(57)【要約】  本発明は、洗剤成分と、親リパーゼで同定された１以上の領域に変異を導入することにより得られる臭気発生の可能性が減少したリパーゼ変異体を含む洗剤組成物に関する。
2009523461.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
洗剤成分と親リパーゼの変異体とを含む組成物であって、前記変異体が、前記親と比較して、合計で少なくとも３つの置換を含み、前記置換が
ａ）領域Ｉ内の少なくとも２つの置換、
ｂ）領域ＩＩ内の少なくとも１つの置換、
ｃ）領域ＩＩＩ内の少なくとも１つの置換、および／または
ｄ）領域ＩＶ内の少なくとも１つの置換
の置換群のうち１以上から選択される組成物。
【請求項２】
前記領域Ｉ内の置換が、２３１位および２３３位に相当する位置の置換を含む、請求項１に記載の洗剤組成物。
【請求項３】
前記２３１位および２３３位における置換が、Ｒへの置換である、請求項２に記載の洗剤組成物。
【請求項４】
前記変異体が、配列番号２の４位に相当する位置の置換を含む、請求項２に記載の洗剤組成物。
【請求項５】
前記配列番号２の４位に相当する位置の置換が、Ｖである、請求項４に記載の洗剤組成物。
【請求項６】
前記変異体が、配列番号２の２２７位に相当する位置の置換を含む、請求項２に記載の洗剤組成物。
【請求項７】
前記配列番号２の２２７位に相当する位置の置換が、Ｇである、請求項６に記載の洗剤組成物。
【請求項８】
前記領域ＩＩ内の少なくとも１つの置換が、２０２位、２１１位、２５５位および２５６位に相当する位置の置換からなる群から選択される置換を含む、請求項１に記載の洗剤組成物。
【請求項９】
前記領域ＩＩ内の少なくとも１つの置換が、Ｘ２０２Ｇ、Ｘ２１１Ｌ、Ｘ２５５Ｙ／ＶおよびＸ２５６Ｋからなる群から選択される置換を含む、請求項８に記載の洗剤組成物。
【請求項１０】
前記領域ＩＩ内の少なくとも１つの置換が、２１０位に相当する位置の置換を含む、請求項１に記載の洗剤組成物。
【請求項１１】
前記２１０位に相当する位置の置換が、Ｘ２１０Ｋを含む、請求項１０に記載の洗剤組成物。
【請求項１２】
前記領域ＩＩＩ内の少なくとも１つの置換が、８３位、８６位、および９０位に相当する位置の置換からなる群から選択される置換を含む、請求項１に記載の洗剤組成物。
【請求項１３】
前記領域ＩＩＩ内の少なくとも１つの置換が、Ｘ８３Ｔ、Ｘ８６Ｖ、およびＸ９０Ａ／Ｒからなる群から選択される置換を含む、請求項１１に記載の洗剤組成物。
【請求項１４】
前記領域ＩＩＩ内の少なくとも１つの置換が、８３位に相当する位置の置換を含む、請求項１に記載の洗剤組成物。
【請求項１５】
前記８３位に相当する位置の置換がＸ８３Ｔを含む、請求項１４に記載の洗剤組成物。
【請求項１６】
前記領域ＩＶ内の少なくとも１つの置換が、２７位、５８位および６０位に相当する位置の置換からなる群から選択される置換を含む、請求項１に記載の洗剤組成物。
【請求項１７】
前記領域ＩＶ内の少なくとも１つの置換が、Ｘ２７Ｒ、Ｘ５８Ｎ／Ａ／Ｇ／Ｐ／Ｔ、およびＸ６０Ｓ／Ｖ／Ｇ／Ｎ／Ｒ／Ｋ／Ａ／Ｌからなる群から選択される置換を含む、請求項１６に記載の洗剤組成物。
【請求項１８】
２７位、５８位および６０位に相当する、領域ＩＶ内の少なくとも２つの置換を含む、請求項１に記載の洗剤組成物。
【請求項１９】
Ｘ２７Ｒ、Ｘ５８Ｎ／Ａ／Ｇ／Ｐ／Ｔ、およびＸ６０Ｓ／Ｖ／Ｇ／Ｎ／Ｒ／Ｋ／Ａ／Ｌからなる群から選択される、領域ＩＶ内の少なくとも２つの置換を含む、請求項１に記載の洗剤組成物。
【請求項２０】
前記変異体が、規定された領域Ｉ〜ＩＶの外側に少なくとも１つの置換を含む、請求項１に記載の洗剤組成物。
【請求項２１】
前記規定された領域Ｉ〜ＩＶの外側の少なくとも１つの置換が、８１位、１４７位、１５０位、および２４９位に相当する位置の置換からなる群から選択される、請求項２０に記載の洗剤組成物。
【請求項２２】
前記規定された領域Ｉ〜ＩＶの外側の少なくとも１つの置換が、Ｘ８１Ｑ／Ｅ、Ｘ１４７Ｍ／Ｙ、Ｘ１５０Ｇ、およびＸ２４９Ｒ／Ｉ／Ｌからなる群から選択される、請求項２０に記載の洗剤組成物。
【請求項２３】
前記親リパーゼが、配列番号２と少なくとも９０％は同一である、請求項２に記載の洗剤組成物。
【請求項２４】
前記親リパーゼが配列番号２と同一であり、前記変異体が以下の群の置換のうちの１つを含む、請求項１に記載の洗剤組成物：
ａ）Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｉ２５５Ｙ
ｂ）Ｉ２０２Ｇ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ
ｃ）Ｉ８６Ｖ＋Ｌ２２７Ｇ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｐ２５６Ｋ
ｄ）Ｑ４Ｖ＋Ｓ５８Ｎ＋Ｖ６０Ｓ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ
ｅ）Ｓ５８Ｎ＋Ｖ６０Ｓ＋Ｉ９０Ｒ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ
ｆ）Ｉ９０Ａ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３１Ｒ＋Ｉ２５５Ｖ
ｇ）Ｓ５８Ｎ＋Ｖ６０Ｓ＋Ｉ８６Ｖ＋Ａ１５０Ｇ＋Ｌ２２７Ｇ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｐ２５６Ｋ
ｈ）Ｓ５８Ｎ＋Ｖ６０Ｓ＋Ｌ１４７Ｍ＋Ｆ２１１Ｌ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ
ｉ）Ｑ４Ｖ＋Ｓ５８Ａ＋Ｖ６０Ｓ＋Ｓ８３Ｔ＋Ｉ８６Ｖ＋Ａ１５０Ｇ＋Ｅ２１０Ｋ＋Ｌ２２７Ｇ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｐ２５６Ｋ
ｊ）Ｓ５８Ｎ＋Ｖ６０Ｓ＋Ｉ８６Ｖ＋Ａ１５０Ｇ＋Ｌ２２７Ｇ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｐ２５６Ｋ。
【請求項２５】
前記親リパーゼが配列番号２と同一であり、前記変異体が以下の群の置換のうちの１つを含む、請求項１に記載の洗剤組成物：
ａ）Ｑ４Ｖ＋Ｓ５８Ａ＋Ｖ６０Ｓ＋Ｓ８３Ｔ＋Ｉ８６Ｖ＋Ａ１５０Ｇ＋Ｅ２１０Ｋ＋Ｌ２２７Ｇ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｐ２５６Ｋ
ｂ）Ｓ５８Ｎ＋Ｖ６０Ｓ＋Ｉ８６Ｖ＋Ａ１５０Ｇ＋Ｌ２２７Ｇ＋Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ＋Ｐ２５６Ｋ。
【請求項２６】
前記リパーゼ変異体が、本明細書で定められたように測定した場合、ベネフィット・リスクが１より大きいことを特徴とする、請求項１に記載の洗剤組成物。
【請求項２７】
０．１〜４０％、好ましくは０．１〜１２％の陰イオン性界面活性剤をさらに含む、請求項１に記載の洗剤組成物。
【請求項２８】
前記陰イオン性界面活性剤が、アルコキシル化アルキル硫酸塩である、請求項２７に記載の洗剤組成物。
【請求項２９】
５〜３０％のアルミノケイ酸塩および／またはリン酸塩ビルダーをさらに含む、請求項１に記載の洗剤組成物。
【請求項３０】
過酸化物源および漂白剤活性剤、好ましくはテトラアセチルエチレンジアミン、をさらに含む、請求項１に記載の洗剤組成物。
【請求項３１】
前記洗剤が、液体洗剤組成物または固体洗剤組成物である、請求項１に記載の洗剤。
【請求項３２】
前記洗剤が顆粒洗剤である、請求項３１に記載の洗剤。
【請求項３３】
前記洗剤が、固体タブレット、または可溶性フィルムに封入された液体である単位用量組成物である、請求項１に記載の洗剤。
【請求項３４】
請求項１に記載の洗剤組成物を含む水溶液中で布物品を洗濯することを含む、洗浄方法。
【請求項３５】
前記方法が、表面から汚れ、およびしみを除去するのに好適であり、
ａ）所望により請求項１に記載の組成物で汚れ、およびしみに前処理を施し、所望により前処理された表面を形成する工程；
ｂ）請求項１に記載の組成物の有効量を水に添加し、約５００〜約１００００ｐｐｍの組成物を含む水性洗浄溶液を形成する工程；
ｃ）前記水性洗浄溶液を、前記所望により前処理された表面に接触させる工程；および
ｄ）所望により前記水性洗浄溶液と前記所望により前処理された表面を攪拌する工程
を含む、請求項３４に記載の洗浄方法。
【請求項３６】
前記水溶液の温度が３０℃未満である、請求項３４に記載の洗浄方洗。
【請求項３７】
前記リパーゼ変異体が、Ｑ４Ｖ、Ｓ５８Ｎ／Ａ／Ｇ／Ｐ／Ｔ、Ｉ９０Ｒ、またはＱ２４９Ｉ／Ｌのうち少なくとも１つの変異を含む、配列番号２の変異体である、請求項１に記載の組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、洗剤組成物、具体的には脂肪分解酵素を含む洗濯洗剤に関する。
【背景技術】
【０００２】
