(57)【要約】  哺乳動物の上側の気道における病原体を殺す又は実質的にそれを根絶するための方法が、開示される。該方法は、少なくとも約２５ｐｐｍの最小の濃度のＩ２との酸化体−還元体の反応を使用することで原位置において分子のヨウ素（１２）を発生させることを含むと共に、Ｉ２は、合計のヨウ素原子の少なくとも４０％を含む。分子のヨウ素を使用することで超抗原を阻害するための方法が、また開示される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
哺乳動物の上気道における病原体を殺す又は実質的に根絶するための方法であって、
前記方法は、
Ｉ２の少なくとも約２５ｐｐｍの最小の濃度で７より下のｐＨにおける水性の組成物において酸化体−還元体の反応を使用することで、原位置で分子のヨウ素（Ｉ２）を発生させること、それにおいて、前記Ｉ２が、前記水性の組成物における合計のヨウ素原子の少なくとも４０％を含むこと、及び、
それの後に又は分子のヨウ素の発生と実質的に同時に前記哺乳動物へ前記水性の組成物を投与すること
を含む、方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法において、
Ｉ２は、それぞれ２０ｐｐｍのヨウ素及び６．９ｐｐｍのヨウ素酸塩の最小の濃度におけるヨウ素及びヨウ素酸塩の源から発生させられる、方法。
【請求項３】
請求項１に記載の方法において、
前記水性の組成物は、α−シクロデキストリン、β−シクロデキストリン、及びγ−シクロデキストリンからなる群より選択されたシクロデキストリンをさらに含む、方法。
【請求項４】
請求項１に記載の方法において、
前記病原体は、黄色ブドウ球菌である、方法。
【請求項５】
請求項１に記載の方法において、
発生させられたＩ２の濃度の範囲は、５０から２５０ｐｐｍまでである、方法。
【請求項６】
請求項１に記載の方法において、
Ｉ２の最大の濃度は、密閉された自立型の目盛り付きのプラスチックのシリンダーの下部に前記水性の組成物を置くこと、前記プラスチックのシリンダーの上側の内側の側壁へヨウ化カリウム澱粉紙の湿らせられた１インチのストリップを付着させること、及び、室温で完全に青色に前記ヨウ化カリウムデンプン紙を変色させるために少なくとも６７秒の時間を得ることによって、Ｉ２からの臭気の存在について制御することによって決定される、方法。
【請求項７】
請求項１に記載の方法において、
前記組成物のｐＨは、３．０から６．０までの範囲にある、方法。
【請求項８】
請求項１に記載の方法において、
前記水性の組成物は、１００から２０００μｌまでの体積にある、方法。
【請求項９】
請求項１に記載の方法において、
前記水性の組成物は、液体、ゲル、クリーム、軟膏、及びエマルジョンからなる群より選択された特性を提供するための配合にある、方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法において、
前記水性の組成物は、ゲル−液体系である、方法。
【請求項１１】
超抗原が免疫細胞を活性化させることを阻害する方法であって、
前記方法は、超抗原が免疫細胞反応を活性化させることを予防するために十分な濃度で超抗原へ分子のヨウ素を適用することを含む、方法。
【請求項１２】
請求項１１に記載の方法において、
水性の組成物は、少なくとも約３０ｐｐｍのＩ２の最小の濃度で哺乳動物の組織へ適用される、方法。
【請求項１３】
請求項１１に記載の方法であって、アトピー性皮膚炎、湿疹、乾癬、膿痂疹、副鼻腔炎、及び喘息を包含する、超抗原によって免疫反応を発生させることが知られた健康状態を処置するための方法。
【請求項１４】
請求項１１に記載の方法において、
前記超抗原は、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）である、方法。
【請求項１５】
請求項１１に記載の方法において、
前記免疫細胞は、ヒトの末梢血の白血球である、方法、
【請求項１６】
請求項１に記載の方法において、
存在する合計のヨウ素の少なくとも５０％は、Ｉ２の形態にある、方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
［分野］
哺乳動物の上気道からの黄色ブドウ球菌及び抗生物質抵抗性の微生物を包含する病原体の根絶のための並びに免疫細胞の活性化を阻害するための分子のヨウ素の適用。分子のヨウ素は、また、アトピー性皮膚炎、湿疹、乾癬、膿痂疹、又は副鼻腔炎の処置における超抗原の阻害に用いられる。
【背景技術】
【０００２】
［発明の背景］
黄色ブドウ球菌の鼻腔保菌は、研究されてきた入院させられた患者のほぼ全てのカテゴリーにおけるその後の感染について明確に定義された危険因子である。黄色ブドウ球菌の保菌は、外科の患者（一般的な、整形外科的な、及び胸部の、外科手術）において、血液透析における患者において、連続携帯式腹膜透析（ＣＡＰＤ）における患者において、ＨＩＶに感染させられた患者において、及び、集中治療室における患者において、広く研究されてきた。
【０００３】
手術部位感染（ＳＳＩ）の罹患率及び死亡率並びに経済的な影響力は、莫大なものである。ＳＳＩ、外科的な患者の間における最も一般的な院内感染は、アメリカ合衆国において一年に行われた見積もられた２千７百万の手術のおおよそ５００，０００を複雑にすることが考えられる。黄色ブドウ球菌は、ＳＳＩにおいて最も頻繁に同定された病原体である。これらの感染と関連させられた見積もられた一年の病院の請求金額は、１６億ドルよりも多いものである。ＳＳＩは、発症当たり５日よりも多い日数だけ病院の滞在を延期する。より重要なことには、ＳＳＩ患者は、手術後の期間に死亡することがありそうなものの二倍よりも多いものである。
【０００４】
黄色ブドウ球菌の病原性は、通常、コアグラーゼ酵素を生産するための特定の菌株の能力と関連させられるが、しかし、これらの生体は、抗原を含有すると共に超抗原の性質を備えた毒素を生産すると共に少なくとも二つの疾患の状態において関与してきたものである。黄色ブドウ球菌は、抗原に特異的な溝の外側でＴ細胞受容体の主要組織適合性のクラスＩＩの複合体（ＭＨＣ）の可変なベータ鎖に結び付くことによってＴ細胞を活性化する。臨床的な研究は、細菌性の超抗原が、鼻のポリープ及び喘息のような上及び下気道の疾患に主要な影響力を有することがあるものである、Ｉｇ−Ｅの合成を誘起することを立証する。
【０００５】
黄色ブドウ球菌の鼻腔保菌の除去は、本発明の目的のために鼻、副鼻腔、咽頭、気管支、及び口腔を包含することが明確に定められるものである上気道の他のエリアのみならず鼻腔における黄色ブドウ球菌の実在の及び潜在的な負の影響を予防するための最も率直なストラテジーであるように見える。１９８０年末期におけるムピロシン軟膏の導入は、この要望を満たすことが意図された。ムピロシン鼻腔軟膏は、黄色ブドウ球菌を除去するための有効な処置である。鼻腔におけるムピロシンでの保菌者の処置は、血液透析及びＣＡＰＤの患者についての院内の黄色ブドウ球菌の感染率の顕著な低減に帰着する。総説ムピロシン研究は、鼻腔におけるムピロシンでの黄色ブドウ球菌の保菌者の処置が、院内の黄色ブドウ球菌の感染の率のものを顕著に（５０％）低減することを結論した。多数の無作為化された及び無作為化されてないムピロシンの治験は、外科手術に先立つ患者のムピロシンの鼻の処理が、黄色ブドウ球菌の手術後の感染を低減することを示唆する。
【０００６】
