(57)【要約】
2009511527.tif 000097  式（Ｉ）のピロロピリミジン誘導体は脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）の阻害物質である。したがって、不適切Ｓｙｋ活性が関連している疾患および病態の治療で、特に炎症およびアレルギー性疾患の治療で治療効果があり得る。【選択図】なし
2009511527.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物：
【化１】
2009511527.tif 000092
［式中：
Ｒ１は、ＨまたはＣ１〜３アルキルであり；
Ｒ２は、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキルであり、この場合各シクロアルキルは、Ｃ１〜３アルキルまたはハロゲンから独立に選択される１個または複数個の置換基によって置換されていてもよく；
Ｒ３は、基：
【化２】
2009511527.tif 000093
であり、
この場合、ＲおよびＴはそれぞれ水素であって、ＳはＣＯＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ８およびＲ９は、独立に、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、Ｃ１〜３アルキレンＣ３〜７シクロアルキル、フェニル（ハロゲン、−Ｃ１〜３アルキル、ＣＮ、またはＳＯ２ＣＦ３から独立に選択される１個または複数個の置換基によって置換されていてもよい）、Ｃ１〜３アルキレンフェニル、Ｃ１〜３アルキレンＯＣ１〜３アルキルであるか、または
Ｒ８およびＲ９は、それらが結合しているＮと一緒になって、Ｏ、Ｓ、またはＮから選択されるさらなるヘテロ原子を場合により含む４員、５員または６員のヘテロ環式基を形成し、各炭素においては２個までのＣ１〜６アルキルまたはハロゲンによって、または＝ＯもしくはＣ１〜６アルコキシによって置換されていてもよく、場合により含む窒素においてはＣ１〜６アルキル、ＣＯＣ１〜３アルキルまたはＣＯＯＣ１〜６アルキルによって置換されていてもよく、そして場合により含む硫黄においては＝Ｏ、または（＝Ｏ）２によって置換されていてもよく；
Ｒ４は、Ｈまたは−Ｃ１〜３アルキルである。］。
【請求項２】
Ｒ１が、Ｈまたはメチルを表している、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
Ｒ１が、Ｈを表している、請求項１または２に記載の化合物。
【請求項４】
Ｒ２が、Ｃ１〜３アルキル、またはＣ１〜３ハロアルキルを表している、請求項１〜３のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項５】
Ｒ２が、Ｃ１〜３アルキルを表している、請求項１〜４のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項６】
Ｒ２が、Ｃ１〜３ハロアルキルを表している、請求項１〜５のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項７】
Ｒ２が、トリフルオロエチルを表している、請求項１〜６のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項８】
Ｒ４が、ＨまたはＣＨ３である、請求項１〜７のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項９】
Ｒ４が、Ｈである、請求項１〜８のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１０】
Ｒ１が、Ｈを表しており；
Ｒ２が、トリフルオロエチルであり；
Ｒ３が、基：
【化３】
2009511527.tif 000094
であり、
この場合ＲおよびＴはそれぞれ水素であって、ＳはＣＯＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ４が、Ｈである；
請求項１〜９のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１１】
Ｒ８が水素であり、Ｒ９がＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、Ｃ１〜３アルキレンＣ３〜７シクロアルキル、好ましくはｎ−プロピルであり；または
Ｒ８がＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、Ｃ１〜３アルキレンＣ３〜７シクロアルキルであり、Ｒ９がＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、Ｃ１〜３アルキレンＣ３〜７シクロアルキルであるか、または
Ｒ８およびＲ９が、それらが結合しているＮと一緒になって、Ｏ、Ｓ、またはＮから選択されるさらなるヘテロ原子を場合により含む４員、５員または６員のヘテロ環式環を形成し、場合により含む窒素においてはＣ１〜６アルキルによって置換されていてもよく、場合により含む硫黄においては＝Ｏ、（＝Ｏ）２によって置換されていてもよい；
請求項１〜１０のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１２】
式（ＩＡ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物：
【化４】
2009511527.tif 000095
［式中：
Ｒ１は、Ｈを表しており；
Ｒ２は、Ｃ１〜３アルキル、またはＣ１〜３ハロアルキルであり；
Ｒ３は、基：
【化５】
2009511527.tif 000096
であり、
この場合ＲおよびＴはそれぞれ水素であって、ＳはＣＯＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ８は水素であり、Ｒ９はＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、Ｃ１〜３アルキレンＣ３〜７シクロアルキル、好ましくはｎ−プロピルであり；または
Ｒ８はＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、Ｃ１〜３アルキレンＣ３〜７シクロアルキルであり、Ｒ９はＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、Ｃ１〜３アルキレンＣ３〜７シクロアルキルであるか、または
Ｒ８およびＲ９は、それらが結合しているＮと一緒になって、Ｏ、Ｓ、またはＮから選択されるさらなるヘテロ原子を場合により含む４員、５員または６員のヘテロ環式基を形成し、場合により含む窒素においてはＣ１〜６アルキルによって置換されていてもよく、場合により含む硫黄においては＝Ｏ、（＝Ｏ）２によって置換されていてもよく；
Ｒ４は、Ｈである。］
である、請求項１〜１１のいずれか一項に記載の化合物。
【請求項１３】
以下：
４−｛［４−（エチルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル］アミノ｝−Ｎ−メチルベンズアミド；
Ｎ−メチル−４−［（４−｛［（１Ｒ）−１−メチルプロピル］アミノ｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル）アミノ］ベンズアミド；
Ｎ−メチル−４−（｛４−［（２−メチルプロピル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
Ｎ−メチル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
Ｎ−メチル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
４−（｛４−［（２，２−ジフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
４−（｛４−［（３，３，３−トリフルオロプロピル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
４−（｛４−［（１，１−ジメチルエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
４−（｛４−［（２−フルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
４−（｛４−［（１−エチルプロピル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
４−（｛４−［（３−メチルブチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
４−｛［４−（エチルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル］アミノ｝ベンズアミド；
４−｛［４−（プロピルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル］アミノ｝ベンズアミド；
４−（｛４−［（２，２−ジメチルプロピル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
４−［（４−｛［（１Ｒ）−１−メチルプロピル］アミノ｝−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル）アミノ］ベンズアミド；
４−（｛４−［（２−メチルプロピル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
４−｛［４−（メチルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル］アミノ｝ベンズアミド；
Ｎ−プロピル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド４−メチルベンゼンスルホナート；
４−（｛４−［（１−メチルエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
Ｎ２−｛４−［（１，１−ジオキシド−４−チオモルホリニル）カルボニル］フェニル｝−Ｎ４−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン；
Ｎ，Ｎ−ジエチル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
Ｎ−［（１Ｓ）−１−シクロヘキシルエチル］−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
Ｎ−（１−エチル−１−メチルプロピル）−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
Ｎ−（２，２−ジメチルプロピル）−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
Ｎ−メチル−Ｎ−プロピル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
Ｎ−シクロブチル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
Ｎ−（１，１−ジメチルエチル）−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
Ｎ−メチル−Ｎ−（１−メチルエチル）−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
Ｎ−シクロペンチル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
Ｎ−シクロヘキシル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
Ｎ２−｛４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）カルボニル］フェニル｝−Ｎ４−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン；
Ｎ−（シクロプロピルメチル）−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
Ｎ２−［４−（１−ピペリジニルカルボニル）フェニル］−Ｎ４−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン；
Ｎ２−［４−（１−ピロリジニルカルボニル）フェニル］−Ｎ４−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン；
Ｎ２−［４−（１−アゼチジニルカルボニル）フェニル］−Ｎ４−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン；
Ｎ−エチル−Ｎ−メチル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
Ｎ−エチル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
Ｎ−（２−メチルプロピル）−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
Ｎ−（１−メチルエチル）−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
４−（｛４−［（１，１−ジメチルエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）−Ｎ−メチルベンズアミド；および
４−（｛４−［（２，２−ジフルオロプロピル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
から選択される、請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項１４】
以下：
Ｎ−プロピル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
から選択される、請求項１に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項１５】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物と、医薬的に許容される担体、希釈剤および賦形剤のうちの１種以上とを含む医薬組成物。
【請求項１６】
治療で使用するための、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項１７】
不適切Ｓｙｋ活性が介在する疾患または病態の治療で使用するための、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物。
【請求項１８】
請求項１〜１４のいずれか一項に記載の式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を哺乳動物に投与することを含む、不適切Ｓｙｋ活性が介在する哺乳動物における疾患または病態の治療方法。
【請求項１９】
不適切Ｓｙｋ活性が介在する疾患または病態が関節リウマチである、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
不適切Ｓｙｋ活性が介在する疾患または病態がアレルギー性鼻炎である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２１】
不適切Ｓｙｋ活性が介在する疾患または病態が慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２２】
不適切Ｓｙｋ活性が介在する疾患または病態が成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤｓ）である、請求項１８に記載の方法。
【請求項２３】
不適切Ｓｙｋ活性が介在する疾患または病態の治療で使用するための医薬の製造における、請求項１〜１４のいずれか一項に記載の化合物またはその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ピロロピリミジン誘導体、それを含有する組成物および医薬、ならびにそのような化合物、組成物および医薬の調製方法および使用に関する。このピロロピリミジン誘導体は、不適切Ｓｙｋ活性が介在する疾患および病態の治療において、特に炎症性およびアレルギー性疾患の治療において治療効果を有し得る。
【背景技術】
【０００２】
脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）は、マスト細胞、Ｂ細胞、マクロファージおよび好中球を含めた多くの炎症細胞のホスト内でシグナル伝達する免疫レセプターの重要なメディエータであるとされてきたプロテインチロシンキナーゼである。
【０００３】
ＦｃレセプターおよびＢ細胞レセプターを含めたこれらの免疫レセプターは、アレルギー性疾患および抗体介在型自己免疫疾患のいずれにとっても重要であり、したがって薬理的にＳｙｋを阻害することにより、これらの障害を治療できると考えられる。
【０００４】
アレルギー性鼻炎および喘息は、マスト細胞、好酸球、Ｔ細胞および樹状細胞を含めた多くの細胞系が関連している過敏反応および炎症事態を伴う疾患である。アレルゲンにさらされると、ＩｇＥ（ＦｃεＲＩ）およびＩｇＧ（ＦｃεＲＩ）のための高親和性免疫グロブリンレセプターが架橋結合され、マスト細胞および他の細胞系における下流プロセスが活性化され、向炎症性メディエータおよび気道スパスモーゲンの放出がもたらされる。例えば、マスト細胞では、アレルゲンによって架橋結合されたＩｇＥレセプターは、前形成された顆粒からヒスタミンを含めたメディエータの放出をもたらし、同時に、新規に合成されるプロスタグランジンおよびロイコトリエンを含めた脂質メディエータの合成と放出ももたらされる。
【０００５】
Ｓｙｋキナーゼは、ＦｃεＲ１および／またはＦｃεＲ１レセプターの架橋結合に関連する下流細胞内シグナルを伝達するうえで重要である非レセプター連結型チロシンキナーゼであり、シグナルカスケードの上流に位置している。例えば、マスト細胞では、アレルゲンがレセプター−ＩｇＥ複合体を架橋結合した後のＦｃεＲ１シグナル伝達の初期連鎖には、最初にＬｙｎ（Ｓｒｃファミリーのチロシンキナーゼ）、その後Ｓｙｋが関与する。したがって、Ｓｙｋ活性の阻害物質があれば、すべての下流シグナル伝達カスケードを阻害し、それによって、向炎症性メディエータおよびスパスモーゲンの放出によって開始されるアレルギー反応および悪事態を直ちに軽減するであろうと期待されている（非特許文献１）。
【０００６】
最近、アレルギー性鼻炎を治療するためのフェーズＩ／ＩＩの研究において鼻内的に投薬されたＳｙｋキナーゼ阻害薬Ｒ１１２（Ｒｉｇｅｌ社）が、アレルギー性鼻漏の改善と高度に関係している重要な免疫メディエータであるＰＧＤ２の統計的に有意な低下を示したこと、同時に、一定範囲の指標においてそれが安全であることが発表された。つまり、これは、局所的Ｓｙｋキナーゼ阻害薬が臨床的に安全であることおよび効果があることについての最初の証拠を提供するものである（非特許文献２）。アレルギー性鼻炎のためのより最近のフェーズＩＩの臨床試験（Clinical Trials.gov Identifier NCT0015089）では、Ｒ１１２は、対プラセボにおいて効果を欠いていると発表された。
【０００７】
関節リウマチ（ＲＡ）は、人口のおよそ１％が冒されている自己免疫疾患である。それは、関節連結部の炎症によって特徴づけられ、骨および軟骨の衰弱性破壊をもたらす。可逆性Ｂ細胞消失を引き起こすリツキシマブを用いた最近の臨床研究（非特許文献３）により、ＲＡのような自己免疫疾患ではＢ細胞の機能を標的にすることが適切な治療戦略であることが示された。臨床効果は自己反応抗体（つまりリウマチ因子）の低下と相関しているので、これらの研究は、Ｂ細胞機能、すなわち実際には自己抗体産生が、この疾患における進行中の病理研究の中心になることを示唆している。
【０００８】
脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）に欠陥があるマウスから取った細胞を用いた研究により、Ｂ細胞機能におけるこのキナーゼの他では補うことができない役割が実証されている。このＳｙｋにおける欠陥は、Ｂ細胞の発達が阻止されることを特徴としている（非特許文献４および非特許文献５）。Ｓｙｋに欠陥がある成熟Ｂ細胞に関する研究（非特許文献６）と共に、これらの研究は、Ｂ細胞の分化および活性化にはＳｙｋが必要であることを実証している。したがって、ＲＡ患者におけるＳｙｋの阻害は、Ｂ細胞機能を阻止し、それによってリウマチ因子の産生が低減されることが考えられる。Ｂ細胞機能におけるＳｙｋの役割に加えて、ＲＡの治療にさらに関連するのが、Ｆｃレセプター（ＦｃＲ）シグナル伝達でのＳｙｋ活性の必要性である。ＲＡにおける免疫複合体によるＦｃＲの活性化は、多くの向炎症性メディエータの放出を引き起こすもととなっていることが示唆されている。
【非特許文献１】Wong et al 2004, Expert Opin. Investig. Drugs (2004) 13 (7) 743-762
【非特許文献２】Meltzer, Eli O.; Berkowitz, Robert B.; Grossbard, Elliott B, Journal of Allergy and Clinical Immunology (2005), 115(4), 791-796
【非特許文献３】J.C.W. Edwards et al 2004, New Eng. J. Med. 350: 2572-2581
【非特許文献４】M. Turner et al 1995 Nature 379: 298-302
【非特許文献５】Cheng et al 1995, Nature 378: 303-306
【非特許文献６】Kurasaki et al 2000, Immunol. Rev. 176:19-29
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００９】
本発明は、Ｓｙｋキナーゼ活性の阻害物質である新規なピロロピリミジンの化合物群に関する。そのようなピロロピリミジン誘導体は、したがって、不適切Ｓｙｋ活性が関連している障害の治療で、特にＳｙｋが介在する疾患状態の治療および予防で治療効果があり得る。そのような疾患状態としては、炎症性、アレルギー性および自己免疫性の疾患、例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、潰瘍性大腸炎、クローン病、気管支炎、皮膚炎、アレルギー性鼻炎、乾癬、硬皮症、じんま疹、関節リウマチ、多発性硬化症、癌、ＨＩＶおよび狼創を挙げることができる。
【課題を解決するための手段】
【００１０】
本発明の１つの態様で、式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物：
【化１】
2009511527.tif 000003
【００１１】
［式中：
Ｒ１は、ＨまたはＣ１〜３アルキルであり；
Ｒ２は、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６−ハロアルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、またはＣ１〜３アルキレンＣ３〜７シクロアルキル［この場合各シクロアルキルは、Ｃ１〜３アルキルまたはハロゲンから独立に選択される１個または複数個の置換基によって置換されていてもよい］であり、
Ｒ３は：
（ａ）３−ピリジニル、４−ピリジニルまたは５−ピリミジニル（これらは、それぞれ、ＯＨ、＝Ｏ、Ｃ１〜３アルキル、ＮＨＣＯＣ１〜３アルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、ＣＯＣ１〜６アルキル、Ｃ０〜３アルキレンＣＯＯＣ１〜３アルキルから独立に選択される１個または複数個の置換基によって場合により置換されていてもよい）から選択される６員へテロアリール基；
（ｂ）基
【化２】
2009511527.tif 000004
【００１２】
［式中、ＰおよびＱは一緒になって５〜７員炭素環式、ヘテロ環式またはヘテロアリール環を形成しており、これらの環は、以下から独立に選択される１個または複数個の置換基によって、すなわち各炭素においては２個までのＣ１〜３アルキル基またはフッ素によってもしくは＝ＯによってもしくはＯＨ、Ｃ１〜３アルコキシ、Ｃ１〜３ハロアルキル、Ｃ０〜３アルキレンＮＲ５Ｒ６によって、各窒素においてはＣ１〜３アルキル、ＣＯＣ１〜３アルキル、Ｃ１〜３アルキレンＣ３〜７シクロアルキル、フェニル（フッ素によって置換されていてもよい）またはＣ０〜３アルキレンＮＲ５Ｒ６によって、または硫黄においては＝Ｏまたは（＝Ｏ）２によって場合により置換されていてもよく；Ｒ５およびＲ６は独立にＨまたはＣ１〜３アルキルである］；
（ｃ）基
【化３】
2009511527.tif 000005
【００１３】
［式中、
Ｒ、ＳおよびＴのうちの１つは水素であり、残りの置換基は：
Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、ＯＨ、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、ＣＮ、Ｃ３〜７シクロアルキル、Ｏフェニル、ＯＣＨ２フェニル、ハロゲン、ＣＯＯＲ７、Ｃ１〜３アルキレンＣＯＯＲ７、ＸＮＲ８Ｒ９、ＸＣＯＮＲ８Ｒ９、ＸＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、ＮＲ７ＣＯＣ１〜６アルキル、ＮＲ７ＳＯ２Ｃ１〜６アルキル、ＯＣＨ２ＣＯＮＲ８Ｒ９、ＳＯ２Ｃ１〜３アルキル、一環式へテロアリール基（メチルによって置換されていてもよい）、
から独立に選択され；
Ｒ７は、Ｈまたは−Ｃ１〜３アルキルであり；
Ｘは、結合またはＣ１〜３アルキレンであり；
Ｒ８およびＲ９は、独立に、Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、Ｃ１〜３アルキレンＣ３〜７シクロアルキル、フェニル（ハロゲン、−Ｃ１〜３アルキルＣＮ、またはＳＯ２ＣＦ３から独立に選択される１個または複数個の置換基によって置換されていてもよい）、Ｃ１〜３アルキレンフェニル、Ｃ１〜３アルキレンＯＣ１〜３アルキルであるか、または
Ｒ８およびＲ９は、それらが結合しているＮと一緒になって４員、５員または６員のヘテロ環式基を形成していて、Ｏ、Ｓ、またはＮから選択されるさらなるヘテロ原子を場合により含んでおり、また各炭素においては２個までのＣ１〜６アルキルまたはハロゲンによって、または＝ＯもしくはＣ１〜６アルコキシによって、任意の場合により含む窒素においてはＣ１〜６アルキル、ＣＯＣ１〜３アルキルまたはＣＯＯＣ１〜６アルキルによって、そして任意の場合により含む硫黄においては＝Ｏ、（＝Ｏ）２によって場合により置換されている。］；
であり；
Ｒ４は、Ｈまたは−Ｃ１〜３アルキルである。］
が提供される。
【００１４】
本発明のさらなる態様で、式（Ｉ）の化合物（またはその塩もしくは溶媒和物）と、医薬的に許容される担体、希釈剤および賦形剤のうちの１種以上とを含む医薬組成物が提供される。
【００１５】
本発明のさらなる態様で、治療で使用するための式（Ｉ）の化合物（またはその塩もしくは溶媒和物）が提供される。
【００１６】
本発明のさらなる態様で、不適切Ｓｙｋ活性が介在する疾患または病態の治療で使用するための式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物が提供される。
【００１７】
本発明のさらなる態様で、不適切Ｓｙｋ活性が介在する疾患または病態の治療で使用するための医薬の製造における式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物の使用が提供される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００１８】
用語「有効量」とは、本明細書で使用する場合、例えば、研究者または臨床医が求めている、組織、系、動物またはヒトの生物学的または医学的応答を引き出すであろう薬物または薬剤の量を意味する。さらに、用語「治療的に有効な量」とは、そのような量を受けていない対応の被験者と比較した場合、疾患、障害、または副作用の治療、治癒、予防、または回復の改善、あるいは疾患または障害の進行速度の低下をもたらす任意の量を意味する。この用語の範囲内には、通常の生理機能を高めるのに有効な量も含まれる。
【００１９】
本明細書で使用する用語「アルキル」とは、指定された数の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖炭化水素基を意味する。用語「Ｃ１〜Ｃ３アルキル」および「Ｃ１〜Ｃ６アルキル」は、本明細書で使用する場合、少なくとも１個、且つ多くとも３個もしくは６個の炭素原子をそれぞれ含む、上記で定義したアルキル基を意味する。本明細書で使用する「アルキル」の例としては、限定するものではないが、メチル、エチル、ｎ−プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、イソペンチルなどが挙げられる。
【００２０】
用語「アルキレン」とは、本明細書で使用する場合、指定された数の炭素原子を有する直鎖もしくは分枝鎖二価炭化水素基を意味する。用語「Ｃ１〜Ｃ３アルキレン」および「Ｃ１〜Ｃ６アルキレン」とは、本明細書で使用する場合、少なくとも１個、且つ多くとも３個もしくは６個の炭素原子をそれぞれ含む、上記で定義したアルキレン基を意味する。本明細書で使用する「アルキレン」の例としては、限定するものではないが、メチレン、エチレン、ｎ−プロピレン、ｎ−ブチレンなどが挙げられる。
【００２１】
用語「ハロゲン」とは、本明細書で使用する場合、フッ素（Ｆ）、塩素（Ｃｌ）、臭素（Ｂｒ）、もしくはヨウ素（Ｉ）を意味し、用語「ハロ」とは、ハロゲン基、すなわちフルオロ（−Ｆ）、クロロ（−Ｃｌ）、ブロモ（−Ｂｒ）、およびヨード（−Ｉ）を意味する。
【００２２】
用語「ハロアルキル」とは、本明細書で使用する場合、少なくとも１個のハロ基（ハロは、本明細書で定義したとおりである）によって置換された、上記で定義したアルキル基を意味する。本発明で有用な、そのような分枝または直鎖ハロアルキル基の例としては、限定するものではないが、１個以上のハロ（例えば、フルオロ、クロロ、ブロモおよびヨード）で独立に置換されたメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチルおよびｎ−ブチルが挙げられる。
【００２３】
用語「シクロアルキル」とは、本明細書で使用する場合、指定された数の炭素原子を含む非芳香族環式炭化水素環を意味する。同様にして、用語「Ｃ３〜Ｃ７シクロアルキル」とは、３〜７個の炭素原子を有する非芳香族環式炭化水素環を意味する。本発明で有用な例示的な「シクロアルキル」としては、限定するものではないが、シクロプロピル、シクロブチル、シクロペンチル、シクロヘキシルおよびシクロヘプチルが挙げられる。
【００２４】
用語「炭素環式」とは、本明細書で使用する場合、炭素と水素原子を含む、飽和されているもしくは一以上の不飽和度を有している非芳香族環を意味する。
【００２５】
用語「ヘテロ環式」あるいは用語「ヘテロシクリル」とは、本明細書で使用する場合、Ｓ、ＳＯ、ＳＯ２、Ｏ，またはＮから選択される１個以上のヘテロ原子置換基を含む、飽和であるかもしくは一以上の不飽和度を有している、指定された数の環員を有する非芳香族環へテロ環式環を意味する。
【００２６】
用語「アルコキシ」とは、本明細書で使用する場合、基ＲａＯ−（ここで、Ｒａは、上記で定義したアルキルである）を意味し、用語「Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ」および「Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ」とは、アルキル部分が少なくとも１個、且つ多くとも３個もしくは６個の炭素原子を含む、本明細書で定義したアルコキシ基を意味する。本発明で有用な例示的な「Ｃ１〜Ｃ３アルコキシ」および「Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ」基としては、限定するものではないが、メトキシ、エトキシ、ｎ−プロポキシ、イソプロポキシ、ｎ−ブトキシ，およびｔ−ブトキシが挙げられる。
【００２７】
用語「ハロアルコキシ」とは、本明細書で使用する場合、基ＲａＯ−（ここで、Ｒａは、上記で定義したハロアルキルである）を意味し、用語「Ｃ１〜Ｃ６ハロアルコキシ」とは、ハロアルキル部分が少なくとも１個、且つ多くとも６個の炭素原子を含む、本明細書で定義したハロアルコキシ基を意味する。本発明で有用な例示的なＣ１〜Ｃ６ハロアルコキシ基としては、限定するものではないが、トリフルオロメトキシが挙げられる。
【００２８】
本明細書で使用される用語「ヒドロキシ」とは、基−ＯＨを意味する。
【００２９】
用語「ヘテロアリール」とは、特に断らない限り、指定された数の環員（例えば炭素およびヘテロ原子であるＮ、Ｏ、および／またはＳ）を有し、Ｎ、ＯおよびＳから選択されるヘテロ原子１、２、３または４個を含む、芳香族一環式基および縮合二環式芳香族環を意味する。好ましいへテロアリール基の例としては、限定するものではないが、フラン、チオフェン、ピロール、イミダゾール、ピラゾール、トリアゾール、テトラゾール、チアゾール、オキサゾール、イソオキサゾール、オキサジアゾール、チアジアゾール、イソチアゾール、ピリジン、ピリダジン、ピラジン、ピリミジン、キノリン、イソキノリン、ベンゾフラン、ベンゾチオペン、ベンズアゼピン、ベンズイミダゾール、ベンゾイミダゾール、インドール、オキシインドールおよびインダゾールが挙げられる。
【００３０】
用語「ヒドロキシアルキル」とは、本明細書で使用する場合、少なくとも１個のヒドロキシ（ヒドロキシは本明細書で定義したとおりである）によって置換された、上記で定義したアルキル基を意味する。本発明で有用な分枝または直鎖「Ｃ１〜Ｃ６ヒドロキシアルキル」基の例としては、限定するものではないが、１個以上のヒドロキシ基で独立に置換されたメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、イソブチルおよびｎ−ブチルが挙げられる。
【００３１】
用語「場合により」とは、本明細書で使用する場合、前に述べられている事象（複数も）が起こるかもしれないし、また起こらないかもしれないことを意味し、起こる事象（複数も）と起こらない事象のいずれもが含まれる。
【００３２】
用語「置換された」とは、本明細書で使用する場合、指定された１個または複数個の置換基によって置換されていることを意味し、特に断らない限り複数度の置換も許される。
【００３３】
用語「Ｓｙｋ阻害物質」は、Ｓｙｋレセプターを阻害する化合物を意味するのに使用されている。
【００３４】
用語「Ｓｙｋ介在疾患」または「不適切Ｓｙｋ活性が介在する障害または疾患もしくは病態」は、Ｓｙｋキナーゼ機構が介在する、またはモジュレートする任意の疾患状態を意味するのに使用されている。そのような疾患状態としては、炎症性、アレルギー性および自己免疫性の疾患、例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤｓ）、潰瘍性大腸炎、クローン病、気管支炎、皮膚炎、アレルギー性鼻炎、乾癬、硬皮症、じんま疹、関節リウマチ、多発性硬化症、癌、ＨＩＶおよび狼創、特に喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤｓ）、アレルギー性鼻炎および関節リウマチを挙げることができる。
【００３５】
「本発明の化合物」は、本明細書で使用される場合、式（Ｉ）の化合物またはその塩、溶媒和物もしくは生理学的に機能する誘導体を意味する。
【００３６】
用語「溶媒和物」とは、本明細書で使用する場合、溶質（本発明では、式（Ｉ）の化合物、またはその塩）と溶媒とによって形成される、可変化学量論量の複合体を意味する。そのような溶媒は、本発明の目的のためには、溶質の生物学的活性と相互干渉するものであってはならない。好適な溶媒の例としては、限定するものではないが、水、アセトン、メタノール、エタノールおよび酢酸が挙げられる。好ましくは、用いる溶媒は、医薬的に許容される溶媒とする。好適な医薬的に許容される溶媒の例としては、水、エタノールおよび酢酸が挙げられる。最も好ましくは、溶媒は、水とする。
【００３７】
式（Ｉ）の化合物は、多形として知られる特性、すなわち２つ以上の形態に結晶化する能力を有し得るが、そのような多形形態（「多形体」）も式（Ｉ）の範囲内にあると理解されたい。多形現象は、一般に、温度、圧、またはその両者における変化への応答として起こり得るものであり、また結晶化プロセスにおける変動からも生じることがある。多形体は、当技術分野で知られているいくつかの物理的特性、例えばＸ線回折パターン、溶解度、および融点によって識別することができる。
【００３８】
本明細書に記載される化合物のいくつかは、１個または複数個のキラル原子を含み得、あるいはそうでなければ２種の鏡像異性体として存在することができる。したがって、本発明の化合物には、鏡像異性体の混合物、ならびに純粋な鏡像異性体または鏡像異性的に濃縮された混合物も含まれる。本発明の範囲には、上記式（Ｉ）で表される化合物の個々の異性体と並んでその任意の完全または部分的平衡混合物も含まれる。本発明はまた、上記式によって表される化合物の個々の異性体を、１個または複数個のキラル中心が反転されているその異性体との混合物としても保護するものである。
【００３９】
また、式（Ｉ）の化合物が互変体を形成し得ることも注記しておく。本発明化合物のすべての互変体および互変体の混合物は、本発明の化合物の範囲内に含まれると理解されたい。
【００４０】
一つの実施形態では、Ｒ１は、Ｈまたはメチルを表している。さらなる実施形態では、Ｒ１は、Ｈを表している。
【００４１】
一つの実施形態では、Ｒ２は、Ｃ１〜３アルキル（例えば１−メチルエチル）を表している。さらなる実施形態では、Ｒ２は、Ｃ１〜３ハロアルキル（例えば１−トリフルオロエチル）を表している。
【００４２】
一つの実施形態では、Ｒ１はＨを表しており、Ｒ２はＣ１〜３アルキル（例えば１−メチルエチル）である。さらなる実施形態では、Ｒ１はＨを表しており、Ｒ２はＣ１〜３ハロアルキル（例えば１−トリフルオロエチル）である。
【００４３】
一つの実施形態では、Ｒ４はＨまたはＣＨ３である。さらなる実施形態では、Ｒ４はＨである。
【００４４】
一つの実施形態では、Ｒ３は、基：
【化４】
2009511527.tif 000006
【００４５】
［式中、
Ｒ、ＳおよびＴのうちの１つはＨであり、残りの置換基は：
Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、ＯＨ、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、ＣＮ、Ｃ３〜７シクロアルキル、Ｏフェニル、ＯＣＨ２フェニル、ハロゲン、ＣＯＯＲ７、Ｃ１〜３アルキレンＣＯＯＲ７、ＸＮＲ８Ｒ９、ＸＣＯＮＲ８Ｒ９、ＸＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、ＮＲ７ＣＯＣ１〜６アルキル、ＮＲ７ＳＯ２Ｃ１〜６アルキル、ＯＣＨ２ＣＯＮＲ８Ｒ９、ＳＯ２Ｃ１〜３アルキル、一環式へテロアリール基（メチルによって置換されていてもよい）、
から独立に選択され；
Ｒ７は、Ｈまたは−Ｃ１〜３アルキルであり；
Ｘは、結合またはＣ１〜３アルキレンであり；
Ｒ８およびＲ９は、上記に定義してあるとおりである。］
である。
【００４６】
さらなる実施形態では、Ｒ３は、基：
【化５】
2009511527.tif 000007
【００４７】
［式中、
ＲはＨであって、ＳおよびＴは：
Ｈ、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ１〜６アルコキシ、ＯＨ、Ｃ１〜６ヒドロキシアルキル、ＣＮ、Ｃ３〜７シクロアルキル、Ｏフェニル、ＯＣＨ２フェニル、ハロゲン、ＣＯＯＲ７、Ｃ１〜３アルキレンＣＯＯＲ７、ＸＮＲ８Ｒ９、ＸＣＯＮＲ８Ｒ９、ＸＳＯ２ＮＲ８Ｒ９、ＮＲ７ＣＯＣ１〜６アルキル、ＮＲ７ＳＯ２Ｃ１〜６アルキル、ＯＣＨ２ＣＯＮＲ８Ｒ９、ＳＯ２Ｃ１〜３アルキル、一環式へテロアリール基（メチルによって置換されていてもよい）、
から独立に選択され；
Ｘは、結合またはＣ１〜３アルキレンであり；
Ｒ７、Ｒ８およびＲ９は、上記に定義してあるとおりである。］
である。
【００４８】
さらなる実施形態では、Ｒ３は、基：
【化６】
2009511527.tif 000008
【００４９】
［式中、
ＲはＨであり、ＳはＸＣＯＮＲ８Ｒ９であって、Ｘは結合であり、そしてＴは水素もしくはハロゲンであり；
Ｒ８およびＲ９は、上記に定義してあるとおりである。］
である。
【００５０】
さらなる実施形態では、Ｒ３は、基：
【化７】
2009511527.tif 000009
【００５１】
［式中、
ＲおよびＴはそれぞれ水素であり、ＳはＣＯＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ８およびＲ９は、上記に定義してあるとおりである。］
である。
【００５２】
一つの実施形態では、Ｒ８およびＲ９はそれぞれ水素である。
【００５３】
一つの実施形態では、Ｒ８は水素であり、Ｒ９はＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、またはＣ１〜３アルキレンＣ３〜７シクロアルキル、好ましくはｎ−プロピルである。
【００５４】
一つの実施形態では、Ｒ８は、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、Ｃ１〜３アルキレンＣ３〜７シクロアルキルであり、Ｒ９は、Ｃ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、Ｃ１〜３アルキレンＣ３〜７シクロアルキルである。
【００５５】
一つの実施形態では、Ｒ８およびＲ９は、それらが結合しているＮと一緒になって４員、５員または６員のへテロ環式基を形成していて、Ｏ、Ｓ、またはＮから選択されるさらなるヘテロ原子を場合により含んでおり、また任意の場合により含む窒素においてはＣ１〜６アルキルによって、任意の場合により含む硫黄においては＝Ｏ、または（＝Ｏ）２によって場合により置換されている。
【００５６】
さらなる実施形態で、式（ＩＡ）またはその塩もしくは溶媒和物：
【化８】
2009511527.tif 000010
【００５７】
［式中、
Ｒ１は、Ｈを表しており；
Ｒ２は、Ｃ１〜３ハロアルキルであり；
Ｒ３は、基：
【化９】
2009511527.tif 000011
【００５８】
［式中、
ＲおよびＴはそれぞれ水素であって、ＳはＣＯＮＲ８Ｒ９であり；
Ｒ８は水素であり、Ｒ９はＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、Ｃ１〜３アルキレンＣ３〜７シクロアルキル（好ましくはｎ−プロピル）であり；または
Ｒ８はＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、Ｃ１〜３アルキレンＣ３〜７シクロアルキルであり、Ｒ９はＣ１〜６アルキル、Ｃ１〜６ハロアルキル、Ｃ３〜７シクロアルキル、Ｃ１〜３アルキレンＣ３〜７シクロアルキルであるか、または
Ｒ８およびＲ９は、それらが結合しているＮと一緒になって４員、５員または６員のへテロ環式基を形成していて、Ｏ、Ｓ、またはＮから選択されるさらなるヘテロ原子を場合により含んでおり、また任意の場合により含む窒素においてはＣ１〜６アルキルによって、任意の場合により含む硫黄においては＝Ｏ、（＝Ｏ）２によって場合により置換されており；
Ｒ４はＨである。］
が提供される。
【００５９】
式（ＩＡ）は、Ｒ１、Ｒ３およびＲ４の等価体を書き入れると、式（ＩＢ）：
【化１０】
2009511527.tif 000012
【００６０】
とも表すことができることは理解されると思われる。
【００６１】
各可変部についての実施形態を各可変部に対して別々に上記に一般的に掲載してきたが、本発明の化合物には、式（Ｉ）中のいくつかのもしくはそれぞれの実施形態が、上記に掲載した実施形態のそれぞれから選択される化合物も含まれる。したがって、本発明には、各可変部についての実施形態のあらゆる組み合わせが含まれるものとする。
【００６２】
本発明の化合物の具体的な例としては、後の実施例のセクションに記載されている実施例１〜５２が挙げられ、特に：
Ｎ−プロピル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド；
またはその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物が挙げられる。
【００６３】
本発明の化合物は、医薬的に許容される塩の形態にすることができ、および／または医薬的に許容される塩として投与することができる。好適な塩についての総説については、Berge et al, J. Pharm. Sci. 1977, 66, 1-19を参照されたい。
【００６４】
本発明の塩は、典型的には、医薬的に許容される塩である。用語「医薬的に許容される塩」の中に包含される塩とは、本発明化合物の無毒の塩を意味する。
【００６５】
好適な医薬的に許容される塩としては、酸付加塩または塩基付加塩を挙げることができる。
【００６６】
医薬的に許容される酸付加塩は、式（Ｉ）の化合物を、適当な無機もしくは有機酸（例えば、臭化水素酸、塩化水素酸、硫酸、硝酸、リン酸、コハク酸、マレイン酸、ギ酸、酢酸、プロピオン酸、フマル酸、クエン酸、酒石酸、乳酸、安息香酸、サリチル酸、グルタミン酸、アスパラギン酸、ｐ−トルエンスルホン酸、ベンゼンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンスルホン酸、ナフタレンスルホン酸例えば２−ナフタレンスルホン酸、またはヘキサン酸）と、場合によっては有機溶媒のような適当な溶媒中で反応させて、その塩を生成させ、これを、通常は、例えば結晶化および濾過により単離することによって生成させることができる。式（Ｉ）の化合物の医薬的に許容される酸付加塩は、例えば、臭化水素酸塩、塩化水素酸塩、硫酸塩、硝酸塩、リン酸塩、コハク酸塩、マレイン酸塩、ギ酸塩、酢酸塩、プロピオン酸塩、フマル酸塩、クエン酸塩、酒石酸塩、乳酸塩、安息香酸塩、サリチル酸塩、グルタミン酸塩、アスパラギン酸塩、ｐ−トルエンスルホン酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、メタンスルホン酸塩、エタンスルホン酸塩、ナフタレンスルホン酸塩（例えば２−ナフタレンスルホン酸塩）またはヘキサン酸塩を含み得、あるいはそれらであり得る。
【００６７】
医薬的に許容されない他の塩（例えばシュウ酸塩やトリフルオロ酢酸塩）も、例えば本発明の化合物の単離で用いることができるので、本発明の範囲内に含まれる。
【００６８】
本発明では、式（Ｉ）の化合物の考えられるすべての化学量論形態および非化学量論形態がその範囲の中に含まれる。
【００６９】
式（Ｉ）の化合物およびその塩、溶媒和物ならびに生理学的に機能する誘導体はＳｙｋ活性の阻害物質であると考えられるので、不適切Ｓｙｋ活性が関連している疾患および病態の治療で有用であり得る。
【００７０】
つまり本発明は、治療で使用するための、そして特に不適切Ｓｙｋ活性が介在する疾患および病態の治療で使用するための、式（Ｉ）の化合物およびその塩、溶媒和物ならびに生理学的に機能する誘導体を提供する。
【００７１】
本明細書に記載されている不適切Ｓｙｋ活性とは、特定の哺乳動物被験体において期待される正常なＳｙｋ活性から逸脱している任意のＳｙｋ活性をいう。不適切Ｓｙｋ活性は、例えば、異常な活性の増加、あるいはＳｙｋ活性のタイミングおよび／または調節の異常の形を取り得る。したがって、そのような不適切活性は、例えば、不適切または無調節活性をもたらすプロテインキナーゼ過剰発現または突然変異から生じ得る。
【００７２】
さらなる実施形態では、本発明は、非調節Ｓｙｋ活性が関係する障害を予防および／または治療するための、Ｓｙｋを調節、モジュレート、または阻害する方法に関する。
【００７３】
さらなる実施形態では、本発明はＳｙｋ活性が介在する障害を患っている哺乳動物を治療する方法を提供するもので、該方法は、そのような被験体に式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩、溶媒和物、もしくは生理学的に機能する誘導体を投与することを含む。
【００７４】
さらなる実施形態では、本発明は、Ｓｙｋ活性が介在する障害を治療するための医薬の調製における、式（Ｉ）の化合物、またはその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物、もしくはその生理学的に機能する誘導体の使用を提供する。
【００７５】
さらなる実施形態では、不適切Ｓｙｋ活性が介在する疾患または病態は、関節リウマチである。
【００７６】
さらなる実施形態では、不適切Ｓｙｋ活性が介在する疾患または病態は、アレルギー性鼻炎である。
【００７７】
さらなる実施形態では、不適切Ｓｙｋ活性が介在する疾患または病態は、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）である。
【００７８】
さらなる実施形態では、不適切Ｓｙｋ活性が介在する疾患または病態は、成人呼吸窮迫症候群（ＡＲＤｓ）である。
【００７９】
治療で使用するためには、式（Ｉ）の化合物（ならびにその塩、溶媒和物および生理学的に機能する誘導体）をそのままの化学物質として投与し得ることも考えられるが、本活性成分は、医薬組成物として提供することができる。したがって、本発明はさらに、式（Ｉ）の化合物、その塩、溶媒和物、生理学的に機能する誘導体と、１種または複数種の医薬的に許容される担体、希釈剤、または賦形剤とを含む医薬組成物を提供する。式（Ｉ）の化合物およびその塩、溶媒和物ならびに生理学的に機能する誘導体は、上記に記載されているとおりである。担体、希釈剤、または賦形剤は、製剤の他の成分と適合性があり、且つその受容者には有害でないという意味において許容されるものでなければならない。本発明のもう一つの態様により、式（Ｉ）の化合物、またはその塩、溶媒和物もしくは生理学的に機能する誘導体と、１種または複数種の医薬的に許容される担体、希釈剤または賦形剤とを混ぜることを含む医薬組成物の調製方法も提供される。
