(57)【要約】神経変性疾患、慢性炎症性疾患、心血管疾患、糖尿病合併症および白内障などの極めて多くの慢性病変の発症の一因となることが知られている、脂質酸化ストレス由来の二次生産物に対して、特に、マロンジアルデヒドおよびヒドロキシノネナールなどの不飽和アルデヒドに対して、興味深い遮断活性を有することが判明した、ヒスチジン残基を含むジペプチド化合物。【特許請求の範囲】
【請求項１】
一般式Ｉの化合物
【化１】
2009541295.tif 000007
式中、
ＲおよびＲ1は、同一または異なっていてよく、
水素、ただし、それらの少なくとも１つは水素ではなく；
直鎖もしくは分枝状Ｃ1〜Ｃ8または環状Ｃ3〜Ｃ7アルキル基；
アリール−Ｃ1〜Ｃ5−アルキル基またはヘテロアリール−Ｃ1〜Ｃ5−アルキル基；
アリール基またはヘテロアリール基；
Ｒ1がアミノ基でありＲ、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4が水素である場合を除いては遊離のアミノ基、または、場合によってはアルキルカルボニル基、アリールカルボニル基、ヘテロアリールカルボニル基、アリールアルキルカルボニル基、ヘテロアリールアルキルカルボニル基、アルキルオキシカルボニル基、もしくはアリールアルキルオキシカルボニル基で置換されているアミノ基；
ヒドラジン基、ヒドロキシルアミノ基またはグアニジン基；
Ｃ1〜Ｃ5アルキル基、アリール基またはアリールアルキル基で場合によって置換されているヒドロキシ基；
であるか、
あるいは、
ＲおよびＲ1は、一緒になって式ＩＩの化合物を形成し、ここで、ＸおよびＹは、同一または異なっていてよく、硫黄原子、窒素原子もしくは、酸素原子またはＣＨ2基であり、ｎおよびｍは、同一または異なっていてよく、０〜５の範囲の値を有するか；
【化２】
2009541295.tif 000008
あるいは、
ＲおよびＲ1は、一緒になって二重結合を形成して、式ＩＩＩの化合物を与え；
【化３】
2009541295.tif 000009
Ｒ2およびＲ3は、同一または異なっていてよく、
水素、
１個以上の二重結合を場合によって含む直鎖もしくは分枝状Ｃ1〜Ｃ20または環状Ｃ3〜Ｃ7アルキルカルボニル基、アリールカルボニル基またはアリールアルキルカルボニル基、
１個以上の二重結合を場合によって含む直鎖もしくは分枝状Ｃ1〜Ｃ10または環状Ｃ3〜Ｃ7アルキルオキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基またはアリールアルキルオキシカルボニル基、
アミノ基、
ヒドロキシ基、
一般式ＩＶの基、
【化４】
2009541295.tif 000010
ここで、Ｍは、窒素、酸素または硫黄であり、Ａは、水素またはアミノ基であり；
であり、
Ｒ4は、
ヒドロキシ基であり、
アミノ基、ただし該アミノ基は場合によっては基によって一置換または二置換され、その基は同一または異なっていてよく、その基は、
１個以上の二重結合を場合によって含む直鎖もしくは分枝状Ｃ1〜Ｃ20または環状Ｃ3〜Ｃ7アルキル基、
アリール基またはアリールアルキル基、
１個以上の二重結合を場合によって含む直鎖もしくは分枝状Ｃ1〜Ｃ20または環状Ｃ3〜Ｃ7アルキルオキシカルボニル基
から選択され、
アリール基、ヘテロアリール基、ヘテロアリールアルキル基またはアリールアルキル基、
１個以上の二重結合を場合によって含む直鎖もしくは分枝状Ｃ1〜Ｃ10または環状Ｃ3〜Ｃ7アルコキシ基、
直鎖状、分枝状または環状のアルキルを有する、アルコキシカルボニルオキシアルコキシ基またはアルキルカルボニルオキシアルコキシ基、
アリールオキシ基、ヘテロアリールオキシ基、ヘテロアリールアルキルオキシ基またはアリールアルコキシ基
である。
エナンチオマー、ジアステレオマー、その混合物、医薬的に許容できる塩および金属カチオンとの錯体。
【請求項２】
（３Ｓ）−３−アミノ−４−（４−ヒドロキシフェニル）ブタノイル−Ｄ−ヒスチジン；
（３Ｓ）−３−アミノ−３−（４−メトキシフェニル）プロパノイル−Ｄ−ヒスチジン；
（３Ｓ）−３−アミノ−３−フェニルプロパノイル−Ｄ−ヒスチジン；
３−アミノ−２−フェニルプロパノイル−Ｄ−ヒスチジン；
（３Ｓ）−３−アミノブタノイル−Ｄ−ヒスチジン；
（３Ｓ）−３−アミノ−４−フェニルブタノイル−Ｄ−ヒスチジン；
（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタノイル−Ｄ−ヒスチジン；
（３Ｓ）−３−アミノ−４−（４−メトキシフェニル）ブタノイル−Ｄ−ヒスチジン
から選択される、請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
請求項２に記載の化合物の、アルキル、アラルキルまたはアリールカルボキシル、アルコキシ、アラルコキシまたはアリールアルコキシカルボキシ置換基によって、アミノ基の位置において置換された、アルキル、アリールまたはアラルキルのエステルおよび誘導体。
【請求項４】
請求項１から３に記載の化合物の有効量と、適当な賦形剤とを組み合わせて含む組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒスチジンペプチド誘導体およびそれらを含む組成物に関する。