洗剤製造業者にとって、特に洗濯における脂っぽい汚れの除去を向上させることは不変の目的である。多くの有効な界面活性剤および界面活性剤の組み合わせの使用にもかかわらず、特に使用する水の温度が低い場合、多くの界面活性剤系製品が脂っぽい／油っぽい汚れを完全に除去することを未だ達成できていない。リパーゼ酵素は、１９８０年代後半から、脂肪汚れをトリグリセリドに分解することにより脂肪汚れを除去するために、洗剤に使用されてきた。
【０００３】
比較的最近まで、リポラーゼ（商標名、ノボザイムス（Novozymes））のような主な市販のリパーゼ酵素は、洗浄過程の乾燥相の水分含量が低い場合特に効率よく機能していた。これらの酵素は、乾燥段階の間洗濯された衣類に残存する汚れにのみ有効な脂肪分解を行う第二洗浄段階でのみ有効に清浄し、次いで分解された脂肪は次の洗浄段階で除去される傾向があった。しかしながら、より最近は、清浄過程の洗浄相の間も効率よく機能する、高効率リパーゼが開発され、その結果第二洗浄工程の清浄でも同様に、第一洗浄周期で見出され得るリパーゼ酵素のために清浄効果を著しく改善できる。かかる酵素の例は、米国特許第６，９３９，７０２  Ｂ１号、国際特許第００／６００６３号および研究開示（Research Disclosure）ＩＰ６５５３Ｄに記載されているようなものである。かかる酵素は、第一洗浄リパーゼとして以下に示す。
【０００４】
さらに、消費者は、衣類のような物品を可能な限り清浄にすることを好む。かかる消費者は通常、清浄したまたは処理した物品の臭気と、かかる物品の清浄度を関連付ける。従って、消費者の観点による清浄および／または処理組成物の有効性は、通常、かかる組成物が、それで清浄または処理された物品に付与する臭気と直接関連する。発明者らは、エステラーゼおよびリパーゼのような特定の物質が、不快な脂肪酸臭気、特に酪酸の臭気のような短鎖脂肪酸臭気を発生させる場合があることを認識した。しかしながら、かかる物質は、特に有効な清浄剤であり得る。不幸なことに、消費者は通常、かかる剤の使用により生じる臭気を、清浄度の不足と関連付ける。Ｃ末端伸張を有する臭気の減少した変異体の例は、国際特許第０２／０６２９７３号で共有されているが、これらのリパーゼ変異体は、商品名リペックス（登録商標）として販売されている変異体を含む、国際特許第００／６００６３号に記載のもののような第一洗浄リパーゼのように強い洗浄性能を示さない。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
従って、任意の不愉快な脂肪酸臭気を発生することなく、脂っぽい／油っぽい汚れ除去効果に優れた脂肪分解酵素を含む洗剤組成物に対する必要性が依然として存在する。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
本発明は、洗剤成分と、臭気を発生する可能性の減少したＣ末端伸張が付着しないリパーゼ変異体を含む洗剤組成物に関する。リパーゼ変異体は、親リパーゼの同定された１以上の領域に変異を導入することにより得られる。
【０００７】
配列一覧
配列番号１は、サーモミセス・ラヌギノサス（Thermomyces lanoginosu）のリパーゼをコードするＤＮＡ配列を示す。
【０００８】
配列番号２は、サーモミセス・ラヌギノサスのリパーゼのアミノ酸配列を示す。
【０００９】
配列番号３は、アブシディア・リフレクサ（Absidia reflexa）のリパーゼのアミノ酸配列を示す。
【００１０】
配列番号４は、アブシディア・コリムビフェラ（Absidia corymbifera）のリパーゼのアミノ酸配列を示す。
【００１１】
配列番号５は、リゾムーコル・ミーヘイ（Rhizomucor miehei）のリパーゼのアミノ酸配列を示す。
【００１２】
配列番号６は、リゾプス・オリザエ（Rhizopus oryzae）のリパーゼのアミノ酸配列を示す。
【００１３】
配列番号７は、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）のリパーゼのアミノ酸配列を示す。
【００１４】
配列番号８は、アスペルギルス・ツビンゲンシス（Aspergillus tubingensis）のリパーゼのアミノ酸配列を示す。
【００１５】
配列番号９は、フサリウム・オキシスポラム（Fusarium oxysporrum）のリパーゼのアミノ酸配列を示す。
【００１６】
配列番号１０は、フサリウム・ヘテロスポラム（Fusarium heterosporum）のリパーゼのアミノ酸配列を示す。
【００１７】
配列番号１１は、アスペルギルス・オリザエ（Aspergillus oryzae）のリパーゼのアミノ酸配列を示す。
【００１８】
配列番号１２は、ペニシリウム・カマンベルティ（Penicillium camemberti）のリパーゼのアミノ酸配列を示す。
【００１９】
配列番号１３は、アスペルギルス・フォエチダス（Aspergillus foetidus）のリパーゼのアミノ酸配列を示す。
【００２０】
配列番号１４は、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）のリパーゼのアミノ酸配列を示す。
【００２１】
配列番号１５は、アスペルギルス・オリザエ（Aspergillus oryzae）のリパーゼのアミノ酸配列を示す。
【００２２】
配列番号１６は、ランデリナ・ペニサポラ（Landerina penisapora）のリパーゼのアミノ酸配列を示す。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２３】
リパーゼ変異体
親リパーゼ
親リパーゼは、「相同性および配列比較（Homology and aligment）」の章で規定されたような、配列番号２に示すサーモミセス・ラヌギノサス（T. lanuginosus）の配列と少なくとも５０％の相同性を有するアミノ酸配列を有する真菌のリパーゼであってよい。
【００２４】
親リパーゼは、カンジダ（Candida）、クリベロミセス（Kluyveromyces）、ピチア（Pichia）、サッカロミセス（Saccharomyces）、シゾサッカロミセス（Schizosaccharomyces）もしくはヤロウィア（Yarrowia）ポリペプチドのような酵母ポリペプチド；またはより好ましくは、アクレモニウム（Acremonium）、アスペルギルス（Aspergillus）、オーレオバシジウム（Aureobasidium）、クリプトコッカス（Cryptococcus）、フィロバシジウム（Filobasidium）、フサリウム（Fusarium）、フミコラ（Humicola）、マグナポルテ（Magnaporthe）、ムコー（Mucor）、ミセリオフトラ（Myceliophthora）、ネオカリマセティクス（Neocallimastix）、ニューロスポラ（Neurospora）、パエシロミセス（Paecilomyces）、ペニシリウム（Penicillium）、ピロミセス（Piromyces）、シゾフィラム（Schizophyllum）、タラロミセス（Talaromyces）、サーモアスクス（Thermoascus）、チエラビア（Thielavia）、トリポクラジウム（Tolypocladiu）もしくはトリコデルマポリペプチドのような糸状菌類ポリペプチドであってよい。
【００２５】
好ましい様態では、親リパーゼは、リパーゼ活性を有するサッカロミセス・カールスベルゲンシス（Saccharomyces carlsbergensis）、サッカロミセス・セレビシエ（Saccharomyces cerevisiae）、サッカロミセス・ジアスタチクス（Saccharomyces diastaticus）、サッカロミセス・ドウグラシ（Saccharomyces douglasii）、サッカロミセス・クルイベリ（Saccharomyces kluyveri）、サッカロミセス・ノルベンシス（Saccharomyces norbensis）またはサッカロミセス・オビフォルミス（Saccharomyces oviformis）ポリペプチドである。
【００２６】
