(57)【要約】  ＩＦＮτを投与することにより自己免疫状態を治療する方法を記載する。ＩＦＮτは、多発性硬化症患者の新しい造影増強脳病変における減少などの、所望の臨床的エンドポイントを達成するために十分な用量で経口投与される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
多発性硬化症患者の脳ＭＲＩで検出可能な新たなガドリニウム増強病変の数を減少させるための薬物の製造において使用するための組成物であって、前記薬物が、経口投与用に処方されたインターフェロン−タウを含有して、前記薬物で約３カ月の期間治療した後の新たなガドリニウム増強病変の出現が、前記薬物で治療せずに１カ月の期間で観察された新たなガドリニウム増強病変の数と比べて少なくとも約３０％減少する上記組成物。
【請求項２】
経口投与したインターフェロン−タウの臨床的効果を評価するための方法であって、
インターフェロン−タウの経口投与の前後のインターフェロン−γ、インターロイキン−１０及びインターロイキン−１２から選択されたサイトカインの血清中濃度を測定すること、及び
インターフェロン−タウの経口投与の前後の新たなガドリニウム増強病変の数を、ＭＲＩ造影を用いて決定することを含み、
それによって、前記血清中サイトカイン濃度のうちの１つ又は複数の測定された変化が、インターフェロン−タウの経口投与後の新たなガドリニウム増強病変の数の減少と共に、臨床的効果を表す上記方法。
【請求項３】
多発性硬化症のインターフェロン−タウ治療に反応する患者を選択する方法であって、
少なくとも約１カ月の期間にわたり、少なくとも１×１０５Ｕ／日の用量でインターフェロン−タウを多発性硬化症患者に経口投与すること、及び
インターフェロン−γ、インターロイキン−１０及びインターロイキン−１２から選択されたサイトカインの血清中濃度の検出可能な変化を示す患者を反応性として選択することを含み、血清中サイトカイン濃度の変化が、前記経口投与後にＭＲＩにより測定した脳のガドリニウム増強病変の数の減少と相関することによって決定されるように、血清中サイトカイン濃度の変化が、インターフェロン−タウ治療に反応する患者と相関する上記方法。
【請求項４】
治療に反応する患者と相関する血清中サイトカイン濃度の変化が、血清中インターロイキン−１０濃度の少なくとも約１５％の増加である、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
経口投与が少なくとも約３カ月の期間であり、治療に反応する患者と相関する血清中サイトカインの変化が、血清中インターロイキン−１０濃度の少なくとも約３０％の増加である、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
前記インターフェロン−タウが、ヒツジインターフェロン−タウ又はウシインターフェロン−タウである、請求項１から３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項７】
前記ヒツジインターフェロン−タウが、配列番号２又は配列番号３として識別される配列を有する、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記インターフェロン−タウが腸管に投与される、請求項１から３までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
前記患者が第２の治療薬でさらに治療される、請求項１又は請求項３に記載の方法。
【請求項１０】
前記第２の治療薬が多発性硬化症の治療に適した薬剤である、請求項９に記載の方法。
【請求項１１】
対象の多発性硬化症の進行を治療又は減速する方法であって、
インターフェロン−タウを少なくとも約１×１０８単位の１日投与量で対象に経口投与すること、及び
新たな造影増強脳病変の減少が観察されるまで対象にインターフェロン−タウを経口投与し続けることを含む上記方法。
【請求項１２】
多発性硬化症を患う対象の再発のリスクを減少させる方法であって、
インターフェロン−タウを少なくとも約１×１０８単位の１日投与量で患者に経口投与すること、及び
新たな造影増強脳病変の減少が観察されるまで対象にインターフェロン−タウを経口投与し続けることを含む上記方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明の主題は、インターフェロン−タウを含む医薬組成物及びその使用法に関する。より具体的には、本発明の主題は、所望の臨床転帰を得るために、インターフェロン−タウ（ＩＦＮτ）を十分な用量で投与すると、自己免疫状態などの特定のサイトカイン濃度の調節から利益を得る、状態を治療する方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
インターフェロン−タウ（以下、「ＩＦＮτ」又は「インターフェロン−τ」）は、当初、反芻動物の受胎産物の栄養外胚葉により産生される妊娠認識ホルモンとして発見された（Ｉｍａｋａｗａ，Ｋ．ら、Ｎａｔｕｒｅ，３３０：３７７−３７９，（１９８７）；Ｂａｚｅｒ，Ｆ．Ｗ．及びＪｏｈｎｓｏｎ，Ｈ．Ｍ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｐｒｏ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，２６：１９−２２，（１９９１））。ＩＦＮτ遺伝子の分布は、ウシ、ヒツジ及びヤギなどの反芻動物に限定されているが（Ａｌｅｘｅｎｋｏ，Ａ．Ｐ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．，１９：１３３５−１３４１，（１９９９））、ヒト及びマウスなどの他の種に属する細胞で活性を有することが示されている（Ｐｏｎｔｚｅｒ，Ｃ．Ｈ．ら、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．，５１：５３０４−５３０７，（１９９１）；Ａｌｅｘｅｎｋｏ，Ａ．Ｐ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．，２０：８１７−８２２，（２０００））。例えば、ＩＦＮτは、抗ウイルス（Ｐｏｎｔｚｅｒ，Ｃ．Ｈ．ら、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍｕｎ．，１５２：８０１−８０７，（１９８８））、抗増殖性（Ｐｏｎｔｚｅｒ，Ｃ．Ｈ．ら、１９９１）及び免疫調節活性（Ａｓｓａｌ−Ｍｅｌｉａｎｉ，Ａ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｐｒｏ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，３３：２６７−２７５（１９９５））を有することが実証されている。
【０００３】
ＩＦＮτは、インナーフェロン−α及びインターフェロン−βなどのＩ型ＩＦＮに古典的に関連した活性の多くを示すが、ＩＦＮτと他のタイプのＩ型ＩＦＮとの間にはかなりの相違が存在する。最も顕著な相違は、反芻動物種の妊娠におけるＩＦＮτの役割である。他のＩＦＮは、妊娠認識において同様の活性を持たない。また、ウイルス誘導性も異なる。ＩＦＮτ以外の全てのＩ型ＩＦＮは、ウイルス及びｄｓＲＮＡにより容易に誘導される（Ｒｏｂｅｒｔｓら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，１３：４３２（１９９２））。誘導されたＩＦＮ−α及びＩＦＮ−β発現は一過性で、ほぼ数時間持続する。対照的に、ＩＦＮτの合成は、一旦、誘導されると、数日間にわたり維持される（Ｇｏｄｋｉｎら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔ．，６５：１４１（１９８２））。１細胞あたりの基準で、ＩＦＮτは、他のＩ型ＩＦＮより３００倍多く生成される（Ｃｒｏｓｓ，Ｊ．Ｃ．及びＲｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｍ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８８：３８１７−３８２１（１９９１））。
【０００４】
他の相違は、ＩＦＮτ及び他のＩ型インターフェロンのアミノ酸配列にある。インターフェロンα２ｂ、β１、ω１、γ及びτの間のアミノ酸配列類似性のパーセントを以下の表に要約する。
【表１】
2009518432.tif 000002
以下の参考文献から判定した配列比較。
Ｔａｎｉｇｕｃｈｉら、Ｇｅｎｅ，１０（１）１１（１９８０）。
Ａｄｏｌｆら、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ，１０８９（２）：１６７（１９９１）。
Ｓｔｒｅｕｌｉら、Ｓｃｉｅｎｃｅ，２０９：１３４３（１９８０）。
Ｉｍａｋａｗａら、Ｎａｔｕｒｅ，３３０：３７７（１９８７）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
組換え型ヒツジＩＦＮτは、ＩＦＮα２ｂに４８．８パーセント相同であり、ＩＦＮβ１に３３．８パーセント相同である。このＩＦＮτとＩＦＮα及びＩＦＮτとＩＦＮβの間の限定的な相同性のため、経口投与した際、ＩＦＮτがＩＦＮα又はＩＦＮβと同じ様式で作用するか予測することができない。また、ＩＦＮτは、ヒト細胞上のＩ型受容体に対する受容体結合親和性が低いことが報告されている（Ｂｒｏｄ，Ｓ．，Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．，１８：８４１（１９９９）；Ａｌｅｘｅｎｋｏ，Ａ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．，１７：７６９（１９９７））。さらに、ＩＦＮτが非内在性ヒトタンパク質であるという事実は、ＩＦＮτが人体に導入されると、全身の中和抗体形成の潜在性を生じる（Ｂｒｏｄ，Ｓ．，Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．，１８：８４１（１９９９））。これらのＩＦＮτと他のインターフェロンとの相違は、ヒトに投与すると、ＩＦＮτが治療上の有益性をもたらすかどうかを予測することを困難にする。ＩＦＮα、ＩＦＮβ、又はタウ以外の他のインターフェロンのいずれかの経口投与に関する当技術分野の教示は、ＩＦＮτに対する何らかの期待を抱くためのベースを提供することができない。
【０００６】
ＩＦＮτ、並びに通常はタンパク質及びポリペプチドの使用における１つの制限因子は、非経口的に投与した際の血漿タンパク質及び血球とのタンパク質の相互作用により影響される体内分布に関連する。経口投与経路は、意図される標的に到達する前に、酸性条件が分子を破壊する可能性がある胃内におけるタンパク分解により、なおさら問題である。例えば、胃及び膵臓の酵素の作用により産生されるポリペプチド及びタンパク質断片は、腸内の刷子縁膜でエキソペプチダーゼ及びエンドペプチダーゼにより切断され、ジペプチド及びトリペプチドを生じる。膵酵素によるタンパク分解が避けられる場合、ポリペプチドは刷子縁ペプチダーゼによる分解にかけられる。胃の通過を生き延びることができるポリペプチド又はタンパク質は、浸透障壁（ｐｅｎｅｔｒａｔｉｏｎ  ｂａｒｒｉｅｒ）が細胞への流入を防止する腸管粘膜で代謝にかけられる。この理由により、多くの試みは、一定期間、口腔に留まるトローチ剤又は溶液の形態で、咽頭口部（ｏｒａｌ−ｐｈａｒｙｎｇｅａｌ  ｒｅｇｉｏｎ）にタンパク質を送達することに焦点が当てられている。
【０００７】
様々な疾患におけるサイトカインの役割、並びにサイトカインの血中濃度と疾患の発症及び重症度との相関は、医学界の関心事である。最近の調査は、血清中ＩＬ−１０濃度の低い多発性硬化症患者が、血清中ＩＬ−１０濃度が高い患者より障害度が顕著であることを示している（Ｐｅｔｅｒｅｉｔ，Ｈ．Ｆ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，２０６：２０９（２００３））。また、ＩＬ−１２の下方制御が多発性硬化症患者を治療する際に有益であり得ることが報告されている（Ｔｕｏｈｙ，Ｖ．ら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．，１１１（１−２）：５５（２０００））。インターフェロン−γと多発性硬化症とのリンクも、文献で報告されている（Ｍｏｌｄｏｖａｎ，Ｉ．Ｒ．ら、Ｊ．Ｎｅｕｒｏｉｍｍｕｎｏｌ．，１４１（１−２）：１３２（２００３））。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
したがって、症状を軽減し、状態の進行を抑制し、及び／又は状態の回復を促進するというように、患者の血清中サイトカイン濃度を調節することにより対象の自己免疫状態を治療する方法を提供する。一実施形態では、症状の軽減、進行の抑制を、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）、特に造影増強ＭＲＩを使用して確認する。血清中サイトカイン濃度の調節は、多発性硬化症と診断された患者で、新しい造影増強ＭＲＩによる脳病変を減少することに相関し、したがって、インターフェロン−タウによる治療に反応する患者は、血清中サイトカイン濃度の変化を検出することにより選択することができる。
【０００９】
別の態様では、多発性硬化症患者の新たなガドリニウム増強病変の数を減少させる方法であって、経口投与用に処方されたインターフェロン−タウを含有する薬物を、少なくとも約３カ月の期間投与して、インターフェロン−タウで治療しない期間の病変の数と比べて、新たな病変の出現が少なくとも約３０％減少する方法を提供する。
【００１０】
別の態様では、症状を軽減し、継続的細胞増殖を抑制し、及び／又は増殖の回復を促進するというように、対象の血清中サイトカイン濃度を調節することにより対象の細胞増殖に関連する状態を治療する方法を提供する。
【００１１】
一態様では、実施形態は、疾患状態の継続的進行を患う又はそのリスクにある患者に、その患者又はモデル患者集団のベースラインの血清中サイトカイン濃度に比べて、選択された血清中サイトカイン濃度を調節するのに十分なインターフェロン−タウの用量を投与することにより達成される。
【００１２】
別の態様では、ヒト対象の血中インターロイキン−１０（ＩＬ−１０）濃度を上方制御する方法であって、インターフェロン−タウ（ＩＦＮτ）を、１×１０５単位を超える、好ましくは約１×１０８単位を超える、好ましくは５×１０８単位を超える１日投与量で、さらにより好ましくは少なくとも約９×１０８単位の１日投与量で患者に投与することを含む方法を提供する。対象へのＩＦＮτの経口投与を、所望の臨床的エンドポイントが達成されるまで、１週間あたり少なくとも数回定期的に継続する。
【００１３】
一実施形態では、ＩＦＮτは、ヒツジＩＦＮτ又はウシＩＦＮτである。典型的なヒツジＩＦＮτ配列は、配列番号２又は配列番号３として識別される。
【００１４】
別の実施形態では、ＩＦＮτを対象の腸管に経口投与する。
【００１５】
一実施形態では、自己免疫状態を患う対象を治療する場合、所望の臨床的エンドポイントは、患者の症状の軽減である。典型的な自己免疫状態は、多発性硬化症、Ｉ型糖尿病、リウマチ様関節炎、エリテマトーデス、乾癬、重症筋無力症、グレーブス病、橋本甲状腺炎、シェーグレン症候群、強直性脊椎炎及び炎症性大腸疾患を含む。
【００１６】
他の実施形態では、ＩＦＮτを、細胞増殖により特徴付けられる障害の治療のために経口投与する。ＩＦＮτを、例えば、腫瘍の大きさ又は全身腫瘍組織量の減少など、障害に関連した症状の軽減などの、臨床的エンドポイントに達するまで投与する。典型的な細胞増殖状態は、ヒト肺大細胞癌、ヒト結腸腺癌、ヒト悪性黒色腫、ヒト腎腺癌、ヒト前骨髄球性白血病、ヒトＴ細胞リンパ腫、ヒト皮膚Ｔ細胞リンパ腫、ヒト乳腺癌及びステロイド感受性腫瘍を含む。
【００１７】
他の実施形態では、ＩＦＮτの投与を第２の治療薬の同時又は連続投与と組み合わされる。典型的な第２の治療薬は、抗ウイルス薬、抗癌剤、及び自己免疫障害の治療に適した薬剤を含む。
【００１８】
別の態様では、一般的に上記の範囲の投与量である、疾患の進行の減速を達成するために選択された１日投与量で患者にＩＦＮτを投与する、ヒトの患者において多発性硬化症の進行を遅らせる方法を提供する。ＩＦＮτの経口投与は、少なくとも新しい造影増強脳病変の減少などの所望の治療転帰が観察されるまで継続する。
【００１９】