ムピロシン抵抗性の菌株は、それの導入のすぐ後に記載された。その上、特に慢性的な感染についての、ムピロシンの増加させられた使用は、抵抗性の増加させられた発生率に至ってきたものである。スペインからの最近の探査において、臨床的な分離株におけるムピロシン抵抗性のレベルは、１９９８年に７．７％から２０００年に１７％まで増加してきたことを報告され、且つ、いくつかの病院は、６３％と同程度に高い発生率を報告してきた。メチシリン耐性の黄色ブドウ球菌（ＭＲＳＡ）の継続する広がり及びムピロシン抵抗性の菌株における増加は、この生産物の予防的な使用を予防すると共に代替の薬剤についての要望に光を当てる。ムピロシンを黄色ブドウ球菌の保菌者であることが疑われた患者へ投与することができる前に、それらは、それらの鼻孔における黄色ブドウ球菌の存在について試験されなければならない。これは、微生物学の実験室によって黄色ブドウ球菌の存在についてのその後の評価のために鼻腔に綿棒で薬をつけること；少なくとも２４時間及びしばしば４８時間がかかるものであるプロセス、を医学の専門家に要求する。
【０００７】
入院させられた患者における黄色ブドウ球菌の保菌の除去のためのムピロシンを研究する大部分の調査者は、一般化された前外科的な適用の予防的な使用が、ムピロシン抵抗性の黄色ブドウ球菌の増加させられた率に至ることになることをコメントしてきた。いくつかの事例において、調査者は、鼻孔から黄色ブドウ球菌を根絶するための代替の処置を探してきた。一つの周知の抗菌性の薬剤、ポリビニルピロリドン−ヨウ素（ＰＶＰ−Ｉ）は、鼻腔における黄色ブドウ球菌及びＭＲＳＡを根絶するために数個のグループによって調査されてきたものである。
【０００８】
これらの研究において、ＰＶＰ−Ｉは、潜在的な毒性を低減するために希釈され、且つ、結果は、将来有望なものであった。これらの調査者は、ＰＶＰ−ヨウ素が、一般的に局所的な抗感染性の処置についての、及び、特に表面の汚染除去についての、有用な性質を提供することを指摘する。微生物の作用スペクトルは、短い露出時間後でさえも、広いものであると共に、ヨウ素に対する知られた微生物の抵抗性が、起こらない。抗生物質と対比して、ＰＶＰ−Ｉは、細菌を破壊するだけでなく、エキソトキシン、エンドトキシン、及び組織を破壊する酵素のような、病原性の因子の放出をもまた有効に阻害する。
【０００９】
ヨウ素に基づいた殺菌剤についての標識クレームは、チオ硫酸塩の滴定によって測定されるものである“合計のヨウ素”に基づいたものである。残念ながら、ヨウ素のこれらの種は、チオ硫酸塩：三ヨウ化物，ＨＯＩ（次亜ヨウ素酸）、及びＩ２によって滴定される。これらの殺菌剤に滴定されたヨウ素の圧倒的な大部分は、三ヨウ化物として存在する。これらの殺菌剤における高い濃度のヨウ化物、緩衝剤（ｐＨ＜４）、及びポビドンは、Ｉ２の分子の安定性を改善するために包含される。
【００１０】
これらの組成物の配合者は、鼻腔に使用することの考慮を与えなかった。鼻腔においてヨウ素を使用することでの先行技術の適用は、それらが皮膚における使用に意図されたものであると、これらの薬剤の毒性の性質に対する効能を最適化することの試みをなさないものである。これらの試剤が、皮膚に適用されるとき、全身性の毒性の点で関心のあるものであるヨウ素の唯一の種は、それが、皮膚を浸透することができるものであるヨウ素の唯一の種であるので、Ｉ２の種である。ＰＶＰ−Ｉが、哺乳動物の皮膚へ適用されるとき、これらの組成物に含有されたヨウ素の０．０１％よりも少ないものは、全身的に吸収される。その結果、全身的に吸収されるものであるヨウ素の量は、背景のレベルより上に（もしあれば）全身のヨウ素における増加を検出することが可能なものではないほど低いものである。その結果、表皮に適用された複雑なヨウ素の配合における他のヨウ素の種に対するＩ２の比は、有意義な安全性の考慮ではない。しかしながら、ヨウ素に基づいた組成物が、粘膜へ適用されるとき、甲状腺に対する危険は、明確に識別できるものである。たとえば、ＰＶＰ−Ｉが、鼻腔へ投与されるとき、投与されたヨウ素の１００％は、全身的に吸収される。
【００１１】
Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．２０４（Ｓｐｐｌ．）；８６−９１，２００２（非特許文献１）におけるＫｒａｍｅｒは、鼻腔及び軟骨組織におけるヨウ素担体の刺激のポテンシャルを検査した。雌鳥の卵の漿尿膜（ＨＥＴ−ＣＡＭ）試験及び外植片試験は、ＰＶＰ−Ｉの許容度を評価するために使用された。表に示されたように、１０％より下のＰＶＰ−Ｉは、成長を阻害する。
【００１２】
【表１】
2009541330.tif 000002
Ｐｏｓｔｇｒａｄ  Ｍｅｄ  Ｊ  １９９３，６９  Ｓｕｐｐｌ  ３，Ｓ１２２−５（非特許文献２）におけるＭａｓａｎｏは、ＰＶＰ−Ｉのクリームで患者及びヘルスケア・ワーカーを処置した。２ヶ月の間の１０％のＰＶＰ−Ｉの一日あたりの適用は、甲状腺腫瘍を誘起しなかったが、しかし、七つの家族の四つにおけるＴＳＨレベルは、上昇させられた。これらの結果は、ヨウ素が、鼻の配合におけるほとんど全ての他の化学的な及び生物学的な処方成分と同様に、鼻腔において吸収されることを示唆する。Ｋｒａｎｋｅｎｈａｕｓ−ｕｎｄ  Ｐｒａｘｉｓｈｙｇｉｅｎｅ（Ｈｏｓｐｉｔａｌ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｈｙｇｉｅｎｅ）におけるＫｒａｍｅｒ及びＧｌｕｃｋ（非特許文献３）；Ｋｒａｍｅｒ，Ａ，Ｈｅｅｇ，Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．；Ｍｕ（ウムラウト）ｎｃｈｅｎ，Ｆｉｓｃｈｅｒ  ＢＥＩ  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ：２００１；ｐｐ．２５２−２６８（非特許文献４）は、鼻腔における適用の前に高いレベルのヨウ素及び１．２５％の濃度まで希釈されたＰＶＰ−Ｉを備えた薬剤の使用に関係付けられた安全性の関心を認識した。８８個（７７個の雄及び１１個の雌）の合計は、三日の間に一日に二回処置され、且つ、報告された主な副作用は、乾燥、かゆみ、及びくしゃみであった。甲状腺の機能障害は、観察されなかった。先行技術は、高い治療指数（副作用に対する効能の比）を備えた組成物を提供するものであるアプローチを記載しない。
【００１３】
米国特許第６，１７１，６１１号明細書（特許文献１）は、水、ヨウ素、又は、生理学的なｐＨ、すなわち、ｐＨ７．４において緩衝されるものであるヨウ素の塩で作られた鼻の湿らせる生理食塩水（０．６５％）の溶液を記載するが、しかし、ある者が物質の殺菌性の組成物を考案することを可能とするものであろう基礎的な配合パラメーターを同定するものではない。６，１７１，６１１に記載されたヨウ素は、“ヨウ素”又はヨウ素酸アンモニウム、ヨウ化アンモニウム、ヨウ素酸カルシウム、ヨウ化カルシウム、一塩化ヨウ素、三塩化ヨウ素、ヨウ素酸マグネシウム、ヨウ化マグネシウム、ヨウ素酸カリウム、ヨウ化カリウム、ヨウ素酸ナトリウム、ヨウ化ナトリウム、ヨウ素酸亜鉛、及びヨウ化亜鉛からなる群より選択された“ヨウ素の塩”のいずれかである。これらのヨウ素の塩が殺菌性のものであることは、当業者に周知である：事実上、７．４のｐＨで、この群におけるヨウ化物の塩は、個々に又は組み合わせられたときのいずれかで殺菌性のものではない。その上、７．４のｐＨは、Ｉ２が、７．４のｐＨで安定なものではないので、Ｉ２の種と適合性のものではないと共に、７．４のｐＨでＩ２の種は、ヨウ化物、ＨＯＩ、ヨウ素酸塩、及び三ヨウ化物を包含するヨウ素の他の種を形成するために非常に急速に加水分解する。米国特許第５，９６２，０２９号明細書（特許文献２）は、７及びより上のｐＨでＩ２の加水分解を記載する。７．０のｐＨで、Ｉ２の約２１％は、一時間で加水分解される；８．０のｐＨで喪失は、一時間で７８％まで増加する。これは、Ｉ２の加水分解の率が、Ａｒｃｈ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １９４５，６，２６１−２６８（非特許文献５）においてＷｙｓｓによって５０年以上前に最初に公開されたので、新しい観察結果ではない。
【００１４】
Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  １９９７，１９５  Ｓｕｐｐｌ  ２，４２−４８（非特許文献６）においてＫｏ（ウムラウト）ｎｉｇ等は、多形核の白血球（ＰＭＮ）細胞におけるＰＶＰ−Ｉの効果を研究した。ＰＭＮ細胞は、外来性の病原体を飲み込むと共に免疫系へ処理された抗原を与えることに先立ちそれを処理することによって免疫反応において役割を果たす。ＰＭＮ細胞は、食作用として知られたプロセスを使用することで病原体を飲み込む。食作用の後に続くものであるが、病原体は、ファゴリソゾームへと移動させられるが、そこでは崩壊性の酵素が、活発に病原体を崩壊させる。病原体が、崩壊させられるとき、それらは、免疫反応を刺激することができるものであるＴＮＦ−αと同様のタンパク質を放出する。これらと同様の免疫反応は、アトピー性皮膚炎、湿疹、乾癬、膿痂疹、及び副鼻腔炎を包含する数個の医学的な健康状態において周知である。Ｋｏ（ウムラウト）ｎｉｇ等は、ＰＶＰ−Ｉの様々な濃度を備えた未知のエンテロトキシンのステータスの黄色ブドウ球菌の菌株を組み合わせ、且つ、ＰＭＮ細胞を加え、且つ、その次に６時間の間混合物を定温放置した。データは、ＰＶＰ−Ｉが、希釈されると、ＰＭＮ細胞が、増加する量のＴＮＦ−αを放出したことを示唆するが、ＰＭＮ細胞からのそれの放出の後でサイトカインのＴＮＦ−αのＰＶＰ−Ｉ不活性化を立証するものである。Ｋｏ（ウムラウト）ｎｉｇによって観察されたＰＶＰ−Ｉ反応は、ＰＭＮに特異的な応答であった（認識−食作用−プロセシング）。
【００１５】
Ｈｉｌｌ  ａｎｄ  Ｃａｓｅｗｌｌ  Ｊ  Ｈｏｓｐ  Ｉｎｆｅｃｔ  ２０００，４５，１９８−２０５（非特許文献７）は、１１個の異なる試料からの鼻の分泌物が、ＰＶＰ−Ｉの殺菌性の活性を低減したことを立証した。彼らは、１．０ミリリットルの鼻の分泌物が、おおよそ２２．５ｍｇの当量のＰＶＰ−Ｉを不活性化したことを計算した。これは、鼻が明確に定義された粘膜毛様体の器官を有することが知られたことであるので、驚くべき結果ではない。気道の粘膜は、二つの層、繊毛を包むものである低い粘弾性の周縁部の層、及び、周縁部の層の上部に乗るものであるより粘性の層、からなる。鼻の粘膜を含むものである主たる糖タンパク質は、ムチンである。ムチンは、Ｉ２と反応すると共にそれによってそれの活性を中和することができるものである非常に高い濃度のシステインを含有する。その結果、鼻腔に存するどんな残留のムチンをも克服することができるものである最小のＩ２の濃度を保証することは、必要なことである。
【００１６】
鼻腔におけるバイオバーデンの存在が与えられると、鍵となる配合パラメーターの一つは、効能について要求された殺菌性のヨウ素（即ち、Ｉ２）の最小の濃度である。理論的には、Ｉ２の濃度は、鼻腔の内部へ接触させられるものである材料の量の関数である。実際には、配合が、ゲル、クリーム、又は軟膏の形態で提供されるとすれば、鼻孔当たり約０．２５グラムの材料を、及び、配合が、鼻の滴又は噴霧の形態における液体として送達されるすとれば、それの量の二倍（即ち、鼻孔当たり０．５グラム）よりも多くはないものを、使用することだけが、実行可能なことである。米国特許第６，１７１，６１１号明細書は、（ヨウ素の種の全てが殺菌性の形態で存在したことを仮定すると）１０ｐｐｍのＩ２に等価なものである重量で０．００１％のより低い濃度の範囲のヨウ素を請求する。１０ｐｐｍのＩ２の濃度が、配合がゲルとして提供されるとき、黄色ブドウ球菌を除去することに適当なものではないことは、本発明に従って見出されてきたことである。組成物が、鼻孔へと噴霧されるときでさえ、それによってより多数のＩ２の分子が鼻孔の粘膜に接触することを許容するものであるが、１０ｐｐｍの組成物は、内因性のムチンと関連させられたバイオバーデンを克服するためには適当なものではない。
【先行技術文献】
【特許文献】
【００１７】
【特許文献１】米国特許第６，１７１，６１１号明細書
【特許文献２】米国特許第５，９６２，０２９号明細書
【非特許文献】
【００１８】
【非特許文献１】Ｋｒａｍｅｒ，Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  Ｖｏｌ．２０４（Ｓｐｐｌ．）；８６−９１，２００２
【非特許文献２】Ｍａｓａｎｏ，Ｐｏｓｔｇｒａｄ  Ｍｅｄ  Ｊ  １９９３，６９  Ｓｕｐｐｌ  ３，Ｓ１２２−５
【非特許文献３】Ｋｒａｍｅｒ  ａｎｄ  Ｇｌｕｃｋ，Ｋｒａｎｋｅｎｈａｕｓ−ｕｎｄ  Ｐｒａｘｉｓｈｙｇｉｅｎｅ（Ｈｏｓｐｉｔａｌ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  Ｈｙｇｉｅｎｅ）
【非特許文献４】Ｋｒａｍｅｒ，Ａ，Ｈｅｅｇ，Ｐ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｄｓ．；Ｍｕ（ウムラウト）ｎｃｈｅｎ，Ｆｉｓｃｈｅｒ  ＢＥＩ  Ｅｌｓｅｖｉｅｒ：２００１；ｐｐ．２５２−２６８
【非特許文献５】Ｗｙｓｓ，Ａｒｃｈ  Ｂｉｏｃｈｅｍ  １９４５，６，２６１−２６８
【非特許文献６】Ｋｏ（ウムラウト）ｎｉｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ  １９９７，１９５  Ｓｕｐｐｌ  ２，４２−４８
【非特許文献７】Ｈｉｌｌ  ａｎｄ  Ｃａｓｅｗｌｌ  Ｊ  Ｈｏｓｐ  Ｉｎｆｅｃｔ  ２０００，４５，１９８−２０５
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【００１９】
本発明に従って、上気道において有効な殺菌性の活性を提供するために必要な最小の濃度は、２５ｐｐｍのＩ２である。この最小の値は、鼻腔から取られた綿棒での定量的な微生物学的な測定に基づいたものである。それに応じて、ヨウ化物及びヨウ素酸塩が、還元体及び酸化体の種として使用されるとき、ヨウ素の２０ｐｐｍ及びヨウ素酸塩の６．９ｐｐｍの最小の濃度は、発生させられたＩ２の比が、少なくとも４０％であるとき、それぞれ、要求される。
【００２０】
鼻腔における使用のためにＩ２を配合するとき、主要な考慮は、Ｉ２の分子の蒸気圧である。ヨウ素の蒸気は、モルの基準で、塩素又は臭素の蒸気のいずれかよりも刺激するものであることが考慮される。ヨウ素の蒸気は、鼻及び咽喉に刺激、咳、喘鳴、喉頭炎を引き起こす。Ｃａｎａｄｉａｎ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｏｃｃｕｐａｔｉｏｎａｌ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｓａｆｅｔｙは、ヨウ素の蒸気に対する繰り返された露出又は高い濃度のヨウ素の蒸気に対する露出が、気道の痙攣、胸部の緊張、呼吸困難、重症の炎症、並びに、発生器、上気道、及び肺における流体の累積を引き起こすことがあることを示唆する。ヒトは、０．１ｐｐｍの大気のＩ２で悩まされずに；０．１５−０．２ｐｐｍで困難を伴って働くことができると共に、０．３ｐｐｍの濃度で働くことができないものである。しかしながら、Ｉ２についての臭気の閾値は、臭気が検出される前に刺激が起こることがあるように、０．９ｐｐｍで報告されてきたものである。明らかに、臭気が、検出されるとすれば、そのとき、Ｉ２のレベルは、最適なものではない。蒸気相におけるＩ２についての良好に確立された安全性の関心が与えられると、危害を引き起こさないことになるところのレベルを維持することは、必要なことである。
【００２１】
２５℃及び１．０気圧の圧力で、Ｉ２の昇華についての平衡定数は、４×１０−４である。この平衡は、２５℃での０．３ｍｍ及び３８．７℃での１．０ｍｍのＩ２の蒸気圧を説明する。標準大気圧を使用することで、約１３００ｐｐｍの大気のＩ２の最大の濃度は、体温で高まり得るであろう。従って、鼻腔におけるＩ２の投与は、不快な臭気に至り得る。強い臭気が、特定の配合で検出されるとすれば、そのとき、鼻の粘膜は、安全でないとして確立されてきたものである濃度のＩ２へ露出されているものである。水におけるＩ２の上限は、この出願の範囲内に留まるものであろう全体として水性の配合において３００ｐｐｍの濃度のＩ２を得ることが理論的に可能なことであるように、３３０ｐｐｍである。３００ｐｐｍのＩ２の溶液が、ヒトによって簡単に検出可能なものであると共に鼻腔において繰り返された投与に最適なものではない臭気の放出することは，見出されてきたことである。
