(57)【要約】  本発明はトリフルオロメチル置換ベンズアミド化合物およびその塩を含む本発明化合物、並びに同化合物を含有してなる、Ｅph受容体関連(例えば、神経性)傷害および障害の処置における医薬組成物に関する。また、本発明は有効量の本発明化合物を細胞または対象に投与することにより、細胞中のＥph受容体の活性を調節し、神経再生を刺激し、またニューロン変性を回復させることに関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
Ｅph受容体関連傷害または障害の処置方法であって、式(Ｉ)：
【化１】
2009543801.tif 000037
[式中、
Ｒ１は、水素または−Ｎ(Ｒ６Ｒ７)であり、ここで、Ｒ６およびＲ７のそれぞれがアルキルであるか、またはＲ６およびＲ７が、それらが結合する窒素と一体となって、５員ないし７員のヘテロ環状環を形成し、そこでのさらなる環原子が炭素および０、１もしくは２個の窒素、酸素および硫黄から選択されるヘテロ原子から選択され、その環は未置換であるか、またはさらなる窒素環原子が存在する場合には未置換であるか、もしくは当該窒素においてアルキルにより置換されており；
Ｒ２は、水素または−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ６Ｒ７)であり、ここで、Ｒ６およびＲ７のそれぞれがアルキルであるか、またはＲ６およびＲ７が、それらが結合する窒素と一体となって、５員ないし７員のヘテロ環状環を形成し、そこでのさらなる環原子が炭素および０、１もしくは２個の窒素、酸素および硫黄から選択されるヘテロ原子から選択され、その環は未置換であるか、またはさらなる窒素環原子が存在する場合には未置換であるか、もしくは当該窒素においてアルキルにより置換されている；
ただし、Ｒ１およびＲ２の少なくとも一方は水素であり；
Ｒ３は、ハロまたはＣ１−Ｃ７−アルキルであり；
Ｒ４は：
【化２】
2009543801.tif 000038
以下からなる群より選択される二環式ヘテロシクリルであり、
ここで、
Ｘは、ＣＨ、ＮまたはＣ−ＮＨ２であり；
Ｙは、ＣＨまたはＮである；
ただし、ＸおよびＹは共に同時にはＮではなく；そして
Ｒ５は、水素、Ｃ１−Ｃ７−アルキルまたは未置換もしくは置換フェニルであり；
Ａは、−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＨ−(−ＮＨ−で式(Ｉ)においてＱおよびＺを含んでなる環に結合する)または−ＮＨ−Ｃ(＝Ｏ)−(−Ｃ(＝Ｏ)−で式(Ｉ)においてＱおよびＺを含んでなる環に結合する)であり；
Ｚは、ＣＨまたはＮであり；また
Ｑは、−Ｓ−または−ＣＨ＝ＣＨ−である。]
で示される化合物、または１個以上の塩形成基が存在する場合にはその塩を、かかる処置の必要な温血動物、とりわけヒトに投与することを含む、方法。
【請求項２】
さらに、式(Ｉ)において、Ｑが−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、ＡおよびＺが請求項１で定義したとおりである化合物、または(好ましくは、医薬的に許容される)その塩を投与することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項３】
さらに、式(Ｉ)において、Ａが−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＨ−(式(Ｉ)におけるＱおよびＺからなる環に結合する−ＮＨ−をもつ)であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、ＱおよびＺが請求項１で定義したとおりである化合物、または(好ましくは、医薬的に許容される)その塩を投与することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項４】
さらに、式(Ｉ)において、Ｒ１およびＲ２の一方が水素であり、他が：
【化３】
2009543801.tif 000039
[式中、「Ａlk」はアルキル、好ましくは、低級アルキル、より好ましくは、メチルまたはエチルであり；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ａ、ＱおよびＺは請求項１で定義したとおりである。]
からなる群より選択される基である化合物または(好ましくは、医薬的に許容される)その塩を投与することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項５】
さらに、式(Ｉ)において、
Ｒ１およびＲ２のそれぞれが水素であり；
Ｒ３がＣ１−Ｃ７アルキル、特にメチルであり；
Ｒ４が：
【化４】
2009543801.tif 000040
からなる群より選択される二環式ヘテロシクリルであり
ここで、
ＸはＣＨ、ＮまたはＣ−ＮＨ２であり；
ＹはＣＨまたはＮである；
ただし、ＸおよびＹの両方が同時にＮであることはなく；
そして、Ｒ５は水素、Ｃ１−Ｃ７アルキルまたはフェニルであり；
(ここで、Ｒ４は、好ましくは
【化５】
2009543801.tif 000041
の基である)
Ａが、−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＨ−(−ＮＨ−で式(Ｉ)においてＱおよびＺを含んでなる環に結合する)または−ＮＨ−Ｃ(＝Ｏ)−(−Ｃ(＝Ｏ)−で式(Ｉ)においてＱおよびＺを含んでなる環に結合する)であり；
ＺがＣＨであり；そして
Ｑが−ＣＨ＝ＣＨ−である；
化合物または(好ましくは、医薬的に許容される)その塩を投与することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項６】
さらに：
Ｎ−(３−イソキノリン−７−イル−４−メチル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド、
Ｎ−(４−メチル−３−キナゾリン−６−イル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド、
３−イソキノリン−７−イル−４−メチル−Ｎ−(３−トリフルオロメチル−フェニル)−ベンズアミド、
４−メチル−３−キナゾリン−６−イル−Ｎ−(３−トリフルオロメチル−フェニル)−ベンズアミド、
Ｎ−(３−ベンゾチアゾール−６−イル−４−メチル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド、
３−ベンゾチアゾール−６−イル−４−メチル−Ｎ−(３−トリフルオロメチル−フェニル)−ベンズアミド、
Ｎ−(４−メチル−３−フタラジン−６−イル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド、
４−メチル−３−フタラジン−６−イル−Ｎ−(３−トリフルオロメチル−フェニル)−ベンズアミド、
Ｎ−(３−ベンゾチアゾール−５−イル−４−メチル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド、および
３−ベンゾチアゾール−５−イル−４−メチル−Ｎ−(３−トリフルオロメチルフェニル)ベンズアミド
からなる群より選択される式(Ｉ)で示される化合物または１個以上の塩形成基が存在する場合には、医薬的に許容されるその塩を投与することを含む、請求項１記載の方法。
【請求項７】
さらに、化合物１〜１０の群から選択される化合物を含んでなる、請求項１記載の方法。
【請求項８】
処置すべき疾患が神経変性疾患である、請求項１記載の方法。
【請求項９】
Ｅph受容体関連傷害または障害が、四肢麻痺、片麻痺、および対麻痺である、請求項１記載の方法。
【請求項１０】
四肢麻痺、片麻痺、および対麻痺が、傷害または外傷を原因とするものである、請求項９記載の方法。
【請求項１１】
四肢麻痺、片麻痺、および対麻痺が、遺伝病を原因とするものである、請求項９記載の方法。
【請求項１２】
処置すべき傷害が脊髄傷害であるか、またはそれに起因するものである、請求項１記載の方法。
【請求項１３】
処置すべき傷害が脳卒中などの脳梗塞に起因するものである、請求項１記載の方法。
【請求項１４】
Ｅph受容体関連傷害または障害の処置方法であって、式(Ｉ)：
【化６】
2009543801.tif 000042
[式中、
Ｒ１は、水素または−Ｎ(Ｒ６Ｒ７)であり、ここで、Ｒ６およびＲ７のそれぞれがアルキルであるか、またはＲ６およびＲ７が、それらが結合する窒素と一体となって、５員ないし７員のヘテロ環状環を形成し、そこでのさらなる環原子が炭素および０、１もしくは２個の窒素、酸素および硫黄から選択されるヘテロ原子から選択され、その環は未置換であるか、またはさらなる窒素環原子が存在する場合には未置換であるか、もしくは当該窒素においてアルキルにより置換されており；
Ｒ２は、水素または−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ６Ｒ７)であり、ここで、Ｒ６およびＲ７のそれぞれがアルキルであるか、またはＲ６およびＲ７が、それらが結合する窒素と一体となって、５員ないし７員のヘテロ環状環を形成し、そこでのさらなる環原子が炭素および０、１もしくは２個の窒素、酸素および硫黄から選択されるヘテロ原子から選択され、その環は未置換であるか、またはさらなる窒素環原子が存在する場合には未置換であるか、もしくは当該窒素においてアルキルにより置換されている；
ただし、Ｒ１およびＲ２の少なくとも一方は水素であり；
Ｒ３は、ハロまたはＣ１−Ｃ７−アルキルであり；
Ｒ４は：
【化７】
2009543801.tif 000043
からなる群より選択される二環式ヘテロシクリルであり、
ここで、
Ｘは、ＣＨ、ＮまたはＣ−ＮＨ２であり；
Ｙは、ＣＨまたはＮである；
ただし、ＸおよびＹは共に同時にはＮではなく；そして
Ｒ５は、水素、Ｃ１−Ｃ７−アルキルまたは未置換もしくは置換フェニルであり；
Ａは、−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＨ−(−ＮＨ−で式(Ｉ)においてＱおよびＺを含んでなる環に結合する)または−ＮＨ−Ｃ(＝Ｏ)−(−Ｃ(＝Ｏ)−で式(Ｉ)においてＱおよびＺを含んでなる環に結合する)であり；
Ｚは、ＣＨまたはＮであり；そして
Ｑは、−Ｓ−または−ＣＨ＝ＣＨ−である。]
(または１個以上の塩形成基が存在する場合にはその塩)
で示される化合物、または医薬的に許容されるその塩、および医薬的に許容される担体を含有してなる医薬組成物を、かかる処置を必要とする温血動物、とりわけヒトに投与することを含む、方法。
【請求項１５】
さらに、式(Ｉ)において、Ｑが−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、ＡおよびＺが請求項１４で定義したとおりである化合物、または医薬的に許容されるその塩を投与することを含む、請求項１４記載の方法。
【請求項１６】
さらに、式(Ｉ)において、Ａが−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＨ−(式(Ｉ)におけるＱおよびＺからなる環に結合する−ＮＨ−をもつ)であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、ＱおよびＺが請求項１４で定義したとおりである化合物、または医薬的に許容されるその塩を投与することを含む、請求項１４記載の方法。
【請求項１７】
さらに、式(Ｉ)において、Ｒ１およびＲ２の一方が水素であり、他が：
【化８】
2009543801.tif 000044
[式中、「Ａlk」はアルキル、好ましくは、低級アルキル、より好ましくは、メチルまたはエチルであり；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ａ、ＱおよびＺは請求項１で定義したとおりである。]
からなる群より選択される基である化合物または医薬的に許容されるその塩を投与することを含む、請求項１４記載の方法。
【請求項１８】
さらに
Ｒ１およびＲ２のそれぞれが水素であり；
Ｒ３がＣ１−Ｃ７アルキル、特にメチルであり；
Ｒ４が以下からなる群より選択される二環式ヘテロシクリルであり：
【化９】
2009543801.tif 000045
ここで、
ＸはＣＨ、ＮまたはＣ−ＮＨ２であり；
ＹはＣＨまたはＮであり；
ただし、ＸおよびＹの両方が同時にＮであることはない；
また、Ｒ５は水素、Ｃ１−Ｃ７アルキルまたはフェニルであり；
(ここで、Ｒ４は、好ましくは、
【化１０】
2009543801.tif 000046
の基である)
Ａが、−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＨ−(−ＮＨ−で式(Ｉ)においてＱおよびＺを含んでなる環に結合する)または−ＮＨ−Ｃ(＝Ｏ)−(−Ｃ(＝Ｏ)−で式(Ｉ)においてＱおよびＺを含んでなる環に結合する)であり；
ＺがＣＨであり；また
Ｑが−ＣＨ＝ＣＨ−である；
式(Ｉ)の化合物、または１個以上の塩形成基が存在する場合には医薬的に許容されるその塩を投与することを含む、請求項１４記載の方法。
【請求項１９】
さらに：
Ｎ−(３−イソキノリン−７−イル−４−メチル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド、
Ｎ−(４−メチル−３−キナゾリン−６−イル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド、
３−イソキノリン−７−イル−４−メチル−Ｎ−(３−トリフルオロメチル−フェニル)−ベンズアミド、
４−メチル−３−キナゾリン−６−イル−Ｎ−(３−トリフルオロメチル−フェニル)−ベンズアミド、
Ｎ−(３−ベンゾチアゾール−６−イル−４−メチル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド、
３−ベンゾチアゾール−６−イル−４−メチル−Ｎ−(３−トリフルオロメチル−フェニル)−ベンズアミド、
Ｎ−(４−メチル−３−フタラジン−６−イル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド、
４−メチル−３−フタラジン−６−イル−Ｎ−(３−トリフルオロメチル−フェニル)−ベンズアミド、
Ｎ−(３−ベンゾチアゾール−５−イル−４−メチル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド、および
３−ベンゾチアゾール−５−イル−４−メチル−Ｎ−(３−トリフルオロメチルフェニル)ベンズアミド
化合物からなる群より選択される式(Ｉ)で示される化合物または１個以上の塩形成基が存在する場合には、医薬的に許容されるその塩を投与することを含む、請求項１４記載の方法。
【請求項２０】
さらに、化合物１〜１０の群から選択される化合物を含んでなる、請求項１４記載の方法。
【請求項２１】
処置すべき疾患が神経変性疾患である、請求項２０記載の方法。
【請求項２２】
Ｅph受容体関連傷害または障害が、四肢麻痺、片麻痺、および対麻痺である、請求項２０記載の方法。
【請求項２３】
四肢麻痺、片麻痺、および対麻痺が、傷害または外傷を原因とするものである、請求項２２記載の方法。
【請求項２４】
四肢麻痺、片麻痺、および対麻痺が、遺伝病を原因とするものである、請求項２２記載の方法。
【請求項２５】
処置すべき傷害が脊髄傷害であるか、またはそれに起因するものである、請求項２０記載の方法。
【請求項２６】
処置すべき傷害が脳卒中などの脳梗塞に起因するものである、請求項２０記載の方法。
【請求項２７】
神経再生を刺激するか、またはニューロン変性を回復させるか、またはその両方の方法であって、式(Ｉ)：
【化１１】
2009543801.tif 000047
[式中、
Ｒ１は、水素または−Ｎ(Ｒ６Ｒ７)であり、ここで、Ｒ６およびＲ７のそれぞれがアルキルであるか、またはＲ６およびＲ７が、それらが結合する窒素と一体となって、５員ないし７員のヘテロ環状環を形成し、そこでのさらなる環原子が炭素および０、１もしくは２個の窒素、酸素および硫黄から選択されるヘテロ原子から選択され、その環は未置換であるか、またはさらなる窒素環原子が存在する場合には未置換であるか、もしくは当該窒素においてアルキルにより置換されており；
