(57)【要約】  本発明は病的障害の治療用医薬としてのウイルスのカプシドタンパク質に関する。より詳細には、本発明は、病的障害、好ましくは品質管理工程に関与する細胞タンパク質、特にシャペロン、の不活化に関連する障害、の治療用組成物における有効成分としてのウイルスのカプシドタンパク質ＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３、好ましくは、ＳＶ４０のＶＰ１、又は任意のそのペプチド、断片、変異体、誘導体及び混合物、あるいはそれらを含むウイルス様粒子（ＶＬＰｓ）に関する。更に、本発明はこのような障害の治療のための方法及び医薬組成物の製造のためのＳＶ４０のカプシドタンパク質の使用を提供する。【特許請求の範囲】
【請求項１】
有効成分として、ウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片の、あるいはウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片を含むウイルス様粒子（ＶＬＰｓ）の、治療的有効量を含む、病的障害の治療用医薬組成物。
【請求項２】
前記ウイルスのカプシドタンパク質が、パピローマウイルス、又はポリオーマウイルスのいずれかのカプシドタンパク質、又は任意のその断片、ペプチド、変異体、誘導体、ペプチド、混合物及び組合せである、請求項１に記載の組成物。
【請求項３】
前記のウイルスのカプシドタンパク質が、ＳＶ４０のＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３の少なくとも一つ、及び任意のそのペプチド、変異体、誘導体、断片、混合物及び組合せである、請求項２に記載の組成物。
【請求項４】
前記ウイルスのカプシドタンパク質が、ＳＶ４０のＶＰ１又は任意のそのペプチド、変異体若しくはその断片、あるいはＳＶ４０カプシドタンパク質の少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片を含むＶＬＰｓである、請求項３に記載の組成物。
【請求項５】
前記ＳＶ４０のＶＰ１変異体が、カルボキシ末端腕を欠損し、ＶＰ１ΔＣと呼ばれる、請求項４に記載の組成物。
【請求項６】
前記病的障害が品質管理工程又は炎症工程に関与する細胞タンパク質の活性化により改善される、請求項１に記載の組成物。
【請求項７】
品質管理工程に関与する前記タンパク質が、シャペロンである、請求項６に記載の組成物。
【請求項８】
前記病的障害が、神経変性障害及び免疫関連障害のいずれか一つであることがある、請求項６及び７のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項９】
前記免疫関連障害が、自己免疫疾患、悪性及び非悪性増殖性障害、移植拒絶病変及び移植片対宿主病、及び病原因子により引き起こされる障害のいずれか一つである、請求項８に記載の組成物。
【請求項１０】
病原因子により引き起こされる前記病的障害が、急性腎不全（ＡＲＦ）、ＡＲＤＳ（急性呼吸窮迫症候群）及び多系統臓器不全のいずれか一つをもたらす敗血症を誘導するものである、請求項９に記載の組成物。
【請求項１１】
前記ＡＲＦ（急性腎不全）がＡＫＩ（急性腎損傷）である、請求項１０に記載の組成物。
【請求項１２】
ＡＲＦの治療に使用するための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１３】
酸化的ストレス及びアポトーシスのいずれか一つからの細胞の救出、及び前記細胞の生存経路の誘導のための、請求項１〜５のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項１４】
酸化的ストレス及びアポトーシスのいずれか一つから、それを必要とする対象者の細胞の救出のための、及び前記細胞の生存経路の誘導のための、請求項１３に記載の組成物。
【請求項１５】
ウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片の、あるいはウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片を含むウイルス様粒子（ＶＬＰｓ）の、あるいはそれらを含む組成物の、治療的有効量を、治療を必要とする対象者に投与する工程を含む、前記対象者における病的障害の治療方法。
【請求項１６】
前記ウイルスのカプシドタンパク質が、パピローマウイルス、又はポリオーマウイルスのカプシドタンパク質のいずれか一つ、又は任意のその断片、変異体、ペプチド、及び混合物及び組合せである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記ウイルスのカプシドタンパク質が、ＳＶ４０のＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３少なくとも１つ、及び任意のそのペプチド、変異体、断片、混合物及び組合せである、請求項１６に記載の方法。
【請求項１８】
前記ウイルスのカプシドタンパク質が、ＳＶ４０のＶＰ１又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片、あるいは前記ＳＶ４０のＶＰ１を含む任意のＶＬＰｓである、請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記ＳＶ４０のＶＰ１変異体が、そのカルボキシ末端腕が欠損し、ＶＰ１ΔＣと呼ばれる、請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記病的障害は品質管理工程又は炎症工程に関与する細胞タンパク質の活性化により改善される、請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
品質管理工程に関与する前記タンパク質が、シャペロンである、請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
前記病的障害が、神経変性障害及び免疫関連障害のいずれか一つである、請求項２０及び２１のいずれか一項に記載の組成物。
【請求項２３】
前記免疫関連障害が自己免疫疾患、悪性及び非悪性増殖性障害、移植拒絶病変及び移植片対宿主病、及び病原因子により引き起こされる障害のいずれか一つである、請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
病原因子により引き起こされる前記病的障害が、急性腎不全（ＡＲＦ）、ＡＲＤＳ（急性呼吸窮迫症候群）及び多系統臓器不全のいずれか一つをもたらす敗血症を誘導するものである、請求項２３に記載の方法。
【請求項２５】
前記ＡＲＦがＡＫＩである、請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
病的障害に罹っている対象者より得られた細胞を、ウイルスのカプシドタンパク質少なくとも１つ、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片の、あるいは前記ウイルスのカプシドタンパク質、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片を含むＶＬＰｓの、有効量と接触させる工程を含む、病的障害における品質管理工程に関与する細胞タンパク質の改善効果の促進方法。
【請求項２７】
ウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片の、あるいは前記ウイルスのカプシドタンパク質、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片を含むＶＬＰｓの、あるいはそれらを含む組成物の、治療的有効量を、それを必要とする対象者に投与する工程を含む、前記対象者における病的障害で品質管理工程に関与する細胞タンパク質の改善効果の促進方法。
【請求項２８】
酸化的ストレス又はアポトーシスが進行中の細胞を、ウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片の、あるいは前記ウイルスのカプシドタンパク質、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片を含むＶＬＰｓの、あるいはそれらを含む組成物の、有効量と接触させる工程を含む、酸化的ストレス又はアポトーシスからの細胞の救出方法。
【請求項２９】
