(57)【要約】  本発明は、ヒストンデアセチラーゼ阻害剤とビタミンＢを含有する医薬組成物、ならびにＨＤＡＣ依存性疾患の処置における、また、該疾患の処置を目的とした医薬製剤の製造のためのその使用方法に関する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
腫瘍、細胞塊または標的細胞を有する対象を処置する方法であって、該対象にヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）の阻害剤およびビタミンＢ分子を投与することを含む、方法。
【請求項２】
対象への投与が、ＨＤＡＣ阻害剤またはビタミン単独を投与した対照に比べた場合の腫瘍、細胞塊または標的細胞の増殖における低下を観察することをさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
腫瘍、細胞塊または標的細胞の増殖における低下を観察することが、腫瘍サイズ；転移；腫瘍壊死；細胞増殖速度；および細胞アポトーシスの群から選択される少なくとも１つのパラメーターの阻害を分析することをさらに含む、請求項２に記載の方法。
【請求項４】
前記対象が哺乳類または哺乳類細胞である、請求項１に記載の方法。
【請求項５】
前記対象がヒトである、請求項４に記載の方法。
【請求項６】
前記腫瘍、細胞塊または標的細胞が、増殖性疾患、過剰増殖性疾患、心血管疾患、免疫系疾患、中枢神経系疾患、末梢神経系疾患および遺伝子の誤発現に関連する疾患の群から選択される少なくとも１つの疾患に存在する、請求項１に記載の方法。
【請求項７】
前記心血管疾患が心不全である、請求項６に記載の方法。
【請求項８】
前記増殖性疾患が良性または悪性腫瘍、脳の癌、腎臓癌、肝臓癌、副腎癌、膀胱癌、乳癌、胃癌（特に、胃腫瘍）、卵巣癌、食道癌、結腸癌、直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、肺癌、膣癌、甲状腺癌、肉腫、膠芽腫、リンパ腫、多発性骨髄腫または消化管癌、結腸癌または結腸直腸腺腫、頭頸部腫瘍、上皮過剰増殖、乾癬、前立腺肥大、新生物、好ましくは、乳癌または白血病である、請求項６に記載の方法。
【請求項９】
前記過剰増殖性疾患が白血病、リンパ腫、過形成、繊維症（肺繊維症、およびまた腎繊維症などの他種の繊維症を含む）、脈管形成、乾癬、アテローム性動脈硬化症および血管の平滑筋増殖（狭窄または血管形成術後の再狭窄など）の群から選択される少なくとも１つである、請求項６に記載の方法。
【請求項１０】
前記免疫症状が関節リウマチ、クローン病、多発性硬化症、乾癬およびＩ型糖尿病の群から選択される少なくとも１つである、請求項６に記載の方法。
【請求項１１】
前記免疫症状が器官または組織の移植された同種異系移植片の免疫拒否である、請求項６に記載の方法。
【請求項１２】
処置される疾患が乾癬などの持続的脈管形成；カポジ肉腫；再狭窄、例えばステント誘発性再狭窄；子宮内膜症；クローン病；ホジキン病；白血病；関節リウマチなどの関節炎；血管腫；血管繊維腫；糖尿病性網膜症および血管新生緑内障などの眼疾患；糸球体腎炎などの腎疾患；糖尿病性腎症；悪性腎硬化症；血栓性細血管障害性症候群；移植拒絶および糸球体症；肝硬変などの繊維性疾患；メサンギウム細胞増殖性疾患；動脈硬化症；神経組織の損傷に関連し；また、バルーンカテーテル処置後の血管の再閉塞を抑制するための；血管補綴に用いるための；または例えばステントなどの血管開口を保持するための機械装置を挿入した後の；免疫抑制剤としての；無瘢痕創傷治癒の補助としての；ならびに加齢斑および接触性皮膚炎を処置するための、請求項６に記載の方法。
【請求項１３】
前記腫瘍、細胞塊または標的細胞がＨＤＡＣ依存性疾患に関連し、該ＨＤＡＣがＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ６、ＨＤＡＣ７、ＨＤＡＣ８、ＨＤＡＣ９、ＨＤＡＣ１０およびＨＤＡＣ１１の群から選択される少なくとも１つである、請求項１に記載の方法。
【請求項１４】
前記タンパク質ＨＤＡＣがＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ６およびＨＤＡＣ８の群から選択される少なくとも１つである、請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
前記ＨＤＡＣ阻害剤が、ヒストンデアセチラーゼと相互作用し、かつ、ＨＤＡＣ酵素活性を阻害する構造を有する化合物を含む、請求項１に記載の方法。
【請求項１６】
ＨＤＡＣ活性の阻害が、ヒストン、ｐ５３、Ｈｉｆ１−α、チューブリン、ＨＳＰ−９０などの群から選択される少なくとも１つのタンパク質からのアセチル基の除去を低減することである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
ＨＤＡＣ活性の阻害が少なくとも約５０％である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
ＨＤＡＣ活性の阻害が少なくとも約７５％である、請求項１６に記載の方法。
【請求項１９】
ＨＤＡＣ活性の阻害が少なくとも約９０％である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２０】
ＨＤＡＣ活性の阻害が少なくとも約９９％である、請求項１６に記載の方法。
【請求項２１】
前記ＨＤＡＣ阻害剤が、別の無関連の生物作用または酵素作用をもたらす阻害剤の濃度よりも低い濃度でデアセチラーゼを阻害する、請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
デアセチラーゼ阻害活性に用いられるＨＤＡＣ阻害剤の濃度が、無関連の生物作用または酵素作用をもたらす濃度よりも少なくとも２倍低い、請求項２１に記載の方法。
【請求項２３】
デアセチラーゼ阻害活性に用いられるＨＤＡＣ阻害剤の濃度が、無関連の生物作用または酵素作用をもたらす濃度よりも少なくとも５倍低い、請求項２１に記載の方法。
【請求項２４】
デアセチラーゼ阻害活性に用いられるＨＤＡＣ阻害剤の濃度が、無関連の生物作用または酵素作用をもたらす濃度よりも少なくとも１０倍低い、請求項２１に記載の方法。
【請求項２５】
デアセチラーゼ阻害活性に用いられるＨＤＡＣ阻害剤の濃度が、無関連の生物作用または酵素作用をもたらす濃度よりも少なくとも２０倍低い、請求項２１に記載の方法。
【請求項２６】
前記ビタミンＢ分子がビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ５、ビタミンＢ６、ビタミンＢ９（フォレート）およびビタミンＢ１２の群から選択される少なくとも１つである、請求項１に記載の方法。
【請求項２７】
前記ビタミンＢ分子がビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ６、ビタミンＢ９（フォレート）およびビタミンＢ１２の群から選択される少なくとも１つである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ビタミンＢ分子がビタミンＢ前駆体である、請求項１に記載の方法。
【請求項２９】
前記ビタミンＢ分子がビタミンＢ類似体または誘導体である、請求項１に記載の方法。
【請求項３０】
前記投与が全身経路による送達である、請求項１に記載の方法。
【請求項３１】
前記全身投与経路が経口、皮下、筋肉内および静脈内の群から選択される少なくとも１つである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記組合せの投与がビタミンと阻害剤の同時投与である、請求項１に記載の方法。
【請求項３３】
前記組合せの投与がビタミンと阻害剤の逐次投与である、請求項１に記載の方法。
【請求項３４】
前記処置がビタミンおよび阻害剤の用量を異なる頻度で投与することである、請求項１に記載の方法。
【請求項３５】
ビタミンの投与が、阻害剤の投与よりも頻度が高い、請求項１に記載の方法。
【請求項３６】
阻害剤の投与が、ビタミンの投与よりも頻度が高い、請求項１に記載の方法。
【請求項３７】
ビタミンの用量が少なくとも５０μｇ／対象／回である、請求項１に記載の方法。
【請求項３８】
ビタミンの用量が少なくとも５００μｇ／対象／回である、請求項１に記載の方法。
【請求項３９】
ビタミンの用量が少なくとも５ｍｇ／対象／回である、請求項１に記載の方法。
【請求項４０】
ビタミンの用量が少なくとも５０ｍｇ／対象／回である、請求項１に記載の方法。
【請求項４１】
ビタミンの用量が少なくとも５００ｍｇ／対象／回である、請求項１に記載の方法。
【請求項４２】
投与がビタミン不在の場合よりも多く、ビタミン不在の場合の同量よりも副作用が少ない量のＨＤＡＣ阻害剤／対象／日をさらに含む、請求項１に記載の方法。
【請求項４３】
抗癌処置としての、ＨＤＡＣ阻害剤とビタミンＢ分子の組合せの使用。
【請求項４４】
腫瘍サイズの増大速度；腫瘍数（転移）の増加速度；および悪性転換細胞の増殖速度からなる群から選択される少なくとも１つのパラメーターの阻害を測定することをさらに含む、請求項４３に記載の使用。
【請求項４５】
ＨＤＡＣ阻害剤、ビタミンＢ分子および容器のそれぞれを含む、増殖性障害および過増殖性障害を処置するためのキット。
【請求項４６】
ＨＤＡＣ阻害剤およびビタミンＢ分子のそれぞれが単位用量である、請求項４５に記載のキット。
【請求項４７】
使用説明書を含む、請求項４５に記載のキット。
【請求項４８】
前記用量が経口利用可能な錠剤中にある、請求項４５に記載のキット。
【請求項４９】
前記用量が非経口投与用バイアル中にある、請求項４５に記載のキット。
【請求項５０】
ＨＤＡＣ阻害剤およびビタミンＢ分子を含む、医薬組成物。
【請求項５１】
ＨＤＡＣ阻害剤およびビタミンＢ分子のそれぞれが有効量で存在する、請求項５０に記載の医薬組成物。
【請求項５２】
薬学上許容されるバッファーをさらに含む、請求項５０に記載の医薬組成物。
【請求項５３】
単位用量である、請求項５０に記載の医薬組成物。
【請求項５４】
抗増殖薬である付加的薬剤をさらに含む、請求項５０に記載の医薬組成物。
【請求項５５】
ａ）ＨＤＡＣ阻害剤が、ヒドロキサム酸、ヒドロキサメート、ヒドロキシアミド、環状ペプチド、抗ＨＤＡｃ抗体、ベンズアミド、ベンズイミダゾール、短鎖脂肪酸、メルカプトミド、カルバミン酸、カルボニル、ピペラジニル、ピペリジニル、モルホリニル、スルホニル、アミン、アミド、バルプロ酸、オキシム、ジオキサン、エポキシド、ラクタムおよびデプデシン、特に、Ｎ−（２−アミノフェニル）−４−［Ｎ−（ピリジン−３−イルメトキシカルボニル）アミノメチル］ベンズアミド、Ｎ−ヒドロキシ−３−［４−［［（２−ヒドロキシエチル）［２−（１Ｈ−インドール−３−イル）エチル］−アミノ］メチル］フェニル］−２Ｅ−２−プロペンアミド、Ｎ−ヒドロキシ−３−［４−［［［２−（２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）−エチル］−アミノ］メチル］フェニル］−２Ｅ−２−プロペンアミドを含む化合物およびその薬学上許容される塩の群から選択され；かつ
ｂ）ビタミンＢ分子が、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ６、ビタミンＢ９（フォレート）およびビタミンＢ１２の群から選択される、
請求項５０に記載の医薬組成物。
【請求項５６】
ＨＤＡＣ阻害剤およびビタミンＢ分子を含む、腫瘍、細胞塊または標的細胞の処置のための薬剤。
【請求項５７】
ＨＤＡＣ阻害剤およびビタミンＢ分子のそれぞれが有効量で存在する、請求項５６に記載の薬剤。
【請求項５８】
薬学上許容されるバッファーをさらに含む、請求項５６に記載の薬剤。
【請求項５９】
組成物が単位用量である、請求項５６に記載の薬剤。
【請求項６０】
抗増殖薬である付加的薬剤をさらに含む、請求項５６に記載の薬剤。
【請求項６１】
ａ）ＨＤＡＣ阻害剤が、ヒドロキサム酸、ヒドロキサメート、ヒドロキシアミド、環状ペプチド、抗ＨＤＡｃ抗体、ベンズアミド、ベンズイミダゾール、短鎖脂肪酸、メルカプトミド、カルバミン酸、カルボニル、ピペラジニル、ピペリジニル、モルホリニル、スルホニル、アミン、アミド、バルプロ酸、オキシム、ジオキサン、エポキシド、ラクタム、およびデプデシン、特に、Ｎ−（２−アミノフェニル）−４−［Ｎ−（ピリジン−３−イルメトキシカルボニル）アミノメチル］ベンズアミド、Ｎ−ヒドロキシ−３−［４−［［（２−ヒドロキシエチル）［２−（１Ｈ−インドール−３−イル）エチル］−アミノ］メチル］フェニル］−２Ｅ−２−プロペンアミド、Ｎ−ヒドロキシ−３−［４−［［［２−（２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）−エチル］−アミノ］メチル］フェニル］−２Ｅ−２−プロペンアミドを含む化合物およびその薬学上許容される塩の群から選択され；かつ
ｂ）ビタミンＢ分子が、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ６、ビタミンＢ９（フォレート）およびビタミンＢ１２の群から選択される、
請求項５６に記載の薬剤。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、ヒストンデアセチラーゼの阻害剤とビタミンＢ分子を含有する医薬組成物およびその使用方法に関する。
【背景技術】
【０００２】
ヒストンの可逆的アセチル化は、転写因子のＤＮＡへの接近性を変更することによって働く遺伝子発現の主要なレギュレーターである。正常細胞では、ヒストンデアセチラーゼ（「ＨＤＡＣ」）とヒストンアセチルトランスフェラーゼは一緒になって、ヒストンのアセチル化レベルを制御し、染色体の活性領域および不活性領域を調節する。ヒストンタンパク質のリシン残基のアセチル化は、ヌクレオソームを脱安定化し、転写因子をＤＮＡ中の認識配列に接近可能とすることによってコンフォメーション変化を誘発する。１以上のＨＤＡＣの活性によるヒストンの脱アセチル化は染色体パッキングを封止し、転写の抑制をもたらす。ＨＤＡＣの阻害は高アセチル化ヒストンの蓄積をもたらし、種々の細胞応答を生じる。
【０００３】
ＨＤＡＣの阻害剤は癌細胞および他の増殖性疾患に対する治療効果に関して研究されてきた。例えば、酪酸およびフェニル酪酸ナトリウムを含むその誘導体は、in vitroにおいてヒト結腸癌、白血病および網膜芽細胞腫細胞系統でアポトーシスを誘発することが報告されている。抗増殖活性に関して広く研究されてきた他のＨＤＡＣ阻害剤はトリコスタチンＡおよびトラポキシンである。トリコスタチンＡは抗真菌薬および抗生物質であり、哺乳類ＨＤＡＣの可逆的阻害剤である。トラポキシンは、哺乳類ＨＤＡＣの不可逆的阻害剤である環状テトラペプチドである。最近では、また、サリドマイドもＨＤＡＣを標的とすることが報告されている。
【０００４】
しかしながら、化学療法薬は新生物組織だけでなく正常な増殖細胞にも作用し、悪性細胞のみならず急速に分裂する正常細胞にも毒性がある。一般的な急性副作用は悪心および嘔吐であり、その後、治療薬投与の約１か月後に骨髄抑制（骨髄活性が低下して血球産生の低下をもたらす症状）などの遅延型副作用が起こることが多い。このような副作用は有効な癌化学療法を妨げ、患者の次段階の処置を後回しにし、かつ／または処置用量が低減される。最近の化学療法薬は以前の薬剤に比べて副作用が軽減されているが、より高い用量およびより長期のプロトコールまたは反復投与が癌患者に利用できるように、既存の薬剤の副作用を軽減または排除する必要がなおある。
