(57)【要約】  本発明は、キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による処置に対する応答を、該キネシンスピンドルタンパク質（ＫＳＰ）阻害剤に対する感受性マーカーとして、ＨＳＰＡ１ａとしても知られている熱ショックタンパク質７０、イソ型Ａ１ａを用いて予測するための方法に関する。キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による処置に対する、それを必要とする第一の哺乳類の応答を予測するための方法であって、該第一哺乳類によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量を決定することを含み、この際、該第一哺乳類によって産生される該ＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量が該キネシンスピンドルタンパク質阻害剤に対する該哺乳類の感受性を示す方法が提供される。
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による処置に対する、それを必要とする第一の哺乳類の応答を予測するための方法であって、該第一哺乳類によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量を決定することを含み、この際、該第一哺乳類によって産生される該ＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量が該キネシンスピンドルタンパク質阻害剤に対する該哺乳類の感受性を示す、方法。
【請求項２】
前記ＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物が前記第一哺乳類由来の少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生される、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記第一哺乳類が腎臓癌、結腸癌、肺癌、および乳癌の群から選択される疾患に罹患している、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記第一哺乳類由来の前記少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量が遺伝子発現プロファイリングによって決定される、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
遺伝子発現プロファイリング方法がAffymetrix（登録商標）およびTaqman遺伝子発現プロファイリングの群から選択される、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記第一哺乳類由来の前記少なくとも１つの腫瘍細胞がウィルムス腫瘍細胞、ＭＸ１、ＭＶ５２２、ＯＶＣＡＲ−３、ＰＣ−３、ＳＫ−ＯＶ−３、ＭＣＦ７、ＨＴ−２９、Ａ５４９、Ａ４９８、ＣＯＬＯ２０１、ＣＯＬＯ２０５、ＨＬ−６０、ＪＵＲＫＡＴ、ＬＮＣａＰ、ＭＯＬＴ−４、ＲＡＪＩ、ＳＷ−６２０、ＴＨＰ−１、およびＵ９３７の群から選択される種類のものである、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記第一哺乳類由来の前記少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量が、前記キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による処置に対して抵抗性である第二の哺乳類由来の少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量より統計的に有意に低いならば、前記第一哺乳類が、前記キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による処置に対して感受性であると予測される、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記第一哺乳類由来の前記少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量と、第二の哺乳類由来の少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量との比較が、統計のＰ値≦０．０５である、請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記第一哺乳類および前記第二哺乳類がヒトである、請求項７に記載の方法。
【請求項１０】
キネシンスピンドルタンパク質阻害剤により第一の哺乳類における細胞増殖性障害を治療するための方法であって、該第一哺乳類によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量を決定することを含む該キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による処置に対する臨床応答の予測を含み、この際、該第一哺乳類によって産生される該ＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量が該キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による処置に対する該哺乳類の感受性を示す、方法。
【請求項１１】
前記ＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物が前記第一哺乳類由来の少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
前記細胞増殖性障害が腎臓癌、結腸癌、肺癌、および乳癌の群から選択される、請求項１０に記載の方法。