別の好ましい様態では、親リパーゼは、アスペルギルス・アクレアタス（Aspergillus aculeatus）、アスペルギルス・アワモリ（Aspergillus awamori）、アスペルギルス・フミガタス（Aspergillus fumigatus）、アスペルギルス・フォエチダス（Aspergillus foetidus）、アスペルギルス・ジャポニカス（Aspergillus japonicus）、アスペルギルス・ニデュランス（Aspergillus nidulans）、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）、アスペルギルス・オリザエ（Aspergillus oryzae）、アスペルギルス・ツルビゲンシス（Aspergillus turbigensis）、フサリウム・バクトリジオイデス（Fusarium bactridioides）、フサリウム・セレアリス（Fusarium cerealis）、フサリウム・クルークウェレンス（Fusarium crookwellense）、フサリウム・クルモラム（Fusarium culmorum）、フサリウム・グラミネアラム（Fusarium graminearum）、フサリウム・グラミナム（Fusarium graminum）、フサリウム・ヘテロスポラム（Fusarium heterosporum）、フサリウム・ネガンジ（Fusarium negundi）、フサリウム・オキシスポラム（Fusarium oxysporum）、フサリウム・レチクラタム（Fusarium reticulatum）、フサリウム・ロセウム（Fusarium roseum）、フサリウム・サンブチウム（Fusarium sambucinum）、フサリウム・サルコクロウム（Fusarium sarcochroum）、フサリウム・スポロトリチオイデス（Fusarium sporotrichioides）、フサリウム・スルフレウム（Fusarium sulphureum）、フサリウム・トルロサム（Fusarium torulosum）、フサリウム・トリコテシオイデス（Fusarium trichothecioides）、フサリウム・ベネナタム（Fusarium venenatum）、フミコラ・インソレンス（Humicola insolens）、サーモミセス・ラノギノサス（Thermomyces lanoginosus）（異名：フミコラ・ラヌギノセ（Humicola lanuginose））、ムコー・ミエヘイ（Mucor miehei）、ミセリオフトラ・サーモフィラ（Myceliophthora thermophila）、ニューロスポラ・クラッサ（Neurospora crassa）、ペニシリウム・プルプロゲナム（Penicillium purpurogenum）、トリコデルマ・ハルジアナム（Trichoderma harzianum）、トリコデルマ・コニンギイ（Trichoderma koningii）、トリコデルマ・ロンギラチアタム（Trichoderma longibrachiatum）、トリコデルマ・リーセイ（Trichoderma reesei）またはトリコデルマ・ビリデ（Trichoderma viride）ポリペプチドである。
【００２７】
別の好ましい様態では、親リパーゼはサーモミセス（Thermomyces）リパーゼである。
【００２８】
より好ましい様態では、親リパーゼは、サーモミセス・ラヌギノサス（Thermomyces lanuginosus）リパーゼである。さらにより好ましい実施形態では、親リパーゼは配列番号２のリパーゼである。
【００２９】
領域の同定および置換
以下の領域Ｉ〜領域ＩＶに示した位置は、配列番号２のアミノ酸残基の位置である。異なるリパーゼ内に相当する（または相同な）位置を見つけるには、「相同性および配列比較」に記載された手順を用いる。
【００３０】
領域Ｉ内の置換
領域Ｉは、Ｎ末端残基Ｅ１の周囲のアミノ酸残基から成る。この領域では、親リパーゼのアミノ酸をより正のアミノ酸に置換することが好ましい。以下の位置に相当するアミノ酸残基は、領域Ｉ：２〜１１および２２３〜２３９に含まれる。以下の位置は、特に興味の対象となる：４、８、１１、２２３、２２７、２２９、２３１、２３３、２３４、２３６。特に以下の置換が同定された：Ｘ４Ｖ、Ｘ２２７Ｇ、Ｘ２３１ＲおよびＸ２３３Ｒ。
【００３１】
好ましい実施形態では、親リパーゼは、配列番号２と８５％または９０％のような少なくとも８０％、例えば少なくとも９５％または９６％または９７％または９８％または９９％同一である。最も好ましい実施形態では、親リパーゼは配列番号２と同一である。
【００３２】
領域ＩＩ内の置換
領域ＩＩは、アシル鎖の片側およびアルコール部分の片側上の基質と接触するアミノ酸残基から成る。この領域では、親リパーゼのアミノ酸をより正のアミノ酸またはより疎水性のアミノ酸に置換することが好ましい。以下の位置に相当するアミノ酸残基は、領域ＩＩ：２０２〜２１１および２４９〜２６９に含まれる。以下の位置は、特に興味の対象となる：２０２、２１０、２１１、２５３、２５４、２５５、２５６。特に以下の置換が同定された：Ｘ２０２Ｇ、Ｘ２１０Ｋ、Ｘ２５５Ｙ／ＶおよびＸ２５６Ｋ／Ｒ。
【００３３】
好ましい実施形態では、親リパーゼは、配列番号２と８５％または９０％のような少なくとも８０％、例えば少なくとも９５％または９６％または９７％または９８％または９９％同一である。最も好ましい実施形態では、親リパーゼは配列番号２と同一である。
【００３４】
領域ＩＩＩ内の置換
領域ＩＩＩは、可撓性構造を形成し、従って基質を活性部位に入れることを可能にするアミノ酸残基から成る。この領域では、親リパーゼのアミノ酸をより正のアミノ酸またはより疎水性のアミノ酸に置換することが好ましい。以下の位置に相当するアミノ酸残基は、領域ＩＩＩ：８２〜１０２に含まれる。以下の位置は、特に興味の対象となる：８３、８６、８７、９０、９１、９５、９６、９９。特に以下の置換が同定された：Ｘ８３Ｔ、Ｘ８６ＶおよびＸ９０Ａ／Ｒ。
【００３５】
好ましい実施形態では、親リパーゼは、配列番号２と８５％または９０％のような少なくとも８０％、例えば少なくとも９５％または９６％または９７％または９８％または９９％同一である。最も好ましい実施形態では、親リパーゼは配列番号２と同一である。
【００３６】
領域ＩＶ内の置換
領域ＩＶは、表面に静電気的に結合するアミノ酸残基から成る。この領域では、親リパーゼのアミノ酸をより正のアミノ酸に置換することが好ましい。以下の位置に相当するアミノ酸残基は、領域ＩＶ：２７および５４〜６２に含まれる。以下の位置は、特に興味の対象となる：２７、５６、５７、５８、６０。特に以下の置換が同定された：Ｘ２７Ｒ、Ｘ５８Ｎ／ＡＧ／Ｔ／ＰおよびＸ６０Ｖ／Ｓ／Ｇ／Ｎ／Ｒ／Ｋ／Ａ／Ｌ。
【００３７】
好ましい実施形態では、親リパーゼは、配列番号２と８５％または９０％のような少なくとも８０％、例えば少なくとも９５％または９６％または９７％または９８％または９９％同一である。最も好ましい実施形態では、親リパーゼは配列番号２と同一である。
【００３８】
その他の位置のアミノ酸
親リパーゼは、所望により、他のアミノ酸置換、特に１０未満または５未満のかかる置換を含んでよい。例は、親リパーゼの２４位、４６位、７４位、８１位、８３位、１２７位、１３１位、１３７位、１４７位、１５０位、２０３位、２０６位、２１１位、２６３位、２６４位、２６５位、２６７位および２６９位のうち１以上に相当する置換である。具体的な実施形態では、８１位、１４７位、１５０位および２４９に相当する位置のうち少なくとも１つに置換が存在する。好ましい実施形態では、該少なくとも１つの置換が、Ｘ８１Ｑ／Ｅ、Ｘ１４７Ｍ／Ｙ、Ｘ１５０ＧおよびＸ２４９Ｒ／Ｉ／Ｌからなる群から選択される。
【００３９】
さらなる置換は、例えば、当該技術分野において既知の原理、例えば、国際特許第９２／０５２４９号、国際特許第９４／２５５７７号、国際特許第９５／２２６１５号、国際特許第９７／０４０７９号および国際特許第９７／０７２０２号に記載された置換に従って作製してよい。
【００４０】
親リパーゼ変異体
ある様態では、該親と比較する場合、該変異体は合計で少なくとも３つの置換を含み、該置換は、
ａ）領域Ｉ内の少なくとも２つの置換、
ｂ）領域ＩＩ内の少なくとも１つの置換、
ｃ）領域ＩＩＩ内の少なくとも１つの置換、および／または
ｄ）領域ＩＶ内の少なくとも１つの置換の群のうち１以上から選択される。
【００４１】
変異体は、変異体の親と比較して、以下の表１に列挙した置換に相当する置換を含んでよい。
【表１】
2009523461.tif 000003
【００４２】
さらに具体的な実施形態では、親リパーゼは配列番号２と同一であり、従って表１の変異体は以下のようになるであろう。
【表２】
2009523461.tif 000004
【００４３】
アミノ酸修飾の表記
本発明によるリパーゼ変異体の記載においては、参照を容易にするために以下の表記を用いる。元のアミノ酸：位置：置換したアミノ酸。
【００４４】
この表記に従って、例えば、１９５位のグリシンのグルタミン酸への置換はＧ１９５Ｅのように示す。同じ位置のグリシンの欠失はＧ１９５＊のように示し、リジンのような追加アミノ酸残基の挿入はＧ１９５ＧＫのように示す。特定のリパーゼが他のリパーゼに比べて「欠失」を含み、かかる位置に挿入が成された場合、３６位へのアスパラギン酸の挿入を＊３６Ｄと示す。複数の変異はプラスにより区切られる、即ち、Ｒ１７０Ｙ＋Ｇ１９５Ｅは、１７０位と１９５位でそれぞれアルギニンとグリシンがチロシンとグルタミン酸に置換した変異を示す。
【００４５】
Ｘ２３１は、記載した配列比較手順を適用した場合、２３１位に相当する親ポリペプチドのアミノ酸を示す。Ｘ２３１Ｒは、アミノ酸がＲに置換されたことを示す。配列番号２でＸがＴの場合、Ｘ２３１Ｒはこのように２３１位のＴがＲに置換されたことを示す。ある位置（例えば、２３１）のアミノ酸が、例えば、ＲおよびＰおよびＹからなる群のアミノ酸群から選択される別のアミノ酸で置換され得る場合、これはＸ２３１Ｒ／Ｐ／Ｙと示されるであろう。
【００４６】
全ての場合において、一般に認められたＩＵＰＡＣの一文字または三文字アミノ酸略記を採用する。
【００４７】
アミノ酸のグループ化