さらに別の態様では、多発性硬化症を患う対象の再発のリスクを減少させる方法を記載する。この方法は、上記の範囲の１日投与量で対象にＩＦＮτを経口投与することを含み、この投与量は一般的に、インターフェロン−タウを投与しない対象の血中ＩＬ−１０濃度に比べて、対象の血中ＩＬ−１０濃度の増加をもたらすのに十分である。対象へのＩＦＮτの経口投与は、少なくとも新しい脳病変の減少若しくは神経学的評価スコアの変化などの所望の臨床転帰に達するまで、又はより長く継続する。
【００２０】
より一般に、対象の自己免疫状態を治療する方法を記載する。この方法は、インターフェロン−タウを投与しない対象の血中ＩＬ−１０濃度に比べて、対象の血中ＩＬ−１０濃度の増加をもたらすのに十分な量でＩＦＮτを対象に投与すること、対象の血中ＩＬ−１０濃度が、インターフェロン−タウを投与しない対象の血中ＩＬ−１０濃度に比べて増加を維持している選択された期間、ＩＦＮτの投与を中止すること、及びＩＦＮτの投与を再開することを含む。
【００２１】
上記の典型的な態様及び実施形態に加えて、さらなる態様及び実施形態が、図を参照することにより、さらに以下に記載の試験により明らかになる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２２】
１．定義
インターフェロン−タウ（ＩＦＮτ又はインターフェロン−τと省略）は、以下の２群の特性の各々から少なくとも１つの特性を有するインターフェロンタンパク質のファミリーのいずれか１つを指す：（ｉ）（ａ）抗黄体融解性（ａｎｔｉ−ｌｕｔｅｏｌｙｔｉｃ）特性、（ｂ）抗ウイルス特性、（ｃ）抗細胞増殖特性；及び（ｉｉ）α−インターフェロンと約４５から６８％アミノ酸相同性及び公知のＩＦＮτ配列に対して７０％より大きいアミノ酸相同性（例えば、Ｏｔｔら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｒｅｓ．，１１：３５７（１９９１）；Ｈｅｌｍｅｒら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔ．，７９：８３（１９８７）；Ｉｍａｋａｗａら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ，３：１２７（１９８９）；Ｗｈａｌｅｙら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．，２６９：１０８４６（１９９４）；Ｂａｚｅｒら、ＷＯ９４／１０３１３（１９９４））。アミノ酸相同性は、例えばデフォルトパラメータを用いたＬＡＬＩＧＮプログラムを使用して決定することができる。このプログラムは、配列比較プログラムのＦＡＳＴＡバージョン１．７パッケージで見つけられる（Ｐｅａｒｓｏｎ及びＬｉｐｍａｎ、ＰＮＡＳ，８５：２４４４（１９８８）；Ｐｅａｒｓｏｎ、「酵素学における方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）」１８３：６３（１９９０）；Ｗｉｌｌｉａｍ  Ｒ．Ｐｅａｒｓｏｎ，Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，Ｂｏｘ  ４４０，Ｊｏｒｄａｎ  Ｈａｌｌ，Ｃｈａｒｌｏｔｔｅｓｖｉｌｌｅ，ＶＡから入手可能なプログラム）。ＩＦＮτ配列は、ウシ（ウシ属、Ｈｅｌｍｅｒ  Ｓ．Ｄ．，Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔ．，７９：８３（１９８７）；Ｉｍａｋａｗａ，Ｋ．，Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，１１９：５３２（１９８８））、ヒツジ（ヒツジ属）、ジャコウウシ（ジャコウウシ属）、キリン（キリン属、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｕ５５０５０）、ウマ（Ｅｑｕｕｓ  ｃａｂａｌｌｕｓ）、シマウマ（Ｅｑｕｕｓ  ｂｕｒｃｈｅｌｌｉ、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＣ００５０２７）、カバ（カバ属）、ゾウ（ゾウ属）、ラマ（Ｌｌａｍａ  ｇｌａｍａ）、ヤギ（ヤギ属、ＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＡＹ３５７３３６、ＡＹ３５７３３５、ＡＹ３４７３３４、ＡＹ３５７３３３、ＡＹ３５７３３２、ＡＹ３５７３３１、ＡＹ３５７３３０、ＡＹ３５７３２９、ＡＹ３５７３２８、ＡＹ３５７３２７）及びシカ（シカ属）を含むがこれらに限定されるものではない様々な反芻動物種で同定されている。これら多くの種のＩＦＮτのヌクレオチド配列が、公開データベース及び／又は文献で報告されている（例えば、Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｍ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  ａｎｄ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ．，１８：８０５（１９９８）、Ｌｅａｍａｎ  Ｄ．Ｗ．ら、Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｒｅｓ．，１２：１（１９９３）、Ｒｙａｎ，Ａ．Ｍ．ら、Ａｎｉｍ．Ｇｅｎｅｔ．，３４：９（１９９６）参照）。「インターフェロン−タウ」という用語は、上記に記載した特性の以下の２群のそれぞれの、少なくとも１つの特性を有する、上記に列挙した反芻動物種により例証されたあらゆる反芻動物種由来のインターフェロン−タウタンパク質を含むことを意図する。
【００２３】
ヒツジＩＦＮτ（ＯｖＩＦＮτ）は、本明細書で配列番号２として識別されるアミノ酸配列を有するタンパク質を指し、また本明細書で配列番号３として識別されるＩＦＮτタンパク質などの、タンパク質の活性に著明な影響を及ぼさない中性アミノ酸置換などのアミノ酸置換及び改変を有するタンパク質を指す。より一般的に、ヒツジＩＦＮτタンパク質は、配列番号２として識別される配列に対して、約８０％、より好ましくは９０％の配列相同性を有するタンパク質である。配列相同性は、例えば、厳密なアミノ酸比較によるか、又は市販の多くのプログラムの１つを使用して判定することができる。
【００２４】
状態を治療することは、状態の症状を緩和及び／又は状態の重症度を軽減するために有効な治療物質を投与することを指す。
【００２５】
経口は、口による投与、又は胃内投与などの胃若しくは腸への直接の投与を含むあらゆる経路を指す。
【００２６】
腸は、胃の下部開口部から肛門まで広がり、小腸（十二指腸、空腸及び回腸）及び大腸（上行結腸、横行結腸、下行結腸、Ｓ字結腸及び直腸）を含む消化管の部分を指す。
【００２７】
「血中ＩＬ−１０濃度の測定可能な増加」は、同一条件下で測定した治療前濃度に対するインターロイキン−１０の血液中（血清及び／又は血球）濃度の統計的有意な増加、一般的に少なくとも２０％の増加、より好ましくは２５％の増加を指す。血中ＩＬ−１０濃度を測定する方法は、本明細書に記載されており、市販の酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）キットを使用する。倍の増加は、ｘ時点の値をスクリーニング又はベースライン値で割ることにより決定する。増加パーセントは、ｘ時点の値とスクリーニング又はベースライン値との差を見出し；この差をスクリーニング又はベースライン値で割り；商に１００を掛けることにより決定する。
【００２８】
「血中ＩＬ−１２濃度の測定可能な減少」は、同一条件下で測定した治療前濃度に対するインターロイキン−１２の血液中（血清及び／又は血球）濃度の統計的有意な増加、一般的に少なくとも２０％の増加、より好ましくは２５％の増加を指す。血中ＩＬ−１２濃度を測定する方法は、本明細書に記載されており、市販の酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）キットを使用する。倍の増加は、ｘ時点の値をスクリーニング又はベースライン値で割ることにより決定する。増加パーセントは、ｘ時点の値とスクリーニング又はベースライン値との差を見出し；この差をスクリーニング又はベースライン値で割り、商に１００を掛けることにより決定する。
【００２９】
「血中インターフェロン−γ濃度を維持すること」又は「血中インターフェロン−γ濃度が実質的に減少しない」は、インターフェロン−γの血液中（血清及び／又は血球）濃度に統計的に有意な変化がないことを指す。血中インターフェロン−γ濃度を測定する方法は、本明細書に記載されており、市販の酵素免疫測定法（ＥＬＩＳＡ）キットを使用する。
【００３０】
インターフェロン−τの１日投与量に関して、例えば、「５×１０８単位を超えた１日投与量」という句は、列挙したタンパク質の抗ウイルス単位数を十分にもたらすＩＦＮτ量を指し、これは以下の方法の部分に記載したような、ＩＦＮτの抗ウイルス活性を標準の細胞変性効果阻害アッセイを使用して測定する。所与の単位数をもたらすタンパク質量（すなわち、ｍｇ）が、このタンパク質の特定の抗ウイルス活性により変動することが理解されよう。
【００３１】
ＩＩ．インターフェロン−τ組成及び治療法
Ａ．インターフェロン−τ
同定された最初のＩＦＮτは、１８〜１９ｋＤａタンパク質のヒツジＩＦＮτ（ＩＦＮτ）であった。いくつかのイソ型が、受胎産物（胚及び周囲の膜）のホモジネート中で同定された（Ｍａｒｔａｌ，Ｊ．ら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔｉｌ．５６：６３−７３（１９７９））。続いて、受胎産物培地に遊離される低分子量タンパク質が精製され、熱不安定性及びプロテアーゼに対して感受性の両方であることが示された（Ｇｏｄｋｉｎ，Ｊ．Ｄ．ら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔｉｌ．６５：１４１−１５０（１９８２））。ＩＦＮτは、元来、ヒツジトロホブラストタンパク質−１（ｏｖｉｎｅ  ｔｒｏｐｈｏｂｌａｓｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ−ｏｎｅ；ｏＴＰ−１）と呼ばれていたが、これは、ヒツジの母性認識の重要な時期の間にヒツジの受胎産物の栄養外胚葉により最初に生産される一次分泌タンパク質であったからである。続く実験は、ＩＦＮτが、反芻動物（例えば、ヒツジ及びウシ）において妊娠に対する生理的な応答を確立するために不可欠な妊娠認識ホルモンであることを決定している（Ｂａｚｅｒ，Ｆ．Ｗ．及びＪｏｈｎｓｏｎ，Ｈ．Ｍ．，Ａｍ．Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．ｌｍｍｕｎｏｌ．２６：１９−２２（１９９１））。
【００３２】
Ｎ末端アミノ酸配列を示す合成オリゴヌクレオチドを用いたヒツジ胚盤胞ライブラリーのプロービングにより得られたＩＦＮτ  ｃＤＮＡ（Ｉｍａｋａｗａ，Ｋら、Ｎａｔｕｒｅ，３３０：３７７−３７９，（１９８７））は、ヒト、マウス、ラット及びブタ由来のＩＦＮ−αと４５〜５５％の相同性を有し、ウシＩＦＮ−αＩＩ（現在はＩＦＮ−Ωと呼ばれる。）と７０％の相同性を有する推定のアミノ酸配列を有する。異なるイソ型を示し得るいくつかのｃＤＮＡ配列が報告された（Ｓｔｅｗａｒｔ，Ｈ．Ｊ．，ら、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２：６５（１９８９）；Ｋｌｅｍａｎｎ，Ｓ．Ｗ．，ら、Ｎｕｃ．Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．１８：６７２４（１９９０）；及びＣｈａｒｌｉｅｒ，Ｍ．，ら、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．７６：１６１−１７１（１９９１））。全ては、２３アミノ酸のリーダー配列と１７２アミノ酸の成熟タンパク質とをコードする５８５塩基のオープンリーディングフレームを含む約１ｋｂである。アミノ末端及びカルボキシル末端を有する並列する４つの螺旋型の束と推定されるＩＦＮτの構造は、ＩＦＮτをＩ型ＩＦＮとして分類することをさらに支持する（Ｊａｒｐｅ，Ｍ．Ａ．ら、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ７：８６３−８６７（１９９４））。
【表２】
2009518432.tif 000003
【００３３】
ＩＦＮτは、Ｉ型ＩＦＮに古典的に関連する活性のいくつかを示す（上記の表を参照のこと）が、ＩＦＮτと他のＩ型ＩＦＮとの間にはかなりの相違が存在する。最も顕著な相違は、上記に詳細に示したような妊娠におけるその役割である。また、ウイルス性誘導性も異なる。ＩＦＮτを除く全てのＩ型ＩＦＮは、ウイルス及びｄｓＲＮＡにより容易に誘導される（Ｒｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｍ．ら、Ｅｎｄｏｃｒｉｎｅ．Ｒｅｖ．１３：４３２−４５２（１９９２））。誘導されたＩＦＮ−α及びＩＦＮ−β発現は一過性で、ほぼ数時間持続する。対照的に、ＩＦＮτの合成は、一旦、誘導されると、数日間にわたり維持される（Ｇｏｄｋｉｎら、１９８２）。１細胞あたりの基準で、他のＩ型ＩＦＮより３００倍多くＩＦＮτが生成される（Ｃｒｏｓｓ，Ｊ．Ｃ．及びＲｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｍ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：３８１７−３８２１（１９９１））。
【００３４】
他の相違が、ＩＦＮτ遺伝子の調節領域に存在し得る。例えば、ウシＩＦＮτ遺伝子を用いたヒトトロホブラスト細胞系ＪＡＲのトランスフェクションは、抗ウイルス活性をもたらしたが、ウシＩＦＮ−Ω遺伝子を用いたトランスフェクションはもたらさなかった。これは、独特のトランス活性化因子がＩＦＮτ遺伝子発現に関与したことを示唆する。これは、ＩＦＮτの近位のプロモーター領域（１２６から転写開始部位まで）がＩＦＮ−α及びＩＦＮ−βの近位のプロモーター領域と高く相同的であり；−１２６から−４５０までの領域は相同的ではなく、ＩＦＮτの発現のみを促進する（Ｃｒｏｓｓ，Ｊ．Ｃ．及びＲｏｂｅｒｔｓ，Ｒ．Ｍ．，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｏｉ．ＵＳＡ８８：３８１７−３８２１（１９９１））という観察と一致する。したがって、他のＩ型ＩＦＮと比較して、ＩＦＮτの発現には異なる調節因子が関与していると思われる。
【００３５】
ヒツジＩＦＮτの１７２のアミノ酸配列が、例えば、米国特許第５９５８４０２号において記載されており、その相同的なウシＩＦＮτの配列は、例えば、Ｈｅｌｍｅｒら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔ．，７９：８３−９１（１９８７）及びＩｍａｋａｗａ，Ｋ．ら、Ｍｏｌ．．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．，３：１２７（１９８９）に記載されている。これらの参考文献からヒツジＩＦＮτ及びウシＩＦＮτの配列を、本願明細書に援用する。ヒツジＩＦＮτのアミノ酸配列を、本明細書の配列番号２に示す。
【００３６】
１．ＩＦＮτの単離
ＩＦＮτタンパク質を、妊娠中のヒツジから回収した受胎産物より単離し、Ｇｏｄｋｉｎ，Ｊ．Ｄ．ら、Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｆｅｒｔｉｌ．６５：１４１−１５０（１９８２）及びＶａｌｌｅｔ，Ｊ．Ｌ．ら、Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐｒｏｄ．３７：１３０７（１９８７）に記載されるように改変最少必須培地中のｉｎ  ｖｉｔｒｏで培養することができる。ＩＦＮτを、イオン交換クロマトグラフィー及びゲル濾過により受胎産物の培養物から精製することができる。単離したＩＦＮτの均一性を、ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲル電気泳動（Ｍａｎｉａｔｉｓ，Ｔ．ら、「分子クローニング：研究室マニュアル（ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ）」、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８２）；Ａｕｓｕｂｅｌ，Ｆ．Ｍ．ら、「分子生物学の最新のプロトコール（ＣＵＲＲＥＮＴ  ＰＲＯＴＯＣＯＬＳ  ＩＮ  ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＢＩＯＬＯＧＹ）」、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ，Ｉｎｃ．，Ｍｅｄｉａ，ＰＡ（１９８８））により評価することができ、精製されたＩＦＮτ試料中のタンパク質濃度の決定をビシンコニン（ｂｉｏｃｉｎｃｈｏｎｉｎｉｃ：ＢＣＡ）アッセイ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｃｏ．、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ，ＩＬ；Ｓｍｉｔｈ，Ｐ．Ｋ．ら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５０：７６（１９８５））を用いて実施することができる。
