(57)【要約】本発明はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの活性をブロック、阻害、低減、拮抗または中和することに関する。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは炎症過程およびヒトの疾患に関与するサイトカインである。本発明はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの両方に結合する抗体、ならびに、炎症におけるその使用の方法を包含する。本発明の抗体および組成物によって治療または予防される疾患しては、喘息、慢性炎症性疾患および急性炎症性疾患が挙げられ、この慢性炎症性疾患としては、炎症性腸疾患、潰瘍性結腸炎、クローン病、関節炎、アトピー性皮膚炎または乾癬が、この急性炎症性疾患としては、内毒素血症、敗血症、トキシックショック症候群または感染性疾患が挙げられる。【特許請求の範囲】
【請求項１】
ＩＬ−１７Ａ（配列番号２）およびＩＬ−１７Ｆ（配列番号４）の両方に結合する単離抗体。
【請求項２】
前記抗体がＩＬ−１７Ｆエピトープに結合し、該エピトープが配列番号４のアミノ酸残基２３、２５、２７、２９および３４を含む、請求項１記載の抗体。
【請求項３】
前記抗体がＩＬ−１７Ａエピトープに結合し、該エピトープが配列番号２のアミノ酸残基２０、２２、２４、２６および３１を含む、請求項１記載の抗体。
【請求項４】
前記抗体が、ＩＬ−１７Ｆエピトープ、ただし該エピトープは配列番号４のアミノ酸残基２３、２５、２７、２９および３４を含むもの、ならびにＩＬ−１７Ａエピトープ、ただし該エピトープは配列番号２のアミノ酸残基２０、２２、２４、２６および３１を含むものに結合する、請求項１記載の抗体。
【請求項５】
前記抗体がＩＬ−１７Ｆエピトープに結合し、該エピトープが配列番号４のアミノ酸残基２３〜３４を含む、請求項１記載の抗体。
【請求項６】
前記抗体がＩＬ−１７Ａエピトープに結合し、該エピトープが配列番号２のアミノ酸残基２０〜３１を含む、請求項１記載の抗体。
【請求項７】
前記抗体がＩＬ−１７Ｆエピトープに結合し、該エピトープが配列番号４のアミノ酸残基６７〜７３を含む、請求項１記載の抗体。
【請求項８】
前記抗体がＩＬ−１７Ａエピトープに結合し、該エピトープが配列番号２のアミノ酸残基６９〜７５を含む、請求項１記載の抗体。
【請求項９】
前記抗体がＩＬ−１７Ｆエピトープ、ただし該エピトープは配列番号４のアミノ酸残基８７〜９３を含むもの、およびＩＬ−１７Ａエピトープ、ただし該エピトープは配列番号２のアミノ酸残基６９〜７５を含むものに結合する、請求項１記載の抗体。
【請求項１０】
前記抗体がＩＬ−１７Ｆエピトープに結合し、該エピトープが配列番号４のアミノ酸残基７９〜８５を含む、請求項１記載の抗体。
【請求項１１】
前記抗体がＩＬ−１７Ａエピトープに結合し、該エピトープが配列番号２のアミノ酸残基８１〜８７を含む、請求項１記載の抗体。
【請求項１２】
前記抗体がＩＬ−１７Ｆエピトープ、ただし該エピトープは配列番号４のアミノ酸残基７９〜８５を含むもの、およびＩＬ−１７Ａエピトープ、ただし該エピトープは配列番号２のアミノ酸残基８１〜８７を含むものに結合する、請求項１記載の抗体。
【請求項１３】
前記抗体がＩＬ−１７Ｆエピトープに結合し、該エピトープが配列番号４のアミノ酸残基１４７〜１５２を含む、請求項１記載の抗体。
【請求項１４】
前記抗体がＩＬ−１７Ａエピトープに結合し、該エピトープが配列番号２のアミノ酸残基１４９〜１５４を含む、請求項１記載の抗体。
【請求項１５】
前記抗体がＩＬ−１７Ｆエピトープ、ただし該エピトープは配列番号４のアミノ酸残基１４７〜１５２を含むもの、およびＩＬ−１７Ａエピトープ、ただし該エピトープは配列番号２のアミノ酸残基１４９〜１５４を含むものに結合する、請求項１記載の抗体。
【請求項１６】
前記抗体がＩＬ−１７Ｆエピトープに結合し、該エピトープが配列番号４のアミノ酸残基１０５〜１０９および１４７〜１５２を含む不連続エピトープである、請求項１記載の抗体。
【請求項１７】
前記抗体がＩＬ−１７Ａエピトープに結合し、該エピトープが配列番号２のアミノ酸残基１０７〜１１１および１４８〜１５４を含む不連続エピトープである、請求項１記載の抗体。
【請求項１８】
前記抗体がＩＬ−１７Ｆエピトープ、ただし該エピトープは配列番号４のアミノ酸残基１０５〜１０９および１４７〜１５２を含む不連続エピトープであるもの、ならびにＩＬ−１７Ａエピトープ、ただし該エピトープは配列番号２のアミノ酸残基１０７〜１１１および１４８〜１５４を含む不連続エピトープであるものに結合する、請求項１記載の抗体。
【請求項１９】
前記抗体がＩＬ−１７Ｆエピトープに結合し、該エピトープが配列番号４のアミノ酸残基７９〜８５、１１９〜１２２および１３０〜１３４を含む不連続エピトープである、請求項１記載の抗体。
【請求項２０】
前記抗体がＩＬ−１７Ａエピトープに結合し、該エピトープが配列番号２のアミノ酸残基８１〜８７、１２１〜１２４および１３２〜１３６を含む不連続エピトープである、請求項１記載の抗体。
【請求項２１】
前記抗体がＩＬ−１７Ｆエピトープ、ただし該エピトープは配列番号４のアミノ酸残基７９〜８５、１１９〜１２２および１３０〜１３４を含む不連続エピトープであるもの、ならびにＩＬ−１７Ａエピトープ、ただし該エピトープは配列番号２のアミノ酸残基８１〜８７、１２１〜１２４および１３２〜１３６を含む不連続エピトープであるものに結合する、請求項１記載の抗体。
【請求項２２】
前記抗体がヒトまたは動物における非経口、経口、鼻腔内、皮下、エアロゾル化または静脈内への投与に適する、請求項１〜２１のいずれかに記載の抗体。
【請求項２３】
前記抗体がモノクローナル抗体である、請求項１〜２１のいずれかに記載の抗体。
【請求項２４】
前記モノクローナル抗体はマウス、キメラ、ヒト化およびヒトのモノクローナル抗体よりなる群から選択される、請求項２３記載の抗体。
【請求項２５】
前記抗体が単鎖モノクローナル抗体である、請求項１〜２１のいずれかに記載の抗体。
【請求項２６】
前記抗体が二重特異性抗体である、請求項１〜２１のいずれかに記載の抗体。
【請求項２７】
前記抗体がＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの両方に結合する交差反応性のモノクローナル抗体である、請求項１〜２１のいずれかに記載の抗体。
【請求項２８】
請求項１〜２７のいずれかに記載の抗体を含有する単離抗血清。
【請求項２９】
請求項１〜２７のいずれかに記載の抗体および該抗体による結合を検出するための手段を含む診断キット。
【請求項３０】
結合を検出するための前記手段が前記抗体に連結した検出可能な標識を含む、請求項２９記載の診断キット。
【請求項３１】
請求項１〜２７のいずれかに記載の抗体の有効量および製薬上許容しうるビヒクル、担体または賦形剤を含む、炎症を治療または予防するための医薬組成物。
【請求項３２】
治療または予防される感染症が、喘息、慢性炎症性疾患および急性炎症性疾患よりなる群から選択される、請求項３１記載の医薬組成物。
【請求項３３】
疾患が炎症性腸疾患、潰瘍性結腸炎、クローン病、関節炎、アトピー性皮膚炎または乾癬を含む慢性炎症性疾患である、請求項３２記載の医薬組成物。
【請求項３４】
疾患が内毒素血症、敗血症、トキシックショック症候群または感染性疾患を含む急性炎症性疾患である、請求項３２記載の医薬組成物。
【請求項３５】
請求項１〜２７のいずれかに記載の抗体の有効量をヒトまたは動物の患者に投与することを含む炎症を治療または予防する方法。
【請求項３６】
炎症を低減させるために十分な請求項１〜２７のいずれかに記載の抗体の組成物の量を炎症を有する哺乳類に投与することを含むＩＬ−１７Ａ誘導またはＩＬ−１７Ｆ誘導炎症を低減する方法。
【請求項３７】
炎症を低減させるために十分な請求項１〜２７のいずれかに記載の抗体の組成物の量を炎症を有する哺乳類に投与することを含むＩＬ−１７Ａ誘導およびＩＬ−１７Ｆ誘導炎症を低減する方法。
【請求項３８】
請求項１〜２７のいずれかに記載の抗体を投与することを含むＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆが役割を果たしている炎症性疾患に罹患した哺乳類を治療する方法であって、ＩＬ−１７Ａ（配列番号２）またはＩＬ−１７Ｆ（配列番号４）のいずれかの炎症活性を低減する方法。
【請求項３９】
請求項１〜２７のいずれかに記載の抗体を投与することを含むＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆが役割を果たしている炎症性疾患に罹患した哺乳類を治療する方法であって、ＩＬ−１７Ａ（配列番号２）およびＩＬ−１７Ｆ（配列番号４）のいずれかの炎症活性を低減する方法。
【請求項４０】
前記疾患が喘息である請求項３６〜３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４１】
前記疾患が慢性炎症性疾患である請求項３６〜３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４２】
前記疾患が炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、潰瘍性結腸炎、クローン病、関節炎、アトピー性皮膚炎または乾癬を含む慢性炎症性疾患である、請求項４１記載の方法。
【請求項４３】
前記疾患が急性炎症性疾患である請求項３６〜３９のいずれかに記載の方法。
【請求項４４】
前記疾患が内毒素血症、敗血症、トキシックショック症候群または感染性疾患を含む急性炎症性疾患である請求項４３記載の方法。
【請求項４５】
請求項１〜２７のいずれかに記載の抗体の有効量を投与することにより、ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆの活性に関連する被験体における病理学的状態を治療することを含む、該病理学的状態を治療する方法。
【請求項４６】
前記病理学的状態が喘息である、請求項４５記載の方法。
【請求項４７】
前記病理学的状態が慢性炎症性状態である、請求項４６記載の方法。
【請求項４８】
前記慢性炎症性状態が炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、潰瘍性結腸炎、クローン病、関節炎、アトピー性皮膚炎または乾癬を含む、請求項４７記載の方法。
【請求項４９】
前記病理学的状態が急性炎症性状態である、請求項４５記載の方法。
【請求項５０】
前記急性炎症性状態が内毒素血症、敗血症、トキシックショック症候群または感染性疾患を含む、請求項４９記載の方法。
【請求項５１】
請求項１〜２７のいずれかに記載の抗体を含むＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆが役割を果たしている炎症性疾患に罹患した哺乳類を治療する方法であって、炎症活性を低減する方法。
【請求項５２】
前記疾患が喘息である、請求項５１記載の方法。
【請求項５３】
前記疾患が慢性炎症性疾患である、請求項５１記載の方法。
【請求項５４】
前記疾患が炎症性腸疾患、過敏性腸症候群、潰瘍性結腸炎、クローン病、関節炎、アトピー性皮膚炎または乾癬を含む慢性炎症性疾患である、請求項５３記載の方法。
【請求項５５】
前記疾患が急性炎症性疾患である、請求項５１記載の方法。
【請求項５６】
前記疾患が内毒素血症、敗血症、トキシックショック症候群または感染性疾患を含む急性炎症性疾患である、請求項５５記載の方法。
【請求項５７】
請求項１〜２７のいずれかに記載の抗体または抗体フラグメントであって、該抗体または抗体フラグメントがＩＬ−１７Ａ（配列番号２）またはＩＬ−１７Ｆ（配列番号４）のいずれかの炎症促進性活性を低減する、抗体または抗体フラグメント。
【請求項５８】
前記抗体または抗体フラグメントがＩＬ−１７Ａ（配列番号２）およびＩＬ−１７Ｆ（配列番号４）の両方の炎症促進性活性を低減する、請求項５７記載の抗体または抗体フラグメント。
【請求項５９】
前記抗体フラグメントが（ａ）ポリクローナル抗体、（ｂ）マウスモノクローナル抗体、（ｃ）（ｂ）由来のヒト化抗体、（ｄ）抗体フラグメント、または（ｅ）ヒトモノクローナル抗体である、請求項５８記載の抗体または抗体フラグメント。
【請求項６０】
前記抗体がさらに放射性核種、酵素、基質、コファクター、蛍光マーカー、化学発光マーカー、ペプチドタグ、磁性粒子、薬品または毒素を含む、請求項５９記載の抗体または抗体フラグメント。
【請求項６１】
前記抗体がさらにＰＥＧ化を含む、請求項６０記載の抗体。
【請求項６２】
前記抗体フラグメントが（ａ）ポリクローナル抗体、（ｂ）マウスモノクローナル抗体、（ｃ）（ｂ）由来のヒト化抗体、（ｄ）抗体フラグメント、または（ｅ）ヒトモノクローナル抗体である請求項６１記載の抗体または抗体フラグメント。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本発明は、一般的に、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの両方に結合する抗体の同定および単離、ならびに、その使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
ＩＬ−１７ファミリーの６個のメンバーは、最初は、ＩＬ−１７として同定され、現在はＩＬ−１７Ａと表記されているファミリーのプロトタイプメンバーとの類似性に基づいて同定されている。例えば、非特許文献１を参照のこと。ファミリーの他のメンバーは、ＩＬ−１７Ｂ、ＩＬ−１７Ｃ、ＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７Ｅ（ＩＬ−２５としても知られている）およびＩＬ−１７Ｆである。例えば、非特許文献２；非特許文献３および非特許文献４を参照のこと。ファミリーのメンバーのうち、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは、相互に最も近似しており、５５％の同一性を共有している（非特許文献３）。それらの配列類似性に加えて、これらのサイトカインの両方は、類似の細胞型、最も顕著には活性化したメモリーＣＤ４＋Ｔ細胞により産生されると考えられる。例えば、非特許文献５を参照；また、非特許文献６および非特許文献７を参照。
【０００３】
さらに、両方とも同様に、ヒトにおけるおよびヒト疾患のマウスモデルにおける、種々の炎症および自己免疫疾患の進行および病理への寄与物質として示唆されている。特に、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは炎症応答を引き起こすことにより、多発性硬化症、関節リウマチおよび炎症性腸疾患を包含する多くの自己炎症性疾患に寄与する主要なエフェクターサイトカインであることが示唆されている。
【非特許文献１】Ｓｐｒｉｇｇｓ、Ｍ．Ｋ．「Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１７  ａｎｄ  ｉｔｓ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ」Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９９７）１７：３６６−３６９
【非特許文献２】Ｋａｗａｇｕｃｈｉ等、「ＩＬ−１７  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｆａｍｉｌｙ」、Ｊ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００４）１１４：１２６５−１２７３
【非特許文献３】Ｋｏｌｌｓ  ａｎｄ  Ｌｉｎｄｅｎ、「Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１７  ｆａｍｉｌｙ  ｍｅｍｂｅｒｓ  ａｎｄ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ」、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００４）２１：４６７−４７６
【非特許文献４】Ｍｏｓｅｌｅｙ等、「Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１７  ｆａｍｉｌｙ  ａｎｄ  ＩＬ−１７  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ」、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ（２００３）１４：１５５−１７４
【非特許文献５】Ａｇａｒｗａｌ等、「Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−２３  ｐｒｏｍｏｔｅｓ  ａ  ｄｉｓｔｉｎｃｔ  ＣＤ４  Ｔ  ｃｅｌｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｓｔａｔｅ  ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚｅｄ  ｂｙ  ｔｈｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ−１７」Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．（２００３）２７８：１９１０−１９１
【非特許文献６】Ｌａｎｇｒｉｓｈ等、ＩＬ−２３  ｄｒｉｖｅｓ  ａ  ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ  Ｔ  ｃｅｌｌ  ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ  ｔｈａｔ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ  ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ」  Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．（２００５）２０１：２３３−２４０
【非特許文献７】Ｓｔａｒｎｅｓ等、「Ｃｕｔｔｉｎｇ  ｅｄｇｅ：ＩＬ−１７Ｆ、ａ  ｎｏｖｅｌ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅｌｙ  ｅｘｐｒｅｓｓｅｄ  ｉｎ  ａｃｔｉｖａｔｅｄ  Ｔ  ｃｅｌｌｓ  ａｎｄ  ｍｏｎｏｃｙｔｅｓ、ｒｅｇｕｌａｔｅｓ  ａｎｇｉｏｇｅｎｅｓｉｓ  ａｎｄ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃｅｌｌ  ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ」Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（２００１）１６７：４１３７−４１４０
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの両方の明らかにされているインビボの活性はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの拮抗剤の臨床上または治療上の潜在性および必要性を説明するものである。特に、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の免疫学的活性を抑制するＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に結合する抗体（拮抗抗体）は、そのような新規な治療上の特性を保有する。すなわち、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に対する拮抗剤が当該分野で必要とされている。
【課題を解決するための手段】
【０００５】
炎症性サイトカインＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは高度な配列類似性を有し、多くの生物学的特性を共有し、そして、両方とも活性化Ｔ細胞により産生される。それらは共に、関節リウマチおよび喘息を包含する種々の自己免疫および炎症性疾患の進行に寄与する因子であることが示唆されている。実際、ＩＬ−１７Ａの機能を無効化する試薬は、ヒト疾患の数種のマウスモデルにおいて疾患の発生率および重症度を顕著に改善する。ＩＬ−１７Ａは、その同族受容体、ＩＬ−１７受容体（ＩＬ−１７ＲＡ）との、およびＩＬ−１７Ｆに関してはＩＬ−１７ＲＡとの相互作用を介してその作用を媒介する。すなわち、本発明は、交差反応性の抗体が、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の拮抗剤として有用であるため、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方をブロックすることを明らかにした。したがって、本発明では、ＩＬ−１７Ａ（ポリヌクレオチド配列は配列番号１として示され、コードされるポリペプチドは配列番号２として示される）およびＩＬ−１７Ｆ（ポリヌクレオチド配列は配列番号３として示され、コードされるポリペプチドは配列番号４として示される）の両方の活性をブロック、抑制、低減、拮抗または中和する治療用分子（例えば、抗体）を提供することにより、この必要性に対処する。したがって、本発明は本明細書に記載する抗体などのＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの拮抗剤に関する。本発明は、さらに炎症性疾患におけるその使用ならびに関連する組成物および方法を提供する。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００６】
Ａ）概論
免疫関連疾患および炎症性疾患は、正常な生理において、発作または傷害に応答し、発作または傷害からの修復を開始し、異物に対して先天的および後天的な防御を開始するために重要である、かなり複雑で、頻繁には相互に連結した、複数の生物学的経路の顕在化または帰結である。疾患または病態は、正常な生理学的経路が、応答の強度に直接関連するものとして、異常な調節または過剰な刺激の帰結として、自己への反応として、あるいはこれらの組み合わせとして、追加的な発作または傷害を誘発する場合に生じる。
【０００７】
これらの疾患の発生には多段階の経路、頻繁には多数の異なる生物学的系／経路が関与している場合が多いが、１つ以上のこれらの経路における厳密な点における介入により、改善効果または治療効果を生じ得る。治療介入は有害なプロセス／経路の拮抗、または有益なプロセス／経路の刺激のいずれかにより起こり得る。
【０００８】
多くの免疫関連の疾患が知らており、広汎に検討されている。そのような疾患には、免疫媒介性の炎症性疾患（例えば、関節リウマチ、免疫媒介腎疾患、肝胆疾患、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、過敏性腸症候群（ＩＢＳ）、乾癬および喘息）、非免疫媒介性疾患、感染性疾患、免疫不全疾患、新生物形成などが包含される。
【０００９】
Ｔリンパ球（Ｔ細胞）は哺乳類の免疫応答の重要な要素である。Ｔ細胞は、主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）内の遺伝子によりコードされる自己分子に関連する抗原を認識する。抗原は抗原提示細胞、ウィルス感染細胞、癌細胞、移植片などの表面上のＭＨＣ分子と共に表示される場合がある。Ｔ細胞系は宿主哺乳類に対する健康危害を呈するこれらの変性した細胞を排除する。Ｔ細胞はヘルパーＴ細胞および細胞毒性Ｔ細胞を包含する。ヘルパーＴ細胞は抗原提示細胞上の抗原ＭＨＣ複合体の認識の後に広範囲に増殖する。ヘルパーＴ細胞はまた、種々のサイトカイン、すなわち、Ｂ細胞、細胞毒性Ｔ細胞および免疫応答に関与する種々の他の細胞の活性化において中心的役割を果たすリンホカインを分泌する。
【００１０】
体性および細胞媒介の免疫応答の両方における中心的事象はヘルパーＴ細胞の活性化およびクローン増殖である。ヘルパーＴ細胞の活性化は、Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）−ＣＤ３複合体の抗原提示細胞の表面の抗原ＭＨＣとの相互作用により開始される。この相互作用は休止期のヘルパーＴ細胞が細胞周期に入る（Ｇ０からＧ１への移行）ように誘導する生化学的事象のカスケードを媒介し、ＩＬ−２および、ときにはＩＬ−４の高親和性受容体の発現をもたらす。活性化したＴ細胞は細胞周期を経て進行し、増殖および分化してメモリー細胞またはエフェクター細胞となる。
【００１１】
ＴＣＲを経て媒介されるシグナルのほかに、Ｔ細胞の活性化には、抗原提示細胞により放出されたサイトカインによるか、または、抗原提示細胞上の膜結合分子およびＴ細胞との相互作用を介して誘導された追加的な同時刺激が関与している。サイトカインＩＬ−１およびＩＬ−６は同時刺激シグナルを与えることが分かっている。さらに、抗原提示細胞の表面上に発現されるＢ７分子およびＴ細胞表面上に発現されるＣＤ２８およびＣＴＬＡ−４分子の間の相互作用が、Ｔ細胞活性化をもたらす。活性化したＴ細胞は、増大した数量の細胞接着分子、例えば、ＩＣＡＭ−１、インテグリン、ＶＬＡ−４、ＬＦＡ−１、ＣＤ５６などを発現する。
【００１２】
混合リンパ球培養物または混合リンパ球反応（ＭＬＲ）におけるＴ細胞の増殖が、免疫系を刺激する化合物の能力の確立された指標である。多くの免疫応答において、炎症細胞は傷害または感染の部位に浸潤する。遊走細胞は、罹患組織の組織学的検査により決定できる通り、好中球、好酸球、単球またはリンパ球であってよい。Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、ｅｄ．Ｊｏｈｎ  Ｅ．Ｃｏｌｉｇａｎ、１９９４、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ、Ｉｎｃ．参照。
【００１３】
免疫関連疾患は免疫応答を抑制することにより治療される。可溶性の受容体および／または免疫刺激活性を有する分子を抑制する中和抗体を用いることは、免疫媒介および炎症性疾患の治療において有益である。免疫応答を抑制する分子は免疫応答を抑制するために利用することができ（直接または抗体アゴニストストの使用を介したタンパク質）、これにより免疫関連疾患を緩解することができる。
【００１４】
インターロイキン−１７（ＩＬ−１７Ａ）はＴリンパ指向性ヘルペスウィルスＳａｉｍｉｒｉ（ＨＳＶ）によりコードされるタンパク質の細胞オーソログとして同定されている［Ｒｏｕｖｉｅｒ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１５０（１２）：５４４５−５４５６（１９９９３）；Ｙａｏ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１２２（１２）：５４８３−５４８６（１９９５）およびＹａｏ等、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、３（６）：８１１−８２１（１９９５）参照］。その後の特性化によれば、このタンパク質は広範な種類の末梢組織において炎症性応答を誘導するよう作用する強力なサイトカインであることが分かった。ＩＬ−１７ＡはＣＤ４＋活性化メモリーＴ細胞によってのみ合成および分離される約３２ｋＤａのジスルフィド連結ホモ２量体サイトカインである（Ｆｏｓｓｉｅｚ等、Ｉｎｔ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６：５４１−５５１［１９９８］において検討されている）。特に、ＩＬ−１７は１９〜２３残基のＮ末端シグナル配列を有する１５５アミノ酸の前駆体ポリペプチドとして合成され、ジスルフィド連結ホモ２量体糖タンパク質として分泌される。ＩＬ−１７ＡはＷＯ９５１８８２６（１９９５）、ＷＯ９７１５３２０（１９９７）およびＷＯ９７０４０９７（１９９７）ならびに米国特許６，０６３，３７２に開示されている。
【００１５】
その制限された組織分布にも関わらず、ＩＬ−１７Ａは種々の型の細胞に対して多指向性の生物学的活性を呈する。ＩＬ−１７Ａは多くのサイトカインの産生を刺激することが分かっている。接着細胞様線維芽細胞、ケラチノサイト、上皮および内皮の細胞によるＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、白血病抑制因子（ＬＩＦ）、プロスタグランジンＥ２、ＭＣＰ−１およびＧ−ＣＳＦの分泌を誘導する。ＩＬの−１７Ａはまた、ＩＣＡＭ−１表面発現、Ｔ細胞増殖、ならびに、ＣＤ３４＋ヒト前駆細胞の好中球へ成長および分化を誘導する能力を有する。ＩＬ−１７Ａはまた、骨代謝において関与し、関節リウマチなど活性化Ｔ細胞の存在およびＴＮＦ−α産生を特徴とする病理学的状態ならびに骨インプラントの弛緩において重要な役割を果たしていることが示唆されている（Ｖａｎ  Ｂｅｚｏｏｉｊｅｎ等、Ｊ．Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．１４：１５１３−１５２１［１９９９］）。関節リウマチ患者由来の滑膜組織の活性化Ｔ細胞は、正常個体または骨関節炎患者由来のものよりもＩＬ−１７Ａのより高値の量を分泌することが分かっている（Ｃｈａｂａｕｄ等、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．４２：９６３−９７０［１９９９］）。この炎症性サイトカインは関節リウマチにおける滑膜炎症に活動的に寄与することが示唆されている。その炎症性の役割とは別に、ＩＬ−１７Ａは、さらに他の機構により関節リウマチの病理に寄与していると考えられる。例えば、ＩＬ−１７Ａは骨芽細胞における破骨細胞（ＯＤＦ）ｍＲＮＡの発現を誘導することが分かっている（Ｋｏｔａｋｅ等、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０３：１３４５−１３５２［１９９９］）。ＯＤＦは、前駆細胞から破骨細胞、すなわち、骨再吸収に関与する細胞への分化を刺激する。
【００１６】
関節リウマチ患者の滑液中では、ＩＬ−１７Ａのレベルが顕著に増加するため、ＩＬ−１７Ａ誘導破骨細胞形成は関節リウマチにおける骨再吸収において重要な役割を果たしていると考えられる。ＩＬ−１７Ａはまた、多発性硬化症などの特定の他の自己免疫障害において重要な役割を果たしていると考えられている（Ｍａｔｕｓｅｖｉｃｉｕｓ等、Ｍｕｌｔ．Ｓｃｌｅｒ．、５：１０１−１０４［１９９９］）。ＩＬ−１７Ａはさらに、細胞内シグナリングにより、ヒトマクロファージにおいて、Ｃａ２＋の流入および［ｃＡＭＰ］の低減を刺激することが分かっている（Ｊｏｖａｎｏｖｉｃ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６０：３５１３［１９９８］）。ＩＬ−１７Ａで治療した線維芽細胞は、ＮＦ−κＢの活性化を誘導するが［Ｙａｏ等、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、３：８１１（１９９５）、Ｊｏｖａｎｏｖｉｃ等、ｓｕｐｒａ］、それを投与したマクロファージはＮＦ−κＢおよび有糸分裂促進物質活性化タンパク質キナーゼを活性化する（Ｓｈａｌｏｍ−Ｂａｒｅｋ等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７３：２７４６７［１９９８］）。
【００１７】
さらに、ＩＬ−１７Ａは骨および軟骨の生育に関与する哺乳類サイトカイン様因子７との配列類似性を共有している。ＩＬ−１７Ａポリペプチドが配列類似性を共有している他のタンパク質は、ヒト胚由来インターロイキン関連因子（ＥＤＩＲＦ）およびインターロイキン−２０である。
【００１８】
ＩＬ−１７Ａの広範な作用と合致して、ＩＬ−１７Ａに関する細胞表面受容体は、多くの組織および細胞タイプにおいて広汎に発現されることが分かっている（Ｙａｏ等、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ、９：７９４［１９９７］）。ヒトＩＬ−１７Ａ受容体（ＩＬ−１７ＲＡ）（８６６アミノ酸）のアミノ酸配列は単一の膜貫通ドメインおよび長鎖の５２５アミノ酸の細胞内ドメインを有するタンパク質を予測させるが、受容体配列は独特であり、そして、サイトカイン／成長因子受容体ファミリーに属する受容体の何れのものとも類似ではない。このことと他の既知のタンパク質に対するＩＬ−１７Ａそのものの類似性の欠如を組み合わせれば、ＩＬ−１７Ａおよびその受容体はシグナリングタンパク質および受容体の新しいファミリーの一部である可能性が示される。ＩＬ−１７Ａ活性はその独特の細胞表面受容体への結合を介して媒介されることがわかっており、ここで、以前の試験では、ＩＬ−１７Ａ受容体ポリペプチドの可溶性形態にＴ細胞を接触させるとＰＨＡ、コンカナバリンＡおよび抗ＴＣＲモノクローナル抗体により誘導されるＴ細胞の増殖およびＩＬ−２の産生が抑制されることが分かっている（Ｙａｏ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１５５：５４８３−５４８６［１９９５］）。すなわち、既知のサイトカイン受容体、特にＩＬ−１７Ａ受容体に対する相同性を有する新規なポリペプチドを同定し、特性化することには顕著な関心がある。
【００１９】
ＩＬ−１７Ｆの発現パターンは、それが活性化ＣＤ４＋Ｔ細胞および単球のみを包含するように、ＩＬ−１７Ａのものと同様であると考えられる（Ｓｔａｒｎｅｓ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：４１３７−４１４０［２００１］）。ＩＬ−１７Ｆは、線維芽細胞においてＧ−ＣＳＦ、ＩＬ−６およびＩＬ−８を（Ｈｙｍｏｗｉｔｚ等、ＥＭＢＯＪ．２０：５３２２−５３４１［２００１］）、内皮細胞においてＴＧＦ−ｂを（Ｓｔａｒｎｅｓ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：４１３７−４１４０［２００１］）誘導することが分かっている。最近、樹状細胞により産生されるサイトカインであるＩＬ−２３が主にメモリーＴ細胞においてＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の産生を媒介できることが報告された（Ａｇｇａｒｗａｌ等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７８：１９１０−１９１４［２００３］）。
【００２０】
さらに、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の過剰発現またはアップレギュレーションが関節炎および喘息の個体において観察されている（Ｍｏｓｅｌｅｙ等、ＣｙｔｏｋｉｎｅＧｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖ  １４：１５５−１７４［２００３］において考察）。関節炎に関しては、これらのサイトカインは、関節リウマチおよび骨関節炎に関連する軟骨および関節の破壊に特徴的な態様で作用する。例えば、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは、新しいプロテオグリカンおよびコラーゲンの合成を抑制しながら、軟骨プロテオグリカングリコサミノグリカンおよびコラーゲンフラグメントの放出を介して関節軟骨の体外移植組織においてマトリックス破壊を増強することが分かっている（Ｃａｉ等、Ｃｙｔｏｋｉｎｅ１６：１０−２１［２００１］；Ａｔｔｕｒ等、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ４４：２０７８−２０８３［２００１］）。
【００２１】
ＩＬ−１７Ａと同様、マウスにおけるＩＬ−１７Ｆの過剰発現もまた、肺好中球補充を増大させ、そしてＩＬ−６、ＩＦＮ−γ、ＩＰ−１０およびＭＩＧを包含する肺におけるＴｈ１関連サイトカインの増大した発現をもたらすことが分かっている（Ｓｔａｒｎｅｓ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：４１３７−４１４０［２００１］）。ＩＬ−１７Ｆはまた、アレルゲン攻撃喘息患者由来のＴ細胞においてアップレギュレートされており（Ｋａｗａｇｕｃｈｉ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ１６７：４４３０−４４３５［２００１］）、ＮＨＢＥにおいてＩＬ−６およびＩＬ−８の産生を誘導することが分かっている。ＩＬ−１７Ａとは対照的に、ＩＬ−１７Ｆはインビトロの血管形成を抑制すると考えられる（Ｓｔａｒｎｅｓ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７：４１３７−４１４０［２００１］）。
【００２２】
ＩＬ−１７ＦｍＲＮＡは、種々のヒト組織におけるノーザンブロットにより検出されていないが、ＣＤ４＋Ｔ細胞および単球の活性化時には劇的に誘導されている。前述。マウスにおいては、Ｔｈ２細胞および肥満細胞が活性化時にＩＬ−１７Ｆを発現することが分かっている。Ｄｕｍｏｎｔ、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．Ｔｈｅｒ．Ｐａｔｅｎｔｓ１３（３）（２００３）を参照のこと。ＩＬ−１７Ａと同様、ＩＬ−１７Ｆの発現もまた、マウスにおいてＩＬ−２３によってアップレギュレートされることが分かっている。
【００２３】
ＩＬ−１７サイトカイン／受容体ファミリーは免疫および炎症の応答の操作への革新的な道程を与えることになるサイトカインネットワーク内の独特のシグナリング系を呈すると考えられる。したがって、本発明はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に結合する抗体に関する。
【００２４】
本発明は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に結合する抗体（ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体）およびＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を用いるための方法を提供する。抗体は拮抗剤またはアゴニストストとして作用してよく、そして、特に、哺乳類細胞あるいはＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆの存在（または非存在）に関連する病理学的状態のインビトロ、インサイチュまたはインビボの診断および治療のための用途を有している。
【００２５】
本発明の好ましい実施形態は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に結合する抗体およびその任意のフラグメントおよび置換物を包含する（本明細書においては「交差反応抗体」、「Ａ／Ｆ抗体」、「二重特異性抗体」、「ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体」などとして互換的に呼称する）。特に、このような抗体は、ヒトＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に特異的に結合することができ、ならびに／あるいは、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆのいずれかもしくは両方および／またはその受容体、ＩＬ−１７ＲＡおよびＩＬ１７ＲＣに関連する生物学的活性を調節することができ、これにより、免疫関連疾患などの種々の疾患および病理学的状態の治療において有用である。より特定される実施形態においては、ＩＬ−１７Ａ（配列番号２）およびＩＬ−１７Ｆ（配列番号４）に特異的に結合する抗体が提供される。場合により、抗体はモノクローナル抗体である。
【００２６】
