は開発に関する陳述］
［０４］該当なし。
【０００３】
［０５］［コンパクトディスクで提出された資料の参照による組込み］
［０６］該当なし。
【０００４】
［０７］［技術分野］
［０８］本発明は、免疫調節活性及び／又は抗再狭窄活性を有する新規な化学化合物、並びにこの新規な化合物の調製に有用な合成中間体に関し、特にマクロライド系免疫調節薬に関する。より詳細には、本発明は、ラパマイシンの半合成類似体、それらの調製手段、そのような化合物を含有する医薬組成物、及びこの医薬組成物を用いる治療方法に関する。
【０００５】
［０９］［発明の背景］
［０１０］緒言
［０１１］化合物シクロスポリン（シクロスポリンＡ）は、臓器移植及び免疫調節の分野でのその導入以来、広く用いられ、移植処置に対する成功率の著しい増加をもたらしてきた。最近、強力な免疫調節活性を有するいくつかの種類の大環状化合物が発見されてきた。Ｏｋｕｈａｒａらは、免疫抑制剤ＦＫ−５０６、すなわちＳ．ツクバエンシス（ｔｓｕｋｕｂａｅｎｓｉｓ）の系統から単離された、２３員環大環状ラクトンを含めた、ストレプトマイセス属から単離された多数の大環状化合物を開示している（Ｏｋｕｈａｒａら、１９８６）。
【０００６】
［０１２］Ｃ−２１でのそれらのアルキル置換基において、ＦＫ−５０６と異なるＦＲ−９００５２０及びＦＲ−９００５２３を含めた他の関連した天然産物は、Ｓ．ハイグロスコピカスヤクシムナエンシス（ｈｙｇｒｏｓｃｏｐｉｃｕｓ  ｙａｋｕｓｈｉｍｎａｅｎｓｉｓ）から単離されてきた。Ｓ．ツクバエンシスから産生される、別の類似体、ＦＲ−９００５２５は、ピペコリン酸部分のプロリン基への置換において、ＦＫ−５０６と異なる。腎毒性などの、シクロスポリン及びＦＫ−５０６に関係する不満足な副作用は、局所的に有効であるが、全身的には無効である免疫抑制剤を含めた、改善された効力及び安全性を有する免疫抑制化合物の探索の継続をまねいている（Ｌｕｌｙ、１９９５）。
【０００７】
［０１３］ラパマイシン
［０１４］ラパマイシンは、ストレプトマイセス  ハイグロスコピカスによって産生される、大環状トリエン抗生物質であり、これは、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏの両方において、特にカンジダアルビカンスに対して抗真菌活性を有することが判明した（Ｃ．Ｖｅｚｉｎａら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．１９７５、２８、７２１；Ｓ．Ｎ．Ｓｅｈｇａｌら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．１９７５、２８、７２７；Ｈ．Ａ．Ｂａｋｅｒら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．１９７８、３１、５３９；米国特許第３９２９９９２号明細書；及び米国特許第３９９３７４９号明細書）。
【０００８】
【化１】
2009511195.tif 000003
【０００９】
［０１５］単独の（Ｓｕｒｅｎｄｒａ、１９８９）又はピシバニールと組み合わせた（Ｅｎｇ、１９８３）ラパマイシンは、抗腫瘍活性を有することが示されてきた。１９７７年に、ラパマイシンはまた、多発性硬化症のモデルである実験的なアレルギー性脳脊髄炎モデル、関節リウマチのモデルであるアジュバント関節炎モデルにおいて、免疫抑制剤として有効であることが示され、ＩｇＥ様抗体の形成を有効に阻害することが示された（Ｍａｒｔｅｌら、１９７７）。
【００１０】
［０１６］ラパマイシンの免疫抑制作用はまた、組織不適合性のげっ歯類において、臓器移植片の生残時間を延長する能力を有するとして、ＦＡＳＥＢ、１９８９、３、３４１１に開示された（Ｍｏｒｒｉｓ及びＭｅｉｓｅｒ、１９８９）。ラパマイシンの、Ｔ細胞活性化を阻害する能力は、Ｍ．Ｓｔｒａｕｃｈによって開示された（ＦＡＳＥＢ、１９８９、３、３４１１）。ラパマイシンのこれらの及び他の生物学的作用は、以前に概説された（Ｍｏｒｒｉｓ、１９９２）。
【００１１】
［０１７］ラパマイシンは、動物モデルにおける新生内膜増殖を低減し、ヒトにおける再狭窄の割合を低減することが示されてきた。ラパマイシンが、関節リウマチの治療用薬剤としてのその選択を支持した特性である、抗炎症作用も示すということを示す証拠が公表されてきた。細胞増殖及び炎症はともに、バルーン血管形成及びステント配置後の再狭窄病変の形成における原因因子であると考えられるので、ラパマイシン及びその類似体が、再狭窄の予防のために提案されてきた。
【００１２】
［０１８］ラパマイシンのモノエステル誘導体及びジエステル誘導体（位置３１及び４２でのエステル化）は、抗真菌剤として（Ｒａｋｈｉｔ、１９８２、米国特許第４３１６８８５号明細書）、及びラパマイシンの水溶性プロドラッグとして（Ｓｔｅｌｌａ、１９８７、米国特許第４６５０８０３号明細書）有用であることが示されてきた。
【００１３】
［０１９］ラパマイシン及び３０−デメトキシラパマイシンの発酵及び精製は、文献に記載されてきた（Ｃ．Ｖｅｚｉｎａら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．（Ｔｏｋｙｏ）、１９７５、２８（１０）、７２１；Ｓ．Ｎ．Ｓｅｈｇａｌら、Ｊ．Ａｎｔｉｂｉｏｔ．（Ｔｏｋｙｏ）、１９７５、２８（１０）、７２７；１９８３、３６（４）、３５１；Ｎ．Ｌ．Ｐａｉｖａら、Ｊ．Ｎａｔｕｒａｌ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ、１９９１、５４（１）、１６７〜１７７）。
【００１４】
［０２０］多数のラパマイシンの化学修飾が試みられてきた。これらには、ラパマイシンのモノ−及びジエステル誘導体（Ｃａｕｆｉｅｌｄ、１９９２）、ラパマイシンの２７−オキシム（Ｆａｉｌｌｉ、１９９２ａ）；ラパマイシンの４２−オキソ類似体（Ｃａｕｆｉｅｌｄ、１９９１）；二環式ラパマイシン（Ｋａｏ、１９９２ａ）；ラパマイシン二量体（Ｋａｏ、１９９２ｂ）；ラパマイシンのシリルエーテル（Ｆａｉｌｌｉ、１９９２ｂ）；並びにアリールスルホネート及びスルファメート（Ｆａｉｌｌｉ、１９９３）の調製が含まれる。ラパマイシンは、その自然発生的鏡像異性形態として最近合成された（Ｈａｙｗａｒｄら、１９９３；Ｎｉｃｏｌａｏｕら、１９９３；Ｒｏｍｏら、１９９３）。
【００１５】
［０２１］ＦＫ−５０６のように、ラパマイシンは、ＦＫＢＰ−１２に結合することが知られていた（Ｓｉｅｋｉｅｒｋａ，Ｊ．Ｊ．；Ｈｕｎｇ，Ｓ．Ｈ．Ｙ．；Ｐｏｅ，Ｍ．；Ｌｉｎ，Ｃ．Ｓ．；Ｓｉｇａｌ，Ｎ．Ｈ．Ｎａｔｕｒｅ、１９８９、３４１、７５５〜７５７；Ｈａｒｄｉｎｇ，Ｍ．Ｗ．；Ｇａｌａｔ，Ａ．；Ｕｅｈｌｉｎｇ，Ｄ．Ｅ．；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｓ．Ｌ．Ｎａｔｕｒｅ  １９８９、３４１、７５８〜７６０；Ｄｕｍｏｎｔ，Ｆ．Ｊ．；Ｍｅｌｉｎｏ，Ｍ．Ｒ．；Ｓｔａｒｕｃｈ，Ｍ．Ｊ．；Ｋｏｐｒａｋ，Ｓ．Ｌ．；Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｐ．Ａ．；Ｓｉｇａｌ，Ｎ．Ｈ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９０、１４４、１４１８〜１４２４；Ｂｉｅｒｅｒ，Ｂ．Ｅ．；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｓ．Ｌ．；Ｂｕｒａｋｏｆｆ，Ｓ．Ｊ．Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９１、２１、４３９〜４４５；Ｆｒｅｔｚ，Ｈ．；Ａｌｂｅｒｓ，Ｍ．Ｗ．；Ｇａｌａｔ，Ａ．；Ｓｔａｎｄａｅｒｔ，Ｒ．Ｆ．；Ｌａｎｅ，Ｗ．Ｓ．；Ｂｕｒａｋｏｆｆ，Ｓ．Ｊ．；Ｂｉｅｒｅｒ，Ｂ．Ｅ．；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｓ，Ｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１９９１、１１３、１４０９〜１４１１）。ラパマイシン／ＦＫＢＰ−１２複合体は、ＦＫ−５０６／ＦＫＢＰ−１２複合体が阻害するタンパク質である、カルシニューリンと異なる、さらに別のタンパク質のｍ−ＴＯＲに結合することも示されてきた（Ｂｒｏｗｎ，Ｅ．Ｊ．；Ａｌｂｅｒｓ，Ｍ．Ｗ．；Ｓｈｉｎ，Ｔ．Ｂ．；Ｉｃｈｉｋａｗａ，Ｋ．；Ｋｅｉｔｈ，Ｃ．Ｔ．；Ｌａｎｅ，Ｗ．Ｓ．；Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ，Ｓ．Ｌ．Ｎａｔｕｒｅ  １９９４、３６９、７５６〜７５８；Ｓａｂａｔｉｎｉ，Ｄ．Ｍ．；Ｅｒｄｊｕｍｅｎｔ−Ｂｒｏｍａｇｅ，Ｈ．；Ｌｕｉ，Ｍ．；Ｔｅｍｐｅｓｔ，Ｐ．；Ｓｎｙｄｅｒ，Ｓ．Ｈ．Ｃｅｌｌ、１９９４、７８、３５〜４３）。
【００１６】
［０２２］他の薬物が、望まれない細胞増殖に対抗するために用いられてきた。これらの例は、パクリタキセルである。タイヘイヨウイチイ（Ｐａｃｉｆｉｃ  Ｙｅｗ）、セイヨウイチイ（Ｔａｘｕｓ  ｂｒｅｖｉｆｏｌｉａ）から抽出された複合アルカロイドであるパクリタキセルは、細胞分裂に決定的である細胞骨格の成分（チューブリン、微小管の構成要素）を安定化し、したがって細胞増殖を防止している（Ｍｉｌｌｅｒ及びＯｊｉｍａ、２００１年）。
【００１７】
［０２３］ステント
［０２４］経皮的経管冠動脈形成術（ＰＴＣＡ）が、１９７０年代にＡｎｄｒｅａｓ  Ｇｒｕｎｔｚｉｇによって開発された。１９７５年９月２４日に、最初のイヌの冠血管拡張が行われ、翌年、ＰＴＣＡの使用を示す研究が、米国心臓協会の年次総会で発表された。その後間もなく、最初のヒト患者が、スイスのチューリッヒで研究され、その後にサンフランシスコ及びニューヨークにおいて最初のアメリカのヒト患者が続いた。この処置は、閉塞性冠動脈疾患を有する患者の治療に関して、介入心臓病学（ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌ  ｃａｒｄｉｏｌｏｇｙ）の慣習を変えたが、この処置により、長期的な解決策は提供されなかった。患者は、血管閉塞に関係する胸痛の一時的な寛解しか受けず、反復処置が多くの場合必要であった。再狭窄病変の存在は、新処置の有用性を著しく制限することが確認された。１９８０年代後半に、血管形成術後の血管開存性を維持するために、ステントが導入された。ステント術は、現在行われる血管形成術の９０％に関与している。ステントの導入前は、再狭窄の割合は、バルーン血管形成術で治療された患者の３０〜５０％の範囲であった。ステント術の導入は、１５３０％の再狭窄の割合を伴って、転帰のさらなる改善をもたらした。ステント術の後、再狭窄病変は、主に新生内膜過形成によって引き起こされ、これは、時間経過及び病理組織学的外観の両方において動脈硬化性疾患と明確に異なる。再狭窄は、損傷した冠動脈壁の治癒プロセスであり、新生内膜組織が、血管腔に大きく作用している。血管近接照射療法は、ステント内再狭窄病変に対して効果的であると思われる。しかし、放射線照射は、実用性及び費用の制限、並びに安全性及び耐久性について長引いている問題を有する。
【００１８】
［０２５］ステント及び併用療法
［０２６］薬物溶出ステントを作製し、評価するために介入デバイス（ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎａｌ  ｄｅｖｉｃｅ）コミュニティーによって取り組まれた大きな努力は、少なくとも５０％再狭窄を低減することによって本来の目的を満たした。しかし、改善された局所薬物送達デバイス、例えば、再狭窄を予防し、治療するための、安全で効果的な手段を提供する、薬物含浸ポリマー被覆ステントの必要性が依然として残っている。例えば、２つの市販の単一薬物溶出ステントは、再狭窄を低減し、患者の転帰を改善するが、再狭窄を解消しないか、又は有害な安全性の問題がない。患者、及び特に糖尿病を含めたリスクのある患者、小血管を有する患者及び急性冠症候群を有する患者は、改善された性能を有するステントなどの局所薬物送達デバイスから恩恵を得ることができるだろう。
【００１９】
［０２７］薬物の組合せを含む薬物送達デバイスは、知られている。しかし、当技術分野が、局所的に投与される、例えばステントから溶出される、特に有効な薬物の組合せを教示しているように思われない。例えば、以下にさらに考察されるように、Ｆａｌｏｔｉｃｏは、ラパマイシン／デキサメタゾンの組合せを含むＥＶＡ−ＰＢＭＡポリマー被覆ステントは、ラパマイシン単独、又はデキサメタゾン単独を送達するステントよりも、新生内膜面積、面積狭窄率、及び炎症スコアを低減することにおいて「極めて効果が弱かった」ことを教示している。
【００２０】
［０４６］［発明の概要］
［０４７］一態様では、本発明の実施形態は、医薬として許容可能な担体又は賦形剤、並びにタキサン、又はその誘導体、プロドラッグ若しくは塩、及び第２の薬物、又はその誘導体、プロドラッグ若しくは塩を有する治療組成物を担持することのできる、支持構造を有する薬物送達システムに関し、このシステムが対象の血管の管腔に植え込まれる場合、対照システムと比較したとき、新生内膜過形成の形成が低減される。対象は、例えばヒト又はブタとすることができる。パクリタキセル：第２の薬物の比、ｒは、重量で、１０：０．０１≧ｒ≧０．０１：１０であり、ある場合には、ｒ＝１：１０である。この薬物送達システムは、ステントを含むことができ、第３の若しくはより多くの薬物、又は生物製剤を含めた他の治療物質を含むことができる。他の治療物質として、それだけに限らないが、抗増殖剤、抗血小板剤、ステロイド系及び非ステロイド系抗炎症剤、抗高脂血症剤、抗血栓剤、血栓溶解剤が挙げられる。対象は、それだけに限らないが、ヒト及びブタを含めた哺乳動物とすることができる。
【００２１】
［０４８］本発明の実施形態の別の目的は、血管における新生内膜過形成を治療又は阻害するための薬物の、制御放出送達を提供するためのシステムに関する。このシステムは、パクリタキセル、又はその塩、プロドラッグ若しくは誘導体、及び第２の薬物、又はその塩、プロドラッグ若しくは誘導体を含み、パクリタキセルは第２の薬物の活性を補完し、第２の薬物はパクリタキセルの活性を補完する。パクリタキセル：第２の薬物の比、ｒは、重量で、１０：０．０１≧ｒ≧０．０１：１０であり、ある場合には、ｒ＝１：１０である。この薬物送達システムは、ステントを含むことができ、第３の若しくはより多くの薬物、又は生物製剤を含めた他の治療物質を含むことができる。他の治療物質として、それだけに限らないが、抗増殖剤、抗血小板剤、ステロイド系及び非ステロイド系抗炎症剤、抗高脂血症剤、抗血栓剤、血栓溶解剤が挙げられる。対象は、それだけに限らないが、ヒト及びブタを含めた哺乳動物とすることができる。
【００２２】
［０４９］本発明の実施形態のさらなる目的は、パクリタキセル、又はその塩、プロドラッグ若しくは誘導体、及び第２の薬物、又はその塩若しくは誘導体を含む医薬組成物に関し、パクリタキセル：第２の薬物の比、ｒは、重量で、１０：００．１≧ｒ≧０．０１：１０であり、この組成物は、対象に、医療デバイスで血管中に投与され、システムが対象の血管の管腔に植え込まれる場合、対照システムと比較したとき、新生内膜過形成の形成が低減される。この比は、ｒ＝１：１０とすることができ、製剤は、ステント又は被覆ステントを含む医療デバイスにさらに付随する。対象は、それだけに限らないが、ヒト及びブタを含めた哺乳動物とすることができる。別の態様では、本発明は、パクリタキセル、又はその塩、プロドラッグ若しくは誘導体、及び第２の薬物、又はその塩、プロドラッグ若しくは誘導体を含む、任意の記載されるシステム又は組成物を、配置又は投与することによって、対象を治療する方法に関し、パクリタキセル：第２の薬物の比、ｒは、重量で、１０：０．０１≧ｒ≧０．０１：１０である。
【００２３】
［０５０］別の態様では、本発明は、パクリタキセル、又はその塩、プロドラッグ若しくは誘導体、及び第２の薬物、又はその塩、プロドラッグ若しくは誘導体を含む、任意の記載されるシステム又は組成物を含むキットに関し、パクリタキセル：第２の薬物の比、ｒは、重量で、１０：０．０１≧ｒ≧０．０１：１０である。
【００２４】
［０５１］別の態様では、本発明は、表面上に被膜を備えるステントを含む、薬物送達システムに関し、この被膜は、パクリタキセル、及び第２の薬物、又はそれらの誘導体、プロドラッグ若しくは塩を含む治療組成物を有し、対照の薬物送達システムと比較したとき、新生内膜過形成が≧１０％低減され、パクリタキセル：第２の薬物の重量比、ｒは、１０：０．０１≧ｒ≧０．０１：１０である。この比、ｒは、ｒ＝１：１０とすることができる。
【００２５】
［０５２］本発明のすべての態様において、第２の薬物は、ラパマイシン、ラパマイシンの類似体、及びラパマイシンの塩、プロドラッグ、若しくは誘導体とすることができる。
【００２６】
［０５３］［発明の実施形態の詳細な説明］
［０５４］定義
［０５５］用語「プロドラッグ」は、本明細書で用いられる場合、ｉｎ  ｖｉｖｏで、例えば、血中での加水分解によって、上記式の親化合物に速やかに変換される化合物を指す。詳細な考察が、Ｈｉｇｕｃｈｉ及びＳｔｅｌｌａ（Ｈｉｇｕｃｈｉ及びＳｔｅｌｌａ、１９８７；Ｒｏｃｈｅ、１９８７）及びＲｏｃｈｅ（Ｒｏｃｈｅ、１９８７）に提供されており、両方とも参照により、本明細書に組み込まれている。
【００２７】
［０５６］用語「付随する」は、本明細書で用いられる場合、それだけに限らないが、混合された、混合されていない、微粒子、被覆剤と混合された、支持構造物と混合された形態を含めた、多くの形態であり得る化合物を指す。当業者は、薬物、被膜／薬物、及び薬物／被膜／支持構造物の間の相互作用の変化を理解するだろう。
【００２８】
［０５７］用語「医薬として許容可能なプロドラッグ」は、本明細書で用いられる場合、適切な医学的判断の範囲内で、過度の毒性、刺激作用、及びアレルギー応答を伴うことなく、ヒト及び下等哺乳動物の組織に接触させて用いるのに適しており、妥当な利益／リスク比と見合っており、それらの使用目的に有効である、本発明の実施形態における化合物のプロドラッグを指す。他の実施形態は、Ｃ−３１ヒドロキシル基で誘導体化される、医薬として許容可能なプロドラッグを含む。
【００２９】
［０５８］用語「プロドラッグエステル」は、本明細書で用いられる場合、生理的条件下で加水分解される、任意のいくつかのエステル形成基を指す。プロドラッグエステル基の例として、アセチル、プロプリオニル（ｐｒｏｐｒｉｏｎｙｌ）、ピバロイル、ピバロイルオキシメチル、アセトキシメチル、フタリジル、メトキシメチル、インダニルなど、並びに自然発生又は非自然発生アミノ酸の、本発明の実施形態の化合物のＣ−３１ヒドロキシル基へのカップリングから誘導されるエステル基が挙げられる。
【００３０】
［０５９］
【化２】
2009511195.tif 000004
Ｒ＝Ｒ１Ｃ（Ｏ）Ｒ２Ｒ３；Ｒ１Ｃ（Ｓ）Ｒ２Ｒ３
ここで、Ｒ１＝Ｏ、Ｓ
Ｒ２＝なし、０、Ｎ、Ｓ、様々なアルキル、アルケニル、アルキニル、複素環、アリール
Ｒ３＝なし、様々なアルキル、アルケニル、アルキニル、複素環、アリール
アルキル基、アルケニル基、アルキニル基、複素環基、アリール基は、置換されていても置換されていなくてもよい。
【００３１】
［０６０］用語「支持構造」は、医薬として許容可能な担体又は賦形剤を含むか、又は支持することのできる骨組みを意味し、この担体又は賦形剤は、１種又は複数種の治療剤又は治療物質、例えば、１種又は複数種の薬物及び／又は他の化合物を含むことができる。支持構造は、典型的には、金属又はポリマー材料で形成される。治療剤又は治療物質を含むことのできる、生分解性ポリマーを含めたポリマー材料で形成される適当な支持構造として、制限なく、参照により本明細書に組み込まれている、米国特許第６４１３２７２号明細書及び第５５２７３３７号明細書に開示されているものが挙げられる（Ｉｇａｋｉ、２００２；Ｓｔａｃｋら、１９９６）。
【００３２】
［０６１］用語「補完的な」は、本明細書で用いられる場合、組合せ物における少なくとも２種の薬物によって示される挙動であって、それらのそれぞれの医薬活性が、ある場合には相加的な活性を有することによって、ある場合には別々であるが、哺乳動物において、全体的な所望の薬理学的効果を助長する有利な活性を有することによって、組合せ物から恩恵を得る場合、及び組合せ薬物が、互いの生物活性を積極的に低減しない場合の挙動を指す。
【００３３】
［０６２］「対象」は、それだけに限らないが、サル、イヌ、ネコ、ウサギ、雌ウシ、ブタ、ヤギ、ヒツジ、ウマ、ラット、マウス、モルモット、及びヒトを含めた哺乳動物を含む脊椎動物を意味する。
【００３４】
［０６３］「治療物質」は、適切な用量で適切に対象に投与される場合、その対象に有益な効果を有する任意の物質を意味する。
【００３５】
［０６４］ラパマイシン、ラパマイシン類似体又はその誘導体若しくは塩は、ラパマイシンのすべての類似体及び誘導体、並びにその塩を指す。例として、タクロリムス、１，２，３，４−テトラヒドロラパマイシンが挙げられ、他には、参照により本明細書に組み込まれている、Ｓｋｏｔｎｉｃｋｉら（Ｓｋｏｔｎｉｃｋｉら、１９９４）によって記載されたものが含まれる。
【００３６】
［０６５］治療方法
