(57)【要約】本発明は、対象の神経変性病、あるいは対象の脳内の酸化ストレスを防止する方法を提供し、対象の神経変性病あるいは酸化ストレスを防ぐのに有効なコリンエステラーゼ阻害量未満又はモノアミンオキシダーゼ阻害量未満の量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を対象に投与するステップを具えている。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
神経変性病に罹患しやすい対象において、神経変性病の症状発現を防ぐ、又は、病気の対象における初期段階の神経変性病の、進行段階の前記神経変性病への進行を遅らせる方法において、前記病気の症状の発現を防ぎ、又は、前記病気の進行を遅らせる有効な量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を、前記対象に投与するステップを具えることを特徴とする方法。
【請求項２】
請求項１に記載の方法において、前記対象へ投与される前記有効な量が、コリンエステラーゼ阻害量未満、又はモノアミンオキシダーゼ阻害量未満の、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩であることを特徴とする方法。
【請求項３】
請求項２に記載の方法において、コリンエステラーゼ阻害量未満、及びモノアミンオキシダーゼ阻害量未満のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を前記対象へ投与するステップを具えることを特徴とする方法。
【請求項４】
請求項１乃至３のいずれか１項に記載の方法において、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの塩の投与ステップを具えることを特徴とする方法。
【請求項５】
請求項４に記載の方法において、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの前記塩が酒石酸塩であることを特徴とする方法。
【請求項６】
請求項１乃至５のいずれか１項に記載の方法において、前記対象がヒトであることを特徴とする方法。
【請求項７】
請求項６に記載の方法において、前記Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの量が、前記対象の０．３７ｍｇ／ｋｇ／日をこえず、又はその塩の対応する量であることを特徴とする方法。
【請求項８】
請求項７に記載の方法において、前記塩が前記酒石酸塩であり、当該塩の前記対応する量が、前記対象の０．４６ｍｇ／ｋｇ／日をこえないことを特徴とする方法。
【請求項９】
請求項６に記載の方法において、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの前記量が、前記対象の２．３ｍｇ／ｋｇ／日をこえず、又はその塩の対応する量であることを特徴とする方法。
【請求項１０】
請求項９に記載の方法において、前記塩が前記酒石酸塩であり、当該塩の前記対応する量が、前記対象の２．９ｍｇ／ｋｇ／日をこえないことを特徴とする方法。
【請求項１１】
請求項６に記載の方法において、投与したＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン、又はその塩の前記量が、１０ｍｇ／日乃至２５ｍｇ／日であることを特徴とする方法。
【請求項１２】
請求項６に記載の方法において、投与したＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン、又はその塩の前記量が、前記対象の０．１４ｍｇ／ｋｇ／日乃至０．４２ｍｇ／ｋｇ／日であることを特徴とする方法。
【請求項１３】
請求項１２に記載の方法において、投与したＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン、又はその塩の前記量が、前記対象の０．１５ｍｇ／ｋｇ／日であることを特徴とする方法。
【請求項１４】
請求項１乃至１３のいずれか１項に記載の方法が、前記対象に対して抗酸化剤を投与するステップを更に具えることを特徴とする方法。
【請求項１５】
請求項１乃至１４のいずれか１項に記載の方法において、前記神経変性病が、アルツハイマ病、認知症、軽度認知障害、パーキンソン病、加齢黄斑変性、又は筋萎縮性側索硬化症であることを特徴とする方法。
【請求項１６】
請求項１５に記載の方法において、前記病気が認知症であり、当該認知症が、静的認知症、老年認知症、初老期認知症、進行性の認知症、血管性認知症、又はレビー小体型認知症であることを特徴とする方法。
【請求項１７】
請求項１乃至１６に記載の方法において、前記方法が、前記対象において初期段階の神経変性病の、更に進行した段階の前記神経変性病への進行を遅らせることを特徴とする方法。
【請求項１８】
請求項１乃至１６に記載の方法において、前記方法が、前記病気に罹患しやすい対象における、神経変性病の症状発現を防ぐことを特徴とする方法。
【請求項１９】
酸化ストレスを患った対象の脳内の酸化ストレスを減ずる方法において、コリンエステラーゼ阻害量未満、又はモノアミンオキシダーゼ阻害量未満の、前記対象の脳内の酸化ストレスを減ずるのに有効な量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を、前記対象に投与するステップを具えることを特徴とする方法。
【請求項２０】
請求項１９に記載の方法において、コリンエステラーゼ阻害量未満、又はモノアミンオキシダーゼ阻害量未満の、前記対象を治療するのに有効な量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を、前記対象に投与するステップを具えることを特徴とする方法。
【請求項２１】
請求項１９又は２０に記載の方法において、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの塩の投与ステップを具えることを特徴とする方法。
【請求項２２】
請求項２１に記載の方法において、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの前記塩が酒石酸塩であることを特徴とする方法。
【請求項２３】
請求項１９乃至２２に記載の方法において、前記対象がヒトであることを特徴とする方法。
【請求項２４】
請求項２３に記載の方法において、前記モノアミンオキシダーゼ阻害量未満のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンが、前記対象の０．３７ｍｇ／ｋｇ／日をこえず、又はその塩の対応する量であることを特徴とする方法。
【請求項２５】
請求項２４に記載の方法において、前記塩が前記酒石酸塩であり、当該塩の前記対応する量が、前記対象の０．４６ｍｇ／ｋｇ／日をこえないことを特徴とする方法。
【請求項２６】
請求項２３に記載の方法において、前記コリンエステラーゼ阻害量未満のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンが、前記対象の２．３ｍｇ／ｋｇ／日をこえず、又はその後の対応する前記その塩の量であることを特徴とする方法。
【請求項２７】
請求項２６に記載の方法において、前記塩が前記酒石酸塩であり、当該塩の前記対応する量が、前記対象の２．９ｍｇ／ｋｇ／日をこえないことを特徴とする方法。
【請求項２８】
請求項２３に記載の方法において、投与したＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン、又はその塩の前記量が、前記対象の１０ｍｇ／日乃至２５ｍｇ／日であることを特徴とする方法。
【請求項２９】
請求項１９乃至２８のいずれか１項に記載の方法において、前記酸化ストレスが前記脳の海馬領域で生じることを特徴とする方法。
【請求項３０】
請求項２９に記載の方法において、前記酸化ストレスが前記脳の前記海馬領域の星状細胞で生じることを特徴とする方法。
【請求項３１】
軽度の認知障害を患った対象を治療する方法において、前記対象を治療するのに有効な量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を、前記対象に投与するステップを具えることを特徴とする方法。
【請求項３２】
請求項３１に記載の方法において、前記有効な量が、コリンエステラーゼ阻害量未満、又はモノアミンオキシダーゼ阻害量未満の、対象を治療するのに有効な量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩であることを特徴とする方法。
【請求項３３】
請求項３２に記載の方法において、前記コリンエステラーゼ阻害量未満、又は前記モノアミンオキシダーゼ阻害量未満の、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩は、ＭＣＩのアルツハイマ病への進行を遅らせるのに有効であることを特徴とする方法。
【請求項３４】
請求項３１乃至３３のいずれか１項に記載の方法において、当該方法がコリンエステラーゼ阻害量未満、又はモノアミンオキシダーゼ阻害量未満の、対象を治療するのに有効な量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を前記対象に投与するステップを具えることを特徴とする方法。
【請求項３５】
請求項３１乃至３４のいずれか１項に記載の方法において、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの塩の投与ステップを具えることを特徴とする方法。
【請求項３６】
請求項３５に記載の方法において、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの前記塩が、酒石酸塩であることを特徴とする方法。
【請求項３７】
請求項３１乃至３６のいずれか１項に記載の方法において、前記対象がヒトであることを特徴とする方法。
【請求項３８】
請求項３７に記載の方法において、前記Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの量が、前記対象の０．３７ｍｇ／ｋｇ／日をこえず、又はその塩の対応する量であることを特徴とする方法。
【請求項３９】
請求項３８に記載の方法において、前記塩が前記酒石酸塩であり、当該塩の前記対応する量が、前記対象の０．４６ｍｇ／ｋｇ／日をこえないことを特徴とする方法。
【請求項４０】
請求項３７に記載の方法において、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの前記量が、前記対象の２．３ｍｇ／ｋｇ／日をこえず、又はその塩の対応する量であることを特徴とする方法。
【請求項４１】
請求項４０に記載の方法において、前記塩が前記酒石酸塩であり、当該塩の前記対応する量が、前記対象の２．９ｍｇ／ｋｇ／日をこえないことを特徴とする方法。
【請求項４２】
請求項３７に記載の方法において、投与したＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン、又はその塩の前記量が、前記対象の１０ｍｇ／日乃至２５ｍｇ／日であることを特徴とする方法。
【請求項４３】
単位剤形中の医薬品組成物において、２５ｍｇまでの量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン、又は、対応する量のその薬学的に許容可能な塩、及び薬学的に許容可能な担体を具えることを特徴とする医薬品組成物。
【請求項４４】
請求項４３に記載の医薬品組成物において、当該医薬品組成物が１０ｍｇ乃至２５ｍｇの量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン、又は、対応する量のその薬学的に許容可能な塩、及び薬学的に許容可能な担体を具えることを特徴とする医薬品組成物。
【請求項４５】
請求項４３又は４４に記載の医薬品組成物において、前記塩が酒石酸塩であることを特徴とする医薬品組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願を通じて、様々な刊行物、公表された特許出願、及び特許が参照されている。これら文書全体の開示は、本発明に関連する技術状況をより完全に述べるために、本出願内に引用しここに取り込まれている。
【背景技術】
【０００２】
酸化ストレスは、アルツハイマ病（ＡＤ）の病原性メカニズムとして提唱されている（Ｐ．Ｆ．Ｇｏｏｄ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｍ．Ｊ．Ｐａｔｈｏｌ．（１９９６）１４９：２１）。酸化ストレスはまた、虚血性発作からアルツハイマ病及びパーキンソン病、加齢黄班変性症、萎縮性側索硬化症に及ぶ障害（Ｍ．Ｐ．Ｍａｔｔｓｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ，Ｒｅｓ．（１９９７）４９：６８１）や、ペルオキシナイトライトを介して、一酸化窒素が重要な役割を果たす障害における神経の変性及び死の一因となり得る。
【０００３】