Ｒ２は、水素または−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ６Ｒ７)であり、ここで、Ｒ６およびＲ７のそれぞれがアルキルであるか、またはＲ６およびＲ７が、それらが結合する窒素と一体となって、５員ないし７員のヘテロ環状環を形成し、そこでのさらなる環原子が炭素および０、１もしくは２個の窒素、酸素および硫黄から選択されるヘテロ原子から選択され、その環は未置換であるか、またはさらなる窒素環原子が存在する場合には未置換であるか、もしくは当該窒素においてアルキルにより置換されている；
ただし、Ｒ１およびＲ２の少なくとも一方は水素であり；
Ｒ３は、ハロまたはＣ１−Ｃ７−アルキルであり；
Ｒ４は：
【化１２】
2009543801.tif 000048
からなる群より選択される二環式ヘテロシクリルであり、
ここで、
Ｘは、ＣＨ、ＮまたはＣ−ＮＨ２であり；
Ｙは、ＣＨまたはＮである；
ただし、ＸおよびＹは共に同時にはＮではなく；そして
Ｒ５は、水素、Ｃ１−Ｃ７−アルキルまたは未置換もしくは置換フェニルであり；
Ａは、−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＨ−(−ＮＨ−で式(Ｉ)においてＱおよびＺを含んでなる環に結合する)または−ＮＨ−Ｃ(＝Ｏ)−(−Ｃ(＝Ｏ)−で式(Ｉ)においてＱおよびＺを含んでなる環に結合する)であり；
Ｚは、ＣＨまたはＮであり；そして
Ｑは、−Ｓ−または−ＣＨ＝ＣＨ−である。]
で示される化合物、または１個以上の塩形成基が存在する場合にはその塩を温血動物、とりわけヒトに投与することを特徴とする方法。
【請求項２８】
該温血動物がニューロン傷害に罹患しているものである、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
該温血動物が神経障害に罹患しているものである、請求項２７記載の方法。
【請求項３０】
該温血動物が遺伝病を原因とする四肢麻痺、片麻痺、および対麻痺に罹患しているものである、請求項２７記載の方法。
【請求項３１】
該温血動物が脊髄傷害に罹患しているものである、請求項２７記載の方法。
【請求項３２】
該温血動物が脳卒中などの脳梗塞を経験しているものである、請求項２７記載の方法。
【請求項３３】
式(Ｉ)で示される化合物を、併用療法において、ミエリン・阻害剤ノゴ(Nogo)、ミエリン関連糖タンパク質(ＭＡＧ)、または乏突起神経膠細胞−ミエリン糖タンパク質ＯＭgpを遮断し得る薬剤と組合わせる請求項１記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
成体哺乳動物中枢神経系(ＣＮＳ)に対する傷害は、多くの場合、切断された軸索がその目標に向かって再成長するのを不能とし、その結果、当該傷害を受けた対象を永久に麻痺させる軸索損傷を特徴とする。現在、脊髄傷害(ＳＣＩ)などのＣＮＳ関連外傷を有する患者にとっての治療法は存在せず、この傷害は頻繁に、対麻痺または四肢麻痺など、身体を衰弱させる臨床症状を伴う。
【背景技術】
【０００２】
軸索再生(例えば、傷害後の)は、成体ＣＮＳにおける多くの阻害の影響、とりわけ、阻害性ミエリンタンパク質および神経膠瘢痕形成などにより妨害される。ミエリン阻害と関連する分子(例えば、ノゴ(Nogo)、ミエリン関連糖タンパク質(ＭＡＧ)、および乏突起神経膠細胞−ミエリン糖タンパク質(ＯＭgp))の同定は相当進歩しているが、傷害に対するグリア細胞の応答として形成される神経膠瘢痕については、余り知られていない。(GrandPre, T., et al. (2000) Nature, 403(6768): 439; Fournier, A.E. et al. (2001) Nature 409(6818): 341; Wang, K.C., et al. (2002) Nature 417(6892): 941; および Wang, K.C., et al. (2002) Nature 420(6911): 74)。神経膠の瘢痕は星状細胞グリオーシスを特徴とし、その場合、通常、休止した星状細胞が傷害に応答して増殖して肥大成長し、また別の場合には、軸索再生に対して物理的および化学的障壁を形成する。(Silver, J., et al. (2004) Nat Rev Neurosci 5(2): 146; および Morgenstern, D.A., et al. (2002) Prog Brain Res. 137: 313)。様々なグリア細胞は瘢痕形成に寄与するが、星状細胞応答(すなわち、星状細胞グリオーシス)は、この出現の主要なメカニズムであると考えられる。
【０００３】
Ｅph受容体チロシンキナーゼ・サブファミリーは、膜透過受容体チロシンキナーゼの最大のサブファミリーであると考えられ、そのリガンドであるエフリンとともに、神経発生に際しての適当な細胞の移動と位置づけを、恐らく細胞間の反発を調節することで、制御する役割を担っている。(Pasquale, E. (1997) Curr. Opin. Cell Biol. 9:608-615)(Orioli and Klein (1997) Trends in Genetics 13:354-359)。Ｅph受容体は密接に関係し合って、それらのエフリンリガンドに結合したときに、活発にシグナルを送り(それらの作用は細胞−細胞間接触により仲介される)、その結果として、それらは前方および双方向にシグナルを伝達することができる。(Murai, K.K., et al. (2003) J Cell Sci. 116: 2823)。
【０００４】
Ｅph受容体は既知の神経発育制御因子であり、その役割は、移動する細胞または軸索の制御、発達する脳の個別の領域における組織パターンと組織分布的地図の確立、およびシナプス形成と可塑性の制御にある。Ｅph受容体は、ＥphＡ４およびＥphＡ７を含め、脊髄傷害または輸入路切断後に上方制御される。(Miranda, et al. (1999) Exp Neurol 156:218; Willson, et al. (2002) Cell Transplantation 11:229)；それ故、それらの阻害は神経障害の処置にとっての有力な治療戦略と見做される。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
脊髄損傷から生じる合併症の治癒または軽減に向かう重要なステップが、ＳＣＩの複雑かつ多因子の性質のために、欠けていた。ミエリン阻害因子(GrandPre, T., et al. (2002) Nature 417(6888): 547; Kim, J.E., et al. (2003) Neuron 38(2): 187)、硫酸コンドロイチンプロテオグリカン(Bradbury, E.J., et al. (2002) Nature 416 (6881): 636)またはこれらの両方の下流のシグナル伝達分子(Fournier, A.E., et al. (2003) J Neurosci. 23(4): 1416; および Sivasankaran, R., et al. (2004) Nat Neurosci. 7(3): 261)のいずれかを遮断することにより、ＳＣＩ後の回復を評価するために、インビボの研究がなされたが、その成果はわずかなものであった。しかし、Ｅph受容体を実験的に阻害すると、傷害後に相当に軸索が再生され、星状細胞グリオーシスが抑制されることをも明らかにし、この阻害が神経膠の瘢痕を劇的に低下させ、軸索傷害とグリオーシスに至らしめる脊髄損傷と脳卒中に対し、これら受容体が理想的な治療目標となることを明らかにした。従って、Ｅph受容体機能を遮断するように設計した戦略と治療薬は、ＣＮＳ関連障害の処置を有意に進歩させ、また恐らく、ＳＣＩ、脳卒中および他の神経変性障害などの神経傷害後の回復を大きく改善させる可能性があろう。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明はＥph受容体関連(例えば、神経性)傷害および障害の処置のために、本発明化合物を使用する方法、およびＥph受容体関連(例えば、神経性)傷害および障害の処置における本発明化合物を含有してなる医薬製剤の使用方法に関する。
【０００７】
本発明はまた細胞におけるＥph受容体の活性を調節する方法であって、該細胞を有効量の本発明化合物と接触させることによる方法に関する。特定の実施態様において、Ｅph受容体はインビトロまたはインビボ両方で調節し得る。
【０００８】
本発明は神経再生を刺激し、促進する方法(脊髄損傷後の軸索再生など)、および外傷による損傷、低酸素症状、または梗塞による神経変性(例えば、多発性硬化症および他の神経変性疾患において内在する原因である脳卒中または神経変性におけるように)を回復させる方法に関する。これを達成し得る一方法は神経再生(軸索再生など)を刺激し、促進するか、またはニューロン変性を回復させるために十分な量の本発明化合物を哺乳動物に投与することを介することである。本発明化合物は正常のおよび傷害を受けた細胞双方に送達し得る。一部の実施態様において、本発明化合物はＥph受容体のリン酸化を阻害する。他の実施態様において、本発明化合物はエフリンリガンドがＥph受容体に結合するのを阻害する。
【０００９】
本発明はまた本発明の化合物に連結した治療剤(例えば、結合剤(linking reagent))を含んでなる接合体を経由するなど、細胞に治療薬を送達する方法に関する。
【００１０】
本明細書に記載する場合、また国際特許公開ＷＯ０６／０１５８５９号明細書(その内容を参照により本明細書の一部とする)において、本発明化合物、例えば、トリフルオロメチル置換ベンズアミド化合物は、とりわけ、プロテインキナーゼ阻害剤として有用であり、従って、プロテインキナーゼ関連障害の処置に有用である。一例として、本発明化合物はエフリン受容体キナーゼ阻害剤などの受容体チロシンキナーゼ阻害剤として有用であり、それ故、例えば、神経傷害および障害の処置に使用し得る。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
【図１】図１はＥphＡ４リガンド依存性リン酸化の阻害を示す(ＥphＡ４免疫沈降に付し、次いでホスホ−チロシン・ウエスタンブロットに付したサンプルから)。図１のレーン１および２は、対照(未処理)および血清飢餓後のエフェリンＢ３−Ｆc刺激細胞におけるＥphＡ４リン酸化を示す。他のレーンはすべて試験したＥph阻害剤の多様な濃度(示したとおり)の存在下、エフェリンＢ３−Ｆcで刺激した細胞からのサンプルを表わす。
【図２】図２は実験的に決定した神経突起発芽後成長阻害のグラフ表示を示す。Ｙ軸は平均神経突起の長さをミクロンで示す。棒グラフは左から右へ、ミエリン、ＰＤＬ、および本発明の試験化合物を表わす。
【図３】図３Ａおよび３Ｂは、Ｅph受容体がサイトカイン(ＴＧＦ−α、ＬＩＦ、およびＩＦＮ)で誘導した星状細胞の移動を遮断することの実験的決定の写真およびグラフ表示をそれぞれ示す。図３Ａは、左から右へ、無血清、サイトカイン、およびサイトカインと化合物３をそれぞれ表わす。図３Ｂにおいて、Ｙ軸は対照(無血清＝１)に比較した細胞移動の相対面積を示す。左から右へ、棒グラフは、無血清、サイトカイン、およびサイトカインと１０ｎＭの化合物３を表わす。
【図４】図４は、Ｅph受容体阻害剤がマウスの脳(脳ホモジネート溶解液をＥphＡ４免疫沈降に、次いでホスホ−チロシン・ウエスタンブロットに付した)においてインビボでＥphＡ４リン酸化を遮断することを示している。動物に関連化合物を静脈内投与し、投与から２５分後または１時間後(０.２５時間または１時間)に殺し、その脳を取り出し、ＥphＡ４免疫沈降に、次いでホスホ−チロシン・ウエスタンブロットに付した。動物４匹を対照として使用し、動物３匹は各薬物について時点ごとに使用した。化合物３は上から２番目に示す。
【発明を実施するための形態】
【００１２】
本発明は特に、式(Ｉ)：
【化１】
2009543801.tif 000002
[式中、
Ｒ１は、水素または−Ｎ(Ｒ６Ｒ７)であり、ここで、Ｒ６およびＲ７のそれぞれがアルキルであるか、またはＲ６およびＲ７が、それらが結合する窒素と一体となって、５員ないし７員のヘテロ環状環を形成し、そこでのさらなる環原子が炭素および０、１もしくは２個の窒素、酸素および硫黄から選択されるヘテロ原子から選択され、その環は未置換であるか、またはさらなる窒素環原子が存在する場合には未置換であるか、もしくは当該窒素においてアルキルにより置換されており；
Ｒ２は、水素または−ＣＨ２−Ｎ(Ｒ６Ｒ７)であり、ここで、Ｒ６およびＲ７のそれぞれがアルキルであるか、またはＲ６およびＲ７が、それらが結合する窒素と一体となって、５員ないし７員のヘテロ環状環を形成し、そこでのさらなる環原子が炭素および０、１もしくは２個の窒素、酸素および硫黄から選択されるヘテロ原子から選択され、その環は未置換であるか、またはさらなる窒素環原子が存在する場合には未置換であるか、もしくは当該窒素においてアルキルにより置換されている；
ただし、Ｒ１およびＲ２の少なくとも一方は水素であり；
Ｒ３は、ハロまたはＣ１−Ｃ７−アルキルである；
【００１３】
Ｒ４は：
【化２】
2009543801.tif 000003
からなる群より選択される二環式ヘテロシクリルであり、
ここで、
Ｘは、ＣＨ、ＮまたはＣ−ＮＨ２であり；
Ｙは、ＣＨまたはＮである；
ただし、ＸおよびＹは共に同時にはＮではなく；
そして、Ｒ５は、水素、Ｃ１−Ｃ７−アルキルまたは未置換もしくは置換フェニルであり；
Ａは、−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＨ−(−ＮＨ−で式(Ｉ)においてＱおよびＺを含んでなる環に結合する)または−ＮＨ−Ｃ(＝Ｏ)−(−Ｃ(＝Ｏ)−で式(Ｉ)においてＱおよびＺを含んでなる環に結合する)であり；
Ｚは、ＣＨまたはＮであり；そして
Ｑは、−Ｓ−または−ＣＨ＝ＣＨ−である。]
で示されるトリフルオロメチル置換ベンズアミド化合物に、または１個以上の塩形成基が存在する場合には、(好ましくは、医薬的に許容される)その塩に関する。
【００１４】
本発明の好適な実施態様において、本発明化合物は以下からなる群より選択される：Ｎ−(３−イソキノリン−７−イル−４−メチル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド(“化合物１”)、Ｎ−(４−メチル−３−キナゾリン−６−イル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド(“化合物２”)、３−イソキノリン−７−イル−４−メチル−Ｎ−(３−トリフルオロメチル−フェニル)−ベンズアミド(“化合物３”)、４−メチル−３−キナゾリン−６−イル−Ｎ−(３−トリフルオロメチル−フェニル)−ベンズアミド(“化合物４”)、Ｎ−(３−ベンゾチアゾール−６−イル−４−メチル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド(“化合物５”)、３−ベンゾチアゾール−６−イル−４−メチル−Ｎ−(３−トリフルオロメチル−フェニル)−ベンズアミド(“化合物６”)、Ｎ−(４−メチル−３−フタラジン−６−イル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド(“化合物７”)、４−メチル−３−フタラジン−６−イル−Ｎ−(３−トリフルオロメチル−フェニル)−ベンズアミド(“化合物８”)、Ｎ−(３−ベンゾチアゾール−５−イル−４−メチル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド(“化合物９”)、および３−ベンゾチアゾール−５−イル−４−メチル−Ｎ−(３−トリフルオロメチルフェニル)ベンズアミド(“化合物１０”)。
【００１５】
本発明の実施態様において、本発明化合物はＥph受容体関連(例えば、神経的)傷害および障害の処置方法に使用する。
【００１６】
本発明の別の実施態様において、本発明化合物から調製される医薬組成物は、Ｅph受容体関連(例えば、神経的)傷害および障害の処置方法に使用する。該医薬組成物は、好ましくは、本発明化合物と医薬的に許容される担体とを含有してなる。担体は本明細書で詳述する。
【００１７】
本発明の別の実施態様において、本発明化合物は、細胞中でのＥph受容体の活性を調節するために、細胞に接触させ使用する。細胞はそこに含まれるＥph受容体を調節するために、本発明化合物の有効量と、インビトロまたはインビボで接触させ得る。
【００１８】