【００８０】
本発明の医薬組成物は、単位用量あたり活性成分の所定量が入っている単位用量剤形で提供することができる。そのような単位は、治療されている病態、投与の経路、ならびに患者の年齢、体重および健康状態にもよるが、例えば、０．５μｇ〜１ｇ、好ましくは１ｍｇ〜７００ｍｇ、より好ましくは５ｍｇ〜１００ｍｇの式（Ｉ）の化合物を含み得る。そのような単位用量はそれゆえに１日１回より多く投与され得る。好ましい単位薬量組成物は、上記で述べたように、活性成分の１日あたりの用量または小分け用量（１日２回以上の投与に）、あるいはその適切な分割分を含有している組成物である。さらには、そのような医薬組成物は、製薬の技術分野で周知のいずれの方法によっても調製することができる。
【００８１】
本発明の医薬組成物は、適切ないずれの経路、例えば経口（経頬や舌下も含まれる）、吸入、あるいは鼻経路による投与にも適合させることができる。そのような組成物は、製薬の技術分野で知られているいずれの方法によっても、例えば活性成分と担体または賦形剤とを組み合わせることによって調製することができる。
【００８２】
さらなる実施形態で、本発明は、例えば関節リウマチを治療するための、経口経路による投与に適合化された医薬組成物を提供する。
【００８３】
さらなる実施形態で、本発明は、例えばアレルギー性鼻炎を治療するための、経鼻経路による投与に適合化された医薬組成物を提供する。
【００８４】
さらなる実施形態で、本発明は、例えばＣＯＰＤまたはＡＲＤＳを治療するための、吸入経路による投与に適合化された医薬組成物を提供する。
【００８５】
経口投与に適合化された本発明の医薬組成物は、カプセルまたはタブレットのような個別の単位；粉末または細粒；水性または非水性液体中の溶液または懸濁液；可食フォームまたはホィップ；あるいは水中油型液体エマルジョンまたは油中水型液体エマルジョン；として提供することができる。
【００８６】
例えば、タブレットまたはカプセルの剤形での経口投与には、本活性薬物成分は、経口用非毒性の医薬的に許容される不活性担体、例えばエタノール、グリセロール、水などと組み合せることができる。粉末剤は、本化合物を適切な微細なサイズに粉砕し、同様に粉砕された医薬用担体例えば可食炭水化物（例えばデンプンやマンニトールのような）と一緒に混合することで調製される。矯味矯臭剤、防腐剤、分散剤および着色剤が存在していてもよい。
【００８７】
カプセル剤は、上記に記載したように、粉末混合物を調製して、ゼラチンシース成形体に充填することで製造される。粉末混合物には、充填工程の前に、滑剤および潤滑化剤、例えばコロイド状シリカ、タルク、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸カルシウムあるいは固体ポリエチレングリコールを加えることができる。カプセル剤が摂取されたときのその医薬のアベイラビリティを良くするために、崩壊剤または可溶化剤、例えば寒天、炭酸カルシウムあるいは炭酸ナトリウムを加えることもできる。
【００８８】
さらには、望ましい場合あるいは必要な場合は、混合物には、適切なバインダー、潤滑剤、崩壊剤および着色剤を組み込むことができる。適切なバインダーとしては、デンプン、ゼラチン、天然の糖類、例えばグルコースまたはβ−ラクトース、コーンスウィートナー、天然および合成のガム例えばアカシア、トラガカントあるいはアルギン酸ナトリウム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックスなどが挙げられる。この投薬剤形に用いられる潤滑剤としては、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが挙げられる。崩壊剤としては、限定するものではないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが挙げられる。タブレット剤は、例えば、粉末混合物を調製し、細粒化またはスラグ化し、潤滑剤および崩壊剤を加え、タブレットにプレス加工することで製剤化される。粉末混合物は、適切に粉砕された本化合物を、上述した希釈剤つまり基剤と、そして場合により、バインダー例えばカルボキシメチルセルロース、アルギン酸塩、ゼラチンあるいはポリビニルピロリドン、溶解遅延剤例えばパラフィン、再吸収促進剤例えば四級塩、および／または吸収剤例えばベントナイト、カオリンあるいはリン酸二カルシウムと混合することで調製される。この粉末混合物は、バインダー、例えばシロップ、デンプンペースト、アカディア粘液あるいはセルロースまたは高分子物質の溶液で湿潤化し、スクリーンを強制通過させることで細粒化することができる。細粒化に代わるものとして、粉末混合物は、タブレット成形機に流すことができ、結果として細粒に砕かれた不完全に形成されたスラグが得られる。この細粒は、ステアリン酸、ステアリン酸塩、タルク、またはミネラルオイルを添加することで潤滑化して、タブレット成形ダイスに付着するのを防ぐことができる。潤滑化された混合物はこの後タブレットに圧縮成形される。本発明の化合物はまた、易流動性不活性担体と組み合せて、細粒化またはスラグ化工程に通すことなく直接タブレットに圧縮成形することができる。シェラックのシールコーティング、糖または高分子物質のコーティング、およびワックスの光沢コーティングからなる透明または不透明の保護コーティングを設けることもできる。異なる単位投薬剤を区別するために、これらのコーティングには、染料を加えることもできる。
【００８９】
溶液剤、シロップ剤およびエリキシル剤のような経口液剤は、投薬量単位剤形に調製して、所与の量が本化合物の所定量を含むようにすることができる。シロップ剤は、本化合物を、適切に矯味矯臭化された水性溶液に溶解することで調製することができ、エリキシル剤は、無毒のアルコール性ビヒクルを用いることで調製される。懸濁液剤は、本化合物を、無毒のビヒクル中に分散させることで製剤化することができる。可溶化剤および乳化剤例えばエトキシル化イソステアリルアルコールおよびポリオキシエチレンソルビトールエーテル、防腐剤、矯味矯臭添加剤例えばペパーミントオイルあるいは天然甘味料またはサッカリンもしくは他の人工甘味料なども加えることができる。
【００９０】
適切であれば、経口投与用の投薬量単位組成物は、マイクロカプセル化することができる。この製剤は、例えば、コーティングすることで、または粒子状物質をポリマー、ワックスなどの中に包埋することで調製し、その放出を遅延または持続させることもできる。
【００９１】
式（Ｉ）の化合物（およびその塩、溶媒和物ならびに生理学的に機能する誘導体）は、リポソーム送達システムの剤形（例えば小一枚膜ベシクル、大一枚膜ベシクルおよび多重膜ベシクル）で投与することもできる。リポソームは、各種のリン脂質（例えばコレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリン）から形成させることができる。
【００９２】
式（Ｉ）の化合物ならびにその塩、溶媒和物および生理学的に機能する誘導体は、本化合物分子がカップリングされている個々の担体としてのモノクローナル抗体を用いることによって送達することもできる。本化合物は、遅延性薬物担体としての可溶性ポリマーとカップリングさせることもできる。そのようなポリマーとしては、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタアクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシエチル−アスパルトアミドフェノールや、パルミトイル残基で置換されたポリエチレンオキシドポリリシンを挙げることができる。さらには、本化合物は、薬物制御放出を確立するうえで有用な一群の生分解性ポリマー、例えば、ポリ乳酸、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレート、およびヒドロゲルの架橋結合または両親媒性ブロックコポリマーにカップリングさせることができる。
【００９３】
吸入投与用の投薬剤形は、都合良くは、エアロゾルまたは乾燥粉末として製剤化することができる。
【００９４】
吸入投与に適しているおよび／または適合化された組成物では、式（Ｉ）の化合物または塩は、粒子サイズが縮小された形態にあるのが好ましく、そしてより好ましくは、このサイズが縮小された形態は、微粉化によって得られたものまたは得ることができるものである。このサイズ縮小（例えば微粉化された）化合物または塩もしくは溶媒和物の好ましい粒子サイズは、Ｄ５０値が約０．５〜約１０ミクロン（例えばレーザー回折を用いて測定した）と範囲画定される。
【００９５】
例えば吸入投与用のエアロゾル製剤は、本活性物質の、医薬的に許容される水性または非水性溶媒中溶液または微細懸濁液からなり得る。エアロゾル製剤は、噴霧器または吸入器と一緒に使用されるカートリッジまたはリフィルの形体を取り得る密封容器に入った滅菌形態の１回または複数回用量の量で提供することができる。この密封容器は、別の形態として、一体型放出デバイス、例えば１回用量型経鼻吸入器、または容器の内容物が使い果たされたら廃棄されることが意図された、計量バルブが取り付けられたエアロゾル放出器（計量式吸入器）であってよい。
【００９６】
投薬剤形がエアロゾル放出器からなる場合は、その中には、好ましくは、圧力下にある適当な推進剤、例えば圧縮された空気、二酸化炭素あるいは有機系推進剤例えばヒドロフルオロカーボン（ＨＦＣ）が入っている。好適なＨＦＣ推進剤としては１，１，１，２，３，３，３−ヘプタフルオロプロパンおよび１，１，１，２−テトラフルオロエタンが挙げられる。エアロゾル投薬剤形は、ポンプ式噴霧器の剤形を取ることもできる。加圧エアロゾルには、本活性化合物の溶液または懸濁液を入れておくことができる。これは、さらなる賦形剤、例えば懸濁液製剤の分散特性および均質性を良くするための共溶媒および／または界面活性剤を組み込むことを必要とし得る。溶液製剤も、エタノールのような共溶媒の添加を必要とし得る。製剤の、例えば安定性および／または風味および／または微細粒子質量特性（量および／または分布）を良くするためには他の賦形改質剤を組み込むこともできる。
【００９７】
吸入式投与に適したおよび／または適合化された医薬組成物には、医薬組成物は、乾燥粉末の吸入可能組成物であるのが好ましい。そのような組成物は、粉末基剤例えばラクトース、グルコース、トレハロース、マンニトールまたはデンプン、式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物（好ましくは粒子サイズが縮小された形態の、例えば微粉形態のもの）、および場合により含む性能改良剤、例えばＬ−ロイシンまたは他のアミノ酸、および／またはステアリン酸の金属塩例えばステアリン酸マグネシウムもしくはカルシウムを含み得る。乾燥粉末の吸入可能組成物は、好ましくは、ラクトースと式（Ｉ）の化合物またはその塩との乾燥粉末ブレンドからなる。好ましくはラクトースはラクトース水和物例えばラクトース一水和物であり、および／または好ましくは吸入グレードおよび／または微細グレードのラクトースである。ラクトースの粒子サイズは、好ましくは、ラクトース粒子の９０％以上（重量でまたは体積で）が、直径が１０００ミクロン（マイクロメーター）未満（例えば１０〜１０００ミクロン例えば３０〜１０００ミクロン）であり、および／またはラクトース粒子の５０％以上が、直径が５００ミクロン未満（例えば１０〜５００ミクロン）であると規定される。より好ましくは、ラクトースの粒子サイズは、ラクトース粒子の９０％以上が、直径が３００ミクロン未満（例えば１０〜３００ミクロン例えば５０〜３００ミクロン）であり、および／またはラクトース粒子の５０％以上が、直径が１００ミクロン未満であると規定される。場合により、ラクトースの粒子サイズは、ラクトース粒子の９０％以上が、直径が１００〜２００ミクロン未満であり、および／またはラクトース粒子の５０％以上が、直径が４０〜７０ミクロン未満であると規定される。最も重要なこととしては、粒子の約３〜約３０％（例えば約１０％）（重量でまたは体積で）が、直径が５０ミクロン未満、さらには２０ミクロン未満であるのが好ましい。好適な吸入グレードのラクトースは、例えば、限定するものではないが、Ｅ９３３４ラクトース（１０％粉末）（Borculo Domo Ingredients, Hanzeplein 25, 8017 JD Zwolle, Netherlands）である。
【００９８】
場合により、特に乾燥粉末の吸入可能組成物には、吸入式投与用の医薬組成物は、適切な吸入装置内部のストリップまたはリボンの長さ方向に取り付けられた複数の密封用量容器（例えば乾燥粉末組成物が入っている）の中に組み込むことができる。この容器は、オンデマンドで開裂可能または剥離開口可能となっており、例えば乾燥粉末組成物の用量を、ＤＩＳＫＵＳ（商標）装置（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅから販売されている）のような装置を介しての吸入によって投与することができる。このＤＩＳＫＵＳ（商標）吸入装置は、例えば英国特許出願公開第２２４２１３４号明細書に記載されており、そしてこのような装置においては、粉末形態にある医薬組成物のための少なくとも１個の容器（この容器（１個または複数個）は、好ましくは、ストリップまたはリボンの長さ方向に取り付けられた複数の密封用量容器である）が、互いに剥離可能に貼り付けられた２枚の部材の間に画定されており、装置は、そのような容器（１個または複数個）の開口ステーションを画定する手段と、該開口ステーションで部材を剥ぎ離して容器を開口するための手段と、その開口された容器と連通している放出口とを有しており、この放出口を通してユーザーはその開口された容器から粉末形態にある医薬組成物を吸入することができる。
【００９９】
経鼻投与用の投薬剤形は、都合良くは、エアロゾル剤、溶液剤、ドロップ剤、ジェル剤または乾燥粉末剤として製剤化することができる。
【０１００】
吸入による投与に適合化された医薬組成物としては微細粒子のダストまたはミストが挙げられ、これは、各種タイプの計量式の、用量加圧式エアロゾル、ネブライザーまたは吹き入れ器により発生させることができる。
【０１０１】
鼻内投与に適したおよび／または適合化された医薬組成物には、式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩または溶媒和物は、流体ディスペンサーから送達されるための流体製剤として製剤化することができる。そのような流体ディスペンサーは、例えば、放出用ノズルまたは放出用オリフィスを有し得、流体ディスペンサーのポンプ機構にユーザーの加える力がかかると、ここから流体製剤の計量用量が放出される。そのような流体ディスペンサーは、一般に、複数回計量用量の流体製剤の貯槽を具備しており、用量は、連続ポンプ起動されると放出されるようになっている。流体製剤を鼻腔の中へスプレー放出するためには、放出ノズルまたはオリフィスは、ユーザーの外鼻孔に挿入されるような形にすることができる。上記したタイプの流体ディスペンサーは、国際公開第２００５／０４４３５４号パンフレットに記載・説明されている（この全内容をここで参照により本明細書に組み込む）。ディスペンサーはハウジングを有しており、ここには、流体製剤を入れておくための容器に取り付けられた圧縮ポンプを有する流体吐出装置が収納されている。ハウジングは少なくとも１個の指操作式のサイドレバーを有しており、これは、ハウジングに対して内側に移動可能となっていて、容器を上の方へハウジング中をカム移動させ、これによってポンプが圧縮され、製剤の計量用量がポンプステムからハウジングの鼻ノズルまでポンプ送りされる。特に好ましい流体ディスペンサーは、国際公開第２００５／０４４３５４号パンフレットの図３０〜４０に図示されている一般的なタイプのものである。
【０１０２】
当然、本発明の化合物が、通常は吸入、静脈内、経口または鼻内経路により投与される他の治療剤との組み合わせで投与される場合は、結果として得られる医薬組成物は、同じ経路により投与することができることは理解されるであろう。
【０１０３】
当然、上記で詳細に述べた成分に加えて、本組成物は、当該の製剤のタイプに関わる技術分野で慣用の他の添加剤を含み得ることは理解されるべきで、例えば経口投与に適したものは、矯味矯臭剤を含み得る。
【０１０４】
本発明の化合物の治療的に有効な量は、例えば、その動物の年齢および体重、治療を必要としているその正確な病態とその重症度、その製剤の特質、およびその投与の経路を含めたさまざまな要因によって決まるものであって、最終的には、担当の医師または獣医の判断によるものである。とはいえ、不適切Ｓｙｋ活性が関連している疾患または病態を治療するための式（Ｉ）の化合物の有効量は、一般には、１日あたり５μｇ〜１００ｍｇ／ｋｇレシピエント（哺乳動物）体重の範囲、より一般的には１日あたり５μｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ体重の範囲にあると思われる。この量は、１日あたり１回の用量で、または、より一般的には、一日分の全用量が同じ量になるように、１日あたりいくつか（例えば、２、３、４、５または６）の小分け用量で与えることができる。式（Ｉ）の化合物の塩または溶媒和物の有効量は、式（Ｉ）の化合物自体の有効量の比例で決定することができる。
【０１０５】
本発明の化合物ならびにその塩および溶媒和物ならびにこれらの生理学的に機能する誘導体は、単独で用いることができるし、あるいは不適切チロシン、セリン／スレオニンキナーゼ活性が関連している疾患および病態を治療するための他の治療薬との組み合わせで用いることもできる。本発明による組み合わせ治療は、したがって、少なくとも１種の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物あるいはこれらの生理学的に機能する誘導体を投与すること、および少なくとも１種の他の医薬的に活性な薬剤を使用することを含む。好ましくは、本発明による組み合わせ治療は、少なくとも１種の式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩もしくは溶媒和物あるいはこれらの生理学的に機能する誘導体と、少なくとも１種の他の医薬的に活性な薬剤とを投与することを含む。式（Ｉ）の化合物（一種または複数）および他の医薬的に活性な薬剤（一種または複数）は、一緒に、または別々に投与することができ、別々に投与する場合は、これは、同時に行ってもよいし、あるいは任意の順序で順次に行ってもよい。式（Ｉ）の化合物（一種または複数）および他の医薬的に活性な薬剤（一種または複数）の量および投与の相対的なタイミングは、所望の組み合わせの治療効果を得るために選択される。
【０１０６】
本発明の化合物ならびにその塩および溶媒和物、ならびにこれらの生理学的に機能する誘導体は、当技術分野で知られている他の類の治療剤との組み合わせで用いることもできる。そのような組み合わせで使用される代表的な薬剤類としては、喘息の治療には抗炎症性ステロイド（特にコルチコステロイド類）、局所性グルココルチコイド作動薬、ＰＤＥ４阻害薬、ＩＫＫ２阻害薬、Ａ２ａ作動薬、β２−アドレナリン受容体作動薬（遅速作用性および長時間作用性β２−アドレナリン受容体作動薬のいずれもが含まれる）、アルファ４インテグリン阻害薬、および抗ムスカリン作用薬が、そしてアレルギーの治療には、上記した薬剤とならんで、Ｈ１およびＨ１／Ｈ３拮抗薬が挙げられる。ひどい喘息を治療するための組み合わせ治療で使用される代表的な薬剤としては、局所作用性ｐ３８阻害薬、およびＩＫＫ２阻害薬が挙げられる。
【０１０７】
抗炎症性コルチコステロイドは当技術分野でよく知られている。代表的な例としては、フルチカゾンプロピオネート（例えば米国特許第４，３３５，１２１号明細書を参照されたい）、ベクロメタゾン１７−プロピオン酸エステル、ベクロメタゾン１７，２１−ジプロピオン酸エステル、デキサメタゾンまたはそのエステル、モメタゾンまたはそのエステル（例えばモメタゾンフロエート）、シクレソニド、ブデゾニド、およびフルニゾリドが挙げられる。抗炎症性コルチコステロイドのさらなる例は国際公開第０２／１２２６６号パンフレット（Ｇｌａｘｏ  Ｇｒｏｕｐ  Ｌｔｄ）に記載されており、特に、実施例１の化合物（６α，９α−ジフルオロ−１７α−［（２−フラニルカルボニル）オキシ］−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−３−オキソ−アンドロスタ−１，４−ジエン−１７β−カルボチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル）、および実施例４１の化合物（６α，９α−ジフルオロ−１１β−ヒドロキシ−１６α−メチル−１７α−［（４−メチル−１，３−チアゾール−５−カルボニル）オキシ］−３−オキソ−アンドロスタ−１，４−ジエン−１７β−カルボチオ酸Ｓ−フルオロメチルエステル）、またはこれらの医薬的に許容される塩である。
【０１０８】
β２−アドレナリン受容体作動薬の例としては、サルメテロール（例えばラセミ化合物または単一鏡像異性体例えばＲ−鏡像異性体として）、サルブタモール、フォルモテロール、サルメファモール、フェノテロールまたはテルブタリンおよびこれらの塩、例えばサルメテロールのキシナホ酸塩、サルブタモールの硫酸塩または遊離塩基、またはフォルモテロールのフマル酸塩が挙げられる。長時間作用性のβ２−アドレナリン受容体作動薬が好ましく、特にサルメテロールやフォルモテロールのように治療効果が２４時間以上あるものが好ましい。
【０１０９】
抗ヒスタミン薬の例としては、アゼラスチン、レボカバスチン、オロパチジン、メタピリレン、ロラタジン、セチリジン、デスロラタジンまたはフェキソフェナジンが挙げられる。
【０１１０】
抗コリン作用性化合物の例としては、ムスカリン（Ｍ）受容体拮抗薬、特にＭ１、Ｍ２、Ｍ１／Ｍ２、またはＭ３受容体拮抗薬、特に（選択的）Ｍ３受容体拮抗薬が挙げられる。抗コリン作用性化合物の例は、国際公開第０３／０１１２７４号パンフレットおよび国際公開第０２／０６９９４５号パンフレット・米国特許出願公開第２００２／０１９３３９３号明細書ならびに米国特許出願公開第２００２／０５２３１２号明細書に記載されている。ムスカリンＭ３拮抗薬の例としては、イプラトロピウムブロミド、オキシトロピウムブロミドまたはチオトロピウムブロミドが挙げられる。
【０１１１】
本発明の化合物との組み合わせで用いることができる代表的なＰＤＥ４または混合ＰＤＥ３／４阻害薬としては、ＡＷＤ−１２−２８１（Ｅｌｂｉｏｎ）、ＰＤ−１６８７８７（Ｐｆｉｚｅｒ）、ロフルミラスト、およびシロミラスト（ＧｌａｘｏＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ）が挙げられる。ＰＤＥ４阻害薬のさらなる例は、国際公開第２００４／１０３９９８号パンフレット（Ｇｌａｘｏ  Ｇｒｏｕｐ  Ｌｔｄ）に記載されている。
【０１１２】
本発明はまた、β２−アドレナリン受容体作動薬および抗炎症性コルチコステロイドと一緒に式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩も含んでいる、いわゆる「三種組み合わせ」の治療も提供する。好ましくはこの組み合わせは、喘息、ＣＯＰＤまたはアレルギー性鼻炎の治療および／または予防のためのものである。このβ２−アドレナリン受容体作動薬および／または抗炎症性コルチコステロイドは、上記に記載したものであってよいし、および／または国際公開第０３／０３０９３９号パンフレットに記載されているものであってもよい。そのような「三種」組み合わせの代表的な例では、式（Ｉ）の化合物またはその医薬的に許容される塩、サルメテロールまたはその医薬的に許容される塩（例えばサルメテロールキシナホエート）、およびフルチカゾンプロピオネートが含まれている。
【０１１３】
当然、適切であれば、他の治療成分（一種または複数）は、塩の形態で、例えばアルカリ金属またはアミン塩としてあるいは酸付加塩として、つまりプロドラッグの形態で、またはエステルとして、例えば低級アルキルエステルとして、あるいは溶媒和物（例えば水和物）として用いて、その治療成分の活性および／または安定性および／または物理特性（例えば溶解度）を至適化することができることは当業者には明らかであろう。また、当然、適切であれば、この治療成分は、光学的に純粋な形態で用いることができることも明らかであろう。
【０１１４】
上記で述べた組み合わせは、都合良くは、使用のためには医薬組成物の形態で提供することができ、したがって医薬的に許容される希釈剤または担体と一緒に上記で定義した組み合わせを含む医薬組成物は本発明のさらなる態様をなす。これらの組み合わせは、特に、呼吸器疾患において重要であり、都合良くは、吸入または鼻内送達に適合化される。
【０１１５】
関節リウマチ（ＲＡ）は、組み合わせ治療が考慮され得るさらなる炎症性疾患である。したがってさらなる態様で、本発明は、関節リウマチの治療で有用なさらなる治療剤との組み合わせでの式（Ｉ）の化合物またはその塩もしくは溶媒和物を提供し、そのような組み合わせは関節リウマチの治療に有用である。
【０１１６】
本発明による化合物および医薬組成物は、例えば、ＮＳＡＩＤＳ、コルチコステロイド、ＣＯＸ−２阻害薬、サイトカイン阻害薬、抗ＴＮＦ薬、オンコスタチンＭの阻害薬、抗マラリア薬、免疫抑制薬および細胞増殖抑制薬から選択される１種以上の他の治療剤との組み合わせで用い得る、つまりそれらを含み得る。