［０６６］それだけに限らないが、実施例で特定されるものを含めて、本発明の化合物は、哺乳動物（ヒトを含めて）において免疫調節活性を有する。免疫抑制剤として、本発明の実施形態の化合物は、心臓、腎臓、肝臓、骨髄、皮膚、角膜、肺、膵臓、小腸（ｉｎｔｅｓｔｉｎｕｍ  ｔｅｎｕｅ）、肢、筋肉、神経、十二指腸、小腸（ｓｍａｌｌ−ｂｏｗｅｌ）、膵島細胞などを含めた臓器又は組織の移植による抵抗性を含めた免疫介在性疾患；骨髄移植によってもたらされる移植片対宿主疾患；関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、橋本甲状腺炎、多発性硬化症、重症筋無力症、Ｉ型糖尿病、ブドウ膜炎、アレルギー性脳脊髄炎、糸球体腎炎などを含めた自己免疫疾患の治療及び予防に有用である。さらなる使用には、乾癬、アトピー性皮膚炎、接触性皮膚炎及びさらに、湿疹性皮膚炎、セボロエイス（ｓｅｂｏｒｒｈｏｅｉｓ）皮膚炎、扁平苔癬、天疱瘡、類天疱瘡、表皮水疱症、じん麻疹、血管性浮腫、血管炎、紅斑、皮膚好酸球増加症（ｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｅｏｓｉｎｏｐｈｉｌｉａ）、紅斑性狼瘡、アクネ及び円形脱毛症を含めた炎症性及び過剰増殖性皮膚疾患及び免疫学的介在性疾病の皮膚発現；角結膜炎、春季結膜炎、ベーチェット病に関係するブドウ膜炎、角膜炎、ヘルペス性角膜炎、円錐角膜、角膜上皮ジストロフィー、角膜白斑、及び眼天疱瘡を含めた様々な眼疾患（自己免疫性又は別の）の治療及び予防が含まれる。さらに、喘息（例えば、気管支喘息、アレルギー性喘息、内因性喘息、外因性喘息及び塵埃喘息）、特に慢性又は難治性喘息（例えば、遅発型喘息及び気道応答性亢進）、気管支炎、アレルギー性鼻炎などを含めた可逆性閉鎖性気道疾患は、本発明の化合物によって標的にされている。胃潰瘍を含めた粘膜及び血管の炎症、虚血性疾患及び血栓症によって起こる血管損傷。さらに、特に生物又は機械介在性血管傷害後の、内膜平滑筋細胞過形成、再狭窄及び血管閉塞を含めた過剰増殖性血管疾患は、本発明の化合物によって治療又は予防することができるだろう。
【００３７】
［０６７］本明細書に記載される化合物又は薬物は、ポリマー化合物で被覆されたステントに施すことができる。ステントのポリマー被膜中への化合物又は薬物の組込みは、ポリマー被覆ステントを、化合物又は薬物を含む溶液中に十分な時間（例えば、５分など）浸漬し、次いで例えば、十分な時間（例えば、３０分など）の空気乾燥などによって被覆されたステントを乾燥させることによって行うことができる。噴霧を含めた、治療物質を施す他の方法も用いることができる。次いで、化合物又は薬物を含むポリマー被覆ステントは、バルーンカテーテルからの配置によって、又は自己展開ステントによって冠血管に送達することができる。ステントに加えて、本発明の薬物を脈管構造に導入するために用いることのできる他のデバイスとして、それだけに限らないが、移植片、カテーテル、及びバルーンが挙げられる。さらに、本発明の薬物の代わりに用いることのできる他の化合物又は薬物には、それだけに限らないが、Ａ−９４５０７及びＳＤＺ  ＲＡＤ（別名エベロリムス）が含まれる。
【００３８】
［０６８］ポリマー被覆ステントに用いるための、本明細書に記載された化合物は、他の薬剤と組み合わせて用いることができる。本発明の化合物を組み合わせて、再狭窄を予防するのに最も有効であると思われる薬剤は、抗増殖剤、抗血小板剤、抗炎症剤、抗血栓剤、及び血栓溶解剤の部類に分類することができる。これらの分類は、さらに細分することができる。例えば、抗増殖剤は、抗有糸分裂性とすることができる。抗有糸分裂剤は、細胞分裂を阻害するか、又は細胞分裂に影響を及ぼし、それによって細胞分裂に通常関与するプロセスが起こらない。抗有糸分裂剤の一サブクラスには、ビンカアルカロイドが含まれる。ビンカアルカロイドの代表的な例として、それだけに限らないが、ビンクリスチン、パクリタキセル、エトポシド、ノコダゾール、インジルビン、並びに例えばダウノルビシン、ダウノマイシン、及びプリカマイシンなどのアントラサイクリン誘導体が挙げられる。抗有糸分裂剤の他のサブクラスとして、例えば、タウロムスチン、ボフムスチン、及びホテムスチンなどの抗有糸分裂性アルキル化剤、並びに例えば、メトトレキセート、フルオロウラシル、５−ブロモデオキシウリジン、６−アザシチジン、及びシタラビンなどの抗有糸分裂性代謝産物が挙げられる。抗有糸分裂性アルキル化剤は、共有結合的にＤＮＡ、ＲＮＡ、又はタンパク質を修飾することによって細胞分裂に影響を及ぼし、それによってＤＮＡ複製、ＲＮＡ転写、ＲＮＡ翻訳、タンパク質合成、又は前述の組合せを阻害する。
【００３９】
［０６９］抗有糸分裂剤の例には、それだけに限らないが、パクリタキセルが含まれる。本明細書で用いられる場合、パクリタキセルは、アルカロイド自体、その自然発生形態及び誘導体、並びにその合成及び半合成形態を含む。
【００４０】
［０７０］抗血小板剤は、（１）表面、典型的には血栓形成表面への血小板の接着を阻害する、（２）血小板の凝集を阻害する、（３）血小板の活性化を阻害する、又は（４）前述の組合せによって作用する、治療構成要素である。血小板の活性化は、それによって血小板が、静止性の休止状態から、血小板が血栓形成表面に接触することによって誘発される多数の形態変化を起こす状態に変換されるプロセスである。これらの変化には、偽足の形成、膜受容体への結合、並びに例えば、ＡＤＰや血小板因子４などの小分子及びタンパク質の分泌を伴う、血小板の形状の変化が含まれる。血小板の接着の阻害剤として作用する抗血小板剤として、それだけに限らないが、エプチフィバチド、チロフィバン、ｇｐＩＩｂＩＩＩａ又はαｖβ３への結合を阻害するＲＧＤ（Ａｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐ）ベースのペプチド、ｇｐＩＩａＩＩＩｂ又はαｖβ３への結合を遮断する抗体、抗Ｐ−セレクチン抗体、抗Ｅ−セレクチン抗体、Ｐ−セレクチン又はＥ−セレクチンの、それらのそれぞれのリガンドへの結合を遮断する化合物、サラチン（ｓａｒａｔｉｎ）、及び抗フォンウィルブランド因子抗体が挙げられる。ＡＤＰ介在性血小板凝集を阻害する薬剤として、それだけに限らないが、ジサグレジン（ｄｉｓａｇｒｅｇｉｎ）及びシロスタゾールが挙げられる。
【００４１】
［０７１］抗炎症剤も用いることができる。これらの例として、それだけに限らないが、プレドニゾン、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、エストラジオール、トリアムシノロン、モメタゾン、フルチカゾン、クロベタゾール、並びに例えば、アセトアミノフェン、イブプロフェン、ナプロキセン、アダリムマブ及びスリンダクなどの非ステロイド系抗炎症剤が挙げられる。アラキドン酸代謝産物プロスタサイクリン又はプロスタサイクリン類似体は、血管作動性抗増殖剤の例である。これらの薬剤の他の例には、サイトカイン活性を遮断するか、又はサイトカイン若しくはケモカインの同族受容体への結合を阻害することによって、サイトカイン若しくはケモカインによって伝達される炎症促進性シグナルを阻害するものが含まれる。これらの薬剤の代表的な例として、それだけに限らないが、抗ＩＬＩ、抗１Ｌ２、抗ＩＬ３、抗ＩＬ４、抗ＩＬ８、抗ＩＬ１５、抗ＩＬ１８、抗ＭＣＰＩ、抗ＣＣＲ２、抗ＧＭ−ＣＳＦ、及び抗ＴＮＦ抗体が挙げられる。
【００４２】
［０７２］抗血栓剤には、凝固経路の任意の段階で介在することのできる、化学及び生物構成要素が含まれる。具体的な構成要素の例には、それだけに限らないが、因子Ｘａの活性を阻害する小分子が含まれる。さらに、例えば、ヘパリン、ヘパラン硫酸、例えば、商標Ｃｌｉｖａｒｉｎ（登録商標）を有する化合物などの低分子量ヘパリン、例えば商標Ａｒｉｘｔｒａ（登録商標）を有する化合物などの合成オリゴ糖などの、ＦＸａ及びトロンビンの両方を、直接的に又は間接的に阻害することのできるヘパリノイド型薬剤（ｈｅｐａｒｉｎｏｉｄ−ｔｙｐｅ  ａｇｅｎｔ）。例えば、メラガトラン、キシメラガトラン、アルガトロバン、イノガトラン及びトロンビンに対するＰｈｅ−Ｐｒｏ−Ａｒｇフィブリノーゲン基質の結合部位のペプチド模倣剤などの直接トロンビン阻害剤も含まれる。送達されることのできる抗血栓剤の別の分類は、例えば、抗因子ＶＩＩ／ＶＩＩａ抗体、ｒＮＡＰｃ２、及び組織因子経路阻害剤（ＴＦＰＩ）などの因子ＶＩＩ／ＶＩＩａ阻害剤である。
【００４３】
［０７３］血栓（血餅）を分解するのを助長する薬剤として定義することのできる血栓溶解剤も、補助剤として用いることができるが、これは血餅を溶解する作用が、血栓のフィブリン基質内に捕捉された血小板を分散させるのを助長するためである。血栓溶解剤の代表的な例として、それだけに限らないが、ウロキナーゼ又は組換えウロキナーゼ、プロウロキナーゼ又は組換えプロウロキナーゼ、組織プラスミノーゲンアクチベーター又はその組換え型、及びストレプトキナーゼが挙げられる。
【００４４】
［０７４］本発明の化合物と組み合わせて用いることのできる他の薬物は、例えば、ＴＧＦなどのアポトーシス誘発剤、及び１０−ヒドロキシカンプトテシン、イリノテカン、及びドキソルビシンを含めたトポイソメラーゼ阻害剤などの細胞毒性薬である。本発明の化合物と組み合わせて用いることのできる他の分類の薬物は、細胞脱分化を阻害する薬物及び細胞増殖抑制薬である。
【００４５】
［０７５］本発明の化合物と組み合わせて用いることのできる他の薬剤として、例えば、フェノフィブラートなどの抗リパエデミック剤、例えば、バチミスタットなどの基質メタロプロテイナーゼ阻害剤、例えば、ダルセンタンなどのエンドセリン−Ａ受容体のアンタゴニスト、及びαｖβ３インテグリン受容体のアンタゴニストが挙げられる。
【００４６】
［０７６］本発明の実施形態は、第３の薬物又は物質をさらに含む。第２の薬物及び／又は第３の治療薬が利用される場合、それには、それだけに限らないが、抗増殖剤、抗血小板剤、抗炎症剤、抗高脂血症剤、抗血栓剤、血栓溶解剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せが含まれる。第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、グルココルチコステリオドである場合、それには、それだけに限らないが、メチルプレドニゾロン、プレドニゾロン、プレドニゾン、トリアムシノロン、デキサメタゾン、モメタゾン、ベクロメタゾン、シクレソニド、ベデソニド、トリアムシノロン、クロベタゾール、フルニソリド、ロテプレドノール、ブデソニド、フルチカゾン、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せが含まれる。第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、ステロイドホルモンである場合、それには、それだけに限らないが、エストラジオール並びにそれらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せが含まれる。実施形態では、第２の薬物及び／又は第３の治療薬の場合、それは、炎症性サイトカイン活性を低減する小分子及び生物製剤とすることができる。第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、抗サイトカイン療法を利用する場合、それだけに限らないが、抗ＴＮＦα療法、アダリムマブ、抗ＭＣＰ−１療法、ＣＣＲ２受容体アンタゴニスト、抗ＩＬ−１８療法、抗ＩＬ−１療法、並びにそれらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せからなる群から選択される。前記第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、抗増殖剤を利用する場合、それには、それだけに限らないが、シクロホスファミド、クロラムブシル、ブスルファン、カルムスチン及びロムスチンを含めた、アルキル化剤、メトトレキセート、フルオロウラシル、シタラビン、メルカプトプリン及びペントスタチンを含めた抗代謝剤、ビンブラスチン及びビンクリスチンを含めたビンカアルカロイド、ドキソルビシン、ブレオマイシン及びマイトマイシンを含めた抗生物質、シスプラチン、プロカルバジン、エトポシド及びテニポシドを含めた抗増殖剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せが含まれる。第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、抗血小板剤を利用する場合、それには、それだけに限らないが、アブシキシマブ、エプチフィバチド及びチロフィバンを含めた糖タンパク質ＩＩＢ／ＩＩＩＡ阻害剤、ジピリダモールを含めたアデノシン再取り込み阻害剤、クロピドグレル及びチクロピジンを含めたＡＤＰ阻害剤、アセチルサリチル酸を含めたシクロオキシゲナーゼ阻害剤、シロスタゾールを含めた、ホスホジエステラーゼ阻害剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せが含まれる。第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、抗炎症剤を利用する場合、それには、それだけに限らないが、デキサメタゾン、ヒドロコルチゾン、フルチカゾン、クロベタゾール、モメタゾン及びエストラジオールを含めたステロイド、並びにアセトアミノフェン、イブプロフェン、ナプロキセン、スリンダク、ピロキシカム、メファナム酸（ｍｅｆａｎａｍｉｃ  ａｃｉｄ）を含めた非ステロイド系抗炎症剤、ＩＬ−１、ＩＬ−２、��Ｌ−８、ＩＬ−１５、ＩＬ−１８及びＴＮＦに対する抗体を含めた、サイトカイン又はケモカインの受容体への結合を阻害することによって、炎症促進性シグナルを阻害するもの、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せが含まれる。第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、抗血栓剤を利用する場合、それには、それだけに限らないが、未分画ヘパリン並びにクリバリン（ｃｌｉｖａｒｉｎ）、ダルテパリン、エノキサパリン、ナドロパリン及びチンザパリンを含めた低分子量ヘパリンを含めたヘパリン、アルガトロバン、ヒルジン、ヒルログ、ヒルゲン（ｈｉｒｕｇｅｎ）を含めた直接トロンビン阻害剤、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体、又はそれらの任意の組合せが含まれる。第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、抗高脂血症剤を利用する場合、それには、ニコチン酸、プロブコール；メバスタチン、ロバスタチン、シンバスタチン、プラバスタチン、フルバスタチンを含めたＨＭＧ  ＣｏＡ還元酵素阻害剤；フェノフィブラート、クロフィブラート、ゲムフィブロジルを含めたフィブリン酸誘導体；それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せを含めた脂質低下剤からなる群から選択される。第２の薬物及び／又は第３の治療薬が、血栓溶解剤を利用する場合、それには、それだけに限らないが、ストレプトキナーゼ、ウロキナーゼ、プロウロキナーゼや、アルテプラーゼ、レテプラーゼ、テネクタプラーゼ（ｔｅｎｅｃｔａｐｌａｓｅ）を含めた組織プラスミノーゲンアクチベーター、それらの塩、プロドラッグ、及び誘導体又はそれらの任意の組合せが含まれる。
【００４７】
［０７７］ポリマー
［０７８］本発明に用いられる場合、被覆材は、そのポリマー材料中で治療剤、即ち薬物は、実質的に溶解性であるか、有効に分散される、任意のポリマー材料を含むことができる。被膜の目的は、病変部位で送達されるための、治療剤用の制御放出ビヒクルとして、又は治療剤用のリザーバーとして機能を果すことである。被覆材はポリマーとすることができ、さらに親水性、疎水性、生分解性、又は非生分解性とすることができる。ポリマー被膜用の材料は、ポリカルボン酸、セルロースポリマー、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、無水マレイン酸ポリマー、ポリアミド、ポリビニルアルコール、ポリエチレンオキシド、グリコサミノグリカン、多糖類、ポリエステル、ポリウレタン、シリコーン、ポリオルトエステル（ｐｏｌｙｏｒｔｈｏｅｓｔｅｒ）、ポリアンヒドリド（ｐｏｌｙａｎｈｙｄｒｉｄｅ）、ポリカーボネート、ポリプロピレン、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリカプロラクトン、ポリヒドロキシブチラートバレラート、ポリアクリルアミド、ポリエーテル、並びに前述の混合物及びコポリマーからなる群から選択することができる。ポリウレタン分散系（ＢＡＹＨＹＤＲＯＬなど）及びアクリル酸ラテックス分散系を含めたポリマー分散系から調製される被覆材も、本発明の治療剤とともに用いることができる。
【００４８】
［０７９］本発明に用いることのできる生分解性ポリマーとして、ポリ（Ｌ−乳酸）、ポリ（ＤＬ−乳酸）、ポリカプロラクトン、ポリ（ヒドロキシブチラート）、ポリグリコリド（ｐｏｌｙｇｌｙｃｏｌｉｄｅ）、ポリ（ジアキサノン）（ｐｏｌｙ（ｄｉａｘａｎｏｎｅ））、ポリ（ヒドロキシバレラート）、ポリオルトエステルを含めたポリマー；ポリ（ラクチド−ｃｏ−グリコリド）、ポリヒドロキシ（ブチラート−ｃｏ−バレラート）、ポリグリコリド−ｃｏ−トリメチレンカーボネートを含めたコポリマー；ポリアンヒドリド；ポリリン酸エステル；ポリリン酸エステル−ウレタン；ポリアミノ酸；ポリシアノアクリレート；フィブリン、フィブリノーゲン、セルロース、デンプン、コラーゲン及びヒアルロン酸を含めた生体分子；並びに前述の混合物が挙げられる。本発明に用いるのに適した生体安定性（ｂｉｏｓｔａｂｌｅ）材料として、ポリウレタン、シリコーン、ポリエステル、ポリオレフィン、ポリアミド、ポリカプロラクタム、ポリイミド、ポリ塩化ビニル、ポリビニルメチルエーテル、ポリビニルアルコール、アクリルポリマー及びコポリマー、ポリアクリロニトリル、ビニルモノマーのオレフィンとのポリスチレンコポリマー（スチレンアクリロニトリルコポリマー、エチレンメチルメタクリレートコポリマー、エチレン酢酸ビニルを含めて）、ポリエーテル、レーヨン、セルロース化合物（酢酸セルロース、硝酸セルロース、プロピオン酸セルロースなどを含めて）、パリレン及びその誘導体を含めたポリマー；並びに前述の混合物及びコポリマーが挙げられる。
【００４９】
［０８０］いくつかの実施形態では、ポリマーとして、それだけに限らないが、ポリ（エチルメタクリレート）、ポリ（ｎ−プロピルメタクリレート）、ポリ（イソプロピルメタクリレート）、ポリ（イソブチルメタクリレート）、ポリ（ｓｅｃ−ブチルメタクリレート）、ポリ（ｎ−ブチルメタクリレート）、ポリ（２−エチルヘキシルメタクリレート）、ポリ（ｎ−ヘキシルメタクリレート）、ポリ（シクロヘキシルメタクリレート）、ポリ（ｎ−ヘキシルメタクリレート）、ポリ（イソボルニルメタクリレート）、及びポリ（トリメチルシクロヘキシルメタクリレート）、ポリ（メチルアクリレート）、ポリ（エチルアクリレート）、ポリ（ｎ−プロピルアクリレート）、ポリ（イソプロピルアクリレート）、ポリ（ｎ−ブチルアクリレート）、ポリ（イソブチルアクリレート）、ポリ（ｓｅｃ−ブチルアクリレート）、ポリ（ペンチルアクリレート）、ポリ（ｎ−ヘキシルアクリレート）、ポリ（シクロヘキシルアクリレート）などのポリ（アクリレート）並びに任意のそれらの誘導体、類似体、同族体、同属種、塩、コポリマー及び組合せが挙げられる。
【００５０】
［０８１］いくつかの実施形態では、ポリマーとして、それだけに限らないが、ポリ（エステルウレタン）、ポリ（エーテルウレタン）、ポリ（ウレアウレタン）、ポリ（ウレタン）；シリコーン；フルオロシリコーン、ポリ（エステル）；ポリ（エチレン）；ポリ（プロピレン）；ポリ（オレフィン）；ポリ（イソブチレン）のコポリマー；スチレンとイソブチレンのトリブロックコポリマー；スチレンとエチレン／ブチレンのトリブロックコポリマー；スチレンとブタジエンのトリブロックコポリマー；エチレン−αオレフィンのコポリマー；（ポリ塩化ビニル）やポリ（フッ化ビニル）などのハロゲン化ビニルポリマー及びコポリマー；例えば、ポリ（塩化ビニリデン）及びポリ（フッ化ビニリデン）などのポリ（ハロゲン化ビニリデン）；ポリ（フッ化ビニリデン−ｃｏ−ヘキサフルオロプロピレン）、ポリ（テトラフルオロエチレン）；ポリ（テトラフルオロエチレン−ｃｏ−クロロトリフルオロエチレン）；例えば、ポリ（ビニルメチルエーテル）などのポリ（ビニルエーテル）；ポリ（アクリロニトリル）；ポリ（ビニルケトン）；ポリ（スチレン）などのポリ（ビニル芳香族化合物）；ポリ（酢酸ビニル）などのポリ（ビニルエステル）；メタクリル酸のコポリマーなどのビニルモノマーとオレフィンのコポリマー；アクリル酸のコポリマー；Ｎ−ビニルピロリドンのコポリマー；ポリ（ビニルアルコール）；ポリ（エチレン−ｃｏ−ビニルアルコール）（ＥＶＡＬ）、ポリ（シアノアクリレート）；ポリ（無水マレイン酸）及び無水マレイン酸のコポリマー；アクリロニトリル−スチレンのコポリマー、ＡＢＳ樹脂、及びエチレン酢酸ビニルのコポリマー；並びにそれらの任意の誘導体、類似体、同族体、同属種、塩、コポリマー及び組合せが挙げられる。
【００５１】
［０８２］いくつかの実施形態では、ポリマーとして、それだけに限らないが、ナイロン６６及びポリ（カプロラクタム）などのポリ（アミド）；アルキド樹脂；ポリ（カーボネート）；ポリ（スルホン）；ポリ（オキシメチレン）；ポリ（イミド）；ポリ（エステルアミド）；例えば、ポリ（エチレングリコール）及びポリ（プロピレングリコール）などのポリ（アルキレングリコール）を含めたポリ（エーテル）；エポキシ樹脂；レーヨン；レーヨン−トリアセテート；例えば、フィブリン、フィブリノーゲン、デンプン、ポリ（アミノ酸）；ペプチド、タンパク質、ゼラチン、コンドロイチン硫酸、デルマタン硫酸（Ｄ−グルクロン酸又はＬ−イズロン酸とＮ−アセチル−Ｄ−ガラクトサミンのコポリマー）、コラーゲン、ヒアルロン酸、及びグリコサミノグリカンなどの生体分子；例えば、ポリ（Ｎ−アセチルグルコサミン）、キチン、キトサン、セルロース、酢酸セルロース、セルロースブチラート、酢酸セルロースブチラート、セロハン、硝酸セルロース、プロピオン酸セルロース、セルロースエーテル、及びカルボキシメチルセルロースなどの他の多糖類；並びにそれらの任意の誘導体、類似体、同族体、同属種、塩、コポリマー及び組合せが挙げられる。
本発明に用いることのできる別のポリマーは、ポリ（ＭＰＣｗ：ＬＡＭｘ：ＨＰＭＡｙ：ＴＳＭＡｚ）であり、ｗ、ｘ、ｙ、及びｚは、ポリマーを調製するための供給原料に用いられるモノマーのモル比を表し、ＭＰＣは、単位２−メタクリオイルオキシエチルホスホリルコリン（ｍｅｔｈａｃｒｙｏｙｌｏｘｙｅｔｈｙｌｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌｃｈｏｌｉｎｅ）を表し、ＬＭＡは、単位ラウリルメタクリレートを表し、ＨＰＭＡは、単位２−ヒドロキシプロピルメタクリレートを表し、ＴＳＭＡは、単位３−トリメトキシシリルプロピルメタクリレートを表す。薬物含浸ステントは、血栓及び／又は動脈硬化性プラークによって以前に閉塞された冠動脈の開存性を維持するために用いることができる。抗増殖剤の送達により、ステント内再狭窄の割合が低減される。本発明に用いることのできるポリマーには、ホスホリルコリン単位を含む双性イオンポリマーが含まれる。