【００２２】
Ｉ２からの臭気の特性決定は、特定の配合におけるＩ２の蒸気圧に直接的に関係付けられる。この出願において企図された配合における組み込みに適切ないくつかの薬剤、例．シクロデキストリン、は、Ｉ２の種が、化学的に活性な、即ち、電位差測定の分析によって検出可能な、ままである一方でさえ、Ｉ２の蒸気圧を低減することの能力を有する。特定の配合においてＩ２から検出可能な臭気を発生させるための現実の電位は、測定されなければならないと共に、水以外の大部分の配合の基材について予測されることができない。
【００２３】
黄色ブドウ球菌によって決定されるような、効能は、鼻の配合における使用に適切なＩ２の上側のレベルを確立するとき、Ｉ２の臭気及び鼻の刺激に対してバランスをとられなければならない。３７℃における３００ｐｐｍの濃度のＩ２は、最適ではないものである強い臭気を生産する。Ｉ２の最適な使用濃度が、鼻腔から黄色ブドウ球菌を除去するために必要な最小のものことは、明らかなことである。２５０ｐｐｍのＩ２を含有する適切に形成されたゲルの配合が、臭気の点で許容可能なものであったことは、見出されたことであった。この出願の目的のために、Ｉ２の好適な濃度は、０．１Ｎの塩酸におけるＩ２の２５０ｐｐｍの溶液において観察されたもの以下のものである蒸気圧を生産するところのものである。
【００２４】
鼻腔に適用された薬剤についての滞留時間は、多種多様な因子によって影響を及ぼされる。これらの一つは、鼻の前方の部分における堆積が、より長い滞留時間を提供するので、堆積の場所である。第二の考慮は、より高い粘度が、より長い滞留時間を提供すると、組成物の粘度である。この出願は、水（即ち、１．０ｃｐ）に実質的に類似のものである値から４０，０００ｃｐの粘度を備えた値までの範囲にわたるものである粘度を備えた配合を予期する。Ｉ２からの殺害のスピードは、極度に急速なもの（秒）であると共に、滞留時間は、鼻腔における固有のバイオバーデン、又はＩ２が、それが病原体に接触することができるように、鼻腔内で均一に乱されることを保証するという問題点、の顕著な因子であることが予期されない。
【００２５】
鼻の粘膜のｐＨは、これが、内因性のリゾチームが細菌を不活性化することを可能にするので、４．５から６．５までの範囲で優先的に維持される。加えて、正常な繊毛の動きは、このｐＨの範囲内で維持される。Ｉ２を、このｐＨの範囲において鼻腔における薬物の予期された滞留時間の間に安定なままであるために、配合することができる。この出願に記載された配合の好適なｐＨの範囲は、３．０と６．０との間にある。この出願において予期された鼻孔当たりのゲルの医薬の体積は、１００−２５０μＬが最も一般的な薬用量の体積であることを伴って、２５から５００μＬまでの間にある。配合が、１０ｃｐ以下であるところの粘度を有するとすれば、そのとき、３ｍＬと同程度に大きい体積は、投与されることがある。従って、適当な配合の緩衝能力は、原位置での望まれたｐＨを維持することが要求される。微生物の成長を予防するための防腐剤の使用は、このような防腐剤が、ｐＨ２．０と６．０との間で有効なものであるとの条件で、この出願において予期される。保湿剤は、この出願において予期されると共に、ゲルに基づいた鼻の生産物において簡単に加えられることができる；一般的な例は、グリセリン、ソルビトール、及びマンニトールを包含する。
【００２６】
ヨウ素は、１２９の分子量を備えた相対的にかさばった原子である。Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）と黄色ブドウ球菌のエンテロトキシン（ＳＥ）の超抗原との間の相互作用は、結び付くドメイン内のアミノ酸とのＩ２の共有結合性の結び付きによって遮断される。これらの反応の正味の効果は、黄色ブドウ球菌の超抗原とＴ細胞受容体との間における結び付きの反応を予防することである。これは、Ｉ２が、黄色ブドウ球菌が、細菌を囲む媒質へとＳＥを分泌するので、黄色ブドウ球菌の欠如におけるＴ細胞受容体へのＳＥの結び付きを予防することができることを意味する。これらの場所の例は、鼻の入口、副鼻洞、皮膚、及び創傷を包含する。加えて、これらのアミノ酸へＩ２を結び付けることは、
次には、細胞のシグナル伝達プロセスを遮断するであろう、チロシン、セリン、ヒスチジン、及びスレオニンへリン酸塩基を加えることのキナーゼの能力を遮断することがある。超抗原を介したＴ細胞の結び付き及び細胞のシグナル伝達に先立つタンパク質のリン酸化の両方と干渉することのＩ２の能力は、黄色ブドウ球菌によって引き起こされた重度の免疫応答を軽減するための先に識別されてない手段を提供する。
【００２７】
本発明は、食作用のプロセシングステップを有するものではないリンパ球／Ｔ細胞の応答を阻害すると共に従ってエンテロトキシンへのリンパ球／Ｔ細胞の応答を阻害するための方法を記載する。事実上、本発明の方法は、どのようにＴ細胞受容体に結び付く超抗原を遮断するかを教示する。この発明は、また、上気道から黄色ブドウ球菌を根絶することになるが、しかし、鼻の組織を刺激しない又は全身性の毒性を引き起こさないものである方法を記載する。
【発明を実施するための形態】
【００２８】
［定義］
ここにおいて使用されたような用語“分子のヨウ素”は、文献において二原子のヨウ素又は元素のヨウ素としばしば称されるものであるＩ２の種を指す。用語“分子のヨウ素”は、Ｉ２が他の分子と錯化されたものではないという点で病原体と反応することができるものであるＩ２を指す。
【００２９】
ここにおいて使用されたような用語“ヨウ素陰イオン”は、化学記号Ｉ−によって表現されるものである種を指す。ヨウ化物陰イオンについての適切な対イオンは、ナトリウム、カリウム、カルシウム、及び同様のものを包含する。
【００３０】
ここにおいて使用されたような用語“三ヨウ化物”は、化学記号Ｉ３−によって表現されるものである種を指す。三ヨウ化物が、一つのヨウ素陰イオン及び遊離の分子のヨウ素の一つの分子へと解離することは、当業者によって認識されることである。
【００３１】
ここにおいて使用されたような用語“合計のヨウ素”は、後に続くヨウ素の種：遊離の分子のヨウ素、ヨウ化物、ヨウ素の有機的に錯化された形態、三ヨウ化物、ヨウ素酸塩、亜ヨウ素酸塩、次亜ヨウ素酸（ＨＯＩ）などの全てに含有されたヨウ素を指す。
【００３２】
用語“治療指数”は、望まれない効果に対する望まれた効果の比として伝統的に定義されてきたものである。単一の薬物が、多数の治療指数、望まれた薬物の作用に相対的なそれの望ましくない効果の各々について一つずつ、を有することができることは、留意されるべきことである。Ｉ２は、予期された組成物におけるヨウ素のただ一つの生物学的に活性な形態である；毒性は、全ての形態のヨウ素と関連させられる。従って、ここにおいて使用されたような用語“治療指数”は、望まれた臨床的な効果を達成するものである合計のヨウ素の最も低い濃度を指す。
【００３３】
用語Ｉ２からの“不快な臭気”は、前記のデンプン紙が、密閉された５０ｍＬの自立型の目盛り付きのプラスチックのチューブ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃａｔ．Ｎｏ．４３０８９７）の上部の内側と鉛直に整列させられると共にそれに付着させられるとき、６７秒内に、青色にヨウ化カリウム澱粉紙（Ｗｈａｔｍａｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｌｔｄ，Ｃａｔ．Ｎｏ．２６０２−５００Ａ）の湿らせられた１インチのストリップを変色させることになるものである組成物の０．１５ｍＬからの２０℃で発生させられたＩ２の蒸気圧を指す。