神経機能不全に続く複雑な神経化学的なプロセスを標的にした神経保護を与えるいくつかのストラテジが、開発されてきた。カルシウムチャネルの閉鎖（カルシウム抑制因子を用いて）と、グルタミン酸塩放出の阻害と、ＮＭＤＡ及びＧＡＢＡ受容体活性化作用の拮抗作用と、を含む古いアプローチ（「Ｎ．Ｇ．Ｗａｈｌｇｒｅｎ，ｉｎ  Ｒ．Ｇｒｅｅｎ，“Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ  Ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌｏｇｙ：Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  Ａｇｅｎｔｓ  ａｎｄ  Ｃｅｒｅｂｒａｌ  Ｉｓｃｈｅｍｉａ”，Ｖｏｌ．４０，Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ，１９９７」に概説）は、注目すべき治療法には至らなかった。活性酸素種（ＲＯＳ）及び窒素オキシアニオン種（ｎｉｔｒｏｇｅｎ  ｏｘｙａｎｉｏｎ  ｓｐｅｃｉｅｓ）の役割が近年重要視されると共に、可能な治療法の焦点が、抗酸化薬や遊離ラジカル捕捉剤へとシフトしている（Ｋ．Ｈｅｎｓｌｅｙ  ｅｔ  ａｌ．，ｉｎ  “Ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ａｎｄ  ｍａｎａｇｅｍｅｎｔ”(Ｅｄ：Ｐ．Ｌ．Ｗｏｏｄ），Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ  Ｉｎｃ．，１９９７）。（３Ｒ）−３−（２−プロピニルアミノ）−２，３−ジヒドロ−１Ｈ−インダン−５−イル  エチルメチルカルバミン酸として既知の、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンは、ＰＣＴ出願公報第ＷＯ９８／２７０５５号（Ｃｈｏｒｅｖに付与された、２００１年１０月１６日米国特許第６，３０３，６５０号）に開示されており、この内容は全体が引用によって取り込まれている。この化合物は、一般名としてラドスチギルと呼ばれている。
【０００４】
ラドスチギルは、脳内で選択的にアセチルコリンエステラーゼ（ＣｈＥ）とモノアミンオキシダーゼを阻害することが示されている（Ｍ．Ｗｅｉｎｓｔｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，ＴＶ３３２６，ａ  ｎｏｖｅｌ  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｖｅ  ｄｒｕｇ  ｗｉｔｈ  ｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ  ａｎｄ  ｍｏｎｏａｍｉｎｅ  ｏｘｉｄａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ  ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ， Ｊ．Ｎｅｕｒａｌ  Ｔｒａｎｓｍ．Ｓｕｐｐｌ．（２０００）６０：１５７−６９）。このように、ラドスチギルは、ヒトのうつ病、注意欠陥障害（ＡＤＤ）、注意欠陥多動性障害（ＡＤＨＤ）、トゥレット症候群、アルツハイマ病、及びその他の認知症、神経外傷性傷害及び記憶障害の治療法として提唱されている（例えば、２００３年３月２５日にＣｈｏｒｅｖらに付与された米国特許第６，５８３，０２５号を参照）。下記のラドスチギルの用量が開示されている：認知症とパーキンソン症候群との併存症を治療するためのラットモデルにおける５２ｍｇ／ｋｇの慢性投与（Ｙ．Ｓａｇｉ，Ｔｈｅ  ｎｅｕｒｏｃｈｅｍｉｃａｌ  ａｎｄ  ｂｅｈａｖｉｏｕｒａｌ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｎｏｖｅｌ  ｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ−ｍｏｎｏａｍｉｎｅ  ｏｘｉｄａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｌａｄｏｓｔｉｇｉｌ，ｉｎ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  Ｌ−ｄｏｐａ  ａｎｄ  Ｌ−ｔｒｙｐｔｏｐｈａｎ，ｉｎ  ｒａｔｓ，Ｂｒ．Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（２００５）１４６（４）：５５３−６０）；過度の不安症（ｈｙｐｅｒａｎｘｉｅｔｙ）やうつ病様の行動を治療するためのラットモデルにおける１７ｍｇ／ｋｇの慢性投与（Ｔ．Ｐｏｌｔｙｒｅｖ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｃｈｒｏｎｉｃ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｗｉｔｈ  ｌａｄｏｓｔｉｇｉｌ（ＴＶ−３３２６）ｏｎ  ａｎｘｉｏｇｅｎｉｃ  ａｎｄ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｖｅ−ｌｉｋｅ  ｂｅｈａｖｉｏｕｒ  ａｎｄ  ｏｎ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｈｙｐｏｔｈａｌａｍｉｃ−ｐｉｔｕｉｔａｒｙ−ａｄｒｅｎａｌ  ａｘｉｓ  ｉｎ  ｍａｌｅ  ａｎｄ  ｆｅｍａｌｅ  ｐｒｅｎａｔａｌｌｙ  ｓｔｒｅｓｓｅｄ  ｒａｔｓ，Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（２００５）１８１（１）：１１８−２５）；脳に、選択的なＭＡＯ阻害を示す２６ｍｇ／ｋｇの慢性投与（それぞれ、Ｍ．Ｗｅｉｎｓｔｏｃｋ，Ｌｉｍｉｔｅｄ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｏｒａｌ  ｔｙｒａｍｉｎｅ  ｂｙ  ｂｒａｉｎ−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｍｏｎｏａｍｉｎｅ  ｏｘｉｄａｓｅ  Ａ−Ｂ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＴＶ−３３２６  ｉｎ  ｃｏｎｓｃｉｏｕｓ  ｒａｂｂｉｔｓ，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（２００２）４３（６）：９９９−１００５と、Ｍ．Ｗｅｉｎｓｔｏｃｋ，Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ＴＶ３３２６，ａ  ｎｏｖｅｌ  ｍｏｎｏａｍｉｎｅ−ｏｘｉｄａｓｅ  ｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ｉｎ  ｒａｔ  ｍｏｄｅｌｓ  ｏｆ  ａｎｘｉｅｔｙ  ａｎｄ  ｄｅｐｒｅｓｓｉｏｎ，Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（２００２）１６０（３）：３１８−２４）。ラドスチギルは、培養し���ドーパミン作動性神経芽細胞種のＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞において、ペルオキシナイトライト生成剤のＮ−モルホリノシドノンイミン（Ｓｉｎ−１）によって誘発されるアポトーシスを抑制することも示されている（Ｍａｒｕｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｔｉ−ａｐｏｐｔｏｔｉｃ  ａｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｔｉ−Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ  ｄｒｕｇ，ＴＶ３３２６［（Ｎ−ｐｒｏｐａｒｇｙｌ）−（３Ｒ）−ａｍｉｎｏｉｎｄａｎｔ−５−ｙｌ］−ｅｔｈｙｌ  ｍｅｔｈｙｌ  ｃａｒｂａｍａｔｅ，ａ  ｎｏｖｅｌ  ｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ−ｍｏｎｏａｍｉｎｅ  ｏｘｉｄａｓｅ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ  Ｌｅｔｔｅｒｓ（２００３）３４１：２３３−２３６）。
【０００５】
ＭＡＯ阻害剤（ＭＡＯＩｓ）は、多くの禁忌を有することが知られており、高血圧緊急症の高い発生率に関連している（Ｐｈｙｓｉｃｉａｎ’ｓ  Ｄｅｓｋ  Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ，５９ｔｈ  Ｅｄ．（２００５）ｐｇｓ．１５８３−４）。
【０００６】
ＣｈＥ阻害は体温を低下させることが知られている（Ｇｏｒｄｏｎ，１９９４）。視床下部の視索前野内のムスカリン受容体を刺激することによって、末梢血管拡張作用を介して熱損失が促進される。体温の低下は、脳のＣｈＥ阻害の程度に比例することが示されている。
【０００７】
モノアミンオキシダーゼ（ＭＡＯ）又はコリンエステラーゼ（ＣｈＥ）の阻害と関連する顕著な副作用が起こらない用量レベルで、ラドスチギルを用いて酸化ニトロ化ストレスの神経変性効果を減ずることができることが、ここに開示されている。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００８】
本発明は、神経変性病に罹患しやすい対象において、前記神経変性病の症状発現を防ぐ方法、又は病気の対象において初期段階の神経変性病の、進行段階の前記神経変性病への進行を遅らせる方法を提供し、前記病気の症状の発現を防ぎ、又は、前記病気の進行を遅らせる有効な量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を、前記対象に投与するステップを具えている。
【０００９】
本発明はまた、酸化ストレスを患った対象の脳内の酸化ストレスを減ずる方法を提供し、前記対象の脳内の酸化ストレスを減ずる有効な量の、コリンエステラーゼ阻害量未満、又はモノアミンオキシダーゼ阻害量未満のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を、前記対象に投与するステップを具えている。
【００１０】
本発明はまた、軽度の認知障害を患った対象を治療する方法を提供しており、前記対象を治療する有効な量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を、前記対象に投与するステップを具える。
【００１１】
本発明はまた、２５ｍｇまでの量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン、又は、対応する量のその塩、及び薬学的に許容可能な担体を具える、単位剤形中の医薬品組成物を提供している。
【課題を解決するための手段】
【００１２】
本発明は、神経変性病に罹患しやすい対象において、前記神経変性病の症状発現を防ぎ、又は病気の対象における初期段階の神経変性病の、進行段階の前記神経変性病への進行を遅らせる方法を提供し、前記病気の症状の発現を防ぎ、又は、前記病気の進行を遅らせるのに有効な量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を、前記対象に投与するステップを具えている。
【００１３】
ある実施例においては、前記対象へ投与する有効な量が、コリンエステラーゼ阻害量未満、又はモノアミンオキシダーゼ阻害量未満のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩である。
【００１４】
ある実施例においては、前記方法が、コリンエステラーゼ阻害量未満、及びモノアミンオキシダーゼ阻害量未満のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を投与するステップを具えている。
【００１５】
別の実施例において、前記方法は、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの塩の投与ステップを具えている。
【００１６】
前記方法の更に別の実施例においては、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの前記塩が酒石酸塩である。
【００１７】
前記方法の更に別の実施例においては、前記投与が急性投与である。
【００１８】
前記方法の更に別の実施例においては、前記対象がヒトである。
【００１９】
ヒトへの急性投与を伴う前記方法の更に別の実施例において、前記モノアミンオキシダーゼ阻害量未満のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンが、前記対象に対して１．７ｍｇ／ｋｇ／日をこえず、又はその塩の対応する量である。
【００２０】
ヒトへの急性投与を伴う前記方法の更に別の実施例においては、前記塩が酒石酸塩であり、当該塩の対応する量は、前記対象に対し２．１ｍｇ／ｋｇ／日をこえない。
【００２１】
ヒトへの急性投与を伴う前記方法の更に別の実施例においては、前記コリンエステラーゼ阻害量未満のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンが、前記対象に対し２．３ｍｇ／ｋｇ／日をこえず、又はその塩の対応する量である。
【００２２】
ヒトへの急性投与を伴う前記方法の更に別の実施例においては、前記塩が酒石酸塩であり、前記対応する量の塩は、前記対象に対し２．９ｍｇ／ｋｇ／日をこえない。
【００２３】
前記方法の更なる実施例においては、前記投与が急性投与である。
【００２４】
前記方法の更なる実施例においては、前記対象がヒトである。
【００２５】
ヒトに対して用いる前記方法の更なる実施例においては、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの前記量が、前記対象に対し０．３７ｍｇ／ｋｇ／日をこえず、又はその塩の対応する量である。
【００２６】
ヒトに対して用いる前記方法の更なる実施例においては、前記塩が酒石酸塩であり、当該塩の対応する量は、前記対象に対し０．４６ｍｇ／ｋｇ／日をこえない。
【００２７】
ヒトに対して用いる前記方法の更なる実施例においては、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの前記量が、前記対象に対し２．３ｍｇ／ｋｇ／日をこえず、又はその塩の対応する量である。
【００２８】
ヒトに対して用いる前記方法の更なる実施例においては、前記塩が酒石酸塩であり、当該塩の対応する量が、前記対象に対し２．９ｍｇ／ｋｇ／日をこえない。
【００２９】
前記方法の別の実施例においては、投与したＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン、又はその塩の量が、前記対象に対し１０ｍｇ／日乃至２５ｍｇ／日である。
【００３０】