例えば、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方のエピトープに結合し、ここで該エピトープは下記に示すヒトＩＬ−１７Ｆの後述する配列およびヒトＩＬ−１７Ａに見られる等価な配列の残基Ｉｌｅ（２３）、Ｌｙｓ（２５）、Ｇｌｙ（２７）、Ｔｈｒ（２９）およびＰｒｏ（３４）を含む。残基２３、２５、２７、２９および３４は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の表面上にあると推測され、このため、本発明の抗体または等価なタンパク質結合拮抗剤の結合に使用できる。
ｈＩＬ１７Ｆ（配列番号４のＩｌｅ２３−Ｐｒｏ３４）ＩＰＫＶＧＨＴＦＦＱＫＰ
ｈＩＬ１７Ａ（配列番号２のＩｌｅ２０−Ｐｒｏ３１）ＩＶＫＡＧＩＴＩＰＲＮＰ  。
【００２７】
場合により、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の別のエピトープに結合し、ここで該エピトープは下記に示すヒトＩＬ−１７Ｆの後述する配列およびヒトＩＬ−１７Ａに見られる等価な配列の残基Ａｒｇ（６７）、Ｓｅｒ（６８）、Ｔｈｒ（６９）、Ｓｅｒ（７０）、Ｐｒｏ（７２）、Ｔｒｐ（７２）、Ａｓｎ（７３）を含む。残基６９、７１および７３は生物学的に活性なサイトカインの表面上にあると推測され、このため、本発明の抗体または等価なタンパク質結合拮抗剤の結合に使用できる。
ｈＩＬ１７Ｆ（配列番号４のＡｒｇ６７−Ａｓｎ７３）ＲＳＴＳＰＷＮ
ｈＩＬ１７Ａ（配列番号２のＡｒｇ６９−Ａｓｎ７５）ＲＳＴＳＰＷＮ  。
【００２８】
場合により、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の別のエピトープに結合し、ここで該エピトープは下記に示すヒトＩＬ−１７Ｆの後述する配列およびヒトＩＬ−１７Ａに見られる等価な配列の残基Ａｓｐ（７９）、Ｐｒｏ（８０）、Ａｓｎ（８１）、Ａｒｇ（８２）、Ｔｙｒ（８３）、Ｐｒｏ（８４）およびＳｅｒ（８５）を含む。このエピトープの全ての残基は生物学的に活性なサイトカインの表面上にあると推測され、このため、本発明の抗体または等価なタンパク質結合拮抗剤の結合に使用できる。
ｈＩＬ−１７Ｆ（配列番号４のＡｓｐ７９−Ｓｅｒ８５）ＤＰＮＲＹＰＳ
ｈＩＬ−１７Ａ（配列番号２のＡｓｐ８１−Ｓｅｒ８７）ＤＰＥＲＹＰＳ  。
【００２９】
場合により、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の別のエピトープに結合し、ここで該エピトープは下記に示すヒトＩＬ−１７Ｆの後述する配列およびヒトＩＬ−１７Ａに見られる相当する配列の残基Ｔｈｒ（１４６）、Ｐｒｏ（１４７）、Ｖａｌ（１４８）、Ｉｌｅ（１４９）、Ｈｉｓ（１５０）、Ｈｉｓ（１５１）、Ｖａｌ（１５２）を含む。これらの残基は生物学的に活性なサイトカインの表面上にあると推測され、このため、本発明の抗体または等価なタンパク質結合拮抗剤の結合に使用できる。
ｈＩＬ−１７Ｆ（配列番号４のＴｈｒ１４６−Ｖａｌ１５２）ＴＰＶＩＨＨＶ
ｈＩＬ−１７Ａ（配列番号２のＴｈｒ１４８−Ｖａｌ１５４）ＴＰＩＶＨＨＶ  。
【００３０】
場合により、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の別のエピトープに結合し、ここで該エピトープは下記に示すヒトＩＬ−１７Ｆの２つの別個のペプチド鎖に由来する残基；または、下記に示すヒトＩＬ−１７Ａに見られる等価な配列を含む不連続エピトープである。特に、ｈＩＬ−１７Ｆの残基１０５〜１０９、１４７〜１５２およびｈＩＬ−１７Ａの１０７〜１１１、１４８〜１５４は、生物学的に活性なサイトカインの表面上にあると推測され、このため、本発明の抗体または等価なタンパク質結合拮抗剤の結合に使用できる。
ｈＩＬ−１７Ｆ配列（配列番号４のＡｓｐ１０５−Ａｓｎ１０９［ＤＩＳＭＮ］およびＰｒｏ１４７−Ｖａｌ１５２［ＰＶＩＨＨＶ］）
ｈＩＬ−１７Ａ配列（配列番号２のＡｓｐ１０７−Ａｓｎ１１１［ＤＹＨＭＮ］およびＰｒｏ１４９−Ｖａｌ１５４［ＰＩＶＨＨＶ］）  。
【００３１】
場合により、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の別のエピトープに結合し、ここで該エピトープは下記に示すヒトＩＬ−１７Ｆの２つまたは３つの別個のペプチド鎖の残基；または、ヒトＩＬ−１７Ａに見られる等価な配列を含む不連続エピトープである。特に、ｈＩＬ−１７Ｆの残基８１、８２、１２１、１３２、１３４およびｈＩＬ−１７Ａの残基８３、８４、１２３、１３４、１３６は生物学的に活性なサイトカインの表面上にあると推測され、このため、本発明の抗体または等価なタンパク質結合拮抗剤の結合に使用できる。
ｈＩＬ−１７Ｆ配列（配列番号４のＡｓｐ７９−Ｓｅｒ８５［ＤＰＮＲＹＰＳ］およびＶａｌ１１９−Ａｒｇ１２２［ＶＶＲＲ］およびＳｅｒ１３０−Ｇｌｕ１３４［ＳＦＱＬＥ］）
ｈＩＬ−１７Ａ配列（配列番号２のＡｓｐ８１−Ｓｅｒ８７［ＤＰＥＲＹＰＳ］およびＶａｌ１２１−Ａｒｇ１２４［ＶＬＲＲ］およびＳｅｒ１３２−Ｇｌｕ１３６［ＳＦＲＬＥ］）  。
【００３２】
特定の実施形態においては、本発明はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に結合する二重特異性抗体を提供する。二重特異性抗体（ＢｓＡｂ）は、抗体が２つの異なる抗原に特異的に結合するように、２つの異なる抗原結合部位を有する抗体である。より高い価数（すなわち、２つより多い抗原に結合する能力）を有する抗体もまた形成することができ；それらは多重特異性抗体と称する。
【００３３】
二重特異性抗体は、好ましくはモノクローナル抗体（ＭＡｂ）である。特定の実施形態においては、抗体はキメラ、ヒト化、または完全ヒト型である。完全ヒト型の抗体は、トランスジェニックマウスの免疫化を行う操作法により作成してよく、その場合、ヒト免疫グロブリン遺伝子が後述する通りマウスに導入されている。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する本発明の二重特異性抗体は、本明細書においては、二重特異性ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体または二重特異性Ａ／ＦＭＡｂと称される。
【００３４】
さらに別の特定の実施形態においては、本発明のモノクローナル抗体を産生するハイブリドーマ細胞系統が提供される。別の実施形態においては、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体はポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールおよびポリオキシアルキレンよりなる群から選択される１つ以上の非タンパク質性の重合体に、あるいは細胞毒性の薬剤または酵素に、あるいは放射性同位体、蛍光化合物または化学発光化合物に連結される。
【００３５】
本発明の典型的な方法は、増大または増強したＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆの発現および／または活性に関連する、またはこれに起因する、哺乳類における病理学的状態または疾患を治療するための方法を包含する。治療方法においては、好ましくは対応する受容体の結合またはその受容体に対する活性化をブロックまたは低減するＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を投与してよい。場合により、該方法において使用するＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の活性をブロックまたは中和することができるものとなり、例えば、ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆの両方の活性をブロックまたは中和する二重拮抗剤が挙げられる（すなわち、本明細書に記載する交差反応性ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体）。該方法は単一の交差反応性の抗体または２つ以上の抗体の組み合わせの使用を意図している。
【００３６】
本発明はまた、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を含む組成物を提供する。場合により、本発明の組成物は製薬上許容しうる担体または希釈剤を包含する。好ましくは、組成物は病理学的状態または疾患を治療するのに治療上、有効である量の１つ以上のＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を包含する。
【００３７】
すなわち、本発明はヒトを包含する哺乳類における免疫関連の疾患の診断および治療のために有用な組成物および方法に関する。本発明は哺乳類における免疫応答を刺激または抑制するＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方（アゴニストおよび拮抗剤の抗体を包含する）に結合する抗体の同定に基づいている。免疫関連疾患は、免疫応答を抑制または増強することにより治療できる。免疫応答を増強する抗体は、抗原への免疫応答を刺激または強化する。免疫応答を刺激する抗体は、免疫応答の増強が有益である場合に治療上使用できる。あるいは、免疫応答を抑制する抗体は、抗原に対する免疫応答を減衰または低減し（例えば、中和抗体）、免疫応答の減衰が有益である場合（例えば、炎症）に治療上使用できる。
【００３８】
したがって、本発明のＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に結合する抗体（本明細書においては、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ、Ａ／Ｆ、および／または交差反応性のＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体とも称する）は、免疫関連および炎症性の疾患、例えば、全身エリテマトーデス、関節炎、乾癬性関節炎、関節リウマチ、骨関節炎、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性硬化症、特発性炎症性ミオパシー、シェーグレン症候群、全身性血管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、甲状腺炎、真性糖尿病、免疫媒介腎疾患、中枢および末梢神経系の脱髄疾患、例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発性神経障害またはギヤン−バレー症候群、および慢性炎症性脱髄性多発性神経障害、肝胆疾患、例えば、感染性、自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性の胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、および硬化性胆管炎、炎症性腸疾患、結腸炎、クローン病、グルテン感受性腸症、および内毒素血症、自己免疫性または免疫媒介性の皮膚疾患、例えば、水疱性皮膚疾患、多形性紅斑およびアトピー性および接触性の皮膚炎、乾癬、好中球性皮膚病、嚢胞性線維症、アレルギー性疾患、例えば、喘息、アレルギー性鼻炎、食物過敏症および蕁麻疹、嚢胞性線維症、肺の免疫学的疾患、例えば、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、成人呼吸症（ＡＲＤ）、急性呼吸促進症候群（ＡＲＤＳ）および炎症性肺傷害、例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気道応答亢進症、慢性気管支炎、アレルギー性喘息および過敏性肺炎、移植関連疾患、例えば、移植片および臓器の拒絶、ならびに、対宿主性移植片病、敗血症性ショック、多臓器不全、癌ならびに血管形成の治療のための医薬および薬剤の製造に有用である。
【００３９】
特定の態様において、このような医薬および薬剤は、製薬上許容しうる担体と共に治療上、有効量のＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を含む。好ましくは、混合物は滅菌されている。
【００４０】
１つの態様において、本発明はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に結合する単離抗体に関する。別の態様において、抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の活性を模倣しているか（アゴニスト抗体）、または逆に、抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の活性を抑制または中和する（拮抗剤抗体）。別の態様において、抗体はモノクローナル抗体であり、これは好ましくは非ヒトの相補性決定領域（ＣＤＲ）の残基およびヒトフレームワーク領域（ＦＲ）の残基を有する。
【００４１】
別の実施形態において、本発明はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆのアゴニストまたは拮抗剤を同定する方法に関し、該方法は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方を候補分子に接触させること、ならびに、ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆにより媒介される生物学的活性をモニタリングすることを含む。別の実施形態において、担体または賦形剤との混合物におけるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に結合するＩＬ−１７Ａ／Ｆのアゴニストまたは拮抗剤の抗体を含む物質の組成物に関する。１つの態様において、組成物はＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の治療上、有効な量を含む。別の態様において、組成物がそのようなアゴニストのＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を含む場合、組成物は（ａ）炎症性細胞の、それを必要とする哺乳類の組織への浸潤の増強、（ｂ）それを必要とする哺乳類における、免疫応答の刺激または増強、（ｃ）それを必要とする哺乳類における、抗原に応答したＴリンパ球の増殖の増大、（ｄ）Ｔリンパ球の活性の刺激、または（ｅ）血管浸透性の増大に有用である。さらに別の態様において、組成物がそのような拮抗性のＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を含む場合、組成物は（ａ）炎症性細胞の、それを必要とする哺乳類における組織への浸潤の低下、（ｂ）それを必要とする哺乳類における、免疫応答の抑制または低減、（ｃ）Ｔリンパ球の活性の低下、または（ｄ）それを必要とする哺乳類における、抗原に応答したＴリンパ球の増殖の低下に有用である。別の態様において、組成物は別の活性成分を含み、これは、例えば、別の抗体またはサイトカインまたは化学療法剤であってよい。好ましくは、組成物は滅菌されている。
【００４２】
別の実施形態において、本発明は、治療上の有効量のアゴニスト性または拮抗剤性のＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を哺乳類に投与することを含む、免疫関連疾患の治療の必要な哺乳類における、免疫関連疾患の治療方法に関する。
【００４３】
好ましい態様において、免疫関連疾患は、全身エリテマトーデス、関節炎、乾癬性関節炎、関節リウマチ、骨関節炎、若年性慢性関節炎、脊椎関節症、全身性硬化症、特発性炎症性ミオパシー、シェーグレン症候群、全身性血管炎、サルコイドーシス、自己免疫性溶血性貧血、自己免疫性血小板減少症、甲状腺炎、真性糖尿病、免疫媒介腎疾患、中枢および末梢神経系の脱髄疾患、例えば、多発性硬化症、特発性脱髄性多発性神経障害またはギヤン−バレー症候群、および慢性炎症性脱髄性多発性神経障害、肝胆疾患、例えば、感染性、自己免疫性の慢性活動性肝炎、原発性の胆汁性肝硬変、肉芽腫性肝炎、および硬化性胆管炎、炎症性腸疾患、結腸炎、クローン病、グルテン感受性腸症、および内毒素血症、自己免疫性または免疫媒介性の皮膚疾患、例えば、水疱性皮膚疾患、多形性紅斑およびアトピー性および接触性の皮膚炎、乾癬、好中球性皮膚病、嚢胞性線維症、アレルギー性疾患、例えば、喘息、アレルギー性鼻炎、食物過敏症および蕁麻疹、嚢胞性線維症、肺の免疫学的疾患、例えば、好酸球性肺炎、特発性肺線維症、成人呼吸症（ＡＲＤ）、急性呼吸促進症候群（ＡＲＤＳ）および炎症性肺傷害、例えば喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、気道応答亢進症、慢性気管支炎、アレルギー性喘息および過敏性肺炎、移植関連疾患、例えば移植片および臓器の拒絶、ならびに、対宿主性移植片病、敗血症性ショック、多臓器不全、癌ならびに血管形成よりなる群から選択される。
【００４４】
場合により、抗体はモノクローナル抗体、ヒト化抗体、抗体フラグメントまたは単鎖抗体である。別の実施形態においては、本発明はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に特異的に結合する抗体を提供する。抗体は標識されていてよく、固体支持体上に固定化されていてよい。別の態様においては、抗体は抗体フラグメント、モノクローナル抗体、単鎖抗体または抗イディオタイプ抗体である。
【００４５】
さらに別の実施形態において、本発明は本発明のポリペプチドをコードする単離ポリヌクレオチドに関し、ここで、該ポリペプチドはＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に結合できる。
【００４６】
さらに別の実施形態において、本発明は本発明の単離ポリペプチドに関し、ここで、該ポリペプチドはＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に結合できる。
【００４７】
これを形成するためのプロセスもまた本明細書に記載しており、これらのプロセスは、該抗体の発現に適する条件下で適切なコード核酸分子を含むベクターを含む宿主細胞を培養すること、および、該抗体を細胞培養物から回収することを含む。
【００４８】
さらに別の実施形態において、本明細書は製薬上許容しうる担体との混合物において、ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を含む組成物を提供する。１つの態様において、組成物は、治療上、有効量の抗体を含む。好ましくは、組成物は滅菌されている。組成物は、長期貯蔵安定性を達成するために保存されていてよい液体医薬品製剤の形態で投与してよい。あるいは、抗体はモノクローナル抗体、抗体フラグメント、ヒト化抗体または単鎖抗体である。
【００４９】
さらに別の実施形態において、本発明は（ａ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体、またはＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に特異的に結合する抗体を含む物質の組成物；（ｂ）該組成物を含有する容器；ならびに（ｃ）該容器に付されたラベル、または該容器に包含されるパッケージインサートであって、免疫関連疾患の治療におけるそれらの該ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の使用に言及したものを含む製造物品に関する。組成物は、治療上有効量のＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を含む。
【００５０】
さらに別の実施形態において、本発明は（ａ）哺乳類から得た組織細胞の被験試料、および（ｂ）同じ細胞型の既知の正常組織の対照試料における、ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆのいずれか、あるいは両方をコードする遺伝子の発現のレベルを検出することを含む哺乳類における免疫関連疾患を診断する方法に関し、ここで対照試料と比較した場合の被験試料中の高値または低値の発現レベルは、被験組織細胞の入手元の哺乳類における免疫関連疾患の存在を示す。
【００５１】
別の実施形態において、本発明は（ａ）哺乳類から得た組織細胞の被験試料とＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体とを接触させること、および（ｂ）被験試料中の抗体とＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆのいずれかまたは両方との間の複合体の形成を検出することを含む哺乳類における免疫疾患を診断する方法に関し、ここで該複合体の形成は該疾患の存在または非存在を示す。検出は定性的または定量的であってよく、同じ細胞タイプの既知の正常組織の対照試料における複合体形成をモニタリングする場合と比較しながら行ってよい。より大量の複合体が被験試料中に形成されていることは、被験組織細胞の入手元の哺乳類における免疫疾患の存在または非存在を示す。抗体は好ましくは検出可能な標識を担持する。複合体形成は、例えば、光学顕微鏡、フローサイトメトリー、蛍光計または当該分野で知られた他の手法によりモニタリングできる。被験試料は、通常は免疫系の不全または異常を有することが疑われる個体から得られる。
【００５２】
別の実施形態においては、本発明は哺乳類における免疫関連疾患を診断する方法を提供し、これは該哺乳類から得た組織細胞の被験試料中のＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の存在または非存在を検出することを含み、ここで該被験試料中のＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の存在または非存在は、該哺乳類における免疫関連疾患の存在を示す。
【００５３】
さらに別の実施形態において、本発明は（ａ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆアゴニスト抗体を哺乳類に投与することを含む、該哺乳類の組織内への脈管構造からの炎症細胞の浸潤を増強するための方法を提供し、この場合、哺乳類の脈管構造からの炎症細胞の浸潤が増強する。さらに別の実施形態においては、本発明は拮抗性のＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を哺乳類に投与することを含む、該哺乳類の組織内への脈管構造からの炎症細胞の浸潤を低下させるための方法を提供し、この場合、哺乳類の脈管構造からの炎症細胞の浸潤が低下する。
【００５４】
さらに別の実施形態において、本発明はＩＬ−１７Ａ／Ｆアゴニスト抗体を哺乳類に投与することを含む、該哺乳類におけるＴリンパ球の活性を増大させる方法を提供し、この場合、哺乳類におけるＴリンパ球の活性は増大する。
【００５５】
さらに別の実施形態において、本発明はＩＬ−１７Ａ／Ｆ拮抗剤抗体を哺乳類に投与することを含む、該哺乳類におけるＴリンパ球の活性を低下させる方法を提供し、この場合は哺乳類におけるＴリンパ球の活性は低下する。
【００５６】
さらに別の実施形態において、本発明はＩＬ−１７Ａ／Ｆアゴニスト抗体を哺乳類に投与することを含む、該哺乳類におけるＴリンパ球の増殖を増大させる方法を提供し、この場合、哺乳類におけるＴリンパ球の増殖は増大する。
【００５７】
さらに別の実施形態において、本発明はＩＬ−１７Ａ／Ｆ拮抗剤抗体を哺乳類に投与することを含む、該哺乳類におけるＴリンパ球の増殖を低下させる方法を提供し、この場合は哺乳類におけるＴリンパ球の増殖は低下する。
【００５８】
本発明はまた、１つ以上のＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を包含する製造物品およびキットを提供する。
【００５９】
Ｂ）定義
以下の説明において、多くの用語を広範に使用する。以下の定義は、本発明の理解を容易にするために提示する。
【００６０】
「抗体」（Ａｂ）および「免疫グロブリン」（Ｉｇ）とは、同じ構造特性を有する糖タンパク質である。抗体は特定の抗原に対する結合特異性を呈するが、免疫グロブリンは抗体および抗原特異性を欠いた他の抗体様分子の両方を包含する。後者の種類のポリペプチドは、例えば、リンパ系により低レベルにおいて、そして、骨髄腫により上昇したレベルにおいて産生される。したがって、本明細書においては、「抗体」または「抗体ペプチド」という用語は、無処置の抗体、または特異的結合に関して無処置の抗体と競合するその結合フラグメントを指し、キメラ、ヒト化、完全ヒト型および二重特異性の抗体を包含する。特定の実施形態においては、結合フラグメントは組み換えＤＮＡ手法により産生される。別の実施形態において、結合フラグメントは無処置の抗体の酵素的、または化学的な切断により産生される。結合フラグメントは、限定しないが、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖおよび単鎖抗体を包含する。「未変性の抗体および免疫グロブリン」は、通常は２つの同一の軽（Ｌ）鎖および２つの同一の重（Ｈ）鎖よりなる約１５０，０００ダルトンのヘテロ４量体糖タンパク質である。各軽鎖は１つの共有結合性のジスルフィド結合により重鎖に連結されており、ジスルフィド連結部の数は、異なる免疫グロブリンアイソタイプの重鎖の間では変動する。各重鎖および軽鎖はまた、規則的な間隔を置いた鎖内のジスルフィド架橋部を有する。各重鎖は、一端において可変ドメイン（ＶＨ）を有し、それに引き続いて多くの定常ドメインを有する。各軽鎖は、一端に可変ドメイン（ＶＬ）を有し、もう一方の端部には定常ドメインを有し；軽鎖の定常ドメインは、重鎖の第１の定常ドメインに配向しており、軽鎖の可変ドメインは重鎖の可変ドメインに配向している。特定のアミノ酸残基が、軽鎖および重鎖の可変ドメインの間の界面を形成していると考えられている（Ｃｌｏｔｈｉａ等、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１８６：６５１（１９８５）；Ｎｏｖｏｔｎｙ  ａｎｄ  Ｈａｂｅｒ、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８２：４５９２（１９８５））。
【００６１】
「単離抗体」という用語は、その天然の環境の成分から同定され、分離および／または回収されている抗体を指す。その天然の環境の夾雑成分は、抗体の診断上または治療上の使用を妨害する物質であり、酵素、ホルモンおよび他のタンパク質性または非タンパク質性の溶質を包含してよい。好ましい実施形態においては、抗体は、（１）ローリー法により測定した場合に抗体の９５重量％超、最も好ましくは９９重量％超まで、（２）スピニングキャップシーケンサーの使用によりＮ末端または内部のアミノ酸配列の少なくとも１５残基を得るために充分な程度まで、あるいは、（３）クーマシーブルーまたは好ましくは銀染色を用いた還元または非還元条件下のＳＤＳ−ＰＡＧＥにより均質となるまで、精製される。抗体の天然の環境の少なくとも１つの成分が存在しないことから、単離抗体は組み換え細胞内のインサイチュの抗体を包含する。しかしながら、通常は、単離抗体は少なくとも１つの精製工程により形成される。
【００６２】
「変異体」抗ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体とは、本明細書においては、「親」抗ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体のアミノ酸配列からは、親抗体配列におけるアミノ酸残基１つ以上の付加、欠失および／または置換のために、アミノ酸配列が異なっている分子を指す。好ましい実施形態においては、変異体は親抗体の超可変領域１つ以上においてアミノ酸置換１つ以上を含む。例えば、変異体は親抗体の超可変領域１つ以上において、置換少なくとも１つ、例えば、約１〜約１０、好ましくは約２〜約５つを含んでよい。通常は、変異体は親抗体の重鎖または軽鎖の可変ドメインと少なくとも７５％、より好ましくは少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも８５％、より好ましくは少なくとも９０％、最も好ましくは少なくとも９５％のアミノ酸配列同一性を有するアミノ酸配列となる。この配列に関する同一性または相同性は、本明細書においては、最大パーセント配列同一性を達成するために、配列を配向させ、必要に応じてギャップを導入した後に、親抗体残基と同一である候補配列内のアミノ酸残基のパーセントとして定義される。Ｎ末端、Ｃ末端または内部の伸長部、欠失または抗体配列内への挿入のいずれも、配列の同一性または相同性に影響するものとみなしてはならない。変異体は、ヒトＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆに結合する能力を保持しており、好ましくは親抗体のものよりも優秀な特性を有する。例えば、変異体はより強力な結合親和性、ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆ誘導炎症を抑制する増強した能力を有してよい。そのような特性を分析するためには、抗ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体のフォーマットは本明細書に開示した生物学的活性試験においてその活性を影響させることが分かっているため、変異体のＦａｂ型を親抗体のＦａｂ型と、または変異体の完全長型を親抗体の完全長型と比較しなければならない。特定の目的の変異体抗体は、本明細書においては、親抗体と比較して生物学的活性において少なくとも約１０倍、好ましくは少なくとも約２０倍、最も好ましくは少なくとも約５０倍の増強を示すものである。
【００６３】
「親抗体」という用語は、本明細書においては、変異体の形成に使用されるアミノ酸配列によりコードされる抗体を指す。好ましくは、親抗体はヒトフレームワーク領域を有し、そして存在する場合は、ヒト抗体定常領域を有する。例えば、親抗体はヒト化またはヒト抗体であってよい。
【００６４】
「アゴニスト」という用語は、別の分子の活性、活性化または機能を増大させるタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、抗体、抗体フラグメント、大分子または小分子（１０ｋＤ未満）を包含する任意の化合物を指す。
【００６５】
「拮抗剤」という用語は、別の分子の活性、活性化または機能を低下させるタンパク質、ポリペプチド、ペプチド、抗体、抗体フラグメント、大分子または小分子（１０ｋＤ未満）を包含する任意の化合物を指す。
【００６６】
「リガンドへの本発明のポリペプチドの結合」という用語は、限定しないが、受容体への本発明のリガンドポリペプチドの結合；リガンドへの本発明の受容体ポリペプチドの結合；抗原またはエピトープへの本発明の抗体の結合；抗体への本発明の抗原またはエピトープの結合；抗イディオタイプ抗体への本発明の抗体の結合；リガンドへの本発明の抗イディオタイプ抗体の結合；受容体への本発明の抗イディオタイプ抗体の結合；リガンド、受容体または抗体への本発明の抗−抗イディオタイプ抗体の結合；などを包含する。
【００６７】
「多重特異性」または「多官能性」の抗体以外の「２価の抗体」とは、特定の実施形態においては、同一の抗原特異性を有する結合部位を含むものと理解される。
【００６８】
「二重特異性」または「２官能性」の抗体とは、２つの異なる重／軽鎖対および２つの異なる結合部位を有するハイブリッドの抗体である。二重特異性抗体は、例えば、限定しないが、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’フラグメントの連結を包含する種々の方法により形成してよい。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ＆Ｌａｃｈｍａｎｎ（１９９０）、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１；Ｋｏｓｔｅｌｎｙｅｔａｌ．（１９９２）、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７−１５５３を参照。
【００６９】
「キメラ抗体」という用語は、異なる種に属する免疫グロブリンの可変および定常領域の遺伝子から、典型的には遺伝子操作により、自身の軽鎖および重鎖の遺伝子が構築されている抗体を指す。例えば、マウスモノクローナル抗体由来の遺伝子の可変セグメントをヒト定常セグメント、例えば、γ１およびγ３に連結してよい。したがって、典型的な治療用のキメラ抗体は、マウス抗体由来の可変または抗原結合ドメインおよびヒト抗体由来の定常ドメインを含むハイブリッドタンパク質であるが、他の哺乳類種も使用してよい。特に、キメラ抗体は、ヒンジおよび免疫グロブリン軽鎖、重鎖または両方の定常領域の全てまたは一部が他の動物の免疫グロブリンの軽鎖または重鎖に由来する相当する領域と置換されている、組み換えＤＮＡ手法により産生される。この手法において、親モノクローナル抗体の抗原結合部分を別の種の抗体の骨格上にグラフトする。Ｗｉｎｔｅｒ等へのＥＰ０２３９４００に記載の１つの道程は、ある種の相補性決定領域（ＣＤＲ）と別の種のものとの置換、例えば、ヒト重鎖および軽鎖の免疫グロブリン可変領域ドメイン由来のＣＤＲをマウス可変領域ドメイン由来のＣＤＲと置換することを記載している。これらの変性抗体を、その後、ヒト免疫グロブリン定常領域と組み合わせることにより、抗原に対して特異的な置換されたマウスＣＤＲを除く、ヒト型である抗体を形成してもよい。抗体のＣＤＲ領域をグラフトするための方法は、例えば、Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ等（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７およびＶｅｒｈｏｅｙｅｎ等（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２３９：１５３４−１５３６に記載されている。
【００７０】
「有効中和価」という用語は、本明細書においては、臨床的効能を有する（ヒトにおいて）か、または、例えば、コットンラットにおいて９９％までウィルスを低減することが分かっている、動物（ヒトまたはコットンラット）の血清中に存在する量に相当する抗体の量を指す。９９％低減は、例えば、１０３ｐｆｕ、１０４ｐｆｕ、１０５ｐｆｕ、１０６ｐｆｕ、１０７ｐｆｕ、１０８ｐｆｕまたは１０９ｐｆｕのＲＳＶの特異的攻撃により定義される。
【００７１】
本明細書においては、「エピトープ」という用語は、モノクローナル抗体が特異的に結合する抗原の部分を指す。すなわち、「エピトープ」という用語は、免疫グロブリンまたはＴ細胞受容体に特異的に結合できる任意のタンパク質決定基を包含する。エピトープ決定基は、通常はアミノ酸または糖側鎖などの分子の化学的に活性な表面の原子団よりなり、通常は特定の三次元構造特性および特定の荷電特性を有する。より特定すれば、「ＩＬ−１７Ａエピトープ」、「ＩＬ−１７Ｆエピトープ」および／または「ＩＬ−１７Ａ／Ｆエピトープ」という用語は、本明細書においては、動物において、好ましくは哺乳類において、最も好ましくはマウスまたはヒトにおいて抗原性または免疫原性の活性を有する相当するポリペプチドの一部分を差す。免疫原性の活性を有するエピトープは、動物において抗体の応答を誘発するＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆポリペプチドの一部分である。抗原性の活性を有するエピトープは、当該分野で良く知られている任意の方法により、例えば、イムノアッセイにより測定した場合に抗体が免疫特異的に結合するＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆポリペプチドの一部分である。抗原性のエピトープは、必ずしも免疫原性である必要はない。そのようなエピトープは本質的に線状であることができ、または、不連続エピトープであることができる。すなわち、本明細書においては、「コンホーメーション性エピトープ」という用語は、アミノ酸の未破壊のシリーズ以外の抗原のアミノ酸の間の空間的関係により形成される不連続エピトープを指す。より特定すれば、エピトープという用語は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に適用されるように、本明細書において定義される通りのエピトープを包含する。
【００７２】
「タグ付けされたエピトープ」という用語は、本明細書においては、「エピトープタグ」に融合された抗ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体を指す。エピトープタグポリペプチドは、対応する抗体が作成できるようなエピトープを与える程度に十分な残基を有し、かつ、本発明の抗体の活性を妨害しない程度に十分短い。エピトープは好ましくは、それに対する抗体が他のエピトープとは実質的に交差反応しないように十分独自なものである。適当なタグポリペプチドは、一般的に少なくとも６個のアミノ酸残基、通常は約８〜５０個のアミノ酸残基（好ましくは、約９〜３０個の残基）を有する。例としてはｆｌｕＨＡタグポリペプチドおよびその抗体１２ＣＡ５（Ｆｉｅｌｄ等、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．８：２１５９−２１６５（１９８８））；ｃ−ｍｙｃタグおよびそれに対する８Ｆ９、３Ｃ７、６Ｅ１０、Ｇ４、Ｂ７および９Ｅ１０抗体（Ｅｖａｎ等、Ｍｏｌ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．５（１２）：３６１０−３６１６（１９８５））；および、単純疱疹ウィルス糖タンパク質Ｄ（ｇＤ）タグおよびその抗体（Ｐａｂｏｒｓｋｙ等、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  ３（６）：５４７−５５３（１９９０））が包含される。特定の実施形態においては、エピトープタグは「サルベージ受容体結合エピトープ」である。本明細書においては、「サルベージ受容体結合エピトープ」という用語は、ＩｇＧ分子のインビボの血清中半減期の増大を担うＩｇＧ分子（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、またはＩｇＧ４）のＦｃ領域のエピトープを指す。
【００７３】
「フラグメント」という用語は、本明細書においては、ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆポリペプチド、あるいはＩＬ−１７ＡもしくはＩＬ−１７Ｆのいずれか、またはＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆポリペプチドの両方に免疫特異的に結合する抗体のアミノ酸配列の、少なくとも５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも２０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも２５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも４０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも５０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも６０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも７０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも８０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも９０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１００個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１２５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１５０個の連続したアミノ酸残基、少なくとも１７５個の連続したアミノ酸残基、少なくとも２００個の連続したアミノ酸残基、少なくとも２５０個の連続したアミノ酸残基のアミノ酸配列を含むペプチドまたはポリペプチドを指す。