生存経路の誘導を必要とする細胞を、ウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片の、あるいは前記ウイルスのカプシドタンパク質、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片を含むＶＬＰｓの、あるいはそれらを含む組成物の、有効量と接触させる工程を含む、それを必要とする細胞における生存経路の誘導方法。
【請求項３０】
前記細胞は病的障害に罹っている対象者の細胞である、請求項２８及び２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３１】
前記ウイルスのカプシドタンパク質が、ＳＶ４０のＶＰ１又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片、あるいはＳＶ４０のＶＰ１又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片を含むＶＬＰｓである、請求項２８及び２９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項３２】
前記ＳＶ４０のＶＰ１変異体が、そのカルボキシ末端腕を欠損し、ＶＰ１ΔＣと呼ばれる、請求項３１に記載の方法。
【請求項３３】
前記病的障害が、神経変性疾患および免疫関連疾患のいずれか一つであることがある、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
前記病的障害はＡＲＦである、請求項３３に記載の方法。
【請求項３５】
病的障害の治療用医薬組成物の製造における、ウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片の、あるいは前記ウイルスのカプシドタンパク質、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片を含むＶＬＰｓの、使用。
【請求項３６】
前記ウイルスのカプシドタンパク質、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片、あるいは前記ウイルスのカプシドタンパク質を含むＶＬＰｓが、前記病的障害において品質管理工程に関与する細胞タンパク質、好ましくはシャペロンの改善効果を促進する、請求項３５に記載の使用。
【請求項３７】
酸化的ストレス又はアポトーシスからの細胞の救出用の医薬組成物の製造における、ウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片の、あるいは前記ウイルスのカプシドタンパク質、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片を含むＶＬＰｓの、使用。
【請求項３８】
前記ウイルスのカプシドタンパク質が、パピローマウイルス、又はポリオーマウイルスのカプシドタンパク質のいずれか一つ、又は任意のその断片、ペプチド、変異体、及び混合物及び組合せ、又は前記カプシドタンパク質、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片を含むＶＬＰｓである、請求項３５及び３７のいずれか一項に記載の使用。
【請求項３９】
前記ウイルスのカプシドタンパク質が、ＳＶ４０のＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３少なくとも１つ、及び任意のそのペプチド、変異体、断片、混合物及び組合せ、又は前記カプシドタンパク質、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片を含むＶＬＰｓである、請求項３８に記載の使用。
【請求項４０】
前記ウイルスのカプシドタンパク質が、ＳＶ４０のＶＰ１又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片、あるいはＳＶ４０のＶＰ１又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片を含むＶＬＰｓである、請求項３９に記載の使用。
【請求項４１】
前記ＳＶ４０のＶＰ１変異体が、そのカルボキシ末端腕を欠損し、ＶＰ１ΔＣと呼ばれる、請求項４０に記載の使用。
【請求項４２】
前記免疫関連障害が自己免疫疾患、悪性及び非悪性増殖性障害、移植拒絶病変及び移植片対宿主病、及び病原因子により引き起こされる障害のいずれか一つである、請求項４０に記載の使用。
【請求項４３】
前記病的障害がＡＫＩである、請求項４２に記載の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、品質管理工程（quality control processes）に関与する細胞タンパク質の不活化と関連する障害の治療のための組成物及び方法に関する。より詳細には、本発明はこのような病的障害の治療のための組成物及び方法における、ウイルスのカプシドタンパク質、好ましくは、ＳＶ４０のＶＰ１又は任意のそのペプチド、断片、変異体及び混合物の使用に関する。
【０００２】
《発明の背景》
本出願を通して記載される全ての刊行物は、本明細書の全ての引用文献を含む参考文献として本明細書に完全に取り込まれている。
【０００３】
究極の寄生体であるウイルスは、自身の複製のために多くの細胞の機能を奪ってしまう［Munther et al., Science’s STKE 335:1-13 (2006)］。それは、細胞と結合するとすぐに、それが発現及び複製で採用する細胞の機構を始動させる前に、細胞への侵入（ｅｎｔｒｙ）、輸送（ｔｒａｆｆｉｃｋｉｎｇ）、及び解体（ｄｉｓａｓｓｅｍｂｌｙ）という事象のための多数のカスケード（階段）への引き金を引く。ウイルス粒子の感染により活性化されるいくつかの因子は、鍵となる工程、例えば炎症反応及び細胞死、に関与する。
【０００４】
ウイルスゲノム（ウイルス全遺伝情報）の解体及び発現以前に起きるごく初期の事象は、ウイルスの外殻により引き金を引かれる可能性が最も高い。従って、ウイルスのカプシドは、治療効果を有することもある細胞メカニズムを使用することもある。
【０００５】
ＳＶ４０（及びポリオーマウイルス及びパピローマウイルス・ファミリーの他のメンバー）は感染後にシャペロンを誘導するが［Ioannis et al., FEBS Letters 355:282-286 (1994); Cripe et al., J. Virol. 69:7807-7813 (1995); Chromy et al., PNAS 100:10477-10482 (2006) 及びこの中の参考文献］、これはおそらくこれらのウイルスが解体（及び組立）に宿主のシャペロンを使用するからである。驚くべきことに本発明で示されるように、シャペロンはウイルスの制御タンパク質によるというよりは、むしろカプシドタンパク質又はウイルスの構造タンパク質により誘導される。シャペロンは、危機的状況、例えばＡＲＤＳ（急性呼吸窮迫症候群）及び以前はＡＴＮ（急性尿細管壊死）と呼ばれていたＡＫＩ（急性腎臓損傷）を改善させると提唱されていた。特に、モデルＡＲＤＳラットの遺伝子治療に適用された、ＨＳＰ７０の異所性発現は改善効果を示した［Weiss et al., the J. Clin. Invest. 110:801-806 (2002)］。従って、本発明者はＳＶ４０によるシャペロンの誘導がこれらの状況を治療するのに役立つこともあるのではないかという可能性を調査した。本発明により明瞭に示されたように、ＳＶ４０カプシド（ＶＬＰｓ）はＡＫＩマウスモデルを使用した病的症状を顕著に改善し、従って急性腎不全（ＡＲＦ）の治療への使用に適用することができる。この特別な例（ＡＲＦ）は、種々の臓器において細胞の品質管理メカニズムの機能不全に関係する任意の他の障害の治療にウイルスのカプシドタンパク質、具体的にはＳＶ４０のＶＰ１を、使用することの実現可能性を明瞭に確立した。
【０００６】
従って、本発明の一つの目的は、病的障害の治療、好ましくは細胞タンパク質の不活化に関連した障害、に使用するための組成物における有効成分として、ウイルスのカプシドタンパク質であるＶＰ１、ＶＰ２及びＶＰ３、好ましくは、ＳＶ４０のＶＰ１又は任意のそのペプチド、変異体、断片及び混合物を提供することである。このような細胞タンパク質は、好ましくは、品質管理工程に関与するタンパク質、例えば、シャペロンである。
【０００７】
また他の目的において、本発明は、細胞タンパク質、好ましくは品質管理工程に関与するタンパク質、例えば、シャペロン、の不活化に関連した障害の治療方法を提供する。
【０００８】