本明細書では、アミノ酸類は、ｐＨ１０におけるそれらの電荷により、負に荷電したもの、正に荷電したもの、または電気的に中性なものに分類される。従って、負のアミノ酸は、Ｅ、Ｄ、Ｃ（システイン）およびＹ、特にＥおよびＤである。正のアミノ酸は、Ｒ、ＫおよびＨ、特にＲおよびＫである。中性のアミノ酸は、ジスルフィド架橋の一部を形成するとき、Ｇ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、Ｗ、Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｎ、ＱおよびＣである。同じグループ（負、正、または中性）の別のアミノ酸との置換は同類置換（conservative substitution）といわれる。
【００４８】
中性アミノ酸は、疎水性または非極性アミノ酸（ジスルフィド架橋の一部としてのＧ、Ａ、Ｖ、Ｌ、Ｉ、Ｐ、Ｆ、ＷおよびＣ）と、親水性または極性アミノ酸（Ｓ、Ｔ、Ｍ、Ｎ、Ｑ）に分類することができる。
【００４９】
アミノ酸の同一性
２つのアミノ酸配列または２つのヌクレオチド配列間の関連性は、「同一性」というパラメータで記載される。
【００５０】
本発明の目的のために、２つのアミノ酸配列の配列比較は、エンボスパッケージ社（EMBOSS package）（http://emboss.org）製ニードル（Needle）プログラムバージョン２．８．０を用いて判定する。ニードルプログラムは、ニードルマン（Needleman）Ｓ．Ｂ．およびビュンシュ（Wunsch）Ｃ．Ｄ．による分子生物学雑誌（J. Mol.Biol.）第４８巻４４３〜４５３頁（１９７０年）に記載された全体的配列比較アルゴリズムを実行する。用いられる置換マトリクスは、ギャップ・オープニング・ペナルティ（gap opening penalty）が１０、ギャップ・エクステンション・ペナルティ（gap extension penalty）が０．５のＢＬＯＳＵＭ６２である。
【００５１】
本発明のアミノ酸配列（「発明配列」；例えば、配列番号２の１〜２６９のアミノ酸）と、異なるアミノ酸配列（「外来配列」）間の同一度は、いずれか短い方の「発明配列」の長さまたは「外来配列」の長さによって分割される２つの配列の配列比較で完全に一致する数として算出される。結果は、同一％として表される。
【００５２】
完全な一致は、「発明配列」と「外来配列」が、重複する同位置において同一のアミノ酸残基を有する際に生じる。配列の長さは、配列中のアミノ酸残基の数である（例えば、配列番号２の長さは２６９）。
【００５３】
親リパーゼは、サーモミセス・ラヌギノサス（T. lanuginosus）のリパーゼ（配列番号２）と少なくとも５０％、具体的には少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、９５％超過または９８％超過のアミノ酸同一性を有する。具体的な実施形態では、親リパーゼは、サーモミセス・ラヌギノサス（T. lanuginosus）のリパーゼ（配列番号２）と同一である。
【００５４】
上記手順を、同一性並びに相同性の算出および配列比較のために用いてよい。本発明において、相同性および配列比較は下記のように算出した。
【００５５】
相同性および配列比較
本発明の目的のために、相同度は、例えば、ポリペプチド配列比較のために以下の設定、すなわちギャップ・クリエーション・ペナルティ３．０、およびギャップ・エクステンション・ペナルティ０．１を用いたギャップを使用する、ＧＣＧプログラムパッケージ（ウィスコンシンパッケージ（Wisconsin Package）のためのプログラムマニュアル、バージョン８、１９９４年８月、ジェネティックス・コンピュータ・グループ（Genetics Computer Group）（米国ウィスコンシン州マジソンサイエンスドライブ５７５（575 Science Drive, Madison, Wisconsin, USA 53711））（ニードルマン（Needleman）Ｓ．Ｂおよびビュンシュ（Wunsch）Ｃ．Ｄ．による分子生物学雑誌（Journal of Molecular Biology）第４８巻４４３〜４５３頁（１９７０年））において提供されるＧＡＰのような当該技術分野で既知のコンピュータプログラムによって好適に判定されてよい。
【００５６】
本発明では、アブシディア・リフレクサ（Absidia reflexa）、アブシディア・コリンベフェラ（Absidia corymbefera）、リゾムコール・ミエヘイ（Rhizmucor miehei）、リゾプス・デレマー（Rhizopus delemar）、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）、アスペルギルス・ツビゲンシス（Aspergillus tubigensis）、フサリウム・オキシスポラム（Fusarium oxysporum）、フサリウム・ヘテロスポラム（Fusarium heterosporum）、アスペルギルス・オリザエ（Aspergillus oryzea）、ペニシリウム・カメンベルティ（Penicilium camembertii）、アスペルギルス・フォエチダス（Aspergillus foetidus）、アスペルギルス・ニガー（Aspergillus niger）、サーモミセス・ラノギノサス（Thermomyces lanoginosus）（異名：フミコラ・ラヌギノセ（Humicola lanuginose））およびランデリナ・ペニサポラ（Landerina penisapora）のリパーゼ配列中の相当する（または相同な）位置は、図１に示す配列比較により規定される。
【００５７】
配列比較で示していないリパーゼ配列中に相同な位置を見つけるために、関心配列を図１に示す配列と配列比較する。ＧＡＰプログラムにより見出された最も相同な配列に対してＧＡＰ配列比較を用いて、新配列を図１の本配列比較と配列比較する。ＧＡＰは、ＧＣＧプログラムパッケージ（ウィスコンシンパッケージ（Wisconsin Package）のためのプログラムマニュアル、バージョン８、１９９４年８月、ジェネティックス・コンピュータ・グループ（Genetics Computer Group）（米国ウィスコンシン州マジソンサイエンスドライブ５７５（575 Science Drive, Madison, Wisconsin, USA 53711））（ニードルマン（Needleman）Ｓ．Ｂおよびビュンシュ（Wunsch）Ｃ．Ｄ．による分子生物学雑誌（Journal of Molecular Biology）第４８巻４４３〜４５３頁（１９７０年））で提供される。ポリペプチド配列比較のために以下の設定を用いる：ギャップ・クリエーション・ペナルティが３．０およびギャップ・エクステンション・ペナルティが０．１。
【００５８】
親リパーゼは、サーモミセス・ラヌギノサス（T. lanuginosus）（配列番号２）と少なくとも５０％、具体的には少なくとも５５％、少なくとも６０％、少なくとも７５％、少なくとも８５％、少なくとも９０％、９５％超過または９８％超過の相同性を有する。具体的な実施形態では、親リパーゼは、サーモミセス・ラヌギノサス（T. lanuginosus）のリパーゼ（配列番号２）と同一である。
【００５９】
ハイブリダイゼーション
本発明はまた、リパーゼ活性を有する単離されたポリペプチドに関し、それは超低ストリンジェント条件下で、好ましくは低ストリンジェント条件下で、より好ましくは中ストリンジェント条件下で、より好ましくは中〜高ストリンジェント条件下で、さらにより好ましくは高ストリンジェント条件下で、最も好ましくは超高ストリンジェント条件下で、（ｉ）配列番号１のヌクレオチド１７８〜６６０、（ｉｉ）配列番号１のヌクレオチド１７８〜６６０を含有するｃＤＮＡ配列、（ｉｉｉ）（ｉ）もしくは（ｉｉ）のサブシークエンス、または（ｉｖ）（ｉ）（ｉｉ）もしくは（ｉｉｉ）の相補鎖（Ｊ．サムブルック（Sambrook）、Ｅ．Ｆ．フリッチェ（Fritsch）およびＴ．マニアタス（Maniatus）による分子クローニング（Molecular Cloning）研究室マニュアル（Laboratory Manual）第２版（１９８９年）、コールド・スプリング・ハーバー（Cold Spring Harbor）、ニューヨーク）とハイブリダイズするポリヌクレオチドによりコードされる。配列番号１のサブシークエンスは、少なくとも１００の近接ヌクレオチド、好ましくは少なくとも２００の近接ヌクレオチドを含有する。さらに、サブシークエンスは、リパーゼ活性を有するポリペプチド断片をコードしてよい。
【００６０】
長さ少なくとも１００ヌクレオチドの長いプローブについて、超低〜超高ストリンジェント条件は、４２℃にて、５Ｘ  ＳＳＰＥ、０．３％ＳＤＳ、２００μｇ／ｍＬの剪断および変性したサケ精子ＤＮＡ、並びに超低および低ストリンジェント条件では２５％、中および中〜高ストリンジェント条件では３５％、高および超高ストリンジェント条件では５０％のホルムアミド中で、標準的なサザンブロッティング手順に従って、最適には１２〜２４時間プレハイブリダイゼーションおよびハイブリダイゼーションすることとして規定される。
【００６１】
