(57)【要約】  ５０重量％を超えるサポニンを含む、キサントケラスソルビフォリア（Ｘａｎｔｈｏｃｅｒａｓ  ｓｏｒｂｉｆｏｌｉａ  Ｂｕｎｇｅ）の抽出物。キサントケラスソルビフォリアの抽出物の抽出並びに老年性認知症又は膀胱退化によって引き起こされる尿失禁及び頻尿、小児遺尿、小児精神遅滞、脳老化、中年性認知症及び老年性認知症、パーキンソン症候群を治療するための医薬品を製造する際のその使用。注射剤、錠剤、カプセル剤、軟カプセル剤、経口液剤又は滴丸剤を含む剤形。【特許請求の範囲】
【請求項１】
文冠果総サポニンを主に含み、これが乾燥文冠果抽出物の総重量の５０％超、好ましくは６０％超、より好ましくは７０％超、最も好ましくは８０％超を占める、文冠果抽出物。
【請求項２】
サポニンＢが、乾燥文冠果抽出物の総重量の１５％超、好ましくは２０％超、より好ましくは２５％超を占める、請求項１に記載の文冠果抽出物。
【請求項３】
以下のステップ、すなわち、
Ａ．文冠果の粗原料を乾燥させ、脱油して（搾油機を用いて圧搾することによるのが好ましい）、文冠果のケーキ粉末を調製し、ケーキ粉末を抽出剤Ａで抽出するか、又は超臨界ＣＯ２抽出方法を使用して抽出し、得られた抽出物を乾燥させて文冠果抽出物クリームを得、ここで、抽出剤Ａは、ｎ−ヘキサン、石油エーテル、クロロホルム及びジエチルエーテルから選択され、ｎ−ヘキサンが好ましいステップと；
Ｂ．文冠果抽出物クリームを抽出剤Ｂでさらに抽出し、得られた抽出物をろ過し、合わせ、次いで水に溶解し、再びろ過して液体抽出物Ｉを得、ここで、抽出剤Ｂは、メタノール又はエタノールであるステップと；
Ｃ．液体抽出物Ｉを抽出剤Ｃでさらに抽出し、得られた抽出物をろ過し、合わせ、次いで水に溶解し、再びろ過して液体抽出物ＩＩを得、ここで、抽出剤Ｃは、ｎ−ブタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、イソブタノール及びペンタノールから選択され、ｎ−ブタノール、ｎ−プロパノール又はイソプロパノールが好ましいステップと；
Ｄ．液体抽出物ＩＩをマクロポーラス型スチレン樹脂カラム上に載せて吸着させ、次いで溶出剤としてメタノール又はエタノール溶液を使用することによって溶出し、溶出液を収集し、濃縮し、乾燥させて文冠果の精製抽出物を得るステップと
を含む、文冠果抽出物を調製する方法。
【請求項４】
ステップＡにおいて、抽出剤Ａで抽出する場合には、抽出剤Ａをケーキ粉末に１から５：１（好ましくは２から３：１）の重量／重量比で加え、抽出工程を２から６回、好ましくは３から５回行うことが好ましく、次いで溶媒を減圧下で回収し、得られた抽出物を乾燥させて文冠果抽出物クリームを得る、請求項３に記載の方法。
【請求項５】
ステップＡにおいて、超臨界ＣＯ２抽出方法によって抽出する場合には、ケーキ粉末を超臨界ＣＯ２に入れて抽出を行い、超臨界ＣＯ２抽出のための技術パラメータは以下の通りであり、すなわち、抽出圧力は１０から５０ＭＰａ（好ましくは２０から３０ＭＰａ）であり、抽出温度は２０から６０℃（好ましくは４０から５０℃）であり、抽出回数は２から５回であり、同伴剤は６０から９５％の体積分率を有するエタノールであり、使用する同伴剤の量は１から６％（好ましくは２から４％）であり；得られた抽出物を乾燥させて文冠果抽出物クリームを得る、請求項３に記載の方法。
【請求項６】
ステップＢにおいて、文冠果抽出物粉末を抽出剤Ｂで抽出する場合には、５０から９０％、好ましくは５５から８５％、又はより好ましくは６５から８０％の濃度を有する抽出剤Ｂを、２から９：１（好ましくは４から８：１）の体積／重量比で使用することが好ましく、抽出工程は１から２回、毎回２から４時間持続して行い、得られた液体抽出物をろ過し、合わせ、次いで減圧下で、好ましくは６０から７０℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収し；得られた抽出物を０．５から３倍、好ましくは１から２倍の体積の水に溶解し、次いでろ過して液体抽出物Ｉを得る、請求項３に記載の方法。
【請求項７】
ステップＣにおいて、液体抽出物Ｉの抽出剤Ｃでのさらなる抽出については、０．５から３倍、好ましくは１から２倍の体積の抽出剤Ｃを使用し、１から３回、毎回２から４時間抽出することが好ましく；次いで、得られた抽出物をろ過し、合わせ、減圧下で、好ましくは６０から７０℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収し；得られた抽出物を０．２から２倍、好ましくは０．５から１倍の体積の水に溶解し、ろ過して液体抽出物ＩＩを得る、請求項３に記載の方法。
【請求項８】
ステップＤにおいて、液体抽出物をＩＩマクロポーラス型スチレン樹脂カラム上に載せて吸着させる場合には、吸着を１０から６０分間（好ましくは２０から４０分間）行うことが好ましく、次いでカラムを６００から１５００ｍｌの水で、好ましくは１．０から４．０ｍｌ／分の流速で洗浄し、次いで、溶出剤として３０から８０％、好ましくは４０から７０％、又はより好ましくは６０から７０％の濃度を有するメタノール又はエタノール溶液８００から３０００ｍｌを使用することによって、好ましくは０．５から２．０ｍｌ／分の流速で溶出し；２０から３０％アルコール溶出液を収集し、減圧下で、好ましくは６０から７０℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収し；得られた溶液を濃縮し、乾燥させて文冠果の精製抽出物を得る、請求項３に記載の方法。
【請求項９】
ステップＤにおいて、使用されるマクロポーラス型スチレン樹脂カラムが、極性又は弱極性又は非極性であってよい、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
抽出方法が、熱還流抽出又は超音波抽出である、請求項３から８までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項１１】
主に文冠果総サポニンからなり、これが乾燥文冠果抽出物の総重量の５０％超、好ましくは６０％超、より好ましくは７０％超、最も好ましくは８０％超を占める、請求項３から８までのいずれか一項に記載の方法によって調製される文冠果抽出物。
【請求項１２】
老年性認知症又は膀胱退化による尿失禁及び頻尿、小児遺尿、小児精神遅滞、脳老化、中年及び老年性認知症並びにパーキンソン症候群の治療用の文冠果抽出物と医薬として許容できる担体とを含み、ここで、文冠果抽出物が主に文冠果総サポニンからなり、これが乾燥文冠果抽出物の総重量の５０％超、好ましくは６０％超、より好ましくは７０％超、最も好ましくは８０％超を占める薬物組成物。
【請求項１３】
文冠果抽出物が請求項３から８までのいずれか一項に記載の方法によって調製される、請求項１２に記載の薬物組成物。
【請求項１４】
老年性認知症又は膀胱退化による尿失禁及び頻尿、小児遺尿、小児精神遅滞、脳老化、中年及び老年性認知症並びにパーキンソン症候群の治療用薬物の調製における、主に文冠果総サポニンからなり、これが乾燥文冠果抽出物の総重量の５０％超、好ましくは６０％超、より好ましくは７０％超、最も好ましくは８０％超を占める文冠果抽出物の使用。
【請求項１５】
文冠果抽出物が請求項３から８までのいずれか一項に記載の方法によって調製される、請求項１４に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、文冠果抽出物、その抽出方法、並びに老年性認知症又は膀胱退化による尿失禁及び頻尿並びに小児遺尿の治療用薬物の調製におけるその使用に関する。