本発明のさらに別の実施態様において、本発明化合物は、神経再生(軸索再生など)を刺激し、促進する方法、および外傷性損傷、脳卒中、多発性硬化症および神経変性疾患によるニューロン変性を回復させる方法に使用する。これを達成し得る一方法は、神経再生(軸索再生など)を刺激し、促進するか、またはニューロン変性を回復させるために十分な量の本発明化合物を哺乳動物に投与することを介することである。本発明化合物は正常のおよび傷害を受けた細胞双方に送達し得る。一部の実施態様において、本発明化合物はＥph受容体のリン酸化を阻害する。他の実施態様において、本発明化合物はエフリンリガンドがＥph受容体に結合するのを阻害する。
【００１９】
本発明のなおさらに別の実施態様において、本発明化合物は治療薬を細胞に送達する方法に使用するが、その方法は本発明化合物に結合した当該治療薬を含んでなる接合体を経由する。本明細書により詳細に記載するように、該治療薬は結合剤であり得る。
【００２０】
定義
本明細書において前記および後記で使用する一般的用語または記号は、特に断りのない限り、本開示の文脈内で以下の意味を有する。
【００２１】
本明細書にて使用する場合、「Ｅph受容体」は、Ｅphファミリーに属する受容体チロシンキナーゼを意味し、例えば、ＥphＡ２、ＥphＡ４、ＥphＡ５、ＥphＡ７、ＥphＢ２およびＥphＢ４などである。本ファミリーは文献、例えば、Pasquale, E. (1997) Curr. Opin. Cell Biol. 9:608-615; and Orioli and Klein (1997) Trends in Genetics 13:354-359、に概説がある。
【００２２】
「Ｅph受容体関連傷害および障害」とは、神経傷害および障害であり、例えば、限定されるものではないが、脊髄損傷(ＳＣＩ)；四肢麻痺、片麻痺、および対麻痺、例えば、傷害を原因とする形態および遺伝性形態；末梢神経障害；およびＣＮＳ関連障害(例えば、細菌性およびウイルス性髄膜炎)である。
【００２３】
「Ｅph受容体関連傷害および障害」はまた、低酸素症状から、または脳卒中におけるなどの梗塞から生じる神経変性をも含む。この症状は、多くの部分で、傷害を受けた軸索が再生し得ず、またシナプスの再組織化を受け得ないことによる、行動、感覚および認識機能の欠損に至り得る。ＳＣＩでのように、脳卒中はグリア瘢痕の形成に続いて梗塞部位で起こるが、ＥphＡ４の阻害(例えば、本発明化合物でのように)が瘢痕形成を阻害し、その結果、接続の再生と再組織化を改善し得る。星状細胞−海馬ニューロン同時培養による脳卒中のインビトロモデルは、星状細胞ギャップ−接合間が低酸素ストレス後のニューロンの生存にとって非常に重要であることを示した。(Blanc, E.M., et al. (1998) J Neurochem, 70(3): 958)。Ｅph受容体はギャップ−接合でのシグナル伝達に関与していることが知られているので、このことは虚血性脳卒中においてＥphＡ４のもう一つの有力な関係を提示している(Mellitzer, G., et al. (1999) Nature, 400(6739): 77)。
【００２４】
本明細書にて使用する場合、用語「処置」とは、予防的または防止的処置、並びに治療的または疾患抑制的処置の両方を包含し、神経学的障害の危険性のある患者、並びに病気の、および傷害を受けた患者の処置も含む。この用語はさらに疾患進行遅延のための処置をも含む。
【００２５】
以下の略号は、実施例を含み、それに限定されない本明細書において共通に使用される用語(括弧内)を表わすために使用する：ＤＭＳＯ(ジメチルスルホキシド)；ＥＳ−ＭＳ(電子スプレー質量スペクトル法)；ＥｔＯＡｃ(酢酸エチル)；ＨＰＬＣ(高速液体クロマトグラフィー)；ｍＬ(ミリリットル)；ＮＭＲ(核磁気共鳴)；ＲＴ(室温)；ＡｔＲＥＴ(分でのＨＰＬＣ保持時間；方法Ａ)；ＢｔＲＥＴ(分でのＨＰＬＣ保持時間；方法Ｂ)；ＣｔＲＥＴ(分でのＨＰＬＣ保持時間；方法Ｃ)；ＤｔＲＥＴ(分でのＨＰＬＣ保持時間；方法Ｄ)；ＴＦＡ(トリフルオロ酢酸)；ＴＨＦ(テトラヒドロフラン)；ＴＭＳＣＩ(塩化トリメチルシリル)。
【００２６】
結合に垂直な波線を使用する各事例において、このものは所定の部分が相当する分子の残りの部分に結合している結合をマークするものである。
【００２７】
「低級」または「Ｃ１−Ｃ７−」という用語は、最大７個を含む７個までの、特に、最大４個を含む４個までの炭素原子を有する部分と定義し、当該部分は分枝鎖または直鎖である。低級またはＣ１−Ｃ７−アルキルとは、例えば、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシルもしくはｎ−ヘプチル、または好ましくは、Ｃ１−Ｃ４−アルキル、とりわけ、メチル、エチル、ｎ−プロピル、sec−プロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、sec−ブチル、tert−ブチルである。
【００２８】
未置換または置換フェニルは、未置換であるか、または１個以上の、好ましくは１個もしくは２個の置換基が置換しており、その場合の置換基は、以下の官能基のいずれか１個以上から独立して選択される：ハロ、低級アルキル、ハロ低級アルキルなどの置換低級アルキル(例えば、トリフルオロメチル)、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルカノイル、低級アルコキシ、ヒドロキシ、エーテル化もしくはエステル化ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−置換アミノ(例えば、モノ−もしくはジ−低級アルキルアミノ)、アミノ低級アルコキシ；低級アルカノイルアミノ；アミジノ、ニトロ、シアノ、シアノ−低級アルキル、カルボキシ、エステル化カルボキシ、とりわけ、低級アルコキシカルボニル(例えば、メトキシカルボニル、ｎ−プロポキシカルボニル、またはイソプロポキシカルボニル)、低級アルカノイル、ベンゾイル、カルバモイル、Ｎ−モノ−もしくはＮ,Ｎ−ジ置換カルバモイル(例えば、Ｎ−モノ−もしくはＮ,Ｎ−ジ−低級アルキルカルバモイルまたはＮ−モノ−もしくはＮ,Ｎ−ジ−(ヒドロキシ−低級アルキル)−カルバモイル)、アミジノ、グアニジノ、ウレイド、メルカプト、スルホ、低級アルキルチオ、スルホンアミド、ベンゾスルホンアミド、スルホノ、フェニル、フェニル−低級アルキル(例えば、ベンジル)、フェノキシ、フェニル−低級アルコキシ(例えば、ベンジルオキシ)、フェニルチオ、フェニル−低級アルキルチオ、低級アルキル−フェニルチオ、低級アルキル−スルフィニル、フェニルスルフィニル、フェニル−低級アルキルスルフィニル、アルキルフェニル−スルフィニル、低級アルカンスルホニル、フェニルスルホニル、フェニル−低級アルキルスルホニル、アルキルフェニルスルホニル、ハロゲン−低級アルキルメルカプト、ハロゲン−低級アルキルスルホニル(例えば、トリフルオロメタンスルホニル)、ジヒドロキシボラ(−Ｂ(ＯＨ)２)、環の隣接するＣ−原子で結合する低級アルキレンジオキシ(例えば、メチレンジオキシ)、ホスホノ(−Ｐ(＝Ｏ)(ＯＨ)２)、ヒドロキシ−低級アルコキシホスホリルまたはジ−低級アルコキシホスホリル、または−ＮＲａＲｂ(ここで、ＲａおよびＲｂは同一または異なって、独立してＨ、低級アルキル(例えば、メチル、エチルまたはプロピル)であるか、またはＲａおよびＲｂがＮ原子と一体になって、１〜４個の窒素、酸素もしくは硫黄原子を含む３員ないし８員のヘテロ環状環(例えば、ピペラジニル、低級アルキル−ピペラジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジノ、モルホリニル、イミダゾリニル)を形成する。
【００２９】
本明細書にて使用する場合、「本発明化合物」はトリフルオロメチル置換ベンズアミドを含む式(Ｉ)で示される化合物である。本発明化合物はまた「化合物(番号)」として本明細書に引用した化合物をもいう。番号を付した化合物のさらなる定義は、本出願の実施例の部に見出し得る。
【００３０】
「アリール」は６個ないし１４個の炭素原子を有する芳香族基、とりわけ、フェニル、ナフチル、インデニル、アズレニル、またはアントリルであり、未置換であるか、または１個以上、好ましくは１個もしくは２個の置換基が置換する；その場合の置換基は以下に定義する官能基のいずれかから選択され、以下を包含する：低級ハロ、アルキル、置換アルキル、ハロ低級アルキル(例えば、トリフルオロメチル)、低級アルケニル、低級アルキニル、低級アルカノイル、低級アルコキシ、ヒドロキシ、エーテル化もしくはエステル化ヒドロキシ、アミノ、モノ−もしくはジ−置換アミノ、アミノ低級アルキル、アミノ低級アルコキシ；アセチルアミノ；アミジノ、ハロゲン、ニトロ、シアノ、シアノ−低級アルキル、カルボキシ、エステル化カルボキシ、とりわけ、低級アルコキシカルボニル(例えば、メトキシカルボニル、ｎ−プロポキシカルボニル、またはイソプロポキシカルボニル)、アルカノイル、ベンゾイル、カルバモイル、Ｎ−モノ−もしくはＮ,Ｎ−ジ置換カルバモイル、カルバメート、カルバミン酸アルキルエステル、アミジノ、グアニジノ、尿素、ウレイド、メルカプト、スルホ、低級アルキルチオ、スルホアミノ、スルホンアミド、ベンゾスルホンアミド、スルホネート、フェニル、ベンジル、フェノキシ、ベンジルオキシ、フェニルチオ、フェニル−低級アルキルチオ、アルキルフェニルチオ、低級アルキルスルフィニル、フェニルスルフィニル、フェニル−低級アルキルスルフィニル、アルキルフェニルスルフィニル、低級アルカンスルホニル、フェニルスルホニル、フェニル−低級アルキルスルホニル、アルキルフェニルスルホニル、ハロゲン−低級アルキルメルカプト、ハロゲン−低級アルキルスルホニル(とりわけ、トリフルオロメタンスルホニルなど)、ジヒドロキシボラ(−Ｂ(ＯＨ)２)、ヘテロシクリル、および環の隣接するＣ−原子で結合する低級アルキレンジオキシ(例えば、メチレンジオキシ)、ホスホノ(−Ｐ(＝Ｏ)(ＯＨ)２)、ヒドロキシ−低級アルコキシホスホリルまたはジ−低級アルコキシホスホリル、カルバモイル、モノ−もしくはジ−低級アルキルカルバモイル、モノ−もしくはジ−(ヒドロキシ−低級アルキル)カルバモイル、または−ＮＲ４Ｒ５(ここで、Ｒ４およびＲ５は同一または異なって、独立してＨ、低級アルキル(例えば、メチル、エチルまたはプロピル)であるか、またはＲ４およびＲ５がＮ原子と一体になって、１〜４個の窒素、酸素もしくは硫黄原子を含む３員ないし８員のヘテロ環状環(例えば、ピペラジニル、低級アルキル−ピペラジニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジノ、モルホリニル、イミダゾリニル)を形成する。
【００３１】
アリールは、より好ましくは、未置換であるか、または独立して以下からなる群より選択される可溶化基から選択される１個または２個の置換基が置換するフェニルである：ハロ(ＣｌまたはＢｒなど)；ヒドロキシ；低級アルキル(Ｃ１−Ｃ３低級アルキルなど)、アリール(フェニルまたはベンジルなど)；アミノ；アミノ低級アルキル(ジメチルアミノなど)；アセチルアミノ；アミノ低級アルコキシ(エトキシアミンなど)；低級アルキル(メチルなど)；アルコキシ(例えば、メトキシまたはベンジルオキシであり、ここで、ベンジル環は置換または未置換であってもよい；３,４−ジクロロベンジルオキシなど)；スルホアミノ；置換もしくは未置換のスルホンアミド(ベンゾスルホンアミド、クロロベンゼンスルホンアミドまたは２,３−ジクロロベンゼンスルホンアミドなど)；置換もしくは未置換のスルホネート(スルホン酸クロロフェニルなど)；置換尿素(３−トリフルオロメチルフェニル尿素または４−モルホリン−４−イル−３−トリフルオロメチルフェニル尿素など)；カルバミン酸アルキルエステルまたはカルバメート(Ｎ−フェニル−カルバミン酸エチル)、または−ＮＲ４Ｒ５(ここで、Ｒ４およびＲ５は同一または異なって、独立してＨ、低級アルキル(例えば、メチル、エチルまたはプロピル)であるか、またはＲ４およびＲ５がＮ原子と一体になって、１〜４個の窒素、酸素もしくは硫黄原子を含む３員ないし８員のヘテロ環状環を形成する；例えば、ピペラジニル、低級アルキル−ピペラジニル、ピリジル、インドリル、チオフェニル、チアゾリル、モルホリニル  ｎ−メチルピペラジニル、ベンゾチオフェニル、アゼチジニル、ピロリジニル、ピペリジノ、またはイミダゾリニル)。
【００３２】
ヘテロアリール基は、好ましくは、単環式であるが、二環式または三環式であってもよく、３〜２４個の、好ましくは４〜１６個の環原子を含んでなり、その場合、少なくとも１個以上、好ましくは１個ないし４個の環炭素がＯ、ＮまたはＳから選択されるヘテロ原子と置き換わっている。好ましくは、該へテロアリール基は以下から選択される：ピリジル、インドリル、ピリミジル、ピラゾリル、オキサゾリル、チオフェニル、ベンゾチオフェニル、２Ｈ−ピロリル、ピロリル、イミダゾリル、ベンズイミダゾリル、ピラゾリル、インダゾリル、プリニル、ピラジニル、ピリダジニル、４Ｈ−キノリジニル、イソキノリル、キノリル、フタラジニル、ナフチリジニル、キノキサリル、キナゾリニル、キノリニル、インドリジニル、３Ｈ−インドリル、イソインドリル、イソキサゾリル、チアゾリル、イソチアゾリル、トリアゾリル、テトラゾリル、フラザニルおよびベンゾ[ｄ]ピラゾール。
【００３３】
より好ましくは、該へテロアリール基は、ピリジル、インドリル、ピリミジル、ピラゾリル、オキサゾリル、チオフェニル、またはベンゾチオフェニルからなる群より選択される。
【００３４】
該へテロアリール基は未置換であっても、またはアリール用として上記に定義した基から選択される１個以上の置換基により、最も好ましくは、ヒドロキシ、ハロゲン、低級アルキル(メチルなど)または低級アルコキシ(メトキシまたはエトキシなど)により置換されていてもよい。
【００３５】
「脂肪族」とは、本明細書にて使用する場合、非芳香族炭素に基づく残基をいう。脂肪族残基の例は、置換または未置換のアルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアルキニルである。
【００３６】
「アルキル」は低級アルキル、好ましくは７個までの炭素原子をもつアルキル、好ましくは５を含む１個ないし５個までをもつアルキルであり、直鎖または分枝状である；好ましくは、低級アルキルは、ｎ−ペンチルなどのペンチル、ｎ−ブチル、sec−ブチル、イソブチル、tert−ブチルなどのブチル、ｎ−プロピルもしくはイソプロピルなどのプロピル、エチルまたはメチルである。好ましくは、低級アルキルは、メチル、プロピルまたはtert−ブチルである。
【００３７】
シクロアルキル基は、好ましくは、シクロペンチル、シクロヘキシルまたはシクロヘプチルであり、未置換であっても、またはアリール用として上記に定義した基から選択される１個以上、特に１個または２個の置換基により、最も好ましくは、低級アルキル(メチルなど)、低級アルコキシ(メトキシまたはエトキシなど)、またはヒドロキシにより置換されていてもよい。
【００３８】
アルケニルおよびアルキニルは、好ましくは、７個までの炭素原子、好ましくは５を含む１個ないし５個までの炭素原子をもち、直鎖または分枝状であり得る。
【００３９】
アルキル、シクロアルキル、アルケニルおよびアルキニルは置換されているか、または未置換であり、置換されている場合は、他のアルキル、シクロアルキル、アルケニル、アルキニルを含む３個までの置換基で置換されていてもよく、その置換基はアリールについて上に定義した置換基のいずれかであるか、または以下に定義する官能基のいずれかである。
【００４０】
「ハロ」または「ハロゲン」は、好ましくは、フルオロ、クロロ、ブロモまたはヨードであり、最も好ましくは、フルオロ、クロロまたはヨードである。
【００４１】
本明細書にて使用する場合の用語「連結原子または基」とは、アルキル(−ＣＨ２−など)；オキシ−Ｏ−；ケト−ＣＯ−；チオ−Ｓ−；スルホニル−ＳＯ２−；スルホキシド−ＳＯ−；アミン−ＮＨ−または−ＮＲ−；カルボン酸；アルコール；エステル(−ＣＯＯ−)；アミド(−−ＣＯＮＲ−、−ＣＯＮＨＲ’−)；スルホンアミド(−ＳＯ２ＮＨ−、−ＳＯ２ＮＲ’−)；スルホン(−ＳＯ２−)；スルホキシド(−ＳＯ−)；アミノ基；尿素(−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＲ−ＣＯ−ＮＨ−、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＲ−、−ＮＲ−ＣＯ−ＮＲ−)；エーテル(−Ｏ−)；カルバメート(−ＮＨ−ＣＯ−Ｏ−、−ＮＲ−ＣＯ−Ｏ−)；または逆アミドスルホンアミドおよびエステル(−ＮＨ−ＣＯ−、−ＮＲ−ＣＯ−、−ＮＨ−ＳＯ２−、−ＮＲ−ＳＯ２−、−ＯＯＣ−)である。
