(57)【要約】【解決手段】  配列ＩＤ番号：７７および配列ＩＤ番号：７８によって定義されるｓｉＲＮＡ（低分子干渉ＲＮＡ）を含有する、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡを、対象の視力を安定化し、脈絡膜血管新生傷害を阻害し、加齢黄斑変性症を治療し、糖尿病黄斑浮腫を治療し、また、対象の網膜中心窩の厚さを縮小するのに使用する方法の実施形態が提供される。更に、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡとｓｉＲＮＡでないＶＥＧＦ拮抗薬とを含む複合治療を投与することによって、加齢黄斑変性症および糖尿病性黄斑浮腫を治療する方法が記載されている。【選択図】      図３
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【特許請求の範囲】
【請求項１】
対照における視力を安定化する方法であって、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖及び配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を有するｓｉＲＮＡの有効な量を前記対象に投与する工程を有するものである、方法。
【請求項２】
請求項１記載の方法において、前記センス及びアンチセンスＲＮＡ鎖は、ヌクレアーゼ分解に対して安定化されているものである。
【請求項３】
請求項１記載の方法において、前記ｓｉＲＮＡは、眼球内投与経路によって投与されるものである。
【請求項４】
請求項３記載の方法において、前記眼球内投与経路は、硝子体内、網膜内、網膜下、テノン下、眼窩周囲及び後眼窩、トランス−角膜、及びトランス−強膜投与から選択されるものである。
【請求項５】
請求項１記載の方法において、この方法は、さらに、
ＶＥＧＦアンタゴニストを投与する工程を有するものである。
【請求項６】
請求項５記載の方法において、前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、ベバシズマブ及びラニビズマブから選択されるヒトＶＥＧＦを標的化したモノクローナル抗体である。
【請求項７】
請求項５記載の方法において、前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、ラニビズマブである。
【請求項８】
請求項１記載の方法において、前記有効な量は、約０．５〜約５ｍｇである。
【請求項９】
請求項１記載の方法において、前記有効な量は、約２．５ｍｇである。
【請求項１０】
請求項１記載の方法において、前記ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効な量は、４週間毎に投与されるものである。
【請求項１１】
請求項１記載の方法において、前記ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効な量は、８週間毎に投与されるものである。
【請求項１２】
請求項１記載の方法において、前記ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効な量は、１２週間毎に投与されるものである。
【請求項１３】
対象における脈絡膜新血管新生を阻害する方法であって、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖及び配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を有するｓｉＲＮＡの有効な量を前記対象に投与する工程を有するものである、方法。
【請求項１４】
請求項１３記載の方法において、前記センス及びアンチセンスＲＮＡ鎖は、ヌクレアーゼ分解に対して安定化されているものである。
【請求項１５】
請求項１３記載の方法において、前記ｓｉＲＮＡは、眼球内投与経路によって投与されるものである。
【請求項１６】
請求項１５記載の方法において、前記眼球内投与経路は、硝子体内、網膜内、網膜下、テノン下、眼窩周囲及び後眼窩、トランス−角膜、及びトランス−強膜投与から選択されるものである。
【請求項１７】
請求項１３記載の方法において、この方法は、さらに、
ＶＥＧＦアンタゴニストを投与する工程を有するものである。
【請求項１８】
請求項１７記載の方法において、前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、ベバシズマブ及びラニビズマブから選択されるヒトＶＥＧＦを標的化したモノクローナル抗体である。
【請求項１９】
請求項１７記載の方法において、前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、ラニビズマブである。
【請求項２０】
請求項１３記載の方法において、前記有効な量は、約０．５〜約５ｍｇである。
【請求項２１】
請求項１３記載の方法において、前記有効な量は、約２．５ｍｇである。
【請求項２２】
請求項１３記載の方法において、前記ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効な量は、４週間毎に投与されるものである。
【請求項２３】
請求項１３記載の方法において、前記ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効な量は、８週間毎に投与されるものである。
【請求項２４】
請求項１３記載の方法において、前記ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効な量は、１２週間毎に投与されるものである。
【請求項２５】
対象における糖尿病性黄斑浮腫を治療する方法であって、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖及び配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を有するｓｉＲＮＡの有効な量を前記対象に投与する工程を有するものである、方法。
【請求項２６】
請求項２５記載の方法において、前記センス及びアンチセンスＲＮＡ鎖は、ヌクレアーゼ分解に対して安定化されているものである。
【請求項２７】
請求項２５記載の方法において、前記ｓｉＲＮＡは、眼球内投与経路によって投与されるものである。
【請求項２８】
請求項２７記載の方法において、前記眼球内投与経路は、硝子体内、網膜内、網膜下、テノン下、眼窩周囲及び後眼窩、トランス−角膜、及びトランス−強膜投与から選択されるものである。
【請求項２９】
請求項２５記載の方法において、この方法は、さらに、ＶＥＧＦアンタゴニストを投与する工程を有するものである。
【請求項３０】
請求項２９記載の方法において、前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、ベバシズマブ及びラニビズマブから選択されるヒトＶＥＧＦを標的化したモノクローナル抗体である。
【請求項３１】
請求項２９記載の方法において、前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、ラニビズマブである。
【請求項３２】
請求項２５の方法において、前記有効な量は、約０．５〜約５ｍｇである。
【請求項３３】
請求項２５記載の方法において、前記有効な量は、約２．５ｍｇである。
【請求項３４】
請求項２５記載の方法において、前記ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効な量は、４週間毎に投与されるものである。
【請求項３５】
請求項２５記載の方法において、前記ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効な量は、８週間毎に投与されるものである。
【請求項３６】
請求項２５記載の方法において、前記ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効な量は、１２週間毎に投与されるものである。
【請求項３７】
対象における中心窩厚さを減少する方法であって、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖及び配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を有するｓｉＲＮＡの有効な量を前記対象に投与する工程を有するものである、方法。
【請求項３８】
請求項３７記載の方法において、前記センス及びアンチセンスＲＮＡ鎖は、ヌクレアーゼ分解に対して安定化されているものである。
【請求項３９】
請求項３７記載の方法において、前記ｓｉＲＮＡは、眼球内投与経路によって投与されるものである。
【請求項４０】
請求項３９記載の方法において、前記眼球内投与経路は、硝子体内、網膜内、網膜下、テノン下、眼窩周囲及び後眼窩、トランス−角膜、及びトランス−強膜投与から選択されるものである。
【請求項４１】
請求項３７記載の方法において、この方法は、さらに、
ＶＥＧＦアンタゴニストを投与する工程を有するものである。
【請求項４２】
請求項４１記載の方法において、前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、ベバシズマブ及びラニビズマブから選択されるヒトＶＥＧＦを標的化したモノクローナル抗体である。
【請求項４３】
請求項４１記載の方法において、前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、ラニビズマブである。
【請求項４４】
請求項３７記載の方法において、前記有効な量は、約０．５〜約５ｍｇである。
【請求項４５】
請求項３７記載の方法において、前記有効な量は、約２．５ｍｇである。
【請求項４６】
請求項３７記載の方法において、前記ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効な量は、４週間毎に投与されるものである。
【請求項４７】
請求項３７記載の方法において、前記ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効な量は、８週間毎に投与されるものである。
【請求項４８】
請求項３７記載の方法において、前記ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効な量は、１２週間毎に投与されるものである。
【請求項４９】
加齢性黄斑変性を治療する方法であって、ＶＥＧＦアンタゴニストの有効な量と、センスＲＮＡ鎖及びアンチセンスＲＮＡ鎖を有するｓｉＲＮＡの有効な量とを対象に投与する工程を有するものであり、前記センス及びアンチセンスＲＮＡ鎖はＲＮＡ二本鎖を形成し、前記センスＲＮＡ鎖はヒトＶＥＧＦ  ｍＲＮＡにおける約１９〜約２５近接ヌクレオチドの標的配列と同一なヌクレオチド配列を有するものである、方法。
【請求項５０】
請求項４９記載の方法において、前記センスＲＮＡ鎖は、配列ＩＤ番号：７７を有し、前記アンチセンスＲＮＡ鎖は、配列ＩＤ番号：７８を有するものである。
【請求項５１】
請求項４９記載の方法において、前記ｓｉＲＮＡは、眼球内投与経路によって投与されるものである。
【請求項５２】
請求項５１記載の方法において、前記眼球内投与経路は、硝子体内、網膜内、網膜下、テノン下、眼窩周囲及び後眼窩、トランス−角膜、及びトランス−強膜投与から選択されるものである。
【請求項５３】
請求項４９記載の方法において、前記有効な量は、約０．５〜約５ｍｇである。
【請求項５４】
請求項４９記載の方法において、前記有効な量は、約２．５ｍｇである。
【請求項５５】
請求項４９記載の方法において、前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、ｓｉＲＮＡの投与前に投与されるものである。
【請求項５６】
請求項４９記載の方法において、前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、ｓｉＲＮＡの投与後に投与されるものである。
【請求項５７】
請求項４９記載の方法において、前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、ｓｉＲＮＡの投与と同時に投与されるものである。
【請求項５８】
請求項４９記載の方法において、前記ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効な量は、４週間毎に投与されるものである。
【請求項５９】
請求項４９記載の方法において、前記ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効な量は、８週間毎に投与されるものである。
【請求項６０】
請求項４９の方法において、前記ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効な量は、１２週間毎に投与されるものである。
【請求項６１】
請求項４９記載の方法において、前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、ラニビズマブである。
【請求項６２】
請求項６１記載の方法において、前記ラニビズマブは、前記ｓｉＲＮＡの投与２週間前に投与されるものである。
【請求項６３】
請求項６２記載の方法において、前記ｓｉＲＮＡは、４週間毎に投与され、前記ラニビズマブは、交互に（ｏｎ  ａｎ  ａｌｔｅｒｎａｔｉｎｇ  ｂａｓｉｓ）４週間毎に投与されるものである。
【請求項６４】
請求項６３記載の方法において、前記ラニビズマブは、８週間以上の期間で投与されるものである。
【請求項６５】
請求項６４記載の方法において、前記ｓｉＲＮＡは、８週間の期間後に、維持期（ｏｎ  ａ  ｍａｉｎｔｅｎａｎｃｅ  ｂａｓｉｓ）として投与されるものである。
【請求項６６】
請求項４９記載の方法において、前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、ベバシズマブである。
【請求項６７】
請求項４９記載の方法において、前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、アフリバセプト（ａｆｌｉｂｅｒｃｅｐｔ）である。
【請求項６８】
請求項４９記載の方法において、前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、ペガプタニブである。
【請求項６９】
糖尿病性黄斑浮腫を治療する方法であって、ＶＥＧＦアンタゴニストの有効な量と、センスＲＮＡ鎖及びアンチセンスＲＮＡ鎖を有するｓｉＲＮＡの有効な量とを対象に投与する工程を有するものであり、前記センス及びアンチセンスＲＮＡ鎖はＲＮＡ二本鎖を形成し、前記センスＲＮＡ鎖はヒトＶＥＧＦ  ｍＲＮＡにおける約１９〜約２５近接ヌクレオチドの標的配列と同一なヌクレオチド配列を有するものである、方法。
【請求項７０】
請求項６９記載の方法において、前記ｓｉＲＮＡは、眼球内投与経路によって投与されるものである。
【請求項７１】
請求項７０記載の方法において、前記眼球内投与経路は、硝子体内、網膜内、網膜下、テノン下、眼窩周囲及び後眼窩、トランス−角膜、及びトランス−強膜投与から選択されるものである。
【請求項７２】
請求項６９記載の方法において、前記ｓｉＲＮＡの有効な量は、約０．１ｍｇ〜約５ｍｇである。
【請求項７３】
請求項６９記載の方法において、前記有効な量は、約２．５ｍｇである。
【請求項７４】
請求項６９記載の方法において、前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、ベバシズマブ及びラニビズマブから選択されるヒトＶＥＧＦを標的化したモノクローナル抗体である。
【請求項７５】
請求項６９記載の方法において、前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、ラニビズマブである。
【請求項７６】
請求項６９記載の方法において、前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、ｓｉＲＮＡの投与前に投与されるものである。
【請求項７７】
請求項６９記載の方法において、前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、ｓｉＲＮＡの投与後に投与されるものである。
【請求項７８】
請求項６９記載の方法において、前記ＶＥＧＦアンタゴニストは、ｓｉＲＮＡの投与と同時に投与されるものである。
【請求項７９】
請求項６９記載の方法において、前記ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効な量は、４週間毎に投与されるものである。
【請求項８０】
請求項６９記載の方法において、前記ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効な量は、８週間毎に投与されるものである。
【請求項８１】
請求項６９記載の方法において、前記ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効な量は、１２週間毎に投与されるものである。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
関連文献の相互参照
本出願は、２００６年６月１２日出願の「目におけるＶＥＧＦのｓｉＲＮＡ阻害のための組成物及び方法」という発明の名称である米国仮出願第６０／８０４，５００号、２００６年９月８日出願の「目におけるＶＥＧＦのｓｉＲＮＡ阻害のための組成物及び方法」という発明の名称である米国仮出願第６０／８２４，９７２号、及び２００６年１１月６日出願の「目におけるＶＥＧＦのｓｉＲＮＡ阻害のための組成物及び方法」という発明の名称である米国仮出願第６０／８６４，４４０号に対して優先権を主張するものであり、これらはこの参照によってその全体が本明細書に組み込まれるものである。
【発明の概要】
【課題を解決するための手段】
【０００２】
本発明の実施形態は、ＶＥＧＦを標的化したｓｉＲＮＡの有効な量を対象へ投与する工程を含む、視力を安定化する方法を提供するものである。好ましくは、前記ｓｉＲＮＡは配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖及び配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を有するものである。
【０００３】
本発明の更なる実施形態は、ＶＥＧＦを標的化したｓｉＲＮＡの有効な量を対象へ投与する工程を含む、脈絡膜新血管新生を阻害する方法を提供するものである。好ましくは、前記ｓｉＲＮＡは配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖及び配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を有するものである。