【０１１７】
ＲＡの治療には２つの薬剤類が考えられ、これらは「高速作用性」薬剤と「遅速作用性」薬剤つまり「セカンドライン」薬剤（疾患修飾性抗リウマチ薬［Disease Modifying Antirheumatic Drugs］つまりＤＭＡＲＤＳとも呼ばれる）に分類され得る。ファーストライン薬剤は、例えば代表的なＮＳＡＩＤ（例えばアスピリン、イブプロフェン、ナプロキセン、エトドラック）、コルチコステロイド（例えばプレドニゾン）である。セカンドライン薬剤としては、ＣＯＸ−２阻害薬および抗ＴＮＦ薬が挙げられる。ＣＯＸ−２阻害薬の例は、セレコキシブ（Ｃｅｌｅｂｒｅｘ）、エトリコキシブおよびロフェコキシブ（Ｖｉｏｘｘ）である。
【０１１８】
抗ＴＮＦ薬としては、インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ）、エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ）およびアダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ）が挙げられる。他の「バイオロジカル」治療薬としては、アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ）、リツキシマブ、リンフォスタット−Ｂ、ＢＡＦＦ／ＡＰＲＩＬ阻害薬およびＣＴＬＡ−４−Ｉｇまたはその模倣薬が挙げられる。他のサイトカイン阻害薬としては、レフルノミド（Ａｒａｖａ）が挙げられる。さらなるセカンドライン薬剤としては、金剤（アウラノフィン（Ｒｉｄａｕｒａ錠）やアウロチオマレート（Ｍｙｏｃｒｉｓｉｎ注射））、マラリアに使われる薬剤（ヒドロキシクロロキン（Ｐｌａｑｕｅｎｉｌ））、免疫系を抑制する薬剤（アザチオプリン（Ｉｍｕｒａｎ、Ｔｈｉｏｐｒｉｎｅ）、メトトレキセート（Ｍｅｔｈｏｂｌａｓｔｉｎ、Ｌｅｄｅｒｔｒｅｘａｔｅ、Ｅｍｔｈｅｘａｔｅ）、シクロスポリン（Ｓａｎｄｉｍｍｕｎ、Ｎｅｏｒａｌ）、シクロホスファミド（Ｃｙｃｌｏｂｌａｓｔｉｎ）、シトキサン、エンドキサン、Ｄ−ペニシラミン（Ｄ−Ｐｅｎａｍｉｎｅ）、スルファサラジン（Ｓａｌａｚｏｐｙｒｉｎ）、非ステロイド性抗炎症薬（アスピリンおよびイブプロフェンが挙げられる）が挙げられる。
【０１１９】
そのような組み合わせの個々の化合物は、別々かまたは組み合わせの医薬組成物で、順次または同時に投与することができる。好ましくは、個々の化合物は、組み合わせの医薬組成物で同時に投与するものである。既知の治療剤の適切な用量は、当業者であれば容易に分かるであろう。
【０１２０】
本発明の化合物は、標準的な化学反応を含めた様々な方法によって生成させることができる。特に断らないかぎり前に定義したいずれの可変部も引き続き前に定義した意味をもつ。説明のための一般的な合成方法を以下に述べ、その後本発明の具体的な化合物を実際の実施例で調製する。
【０１２１】
一般式（Ｉ）の化合物は有機合成の技術分野で知られている方法によって調製することができ、以下の合成スキームには一部が記載されている。以下に記載されるすべてのスキームにおいては、感応性または反応性基に対する保護基が、必要な場合、化学の一般原理に従って用いられることは十分理解されるところである。保護基は、有機合成の標準的な方法（T. W. Green and P. G. M. Wuts (1991) Protecting Groups in Organic Synthesis, John Wiley & Sons）に従って操作される。これらの基は、当業者には容易に明らかである方法を用いて化合物合成の都合の良い段階で脱離される。各プロセスの選択ならびに反応条件およびその実行の順序は、式（Ｉ）の化合物の調製と整合性が取れたものとする。当業者であれば、式（Ｉ）の化合物に立体中心が存在するか否かはわかるであろう。したがって、本発明には、あり得る立体異性体のいずれもが含まれ、またラセミ化合物のみならず個々の鏡像異性体も同様に含まれる。化合物が単一の鏡像異性体として望まれている場合は、立体特異的合成によって、またはその最終の生成物または任意の都合良い中間体の分割によって、得ることができる。最終の生成物、中間体、または出発物質の分割は、当技術分野で知られている適切ないずれの方法によっても行うことができる。例えば、Stereochemistry of Organic Compounds by E. L. Eliel, S. H. Wilen, and L. N. Mander (Wiley-Interscience, 1994)を参照されたい。
【０１２２】
ルート１
【化１１】
2009511527.tif 000013
【０１２３】
（ｉ）ＨＮＲ１Ｒ２、ＩＰＡ、マイクロ波加熱１００℃；（ｉｉ）Ｒ３ＮＨ２、Ｐｄ（ｄｂａ）２、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’−（Ｎ，Ｎ’−ジメチルアミノ）ビフェニル、Ｃｓ２ＣＯ３、ＤＭＦ、マイクロ波加熱１５０℃。
【０１２４】
ルート２
【化１２】
2009511527.tif 000014
【０１２５】
（ｉ）ＮａＨ、ＴｓＣｌ、ＤＭＦ；（ｉｉ）ＨＮＲ１Ｒ２、ＩＰＡ、８０℃；（ｉｉｉ）Ｒ３ＮＨ２、Ｐｄ２（ｄｂａ）３、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル、Ｋ２ＣＯ３、ｔ−ＢｕＯＨ、８０℃；（ｉｖ）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ。
【０１２６】
ルート３（Ｒ４＝Ｈの場合）
【化１３】
2009511527.tif 000015
【０１２７】
（ｉ）Ｒ３ＮＨ２、１９０℃；（ｉｉ）ＣｌＣＨ２ＣＨＯ、ＮａＯＡｃ、ＩＰＡ／Ｈ２Ｏ、８０；（ｉｉｉ）（ＣＦ３ＳＯ２）２ＮＰｈ、Ｋ２ＣＯ３、ＤＭＦ、ＲＴ；（ｉｖ）ＨＮＲ１Ｒ２、Ｋ２ＣＯ３、ジオキサン、マイクロ波加熱８０℃；（ｖ）２Ｎ  ＮａＯＨ。
【０１２８】
ルート４
【化１４】
2009511527.tif 000016
【０１２９】
（ｉ）ＣｌＣＨＲ４ＣＨＯ、ＮａＨＣＯ３、Ｈ２Ｏ、５０℃；（ｉｉ）（ｔＢｕＣＯ）２Ｏ、ＤＭＡＰ、１２０℃；（ｉｉｉ）ＰＯＣｌ２、１１０℃；（ｉｖ）２Ｎ  ＮａＯＨ、１００℃；（ｖ）ＴｓＣｌ、ＮａＨ、ＤＭＦ、ＲＴ；（ｖｉ）ｔＢｕＯＮＯ、ＣＨ２Ｉ２、ＣｕＩ、Ｉ２、ＴＨＦ、８０℃；（ｖｉｉ）ＨＮＲ１Ｒ２、ＩＰＡ、８０℃；（ｖｉｉｉ）Ｒ３ＮＨ２、Ｐｄ２（ｄｂａ）３、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’−（Ｎ，Ｎ’−ジメチルアミノ）ビフェニル、Ｃｓ２ＣＯ３、ＤＭＦ、９０℃；（ｉｘ）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ。
【０１３０】
ルート５
【化１５】
2009511527.tif 000017
【０１３１】
（ｉ）ＣｌＣＨＲ４ＣＨＯ、ＮａＨＣＯ３、Ｈ２Ｏ、５０℃；（ｉｉ）（ｔＢｕＣＯ）２Ｏ、ＤＭＡＰ、１２０℃；（ｉｉｉ）ＰＯＣｌ２、１１０℃；（ｉｖ）２Ｎ  ＮａＯＨ、１００℃；（ｖ）ＴｓＣｌ、ＮａＨ、ＤＭＦ、ＲＴ；（ｖｉ）ｔ−ＢｕＯＮＯ、Ｍｅ２ＳｉＣｌ、ＢｎＮ（Ｅｔ）３Ｃｌ、ＤＣＭ；（ｖｉｉ）ＨＮＲ１Ｒ２、ＩＰＡ、８０℃；（ｖｉｉｉ）Ｒ３ＮＨ２、Ｐｄ２（ｄｂａ）３、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル、Ｋ２ＣＯ３、ｔ−ＢｕＯＨ、マイクロ波加熱、１２０℃；（ｉｘ）ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨ。
【０１３２】
したがって、さらなる態様で、本発明は、式（Ｉ）の化合物の調製方法を提供し、その方法は：
（ｉ）式（ＩＩ）：
【化１６】
2009511527.tif 000018
【０１３３】
［式中ＸはＨであるか、またはｐ−トルエンスルホニルのような保護基である］
の化合物をアミンＲ３ＮＨ２と反応させ、その後、存在する場合は、保護基を脱離させること；
（ｉｉ）Ｒ４＝Ｈのときは、式（ＩＩＩ）：
【化１７】
2009511527.tif 000019
【０１３４】
［式中Ｙはトリフレートのような保護基である］
の化合物をアミンＨＮＲ１Ｒ２と反応させ、その後保護基を脱離させること；
（ｉｉｉ）式（ＩＶ）：
【化１８】
2009511527.tif 000020
【０１３５】
［式中ＨａｌはＣｌまたはＩである］
の化合物をアミンＲ３ＮＨ２と反応させ、その後保護基を脱離させること
を含む。
【実施例】
【０１３６】
次に、本発明のいくつかの実施形態を、以下に、単なる例として説明する。例示されている化合物に対して示されている物理データは、これらの化合物の割り当てられた構造と一致している。
【０１３７】
これらのプロセス、スキームおよび実施例で使用する記号および取り決めは、本明細書で使用する場合、現代の科学文献、例えば、Journal of the American Chemical SocietyやJournal of Biological Chemistryで使用されているものと一致している。特に断らないかぎり、Ｌ−配置にあるとされているアミノ酸残基を表すために、標準の一文字または三文字略記号が一般的に使用される。特に断らないかぎり、出発物質はすべて供給業者から得たもので、それらは、さらに精製することなく用いた。具体的には、以下の略記号が、実施例および明細書全体をとおして使用され得る。
【０１３８】
ｇ（グラム）；
ｌ（リットル）；
μｌ（マイクロリットル）；
Ｍ（モル濃度）；
ＭＨｚ（メガヘルツ）；
ｍｍｏｌ（ミリモル）；
ｍｉｎ（分）；
Ｒｔ（保持時間）；
ＴＦＡ（トリフルオロ酢酸）；
ＴＨＦ（テトラヒドロフラン）；
ＤＭＳＯ（ジメチルスルホキシド）；
ＤＣＭ（ジクロロメタン）；
ＤＭＦ（Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド）；
ＤＭＡＰ（４−ジメチルアミノピリジン）；
ＡＴＰ（アデノシン三リン酸）；
ＤＭＥＭ（ダルベッコ変法イーグル培地）；
ＨＰＬＣ（高圧液体クロマトグラフィー）；
ＴＢＡＦ（テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオリド）；
ＴｓＣｌ（塩化トシル）；
ＨＥＰＥＳ（４−（２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸）；
ＥＤＴＡ（エチレンジアミンテトラ酢酸）；
ＴＢＴＵ（Ｏ−ベンゾトリアゾール−１−イル−Ｎ，Ｎ，Ｎ’，Ｎ’−テトラメチルウロニウムテトラフルオロボレート）；
ＤＩＰＥＡ（ジイソプロピルエチルアミン）；
Ｐｄ２（ｄｂａ）３（ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム）；
ＬＣ／ＭＳ（液体クロマトグラフィー−質量分析）；
ｍｇ（ミリグラム）；
ｍｌ（ミリリットル）；
ｍＭ（ミリモル濃度）；
ｈ（時）；
ＩＰＡ（イソプロパノール）；
ａｔｍ（気圧）；
ＢＳＡ（ウシ血清アルブミン）；
ＨＲＰ（ホースラディッシュペルオキシダーゼ）；
ＭＤＡＰ（質量直結自動分取／分取質量直結［Mass directed autoprep / preparative mass directed］ＨＰＬＣ）。
【０１３９】
エーテルと記載されているのは、すべて、ジエチルエーテルであり；ブラインとは、飽和ＮａＣｌ水溶液を言う。特に断らない限り、温度はすべて℃（摂氏）で表記されている。特に断らない限り、反応は、すべて、室温にある不活性雰囲気下で行われる。
【０１４０】
１Ｈ  ＮＭＲスペクトルはＢｒｕｋｅｒ  ＤＰＸ  ４００ＭＨｚを用いて記録し、テトラメチルシランを基準にした。
【０１４１】
ＬＣ／ＭＳは、０．１％ＨＣＯ２Ｈおよび０．０１Ｍ酢酸アンモニウム／水（溶媒Ａ）、および０．０５％ＨＣＯ２Ｈ  ５％水／アセトニトリル（溶媒Ｂ）を用いてＳｕｐｅｌｃｏｓｉｌ  ＬＣＡＢＺ＋ＰＬＵＳカラム（３．３ｃｍ×４．６ｍｍ  ＩＤ）で行い、流量が３ｍｌ／分の溶離勾配：０．０〜０．７分は０％Ｂ、０．７〜４．２分は１００％Ｂ、４．２〜５．３分は０％Ｂ、および５．３〜５．５分は０％Ｂを用いた。質量スペクトルは、エレクトロスプレーポジティブおよびネガティブモード（ＥＳ＋ｖｅおよびＥＳ−ｖｅ）を用いるＦｉｓｏｎｓ  ＶＧ  Ｐｌａｔｆｏｒｍスペクトロメータで記録した。
【０１４２】
「質量直結自動分取」／「分取質量直結ＨＰＬＣ」は、揚程を大きくしてあるＷａｔｅｒｓ  ６００ポンプ、Ｗａｔｅｒｓ  ２７００自動サンプラー、Ｗａｔｅｒｓ  ９９６ダイオードアレイ、および１０ｃｍ  ２．５４ｃｍ  ＩＤ  ＡＢＺ＋カラム上のＧｉｌｓｏｎ  ２０２フラクションコレクターから構成される装置などの装置で行い、０．１％のギ酸もしくはトリフルオロ酢酸／水（溶媒Ａ）および０．１％のギ酸もしくはトリフルオロ酢酸／アセトニトリル（溶媒Ｂ）で、適切な溶離勾配を用いて溶離した。質量スペクトルは、エレクトロスプレーポジティブおよびネガティブモード（オルタネートスキャン）を用いるＭｉｃｒｏｍａｓｓ  ＺＭＤ質量スペクトロメータで記録した。用いたソフトウエアは、ＯｐｅｎＬｙｎｘおよびＦｒａｃｔｉｏｎＬｙｎｘ  ｏｐｔｉｏを有するＭａｓｓＬｙｎｘ  ３．５とした（あるいは同等の別のシステムを用いた）。
【０１４３】
「疎水フリット［Hydrophobic frits］」とは、Ｗｈａｔｍａｎから販売されている濾過チューブを意味する。ＳＰＥ（固相抽出）とは、Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｓｏｒｂｅｎｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｌｔｄから販売されているカートリッジを用いることを意味する。
【０１４４】
Ｆｌａｓｈｍａｓｔｅｒ  ＩＩは、Ａｒｇｏｎａｕｔ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｌｔｄから入手可能な自動マルチユーザーフラッシュクロマトグラフィー装置であり、使い捨て順相ＳＰＥカートリッジ（２ｇ〜１００ｇ）が使用されている。勾配法を行えるようにする四成分オンライン溶媒混合がこれにより提供される。各溶媒、流量、勾配形状およびコレクション条件を管理する多機能オープンアクセスソフトウエアを用いてサンプル列をつくる。装置には、Ｋｎａｕｅｒの可変波長式ｕｖ検出器および２つのＧｉｌｓｏｎ  ＦＣ２０４フラクションコレクターが装着されていて、自動式のピークカッティング、コレクションおよびトラッキングが可能になっている。
【０１４５】
シリカクロマトグラフィー法は、自動化された（Ｆｌａｓｈｍａｓｔｅｒ）方法か、またはプレパックカートリッジ（ＳＰＥ）でのマニュアル式クロマトグラフィーか、またはマニュアル式パックのフラッシュカラムで行った。
【０１４６】
マイクロ波化学反応は、典型的には、密封容器中で行い、適当なマイクロ波反応装置（例えばＢｉｏｔａｇｅ  Ｉｎｉｔｉａｔｏｒ（商標）Ｍｉｃｒｏｗａｖｅ  Ｓｙｎｔｈｅｓｉｓｅｒ）を用いて照射した。
【０１４７】
供給業者の名称が化合物または試薬の名称の後に記載されている（例えば「化合物Ｘ（Ａｌｄｒｉｃｈ）」や「化合物Ｘ／Ａｌｄｒｉｃｈ」）ときは、名称が書かれている供給業者のような供給業者から化合物Ｘは入手可能であることを意味する。
【０１４８】
同様に、文献名または特許番号が化合物の名称の後に記載されている（例えば化合物Ｙ（ＥＰ０１２３４５６））ときは、その化合物の調製が、指定されている文献に記載されていることを意味する。
【０１４９】
実施例の名称は、化合物命名プログラム「ＡＣＤ  Ｎａｍｅ  Ｐｒｏ  ６．０２」を用いて得たものである。
【０１５０】
（実施例１）
４−（｛４−［（１−メチルエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミドホルマート
【化１９】
2009511527.tif 000021
【０１５１】
２−｛［４−（アミノカルボニル）フェニル］アミノ｝−７−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルトリフルオロメタンスルホナート（０．０２４ｇ）のジオキサン（１．５ｍｌ）溶液に炭酸カリウム（１５ｍｇ）およびイソプロピルアミン（０．００５ｇ）を加えた。この懸濁液を密封バイアル中でマイクロ波照射により８０℃で１０分間加熱した。この混合物を水酸化ナトリウム水溶液（２Ｍ、０．７５ｍｌ）で処理し、激しく４時間攪拌した。混合物を塩酸水溶液（２Ｍ、０．７５ｍｌ）で処理し、ＳＣＸ−２カートリッジ（１０ｇ、メタノールで前処理）に適用した。カートリッジをメタノールで洗浄し、メタノール中１０％アンモニアで溶離した。塩基性のフラクションを真空中で濃縮し、この残留物をＭＤＡＰにより精製して、４−（｛４−［（１−メチルエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミドホルマート（０．０１０ｇ）を白色の固形物として得た。LC/MS;Rt2.37min, MH+ 311。
【０１５２】
（中間体１）
２−｛［４−（アミノカルボニル）フェニル］アミノ｝−７−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルトリフルオロメタンスルホナート
【化２０】
2009511527.tif 000022
【０１５３】
４−［（４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル）アミノ］ベンズアミド（０．０７７ｇ）のＤＭＦ（３ｍｌ）中懸濁液に炭酸カリウム（０．０９７ｇ）およびＮ−フェニルトリフルオロメタンスルホンアミド（０．２５ｇ）を加えた。この懸濁液を２０℃で１．５時間攪拌した。この混合物にさらなる量のＮ−フェニルトリフルオロメタンスルホンアミド（０．０６４ｇ）および炭酸カリウム（０．０２４ｇ）を加え、２０℃で３．５時間攪拌した。混合物を酢酸エチル（３０ｍｌ）と水（２０ｍｌ）とに分配させた。相を分離し、有機相を水（２×１５ｍｌ）で洗浄した。合わせた水性洗浄液を酢酸エチル（２０ｍｌ）で抽出し、２回目の酢酸エチル抽出物を水（１０ｍｌ）で洗浄した。合わせた有機抽出物を乾燥（硫酸マグネシウム）させ、濾過して、その溶媒を真空中で除去した。この残留物をシリカに吸着させ、３０分かけて酢酸エチル／シクロヘキサン勾配（０〜１００％）で溶離するシリカカートリッジ（２０ｇ）でのクロマトグラフィーによって精製し、その適切なフラクションからその溶媒を蒸発させて、２−｛［４−（アミノカルボニル）フェニル］アミノ｝−７−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルトリフルオロメタンスルホナート（０．０５０ｇ）を得た。LC/MS;Rt 3.50min, MH+ 534。
【０１５４】
（中間体２）
４−［（４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル）アミノ］ベンズアミド
【化２１】
2009511527.tif 000023
【０１５５】
４−［（４−アミノ−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−２−ピリミジニル）アミノ］ベンズアミド（０．３２５ｇ）のＩＰＡ（３ｍｌ）および水（１ｍｌ）中懸濁液に酢酸ナトリウム（０．２４０ｇ）を加えた。この混合物にクロロアセトアルデヒド（０．２２ｍｌ、水中５０％）を加えた。この懸濁液を８０℃で２０分間加熱した。室温でこの混合物を水（３０ｍｌ）で希釈し、得られた懸濁液を１５分間攪拌した。懸濁液を濾過し、その残留物を水（１０ｍｌ）で洗浄した。この粗製物を、さらに、メタノール／ＤＣＭ勾配（０〜３０％）＋１％トリエチルアミンで溶離するシリカカートリッジ（５０ｇ）でのクロマトグラフィーによって精製し、その適切なフラクションからその溶媒を蒸発させて、４−［（４−オキソ−４，７−ジヒドロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル）アミノ］ベンズアミド（０．１３２ｇ）を白色の固形物として得た。LC/MS;Rt 2.1min, MH+ 270。
【０１５６】
（中間体３）
４−［（４−アミノ−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−２−ピリミジニル）アミノ］ベンズアミド
【化２２】
2009511527.tif 000024
【０１５７】
６−アミノ−２−（メチルチオ）−４（１Ｈ）−ピリミジノン（１．０２３ｇ、Ｓａｌｏｒ）と４−アミノベンズアミド（１．０ｇ、Ａｃｒｏｓ）の混合物を室温で震盪し、その後１９０℃で２６時間撹拌した。ＤＣＭ／メタノール（１：１、１００ｍｌ）を用いてこの残留物をシリカに吸着させた。この粗生成物を、メタノール／ＤＣＭ勾配（０〜２５％）、次いで１％トリエチルアミン含有５０％メタノール／ＤＣＭで溶離するシリカカートリッジ（１００ｇ）でのクロマトグラフィーによって精製した。適切なフラクションからその溶媒を蒸発させて、４−［（４−アミノ−６−オキソ−１，６−ジヒドロ−２−ピリミジニル）アミノ］ベンズアミド（０．３４０ｇ）を黄色の固形物として得た。LC/MS;Rt 1.8min, MH+ 246。
【０１５８】
（中間体４）
２−ヨード−Ｎ−（１−メチルエチル）−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【化２３】
2009511527.tif 000025
【０１５９】
４−クロロ−２−ヨード−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１．３ｇ）をエタノール（２０ｍｌ）に懸濁させ、イソプロピルアミン（３６０ｍｇ、Ａｌｄｒｉｃｈ）およびＤＩＰＥＡ（１０ｍｍｏｌ）で処理し、この混合物を８０℃で３時間加熱した。反応を乾燥まで減量させ、その残留物を、酢酸エチル／ＤＣＭ勾配（０〜１００％）で溶離するシリカカートリッジでのクロマトグラフィーによって精製した。適切なフラクションを組み合わせ、その溶媒を蒸発させて、標題化合物（９５０ｍｇ）を得た。LC/MS;Rt 3.88min, MH+ 456.9。
【０１６０】
（中間体５）
２−ヨード−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【化２４】
2009511527.tif 000026
【０１６１】
４−クロロ−２−ヨード−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１．３ｇ）をエタノール（２０ｍｌ）に懸濁させ、２，２，２−トリフルオロエチルアミン（６００ｍｇ、Ａｌｄｒｉｃｈ）およびＤＩＰＥＡ（１０ｍｍｏｌ）で処理し、この混合物を８０℃で６時間加熱した。２，２，２−トリフルオロエチルアミン（２ｍｌ）およびＤＩＰＥＡ（２ｍｌ）を加え、加熱を９０℃で１８時間続けた。反応を乾燥まで減量させ、その残留物を、酢酸エチル／ＤＣＭ勾配（０〜１００％）で溶離するシリカカートリッジでのクロマトグラフィーによって精製した。適切なフラクションを組み合わせ、その溶媒を蒸発させて、標題化合物（１．２１ｇ）を得た。LC/MS;Rt 3.80min, MH+ 496.9。
【０１６２】
方法１：
４−クロロ−２−ヨード−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（３１０ｍｇ）をメタノールに懸濁させ、アミン（２ｍｍｏｌ）およびＤＩＰＥＡ（３ｍｍｏｌ）で処理し、この混合物を８０℃で３時間加熱した。反応を乾燥まで減量させ、その残留物を、酢酸エチル／ＤＣＭ勾配（０〜１００％）で溶離するシリカカートリッジでのクロマトグラフィーによって精製した。適切なフラクションを組み合わせ、その溶媒を蒸発させて、所望の生成物を得た。
【０１６３】
方法１を用いて以下の化合物を調製した。
【表１】
2009511527.tif 000027
【０１６４】
（中間体８）
Ｎ−エチル−２−ヨード−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【化２５】
2009511527.tif 000028
【０１６５】
４−クロロ−２−ヨード−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（３００ｍｇ）をエタノール（５ｍｌ）に懸濁させ、エチルアミン（１ｍｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）およびＤＩＰＥＡ（１ｍｌ）で処理し、この混合物を８０℃で２時間加熱した。反応を乾燥まで減量させ、その残留物を、酢酸エチル／シクロヘキサン勾配（０〜１００％）で溶離するシリカカートリッジ（２０ｇ）でのクロマトグラフィーによって精製した。適切なフラクションを組み合わせ、その溶媒を蒸発させて、標題の化合物を得た。LC/MS;Rt 3.82min, MH+ 442.78。
【０１６６】
方法２：
ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン試薬（例えばピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン）（０．１ｍｍｏｌ、４３ｍｇ）、４−アミノ−Ｎ−メチルベンズアミド（２９．８ｍｇ、Ａｓｉｎｅｘ）、炭酸セシウム（９６ｍｇ）、ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（６ｍｇ、Ａｃｒｏｓ）および２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ビフェニル（６ｍｇ、Ａｃｒｏｓ）をＤＭＦ（２．０ｍｌ）中で合わせた。この反応混合物を８０℃で３時間加熱した。反応混合物を冷却させ、セライトで濾過し、そのセライトをＤＭＦで洗浄し、合わせた濾液および洗浄液を乾燥まで蒸発させた。この残留物をナトリウムメトキシド溶液（２Ｎ、０．５ｍｌ）と一緒に８０℃で２時間加熱し、室温まで冷却した。この溶液を乾燥まで蒸発させ、その残留物をＤＭＳＯに溶解させ、ＭＤＡＰによって精製した。生成物を含有しているフラクションを乾燥まで蒸発させて、所望の化合物を得た。
【０１６７】
方法２を用いて以下を調製した。
【表２】
2009511527.tif 000029
【０１６８】
方法３：
２−｛［４−（アミノカルボニル）フェニル］アミノ｝−７−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルトリフルオロメタンスルホナート（８５３ｍｇ）をＩＰＡ（１６ｍｌ）に懸濁させ、この混合物のアリコート（１ｍｌ）をアミン（０．１５ｍｍｏｌ）のＩＰＡ（１ｍｌ）およびＤＩＰＥＡ（１７μｌ）中溶液で処理した。還流条件下で反応を８０℃で一晩撹拌した。反応を濃縮し、その残留物をジオキサン（１ｍｌ）および水酸化ナトリウム（２Ｍ、１ｍｌ）中に溶解させ、得られた二相性の混合物を室温でおよそ７２時間激しく撹拌した。反応を塩酸（２Ｎ）で中和して、酢酸エチル（２ｍｌ）で抽出した。有機相を濃縮し、残留物をＭＤＡＰによって精製した。生成物を含有しているフラクションを乾燥まで蒸発させて、所望の化合物を得た。
【０１６９】
方法３を用いて以下の化合物を調製した。
【表３】
2009511527.tif 000030
【０１７０】
方法４：
２−｛［４−（アミノカルボニル）フェニル］アミノ｝−７−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルトリフルオロメタンスルホナート（１１９０ｍｇ、６０％純度）をＩＰＡ（１７ｍｌ）に懸濁させた。この混合物のアリコート（１ｍｌ）をアミン（０．１５ｍｍｏｌ）のＩＰＡ（１ｍｌ）およびＤＩＰＥＡ（１７μｌ）中溶液で処理した。還流条件下で反応を８０℃で一晩撹拌した。反応を窒素流下で濃縮し、その残留物をジオキサン（１ｍｌ）および水酸化ナトリウム（２Ｍ、１ｍｌ）中に溶解させ、得られた二相性の混合物を２５℃でおよそ７２時間激しく撹拌した。ジオキサン相を単離し、濃縮した。残留物をＭＤＡＰによって精製した。適切なフラクションを乾燥まで蒸発させて、所望の生成物を得た。
【０１７１】
方法４を用いて以下の化合物を調製した。
【表４】
2009511527.tif 000031
【０１７２】
（実施例１２）
４−（｛４−［（２，２−ジフルオロプロピル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミドトリフルオロアセタート
【化２６】
2009511527.tif 000032
【０１７３】
２−｛［４−（アミノカルボニル）フェニル］アミノ｝−７−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルトリフルオロメタンスルホナート（３１２ｍｇ）をＩＰＡ（１７ｍｌ）に懸濁させた。この混合物のアリコート（１ｍｌ）を（２，２−ジフルオロプロピル）アミン（１４．３ｍｇ、Ｏａｋｗｏｏｄ  Ｐｒｏｄｕｃｔｓ）のＩＰＡ（１ｍｌ）およびＤＩＰＥＡ（１７μｌ）中溶液で処理した。還流条件下で反応を８０℃で１８時間撹拌した。反応を濃縮し、その残留物をジオキサン（１ｍｌ）および水酸化ナトリウム（２Ｍ、１ｍｌ）中に溶解させ、得られた二相性の混合物を２５℃でおよそ９０時間激しく撹拌した。ジオキサン相を単離し、濃縮した。残留物をＭＤＡＰによって精製した。適切なフラクションを乾燥まで蒸発させて、標題の化合物を得た。LC/MS;Rt 2.43min, MH+ 347。
【０１７４】
（実施例１３）
４−（｛４−［（３−メチルブチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミドトリフルオロアセタート
【化２７】
2009511527.tif 000033
【０１７５】
２−｛［４−（アミノカルボニル）フェニル］アミノ｝−７−［（トリフルオロメチル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−イルトリフルオロメタンスルホナート（２．７ｇ、不純で約４．２ｍｍｏｌ）をＩＰＡ（４２ｍｌ）に懸濁させた。この混合物のアリコート（１ｍｌ）をＩＰＡ（１ｍｌ）およびＤＩＰＥＡ（１７μｌ）中（３−メチルブチル）アミン（１３．１ｍｇ、Ａｌｄｒｉｃｈ）で処理した。還流条件下で反応を８０℃でおよそ７２時間撹拌した。反応を濃縮し（真空遠心分離）、その残留物をメタノール（０．５Ｍ、０．５ｍｌ）に溶解させ、メタノール中ナトリウムメトキシド（０．５Ｍ、０．５ｍｌ）で処理し、得られた溶液を８０℃で一晩撹拌した。反応を濃縮（真空遠心分離）し、残留物をＭＤＡＰによって精製した。生成物を含有しているフラクションを乾燥まで蒸発させて、標題化合物（１３．８ｍｇ）（精製方法１）を得た。LC/MS;Rt 2.63min, MH+ 339。
【０１７６】
以下の化合物を同様にして調製して、上記した精製方法（精製方法１）か、または精製方法２（下記）を用いて精製した。
【０１７７】
精製方法２
ナトリウムメトキシドによる脱保護の後、脱保護された種への変換が不完全であった。反応を濃縮し、残留物をジオキサン（１ｍｌ）および水酸化ナトリウム（２Ｍ、１ｍｌ）中に溶解させた。反応を１６時間激しく撹拌した。ジオキサン相を単離し、濃縮し、残留物をＭＤＡＰによって精製した。適切なフラクションを乾燥まで蒸発させて、所望の生成物を得た。
【表５】
2009511527.tif 000034
【０１７８】
（実施例１９）
４−（｛４−［（１−メチルエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミドトリフルオロアセタート
【化２８】
2009511527.tif 000035
【０１７９】
２−ヨード−Ｎ−（１−メチルエチル）−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（４５．８ｍｇ）、４−アミノベンズアミド（２０．４ｍｇ、Ａｌｄｒｉｃｈ）、炭酸セシウム（９７．５ｍｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ビフェニル（５．８ｍｇ）およびビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（５．８ｍｇ）の混合物をＤＭＦ（２ｍｌ）に懸濁させ、反応を窒素下８０℃で４時間撹拌した。反応をセライトで濾過し、濾液を濃縮した。得られたガム状物を、ＤＭＦ（２ｍｌ）中４−アミノベンズアミド（２０．４ｍｇ）、炭酸セシウム（１３０ｍｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ビフェニル（５．８ｍｇ）およびビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（５．８ｍｇ）で処理し、反応を窒素下８０℃で２時間撹拌した。反応をセライトで濾過し、濃縮した。残留物をメタノール（１ｍｌ）に溶解させ、メタノール中ナトリウムメトキシド（０．５Ｍ、１ｍｌ）で処理し、６０℃で一晩撹拌した。反応を濃縮し、残留物をＭＤＡＰによって精製した。生成物を含有しているフラクションを乾燥まで蒸発させて、標題化合物（６．０ｍｇ）を得た。LC/MS;Rt 2.22min, MH+ 311。
【０１８０】
方法５：
２−ヨード−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（９９２ｍｇ）をＤＭＦ（２０ｍｌ）に懸濁させた。この混合物のアリコート（１ｍｌ）を、アニリン（０．２ｍｍｏｌ）のＤＭＦ（１ｍｌ）溶液、炭酸セシウム（９７．５ｍｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ビフェニル（５．８ｍｇ）およびビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（５．８ｍｇ）で処理した。反応を窒素下８０℃で３時間撹拌した。反応をセライトで濾過し、濃縮（真空遠心分離）し、その残留物をメタノール（１ｍｌ）に溶解させ、メタノール中ナトリウムメトキシド（０．５Ｍ、５００μｌ）で処理し、６０℃で一晩撹拌した。反応を濃縮し、ＭＤＡＰを用いて精製した。適切なフラクションを乾燥まで減量させて、標題の化合物を得た。
【０１８１】
方法５を用いて以下を調製した。
【表６】
2009511527.tif 000036
【０１８２】
（実施例２２）
Ｎ−プロピル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド
【化２９】
2009511527.tif 000037
【０１８３】
メタノール／水（４：１、１２．５ｍｌ）中４−（｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）−Ｎ−プロピルベンズアミド（５５０ｍｇ）および炭酸カリウム（４１４ｍｇ）を還流で５時間加熱した。冷却されたこの反応を水で希釈し、沈殿物を濾過によって単離した。この固形物をエーテルで洗浄すると、標題の化合物が白色の固形物（３１５ｍｇ）として残った。LC/MS;Rt 3.10min, MH+ 393。
【０１８４】
（中間体９）
４−（｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）−Ｎ−プロピルベンズアミド
【化３０】
2009511527.tif 000038
【０１８５】
ｔ−ブタノール（１０ｍｌ）中２−クロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（５００ｍｇ）、４−アミノ−Ｎ−プロピルベンズアミド（２６７ｍｇ、Ｂｕｔｔｐａｒｋ  Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ  Ｌｉｂｒａｒｙ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（６８ｍｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（３０ｍｇ）および炭酸カリウム（２２２ｍｇ）の混合物を窒素下還流で一晩加熱した。冷却された反応を、酢酸エチルと水とに分配させ、有機相を水およびブラインで洗浄した。有機相を乾燥させ（疎水フリット）、真空中で乾燥まで減量させた。残留物を酢酸エチル／シクロヘキサン勾配（１：１５〜７：１）で溶離するシリカカートリッジ（５０ｇ）でのクロマトグラフィーによって精製した。生成物のフラクションから溶媒を蒸発させると、標題の化合物（５５６ｍｇ）が残った。LC/MS;Rt 3.5min, MH+ 547。
【０１８６】
（中間体１０）
２−クロロ−Ｎ−（１−メチルエチル）−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【化３１】
2009511527.tif 000039
【０１８７】
２，４−ジクロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（７０ｇ）のＩＰＡ（９００ｍｌ）中懸濁液にイソプロピルアミン（７０ｍｌ）を加えた。この混合物を１００℃で３０分間撹拌し、その後真空中で濃縮した。この残留物を水（１．５Ｌ）と酢酸エチル（３００ｍｌ）とに分配させた。層を分離し、水性相を酢酸エチル（２×３００ｍｌ）でさらに抽出した。合わせた有機抽出液を硫酸ナトリウムで乾燥させ、真空中で蒸発させた。残留物からエーテルを蒸発させて、標題の化合物を金色の泡状物（７２．２ｇ）として得た。NMR [CDCl2]; δH 8.10,(2H, d), 7.43,(1H, d), 7.33,(2H, d), 6.39,(1H, d), 4.97,(1H, br s), 4.37,(1H, br m), 2.41,(3H, s), 1.27,(6H, d).  LC/MS；Rt 3.59min, MH+ 365, 367。
【０１８８】
（中間体１１）
２，４−ジクロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【化３２】
2009511527.tif 000040
【０１８９】
４−クロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン（８６．８ｇ）、クロロトリメチルシラン（５７０ｍｌ）およびベンジルトリエチルアンモニウムクロリド（１２７．２ｇ）のＤＣＭ（１．１Ｌ）溶液に、窒素雰囲気下で、亜硝酸ｔ−ブチル（５２ｍｌ）を２０分かけて滴下で加えた。１５分間撹拌した後、混合物はおよそ２０℃まで冷却されたので、混合物をアイスバス中で冷却しながら水（１．５Ｌ）で慎重に処理した。この層を分離し、水相をＤＣＭ（２×５００ｍｌ）でさらに抽出した。合わせた有機抽出物を乾燥させ（硫酸ナトリウム）、真空中で蒸発させた。この残留物をエーテルで磨砕して、標題化合物を薄黄色の固形物（７０．６ｇ）として得た。NMR; [CDCl2] δH 8.12,(2H, d), 7.76,(1H, d), 7.37,(2H, d), 6.68,(1H, d), 2.44,(3H, s).  LC/MS；Rt 3.54min, MH+ 342, 344, 346。
【０１９０】
（実施例２３）
Ｎ−メチル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド
【化３３】
2009511527.tif 000041
【０１９１】
メタノール（０．５Ｍ、５ｍｌ）中Ｎ−メチル−４−（｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド（３８５ｍｇ）およびナトリウムメトキシドを８０℃で１．５時間加熱した。反応を一晩放置して室温まで冷却させ、そのメタノールを真空中で蒸発させ、残留物を水で磨砕し、濾過した。この残留の固形物をシリカに吸着させ、シリカカートリッジ（２０ｇ）に適用し、カートリッジを酢酸エチル／シクロヘキサン勾配（３０〜１００％）で溶離した。生成物フラクションを真空下で乾燥まで減量させ、その残留物をエーテル／酢酸エチルで磨砕して、標題化合物を白色の固形物（１１５ｍｇ）として得た。LC/MS;Rt 2.65min, MH+ 365。
【０１９２】
（中間体１２）
Ｎ−メチル−４−（｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド
【化３４】
2009511527.tif 000042
【０１９３】
ｔ−ブタノール（１８ｍｌ）中２−クロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（４０４ｍｇ）、４−アミノ−Ｎ−メチルベンズアミド（１８０ｍｇ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（９１．６ｍｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（４７．３ｍｇ）および炭酸カリウム（１９３ｍｇ）を脱ガスし、次に、窒素下８０℃で一晩加熱した。冷却されたこの反応を酢酸エチルで希釈し、ＳＣＸ−２  ＳＰＥ（５０ｇ）に適用し、カラムを酢酸エチルおよびメタノールで洗浄し、生成物をメタノール／０．８８０アンモニアで溶離した。その溶媒を蒸発させて、標題化合物をベージュ色の泡状物（３８５ｍｇ）として得た。LC/MS;Rt 3.52min, MH+ 519。
【０１９４】
（中間体１３）
４−クロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン
【化３５】
2009511527.tif 000043
【０１９５】
窒素下で、水素化ナトリウム（油中６０％の分散物、２．２ｇ）を、４−クロロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン（８．０ｇ、国際公開第２００４／０２４０８２号パンフレット）の、攪拌した冷却（アイスバス）ＤＭＦ（１２０ｍｌ）中溶液に加えた。１５分後、４−トルエンスルホニルクロリド（１１ｇ）のＤＭＦ（５０ｍｌ）溶液を１０分かけて加えた。この混合物を１５分間撹拌し、１０％塩化アンモニウム溶液（８００ｍｌ）に注ぎ入れ、酢酸エチル（３×２００ｍｌ）の中に抽出させた。合わせた抽出物を水（３×２００ｍｌ）で洗浄し、乾燥（硫酸ナトリウム）させ、真空中で蒸発させて、標題の化合物を黄色の固形物（１５ｇ）として得た。LC/MS;Rt 3.34min, MH+ 325。
【０１９６】
（中間体１４）
４−クロロ−２−ヨード−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン
【化３６】
2009511527.tif 000044
【０１９７】
室温にて、亜硝酸ｔ−ブチル（２３ｍｌ）を、ＴＨＦ（２５０ｍｌ）中４−クロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−アミン（１５ｇ）、ヨウ化第一銅（１０．６ｇ）、ヨウ素（１３．７ｇ）およびジヨードメタン（４４ｍｌ）の撹拌混合物に加えた。次いでこの混合物を２０分かけて８０℃まで加熱し、この温度で４５分間保持した。冷却されたこの反応混合物を亜硫酸ナトリウムの水溶液（１０００ｍｌ）に注ぎ、酢酸エチル（３×３００ｍｌ）の中に抽出させた。合わせた抽出物を水（２×３００ｍｌ）で洗浄し、乾燥（硫酸ナトリウム）させ、その溶媒を蒸発させた。この残留物を、シクロヘキサン／エーテル（３：１）で溶離するシリカ（８００ｇ）でのフラッシュクロマトグラフィーによって精製した。適切なフラクションを蒸発させて、標題化合物を灰色がかった白色の固形物（８．５ｇ）として得た。LC/MS;Rt 3.74min, MH+ 435。
【０１９８】
（中間体１５）
２−クロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【化３７】
2009511527.tif 000045
【０１９９】
２，４−ジクロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（４．０ｇ）、２，２，２−トリフルオロエチルアミン（１．４９ｇ、Ａｌｄｒｉｃｈ）、ＤＩＰＥＡ（３．２３ｍｌ）およびエタノール（１００ｍｌ）の混合物を窒素下９５℃で一晩加熱した。この反応混合物を濃縮し、その残留物を酢酸エチル（５００ｍｌ）に溶解させ、水（５×３００ｍｌ）で洗浄して、その有機相を濃縮した。この残留物をエタノール（１００ｍｌ）に溶解させ、２，２，２−トリフルオロエチルアミン（１．４９ｇ、Ａｌｄｒｉｃｈ）、ＤＩＰＥＡ（３．２３ｍｌ）を加え、この混合物を窒素下９５℃で一晩加熱した。混合物を濃縮し、その残留物を酢酸エチル（４５０ｍｌ）に溶解させ、水（５×２００ｍｌ）で洗浄した。この有機相を乾燥（疎水フリット）させ、濃縮して、標題の化合物（４．４３ｇ）を得た。LC/MS;Rt 3.64min, MH+ 405。
【０２００】
（実施例２４）
Ｎ−プロピル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド
【化３８】
2009511527.tif 000046
【０２０１】
４−（｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）−Ｎ−プロピルベンズアミド（１０１ｇ）にメタノール（１５００ｍｌ）を加え、その後水（５００ｍｌ）および固体炭酸カリウム（７６．５ｇ）を加えた。これを還流まで加熱すると、最初の溶液は急速に透明でなくなった。還流５時間後に反応を冷却し、濾過した。単離された白色の固形物を水（およそ１．５Ｌ）で洗浄し、フィルター上で吸引乾燥させた。この固形物を、体積で５％のメタノールを含有している水（５００ｍｌ）に懸濁させ、さらなる５００ｍｌのメタノール／水を加え、この混合物を１時間十分撹拌し、真空下で濾過し、メタノール／水（２５０ｍｌ）で洗浄した。固形物を吸引乾燥させ、その後４０℃の高真空下でさらに乾燥させて、所望の生成物を白色の固形物（６０．３ｇ）として得た。LC/MS;Rt 2.90min, MH+ 393. NMR; [D6-DMSO] δH 11.22,(1H, s), 9.10,(1H, s), 8.19,(1H, t), 7.93-7.86,(3H, m), 7.73,(2H, d), 6.89,(1H, m), 6.51,(1H, m), 4.38,(2H, m), 3.20,(2H, q), 1.53,(2H, m), 0.89,(3H, t)。
【０２０２】
（中間体１６）
４−（｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）−Ｎ−プロピルベンズアミド
【化３９】
2009511527.tif 000047
【０２０３】
４−アミノ−Ｎ−プロピルベンズアミド（３６．７ｇ）に２−クロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（６９．４ｇ）、固体炭酸カリウム（３４．４ｇ）および窒素パージ済みｔ−ブタノール（１７００ｍｌ）を加えた。この混合物を窒素で１０分間パージし、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（３．１４ｇ）および２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピル’ビフェニル（３．２８ｇ）を加えた。光が入らないようにしながら、窒素下で混合物を８５℃で一晩加熱した。反応を冷却し、酢酸エチルと水とに分配させ、有機相を水、ブラインで洗浄し、乾燥させ、真空中で蒸発させて、黒っぽい赤色の油／泡状物とした。この粗生成物を温酢酸エチル（５００ｍｌ）に溶解させ、シクロヘキサン（５００ｍｌ）を少しずつ加えた。得られた固形物を真空下の濾過によって単離し、単離したベージュ色の固形物をシクロヘキサンで洗浄した。この粘着性の固形物を酢酸エチルに溶解させ、それを蒸発させて固形物を得、酢酸エチル／ＤＣＭ勾配（０〜５０％）で溶離するシリカ（１．５ｋｇ）でのクロマトグラフィーによってこれを精製した。適切なフラクションからその溶媒を蒸発させて、所望の生成物を白色の泡状物（７０．７６ｇ）として得た。LC/MS;Rt 3.54min、MH+ 547. NMR; [D6-DMSO] δH 9.51,(1H, s), 8.34-8.29,(2H, m), 7.99-7.96,(4H, m), 7.84,(2H, d), 7.37-7.36,(3H, m), 6.85,(1H, d), 4.36,(2H, m), 3.23,(2H, q), 2.31,(3H, s), 1.55,(2H, m), 0.90,(3H, t) ＋酢酸エチル。
【０２０４】
（中間体１７）
２−クロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【化４０】
2009511527.tif 000048
【０２０５】
エタノール（１９００ｍｌ）に懸濁させた２，４−ジクロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（１４０ｇ）にＤＩＰＥＡ（１０５．９ｇ）を加え、その後トリフルオロエチルアミン（８１．２ｇ）を加えた。水コンデンサーに加えてドライアイスコンデンサーを用いて、この混合物を還流まで加熱した。４．５時間後にトリフルオロエチルアミン（３３ｍｌ）を加えた。反応を７５℃で一晩撹拌した。少し冷却した後トリフルオロエチルアミン（３３ｍｌ）を加え、加熱を続けた。２３．５時間後、反応を冷却し、揮発分を蒸発させた。得られた油状物を酢酸エチル（１１００ｍｌ）に溶解させ、水、ブラインで洗浄し、乾燥させ、蒸発させて、茶色の油状物とした。これは一晩で凝固した。この若干ワックス状の固形物を押し潰し、エーテル（３５０ｍｌ）中で１５分間十分撹拌した。ヘキサンを加え（３００ｍｌ）、そのスラリーを真空下で濾過した。この固形物をエーテル／ヘキサン（１：１、３００ｍｌ）で洗浄し、吸引乾燥させ、その後高真空下で乾燥させて、所望の生成物を薄黄色〜ベージュ色の固形物（１１１．４ｇ）として得た。LC/MS;Rt 3.56min, MH+ 405. NMR; [D6-DMSO] δH 8.90,(1H, m), 7.96,(2H, d), 7.65,(1H, d), 7.46,(2H, d), 6.96,(1H, d), 4.30,(2H, m), 2.37,(3H, s)。
【０２０６】
１回目の収穫物からの濾液を蒸発させ、上記と同じように再作業（×２）して、生成物の２回目の収穫物（２７．５９ｇ）を得た。
【０２０７】
（中間体１８）
４−アミノ−Ｎ−プロピルベンズアミド
【化４１】
2009511527.tif 000049