【００５２】
［０８３］他の治療可能な状態として、それだけに限らないが、虚血性腸疾患、炎症性腸疾患、壊死性腸炎や、小児脂肪便症、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病及び潰瘍性大腸炎を含めた腸炎症／腸アレルギー；多発性筋炎、ギランバレー症候群、メニエール病、多発性神経炎（ｐｏｌｙｎｅｕｒｉｔｉｓ）、多発性神経炎（ｍｕｌｔｉｐｌｅ  ｎｅｕｒｉｔｉｓ）、単発神経炎及び神経根症を含めた神経疾患；甲状腺機能亢進症及びバセドー病を含めた内分泌疾患；赤芽球癆、再生不良性貧血（ａｐｌａｓｔｉｃ  ａｎｅｍｉａ）、再生不良性貧血（ｈｙｐｏｐｌａｓｔｉｃ  ａｎｅｍｉａ）、特発性血小板減少性紫斑病、自己免疫性溶血性貧血、無顆粒球症、悪性貧血、巨赤芽球性貧血及び赤血球形成不全を含めた血液疾患；骨粗鬆症を含めた骨疾患；サルコイドーシス、肺線維症及び特発性間質性肺炎を含めた呼吸器疾患；皮膚筋炎、尋常性白斑（ｌｅｕｋｏｄｅｒｍａ  ｖｕｌｇａｒｉｓ）、尋常性魚鱗癬、光アレルギー性過敏症及び皮膚Ｔ細胞リンパ腫を含めた皮膚疾患；動脈硬化症、アテローム性動脈硬化症、大動脈炎症候群、結節性多発性動脈炎及び心筋症を含めた循環疾患；強皮症、ヴェグナー肉芽腫及びシェーグレン症候群を含めたコラーゲン疾患；脂肪過多；好酸球性筋膜炎；歯肉、歯周組織、歯槽骨及び歯のセメント質の病変を含めた歯周疾患；糸球体腎炎を含めたネフローゼ症候群；脱毛の予防又は毛の発芽の提供及び／又は毛の生成の促進及び発毛による男性型脱毛症又は老人性脱毛症；筋ジストロフィー；膿皮症及びセザリー症候群；アジソン病；例えば、保存、移植又は虚血性疾患（例えば、血栓症及び心筋梗塞）で起こる、臓器（心臓、肝臓、腎臓及び消化管を含めて）の虚血再灌流傷害を含めた臓器傷害のような活性酸素介在疾患；内毒素ショック、偽膜性大腸炎及び薬物又は放射線照射によって生じる大腸炎を含めた腸疾患；虚血性急性腎不全及び慢性腎不全を含めた腎疾患；肺酸素又は薬物（例えば、パラコルト（ｐａｒａｃｏｒｔ）及びブレオマイシン）によって生じる中毒症、肺癌及び肺気腫を含めた肺疾患；白内障、鉄沈着症、網膜炎、色素変性症（ｐｉｇｍｅｎｔｏｓａ）、老人性黄斑変性症、硝子体瘢痕（ｖｉｔｒｅａｌ  ｓｃａｒｒｉｎｇ）及び角膜のアルカリによるやけどを含めた眼疾患；多形性紅斑；線状ＩｇＡバロウス（ｂａｌｌｏｕｓ）皮膚炎及びセメント皮膚炎を含めた皮膚炎；並びに歯肉炎、歯周病、敗血症、膵炎、環境汚染（例えば、大気汚染）によって生じる疾患、加齢、発癌、癌の転移及び高山病を含めた他のもの；ヒスタミン又はロイコトリエン−Ｃ４の放出によって生じる疾患；腸−、血管−又は神経−ベーチェット病を含むベーチェット病、及びまた、口腔、皮膚、眼、外陰部、関節、精巣上体、肺、腎臓などに影響を及ぼすベーチェット病が挙げられる。さらに、本発明の化合物は、免疫原性疾患（例えば、自己免疫性肝炎、原発性胆汁性肝硬変及び硬化性胆管炎を含めた慢性自己免疫性肝臓疾患）、肝臓部分切除、急性肝壊死（例えば、毒素、ウイルス性肝炎、ショック又は無酸素症によって生じる壊死）、Ｂ型ウイルス肝炎、非Ａ型／非Ｂ型肝炎、肝硬変（アルコール性肝硬変を含めて）、並びに劇症肝炎、遅発性肝不全及び「慢��状態の急性（ａｃｕｔｅ−ｏｎ−ｃｈｒｏｎｉｃ）」肝不全（慢性肝臓疾患での急性肝不全）を含めた肝不全を含む肝臓疾患の治療及び予防に有用であり、さらに、患者が既に服用している場合のある薬物の主な化学療法効果、抗ウイルス作用、抗炎症作用、及び強心作用の増大における、これらの化合物の潜在的に有用な活性のために、様々な疾患に対して有用である。
【００５３】
［０８４］本発明の化合物の、増殖性疾患を治療する能力は、Ｂｕｎｃｈｍａｎ  ＥＴ及びＣＡ  Ｂｒｏｏｋｓｈｉｒｅ、Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔａｔｉｏｎ  Ｐｒｏｃｅｅｄ．２３  ９６７〜９６８（１９９１）；Ｙａｍａｇｉｓｈｉら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１９１  ８４０〜８４６（１９９３）；並びにＳｈｉｃｈｉｒｉら、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．８７  １８６７〜１８７１（１９９１）において以前に説明されている方法によって実証されることができる。増殖性疾患として、平滑筋増殖、全身性硬化症、肝臓の硬変、成人呼吸窮迫症候群、特発性心筋症、紅斑性狼瘡、糖尿病性網膜症又は他の網膜症、乾癬、強皮症、前立腺肥大症、心臓肥大（ｃａｒｄｉａｃ  ｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ）、動脈傷害後の再狭窄又は血管の他の病的狭窄が挙げられる。さらに、これらの化合物は、いくつかの増殖因子に対する細胞応答をアンタゴナイズし、したがって抗血管新生特性を有し、これらの化合物を特定の腫瘍の増殖、並びに肺、肝臓、及び腎臓の線維性疾患を制御するか又は回復させるのに有用な薬剤にしている。
【００５４】
［０８５］本発明の実施形態の水性液体組成物は、自己免疫疾患（例えば、円錐角膜、角膜炎、ジソフィアエピテリアリスコルネア（ｄｙｓｏｐｈｉａ  ｅｐｉｔｈｅｌｉａｌｉｓ  ｃｏｒｎｅａｅ）、白斑、モーレン潰瘍、スクレビチス（ｓｃｌｅｖｉｔｉｓ）及びグレーブス眼症を含めて）及び角膜移植の拒絶反応を含めた眼の様々な疾患の治療及び予防に特に有用である。
【００５５】
［０８６］上記又は他の治療に用いられる場合、治療有効量の本発明の実施形態の化合物の１つは、純粋な形態又は、医薬として許容可能な塩、エステル又はプロドラッグの形態が存在する場合、そのような形態として用いることができる。或いは、化合物は、１種又は複数種の医薬として許容可能な賦形剤と組み合わせた、対象の化合物を含む医薬組成物として投与することができる。「治療有効量」の本発明の化合物という語句は、任意の医療処置に適用できる妥当な利益／リスク比で、障害を治療するのに十分な量の化合物を意味する。しかし、本発明の実施形態の化合物及び組成物の全日使用量は、適切な医学的判断の範囲内で担当医によって決定されることが理解されよう。任意の特定の患者に対する、具体的な治療有効用量レベルは、治療中の障害及び障害の重症度；用いられる具体的な化合物の活性；用いられる具体的な組成；患者の年齢、体重、全般的な健康、性別及び食餌；用いられる具体的な化合物の投与時間、投与経路、及び排出速度；治療の継続期間；用いられる具体的な化合物と組み合わせて、又は同時に用いられる薬物；並びに医学分野で周知の同様な要因を含めた様々な要因に依存することになる。例えば、所望の治療効果を達成するために必要とされるよりも低いレベルでの化合物の用量から開始し、所望の効果が達成されるまで投与量を徐々に増加させることは、十分当分野の技術の範囲内である。
【００５６】
［０８７］ヒト又は下等動物に投与される、本発明の実施形態における化合物の全日用量は、約０．０１から約１０ｍｇ／ｋｇ／日の範囲とすることができる。経口投与の目的に対しては、用量は、約０．００１から約３ｍｇ／ｋｇ／日の範囲内とすることができる。ステントからの局所送達の目的に対しては、患者が受けることとなる日用量は、ステントの長さに依存する。例えば、１５ｍｍの冠血管ステントは、約１から約６００マイクログラムの範囲の量で薬物を含むことができ、数時間から数週間の範囲の期間にわたってその薬物を送達することができる。必要に応じて、有効日用量は、投与の目的のために複数の用量に分割することができ、したがって、１回の用量の組成物は、そのような量又はその約数を含むことによって日用量を構成することができる。当業者は、局所投与のために本発明を用いることができ、用量は、適用部位に依存するだろう。
【００５７】
［０８８］本発明の範囲内で、適当な薬物添加ポリマー層を提供することにおいて、多くの柔軟性が存在する。例えば、対象の薬物に関係する治療ウインドウパラメータ内で（一般に治療有効レベルと毒性レベルの間のレベル）、組合せ物において用いられる薬物の比は、互いに相関して変更することができる。例えば、一実施形態は、９０：１０の全薬物：ポリマー比を有し、ここで組合せにおける薬物の比は、１：１とすることができる。したがって、本発明によるゾタロリムス／デキサメタゾン組合せ物を送達するステントは、５ｍｃｇ／ｍｍのＰＣの上塗り層を有するＰＣポリマー層中に、１０ｍｃｇ／ｍｍのゾタロリムス及び１０ｍｃｇ／ｍｍのデキサメタゾンを含むことができる。しかし、全薬物：ポリマー比は、より低くすることができ、例えば、４０：６０以下である。薬物の全量に対する上限は、選択されたポリマー中での選択された薬物の混和性、薬物／ポリマー混合物の安定性、例えば、滅菌との適合性、及び混合物の物理的特性、例えば、流動性／処理性、弾性、脆性、粘性（ステントストラット同士の間でクモの巣状になったり、架橋したりしない）、実質的にステントの輪郭に加わるか、又は層間剥離若しくは亀裂の原因となるか、又は圧着することが困難な、被膜の厚さを含めたいくつかの要因に依存することになる。本発明の実施形態は、約６０〜８０ミクロン離れて配置されたステントストラットを含み、薬物／ポリマー／ポリマー上塗り層の厚さの上限が約３０ミクロンであることを示しているが、それらの実施形態に説明されるように、任意のステントサイズ、ストラットサイズ及び空間間隔、及び／又はステント構造を、薬物送達のために用いることができる。実施形態では、治療量のオリムス薬物は、ゾタロリムス又はエベロリムスを含み、ステント１ｍｍ当たり少なくとも１μｇである。別の実施形態では、第２の薬物は、グルココルチコステリオドである。第２の薬物が、実施形態で用いられる場合、この第２の薬物はデキサメタゾンであり、治療量は、ステント１ｍｍ当たり少なくとも０．５μｇである。
【００５８】
［０８９］上塗り層の厚さ（上塗り層が用いられる場合）は、望ましくは、薬物の放出動態を過度に妨害すべきではない。上塗り層はまた、下にある薬物添加ポリマー層中の薬物と同じであるか、又は異なっていることのできる、１種又は複数種の薬物を添加されることができる。
【００５９】
［０９０］一般的にいえば、本発明の組合せ物に有用な薬物は、組合せ物中の他の薬物の所望の活性に悪く影響することにはならない。組合せ物に用いるために提案される薬物は、おそらく補完的な活性又は作用機序を有する。したがって、提案された組合せ物中の一薬物は、他の薬物の所望の活性、例えば抗増殖活性を阻害すべきではない。また、いずれの薬物も、他の薬物の分解を生じさせたり、増強したりすべきではない。しかし、例えば、滅菌の間に分解するために、他の点では不適当であると思われる場合のある薬物は、実際には、別の薬物による相互作用のために有用となり得る。したがって、単独ではＥｔＯ滅菌の間に分解することが観察されたデキサメタゾンは、ゾタロリムスの疎水性のために、ゾタロリムスと組み合わせて首尾よく用いることができる。さらに、出願者の同時係属中の米国特許出願第１０／７９６４２３号明細書［代理人整理番号７０４７ＵＳ０１］に記載されているように、ゾタロリムスは、デキサメタゾンの溶出速度を低減させることが観察された。
【００６０】
［０９１］本発明の実施形態の医薬組成物は、化合物及び医薬として許容可能な担体又は賦形剤を含み、これは、経口的、経直腸的、非経口的、大槽内、膣内、腹腔内、局所的（ｔｏｐｉｃａｌｌｙ）（粉末、軟膏、滴剤又は経皮パッチによるような）、経口又は鼻内噴霧のような口腔内、或いはバルーンカテーテル内のような脈管構造内に配置されたステント内、又は心膜空間若しくは心筋内若しくは心筋上への送達のように局所的（ｌｏｃａｌｌｙ）に投与することができる。語句「医薬として許容可能な担体」は、無毒性の固体、半固体、液体増量剤、希釈剤、封入材料又は任意の種類の製剤助剤を意味する。本明細書で用いられる場合、用語「非経口的」は、経口以外のすべての様式の投与を指し、これには、それだけに限らないが、静脈内、動脈内、筋肉内、腹腔内、胸骨内（ｉｎｔｒａｓｔｅｒｎａｌ）、皮下及び関節内注射、注入、経皮、及び例えば、脈管構造内などの配置が挙げられる。
【００６１】
［０９２］非経口注射用の本発明の医薬組成物は、医薬として許容可能な滅菌水性又は非水性の溶液、分散系、懸濁液、ナノ粒子懸濁液、又はエマルジョン、並びに使用直前に滅菌注射用溶液若しくは分散系に再構成するための滅菌粉末を含む。適当な水性及び非水性の担体、希釈剤、溶媒又はビヒクルの例として、水、エタノール、ポリオール（グリセロール、プロピレングリコール、ポリエチレングリコールなどを含めて）、カルボキシメチルセルロース及びそれらの適当な混合物、植物油（オリーブ油を含めて）、及びオレイン酸エチルを含めた注射用有機エステルが挙げられる。レシチンを含めた被覆材料の使用によって、分散系の場合における所定の粒径の維持によって、及び界面活性物質の使用によって、適切な流動性を維持することができる。
【００６２】
［０９３］これらの組成物は、例えば、保存剤、湿潤剤、乳化剤、及び分散剤などの補助剤も含むことができる。微生物の作用の防止は、様々な抗菌剤及び抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノールソルビン酸などを含めることによって確実にすることができる。糖、塩化ナトリウムなどを含めた等張剤を含めることも望ましい場合がある。注射用医薬形態の吸収の延長は、モノステアリン酸アルミニウム及びゼラチンを含めた、吸収を遅延させる剤を含めることによってもたらすことができる。
【００６３】
［０９４］場合によっては、薬物の効果を延長するために、皮下又は筋肉内注射からの薬物の吸収を遅くすることが望ましい。これは、難水溶性を有する結晶性又は非結晶性物質の液体懸濁剤を用いることによって達成することができる。その場合、薬物の吸収速度は、その溶解速度に依存し、これはさらには、結晶サイズ及び結晶形態に依存する場合がある。或いは、非経口的に投与される薬物形態の吸収の遅延は、薬物を油ビヒクル中に溶解又は懸濁させることによって達成される。
【００６４】
［０９５］注射用デポー形態は、ポリ乳酸−ポリグリコリドを含めた生分解性ポリマー中に、薬物のマイクロカプセル化マトリックスを形成することにより作製される。薬物とポリマーの比及び用いられる特定のポリマーの性質に応じて、薬物放出速度を制御することができる。他の生分解性ポリマーの例には、ポリ（オルトエステル）及びポリ（アンヒドリド）が含まれる。デポー注射用製剤は、薬物を、体組織と適合するリポソーム又はマイクロエマルジョン中に封入することによっても調製される。
【００６５】
［０９６］注射用製剤は、例えば、細菌保持フィルターを通す濾過によって、又は使用直前に滅菌水又は他の滅菌注射用媒体に溶解又は分散させることのできる滅菌固体組成物の形態で滅菌剤を混入することによって滅菌することができる。
【００６６】
［０９７］経口投与用の固体剤形として、カプセル、錠剤、ピル、粉末、及び顆粒が挙げられる。このような固体剤形では、活性化合物は、クエン酸ナトリウム又はリン酸二カルシウムを含めた、少なくとも１種の不活性な、医薬として許容可能な賦形剤又は担体及び／又はａ）デンプン、ラクトース、スクロース、グルコース、マンニトール、及びケイ酸を含めた増量剤（ｆｉｌｌｅｒ）又は増量剤（ｅｘｔｅｎｄｅｒ）、ｂ）例えば、カルボキシメチルセルロース、アルギナート、ゼラチン、ポリビニルピロリドン、スクロース、及びアカシアなどの結合剤、ｃ）グリセロールを含めた湿潤剤（ｈｕｍｅｃｔａｎｔ）、ｄ）寒天、炭酸カルシウム、ジャガイモデンプン又はタピオカデンプン、アルギン酸、特定のケイ酸塩、及び炭酸ナトリウムを含めた崩壊剤、ｅ）パラフィンを含めた溶解遅延剤、ｆ）四級アンモニウム化合物を含めた吸収促進剤、ｇ）例えば、セチルアルコール及びグリセロールモノステアレートなどの湿潤剤（ｗｅｔｔｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、ｈ）カオリン及びベントナイト粘土を含めた吸収剤、並びにｉ）タルク、ステアリン酸カルシウム、ステアリン酸マグネシウム、固体ポリエチレングリコール、ラウリル硫酸ナトリウムを含めた潤滑剤、並びにそれらの混合物と混合される。カプセル、錠剤、及びピルの場合、剤形は緩衝剤も含むことができる。
【００６７】
［０９８］類似の種類の固体組成物は、ラクトース又は乳糖並びに高分子量ポリエチレングリコールなどのような賦形剤を用いて、軟、半固体及び硬充填ゼラチンカプセル又は液体充填カプセル中の増量剤として用いることもできる。
【００６８】
［０９９］錠剤、糖衣丸、カプセル、ピル、及び顆粒に限らず、経口投与用の固体剤形は、腸溶コーティング及び医薬製剤分野で周知の他の被覆剤を含めた被覆剤及びシェルとともに調製することができる。それらは、場合によって乳白剤を含有することができ、それらが活性成分（複数も）を、腸管の特定の部分のみに又はその部分に優先的に、場合によって遅延された様式で放出する組成物となることもできる。用いることのできる包埋組成物の例には、ポリマー物質及びワックスが含まれる。薬物を含むこれらの包埋組成物は、ステント、移植片、カテーテル及びバルーンを含めた医療デバイス上に配置することができる。
【００６９】
［０１００］活性化合物は、適切な場合、１種又は複数種の上述の賦形剤とともにマイクロカプセル化形態とすることもできる。
【００７０】
［０１０１］経口投与用の液体剤形として、医薬として許容可能なエマルジョン、溶液、懸濁液、シロップ及びエリキシル剤が挙げられる。活性化合物に加えて、液体剤形は、例えば、水又は他の溶媒、エチルアルコール、イソプロピルアルコール、炭酸エチル、酢酸エチル、ベンジルアルコール、安息香酸ベンジル、プロピレングリコール，１，３−ブチレングリコール、ジメチルホルムアミド、油（特に、綿実油、ラッカセイ油、コーン油、胚芽油、オリーブ油、ヒマシ油、及びゴマ油）、グリセロール、テトラヒドロフルフリルアルコール、ポリエチレングリコール及びソルビタンの脂肪酸エステル、及びそれらの混合物を含めた可溶化剤及び乳化剤などの当技術分野で一般に用いられる不活性な希釈剤を含むことができる。
【００７１】
［０１０２］不活性な希釈剤に加えて、経口組成物は、湿潤剤、乳化剤及び懸濁剤、甘味剤、着香剤及び芳香剤を含めた補助剤も含むことができる。
【００７２】
［０１０３］懸濁液は、活性化合物に加えて、例えば、エトキシ化イソステアリルアルコール、ポリオキシエチレンソルビトール及びソルビタンエステルなどの懸濁剤、微結晶セルロース、アルミニウムメタヒドロキシド、ベントナイト、寒天、及びトラガカント、及びそれらの混合物を含むことができる。
【００７３】
［０１０４］局所投与には、眼の表面を含めた皮膚への投与が含まれる。皮膚上の局所使用のための組成物には、軟膏、クリーム、ローション、及びゲルも含まれる。局所投与の別の形態は、自己免疫疾患、アレルギー性又は炎症性状態、及び角膜移植を含めた眼の免疫介在状態の治療用のような、眼に対してである。本発明の化合物は、医薬として許容可能な眼のビヒクルで送達され、その結果この化合物が、眼の表面に十分な時間接触して維持されることによって、化合物が眼の角膜領域及び内部領域、例として前房、後房、硝子体、房水、硝子体液、角膜、虹彩／シラリ（ｃｉｌａｒｙ）、水晶体、脈絡膜／網膜及び強膜に浸透することを可能にする。医薬として許容可能な眼のビヒクルは、例えば、軟膏、植物油又は封入材料とすることができる。
【００７４】
［０１０５］粘膜投与用の組成物、特に吸入用の組成物は、乾燥粉末として調製することができ、これは加圧されていても加圧されていなくてもよい。加圧されていない粉末組成物において、微細に分割された形態での活性成分は、例えば、直径最大１００マイクロメートルのサイズを有する粒子を含む、より大きなサイズの医薬として許容可能な、不活性な担体との混合物として用いることができる。適当な不活性な担体には、ラクトースを含めた糖が含まれる。望ましくは、活性成分の粒子の少なくとも９５重量％が、０．０１から１０マイクロメートルの範囲の有効粒径を有する。直腸又は膣の経粘膜投与において、製剤は、座剤又は停留浣腸を含み、これらは、本発明の化合物を、カカオ脂、ポリエチレングリコール、又は座剤ワックスを含めた、適当な非刺激性の賦形剤又は担体と混合することによって調製することができ、これらは、室温で固体であるが、体温で液体であり、したがって直腸又は膣腔内で融解し、活性化合物を放出する。
【００７５】
［０１０６］或いは、組成物は、加圧され、窒素を含めた圧縮ガス又は液化ガス噴射剤を含むことができる。液化噴射剤媒体及び実際には全組成物は、活性成分が任意の実質的限度までその中に溶解しないようになっている。加圧された組成物は、界面活性剤も含むことができる。界面活性剤は、液体又は固体の非イオン性界面活性剤とすることができるか、又は固体の陰イオン性界面活性剤とすることができる。他の実施形態では、固体の陰イオン性界面活性剤の使用は、ナトリウム塩の形態としてである。
【００７６】
［０１０７］本発明の実施形態の化合物は、リポソームの形態で投与することもできる。当技術分野で知られているように、リポソームは、リン脂質又は他の脂質物質から一般に得られる。リポソームは、水性媒体中に分散されている、単層又は多層の水和液晶によって形成される。リポソームを形成することのできる、任意の無毒の生理的に許容可能で代謝可能な脂質を用いることができる。リポソーム形態での組成物の実施形態は、本発明の化合物に加えて、安定剤、保存剤、賦形剤などを含むことができる。実施形態での脂質は、リン脂質及びホスファチジルコリン（レシチン）であり、両方とも天然及び合成である。リポソームを形成する方法は、当技術分野で知られている。例えば、Ｐｒｅｓｃｏｔｔ、編集、Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、ＸＩＶ巻、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、Ｎ．Ｙ．（１９７６）、ｐ．３３以下参照を参照されたい。