【０００４】
本発明の他の実施形態は、ＶＥＧＦを標的化したｓｉＲＮＡの有効な量を対象へ投与する工程を含む、糖尿病性黄斑浮腫を治療する方法を提供するものである。好ましくは、前記ｓｉＲＮＡは配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖及び配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を有するものである。
【０００５】
本発明の付加的な実施形態は、ＶＥＧＦを標的化したｓｉＲＮＡの有効な量を対象へ投与する工程を含む、中心窩厚さを減少させる方法を提供するものである。好ましくは、前記ｓｉＲＮＡは配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖及び配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を有するものである。
【０００６】
本発明の更なる実施形態は、ＶＥＧＦを標的化したｓｉＲＮＡ及びＶＥＧＦアンタゴニストを投与する工程を含む、黄斑変性、特に加齢性黄斑変性を治療する方法を提供するものである。好ましくは、前記ｓｉＲＮＡは配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖及び配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を有するものである。
【０００７】
本発明の付加的な実施形態は、ＶＥＧＦを標的化したｓｉＲＮＡ及びＶＥＧＦアンタゴニストを投与する工程を含む、糖尿病性黄斑浮腫を治療する方法を提供するものである。好ましくは、前記ｓｉＲＮＡは配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖及び配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を有するものである。
【０００８】
本発明の付加的な実施形態は、ＶＥＧＦを標的化したｓｉＲＮＡを投与する工程を含む、糖尿病性網膜症を治療する方法を提供するものである。好ましくは、前記ｓｉＲＮＡは配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖及び配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を有するものである。
【０００９】
本発明の付加的な実施形態は、ＶＥＧＦを標的化したｓｉＲＮＡを投与する工程を含む、増殖性糖尿病性黄斑浮腫を治療する方法を提供するものである。好ましくは、前記ｓｉＲＮＡは配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖及び配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を有するものである。
【００１０】
本発明の更なる実施形態において、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖及び配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含むｓｉＲＮＡを有する薬学的組成物を提供するものである。
【図面の簡単な説明】
【００１１】
本出願の書類には、少なくとも１つのカラーの写真或いは図面が含まれている。カラー図面或いは写真を含む本出願のコピーは、特許庁へ要求し必要手数料を支払うことによって提供される。
【００１２】
本発明の本質及び利点をより完全に理解するために、付随する図面に関連した以下の詳細な説明は参照されるべきである。
【００１３】
【図１】図１は、ヒトＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡｓ、非特異的ｓｉＲＮＡ（ＥＧＦＰ  ｓｉＲＮＡ）を形質移入した２９３細胞、或いはｓｉＲＮＡを含まない偽形質移入体におけるｈＶＥＧＦタンパク質レベルのグラフである。
【図２】図２は、Ｃａｎｄ５、ｈＶＥＧＦ＃１、ｈＶＥＧＦ＃２、ｈＶＥＧＦ＃３、ｈＶＥＧＦ＃４、ｈＶＥＧＦ＃６及びｈＶＥＧＦ＃７での用量反応性研究のグラフである。
【図３】図３は、Ｃａｎｄ５の異なる用量を投与された３研究群のそれぞれにおける初期治療糖尿病性網膜症研究（「ＥＴＤＲＳ」）方法論によって測定された、ヒト対象における最良矯正距離視力における平均変化のグラフである。
【図４】図４は、ベースラインと比較して１２週での、若しくは３週目と比較して１５週でのＥＴＤＲＳテストにおいて１５文字以下の損失によって決定された、距離視力の安定化を示した研究群のそれぞれにおけるヒト対象のパーセンテージを示した柱状図である。
【図５】図５は、Ｃａｎｄ５の異なる用量を投与された３研究群のそれぞれにおけるＥＴＤＲＳ方法論によって測定された、ヒト対象における最良矯正接近視力における平均変化のグラフである。
【図６】図６は、ベースラインと比較して１２週での、若しくは３週目と比較して１５週でのＥＴＤＲＳテストにおいて１５文字以下の損失によって決定された、接近視力の安定化を示した研究群のそれぞれにおけるヒト対象のパーセンテージを示した柱状図である。
【図７Ａ】図７Ａ及びＢは、関連ＴＡＰ研究の対照プラセボ群と比較した、３つのＣａｎｄ５研究群のそれぞれにおける最良矯正距離視力における平均変化の一組のグラフである。
【図７Ｂ】図７Ａ及びＢは、関連ＴＡＰ研究の対照プラセボ群と比較した、３つのＣａｎｄ５研究群のそれぞれにおける最良矯正距離視力における平均変化の一組のグラフである。図７Ｂは、データセットに対して、治験実施計画書に適合した対象集団（Ｌａｓｔ  Ｏｂｓｅｒｖｅｄ  Ｃａｒｒｉｅｄ  Ｆｏｒｗａｒｄ）（「ＬＯＣＦ」）解析を適用した。
【図８Ａ】図８Ａ及びＢは、３つのＣａｎｄ５研究群のそれぞれにおける脈絡膜新血管新生（ＣＮＶ）病変の平均サイズにおけるベースラインからの変化の一組のグラフである。
【図８Ｂ】図８Ａ及びＢは、３つのＣａｎｄ５研究群のそれぞれにおける脈絡膜新血管新生（ＣＮＶ）病変の平均サイズにおけるベースラインからの変化の一組のグラフである。図８Ｂは、データセットに対してＬＯＣＦ解析を適用した。
【図９】図９は、Ｃａｎｄ５の異なる用量で処理されたＤＭＥを有するヒト対象の３群における視覚光干渉断層像（「ＯＣＴ」）によって測定された、中心窩厚さにおける変化のグラフである。
【図１０】図１０は、Ｃａｎｄ５の異なる用量で処理されたＤＭＥを有するヒト対象の３群におけるＥＤＴＲＳによって測定された、視力の変化のグラフである。
【発明を実施するための形態】
【００１４】
本発明の組成物及び方法を記載する前に、本発明は記載された特定の工程、組成物或いは方法論に限定されるものでなく変更されるものであるということが理解されるものである。更に，本説明において使用される専門用語は、特定のバージョン或いは実施例を記載することのみを目的としているものであり、添付された請求項によってのみ制限される本発明の観点を制限することを意図するものではないということも理解される。他に定義されない限り、本明細書で使用された全ての技術的及び化学的用語は、本分野の当業者によって共通して理解されているものと同じ意味を持つものである。本明細書に記載されたものと同じ或いは同等の全ての方法及び物質は、本発明の実施例の実施或いはテストにおいて使用され得るが、ここでは好ましい方法、装置及び物質を記載する。本明細書で引用した全ての刊行物は、この参照によってその全てが組み込まれるものである。本明細書には、本発明が先行発明によるそのような開示を先行する権利がないことを認めるものと解釈されるものはない。
【００１５】
本明細書及び添付された請求項で使用されたように、単数形「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は、文脈で明らかに指示されていない限り、複数形参照を含むということに注意すべきである。従って、例えば「分子」という意味は、１若しくはそれ以上の分子及び本分野の当業者に知られたその同等物等を意味するものである。
【００１６】
本明細書で使用されたように、「約」という用語は、使用される数の数値的な値のプラス或いはマイナス１０％を意味するものである。従って、約５０％とは４５％〜５５％の範囲を意味するものである。
【００１７】
本明細書で使用されたように、「対象」とは、ヒト或いは非ヒト動物を含む。好ましくは、前記対象はヒトである。
【００１８】
本明細書で使用されたように、ｓｉＲＮＡの「有効な量」とは、標的ｍＲＮＡのＲＮＡｉ−媒介性分解を引き起こすのに十分な量、若しくは対象における血管新生の進行を阻害するのに十分な量である。
【００１９】
本明細書で使用されたように、「単離された」とは、人の介入を介して天然状態から変える或いは除去することを意味する。例えば、生動物に天然に存在するｓｉＲＮＡは「単離された」ものではないが、合成ｓｉＲＮＡ若しくはその天然状態の共存物質から部分的に或いは完全に分離されたｓｉＲＮＡは「単離された」ものである。
【００２０】
単離されたｓｉＲＮＡは、実質的に精製された形態で存在する、若しくは例えば前記ｓｉＲＮＡが運搬された細胞などの非天然環境において存在することができる。
【００２１】
本明細書で使用されたように、「標的ｍＲＮＡ」は、ヒトＶＥＧＦ  ｍＲＮＡを意味する。
【００２２】
他に指摘されない限り、本明細書の全ての核酸配列は５’から３’方向で記載されている。更に、核酸配列における全てのデオキシリボヌクレオチドは大文字で示されており（例えば、デオキシチミジンは「Ｔ」である）、核酸配列におけるリボヌクレオチドは小文字で示されている（例えば、ウリジンは「ｕ」である）。
【００２３】
新規毛細血管の増殖或いは「新血管新生」として定義される血管新生は、増殖及び発生において基礎的な役割を担っている。成熟したヒトにおいて、血管新生を開始する能力は全ての組織に存在するが、厳格なコントロール下に保持されている。血管新生の鍵となる制御因子は、血管透過性因子（「ＶＰＦ」）とも呼ばれている、血管内皮増殖因子（「ＶＥＧＦ」）である。ＶＥＧＦは、ヒトにおいて少なくとも４つの異なる選択的スプライシング形態（ＶＥＧＦ１２１、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１８９及びＶＥＧＦ２０６）で存在し、それら全ては同様な生物学的活性を発揮する。
【００２４】
血管新生は、分泌ＶＥＧＦが、内皮細胞の表面に発現したＦｌｔ−１及びＦｌｋ−１／ＫＤＲ受容体（ＶＥＧＦ受容体１及びＶＥＧＦ受容体２とも呼ばれている）へ結合した場合に開始される。Ｆｌｋ−１／ＫＤＲは膜貫通タンパク質チロシンキナーゼであり、ＶＥＧＦの結合は細胞シグナルカスケードを惹起し、最終的には周囲組織の新血管新生を生じる。
【００２５】
異常な血管新生、或いは新規血管の病的増殖は、多数の症状に関連する。これらの症状には、糖尿病性網膜症、糖尿病性黄斑浮腫（「ＤＭＥ」）、乾癬、滲出性或いは「湿潤性」加齢性黄斑変性症（「ＡＲＭＤ」）、関節リウマチ及び他の炎症性疾患、及びほとんどの癌がある。これらの症状に関連する疾患は、異常に高レベルのＶＥＧＦを示し、一般的に高度の血管新生或いは血管透過性を示す。
【００２６】
特にＡＲＭＤは、臨床的に重要な血管新生疾患である。この症状は、高齢者の片方或いは両方の目における脈絡膜新血管新生によって特徴付けされ、先進工業国における失明の主な原因である。
【００２７】
糖尿病性網膜症とも呼ばれる糖尿病性黄斑浮腫（ＤＭＥ）は、糖尿病患者を苦しめる慢性高血糖の合併症である。これは、網膜血管の漏れやすさ及び網膜、視神経及び虹彩上の新規血管の増殖によって引き起こされる。漏出性血管は、網膜の膨張及び失明を生じる。視神経及び網膜上に増殖した新規血管は出血しやすく、重篤な失明を生じる。更に、虹彩における新規血管は目の流れを詰まらせ、激烈な痛みと潜在的な失明を伴う目の極度な高圧を生じるものである。ＤＭＥは糖尿病を患ったほとんどの人に影響を及ぼす。一般的に、糖尿病をより長く患った人は、ＤＭＥを患うリスクがより高い。最終的には、若年発症糖尿病を患ったほとんど全ての人は、ＤＭＥのいくつかの症状を発生するであろう。人生後半で糖尿病を患った患者も、進行型ＤＭＥを発生する可能性がいくぶん高くないが、ＤＭＥのリスクを有している。
【００２８】
ＶＥＧＦの産生或いは効果を減少させるよう試みた、「ＶＥＧＦアンタゴニスト」として本明細書では言及されている、異常血管新生を阻害する多くの治療戦略が存在する。例えば、ＶＥＧＦが結合する内皮細胞受容体と競合する抗−ＶＥＧＦ或いは抗−ＶＥＧＦ受容体抗体、抗−ＶＥＧＦアプタマー、及び可溶性ＶＥＧＦトラップが開発されている。ＶＥＧＦ遺伝子発現に対する典型的ＶＥＧＦ「アンチセンス」療法も提案されている。しかしながら、これら療法で使用される抗−血管新生剤は、ＶＥＧＦ或いはＶＥＧＦ受容体における化学量論的減少のみを産生でき、その薬剤は、疾患組織によるＶＥＧＦの異常高産生によって一般的に圧倒される。従って、利用可能な抗−血管新生療法によって達成された結果は不満足なものであった。
【００２９】
ＲＮＡ干渉（以後「ＲＮＡｉ」）は、多くの真核生物を通じて保存されている、転写後遺伝子調節の方法である。ＲＮＡｉは、細胞内に存在する短い（すなわち<３０ヌクレオチド）二本鎖ＲＮＡ（「ｄｓＲＮＡ」）分子によって誘導される。「低分子干渉ＲＮＡ」或いは「ｓｉＲＮＡ」と呼ばれるこれらの短いｄｓＲＮＡ分子は、１ヌクレオチド分解能で、ｓｉＲＮＡと配列相同性を共有するメッセンジャーＲＮＡｓ（「ｍＲＮＡｓ」）の破壊を引き起こす。ｓｉＲＮＡ及び標的ｍＲＮＡは、標的ｍＲＮＡを切断する「ＲＮＡ−誘導サイレンシング複合体」或いは「ＲＩＳＣ」へ結合する。１つのｓｉＲＮＡ分子は約１０００個のｍＲＮＡ分子の切断を誘導することができるので、前記ｓｉＲＮＡは複数代謝回転酵素のように明らかに再利用されている。従って、ｍＲＮＡのｓｉＲＮＡ−誘導ＲＮＡｉ分解は、標的遺伝子の発現を阻害するための現在利用可能な技術より有効的である。
【００３０】
従って、本発明の１実施形態は、標的ｍＲＮＡを標的とした約１７ヌクレオチド〜約２９ヌクレオチド長の、好ましくは約１９〜約２５ヌクレオチド長の短い二本鎖ＲＮＡを有する単離されたｓｉＲＮＡを提供するものである。前記ｓｉＲＮＡは、標準ワトソン−クリック塩基対相互作用（以後「塩基対」）によってアニーリングされたセンスＲＮＡ鎖及び相補的アンチセンスＲＮＡ鎖を有する。以下により詳細に記載されるように、前記センス鎖は、標的ｍＲＮＡ内に含まれる標的配列と同一の核酸配列を有する。
【００３１】
前記ｓｉＲＮＡのセンス及びアンチセンス鎖は、２つの相補的な一本鎖ＲＮＡ分子を有することができる、若しくは例えば一本鎖「ヘアピン」ループによって、２つの相補的部位が塩基対で共有結合する単一分子を有することができる。あらゆる理論に束縛されることなく、後者のタイプのｓｉＲＮＡ分子のヘアピンループは、「ダイサー」タンパク質（或いはその同等物）によって細胞内で切断され、２つの個々の塩基対ＲＮＡ分子のｓｉＲＮＡを形成すると考えられている。
【００３２】
ＶＥＧＦ１２１（配列ＩＤ番号：２）、ＶＥＧＦ１６５（配列ＩＤ番号：３）、ＶＥＧＦ１８９（配列ＩＤ番号：４）及びＶＥＧＦ２０６（配列ＩＤ番号：５）を含む  ヒトＶＥＧＦのスプライシング変異体が知られている。ヒトＶＥＧＦ、Ｆｌｔ−１（配列ＩＤ番号：６）或いはＦｌｋ−１／ＫＤＲ（ＩＤ７）遺伝子から転写されたｍＲＮＡは、本分野でよく知られた技術を用いて更なる選択的スプライシング形態を解析され得る。そのような技術には、逆転写−ポリメラーゼ連鎖反応法（ＲＴ−ＰＣＲ）、ノーザンブロッティング及びｉｎ−ｓｉｔｕハイブリダイゼーションを含む。ｍＲＮＡ配列を解析するための技術は、例えば、Ｂｕｓｔｉｎｇ  ＳＡ（２０００），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．２５：１６９−１９３に記載されており、これに開示されている全てはこの参照によって本明細書に組み込まれるものである。選択的スプライシングを受けたｍＲＮＡを同定するための代表的な技術も以下に記載している。
【００３３】
例えば、所定の疾患遺伝子に関連したヌクレオチド配列を含むデータベースは、選択的スプライシングを受けたｍＲＮＡを同定するために使用され得る。そのようなデータベースは、ＧｅｎＢａｎｋ、Ｅｍｂａｓｅ及びＣａｎｃｅｒ  Ｇｅｎｏｍｅ  Ａｎａｔｏｍｙ  Ｐｒｏｊｅｃｔ（ＣＧＡＰ）データベースを含む。例えばＣＧＡＰデータベースは、様々なタイプのヒト癌からの発現遺伝子配列断片（ＥＳＴｓ）を含む。ＶＥＧＦ遺伝子からのｍＲＮＡ或いは遺伝子配列は、そのようなデータベースをクエリーするために使用し、選択的スプライシングを受けたｍＲＮＡを表すＥＳＴｓがこの遺伝子に見いだせるかを決定することができる。
【００３４】
「ＲＮＡｓｅ（リボヌクレアーゼ）プロテクション」と呼ばれる技術も、選択的スプライシングを受けたＶＥＧＦ  ｍＲＮＡを同定するために使用され得る。ＲＮＡｓｅプロテクションは、他の細胞；例えば新血管新生の部位の組織或いはその近くの組織からの細胞など由来のＲＮＡへハイブリダイズする合成ＲＮＡへの遺伝子配列の転写を含む。ハイブリダイズされたＲＮＡは次にＲＮＡ：ＲＮＡハイブリッドミスマッチを認識する酵素とインキュベーションした。予想されたモノより小さい断片は、選択的スプライシングを受けたｍＲＮＡｓの存在を示すものである。推定上の選択的スプライシングを受けたｍＲＮＡｓはクローニングされ、本分野でよく知られている方法によって配列決定される。
【００３５】
ＲＴ−ＰＣＲもまた選択的スプライシングを受けたＶＥＧＦ  ｍＲＮＡを同定するために使用され得る。ＲＴ−ＰＣＲにおいて、疾病組織からのｍＲＮＡは、本分野の当業者がよく知っている方法を用いて、逆転写酵素によってｃＤＮＡへ変換される。次に、前記ｃＤＮＡの完全なコード化配列を、３’非翻訳領域に位置するフォワードプライマー、及び５’非翻訳領域に位置するリバースプライマーを用いたＰＣＲを介して複製した。例えば正常にスプライシングされたｍＲＮＡからの予想産物のサイズと複製産物のサイズとを、例えばアガロースゲル電気泳動によって比較することで、複製産物の選択的スプライシング形態を解析した。前記複製産物のサイズにおけるあらゆる変化は選択的スプライシングを示すものである。
【００３６】
変異ＶＥＧＦ、Ｆｌｔ−１或いはＦｌｋ−１／ＫＤＲ遺伝子から産生されたｍＲＮＡもまた、選択的スプライシング形態を同定するために上述された技術を通じて容易に同定され得る。本明細書で使用されたように、「変異」ＶＥＧＦ遺伝子或いはｍＲＮＡは、本明細書で説明したＶＥＧＦ配列から配列が異なるヒトＶＥＧＦ遺伝子或いはｍＲＮＡを含む。従って、これらの遺伝子のアレル形態及びそれらから産生されたｍＲＮＡは、本発明の目的としては「変異」と考えられる。
【００３７】