【０２０８】
パラジウム／炭素（１０％、５０％湿潤、４ｇ）に酢酸エチル（１００ｍｌ）を加え、続いて酢酸エチル（１６００ｍｌ）中ニトロアミド（１００ｇ、Ｂｕｔｔ  Ｐａｒｋ）を加え、この混合物を室温および大気圧で一晩水素化した。反応を濾過し、触媒を酢酸エチルで洗浄した。濾液および洗浄液を乾燥（硫酸マグネシウム）させ、濾過し、蒸発させて、所望の生成物を薄い金色の油状物として得、これを真空下で１時間さらに乾燥させた（８９．０ｇ）。LC/MS;Rt 1.85min, MH+ 179. NMR; [D6-DMSO] δH 7.96,(1H, t), 7.56,(2H, d), 6.52,(2H, d), 5.56,(2H, br s), 3.15,(2H, q), 1.49,(2H, m), 0.86,(3H, t)。
【０２０９】
（実施例２５）
Ｎ−プロピル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド４−メチルベンゼンスルホナート
【化４２】
2009511527.tif 000050
【０２１０】
Ｎ−プロピル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド（６１．５ｇ）を乾燥ＴＨＦ（１０５０ｍｌ）に懸濁させ、この混合物を窒素下４０℃で攪拌した。ｐ−トルエンスルホン酸一水和物（２９．８ｇ、Ａｌｄｒｉｃｈ）の乾燥ＴＨＦ（１８５ｍｌ）溶液を滴下で加えた。最初の５０ｍｌを加えた後、この混合物を少しのＮ−プロピル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド４−メチルベンゼンスルホナートでシード化した。反応温度をおよそ４０℃に保ちながら、ｐ−トルエンスルホン酸の残っている分をおよそ４５分かけて滴下で加えた。添加が完了した後、反応を４０℃でさらに１時間攪拌し、２時間かけて０℃まで冷却し、０℃に０．５時間保ち、その後周囲温度まで０．５時間かけて温めた。この結晶を濾過で取り出し、ＴＨＦ（５００ｍｌ）で洗浄し、４０℃真空中で一晩乾燥させた。この結晶を粉砕し、４０℃でさらなる一夜再乾燥させて、所望生成物（８７．５ｇ）を得た。NMR; [D6-DMSO] δH 11.71,(1H, s), 9.78,(1H, br s), 8.94,(1H, br s), 8.35,(1H, t), 7.83,(2H, d), 7.74,(2H, d), 7.51,(2H, d), 7.13,(2H, d), 7.02,(1H, s), 6.68,(1H, s), 4.41,(2H, m), 3.31,(2H, q), 2.29,(3H, s), 1.53,(2H, m), 0.89,(3H, t)。
【０２１１】
（実施例２６）
４−（｛４−［（１−メチルエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド
【化４３】
2009511527.tif 000051
【０２１２】
メタノール（１２５０ｍｌ）中４−（｛４−［（１−メチルエチル）アミノ］−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド（５０．５２ｇ）に無水炭酸カリウム（４５ｇ）および水（２５０ｍｌ）を加えた。この懸濁液を加熱して還流した。４．７５時間後、反応を冷却し、そのメタノールを真空中で蒸発させ、この水性残留物を酢酸エチル（１Ｌ、その後３×１００ｍｌ）で抽出した。その合わせた有機物をブラインで洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）させ、濾過し、その溶媒を蒸発させて、茶色の泡状物を得た。酢酸エチルで、その後メタノール（０〜５％）の割合を増やして溶離するシリカ（１ｋｇ）でのクロマトグラフィーによってこれを精製し、その適切なフラクションから溶媒を蒸発させて、所望の生成物を若干緑色の泡状物（３２．３ｇ）として得た。LC/MS; Rt 2.21min, MH+ 311。
【０２１３】
この物質を温めながらアセトン（４００ｍｌ）に溶解させ、混合物が曇ったままになるまで水をゆっくり加えた（全体積およそ１．３Ｌ）。スクラッチすると結晶が始まり、この混合物を、栓をせずに３日間そのままにし、アイスバス中でおよそ２時間冷却し、その結晶を濾過によって単離した。この固形物を少しの水で洗浄し、その後４０℃の高真空下で一晩乾燥させて、薄黄色っぽい固形物（２７．８ｇ）を得た。LC/MS;Rt 2.25min, MH+ 311. NMR; [D6-DMSO] δH 11.03,(1H, s), 8.93,(1H, s), 7.91,(2H, d), 7.74,(2H, d), 7.72,(1H, br s), 7.04,(2H, br s), 6.80,(1H, s), 6.47,(1H, s), 4.44,(1H, m), 1.25,(6H, d)およびアセトン。
【０２１４】
（中間体１９）
４−（｛４−［（１−メチルエチル）アミノ］−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド
【化４４】
2009511527.tif 000052
【０２１５】
２−クロロ−Ｎ−（１−メチルエチル）−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（４５ｇ）に４−アミノベンズアミド（２０．１ｇ）、窒素パージ済みｔ−ブタノール（１１２５ｍｌ）、無水炭酸カリウム（２４．７ｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（２．３５ｇ）およびトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（２．２６ｇ）を加えた。光が入らないようにしながらこの混合物を窒素下で加熱して還流した。５．５時間後に混合物を若干冷却し、その溶媒を蒸発させると赤茶色の油／泡状物が残った。この残留物を水（１０００ｍｌ）で希釈し、酢酸エチルで抽出した。合わせた有機物をブラインで洗浄し、乾燥（硫酸マグネシウム）させ、セライトで濾過し、その溶媒を蒸発させると、赤茶色の油／泡状物が残った。この物質を、ＤＣＭ／酢酸エチル（２：１から始めて１：１に、最終は２：３で）で溶離するシリカ（１６００ｇ）でのカラムクロマトグラフィーによって精製した。適切なフラクションからその溶媒を蒸発させて、所望化合物を薄いピンク〜ベージュ色の固形物（４２．１ｇ）を得た。LC/MS;Rt 3.32min, MH+ 465. NMR; [D6-DMSO] δH 9.31,(1H, s), 7.97,(4H, d), 7.83,(2H, d), 7.80,(1H, br s), 7.47, (1H, d), 7.38,(2H, d), 7.28,(1H, d), 7.11,(1H, br s), 6.80,(1H, d), 4.37,(1H, m), 2.31,(3H, s), 1.21,(6H, d)および酢酸エチル。
【０２１６】
（実施例２７）
４−（｛４−［（１，１−ジメチルエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）−Ｎ−メチルベンズアミドトリフルオロアセタート
【化４５】
2009511527.tif 000053
【０２１７】
Ｎ−（１，１−ジメチルエチル）−２−ヨード−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（０．８ｍｍｏｌ）をＤＭＦ（１６ｍｌ）に溶解させた。ビス（ジベンジリデンアセトン）パラジウム（１０ｍｏｌ％、Ａｌｄｒｉｃｈ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）ビフェニル（１５ｍｏｌ％）、炭酸セシウム（０．３ｍｍｏｌ）および４−アミノ−Ｎ−メチルベンズアミド（０．１５ｍｍｏｌ）をこの溶液（２ｍｌ）のアリコートと合わせた。反応を８０℃で２時間加熱し、冷却させ、セライトで濾過し、濃縮した。反応をメタノール（１．５ｍｌ）に溶解させ、メタノール（０．５Ｍ、５００μｌ）中ナトリウムメトキシドで処理し、７０℃で２時間撹拌し、室温で一晩静置しておいた。反応をさらに５時間加熱し、濃縮し、ＭＤＡＰを用いて精製した。生成物を含有しているフラクションを乾燥まで蒸発させて、標題の化合物（３ｍｇ）を得た。LC/MS;Rt 2.58min, MH+ 339。
【０２１８】
（中間体２０）
Ｎ−（１，１−ジメチルエチル）−２−ヨード−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【化４６】
2009511527.tif 000054
【０２１９】
エタノール（１０ｍｌ）中４−クロロ−２−ヨード−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（５００ｍｇ）をｔ−ブチルアミン（６１０μｌ）およびＤＩＰＥＡ（４１０μｌ）で処理した。この反応を８０℃で６．５時間撹拌し、週末にかけて室温に静置しておいた。ｔ−ブチルアミン（１００μｌ）を加え、反応を８０℃で２時間加熱した。反応を濃縮し、酢酸エチル／シクロヘキサン勾配（０〜１００％）で３０分かけて溶離するシリカカートリッジ（５０ｇ）でのクロマトグラフィーによって精製した。適切なフラクションを合わせ、乾燥まで減量させると、標題化合物（０．４ｇ）が残った。LC/MS;Rt 4.01min, MH+ 471。
【０２２０】
（実施例２８）
Ｎ−（１−メチルエチル）−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド
【化４７】
2009511527.tif 000055
【０２２１】
栓をしたフラスコ中でＤＭＦ（０．７５ｍｌ）中４−（｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）安息香酸（６０ｍｇ）、ＴＢＴＵ（４２ｍｇ）およびＤＩＰＥＡ（０．０６２ｍｌ）を室温で撹拌した。３０分後にイソプロピルアミン（０．１０１ｍｌ）を加え、反応を１時間撹拌した。反応を真空中で乾燥まで減量させ、その残留物をメタノールで共沸させた。メタノールに溶解させたこの残留物を前処理してあるＳＣＸ−２カートリッジ（５ｇ）に適用し、これをメタノールで洗浄し、生成物をメタノール中２Ｎアンモニアで溶離した。塩基性のフラクションを乾燥まで減量させて、その残留物を水（０．５ｍｌ）およびメタノール（１．５ｍｌ）中に溶解させ、炭酸カリウム（４１ｍｇ）を加えた。この混合物を８５℃で６時間撹拌した。炭酸カリウム（３０ｍｇ）を加え、反応を８５℃でさらに１５時間撹拌した。反応を濾過し、その固形物を水およびエーテルで洗浄し、真空中で乾燥させて、標題の化合物を灰色っぽい白色の固形物（１７ｍｇ）として得た。LC/MS;MH+ 393, Rt 3.03min。
【０２２２】
（中間体２１）
４−（｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）安息香酸
【化４８】
2009511527.tif 000056
【０２２３】
ＤＣＭ（６ｍｌ）中の１，１−ジメチルエチル４−（｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンゾアート（１５０ｍｇ）をＴＦＡ（１ｍｌ）で処理し、室温で１．７５時間撹拌した。揮発分を真空下で蒸発させ、その残留固形物を酢酸エチル（２５ｍｌ）に溶解させた。この溶液を水（２×２５ｍｌ）で洗浄し、乾燥（疎水フリット）させた。溶媒を蒸発させると、標題の化合物が緑色の固形物（１３０ｍｇ）として残った。LC/MS;MH+ 506, Rt 3.72min。
【０２２４】
（中間体２２）
１，１−ジメチルエチル−４−（｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンゾアート
【化４９】
2009511527.tif 000057
【０２２５】
ｔ−ブタノール（５ｍｌ）中２−クロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（２００ｍｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（１１．８ｍｇ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（４５．２ｍｇ）、炭酸カリウム（９５．６ｍｇ）およびｔ−ブチル４−アミノベンゾアート（１１４．５ｍｇ、Ｆｌｕｋａ）の混合物を脱ガスさせた。容器を密封し、マイクロ波加熱機中１２０℃で３時間照射した。この反応混合物を乾燥まで減量させ、その残留物を酢酸エチルに懸濁させた。この懸濁液をＳＣＸ−２カートリッジ（１０ｇ、メタノールで、その後酢酸エチルで前処理）に適用し、酢酸エチル、メタノール、およびメタノール中２Ｎアンモニアで溶離した。アンモニアフラクションを濃縮し、メタノールに再溶解させ、フロリシル（Ｆｌｏｒｉｓｉｌ）に吸着させた。酢酸エチル／シクロヘキサン勾配（０〜５０％）で溶離するシリカカートリッジ（１００ｇ）でのクロマトグラフィーによってこれを精製した。適切なフラクションを合わせ、乾燥まで減量させ、エーテルで共沸させて、標題の化合物を黄色の固形物（１５０ｍｇ）として得た。LC/MS;MH+ 562, Rt 4.00min。
【０２２６】
（実施例２９）
Ｎ−（２−メチルプロピル）−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド
【化５０】
2009511527.tif 000058
【０２２７】
栓をしたフラスコ中でＤＭＦ（０．７５ｍｌ）中４−（｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）安息香酸（６０ｍｇ）、ＴＢＴＵ（４２ｍｇ）およびＤＩＰＥＡ（０．０６２ｍｌ）を室温で撹拌した。３０分後にイソブチルアミン（０．１１７ｍｌ）を加え、混合物を１時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させ、その残留物をメタノールで共沸させた。メタノール中この残留物を前処理してあるＳＣＸ−２カートリッジ（５ｇ）に適用し、カートリッジをメタノールで洗浄し、生成物をメタノール中２Ｎアンモニアで溶離した。塩基性のフラクションを乾燥まで減量させて、その残留物を水（０．５ｍｌ）およびメタノール（１．５ｍｌ）中に溶解させた。炭酸カリウム（６９ｍｇ）を加え、この混合物を８５℃で７時間撹拌した。炭酸カリウム（６９ｍｇ）を加え、この混合物を８５℃で７時間撹拌した。混合物を濾過し、その固形物を水およびエーテルで洗浄した。洗浄を繰り返し、エーテルフラクションを固形物と一緒に合わせ、乾燥まで減量させた。この残留の固形物を温メタノールに溶解させ、ＳＣＸ−２カートリッジ（５ｇ、メタノールで前処理）に適用した。カートリッジをメタノールで洗浄し、生成物をメタノール中２Ｎアンモニア溶液で溶離した。このアンモニアフラクションを乾燥まで減量させると、標題の化合物が白色の固形物（２３．２ｍｇ）として残った。LC/MS;MH+ 407, Rt 3.09min。
【０２２８】
（実施例３０）
Ｎ−エチル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド
【化５１】
2009511527.tif 000059
【０２２９】
メタノール（１０ｍｌ）および水（５ｍｌ）中Ｎ−エチル−４−（｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド（３０６ｍｇ）および炭酸カリウム（７９４ｍｇ）を８５℃で２．５時間撹拌した。反応を周囲温度まで冷却させ、その溶媒を真空下で蒸発させた。この固形物をメタノールに懸濁させ、濾過し、その濾液をＳＣＸ−２カートリッジ（２０ｇ、メタノールで前処理）に適用した。カートリッジをメタノールで洗浄し、生成物をメタノール中２Ｎアンモニアで溶離した。アンモニアのフラクションを合わせ、乾燥まで減量させた。この残留の固形物をメタノールに溶解させ、フロリシル（Ｆｌｏｒｉｓｉｌ）に吸着させた。ＤＣＭ／メタノール勾配（０〜２５％）で３０分かけて溶離するシリカカートリッジ（５０ｇ）でのクロマトグラフィーによってこの物質を精製した。溶離したフラクションのうちの１つに沈殿物が生成し、これを濾過によって単離し、ＤＣＭで洗浄した。これを真空中で乾燥させると、標題の化合物が白色／桃色の固形物（１２ｍｇ）として得られた。LC/MS;MH+ 379, Rt 2.81min。
【０２３０】
（中間体２３）
Ｎ−エチル−４−（｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド
【化５２】
2009511527.tif 000060
【０２３１】
ｔ−ブタノール（１２ｍｌ）中２−クロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（３５０ｍｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（２１ｍｇ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（４８ｍｇ）、炭酸カリウム（１６７ｍｇ）および４−（エチルカルバミル）アニリン（１７０ｍｇ、Ｂｕｔｔ  Ｐａｒｋ）を窒素下８０℃で一晩加熱した。反応を加熱源から取り出し、内容物をマイクロ波加熱機容器に移した。混合物を脱ガスし、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（４８ｍｇ）を加えた。密封容器中でマイクロ波により混合物を１０５℃で２時間加熱した。反応混合物を窒素下で脱ガスし、マイクロ波加熱機中でもう一度１０５℃で１．５時間加熱した。反応混合物を真空中で濃縮し、その残留の固形物を酢酸エチルに懸濁させた。セライトによる濾過の後、濾液をフロリシル（Ｆｌｏｒｉｓｉｌ）に前吸収させ、酢酸エチル／シクロヘキサン勾配（０〜１００％）で６０分かけて溶離するシリカカートリッジ（１００ｇ）でのクロマトグラフィーによって精製した。適切なフラクションを合わせ、蒸発させると、標題の化合物を黄色の油状物（３０６ｍｇ）として得た。LC/MS;MH+ 533, Rt 3.61min。
【０２３２】
（実施例３１）
Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド
【化５３】
2009511527.tif 000061
【０２３３】
ＩＰＡ（３ｍｌ）中Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−（｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド（１１４ｍｇ）を水酸化ナトリウム水溶液（２Ｎ、０．６４ｍｌ）で処理し、８０℃で６時間加熱した。温度を７０℃まで下げ、反応を一晩撹拌した。加熱の２２時間後に反応混合物を室温まで冷却し、その溶媒を真空下で蒸発させた。この残留物を酢酸エチルに懸濁させ、ＳＣＸ−２カートリッジ（５ｇ、メタノールおよび酢酸エチルで前処理）に適用した。カートリッジを酢酸エチル、メタノールで洗浄し、生成物をメタノール中２Ｎアンモニアで溶離した。このアンモニアフラクションから溶媒を蒸発させ、その残留の油状物をメタノールに溶解させ、フロリシル（Ｆｌｏｒｉｓｉｌ）に吸着させた。シクロヘキサン中酢酸エチル／メタノール（１：１）の勾配（１０〜１００％）で溶離するシリカカートリッジ（２０ｇ）でのクロマトグラフィーによってこの物質を精製した。適切なフラクションを合わせ、その溶媒を蒸発させると、茶色の固形物が残った。エーテルで磨砕し、窒素下で乾燥させて、標題の化合物を黄色／茶色の固形物（３７．２ｍｇ）として得た。LC/MS;MH+ 379, Rt 2.64min。
【０２３４】
（中間体２４）
Ｎ，Ｎ−ジメチル−４−（｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド
【化５４】
2009511527.tif 000062
【０２３５】
ｔ−ブタノール（２ｍｌ）中２−クロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（１１７ｍｇ）、４−（Ｎ，Ｎ−ジメチルカルバモイル）アニリン（５７ｍｇ、Ａｐｏｌｌｏ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ  Ｌｔｄ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（１６ｍｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（６．９ｍｇ）および炭酸カリウム（５５．９ｍｇ）を密封容器中でマイクロ波放射機により１２０℃で１時間加熱した。この反応混合物を酢酸エチルで希釈し、セライトのパッドで濾過した。この濾液をＳＣＸ−２カートリッジ（５ｇ、メタノールおよび酢酸エチルで前処理）に適用した。カートリッジを酢酸エチル、メタノールで洗浄し、生成物をメタノール中２Ｎアンモニア溶液で溶離した。アンモニアフラクションを真空下で乾燥まで減量させ、メタノールからフロリシル（Ｆｌｏｒｉｓｉｌ）に吸着させた。酢酸エチル／シクロヘキサン勾配（２５〜１００％）で溶離するシリカカートリッジ（２０ｇ）でのクロマトグラフィーによってこれを精製した。適切なフラクションを合わせ、その溶媒を蒸発させ、エーテルで共沸させて、標題の化合物をガラス質の固形物（１１４ｍｇ）として得た。LC/MS;MH+ 533, Rt 3.41min。
【０２３６】
（実施例３２）
Ｎ−（シクロプロピルメチル）−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド
【化５５】
2009511527.tif 000063
【０２３７】
ｔ−ブタノール（１．５ｍｌ）中２−クロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（１００ｍｇ）、４−アミノ−Ｎ−（シクロプロピルメチル）ベンズアミド塩酸塩（６２．８ｍｇ）トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（１３．６ｍｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（５．９ｍｇ）および炭酸カリウム（９１．８ｍｇ）を撹拌し、マイクロ波加熱機の密封容器に入れて１２０℃で１時間照射した。混合物を１５０℃でさらに１時間加熱した。トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（７ｍｇ）および炭酸カリウム（１７ｍｇ）をこの反応に加えた。容器を密封し、マイクロ波加熱機中で混合物を１５０℃で４５分間加熱した。反応混合物を酢酸エチル（２ｍｌ）で希釈し、セライトで濾過した。この濾液をＳＣＸ−２カートリッジ（５ｇ、メタノールおよび酢酸エチルで前処理）に適用した。カートリッジを酢酸エチル、メタノールで洗浄し、生成物をメタノール中２Ｎアンモニア溶液で溶離した。このアンモニアフラクションを減圧下で乾燥まで減量させ、その残留物をＩＰＡ（１．５ｍｌ）に溶解させた。この溶液を水酸化ナトリウム水溶液（２Ｎ、１ｍｌ）で処理し、その混合物を８０℃で１６時間撹拌した。溶媒を窒素の流れの下で蒸発させ、その残留物をメタノールに懸濁させた。この懸濁液をＳＣＸ−２カートリッジ（２ｇ、メタノールで前処理）に適用した。カートリッジの上部に保持された固形物を窒素下で乾燥させて、標題化合物を灰色っぽい白色の固形物（３３ｍｇ）として得た。LC/MS;MH+ 405, Rt 2.89min。
【０２３８】
（中間体２５）
４−アミノ−Ｎ−（シクロプロピルメチル）ベンズアミド塩酸塩
【化５６】
2009511527.tif 000064
【０２３９】
Ｎ−（シクロプロピルメチル）−４−ニトロベンズアミド（２３．８ｇ）をエタノールに溶解させ、パラジウム／炭素（１０％、１．８ｇ）で水素化した。反応を濾過し、そのエタノールを真空中で蒸発させ、その残留のガム状物を酢酸エチルと重炭酸ナトリウム溶液とに分配させた。有機相を真空中で乾燥まで減量させ、ジオキサン中塩酸（４Ｎ）を加えた。この白色の固形物を濾過により単離し、エーテルで洗浄し、真空中で乾燥させて、標題の化合物（１５．５ｇ）を得た。NMR; [D6-DMSO] δH 9-8,(3H, bm), 7.81,(2H, d), 7.11,(2H, d), 3.12,(2H, m), 1.01,(1H, m), 0.42,(2H, m), 0.22 (2H, m)。
【０２４０】
（中間体２６）
Ｎ−（シクロプロピルメチル）−４−ニトロベンズアミド
【化５７】
2009511527.tif 000065
【０２４１】
４−ニトロベンゾイルクロリド（２０ｇ、Ａｌｄｒｉｃｈ）をＤＣＭ（５００ｍｌ）に溶解させ、トリエチルアミン（１６．５ｍｌ）を加えた。シクロプロパンメチルアミン（２１ｍｌ、Ａｌｄｒｉｃｈ）を加え（発熱）、反応を窒素下室温で一晩撹拌した。揮発分を蒸発させ、その残留物を真空中で乾燥させて、標題の化合物を得た。LC/MS;MH+ 221, Rt 2.7min。
【０２４２】
（実施例３３）
Ｎ２−｛４−［（４−メチル−１−ピペラジニル）カルボニル］フェニル｝−Ｎ４−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン
【化５８】