１０ｍｇ／日乃至２５ｍｇ／日によれば、その範囲内の小数点第２位、小数点第１位及び整数の単位量全てが、本発明の一部として特別に開示されていることを意味する。従って、１０．０１、１０．０２、・・・、２４．９９；１０．１、１０．２、・・・、２４．９；及び１１、１２、・・・２４ｍｇ／日といった単位量が、本発明の実施例に含まれている。
【００３１】
前記方法の別の実施例においては、投与したＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン、又はその塩の量が、前記対象に対し０．１４ｍｇ／ｋｇ／日乃至０．４２ｍｇ／ｋｇ／日である。
【００３２】
０．１４ｍｇ／ｋｇ／日乃至０．４２ｍｇ／ｋｇ／日によれば、その範囲内の小数点第２位及び小数点第１位の単位量全てが、本発明の一部として特別に開示されていることを意味する。従って、０．１５、０．１６、０．１７、・・・、０．４１ｍｇ／ｋｇ／日といった単位量が、本発明の実施例に含まれている。
【００３３】
前記方法の別の実施例においては、投与したＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン、又はその塩の量が、前記対象に対し０．１５ｍｇ／日である。
【００３４】
前記方法の別の実施例においては、投与したＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン、又はその塩の量が、前記対象に対し０．５ｍｇ／ｋｇ、前記対象に対し０．７８４ｍｇ／ｋｇ、前記対象に対し１ｍｇ／ｋｇ、前記対象に対し１．５ｍｇ／ｋｇ、前記対象に対し２ｍｇ／ｋｇ、前記対象に対し３ｍｇ／ｋｇ、又は前記対象に対し４ｍｇ／ｋｇ、である。
【００３５】
別の実施例においては、前記方法は、前記対象に抗酸化剤を投与するステップを更に具える。
【００３６】
前記方法の別の実施例においては、前記神経変性病は、アルツハイマ病、認知症、軽度認知障害、パーキンソン病、加齢黄斑変性、又は筋萎縮性側索硬化症である。
【００３７】
認知症を治療する方法の実施例においては、前記認知症は、静的な認知症、老年認知症、初老期認知症、進行性の認知症、血管性認知症、又はレビー小体型認知症を含んでいる。
【００３８】
ある実施例においては、前記方法は前記対象における初期段階の神経変性病を進行段階の前記神経変性病への進行を遅らせている。
【００３９】
ある実施例においては、前記方法は前記病気に罹患しやすい対象の神経変性病の症状の発現を防いでいる。
【００４０】
本発明はまた、神経変性病を患った対象を治療する方法を提供し、コリンエステラーゼ阻害量未満、又はモノアミンオキシダーゼ阻害量未満の、前記対象を治療するのに有効な量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を、前記対象に投与するステップを具えている。
【００４１】
ある実施例においては、前記方法はコリンエステラーゼ阻害量未満、及びモノアミンオキシダーゼ阻害量未満の、前記対象を治療する有効な量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を、前記対象に投与するステップを具えている。
【００４２】
別の実施例において、前記方法はＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの塩の投与ステップを具えている。Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの前記塩は、酒石酸塩にすることができる。
【００４３】
前記方法の更なる実施例においては、前記対象がヒトである。
【００４４】
ヒトに対して用いる前記方法の更なる実施例においては、前記モノアミンオキシダーゼ阻害量未満のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンが、前記対象に対し０．３７ｍｇ／ｋｇ／日、又は対応する量のその塩をこえない。
【００４５】
ヒトに対して用いる前記方法の更なる実施例においては、前記塩が酒石酸塩であり、当該塩の対応する量が、前記対象に対し０．４６ｍｇ／ｋｇ／日をこえない。
【００４６】
ヒトに対して用いる前記方法の更なる実施例においては、前記コリンエステラーゼ阻害量未満のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンが、前記対象に対し２．３ｍｇ／ｋｇ／日をこえず、又はその塩の対応する量である。
【００４７】
ヒトに対して用いる前記方法の更なる実施例においては、前記塩が酒石酸塩であり、当該塩の前記対応する量が、前記対象に対し２．９ｍｇ／ｋｇ／日をこえない。ここに開示されているその他の量も本方法に用いることができる。
【００４８】
前記方法の別の実施例においては、投与したＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン、又はその塩の前記量が、前記対象に対し１０ｍｇ／日乃至２５ｍｇ／日である。
【００４９】
１０ｍｇ／日乃至２５ｍｇ／日によれば、その範囲内の小数点第２位、小数点第１位及び整数の単位量全てが、本発明の一部として特別に開示されていることを意味する。従って、１０．０１、１０．０２、・・・、２４．９９；１０．１、１０．２、・・・、２４．９；及び１１、１２、・・・２４ｍｇ／日といった単位量は、本発明の実施例に含まれている。
【００５０】
前記方法の別の実施例においては、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン、又はその塩の前記量は、前記対象に対し０．５ｍｇ／ｋｇ、前記対象に対し０．７８４ｍｇ／ｋｇ、前記対象に対し１ｍｇ／ｋｇ、前記対象に対し１．５ｍｇ／ｋｇ、前記対象に対し２ｍｇ／ｋｇ、前記対象に対し３ｍｇ／ｋｇ、又は前記対象に対し４ｍｇ／ｋｇ、である。
【００５１】
前記方法の別の実施例において、前記神経変性病は、アルツハイマ病、認知症、軽度認知障害、パーキンソン病、加齢黄斑変性、又は筋萎縮性側索硬化症である。
【００５２】
前記方法の別の実施例においては、前記認知症が、静的認知症、老年認知症、初老期認知症、進行性の認知症、血管性認知症、又はレビー小体型認知症を含んでいる。
【００５３】
前記方法の別の実施例においては、前記認知症が、静的認知症、老年認知症、初老期認知症、進行性の認知症、又は血管性認知症を含んでいる。
【００５４】
本発明はまた、酸化ストレスを患った対象の脳中酸化ストレスを減ずる方法を提供し、コリンエステラーゼ阻害量未満、又はモノアミンオキシダーゼ阻害量未満の、前記対象の脳内の酸化ストレスを減ずるのに有効な量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を、前記対象に投与するステップを具えている。
【００５５】
ある実施例においては、前記方法は、コリンエステラーゼ阻害量未満、又はモノアミンオキシダーゼ阻害量未満の、前記対象を治療するのに有効な量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を、前記対象に投与するステップを具えている。
【００５６】
別の実施例においては、前記方法は、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの塩を投与するステップを具えている。
【００５７】
前記方法の別の実施例においては、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの前記塩が酒石酸塩である。
【００５８】
前記方法の更に別の実施例においては、前記投与が急性投与である。
【００５９】
前記方法の更に別の実施例においては、前記対象がヒトである。
【００６０】
ヒトへの急性投与に対して用いる前記方法の更に別の実施例においては、前記モノアミンオキシダーゼ阻害量未満のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンが、前記対象に対し１．７ｍｇ／ｋｇ／日をこえず、又はその塩の対応する量である。
【００６１】
ヒトへの急性投与に対して用いる前記方法の更に別の実施例においては、前記塩が酒石酸塩であり、当該塩の前記対応する量は、前記対象に対し２．１ｍｇ／ｋｇ／日をこえない。
【００６２】
ヒトへの急性投与に対して用いる前記方法の更に別の実施例においては、前記コリンエステラーゼ阻害量未満のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンは、前記対象に対し２．３ｍｇ／ｋｇ／日をこえず、又はその塩の対応する量である。
【００６３】
ヒトへの急性投与を伴う前記方法の更に別の実施例においては、前記塩が酒石酸塩であり、当該塩の前記対応する量は、前記対象に対し２．９ｍｇ／ｋｇ／日をこえない。
【００６４】
前記方法の更なる実施例においては、前記投与が急性投与である。
【００６５】
前記方法の更なる実施例においては、前記対象がヒトである。
【００６６】
ヒトへの急性投与に対して用いる前記方法の更なる実施例においては、前記モノアミンオキシダーゼ阻害量未満のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンが、前記対象に対し０．３７ｍｇ／ｋｇ／日をこえず、又はその塩の対応する量である。
【００６７】
ヒトへの急性投与に対して用いる前記方法の更なる実施例においては、前記塩が酒石酸塩であり、当該塩の前記対応する量は、前記対象に対し０．４６ｍｇ／ｋｇ／日をこえない。
【００６８】
ヒトへの急性投与に対して用いる前記方法の更なる実施例においては、前記コリンエステラーゼ阻害量未満のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンが、前記対象に対し２．３ｍｇ／ｋｇ／日をこえず、又はその塩の対応する量である。
【００６９】
ヒトへの急性投与に対して用いる前記方法の更なる実施例においては、前記塩が酒石酸塩であり、当該塩の前記対応する量は、前記対象に対し２．９ｍｇ／ｋｇ／日をこえない。
【００７０】
前記方法の別の実施例においては、投与したＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン、又はその塩の前記量が、前記対象に対し１０ｍｇ／日乃至２５ｍｇ／日である。
【００７１】
１０ｍｇ／日乃至２５ｍｇ／日によれば、その範囲内の小数点第２位、小数点第１位及び整数の単位量全てが、本発明の一部として特別に開示されていることを意味する。従って、１０．０１、１０．０２、・・・、２４．９９；１０．１、１０．２、・・・、２４．９；及び１１、１２、・・・２４ｍｇ／日といった単位量は、本発明の実施例に含まれている。
【００７２】
前記方法の別の実施例においては、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの前記対象を治療するのに有効な量は、又はその塩は、前記対象に対し０．５ｍｇ／ｋｇ、前記対象に対し０．７８４ｍｇ／ｋｇ、前記対象に対し１ｍｇ／ｋｇ、前記対象に対し１．５ｍｇ／ｋｇ、前記対象に対し２ｍｇ／ｋｇ、前記対象に対し３ｍｇ／ｋｇ、又は前記対象に対し４ｍｇ／ｋｇ、である。
【００７３】
前記方法の別の実施例においては、前記酸化ストレスが前記脳の海馬領域で生じている。
【００７４】
前記方法の別の実施例においては、前記酸化ストレスが前記脳の前記海馬領域の星状細胞で生じている。
【００７５】
本発明はまた、軽度の認知障害を患った対象を治療する方法を提供しており、対象を治療するのに有効な量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を、前記対象に投与するステップを具える。
【００７６】
本発明はまた、軽度の認知障害を患った前記対象を治療する方法を提供しており、コリンエステラーゼ阻害量未満、又はモノアミンオキシダーゼ阻害量未満の、対象を治療するのに有効な量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を、前記対象に投与するステップを具える。
【００７７】
前記方法のある実施例においては、前記コリンエステラーゼ阻害量未満、又は前記モノアミンオキシダーゼ阻害量未満の、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩は、ＭＣＩ乃至アルツハイマ病の進行を遅らせるのに有効である。
【００７８】
別の実施例においては、前記方法は、コリンエステラーゼ阻害量未満、及びモノアミンオキシダーゼ阻害量未満の、対象を治療するのに有効な量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を前記対象に投与するステップを具えている。
【００７９】
別の実施例においては、前記方法が、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの塩の投与ステップを具えている。
【００８０】
この方法の別の実施例においては、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの前記塩が、酒石酸塩である。
【００８１】
この方法の更なる実施例においては、前記対象がヒトである。
【００８２】
ヒトに用いる前記方法の更なる実施例においては、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの前記量が、前記対象に対し０．３７ｍｇ／ｋｇ／日をこえず、又は対応する量のその塩ある。
【００８３】
ヒトに用いる前記方法の更なる実施例においては、前記塩が酒石酸塩であり、当該塩の対応する量が、前記対象に対し０．４６ｍｇ／ｋｇ／日をこえない。
【００８４】
ヒトに用いる前記方法の更なる実施例においては、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンの量が、前記対象に対し２．３ｍｇ／ｋｇ／日をこえず、又のその塩の対応する量である。
【００８５】
ヒトに対して用いる前記方法の更なる実施例においては、前記塩が酒石酸塩であり、当該塩の前記対応する量が、前記対象に対し２．９ｍｇ／ｋｇ／日をこえない。
【００８６】
前記方法の別の実施例においては、投与したＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン、又はその塩の前記量が、前記対象に対し１０ｍｇ／日乃至２５ｍｇ／日である。