本発明の他の目的は、病的障害における品質管理工程に関与する細胞タンパク質、例えばシャペロンの効果を、前記細胞タンパク質を亢進させることで促進させる方法を提供することである。
【０００９】
他の目的において、本発明は、病的障害、好ましくは免疫関連障害又は神経変性障害の治療用組成物の製造物中における、ＳＶ４０カプシドタンパク質又は前記カプシドタンパク質を含むＳＶ４０のＶＬＰｓの使用を提供する。
【００１０】
本発明のこれら及び他の目的は記載が進むにつれて明らかになるであろう。
【００１１】
《発明の概要》
第一の観点では、本発明は病的障害の治療用医薬組成物に関する。本発明の組成物は、有効成分としてウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片、あるいはウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片を含む任意のＶＬＰｓの、治療的有効量を含む。
【００１２】
本発明の組成物は、病的障害の治療を意図したものではあるが、前記カプシドタンパク質が由来するウイルスに対するワクチンとしての使用を意図したものではないことは留意されるべきである。
【００１３】
或る実施態様によれば、ウイルスのカプシドタンパク質が、パピローマウイルス、又はポリオーマウイルスの任意のカプシドタンパク質、又は任意のその断片、ペプチド、変異体、任意の混合物及び組合せであることもある。
【００１４】
或る特定の好ましい実施態様によれば、ウイルスのカプシドタンパク質が、ＳＶ４０のＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３の少なくとも一つ、及び任意のそのペプチド、変異体、断片、任意のその混合物及び任意の組合せ、又は前記のＳＶ４０カプシドタンパク質の少なくとも一つ又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片を含む任意のＶＬＰｓであることもある。最も好ましくは、ウイルスのカプシドタンパク質が、ＳＶ４０のＶＰ１又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片であることができる。変異ＳＶ４０のＶＰ１分子にとっての具体的な例は、ＶＰ１ΔＣ変異体、好ましくは、前記変異分子は配列番号：４に実質的に記されるアミノ酸配列を含むものであることができる。
【００１５】
他の実施態様によれば、本発明の組成物は病的障害、例えば神経変性障害又は免疫関連障害、の治療に特に適用可能かつ適合していることができる。本発明の組成物により治療を受ける病的障害は、好ましくは細胞内における品質管理工程に関与する細胞タンパク質の不活化と関連した障害であり、好ましくはシャペロン不活化と関連した障害であることは留意されるべきである。
【００１６】
第二の観点では、本発明は、それを必要とする対象者における病的障害の治療方法に関する。この方法は、ウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片、あるいは同一組成物を含む任意のＶＬＰｓの、あるいはそれらを含む組成物の、治療有効量を、治療を受ける対象者に対して投与する工程を含む。
【００１７】
第三の観点では、本発明は病的障害で、品質管理工程に関与する細胞タンパク質の改善効果工程の促進方法に関する。この方法は、病的障害に罹っている対象者より得られた細胞をウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片、あるいはそれらを含むＶＬＰｓの、有効量と接触させる工程を含む。
【００１８】
第四の観点では、本発明は病的障害の治療用医薬組成物の製造における、ウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片、あるいはそれらを含むＶＬＰｓの、使用に関する。
【００１９】
さらに、本発明は次の図及び実施例をもとに記載されよう。
【図面の簡単な説明】
【００２０】
【図１】（図１Ａ〜１Ｃ）昆虫細胞における組換えＶＬＰｓの生産。（Ａ）ＶＬＰｓ及び（Ｂ）野生型ＳＶ４０、１％タングストリン酸塩ｐＨ７で染色後電子顕微鏡により観察。（Ｃ）クマシー染色した、精製ＶＬＰｓのＰＡＧＥ分析。略語：Ｐｒｏｔ.（タンパク質）。
【図２】（図２Ａ〜２Ｂ）培養ＣＶ１細胞においてＳＶ４０のＶＬＰｓはＨｓｐ／ｃ７０を上方調節（ｕｐｒｅｇｌａｔｅ）する。ＣＶ１細胞は１０６細胞あたり５０ｎｇ及び５００ｎｇのＳＶ４０のＶＬＰｓで処理された。（Ａ）総細胞タンパク質は上に示す時間における異なる時点で回収され、ｈｓｐ／ｈｓｃ７０タンパク質に対するモノクローナル抗体でウエスタンブロティングにより分析された。対照群：９０分間４５℃で熱ショックを与えたＨＳ−ＣＶ１細胞、Ｃ−無処理対照。（Ｂ）５０ｎｇＶＬＰｓで処理されたＣＶ１細胞、抗Ｈｓｐ／ｃ７０抗体で免疫染色し共焦点顕微鏡で観察した。略語：ｍｏｃ．（偽処理）。
【図３】（図３Ａ〜３Ｃ）ヒト胎児腎臓（ＨＥＫ）細胞。細胞はＶＬＰｓにより感染させた時点で、最終濃度２０μｇ／ｍｌのエトポシドで処理した。ＶＬＰｓの濃度は１０６細胞あたり５０ｎｇであった。（Ａ）は対照を示す；（Ｂ）はエトポシドによる処理を、及び（Ｃ）はエトポシド及びＳＶ４０のＶＰＬｓによる処理を示す。略語：ｃｏｎｔ．（対照）。
【図４】（図４Ａ〜４Ｂ）ＳＶ４０はマウスにおいて腎臓を標的とする。尾静脈より１００μｌ容積の１０８感染単位（ｐｆｕ）のＳＶｌｕｃベクター［Arad, U. Virology 304:155-159 (2002)］の注射４８時間後のマウス腎臓全体の切片。免疫組織化学は、腎臓組織に対して抗ＳＶ４０のＶＰ１の一次抗体［Sandalon and Oppenheim, Virology 237:414-421(1997)］及びＨＲＰ標識抗ウサギ二次抗体により実施した。褐色の染色は腎尿細管上皮細胞によるＶＰ１の取り込みを示す。ＰＢＳを注射された対照は染色を示さなかった。（Ａ）は１０ｘ倍率を、及び（Ｂ）は４０ｘ倍率を示す。
【図５】腎臓毒性のマウスモデル。ＨｇＣｌ２を示す濃度でＢＡＬＢ／Ｃ雌マウスにＩＰ投与し、示す日に尾静脈より血液を採取し、そして尿素のレベルはレフロトロン（Ｒｅｆｌｏｔｒｏｎ）尿試験（ロシュ）を使用して測定した。各群の動物数は括弧内に示す。棒線は標準偏差を示す。略語：ｂｌ．Ｕｒ．（血液中尿素）、ｓｈ．（シャム；偽処置）。
【図６】ＨｇＣｌ２損傷に対する培養マウス腎尿細管細胞の保護。培養マウス腎尿細管細胞はＨｇＣｌ２（Ａ）又はＨｇＣｌ２及びＳＶ４０のＶＬＰｓ（Ｂ）で処理し、顕微鏡観察した。
【図７】（図７Ａ〜７Ｃ）ＳＶ４０のＶＬＰｓ処理マウスの生存率。（Ａ）図は、ＶＬＰｓによる治療がＡＫＩモデルマウス（Ｎｏ  ｖｅｃ．＝ＨｇＣｌ２のみ；ＶＬＰ＝ＶＬＰ＋ＨｇＣｌ２）の生存率を上昇させることを示す；（Ｂ）は無処理ＡＫＩ動物に対するＶＬＰ処理動物の生存を示す；（Ｃ）は用量反応を示す。ＶＬＰ量のログ・スケールに留意。ポイントの下に示される数字は特定の用量における動物の数を示す。略語：ｓｕｒ．（生存率）、Ｄ（ＨｇＣｌ２注射後の日にち）、ｓｈ．（シャム）。
【図８】（図８Ａ〜８Ｂ）変異ＳＶ４０のＶＰ１カプシドタンパク質、ＶＰ１ΔＣ、はＡＫＩマウスを保護する。（Ａ）変異タンパク質（ａ）、（ｂ）の産生―２つの異なるバッチのＶＰ１ΔＣを注射されたマウスから得られた試料。ＰＡＧＥはＭＥＳ緩衝液で泳動し、タンパク質は銀染色で検出した。Ｍ−シーブルー・サイズ・マーカー（インビトロジェン）。（Ｂ）生存実験。略語：Ｐｒｏｔ．（タンパク質）、Ｓｕｒ．（生存率）、ｓｈ．（シャム）。
【図９】（図９Ａ〜９Ｃ）異なる病変パラメーターにおけるＳＶ４０のＶＬＰｓの保護効果。（Ａ）ＨｇＣｌ２注射３日後に写真撮影した腎臓全体の外見。（Ｂ）血清中尿素（左）及びクレアチニン（右）のレベルは、４日目に尿素及びクレアチニンについてはそれぞれレフロトロン・キット及びクレアチニンテスト（ロシュ）を用いて測定した。シャム及びＶＬＰでのみ処理したグループの血清中クレアチニンは検出限界以下であることは留意される。片側スチューデント・テストの結果は、血液尿素及びクレアチニンについてはそれぞれＰ＝０．０００８及びＰ＝０．０３５であった。各グループの動物数は下に示す。（Ｃ）ＶＬＰ処理及びＶＬＰ非処理のＡＫＩマウスの血清中尿素。各グループの動物数は括弧内に示す。棒線は標準誤差を示す。略語：Ｎ．ａｎ（動物数）、Ｄ．（日）、ｓｈ．（シャム）。