【００７７】
［０１０８］本発明の実施形態の化合物は、１種又は複数種の全身免疫抑制剤とともに同時投与することもできる。本発明の範囲内の免疫抑制剤として、それだけに限らないが、ＩＭＵＲＡＮ（登録商標）アザチオプリンナトリウム、ブレキナルナトリウム、ＳＰＡＮＩＤＩＮ（登録商標）グスペリムス三塩酸塩（デオキシスペルグアリン（ｄｅｏｘｙｓｐｅｒｇｕａｌｉｎ）としても知られる）、ミゾリビン（ブレジニン（ｂｒｅｄｉｎｉｎ）としても知られる）、ＣＥＬＬＣＥＰＴ（登録商標）ミコフェノール酸モフェチル、ＮＥＯＲＡＬ（登録商標）シルオスポリン（Ｃｙｌｏｓｐｏｒｉｎ）Ａ（商標ＳＡＮＤＩＭＭＵＮＥ（登録商標）の下で、シクロスポリンＡの異なる製剤としても販売されている）、ＰＲＯＧＲＡＦ（登録商標）タクロリムス（ＦＫ−５０６としても知られる）、シロリムス及びＲＡＰＡＭＵＮＥ（登録商標）、エベロリムス、レフルノミド（ＨＷＡ−４８６としても知られる）、プレドニゾロン及びその誘導体を含めた糖質コルチコイド、オルソクローン（ＯＫＴ３）及びＺｅｎａｐａｘ（登録商標）を含めた抗体療法、白血病療法、及びチモグロブリンを含めたアンチチミオサイト（ａｎｔｉｔｈｙｍｙｏｃｙｔｅ）グロブリンが挙げられる。
【００７８】
［０１０９］実施形態
［０１１０］本発明の一実施形態では、式
【００７９】
【化３】
2009511195.tif 000005
の化合物である。
【００８０】
［０１１１］本発明の別の実施形態では、式
【００８１】
【化４】
2009511195.tif 000006
の化合物である。
【００８２】
［０１１２］本発明の化合物の調製
［０１１３］本発明の実施形態の化合物及びプロセスは、本発明の化合物を調製することのできる方法を図示している以下の合成スキームに関連して、より良好に理解されよう。
【００８３】
［０１１４］本発明の化合物は、様々な合成経路によって調製することができる。代表的な手順は、スキーム１に示されている。
【００８４】
［０１１５］
【化５】
2009511195.tif 000007
【００８５】
［０１１６］スキーム１に示すように、ラパマイシンのＣ−４２ヒドロキシルの、トリフルオロメタンスルホネート又はフルオロスルホネート脱離基への変換により、Ａが得られた。２，６−ルチジン、ジイソプロピルエチルアミンを含む、ヒンダード非求核塩基（ｈｉｎｄｅｒｅｄ，ｎｏｎ−ｎｕｃｌｅｏｐｈｉｌｉｃ  ｂａｓｅ）の存在下での、この脱離基のテトラゾールとの置換により、異性体Ｂ及びＣが得られ、これらはフラッシュカラムクロマトグラフィーによって分離精製された。
【００８６】
［０１１７］合成方法
［０１１８］前述のことは、以下の実施例を参照してより良好に理解することができ、これらは本発明の化合物を調製することができる方法を例示し、添付の特許請求の範囲で定義された本発明の範囲を限定することを意図していない。
【００８７】
［０１１９］実施例１  ４２−（２−テトラゾリル）−ラパマイシン（極性の低い異性体）
［０１２０］実施例１Ａ
［０１２１］窒素雰囲気下、−７８℃の、ラパマイシン（１００ｍｇ、０．１１ｍｍｏｌ）のジクロロメタン（０．６ｍＬ）溶液を、２，６−ルチジン（５３μＬ、０．４６ｍｍｏｌ、４．３当量）及びトリフルオロメタンスルホン酸無水物（３７μＬ、０．２２ｍｍｏｌ）で順次処理し、その後１５分間攪拌し、室温まで加温し、ジエチルエーテルを用いてシリカゲル（６ｍＬ）のパッドを通して溶出した。トリフレートを含む画分をプールし、濃縮することによって、指定した化合物を琥珀色の発泡体として得た。
【００８８】
［０１２２］実施例１Ｂ  ４２−（２−テトラゾリル）−ラパマイシン（極性の低い異性体）
［０１２３］実施例１Ａの酢酸イソプロピル（０．３ｍＬ）溶液を、ジイソプロピルエチルアミン（８７ｍＬ、０．５ｍｍｏｌ）及び１Ｈ−テトラゾール（３５ｍｇ、０．５ｍｍｏｌ）で順次処理し、その後１８時間攪拌した。この混合物を、水（１０ｍＬ）とエーテル（１０ｍＬ）の間で分配した。有機物をブライン（１０ｍＬ）で洗浄し、乾燥させた（Ｎａ２ＳＯ４）。この有機物を濃縮することより、粘着性の黄色固体を得、これをヘキサン（１０ｍＬ）、ヘキサン：エーテル（４：１（１０ｍＬ）、３：１（１０ｍＬ）、２：１（１０ｍＬ）、１：１（１０ｍＬ））、エーテル（３０ｍＬ）、ヘキサン：アセトン（１：１（３０ｍＬ））で溶出するシリカゲル（３．５ｇ、７０〜２３０メッシュ）でのクロマトグラフィーによって精製した。異性体のうちの１つをエーテル画分として採取した。
［０１２４］ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ９６６（Ｍ）−
【００８９】
［０１２５］実施例２  ４２−（１−テトラゾリル）−ラパマイシン（極性の高い異性体）
［０１２６］
［０１２７］実施例１Ｂにおいて、ヘキサン：アセトン（１：１）移動相を用いるクロマトグラフィーカラムから、より遅く移動するバンドを採取することにより、指定した化合物を得た。
［０１２８］ＭＳ（ＥＳＩ）ｍ／ｅ９６６（Ｍ）−
【００９０】
［０１２９］ラパマイシン類似体の混合リンパ球反応アッセイ
［０１３０］ｒａｐ類似体の薬物動態
［０１３１］本発明の実施形態の化合物の免疫抑制活性を、ラパマイシン並びに２種のラパマイシン類似体：両方とも開示されている（Ｏｒら、１９９６）、４０−エピ−Ｎ−［２’−ピリドン］−ラパマイシン及び４０−エピ−Ｎ−［４’−ピリドン］−ラパマイシンと比較した。活性は、記載されている（Ｋｉｎｏら、１９８７）ヒト混合リンパ球反応（ＭＬＲ）アッセイを用いて判定した。このアッセイの結果は、本発明の化合物が、表１に示すように、ナノモル濃度で有効な免疫調節薬であることを実証する。
【００９１】
【表１】
2009511195.tif 000008
【００９２】
［０１３２］実施例１及び実施例２の薬物動態学的挙動を、カニクイザル（１群当たりｎ＝３）における、単回の２．５ｍｇ／ｋｇ静脈内用量の後に特徴づけた。各化合物は、エタノール２０％：プロピレングリコール３０％：クレモホル（ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ）ＥＬ２％：水ビヒクル中５％のデキストロース４８％の２．５ｍｇ／ｍＬ溶液として調製した。１ｍＬ／ｋｇの静脈内用量を、サルの伏在静脈中に緩徐な大量瞬時投与（約１〜２分）として投与した。血液試料は、投薬前及び投薬後０．１（静脈内のみ）、０．２５、０．５、１、１．５、２、４、６、９、１２、２４、及び３０時間に、各動物の大腿動脈又は静脈から得た。ＥＤＴＡ含有試料（ＥＤＴＡ  ｐｒｅｓｅｒｖｅｄ  ｓａｍｐｌｅ）を完全に混合し、引き続く分析のために抽出した。
【００９３】
［０１３３］血液のアリコート（１．０ｍＬ）を、内部標準物質を含む、水中２０％のメタノール（０．５ｍｌ）で溶血させた。溶血させた試料を、酢酸エチルとヘキサン（１：１（ｖ／ｖ）、６．０ｍＬ）の混合物で抽出した。有機層を、室温で窒素流を用いて乾燥するまで蒸発させた。試料を、メタノール：水（１：１、１５０μＬ）で再構成した。表題の化合物（５０μＬ注射剤）を、ＵＶ検出を用いる逆相ＨＰＬＣを用いて混在物から分離した。試料は、実施中冷却を保った（４．０℃）。各研究からのすべての試料を、ＨＰＬＣで単一バッチとして分析した。
【００９４】
［０１３４］実施例１、実施例２及び内部標準物質の曲線下面積（ＡＵＣ）測定値は、Ｓｃｉｅｘ  ＭａｃＱｕａｎ（商標）ソフトウェアを用いて求めた。検量線は、スパイク血液（ｓｐｉｋｅｄ  ｂｌｏｏｄ）標準物質のピーク面積比（親薬物／内部標準物質）から、理論濃度に対する比の最小二乗線形回帰を用いて得た。この方法は、０．１ｎｇ／ｍＬの推定定量限界を伴った標準曲線の範囲にわたって、両方の化合物について線形であった（相関＞０．９９）。最高血中濃度（Ｃｍａｘ）及び最高血中濃度に到達するまでの時間（Ｔｍａｘ）は、観察された血中濃度−時間データから直接読み取った。血中濃度データをＣＳＴＲＩＰを用いる多次指数関数的曲線フィッティングにかけることによって、薬物動態学的パラメータの推定値を得た。推定したパラメータは、ＮＯＮＬＩＮ８４を用いてさらに限定した。投薬後０からｔ時間（最終の測定可能な血中濃度時点）の血中濃度−時間曲線下面積（ＡＵＣ０〜ｔ）を、血液−時間特性に対して線形台形則を用いて計算した。無限大まで外挿した残余面積を、終末消失速度定数（β）で除した最終測定血中濃度（Ｃｔ）として求め、ＡＵＣ０〜ｔに加えることによって全曲線下面積（ＡＵＣ０〜ｔ）を作出した。
【００９５】
［０１３５］図１及び表２に示すように、実施例１及び実施例２の両方は、ラパマイシンと比較した場合、驚くほど相当に短い終末消失半減期（ｔ１／２）を有していた。したがって、本発明の化合物のみが、十分な効力（表１）及びより短い終末半減期（表２）の両方を提供する。
【００９６】
【表２】
2009511195.tif 000009
【００９７】
［０１３６］ステントを用いるパクリタキセルと第２の薬物の同時投与
［０１３７］血管に植え込まれたステントを用いて、パクリタキセルを、ラパマイシン、類似体又は誘導体を含めた第２の薬物とともに同時投与する場合、パクリタキセル：第２の薬物の重量比、ｒは、一方の薬物の活性が、他方の薬物の活性を減弱（即ち妨害）せず、同時投与の全体的な効果は、相加的であり、場合によっては相乗的であるようになっている。パクリタキセル：第２の薬物の有用な比は、約７：１０より大、又は約７：１０≧ｒ≧０．０１：１０、又は約７：１０≧ｒ≧０．１：１０、及び又は約ｒ＝１：１０である。
【００９８】
［０１３８］血管植込み用ステントを含めた、植込み可能な医療デバイスに適用される場合、治療物質の典型的な投与量は、０．０１μｇ／ｍｍから１００μｇ／ｍｍである。典型的には、実用的な最大量は、ポリマー、薬物、及びデバイスの作製方法によって決定される。パクリタキセル、第２の薬物が、ステントに適用される場合、他の投与量も有効であり、有用であるが、典型的な投与量は、０．０１μｇ／ｍｍから２０μｇ／ｍｍ、又は０．１μｇ／ｍｍから１５μｇ／ｍｍ、及び又は１μｇ／ｍｍから１０μｇ／ｍｍである。しかし、パクリタキセル：第２の薬物の比が、約７：１０≧ｒ≧０．０１：１０、又は約７：１０≧ｒ≧０．１：１０、及び又はｒ＝１：１０の範囲内に維持され、生物学的安全性が、著しく損なわれない限り、任意の投薬体制を用いることができる。
【００９９】
［０１３９］医療デバイス上のポリマー層及び治療物質
［０１４０］本発明の範囲内で、適当な薬物添加ポリマー（ｄｒｕｇ  ｌｏａｄｅｄ  ｐｏｌｙｍｅｒ）層を提供することにおいて、多くの柔軟性が存在する。例えば、対象の薬物に関係する治療ウインドウ（ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  ｗｉｎｄｏｗ）パラメータ内で（一般に治療有効レベルと毒性レベルの間のレベル）、組合せ物において用いられる薬物の比は、互いに相関して変更することができる。例えば、一実施形態は、９０：１０の全薬物：ポリマー比を有し、ここで組合せにおける薬物の比は、１：１とすることができる。したがって、パクリタキセル／第２の薬物組合せ物を送達するステントは、５μｇ／ｍｍのＰＣの上塗り層を有するＰＣポリマー層中に、１０μｇ／ｍｍのパクリタキセル及び１０μｇ／ｍｍの第２の薬物を含むことができる。しかし、全薬物：ポリマー比は、より低くすることができ、例えば、４０：６０以下である。薬物の全量に対する上限は、選択されたポリマー中での選択された薬物の混和性、薬物／ポリマー混合物の安定性、例えば、滅菌との適合性、及び混合物の物理的特性、例えば、流動性／処理性、弾性、脆性、粘性（ステントストラット同士の間でクモの巣状になったり、架橋したりしない）、実質的にステントの輪郭に加わるか、又は層間剥離若しくは亀裂の原因となるか、又は圧着することが困難な、被膜の厚さを含めたいくつかの要因に依存することになる。本発明の実施形態は、約６０〜８０ミクロン離れて配置されたステントストラットを含み、薬物／ポリマー／ポリマー上塗り層の厚さの上限が約３０ミクロンであることを示しているが、それらの実施形態に説明されるように、任意のステントサイズ、ストラットサイズ及び空間間隔、及び／又はステント構造を、薬物送達のために用いることができる。上塗り層の厚さ（上塗り層が用いられる場合）は、望ましくは、薬物の放出動態を過度に妨害すべきではない。上塗り層はまた、下にある薬物添加ポリマー層中の薬物と同じであるか、又は異なっていることのできる、１種又は複数種の薬物を添加されることができる。
【０１００】
［０１４１］一般的にいえば、本発明の組合せ物に有用な薬物は、組合せ物中の他の薬物の所望の活性に悪く影響することにはならない。したがって、提案された組合せ物中の一薬物は、他の薬物の所望の活性、例えば抗増殖活性を阻害することにならない。また、いずれの薬物も、他の薬物の分解を生じさせたり、増強したりすることにならない。しかし、例えば、滅菌の間に分解するために、他の点では不適当であると思われる場合のある薬物は、実際には、別の薬物による相互作用のために有用となり得る。したがって、単独ではＥｔＯ滅菌の間に分解することが観察されたデキサメタゾンは、ゾタロリムスの疎水性のために、ゾタロリムスと組み合わせて首尾よく用いることができる。さらに、出願者の同時係属中の米国特許出願第１０／７９６４２３号明細書［代理人整理番号７０４７ＵＳ０１］に記載されているように、ゾタロリムスは、デキサメタゾンの溶出速度を低減させることが観察された。
【０１０１】
［０１４２］ステント植込み後の新生内膜過形成及び内皮化についての試験
［０１４３］この試験は、新生内膜過形成及び内皮化に対する、２種の薬物の効果を判定するために用いた。この試験は、技術で認められた、ブタ冠血管過剰拡張（ｏｖｅｒｓｔｒｅｔｃｈ）モデルを利用し（Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．Ｓ．、Ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ  ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｉｎｊｕｒｙ：ｒｅｓｕｌｔｓ  ｉｎ  ａ  ｐｏｒｃｉｎｅ  ｍｏｄｅｌ．Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ．１９９２年２月；１９（２）：２６７〜２７４）、通常約２〜８週間行われる。典型的には、実験構成体は、少なくとも、治療物質又はポリマーを含めた１つの変数の変化を除いた、すべての点において実験ステントと類似しているステントの対照を含む。
【０１０２】
［０１４４］一例では、各ブタにおいて、２つの主要冠動脈に、それぞれ１つの試験ステントを植え込み、第３の主要冠動脈には、対照ステントを植え込む。追加の対照は、主要冠動脈にそれぞれ１つの、３つの対照ステントを植え込まれたブタである。ステントは、同じ寸法であるか又はできるだけ類似しているべきである。
【０１０３】
［０１４５］ステントは、標準的な技法を用いて植え込む。研究の終りに、動物を安楽死させ、心臓を取り出し、洗浄し、標準的な組織学的保存技法（ホルマリン、ホルムアルデヒドなどを含めて）を用いて固定する。ステント血管を切り取り、次いで切出しのために、メタクリル酸メチル（ＭＭＡ）、パラフィン、又は凍結媒体（ｃｒｙｏｍｅｄｉａ）を含めた適当な媒体中に浸潤させ、包埋する。ステント血管を含むすべてのブロックは、例えば、３つのステント内切片及び２つの対照切片といった、情報価値のある切片が得られるように切断する。連続した薄い切片（約５μｍ）を、各レベルで通常採取し、染色することによって細胞及び組織を視覚化する（例えば、ヘマトキシリンとエオシン（ＨＥ）及びＭａｓｓｏｎのＶｅｒｈｏｅｆｆ  Ｅｌａｓｔｉｎ（ＭＶＥ））。画像解析システム又は他の技術で認められた形態学的データ収集及び定量化の方法を用いて、切片を評価し、記録する。新生内膜面積、新生内膜厚、及び面積狭窄率についてのデータを記録する。
【０１０４】
［０１４６］実施例３
［０１４７］本実施例の目的は、ステントを含有するブタの冠動脈における新生内膜形成に対するラパマイシン類似体の効果を判定することであった。本実施例は、ラパマイシン類似体ゾタロリムスは、合成され、ＢｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｓのＢｉｏｄｉｖｉＹｓｉｏ  ＰＣ  Ｃｏｒｏｎａｒｙステントから送達される場合、ブタ冠動脈における新生内膜過形成及び管腔サイズに有利に影響を及ぼすことを例示する。この知見は、医療デバイスからのゾタロリムスの送達が、新生内膜過形成を制限することによってヒトにおいて適切に適用される場合、相当な臨床上の利点となり得ることを示す。
【０１０５】
［０１４８］薬剤ゾタロリムスは、ラパマイシン類似体である。本実施例で説明する研究は、ブタの冠血管ステントモデルにおいて、ラパマイシン類似体ゾタロリムスの、新生内膜過形成を低減する能力を評価するために構築した。このモデルにおけるゾタロリムスの効力は、経皮的血管再生後のステントにおける冠血管再狭窄及び血管再狭窄の制限及び治療に対する、その臨床的可能性を示すだろう。家畜のブタを用いたが、これは、このモデルが、ヒト被験者において新生内膜過形成を制限することを探求する他の研究と比較可能な結果をもたらすように思われるためである。
【０１０６】
［０１４９］実施例では、未成熟の飼育場のブタ中に配置した冠血管ステントから溶出するゾタロリムスを試験し、これらの結果を対照ステントと比較した。対照ステントは、薬物なしでポリマー被覆されている。ポリマー自体は、重大な程度に新生内膜過形成を刺激してはならないので、これは重要である。溶出した薬物が消失すると、ポリマーに対する炎症応答は、再狭窄プロセスは停止されないが、代わりに遅らされる、遅発型の「追い上げ現象」をおそらくもたらし得るだろう。この現象は、ヒト被験者において、後日再狭窄をもたらすだろう。
【０１０７】
［０１５０］ステントは、各ブタの２本の血管に植え込んだ。このモデルで用いたブタは、一般に２〜４カ月の年齢で、３０〜４０ｋｇの体重であった。こうして２つの冠血管ステントを、１．１〜１．２の通常のステント：動脈比を視覚的に評価することによって、各ブタに植え込んだ。
【０１０８】
［０１５１］この処置の日の最初に、経口アスピリン（１日３２５ｍｇ）をブタに投与し、残りの過程を継続した。全身麻酔は、筋肉内注射によって達成し、その後静脈内ケタミン（３０ｍｇ／ｋｇ）及びキシラジン（３ｍｇ／ｋｇ）が続いた。誘導時の追加の薬物投与は、筋肉内に投与されるアトロピン（１ｍｇ）及びフロシリン（ｆｌｏｃｉｌｌｉｎ）（１ｇ）を含んでいた。ステント術処置の間、１００００ユニットのヘパリンを動脈内に大量瞬時投与した。
【０１０９】
［０１５２］動脈アクセスは、右外側頸動脈の切開及び８Ｆシースの配置によって得た。処置後、動物を、コレステロール又は他の特別な補充のない通常の食餌で維持した。
【０１１０】
［０１５３］ＢｉｏｄｉｖＹｓｉｏステントは、３．０ｍｍの通常の血管標的サイズで用いた。図２を参照されたい。ブタ１頭当たり２本の冠動脈を、ステントの配置に無作為に割り当てた。ステントは、薬物溶出ステント（ポリマーと薬物のステント）又はポリマーのみで被覆されたステント（ポリマーのみのステント）のいずれかであった。ステントは、標準的なガイドカテーテル及びワイヤーによって送達した。ステントバルーンを３０秒未満で適切なサイズに膨張させた。
【０１１１】
［０１５４］各ブタは、各ブタが１つの薬物用ステント及び１つの対照用ステントを有するように、別々の冠動脈内に配置された、１つのポリマーのみのステント及び１つのポリマーと薬物のステントを有した。
【０１１２】
［０１５５］合計２０頭のブタの試料サイズは、指数０．９５及びベータ０．０２で、０．１５ｍｍの標準偏差を有する０．１２ｍｍの新生内膜厚の予測される差異を検出するために選択した。
【０１１３】
［０１５６］動物は、病理組織学的検査及び定量化のために２８日目に安楽死させた。注入ポンプ系から心臓を取り出した後、近位の冠動脈にアクセスするために左心耳を除去した。傷害を有する冠動脈セグメントを、心外膜を取り除いて解剖した。病変部を含むセグメントを単離し、それによって十分な組織が、一方の端に未関与の血管を含有するようにさせた。それぞれ長さおよそ２．５ｃｍの前述のセグメントを、標準的なプラスチック包埋技法によって包埋し、処理した。この組織を、ヘマトキシリン−エオシン及びエラスチック−ワンギーソン（ｅｌａｓｔｉｃ−ｖａｎ  Ｇｉｅｓｏｎ）技法で引き続いて処理し染色した。
【０１１４】
［０１５７］低強度光及び高強度光の顕微鏡観察法を用いることによって、較正されたレチクル、及び較正された分析ソフトウェアを使用するコンピュータに接続されたデジタル顕微鏡観察装置により、顕微鏡視野の平面内で長さの測定を行った。
【０１１５】
［０１５８］血管傷害の重症度及び新生内膜応答を、較正されたデジタル顕微鏡観察法によって測定した。内弾性板の完全性の重要性は、当業者に周知である。ステント血管における病理組織学的傷害スコアは、新生内膜厚に密接に関連すると認証されてきた。このスコアは、傷害深度に関連し、以下のようなものである。
【０１１６】
【表３】
2009511195.tif 000010
【０１１７】
［０１５９］傷害のこの定量的測定を、各ステントセクションのすべてのステントストラットについて評価した。較正されたデジタル画像も、各ステントストラット部位で新生内膜厚を測定するために用いた。管腔面積、内弾性板に含まれる面積、及び外弾性板内の面積も測定した。
【０１１８】
［０１６０］中位のステントセグメントを、測定、分析及び比較のために用いた。近位及び遠位のセグメントについてのデータも記録した（本報告のデータの節に含めた）。
【０１１９】
［０１６１］対応のあるｔ−検定を行うことによって、ポリマーのみのステント（対照群）及びポリマーと薬物のステント（治療群）にわたって変数を比較した。この研究において、予定した時点の前に死んだ動物はいなかった。
【０１２０】
［０１６２］表３は、用いたブタ及び動脈を示す。表３において、ＬＣＸは、左冠動脈の回旋枝を意味し、ＬＡＤは、左冠動脈前下行枝を意味し、ＲＣＡは、右冠動脈を意味する。
【０１２１】