【背景技術】
【０００２】
文冠果（Ｓｈｉｎｙｌｅａｆ  ｙｅｌｌｏｗｈｏｒｎ）は、文官果（Ｗｅｎｇｕａｎｇｕｏ）及び岩木瓜（Ｙａｎｍｕｇｕａ）としても知られており、多年生草本キサントケラスソルビフォリア（Ｘａｎｔｈｏｃｅｒａｓ  ｓｏｒｂｉｆｏｌｉａ  Ｂｕｎｇｅ）（科名：ムクロジ科；属名：キサントケラス属）の果実である。野生のキサントケラスソルビフォリアの原産地は中国北部であり、現在ではキサントケラスソルビフォリアは多くが栽培されている。文冠果は、関節リウマチ、リウマチ内熱及び皮膚リウマチの治療に主に使用されており、１９７７年に中国葯典（Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｐｈａｒｍａｃｏｐｏｅｉａ）に記載された。
【０００３】
近年になって、文冠果及びそのアルコール抽出物は、学習機能及び記憶機能を改善することが証明され、精神遅滞及び老年性認知症の治療に使用されてきている。Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｍｅｄｉｃｉｎｅ  ＆  Ｐｈａｒｍａｃｙ  ｏｆ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  Ｍｉｎｏｒｉｔｉｅｓ，１９９７，ｖｏｌ．３（１）は、遺尿症１２０例を治療するために乾燥文冠果を直接使用した場合の臨床的観察を報告した。ＣＮ１０９２９９１Ａは、文冠果のアルコール抽出物の、脳機能を改善するための使用及びその調製を報告した。しかし、文冠果からサポニンを抽出することは困難である。現存技術によって得られる文冠果抽出物中の総サポニンの含量は通常１８〜２８％であり、文冠果の果殻中の含量は１５〜２５％である（ＣＮ１３５０００１「文冠果サポニン、粗脂肪、粗タンパク質及び糖の抽出のための果殻」（Ｎｕｔｓｈｅｌｌｓ  ｆｏｒ  ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｓｈｉｎｙｌｅａｆ  ｙｅｌｌｏｗｈｏｒｎ  ｓａｐｏｎｉｎ，ｃｒｕｄｅ  ｆａｔ，ｃｒｕｄｅ  ｐｒｏｔｅｉｎ  ａｎｄ  ｓｕｇａｒ）を参照のこと）。文冠果抽出物中の総サポニン含量を評価するための現存方法は正確さに欠けるものであり、このことが、薬物の投与量の正確さ、薬物の品質管理及び薬物の治療効果を直接妨げている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００４】
文冠果の化学成分はかなり複雑であるため、文冠果から高含量（５０％超）の総サポニンを得るために、工業生産に適しており、且つ広く採用されているクロマトグラフ技術を使用することは非常に困難である。これまで、高含量（５０％超）の総サポニンを含む文冠果抽出物の調製についても、高含量の総サポニンを含む文冠果抽出物をクロマトグラフ技術によって調製する方法についても、まだ報告されていない。
【０００５】
現在のところ、老年性認知症又は膀胱退化による尿失禁及び頻尿、小児遺尿及び小児精神遅滞、脳老化、並びに中年及び老年性認知症の治療用の、安全且つ有効で適正療法の薬物は存在しない。本発明は、文冠果抽出物を、良好な治療効果を有し毒性及び副作用を有さない植物性医薬製剤として提供することによって、その必要性に対処している。
【０００６】
本発明の目的は、高含量の総サポニンを有する一種の文冠果抽出物を提供することである。本発明の第２の目的は、前記抽出物を調製する方法を提供することである。他の目的は、文冠果抽出物中の総サポニンの含量を測定する方法を提供することである。さらに他の目的は、老年性認知症又は膀胱退化による尿失禁及び頻尿並びに小児遺尿の治療用薬物の調製における文冠果抽出物の使用を取り扱うことである。さらにもう１つの目的は、上記疾患を上記抽出物で治療する方法を提供することである。
【課題を解決するための手段】
【０００７】
上記目的は、以下の好ましい実施形態によって実現される。
【０００８】
本発明は、総サポニンを主に含み、これが乾燥文冠果抽出物の総重量の５０％超（好ましい実施形態では６０％超、より好ましくは７０％超、最も好ましくは８０％超、さらには最大９０％以上）を占める、一種の文冠果抽出物を提供する。文冠果抽出物中のサポニンＢは、乾燥文冠果抽出物の総重量を基準として、１５％超、好ましい実施形態では１８％超、より好ましくは２１％超を占める。
【０００９】
本発明はまた、上記抽出物を調製する方法を提供する。本発明者は、独自の抽出技術及び精製技術によって、５０％超の総サポニンを含む文冠果抽出物を得ることが可能であることを見い出した。
【００１０】
文冠果抽出物を調製する方法は、以下のステップを含む。すなわち、
Ａ．文冠果の粗原料を乾燥させ、脱油して（搾油機を使用することが好ましい）、文冠果のケーキ粉末を得る。ケーキ粉末を抽出剤Ａで抽出するか、又は超臨界ＣＯ２抽出によって抽出する。次いで、得られた抽出物を乾燥させて文冠果抽出物クリームを得る。抽出剤Ａは、ｎ−ヘキサン、石油エーテル、ジエチルエーテル及びクロロホルムから選択され、ｎ−ヘキサンが好ましい；
Ｂ．文冠果抽出物クリームを抽出剤Ｂで抽出する。得られた液体抽出物をろ過し、合わせ、水を加えて溶解し、次いでろ過して液体抽出物Ｉを得る。抽出剤Ｂは、メタノール又はエタノールであってよい；
Ｃ．液体抽出物Ｉを抽出剤Ｃでさらに抽出する。得られた液体抽出物をろ過し、合わせ、水を加えて溶解し、次いでろ過して液体抽出物ＩＩを得る。抽出剤Ｃは、ｎ−ブタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、イソブタノール及びペンタノールから選択され、好ましくはｎ−ブタノール、ｎ−プロパノール及びイソプロパノールである；
Ｄ．液体抽出物ＩＩをマクロポーラス型スチレン樹脂カラム上に載せて吸着工程を行う。次いで、メタノール又はエタノール溶液で溶出する。溶出液を収集し、濃縮し、乾燥させて文冠果精製抽出物を得る。
【００１１】
本発明の好ましい実施形態によると、文冠果抽出物を調製する方法は、以下のステップを含む。
【００１２】
Ａ．文冠果の粗原料を乾燥させ、脱油して（搾油機を使用することが好ましい）、文冠果のケーキ粉末を得る。ケーキ粉末を抽出剤Ａで抽出するか、又は超臨界ＣＯ２抽出によって抽出する。得られた抽出物を乾燥させて文冠果抽出物クリームを得る。
【００１３】
抽出剤Ａで抽出する場合には、抽出剤Ａで、１〜５：１、好ましくは２〜３：１の重量／重量比で抽出することが好ましく、抽出手法を２〜６回、好ましくは３〜５回行うことが好ましい。次いで、得られた抽出物から減圧下で溶媒を回収し、乾燥させて文冠果抽出物クリームを得る。
【００１４】
超臨界ＣＯ２抽出によって抽出する場合には、ケーキ粉末を超臨界ＣＯ２に加えて抽出を行う。超臨界ＣＯ２抽出のための技術パラメータは以下の通りである。すなわち、抽出圧力：１０〜５０ＭＰａ（好ましくは２０〜３０ＭＰａ）、抽出温度：２０〜６０℃（好ましくは４０〜５０℃）、実施回数：２〜５回、同伴剤：エタノール、体積分率：６０〜９５％、量：１〜６％（好ましくは２〜４％）である。
【００１５】