【図１０】水銀で引き起こされる酸化的ストレス。チオバルビツール酸に反応性の基質レベルは、ＴＢＡＲＳ測定法［Esterbauer, H. and Cheeseman, K.H. Methods Enzymol.186:407-421 (1990)］を使用して測定した。マウスに６．５ｍｇ／ｋｇのＨｇＣｌ２を、０．３ｍｇ／ｋｇのＶＬＰｓによる処理とともに、又はそれ無しに注射した。各グループの数は棒線の下に示す。略語：Ｎ．ａｎ（動物数）、ｓｈ．（シャム）。
【発明の詳細な説明】
【００２１】
第一の観点では、本発明は病的障害の治療用医薬組成物に関する。本発明の組成物は有効成分として、ウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド、変異体、断片、又はウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ又は任意のそのペプチド、変異体、断片を含むＶＬＰｓの、治療的有効量を含む。
【００２２】
本発明の組成物は、病的障害の治療を意図してはいるが、前記カプシドタンパク質の由来するウイルスに対するワクチンとして使用されるものではないことは、留意されることが好ましい。従って、本発明の組成物は、この組成物がワクチンとして又は治療を受ける対象者のワクチン接種のために使用されないという条件における、病的障害治療のためのものである。
【００２３】
或る実施態様によれば、有効成分として含まれるウイルスのカプシドタンパク質が、パピローマウイルス、ポリオーマウイルスのカプシドタンパク質のいずれか一つ、又はその断片、ペプチド及び混合物及び組合せのいずれかであることができる。
【００２４】
パピローマ、ポリオーマ及び空胞化ウイルスは腫瘍ウイルスの自然界のグループを形成し、これに対してはパポーバウイルス・グループという名前が使用された。歴史的には、パポーバ（ｐａｐｏｖａ）という名前はウサギＰＡｐｉｌｌｏｍａ（パピローマ）ウイルス、マウスＰＯｌｙｏｍａ（ポリオーマ）ウイルス、シミアンＶＡｃｕｏｌａｔｉｎｇ（空胞化）ウイルスから由来する。このグループのメンバーは全てエンベロープを持たない、二本鎖ＤＮＡゲノムを有するウイルスであり、細胞核の中で増殖する。パピローマ及びポリオーマウイルスは共通のカプシド構造を有する関連するウイルスファミリーである。両方において、７２個のカプソメアは、それぞれは主要カプシドタンパク質の５量体であるが、Ｔ＝７の正二十面体格子を形成する。この構造的な類似性は、ポリオーマウイルス（ＶＰ１）及びパピローマウイルス（Ｌ１）の主要カプシドタンパク質の間に配列の相同性を全く欠損するにもかかわらず、存在する。
【００２５】
今までに７０株のヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）が同定されている。これらのウイスルでは、疣（いぼ）（通常の疣及び生殖器の疣）の原因としての役割並びに癌との関連が知られている。ほとんどの人は生涯にいくつかのＨＰＶの株に感染する。２つの構造タンパク質がパピローマウイルスのカプシドを形成する。主要な構造タンパク質であるＬ１はカプシドの構造的決定要素であり、７２個の５量体中に３６０コピーが配列されている。主要な構造タンパク質であるＬ２は、カプシド当たり１２コピー存在すると見積もられている。細胞表面のレセプターとの相互作用及びビリオンの取り込みにおけるＬ２の役割の可能性が示唆されてきた。Ｌ２は核ドメイン１０（ＮＤ１０）として同定されている核内ドメインに局在する。
【００２６】
従って、或る具体的な実施態様によれば、パピローマウイルスのカプシドタンパク質Ｌ１及びＬ２は本発明の組成物のための有効成分として使用することもある。小型のエンベロープを持たない、正２０面体ＤＮＡウイルスのポリオーマウイルス科ファミリーはげっ歯類ポリオーマウイルス、シミアンウイルス４０（ＳＶ４０）、ヒトＢＫウイルス及びヒトＪＣウイルスによりもっとも良く代表されるであろう。ほとんどのＤＮＡウイルスのように、ポリオーマウイルスのカプシドタンパク質は細胞質ゾル中で合成されるが、一方ビリオンの集合は核でのみ起こる。ポリオーマウイルスのカプシドは７２個の主要カプシドウイルスタンパク質（ＶＰ１）の５量体（カプソメア）から成っているが、これは直径〜５０ｎｍのＴ＝７正２０面体格子に配列されている。ＶＰ２又はＶＰ３のいずれかの、マイナーな（重要でない）カプシドタンパク質の一つは各ＶＰ１の５重のカビテー（空洞）の中心に結合する。ビリオンの原子構造は、各ＶＰ１の単体のＣ末端ドメインは隣接する５量体に「侵入して」５量体間の主要な密着性を形成し、そしてこの密着性はカルシュウムイオンにより安定化されていることを示している。
【００２７】
或る特に好ましい実施態様によれば、ウイルスのカプシドタンパク質が、ＳＶ４０のＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３の少なくとも一つ、及びそのペプチド、変異体、断片、混合物及び組合せのいずれか、又はＳＶ４０のＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３の少なくとも一つ、又はそのペプチド、変異体、断片、混合物及び組合せのいずれかを含むＶＬＰｓであることもある。最も好ましくは、ウイルスのカプシドタンパク質はＳＶ４０のＶＰ１又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片であることもある。好ましくは、ＳＶ４０のＶＰ１タンパク質という用語は本明細書に参考文献として取り込まれているＧｅｎＢａｎｋ登録番号ＮＰ＿０４３１２６ＧＩ：９６  ２８４２６に示されているアミノ酸配列を有するＶＰ１タンパク質を指すことが、留意されることが好ましい。或る特に好ましい実施態様によれば、ＳＶ４０のＶＰ１のカプシドタンパク質は配列番号：１で示されるアミノ酸配列を含む。
【００２８】
ＳＶ４０は小型の２本鎖ＤＮＡの、５．２ｋｂのミニ染色体を有するシミアンポリオーマウイルスである。そのウイルスカプシドはウイルスによりコードされている３つのタンパク質、ＶＰ１、ＶＰ２、及びＶＰ３から構成され、これはミニ染色体を包む。カプシド化は、染色体の周りにカプシドタンパク質を徐々に添加し組織化することで行われる。ウイルスタンパク質であるＶＰ２及びＶＰ３は、ウイルスの染色体及びＶＰ１カプシドの殻の間の架橋を行うと考えられている。ＶＰ３のカルボキシル末端近傍ドメインはｉｎ  ｖｉｔｒｏでＶＰ１と相互作用することが示されている。追加されるウイルス後期タンパク質は、後期１６ＳｍＲＮＡでコードされるアグノタンパク質、又はＬＰ１である。この小型（６１個のアミノ酸）タンパク質はＶＰ１の各領域への効率的な局在化を仲介し、感染細胞からの成熟ウイルスの放出を容易にすることが見出された。
【００２９】
シャペロンのレベルを上げる作用を有し、細胞生存機構を促進させ、細胞をアポトーシス又は酸化的ストレスから救う作用をする任意の変異ウイルスのカプシドタンパク質、好ましくは、ＶＰ１分子、が本発明により包含されていることは、理解されることが好ましい。
【００３０】
本発明の組成物及び方法で使用されることもあるウイルスのカプシドタンパク質の変異体又はその誘導体は、点変異、ミスセンス、ノンセンス、挿入、欠失、又は再配列で構成されるグループから選択される変異の少なくとも一つを有することもある。「挿入」及び「欠失」という本明細書で使用されている用語は、本発明のウイルスのカプシドタンパク質に対してそれぞれ任意のアミノ酸残基の添加又は欠失を意味し、それは１〜１００の間のアミノ酸残基、好ましくは１〜５０の間のアミノ酸残基、そして最も好ましくは１〜２０の間のアミノ酸残基であることは理解されることが好ましい。
【００３１】
或る具体的な実施態様では、変異ＳＶ４０のＶＰ１分子はカルボキシ末端腕が欠損したＶＰ１分子であることもある。このような特別に変異した分子は、変異体ＶＰ１ΔＣであることもある。或る特別に好ましい実施態様では、この変異ＶＰ１分子は配列番号：４に実質的に示すアミノ酸配列を含む。
【００３２】
例えば、β鎖の間を結ぶＶＰ１の表面ループ中に存在することもある欠失又は挿入を含む追加の変異は、本発明の範囲内であることは、理解されることが好ましい。このような変異は野生型のＶＰ１よりも、シャペロン装置及び／又は生存経路の活性化、並びにアポトーシス又は酸化的ストレスに対する保護において、より強力であることが期待される。更に、ｉｎ  ｖｉｖｏでの持続効果をもたらすＶＰ１又はＶＰ２誘導体の構造に影響を与える他の任意の変異も、また本発明の範囲内であることは、留意されることが好ましい。
【００３３】
或る具体的な実施態様では、本発明の組成物は、前記の野生型ＶＰ１、ＶＰ１ΔＣ変異体及び任意の他の変異体の任意の組み合わせを含むこともある。
【００３４】