【００３４】
ここに使用されたような用語“ヨウ素発生の率”は、分子のヨウ素が形成されるところの率を指す。本出願における組成物は、全て、混合することによって活性化されると共にその次に関心のある表面へ適用されることを必要とする。この出願における組成物の適用は、混合した後の２０秒から６０分まで起こるべきである；従って、Ｉ２の発生の率は、有意義な考慮である。
【００３５】
ここに使用されたような用語“分子のヨウ素の率”は、錯化されたヨウ素を包含する全ての他のヨウ素の種に対する分子のヨウ素（Ｉ２）の比を指す。
【００３６】
用語“超抗原”は、それらが、細胞のプロセシング及び提示が応答を誘発させることを要求しないため、特有のものである、あるクラスの免疫刺激物を指す。黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＢは、効力のあるエンテロトキシンである。超抗原は、細胞毒素の合成及び放出を包含する組織全体に及ぶ炎症性の応答のみならず局在化されたものを引き起こす免疫系のＴ細胞を無差別に活性化させる。超抗原は、細菌によってエキソトキシンとして分泌される。超抗原は、外部からＴ細胞受容体（ＴＣＲ）のＶβドメインへ及び抗原に独立なＴ細胞の活性化を引き起こす主要組織適合性複合体のタイプＩＩの分子（ＭＨＣ  ＩＩ）の相補的な鎖へ結び付く。
【００３７】
用語“ヨウ素化”は、有機分子へのヨウ素原子の化学的な付加を指す。ヨウ素は、アミノ基、スルヒドラル（sulphydral）基、芳香族の炭素原子を含有するヒドロキシル基、及び不飽和結合をヨウ素化することが知られたものである。
【００３８】
［記載］
水性の組成物におけるＩ２の形成は、好ましくは、水性の組成物に存在する合計のヨウ素の少なくとも４０％が、約２５ｐｐｍより上のＩ２の最小の濃度におけるＩ２であるような様式で、酸化体及び還元体によって反応からこの発明に従って発生させられる。この出願において企図されたＩ２の濃度は、Ｉ２の形態にあるものである合計のヨウ素の少なくとも４０％で、しかし、好ましくは少なくとも５０％で、２５ｐｐｍから２５０ｐｐｍまで範囲にわたる。Ｉ２の好適な濃度は、２５ｐｐｍから１５０ｐｐｍまでである。分子のヨウ素の最も好適な濃度は、５０ｐｐｍから７５ｐｐｍまでである。
【００３９】
この出願に企図された合計のヨウ素の濃度は、２５ｐｐｍから５００ｐｐｍまでの範囲にわたる。合計のヨウ素の好適な濃度は、２５ｐｐｍから３００ｐｐｍまでである。合計のＩ２の最も好適な濃度は、約５０から１５０ｐｐｍまでである。
【００４０】
この出願に企図されたＩ２の比は、４０から１００％までの範囲にわたる。分子のヨウ素の好適な比は、７０から１００％までである。分子のヨウ素の最も好適な比は、１００％である。
【００４１】
ヨウ素の発生の率は、最大の値に到達するためのＩ２の発生に要求された時間として、ここに定義される。この出願において企図されたヨウ素の発生の率は、水性の環境におけるヨウ化物とヨウ素酸塩との間のもののような拡散で制御された反応についての秒から１５分の高いものまでの範囲にわたる。この出願において企図されたＩ２の発生の最も好適な率は、２−５秒である。ヨウ素の安定な組成物を希釈すること、及びその次に、前記希釈の生産物を直ちに適用することによってこの出願を実用化することは、可能なことである。このアプローチは、また、現行の出願の下で企図されたものであると共に、Ｉ２の発生の瞬間的な率を有することが考慮されるであろう。
【００４２】
当技術において知られた非常に多くの方法を、この出願において企図されたものとしてＩ２を発生させるために利用することができる。ヨウ素からのＩ２の原位置での発生のために、最も一般的な酸化体は、活性な塩素化合物及び過酸化水素である。ヨウ化物からＩ２を発生させることが好適な酸化体は、ヨウ素酸塩である。ヨウ素酸塩を、後に続く群：ヨウ素酸カルシウム、ヨウ素酸ナトリウム、ヨウ素酸カリウム、ヨウ素酸マグネシウム、ヨウ素酸亜鉛、ヨウ素酸アンモニウム、及び同様のものからの塩として導入することができる。分子のヨウ素を、また、錯化されたヨウ素を含有するものである配合の希釈によって、又は、水の消毒に利用された数個のデバイスにおいてなされるような元素のヨウ素の解離によって、発生させることができる。
【００４３】
ヨウ化物の陰イオンの適切な乾燥した源は、ヨウ化ナトリウム、ヨウ化カルシウム、ヨウ化アンモニウム、ヨウ化マグネシウム、ヨウ化亜鉛、及びヨウ化カリウムを、ヨウ化物の他の塩のみならず、包含する。水性の干渉における解離においてヨウ化物の陰イオンを産出するものであるいずれの化合物も、この出願に適切なものである。ヨウ化物の単塩は、好適なものであると共にあまり高価なものではないという利点を有する。加えて、それらは、固体及び液体の形態における長い保存寿命を有する。
【００４４】
この出願の下で企図された組成物のタイプは、油に基づいたクリーム及びエマルジョンが、この出願において企図されたものではないとの条件で、液体、ゲル、クリーム、軟膏、及びエマルジョンを包含する。組成物のタイプは、この出願の確定的な態様ではなく、むしろ、Ｉ２及び錯化されたＩ２の絶対的な及び相対的な濃度は、この発明の二つの最も臨床的な態様である。組成物の異なるタイプの例は、一例として、この出願の例の節において提供される。多数の異なるタイプの組成物が、この出願の教示と適合性のものであることは、これらの実験から明らかなことである。
【００４５】
発明の文脈において有用な厚さは、好ましくは、アルキルセルロース、アルコキシセルロース、キサンタンガム、グアーガム、ポリ有機スルホン酸、及びそれらの混合物からなる群から取られる。増粘剤は、他の配合の処方成分との適合性及び望まれた粘度に基づいて選ばれる。一般的に言えば、増粘剤は、重量で約０．０１−１０％、及び、より好ましくは、重量で約０．１−１％のレベルで存在するものであるべきである。
【００４６】
シクロデキストリンは、グルコピラノース単位で構成された結晶性の、水溶性の、環式の、非還元性の、オリゴ糖である。Ｉ２は、水よりも実質的に親水性ではないものであると共に、従って、水の存在においてシクロデキストリン・キャビティに包含されるためのポテンシャルを有する。シクロデキストリンでのＩ２のこのような錯化は、蒸発するためのそれの能力を低減する。それぞれ、６、７、及び８個のグルコピラノース単位で構成されたシクロデキストリン（即ち、α、β、及びγ）の三つのクラスがある。シクロデキストリンは、潜在的には、それらが、Ｉ２を結び付けると共にそれによって配合におけるＩ２の有効な蒸気圧を低減することができるので、この出願に企図された配合に有用なものである。
【００４７】
この出願において企図された組成物についての適切な緩衝剤は、水及びグリシン、フタル酸、クエン酸、リン酸塩、ジメチルグルタル酸、酢酸塩、コハク酸、フタル酸、リンゴ酸、ホウ酸、及び同様のもので緩衝された水アルコール性の混合物を包含する。これらの薬剤の一般的に入手可能な塩、例．クエン酸ナトリウム、リン酸カリウム、マレイン酸カルシウム、は、この出願に企図されたこの組成物における使用に等しく適切なものである。
【００４８】
一般には、当業者に知られた、いずれの分散性の条件剤、保湿剤、及び皮膚軟化剤も、本発明において使用されることがある。当該発明において使用されるための好適な皮膚軟化剤は、グリセリン、プロピレン、グリコール、ソルビトール、ラノリン、ラノリン誘導体、ポリエチレングリコール、アロエベラ、グルカミン酸塩、ポリエチレングリコール部位に少なくとも１００個のエトキシ単位を含有するポリエトキシル化されたグルコース＝ジオレアート、入手可能な、少なくとも１０個のエトキシ単位を含有するポリエトキシル化されたメチルグルコース、アラントイン、アルギン酸塩、スルホコハク酸塩のモノエステル塩、アリファヒドロキシ脂肪酸、脂肪酸のエステル、セラミド、及びそれらの混合物からなる群からとられる。広くは、条件剤は、重量で約０．５−２０％のレベルで使用される。最も好適な条件剤は、ソルビトール、鉱物油、グリセリン、及び／又はマンニトールであると共に、通常では重量で約１−２０％、及びより好ましくは重量で約２−１０％、のレベルで用いられる。