【００４２】
本明細書にて使用する場合の用語「官能基」とは：カルボン酸；ヒドロキシル；ハロゲン；シアノ(−ＣＮ)；エーテル(−ＯＲ)；ケトン(−ＣＯ−Ｒ)；エステル(−ＣＯＯＲ)；アミド(−ＣＯＮＨ２、−ＣＯＮＨＲ、−ＣＯＮＲＲ’)；チオエーテル(−ＳＲ)；スルホンアミド(−ＳＯ２ＮＨ２、−ＳＯ２ＮＨＲ、−ＳＯ２ＮＲＲ’)；スルホン(−ＳＯ２−Ｒ)；スルホキシド(−ＳＯ−Ｒ)；アミン(−ＮＨＲ、ＮＲ’Ｒ)；尿素(−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨ２、−ＮＨ−ＣＯ−ＮＨＲ)；エーテル(−Ｏ−Ｒ)；ハロゲン；カルバメート(−ＮＨ−ＣＯ−ＯＲ)；アルデヒド−官能基(−ＣＨＯ)；さらに、逆のアミド；スルホンアミドおよびエステル(−ＮＨ−ＣＯ−Ｒ、−ＮＨ−ＳＯ２−Ｒ、−ＯＯＣ−Ｒ)である。
【００４３】
ＲおよびＲ’は同一または異なって、Ｈであってもよく、または上記定義の脂肪族、アリールもしくはヘテロアリール基である。
【００４４】
塩は、特に、式(Ｉ)で示される化合物の医薬的に許容される塩である。これらの塩は、塩形成基、例えば、塩基性または酸性基などが存在する場合に形成され、少なくとも部分的に、水溶液中、ｐＨ４ないし１０の範囲で解離した形状で存在し得るか、または特に固体の形状で単離し得る。
【００４５】
かかる塩は、例えば、塩基性窒素原子をもつ式(Ｉ)の化合物から酸付加塩として、好ましくは有機酸または無機酸との塩、とりわけ、医薬的に許容される塩として形成される。適切な無機酸は、例えば、ハロゲン酸(塩酸など)、硫酸、またはリン酸である。適切な有機酸は、例えば、カルボン酸、ホスホン酸、スルホン酸またはスルファミン酸、例えば、酢酸、プロピオン酸、乳酸、フマル酸、コハク酸、クエン酸、アミノ酸(グルタミン酸またはアスパラギン酸など)、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、メチルマレイン酸、安息香酸、メタン−もしくはエタン−スルホン酸、エタン−１,２−ジスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、２−ナフタレンスルホン酸、１,５−ナフタレン−ジスルホン酸、Ｎ−シクロヘキシルスルファミン酸、Ｎ−メチル−、Ｎ−エチル−もしくはＮ−プロピル−スルファミン酸、またはアスコルビン酸などの他の有機プロトン酸である。
【００４６】
負電荷ラジカル基、例えば、カルボキシまたはスルホなどの存在下、塩は塩基とも形成し得る；例えば、アルカリ金属塩またはアルカリ土類金属塩などの金属塩またはアンモニウム塩、例えば、ナトリウム、カリウム、マグネシウムもしくはカルシウム塩、またはアンモニアもしくは三級モノアミンなど適当な有機アミンとのアンモニウム塩、例えば、トリエチルアミンもしくはトリ(２−ヒドロキシエチル)アミン、またはヘテロ環状塩基、例えば、Ｎ−エチル−ピペリジンもしくはＮ,Ｎ’−ジメチルピペラジンなどとの塩である。
【００４７】
塩基性基と酸性基が同じ分子中に存在する場合、式(Ｉ)の化合物は内部塩をも形成し得る。
【００４８】
単離または精製を目的とする場合は、医薬的に許容されない塩、例えば、ピクリン酸塩または過塩素酸塩などを使用することも可能である。治療に使用する場合は、医薬的に許容される塩または遊離の化合物のみが採用され(適用可能な場合は、医薬製剤に包含される)、従って、それらが好ましい。
【００４９】
遊離形状の化合物とその塩形状の化合物との間の密接な関係に鑑みて、例えば、それらの化合物または塩の精製または同定において、中間体として使用し得るそれらの塩を含め、すでに記載した、または以後に記載する「化合物」、とりわけ、式(Ｉ)の化合物について言及する場合には、適切であり、得策であり、かつ他に断りがない限り、１種以上のその塩、または遊離の化合物と１種以上のその塩の混合物についても言及しているものと理解すべきである。
【００５０】
複数形を化合物、塩、医薬製剤、疾患、障害などについて使用する場合、この複数形は単一の化合物、塩、医薬製剤、疾患などをも意味するものとし、逆もまた同様とする。
【００５１】
遊離形状の化合物とその塩の形状の化合物との間の密接な関係に鑑みて、例えば、化合物、互変異性体または互変異性体混合物およびその塩の精製または同定において、中間体として使用し得るそれらの塩を含め、すでに記載した、または以後に記載する「化合物」、とりわけ、式(Ｉ)の化合物について言及する場合には、適切であり、得策であり、かつ他に断りがない限り、これら化合物の対応する互変異性体混合物、とりわけ、式(Ｉ)の化合物またはそれらのいずれかの塩の互変異性体混合物についても言及しているものと理解すべきである。
【００５２】
「化合物....、その互変異性体；またはその塩」などと言及している場合、それは「化合物....、その互変異性体、または該化合物もしくは互変異性体の塩」を意味する。
【００５３】
不斉炭素原子は、(Ｒ)−、(Ｓ)−または(ＲＳ)−立体配置、好ましくは、(Ｒ)−または(Ｓ)−立体配置に存在し得る。飽和結合をもつ原子での環の置換基は、可能であれば、シス−(＝Ｚ−)またはトランス(＝Ｅ−)形状で存在し得る。従って、該化合物は異性体の混合物として、または好ましくは、純粋な異性体として、好ましくは、エナンチオマー−純−ジアステレオマーもしくは純エナンチオマーとして存在し得る。
【００５４】
式(Ｉ)で示される化合物は有益な薬理学的性質を有し、Ｅph受容体関連(例えば、神経的)傷害および障害の処置において、例えば、神経疾患を処置する薬物として有用である。
【００５５】
ＣＮＳ−関連障害および傷害
中枢神経系に対する傷害は、通常、機能的に障害を受けた軸索の再生を、あるとしても非常に限定されたものとし、結果として永続的機能障害に至らしめる。一部のＣＮＳニューロンは、出生後の軸索を再生する本来備わっている能力を失っていると思われる一方、多くの他のニューロン、例えば、錐体路(ＣＳＴ)ニューロンなどは、再生し得ると考えられるが、傷害部位の周囲の状況によっては、その動きが阻害される。(Goldberg et al., (2002) Science 296: 1860)。ＣＮＳ再生に対する主要な障害は、ミエリン阻害因子と星状細胞グリオーシスの存在である。
【００５６】
軸索再生は成体ＣＮＳにおける多くの阻害性作用、とりわけ、阻害性ミエリンタンパク質と神経膠瘢痕の形成により妨害される。ミエリン阻害と関連する分子(例えば、ノゴ(Nogo)、ミエリン関連糖タンパク質(ＭＡＧ)、および乏突起神経膠細胞−ミエリン糖タンパク質(ＯＭgp))の同定には相当の進歩が見られるが、神経学的障害の処置または軽減のためのこれらタンパク質の標的化は、その解決が不完全である。脊髄傷害後に、個々のミエリンタンパク質またはその共通する受容体をインビボで遮断すると、部分的な軸索再生と、それに随伴して機能回復の改善が起こり得る；しかし、僅かなパーセントの軸索が再生するだけであり、より完全な治療的解決のためには、再生に対する他の障害を取り除く必要性を強調して示している(Simonen M., et al. (2003) Neuron 38: 201; Zheng B., et al. (2003) Neuron 38: 213)。
【００５７】
神経膠瘢痕化の主たる成分は星状細胞グリオーシスであり、それによって正常な休止星状細胞が傷害に対して激しい応答を示す。(Stichel CC, et al. (1998) Cell Tissue Res 294: 1)。それらは神経膠原繊維酸性タンパク質(ＧＦＡＰ)の肥大性、増殖性、上方制御発現に適し、病巣部位での、およびそこから拡大する神経膠プロセスの緻密なネットワークを形成する。同時に、星状細胞は多様なサイトカインを分泌し、細胞接着性と細胞外マトリックス分子を生じるが、その一部は再生に阻害性である(例えば、硫酸コンドロイチン・プロテオグリカン(ＣＳＰＧ)およびコラーゲンIV)。当該星状細胞産物の沈降を遮断すると、軸索再生が促進される(Stitchel CC, et al.)。
【００５８】
殆どの脊髄傷害関連のこれまでに試行されている治療薬は、ミエリン阻害因子または神経膠瘢痕の成分を克服することに集中しているので、Ｅph受容体の阻害に向けた薬剤(例えば、本発明化合物)は、神経再生を促進する新しい戦略の代表となる。
【００５９】
Ｅph受容体およびエフリン
Ｅph受容体チロシンキナーゼ・サブファミリーは、膜透過受容体チロシンキナーゼの最大のサブファミリーであると考えられており、そのリガンドであるエフェリンと共に、神経成長に際しての細胞移動と位置づけの統御に、恐らく細胞間反発を調節することにより役割を果たしている(Pasquale, E. (1997) Curr. Opin. Cell Biol. 9:608-615)(Orioli and Klein (1997) Trends in Genetics 13:354-359)。Ｅphファミリーは錐体路と大脳前交連の形成に役割を果たしている(Kullander K., et al. (2001a) Neuron 29: 73; Henkemeyer M, et al. (1996) Cell 86: 35)。
【００６０】
Ｅph受容体は密接に関連し合っており、それらがエフリンリガンドに結合したときに、活発にシグナルを送り(それらの影響は細胞−細胞の接触により仲介される)、それによって、前方および双方向にシグナルを伝達し得る。(Murai, K.K., et al. (2003) J Cell Sci. 116(14): 2823)。
【００６１】
これらの受容体は３つの官能性ドメインを特徴とする；すなわち、細胞内チロシンキナーゼ触媒ドメイン、単一膜橋架けドメイン、および細胞外リガンド結合ドメインである。
【００６２】
Ｅph受容体によるリガンド・エフリンの結合は、チロシン残基上のリン酸化を誘導し、それがＳＨ２ドメインを含むシグナル伝達タンパク質の結合部位を確立し、一連のシグナル伝達経路を活性化する。エフリンはＥph受容体を集団化し、自己リン酸化を誘導することによりＥph受容体を活性化すると考えられ、一方、可溶性単体エフリンはＥph受容体の活性化を阻害すると考えられる。(Davis et al. (1994) Science 266: 816)。
【００６３】
１６種の既知Ｅph受容体は配列相同性に基づいて、２つのサブグループ(ＥphＡおよびＥphＢ)に分類される。ＥphＡ受容体は優先してグリコシルホスファチジルイノシトール(ＧＰＩ)−連結エフリン−Ａリガンドに結合し、一方、ＥphＢ優先受容体は膜透過エフィン−Ｂリガンドに結合する。しかし、エフリン−リガンドはむしろ無差別であり、Ｅph受容体のそれらの活性化において選択性を欠く傾向がある。(Murai, K. et al. (2003) Molecular and Cellular Neuroscience 24:1000)。例えば、ＥphＡ４は、エフリンＡリガンド・ファミリーのメンバーに加えて、リガンド・エフリンＢ２およびＢ３に結合し得る(従って、それにより活性化される)。
【００６４】
Ｅph受容体ファミリーメンバーおよびそれらのエフリン・リガンドは、文献での知見に基づいて、軸索再生促進の標的としての興味を含め、神経障害および傷害の処置のための治療標的として興味深い。例えば、Ｅph−エフリン・シグナル伝達は、ニューロン成長錐体の崩壊を含め、接触反発を介して軸索指標を調節すると思われる(Wahl S., et al. (2000) J Cell Biol 149: 263; Kullander et al.)；また、このファミリーのメンバーは神経障害後の成体において上方制御される(Moreno-Flores MT, et al. (1999) Neuroscience 91: 193; Willson CA, et al. (2002) Cell Transplant 11: 229)；Ｅph受容体の異常な発現または不存在は、成熟ＣＮＳにおける傷害の結果を決定するに際して、極めて重要であることが証明し得た。
【００６５】
ＥphＡ４
ＥphＡ４は成長中および成熟した神経系において重要な機能を有するＥphＡファミリーからの受容体チロシンキナーゼである。神経成長に際してのその既知の発現パターンと共に(Mori, T., et al. (1995) Brain Res Mol Brain Res 29:325;  Ohta, K., et al. (1996) Mechanisms of Development(成長のメカニズム)54:59; Soans, C., et al. (1994) Oncogene 9:3353)、ＥphＡは広範なシナプス改造作用を示す脳の領域において発現される(Murai, K., et al. (2003) Nature Neurosci 6:153)。成体において、ＥphＡは、学習と記憶にとって決定的な２つの構造体、海馬と皮質において濃厚である。この受容体はまた神経稜細胞の移動、軸索突起の成長、および広範な可塑性を示す成熟脳構造体においても濃厚である(Murai, et al.)。
【００６６】
最近の研究では、ＥphＡ４が脊髄傷害、軸索阻害および星状細胞グリオーシスの２つの決定的局面に関係していると見做している。(Goldshmit, Y., et al. (2004) J Neurosci. 24(45): 10064)。ゴールドシュミット(Goldshmit)は、野生型およびＥphＡ−／−マウスにおいて脊髄の片側切断後の神経再生を比較し、星状細胞グリオーシスの欠如と同側軸索の再生を特徴とする、後者の全体的機能改善を発見した。改善が見られたそのメカニズムに関しては、実験(並びに文献)が、軸索再生におけるＥph受容体の３つの役割を証明している。
【００６７】
インビトロアッセイにより証明されるように、第一は、軸索上の受容体−リガンドに結合する星状細胞上、ＥphＡ４が仲介する神経突起発芽成長の直接阻害である。ＥphＡ４のかかる作用は、ＩＦＮの存在下に観察される星状細胞上の神経突起の発芽成長を阻害するメカニズムを提供し得る；ゴールドシュミットはこのことをＥphＡ４発現の上方制御で示している。(Fok-Seang J., et al. (1998) Eur J Neurosci 10: 2400)。これらの結果は、ＥphＡ４が、細胞外マトリックスおよびミエリン由来分子などの他の阻害性成分に加えて、星状細胞グリオーシスに際して産生されるなお別の直接的阻害分子であることを示唆している。
【００６８】
第二の、観察されることの稀なメカニズムは、再生する軸索上のＥphＡ４よるもので、Ｅ１６皮質ニューロンに対してと同様であり得る。しかし、ＥphＡ４は星状細胞と運動ニューロン上にのみ高度に発現され、傷害を受けた成熟脊髄においては、下降する軸索上に低レベルで存在することが判明した。
【００６９】
ＥphＡ４が阻害作用を示す第三のメカニズムは、星状細胞を活性化し、グリオーシスと神経膠瘢痕の形成に導く上で、その極めて重要な役割を内包している。かかる活性化はサイトカイン刺激に対する応答性に依存していると思われ、またＲho活性化に依存している可能性もある。このサイトカイン誘導応答は、星状細胞上のＥphＡ４受容体発現の上方制御に寄与し得るものであり、増強されたリガンド結合と受容体活性化を可能とする。また可能なことは、サイトカイン誘導星状細胞増殖と肥大が、エフリンＢ分子のＦＧＦ２−およびＰＤＧＦ−誘導リン酸化について示されているように(Chong et al., (2000) Mol Cell Biol 20: 724)、ＥphＡ４のトランス活性化により惹き起され得ること、それがＲho活性化と細胞骨格再構成に導くということである。神経膠活性化における差異は、マクロファージ−ミクログリア活性化の明確な差異がない場合に星状細胞に特異的であると思われる。Ｅphとエフリンは、星状細胞と脳脊髄膜線維芽細胞間の相互作用に、神経膠瘢痕から線維芽細胞を排除する役割を演じていると報告されている。(Bundesen LQ, et al. (2003) J Neurosci 23: 7789)。
【００７０】
製造工程
式(Ｉ)で示される化合物は、他の化合物について当該技術分野で基本的に既知である方法同様に、好ましくは、式(II)：
【化３】
2009543801.tif 000004