本発明の組成物及び方法に使用されるウイルスのカプシドタンパク質は、天然又は合成、修飾又は非修飾、全体又はその断片であることができることを留意されることが好ましい。断片は断片としての合成、又は大きな物から断片を生成するための消化又は他の修飾による手段に由来することもできる。
【００３５】
好ましくは、ウイルスのカプシドタンパク質は（遺伝子）組換えで製造されることもある。組換えカプシドタンパク質の製造は、当業界では周知の一般的な分子生物学的技術の使用を含む。このような技術は、例えば、所望のウイルスのカプシドタンパク質をコードする遺伝子を適当な発現ベクターにクローニングすることを含む。好ましい組換えＳＶ４０のＶＰ１のカプシドタンパク質は原核生物、好ましくは、細菌又は真核生物発現システムを使用して製造されることもある。最も好ましいのは真核生物発現システム、例えば実験方法で記載したバキュロウイルス科のシステムで製造されたカプシドタンパク質である。また、これらベクターの構築はＳａｎｄａｌｏｎら［Sandalon (1997) ibid.］により詳細に記載され、これは以前に本発明者により刊行されたものであり本明細書に参考文献として取り込まれていることは、留意されるべきである。
【００３６】
カプシドタンパク質、特にはＳＶ４０のＶＰ１は、本発明の組成物のために、解離したＶＰ１の５量体として、又はＶＰ１及び他のＳＶ４０のカプシドタンパク質、又は代替としてＶＰ１のみを含むウイルス様粒子（図１により示すように、ＶＬＰｓ）として、使用することもあることは、更に留意されることが好ましい。更に、ウイルスのカプシドタンパク質は他の任意のタンパク質、例えばアグノタンパク質又はその作用を容易にする任意の他のタンパク質と混合することもあることは、理解されることが好ましい。更にまた、解離した５量体又は前記ＳＶ４０のＶＰ１タンパク質の断片の製造のために、細菌の発現システムが使用されることもあることは、留意されるべきである。更に、本発明は、本発明の組成物のいずれか一つの中に有効成分として、前記ＶＰ１又はＶＰ１の任意の変異体（例えば、ＶＰ１ΔＣ）を含む任意の融合タンパク質の使用を更に包含することもあることは、理解されることが好ましい。
【００３７】
或る特に好ましい実施態様では、本発明の組成物により治療を受ける病的障害は、品質管理工程に関与する細胞タンパク質の不活性化と関連することもあり、従ってそのようなタンパク質の活性化により改善されることもある。
【００３８】
新しく合成されたタンパク質は紐状構造（string-like structure）を有し、そしてその紐は生成されたタンパク質が正常に働くように立体的に適切に折りたたまれなければならない。この目的のために、「分子シャペロン」と呼ばれる分子が、タンパク質の紐を立体的に適切に折りたたむのを助けるために、小胞体中に存在する。しかしながら、時にはタンパク質は分子シャペロンの助けによっても適切に折りたたまれない。このような異常なタンパク質は小胞体より排除され（ＥＲ）そして「プロテアソーム（proteasome）」と呼ばれるタンパク質の分解工場で分解される。すなわち、小胞体は異常タンパク質を廃棄するために不適切に折りたたまれたタンパク質を折りたたまれたタンパク質から区別する機能を有している。この機能的メカニズムは「小胞体タンパク質の品質管理メカニズム」と呼ばれる。もしもこのメカニズムが破壊されると、細胞はどのタンパク質が適切な「産物」であるか判断できなくなり、重篤な生命の脅威となるダメージが誘導される。
【００３９】
より詳細には、生存する細胞では、新しく作製されたポリペプチドも既存のポリペプチドもともに、誤った折りたたまれ方と凝集の危険に常にさらされている。誤った折りたたまれ方の広い多様性に従い、この不可避の事故に対応するために巧妙な品質管理戦略が発達した。最近の報告は、細胞質ゾルからの凝集体の除去、小胞体でのタンパク質の品質管理のメカニズムの明確化及びＨｓｐ７０システム及びＡＡＡ＋（Ｈｓｐ１００）アンフォールダーゼという２つのクラスのシャペロンに対する新しい洞察を記載している。
【００４０】
前記のように、小胞体（ＥＲ）は分泌経路を通過する、およそ４分の１プロテオーム（全タンパク質）の構造的成熟を担当している。ＥＲは、誤って折りたたまれた形状に対して２つの異なる応答メカニズムを採用している。一番目は、折りたたまれていないタンパク質応答（ＵＰＲ）と命名されているＥＲ専用のストレス応答であり、これは折りたたむ能力を増加させるようにＥＲを改変するように作用する。酵母では、ＥＲの折りたたむ能力はＩＲＥ１で監視されていて、これは、保存度の高い膜貫通キナーゼであって誤って折りたたまれた形状を感知することを担当している内腔及び細胞質ゾルキナーゼ及びリボヌクレアーゼ・ドメインを含む。ＥＲ中の誤って折りたたまれたタンパク質の蓄積は、ＩＲＥキナーゼの活性化をもたらす。
【００４１】
ＥＲ関連分解（ＥＲＡＤ）と命名されている、二番目（のメカニズム）は、末期に誤って折りたたまれたタンパク質を特定して認識し、それはＥＲ膜を通過させて細胞質ゾルへ逆に異動させ、ここでそれをユビキチン・プロテアソーム分解装置により分解させることができる。ＥＲで折りたたまれるタンパク質の多様性から予期されるかもしれないが、最近の研究は、ＥＲ関連分解（ＥＲＡＤ）はそれぞれが共通の物理的性状を共有するタンパク質のサブセット（部分集合）の分解を担当する、多数の異なるシステムを包含すると主張している。これはおそらく酵母で最も明瞭に示されており、ここでは、末期に誤って折りたたまれたＥＲタンパク質の少なくとも２つの異なる監視メカニズムが存在する。第一に、ＥＲＡＤ−Ｌと呼ばれるメカニズムは特定の誤って折りたたまれた空腔ドメインを含むタンパク質を検査する。第二に、ＥＲＡＤ−Ｃと命名されるメカニズムは、膜貫通タンパク質の誤って折りたたまれた細胞質ゾルドメインを検出する。これらの経路の両方ともが最終的にはユビキチン・プロテアソーム分解システムに集まるが、これらは誤って折りたたまれた（タンパク質の）種族を細胞質ゾルで検出しそこへ送達するために、異なるＥＲ関連構成成分のセットに依存している。ＥＲＡＤ−Ｃの場合には（ＥＲＡＤ−Ｌの場合には当てはまらない）、分解はＨｓｐ７０及びＨｓｐ４０メンバーを含む細胞質ゾルシャペロンの特定のサブセットに典型的には依存する。
【００４２】
最近の研究は、ＥＲＡＤで決定的な役割を果たすＥＲに局在する２つの異なるレクチンを同定した。一番目はＥＲ中のＮグリカンのトリミング（trimming）を担当するマンノシダーゼタンパク質に関連するが、その触媒活性を失ってしまっているように見える。二番目のレクチンであるＹｏｓ９ｐは、誤って折りたたまれたタンパク質と安定した複合体を形成し、Ｙｏｓ９ｐを失うと誤って折りたたまれた糖タンパク質の分解に甚大で特定の欠損がもたらされる。
【００４３】
ユビキチン・プロテアソーム経路は凝集しやすい種族の排除にとって頼みの綱である可能性がある。今では、ユビキチン修飾は実際のところ独立したメカニズムである、「自食作用（autophagy）」経路を介した浄化の対象となる凝集物種の補給を行うこともあるように見える。自食作用は、標的のタンパク質又は細胞小器官の認識及びそのオートファゴゾーム顆粒へのパケージ化／飲み込み（packaging/engulfment）を含み、この顆粒はリソソームと融合して、そこで顆粒及びその内容物は共に破壊される。２０個を超える、いわゆるＡｔｇ成分がこの注目すべき経路を仲介する。
【００４４】
シャペロン及びタンパク質分解装置が誤って折りたたまれたタンパク質と同じコンパートメントに存在したとしても、この品質管理メカニズムが機能しないで誤って折りたたまれたタンパク質が凝集物を形成するまで進行するようなｉｎ  ｖｉｖｏの多様な条件が存在することがますます明らかになってきた。更に、このような細胞内凝集物は多くの神経変性障害、例えばハンチントン病、アルツハイマー病、筋萎縮性側索硬化症及びパーキンソン病、と関連している。真核細胞中でのタンパク質凝集物の性状及び運命に関する理解は乏しい。
【００４５】
どのような理論とも結びつくことなく、後述の実施例で示されるように、ウイルスのカプシドタンパク質、特にＶＰ１、ＶＰ１の５量体、又は変異ＶＰ１分子、好ましくは、ＶＰ１ΔＣ変異体を含むＶＬＰｓ、は品質管理工程に関与するタンパク質、特にシャペロン（例えば、ＨＳＰ／ｃ７０に関する本発明に示されるように）を活性化し、それにより治療しようとする病的状況の改善をもたらした。病的状況のこの改善は、本発明により正式にはＡＴＮと呼ばれるＡＫＩ（急性腎臓損傷）マウスモデルを用いて明らかにされた。
【００４６】