【０００５】
望ましくない副作用を改善または軽減するために、軽減または癌性固形腫瘍、白血病およびリンパ腫を含む増殖性疾患を処置する方法の必要がなおある。
【発明の概要】
【０００６】
本発明は、一実施形態において、腫瘍、細胞塊または標的細胞を有する対象を処置する方法を提供し、その方法は対象にヒストンデアセチラーゼ（ＨＤＡＣ）の阻害剤およびビタミンＢ分子を投与するステップを含む。関連の実施形態は、対象へ投与した後に、ＨＤＡＣ阻害剤またはビタミン単独を同様に投与した対照に比べた場合の腫瘍、細胞塊または標的細胞の増殖における低下を観察することをさらに含む。標的細胞の増殖における低下を観察することは、腫瘍サイズ；転移；腫瘍壊死；細胞増殖速度；および細胞アポトーシスの群から選択される少なくとも１つのパラメーターの阻害を分析することにより判定される。これらの使用および方法に関連する実施形態では、対象は哺乳類または哺乳類細胞であり、例えば、対象はヒトである。
【０００７】
これらの使用および方法に関連する実施形態では、腫瘍、細胞塊または標的細胞は、増殖性疾患、過剰増殖性疾患、心血管疾患、免疫系疾患、中枢神経系疾患、末梢神経系疾患および遺伝子の誤発現に関連する疾患の群から選択される少なくとも１つの疾患に存在する。関連の実施形態では、増殖性疾患は良性または悪性腫瘍、脳の癌、腎臓癌、肝臓癌、副腎癌、膀胱癌、乳癌、胃癌（特に、胃腫瘍）、卵巣癌、食道癌、結腸癌、直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、肺癌、膣癌、甲状腺癌、肉腫、膠芽腫、リンパ腫、多発性骨髄腫または消化管癌、結腸癌または結腸直腸腺腫、頭頸部腫瘍、上皮過剰増殖、乾癬、前立腺肥大、新生物、好ましくは、乳癌または白血病である。
【０００８】
別の関連の実施形態では、過剰増殖性疾患は白血病、過形成、繊維症（肺繊維症、およびまた腎繊維症などの他種の繊維症を含む）、脈管形成、乾癬、アテローム性動脈硬化症および血管の平滑筋増殖（狭窄または血管形成術後の再狭窄など）の群から選択される少なくとも１つである。
【０００９】
さらに別の関連の実施形態では、免疫症状は関節リウマチ、クローン病、多発性硬化症、乾癬およびＩ型糖尿病の群から選択される少なくとも１つである。さらなる関連の実施形態では、免疫症状は器官または組織の移植された同種異系移植片の免疫拒否である。
【００１０】
これらの使用および方法に関連する他の実施形態では、治療される疾患は乾癬などの持続的脈管形成；カポジ肉腫；再狭窄、例えばステント誘発性再狭窄；子宮内膜症；クローン病；ホジキン病；白血病；関節リウマチなどの関節炎；血管腫；血管繊維腫；糖尿病性網膜症および血管新生緑内障などの眼疾患；糸球体腎炎などの腎疾患；糖尿病性腎症；悪性腎硬化症；血栓性細血管障害性症候群；移植拒絶および糸球体症；肝硬変などの繊維性疾患；メサンギウム細胞増殖性疾患；動脈硬化症；神経組織の損傷に関連し、また、バルーンカテーテル処置後の血管の再閉塞を抑制するための、血管補綴に用いるための、または例えばステントなどの血管開口を保持するための機械装置を挿入した後の、免疫抑制剤としての、無瘢痕創傷治癒の補助としての、ならびに加齢斑および接触性皮膚炎を処置するためのものである。
【００１１】
これらの使用および方法に関連する実施形態では、腫瘍、細胞塊または標的細胞は、ＨＤＡＣ依存性疾患に存在するか、または関連し、該ＨＤＡＣはＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ６、ＨＤＡＣ７、ＨＤＡＣ８、ＨＤＡＣ９、ＨＤＡＣ１０およびＨＤＡＣ１１の群から選択される少なくとも１つである。関連の実施形態では、タンパク質ＨＤＡＣはＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ６およびＨＤＡＣ８の群から選択される。
【００１２】
これらの使用および方法に関連する実施形態では、ＨＤＡＣの阻害剤は、ヒストンデアセチラーゼと相互作用し、かつ、ＨＤＡＣ酵素活性を阻害する構造を有する化合物を含む。ＨＤＡＣ活性の阻害は、例えば、ヒストンからのアセチル基の除去の阻害など、同定されているＨＤＡＣ活性の阻害として便宜にアッセイされる。あるいは、ＨＤＡＣ活性の阻害は、チューブリン、ＨＳＰ−９０、Ｈｉｆ−１αおよびｐ５３などの他の基質の脱アセチル化の阻害としてアッセイされる。ある特定の実施形態では、ＨＤＡＣ活性の阻害は、阻害剤の不在下での活性と比べて少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約９０％、または少なくとも約９９％である。
【００１３】
これらの使用および方法に関連する他の実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤は、別の無関連の生物作用または酵素作用をもたらす阻害剤の濃度よりも低い濃度でデアセチラーゼを阻害する。いくつかの実施形態では、ヒストンデアセチラーゼ阻害活性に用いられるＨＤＡＣ阻害剤の濃度は、無関連の生物作用または酵素作用をもたらす濃度よりも少なくとも約２倍低いか、少なくとも約５倍低いか、少なくとも約１０倍低いか、または少なくとも約２０倍低い。
【００１４】
これらの使用および方法に関連する他の実施形態では、ビタミンＢ分子はビタミンＢ１、ビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ５、ビタミンＢ６、ビタミンＢ９およびビタミンＢ１２の群から選択される。関連の実施形態では、ビタミンＢ分子はビタミンＢ２、ビタミンＢ３、ビタミンＢ６、ビタミンＢ９およびビタミンＢ１２の群から選択される。さらに別の関連の実施形態では、ビタミンＢ分子はビタミンＢ前駆体である。さらに別の関連の実施形態では、ビタミンＢ分子はビタミンＢ類似体または誘導体である。
【００１５】
これらの使用および方法に関連する実施形態では、投与は全身経路による送達である。例えば、全身投与経路は経口、皮下、筋肉内、腹腔内、経皮および静脈内の少なくとも１つである。
【００１６】
これらの使用および方法の一実施形態では、組合せの投与は、ビタミンと阻害剤の同時投与である。もう１つの実施形態では、組合せの投与は、ビタミンと阻害剤の逐次投与である。関連の実施形態では、ビタミンと阻害剤の用量は異なる頻度で投与される。例えば、ビタミンの投与が阻害剤の投与よりも頻度が高く；あるいは、阻害剤の投与がビタミンの投与よりも頻度が高い。
【００１７】
これらの使用および方法に関連する実施形態では、対象当たりのビタミンの用量は少なくとも約５０マイクログラム（μｇ）、少なくとも約８０μｇ、９０μｇ、１００μｇまたは少なくとも約５００μｇ、少なくとも約２５ミリグラム（ｍｇ）、３０ｍｇ、４０ｍｇまたは少なくとも約５０ｍｇ、少なくとも約５００ｍｇまでである。
【００１８】
これらの使用および方法に関連する実施形態では、投与はビタミン不在の場合よりも多く、ビタミン不在の場合の同量よりも副作用が少ない量のＨＤＡＣ阻害剤／対象／日をさらに含む。
【００１９】
本発明の実施形態は、抗癌処置としての、ＨＤＡＣ阻害剤とビタミンＢ分子の組合せの使用を提供する。関連の実施形態は、腫瘍サイズの増大速度；腫瘍数（転移）の増加速度；および悪性転換細胞の増殖速度からなる群から選択される少なくとも１つのパラメーターの阻害を測定することをさらに含む。
【００２０】
ある特定の実施形態では、本発明は、増殖または過剰増殖性障害を処置するための、ＨＤＡＣ阻害剤およびビタミンＢ分子のそれぞれを含む、また、容器も含むキットを提供する。
関連の実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤およびビタミンＢ分子のそれぞれはキット中に単位用量で存在する。別の関連の実施形態では、キットは使用説明書も含む。関連の実施形態では、この用量は経口利用可能な錠剤中にある。別の関連の実施形態では、この用量は非経口投与用バイアル中にある。
【００２１】
本発明の実施形態は、ＨＤＡＣ阻害剤およびビタミンＢ分子を含む医薬組成物を提供する。関連の実施形態では、医薬組成物はＨＤＡＣ阻害剤およびビタミンＢ分子のそれぞれを有効量で含む。別の関連の実施形態では、医薬組成物は薬学上許容されるバッファーをさらに含む。別の関連の実施形態では、医薬組成物は単位用量で存在する。
【００２２】
本発明の化合物は、特に細胞増殖性疾患および／または制御を欠いた遺伝子発現に関連する疾患を処置するのに有効な医薬組成物における有効薬として好適である。種々の実施形態の医薬組成物は薬学上有効な量の本有効薬を他の薬学上許容される賦形剤、担体、増量剤、希釈剤などとともに含む。本明細書において「薬学上有効な量」とは、ある治療結果、特に抗腫瘍作用、例えば、悪性癌細胞、良性腫瘍細胞もしくは他の増殖細胞の増殖の阻害、または他のいずれかのＨＤＡＣ依存性疾患の阻害を達成するために宿主に、または宿主の細胞、組織(issue)または器官に投与する必要のある量を示す。
【００２３】
ＨＤＡＣ阻害化合物
本明細書において「ヒストンデアセチラーゼ阻害剤」、「ヒストンデアセチラーゼの阻害剤」または「ＨＤＡＣ阻害剤」とは、ヒストンデアセチラーゼと相互作用し、その酵素活性を阻害する働きをし得る構造を有するいずれかの、または全ての化合物を指す。「ヒストンデアセチラーゼ酵素活性を阻害する」とは、ヒストンデアセチラーゼの、例えばヒストン由来、または例えばチューブリン由来、ＨＳＰ−９０由来、Ｈｉｆ−１α由来もしくはｐ５３由来のタンパク質からアセチル基を除去する能力を低下させることを意味する。さらに、ヒストンデアセチラーゼ活性の低下は、阻害剤の不在下でのヒストンデアセチラーゼ活性に比べて少なくとも約５０％、少なくとも約７５％、少なくとも約９０％、少なくとも約９５％または少なくとも約９９％である。
【００２４】
さらに、阻害剤はある特定の実施形態において、別の無関連の生物作用または酵素作用をもたらす阻害剤の濃度よりも低い濃度でデアセチラーゼを阻害する。例えば、ヒストンデアセチラーゼ阻害活性のための阻害剤の濃度は、無関連の生物作用または酵素作用をもたらす濃度よりも少なくとも２倍低いか、少なくとも５倍低いか、少なくとも１０倍低いか、または少なくとも２０倍低い。
【００２５】
さらに、本明細書において、この用語は、限定されるものではないが、米国特許第６，８３１，０６１号(Lee et al.)；同第６，８００，６３８号(Georges et al.)；同第６，３９９，５６８号(Nishino et al.)；同第６，１２４，４９５号(Neiss et al.)および同第５，９３９，４５５号(Rephaeli)に見られる化合物など、これまでに記載されているいずれのＨＤＡＣ阻害剤も含む。
【００２６】
よって、一実施形態では、ＨＤＡＣ阻害剤は、米国特許第６，８３１，０６１号に示されているように、下記一般式：
【化１】
2009541488.tif 000002
で表される置換アピシジン誘導体である。
【００２７】
一実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤は、米国特許第６，８００，６３８号にて示されているように、下記一般式：
【化２】
2009541488.tif 000003
で表されるテトラヒドロピリジン誘導体である。
【００２８】
一実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤は、米国特許第６，３９９，５６８号に示されているように、下記一般式：
【化３】
2009541488.tif 000004
で表される環状テトラペプチド誘導体である。
【００２９】
一実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤は、米国特許第６，１２４，４９５号に示されているように、下記一般式：
【化４】
2009541488.tif 000005
で表される不飽和オキシアルキレンエステルである。
【００３０】
一実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤は、米国特許第５，９３９，４５５号に示されているように、下記一般式：
【化５】
2009541488.tif 000006
で表されるオキシアルキレンジエステル酪酸誘導体である。
【００３１】
一実施形態において、ＨＤＡＣ阻害剤化合物は、ＰＣＴ公報ＷＯ０２／２２５７７に示されているように、下記一般式：
【化６】
2009541488.tif 000007
で表されるヒドロキサメート誘導体である。
【００３２】
ＨＤＡＣ阻害剤はさらに、ヒドロキサム酸、ヒドロキサメート、ヒドロキシアミド、環状ペプチド、ベンズアミド、ベンズイミダゾール、短鎖脂肪酸、メルカプトミド、カルバミン酸、カルボニル、ピペラジニル、ピペリジニル、モルホリニル、スルホニル、アミン、アミド、バルプロ酸、オキシム、ジオキサン、エポキシド、ラクタムおよびデプデシンなどの化合物を含む。
【００３３】
ヒドロキサム酸およびヒドロキサメート誘導体であるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、トリコスタチンＡ（ＴＳＡ）、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）、オキサムフラチン、スベリックビスヒドロキサム酸（ＳＢＨＡ）、ｍ−カルボキシ−桂皮酸ビスヒドロキサム酸（ＣＢＨＡ）およびピロキサミドが挙げられる。ヒドロキサム酸およびヒドロキサメート誘導体であるＨＤＡＣ阻害剤のさらなる例は．出願番号ＷＯ０３０８２２８８(Watkins et al.)、ＣＡ２５２０６１１(Miller et al.)、ＷＯ２００５０７５４６６(Bordogna et al.)、ＷＯ２００５０５３６１０(Miller et al.)、ＵＳ２００５１２４６７９(Kim et al.)およびＷＯ２００５０１４５８８(Dyke et al.)に見出せる。
【００３４】