【００７４】
本明細書においては、「免疫グロブリン」という用語は、免疫グロブリン遺伝子により実質的にコードされるポリペプチド１つ以上よりなるタンパク質を指す。免疫グロブリンの１つの形態は、抗体の基本構造単位を構成する。この形態は４量体であり、免疫グロブリン鎖の２つの同一の対よりなり、各対は１軽鎖および１重鎖を有する。各対において軽鎖および重鎖の可変領域はともに、抗原への結合を担っており、定常領域は抗体エフェクター機能を担っている。
【００７５】
完全長免疫グロブリン「軽鎖」（約２５Ｋｄまたは２１４アミノ酸）は、ＮＨ２末端において可変領域遺伝子およびＣＯＯＨ末端においてラムダ定常領域遺伝子によりコードされている。完全長免疫グロブリン「重鎖」（約５０Ｋｄまたは４４６アミノ酸）は同様に、可変領域遺伝子（約１１６アミノ酸）および他の上記した定常領域遺伝子の１つ（約３３０アミノ酸）によりコードされている。重鎖は、γ、μ、α、δまたはεに分類され、それぞれＩｇＧ、ＩｇＭ、ＩｇＡ、ＩｇＤおよびＩｇＥとして抗体アイソタイプを定義する。軽鎖および重鎖内において、可変および定常領域は、アミノ酸約１２以上の「Ｊ」領域により連結されており、重鎖はまた、アミノ酸約１０以上の「Ｄ」領域を含んでいる（一般的に、Ｆｕｎｄａｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ（Ｐａｕｌ、Ｗ．編、第２版Ｒａｖｅｎ  Ｐｒｅｓｓ、Ｎ．Ｙ．、１９８９）、Ｃｈ．７を参照、全ての目的のために参照により全体が本明細書に組み込まれる）。
【００７６】
免疫グロブリン軽鎖または重鎖可変領域は、３つの超可変領域により中断された「フレームワーク」領域よりなる。すなわち、「超可変領域」という用語は、抗原結合を担っている抗体のアミノ酸残基を指す。超可変領域は「相補性決定領域」、すなわち、「ＣＤＲ」由来のアミノ酸残基（すなわち、軽鎖可変ドメインの残基２４〜３４（Ｌ１）、５０〜５６（Ｌ２）および８９〜９７（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメインの３１〜３５（Ｈ１）、５０〜６５（Ｈ２）および９５〜１０２（Ｈ３）（Ｋａｂａｔ等、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、第５版、Ｐｕｂｌｉｃ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｓｅｒｖｉｃｅ、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、Ｍｄ．（１９９１））、および／または「超可変ループ」由来の残基（すなわち、軽鎖可変ドメインの残基２６〜３２（Ｌ１）、５０〜５２（Ｌ２）および９１〜９６（Ｌ３）ならびに重鎖可変ドメインの２６〜３２（Ｈ１）、５３〜５５（Ｈ２）および９６〜１０１（Ｈ３）；Ｃｈｏｔｈｉａ  ａｎｄ  Ｌｅｓｋ、１９８７、Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．１９６：９０１−９１７）を含む（これらは共に参照により本明細書に組み込まれる）。「フレームワーク領域」、すなわち、「ＦＲ」の残基は、本明細書において定義する超可変領域残基以外の可変ドメイン残基である。異なる軽鎖または重鎖のフレームワーク領域の配列は、種内で比較的保存されている。すなわち、「ヒトフレームワーク領域」は、天然に存在するヒト免疫グロブリンのフレームワーク領域に実質的に同一（約８５％以上、通常は９０〜９５％以上）であるフレームワーク領域である。構成要素である軽鎖および重鎖の複合フレームワーク領域である抗体のフレームワーク領域は、ＣＤＲを位置決めし、配向させるよう働く。ＣＤＲは抗原のエピトープへの結合を主に担っている。
【００７７】
したがって、「ヒト化」免疫グロブリンとは、ヒトフレームワーク領域および非ヒト（通常はマウスまたはラット）の免疫グロブリン由来のＣＤＲ１つ以上を含む免疫グロブリンを指す。ＣＤＲを与える非ヒト免疫グロブリンは「ドナー」と称され、フレームワークを与えるヒト免疫グロブリンは「アクセプター」と称される。定常領域は存在する必要はないが、存在する場合は、それらはヒト免疫グロブリン定常領域と実質的に同一、すなわち、少なくとも約８５〜９０％、好ましくは約９５％以上同一でなければならない。したがって、おそらくはＣＤＲを除くヒト化免疫グロブリンの全ての部分は、天然のヒト免疫グロブリン配列の相当する部分と実質的に同一である。「ヒト化抗体」とはヒト化軽鎖およびヒト化重鎖の免疫グロブリンを含む抗体である。例えば、ヒト化抗体は上記定義した典型的なキメラ抗体を包含しないが、その理由は、例えば、キメラ抗体の全可変領域は非ヒト型であるためである。
【００７８】
本明細書においては、「ヒト抗体」という用語は、ヒト免疫グロブリンのアミノ酸配列を有する抗体を包含し、例えば、Ｋｕｃｈｅｒｌａｐａｔｉ等による、米国特許第５，９３９，５９８号に記載される通り、ヒト免疫グロブリンライブラリから、またはヒト免疫グロブリン１つ以上に関してトランスジェニックな動物から単離され、内因性免疫グロブリンを発現しないような抗体を包含する。
【００７９】
「遺伝子的に変性した抗体」という用語は、アミノ酸配列が未変性の抗体のものから変化している抗体を意味する。抗体の作成における組み換えＤＮＡ手法の妥当性からすれば、天然の抗体中に存在するアミノ酸の配列に制約される必要はなく；所望の特性が得られるように抗体を設計し直すことができる。可能な変異は多岐に渡り、そして、僅か１つまたは数個のアミノ酸を変えることから、例えば、可変または定常領域の完全な再設計に至る。定常領域の変化は、一般的に補体の固定などの特性を向上または変性するために行われる。可変領域の変化は抗原結合特性を改善するために行われる。
【００８０】
抗体のほかに、免疫グロブリンは種々の他の形態、例えば、単鎖またはＦｖ、Ｆａｂおよび（Ｆａｂ’）２、ならびに二重特異性抗体、線状抗体、多価のハイブリッド抗体（上記および詳細には、Ｌａｎｚａｖｅｃｃｈｉａ等、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７、１０５（１９８７））および単鎖（例えば、Ｈｕｓｔｏｎ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８５、５８７９−５８８３（１９８８）およびＢｉｒｄ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ、２４２、４２３−４２６（１９８８）、これらは参照により本明細書に組み込まれる）において存在してよい（一般的には、Ｈｏｏｄ等、「Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ」、Ｂｅｎｊａｍｉｎ、Ｎ．Ｙ．、第２版（１９８４）およびＨｕｎｋａｐｉｌｌｅｒ  ａｎｄ  Ｈｏｏｄ、Ｎａｔｕｒｅ、３２３、１５−１６（１９８６）（参照により本明細書に組み込まれる）を参照）。
【００８１】
本明細書においては、、「単鎖Ｆｖ」、「単鎖抗体」、「Ｆｖ」または「ｓｃＦｖ」という用語は、重鎖および軽鎖の両方に由来する可変領域を含むが定常領域は欠いており、しかし、単一のポリペプチド鎖内にある抗体フラグメントを指す。一般的に、単鎖抗体は、抗原結合を可能にする所望の構造を形成できるようにするＶＨおよびＶＬドメインの間のポリペプチドリンカーを含む。単鎖抗体は、ＰｌｕｃｋｔｈｕｎによりＴｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、ｖｏｌ．１１３、Ｒｏｓｅｎｂｕｒｇ  ａｎｄ  Ｍｏｏｒｅ編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、ｐｐ．２６９−３１５（１９９４）において詳細に考察されている。単鎖抗体を作成する種々の方法が知られており、例えば、米国特許第４，６９４，７７８号および同第５，２６０，２０３号；国際特許出願公開ＷＯ８８／０１６４９；Ｂｉｒｄ（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４４２；Ｈｕｓｔｏｎ等（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３；Ｗａｒｄ等（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３３４：５４４５４；Ｓｋｅｒｒａ等（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：１０３８−１０４１に記載されているものが包含され、その開示内容は任意の目的のために参照により本明細書に組み込まれる。特定の実施形態においては、単鎖抗体はまた二重特異性および／またはヒト化されることができる。
【００８２】
「Ｆａｂフラグメント」は、１つの軽鎖および１つの重鎖のＣＨ１および可変領域を含む。Ｆａｂ分子の重鎖は別の重鎖分子とジスルフィド結合を形成できない。
【００８３】
「Ｆａｂ’フラグメント」は、１つの軽鎖ならびにＣＨ１およびＣＨ２ドメインの間の定常領域より多くを含有する１つの重鎖を含有し、これにより２つの重鎖の間に鎖間ジスルフィド結合が形成されＦ（ａｂ’）２分子の形成が可能となる。
【００８４】
「Ｆ（ａｂ’）２フラグメント」は、２つの軽鎖ならびにＣＨ１およびＣＨ２ドメインの間に定常領域の一部分を含有する２つの重鎖を含有し、これにより２つの重鎖の間に鎖間ジスルフィド結合が形成される。
【００８５】
「二重特異性抗体」という用語は、２つの抗原結合部位を有する小型抗体フラグメントを指し、そのフラグメントは同じポリペプチド鎖（ＶＨ−ＶＬ）において軽鎖可変ドメイン（ＶＬ）に連結した重鎖可変ドメイン（ＶＨ）を含む。同じ鎖上の２ドメインの間の対形成を可能とするには、短すぎるリンカーを使用することにより、ドメインはもう一方の鎖の相補ドメインと強制的に対形成させられ、２つの抗原結合部位を生じさせる。二重特異性抗体は、例えば、ＥＰ４０４０９７；ＷＯ９３／１１１６１；およびＨｏｌｌｉｎｇｅｒ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ９０：６４４４−６４４８（１９９３）により詳細に説明されている。
【００８６】
「線状抗体」という用語は、Ｚａｐａｔａ等、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇ．８（１０）：１０５７−１０６２（１９９５）に記載されている抗体を指す。慨すれば、これらの抗体は、抗原結合領域の対を形成する直列のＦｄセグメント（ＶＨ−ＣＨ１−ＶＨ−ＣＨ１）の対を含む。線状抗体は、二重特異性または単一特異性であることができる。
【００８７】
「免疫学的に機能性の免疫グロブリンフラグメント」という用語は、本明細書においては免疫グロブリン重鎖および軽鎖の少なくとも可変ドメインを含有するポリペプチドフラグメントを指す。本発明の免疫学的に機能性の免疫グロブリンフラグメントは、リガンドへの結合、リガンドのその受容体への結合の防止、受容体へのリガンドの結合から生じる生物学的応答への干渉またはそれらの任意の組み合わせが可能である。好ましくは、本発明の免疫学的に機能性の免疫グロブリンフラグメントは、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に特異的に結合する。
【００８８】
「モノクローナル抗体」という用語は、本明細書においてはハイブリドーマ手法を介して産生された抗体に限定されない。「モノクローナル抗体」という用語は、任意の真核生物、原核生物またはファージクローンを含む単一のクローン由来の抗体を指し、それが産生された方法ではない。
【００８９】
本明細書においては、「核酸」または「核酸分子」とは、ポリヌクレオチド、例えば、デオキシリボ核酸（ＤＮＡ）またはリボ核酸（ＲＮＡ）、オリゴヌクレオチド、ポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）により形成したフラグメント、ならびにライゲーションおよび切り出し、エンドヌクレアーゼ作用およびエキソヌクレアーゼ作用のいずれかにより形成したフラグメントを指す。核酸分子は、天然に存在するヌクレオチド（例えば、ＤＮＡおよびＲＮＡ）または天然に存在するヌクレオチドの類縁体（例えば、天然に存在するヌクレオチドのα−エナンチオマー型）あるいは両方の組み合わせである単量体を含むことができる。修飾されたヌクレオチドは、糖部分において、および／またはピリミジンまたはプリン塩基部分において変性を有することができる。糖の修飾は、例えば、ハロゲン、アルキル基、アミンおよびアジド基によるヒドロキシル基１つ以上の置き換えを包含し、あるいは、糖はエーテルまたはエステルとして官能性付与されることができる。さらに、糖部分全体を立体的および電子的に同様の構造、例えば、アザ糖および炭素環糖類縁体で置き換えられることもできる。塩基部分の修飾の例は、アルキル化プリンおよびピリミジン、アシル化プリンまたはピリミジンあるいは他のよく知られた複素環置換を包含する。核酸単量体は、ホスホジエステル結合またはそのような連結部の類縁体により連結することができる。ホスホジエステル連結部の類縁体は、ホスホロチオエート、ホスホロジチオエート、ホスホロセレノエート、ホスホロジセレノエート、ホスホロアニロチオエート、ホスホロアニリデート、ホスホアミデートなどを包含する。「核酸分子」という用語はまた、所謂「ペプチド核酸」を包含し、これはポリアミド骨格に結合した天然に存在するまたは修飾された核酸塩基を含む。核酸は１本鎖または２本鎖のいずれかであることができる。
【００９０】
核酸分子の相補体という用語は、基準ヌクレオチド配列と比較した場合に、相補なヌクレオチド配列および逆の方向を有する核酸分子を指す。例えば、配列５’ＡＴＧＣＡＣＧＧＧ３’は、５’ＣＣＣＧＴＧＣＡＴ３’に対して相補である。
【００９１】
「縮重ヌクレオチド配列」という用語は、ポリペプチドをコードする基準核酸分子と比較した場合に、縮重コドン１つ以上を包含するヌクレオチドの配列を指す。縮重コドンはヌクレオチドの異なるトリプレットを含有するが、同じアミノ酸残基をコードしている（すなわち、ＧＡＵおよびＧＡＣトリプレットは各々Ａｓｐをコードしている）。
【００９２】
「構造遺伝子」という用語は、メッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）に転写され、次に特定のポリペプチドに特徴的なアミノ酸配列に翻訳される核酸分子を指す。
【００９３】
「単離核酸分子」は、生物のゲノムＤＮＡに組み込まれていない核酸分子である。例えば、細胞のゲノムＤＮＡから分離されている成長因子をコードするＤＮＡ分子は、単離したＤＮＡ分子である。単離核酸分子の別の例は、生物のゲノム内に組み込まれていない化学合成された核酸分子である。特定の種から単離されている核酸分子は、その種の染色体の完全なＤＮＡ分子よりも小型である。
【００９４】
「核酸分子構築物」とは、人的介入により修飾された、天然には存在しない配置において組み合わせられ並置されている核酸分子の特定のセグメントを含有している１本鎖または２本鎖のいずれかの核酸分子である。
【００９５】
「線状ＤＮＡ」とは、遊離の５’および３’末端を有する非環状のＤＮＡ分子を指す。線状ＤＮＡは、酵素的消化または物理的途絶により、プラスミドのような閉環型のＤＮＡ分子から産生できる。
【００９６】
「相補ＤＮＡ（ｃＤＮＡ）」とは、酵素である逆転写酵素によりｍＲＮＡ鋳型から形成される１本鎖ＤＮＡ分子である。典型的には、ｍＲＮＡの部分に相補なプライマーを逆転写の開始のために使用する。当業者はまた、そのような１本鎖ＤＮＡ分子およびその相補ＤＮＡ鎖よりなる２本鎖ＤＮＡ分子を指すために「ｃＤＮＡ」という用語も使用する。「ｃＤＮＡ」という用語は、ＲＮＡ鋳型から合成されたｃＤＮＡ分子のクローンも指す。
【００９７】
「プロモーター」とは、構造遺伝子の転写を試行するヌクレオチド配列である。典型的には、プロモーターは構造遺伝子の転写開始部位に近位の遺伝子の５’非コード領域に位置する。転写の開始において機能するプロモーター内の配列エレメントは、頻繁にはコンセンサスヌクレオチド配列により特徴づけられる。これらのプロモーターエレメントは、ＲＮＡポリメラーゼ結合部位、ＴＡＴＡ配列、ＣＡＡＴ配列、分化特異性配列（ＤＳＥ；ＭｃＧｅｈｅｅ等、Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．７：５５１（１９９３））、環状ＡＭＰ応答エレメント（ＣＲＥｓ）、血清応答エレメント（ＳＲＥ；Ｔｒｅｉｓｍａｎ、Ｓｅｍｉｎａｒｓ  ｉｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｂｉｏｌ．１：４７（１９９０））、糖質コルチコイド応答エレメント（ＧＲＥ）および他の転写因子のための結合部位、例えば、ＣＲＥ／ＡＴＦ（Ｏ’Ｒｅｉｌｌｙ等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６７：１９９３８（１９９２））、ＡＰ２（Ｙｅ等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２６９：２５７２８（１９９４））、ＳＰ１、ｃＡＭＰ応答エレメント結合タンパク質（ＣＲＥＢ；Ｌｏｅｋｅｎ、Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒ．３：２５３（１９９３））および８量体因子を包含する（一般的に、Ｗａｔｓｏｎ等編、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｅｎｅ、第４版（Ｔｈｅ  Ｂｅｎｊａｍｉｎ／Ｃｕｍｍｉｎｇｓ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ、Ｉｎｃ．１９８７）ならびにＬｅｍａｉｇｒｅおよびＲｏｕｓｓｅａｕ、Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．３０３：１（１９９４）を参照）。プロモーターが誘導プロモーターである場合、転写の速度は誘導剤に応答して増大する。反対に、プロモーターが構成プロモーターである場合は、誘導剤により転写速度は調節されない。抑制プロモーターも知られている。
【００９８】
「コアプロモーター」は、ＴＡＴＡボックスおよび転写開始を包含するプロモーター機能のための必須のヌクレオチド配列を含有する。この定義により、コアプロモーターは、活性を増強するかまたは組織特異的活性を付与する場合がある特異的配列の非存在下において検出可能な活性を有していてもいなくてもよい。
【００９９】
「調節エレメント」とは、コアプロモーターの活性を調節するヌクレオチド配列である。例えば、調節エレメントは細胞因子と結合することにより特定の細胞、組織または細胞内小器官において排他的または優先的に転写を可能とするヌクレオチド配列を含有してよい。これらの型の調節エレメントは、通常は「細胞特異的」、「組織特異的」または「細胞内小器官特異的」な様式において発現される遺伝子に関連している。
【０１００】
「エンハンサー」は、転写の開始部位に対して相対的なエンハンサーの距離または方向に関わらず、転写の効率を増大させることができる調節エレメントの型である。
【０１０１】
「非相同ＤＮＡ」とは、ある宿主細胞内に天然には存在しないＤＮＡ分子またはＤＮＡ分子の集団を指す。特定の宿主細胞に対して非相同であるＤＮＡ分子は、宿主ＤＮＡが非宿主ＤＮＡ（すなわち、外因性ＤＮＡ）と組み合わせられる限り、宿主細胞種由来のＤＮＡ（すなわち、内因性ＤＮＡ）を含有してよい。例えば、転写プロモーターを含む宿主ＤＮＡセグメントに作動可能に連結したポリペプチドをコードする非宿主ＤＮＡセグメントを含むＤＮＡ分子は、非相同ＤＮＡ分子とみなされる。逆に、非相同ＤＮＡ分子は、外因性プロモーターに作動可能に連結した内因性遺伝子を含むことができる。別の説明としては、野生型細胞由来の遺伝子を含むＤＮＡ分子は、そのＤＮＡ分子が野生型遺伝子を欠いている突然変異体細胞内に導入されれば、非相同ＤＮＡとみなされる。
【０１０２】
「ポリペプチド」とは、天然または合成により産生されるペプチド結合で連結されたアミノ酸残基の重合体である。約１０個のアミノ酸残基よりも少ないポリペプチドは一般的に「ペプチド」と称される。
【０１０３】
「タンパク質」は、ポリペプチド鎖１つ以上を含む巨大分子である。タンパク質は炭水化物基などの非ペプチド成分も含んでよい。炭水化物および他の非ペプチド性の置換基は、タンパク質が産生される細胞によりタンパク質に付加されてよく、細胞の型により変動する。タンパク質は、本明細書においては、そのアミノ酸骨格の構造の観点から定義し；炭水化物基などの置換基は一般的に特定しないが、それでもなお存在してよい。
【０１０４】
非宿主ＤＮＡ分子によりコードされるペプチドまたはポリペプチドは、「非相同」ペプチドまたはポリペプチドである。
【０１０５】
「クローニングベクター」とは、宿主細胞において自律的に複製する能力を有するプラスミド、コスミド、またはバクテリオファージなどの核酸分子である。クローニングベクターは、典型的には、ベクターの本質的な生物学的機能の損失を伴うことなく測定可能な態様において核酸分子の挿入を可能にする制限エンドヌクレアーゼ認識部位１つまたは少数、ならびに、クローニングベクターにより形質転換された細胞の同定および選別においての使用に適するマーカー遺伝子をコードするヌクレオチド配列を含有する。マーカー遺伝子は、典型的にはテトラサイクリン耐性またはアンピシリン耐性を与える遺伝子を包含する。
【０１０６】
「発現ベクター」とは、宿主細胞内において発現される遺伝子をコードする核酸分子である。典型的には、発現ベクターは、転写プロモーター、遺伝子、および転写ターミネーターを含む。遺伝子発現は、通常はプロモーターの制御下におかれ、そのような遺伝子はプロモーターに「作動可能に連結」しているといわれる。同様に調節エレメントおよびコアプロモーターは、調節エレメントがコアプロモーターの活性を調節する場合は、作動可能に連結している。
【０１０７】
「組み換え宿主」とは、クローニングベクターまたは発現ベクターのような非相同核酸分子を含有する細胞である。この観点において、組み換え宿主細胞の例は発現ベクターからＩＬ−１７ＲＡを産生する細胞である。一方、ＩＬ−１７ＲＡは、ＩＬ−１７ＲＡの「天然原料」であり、発現ベクターを欠いている細胞により産生されることができる。
【０１０８】
「組み込み形質転換体」とは、細胞のゲノムＤＮＡ内に非相同ＤＮＡが組み込まれている組み換え宿主細胞である。
【０１０９】
「融合タンパク質」は、遺伝子少なくとも２つのヌクレオチド配列を含む核酸分子により発現されるハイブリッドタンパク質である。例えば、融合タンパク質は、アフィニティーマトリックスに結合するポリペプチドと融合したＩＬ−１７ＲＡポリペプチドの少なくとも部分を含むことができる。そのような融合タンパク質は、アフィニティークロマトグラフィーを用いた大量のＩＬ−１７ＲＡを単離する手段を与える。
【０１１０】
「受容体」という用語は、「リガンド」と呼称される生物学的活性分子に結合する細胞関連タンパク質を指す。この相互作用は、細胞上のリガンドの作用を媒介する。受容体は、膜結合性、シトゾル性、または核性；単量体（例えば、甲状腺刺激ホルモン受容体、ベータ−アドレナリン作用性受容体）または多量体（例えば、ＰＤＧＦ受容体、成長ホルモン受容体、ＩＬ−３受容体、ＧＭ−ＣＳＦ受容体、Ｇ−ＣＳＦ受容体、エリスロポエチン受容体およびＩＬ―６受容体）であることができる。膜結合受容体は、典型的にはシグナルトランスダクションに関与する細胞外リガンド結合ドメインおよび細胞内エフェクタードメインを含む多重ドメイン構造を特徴とする。特定の膜結合受容体においては、細胞外リガンド結合ドメインおよび細胞内エフェクタードメインは完全な機能的受容体を含む別個のポリペプチド内に位置する。
【０１１１】
一般的に、受容体へのリガンドの結合はエフェクタードメインと細胞内の他の分子との間の相互作用を誘発する受容体中のコンホーメーション変化をもたらし、これが次に、細胞の代謝の変性をもたらす。受容体リガンド相互作用に関連する場合が多い代謝事象は遺伝子転写、ホスホリル化、脱ホスホリル化、環状ＡＭＰ産生の増大、細胞カルシウムの移動、膜脂質の移動、細胞接着、イノシトール脂質の加水分解およびリン脂質の加水分解を包含する。
【０１１２】
「分泌シグナル配列」という用語は、より大型のポリペプチドの成分として、それが合成される細胞の分泌経路を経て、より大型のポリペプチドを指向するペプチド（「分泌ペプチド」）をコードするＤＮＡ配列を指す。より大型のポリペプチドは共通して、分泌経路を経た通過の間に、分解されて分泌ペプチドを除去する。
【０１１３】
「単離ポリペプチド」とは、天然においてポリペプチドに伴っている炭水化物、脂質または他のタンパク質性の不純物のような夾雑細胞成分を本質的に含まないポリペプチドである。典型的には、単離ポリペプチドの調製品は、高度に精製された形態、すなわち、少なくとも約８０％純度、少なくとも約９０％純度、少なくとも約９５％純度、９５％超の純度、例えば、９６％、９７％または９８％以上の純度、または９９％超の純度でポリペプチドを含有する。特定のタンパク質調製品が単離ポリペプチドを含有することを示す１つの方法は、タンパク質調製品のドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）−ポリアクリルアミドゲル電気泳動およびゲルのクーマシーブリリアントブルー染色の後に単一のバンドが生じることによる。しかしながら、「単離された」という用語は、２量体または別様にグリコシル化または誘導体化された形態のような別様の物理的形態における同じポリペプチドの存在を排除しない。
【０１１４】
「アミノ末端」および「カルボキシ末端」という用語は、本明細書においては、ポリペプチド内の位置を指す。文脈上可能な場合は、これらの用語は近接度または相対的位置を指すためにポリペプチドの特定の配列または部分に言及するために使用される。例えば、ポリペプチド内の基準配列に対してカルボキシル末端に位置する特定の配列は、基準配列のカルボキシル末端に対して近位に位置するが、必ずしも完全なポリペプチドのカルボキシル末端にあるわけではない。
【０１１５】
「発現」という用語は、遺伝子産物の生合成を指す。例えば、構造遺伝子の場合、発現はｍＲＮＡへの構造遺伝子の転写およびポリペプチド１つ以上へのｍＲＮＡの翻訳を包含する。
【０１１６】
本明細書においては、「免疫モジュレーター」という用語は、サイトカイン、幹細胞成長因子、リンホトキシン、同時刺激分子、造血因子など、およびこれらの分子の合成類縁体を包含する。
【０１１７】
「補体／抗補体対」とは、適切な条件下で非共有結合的に会合している安定な対を形成する非同一の部分を指す。例えば、ビオチンおよびアビジン（またはストレプトアビジン）は、補体／抗補体対のプロトタイプ的メンバーである。他の例示される補体／抗補体対は、受容体／リガンド対、抗体／抗原（あるいは、ハプテンまたはエピトープ）対、センス／アンチセンスポリヌクレオチド対などを包含する。補体／抗補体対の後の解離が望ましい場合は、補体／抗補体対は好ましくは１０９Ｍ−１未満の結合親和性を有する。
【０１１８】
本明細書においては、「治療薬」とは、抗体部分に共役して、治療に有用な共役を形成する分子または原子である。治療薬の例は、薬品、毒素、免疫モジュレーター、キレート形成剤、ホウ素化合物、光学活性物質または染料、および放射性同位体である。
【０１１９】
「検出可能な標識」とは、抗体部分に共役して、診断に有用な分子を形成する分子または原子である。検出可能な標識の例は、キレート形成剤、光学活性物質、放射性同位体、蛍光物質、常磁性体イオン、または他のマーカー部分を包含する。
【０１２０】
「アフィニティータグ」という用語は、本明細書においては、第２のポリペプチドに結合され、第２のポリペプチドの精製または検出を提供するか、基質への第２のポリペプチドの結合のための部位を提供することができるポリペプチドセグメントを指す。原則として、抗体または他の特異的結合剤の使用対象となり得る任意のペプチドまたはタンパク質も、アフィニティータグとして使用できる。アフィニティータグは、ポリヒスチジン管、タンパク質Ａ（Ｎｉｌｓｓｏｎ等、ＥＭＢＯ  Ｊ．４：１０７５（１９８５）；Ｎｉｌｓｓｏｎ等、Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｅｎｚｙｍｏｌ．１９８：３（１９９１））、グルタチオンＳトランスフェラーゼ（Ｓｍｉｔｈ  ａｎｄ  Ｊｏｈｎｓｏｎ、Ｇｅｎｅ  ６７：３１（１９８８））、Ｇｌｕ−Ｇｌｕアフィニティータグ（Ｇｒｕｓｓｅｎｍｅｙｅｒ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８２：７９５２（１９８５））、物質Ｐ、ＦＬＡＧペプチド（Ｈｏｐｐ等、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ６：１２０４（１９８８））、ストレプトアビジン結合ペプチド、または他の抗原性のエピトープまたは結合ドメインを包含する。一般的に、Ｆｏｒｄ等、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ａｎｄ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  ２：９５（１９９１）を参照。アフィニティータグをコードしているＤＮＡ分子は、市販品として入手できる（例えば、Ｐｈａｒｍａｃｉａ  Ｂｉｏｔｅｃｈ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）。
【０１２１】
「標的ポリペプチド」または「標的ペプチド」とは、エピトープ少なくとも１つを含み、標的細胞、例えば、腫瘍細胞、または感染性の物質である抗原を担持している細胞上に発現されるアミノ酸配列である。Ｔ細胞は標的ポリペプチドまたは標的ペプチドに対する主要組織適合性複合体分子により提示されるペプチドエピトープを認識し、典型的には標的細胞を溶解するか、または、標的細胞の部位に別の免疫細胞を補充することにより標的細胞を殺傷する。
【０１２２】
真核生物においては、ＲＮＡポリメラーゼＩＩは構造遺伝子の転写を触媒してｍＲＮＡを生成する。核酸分子は、ＲＮＡ転写物が特定のｍＲＮＡの配列と相補である配列を有するようなＲＮＡポリメラーゼＩＩ鋳型を含有するように設計できる。ＲＮＡ転写物は「アンチセンスＲＮＡ」と称され、アンチセンスＲＮＡをコードする核酸分子は「アンチセンス遺伝子」と称される。アンチセンスＲＮＡ分子はｍＲＮＡ分子に結合することができ、これにより、ＲＮＡ翻訳の抑制をもたらす。
【０１２３】
「ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆに特異的なアンチセンスオリゴヌクレオチド」とは、（ａ）ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆ遺伝子の一部分と安定なトリプレックス形成することができるか、あるいは（ｂ）ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆ遺伝子のｍＲＮＡ転写物の一部分と安定なデュプレックスを形成することができる、配列を有するオリゴヌクレオチドである。
【０１２４】
「リボザイム」とは、触媒中心を含有する核酸分子である。用語には、ＲＮＡ酵素、自己スプライシングＲＮＡ、自己切断ＲＮＡ、およびこれらの触媒機能を実施できる核酸分子が包含される。リボザイムをコードする核酸分子は「リボザイム遺伝子」と称される。
【０１２５】
「外部ガイド配列」とは、細胞内ｍＲＮＡの特定の種に内因性リボザイム、ＲＮａｓｅＰを指向させることによりＲＮａｓｅＰによるｍＲＮＡの切断をもたらす核酸分子である。外部ガイド配列をコードする核酸分子は「外部ガイド配列遺伝子」と称される。
【０１２６】
「対立遺伝子変異体」という用語は、本明細書においては、同じ染色体遺伝子座を占有している遺伝子の代替形態２つ以上のいずれかを指す。対立遺伝子変異体は突然変異により天然に生じ、集団内の表現型多形をもたらす場合がある。遺伝子突然変異はサイレント（コードされるポリペプチドは無変化）であるか、または、変性されたアミノ酸配列を有するポリペプチドをコードしてよい。対立遺伝子変異体という用語はまた、本明細書においては、遺伝子の対立遺伝子変異体によりコードされるタンパク質を指すために使用する。
【０１２７】
「オーソログ」という用語は、異なる種に由来するポリペプチドまたはタンパク質の機能的な対応物である１つの種から得られるポリペプチドまたはタンパク質を指す。オーソログ間の配列の相違は種分化の結果である。
【０１２８】
「パラログ」とは、生物により産生され、区別されるが、構造的に関連性のあるタンパク質である。パラログは遺伝子重複を介して生じると考えられている。例えば、α−グロビン、β−グロビンおよびミオグロビンは相互にパラログである。
【０１２９】
標準的な分析方法の不正確さのために、重合体の分子量および長さは概数値と理解すべきである。そのような値を「約」Ｘまたは「概ね」Ｘと表記する場合は、Ｘの記載された値は±１０％まで正確であると理解するものとする。
【０１３０】
Ｃ）ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する抗体
本発明の抗体は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に特異的に結合する。一部の実施形態においては、本発明の抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の単量体型に特異的に結合する。一部の実施形態においては、本発明の抗体はＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆのいずれかのホモ２量体型に結合する。さらに他の実施形態においては、本発明の抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの多量体型（例えば、ヘテロ２量体型）に特異的に結合する。本発明の好ましい抗体はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の生物学的活性をブロックする。
【０１３１】
好ましい抗体および本発明の方法における使用に適する抗体は、例えば、完全ヒト抗体、ヒト抗体相同体、ヒト化抗体相同体、キメラ抗体相同体、Ｆａｂ、Ｆａｂ’、Ｆ（ａｂ’）２およびＦ（ｖ）抗体フラグメント、単鎖抗体、および抗体重鎖または軽鎖の単量体または２量体、またはこれらの混合物を包含する。本発明の抗体は好ましくはモノクローナル抗体である。
【０１３２】
本発明の抗体はＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＥ、ＩｇＤ、ＩｇＭ型（および、それらのサブタイプ）を包含するいずれかのアイソタイプの無処置の免疫グロブリンを包含してよい。抗体は、好ましくは無処置のＩｇＧ、より好ましくはＩｇＧ１を包含する。免疫グロブリンの軽鎖はκまたはλであってよい。軽鎖は好ましくはκである。
【０１３３】
本発明の抗体は抗原結合特異性を保持している無処置の抗体の部分、例えば、Ｆａｂフラグメント、Ｆａｂ’フラグメント、Ｆ（ａｂ’）２フラグメント、Ｆ（ｖ）フラグメント、重鎖単量体または２量体、軽鎖単量体または２量体、重鎖１つおよび軽鎖１つよりなる２量体などを包含する。すなわち、抗原結合フラグメントおよび上記抗体由来の完全長の２量体または３量体のポリペプチドはそれら自体が有用である。
【０１３４】
ヒト治療薬としてのげっ歯類モノクローナル抗体（ＭＡｂ）の直接の使用は、げっ歯類誘導抗体を投与した患者のかなりの数において生じるヒト抗げっ歯類抗体（「ＨＡＲＡ」）（例えば、ヒト抗マウス抗体（ＨＡＭＡ）応答をもたらしている（Ｋｈａｚａｅｌｉ等（１９９４）Ｉｍｍｕｎｏｔｈｅｒ．１５：４２−５２）。より少ないマウスアミノ酸配列を含有するキメラ抗体はヒトにおいて免疫応答を誘発する問題から免れると考えられる。
【０１３５】
ＨＡＲＡ応答の問題を回避するための抗体の改良により「ヒト化抗体」の開発がもたらされた。ヒト化抗体は組み換えＤＮＡ手法により形成され、その場合、抗原結合に必要ではないヒト免疫グロブリン軽鎖または重鎖のアミノ酸の少なくとも１つが非ヒト哺乳類免疫グロブリン軽鎖または重鎖に由来する相当するアミノ酸を置換している。例えば、免疫グロブリンがマウスモノクローナル抗体である場合、抗原結合に必要ではないアミノ酸少なくとも１つがその位置における相当するヒト抗体上に存在するアミノ酸を用いて置換される。操作の任意の特定の理論に制約されないが、モノクローナル抗体の「ヒト化」は外来免疫グロブリン分子に対するヒトの免疫学的反応性を抑制すると考えられる。
【０１３６】
非限定的な例として、相補性決定領域（ＣＤＲ）のグラフトを実施する方法は、標的抗原（例えば、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ）に結合する目的の抗体のマウス重鎖および軽鎖を配列決定すること、ならびに、ＣＤＲ  ＤＮＡ配列を遺伝子操作により作成すること、ならびに、これらのアミノ酸配列を部位指向突然変異誘発により相当するヒトＶ領域に挿入することにより実施してよい。所望のアイソタイプのヒト定常領域遺伝子セグメントを付加し、「ヒト化」重鎖および軽鎖の遺伝子を哺乳類細胞において同時発現させることにより可溶性ヒト化抗体を作成する。典型的な発現細胞はチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞である。キメラ抗体を作成するための適当な方法は、例えば、Ｊｏｎｅｓ等（１９８６）Ｎａｔｕｒｅ  ３２１：５２２−５２５；Ｒｉｅｃｈｍａｎｎ（１９８８）Ｎａｔｕｒｅ  ３３２：３２３−３２７；Ｑｕｅｅｎ等（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：１００２９：および、Ｏｒｌａｎｄｉ等（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：３８３３に記載されている。
【０１３７】
Ｑｕｅｅｎ等（１９８９）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８６：１００２９−１００３３およびＷＯ９０／０７８６１は、ヒト化抗体の形成を記載している。ヒトおよびマウスの可変フレームワーク領域を最適なタンパク質配列相同性のために選択している。マウス可変領域の３次構造をコンピューターモデリングし、相同ヒトフレームワーク上に入れることによりマウスＣＤＲとのアミノ酸残基の最適な相互作用を示している。これにより抗原に対する向上した結合親和性（これは典型的にはＣＤＲグラフトキメラ抗体の作成により低下する）を有する抗体が開発されている。ヒト化抗体を作成する代替の方法は、例えば、Ｔｅｍｐｅｓｔ（１９９１）Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ９：２６６−２７１に記載されている。
【０１３８】
本発明の抗体は単独または細胞毒性剤とのイムノ共役として使用してよい。一部の実施形態においては、薬剤は化学療法剤である。一部の実施形態においては、薬剤は放射性同位体、例えば、限定しないが、鉛−２１２、ビスマス−２１２、アスタチン−２１１、ヨウ素−１３１、スカンジウム−４７、レニウム−１８６、レニウム−１８８、イットリウム−９０、ヨウ素−１２３、ヨウ素−１２５、臭素−７７、インジウム−１１１および核分裂性核種、例えば、ホウ素−１０またはアクチニドである。他の実施形態においては、薬剤は毒素、または細胞毒性剤、例えば、限定しないが、リシン、修飾されたシュードモナスエンテロトキシンＡ、カリケアマイシン、アドリアマイシン、５−フルオロウラシルなどである。そのような薬剤に抗体および抗体フラグメントを接合する方法は、文献既知である。
【０１３９】