ヒトＶＥＧＦｍＲＮＡは、そのそれぞれの選択的スプライシング形態、同族体或いは変異体と同じように標的配列を含むことが理解される。従って、そのような共通標的配列を有する単一ｓｉＲＮＡは、共通標的配列を含む異なるＲＮＡタイプのＲＮＡｉ−仲介性分解を誘導することができる。
【００３８】
ｓｉＲＮＡは、部分的に精製されたＲＮＡ、実質的に純粋なＲＮＡ、合成ＲＮＡ或いは組換え産物ＲＮＡ、更には１若しくはそれ以上のヌクレオチドの付加、欠損、置換及び／若しくは変更によって天然由来ＲＮＡとは異なる改変ＲＮＡを有する。そのような変更には、ｓｉＲＮをヌクレアーゼ切断耐性にする修飾を含む、ｓｉＲＮＡの末端へ若しくはｓｉＲＮＡの１若しくはそれ以上の内部ヌクレオチドへなどの、非ヌクレオチド物質の付加を含む。
【００３９】
ｓｉＲＮＡの１若しくは両鎖は、３’オーバーハングも有している。本明細書で使用されたように、「３’オーバーハング」とは、二本鎖ＲＮＡ鎖の３’末端から延長した少なくとも１つの不対ヌクレオチドを意味する。
【００４０】
従って、１実施形態において、前記ｓｉＲＮＡは、１〜約６ヌクレオチド（リボヌクレオチド或いはデオキシヌクレオチドを含む）長、好ましくは１〜約５ヌクレオチド長、より好ましくは１〜約４ヌクレオチド長、及び特に好ましくは約２〜約４ヌクレオチド長の少なくとも１つの３’オーバーハングを有する。
ｓｉＲＮＡ分子の両鎖が３’オーバーハングを有する実施形態において、前記オーバーハングの長さは各鎖で同じ或いは異なるものである。最も好ましい実施形態において、前記３’オーバーハングは、ｓｉＲＮＡの両鎖上に存在し、２ヌクレオチド長である。例えば、前記ｓｉＲＮＡの各鎖は、ジチミチン酸（「ＴＴ」）或いはジウリジン酸（「ｕｕ」）の３’オーバーハングを有することができる。
【００４１】
本発明のｓｉＲＮＡの安定性を増強するために、前記３’オーバーハングはさらに分解に対して安定化させることができる。１実施形態において、前記オーバーハングは、アデノシン或いはグアノシンヌクレオチドなどのプリンヌクレオチドを含むことによって安定化される。或いは、例えば２’−デオキシチミジンでの３’オーバーハングにおけるウリジンヌクレオチドの置換などの修飾類縁体によるピリミジンヌクレオチドの置換は、許容され、ＲＮＡｉ分解の有効性に影響を及ぼさない。特に、前記２’−デオキシチミジンにおける２’ヒドロキシルの非存在は、組織培養における前記３’オーバーハングのヌクレアーゼ耐性を有意に増強するものである。
【００４２】
特定の実施形態において、前記ｓｉＲＮＡは、配列ＡＡ（Ｎ１９）ＴＴ或いはＮＡ（Ｎ２１）を有し、ここにおいてＮはあらゆるヌクレオチドである。これらのｓｉＲＮＡは、約３０〜７０％Ｇ／Ｃ含有であり、好ましくは約５０％Ｇ／Ｃ含有である。センスｓｉＲＮＡ鎖の配列は、それぞれ（Ｎ１９）ＴＴＮ２１（すなわち３〜２３位）に一致する。後者の場合において、前記センスｓｉＲＮＡの３’末端はＴＴへ変換される。この配列変換に対する理論的根拠は、前記センス及びアンチセンス鎖３’オーバーハングの配列組成に関連した対称性二本鎖を産生することである。次に前記アンチセンスＲＮＡ鎖は、センス鎖の１〜２１位に対する相補鎖として合成される。
【００４３】
これらの実施形態における２３−ｎｔ位センス鎖の１位は前記アンチセンス鎖によって配列特異的なやり方で認識されないので、前記アンチセンスの前記３’−最末端ヌクレオチド残基は意図的に選択され得る。しかしながら、前記アンチセンス鎖（他の実施形態において２３−ｎｔセンス鎖の２位と相補的）の最後から２番目のヌクレオチドは、一般的に標的配列に対して相補的である。
【００４４】
別の実施形態において、前記ｓｉＲＮＡは、配列ＮＡＲ（Ｎ１７）ＹＮＮを有し、ここにおいてＲはプリン（例えばＡ或いはＧ）であり、Ｙはピリミジン（例えばＣ或いはＵ／Ｔ）である。従って、この実施形態のそれぞれの２１−ｎｔセンス及びアンチセンスＲＮＡ鎖は一般的に、プリンヌクレオチドで開始する。第一に転写されたヌクレオチドがプリンの場合、ｐｏｌＩＩＩプロモーターからのＲＮＡｓの発現が有効であると考えられているので、そのようなｓｉＲＮＡは、標的部位の変更なしにｐｏｌＩＩＩ発現ベクターから発現され得る。
【００４５】
更なる実施形態において、前記ｓｉＲＮＡは、５以下の連続プリン或いはピリミジンを持つ配列を有する。更なる実施形態において、前記ｓｉＲＮＡは、同じ核酸塩基（すなわちＡ、Ｃ、Ｇ或いはＵ／Ｔ）を持つ５以下の連続ヌクレオチドを持つ配列を有する。
【００４６】
前記ｓｉＲＮＡは、あらゆる標的ｍＲＮＡ配列（前記「標的配列」）における一続きの約１９〜２５近接ヌクレオチドを標的とすることができる。ｓｉＲＮＡに対する標的配列を選択するための技術は、例えばＴｕｓｃｈｌ  Ｔらの「Ｔｈｅ  ｓｉＲＮＡ  Ｕｓｅｒ  Ｇｕｉｄｅ」に記載されており、この全体の開示はこの参照によって本明細書に組み込まれる。従って、本発明のｓｉＲＮＡのセンス鎖は、前記標的ｍＲＮＡにおけるあらゆる約１９〜約２５ヌクレオチドの近接配列と同一のヌクレオチド配列を有する。
【００４７】
一般的に、前記標的ｍＲＮＡ上の標的配列は、好ましくは開始コドンから５０〜１００ｎｔ下流（すなわち３’方向に）に始まる、前記標的ｍＲＮＡに一致する所定のｃＤＮＡ配列から選択され得る。しかしながら標的配列は、５’或いは３’非翻訳領域に、或いは開始コドン近くの領域（例えば、ＶＥＧＦ１２１  ｃＤＮＡの５’末端の１００ｎｔ以内である、以下の表１における配列ＩＤ番号：７３及び７４の標的配列を参照のこと）に位置付けされ得る。
【００４８】
本発明の更なる実施形態において、前記標的ｍＲＮＡ配列は、５以下の連続プリン或いはピリミジンを有する。例えば、ＶＥＧＦ１２１  ｃＤＮＡ配列における適切な標的配列は：
ＴＣＡＴＣＡＣＧＡＡＧＴＧＧＴＧＡＡＧ  （配列ＩＤ番号：８）である。
【００４９】
従って、この配列を標的化し、各鎖上に３’ｕｕオーバーハング（オーバーハングは太字で示した）を有するｓｉＲＮＡは以下のようになる。
【００５０】
【化１】
2009540011.tif 000003
【００５１】
この同じ配列を標的化し、各鎖上に３’ＴＴオーバーハング（オーバーハングは太字で示した）を有するｓｉＲＮＡは以下のようになる。
【００５２】
【化２】
2009540011.tif 000004
【００５３】
ｓｉＲＮＡを派生することができる他のＶＥＧＦ１２１標的配列を表１に示した。表１に記載した全てのＶＥＧＦ１２１標的配列は、全てのヒトＶＥＧＦ選択的スプライシング形態に共通のＶＥＧＦ１２１選択的スプライシング形態の一部内であることは理解されるものである。従って、表１のＶＥＧＦ１２１標的配列はさらに、ＶＥＧＦ１６５、ＶＥＧＦ１８９及びＶＥＧＦ２０６  ｍＲＮＡも標的にすることができる。特異的ＶＥＧＦアイソフォームを標的化する標的配列も、容易に同定され得る。例えば、ＶＥＧＦ１２１  ｍＲＮＡでなくＶＥＧＦ１６５  ｍＲＮＡを標的化した標的配列は、ＡＡＣＧＴＡＣＴＴＧＣＡＧＡＴＧＴＧＡＣＡ（配列ＩＤ番号：１３）である。
【００５４】
【表１】
2009540011.tif 000005
2009540011.tif 000006
【００５５】
本発明の一実施形態は、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量投与を含む、視力を安定化させる方法を提供する。本発明の特定の一実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡを、対象の視力が長期にわたって減退することがないだけの有効量を投与する。好ましい実施形態では、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含むｓｉＲＮＡを、対象の視力が長期にわたって減退することがないだけの有効量を投与する。
【００５６】
本発明の他の一実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの対象への投与、および好ましくはＶＥＧＦのアンタゴニストなど、ｓｉＲＮＡとは異なる医薬品の投与によって、視力を安定させる。幾つもの異なる種類の薬剤を含むＶＥＧＦのアンタゴニストが既に開発されている。一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、ベバシズマブまたはラニビズマブなどのＶＥＧＦタンパク質を標的とするモノクローナル抗体を含む。他の一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、アフリバセプトのようなＶＥＧＦトラップである。さらに他の一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、マクジェンのようなアプタマーである。好ましい一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストと共に投与するｓｉＲＮＡは、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖、および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含む。
【００５７】
本発明の一実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの、視力を安定させるための有効量は約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇである。さらなる実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量は約０．２ｍｇ〜約１０ｍｇである。追加的な実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量は好ましくは約０．５〜約５ｍｇである。さらに好ましい実施形態は、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡ約１．５ｍｇ、２．５ｍｇ、または約３ｍｇを含む、約１ｍｇ〜約３ｍｇの有効量を提供する。好ましい実施形態では、対象へ投与する、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡは、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖、および列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含む。
【００５８】
本発明の一実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を週１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与を含み、対象の視力を安定させる方法、を含む。本発明の他の一実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を２週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与を含み、対象の視力を安定させる方法、を含む。好ましくは、本発明のさらなる実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を４週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与によって、対象の視力を安定させる方法、を含む。本発明の追加的な好ましい実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を８週間に１回、１２週間に１回、１６週間に１回、または２０週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与によって、対象の視力を安定させる方法、を含む。
【００５９】
本発明の他の一実施形態は、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与を含む、対象の脈絡膜血管新生の阻害方法、を提供する。好ましい実施形態では、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖、および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含むｓｉＲＮＡを、対象の脈絡膜血管新生を阻害するような有効量で、投与する。
【００６０】
本発明の他の一実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの対象への投与、および前記ｓｉＲＮＡとは異なる薬剤、好ましくはＶＥＧＦのアンタゴニスト、の投与によって脈絡膜血管新生を阻害する。幾つもの異なる種類の薬剤を含むＶＥＧＦのアンタゴニストが既に開発されている。一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、ベバシズマブまたはラニビズマブなどの、ＶＥＧＦを標的とするモノクローナル抗体、を含む。他の一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、アフリバセプトのようなＶＥＧＦトラップである。さらに他の一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、マクジェンなどのアプタマーである。好ましい実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストと共に投与するｓｉＲＮＡは、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖、および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含む。
【００６１】
本発明の一実施形態では、脈絡膜血管新生を阻害するための、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量は、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇまでである。さらなる実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量は約０．２ｍｇ〜約１０ｍｇである。追加的な実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量は好ましくは約０．５ｍｇ〜約５ｍｇである。さらなる好ましい実施形態は、約１．５ｍｇ、２．５ｍｇ、または約３ｍｇの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡを含む、約１ｍｇ〜約３ｍｇの有効量、を提供する。好ましい実施形態では、対象へ投与するＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡは、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖、および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖、を含む。
【００６２】
本発明の一実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を週１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与による、対象の脈絡膜血管新生を阻害する方法、を含む。本発明の他の一実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を２週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与による、対象の脈絡膜血管新生を阻害する方法、を含む。好ましくは、本発明のさらなる実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を４週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与による、対象の脈絡膜血管新生を阻害する方法、を含む。本発明の追加的な好ましい実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を８週間に１回、１２週間に１回、１６週間に１回、または２０週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与による、対象の脈絡膜血管新生を阻害する方法、を含む。
【００６３】
本発明の一実施形態は、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与を含む、糖尿病性黄斑浮腫の治療方法、を提供する。好ましい一実施形態では、対象の糖尿病性黄斑浮腫を治療するために有効な量だけ、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖、および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含むｓｉＲＮＡを対象へ投与する。
【００６４】
本発明の他の一実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの対象への投与、および前記ｓｉＲＮＡとは異なる薬剤、好ましくはＶＥＧＦのアンタゴニスト、の投与によって、糖尿病性黄斑浮腫を治療することができる。幾つもの異なる種類の薬剤を含むＶＥＧＦのアンタゴニストが既に開発されている。一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、ベバシズマブまたはラニビズマブなどのＶＥＧＦを標的とするモノクローナル抗体を含む。他の一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、アフリバセプトのようなＶＥＧＦトラップである。さらに他の一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、マクジェンのようなアプタマーである。好ましい一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストと共に投与するｓｉＲＮＡは、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖、および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含む。
【００６５】