[式中、Ｄ１およびＤ２はヒドロキシもしくは置換ヒドロキシであるか、または結合するホウ素原子および２つの酸素原子と一緒になって、式(IIＡ)：
【化４】
2009543801.tif 000005
の環を形成し、ここで、
Ｅはアルキレン、置換アルキレン、未置換もしくは置換シクロアルキレン、未置換もしくは置換ビシクロアルキレンまたは未置換もしくは置換トリシクロアルキレンである。]
で示されるボロン酸誘導体を、式(III)：
【化５】
2009543801.tif 000006
[式中、Ｒ４は、式(Ｉ)の化合物について上記に、または下記に定義するとおりであり、Ｌは脱離基である。]
で示されるカップリング・パートナーと反応させ、所望により式(Ｉ)の化合物を異なる式(Ｉ)の化合物に変換し、得られる式(Ｉ)の化合物の塩を遊離の化合物もしくは異なる塩に変換し、および／または得られる式(Ｉ)の遊離の化合物をその塩に変換することにより調製する。
【００７１】
反応は、好ましくは、通例の条件、例えば、スズキ−ミヤウラのクロス−カップリング条件(参照例：Miyaura et al., Chem. Rev. 95, 2457 (1995))下、適切な(好ましくは、無水＝絶対無水)溶媒、例えば、エチレングリコールジメチルエーテルもしくはジオキサンなどのエーテル、ヘキサンもしくはトルエンなどの炭化水素、またはエタノールなどのアルコール、またはそのいずれか２種以上の混合物の存在下、触媒、とりわけ、貴金属複合体触媒、例えば、イリジウム、ロジウムまたは好ましくはパラジウム触媒、例えば、テトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウム(Ｐｄ(ＰＰｈ３)４)(このものは反応系中で、酢酸パラジウムなどのパラジウムおよび複合体リガンド、例えば、トリフェニルホスフィンからも形成し得る)の存在下、好ましくは、塩基、例えば、無機酸のアルカリ金属塩などの金属の酸付加塩、例えば、無機酸のアルカリ金属塩、例えば、(ナトリウムまたはカリウムなどの)リン酸塩または炭酸塩、炭酸のアルカリ金属塩、例えば、(ナトリウムまたはカリウムなどの)低級アルカン酸塩、例えば、酢酸塩、などの存在下、好ましくは上昇温度、例えば、２５℃ないし還流温度、例えば、７５℃ないし９５℃の温度で実施する。反応は、好ましくは、窒素またはアルゴンなどの不活性ガス下に実施する。
【００７２】
Ｄ１およびＤ２がそれぞれ置換されたヒドロキシである場合、置換されたヒドロキシは、好ましくはアルキルオキシ、とりわけ、低級アルキルオキシ、アリールオキシ、特に、上記定義の未置換もしくは置換フェニルを有するフェニルオキシ、またはシクロアルキルオキシであり、その場合のシクロアルキルは、好ましくは、Ｃ３−Ｃ８−シクロアルキル、例えば、シクロペンチルもしくはシクロヘキシルである。
【００７３】
Ｄ１およびＤ２が(好ましい場合として)、結合するホウ素原子および酸素原子と一緒になって、上に示した式(IIＡ)の環を形成する場合、Ｅは、好ましくは、空間的に近傍の、または隣接する炭素原子である２個の異なる炭素原子、例えば、近接位(“１,２−”)または“１,３−”位(互いに相対的)で、ホウ素原子に結合する２個の酸素原子を担持する。
【００７４】
アルキレンは、好ましくは、未分枝Ｃ２−Ｃ１２−、好ましくは、Ｃ２−Ｃ７アルキレン部分、エチレンまたはプロピレン、より広い観点では、ブチレン、ペンチレンまたはヘキシレンであり、上記のように、２個の異なる炭素原子を介して、好ましくは、近接位または“１,３−”位で結合している。置換されたアルキレン(好適である)は、好ましくは、未置換であるか、または１個以上の、特に４個までの置換基により置換された上記定義の未分枝低級アルキレン部分である；該置換基は、好ましくは、メチルまたはエチルなどの低級アルキル(例えば、１−メチルエチレン、１,２−ジメチルエチレン、(好ましくは)２,２−ジメチルプロピレン(ネオペンチレン)もしくは(特に好ましくは)１,１,２,２−テトラメチルエチレンにおいて)、または本発明の広い意味では、ヒドロキシ(例えば、２−ヒドロキシプロピレンにおいて)、またはヒドロキシメチルなどのヒドロキシ−低級アルキル(例えば、１−ヒドロキシメチル−エチレンにおいて)から独立して選択される。
【００７５】
未置換または置換シクロアルキレンは、好ましくは、Ｗについて記載したように、２個の異なる炭素原子を介して、好ましくは、近接位または“１,３−”位で結合したＣ３−Ｃ１２−、より好ましくは、Ｃ３−Ｃ８−シクロアルキレン、例えば、シクロヘキシレンまたはシクロペンチレンである。未置換または置換ビシクロアルキレンは、好ましくは、Ｅについて記載したように、２個の異なる炭素原子を介して、好ましくは、近接位または“１,３−”位で結合したＣ５−Ｃ１２−ビシクロアルキレンである。その例は、ピナニレン(２,３−(２,６,６−トリメチル−ビシクロ[３.１.１]ヘプタン)である。未置換または置換トリシクロアルキレンは、好ましくは、Ｅについて記載したように、２個の異なる炭素原子を介して、好ましくは、近接位または“１,３”−位で結合したＣ８−Ｃ１２−トリシクロアルキレンである。
【００７６】
未置換もしくは置換シクロアルキレン、未置換もしくは置換ビシクロアルキレン、または未置換もしくは置換トリシクロアルキレンは、未置換であっても、あるいは１個以上の、とりわけ、３個までの置換基により置換されていてもよい；該置換基は、メチルもしくはエチルなどの低級アルキル、ヒドロキシ、メトキシなどのヒドロキシ−低級アルキル、または酸素原子を介して結合するモノ−もしくはオリゴ糖(好ましくは５個までの糖部分からなる“オリゴサッカリジル”)から独立して選択される。
【００７７】
式(III)で示される化合物における脱離基Ｌは、好ましくは、ハロ、とりわけ、ヨード、ブロモ(好適)もしくはクロロ、またはペルフルオロアルキルスルホニルオキシ(例えば、−Ｏ−ＳＯ２−(ＣｆＦ２ｆ＋１)；ここで、ｆ＝１、２または４)である。
【００７８】
別法として、式(Ｉ)で示される化合物の製造は、原理的に、上に示した式(IIＡ)の基の代わりに脱離基Ｌをもつ式(II)の化合物を、また反応パートナーとして、脱離基Ｌの代わりに上に示した式(IIＡ)の基を担持する式(III)の化合物を採用することも可能である。従って、反応条件は上に示した式(II)および(III)の化合物の反応について記載した条件と同様である。
【００７９】
所望の反応と変換
式(Ｉ)で示される化合物は、式(Ｉ)で示される異なる化合物に変換してもよい。例えば、低級アルコキシカルボニル置換基はアミノに水素化し得る。
【００８０】
少なくとも１個の塩形成基を有する式(Ｉ)の化合物の塩は、それ自体既知の方法で調製し得る。例えば、式(Ｉ)で示される化合物の塩は、例えば、該化合物を適当な有機カルボン酸のアルカリ金属塩などの金属化合物、例えば、２−エチルヘキサン酸のナトリウム塩；有機アルカリ金属もしくはアルカリ土類金属化合物、例えば、相当する水酸化物、炭酸塩または炭酸水素塩、例えば、水酸化、炭酸または炭酸水素ナトリウムもしくはカリウムなどにより；相当するカルシウム化合物により、またはアンモニアもしくは適当な有機アミンにより；好ましくは、化学量論的量または小過剰の塩形成剤を用いて処理することにより形成するとよい。式(Ｉ)で示される化合物の酸付加塩は、通例の方法で、例えば、該化合物を酸または適当なアニオン交換試薬で処理することにより得られる。酸および塩基塩−形成基、例えば、遊離のカルボキシ基および遊離のアミノ基を含む式(Ｉ)で示される化合物の内部塩は、例えば、酸付加塩などの塩を、例えば、弱塩基で等電点に中和することにより、またはイオン交換体で処理することにより形成し得る。
【００８１】
式(Ｉ)で示される化合物の塩は、通例の方法で遊離の化合物に変換し得る；金属塩およびアンモニウム塩は、例えば、適当な酸での処理により、また酸付加塩は、例えば、適当な塩基性剤により処理して変換し得る。両方の事例において、適当なイオン交換体を使用してもよい。
【００８２】
中間体および最終産物は標準的方法、クロマトグラフ法、分配法、(再)結晶化などを用いて、後処理および／または精製することができる。
【００８３】
出発原料
出発原料は、例えば、好ましくは、以下のように調製し得る：
式(II)で示されるボロン酸誘導体は、好ましくは、式(IV)：
【化６】
2009543801.tif 000007
[式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ａ、ＱおよびＺは、式(Ｉ)で示される化合物について上記に定義したとおりであり；Ｇは脱離基、特に、式(III)の化合物において脱離基Ｌとして上記に定義したとおりである。]
で示される化合物と、式(ＶＡ)または(ＶＢ)：
【化７】
2009543801.tif 000008
[式中、Ｄ１およびＤ２は、式(II)で示される化合物について上記に定義したとおりであり；Ｄ３は式(II)のもとで上記に定義した置換ヒドロキシである。]
で示される二ホウ素化合物とを、通例の反応条件下、すなわち、適切な(好ましくは、無水＝絶対無水)溶媒、例えば、エチレングリコールジメチルエーテル、テトラヒドロフランもしくはジオキサンなどのエーテル、炭化水素、例えば、ヘキサン、またはエタノールなどのアルコール、あるいはそのいずれか２種以上の混合物の存在下、イリジウム、ロジウムまたは好ましくはパラジウムなどの貴金属複合体触媒、例えば、好ましくは、１,１’−ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン−ジクロロパラジウム(Ｐd(dppf)Ｃl２)、複合体触媒、そして好ましくは、塩基、例えば、無機酸のアルカリ金属塩などの金属の酸付加塩、例えば、炭酸(ナトリウムもしくはカリウムなど)、または炭酸の塩、例えば、低級アルカン酸(ナトリウムもしくはカリウムなど)、例えば、酢酸塩などの存在下、好適な温度、例えば、２０℃ないし反応混合物の還流温度、例えば、７５℃ないし還流温度で、反応させることにより調製する。反応は、好ましくは、窒素またはアルゴンなどの不活性ガス下に実施する。別法として、式(IV)で示される化合物は、先ず、例えば、ｎ−ブチルリチウムによりリチウム化し、次いで、得られるリチウム化産物を通例の反応条件下に式(ＶＢ)の化合物と反応させる。
【００８４】
Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ＱおよびＺが式(Ｉ)で示される化合物について上記または下記に定義したとおりであり；Ｇが脱離基であり、Ａが−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＨ−(−ＮＨ−で式(Ｉ)におけるＱおよびＺからなる環に結合する)である式(IV)で示される出発原料は、好ましくは、式(VI)： 
【化８】
2009543801.tif 000009
[式中、Ｒ１およびＲ２は、式(Ｉ)で示される化合物について上記に定義したとおりである。]
で示される炭酸の反応性誘導体と、式(VII)：
【化９】
2009543801.tif 000010
[式中、Ｑ、ＺおよびＲ３は、式(Ｉ)で示される化合物について上記に定義したとおりであり；Ｇは式(IV)のもとで定義した脱離基である。]
で示されるアミノ塩基とを、適切な溶媒、例えば、アセトニトリルなどのニトリル中、好ましくは、０ないし５０℃の温度、例えば、２０ないし４０℃の温度で、好ましくは、塩基、例えば、トリ−低級アルキルアミンなどの三級窒素塩基、例えば、トリエチルアミンの存在下に反応させることにより製造する。活性誘導体はその場で、例えば、式(IV)および(Ｖ)の化合物を適当な溶媒、例えば、Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド、Ｎ,Ｎ−ジメチルアセトアミド、Ｎ−メチル−２−ピロリドン、塩化メチレン、または２種以上のかかる溶媒の混合物に溶かし、次いで、適当な塩基、例えば、トリエチルアミン、ジイソプロピルエチルアミン(ＤＩＥＡ)またはＮ−メチルモルホリン、およびその場で式(III)の炭酸の好適な反応誘導体を形成する適当なカップリング剤、例えば、ジシクロヘキシルカルボジイミド／１−ヒドロキシベンゾトリアゾール(ＤＣＣ／ＨＯＢＴ)；Ｏ−(１,２−ジヒドロ−２−オキソ−１−ピリジル)−Ｎ,Ｎ,Ｎ’,Ｎ’−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレート(ＴＰＴＵ)；Ｏ−(ベンゾトリアゾール−１−イル)−Ｎ,Ｎ,Ｎ’,Ｎ’−テトラメチルウロニウム・テトラフルオロボレート(ＴＢＴＵ)；または１−(３−ジメチルアミノプロピル)−３−エチルカルボジイミド塩酸塩(ＥＤＣ)を加えることにより、反応性誘導体に変換する。他の可能なカップリング剤の概説については、文献(例えば、Klauser; Bodansky, Synthesis 1972, 453-463)を参照されたい。反応混合物は、好ましくは、約−２０℃ないし５０℃の温度、とりわけ、０℃ないし室温で撹拌し、式(IV)の化合物を得る。別法として、式(VI)で示される炭酸は、反応性誘導体の形状で、例えば、塩化物などの炭酸ハロゲン化物として、炭酸との無水物、例えば、Ｃ１−Ｃ７−アルカン酸との無水物として、活性エステルとして、またはアルカリ金属塩、例えば、ナトリウム、リチウムもしくはカリウム塩の形状で使用する。両方の場合に、反応は、好ましくは、不活性ガス、例えば、窒素またはアルゴン下に実施し得る。
【００８５】
式中、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、ＱおよびＺが式(Ｉ)で示される化合物について上記または下記に定義したとおりであり；Ｇが脱離基であり、Ａが−ＮＨ−Ｃ(＝Ｏ)−(−Ｃ(＝Ｏ)−で式(Ｉ)におけるＱおよびＺからなる環に結合する)である式(IV)で示される出発原料は、式(VIII)：
【化１０】
2009543801.tif 000011
[式中、Ｒ３、ＱおよびＺは、式(Ｉ)で示される化合物について定義したとおりであり；Ｇは式(IV)のもとで定義した脱離基である。]
で示される炭酸の反応性誘導体(その場で形成するか、または直接提供する、上記式(VI)の炭酸の反応性誘導体を用いる類似の反応条件を参照)から、式(IX)：
【化１１】
2009543801.tif 000012
[式中、Ｒ１およびＲ２は、式(Ｉ)で示される化合物について定義したとおりである。]
で示されるアミノ化合物との反応により合成し得る；その場合に使用される反応条件は、式(VI)および(VII)で示される化合物の反応について本明細書に記載した条件と同様である。
【００８６】
Ｌがペルフルオロアルカンスルホニルオキシ脱離基である式(III)で示される化合物は、例えば、Ｌの代わりにヒドロキシ基が存在する相当する化合物と、相当するペルフルオロアルカンスルホン酸無水物とを、例えば、ハロゲン化炭化水素などの適切な溶媒、例えば、ジクロロメチレン中、トリ−低級アルキルアミンなどの(好ましくは、三級窒素)塩基、例えば、トリエチルアミンの存在下、−１０℃ないし５０℃の好適な温度、例えば、０℃ないし２５℃の温度で反応させることにより調製し得る。式(III)で示される化合物(式中、Ｌはハロである)は、例えば、Ｌの代わりに水素が存在する相当する前駆体化合物と、ハロゲン化剤、例えば、Ｎ−ブロモコハク酸イミドとを、濃硫酸／トリフルオロ酢酸中、０ないし４０℃の好適な温度、例えば、室温で反応させることにより調製し得る。
【００８７】
その他の出発原料、例えば、式(Ｖ)、(VI)、(VII)、(VIII)および(IX)の化合物は既知であるか、当該技術分野で既知の方法と同様に入手し得るか、および／または市販品として入手し得る；とりわけ、実施例に示した方法により、またはそれと同様に入手し得る。
【００８８】
一般法の条件
以下は一般的にすでに記載した工程および以降に記載する工程すべてに適用する一方、上記または以下に記載する反応条件が好適である：
すでに記載した反応および以降に記載する反応のいずれにおいても、保護基について具体的に記載されていなくても、適切な場合、または要望される場合、所定の反応において反応の生起を意図していない官能基を保護するために保護基を使用してもよい；保護基は適切なまたは所望の段階で導入および／または除去することができる。それ故、保護および／または脱保護について具体的な考察のない反応が本明細書に記載されている場合であっても、保護基の使用で成り立つ反応が可能なものとして包含される。