Ｂ．文冠果抽出物クリームの抽出は、抽出剤Ｂで１又は２回、毎回約２〜４時間持続して行い、５０〜９０％（好ましくは５５〜８５％、より好ましくは６５〜８０％）の濃度の抽出剤Ｂで、２〜９：１（好ましくは４〜８：１）の体積／重量比で行うことが好ましい。得られた液体抽出物をろ過し、合わせ、次いで減圧下で、好ましくは６０〜７０℃にて、アルコール臭がなくなるまでアルコールを回収する。０．５〜３倍（好ましくは１〜２倍）の体積の水を加え、再びろ過して液体抽出物Ｉを得る。
【００１６】
Ｃ．液体抽出物Ｉに抽出剤Ｃを加え、１〜３回抽出を行う。０．５〜３：１（好ましくは１〜２：１）の体積／体積比の抽出剤Ｃを使用し、毎回２〜４時間行うことが好ましい。得られた液体抽出物をろ過し、合わせ、次いで減圧下で（好ましくは６０〜７０℃にて）アルコール臭がなくなるまでアルコールを回収する。０．２〜２倍（好ましくは０．５〜１倍）の体積の水を加え、再びろ過して液体抽出物ＩＩを得る。
【００１７】
Ｄ．液体抽出物ＩＩをマクロポーラス型スチレン樹脂カラム上に載せて吸着工程を行う。吸着工程は、１０〜６０分間（より好ましくは２０〜４０分間）行うことが好ましい。６００〜１５００ｍｌの水で、好ましくは１．０〜４．０ｍｌ／分の流速で溶出する。次いで、３０〜８０％（好ましくは４０〜７０％、より好ましくは６０〜７０％）メタノール又はエタノール溶液８００〜３０００ｍｌで、好ましくは０．５〜２．０ｍｌ／分の流速で溶出する。２０〜３０％のアルコール溶出液を収集し、減圧下で（好ましくは６０〜７０℃にて）アルコール臭がなくなるまでアルコールを回収する。得られた溶液を濃縮し、乾燥させて文冠果精製抽出物を得る。
【００１８】
上記の好ましい抽出手法は、熱還流抽出又は超音波抽出が好ましい。本明細書において使用される重量／体積比はｋｇ／Ｌである。
【００１９】
本発明の実施形態によると、本明細書において使用されるマクロポーラス型スチレン樹脂カラムは、極性、弱極性又は非極性のものであってよい。吸着工程の前に、樹脂カラムをメタノール又はエタノールで前処理し、水で洗浄した後、抽出剤を加えることができる。本発明の特定の実施形態では、使用される樹脂は以下のいずれかであることができる。すなわち、ＤＡ２０１（乳白色又は浅黄色の不透明球形粒子を含む極性マクロポーラス型ポリスチレン高分子ポリマー、天津大学化学プラント製）、ＡＢ８（乳白色又は浅黄色の不透明球形粒子を含む非極性マクロポーラス型ポリスチレン高分子ポリマー、天津ＡＡＡプラント製）、Ｄ１０１（乳白色又は浅黄色の不透明球形粒子を含む弱極性マクロポーラス型ポリスチレン高分子ポリマー、天津大学化学プラント製）、ＨＰ２０（乳白色不透明球形粒子を含む弱極性マクロポーラス型ポリスチレン高分子ポリマー、日本三菱化学工業株式会社製）、ＳＰ８２５（褐色不透明球形粒子を含む弱極性マクロポーラス型ポリスチレン高分子ポリマー、日本三菱化学工業株式会社製）である。
【００２０】
実験は、文冠果の総サポニンが主にサポニンＡ、Ｂ、Ｃ及びＤからなり、これらの成分が相対的に安定な比率を有していることを示している。文冠果の総サポニンの核は、オレアナン系５環式トリテルぺノイドを有する化合物の一種であることが報告されている［「文冠果の化学成分及びそれらの薬理作用の研究における進展」（Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｃｈｅｍｉｃａｌ  ｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓ  ｏｆ  Ｓｈｉｎｙｌｅａｆ  ｙｅｌｌｏｗｈｏｒｎ  ａｎｄ  ｔｈｅｉｒ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ａｃｔｉｏｎｓ），Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｓｈｅｎｙａｎｇ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，２００４，２１（６）を参照のこと］。文冠果中のサポニンＢの分子式はＣ６０Ｈ９２Ｏ２４、分子量は１１９６であり、その化学構造は以下の通りである。
【化１】
2009523135.tif 000002
【００２１】
文冠果及びその抽出物において、総サポニンに対するサポニンＢ（Ｃ６０Ｈ９２Ｏ２４）の比率はかなり一定である。サポニンＢは、サポニンＡ、Ｂ、Ｃ及びＤの総量の３０〜３５％を占める。したがって、発明者は、文冠果中のサポニンＢの含量を正確に測定することによって、総サポニンの相対含量の計算が可能になることを発見した。
【００２２】
総サポニンの含量測定の理論的根拠は次の通りである。本発明の抽出方法によって得られた文冠果抽出物１ｇには１５０ｍｇ超のサポニンＢ（Ｃ６０Ｈ９２Ｏ２４）が含まれており、すなわち、文冠果サポニンＢの含量は１５％を超えている。よって、サポニンＢがサポニンＡ、Ｂ、Ｃ及びＤの総量の３０％を占めるという事実を考慮すると、文冠果抽出物１ｇには５００ｍｇ超の総サポニンが含まれており、すなわち、文冠果抽出物中の総サポニンの含量は、サポニンＢの含量から計算すると、５０％を超えている。
【００２３】
本発明において、総サポニンは、総文冠果抽出物の乾燥重量を基準として５０％超を占める。同時に、サポニンＢ（Ｃ６０Ｈ９２Ｏ２４）は総サポニンの３０〜３５％を占める。よって、乾燥文冠果抽出物中のサポニンＢの含量は１５％超である。本発明に開示されている文冠果抽出物を調製する方法は、安定で、信頼性が高く、高含量の総サポニンを含む抽出物を得ることができ、それによって、医薬製剤の安定な品質、薬物投与量の減少、治療効果の増強及び医薬製剤化の容易さが可能となる。
【００２４】
文冠果抽出物が、水負荷マウスの排尿頻度に及ぼす影響、ラット摘出膀胱平滑筋に及ぼす影響及びウサギ膀胱外括約筋の細胞外電極の生体電気に及ぼす影響、並びにラット摘出膀胱平滑筋のＡｃｈ（アセチルコリン）誘発性収縮に及ぼす拮抗作用を示すことによって、本発明は、文冠果抽出物が老年性認知症又は膀胱退化による尿失禁及び頻尿の治療において有効であることを立証した。文冠果抽出物がマウスの睡眠時間に及ぼす影響を示すことによって、本発明は文冠果抽出物が小児遺尿の治療において有効であることを証明した。文冠果抽出物がアニソジン誘発性ラット記憶障害に及ぼす改善効果、並びに破壊されたコリン作動性ニューロン及びマイネルト基底核を有する認知症ラットモデルの回避条件反射に及ぼす文冠果抽出物の影響を示すことによって、本発明は認知症の治療における文冠果抽出物の有効性を立証した。本発明に開示されている文冠果抽出物は、脳機能を改善する効果及び脳活動を高める効果を有し、老年性認知症又は膀胱退化による尿失禁及び頻尿、小児遺尿、小児精神遅滞、脳老化、中年及び老年性認知症並びにパーキンソン症候群を治療するために使用することができることが証明された。
【００２５】
本発明の方法によって得られた植物抽出物は、薬物組成物を、例えば錠剤、カプセル剤、経口液剤、注射剤及び滴丸剤の形に製造するために、医薬として許容できる担体と一緒に使用することができる。医薬分野における従来の薬物生産方法を、本発明の植物抽出物を用いた種々の医薬製剤の生産に使用することができる。医薬製剤は、好ましくは経口又は非経口投与用であり、より好ましくは経口投与用である。
【００２６】
本発明に開示されている薬物組成物は、経口投与に適した任意のタイプの医薬製剤として経口投与することができ、かかる医薬製剤には、カプセル剤、錠剤、水性懸濁液及び溶液剤が含まれるがこれらに限定されない。経口錠剤の場合、一般に使用されている担体には乳糖及びコーンスターチが含まれ、ステアリン酸マグネシウムなどの潤滑剤を通常加える。経口投与されるカプセル剤に関しては、適した希釈剤には乳糖及び乾燥コーンスターチが含まれる。経口投与される水性懸濁液に関しては、活性成分を乳化剤及び懸濁化剤と組み合わせる。必要ならば、甘味剤又は着香剤若しくは着色剤を薬物組成物に加えることができる。