本発明の一実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの、糖尿病性黄斑浮腫を治療するための有効量は約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇである。さらなる実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量は約０．２ｍｇ〜約１０ｍｇである。追加的な実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量は好ましくは約０．５〜約５ｍｇである。さらに好ましい実施形態では、約１．５ｍｇ、２．５ｍｇ、または約３ｍｇのＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡを含む、約１ｍｇ〜約３ｍｇの有効量を提供する。好ましい実施形態では、対象へ投与する、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡは、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖、および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含む。
【００６６】
本発明の一実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を週１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与によって、対象の糖尿病性黄斑浮腫を治療する方法、を含む。本発明の他の一実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を２週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与によって、対象の糖尿病性黄斑浮腫を治療する方法、を含む。好ましくは、本発明のさらなる実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を４週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与によって、対象の糖尿病性黄斑浮腫を治療する方法、を含む。本発明の追加的な好ましい実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を８週間に１回、１２週間に１回、１６週間に１回、または２０週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与によって、対象の糖尿病性黄斑浮腫を治療する方法、を含む。
【００６７】
本発明の一実施形態は、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与を含む、糖尿病性網膜症の治療方法を提供する。好ましい一実施形態では、対象の糖尿病性網膜症を治療するために有効な量だけ、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖、および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含むｓｉＲＮＡを対象へ投与する。
【００６８】
本発明の他の一実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの対象への投与、および前記ｓｉＲＮＡとは異なる薬剤、好ましくはＶＥＧＦのアンタゴニスト、の投与によって、糖尿病性網膜症を治療することができる。幾つもの異なる種類の薬剤を含むＶＥＧＦのアンタゴニストが既に開発されている。一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、ベバシズマブまたはラニビズマブなどのＶＥＧＦを標的とするモノクローナル抗体を含む。他の一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、アフリバセプトのようなＶＥＧＦトラップである。さらに他の一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、マクジェンのようなアプタマーである。好ましい一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストと共に投与するｓｉＲＮＡは、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖、および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含む。
【００６９】
本発明の一実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの、糖尿病性網膜症を治療するための有効量は約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇである。さらなる実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量は約０．２ｍｇ〜約１０ｍｇである。追加的な実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量は好ましくは約０．５〜約５ｍｇである。さらに好ましい実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡ約１．５ｍｇ、２．５ｍｇ、または約３ｍｇを含む、約１ｍｇ〜約３ｍｇの有効量を提供する。好ましい実施形態では、対象へ投与する、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡは、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖、および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含む。
【００７０】
本発明の一実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を週１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与によって、対象の糖尿病性網膜症を治療する方法、を含む。本発明の他の一実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を２週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与によって、対象の糖尿病性網膜症を治療する方法、を含む。好ましくは、本発明のさらなる実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を４週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与によって、対象の糖尿病性網膜症を治療する方法、を含む。本発明の追加的な好ましい実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を８週間に１回、１２週間に１回、１６週間に１回、または２０週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与によって、対象の糖尿病性網膜症を治療する方法、を含む。
【００７１】
本発明の一実施形態は、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与を含む、増殖性糖尿病網膜症の治療方法を提供する。好ましい一実施形態では、対象の増殖性糖尿病網膜症を治療するために有効な量だけ、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖、および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含むｓｉＲＮＡを対象へ投与する。
【００７２】
本発明の他の一実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの対象への投与、および前記ｓｉＲＮＡとは異なる薬剤、好ましくはＶＥＧＦのアンタゴニスト、の投与によって、増殖性糖尿病網膜症を治療することができる。幾つもの異なる種類の薬剤を含むＶＥＧＦのアンタゴニストが既に開発されている。一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、ベバシズマブまたはラニビズマブなどのＶＥＧＦを標的とするモノクローナル抗体を含む。他の一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、アフリバセプトのようなＶＥＧＦトラップである。さらに他の一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、マクジェンのようなアプタマーである。好ましい一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストと共に投与するｓｉＲＮＡは、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖、および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含む。
【００７３】
本発明の一実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの、増殖性糖尿病網膜症を治療するための有効量は約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇである。さらなる実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量は約０．２ｍｇ〜約１０ｍｇである。追加的な実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量は好ましくは約０．５〜約５ｍｇである。さらに好ましい実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡ約１．５ｍｇ、２．５ｍｇ、または約３ｍｇを含む、約１ｍｇ〜約３ｍｇの有効量を提供する。好ましい実施形態では、対象へ投与する、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡは、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖、および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含む。
【００７４】
本発明の一実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を週１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与によって、対象の増殖性糖尿病網膜症を治療する方法、を含む。本発明の他の一実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を２週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与によって、対象の増殖性糖尿病網膜症を治療する方法、を含む。好ましくは、本発明のさらなる実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を４週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与によって、対象の増殖性糖尿病網膜症を治療する方法、を含む。本発明の追加的な好ましい実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を８週間に１回、１２週間に１回、１６週間に１回、または２０週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与によって、対象の増殖性糖尿病網膜症を治療する方法、を含む。
【００７５】
本発明の一実施形態は、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与を含む、対象の網膜厚を減少させる方法を提供する。本発明の特定の一実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡを、対象の網膜厚を長期にわたって減少させられる有効量で、対象へ投与する。好ましい一実施形態では、対象の網膜厚を減少させるために有効な量だけ、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖、および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含むｓｉＲＮＡを対象へ投与する。
【００７６】
本発明の他の一実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの対象への投与、および前記ｓｉＲＮＡとは異なる薬剤、好ましくはＶＥＧＦのアンタゴニスト、の投与によって、糖尿病性黄斑浮腫と診断した対象の網膜厚を減少させる。幾つもの異なる種類の薬剤を含むＶＥＧＦのアンタゴニストが既に開発されている。一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、ベバシズマブまたはラニビズマブなどのＶＥＧＦを標的とするモノクローナル抗体を含む。他の一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、アフリバセプトのようなＶＥＧＦトラップである。さらに他の一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、マクジェンのようなアプタマーである。好ましい一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストと共に投与するｓｉＲＮＡは、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖、および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含む。
【００７７】
本発明の一実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの、対象の網膜厚を減少させるための有効量は約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇである。さらなる実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量は約０．２ｍｇ〜約１０ｍｇである。追加的な実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量は好ましくは約０．５〜約５ｍｇである。さらに好ましい実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡ約１．５ｍｇ、２．５ｍｇ、または約３ｍｇを含む、約１ｍｇ〜約３ｍｇの有効量を提供する。好ましい実施形態では、対象へ投与する、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡは、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖、および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含む。
【００７８】
本発明の一実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を週１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与によって、対象の網膜厚を減少させる方法、を含む。本発明の他の一実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を２週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与によって、対象の網膜厚を減少させる方法、を含む。好ましくは、本発明のさらなる実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を４週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与によって、対象の網膜厚を減少させる方法、を含む。本発明の追加的な好ましい実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を８週間に１回、１２週間に１回、１６週間に１回、または２０週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与によって、対象の網膜厚を減少させる方法、を含む。
【００７９】
本発明の一実施形態は、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与を含む、対象の加齢黄斑変性症の治療方法を提供する。本発明の特定の一実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡを、対象の加齢黄斑変性症を治療するための有効量で、対象へ投与する。好ましい実施形態では、対象の加齢黄斑変性症を治療するために有効な量だけ、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖、および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含むｓｉＲＮＡを対象へ投与する。
【００８０】
本発明の他の一実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの対象への投与、および前記ｓｉＲＮＡとは異なる薬剤、好ましくはＶＥＧＦのアンタゴニスト、の投与によって、加齢黄斑変性症を治療する。幾つもの異なる種類の薬剤を含むＶＥＧＦのアンタゴニストが既に開発されている。一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、ベバシズマブまたはラニビズマブなどのＶＥＧＦを標的とするモノクローナル抗体を含む。他の一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、アフリバセプトのようなＶＥＧＦトラップである。さらに他の一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、マクジェンのようなアプタマーである。好ましい一実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストと同時に投与するｓｉＲＮＡは、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖、および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含む。