【００３７】
２．ＩＦＮτの組換え産生
組換えＩＦＮτタンパク質を、任意に選択されたＩＦＮτポリヌクレオチド断片から、適切な発現系（例えば、細菌細胞又は酵母細胞）を用いて産生させることができる。ＩＦＮτヌクレオチド及びポリペプチド配列の単離は、ＰＣＴ公開ＷＯ／９４／１０３１３に記載され、本願明細書に援用する。
【００３８】
ＩＦＮτ発現ベクターを作製するために、ＩＦＮτコード配列（例えば、配列番号１又は４）を発現ベクター（例えば、細菌の発現ベクター）中に配置し、標準的な方法に従って発現させる。適切なベクターの例としては、λｇｔ１１（Ｐｒｏｍｅｇａ，Ｍａｄｉｓｏｎ  ＷＩ）；ｐＧＥＸ（Ｓｍｉｔｈ，Ｐ．Ｋ．ら、Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．１５０：７６（１９８５））；ｐＧＥＭＥＸ（Ｐｒｏｍｅｇａ）；及びｐＢＳ（Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，Ｌａ  Ｊｏｌｌａ  ＣＡ）ベクターなどがある。適切なプロモーター（例えば、Ｔ７ＲＮＡポリメラーゼプロモーター又はｔａｃプロモーター）を有する他の細菌の発現ベクターもまた、使用することができる。ＩＦＮτ合成ポリヌクレオチドの改変ｐＩＮ  ＩＩＩ  ｏｍｐ−Ａ発現ベクターへのクローニングを材料及び方法において記載する。
【００３９】
本明細書中に記載された試験では、配列番号４に存在するＩＦＮτコード配列を、酵母細胞の形質転換に適切な、メタノール調節アルコールオキシダーゼ（ＡＯＸ）プロモーター及びＰｈｏ１シグナル配列を有するベクター中にクローン化した。このベクターを用いてピキア・パストリス（Ｐ．ｐａｓｔｏｒｉｓ）宿主細胞を形質転換し、そして形質転換細胞を用いて、製造者の説明書（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）に従ってタンパク質を発現させた。
【００４０】
ＩＦＮτを発現させるために適切な他の酵母ベクターとしては、２μｍプラスミドベクター（Ｌｕｄｗｉｇ，Ｄ．Ｌ．ら、Ｇｅｎｅ，１３２：３３（１９９３））、酵母組み込みプラスミド（Ｓｈａｗ，Ｋ．Ｊ．ら、ＤＮＡ，７：１１７（１９８８））、ＹＥＰベクター（Ｓｈｅｎ，Ｌ．Ｐ．ら、Ｓｃｉ．Ｓｉｎ．，２９：８５６（１９８６））、酵母セントロメアプラスミド（ＹＣｐ）及び発現の調整可能な他のベクター（Ｈｉｔｚｅｍａｎ，Ｒ．Ａ．ら、米国特許第４７７５６２２号、１９８８年１０月４日発行；Ｒｕｔｔｅｒ，Ｗ．Ｊ．ら、米国特許第４７６９２３８号、１９８８年９月６日発行；Ｏｅｄａ，Ｋ．ら、米国特許第４７６６０６８号、１９８８年８月２３日発行）などがある。好ましくは、ベクターは、例えば、ＭＦα１プロモーター（Ｂａｙｎｅ，Ｍ．Ｌ．ら、Ｇｅｎｅ  ６６．２３５−２４４（１９８８））、ＧＡＤＰＨプロモーター（グリセルアルデヒド−３−リン酸−デヒドロゲナーゼ；Ｗｕ，Ｄ．Ａ．ら、ＤＮＡ，１０：２０１（１９９１））又はガラクトース誘導性ＧＡＬ１０プロモーター（Ｌｕｄｗｉｇ，Ｄ．Ｌ．ら、Ｇｅｎｅ，１３２：３３（１９９３）；Ｆｅｈｅｒ，Ｚ．ら、Ｃｕｒｒ．Ｇｅｎｅｔ．，１６：４６１（１９８９）；Ｓｈｅｎ，Ｌ．Ｐ．ら、Ｓｃｉ．Ｓｉｎ．，２９：８５６（１９８６））などの有効な酵母プロモーターを含む発現カセットを含む。酵母の形質転換宿主は、一般的に出芽酵母（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）であるが、上記のように形質転換に適切な他の酵母（例えば、分裂酵母（Ｓｃｈｉｚｏｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ  ｐｏｍｂｅ）、ピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）など）もまた同様に用いることができる。
【００４１】
さらに、ＩＦＮτポリペプチドをコードするＤＮＡは、多くの市販のベクターにクローン化させ、適切な宿主系においてポリペプチドの発現を生じさせることができる。これらの系としては、上記の細菌発現系及び酵母発現系、並びに以下が挙げられる：バキュロウイルス発現系（Ｒｅｉｌｌｙ，Ｐ．Ｒ．ら、「バキュロウイルス発現ベクター：実験マニュアル（ＢＡＣＵＬＯＶＩＲＵＳ  ＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮ  ＶＥＣＴＯＲＳ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ）」（１９９２）；Ｂｅａｍｅｓら、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ，１１：３７８（１９９１）；Ｃｌｏｎｅｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ  ＣＡ）；植物細胞発現系、トランスジェニック植物発現系、及び哺乳動物細胞内での発現系（Ｃｌｏｎｔｅｃｈ、Ｐａｌｏ  Ａｌｔｏ  ＣＡ；Ｇｉｂｃｏ−ＢＲＬ、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ  ＭＤ）。組換えポリペプチドは、融合タンパク質として又は天然のタンパク質として発現され得る。多くの特性（例えば、培養培地中へ発現される配列の分泌を促進するリーダー配列）を発現ベクター中に工学的に導入することができる。組換え生産されたポリペプチドは、一般的には溶解された細胞又は培養培地から単離される。精製は、塩分画、イオン交換クロマトグラフィー、及びアフィニティークロマトグラフィーを含む、当技術分野で公知の方法により行うことができる。上記のように、ＩＦＮτポリペプチドに基づいて生成された抗体を用いて、イムノアフィニティークロマトグラフィーを用いることができる。
【００４２】
組換え方法に加えて、ＩＦＮτタンパク質又はポリペプチドを、親和性に基づく方法により（例えば、適切な抗体を使用することにより）選択された細胞から単離させることができる。さらに、ＩＦＮτペプチド（例えば、配列番号２又は３）を、当業者に公知の方法を用いて化学的に合成させることができる。
【００４３】
Ｂ．ＩＦＮτの投与
補助試験では、ＩＦＮτを、多発性硬化症を患う患者及びＣ型肝炎に苦しむ患者に投与した。試験中、サイトカインＩＬ−１０、ＩＦＮ−γ及びＩＬ−１２の血清中濃度を患者ごとに監視した。これより、これらの試験について述べる。
【００４４】
１．多発性硬化症を患うヒトへのＩＦＮτの投与
多発性硬化症を患うヒトを、ＩＦＮτ治療に関する試験に登録した。実施例１Ａに記載のように、患者１５例を３つの治療群にランダム化した（表１に要約する）。
【表３】
2009518432.tif 000004
１１ｍｇ  ＩＦＮτ＝１×１０８単位
【００４５】
治療前に、各対象から血液試料を採取し、ベースラインの血清中サイトカイン濃度を決定した。１日目の採血後、各患者に、適切な用量でＩＦＮτを経口投与することにより治療を開始した。治療は２８日間継続し、血液試料を、試験の１、４、８、１５、２９及び５７日目に各患者から採取した。試料を、ＩＦＮγ及びＩＬ−１０濃度について分析した。
【００４６】
群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩの患者のＩＬ−１０濃度を、それぞれ図１Ａ〜１Ｃに示す。図１Ａは、群Ｉの患者５例における血清中ＩＬ−１０濃度（ｐｍ／ｍＬ）を示す。これらの患者を解釈すると、患者３例（患者番号１０３、１０４及び１０５）は、４日目にＩＬ−１０濃度の増加を示したが、８日目にＩＬ−１０濃度は減少した。患者番号１０３及び１０４の８及び１５日目ＩＬ−１０濃度は、４日目の濃度と著しく変わらなかった。図１Ｂ及び１Ｃは、それぞれ試験群ＩＩ及びＩＩＩにおける患者の結果を示す。特に群ＩＩＩの患者では、ＩＦＮτ投与後の血清中ＩＬ−１０濃度のわずかな増加が示唆される。
【００４７】
図１Ｄは、群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩにおける平均血清中ＩＬ−１０濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示す。２〜２８日目のＩＦＮτの投与期間中に、試験群においてＩＬ−１０のわずかな上方制御が認められたが、このわずかな上方制御は、実施例１Ａ（１）に記載された統計解析に基づいて、統計的に有意ではなかった。ＩＦＮτ投与後の一定期間の群Ｉ及びＩＩにおける継続した血中ＩＬ−１０濃度のわずかな増加は、２８日目には停止した。ＩＦＮτの最後の投与から３４日後の５７日目の血清中ＩＬ−１０濃度は、０日目及び１日目に測定したベースライン濃度より上に維持されていた。したがって、対象の自己免疫状態を治療する方法が企図され、ＩＦＮτは、インターフェロン−タウを投与しない対象の血中ＩＬ−１０濃度と比べて、対象の血中ＩＬ−１０濃度に最初の測定可能な増加を生じさせるために十分な量で投与される。次いで、インターフェロン−タウを投与しない対象の血中ＩＬ−１０濃度に比べて、対象の血中ＩＬ−１０濃度が増加を維持している間の選択された一定期間、ＩＦＮτの投与を終了する。次いで、ＩＦＮτの投与を、所望により再開してもよい。
【００４８】
また、本試験では、血中ＩＦＮ−γ濃度を監視した。ＩＦＮ−γは、炎症誘発性サイトカインであり、ＩＦＮ−γの上方制御は、自己免疫状態（例えば、多発性硬化症及び関節炎）を患う患者における不快感の増大に相関する。インターフェロン−β（ＩＦＮ−β）による多発性硬化症の治療の間、ＩＦＮ−γ分泌細胞の頻度がＩＦＮ−β治療の最初の２カ月間に増加することが報告されており、この血清中ＩＦＮ−γ濃度の増加は、おそらく患者がＩＦＮ−β治療中に経験する顕著な「インフルエンザ様」症状に関連する。したがって、ＩＬ−１０濃度がＩＦＮ−γの上方制御を伴うことなしに好都合に上方制御される場合、自己免疫状態を治療する方法は有益と思われる。
【００４９】
図２Ａ〜２Ｄは、多発性硬化症を患い、ＩＦＮτで経口的に治療された群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩの患者における血中ＩＦＮ−γ濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示す。図２Ａは、ＩＦＮτ０．２ｍｇで治療された群Ｉの患者における血清中濃度を示す。患者番号１０１、１０２、１０４、１０５は、それぞれ治療コース中に血中ＩＦＮ−γ濃度が減少した。血清中濃度は、２８日目の治療中断直後に増加した。患者番号１０３の血清中ＩＦＮ−γ濃度は増加せず、本質的に変化しなかった。
【００５０】
図２Ｂは、ＩＦＮτ０．６ｍｇで毎日治療された群ＩＩの患者における血中ＩＦＮ−γ濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示す。図２Ｃは、ＩＦＮτ１．８ｍｇで毎日治療された群ＩＩＩの患者における血中ＩＦＮ−γ濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示す。前述のように、ＩＦＮ−τの最初の用量は、１日目の採血後に投与され、最終用量は、２８日目に投与された。したがって、１日目及び「スクリーン」のデータポイントは、個々の患者のベースライン濃度である。群Ｉ及びＩＩＩの全患者が、ＩＦＮ−τによる治療中に血清中ＩＦＮ−γ濃度の減少又は血清中ＩＦＮ−γ濃度の有意な変化がないかのいずれかを経験した。
【００５１】
図２Ｄは、各試験群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩのヒト患者における平均血中ＩＦＮ−γ濃度（ｐｇ／ｍＬ）を要約する。血中ＩＦＮ−γ濃度のこの減少傾向は、特に高用量のＩＦＮ−τが投与される場合（群ＩＩＩ）、明白である。
【００５２】
図３Ａ〜３Ｅは、治療群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩから選択された個々の患者のＩＬ−１０（ダイヤモンド）及びＩＦＮ−γ（正方形）の血清中濃度（両方ともｐｇ／ｍＬ）を示す。図３Ａは、治療群Ｉの患者番号１０１におけるサイトカインの産生動態（ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｋｉｎｅｔｉｃｓ）を示す。血中ＩＬ−１０濃度（ダイヤモンド）は、治療期間中、統計学的に増加しない。血中ＩＦＮ−γ濃度は、経口投与されたＩＦＮ−τによる治療中、減少する。ＩＬ−１０及びＩＦＮ−γのベースライン濃度は、それぞれ１５．８ｐｇ／ｍＬ及び１４．５ｐｇ／ｍＬで、最初のＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比の１．１を得た。ＩＦＮ−τによる治療中、血中ＩＦＮ−γ濃度の減少により、ＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比は約２．２まで増加した。ＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比は、治療終了の約１カ月後の５７日目に、ベースライン比の約１．１に戻った。したがって、ＩＦＮ−τによる治療の期間中、ＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比は約１００％増加した。
【００５３】
図３Ｂは、治療群Ｉの患者番号１０５におけるサイトカインの産生動態を示す。ＩＬ−１０及びＩＦＮ−γのベースライン濃度は、それぞれ平均して６．６ｐｇ／ｍＬ及び４９．２ｐｇ／ｍＬで、最初のＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比の０．１３を得た。ＩＦＮ−τによる治療中、血中ＩＦＮ−γ濃度の減少により、ＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比は約０．２〜０．３まで増加した。ＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比は、治療終了の約１カ月後の５７日目に、ベースライン比の約０．１２に戻った。したがって、ＩＦＮτ治療は、５０％を超えて、より好ましくは８０％を超えて比を増加させ、ＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比を調節するために有効だった。
【００５４】
図３Ｃは、治療群ＩＩＩの患者番号３０２におけるサイトカインの産生動態を示す。ＩＬ−１０及びＩＦＮ−γのベースライン濃度（スクリーン及び１日目の平均として得た）は、それぞれ５．８ｐｇ／ｍＬ及び４．０ｐｇ／ｍＬで、最初のＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比の１．４５を得た。ＩＦＮ−τによる治療中、平均血中ＩＬ−１０濃度（４、８、１５日目の平均ＩＬ−１０濃度）は７．７ｐｇ／ｍＬで、これはベースラインのＩＬ−１０濃度（スクリーン及び１日目の平均血中ＩＬ−１０濃度）と統計的に差異はなかった。ＩＦＮ−γ濃度は、実質的に治療期間にわたり変わらなかった。この患者のＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比は、本質的に変わらなかった。
【００５５】
図３Ｄは、治療群ＩＩＩの患者番号３０３におけるサイトカインの産生動態を示す。ＩＬ−１０及びＩＦＮ−γのベースライン濃度（スクリーン及び１日目の平均として得た）は、それぞれ４．４ｐｇ／ｍＬ及び３．６ｐｇ／ｍＬで、最初のＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比の１．２を得た。ＩＦＮ−τによる治療中、血中ＩＦＮ−γ濃度の減少により、ＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比は８日目に約１１まで増加したが、２９日目にはベースライン比に戻った。
【００５６】