【００２７】
本発明の好ましい実施形態では、経口的に許容できる剤形には、１０〜９０％（好ましくは４０〜８０％）の文冠果抽出物が含まれる。文冠果総サポニンに関して計算した場合、含量は５〜８０％（好ましくは２０〜４０％）である。剤形は、１日１〜４回（好ましくは２〜３回）、各０．１〜１ｇ（好ましくは０．２〜０．４ｇ）の用量で投与することが好ましい。
【００２８】
本発明に開示されている薬物組成物の無菌注射用剤形は、水性又は油性の懸濁液であってよい。これらの懸濁液は、当技術分野において確立された技術によって、適した分散剤又は湿潤剤を懸濁化剤と一緒に用いて調製することができる。無菌注射用医薬製剤は、非経口的に許容できる非毒性の希釈剤又は溶媒中の、無菌注射用液剤又は懸濁液、例えば１，３−ブタンジオール溶液などであってもよい。許容できる担体及び溶媒には、水、リンガー溶液及び生理食塩液が含まれる。加えて、無菌不揮発性油は、溶媒又は懸濁媒質としてよく使用されている。
【００２９】
患者の健康状態が改善されると、必要ならば、本発明の化合物、組成物又はその組み合わせの維持量を、患者に処方することができる。続いて、薬物投与の用量及び／又は頻度を、改善された健康状態を維持するために必要な最低水準に減じることができる。症状の改善が要求される水準に到達すると、治療を中止すべきである。しかし、疾患の症状が少しでも再発すると、患者は長期にわたる断続的な治療を必要とすることがある。
【００３０】
本発明に開示されている医薬製剤は、老年性認知症又は膀胱退化による尿失禁及び頻尿、小児遺尿、小児精神遅滞、脳老化、中年及び老年性認知症並びにパーキンソン症候群のための他の活性剤又は薬物を含んでもよく、或いは組み合わせて又は適切な順序で使用してよい。
【００３１】
特定の患者のための、薬物投与の具体的な用量及び具体的な治療計画は、具体的な抽出物の活性、患者の年齢、体重、全身の健康状態、性別、食事、投与時間、排泄率、薬物組成物、主治医の判断及び治療される特定疾患の重症度を含む種々の因子によって決まることも留意される。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３２】
以下の実施例は、本発明のさらなる例証のために使用されるが、本発明を限定するものではない。
【実施例】
【００３３】
（実施例Ｉ）
文冠果抽出物クリームの調製における異なる溶媒の影響
文冠果の粗原料を乾燥させ、脱油して（搾油機を用いて圧搾することによるのが好ましい）文冠果ケーキ粉末を得る。ケーキ粉末０．１５ｇを正確に計量し、２倍重量の抽出剤Ａで抽出する。抽出は４回行い、毎回５時間持続する。溶媒を減圧下で回収し、乾燥させて文冠果抽出物を得る。
【００３４】
抽出剤Ａは、ヘキサン、ジエチルエーテル、クロロホルム又は石油エーテルであることができる。抽出は、超臨界ＣＯ２抽出手法によって行うこともできる。超臨界ＣＯ２抽出のための技術パラメータは以下の通りである。すなわち、抽出圧力：２５〜３０ＭＰａ、抽出温度：４５℃、実施回数：４回、同伴剤：エタノール、体積分率：７０％、量：３％である。得られた抽出物を乾燥させて文冠果抽出物クリームを得る。
【００３５】
文冠果ケーキ粉末を前記溶媒で抽出するか、又は超臨界ＣＯ２抽出方法によって抽出すること、及びそれぞれの結果を測定し、比較することによって、我々は、それらの溶媒はすべて７０％以上の抽出効率を実現することができ、一方、超臨界ＣＯ２抽出方法は８０％以上の抽出効率を実現することができることを見い出した。ジエチルエーテルは麻酔剤であり、クロロホルムは非常に毒性があり、石油エーテルの生産は安全でないという点を考慮に入れて、抽出剤ＡとしてＮ−ヘキサンを選択することがより好ましい。それに対して、超臨界ＣＯ２抽出方法は、より高い抽出収率を有し、毒性不純物がなく、抽出剤Ａを用いる従来の抽出方法の代わりに採用することができる。
【００３６】
（実施例ＩＩ）
文冠果ケーキ粉末５ｋｇを計量し、石油エーテル１０ｋｇを加えて抽出する。抽出工程を４回行い、毎回６時間持続する。溶媒を減圧下で回収し、得られた液体抽出物を乾燥させて文冠果抽出物クリームを得る。抽出物クリーム１ｋｇを計量し、５５％メタノール溶液６Ｌを加える。抽出工程を２回行い、毎回２時間持続する。液体抽出物をろ過し、合わせ、減圧下で６０℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を水１Ｌに溶解し、次いでろ過して液体抽出物Ｉを得る。液体抽出物Ｉをさらにイソブタノール１Ｌで３回抽出し、毎回２時間持続する。液体抽出物をろ過し、合わせ、次いで減圧下で７０℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を水１Ｌで溶解し、次いで溶液をろ過して液体抽出物ＩＩを得る。分析の目的のために、液体抽出物ＩＩの一部を蒸発させ、乾燥させて文冠果の粗抽出物を得る。
【００３７】
（実施例ＩＩＩ）
文冠果ケーキ粉末５ｋｇを計量し、ジエチルエーテル１５ｋｇを加えて抽出する。抽出工程を３回行い、毎回５時間持続する。溶媒を減圧下で回収し、得られた液体抽出物を乾燥させて文冠果抽出物クリームを得る。抽出物クリーム１ｋｇを計量し、６５％エタノール溶液７Ｌを加え、抽出を３時間行う。液体抽出物をろ過し、合わせ、減圧下で６５℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を水２Ｌに溶解し、次いでろ過して液体抽出物Ｉを得る。液体抽出物Ｉをさらにペンタノール２Ｌで３時間抽出する。液体抽出物をろ過し、合わせ、次いで減圧下で６２℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を水０．５Ｌで溶解し、次いで溶液をろ過して液体抽出物ＩＩを得る。分析の目的のために、液体抽出物ＩＩの一部を蒸発させ、乾燥させて文冠果の粗抽出物を得る。
【００３８】
（実施例ＩＶ）
文冠果ケーキ粉末５ｋｇを計量し、石油エーテル１５ｋｇを加えて抽出する。抽出工程を５回行い、毎回４時間持続する。溶媒を減圧下で回収し、得られた液体抽出物を乾燥させて文冠果抽出物クリームを得る。抽出物クリーム１ｋｇを計量し、７５％エタノール溶液８Ｌを加えて抽出する。抽出工程を２回行い、毎回２時間持続する。液体抽出物をろ過し、合わせ、減圧下で７０℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を水１Ｌに溶解し、次いでろ過して液体抽出物Ｉを得る。液体抽出物Ｉをさらにｎ−ブタノール２Ｌで２回抽出し、毎回４時間持続する。液体抽出物をろ過し、合わせ、次いで減圧下で６５℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を水０．７Ｌで溶解し、次いでろ過して液体抽出物ＩＩを得る。分析の目的のために、液体抽出物ＩＩの一部を蒸発させ、乾燥させて文冠果の粗抽出物を得る。
【００３９】
（実施例Ｖ）