【背景技術】
【０００２】
酸化損傷は、老化、炎症性障害、糖尿病、心血管疾患および神経変性過程を含む、種々の生理病理学的過程の病因発生（aetiogenesis）および／または進行に関与していることが広く実証されている。酸化損傷の原因となる主要な分子機構のうち、フリーラジカルの活性酸素種によって、および細胞の酸化還元状態が変化することによって誘発される、タンパク質、脂質および核酸への構造上の損傷が、決定的な役割を果たしている[Halliwell B, Gutteridge JM. Free Radicals in Biology and Medicine (2001) Oxford Science Publications, 3rd Ed.]。
【０００３】
ケト／アルデヒド官能基を特徴とする脂質酸化生成物の中には、生体分子の不可逆的な構造変異を引き起こし、その結果、細胞の機能性を変化させてしまうという、重要な細胞毒性の酸化媒介物質として作用するものがあることも示唆されている[Esterbauer H. et al., Free Radic. Biol. Med. 1991; 11:81-128；Uchida K. Free Radic. Biol. Med. 2000; 28:1685-96；Poli G. et al., IUBMB Life. 2000; 50:315-21]。
【０００４】
研究されているカルボニル化合物のうち、４−ヒドロキシ−トランス−２−ノネナール（ＨＮＥ）およびアクロレイン（ＡＣＲ）などのα，β−不飽和アルデヒドを含む多価不飽和脂肪酸の酸化生成物は、科学的にかなり興味深い。これらの誘導体の高い生物学的応答はそれらの求電子性に起因し、かかる求電子性は、タンパク質（ヒスチジン、リジンおよびシステイン残基）および核酸（デオキシグアノシン）に存在する求核部位との付加／抱合反応を引き起こし、その結果、細胞の応答／機能を変化させ、変異原性作用を引き起こす可能性がある[Esterbauer H. et al., Free Radic. Biol. Med. 1991; 11:81-128]。
【０００５】
不飽和アルデヒドが酸化に基づく種々の病理学的過程に関与していることは、モノクローナル抗体およびポリクロナール抗体を用いて実証されている[Uchida K. 4-Hydroxy-2-nonenal: a product and mediator of oxidative stress. Prog. Lipid Res. 2003; 42:318-43]。特に、糖尿病、アテローム性動脈硬化、筋ジストロフィー、関節リウマチ、日光弾性線維症、脳虚血ならびにアルツハイマー病およびパーキンソン病などの神経変性疾患に罹患している患者の生検および剖検組織において、タンパク質とＨＮＥおよびアクロレインとの付加物（adducts between HNE and acrolein with proteins）が確認されている[Uchida K. Prog. Lipid Res. 2003; 42:318-43；Zarkovic N. Mol. Aspects Med. 2003; 24:281-91；Zarkovic N. Mol. Aspects Med. 2003; 24:293-303；M. Carini et al. in「Redox Proteomics: from Protein Modifications to Cellular Dysfunction and Diseases」(Ed. I. Dalle-Donne, A. Scaloni, and A. Butterfield)；Wiley InterScience Books from John Wiley & Sons (2005)]。
【０００６】
ＨＮＥの病原性因子としての役割は、線維症[Chiarpotto E. et al., Biofactors. 2005;24(1-4):229-36]、糖尿病性腎症[Furfaro AL. et al. Biofactors. 2005;24(1-4):291-8.]、アテローム性動脈硬化過程[Leonarduzzi G. et al., Mol Nutr Food Res. 2005 Nov; 49(11):1044-9]および神経変性疾患[Zarkovic K. Mol Aspects Med. 2003 Aug-Oct; 24(4-5):293-303]を含む、種々の疾患に関して分子レベルで実証されている。
【０００７】
したがって、カルボニル消失活性を有する、新規の生物学的に活性な分子類の開発にとって、カルボニルプロセス、特に、ＨＮＥなどの活性カルボニル化合物が、重要な標的となることは明白である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００８】
【非特許文献１】Halliwell B, Gutteridge JM. Free Radicals in Biology and Medicine (2001) Oxford Science Publications, 3rd Ed.