2009511527.tif 000066
【０２４３】
ｔ−ブタノール（１．５ｍｌ）中２−クロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（１００ｍｇ）、１−（４−アミノベンゾイル）−４−メチルピペラジン（６５．１ｍｇ、Ｂｕｔｔ  Ｐａｒｋ  Ｌｔｄ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（１３．６ｍｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（５．９ｍｇ）および炭酸カリウム（４７．８ｍｇ）を撹拌し、密封容器に入れてマイクロ波により１２０℃で１時間照射した。この混合物をさらに３０分間１５０℃で加熱した。反応混合物を酢酸エチル（２ｍｌ）で希釈し、セライトで濾過した。この濾液をＳＣＸ−２カートリッジ（５ｇ、メタノールおよび酢酸エチルで前処理）に適用した。カートリッジを酢酸エチル、メタノールで洗浄し、生成物をメタノール中２Ｎアンモニア溶液で溶離した。このアンモニアフラクションを真空中で乾燥まで減量させ、その残留物をＩＰＡ（１．５ｍｌ）に溶解させた。この溶液を水酸化ナトリウム水溶液（２Ｎ、１ｍｌ）で処理し、８０℃で１６時間撹拌した。溶媒を窒素の流れの下で蒸発させ、その残留物をメタノールに懸濁させた。この懸濁液をＳＣＸ−２カートリッジ（２ｇ、メタノールで前処理）に適用した。生成物をメタノールに溶離させ、これを真空下で濃縮した。この残留物をＭＤＡＰで精製し、その適切なフラクションを合わせ、蒸発させた。サンプルをメタノールからフロリシル（Ｆｌｏｒｉｓｉｌ）に吸着させ、シリカカートリッジ（２０ｇ）に適用した。これをシクロヘキサン中酢酸エチル／メタノール（１：１）の勾配（１０〜１００％）で溶離した。適切なフラクションを合わせ、その溶媒を蒸発させて、標題の化合物を得た。LC/MS;MH+ 434, Rt 2.03min。
【０２４４】
方法６：
無水ＤＭＦ（３．７５ｍｌ）中４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）安息香酸（５２７ｍｇ）をＤＩＰＥＡ（０．７８ｍｌ）およびＴＢＴＵ（５３０ｍｇ）で処理し、室温で３０分間そのままにしておいた。この溶液の一部（０．３０２ｍｌ）をアミン（０．２０ｍＭ）のＤＭＦ（０．２５ｍｌ）溶液に加えた。この反応混合物を窒素下室温で一晩そのままにしておいた。混合物を真空遠心分離で乾燥まで減量させ、その残留物をＭＤＡＰによって精製した。真空遠心分離を用いてその適切なフラクションを蒸発させて、所望生成物を得た。
【０２４５】
方法６を用いて以下の化合物を調製した。
【表７】
2009511527.tif 000067
2009511527.tif 000068
【０２４６】
（中間体２７）
４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）安息香酸
【化５９】
2009511527.tif 000069
【０２４７】
エチル４−（｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンゾアート（２．５ｇ）をエタノール（６０ｍｌ）に懸濁させ、水酸化ナトリウム水溶液（２Ｎ、１４．１ｍｌ）で処理した。この混合物を８０℃で３時間撹拌し、周囲温度まで冷却させた。反応混合物をアイスバス中で撹拌しながら氷酢酸で酸性化した。この沈殿物を濾過によって単離し、アセトンに溶解させ、濾過し、そのアセトンを蒸発させた。この残留物を酢酸エチル＋数滴のアセトンおよび水から再結晶化させた。沈殿した固形物を濾過によって単離して、標題の化合物（１．０ｇ）を得た。LC/MS;MH+ 351.98, Rt 2.87min。
【０２４８】
（中間体２８）
エチル４−（｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンゾアート
【化６０】
2009511527.tif 000070
【０２４９】
ｔ−ブタノール（４０ｍｌ）中２−クロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（７．５ｇ）、エチル−４−アミノベンゾアート（３．３７ｇ、Ａｌｄｒｉｃｈ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（５１０ｍｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（１４２ｍｇ）および炭酸カリウム（３．５９ｇ）を窒素下１１０℃で一晩加熱した。溶媒を真空中で蒸発させ、その残留物を酢酸エチルに溶解させた。この溶液をセライトで濾過し、その濾液を乾燥まで減量させた。この残留物をエタノールから結晶化させ、その結晶を濾過によって単離した。これらを沸騰エタノールに溶解させ、この溶液を初めは室温まで冷却させ、その後およそ４℃にて５時間冷却させておいた。得られた結晶からエタノールを抜き、これをこの後さらにシンター（ｓｉｎｔｅｒ）で乾燥させて、標題の化合物（４．７ｇ）を得た。LC/MS;MH+ 533.98, Rt 3.84min。
【０２５０】
方法７：
無水ＤＭＦ（６ｍｌ）中４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）安息香酸（８４２ｍｇ）をＴＢＴＵ（８４７．２ｍｇ）ＤＩＰＥＡ（１．７ｍｌ）で処理し、室温で３０分間そのままにしておいた。この溶液の一部（０．３２ｍｌ）をアミン（０．２０ｍＭ）のＤＭＦ（０．２５ｍｌ）溶液に加えた。この反応混合物を室温で３．５日間そのままにしておいた。さらにＴＢＴＵ（３２ｍｇ）およびＤＩＰＥＡ（０．０１７ｍｌ）を加え、反応を室温で一晩そのままにしておいた。反応をＭＤＡＰによって精製し、適切なフラクションを合わせ、蒸発させて、所望の生成物を得た。
【０２５１】
方法７を用いて以下の化合物を調製した。
【表８】
2009511527.tif 000071
【０２５２】
（実施例４３）
４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド
【化６１】
2009511527.tif 000072
【０２５３】
４−（｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド（２２９ｍｇ）をメタノール（０．５Ｍ、３ｍｌ）中ナトリウムメトキシドに溶解させ、この溶液を窒素下８０℃でおよそ１時間加熱し、その後一晩室温でそのままにしておいた。反応を水（およそ５ｍｌ）で希釈し、その沈殿物を濾過によって単離した。この固形物を水で洗浄し、シンター（ｓｉｎｔｅｒ）で吸引乾燥し、さらに真空下４５℃で乾燥させて、所望の生成物をクリーム色の固形物（１３３ｍｇ）として得た。LC/MS;MH+ 350.93, Rt 2.51min。
【０２５４】
（中間体２９）
４−（｛７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド
【化６２】
2009511527.tif 000073
【０２５５】
２−クロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（２００ｍｇ）、４−アミノベンズアミド（８１ｍｇ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（１２ｍｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（６ｍｇ）および炭酸カリウム（１００ｍｇ）をｔ−ブタノール（７．５ｍｌ）に混合し、この混合物を脱ガスし、窒素下８５℃でおよそ２０時間加熱した。この反応にトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（１２ｍｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（６ｍｇ）を加え、加熱を８５℃で３時間、その後９５℃でおよそ２０時間続けた。冷却されたこの反応を酢酸エチルで希釈し、シリカに吸着させ、シリカカートリッジ（２０ｇ）に適用した。カートリッジを酢酸エチル／シクロヘキサン勾配（０〜１００％）で溶離し、その適切なフラクションを合わせ、その溶媒を真空中で蒸発させて、所望の生成物を薄黄色の固形物（２３０ｍｇ）として得た。NMR; [D6-DMSO] δH 9.51,(1H, s), 8.32,(1H, t), 7.98-7.93,(4H, m), 7.86-7.84,(3H, m), 7.40-7.37,(3H, m), 7.15,(1H, bs), 6.85,(1H, d), 4.35,(2H, m), 2.32,(3H, s)。
【０２５６】
（実施例４４）
４−｛［４−（メチルアミノ）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル］アミノ｝−Ｎ−プロピルベンズアミド
【化６３】
2009511527.tif 000074
【０２５７】
２−クロロ−Ｎ−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（１００ｍｇ）、４−アミノ−Ｎ−プロピルベンズアミド（９８ｍｇ）、トリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（５０．４ｍｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（３９．１ｍｇ）、炭酸カリウム（１５２ｍｇ）およびｔ−ブタノール（１０ｍｌ）を合わせ、密封容器に入れてマイクロ波加熱機により１４０℃で４０分間加熱した。反応をエタノールで希釈し、セライトで濾過し、その濾液を窒素の流れの下で乾燥まで減量させた。この残留物をＤＣＭ／メタノールに溶解させ、ＳＣＸ−２カートリッジ（１０ｇ、メタノールで前処理）に入れ込んだ。カートリッジをメタノールおよびメタノール中２Ｍアンモニアで溶離した。そのメタノール性アンモニアフラクションから溶媒を窒素の流れの下で蒸発させた。この残留物を、メタノール／ＤＣＭ（０〜１５％）＋１％トリエチルアミンの勾配で３０分かけて溶離するシリカカートリッジ（２０ｇ）でのクロマトグラフィーによって精製して、標題の化合物（４１ｍｇ）を得た。LC/MS;Rt 2.32min, MH+ 325。
【０２５８】
（中間体３０）
２−クロロ−Ｎ−メチル−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン
【化６４】
2009511527.tif 000075
【０２５９】
２，４−ジクロロ−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン（４００ｍｇ、Ｐｈａｒｍａ  Ｌａｂ  Ｐｒｏｄｕｃｔ  Ｌｉｓｔ）およびメチルアミンのエタノール（３３％、１０ｍｌ）溶液を密封容器に入れてマイクロ波加熱機により８０℃で１０分間加熱した。揮発分を真空中で蒸発させ、その残留の固形物を水に懸濁させ、５分間撹拌した。この固形物を濾過によって単離し、４０℃の真空下で一晩乾燥させて、標題の化合物（３１１ｍｇ）を得た。LC/MS;Rt 2.22min, MH+ 183, 185。
【０２６０】
（実施例４５）
Ｎ２−｛４−［（１，１−ジオキシド−４−チオモルホリニル）カルボニル］フェニル｝−Ｎ４−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン
【化６５】
2009511527.tif 000076
【０２６１】
４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）安息香酸（０．４２ｇ）をＤＭＦ（３ｍｌ）に懸濁させた。この懸濁液をＤＩＰＥＡ（０．８４ｍｌ）で、その後ＴＢＴＵ（０．４８ｇ）で処理し、２０分間そのままにしておいた。チオモルホリン１，１−ジオキシド（２７．０ｍｇ、Ｓｙｎｔｅｃｈ）をＤＭＦ（０．２５ｍｌ）に懸濁させ、活性化エステル混合物の１２分の１（およそ０．２５ｍｌ）を加えた。反応混合物を窒素下室温でそのままにしておいた。反応混合物をＭＤＡＰによって精製し、その適切なフラクションを合わせ、その溶媒を真空遠心分離によって蒸発させた。この残留物を少量のメタノールに溶解させ、アミノプロピルカートリッジ（１ｇ、メタノールで前処理）で濾過した。カートリッジをメタノールで洗浄し、合わせた濾液および洗浄液から溶媒を真空下で蒸発させて、所望の生成物を得た。LC/MS;MH+ 468.84, Rt 2.60min。
【０２６２】
（実施例４６）
Ｎ−エチル−Ｎ−メチル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド
【化６６】
2009511527.tif 000077
【０２６３】
ＤＭＦ（０．５ｍｌ）中４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）安息香酸（３５．１ｍｇ）およびＴＢＴＵ（３５．３ｍｇ）の混合物をＤＩＰＥＡ（０．０５３ｍｌ）で処理し、この混合物を室温で３０分間激しく撹拌した。Ｎ−エチルメチルアミン（０．０８６ｍｌ）を加え、混合物を１．２５時間撹拌した。ＤＩＰＥＡ（０．０２６ｍｌ）およびＴＢＴＵ（１５．０ｍｇ）を加え、混合物を３０分間撹拌した。次いでＮ−エチルメチルアミン（０．０４２ｍｌ）を加え、混合物をさらに１．２５時間撹拌した。溶媒を真空下で蒸発させ、その残留物を少量のメタノールに溶解させ、ＳＣＸ−２カートリッジ（１ｇ、メタノールで前処理）に適用した。カートリッジをメタノールで、その後メタノール中２Ｍアンモニアで溶離した。適切なフラクションを集め、その溶媒を真空下で蒸発させた。この残留物をＭＤＡＰによってさらに精製し、その適切なフラクションを合わせ、その溶媒を真空下で蒸発させて、標題の化合物（１２ｍｇ）を得た。LC/MS;Rt 2.76min, MH+ 393。
【０２６４】
（実施例４７）
Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド
【化６７】
2009511527.tif 000078
【０２６５】
４−アミノ−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ベンズアミド（６４．７ｍｇ）、２−クロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（１００ｍｇ）、炭酸カリウム（４７．８ｍｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（５．９ｍｇ）およびトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（１３．６ｍｇ）のｔ−ブタノール（２．５ｍｌ）中撹拌混合物を密封バイアルに入れてマイクロ波照射により１２０℃で１時間加熱した。この混合物を室温まで冷却し、ＳＣＸ−２  ＳＰＥカートリッジ（２０ｇ）に適用した。カートリッジをメタノールで洗浄し、生成物をメタノール中２Ｍアンモニアで溶離した。アンモニア性フラクションを集め、その溶媒を真空下で蒸発させた。この残留物をＩＰＡ（３ｍｌ）および水酸化ナトリウム水溶液（２Ｍ、３ｍｌ）で処理し、この混合物を６０℃で一晩加熱した。溶媒を減圧下で蒸発させ、ぞの残留物をメタノールに溶解させ、この溶液をＳＣＸ−２カートリッジ（２０ｇ）に適用した。カートリッジをメタノールで洗浄し、生成物をメタノール中２Ｍアンモニア溶液で溶離した。塩基性のフラクションを合わせ、その溶媒を真空下で蒸発させた。この残留物をＭＤＡＰによって精製し、その適切なフラクションを合わせ、その溶媒を真空下で蒸発させて、標題の化合物（６０ｍｇ）を得た。LC/MS;Rt 2.99min, MH+ 432.86。
【０２６６】
（中間体３１）
４−アミノ−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ベンズアミド
【化６８】
2009511527.tif 000079
【０２６７】
４−ニトロ−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ベンズアミド（５５０ｍｇ）のエタノール（３０ｍｌ）溶液をパラジウム／炭素（１０％、５５ｍｇ）で一晩水素化（１ａｔｍ）した。この混合物をセライトで濾過し、その残留物をエタノールで洗浄した。濾液をセライトで再濾過し、セライトをエタノールで洗浄した。合わせた濾液および洗浄液から溶媒を真空下で蒸発させて、標題の化合物を白色の固形物（２９０ｍｇ）として得た。LC/MS;Rt 1.91min, MH+ 219。
【０２６８】
（中間体３２）
４−ニトロ−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）ベンズアミド
【化６９】
2009511527.tif 000080
【０２６９】
ＤＣＭ（４０ｍｌ）中４−ニトロベンゾイルクロリド（７５０ｍｇ）および炭酸カリウム（６０６．６ｍｇ）の混合物を２，２，２−トリフルオロエチルアミン（０．４８２ｍｌ）で処理し、この混合物を窒素下室温で２時間４０分攪拌した。炭酸カリウム（６０６ｍｇ）および２，２，２−トリフルオロエチルアミン（０．４８２ｍｌ）を加え、この混合物を室温でさらに１．５時間攪拌した。水（４０ｍｌ）を加え、この混合物を１５分間激しく攪拌した。相を分離させ、有機相を単離（疎水フリット］）し、その溶媒を真空下で蒸発させて、表題の化合物を白色の固形物（５５０ｍｇ）として得た。LC/MS;Rt 2.63min, [M-H]- 247。
【０２７０】
（実施例４８）
Ｎ２−［４−（１−ピペリジニルカルボニル）フェニル］−Ｎ４−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン
【化７０】
2009511527.tif 000081
【０２７１】
ｔ−ブタノール（２．５ｍｌ）中４−（１−ピペリジニルカルボニル）アニリン（１００ｍｇ、Ｆｌｕｏｒｏｃｈｅｍ）、２−クロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（１６５ｍｇ）、炭酸カリウム（７９ｍｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（９．８ｍｇ）およびトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（２２．５ｍｇ）の混合物を密封管に入れてマイクロ波放射により１２０℃で１時間加熱した。この混合物を室温まで冷却し、溶媒を真空下で蒸発させた。この残留物を少量のメタノールに溶解させ、ＳＣＸ−２カートリッジ（５ｇ、メタノールで前処理）に適用した。カートリッジをメタノールで洗浄し、生成物をメタノール中２Ｍアンモニアで溶離した。適切なフラクションを集め、その溶媒を真空下で蒸発させた。この残留物を少量のメタノールに溶解させ、フロリシル（Ｆｌｏｒｉｓｉｌ）に吸着させ、６０分かけて酢酸エチル／シクロヘキサン勾配（０〜１００％）で溶離するシリカカートリッジ（７０ｇ）でのクロマトグラフィーによって精製した。適切なフラクションを合わせ、その溶媒を真空下で蒸発させた後、その残留物を少量のエーテルに溶解させ、その溶媒を真空下で蒸発させると、白色の固形物（１９４ｍｇ）が残った。
【０２７２】
この固形物を炭酸カリウム（３４０ｍｇ）、メタノール（２ｍｌ）および水（１ｍｌ）で処理し、この混合物を８０℃で一晩加熱した。水酸化ナトリウム水溶液（２Ｍ、１ｍｌ）を加え、８０℃への加熱をさらに４．５時間続けた。混合物を室温まで冷却し、酢酸エチルと水とに分配させた。水相を酢酸エチル（３×２０ｍｌ）で抽出した。その有機相を合わせ、真空下で蒸発させた。この残留物にメタノール中ナトリウムメトキシド（０．５Ｍ、３ｍｌ）を加え、この攪拌混合物を８０℃で３時間加熱した。溶媒を真空下で蒸発させ、その残留物を最小量のメタノールに溶解させ、この溶液をＳＣＸ−２カートリッジ（１０ｇ、メタノールで前処理）に適用した。カートリッジをメタノールで洗浄し、生成物をメタノール中２Ｍアンモニアで溶離した。適切なフラクションを合わせ、その溶媒を真空下で蒸発させた。この残留物をＭＤＡＰによって精製し、その適切なフラクションを合わせ、その溶媒を真空下で蒸発させて、表題の化合物（１４ｍｇ）を得た。LC/MS;Rt 2.96min, MH+ 419。
【０２７３】
（実施例４９）
Ｎ２−［４−（１−ピロリジニルカルボニル）フェニル］−Ｎ４−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン
【化７１】
2009511527.tif 000082
【０２７４】
ｔ−ブタノール（２．５ｍｌ）中４−（１−ピロリジニルカルボニル）アニリン（５６．４ｍｇ）、２−クロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（１００ｍｇ）、炭酸カリウム（４８ｍｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（６ｍｇ）およびトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（１４ｍｇ）の攪拌混合物を密封バイアルに入れてマイクロ波放射により１２０℃で１時間加熱した。この混合物を室温まで冷却し、炭酸カリウム（２４ｍｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（３ｍｇ）およびトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（７ｍｇ）を加えた。次いでこの攪拌混合物を密封バイアルに入れてマイクロ波放射により１２０℃で１時間加熱した。この混合物を室温まで冷却し、ＳＣＸ−２カートリッジ（２０ｇ）に適用した。カートリッジを酢酸エチルで洗浄して、生成物をメタノール中２Ｍアンモニアで溶離した。適切なフラクションを集め、その溶媒を真空下で蒸発させた。この残留物をＩＰＡ（３ｍｌ）で懸濁させ、水酸化ナトリウム水溶液（２Ｍ、３ｍｌ）で処理し、この混合物を６０℃で一晩加熱した。溶媒を真空下で蒸発させ、その残留物を酢酸エチルに溶解させ、塩酸で２回洗浄した。有機相を真空中で乾燥まで減量させた。この残留物をＭＤＡＰによって精製し、その適切なフラクションを合わせ、その溶媒を真空下で蒸発させて、表題の化合物（１７ｍｇ）を得た。LC/MS;Rt 2.83min, MH+ 405。
【０２７５】
（中間体３３）
４−（１−ピロリジニルカルボニル）アニリン
【化７２】
2009511527.tif 000083
【０２７６】
１−［（４−ニトロフェニル）カルボニル］ピロリジン（５００ｍｇ）のエタノール（３０ｍｌ）溶液をパラジウム／炭素（５％、５０ｍｇ）で一晩水素化（１ａｔｍ）した。この混合物をセライトで濾過して、触媒をエタノールで２回洗浄した。この溶媒を真空下で蒸発させて、表題の化合物を白色の固形物（４０２ｍｇ）として得た。LC/MS;Rt 1.86min, MH+ 191。
【０２７７】
（中間体３４）
１−［（４−ニトロフェニル）カルボニル］ピロリジン
【化７３】
2009511527.tif 000084
【０２７８】
ＤＣＭ（５０ｍｌ）中４−ニトロベンゾイルクロリド（７５０ｍｇ）の混合物をピロリジン（１．６６ｍｌ）で処理し、この混合物を窒素下室温で５時間攪拌した。塩酸（１Ｍ、５０ｍｌ）を加え、この混合物を２０分間激しく攪拌した。層を分離し、有機相を炭酸水素ナトリウム溶液（５０ｍｌ）、その後水で洗浄し、真空下で乾燥まで減量させて、表題の化合物（５００ｍｇ）を得た。LC/MS;Rt 2.54min, MH+ 221。
【０２７９】
（実施例５０）
Ｎ２−［４−（１−アゼチジニルカルボニル）フェニル］−Ｎ４−（２，２，２−トリフルオロエチル）−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２，４−ジアミン
【化７４】
2009511527.tif 000085
【０２８０】
ｔ−ブタノール（２．５ｍｌ）中４−（１−アゼチジニルカルボニル）アニリン（５２．２ｍｇ）、２−クロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（１００ｍｇ）、炭酸カリウム（４７．８ｍｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（６ｍｇ）およびトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（１３．６ｍｇ）の攪拌混合物を密封バイアルに入れてマイクロ波照射により１２０℃で１時間加熱した。この混合物を室温まで冷却し、ＳＣＸ−２  ＳＰＥカートリッジ（２０ｇ）に適用した。カートリッジをメタノール、酢酸エチルで洗浄し、生成物をメタノール中２Ｍアンモニアで溶離した。塩基性のフラクションを集め、その溶媒を真空下で蒸発させた。この残留物をＩＰＡ（３ｍｌ）に懸濁させ、水酸化ナトリウム水溶液（２Ｍ、３ｍｌ）で処理し、この混合物を６０℃で一晩加熱した。溶媒を減圧下で蒸発させた。この残留物にＤＣＭを加え、不溶物質を濾過により単離した。この固形物をメタノール（３０ｍｌ）に溶解させ、その溶媒を真空下で蒸発させた。この残留物をクロロホルムに溶解させ、その溶液をアミノプロピルＳＰＥ（１０ｇ）に適用し、クロロホルム、酢酸エチルおよびメタノールで溶離した。クロロホルムフラクションを合わせ、その溶媒を真空下で蒸発させた。この残留物をＭＤＡＰによって精製し、その適切なフラクションを合わせ、その溶媒を真空下で蒸発させて、表題の化合物（６ｍｇ）を得た。LC/MS;Rt 2.73min, MH+ 391。