【請求項１３】
前記少なくとも１つの腫瘍細胞がウィルムス腫瘍細胞、ＭＸ１、ＭＶ５２２、ＯＶＣＡＲ−３、ＰＣ−３、ＳＫ−ＯＶ−３、ＭＣＦ７、ＨＴ−２９、Ａ５４９、Ａ４９８、ＣＯＬＯ２０１、ＣＯＬＯ２０５、ＨＬ−６０、ＪＵＲＫＡＴ、ＬＮＣａＰ、ＭＯＬＴ−４、ＲＡＪＩ、ＳＷ−６２０、ＴＨＰ−１、およびＵ９３７の群から選択される種類のものである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記第一哺乳類由来の前記少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量が、前記キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による処置に対して抵抗性である第二の哺乳類由来の少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量より統計的に有意に低いならば、前記第一哺乳類が、前記キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による処置に対して感受性であると予測される、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
前記第一哺乳類由来の前記少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量と、第二の哺乳類由来の少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量との比較が、Ｐ値≦０．０５である、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
前記第一哺乳類および前記第二哺乳類がヒトである、請求項１４に記載の方法。
【請求項１７】
キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による細胞増殖性障害の処置に対する哺乳類の臨床応答を予測するためのキットであって、該哺乳類由来の組織サンプル中のＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量を検出することができる試薬を含んでなり、この際、該組織サンプル中の該ＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量が該キネシンスピンドルタンパク質阻害剤に対する該哺乳類の感受性を示す、キット。
【請求項１８】
前記組織サンプルが少なくとも１つの腫瘍細胞を含んでなる、請求項１７に記載のキット。
【請求項１９】
前記哺乳類がヒトである、請求項１７に記載のキット。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による処置に対する応答を、該キネシンスピンドルタンパク質（ＫＳＰ）阻害剤に対する感受性マーカーとして、ＨＳＰＡ１ａとしても知られている熱ショックタンパク質７０ｋＤａ、イソ型Ａ１ａを用いて予測するための方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
世界中で癌罹患率が高く、市場には様々な癌治療法があり、患者にとって最良の処置を決定する必要が生じる。患者がある特定の治療法に対してどの程度応答するかを予測することができるマーカーは、臨床試験のために患者を選抜する手助けをする他に、患者をより効果的に治療する大きな手助けとなるであろう。
【０００３】
キネシンスピンドルタンパク質（ＫＳＰ）は、有糸分裂プロセスにおける最初期ステップの１つである中心体の分離に関与する有糸分裂キネシンモータータンパク質である(Blangy, et al., Cell. 1995; 83:1159-1169)。中心体が反対極に向かって移動すると、二極性の紡錘体が形成される。形成されない場合には、有糸分裂が停止する。そのため、キネシンスピンドルタンパク質（ＫＳＰ）などのキネシンモータータンパク質の阻害剤は、新世代の分裂抑制因子として魅力的な代替手段を提供する。
【０００４】
熱ショック７０ｋＤａタンパク質１Ａ（ＨＳＰＡ１ａ）は、キネシンスピンドルタンパク質（ＫＳＰ）阻害剤に対する感受性マーカーの一例である。ＨＳＰＡ１ａは、タンパク質を凝集に対して安定化させる手助けをし、タンパク質フォールディングを媒介する働きをする。他の遺伝子の別名としては、ＨＳＰ７２；ＨＳＰＡ１；ＨＳＰＡ１Ｂ；およびＨＳＰ７０−１が挙げられる。ヒトゲノムにおいては熱ショックタンパク質７０ｋＤａ（ＨＳＰ７０）について８つの公知イソ型が存在するが、ヒトＨＳＰＡ１ａ（配列番号１）だけがＫＳＰ阻害剤に対する感受性と関係している。従って、患者のＫＳＰ阻害剤に対する感受性を予測するための方法が必要である。
【先行技術文献】
【非特許文献】
【０００５】
【非特許文献１】Blangyら、Cell. 1995; 83:1159-1169
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【０００６】
患者のＫＳＰ阻害剤に対する感受性を予測するための方法に対する要求がある。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
本発明の一態様において、キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による処置に対する、それを必要とする第一の哺乳類の応答を予測するための方法であって、該第一哺乳類によって産生される熱ショック７０ｋＤａ、イソ型Ａ１ａ（ＨＳＰＡ１ａ）ｍＲＮＡ転写物の量を決定することを含み、この際、該第一哺乳類によって産生される該ＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量が該キネシンスピンドルタンパク質阻害剤に対する該哺乳類の感受性を示す方法が提供される。
【０００８】