【００８１】
本発明の一実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの、対象の加齢黄斑変性症を治療するための有効量は約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇである。さらなる実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量は約０．２ｍｇ〜約１０ｍｇである。追加的な実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量は好ましくは約０．５〜約５ｍｇである。さらに好ましい実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡ約１．５ｍｇ、２．５ｍｇ、または約３ｍｇを含む、約１ｍｇ〜約３ｍｇの有効量を提供する。好ましい実施形態では、対象へ投与する、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡは、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖、および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含む。
【００８２】
本発明の一実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を週１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与による、対象の加齢黄斑変性症の治療方法、を含む。本発明の他の一実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を２週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与による、対象の加齢黄斑変性症の治療方法、を含む。好ましくは、本発明のさらなる実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を４週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与による、対象の加齢黄斑変性症の治療方法、を含む。本発明の追加的な好ましい実施形態は、ｓｉＲＮＡの有効量を８週間に１回、１２週間に１回、１６週間に１回、または２０週間に１回投与するところの、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量の投与による、対象の加齢黄斑変性症の治療方法、を含む。
【００８３】
本発明の他の実施形態は、ヒトＶＥＧＦのｍＲＮＡにある約１９〜約２５の連続したヌクレオチドの標的配列と同一なヌクレオチド配列をセンスＲＮＡ鎖が含み、センスおよびアンチセンスＲＮＡ鎖がＲＮＡ二重鎖を形成する、センスＲＮＡ鎖およびアンチセンスＲＮＡ鎖を含むｓｉＲＮＡの有効量、およびＶＥＧＦのアンタゴニストの有効量の、対象への投与を含む、加齢黄斑変性症および糖尿病性黄斑浮腫の治療方法、を提供する。ＶＥＧＦのアンタゴニストは、ｓｉＲＮＡの前に、後に、または同時に投与することができる。好ましい実施形態では、センスＲＮＡ鎖は配列ＩＤ番号：７７を含み、アンチセンスＲＮＡ鎖は配列ＩＤ番号：７８を含む。ｓｉＲＮＡは、硝子体内、網膜内、網膜下、テノン下、眼窩の周囲および後方、角膜を貫いて、および鞏膜を貫いて、といった方法で眼内投与することができる。そうした方法においては、前記ｓｉＲＮＡの有効量は、約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇとすることができる。さらなる実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量は約０．２ｍｇ〜約１０ｍｇである。追加的な実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡの有効量は好ましくは約０．５〜約５ｍｇである。さらに好ましい実施形態では、ＶＥＧＦを標的とするｓｉＲＮＡ約１．５ｍｇ、２．５ｍｇ、または約３ｍｇを含む、約１ｍｇ〜約３ｍｇの有効量を提供する。前記ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効量は週１回、２週間に１回、４週間に１回、８週間に１回、１２週間に１回、１６週間に１回、または２０週間に１回、投与することができる。好ましくは、ＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡを４週間に１回投与する。
【００８４】
特定の実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、例えばベバシズマブまたはラニビズマブといった、ヒトＶＥＧＦを標的とするモノクローナル抗体である。他の実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、アフリバセプトのような、ＶＥＧＦトラップである。他の実施形態では、ＶＥＧＦのアンタゴニストは、マクジェンのような、ＶＥＧＦのアプタマーである。
【００８５】
一実施形態では、そういった方法は、好ましくは、センスＲＮＡ鎖が配列ＩＤ番号：７７を含み、アンチセンスＲＮＡ鎖が配列ＩＤ番号：７８を含むＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡ、およびラニビズマブ、の投与を含む。前記ｓｉＲＮＡは４週間に１回（すなわち月１回）投与することができ、前記ラニビズマブは４週間に１回（月１回）投与することができる。さらなる実施形態では、前記ｓｉＲＮＡの投与と交互に、前記ｓｉＲＮＡの２週間前にラニビズマブを投与することができる。例えば、一実施形態は、０日目のラニビズマブの有効量の投与、そして２週間目のＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効量の投与、そして４週間目のラニビズマブの有効量の投与、そして６週目のＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効量の投与、そして８週目のラニビズマブの有効量の投与、を含む。そうした投与は、加齢黄斑変性症を治療するための急性期治療を含むことができる。さらなる実施形態では、前記急性期治療には、維持療法を続けて行うことができ、その維持療法は１２週目に始まり、例えば、８週間に１回、または１２週間に１回、ｓｉＲＮＡを投与する。
【００８６】
一実施形態では、そういった方法は、好ましくは、センスＲＮＡ鎖が配列ＩＤ番号：７７を含み、アンチセンスＲＮＡ鎖が配列ＩＤ番号：７８を含むＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡ、およびベバシズマブ、の投与を含む。前記ｓｉＲＮＡは４週間に１回（すなわち月１回）投与することができ、前記ベバシズマブは４週間に１回（月１回）投与することができる。さらなる実施形態では、前記ｓｉＲＮＡの投与と交互に、前記ｓｉＲＮＡの２週間前にベバシズマブを投与することができる。例えば、一実施形態は、０日目のベバシズマブの有効量の投与、そして２週間目のＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効量の投与、そして４週間目のベバシズマブの有効量の投与、そして６週目のＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効量の投与、そして８週目のベバシズマブの有効量の投与、を含む。そうした投与は、加齢黄斑変性症を治療するための急性期治療を含むことができる。さらなる実施形態では、前記急性期治療には、維持療法を続けて行うことができ、その維持療法は１２週目に始まり、例えば、８週間に１回、または１２週間に１回、ｓｉＲＮＡを投与する。
【００８７】
他の一実施形態では、そういった方法は、好ましくは、センスＲＮＡ鎖が配列ＩＤ番号：７７を含み、アンチセンスＲＮＡ鎖が配列ＩＤ番号：７８を含むＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡ、および例えばラニビズマブ、ベバシズマブ、アフリバセプト、またはマクジェンといったＶＥＧＦのアンタゴニストの投与を含む。前記ｓｉＲＮＡは４週間に１回（すなわち月１回）投与することができ、前記ＶＥＧＦのアンタゴニストは４週間に１回（月１回）投与することができる。さらなる実施形態では、前記ｓｉＲＮＡの投与と交互に、前記ｓｉＲＮＡの２週間前にＶＥＧＦのアンタゴニストを投与することができる。例えば、一実施形態は、０日目のＶＥＧＦのアンタゴニストの有効量の投与、そして２週間目のＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効量の投与、そして４週間目のＶＥＧＦのアンタゴニストの有効量の投与、そして６週目のＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡの有効量の投与、そして８週目のＶＥＧＦのアンタゴニストの有効量の投与、を含む。そうした投与は、加齢黄斑変性症を治療するための急性期治療を含むことができる。さらなる実施形態では、前記急性期治療には、維持療法を続けて行うことができ、その維持療法は１２週目に始まり、例えば、８週間に１回、または１２週間に１回、ｓｉＲＮＡを投与する。
【００８８】
本発明の実施形態はまた、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含むｓｉＲＮＡを含み、前記ｓｉＲＮＡが平衡塩類溶液中にある、医薬組成物も含む。本発明の他の一実施形態は、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含むｓｉＲＮＡ、および医薬組成物が眼内投与に適合するような平衡塩類溶液、を含む医薬組成物である。本発明の追加的な実施形態は、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含むｓｉＲＮＡ、および平衡塩類溶液を含み、医薬組成物が約６．０８〜約８．０のｐＨ値を有する、医薬組成物である。
【００８９】
さらなる実施形態は、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含むｓｉＲＮＡを含み、前記ｓｉＲＮＡの濃度が０．２ｍｇ／１００μＬ〜約３．０ｍｇ／１００μＬである、医薬組成物を含む。本発明の追加的な実施形態は、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含むｓｉＲＮＡを含み、前記ｓｉＲＮＡの濃度が１．５ｍｇ／１００μＬ、２．５ｍｇ／１００μＬ、または３．０ｍｇ／１００μＬである、医薬組成物である。さらなる実施形態は、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含むｓｉＲＮＡを含み、前記ｓｉＲＮＡの濃度が０．２ｍｇ／５０μＬ〜約３．０ｍｇ／５０μＬである、医薬組成物を含む。本発明の追加的な実施形態は、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含むｓｉＲＮＡを含み、前記ｓｉＲＮＡの濃度が１．５ｍｇ／５０μＬ、２．５ｍｇ／５０μＬ、または３．０ｍｇ／５０μＬである、医薬組成物である。
【００９０】
他の一実施形態は、配列ＩＤ番号：７７のセンスＲＮＡ鎖および配列ＩＤ番号：７８のアンチセンスＲＮＡ鎖を含むｓｉＲＮＡ、酢酸ナトリウム（三水和物）、塩化ナトリウム、クエン酸ナトリウム（無水三塩基性）塩化カリウム、塩化カリダム（無水）、塩化マグネシウム（六水和物）、塩酸、水酸化ナトリウム、および水、を含む眼内投与に適した医薬組成物である。
【００９１】
ｓｉＲＮＡは、当該技術分野において周知のいくつもの技術によって得ることが可能である。例えば、ｓｉＲＮＡを化学的に合成する、または、その開示内容全てが本願明細書に参照として組み込まれるところのＴｕｓｃｈｌ  ｅｔ  ａｌ．，による米国公開特許第２００２／００８６３５６号に記述されているショウジョウバエのインビトロ・システムといった当該技術分野において既知の方法を用いた組み換えによって作製する、ことが可能である。
【００９２】
好ましくは、ｓｉＲＮＡは、適切に保護したリボヌクレオシド・ホスホアミダイトおよび古典的なＤＮＡ／ＲＮＡ合成装置を用いて化学的に合成する。ｓｉＲＮＡは、２つの相補的な別のＲＮＡ分子として、または相補的な２つの領域を有した１つのＲＮＡ分子として、合成することが可能である。ＲＮＡ分子または合成試薬の供給業者には、Ｐｒｏｌｉｇｏ（ドイツＨａｍｂｕｒｇ），Ｄｈａｒｍａｃｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（米国コロラド州Ｌａｆａｙｅｔｔｅ），Ｐｉｅｒｃｅ  Ｃｈｅｍｉｃａｌ（Ｐｅｒｂｉｏ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，米国イリノイ州Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、のグループ企業），Ｇｌｅｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（米国バージニア州Ｓｔｅｒｌｉｎｇ），ＣｈｅｍＧｅｎｅｓ（米国マサチューセッツ州Ａｓｈｌａｎｄ）、およびＣｒｕａｃｈｅｍ（英国Ｇｌａｓｇｏｗ）が含まれる。
【００９３】
ｓｉＲＮＡはまた、２００６年９月８日の出願になり、「ｓｉＲＮＡおよび製造方法」と題され、その全体が本願明細書に参照として組み込まれるところの同時係属の米国仮出願第６０／８２４，９５３号にさらなる詳細が記述されているように、複数の相補的ＲＮＡ分子として合成することも可能である。
【００９４】
あるいは、ｓｉＲＮＡは、適切なプロモーターを用いて、環状または直線状のＤＮＡプラスミドから発現させることもまた可能である。プラスミドからｓｉＲＮＡを発現させるのに適切なプロモーターは、例えば、Ｕ６またはＨ１  ＲＮＡ  ｐｏｌＩＩＩプロモーター配列、およびサイトメガロウイルス・プロモーターを含む。他の適切なプロモーターの選択は、当該技術分野の範囲内である。本発明の組換えプラスミドは、特定の組織または特定の細胞内環境においてｓｉＲＮＡの発現を誘導可能な、または調節可能なものも、また含むことが可能である。
【００９５】
組換えプラスミドから発現させるｓｉＲＮＡは、標準的な技術によって培養細胞の発現系から単離すること、または、インビボでの血管新生の領域またはその近傍の細胞内で発現させることの、いずれもが可能である。組換えプラスミドを用いた、インビボでのｓｉＲＮＡの細胞への輸送については、以下でさらに詳細に議論する。
【００９６】
ｓｉＲＮＡは、２つの相補的な別のＲＮＡ分子として、または相補的な２つの領域を有する１つのＲＮＡ分子として、組換えプラスミドから発現させることが可能である。
【００９７】
ｓｉＲＮＡの発現に適したプラスミドの選択、ｓｉＲＮＡ発現のための核酸配列をプラスミドへ挿入する方法、および興味のある細胞へ組換えプラスミドを輸送する方法は、当該技術分野の範囲内である。例としては、それらの全ての開示内容が本願明細書に参照として組み込まれるところの、Ｔｕｓｃｈｌ，Ｔ．（２００２），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ，２０：４４６−４４８；Ｂｒｕｍｍｅｌｋａｍｐ  ＴＲ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ｓｃｉｅｎｃｅ２９６：５５０−５５３；Ｍｉｙａｇｉｓｈｉ  Ｍ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：４９７−５００；Ｐａｄｄｉｓｏｎ  ＰＪ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．１６：９４８−９５８；Ｌｅｅ  ＮＳ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：５００−５０５；および、Ｐａｕｌ  ＣＰ  ｅｔ  ａｌ．（２００２），Ｎａｔ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．２０：５０５−５０８を参照されたい。
【００９８】
ｓｉＲＮＡ発現のための核酸配列を含むプラスミドは、後述の実施例７に記載してある。ｐＡＡＶｓｉＲＮＡと呼ばれるそのプラスミドは、ヒトＵ６  ＲＮＡプロモーターの制御下でポリＴ終止配列と操作的に関連するセンスＲＮＡ鎖、およびヒトＵ６  ＲＮＡプロモーターの制御下でポリＴ終止配列と操作的に関連するアンチセンスＲＮＡ鎖、を含む。プラスミドであるｐＡＡＶｓｉＲＮＡは結局、ｓｉＲＮＡ発現のためのものと同一の核酸配列を含む組換えアデノ随伴ウイルスベクターの作製における利用を意図したものである。
【００９９】
本願明細書で使用する際、「ポリＴ終止配列と操作的に関連する」とは、センスまたはアンチセンス鎖をコードする核酸配列が前記ポリＴ終止配列の５’側のすぐ隣に近接していることを意味する。プラスミドからセンスまたはアンチセンス配列を転写する際、ポリＴ終止シグナルは転写を終止させるように働く。
【０１００】
本願明細書で使用する際、プロモーター「の制御下で」とは、センスまたはアンチセンスのコード配列の転写を前記プロモーターが開始することが可能であるように、センスまたはアンチセンス鎖をコードする核酸配列がプロモーターの３’側に位置することを意味する。
【０１０１】
ｓｉＲＮＡは、インビボにおいて血管新生の領域または近傍で、組換えウイルスベクターから細胞内で発現させることもまた可能である。本発明の組換えウイルスベクターは、ｓｉＲＮＡ、およびｓｉＲＮＡ配列の発現のためのあらゆる適切なプロモーターを含む。適切なプロモーターは、例えば、Ｕ６またはＨ１  ＲＮＡ  ｐｏｌＩＩＩプロモーター配列、およびサイトメガロウイルス・プロモーターを含む。他の適切なプロモーターの選択は、当該技術分野の範囲内である。本発明の組換えウイルスベクターは、特定の組織または、特定の細胞内環境におけるｓｉＲＮＡ発現のための、誘導可能な、または調節可能なプロモーターもまた、含む。インビボにおけるｓｉＲＮＡの細胞への輸送のための組換えウイルスベクターの利用は、以下でさらに詳細に議論する。
【０１０２】
ｓｉＲＮＡは、２つの相補的な別のＲＮＡ分子として、または相補的な２つの領域を有する１つのＲＮＡ分子として、組換えウイルスベクターから発現させることが可能である。
【０１０３】