文冠果ケーキ粉末５ｋｇを計量し、石油エーテル１０ｋｇを加えて抽出する。抽出工程を３回行い、毎回６時間持続する。溶媒を減圧下で回収し、得られた液体抽出物を乾燥させて文冠果抽出物クリームを得る。抽出物クリーム１ｋｇを計量し、８５％メタノール溶液４Ｌを加え、抽出を４時間行う。液体抽出物をろ過し、合わせ、減圧下で６７℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を水２Ｌに溶解し、次いでろ過して液体抽出物Ｉを得る。液体抽出物Ｉをさらにｎ−プロパノール１Ｌで３回抽出し、毎回２〜４時間持続する。液体抽出物をろ過し、合わせ、次いで減圧下で６０℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を水１Ｌで溶解し、次いでろ過して液体抽出物ＩＩを得る。分析の目的のために、液体抽出物ＩＩの一部を蒸発させ、乾燥させて文冠果の粗抽出物を得る。
【００４０】
（実施例ＶＩ）
文冠果ケーキ粉末５ｋｇを計量し、ｎ−ヘキサン１０ｋｇを加えて抽出する。抽出工程を４回行い、毎回６時間持続する。溶媒を減圧下で回収し、得られた液体抽出物を乾燥させて文冠果抽出物クリームを得る。抽出物クリーム１ｋｇを計量し、５５％メタノール溶液６Ｌを加える。抽出を２回行い、毎回２時間持続する。液体抽出物をろ過し、合わせ、減圧下で６０℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を水１Ｌに溶解し、次いでろ過して液体抽出物Ｉを得る。液体抽出物Ｉをさらにイソブタノール１Ｌで３回抽出し、毎回２時間持続する。液体抽出物をろ過し、合わせ、次いで減圧下で７０℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を水１Ｌで溶解し、次いでろ過して液体抽出物ＩＩを得る。分析の目的のために、液体抽出物ＩＩの一部を蒸発させ、乾燥させて文冠果の粗抽出物を得る。
【００４１】
（実施例ＶＩＩ）
文冠果ケーキ粉末５ｋｇを計量し、ｎ−ヘキサン１５ｋｇを加えて抽出する。抽出工程を３回行い、毎回５時間持続する。溶媒を減圧下で回収し、得られた液体抽出物を乾燥させて文冠果抽出物クリームを得る。抽出物クリーム１ｋｇを計量し、６５％エタノール溶液７Ｌを加え、抽出を３時間行う。液体抽出物をろ過し、合わせ、減圧下で６５℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を水２Ｌに溶解し、次いでろ過して液体抽出物Ｉを得る。液体抽出物Ｉをさらにペンタノール２Ｌで３時間抽出する。液体抽出物をろ過し、合わせ、次いで減圧下で６２℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を水０．５Ｌで溶解し、次いでろ過して液体抽出物ＩＩを得る。分析の目的のために、液体抽出物ＩＩの一部を蒸発させ、乾燥させて文冠果の粗抽出物を得る。
【００４２】
（実施例ＶＩＩＩ）
文冠果ケーキ粉末５ｋｇを計量し、ｎ−ヘキサン１５ｋｇを加えて抽出する。抽出工程を５回行い、毎回４時間持続する。溶媒を減圧下で回収し、得られた液体抽出物を乾燥させて文冠果抽出物クリームを得る。抽出物クリーム１ｋｇを計量し、７５％エタノール溶液８Ｌを加える。抽出を２回行い、毎回２時間持続する。液体抽出物をろ過し、合わせ、減圧下で７０℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を水１Ｌに溶解し、次いでろ過して液体抽出物Ｉを得る。液体抽出物Ｉをさらにｎ−ブタノール２Ｌで抽出し、抽出を２回行い、毎回４時間持続する。液体抽出物をろ過し、合わせ、次いで減圧下で６５℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を水０．７Ｌで溶解し、次いでろ過して液体抽出物ＩＩを得る。分析の目的のために、液体抽出物ＩＩの一部を蒸発させ、乾燥させて文冠果の粗抽出物を得る。
【００４３】
（実施例ＩＸ）
文冠果ケーキ粉末５ｋｇを計量し、ｎ−ヘキサン１０ｋｇを加えて抽出する。抽出工程を３回行い、毎回６時間持続する。溶媒を減圧下で回収し、得られた液体抽出物を乾燥させて文冠果抽出物クリームを得る。抽出物クリーム１ｋｇを計量し、８５％メタノール溶液４Ｌを加え、抽出を４時間行う。液体抽出物をろ過し、合わせ、減圧下で６７℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を水２Ｌに溶解し、次いでろ過して液体抽出物Ｉを得る。液体抽出物Ｉをさらにイソプロパノール１Ｌで抽出し、抽出を３回行い、毎回２〜４時間持続する。液体抽出物をろ過し、合わせ、次いで減圧下で６０℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を水１Ｌで溶解し、次いでろ過して液体抽出物ＩＩを得る。分析の目的のために、液体抽出物ＩＩの一部を蒸発させ、乾燥させて文冠果の粗抽出物を得る。
【００４４】
（比較例Ｉ）
文冠果ケーキ粉末５ｋｇを計量し、水１０ｋｇを加えて抽出する。抽出工程を４回行い、毎回５時間持続する。溶媒を減圧下で回収し、得られた液体抽出物を乾燥させて文冠果抽出物クリームを得る。抽出物クリーム１ｋｇを計量し、７０％メタノール溶液６Ｌを加える。抽出工程を２回行い、毎回２時間持続する。液体抽出物をろ過し、合わせ、減圧下で６０〜７０℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を水２Ｌに溶解し、次いでろ過して液体抽出物Ｉを得る。液体抽出物Ｉをさらにｎ−ブタノール１Ｌで抽出し、抽出を３回行い、毎回２〜４時間持続する。液体抽出物をろ過し、合わせ、次いで減圧下で６５℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を水１Ｌで溶解し、次いでろ過して液体抽出物ＩＩを得る。分析の目的のために、液体抽出物ＩＩの一部を蒸発させ、乾燥させて文冠果の粗抽出物を得る。
【００４５】
（比較例ＩＩ）
文冠果ケーキ粉末５ｋｇを計量し、メタノール１０ｋｇを加えて抽出する。抽出工程を４回行い、毎回５時間持続する。溶媒を減圧下で回収し、得られた液体抽出物を乾燥させて文冠果抽出物クリームを得る。抽出物クリーム１ｋｇを計量し、ｎ−ブタノール溶液６Ｌを加える。抽出工程を２回行い、毎回２時間持続する。液体抽出物をろ過し、合わせ、減圧下で６０〜７０℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を水２Ｌに溶解し、次いでろ過して液体抽出物Ｉを得る。液体抽出物Ｉをさらに水１Ｌで抽出し、抽出を３回行い、毎回２〜４時間持続する。液体抽出物をろ過し、合わせ、次いで減圧下で６５℃にて溶媒を回収する。得られた抽出物を水１Ｌで溶解し、次いでろ過して液体抽出物ＩＩを得る。分析の目的のために、液体抽出物ＩＩの一部を蒸発させ、乾燥させて文冠果の粗抽出物を得る。
【００４６】
（精製例Ｉ）
実施例ＶＩから得られた液体抽出物ＩＩをマクロポーラス型スチレン樹脂カラムＤ２０１上に載せ、２０分間吸着させる。カラムを水１５００ｍｌで、流速３．０ｍｌ／分で洗浄し、次いで、溶出剤として３５％メタノール又はエタノール溶液１５００ｍｌで、流速１．５ｍｌ／分で溶出する。２０％アルコール溶出液を収集し、減圧下で６８℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を濃縮し、乾燥させて文冠果の精製抽出物を得る。
【００４７】
（精製例ＩＩ）