ヒドロキサメートおよびヒドロキサメート誘導体であるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、出願番号ＵＳ２００６０５８５５３(Leahy et al.)、ＷＯ２００５０９７７７０(Setti)、ＷＯ２００５０５８８０３(LeBlond et al.)およびＷＯ２００５０４０１６１(Stunkel et al.)に見出せるものが挙げられる。ヒドロキシアミドおよびヒドロキシアミド誘導体であるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、出願番号ＷＯ２００６０２５６８３(Lee et al.)およびＷＯ２００６０１６６８０(Ishibashi et al.)に見出せるものが挙げられる。ベンズイミダゾールおよびベンズイミダゾール誘導体であるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、出願番号ＷＯ２００４０７２０４７(Urano et al.)に見出せるものが挙げられる。メルカプトミドおよびメルカプトミド誘導体であるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、出願番号ＷＯ２００６０２８９７２(Ahmed et al.)およびＷＯ２００５０７５４４６(Koyama et al.)に見出せるものが挙げられる。カルバミン酸およびカルバミン酸誘導体であるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、出願番号ＵＳ２００６０５８２８２(Finn et al.)およびＵＳ２００５１４３３８５(Watkins et al.)に見出せるものが挙げられる。カルボニルおよびカルボニル誘導体であるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、出願番号ＥＰ１６３５８００(Wash et al.)、ＵＳ２００５１４８６１３(Van Emelen et al.)、ＷＯ０３０９９７６０(Lan-Hargest et al.)およびＷＯ０３０９９７８９(Lan-Hargest et al.)に見出せるものが挙げられる。ピペラジニル、ピペリジニルおよびモルホリニルならびにピペラジニル、ピペリジニルおよびモルホリニル誘導体であるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、出願番号ＺＡ２００４０７２３７(Van Emelen et al.)およびＷＯ２００６０１０７４９(Van Brandt et al.)に見出せるものが挙げられる。スルホニルおよびスルホニル誘導体であるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、出願番号ＷＯ０３０７６４０１(Van Emelen et al.)、ＵＳ２００６０３０５４３(Malecha et al.)およびＷＯ２００５０４０１０１(Lim et al.)に見出せるものが挙げられる。アミンおよびアミン誘導体であるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、出願番号ＷＯ２００６０１０７５０(Verdonck et al.)、ＵＳ２００５１１９２５０(Angibaud et al.)、ＵＳ２００４１５７８４１(Fertig et al.)およびＵＳ２００４１６２３１７(Fertig et al.)に見出せるものが挙げられる。アミドおよびアミド誘導体であるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、出願番号ＷＯ２００６００５９５５(Chakravarty et al.)、ＷＯ２００６００５９４１(Chakravarty et al.)、ＷＯ２００５０６５６８１(Bressi et al.)およびＷＯ０３０７０６９１(Uesato et al.)に見出せるものが挙げられる。バルプロ酸およびバルプロ酸誘導体であるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、出願番号ＵＳ２００５０３８１１３(Groner et al.)に見出せるものが挙げられる。オキシムおよびオキシム誘導体であるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、出願番号ＣＡ２５１９３０１(Fertig et al.)に見出せるものが挙げられる。ジオキサンお���びジオキサン誘導体であるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、出願番号ＷＯ０２０８９７８２(Schreiber et al.)に見出せるものが挙げられる。エポキシドおよびエポキシド誘導体であるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、出願番号ＵＳ２００５２８２８９０(Zheng)およびＷＯ０３０９９２７２(Lan-Hargest et al.)に見出せるものが挙げられる。ラクタムおよびラクタム誘導体であるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、出願番号ＵＳ２００４０７７６９８(Georges et al.)に見出せるものが挙げられる。
【００３５】
環状ペプチドであるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、トラポキシンＡ、アピシジンおよびＦＲ９０１２２８が挙げられる。環状ペプチドおよび環状ペプチド誘導体であるさらなるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、出願番号ＵＳ２００２１２００９９(Basting)、ＵＳ６６５６９０５(Mori et al.)およびＵＳ６３９９５６８(Nishino et al.)に見出せる。
【００３６】
ベンズアミドであるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、ＭＳ−２７−２７５（Ｎ−（２−アミノフェニル）−４−［Ｎ−（ピリジン−３−イルメトキシカルボニル）アミノメチル］ベンズアミド）が挙げられる。ベンズアミドおよびベンズアミド誘導体であるさらなるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、出願番号ＨＫ１０７９０４２、ＵＳ２００５１７１１０３(Stokes et al.)およびＨＫ１０４６２７７(Ishibashi et al.)に見出せる。
【００３７】
短鎖脂肪酸であるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、限定されるものではないが、酪酸塩（例えば、酪酸、酪酸アルギニンおよび酪酸フェニル）が挙げられる（Newmark et al. (1994) Cancer Lett. 78:1-5;およびCarducci et al. (1997) Anticancer Res. 17:3972-3973）。短鎖脂肪酸および短鎖脂肪酸誘導体であるさらなるＨＤＡＣ阻害剤の例としては、出願番号ＵＳ２００６０６９１５７(Ferrante)、ＷＯ２００５０５５９２８(Chen et al.)およびＷＯ９８００１２７(Rephaeli et al.)に見出せる。
【００３８】
さらに、マイクロモル濃度でＨＤＡＣを阻害することが示されているデプデシン(Kwon et al. (1998) Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 95:3356-3361)も本発明のヒストンデアセチラーゼ阻害剤の範囲内にある。
【００３９】
一般に、ＨＤＡＣ阻害剤はメタノールもしくはエタノールなどのアルコール、またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）などの有機溶媒に可溶である。あるいは、ＨＤＡＣ阻害剤はシクロデキストリン、例えば２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンと複合体を形成することができ（Hockly et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2003; 100(4): 2041-2046参照）、その結果、ＨＤＡＣ阻害剤は水溶液中で複合体として可溶となる。
【００４０】
ＨＤＡＣ依存性疾患における使用
本発明の方法は、有用な薬理学的特性を有し、かつ、疾患の処置に有用である化合物を含む。これらの使用および方法のある特定の実施形態では、これらの化合物はＨＤＡＣ依存性疾患の処置に、例えば、増殖性疾患を処置するための薬剤として有用である。
【００４１】
「ＨＤＡＣ依存性疾患の処置」とは、これらの疾患（例えば、後述の疾患を含む）の予防的または治療的（待期的処置および／または治癒的）処置を指す。
【００４２】
「使用」とは、特に断りのない限り、適当、また便宜であれば、それぞれ本発明の下記実施形態のいずれか１以上を含む：ＨＤＡＣ依存性疾患の処置における使用；これらの疾患の処置に用いるための医薬組成物の製造のための、例えば薬剤の製造における使用；これらの疾患の処置における誘導体の使用方法；これらの疾患の処置のための誘導体を含む医薬製剤；およびこれらの疾患の処置に用いるための誘導体。特に、処置される、従って本発明の化合物を使用するのに好適な疾患は、増殖性疾患に相当するものを含むＨＤＡＣ依存性（「依存性」とは、「単に依存する」だけでなく「支持される」ことも意味する）疾患から選択され、従って、ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ６、ＨＤＡＣ７、ＨＤＡＣ８、ＨＤＡＣ９、ＨＤＡＣ１０、ＨＤＡＣ１１またはＨＤＡＣ複合体（以下、「ＨＤＡＣ」）に依存する疾患は、ＨＤＡＣ依存性疾患の処置に用い得る。「使用」とはさらに、トレーサーまたは標識として働くよう十分にＨＤＡＣタンパク質と結合する、従って、フルオロまたはタグと結合された際に、あるいは放射活性とされた際に、研究試薬として、または診断薬もしくは造影剤として使用可能な本明細書の組成物の実施形態を含む。
【００４３】
ある特定の実施形態では、本発明の方法は、「ＨＤＡＣ依存性疾患」、すなわち、本明細書に記載のような少なくとも１つのＨＤＡＣの活性に依存する疾患を処置するために使用される。使用は、ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３、ＨＤＡＣ４、ＨＤＡＣ５、ＨＤＡＣ６、ＨＤＡＣ７、ＨＤＡＣ８、ＨＤＡＣ９、ＨＤＡＣ１０およびＨＤＡＣ１１の群の１つまたはサブセットを阻害する処置であり得ると考えられ、これらの酵素の全てが本発明のいずれかの化合物によって等しい程度で阻害されることを意味するものではない。
【００４４】
本明細書ではまた、in vivoにおける本方法の化合物の抗腫瘍活性の証明を意図する。
【００４５】
本方法の化合物の種々の実施形態は有用な薬理学的特性を有し、タンパク質ＨＤＡＣ依存性疾患の処置において、例えば、増殖性疾患および過剰増殖性疾患、ならびに本開示を通じて挙げられている他のＨＤＡＣ依存性疾患を処置する薬剤として有用である。本発明の化合物の種々のさらなる実施形態は有用な結合特性を有し、診断能力および標識能力において、また、造影剤として有用である。
【００４６】
アッセイ
ＨＤＡＣ活性の阻害は次のようにして測定することができる：バキュロウイルスドナーベクターｐＦＢ−ＧＳＴＸ３を用いて、ＨＤＡＣポリペプチドを発現する組換えバキュロウイルスを作製する。ＨＤＡＣコード領域を含む導入ベクターをＤＨ１０Ｂａｃ細胞系統(GIBCO)にトランスフェクトし、選択寒天プレートで平板培養する。融合配列がウイルスゲノム（細菌が担持）に導入されていないコロニーは青色である。白色コロニーを単離採取し、標準的なプラスミド精製法によって、各細菌クローンからウイルスＤＮＡ（バクミド）を単離する。次に、Ｃｅｌｌｆｅｃｔｉｎ試薬を用い、２５ｃｍ２フラスコにて、Ｓｆ９細胞またはＳｆ２１(American Type Culture Collection)細胞にウイルスＤＮＡをトランスフェクトした。
【００４７】
Ｓｆ９細胞における小規模タンパク質発現の測定：トランスフェクト細胞培養物からウイルス含有培地を採取し、その力価を高めるための感染に用いた。２回の感染後に得られたウイルス含有培地を大規模タンパク質発現に用いる。大規模タンパク質発現では、１００ｃｍ２の丸底組織培養プレートに５×１０７細胞／プレートを播種し、１ｍＬのウイルス含有培地を感染させる（ＭＯＩおよそ５）。３日後、細胞をプレートから掻き取り、５００ｒｐｍで５分間遠心分離する。１０〜２０個の１００ｃｍ２プレートからの細胞ペレットを５０ｍＬの氷冷溶解バッファー（２５ｍＭ  ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、１％ＮＰ−４０、１ｍＭ  ＤＴＴ、１ｍＭ  Ｐ  ＭＳＦ）に再懸濁させる。これらの細胞を氷上で１５分間攪拌した後、５，０００ｒｐｍで２０分間遠心分離する。
【００４８】
ＧＳＴタグ付きタンパク質の精製：  遠心分離した細胞溶解液を２ｍＬグルタチオン−セファロースカラム(Pharmacia)にのせ、１０ｍＬの２５ｍＭ  ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、２ｍＭ  ＥＤＴＡ、１ｍＭ  ＤＴＴ、２００ｍＭ  ＮａＣｌで３回洗浄する。次に、ＧＳＴタグ付きタンパク質を２５ｍＭ  ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１０ｍＭ還元型グルタチオン、１００ｍＭ  ＮａＣｌ、１ｍＭ  ＤＴＴ、１０％グリセロールを１０回適用（各１ｍＬ）して溶出させ、−７０℃で保存する。
【００４９】
酵素活性の測定：精製ＧＳＴ−ＨＤＡＣタンパク質を用いたＨＤＡＣアッセイは、１５ｎｇのＧＳＴ−ＨＤＡＣタンパク質、２０ｍＭ  ｔｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．５、１ｍＭ  ＭｎＣｌ２、１０ｍＭ  ＭｇＣｌ２、１ｍＭ  ＤＴＴ、３μｇ／ｍＬポリ（Ｇｌｕ，Ｔｙｒ）４：１、１％ＤＭＳＯ、２．０μＭ  ＡＴＰ（γ−［３３Ｐ］−ＡＴＰ  ０．１μＣｉ）を含有する最終量３０μＬで行う。阻害剤の存在下または不在下で活性をアッセイする。アッセイは下記の条件下、９６ウェルプレートにて周囲温度で１５分間行い、２０μＬの１２５ｍＭ  ＥＤＴＡを加えることで終了させた。次に、４０μＬの反応混合物を、予めメタノールに５分間浸し、水ですすいだ後に０．５％Ｈ３ＰＯ４に５分間浸し、接続されていない真空源を備えた真空マニホールドに取り付けたＩＭＭＯＢＩＬＯＮ−ＰＶＤＦ膜(Millipore)上に移す。全てのサンプルをスポットした後、真空装置を接続し、それぞれを２００μＬの０．５％Ｈ３ＰＯ４でよくすすぐ。膜を取り外し、シェーカー上、１．０％Ｈ３ＰＯ４で４回、エタノールで１回洗浄する。膜を周囲温度で乾燥させ、Ｐａｃｋａｒｄ  ＴｏｐＣｏｕｎｔ  ９６ウェルフレームに取り付け、１０μＬ／ウェルのＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ  ＴＭ(Packard)を加えた後、計数する。各化合物、二反復、４濃度（通常、０．０１、０．１、１および１０μＭ）の阻害率（％）の直線回帰分析によってＩＣ５０値を算出する。
【００５０】
ＩＣ５０の算出
投入：ＩＭＭＯＢＩＬＯＮ膜（未洗浄）上、３×４μＬ停止アッセイ
バックグラウンド（３ウェル）：酵素の代わりにＨ２Ｏを用いたアッセイ
陽性対照（４ウェル）：化合物の代わりに３％ＤＭＳＯ
反応槽対照（１ウェル）：反応混合物不含
【００５１】
各化合物、４濃度（通常、１０μＭで始まる３または１０倍希釈液）の阻害率（％）の対数回帰分析によってＩＣ５０値を算出する。各実験において、参照阻害剤の平均値に対してＩＣ５０値をノーマライズするために、参照化合物による実際の阻害を用いる。
ノーマライズＩＣ５０＝測定ＩＣ５０平均参照ＩＣ５０／測定参照ＩＣ５０
【００５２】
例：実験における参照阻害剤０．４μＭ、平均０．３μＭ
実験における試験化合物１．０μＭ、ノーマライゼーション：０．３／０．４＝０．７５μＭ
【００５３】
例えば、既知のＨＤＡＣ阻害剤またはその合成誘導体を参照化合物として用いることができる。
【００５４】
このプロトコールを用いると、本発明の化合物は、ＨＤＡＣ阻害に関するＩＣ５０値が０．００５〜１００μＭまたは０．００２〜５０μＭの範囲（例えば、０．００１〜２μＭまたはそれ以下の範囲を含む）であることが示すことが分かる。