長さ少なくとも１００ヌクレオチドの長いプローブについて、担体物質は最終的に、好ましくは少なくとも４５℃（超低ストリンジェント条件）、より好ましくは少なくとも５０℃（低ストリンジェント条件）、より好ましくは少なくとも５５℃（中ストリンジェント条件）、より好ましくは少なくとも６０℃（中〜高ストリンジェント条件）、さらにより好ましくは少なくとも６５℃（高ストリンジェント条件）、最も好ましくは少なくとも７０℃（超高ストリンジェント条件）で、２Ｘ  ＳＳＣ、０．２％ＳＤＳを用いて各々１５分間、３回洗浄される。
【００６２】
ＤＮＡ配列、発現ベクター、宿主細胞、リパーゼの生成
本発明は、本発明のリパーゼをコードするＤＮＡ配列と、該ＤＮＡ配列または発現ベクターを含有する形質転換された宿主細胞を提供する。これらは当該技術分野において既知の方法により得ることができる。
【００６３】
本発明はまた、リパーゼの産生をもたらす条件下で形質転換された宿主細胞を培養し、得られた液体培地からリパーゼを回収することにより、リパーゼを生産する方法を提供する。方法は、当該技術分野において既知の原理に従って実施してよい。
【００６４】
リパーゼ活性
−中性ｐＨ（ＬＵ）におけるトリブチリンに対するリパーゼ活性
リパーゼの基質は、乳化剤としてアラビアゴムを用いて、トリブチリン（グリセリントリブチレート）を乳化することにより調製する。３０℃、ｐＨ７〜９におけるトリブチリンの加水分解は、ｐＨ−スタット滴定実験に従う。リパーゼ活性の単位（１ＬＵ）は、ｐＨ７で、１分当たり１μｍｏｌの酪酸を放出することのできる酵素の量と等しい。
【００６５】
−ベネフィット・リスク（Benefit Risk）
臭気に関して低下したリスクと比較した性能を表現するベネフィット・リスク因子は、ＢＲ＝ＲＰａｖｇ／Ｒとして定義される。本明細書で記載するリパーゼ変異体のＢＲは、１を超える、１．１を超える、または１〜約１０００ですらあってよい。
【００６６】
−平均相対性能（Average Relative Performance）
平均相対性能（ＲＰａｖｇ）を算出する手順は、本明細書の実施例５に見出される。本明細書で記載するリパーゼ変異体のＲＰａｖｇは、少なくとも０．８、少なくとも１．１、少なくとも１．５、または少なくとも２〜約１０００ですらあってよい。
【００６７】
洗剤成分
本明細書で使用する時、洗剤組成物は、物品並びに清浄および処理組成物を含む。本明細書で使用する時、「清浄および／または処理組成物」という用語は、特に指示しない限り、タブレット、顆粒または粉末形態の多目的または「強力」洗浄剤のもの、特に洗濯洗剤；液体、ゲルまたはペースト形態の多目的洗浄剤、特にいわゆる強力液体型；液体上質布地用洗剤；手洗い用皿洗い洗剤または軽質皿洗い洗剤、特に高発泡型のもの；家庭用および業務用の種々のタブレット、顆粒、液体およびすすぎ補助剤型を含む食器洗い機用皿洗い洗剤を含む。組成物はまた、当該技術分野において既知のもの並びに水溶性、非水溶性および／または透水性であるものを含む単位用量包装であってよい。
【００６８】
本発明の洗剤組成物は、１以上の本発明のリパーゼ変異体を含んでよい。リパーゼ変異体に加えて、洗剤組成物はさらに洗剤成分を含むであろう。本明細書で以下に示す洗剤成分の非限定的一覧は、本組成物で用いるのに好適であり、望ましくは、例えば清浄される基質の処理用に清浄性能を補助するまたは強化するために、または着色剤、染料等と同様に清浄組成物の美観を改良するために、本発明の特定の実施形態に組み込まれてよい。このような追加成分の正確な性質、およびそれを組み込む濃度は、組成物の物理的形態および使用されるべき洗浄作業の性質に応じて決定されるであろう。好適な洗剤成分としては、界面活性剤、ビルダー、キレート剤、転染抑制剤、分散剤、酵素、および酵素安定剤、漂白活性化剤、過酸化水素、過酸化水素源、予形成過酸（preformed peracids）、高分子分散剤、増白剤、泡抑制剤、染料、抗腐食剤、変色防止剤、香料、柔軟剤、担体、ヒドロトロープ、加工助剤、溶媒および／または顔料が挙げられるが、これらに限定されない。
【００６９】
代表的な洗剤は、５〜３０重量％の界面活性剤、好ましくは直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩およびアルコールエトキシ硫酸塩のような陰イオン性界面活性剤；０．００５〜０．１％の、プロテアーゼが好ましくはコロナーゼ（Coronase）（商標）、ＦＮ４  ＦＮＡ、またはサビナーゼ（Savinase）（商標）から選択されるプロテアーゼ活性タンパク質、並びに０．００１〜０．１％の、アミラーゼが好ましくはターマミル（Termamyl）（商標）、ナタラーゼ（Natalase）（商標）、ステインザイム（Stainzyme）（商標）およびプラスター（Purastar）（商標）から選択されるアミラーゼ活性タンパク質、並びに０．１〜３％のキレート剤、好ましくはジエチレントリアミン五酢酸の任意の組み合わせを含むであろう。顆粒およびタブレット製品については、かかる代表的な洗剤は、さらに５〜２０重量％の漂白剤、好ましくは過炭酸ナトリウム；１〜４重量％の漂白活性化剤、好ましくはＴＡＥＤ並びに／または０〜３０重量％、好ましくは５〜３０重量％、より好ましくは１０重量％未満のアルミノケイ酸塩ゼオライトＡおよび／もしくはトリポリホスフェートのようなビルダーを含むであろう。
【００７０】
漂白剤−本発明の洗剤組成物は１以上の漂白剤を含んでよい。
【００７１】
一般的に、漂白剤が使用される場合、本発明の組成物は、対象清浄組成物の約０．１重量％〜約５０重量％またはさらに約０．１重量％〜約２５重量％の漂白剤を含んでよい。好適な漂白剤の例としては、以下が挙げられる：
（１）過ホウ酸のナトリウム塩（通常モノ−またはテトラ−ヒドレート）、過炭酸塩、過硫酸塩、過リン酸塩、過ケイ酸塩およびこれらの混合物のようなアルカリ金属塩類を含む、過酸化水素源、例えば無機過水和物塩類。発明のある態様では、無機過水和物塩類は、過ホウ酸塩、過炭酸塩のナトリウム塩類およびこれらの混合物からなる群から選択される。石鹸；および
（２）Ｒ−（Ｃ＝Ｏ）−Ｌの漂白活性化剤（式中、Ｒは、漂白活性化剤が疎水性の場合、６〜１４個、または８〜１２個の炭素原子を有し、漂白活性化剤が親水性の場合、６個未満または４個未満さえの炭素原子を有し、所望により分岐鎖である、アルキル基であり；Ｌは脱離基である）。好適な脱離基の例は、安息香酸およびその誘導体−特にベンゼンスルホン酸である。好適な漂白活性化剤類としては、ドデカノイルオキシベンゼンスルホネート、デカノイルオキシベンゼンスルホネート、デカノイルオキシ安息香酸またはその塩類、３，５，５−トリメチルヘキサノイルオキシベンゼンスルホネート、テトラアセチルエチレンジアミン（ＴＡＥＤ）およびノナノイルオキシベンゼンスルホネート（ＮＯＢＳ）が挙げられる。好適な漂白活性化剤類はまた、国際公開特許第９８／１７７６７号にも開示される。いかなる好適な漂白活性化剤を使用してもよいが、発明のある態様では、対象清浄組成物は、ＮＯＢＳ、ＴＡＥＤまたはこれらの混合物を含んでよい。
（３）予形成過酸（Pre-formed peracids）
存在する場合、過酸および／または漂白活性化剤は、一般に、組成物を基準として、約０．１〜約６０重量％、約０．５〜約４０重量％またはさらに約０．６〜約１０重量％の量で組成物中に存在する。その１以上の疎水性前駆体を、１以上の親水性過酸またはその前躯体と組み合わせて用いてよい。
【００７２】
過酸化水素供給源および過酸または漂白活性化剤の量は、有効酸素（過酸化物供給源より供給される）の過酸に対するモル比が、１：１〜３５：１、またはさらに２：１〜１０：１となるように選択してよい。
【００７３】
界面活性剤−本発明による洗剤組成物は、界面活性剤または界面活性剤系を含んでよく、界面活性剤は、非イオン性界面活性剤、陰イオン性界面活性剤、陽イオン性界面活性剤、両性界面活性剤、双極性界面活性剤、半極性非イオン性界面活性剤およびこれらの混合物から選択してよい。存在する場合、界面活性剤は、通常、対象組成物の約０．１重量％〜約６０重量％、約０．１重量％〜約４０重量％、約０．１重量％〜約１２重量％、約１重量％〜約５０重量％、さらに約５重量％〜約４０重量％の濃度で存在する。
【００７４】
その中に含まれる場合、洗剤は通常、約１％〜約４０％の、直鎖アルキルベンゼンスルホン酸塩、α−オレフィンスルホネート、アルキルサルフェート（脂肪族アルコールサルフェート）、アルコールエトキシサルフェート、二級アルカンスルホネート、α−スルホ脂肪酸メチルエステル、コハク酸アルキルアルケニルまたは石鹸のような陰イオン性界面活性剤を含有するであろう。
【００７５】
洗剤は、所望により、約０．２％〜約４０％の、アルコールエトキシレート、ノニルフェノールエトキシレート、アルキルポリグリコシド、アルキルジメチルアミンオキシド、エトキシ化脂肪酸モノエタノールアミド、脂肪酸モノエタノールアミド、ポリヒドロキシアルキル脂肪酸アミド、またはグルコサミンのＮ−アシルＮ−アルキル誘導体（「グルカミド」）のような非イオン性界面活性剤を含有してよい。
【００７６】