【００８７】
１０ｍｇ／日乃至２５ｍｇ／日によれば、その範囲内の小数点第２位、小数点第１位及び整数の単位量全てが、本発明の一部として特別に開示されていることを意味する。従って、１０．０１、１０．０２、・・・、２４．９９；１０．１、１０．２、・・・、２４．９；及び１１、１２、・・・２４ｍｇ／日といった単位量は、本発明の実施例として含まれている。
【００８８】
前記方法の別の実施例においては、Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン、又はその塩の前記量は、前記対象に対し０．５ｍｇ／ｋｇ、前記対象に対し０．７８４ｍｇ／ｋｇ、前記対象に対し１ｍｇ／ｋｇ、前記対象に対し１．５ｍｇ／ｋｇ、前記対象に対し２ｍｇ／ｋｇ、前記対象に対し３ｍｇ／ｋｇ、又は前記対象に対し４ｍｇ／ｋｇ、である。
【００８９】
本発明はまた、２５ｍｇまでの量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン、又は、対応する量のその薬学的に許容可能な塩、及び薬学的に許容可能な担体を具える、単位剤形中の医薬品組成物を提供している。
【００９０】
ある実施例においては、この方法は１０ｍｇ乃至２５ｍｇの量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン、又は、対応する量のその薬学的に許容可能な塩、及び薬学的に許容可能な担体を具えている。
【００９１】
前記方法の更なる実施例においては、前記薬学的に許容可能な塩が、酒石酸塩である。
【００９２】
本発明はまた、神経変性病に罹患しやすい対象における、前記神経変性病の症状発現を防ぎ、又は初期段階の神経変性病の、進行段階の前記神経変性病への進行を遅らせる薬剤の製造における、ある量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩の使用を提供する。前記薬剤中のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩の前記量は、前記病気の症状発現を防ぎ、又は前記病気の進行を遅らせるのに有効である。Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩の前記量は、コリンエステラーゼ阻害量未満、又はモノアミンオキシダーゼ阻害量未満にすることもできる。ここに開示されるその他の実施例は、本使用に関連して実行することができる。
【００９３】
本発明は更に、このような酸化ストレスを患った対象の脳内の酸化ストレスを減ずる薬剤の製造における、ある量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩の使用を提供する。前記薬剤内に前記量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を含む、ここに開示したその他の実施例は、本使用に関連して容易に実行することができる。
【００９４】
本発明は更に、軽度の認知障害を患った対象の当該軽度の認知障害を治療する薬剤製造用の、ある量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩の使用を提供する。前記薬剤中に前記量のＲ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダン又はその塩を含む、ここに開示したその他の実施例は、本使用に関連して容易に実行することができる。
【００９５】
化合物Ｒ（＋）−６−（Ｎ−メチル，Ｎ−エチル−カルバモイルオキシ）−Ｎ’−プロパルギル−１−アミノインダンは、神経変性病又は酸化ストレスの、予防又は治療に特に有用な医薬品組成として調剤することができる。例えば、前記組成は、前記神経変性病用の補助治療薬又は更なる抗酸化剤を含むこともできる。
【００９６】
このような組成は、ラドスチギル又はその薬学的に許容可能な塩を薬学的に許容可能な担体及び／又は賦形剤と共に具えることができる。単位剤形の用量は、例えば１乃至２５ｍｇ、好ましくは５乃至２０ｍｇの範囲にすることができる。本発明の実施において、薬学的に許容可能な塩は、メシル酸塩、マレイン酸塩、フマル酸塩、酒石酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、エシレート、ｐ−トルエンスルホン酸塩、安息香酸塩、酢酸塩、リン酸塩及び硫酸塩を含むがこれらに限定されない。
【００９７】
前記組成は、経口、非経口、直腸又は経皮投与用の薬剤として調剤することができる。経口投与用に適した形態は、錠剤、圧縮又は皮膜した丸剤、糖衣錠、小袋、硬質又は軟質のゼラチンカプセル、舌下錠、シロップ及び懸濁剤を含み；非経口用には、本発明は水溶液又は非水溶液、若しくは乳濁液を含むアンプル又はバイアルを提供し；直腸投与用には、親水性又は疎水性の賦形剤を有する座薬を提供し；軟膏剤としての局所投与又は経皮送達用には、当該技術分野で公知の適した送達系を提供する。
【００９８】
本発明の経口剤形に調剤するのに用いることができる薬学的に許容可能な担体及び賦形剤の特異的な例は、例えば、１９７５年9月2日にＲｏｂｅｒｔに付与された米国特許第３，９０３，２９７号に記載されている。本発明に有用な剤形を製造する技術及び組成は、下記の文献に記載されている：７  Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ，Ｃｈａｐｔｅｒｓ  ９  ａｎｄ  １０（Ｂａｎｋｅｒ＆Ｒｈｏｄｅｓ，Ｅｄｉｔｏｒｓ，１９７９）；Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ：Ｔａｂｌｅｔｓ（Ｌｉｅｂｅｒｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，１９８１）；Ａｎｓｅｌ，Ｉｎｔｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  ｔｏ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ  ２ｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ（１９７６）；Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，１７ｔｈ  ｅｄ．（Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，Ｅａｓｔｏｎ，Ｐａ．，１９８５）；Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｄａｖｉｄ  Ｇａｎｄｅｒｔｏｎ，Ｔｒｅｖｏｒ  Ｊｏｎｅｓ，Ｅｄｓ．，１９９２）；Ａｄｖａｎｃｅｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ  Ｖｏｌ  ７．（Ｄａｖｉｄ  Ｇａｎｄｅｒｔｏｎ，Ｔｒｅｖｏｒ  Ｊｏｎｅｓ，Ｊａｍｅｓ  ＭｃＧｉｎｉｔｙ，Ｅｄｓ．，１９９５）；Ａｑｕｅｏｕｓ  Ｐｏｌｙｍｅｒｉｃ  Ｃｏａｔｉｎｇｓ  ｆｏｒ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｄｏｓａｇｅ  Ｆｏｒｍｓ（Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｓｅｒｉｅｓ  ３６（Ｊａｍｅｓ  ＭｃＧｉｎｉｔｙ，Ｅｄ．，１９８９）；Ｐａｒｔｉｃｕｌａｔｅ  Ｃａｒｒｉｅｒｓ：Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ：Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ  ６１（Ａｌａｉｎ  Ｒｏｌｌａｎｄ，Ｅｄ．，１９９３）；Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  ｔｏ  ｔｈｅ  Ｇａｓｔｒｏｉｎｔｅｓｔｉｎａｌ  Ｔｒａｃｔ（Ｅｌｌｉｓ  Ｈｏｒｗｏｏｄ  Ｂｏｏｋｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ．Ｓｅｒｉｅｓ  ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ｊ．Ｇ．Ｈａｒｄｙ，Ｓ．Ｓ．Ｄａｖｉｓ，Ｃｌｉｖｅ  Ｇ．Ｗｉｌｓｏｎ，Ｅｄｓ．）；Ｍｏｄｅｒｎ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃｓ  Ｄｒｕｇｓ  ａｎｄ  ｔｈｅ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｖｏｌ  ４０（Ｇｉｌｂｅｒｔ  Ｓ．Ｂａｎｋｅｒ，Ｃｈｒｉｓｔｏｐｈｅｒ  Ｔ．Ｒｈｏｄｅｓ，Ｅｄｓ．）。
【００９９】
錠剤は、好適な結合剤、潤滑剤、崩壊剤、着色剤、着香剤、流動誘発剤（ｆｌｏｗ−ｉｎｄｕｃｉｎｇ  ａｇｅｎｔ）、及び溶融剤を含むことができる。例えば、錠剤やカプセルの単位剤形での経口投与用に、活性薬物成分を、ラクトース、ゼラチン、寒天、デンプン、スクロース、グルコース、メチルセルロース、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、ソルビトール、結晶セルロース等のような、経口、非毒性、薬学的に許容可能な非活性担体と結合することができる。好適な結合剤は、デンプン、ゼラチン、グルコースやβ−ラクトースのような自然糖、コーンスターチ、アカシア、トラガカント、又はアルギン酸ナトリウムのような天然又は合成ゴム、ポビドン、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ろう等を含むことができる。これらの剤形に用いられる潤滑剤には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウム、ステアリン酸、ステアリルフマル酸ナトリウム、滑石等がある。崩壊薬には、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガム、クロスカルメロースナトリウム、デンプングリコール酸ナトリウム等があるがこれに限定されない。
【０１００】
ここに用いられるように、「薬学的に許容可能な」担体は、合理的な利点／危険の比率が釣り合い、（毒性、刺激及びアレルギ反応のような）過度に有害な副作用がなく、ヒト及び／又は動物への投与に適しているものである。
【０１０１】
ここに用いられるように、「神経変性病」は、変性が神経系の灰白質又は白質のいずれか、あるいは両方に生じる病気である。従って、このような病気は糖尿病性神経障害、老年認知症、アルツハイマ病、軽度認知障害（ＭＣＩ）、パーキンソン病、顔面神経（ベル）麻痺、緑内障、ハンチントン舞踏病、筋萎縮性側索硬化症（ＡＬＳ）、てんかん重積状態、非動脈性視神経症、椎間板ヘルニア、ビタミン欠乏症、クロイツフェルトヤコブ病のようなプリオン病、手根管症候群、様々な病気に付随する末梢神経障害であり、尿毒症、ポルフィリン症、低血糖症、シェーグレン・ラルソン症候群、急性感覚性神経障害、慢性失調性神経障害、胆汁性肝硬変、原発性アミロイドーシス、閉塞性肺疾患、先端巨大症、吸収不良症候群、真性多血症、ＩｇＡ及びＩｇＧ免疫グロブリン症、様々な薬物（例えば、メトロニダゾール）及び毒物（例えば、アルコール又は有機リン酸類塩）の合併症、 シャルコー・マリー・トゥース病、毛細血管拡張性運動失調、フリートライヒ運動失調、アミロイド多発神経障害、副腎脊髄神経障害、巨大軸索神経障害、レフサム病、ファブリ病、リポタンパク質血症、を含むがこれらに限定されない。
【０１０２】
ここに用いられるように、脳内の神経変性病又は酸化ストレスに「罹患しやすい」は、遺伝的、家族性、又は化学的誘発の素因のことである。
【０１０３】
ここに用いられるように、「モノアミンオキシダーゼ阻害量未満」は、対象への急性投与の直後に２５％をこえないＭＡＯ阻害、又は対象への慢性投与中に３０％をこえないＭＡＯ阻害を引き起こす量のことである。
【０１０４】
「コリンエステラーゼ阻害量未満」は、対象への急性投与の直後に３０％をこえないＣｈＥ阻害、又は対象への慢性投与中に３０％をこえないＣｈＥ阻害を引き起こす量のことである。
【０１０５】
記載された方法において、投与は周期的又は定期的であってもよい。従って、投与は例えば、日、週、月に１回等といった既知の周期につき、所望量を単一剤形において行うことができ、あるいは、この周期を通して、所望量まで複数の投薬を重ねていくよう構成することができる。例えば、投与は、毎日１回、２回、３回又は４回、又は５日毎、毎週、２週ごと、３週ごと、毎月、２ヶ月ごと、３ヶ月ごと、６ヶ月ごと、又は毎年にすることができる。
【０１０６】
ここで用いられるように、「急性」投与は、対象への単一投与のことである。
【０１０７】
ここで用いられるように、「慢性」投与は、対象への１回以上の投与であり、各投与は、前歴が対象から完全になくなる前に生じる。ある実施例において、慢性投与は、例えば毎日といった定期的間隔で７回連続で投与することができる。
【０１０８】
ここに用いられるように、脳内に神経変性病又は酸化ストレスを「患った」対象とは、その対象が脳内に、神経変性病又は酸化ストレスがあると診断された対象を意味している。
【０１０９】
従って、本発明はこのような病気に罹患しやすい対象において、神経変性病の発生又は症状発現を遅らせる、又は予防する方法、並びに、このような病気の初期段階を患った対象において、このような病気の進行を遅くする、又は抑制する方法を提供している。
【発明を実施するための最良の形態】
【０１１０】
モノアミンオキシダーゼ（ＭＡＯ）阻害アッセイ
ＭＡＯ（ＭＡＯ−Ａ、ＭＡＯ−Ｂ）阻害のレベルは、通常の方法によって決定することができ、以下の項目を含む。
【０１１１】
インビボ
ラット及びマウスを、試験すべき化合物の皮下（ｓ．ｃ．）又は腹腔内（ｉ．ｐ．）注射又は口腔内（ｐ．ｏ．）投与によって処理する。動物を薬物治療の約２時間後に断頭し、脳、腸、及び／又は肝内のＭＡＯ活性を定量する。ＭＡＯ活性は、賦形剤だけを投与したコントロール群に対する酵素活性の割合で表わす。５０％のＭＡＯ阻害を生成する有効用量（ＥＤ５０値）を、阻害曲線から算出する。