本発明の別の態様において、キネシンスピンドルタンパク質阻害剤により第一の哺乳類における細胞増殖性障害を治療するための方法であって、該第一哺乳類によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量を決定することを含む該キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による処置に対する臨床応答の予測を含み、この際、該第一哺乳類によって産生される該ＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量が該キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による処置に対する該哺乳類の感受性を示す方法が提供される。
【０００９】
さらに別の態様において、本発明は、キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による細胞増殖性障害の処置に対する哺乳類の臨床応答を予測するためのキットであって、該哺乳類由来の組織サンプル中のＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量を検出することができる試薬を含んでなり、この際、該組織サンプル中の該ＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量が該キネシンスピンドルタンパク質阻害剤に対する該哺乳類の感受性を示すキットを提供する。
【図面の簡単な説明】
【００１０】
【図１】ヒトＨＳＰＡ１ａ（配列番号１）のアミノ酸配列を示す。
【図２】ウィルムス腫瘍サンプルにおけるヒトＨＳＰＡ１ａ（配列番号１）の発現レベルを示す。
【図３】前臨床細胞系統におけるヒトＨＳＰＡ１ａ（配列番号１）の発現レベルを示す。
【図４】ヒト（Ｈｓと表している）、アフリカミドリザル（ｃａと表している）、マウス（ｍｍと表している）、ラット（ｒｎと表している）およびウシ（ｂｔと表している）由来の、ＨＳＰＡ１Ａ、ＨＳＰＡ１Ｂ、ＨＳＰＡ１Ｌを含む哺乳類熱ショックタンパク質（配列番号１〜１２）のアミノ酸アラインメントを示す。
【発明を実施するための形態】
【００１１】
本発明は、キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による処置に対する哺乳類の応答を予測するための様々な方法を提供する。また、哺乳類における細胞増殖性障害を治療するための方法も提供する。本発明はまた、キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による細胞増殖性障害の処置に対する哺乳類の臨床応答を予測するためのキットも提供する。
【００１２】
定義
本明細書において、そして当技術分野において理解されているように「より統計的に有意に低い」とは、ある特定の結果が偶然だけで起こるという可能性が１００回のうち５回より少ない（ｐ＜０．０５）ことを指す。群間で認められた差は偶然にのみ起こったという確率の尺度である、統計のＰ値は、当技術分野において理解されている多数の統計的アルゴリズムによって計算することができる。
【００１３】
本明細書において「遺伝子発現プロファイリングのための方法」とは、少なくとも１つの細胞における特定の遺伝子の遺伝子発現量のいずれかを測定することができる任意の方法を指す。かかる方法としては、限定されるものではないが、ＲＴ−ＰＣＲおよびマイクロアレイが挙げられる。かかる方法には、限定されるものではないが、特定の遺伝子からの、ｍＲＮＡ発現またはポリペプチド発現（前駆体または成熟ポリペプチド発現を含む）の定性的または定量的測定を含み得る。
【００１４】
当業者には、細胞によって産生されるある特定のタンパク質のレベルが、それをコードするメッセンジャーＲＮＡ（ｍＲＮＡ）のレベルと関係していることは理解されるであろう。そのため、ＨＳＰＡ１ａ（配列番号１）などのタンパク質のアミノ酸配列が公知であるときには、方法を容易に考えることができ、この方法によれば少なくとも１つの腫瘍細胞における産生が、該タンパク質に対応するｍＲＮＡのレベルを測定することによって決定されるであろう。加えて、ある特定のタンパク質に関する各ｍＲＮＡの相補的ＤＮＡもその特異的認識エレメントであり得、ノーザンブロット、スロットブロット、in situハイブリダイゼーション、およびポリメラーゼ連鎖反応（ＰＣＲ）として知られる既存の技術もタンパク質レベルを決定するために適用することができた。対応するタンパク質の産生を決定するためにはメッセンジャーＲＮＡレベルが使用されてきた(G. Bevilacqua, M. E. Sobel, L. A. Liotta and T. S. Steeg, Cancer Res. 49, 5185-5190 (1989))。ヒト由来のＨＳＰＡ１ａの配列アラインメント（配列番号１）と、ヒト（Ｈｓと表している）、アフリカミドリザル（ｃａと表している）、マウス（ｍｍと表している）、ラット（ｒｎと表している）およびウシ（ｂｔと表している）由来の、ＨＳＰＡ１ａ、ＨＳＰＡ１ｂ、ＨＳＰＡ１Ｌを含む他の哺乳類熱ショックタンパク質（配列番号２〜１２）との比較を図４Ａ〜Ｃに示している。
【００１５】
本明細書において「細胞増殖性障害」とは、癌、アテローム性動脈硬化症、関節リウマチおよび乾癬などのいくつかの疾患の病因に関与する可能性がある、細胞の過剰増殖および細胞マトリックスのターンオーバーを指す。
【００１６】
紡錘体は、臨床的に確証された抗癌薬標的であり、その破壊は、腫瘍細胞を標的とするための成功率が高い戦略の１つである(Wood, et al., Curr Opin Pharmacol. 2001; 1:370-377)。この紡錘体は微小管、微小管結合タンパク質およびモータータンパク質からなり、多くの有糸分裂キネシンを含む。細胞周期が有糸分裂を経て進行するためには、この紡錘体が正確に形成することが必要である(Wood, et al., 前掲).