ビルダー−本発明の洗剤組成物は、１以上の洗剤ビルダーまたはビルダー系を含んでよい。ビルダーを使用する場合、対象組成物は、通常、対象組成物の少なくとも約１重量％、約５重量％〜約６０重量％、またはさらに約１０重量％〜約４０重量％のビルダーを含む。ビルダーとしては、アルカリ金属、ポリホスフェートのアンモニウムおよびアルカノールアンモニウム塩類、アルカリ金属ケイ酸塩類または層状ケイ酸塩、アルカリ土類およびアルカリ金属炭酸塩類、アルミノケイ酸塩ビルダー、および種々のアルカリ金属、エチレンジアミン四酢酸およびニトリロ三酢酸のようなポリ酢酸のアンモニウムおよび置換アンモニウム塩類、並びにメリト酸、コハク酸、クエン酸、オキシジコハク酸、ポリマレイン酸、ベンゼン１，３，５−トリカルボン酸、カルボキシメチルオキシコハク酸、およびこれらの可溶性塩類のようなポリカルボキシレートが挙げられるが、これらに限定されない。
【００７７】
キレート剤−本明細書の洗剤組成物は、キレート剤を含有してもよい。好適なキレート剤としては、銅、鉄および／またはマンガンキレート剤およびこれらの混合物が挙げられる。キレート剤を使用する場合、対象組成物は、対象組成物の約０．００５重量％〜約１５重量％、またはさらに約３．０重量％〜約１０重量％のキレート剤を含んでよい。
【００７８】
増白剤−本発明の洗剤組成物はまた、蛍光増白剤のような、物品の外観を清浄な状態に変化させることができる追加成分を含有してよい。これらの増白剤は紫外線領域を吸収し、可視領域で放射する。好適な蛍光増白剤濃度としては、約０．０１重量％、約０．０５重量％、約０．１重量％、さらには約０．２重量％の低い濃度から、０．５重量％またはさらに０．７５重量％の高い濃度までが挙げられる。
【００７９】
分散剤−本発明の組成物はまた、分散剤を含むことができる。好適な水溶性有機物質類としては、ホモポリマーまたはコポリマーの酸類またはそれらの塩類が挙げられ、それらのうちのポリカルボン酸は、互いに炭素原子２個を超えない程度に離れている少なくとも２個のカルボキシルラジカルを含む。
【００８０】
酵素−本発明のリパーゼ変異体に加えて、洗剤組成物は、清浄性能および／または布地ケア効果をもたらす、プロテアーゼ、別のリパーゼ、クチナーゼ、アミラーゼ、カルボヒドラーゼ、セルラーゼ、ペクチナーゼ、マンナーゼ、アラビナーゼ、ガラクタナーゼ、キシラナーゼ、オキシダーゼ、例えばラッカーゼおよび／またはペルオキシダーゼのような、１以上のさらなる酵素を含んでよい。
【００８１】
一般に、選択した酵素の特性は、選択した洗剤と相溶性であるべきであり（即ち、ｐＨ−最適条件、他の酵素的および非酵素的成分等との相溶性）、酵素は有効量存在すべきである。
【００８２】
好適なプロテアーゼとしては、動物植物または微生物起源のものが挙げられる。微生物起源が好ましい。化学的に改質したまたはタンパク質工学的変異が含まれる。プロテアーゼは、セリンプロテアーゼまたはメタロプロテアーゼ、好ましくはアルカリ微生物プロテアーゼ、またはトリプシン様プロテアーゼであってよい。アルカリプロテアーゼの例は、サブチリシン、特にバチルス由来のもの、例えば、サブチリシンノボ（Novo）、サブチリシンカールスバーグ（Carlsberg）、サブチリシン３０９、サブチリシン１４７およびサブチリシン１６８（国際特許第８９／０６２７９号に記載）、国際特許第０５／１０３２４４号の配列番号４および配列番号７である。他の好適なセリンプロテアーゼとしては、国際特許第２００５０５２１４６号に開示された、マイクロコッカス（Micrococcineae）種、特にセルノナス（Cellulonas）種およびこれらの変異体由来のものが挙げられる。トリプシン様プロテアーゼの例は、トリプシン（例えばブタまたはウシ起源の）並びに国際特許第８９／０６２７０号および同第９４／２５５８３号に記載のフサリウムプロテアーゼである。
【００８３】
有用なプロテアーゼの例は、国際特許第９２／１９７２９号、同第９８／２００１５号、同第９８／２００１６号および同第９８／３４９４６号に記載の変異体、特に以下の位置のうち１以上が置換された変異体：２７、３６、５７、６８、７６、８７、９７、１０１、１０４、１０６、１２０、１２３、１６７、１７０、１９４、２０６、２１８、２２２、２２４、２３５、２４５、２５２および２７４、並びにとりわけ以下の変異を有する変異体：（Ｋ２７Ｒ、Ｖ１０４Ｙ、Ｎ１２３Ｓ、Ｔ１２４Ａ）、（Ｎ７６Ｄ、Ｓ１０３Ａ、Ｖ１０４Ｉ）、または（Ｓ１０１Ｇ、Ｓ１０３Ａ、Ｖ１０４Ｉ、Ｇ１５９Ｄ、Ａ２３２Ｖ、Ｑ２３６Ｈ、Ｑ２４５Ｒ、Ｎ２４８Ｄ、Ｎ２５２Ｋ）である。有用なプロテアーゼの他の例は、国際特許第０５／０５２１４６号に記載の変異体、特に以下の位置のうち１以上が置換された変異体である：１４、１６、３５、６５、７５、７６、７９、１２３、１２７、１５９および１７９。
【００８４】
好ましい市販のプロテアーゼ酵素としては、アルカラーゼ（Alcalase）（商標）、サビナーゼ（Savinase）（商標）、プリマーゼ（Primase）（商標）、デュララーゼ（Duralase）（商標）、エスペラーゼ（Esperase）（商標）、コロナーゼ（Coronase）（商標）、ポラザイム（Polarzyme）（商標）およびカンナーゼ（Kannase）（商標）（ノボザイムスＡ／Ｓ（Novozymes A/S））、マキサターゼ（Maxatase）（商標）、マキサカル（Maxacal）（商標）、マキサペム（Maxapem）（商標）、プロペラーゼ（Properase）（商標）、プラフェクト（Purafect）（商標）、プラフェクトプライム（Purafect Prime）（商標）、プラフェクトＯｘＰ（Purafect OxP）（商標）、ＦＮ２、ＦＮ３およびＦＮ４ジェネンコア・インターナショナル社（Genencor International Inc.）が挙げられる。
【００８５】
リパーゼは細菌または真菌起源のものを含む。化学的に改質したまたはタンパク質工学的変異を含む。有用なリパーゼの例としては、フミコラ（Humicola）（異名：サーモミセス（Thermomyces））、例えば、欧州特許第２５８０６８号および同第３０５２１６号に記載のようなフミコラ・ラヌギノサ（H. lanuginosa）（異名：サーモミセス・ラヌギノサス（T. lanuginosus））または国際特許第９６／１３５８０号に記載のようなフミコラ・イノソレンス（H.insolens）、シュードモナス（Pseudomonas）リパーゼ、例えば、シュードモナス・アルカリゲンス（P. alcaligenes）またはシュードモナス・シュードアルカリゲンス（P. pseudoalcaligenes）（欧州特許第２１８２７２号）、シュードモナス・セパシア（P. cepacia）（欧州特許第３３１３７６号）、シュードモナス・スタッチェリ（P. stutzeri）（英国特許第１，３７２，０３４号）、シュードモナス・フルオレッセンス（P. fluorescens）、シュードモナス種（Pseudomonas sp.）菌株ＳＤ７０５（国際特許第９５／０６７２０号および国際特許第９６／２７００２）、シュードモナス・ウィスコンシネンシス（P. wisconsinensis）（国際特許第９６／１２０１２号）、バチルスリパーゼ、例えば、バチルス・サブチリス（B. subtilis）（ダートイス（Dartois）ら、（１９９３年）、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａ  ｅｔ  Ｂｉｏｐｈｙｓｉｃａ  Ａｃｔａ、第１１３１巻、２５３〜３６０頁）、バチルス・ステアロサーモフィラス（B. stearothermophilus）（特開昭６４／７４４９９２号）またはバチルス・プミラス（B. pumilus）（国際特許第９１／１６４２２号）由来のリパーゼが挙げられる。
【００８６】
他の例は、国際特許第９２／０５２４９号、国際特許第９４／０１５４１、欧州特許第４０７２２５号、欧州特許第２６０１０５号、国際特許第９５／３５３８１号、国際特許第９６／００２９２号、国際特許第９５／３０７４４号、国際特許第９４／２５５７８号、国際特許第９５／１４７８３号、国際特許第９５／２２６１５号、国際特許第９７／０４０７９号および国際特許第９７／０７２０２号に記載のもののようなリパーゼ変異体である。
【００８７】
他の市販のプロテアーゼ酵素としては、リポラーゼ（Lipolase）（商標）、リポラーゼウルトラ（Lipolase Ultra）（商標）およびリペックス（Lipex）（商標）（ノボザイムスＡ／Ｓ（Novozymes A/S））が挙げられる。
【００８８】
好適なアミラーゼ（αおよび／またはβ）としては、細菌または真菌起源のものが挙げられる。化学的に改質したまたはタンパク質工学的変異を含む。アミラーゼとしては、例えば、バチルス、例えば、バチルス・リケニフォルミス（B. licheniformis）の特別菌株から得たα−アミラーゼが挙げられ、これは英国特許第１，２９６，８３９号により詳細に記載されている。
【００８９】
有用なアミラーゼの例は、国際特許第９４／０２５９７号、国際特許第９４／１８３１４号、国際特許第９６／２３８７３号、および国際特許第９７／４３４２４号に記載された変異体、特に以下の位置の１以上が置換された変異体である：１５、２３、１０５、１０６、１２４、１２８、１３３、１５４、１５６、１８１、１８８、１９０、１９７、２０２、２０８、２０９、２４３、２６４、３０４、３０５、３９１、４０８、および４４４。