【００４９】
キレート化剤又は金属イオン封鎖剤は、特にヨウ素の錯化された形態が存在するとき、当該発明において有用な安定化剤であることができる。無機の及び有機のキレート化剤の両方を包含する、一般的に入手可能なキレート化剤を、当該発明において使用することができる。有機のキレート化剤は、アルキルジアミンポリ酢酸、ＥＤＴＡ（エチレンジアミンテトラ酢酸四ナトリウム塩）のようなキレート化剤、アクリル酸及びポリアクリル酸タイプの安定化剤、ホスホン酸及びホスホン酸塩タイプのキレート化剤、及び他のものを包含する。好ましい有機の金属イオン封鎖剤は、アルカリ金属塩、アンモニウム塩、又は、モノ、ジ、若しくはトリエタノールアミノ塩を包含するアルキル若しくはアルカノールアミン塩のみならず、１−ヒドロキシエチリデン−１，１−ジホスホン酸、アミノ［トリ（メチレンホスホン酸）］、エチレンジアミン［テトラ（メチレン−ホスホン酸）］、２−ホスホノブタン−１，２，４−トリカルボン酸を包含する、ホスホン酸及びホスホン酸塩、を包含する。無機のキレート化剤は、環式の又はより高級のポリリン酸塩の種と一緒に、ピロリン酸ナトリウム、トリポリリン酸ナトリウム又はカリウムのような一般的に入手可能なポリリン酸塩材料を包含する。好ましくは、このような金属イオン封鎖剤は、組成物の約０．０５重量％から約０．５重量％までの範囲にわたる濃度で使用される。
【００５０】
当該発明において使用することができるものである一般的に入手可能な有機酸は、安息香酸、マンデル酸、ソルビン酸、クエン酸、より低級のアルカン酸、及び、それらのナトリウム、カリウム、又はアンモニウム塩のような、それらの食品用の塩を包含する。これらの有機酸、それらの塩、又はそれらの混合物は、重量で約０．０１０から０．５パーセントまで、好ましくは重量で０．０５０から０．２０パーセントまで、の間の量における組成物において存在するものである。現在好適な有機酸は、マンデル酸、安息香酸、クエン酸、及びソルビン酸であるが、安息香酸は、安息香酸ナトリウムとして適切に存在すると共にソルビン酸は、遊離の酸として適切に存在するものである。これらの酸、又はそれらの塩、及び他のものの各々を、単独で又は組み合わせで、この発明において企図された組成物へと組み込むことができる。
【００５１】
本発明は、分子のヨウ素の薬用量に依存性の適用が、黄色ブドウ球菌エンテロトキシン超抗原と反応すると共にそれを様々なサイトカインを合成すると共に放出するためのＴ細胞の不足によって測定されたようなＴ細胞のリンパ球へ結び付くことが不可能なものにすることを立証する。薬用量に依存性の様式における超抗原のＴ細胞の結び付きと干渉することのヨウ素の能力は、本発明の新規な観察結果である。
【００５２】
この出願における教示及び例は、局所のヨウ素の調製のエリアにおける先行技術の全体を具体的に列挙することのいずれの試みもなすものではない。ヨウ素と適合性のものであることが知られたものである賦形剤は、また、この出願に記載された組成物及び条件を伴った使用のものであることがある。このような賦形剤は、界面活性剤、増粘剤、保湿剤、皮膚軟化剤、皮膚条件剤、安定化剤、乳白剤、湿潤剤、精油、キレート化剤、緩衝剤、防腐剤、有機酸、及び芳香剤を包含する。
【００５３】
［例］
例１
鼻の分泌物を、冷たい空気中で運動した後で１０人のボランティア（７人の男性及び３人の女性）から集めた；ボランティアの四人は、風邪を引いた。分泌物を滴下すること又吹き込まれた分泌物を、プラスチックの目盛りを付けたビーカー（Ｆｉｓｃｈｅｒ，Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ）において収集し、且つ、上部をＰａｒａｆｉｌｍ  Ｍでカバーした。初期の試料を、全ての試料を収集するまで、凍結した。全ての試料が、実質的に均質であると共に均一なアリコットをピペットで取り除くことができるまで、試料を水と混合した（２部の試料対１部の水（体積／体積））と共に拍動性の様式で渦をなした。
【００５４】
ヨウ素の結晶（ＡＣＳ  Ｒｅａｇｅｎｔ  Ｇｒａｄｅ，Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ）を、１リットルの容積測定のフラスコにおいて置き、且つ、その次に、０．０１ＮのＨＣｌを１リットルまでフラスコＱＳに加えた；ラバーストッパーは、それを通じて挿入された小さいガラスチューブを有した；このチューブの上部をパラフィルムで密閉した。Ｉ２の結晶を、マグネティックスターラーバー及びマグネティックスターラープレートで３時間の間室温でかき混ぜた。二時間後に、ガラスチューブを、チューブの下部をフラスコの下部より約３インチ上の点で位置させたように、押し下げた。飽和のＩ２の溶液の試料を、それの終端へ付けられた細いプラスチックのチューブ（ＰＶＣ  ＩＤ  ０．０４６’’）を有したものである１８ゲージの皮下注射針を備えた５０ｍＬのガラスシリンジを使用することによって、このガラスチューブを通じて抜き取った。従って、ストッパーを、常にフラスコに維持した。貯蔵のＩ２の溶液の試料を、抜き取り、且つ、Ｉ２の濃度は、Ｇｏｔｔａｒｄｉの電位差測定の方法を使用することで３３０ｐｐｍであることが決定した。
【００５５】
渦をなした鼻の分泌物の０．２５ｍＬのアリコットを１ドラムのバイアル（１５×４５ｍｍのバイアル）に置き、且つ、カップを上部に置いた。ｐＨ５．０のクエン酸緩衝剤のアリコット（１００ｍＭ）を、７ドラムのバイアル（２９×６５ｍｍ）に置き、且つ、バイアルへと薄いプラスチックのカップを置くことによって密閉した。貯蔵のＩ２の溶液の一リットルを、１００ｍＭのクエン酸緩衝剤の１、３、６、１０又は１５ｍＬを含有するバイアルに注入した；これは、１６５、８３、４７、３０、及び２１ｐｐｍのＩ２を含有する溶液を産出した。試料（０．２５ｍＬ）を、各々のＩ２の溶液から抜き取り、且つ、渦をなした鼻の分泌物の試料へとプラスチックのカップを通じて注入した；組み合わせた試料を渦によって混合した。対照試料は、いずれのＩ２をも無しに０．２５ｍＬのクエン酸緩衝剤を受容した。全ての試料を、１０分の間室温で定温放置することを可能にした。
【００５６】
十分後に、１．０ｍＬの０．５％のチオ硫酸ナトリウムを、対照を包含する各々の試料へ加えた。トリプチケース大豆寒天培地（ＴＳＡ）プレートを、ＴＳＡプレートの表面にわたって各々の試料の０．５ｍＬを広げることによって接種した。プレートを、摂氏３７度で２４時間の間定温放置した。プレートを、定温放置の２４時間後に細菌のコロニーの存在について検査した。鼻腔は、ムコ多糖類が栄養の源を提供するので、細菌の複製に対して伝導性のものである；その結果として、全ての細菌は、薬剤が有効なものであるために除去されることを必要とする。その結果として、プレートに、陽性のもの（コロニーの存在）又は陰性のもの（コロニーの欠如）かいずれかとして評点を付けた。結果は、表１に示されると共に、鼻の分泌物が、病原体を不活性化することのＩ２の能力に影響を及ぼすことを示唆する。この結果は、鼻の分泌物を含むものであるムコ多糖類が、相対的に高い百分率のスルヒドラル基を含有するので、驚くべきことではない。
【００５７】
【表２】
2009541330.tif 000003
例２