【０１１２】
ラドスチギル（例えば、７日間毎日投与）による反復処理を用いて、慢性投与を通して達した阻害を算出することができる。
【０１１３】
ラドスチギル酒石酸塩（ｌａｄｏｓｔｉｇｉｌ  ｔａｒｔｒａｔｅ）の場合には、本方法を用いて、ラドスチギル塩を２０．４ｍｇ／ｋｇまで（急性投与）、及びラドスチギル塩を４．５ｍｇ／ｋｇまで（慢性投与）の量が、２５％をこえるＭＡＯ阻害（ＭＡＯ−ＡとＭＡＯ−Ｂの両方）を生じさせないことを決定した。
【０１１４】
インビトロ
ＭＡＯ酵素を、０．３Ｍスクロースにおけるラットの脳のホモジェネートから得て、１５分間６００ｇで遠心分離した。上澄みを０．０５Ｍのリン酸塩バッファで適宜希釈し、３７度で２０分間、試験化合物の段階希釈溶液と共にプレインキュベートした。次いで、１４Ｃ標識基体（２−フェニルエチルアミン、以下ＰＥＡという、５−ヒドロキシトリプトアミン、以下５−ＨＴという）を添加し、２０分間（ＰＥＡ）又は３０乃至４５分間（５−ＨＴ）更にインキュベートした。使用した基体濃度は５０μＭ（ＰＥＡ）と１ｍＭ（５−ＴＨ）である。ＰＥＡの場合においては、１０％以下の基体が、反応の進行中に代謝できるように酵素濃度を選択した。脱アミノ化した生成物を抽出した、液体シンチレーション測定により定量する前に、０．６％（ｗ／ｖ）の２，５−ジフェニルオキサゾル（ｐｐｏ）を含むトルエン−酢酸エチル（１：１  ｖ／ｖ）とした。希釈溶液中の放射活性は、ＭＡＯ活性の結果として形成した中性又は酸性代謝産物の生成を示している。サンプル中のＭＡＯ活性は、適合するブランク値を減算後の阻害薬がないときのコントロール活性の割合として表わされている。基体としてＰＥＡを用いて測定した活性はＭＡＯ−Ｂと呼ばれ、基体として５−ＨＴを用いて測定した活性はＭＡＯ−Ａと呼ぶ。５０％の基体代謝の阻害（ＩＣ５０）を生成する阻害剤の濃度は、阻害曲線から算出する。
【０１１５】
アセチルコリンエステラーゼ（ＣｈＥ）阻害アッセイ
ＣｈＥ阻害のレベルは、通常の方法によって決定することができ、以下の項目を含むことができる。  
【０１１６】
インビボ
ＣｈＥ阻害のインビボ測定は、カニクイザルを治療することと、脳、血漿及び赤血球のＣｈＥ阻害について組織を検査することを除いては、ＭＡＯ阻害のインビボでの測定と同様である。
【０１１７】
ラドスチギル酒石酸塩の場合には、本方法をもちいて、７．０ｍｇ／ｋｇまでのラドスチギル塩の量（急性又は慢性投与）によって、３０パーセントをこえる阻害を引き起こさないことを定量した。
【０１１８】
インビトロ
ヒト赤血球アセチルコリンエステラーゼ（ＸＩＩＩ型、Ｓｉｇｍａ社、イスラエル）を、リン酸塩バッファ（ｐＨ８）中にトリトン（１％）とウシ血清アルブミン（０．０５％）を含むａ．保存液１Ｕ／ｍｌで調製した。酵素（０．０５Ｕ）を、３７℃で１５乃至６０分間、３乃至５の異なる濃度の試験化合物（３重）でインキュベートする。その後、基体のアセチルチオコリン（０．０７５Ｍ）と５，５’−ジチオビス−（２−ニトロ安息香酸）（ＤＴＮＢ、０．０１Ｍ）を添加して、黄色の生成物を産生する培地の加水分解率を、４１２ｎＭの分光測定でモニタした（Ｅｌｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（１９６１）７：８８−９５）。各々の薬物濃度によるＣｈＥ阻害の割合は、薬物がない場合の酵素の割合と比較して算出する。次いでピーク活性の際に、５０％でＣｈＥを阻害する各薬物の濃度（ＩＣ５０）を算出する。
【０１１９】
ヒトに用いるのに適した用量を動物に用いられる用量に変換する標準的な方法は、公的に入手可能である（Ｇｕｉｄａｎｃｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｄｕｓｔｒｙ：Ｅｓｔｉｍａｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｍａｘｉｍｕｍ  Ｓａｆｅ  Ｓｔａｒｔｉｎｇ  Ｄｏｓｅ  ｉｎ  Ｉｎｉｔｉａｌ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｔｒｉａｌｓ  ｆｏｒ  Ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ  ｉｎ  Ａｄｕｌｔ  Ｈｅａｌｔｈｙ  Ｖｏｌｕｎｔｅｅｒｓ，Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐｔ．ＨＨＳ／ＦＤＡ／ＣＤＥＲ（Ｊｕｌｙ  ２００５），ａｔ  ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆｄａ．ｇｏｖ／ｃｄｅｒ／ｇｕｉｄａｎｃｅ／５５４１ｆｎｌ．ｄｏｃ）。この用量変換は種に依存している。種間の用量変換は、ヒトに用いる用量を導くために標準係数で動物の用量を除算するステップから成る。動物種に基づいて平均６０ｋｇのヒト用のヒト等価用量に変換する推奨される標準係数は、例えばマウス用には１２．３、ラット用には６．２、カニクイザル用には３．１である。代替的に、ヒト等価用量（ＨＥＤ）は、以下の式を用いて得ることができる：動物の用量（ｍｇ／ｋｇ）＊（動物の体重（ｋｇ）／ヒトの体重（ｋｇ））＾０．３３。
【０１２０】
動物試験
ストレプトゾトシン（ＳＴＺ）は、非経口注入すると膵臓β細胞に酸化ストレスを引き起こすことが知られている（Ｔａｋａｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，Ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ−  ａｎｄ  ａｌｌｏｘａｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  Ｈ２Ｏ２  ｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ａｎｄ  ＤＮＡ  ｆｒａｇｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｉｓｌｅｔｓ，Ｄｉａｂｅｔｅｓ（１９９１）４０：１１４１−５）。発明者らによる最近の研究は、一回のＳＴＺ両側脳室内注射が、２週後に物体認識試験で計測すると、エピソード記憶の障害を引き起こし、８週後もそのままであることを示している。記憶欠損は３乃至８週後、特にＳＴＺの脳室内注射３週後（Ｌａｎｎｅｒｔ  ａｎｄ  Ｈｏｙｅｒ，１９９８）、に見られ、抗酸化剤、メラトニン、リスベラトロールを用いた慢性治療により減ずることができ（Ｓｈａｒｍａ  ａｎｄ  Ｇｕｐｔａ，２００１，２００２）、病因学におけるＲＯＳの役割を支持している。
【０１２１】
発明者らによる最近の研究は、ＳＴＺが一週後に海馬の多形細胞層に酸化窒素ストレスを誘発し、一回のＳＴＺ注射が脳弓と脳梁中の低分子重量の抗酸化剤のレベルを減ずることも示している。ラットにおけるストレプトゾトシン（ＳＴＺ）の脳室内（ｉｃｖ）注射後の、脳の詳細な組織学的検討すると、ミクログリア活性が、別々の領域に発生することが分かった（Ｓｈｏｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。脳室内ＳＴＺは、海馬中、及びＳＴＺ注射部位で、星状細胞及びミクログリアを活性化させ、これが酸化窒素（ＮＯ）と、最終的には、反応性酸素種（Ｏ２−及びＯＨ−）の生成を引き起こす（Ｓｉｍｍｏｎｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｄｕｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ｉｎ  ｇｌｉａｌ  ｃｅｌｌｓ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．（１９９２）５９：８９７−９０５）。
【０１２２】
活性化した星状細胞は、興奮性アミノ酸レセプタを発現し、グルタミン酸塩を取り込み、酸化ストレスのリスクにもなる（Ｏｕｙａｎｇ  ａｎｄ  Ｇｉｆｆａｒｄ，２００４）。従って海馬中の酸化ストレスの共通の起源は、細胞内抗酸化防御システムの破壊を引き起こすことがある細胞内カルシウム調節不全を含む過剰な興奮性刺激（グルタミン酸塩−ＧＡＢＡの不均等）かもしれない（Ｌｉｐｔｏｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｘｃｉｔａｔｏｒｙ  ａｍｉｎｏ  ａｃｉｄｓ  ａｓ  ａ  ｆｉｎａｌ  ｃｏｍｍｏｎ  ｐａｔｈｗａｙ  ｆｏｒ  ｎｅｕｒｏｌｏｇｉｃａｌ  ｄｉｓｏｒｄｅｒｓ，Ｎ．Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．（１９９４）３３０：６１３−２２）。
【０１２３】
アストログリアの喪失を伴う活性化は、グリアないしニューロン信号伝達の統率の調節不全を引き起こす（Ｋｉｅｌｉａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｎｅｕｒｏｉｎｆｌａｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｎ  ｇｌｉａ−ｇｌｉａ  ｇａｐｊｕｎｃｔｉｏｎａｌｉｎｔｅｒｃｅｌｌｕｌａｒ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ：ａ  ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ，Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．Ｉｎｔ．（２００４）４５：４２９−３６）。これは、皮質及び海馬中の有髄ニューロンにおけるインパルス伝導を遅くすることによって、記憶欠損を誘発し、結局は海馬のコリン作動性伝達の減少を引き起こすことがある。
【０１２４】
従って、ＳＴＺが誘発した酸化ストレスをモデルとして選択して、ラドスチギルの抗酸化の可能性を試験した。
【実施例】
【０１２５】
実施例１
本研究は、「Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ」の指針に従って、かつ、米国の国立衛星研究所の指針に基づき、体重３２０乃至３４０ｇ、４週齢のオスのスプラーグドーリラット（Ｈａｒｌｅｎ社、エルサレム）で行った。ラットは手術に先立ち、２１±１℃の外気温、１２時間の概日の光周期（光は７時に点灯）で、収容ケージ（Ａｎｉｍａｌ  Ｈｏｕｓｅ）に一週間収容した。
【０１２６】
体重３２０乃至３４０ｇのオスのスプラーグドーリラット（３０）は、エクイセシン（Ｅｑｕｉｔｈｅｓｉｎ）０．３ｍｌ／ｋｇの腹腔内（ｉ．ｐ．）注射によって麻酔した。２μｌの人工脳脊髄液（ＣＳＦ）中のＳＴＺ（０．５ｍｇ）を、２０匹のラットの各側脳室に注射した。ｉｃｖ注射用の定位座標は、ブレグマレベルから０．９ｍｍ後側、１．８ｍｍ外側、３．８ｍｍ腹側であった。コントロールラット（１０）は、２μｌの人工ＣＳＦの両側の注射を受けた。ＳＴＺを注射したラットの半分は、ｉｃｖへのＳＴＺの一週前、及びその後一週間、１（ｍｇ／ｋｇ）の量で経口でラドスチギルを与えられた。残りは１ｍｌ／ｋｇの水が与えられた。ラットを、ペントバルビタールナトリウムで麻酔して、経心的に灌流し、脳を下記のように免疫細胞化学用に処理した。
【０１２７】
病理組織診断
脳をクリオスタット内で３０μｍ厚のスライスに切断して、下記のマーカで免疫科学的に染色した：窒素／酸化ストレスのマーカであるニトロチロシンは、１：１００で希釈された、Ｕｐｓｔａｔｅ社（Ｌａｋｅ  Ｐｌａｃｉｄ社、ニューヨーク州、米国）のウサギ抗ニトロチロシンで染色した。星状細胞活性化のマーカである、グリア線維性酸性タンパク質（ＧＦＡＰ）は、１：５００、１：２５０で希釈したＳｉｇｍａ社（Ｒｅｈｏｖｏｔ社、イスラエル）のクローンＧＡ−５のマウス抗体で染色した。ウサギ抗体用として、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ社（Ｔｅｍｅｃｕｌａ社、カリフォルニア州、米国）のホースラディッシュペルオキシダーゼと接合した二次ロバ抗ウサギ抗体を、１：２００で希釈した。マウス抗ＧＦＡＰ用として、Ｓｉｇｍａ社（Ｒｅｈｏｖｏｔ社、イスラエル）のホースラディッシュペルオキシダーゼと接合した二次ヤギ抗マウス抗体を、１：１００で希釈した。呈色の発生は、「Ｓｈｏｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒｏｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒ  ｉｎｊｅｃｔｉｏｎ  ｏｆ  ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎｃａｕｓｅｓ  ｎｅｕｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｔｏ  ｍｙｅｌｉｎ  ｔｈａｔ  ｃｏｎｔｒｉｂｕｔｅｓ  ｔｏ  ｓｐａｔｉａｌ  ｍｅｍｏｒｙ  ｄｅｆｉｃｉｔｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ，Ｅｘｐ．Ｎｅｕｒｏｌ．（２００３）１８４：１０４３−５２」に記載のように、ジアミノベンジジンや過酸化水素を用いた反応によって得た。明視野顕微鏡によって画像を得て、適したマーカの量的評価は、分析ソフトウェアを用いた濃度測定によって行った。
【０１２８】
星状細胞活性と酸化ストレス間の相関の共焦点顕微鏡検査
脳の切片を、ウサギ抗ＮＴとマウスの抗ＧＦＡＰの双方と一緒にインキュベートした。ＤＡＢ−ペルオキシダーゼ呈色反応の代わりに、二次抗体をフルオレセインイソチオシアネート（ＦＩＴＣ）（ＮＴ）又はローダミンイソチオシアネート（ＲＩＴＣ）（ＧＦＡＰ）と接合した。
【０１２９】
画像分析を用いた定量化
ＮＴ免疫反応性の星状細胞は、海馬の多形細胞層、放線状層、白板に見られた。２００μｍ×１００μｍの寸法の矩形領域は、各ラットからの海馬を含む２つの切片にあるこれらの部位から標本化した。ニトロチロシン免疫活性が見られる部位の割合が計算され、２つの切片間を平均した。
【０１３０】
統計分析
濃度測定データは、一変量分散分析（ＡＮＯＶＡ）、その後のダンカンの事後テストによって分析した。