実施例ＶＩＩから得られた液体抽出物ＩＩをマクロポーラス型スチレン樹脂カラムＡＢ８上に載せ、３０分間吸着させる。カラムを水１３００ｍｌで、流速４．０ｍｌ／分で洗浄し、次いで、溶出剤として８０％メタノール又はエタノール溶液１０００ｍｌで、流速２ｍｌ／分で溶出する。３０％アルコール溶出液を収集し、減圧下で６５℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を濃縮し、乾燥させて文冠果の精製抽出物を得る。
【００４８】
（精製例ＩＩＩ）
実施例ＶＩＩＩから得られた液体抽出物ＩＩをマクロポーラス型スチレン樹脂カラムＨＰ２０上に載せ、３５分間吸着させる。カラムを水９００ｍｌで、流速１．０ｍｌ／分で洗浄し、次いで、溶出剤として６０％メタノール又はエタノール溶液３０００ｍｌで、流速１ｍｌ／分で溶出する。２５％アルコール溶出液を収集し、減圧下で６０℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を濃縮し、乾燥させて文冠果の精製抽出物を得る。
【００４９】
（精製例ＩＶ）
実施例ＩＸから得られた液体抽出物ＩＩをマクロポーラス型スチレン樹脂カラムＤ１０１上に載せ、４０分間吸着させる。カラムを水６００ｍｌで、流速２．０ｍｌ／分で洗浄し、次いで、溶出剤として４０％メタノール又はエタノール溶液２０００ｍｌで、流速０．５ｍｌ／分で溶出する。２２％アルコール溶出液を収集し、減圧下で６０℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収する。得られた抽出物を濃縮し、乾燥させて文冠果の精製抽出物を得る。
【００５０】
（分析例）
文冠果サポニンＢの含量の測定
ＨＰＬＣによってサポニンＢの含量を測定する。
【００５１】
対照サンプルの調製：文冠果抽出物クリームを、５５〜８５％メタノール又はエタノールで抽出し、次いで得られた液体抽出物をマクロポーラス型スチレン樹脂カラム上に載せて吸着させる。溶出剤として２０〜８０％エタノール溶液で溶出する。５０〜７０％アルコール溶出液を収集し、シリカカラム上に載せる。溶出剤としてクロロホルム／メタノールで溶出する。４５：５５（Ｖ／Ｖ、クロロホルム／メタノール）の溶出液を収集し、分取用液体クロマトグラフで、移動相としてメタノール／水（７５／２５のＶ／Ｖ）を使用してクロマトグラフィーを行う。得られた溶出液を濃縮し、乾燥させてサポニンＢの対照サンプルを得る。液体クロマトグラフィー用蒸発光検出器で測定すると、サポニンＢ対照サンプルの純度は９７％超である。
【００５２】
クロマトグラフの検出条件及びシステム適合性テスト：ＯＤＳを充填剤として使用し、メタノール−水−リン酸（７５／２５／０．０１のＶ／Ｖ／Ｖを有する）を移動相として使用し；検出波長は２１５ｎｍであり；理論段数（Ｎ．Ｔ．Ｐ）は、文冠果サポニンＢのピークによって計算すると、３０００以上であろう。
【００５３】
対照サンプル溶液の調製：いくらかのサポニンＢ対照サンプルを正確に計量し、移動相に混合して０．０４ｍｇ／ｍｌ溶液を調製する。
【００５４】
供試サンプル溶液の調製：文冠果抽出物４ｇを計量し、７０％エタノールで超音波抽出する。１０ｍｌ分を蒸発させ、乾燥させ；次いで水に溶解し、樹脂カラム上に載せ；「カラムクロマトグラフィー」試験に従って、７０％エタノール溶出液を収集し、次いで０．４５μｍフィルター膜を用いてろ過して供試サンプル溶液を得る。
【００５５】
測定法：対照サンプル溶液及び供試サンプル溶液の各１０μｌを抜き取り、ピーク面積を測定し、サポニンＢの含量を計算する。
【００５６】
種々の抽出方法によって調製された抽出物中のサポニンＢの含量比較
各実施例から得られた文冠果抽出物中のサポニンＢの含量を、上記の方法を用いて測定し、次いで、サポニンＢが総サポニンの３０％を占めると仮定して、総サポニンの含量を推定する。結果は以下の通りである。
表１．文冠果抽出物中のサポニンＢ及び総サポニンの含量
【表１】
2009523135.tif 000003
【００５７】
（実験例Ｉ）
文冠果抽出物が水負荷マウスの排尿頻度に及ぼす影響
本明細書において使用される実験動物の系統は、ＳＰＦ  ＫＭマウス及びＷｉｓｔａｒラットである。ラット又はマウスにそれぞれ、強制薬物投与する。文冠果抽出物は、精製例ＩＶ由来の精製抽出物で、カプセル剤の形である。対照薬はイミプラミンであり、強い抗うつ作用及び弱いアトロピン様作用を有し、うつ病及び小児遺尿の治療によく使用されている。実験方法としては、乾燥ヨウ化カリウム及びスターチを尿と混合した時に起こる呈色反応に基づいてマウスの排尿頻度を計算する。
表２．文冠果抽出物が水負荷マウスの排尿頻度に及ぼす影響
【表２】
2009523135.tif 000004
＊：対照群と比較してＰ＜０．０５
【００５８】
実験結果は、一定用量の文冠果抽出物を投与することによって、一定時間内の水負荷マウスの排尿頻度の減少につながることを示している。
【００５９】
（実験例ＩＩ）
文冠果抽出物及びイミプラミンがラット摘出膀胱平滑筋に及ぼす影響
本明細書において使用される実験動物の系統は、ＳＰＦ  Ｗｉｓｔａｒラットである。実験工程は以下の通りである。すなわち、ラット膀胱を外科的に摘出し、平滑筋の細片を用意し、平滑筋を恒温栄養溶液中に置き、次いで酸素供給条件下で、文冠果抽出物（精製例ＩＶ由来の精製抽出物で、カプセル剤の形）及びイミプラミンをそれぞれ加え、平滑筋の変化を観察する。
【００６０】
判定基準：変換器による較正後、ベースラインの０．５ｍｍ下降は平滑筋の完全弛緩を示し、ベースラインの不変は平滑筋の無反応を示し、一方ベースラインの上昇は平滑筋の収縮を示す。
表３．平滑筋が完全弛緩を示す時の溶液濃度
【表３】
2009523135.tif 000005
【００６１】
実験結果は、文冠果抽出物がラット膀胱平滑筋に直接作用し、それを弛緩させることができることを示している。
【００６２】
（実験例ＩＩＩ）
文冠果抽出物がラット摘出膀胱平滑筋のＡｃｈ誘発性収縮に及ぼす拮抗作用
実験方法は、実験例ＩＩに記載されている方法と同じである。
表４．文冠果抽出物及び／又はＡｃｈがラット摘出膀胱平滑筋の収縮に及ぼす作用のＥＣ５０測定
【表４】
2009523135.tif 000006
【００６３】
実験結果は、文冠果抽出物（精製例ＩＶ由来の精製抽出物で、カプセル剤の形に製剤されている）が、ラット摘出膀胱平滑筋のＡｃｈ誘発性収縮に及ぼす拮抗作用を有し、収縮した平滑筋を完全に弛緩させることを示している。
【００６４】
（実験例ＩＶ）
文冠果抽出物がウサギ膀胱外括約筋の細胞外電極の生体電気に及ぼす影響
実験方法：内在電極を外科的に埋め込み、ウサギ膀胱外括約筋の変化を生理記録計を用いて記録する。投与方式：強制投与。アドレナリン様作動薬であるミドドリンは、選択的α１アドレナリン受容体作動薬であり、緊張性尿失禁の治療に臨床的に一般に使用されている。
表５．文冠果抽出物がウサギ膀胱外括約筋に及ぼす影響（Ｘ±ＳＤ）
【表５】
2009523135.tif 000007
＊：対照群と比較してＰ＜０．０５。
＊＊：対照群と比較してＰ＜０．０１。
【００６５】
実験結果は、文冠果抽出物（精製例ＩＶ由来の精製抽出物で、カプセル剤の形）及びミドドリンの両方が、ウサギ膀胱外括約筋の細胞外電極の生体電気の頻度及び波の振幅を有意に上昇させることができることを示しており、したがって、膀胱括約筋の興奮性を有意に増強させることにおいて、それらの効果を証明している。
【００６６】
（実験例Ｖ）
文冠果抽出物がマウスの睡眠時間に及ぼす影響