【非特許文献２】Esterbauer H. et al., Free Radic. Biol. Med. 1991; 11:81-128
【非特許文献３】Uchida K. Free Radic. Biol. Med. 2000; 28:1685-96
【非特許文献４】Poli G. et al., IUBMB Life. 2000; 50:315-21
【非特許文献５】Esterbauer H. et al., Free Radic. Biol. Med. 1991; 11:81-128
【非特許文献６】Uchida K. 4-Hydroxy-2-nonenal: a product and mediator of oxidative stress. Prog. Lipid Res. 2003; 42:318-43
【非特許文献７】Uchida K. Prog. Lipid Res. 2003; 42:318-43
【非特許文献８】Zarkovic N. Mol. Aspects Med. 2003; 24:281-91
【非特許文献９】Zarkovic N. Mol. Aspects Med. 2003; 24:293-303
【非特許文献１０】M. Carini et al. in「Redox Proteomics: from Protein Modifications to Cellular Dysfunction and Diseases」(Ed. I. Dalle-Donne, A. Scaloni, and A. Butterfield)
【非特許文献１１】Wiley InterScience Books from John Wiley & Sons (2005)
【非特許文献１２】Chiarpotto E. et al., Biofactors. 2005;24(1-4):229-36
【非特許文献１３】Furfaro AL. et al. Biofactors. 2005;24(1-4):291-8.
【非特許文献１４】Leonarduzzi G. et al., Mol Nutr Food Res. 2005 Nov; 49(11):1044-9
【非特許文献１５】Zarkovic K. Mol Aspects Med. 2003 Aug-Oct; 24(4-5):293-303
【発明の概要】
【０００９】
発明の開示
本発明は、神経変性疾患、慢性炎症性疾患、心血管疾患、糖尿病合併症および白内障などの極めて多くの慢性病変の発症の一因となることが知られている、脂質酸化ストレス由来の二次生産物に対して、特に、マロンジアルデヒドおよびヒドロキシノネナールなどの不飽和アルデヒドに対して、興味深い遮断活性を有することが判明した、ヒスチジン残基を含むジペプチド化合物に関する。
【００１０】
本発明はさらに、前記病変の治療または予防のための前記化合物の使用に関する。
【００１１】
本発明の化合物は、一般式Ｉを有する。
【００１２】
【化１】
2009541295.tif 000002
【００１３】
式中、
ＲおよびＲ1は、同一または異なっていてよく、
水素、ただし、それらの少なくとも１つは水素ではなく；
直鎖もしくは分枝状Ｃ1〜Ｃ8または環状Ｃ3〜Ｃ7アルキル基；
アリール−Ｃ1〜Ｃ5−アルキル基またはヘテロアリール−Ｃ1〜Ｃ5−アルキル基；
アリール基またはヘテロアリール基；
Ｒ1がアミノ基でありＲ、Ｒ2、Ｒ3およびＲ4が水素である場合を除いては遊離のアミノ基、または、場合によってはアルキルカルボニル基、アリールカルボニル基、ヘテロアリールカルボニル基、アリールアルキルカルボニル基、ヘテロアリールアルキルカルボニル基、アルキルオキシカルボニル基、もしくはアリールアルキルオキシカルボニル基で置換されているアミノ基；
ヒドラジン基、ヒドロキシルアミノ基またはグアニジン基；
Ｃ1〜Ｃ5アルキル基、アリール基またはアリールアルキル基で場合によって置換されているヒドロキシ基；
であるか、
あるいは、
ＲおよびＲ1は、一緒になって式ＩＩの化合物を形成し、ここで、ＸおよびＹは、同一または異なっていてよく、硫黄原子、窒素原子、もしくは酸素原子またはＣＨ2基であり、ｎおよびｍは、同一または異なっていてよく、０〜５の範囲の値を有するか；