【表４】
2009511195.tif 000011
【０１２２】
［０１６３］表４は、近位、中位、及び遠位セグメントを含めた、各ステントの平均傷害及び新生内膜厚に関するすべてのデータについての概要結果を示す。表４は、内弾性板（ＩＥＬ）及び外弾性板（ＥＥＬ）によって測定した場合の、管腔サイズ、狭窄率、及び動脈サイズも示す。
【０１２３】
【表５】
2009511195.tif 000012
【０１２４】
［０１６４］試験群（ポリマーと薬物のステント）又は対照群（ポリマーのみのステント）内で、近位、中位、又は遠位セグメントにわたって、新生内膜面積又は厚さについての統計学的に有意な差異はなかった。この観察結果は、前の研究とまったく一致しており、したがって試験デバイス（ポリマーと薬物のステント）対対照デバイス（ポリマーのみのステント）の統計的比較に対して、中位セグメントのみを用いることを可能にする。
【０１２５】
［０１６５］表５は、試験群及び対照群にわたる統計学的ｔ−検定の比較を示す。新生内膜厚、新生内膜面積、管腔サイズ、及び管腔狭窄率において統計学的に有意な差異があり、薬物溶出ステントが明らかに好都合であった。逆に、平均傷害スコア、外弾性板面積、又は内弾性板面積については、試験群（ポリマーと薬物のステント）及び対照群（ポリマーのみのステント）の間で統計学的に有意な差異はなかった。
【０１２６】
【表６】
2009511195.tif 000013
【０１２７】
［０１６６］ステントセグメントに対して近位及び遠位の参照動脈を観察し、定量化した。これらの血管は、すべての場合において正常であり、対照群（ポリマーのみのステント）及び試験群（ポリマーと薬物のステント）の両方において未損傷であると思われた。図３Ａ及び３Ｂを参照されたい。以下のデータは、対照群のステントと試験群のステントの間でサイズに統計学的に有意な差異がないことを示す。
【０１２８】
【表７】
2009511195.tif 000014
【０１２９】
［０１６７］データは、効力のモルホロメトリックな（ｍｏｒｐｈｏｒｏｍｅｔｒｉｃ）測定値に対して、統計学的に有意な差異が存在し、ゾタロリムスを溶出するステントが好都合であることを実証する。本発明のステントは、より小さい新生内膜面積、より小さい新生内膜厚、及びより大きな管腔面積をもたらす。炎症又は傷害パラメータに関して、試験群（ポリマーと薬物のステント）及び対照群（ポリマーのみのステント）内に有意な差異はなかった。試験群と比較した対照群について、動脈サイズ（ステントを含む）に有意な差異はなかった。これらの後者の知見は、薬物を含有するポリマー被膜の動脈リモデリング特性に有意な差異のないことを示す。
【０１３０】
［０１６８］最大限でも、ポリマーと薬物のステント及びポリマーのみのステントの両方で、軽度の炎症しか見つからなかった。この知見は、ポリマーが、薬物を添加していなくても、満足な生体適合性を示すことを示す。他の研究は、薬物がポリマーから完全になくなった場合、ポリマー自体が新生内膜を生じるのに十分な炎症を引き起こすことを示す。この観察結果は、臨床上遅発性再狭窄の遅発型追い上げ現象の原因となる場合がある。本実施例のポリマーは、冠動脈において炎症を引き起こさなかったので、薬物がなくなった後のポリマーに関連する遅発問題は起こりそうにない。
【０１３１】
［０１６９］結論として、ポリマーから化合物ゾタロリムスを溶出するステントは、冠動脈に配置した場合、ブタモデルにおいて新生内膜過形成の低減を示した。
【０１３２】
［０１７０］実施例４
［０１７１］本実施例の目的は、ホスホリルコリン側基を含有する生体適合性ポリマーで被覆された３１６Ｌ電解研磨ステンレス鋼クーポン（Ｅｌｅｃｔｒｏｐｏｌｉｓｈｅｄ  Ｓｔａｉｎｌｅｓｓ  Ｓｔｅａｌ  Ｃｏｕｐｏｎ）からのゾタロリムス薬の放出速度を求めることである。
【０１３３】
［０１７２］ＨＰＬＣバイアルの蓋のゴムセプタムをバイアルから取り出し、「テフロン」側が上になるようにガラスバイアル中に置いた。これらのセプタムは、試験試料の支持体として機能した。試験試料は、ホスホリルコリン側基を含有する生体適合性ポリマー（ＰＣポリマー）で予め被覆された３１６Ｌステンレス鋼クーポンであった。冠血管ステントは、３１６Ｌステンレス鋼で一般に作製されており、ＰＣポリマーで被覆することによって、薬物を添加するためのデポー部位を提供することができる。ステントをシミュレートするために機能する、被覆されたクーポンは、セプタムの上に置いた。ガラスのハミルトンシリンジを用いることによって、ゾタロリムスとエタノールの溶液（１０μｌ）を各クーポンの表面に適用した。この溶液は、１００％エタノール（３．０ｍｌ）中に溶解させたゾタロリムス（３０．６ｍｇ）を含有していた。シリンジは、各適用の間にエタノールで洗浄した。ガラスバイアルのキャップは、バイアルの上にゆるく置き、それによって適当な通気を保証した。このクーポンを最低１．５時間乾燥させた。１２個のクーポンをこのようにして装備し、６個をデバイスに添加された薬物の平均量を求めるために用い、６個をデバイスから薬物を放出するのに必要な時間を測定するために用いた。
【０１３４】
［０１７３］クーポンに添加されたゾタロリムスの全量を求めるために、クーポンをバイアルから取り出し、５０／５０のアセトニトリル／０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６．０、５．０ｍｌ）中に入れた。このクーポンを、５２１０  Ｂｒａｎｓｏｎ超音波処理器上に１時間置いた。次いでこのクーポンを溶液から取り出し、この溶液をＨＰＬＣでアッセイした。
【０１３５】
［０１７４］時間放出研究は、以下の時間間隔、５、１５、３０及び６０分のそれぞれにおいて、個々のクーポンをｐＨ６．０の０．０１Ｍリン酸緩衝液の新鮮なアリコート（１０．０ｍｌ）に浸漬し、このアリコートから取り出すことによって行った。１２０、１８０、２４０、３００、３６０分の残りの時点については、５．０ｍｌの容量の緩衝液を用いた。薬物放出段階の間の混合を促進するため、試料を、低速に設定したＥｂｅｒｂａｃｈ振盪機上に置いた。最後の試料の試験が完了した後、すべての溶液アリコートをＨＰＬＣによってアッセイした。
【０１３６】
［０１７５］ＨＰＬＣ分析は、以下の設定を有するＨｅｗｌｅｔｔ  Ｐａｃｋａｒｄシリーズ１１００測定器で行った。
注入容量  ＝１００μｌ
収集時間  ＝４０分
流速      ＝１．０ｍｌ／分
カラム温度＝４０℃
波長      ＝２７８ｎｍ
移動相    ＝６５％アセトニトリル／３５％Ｈ２Ｏ
カラム    ＝ＹＭＣ  ＯＤＳ−Ａ  Ｓ５μｍ、４．６×２５０ｍｍ  パート番号Ａ１２０５２５４６ＷＴ
［０１７６］上記実験からの結果は、以下の放出データを示した（表６）。
【０１３７】
【表８】
2009511195.tif 000015
【０１３８】
［０１７７］実施例５
［０１７８］本実施例の目的は、１５ｍｍ  ＢｉｏｄｉｖＹｓｉｏ薬物送達ステントからのゾタロリムスの添加及び放出を求めることであった。
【０１３９】
［０１７９］ステントに薬物を添加するために、５０ｍｇ／ｍｌの濃度でゾタロリムスのエタノール溶液を調製し、１２個のバイアル中に分注した。１２個の個々のポリマー被覆ステントを、ステントを垂直位置に保持するために設計された固定具上に配置し、これらのステントを、薬物溶液中に垂直に５分間浸漬した。ステント及び固定具をバイアルから取り出し、過剰の薬物溶液は、ステントを吸収材に接触させることによって吸い取った。次いでこれらのステントを、反転した垂直位置で、空気中で３０分間乾燥させた。
【０１４０】
［０１８０］ステントを固定具から取り外し、各ステントを、５０／５０のアセトニトリル／リン酸緩衝液（ｐＨ５．１、２．０ｍｌ）中に入れ、１時間超音波処理した。ステントを溶液から取り出し、薬物濃度について溶液をアッセイし、これはステントに最初にあった薬物の量の計算を可能にした。この方法は、ステント被膜から少なくとも９５％の薬物を取り出すことを独立に示した。平均して、ステントは、１２０±９マイクログラムの薬物を含んでいた。
【０１４１】
［０１８１］薬物添加ステントを、固定具に配置し、個々のバイアルの０．０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ＝６．０、１．９ｍｌ）中に入れた。これらの試料を、低速に設定したＥｂｅｒｂａｃｈ振盪機上に置くことにより、往復攪拌を提供した。緩衝液中で薬物が飽和状態に接近するのを回避するため、ステントを、以下の時点で、新鮮な緩衝液のバイアルに定期的に移した；１５、３０、４５、６０、１２０、１３５、１５０、１６５、１８０、２４０、３９０分。研究した薬物放出期間の最後の薬物濃度について、溶解緩衝液のバイアルをＨＰＬＣによってアッセイした。時間の関数としての薬物の累積放出（％）として表したデータを、表形式で以下に示す（表７）。
【０１４２】
【表９】
2009511195.tif 000016
【０１４３】
［０１８２］実施例６
［０１８３］ラパマイシンのテトラゾール類似体である、ゾタロリムスは、ブタの冠血管ステント誘導性傷害及び（Ｒｏｂｉｎｓｏｎ，ＫＡ、Ｄｕｂｅ，Ｈ．Ｍ．Ｅｆｆｉｃａｃｙ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ  Ｌｏａｄｅｄ  Ｃｏｒｏｎａｒｙ  Ｓｔｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｙｕｃａｔａｎ  Ｍｉｎｉｓｗｉｎｅ−Ｐｒｅｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｓｔｕｄｙ、０９／２０／２００１及びＳｃｈｗａｒｔｚ，Ｒ．Ｓ．Ｅｆｆｉｃａｃｙ  Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａ  Ｒａｐａｍｙｃｉｎ  Ａｎａｌｏｇ（Ａ−１７９５７８）．Ｄｅｌｉｖｅｒｅｄ  ｆｒｏｍ  ｔｈｅ  Ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｓ  ＢｉｏｄｉｖＹｓｉｏ  ＰＣ  Ｃｏｒｏｎａｒｙ  Ｓｔｅｎｔｓ  ｉｎ  Ｐｏｒｃｉｎｅ  Ｃｏｒｏｎａｒｙ  Ａｒｔｅｒｉｅｓ、Ｔｅｃｈｎｉｃａｌ  Ｒｅｐｏｒｔ、Ｍａｙｏ  Ｃｌｉｎｉｃ  ａｎｄ  Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ、Ｒｏｃｈｅｓｔｅｒ、ＭＮ．）ラットのバルーン血管形成術（Ｇｒｅｇｏｒｙ，Ｃ．Ｓｕｍｍａｒｙ  ｏｆ  Ｓｔｕｄｙ  Ｅｖａｌｕａｔｉｎｇ  Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｚｏｔａｒｏｌｉｍｕｓ  ｉｎ  ａ  Ｒａｔ  Ｍｏｄｅｌ  ｏｆ  Ｖａｓｃｕｌａｒ  Ｉｎｊｕｒｙ）のモデルにおいて、抗再狭窄活性を有することが示された。本実施例の目的は、健康な男性における、ゾタロリムスの段階的増加単回静脈内（ＩＶ）用量の安全性及び薬物動態（ＰＫ）を評価することであった。
【０１４４】
［０１８４］この、ヒトにおける最初の（ｆｉｒｓｔ−ｔｉｍｅ−ｉｎ−ｍａｎ）研究において、ゾタロリムスの安全性及び薬物動態を、１００から９００μｇの用量範囲にわたる、ゾタロリムスの静脈内大量瞬時投与後に調査した。静脈内大量瞬時投与用量の投与は、ｉｎ  ｖｉｖｏで、薬物被覆ステントからのゾタロリムスの最も急速で予期されない放出を模倣するだろう。
【０１４５】
［０１８５］これは、フェーズ１、単回段階的増加用量、二重盲検、無作為化、プラセボ対照、単一施設研究であった。６０人の健康な成人男性を、１００、３００、５００、７００、及び９００μｇの、５つのＩＶ用量群に分割した。被験者についての個体群統計情報を表８に要約する。
【０１４６】
【表１０】
2009511195.tif 000017
【０１４７】
［０１８６］被験者を、表９に示す投薬スキームに示すように、空腹条件下で、ゾタロリムスの単回静脈内用量又は適合する静脈内プラセボ（ｍａｔｃｈｉｎｇ  ｉｎｔｒａｖｅｎｏｕｓ  ｐｌａｃｅｂｏ）を受けるように無作為に割り当てた。
【０１４８】
【表１１】
2009511195.tif 000018
【０１４９】
［０１８７］先行する低用量群からの安全性データを評価した後、高用量を投与した。処置群は、少なくとも７日隔てた。安全性の理由のため、各処置群を、６被験者の２つのコホートに分け、１つの群の２つのコホートの投薬を、少なくとも１日隔てた。
【０１５０】
［０１８８］用量は、８被験者に、３分にわたってＩＶ大量瞬時投与として投与した。各用量群において、４被験者がゾタロリムスを受け、４被験者がプラセボを受けた。ゾタロリムスの血中濃度を、１６８時間試料採取し、０．２０ｎｇ／ｍＬのＬＯＱを有するＬＣ−ＭＳ／ＭＳを用いて測定した。
【０１５１】
［０１８９］研究第１日の投薬前（０時間）及び投薬後０．０８３（５分）、０．２５、０．５、１、２、４、８、１２、１６、２４、３６、４８、７２、９６、１２０、１４４、及び１６８時間に、７ｍＬの血液試料を、静脈穿刺によってエデト酸（ＥＤＴＡ）を含有する真空採取管中に採取した。
【０１５２】
［０１９０］ゾタロリムスの血中濃度は、有効な液／液抽出ＨＰＬＣタンデム質量分析法（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）を用いて求めた（Ｊｉら、２００４）。ゾタロリムスの定量化の下限値は、０．３ｍＬの血液試料を用いて０．２０ｎｇ／ｍＬであった。すべての検量線は、０．９９２３以上の決定係数（ｒ２）値を有していた。
【０１５３】
［０１９１］安全性は、有害事象、理学的検査、バイタルサイン、ＥＣＧ、注射部位及び検査室検査の評価に基づいて評価した。
【０１５４】
［０１９２］ゾタロリムスの薬物動態学的パラメータの値は、非コンパートメント法を用いて推定した。これらのパラメータは、ゾタロリムス投与後５分での濃度（Ｃ５）、用量規格化Ｃ５、消失速度定数（β）、半減期（ｔ１／２）、時間０から最終測定可能濃度の時間までの血中濃度対時間曲線下面積（ＡＵＣ０〜ｌａｓｔ）、用量規格化ＡＵＣ０〜ｌａｓｔ、無限時間まで外挿した、血中濃度対時間曲線下面積（ＡＵＣ０〜ｉｎｆ）、用量規格化ＡＵＣ０〜ｉｎｆ、総クリアランス（ＣＬ）、及び分布容積（Ｖｄβ）を含んでいた。
【０１５５】
［０１９３］ゾタロリムスの静脈内投与後の平均血中濃度−時間のプロットを、図４及び５にそれぞれ線形目盛及び対数−線形目盛で示す。
【０１５６】
［０１９４］２つの投与計画のそれぞれの、投与後のゾタロリムスの薬物動態学的パラメータの平均±標準偏差を表１０に示す。
【０１５７】
【表１２】
2009511195.tif 000019
【０１５８】
［０１９５］用量比例関係及び線形薬物動態の疑問を調査するために、共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）を行った。被験者を用量レベルによって分類し、体重が共変量であった。分析した変数は、β、Ｖｄβ、用量規格化Ｃ５、並びに用量規格化ＡＵＣ０−ｌａｓｔの対数及び用量規格化ＡＵＣ０−ｉｎｆの対数を含んでいた。用量との不変性についての仮説の初期試験は、用量の単調関数に対して良好な指数を伴う用量レベル効果に対する試験であった。さらに、最高及び最低用量レベルを、ＡＮＣＯＶＡの枠組みの中で比較した。
【０１５９】
［０１９６］図６は、ゾタロリムスの用量比例関係Ｃｍａｘ、ＡＵＣ０−ｌａｓｔ及びＡＵＣ０−ｉｎｆを示す。この図からわかるように、用量規格化Ｃｍａｘ及びＡＵＣ０−ｌａｓｔに、統計学的に有意な単調傾向は観察されず、これらのパラメータの用量比例増加を示した。ゾタロリムスの用量規格化ＡＵＣ０−ｉｎｆについて、用量との統計学的に有意な単調傾向が観察された（ｐ＝０．０１５２）。しかし、全群にわたる用量規格化ＡＵＣ０−ｉｎｆの対比較では、１００μｇの用量規格化ＡＵＣ０−ｉｎｆのみが、９００μｇ及び３００μｇの用量規格化ＡＵＣ０−ｉｎｆ（それぞれ、ｐ＝０．００３２及びｐ＝０．０３１６）と統計学的に有意に異なることを示した。統計学的に有意な単調傾向は、βにも観察された。この逸脱は、１００μｇ用量群でのβのわずかな過剰評価が原因であり得るだろう。表１１に示すように、平均ゾタロリムスＣ５（５分での濃度）及びＡＵＣ０−ｉｎｆは、用量に比例して増加した。
【０１６０】
【表１３】
2009511195.tif 000020
【０１６１】
［０１９７］平均半減期は、研究した用量にわたって２６．０〜４０．２ｈであり、３００〜９００μｇの用量範囲にわたって大きく異なっていなかった。ゾタロリムスは、すべての用量で良好な耐容性を示し、臨床上重要な理学的検査結果、バイタルサイン又は検査室測定値は観察されなかった。
【０１６２】
［０１９８］安全性
［０１９９］ゾタロリムスに関係した最も一般的な、治療により発現した有害事象（任意の一治療群における２人以上の被験者によって報告された）は、注射部位の反応及び疼痛であった。
【０１６３】
［０２００］大部分の有害事象は、重傷度において軽度であり、自然に回復した。
【０１６４】
［０２０１］本研究において、重大な有害事象は報告されなかった。
【０１６５】
［０２０２］研究の間、理学的検査の知見、バイタルサイン、臨床検査室又はＥＣＧパラメータに、臨床上重要な変化はなかった。
【０１６６】
［０２０３］結論
［０２０４］ＩＶゾタロリムスの薬物動態は、Ｃ５及びＡＵＣ０−ｉｎｆに関して、１００〜９００μｇの用量範囲にわたって用量に比例する。全体的に、ゾタロリムスの薬物動態は、Ｃ５、ＡＵＣ０−ｌａｓｔ及びＡＵＣ０−ｉｎｆの用量比例増加によって示されたように、１００μｇから９００μｇの用量範囲にわたって基本的に線形であった。最大９００μｇの単回ＩＶ大量瞬時投与用量が、安全性の問題なく投与された。
【０１６７】
［０２０５］ゾタロリムスの平均消失半減期は、研究した用量範囲にわたって、２６．０から４０．２時間の範囲であった。平均クリアランス及び分布容積は、それぞれ２．９０から３．５５Ｌ／ｈ及び１１３から２０２Ｌの範囲であった。βに関して、及びかなりの程度で、Ｖｄβに関して観察された線形動態からの逸脱は、１００μｇ用量群に対するβの過剰評価によるものであった。
【０１６８】
［０２０６］１００から９００μｇの単回用量でのゾタロリムスは、対象によって一般に良好な耐容性が示された。
【０１６９】
［０２０７］実施例７
［０２０８］本研究は、複数回投薬後のゾタロリムスの薬物動態を評価するため、及び健康な被験者の全身暴露を最大にする間のその安全性を評価するために計画した。主要目的は、被覆ステントから溶出される薬物の予測されたレベルを大きく超える、ゾタロリムスの全暴露を達成することであった。この研究により、健康な対象において、連続１４日間毎日の、２００、４００及び８００μｇ用量の複数回静脈内注入後の、フェーズ１、複数回用量段階的増加研究における、ゾタロリムスの薬物動態及び安全性を調査した。
【０１７０】
［０２０９］方法
［０２１０］フェーズ１、複数回段階的増加、二重盲検、プラセボ対照、無作為化研究。３つの１日１回（ＱＤ）投与計画（１投与計画当たり１６活性及び８プラセボでの２００、４００又は８００μｇＱＤ）に等しく分割された７２被験者に、連続１４日間、ゾタロリムスの６０分ＱＤ  ＩＶ注入を投与した。血液試料は、最初の投与後２４時間、第１０、１１、１２、１３日の投薬前、及び第１４日の投与後１６８時間にわたって採取した。尿試料は、第１、１４、１６、１８及び２０日に２４時間にわたって採取した。血液及び尿のゾタロリムス濃度は、有効なＬＣ／ＭＳ／ＭＳ法を用いて求めた。薬物動態学的パラメータは、コンパートメント解析によって求めた。全日−ＡＵＣ０〜∞（全１４用量を含めた、時間０から無限大までの血中濃度−時間曲線下面積）を計算した。用量及び時間線形性並びに定常状態の達成を評価した。尿中に排出された薬物の割合を求めた。
【０１７１】
［０２１１］全般に良好な健康状態にある７２人の男性及び女性の対象をこの研究に登録した。個体群統計情報を表１２に要約する。
【０１７２】
【表１４】
2009511195.tif 000021
【０１７３】
［０２１２］表１３に示すように、被験者を、３つの群（群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩ）に対して、２つの異なるサイトで無作為化した。各群内で、被験者を２つの研究サイトで均等に分割し、各サイトは１２被験者（ゾタロリムス、８被験者；プラセボ、４被験者）を登録した。各用量群内の投薬スキームを以下に示す。
【０１７４】
【表１５】
2009511195.tif 000022
【０１７５】
［０２１３］対象は、空腹条件下で、それぞれ群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩについて、研究第１日から１４日に、２００、４００、又は８００μｇのゾタロリムスの単回６０分毎日（ＱＤ）の静脈内注入又はプラセボの適合した静脈内注入を受けた。薬物は、ｙサイトデバイスに接続されたシリンジポンプによって投与し、このシリンジポンプは、１２５〜１５０ｍＬの５％デキストロース水溶液（Ｄ５Ｗ）も６０分にわたって注入した。これらの群に、先の群の最後の用量と次の群の最初の用量を少なくとも７日隔てて順次投薬し、その時間に先の群からの安全性のデータを分析した。用量の段階的増加は、低用量群の安全性の分析に依存した。
【０１７６】
［０２１４］５ｍＬの血液試料を、カリウムＥＤＴＡ含有管に採取することによって、投薬前（０時間）、及び研究第１及び１４日の注入開始後０．２５、０．５、１．０時間、１時間５分、１．２５、１．５、２、３、４、８、１２、１８及び２４時間にゾタロリムス濃度を評価した。研究第１４日の注入開始後３６、４８、７２、９６、１２０、１４４及び１６８時間並びに第１０、１１、１２及び１３日の投薬前に、追加の試料を採取した。尿は、保存剤なしの容器中に以下の間隔にわたって採取した：研究第１、１４、１６、１８及び２０日の注入開始後０から６、６から１２、１２から１８及び１８から２４時間。
【０１７７】
［０２１５］血液及び尿のゾタロリムス濃度は、有効な液／液抽出ＨＰＬＣタンデム質量分析法（ＬＣ−ＭＳ／ＭＳ）を用いて求めた。ゾタロリムスの定量化の下限値は、０．３ｍＬの血液試料で０．２０ｎｇ／ｍＬ及び０．３ｍＬの尿試料で０．５０ｎｇ／ｍＬであった。