従って、或る特定の実施態様では、品質管理工程に関与するタンパク質はシャペロンであることもある。例えば、次のファミリーのシャペロン：ＨＳＰ−４０、ＨＳＰ−７０、ＣＡＬＮＥＸＩＮ、ＢｉＰ、ＨＳＰ−２７、ＨＳＰ−２２、ＨＳＰ−６０、ＨＳＰ−６５、ＨＳＰ−２７、ＨＳＰ−９０。
【００４７】
熱ショックタンパク質（ＨＳＰｓ）はストレスタンパク質又は分子シャペロンと呼ばれ、これは合成後の又はストレスで変性したタンパク質の折りたたみを通して細胞の救出に役立つ。前記のように、ＨＳＰｓはまた種々の自己免疫病における原因因子と信じられており、その病因は標的分子としたＨＳＰｓに対する免疫反応から生じると考えられている。例えば、ＨＳＰ６０ファミリータンパク質並びにＨＳＰ７０ファミリータンパク質（ＨＳＰ７０及びＨＳＣ７０）に対する上昇した抗体価は、多発性硬化（症）及び他の神経性疾患の患者の脳脊髄液（ＣＳＦ）中に報告されており、従って免疫反応及び分子シャペロンの細胞保護機能を通したＭＳの病理生理において重要な役割を果たすこともある。
【００４８】
熱ショックタンパク質２７（ＨＳＰ２７）及びＨＳＰ２２の変異は、シャルコー・マリー・ツース病（ＣＭＴ）で同定されたが、これは最も普通ではあるがヘテロ性の遺伝性運動及び感覚ニューロパシー（神経障害）の一つであり、それはもっぱら運動ニューロパシーであるが、また臨床的及び遺伝的にはヘテロ性ニューロパシーでもある末梢遺伝性運動ニューロパシー（ＨＭＮ）である。
急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）（炎症反応の一例）、レジオネラ病（Legioner disease）、ＧＢＳ（ギラン・バレー症候群）及び有足突起損傷（podocyte injury）は、やはりシャペロンの機能障害と関連した障害であることが示され、従って本発明の組成物及び方法により治療を受けることもある。
【００４９】
他の実施態様では、本発明の組成物は病的障害の治療、例えば神経変性障害又は免疫関連障害、の治療に特に適用可能であるか又は適していることもある。前記のように、本発明の組成物により治療を受ける病的障害は、好ましくは細胞内の品質管理工程に関与する細胞タンパク質の不活性化と関連した障害であることは留意されるべきである。
【００５０】
より詳細には、Ｔｈ１−Ｔｈ２反応の不均衡に関連する免疫障害は、従って免疫関連障害、例えば自己免疫病（例えば多発性硬化症（ＭＳ）、１型糖尿病、狼瘡、グレーブス病及び甲状腺炎）、悪性及び非悪性増殖性障害、移植拒絶病変及び移植片対宿主病、炎症、及びまた病原体関連障害（例えば、発熱性外毒素により引き起こされる毒素性ショック、無能力化及び死、敗血性ショック及び重症の敗血症）であることもある。
【００５１】
炎症は、任意の炎症状態を含み、ここでは前記炎症状態は次のいずれか一つであることもある：リウマチ性関節炎、急性呼吸窮迫症候群（ＡＲＤＳ）、喘息、鼻炎、特発性肺線維症、腹膜炎、心血管炎症、心筋虚血、再還流障害、アテローム性動脈硬化症、敗血症、外傷性障害、２型糖尿病、網膜症、乾癬、胃腸炎症、肝硬変及び炎症性腸疾患。
【００５２】
一般に以下に記載する本発明の組成物並びに方法は、任意の自己免疫疾患、例えば（ただしこれに限らないが）イートン・ランバート症候群、グッドパスチャー症候群、グリーブ病（Ｇｒｅａｖｅ病）、ギラン・バレー症候群（Guillain-Barr syndrome）、自己免疫性溶血性貧血（ＡＩＨＡ）、肝炎、インスリン依存性糖尿病（ＩＤＤＭ）、全身性紅斑性狼瘡（ＳＬＥ）、多発性硬化症（ＭＳ）、重症筋無力症、神経叢疾患、例えば急性上腕神経炎、多内分泌腺機能低下症候群、原発性胆汁性肝硬変、リウマチ性関節炎、強皮症、血小板減少症、甲状腺炎例えば橋本病、シェーグレン症候群、アレルギー性紫斑病、乾癬、混合性結合組織病、多発性筋炎、皮膚筋炎、脈管炎、結節性多発（性）動脈炎、リウマチ性多発（性）筋痛、ウェゲナー肉芽腫症（Wegener's granulomatosis）、ライター症候群、ベーチェット（Ｂｅｈｇｅｔ’ｓ）症候群、強直性脊椎炎、天疱瘡、水疱性類天疱瘡、疱疹状皮膚炎、インスリン依存性糖尿病、炎症性腸疾患、潰瘍性大腸炎及びクローン病、の治療に使用することもある。
【００５３】
本発明の記載に明細書で使用している、「悪性増殖性障害」、「癌」、「腫瘍」及び「悪性（疾患）」という用語は、すべて等しく組織又は器官の過形成に関係する。もしも組織がリンパ管又は免疫システムの一部であれば、悪性細胞は循環細胞である非固形腫瘍を含むこともある。他の組織又は器官の悪性疾患は固形腫瘍を含むこともある。一般に、下記に記載の本発明の組成物並びに方法は、非固形及び固形腫瘍、例えば上皮性悪性腫瘍、黒色腫、白血病及びリンパ腫の治療に使用することもある。
【００５４】
従って、或る好ましい実施態様に従えば、本発明に記載のＳＶ４０のカプシドタンパク質あるいはそれらを含む任意の組成物は、非固形癌、例えば全てのタイプの白血病のような造血悪性腫瘍、例えば急性リンパ性白血病（ＡＬＬ）、急性骨髄性白血病（ＡＭＬ）、慢性リンパ性白血病（ＣＬＬ）、慢性骨髄性白血病（ＣＭＬ）、骨髄異形成症候群（ＭＤＳ）、肥満細胞性白血病、有毛細胞白血病、ホジキン病、非ホジキンリンパ腫、バーキットリンパ腫及び多発性骨髄腫、並びに次のような固形腫瘍の治療又は阻止に使用することができる：口唇及び口腔、咽頭、喉頭、副鼻腔、大唾液腺、甲状腺、食道、胃、小腸、結腸、結腸直腸、肛門管、肝臓、胆嚢、エクストラリーパティック（ｅｘｔｒａｌｉｅｐａｔｉｃ）胆管、ファーター膨大部、膵臓外分泌腺、肺、胸膜中皮腫、骨髄における肉腫、軟部組織の肉腫、皮膚、乳房、外陰部、膣、子宮頚部、子宮体、卵巣、卵管、卵管妊娠性絨毛（性）腫瘍、陰茎、前立腺、睾丸、腎臓、腎盂、尿管、膀胱、尿道における上皮性悪性腫瘍及び悪性黒色腫、瞼の上皮性悪性腫瘍、結膜の上皮性悪性腫瘍、結膜の悪性黒色腫、ブドウ膜の悪性黒色腫、 網膜芽細胞腫、涙腺の上皮性悪性腫瘍、眼窩の腫瘍、脳、脊髄、脈管系における肉腫、血管肉腫及びカポジ肉腫、の治療又は阻止に使用することができる。
【００５５】
更に他の特定の実施態様では、後述の明細書に記載の本発明の組成物並びに本発明の方法は神経変性障害の治療に使用されることもある。
【００５６】
「神経障害」とは神経細胞又は神経支持細胞の異常又は機能不全を特徴とする疾患又は障害である。この障害は中枢及び／又は末梢神経系に影響を与えることができる。神経障害の例としては、ニューロパシー、骨格筋委縮及び神経変性疾患が含まれる。
【００５７】
「神経変性障害」とは複雑で致命的な疾患であり、その発病は知らないうちに起こり、それに続いて悪化が進行する。臨床症状は、障害の部位及び重症度により認定される。原因が異なることがあっても、神経変性障害の患者は脳細胞の一般的な委縮の局在化を示すようであり、その結果精神的及び肉体的な両方の障害がもたらされる。神経変性疾患には、アルツハイマー病、パーキンソン病、ＡＬＳ（筋萎縮側索硬化症）、ハンチントン病、タウパシー（taupathies）、例えばピック病、前頭側頭認知症、大脳皮質基底核変性症及び進行性核上麻痺、及び海綿状脳症、例えばスクレピー、狂牛病及びウシ海綿状脳症、クロイツフェルト・ヤコブ病、致死性家族性不眠症、ゲルストマン・シュトロイスラー症候群及びクルーが含まれる。
【００５８】
前記のように、本発明の組成物により治療を受ける病的障害は、病原因子により引き起こされる障害であることもある。病原因子は原核微生物、下級真核微生物、複合真核生物、ウイルス、真菌、プリオン、寄生虫、酵母、毒素及び毒を含む。
【００５９】