【表１】
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【０１３１】
一回のＳＴＺのｉｃｖ注射後１週間で、海馬ＣＡ１領域の多形細胞層、白板、放線状層においてニトロチロシン染色における有意な増加が見られた。共焦点顕微鏡試験は、反応性星状細胞にニトロチロシン免疫活性が生じたことを示した。ラドスチギルは海馬のＣＡ１野の３領域の星状細胞において、ニトロチロシンの免疫活性の増加を完全に防止した（図１）。
【０１３２】
考察
１回のストレプトゾトシン（ＳＴＺ）の両側性ｉｃｖ注射は、１週間後に海馬の多形細胞層において酸化窒素ストレスを誘発する。本発明は、海馬のＣＡ１領域内の２つの隣接領域、白板及び層にこの所見を拡張する。ニトロチロシン免疫活性の誘発は、酸化ストレスを含むＳＴＺ誘発プロセスに対するこの領域に独特の脆弱性を示唆している。特に、ＳＴＺは活性化に続いて、この脳部位における星状細胞の減少を引き起こし、従ってグルタミン酸塩の過度な活性化の可能性が増加する。
【０１３３】
ｉｃｖへのＳＴＺ注射の１週間前から、注射１週間後までの毎日のラドスチギルの経口投与（１．０ｍｇ／ｋｇ）は、３つの海馬領域の星状細胞において、ニトロチロシン免疫活性の増加を防止した。これは、低用量のラドスチギルが所定の海馬領域における星状細胞の酸化窒素ストレスを減じることができ、ＳＴＺによって海馬の錐体細胞におけるシグナル伝達の減少を少なくし、従って記憶欠損を減少させることができる。
【０１３４】
実施例２
本研究は、「Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ  ｆｏｒ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ」の指針に従って、かつ、米国の国立衛星研究所の指針に基づき、体重３２０乃至３４０ｇ、４週齢のオスのスプラーグドーリラット（Ｈａｒｌｅｎ社、エルサレム）で行った。ラットは手術に先立ち、２１±１℃の外気温、１２時間の概日の光周期（光は７時に点灯）で、収容ケージ（Ａｎｉｍａｌ  Ｈｏｕｓｅ）に一週間収容した。
【０１３５】
体重３２０乃至３４０ｇのオスのスプラーグドーリラット（６３）は、エクイセシン０．３ｍｌ／ｋｇの腹腔内注射によって麻酔した。２μｌの人工脳脊髄液（ＣＳＦ）でＳＴＺ（０．５ｍｇ）を、４５匹のラットの各側脳室に注射した。ｉｃｖ注射用の定位座標は、ブレグマレベルから０．９ｍｍ後側、１．８ｍｍ外側、３．８ｍｍ腹側であった。コントロールラット（１８）は、２μｌの人工ＣＳＦの両側の注射を受けた。ＳＴＺを注射したラット（２５）は、ｉｃｖへのＳＴＺの１週前から、その後１週間乃至８週間後まで１ｍｌ／ｋｇの量で、経口でラドスチギル（１ｍｇ／ｋｇのヘミ酒石酸塩／日）を与えられた。残りの２０匹のラットには１ｍｌ／ｋｇの水が与えられた。ラットは、行動、酵素及び細胞科学測定が完了するまで、餌と水に自由にアクセスさせ、１ケージに２匹収容した。
【０１３６】
免疫細胞化学
ｉｃｖ注射の１週間後、ｉｃｖへＣＳＦを注射した８匹のラットは、ＳＴＺのみを与えた７匹のラット、及びラドスチギルで治療した７匹のラットを、ペントバルビタールナトリウムで麻酔して、経心的に灌流し、脳を免疫細胞化学用に処理した。下記のように記憶欠損用にラットを試験する際に、ｉｃｖ注射後８週間で、この手順を各群の別の６のラットで繰り返した。３０μｍ厚の浮遊切片が、クリオスタット中で脳から作成され、「Ｓｈｏｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，（上述）」に記載されているように凍結保存した。
【０１３７】
グリア活性と窒素ストレス
窒素／酸化ストレスのマーカであるニトロチロシン（ＮＴ）は、１：１００で希釈した、Ｕｐｓｔａｔｅ社（Ｌａｋｅ  Ｐｌａｃｉｄ社、ニューヨーク州、米国）のウサギ抗ニトロチロシンで染色し、続いて、Ｃｈｅｍｉｃｏｎ社（Ｔｅｍｅｃｕｌａ社、カリフォルニア州、米国）のホースラディッシュペルオキシダーゼと接合した二次ロバ抗ウサギ抗体を、１：２００で希釈した。星状細胞活性のマーカであるＧＦＡＰは、まず１：５００で希釈したＳｉｇｍａ社（Ｒｅｈｏｖｏｔ社、イスラエル）のクローンＧＡ−５のマウス抗体で染色し、次いで、Ｓｉｇｍａ社（Ｒｅｈｏｖｏｔ社、イスラエル）のホースラディッシュペルオキシダーゼと接合した二次ヤギ抗マウス抗体を、１：１００で希釈した。ミクログリアはビオチン化レクチン（Ｇｒｉｆｆｏｎｉａ  Ｂａｎｄｅｉｒｅａ  Ｓｉｍｐｌｉｃｉｆｏｌｉａ、Ｖｅｃｔｏｒ  ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ社、カリフォルニア州バーリンゲーム）を用いたインキュベーションによって染色し、次いで、ホースラディッシュペルオキシダーゼとｅｘｔｒａｖｉｄｉｎ接合させた。この呈色は、「Ｓｈｏｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，（上述）」において上述したように、ジアミノベンジジンと過酸化水素との反応によって発生した。明視野顕微鏡によって画像を得て、適したマーカの量的評価を分析ソフトウェアを用いて行った。
【０１３８】
コリン作動性マーカ
コリン作動性ニューロンは、コリンアセチルトランスフェラーゼ（ＣｈＡＴ）用に１：２００のヤギ抗ＣｈＡＴ（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ、Ｔｅｍｅｃｕｌａ社、カリフォルニア州、米国）で、小胞アセチルコリン輸送体（ＶＡＣｈＴ）用に１：１００のウサギ抗ＶＡＣｈＴ（Ｓｉｇｍａ、Ｒｅｈｏｖｏｔ社、イスラエル）で、神経成長因子レセプタ（ＮＧＦＲ）用に１：１００のウサギ抗ＮＧＦＲ（Ａｌｏｍｏｎｅ  ｌａｂｓ社、エルサレム、イスラエル）で染色した。二次抗体溶液は、１：２００のロバ抗ヤギ抗体と、ロバ抗ウサギ抗体であり、各々がホースラディッシュペルオキシダーゼと接合していた（Ｃｈｅｍｉｃｏｎ、Ｔｅｍｅｃｕｌａ社、カリフォルニア州、米国）。最終的な呈色反応は「Ｓｈｏｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，（上述）」に前述したように、発現した。
【０１３９】
共焦点顕微鏡検査
活性化した星状細胞における酸化窒素ストレスの形跡を検出するために、脳の切片を、ウサギ抗ＮＴとマウス抗ＧＦＡＰの双方と一緒にインキュベートした。ＤＡＢ−ペルオキシダーゼ呈色反応の代わりに、二次抗体をＮＴ用のフルオレセインイソチオシアネート又はＧＦＡＰ用のローダミンイソチオシアネートと接合させた。ミクログリア及び星状細胞上のＳＴＺ注射の影響を調査するために、脳の切片をマウス抗ＧＦＡＰ（星状細胞用）とビオチン標識アイソレクチンＢ４（ミクログリア用）の双方と一緒にインキュベートした。二次抗体は、ＧＦＡＰ用にはフルオレセインイソチオシアネートであり、アイソレクチンＢ４用にはストレプトアビジンＣｙ３であった。
【０１４０】
画像分析を用いた定量化
異なる形態で星状細胞及びミクログリアを含むｉｃｖへのＳＴＺ注射後に、皮質注射部位の近傍で３つの別個のゾーンを区別した。３つのゾーンにおけるミクログリア及び星状細胞の定量化は、ブレグマからＰ０．２乃至０．８ｍｍの範囲内で標本化した切片において行った。異なるタイプの星状細胞を含む各ゾーンの面積を計測し、創傷領域を各ゾーンが占める割合を算出した（Ｓｔａｔｉｓｔｉｃａ  ｓｏｆｔｗａｒｅ、ＳｔａｔＳｏｆｔ社、米国）。ミクログリアの種類は各ゾーンで個別に計数した。細胞数をゾーン面積で除算して、細胞密度を測定した。
【０１４１】
ＮＴ免疫反応性星状細胞の各量的分析用に、各ラットから３つの切片を標本化した。側脳室と境を接する４つの脳部位において、及び、海馬のＣＡ１領域において、ＮＴ免疫反応性を、下記のスコアリングシステムによって評価した：０＝ＮＴ陽性星状細胞がない；１＝星状細胞線維にＮＴ陽性染色があるが、細胞体にはない、４０倍領域につき約７の星状細胞がある；２＝星状細胞線維及び細胞体にＮＴ陽性染色がある、４０倍領域につき約２０の星状細胞がある；３＝ＮＴ陽性の星状細胞が部位の至る所に存在している；４＝ＮＴ陽性の星状細胞が部位の至る所に存在し、強く染色されている。
【０１４２】
コリンエステラーゼ及びモノアミンオキシダーゼ活性
ラットの皮質及び海馬におけるＣｈＥ活性への慢性ラドスチギル治療の効果は、１２匹のラット（うち３匹は水で治療し、９匹はラドスチギルで治療した）へのｉｃｖＳＴＺの１週間後に測定した。ラドスチギル１又は１７ｍｇ／ｋｇでの急性投与の効果を、薬物投与２時間後に測定した。そこで最大のＣｈＥ阻害が見られる薬物の最終投与の１２０分後に（Ｗｅｉｎｓｔｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，２０００）、ラットを頚部脱臼により安楽死させた。脳を素早く除去して、氷上の生理食塩水で洗浄し、皮質、海馬及び線条体を切り離して、素早く計量し、アッセイまで−７０℃で保管した。皮質及び海馬中のＣｈＥ活性を、「Ｗａｎｇ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｅｎｄｅｒ  ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｒｉｖａｓｔｉｇｍｉｎｅ  ｏｎ  ｂｒａｉｎ  ｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ  ａｎｄ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｒａｔｓ，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（２０００）３９：４９７−５０６」に記載されているように計測した。この計測には、１ｍｌのリン酸バッファ中の１００ｍｇの組織のホモジェネートを用いて、基質とアセチルチオコリン（Ｓｉｇｍａ社）を用いて、「Ｅｌｌｍａｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ａ  ｎｅｗ  ａｎｄ  ｒａｐｉｄ  ｃｏｌｏｒｉｍｅｔｒｉｃ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｃｅｔｙｌｃｈｏｌｉｎｅｓｔｅｒａｓｅ  ａｃｔｉｖｉｔｙ，Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（１９６１）７：８８−９５」の分光光度法を使用した。ブチリルコリンエステラーゼ（ＢｕＣｈＥ）活性のみを測定するために、バッファの組織／ｍｌの量を３倍に増加し、ブチリルチオコリン（Ｓｉｇｍａ社）を基質として利用した。ＭＡＯ  Ａ及びＢ活性は、「Ｗｅｉｎｓｔｏｃｋ  ｅｔ  ａｌ．，Ｌｉｍｉｔｅｄ  ｐｏｔｅｎｔｉａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｂｌｏｏｄ  ｐｒｅｓｓｕｒｅ  ｒｅｓｐｏｎｓｅ  ｔｏ  ｏｒａｌ  ｔｙｒａｍｉｎｅ  ｂｙ  ｂｒａｉｎ−ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｍｏｎｏａｍｉｎｅ  ｏｘｉｄａｓｅ  Ａ−Ｂ  ｉｎｈｉｂｉｔｏｒ，ＴＶ−３３２６  ｉｎ  ｃｏｎｓｃｉｏｕｓ  ｒａｂｂｉｔｓ，Ｎｅｕｒｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ（２００２）４３：９９９−１００５」に記載されているように、線条体のホモジェネート内で測定した。
【０１４３】
物体及び位置認識
物体認識テストにおけるエピソード記憶は、１回のｉｃｖへのＳＴＺ注射２週間後では損なわれていないが、４週間後に損なわれた（表３）。故に、ラドスチギル又は水で治療したラットを、ＳＴＺ又はＣＳＦのｉｃｖ注射の４週間後に物体及び位置認識についてテストした。物体認識テストは、老年認知症に主として影響を及ぼすエピソード記憶の特徴を用いて、非空間的作業記憶を測定した（Ｂａｒｔｏｌｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｎｉｒａｃｅｔａｍ  ｒｅｓｔｏｒｅｓ  ｏｂｊｅｃｔ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ｉｍｐａｉｒｅｄ  ｂｙ  ａｇｅ，ｓｃｏｐｏｌａｍｉｎｅ，ａｎｄ  ｎｕｃｌｅｕｓ  ｂａｓａｌｉｓ  ｌｅｓｉｏｎｓ，Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｅｈａｖ．（１９９６）５３：２７７−８３)。このテストは無傷の皮質及び海馬機能に依存しているが（Ｗｉｎｔｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｄｏｕｂｌｅ  ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｂｅｔｗｅｅｎ  ｔｈｅ  ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｐｅｒｉ−ｐｏｓｔｒｈｉｎａｌ  ｃｏｒｔｅｘ  ａｎｄ  ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｌｅｓｉｏｎｓ  ｏｎ  ｔｅｓｔｓ  ｏｆ  ｏｂｊｅｃｔ  ｒｅｃｏｇｎｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  ｓｐａｔｉａｌ  ｍｅｍｏｒｙ：ｈｅｔｅｒｏｇｅｎｅｉｔｙ  ｏｆ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｗｉｔｈｉｎ  ｔｈｅ  ｔｅｍｐｏｒａｌ  ｌｏｂｅ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｓｃｉｅｎｃｅ（２００４）２４：５９０１−８）、空間的記憶の別の症状である位置認識は、無傷の海馬機能に依存する。実験は「Ｍｕｍｂｙ  ｅｔ  ａｌ．，Ｈｉｐｐｏｃａｍｐａｌ  ｄａｍａｇｅ  ａｎｄ  ｅｘｐｌｏｒａｔｏｒｙ  ｐｒｅｆｅｒｅｎｃｅｓ  ｉｎ  ｒａｔｓ：ｍｅｍｏｒｙ  ｆｏｒ  ｏｂｊｅｃｔｓ，ｐｌａｃｅｓ，ａｎｄ  ｃｏｎｔｅｘｔｓ，Ｌｅａｒｎｉｎｇ  Ｍｅｍｏｒｙ（２００２）９：４９−５７」で上述したように、黒いパースペクス（６０×６０ｃｍ及び高さ５０ｃｍ）で作られ、黒いパースペクスのふたでカバーした箱の中で行われた。物体に興味を持たせるために、ラットは３連続日の各々の日に５分間、テストアリーナに配置することによって、テストアリーナに親しませ、物体認識テストを４日目に行った。２つの同一の物体を、アリーナ内に配置して、３分の期間中にラットが各物体を探索するのにかかった時間が記録された。１時間後、物体は第１のテストで用いた２つと同一の物体を、それらと異なる第２の物体に置き換えて、各物体を探索するのにかかった時間を記録した。次の日、位置認識テストを、上述のように２つの同一の、しかし以前に用いた物体とは異なる物体で行った。１時間後、「Ｍｕｍｂｙ  ｅｔ  ａｌ．（上述）」に述べられているようにアリーナ内の別の位置へ２つの物体のうちの１つを移動させた。