【００５５】
増殖性疾患
上述のように、本発明の方法は増殖性疾患を処置するのに有用である。増殖性疾患としては、例えば、腫瘍性疾患（もしくは癌）および／もしくは転移）または白血病またはリンパ腫などの血液細胞の増殖性疾患を含む。本発明の方法は、例えば、乳癌、尿生殖器癌、肺癌、消化管癌、食道癌、類表皮癌、黒色腫、卵巣癌、膵臓癌、神経芽腫、頭部および／または頸部癌または膀胱癌、あるいはより広義には、腎臓癌、脳の癌または胃癌、または白血病もしくはリンパ腫（（ｉ）骨髄性白血病または急性白血病または慢性白血病などの白血病；ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫などのリンパ腫；乳房腫瘍；類表皮頭部および／または頸部腫瘍または口腔腫瘍などの類表皮腫瘍；肺腫瘍、例えば、小細胞または非小細胞肺腫瘍；消化管腫瘍、例えば、結腸直腸腫瘍；または尿生殖器腫瘍、例えば、前立腺腫瘍（ホルモン不応前立腺腫瘍を含む）；あるいは（ｉｉ）他の化学療法薬による処置に不応の増殖性疾患；あるいは（ｉｉｉ）多剤耐性のために他の化学療法薬による処置に不応の腫瘍といった腫瘍を処置するのに有用である。
【００５６】
【表１】
2009541488.tif 000008
【００５７】
ＨＤＡＣ依存性疾患は、ＨＤＡＣタンパク質またはＨＤＡＣ関連タンパク質の１つをコードする１以上の遺伝子の発現、またはそのタンパク質の阻害がその病態の改善をもたらすという点で、このようなタンパク質の活性に関連する病態である。ＨＤＡＣ遺伝子およびタンパク質は、the Online Mendelian Inheritance in Man (O.M.I.M)に記載の通りである。ＨＤＡＣタンパク質の阻害は、ＨＤＡＣ依存性疾患の改善をもたらす。表１はＨＤＡＣタンパク質およびそのヒトゲノム上の各遺伝子座のリストである。表２は、得られる場合には少なくとも３つの生物種における代表的アミノ酸配列のＨＤＡＣ  １−１１  ＧｅｎＢａｎｋ受託番号を示す。
【００５８】
【表２】
2009541488.tif 000009
【００５９】
ある特定の実施形態では、増殖性疾患はさらに、白血病、過形成、繊維症（肺繊維症、およびまた腎繊維症などの他種の繊維症を含む）、脈管形成、乾癬、アテローム性動脈硬化症および血管の平滑筋増殖（狭窄または血管形成術後の再狭窄など）のような過剰増殖性症状であり得る。
【００６０】
腫瘍、腫瘍性疾患、癌腫または癌という場合には、その代わりに、またはそれに加えて、その元の器官または組織における転移および／または他の場所における転移も、その腫瘍および／または転移の場所によらず含まれる。
【００６１】
本明細書の方法で記載される化合物は、例えば、ヒト癌細胞、例えば、癌性腫瘍を含め、正常細胞よりも増殖の速い細胞に選択的に毒性であるか、またはより毒性が高い。これらの化合物は、有意な抗増殖作用を有し、分化を誘発する（例えば、細胞周期の停止およびアポトーシス）。さらに、本明細書の方法の化合物は、種々の細胞系統においてアポトーシスか、またはＧ１停止のいずれかを誘発するサイクリン−ＣＤＫ相互作用タンパク質ｐ２１を誘発する。
【００６２】
以下の例は本発明の説明を意図するものであり、それに限定されるとみなすべきではない。
【００６３】
以下の実施形態では、一般的な表現は、以上および以下に示される、対応するより具体的な定義に置き換えることができる。
【００６４】
本明細書の医薬組成物、使用および方法、本発明の化合物、その互変異性体またはその薬学上許容される塩の使用の特定の実施形態では、処置されるＨＤＡＣ依存性疾患は、例えば、ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ６およびＨＤＡＣ８を含む、いずれか１以上のＨＤＡＣに依存する増殖性疾患である。
【００６５】
他の実施形態では、ＨＤＡＣ依存性疾患は、白血病、過形成、繊維症（肺繊維症、およびまた腎繊維症などの他種の繊維症を含む）、脈管形成、乾癬、アテローム性動脈硬化症および血管の平滑筋増殖（狭窄または血管形成術後の再狭窄など）のような過剰増殖性症状を含む増殖性疾患であり得る。
【００６６】
他の実施形態では、本発明は、ＨＤＡＣ依存性疾患を処置する医薬組成物、使用および方法を提供し、その方法はＨＤＡＣ阻害剤およびビタミンＢ分子を投与することを含み、処置される疾患は、例えば、骨髄性白血病または急性白血病または慢性白血病などの白血病；ホジキンリンパ腫または非ホジキンリンパ腫などのリンパ腫；良性または悪性腫瘍、脳の癌、腎臓癌、肝臓癌、副腎癌、膀胱癌、乳癌、胃癌（胃腫瘍を含む）、食道癌、卵巣癌、結腸癌、直腸癌、前立腺癌、膵臓癌、肺癌（ＳＣＬＣを含む）、膣癌、甲状腺癌、肉腫、膠芽腫、多発性骨髄腫または消化管癌、特に、結腸癌または結腸直腸腺腫、または頭頸部腫瘍、上皮過剰増殖（乾癬を含む）、前立腺肥大、新生物（乳癌を含む上皮性のものを含む）；あるいはリンパ腫または白血病などの血液細胞の増殖性疾患を含む増殖性疾患である。また、アテローム性動脈硬化症、血栓症、乾癬、硬皮症および繊維症の処置のための方法も含む。
【００６７】
これらの方法の使用は、腫瘍の退縮ならびに腫瘍転移（微小転移を含む）の形成および転移（微小転移を含む）の成長の予防または軽減をもたらす。さらに、これらの方法は、上皮過剰増殖（例えば、乾癬）を処置するため、また前立腺肥大において、また例えば乳癌など、上皮性のものを含む新生物の処置のために用いられる。また、１以上の個々のＨＤＡＣタンパク質種または関連のタンパク質が関与する限り、本発明の方法を使用することができる。また、本発明の方法は、少なくとも１つのＨＤＡＣタンパク質によるシグナル伝達が関与する限り、中枢神経系または末梢神経系の疾患の処置にも使用可能である。
【００６８】
本発明の医薬組成物、使用および方法はまた、ＶＥＧＦ受容体チロシンキナーゼ過剰発現などのシグナル伝達に関与するタンパク質の転写調節に関連する疾患の療法にも適当である。これらの疾患としては、網膜症、加齢性黄斑変性、乾癬、血管芽腫、血管腫、動脈硬化症、筋ジストロフィーなどの筋肉消耗症状、悪液質、ハンチントン症候群；関節炎を含むリウマチ様またはリウマチ性炎症性疾患、ならびに骨関節炎および関節リウマチなどの関節症状、または慢性喘息などの慢性炎症疾患といった炎症性疾患；動脈性または移植後アテローム性動脈硬化症、子宮内膜症、および特に、新生物性疾患、例えば、いわゆる固形腫瘍（消化管癌、膵臓癌、乳癌、胃癌、子宮頚癌、膀胱癌、腎臓癌、前立腺癌、食道癌、卵巣癌、子宮内膜癌、肺癌、脳の癌、黒色腫、カポジ肉腫、頭頸部の扁平上皮癌、悪性胸膜中皮腫、リンパ腫または多発性骨髄腫を含む）および液性腫瘍（例えば、白血病）がある。
【００６９】
ＨＤＡＣタンパク質は９つのコンセンサス配列のセットを共有している。ＨＤＡＣタンパク質はアミノ酸配列に基づいて２つのクラスに分類され、ＨＤＡＣ１、ＨＤＡＣ２およびＨＤＡＣ３などのクラスＩタンパク質は、酵母Ｒｐｄ３と実質的な相同性を有し、ＨＤＡＣ４およびＨＤＡＣ６などのクラスＩＩタンパク質は、酵母Ｈｄａ１と相同性を示す。様々な知見が、これらのタンパク質とＨＤＡＣ依存性疾患との関連を示唆している。
【００７０】
ＨＤＡＣ１は４８２個のアミノ酸を有するタンパク質であり、自然界で保存性が高く、酵母転写因子と６０％の同一性を有している。これはあらゆる組織に様々なレベルで見られ、転写調節および細胞周期の進行、特に、Ｇ１チェックポイントの制御に関与している。ＨＤＡＣ１は、細胞増殖を阻害する網膜芽細胞腫腫瘍抑制タンパク質ＲＢ１および核転写因子ＮＦκＢと物理的に相互作用し、それらと協働する。
【００７１】
ＨＤＡＣ２は、哺乳類ジンクフィンガー転写因子ＹＹ１と関連していることから、ＹＹ１関連因子（ＹＡＦ１）としても知られる。このタンパク質をコードする、ヒトゲノム上の遺伝子座は、小児急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）および尺側列四肢欠陥に関連づけられている領域である６ｑ２１である。さらに、ＨＤＡＣ２は、ＨＤＡＣ１も含む複合体中のＢＲＣＡ１と相互作用し、それと物理的に会合する。この複合体の共通核は遺伝子をサイレント状態に抑制する働きをする。Ｓ期には異なる複合体が形成され、複製した後にヒストン脱アセチル化されて異質染色質となる。
【００７２】
ＨＤＡＣ３はあらゆるヒト組織および腫瘍細胞系統で発現されることが知られている。ヒト骨髄性白血病系統をトランスフェクトすると、異常な核形態を有し、細胞の大きさが増したＧ２／Ｍ境界期の細胞が蓄積した。ＨＤＡＣ３の触媒ドメインはＨＤＡＣ４の触媒ドメインと相互作用する。
【００７３】
ＨＤＡＣ４デアセチラーゼ活性は４つの核ヒストンタンパク質の全てに作用し、前肥大軟骨細胞で発現され、軟骨細胞肥大、軟骨性骨形成および骨格形成を調節する。ＨＤＡＣ４ヌルマウスは未熟骨化を示す。ＨＤＡＣ４は、ＭＩＲおよびＣＡＢＩＮ１とともに、ＭＥＦ−２（筋細胞エンハンサー因子−２）のカルシウム感受性転写レプレッサーの一ファミリーをなしている。
【００７４】
ＨＤＡＣ５は試験した全ての組織で発現するが、脾臓および膵臓での発現は低い。ＨＤＡＣ５のアミノ酸１，１２３個の配列は、ＨＤＡＣ４と５１％同一である。２９人の結腸癌患者のうち５人が血清学的にＨＤＡＣ５に対する抗体が陽性であると判定された。ＭＥＦ−２タンパク質はＨＤＡＣ４およびＨＤＡＣ５と相互作用する。
【００７５】
ＨＤＡＣ６はチューブリンデアセチラーゼであり、もっぱら細胞質に局在する。この酵素は組み立てられた微小管に対して強いデアセチラーゼ活性を有し、その発現または活性への治療的介入が、ハンチントン病および悪液質などの筋肉の健全性および筋肉消耗に影響を及ぼす様々な症状に関連づけることができる。
【００７６】
ＨＤＡＣ７Ａ転写物は主として心臓および肺組織に見られ、程度は低いが骨格筋にも見られる。このタンパク質は核内領域にＨＤＡＣ５とともに局在する。
【００７７】
ＨＤＡＣ８は、コンセンサス配列の典型的な９つの保存されたＨＤＡＣブロックを有しつつ、そのアミノ末端およびカルボキシ末端のそれぞれに、他のＨＤＡＣタンパク質のものとは異なる配列を有するアミノ酸３７７個のタンパク質である。それは脳で最も強く発現される。ＲＮＡｉによる発現のノックダウンは、ヒト肺、結腸および子宮頸癌細胞系統の増殖を阻害する。Ｘｑ１３におけるコード遺伝子のマップ位置は、Ｘ染色体不活化の誘発に関与しているＸＩＳＴ付近、かつ、前白血病症状に関連する破断付近に限局化される。さらに、その発現または活性への治療的介入は、種々の関節症状、例えば関節リウマチなどの炎症性疾患に影響を及ぼす様々な症状に関連づけることができる。
【００７８】
ＨＤＡＣ９は７Ｂ、ＭＩＴＲおよびＫＩＡＡ０７４４としても知られる。それは脳で最も活発に発現され、程度は低いが心臓および平滑筋でも発現され、その他の組織では発現は極めて低い。このタンパク質はＨＤＡＣ１と相互作用し、転写のレプレッサーである。長いイソ型は１，０１１個のアミノ酸を含み、９ａとして知られている短い形態は８７９個のアミノ酸を含み、Ｃ末端の１３２残基を欠いており、肺、肝臓および骨格筋で優勢である。
【００７９】
ＨＤＡＣ１０はアミノ酸６６９個と６４９個の２つのスプライス変異体で見られる。このタンパク質はチミジンキナーゼプロモーターからの転写を抑制し、ＨＤＡＣ３と相互作用する。
【００８０】
ＨＤＡＣ１１は、脳、心臓、骨格筋、腎臓および精巣で最も発現が高い、アミノ酸３４７個のタンパク質である。それは抽出液とともに分液される。
【００８１】
本発明の方法はまた、乾癬などの持続的脈管形成；カポジ肉腫；再狭窄、例えばステント誘発性再狭窄；子宮内膜症；クローン病；ホジキン病；白血病；関節リウマチなどの関節炎；血管腫；血管繊維腫；糖尿病性網膜症および血管新生緑内障などの眼疾患；糸球体腎炎などの腎疾患；糖尿病性腎症；悪性腎硬化症；血栓性細血管障害性症候群；移植拒絶および糸球体症；肝硬変などの繊維性疾患；メサンギウム細胞増殖性疾患；動脈硬化症；神経組織の損傷によって引き起こされる疾病の予防または処置のため；また、バルーンカテーテル処置後の血管の再閉塞を抑制するため；血管補綴に用いるため、または例えばステントなどの血管開口を保持するための機械装置を挿入した後；免疫抑制剤として；無瘢痕創傷治癒の補助として；ならびに加齢斑および接触性皮膚炎を処置するために使用することができる。
【００８２】
ビタミンＢ分子
本明細書において「ビタミンＢ分子」とは、ビタミンＢ１（チアミン）、ビタミンＢ２（リボフラビン）、ビタミンＢ３（ビタミンＰまたはビタミンＰＰまたはナイアシン）、ビタミンＢ５（パントテン酸）、ビタミンＢ６（ピリドキシンおよびピリドキサミン）、ビタミンＢ７（ビタミンＨ、ビタミンＢ−ｗまたはビオチン）、ビタミンＢ９（ビタミンＭ、ビタミンＢ−ｃまたは葉酸）、ビタミンＢ１２（シアノコバラミン）によって例示される、ヒトの栄養素の初期の研究で発見された数種のビタミンの複合体のいずれかまたは全てを指す。
【００８３】
ビタミンＢ分子にはまた、限定されるものではないが、ビタミンＢ４（アデニン）、ビタミンＢ８（エルガデニル酸）、ビタミンＢ１０（パラアミノ安息香酸）、ビタミンＢ１１（サリチル酸またはビタミンＳ）、ビタミンＢ１３（ピリミジンカルボン酸またはオロチン酸）、ビタミンＢ１４（ビタミンＢ１０とビタミンＢ１１の混合物）、ビタミンＢ１５（パンガミン酸またはジメチルグリシン）、ビタミンＢ１６、ビタミンＢ１７（アミグダリン）、ビタミンＢ２２、ビタミンＢ−ｔ（Ｌ−カルニチン）およびビタミンＢ−ｘ（パラアミノ安息香酸）などの他の生活型（動物、細菌、酵母など）における栄養素の研究により発見された「非ヒト形態」が含まれる。
【００８４】
これらのＢビタミンは、代謝の強化、健康な皮膚の維持および筋肉張力、免疫の増強および神経系の機能、ならびに細胞増殖および分裂の促進（貧血の発症を予防するための最小閾値レベルにおいて重要な赤血球のそれを含む）などの身体に対する多くの健康利益をもたらすために一緒に働くことが多い。これらのビタミンＢは組み合わさって、ストレス、鬱病および心血管疾患の症候および原因に対抗する助けをする。ビタミンＢは水溶性であり、体中に分散し、過剰分は一般に尿に排泄されるので、毎日補充しなければならない。
【００８５】
本明細書において「ビタミンＢ２分子」とは、ビタミンＢ２、リボフラビンまたはビタミンＧのいずれか、または全てを指す。本明細書においてこの用語にはまた、補酵素形態、フラビンアデニンジヌクレオチド（ＦＡＤ）およびフラビンアデニンモノヌクレオチド（ＦＭＮ）が含まれる。Ｂ２分子は、脂肪、炭水化物およびタンパク質の代謝を助けることによってエネルギー生産を支える、吸収の容易な水溶性の微量栄養素である。ビタミンＢ２分子はまた、赤血球の形成および呼吸、抗体産生に、またヒトの成長および生殖にも必要とされる。それらはフリーラジカルとして知られる体内の傷害粒子を捕捉することによって酸化防止剤として働く。ビタミンＢ２分子は、健康な皮膚、爪、毛髪成長および全般的な良好な健康状態（甲状腺活動の調節を含む）に重要である。
【００８６】
ビタミンＢ２欠乏症はそれ自体、口角の亀裂およびただれ、眼の障害、口腔および舌の炎症、皮膚病巣、皮膚炎、めまい、脱毛症、不眠症、光感受性、消化不良、成長遅延および足の灼熱感として現れる。
【００８７】
ビタミンＢ２分子の構造例を以下に示す。
【化７】
2009541488.tif 000010
【００８８】