【００１７】
キネシンスピンドルタンパク質（ＫＳＰ）は、有糸分裂プロセスにおける最初期ステップの１つである中心体の分離に関与する有糸分裂キネシンモータータンパク質である(Blangy, et al., Cell. 1995; 83:1159-1169.)。中心体が反対極に向かって移動すると、二極性の紡錘体が形成される。形成されない場合には、有糸分裂が停止する。そのため、キネシンスピンドルタンパク質（ＫＳＰ）などのキネシンモータータンパク質の阻害剤は、新世代の分裂抑制因子として魅力的な代替手段を提供する。
【００１８】
腫瘍生検標本はｍＲＮＡを含み、このｍＲＮＡを抽出し、その特定の腫瘍における遺伝子の発現レベルを測定するために使用することができる。ヒトウィルムス腫瘍の異種移植片を用いた基礎遺伝子発現の予備解析では、ＨＳＰＡ１ａ発現はＫＳＰ阻害剤に対して抵抗性である腫瘍では高く、その阻害剤に対して感受性である腫瘍では発現せず、これらの異なる腫瘍間での基礎発現において２０〜３０倍の差が生じていることが示されている。ＫＳＰ阻害剤に対する結果が分かっている前臨床細胞系統でのさらなる研究では、応答物と非応答細胞系統を〜９１％の信頼で識別する単一遺伝子転写物、ＨＳＰＡ１ａの能力が確認されている。よって、本発明により示されるとおり、ＨＳＰ７０のイソ型であるＨＳＰＡ１ａは、ＫＳＰ阻害剤に対する応答の効果的なマーカーとして役割を果たす。
【００１９】
従って、本発明は、キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による処置に対する、それを必要とする第一の哺乳類の応答を予測するための方法であって、該第一哺乳類によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量を決定することを含み、この際、該第一哺乳類によって産生される該ＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量が該キネシンスピンドルタンパク質阻害剤に対する該哺乳類の感受性を示す方法を提供する。前記ＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物は、前記第一哺乳類由来の少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生される可能性がある。前記哺乳類は、腎臓癌、結腸癌、肺癌、および乳癌の群から選択される疾患に罹患している可能性がある。前記第一哺乳類由来の前記少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量は、様々な遺伝子発現プロファイリング技術によって決定してよく、これらの技術には、限定されるものではないが、Affymetrix（登録商標）またはTaqman遺伝子発現プロファイリングが含まれる。腫瘍細胞は、限定されるものではないが、ウィルムス腫瘍、ＭＸ１、ＭＶ５２２、ＯＶＣＡＲ−３、ＰＣ−３、ＳＫ−ＯＶ−３、ＭＣＦ７、ＨＴ−２９、Ａ５４９、Ａ４９８、ＣＯＬＯ２０１、ＣＯＬＯ２０５、ＨＬ−６０、ＪＵＲＫＡＴ、ＬＮＣａＰ、ＭＯＬＴ−４、ＲＡＪＩ、ＳＷ−６２０、ＴＨＰ−１、およびＵ９３７の群から選択してよい。
【００２０】
前記第一哺乳類由来の前記少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量は、当技術分野で公知の様々な統計的方法によって、第二の哺乳類由来の少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量と統計的に比較し得る。これらの方法としては、限定されるものではないが、スチューデントｔ検定またはＡＮＯＶＡ比較が挙げられる。よって、本発明の一態様において、前記第一哺乳類由来の前記少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量は、前記キネシンスピンドルタンパク質阻害剤(said kinsesin spindle protein inhibitor)による処置に対して抵抗性である第二の哺乳類由来の少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量より統計的に有意に低い。前記第一哺乳類由来の前記少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量と、第二の哺乳類由来の少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量との比較は、統計のＰ値≦０．０５であってよい。本発明の一態様において、前記第一哺乳類および前記第二哺乳類はヒトである。