【０１７８】
［０２１６］安全性は、有害事象、理学的検査、バイタルサイン、ＥＣＧ、注射部位及び検査室検査の評価に基づいて評価した。
【０１７９】
［０２１７］結果
［０２１８］すべての被験者についてのゾタロリムス血中濃度−時間データは、１次消去（ｆｉｒｓｔ  ｏｒｄｅｒ  ｅｌｉｍｉｎａｔｉｏｎ）を伴う３コンパートメント開放モデルによって説明した。研究した投与計画にわたって、平均コンパートメント薬物動態学的パラメータは、ＣＬ  ４．０〜４．６Ｌ／ｈ；Ｖ１  １１．３〜１３．１Ｌ；Ｖｓｓ  ９２．５〜１１８．０Ｌ、及び終末消失ｔ１／２  ２４．７〜３１．０ｈであった。ゾタロリムスの薬物動態は、第１及び１４日で、研究した投与計画にわたって用量線形性と一致した。薬物動態学的モデルは、第１及び１４日のデータに同時に適合し、時間線形性の薬物動態を示した。研究した投与計画に対する全日−ＡＵＣ０〜∞は、６７７〜２３９５ｎｇ・ｈｒ／ｍＬの範囲であった。平均して、０．１％のゾタロリムス用量を、投与後２４時間以内に尿中で回収した。
【０１８０】
［０２１９］薬物動態学的及び統計学的分析
［０２２０］ゾタロリムスの薬物動態学的パラメータ値を、コンパートメント解析を用いて、個々の被験者について推定した。研究第１日の最初の用量、研究第１４日の最後の用量及び研究第１０、１１、１２及び１３日のトラフ濃度からのデータを、各個々の被験者について同時にシミュレートした。求めたパラメータは、中央コンパートメントの容積（Ｖ１）、終末消失速度定数（ガンマ）、クリアランス（ＣＬ）、定常状態の分布容積（Ｖｓｓ）、半減期（ｔ１／２）、最高濃度（Ｃｍａｘ）、最高濃度の時間（Ｔｍａｘ）、第１４日についての血中濃度対時間曲線下面積（ＡＵＣτ）並びに対応する用量規格化Ｃｍａｘ及び用量規格化ＡＵＣτであった。各個人に対して最適なモデルを用いることによって、１４日間にわたる個々の濃度−時間特性を予測して、研究期間にわたる慢性暴露量、即ちＣｍａｘ及び全日−ＡＵＣ０〜∞（研究中のすべての１４用量を考慮に入れた、時間０から無限大までの予測された血中濃度−時間特性下面積）を推定した。
【０１８１】
［０２２１］研究第１４日の用量について、用量比例関係を評価するために、用量規格化Ｃｍａｘの対数、用量規格化ＡＵＣ、及び終末消失速度定数□に対して共分散分析（ＡＮＣＯＶＡ）を行った。センター（ｃｅｎｔｅｒ）及び用量が因子であり、体重が共変量であった。定常状態に到達したかどうかの疑問に対処するため、研究第１０〜１４日の用量規格化投与前濃度に対して、センター及び用量レベルを因子として反復測定分析を行った。
【０１８２】
［０２２２］薬物動態
［０２２３］すべての被験者についてのゾタロリムス血中濃度−時間データは、１次消去を伴う３コンパートメント開放モデルによって説明した。第１日、第１４日及び第１から１４日についてのゾタロリムスの平均血中濃度を図７に示す。ゾタロリムスの薬物動態学的パラメータの平均±標準偏差を表１４に示す。
【０１８３】
【表１６】
2009511195.tif 000023
【０１８４】
［０２２４］研究した投与計画にわたって観察対予測診断プロットにおいて偏りは観察されなかったので、研究した用量投与計画にわたるコンパートメント薬物動態学的パラメータの範囲は非常に狭く、２次パラメータにおいて、研究した投与計画にわたって有意な傾向は観察されず、研究した投与計画にわたって、ゾタロリムスについて用量線形性が推測された。
【０１８５】
［０２２５］以下の図は、ゾタロリムスの第１４日のＣｍａｘ及びＡＵＣ０〜２４ｈにおける用量比例関係を示す。図８ａ、８ｂ及び８ｃは、それぞれ第１日、第１４日、及び第１〜１４日の、２００、４００及び８００μｇＱＤ用量群についての、平均ゾタロリムス血中濃度−時間特性を示す。各用量群について、図９（８００μｇＱＤ用量群のデータをフィッティングしたときの、時間に対する平均観察血中濃度及び予測血中濃度のプロットの例）に例示したように、モデルは、第１日並びに第１４日及びその間のデータを十分に説明した。線形動態を仮定する３コンパートメントモデルによる、第１日から第１４日にわたる、観察されたゾタロリムス濃度−時間のデータの良好な適合は、ゾタロリムスが、時間に不変なクリアランスを示すことを示す。
【０１８６】
［０２２６］図９に示すように、研究第１０〜１４日の用量規格化投与前濃度において、統計学的差異は観察されなかった。
【０１８７】
［０２２７］２００、４００及び８００μｇＱＤ用量群についてのＣｍａｘの中央値は、それぞれ１１．４、２２．１及び３８．９ｎｇ／ｍＬであった。対応する全日−ＡＵＣ０〜∞の中央値は、それぞれ６７７、１４３８、及び２３９５ｎｇ・ｈ／ｍＬであった。
【０１８８】
［０２２８］尿中に排出されたゾタロリムス用量の割合を、８００μｇＱＤ用量群について計算した。平均して、第１日及び第１４日の２４時間以内で、約０．１％のゾタロリムスが尿中に回収された。
【０１８９】
［０２２９］安全性
［０２３０］ゾタロリムスに関係した最も一般的な、治療により発現した有害事象は、疼痛、頭痛、注射部位の反応、乾燥皮膚、腹痛、下痢及び発疹であった。大部分の有害事象は、重傷度において軽度であり、自然に回復した。本研究において、重大な有害事象は報告されなかった。具体的には、免疫抑制、ＱＴｃ延長又は臨床上重大な有害事象の任意の臨床的又は生化学的証拠を示した被験者はいなかった。
【０１９０】
［０２３１］結論
［０２３２］ゾタロリムスの薬物動態は、研究した用量投与計画にわたって、連続１４日間静脈内に投与された場合、用量比例的であり、時間に不変であった。
【０１９１】
［０２３３］ゾタロリムスのＱＤ投薬に対する定常状態は、第１０日までに到達し、この日に最初のトラフ試料を測定した。
【０１９２】
［０２３４］１日当たり、用量の約０．１％が尿中に変化していない薬物として排泄されたので、腎排泄は、ゾタロリムスにとって排出の主要経路ではない。
【０１９３】
［０２３５］ゾタロリムスは、連続１４日間に、２００、４００、及び８００μｇの複数回用量として投与される場合、一般に良好な耐容性を示す。
【０１９４】
［０２３６］実施例８  ゾタロリムス及びパクリタキセルの抗増殖活性
［０２３７］組み合わせて投与された場合の、ゾタロリムス（ＡＢＴ−５７８）とパクリタキセルとの相互作用を調査するために、実験を行った。ヒト冠動脈平滑筋細胞（ｈＣａＳＭＣ）及びヒト冠動脈内皮細胞（ｈＣａＥＣ）の抗増殖活性に対する、パクリタキセルとゾタロリムスの作用を、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ増殖アッセイを用いて判定した。血管平滑筋細胞の血管新生内膜への増殖及び遊走は、再狭窄病変に見られる特徴的な病理的応答である（Ｌａｆｏｎｔ及びＬｉｂｂｙ、１９９８）。結果として、ヒト冠動脈平滑筋細胞及びヒト冠動脈内皮細胞に対する候補の抗再狭窄化合物の抗増殖活性を特異的に測定するｉｎ  ｖｉｔｒｏアッセイにより、ｉｎ  ｖｉｖｏでの潜在的な抗再狭窄活性が予測される。
【０１９５】
［０２３８］ｉｎ  ｖｉｔｒｏでトリチウム取込みアッセイによって測定される場合、増殖因子介在ヒト冠動脈平滑筋細胞（ｈＣａＳＭＣ）増殖を減弱させる化合物又は化合物の組合せは、候補の抗再狭窄剤である。トリチウム取込みアッセイ（ｔｒｉｔｉｕｍ  ｉｎｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ  ａｓｓａｙ）は、細胞数及び増殖を測定するための、正確で感受性の高い方法である。このアッセイは、単独で抗増殖活性を示す薬剤が、組合せ物においても同様の活性を示すかどうかを判定するために用いた。さらに、より低い効力の抗増殖活性を示す薬剤は、組合せ物として投与される場合、より強力な抗増殖剤の活性を遮断する場合がある。ゾタロリムスの抗増殖活性のタクロリムスによる減弱は、この作用の明瞭な例である（図１０Ａ）。ゾタロリムスとパクリタキセルの組合せの潜在的な抗再狭窄活性を判定するため、ｈＣａＳＭＣの増殖を、各化合物の存在下及び組合せ物において測定した。
【０１９６】
［０２３９］パクリタキセルは、微小管脱重合を妨害し、Ｓ期での細胞進行を遮断する（Ｓｃｈｉｆｆ及びＨｏｒｗｉｔｚ、１９８０）。ラパマイシンのように、ゾタロリムスは、ｍＴＯＲ阻害によってサイクリン依存性キナーゼを遮断し、Ｇ１−Ｓ期で細胞周期進行を阻害する（Ｍａｒｘら、１９９５；Ｓｅｈｇａｌ、１９９８；Ｓｅｈｇａｌ、２００３）。
【０１９７】
［０２４０］パクリタキセルが、ゾタロリムスの活性を減弱したか又は増強したかを判断するために、増殖因子誘導増殖に対する、単独及び組合せでのパクリタキセル及びゾタロリムスの作用を判定した。アイソボログラム手法及び併用指数（ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｉｎｄｅｘ）分析を用いて、データを相加性について分析した。アイソボログラムは、組合せにおいて、特定のレベルの効果を生じる、対の用量のデカルトプロットである。アイソボログラムは、薬物組合せ及び同様の研究の結果を、グラフを用いて示す好都合な方法であるが、これは、軸上の点を結ぶ線の下又は上に入る、対をなした値の実験点が、それぞれ相乗的相互作用及び非相乗的相互作用を示すためである。
【０１９８】
［０２４１］増殖アッセイ法
［０２４２］３Ｈチミジン取込み
［０２４３］細胞増殖を、血清及び増殖因子によって刺激された細胞の、新規に合成されたＤＮＡへの３Ｈ−チミジンの取込みを追跡することによってモニターした。指数関数的に増殖しているｈＣａＳＭＣを、９６ウェル平底組織培養プレート中に、５０００細胞／ウェル（ｈＣａＥＣについては１００００細胞／ウェル）で蒔いた。これらの細胞を一晩付着させた。翌日に増殖培地を取り出し、細胞を無補足（基本）培地で２回洗浄することによって、微量の血清及び増殖因子を除去した。基本培地（２００μｌ）を各ウェルに加え、細胞を、増殖因子及び血清のない培地中でインキュベートすることによって飢餓させ、それらをＧ０状態に同調させた。血清及び増殖因子のない培地中での飢餓後（ｈＣａＳＭＣについて４８時間及びｈＣａＥＣについて３９時間）、細胞を、薬物の非存在下又は存在下で、２００μｌの補足培地を補充した。すべてのウェルにおいて、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）を０．１％の最終濃度で維持した。７２時間のインキュベーション期間後、２５μｌ（１μＣｉ／ウェル）の３Ｈ−チミジン（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ；Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、Ｎ）を、各ウェルに加えた。細胞を３７℃で１６〜１８時間インキュベートし、細胞ハーベスター（Ｈａｒｖｅｓｔｅｒ  ９６００、ＴＯＭＴＥＣ；Ｈａｍｄｅｎ、ＣＴ）を用いて、結合したガラス繊維フィルターを含む９６ウェルプレート上に細胞を収集した。フィルタープレートを一晩空気乾燥させ、ＭｉｃｒｏＳｃｉｎｔ−２０（２５μｌ；ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ、Ｗｅｌｌｅｓｌｅｙ、ＭＡ）を各フィルターウェルに加え、これらのプレートを、ＴｏｐＣｏｕｎｔマイクロプレートシンチレーションカウンター（ＰｅｒｋｉｎＥｌｍｅｒ）を用いてカウントした。対照は、培地のみ、飢餓細胞、及び完全培地中の細胞を含んでいた。薬物活性は、完全培地中で増殖した細胞と比べた、新規に合成されたＤＮＡへの３Ｈ−チミジンの取込みの阻害を測定することによって確証した。
【０１９９】
［０２４４］データは、ビヒクル処置対照と比べた３Ｈ−チミジンの取込みの阻害率として示し、３〜４実験の平均±標準誤差として提供する。各実験からの阻害の平均値対薬物濃度の片対数プロットを作成し、各実験に対するＩＣ５０（半阻害濃度（細胞増殖を５０％低減する濃度）を、薬物の非存在下の完全培地中でインキュベートした細胞と比べた、５０％阻害レベルの外挿によって求めた。最終的なＩＣ５０は、３〜４実験の平均である。
【０２００】
［０２４５］これらの実験において、ｘ軸は、変更される薬物の濃度を表す。それぞれのグラフは、ゾタロリムス単独の曲線及びパクリタキセル単独の曲線を含む。各グラフの一連の曲線は、固定濃度のパクリタキセルを、指定した濃度のゾタロリムスに加えることによって作成した。各曲線は、指定した固定濃度のパクリタキセルの存在下でのゾタロリムス（ｘ軸に与えられた濃度）の用量応答を表す。
【０２０１】
［０２４６］２つの方法を用いることによって、増殖に対するゾタロリムスとパクリタキセルの併用効果を分析した。いくつかの効果レベルでアイソボログラムを作成した（Ｔａｌｌａｒｉｄａら、１９８９）。濃度応答曲線を、非線形回帰（Ｐｒｉｓｍ、ＧｒａｐｈＰａｄ；Ｓｏｆｔｗａｒｅ；ＳａｎＤｉｅｇｏ、ＣＡ）によって合わせることによって、ＥＣ５０及びヒル勾配の値を得た。特定の抗増殖作用を誘発する濃度は、４パラメータ方程式（式１）を用いて求めた。
【０２０２】
［０２４７］Ｙ＝最下値＋（最上値−最下値）／（１＋１０＾（（ＬｏｇＥＣ５０−Ｘ）＊ヒル勾配））
Ｘは、濃度の対数である。Ｙは、応答である。
或いは：
【数１】
2009511195.tif 000024
【０２０３】
式中、Ｘ＝Ｙ応答を生じる、薬物の対数濃度であり、最上値及び最下値は、それぞれ１００及び０に限定される。アイソボログラムに加えて、以下の例外とともにＣｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙの方法（Ｃｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙ、１９８４）を用いて、データを相乗作用について分析した。非線形４パラメータ方程式は、濃度−応答曲線をより正確にシミュレートするので、各曲線に対して作成した回帰モデルを、中央値−効果（ｍｅｄｉａｎ−ｅｆｆｅｃｔ）データの代わりに用いた（対数−ロジットプロット）。中央値−効果プロットは、０．２未満及び０．８超の部分占有率の値によって大いに影響を受ける。２５％、５０％、６０％及び７５％を生じる、いくつかの薬物の組合せに対する併用指数（ＣＩ）を、式２によって計算した。
【０２０４】
［０２４８］（Ｄ）１／（Ｄｘ）１＋（Ｄ）２／（Ｄｘ）２＋（（Ｄ）１（Ｄ）２）／（Ｄｘ）１（Ｄｘ）２＝ＣＩ    （式２）
【０２０５】
［０２４９］式中、特定の効果レベルにおいて、（Ｄ）１及び（Ｄ）２は、組合せ中の薬物１及び薬物２の濃度であり、（Ｄｘ）１及び（Ｄｘ）２は、薬物１単独及び薬物２単独の濃度である。ＣＩ値は、各薬物がその独自の効力によって作用していたと仮定して、組合せの効果の加重を反映する。式２は、２つの相互に非排他的な化合物の組合せに対して予測される効果を記述する。各薬物が、その独自の用量依存的部分占有率に応じて併用効果に寄与する場合、ＣＩは１に等しい。１未満のＣＩ値は、相乗的であるとみなされ、１を大きく超える値は、亜相加的であるとみなされる。ＣＩと、相乗性、相加性又は減弱との間の関係は、効果レベルに依存し得るので、ＣＩを、複数の薬物組合せを用いていくつかの効果レベルにおいて求めた。ＣＩ値を、それらが計算された効果レベル（又はｆａ）の関数としてプロットした。ＣＩ値は、アイソボログラム分析と同様に、効果レベル依存性であり、効果のレベルが変化すると変動し、したがって、ＣＩ値を比較する際には効果レベルを考慮することが重要である。ＣＩ値の精度は、その結果としてそれらの計算に用いる濃度値の精度に依存する。本研究では、正確な方法（ＧｒａｐｈＰａｄのソフトウェアによる反復曲線フィッティング）を用いることによって、いくつかの効果レベルでの各累積用量−応答曲線から薬物濃度を計算した。用量−応答曲線は、データに合わせることができ、これにより、わずかな用量依存活性も示すことができる。これは、高濃度の、試験薬剤のうちの１つの存在下で作成された用量−応答曲線を分析する場合、特に明白である。これらの条件下での用量−応答曲線からの薬物濃度の決定における誤差は、低効果レベル（ｆａ）で高ＣＩ値をもたらす場合がある。したがって、最大半量の効果付近又は最大半量の効果の上（即ち、ｆａ〜０．５）での明瞭な用量−応答曲線から生じるＣＩ値は、薬物組合せ物の活性の最も正確な予測判断材料である。これらの条件下で、１未満のＣＩ値は、超相加的であるとみなされ、１を大きく超える値は、亜相加的であるとみなされる。１付近の値は、相加的であるとみなされる。
【０２０６】
［０２５０］結果
［０２５１］本研究は、再狭窄に関係づけられる２つの細胞型である、ヒト冠動脈平滑筋細胞（ｈＣａＳＭＣ）及びヒト冠動脈内皮細胞（ｈＣａＥＣ）に対する、薬剤の活性に対処した。結果を図１０及び表１５に提供する。図１０は、タクロリムスが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの平滑筋細胞において、ゾタロリムスの抗増殖活性を遮断することを示す（図１０Ａ）。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの平滑筋細胞（図１０Ｂ）並びに内皮細胞（図１０Ｃ）における、ゾタロリムス、パクリタキセル（Ｐ）及び組合せ物の抗増殖活性も示す。図１０Ｄ〜Ｇは、平滑筋細胞における、組合せ物の抗増殖活性のアイソボログラム分析を示す。特定のレベルの抗増殖活性を生じさせる濃度は、データ平均値の非線形曲線フィッティングによって作成した用量−応答曲線から求めた。図１０Ｈ〜Ｋは、内皮細胞における、ゾタロリムスとパクリタキセルの組合せ物の抗増殖活性のアイソボログラム分析を示す。特定のレベルの活性を生じさせる化合物の濃度は、平均データから求めた。図１０Ｌ〜Ｍは、ｈＣａＳＭＣ及びｈＣａＥＣにおける、ＡＢＴ−５７８とパクリタキセルの組合せ物の抗増殖活性の併用指数（ＣＩ）分析を示す。ＣＩレベルは、Ｃｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙの方法（Ｃｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙ、１９８４）を用いて、平均データから求めた。
【０２０７】
［０２５２］それぞれの個々の薬剤単独からのデータは、ゾタロリムス及びパクリタキセルの両方は、それぞれの細胞型における増殖を、用量依存的に阻害することを示す。図１０Ｂ／Ｃは、ゾタロリムスによる増殖の阻害が、パクリタキセルによって遮断されないことを示す。パクリタキセル及びゾタロリムスの両方の濃度を増加させることにより、ｈＣａＥＣ及びｈＣａＳＭＣの増殖が、ほとんど完全に阻害される。これらのデータは、低効果レベル（即ち、≦５０％の増殖の阻害）では、パクリタキセルとゾタロリムスを組み合わせることの効果は、それらの個々の活性の合計によって予測されることを示す。この関係は、高レベルの阻害を除いて、ほとんどのレベルの阻害で当てはまる。高レベルの阻害では、抗増殖活性は、各薬剤単独の活性によって予測される抗増殖活性をわずかに上回る。ｈＣａＳＭＣデータの、アイソボログラム分析及びＣＩ分析の両方は、パクリタキセル（２．５ｎＭ）及びゾタロリムスを含む組合せ物は、高効果レベル（６０及び７５％）で、潜在的な超相加的抗増殖活性を示すことを示す。
【０２０８】
【表１７】
2009511195.tif 000025
【０２０９】
［０２５３］これらのデータは、パクリタキセルが、ゾタロリムスの抗増殖活性を遮断しないことを示す。さらに、高濃度のゾタロリムス及びパクリタキセルは、相乗的と思われる抗増殖活性を示す。
【０２１０】
［０２５４］実施例１０  有益な薬剤の溶出実験
［０２５５］ＰＣ１０３６でのステントの被覆
［０２５６］あらゆる実験の前に、被覆したステントを作製した。これらは、３．０ｍｍ×１５ｍｍの３１６Ｌ電解研磨ステンレス鋼のステントであった。それぞれのステントを、濾過した２０ｍｇ／ｍＬの、ホスホリルコリンポリマーＰＣ１０３６（Ｂｉｏｃｏｍｐａｔｉｂｌｅｓ  Ｌｔｄ．；Ｆａｒｎｈａｍ、Ｓｕｒｒｅｙ、ＵＫ）のエタノール（ＥｔＯＨ）溶液を用いて、スプレー被覆した。これらのステントを最初に空気乾燥させ、次いで７０℃で１６時間硬化させた。次いでそれらを＜２５ＫＧｙのγ線照射に出した。
【０２１１】
［０２５７］ステントへの治療物質の添加
［０２５８］これらの実験において、薬剤をステント上に添加し、溶出特性を調査した。一般に、手順は以下のようであった。複数のＰＣ被覆ステントに、各薬物組合せ物の溶液を添加した。薬物の溶液は、通常１００％のエタノール中に、２〜２０ｍｇ／ｍＬのゾタロリムス及び１．０〜７．０ｍｇ／ｍＬのパクリタキセルの範囲であり、この溶液に約〜１０％のＰＣ１０３６を加えることによって、被膜形成を増強した。２種薬物ステント及び単一薬物ステントの添加は、アイソレーターユニット（ｉｓｏｌａｔｏｒ  ｕｎｉｔ）内の単一パス（ｓｉｎｇｌｅ  ｐａｓｓ）スプレー装置での、適切な薬物のステントへのスプレー添加によって達成した。すべてのＤＥＳステントは、Ａｂｂｏｔｔ  ＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓのＴｒｉＭａｘｘ  Ｎ５構築物の１５ｍｍ×３．０ｍｍのステントから作製し、すべてのカテーテルは、Ｍｅｄｔｒｏｎｉｃ（Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ、ＭＮ）のＯＴＷ、１５ｍｍ×３．０ｍｍであった。各組合せのために作製した数は、溶出の加速、薬物添加含有量、不純物特性、及び動物有効性試験のための単位量を含んでいた。ステントは、薬物溶液を添加する前に計量した。エタノール中に適切な薬物（複数も）とＰＣ１０３６を９１：９の比で含有する溶液から、すべてのステントに、それらの目標とする薬物含有量までスプレー添加した。パクリタキセル：ゾタロリムスの組合せについては、１０μｇ／ｍｍのゾタロリムスと７μｇ／ｍｍのパクリタキセル、５μｇ／ｍｍのゾタロリムスと３．５μｇ／ｍｍのパクリタキセル、１０μｇ／ｍｍのゾタロリムスと１μｇ／ｍｍのパクリタキセル、７μｇ／ｍｍのパクリタキセル単独、及び１０μｇ／ｍｍのゾタロリムス単独で、ステントを作製した。添加したら、すべてのステントを、４０℃に設定した乾燥器において、開放したバイアル中で３０分間乾燥させ、計量して薬物の添加量を求めた。次いで薬物添加ステントを、１０ｍｇ／ｍｌのポリマーのエタノール溶液を用いてスプレーすることによって、５μｇ／ｍｍのＰＣ１０３６で上塗りした。