【００８９】
本文書の範囲内で、式(Ｉ)で示される特定の、所望とする最終産物の構成要素ではないが容易に除去し得る基のみが、特に文面に断りのない限り、「保護基」と見做される。かかる保護基による官能基の保護、保護基それ自体、およびそれらの除去に適切な反応は、例えば、以下の著作文献に記載されている：J. F. W. McOmie, “Protective Groups in Organic Chemistry”, Plenum Press, London and New York 1973, in T. W. Greene and P. G. M. Wuts, “Protective Groups in Organic Synthesis”, Third edition, Wiley, New York 1999, in “The Peptides”; Volume 3 (editors: E. Gross and J. Meienhofer), Academic Press, London and New York 1981, in “Methoden der organischen Chemie” (Methods of Organic Chemistry), Houben Weyl, 4th edition, Volume 15/I, Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974, in H.-D. Jakubke and H. Jeschkeit, “Aminosaeuren, Peptide, Proteine” (Amino acids, Peptides, Proteins), Verlag Chemie, Weinheim, Deerfield Beach, and Basel 1982, and in Jochen Lehmann, “Chemie der Kohlenhydrate: Monosaccharide und Derivate” (Chemistry of Carbohydrates: Monosaccharides and Derivatives), Georg Thieme Verlag, Stuttgart 1974。保護基の特徴は、それらが、例えば、加溶媒分解、還元、光分解、または別法として、生理学的条件下(例えば、酵素による切断)、容易に除去し得る(すなわち、不所望の二次反応を起こすことなく)ことである。
【００９０】
上記の工程段階のすべては、それ自体既知の反応条件下、好ましくは具体的に述べた条件下、溶媒なし、または通例、溶媒または希釈剤の存在下、好ましくは、使用される試薬類に不活性であり、かつそれらを溶解する溶媒または希釈剤の存在下、触媒、縮合剤もしくは中和剤、例えば、カチオン交換体(例えば、Ｈ＋型で)などのイオン交換体の存在または不存在下、反応の、および／または反応剤の性質に依存的に、低温、常温または上昇温度、例えば、約−１００℃ないし約１９０℃の温度範囲で、好ましくは約−８０℃ないし約１５０℃で、例えば、−８０ないし−６０℃で、室温で、−２０ないし４０℃で、または還流温度で、大気圧下または密閉容器中、適切な場合には加圧下に、および／または不活性気流中、例えば、アルゴンまたは窒素気流下に実施し得る。
【００９１】
特定の反応に適当な溶媒から選択し得る溶媒は、その工程の記載で特に断りを示さない限り、具体的に言及した溶媒、または例えば、水、低級アルカン酸低級アルキルなどのエステル、例えば、酢酸エチル；脂肪族エーテルなどのエーテル、例えば、ジエチルエーテル、または環状エーテル、例えば、テトラヒドロフランまたはジオキサン；液状芳香族炭化水素、例えば、ベンゼンまたはトルエン；アルコール、例えば、メタノール、エタノールまたは１−もしくは２−プロパノール；ニトリル、例えば、アセトニトリル；ハロゲン化炭化水素、例えば、塩化メチレンまたはクロロフォルム；酸アミド、例えば、ジメチルホルムアミドまたはジメチルアセトアミド；ヘテロ環状窒素塩基などの塩基、例えば、ピリジンまたはＮ−メチルピロリジン−２−オン；低級アルカン酸無水物などのカルボン酸無水物、例えば、無水酢酸；環状、鎖状または分枝状の炭化水素、例えば、シクロヘキサン、ヘキサンもしくはイソペンタン、またはそれらの混合物、例えば、水溶液を包含する。かかる溶媒混合物はまた、後処理に、例えば、クロマトグラフィーまたは分配による処理に使用してもよい。
【００９２】
該化合物は、その用語が各事例において、遊離の化合物および／または塩−形成基が存在する場合のそれらの塩を含んでおり、水和物の形状でも得られるか、またはそれらの結晶は、例えば、溶媒和を形成する結晶化に使用する溶媒を含み得る。異なる結晶形が存在し得る。
【００９３】
本発明はまた製造法の形態にも関係し、その製造法ではその製造法のいずれかの段階で中間体として入手し得る化合物が出発原料として使用され、残りの製造工程が実施されるか、またはその製造法では、出発原料が該反応条件下で形成されるか、または誘導体の形状で、例えば、保護形状または塩の形状で使用されるか、または本発明による製造法により得られる化合物は、該製造法の条件下で製造され、さらにその場で処理加工される。本発明の製造法において、これらの出発原料は、好ましくは、好適であると記載されている式(Ｉ)の化合物となるものが使用される。実施例に記載した条件と同じか、または類似の反応条件に、特別の優先性が与えられる。
【００９４】
本発明による好適な実施態様
以下の好適な実施態様においては、いずれもの１つ以上の表現が、上記および下記に提供した相当するより具体的な定義と置き換え可能であり、結果として、本発明のより強力な好適な実施態様を与える。
【００９５】
本発明の好適な実施態様は、式(Ｉ)において、Ｑが−ＣＨ＝ＣＨ−であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、ＡおよびＺが式(Ｉ)で定義したとおりである化合物、またはその塩(好ましくは、医薬的に許容される塩)またはその使用に関する。
【００９６】
本発明の別の好適な実施態様は、式(Ｉ)において、Ａが−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＨ−(式(Ｉ)におけるＱおよびＺからなる環に結合する−ＮＨ−をもつ)であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、ＱおよびＺが式(Ｉ)で定義したとおりである化合物、またはその塩(好ましくは、医薬的に許容される塩)またはその使用に関する。
【００９７】
別の好適な実施態様は、式(Ｉ)において、Ｒ１およびＲ２の一方が水素であり、他が：
【化１２】
2009543801.tif 000013
[式中、「Ａlk」はアルキル、好ましくは、低級アルキル、より好ましくは、メチルまたはエチルである；Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、Ａ、ＱおよびＺは式(Ｉ)の化合物について上記でまたは下記で定義したとおりである。]
からなる群より選択される基である化合物またはその塩(好ましくは、医薬的に許容される塩)に関する。
【００９８】
本発明は、より好ましくは：
Ｒ１およびＲ２のそれぞれは水素であり；
Ｒ３はＣ１−Ｃ７アルキル、特にメチルであり；
Ｒ４は
【化１３】
2009543801.tif 000014
からなる群より選択される二環式ヘテロシクリルであり：
ここで
ＸはＣＨ、ＮまたはＣ−ＮＨ２であり；
ＹはＣＨまたはＮである；
ただし、ＸおよびＹの両方が同時にＮであることはなく；
そして、Ｒ５は水素、Ｃ１−Ｃ７アルキルまたはフェニルである；
(ここで、Ｒ４は、好ましくは
【化１４】
2009543801.tif 000015
の基である)
Ａは、−Ｃ(＝Ｏ)−ＮＨ−(−ＮＨ−で式(Ｉ)においてＱおよびＺを含んでなる環に結合する)または−ＮＨ−Ｃ(＝Ｏ)−(−Ｃ(＝Ｏ)−で式(Ｉ)においてＱおよびＺを含んでなる環に結合する)であり；
ＺはＣＨであり；そして
Ｑは−ＣＨ＝ＣＨ−である
式(Ｉ)で示される化合物に、または１個以上の塩形成基が存在する場合には、(好ましくは、医薬的に許容される)その塩に関する。
【００９９】
本発明の好適な実施態様は、式中のＱはＳであり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、ＡおよびＺは、式(Ｉ)の化合物について上記または下記で定義したとおりである式(Ｉ)で示される化合物、または医薬的に許容されるその塩の(上記定義の)使用に関する。
【０１００】
好適には、また、式中のＡはＮＨ−Ｃ(＝Ｏ)(−Ｃ(＝Ｏ)−で式(Ｉ)においてＱおよびＺを含んでなる環に結合する)であり、Ｒ１、Ｒ２、Ｒ３、Ｒ４、Ｒ５、ＱおよびＺは、式(Ｉ)の化合物について上記または下記で定義したとおりである、式(Ｉ)で示される化合物、または医薬的に許容されるその塩の(上記定義の)使用である。
【０１０１】
とりわけ好適なのは、式(Ｉ)で示される化合物、または医薬的に許容されるその塩の使用、Ｅph受容体関連(例えば、神経的)傷害および障害の処置のための医薬製剤の製造における使用である。また好適なのは、Ｅph受容体関連(例えば、神経的)傷害および障害の処置における使用のために上に示した式(Ｉ)で示される化合物、または医薬的に許容されるその塩である。
【０１０２】
医薬組成物
本発明は、Ｅph受容体関連(例えば、神経的)傷害および障害の治療処置(本発明の広範な側面では予防も含む)における式(Ｉ)で示される化合物を含有してなる医薬組成物の使用にも関する。
【０１０３】
本発明の薬理学的に許容される化合物は、例えば、有効成分として式(Ｉ)で示される化合物またはその医薬的に許容される塩の有効量を、１種以上の無機もしくは有機の、固体もしくは液体の医薬的に許容される担体の有意な量と一緒に、またはそれと混合して含有してなる医薬組成物の調製のために使用し得る。
【０１０４】
また、本発明はキナーゼ活性の阻害に応答する疾患の処置、または本発明の広範な局面においては予防(＝防止)のために、温血動物、とりわけヒト(または温血動物、とりわけヒト由来の細胞または細胞株、例えば、リンパ球)への投与に適する医薬組成物であって、当該阻害に有効な式(Ｉ)で示される化合物、またはその医薬的に許容される塩の一定量を、少なくとも１種の医薬的に許容される担体と共に含有してなる医薬組成物に関する。
【０１０５】
本発明による医薬組成物は、温血動物(とりわけ、ヒト)への経腸投与用組成物(例えば、鼻腔、直腸もしくは経口)、または非経口投与用組成物(例えば、筋肉内または静脈内)であり、薬理学的有効成分の有効用量を、単独で、または医薬的に許容される担体の有意量と共に含有してなる組成物である。有効成分の投与量は、温血動物の種類、体重、年齢と個々の条件、個々の薬物動態学データ、処置すべき疾患、および投与形態による。
【０１０６】
本発明はまたキナーゼの阻害に応答する疾患を処置する方法に関する；該方法は(言及された疾患に対して)予防的にまたは特に治療的に有効な量の本発明による式(Ｉ)の化合物を、言及した疾患の一つのために、かかる処置を必要とする温血動物、例えば、ヒトに投与することからなる。
【０１０７】
温血動物、例えば、体重約７０ｋｇのヒトに投与すべき式(Ｉ)で示される化合物、またはその医薬的に許容される塩の投与量は、好ましくは、約３ｍｇないし約１０ｇ、より好ましくは約１０ｍｇないし約１.５ｇ、最も好ましくは、約１００ｍｇないし約１０００ｍｇ／人／日であり、これを好ましくは、例えば、同じサイズであり得る１回ないし３回用の単一投与剤に分割する。通常、小児は成人用量の半量を投与する。
【０１０８】
該医薬組成物は、約１％ないし約９５％、好ましくは約２０％ないし約９０％の有効成分を含有してなる。本発明による医薬組成物は、例えば、単位投与量の形状、例えば、アンプル、バイアル、坐剤、糖衣錠、錠剤またはカプセルなどの形状としてもよい。
【０１０９】
本発明の医薬組成物はそれ自体既知の方法、例えば、常套の溶解、凍結乾燥、混合、顆粒化または舐剤調製方法により調製し得る。
【０１１０】
有効成分の溶液およびさらに懸濁液の場合、特に等張水溶液または懸濁液が好適に使用されるが、例えば、有効成分を単独で、またはマンニトールなどの担体と一緒に含有してなる凍結乾燥組成物の場合に、かかる溶液または懸濁液は使用前に調製することが可能である。該医薬組成物は滅菌処理可能であり、および／または添加剤、例えば、保存剤、安定化剤、湿潤剤および／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧調節剤および／または緩衝剤を含有していてもよく、それ自体既知の方法で、例えば、常套の溶解または凍結乾燥プロセスにより調製する。当該溶液または懸濁液は増粘性物質、例えば、カルボキシメチルセルロース・ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルピロリドンまたはゼラチンなどを含有し得る。
【０１１１】
油中懸濁液は油成分として、注射目的に常用される植物油、合成油または半合成油を含有してなる。酸成分として、８〜２２個、特に１２〜２２個の炭素原子をもつ長鎖脂肪酸を含む特に液状の脂肪酸エステルについても言及し得る：例えば、ラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マーガリン酸、ステアリン酸、アラキドン酸、ベヘン酸、または対応する不飽和酸、例えば、オレイン酸、エライジン酸、エルカ酸、ブラシジン酸、またはリノール酸であり、所望により、抗酸化剤、例えば、ビタミンＥ,β−カロテンまたは３,５−ジ−tert−ブチル−４−ヒドロキシトルエンなどを加える。これら脂肪酸エステルのアルコール成分は、最大６個の炭素原子を有し、モノ−もしくはポリ−ヒドロキシ、例えば、モノ−、ジ−もしくはトリ−ヒドロキシアルコールであり、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールもしくはペンタノールまたはその異性体であるが、特にグリコールおよびグリセロールは除く。従って、脂肪酸エステルの以下の例が言及すべきものである：オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、「ラブラフィル(Labrafil)Ｍ２３７５」(トリオレイン酸ポリオキシエチレングリコール；ゲテフォッセ、パリ)、「ミグリオール(Miglyol)８１２」(Ｃ８ないしＣ１２の鎖長の飽和脂肪酸のトリグリセリド；ヒュールス(Huels)ＡＧ、ドイツ)；ただし、特に植物油、例えば、綿実油、アーモンド油、オリーブ油、ひまし油、ゴマ油、ダイズ油、およびさらに特にラッカセイ油は除く。
【０１１２】
注射用組成物は無菌条件下で通常の方法で調製する；同様のことが組成物のアンプルまたはバイアルへの導入および容器の密閉にも当てはまる。
【０１１３】
経口投与用の医薬組成物は、有効成分と固形担体とを組合わせることにより、所望により、得られる混合物を顆粒化し、混合物を加工処理し、所望により、または要すれば、適切な添加剤を加えた後、錠剤、糖衣錠コアまたはカプセルにすることにより得ることができる。また、有効成分を一定量拡散または放出するようなプラスチック担体にそれらを取り込ませることも可能である。
【０１１４】