本明細書において「ビタミンＢ３分子」とは、ビタミンＢ３、ナイアシンまたはニコチン酸のいずれか、または全てを指す。これらにはアミド型、ニコチンアミドまたはナイアシンアミドが含まれる。ビタミンＢ３分子は水溶性ビタミンであり、ＮＡＤＨ、ＮＡＤ、ＮＡＤ＋およびＮＡＤＰなどのその誘導体は、生細胞におけるエネルギー代謝およびＤＮＡ修復に重要な役割を果たす。これらの分子はまた、身体が副腎および他の身体部位で性ホルモンおよびストレス関連ホルモンを作る手助けをする。ビタミンＢ３分子は循環を改善し、血中のコレステロールレベルを低下させるのに効果的である。
【００８９】
ビタミンＢ３分子の欠乏は欠乏疾患ペラグラを引き起こす。軽度Ｂ３欠乏症は代謝を緩慢にし、次に、耐寒性の低下を招き、肥満に対する潜在的寄与因子となる。
【００９０】
in vivoにおけるビタミンＢ３分子の合成は、アミノ酸トリプトファンの５員芳香族複素環から始まり、これが開裂され、トリプトファンのαアミノ基を伴って再配列され、ビタミンＢ３分子の６員芳香族複素環となる。この反応は次のように進行する：トリプトファン→キヌレニン→３−ヒドロキシキヌレニン（必要とされるＢ６酵素）→ビタミンＢ３分子。肝臓はアミノ酸トリプトファンからビタミンＢ３分子を合成することができ、この合成は緩慢で、ビタミンＢ６を必要とし、すなわち、１ｍｇのビタミンＢ３分子を作り出すのに６０ｍｇのトリプトファンが必要とされる。
【００９１】
ビタミンＢ３分子の構造例を以下に示す。
【化８】
2009541488.tif 000011
【００９２】
本明細書において「ビタミンＢ６分子」とは、ビタミンＢ６、ピリドキシン、ピリドキサールおよびピリドキサミンのいずれか、または全てを指す。これらの分子は肝臓でピリドキサール５’−リン酸（ＰＬＰ）に変換される。ＰＬＰは、アミノトランスフェラーゼ、アミノ酸ラセマーゼおよびアミノ酸デカルボキシラーゼ（そのほとんどがアミノ基含有化合物を基質とする）などの多くの代謝酵素の重要な補因子である。ＰＬＰが存在しないと、実質的な数の細胞生合成および異化経路が機能を止める。
【００９３】
ＰｄｘＡ／ＰｄｘＪ経路とＰＤＸ１／ＰＤＸ２経路の２つのde novo  ＰＬＰ合成経路が知られている。生物は一方または他方いずれかのde novo  ＰＬＰ合成経路を含んでいると思われる。ビタミンＢ６はＰＬＰの他、リン酸化形態および非リン酸化形態のＰＬＰ前駆体を含み、これらの化合物はＢ６ビタマーと呼ばれている。非リン酸化ビタマーピリドキシン、ピリドキサールおよびピリドキサミンは、多くの細菌、真菌、植物および哺乳類細胞が取り込むことができ、サルベージ経路によってＰＬＰに変換される。
【００９４】
ビタミンＢ６分子の構造例を以下に示す。
【化９】
2009541488.tif 000012
【００９５】
本明細書において「ビタミンＢ９分子」とは、ビタミンＢ９、葉酸およびフォレートのいずれか、または全てを指す。Ｂ９分子は、新たな細胞、特に、幼少期および妊娠期などの急速な細胞分裂および成長中の細胞の産生および維持に重要な水溶性ビタミンである。Ｂ９分子はＤＮＡの複製およびＲＮＡの合成に必要とされ、ＤＮＡの合成、修復および機能に関与する。フォレートの欠乏は、癌に至り得るＤＮＡ損傷をもたらし得る。成人および小児とも、正常な赤血球を作り出し、貧血を防ぐためにビタミンＢ９分子を必要とする。
【００９６】
一連のテトラヒドロフォレート化合物の形態において、フォレート誘導体は、生化学的には、いくつかの一炭素転位反応の補酵素であり、また、ｄＵＭＰ（２’−デオキシウリジン−５’−リン酸）からのｄＴＭＰ（２’−デオキシチミジン−５’−リン酸）の合成に関与する。
【００９７】
テトラヒドロフォレート（ＦＨ４）の形成の経路は、葉酸レダクターゼによるフォレート（Ｆ）からジヒドロフォレート（ＦＨ２）への還元と、その後の、ジヒドロ葉酸レダクターゼによるジヒドロフォレートからテトラヒドロフォレート（ＦＨ４）への還元である。テトラヒドロ葉酸メチレン（ＣＨ２ＦＨ４）は、３つの炭素供与体：ホルムアルデヒド、セリンまたはグリシンの１つからのメチレン基の付加により、テトラヒドロフォレートから形成される。テトラヒドロ葉酸メチル（ＣＨ３−ＦＨ４）は、テトラヒドロ葉酸メチレンから、メチレン基の還元によって作り出すことができ、テトラヒドロ葉酸ホルミル（ＣＨＯ−ＦＨ４、フォリン酸）は、テトラヒドロ葉酸メチレンの酸化によって作られる。
【００９８】
ビタミンＢ９欠乏症の徴候としては、下痢、食欲低下、体重低下、虚弱、舌痛、頭痛、心臓動悸、被刺激性および行動障害が含まれる。成人では、貧血が進行したビタミンＢ９欠乏症の徴候である。小児では、ビタミンＢ９欠乏症は成長速度を遅延させ得る。
【００９９】
ビタミンＢ９分子の構造例を以下に示す。
【化１０】
2009541488.tif 000013
【０１００】
本明細書において「ビタミンＢ１２分子」とは、コリノイドとして知られるコバルト含有テトラピロール化合物群のいずれか、または全てを指す。例としては、コバラミン、シアノコバラミン、ヒドロキソコバラミンおよびチオシアネートコバラミンが挙げられる。ビタミンＢ１２分子の構造は、４つのピロール基と中心のコバルト原子からなるコリン環に結合されたヌクレオチド（塩基、リボースおよびリン酸基）からなる。このコバルト原子は、メチル基、デオキシアデノシル基およびヒドロキシル基またはシアノ基に結合している。ビタミンＢ１２分子は、ビタミンＢ１２の補酵素、すなわち、メチルコバラミンおよび５−セオキシアデノシルコバラミン（アデノシルコバラミン）を含む。
【０１０１】
ビタミンＢ１２分子はまた、the United States Pharmacopoeia, The National Formulary, 1995, pp. 1719-1721, United States Pharmacopoeial Convention, Inc., Rockville, Md.に詳細に記載されているように、ラヒマン乳酸菌(Lactobacillus leichmanii)ＡＴＣＣ  ７８３０の増殖応答に基づく濁度測定バイオアッセイで検出できるようなビタミンＢ１２活性を有するビタミンＢ１２前駆体も含む。このような前駆体の例としては、コビリン酸、ウロポルフィリノーゲンＩＩＩ、ヒドロゲノブリニック酸(hydrogenobryinic acid)、プレコリン−３およびプレコリン−６ｘが挙げられる。ビタミンＢ１２前駆体のさらなる例はThibaut et al., 1990 Proc. Natl. Acad. Sci. 87:8795-8799に記載されている。
【０１０２】
ビタミンＢ１２分子はさらにビタミンＢ１２類似体または誘導体を含む。ビタミンＢ１２類似体または誘導体の例としては、そのヌクレオチドリガンドのα−リボース部分がスクシニル化されているビタミンＢ１２分子があり、別の例としては、アクシアルヌクレオチドを欠いているビタミンＢ１２分子があり、この分子は１以上のアルキルハリド基でさらに置換されている。
【０１０３】
ビタミンＢ１２の欠乏は、血液、神経および消化管作用をもたらす。血液作用はＤＮＡ合成の妨害によって引き起こされる。ビタミンＢ１２欠乏の血液症状および徴候には、多形核白血球、大球性、高色素性赤血球の過分葉、平均赤血球容積（ＭＣＶ）の増殖、平均ヘモグロビン濃度（ＭＣＨ、ＭＣＨＣ）の上昇、赤血球総数の低下、皮膚の蒼白、エネルギー低下および疲れやすさ、息切れおよび動悸が含まれる。
【０１０４】
ビタミンＢ１２欠乏の神経作用としては、四肢（特に、下肢）の刺痛およびしびれ、振動感覚および位置感覚の低下、歩行異常、痙直、バビンスキー反応、被刺激性、鬱および認知変化（集中力の低下、記憶喪失、認知症）が含まれる。
【０１０５】
ビタミンＢ１２欠乏の消化管作用としては、断続的下痢および便秘、腹痛、鼓腸および舌の灼熱感（舌炎）が含まれる。食欲不振および体重低下がビタミンＢ１２欠乏の一般症状である。
【０１０６】
病態または欠乏症は、内因性因子を産生する細胞に対する抗体の形成を含む自己免疫症状；広節裂頭条虫の存在；またはＢ１２および内因性因子を十分得られない小腸表面をもたらす小腸手術の後遺症など、この経路の効率または機能を減退させ得る。これらの病態または欠乏症はビタミンＢ１２の効率的吸収の低下をもたらし、高用量ビタミンＢ１２の投与によって改善され得る。
【０１０７】
ビタミンＢ１２分子の構造例を以下に示す。
【化１１】
2009541488.tif 000014
【０１０８】
ＨＤＡＣ阻害剤を伴うビタミンＢ分子の使用
骨髄抑制は、骨髄活性が低下して血液細胞（骨髄で産生される）が少なくなる症状であり、例えば、貧血（低赤血球）、血小板減少症（低血小板）および白血球減少症（低白血球）などがある。一般に、骨髄抑制、特に、血小板減少症は、ほとんどの抗癌薬に一般的な用量制限的毒性副作用である。この毒性は有効な癌化学療法を妨げ、次のコースの遅れおよび／または処置用量の低減を招き得る。重篤な骨髄抑制は、白血球を含む宿主防御機構が長期間阻害されるために感染を招き得る。
【０１０９】
特定の理論または作用機序に限定されるものではないが、in vivoにおけるビタミンＢの作用は不可欠な細胞分裂および細胞複製経路を促進する。例えば、ビタミンＢ１２およびビタミンＢ９は、細胞分裂中のＤＮＡの急速合成プロセス、特に、ＤＮＡおよびＲＮＡ合成のための構成ブロックの合成に関与している。ビタミンＢ３はＤＮＡの修復に関与し、ビタミンＢ２は赤血球の合成に関与している。
【０１１０】
これらのプロセスは、細胞が急速に分裂している組織、特に赤血球の形成を担う骨髄組織において特に重要である。ビタミンＢの量が不十分であると、正常な細胞分裂に必要なＤＮＡ合成の前駆体であるチミジル酸やプリンヌクレオチドなどの必須構成ブロックの利用度が低下する。
【０１１１】
特定の理論または作用機序に限定されるものではないが、口角の亀裂およびただれ、皮膚病巣、皮膚炎、脱毛症、消化不良、耐寒性の低下、下痢、食欲低下、体重低下、虚弱、頭痛、貧血（低赤血球数）、血小板減少症（低血小板数）および白血球減少症（低白血球数）、皮膚の蒼白、エネルギー低下および疲れやすさおよび腹痛として一般に表される、１回の化学療法処置から起こる患者の副作用は、ビタミンＢ欠乏患者に現れる症状と同様である。
【０１１２】
ビタミンＢ投与
ビタミンＢ分子は、例えば経口、皮下、筋肉内および静脈内などで全身投与される。ビタミンＢの投与量は、栄養補給分野の熟練者によく知られているように、送達の形態および経路、すなわち、注射、鼻腔ゲルまたはトローチ剤もしくは舌下錠による経口投与であるかどうかによって異なる。ビタミンＢは水溶性であり、過剰分は貯蔵されずに、一般に尿に排泄されるので、毎日補充されることが重要である。下記表３は種々のビタミンＢの典型的な投与形を示す。
【０１１３】
【表３】
2009541488.tif 000015
【０１１４】
これらのビタミンＢの総吸収量は摂取量が増すにつれ増加する。特定の理論または作用機序に限定されるものではないが、抗癌化学療法中などのビタミンストレスの環境下では、最少１日要求量よりも高い用量が有益である。投与される過剰量のビタミンはその後、便や尿に排泄される。一般に、循環中のビタミンＢレベルが血液のビタミンＢ結合能を超えると、過剰分が尿に排泄される。
【０１１５】
医薬組成物
上記のＨＤＡＣ阻害化合物および該医薬組成物の分子、使用および方法は、薬学上許容される塩の形態で用いられる場合が多い。薬学上許容される塩としては、適当であれば、薬学上許容される塩基付加塩および酸付加塩、例えば、アルカリおよびアルカリ土類金属塩などの金属塩、アンモニウム塩、有機アミン付加塩、ならびにアミノ酸付加塩およびスルホン酸塩が含まれる。酸付加塩としては、塩酸塩、硫酸塩およびリン酸塩などの無機酸付加塩、ならびにアルキルスルホン酸塩、アリールスルホン酸塩、酢酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、クエン酸塩および乳酸塩などの有機酸付加塩が含まれる。金属塩の例としては、リチウム塩、ナトリウム塩およびカリウム塩などのアルカリ金属塩；マグネシウム塩およびカルシウム塩などのアルカリ土類金属塩；アルミニウム塩および亜鉛塩が含まれる。アンモニウム塩の例としては、アンモニウム塩およびテトラメチルアンモニウム塩がある。有機アミン付加塩の例としては、モルホリンおよびピペリジンとの塩がある。アミノ酸付加塩の例としては、グリシン、フェニルアラニン、グルタミン酸およびリシンとの塩がある。スルホン酸塩としては、メシル酸塩、トシル酸塩およびベンゼンスルホン酸塩が含まれる。
【０１１６】
本発明はまた、ＨＤＡＣ阻害化合物とビタミンＢ分子を含む医薬組成物、および治療的処置（本発明のより広い態様においては予防的処置も）または例えば上述の疾病を含むＨＤＡＣ依存性疾患の処置の方法におけるそれらの使用、該使用のためのＨＤＡＣ阻害化合物および該使用のための医薬製剤の製造を提供する。
【０１１７】
本発明はまた、それ自体in vivoにおいて本方法のＨＤＡＣ阻害化合物に変換するＨＤＡＣ阻害化合物のプロドラッグとビタミンＢ分子を提供する。従って、本方法のＨＤＡＣ阻害化合物という場合には、適当および便宜であれば、対応するＨＤＡＣ阻害化合物のプロドラッグも指すものと理解すべきである。
【０１１８】
本明細書においてＨＤＡＣ阻害化合物は、例えば、本明細書の有効量のＨＤＡＣ阻害剤とビタミンＢ分子またはその薬学上許容される塩を有効成分として一緒に含む、または有意な量の１以上の無機または有機、固体または液体の薬学上許容される担体と混合して含む、医薬組成物製造のために使用することができる。
【０１１９】
本明細書の組成物は、ＨＤＡＣ活性の阻害に応答する疾病の処置のため、または本発明の別の態様では、予防のため（予防薬とも呼ばれる）に、例えば、ヒトを含む温血動物に（または例えば、ヒト細胞、例えばリンパ球などを含む温血動物に由来する細胞または細胞系統に）投与するのに好適であり、ＨＤＡＣ活性の阻害または別の転写エフェクタータンパク質と相互作用するＨＤＡＣタンパク質の阻害を含む、この阻害に有効な量の本方法の化合物またはその薬学上許容される塩を、少なくとも１つの薬学上許容される担体およびビタミンＢ分子とともに含む。
【０１２０】
本方法の医薬組成物は、有効量の薬理学的に有効な成分を単独で、または有意な量の薬学上許容される担体とともに含む、温血動物（例えば、ヒトを含む）に、鼻腔、直腸もしくは経口などの腸内、または筋肉内もしくは静脈内などの非経口投与するためのものである。有効成分の用量は、温血動物の種、体重および齢、個々の症状、個々の薬物動態データ、処置される疾患および投与様式によって異なる。
【０１２１】
温血動物、例えば体重およそ７０ｋｇのヒトに投与される本方法のＨＤＡＣ阻害剤またはその薬学上許容される塩の用量は、例えば、およそ３ｍｇ〜およそ１０ｇ、およそ１０ｍｇ〜およそ１．５ｇ、約１００ｍｇ〜約１０００ｍｇ／人／日を１〜３回の単回量に分割したもの（例えば、同じサイズであり得る）である。通常、小児には成人用量の半分を施す。
【０１２２】
温血動物、例えば体重およそ７０ｋｇのヒトに投与されるビタミンＢ分子の用量は、例えば、少なくとも約５０マイクログラム（μｇ）、少なくとも約８０μｇ、９０μｇ、１００μｇまたは少なくとも約５００μｇ、少なくとも約２５ミリグラム（ｍｇ）、３０ｍｇ、４０ｍｇ、または少なくとも約５０ｍｇ〜少なくとも約５００ｍｇである。
【０１２３】
本医薬組成物はおよそ例えば１％〜およそ９５％、またはおよそ２０％〜およそ９０％の有効成分を含む。本発明の医薬組成物は例えば、アンプル、バイアル、坐剤、糖衣錠、錠剤またはカプセル剤などの単位投与形であり得る。