【００１４】
【化２】
2009541295.tif 000003
【００１５】
あるいは、
ＲおよびＲ1は、一緒になって二重結合を形成して、式ＩＩＩの化合物を与え；
【００１６】
【化３】
2009541295.tif 000004
【００１７】
Ｒ2およびＲ3は、同一または異なっていてよく、
水素、
１個以上の二重結合を場合によって含む直鎖もしくは分枝状Ｃ1〜Ｃ20または環状Ｃ3〜Ｃ7アルキルカルボニル基、アリールカルボニル基またはアリールアルキルカルボニル基、
１個以上の二重結合を場合によって含む直鎖もしくは分枝状Ｃ1〜Ｃ10または環状Ｃ3〜Ｃ7アルキルオキシカルボニル基、アリールオキシカルボニル基またはアリールアルキルオキシカルボニル基、
アミノ基、
ヒドロキシ基、
一般式ＩＶの基、
【００１８】
【化４】
2009541295.tif 000005
【００１９】
ここで、Ｍは、窒素、酸素または硫黄であり、Ａは、水素またはアミノ基であり；
であり、
Ｒ4は、
ヒドロキシ基、
アミノ基、ただし該アミノ基は場合によっては基によって一置換または二置換され、その基は同一または異なっていてよく、その基は、
１個以上の二重結合を場合によって含む直鎖もしくは分枝状Ｃ1〜Ｃ20または環状Ｃ3〜Ｃ7アルキル基、
アリール基またはアリールアルキル基、
１個以上の二重結合を場合によって含む直鎖もしくは分枝状Ｃ1〜Ｃ20または環状Ｃ3〜Ｃ7アルキルオキシカルボニル基、
から選択され、
アリール基、ヘテロアリール基、ヘテロアリールアルキル基またはアリールアルキル基、
１個以上の二重結合を場合によって含む直鎖もしくは分枝状Ｃ1〜Ｃ10または環状Ｃ3〜Ｃ7アルコキシ基、
直鎖状、分枝状または環状のアルキルを有する、アルコキシカルボニルオキシアルコキシ基またはアルキルカルボニルオキシアルコキシ基、
アリールオキシ基、ヘテロアリールオキシ基、ヘテロアリールアルキルオキシ基またはアリールアルコキシ基
である。
【００２０】
本発明はまた、一般式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの化合物のジアステレオマーを、単独で、すなわち、任意の比のその混合物で含み、医薬的に許容できるその塩、および亜鉛または銅などの金属カチオンを有するその化合物の錯体も含む。
【００２１】
上記定義のアリール基、ヘテロアリール基、アリール−アルキル基、ヘテロアリール−アルキル基、アリールカルボニル基、ヘテロアリールカルボニル基、ヘテロアリールアルキルカルボニル基、アリールアルキルカルボニル基、アリールオキシカルボニル基、アリールアルキルオキシカルボニル基、アリールオキシ基、ヘテロアリールオキシ基、ヘテロアリールアルキルオキシ基、アリールアルコキシ基、アリールスルホニル基
のアリールまたはヘテロアリール部分は、単環式または多環式であってよく、
ヒドロキシ基、メトキシ基、Ｃ1〜Ｃ5−アルコキシカルボニル基；
アミノ基、Ｃ1〜Ｃ5−モノ−またはジ−アルキルアミノ基、Ｃ1〜Ｃ5−アシルアミノ基；
Ｃｌ、Ｂｒ、Ｆ、Ｉなどのハロゲン原子；
直鎖状または分枝状または環状のアルキル基
から選択される、一個以上の置換基で、場合によって置換されていてもよい。
【００２２】
好ましいアルキル基、アルキルオキシカルボニル基、アルコキシ基またはアルコキシカルボニル基は、アルキル基が、メチル、エチル、プロピル、イソプロピル、ｎ−ブチル、ｓｅｃ−ブチル、ｔｅｒｔ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−オクチル、ｎ−デシルである基である。
【００２３】
好ましいシクロアルキル基は、シクロプロピル、シクロペンチルおよびシクロヘキシルである。
【００２４】
「アリール基または残基」とは、好ましくはフェニルまたはナフチルを意味し、より好ましくはフェニルを意味し、場合によっては、ヒドロキシ基、メチル基、シクロプロピル基、メトキシ基、アミノ基、ジメチルアミノ基、メチルアミノ基、エチルアミノ基、ジエチルアミノ基、アセチルアミノ基、ホルミルアミノ基、プロピオニルアミノ基、ブタノイルアミノ基、ハロゲン原子で置換されている。