本発明の抗体は、例えば、共有結合が抗体のそのエピトープへの結合を妨げないように抗体に任意の型の分子を共有結合させることにより修飾された誘導体を包含する。適当な誘導体の例は限定しないが、フコシル化抗体およびフラグメント、グリコシル化抗体およびフラグメント、アセチル化抗体およびフラグメント、ＰＥＧ化抗体およびフラグメント、ホスホリル化抗体およびフラグメント、およびアミド化抗体およびフラグメントを包含する。本発明の抗体およびその誘導体は、それ自体、知られた保護／ブロッキング基、タンパク質分解性切断、細胞リガンドまたは他のタンパク質への連結などにより誘導体化されてよい。本発明の一部の実施形態においては、抗体の重鎖少なくとも１つはフコシル化される。一部の実施形態においては、フコシル化はＮ連結である。一部の好ましい実施形態においては、抗体の重鎖少なくとも１つはフコシル化されたＮ連結のオリゴ糖を含む。
【０１４０】
本発明の抗体は、本発明の抗体の生物学的特性（例えば、ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆのそれらの対応する受容体への結合のブロック、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの生物学的活性のブロック、結合親和性）を保持している単一または多数のアミノ酸の置換、欠失、付加または置き換えを有する変異体を包含する。当業者であれば、単一または多数のアミノ酸の置換、欠失、付加または置き換えを有する変異体を産生できる。これらの変異体は、特に（ａ）アミノ酸残基１つ以上が保存的または非保存的なアミノ酸により置換されている変異体、（ｂ）アミノ酸１つ以上がポリペプチドに付加されているかこれより欠失している変異体、（ｃ）アミノ酸１つ以上が置換基を含む変異体、および（ｄ）ポリペプチドが他のペプチドまたはポリペプチド、例えば、融合相手、タンパク質タグ、または、ポリペプチドに有用な特性を付与する別の化学的部分、例えば、抗体に対するエピトープ、ポリヒスチジン配列、ビオチン部分などに融合している変異体を包含してよい。本発明の抗体は、ある種に由来するアミノ酸残基が保存または非保存の位置において他の種における相当する残基を置換している変異体を包含してよい。別の実施形態において、非保存の位置におけるアミノ酸残基が保存または非保存の残基で置換されている。これらの変異体を得るための手法、例えば、遺伝子的（抑制、欠失、突然変異など）、化学的および酵素的な手法は当業者の知る通りである。本発明の抗体はまた、抗体フラグメントを包含する。「フラグメント」とは、好ましくは少なくとも約４０、より好ましくは少なくとも約５０、より好ましくは少なくとも約６０、より好ましくは少なくとも約７０、より好ましくは少なくとも約８０、より好ましくは少なくとも約９０、より好ましくは少なくとも約１００アミノ酸長であり、完全長の配列の一部の生物学的活性または免疫学的活性、例えば、ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆのそれらの対応する受容体への結合をブロックする、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの生物学的活性をブロックする能力、結合親和性を保持しているポリペプチド配列を指す。
【０１４１】
本発明はまた、完全ヒト抗体、例えば、卵巣、乳房、腎臓、結腸直腸、肺、子宮内膜または脳の癌の患者の末梢血液単核細胞由来のものを包含する。そのような細胞を骨髄腫細胞と融合することにより、例えば、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの両方に対する完全ヒト抗体を産生するハイブリドーマ細胞を形成してよい。
【０１４２】
本発明はまた、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの両方に結合する二重特異性抗体を包含する。
【０１４３】
本発明の抗体は、好ましくは、例えば、インビボの毒性学的試験において明らかにされる通り非毒性である。
【０１４４】
本発明の抗体およびその誘導体は、１×１０−２未満の解離定数（Ｋｄ）を包含する結合親和性を有する。一部の実施形態においては、Ｋｄは１×１０−３未満である。他の実施形態においては、Ｋｄは１×１０−４未満である。一部の実施形態においては、Ｋｄは１×１０−５未満である。さらに他の実施形態においては、Ｋｄは１×１０−６未満である。他の実施形態においては、Ｋｄは１×１０−７未満である。他の実施形態においては、Ｋｄは１×１０−８未満である。他の実施形態においては、Ｋｄは１×１０−９未満である。他の実施形態においては、Ｋｄは１×１０−１０未満である。さらに他の実施形態においては、Ｋｄは１×１０−１１未満である。一部の実施形態においては、Ｋｄは１×１０−１２未満である。他の実施形態においては、Ｋｄは１×１０−１３未満である。他の実施形態においては、Ｋｄは１×１０−１４未満である。さらに他の実施形態においては、Ｋｄは１×１０−１５未満である。
【０１４５】
Ｄ）核酸
本発明はまた、本発明の抗体の重鎖および／または軽鎖をコードする核酸を包含する。本発明の核酸は本発明の核酸に対して少なくとも８０％、より好ましくは少なくとも約９０％、より好ましくは少なくとも約９５％、最も好ましくは少なくとも約９８％の相同性を有する核酸を包含する。「パーセント類似性」、「パーセント同一性」および「パーセント相同性」という用語は、特定の配列に言及する場合、ウイスコンシン大学ＧＣＧソフトウェアプログラムに記載されている通り使用する。本発明の核酸はまた相補的な核酸を包含する。一部の場合において、配列が配向されると、配列は完全に相補となる（ミスマッチ無し）。他の場合においては、配列に約２０％ミスマッチがあってよい。本発明の一部の実施形態においては、本発明の抗体の重鎖および軽鎖の両方をコードする核酸が提供される。
【０１４６】
本発明の核酸はベクター、例えば、プラスミド、コスミド、バシミド、ファージ、人工染色体（ＢＡＣ、ＹＡＣ）またはウィルスにクローニングすることができ、それに別の遺伝子配列またはエレメント（ＤＮＡまたはＲＮＡ）を挿入することにより結合した配列またはエレメントの複製をもたらしてよい。一部の実施形態においては、発現ベクターは構成的に活性なプロモーターセグメント（例えば、限定しないが、ＣＭＶ、ＳＶ４０、伸長因子、またはＬＴＲ配列）または誘導プロモーター配列、例えば、ステロイド誘導ｐＩＮＤベクター（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）を含有し、その場合、核酸の発現を調節できる。本発明の発現ベクターはさらに、調節配列、例えば、内部リボソーム進入部位を含んでよい。発現ベクターは、例えば、トランスフェクションにより細胞内に導入できる。
【０１４７】
Ｅ）ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対する抗体を形成する方法
本発明はまたＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの両方に特異的に結合するモノクローナル抗体を形成する方法を提供する。本発明の抗体はインビボまたはインビトロで形成してよい。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に対する抗体を作成するための１つの方策では、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方で動物を免疫化する。一部の実施形態においては、動物はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方のＦＲの単量体または多量体の形態で免疫化する。そのように免疫化された動物はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に対する抗体、ならびにＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に対する交差反応性抗体を産生することになる。モノクローナル抗体を作成するための標準的な方法、例えば、限定しないが、ハイブリドーマ法（Ｋｏｈｌｅｒ＆Ｍｉｌｓｔｅｉｎ、（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ  ２５６：４９５−４９７参照）；トリオーマ法；ヒトＢ細胞ハイブリドーマ法（Ｋｏｚｂｏｒ等、（１９８３）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  ４：７２参照）およびヒトモノクローナル抗体を作成するためのＥＢＶハイブリドーマ法（Ｃｏｌｅ等、ＭＯＮＯＣＬＯＮＡＬ  ＡＮＴＩＢＯＤＩＥＳ  ＡＮＤ  ＣＡＮＣＥＲ  ＴＨＥＲＡＰＹ、Ａｌａｎ  Ｒ．Ｌｉｓｓ、Ｉｎｃ．、１９８５、ｐｐ．７７−９６参照）が知られている。
【０１４８】
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは共に、タンパク質を単離および精製するための種々のよく知られた手法を用いながら、細胞からまたは組み換え系から精製してよい。例えば、限定しないが、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは両方ともＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上にタンパク質を泳動し、タンパク質を膜にブロットすることにより、タンパク質の見かけの分子量に基づいて単離してよい。その後各タンパク質に相当する適切なサイズのバンドを膜から切り出し、直接動物において免疫原として使用するか、または、先ず膜からタンパク質を抽出または溶出させてよい。代替例としては、タンパク質をサイズ排除クロマトグラフィー単独、または他の単離および精製の手段と組み合わせて単離してよい。
【０１４９】
本発明はまたＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方のホモ２量体、ヘテロ２量体および／または多量体型に特異的に結合するモノクローナル抗体を産生する方法を提供する。これらの異なる形態はタンパク質を単離および精製するための種々のよく知られた手法を用いながら、細胞から、または組み換え系から精製してよい。例えば限定しないが、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは両方ともＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上にタンパク質を泳動し、タンパク質を膜にブロットすることにより、タンパク質の見かけの分子量に基づいて単離してよい。その後、各々に相当する適切なサイズのバンドを膜から切り出し、直接動物において免疫原として使用するか、または、先ず膜からタンパク質を抽出または溶出させてよい。代替例としては、タンパク質をサイズ排除クロマトグラフィー単独、または他の単離および精製の手段と組み合わせて単離してよい。
【０１５０】
精製のための他の手段は、標準的な参考テキスト、例えば、Ｚｏｌａ、Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｏｆ  Ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  Ａｎｄ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｅｄ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ（Ｂａｓｉｃｓ：Ｆｒｏｍ  Ｂａｃｋｇｒｏｕｎｄ  Ｔｏ  Ｂｅｎｃｈ）Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ  Ｌｔｄ．、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、２０００；Ｂａｓｉｃ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  Ｉｎ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ、Ｃｈａｐｔｅｒ  １１、「Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ｍｅｔｈｏｄｓ」、Ｈｏｗａｒｄ  ａｎｄ  Ｂｅｔｈｅｌｌ、Ｅｄｓ．、ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ、２０００；Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ（Ｓｐｒｉｎｇｅｒ  Ｌａｂ  Ｍａｎｕａｌ．）、Ｋｏｎｔｅｒｍａｎｎ  ａｎｄ  Ｄｕｂｅｌ、Ｅｄｓ．、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、２００１から得ることができる。
【０１５１】
インビボの抗体形成のためには、動物は一般的にＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆのいずれか、あるいはいずれかの免疫原性の部分（例えば、上記した共有エピトープ）で免疫化される。抗原は、一般的にアジュバントと組み合わせることにより免疫原性が増進される。アジュバントは、免疫化のために使用される種に応じて変動する。アジュバントの例は限定しないが、フロイントの完全アジュバント（ＦＣＡ）、フロイントの不完全アジュバント（ＦＩＡ）、鉱物質ゲル（例えば、水酸化アルミニウム）、界面活性物質（例えば、リソレシチン、プルロニックポリオール、ポリアニオン）、ペプチド、油脂エマルジョン、キーホールリンペットヘモシアニン（ＫＬＨ）、ジニトロフェノール（ＤＮＰ）、および潜在的に有用なヒトアジュバント、例えば、Ｂａｃｉｌｌｅ  Ｃａｌｍｅｔｔｅ−Ｇｕｅｒｉｎ（ＢＣＧ）およびコリネバクテリウム・パルブムを包含する。このようなアジュバントもまた当該分野で良く知られている。免疫化は、当該分野で良く知られている操作法を用いて達成してよい。用量および免疫化の用法は免疫化する哺乳類の種、その免疫状態、体重および／または計算された表面積などに応じたものとなる。典型的には、血清を免疫化された哺乳類から採取し、例えば、後述する適切なスクリーニング方法を用いて抗ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体に関して試験する。
【０１５２】
ヒト化抗体を形成するための一般的な方法は、ヒトＩｇ骨格にＭＡｂ（げっ歯類ホストを免疫化することにより形成）由来のＣＤＲ配列をグラフトすること、およびキメラ遺伝子をチャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞にトランスフェクトし、次にＣＨＯ細胞により分泌される機能的Ａｂをこれに形成させることである（Ｓｈｉｅｌｄｓ、Ｒ．Ｌ．等（１９９５）Ａｎｔｉ−ＩｇＥ  ｍｏｎｏｃｌｏｎａｌ  ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ  ｔｈａｔ  ｉｎｈｉｂｉｔ  ａｌｌｅｒｇｅｎ−ｓｐｅｃｉｆｉｃ  ｈｉｓｔａｍｉｎｅ  ｒｅｌｅａｓｅ．Ｉｎｔ  Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．１０７：４１２−４１３）。本出願に記載している方法はまた、げっ歯類細胞系統、植物、酵母および原核生物のような宿主細胞内にトランスフェクトされたＩｇ遺伝子またはキメラＩｇ内に遺伝子的変性を発生させるためにも有用である（Ｆｒｉｇｅｒｉｏ  Ｌ等（２０００）Ａｓｓｅｍｂｌｙ、ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ、ａｎｄ  ｖａｃｕｏｌａｒ  ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  ａ  ｈｙｂｒｉｄ  ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  ｉｎ  ｐｌａｎｔｓ．Ｐｌａｎｔ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．１２３：１４８３−１４９４）。
【０１５３】
免疫化された動物に由来する脾細胞は、骨髄腫系統のような不死化細胞系統に脾細胞（抗体産生Ｂ細胞含有）を融合させることにより不死化されてもよい。典型的には、骨髄腫細胞系統は、脾細胞ドナーと同じ種に由来するものである。１つの実施形態において、不死化細胞系統は、ヒポキサンチン、アミノプテリンおよびチミジンを含有する培地（ＨＡＴ培地）に対して感受性である。一部の実施形態においては、骨髄腫細胞は、エプスタイン・バーウィルス（ＥＢＶ）感染に関して陰性である。好ましい実施形態においては、骨髄腫細胞は、ＨＡＴ感受性、ＥＢＶ陰性およびＩｇ発現陰性である。任意の適当な骨髄腫を使用してよい。マウスハイブリドーマはマウス骨髄腫細胞系統を用いて作成してよい（例えば、Ｐ３−ＮＳ１／１−Ａｇ４−１、Ｐ３−ｘ６３−Ａｇ８．６５３またはＳｐ２／Ｏ−Ａｇ１４骨髄腫系統）。これらのマウス骨髄腫系統はＡＴＣＣより入手可能である。これらの骨髄腫細胞をドナー脾細胞ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）、好ましくは１５００分子量のポリエチレングリコール（ＰＥＧ１５００）に融合させる。融合により得られるハイブリドーマ細胞は、未融合および非生産性に融合した骨髄腫細胞を死滅させるＨＡＴ培地中で選択する。未融合脾細胞は培養の短期間に渡って死滅する。一部の実施形態においては、骨髄腫細胞は免疫グロブリン遺伝子を発現しない。
【０１５４】
後述するようなスクリーニング試験により検出される所望の抗体を産生するハイブリドーマを使用することにより培養物中、または動物中で抗体を産生してよい。例えば、ハイブリドーマ細胞は、栄養培地中、ハイブリドーマ細胞が培地中にモノクローナル抗体を分泌できるために十分な条件下および時間に渡って培養してよい。これらの手法および配置は当該分野で良く知られている。あるいは、ハイブリドーマ細胞を未免疫化動物の腹腔内に注射してよい。腹腔内で細胞が増殖し、抗体を分泌し、これが腹水として蓄積する。腹水はモノクローナル抗体の豊富な原料としてシリンジを用いて腹腔から採取してよい。
【０１５５】
ヒト抗体を形成するための別の非限定的な方法は、米国特許第５，７８９，６５０号に記載されており、これは他の種（例えば、ヒト）の抗体を産生するトランスジェニック哺乳類を説明しており、それら自身の内因性免疫グロブリン遺伝子は不活性化されている。非相同抗体に関わる遺伝子は、ヒト免疫グロブリン遺伝子によりコードされている。非再配列免疫グロブリンコード領域を含有するトランスジーンを非ヒト動物に導入する。得られるトランスジェニック動物はトランスジェニック免疫グロブリン配列を機能的に再配列させ、ヒト免疫グロブリン遺伝子によりコードされる種々のアイソタイプの抗体のレパートリーを産生することができる。トランスジェニック動物由来のＢ細胞はその後、不死化細胞系統（例えば、骨髄腫細胞）との融合を包含する種々の方法のいずれかにより不死化される。
【０１５６】
本発明の抗体はまた、当該分野で知られた種々の手法を用いながらインビトロで形成してよい。例えば、限定しないが、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対する完全ヒトモノクローナル抗体は、インビトロで薬物刺激されたヒト脾細胞を用いて形成してよい（Ｂｏｅｒｎｅｒ等（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４７：８６−９５）。
【０１５７】
あるいは、例えば、本発明の抗体は「レパートリークローニング」により形成してよい（Ｐｅｒｓｓｏｎ等（１９９１）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８８：２４３２−２４３６；およびＨｕａｎｇ  ａｎｄ  Ｓｔｏｌｌａｒ（１９９１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｍｅｔｈｏｄｓ  １４１：２２７−２３６）。さらに、米国特許第５，７９８，２３０号は、エプスタイン・バーウィルス核抗原２（ＥＢＮＡ２）を発現するエプスタイン・バーウィルスによる感染により不死化されるヒトＢ抗体産生Ｂ細胞由来のヒトモノクローナル抗体の形成を記載している。不死化に必要なＥＢＮＡ２はその後不活性化され、増大した抗体力価が得られる。
【０１５８】
別の実施形態において、本発明の抗体は末梢血液単核細胞（ＰＢＭＣ）のインビトロの免疫化により形成される。これは当該分野で知られた任意の手段、例えば、文献記載の方法を用いて行ってよい（Ｚａｆｉｒｏｐｏｕｌｏｓ等（１９９７）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ２００：１８１−１９０）。
【０１５９】
特定の実施形態においては、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に結合する二重特異性で単鎖の抗体を作成する。本発明の１つの方法は、二重特異性のＡ／Ｆ抗体を製造するための方法である。方法はＩＬ−１７Ａに結合するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞を、ＩＬ−１７Ｆに結合するモノクローナル抗体を分泌するハイブリドーマ細胞と融合させることにより、二重特異性Ａ／Ｆモノクローナル抗体を分泌するハイブリッドのハイブリドーマを形成することを含む。１つの実施形態においては、方法は拮抗性（またはアゴニスト性）のＩＬ−１７ＡＭＡｂを分泌するハイブリドーマ細胞を拮抗性（またはアゴニスト性）のＩＬ−１７ＦＭＡｂを分泌するハイブリドーマ細胞と融合させることを含む。そのような融合を実施するため、および、所望のハイブリッドのハイブリドーマを単離するための従来の方法は、本明細書のいずれかの個所に記載するもの、および、後述する実施例において説明するものを包含する。
【０１６０】
米国特許第６，０６０，２８５号は二重特異性抗体の形成のためのプロセスを開示しており、そこでは、第１の特異性を有する抗体の軽鎖および重鎖の可変部分に関する遺伝子を少なくとも第２の特異性を有する抗体を分泌するハイブリドーマ細胞内にトランスフェクトしている。トランスフェクトされたハイブリドーマ細胞を培養すると、二重特異性抗体が産生され、当該分野で知られた種々の手段により単離してよい。
【０１６１】
他の研究者等は２つの異なる抗原に対する特異性を有する抗原結合分子を調製するために抗体フラグメントの化学カップリングを使用している（Ｂｒｅｎｎａｎ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９：８１  １９８５；Ｇｌｅｎｎｉｅ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１３９：２３６７、１９８７）。米国特許第６，０１０，９０２号はまた、例えば、ＧＭＢＳ（マレイミドブチリルオキシスクシンイミド）またはＳＰＤＰ（Ｎ−スクシンイミジル３−（２−ピリジルジチオ）プロピオネート）のようなヘテロ２官能性交差結合剤の使用によるなど、二重特異性抗体を形成できる当該分野で知られた手法を考察している。（例えば、Ｈａｒｄｙ、「Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ  Ａｎｄ  Ｃｏｕｐｌｉｎｇ  Ｏｆ  Ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  Ｆｏｒ  Ｕｓｅ  Ｉｎ  Ｆｌｏｗ  Ｃｙｔｏｍｅｔｒｙ」、Ｈａｎｄｂｏｏｋ  Ｏｆ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第４版、Ｖｏｌｕｍｅ  １、Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、Ｗｅｉｒ等（編）、ｐｐ．３１．４−３１．１２、１９８６参照）。
【０１６２】
組み換えＤＮＡ手法を介して抗体を形成する能力は、二重特異性抗体の形成を容易にしている。Ｋｏｓｔｅｌｎｙ等は、細胞表面分子ＣＤ３およびインターロイキン−２に対する受容体の両方を結合することができる二重特異性抗体を形成するためにｆｏｓおよびｊｕｎタンパク質（これらは優先的にヘテロ２量体を形成する）に由来するロイシンジッパー部分を利用している（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８：１５４７；１９９２）。
【０１６３】
単鎖抗体は、アミノ酸架橋（短鎖ペプチドリンカー）を介して重鎖および軽鎖の可変領域（Ｆｖ領域）フラグメントを連結して単鎖ポリペプチドとすることにより形成してよい。そのような単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）は、２つの可変領域ポリペプチド（ＶＬおよびＶＨ）をコードするＤＮＡ間にペプチドリンカーをコードするＤＮＡを融合させることにより形成されている。得られる抗体フラグメントは、２つの可変ドメインの間のフレキシブルリンカーの長さのような要因に応じて、２量体またはより高次のオリゴマーを形成できる（Ｋｏｒｔｔ等、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ１０：４２３、１９９７）。特定の実施形態においては、２つ以上のｓｃＦｖを、化学交差結合剤を使用することにより連結する。
【０１６４】
単鎖抗体の形成のために開発された手法は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に結合する本発明の単鎖抗体を形成するために適合される。そのような手法は米国特許第４，９４６，７７８号；Ｂｉｒｄ（Ｓｃｉｅｎｃｅ２４２：４２３、１９８８）；Ｈｕｓｔｏｎ等（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８５：５８７９、１９８８）；およびＷａｒｄ等（Ｎａｔｕｒｅ３３４：５４４、１９８９）に記載されているものを包含する。所望の単鎖抗体が同定される（例えば、ファージディスプレイライブラリより）と、当業者はさらに、単鎖抗体をコードするＤＮＡを操作することにより二重特異性抗体、例えば、Ｆｃ領域を有する二重特異性抗体を得ることができる。
【０１６５】
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対する単鎖抗体はいずれかの順序でコンカテマー化してよい（すなわち、抗ＩＬ−１７Ａ−抗ＩＬ−１７Ｆまたは抗ＩＬ−１７Ｆ−抗ＩＬ−１７Ａ）。特定の実施形態においては、二重特異性Ａ／Ｆ抗体を形成するための原料は、ＩＬ−１７Ａに対して指向された拮抗性（またはアゴニスト性）の単鎖抗体およびＩＬ−１７Ｆに対して指向された拮抗性（またはアゴニスト性）の単鎖抗体を包含する。
【０１６６】
米国特許第５，５８２，９９６号は、二重特異性抗体の形成におけるヘテロ２量体形成を容易にするための相補性相互作用ドメイン（例えば、ロイシンジッパー部分または他のロックアンドキーの相互作用ドメイン構造）の使用を開示している。相補性相互作用ドメインは重鎖のＦａｂフラグメントと他の部分（すなわち、重鎖のＣＨ１またはＣＨ２領域）との間に挿入してよい。２つの異なるＦａｂフラグメントおよび優先的にヘテロ２量化する相補性相互作用ドメインの使用は二重特異性抗体分子の形成をもたらすことになる。システイン残基を相補性相互作用ドメインに導入することにより相補性相互作用ドメインの間のジスルフィド結合を可能とし、形成される二重特異性抗体を安定化させてよい。
【０１６７】
４価の二重特異性分子は米国特許第５，９５９，０８３号に記載の通り、抗体のＦ（ａｂ’）２の重鎖をコードするＤＮＡの、第２のＦ（ａｂ’）２分子の重鎖をコードするＤＮＡ（この場合、ＣＨ１ドメインはＣＨ３ドメインにより置き換えられている）との、または、抗体の単鎖ＦｖフラグメントをコードするＤＮＡとの融合により形成できる。形成された融合遺伝子を哺乳類細胞において相当する軽鎖に関わる遺伝子と共に発現させることにより、選択された抗原に対する特異性を有する４価の二重特異性分子が得られる。
【０１６８】
二重特異性抗体はまた参照により本明細書に組み込まれる米国特許第５，８０７，７０６号に記載の通り形成できる。一般的に、該方法では第１のポリペプチド内に突出部、および第２のポリペプチド、ポリペプチド界面内に相当する空洞を導入する。突出部および空洞はヘテロ多量体の形成を促進し、ホモ多量体の形成を妨害するように位置付ける。突出部は小さい側鎖を有するアミノ酸をより大きい側鎖を有するアミノ酸で置き換えることにより作成する。空洞は、逆の方法、すなわち、相対的に大きい側鎖を有するアミノ酸をより小さい側鎖を有するアミノ酸で置き換えることにより作成する。
【０１６９】
突出部および空洞はポリペプチドにおいてアミノ酸置換を行うための従来の方法により形成できる。例えば、ポリペプチドをコードする核酸を従来のインビトロの突然変異誘発手法により変性してよい。あるいは、所望のアミノ酸置換を取り込んだポリペプチドをペプチド合成により形成してよい。置換のために選択されるアミノ酸は第１および第２のポリペプチドの間の界面に位置させる。
【０１７０】
Ｆ）抗体特異性のスクリーニング
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に特異的に結合する抗体を得るためのスクリーニングは、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方でマイクロプレートをコーティングする酵素結合免疫吸着試験（ＥＬＩＳＡ）を用いて行ってよい。一部の実施形態においては、陽性反応性のクローンに由来するＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に結合する抗体を、他の形態のＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ、または他のＩＬ−１７ファミリーメンバーでコーティングされたマイクロプレートを用いるＥＬＩＳＡ系試験において、反応性に関してさらにスクリーニングすることができる。他の形態またはファミリーメンバーに対して反応性の抗体を産生するクローンを排除し、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に対して反応性の抗体を産生するクローンを選択して、その後の増殖および育成に付す。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に対する抗体の反応性の確認は、例えば、ウエスタンブロット試験において行ってよく、その場合、卵巣、乳房、腎臓、結腸直腸、肺、子宮内膜または脳の癌細胞に由来するタンパク質および精製されたＦＲαおよび他のフォレート受容体アイソフォームをＳＤＳ−ＰＡＧＥゲル上で泳動させ、その後、膜上にブロットする。次に、膜を推定抗ＦＲα抗体を用いて精査してよい。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方とは反応性があること、ならびに他のファミリーメンバーとは反応性ではないことにより、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方との反応性の特異性を確認する。
【０１７１】
一部の実施形態においては、本発明の抗体の結合親和性を測定する。本発明の抗体は、好ましくは少なくとも約１×１０−７Ｍ、より好ましくは少なくとも約１×１０−８Ｍ、より好ましくは少なくとも約１×１０−９Ｍ、最も好ましくは少なくとも約１×１０−１０ＭのＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に対する結合親和性を有する。本発明の好ましい抗体産生細胞は、実質的には、少なくとも約１×１０−７Ｍ、より好ましくは少なくとも約１×１０−８Ｍ、より好ましくは少なくとも約１×１０−９Ｍ、最も好ましくは少なくとも約１×１０−１０ＭのＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に対する結合親和性を有する抗体のみを産生する。本発明の好ましい組成物は、実質的には、少なくとも約１×１０−７Ｍ、より好ましくは少なくとも約１×１０−８Ｍ、より好ましくは少なくとも約１×１０−９Ｍ、最も好ましくは少なくとも約１×１０−１０ＭのＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に対する結合親和性を有する抗体のみを含む。
【０１７２】
本発明の抗体は、好ましくはＩＬ−１７ＲＡおよびＩＬ−１７ＲＣ担持細胞において抗体依存性細胞性細胞毒性（ＡＤＣＣ）を誘導する。ＡＤＣＣ試験は当該分野で知られている。
【０１７３】
Ｇ）抗ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体産生細胞
本発明の抗体産生細胞は、知られた任意の昆虫の発現細胞系統、例えば、スポドプテラ・フルギペルダの細胞を包含する。発現細胞系統はまた酵母細胞系統、例えば、サッカロマイセス・セレビシアエおよびスキゾサッカロマイセス・ポンベの細胞であることもできる。発現細胞はまた、哺乳類細胞、例えば、ハイブリドーマ細胞（例えば、ＮＳ０細胞）、チャイニーズハムスター卵巣細胞、ベビーハムスター腎細胞、１胚腎系統２９３、正常イヌ腎細胞系統、正常ネコ腎細胞系統、サル腎細胞、アフリカミドリザル腎細胞、ＣＯＳ細胞、および、非腫瘍発生性のマウス筋芽細胞Ｇ８細胞、線維芽細胞系統、骨髄腫細胞系統、マウスＮＩＨ／３Ｔ３細胞、ＬＭＴＫ３１細胞、マウスセルトーリ細胞、ヒト子宮頸癌細胞、バッファローラット肝細胞、ヒト肺細胞、ヒト肝細胞、マウス乳癌細胞、ＴＲＩ細胞、ＭＲＣ５細胞およびＦＳ４細胞であってよい。
【０１７４】
一部の好ましい実施形態においては、本発明の抗体産生細胞は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に特異的に結合する抗体を産生する。細胞は、好ましくはＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の結合競合相手を実質的に含まない。好ましい実施形態においては、抗体産生細胞はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の結合競合相手を、重量で、約１０％未満、好ましくは約５％未満、より好ましくは約１％未満、より好ましくは約０．５％未満、より好ましくは約０．１％未満、最も好ましくは０％含む。一部の好ましい実施形態においては、抗体産生細胞により産生される抗体は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の競合相手を実質的に含まない。好ましい実施形態においては、抗体産生細胞により産生される抗体は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の結合競合相手を、重量で、約１０％未満、好ましくは約５％未満、より好ましくは約１％未満、より好ましくは約０．５％未満、より好ましくは約０．１％未満、最も好ましくは０％含む。本発明の好ましい抗体産生細胞は、実質的に、少なくとも約１×１０−７Ｍ、より好ましくは少なくとも約１×１０−８Ｍ、より好ましくは少なくとも約１×１０−９Ｍ、最も好ましくは少なくとも約１×１０−１０ＭのＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に対する結合親和性を有する抗体のみを産生する。
【０１７５】
Ｈ）抗体精製
抗体精製の方法は、当該分野で知られている。本発明の一部の実施形態においては、抗体精製のための方法は、濾過、アフィニティーカラムクロマトグラフィー、カチオン交換クロマトグラフィー、アニオン交換クロマトグラフィーおよび濃縮を包含する。濾過工程は、好ましくは限外濾過、より好ましくは限外濾過と透析濾過を含む。濾過は、好ましくは少なくとも約５〜５０回、より好ましくは１０〜３０回、最も好ましくは１４〜２７回実施する。アフィニティーカラムクロマトグラフィーは、例えば、ＰＲＯＳＥＰアフィニティークロマトグラフィー（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ、Ｂｉｌｌｅｒｉｃａ、Ｍａｓｓ．）を用いて行ってよい。好ましい実施形態においては、アフィニティークロマトグラフィー工程はＰＲＯＳＥＰ−ＶＡカラムクロマトグラフィーを含む。溶出液は溶媒洗剤中で洗浄してよい。カチオン交換クロマトグラフィーは、例えば、ＳＰ−セファロースカチオン交換クロマトグラフィーを包含してよい。アニオン交換クロマトグラフィーは、例えば、限定しないが、Ｑ−セファロースファーストフローアニオン交換を包含してよい。アニオン交換工程は好ましくは非結合性であり、これによりＤＮＡおよびＢＳＡを包含する汚染物質の除去が可能になる。抗体産物は、好ましくは、例えば、ＰａｌｌＤＶ２０ナノフィルターを用いて、ナノ濾過される。抗体産物は、例えば、限外濾過および透析濾過を用いて、濃縮してよい。該方法は、さらに、凝集塊を除去するためのサイズ排除クロマトグラフィーの工程を含んでよい。
【０１７６】
ｌ）交差反応性のＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体の治療上の使用
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に対して交差反応性である抗体を用いながら、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ（単独または共に）に結合し、これによりＩＬ−１７ＡのＩＬ−１７ＲＡまたはＩＬ−１７ＲＣとの、およびＩＬ−１７ＦのＩＬ−１７ＲＣまたは結合する可能性のある任意の他の受容体、特にＩＬ−１７ファミリーメンバーとの結合を防止することにより、免疫系を調節することができる。本発明の抗体はまた、内因性のＩＬ−１７ＡのＩＬ−１７ＲＡおよび／またはＩＬ−１７ＲＣ受容体との、ＩＬ−１７Ｆの内因性ＩＬ−１７ＲＣ受容体との結合の両方を抑制することにより免疫系を調節するために使用することができる。本発明の抗体はまた、ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆのいずれかの過剰量を産生する被験体を治療するためにも使用できる。適当な被験体は哺乳類、例えば、ヒトを包含する。例えば、本発明の抗体は、炎症および炎症性疾患、例えば、乾癬、乾癬性関節炎、関節リウマチ、内毒素血症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、ＩＢＳ、腸炎、喘息、同種移植片拒絶、免疫媒介腎疾患、肝胆疾患、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、腫瘍生育増進、または、変性関節疾患、および本明細書に開示する他の炎症状態の治療におけるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方（単独または共に）の結合、ブロック、抑制、低減、拮抗または中和において有用である。
【０１７７】
好ましい実施形態においては、本発明の抗体はインビボでＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ（単独または共に）に結合、ブロック、抑制、低減、拮抗または中和する。
【０１７８】
すなわち、本発明の特定の実施形態は、乾癬、乾癬性関節炎、アトピー性皮膚炎、炎症性皮膚状態、関節リウマチ、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、憩室炎、喘息、膵臓炎、Ｉ型糖尿病（ＩＤＤＭ）、膵臓癌、膵臓炎、グレーブス病、結腸および腸の癌、自己免疫疾患、敗血症、臓器または骨髄の移植片；内毒素血症、外傷、手術または感染症による炎症；アミロイドーシス、脾臓腫大；対宿主性移植片病のような炎症性および免疫性の疾患または状態；および炎症の抑制、免疫抑制、造血性、免疫性、炎症性またはリンパ系の細胞、マクロファージ、Ｔ細胞（Ｔｈ１およびＴｈ２を包含）の増殖の低減、病原体または抗原への免疫応答の抑制、またはＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆサイトカインの抑制が望ましい他の場合における、拮抗剤としての本発明の抗体の使用に関する。