鼻腔から黄色ブドウ球菌を除去することが必要なＩ２の最小の濃度を、ヒトのボランティアにおいて評価した。三十五人の成人のボランティアを、鼻腔から黄色ブドウ球菌を除去するためにＩ２の異なる濃度の能力を評価するために使用した。標本を、ＢＢＬ  ＣｕｌｔｕｒｅＳｗａｂで各々の鼻の入口の前側の１．５ｃｍを綿棒でとることによって成人の鼻孔の前側から取った。綿棒を、各々の鼻の開口の内壁のまわりに４倍回転させ、且つ、その次にスチュワート（Ｓｔｅｗａｒｔ）培地へと置き、且つ、評価用のラボへ輸送した。ＴＳＡ  ＩＩプレートに綿棒で接種した。プレートに非ＣＯ２の恒温器において３７℃で接種した。低温放置の後に続けることで、ＴＳＡ  ＩＩプレートを、黄色ブドウ球菌の示唆に富むコロニーについて検査した。黄色ブドウ球菌を、グラム染色及びコアグラーゼ試験を包含する標準的な方法を使用することで同定した。ボランティアを、一週間離れて、五個の別個の場合における黄色ブドウ球菌の鼻腔保菌についてスクリーニングした。持続性の保菌者のみ（即ち、少なくとも８０％の培養陽性のもの）を試験に使用した。
【００５８】
試験項目は、二つの構成成分のゲル−液体系からなるものであった。ゲル及び液体を、綿棒での鼻腔における適用より先に混合した。ゲルを、ＵＳＰクエン酸（１０％重量／体積）、ＮＦグリセリン（１０％重量／体積）、ＮＦカルボキシメチルセルロース（０．７５％重量／体積）、ＮＦ、及びホウ酸（０．３％重量／体積）を使用することで、調製した；ゲルのｐＨを水酸化ナトリウムで３．０まで調節した。炭酸ナトリウム（０．２％重量／体積）におけるＵＳＰヨウ化ナトリウム（０．３５４％重量／体積）及びＦＣＣヨウ素酸カリウム（０．３０３％）の水性の混合物を調製した。Ｉ２処理剤を、水性の溶液の１部とゲルの９部を混合することによって、使用に先立ち調製した；これは、Ｇｏｔｔａｒｄｉの電位差測定の方法によって及びチオ硫酸塩の滴定によって決定されたような３００ｐｐｍのＩ２との混合物を産出した。
【００５９】
Ｉ２の七個の異なる濃度を使用した。異なるＩ２処理剤を、ヨウ化物／ヨウ素酸塩の水性の混合物と異なる量のカルボキシメチルセルロース（ＣＭＣ）ゲルを混合することによって調製した。表２は、Ｉ２の濃度及び使用したゲル−ヨウ化物／ヨウ素酸塩の溶液の相対的な体積を同定する。
【００６０】
【表３】
2009541330.tif 000004
慢性的にコロニー形成されたボランティアを、五個の（４）連続的な日についての試験項目で処置した。ボランティアの処置の各々の日で、活性化されたゲルを、作業日のスタートより前に、及びその次にその６時間後に、適用した。ＣＭＣゲルを、ヨウ化物／ヨウ素酸塩の混合物と混合し、且つ、その次に滅菌した綿が先に付けられた綿棒で各々ボランティアの鼻孔の各々へ適用した。ＣＭＣゲルを、活性化させ、且つ、その次に、５分内に適用した。ゲルを適用するために、綿棒を、活性化されたゲルへと浸漬させ、且つ、その次に各々の鼻孔の内側で回転させた；これを、各々の鼻孔で各々の適用について二回した。処置の前に、ＢＢＬ  ＣｕｌｔｕｒｅＳｗａｂを、黄色ブドウ球菌の存在を確認するために取ってきた；第二のＢＢＬ  ＣｕｌｔｕｒｅＳｗａｂを、処置が終了してしまった後２４時間で取ってきた。ボランティアを、また、最後の処置の後の１及び２週間で評価した。
【００６１】
【表４】
2009541330.tif 000005
例３
架橋されたアクリル酸のゲルを、Ｉ２の収率対数個の配合の変数を評価するために使用した。架橋されたアクリル酸重合は、それらを鼻腔における使用について有用なものにすることがあるところのレオロジーの性質を有する。加えて、架橋されたアクリル酸重合体は、臭気の無いものであると共に、重合体に多数のカルボン酸基を有するが、それは、安定な酸性のｐＨを維持することを助ける。三個の異なるゲル（Ｂ１８２，ＮｏＥ−０２６，ＮｏＥ−００４）を、Ｉ２の収率対配合における賦形剤の異なる濃度を調査するために調製した。
【００６２】
【表５】
2009541330.tif 000006
ビーカーを、約４００ｍｌの水で装填した；関心のあるポリアクリル酸の重合体、例．Ｃａｒｂｏｐｏｌ  ９８０  ＮＦを、その次に加え、且つ、Ｃａｒｂｏｐｏｌを水和させると共にその次にグリセリンを加える前に、１−２時間の間８００−１０００ｒｐｍでＬｉｇｈｔｎｉｎ  ＬａｂＭａｓｔｅｒミキサーで攪拌した。８０ｍｌの水におけるＥＤＴＡ、ホウ酸、及び１０ＮのＮａＯＨを含有する溶液を、その次に、混合物へ加えた。混合物を、その次に、６００ｐｐｍで１時間の間攪拌し、且つ、室温で貯蔵し、且つ、その次に、ＱＳを１リットルまでにした。ヨウ化ナトリウム及びヨウ素酸ナトリウムの貯蔵液を、明確に定められた量のＩ２を発生させる為に、ゲルとの混和物のために調製した。ヨウ化ナトリウム（０．６０グラム）及びヨウ素酸ナトリウム（２．０グラム）を、１０ＮのＮａＯＨの１．４ｍｌを含有するものであった１２０ｍｌの水に溶解させた。ゲルの最終的なｐＨは、４．５と６．０との間にあった。
【００６３】
ゲルの一ｍｌを１．０ｍｌの貯蔵のヨウ化物／ヨウ素酸塩の混合物と混合した。反応を、０．５、１．０、２．０、及び４．０分で停止させた。ゲルを、その次に、１０ｍｌのクロロホルム及びリットル当たり３００グラムの硫酸ナトリウムを含有するものであるｐＨ４．８における５０ｍｌの１．０Ｎのリン酸塩緩衝剤で抽出した。５２０ｎｍにおける吸光度を、Ｓｃｈｉｍａｄｚｕ  ＵＶ−１６０２分光光度計において測定した。ゲルＮｏＥ−０２６を、試験し、新たに調製し、且つ、４ヶ月の間に４０℃に貯蔵されたＮｏＥ−０２６ゲルに対して比較した。Ｉ２の収率は、全ての例において５０％より上にあった；ゲルの貯蔵は、Ｉ２の収率に強い影響を与えるようには見えなかった。ヨウ化物及びヨウ素酸塩の間における反応の率は、拡散で制御されたものであることが知られたことであると共に、Ｉ２の収率が、時間の関数でなかったことは、驚くべきことではない。
【００６４】
【表６】
2009541330.tif 000007
例４
この出願において企図された配合の知覚されたＩ２の臭気は、直接的に有用性に影響がある。特定の配合においてＩ２から検出可能な臭気を発生させるために現実のポテンシャルを、測定しなければならず、且つ、水以外の大部分の配合の基材について予測することができない。この実験は、水性の媒体においてヒトによって知覚されたＩ２の臭気に基づいたこの出願において企図された複合体組成物から知覚された臭気を特性決定するという定量的な手段を提供する。
【００６５】
０．１ＮのＨＣｌにおける数個の異なる濃度の純粋なＩ２を、平面内のストッパーを備えたガラスの体積測定のフラスコにおいてＩ２の結晶（Ｓｉｇｍａ−Ａｌｄｒｉｃｈ  Ｃａｔ．Ｎｏ．２６６４２６−２５０Ｇ）の溶解によって調製した。ヨウ化カリウム澱粉紙（Ｗｈａｔｍａｎ  Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｌｔｄ．，Ｃａｔ．Ｎｏ．２６０２−５００Ａ）の１インチのストリップを、蒸留水で完全に湿らせ、且つ、５０ｍＬの自立型の目盛り付きのプラスチックのチューブ（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｃａｔ．Ｎｏ．４３０８９７）の内側の表面に対して同じ高さに鉛直に整列させた。一度開始の紙を、壁の内側に付着させたら、Ｉ２の溶液の１５０μｌをプラスチックのチューブの下部へと移した；これらのチューブの下部の断面は、形状において円錐形のものであると共に、相対的に明確に定められたエリアにおいてこの体積の流体を保持する。一度試料を目盛り付きのプラスチックのチューブへと移したら、上部を、直ちにねじで留め、且つ、ストップウォッチをスタートさせた。デンプン紙が青色に変色するために要求された時間を、秒単位で記録した。
【００６６】
【表７】
2009541330.tif 000008
五人のボランティア（３人の男性；２人の女性）を、Ｉ２の水性の溶液から臭気を評価するために使用した。実験室、カフェテリア、又はバスルームに隣接したものでない臭気の無い部屋を評価に使用した。ヨウ素の臭気を評価するために選択された個人は、風邪又はアレルギーを持っていなかった。試験を、朝に行い、且つ、試験の朝にシャワーを浴びることを、且つ、その朝にローション剤を使用すること又は後に髭を剃ることがないことを、ボランティアを指示した。不快な臭気を提供したものであるいずれの試料をも識別することを、ボランティアを指示した。ボランティアの誰もが、２２．５ｐｐｍ以下のＩ２の濃度でどんな臭気も検出しなかった。ボランティアの全員は、５５ｐｐｍより上の香気の存在を検出することができたが、しかし、この臭気は、Ｉ２の濃度が、２７５ｐｐｍ以上であるまで、好ましくないものであるとは思われなかった（５人のボランティアの中の４人）。