【００９０】
市販のアミラーゼは、デュラミル（Duramyl）（商標）、ターマミル（Termamyl）（商標）、ステインザイム（Stainzyme）（商標）、ステインザイムウルトラ（Stainzyme Ultra）（商標）、ファンガミル（Fungamyl）（商標）およびＢＡＮ（商標）（ノボザイムスＡ／Ｓ（Novozymes A/S））、ラピダーゼ（Rapidase）（商標）およびプラスター（Purastar）（商標）（ジェネンコア・インターナショナル社（Genencor International Inc.）製）である。
【００９１】
好適なセルラーゼは細菌または真菌起源のものを含む。化学的に改質したまたはタンパク質工学的変異を含む。好適なセルラーゼとしては、バチルス属、シュードモナス属、フミコラ属、フサリウム属、シーラビア属、アクレモニウム属由来のセルラーゼ、例えば、米国特許第４，４３５，３０７号、米国特許第５，６４８，２６３号、米国特許第５，６９１，１７８号、米国特許第５，７７６，７５７号および国際特許第８９／０９２５９号に開示されたフミコラ・インソレンス（Humicola insolens）、ミセリオフトラ・サーモフィラ（Myceliophthora thermophila）およびフサリウム・オキシスポラム（Fusarium oxysporum）から産生された真菌セルラーゼが挙げられる。
【００９２】
特に好適なセルラーゼは、色ケア効果を有するアルカリまたは中性セルラーゼである。かかるセルラーゼの例は、欧州特許第０４９５２５７号、欧州特許第０５３１３７２号、国際特許第９６／１１２６２号、国際特許第９６／２９３９７号、国際特許第９８／０８９４０号に記載されたセルラーゼである。他の例は、国際特許第９４／０７９９８号、欧州特許第０５３１３１５号、米国特許第５，４５７，０４６号、米国特許第５，６８６，５９３号、米国特許第５，７６３，２５４号、国際特許第９５／２４４７１号、国際特許第９８／１２３０７号および国際出願ＰＣＴ／ＤＫ９８／００２９９号に記載されたもののようなセルラーゼ変異体である。
【００９３】
市販のセルラーゼとしては、レノザイム（Renozyme）（商標）、セルクリーン（Celluclean）（商標）、エンドラーゼ（Endolase）、（商標）セルザイム（Celluzyme）（商標）、およびカレザイム（Carezyme）（商標）ノボザイムスＡ／Ｓ（Novozymes A/S）、クラジナーゼ（Clazinase）（商標）、およびプラダックスＨＡ（Puradax HA）（商標）（ジェネンコア・インターナショナル社（Genencor International Inc.））、およびＫＡＣ−５００（Ｂ）（商標）（花王）が挙げられる。
【００９４】
ペルオキシダーゼ／オキシダーゼ
好適なペルオキシダーゼ／オキシダーゼとしては、植物、細菌または真菌起源のものが挙げられる。化学的に改質したまたはタンパク質工学的変異を含む。有用なペルオキシダーゼの例としては、コプリヌス（Coprinus）、例えばコプリヌス・シネレウス（C. cinereus）由来のペルオキシダーゼおよび、国際特許第９３／２４６１８号、国際特許第９５／１０６０２号、および国際特許第９８／１５２５７号に記載されたもののようなそれらの変異体が挙げられる。
【００９５】
市販のペルオキシダーゼとしては、ガードザイム（Guardzyme）（商標）（ノボザイムスＡ／Ｓ（Novozymes A/S））が挙げられる。
【００９６】
清浄組成物中に存在する場合、上述した酵素類は、組成物の約０．００００１重量％〜約２重量％、約０．０００１重量％〜約１重量％、またはさらに約０．００１重量％〜約０．５重量％の濃度の酵素タンパク質で存在してよい。
【００９７】
酵素安定剤−種々の技法によって、洗剤に使用する酵素類を安定化させることができる。本明細書に用いられる酵素類は、カルシウムイオンおよび／またはマグネシウムイオンを酵素に供給する、最終組成物中のカルシウムおよび／またはマグネシウムイオンの水溶性供給源の存在によって安定化させることができる。さらなる従来の安定剤、例えば、プロピレングリコールまたはグリセロールのようなポリオール、糖または糖アルコール、乳酸、ホウ酸、またはホウ酸誘導体、例えば、芳香族ホウ酸エステル、または４−フォルミルフェニルボロン酸のようなフェニルボロン酸誘導体もまた使用してよく、組成物は例えば国際特許第９２／１９７０９号および国際特許第９２／１９７０８号に記載のように配合してよい。
【００９８】
溶媒−好適な溶媒としては、水および親油性流体のような他の溶媒が挙げられる。好適な親油性流体の例としては、シロキサン類、その他のシリコーン類、炭化水素類、グリコールエーテル類、例えばグリセリンエーテル類などのグリセリン誘導体類、ペルフルオロ化アミン類、ペルフルオロ化およびハイドロフルオロエーテル溶媒類、低揮発性の非フッ素化有機溶媒類、ジオール溶媒類、環境に優しいその他の溶媒類、並びにこれらの混合物が挙げられる。
【００９９】
洗浄方法
本発明は、ある場所、とりわけ表面または布地を清浄および／または処理する方法を含む。これらの方法は、本出願人による清浄組成物の実施形態を、希釈していない形態で、または洗浄溶液中で希釈して、表面または布地の少なくとも一部分に接触させ、次いで、所望により、かかる表面または布地をすすぐ工程を含む。表面または布地は上記すすぎ工程の前に洗浄工程を経てもよい。本発明の目的上、洗浄は、擦ることおよび機械的攪拌を含むが、これらに限定されない。当業者に理解されるように、本発明の洗浄組成物は理想的には洗濯用途に用いるのに適している。それ故に、本発明は布地を洗濯するための方法を含む。この方法は、洗濯されるべき布地を、本出願の清浄組成物の少なくとも１つの実施形態、清浄添加物、またはこれらの混合物を含む清浄洗濯溶液と接触させる工程を含む。布地は、標準的な消費者の使用条件で洗濯され得る大部分の任意の布地を含んでもよい。溶液は、好ましくは、約８〜約１０．５のｐＨを有する。組成物は、溶液中に約１００ｐｐｍ〜、好ましくは５００ｐｐｍ〜約１５，０００ｐｐｍの濃度で使用してよい。水温は、通常、約５℃〜約９０℃の範囲である。本発明は、３０℃未満または２５℃もしくは２０℃未満のような低い水温にて特に有益な場合がある。水の布地に対する比は、通常、約１：１〜約３０：１である。
【０１００】
リパーゼ変異体実施例
緩衝剤として用いる化学物質および基質は、少なくとも試薬等級の市販製品であった。
−培地および溶液：ＬＡＳ（サーファックＰＳ（Surfac PS）（商標））およびゼオライトＡ（Zeolite A）（ウェサリスＰ（Wessalith P）（商標））用いる他の成分は、標準的な実験用試薬である。
−材料：ＥＭＰＡ２２１ＥＭＰＡサンクトガレン（St. Gallen）（スイス、サンクトガレン、ＣＨ−９０１４、Ｌｅｒｃｈｆｅｌｄｓｔｒａｓｓｅ５）製
【０１０１】
（実施例１）：酵素の産生
リパーゼをコードしている遺伝子を含有するプラスミドを作成し、当該技術分野において標準的な方法を用いて好適な宿主細胞に形質転換する。
【０１０２】
３４℃である一定の培地温度、１．２Ｌの開始容量で、流加発酵として発酵を実施する。培地の初期ｐＨは６．５に設定する。いったんｐＨが７．０に増加すると、この値は１０％Ｈ３ＰＯ４の添加を通して維持される。培地中に溶解する酸素濃度は、攪拌速度の変動および１．０Ｌ空気／Ｌ培地／分に固定された曝気速度の使用により制御される。給餌速度（feed addition rate）は、全体の流加相中一定の速度に維持される。回分培地（batch medium）は、炭素源としてのマルトースシロップ、窒素源としての尿素および酵母抽出物、並びに微量金属および塩類の混合物を含有する。流加相中持続的に添加される餌は、炭素源としてのマルトースシロップを含有する一方、酵母抽出物および尿素は確実に十分な窒素を供給するために添加される。
【０１０３】
リパーゼの精製は、当該技術分野において標準的な方法、例えば、欧州特許第０８５１９１３号の実施例３に記載されたような、例えば、発酵上清の濾過およびそれに続く疎水クロマトグラフィーおよび陽イオン交換を使用することにより行ってよい。
【０１０４】
（実施例２）：ＡＭＳＡ−相対性能（ＲＰ）の算出のための自動機械的ストレス分析
本出願の酵素変異体を、自動機械的ストレス分析（ＡＭＳＡ）を用いて試験した。ＡＭＳＡ試験によって、大量の少容量酵素洗剤溶液の清浄性能を測定することができる。ＡＭＳＡプレートは、試験溶液のための多数のスロットと、全てのスロット開口部に対して洗浄される布地見本をしっかりと絞るふたを有する。洗浄時間中、プレート、試験溶液、布地およびふたは激しく振盪され、試験溶液を布地に接触させ、機械的ストレスを加える。さらなる記載は、国際特許第０２／４２７４０号、特に２３〜２４頁の「特別な方法および実施形態」の段落を参照のこと。洗剤試験溶液を収容する容器は、金属プレートの円筒形の穴（直径６ｍｍ、深さ１０ｍｍ）から成る。しみの付いた布地（試験材料）を金属プレート上に置き、ふたとして用い、容器を封止する。別の金属プレートをしみの付いた布地上に置き、各容器からいずれかが漏れることを防ぐ。２枚の金属プレートをしみの付いた布地とともに、周波数３０Ｈｚ、振幅２ｍｍで上下に振動させる。