図３Ｅは、治療群ＩＩＩの患者番号３０５におけるサイトカインの産生動態を示す。ＩＬ−１０及びＩＦＮ−γのベースライン濃度（スクリーン及び１日目の平均として得た）は、それぞれ４．３ｐｇ／ｍＬ及び３４．８ｐｇ／ｍＬで、最初のＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比の０．１を得た。ＩＦＮ−τによる治療中、血中ＩＬ−１０濃度は本質的に一定であったが；血中ＩＦＮ−γ濃度がわずかに減少したため、ＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比は、８日目に０．１４まで約１４％増加した。
【００５７】
したがって、自己免疫状態を患う対象のＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比を増加させる方法であって、インターフェロン−タウを投与しない対象の血中ＩＬ−１０濃度に比べて、対象の血中ＩＬ−１０濃度の測定可能な増加をもたらすために十分な量でＩＦＮτを対象に投与することを含み、（ｉ）ＩＦＮτを投与しないＩＦＮγ濃度と比べて、対象の血中ＩＦＮγ濃度に実質的な変化がない、又は（ｉｉ）ＩＦＮτを投与しないＩＦＮγ濃度と比べて、対象の血中ＩＦＮγ濃度が減少する方法を提供する。ＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比は、少なくとも約１０％、好ましくは約２５％、より好ましくは約４０％、さらにより好ましくは少なくとも約５０％増加する。一実施形態では、ＩＦＮτは、ヒツジ又はウシＩＦＮτである。他の実施形態では、ＩＦＮγを、約５×１０８抗ウイルス単位（Ｕ）を超える用量、より好ましくは０．５×１０９Ｕ以上、さらにより好ましくは１×１０９Ｕ以上の用量で投与する。
【００５８】
実施例１Ｂに記載の別の試験では、活動状態の疾患を有するＭＳ患者２２例を、ＩＦＮτ治療に組み入れた。ＭＳ患者は、以前に再発寛解型（ｒｅｌａｐｓｉｎｇ−ｒｅｍｉｔｔｉｎｇ）ＭＳの臨床診断を受けていた。疾患が活動状態であったか確認するために、ＭＲＩ脳スキャンを、３カ月の期間、毎月撮影した。ＭＲＩスキャンのうちの１つにおいて示された少なくとも１つのガドリニウム増強病変を有する患者を、本試験の登録のために選択した。ＩＦＮτ治療の前に、血液試料を採取して、治療前のベースライン血清中サイトカイン濃度を評価した。患者を、１日３回、経口ＩＦＮτ３ｍｇにより６カ月間治療した。
【００５９】
表２Ａは、最初に登録された患者２２例うちの６カ月の時点で試験に残った１５例の新しいガドリニウム増強病変の数を要約する。
【表４】
2009518432.tif 000005
＊患者００６は、治療３カ月前（−３カ月）に実施した最初のＭＲＩスクリーンで、１つの造影増強病変が認められたので、登録資格を有した。
＊＊ｎａ＝ＭＲＩスキャンが行われず、データが入手できない。
【００６０】
データの統計解析を、表２Ｂに示す。
【表５】
2009518432.tif 000006
【００６１】
患者２２例のスクリーニング期間中（治療の３、２及び１カ月前）の新しいガドリニウム増強病変の平均数は、２．５９であった。経口投与によるＩＦＮτ治療の３カ月後、新しいガドリニウム増強病変の平均数は１．０１まで減少し、治療前のスクリーニング期間中に観察された新しい病変の数から６３．４％減少した。治療の６カ月後、新しいガドリニウム増強病変の平均数は１．３０まで減少し、治療前のスクリーニング期間中に観察された新しい病変の数から６２．４％減少した。
【００６２】
ＭＲＩの病変データは、患者１８例（すなわち、治療した患者集団の約８２％）が、インターフェロン−タウで治療すると、新しい病変の数に３０％を超える変化（減少）があったことを示している。１４例（すなわち、治療した患者集団の約６３％）は、インターフェロン−タウで治療すると、新しい病変の数に５０％を超える変化（減少）があった。したがって、インターフェロン−タウの経口投与は、治療した患者集団の大多数で新しい病変の数の３０％を超える減少を達成した。一実施形態では、治療した患者の少なくとも６０％は、少なくとも約３０％、好ましくは５０％の新しい脳病変の数の減少を達成する。他の実施形態では、治療した患者の少なくとも７５％は、少なくとも約３０％の新しい脳病変の数の減少、好ましくは少なくとも約５０％の減少を達成する。
【００６３】
また、血清中サイトカイン濃度を評価し、ＩＬ−１０及びＩＦＮ−γの結果を表２Ｃ〜２Ｄに示す。
【表６】
2009518432.tif 000007
＊＊ｎａ＝データが入手できず。
【表７】
2009518432.tif 000008
＊＊ｎａ＝データが入手できず。
【００６４】
３カ月の治療後、本試験に登録した患者１６例の平均血清中ＩＬ−１０濃度は６．７２ｐｇ／ｍＬで、これは血清中ＩＬ−１０の３１．５％の増加に相当した（パーセント変化は、全患者に対して平均した各患者のベースラインでのスクリーニングのＩＬ−１０濃度からの変化である）。６カ月の治療後、本試験に登録した患者１５例の平均ＩＬ−１０濃度は６．１５ｐｇ／ｍＬで、これは血清中ＩＬ−１０の５３．６％の増加に相当した（パーセント変化は、全患者に対して平均した各患者のベースラインでのスクリーニングのＩＬ−１０濃度からの変化である）。
【００６５】
３カ月の治療後、本試験に登録した患者１６例の平均血清中ＩＦＮ−γ濃度は３．９ｐｇ／ｍＬで、これは血清中ＩＦＮ−γの２．５％の増加に相当した（パーセント変化は、全患者に対して平均した各患者のベースラインでのスクリーニングのＩＦＮ−γ濃度からの変化である）。６カ月の治療後、本試験に登録した患者１５例の平均ＩＦＮ−γ濃度は４．５ｐｇ／ｍＬで、これは血清中ＩＦＮ−γの９．１％の増加に相当した（パーセント変化は、全患者に対して平均した各患者のベースラインでのスクリーニングのＩＦＮ−γ濃度からの変化である）。
【００６６】
治療前のスクリーニング期間の平均ＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比は、１．６５であった。３カ月の治療後、比は１．９８まで、７１．４％増加した。インターフェロン−タウによる６カ月の治療後、比は１．７まで、１９４％増加した。
【００６７】
したがって、一実施形態では、多発性硬化症患者の脳ＭＲＩで検出可能な新しいガドリニウム増強病変の数を減少させるための薬物の製造用組成物を提供する。本薬物は、経口投与用に調製されたインターフェロン−タウを含み、本薬物による治療のない期間中に観察された新しいガドリニウム増強病変の数と比べて、約１カ月、好ましくは約２カ月、及びさらにより好ましくは少なくとも約３カ月の期間の本薬物による治療後に、新しいガドリニウム増強病変の出現において、少なくとも約１０％、より好ましくは少なくとも約２０％、及びさらに好ましくは少なくとも約３０％の減少をもたらす。治療のない期間はインターフェロン−タウ治療の１、２又は３カ月前からの期間に相当し得て、新しい病変の数を１回又は複数回測定した。また、治療期間は、治療後の期間が、持続した１、２又は３カ月であるインターフェロン−タウによる治療後の期間に相当し得て、新しい病変の数を１回又は複数回測定した。
【００６８】
他の実施形態では、多発性硬化症のインターフェロン−タウ治療に反応する患者を選択するための方法を提供する。この方法は、選択した用量でインターフェロン−タウを多発性硬化症患者に経口投与することを含み、本明細書に記載のいずれの用量も適するが、少なくとも１×１０５Ｕ／日の用量が好ましい。本用量を、少なくとも約１カ月の期間投与し、次いで１種又は複数のサイトカインの血中濃度を測定する。血清中濃度に検出可能な変化を示す患者を、血清中サイトカイン濃度の変化及びＭＲＩにより測定した脳のガドリニウム増強病変の数の減少との確立された相関（上記に記載）に基づき反応する患者と確認する。血清中サイトカイン濃度の変化が選択されたサイトカインにより増加又は減少し得ることが理解されよう。もちろん、変化の範囲は、上記のデータで例証したように、インターフェロン−タウ治療の用量及び長さにより決まる。
【００６９】
２．Ｃ型肝炎を患うヒトへの投与
別の試験では、Ｃ型肝炎に感染したヒト患者を組み入れた。患者を、経口ＩＦＮτ（配列番号４）治療のために、４つの試験群に割り付けた。実施例２に記載のように、試験群の各対象は、ＩＦＮτ１ｍｇ／ｍＬ溶液の管理された量を１日３回自己投与した。試験群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩの患者に、それぞれＩＦＮτ１ｍｇ、ＩＦＮτ３ｍｇ、ＩＦＮτ９ｍｇ及びＩＦＮτ１５ｍｇの総１日量を投与した（ＩＦＮτ１ｍｇは、約１×１０８抗ウイルス単位である）。治療期間は、８４日間継続し、患者は、ＩＬ−１０及びＩＦＮ−γの濃度分析の血液試料を提供するために、規定の間隔で試験診療所に戻った。監視は、ＩＦＮτによる治療終了の８５日後である１６９日間継続した。
【００７０】
図４Ａ〜４Ｃは、各試験群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩの患者６例における血清中ＩＬ−１０濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。図４Ａは、総１日量１ｍｇ（１×１０８Ｕ）で、１日３回ＩＦＮτ０．３３ｍｇで毎日治療した試験群Ｉの患者６例のＩＬ−１０濃度を示す。全患者のデータは、ＩＬ−１０濃度が増加する傾向を示す。
【００７１】
図４Ｂは、８４日目まで、それぞれ１日３回ＩＦＮτ１．０ｍｇ（３×１０８Ｕ／日）で毎日治療した試験群ＩＩの患者６例のデータを示す。全患者のデータは、治療期間にわたり（１〜８４日目）、統計的に有意ではないが、より明確にＩＬ−１０濃度が増加する傾向を示す。ＩＦＮτの投与中断直後より、血中ＩＬ−１０濃度は、８５〜１６９日目の継続した監視期間にわたり、ベースライン濃度に緩徐に近づいた。
【００７２】
図４Ｃは、１〜８４日目まで、１日３回ＩＦＮτ３ｍｇ（９×１０８Ｕ／日）で毎日治療した試験群ＩＩＩの患者６例の血清中ＩＬ−１０濃度を示す。全患者は、ＩＦＮτ投与に反応して血清中ＩＬ−１０濃度が統計学的に増加した。ＩＦＮτの投与の終了直後より、血中ＩＬ−１０濃度は、ほぼ３カ月間、上昇したまま維持した。
【００７３】
図４Ｄは、図４Ａ〜４Ｃにおける試験群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩの血清中ＩＬ−１０濃度の要約図である。図４Ｄは、試験群Ｉ（ダイヤモンド、１日３回０．３３ｍｇ）、群ＩＩ（正方形、１日３回１ｍｇ）及び群ＩＩＩ（三角形、１日３回３ｍｇ）に関する時間に応じた血清中ＩＬ−１０濃度の増加パーセントを示す。用量に応じた血清中ＩＬ−１０濃度の増加パーセントが図から明らかであり、最高用量の９ｍｇ（３ｍｇを１日３回；９×１０８Ｕ／日）が、治療の最初の１５日以内に１００％を超えるＩＬ−１０の上方制御を誘発している。３ｍｇの１日量（試験群ＩＩ、正方形）は、ＩＬ−１０の産生を刺激して、試験１５日目までに約１５０％の増加を引き起こした。３ｍｇの１日量は、８４日の試験期間に１５０％の増加を維持するために十分であった。
【００７４】
また、図４Ｄは、ＩＦＮτの投与を中断した８５〜１６９日目の期間中、ベースラインの治療前濃度と比べたＩＬ−１０濃度の継続した上昇を例証する。試験群ＩＩＩ（毎日ＩＦＮ−τ９ｍｇ）では、ＩＬ−１０濃度は、１６９日目までにベースライン濃度に戻らなかった。したがって、インターフェロン−タウを投与しない対象の血中ＩＬ−１０濃度に比べて、対象の血中ＩＬ−１０濃度の最初の測定可能な増加をもたらすために十分な量でＩＦＮτを対象に投与すること、ＩＦＮτを投与しない対象の血中ＩＬ−１０濃度に比べて、対象の血中ＩＬ−１０濃度が増加を維持している選択された期間、ＩＦＮτの投与を中断すること、及び、必要に応じて（例えば、症状が悪化した時）、ＩＦＮτの投与を再開することにより、自己免疫状態（特に、多発性硬化症、乾癬、関節リウマチ及びアレルギー）を治療する方法を企図する。血中ＩＬ−１０濃度の増加をもたらすために十分なＩＦＮτ量は、約１×１０８Ｕ／日超、より好ましくは５×１０８Ｕ／日以上、さらにより好ましくは１×１０９Ｕ／日以上である。ＩＦＮτの投与が中断される期間は、疾患の状態により変動し得るが、その疾患状態を患う患者のＩＬ−１０濃度をＩＦＮτによる治療中及びＩＦＮτ治療の終了後に監視する試験から、容易に判定することができる。そのような試験の結果を、一般に、他の患者に適用し、推奨される投与パターンを提供することができる。或いは、ＩＦＮτの投与が中断される期間は、個々の患者に対して、治療をいつ再開するか判定するために、治療をしない期間中、定期的に（例えば、毎週又は週２回）血中ＩＬ−１０濃度を実際に監視するか、又は患者の症状認知の自覚的徴候により追跡することができる。治療は、その特定の患者若しくはモデル患者集団におけるＩＬ−１０濃度が治療前の濃度に近づいている時、又は治療している特定の患者において症状が悪化した時に再開する。
【００７５】
図５Ａ〜５Ｃは、本試験におけるＣ型肝炎患者の血清中ＩＦＮ−γ濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。図５Ａは、１日３回ＩＦＮτ０．３３ｍｇで毎日治療した試験群Ｉの患者６例のＩＦＮ−γ濃度を示す。ベースライン濃度でＩＦＮ−γ濃度を維持し、わずかにＩＦＮ−γ濃度が減少へと向かう全体的な傾向が明白である。
【００７６】
図５Ｂは、１日３回ＩＦＮτ１．０ｍｇで毎日治療した試験群ＩＩの患者６例の血清中ＩＦＮ−γ濃度を示す。約３〜１５日目の治療の初期段階におけるＩＦＮ−γ濃度の減少は、明白である。次いで濃度はベースラインに戻り、残りの試験期間にはおよそ投与前の濃度を維持した。
【００７７】
図５Ｃは、１日３回ＩＦＮτ３ｍｇで毎日治療した試験群ＩＩＩＩの患者６例の血清中ＩＦＮ−γ濃度を示す。一部の患者がＩＦＮ−γ濃度の明確な減少を経験した間、総体的に、治療群は治療期間にわたり濃度の変化がほとんど見られないようであった。投与の中断直後のＩＦＮ−γ濃度の増加は、８５〜１６９日目に見られる。このことは、ある程度までの濃度の減少が、ＩＦＮτの投与により達成されたことを示唆している。
【００７８】
図５Ｄは、時間に応じた試験群Ｉ（ダイヤモンド、１日３回０．３３ｍｇ）、群ＩＩ（丸、１日３回１ｍｇ）及び群ＩＩＩ（三角形、１日３回３ｍｇ）に関する時間に応じた平均血清中ＩＦＮ−γ濃度を示す、図５Ａ〜５Ｃにおける試験群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩの要約図である。ＩＦＮτの投与は、（１）ＩＦＮ−γ濃度の著明な変化を起こさず、濃度が本質的にスクリーン時の投与前の濃度のままであるか、又は（２）ベースラインの投与前の濃度からのＩＦＮ−γ濃度の減少を引き起こすかのいずれであることは明らかである。
【００７９】
したがって、別の態様では、ＩＦＮτを投与しない対象の血中ＩＦＮ−γ濃度に比べて、対象の血中ＩＦＮ−γ濃度を減少させるために有効な量でＩＦＮτを対象に投与することにより対象の血中ＩＦＮ−γ濃度を減少させる方法を提供する。この方法は、特にＩＦＮ−γ濃度の上昇を引き起こす薬剤を服用している患者、又はＩＦＮ−γ濃度が上昇する状態を患う患者における使用を見出す。したがって、ＩＦＮτを投与しない患者の血中ＩＦＮ−γ濃度に比べて、対象の血中ＩＦＮ−γ濃度を減少させるために有効な量でＩＦＮτを対象に投与することにより、（ｉ）治療薬の投与又は（ｉｉ）疾患状態による血中ＩＦＮ−γ濃度の上昇リスクにある対象の血中ＩＦＮ−γ濃度の増加を予防する方法も企図する。前述のように、ＩＦＮβによる多発性硬化症の治療は、患者のＩＦＮγ濃度の増加を引き起こす。ＩＦＮτの同時投与（同時又は連続投与）は、治療前のＩＦＮγ濃度を維持することを補助する。一般的に、対象の血中ＩＦＮ−γ濃度におけるそのような減少を生じさせるために十分なＩＦＮτの量は、約１×１０８Ｕ／日超、好ましくは約５×１０８Ｕ／日超、より好ましくは少なくとも約９×１０８Ｕ／日、より好ましくは０．５×１０８Ｕ／日以上、さらにより好ましくは１×１０９Ｕ／日以上である。
【００８０】
図６Ａ〜６Ｆは、図４〜５に関して述べた治療群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩから選択された個々のＣ型肝炎患者のＩＬ−１０（ダイヤモンド）及びＩＦＮ−γ（正方形）の血清中濃度（両方ともｐｇ／ｍＬ）を示す。
【００８１】
図６Ａは、ＩＦＮτ１ｍｇの１日量で、１日３回ＩＦＮτ０．３３ｍｇにより治療した試験群Ｉの患者番号１０１のＩＬ−１０（ダイヤモンド）及びＩＦＮ−γ（正方形）の血清中濃度を示す。ＩＬ−１０及びＩＦＮ−γのベースライン濃度は、それぞれ平均５．２ｐｇ／ｍＬ及び３．９ｐｇ／ｍＬ（スクリーン及び１日目の平均値）で、最初のＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比の１．３を得た。ＩＦＮτによる治療中、ＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比は、２２日目に１．６まで増加し、その後、８４日目の投与中断までベースライン比に戻った。