【０１７９】
さらにまた、本発明の抗体は以下にも有用である。
【０１８０】
（１）急性の炎症、外傷、組織傷害、手術、敗血症または感染症の結果としての炎症、および慢性の炎症性疾患、例えば、喘息、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、ＩＢＳ、慢性結腸炎、脾臓腫大、関節リウマチ、再発性の急性炎症性エピソード（例えば、結核）の治療、および、アミロイドーシスおよびアテローム性動脈硬化症、キャッスルマン病、喘息および急性期応答の誘導に関連する他の疾患の治療におけるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆを介したシグナリングのブロック、抑制、低減、拮抗または中和。
【０１８１】
（２）ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの受容体（例えば、ＩＬ−１７ＲＡまたはＩＬ−１７ＲＣ）を介した免疫細胞（例えば、リンパ球、単球、白血球）におけるシグナリングを防止または抑制するためのＩＤＤＭ、多発性硬化症（ＭＳ）、全身エリテマドーデス（ＳＬＥ）、重傷筋無力症、関節リウマチ、ＩＢＳおよびＩＢＤのような自己免疫疾患の治療におけるそれらを介したシグナリングのブロック、抑制、低減、拮抗または中和。本発明の抗体を用いたＩＬ−１７ＲＡまたはＩＬ−１７ＲＣを介したシグナリングのブロック、抑制、低減または拮抗はまた、膵臓、腎臓、下垂体およびニューロン細胞の疾患にも有益である場合がある。ＩＤＤＭ、ＮＩＤＤＭ、膵臓炎および膵臓癌が利益を被る。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対するＭａｂはまた、腎症、例えば、糸球体硬化症、膜神経障害、アミロイドーシス（他の組織と比べて特に腎臓にも罹患）、腎動脈硬化症、種々の原因による糸球体腎炎、腎臓の線維増殖性疾患、ならびにＳＬＥ、ＩＤＤＭ、ＩＩ型糖尿病（ＮＩＤＤＭ）、腎腫瘍および他の疾患に関連する腎機能不全に対しても有用である場合がある。
【０１８２】
（３）ＩＤＤＭ、ＭＳ、ＳＬＥ、重傷筋無力症、関節リウマチ、ＩＢＳおよびＩＢＤのような自己免疫疾患の治療におけるＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆの受容体を介したシグナリングのアゴナイズ、増強、増大または開始。抗ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ中和およびモノクローナル抗体は、リンパ球または他の免疫細胞をシグナリングすることにより、自己免疫を改善するサイトカインまたは細胞表面タンパク質を分化したり、増殖を改変したり、または、産生を変化させる場合がある。特に、サイトカイン分泌の代替パターンに対するＴヘルパー細胞応答のモジュレーションは自己免疫応答を偏移させることにより疾患を軽減する場合がある（Ｓｍｉｔｈ  ＪＡ等、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６０：４８４１−４８４９、１９９８）。同様に、アゴニスト性の抗体は、喘息、アレルギーおよびアトピー性疾患に関与する免疫細胞をシグナリング、枯渇および偏移させるために使用してよい。ＩＬ−１７ＲＡおよびＩＬ−１７ＲＣを介したシグナリングはまた、膵臓、腎臓、下垂体およびニューロン細胞の疾患にも利益を与える場合がある。ＩＤＤＭ、ＮＩＤＤＭ、膵臓炎および膵臓癌が利益を被る。
【０１８３】
本明細書に記載した抗体は、上記した通り自己免疫疾患、アトピー性疾患、ＮＩＤＤＭ、膵臓炎および腎機能不全においてＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａの活性に対して単独または共に、結合、ブロック、抑制、低減、拮抗または中和するために使用できる。本発明の抗体はＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆサイトカインの拮抗剤として有用である。そのような拮抗作用はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの直接の中和または結合により達成できる。
【０１８４】
炎症は侵襲物質を払い除ける生物による保護応答である。炎症は多くの細胞および体性のメディエーターが関与するカスケード事象である。一方において、炎症応答の抑制は宿主を免疫無防備状態にしたままとする場合がある。しかしながら、未確認放置されれば炎症は重篤な合併症、例えば、慢性炎症性疾患（例えば、乾癬、関節炎、関節リウマチ、多発性硬化症、炎症性腸疾患など）、敗血症性ショックおよび多臓器不全をもたらす場合がある。重要な点として、これらの多様な疾患状態は共通の炎症メディエーターを共有している。炎症を特徴とする集合的疾患は、ヒトの罹患率および死亡率に対して大きな影響を有する。したがって、本発明の抗体が喘息およびアレルギーから自己免疫性および敗血症性ショックに至るまでの多数のヒトおよび動物の疾患に対して重要な臨床的潜在性を有し得ることは明白である。
【０１８５】
１．関節炎
関節炎、例えば、骨関節炎、関節リウマチ、傷害の結果としての関節炎性関節などはＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆを拮抗、中和またはブロックする抗体の治療上の使用から利益を被る一般的炎症状態である。例えば、関節リウマチ（ＲＡ）は身体全体に渡って罹患する全身性の疾患であり、関節炎の最も一般的な形態の１つである。その特徴は感染の内張りとなっている膜の炎症であり、これが疼痛、強直、発熱感、発赤および浮腫をもたらす。炎症細胞は骨および軟骨を消化する場合のある酵素を放出する。関節リウマチの結果として、炎症した関節の内張り、すなわち、滑膜が骨および軟骨に侵襲して損傷を起こし、関節の劣化および他の生理学的作用の中でもとりわけ重度の疼痛をもたらす。関与する関節はその形状および配置を損失し、疼痛および運動不能に至る場合がある。
【０１８６】
関節リウマチ（ＲＡ）は重度の身体障害および高い死亡率をもたらす炎症およびその後の組織の損傷により特に特徴づけられる免疫媒介性の疾患である。種々のサイトカインがリウマチ様関節において産生される。多くの研究によれば、２つのプロトタイプの炎症性サイトカインであるＩＬ−１およびＴＮＦ−αが滑膜の炎症に、進行性の関節破壊に関与している機構において重要な役割を果たしている。実際、ＴＮＦ−αおよびＩＬ−１の抑制剤のＲＡ患者への投与により、炎症の臨床的および生物学的な兆候の劇的な改善および骨侵食および軟骨破壊の放射線的兆候の低減がもたらされている。しかしながら、これらの期待できる結果にもかかわらず、かなりの比率の患者がこれらの薬剤に応答しておらず、他のメディエーターがやはり関節炎の病理生理に関与していることが示唆される（Ｇａｂａｙ、Ｅｘｐｅｒｔ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｌ．Ｔｈｅｒ．２（２）：１３５−１４９、２００２）。これらのメディエーターの１つは、ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆである可能性があり、そのため、ＩＬ−１７ＦまたはＩＬ−１７Ａに結合して活性を抑制する分子、例えば、可溶性ＩＬ−１７ＲＡ、ＩＬ−１７ＲＡポリペプチド、または抗ＩＬ−１７ＲＡ抗体または結合相手は、関節リウマチおよび他の関節炎性の疾患において炎症を低減する価値ある治療薬として作用する可能性がある。
【０１８７】
当該分野で知られた関節リウマチに関わる動物モデルが数種存在する。例えば、コラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）モデルにおいて、マウスはヒトの関節リウマチに酷似している慢性炎症性関節炎を発症する。ＣＩＡはＲＡと同様の免疫学的および病理学的な特徴を共有しているため、潜在的なヒト抗炎症化合物をすりするための理想的なモデルとなっている。ＣＩＡモデルは、発症するためには免疫応答と炎症応答の両方に依存しているマウスにおけるよく知られたモデルである。免疫応答は、抗原として与えられるコラーゲンに応答したＢ細胞とＣＤ４＋Ｔ細胞の相互作用を含み、抗コラーゲン抗体の産生をもたらす。炎症相はマウスの未変性のコラーゲンに対して交差反応し、補体カスケードを活性化させるこれらの抗体の一部の結果として、炎症のメディエーターからの組織応答の結果である。ＣＩＡモデルを使用することの利点は、発症の基本的機構が既知である点である。ＩＩ型コラーゲン上の関連するＴ細胞およびＢ細胞のエピトープが発見されており、免疫媒介関節炎に関連する種々の免疫学的（例えば、遅延型の過敏症および抗コラーゲン抗体）および炎症性（例えば、サイトカイン、ケモカインおよびマトリックス分解酵素）のパラメーターが測定されており、これによりＣＩＡモデルにおける被験化合物の有効性を試験するために使用できる（Ｗｏｏｌｅｙ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｒｈｅｕｍ．３：４０７−２０、１９９９；Ｗｉｌｌｉａｍｓ等、Ｉｍｍｕｎｏｌ．８９：９７８４−７８８、１９９２；Ｍｙｅｒｓ等、Ｌｉｆｅ  Ｓｃｉ．６１：１８６１−７８、１９９７；およびＷａｎｇ等、Ｉｍｍｕｎｏｌ．９２：８９５５−９５９、１９９５）。
【０１８８】
１つのグループは、単回マウスＩＬ−１７特異的ラット抗血清の投与は、モデルにおいて予防的にまたは関節炎の症状が既に生じた後に導入された場合に、動物において関節炎の症状を低減したため、抗マウスＩＬ−１７抗体が対照マウスと相対比較してマウスＣＩＡモデルにおいて症状を低減し、概念的に、ヒト疾患の治療において抗ＩＬ−１７Ａ抗体が有益であることを示している（Ｌｕｂｂｅｒｔｓ等、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．５０：６５０−９、２００４）。したがって、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆのその対応する受容体への結合を拮抗、中和またはブロックする抗体は関節炎、乾癬、乾癬性関節炎、内毒素血症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、ＩＢＳ、腸炎、および本明細書に開示した他の炎症性の状態のような特定のヒトの疾患の治療においてＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆを中和するために使用できる。
【０１８９】
これらのＣＩＡモデルマウスへの本発明の抗体の投与を用いながら、症状を緩解し、疾患経過を改変するために使用されるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対する拮抗剤としてのそのような抗体の使用を評価する。例示であって限定しないが、マウス当たり本発明の抗体１０〜２００ｕｇの注射（例えば、限定しないが、４週間まで、週１〜７回、ｓｃまたはｉｍの投与経路による）により、疾患スコアが有意に低減できる（手掌スコア、炎症または疾患の発生率）。抗体投与の開始（例えば、コラーゲン免疫化の前または同時、あるいは第２のコラーゲン免疫化の後のいずれかの時点、例えば、疾患が既に診断されている時点）に応じて、そのような抗ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの抗体は関節リウマチの防止、ならびにその進行の防止において有効であることができる。
【０１９０】
２．内毒素血症
内毒素血症は一般的には感染性主因物、例えば、細菌および他の感染性の疾患の主因物、敗血症、毒性ショック症候群に起因するか、または、日和見感染などに付されている免疫無防備状態の患者において生じる、重症の状態である。治療上有用な抗炎症性タンパク質、例えば、本発明の抗体はヒトおよび動物において内毒素血症を防止および治療する場合に有用である。そのような抗体は内毒素血症における炎症および病理学的作用を低減する価値ある治療薬として機能する。
【０１９１】
リポ多糖類（ＬＰＳ）誘導内毒素血症は、感染性疾患における病理学的作用をもたらす炎症性メディエーターの多くに関わっており、げっ歯類におけるＬＰＳ誘導内毒素血症は潜在的な炎症性または免疫調節性の薬剤の薬理学的作用を検討するための後半に使用されている許容できるモデルである。グラム陰性細菌において産生されるＬＰＳは敗血症性ショックの発症における主要な原因物質である（Ｇｌａｕｓｎｅｒ等、Ｌａｎｃｅｔ３３８：７３２、１９９１）。ショック様の状態は実際に、動物へのＬＰＳの単回注射により実験的に誘導できる。ＬＰＳに応答して細胞により産生される分子は、直接または間接的に病原体をターゲティングできる。これらの生物学的応答は、侵襲病原体に対抗して宿主を保護するが、それらもまた有害となりえる。すなわち、重度のグラム陰性細菌感染の結果として生じる生得の免疫の多大な刺激が、サイトカインおよび他の分子の過剰な産生、ならびに、発熱、低血圧、播種性血管内凝血、および多臓器不全を特徴とする致命的な症候群である敗血症性ショック症候群の発症をもたらす（Ｄｕｍｉｔｒｕ等、Ｃｅｌｌ１０３：１０７１−１０８３、２０００）。
【０１９２】
ＬＰＳのこのような毒性作用は、大部分は多数の炎症メディエーターの放出をもたらすマクロファージ活性化に関連している。これらのメディエーターのうち、ＴＮＦは、中和抗ＴＮＦ抗体の投与によるＬＰＳ毒性の防止により示される通り、重要な役割を果たしていると考えられる（Ｂｅｕｔｌｅｒ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：８６９、１９８５）。Ｃ５７Ｂｌ／６マウスへのＥ．ｃｏｌｉ  ＬＰＳの１ｕｇ注射は、注射後約２時間に循環系のＩＬ−６、ＴＮＦ−α、ＩＬ−１および急性期のタンパク質（例えば、ＳＡＡ）の有意な上昇をもたらすことが明らかにされている。これらのメディエーターに対抗する受動免疫が死亡率の低下をもたらす場合があることから、ＬＰＳの毒性はこれらのサイトカインにより媒介されていると考えられる（Ｂｅｕｔｌｅｒ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ２２９：８６９、１９８５）。敗血性ショックの防止および／または治療のための潜在的な免疫介入の方策は抗ＴＮＦｍＡｂ、ＩＬ−１受容体拮抗剤、ＬＩＦ、ＩＬ−１０およびＧ−ＣＳＦを包含する。
【０１９３】
これらのＬＰＳ誘導モデルへの本発明の抗体の投与を使用することにより、ＬＰＳ誘導疾患の症状を緩解し、経過を改変するためにこのような抗体を使用することを評価してよい。さらに、本発明の抗体によるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの抑制を示す結果は、ＬＰＳ誘導モデルにおいて症状を緩解し経過を改変するためにこのような抗体を使用できるという概念の証拠を与えるものである。モデルはＬＰＳ注射によるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの誘導およびそのような抗体による疾患の潜在的治療を示すことになる。ＬＰＳは内毒素血症の病理に寄与している可能性がある炎症性因子の産生を誘導するため、本発明の抗体によるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方の活性または他の炎症性因子の中和は、内毒素ショックにおいて観察されるような内毒素血症の症状を低減するために使用できる。
【０１９４】
３．炎症性腸疾患ＩＢＤ
合衆国においては、概ね５００，０００人が炎症性腸疾患（ＩＢＤ）に罹患しており、これは結腸および直腸のいずれか（潰瘍性結腸炎）または両方、小腸および大腸（クローン病）に発生する。これらの疾患の病因は明確ではないが、それらには発病した組織の慢性の炎症が関与している。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に結合する抗体は、ＩＢＤおよび関連の疾患における炎症および病理学的作用を低減する価値ある治療薬として機能すると考えられる。
【０１９５】
潰瘍性結腸炎（ＵＣ）は一般的に結腸と称される大腸の炎症性疾患であり、粘膜または結腸の最も内側の層の炎症および潰瘍を特徴とする。この炎症は頻繁に結腸を空虚化し、下痢をもたらす。症状は軟便および関連する腹痛、発熱および体重減少を包含する。ＵＣの厳密な原因は不明であるが、最近の研究では、身体が外来性とみなしている身体内のタンパク質に対抗して身体の天然の防御が作用していると示唆されている（「自己免疫反応」）。それらはおそらくは腸内の細菌タンパク質に似ているため、これらのタンパク質は結腸の内層の破壊するために開始される炎症プロセスを促進または刺激する場合がある。結腸の内層が破壊されると潰瘍が形成され、粘膜、膿および血液が放出される。疾患は通常は直腸区域で開始され、最終的には大腸全体に渡って拡大する。炎症の反復エピソードは瘢痕組織を伴った腸および直腸の壁面の肥厚化をもたらす。重度の疾患では結腸組織の死滅または敗血症が生じる場合がある。潰瘍性結腸炎の症状は重症度において様々であり、それらの発症は緩徐または急速である。発作は多くの要因、例えば、呼吸器感染症またはストレスにより惹起される。
【０１９６】
ＵＣの完治法は現在存在しないが、治療は結腸内装における異常炎症プロセスを抑制することに着目している。コルチコステロイド免疫抑制剤（例えば、アザチオプリン、メルカプトプリンおよびメトトレキセート）およびアミノサリシレートを包含する治療法が疾患の治療に使用される。しかしながら、コルチコステロイドおよびアザチオプリンのような免疫抑制剤の長期間の使用は骨の退縮、白内障および肝臓および骨髄作用を包含する重篤な副作用をもたらす場合がある。現在の治療薬が奏功していない患者においては、手術が選択肢となる。手術では全結腸および直腸の摘出を行う。
【０１９７】
慢性潰瘍性結腸炎に部分的に近似できる数種の動物モデルが存在する。最も広範に使用されているモデルは２，４，６−トリニトロベンスルホン酸／エタノール（ＴＮＢＳ）誘導結腸炎モデルであり、これは結腸における慢性の炎症および潰瘍を誘発する。ＴＮＢＳを直腸内点滴により感受性マウスの結腸ないに導入すると、これは結腸粘膜においてＴ細胞媒介免疫応答を誘導し、この場合、大腸の全壁面に渡るＴ細胞およびマクロファージの緻密な浸潤を特徴とする多大な粘膜炎症をもたらす。さらに、この組織病理学像は進行性の体重減少（消耗）、出血性下痢、脱肛および大腸壁肥厚化の臨床像を伴う（Ｎｅｕｒａｔｈ等、Ｉｎｔｅｒｎ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９：５１−６２、２０００）。
【０１９８】
別の結腸炎モデルはデキストランスルフェートナトリウム（ＤＳＳ）を使用しており、これは出血性下痢、体重減少、結腸短縮化および好中球浸潤を伴った粘膜潰瘍により顕在化する急性の結腸炎を誘導する。ＤＳＳ誘導結腸炎はリンパ様過形成、限局的陰窩損傷および上皮の潰瘍を伴った固有層内への炎症細胞の浸潤を組織学的特徴とする。これらの変化は上皮に対するＤＳＳの毒性作用により、固有層の貪食作用およびＴＮＦ−αおよびＩＦＮ−γの産生により発生すると考えられている。その一般的使用にも関わらず、ヒト疾患への関連性について、ＤＳＳの機構に関する数種の問題点が未解決のままとなっている。ＤＳＳは、それがＳＣＩＤマウスのようなＴ細胞不全動物において観察されることからＴ細胞非依存性モデルとみなされる。
【０１９９】
これらのＴＮＢＳまたはＤＳＳモデルへの本発明の抗体の投与は、そのような抗体の胃腸疾患の症状の緩解および経過の改変のための使用について評価するために使用できる。さらに、そのような抗体によるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの抑制を示す結果は、本発明の抗体が結腸炎／ＩＢＤモデルにおいて症状を緩解し、疾患の経過を改変するために使用できるという概念の証拠を与える。
【０２００】
４．乾癬
乾癬は７百万超の米国人が罹患している慢性の皮膚状態である。乾癬は新しい皮膚細胞が異常に生育し、炎症、浮腫および鱗片斑状の皮膚をもたらす場合に生じ、その場合に古い皮膚は十分迅速に剥離されていない。最も一般的な形態であるプラーク乾癬は銀白色の鱗片で被覆された皮膚の炎症斑（患部）を特徴とする。乾癬は数個のプラークに限局されるか、または中等度から広範な領域の皮膚に渡る場合があり、頭皮、膝、肘および体幹部の最も一般的に生じる。外観は著明であるが、乾癬は感染性の疾患ではない。疾患の病因には罹患組織の慢性炎症が含まれる。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に結合する抗体は乾癬、他の炎症性皮膚疾患、皮膚および粘膜のアレルギーおよび関連の疾患において炎症および病理学的作用を低減するための価値ある治療薬として機能する。
【０２０１】
乾癬は多大な不快感を生じさせる皮膚のＴ細胞媒介炎症性障害である。治癒されない全年齢が罹患する疾患である。乾癬には欧州および北米の人口の概ね２パーセントが罹患している。軽度の乾癬を有する者は局所薬剤で自身の疾患を管理できることが多いが、世界中で百万超の患者は紫外線または全身免疫抑制療法を要する。残念なことに、紫外線照射の不都合さと危険性、および多くの治療薬の毒性のために、その長期の使用は制限される。さらに、患者は通常は乾癬を再発させ、一部の場合においては免疫抑制療法中止後短期間でリバウンドする。
【０２０２】
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに結合する抗体はまた、ＩＬ−１７ＦまたはＩＬ−１７Ａの循環レベルの検出のための診断系内で、急性期の炎症応答に関連するＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆの検出において使用してよい。リガンドまたは受容体ポリペプチドの上昇した、または低下したレベルは病理学的状態、例えば炎症または癌を示す場合がある。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは関連する急性期の炎症応答を誘導することが知られている。さらに、急性期のタンパク質または分子、例えば、ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆの検出は特定の疾患状態（例えば、喘息、乾癬、関節リウマチ、結腸炎、ＩＢＤ）に置ける慢性の炎症状態を示す場合がある。そのような状態の検出は疾患の診断を支援し、ならびに適切な療法を選択する場合の医師の参考となる。
【０２０３】
本明細書に記載する他の疾患モデルのほかに、ヒト乾癬患部から誘導された炎症組織に対する本発明の抗体の活性は、重度複合免疫不全（ＳＣＩＤ）マウスモデルを用いてインビボで測定できる。ヒトの細胞を免疫不全マウスに移植する数種のマウスモデルが開発されている（総称して異種移植片モデル）；例えば、Ｃａｔｔａｎ  ＡＲ、Ｄｏｕｇｌａｓ  Ｅ、Ｌｅｕｋ．Ｒｅｓ．１８：５１３−２２、１９９４およびＦｌａｖｅｌｌ、ＤＪ、Ｈｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ１４：６７−８２、１９９６を参照。乾癬のインビボの異種移植片モデルとして、ヒト乾癬皮膚組織をＳＣＩＤマウスモデルに移植し、適切な拮抗剤で攻撃する。さらに、ＡＧＲ１２９マウスモデルに移植したヒト乾癬皮膚グラフトのような当該分野で知られた他の乾癬動物モデルを用いて本発明の抗体を評価し、適切な拮抗剤で攻撃してもよい（例えば、参照により本明細書に組み込まれるＢｏｙｍａｎ、Ｏ．等、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．Ｏｎｌｉｎｅ  ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  ＃２００３１４８２、２００４を参照）。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの活性を結合、ブロック、抑制、低減、拮抗または中和する抗ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体が好ましい拮抗剤である。同様に、ヒトの結腸炎、ＩＢＤ、関節炎または他の炎症性の患部から誘導された組織または細胞をＳＣＩＤモデルにおいて使用することにより本明細書に記載する本発明の抗体の抗炎症特性を試験することができる。
【０２０４】
本発明の抗体を用いて炎症を根絶、遅延または低減するために設計された治療薬は、ヒト炎症組織（例えば、乾癬患部など）を担持したＳＣＩＤマウスまたは本明細書に記載する他のモデルにそのような抗体を投与することにより試験できる。治療の効果を測定し、当該分野で良く知られている方法を用いながら経時的に投与集団内における増大した抗炎症作用として統計学的に評価する。一部の例示される方法は限定しないが、例えば、乾癬モデルにおいて表皮の厚み、上部真皮における炎症細胞の数、および不全角化症の等級を測定することである。このような方法は当該分野で知られており、本明細書に記載する通りである。例えば、Ｚｅｉｇｌｅｒ、Ｍ．等、Ｌａｂ  Ｉｎｖｅｓｔ８１：１２５３、２００１；Ｚｏｌｌｎｅｒ、Ｔ．Ｍ．等、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０９：６７１、２００２；Ｙａｍａｎａｋａ、Ｎ．等、Ｍｉｃｒｏｂｉｏ．ｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．４５：５０７、２００１；Ｒａｙｃｈａｕｄｈｕｒｉ、Ｓ．Ｐ．等、Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１４４：９３１、２００１；Ｂｏｅｈｎｃｋｅ、Ｗ．Ｈ等、Ａｒｃｈ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｒｅｓ．２９１：１０４、１９９９；Ｂｏｅｈｎｃｋｅ、Ｗ．Ｈ等、Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．１１６：５９６、２００１；Ｎｉｃｋｏｌｏｆｆ、Ｂ．Ｊ．等、Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．１４６：５８０、１９９５；Ｂｏｅｈｎｃｋｅ、Ｗ．Ｈ等、Ｊ．Ｃｕｔａｎ．Ｐａｔｈｏｌ．２４：１、１９９７；Ｓｕｇａｉ、Ｊ．、Ｍ．等、Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．Ｓｃｉ．１７：８５、１９９８；およびＶｉｌｌａｄｓｅｎ  Ｌ．Ｓ．等、Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１１２：１５７１、２００３を参照。炎症はまた、試料中に存在する炎症性または患部の細胞の数を定量するためのフローサイトメトリー（またはＰＣＲ）、ＩＢＤのスコア（体重減少、下痢、直腸出血、結腸の長さ）、ＣＩＡＲＡモデルの場合は手掌疾患スコアおよび炎症スコアのような、よく知られた方法を用いて経時的にモニタリングしてよい。
【０２０５】
さらに、乾癬は過形成の表皮ケラチノサイトおよび浸潤単核細胞、例えば、ＣＤ４＋メモリーＴ細胞、好中球およびマクロファージを伴った慢性の炎症性皮膚疾患である（Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒｓ、Ｉｎｔ．Ａｒｃｈ．Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１１０：１９９、１９９６）。環境中の抗原が疾患の開始および病因への寄与において多大な役割を果たしていると現在は考えられている。しかしながら、乾癬の病因を媒介すると考えられているものは自己抗原に対する耐容性の損失である。樹状細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞は病理学的特徴をもたらす免疫応答を媒介する抗原の提示および認識において重要な役割を果たしていると考えられている。本発明者等は最近、ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲＢ転移モデル（Ｄａｖｅｎｐｏｒｔ等、Ｉｎｔｅｒｎａｔ．Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．、２：６５３−６７２）に基づいて乾癬のモデルを開発している。疾患スコア（皮膚患部、炎症サイトカイン）の抑制は乾癬におけるそのような抗体の有効性を示している。
【０２０６】
５．アトピー性皮膚炎
ＡＤはヘルパーＴ細胞のサブセット２（Ｔｈ２）の過剰活性化されたサイトカインにより特徴づけられる一般的な慢性炎症性疾患である。ＡＤの厳密な病因は不明であるが、多数の因子が関与を示唆されており、例えば、過剰活性Ｔｈ２免疫応答、自己免疫性、感染、アレルゲンおよび遺伝子的素因が挙げられる。疾患の重要な特徴は乾皮症（皮膚の乾燥）、掻痒（皮膚のかゆみ）、結膜炎、炎症性皮膚患部、スタフィロコッカス・アウレウス感染、上昇した血中好酸球、上昇した血清中ＩｇＥおよびＩｇＧ１、およびＴ細胞、肥満細胞、マクロファージおよび好酸球の浸潤を伴った慢性の皮膚炎を包含する。Ｓ・アウレウスのコロニー形成または感染はＡＤを悪化させ、この皮膚病の慢性度を決定づけるものと認識されている。
【０２０７】
ＡＤは喘息およびアレルギー性鼻炎を有する患者で観察される場合が多く、アレルギー性疾患の初期の顕在化である場合が多い。西欧諸国の人口の約２０％がこれらのアレルギー性疾患に罹患しており、先進国におけるＡＤの発生率は原因不明の上昇を続けている。ＡＤは典型的には小児期にはじまり、思春期を経て成人に至るまで持続する場合が多い。ＡＤの現在の治療は局所コルチコステロイド、経口シクロスポリンＡ、非コルチコステロイド免疫抑制剤、例えば、タクロリムス（軟膏型のＦＫ５０６）およびインターフェロン−γを包含する。ＡＤの多様な治療にも関わらず、多くの患者の症状は改善しないか医薬に対する有害反応を呈し、他のより有効な治療薬を探す必要が生じる。本発明の抗体、例えば本発明の中和抗ヒトＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体はアトピー性皮膚炎、炎症性皮膚状態、および本明細書に開示した他の炎症状態のような特定のヒトの疾患の治療において、ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａを中和するために使用できる。
【０２０８】
６．喘息
ＩＬ−１７は、気道におけるアレルゲン誘導Ｔ細胞活性化および好中球の流入において重要な役割を果たしている。ＩＬ−１７に対する受容体は、気道において発現され（Ｙａｏ等、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ３：８１１（１９９５））、アレルギー性喘息におけるＩＬ−１７好中球補充は大部分が、ＩＬ−１７刺激ヒト気管支上皮細胞（ＨＢＥＣ）およびヒト気管支線維芽細胞により産生される化学誘引物質ＩＬ−８、ＧＲＯ−αおよびマクロファージ炎症タンパク質−２（ＭＩＰ２）により誘導される（Ｙａｏ等、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １５５：５４８３（１９９５））；Ｍｏｌｅｔ等、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０８：４３０（２００１））。ＩＬ−１７はまた、ＨＢＥＣを刺激して好中球活性化因子であるＩＬ−６を放出し（Ｆｏｓｓｉｅｚ等、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ１８３：２５９３（１９９６）およびＬｉｎｄｅｎ等、Ｉｎｔ  Ａｒｃｈ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ１２６：１７９（２００１））、ＴＮＦ−αと相乗作用してインビトロのヒト好中球の生存を延長する（Ｌａａｎ等、Ｅｕｒ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｊ  ２１：３８７（２００３））ことが分かっている。さらにまた、ＩＬ−１７はプロ線維性サイトカイン、ＩＬ−６およびＩＬ−１１および炎症メディエーター顆粒球コロニー刺激因子（Ｇ−ＣＳＦ）および顆粒球マクロファージコロニー刺激因子（ＧＭ−ＣＳＦ）などの気道リモデリングに関与するとされているサイトカインの分泌を増強するその能力により喘息において炎症応答を増幅することができる（Ｍｏｌｅｔ等、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ１０８：４３０（２００１））。
【０２０９】
臨床的証拠によれば、喘息の急性の重度の悪化は気道における好中球の補充および活性化に関連しており、すなわち、ＩＬ−１７は喘息において重要な役割を果たしていると考えられる。軽度の喘息を有する患者は、遊離の可溶性ＩＬ−１７Ａタンパク質の局所的濃度における検出可能な上昇を呈する（Ｍｏｌｅｔ等、Ｊ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １０８：４３０（２００１））のに対し、ブタ制限への曝露により誘導された重度の気道炎症を有する健常者ボランティアは、気管支肺胞空間内に遊離の可溶性ＩＬ−１７Ａタンパク質の濃度の著明な上昇を呈する（Ｆｏｓｓｉｅｚ等、Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８３：２５９３（１９９６）およびＬｉｎｄｅｎ等、Ｉｎｔ  Ａｒｃｈ  Ａｌｌｅｒｇｙ  Ｉｍｍｕｎｏｌ１２６：１７９（２００１））。さらに、喀痰におけるＩＬ−１７レベルは増大した気道過剰反応性を有する個体と相関していた（Ｂａｒｃｚｙｋ等、Ｒｅｓｐｉｒ  Ｍｅｄ  ９７：７２６（２００３））。
【０２１０】
気道過剰応答性の動物モデルにおいて、感作マウスによる卵アルブミンの長期吸入は気管支の好酸球性炎症および炎症肺組織におけるＩＬ−１７ｍＲＮＡ発現の早期の誘導、ならびに、気管支好中球増多症をもたらした（Ｈｅｌｌｉｎｇｓ等、Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２８：４２（２００３））。抗ＩＬ−１７モノクローナル抗体は気管支好中球流入を強力に低減したが、気管支肺胞洗浄液および血清の両方においてＩＬ−５レベルを有意に増強し、アレルゲン誘導気管支好酸球流入を悪化させ、ＩＬ−１７Ａが抗原発作Ｉｄ後の好中球と好酸球の蓄積の間のバランスの決定に関与している可能性が示唆された。
【０２１１】
ＩＬ−１７ファミリーメンバーのうち、ＩＬ−１７ＦはＩＬ−１７Ａと最も緊密に関連している。ＩＬ−１７Ｆにより媒介される生物活性はＩＬ−１７Ａのものと同様であるのに対し、ＩＬ−１７ＦはＩＬ−６、ＩＬ−８およびＧ−ＣＳＦの産生を刺激する（Ｈｕｒｓｔ等、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６９：４４３（２００２））。ＩＬ−１７Ｆはまた内皮細胞においてＩＬ−２、形質転換成長因子（ＴＧＦ）−αおよび単球化学誘引タンパク質（ＭＣＰ）の産生を誘導する（Ｓｔａｒｎｅｓ等、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６７：４１３７（２００１））。同様に、アレルゲン攻撃はアレルギー性喘息の患者において局所的ＩＬ−１７Ｆを増大させることができる（Ｋａｗａｇｕｃｈｉ等、Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６７：４４３０（２００１））。マウス肺におけるＩＬ−１７Ｆの遺伝子送達は気管支肺胞空間において好中球を増大させるのに対し、ＩＬ−１７Ｆ遺伝子の粘膜移行はＡｇ誘導肺好中球増多症のレベルおよびメタコリンに対する軌道の応答性を増大させる（Ｏｄａ等、Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｒｉｔ  Ｃａｒｅ  Ｍｅｄ  １７１：１２（２００５））。
【０２１２】
喘息以外に、数種の慢性炎症性気道疾患が気道における好中球補充を特徴とし、ＩＬ−１７は慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ）、細菌性肺炎および嚢胞性線維症のような呼吸器状態の発症において重要な役割を果たしていることが報告されている（Ｌｉｎｄｅｎ等、Ｅｕｒ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｊ  １５：９７３（２０００）、Ｙｅ等、Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｓｐｉｒ  Ｃｅｌｌ  Ｍｏｌ  Ｂｉｏｌ  ２５：３３５（２００１）、Ｒａｈｍａｎ等、Ｃｌｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １１５：２６８（２００５））。抗ＩＬ−１７Ａおよび抗ＩＬ−１７Ｆ抗体は、炎症のインビトロのモデルにおいて慢性炎症性気道疾患に対して有効であることが明らかにできる。培養ＨＢＥＣまたは気管支線維芽細胞からのＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆ誘導サイトカインおよびケモカイン産生を抑制する本発明の抗体のようなＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａの活性に対する拮抗剤の能力は、ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆから直接生じる炎症メディエーターの産生におけるこのような拮抗剤の有効性の尺度として使用できる。本発明の抗体のようなＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａの活性に対する拮抗剤の添加が炎症メディエーターの産生および発現を顕著に低減すれば、それは慢性気道炎症に関連する炎症の特徴において有効であることが期待される。
【０２１３】
７．過敏性腸症候群（ＩＢＳ）
過敏性腸症候群は、腹部の疼痛または不快感および混乱した腸の習慣性を特徴とする疾患を示す。ＩＢＳ患者は腸の習慣に基づいて３つの主な群、すなわち、主に軟便または頻繁な排便を有する者、主に硬質で稀な排便を有する者、および変動性または正常な排便を有する者に分類できる（Ｔａｌｌｅｙ等、２００２）。改変された腸の運動性、上皮機能の異常、便およびガスの異常な通過、ならびにストレスが症状に寄与するのに対し、内蔵の過敏性が大部分の患者における重要な特徴である。疼痛のシグナリングおよび求心性のシグナルの中枢プロセシングにおける混乱に影響する遺伝子的要因が特定の環境への曝露ののちのＩＢＳに対して個体を罹患しやすくすると推測されている。研究はさらに、結腸における炎症応答は平滑筋および超の神経の感受性の増大に寄与し、これにより腸における感覚運動機能を混乱させる場合があることを明らかにしている（Ｃｏｌｌｉｎｓ等、２００１）。ＩＢＳとＩＢＤとの間には臨床的な重複が存在し、ＩＢＤの診断の前に患者において報告されることが頻繁であるＩＢＳ様症状および確立されたＩＢＤから回帰した患者における予測より高値のＩＢＳ症状が挙げられる。すなわち、これらの状態は予測より高値の頻度において共存する場合があり、あるいは、同じスペクトルの異なる末端においてＩＢＳおよびＩＢＤと連携して存在する場合がある。しかしながら、大部分のＩＢＳ患者において、結腸の生検標本は正常であるように観察されることに留意しなければならない。しかしなお、ＩＢＳは極めて多人数（合衆国の２０００年の罹患数は約１６百万人）で生じており、１７憶ドルの総医療費をもたらしている（２０００年）。すなわち、最も蔓延しており医療費のかかる胃腸の疾患および障害のうち、ＩＢＳは胃食道逆流性疾患（ＧＥＲＤ）にのみ次いで第２位である。ＧＥＲＤとはなお異なり、ＩＢＳの治療は満足できないままとなっており（Ｔａｌｌｅｙ等、２００２；Ｆａｒｈａｄｉ等、２１００１；Ｃｏｌｌｉｎｓ等、２００１）、ＩＢＳは明らかになお満足されない医療上の必要性を提示していることを示している。
【０２１４】