【００２５】
好ましいアラルキル基は、ベンジルまたはフェネチルである。
【００２６】
「ヘタリル基または残基」とは、好ましくは、イミダゾリル、ピリジル、ピリミジニル、ピラジニル、チエニル、フロイル、チアゾリル、トリアゾリル、オキサゾリルを意味する。
【００２７】
式Ｉの好ましい化合物は、以下のものである。すなわち、
ａ）Ｒ1は水素であり、Ｒは、上記定義のアルキル基、アリール基またはアラルキル基である；
ｂ）Ｒ1はアミノ基であり、Ｒは水素である；
ｃ）Ｒ1は、上記定義のアルキル基、アリール基またはアラルキル基であり、Ｒは水素である；
ｄ）Ｒ2およびＲ3は、水素、アルキルカルボニル、アルコキシカルボニル、アリールカルボニルまたはアリールアルコキシカルボニルであるが、ＲおよびＲ1は項目ａ）〜ｃ）に示されているような好ましい意味を有する；
ｅ）Ｒ4はアルコキシであるが、Ｒ、Ｒ1、Ｒ2およびＲ3は、項目ａ〜ｄに示されているような好ましい意味を有する。
【００２８】
本発明の化合物は、文献、例えばHouben-Weil、「Synthesis of peptides and peptidomimetics」vol. E22 a-dまたはJ. Jones、「Amino acid and peptide synthesis」に報告されているような、ペプチド合成のためのよく知られている固相法または溶液法のいくつかを使用して調製した。合成に使用するアミノ酸は、すでに保護されている形で入手できない場合には、例えば、T.W. Greene, P.G.M. Wuts、「Protective group in organic synthesis」、またはP.J. Kocienski、「Protecting groups」などに報告されている確立された手法を使用して、必要な保護基にて適当に官能基化した。
【００２９】
得られた最終生成物は、必要な場合には、当業者によく知られている手法に従い、例えば結晶化、クロマトグラフ精製または化合物を所望の純度で得るために必要な他の技術を使用して精製した。
【００３０】
本発明の化合物の薬理活性は、インビトロにて、多くの病変に関与していることで知られている、４−ヒドロキシノネナール（ＨＮＥ）に対するカルボニル消失活性を評価し、判定した。
【００３１】
所望の用途に応じ、式Ｉ、ＩＩまたはＩＩＩの化合物は、経口、非経口、局所または経皮経路による投与に適した、従来の医薬組成物、化粧用組成物または栄養組成物に、都合よく調剤される。前記組成物は、本発明のさらなる目的である。前記組成物の例は、カプセル剤、錠剤、シロップ剤、注射用液剤または懸濁剤、軟膏、坐剤、制御放出剤形など、水溶性造粒剤である。前記剤形は、製剤技術において使用される担体および賦形剤に加えて、場合によっては、当該病変の治療／予防に対して、相補的またはとにかく有用な活性を有する他の活性成分を含むことができる。
【００３２】
本発明は、以下の例によって詳しく説明される。
【００３３】
ジペプチド誘導体の一般的な合成方法
１．２ｅｑのＦｍｏｃ−Ｄ−Ｈｙｓ（Ｔｒｔ）−ＯＨを、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）中、３ｅｑのジイソプロピルエチルアミン存在下、クロロトリチルＰＳ樹脂に結合させる。Ｆｍｏｃ基を、ピペリジン／ＤＭＦ（２５／７５）溶液で１５分間、２回処理することによって除去する。次いで、適当なＢｏｃ−アミノ酸（２ｅｑ）、ＰｙＢｏｐ（２ｅｑ）およびＨＯＢＴ（２ｅｑ）のＤＭＦ溶液を、前記樹脂を含む反応器に加え、続いて５ｅｑのジイソプロピルエチルアミンを加える。反応の終了は、カイザー試験によってモニターする。適当に洗浄した後、ジクロロメタン中５％水を含むトリフルオロ酢酸溶液を使用して、ペプチドを樹脂から切断する。その粗ペプチドを、適当な溶媒、通常エーテルを使用して沈澱させることによって、溶液から回収する。次いで、逆相カラムを使用し、水およびアセトニトリルの混合物で溶出する、分取用ＨＰＬＣによって、粗ペプチドを精製する。純粋な生成物を含む画分を濃縮してアセトニトリルを除去し、次いで凍結乾燥して固体生成物を得る。
【００３４】
この手法に従い、以下の例となる化合物を調製した。