適当な担体は、特に、充填剤、例えば、ラクトース、サッカロース、マンニトールまたはソルビトールなどの糖類、セルロース製剤および／またはリン酸カルシウム、例えば、リン酸トリカルシウムまたはリン酸水素カルシウム、およびデンプン糊などの結合剤、例えば、トウモロコシ、コムギ、コメもしくはバレイショデンプン、ゼラチン、トラガカント、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ナトリウム・カルボキシメチルセルロースおよび／またはポリビニルピロリドン、および／または所望により、崩壊剤、例えば、上記のデンプン、および／またはカルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸もしくはその塩(アルギン酸ナトリウムなど)である。添加剤は、特に、流動コンディショナーおよび滑沢剤、例えば、ケイ酸、タルク、ステアリン酸もしくはその塩、例えば、ステアリン酸マグネシウムもしくはカルシウム、および／またはポリエチレングリコールである。糖衣錠コアは適当な任意の腸溶コーティング剤で調製するが、就中、濃縮糖溶液が使用される；該糖溶液は、アラビアゴム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールおよび／または二酸化チタン、または適当な有機溶媒中のコーティング溶液、または腸溶コーティング剤調製のためには、適当なセルロース製剤の溶液、例えば、フタル酸エチルセルロースもしくはフタル酸ヒドロキシプロピルメチルセルロースを含有し得る。カプセルはゼラチンで作製した乾式充填カプセルおよびゼラチンとグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤で作製したソフトシールカプセルである。乾式充填カプセルは、例えば、充填剤(ラクトースなど)、結合剤(デンプンなど)、および／または滑沢剤(タルクまたはステアリン酸マグネシウムなど)、および所望により、安定化剤を含み得る。ソフトカプセルの場合、有効成分は、好ましくは、適当な油性添加剤、例えば、脂肪油、パラフィン油または液状ポリエチレングリコールなど中に溶解または懸濁する；安定化剤および／または抗菌剤を加えることも可能である。染料または色素を、例えば、同定の目的で、または有効成分の異なる用量を示すために、錠剤または糖衣錠コーティング剤またはカプセル外皮に加えてもよい。
【０１１５】
組合わせ剤
本発明化合物は、Ｒhoキナーゼ阻害剤、古典的ＰＫＣイソ型の阻害剤、ノゴＡまたはノゴ受容体に対する遮断抗体、コンドロイチナーゼＡＢＣもしくはＧＡＧ側鎖オフ・プロテオグリカンを切断する他の試薬、および本来備わっているニューロンの成長能力を増大させる薬剤など、突起成長阻害を克服することの知られた他の薬剤との組合わせに有利となるようにも使用し得る(例えば、ｃＡＭＰおよびｂｃｌ−２)。
【０１１６】
非排他的例として、本発明化合物は、ミエリン阻害因子ノゴ、ミエリン関連糖タンパク質(ＭＡＧ)、または希突起膠細胞−ミエリン糖タンパク質ＯＭgpを遮断し得る薬剤との併用療法に使用し得る。
【０１１７】
コード番号、一般名称または商品名により同定される活性薬剤の構造は、標準的概要集「メルクインデックス」の現行版から、またはデータベース、例えば、国際特許(例えば、IMS World Publications)から引き出し得る。
【０１１８】
式(Ｉ)の化合物と組合わせて使用し得る上記の化合物は、上に引用した文献などの技術分野で記載されているように調製し、投与し得る。
【０１１９】
以下の実施例は単に説明するためのものであって、如何なる方法でも本発明請求項の範囲を限定することを意味しない。
【実施例】
【０１２０】
実施例１〜１２：合成
以下の実施例は本明細書に掲載した略号を採用し、他の意味で記載しない限り、以下の条件を採用する：温度が示されていない場合、反応は外気温度(室温)で実施する；また、溶媒の比、例えば、溶出液または溶媒混合物の比は、容量／容量(ｖ／ｖ)で示す。
【０１２１】
溶媒の比、例えば、溶出液または溶媒混合物の比は、容量／容量(ｖ／ｖ)または容量パーセントで示す。温度は摂氏で測定する。特に断りのない限り、反応はＲＴ(室温)で実施する。Ｒｆ値は、それぞれ命名した溶媒系を用いる薄層クロマトグラフィーにより、各物質が移動した距離と、溶出液前端が移動した距離の比を示すものであり、シリカゲル薄層プレート(メルク、ダルムシュタット、ドイツ)上で測定する。
【０１２２】
ＨＰＬＣが言及されている場合の分析用ＨＰＬＣの条件は、以下のとおりである：
カラム：(７０×４.０ｍｍ)ＨＰＬＣカラムＣＣ７０／４ヌクレオシル１００−３Ｃ１８(３μｍ平均粒子径、オクタデシルシランで共有結合誘導化したシリカゲルを含む；マッチェリー＆ナーゲル、デューレン、ドイツ)。ＵＶ吸収２１５ｎｍで検出。保持時間(ｔＲ)は分で示す。流速：１ｍｌ／分。
勾配：２０％→１００％  ａ)／ｂ)５分間＋１分間１００％ａ)。ａ)；アセトニトリル＋０.１％ＴＦＡ；ｂ)：水＋０.１％ＴＦＡ。
【０１２３】
他のＨＰＬＣ条件：
ＨＰＬＣ(ＧＲＡＤ３)：
カラム：(２５０×４.６ｍｍ)逆相物質Ｃ１８−ヌクレオシル充填(５μｍ平均粒子径、オクタデシルシランで共有結合誘導化したシリカゲルを含む；マッチェリー＆ナーゲル、デューレン、ドイツ)。ＵＶ吸収２１５ｎｍで検出。保持時間(ｔＲ)は分で示す。流速：１ｍｌ／分。
勾配：５％→４０％  ａ)／ｂ)７.５分間＋７分間４０％ａ)。ａ)；アセトニトリル＋０.１％ＴＦＡ；ｂ)：水＋０.１％ＴＦＡ。
【０１２４】
使用する短縮型および略号は、以下の定義をもつ：
conc.：濃縮；ＤＭＦ：Ｎ,Ｎ−ジメチルホルムアミド；ＭＳ−ＥＳ：マス・スペクトル法(電子スプレー)；ｈ：時間；Ｍｅ：メチル；min：分；ｍＬ：ミリリットル；m.p.：融点；ＲＴ：室温；ＴＦＡ：トリフルオロ酢酸；ＴＨＦ：テトラヒドロフラン(Ｎａ／ベンゾフェノン上で蒸留)；ＴＬＣ：薄層クロマトグラフィー；ｔＲ：保持時間。
【０１２５】
実施例１：Ｎ−(３−イソキノリン−７−イル−４−メチル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド(化合物１)
【化１５】
2009543801.tif 000016
乾燥ジオキサン(２８ｍL)中、Ｎ−[４−メチル−３−(４,４,５,５−テトラメチル−[１,３,２]ジオキサボロラン−２−イル)−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド(１.７４ｇ、４.３ｍｍｏｌ)およびトリフルオロメタンスルホン酸イソキノリン−７−イルエステル(１.０８１ｇ、３.９ｍｍｏｌ)の溶液に、１.２３ｇ(５.７９ｍｍｏｌ)のリン酸カリウムを加え、この懸濁液に窒素流を１５分間ゆるやかに吹き込み、脱気溶液とする。０.２３２ｇ(０.３３ｍｍｏｌ)のテトラキス(トリフェニルホスフィン)パラジウムを添加した後、その混合物を９０℃で１０時間加熱する。同量の触媒とリン酸カリウムを再度添加し、その混合物を９０℃で１７時間撹拌する。反応混合物を冷却し、ハイフロスーパーセル(登録商標)(フルカ、ブッフス、スイス)で濾過し、残渣をジオキサンで洗浄する。併合したジオキサン溶液を蒸発させ、褐色の残渣をコンビ−フラッシュ・コンパニオン(商標)(イスク・インク)装置上、１２０ｇのシリカゲルカラムを用いるクロマトグラフィーにより精製する。tert−ブチルメチルエーテル／ヘキサン(１：１ないし４：１)の勾配を使用する。精製フラクションをプールし、蒸発させて標題化合物をピンクの泡状物として得る。Ｒｆ(tert−ブチルメチルエーテル)＝０.３２；ＨＰＬＣ  ｔＲ＝３.２４分；ＭＳ−ＥＳ＋：(Ｍ＋Ｈ)＋＝４０７。
【０１２６】
工程１.１：Ｎ−[４−メチル−３−(４,４,５,５−テトラメチル−[１,３,２]ジオキサボロラン−２−イル)−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化１６】
2009543801.tif 000017
ＴＨＦ(５０ｍＬ)中、５.０ｇ(１４ｍｍｏｌ)のＮ−(３−ブロモ−４−メチル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミドおよび３.４２ｇ(３４.５ｍｍｏｌ)の酢酸カリウムの混合物に、窒素を約２０分間吹き込む。４.０６ｍｇ(１６ｍｍｏｌ)のビス−(ピナコラト)−ジボランを加えた後、６ｍｏｌ％の１,１’−ビス(ジフェニルホスフィノ)フェロセン−パラジウム二塩化物(７００ｍｇ、０.８ｍｍｏｌ)を加え、得られる混合物を１８時間加熱還流する。反応混合物をＲＴに冷却し、酢酸エチルで希釈する。この混合物を濃塩化ナトリウム溶液で洗った後、酢酸エチル相を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発する。粗製の産物をジクロロメタンを溶媒とするフラッシュ・クロマトグラフィーにより精製する。標題化合物を無色固体として得る；m.p.１４８−１５２℃；Ｒｆ(ジクロロメタン)＝０.３６；ＨＰＬＣ  ｔＲ＝４.８２分；ＭＳ−ＥＳ＋：(Ｍ＋Ｈ)＋＝４０６。
【０１２７】
工程１.２：Ｎ−(３−ブロモ−４−メチル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド
【化１７】
2009543801.tif 000018
アセトニトリル(８０ｍL)中の５.８ｍＬ(３９ｍｍｏｌ)の塩化３−トリフルオロ−ベンゾイルの溶液に、トリエチルアミン１２.２ｍＬ(７８ｍｍｏｌ)をＲＴで滴下し、次いで、３−ブロモ−４−メチル−アニリン７.８ｇ(４２.９ｍｍｏｌ)を加えた。３−トリフルオロメチル−アニリンをゆっくり添加する間、温度が約３０℃に上昇する。混合物を室温で１０時間撹拌し、次いで、０℃に冷却する。水を加え(１００ｍＬ)、得られる沈殿を濾取し、水洗し、乾燥する。固形物をヘキサンに懸濁し、数分間撹拌し、濾過し、再度乾燥し、標題化合物を無色固体として得る。m.p.１５３−１５５℃；ＨＰＬＣ  ｔＲ＝４.５４分。
【０１２８】
工程１.３：トリフルオロメタンスルホン酸イソキノリン−７−イルエステル
【化１８】
2009543801.tif 000019
ジクロロメタン１００ｍＬ中、５.８ｇ(０.０４ｍｏｌ)の７−ヒドロキシキノリンおよび６.６８ｍＬ(０.０４８ｍｏｌ)のトリエチルアミンの溶液を氷浴で冷却し、これに７.２６ｍＬ(０.０４４ｍｏｌ)のトリフルオロ−スルホン酸無水物を３０分で滴下する。添加終了後、冷却浴を除き、暗色の混合物をＲＴで１.５時間撹拌する。反応混合物を氷水１００ｍＬに注ぎ、ハイフロスーパーセル(登録商標)(珪藻土に基づく濾過剤；フルカ(ブッフス、スイス)から入手)で二相混合物を濾過する。有機層を分離し、１０％クエン酸(５０ｍＬ)、食塩水(５０ｍＬ)で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発して褐色残渣を得る。これをジクロロメタン／酢酸エチル(１００：２.５ないし１００：５)によるフラッシュ・クロマトグラフィーにより精製する。精製フラクションをプールし、蒸発させて橙色油を得る。ＨＰＬＣ  ｔＲ＝２.３５分；Ｒｆ(tert−ブチルメチルエーテル)＝０.３８；ＭＳ−ＥＳ＋：(Ｍ＋Ｈ)＋＝２７８。
【０１２９】
実施例２：Ｎ−(４−メチル−３−キナゾリン−６−イル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド(化合物２)
【化１９】
2009543801.tif 000020
トルエン(３ｍＬ)およびエタノール(０.３７５ｍＬ)中、Ｎ−[４−メチル−３−(４,４,５,５−テトラメチル−[１,３,２]ジオキサボロラン−２−イル)−フェニル]−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド(０.４５６ｇ、１.１２５ｍｍｏｌ)および６−ブロモ−キナゾリン(０.１５７ｇ、０.７５ｍｍｏｌ)の混合物を、２モル炭酸ナトリウム溶液(０.７５ｍＬ)で処理し、得られた混合物に窒素を該混合物を通して５分吹き込んで、脱気する。酢酸パラジウム(０.００７５ｇ、０.０３４ｍｍｏｌ)およびトリフェニルホスフィン(０.０２９３ｇ、０.１１７ｍｍｏｌ)を添加した後、その混合物を９０℃で２時間撹拌する。同量の酢酸パラジウムとトリフェニルホスフィンを再度添加し、その混合物を９０℃で６時間撹拌する。反応混合物を冷却し、酢酸エチル１０ｍＬと水４ｍＬを加える。二相混合物をハイフロスーパーセル(登録商標)(フルカ、ブッフス、スイス)で濾過し、有機層を分離し、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させ、褐色の樹脂を得る。粗製の産物をコンビ−フラッシュ・コンパニオン(商標)(イスク・インク)装置上、４０ｇのシリカゲルカラムを用いるクロマトグラフィーにより精製する。ジクロロメタン／メタノール(１００：１ないし１００：１５)の勾配を使用する。濃厚化フラクションは同じシステム上、４０ｇのシリカゲルカラムと溶媒としてtert−ブチルメチルエーテルを用いて再クロマトする。精製フラクションをプールし、蒸発させて標題化合物を黄褐色の泡状物として得る。Ｒｆ(ジクロロメタン／エタノール＝９：１)＝０.５６；ＨＰＬＣ  ｔＲ＝３.２３分；ＭＳ−ＥＳ＋：(Ｍ＋Ｈ)＋＝４０８。
【０１３０】
工程２.１：６−ブロモ−キナゾリン
【化２０】
2009543801.tif 000021
温度計と機械的撹拌機を備えた反応容器に、トリフルオロ酢酸(１０ｍＬ)を容れる。キナゾリン(２.６ｇ、０.０２０ｍｏｌ)を２０℃で加え、次いで、９６％硫酸３.４ｍＬを加える。次いで、Ｎ−ブロモコハク酸イミド(４.８ｇ、０.０２７ｍｏｌ)を５分割して３０分おきに加える。添加終了後、黄色の混合物をＲＴで１７時間撹拌する。トリフルオロ酢酸とロータリーエバポレーター(ロタバップ)で除去し、残渣を２０ｇの砕氷に注ぐ。３０％水酸化ナトリウム溶液により混合物のｐＨを８〜９に調整する。得られる懸濁液を酢酸エチル４０ｍＬで希釈し、濾過する。有機層を分離し、水相を酢酸エチル２０ｍＬで抽出する。併合した酢酸エチル抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させる。残渣を酢酸エチル／ヘキサン(１：３ないし１：２)によるフラッシュ・クロマトグラフィーに付し、標題化合物を無色結晶として得る。m.p.１５５−１５６℃；ＨＰＬＣ  ｔＲ＝１.２９分；Ｒｆ(酢酸エチル／ヘキサン、３：２)＝０.３６；ＭＳ−ＥＳ＋：(Ｍ＋Ｈ)＋＝２１０.９。
【０１３１】
実施例３：３−イソキノリン−７−イル−４−メチル−Ｎ−(３−トリフルオロメチル−フェニル)−ベンズアミド(化合物３)
【化２１】
2009543801.tif 000022
異なる出発原料として４−メチル−３−(４,４,５,５−テトラメチル−[１,３,２]ジオキサボロラン−２−イル)−Ｎ−(３−トリフルオロメチル−フェニル)ベンズアミドを用い、触媒の２回目の添加を必要としない以外、実施例１に記載の手順と同じ手順を使用する。標題化合物を無色固体として得る。m.p.１８９−１９１℃；ＨＰＬＣ  ｔＲ＝３.３０分；Ｒｆ(酢酸エチル／ジクロロメタン、１：４)＝０.２１；ＭＳ−ＥＳ＋：(Ｍ＋Ｈ)＋＝４０７。
【０１３２】
工程３.１：４−メチル−３−(４,４,５,５−テトラメチル−[１,３,２]ジオキサボロラン−２−イル)−Ｎ−(３−トリフルオロメチル−フェニル)−ベンズアミド
【化２２】
2009543801.tif 000023
３−ブロモ−４−メチル−Ｎ−(３−トリフルオロメチル−フェニル)−ベンズアミドから出発する以外、実施例１の工程１に記載した手順と同じ手順を用いる。反応時間は８時間である。標題化合物は黄褐色固体として得る。m.p.１５７−１５９℃；Ｒｆ(ジクロロメタン)＝０.３６；ＨＰＬＣ  ｔＲ＝４.９３分；ＭＳ−ＥＳ＋：(Ｍ＋Ｈ)＋＝４０６。
【０１３３】
工程３.２：３−ブロモ−４−メチル−Ｎ−(３−トリフルオロメチル−フェニル)−ベンズアミド
【化２３】
2009543801.tif 000024
アセトニトリル(１２０ｍＬ)中、１４ｇ(６０ｍｍｏｌ)の塩化３−ブロモ−４−メチル−ベンゾイルの溶液に、ＲＴで、１２.６ｇ(１２０ｍｍｏｌ)のトリエチルアミンを、次いで、８.３ｍＬ(６６ｍｍｏｌ)の３−トリフルオロメチル−アニリンを滴下する。３−トリフルオロメチル−アニリンをゆっくり滴下している間に、温度が約３５℃に上昇する。この混合物を室温で５時間撹拌し、次いで、酢酸エチルで希釈する。得られる混合物を飽和重炭酸ナトリウム溶液、１Ｎ−塩酸および食塩水で順次洗い、次いで、硫酸ナトリウムで乾燥する。溶媒を蒸発させると褐色油を得て、これをエーテル／石油エーテルで結晶化し、標題化合物を無色固体として得る。m.p.１５７−１５８℃；ＨＰＬＣ  ｔＲ＝４.６３分；Ｒｆ(ジクロロメタン)＝０.７５。
【０１３４】
実施例４：４−メチル−３−キナゾリン−６−イル−Ｎ−(３−トリフルオロメチル−フェニル)−ベンズアミド(化合物４)
【化２４】
2009543801.tif 000025
異なる出発原料として実施例３.１の標題化合物を用い、触媒の２度目の添加を必要としない以外、実施例２に記載の手順と同じ手順を使用する。標題化合物を無色泡状物として得る。ＨＰＬＣ  ｔＲ＝３.３１分；Ｒｆ(tert−ブチルメチルエーテル)＝０.２１；ＭＳ−ＥＳ＋：(Ｍ＋Ｈ)＋＝４０８。
【０１３５】
実施例５：Ｎ−(３−ベンゾチアゾール−６−イル−４−メチル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド(化合物５)
【化２５】
2009543801.tif 000026