ペントバルビタールナトリウムの腹腔内注射によって、マウス睡眠動物モデルを確立する。マウスの立ち直り反射の回復時間を観察するために、注射１時間前に、強制投与によって薬物を投与する。投与方式：強制投与。テルシドン（メクロフェノキサート、又はセントロフェノキシン）は、中枢神経に及ぼす興奮作用を有し、外傷性無意識的障害及び小児遺尿の臨床治療に一般に使用されている。
表６．文冠果抽出物がマウスの睡眠時間に及ぼす影響（Ｘ±ＳＤ）
【表６】
2009523135.tif 000008
＊：睡眠対照群と比較してＰ＜０．０５
＊＊：睡眠対照群と比較してＰ＜０．０１
【００６７】
実験結果は、文冠果抽出物（精製例ＩＶ由来の精製抽出物で、カプセル剤の形）が、マウスにおけるペントバルビタールナトリウムによる持続睡眠時間を有意に短縮することができることを示しており、このことは、文冠果抽出物が中枢神経の興奮性を有意に増強させることを示している。
【００６８】
（実験例ＶＩ）
文冠果抽出物が記憶障害に及ぼす影響
「記憶障害動物モデル（Ｍｅｍｏｒｙ  Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ  Ａｎｉｍａｌ  Ｍｏｄｅｌｓ）」（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐ８２９）に開示されている方法に準じて、記憶障害の動物モデルを確立する。アニソジンは、抗コリン作動薬であり、アトロピンよりも毒性が少ない。
【００６９】
投与方式：強制投与。コリン様作動薬であるドネペジル（アリセプト）は、脳代謝性向知性薬であり、アセチルコリンエステラーゼの特異的可逆的阻害薬である。この薬物は、シナプス間隙におけるアセチルコリンの分解を遅らせることができ、したがって、アセチルコリンの含量を高めることができ、アルツハイマー老年性認知症の臨床治療に一般に使用されている。
表７．文冠果抽出物がアニソジン誘発性マウス記憶障害に及ぼす改善効果（Ｘ±ＳＤ）
【表７】
2009523135.tif 000009
＊：モデル対照群と比較してＰ＜０．０５；＊＊：モデル対照群と比較してＰ＜０．０１
【００７０】
実験結果は、文冠果抽出物（精製例ＩＶ由来の精製抽出物で、カプセル剤の形）が、記憶障害を有するマウスにおける避電時間を有意に延長し、錯誤回数を有意に減少させることができることを示しており、このことは、文冠果抽出物が後天性記憶障害を有意に改善することができることを示している。
【００７１】
（実験例ＶＩＩ）
破壊されたコリン作動性ニューロン及びマイネルト基底核を有する認知症ラットモデルの回避条件反射に及ぼす文冠果抽出物の影響
「破壊されたコリン作動性ニューロンを有する実験的アルツハイマー病動物モデル（Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ａｎｉｍａｌ  Ｍｏｄｅｌ  ｗｉｔｈ  Ｄｅｓｔｒｕｃｔｅｄ  Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ  Ｎｅｕｒｏｎ）」（Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｙ，Ｔｈｉｒｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｐ８４８）に開示されている方法に準じて、老年性認知症の動物モデルを確立する。カイニン酸は、中枢興奮性神経伝達物質であるグルタミン酸の受容体作動薬であり、神経毒性モデルを確立するためのツール薬として、国際社会によって広く使用されている。
【００７２】
投与方式：強制投与。ピラセタム−ＮＥＧＰＦ［ピラセタム、トピラマートアセトアミド、アミドピロール環（ケトン）］は、脳代謝性向知性薬であり、脳神経細胞を保護及び修復し、脳内ＡＤＰのＡＴＰへの変換を促進し、アセチルコリンの合成を促進し、物理的及び化学的要因によって引き起こされる脳機能損傷を予防することができ、老化、脳血管発作、外傷性脳損傷及びＣＯ中毒による脳機能障害の治療に臨床的に使用されている。
表８  文冠果抽出物が認知症ラットモデルの回避条件反射に及ぼす影響  Ｘ±ＳＤ
【表８】
2009523135.tif 000010
＊：認知症ラットモデル群と比較してＰ＜０．０５；＊＊：認知症ラットモデル群と比較してＰ＜０．０１。
【００７３】
実験結果は、文冠果抽出物（精製例ＩＶ由来の精製抽出物で、カプセル剤の形）が、認知症動物モデルにおける回避反応の陽性率を有意に高め、回避反応の潜伏期を有意に短縮させることができることを示しており、このことは、文冠果抽出物が認知症動物モデルにおける脳機能を改善することができることを示している。
【００７４】
（実験例ＶＩＩＩ）
文冠果抽出物を用いた老年性認知症の治療の臨床試験報告
症例源：老年性認知症と診断された外来患者合計３０例を、分析のために無作為に選択した。対象患者３０例には、男性２３例（７６．６６％）及び女性７例（２３．３３％）が含まれた。これらのうち、６例が６８〜７０歳、１７例が７０〜８０歳、７例が８０〜８６歳であり、平均年齢は７７．５歳であった。
【００７５】
１９８９年にＣｈｉｎａ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎによって発行された老年性認知症の診断基準を診断に使用した。文冠果抽出物は、精製例ＩＩＩから得られ、錠剤の形である。用量は、１回０．２ｇ（１日３回）である。３ヶ月間の継続投与後、治療効果を評価する。
【００７６】
治療効果の基準：１９９０年５月にＮａｔｉｏｎａｌ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  Ｔｒａｄｉｔｉｏｎａｌ  Ｃｈｉｎｅｓｅ  ＭｅｄｉｃｉｎｅｓのＧｅｒｏｎｔｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙ及びＩｎｔｅｒｎａｌ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｓｏｃｉｅｔｙによって開催された老年性認知症における国際会議（Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｏｎｆｅｒｅｎｃｅ  ｏｎ  Ｓｅｎｉｌｅ  Ｄｅｍｅｎｔｉａ）において改訂された治療効果の基準を治療の効果の判定に使用した：
治癒：自覚症状は完全に消失し；意識ははっきりし；定位は健全であり；対象患者は質問に正確に答えることができ、反応は鋭敏であり；対象患者はセルフケア能力を有し、社会活動に参加することができる；
著効：主要症状は消失し；意識ははっきりし；定位は健全であり；対象患者は質問に大体正確に答えることができ、反応はかなり鋭敏であり；対象患者はセルフケア能力を有し、通常の社会活動に参加することができる；
有効：主要精神症状は軽減又は部分的に消失し；対象患者はセルフケア能力を有し；対象患者は質問に大体正確に答えることができるが、反応は遅く；知能障害及び人格障害がまだ多少見られる；
無効：主要精神症状は改善の徴候を全く示さないか、又は病状がさらに悪化しており；対象患者はセルフケアができず、質問に正確に答えることができず、意識は完全に遅滞している。
【００７７】
有効性結果の分析：３ヶ月間の継続投与後、治療効果を評価する。対象患者合計３０例中、９例（３０％）が著効を示し、１９例（６３％）が多少有効を示したが、一方、２例（７％）は無効を示し；総有効率は９３％である。