【００８２】
図６Ｂは、ＩＦＮτ３ｍｇの１日量で、１日３回ＩＦＮτ１．０ｍｇにより治療した試験群ＩＩの患者番号２０５のＩＬ−１０（ダイヤモンド）及びＩＦＮ−γ（正方形）の血清中濃度を示す。ＩＬ−１０及びＩＦＮ−γのベースライン濃度は、それぞれ平均３．８ｐｇ／ｍＬ及び５．２ｐｇ／ｍＬ（スクリーン及び１日目の平均値）で、最初のＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比の０．７３を得た。ＩＦＮτによる治療中、ＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比は、１に近づき、１５日目に１に達した。したがって、ＩＦＮτによる治療は、比を約２５％増加させることにより、ＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比を調節した。
【００８３】
図６Ｃは、ＩＦＮτ９ｍｇ（９×１０８Ｕ）の１日量で、１日３回ＩＦＮτ３．０ｍｇにより治療した試験群ＩＩＩの患者番号３０１のＩＬ−１０（ダイヤモンド）及びＩＦＮ−γ（正方形）の血清中濃度を示す。ＩＬ−１０及びＩＦＮ−γのベースライン濃度は、それぞれ平均４．４ｐｇ／ｍＬ及び３．９ｐｇ／ｍＬ（スクリーン及び１日目の平均値）で、最初のＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比の約１．０を得た。ＩＦＮτによる治療中、ＩＬ−１０濃度が、かなりの増加である４〜５倍増加したが、ＩＦＮ−γ濃度は、４〜５ｐｇ／ｍＬのおよそ最初の濃度で維持した。したがって、ＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比は、ＩＦＮτの投与直後より約１．０からおよそ４．０まで増加した（４倍の増加）。
【００８４】
図６Ｄ〜６Ｆは、ＩＦＮτ９ｍｇの１日量で、１日３回ＩＦＮτ３．０ｍｇにより治療した試験群ＩＩＩの患者番号３０３、３０４及び３０５のＩＬ−１０（ダイヤモンド）及びＩＦＮ−γ（正方形）の血清中濃度を示す。ＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比の分析は、図６Ｃに記載の患者番号３０１のものと類似している。具体的には、図６Ｄは、患者番号３０３のデータを示す。この患者では、血中ＩＬ−１０濃度は、試験４３日目までにベースライン濃度から約４倍増加し、試験７１日目までに６倍を超えて増加した。血中ＩＦＮ−γ濃度は、実質的に一定のままであった。したがって、血中ＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比は、０．６のベースライン値から３超まで増加した（５倍増加、５００％増加）。
【００８５】
図６Ｅは、群ＩＩＩの患者番号３０４のデータを示す。患者の血中ＩＬ−１０濃度は、ＩＦＮτによる治療中、４〜５倍増加したが、ＩＦＮγ濃度は本質的に変わらなかった。したがって、ＩＬ−１０／ＩＦＮγ比は、０．６の最初の値から７１日目の２．６まで増加した（４００％を超えた増加）。
【００８６】
図６Ｆは、群ＩＩＩの患者番号３０５のデータを示す。治療期間中の血中ＩＬ−１０濃度の増加は明白であり、４３日目までに０．７ｐｇ／ｍＬから９ｐｇ／ｍＬを超えて増加した。ＩＦＮγ濃度が本質的に変わらなかったため、ＩＬ−１０／ＩＦＮγ比は１０倍を超えて増加した。
【００８７】
要約すると、群ＩＩＩの患者に関して示したデータは、ＩＦＮτの投与がＩＬ−１０／ＩＦＮ−γ比を増加させるために有効だったことを示す。特に、血中ＩＬ−１０濃度は、血中ＩＬ−１０濃度の統計学的な増加により証明されたように、ＩＦＮτの経口投与により測定可能なまで増加した。血中ＩＬ−１０濃度は、２５％を超えて増加し、この患者集団では、血中ＩＬ−１０濃度の増加が相当大きかった。
【００８８】
別の試験では、Ｃ型肝炎を患う患者５例を、ＩＦＮτ治療のために組み入れた。実施例３に記載した本試験では、ＩＦＮτ１５ｍｇの１日量（１．５×１０９抗ウイルス単位）で、患者を１日２回ＩＦＮτ７．５ｍｇにより治療した。最初の用量を、朝食前の朝に投与し、第２の用量を夕食の少なくとも３時間後に投与した。血液試料を、１１３日の試験期間にわたり規定の間隔で採取し、ＩＦＮτの投与は、試験８４日目に終了した。この試料を、市販の方法を使用して、血清中のＩＬ−１０、ＩＬ−１２及びＩＦＮ−γ濃度について分析した。
【００８９】
図７Ａ〜７Ｂは、時間（日）に応じた、患者５例における血清中ＩＬ−１０濃度（図７Ａ）及び血清中ＩＦＮ−γ濃度（図７Ｂ）（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。図７Ａで見られるように、患者３例（三角形、ダイヤモンド及びｘにより示された患者）は、１日目〜８４日目のＩＦＮτ投与期間にわたりＩＬ−１０濃度が増加したことを示す。図７Ｂは、１日目〜８４日目のＩＦＮτ投与期間にわたり、全患者５例が、血中ＩＦＮγ濃度が減少したことを示す。投与終了後、８５日目〜１１３日目の期間中に見られるように、ＩＦＮ−γ濃度は増加している。
【００９０】
また、本試験の患者から採血した血液試料を、ＩＬ−１２濃度について分析した。ＩＬ−１２は、炎症誘発性サイトカインであり、多発性硬化症の病因の一因となる。文献は、（１）ＩＬ−１２産生の増加が、多発性硬化症の病因における重要なメカニズムであり（Ｆｉｌｓｏｎら、Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１０６（２）：１２７（２００３））；（２）ＭＳ患者が、一般的にＩＬ−１０濃度の減少及びＩＬ−１２濃度の増加を示し、これらサイトカイン濃度が、病期に相関すること（ｖａｎ  Ｂｏｘｅｌ−Ｄｅｚａｉｒｅら、Ａｎｎ．Ｎｅｕｒａｌ．，４５：６９５（１９９９））を報告している。ウイルス感染に関して、高いＩＬ−１２濃度も、百日咳菌（Ｂ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）の細菌定着を増悪することが示されている（Ｃａｒｔｅｒら、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１３５（２）：２３３（２００４）。したがって、本試験に登録したＨＣＶ患者のＩＬ−１２濃度を監視することは望ましかった。
【００９１】
図８Ａ〜８Ｄは、本試験（実施例３）の患者６例におけるＩＬ−１０（ダイヤモンド）、ＩＦＮ−γ（正方形）及びＩＬ−１２（三角形）の血清中濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示す。実際のＩＬ−１２濃度は、図８Ａ〜８Ｄに示す値の１０倍である（実際の値を、１つのグラフ上で全データを示すために１０で割った）。
【００９２】
図８Ａは、患者番号４０１のデータを示す。見られるように、ＩＬ−１０濃度は、ＩＦＮτを投与した治療期間にわたり増加し、ＩＦＮ−γは変化なしか、又はわずかに減少し、ＩＬ−１２は最初に上下し、次いで、約２９日目以降は下方制御された。０．０８のＩＬ−１０／ＩＬ−１２比に関して、最初のＩＬ−１０濃度は５３．１ｐｇ／ｍＬで、最初のベースラインのＩＬ−１２は６９６ｐｇ／ｍＬであった。治療期間中、この比は、約０．１２〜０．１８に増加した（５７０〜１，２００％増加）。この患者のＩＬ−１０濃度は、５３．１ｐｇ／ｍＬのベースライン値から１４０ｐｇ／ｍＬを超えて増加した（１６０％超の増加、２．６倍）。
【００９３】
図８Ｂは、患者番号４０２のデータを示し、図８Ｃは、患者番号４０３のデータを示す。患者番号４０２は、最初のベースラインの血中ＩＬ−１０濃度が４２．７ｐｇ／ｍＬであった（スクリーン及び１日目の平均血中濃度）。血中ＩＬ−１０濃度は、４３日目にピークに達し、この時、濃度は６７ｐｇ／ｍＬに達した（５６％の増加）。血中ＩＦＮγ濃度は、ベースライン濃度周辺で上下した。最初のＩＬ−１０／ＩＬ−１２比の０．０４６における治療前の血中ＩＬ−１２濃度は、９３４ｐｇ／ｍＬであった。４３日目に、ＩＬ−１０／ＩＬ−１２比は０．０８８であった（ベースライン比からの９０％の増加）。
【００９４】
図８Ｃでは、患者の最初のＩＬ−１０／ＩＬ−１２比は０．１０であった（ＩＬ−１０＝１１８．５ｐｇ／ｍＬ；ＩＬ−１２＝１，２２７ｐｇ／ｍＬ）。この比は治療期間にわたり増加し、４３日目の比の値は０．２２であった（ＩＬ−１０／ＩＬ−１２比で２．２倍の増加）。患者の血中ＩＬ−１０濃度は、ベースライン濃度より６３％高い値で、４３日目にピークに達した。
【００９５】
図８Ｄは、患者番号４０４のデータを示す。この患者は、最初の血中ＩＬ−１０濃度が６９．６ｐｇ／ｍＬ、最初の血中ＩＬ−１２濃度が１，５５２ｐｇ／ｍＬであり、これに対する最初のＩＬ−１０／ＩＬ−１２比は０．０４５であった。１．５×１０９Ｕ／日の投与量でのＩＦＮτによる治療中、血中ＩＬ−１０濃度は、４３日目に１１３ｐｇ／ｍＬまで上昇した（約６０％の増加）。４３日目のＩＬ−１２は９００ｐｇ／ｍＬに減少し、４３日目のＩＬ−１０／ＩＬ−１２比が０．１２になった。
【００９６】
本試験の患者番号４０５は、最初の血中ＩＬ−１０濃度が３４．９ｐｇ／ｍＬ、最初の血中ＩＬ−１２濃度が９７６ｐｇ／ｍＬであった（ＩＬ−１０／ＩＬ−１２比０．０３６；データ示さず）。１．５×１０９Ｕ／日の投与量でのＩＦＮτ投与は、ＩＬ−１０／ＩＬ−１２比を治療期間の７１日目の０．０５８に増加させるために有効であった（６０％の増加）。血中ＩＬ−１０濃度は、最初の治療前の濃度から７１日目の濃度へ２０％増加した。
【００９７】
したがって、インターフェロン−タウを投与しない対象の血中ＩＬ−１０濃度に比べて、対象の血中ＩＬ−１０濃度の最初の測定可能な増加をもたらし、インターフェロン−タウを投与しないＩＬ−１２濃度に比べて、対象の血中ＩＬ−１２濃度の減少をもたらすために有効な量でインターフェロン−タウを対象に投与することにより、自己免疫障害を患う患者における血中ＩＬ−１０／ＩＬ−１２比を増加させる方法を提供する。また、インターフェロン−タウを投与しない患者の血中ＩＬ−１０濃度に比べて、対象の血中ＩＬ−１０濃度の最初の測定可能な増加をもたらし、インターフェロン−タウを投与しないＩＬ−１２濃度に比べて、対象の血中ＩＬ−１２濃度の減少をもたらすために有効な量でインターフェロン−タウを対象に投与することにより、対象の自己免疫状態の進行を抑制する方法を企図する。特に、約５×１０８Ｕを超えるＩＦＮτにより治療した対象は、２５％を超えて、及び多くの場合５０％を超えて、血中ＩＬ−１０濃度が増加した。同じ患者において、血中ＩＦＮγ濃度は本質的に変化しないか、又は減少し、ＩＬ−１２濃度は一般に減少した。
【００９８】
要約すると、治療を必要とする患者に対するＩＦＮτの経口投与は、最初のＩＦＮτの用量が、その特定の患者における血中ＩＬ−１０濃度の増加、及び／又はＩＦＮ−γ濃度の減少若しくは実質的な無変化、及び／又はＩＬ−１２濃度の減少を達成するために選択された場合に、血清中サイトカイン濃度を調節するために有益である。ＩＦＮτは、口腔よりむしろ、患者の腸管を標的とする形状で好ましくは投与する。投与量の選択は、例えば、血中ＩＬ−１０濃度を（例えば、治療前及び治療開始後に）監視することにより行うか、又は確認することができる。或いは、有効量を、異なる疾患状態下での所与の投与量に対するモデル患者の反応から事前に決定してもよい。例えば、年齢／疾患プロフィールを有する患者の適した用量を事前に決定するために、所与の年齢範囲内で、特定の状態（例えば、ウイルス感染又は自己免疫状態）を呈する患者を、異なる最初のＩＦＮτ濃度に反応した血中ＩＬ−１０の変化を監視してもよく、そのような投与ガイドラインを治療する医師に提供することができる。ＩＦＮτの治療キットを企図し、このキットは、腸管へのタンパク質を標的にするために適した経口送達形態（例えば、ＩＦＮ−タウの腸溶性形態）のＩＦＮτ、及び異なる患者の状態下での有効量に関するガイドラインを提供する製品説明書（ｐｒｏｄｕｃｔ  ｌｉｔｅｒａｔｕｒｅ）又は添付文書；（すなわち、血中ＩＬ−１０濃度の測定可能な増加を生じさせるために有効な用量）を含む。好ましくは、添付文書は用量の範囲及びＩＬ−１０反応における予測される最初の変化を提供する。
【００９９】
最初の投与後、又は血中ＩＬ−１０濃度の測定可能な増加をもたらす用量（有効量）に達した時、有効量のＩＦＮτの投与を、延長された治療期間に、好ましくは毎日又は週に数回の割合で継続する。延長して投与される有効量は、継続する有効量が最初の有効量と同一又は異なるかにかかわらず、延長された治療期間にわたる実際の血中ＩＬ−１０濃度の動きとは無関係に、血中ＩＬ−１０の最初の測定可能な増加をもたらすために有効な用量である。したがって、治療期間中、血中ＩＬ−１０濃度は、患者が血中ＩＬ−１０濃度の最初の測定可能な増加をもたらすために有効なＩＦＮτの用量を継続して服用するとしても、上昇した濃度で一定のままか、継続して増加するか、又は減少することすらあり得る（例えば、感染したウイルスのレベルの減少に反応して）。この有効量は、一般的に、少なくとも約１×１０８単位／日から約１０１２単位／日までの範囲である。用量は、血中ＩＬ−１０の所望の最初の増加（例えば、正常の未治療の濃度の１．５から４倍の間）を達成するために調整することができる。
【０１００】
一部の患者及び一部の状態では、他の治療薬と組み合わせたＩＦＮτの投与が企図されることが理解されよう。例えば、他の認められた肝炎の抗ウイルス薬とＩＦＮτとの組合せは、一部の患者で有益であり得る。同様に、自己免疫状態を治療するために用いられる薬剤とＩＦＮτとの組合せは、この状態を治療する際に有益である。細胞増殖を患う患者での化学療法剤とＩＦＮτとの組合せも、企図される。より一般的に、あらゆる公知の医薬品とＩＦＮτとの組合せが企図され、典型的な薬剤を以下に示す。第２の薬剤とＩＦＮτとの「組合せ」が、２つの薬剤の連続又は同時の投与を意図し、この場合、連続投与が即時又は非即時であり得ることが理解されよう。
【０１０１】
ＩＩＩ．使用の方法
第１の態様では、ヒト対象におけるインターフェロン治療に反応する疾患又は状態を治療する方法を提供する。「インターフェロン治療に反応する」状態は、その状態の存在、進行又は症状が、インターフェロン、特にＩ型インターフェロン及びより具体的にはインターフェロン−タウの投与に続いて変化する状態である。また、ＩＦＮα又はＩＦＮβによる治療に反応する状態も、ＩＦＮτによる治療に反応する。より好ましくは、インターフェロン治療に反応する状態は、その状態の存在、進行又は症状が、非経口経路（例えば、注射）で投与したＩＦＮτにより軽減される状態である。本明細書に記載の方法は、同様な状態にある患者又は治療されている特定の個々の患者に関する試験から決定された血中ＩＬ−１０濃度の増加により証明された、治療に有効な量で、好ましくは胃及び／又は腸への投与用の経口投与可能な剤形でＩＦＮτを提供することを含む。血中ＩＬ−１０濃度を増加させるために十分なＩＦＮτの用量も、ＩＦＮ−γ濃度の減少又は無変化と共に、血中ＩＬ−１２濃度の減少を引き起こすために有効であり得る。
【０１０２】
ＩＦＮτは、抗ウイルス薬、抗増殖薬として、及び自己免疫障害の治療において生物活性を有する（米国特許第５９５８４０２号；第５９４２２２３号；第６０６０４５０号；第６３７２２０６号を参照のこと、これらを本願明細書に援用する）。したがって、注射を通して投与した時、ＩＦＮτに反応するあらゆる状態の治療におけるＩＦＮτの経口投与が企図される。本明細書に記載の方法により治療し得る状態及び疾患は、自己免疫、炎症性、ウイルス性感染症、増殖性及び過剰増殖性疾患、並びに免疫媒介性疾患を含む。
【０１０３】
Ａ．免疫系障害の治療
本明細書に詳述された方法は、免疫系過敏症に関する状態を治療するために有益である。４つのタイプの免疫系過敏症が存在する（Ｃｌａｙｍａｎ，Ｃ．Ｂ．編、「米国医師会医学事典（ＡＭＥＲＩＣＡＮ  ＭＥＤＩＣＡＬ  ＡＳＳＯＣＩＡＴＩＯＮ  ＥＮＣＹＣＬＯＰＥＤＩＡ  ＯＦ  ＭＥＤＩＣＩＮＥ）」Ｒａｎｄｏｍ  Ｈｏｕｓｅ，Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．，（１９９１））。タイプＩ、つまり即時型／アナフィラキシー性過敏症は、アレルゲン（例えば、花粉）に応答する肥満細胞の脱顆粒に起因し、喘息、アレルギー性鼻炎（枯草熱）、じんま疹（ｕｒｔｉｃａｒｉａ）（じんま疹（ｈｉｖｅｓ））、アナフィラキシーショック、及びアレルギー性の他の疾患を含む。タイプＩＩ、つまり自己免疫過敏症は、身体自体の細胞上の認識された「抗原」に対する抗体に起因する。タイプＩＩＩ過敏症は、種々の組織中に存在し、さらなる免疫応答を活性化させる抗原／抗体免疫複合体の形成に起因し、血清病、アレルギー性肺胞炎、及び時にブースターワクチン接種後に形成される大腫脹などの症状の原因となる。タイプＩＶ過敏症は、感作されたＴ細胞からのリンホカインの放出に起因し、これは炎症性反応を生じる。例は、接触皮膚炎、麻疹の発疹、及び特定の薬物に対する「アレルギー性」反応を含む。