【０１２４】
本発明の医薬組成物は、例えば、慣例の溶解、凍結乾燥、混合、造粒または糖剤形成プロセスの手段によるなど、それ自体既知の様式で製造される。
【０１２５】
有効成分の溶液およびまた懸濁液、特に、等張水溶液または懸濁液が使用可能であり、可能であれば、例えば、有効成分を単独で、または使用前にこのような溶液または懸濁液を作製するための、例えばマンニトールなどの担体とともに含む凍結乾燥組成物の場合などがある。これらの医薬組成物は滅菌可能であり、かつ／または例えば、保存剤、安定剤、湿潤および／または乳化剤、可溶化剤、浸透圧を調節するための塩および／またはバッファーなどの賦形剤を含んでもよく、例えば慣例の溶解または凍結乾燥プロセスの手段によるなど、それ自体公知の様式で製造される。これらの溶液または懸濁液は、カルボキシメチルセルロースナトリウム、カルボキシメチルセルロース、デキストラン、ポリビニルピロリドンまたはゼラチンなどの増粘物質を含み得る。
【０１２６】
油中懸濁液は油成分として、注射目的で慣例の植物油、合成油または半合成油を含む。例えば、酸成分として、８〜２２個または１２〜２２個の炭素原子を有する長鎖脂肪酸、例えば、ラウリン酸、トリデシル酸、ミリスチン酸、ペンタデシル酸、パルミチン酸、マルガリン酸、ステアリン酸、アラキドン酸、ベヘン酸、または対応する不飽和酸、例えば、オレイン酸、エライジン酸、エルシン酸、ブラシジン酸またはリノール酸を、所望により例えばビタミンＥ、β−カロテンまたは３，５−ジ−ｔｅｒｔ−ブチル−４−ヒドロキシトルエンなどの酸化防止剤とともに含有する液体脂肪酸エステルが挙げられる。これらの脂肪酸エステルのアルコール成分は、最大６個の炭素原子を有し、モノ−またはポリ−ヒドロキシ、例えば、モノ、ジ−またはトリ−ヒドロキシ、アルコール、例えば、メタノール、エタノール、プロパノール、ブタノールもしくはペンタノール、またはその異性体であるが、特に、グリコールおよびグリセロールである。従って、下記の脂肪酸エステルの例が挙げられる：オレイン酸エチル、ミリスチン酸イソプロピル、パルミチン酸イソプロピル、「Ｌａｂｒａｆｉｌ  Ｍ  ２３７５」（ポリオキシエチレングリセロールトリオレエート、Gattefosse, Paris）、「Ｍｉｇｌｙｏｌ  ８１２」（鎖長Ｃ８〜Ｃ１２の飽和脂肪酸のトリグリセリド、Huls AG, Germany）、特に、綿実油、アーモンド油、オリーブ油、ヒマシ油、ゴマ油、大豆油、さらに特に、アメリカホドイモ油などの植物油。
【０１２７】
注射組成物は無菌条件下で慣例の方法で製造され、組成物をアンプルまたはバイアルに導入し、それらの容器を封止するためにも同様の方法を提供する。
【０１２８】
経口投与用医薬組成物は、有効成分を固形担体と合わせ、所望により得られた混合物を造粒し、所望により、または必要であれば、適当な賦形剤を添加した後にその混合物を錠剤、糖衣核またはカプセル剤へ加工することによって得ることができる。また、有効成分を定量で拡散または放出させるプラスチック担体中にそれらを組み込むこともできる。
【０１２９】
好適な担体としては、例えばラクトース、サッカロース、マンニトールまたはソルビトール、セルロース調製物などの糖類および／またはリン酸三カルシウムまたはリン酸水素ナトリウムなどのリン酸カルシウムなどの増量剤；ならびに例えば、トウモロコシ、小麦、米またはジャガイモデンプンなどを用いたデンプンペースト、ゼラチン、トラガカントガム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチルセルロース、カルボキシメチルセルロースナトリウムおよび／またはポリビニルピロリドンなどの結合剤；および／または所望により、上述のデンプンおよび／またはカルボキシメチルデンプン、架橋ポリビニルピロリドン、寒天、アルギン酸またはアルギン酸ナトリウムなどのその塩などの崩壊剤がある。賦形剤としては、特に、流動性調整剤および滑沢剤、例えば、ケイ酸、タルク、ステアリン酸またはマグネシウムもしくはステアリン酸カルシウムなどのその塩および／またはポリエチレングリコールがある。糖衣核は好適な、所望により腸溶性のコーティングが施され、とりわけ、アラビアガム、タルク、ポリビニルピロリドン、ポリエチレングリコールおよび／または二酸化チタンを含み得る濃縮糖溶液、または好適な有機溶媒中の、もしくはエチルセルロースフタレートまたはヒドロキシプロピルメチルセルロースフタレートなどの好適なセルロース調製物の溶液である腸溶コーティングの作製のためのコーティング溶液が用いられる。カプセルとしては、ゼラチンからなる乾燥充填カプセルおよびゼラチンとグリセロールまたはソルビトールなどの可塑剤からなるソフトシールドカプセルがある。乾燥充填カプセルは、顆粒形態の有効成分を、例えば、ラクトースなどの増量剤；デンプンなどの結合剤；および／またはタルクまたはステアリン酸マグネシウムなどの流動促進剤；および所望により安定剤とともに含み得る。ソフトカプセルでは、有効成分を好ましくは、脂肪油、パラフィン油または液体ポリエチレングリコールなどの好適な油性賦形剤に溶解または懸濁させるが、安定剤および／または抗菌薬を添加することもできる。染色剤または色素を、例えば、目的を識別するため、または有効成分の種々の用量を示すために、錠剤、糖衣コーティングまたはカプセル剤皮に加えてもよい。
【０１３０】
ＨＤＡＣとビタミンＢ分子の組合せを含有する医薬組成物
本発明は、ＨＤＡＣ阻害剤とビタミンＢ分子を含有する医薬組成物を提供し、該組成物は、例えばヒトなどの対象に、ＨＤＡＣ活性の阻害に応答する疾患、特に、増殖性疾患の処置、予防または改善のために投与するのに好適である。
【０１３１】
該医薬組成物は一般に、各有効量のＨＤＡＣ阻害剤とビタミンＢ分子を含む。本明細書において、「有効量」とは、他方の有効成分が存在しない治療計画で投与した際の化合物の至適量とは異なる各有効成分の量を意味する。医薬組成物の有効量は、対象に投与した際に、疾患の症状の予防または改善し、すなわち、増殖性障害またはＨＤＡＣ依存性疾患、あるいは腫瘍、細胞塊または標的細胞を軽減および／または改善し、かつまた、ＨＤＡＣ阻害剤またはビタミンＢ分子のいずれか単独を投与した対照対象におけるこれらの症状と比べて副作用が少ない。増殖性疾患の処置の分野の熟練者であれば、この組合せにおける各成分の有効量を容易に決定することができる。例えば、副作用は、組合せ中に特定用量のビタミンＢが存在し、その後、対象に投与されるＨＤＡＣ阻害剤単独の量である対照量よりも多い量のＨＤＡＣ阻害剤成分が対象に投与される医薬組成物中に含まれることで予防または改善される。本明細書の方法および組成物の目的は、ビタミンＢの存在下または同時投与下で、ビタミンＢの存在下でのこれらの化合物の有効性の増強のために、ビタミンＢの不在下での有効量に比べてＨＤＡＣ阻害剤の有効量が低減されることである。
【０１３２】
抗腫瘍薬は、望ましくない副作用によって用量が制限される場合が多く、従って、有効性は対象の用量許容性に基づいた用量選択によって制限される。副作用としては、例えば、血小板減少症および貧血および造血薬による阻害から起こる他の症状が含まれる。ここで、ビタミンＢ分子は驚くべきことにこれらの作用を予防または改善することが判明し、従って、一定量のビタミンＢ分子を含む本明細書の医薬組成物を用いる治療計画においてより高い用量のＨＤＡＣ阻害剤が許容される。マウスなどの試験対象に標準量のＨＤＡＣ阻害剤を投与することで始め、ＨＤＡＣ阻害剤が単独で投与される対照群以外、各試験群の各マウスにビタミンＢ分子を種々の量で投与し、あるいは対照にはいずれの薬剤も投与しない。疾患および副作用双方の改善の症候を、癌アッセイ、および血液凝固時間、赤血球量などの慣例のアッセイでモニタリングする。次に、症候を予防または改善するビタミンＢ分子用量で始め、新たなマウス群にて、過度な実験なく、これらの慣例法で副作用が最少で最も効力の高い組合せの有効量が求められるまで、漸増用量のビタミンＢと組み合わせていっそう高用量のＨＤＡＣの許容性を試験する。
【０１３３】
腫瘍、細胞塊もしくは標的細胞の増殖の低下、または転移の低下は、例えば、腫瘍サイズ、転移数、腫瘍壊死、細胞増殖速度または細胞アポトーシスの低下を観察することによって分析することができる。製薬分野では標準的であるが、医薬組成物の有効量は、温血動物の種、体重および齢、個々の症状、個々の薬物動態データ、処置される疾患および投与様式によって異なる。
【０１３４】
ある特定の条件下では、ビタミンＢ分子は、ＨＤＡＣ活性の阻害に応答する疾患、例えば増殖性疾患の予防または改善において、あるクラスのＨＤＡＣ阻害剤と組み合わせると相乗作用を有する。よって、該医薬組成物は、匹敵する治療効果を得るのに、ＨＤＡＣ阻害剤単独を対象に投与する場合に比べ、より少ない量である有効量のＨＤＡＣ阻害剤成分を含む。
【０１３５】
該医薬組成物のビタミンＢ成分の有効量は、ＨＤＡＣ阻害剤の投与から生じる１以上の副作用を予防または改善する量であり、本明細書に記載されている。
【０１３６】
増殖性疾患の処置の分野の熟練者であれば、増殖性疾患の、またはその疾患に処置からの副作用が特定のビタミン欠乏からどの程度起こるかを容易に判定することができる。ある特定の条件下では、医薬組成物中のビタミンＢ成分の有効量は、増殖性疾患を有する患者に存在するビタミン欠乏症を予防または改善し、それによりさらにＨＤＡＣ阻害剤の副作用を軽減する量である。
【０１３７】
組合せ
本方法のＨＤＡＣ阻害化合物はまた、他の抗増殖性薬と組み合わせて有利に使用することができる。このような抗増殖性薬としては、限定されるものではないが、アロマターゼ阻害剤；抗エストロゲン作用薬；トポイソメラーゼＩ阻害剤；トポイソメラーゼＩＩ阻害剤；微小管活性剤；アルキル化剤；ヒストンデアセチラーゼ阻害剤；細胞分化プロセスを誘発する化合物；シクロオキシゲナーゼ阻害剤；ＭＭＰ阻害剤；ｍＴＯＲ阻害剤；抗新生物性代謝拮抗物質；プラチン化合物；タンパク質または脂質キナーゼ活性を標的化する／低下させる化合物およびさらなる抗脈管形成化合物；タンパク質または脂質ホスファターゼの活性を標的化する、低下させる、または阻害する化合物；ゴナドレリンアゴニスト；抗アンドロゲン作用薬；メチオニンアミノペプチダーゼ阻害剤；ビスホスホネート；生物反応修飾物質；抗増殖性抗体；ヘパラナーゼ阻害剤；Ｒａｓ癌遺伝子イソ型の阻害剤；テロメラーゼ阻害剤；プロテアソーム阻害剤；血液性悪性疾患の処置に用いられる薬剤；Ｆｌｔ−３の活性を標的化する、低下させる、または阻害する化合物；Ｈｓｐ９０阻害剤；テモゾロマイド（ＴＥＭＯＤＡＬ（登録商標））；およびロイコボリンが挙げられる。
【０１３８】
本明細書において「アロマターゼ阻害剤」とは、エストロゲンの産生、すなわち、基質アンドロステンジオンおよびテストステロンの、それぞれエストロンおよびエストラジオールへの変換を阻害する化合物に関する。この用語には、限定されるものではないが、ステロイド、特に、アタメスタン、エキセメスタンおよびフォルメスタン、および特に、非ステロイド、特に、アミノグルテチミド、ログレチミド、ピリドグルテチミド、トリロスタン、テストラクトン、ケトコナゾール、ボロゾール、ファドロゾール、アナストロゾールおよびレトロゾールが含まれる。エキセメスタンは、例えば商標ＡＲＯＭＡＳＩＮとして市販されている形態で投与することができる。フォルメスタンは、例えば商標ＬＥＮＴＡＲＯＮとして市販されている形態で投与することができる。ファドロゾールは、例えば商標ＡＦＥＭＡとして市販されている形態で投与することができる。アナストロゾールは、例えば商標ＡＲＩＭＩＤＥＸとして市販されている形態で投与することができる。レトロゾールは、例えば商標ＦＥＭＡＲＡまたはＦＥＭＡＲとして市販されている形態で投与することができる。アミノグルテチミドは、例えば商標ＯＲＩＭＥＴＥＮとして市販されている形態で投与することができる。アロマターゼ阻害剤である化学療法薬を含む本発明の組合せは、ホルモン受容体陽性腫瘍、例えば、乳房腫瘍の処置に特に有用である。
【０１３９】
本明細書において「抗エストロゲン作用薬」とは、エストロゲン受容体レベルにおいてエストロゲンの作用と拮抗する化合物に関する。この用語には、限定されるものではないが、タモキシフェン、フルベストラント、ラロキシフェンおよび塩酸ラロキシフェンが含まれる。タモキシフェンは、例えば商標ＮＯＬＶＡＤＥＸとして市販されている形態で投与することができる。塩酸ラロキシフェンは、例えば商標ＥＶＩＳＴＡとして市販されている形態で投与することができる。フルベストラントは、米国特許第４，６５９，５１６号に開示されているように調剤することができ、例えば商標ＦＡＳＬＯＤＥＸとして市販されている形態で投与することができる。抗エストロゲン作用薬である化学療法薬を含む本発明の組合せは、エストロゲン受容体陽性腫瘍、例えば乳房腫瘍の処置に特に有用である。
【０１４０】
本明細書において「抗アンドロゲン作用薬」とは、アンドロゲンホルモンの生物作用を阻害し得る物質に関し、限定されるものではないが、例えば米国特許第４，６３６，５０５号に開示されているように調剤することができるビカルタミド（ＣＡＳＯＤＥＸ）が含まれる。
【０１４１】
本明細書において「ゴナドレリンアゴニスト」には、限定されるものではないが、アバレリクス、ゴセレリンおよび酢酸ゴセレリンが含まれる。ゴセレリンは米国特許第４，１００，２７４号に開示されており、例えば商標ＺＯＬＡＤＥＸとして市販されている形態で投与することができる。アバレリクスは、例えば米国特許第５，８４３，９０１号に開示されているように調剤することができる。
【０１４２】
本明細書において「トポイソメラーゼＩ阻害剤」としては、限定されるものではないが、トポテカン、ギマテカン、イリノテカン、カンプトテカンおよびその類似体、９−ニトロカンプトテシンおよび高分子カンプトテシンコンジュゲートＰＮＵ−１６６１４８（ＷＯ９９／１７８０４の化合物Ａ１）が含まれる。イリノテカンは、例えば商標ＣＡＭＰＴＯＳＡＲとして市販されている形態で投与することができる。トポテカンは、例えば商標ＨＹＣＡＭＴＩＮとして市販されている形態で投与することができる。
【０１４３】
本明細書において「トポイソメラーゼＩＩ阻害剤」としては、限定されるものではないが、ドキソルビシン（例えばＣＡＥＬＹＸなどのリポソーム製剤を含む）、ダウノルビシン、エピルビシン、イダルビシンおよびネモルビシンなどのアントラサイクリン類；ミトキサントロンおよびロソキサントロンなどのアントラキノン類；ならびにエトポシドおよびテニポシドなどのポドフィロトキシン類が含まれる。エトポシドは、例えば商標ＥＴＯＰＯＰＨＯＳとして市販されている形態で投与することができる。テニポシドは、例えば商標ＶＭ  ２６−ＢＲＩＳＴＯＬとして市販されている形態で投与することができる。ドキソルビシンは、例えば商標ＡＤＲＩＢＬＡＳＴＩＮまたはＡＤＲＩＡＭＹＣＩＮとして市販されている形態で投与することができる。エピルビシンは、例えば商標ＦＡＲＭＯＲＵＢＩＣＩＮとして市販されている形態で投与することができる。イダルビシンは、例えば商標ＺＡＶＥＤＯＳとして市販されている形態で投与することができる。ミトキサントロンは、例えば商標ＮＯＶＡＮＴＲＯＮとして市販されている形態で投与することができる。
【０１４４】