【０２１２】
［０２５９］上塗り後、ステントを、乾燥器中で７０℃で２時間硬化させた後、計量して上塗り層の重量を求めた。薬物を添加した後、ステントを、カテーテル上に取り付け、バルーン上に圧着した。次いでこのステントを、被膜及び物理的欠陥について視覚的に検査した。ステント／カテーテルをパッケージングフープ（ｐａｃｋａｇｉｎｇ  ｈｏｏｐ）中に挿入し、このステント／カテーテルをＴｙｖｅｋのポーチ中に入れた。このポーチを、Ｖｅｒｔｒｏｄ（Ｓａｎ  Ｒａｆａｅｌ、ＣＡ）Ｉｍｐｕｌｓｅ  Ｈｅａｔシーラーで密封した。ステント識別ラベルを、製品を含む密封領域の外側の、ポーチ正面の下隅に配置した。次いで製品を、製品詳細を貼った白色の箱に入れ、ＥｔＯ滅菌のために発送した。滅菌から戻されると、製品は、酸素捕捉剤及び乾燥剤の小袋を含むホイルポーチ中に梱包されていた。これらのポーチには、ステント識別番号及び製品詳細が貼られていた。これらのポーチは、窒素を流しながら密封された。
【０２１３】
［０２６０］ステントからの薬物の抽出
［０２６１］それぞれの薬物に対して、３つのステントを用いることによって、添加された薬物の全量を評価した。ステントを、６ｍＬの５０％アセトニトリル、５０％水溶液に浸漬し、２０分間超音波処理した。抽出溶液中の各薬物の濃度を、高圧液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）によって分析した。
【０２１４】
［０２６２］以下に考察する溶出実験の最後に、ステントを溶出媒体から取り出し、６ｍＬの５０％アセトニトリル、５０％水溶液に浸漬し、２０分間超音波処理した。これらのバイアル中の各薬物の濃度は、溶出実験の最後にステント上に残っている薬物の量を示した。
【０２１５】
［０２６３］溶出プロセス
［０２６４］ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの薬物溶出の評価のために、ステント（各群についてｎ＝３）を拡張し、次いでＵＳＰ  Ｔｙｐｅ  ＩＩ溶解装置中の、３７℃に加熱した、１％Ｓｏｌｕｔｏｌ  ＨＳ  １５（ＢＡＳＦ；Ｆｌｏｒｈａｍ  Ｐａｒｋ、ＮＹ）を含む１０ｍＭの酢酸緩衝液（ｐＨ＝４．０）の溶液中に入れた。薬物は非常に低い水溶性しか有さないので、可溶化剤が必要であった。溶解媒体を緩衝することによって、６を超えるｐＨで生じる、‘オリムス薬物の分解を最小限にした。ｐＨ４での緩衝作用は、この問題を解決する。これらの薬物は、こうしたｐＨ範囲で最小限の解離を有するので、ｐＨは、溶出速度にほとんど影響がないはずである。試料を、テフロン、ステンレス鋼、又はガラス表面のみを備えたシリンジサンプラーを用いて、選択した時間間隔に溶解槽から吸い上げた。１５分、３０分、１時間、２時間、４時間、６時間、８時間、１２時間及び２４時間後にアリコートを採取した。試料を、ＨＰＬＣによってゾタロリムス及びパクリタキセルの濃度についてアッセイした。データを、マイクログラムでの溶出した薬物及び溶出した平均百分率として表す。
【０２１６】
［０２６５］ＨＰＬＣ法において、カラム交換を用いることによって、分析カラムのＳｏｌｕｔｏｌ汚染を最小限にし、保護カラムのすすぎを可能にすることが必要であり、さもなければシステムはＳｏｌｕｔｏｌで被覆され、クロマトグラフィーの保持が劇的に変化する。試料は、保護カラム上に最初に注入した。分析物のピークが保護カラムから溶出し、分析カラムに移ると、保護カラムを分析経路からはずした。次いで保護カラムを洗浄することによって、次の注入の前にＳｏｌｕｔｏｌを除去した。
【０２１７】
［０２６６］結果
［０２６７］図１１〜１３は、上記に詳述したように、ポリマーＰＣ１０３６の５μｇ／ｍｍの上塗り層を有するステント上に、１０μｇ／ｍｍのゾタロリムスと７μｇ／ｍｍのパクリタキセル、５μｇ／ｍｍのゾタロリムスと３．５μｇ／ｍｍのパクリタキセル、１０μｇ／ｍｍのゾタロリムスと１μｇ／ｍｍのパクリタキセル、７μｇ／ｍｍのパクリタキセル単独、及び１０μｇ／ｍｍのゾタロリムス単独で、ゾタロリムス及びパクリタキセルを添加したステントの加速された溶出速度を示す。
【０２１８】
［０２６８］図１１では、１つの有益な薬剤がパクリタキセルであり、第２の有益な薬剤がゾタロリムスである場合の、２４時間溶出特性を示す。溶出は上述したように行った。パクリタキセル単一薬物ステントは、最初に大きなバースト放出（約６０％）、その後により遅い０次放出速度が続く、２つの放出特性の組合せを示したが、パクリタキセル及びゾタロリムスの両方を含む２種薬物ステントは、バースト放出を有さない。
【０２１９】
［０２６９］図１２は、図１１と同じデータを示すが、最終のステント抽出後、ステントに対して測定された全薬物によって規格化されている。図に示すように、１００％の両薬物が、ステントの被膜から回収されており、回収された全薬物は、薬物添加プロセスの間のステントの重量取込みによって予測された薬物添加量と良好に一致している。これらのデータは、同じバッチからのステントでの薬物効力及び関連物質試験とともに、薬物は、説明したように作製された場合、ポリマー被膜中で安定であったことを示す。小さな標準偏差は、２種薬物溶出ステントは、再現性のある溶出動態を伴って作製することができることを示す。
【０２２０】
［０２７０］図１３において、４つの曲線は、同じ条件下での、それぞれ単独及びパクリタキセルの存在下でのゾタロリムスについての溶出特性（マイクログラムでの放出対時間）である。図に示すように、単独又はパクリタキセルと組み合わせた、１０μｇ／ｍｍのゾタロリムスを含むステントに属する３つの曲線は、非常に類似している。これは、パクリタキセルは、ゾタロリムスの溶出特性にほとんど影響がないことを示す。第４の曲線（ＰＴＸ  ３．５及びゾタロリムス５）は、実際そうなるように、他のステントの半分の薬物を溶出すると予期される挙動を示した。
【０２２１】
［０２７１］実施例１１  ステント植込み後のｉｎ  ｖｉｖｏでの新生内膜形成
［０２７２］ブタ冠血管過剰拡張モデル研究（Ｓｃｈｗａｒｔｚ、１９９２）を行うことによって、新生内膜形成をステント植込み後２８日間調査した。研究により、対照のゾタロリムス添加（１０μｇ／ｍｍ；ＺｏＭａｘｘ（商標））ステントに対するいくつかの無作為化された薬物溶出ステントを評価した。予想外に、ステントで送達されるゾタロリムスとパクリタキセルの組合せ物は、非常に効果的であり、広く利用されているブタ冠血管過剰拡張モデルにおいて、新生内膜過形成の低減の改善を提供する。
【０２２２】
［０２７３］ブタ冠血管過剰拡張モデル研究（Ｓｃｈｗａｒｔｚ、１９９２）を行うことによって、ステント植込み後の新生内膜形成を２８日間調査した。研究により、対照のＺｏＭａｘｘ（商標）ステントに対するいくつかの無作為化された薬物溶出ステントを評価した。
【０２２３】
［０２７４］実験の構成体及び方法
［０２７５］各ブタにおいて、２つの主要冠動脈に、それぞれ１つの試験ステントを植え込み、第３の主要冠動脈には、１つのゾタロリムス（１０μｇ／ｍｍ又は１．６９μｇ／ｍｍ２）被覆ＺｏＭａｘｘ（商標）ステントを植え込んだ。さらに、比較のために、３頭のブタに、それぞれ３つの非薬物含有ＴｒｉＭａｘｘ（商標）ステント（Ａｂｂｏｔｔ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ；Ａｂｂｏｔｔ  Ｐａｒｋ、ＩＬ）（全部で９ステント）を植え込んだ。比較したステントには、ＺｏＭａｘｘ（商標）ステント（３．０×１５ｍｍ）、市販のシロリムス（８．５μｇ／ｍｍ又は１．４０μｇ／ｍｍ２）−ポリマー被覆Ｃｙｐｈｅｒ（登録商標）ステント（３．０×１３ｍｍ；Ｃｏｒｄｉｓ  Ｃｏｒｐ．；Ｍｉａｍｉ、ＦＬ）及びパクリタキセル−（６．８μｇ／ｍｍ又は１．０μｇ／ｍｍ２）ポリマー被覆Ｔａｘｕｓ（登録商標）ステント（３．０×１６ｍｍ；Ｂｏｓｔｏｎ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ；Ｎａｔｉｃｋ、ＭＡ）ステントが含まれていた。残りの群のステントは、３．０×１５ｍｍであった。Ｔａｘｕｓ（７μｇ／ｍｍ）と同じ薬物添加量を含むが、送達ビヒクルとしてＰＣ−１０３６を添加した、パクリタキセルステントを、研究に含めた（ＰＴＸ−７）。さらに、表１６に示すように、添加したゾタロリムス及びパクリタキセルの量の異なる、３組の組合せステントを被覆した。
【０２２４】
【表１８】
2009511195.tif 000026
【０２２５】
［０２７６］最後に、非薬物溶出ＴｒｉＭａｘｘステントを含めることによって、新生内膜形成のベースラインを識別した。
【０２２６】
［０２７７］ステントは、定量的冠血管造影によって求められた、１．３０のバルーン／動脈比で植え込んだ。この研究において、心臓又はステント関連の死亡はなかった。２８日後、動物を安楽死させ、心臓を取り出し、血液が除去されるまで乳酸加リンガー溶液で、続いて１０％中性緩衝化ホルマリンで、〜１００ｍｍＨｇで灌流固定した。次いでステント血管を切り取り、メタクリル酸メチル（ＭＭＡ）中に浸潤させ、包埋した。ステント血管を含むすべてのブロックを、３つのステント内切片と２つの対照切片が採取されるように切断した。２つの連続した薄い切片（約５ミクロン）を各レベルで採取し、ヘマトキシリンとエオシン（ＨＥ）及びＭａｓｓｏｎのＶｅｒｈｏｅｆｆ  Ｅｌａｓｔｉｎ（ＭＶＥ）で染色した。ＢＩＯＱＵＡＮＴ（商標）ＴＣＷ９８画像解析システムを用いて、切片を評価し、記録した。新生内膜面積、新生内膜厚、及び％面積狭窄についての、８群内のすべてのステントに対する平均値を図１４〜１６に示す。
【０２２７】
［０２７８］ＺｏＭａｘｘ（商標）、Ｃｙｐｈｅｒ（登録商標）、及びＴａｘｕｓ（登録商標）ステントは、ＴｒｉＭａｘｘ（商標）ステントと比較して、形態計測測定値で表した場合、新生内膜形成の統計学的に等価な低減を有した。１μｇ／ｍｍのパクリタキセル及び１０μｇ／ｍｍのゾタロリムスを含む組合せステント（ＰＴＸ／Ｚｏｔ  １／１０）は、ＴｒｉＭａｘｘ（商標）に対して新生内膜過形成の著しい低減を示した。さらに、ＰＴＸ／Ｚｏｔ  １／１０組合せステントは、ＺｏＭａｘｘ（商標）、Ｃｙｐｈｅｒ（登録商標）、及びＴａｘｕｓ（登録商標）ステントに対して、新生内膜の低減のさらなる改善も示した。表１７は、ＴｒｉＭａｘｘ（商標）に対して、ＺｏＭａｘｘ（商標）及びＰＴＸ／Ｚｏｔ  １／１０組合せ薬物ステントで得られた改善を要約している。
【０２２８】
［０２７９］それぞれの最新式の単一薬物ステント、ＺｏＭａｘｘ（商標）、Ｃｙｐｈｅｒ（登録商標）、及びＴａｘｕｓ（登録商標）は、ＴｒｉＭａｘｘ（商標）対照に対して、新生内膜形成の劇的な低減を示した。例えば、ＺｏＭａｘｘ（商標）ステントについての新生内膜の平均の低減は、対照に対して３４．５％であった。ＰＴＸ／Ｚｏｔ  １／１０組合せステントは、商業的に及び臨床試験で入手できる最良の単一薬物ステントで見られた既に印象的な結果に対して、新生内膜形成の低減のさらなる改善を生じた。ＰＴＸ／Ｚｏｔ  １／１０組合せ薬物溶出ステントは、ＴｒｉＭａｘｘ（商標）非薬物溶出ステントと比較した場合、４６．８％の新生内膜過形成の平均の低減を有した。ＺｏＭａｘｘ（商標）、Ｃｙｐｈｅｒ（登録商標）、及びＴａｘｕｓ（登録商標）と比較して、新生内膜の形成の追加の劇的な低減は、それぞれ１８．８、２１．７、及び２１．５％であった（表１８）。
【０２２９】
【表１９】
2009511195.tif 000027
【０２３０】
【表２０】
2009511195.tif 000028
【０２３１】
［０２８０］以前に公表されたデータ（Ｆａｌｏｔｉｃｏ、２００３；Ｓｕｚｕｋｉら、２００１）に基づくと、当業者は、‘ロリムス薬物の、第２の薬物との組合せにより、利点は提供されないと結論づけるだろう。予想外に、適切な組合せで送達される場合、パクリタキセルとゾタロリムスの組合せは、非常に効果的であり、広く利用されているブタ冠血管過剰拡張モデルにおける新生内膜過形成の低減の改善を提供する。図１７及び１８は、ゾタロリムス及びパクリタキセル（ＰＴＸ／Ｚｏｔ  １／１０）での本発明者らの結果と、シロリムス及びデキサメタゾンで以前に公表された結果（Ｆａｌｏｔｉｃｏ、２００３；Ｓｕｚｕｋｉら、２００１）との間の顕著な差異を示す。以前の実験は、組合せステントと単一薬物溶出ステントとの間で利点を示さなかった。同じ過剰拡張比でのブタモデルにおいて、ＢＸ  Ｖｅｌｏｃｉｔｙ（登録商標）に対して、対照のＴｒｉＭａｘｘ（商標）において劇的な改善を伴っていても、本発明者らの組合せ製品は、対照より相当に良好でもあり、単一薬物溶出ステント、ＺｏＭａｘｘ（商標）より統計的に、相当に有意に良好でもあった。
【０２３２】
［０２８１］７μｇ／ｍｍのパクリタキセル及び１０μｇ／ｍｍのゾタロリムスで被覆したステント（ＰＴＸ／Ｚｏｔ  ７／１０）は、ＺｏＭａｘｘステントに対して、新生内膜形成の統計学的に等価な低減を有した（図１４〜１６）。したがって、パクリタキセル誘導体と‘ロリムス薬物の理想的な比は、重量で、７：１０と０．１：１０の間であり、１／１０に等しい最も好ましい比を含む。３．５μｇ／ｍｍのパクリタキセル及び５μｇ／ｍｍのゾタロリムス（ＰＴＸ／Ｚｏｔ  ３．５：５）への全薬物用量の低減は、非薬物溶出ＴｒｉＭａｘｘステントと等価な、最適以下の性能をもたらした（図１４〜１６）。したがって、パクリタキセル誘導体及び‘オリムス薬物の最適な全用量は、パクリタキセル誘導体と‘オリムス薬物の比が７：１０に近づく場合、１５ｍｍのステント上で約１５０μｇを下回るべきではない。
【０２３３】
［０２８２］実施例１２  （予言的）臨床適用
［０２８３］１つの抗増殖剤を送達するステントの導入及び引き続く普及した使用により、一般の臨床集団において、再狭窄率が１０％未満に低減された。しかし、再狭窄率及び有害臨床事象をさらにいっそう低減するために、一般の臨床集団における、及び様々な心血管疾患サブセットからの両方の患者を治療するための、ステントからの適切な薬物組合せ物の送達に対する、明白な理論的根拠が存在する。例えば、ステント術を受けた糖尿病患者において、その疾患のない患者と比較した場合、再狭窄の割合が著しく増加し、ステント術に対する炎症応答が、糖尿病患者及び非糖尿病患者の両方において存在することが、十分に認められている（Ａｇｇａｒｗａｌら、２００３）。さらに、炎症は、不安定狭心症、非ＳＴセグメント上昇心筋梗塞、並びに持続性ＳＴセグメント上昇に関係する梗塞を含めた、急性心筋虚血状態の範囲を定義する用語である、急性冠症候群（ＡＣＳ）を有する患者における特徴である。これらの患者は、多くの場合、ステント配備の最も重要な候補であり、経皮的介入（ＰＣＩ）を受けている一般の患者集団と比べて、著しく高い割合の再発性虚血、再梗塞、及び引き続く反復ＰＣＩ処置の必要性を有する。最後に、肥満症は、多くの場合、炎症促進状態及び内皮障害と関係がある。両状態は、冠血管ステント配置後の早期再狭窄の独立した予測判断材料であることが知られている。実際に、肥満症、脂肪細胞によるインターロイキン−６（ＩＬ−６）産生、及び冠動脈疾患との間の関連について、症例が作成されてきており、この炎症性サイトカインの上昇とこのサブセットの患者におけるＣＡＤの発症との間の関連を示している（Ｙｕｄｋｉｎら、２０００）。
【０２３４】
［０２８４］糖尿病患者は、非糖尿病患者より高いレベルの炎症性マーカー、ｃ反応性タンパク質（ＣＲＰ）を示すことが知られている（Ａｇｇａｒｗａｌら、２００３；Ｄａｎｄｏｎａ及びＡｌｊａｄａ、２００２）。このタンパク質は、冠動脈疾患を有する患者における、重要な炎症メディエーターとして明白に同定されてきており、重症の不安定狭心症を有する患者における有害事象の予測判断材料である（Ｂｉｏｎｄｉ−Ｚｏｃｃａｉら、２００３）。ＣＲＰは、ヒト内皮細胞による単球走化性タンパク質（ＭＣＰ−１）の産生を刺激することが知られている。このメディエーターの放出は、単球の流入を伴い、これらの細胞は活性化され、内皮下の空間に移動し、そこでそれらが酸化低密度リポタンパク質（ＬＤＬ）を含有する泡沫細胞を形成するので、顕著な炎症状態をもたらす。血漿ＩＬ−６及び腫瘍壊死因子−α（ＴＮＦ−α）は、肥満患者において、及び２型糖尿病においても上昇させられる炎症性サイトカインである。実際、高感度ＣＲＰ、ＩＬ−６又は血清血管細胞接着分子−１（ＶＣＡＭ−１）の上昇は、冠動脈疾患を有する患者における死亡率の増加と関係づけられた（Ｒｏｆｆｉ及びＴｏｐｏｌ、２００４）。再狭窄プロセスの特徴である新生内膜形成は、炎症によって強調されることが示されてきたので、薬剤の、パクリタキセルやゾタロリムスなどの、抗炎症活性物質及び抗増殖活性物質との組合せ物を、局所血管環境に送達するステントの使用は、糖尿病患者において明白な有用性を有することが期待されるだろう。
【０２３５】
［０２８５］アテローム性プラークの破壊は、急性冠症候群の開始に対して重要である（Ｇｒｅｃｈ及びＲａｍｓｄａｌｅ、２００３）。プラーク破壊は、泡沫細胞によって分泌される基質メタロプロテイナーゼの濃度の増加によって誘発される場合があり、プラークの不安定性及び発症中の病変部の上に覆い被さる、薄い繊維性キャップの決定的な破壊に導く。さらに、泡沫細胞の表面に発現される組織因子は、凝固因子ＶＩＩを活性化し、これは、トロンビンの形成を導く。このタンパク質の産生は、血小板活性化及び凝集、並びにフィブリノーゲンのフィブリンへの変換、及び血栓の明らかな形成をまねく。この設定におけるステントの配置に関する最初の懸念は、根拠のないように思われるが、これは、ステント配置及び技術の改善により、ステント術を受けた患者は、再発性虚血、再梗塞、及び反復血管形成術の必要性がより少ないことが示されたためである（Ｇｒｅｃｈ及びＲａｍｓｄａｌｅ、２００３）。炎症と冠動脈病変の発症との間の密接な関係は、薬剤の、パクリタキセルやゾタロリムスなどの、抗炎症活性物質及び抗増殖活性物質との組合せ物を、局所血管環境に送達するステントの使用を、そのような患者を治療するための魅力的な手法にする。
【０２３６】
［０２８６］本明細書で説明したステントは、冠動脈中の狭窄病変による虚血性心疾患と診断される患者において、及び再発性冠血管疾患及び他の有害臨床事象に対して高いリスクのある臨床集団のサブセットにおいて採用される。介入についての他の標的には、表層大腿動脈、腎動脈、腸骨、及び膝より下の血管における狭窄などの末梢血管疾患が含まれる。介入処置のための標的血管は、大腿動脈又は橈骨動脈のいずれかを経由した経皮血管アクセスを用いて到達され、ガイドカテーテルが血管中に挿入される。次いで標的病変部は、ガイドワイヤーで横断され、バルーンカテーテルが、ワイヤーによって、又は迅速交換システムを用いて挿入される。医師は、オンラインの定量的冠血管造影（ＱＣＡ）によって、又は視覚的な推定によって、植え込まれるステントの適切なサイズを決定する。ステントは、そのステントのコンプライアンスによって示される、適切な圧力を用いて配置され、次いで処置後の血管造影図を得ることができる。処置が完了すると、患者は、狭心症状態について、及び任意の有害事象の存在について定期的にモニターされる。反復処置の必要性も評価される。
【０２３７】
［０２８７］前述の詳述した説明及び付随する実施例は、単に例示的であり、添付の特許請求の範囲及びそれらの均等物によって専ら定義される、本発明の範囲に対する限定として受け取られないことが理解される。開示した実施形態に対する様々な変更及び改変は、当業者にとって明らかとなろう。制限なく、化学構造、置換基、誘導体、中間体、合成、製剤及び／又は本発明の使用方法に関連するものを含めた、そのような変更及び改変は、それらの精神及び範囲から逸脱することなく行うことができる。
【０２３８】
参考文献
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Ｆａｉｌｌｉ．  ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ５，１７７，２０３．  １９９３．  Ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ４２−Ｓｕｌｆｏｎａｔｅｓ  ａｎｄ  ４２−（Ｎ−Ｃａｒｂｏａｌｋｏｘｙ）  Ｓｕｌｆａｍａｔｅｓ  Ｕｓｅｆｕｌ  ａｓ  Ｉｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｅ  Ａｇｅｎｔｓ．
Ｆａｌｏｔｉｃｏ，  Ｒ．  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．  ＵＳ  ２００３／０２１６６９９．  ２００３．  Ｃｏａｔｅｄ  ｍｅｄｉｃａｌ  ｄｅｖｉｃｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｄｉｓｅａｓｅ．
Ｆｒｅｔｚ，  Ｈ．，  Ｍ．  Ａｌｂｅｒｓ，  Ａ．  Ｇａｌａ，  Ｒ．  Ｓｔａｎｄａｅｒｔ，  Ｗ．  Ｌａｎｅ，  Ｓ．  Ｂｕｒａｋｏｆｆ，  Ｂ．  Ｂｉｅｒｅｒ，  ａｎｄ  Ｓ．  Ｓｃｈｒｅｉｂｅｒ．  １９９１．  Ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ａｎｄ  ＦＫ５０６  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ  （ｉｍｍｕｎｏｐｈｉｌｉｎｓ）．  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １１３：１４０９−１４１１．
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Ｏｋｕｈａｒａ，  Ｍ．，  Ｔ．  Ｈｉｒｏｋａｚｕ，  Ｇ．  Ｔｏｓｈｉｏ，  Ｋ．  Ｔｏｈｒｕ，  ａｎｄ  Ｈ．  Ｈｉｒｏｓｈｉ．  ＥＰ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ０１８４１６２．  １９８６．  Ｔｒｉｃｙｃｌｏ  ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ，  ａ  ｐｒｏｃｅｓｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅｉｒ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ａ  ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓａｍｅ．