【０１０４】
それによって特定の状態がある個体において過敏症を生じ得る機構は、一般に十分には理解されていないが、遺伝的要因及び外因性要因の両方が関与し得る。例えば、細菌、ウイルス又は薬物が、自己免疫障害に対する遺伝的素因を既に有する個体における自己免疫反応を引き起こす役割を果たし得る。あるタイプの過敏症の発生数が、他と相関され得ることが示唆されている。例えば、特定の一般的なアレルギーを有する個体は、より自己免疫障害になりやすいと提唱されている。
【０１０５】
自己免疫障害は、主に特定の器官又は組織に限定される障害と、全身を冒す障害とにおおまかにグループ分けすることができる。器官特異的（冒された器官に）障害の例は、多発性硬化症（神経突起上のミエリン被覆）、Ｉ型糖尿病（膵臓）、橋本甲状腺炎（甲状腺）、悪性貧血（胃）、アディソン病（副腎）、重症筋無力症（神経筋接合部におけるアセチルコリン受容体）、関節リウマチ（関節内層）、ブドウ膜炎（眼）、乾癬（皮膚）、ギヤン−バレー症候群（神経細胞）及びグレーブス病（甲状腺）を含む。全身性自己免疫疾患は、全身性エリテマトーデス及び皮膚筋炎を含む。他の自己免疫障害は、白血球がモイスチャー産生腺（ｍｏｉｓｔｕｒｅ−ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ  ｇｌａｎｄ）を攻撃するシェーグレン症候群である。シェーグレン症候群の特徴症状は、ドライアイ及び口渇であるが、多くの器官に影響を及ぼす全身性疾患である。
【０１０６】
過敏症障害の他の例は、喘息、湿疹、アトピー性皮膚炎、接触皮膚炎、他の湿疹性皮膚炎、脂漏性皮膚炎、鼻炎、扁平苔癬、天疱瘡（Ｐｅｍｐｌｕｇｕｓ）、水疱性類天疱瘡、表皮水疱症、じんま疹、血管性浮腫、脈管炎（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｄｅｓ）、紅班、皮膚性好酸球増加、円形脱毛症、アテローム性動脈硬化、原発性胆汁性肝硬変及びネフローゼ症候群を含む。関連疾患は、小児脂肪便症、直腸炎、好酸球性胃腸炎、肥満細胞症、炎症性腸疾患、クローン病（Ｃｈｒｏｈｎ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ）及び潰瘍性大腸炎などの腸炎症、並びに食物関連アレルギーを含む。強直性脊椎炎は、脊椎の関節及び骨の一部又は全てが融合する自己免疫、炎症性疾患の他の例である。
【０１０７】
本明細書に記載された方法を用いる治療を特に受け入れられる自己免疫疾患は、多発性硬化症、Ｉ型（インスリン依存性）糖尿病、エリテマトーデス、筋萎縮性側索硬化症、クローン病、関節リウマチ、口内炎、喘息、ブドウ膜炎、アレルギー、乾癬、強直性脊椎炎、重症筋無力症、グレーブス病、橋本甲状腺炎、シェーグレン症候群及び炎症性大腸疾患を含む。
【０１０８】
本方法を使用して、上記の障害などの自己免疫障害を治療的に治療し、それによって軽減する。自己免疫障害の治療は、本明細書中に、多発性硬化症の動物モデルであるＥＡＥの処置に関して例示される。自己免疫障害を治療するために使用するとき、ＩＦＮτを、ＩＦＮτの投与の初期段階中にＩＬ−１０の測定可能な増加を達成するために十分な用量で投与する。一旦、所望の有効量が獲得されると、その後のさらなる血中ＩＬ−１０濃度の変化と無関係に、ＩＦＮτの有効量で延長された期間にわたり患者を治療する。治療期間は、少なくとも患者が症候性である期間にわたる。自己免疫状態に関連した症状の停止に続いて、用量を下方へ調整するか、又は治療を中断してもよい。ＩＦＮτ治療の治療期間中に、患者を、公知の抗炎症薬又は免疫抑制薬などの別の薬剤と併用して治療することができる。
【０１０９】
また、対象のＩＬ−１０濃度を上昇させる用量でＩＦＮτを投与することにより、自己免疫状態の進行を防止する方法を企図する。また、血清中ＩＬ−１０濃度を、好ましくはＩＦＮ−γ濃度の無変化又は減少を伴って、増加させるために有効な用量でＩＦＮτを投与することにより自己免疫状態の発症を抑制する方法を企図する。また、血清中ＩＬ−１０／ＩＬ−１２比を増加させるために有効な用量でＩＦＮτを投与することにより自己免疫状態を治療する方法を企図する。
【０１１０】
Ｂ．ウイルス感染症の治療
本方法は、ウイルス感染症に関連した状態を治療するためにも使用される。ＩＦＮτの抗ウイルス活性は、通常ＩＦＮαに関連する毒性なしに、広範な治療的適用を有し、さらにＩＦＮτは細胞に対する有害作用なしに、その治療活性を発揮する。ＩＦＮτの細胞毒性が比較的ないことが、ＩＦＮτをｉｎ  ｖｉｖｏでの治療薬として極めて貴重なものにしており、ＩＦＮτを大部分の他の公知の抗ウイルス薬及び全ての他の公知のインターフェロンとは異質にしている。
【０１１１】
ＩＦＮτを含む製剤を、ウイルス複製を阻害するために経口投与することができる。ウイルス感染症を治療するために、このタンパク質を、患者の血中ＩＬ−１０の測定可能な増加を達成するために十分な用量で投与する。その後に、さらなる血中ＩＬ−１０濃度の変化（例えば、ウイルス量の減少による血中ＩＬ−１０濃度の減少）と無関係に、治療を有効量で継続する。ＩＦＮτの投与を、例えば、血中ウイルス価から、又はウイルス感染症と関連した症状の臨床観察から測定したウイルス感染症のレベルが寛解するまで継続する。
【０１１２】
ウイルス感染症は、ＲＮＡウイルス又はＤＮＡウイルスに起因し得る。経口投与したＩＦＮτにより治療できる特定のウイルス疾患の例は、エプスタイン−バーウイルス感染症、ＨＩＶ感染症、ヘルペスウイルス（ＥＢ、ＣＭＬ、単純ヘルペス）、乳頭腫、ポックスウイルス、ピコルナウイルス、アデノウイルス、ライノウイルス、ＨＴＬＶ  Ｉ、ＨＴＬＶ  ＩＩ及びヒト・ロタウイルスを含む。一実施形態では、ウイルス感染症は、肝炎ウイルス感染症以外であって、さらにより好ましくはＣ型肝炎ウイルス感染症ではない。ＩＦＮτ治療の治療期間中に、患者を、第２の抗ウイルス薬と併用して治療することができ、典型的薬剤を以下に挙げる。
【０１１３】
Ｃ．細胞増殖状態を治療するための方法
他の実施形態では、過剰増殖により特徴付けられる状態を治療するための方法を企図する。ＩＦＮτは、強力な抗細胞増殖活性を示す。したがって、経口投与したＩＦＮτにより細胞増殖を抑制する方法を、無制御の細胞増殖を抑制、予防又は減速するために企図する。
【０１１４】
経口投与したＩＦＮτにより治療することができるヒトにおける細胞増殖性障害の例は、肺大細胞癌、結腸腺癌、皮膚癌（基底細胞癌及び悪性黒色腫）、腎腺癌、前骨髄球性白血病、Ｔ細胞リンパ腫、皮膚Ｔ細胞リンパ腫、乳腺癌、ステロイド感受性腫瘍、ヘアリー細胞白血病、カポジ肉腫、慢性骨髄性白血病、多発性骨髄腫、表在性膀胱癌、卵巣癌及び神経膠腫を含むが、これらに限定されるものではない。
【０１１５】
細胞増殖状態の治療に用いるために、ＩＦＮτを、患者の血中ＩＬ−１０濃度の最初の測定可能な増加を達成するために十分な用量で投与する。その後に、血中ＩＬ−１０濃度のさらなる変化（例えば、身体の癌細胞の減少による血中ＩＬ−１０濃度の減少）と無関係に、治療を有効量で継続する。有効量でのＩＦＮτの投与を、例えば、腫瘍の大きさ又は特定の組織における癌細胞の広がりにより測定した所望の退縮レベルが観察されるまで継続する。
【０１１６】
ＩＦＮτ治療の治療期間中に、患者を、第２の抗癌剤（例えば、シスプラチン、ドキソルビシン又はタキソール、及び以下に挙げた他の薬剤）と併用して治療することができる。
【０１１７】
Ｄ．製剤及び投与量
ＩＦＮτを含む経口製剤を、医薬組成物を調製するために公知の方法に従って調製することができる。一般に、ＩＦＮτの治療用組成物を、本組成物の有効な経口投与を促進するために、ＩＦＮτの有効量を適した添加剤、担体及び／又は賦形剤と組み合わせるというように調製する。例えば、ＩＦＮτを含む錠剤及びカプセルを、ＩＦＮτ（例えば、凍結乾燥されたＩＦＮτタンパク質）と薬学的に許容される担体（例えば、ラクトース、コーンスターチ、微結晶性セルロース、スクロース）、結合剤（例えば、α型デンプン、メチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、ポリビニルピロリドン）、崩壊剤（例えば、カルボキシメチルセルロースカルシウム、デンプン、低置換度ヒドロキシ−プロピルセルロース）、界面活性剤（例えば、ツウィーン８０（Ｔｗｅｅｎ８０）、ポリオキシエチレン−ポリオキシプロピレンコポリマー）、抗酸化剤（例えば、Ｌ−システイン、亜硫酸ナトリウム、アスコルビン酸ナトリウム）、潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム、タルク）などの添加剤と組み合わせることにより調製することができる。
【０１１８】
さらに、ＩＦＮτポリペプチドは、固体、粉状又はその他の担体（例えば、ラクトース、サッカロース、ソルビトール、マンニトール、デンプン（例えば、ポテトスターチ、コーンスターチ）、ミリペクチン、セルロース誘導体又はゼラチン）と混合することができ、また潤滑剤（例えば、ステアリン酸マグネシウム若しくはステアリン酸カルシウム、又は錠剤の形態に圧縮されたポリエチレングリコールワックス）を含有することができる。いくつかの担体又は希釈剤の層を用いることにより、徐放性を有して作用する錠剤を調製することができる。
【０１１９】
経口投与のための液体製剤は、エリキシル剤、シロップ、又は懸濁剤の形態で作製することができ、例えば、溶液は、約０．１重量％〜約３０重量％のＩＦＮτ、糖、並びにエタノール、水、グリセロール、プロピレン、グリコール及びおそらく従来の性質を有する他の添加物の混合物を含む。
【０１２０】
他の適した製剤は、腸管粘膜により吸収されるまで胃及び腸において残存させるために、このタンパク質を保護する保護剤形である。タンパク質のための保護剤形は、当技術分野で公知であって、腸溶コーティング及び／又は粘膜付着性ポリマーコーティングを含む。典型的な粘膜付着性ポリマー製剤は、エチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、Ｅｕｄｒａｇｉｔ（登録商標）、カルボキシビニルポリマー、カルボマーなどを含む。腸管及び特に小腸に活性形態のＩＦＮτを送達するために、経口摂取を通した胃への投与のために設計された剤形を企図する。或いは、ＩＦＮτは、胃及び／又は腸内環境に対するある程度の保護を提供するために、プロテアーゼ阻害薬と同時投与するか、ポリマー物質で安定化させるか、又は脂質若しくはポリマー粒子でカプセル化することができる。
【０１２１】
経口的に活性なＩＦＮτの医薬組成物を、治療的有効量で、治療を必要とする個体に投与する。用量はかなり変更することができ、障害の重篤度、患者の年齢及び体重、並びに患者が摂取し得る他の薬物などの要因に依存する。この量又は投与量は、一般的には主治医により決定される。投与量は一般的には、約１×１０８単位／日〜５×１０１２単位／日の間であり；より具体的には約１×１０８単位／日以上であって、好ましくは約２×１０８単位／日、好ましくは約３×１０８単位／日、好ましくは約４×１０８単位／日、より好ましくは約５×１０８単位／日、好ましくは約６×１０８単位／日、好ましくは約７×１０８単位／日、好ましくは約８×１０８単位／日以上、さらにより好ましくは約１×１０９単位／日以上である。
【０１２２】
定常的な上昇した血漿中ＩＦＮτ濃度を必要とする障害は、約２〜４時間ごと程度の頻度の投与から利益を得るが、他の障害（例えば、多発性硬化症）は、より少ない頻度の間隔（例えば、１日１回又は４８時間ごとに１回）で治療的有効量を投与することにより、効果的に治療することができる。個々の用量の投与速度は、一般的には、主治医により、処置される疾患の重症度を軽減しつつ最低の総投与量の投与を可能にするように調整される。上記のように、方法は、治療の必要な患者に最初の用量でＩＦＮτを経口投与し、最初の用量レベルに対する個々の患者の反応を判定するための生物学的マーカーを監視することを企図する。監視は、採血、及び例えば、ＥＬＩＳＡ又はラジオイムノアッセイキットを用いた血中のＩＬ−１０などのマーカーの分析を介して容易に行うことができる。したがって、別の態様では、ＩＦＮτに反応する状態を患う個人を治療する際に用いるキットを企図する。キットは、ＩＦＮτの経口投与用に設計された１種又は複数の剤形を含有するコンテナを含む第１の部分、及びＩＦＮτのバイオマーカー（例えば、血中ＩＬ−１０濃度を分析するために必要なコンポーネント）を監視するために必要なコンポーネントを含む第２の部分を含む。
【０１２３】
ＩＦＮτの投与は、一般に臨床的エンドポイントに達するまで継続する。この臨床的エンドポイントは、治療される状態、状態の重症度、及び患者の個々の特性（年齢、体重、健康）により変動する。臨床的エンドポイントは、主治医又は看護師により容易に決定され、一時的又は永続的な症状の停止から状態の回復までの範囲にわたる。例えば、乾癬などの自己免疫状態を患う患者では、ＩＦＮτによる治療は、乾癬が消失するまで継続し得る。多発性硬化症患者では、適切な臨床的エンドポイントは、症状の重症度の低下、新しい造影増強脳病変の減少、又は評価スコアの良好な変化と思われる。ウイルス感染症で苦しむ個人では、適切な臨床的エンドポイントは、ウイルス価の減少又はウイルス感染症に関連した症状（発熱、発疹、倦怠感、など）の減弱と思われる。細胞増殖によって特徴付けられる状態を患う患者では、ＩＦＮτの投与を中断する臨床的エンドポイントは、腫瘍の大きさの退縮により測定した細胞増殖速度の退行、又は腫瘍増殖速度の減少により測定した細胞増殖の減速と思われる。
【０１２４】
一旦所望の臨床的エンドポイントを達成すれば、ＩＦＮτによる毎日の治療を中断することができるが、望む場合又は必要であれば維持用量を投与することができる。続いて、投与量若しくは投与の頻度、又は両方を、症状に応じて、臨床的エンドポイントが維持されるか、又は改善した状態が維持されるレベルで減らしてもよい。
【０１２５】
ＩＦＮτの経口投与が、他の治療と組み合わせて使用できることは、もちろん理解される。例えば、ＩＦＮτは、自己免疫反応に向けられる抗原の投与と併用することができる。例は、多発性硬化症を治療するためのミエリン塩基性タンパク質とＩＦＮτ；関節リウマチを治療するためのコラーゲンとＩＦＮτ、及び重症筋無力症を治療するためのアセチルコリン受容体ポリペプチドとＩＦＮτの同時投与を含む。
【０１２６】
さらに、ＩＦＮτは、多発性硬化症などの自己免疫疾患を治療するために、公知の免疫抑制剤（例えば、ステロイド）と共に経口投与することができる。免疫抑制剤は、ＩＦＮτと共働的に作用し、等価な用量のＩＦＮτ又は免疫抑制剤単独で得るより有効な治療となり得る。より一般的に、薬物（すなわち、自己免疫状態の治療のための治療薬）と組み合わせて投与されるＩＦＮτを企図し、代表的薬物は、アザチオプリン、シクロホスファミド、コルチコステロイド（プレドニゾン、プレドニゾロン、など）、シクロスポリン、ミコフェノール酸モフェチル、抗胸腺細胞グロブリン、ムロモナブＣＤ３モノクローナル抗体、メルカプトプリン、ミトキサントロン、酢酸グラティラマー（Ｃｏｐａｘｏｎｅ）、インターフェロン−β（Ａｖｏｎｅｘ（商標）、Ｂｅｔａｓｅｒｏｎ（商標）、Ｒｉｂｉｆ（商標））、ダクリズマブ、メトトレキセート、シロリムス、タクロリムスなどを含むが、これらに限定されるものではない。
【０１２７】
同様に、癌又はウイルス疾患の治療において、ＩＦＮτは、例えば、１種又は複数の化学療法薬剤の治療有効量と共に投与することができる。細胞増殖状態の治療用薬剤の典型的なタイプは、ナイトロジェンマスタード、エチレンイミン、メチルメラミン、スルホン酸アルキル、ニトロソウレア、トリアゼン、葉酸類似体、ピリミジン類似体、プリン類似体、ビンカアルカロイド、エピポドフィロトキシン、抗生物質、酵素、生体応答修飾物質（例えば、サイトカイン）、白金配位錯体、アントラセンジオン、置換された尿素、メチルヒドラジン誘導体、副腎皮質性抑制剤、プロゲスチン、エストロゲン、抗エストロゲン剤、アンドロゲン、抗男性ホルモン及び生殖腺刺激ホルモン放出ホルモン類似体を含むが、これらに限定されるものではない。代表的薬物は、メクロレタミン、シクロホスファミド、イホスファミド、メルファラン、クロラムブシル、ヘキサメチルメラミン、チオテパ、ブスルファン、カルムスチン、ロムスチン、セムスチン、ストレプトゾシン、ダカルバジン、メトトレキセート、フルオロウラシル、フロキシウリジン、シタラビン、メルカプトプリン、チオグアニン、ペントスタチン、ビンブラスチン、ビンクリスチン、エトポシド、テニポシド、ダクチノマイシン、ダウノルビシン、ドキソルビシン、ブレオマイシン、プリカマイシン、マイトマイシン、アスパラギナーゼ、インターフェロン−α、シスプラチン、カルボプラチン、ミトキサントロン、ヒドロキシ尿素、プロカルバジン、ミトタン、アミノグリチミド（ａｍｉｎｏｇｌｙｅｔｈｉｍｉｄｅ）、プレドニゾン、カプロン酸ヒドロキシプロゲステロン、酢酸メドロキシプロゲステロン、酢酸メゲストロール、ジエチルスチルベストロール、エチニルエストラジオール、タモキシフェン、プロピオン酸テストステロン、フルオキシメステロン、フルタミド、ロイプロリド、ジドブジン（ＡＺＴ）、ロイコボリン、メルファラン、シクロホスファミド、ダカルバジン、ジピリダモールなどを含むが、これらに限定されるものではない。