「微小管活性剤」とは、微小管安定剤、微小管脱安定剤およびミクロチューブリン重合阻害剤に関し、限定されるものではないが、例えばパクリタキセルおよびドセタキセルなどのタキサン類；例えば、硫酸ビンブラスチンを含むビンブラスチン、硫酸ビンクリスチンを含むビンクリスチンおよびビノレルビンなどのビンカアルカロイド類；ディスコデルモリド類；コルヒシン(cochicine)；ならびに例えばエポチロンＢまたはＤまたはその誘導体などのエポチロン類およびその誘導体が含まれる。パクリタキセルは、例えばタキソール（ＴＡＸＯＬ）として市販されている形態で投与することができる。ドセタキセルは、例えば商標タキソテール（ＴＡＸＯＴＥＲＥ）として市販されている形態で投与することができる。硫酸ビンブラスチンは、例えば商標ＶＩＮＢＬＡＳＴＩＮとして市販されている形態で投与することができる。硫酸ビンクリスチンは、例えば商標ＦＡＲＭＩＳＴＩＮとして市販されている形態で投与することができる。ディスコデルモリドは、例えば米国特許第５，０１０，０９９号に開示されているように得ることができる。また、ＷＯ９８／１０１２１、米国特許第６，１９４，１８１号、ＷＯ９８／２５９２９、ＷＯ９８／０８８４９、ＷＯ９９／４３６５３、ＷＯ９８／２２４６１およびＷＯ００／３１２４７に開示されているエポチロン誘導体も含まれる。エポチロンＡおよび／またはＢが含まれる。
【０１４５】
本明細書において「アルキル化剤」としては、限定されるものではないが、シクロホスファミド、イフォスファミド、メルファランまたはニトロソ尿素（ＢＣＮＵまたはＧｌｉａｄｅｌ）が含まれる。シクロホスファミドは、例えば商標ＣＹＣＬＯ-ＳＴＩＮとして市販されている形態で投与することができる。イフォスファミドは、例えば商標ＨＯＬＯＸＡＮとして市販されている形態で投与することができる。
【０１４６】
「ヒストンデアセチラーゼ阻害剤」または「ＨＤＡＣ阻害剤」とは、本明細書に記載のようにヒストンデアセチラーゼとして知られる酵素クラスの少なくとも１つの例を阻害する化合物および一般に抗増殖性活性を有する化合物に関する。これまでに開示されているＨＤＡＣ阻害剤としては、例えば、Ｎ−ヒドロキシ−３−［４−［［（２−ヒドロキシエチル）［２−（１Ｈ−インドール−３−イル）エチル］−アミノ］メチル］フェニル］−２Ｅ−２−プロペンアミド、Ｎ−ヒドロキシ−３−［４−［［［２−（２−メチル−１Ｈ−インドール−３−イル）−エチル］−アミノ］メチル］フェニル］−２Ｅ−２−プロペンアミドおよびその薬学上許容される塩を含む、ＷＯ０２／２２５７７に開示されている化合物が含まれる。さらに、スベロイルアニリドヒドロキサム酸（ＳＡＨＡ）も含む。他の公開開示されているＨＤＡＣ阻害剤としては、フェニル酪酸ナトリウム、サリドマイド、トリコスタチンＡおよびトラポキシンを含む酪酸およびその誘導体が含まれる。
【０１４７】
さらなるＨＤＡＣ阻害剤としては、ヒドロキサム酸、ヒドロキサメート、ヒドロキシアミド、環状ペプチド、ベンズアミド、ベンズイミダゾール、短鎖脂肪酸、メルカプトミド、カルバミン酸、カルボニル、ピペラジニル、ピペリジニル、モルホリニル、スルホニル、アミン、アミド、バルプロ酸、オキシム、ジオキサン、エポキシド、ラクタムおよびデプデシンなどの化合物が含まれる。
【０１４８】
上記のＨＤＡＣ阻害剤の例は米国特許第６，８３１，０６１号(Lee et al.)；同第６，８００，６３８号(Georges et al.)；同第６，３９９，５６８号(Nishino et al.)；同第６，１２４，４９５号(Neiss et al.)；および同第５，９３９，４５５号(Rephaeli)、ならびに特許出願ＷＯ０３０８２２８８(Watkins et al.)；ＣＡ２５２０６１１(Miller et al.)；ＷＯ２００５０７５４６６(Bordogna et al.)；ＷＯ２００５０５３６１０(Miller et al.)；ＵＳ２００５１２４６７９(Kim et al.)；ＷＯ２００５０１４５８８(Dyke et al.)；ＵＳ２００６０５８５５３(Leahy et al.)；ＷＯ２００５０９７７７０(Setti)；ＷＯ２００５０５８８０３(LeBlond et al.)；ＷＯ２００５０４０１６１(Stunkel et al.)；ＷＯ２００６０２５６８３(Lee et al.)；ＷＯ２００６０１６６８０(Ishibashi et al.)；ＷＯ２００４０７２０４７(Urano et al.)；ＷＯ２００６０２８９７２(Ahmed et al.)；ＷＯ２００５０７５４４６(Koyama et al.)；ＵＳ２００６０５８２８２(Finn et al.)；ＵＳ２００５１４３３８５(Watkins et al.)；ＥＰ１６３５８００(Wash et al.)；ＵＳ２００５１４８６１３(Van Emelen et al.)；ＷＯ０３０９９７６０(Lan-Hargest et al.)；ＷＯ０３０９９７８９(Lan-Hargest et al.)；ＺＡ２００４０７２３７(Van Emelen et al.)；ＷＯ２００６０１０７４９(Van Brandt et al.)；ＷＯ０３０７６４０１(Van Emelen et al.)；ＵＳ２００６０３０５４３(Malecha et al.)；ＷＯ２００５０４０１０１(Lim et al.)；ＷＯ２００６０１０７５０(Verdonck et al.)；ＵＳ２００５１１９２５０(Angibaud et al.)；ＵＳ２００４１５７８４１(Fertig et al.)；ＵＳ２００４１６２３１７(Fertig et al.)；ＷＯ２００６００５９５５(Chakravarty et al.)；ＷＯ２００６００５９４１(Chakravarty et al.)；ＷＯ２００５０６５６８１(Bressi et al.)；ＷＯ０３０７０６９１(Uesato et al.)；ＵＳ２００５０３８１１３(Groner et al.)；ＣＡ２５１９３０１(Fertig et al.)；ＷＯ０２０８９７８２(Schreiber et al.)；ＵＳ２００５２８２８９０(Zheng)；ＷＯ０３０９９２７２(Lan-Hargest et al.)；ＵＳ２００４０７７６９８(Georges et al.)；ＵＳ２００２１２００９９(Basting)；ＵＳ６６５６９０５(Mori et al.)；およびＵＳ６３９９５６８(Nishino et al.)；ＨＫ１０７９０４２；ＵＳ２００５１７１１０３(Stokes et al.)；ＨＫ１０４６２７７(Ishibashi et al.)；ＵＳ２００６０６９１５７(Ferrante)；ＷＯ２００５０５５９２８(Chen et al.)；およびＷＯ９８００１２７(Rephaeli et al.)に見出せる。
【０１４９】
「抗新生物性代謝拮抗物質」としては、限定されるものではないが、５−フルオロウラシルまたは５−ＦＵ、カペシタビン、ゲムシタビン、ＤＮＡ脱メチル化剤（５−アザシチジンおよびデシタビン、メトトレキサートおよびエダトレキサートなど）ならびに葉酸拮抗薬（ペメトレキセドなど）が含まれる。カペシタビンは、例えば商標ＸＥＬＯＤＡとして市販されている形態で投与することができる。ゲムシタビンは、例えば商標ＧＥＭＺＡＲとして市販されている形態で投与することができる。また、例えば商標ＨＥＲＣＥＰＴＩＮとして市販されている形態で投与することができるモノクローナル抗体トラスツズマブも含まれる。
【０１５０】
本明細書において「プラチン化合物」としては、限定されるものではないが、カルボプラチン、シスプラチン、シスプラチンおよびオキサリプラチンが含まれる。カルボプラチンは、例えば商標ＣＡＲＢＯＰＬＡＴとして市販されている形態で投与することができる。オキサリプラチンは、例えば商標ＥＬＯＸＡＴＩＮとして市販されている形態で投与することができる。
【０１５１】
本明細書において「ＨＤＡＣ活性もしくはヒストンデアセチラーゼ活性を標的化する／低下させる化合物またはさらなる抗脈管形成化合物」としては、限定されるものではないが、ＨＤＡＣ１−１１阻害剤、例えば、ＨＤＡＣ２、ＨＤＡＣ３およびＨＤＡＣ８阻害剤が含まれる。
【０１５２】
シグナル伝達に関与する以下のタンパク質リストは、ＨＤＡＣ活性を阻害することにより広く及ぶ転写調節作用を示す：
ｉ）血小板由来増殖因子受容体（ＰＤＧＦＲ）の活性を標的化する、低下させる、または阻害する化合物、例えば、ＰＤＧＦＲの活性を標的化する、低下させる、または阻害する化合物、特に、ＰＤＧＦ受容体を阻害する化合物、例えば、Ｎ−フェニル−２−ピリミジン−アミン誘導体、例えばイマチニブ、ＳＵ１０１、ＳＵ６６６８およびＧＦＢ−１１１；
ｉｉ）繊維芽細胞増殖因子受容体（ＦＧＦＲ）の活性を標的化する、低下させる、または阻害する化合物；
ｉｉｉ）インスリン様増殖因子受容体Ｉ（ＩＧＦ−ＩＲ）の活性を標的化する、低下させる、または阻害する化合物、例えば、ＩＧＦ−ＩＲの活性を標的化する、低下させる、または阻害する化合物、特に、ＩＧＦ−ＩＲ受容体を阻害する化合物、例えば、ＷＯ０２／０９２５９９に開示されている化合物；および／または
ｉｖ）ｃ−Ｍｅｔ受容体の活性を標的化する、低下させる、または阻害する化合物。
【０１５３】
腫瘍細胞傷害アプローチとは、電磁放射線などのアプローチを指す。上記および下記でいう「電磁放射線」とは、電磁線（Ｘ線およびγ線など）または粒子（α粒子およびβ粒子など）のいずれかとして生じる電磁放射線を意味する。電磁線照射は、限定されるものではないが、放射線療法で提供され、当技術分野で公知である。例えば、Hellman, Principles of Radiation Therapy, Cancer, Principles and Practice of Oncology, Devita et al., Eds., 4th Edition, Vol. 1, pp. 248-275 (1993)参照。
【０１５４】
本明細書において「ＥＤＧ結合剤」とは、ＦＴＹ７２０など、リンパ球の再循環を調節する免疫抑制剤クラスを指す。
【０１５５】
試験的な新規増殖シグナル阻害剤ＣＥＲＴＩＣＡＮ（エベロリムス、ＲＡＤ）はＴ細胞および血管平滑筋細胞の増殖を妨げる。
【０１５６】
「リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤」とは、ピリミジンまたはプリンヌクレオシド類似体を指し、限定されるものではないが、フルダラビンおよび／またはシトシンアラビノシド（ａｒａ−Ｃ）、６−チオグアニン、５−フルオロウラシル、クラドリビン、６−メルカプトプリン（特に、ＡＬＬに対してはａｒａ−Ｃとの組合せ）および／またはペントスタチンが含まれる。リボヌクレオチドレダクターゼ阻害剤としては、特に、ヒドロキシ尿素または２−ヒドロキシ−１Ｈ−イソインドール−１，３−ジオン誘導体、例えば、Nandy et al., Acta Oncologica, Vol. 33, No. 8, pp. 953-961 (1994)に記載されているＰＬ−１、ＰＬ−２、ＰＬ−３、ＰＬ−４、ＰＬ−５、ＰＬ−６、ＰＬ−７またはＰＬ−８がある。
【０１５７】
本明細書において「Ｓ−アデノシルメチオニンデカルボキシラーゼ阻害剤」としては、限定されるものではないが、米国特許第５，４６１，０７６号に開示されている化合物が含まれる。
【０１５８】
また、特に、ＷＯ９８／３５９５８（例えば、１−（４−クロロアニリノ）−４−（４−ピリジルメチル）フタラジンまたは例えばコハク酸塩などのその薬学上許容される塩）またはＷＯ００／０９４９５、ＷＯ ００／２７８２０、ＷＯ００／５９５０９、ＷＯ９８／１１２２３、ＷＯ００／２７８１９およびＥＰ０７６９９４７に開示されている化合物、タンパク質またはＶＥＧＦのモノクローナル抗体； Prewett et al, Cancer Res, Vol. 59, pp. 5209-5218 (1999); Yuan et al., Proc Natl Acad Sci U S A, Vol. 93, pp. 14765-14770 (1996); Zhu et al., Cancer Res, Vol. 58, pp. 3209-3214 (1998);およびMordenti et al., Toxicol Pathol, Vol. 27, No. 1, pp. 14-21 (1999)；ＷＯ００／３７５０２およびＷＯ９４／１０２０２に開示されているもの；O’Reilly et al., Cell, Vol. 79, pp. 315-328 (1994)により記載されているＡＮＧＩＯＳＴＡＴＩＮ; O’Reilly et al., Cell, Vol. 88, pp. 277-285 (1997)により記載されているＥＮＤＯＳＴＡＩＮ；アントラニル酸アミド；ＺＤ４１９０；ＺＤ６４７４；ＳＵ５４１６；ＳＵ６６６８；ベバシズマブ；または抗ＶＥＧＦ抗体もしくは抗ＶＥＧＦ受容体抗体、例えば、ｒｈｕＭＡｂおよびＲＨＵＦａｂ、ＶＥＧＦアプタマー、例えば、Ｍａｃｕｇｏｎ；ＦＬＴ−４阻害剤、ＦＬＴ−３阻害剤、ＶＥＧＦＲ−２  ＩｇＧ１抗体、Ａｎｇｉｏｚｙｍｅ（ＲＰＩ  ４６１０）およびＡｖａｓｔａｎが含まれる。
【０１５９】
本明細書において光線力学療法とは、癌を処置または予防するために、光増感剤として知られる特定の化合物を用いる療法を指す。光線力学療法の例としては、例えばＶＩＳＵＤＹＮＥおよびポルフィマーナトリウムなどの薬剤による処置が含まれる。
【０１６０】
本明細書において「脈管形成抑制ステロイド」とは、例えば、アネコルタブ、トリアムシノロン、ヒドロコルチゾン、１１−α−エピヒドロコチゾール、コルテキソロン、１７α−ヒドロキシプロゲステロン、コルチコステロン、デスオキシコルチコステロン、テストステロン、エストロンおよびデキサメタゾンなどの、脈管形成を遮断または阻害する薬剤を指す。
【０１６１】
コルチコステロイドを含有するインプラントは、例えばフルオシノロン、デキサメタゾンなどの薬剤を指す。
【０１６２】
その他の化学療法薬としては、限定されるものではないが、植物アルカロイド、ホルモン剤および拮抗薬；生物反応修飾物質、好ましくは、リンホカインまたはインターフェロン；アンチセンスオリゴヌクレオチドまたはオリゴヌクレオチド誘導体；またはその他の、もしくは未知の作用機序を有する雑多な薬剤が含まれる。
【０１６３】
コード番号、一般名または商標によって識別される活性剤の構造は、標準的な大要「The Merck Index」の最新版またはデータベース、例えば、Patents International（例えば、IMS World Publications）から入手することができる。
【０１６４】
本方法の化合物と組み合わせて使用可能な上述の化合物は、上記に引用されている文献など、当技術分野で記載されているようにして作製および投与することができる。
【０１６５】
本方法の化合物はまた、例えばホルモンまたは特に放射線の投与などの既知の治療プロセスと組み合わせて有利に使用することができる。
【０１６６】
本発明の化合物はまた、例えば放射線療法に感受性の低い腫瘍の処置を含め、放射線増感剤として使用することもできる。
【０１６７】
「組合せ」とは、１つの単位投与形での一定の組合せ、または組合せ投与（この場合、本発明の化合物と組合せ相手が同時点で独立に投与されてもよいし、あるいは特にそれらの組合せ相手が協働作用、例えば相乗作用を示し得る時間内に個別に投与されてもよい）のためのパーツキット、またはそのいずれかの組合せを意味する。
【０１６８】
下記の実施例１は、ラットのin vivoにおける腫瘍増殖の阻害を、ＨＤＡＣ阻害剤のみの投与とＨＤＡＣ阻害およびビタミンＢ分子の組合せの投与を比較して示す。
【０１６９】
実施例２は、ＨＤＡＣ阻害剤を用いた単剤処置の効力と、ＨＤＡＣ阻害剤およびビタミンＢ分子を用いた組合せ療法の比較を示す。表３は、各動物群に投与される化合物と分子および各濃度を示す。