Ｏｒ，  Ｙ．，  Ｊ．  Ｌｕｌｙ，  ａｎｄ  Ｒ．  Ｗａｇｎｅｒ．  ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ５，５２７，９０７．  １９９６．  Ｍａｃｒｏｌｉｄｅ  ｉｍｍｕｎｏｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ．
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Ｒｏｃｈｅ，  Ｅ．  １９８７．  Ｂｉｏｒｅｖｅｒｓｉｂｌｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｓｉｇｎ．  Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｅｒｇａｍｏｎ  Ｐｒｅｓｓ．
Ｒｏｆｆｉ，  Ｍ．，  ａｎｄ  Ｅ．Ｊ．  Ｔｏｐｏｌ．  ２００４．  Ｐｅｒｃｕｔａｎｅｏｕｓ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ  ｉｎ  ｄｉａｂｅｔｉｃ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｎｏｎ−ＳＴ−ｓｅｇｍｅｎｔ  ｅｌｅｖａｔｉｏｎ  ａｃｕｔｅ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ｓｙｎｄｒｏｍｅｓ．  Ｅｕｒ  Ｈｅａｒｔ  Ｊ．  ２５：１９０−８．
Ｒｏｍｏ，  Ｄ．，  Ｓ．  Ｍｅｙｅｒ，  Ｄ．  Ｊｏｈｓｎｏｎ，  ａｎｄ  Ｓ．  Ｓｃｈｒｉｅｂｅｒ．  １９９３．  Ｔｏｔａｌ  ｓｙｎｔｈｅｓｉｓ  ｏｆ  （−）−ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ｕｓｉｎｇ  ａｎ  Ｅｖａｎｓ−Ｔｉｓｈｃｈｅｎｋｏ  ｆｒａｇｍｅｎｔ  ｃｏｕｐｌｉｎｇ．  Ｊ．  Ａｍ．  Ｃｈｅｍ．  Ｓｏｃ．  １１５：７９０６−７９０７．
Ｓａｂａｔｉｎｉ，  Ｄ．Ｍ．，  Ｈ．  Ｅｒｄｊｕｍｅｎｔ−Ｂｒｏｍａｇｅ，  Ｍ．  Ｌｕｉ，  Ｐ．  Ｔｅｍｐｓｔ，  ａｎｄ  Ｓ．Ｈ．  Ｓｎｙｄｅｒ．  １９９４．  ＲＡＦＴ１：  ａ  ｍａｍｍａｌｉａｎ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｔｈａｔ  ｂｉｎｄｓ  ｔｏ  ＦＫＢＰ１２  ｉｎ  ａ  ｒａｐａｍｙｃｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｆａｓｈｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｓ  ｈｏｍｏｌｏｇｏｕｓ  ｔｏ  ｙｅａｓｔ  ＴＯＲｓ．  Ｃｅｌｌ．  ７８：３５−４３．
Ｓｃｈｉｆｆ，  Ｐ．Ｂ．，  ａｎｄ  Ｓ．Ｂ．  Ｈｏｒｗｉｔｚ．  １９８０．  Ｔａｘｏｌ  ｓｔａｂｉｌｉｚｅｓ  ｍｉｃｒｏｔｕｂｕｌｅｓ  ｉｎ  ｍｏｕｓｅ  ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｃｅｌｌｓ．  Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ．  ７７：１５６１−５．
Ｓｃｈｗａｒｔｚ，  Ｒ．  １９９２．  Ｒｅｓｔｅｎｏｓｉｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  ｐｒｏｐｏｒｔｉｏｎａｌ  ｎｅｏｉｎｔｉｍａｌ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｃｏｒｏｎａｒｙ  ａｒｔｅｒｙ  ｉｎｊｕｒｙ：  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｉｎ  ａ  ｐｏｒｃｉｎｅ  ｍｏｄｅｌ．  Ｊ  Ａｍ  Ｃｏｌｌ  Ｃａｒｄｉｏｌ．  １９：２６７−２７４．
Ｓｅｈｇａｌ，  Ｓ．Ｎ．  ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ３，９２９，９９２．  １９７５．  Ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  ｏｆ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ．
Ｓｅｈｇａｌ，  Ｓ．Ｎ．  ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ３，９９３，７４９．  １９７６．  Ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ａｎｄ  Ｐｒｏｃｅｓｓ  ｏｆ  Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ．
Ｓｅｈｇａｌ，  Ｓ．Ｎ．  １９９８．  Ｒａｐａｍｕｎｅ  （ＲＡＰＡ，  ｒａｐａｍｙｃｉｎ，  ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ）：  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ  ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓｉｖｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｆｒｏｍ  ｂｌｏｃｋａｄｅ  ｏｆ  ｓｉｇｎａｌ  ｔｒａｎｓｄｕｃｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｅｌｌ  ｃｙｃｌｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ．  Ｃｌｉｎ  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ３１：３３５−４０．
Ｓｅｈｇａｌ，  Ｓ．Ｎ．  ２００３．  Ｓｉｒｏｌｉｍｕｓ：  ｉｔｓ  ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，  ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ，  ａｎｄ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍ  ｏｆ  ａｃｔｉｏｎ．  Ｔｒａｎｓｐｌａｎｔ  Ｐｒｏｃ．  ３５：７Ｓ−１４Ｓ．
Ｓｅｈｇａｌ，  Ｓ．Ｎ．，  Ｈ．  Ｂａｋｅｒ，  Ｃ．Ｐ．  Ｅｎｇ，  Ｋ．  Ｓｉｎｇｈ，  ａｎｄ  Ｃ．  Ｖｅｚｉｎａ．  １９８３．  Ｄｅｍｅｔｈｏｘｙｒａｐａｍｙｃｉｎ  （ＡＹ−２４，６６８），  ａ  ｎｅｗ  ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ．  Ｊ  Ａｎｔｉｂｉｏｔ  （Ｔｏｋｙｏ）．  ３６：３５１−４．
Ｓｅｈｇａｌ，  Ｓ．Ｎ．，  Ｈ．  Ｂａｋｅｒ，  ａｎｄ  Ｃ．  Ｖｅｚｉｎａ．  １９７５．  Ｒａｐａｍｙｃｉｎ  （ＡＹ−２２，９８９），  ａ  ｎｅｗ  ａｎｔｉｆｕｎｇａｌ  ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃ．  ＩＩ．  Ｆｅｒｍｅｎｔａｔｉｏｎ，  ｉｓｏｌａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ．  Ｊ  Ａｎｔｉｂｉｏｔ  （Ｔｏｋｙｏ）．  ２８：７２７−３２．
Ｓｈｉｃｈｉｒｉ，  Ｍ．，  Ｙ．  Ｈｉｒａｔａ，  Ｔ．  Ｎａｋａｊｉｍａ，  Ｋ．  Ａｎｄｏ，  Ｔ．  Ｉｍａｉ，  Ｍ．  Ｙａｎａｇｉｓａｗａ，  Ｔ．  Ｍａｓａｋｉ，  ａｎｄ  Ｆ．  Ｍａｒｕｍｏ．  １９９１．  Ｅｎｄｏｔｈｅｌｉｎ−１  ｉｓ  ａｎ  ａｕｔｏｃｒｉｎｅ／ｐａｒａｃｒｉｎｅ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｆｏｒ  ｈｕｍａｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｉｎｖｅｓｔ．  ８７：１８６７−７１．
Ｓｉｅｋｉｅｒｋａ，  Ｊ．Ｊ．，  Ｓ．Ｈ．  Ｈｕｎｇ，  Ｍ．  Ｐｏｅ，  Ｃ．Ｓ．  Ｌｉｎ，  ａｎｄ  Ｎ．Ｈ．  Ｓｉｇａｌ．  １９８９．  Ａ  ｃｙｔｏｓｏｌｉｃ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｉｍｍｕｎｏｓｕｐｐｒｅｓｓａｎｔ  ＦＫ５０６  ｈａｓ  ｐｅｐｔｉｄｙｌ−ｐｒｏｌｙｌ  ｉｓｏｍｅｒａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｂｕｔ  ｉｓ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ｆｒｏｍ  ｃｙｃｌｏｐｈｉｌｉｎ．  Ｎａｔｕｒｅ，  ３４１：７５５−７．
Ｓｋｏｔｎｉｃｋｉ，  Ｊ．  Ｓ．，  Ｃ．  Ｌ．  Ｌｅｏｎｅ，  ａｎｄ  Ｇ．  Ｓｃｈｉｅｈｓｅｒ，  ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ５，３６２，７１８．  １９９４．  Ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ｈｙｄｒｏｘｙｅｓｔｅｒｓ．
Ｓｔａｃｋ，  Ｒ．，  Ｈ．  Ｃｌａｒｋ，  Ｗ．  Ｗｌａｋｅｒ，  ａｎｄ  Ｊ．  ＭｃＥｌｈａｎｅｙ．  ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ５，５２７，３３７．  １９９６．  Ｂｉｏａｂｓｏｒｂａｂｌｅ  ｓｔｅｎｔ  ａｎｄ  ｍｅｔｈｏｄ  ｏｆ  ｍａｋｉｎｇ  ｔｈｅ  ｓａｍｅ．
Ｓｔｅｌｌａ．  ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ４，６５０，８０３．  １９８７．  Ｐｒｏｄｒｕｇｓ  ｏｆ  Ｒａｐａｍｙｃｉｎ．
Ｓｕｒｅｎｄｒａ．  ＵＳ  Ｐａｔｅｎｔ  Ｎｏ．  ４，８８５，１７１．  １９８９．  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｒａｐａｍｙｃｉｎ  ｉｎ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｃｅｒｔａｉｎ  Ｔｕｍｏｒｓ．
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【図面の簡単な説明】
【０２３９】
【図１】サルに投薬されたテトラゾール含有ラパマイシン類似体の血中濃度±標準誤差（ｎ＝３）を示す。
【図２】本発明での使用に適したステントを示す、立面側面図（ｓｉｄｅ  ｖｉｅｗ  ｉｎ  ｅｌｅｖａｔｉｏｎ）である。
【図３Ａ】ポリマーのみで被覆されたステントが配置された血管セグメントの断面図である。
【図３Ｂ】ポリマーと薬物で被覆されたステントが配置された血管セグメントの断面図である。
【図４】ヒトにおけるゾタロリムスの単回段階的増加静脈内投与に対する、線形目盛での平均血中濃度−時間のプロットを示す。
【図５】ヒトにおけるゾタロリムスの単回段階的増加静脈内投与後の、対数−線形目盛での平均血中濃度−時間のプロットを示す。
【図６】ヒトにおける単回段階的増加静脈内用量後の、ゾタロリムスのＣｍａｘ及びＡＵＣパラメータの用量比例関係を示す。
【図７】ヒトにおける複数回静脈内投与後の、ゾタロリムスの平均血中濃度−時間のプロットを示す。
【図８Ａ】第１日（図８ａ）、第１４日（図８ｂ）、及び第１〜１４日（図８ｃ）の、２００、４００及び８００μｇＱＤ（毎日）投与群についての、平均ゾタロリムス血中濃度−時間特性を示す。
【図８Ｂ】第１日（図８ａ）、第１４日（図８ｂ）、及び第１〜１４日（図８ｃ）の、２００、４００及び８００μｇＱＤ（毎日）投与群についての、平均ゾタロリムス血中濃度−時間特性を示す。
【図８Ｃ】第１日（図８ａ）、第１４日（図８ｂ）、及び第１〜１４日（図８ｃ）の、２００、４００及び８００μｇＱＤ（毎日）投与群についての、平均ゾタロリムス血中濃度−時間特性を示す。
【図９】８００μｇＱＤ投与群についての、第１日から第１４日にわたる、観察されたゾタロリムス濃度−時間のデータを示す。
【図１０Ａ】タクロリムスが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの平滑筋細胞において、ゾタロリムスの抗増殖活性を遮断することを示す（図１０Ａ）。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの平滑筋細胞（図１０Ｂ）並びに内皮細胞（図１０Ｃ）における、ゾタロリムス、パクリタキセル（Ｐ）及び組合せ物の抗増殖活性も示す。増殖は、測定することによって判定した。データは、指摘したものを除いて、３実験の平均±標準誤差である。
【図１０Ｂ】タクロリムスが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの平滑筋細胞において、ゾタロリムスの抗増殖活性を遮断することを示す（図１０Ａ）。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの平滑筋細胞（図１０Ｂ）並びに内皮細胞（図１０Ｃ）における、ゾタロリムス、パクリタキセル（Ｐ）及び組合せ物の抗増殖活性も示す。増殖は、測定することによって判定した。データは、指摘したものを除いて、３実験の平均±標準誤差である。
【図１０Ｃ】タクロリムスが、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの平滑筋細胞において、ゾタロリムスの抗増殖活性を遮断することを示す（図１０Ａ）。ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの平滑筋細胞（図１０Ｂ）並びに内皮細胞（図１０Ｃ）における、ゾタロリムス、パクリタキセル（Ｐ）及び組合せ物の抗増殖活性も示す。増殖は、測定することによって判定した。データは、指摘したものを除いて、３実験の平均±標準誤差である。
【図１０Ｄ】図１０Ｄ〜Ｇは、平滑筋細胞における、組合せ物の抗増殖活性のアイソボログラム分析を示す。特定のレベルの抗増殖活性を生じさせる濃度は、データ平均値の非線形曲線フィッティングによって作成した用量−応答曲線から求めた。
【図１０Ｅ】図１０Ｄ〜Ｇは、平滑筋細胞における、組合せ物の抗増殖活性のアイソボログラム分析を示す。特定のレベルの抗増殖活性を生じさせる濃度は、データ平均値の非線形曲線フィッティングによって作成した用量−応答曲線から求めた。
【図１０Ｆ】図１０Ｄ〜Ｇは、平滑筋細胞における、組合せ物の抗増殖活性のアイソボログラム分析を示す。特定のレベルの抗増殖活性を生じさせる濃度は、データ平均値の非線形曲線フィッティングによって作成した用量−応答曲線から求めた。
【図１０Ｇ】図１０Ｄ〜Ｇは、平滑筋細胞における、組合せ物の抗増殖活性のアイソボログラム分析を示す。特定のレベルの抗増殖活性を生じさせる濃度は、データ平均値の非線形曲線フィッティングによって作成した用量−応答曲線から求めた。
【図１０Ｈ】図１０Ｈ〜Ｋは、内皮細胞における、ゾタロリムスとパクリタキセルの組合せ物の抗増殖活性のアイソボログラム分析を示す。特定のレベルの活性を生じさせる化合物の濃度は、平均データから求めた。
【図１０Ｉ】図１０Ｈ〜Ｋは、内皮細胞における、ゾタロリムスとパクリタキセルの組合せ物の抗増殖活性のアイソボログラム分析を示す。特定のレベルの活性を生じさせる化合物の濃度は、平均データから求めた。
【図１０Ｊ】図１０Ｈ〜Ｋは、内皮細胞における、ゾタロリムスとパクリタキセルの組合せ物の抗増殖活性のアイソボログラム分析を示す。特定のレベルの活性を生じさせる化合物の濃度は、平均データから求めた。
【図１０Ｋ】図１０Ｈ〜Ｋは、内皮細胞における、ゾタロリムスとパクリタキセルの組合せ物の抗増殖活性のアイソボログラム分析を示す。特定のレベルの活性を生じさせる化合物の濃度は、平均データから求めた。
【図１０Ｌ】図１０Ｌ〜Ｍは、ｈＣａＳＭＣ及びｈＣａＥＣにおける、ＡＢＴ−５７８とパクリタキセルの組合せ物の抗増殖活性の併用指数（ＣＩ）分析を示す。ＣＩレベルは、Ｃｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙの方法（Ｃｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙ、１９８４）を用いて、平均データから求めた。
【図１０Ｍ】図１０Ｌ〜Ｍは、ｈＣａＳＭＣ及びｈＣａＥＣにおける、ＡＢＴ−５７８とパクリタキセルの組合せ物の抗増殖活性の併用指数（ＣＩ）分析を示す。ＣＩレベルは、Ｃｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙの方法（Ｃｈｏｕ及びＴａｌａｌａｙ、１９８４）を用いて、平均データから求めた。
【図１１】パクリタキセル（７μｇ／ｍｍ）単独、パクリタキセル（７μｇ／ｍｍ）とゾタロリムス（１０μｇ／ｍｍ）；パクリタキセル（３．５μｇ／ｍｍ）とゾタロリムス（５μｇ／ｍｍ）；又はパクリタキセル（１μｇ／ｍｍ）とゾタロリムス（１０μｇ／ｍｍ）を添加したステントからのパクリタキセルの放出を示す。
【図１２】パクリタキセル（７μｇ／ｍｍ）単独、パクリタキセル（７μｇ／ｍｍ）とゾタロリムス（１０μｇ／ｍｍ）；パクリタキセル（３．５μｇ／ｍｍ）とゾタロリムス（５μｇ／ｍｍ）；又はパクリタキセル（１μｇ／ｍｍ）とゾタロリムス（１０μｇ／ｍｍ）を添加したステントからのパクリタキセルの放出率を示す。
【図１３】ゾタロリムス（１０μｇ／ｍｍ）単独、パクリタキセル（７μｇ／ｍｍ）とゾタロリムス（１０μｇ／ｍｍ）；パクリタキセル（３．５μｇ／ｍｍ）とゾタロリムス（５μｇ／ｍｍ）；又はパクリタキセル（１μｇ／ｍｍ）とゾタロリムス（１０μｇ／ｍｍ）を添加したステントからのゾタロリムスの放出を示す。
【図１４】薬物溶出（単一及び複数）ステント及び非薬物溶出ステントの、ブタの血管における植込み２８日後の新生内膜面積（３０％過剰拡張）を示し、四角で囲んだ数値は、１群当たりのステントの数を示す。
【図１５】薬物溶出（単一及び複数）ステント及び非薬物溶出ステントの、ブタの血管における植込み２８日後の新生内膜厚（３０％過剰拡張）を示し、四角で囲んだ数値は、１群当たりのステントの数を示す。
【図１６】薬物溶出（単一及び複数）ステント及び非薬物溶出ステントの、ブタの血管における植込み２８日後の面積狭窄率（３０％過剰拡張）を示し、四角で囲んだ数値は、１群当たりのステントの数を示す。
【図１】
2009511195.tif 000029
【図２】
2009511195.tif 000030
【図３Ａ】
2009511195.tif 000031
【図３Ｂ】
2009511195.tif 000032
【図４】
2009511195.tif 000033
【図５】
2009511195.tif 000034
【図６】
2009511195.tif 000035
【図７】
2009511195.tif 000036
【図８Ａ】
2009511195.tif 000037
【図８Ｂ】
2009511195.tif 000038
【図８Ｃ】
2009511195.tif 000039
【図９】
2009511195.tif 000040
【図１０Ａ】
2009511195.tif 000041
【図１０Ｂ】
2009511195.tif 000042
【図１０Ｃ】
2009511195.tif 000043
【図１０Ｄ】
2009511195.tif 000044
【図１０Ｅ】
2009511195.tif 000045
【図１０Ｆ】
2009511195.tif 000046
【図１０Ｇ】
2009511195.tif 000047
【図１０Ｈ】
2009511195.tif 000048
【図１０Ｉ】
2009511195.tif 000049
【図１０Ｊ】
2009511195.tif 000050
【図１０Ｋ】
2009511195.tif 000051
【図１０Ｌ】
2009511195.tif 000052
【図１０Ｍ】
2009511195.tif 000053
【図１１】
2009511195.tif 000054
【図１２】
2009511195.tif 000055
【図１３】
2009511195.tif 000056
【図１４】
2009511195.tif 000057
【図１５】
2009511195.tif 000058
【図１６】
2009511195.tif 000059
【手続補正書】
【提出日】平成20年11月6日(2008.11.6)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００７９
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００７９】
【化３】
2009511195.tif 000060
の化合物である。
【手続補正２】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】００８１
【補正方法】変更
【補正の内容】
【００８１】
【化４】
2009511195.tif 000061
の化合物である。
【国際調査報告】
2009511195.tif 000062
2009511195.tif 000063