【００２１】
本発明の別の態様は、キネシンスピンドルタンパク質阻害剤により第一の哺乳類における細胞増殖性障害を治療するための方法であって、該第一哺乳類によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量を決定することを含む該キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による処置に対する臨床応答の予測を含み、この際、該第一哺乳類によって産生される該ＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量が該キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による処置に対する該哺乳類の感受性を示す方法を提供する。前記ＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物は、前記第一哺乳類由来の少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生される可能性がある。前記細胞増殖性障害は、腎臓癌、結腸癌、肺癌、および乳癌から選択してよい。腫瘍細胞としては、限定されるものではないが、ウィルムス腫瘍細胞、ＭＸ１、ＭＶ５２２、ＯＶＣＡＲ−３、ＰＣ−３、ＳＫ−ＯＶ−３、ＭＣＦ７、ＨＴ−２９、Ａ５４９、Ａ４９８、ＣＯＬＯ２０１、ＣＯＬＯ２０５、ＨＬ−６０、ＪＵＲＫＡＴ、ＬＮＣａＰ、ＭＯＬＴ−４、ＲＡＪＩ、ＳＷ−６２０、ＴＨＰ−１、およびＵ９３７が挙げられる。本発明の別の態様において、前記第一哺乳類由来の前記少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量が、前記キネシンスピンドルタンパク質阻害剤(said kinsesin spindle protein inhibitor)による処置に対して抵抗性である第二の哺乳類由来の少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量より統計的に有意に低いならば、前記第一哺乳類は、前記キネシンスピンドルタンパク質阻害剤(said kinsesin spindle protein inhibitor)による処置に対して感受性であると予測される。前記第一哺乳類由来の前記少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量と、第二の哺乳類由来の少なくとも１つの腫瘍細胞によって産生されるＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量との比較は、Ｐ値≦０．０５であってよい。本発明の一態様において、前記第一哺乳類および前記第二哺乳類がヒトである。
【００２２】
さらに別の態様では、本発明は、キネシンスピンドルタンパク質阻害剤による細胞増殖性障害の処置に対する哺乳類の臨床応答を予測するためのキットであって、該哺乳類由来の組織サンプル中のＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量を検出することができる試薬を含んでなり、この際、該組織サンプル中の該ＨＳＰＡ１ａ  ｍＲＮＡ転写物の量が該キネシンスピンドルタンパク質阻害剤に対する該哺乳類の感受性を示すキットを提供する。一態様において、前記組織サンプルは少なくとも１つの腫瘍細胞を含んでなる。別の態様において、前記哺乳類はヒトである。
【００２３】
次の実施例によって本発明の様々な態様を例示する。これらの実施例は、例示するものであって、本発明の範囲を限定するものではなく、本発明は添付の特許請求の範囲によって定義される。
【００２４】
実施例１