発現させるｓｉＲＮＡ分子のコード配列を受け入れることができるあらゆるウイルスベクター、例えば、アデノウイルス由来のベクター（ＡＶ）；アデノ随伴ウイルス（ＡＡＶ）；レトロウイルス（例えば、レンチウイルス（ＬＶ），ラブドウイルス、マウス白血病ウイルス）；ヘルペスウイルス、およびそれらに類するものを用いることが可能である。ウイルスベクターの向性を、ベクターを他のウイルスのエンベロープ・タンパク質または他の表面抗原でシュードタイピングすることによって、修飾することもできる。例えば、本発明のＡＡＶベクターは、水泡性口内炎ウイルス（ＶＳＶ）、狂犬病、エボラ、モコラ、およびそれらに類するものの表面タンパク質で、シュードタイピングすることが可能である。
【０１０４】
本発明での利用に適した組換えウイルスベクターの選択、ｓｉＲＮＡを発現させるための核酸配列のベクターへの挿入方法、および興味のある細胞へのウイルスベクターの輸送方法は、当該技術分野の範囲内である。例えば、それらの全ての開示内容が本願明細書に参照として取り込まれるところの、Ｄｏｒｎｂｕｒｇ  Ｒ（１９９５），Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐ．２：３０１−３１０；Ｅｇｌｉｔｉｓ  ＭＡ（１９８８），Ｂｉｏｔｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ６：６０８−６１４；Ｍｉｌｌｅｒ  ＡＤ（１９９０），ＨｕｍＧｅｎｅ  Ｔｈｅｒａｐ．１：５−１４；および、Ａｎｄｅｒｓｏｎ  ＷＦ（１９９８），Ｎａｔｕｒｅ  ３９２：２５−３０を参照されたい。
【０１０５】
好ましいウイルスベクターは、ＡＶおよびＡＡＶ由来のものである。特に好ましい実施形態では、ｓｉＲＮＡは、２つの相補的な１本鎖ＲＮＡ分子として、例えば、Ｕ６またはＨ１  ＲＮＡプロモーター、またはサイトメガロウイルス（ＣＭＶ）プロモーターを含む組換えＡＡＶベクターから発現させる。
【０１０６】
ｓｉＲＮＡの発現のための適切なＡＶベクター、組換えＡＶベクターの作製方法、および標的細胞へのベクターの輸送方法は既に記述されている。
【０１０７】
ｓｉＲＮＡの発現のための適切なＡＡＶベクター、組換えＡＡＶベクターの作製方法、および標的細胞へのベクターの輸送方法は、それらの全ての開示内容が本願明細書に参照として取り込まれるところの、Ｓａｍｕｌｓｋｉ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８７），Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６１：３０９６−３１０１；Ｆｕｓｈｅｒ  ＫＪ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６），Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．，７０：５２０−５３２；Ｓａｍｕｌｓｋｉ  Ｒ  ｅｔ  ａｌ．（１９８９），Ｊ．Ｖｉｒｏｌ．６３：３８２２−３８２６；米国特許第５，２５２，４７９号明細書；米国特許第５，１３９，９４１号明細書；国際特許出願第ＷＯ９４／１３７８８号；および国際特許出願第ＷＯ９３／２４６４１号に記述されている。
【０１０８】
上述したように、ｓｉＲＮＡはＶＥＧＦを標的としてＲＮＡｉを介したＶＥＧＦ，さらに好ましくはヒトＶＥＧＦ、の分解を引き起こすことが可能である。前記ｓｉＲＮＡによる標的ｍＲＮＡの分解は、ＶＥＧＦの機能的な遺伝子産物の生産を減少させる。従って、本発明の他の一実施形態は、標的ｍＲＮＡが分解するような対象体内へのｓｉＲＮＡの有効量の投与を含む、対象体内のＶＥＧＦ発現の阻害方法、を提供する。ＶＥＧＦ遺伝子産物は血管新生の開始および維持に必要とされるので、本発明の他の一実施形態は、本発明のｓｉＲＮＡによる、ＲＮＡｉを介した標的ｍＲＮＡの分解による対象体内の血管新生の阻害方法、を提供する。
【０１０９】
ＲＮＡｉを介した標的ｍＲＮＡの分解は、上述したｍＲＮＡまたはタンパク質の単離および定量の標準的技術を用いた、標的ｍＲＮＡまたは対象の細胞内タンパク質の量の測定によって、検出できる。
【０１１０】
血管新生の阻害は、例えば、ｓｉＲＮＡによる治療前後の血管新生領域のサイズの観察によって、対象体内の病原性または非病原性の血管新生の進行を直接的に測定することで、評価できる。もし、血管新生領域のサイズが同じまま、または縮小したならば、血管新生の阻害が示唆される。対象体内の血管新生領域のサイズの観察または測定のための技術は当該技術分野の範囲内であり、例えば、脈絡膜血管新生の領域は検眼鏡検査によって観察することが可能である。
【０１１１】
血管新生の阻害は、血管新生と関連する病原性の症状の変化または快復の観察を通して推定することも、また可能である。例えば、ＡＲＭＤでは、失明の減速、停止、または快復が、脈絡膜における血管新生の阻害を示している。
【０１１２】
ｓｉＲＮＡが標的ｍＲＮＡを半化学量論的に分解（および、従って血管新生を阻害）することが可能であることが理解されている。いかなる理論にも束縛されたいと望むことなしに、ｓｉＲＮＡは触媒的に働いて標的ｍＲＮＡの分解を引き起こすとされている。従って、標準的な抗血管新生治療と比較して、治療効果を得るためには、血管新生領域またはその近傍へ輸送するｓｉＲＮＡは著しく少なくてよい。
【０１１３】
特定の実施形態では、ｓｉＲＮＡの有効量は約０．１ｍｇ〜約２０ｍｇである。他の実施形態では、ｓｉＲＮＡの有効量は約０．２ｍｇ〜約２０ｍｇである。好ましい実施形態では、ｓｉＲＮＡの有効量は約０．５ｍｇ〜約５ｍｇであり、さらに好ましくは、約１．５ｍｇ、約２．５ｍｇ、および約３．０ｍｇを含む、約１ｍｇ〜約３ｍｇである。
【０１１４】
他の血管新生関連の疾患は、糖尿病性網膜症、加齢黄斑変性症（ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：ＡＲＭＤ）、乾癬、関節リウマチ、および他の炎症性疾患、を含む。これら疾患は、血管新生領域における、新たに形成された血管による正常組織の破壊、によって特徴付けられる。例えばＡＲＭＤでは、脈絡膜が毛細血管によって侵され、破壊される。ＡＲＭＤにおける血管新生由来の脈絡膜の破壊は、最終的には部分的な、または完全な失明を引き起こす。
【０１１５】
さらに好ましくは、加齢黄斑変性症における脈絡膜血管新生を抑制するためにｓｉＲＮＡを用いる。
【０１１６】
血管新生関連の疾患を治療するために、ｓｉＲＮＡを、前記ｓｉＲＮＡとは異なる医薬品と組み合わせて、対象へ投与することが可能である。あるいは、血管新生関連の疾患を治療するために設計したほかの治療方法と組み合わせて、ｓｉＲＮＡを対象へ投与することが可能である。例えば、加齢黄斑変性症の治療のために現在使用されている治療方法と組み合わせて、ｓｉＲＮＡを投与することが可能である。
【０１１７】
本発明の方法では、本発明のｓｉＲＮＡは、裸のｓｉＲＮＡのまま、デリバリー試薬と結合して、または前記ｓｉＲＮＡを発現する組換えプラスミドまたはウイルスベクターとして、対象へ投与することが可能である。
【０１１８】
本発明のｓｉＲＮＡと結合して投与するための適切なデリバリー試薬は、マイラス・トランスイットＴＫＯ脂肪親和性試薬（Ｍｉｒｕｓ  Ｔｒａｎｓｉｔ  ＴＫＯ  ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ  ｒｅａｇｅｎｔ）；リポフェクチン；リポフェクタミン；セルフェクチン；またはポリカチオン（例えば、ポリリシン）、またはリポソーム、を含む。好ましいデリバリー試薬はリポソームである。
【０１１９】
リポソームは、網膜または腫瘍組織など特定の組織へのｓｉＲＮＡの輸送において助けとなることが可能であり、ｓｉＲＮＡの血中半減期を増加させることもまた可能である。本発明での使用に適したリポソームは、中性または負に帯電した脂質および、コレステロールなどのステロールを含む、ベシクルを形成する標準的な脂質から形成させる。脂質の選択は、リポソームの望ましいサイズ、および血流中でのリポソームの半減期といった要素を考慮に入れて行う。リポソームの調製のためには様々な方法が知られており、例えば、それらの開示内容の全てが本願明細書に参照として取り込まれるところの、Ｓｚｏｋａ  ｅｔ  ａｌ．（１９８０），Ａｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｂｉｏｅｎｇ．９：４６７；および米国特許第４，２３５，８７１号明細書、同第４，５０１，７２８号明細書、同第４，８３７，０２８号明細書、および同第５，０１９，３６９号明細書に記述されている。
【０１２０】
好ましくは、本発明のｓｉＲＮＡを封入するリポソームは、血管新生の部位またはその近傍の特定の細胞または組織をリポソームの標的とすることが可能なリガンド分子、を含む。腫瘍抗原または内皮細胞の表面抗原に結合するモノクローナル抗体といった、腫瘍または血管内皮細胞に多く見られる受容体に結合するリガンドが好ましい。
【０１２１】
特に好ましくは、本発明のｓｉＲＮＡを封入するリポソームは、単核マクロファージ（ｍｏｎｏｎｕｃｌｅａｒ  ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ）および網膜内皮系による排除を避けるために、例えば、構造の表面に結合したオプソニン化阻害部分を有するように修飾する。一実施形態では、本発明のリポソームは、オプソニン化阻害部分およびリガンドの両方を含むことが可能である。
【０１２２】
本発明のリポソームの調製において使用するオプソニン化阻害部分は、典型的には、リポソーム膜に結合した大きな親水性ポリマーである。本願明細書で用いる場合、オプソニン化阻害部分がリポソーム膜へ「結合している」という場合は、例えば、脂溶性アンカーを膜自体への挿入、または膜脂質の活性基への直接的な結合によって、前記オプソニン化阻害部分が化学的または物理的に膜へ付着していることを意味する。それらのオプソニン化阻害親水性ポリマーは、例えばその開示内容の全てが本願明細書において参照として取り込まれるところの、米国特許第４，９２０，０１６号明細書に記述されている通り、マクロファージ・単球系（ｍａｃｒｏｐｈａｇｅ−ｍｏｎｏｃｙｔｅ  ｓｙｓｔｅｍ：ＭＭＳ）および網膜内皮系（ｒｅｔｉｃｕｌｏｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｓｙｓｔｅｍ：ＲＥＳ）によるリポソームの取り込みを著しく減少させる、保護的な表層を形成する。従って、オプソニン化阻害部分によって修飾したリポソームは、修飾していないリポソームと比較して、循環系により長く留まる。この理由により、そういったリポソームは時々、「ステルス（ｓｔｅａｌｔｈ）」リポソームと呼ばれる。
【０１２３】
ステルス・リポソームは、多孔質または「漏れ易い（ｌｅａｋｙ）」微小血管系によって血液供給される組織に蓄積することが知られている。従って、そういった微小血管系の異常、例えば固形腫瘍によって特徴付けられる標的組織は、それらのリポソームを効率的に蓄積する。さらに、ＲＥＳによる取り込みの減少は、肝臓および脾臓への顕著な蓄積を妨げることにより、ステルス・リポソームの毒性を低める。従って、オプソニン化阻害部分によって修飾した本発明のリポソームは、本発明のｓｉＲＮＡを腫瘍細胞へ輸送することが可能である。
【０１２４】
リポソームを修飾するのに適したオプソニン化阻害部分は、好ましくは数平均分子量が約５００〜約４０，０００ダルトン、およびさらに好ましくは約２，０００〜約２０，０００ダルトンの、水溶性ポリマーである。そのようなポリマーは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）またはポリプロリレングリコール（ＰＰＧ）の誘導体を含む；例えば、メトキシＰＥＧまたはＰＰＧ、およびステアリン酸ＰＥＧまたはＰＰＧ；ポリアクリルアミドまたはポリビニルピロリドンといった合成ポリマー；直鎖状、分岐、または樹状ポリアミドアミン；ポリアクリル酸；多価アルコール、例えばガングリオシドＧＭ１といったガングリオシドのようにカルボキシル基またはアミノ基が化学的に結合したポリビニルアルコールおよびポリキシリトール、である。ＰＥＧ、メトキシＰＥＧ，またはメトキシＰＰＧ、またはそれらの誘導体の共重合体もまた、適している。さらに、オプソニン化阻害ポリマーは、ポリアミノ酸、多糖、ポリアミドアミン、ポリエチルエナミン、またはポリヌクレオチドと、ＰＥＧのブロック共重合体とすることも可能である。オプソニン化阻害ポリマーは、例えばガラクツロン酸、マンヌロン酸、ヒアルロン酸、ペクチン酸、ノイラミン酸、アルギン酸、カラギナンといった、アミノ酸またはカルボン酸を含む天然多糖；アミノ化多糖またはオリゴ糖（直鎖または分岐）；または、例えばカルボキシル基で架橋した合成物とカルボン酸の誘導体と反応させたカルボキシル化した多糖またはオリゴ糖、とすることも可能である。
【０１２５】
好ましくは、オプソニン化阻害部分は、ＰＥＧ、ＰＰＧ、またはそれらの誘導体である。ＰＥＧまたはＰＥＧ誘導体で修飾したリポソームは時に「ＰＥＧ化リポソーム（ＰＥＧｙｌａｔｅｄ  ｌｉｐｏｓｏｍｅｓ）」と呼ばれる。
【０１２６】
オプソニン化阻害部分は、多くの既知の技術のうちのいずれかによってリポソーム膜へ結合することが可能である。例えば、Ｎ−ヒドロキシスクシンイミドのＰＥＧエステルをホスファチジルエタノールアミンの脂溶性アンカーへ結合し、それを膜へ結合することが可能である。同様に、デキストランポリマーは、Ｎａ（ＣＮ）ＢＨ３および、テトラヒドロフランおよび水を６０℃で３０：１２の比率にしたものといった溶媒混合液、を用いた還元的アミノ化を介して、ステアリルアミンの脂溶性アンカーによって誘導体化することが可能である。
【０１２７】
ｓｉＲＮＡを発現する組換えプラスミドは、上述の通りである。そうした組換えプラスミドは、マイラス・トランスイットＬＴ１脂肪親和性試薬（Ｍｉｒｕｓ  Ｔｒａｎｓｉｔ  ＬＴ１  ｌｉｐｏｐｈｉｌｉｃ  ｒｅａｇｅｎｔ）；リポフェクチン；リポフェクタミン；セルフェクチン；ポリカチオン（例えば、ポリリシン）またはリポソーム、を含む適切なデリバリー試薬と結合させて、または直接に、投与することもまた可能である。ｓｉＲＮＡを発現する組換えウイルスベクターもまた、上述の通りであり、患者体内の血管新生領域へのそうしたベクターの輸送方法は、当該技術分野の範囲内である。
【０１２８】
血管新生の領域またはその近傍の組織の細胞へｓｉＲＮＡを輸送するのに適した、いかなる方法によっても、ｓｉＲＮＡを対象へ投与することが可能である。例えば、ｓｉＲＮＡは、遺伝子銃、エレクトロポレーション、または他の適切な非経口または腸溶性の投与経路によって、投与することが可能である。
【０１２９】
適切な腸溶性の投与経路は、経口、直腸、または経鼻投与を含む。
【０１３０】
適切な非経口の投与経路は、血管内投与（例えば静脈内ボーラス注射、静脈内注入、動脈内ボーラス注射、動脈内注入、およびカテーテルから血管系への滴下）；組織内または周辺への投与（例えば、腫瘍周辺および腫瘍内への注射、網膜内への注射、網膜下への注射、または硝子体内への注射）；皮下注射、または皮下注入（浸透圧ポンプによるもののような）を含む注入；例えばカテーテルまたは他の注入器（例えば、角膜用のペレット、または坐薬、目薬、または多孔質、非多孔質、またはゲル状の物質を含むインプラント）などによる、血管新生部位またはその近傍への直接的な（例えば局所の）使用；および吸入剤、を含む。
【０１３１】
適切な注入器は、米国特許第５，９０２，５９８号明細書、および同第６，３７５，９７２号明細書に記載されている眼内インプラント、および米国特許第６，３３１，３１３号明細書に記載されている生体分解性の眼内インプラントを含み、これらの開示内容の全ては本願明細書に参照として取り込まれるものである。そういった眼内インプラントは、Ｃｏｎｔｒｏｌ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｓｙｓｔｅｍｓ，Ｉｎｃ．（マサチューセッツ州Ｗａｔｅｒｔｏｗｎ）およびＯｃｕｌｅｘ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．（カリフォルニア州Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ）から入手できる。
【０１３２】
好ましい実施形態では、ｓｉＲＮＡの注射または注入は、血管新生の部位またはその近傍で行う。さらに好ましくは、本技術分野の範囲内（例えば、その開示内容の全てが本願明細書に参照として組み込まれるところの、Ａｃｈｅａｍｐｏｎｇ  ＡＡ  ｅｔ  ａｌ，２００２、Ｄｒｕｇ  Ｍｅｔａｂｏｌ．  ａｎｄ  Ｄｉｓｐｏｓｉｔｉｏｎ  ３０：４２１−４２９を参照）にあるように、例えば下まぶた又は結膜円蓋へ液体またはゲル状にて、ｓｉＲＮＡを目に局所的に投与する。
【０１３３】
典型的には、ｓｉＲＮＡは、約５マイクロリットル〜約７５マイクロリットルの量、例えば約７マイクロリットル〜約５０マイクロリットル、好ましくは約１０マイクロリットル〜約３０マイクロリットルを、目に局所的に投与する。７５マイクロリットル以上の量のｓｉＲＮＡの目への局所的な滴下は、こぼしたり溢れさせたりすることでｓｉＲＮＡを無駄にしてしまうことが理解されよう。
【０１３４】
特に好ましい非経口投与の経路は、眼内投与である。本発明のｓｉＲＮＡの眼内投与としては、投与経路がｓｉＲＮＡの目への進入を許すものである限り、注射によるまたは直接的な（例えば局所的な）目への投与が可能であることが理解されよう。上述した目への投与の局所的な経路に加えて、適切な眼内への投与経路は、硝子体内、網膜内、網膜下、テノン下、眼窩の周囲および後方、角膜を貫いた、および鞏膜を貫いた、投与を含む。そうした眼内投与経路は本技術分野の範囲内であり、例えば、それらの開示内容の全てが本願明細書に参照として組み込まれるところの、上記のＡｃｈｅａｍｐｏｎｇ  ＡＡ  ｅｔ  ａｌ，２００２，およびＢｅｎｎｅｔｔ  ｅｔ  ａｌ．（１９９６），Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅ  Ｔｈｅｒ．７：１７６３−１７６９、およびＡｍｂａｔｉ  Ｊ  ｅｔ  ａｌ．，２００２，Ｐｒｏｇｒｅｓｓ  ｉｎ  Ｒｅｔｉｎａｌ  ａｎｄ  Ｅｙｅ  Ｒｅｓ．２１：１４５−１５１、を参照されたい。他の好ましい一実施形態では、ｓｉＲＮＡを硝子体内への注射によって投与する。
【０１３５】
ｓｉＲＮＡは単回投与または複数回投与で投与することが可能である。注入によるｓｉＲＮＡの投与では、注入は、１回の長い投与または複数回の注入による供給、とすることが可能である。組織への直接的な試薬の注射は、血管新生の部位またはその近傍へすることが好ましい。血管新生の部位またはその近傍の組織への、試薬の複数回の注射が、特に好ましい。
【０１３６】