【００６７】
例５
この実験は、Ｉ２の薬用量に依存性の適用が、黄色ブドウ球菌エンテロトキシンＢ（ＳＥＢ）のような、超抗原と反応するが、それらをＴ細胞のリンパ球に結び付くことを不可能なものにする、ことを立証した。超抗原の結び付きによるＴ細胞の刺激は、サイトカイン合成に要求される。発明者は、哺乳動物の細胞を殺すことなく細菌又はカビ／酵母を殺すための培養された哺乳動物の細胞を消毒する方法を調査していた。選抜された哺乳動物の細胞は、クエン酸ナトリウムと共にＢＤ  ｖａｃｕｔａｉｎｅｒ  ＣＰＴ細胞調製チューブを使用することで新たに収集されたヒトの末梢血の白血球（ＰＢＬ）であった。先に記載された手順を、Ｂ細胞及びＴ細胞の両方を包含するものである、高度に豊富にされたリンパ球を産出するために使用した。黄色ブドウ球菌を寒天斜面において地元の病院から得た。黄色ブドウ球菌の分離株は、食中毒を患う患者からのものだった。黄色ブドウ球菌の分離株は、ＳＥＢを発現した。
【００６８】
リンパ球（血球計算器によって計数された１０６個／ｍＬ）を、ＨＥＰＥＳ（３ｍＭ）を備えたＨａｎｋｓの平衡塩類溶液に懸濁させ、且つ、２％（体積／体積）のウシ胎児血清及び１０３−１０５ｃｆｕ／ｍＬの範囲にわたる、変動する量の黄色ブドウ球菌を加え、且つ、アッセイを一時間の間に３７℃で定温放置した。一時間後に５００マイクロリットルのＩ２を、様々な濃度（０．１−１００ｐｐｍの遊離の分子のヨウ素、最終的な濃度）で様々な培養物に加えた。追加的な１０分の後に、チオ硫酸ナトリウムの２Ｎの溶液の２００マイクロリットルを加えた；１００マイクロリットルのアリコットを各々の反応ベッセルから取り除き、且つ、栄養寒天プレートに黄色ブドウ球菌の単離のためにすじをつけた；反応チューブをその次に恒温器（３７℃）へ戻した。結果は、若干、予測可能なものである。０．１−１０ｐｐｍのヨウ素で処置されたリンパ球−黄色ブドウ球菌（１０３−１０５）の培養物は、寒天において成長するものであった、生存可能な黄色ブドウ球菌を有するものであった。
【００６９】
１０−１００ｐｐｍのＩ２を備えた反応ベッセルは、生存可能な黄色ブドウ球菌を有するものではなかった。しかしながら、驚くべき発見は、三日後に起こった。各々の反応ベッセルを、リンパ球の数を観察すると共に計数するために顕微鏡／血球計算器を使用することで検査した。１０５個の黄色ブドウ球菌及び１０ｐｐｍのヨウ素を備えた反応ベッセルは、１００ｐｐｍのＩ２で処置された類似の培養物より１００倍多いリンパ球（〜１０８個／ｍＬ）を有するものであった。これらの結果は、混乱するものであった。我々は、これらの実験に使用された黄色ブドウ球菌の菌株が、ＳＥＢ、知られた超抗原、を発現させたことを知った。我々は、何かが、１０ｐｐｍのＩ２でリンパ球の増殖をトリガーしたが、しかし、１００ｐｐｍのＩ２ではしなかったことを予測し、且つ、それが、黄色ブドウ球菌のＳＥＢであったことを仮定した。鍵となる仮定は、どういうわけかＩ２が黄色ブドウ球菌とリンパ球との間の反応を遮断したため、Ｉ２がより高いＩ２の濃度でリンパ球の増殖を遮断したということであった。これらの結果は、我々が、増殖の結果を説明するものであるかもしれない実験を行うことを促進した。
【００７０】
我々は、我々の仮説を試験することの大部分の直接的な方式が、Ｉ２と黄色ブドウ球菌ＳＥＢを混合するためのものであったことを決めた；チオ硫酸ナトリウムで混合物を中和し、且つ、その次に、中和させられた溶液で新たなリンパ球を処置した。我々は、その次に、Ｔ細胞との相互作用の後に続くサイトカイン合成を測定することができたであろう。我々は、公開された研究に基づいたＴ細胞刺激のマーカーとしてのインターロイキン６（ＩＬ−６）及びインターフェロン・ガンマ（ＩＦＮ−γ）を測定することを選抜した。黄色ブドウ球菌のＳＥＢ（ＵＳ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ，Ｓｗａｍｐｓｃｏｔｔ，ＭＡ；ｃａｔ＃  Ｓ７９６５−３５Ａ）、精製されたマウスの抗エンテロトキシンＢ単クローン性のＩｇＧ抗体、精製されたマウスの単クローン性のＩｇＧからインターフェロンＩＦＮ−γ、及びサイトカインＩＬ−６を包含する全ての試剤を、商業的な源から購入した。対照実験を、新たなＰＢＬ及び１ｐｇ／ｍＬのＳＥＢを使用することで行った。９６ウェルの微量検定板における二つのサイト捕獲ＥＬＩＳＡ免疫学的検定を、商業的なキットＩＦＮ−γ（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；ｃａｔ＃８８−７３１４−７６）及びＩＬ−６（ｅＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ，ＣＡ；ｃａｔ＃８８−７０６６）として購入した。使用した酵素は、ホースラディッシュペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）であり、且つ、リンカーは、ビオチン−ストレプトアビジンであり、基質は、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）であった；色の発色を、硫酸で停止させ、且つ、色を、Ｓｃｈｉｍａｄｚｕ  ＵＶ−１６０２分光光度計で５７０ｎｍにおいて読み取った。各々の未知のものの光学濃度を、決定し、且つ、各々の商業的なキットが供給された標準品を使用することで得られたＩＬ−６及びＩＦＮ−γの濃度に対して比較した。
【００７１】
検量線を、ＩＬ−６（６−２００ｐｇ／ｍＬ）及びＩＮＦ−γ（０．１−３．０ｎｇ／ｍＬ）の両方について用意した。Ｉ２を、３３０ｐｐｍ／ｍＬの貯蔵濃度で新たに調製し、且つ、アリコットを、望まれた最終的なヨウ素の濃度を達成するために様々な反応チューブへ加えた。
【００７２】
希釈されてないＳＥＢ（１０マイクロリットル）を、３０分の間に室温でＩ２（１０マイクロリットル）及び緩衝剤（１Ｍのクエン酸塩の緩衝剤ｐＨ５．０）と混合した。１時間の後に、５μＬの２Ｎのチオ硫酸ナトリウムを、全ての試料へ加え、且つ、Ｉ２の完全な中和を保証するために穏やかにかきまぜた。ＰＢＬの細胞、ヨウ素化されたＳＥＢを、反応チューブにおいて穏やかに混合し、且つ、３７℃で置いた。１時間の後に、細胞をペレット成形し、且つ、５μＬを、各々のチューブの上澄みから取り除き、且つ、細胞の無いフラクションにおけるサイトカインＩＬ−６及びＩＦ−γの存在について分析した。上澄みの試料を、また、１２、２４、３６、及び４８時間で収集し、且つ、ＩＬ−６及びＩＦＮ−γについて分析した。ＥＬＩＳＡ免疫学的検定の試料ウェル、９６個のウェルの微量検定板を、ＳＥＢを保存するために使用されたアジ化ナトリウムの全ての取り除きを保証するために、標識の結び付きの後で、二回洗浄した。（以下に示された）これらのアッセイの結果は、＞２５ｐｐｍの濃度で、Ｉ２が、サイトカインのＴ細胞の合成を活性化するための超抗原の能力を阻害することを立証する。
【００７３】
【表８】
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【００７４】
【表９】
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【産業上の利用分野】
【００７５】
哺乳動物の上気道からの黄色ブドウ球菌及び抗生物質抵抗性の微生物を包含する病原体の根絶のための並びに免疫細胞の活性化を阻害するための方法
【国際調査報告】
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