【０１４４】
水迷路内での空間記憶
位置認識タスクの２週間後、ラットをモーリス水迷路（ＭＷＭ）における空間的記憶についてテストした。ＭＷＭは、深さ３０ｃｍまで２２±１℃の温度の水で満たした環状プール（直径１５０ｃｍ、高さ６０ｃｍ）からなっていた。透明なガラスの逃避用プラットフォーム（直径２０ｃｍ）を、全ての取得試験用に残した四分円内に、プールの中央と縁の途中の表面の１センチ下方に配置した。データ分析用に、タンクを４つの四分円、北（Ｎ）、南（Ｓ）、東（Ｅ）、西（Ｗ）に分割した。データ収集及び分析の双方を、自動ビデオ追跡システム（ＨＶＳ社）を用いて行った。各試験を開始するために、プールの周囲に均等に区切られた４つのスタート位置（Ｎ、Ｓ、Ｅ及びＷ）のうちの１つから、水迷路に面して、ラットを水中に配置した。スタート位置は、全てのラットについて各日の開始時にランダムに選択した。ラットが１２０秒以内に逃避用プラットフォームをみつけられなかった場合、１０秒間プラットフォームにおいて、その後プールから移動させた。１５分間の試験間のインターバルで、５日間、１０：００から１４：００の間に１日２回の試験をラットに行った。
【０１４５】
データ分析
物体及び位置認識テストの３回の測定の群平均、第１及び第２段階の探索時間、及び識別指数について一方向ＡＮＯＶＡを行った。各群におけるＭＷＭでの試験１と試験２についての毎日の逃避時間（ｅｓｃａｐｅ  ｌａｔｅｎｃｙ）の平均は、日（ＤＡＹ）及び群（ＧＲＯＵＰ）についての反復測定ＡＮＯＶＡで分析し、必要に応じて、その後のダンカンの検定によって分析した。組織学的データは、一変量ＡＮＯＶＡ，その後のダンカンの事後テストによって分析した。全ての値は平均±ＳＥＭで示す。
【０１４６】
結果
カニューレ穿通部位の近傍におけるミクログリア及び星状細胞の変化
ｉｃｖへのＳＴＺの７日後、カニューレ穿通部位近傍の運動皮質及び帯状皮質において認められる３つの神経膠症のゾーンを図２に示した。ゾーンｉ）は、マクロファージに似ているが、ほとんど星状細胞がない、突起のない円形の細胞体を有するミクログリアを含み；ゾーンｉｉ）は、多型の細胞体と様々な線維性突起で活性化されたミクログリアと、伸長した突起で活性化されているが、細胞体を有しない星状細胞を含み；ゾーンｉｉｉ）はＣＳＦ注射したコントロールのそれに似た常在性ミクログリアと、太くなった突起と充填された細胞体を有する反応性星状細胞を含んでいた。ラドスチギルは、ミクログリア中の変化ゾーンｉ）及びｉｉｉ）中のＳＴＺのｉｃｖ注射による星状細胞の変化の双方を予防したが、ＣＳＦ注射したコントロールのそれに似たゾーンｉｉ）の線維性ミクログリアの密度には影響しなかった（図３ａ、ｂ）。
【０１４７】
海馬においては、グリア細胞へのＳＴＺの効果があまり明確ではなかった。反応性星状細胞は、散らばった集団内にあり、そのほとんどはＣＡ１領域で発見された。反応性星状細胞はまた、脳梁や、側脳質の近くの外側及び内側中隔にも見られたが、その他の領域にはほとんど星状細胞がなかった。これらの全ての領域において、星状細胞はＮＴ免疫反応性の有意な増加を示した（図４及び５）。ラドスチギル治療は、これらの脳部位での星状細胞活性とＮＴ免疫反応性の双方を、ＣＳＦ注射したコントロールのレベルへと減じた（図４及び６）。
【０１４８】
ｉｃｖへのＳＴＺ注射の８週間後、カニューレ穿通部位は、以前になかった部分も含み、反応性のない密に充填された星状細胞線維で満たされた瘢痕組織を含んでいた。瘢痕の周りには、数個の反応性星状細胞はあるが、瘢痕の中又は周りに、円形又は繊維性の反応性ミクログリアはなかった。ラドスチギルの有無で、ｉｃｖへＳＴＺを注射したラットの瘢痕形態において、違いは検出されなかった。どの脳部位の星状細胞にも、初期にはあったＮＴ免疫反応性の徴候はなかった。
【０１４９】
コリン作動性マーカ
コリン作動性ニューロンの数と形態における変化は、ｉｃｖへのＳＴＺ注射の１乃至８週間後に、前脳基底核、内側中隔、対角帯、基底核大細胞部のいずれにも変化が検出されなかった。ＶＡＣｈＴの免疫反応性結節状構造及び軸索突起に基づく海馬のコリン作動性末端密度にも変化はなかった。
【０１５０】
コリンエステラーゼ及びモノアミンオキシダーゼ活性
全酵素活性に対するラドスチギル（１ｍｇ／ｋｇ）での慢性治療の効果と、ＢｕＣｈＥの効果を、表２に示す。
【０１５１】
表２：ラドスチギルによるコリンエステラーゼとモノアミンオキシダーゼの阻害
【表２】
2009518433.tif 000003
【０１５２】
比較的低いが有意な阻害度が皮質で見られた、ｉｃｖへのＳＴＺの７日後、及びラドスチギルの最終投与の１乃至２時間後に、全酵素活性の（２４％）とＢｕＣｈＥの１６％。プラズマは、２０％阻害されたが、どちらの酵素も有意な阻害が海馬で検出されなかった。ラドスチギル治療はまた、線条体のＭＡＯ−Ａ活性には効果がなく、２時間後にＭＡＯ−Ｂの活性を１５％減少させただけであった（表２）。
【０１５３】
ラドスチギルの急性投与（１ｍｇ／ｋｇ）は、皮質で７．８±１．５％ＣｈＥを阻害したのみで、海馬又はプラズマでは阻害しなかった。一方、１７ｍｇ／ｋｇの投与では、脳部位とプラズマの両方で４０乃至４２％ほどＣｈＥを阻害した。
【０１５４】
物体及び位置認識
物体及び位置認識テストの結果を表３に示す。
【０１５５】
表３：様々な治療を行った場合の物体の識別指数§及び位置認識‡テスト
【表３】
2009518433.tif 000004
データは平均±ｓ．ｅ．ｍで表わす。
§識別指数＝新しい物体を探索する時間−類似した物体を探索する時間／双方の物体の総探索時間
‡新しい位置の物体を探索する時間−元の位置の物体を探索する時間／双方の物体の総探索時間
ＮＴ＝テストせず
０からの有意な差、＊＊Ｐ＜０．０１、＊＜０．０５；ＣＳＦからの有意な差、＃Ｐ＜０．０１
【０１５６】
物体及び位置認識テストの識別段階において、ラットが双方の物体を探索するのにかかった全時間は群の間で違いがなかった。しかし、ｉｃｖへＣＳＦを与えたラット又はラドスチギルとともにｉｃｖへＳＴＺを与えたラットは、双方のテストにおいて有意な識別指数を示した（有意に＞０、Ｐ＜０．０５）が、ｉｃｖへのＳＴＺのみを与えたラットは、そうならなかった。これは、ラドスチギルが、ｉｃｖへのＳＴＺによって誘発されたエピソード及び空間記憶の障害を防止したことを示している。
【０１５７】
ラドスチギルは、ＳＴＺのｉｃｖ注射の４週間後に、１ｍｇ／ｋｇの単回投与が与えられた場合は、エピソード記憶の欠損に効果がない。しかし、１７ｍｇ／ｋｇに増やすと、記憶欠損は消失するが、ＣｈＥはそれ以上阻害されないので２日後に元に戻る。
【０１５８】
空間記憶テスト
試験１の反復測定ＡＮＯＶＡは、日（ＤＡＹ）について有意な効果を示した（Ｆ４，２６＝２５．６７、Ｐ＜０．０００１）が、群（ＧＲＯＵＰ）×日（ＤＡＹ）の有意な相互作用は示さなかった。５日にわたる、群の平均用の事後テストは、ｉｃｖへのＳＴＺのみを与えられたラットが、ＣＳＦ又はＳＴＺを注射され、ラドスチギルで治療されたラットよりも、有意に高い潜伏性を有することを示している。試験２でも、日（ＤＡＹ）について高い有意な効果を示した（Ｆ４，２６＝２３．０、Ｐ＜０．０００１）が、群（ＧＲＯＵＰ）×日（ＤＡＹ）の有意な相互作用は示さなかった（図６）。異なるラット群のいずれの日の逃避時間においても、試験１と２の間に有意な差異はなく、ｉｃｖ−ＳＴＺは、本テストにおいて作業記憶を有意に損わないことを示していた。
【０１５９】
考察
ラットにおけるＳＴＺのｉｃｖ注射は、ＡＤの早期の病態生理学的変化のモデルとして提唱されており（Ａｒｎａｉｚ  ｅｔ  ａｌ，Ｉｍｐａｉｒｅｄ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ａｎｄ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｆｕｎｃｔｉｏｎｉｎｇ  ｐｒｅｄｉｃｔ  ｄｅｔｅｒｉｏｒａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｍｉｌｄ  ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ，Ｎｅｕｒｏｒｅｐｏｒｔ（２００１）１２：８５１−５）、記憶欠損の誘発前に反応性神経膠症及び酸化窒素ストレスを誘発し、ラドスチギルでの事前治療によってこれらの効果を防止することができる。反応性神経膠症は、カニューレ穿通部位である海馬のＣＡ１領域に近傍の帯状皮質と運動皮質中、及び側脳室近傍の内側及び外側中隔である脳梁中のミクログリア及び星状細胞の双方に関係する。酸化窒素ストレスの兆候は、カニューレ穿通部位の近く、海馬のＣＡ１領域、側脳室の境界部位の星状細胞にＮＴ免疫反応性として見られる。２乃至５週間後に、エピソード及び空間記憶の障害が続くが、皮質又は海馬内の特別なコリン作動性マーカには、ニューロンの障害又は減少の徴候はない。
【０１６０】
細胞培地中にＮＯドナーによって誘発される細胞毒性を保護する新規の二機能性ＣｈＥ及びＭＡＯ阻害剤である、ラドスチギル（１ｍｇ／ｋｇ）を用いたＳＴＺのｉｃｖ注射前１週間及び注射後１週間の事前治療は、カニューレ穿通及び海馬領域の近くで、ミクログリア活性及び星状細胞の損失を防ぎ、ＮＴ免疫反応の増加を防ぐ。記憶欠損の発生を３週間後に防いだ。
【０１６１】
ミクログリアは微小環境の変化に非常に感受性があり、感染、脳損傷に応じて、及び血液脳関門が破壊されると、容易に活性化する（ＭｃＧｅｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，Ｉｎｆｌａｍｍａｔｏｒｙ  ｐｒｏｃｅｓｓｅｓ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｐｒｏｇ．Ｎｅｕｒｏ−Ｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｐｓｙｃｈｉａｔｒｙ（２００３）２７：７４１−９）。ＳＴＺのｉｃｖ注射が、活性化したミクログリアの数をかなり増大させることが示され、これはカニューレ穿通部位の近傍、海馬、及び側脳室の境界部位において、細胞内突起が短くなる及び細胞体が拡大することによって特徴づけられる。最も高い活性化ミクログリア濃度を示す皮質及び海馬の領域は、ＣＳＦ注射したラットよりも更に星状細胞密度が低かった。ミクログリアによるニューロンに有害な炎症誘発性及び神経毒性のサイトカイン、ＮＯ及びスーパオキシドの分泌によってこれらを消失させることができた（ＭｃＣａｒｔｙ  ｅｔ  ａｌ．２００６）。星状細胞はグルタミン酸塩を隔絶するのに重要であるので、星状細胞の損失は過剰なグルタミン酸活性と興奮毒性ストレスを引き起こすことがある（Ｌｉｐｔｏｎ  ａｎｄ  Ｒｏｓｅｎｂｅｒｇ，１９９４）。この示唆を支持するように、グルタミン酸拮抗薬であるメマンチンが、ラットにおけるＡβ（１−４０）のｉｃｖ注射後に見られたミクログリアと星状細胞の活性化を低減し、記憶欠損を減じたことが示されている（Ｍｉｇｕｅｌ−Ｈｉｄａｌｇｏ  ｅｔ  ａｌ．，Ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｂｙ  ｍｅｍａｎｔｉｎｅ  ａｇａｉｎｓｔ  ｎｅｕｒｏｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ  ｉｎｄｕｃｅｄ  ｂｙ  ｂｅｔａ−ａｍｙｌｏｉｄ（１−４０），Ｂｒａｉｎ  Ｒｅｓ．（２００２）９５８：２１０−２１）。
【０１６２】
隣接する皮質穿通ゾーンにおいて、主な形態のミクログリアは、様々な線維性突起を有する多型の細胞体を有していた。これらは、長い線維性突起を有する多数の活性化星状細胞を含んでおり、ＲＯＳによって誘発され、老齢ラットにおいて増加したＧＦＡＰ免疫活性化を示す（Ｆｉｎｃｈ，Ｎｅｕｒｏｎｓ，ｇｌｉａ，ａｎｄ  ｐｌａｓｔｉｃｉｔｙ  ｉｎ  ｎｏｒｍａｌ  ｂｒａｉｎ  ａｇｉｎｇ，Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．Ａｇｉｎｇ（２００３）２４：Ｓ１２３−７）。このゾーンのミクログリアは、ＣＳＦ注射のラットのミクログリアの密度と相異がなく、ＧＦＡＰの生成を刺激するが、星状細胞に対する毒性があるサイトカインを放出しなかったことを示唆していた。
【０１６３】