血管新生の部位またはその近傍への１回の注射または注入などによって、ｓｉＲＮＡを対象へ１回投与することが可能である。あるいは、毎日または毎週ごとに数回、ｓｉＲＮＡを対象へ投与することが可能である。例えば、約３週間〜約２８週間、さらに好ましくは約７週間〜約１０週間の期間に渡って、ｓｉＲＮＡを週１回ずつ対象へ投与することが可能である。好ましい投薬計画では、４週間、８週間、または１２週間に１回、血管新生部位またはその近傍にｓｉＲＮＡを注射する。さらに好ましい投薬計画では、好ましくは約８週間の急性期の間は４週間に１回、血管新生の部位またはその近傍へ（例えば硝子体内へ）ｓｉＲＮＡを注射し、それに続く維持療法期には８週間〜１２週間に１回ずつ前記ｓｉＲＮＡを注射する。好ましくは、ｓｉＲＮＡに先んじて、好ましくは前記ｓｉＲＮＡの投与の２週間前に、そして８週間の間（すなわち、急性期の間）、ＶＥＧＦのアンタゴニストを投与する。滲出型のＡＲＭＤまたは糖尿病性網膜症といった慢性的な血管新生病を患う患者に対しては、無期限の期間、定期的なｓｉＲＮＡの投与が必要となる。
【０１３７】
投薬計画が複数の投与を含む場合、対象へ投与するｓｉＲＮＡの有効量は、全体の投薬計画を通して投与したｓｉＲＮＡの総量を含むことが可能である。
【０１３８】
対象への投与に先んじて、ｓｉＲＮＡを好ましくは、当該技術分野で既知の技術に従って、医薬組成物として規格化する。本発明の医薬組成物は少なくとも発熱物質を含まず無菌であることで特徴付けられる。本願明細書で用いる場合、「医薬品としての規格」とは、ヒトおよび動物への使用における規格を含む。本発明の医薬組成物の調製方法は当該技術分野の範囲内であり、例えば、その開示内容の全てが本願明細書に参照として取り込まれるところの、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅ，１７ｔｈ  ｅｄ．，Ｍａｃｋ  Ｐｕｂｌｉｓｈｉｎｇ  Ｃｏｍｐａｎｙ，ペンシルバニア州Ｅａｓｔｏｎ（１９８５）に記述されている。
【０１３９】
一実施形態では、医薬品としての規格は、ｓｉＲＮＡ（例えば重量で０．１〜９０％）またはそれの生理学的に許容可能な塩を、生理学的に許容可能なキャリアー媒体と混合したもの、を含む。好ましい生理学的に許容可能なキャリアー媒体としては、水、緩衝液、生理的食塩水（例えば、生理食塩水、またはハンクス液またはアール液といった平衡塩類溶液）、０．４％生理食塩水、０．３％グリシン、ヒアルロン酸、およびそれらに類するものが挙げられる。
【０１４０】
医薬組成物は、古典的な医薬賦形剤および／または添加剤もまた、含むことが可能である。適切な医薬賦形剤は、安定剤、酸化防止剤、浸透圧剤、緩衝液、およびｐＨ調節剤、を含む。適切な添加剤は、生理学的に生体適合性のある緩衝液（例えば、塩酸トロメタミン）、キレート剤の添加（例えば、ＤＴＰＡまたはＤＴＰＡ−ビスアマイド）またはカルシウムキレート剤複合体（例えば、カルシウムＤＴＰＡまたはＣａＮａＤＴＰＡ−ビスアマイド）、または、選択的に、カルシウムまたはナトリウム塩の添加（例えば、塩化カルシウム、アスコルビン酸カルシウム、グルコン酸カルシウム、または乳酸カルシウム）、を含む。本発明の医薬組成物は、液状でパッケージすることが可能であり、また凍結乾燥することも可能である。
【０１４１】
目への局所的投与のためには、古典的な眼内へのデリバリー試薬を用いることが可能である。例えば、眼内への局所的デリバリーのための本発明の医薬組成物は、上述した生理食塩水、角膜透過促進剤、不溶性粒子、流動パラフィン又は他のゲルをベースとした軟膏、目への滴下における増粘効果のあるポリマー、または粘膜付着性ポリマー、を含むことが可能である。好ましくは、眼内へのデリバリー試薬は、角膜透過性を増加させる、または、粘度による効果を通して又は角膜上皮を覆うムチン層との物理化学的反応の確立によってｓｉＲＮＡの眼内前方への滞留時間を延長させる、ものである。
【０１４２】
眼内への局所的デリバリーのための適切な不溶性粒子は、その開示内容の全てが本願明細書へ参照として取り込まれるところの、Ｂｅｌｌ  ｅｔ  ａｌ．，による米国特許第６，３５５，２７１号に記載されているリン酸カルシウム粒子、を含む。目への滴下における増粘効果のある適切なポリマーは、ポロキサマー４０７（例えば、濃度２５％）といったポリエチレンポリオキシプロピレンのブロック共重合体、酢酸フタル酸セルロース（例えば、濃度３０％）、またはＧｅｌｒｉｔｅ（登録商標）（ＣＰ  Ｋｅｌｃｏ，デルウェア州Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎより入手可能）といった低アセチル化増粘安定剤、を含む。適切な粘膜付着性ポリマーは、カルボキシル基、水酸基、アミド基、および／または硫酸基といった複数の親水性官能基を有する親水コロイド、例えば、ヒドロキシプロピルセルロース、ポリアクリル酸、高分子量ポリエチレングリコール（例えば、数平均分子量が２００，０００より大きなもの）、デキストラン、ヒアルロン酸、ポリガラクツロン酸、およびキシロカン、を含む。適切な角膜透過促進剤は、シクロデキストリン、塩化ベンザルコニウム、ポリオキシエチレングリコールラウリルエーテル（例えば、ブリッジ（登録商標）３５）、ポリオキシエチレングリコールステアリルエーテル（例えば、ブリッジ（登録商標）７８）、ポリオキシエチレングリコールオレイルエーテル（例えば、ブリッジ（登録商標）９８）、エチレンジアミン四酢酸（ｅｔｈｌｅｎｅ  ｄｉａｍｉｎｅ  ｔｅｔｒａａｃｅｔｉｃ  ａｃｉｄ：ＥＤＴＡ）、ジギトニン、タウロコール酸ナトリウム、サポニン、およびＣｒｅｍａｐｈｏｒ  ＥＬといったポリオキシエチル化ひまし油、を含む。
【０１４３】
固体組成物では、古典的な非毒性の固体担体を用いることが可能である。例えば、医薬品グレードのマンニトール、乳糖、でんぷん、ステアリン酸マグネシウム、サッカリンナトリウム、タルカムパウダー、セルロース、グルコース、スクロース、炭酸マグネシウム、およびそれらに類するもの、である。
【０１４４】
例えば、経口投与のための固体の医薬組成物は、上述の担体および賦形剤のいずれをも含むことが可能であり、１０〜９５％、好ましくは２５〜７５％の１若しくはそれ以上のｓｉＲＮＡを含むことが可能である。エアロゾル（吸入による）投与のための医薬組成物は、重量で０．０１〜２０％、好ましくは重量で１％〜１０％の１若しくはそれ以上のｓｉＲＮＡを上述のリポソームに封入したもの、および推進剤、を含むことが可能である。例えば経鼻投与のためのレチシンなどの担体もまた、必要であれば含むことが可能である。
【０１４５】
本発明は、以下の限定されない実施例によって、説明されることとする。
【実施例１】
【０１４６】
抗ＶＥＧＦ（血管内皮細胞増殖因子）  ｓｉＲＮＡによるサル類のＶＥＧＦのインビボＲＮＡ干渉
ｓｉＲＮＡの設計  ヒトのＶＥＧＦ  ｍＲＮＡの５’末端からｎｔ（ヌクレオチド）３２９に所在の１９ｎｔ配列を標的配列に選んだ：ＡＡＡＣＣＴＣＡＣＣＡＡＧＧＣＣＡＧＣＡＣ（配列ＩＤ番号：５１）。他のどんな遺伝子由来のｍＲＮＡにも含まれていないことを確認するために、この標的配列を、ＮＣＢＩ（米国立生物工学情報センター（Ｔｈｅ  Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ：ＮＣＢＩ））提供のＢＬＡＳＴ検索エンジンに入力した。ＢＬＡＳＴ（Ｂａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｓｅａｒｃｈ  Ｔｏｏｌ）アルゴリズムの使用については、Ａｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９０），Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２１５：４０３−４１０およびＡｌｔｓｃｈｕｌ  ｅｔ  ａｌ．（１９９７），Ｎｕｃｌｅｉｃ  Ａｃｉｄｓ  Ｒｅｓ．２５：３３８９−３４０２、に記載されている。これらの開示は、参照によってその全体が本明細書に組み入まれるものである。前記標的配列を含むｍＲＮＡが他に見つからなかったので、この配列を標的とするため、二重鎖ｓｉＲＮＡを合成した（Ｄｈａｒｍａｃｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ，Ｉｎｃ．，コロラド州Ｌａｆａｙｅｔｔｅ）。
【０１４７】
この二重鎖ｓｉＲＮＡは、次のセンスおよびアンチセンス鎖を有するものである。
【０１４８】
センス：
５’−ａｃｃｕｃａｃｃａａｇｇｃｃａｇｃａｃＴＴ‐３’（配列ＩＤ番号：７７）
アンチセンス：
５’−ｇｕｇｃｕｇｇｃｃｕｕｇｇｕｇａｇｇｕＴＴ‐３’（配列ＩＤ番号：７８）
【０１４９】
前記ｓｉＲＮＡセンスおよびアンチセンス鎖は、共にＴＴ３’の突出末端（オーバーハング）（ボールド体で示す）を各鎖に備えたｎｔ１９の二本鎖ｓｉＲＮＡを形成したものである。このｓｉＲＮＡを「Ｃａｎｄｉｄａｔｅ（候補５）」あるいは「Ｃａｎｄ５」と名付けた。その他の、ヒトのＶＥＧＦ  ｍＲＮＡを標的とするｓｉＲＮＡを設計し、Ｃａｎｄ５に記載のようにテストした。
【０１５０】
この治験の目的は、ＣＮＶ（脈絡膜血管新生）誘発後のオスのカニクイザルに一回硝子体内注入で投与時のＣａｎｄ５の安全性および薬効を決定することであった。Ｃａｎｄ５は、次の投与レベルで未試験済オスのカニクイザルに賦形コントロール剤に入れて投与した：０ｍｇ／目（対照）、０．０７ｍｇ／目、０．１８ｍｇ／目、０．３５ｍｇ／目、および０．７０ｍｇ／目。
【０１５１】
各動物の両眼の黄斑部にレーザー処理してＣＮＶ（脈絡膜血管新生）を誘発し、レーザー処置理後短時間内にＣａｎｄ５の前記投与量を与えた。動物は、臨床的徴候、体重および視覚状態（広範囲な眼科検査、網電図記録および眼圧測定）の変化に就いて評価した。蛍光眼底血管造影を実施し、血液試料を採集した。本治験（４４日目）の終わりに、動物はすべて安楽死させ、また、完全な総体の検屍を行なった。選択した組織は集められ、組織病理学的評価のために保存した。
【０１５２】
サルが、レーザーによる黄斑部損傷後およびその後のＣＮＶ（脈絡膜血管新生）の進行中、０．７０ｍｇ／目以下の投与量を両眼の硝子体内に単回注入した場合、全身あるいは局所（眼）にＣａｎｄ５による悪影響は、検知されなかった。
【実施例２】
【０１５３】
ヒトの胚の腎臓２９３セルにおける抗ＶＥＧＦｓｉＲＮＡによるＶＥＧＦのインビトロＲＮＡ干渉
ヒトの胚の腎臓２９３セル（ＡＴＣＣ、バージニア州Ｍａｎａｓｓａｓから入手）を、１０％のウシ胎児血清（ｆｅｔａｌ  ｂｏｖｉｎｅ  ｓｅｒｕｍ：ＦＢＳ；ＪＲＨ  Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ，カンザス州Ｌｅｎｅｘａから入手）  および細胞培養成長汚染物質予防のために使用した（Ｇｉｂｃｏ社，カルフォルニア州Ｃａｒｌｓｂａｄから入手）抗生−抗真菌性薬剤と共に、ダルベッコ変法イーグル培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ  Ｍｏｄｉｆｉｅｄ  Ｅａｇｌｅ  Ｍｅｄｉｕｍ  （ＤＭＥＭ；Ｃｅｌｌｇｒｏ，バージニア州Ｈｅｒｎｄｏｎから入手）中で培養した。
【０１５４】
ｓｉＲＮＡｓは、Ｉｎｔｅｇｒａｔｅｄ  ＤＮＡ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ  社  （アイオア州Ｃｏｒａｌｖｉｌｌｅ）で合成された。ｓｉＲＮＡ標的配列は表に示されている。この治験では、増強緑色蛍光蛋白質（Ｅｎｈａｎｃｅｄ  ｇｒｅｅｎ  ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｔ  ｐｒｏｔｅｉｎ：ＥＧＦＰ）の遺伝子を標的とする補足のｓｉＲＮＡを、陰性対照として使用した。
【０１５５】
【表２】
2009540011.tif 000007
【０１５６】
インビトロｓｉＲＮＡトランスフェクション（形質移入）および低酸素症誘発  ヒト２９３セルを２４穴（ウエル）プレート中、５％ＣＯ２、３７℃で一晩培養した。翌日、セルが５０％−７０％密集状態（コンフルエント）に達した時、トランスフェクションを実施した。セルは、ヒトのＶＥＧＦに対してつくられたｓｉＲＮＡｓでトランスフェクトした。ｓｉＲＮＡｓはＣａＰｉ試薬中で混合し、２５０ｍＭ  ＣａＣｌ２溶液２０μｌに添加した。前記ｓｉＲＮＡ／ＣａＣｌ２混合物は２倍量のハンクス均衡塩溶液（Ｈａｎｋｓ  Ｂａｌａｎｃｅｄ  Ｓａｌｔ  Ｓｏｌｕｔｉｏｎ：（ＨＢＳ））２０μｌに渦を起こして混合しながら滴下した。前記ＳｉＲＮＡ／ＣａＣｌ２／ＨＢＳ複合体をそれぞれのウエルの培地に直接（３００μｌ／ウエル）添加した。３７℃で４時間培養後に、培地を取り出し、セルを、さらに１０％ＤＭＳＯ含有の無血清培地を用い（３００μｌ／ウエルで１〜２分間室温で）、培養した。次いで、この培地を取り出し、前記セルを再び成長培地で培養した（５００μｌ／ウエル）。陰性対照は、ｓｉＲＮＡｓ不含のトランスフェクション試薬と非特異性ｓｉＲＮＡ  （ＥＧＦＰ１  ｓｉＲＮＡ）を包含した。スクリーニング実験には、ｓｉＲＮＡｓを濃度２５ｎＭで使用した。投与量依存応答実験については、ｓｉＲＮＡｓを、１  ｎＭ、５ｎＭ、および２５ｎＭの濃度で使用した。トランスフェクション実施４時間後にデスフェリオキサミン（Ｄｅｓｆｅｒｒｉｏｘａｍｉｎｅ）を最終濃度１３０μＭで用いて低酸素症を引き起こした。デスフェリオキサミン（Ｄｅｓｆｅｒｒｉｏｘａｍｉｎｅ）は低酸素症状態を擬態するが、これは、ヘム−Ｆｅ２＋相互作用を阻害することにより哺乳類セルの正常な酸素検知経路を中断すると提案されているからである。
【０１５７】
治験設計
ＶＥＧＦ蛋白質の定量化
トランスフェクションから約４８時間後、上澄み液をすべてのウエルから取り出し、ヒトのＶＥＧＦのＥＬＩＳＡ（酵素免疫検定法）（Ｒ&Ｄ  ｓｙｓｔｅｍｓ，ミネソタ州Ｍｉｎｎｅａｐｏｌｉｓ）を、Ｑｕａｎｔｉｋｉｎｅ  ｈｕｍａｎ  ＶＥＧＦ  ＥＬＩＳＡ  プロトコルに記載のように、前記２９３セルに実施した。ＶＥＧＦに特有の抗体をそれぞれのプレートに添加すると、プレートに結合したＶＥＧＦの量に比例して呈色した。ＥＬＩＳＡの結果は、４５０ｎｍ（ベックマンコールター（ＢｅｃｋｍａｎＣｏｕｌｔｅｒ））でＡＤ３４０プレート・リーダ上で読取った。
【０１５８】
結果  ヒトのＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡｓは、２９３セルのヒトのＶＥＧＦ蛋白質の低酸素症誘発上方調節を抑制する。ヒトのＶＥＧＦはデスフェリオキサミン媒介による低酸素症の誘発によって上方調節された。４５０ｎｍでのＯＤ（光学密度）の読みは、セル試料中のヒトのＶＥＧＦ蛋白質レベルを示した。低酸素症の誘発によるｈＶＥＧＦ蛋白質レベルの上昇は、すべてのヒトＶＥＧＦ  ｓｉＲＮＡｓ（図１）でトランスフェクトしたセルで、激減した。非特異性ｓｉＲＮＡ  （ＥＧＦＰ  ｓｉＲＮＡ）を用いたトランスフェクション、あるいはｓｉＲＮＡなしの模擬トランスフェクションでは、ｈＶＥＧＦレベルに対する影響は見られなかった。Ｃａｎｄ５、ｈＶＥＧＦ＃１、ｈＶＥＧＦ＃２、ｈＶＥＧＦ＃３、ｈＶＥＧＦ＃４、ｈＶＥＧＦ＃６およびｈＶＥＧＦ＃７の投与量に対する応答を調べた（図２）。
【実施例３】
【０１５９】
抗ＶＥＧＦｓｉＲＮＡを用いた、ＡＲＭＤ（ａｇｅ−ｒｅｌａｔｅｄ  ｍａｃｕｌａｒ  ｄｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ：ＡＲＭＤ）（加齢黄斑変性症）対象のＶＥＧＦのインビボＲＮＡ干渉
治験設計  合計１１０人（最初に登録された１２９人中）の治験対象が、２８箇所の臨床施設で本格的に参加した。３４人の対象を無作為化して、０．２ｍｇのＣａｎｄ５で治療し、３９人を１．５ｍｇのＣａｎｄ５で治療するよう割り当て、３７人を３．０ｍｇのＣａｎｄ５で治療した。
【０１６０】
自覚屈折度（ｍａｎｉｆｅｓｔ  ｒｅｆｒａｃｔｉｏｎ）、最良矯正視力（ｂｅｓｔ  ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ  ｖｉｓｕａｌ  ａｃｕｉｔｙ）、細隙灯（顕微鏡）検査（ｓｌｉｔ  ｌａｍｐ  ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ）、間接検眼鏡検査（ｉｎｄｉｒｅｃｔ  ｏｐｈｔｈａｌｍｏｓｃｏｐｉｃ  ｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎ）、蛍光眼底血管造影（ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｉｎ  ａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ）、眼底撮影（  ｆｕｎｄｕｓ  ｐｈｏｔｏｇｒａｐｈｙ）、および視覚の統一断層撮影法（ｏｃｕｌａｒ  ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ："ＯＣＴ"）を含むスクリーニング法を用いて、対象をＡＲＭＤ（加齢黄斑変性症）に関連する中心窩下の脈絡膜血管新生（ｃｈｏｒｏｉｄａｌ  ｎｅｏｖａｓｃｕｌａｒｉｚａｔｉｏｎ（ＣＮＶ））に対してスクリーニングした。次の基準がすべて満たされた場合、対象は前記治験に適格とした。
【０１６１】
１．  ＡＲＭＤ（加齢黄斑変性症）に続発する、中心窩下の典型的（クラシック）、主として典型的、或いは最低限度典型的傷害であって、全傷害の大きさ（血液、萎縮／瘢痕，および新生血管を含む）が全１２個のディスク面積≦３０．４８ｍｍ２）で、そのうち少なくとも５０％が活性ＣＮＶ（脈絡膜血管新生）である。最低限度典型的（クラシック）な傷害は次に定義する傷害活性の証拠が無ければならない：
ａ．網膜下の出血、および／または体液および／または脂質の存在、あるいは、
ｂ．過去１２週間中で１行以上の視力の喪失（糖尿病網膜症の早期治療研究視力図表）（Ｅａｒｌｙ  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  Ｄｉａｂｅｔｉｃ  Ｒｅｔｉｎｏｐａｔｈｙ  Ｓｔｕｄｙ  ｖｉｓｕａｌ  ａｃｕｉｔｙ  ｃｈａｒｔｓ：ＥＴＤＲＳ）あるいはこれと同等なもの）、あるいは、
ｃ．過去１２週間にＦＡ（蛍光眼底血管造影）で記録した傷害の進行が≧１０％；
２．ＥＴＤＲＳ最良矯正視力が、治験対象とする眼で６４〜２４個の文字（Ｓｎｅｌｌｅｎ  Ｅ
ｑｕｉｖａｌｅｎｔ（スネーレン等価）２０／５０〜２０／３２０）；
３．網膜下の出血（もしあれば）が傷害全体の大きさの５０％以下であって、また中心
窩下のスペースに関連してはならない；
５．≧５０歳；
６．記入済みインフォームド・コンセント用紙を提出する；
７．予定されたフォローアップ（追跡）検査に再来する意思があり、可能である
８．女性の場合には、≧１年閉経後か、不妊手術済み。
【０１６２】
対象は、すべて、割り当てられた投与量のＣａｎｄ５が１００μｌ硝子体内に２回注入された。
【０１６３】
前記注入は、６週間置いて、初日（Ｄａｙ０）および６週目に投与された。対象は、二重盲検調査試料の１回目の注入から３および６週間後、更に２回目の注入の３、６、９、および１２週間後検査に戻るよう予定された。各注入後１日および１週目に対象全員に電話連絡を行なうことになっていた。最初の注入後から３０、５２および１０４週目に、さらなるフォローアップ（追跡調査）診察が行なわれた。