【０１０５】
以下に述べる実験条件下で分析を実施した。
【表３】
2009523461.tif 000005
【０１０６】
５ｇのターメリック（サンタマリア（Santa Maria）、デンマーク）と１００ｇのクリーム（脂肪分３８％、アルラ（Arla）、デンマーク）を５０℃で混合し、混合物をこの温度で約２０分間放置し、濾過し（５０℃）、任意の不溶粒子を除去することにより、クリーム状ターメリック見本を調製した。混合物を２０℃に冷却し、綿織物見本、ＥＭＰＡ２２１をクリーム状ターメリック混合物に浸漬し、その後室温で一晩乾燥させ、使用まで冷凍する。クリーム状ターメリック見本の調製は、特許出願２００５００７７５（２００５年５月２７日出願）に開示されている。
【０１０７】
酵素変異体の性能を、特定の酵素変異体で洗浄した布地見本の色の輝度として測定する。輝度はまた、白色光を照射した際に布地から反射する光の強度として表すこともできる。布地にしみがついている場合、反射する光の強度は清浄な布地より低い。従って、反射する光の強度を用いて、酵素変異体の洗浄性能を測定することができる。
【０１０８】
色測定は、専門の平床式スキャナ（ＰＦＵ  ＤＬ２４００ｐｒｏ）で行い、それを用いて洗浄した布地見本の画像を記録する。解像度２００ｄｐｉ、出力の色の深み２４ビットでスキャンする。正確な結果を得るために、スキャナを、コダックリフレクティブＩＴ８ターゲット（Kodak reflective IT8 target）で頻繁に較正する。
【０１０９】
スキャンした画像から光の強度値を抽出するために、特別に設計されたソフトウェア・アプリケーションを用いる（ノボザイムス・カラー・ベクター・アナライザー（Novozymes Color Vector Analyzer）。プログラムは、画像から２４ビットの画素値を読み出し、それを赤、緑および青（ＲＧＢ）の値に変換する。ベクターとしてＲＧＢ値をともに加え、次いで得られたベクターの長さをとることにより、強度値（Ｉｎｔ）を算出する。
【数１】
2009523461.tif 000006
【０１１０】
変異体の清浄性能（Ｐ）は、以下の式に従って算出する。Ｐ＝Ｉｎｔ（ｖ）−Ｉｎｔ（ｒ）式中、Ｉｎｔ（ｖ）は試験酵素で洗浄した布地表面の光の強度値であり、Ｉｎｔ（ｒ）は試験酵素なしで洗浄した布地表面の光の強度値である。
【０１１１】
相対性能値は、以下の定義に従ったＡＭＳＡ洗浄の結果として与えられる。相対性能値（ＲＰ）は、参照酵素に対する試験酵素変異体の性能（Ｐ）の合計である。ＲＰ＝Ｐ（試験酵素）／Ｐ（参照酵素）
【０１１２】
ＲＰａｖｇは、４つの酵素濃度（０．１２５、０．２５、０．５、１．０ｍｇ  ｅｐ／ｌ）全てで参照酵素と比べた相対性能の平均を示す。
ＲＰａｖｇ＝ａｖｇ（ＲＰ（０．１２５），ＲＰ（０．２５），ＲＰ（０．５），ＲＰ（１．０））
【０１１３】
変異体は、それが参照より良好な性能を発揮する場合、洗浄性能が向上したと考えられる。本発明において、参照酵素は、Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒの置換を有する配列番号２のリパーゼである。
【０１１４】
（実施例３）：リスク因子算出のためのＧＣ−ガスクロマトグラフ
見本を洗浄したリパーゼから放出される酪酸を、以下の方法を用いて固相微量抽出ガスクロマトグラフィー（ＳＰＭＥ−ＧＣ）により測定した。１ｍｇ／Ｌのリパーゼを含有する表３の特定の溶液で洗浄された４つの布地片（直径５ｍｍ）をガスクロマトグラフ（ＧＣ）バイアル瓶に移動させた。スタビルワックス−ＤＡｗ／インテグラ−ガードカラム（Stabilwax- DA w／Integra-Guard column）（３０ｍ、０．３２ｍｍＩＤおよび０．２５マイクロ−ｍ  ｄｆ）およびカーボキセン（Carboxen）ＰＤＭＳ  ＳＰＭＥファーバー（７５マイクロ−ｍ）を装備したヴァリアン（Varian）３８００ＧＣで試料を分析した。各試料は、４０℃で１０分間前保温し、続いて２０分間布地片全体にわたってヘッドスペースのＳＰＭＥファイバーで抽出した。次いで、試料をカラムに注入した（注入温度＝２５０℃）。カラム流量＝２ｍＬヘリウム／分。カラムオーブン温度勾配：０分＝４０℃、２分＝４０℃、２２分＝２４０℃、３２分＝２４０℃。酪酸をＦＩＤ検出により検出し、酪酸検量線を基準として酪酸の量を算出した。
【０１１５】
リパーゼ変異体のリスク性能臭気、Ｒは、両値をリパーゼなしで洗浄した見本から放出された酪酸の量で補正した後、見本を洗浄したリパーゼ変異体から放出された酪酸の量と、Ｔ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒ（参照酵素）の置換を有する配列番号２のリパーゼで洗浄した見本から放出された酪酸の量との比である。変異体のリスク（Ｒ）は以下の式に従って算出される。
臭気＝１ｍｇ酵素タンパク質／ｌ（ブランクで補正）で発生した酪酸（μｇ）で測定
α試験酵素＝臭気試験酵素−ブランク
α参照酵素＝臭気参照酵素−ブランク
Ｒ＝α試験酵素／α参照酵素
【０１１６】
変異体は、Ｒ因子が１未満である場合、参照に比べて臭気が減少すると考えられる。
【０１１７】
（実施例４）：２８０ｎｍでの吸光度に対する活性（ＬＵ）
２８０ｎｍでの吸光度に対するリパーゼ活性は、以下の分析ＬＵ／Ａ２８０によって測定される。
【０１１８】
リパーゼ活性は、上記リパーゼ活性の章に記載したように測定される。２８０ｎｍにおけるリパーゼの吸光度を測定し（Ａ２８０）、比ＬＵ／Ａ２８０を算出する。相対的ＬＵ／Ａ２８０を、参照酵素のＬＵ／Ａ２８０によって除された変異体のＬＵ／Ａ２８０として算出する。本発明において、参照酵素はＴ２３１Ｒ＋Ｎ２３３Ｒの置換を有する配列番号２のリパーゼである。
【０１１９】
（実施例５）：ＢＲ−ベネフィット・リスク
臭気リスクの減少と比較した性能を説明するベネフィット・リスク因子は、従って、以下のように定義される：ＢＲ＝ＲＰａｖｇ／Ｒ。
【０１２０】
変異体は、ＢＲ因子が１を超える場合、洗浄性能を向上させ、臭気を低減すると考えられる。
【０１２１】
上記方法の適用によって、以下の結果が得られる。
【表４】
2009523461.tif 000007
【０１２２】
表４中の参照リパーゼおよび変異体７および８は、国際特許第２０００／０６００６３号に記載されている。
【０１２３】
洗剤実施例
例えば、実施例において短縮された成分の識別は以下の通りである。
【表５−１】
2009523461.tif 000008
【表５−２】
2009523461.tif 000009
【０１２４】
（実施例Ａ）
顆粒洗濯洗剤の形態を有する漂白洗剤組成物は、以下の配合によって例示される。
【表６】
2009523461.tif 000010
【０１２５】
実施例Ａの任意の組成物は、２５００ｐｐｍ、２５℃、および水：衣類の比２５：１の代表的な中央条件で、水中に６００〜１００００ｐｐｍの濃度で洗濯布地に用いる。代表的なｐＨは約１０であるが、酸のＮａ塩形態のアルキルベンゼンスルホネートに対する比率を変えることによって調整することができる。
【０１２６】
（実施例Ｂ）
顆粒洗濯洗剤の形態を有する漂白洗剤組成物は、以下の配合によって例示される。
【表７】
2009523461.tif 000011
【０１２７】
実施例Ｂの任意の上記組成物は、２０〜９０℃、水：衣類の比５：１で、水中に１０，０００ｐｐｍの濃度で洗濯布地に用いる。代表的なｐＨは約１０であるが、酸のＮａ塩形態のアルキルベンゼンスルホネートに対する比率を変えることによって調整することができる。
【０１２８】
（実施例Ｃ）
【表８】
2009523461.tif 000012
＊  ｍｇ酵素／１００ｇで見積もった数
１  米国特許第４，５９７，８９８号に記載
２  国際特許第０１／０５８７４号に記載されたもののような、ＢＡＳＦ社から商品名ＬＵＴＥＮＳＩＴ（登録商標）として入手可能
【０１２９】
「発明を実施するための最良の形態」で引用した全ての文書の要部は、本明細書に参照により組み込まれる。文書の引用はいずれも、それが本発明に対する従来技術であることの容認であると解釈されるべきではない。この文書における用語のいずれかの意味または定義が、参考として組み込まれる文献における同一用語のいずれかの意味又または定義と対立する範囲については、本文書におけるその用語に与えられた意味または定義を適用するものとする。
【０１３０】
本発明の特定の実施形態を説明記述してきたが、本発明の精神範囲から逸脱することなく他の様々な変更修正を行えることが当業者には明白であろう。したがって、本発明の範囲内にあるそのような全ての変更および修正を添付の特許請求の範囲で扱うものとする。
【図面の簡単な説明】
【０１３１】
【図１】リパーゼの配列比較を示す。
【図１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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