中枢神経系（ＣＮＳ）における、または、正常なホメオスタシスの腸から中枢（精神社会的）もしくは末梢（組織刺激、炎症、感染）の撹乱における、神経、免疫または神経免疫回路の増強された応答性を想定している集中的な疾患モデルが提案されている（Ｔａｌｌｅｙ等、２００２）。この増強された応答性は腸の運動性、上皮の機能（免疫、透過性）および内臓の過敏性の調節不全をもたらし、これらが次にＩＢＳ症状をもたらす。
【０２１５】
ＩＢＳの発症においては多くの異なる種類の分子の役割が存在し、例えば、ニューロンを刺激する分子に関する役割、および、炎症プロセスの開始に関与するものが挙げられる。多くの分子は、ニューロンによるそれらの直接の発現、またはＩＬ−１７Ｄ、ＩＬ−１７ＢおよびＩＬ−３１を包含するニューロン上のそれらの受容体の発現のために、ニューロン上の可能な活性に関連することが分かっている。さらに、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１２およびＩＬ−３１を包含する多くのＩＬ−１７ファミリーメンバーおよび関連の分子が腸における炎症に関連している。
【０２１６】
これらの分子の抑制剤／拮抗剤の有効性は、疾患の動物モデルにおいて、インビボで試験される。ＩＢＳの重要な特徴を模倣し、中枢標的刺激（ストレス）または末梢標的刺激（感染、炎症）が関与する数種の動物モデルが提案されている。ＩＢＳの治療における抑制剤の有効性を測定するために使用できるインビボの動物モデルの２つの例は（ｉ）ＩＢＳの主要ＣＮＳ指向性発症に着目したモデル（ストレスモデル）、および（ｉｉ）ストレスの腸指向性誘導因子に着目したモデル（すなわち、腸の炎症、感染または物理的ストレス）である。しかしながら、ＣＮＳ内、または胃腸（ＧＩ）管における事象は単独では生じないこと、および、ＩＢＳの症状はＧＩに対するＣＮＳからのシグナルとその逆のものとの間の複雑な相互作用に起因する可能性が最も大であることに留意しなければならない。
【０２１７】
医薬品としての使用のためには、本発明の抗体は従来の方法に従って非経口、特に静脈内または皮下の送達のために製剤される。静脈内投与は瞬時注射、制御放出、例えば、ミニポンプまたは他の適切な手法を用いたものによるか、または、１〜数時間の典型的な時間に渡る注入により行うことになる。一般的に、医薬品製剤は食塩水、緩衝食塩水、水中５％デキストロースなどのような製薬上許容しうるビヒクルと組み合わせて造血タンパク質を包含することになる。製剤はさらに、１つ以上の賦形剤、保存料、可溶化剤、緩衝剤、ウィルス表面上のタンパク質の損失を防止するアルブミンなどを含有してよい。そのような複合療法を使用する場合、サイトカインは単一の製剤内で組み合わせてよく、あるいは、別個の製剤中で投与してよい。製剤の方法は当該分野で良く知られており、例えば、参照により本明細書に組み込まれるＲｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、Ｇｅｎｎａｒｏ編、Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏ．、Ｅａｓｔｏｎ  ＰＡ、１９９０に開示されている。治療用の用量は一般的に一日当たり０．１〜１００ｍｇ／患者の体重ｋｇ、好ましくは一日当たり０．５〜２０ｍｇ／患者の体重ｋｇの範囲となり、厳密な用量は治療すべき状態の性質および重症度、患者の体質などを考慮しながら、許容される定法に従って、医師により決定される。用量の決定は当業者の知る通りである。タンパク質は一般的には、化学療法または骨髄移植の後２８日までの期間に渡り、＞２０，０００／ｍｍ３、好ましくは＞５０，０００／ｍｍ３の血小板数が達成されるまで投与される。より一般的には、タンパク質は１週間以内に渡って、頻繁には１〜３日間の期間に渡って投与される。一般的に、本発明の抗体の治療有効量は、成熟細胞（例えば、血小板または好中球）の循環レベルの上昇として顕在化するリンパ様または骨髄腫様の先祖細胞の増殖および／または分化の臨床上有意な増加がもたらされるために十分な量である。すなわち、血小板障害の治療は少なくとも２０，０００／ｍｍ３、好ましくは５０，０００／ｍｍ３の血小板数に到達するまで継続される。本発明の抗体はまた、ＩＬ−３、−６および−１１；幹細胞因子；エリスロポエチン；Ｇ−ＣＳＦおよびＧＭ−ＣＳＦのような他のサイトカインと組み合わせて投与することもできる。複合療法の用法内において、他のサイトカインの一日当たり用量は一般的にＥＰＯ、１５０Ｕ／ｋｇ；ＧＭ−ＣＳＦ、５〜１５ｌｇ／ｋｇ；ＩＬ−３、１〜５ｌｇ／ｋｇ；およびＧ−ＣＳＦ、１〜２５ｌｇ／ｋｇとなる。例えば、ＥＰＯを用いた複合療法は低いＥＰＯレベルを有する貧血患者が適応症となる。
【０２１８】
一般的に、投与される抗体の用量は患者の年齢、体重、身長、性別、全身的な医学的状態および以前の医学的経歴のような要因に応じて変動する。典型的には、約１ｐｇ／ｋｇ〜１０ｍｇ／ｋｇ（薬剤の量／患者の体重）の範囲にある抗体の用量をレシピエントに与えることが望ましいが、より低値または高値の用量もまた状況に応じて投与してよい。
【０２１９】
被験体への本発明の抗体の投与は、静脈内、動脈内、腹腔内、筋肉内、皮下、胸膜内、髄腔内、局所カテーテルを介した灌流により、または直接患部内注射により行うことができる。注射により治療用タンパク質を投与する場合は、投与は連続注入によるか、または単回または多数回の瞬時注射により行ってよい。
【０２２０】
投与の別の経路は経口、粘膜、肺、および経皮投与を包含する。経口送達はポリエステル微小球、ゼイン微小球、タンパク質様微小球、ポリシアノアクリレート微小球、および脂質系に対して適している（例えば、ＤｉＢａｓｅ  ａｎｄ  Ｍｏｒｒｅｌ「Ｏｒａｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｍｉｃｒｏｅｎｃａｐｓｕｌａｔｅｄ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ」、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓａｎｄｅｒｓ  ａｎｄ  Ｈｅｎｄｒｅｎ（編）ｐ．２５５−２８８（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ１９９７）参照）。鼻腔内送達の実現性は、インスリン投与の様式などにより例示される（例えば、Ｈｉｎｃｈｃｌｉｆｆｅ  ａｎｄ  Ｉｌｌｕｍ、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．３５：１９９（１９９９）参照）。本発明の抗体を含む乾燥または液体の粒子を製造し、乾燥粉末分散器、液体エアロゾル発生器またはネブライザーを用いて吸入できる（例えば、Ｐｅｔｔｉｔ  ａｎｄ  Ｇｏｍｂｏｔｚ、ＴＩＢＴＥＣＨ１６：３４３（１９９８）；Ｐａｔｔｏｎ等、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．３５：２３５（１９９９）参照）。この方法はＡＥＲＸ糖尿病管理システムにより説明され、これは肺内にエアロゾル化されたインスリンを送達するハンドヘルド型の電気吸入器である。研究によれば、４８，０００ｋＤａもの大型のタンパク質が低周波の超音波を用いて治療の濃度において皮膚を経由して送達されており、これは経皮投与の実現性を説明している（Ｍｉｔｒａｇｏｔｒｉ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２６９：８５０（１９９５））。エレクトロポレーションを用いた経皮送達は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ結合活性を有する分子を投与するための別の手段を提供する（Ｐｏｔｔｓ等、Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：２１３（１９９７））。
【０２２１】
本発明の抗体を含む医薬組成物は薬学的に有用な組成物を製造するための既知の方法に従って製剤することができ、その場合、治療用タンパク質は製薬上許容しうる担体との混合物中に組み合わせられる。組成物はレシピエントの患者により投与の耐容性が示されれば「製薬上許容しうる担体」と言える。滅菌されたリン酸塩緩衝食塩水は製薬上許容しうる担体の一例である。他の適当な担体は当該分野で良く知られている。例えば、Ｇｅｎｎａｒｏ（編）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１９版、（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ１９９５）を参照。
【０２２２】
治療の目的のためには、本発明の抗体および製薬上許容しうる担体を治療有効量において患者に投与する。本発明の治療用分子および製薬上許容しうる担体の組み合わせは投与される量が生理学的に意味のある場合に、「治療上有効量」において投与されるといえる。薬剤は、その存在がレシピエント患者の生理状態において検出可能な変化をもたらす場合に生理学的に意味のあるものとなる。例えば、炎症を治療するために使用される薬剤はその存在が炎症応答を軽減する場合に生理学的に意味のあるものとなる。有効な治療は種々の方法において評価してよい。１つの実施形態においては、有効な治療は低減された炎症により判明する。他の実施形態においては、有効な治療は体重増加、体力回復、疼痛低下、旺盛度、および、より良好な健康状態の患者からの自覚的提示のような兆候を包含する患者の増進した健康状態により計測される。
【０２２３】
本発明の抗体を含む医薬組成物は液体形態において、エアロゾルにおいて、あるいは固体形態において製品化することができる。液体形態は、注射用の溶液および経口用の懸濁液として示される。例示される固体形態はカプセル、錠剤および制御放出形態を包含する。後者の形態はミニ浸透圧ポンプおよびインプラントにより例示される（Ｂｒｅｍｅｒ等、Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：２３９（１９９７）；Ｒａｎａｄｅ、「Ｉｍｐｌａｎｔｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｒａｎａｄｅ  ａｎｄ  Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ（編）ｐ．９５−１２３（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ１９９５）；Ｂｒｅｍｅｒ等、「Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｗｉｔｈ  Ｉｎｆｕｓｉｏｎ  Ｐｕｍｐｓ」、ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓａｎｄｅｒｓ  ａｎｄ  Ｈｅｎｄｒｅｎ（編）ｐ．２３９−２５４（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ１９９７）；Ｙｅｗｅｙ等、「Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｒｏｍ  ａ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ  Ｉｍｐｌａｎ」、ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓａｎｄｅｒｓ  ａｎｄ  Ｈｅｎｄｒｅｎ（編）ｐ．９３−１１７（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ１９９７））。
【０２２４】
リポソームは静脈内、腹腔内、髄腔内、筋肉内、皮下または経口投与、吸入または鼻腔内投与を介して、被験体に治療用ポリペプチドを送達するための１つの手段を提供する。リポソームは水相のコンパートメントを包囲する脂質の二層構造１つ以上よりなる顕微鏡的な小胞である（一般的に、Ｂａｋｋｅｒ−Ｗｏｕｄｅｎｂｅｒｇ等、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１２（Ｓｕｐｐｌ．１）：Ｓ６１（１９９３）、Ｋｉｍ、Ｄｒｕｇｓ  ４６：６１８（１９９３）、およびＲａｎａｄｅ、「Ｓｉｔｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｕｓｉｎｇ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ａｓ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ」、ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｒａｎａｄｅ  ａｎｄ  Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ（編）ｐ．３−２４（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ１９９５）参照）。リポソームは組成において細胞膜と同様であり、その結果として、リポソームは安全に投与でき、生体分解性である。製造方法に応じて、リポソームは単層または多層であってよく、リポソームは０．０２μｍ〜１０μｍ超の範囲の直径を有する大きさにおいて変動できる。種々の薬剤をリポソーム内にカプセル化することができ、疎水性の薬剤は二層に分配され、親水性の薬剤は内側の水性の空間に分配される（例えば、Ｍａｃｈｙ等、Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  Ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｌｉｂｂｅｙ  １９８７）、およびＯｓｔｒｏ等、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊ．Ｈｏｓｐ．Ｐｈａｒｍ．４６：１５７６（１９８９）参照）。さらに、リポソームの大きさ、二層の数、脂質の組成、ならびにリポソームの電荷および表面特性を変動させることによりカプセル化された薬剤の治療上の利用性を制御することができる。
【０２２５】
リポソームは実質的に任意の型の細胞に吸着でき、その後、カプセル化された薬剤を緩徐に放出する。あるいは、吸着されたリポソームは、貪食細胞性である細胞によるエンドサイトーシスに付される場合がある。エンドサイトーシスに引き続きリポソーム脂質のリポソーム内分解およびカプセル化された薬剤の放出が起こる（Ｓｃｈｅｒｐｈｏｆ等、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．４４６：３６８（１９８５））。静脈内投与後、小型のリポソーム（０．１〜１．０μｍ）は典型的には、肝臓および脾臓に主に位置する細網内皮系の細胞により取り込まれるのに対し、３．０μｍより大きいリポソームは肺内に沈着する。このような細網内皮系の細胞による、より小型のリポソームの優先的な取り込みは、マクロファージに対し、肝臓の腫瘍に対して化学療法剤を送達するために、用いられている。
【０２２６】
細網内皮系はリポソーム粒子の大用量による飽和、または薬理学的手段による選択的なマクロファージの不活性化を包含する数種の方法により妨げることができる（Ｃｌａａｓｓｅｎ等、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  ８０２：４２８（１９８４））。さらに、リポソーム膜内への糖脂質またはポリエチレングリコール誘導のリン脂質の取り込みは、細網内皮系による優位に低減した取り込みをもたらすことが分かっている（Ａｌｌｅｎ等、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １０６８：１３３（１９９１）；Ａｌｌｅｎ等、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １１５０：９（１９９３））。
【０２２７】
リポソームはまた、リン脂質の組成を変化させることにより、またはリポソーム内に受容体またはリガンドを挿入することにより、特定の細胞または臓器をターゲティングするように産生できる。例えば、ノニオン性界面活性剤の高い含有量を有するように産生したリポソームは肝臓をターゲティングするために使用されている（Ｈａｙａｋａｗａ等、Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｐａｔｅｎｔ  ０４−２４４、０１８；Ｋａｔｏ等、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１６：９６０（１９９３））。これらの製剤は、大豆ホスファチジルコリン、α−トコフェロールおよびエトキシル化水素化ヒマシ油（ＨＣＯ−６０）をメタノール中で混合し、真空下に混合物を濃縮し、次に水で混合物を再構成することにより製造されている。ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）と大豆誘導ステリルグルコシド混合物（ＳＧ）およびコレステロール（Ｃｈ）のリポソーム製剤もまた肝臓をターゲティングすることが分かっている（Ｓｈｉｍｉｚｕ等、  Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２０：８８１（１９９７））。
【０２２８】
あるいは、抗体、抗体フラグメント、炭水化物、ビタミンおよび輸送タンパク質などの種々のターゲティングリガンドをリポソームの表面に結合させることができる。例えば、リポソームは肝細胞表面上で排他的に発現されるアシアロ糖タンパク質（ガラクトース）受容体をターゲティングするために分枝鎖型のガラクトシル脂質誘導体で修飾することができる（Ｋａｔｏ  ａｎｄ  Ｓｕｇｉｙａｍａ、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．１４：２８７（１９９７）；Ｍｕｒａｈａｓｈｉ等、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２０：２５９（１９９７））。同様に、Ｗｕ等のＨｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２７：７７２（１９９８）では、アシアロフェチュインでリポソームを標識することによりリポソームの結晶中半減期が短縮され、肝細胞によるアシアロフェチュイン標識リポソームの取り込みが大きく増強されている。一方、分枝鎖型のガラクトシル脂質誘導体を含むリポソームの肝蓄積はアシアロフェチュインの予備注射により抑制できる（Ｍｕｒａｈａｓｈｉ等、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２０：２５９（１９９７））。ポリアコチニル化ヒト血清アルブミンリポソームは、肝細胞にリポソームをターゲティングするための別の方法を与える（Ｋａｍｐｓ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９４：１１６８１（１９９７））。さらに、Ｇｅｈｏ等の米国特許第４，６０３，０４４号は、肝臓の特殊化された代謝細胞に関連する肝胆受容体に対する特異性を有する肝細胞指向型のリポソーム小胞送達系を記載している。
【０２２９】
組織ターゲティングのより一般的な方法においては、標的細胞を、標的細胞により発現されるリガンドに対して特異的なビオチニル化抗体で予め標識する（Ｈａｒａｓｙｍ等、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．３２：９９（１９９８））。遊離の抗体の血漿排除の後、ストレプトアビジン接合リポソームを投与する。別の方法においては、ターゲティング抗体を直接リポソームに結合させる（Ｈａｒａｓｙｍ等、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．３２：９９（１９９８））。
【０２３０】
ポリペプチドおよび抗体はタンパク質のマイクロカプセル化の標準的な手法を用いて、リポソーム内にカプセル化できる（例えば、Ａｎｄｅｒｓｏｎ等、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．３１：１０９９（１９８１）、Ａｎｄｅｒｓｏｎ等、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５０：１８５３（１９９０）、およびＣｏｈｅｎ等、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １０６３：９５（１９９１）、Ａｌｖｉｎｇ  等、「Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔｕｄｉｅｓ」、ｉｎ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｖｏｌ．ＩＩＩ、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ（編）、ｐ．３１７（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ１９９３）、Ｗａｓｓｅｆ等、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１４９：１２４（１９８７）参照）。上記した通り、治療上有用なリポソームは種々の成分を含有してよい。例えば、リポソームはポリ（エチレングリコール）の脂質誘導体を含んでよい（Ａｌｌｅｎ等、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １１５０：９（１９９３））。
【０２３１】
分解性重合体微小球は、治療用タンパク質の高い全身レベルを維持するために設計されている。微小球は重合体内にタンパク質を捕獲する分解性重合体、例えば、ポリ（ラクチドコグリコリド）（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（オルトエステル）、非生体分解性エチルビニルアセテート重合体から製造する（Ｇｏｍｂｏｔｚ  ａｎｄ  Ｐｅｔｔｉｔ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．６：３３２（１９９５）；Ｒａｎａｄｅ、「Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｒａｎａｄｅ  ａｎｄ  Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ（編）ｐ．５１−９３（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ１９９５）；Ｒｏｓｋｏｓ  ａｎｄ  Ｍａｓｋｉｅｗｉｃｚ、「Ｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｕｓｅｆｕｌ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓａｎｄｅｒｓ  ａｎｄ  Ｈｅｎｄｒｅｎ（編）ｐ．４５−９２（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ１９９７）；Ｂａｒｔｕｓ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８１：１１６１（１９９８）；Ｐｕｔｎｅｙ  ａｎｄ  Ｂｕｒｋｅ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １６：１５３（１９９８）；Ｐｕｔｎｅｙ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２：５４８（１９９８））。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）コーティングされたナノ微小球もまた治療用タンパク質の静脈内投与のための担体を与えることができる（例えば、Ｇｒｅｆ等、Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：１６７（１９９７）参照）。
【０２３２】
本発明はまた、抗ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体などのＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ結合活性を有する化学的に修飾されたポリペプチドを意図しており、そのようなポリペプチドは上記した通り重合体に連結される。
【０２３３】
他の剤型は、例えば、Ａｎｓｅｌ  ａｎｄ  Ｐｏｐｏｖｉｃｈ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、５版、（Ｌｅａ＆Ｆｅｂｉｇｅｒ  １９９０）、Ｇｅｎｎａｒｏ（編）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１９版、（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ  １９９５）およびＲａｎａｄｅ  ａｎｄ  Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ１９９６）に示される通り、当業者が考案できる。
【０２３４】
例示すれば、医薬組成物は本発明の抗体を含む容器を含むキットとして供給してよい。本発明の抗体は単一または多数の用量のための注射用溶液の形態において、または、注射前に再構成する滅菌粉末として提供できる。あるいは、そのようなキットは治療用ポリペプチドの投与のために乾燥粉末分散器、液体エアロゾル発生器またはネブライザーを包含できる。そのようなキットはさらに、医薬組成物の適応症および使用法に関する書面による情報を含んでよい。さらに、そのような情報はＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆへの既知の過敏症を有する患者においては抗体組成物が禁忌であることの陳述書を包含してよい。
【０２３５】
本発明の抗体を含む医薬組成物は液体形態において、エアロゾルにおいて、あるいは固体形態において製品化することができる。液体形態は、注射用の溶液、エアロゾル、ドロップ剤、局所用溶液、および経口用の懸濁液として示される。例示される固体形態はカプセル、錠剤および制御放出形態を包含する。後者の形態はミニ浸透圧ポンプおよびインプラントにより例示される（Ｂｒｅｍｅｒ等、Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：２３９（１９９７）；Ｒａｎａｄｅ、「Ｉｍｐｌａｎｔｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」、Ｒａｎａｄｅ  ａｎｄ  Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ（編）ｐ．９５−１２３（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ１９９５）；Ｂｒｅｍｅｒ等、「Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｗｉｔｈ  Ｉｎｆｕｓｉｏｎ  Ｐｕｍｐｓ、ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」：Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓａｎｄｅｒｓ  ａｎｄ  Ｈｅｎｄｒｅｎ（編）ｐ．２３９−２５４（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ１９９７）；Ｙｅｗｅｙ等、「Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｆｒｏｍ  ａ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｉｎｊｅｃｔａｂｌｅ  Ｉｍｐｌａｎｔ、ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」：Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｓａｎｄｅｒｓ  ａｎｄ  Ｈｅｎｄｒｅｎ（編）ｐ．９３−１１７（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ１９９７））。他の固体形態はクリーム、ペースト、他の局所適用物などを包含する。
【０２３６】
リポソームは静脈内、腹腔内、髄腔内、筋肉内、皮下または経口投与、吸入または鼻腔内投与を介して、対象に治療用ポリペプチドを送達するための１つの手段を提供する。リポソームは水相のコンパートメントを包囲する脂質の二層構造１つ以上よりなる顕微鏡的な小胞である（一般的にＢａｋｋｅｒ−Ｗｏｕｄｅｎｂｅｒｇ等、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１２（Ｓｕｐｐｌ．１）：Ｓ６１（１９９３）、Ｋｉｍ、Ｄｒｕｇｓ  ４６：６１８（１９９３）、ａｎｄ  Ｒａｎａｄｅ、「Ｓｉｔｅ−Ｓｐｅｃｉｆｉｃ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｕｓｉｎｇ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ａｓ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ」、ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｒａｎａｄｅ  ａｎｄ  Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ（編）ｐ．３−２４（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ１９９５）参照）。リポソームは組成において細胞膜と同様であり、そしてその結果として、リポソームは安全に投与でき、そして生体分解性である。製造方法に応じて、リポソームは単層または多層であってよく、そしてリポソームは０．０２μｍ〜１０μｍ超の範囲の直径を有する大きさにおいて変動できる。種々の薬剤をリポソーム内にカプセル化することができ、疎水性の薬剤は二層に分配され、そして親水性の薬剤は内側の水性の空間に分配される（例えばＭａｃｈｙ等、Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  Ｉｎ  Ｃｅｌｌ  Ｂｉｏｌｏｇｙ  Ａｎｄ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（Ｊｏｈｎ  Ｌｉｂｂｅｙ  １９８７）、ａｎｄ  Ｏｓｔｒｏ等、Ａｍｅｒｉｃａｎ  Ｊ．Ｈｏｓｐ．Ｐｈａｒｍ．４６：１５７６（１９８９）参照）。さらに、リポソームの大きさ、二層の数、脂質の組成、ならびにリポソームの電荷および表面特性を変動させることによりカプセル化された薬剤の治療上の利用性を制御することができる。
【０２３７】
リポソームは実質的に如何なる型の細胞にも吸着でき、そしてその後、カプセル化された薬剤を緩徐に放出する。あるいは、吸着されたリポソームは貪食細胞性である細胞によるエンドサイトーシスに付される場合がある。エンドサイトーシスに引き続きリポソーム脂質のリソソーム内分解およびカプセル化された薬剤の放出が起こる（Ｓｃｈｅｒｐｈｏｆ等、Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．４４６：３６８（１９８５））。静脈内投与後、小型のリポソーム（０．１〜１．０μｍ）は典型的には、肝臓および脾臓に主に位置する細網内皮系の細胞により取り込まれるのに対し、３．０μｍより大きいリポソームは肺内に沈着する。このような細網内皮系の細胞によるより小型のリポソームの優先的な取り込みは、マクロファージに対し、そして肝臓の腫瘍に対して化学療法剤を送達するために、用いられている。
【０２３８】
細網内皮系はリポソーム粒子の大用量による飽和、または薬理学的手段による選択的なマクロファージの不活性化を包含する数種の方法により妨げることができる（Ｃｌａａｓｓｅｎ等、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  ８０２：４２８（１９８４））。さらに、リポソーム膜内への糖脂質またはポリエチレングリコール誘導のリン脂質の取り込みは、細網内皮系による優位に低減した取り込みをもたらすことが分かっている（Ａｌｌｅｎ等、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １０６８：１３３（１９９１）；Ａｌｌｅｎ等、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １１５０：９（１９９３））。
【０２３９】
リポソームはまたリン脂質の組成を変化させることにより、またはリポソーム内に受容体またはリガンドを挿入することにより、特定の細胞または臓器をターゲティングするように製造できる。例えば、ノニオン性界面活性剤の高い含有量を有するように製造したリポソームは肝臓をターゲティングするために使用されている（Ｈａｙａｋａｗａ等、Ｊａｐａｎｅｓｅ  Ｐａｔｅｎｔ  ０４−２４４、０１８；Ｋａｔｏ等、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．１６：９６０（１９９３））。これらの製剤は、大豆ホスファチジルコリン、α−トコフェロールおよびエトキシル化水素化ヒマシ油（ＨＣＯ−６０）をメタノール中で混合し、真空下に混合物を濃縮し、そして次に水で混合物を再構成することにより製造されている。ジパルミトイルホスファチジルコリン（ＤＰＰＣ）と大豆誘導ステリルグルコシド混合物（ＳＧ）およびコレステロール（Ｃｈ）のリポソーム製剤もまた肝臓をターゲティングすることが分かっている（Ｓｈｉｍｉｚｕ等、  Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２０：８８１（１９９７））。
【０２４０】
あるいは、本発明の抗体、抗体フラグメント、炭水化物、ビタミンおよび輸送タンパク質のような種々のターゲティングリガンドをリポソームの表面に結合させることができる。例えば、リポソームは肝細胞表面上で排他的に発現されるアシアロ糖タンパク質（ガラクトース）受容体をターゲティングするために分枝鎖型のガラクトシル脂質誘導体で修飾することができる（Ｋａｔｏ  ａｎｄ  Ｓｕｇｉｙａｍａ、Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｔｈｅｒ．Ｄｒｕｇ  Ｃａｒｒｉｅｒ  Ｓｙｓｔ．１４：２８７（１９９７）；Ｍｕｒａｈａｓｈｉ等、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２０：２５９（１９９７））。同様にＷｕ等のＨｅｐａｔｏｌｏｇｙ  ２７：７７２（１９９８）では、アシアロフェチュインでリポソームを標識することによりリポソームの結晶中半減期が短縮され、肝細胞によるアシアロフェチュイン標識リポソームの取り込みが大きく増強されている。一方、分枝鎖型のガラクトシル脂質誘導体を含むリポソームの肝蓄積はアシアロフェチュインの予備注射により抑制できる（Ｍｕｒａｈａｓｈｉ等、Ｂｉｏｌ．Ｐｈａｒｍ．Ｂｕｌｌ．２０：２５９（１９９７））。ポリアコチニル化ヒト血清アルブミンリポソームは肝細胞にリポソームをターゲティングするための別の方法を与える（Ｋａｍｐｓ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ’ｌ  Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９４：１１６８１（１９９７））。さらに、Ｇｅｈｏ等の米国特許第４，６０３，０４４号は、肝臓の特殊化された代謝細胞に関連する肝胆受容体に対する特異性を有する肝細胞指向型のリポソーム小胞送達系を記載している。
【０２４１】
組織ターゲティングのより一般的な方法においては、標的細胞を、標的細胞により発現されるリガンドに対して特異的なビオチニル化抗体で予め標識する（Ｈａｒａｓｙｍ等、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．３２：９９（１９９８））。遊離の抗体の血漿排除の後、ストレプトアビジン共役リポソームを投与する。別の方法においては、ターゲティング抗体を直接リポソームに結合させる（Ｈａｒａｓｙｍ等、Ａｄｖ．Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．３２：９９（１９９８））。
【０２４２】
本発明の抗体はタンパク質のマイクロカプセル化の標準的な手法を用いてリポソーム内にカプセル化できる（例えば、Ａｎｄｅｒｓｏｎ等、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．３１：１０９９（１９８１）、Ａｎｄｅｒｓｏｎ等、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．５０：１８５３（１９９０）、ａｎｄ  Ｃｏｈｅｎ等、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １０６３：９５（１９９１）、Ａｌｖｉｎｇ  等、「Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  ｏｆ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｔｕｄｉｅｓ」、ｉｎ  Ｌｉｐｏｓｏｍｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｖｏｌ．ＩＩＩ、Ｇｒｅｇｏｒｉａｄｉｓ（編）、ｐ．３１７（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ１９９３）、Ｗａｓｓｅｆ等、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．１４９：１２４（１９８７）参照）。上記した通り、治療上有用なリポソームは種々の成分を含有してよい。例えば、リポソームはポリ（エチレングリコール）の脂質誘導体を含んでよい（Ａｌｌｅｎ等、Ｂｉｏｃｈｉｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ａｃｔａ  １１５０：９（１９９３））。
【０２４３】
分解性重合体微小球は治療用タンパク質の高い全身レベルを維持するために設計されている。微小球は重合体内にタンパク質を捕獲する分解性重合体、例えば、ポリ（ラクチドコグリコリド）（ＰＬＧ）、ポリ無水物、ポリ（オルトエステル）、非生体分解性エチルビニルアセテート重合体から製造する（Ｇｏｍｂｏｔｚ  ａｎｄ  Ｐｅｔｔｉｔ、Ｂｉｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ  Ｃｈｅｍ．６：３３２（１９９５）；Ｒａｎａｄｅ、「Ｒｏｌｅ  ｏｆ  Ｐｏｌｙｍｅｒｓ  ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ」、ｉｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ｒａｎａｄｅ  ａｎｄ  Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ（編）ｐ．５１−９３（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ１９９５）；Ｒｏｓｋｏｓ  ａｎｄ  Ｍａｓｋｉｅｗｉｃｚ、「Ｄｅｇｒａｄａｂｌｅ  Ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  Ｒｅｌｅａｓｅ  Ｓｙｓｔｅｍｓ  Ｕｓｅｆｕｌ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ、ｉｎ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ：Ｐｈｙｓｉｃａｌ  Ｓｙｓｔｅｍｓ」、Ｓａｎｄｅｒｓ  ａｎｄ  Ｈｅｎｄｒｅｎ（編）ｐ．４５−９２（Ｐｌｅｎｕｍ  Ｐｒｅｓｓ１９９７）；Ｂａｒｔｕｓ等、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８１：１１６１（１９９８）；Ｐｕｔｎｅｙ  ａｎｄ  Ｂｕｒｋｅ、Ｎａｔｕｒｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  １６：１５３（１９９８）；Ｐｕｔｎｅｙ、Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．２：５４８（１９９８））。ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）コーティングされたナノ微小球もまた治療用タンパク質の静脈内投与のための担体を与えることができる（例えばＧｒｅｆ等、Ｐｈａｒｍ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１０：１６７（１９９７）参照）。