【０１６４】
薬効指標項目については、欠測値がある対象のためのデータの補完方法（インピュテーション）として、時系列データの欠測に最直前のデータを補完する方法（Ｌａｓｔ  Ｏｂｓｅｒｖｅｄ  Ｃａｒｒｉｅｄ  Ｆｏｒｗａｒｄ：ＬＯＣＦ）を使用することにした。救援治療を受けた対象には、前記救援治療前に観察された薬効値を、ＬＯＣＦ価として使用することにした。ＬＯＣＦ分析に加えて、データの補完（インピュテーション）を実施せずに利用できる観察データを分析した。他に特記しない限り、分析は、利用できるデータについて行なうのである。
【０１６５】
治験結果  重要薬効および安全性結果の要約は表３に提供される。示されているように、治験集団の約７８％で、遠見視力がベースラインから１２週まで安定していた；３〜１５週の期間を考慮すると、この傾向は、治験集団の約８３％までに増加した。ＣＮＶ（脈絡膜血管新生）の大きさは、ほんの僅か変わっただけで、傷害が安定化したことを示唆している。これは、さらにＣＮＶ（脈絡膜血管新生）が示す傷害のパーセントの減少に裏づけされている。（表１１も併せて参照）
【表３】
2009540011.tif 000008
【０１６６】
この結果を見ると、注目すべき重要なことは、Ｃａｎｄ５がＶＥＧＦのｍＲＮＡの分解を誘発し、それによって新規のＶＥＧＦタンパク質の産生を阻害するが、ＶＥＧＦの拮抗剤ではないので、従って以前産生されたＶＥＧＦタンパク質にはなんら作用し得ないことである。ＶＥＧＦ産生を抑制するＣａｎｄ５の前記薬効は、網膜組織中に以前発現されたＶＥＧＦのせいで、直ちに明白に現れないかもしれない。
【０１６７】
これらの事を考慮するので、遠見および近見両方の視力に対するＢＣＶＡ  （ｂｅｓｔ  ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ  ｖｉｓｕａｌ  ａｃｕｉｔｙ：ＢＣＶＡ）（最良矯正視力）文字の変化の平均の分析に加えて、各薬効パラメーターについてベースラインから１２、１５、および１８週目の変化を評価して行なう分析を提出するのである。さらに、ＶＥＧＦの拮抗剤としての活性が無く、ＶＥＧＦ遺伝子を抑制するＣａｎｄ５の作用機構に基づき、個々の重要な薬効パラメーターについて、３週〜１２、１５、および１８週までの変化の評価が提示される。この分析は、網膜組織にあるＶＥＧＦの代謝回転（ターンオーバー）および分解が約３週間で起こると仮定し、それでＶＥＧＦ発現の抑制に関連するＣａｎｄ５の薬効評価ができるようになるのである。
【０１６８】
ＢＣＤＶＡ（最良矯正遠見視力）（Ｂｅｓｔ  Ｃｏｒｒｅｃｔｅｄ  Ｄｉｓｔａｎｃｅ  Ｖｉｓｕａｌ  Ａｃｕｉｔｙ：ＢＣＤＶＡ）  ベースラインからの平均最良矯正遠見視力（ＢＣＤＶＡ）の変化  は、図３に示されている。示すように、平均喪出文字数は、ベースラインから、治験期間に亘って増加していったが、前記平均喪失数は、すべての治療グループのＢＣＤＶＡで１０個未満の文字（<２行）であった。
【０１６９】
ベースラインから９，１２，１５，１８週目のフォローアップ診察までの、最良矯正遠見視力を表わす文字の獲得数が表４に示されている。
【０１７０】
【表４】
2009540011.tif 000009
【０１７１】
３週目からフォローアップ診察までのＢＣＤＶＡ（最良矯正遠見視力）の文字の獲得に関する同様なの分析は、表５に示されている。比較的に侵攻性、即ち、主として典型的および最低限度典型的（クラシック）であるが、潜在疾患ではない疾患に罹患した対象の治験集団において、Ｃａｎｄ５投薬グループの各々の多くの対象がＢＣＤＶＡの文字を獲得し、中には１０および１５、またはそれ以上のＢＣＤＶＡの文字、つまり２〜３行、またはそれ以上を獲得した。
【０１７２】
【表５】
2009540011.tif 000010
【０１７３】
文字を１５個喪失せずとして定義されていて、ＣＮＶ（脈絡膜血管新生）治療剤の臨床試験における主要な分析値と考えられている最良矯正視力の安定化が、表６および表７、ならびに図４に示されている。表６に示すように、眼は、およそ８５％が９週間中安定していたが、１２週で７８％までに若干減少し、次いで、１５および１８週で夫々、７７％および８３％で比較的安定に留まった。
【０１７４】
【表６】
2009540011.tif 000011
【０１７５】
３週目以降の変化を考慮すると、実質的により多数の治験対象が最良矯正視力の安定化を体験した（表７）、つまり、９週目の対象で約９２％、１２週目で８４％、および１５および１８週目で８０％以上が体験した。この調査結果は、以前に発現した細胞外のＶＥＧＦが分解されてしまった時点でＣａｎｄ５の薬効がよりはっきりと明白になるという、ＶＥＧＦの発現をサイレンス（抑制）するＣａｎｄ５の作用機構と一致するのである（図４）。
【０１７６】
【表７】
2009540011.tif 000012
【０１７７】
最良矯正近見視力  ベースラインからの（最良矯正）近見視力（ＢＣＮＶＡ）文字の経時変化を表８および表９、ならびに図５、図６に示す。治験のフォローアップ期間中、ＢＣＮＶＡでは、一般に近見視力の文字５個未満あるいは１行未満の、ほんの僅かな変化が見られたに過ぎないので、最良矯正近見視力の安定性がよいことを示峻している（図５）。
【０１７８】
最良矯正近見視力の経時的文字獲得は、表８に要約されている。治験集団の約５％では、１５個または、それ以上の文字、つまり３行、またはそれ以上のの改善が見られ、９週目〜１８週目の間、比較的安定に留まった。ベースラインからのＢＣＮＶＡ（最良矯正近見視力）の増加の分析では、治療グループ間に統計的に有意な差異が見られ、３．０ｍｇＣａｎｄ５グループの対象が、投与量のより少ない２つのグループに比して、より多くが近見視力文字を獲得したのである（表８；ｐ<０．０５）。
【０１７９】
【表８】
2009540011.tif 000013
【０１８０】
最良矯正近見視力の安定化、つまり対象が文字を１５個喪失しない割合、およびＢＣＮＶＡ（最良矯正近見視力）文字の喪失は、表９および図６に要約されている。９週目で、治験集団の９０％以上は近見視力の文字１５個を喪失せず、この応答者区分では、ほんの僅かの減少が１２、１５、および１８週目に見られるだけであった。最良矯正近見視力の安定性は、３週目以降の診察での変化を考慮すると、さらにもっと顕著になった（図６）。
【０１８１】
【表９】
2009540011.tif 000014
【０１８２】
一回分０．２ｍｇ投与したＣａｎｄ５の明らかな臨床効果を考えると、適切な対照群がないので、無治療対照あるいは擬似処置対照についての既報のデータと比較することは、Ｃａｎｄ５の臨床的有益性を自然経過に対して評価するのに興味深い。ＡＲＭＤ（加齢黄斑変性症）の光線力学療法（ＴＡＰ：  Ｂｌｉｎｄｅｒ  ＫＪ  ｅｔ  ａｌ．  （２００３）  ＴＡＰ  ａｎｄ  ＶＩＰ  ｒｅｐｏｒｔ  Ｎｏ．  １，  Ａｍｅｒ  Ｊ  Ｏｐｈｔｈ  １３６：４０７−１８）  治療の際の偽薬（ｐｌａｃｅｂｏ）群は、このＣａｎｄ５臨床試験の主として典型的（クラシック）な集団にもっとも類似しているので、比較には特に適切である。これは、ＴＡＰ臨床試験の対象集団は、ＡＲＭＤ（加齢黄斑変性症）に対する他の治療選択の余地がなく、（対象の）登録時に治験医師の先入観に左右されず、完全に治療ずれしていない集団であること考慮すると、控えめな比較であると主張出来よう。対象を競合する治療法で治療したり、あるいは対象を他の臨床試験に参加させようとする治験医師の先入観が、他の治療法では余りよい成績が得られそうもなかった対象に偏った、本治験の集団に導かせたたのかもしれないのである。主に典型的（クラシック）な疾患に罹患しているＴＡＰ研究の偽薬対象は、３箇月で文字を１１．７個失った（Ｂｒｅｓｓｌｅｒ  ＮＭ  ｅｔ  ａｌ．  （２００２）  Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ．  １２０：１４４３−５４）が、それに較べて、該当するＣａｎｄ５治療集団では、文字を５．５個失った（図７Ａおよび７Ｂ）（ＬＯＣＦ））。ＴＡＰの主に典型的（クラシック）な偽薬対象は、全体の６９．０％が視力を保持した（文字の喪失、１５未満）が、これに反して本治験では対象の７８．３％が保持した。
【０１８３】
ＣＮＶの大きさ  脈絡膜血管新生（ＣＮＶ）の平均の大きさの、ベースラインからの変化を図８Ａおよび８Ｂ（ＬＯＣＦ））に示す。ＶＥＧＦは、動物モデルで、ＣＮＶの成長に必要且つ十分なことが知られている（Ａｄａｍｉｓ  ＡＰ  ｅｔ  ａｌ．  （１９９６）  Ａｒｃｈ  Ｏｐｈｔｈａｌｍｏｌ  １１４：６６−７１）  ので、傷害で最もＶＥＧＦに応答する成分であると予想されている。投与量の効果傾向を示す証拠があり、これが、統計的に有意ではないとしても、ベースラインからのＣＮＶの成長に関して、すべての診察において明白であることを指摘するのは注目に値する。
【０１８４】
傷害全体の大きさ  傷害全体の大きさのベースラインからの変化を表１０に示す。より適切な  パラメーター（変数）は、ＣＮＶの大きさの変化および、ＣＮＶが表わす傷害の割合の変化であるが、全面的な傷害の大きさのパーセントとしてＣＮＶの変化を分析するのに、傷害全体の大きさに関する情報は、背景知識として有用である。さらに、傷害全体の大きさの変化が、特に後期の時点において、０．２ｍｇのグループおよび１．５ｍｇのグループより、最高量投薬グループの方が小さかったことは、これらの違いが統計的に有意ではないとしても注目に値する。
【０１８５】
【表１０】
2009540011.tif 000015
【０１８６】
傷害全体の大きさ中ＣＮＶのパーセント。傷害全体の大きさでＣＮＶが占める割合の変化を、表１１に示す。示すように３組の治療グループすべての全傷害中のＣＮＶ％に全面的な減少があり、この変化の程度は、３週目〜１８週目に亘って増加した。
【０１８７】
【表１１】
2009540011.tif 000016
【０１８８】
３週目〜１２、１５、１８週目までの傷害中のＣＮＶ％の変化を表１２に示す。  
ベースラインからの変化の分析と一致していて、傷害の内ＣＮＶが占める％は、経時的に減少し、Ｃａｎｄ５が傷害全体の％に基づくＣＮＶの大きさを縮小する薬効を示している。この効果は、どの傷害タイプにも全治験集団でも見られたのである。
【０１８９】
【表１２】
2009540011.tif 000017
【０１９０】
要約と考察  Ｃａｎｄ５はＶＥＧＦ発現をサイレンシング（抑制させること）により作用している可能性があるが、これは、抗ＶＥＧＦ剤ではなく、以前に産生されたＶＥＧＦ蛋白質にはなんら作用しない。ウエット型ＡＲＭＤ（加齢黄斑変性症）対象では、眼の様々な組織中のＶＥＧＦの循環レベルの増加で、新しいＶＥＧＦ産生がない状態で、前記蛋白質が受容体結合および／あるいは自然異化作用で代謝されてしまう迄、新血管新生および血管の浸透性は、促進続ける。蛋白質のこの「代謝」が起こる迄、ＶＥＧＦ産生を抑制するＣａｎｄ５の薬効は直ちに現れないかもしれない。この細胞外のＶＥＧＦ蛋白質集団が代謝するにつれて、新しいＶＥＧＦ産生はＣａｎｄ５によって阻害されることになる。
【０１９１】
したがって、３週目〜１２、１５、および１８週目にかけてのそれぞれの重要な成果の変化の分析が、Ｃａｎｄ５薬効を観察するのにより薬理学的に適切な時間帯（ウィンドウ）を表わしているかもしれない。決定的に確立されているわけではないが、この分析では、およそ３週間で網膜の組織中の細胞外のＶＥＧＦの代謝および分解が起きると仮定している。
【０１９２】
グループ間の著しい違いは識別されなかったが、主な成果中のいくつかの重要な傾向は注目すべきである。特に、遠見視力は、治験対象のおよそ７８％がベースラインから１２週目まで安定していた；また、３週目〜１５週目までの期間について考慮すると、治験集団のおよそ８３％にまで増えた。この８３％視力安定化は１８週目の検査を通じて保持された。これはＣａｎｄ５で最後に治療して以降１２週間にも及んだことになる。
【０１９３】
ＣＮＶの大きさは、この１８週間の期間にほんの僅か変化しただけであり、これは、傷害が安定化したことを示唆している。重要なことは、ＣＮＶ傷害の大きさにかなり明瞭な投与量効果が見られ、ＣＮＶの大きさの増加がＣａｎｄ５の０．２ｍｇの投与量で最大で、１．５ｍｇのグループでやや低下し、Ｃａｎｄ５の３．０ｍｇの投与量で治療した眼で最小であったことである。動物モデル［３］で、ＶＥＧＦがＣＮＶの成長に必要、且つ十分なことが知られており、したがって、ＣＮＶが傷害の最大のＶＥＧＦ応答成分であると予想される。このように、この結果は、Ｃａｎｄ５効果にとって特に適切なマーカーになる。ＣＮＶの大きさの変化の間の違いが、ベースラインから１２週目（ｐ＝０．０５８２）  に亘って統計的に有意でなかったが、より大きな集団で調査すると、このことがさらに実証されるであろうと予想される。
【０１９４】
視力とＣＮＶの大きさの安定化におけるこれらの発見は、ＣＮＶ傷害タイプに関する治験集団の特性を考えると、特に注目すべきである。１２週間の治療後のＣａｎｄ５薬効の評価ができるように、侵攻性疾患対象を登録した。この治験集団は、６４％が主に典型的（クラシック）傷害で３６％が最低度の典型的（クラシック）傷害であったが、潜在性疾患対象は登録から除いた。最低度の典型的（クラシック）傷害は、活性であることが必要で、また、３か月以上、登録に先立って、傷害の大きさの増加が>１０％、あるいはＢＣＤＶＡ（最良矯正遠見視力）の>１行の喪失が必要とされた。最後に、複数、つまりＭａｃｕｇｅｎ（登録商標）の注射２回以下、トリアムシノロン（ｔｒｉａｍｃｉｎｏｌｏｎｅ）注射１回、およびＰＤＴ治療１回という以前の治療は承認された。本治験では、対象の２４％は以前に自分の治験対象眼のＡＲＭＤ（加齢黄斑変性症）治療を受けていた。傷害の２１％がｔｈｅ  Ｄｉｇｉｔａｌ  Ａｎｇｉｏｇｒａｐｈｙ  Ｒｅａｄｉｎｇ  Ｃｅｎｔｅｒ（ディジタル血管造影読影センター）で決定されたような網膜内血管腫状増殖（ｒｅｔｉｎａｌ  ａｎｇｉｏｍａｔｏｕｓ  ｐｒｏｆｉｌｅｒａｔｉｏｎ：ＲＡＰ）の特性を持つと識別されていたことは、注目に値する。想定外の、高度の侵攻性なＲＡＰ傷害の発生があったので、本治験期間において、無作為化層化の導入を追加することになった。この厳しい影響を受けた集団であったにもかかわらず、Ｃａｎｄ５は、すべての投与量グループに薬効を持つようであった。
【０１９５】
Ｃａｎｄ５は、硝子体注入により３．０ｍｇを超えない投与量で、安全、且つ薬効があると結論できる。
【０１９６】
前記の事項に基づけば、Ｃａｎｄ５の投与と別の治療と組み合わせることが有利かもしれないと考えられる。例えば、最初の３か月間あるいはそれ以上、１月当たりルセンティス（Ｌｕｃｅｎｔｉｓ）を投与することと、維持療法として既往のＶＥＧＦに悪影響を与えないように思われるＣａｎｄ５を投与することとからなる急性初期療法である。
【実施例４】
【０１９７】
抗ＶＥＧＦｓｉＲＮＡを使用する、ＤＭＥ（糖尿病性黄斑浮腫）罹患のヒトのＶＥＧＦのインビボ  ＲＮＡ干渉
治験設計  ４８人の対象を無作為化し、Ｃａｎｄ５を、０．２ｍｇ（１８人）、１．５ｍｇ（１２人）、および３．０ｍｇ（１８人）で治療した。この注入投与は、初日（Ｄａｙ０）、４週目および８週目に、４週間置いて行なわれた。対象は、少なくとも２１歳で、１型あるいは２型糖尿病と診断されている。対象は、視覚統一断層撮影法で中心部分体に黄斑の中心が最低２５０ミクロン以上の黄斑浮腫を有し、牽引性病因の兆候がなく、検眼鏡診察で臨床的有意な黄斑浮腫（ＣＳＭＥ（ｃｌｉｎｉｃａｌｌｙ  ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ  ｍａｃｕｌｒ  ｅｄｅｍａ：ＣＳＭＥ））、最良矯正視力の文字成績６９〜２４、およびスネーレン（Ｓｎｅｌｌｅｎ  ｅｑｕｉｖａｌｅｎｔ）等価視力（２０／４０〜２０／３２０）を有していた。対象が慢性腎不全、不安定な病状（ＨｂＡ１Ｃ（ヘモグロビンＡ１Ｃ（糖化ヘモグロビン）が１０％超過）、ＰＲＰ（汎網膜光凝固（ｐａｎｒｅｔｉｎａｌ  ｐｈｏｔｏｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ：ＰＲＰ）に１２週以内に編入、あるいはその予定、焦点レーザーに１２週以内に編入、あるいは６箇月以内にステロイド使用へ編入の場合には排除された。
【０１９８】
ベースライン年齢は、６２．７歳、５６％が女性、４４％が男性、７０％が白人で３０％が白人以外であった。他眼は、７６．７％がＤＭＥ（糖尿病性黄斑浮腫）（ｄｉａｂｅｔｅｓ  ｍａｃｕｌａｒ  ｅｄｅｍａ：ＤＭＥ）で２３．３％はＤＭＥに罹患していなかった。当該平均視力は文字数５７．３であった（２０／６３）。国際臨床糖尿病網膜症の重症分類を使用すると、６人は、軽症非増殖、１８人は、中等非増殖、８人は重症非増殖、また、１６人は増殖網膜症であった。
【０１９９】
試料は、硝子体注入してから３０分、３時間、および２４時間後に採集した。血漿試料は検知可能な程度のＣａｎｄ５を含んでいなかった。一次有効性指標（評価項目）（ｅｎｄｐｏｉｎｔ）は、１２週目のＯＣＴ（視覚の統一断層撮影法（ｏｃｕｌａｒ  ｃｏｈｅｒｅｎｃｅ  ｔｏｍｏｇｒａｐｈｙ："ＯＣＴ"））厚さ変化であって、二次有効性指標は、１２週目の視力変化であった。一次評価指標（ＯＣＴ）は、中心下部分野の平均厚さ比べた、網膜厚さの変化として測定された。１２週目、投与量３回後のベースラインからの変化は、−８．９μｍ（範囲、−５４７μｍ〜３１０μｍ）で，さらに図９に図示してある。二次有効性指標は、文字で表わした矯正視力の平均の変化として分析した。１２週目、投与量３回後のベースラインからの平均の変化は、文字数０．１（範囲：−３９文字〜２１文字）で、図１０に図示してある。
【０２００】
Ｃａｎｄ５は安全で、ＤＭＥ対象の忍容性は良好である。３箇月目、投与３回後、平均ＯＣＴ厚さおよび視力変化は少なかったが、一部（サブセット）の対象らはよくなり、ＤＭＥにおける［治療の］生物学的効果を立証した。ＡＲＭＤ（加齢黄斑変性症）で見られるように、既往の細胞外ＶＥＧＦの中には、治療処理されないものがあるようであるが、新規のＶＥＧＦの産生は阻害されている。したがって、前記指標に対する究極の効果は、調査する時間が必要である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９】
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【図１０】
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【配列表】
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【国際調査報告】
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