原核微生物は、細菌、例えばグラム陽性、グラム陰性及びグラム不定性の細菌及び細胞内細菌を含む。本明細書の意図する細菌の例には、次の属の種が含まれる：トレポネマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｓｐ．）、ボレリア（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｓｐ．）、ナイセリア（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｓｐ．）、レジオネラ（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｓｐ．）、ボルデテラ（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｓｐ．）、エシェリキア（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｓｐ．）、サルモネラ（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｓｐ．）、シゲラ（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｓｐ．）、クレブシエラ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｓｐ．）、エルシニア（Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｓｐ．）、ビブリオ（Ｖｉｂｒｉｏ  ｓｐ.）、ヘモフィルス（Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｓｐ．）、リケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｓｐ．）、クラミジア（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｓｐ．）、マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｓｐ．）、スタフィロコッカス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．）、ストレプトコッカス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｓｐ．）、バシルス（  Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ｓｐ．）、クロストリジウム（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｓｐ．）、コリネバクテリウム（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．）、プロプリオニバクテリウム（Ｐｒｏｐｒｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．）、ミコバクテリウム（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｓｐ．）、ウレアプラズマ（Ｕｒｅａｐｌａｓｍａ  ｓｐ．）及びリステリア（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｓｐ．）。
【００６０】
特定の種としては次のものが含まれる：梅毒トリポネーマ（Ｔｒｅｐｏｎｅｍａ  ｐａｌｌｉｄｕｍ）、ボレリア・ブルグドルフェリ（Ｂｏｒｒｅｌｉａ  ｂｕｒｇｄｏｒｆｅｒｉ）、淋菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｇｏｎｏｒｒｈｅａ）、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ  ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）、在郷軍人病菌（Ｌｅｇｉｏｎｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｐｈｉｌａ）、百日咳菌（Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ  ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ  ｃｏｌｉ）、チフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉ）、ネズミチフス菌（Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ  ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、志賀赤痢菌（Ｓｈｉｇｅｌｌａ  ｄｙｓｅｎｔｅｒｉａｅ）、肺炎桿菌（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、ペスト菌  （Ｙｅｒｓｉｎｉａ  ｐｅｓｔｉｓ）、コレラ菌（Ｖｉｂｒｉｏ  ｃｈｏｌｅｒａｅ）、インフルエンザ菌（Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ  ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ，）、ロッキー山紅斑熱リケッチア（Ｒｉｃｋｅｔｔｓｉａ  ｒｉｃｋｅｔｔｓｉｉ）、クラミジア・トラコマチス（Ｃｈｌａｍｙｄｉａ  ｔｒａｃｈｏｍａｔｉｓ）、肺炎マイコプラズマ（Ｍｙｃｏｐｌａｓｍａ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ  ａｕｒｅｕｓ）、肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、化膿連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｐｙｏｇｅｎｅｓ）、炭素菌（Ｂａｃｉｌｌｕｓ  ａｎｔｈｒａｃｉｓ）、ボツリヌス菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｂｏｔｕｌｉｎｕｍ）、破傷風菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｔｅｔａｎｉ）、ウェルシュ菌（Ｃｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ  ｐｅｒｆｒｉｎｇｅｎｓ）、ジフテリア菌（Ｃｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ）、プロプリオニバクテリウム・アクネス（Ｐｒｏｐｒｉｏｎｉｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ａｃｎｅｓ）、結核菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、ハンセン菌（Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ  ｌｅｐｒａｅ）及びリステリア菌（Ｌｉｓｔｅｒｉａ  ｍｏｎｏｃｙｔｏｇｅｎｅｓ．）。
【００６１】
下級真核生物は、酵母又は真菌、例えば（ただしこれらに限定されないが）ニューモシスティス・カリニ（Ｐｎｅｕｍｏｃｙｓｔｉｓ  ｃａｒｉｎｉｉ）、カンジダ・アルビカンス（Ｃａｎｄｉｄａ  ａｌｂｉｃａｎｓ）、アスペルギルス（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ）、ヒストプラスマ・カプスラーツム（Ｈｉｓｔｏｐｌａｓｍａ  ｃａｐｓｕｌａｔｕｍ）、ブラストミセス・デルマチチジス（Ｂｌａｓｔｏｍｙｃｅｓ  ｄｅｒｍａｔｉｔｉｄｉｓ）、クリプトコックス・ネオフォルマンス（Ｃｒｙｐｔｏｃｏｃｃｕｓ  ｎｅｏｆｏｒｍａｎｓ）、白癬菌（Ｔｒｉｃｈｏｐｈｙｔｏｎ）及び小胞子菌を含む。
【００６２】
複雑な真核生物には次のものが含まれる：虫、昆虫、クモ形類動物、線虫、アメーバ、赤痢アメーバ（Ｅｎｔａｍｏｅｂａ  ｈｉｓｔｏｌｙｔｉｃａ）、ランブル鞭毛虫（Ｇｉａｒｄｉａ  ｌａｍｂｌｉａ）、膣トリコモナス（Ｔｒｉｃｈｏｍｏｎａｓ  ｖａｇｉｎａｌｉｓ）、ガンビア・ブルーセイ・トリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｂｒｕｃｅｉ  ｇａｍｂｉｅｎｓｅ）、クルーズ・トリパノソーマ（Ｔｒｙｐａｎｏｓｏｍａ  ｃｒｕｚｉ）、大腸バランチジウム（Ｂａｌａｎｔｉｄｉｕｍ  ｃｏｌｉ）、トキソプラズマ原虫（Ｔｏｘｏｐｌａｓｍａ  ｇｏｎｄｉｉ）、クリプトスポリジウム（Ｃｒｙｐｔｏｓｐｏｒｉｄｉｕｍ）又はリーシュマニア（Ｌｅｉｓｈｍａｎｉａ）。
【００６３】
用語「ウイルス」は次のウイルスファミリーを含むその最も広い意味で使用されている：アデノウイルス、パピローマウイルス、及びポリオーマウイルス、ヘルペスウイルス（単純ヘルペスウイルス、帯状疱疹ウイルス、エプシュタイン・バール・ウイルス、ＣＭＶ、ポックス・ウイルス（天然痘、ワクチニア）、Ｂ型肝炎ウイルス、ライノウイルス、Ａ型肝炎ウイルス、ポリオウイルス、風疹ウイルス、Ｃ型肝炎ウイルス、アルボウイルス、狂犬病ウイルス、Ａ型及びＢ型インフルエンザウイルス、麻疹ウイルス、流行性耳下腺炎ウイルス、ＨＩＶ、ＨＴＬＶＩ及びＩＩ。
【００６４】