【０２４４】
他の剤型は、例えば、Ａｎｓｅｌ  ａｎｄ  Ｐｏｐｏｖｉｃｈ、Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ａｎｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、５版、（Ｌｅａ＆Ｆｅｂｉｇｅｒ  １９９０）、Ｇｅｎｎａｒｏ（編）、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ、１９版、（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ  １９９５）およびＲａｎａｄｅ  ａｎｄ  Ｈｏｌｌｉｎｇｅｒ、Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ（ＣＲＣ  Ｐｒｅｓｓ１９９６）に示される通り、当業者が考案できる。
【０２４５】
本発明は抗体がＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に結合する該抗体の組成物、および本明細書に記載したそのような抗体を含む方法および治療上の用途を意図している。そのような組成物はさらに担体を含むことができる。担体は従来の有機または無機の担体であることができる。担体の例は、水、緩衝溶液、アルコール、プロピレングリコール、マクロゴール、ゴマ油、コーン油などを包含する。
【０２４６】
本発明をさらに以下の非限定的実施例により説明する。
【実施例】
【０２４７】
（実施例１）
ＩＬ−１７ＦｍＲＮＡは喘息のマウスモデルにおいてアップレギュレートされる
ＩＬ−１７ＦｍＲＮＡレベルをマウスにおける感作および気道攻撃モデルにおいて測定した。８〜１０週齢のマウスの群を、第１および第７日において５０％Ｉｍｊｅｃｔ  Ａｌｕｍ（Ｐｉｅｒｃｅ）中の組み換えデルマトファゴイデス・プテロニシヌスノアレルゲン１（ＤｅｒＰ１）（Ｉｎｄｏｏｒ  ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｃａｒｄｉｆｆ、ＵＫ）１０ｕｇの腹腔内注射により感作した。７日後、５０ｕＬのＰＢＳ中のＤｅｒＰ１の２０ｕｇで連続３日間（第１４、１５および１６日）に攻撃した。この群を示すマウスは４匹とした。陰性対照には、リン酸塩緩衝食塩水（ＰＢＳ）感作を行い、後にＰＢＳ攻撃を行ったマウス５匹とした。さらに、マウス３匹にＤｅｒＰ１感作を行った後、ＰＢＳ攻撃を行った。アレルゲンまたは対照の攻撃の４８時間後、全肺組織を採取し、全ＲＮＡを単離した。
【０２４８】
第１の鎖のｃＤＮＡは各被験体由来の全ＲＮＡの同一量を用いて製造した。ＩＬ−１７ＦＰＣＲはＱｉａｇｅｎのホットスターポリメラーゼ（Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）および製造元の推奨事項を用いて適用した。ＩＬ−１７Ｆ  ＰＣＲではセンスプライマーｚｃ４６０９８（配列番号９）およびアンチセンスプライマーｚｃ４６０９９（配列番号１０）を用いながら、増幅３５サイクルを行った。鋳型の品質が全被験体中で均一になるように、ベータアクチンＰＣＲをＩＬ−１７Ｆ増幅において使用した各鋳型の同じ量に対して適用した。ＢアクチンＰＣＲでは、センスプライマーｚｃ４４７７９（配列番号１１）およびアンチセンスプライマーｚｃ４４７７６（配列番号１２）を用いながらＰＣＲ２５サイクルを行った。
【０２４９】
ＤｅｒＰ１感作ＤｅｒＰ１攻撃投与群（喘息刺激）の全４匹のマウスは、頑健なＩＬ−１７Ｆ増幅を示した。これとは対照的に、ＤｅｒＰ１感作／ＰＢＳ攻撃投与群に相当する３被験体中３例およびＰＢＳ感作／ＰＢＳ攻撃投与群に相当する５被験体中５例を含む陰性対照からは弱いＩＬ−１７Ｆ増幅が観察された。Ｂアクチン増幅は、少なくとも、陰性対照の場合も喘息刺激被験体の場合と同様に頑健であり、弱い陰性対照ＩＬ−１７Ｆ増幅は鋳型の問題によるものではなかったことが示された。
【０２５０】
（実施例２）
ＩＬ−１７Ａはヒト末梢血単核細胞においてＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αの上昇したレベルを誘導する
ヒト末梢血単核細胞（ＰＢＭＣ）をフィコール密度勾配遠心分離により精製し、次に培地のみ、５０ｎｇ／ｍＬ抗ヒトＣＤ３抗体、または５０ｎｇ／ｍＬ抗ヒトＣＤ３抗体＋１□ｇ／ｍＬの抗ヒトＣＤ２８抗体中で３７℃において一晩インキュベートした。これらの条件の各々につき重複培養を設定し、サイトカイン無添加、２５ｎｇ／ｍＬヒトＩＬ−１７Ａまたは２５ｎｇ／ｍＬヒトＩＬ−１７Ｆを与えた。２４時間インキュベートした後、各培地から上澄みを採取し、Ｂ−Ｄ  ＢｉｏｓｃｉｅｎｃｅのヒトＴｈ１／Ｔｈ２サイトメトリックビーズアレイ（ＣＢＡ）を用いながらサイトカイン含有量を試験した。本発明者等は、抗ＣＤ３または抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８のいずれかで刺激され、ＩＬ−１７Ａを添加されていた培養物が、サイトカイン無添加の培養物またはＩＬ−１７Ｆを添加したものを越えて、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αの有意に上昇したレベル（各々３〜５倍の上昇）を含有していたことを観察している。抗ＣＤ３刺激を行わなかった培養物はサイトカインレベルの有意な変化を示さなかった。さらにまた、ＩＬ−１７Ａの添加は、ＩＬ−２、ＩＬ−４、ＩＬ−５およびＩＬ−１０を含め、ＣＢＡを用いて試験した他のサイトカインの有意な変化を誘導しなかった。このデータは、ＩＬ−１７Ｆとは異なり、ＩＬ−１７Ａは抗ＣＤ３または抗ＣＤ３＋抗ＣＤ２８で刺激したＰＢＭＣ培地において、ＩＦＮ−γおよびＴＮＦ−αの産生を増強できることを示している。
【０２５１】
（実施例３）
抗ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体はマウスコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）モデルにおいて疾患の発生率および進行を低下させる
Ａ）マウスコラーゲン誘導関節炎（ＣＩＡ）モデル
１０週齢の雄性ＤＢＡ／１Ｊマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｓ）を１３匹／群の３群に分割した。第２１日目において、動物に完全フロイントアジュバント（Ｃｈｏｎｄｒｅｘ、Ｒｅｄｍｏｎｄ、ＷＡにより製造）中に製剤した１ｍｇ／ｍＬニワトリＩＩ型コラーゲン５０〜１００μＬを皮内尾部注射し、３週間後、第０日目に不完全フロイントアジュバント中に製造した以外は同様の注射を行った。本発明の抗体（例えば、交差反応抗体または二重特異性抗体）を第０日目からマウスの大多数が中等度の疾患兆候を示す日までの範囲の異なる時点において、４週間週３回、腹腔内注射として投与した。群には用量当たり動物当たり抗体１０または１０００μｇのいずれかを投与し、対照群にはビヒクル対照であるＰＢＳ（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ、Ｒｏｃｋｖｉｌｌｅ、ＭＤ）を投与した。動物は、第２のコラーゲン注射ののちに関節炎の症状を示し始め、１．５〜３週間以内に大部分の動物が炎症を発生させた。疾患の範囲は各肢においてカリパスを用いて肢の厚みを測定し、各肢に臨床スコア（０〜３）、すなわち、後に詳述する通り、０＝正常、０．５＝踵炎症、１＝軽度の肢炎症、２＝中等度の肢炎症、そして３＝重度の肢炎症を割り付けることにより評価した。
【０２５２】
Ｂ）疾患のモニタリング
動物は第２のコラーゲン注射の後早期に肢炎症の兆候を示し始めることができるが、一部の動物は第２のコラーゲン注射よりも前であっても炎症兆候を有し始める場合がある。大部分の動物は、ブースト注射の１．５〜３週間以内に関節炎を発症するが、一部はより長い時間を必要とする場合がある。このモデルにおける疾患の発生率は、典型的には９５〜１００％であり、４０匹を使用する試験においては典型的には０〜２の非応答個体（観察６週間後に測定）が観察される。留意すべき点として、炎症開始時には共通して変動性の低等級の肢または踵の炎症の共通な一過性の発生が起こる場合がある。この理由のために、動物は顕著で持続性の肢の浮腫が発生するまでは疾患を樹立しているともなしてはならない。
【０２５３】
全動物を毎日観察することによりそれらの肢における疾患の状態を評価し、これは肢の各々に対して定性的な臨床スコアを割り付けることにより実施する。毎日、各動物はその４肢を臨床疾患のその状態に従って、スコア付けされる。臨床スコアを求めるためには、肢は３区域、すなわち、踵、肢自体（手または足）および手首足首関節を有するものとみなすことができる。これらの区域に関する炎症の範囲および重症度、例えば、浮腫に関する各踵の観察；裂傷のある爪または踵の紅潮；肢のいずれかにおける浮腫または紅潮のいずれかの兆候の記録；腱または骨の微細な解剖学的分界のいずれかの損失の記録；いずれかの浮腫または紅潮に関する手首または足首の評価；および炎症が足より近位に上昇して伸張しているかどうかの記録を記録する。１、２または３の肢スコアは第１には重症度の全体的印象に基づき、第２にはどの程度多くの区域が含まれるかに基づく。臨床スコア付けのために使用する尺度は以下に記載する。
【０２５４】
Ｃ）臨床スコア
０＝正常
０．５＝１つ以上の踵に発生、ただし踵のみが炎症
１＝肢（１区域）に軽度の炎症発生、踵を含む場合がある
２＝肢に中等度の炎症発生、一部の踵および／または手首／足首（２区域）を含む場合がある
３＝肢、手首／足首および一部または全ての踵（３区域）に重度の炎症。
【０２５５】
確立した疾患は、連続２日間持続する肢炎症順位２以上の定量的スコアとして定義される。確立した疾患が存在した場合、日付を記録し、「確立した疾患」を有するその動物の初日として表記する。
【０２５６】
抗コラーゲン抗体の血清中レベルならびに血清中免疫グロブリンおよびサイトカインのレベルをモニタリングするために実験期間中を通じて採血する。血清中抗コラーゲン抗体は疾患の重度に明確に相関している。動物は第２１日目に安楽死させ、採血して血清およびＣＢＣを得る。各動物から罹患した肢１つを１０％ＮＢＦ中に採取し、組織学的分析に付し、１つは液体窒素中に凍結させ、−８０℃で保存してｍＲＮＡ分析に付す。さらに、１／２脾臓、１／２胸腺、１／２腸間膜リンパ節、１肝葉および左腎臓をＲＮＡｌａｔｅｒに採取してＲＮＡ分析に付し、１／２脾臓、１／２胸腺、１／２腸間膜リンパ節、残余の肝臓および右腎臓は１０％ＮＢＦ中に採取して組織学的分析に付す。血清を採取し、−８０℃で保存して免疫グロブリンおよびサイトカインの試験に付す。
【０２５７】
全ての時点において、本発明の抗体を投与されたマウスの群は肢の炎症の発症および／または進行における遅延を特徴とする。これらの結果は、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ交差反応性および／または二重特異性抗体が炎症ならびにこのモデルに関連する疾患の発生率および進行を低減できることを示している。これらの結果はさらに、このような抗体の投与が血清中のＴＮＦα、ＩＬ−１ｂおよび抗コラーゲン抗体の低下したレベルをもたらしたという観察結果によっても裏付けられている。
【０２５８】
（実施例４）
抗ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体は炎症性腸疾患（ＩＢＤ）モデルにおいて疾患の発生率および進行を低下させる
本モデルはＩＢＤ患者由来の培養腸組織が健常者対照由来の組織に比較した場合に炎症メディエーターの高値のレベルをもたらすことを示すように設計されている。この増強された炎症メディエーター（例えば、限定しないが、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７ＡおよびＦ、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−α、ＩＦＮ−ｇ、ＭＩＰファミリーメンバー、ＭＣＰ−１、Ｇ−およびＧＭ−ＣＳＦなど）の産生は、炎症経路および下流のエフェクター細胞を活性化させることに対するそれらの作用によりクローン病（ＣＤ）および潰瘍性結腸炎（ＵＣ）などのＩＢＤに関連する症状および病理学的特徴に寄与する。これらの経路および成分は次にインビボにおいて観察される組織および細胞の損傷／破壊をもたらす。したがって、このモデルはＩＢＤのこの増強された炎症メディエーターの特徴を模倣することができる。さらに、健常者対照由来またはヒト腸上皮細胞（ＩＥＣ）系統由来の腸組織をこれらの炎症性分の存在下に培養すると、炎症経路シグナリングならびに組織および細胞の損傷の兆候が観察できる。
【０２５９】
インビボでヒトＩＢＤにおいて有効である治療薬は、炎症メディエーターの産生および／または存在を抑制および／または中和することにより上記エクスビボまたはＩＥＣモデルにおいても機能すると考えられる。
【０２６０】
このモデルにおいて、ヒト腸組織をＩＢＤ患者から、または腸生検、再切片化を受けた健常者対照から、または死後の組織収集物から採取し、Ａｌｅｘａｋｉｓ等の変法を用いて処理した（Ｇｕｔ５３：８５−９０；２００４）。無菌条件下で試料を穏やかに多量のＰＢＳで洗浄し、次に完全組織培地（＋最近の過剰生育を防止するための抗生物質）の存在下で組織の粉砕切片化物を培養する。粉砕組織の同じプールに由来する試料に以下の物質、すなわち、ビヒクル（ＰＢＳ）；組み換えヒト（ｒｈ）ＩＬ−１７Ａ；ｒｈＩＬ−１７Ｆ；またはｒｈＩＬ−１７Ａ＋ｒｈＩＬ−１７Ｆのうちの１つを投与する。さらに、これらに本発明の抗体（例えば、交差反応性または二重特異性の抗体）を投与または未投与とする。この実験プロトコルは細胞を既存の保存株から継代することを除きヒトＩＥＣ系統に関する試験に従っている。種々の時間の培養（１〜数日間）の後、上澄みを収集し、上記したものを包含する炎症メディエーターのレベルに関して分析する。ＩＢＤ患者由来の試料において、または、ｒｈＩＬ−１７Ａおよび／またはＦを投与した試料において、炎症性のサイトカインおよびケモカインのレベルは未投与健常者対照組織試料と比較して上昇している。本発明の抗体の添加は炎症メディエーターの産生を顕著に低減し、このため、ヒトＩＢＤにおいて有効であることが期待される。
【０２６１】
（実施例５）
抗ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体は多発性硬化症（ＭＳ）モデルにおいて疾患の発生率および進行を低下させる
多発性硬化症（ＭＳ）は、リンパ球および単核細胞の炎症性浸潤の存在およびＣＮＳ全体に渡る脱髄を包含する多くの要因により媒介されると考えられている複雑な疾患である。小神経膠細胞は中枢神経系（ＣＮＳ）に居留し、傷害または感染により活性化されるマクロファージ様細胞である。小神経膠細胞はＭＳを包含する種々のＣＮＳ疾患において重要な役割を果たしていることが示唆されており、疾患の開始、進行および治療の機構を試験するために使用してよい（Ｎａｇａｉ等、Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ  Ｄｉｓ８：１０５７−１０６８；２００１；Ｏｌｓｏｎ等、Ｊ  Ｎｅｕｒｏｓｃｉ  Ｍｅｔｈｏｄｓ１２８：３３−４３；２００３）。したがって、不死化ヒト小神経膠細胞の細胞系統および／または確立したヒト大グリア細胞の細胞系統はこれらの細胞型に対する炎症メディエーターの作用の一部、および、それらによる中和の潜在性に関して試験するために使用できる。炎症メディエーター（例えば、限定しないが、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７ＡおよびＦ、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−ａ、ＩＦＮ−ｇ、ＭＩＰファミリーメンバー、ＲＡＮＴＥＳ、ＩＰ−１０、ＭＣＰ−１、Ｇ−およびＧＭ−ＣＳＦなど）は炎症経路および下流のエフェクター細胞を活性化させることに対するそれらの作用によりＭＳに関連する症状および病理学的特徴に寄与することができる。
【０２６２】
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの炎症性作用およびこれらの作用を中和または低下させる本発明の抗体の能力を評価するために、培養されたグリア細胞に以下の物質、すなわち、ビヒクル；ｒｈＩＬ−１７Ａ；ｒｈＩＬ−１７Ｆ；ｒｈＩＬ−１７Ａ＋ＩＬ−１７Ｆのうちの１つを投与する。さらに、これらに本発明の抗体を投与または未投与とする。種々の時間の培養（１〜数日間）の後、上澄みおよび細胞を収集し、上記したものを包含する炎症メディエーターのレベルおよび／または発現に関して分析する。炎症性のサイトカインおよびケモカインのレベルはビヒクル単独を投与した培養物と比較してｒｈＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆの存在下で上昇している。本発明の抗体の添加は炎症メディエーターの産生および発現を顕著に低減し、このため、ヒトＭＳに関連する炎症の特徴において有効であることが期待される。
【０２６３】
（実施例６）
抗ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗体は関節リウマチ（ＲＡ）および骨関節炎（ＯＡ）モデルにおいて疾患の発生率および進行を低下させる
このモデルはヒト滑膜培養物（滑膜マクロファージ、滑膜線維芽細胞、および関節軟骨細胞）およびＲＡおよびＯＡを有する患者に由来する外移植片が健常者対照に由来する培養物／外移植片と比較した場合に炎症メディエーターの高値のレベルをもたらすことを示すように設計されている。炎症メディエーター（例えば、限定しないが、オンコスタチンＭ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７ＡおよびＦ、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−ａ、ＩＦＮ−ｇ、ＩＰ−１０、ＲＡＮＴＥＳ、ＲＡＮＫＬ、ＭＩＰファミリーメンバー、ＭＣＰ−１、Ｇ−およびＧＭ−ＣＳＦ、酸化窒素など）のこの増強された産生は、炎症経路および下流のエフェクター細胞を活性化させることに対するそれらの作用によりＲＡおよびＯＡに関連する症状および病理学的特徴に寄与している。これらの経路および成分が次に炎症浸潤、軟骨およびマトリックスの損失／破壊、骨損失およびプロスタグランジンおよびシクロオキシゲナーゼをアップレギュレートさせる。したがって、このモデルはインビトロおよびエクスビボの実験におけるＲＡおよびＯＡの破壊性炎症特徴を模倣することができる。さらに、健常者対照に由来する外移植片および滑膜培養物をこれらの炎症性分（オンコスタチンＭ、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１７ＡおよびＦ、ＩＬ−１５）の数種の存在下に培養したところ、炎症経路シグナリングが観察できる。インビボでヒトＲＡにおいて有効である治療薬は、炎症メディエーターの産生および／または存在を抑制および／または中和することにより上記インビトロおよびエクスビボのモデルにおいて機能すると考えられる。
【０２６４】
このモデルにおいて、ヒト滑膜外移植片をＲＡ、ＯＡ患者から、または関節移植を受けた健常者対照から、または、死後の組織収集物から採取し、ＷｏｏｌｅｙとＴｅｔｌｏｗ（Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｅｓ  ２：６５−７０；２０００）およびｖａｎ’ｔＨｏｆ等（Ｒｈｅｕｍａｔｏｌｏｇｙ  ３９：１００４−１００８；２０００）の変法を用いて処理する。滑膜線維芽細胞、滑膜マクロファージおよび関節軟骨細胞の培養物もまた試験する。多連とした試料に以下の物質、すなわち、ビヒクル（ＰＢＳ）；組み換えヒト（ｒｈ）ＩＬ−１７Ａ；ｒｈＩＬ−１７Ｆ；またはｒｈＩＬ−１７Ａ＋ｒｈＩＬ−１７Ｆのうちの１つを投与し、一部の試料には種々の組み合わせのオンコスタチンＭ、ＴＮＦ−ａ、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−６、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１５を含有させた。さらに、これらに本発明の抗体を投与または未投与とする。種々の時間の培養（１〜数日間）の後、上澄みを収集し、上記したものを包含する炎症メディエーターのレベルに関して分析する。ＲＡまたはＯＡの患者に由来する試料において、または、ｒｈＩＬ−１７Ａおよび／またはＦ（単独または他の炎症サイトカインとの組み合わせ）を投与した試料において、炎症性のサイトカインおよびケモカインのレベルは未投与の健常者対照外移植片および未投与の細胞培養物と比較して上昇している。本発明の抗体の添加は炎症メディエーターの産生を顕著に低減し、このため、ヒトＲＡおよびＯＡにおいて有効であることが期待される。
【０２６５】
（実施例７）
マウス疾患モデルにおけるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの発現
疾患（喘息、ＤＳＳ結腸炎、アトピー性皮膚炎および実験的アレルギー性脳脊髄炎）の４つのマウスモデルをＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの発現に関する知られた手法を用いて分析した。
【０２６６】
喘息モデルにおいて、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆは疾患および非疾患のマウスにおいて肺、脾臓、肺連絡リンパ節および肺浸潤細胞中では極めて低値であるか検出不能なレベルにおいて発現される。
【０２６７】
喘息モデルとは逆に、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７ＦはＤＳＳ結腸炎モデルの近位および遠位の両方の結腸において、罹患マウスでは高度にアップレギュレートされるが、正常マウスではされなかった。何れのサイトカインも腸間膜リンパ節では有意にアップレギュレートされなかった。さらに、急性ＤＳＳ誘導結腸炎の範囲においては両方のサイトカインのアップレギュレーションが観察されたが慢性ＤＳＳ誘導結腸炎では観察されなかった。
【０２６８】
アトピー性皮膚炎において、ＩＬ−１７ＡｍＲＮＡは検出されなかった。ＩＬ−１７Ｆは皮膚および皮膚連絡リンパ節の両方において発現されたが、疾患により有意に調節されているようには観察されなかった。
【０２６９】
実験的アレルギー性脳脊髄炎においては、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方が疾患マウスの脊髄においてアップレギュレートされるように観察されたが、健常マウスでは観察されなかった。ＩＬ−１７Ｆは脊髄と比較してリンパ節においてより高度に発現されていたが、リンパ節における発現は疾患により調節されなかった。しかしながら、これらの組織における発現の全体的レベルは極めて低値であった。
【０２７０】
慨すれば、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの発現は、ＤＳＳ誘導結腸炎および実験的アレルギー性脳脊髄炎に場合には疾患により調節されると観察されたが、喘息およびアトピー性皮膚炎ではそのような観察所見はなかった。
【０２７１】
（実施例８）
ヒトＩＬ−１７ＡおよびＦに関するＥ．ｃｏｌｉ発現ベクターの構築。
【０２７２】
ＩＬ−１７Ａ
ｐＣＨＡＮ２８の構築
ヒトＩＬ−１７Ａ発現構築物を以下の通り作成した。未変性のＩＬ−１７Ａの配列は、２つのオリゴヌクレオチドプライマーｚｃ４８，６８６（配列番号１３）およびｚｃ４８，６８５（配列番号１４）を用いたＰＣＲ増幅により作成した。ＰＣＲ条件は以下の通り、すなわち、２５サイクルにおいて、９４℃３０秒、５０℃３０秒、および７２℃１分；その後の４℃浸積とした。ＤＮＡフラグメントは２容量の無水エタノールで沈殿させた。ペレットを１０μＬのＨ２Ｏに再懸濁し、ＳｍａＩ切断レシピエントベクターｐＴＡＰ２３８内への組み換えのために使用することにより、ヒトＩＬ−１７Ａをコードする構築物を作成した。得られたクローンはｐＣＨＡＮ２８と命名した。それらをＮｏｔＩ（１０μＬＤＮＡ、５μＬ緩衝液３Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ、２μＬのＮｏｔＩ、３３μＬのＨ２Ｏ、１時間３７℃）で消化し、再ライゲーションはＴ４ＤＮＡリガーゼ緩衝液（７μＬの前回の消化物、２μＬの５Ｘ緩衝液、１μＬのＴ４ＤＮＡリガーゼ）を用いて行った。この工程により酵母の配列ＣＥＮ−ＡＲＳが除去され、ベクターが流線型化した。ＤＮＡの小分量をＰｖｕ２およびＰｓｔＩで消化することにより酵母配列の非存在を確認した。ヒトＩＬ−１７Ａ発現構築物をＥ．ｃｏｌｉ菌株Ｗ３１１０内に形質転換した。ヒトＩＬ−１７Ａに関するポリヌクレオチド配列は配列番号５に示す通りであり、相当するコードされたＩＬ−１７Ａポリペプチドは配列番号６に示す。
【０２７３】
ＩＬ−１７Ｆ
ｐＴＡＰ４１９の構築
ヒトＩＬ−１７Ｆ発現構築物を以下の通り作成した。未変性のＩＬ−１７Ｆの配列は２つのオリゴヌクレオチドプライマーｚｃ４２，８５２（配列番号１５）およびｚｃ４２，８５４（配列番号１６）を用いたＰＣＲ増幅により作成した。ＰＣＲ条件は以下の通り、すなわち、２５サイクルにおいて、９４℃３０秒、５０℃３０秒、および７２℃１分；その後の４℃浸積とした。ＤＮＡフラグメントは２容量の無水エタノールで沈殿させた。ペレットを１０μＬのＨ２Ｏに再懸濁し、ＳｍａＩ切断レシピエントベクターｐＴＡＰ２３８内への組み換えのために使用することにより、ヒトＩＬ−１７Ｆをコードする構築物を作成した。得られたクローンはｐＴＡＰ４１９と命名した。それらをＮｏｔＩ（１０μＬのＤＮＡ、５μＬの緩衝液３Ｎｅｗ  Ｅｎｇｌａｎｄ  ＢｉｏＬａｂｓ、２μＬのＮｏｔＩ、３３μＬのＨ２Ｏ、１時間３７℃）で消化し、そして再ライゲーションはＴ４ＤＮＡリガーゼ緩衝液（７μＬの前回の消化物、２μＬの５Ｘ緩衝液、１μＬのＴ４ＤＮＡリガーゼ）を用いて行った。この工程により酵母の配列ＣＥＮ−ＡＲＳが除去され、ベクターが流線型化した。ＤＮＡの小分量をＰｖｕ２およびＰｓｔＩで消化することにより酵母配列の非存在を確認した。ヒトＩＬ−１７Ｆ発現構築物をＥ．ｃｏｌｉ菌株Ｗ３１１０内に形質転換した。ヒトＩＬ−１７Ｆに関するポリヌクレオチド配列は配列番号７に示す通りであり、相当するコードされたＩＬ−１７Ｆポリペプチドは配列番号８に示す。
【０２７４】
（実施例９）
Ｅ．ｃｏｌｉにおけるＩＬ−１７Ａの発現
ｐＩＬ１７ＡＣＨ６を含有する発現プラスミドをヒトＩＬ１７ＡＣＨ６および発現ベクターｐＺＭＰ２０を用いながら相同組み換えを介して構築した。フラグメントはプライマーｚｃ４８８９５（配列番号１７）およびｚｃ４８８９３（配列番号１８）を用いたＰＣＲ増幅により作成した。ＰＣＲフラグメントＩＬ１７ＡＣＨ６は、鋳型としてヒトＩＬ１７Ａを用いながら作成したＣ末端上で６ｘＨｉｓタグに融合したＩＬ１７Ａコーディング領域を含有する。フラグメントは、挿入点においてｐＺＭＰ２０ベクター配列と５’オーバーラップならびにｐＺＭＰ２０ベクターと３’オーバーラップを包含している。ＰＣＲ条件は以下の通り、すなわち、１サイクルにおいて、９４℃５分；３５サイクルにおいて、９４℃１分、その後５５℃２分、その後７２℃３分；１サイクルにおいて、７２℃１０分とした。ＰＣＲ反応混合物は１％アガロースゲル上で泳動し、インサートのサイズに相当するバンドをＱＩＡｑｕｉｃｋＴＭゲルエキストラクションキット（Ｑｉａｇｅｎ、Ｃａｔ．Ｎｏ．２８７０４）を用いてゲル抽出した。
【０２７５】
プラスミドｐＺＭＰ２０は、ＣＭＶプロモーター、コーディング配列の挿入のための多数の制限部位、ｏｔＰＡシグナルペプチド配列（この場合には組み換えを介して除去される）を有する発現カセット；ポリオウィルス由来の内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）エレメント、および膜貫通ドメインのＣ末端においてトランケーションされたＣＤ８の細胞外ドメイン；Ｅ．ｃｏｌｉの複製起点；ＳＶ４０プロモーター、エンハンサーおよび複製起点、ＤＨＦＲ遺伝子、およびＳＶ４０ターミネーターを含む哺乳類選択可能マーカー発現単位；およびＳ・セレビシアエの選択および複製のために必要なＵＲＡ３およびＣＥＮ−ＡＲＳ配列を含有する哺乳類発現ベクターである。プラスミドｐＺＭＰ２０をＢｇｌＩＩで切断（挿入点を作成）した後に、ＰＣＲフラグメントで酵母を組み換えた。コンピテントの酵母（Ｓ・セレビシアエ）細胞１００マイクロリットルを独立して、１０μＬのインサートＤＮＡおよび１００ｎｇの切断ｐＺＭＰ２０ベクターと組み合わせ、混合物を０．２ｃｍのエレクトロポレーションキュベットベットに移した。酵母／ＤＮＡ混合物を０．７５ｋＶ（５ｋＶ／ｃｍ）、無限大オームおよび２５μＦの設定で電源（ＢｉｏＲａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）を用いてエレクトロポレーションに付した。６００μＬの１．２Ｍソルビトールをキュベットに添加し、２枚のＵＲＡ−Ｄプレート上に１００μＬおよび３００μＬの小分量ずつプレーティングし、３０℃でインキュベートした。約７２時間の後、単一のプレートに由来するＵｒａ＋酵母形質転換体を１ｍＬのＨ２Ｏに再懸濁し、短時間遠心分離することにより酵母細胞をペレット化した。細胞ペレットを溶解緩衝液（２％トリトンＸ−１００、１％  ＳＤＳ、１００ｍＭＮａＣｌ、１０ｍＭＴｒｉｓ、ｐＨ８．０、１ｍＭＥＤＴＡ）０．５ｍＬに再懸濁した。５００μＬの溶解混合物を２５０μＬの酸洗浄ガラスビーズおよび３００μＬのフェノールクロロホルムの入ったエッペンドルフ試験管に添加し、３分間回転混合し、最高速度においてエッペンドルフ遠沈管中で５分間遠心分離した。水層３００マイクロリットルを新しい試験管に移し、ＤＮＡを６００μＬのエタノール（ＥｔＯＨ）で沈殿させ、その後最大速度で３０分間遠心分離した。試験管を傾斜し、ペレットを１ｍＬの７０％エタノールで洗浄した。試験管を傾斜し、ＤＮＡペレットを３０μＬのＴＥに再懸濁した。
【０２７６】
エレクトロコンピテントなＥ．ｃｏｌｉ宿主細胞（ＤＨ１２Ｓ）の形質転換は５μＬの酵母ＤＮＡプレパレーションおよび５０μＬの細胞を用いて実施した。細胞を２．０ｋＶ、２５μＦおよび４００オームにおいて電気パルスに付した。エレクトロポレーションの後１ｍＬのＳＯＣ（２％ＢａｃｔｏＴＭトリプトン（Ｄｉｆｃｏ、Ｄｅｔｒｏｉｔ、ＭＩ）、０．５％酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ）、１０ｍＭＮａＣｌ、２．５ｍＭＫＣｌ、１０ｍＭＭｇＣｌ２、１０ｍＭＭｇＳＯ４、２０ｍＭグルコース）を添加し、次に、細胞を２枚のＬＢＡＭＰプレート（ＬＢブロス（Ｌｅｎｎｏｘ）、１．８％ＢａｃｔｏＴＭ寒天（Ｄｉｆｃｏ）、１００ｍｇ／Ｌアンピシリン）上に５０μＬおよび２００μＬの小分量ずつでプレーティングした。
【０２７７】
構築物に対する３つのクローンのインサートを配列分析に付し、正しい配列を含有する各構築物につき１つのクローンを選択した。より大きい規模のプラスミドＤＮＡは市販のキット（ＱＩＡＧＥＮプラスミドメガキット、Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）を用いながら製造元の説明書に従って単離した。
【０２７８】
ｐＩＬ１７ＡＣＨ６の発現は一過性のトランスフェクションを介して実施した。６本の１０００ｍＬ容フラスコに１Ｅ６ｃ／ｍＬで２９３Ｆ細胞２５０ｍＬを播種し、静置した。ＯｐｔｉＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ｃａｔ＃３１９８５−０７０）を２本の５０ｍＬ容のコニカル試験管の各々に入れた。２ｍＬのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｔｉｒｏｇｅｎ、ｃａｔ＃１１６６８−０１９）をＯｐｔｉＭＥＭの入った５０ｍＬのコニカル試験管の一方に混合し、ＩＬ１７ＡＣＨ６ｐＺＭＰ２０発現プラスミド１．５ｍｇを他方の試験管に入れた。試験管を数回反転させ、室温で５分間インキュベートした。次に２つの試験管を友に混合し、数回反転させ、室温で３０分間インキュベートした。次にＤＮＡリポフェクタミン２０００混合物を６本のフラスコの各々に均一に分配し、その間、細胞培養物の攪拌を継続した。次にフラスコを３７℃、６％ＣＯ２において振とう器上のインキュベーター内に入れ、１２０ＲＰＭで振とうした。培養物は９６時間後に回収した。
【０２７９】
（実施例１０）
Ｅ．ｃｏｌｉにおけるＩＬ−１７Ｆの発現
ｐＩＬ１７ＦＣＨ６を含有する発現プラスミドをヒトＩＬ１７ＦＣＨ６および発現ベクターｐＺＭＰ２０を用いながら相同組み換えを介して構築した。フラグメントはプライマーｚｃ４８８９４（配列番号１９）およびｚｃ４８８９２（配列番号２０）を用いたＰＣＲ増幅により作成した。ＰＣＲフラグメントＩＬ１７ＦＣＨ６は、鋳型としてヒトＩＬ１７Ｆの以前に作成されたクローンを用いながら作成したＣ末端上で６ｘＨｉｓタグに融合したＩＬ１７Ｆコーディング領域を含有する。フラグメントは、挿入点においてｐＺＭＰ２０ベクター配列と５’オーバーラップならびにｐＺＭＰ２０ベクターと３’オーバーラップを包含している。ＰＣＲ条件は以下の通り、すなわち、１サイクルにおいて、９４℃５分；３５サイクルにおいて、９４℃１分、その後５５℃２分、その後７２℃３分；１サイクルにおいて、７２℃１０分とした。ＰＣＲ反応混合物は１％アガロースゲル上で泳動し、インサートのサイズに相当するバンドをＱＩＡｑｕｉｃｋＴＭゲルエキストラクションキット（Ｑｉａｇｅｎ、Ｃａｔ．Ｎｏ．２８７０４）を用いてゲル抽出した。
【０２８０】
プラスミドｐＺＭＰ２０はＣＭＶプロモーター、コーディング配列の挿入のための多数の制限部位、ｏｔＰＡシグナルペプチド配列（この場合には組み換えを介して除去される）を有する発現カセット；ポリオウィルス由来の内部リボソーム進入部位（ＩＲＥＳ）エレメント、および膜貫通ドメインのＣ末端においてトランケーションされたＣＤ８の細胞外ドメイン；Ｅ．ｃｏｌｉの複製起点；ＳＶ４０プロモーター、エンハンサーおよび複製起点、ＤＨＦＲ遺伝子、およびＳＶ４０ターミネーターを含む哺乳類選択可能マーカー発現単位；およびＳ・セレビシアエの選択および複製のために必要なＵＲＡ３およびＣＥＮ−ＡＲＳ配列を含有する哺乳類発現ベクターである。
【０２８１】
プラスミドｐＺＭＰ２０をＢｇｌＩＩで切断（挿入点を作成）した後に、ＰＣＲフラグメントで酵母を組み換えた。コンピテントの酵母（Ｓ・セレビシアエ）細胞１００マイクロリットルを独立して１０μＬのインサートＤＮＡおよび１００ｎｇの切断ｐＺＭＰ２０ベクターと組み合わせ、そして混合物を０．２ｃｍのエレクトロポレーションキュベットベットに移した。酵母／ＤＮＡ混合物を０．７５ｋＶ（５ｋＶ／ｃｍ）、無限大オームおよび２５μＦの設定で電源（ＢｉｏＲａｄ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｈｅｒｃｕｌｅｓ、ＣＡ）を用いてエレクトロポレーションに付した。６００μＬの１．２Ｍソルビトールをキュベットに添加し、２枚のＵＲＡ−Ｄプレート上に１００μＬおよび３００μＬの小分量ずつプレーティングし、３０℃でインキュベートした。約７２時間の後、単一のプレートに由来するＵｒａ＋酵母形質転換体を１ｍＬのＨ２Ｏに再懸濁し、短時間遠心分離することにより酵母細胞をペレット化した。細胞ペレットを溶解緩衝液（２％トリトンＸ−１００、１％ＳＤＳ、１００ｍＭＮａＣｌ、１０ｍＭＴｒｉｓ、ｐＨ８．０、１ｍＭＥＤＴＡ）０．５ｍＬに再懸濁した。５００マイクロリットルの溶解混合物を２５０μＬの酸洗浄ガラスビーズおよび３００μＬのフェノールクロロホルムの入ったエッペンドルフ試験管に添加し、３分間回転混合し、最高速度においてエッペンドルフ遠沈管中で５分間遠心分離した。水層３００マイクロリットルを新しい試験管に移し、ＤＮＡを６００μＬのエタノール（ＥｔＯＨ）で沈殿させ、その後最大速度で３０分間遠心分離した。試験管を傾斜し、ペレットを１ｍＬの７０％エタノールで洗浄した。試験管を傾瀉し、ＤＮＡペレットを３０μＬのＴＥに再懸濁した。
【０２８２】
エレクトロコンピテントなＥ．ｃｏｌｉ宿主細胞（ＤＨ１２Ｓ）の形質転換は５μＬの酵母ＤＮＡプレパレーションおよび５０μＬの細胞を用いて実施した。細胞を２．０ｋＶ、２５μＦおよび４００オームにおいて電気パルスに付した。エレクトロポレーションの後１ｍＬのＳＯＣ（２％ＢａｃｔｏＴＭトリプトン（Ｄｉｆｃｏ、Ｄｅｔｒｏｉｔ、ＭＩ）、０．５％酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ）、１０ｍＭＮａＣｌ、２．５ｍＭＫＣｌ、１０ｍＭＭｇＣｌ２、１０ｍＭＭｇＳＯ４、２０ｍＭグルコース）を添加し、次に、細胞を２枚のＬＢＡＭＰプレート（ＬＢブロス（Ｌｅｎｎｏｘ）、１．８％ＢａｃｔｏＴＭ寒天（Ｄｉｆｃｏ）、１００ｍｇ／Ｌアンピシリン）上に５０μＬおよび２００μＬの小分量ずつでプレーティングした。
【０２８３】
構築物に対する３クローンのインサートを配列分析に付し、正しい配列を含有する各構築物につき１クローンを選択した。より大きい規模のプラスミドＤＮＡは市販のキット（ＱＩＡＧＥＮプラスミドメガキット、Ｑｉａｇｅｎ、Ｖａｌｅｎｃｉａ、ＣＡ）を用いながら製造元の説明書に従って単離した。
【０２８４】
ｐＩＬ１７ＦＣＨ６の発現は一過性のトランスフェクションを介して実施した。６本の１０００ｍＬ容フラスコに１Ｅ６ｃ／ｍＬで２９３Ｆ細胞２５０ｍＬを播種し、静置した。ＯｐｔｉＭＥＭ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、ｃａｔ＃３１９８５−０７０）を２本の５０ｍＬ容のコニカル試験管の各々に入れた。２ｍＬのＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００（Ｉｎｖｔｉｒｏｇｅｎ、ｃａｔ＃１１６６８−０１９）をＯｐｔｉＭＥＭの入った５０ｍＬのコニカル試験管の一方に混合し、ＩＬ１７ＦＣＨ６ｐＺＭＰ２０発現プラスミド１．５ｍｇを他方の試験管に入れた。試験管を数回反転させ、室温で５分間インキュベートした。次に２つの試験管を友に混合し、数回反転させ、室温で３０分間インキュベートした。次にＤＮＡリポフェクタミン２０００混合物を６本のフラスコの各々に均一に分配し、その間、細胞培養物の攪拌を継続した。次にフラスコを３７℃６％ＣＯ２において振とう器上のインキュベーター内に入れ、１２０ＲＰＭで振とうした。培養物は９６時間後に回収した。
【０２８５】
（実施例１１）
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に結合するモノクローナル抗体の特性
２つの試験を各セットにおいて最良の初回ラウンドのクローンに由来する抗体含有上澄みを用いて実施する。第１に、中和試験において使用する各上澄みにおけるＩｇＧの濃度をマウスＩｇＧＥＬＩＳＡキット（カタログ番号１３３３１５１（Ｒｏｃｈｅ  Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｓｃｉｅｎｃｅ））を用いて測定する。これにより各上澄みの特定の中和活性の測定が可能となり、そしてこれにより、最も強力な抗ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａ＋ＩＬ−１７Ｆの中和ｍＡｂを産生していたハイブリドーマが発見された。この分析から、最も強力なｍＡｂを選択してその後の特性化に付す。第２に、予備的エピトープ特異性（ビニング）試験をＢｉａｃｏｒｅ１０００表面プラズモン共鳴装置を用いながら上澄みで実施した。