イスピネシブメシレート(Ispinesib mesylate)は癌治療の臨床開発において強力な選択的ＫＳＰ阻害剤である(Johnson, et al. Proc Am Assoc Cancer Res. 2002;43;269. Abstract 1335; Jackson, et al. Proc Am Assoc Cancer Res. 2002;43;269. Abstract 1336; Gonzales, et al. Proc Am Assoc Cancer Res. 2002;43;269. Abstract 1337.)。ＫＳＰは、出現する紡錘体の２つの中心体を引き離すように作用する。イスピネシブによるＫＳＰの阻害では、二極性の紡錘体の形成を妨げ、その結果細胞周期を停止させる(Johnson, et al., 前掲; Jackson, et al., 前掲; Gonzales, et al, 前掲)。
【００２５】
ヒトウィルムス腫瘍異種移植片モデルにおけるＫＳＰ阻害剤に対する感受性に関係している基礎発現パターンを確認するために、Affymetrix（登録商標）遺伝子発現プロファイリングを行った。イスピネシブメシレート阻害に対する結果（２〜３回の反復）が分かっている３つの異なるウィルムス腫瘍由来の全ＲＮＡを５μｇのプロトコールを用いて標識し、HG-U133A Affymetrix（登録商標）アレイとハイブリダイズした。イスピネシブメシレートに対して抵抗性である腫瘍（ＷＴ７およびＷＴ８）と感受性である腫瘍（ＷＴ１０）との基礎遺伝子発現の差を比較した。発現差に基づいてデータを分類すると、ＨＳＰＡ１ａは、抵抗性である腫瘍と感受性である腫瘍との間に２９倍の発現差があった（図２に示すとおりである）。前記化合物に対して感受性であるウィルムス腫瘍では平均発現が９１４．３３であるのに対して、抵抗性である腫瘍では平均発現が３０．９５であり、これにより発現の低さが感受性と関係していることが分かる。同じ腫瘍のＱＰＣＲによる検証によりこの発現パターンが確認された。
【００２６】
実施例２
４つの細胞系統：イスピネシブメシレートに対して抵抗性であるＭＸ１（乳癌）およびＭＶ５２２（肺癌）ならびにイスピネシブメシレート阻害に対して感受性であるＣｏｌｏ２０１（結腸癌）およびＣｏｌｏ２０５（結腸癌）においてＨＳＰＡ１ａの基礎発現を検証した。腫瘍と同様に、ＨＳＰＡ１ａ発現によって抵抗性である前記細胞系統と感受性である前記細胞系統が識別された。ＫＳＰ阻害剤に対して抵抗性である細胞系統は平均遺伝子強度が９３０．９２であり、一方感受性である細胞系統は平均遺伝子強度が１７．２であった。
【００２７】
実施例３
実施例２に示したものと比較して、固形腫瘍および液性腫瘍の両方由来の細胞系統を含むより幅広い前臨床細胞系統リストを解析した。この場合も、ＦＡＣＳ解析を用いて、これらの細胞系統がイスピネシブメシレートに対して抵抗性であるか、またはイスピネシブメシレートに対して感受性であるかを予め決定した。図３はこれらの細胞系統におけるＨＳＰＡ１ａの発現を示している。ＨＳＰＡ１ａ発現レベルによって、解析した２２の細胞系統のうち１９の細胞系統をＫＳＰ阻害剤に対して抵抗性であるか、またはＫＳＰ阻害剤に対して感受性であるかに正確に分類することができた。このＨＳＰＡ１ａマーカーによって、２つの細胞系統ＤａｕｄｉおよびＨＣＴ１１６を（これらの細胞におけるＨＳＰＡ１ａの基礎発現の低さから）感受性であると、ＨｅＬａＳ３細胞系統を（これらの細胞におけるＨＳＰＡ１ａの基礎発現の高さから）抵抗性であると分類を誤った。
【００２８】
この特許出願によって優先権を主張する対象となるいかなる特許出願も引用することによりそのまま本明細書の一部とされる。
【図１】
2009544329.tif 000003
【図２】
2009544329.tif 000004
【図３】
2009544329.tif 000005
【図４Ａ】
2009544329.tif 000006
【図４Ｂ−１】
2009544329.tif 000007
【図４Ｂ−２】
2009544329.tif 000008
【図４Ｃ−１】
2009544329.tif 000009
【図４Ｃ−２】
2009544329.tif 000010
【手続補正書】
【提出日】平成21年4月24日(2009.4.24)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2009544329000001.app
【国際調査報告】
2009544329.tif 000011