【０１７０】
実施例３は、化学療法からの副作用に関するアッセイ方法を含む。表４は、各動物群に投与される化合物と分子および各濃度を示す。
【０１７１】
本発明を十分に記載してきたが、さらに以下の実施例および特許請求の範囲で具体的に示す例示する。それらは例示であって、限定を意味するものではない。当業者であれば、通常の実験だけを用い、本明細書に記載されている特定の手順の多くの等価物を認識または確認することができる。このような等価物は本発明および特許請求の範囲内にある。本願に引用されている、発行特許および公開特許出願を含む全ての参照文献の内容は、出典明示により本明細書の一部とされる。
【実施例】
【０１７２】
実施例１〜２の実施を助けるため、以下のプロトコールを示す。
【０１７３】
薬剤投与
齧歯類への投与に関しては、溶解度の高め、ＨＤＡＣ阻害剤を水に可溶とするために、Hockly et al., Proc Natl Acad Sci U S A. 2003; 100(4): 2041-2046に示されるように、ＨＤＡＣ阻害剤を２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンと複合体形成させる。シクロデキストリンおよび他のＨＤＡＣ阻害剤処方物も、固体懸濁液または分散物として調製する。ビタミンＢ分子は通常の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）に溶かす。
【０１７４】
in vivo抗腫瘍試験
ＨＣＴ１１６結腸癌細胞系統をアッセイおよびマウス異種移植モデルに用いる。あるいは、Ｂ１６−Ｆ１０マウス黒色腫細胞を用いる。米国特許出願第ＵＳ／２００４／０２２９８４３号(Toole et al.)参照。腫瘍は、ドナーマウスからのＨＣＴ１１６結腸癌細胞またはＢ１６−Ｆ１０マウス黒色腫細胞を用い、適当なラットレシピエント系統への細胞の皮下注射として増殖させる。
【０１７５】
実験の開始時、腫瘍処置のためのＨＤＡＣ阻害剤単独またはビタミンＢ分子との組合せを投与する前に必要数の動物をプールした後、種々の処置群および対照群に分配する。各動物に対する有効性および効果に関する所見は、腫瘍の拡散、腫瘍サイズ、腫瘍数または腫瘍重などの１以上のパラメーターを評価することによって判定し、そのいくつかはプロトコールの過程で生きた動物に対してアッセイされ、また他のものは終了および動物の屠殺後にアッセイされる。
【０１７６】
腫瘍サイズは週２回、カリパスで腫瘍を測定することによって測定する。腫瘍重（ｍｇ）は式：腫瘍重＝（長さ×幅２）／２から評価する。腫瘍数は剖検データから求める。腫瘍潅流はエバンブルー染色剤取り込みアッセイを用いて測定する。ラットにエバンブルー染色剤を静注投与する。腫瘍に蓄積したエバンブルーの量は腫瘍の血流に比例する。
【０１７７】
一般に、組成物は経口（ｐｏ）、静脈送達（ｉｖ）または皮下（ｓｃ）投与される。あるいは、ALZA Corporation (Palo Alto, CA)から入手可能なＡＬＺＥＴポンプを用いる。処方物はＰＢＳまたは別のビヒクルを含み、２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンと複合体を形成させ、水に溶解させたＨＤＡＣ阻害剤または通常の生理食塩水（０．９％ＮａＣｌ）に溶解させたビタミンＢ分子ラットの背部の皮膚にｓｃ注射する。注射１日後に、０．１ｍｌのＰＢＳ中、０．５×１０５〜１．０×１０６の腫瘍細胞をその投与部位のすぐ近傍にさらに注射する。処置１４日後に、ラットをＣＯ２により安楽死させ、腫瘍の増殖を上記のように評価する。
【０１７８】
実施例１：ＨＤＡＣ阻害剤とビタミンＢ分子の組合せ療法の有効性の改善
ＨＤＡＣ阻害剤を用いた単剤処置
Ｂ１６−Ｆ１０マウス黒色腫細胞を皮下移植するためにＨＤＡＣ阻害剤を投与すると、これらの細胞の増殖が阻害される。阻害の程度は、黒色腫細胞の移植とＨＤＡＣ阻害剤の投与の相対的時点に関連する。各試験では、対照動物５匹と各試験条件につき試験マウス５匹の群で、被験動物に腫瘍細胞を皮下注射する。
【０１７９】
腫瘍を試験動物に移植し、腫瘍が大きくなる約１〜２週間、腫瘍の増殖をモニタリングする。次に、ＨＤＡＣ阻害剤をｓｃ投与する。ＨＤＡＣ阻害剤は、例えば１４日間など、特定のプロトコールで定めらされたタイムコースで投与する。対照動物にはビヒクル（ＨＤＡＣ阻害剤との複合体形成に用いたものに匹敵する量の２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを含むリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ））のみを投与する。
【０１８０】
ＨＤＡＣ阻害剤の投与は、腫瘍増殖を阻害する、すなわち、対照群の動物で得られたデータと比較した場合に、腫瘍サイズ、腫瘍重、腫瘍数および腫瘍潅流の１以上における低下と統計学的に相関があることが分かる。
【０１８１】
ＨＤＡＣ阻害剤とビタミンＢ分子の組合せ療法
ＨＣＴ１１６結腸癌腫瘍の処置または予防において、ＨＤＡＣ阻害剤をビタミンＢ分子と組み合わせて投与した場合、相乗作用的抗腫瘍活性が見られる。各試験で、腫瘍細胞を上記のように対照動物５匹と試験動物５匹の群に皮下注射する。
【０１８２】
ＨＤＡＣ阻害剤とビタミンＢ分子は腫瘍細胞注射の１日前に個別に投与するか、または単一の溶液として１回の注射で投与する。ＨＤＡＣ阻害剤は、移植部位に隣接して１４日間投与する。ビタミンＢ分子も１４日間投与する。対照動物にはビヒクル（ＨＤＡＣ阻害剤との複合体形成に用いたものに匹敵する量の２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを含むＰＢＳ）のみを投与する。
【０１８３】
ＨＤＡＣ阻害剤とビタミンＢ分子の投与の組合せは、腫瘍増殖を阻害する、すなわち、対照群と比較した場合に、腫瘍サイズ、腫瘍重、腫瘍数および腫瘍潅流を低下させることが分かる。単剤、すなわち、ＨＤＡＣ阻害剤のみの投与から得られた結果と比較して、ＨＤＡＣ阻害剤とビタミンＢ分子の組合せ療法は、よりいっそう腫瘍増殖を阻害する、すなわち、腫瘍サイズ、腫瘍重、腫瘍数および腫瘍潅流を低下させることが分かる。
【０１８４】
実施例２：ビタミンＢによる効力増強に関する有効用量−薬物動態
ＨＤＡＣ阻害剤とビタミンＢ分子の組合せによる治療的処置は、実施例１に示されるように、腫瘍の出現または増殖の阻害に関して治療的相乗作用をもたらすことが示されている。次に、ビタミンＢ分子の量を一定としてＨＤＡＣ阻害剤の量を変更した組合せ療法により、ＨＤＡＣ阻害剤を用いた単剤療法の効力との比較を行う。腫瘍増殖の阻害は、上記のように、腫瘍サイズ、腫瘍重、腫瘍数および腫瘍潅流の測定によって分析する。
【０１８５】
各試験では、Ｂ１６−Ｆ１０マウス黒色腫細胞を、各群５匹を含む７群のラットに皮下注射する。これらの群は、下表３に記載のように、種々の濃度のＨＤＡＣ阻害剤のみで処置した３つの試験動物群（単剤、Ｉ群、ＩＩ群およびＩＩＩ群）、一定量のビタミンＢ分子を種々の濃度のＨＤＡＣ阻害剤と組み合わせて投与した動物３群（組合せ、ＩＶ群、Ｖ群およびＶＩ群）ならびにビヒクルのみを投与した対照（ＶＩＩ群）である。
【０１８６】
ＨＤＡＣ阻害剤およびビタミンＢ分子は腫瘍細胞注射の１日前にｓｃ投与する。高レベルのＨＤＡＣ阻害剤は約１００ｍｇ／ｋｇ体重、または少なくとも約５０ｍｇ／ｋｇ、６０ｍｇ／ｋｇ、７０ｍｇ／ｋｇ、８０ｍｇ／ｋｇまたは約９０ｍｇ／ｋｇのｐｏまたはｉｖ投与である。低レベルは約１ｍｇ／ｋｇ全体重、または約２ｍｇ／ｋｇ未満、約３ｍｇ／ｋｇ未満または約５ｍｇ／ｋｇ未満である。中レベルは、約１０ｍｇ／ｋｇ体重より高い、約２０ｍｇ／ｋｇより高い、約３０ｍｇ／ｋｇまたは約４０ｍｇ／ｋｇである。ＨＤＡＣ阻害剤は、単剤群（Ｉ〜ＩＩＩ群）に１４日間、高用量で（Ｉ群）、中用量で（ＩＩ群）および１４日間低用量で（ＩＩＩ群）、投与部位に隣接して投与する。ＨＤＡＣ阻害剤とビタミンＢ分子の組合せを投与する群（ＩＶ群、Ｖ群およびＶＩ群）には、その組合せを１回の注射か、または２回の注射で個別に投与する。組合せ群ＩＶ、ＶおよびＶＩのＨＤＡＣ阻害剤は、１４日間高用量で（ＩＶ群）、１４日間中用量で（ＶＩ群）および１４日間低用量で（ＶＩＩ群）投与する。ビタミンＢ分子は、各組合せ群ＩＶ、ＶおよびＶＩで、１４日間一様に高用量で投与する。対照群にはビヒクル（ＨＤＡＣ阻害剤との複合体形成に用いたものに匹敵する量の２−ヒドロキシプロピル−β−シクロデキストリンを含むＰＢＳ）のみを投与する。
【０１８７】
【表４】
2009541488.tif 000016
【０１８８】
ＨＤＡＣ阻害剤を投与した全ての群（Ｉ〜ＶＩ群）で腫瘍の出現または増殖は対照群（ＶＩＩ群）と比べて阻害されることが分かる。ＨＤＡＣ阻害剤とビタミンＢ分子の組合せを用いた処置（ＩＶ〜ＶＩ群）は、ＨＤＡＣ阻害剤の単剤処置よりも効果が大きいことが分かる。
【０１８９】
高レベルのＨＤＡＣ阻害剤とビタミンＢ分子を投与した組合せ群ＩＶは、最大量の腫瘍増殖阻害を示し、すなわち、腫瘍サイズ、腫瘍重、腫瘍数および腫瘍潅流の低下と統計学的に相関がある。中レベルのＨＤＡＣ阻害剤とビタミンＢを投与した組合せ群Ｖは、中レベルのＨＤＡＣ阻害剤のみを投与した単剤群ＩＩおよび高レベルのＨＤＡＣ阻害剤のみを投与した単剤群Ｉに比べて、より高い腫瘍増殖阻害、すなわち、腫瘍サイズ、腫瘍重、腫瘍数および腫瘍潅流の低下を示す。低レベルのＨＤＡＣ阻害剤とビタミンＢを投与した組合せ群ＶＩは、低レベルのＨＤＡＣ阻害剤のみを投与した単剤群ＩＩＩ、中レベルのＨＤＡＣ阻害剤のみを投与した単剤群ＩＩ、および高レベルのＨＤＡＣ阻害剤のみを投与した単剤群Ｉに比べて、より高い腫瘍増殖阻害、すなわち、腫瘍サイズ、腫瘍重、腫瘍数および腫瘍潅流の低下を示す。
【０１９０】
これらのデータは、腫瘍阻害においてＨＤＡＣ阻害剤とビタミンＢ分子の間に相乗作用が存在することを示す。
【０１９１】
実施例３：化学療法薬の投与からの副作用のin vitro分析
一般に、抗癌治療プロトコールは副作用による実施の、また知覚される困難によって患者の許容性が制限されることが知られている。低用量の抗癌剤で有効であり得るように効力を高めるか、または標準的な、または高用量でより高い許容性が得られるように副作用が低減された組成物が必要である。
【０１９２】
よって、処置に関連する毒性を、骨髄細胞を用い、上記の処置から起こる副作用を測定することによって分析する。起こり得るこのような副作用の例としては、骨髄抑制、血小板減少症または貧血がある。骨髄毒性は、１４日コロニー形成単位顆粒球−マクロファージアッセイにて、ラットからの骨髄サンプルを用いて分析する。ビタミンＢ投与後の副作用の出現または程度は、処置に関連する抗腫瘍能の増強の尺度となる。各動物で、一般的な血液検査ならびに赤血球、白血球および血小板を含む血液細胞の濃度を測定する。
【０１９３】
骨髄サンプル
数週齢〜１０週齢のラットに標準的な実験食を与える。動物をＣＯ２窒息により屠殺し、大腿骨から骨髄を無菌的に流出させ、穏やかに破砕することにより、単一細胞懸濁液を作製する。細胞を培地で洗浄し、適当な濃度に調整する。培地は２５ｍｍｏｌ／ＬのＨＥＰＥＳバッファーおよび５％（ｖ／ｖ）ウシ胎児血清を含有するイスコブの改変ダルベッコ培地である。
【０１９４】
ＨＤＡＣ阻害剤およびビタミンＢ分子の調製
ＨＤＡＣ阻害剤およびビタミンＢ分子を秤量し、Fisher Scientific (Fair Lawn, NJ)からのジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶かす。ＤＭＳＯで連続希釈液を作製した後、骨髄細胞の入った試験管に加え、最終ＤＭＳＯ濃度を全ての培養物で０．５％とする。
【０１９５】
試験は、下表４に記載されるように、ＨＤＡＣ阻害剤のみで処置する群（単剤、ＶＩＩＩ群）、ＨＤＡＣ阻害剤を種々の濃度のビタミンＢ分子と組み合わせて投与する３群（組合せ、ＩＸ群、Ｘ群およびＸＩ群）およびビヒクルのみで処置する対照（ＸＩＩ群）の５群とする。
【０１９６】
【表５】
2009541488.tif 000017
【０１９７】
単剤群ＶＩＩＩおよび各組合せ群ＩＸ、ＸおよびＸＩへ投与するＨＤＡＣ阻害剤の濃度は１００ｐｍｏｌ／Ｌである。各組合せ群ＩＸ、ＸおよびＸＩに投与するビタミンＢ分子の濃度は２００ｐｍｏｌ／Ｌ（ＩＸ群）、５００ｐｍｏｌ／Ｌ（Ｘ群）および１０００ｐｍｏｌ／Ｌ（ＸＩ群）である。対照群の細胞には、０．５％ＤＭＳＯを含有するＰＢＳ溶液を投与する（ＸＩＩ群）。
【０１９８】
in vitro顆粒球−マクロファージアッセイ
骨髄サンプルを無菌の保存剤不含ヘパリン試験管に採取し、Ｆｉｃｏｌｌ−Ｈｙｐａｑｕｅ（ｄ＝１０７０）密度勾配遠心分離によって分離する。顆粒球−マクロファージアッセイをIscove et al., Am J Cell Physiol 1974;83:309-20に記載のように行う。要するに、２×１０５の骨髄細胞／ｍｌイスコブの改変ダルベッコ培地を３５ｍｍペトリ皿の、１０％フィトヘマグルチニン刺激白血球細胞馴化培地、１０％ウシ血清アルブミンおよび１０％ヒトＡＢ血清を含有する０．９％メチルセルロース中にプレーティングする。５％ＣＯ２を含む飽和湿度雰囲気下、３７℃で培養する。ＨＤＡＣ阻害剤はＶＩＩＩ〜ＸＩの各群の培地に全培養期間（１４日）含め、ビタミンＢ分子はさらにＩＸ〜ＸＩの各群の培地に全培養期間（１４日）含める。１４日目に倒立顕微鏡下で顆粒球−マクロファージコロニーのスコア付けをする。４０個を超える細胞を含む凝集塊をコロニー、４〜４０個の細胞を含む凝集塊をクラスターとしてスコアを付ける。
【０１９９】
結果
ビヒクルのみを投与した対照群（ＸＩＩ群）で最大数のコロニーが見られ、この数を用いて他の群に関して得られたデータをノーマライズし、生存率％を得る。ＨＤＡＣ阻害剤とビタミンＢ分子の組合せを用いた治療処置は、ＨＤＡＣ阻害剤のみを投与した単剤群（ＶＩＩＩ）から生じたコロニーの数に比べ、有意に多い数のコロニーを生じることが分かる。ビタミンＢ分子を１０００ｐｍｏｌ／Ｌの濃度（高レベル）で投与した組合せ群ＸＩは、ＨＤＡＣ阻害剤を投与した全ての群の最大数コロニー（最高生存率％）を生じる。ビタミンＢ分子を２００ｐｍｏｌ／Ｌの濃度（低レベル）で投与した組合せ群ＩＸでさえ、ＨＤＡＣ阻害剤のみを投与した単剤群ＶＩＩＩにより多いコロニー数を生じる。
【０２００】
これらのデータは、ビタミンＢをＨＤＡＣ阻害剤と組み合わせて投与すると、化学療法薬に伴う特定の副作用が軽減または改善されることを示す。副作用の軽減または改善の結果は、より高用量のＨＤＡＣ阻害剤を単独で、または他の既知の抗癌薬と組み合わせて使用することができ、ＨＤＡＣ阻害剤の治療係数が向上するということである。
【０２０１】
均等物
本明細書で特定の実施形態を詳細に開示してきたが、これは単に例示の目的で示すものであり、添付の特許請求の範囲に関する限定を意図するものではない。特に、本発明者らは、特許請求の範囲によって定義される本発明の精神および範囲を逸脱することなく、本発明に対して種々の置換、変更および改変を行えることを意図する。他の態様、利点および改変も特許請求の範囲内にあるものと見なされる。
【国際調査報告】
2009541488.tif 000018
2009541488.tif 000019
2009541488.tif 000020
2009541488.tif 000021
2009541488.tif 000022