活性化した星状細胞は、ＳＴＺ注射したラットの海馬の様々な部位にも見られ、ｉｃｖへのＣＳＦ後よりも有意に大きい量のＮＴが含まれていた。これは、ＳＴＺの非経口投与後に膵臓で見られるような、ＳＴＺによるＲＯＳの誘発によるものであり（Ｔａｋａｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，１９９１）、老齢のげっ歯類やヒトにも見られる。ＮＯとスーパオキシドは、星状細胞内及び隣接ニューロン内のミトコンドリア機能と細胞内エネルギを変えることが示されている（Ｂｏｌａｎｏｓ  ｅｔ  ａｌ．，Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｂｙ  ｎｉｔｒｏｓａｔｉｖｅ  ｓｔｒｅｓｓ  ｉｎ  ｎｅｕｒａｌ  ｃｅｌｌｓ，Ｍｏｌ．Ａｓｐｅｃｔｓ  Ｍｅｄ．（２００４）２５：６１−７３）。増加したＮＴ免疫反応性と抑制されたミトコンドリア機能を含む同様の変化がＡＤの対象の脳内に見られる（Ｆｉｎｃｈ，２００３）。これは前述したｉｃｖへのＳＴＺにより誘発されたグルコース代謝の変化を説明することができた（Ｎｉｔｓｃｈ  ｅｔ  ａｌ．，Ｔｈｅ  ｉｎｔｒａｃｅｒｅｂｒｏｖｅｎｔｒｉｃｕｌａｒｌｙ  ｓｔｒｅｐｔｏｚｏｔｏｃｉｎ−ｔｒｅａｔｅｄ  ｒａｔ：ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ  ｏｆ  ｃｅｒｅｂｒａｌ  ｇｌｕｃｏｓｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｒｅｓｅｍｂｌｅｓ  ｔｈｅ  ａｌｔｅｒａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｂｒａｉｎ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，Ｊ．Ｎｅｕｒａｌ  Ｔｒａｎｓｍ．（１９８９）１：１０９−１０)。活性化した星状細胞のＧＦＡＰ発現の増加は、シナプス機能の低下にも寄与し、最終的に空間及びエピソード記憶に影響を及ぼす。酸化窒素ストレスに関連する神経膠症の存在は、ＡＤにおいて報告されており（Ｇｒｉｆｆｉｎ  ｅｔ  ａｌ．，Ｇｌｉａｌ−ｎｅｕｒｏｎａｌ  ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ：ｔｈｅ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｒｏｌｅ  ｏｆ  ａ  ‘ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ｃｙｃｌｅ’  ｉｎ  ｄｉｓｅａｓｅ  ｐｒｏｇｒｅｓｓｉｏｎ，Ｂｒａｉｎ  Ｐａｔｈｏｌ．（１９９８）８：６５−７２）、ミトコンドリア機能を抑制することができた。活性化した星状細胞の増加したＧＦＡＰ発現は、シナプス機能の低下に関連する（Ｆｉｎｃｈ，２００３）。従って、ｉｃｖへのＳＴＺ後に見られるＧＦＡＰの増加は、測定可能なコリン作動性マーカの損失を引き起こすことなく、空間（位置認識）及びエピソード記憶（物体認識テスト）の障害に寄与する。ｉｃｖへのＳＴＺにより誘発される帯状皮質（両側のカニューレ間に位置する）の部分的隔離は、カニューレ穿通部位周りに形成された神経膠瘢痕が全ての表層と脳梁を含むので、エピソード記憶の欠損を説明することができた。この瘢痕は、物体認識に重要な帯状皮質と鼻周囲皮質との結合を分離することができた（Ｗｉｎｔｅｒｓ  ｅｔ  ａｌ．，２００４）。ミクログリア活性の位置、つまり星状細胞形態の変化、及びグルコース代謝と記憶の欠損の発現に先行する酸化窒素ストレスは、ＡＤにおける早期の病態生理学上の変化のモデルとしての、ＳＴＺのｉｃｖ注射したラットの正当性を支持している。
【０１６４】
ラドスチギルは抗酸化剤ではないが、低濃度で、培養した神経細胞のＲＯＳ及びＮＯにより誘発された細胞毒性を防ぐことが示されてきた（Ｙｏｕｄｉｍ  ａｎｄ  Ｗｅｉｎｓｔｏｃｋ，２００１）。本研究では、ＳＴＺ注射前後の低用量でのラドスチギルの慢性投与が、ミクログリアの変性を有意に減じ、星状細胞がＮＴ免疫活性の増加と、３週間後に、エピソード記憶欠損の発生を防いだ。ラドスチギルによる物体認識の損失の防止が、皮質中の２８％のＣｈＥ阻害が原因となることはありうる。しかし、これは海馬のコリン作動性活性に依存し、ＣｈＥ阻害が生じていなかった位置認識についての効果を説明できない。従って、ラドスチギルの神経保護効果は、薬物の他の作用が原因であった可能性がある。この作用には、我々の研究室の実験の予備データに示されるようなミクログリアの直接的な効果が含まれ、０．１乃至１０μＭの濃度で、ＬＰＳにより誘発される培養したミクログリアからのＮＯ放出が２０乃至４０％減じた。これらの濃度は低すぎて、ミクログリアのＣｈＥを阻害することができない。ラドスチギル（０．１乃至１０μＭ）は、ミトコンドリアの膜電位の低下を１４減ずることによって、ＮＯドナーのＳｉｎ１に曝露したドーパミン作動性の神経芽細胞種のＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞におけるアポトーシスも防いだ（Ｍａｒｕｙａｍａ  ｅｔ  ａｌ．，２００３）。この作用はおそらくはＭＡＯ又はＣｈＥ阻害を原因とするものではない。なぜならばこれらの酵素に効果がないその他のプロパルギルアミンを含むアミノインダン誘導体によって、この作用が共有されるからである。
【０１６５】
ラドスチギル（１ｍｇ／ｋｇ）を用いた日に一度の慢性治療は、活性化したミクログリアの数を減少させ、ｉｃｖへのＳＴＺ注射後のカニューレ穿通部位のゾーン（ｉ）の星状細胞を、ＣＳＦの注射後に見られる星状細胞に回復させた。前記慢性治療は、これらの間に病原学的な連結を提供する、ＮＴ免疫反応性の増加と記憶欠損の発生も防いだ。ラドスチギルがこれらの抗炎症性及び神経保護効果をもたらすメカニズムは、十分にはわかっていない。１つの可能性はラドスチギルがＡＣｈＥ阻害の結果として間接的にα７ニコチンレセプタを活性化することである（Ｓｈｙｔｌｅ  ｅｔ  ａｌ．，Ｃｈｏｌｉｎｅｒｇｉｃ  ｍｏｄｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｍｉｃｒｏｇｌｉａｌ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｂｙ  ａｌｐｈａ  ７  ｎｉｃｏｔｉｎｉｃ  ｒｅｃｅｐｔｏｒｓ，Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．（２００４）８９：３３７−４３）。このような作用は、約２０％のＡＣｈＥ阻害をもたらす皮質の神経膠症の防止におそらく寄与しているが、有意なＡＣｈＥ阻害が生じない海馬でのＮＴ免疫反応性と星状細胞活性の顕著な低下を説明することができない。神経保護は１５％を超えないＭＡＯ−Ｂ阻害が原因ではない。よりもっともらしい説明は、ミクログリアから放出されたＮＯ及びスーパオキシドの陰イオンにより誘発されるミトコンドリア膜電位の低下を防ぐことによって、ラドスチギルがニューロンと星状細胞の双方でアポトーシスと細胞死を減じていることである（Ｔａｋｕｍａ  ｅｔ  ａｌ．，Ａｓｔｒｏｃｙｔｅ  ａｐｏｐｔｏｓｉｓ：ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｐｒｏｇ．Ｎｅｕｒｏｂｉｏｌ．（２００４）７２：１１１−１２７）。このようなラドスチギルの作用は、ＮＯドナーであるＳｉｎ１に曝露したドーパミン作動性の神経芽細胞種のＳＨ−ＳＹ５Ｙ細胞にみられる。
【０１６６】
約８％のＣｈＥを阻害しただけのラドスチギルの急性投与（１ｍｇ／ｋｇ）では、一旦記憶欠損が生じたらそれを取り戻すことはできなかった。これは、皮質のＣｈＥを４０％阻害するより大きな用量で達成された。データは低用量のラドスチギルの慢性投与によって誘発される神経膠症、酸化窒素ストレス、及び記憶欠損の防止は、ニューロン細胞とグリア細胞の作用の組合せに起因することを示唆している。ＣｈＥを阻害する能力は、エピソード記憶の効果を寄与する。
【０１６７】
実施例３
軽度認知障害（ＭＣＩ）の臨床症状は、その年齢に期待される以上にヒトが記憶欠損を経験する状態である（Ｐｅｔｅｒｓｅｎ  ｅｔ  ａｌ．，２００１）。ＭＣＩを伴う対象の有意な割合が、数年以内にアルツハイマ型の認知症（ＡＤ）にかかる。ＣｈＥ阻害剤は、ＡＤにおける軽度障害の進行を遅らせるが、ＭＣＩのＡＤへの進行を遅らせることができるのか、あるいは、防ぐことができるのかはまだ知られていない。ヒトと同様に、ラットは、皮質錐体細胞上のコリン作動性の神経末端の数及び大きさの減少に関連する、年齢に比例した記憶欠損を発現する（Ｔｕｒｒｉｎｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００１，Ｃａｓｕ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。１８月齢で、ラットは既に皮質及び海馬におけるＡＣｈ放出の４０乃至５０％の低下を示す。この記憶欠損を改善する用量でＣｈＥ阻害剤の急性投与することによってこれを標準レベルへと増加させることができる（Ｓｃａｌｉ  ｅｔ  ａｌ．，２００２）。しかし、どのＣｈＥ阻害剤、特にラドスチギル、が、老齢ラットの記憶障害の進行を防ぐのかはわかっておらず、どの用量が有効であるのかもわかっていない。
【０１６８】
実験にはウィスター系オスラット３０匹を用いた。１６月齢で、８０％が完全な物体認識を示し、９０％の３月齢のラットと比較した。ラットは２１℃の周囲温度で２匹１組で収容した。週に１回計量され、水分摂取は２週の間は毎日、残りの４ヶ月は週２回測定した。１０匹のラットは、１６月齢の時に、飲料水内にラドスチギル１ｍｇ／ｋｇ／日の投与を開始し、４ヶ月間薬物を与えた。同月齢の残りの１０匹のラットには通常の飲料水を与えた。この４ヶ月の最後に、これらの２０匹のラットと別の３月齢の１０匹のラットの空間記憶を前述のようにモーリス水迷路でテストした（Ｓｈｏｈａｍ  ｅｔ  ａｌ．，２００６）。
【０１６９】
老齢の未治療ラットは、若齢ラットよりも有意に遅い空間学習の取得を示した。若齢ラットと老齢ラットとの間の学習における差異は、低用量のラドスチギル治療によって実質的に消滅した（図１ａ、ｂ）。低用量のラドスチギルを用いた慢性投与は、老齢ラットにおける記憶欠損の発生を防止することができることをデータは示している。
【０１７０】
考察
軽度認知障害（ＭＣＩ）は一般的には軽度な最近の記憶の欠損であって、その他の認知症や認知機能の有意な障害を有しないことを特徴とする状態である。ＭＣＩは老化によって通常予想されるよりも大きな記憶の問題を引き起こすが、ＭＣＩを有するヒトは判断や推理の障害のような認知症のその他の徴候を示していない。ＭＣＩの原因はあまりわかっていない。米国食品医薬品局の諮問委員会は２００１年に、アルツハイマ病とは別の症状であるＭＣＩが、新しい薬物療法の有効なターゲットであると規定した。ＦＤＡ調査会（Ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ａｎｄ  Ｃｅｎｔｒａｌ  Ｎｅｒｖｏｕｓ  Ｓｙｓｔｅｍ  Ｄｒｕｇｓ  Ａｄｖｉｓｏｒｙ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅ）は、軽度認知障害を有する患者のうちの８０％が、１０年以内にアルツハイマ病を発現すると述べている。科学者たちはＭＣＩとアルツハイマ病との関係を理解するために研究している。この障害についての基本的な問題が、まだわかっていないので、ＭＣＩの定義は変化し続けている（Ｍｉｌｄ  Ｃｏｇｎｉｔｉｖｅ  Ｉｍｐａｉｒｍｅｎｔ−Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  Ｐａｒｔ  ＸＶＩ，Ｈａｒｏｌｄ  Ｒｕｂｉｎ，ＭＳ，ＡＢＤ，ＣＲＣ，Ｎｏｖｅｍｂｅｒ  １４，２００６）。
【０１７１】
軽度認知障害は、神経変性ＭＳＩと血管性ＭＳＩという２つの異なるサブタイプがあることが最近示されている。双方を磁気共鳴映像法（ＭＲＩ）により観察すると、神経変性ＭＣＩを有する対象は内側側頭葉萎縮症を示すが、血管性ＭＳＩの対象は、血管病変を呈している。神経変性ＭＣＩの対象は、認知症又はアルツハイマ病への転換の前兆であることが分かっている記憶を含む障害性の認知領域を持っている（Ｍａｙｅｒ  ｅｔ  ａｌ．，２００５）。最近までは、ＭＣＩがアルツハイマ病の前駆体であるという仮説を支持する証拠はほとんどなかったが、Ｍｅｙｅｒらは、ＭＣＩが神経変性障害の形態を取り、後に認知症又はアルツハイマ病の形態を取ることができることを教示している。
【図面の簡単な説明】
【０１７２】
【図１】ＳＴＺの両側脳室（ｉｃｖ）注入から一週間後のＣＡ１領域の３つの海馬領域の星状細胞におけるニトロチロシン免疫反応へのラドスチギルの効果。＊はＣＳＦとＳＴＺ＋ラドスチギル、Ｐ＜０．０１では結果が有意に異なることを示している。
【図２】ａ）ＳＴＺ  ｉｃｖ７日後の、異なるミクログリア及び星状細胞活性を有するカニューレ穿通部位の近傍の３ゾーンを示す脳切片を示す図である。ｂ）ミクログリア：ｙゾーンｉ）ミクログリアが突起のない円形の細胞体を有する；ｉｉ）多型の細胞体と様々な線維性突起を有するミクログリア；ｉｉｉ）無活動のミクログリア。ｃ）星状細胞：ゾーンｉ）星状細胞なし；ｉｉ）伸張した突起は有するが細胞体のない星状細胞；ｉｉｉ）太くなった突起と充填した細胞体を有する反応性星状細胞。ｂ）及びｃ）の領域ボックスを、それぞれｄ）及びｅ）に高倍率で示す。目盛りバーはｂ）及びｃ）では、１００μｍ、ｄ）及びｅ）においては２０μｍである。
【図３】図２に示したゾーン内でのミクログリア及び星状細胞の活性化の定量化。ａ）ゾーンｉ）及びｉｉ）におけるミクログリアのサブタイプの計数。ｂ）ゾーンｉ）、ｉｉ）及びｉｉｉ）によって占められている創傷横断領域の割合。ＳＴＺ注入ラットではゾーン（ｉ）において、星状細胞のない領域が大きい。その他の群と有意に異なっている。＊＊Ｐ＜０．０１、＊Ｐ＜０．０５。
【図４】カニューレ穿通部位及び側脳室に接する３つのその他の部位におけるＮＴ発現を有する星状細胞の定量化。ＣＰ＝カニューレ穿通部位；ＣＣ＝脳梁；ＬＳ＝外側中隔；ＭＳ＝内側中隔；ＨＰ＝海馬ＣＡ１野。他の群とは有意に異なっている。＊＊Ｐ＜０．０１。
【図５】海馬の反応性星状細胞におけるＮＴ発現の共焦点顕微鏡写真であり、活性化星状細胞におけるＮＴ免疫反応の局在化を含んでいる。
【図６】ｉｃｖ  ＳＴＺによって誘発される、モーリス水迷路における空間記憶欠乏へのラドスチギルの効果。ａ）試験１；ｂ）試験２。その他の群と＊Ｐ＜０．０５で有意に異なっている。
【図７】モーリス水迷路（ＭＷＭ）での若齢及び老齢ラットの空間学習の比較。１ｍｇ／ｋｇのラドスチギルによって老齢ラットの学習欠乏を防止；ａ）１日２回の試験の各々での逃避時間を示す。ラドスチギルを伴う慢性治療によって予防された老齢未治療ラットの逃避学習の変異性が日毎に大きくなることに留意；ｂ）１日２回の試験の平均逃避時間。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【国際調査報告】
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