【００７８】
（実験例ＩＸ）
文冠果抽出物を用いた小児精神遅滞の治療の臨床試験
症例源：小児精神遅滞であると診断された外来患者合計３０例を、分析のために無作為に選択した。対象患者３０例には、男児１８例（６０％）及び女児１２例（４０％）が含まれた。これらのうち、１６例が５〜８歳、１４例が８〜１３歳であり、平均年齢は８．１歳であった。患者の状態の判定は以下の通りである。すなわち、それぞれ重度の症状３例、中等度１４例及び軽度１３例である。
表９  治療前の異なる年齢群におけるＩＱ分布
【表９】
2009523135.tif 000011
【００７９】
診断基準：Ｃｈｉｎａ−Ｗｅｃｈｓｌｅｒ  Ｙｏｕｎｇ  Ｃｈｉｌｒｅｎ  Ｓｃａｌｅ  ｏｆ  Ｉｎｔｅｌｌｉｇｅｎｃｅ（ＣＷＹＣＳＩ）に従って、ＩＱスコアが７０未満の場合、対象患者を精神遅滞であると診断し、これをさらに３グレードに分類して、重度（ＩＱスコアが２０〜３４）、中等度（３５〜４９）及び軽度（５０〜７０）とした。
【００８０】
文冠果抽出物は、精製例ＩＩＩから得られ、錠剤の形である。用量は、１回０．１ｇ（１日３回）である。３ヶ月間の継続投与後、ＩＱを測定する。
【００８１】
有効性結果の分析：３ヶ月間の継続投与後、ＩＱを測定する。対象患者合計３０例中、１１例（３６．６６％を占める）が著効を示し、２例（６．６７％）が有効を示したが、一方、１７例（５６．６６％を占める）は無効を示した。総有効率は４３．３３％である。
表１０  治療後の異なる年齢群におけるＩＱ分布
【表１０】
2009523135.tif 000012
【００８２】
全対象患者は、治療中に副作用を全く示さなかった。したがって、本発明に開示されている文冠果抽出物は、小児精神遅滞を治療する際に治療効果を有し、安全で、信頼性が高い。
【手続補正書】
【提出日】平成19年11月9日(2007.11.9)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
以下のステップ、
Ａ．文冠果の粗原料を乾燥させ、脱油して（搾油機を用いて圧搾することによるのが好ましい）、文冠果のケーキ粉末を調製し、ケーキ粉末を抽出剤Ａで抽出するか、又は超臨界ＣＯ２抽出方法を使用して抽出し、得られた抽出物を乾燥させて文冠果抽出物クリームを得、ここで、抽出剤Ａは、ｎ−ヘキサン、石油エーテル、クロロホルム及びジエチルエーテルから選択され、ｎ−ヘキサンが好ましいステップと；
Ｂ．文冠果抽出物クリームを、５０から９０％、好ましくは５５から８５％、又はより好ましくは６５から８０％の濃度を有する抽出剤Ｂで、２から９：１（好ましくは４から８：１）の体積／重量比でさらに抽出し、抽出工程は１から２回、毎回２から４時間持続して行い、得られた抽出物をろ過し、合わせ、次いで水に溶解し、再びろ過して液体抽出物Ｉを得、ここで、抽出剤Ｂは、メタノール又はエタノールであるステップと；
Ｃ．液体抽出物Ｉを抽出剤Ｃでさらに抽出し、得られた抽出物をろ過し、合わせ、次いで水に溶解し、再びろ過して液体抽出物ＩＩを得、ここで、抽出剤Ｃは、ｎ−ブタノール、ｎ−プロパノール、イソプロパノール、イソブタノール及びペンタノールから選択され、ｎ−ブタノール、ｎ−プロパノール又はイソプロパノールが好ましいステップと；
Ｄ．液体抽出物ＩＩをマクロポーラス型スチレン樹脂カラム上に載せて吸着させ、次いで溶出剤としてメタノール又はエタノール溶液を使用することによって溶出し、溶出液を収集し、濃縮し、乾燥させて文冠果の精製抽出物を得るステップと
を含む、文冠果抽出物を調製する方法。
【請求項２】
ステップＡにおいて、抽出剤Ａで抽出する場合には、抽出剤Ａをケーキ粉末に１から５：１（好ましくは２から３：１）の重量／重量比で加え、抽出工程を２から６回、好ましくは３から５回行うことが好ましく、次いで溶媒を減圧下で回収し、得られた抽出物を乾燥させて文冠果抽出物クリームを得る、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
ステップＡにおいて、超臨界ＣＯ２抽出方法によって抽出する場合には、ケーキ粉末を超臨界ＣＯ２に入れて抽出を行い、超臨界ＣＯ２抽出のための技術パラメータは以下の通りであり、すなわち、抽出圧力は１０から５０ＭＰａ（好ましくは２０から３０ＭＰａ）であり、抽出温度は２０から６０℃（好ましくは４０から５０℃）であり、抽出回数は２から５回であり、同伴剤は６０から９５％の体積分率を有するエタノールであり、使用する同伴剤の量は１から６％（好ましくは２から４％）であり；得られた抽出物を乾燥させて文冠果抽出物クリームを得る、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
ステップＢにおいて、得られた液体抽出物をろ過し、合わせ、次いで減圧下で、好ましくは６０から７０℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収し；得られた抽出物を０．５から３倍、好ましくは１から２倍の体積の水に溶解し、次いでろ過して液体抽出物Ｉを得る、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
ステップＣにおいて、液体抽出物Ｉの抽出剤Ｃでのさらなる抽出については、０．５から３倍、好ましくは１から２倍の体積の抽出剤Ｃを使用し、１から３回、毎回２から４時間抽出することが好ましく；次いで、得られた抽出物をろ過し、合わせ、減圧下で、好ましくは６０から７０℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収し；得られた抽出物を０．２から２倍、好ましくは０．５から１倍の体積の水に溶解し、ろ過して液体抽出物ＩＩを得る、請求項１に記載の方法。
【請求項６】
ステップＤにおいて、液体抽出物をＩＩマクロポーラス型スチレン樹脂カラム上に載せて吸着させる場合には、吸着を１０から６０分間（好ましくは２０から４０分間）行うことが好ましく、次いでカラムを６００から１５００ｍｌの水で、好ましくは１．０から４．０ｍｌ／分の流速で洗浄し、次いで、溶出剤として３０から８０％、好ましくは４０から７０％、又はより好ましくは６０から７０％の濃度を有するメタノール又はエタノール溶液８００から３０００ｍｌを使用することによって、好ましくは０．５から２．０ｍｌ／分の流速で溶出し；２０から３０％アルコール溶出液を収集し、減圧下で、好ましくは６０から７０℃にて、アルコール臭がなくなるまで溶媒を回収し；得られた溶液を濃縮し、乾燥させて文冠果の精製抽出物を得る、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
ステップＤにおいて、使用されるマクロポーラス型スチレン樹脂カラムが、極性又は弱極性又は非極性であってよい、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
抽出方法が、熱還流抽出又は超音波抽出である、請求項１から７までのいずれか一項に記載の方法。
【請求項９】
主に文冠果総サポニンからなり、これが乾燥文冠果抽出物の総重量の５０％超、好ましくは６０％超、より好ましくは７０％超、最も好ましくは８０％超を占める、請求項１から７までのいずれか一項に記載の方法によって調製される文冠果抽出物。
【国際調査報告】
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