【０２８１】
（中間体３５）
４−（１−アゼチジニルカルボニル）アニリン
【化７５】
2009511527.tif 000086
【０２８２】
１−［（４−ニトロフェニル）カルボニル］アゼチジン（４６３ｍｇ）のエタノール（３０ｍｌ）溶液をパラジウム／炭素（４６．３ｍｇ）で一晩水素化した。この混合物をセライトで濾過し、これをエタノールで２回洗浄した。その溶媒を真空下で蒸発させて、表題の化合物を黄色の固形物（３４０ｍｇ）として得た。LC/MS;Rt 1.72min, MH+ 177。
【０２８３】
（中間体３６）
１−［（４−ニトロフェニル）カルボニル］アゼチジン
【化７６】
2009511527.tif 000087
【０２８４】
ＤＣＭ（５０ｍｌ）中４−ニトロベンゾイルクロリド（７５０ｍｇ）および炭酸カリウム（６０７ｍｇ）の混合物をアゼチジン（０．４０８ｍｌ）で処理し、この混合物を窒素下室温で４時間２０分攪拌した。炭酸カリウム（６０６ｍｇ）およびアゼチジン（０．４０８ｍｌ）を加え、この混合物を室温でさらに４０分間攪拌した。水（５０ｍｌ）を加え、この混合物を１５分間激しく攪拌した。層を分離させ、有機相を単離した（疎水フリット）。溶媒を真空下で蒸発させて、表題の化合物を黄色の固形物（４６３ｍｇ）として得た。LC/MS;Rt 2.41min, MH+ 207。
【０２８５】
（実施例５１）
Ｎ−メチル−Ｎ−プロピル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド
【化７７】
2009511527.tif 000088
【０２８６】
ｔ−ブタノール（２．５ｍｌ）中４−アミノ−Ｎ−メチル−Ｎ−プロピルベンズアミド（５７ｍｇ）、２−クロロ−７−［（４−メチルフェニル）スルホニル］−Ｎ−（２，２，２−トリフルオロエチル）−７Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−４−アミン（１００ｍｇ）、炭酸カリウム（４８ｍｇ）、２−ジシクロヘキシルホスフィノ−２’，４’，６’−トリイソプロピルビフェニル（６ｍｇ）およびトリス（ジベンジリデンアセトン）ジパラジウム（０）（１４ｍｇ）の攪拌混合物を密封バイアルに入れてマイクロ波照射により１２０℃で１時間加熱した。冷却されたこの反応を前処理済みＳＣＸ−２カートリッジ（２０ｇ）に適用した。カートリッジをメタノールで洗浄し、生成物をメタノール中２Ｍアンモニアで溶離した。このアンモニア性フラクションを集め、その溶媒を真空下で蒸発させた。この残留物を炭酸カリウム（４２３．５ｍｇ）、メタノール（２ｍｌ）および水（１ｍｌ）で処理し、この攪拌混合物を８０℃で一晩加熱した。水（５ｍｌ）を加え、その沈殿物を濾過によって単離した。濾液を酢酸エチル（３０ｍｌ）で抽出し、有機相を乾燥させ（疎水フリット）、その溶媒を真空下で蒸発させた。この残留物および沈殿物をメタノールに溶解させ、合わせ、真空中で乾燥まで減量させた。得られた残留物をＭＤＡＰによって精製し、その適切なフラクションを合わせ、その溶媒を真空下で蒸発させて、表題の化合物（１９ｍｇ）を得た。LC/MS;Rt 2.91min, MH+ 406.9。
【０２８７】
（中間体３７）
４−アミノ−Ｎ−メチル−Ｎ−プロピルベンズアミド
【化７８】
2009511527.tif 000089
【０２８８】
Ｎ−メチル−４−ニトロ−Ｎ−プロピルベンズアミド（３３０ｍｇ）のエタノール（１５ｍｌ）溶液をパラジウム／炭素（１０％、１５．３ｍｇ）で一晩水素化した（１ａｔｍ）。この混合物をセライトで濾過し、次いでこれをエタノールで洗浄した。その溶媒を真空下で蒸発させて、表題の化合物（２６０ｍｇ）を得た。LC/MS;Rt 2.02min, MH+ 193。
【０２８９】
（中間体３８）
Ｎ−メチル−４−ニトロ−Ｎ−プロピルベンズアミド
【化７９】
2009511527.tif 000090
【０２９０】
ＤＣＭ（５０ｍｌ）中４−ニトロベンゾイルクロリド（７５０ｍｇ）、Ｎ−メチルプロピルアミン（０．６２２ｍｌ）および炭酸カリウム（８３６ｍｇ）の混合物を窒素下室温で一晩攪拌した。塩酸（１Ｍ、５０ｍｌ）を加え、この混合物を１５分間攪拌し、その相を分離し、有機相を水（１００ｍｌ）で洗浄し、乾燥（疎水フリット）させた。その溶媒を真空中で蒸発させると残留物が得られ、これを酢酸エチル（２５ｍｌ）に溶解させ、炭酸水素ナトリウム溶液（５０ｍｌ）で洗浄した。この有機相を疎水フリットで集め、その溶媒を真空下で蒸発させて、表題の化合物（３３０ｍｇ）を得た。LC/MS;Rt 2.58min, MH+ 223。
【０２９１】
（実施例５２）
Ｎ−プロピル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド４−メチルベンゼンスルホナート
【化８０】
2009511527.tif 000091
【０２９２】
Ｎ−プロピル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミド（３５０ｍｇ）を加熱＋超音波でＴＨＦ（７ｍｌ）に溶解させた。ｐ−トルエンスルホン酸水和物（１６２ｍｇ）を加熱でＴＨＦ（１ｍｌ）に溶解させ、得られた溶液をこのＮ−プロピル−４−（｛４−［（２，２，２−トリフルオロエチル）アミノ］−１Ｈ−ピロロ［２，３−ｄ］ピリミジン−２−イル｝アミノ）ベンズアミドに加えた。この混合物をゆっくり温めて溶液とし、次いで室温まで冷却させた。この混合物を４０℃まで再加温して、冷却させ、この加熱冷却サイクルを繰り返した（×２）。この混合物を週末にかけて室温にそのままにしておき、その白色の固形物を濾過によって単離し、ＴＨＦ（１ｍｌ）で洗浄し、シンターで吸引乾燥させた。固形物をさらにおよそ４０℃真空下で２時間乾燥させて、表題の化合物を白色の固形物（４２５ｍｇ）として得た。NMR; [D6-DMSO] δH 11.46,(1H, b), 9.44,(1H, b), 8.47,(1H, b), 8.28,(1H, t), 7.79,(4H, s), 7.48,(2H, d), 7.11,(2H, d), 6.96,(1H, m), 6.60,(1H, m), 4.40,(2H, m), 3.21,(2H, q), 2.29,(3H, s), 1.53,(2H, m), 0.89,(3H, t)。
【０２９３】
生物学的試験方法
以下のアッセイに従って本発明の化合物はインビトロ活性について試験することができる。
【０２９４】
１．酵素アッセイ：時間分解蛍光共鳴エネルギー転移キナーゼアッセイ
組み換えヒトＳｙｋをＨｉｓタグ−タンパク質＊として発現させた。Ｓｙｋの活性を時間分解蛍光共鳴エネルギー転移（ＴＲ−ＦＲＥＴ）アッセイを用いて評価した。
【０２９５】
バージョンＡ：ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４（最終４０ｍＭ）中にビオチニル化ペプチドであるＢｉｏｔｉｎ−ＡＡＡＥＥＩＹＧＥＩ（最終０．５μＭ）、ＡＴＰ（最終３０μＭ）およびＭｇＣｌ２（最終１０ｍＭ）を含有している基質試薬３μｌを、さまざまな濃度の化合物またはＤＭＳＯビヒクル（最終３．３％）０．２μｌが入っているＧｒｅｉｎｅｒ低容量３８４ウェル黒色プレート中の各ウェルに加えた。３μｌのＳｙｋ（最終２０ｎＭ）／ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４（最終４０ｍＭ）を加えることによって反応を開始させた。反応を室温で４０分間インキュベートし、その後、４０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．０３％  ＢＳＡ中に６０ｍＭ  ＥＤＴＡ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５０ｎＭ  Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ  ＡＰＣ（Ｐｒｏｚｙｍｅ、サンリアンドロ、カリフォルニア州、米国）、Ｗ−１０２４ユーロピウムキレート（Ｗａｌｌａｃ  ＯＹ，  トゥルク、フィンランド）で標識された０．５ｎＭ抗ホスホチロシン抗体を含有している赤色試薬３μｌを加えることによって停止させた。反応をさらに室温で６０分間インキュベートした。Ｂｉｏｔｉｎ−ＡＡＡＥＥＩＹＧＥＩのリン酸化の程度は、ＢＭＧ  Ｒｕｂｙｓｔａｒプレートリーダー（ＢＭＧ  ＬａｂＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｌｔｄ、エールズベリー、英国）を用いて、基準ユーロピウム６２０ｎｍシグナルに対する特異的６６５ｎｍエネルギー転移シグナルの比として測定した。
【０２９６】
バージョンＢ：Ｓｙｋを、１６．６ｍＭ  ＭｇＣｌ２、８．３ｍＭ  ＡＴＰの存在下に３０分間室温で予活性化し、その後４０ｍＭ  Ｈｅｐｅｓ  ｐＨ７．４、０．０１％  ＢＳＡに４ｎＭまで希釈した。４０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．０１％  ＢＳＡ中にビオチニル化ペプチドであるＢｉｏｔｉｎ−ＡＡＡＥＥＩＹＧＥＩ（最終０．５μＭ）、ＡＴＰ（最終３０μＭ）および  ＭｇＣｌ２（最終１０ｍＭ）を含有している基質試薬３μｌを、さまざまな濃度の化合物またはＤＭＳＯビヒクル（最終１．７％）０．１μｌが入っているＧｒｅｉｎｅｒ低容量３８４ウェル黒色プレート中の各ウェルに加えた。３μｌの希釈Ｓｙｋ（最終２ｎＭ）を加えることによって反応を開始させた。反応を室温で６０分間インキュベートし、その後、４０ｍＭ  ＨＥＰＥＳ  ｐＨ７．４、０．０３％  ＢＳＡ中に６０ｍＭ  ＥＤＴＡ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、５０ｎＭ  Ｓｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ  ＡＰＣ（Ｐｒｏｚｙｍｅ、サンリアンドロ、カリフォルニア州、米国）、Ｗ−１０２４ユーロピウムキレート（Ｗａｌｌａｃ  ＯＹ，  トゥルク、フィンランド）で標識された０．５ｎＭ抗ホスホチロシン抗体を含有している赤色試薬３μｌを加えることによって停止させた。反応をさらに室温で４５分間インキュベートした。Ｂｉｏｔｉｎ−ＡＡＡＥＥＩＹＧＥＩのリン酸化の程度は、ＢＭＧ  Ｒｕｂｙｓｔａｒプレートリーダー（ＢＭＧ  ＬａｂＴｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  Ｌｔｄ、エールズベリー、英国）を用いて、基準ユーロピウム６２０ｎｍシグナルに対する特異的６６５ｎｍエネルギー転移シグナルの比として測定した。
【０２９７】
本発明による化合物をこの（または同じような）時間分解蛍光共鳴エネルギー転移キナーゼアッセイでアッセイして、１０μＭ未満のＩＣ５０値を得た。
【０２９８】
＊：組み換えヒト完全長脾臓チロシンキナーゼ（Ｓｙｋ）Ｓｙｋの調製
バキュロウイルス系（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ペーズリー、スコットランド）を用いてＮ−末端に６Ｈｉｓタグを有する完全長ヒトＳｙｋを発現させた。この細胞を加圧型細胞破砕装置によって分断し、その残屑を遠心分離によって除去し、その溶解産物をＮｉＮＴＡ  Ｓｕｐｅｒｆｌｏｗ（Ｑｉａｇｅｎ、クローリー、英国）に接触させた。このＮｉＮＴＡをカラムの中に充填し、緩衝液（２０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ８．０、３００ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  βＭｃＥｔＯＨ、１０％グリセロール）、緩衝液＋１Ｍ  ＮａＣｌ、緩衝液＋２０ｍＭイミダゾール、および緩衝液＋３００ｍＭイミダゾールのそれぞれ１０カラム体積を用いて溶離した。Ｇ２５Ｍ（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、バッキンガムシャー州、英国）を用いてこの３００ｍＭイミダゾールのフラクションを、２０ｍＭ  ＭＥＳ  ｐＨ６．０、２０ｍＭ  ＮａＣｌ、１０ｍＭ  βＭｃＥｔＯＨ、１０％グリセロールに貯留・緩衝液交換させた。この緩衝液交換された６Ｈｉｓ−ＳｙｋをＳｏｕｒｃｅ１５Ｓカラム（Ａｍｅｒｓｈａｍ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ、バッキンガムシャー州、英国）にロードし、５０カラム体積に亘るＮａＣｌ勾配０〜５００ｍＭを用いてカラムを溶離した。６Ｈｉｓ−Ｓｙｋ含有フラクションを貯留し、限外濾過によって濃縮した。６Ｈｉｓ−Ｓｙｋのアイデンティティーは、ペプチドマスフィンガープリンティング法およびインタクトＬＣ−ＭＳによって確認された。
【０２９９】
２．全細胞アッセイ：ｃＦｍｓアッセイ
【０３００】
アッセイの原理
マウス線維芽細胞細胞株ＮＩＨ−３Ｔ３の細胞をｃＦｍｓ−ＳＹＫキメラで安定にトランスフェクションする。リガンド（ＭＣＳＦ）を加えるとキメラの二量化が起こり、ＳＹＫキナーゼドメインの自己リン酸化が起こる。細胞溶解の後ＥＬＩＳＡによってリン酸化ＳＹＫを検出する。
【０３０１】
ＭＣＳＦを用いたｃＦｍｓ−ＳＹＫ細胞の刺激  バージョンＡ
９６ウェルＣｏｌｌａｇｅｎ１コート組織培養プレート中の、体積が２００μｌの増殖培地（熱不活化ウシ胎仔血清１０％、Ｌ−グルタミン１％、ジェネティシン４００μｇ／ｍｌ、およびゼオシン４００μｇ／ｍｌを含有しているＤＭＥＭ）に細胞を１×１０５／ウェルの密度で平板培養する。３７℃、１０％ＣＯ２で２０時間インキュベートした後、細胞上澄み液を除去し、１％のペニシリン／ストレプトマイシンを含有しているＤＭＥＭ（無血清ＤＭＥＭ）２００μｌで置き換える。上記した条件の下で細胞を１時間インキュベートする。培地を除去し、５０μｌの適切に希釈された化合物溶液を加え、プレートをさらに１時間インキュベートする。２５μｌのＭＣＳＦ（最終０．６６μｇ／ｍｌ）を用いて細胞を３７℃で２０分間刺激する。上澄み液を除去した後、細胞を冷ＰＢＳで洗い、１００μｌの溶解緩衝液を用いて４℃で４時間溶解する。
【０３０２】
ＭＣＳＦを用いたｃＦｍｓ−ＳＹＫ細胞の刺激  バージョンＢ
９６ウェルＣｏｌｌａｇｅｎ１コート組織培養プレート中の、体積が２００μｌの増殖培地（熱不活化ウシ胎仔血清１０％、Ｌ−グルタミン１％、ジェネティシン４００μｇ／ｍｌ、およびゼオシン４００μｇ／ｍｌを含有しているＤＭＥＭ）に細胞を１×１０５／ウェルの密度で平板培養する。３７℃、１０％ＣＯ２で２０時間インキュベートした後、細胞上澄み液を除去し、５０μｌの適切に希釈された化合物溶液を加え、プレートを１時間インキュベートする。２５μｌのＭＣＳＦ（最終０．６６μｇ／ｍｌ）を用いて細胞を３７℃で２０分間刺激する。上澄み液を除去した後、細胞を冷ＰＢＳで洗い、１００μｌの溶解緩衝液を用いて４℃で４時間溶解する。
【０３０３】
ｃＦｍｓ  ＥＬＩＳＡ
ヤギ抗ヒトＭ−ＣＳＦ  Ｒ捕捉用抗体がコートされた９６ウェルＥＬＩＳＡプレートに８５μｌの細胞溶解産物を移し、４℃で１６時間インキュベートする。プレートを洗い、ビオチニル化抗ホスホチロシン検出用抗体を加えて室温で２時間おく。これを除去し、１００μｌのＳｔｒｅｐｔａｖｉｄｉｎ−ＨＲＰで置き換えて３０分間おく。１００μｌのＴＭＢ基質を用いて捕捉されたリン酸化ＳＹＫを可視化する。５０μｌの１Ｍ硫酸を用いて反応を停止させ、４５０ｎｍで吸光度を測定する。
【０３０４】
化合物調製
化合物はＤＭＳＯ中１０ｍＭストック液として調製し、９回連続５倍希釈を用いてＤＭＳＯ中希釈液シリーズを調製する。無血清ＤＭＥＭでこの希釈液シリーズをさらに１：３３３に希釈して、試験すべき１×１０−５〜１．５４×１０−１１Ｍの濃度範囲を得る。化合物希釈液はＢｉｏｍｅｋ  ２０００またはＢｉｏｍｅｋ  Ｎｘ自動ロボット式ピペット装置を用いて調製する。
【０３０５】
３．Ｂ細胞増殖アッセイ
【０３０６】
背景
このアッセイで観察するＢ細胞母集団は、ナイーブ成熟ＩｇＭ／ＩｇＤ発現母集団である。これは、精製Ｂ細胞母集団の少なくとも７０％を形成しており（残りは、アイソタイプスイッチ記憶Ｂ細胞である）、細胞が抗−ＩｇＭで刺激されると増殖する唯一の細胞である。
【０３０７】
抗−ＩｇＭは、Ｓｙｋ依存性であるＢ細胞受容体を介してのシグナル伝達を駆動する。増殖は、Ｂ細胞シグナル伝達の機能尺度であり、これは、細胞へのトリチウム化メチルチミジンの取り込みを観測することによって測定することができる。
【０３０８】
プロトコル
精製ヒト扁桃Ｂ細胞を１．２５×１０６／ｍｌの濃度でＢｕｃｋｌｅｙｓ＊培地に再懸濁させる。
【０３０９】
Ｂｕｃｋｌｅｙ培地に再懸濁させた細胞１６０μｌを９６ウェルプレートの化合物ウェルおよび対照ウェルに加える。対照ウェルは９６ウェルプレートの列１１および１２に位置させる。バックグラウンドウェルは列１２に位置させ、２０μｌの１０μＭ対照液を加えて、適切なバックグラウンド対照とする。刺激対照については列１１のウェルに２０μｌの１％ＤＭＳＯを加える。
【０３１０】
化合物滴定は列１と列１０の間に位置させる。各プレート上では３つの化合物を２つずつ流し、対照化合物滴定には行ＡおよびＢを使用する。
【０３１１】
アッセイではＤＭＳＯの最終濃度は０．１％にする。細胞を４５分間静置させておき、４５分後に増殖刺激因子を９６ウェルプレートの最初の１１ウェルに加え、２０μｌの培地を列１２に加える。ポリクローナルヤギ抗血清（ヒトＩｇＭに対して作製された）のＦ（ａｂ’）２断片を１５μｇ／ｍｌの最終濃度で用いて細胞を刺激する。（Ｂｉｏｓｏｕｒｃｅ．カタログ番号：ＡＭＩ  ４６０１）。
【０３１２】
細胞にはトリチウム化メチルチミジンを１ウェルあたり１μＣｉの濃度で加える。（Ａｍｅｒｓｈａｍ、ＴＲＫ  ７５８）。この放射能は最初の刺激の６５時間後に加え、細胞に６〜８時間静置させておく。メチルチミジンでパルスした後細胞をＳｋａｔｒｏｎ  ９６ウェル細胞ハーベスター上のグラスファイバーマットに捕集する。細胞が乾いたら細胞をＷａｌｌａｃ  １４５０  Ｍｉｃｒｏｂｅｔａシンチレーションカウンターで計数する。
【０３１３】
データをＸＬファイルとしてダウンロードし、Ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｂａｓｅを用いてＩＣ５０を決定する。
【０３１４】
＊  Ｂｕｃｋｌｅｙｓ  Ｍｅｄｉｕｍ：４５０ｍｌのＩｓｃｏｖｅｓ（Ｓｉｇｍａ  Ｉ  ３３９０）、５０ｍｌのＦＣＳ、２．５ｇのＢＳＡ、５ｍｌのＰｅｎ／ｓｔｒｅｐ、５ｍｌのＧｌｕｔａｍｉｎｅ（２００ｍＭ）、５００μｌのＡｐｏ  ｔｒａｎｓｆｅｒｒｉｎ（５０ｍｇ／ｍｌ）Ｓｉｇｍａ（Ｔ  １１４７）、１００μｌのＢｏｖｉｎｅ  Ｉｎｓｕｌｉｎ（１０ｍｇ／ｍｌ）Ｓｉｇｍａ（Ｉ  １８８２）。
【０３１５】
化合物調製
化合物はＤＭＳＯ中１０ｍＭストック液として調製し、９回連続３倍希釈を用いてＤＭＳＯ中希釈液シリーズを調製する。この希釈液シリーズをＢｕｃｋｌｅｙｓＤＭＥＭでさらに１：１００に希釈して、試験すべき１００μＭ〜５ｎＭの濃度範囲を得る。これを２０μｌにして９６ウェルプレートに２つずつ加え、試験される各化合物に対して２つのＩＣ５０を作出させる。各プレートは対照化合物の存在の下に操作する。これは内部標準としての役割を果たす。
【０３１６】
４．ＬＡＤ２アッセイ
【０３１７】
アッセイの原理
ＬＡＤ２は、マスト細胞肉腫／白血病を有する患者からの骨髄吸引液からＮＩＨによって確立されたステム細胞因子（ＳＣＦ）依存性ヒトマスト細胞株である。ＬＡＤ２細胞はＣＤ３４＋−誘導ヒトマスト細胞に似ており、機能性ＦｃεＲＩを発現している。このＦｃεＲＩを、ＩＬ−４、ＳＣＦおよびＩｇＥの存在下にアップレギュレーションし、続いて細胞結合ＩｇＥを架橋結合させると脱顆粒が起こり、これはヘキソサミニダーゼの放出として測定することができる。
【０３１８】
ＦｃεＲＩをアップレギュレーションするためのＬＡＤ２細胞のプライミング
追加的な補充剤であるヒト組み換えＳＣＦ（１００ｎｇ／ｍｌ；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）、ヒト組み換えインターロイキン−４（６ｎｇ／ｍｌ；Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）およびＩｇＥ（１００μｇ／ｍｌ；Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ）を含む完全ステムｐｒｏ−３４ＳＦＭ（Ｓｔｅｍ  Ｐｒｏ−３４栄養素補助剤（１：４０）、グルタミン（２ｍＭ）、ペニシリン（１００μｇ／ｍｌ）、ストレプトマイシン（１００μｇ／ｍｌ）を含有しているＧｉｂｃｏ  Ｃａｔ  １０６４０−０１９倍地）にＬＡＤ２細胞を１×１０５／ｍｌで再懸濁させる。次いで細胞を加湿雰囲気中３７℃、５％ＣＯ２で５日間保持する。
【０３１９】
化合物調製
化合物を１００％ＤＭＳＯ中２ｍＭストック液から滴定して、９回連続１：３希釈液を得る（Ｖ  ９６−ウェルＮｕｎｃ；Ｂｉｏｍｅｋ  ２０００）。このマスタープレートから３μｌをドータープレート（平坦９６−ウェルＮｕｎｃＢｉｏｍｅｋ  Ｆｘ）に分注し、これを次に２ｍＭのグルタミンを含むＲＰＭＩに１：４０希釈し、この化合物希釈液の２０μｌをＧｒｅｉｎｅｒ細胞プレートに移す。したがって最終化合物濃度範囲は０．５％一定ＤＭＳＯ中１×１０−５Ｍ〜５×１０−１０Ｍである。対照ウェルは０．５％ＤＭＳＯで処理する。
【０３２０】
抗−ＩｇＥによるＬＡＤ２細胞の活性化  バージョンＡ
プライミングしたＬＡＤ２細胞を遠心分離し（（３００ｇ、５分）、上澄み液を捨て、細胞ペレットをグルタミン（２ｍＭ）が補充されたＲＰＭＩに１×１０４細胞／ｍｌで再懸濁させる。さらなる遠心分離（３００ｇ、５分）の後に細胞を、グルタミン（２ｍＭ）を含む新鮮ＲＰＭＩに再懸濁させ、２．８５×１０５／ｍｌの密度に調整して、化合物希釈液（上記で詳述したようにして調製）２０μｌが入っている滅菌Ｖ−ウェルプレート（７０μｌ／ウェル；Ｇｒｅｉｎｅｒ）にピペット注入する。次いで細胞を１時間インキュベートし（加湿雰囲気中３７℃、５％ＣＯ２）、その後最大下濃度の抗−ＩｇＥ（１：２７００の最終アッセイ希釈を得るためには１０μｌの体積；Ｓｉｇｍａ）で活性化する。４０分のインキュベーション（加湿雰囲気中３７℃、５％ＣＯ２）の後、プレートを遠心分離し（１２００ｇ、１０分、４℃）、ヘキソサミニダーゼアッセイのために上澄み液を除去する。細胞ペレットは１００μｌ／ウェルのトリトン−Ｘ（ＲＰＭＩ中０．５％  ２ｍＭグルタミン）中３７℃で３０分間溶解させる。
【０３２１】
抗−ＩｇＥによるＬＡＤ２細胞の活性化  バージョンＢ
プライミングしたＬＡＤ２細胞を遠心分離し（（４００ｇ、５分）、上澄み液を捨て、細胞ペレットをグルタミン（２ｍＭ）が補充されたＲＰＭＩに１×１０４細胞／ｍｌで再懸濁させる。さらなる遠心分離（４００ｇ、５分）の後に細胞を、グルタミン（２ｍＭ）を含む新鮮ＲＰＭＩに再懸濁させ、５．７×１０５／ｍｌの密度に調整して、化合物希釈液（上記で詳述したようにして調製）２０μｌが入っている滅菌Ｖ−ウェルプレート（７０μｌ／ウェル；Ｇｒｅｉｎｅｒ）にピペット注入する。次いで細胞を１時間インキュベートし（加湿雰囲気中３７℃、５％ＣＯ２）、その後最大下濃度の抗−ＩｇＥ（１：２７００の最終アッセイ希釈を得るためには１０μｌの体積；Ｓｉｇｍａ）で活性化する。４０分のインキュベーション（加湿雰囲気中３７℃、５％ＣＯ２）の後、プレートを遠心分離し（１２００ｇ、１０分、４℃）、ヘキソサミニダーゼアッセイのために上澄み液を除去する。細胞ペレットは１００μｌ／ウェルのトリトン−Ｘ（ＲＰＭＩ中０．５％  ２ｍＭグルタミン）中３７℃で３０分間溶解させる。
【０３２２】
ベータ−ヘキソサミニダーゼアッセイ
ベータ−ヘキソサミニダーゼ活性は４−メチルウンベリフェリルＮ−アセチル−ε−Ｄグルコサミニド（Ｓｉｇｍａ）を蛍光生成物に変換させることによって測定する。
【０３２３】
上澄み液または溶解液（２５μｌ）を同じ体積の４−メチルウンベリフェリルＮ−アセチル−ε−Ｄグルコサミニド（０．２Ｍクエン酸ナトリウム緩衝液中５００μＭ、ｐＨ４．５）と一緒に黒色９６ウェルプレート（Ｎｕｎｃ）中３７℃で１時間インキュベートする。次いで反応をＴｒｉｚｍａ  ｐＨ９（９０μｌ）を加えることによって停止させ、その蛍光生成物を励起３５６ｎｍおよび発光４５０ｎｍ（Ｔｅｃａｎ  Ｓａｆｉｒｅ）を用いて測定する。
【０３２４】
有用なスクリーニング戦略は、アッセイ１（酵素アッセイ（ｐＫｉ））と、アッセイ２と、その後のアッセイ３（Ｂ細胞の増殖）またはアッセイ４（ＬＡＤ２）とからなる。
【０３２５】
本明細書および特許請求項により一部が形成されている本出願は、この後の任意の出願についての優先権主張のための基礎として用いられ得る。そのような後続の出願の特許請求項は、本明細書に記載したいずれの特徴または特徴の組み合わせにも向けられ得る。それらは、生成物クレーム、組成物クレーム、方法クレーム、または使用クレームの形を取り得、例として、限定するものではないが、添付の特許請求項を含み得る。
【国際調査報告】
2009511527.tif 000098
2009511527.tif 000099
2009511527.tif 000100