【０２８６】
競合的エピトープ結合
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対するモノクローナル抗体の機能的結合特性を評価するためにエピトープビニングおよびウエスタンブロッティングの実験を実施した。ビニング試験はＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆの上の異なるエピトープまたは抗原決定基に結合する抗体を測定するために完了される。ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆのそれぞれの上の同じか同様のエピトープに結合するモノクローナル抗体は、同時に結合することができず、そして機能的には単一のファミリーまたは「ビン」に分類される。ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆ上の異なるエピトープに結合するモノクローナル抗体は同時に結合することができ、そして別個のファミリーまたは「ビン」に分類される。Ｂｉａｃｏｒｅ１０００ＴＭ装置を用いて実験を行った。Ｂｉａｃｏｒｅはモノクローナル抗体の定型的に使用されているエピトープビンパネルである種々の試験フォーマットの単なる１例である。多くの参考文献（例えば、Ｔｈｅ  Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｖｏｌｕｍｅ６、６Ｇｌｅｎｎ  Ｅ．Ｍｏｒｒｉｓ編）がモノクローナル抗体を「ビン」するために（当業者が）使用でき、そしてＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対するモノクローナル抗体の結合特性に関する一貫した情報を提供することが期待される代替法を記載している。エピトープビニング実験は可溶性の未変性の抗原、Ｅ．ｃｏｌｉ誘導または哺乳類誘導の組み換えＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆを用いて実施する。
【０２８７】
ウエスタンブロッティング
ハイブリドーマ由来のモノクローナル抗体の、変性および還元／変性ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆに結合するおよびこれを検出する能力は、また、ウエスタンブロッティングフォーマットを用いて、評価される。
【０２８８】
エピトープビニング
Ａ）材料および方法
エピトープビニング試験はＢｉａｃｏｒｅ１０００ＴＭシステム（Ｂｉａｃｏｒｅ、Ｕｐｐｓａｌｌａ  Ｓｗｅｄｅｎ）上で実施する。方法はメソッドデフィニションランゲージ（ＭＤＬ）を用いてプログラミングされ、そしてＢｉａｃｏｒｅコントロールソフトウェアｖ１．２を用いて実行する。ポリクローナルヤギ抗マウスＩｇＧＦｃ抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）をＢｉａｃｏｒｅＣＭ５センサーチップに共有結合的に固定化し、チップに試験シリーズの一次モノクローナル抗体を結合（キャプチャー）するために使用する。次にチップ上の未占有のＦｃ結合部位をポリクローナルＩｇＧＦｃフラグメント（Ｊａｃｋｓｏｎ  ＩｍｍｕｎｏＲｅｓｅａｒｃｈ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｗｅｓｔ  Ｇｒｏｖｅ、ＰＡ）を用いてブロックする。その後、ＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆを注入し、キャプチャーされた一次モノクローナル抗体に特異的に結合させる。Ｂｉａｃｏｒｅ装置はセンサーチップ表面に結合したタンパク質の質量を測定し、そしてこれにより一次抗体およびＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆ抗原の両方の結合を各サイクルにつき確認できる。チップへの一次抗体および抗原の結合の後、試験シリーズのモノクローナル抗体を二次抗体として注入し、予め結合した抗原に結合させる。二次モノクローナル抗体が一次モノクローナル抗体と同時にＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆ抗原に結合できれば、チップ表面上の質量の増大、すなわち、結合が検出される。しかしながら二次モノクローナル抗体が一次モノクローナル抗体と同時にＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆ抗原に結合できなければ、追加的な質量、すなわち、結合は検出されない。各モノクローナル抗体をそれ自体に対して試験し、そして陰性対照として使用することによりバックグラウンド（無結合）シグナルのレベルを確立できる。
【０２８９】
各々の精製されたモノクローナル抗体を選択されたモノクローナル抗体の完全パネルと組み合わせ一次抗体として試験する。全ての精製されたモノクローナル抗体を等しい濃度において試験する。サイクルの合間にチップ上のヤギ抗マウスＩｇＧＦｃキャプチャー抗体を２０ｍＭＨＣｌで再生する。対照サイクルを実施することにより一次抗体または抗原の非存在下における二次抗体の応答の欠失を明確化する。データはＢｉｏＥｖａｌｕａｔｉｏｎ３．２ＲＣＩソフトウェアを用いてコンパイルし、次にＥｘｃｅｌＴＭにロードしてデータプロセシングする。
【０２９０】
Ｂ）ウエスタンブロッティング
２つの原料に由来する変性および還元／変成されたＩＬ−１７ＡまたはＩＬ−１７Ｆを検出する各クローン由来のモノクローナル抗体の能力をウエスタンブロットフォーマットを用いて評価する。ウエスタンブロットフォーマットにおいてＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆを検出することが分かっているウサギポリクローナル抗体を陽性対照として使用する。
【０２９１】
材料および方法
ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ抗原は２つの原料から入手し、すなわち、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７ＦはＥ．ｃｏｌｉにおいて、または哺乳類細胞、例えば２９３細胞（本明細書に記載）において産生させ、精製する。各抗原の小分量（１００ｎｇ／レーン）を分子量標準物質（ＳｅｅＢｌｕｅ；Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）と共に非還元または還元試料緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中の４〜１２％ＮｕＰＡＧＥＢｉｓ−Ｔｒｉｓゲル（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ、Ｃａｒｌｓｂａｄ、ＣＡ）上にロードし、そして電気泳動を１ｘＭＥＳ泳動緩衝液（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）中で実施した。電気泳動の後、タンパク質をゲルから０．２μｍのニトロセルロース膜（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎ）に移す。ニトロセルロースブロットはウエスタンＡ緩衝液（ＺｙｍｏＧｅｎｅｔｉｃｓ、５０ｍＭ  Ｔｒｉｓ  ｐＨ７．４、５ｍＭ  ＥＤＴＡ、１５０ｍＭ  ＮａＣｌ、０．０５％  Ｉｇｅｐａｌ、０．２５％  ｇｅｌａｔｉｎ）中の２．５％無脂肪乾燥乳中で一晩ブロッキングし、次に切片化し、各抗体（ウエスタンＡ緩衝液中の各モノクローナル抗体０．２μｇ／ｍＬまたはウサギポリクローナル抗体０．５μｇ／ｍＬ）に曝露する。次にブロットをセイヨウワサビパーオキシダーゼに共役した二次抗体、すなわち、モノクローナル抗体に対してはヒツジ抗マウスＩｇＧ−ＨＲＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ、Ｐｉｓｃａｔａｗａｙ、ＮＪ）、および、ポリクローナル抗体に対してはロバ抗ウサギＩｇ−ＨＲＰ（Ａｍｅｒｓｈａｍ）でプローブする。次に結合した抗体を化学発光試薬（Ｌｕｍｉ−ＬｉｇｈｔＰｌｕｓＲｅａｇｅｎｔ：Ｒｏｃｈｅ、Ｍａｎｎｈｅｉｍ、Ｇｅｒｍａｎｙ）を用いて検出し、ブロットの画像をルミイメージャー（Ｍａｎｎｈｅｉｍ−Ｂｏｅｈｒｉｎｇｅｒ）またはＸ線フィルム（Ｋｏｄａｋ）上に記録する。
【０２９２】
（実施例１２）
２９３一過性細胞系からのＣ末端Ｈｉｓタグ付きＩＬ−１７Ａタンパク質の精製。
【０２９３】
マウスＩＬ−１７Ａ
固体の添加を介して、送達培地を２５ｍＭイミダゾール、５００ｍＭＮａＣｌｐＨ７．５に調節する（それぞれＦｌｕｋａおよびＪＴ  Ｂａｋｅｒ）（総容量１．４１Ｌ）。ｈｉｓタグ付き標的の発現はＲＰ−ＨＰＬＣを介したウエスタンブロットにより分析する（１．１１ｍｇ／Ｌ）。調節された培地を４℃で一晩、ＮｉＮＴＡＨｉｓ結合スーパーフロー（Ｎｏｖａｇｅｎ）カラム（５ｃｍ、１ｃｍ直径、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）上にロードする。フロースルーはＲＰ−ＨＰＬＣおよびウエスタンブロットによりＩＬ−１７Ａ標的が存在しないことを確認する。ＮｉＮＴＡカラムをＡ２８０ｎｍにおけるＵＶのベースラインが安定化するまで５０ｍＭ  ＮａＰＯ４、２５ｍＭ  イミダゾール、０．５Ｍ  ＮａＣｌ  ｐＨ７．５で洗浄する。カラムは２段階で、すなわち、５００ｍＭ  イミダゾール保存液を用いて４５ｍＭおよび５００ｍＭイミダゾールに調節した上記緩衝液で溶離する。溶出画分は銀染色分析により確認し、標的を含有する物をプールする（５００ｍＭ工程溶離）。ＮｉＮＴＡプールをＲＰ−ＨＰＬＣで分析する。ＮｉＮＴＡプールを１０ｋＤのＭＷＣＯウルトラセル膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に対して２ｍＬとなるまで濃縮し、そしてＳｕｐｅｒｄｅｘｒ（登録商標）７５からむ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、１２／６０ｍｍ）に注入し、５０ｍＭＮａＰＯ４、１０９ｍＭＮａＣｌｐＨ７．３中、１．０２ｍＬ／分で泳動する。２つのピークを分割し、銀染色により分析する。マウスＩＬ−１７Ａは残余の夾雑タンパク質から良好に分割される。純粋な標的を含有する画分をプールし、１０ｋＤのＭＷＣＯウルトラセル膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて２．０ｍＬまで再度濃縮し、０．２２ｕｍで濾過し、細分する。
【０２９４】
ヒトＩＬ−１７Ａ
固体の添加を介して、送達培地を２５ｍＭイミダゾール、５００ｍＭ  ＮａＣｌｐＨ７．５に調節する（それぞれ、ＦｌｕｋａおよびＪＴ  Ｂａｋｅｒ）（総容量１．４１Ｌ）。ｈｉｓタグ付き標的の発現は標準物質としてＡ１０２２Ｇを用いたウエスタンブロットにより、そしてＲＰ−ＨＰＬＣにより分析する（３．１９ｍｇ／Ｌ）。調節された培地を４℃で一晩、ＮｉＮＴＡＨｉｓ結合スーパーフロー（Ｎｏｖａｇｅｎ）カラム（５ｃｍ、１ｃｍ直径、Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）上にロードする。フロースルーはＲＰ−ＨＰＬＣおよびウエスタンブロットによりＩＬ−１７Ａ標的が存在しないことを確認する。ＮｉＮＴＡカラムをＡ２８０ｎｍにおけるＵＶのベースラインが安定化するまで５０ｍＭ  ＮａＰＯ４、２５ｍＭ  イミダゾール、０．５Ｍ  ＮａＣｌ  ｐＨ７．５で洗浄する。カラムは２段階で、すなわち、５００ｍＭイミダゾール保存液を用いて４５ｍＭおよび５００ｍＭイミダゾールに調節した上記緩衝液で溶離する。溶出画分は銀染色分析により確認し、標的を含有する物をプールする（５００ｍＭ工程溶離）。ＮｉＮＴＡプールを標準物質としてＡ１０２２Ｇを用いながらＲＰ−ＨＰＬＣで分析する。ＮｉＮＴＡプールを１０ｋＤのＭＷＣＯウルトラセル膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）に対して５ｍＬとなるまで濃縮し、そしてＳｕｐｅｒｄｅｘｒ（登録商標）７５からむ（ＧＥ  Ｈｅａｌｔｈｃａｒｅ、２６／６０ｍｍ）に注入し、５０ｍＭＮａＰＯ４、１０９ｍＭＮａＣｌｐＨ７．３中、２．７１ｍＬ／分で泳動する。２つのピークを分割し、銀染色により分析する。マウスＩＬ−１７Ａは残余の夾雑タンパク質から良好に分割される。純粋な標的を含有する画分をプールし、１０ｋＤのＭＷＣＯウルトラセル膜（Ｍｉｌｌｉｐｏｒｅ）を用いて９．０ｍＬまで再度濃縮し、０．２２ｕｍで濾過し、細分する。
【０２９５】
（実施例１３）
２９３一過性細胞系からのＣ末端Ｈｉｓタグ付きＩＬ−１７Ｆタンパク質の精製
ＩＭＡＣを一過性発現由来の２９３Ｆ培地上でアフィニティーキャプチャーする。培地を２５ｍＭイミダゾール、２５ｍＭＮａＰｈｏｓ、４００ｍＭＮａＣｌおよびｐＨ７．５に調節する。このように調節された培地を、２５ｍＭＮａＰｈｏｓ、２５ｍＭイミダゾール、５００ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ７．５に平衡化されたＱｉａｇｅｎＮＴＡスーパーフロー（１ｃｍ直径）の５ｍＬベッド上に１ｍＬ／分でロードした。ロード終了後、カラムを２０ＣＶ平衡化緩衝液で洗浄した後に、溶離緩衝液と２５ｍＭＮａＰｈｏｓ、５０ｍＭイミダゾール５００ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ７．５との間に形成された１０ＣＶの勾配で溶離した。画分を生成物に関してＲＰ−ＨＰＬＣで試験し、プールし、濃縮してＳＥＣ工程に供した。ＩＭＡＣ工程に由来する濃縮プールを５０ｍＭＮａＰｈｏｓ、１０９ｍＭＮａＣｌ、ｐＨ７．２で平衡化したＰｈａｒｍａｃｉａ  Ｓｕｐｅｒｄｅｘ７５ＳＥＣカラムに注入した。〜０．５ＣＶで溶出する主要な対称ピークが生成物を含有している。試料をプールし、細分するための調製において０．２ミクロンに対して濾過滅菌した。
【０２９６】
（実施例１４）
上皮バリア機能を介したヒトＩＢＤ試料におけるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に結合する抗体の有効性
上皮バリアの完全性を維持することは、健康な胃腸管を温存する場合に重要な要因となる。実験結果によれば、腸における上皮バリアの漏出性がＩＢＤの発症に寄与している可能性が示唆された。腸の固有層に位置する免疫細胞は一般的に、細胞と細胞の接触または可溶性因子の産生を介して腸上皮細胞と相互作用することにより免疫サーベイランスを維持し、そして上皮バリアの完全性に寄与している。しかしながら長期化した、または調節不全の免疫媒介炎症は上皮バリア細胞の完全性および機能における血管に寄与していると考えられる。以下の試験は上皮バリア完全性に対するＴ細胞誘導ＩＬ−１７Ａおよび／またはＩＬ−１７Ｆの直接の作用を測定するために設計されている。
【０２９７】
本実施例において、腸の上皮細胞系統、例えば、Ｃａｃｏ−２細胞を半透過性膜上で分化させ、ＩＢＤ患者または正常個体に由来する生検検体から誘導したＴ細胞または単球のいずれかとともに、基底外側の面上で同時培養する。上皮単層の完全性は経上皮の電気抵抗または染料の拡散に対する単層の抵抗性を評価することにより経時的にモニタリングする。同時培養物中の単層の経上皮の抵抗性の低下は、同時培養物中のＴ細胞または単球の活性により誘導された単層の破壊を示唆している。本発明の抗体のようなＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの抑制剤は上皮単層の破壊に対するＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの相対的寄与を調べ、上皮バリア完全性の維持においてＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの抑制剤が有効であるかどうかを調べるために使用できる。そのような分子による活性化Ｔ細胞により誘導された上皮単層破壊の防止は、ヒトにおけるＩＢＤの治療上の処置のために本発明の抗体が有効であることを示唆している。
【０２９８】
同時培養系はまた、ＩＢＤ患者由来の一次上皮により形成された単層を用いて作成することにより、これらの細胞が健常者個体から誘導した上皮細胞と比較した場合にＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対してより感受性であるかどうか調べることができる。そうであれば、これらのデータはＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆを抑制することがＩＢＤの治療上の処置のために適した方策であることを示唆しているといえる。
【０２９９】
（実施例１５）
正常およびヒトＩＢＤ試料由来の固有層Ｔ細胞および単球／マクロファージに対するＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの作用
調節不全または持続性の免疫媒介炎症は、組織の損傷または不適切または延長された免疫応答への永久的な傾倒により、ＩＢＤに関連する症状および病理に対して寄与する場合がある。このモデルは腸組織の間近にあるサイトカイン環境において存在する可能性があるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに対する疾患関連Ｔ細胞および単球の曝露の潜在的下流結果を調べることができる。
【０３００】
インビボでヒトＩＢＤに有効な治療薬は、炎症メディエーター（例えば、限定しないが、ＩＬ−１ｂ、ＩＬ−４、ＩＬ−５、ＩＬ−６、ＩＬ−８、ＩＬ−１２、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７ＡおよびＦ、ＩＬ−１８、ＩＬ−２３、ＴＮＦ−ａ、ＩＦＮ−ｇ、ＭＩＰファミリーメンバー、ＭＣＰ−１、Ｇ−およびＧＭ−ＣＳＦなど）の産生および／または存在を抑制および／または中和することにより上記エクスビボのモデルにおいて機能すると考えられる。
【０３０１】
本モデルにおいては、ＨＢＳＳ中ハサミを用いて生検試料を慎重に粉砕し、コラゲナーゼおよびジスパーゼＩＩで処理し、振とう器中３７℃で１時間インキュベートすることにより生検試料からＴ細胞および単球／マクロファージを単離する。細胞上澄みをナイロンメッシュで濾過することにより破砕片および細胞集塊を除去し、ＨＢＳＳで複数回洗浄する。Ｔ細胞および単球／マクロファージは直接の細胞ソーティングまたはビーズ枯渇／リッチ化プロトコルを用いて単離できる。単離された細胞をＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの存在下にインキュベートする。これによりＴ細胞および単球／マクロファージによる炎症メディエーターの産生が誘導されるか、または、後のＴ細胞応答を高度に炎症性の応答となるような方向付けが起こる。ＩＢＤ患者由来の細胞により産生される炎症メディエーターの型と正常個体の細胞由来のものとの間の比較を行うことができ、そしてＩＢＤ患者由来のＴ細胞および単球／マクロファージがＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの存在下でより多くの炎症性の特徴をもたらすことが示唆される。ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆにより誘導された下流の炎症メディエーターの産生を中和する本発明の抗体の添加は、ＩＢＤ患者の治療上の処置においてそのような抗体が有効であることを示唆している。
【０３０２】
（実施例１６）
過敏性腸症候群（ＩＢＳ）におけるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に対する抗体の有効性：ＣＮＳ指向性発症
ＩＢＳの症状の特徴を誘導するためにストレス刺激を用いるＩＢＳの一次ＣＮＳ指向性発症に着目したモデル。新生仔精神社会的ストレスモデルは内蔵痛覚過敏、下痢およびストレス感受性を包含するＩＢＳ患者に関連する一部の臨床特徴を模倣している。生後４〜１８日間、毎日１８０分、仔動物を母動物から毎日分離することは、母動物挙動の改変をもたらし、舐め／毛繕いの挙動の時間を有意に低減する。新生仔に対するストレスはＣＮＳにおける永久的な変化をもたらし、改変されたストレス誘導性の内臓および体性の疼痛過敏をもたらす。ストレスに応答した結腸の運動機能がこれらの動物において増強され、そして予備的なデータによれば腸の透過性の増大の証拠が示されている（Ｍａｙｅｒ等、２００２）。本発明の抗体の投与、およびその後の結腸運動機能、上皮透過性およびストレス刺激に対する応答の分析により、ＩＢＳのこの動物モデルにおける有効性を調べることができる。これらの抑制剤の投与の後の症状の発生率の低下はＩＢＳの治療における潜在的有効性を示唆している。
【０３０３】
（実施例１７）
過敏性腸症候群（ＩＢＳ）におけるＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ両方に対する抗体の有効性：一次腸指向性ストレス誘導物質
これは一次腸指向性ストレス誘導物質（すなわち、炎症、感染または物理的ストレス）に着目したモデルである。動物実験によれば低い等級の炎症または免疫活性化は腸の改変された運動性、および／または求心性および上皮の機能の根拠となることが示唆されている（Ｍａｙｅｒ等、２００２）。このモデルにおいては、毎日の結腸の刺激をマスタードオイルの毎日結腸内注射の形態で新生仔（８〜２１日齢）において行う。マスタードオイルはニューロン刺激物質であり、結腸内投与後に内蔵の痛覚過敏を誘導することが分かっている。このモデルは内蔵の過敏症および腸の習慣の改変を包含するＩＢＳの重要な特徴を模倣している。動物はまたＩＢＳ患者の重要な特徴である下痢または便秘を伴う（Ｍａｙｅｒ等、２００２；Ｋｉｍｂａｌｌ等、２００５）。本発明の抗体はこのモデルに関連する症状の発症における変化を測定するために送達される。本発明者等の抑制剤の治療上の処置の後の内蔵過敏症および改変された腸の運動性の発生率または規模の低下は、これらの分子がＩＢＳの治療において有効である可能性を示唆している。
【０３０４】
（実施例１８）
ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の形成
Ａ）キャプチャー試験
ＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ａに結合する抗血清中の抗ヒトＩＬ−１７Ｆまたは抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体の能力を、キャプチャーＥＬＩＳＡ試験を用いて評価した。この試験においては、９６穴のポリスチレンＥＬＩＳＡプレートのウェルに先ず、１００μＬ／ウェルのヤギ抗マウスＩｇＧ、Ｆｃ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）を１００ｎｇ／ｍＬの濃度において、コーティングバッファー（０．１ＭＮａ２ＣＯ３、ｐＨ９．６）中でコーティングした。各リガンドにつき１プレートを作成した。プレートを４℃で一晩インキュベートした後、未結合の抗体を吸引し、そしてプレートを２回３００μＬ／ウェルの洗浄緩衝液（０．１３７ＭＮａＣｌ、０．００２７ＭＫＣｌ、０．００７２ＭＮａ２ＨＰＯ４、０．００１５ＭＫＨ２ＰＯ４、０．０５％ｖ／ｖのポリソルベート２０、ｐＨ  ７．２として定義されるＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ）で洗浄した。ウェルを２００μＬ／ウェルのブロッキングバッファー（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ＋１％ｗ／ｖのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））で１時間ブロックし、その後プレートをウオッシュバッファーで洗浄した。最初の希釈度１：１０００から始まって１：１，０００，０００までの範囲の血清の連続１０倍希釈物（ブロッキングバッファー中）を作成した。次に各希釈度の２連の試料を試験プレートに移し、１００μＬ／ウェルとすることにより、分子のＦｃ部分を経て試験プレートに血清中のマウスＩｇＧを結合させた。正常マウス血清を陰性対照として使用し、ヒトＩＬ１７ＲＣ−Ｆｃ部分を陽性試験対照として添加した。ただしこの対照用のコーティングはヤギ抗ヒトＩｇＧ、Ｆｃ特異的抗体とした（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）。ＲＴで１時間インキュベートした後、ウェルを吸引し、プレートを上記した通り２回洗浄した。次にビオチニル化ＩＬ１７Ｆ（ビオチン：タンパク質の６：１モル比）またはビオチニル化ＩＬ１７Ａ（ビオチン：タンパク質の１０：１モル比）を５００ｎｇ／ｍＬの濃度でウェル（別個のプレート）に添加し、１００μＬ／ウェルとした。ＲＴで１時間インキュベートした後、未結合のビオチニル化リガンドをウェルから吸引し、プレートを２回洗浄した。次にセイヨウワサビパーオキシダーゼ標識ストレプトアビジン（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を５００ｎｇ／ｍＬの濃度で各ウェルに添加して１００μＬ／ウェルとし、プレートを１時間ＲＴでインキュベートした。未結合のＨＲＰ−ＳＡを除去したのち、プレートを２回洗浄し、１００μＬ／ウェルのテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）（ＢｉｏＦＸ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｏｗｉｎｇ  Ｍｉｌｌｓ、ＭＤ）を各ウェルに添加し、プレートをＲＴで２分間インキュベートした。１００μＬ／ウェルの４５０ｎｍＴＭＢＳｔｏｐＲｅａｇｅｎｔ（ＢｉｏＦＸ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｏｗｉｎｇ  Ｍｉｌｌｓ、ＭＤ）の添加により発色を停止させ、ウェルの吸光度値を４５０ｎｍにおいてＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｓｐｅｃｔｒａ  ＭＡＸ３４０装置上で読み取った。
【０３０５】
Ｂ）直接試験
ＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ａに結合する抗血清中の抗ヒトＩＬ−１７Ｆまたは抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体の能力を、直接ＥＬＩＳＡ試験を用いて評価した。この試験においては、９６穴のポリスチレンＥＬＩＳＡプレートのウェルに先ず、１００μＬ／ウェルのＩＬ−１７ＦまたはＩＬ−１７Ａを１００ｎｇ／ｍＬの濃度において、コーティングバッファー（０．１ＭＮａ２ＣＯ３、ｐＨ９．６）中でコーティングした。各リガンドにつき１プレートを作成した。プレートを４℃で一晩インキュベートした後、未結合の抗体を吸引し、そしてプレートを２回３００μＬ／ウェルの洗浄緩衝液（０．１３７ＭＮａＣｌ、０．００２７ＭＫＣｌ、０．００７２ＭＮａ２ＨＰＯ４、０．００１５ＭＫＨ２ＰＯ４、０．０５％ｖ／ｖのポリソルベート２０、ｐＨ  ７．２として定義されるＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ）で洗浄した。ウェルを２００μＬ／ウェルのブロッキングバッファー（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ＋１％ｗ／ｖのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））で１時間ブロックし、その後プレートをウオッシュバッファーで洗浄した。最初の希釈度１：１０００から始まって１：１，０００，０００までの範囲の血清の連続１０倍希釈物（ブロッキングバッファー中）を作成した。次に各希釈度の２連の試料を試験プレートに移し、１００μＬ／ウェルとすることにより、試験プレートに血清中の特異的タンパク質を結合させた。正常マウス血清を陰性対照として使用し、ｚｃｙｔｏｒ１４（ロットＡ１０３４Ｆ）を陽性試験対照として添加した。ＲＴで１時間インキュベートした後、ウェルを吸引し、プレートを上記した通り２回洗浄した。次にセイヨウワサビパーオキシダーゼ標識ヤギ抗マウスＩｇＧ、Ｆｃ特異的抗体（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｉｍｍｕｎｏｒｅｓｅａｒｃｈ）を１：５０００の濃度で両方のプレートのウェルに添加し、１００μＬ／ウェルとした。プレートを１時間ＲＴでインキュベートし、未結合の抗体をウェルから吸引し、プレート２回洗浄した。１００μＬ／ウェルのテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）（ＢｉｏＦＸ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｏｗｉｎｇ  Ｍｉｌｌｓ、ＭＤ）を各ウェルに添加し、プレートをＲＴで２分間インキュベートした。１００μＬ／ウェルの４５０ｎｍＴＭＢＳｔｏｐＲｅａｇｅｎｔ（ＢｉｏＦＸ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｏｗｉｎｇ  Ｍｉｌｌｓ、ＭＤ）の添加により発色を停止させ、ウェルの吸光度値を４５０ｎｍにおいてＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｓｐｅｃｔｒａ  ＭＡＸ３４０装置上で読み取った。
【０３０６】
Ｃ）中和試験
抗血清中の抗ヒトＩＬ−１７Ｆまたは抗ヒトＩＬ−１７Ａ抗体が、ＩＬ−１７Ｆおよび／またはＩＬ−１７Ａのその同族体受容体を介した刺激活性を抑制（中和）する能力について、プレート系中和試験を用いて評価した。この試験においては、９６穴のポリスチレンＥＬＩＳＡプレートのウェルに先ず、１００μＬ／ウェルのヒトＩＬ−１７ＲＣ−Ｆｃタンパク質を１００ｎｇ／ｍＬの濃度において、コーティングバッファー（０．１ＭＮａ２ＣＯ３、ｐＨ９．６）中でコーティングした。各リガンドにつき１プレートを作成した。プレートを４℃で一晩インキュベートした後、未結合の抗体を吸引し、そしてプレートを２回３００μＬ／ウェルの洗浄緩衝液（０．１３７ＭＮａＣｌ、０．００２７ＭＫＣｌ、０．００７２ＭＮａ２ＨＰＯ４、０．００１５ＭＫＨ２ＰＯ４、０．０５％ｖ／ｖのポリソルベート２０、ｐＨ  ７．２として定義されるＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ）で洗浄した。ウェルを２００μＬ／ウェルのブロッキングバッファー（ＰＢＳ−Ｔｗｅｅｎ＋１％ｗ／ｖのウシ血清アルブミン（ＢＳＡ））で１時間ブロックし、その後プレートをウオッシュバッファーで洗浄した。最初の希釈度１：５００から始まって１：５０００，０００までの範囲の血清の連続１０倍希釈物（ブロッキングバッファー中）を作成した。次にビオチニル化ＩＬ１７Ｆ（ビオチン：タンパク質の６：１モル比）またはビオチニル化ＩＬ１７Ａ（ビオチン：タンパク質の１０：１モル比）を２００ｎｇ／ｍＬの濃度でウェル（別個のプレート）に添加し、１００μＬ／ウェルとし、数回ピペッティングで上下させることにより混合し、ＲＴで１時間インキュベートした。ただし血清希釈液およびビオチニル化リガンドの等容量においける混合は、連続希釈を１：１０００〜１：１，０００，０００とし、そしてリガンド濃度を１０ｎｇ／ｍＬとする。次に各血清希釈／ビオチニル化リガンド溶液の２連の試料を試験プレートに移し、１００μＬ／ウェルとする。正常マウス血清を陰性対照として使用し、ヒトＩＬ１７ＲＣ−Ｆｃ部分を陽性試験対照として添加した。ＲＴで１時間インキュベートした後、ウェルを吸引し、プレートを上記した通り２回洗浄した。次にセイヨウワサビパーオキシダーゼ標識ストレプトアビジン（Ｐｉｅｒｃｅ、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、ＩＬ）を５００ｎｇ／ｍＬの濃度で各ウェルに添加して１００μＬ／ウェルとし、プレートを１時間ＲＴでインキュベートした。未結合のＨＲＰ−ＳＡを除去したのち、プレートを２回洗浄し、１００μＬ／ウェルのテトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）（ＢｉｏＦＸ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｏｗｉｎｇ  Ｍｉｌｌｓ、ＭＤ）を各ウェルに添加し、プレートをＲＴで３分間インキュベートした。１００μＬ／ウェルの４５０ｎｍＴＭＢＳｔｏｐＲｅａｇｅｎｔ（ＢｉｏＦＸ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｏｗｉｎｇ  Ｍｉｌｌｓ、ＭＤ）の添加により発色を停止させ、ウェルの吸光度値を４５０ｎｍにおいてＭｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ  Ｓｐｅｃｔｒａ  ＭＡＸ３４０装置上で読み取った。
【０３０７】
Ｄ）免疫化スキーム
５匹のｂａｌｂ／Ｃマウスを腹腔内注射により、６週間２週毎にＩＬ−１７Ｆ−ＢＳＡ（各々５０μｇ）で免疫化した（３免疫化）。２週間後、これらのマウスを腹腔内注射によりＩＬ１７Ａ−ＢＳＡ（各々５０μｇ）でブーストした。最後の３ブースト後は毎週採血し、血清の評価に付した。最後のブーストの後約２か月において、全５匹の動物を皮下注射によりＩＬ−１７Ａ−ＢＳＡ（各々５０μｇ）でブーストし、そして最終採血を行って血清の評価に付した。
【０３０８】
Ｅ）ＥＬＩＳＡによる血清評価の結論
キャプチャーＥＬＩＳＡ試験ならびに直接ＥＬＩＳＡ試験の両方とも、全５匹のマウスがＩＬ−１７Ｆに対する有意な抗体応答を発生させたことを示している。直接試験は５匹中４匹のマウスがやはりＩＬ−１７Ａに中等度で結合し、そして１匹のマウスはＩＬ−１７Ａに弱く結合したことを示している。中和試験は５匹中２匹がＩＬ−１７Ｆの結合を中等度に抑制し、そして他の２匹がＩＬ−１７Ｆの結合を弱く抑制したことを示している。１匹のマウスはＩＬ−１７Ｆの結合を全く抑制していない。この試験によりやはり示されることは、５匹中２匹のマウスがＩＬ−１７Ａの結合を弱く抑制したのに対し、他の３匹は結合を抑制しなかった点である。１匹のマウスは異なる程度に両方のリガの結合を抑制している。
【０３０９】
Ｆ）融合の操作法
最終免疫化後、最大４週間の後、最も有意なＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａの中和力価を示したマウスを皮下注射によりＰＢＳ中約５０μｇのＩＬ−１７Ａ−ＢＳＡで最終回免疫化した。通常の条件下では、５日後にこのマウスの脾臓およびリンパ節を採取し、単細胞懸濁液に調整し、そしてＡｇ８マウス骨髄腫細胞系統に、２：１のリンパ様細胞：骨髄腫細胞の比において、ＰＥＧ１５００を用いながら、標準的な部内のプロトコルに従って融合した。この例においては、マウスは注射後に死亡し、そして脾臓を採取し、単細胞懸濁液に調整し、５日間、−８０℃で凍結した。脾臓細胞懸濁液を急速解凍した後、融合を上記した通り完了した。融合混合物は一連の９６穴平底プレートに分注した。融合プレートのウェルには第４〜７日（最低２回、最高３回）に供給した。ウェルは融合物のプレーティング後８日に試験した。
【０３１０】
Ｇ）融合物のスクリーニング
ハイブリドーマ上澄みは培養プレートから未希釈の状態で試験した以外は、上記したＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆに関するキャプチャーＥＬＩＳＡおよび中和ＥＬＩＳＡを用いてスクリーニングを行った。全ての「陽性」クローン（実施例１９において詳述）を２連の試料を用いて両方の試験を反復することにより確認した。全ての「陽性」クローンを２４穴プレート中の培養物として増殖させた。２４穴培養物の細胞密度が４〜６ｘ１０５個／ｍＬとなった時点で、上澄み（約１．８ｍＬ）を各クローンにつき個別に採取して保存し、各ウェル由来の細胞を低温保存した。収集した上澄みを使用しながら、要求された試薬の必要性にどのクローンが合致するのかをさらに評価した。適切なクローンを第１および第２ラウンドのクローニングに付した後に、精製のためのスケールアップに付した。
【０３１１】
（実施例１９）
ＩＬ−１７Ａ／ＦｍＡｂ競合的結合試験プロトコル
本発明のＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体（実施例１８に開示）がリガンド主語に結合する能力を評価するために、フローサイトメトリー系の競合的結合試験を利用した。リガンドＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆおよびリガンドに結合するようにターゲティングされた本発明のＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体の存在下において、完全長のＩＬ−１７ＲＣで安定にトランスフェクトされたＢＨＫ細胞系統のインキュベーションにより、細胞表面に結合する（そしてそれにより抗体により結合されない）リガンドの検出および相対的定量が可能となる。リガンドのビオチニル化は二次ストレプトアビジン共役蛍光団を使用したＦＡＣＳ検出を可能とする。抗体の滴定に渡る細胞結合リガンドの低減を細胞の平均蛍光の低減として記録する。
【０３１２】
ビオチニル化リガンドを１００ｕｌ容量中の染色媒体（ＨＢＳＳ−１％ＢＳＡ−０．１％Ｎａアジド−１０ｍＭＨＥＰＥＳ）中の抗体の滴定量と１ｕｇ／ｍＬで個別に予備混合し、ＲＴで１５分間インキュベートする。完全長ＩＬ１７ＲＣで安定にトランスフェクトされたＢＨＫ細胞系統は、Ｖｅｒｓｅｎｅ（Ｉｎｖｉｔｒｏｇｅｎカタログ番号１５０４０−０６６）で再懸濁し、１ｘ１０５個／１００ｕｌの細胞密度に平衡化し、ペレット化し、そしてリガンド／抗体予備混合物中に再懸濁することにより、リガンド染色用に調整する。染色された細胞を３０分間４℃でインキュベートし、染色媒体中で１回洗浄し、ストレプトアビジン−ＰＥ（ＢＤ  Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎカタログ番号５５４０６１）で１：１００の比において染色する。細胞を３０分間暗所４℃でインキュベートし、染色媒体中で２回洗浄し、１：１の比の染色媒体およびＣｙｔｏｆｉｘ（ＢＤ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅ５５４６５５）中に再懸濁する。ＢＤＬＳＲＩＩフローサイトメーターまたは同様の装置を用いてデータの収集と分析を行う。図に示すグラフは前述したプロトコルを用いた場合の典型的な試験結果を示す。グラフはＰｒｉｚｍソフトウェアプログラムを用いて作成した。Ｙ値はリガンドのみおよび無リガンド／無抗体の対照ウェルに基づいた最大および最少に対して規格化されたＭＦＩ、したがって、細胞へのリガンドのパーセント結合を示す。各曲線に関するＩＣ５０はソフトウェアが計算する。
【０３１３】
表１は各ＩＬ−１７Ａ／Ｆ抗体について得られたＩＣ５０値を含む。
【０３１４】
【表１】
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以上より、本発明の特定の実施形態を説明の目的のための本明細書に記載したが、種々の変更が本発明の精神および範囲から外れることなく行える。
【図面の簡単な説明】
【０３１５】
【図１】図は、Ｐｒｉｓｍソフトウェアプログラムにより生成される代表的な結合曲線を示す。
【図１】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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