【０１２８】
ウイルス感染症治療におけるＩＦＮτの同時投与のための典型的薬剤は、抗ヘルペスウイルス剤、抗レトロウイルス剤及び抗ウイルス薬を含むが、これらに限定されるものではない。代表的薬物は、アシクロビル、ファムシクロビル、ホスカルネット、ガンシクロビル、イドクスウリジン、ソリブジン、トリフルリジン、バラシクロビル、ビダラビン、ジダノシン、スタブジン、ザルシタビン、ジドブジン、アマンタジン、インターフェロン−α、リバビリン、リマンタジン、ラミブジン、プロテアーゼ阻害薬、非環状ヌクレオシドホスホネートなどを含む。
【実施例】
【０１２９】
ＩＶ．実施例
以下の実施例は、本明細書に記載の方法をさらに例証するもので、決して主題の範囲を制限することを意図するものではない。
【０１３０】
材料及び方法
Ａ．ＩＦＮτの生産
一実施形態では、合成ＩＦＮτ遺伝子を、ＩＦＮτのアミノ酸配列をコードしているＤＮＡ配列の連続した部分を含むオリゴヌクレオチドを結合させることによる標準の分子的手法（Ａｕｓｕｂｅｌら、上記、１９８８）を用いて生成した。使用されるＤＮＡ配列は、配列番号１若しくは配列番号４又はＩｍａｋａｗａ，Ｋ．ら、Ｎａｔｕｒｅ、３３０：３７７−３７９，（１９８７）に示される配列のいずれかでよい。得られたＩＦＮτポリヌクレオチドコード配列は、１７２アミノ酸のコード配列である１６から５３１位にわたり得る。
【０１３１】
一実施形態では、全長合成遺伝子ＳｔｕＩ／ＳＳｔＩ断片（５４０ｂｐ）を、改変ｐＩＮ  ＩＩＩ  ｏｍｐ−Ａ発現ベクターにクローン化し、適格な大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）のＳＢ２２１株中に形質転換した。ＩＦＮτタンパク質の発現のために、発現ベクターを有する細胞を、アンピシリンを含有するＬ−ブロス中でＯＤ（５５０ｎｍ）０．１〜１まで増殖させ、ＩＰＴＧ（イソプロピル−１−チオ−ｂ−Ｄ−ガラクトシド）で３時間誘導し、遠心分離により回収した。可溶性組換えＩＦＮτを、超音波処理又は浸透圧分画により、細胞から遊離させることができる。
【０１３２】
酵母における発現のために、ＩＦＮτ遺伝子を、それぞれ５’末端及び３’末端にＳｔｕＩ及びＳａｃＩ制限部位を含むＰＣＲプライマーによるポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ；Ｍｕｌｌｉｓ，Ｋ．Ｂ．、米国特許第４６８３２０２号、１９８７年７月２８日発行；Ｍｕｌｌｉｓ，Ｋ．Ｂら、米国特許番号４６８３１９５号、１９８７年７月２８日発行）を用いて増幅することができる。増幅された断片をＳｔｕＩ及びＳａｃＩＩで消化し、ｐＢＬＵＥＳＣＲＩＰＴ＋（ＫＳ）のＳａｃＩＩ及びＳｍａＩ部位に連結して、ｐＢＳＹ−ＩＦＮτを生成した。プラスミドｐＢＳＹ−ＩＦＮτをＳａｃＩＩ及びＥｃｏＲＶで消化し、そして合成ＩＦＮτ遺伝子を含む断片を単離した。酵母発現ベクターｐＢＳ２４Ｕｂ（Ｅｃｋｅｒ，Ｄ．Ｊ．ら、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６４：７７１５−７７１９（１９８９））をＳａｌＩで消化した。平滑末端を、Ｔ４  ＤＮＡポリメラーゼを用いて生成した。ベクターＤＮＡをフェノールで抽出し、エタノール沈澱した（Ｓａｍｂｒｏｏｋら、「分子クローニング：実験マニュアル（ＭＯＬＥＣＵＬＡＲ  ＣＬＯＮＩＮＧ：Ａ  ＬＡＢＯＲＡＴＯＲＹ  ＭＡＮＵＡＬ）」第２編，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ，ＮＹ（１９８９））。回収したプラスミドをＳａｃＩＩで消化し、アガロースゲル電気泳動により精製し、ｐＢＳＹ−ＩＦＮτから単離したＳａｃＩＩ−ＥｃｏＲＶ断片に連結した。生じた組換えプラスミドをｐＢＳ２４Ｕｂ−ＩＦＮτと名付けた。
【０１３３】
組換えプラスミドｐＢＳ２４Ｕｂ−ＩＦＮτを、大腸菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）中に形質転換した。ＩＦＮτインサートを含む組換えクローンを単離し、制限酵素解析により同定した。ＩＦＮτコード配列をｐＢＳ２４Ｕｂ−ＩＦＮτから単離し、アルコールオキシダーゼ（ＡＯＸ１）プロモーターを含むピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）ベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ）中にクローン化した。次いで、このベクターを用いてピキア・パストリス（Ｐｉｃｈｉａ  ｐａｓｔｏｒｉｓ）ＧＳ１１５  Ｈｉｓ−宿主細胞を形質転換し、タンパク質を製造者の説明書に従って発現させた。タンパク質を培地中に分泌させ、連続したＤＥＡＥ−セルロース及びヒドロキシアパタイトクロマトグラフィーにより、ＳＤＳ−ＰＡＧＥ及び銀染色により判定される電気泳動的な均質まで精製した。
【０１３４】
Ｂ．特定の抗ウイルス活性を測定する抗ウイルスアッセイ
抗ウイルス活性を、標準の細胞変性効果アッセイを用いて評価した（Ｆａｍｉｌｌｅｔｔｉ，Ｐ．Ｃ．ら、「酵素学における方法（Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ）」，７８：３８７−３９４（１９８１）；Ｒｕｂｉｎｓｔｅｉｎ，Ｓ．ら、Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，３７：７５５−７５８（１９８１））。簡単に述べると、ＩＦＮτの希釈物を、マディンダービー（Ｍａｄｉｎ−Ｄａｒｂｙ）ウシ腎（ＭＤＢＫ）細胞と共に３７℃で１６〜１８時間インキュベートした。インキュベート後、ウイルス複製の阻害を、負荷として水疱性口炎ウイルスを用いる細胞変性効果アッセイで測定した。１抗ウイルス単位（Ｕ）は、単層の破壊で５０％の減少を引き起こした。本明細書中に記載された試験では、ＩＦＮτは、約１×１０８抗ウイルスＵ／ｍｇタンパク質の特定の活性を有した。
【０１３５】
（実施例１）
多発性硬化症患者へのＩＦＮτの投与
Ａ．様々な用量での試験
多発性硬化症を患うヒトを、ＩＦＮτ治療に関する試験に登録した。患者１５例を、３つの治療群にランダムに割り付けた。群Ｉの患者に、０．２ｍｇ／日（２×１０７Ｕ／日）の用量でＩＦＮτを経口投与した。群ＩＩの患者に、０．８ｍｇ／日（８×１０７Ｕ／日）の用量でＩＦＮτを経口投与した。群ＩＩＩの患者に、１．８ｍｇ／日（１．８×１０８Ｕ／日）の用量でＩＦＮτを経口投与した。
【０１３６】
ＩＦＮτ治療前のスクリーニング日及び１日目に、ベースラインの血清中サイトカイン濃度を決定するために、各患者から血液試料を採取した。１日目の採血後、各対象にＩＦＮτを経口投与することにより治療を開始した。投与前に、ＩＦＮτ（配列番号３）のバイアル及びシリンジを、２〜８℃で冷蔵庫に保存した。薬物の自己投与前に、患者は１つのバイアルと１つのシリンジを冷蔵庫から取り出した。シリンジの先端からキャップを取り外し、１日目に診療所での指示の通りに、シリンジの先端を薬物のビンに入れ、適切な容量をシリンジに吸い上げた。シリンジの先端を口腔内に置き、シリンジの内容物を、プランジャーを押し下げることによって口にあけた。次いで、患者は飲み込み、望むならば、コップ１杯の水を飲んだ。患者は、彼／彼女の日記型カードに用量を投与した日付及び時間を記入した。
【０１３７】
血液試料を、試験の１、４、８、１５、２９及び５７日目に各患者から採取した。試料を、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｇｅｎｚｙｍｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ）を用いてＩＬ−１０濃度及びＩＦＮ−γ濃度について分析した。結果を、図１Ａ〜１Ｄ（ＩＬ−１０）及び図２Ａ〜２Ｄ（ＩＦＮ−γ）、並びに図３Ａ〜３Ｅ（ＩＬ−１０及びＩＦＮ−γ）に示す。
【０１３８】
Ａ１．結果の統計解析
再発寛解型多発性硬化症患者１５例を、３つの用量（０．２ｍｇ、０．６ｍｇ及び１．８ｍｇ）のうちの１つで、１日１回４週間経口ＩＦＮ−タウで治療した。血清試料は、スクリーニング並びに１、４、８、１５、２９及び５７日目に得て、ＩＬ−１０濃度及びＩＦＮ−γ濃度（ｐｇ／ｍｌ）について評価した。３群の結果を、反復測定分散分析統計を用いて経時的に評価した。９０のデータポイント（１日目〜５７日目）のうち、９つの欠測データポイントの値は、以前の値を繰り越すことで代用した。
【０１３９】
ＩＬ−１０：解析により、３つの用量群間における有意差（Ｆ＝２．９２、Ｐ＝０．０９２７）、時間の有意な影響（Ｆ＝０．７０、Ｐ＝０．６２８５）及び有意な群と時間の相互関係（Ｆ＝０．７４、Ｐ＝０．６８０３）は認められなかった。このことは、２８日の投与期間及び２８日の追跡期間にわたり、ＩＬ−１０濃度が全３群でＩＦＮτの投与後に変わらなかったことを示唆している。最低から最高までの用量群における投与の１日目から２９日目までの平均の変化は、それぞれ７％、３％及び−２５％であった。３つの用量群の５７日目までの平均の変化は、それぞれ１０％、−１０％及び−３９％であった。全ての場合、全３群のデータは、大きなばらつきがあった。
【０１４０】
ＩＦＮ−γ：解析により、３つの用量群間における有意差（Ｆ＝１．０６、Ｐ＞０．３７６９）、時間の有意な影響（Ｆ＝１．８６、Ｐ＝０．１１４０）及び有意な群と時間の相互関係（Ｆ＝１．４５、Ｐ＝０．１８２０）は認められなかった。このことは、２４日の投与期間及び２８日の追跡期間にわたり、ＩＦＮ−γ濃度が全３群でＩＦＮτの投与後に変わらなかったことを示唆している。最低から最高までの用量群における投与の１日目から２９日目までの平均の変化は、それぞれ−６３％、−１４％及び３５％であった。３つの用量群の５７日目までの平均の変化は、それぞれ−２７％、−４６％及び２２％であった。ＩＬ−１０の解析と同様に、全３群のデータは、大きなばらつきがあった。
【０１４１】
Ｂ．単回投与試験
再発寛解型多発性硬化症の臨床診断を受けた対象を、磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）脳スキャンを用いて評価した。画像診断前に、患者にガドリニウムを投与した。３カ月の期間中に、毎月撮影した３回のＭＲＩスキャンのうちの少なくとも１回でガドリニウム増強病変が認められた患者を本試験に登録した。合計で、患者２２例をＩＦＮτ治療のために選択した。
【０１４２】
身体診察、血液学的検査及び血清化学的検査により、スクリーニング時、１及び２週目、６カ月目まで毎月評価した。免疫学的評価（ＩＬ−１２、ＩＬ−１０、ＴＧＦ−β、ネオプトリン、ＩＬ−６、ＩＦＮ−γ、Ｔｈ１及びＴｈ２サイトカイン）を、スクリーニング時及び６カ月目まで毎月評価した。ガドリニウム増強病変の評価のためのＭＲＩスキャンは、毎月撮影した。神経学的試験は、スクリーニング時及び３及び６カ月目に実施した。
【０１４３】
本試験のために選択された患者２２例に、経口投与を介して、インターフェロン−タウ３．０ｍｇを１日３回（総１日量９．０ｍｇ）投与した。標準のアッセイで測定した１〜２×１０８単位／ｍｇタンパク質の特定の抗ウイルス活性に基づき、各患者に投与した１日投与量は、約９×１０８から１．８×１０９単位の間であった。ＩＦＮτは、緩衝液中に１．５ｍｇ／ｍＬの濃度で提供し、２ｍＬの容量を１日３回投与した。
【０１４４】
新しいガドリニウム増強病変の減少を、登録した多発性硬化症患者を治療することにおけるインターフェロン−タウの有効性を評価するための臨床的エンドポイントとして使用した。ＭＲＩスキャンは、病変部位をマニュアルで確認する専門のＭＲＩリーダーにより解読された。新しいガドリニウム増強病変の数を、治療前のスキャンに対して後のスキャンで病変部位を比較することにより確認した。結果を、表２Ａ〜２Ｄに示す。
【０１４５】
（実施例２）
Ｃ型肝炎に感染したヒトの患者へのＩＦＮτの１日３回の投与
Ａ．ＩＦＮτの調製
１日目、ＩＦＮτ（配列番号３）１ビンを冷蔵庫から取り出し、患者は、表３に従って適切な容量の試験材料を自己投与した。また、ＩＦＮτ（配列番号２）を、同様に調製及び投与した。
【表８】
2009518432.tif 000009
【０１４６】
Ｂ．患者服用指示
試験材料の全バイアル及びシリンジは、２〜８℃に保った冷蔵庫内に保存した。薬物の自己投与前に、患者は冷蔵庫から１つのバイアル及び１つのシリンジを取り出した。シリンジの先端からキャップを取り外し、１日目に診療所での指示の通りに、シリンジの先端を薬物のビンに入れ、適切な容量をシリンジに吸い上げた。
【０１４７】
シリンジの先端を口腔内に置き、シリンジの内容物を、プランジャーを押し下げることによって口にあけた。次いで患者は試験材料を飲み込んだ。患者は、望むならば、コップ１杯の水を飲んだ。患者は、彼／彼女の日記型カードに試験材料の用量を投与した日付及び時間を記入した。
【０１４８】
上記のステップを、約８時間の間隔で、朝に１回、正午に１回及び夕方に１回の１日３回繰り返した。
【０１４９】
Ｃ．結果
血液試料を、１６９日の試験期間にわたり規定の間隔で採取した。試料を、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｇｅｎｚｙｍｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ）を用いて、製造者の説明書に従って血清中のＩＬ−１０濃度及びＩＦＮ−γ濃度について分析した。また、逆転写酵素ポリメラーゼ連鎖反応を用いたＣ型肝炎ウイルス価、２’，５’−オリゴアデニル酸シンセターゼ（ＯＡＳ）の血中濃度及びアラニンアミノ基転移酵素（ＡＬＴ）の血清中濃度を測定したが、本明細書では報告しない。
【０１５０】
各対象の結果を、図４Ａ〜４Ｄ（ＩＬ−１０濃度）及び図５Ａ〜５Ｄ（ＩＦＮ−γ濃度）、並びに図６Ａ〜６Ｆ（ＩＬ−１０及びＩＦＮ−γ）に示す。
【０１５１】
Ｄ．結果の統計解析
３群の結果を、反復測定分散分析統計を用いて経時的に評価した。群ＩＩの患者１例のデータは、ベースラインの血清試料が不明により使用しなかった。２０４のデータポイント（１日目〜１６９日目）のうち、両方の測定に関する７つの欠測データポイントの値は、以前の値を繰り越すことで代用した。
【０１５２】
ＩＬ−１０：解析により、３群間における有意差（Ｆ＝１２．０８、Ｐ＝０．０００９）、時間の有意な影響（Ｆ＝１１．２０、Ｐ＝０．０００１）及び有意な群と時間の相互関係（Ｆ＝７．８８、Ｐ＝０．００１）が認められた。後者の知見は、経時的な３つの用量群間におけるＩＬ−１０反応率の差により明白に見ることができる。最低用量群（群Ｉ；０．３３ｍｇ  ＴＩＤ）は、１日目〜４３日目にＩＬ−１０濃度が２２％増加したが、群ＩＩ（１ｍｇ  ＴＩＤ）は、２９日までに１１４％のピーク反応を生じた。対照的に、群ＩＩＩは（３ｍｇ  ＴＩＤ）、４３日目までに３８７％増加し、７１日目までに４８４％のピークを有した。
【０１５３】
また、有意な相互作用項（ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎ  ｔｅｒｍ）は、一旦投与が８４日目に終了されると、ＩＬ−１０濃度における用量群間の示差的減少により支持されている。群Ｉが８５日目のＩＬ−１０濃度の１１％増加から１６９日目の４％に減少し、群ＩＩが同じ期間にわたり９５％から０．５％に減少した。したがって、２つの最低用量群は、投与終了の６カ月後にベースラインに戻った。しかし、最高用量群（群ＩＩＩ；３ｍｇ  ＴＩＤ）は、１６９日目までに４５３％から１９４％に減少し、したがって、ベースラインの６カ月に対して投与終了後も依然としてかなりの増加を示している。
【０１５４】
ＩＦＮ−γ：解析により、３つの用量群間における有意差（Ｆ＝１．１３、Ｐ＞０．３４９９）、時間の有意な影響（Ｆ＝１．５５、Ｐ＝０．１１８７）及び有意な群と時間の相互関係（Ｆ＝１．３９、Ｐ＝０．１２７５）は認められなかった。このことは、８４日の投与期間及び８４日の追跡期間にわたり、ＩＦＮ−γ濃度が全３群でＩＦＮτの投与後に有意に変わらなかったことを示している。最低から最高までの用量群における投与の１日目から８５日目までの平均の変化は、それぞれ−６％、８％及び７％であった。興味深いことに、３つの用量群の１６９日目までの平均の変化は、それぞれ４％、２１％及び３１％であり、このことは投与終了後の用量反応を示唆している。