異なる出発原料として６−ブロモ−ベンゾチアゾールを用い、触媒の２度目の添加を必要としない以外、実施例２に記載の手順と同じ手順を使用する。反応時間２時間、精製はフラッシュ・クロマトグラフィーによる。標題化合物を無色固体として得る。m.p.９４−９６℃；ＨＰＬＣ  ｔＲ＝４.５８分；Ｒｆ(ジクロロメタン／エタノール、９８：２)＝０.３；ＭＳ−ＥＳ＋：(Ｍ＋Ｈ)＋＝４１３。
【０１３６】
実施例６：３−ベンゾチアゾール−６−イル−４−メチル−Ｎ−(３−トリフルオロメチル−フェニル)−ベンズアミド(化合物６)
【化２６】
2009543801.tif 000027
出発原料として、６−ブロモ−ベンゾチアゾールおよび実施例３.１の標題化合物を用い、触媒の２度目の添加を必要としない以外、実施例２に記載の手順と同じ手順を使用する。反応時間３時間。標題化合物を無色固体として得る。m.p.１０２−１０４℃；ＨＰＬＣ  ｔＲ＝４.６６分；Ｒｆ(ジクロロメタン／エタノール、９８：２)＝０.３；ＭＳ−ＥＳ＋：(Ｍ＋Ｈ)＋＝４１３。
【０１３７】
実施例７：Ｎ−(４−メチル−３−フタラジン−６−イル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド(化合物７)
【化２７】
2009543801.tif 000028
触媒の２度目の添加を必要としない以外、実施例２に記載の手順と同じ手順を使用する。反応時間３時間。標題化合物を無色固体として得る。m.p.２０５−２０６℃；ＨＰＬＣ  ｔＲ＝３.３４分；ＭＳ−ＥＳ＋：(Ｍ＋Ｈ)＋＝４０８。
【０１３８】
出発原料は以下のように調製する。
工程７.１：６−ブロモ−フタラジン
【化２８】
2009543801.tif 000029
エタノール(４ｍＬ)およびジクロロメタン(４ｍｌ)中、１.０ｇ(４.７ｍｍｏｌ)の４−ブロモ−ベンゼン−１,２−ジカルバルデヒドの溶液を、０℃、窒素下、ヒドラジン水和物(０.６８４ｍＬ、１４.１ｍｍｏｌ)とエタノール(４.７ｍＬ)からなる溶液に、４０分間にわたり滴下する。得られる懸濁液を０℃で１時間撹拌し、次いで、溶媒を蒸発させる。結晶性物質をトルエン(２０ｍL)と共に撹拌し、溶媒を再度蒸発させる。この手順をジクロロメタンで繰り返す。最後に、生成物を真空下に６０℃で８時間乾燥し、標題化合物を無色結晶として得る。m.p.１４０−１４３℃、ＨＰＬＣ  ｔＲ＝１.４９分；ＭＥ−ＥＳ＋：(Ｍ＋Ｈ)＋＝２１０.９。
【０１３９】
工程７.２：４−ブロモ−ベンゼン−１,２−ジカルバルデヒド
【化２９】
2009543801.tif 000030
標題化合物は文献(O. Farooq, Synthesis 10, 1035-1037 (1994))記載の手法に従い、(４−ブロモ−２−ヒドロキシメチル−フェニル)−メタノールのスワーン酸化により合成し、僅かに黄色の結晶として得る。m.p.９７−１００℃；ＭＳ−ＥＳ＋：(Ｍ＋Ｈ)＋＝２１０.９＋２１２.９。
【０１４０】
工程７.３：３−(４−ブロモ−２−ヒドロキシメチル−フェニル)メタノール
【化３０】
2009543801.tif 000031
１,２−ジメトキシエタン(２４ｍＬ)中、３ｇ(１２.２ｍｍｏｌ)の４−ブロモ−フタル酸の溶液に、１.３９４ｇ(３６.８ｍｍｏｌ)の水素化ホウ素ナトリウムを１０回に分けて０℃で添加する。１５分間撹拌した後、４.６１ｍＬ(３６.５ｍｍｏｌ)の三フッ化ホウ素・エーテレートと８ｍＬの１,２−ジメトキシエタンからなる溶液を１０分以内に加える。０℃で１０分間撹拌した後、混合物をＲＴまで加温し、２時間撹拌を続ける。次いで、反応混合物を４０ｇの砕氷にゆっくりと加え、水性混合物を酢酸エチルで蒸発する。併合した酢酸抽出液を水と食塩水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させる。残留する黄色油(粗製物)を、コンビフラッシュ・コンパニオン(商標)(イスコ・インク)クロマトグラフィー装置上、１２０ｇのシリカゲルカラムによるクロマトグラフィーにより精製する。ジクロロメタン／酢酸エチル０→５０％酢酸エチルの勾配を用いる。標題化合物を油として得、これを放置して結晶化させる。m.p.７９−８１℃；ＨＰＬＣ  ｔＲ＝１.９４分；ＭＳ−ＥＳ＋：(Ｍ＋Ｈ)＋＝２１４＋２１６。
【０１４１】
実施例８：４−メチル−３−フタラジン−６−イル−Ｎ−(３−トリフルオロメチル−フェニル)−ベンズアミド(化合物８)
【化３１】
2009543801.tif 000032
実施例２に記載の手順と同じ手順を使用する。標題化合物：m.p.２７０−２７２℃；ＨＰＬＣ  ｔＲ＝３.４３分；Ｒｆ(ジクロロメタン／エタノール)＝０.３２；ＭＳ−ＥＳ＋(Ｍ＋Ｈ)＋＝４０８。
【０１４２】
実施例９：Ｎ−(３−ベンゾチアゾール−５−イル−４−メチル−フェニル)−３−トリフルオロメチル−ベンズアミド(化合物９)
【化３２】
2009543801.tif 000033
５−ブロモ−ベンゾチアゾールから出発して、実施例２に記載の手順と同じ手順を使用する。反応時間：合計４時間。標題化合物を無色固体として得る。M.p.９０−９３℃；ＨＰＬＣ  ｔＲ＝４.５４分；Ｒｆ(ジクロロメタン(エタノール)＝０.３０；ＭＳ−ＥＳ＋：(Ｍ＋Ｈ)＋＝４１３。
【０１４３】
出発原料は以下のように調製する：
工程９.１：５−ブロモ−ベンゾチアゾール
【化３３】
2009543801.tif 000034
３５％臭化水素酸溶液(１８ｍＬ)中、４−アミノ−ベンゾチアゾール(３.０ｇ、０.０２ｍｏｌ)に、亜硝酸ナトリウム(１.１９ｇ、０.０１９５ｍｍｏｌ)と水(１１ｍＬ)との溶液を０℃でゆっくりと加えてジアゾ化する。０℃で１時間撹拌した後、褐色溶液をＣｕＢｒ(３.３ｇ、０.０２３ｍｏｌ)と３５％臭化水素酸溶液(４５ｍＬ)との暗色溶液に０℃で滴下する。反応混合物を０℃で０.５時間、ＲＴで２時間、次いで、９０℃で２時間撹拌する。混合物をＲＴに冷却し、砕氷２０ｇに注ぐ。この混合物に濃アンモニアを加えてアルカリ性とし、次いで、酢酸エチルで抽出する。有機層を併合し、食塩水で洗い、硫酸ナトリウムで乾燥し、蒸発させる。残渣を、ジクロロメタン／石油エーテルを溶出液として用いるシリカゲル上のフラッシュ・クロマトグラフィーにより精製する。標題化合物を固体として得る。m.p.１０４−１０６℃；ＨＰＬＣ  ｔＲ＝３.４４分；Ｒｆ(ジクロロメタン／石油エーテル)＝０.３０。
【０１４４】
工程９.２：５−アミノ−ベンゾチアゾール
【化３４】
2009543801.tif 000035
精製した５−ニトロ−ベンゾチアゾール(７.２ｇ、０.０４ｍｏｌ；参照：ＷＯ９８／２３６１２号明細書、実施例７Ａ)を１６０ｍＬのメタノールと１６０ｍＬのＴＨＦに溶かし、１.６ｇのＰｄ／Ｃ(１０％；エンゲルハード４５０５)の存在下に水素化する。触媒を濾去し、濾液を濃縮して、残留油を、ジクロロメタン／メタノール(９７：３)を溶出液として用いるシリカゲル上のフラッシュ・クロマトグラフィーにより精製する。標題化合物を無色固体として得る。m.p.７６−７８℃；ＨＰＬＣ  ｔＲ＝０.７６分；ＭＳ−ＥＳ＋：(Ｍ＋Ｈ)＋＝１５１；Ｒｆ(ジクロロメタン／メタノール、９７：３)＝０.７６。
【０１４５】
実施例１０：３−ベンゾチアゾール−５−イル−４−メチル−Ｎ−(３−トリフルオロメチルフェニル)ベンズアミド(化合物１０)
【化３５】
2009543801.tif 000036
実施例９に記載の手順と同じ手順を使用する。標題化合物：m.p.２００−２０２℃；ＨＰＬＣ  ｔＲ＝４.６２分；Ｒｆ(ジクロロメタン／エタノール、９８：２)＝０.３０；ＭＳ−ＥＳ＋：(Ｍ＋Ｈ)＋＝４１３。
【０１４６】
実施例１１：ソフトカプセル
各カプセルが有効成分として、上記実施例のいずれか１例に記載された式(Ｉ)の化合物０.０５ｇ含有してなる５０００個のゼラチンカプセルを以下のように調製する：
組成：
有効成分：２５０ｇ
ラウログリコール：２リットル
【０１４７】
製造工程：粉末化有効成分をラウログリコール(Lauroglykol；登録商標)(ラウリル酸プロピレングリコール；ガテフォッセ(株)(Gattefosse S.A.)、サン・プリエスト(Saint Priest)、フランス)に懸濁し、湿式粉砕機で研磨し、粒子径約１〜３μｍとする。次いで、この混合物の０.４１９ｇ分をカプセル充填機によりソフトゼラチンカプセルに導入する。
【０１４８】
実施例１２：式(Ｉ)の化合物を含有してなる錠剤
錠剤は有効成分として実施例１ないし１０の式(Ｉ)で示される化合物のいずれか１種、１００ｍｇを含有してなり、標準的手法に従い、以下の組成で調製する：
組成：
有効成分：１００ｍｇ；結晶性ラクトース：２４０ｍｇ；アビセル：８０ｍｇ；ＰＶＰＰＸＬ：２０ｍｇ；エーロジル：２ｍｇ；ステアリン酸マグネシウム：５ｍｇ；合計４４７ｍｇ
【０１４９】
製造：有効成分を担体物質と混合し、製錠機(コルシュ(Korsch)ＥＫＯ、ステンペルデュルッフメッサー(Stempeldurchmesser)１０ｍｍ)により打錠する。
アビセル(登録商標)は微結晶セルロース(ＦＭＣ；フィラデルフィア、米国)であり、ＰＶＰＰＸＬはポリビニルポリピロリドン架橋体(ＢＡＳＦ、ドイツ)である。エーロジル(登録商標)は二酸化ケイ素である(デグッサ、ドイツ)。
【０１５０】
実施例１３：ＥphＡ４様式および作用メカニズム
エフリンが軸索再生という意味で可能である前方および双方向シグナル伝達を識別するために、野生型およびキナーゼ致死ＥphＡ４のレンチウイルス発現ベクターを生成させ、精製した星状細胞にて過剰発現させる。皮質ニューロンを２つの星状細胞集団に塗布し、神経突起発芽成長をアッセイし、比較する。ＥphＡ４と関連するリガンドの相互作用を遮断し、結果として受容体活性化を阻害することの証明されている生物学的ペプチド(Murai, K.K., et al., (2003) Mol Cell Neurosci 24(4): p. 1000)は、星状細胞／皮質ニューロン培養系において、それらのＥphＡ４阻害活性について試験する。ニューロンリガンド／エフリン仲介ＥphＡ４阻害の同定は、エフリンをノックダウンするためにＲＮＡ干渉を用い、ニューロンでの候補エフリン発現を系統的に遮断することにより、または優性ネガティブエフリン構築物を用い、次いでそれらを野生型星状細胞に塗布することにより、達成する。これらの実験はＥphＡ４活性化の様式を集約的に明確にする。
【０１５１】
ＥphＡ４活性化が引き金となる細胞内事象を説明するためには、星状細胞のサイトカイン誘導活性化を用い、正確なシグナル伝達活性化経路を探究する。培養した星状細胞をＥphＡ４遮断ペプチドの存在下または不存在下に、炎症性サイトカイン(これらは星状細胞の活性化に関与していることが示されている)ＬＩＦまたはＩＦＮで処理し、その細胞を溶解し、適切なホスホ−抗体を用いて、主要シグナル伝達経路(ＭＡＰＫ、Ｐ１３Ｋ、ＪＮＫ、ＳＴＡＴ、ＲhoＡ)の活性化について、ウエスタンブロットにより分析する。ＥphＡ４による神経突起発芽成長阻害に関わるシグナル伝達は、星状細胞上の、もしくはＣＮＳミエリン上の皮質ニューロン、または脊髄抽出液を、主たるシグナル伝達経路の市場入手可能な薬理学的阻害剤およびＥphＡ４阻害性ペプチドの存在下もしくは不存在下に培養することにより評価する。
【０１５２】
実施例１４：自己リン酸化およびリガンド依存性リン酸化アッセイ
一次星状細胞培養を新生児マウス皮質から確立し、約９５〜９８％純度の星状細胞培養物となるように精製する。自己リン酸化を検出するためには、細胞を薬理学的阻害剤の存在下または不存在下に培養し、次いでそのまま溶解し、免疫沈降とウエスタン分析に付す。リガンド依存性リン酸化については(図１に示すように)、培養物を３６時間血清飢餓状態として基礎的受容体リン酸化を低下させ、次いで、種々濃度で加える候補キナーゼ阻害剤または遮断ペプチドの存在下または不存在下に、可溶型同族体リガンドで様々な長さの時間刺激する。細胞を溶解し、溶解液をＥphＡ４免疫沈降に付し、次いで、ホスホ−チロシン抗体を用いて、受容体リン酸化のレベルについて、ウエスタン法により分析する。
【０１５３】
実施例１５：神経突起発芽成長／軸索再生についてのインビトロアッセイ
本アッセイは、星状細胞上に発現されるＥph受容体による胎児性皮質ニューロンの神経突起発芽成長阻害の評価、またはミエリンに存在するエフリンリガンドによる生後の皮質ニューロンの神経突起発芽成長阻害の評価に使用する。生後(Ｐ３)皮質ニューロンを４穴チャンバーまたは９６穴プレートにて固定したＣＮＳミエリンに塗布する。薬理学的阻害剤を培地に加え、各ニューロンからの最長の神経突起の長さを各条件下で測定し、薬理学的薬剤不存在下のミエリン上の平均神経突起の長さと比較する。図２はＣＮＳミエリン上に塗布した皮質培養において、化合物３および他の化合物すべて(１００ｎＭ濃度で試験)で観察される神経突起発芽成長作用の定量化を示す。
【０１５４】
実施例１６：アストログリオーシス−星状細胞掻き傷についてのインビトロアッセイ
アッセイ用星状細胞は新生児Ｃ５７ＢＬ／６マウス(Ｐ１−Ｐ２)の大脳皮質から調製する。細胞は１０％ＦＢＳを含むダルベッコ変法イーグル培地に維持する。４〜７週令の星状細胞を掻き傷アッセイ用の血清飢餓ポリ−Ｄ−リジン被覆２穴チャンバースライドにコンフルーエントに塗布する。血清飢餓４８時間後、星状細胞の単層を無菌２００μｌチップで掻き、ＰＢＳで２回洗い、細胞片を取り除く。条件化培地(＋／−サイトカイン)を、傷つけた星状細胞に加える。掻き傷の微視的イメージは引っ掻き直後に１０倍に拡大して捕捉し、引っ掻き後、０.２４時間、４８時間または７２時間後の時点で、同じ引っ掻き領域を画像化し、１μｇ／ｍｌのＤＡＰＩを含むメタノールで固定し、星状細胞の移動と増殖をモニターして検討する。
【０１５５】
実施例１７：メカニズムの証明
本実験は、本発明の化合物が脳関門を通過し、インビボでＥphＡ４のリン酸化を効率的に遮断することを証明する。雄性ＮＭＲＩマウスに関連化合物を１０ｍｇ／ｋｇ体重の用量で注射し、投与(図４に示す０.２５時間または１時間)の２５分後または１時間後に犠牲とした。脳を取り出し、各脳の１／２の重量を測定し、適切な容量の溶解バッファー中で３０秒間均一化した(１０秒のパルスと１０秒の停止−３回)。ホモジネートを１２,０００ｇで３０分間遠心する。上清についてタンパク質量を評価し(ＢＣＡを使用)、各条件について等量のタンパク質をＥphＡ４免疫沈降に付し、次いで、ホスホ−チロシン・ウエスタンブロットに付した。４匹の対照動物を使用し、試験化合物それぞれについて、時点ごとに３匹の実験動物を使用した。
【０１５６】
実施例１８：高処理能力スクリーニング(ＨＴＳ)
ＥphＡ４活性の選択的特異的な薬理学的阻害剤を探索するために、高処理能力スクリーニング法を開発し得る。かかる化合物は、本発明化合物でのように、そのリガンドとＥphＡ４の相互作用を遮断するか、および／またはＥphＡ４キナーゼ活性化を特異的に遮断するキナーゼ阻害剤または結合アンタゴニストである。かかる化合物は、本発明化合物でのように、グリオーシスおよび軸索再生という面において、ＥphＡ４活性を効率的に遮断する阻害剤として働き得る。
【０１５７】
実施例１９：マウスＳＣＩモデルにおけるインビボ標的検証
本明細書に記載したＨＴＳからの現存のＥphＡ４阻害性ペプチド／ヒット、例えば、本発明化合物は、軸索再生を促進する上でのそれらの有効性を決定するインビボ脊髄傷害(ＳＣＩ)実験に使用し得る。マウスを３つのグループに分ける：傷害なし；媒体注入による傷害；および薬物／ペプチド注入による傷害。薬物または媒体(例えば、本発明化合物の１種を含む)は、浸透ポンプを介して脊髄内に投与し、順向性トレーサーを用いて傷害された軸索の解剖学的再生を追跡記録する。適切な行動および電気生理学的アッセイを実施し、知覚および運動機能の機能的回復を評価する。
【０１５８】
上記のＳＣＩモデル実験に加えて、ＥphＡ４阻害性薬剤、例えば、本発明化合物について、ノゴシグナル伝達を障害させて試験でき、これが改善された機能回復に導く相乗効果をもたらすかどうかを見ることもできる。
【図１】
2009543801.tif 000049
【図２】
2009543801.tif 000050
【図３】
2009543801.tif 000051
【図４】
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【国際調査報告】
2009543801.tif 000053
2009543801.tif 000054
2009543801.tif 000055