【００３５】
（３Ｓ）−３−アミノ−３−フェニルプロパノイル−Ｄ−ヒスチジン（ＦＬ−９２６−Ａ−００６）
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−Ｄ６）：８．４７〜８．４５（１Ｈ，ｄ）、７．６９（１Ｈ，ｓ）、７．５５〜７．４１（５Ｈ，ｍ）、６．８８（１Ｈ，ｓ）、４．６９〜４．６５（１Ｈ，ｔ）、４．３８〜４．３４（１Ｈ，ｍ）、３．１５〜３．０８（１Ｈ，ｄｄ）、２．９０〜２．７３（３Ｈ，ｍ）。
【００３６】
13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−Ｄ６）：１７２．５４、１６８．８０、１３８．２７、１３５．０１、１３４．０８、１２９．１６、１２８．９６、１２７．４８、１１７．１３、５４．０５、５２．２２、４１．１２、２９．３０。
【００３７】
（３Ｓ）−３−アンミノブタノイル−Ｄ−ヒスチジン（ＦＬ−９２６−Ａ−００２）。
【００３８】
1Ｈ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）：８．３８（１Ｈ，ｓ）、７．２０（１Ｈ，ｓ）、４．５１〜４．４６（１Ｈ，ｄｄ）、３．７１〜３．６５（１Ｈ，ｍ）、３．２７〜３．２０（１Ｈ，ｄｄ）、３．１１〜３．０３（１Ｈ，ｄｄ）、２．７２〜２．５３（２Ｈ，ｍ）、１．２８〜１．２６（３Ｈ，ｄ）。
【００３９】
13Ｃ−ＮＭＲ（Ｄ2Ｏ）：１７６．６５、１７１．１９、１３３．６７、１３０．３７、１１６．８３、５４．２３、４４．８７、３８．９７、２７．４７、２３．１９。
【００４０】
（２Ｒ，３Ｓ）−３−アミノ−２−ヒドロキシ−４−フェニルブタノイル−Ｄ−ヒスチジン（ＦＬ−９２６−Ａ−００５）。
【００４１】
1Ｈ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−Ｄ６）：８．２０〜８．１８（１Ｈ，ｄ）、７．６５（１Ｈ，ｓ）、７．４０〜７．２８（５Ｈ，ｍ）、６．８９（１Ｈ，ｓ）、４．３８〜４．３２（１Ｈ，ｓ）、４．２０〜４１９（１Ｈ，ｄ）、３．５９（１Ｈ，ｂｓ）、３．１３〜２．８０（４Ｈ，ｍ）。
【００４２】
13Ｃ−ＮＭＲ（ＤＭＳＯ−Ｄ６）：１７２．５３、１７０．８８、１３７．５０、１３５．１４、１３４．１８、１２９．９３、１２８．８９、１２７．０５、１１７．３５、７１．１９、５６．３０、５４．０４、３４．３２、２８．９５。
【００４３】
薬理検定
本発明の選択された一連の化合物のカルボニル消失活性を、ＨＮＥ（５０μＭ）をその試験化合物（１ｍＭ）と共に、リン酸緩衝液（１０ｍＭ）中、ｐＨ７．４、３７℃でインキュベートすることで、インビトロにて評価した。その活性は、Aldini Gらによる［Biochem Biophys Res Commun. 2002 Nov 15;298(5):699-706］に記載されているように、インキュベーション１、２および３時間後に、ＨＮＥの残存量を逆相クロマトグラフィーによって測定することで、評価した。カルボニル消失活性を、試験化合物の非存在下でのＨＮＥ含量と比較し、反応済ＨＮＥの百分率として表している。
【００４４】
表Ｉにまとめた結果は、すべての試験化合物は、その程度は異なるが、活性があることを証明している。特にＨＮＥなどのα，β−不飽和アルデヒドに対してよく知られた、カルノシンのカルボニル消失活性を考慮して、カルノシンを対照として用いた［Aldini G et al.: Biofactors. 2005; 24(1-4):77-87；Aldini G. et al.: Biochem Biophys Res Commun. 2002 Nov 15; 298(5):699-706］。驚いたことに、本発明の一連の化合物は、カルノシンに比べて著しく活性が高いことが判明し、化合物ＦＬ−９２６−Ａ−００６の場合には、かかる活性が、インキュベーション１時間後にほぼ２倍高かった。
【００４５】
【表１】
2009541295.tif 000006
【国際調査報告】
2009541295.tif 000011
2009541295.tif 000012
2009541295.tif 000013