【０１５５】
（実施例３）
Ｃ型肝炎に感染した患者へのＩＦＮτの１日２回投与
Ｃ型肝炎に感染したヒト患者５例を試験に組み入れた。患者を、実施例２の方法に従って、ＩＦＮτにより治療し、各患者に７．５ｍｇを１日２回（総１日量１５ｍｇ；１．５×１０９Ｕ）投与した。最初の用量は、朝の朝食前に投与した。第２の用量は、夕食の少なくとも３時間後に投与した。
【０１５６】
血液試料を、１１３日の試験期間にわたり規定の間隔で採取した。試料を、市販のＥＬＩＳＡキット（Ｇｅｎｚｙｍｅ，Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ，Ｍａｓｓ）を用いて血清中ＩＬ−１０、ＩＬ−１２及びＩＦＮ−γ濃度について分析した。各患者５例の結果を、図７Ａ（ＩＬ−１０）、図７Ｂ（ＩＦＮ−γ）及び図８Ａ〜８Ｄ（ＩＬ−１０、ＩＬ−１２及びＩＦＮ−γ）に示す。
【０１５７】
多くの典型的な態様及び実施形態について、これまで述べてきたが、当業者は、一定の改変、置換、追加及びそれらの一部組合せを認めるであろう。したがって、以下の添付の特許請求の範囲及び以下の特許請求の範囲は、その趣旨及び範囲の範囲内に全てのそのような改変、置換、追加及び一部組合せを含むと解釈される。
【０１５８】
（配列表の簡単な説明）
配列番号１は、ヒツジのインターフェロン−τ（ＩＦＮτ）をコードする合成遺伝子のヌクレオチド配列である。
配列番号２は、成熟ヒツジのインターフェロン−τのアミノ酸配列（ＩＦＮτ；ｏＴＰ−１；ＧｅｎＢａｎｋ登録番号Ｙ００２８７；ＰＩＤ  ｇ１３５８）に相当する。
配列番号３は、配列番号２の配列に比べて、配列の５位及び６位のアミノ酸残基が修飾されている成熟ヒツジのＩＦＮτのアミノ酸配列に相当する。
配列番号４は、配列番号３のタンパク質をコードしている合成ヌクレオチド配列である。
【図面の簡単な説明】
【０１５９】
【図１Ａ】１〜２９日目にＩＦＮτ０．２ｍｇで毎日治療した患者群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩの時間（日）に応じた、多発性硬化症を患い、ＩＦＮτで経口的に治療したヒト患者における血清中ＩＬ−１０濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図１Ｂ】１〜２９日目にＩＦＮτ０．６ｍｇで毎日治療した患者群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩの時間（日）に応じた、多発性硬化症を患い、ＩＦＮτで経口的に治療したヒト患者における血清中ＩＬ−１０濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図１Ｃ】１〜２９日目にＩＦＮτ１．８ｍｇで毎日治療した患者群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩの時間（日）に応じた、多発性硬化症を患い、ＩＦＮτで経口的に治療したヒト患者における血清中ＩＬ−１０濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図１Ｄ】１〜２９日目にＩＦＮτ０．２ｍｇ（ダイヤモンド、群Ｉ）、ＩＦＮτ０．６ｍｇ（正方形、群ＩＩ）及びＩＦＮτ１．８ｍｇ（三角形、群ＩＩＩ）で毎日治療した各試験群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩのヒト患者における平均血清中ＩＬ−１０濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図２Ａ】１〜２９日目にＩＦＮτ０．２ｍｇで毎日治療した患者群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩの時間（日）に応じた、多発性硬化症を患い、ＩＦＮτで経口的に治療したヒト患者における血清中ＩＦＮ−γ濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図２Ｂ】１〜２９日目にＩＦＮτ０．６ｍｇで毎日治療した患者群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩの時間（日）に応じた、多発性硬化症を患い、ＩＦＮτで経口的に治療したヒト患者における血清中ＩＦＮ−γ濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図２Ｃ】１〜２９日目にＩＦＮτ１．８ｍｇで毎日治療した患者群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩの時間（日）に応じた、多発性硬化症を患い、ＩＦＮτで経口的に治療したヒト患者における血清中ＩＦＮ−γ濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図２Ｄ】１〜２９日目にＩＦＮτ０．２ｍｇ（ダイヤモンド、群Ｉ）、ＩＦＮτ０．６ｍｇ（正方形、群ＩＩ）及びＩＦＮτ１．８ｍｇ（三角形、群ＩＩＩ）で毎日治療した各試験群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩのヒト患者における平均血清中ＩＦＮ−γ濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図３Ａ】図１〜２に関して述べた治療群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩから選択された個々の患者のＩＬ−１０（ダイヤモンド）及びＩＦＮ−γ（正方形）の血清中濃度（両方ともｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図３Ｂ】図１〜２に関して述べた治療群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩから選択された個々の患者のＩＬ−１０（ダイヤモンド）及びＩＦＮ−γ（正方形）の血清中濃度（両方ともｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図３Ｃ】図１〜２に関して述べた治療群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩから選択された個々の患者のＩＬ−１０（ダイヤモンド）及びＩＦＮ−γ（正方形）の血清中濃度（両方ともｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図３Ｄ】図１〜２に関して述べた治療群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩから選択された個々の患者のＩＬ−１０（ダイヤモンド）及びＩＦＮ−γ（正方形）の血清中濃度（両方ともｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図３Ｅ】図１〜２に関して述べた治療群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩから選択された個々の患者のＩＬ−１０（ダイヤモンド）及びＩＦＮ−γ（正方形）の血清中濃度（両方ともｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図４Ａ】１日３回ＩＦＮτ０．３３ｍｇで毎日治療した試験群Ｉの患者６例に関する、時間（日）に応じた、Ｃ型肝炎を患い、ＩＦＮτで経口的に治療したヒト患者における血清中ＩＬ−１０濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図４Ｂ】１日３回ＩＦＮτ１．０ｍｇで毎日治療した試験群ＩＩの患者６例に関する、時間（日）に応じた、Ｃ型肝炎を患い、ＩＦＮτで経口的に治療したヒト患者における血清中ＩＬ−１０濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図４Ｃ】１日３回ＩＦＮτ３ｍｇで毎日治療した試験群ＩＩＩＩの患者６例に関する、時間（日）に応じた、Ｃ型肝炎を患い、ＩＦＮτで経口的に治療したヒト患者における血清中ＩＬ−１０濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図４Ｄ】試験群Ｉ（ダイヤモンド、１日３回０．３３ｍｇ）、群ＩＩ（正方形、１日３回１ｍｇ）及び群ＩＩＩ（三角形、１日３回３ｍｇ）に関する時間に応じた血清中ＩＬ−１０濃度の増加パーセント示す、図４Ａ〜４Ｃにおける試験群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩの要約図である。
【図５Ａ】１日３回ＩＦＮτ０．３３ｍｇで毎日治療した試験群Ｉの患者６例に関する、時間（日）に応じた、Ｃ型肝炎を患い、ＩＦＮτで経口的に治療したヒト患者における血清中ＩＦＮ−γ濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図５Ｂ】１日３回ＩＦＮτ１．０ｍｇで毎日治療した試験群ＩＩの患者６例に関する、時間（日）に応じた、Ｃ型肝炎を患い、ＩＦＮτで経口的に治療したヒト患者における血清中ＩＦＮ−γ濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図５Ｃ】１日３回ＩＦＮτ３ｍｇで毎日治療した試験群ＩＩＩＩの患者６例に関する、時間（日）に応じた、Ｃ型肝炎を患い、ＩＦＮτで経口的に治療したヒト患者における血清中ＩＦＮ−γ濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図５Ｄ】試験群Ｉ（ダイヤモンド、１日３回０．３３ｍｇ）、群ＩＩ（丸、１日３回１ｍｇ）及び群ＩＩＩ（三角形、１日３回３ｍｇ）に関する時間に応じた平均血清中ＩＦＮ−γ濃度を示す、図５Ａ〜５Ｃにおける試験群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩの要約図である。
【図６Ａ】図４〜５に関して述べた治療群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩから選択された個々の患者のＩＬ−１０（ダイヤモンド）及びＩＦＮ−γ（正方形）の血清中濃度（両方ともｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図６Ｂ】図４〜５に関して述べた治療群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩから選択された個々の患者のＩＬ−１０（ダイヤモンド）及びＩＦＮ−γ（正方形）の血清中濃度（両方ともｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図６Ｃ】図４〜５に関して述べた治療群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩから選択された個々の患者のＩＬ−１０（ダイヤモンド）及びＩＦＮ−γ（正方形）の血清中濃度（両方ともｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図６Ｄ】図４〜５に関して述べた治療群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩから選択された個々の患者のＩＬ−１０（ダイヤモンド）及びＩＦＮ−γ（正方形）の血清中濃度（両方ともｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図６Ｅ】図４〜５に関して述べた治療群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩから選択された個々の患者のＩＬ−１０（ダイヤモンド）及びＩＦＮ−γ（正方形）の血清中濃度（両方ともｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図６Ｆ】図４〜５に関して述べた治療群Ｉ、ＩＩ及びＩＩＩから選択された個々の患者のＩＬ−１０（ダイヤモンド）及びＩＦＮ−γ（正方形）の血清中濃度（両方ともｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図７Ａ】ＩＦＮτの用量７．５ｍｇを空腹時に１日２回投与した場合の、時間（日）に応じた、Ｃ型肝炎を患い、ＩＦＮτで経口的に治療したヒト患者における血清中ＩＬ−１０濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図７Ｂ】ＩＦＮτの用量７．５ｍｇを空腹時に１日２回投与した場合の、時間（日）に応じた、Ｃ型肝炎を患い、ＩＦＮτで経口的に治療したヒト患者における血清中ＩＦＮ−γ濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図８Ａ】図７Ａ〜７Ｂに関して述べたように治療した患者におけるＩＬ−１０（ダイヤモンド）、ＩＦＮ−γ（正方形）及びＩＬ−１２（三角形）の血清中濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図８Ｂ】図７Ａ〜７Ｂに関して述べたように治療した患者におけるＩＬ−１０（ダイヤモンド）、ＩＦＮ−γ（正方形）及びＩＬ−１２（三角形）の血清中濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図８Ｃ】図７Ａ〜７Ｂに関して述べたように治療した患者におけるＩＬ−１０（ダイヤモンド）、ＩＦＮ−γ（正方形）及びＩＬ−１２（三角形）の血清中濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図８Ｄ】図７Ａ〜７Ｂに関して述べたように治療した患者におけるＩＬ−１０（ダイヤモンド）、ＩＦＮ−γ（正方形）及びＩＬ−１２（三角形）の血清中濃度（ｐｇ／ｍＬ）を示すグラフである。
【図１Ａ】
2009518432.tif 000010
【図１Ｂ】
2009518432.tif 000011
【図１Ｃ】
2009518432.tif 000012
【図１Ｄ】
2009518432.tif 000013
【図２Ａ】
2009518432.tif 000014
【図２Ｂ】
2009518432.tif 000015
【図２Ｃ】
2009518432.tif 000016
【図２Ｄ】
2009518432.tif 000017
【図３Ａ】
2009518432.tif 000018
【図３Ｂ】
2009518432.tif 000019
【図３Ｃ】
2009518432.tif 000020
【図３Ｄ】
2009518432.tif 000021
【図３Ｅ】
2009518432.tif 000022
【図４Ａ】
2009518432.tif 000023
【図４Ｂ】
2009518432.tif 000024
【図４Ｃ】
2009518432.tif 000025
【図４Ｄ】
2009518432.tif 000026
【図５Ａ】
2009518432.tif 000027
【図５Ｂ】
2009518432.tif 000028
【図５Ｃ】
2009518432.tif 000029
【図５Ｄ】
2009518432.tif 000030
【図６Ａ】
2009518432.tif 000031
【図６Ｂ】
2009518432.tif 000032
【図６Ｃ】
2009518432.tif 000033
【図６Ｄ】
2009518432.tif 000034
【図６Ｅ】
2009518432.tif 000035
【図６Ｆ】
2009518432.tif 000036
【図７Ａ】
2009518432.tif 000037
【図７Ｂ】
2009518432.tif 000038
【図８Ａ】
2009518432.tif 000039
【図８Ｂ】
2009518432.tif 000040
【図８Ｃ】
2009518432.tif 000041
【図８Ｄ】
2009518432.tif 000042
【配列表】
2009518432000001.app
【国際調査報告】
2009518432.tif 000043
2009518432.tif 000044
2009518432.tif 000045
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2009518432.tif 000047
2009518432.tif 000048