用語「真菌」は、例えば、次の様な疾患の原因となる真菌を含む：白癬、ヒストプラズマ症、ブラストミセス症、アスペルギルス症、クリプトコッカス症、スポロトリクム症、コクシジオイデス症、パラコシジオイデス症（paracoccidio-idoinycosis）及びカンジダ症。
【００６５】
寄生虫という用語は、次のものにより引き起こされる感染症、（ただしこれに限定されない）を含む：体性サナダムシ、住血吸虫、組織性回虫、アメーバ、及びプラズモジウム、トリパノソーマ、リーシュマニア及びトキソプラズマの各種。
【００６６】
或る具体的なそして好ましい実施態様によれば、本発明の組成物は病原因子により引き起こされる病的障害の治療を意図している。そのような障害は、ＡＲＦ（急性腎不全）状態、又は疾患、例えばＡＫＩ、ＡＲＤＳ（急性呼吸窮迫症候群）及び多系統臓器不全のいずれか一つがもたらされる、敗血症を導くこともある。
【００６７】
或る具体的なそして好ましい実施態様によれば、そして実施例３〜７により明確に示めされているように、本発明の組成物は、ＡＫＩモデルを使用して明らかにされているＡＲＦの治療に特に適しており、前記のように、ＡＲＦはシャペロンの活性化又は添加により改善することのできる疾患である。
【００６８】
急性腎損傷（ＡＫＩ：正式には「急性尿細管壊死」と呼ばれる）は、宿主の生理病理学的メカニズムを包含する。直接の尿細管毒、腎微小循環の変化による内皮の機能不全、尿細管低酸素損傷、活性酸素種による損傷、糸球体血行動態損傷及び局所性又は全身性炎症、これらは全て、腎不全を引き起こし、それは糸球体濾過率（ＧＦＲ）の急速な低減及び尿細管機能欠陥を特徴とする。また、慢性腎疾患（ＣＫＤ）の進行は宿主の生理病理学的メカニズムを反映し、最初の腎構造の損傷に続いて開始される。３つの主要な促進因子である、糸球体過剰濾過、タンパク尿及び腎実質性低酸素が、多数の化合物及び相互作用メカニズムを介して微小血管及び尿細管の委縮及び間質線維化をもたらす。ＡＫＩ及びＣＫＤの最終段階の腎不全への進行は共に実質的な病的状態及び死亡率の顕著な増加をもたらし、そしてその臨床的管理のために多額の出費に結びつく。
【００６９】
これら障害と関連する生理学的メカニズムは部分的にしか理解されていないが、腎実質組織のアポトーシス又は非アポトーシスによる細胞死が明らかに中心的役割を演じており、この過程を緩和する対策が治療行為において主な到達点となる。そのような一つの可能性のある治療行為は、細胞の適応メカニズム、例えば熱ショックタンパク質（ＨＳＰ）を始めとするストレス応答遺伝子の上方調節を誘導することである。系統樹で高度に保存されたこれらの分子は、プロテアソームによる分解を通じて、損傷タンパク質のためのシャペロンとして作用する［Aufricht, C. Pediatr. Nephrol. 20: 707-713 (2005)］。ＨＳＰｓは細胞に保護的に作用すると考えられ、一時的な低酸素又は熱ストレスによるその誘導はアポトーシスによる損傷及びＡＫＩを、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ及びｉｎ  ｖｉｖｏの両方で緩和することが示された［Lu, C.Y. et al. Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. 16:83-89(2007)］。
【００７０】
本明細書で示された本発明の組成物により治療を受けることのできる全ての障害は、これから記載される本発明の方法によっても治療を受けることができることに、留意されるべきである。
【００７１】
或る他の具体的な実施態様では、本発明の組成物はＡＲＦ、及び特にＡＫＩの治療における使用に提供される。
【００７２】
実施例２及び７で示されるように、ＳＶ４０のＶＰ１を含むＶＬＰｓは腎細胞をアポトーシスから保護し、また、細胞を酸化的ストレスから保護することもある。従って、本発明の組成物は、酸化的ストレス及びアポトーシスを含む病理的過程から、それを必要とする対象者における細胞を救うために、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｅｘ  ｖｉｖｏで更に使用されることもあることが留意されるべきである。
【００７３】
アポトーシス又はプログラムされた細胞死という用語は、多細胞生物の発生及び健全性にとっての正常な要素であることを意味する。細胞は種々の刺激に反応し、アポトーシスの間に死ぬが、それは制御され調節されたやり方で行われる。この点でアポトーシスは壊死と呼ばれている他の細胞死の形態と区別され、壊死では制御されていない細胞死が細胞の融解、炎症反応、及び深刻な潜在的な健康問題へと導く。しかしながら、本明細書で前に示したように、いくつかの場合における制御されないアポトーシスの過程は病的障害、例えばＡＫＩをもたらすこともあり、従って阻止されるのが好ましい。本発明は、従って、有害なアポトーシス過程を緩和し、そして細胞が生き残る経路を誘導するための方法と組成物を提供する。
【００７４】
前記のように、本発明の組成物は酸化的ストレスを含む状態に適用できることもある。酸化的ストレスは、反応性酸素の産生と反応性中間体を速やかに無害化するか又は結果としもたらされる損傷を速やかに修復する生物学的システムの能力との間の不均衡によって引き起こされる。全ての生命体はその細胞内で還元的環境を維持している。細胞の酸化還元環境は、代謝エネルギーの恒常的な提供を通して、還元状態を維持する酵素により保たれる。この正常の酸化還元状態における乱れは、タンパク質、脂質及びＤＮＡを含む全ての細胞組成物に損傷を与える過酸化物及びフリーラジカルの産生を通して毒性効果を引き起こすことができる。広範な種々の疾患は、フリーラジカルの過剰な生成、酸化的ストレス及び不適切な抗酸化活性を示す証拠がある。いくつかの例としては、神経変性疾患（下記参照）、心疾患、ＨＩＶ疾患、慢性疲労症候群、肝炎、癌、自己免疫疾患などが挙げられる。
【００７５】
実施例に示されるように、本発明者による未発表のデータは、おそらく細胞生存メカニズムの、好ましくはＰＩ３Ｋ−ＰＫＢ／Ａｋｔ生存経路の誘導により、ＳＶ４０のＶＰ１が細胞を酸化的ストレス及びアポトーシスから救うことを示している。従って、或る実施態様によれば、本発明の組成物は、それを必要としている対象者の細胞において細胞生存経路、好ましくはＰＩ３Ｋ−ＰＫＢ／Ａｋｔ生存経路の誘導のために使用されることもある。
【００７６】
ＰＫＢ／Ａｋｔは多くの細胞の生存メカニズムにおいて鍵を握るプレーヤーであることは留意されるべきである。それは、特に神経変性疾患における潜在的な神経保護に関わっているとされてきた［Schmeer, C. et al. Restor Neurol Neurosci 24:79-95 (2006)］、例えばパーキンソン病［Fallon, L. et al. Nat. Cell. Biol.8:834-842 (2006)］、アルツハイマー病［Cole, G.M. et al. Exp. Gerontol. 42:10-21 (2007)］を挙げることができ、発作及び脳損傷後の神経の生存にも関わっているとされてきた［Zhang, X. J. Cereb. Blood Flow Metab. 26:915-926 (2006)］。追加の例としては、心臓肥大［Patten, R.D. and Karas, R.H. Trends Cardiovasc. Med. 16:69-75(2006)］及び腎疾患［Mitch, W.E. J. Ren. Nutr. 17:66-69 (2007)］に対する保護が挙げられる。
【００７７】
更にまた、本発明は病的障害に対してシャペロンによる改善効果を促進するための医薬組成物を提供する。
【００７８】
本発明の医薬組成物は、当技術分野で周知のように、緩衝薬、その浸透圧（オスモル）濃度を調整するための薬剤、及び場合によっては薬学的に許容可能な担体、賦形剤及び／又は添加物の一つ以上を一般に含むことは理解されることが好ましい。また、補助的有効成分も組成物の中に取り込むことができる。担体は溶媒又は分散媒、例えば、水、エタノール、多価アルコール(例えば、グリセロール、プロピレン・グリコール、及び液性ポリエチレン・グリコールなど)、その適切な混合物、及び植物油であることができる。適切な流動性は、例えばレシチンのような被覆剤の使用、分散媒の場合には要求される顆粒サイズの維持及び界面活性剤の使用により維持することができる。
【００７９】
本明細書で使用されている「薬学的に許容可能な担体」は、全てのそして任意の溶媒、分散媒、被覆剤、抗菌剤及び抗真菌剤などを含む。薬学的に活性を有する物質のためのこのような媒質及び薬剤の使用は当技術分野では周知である。任意の通常の媒質又は薬剤が前記有効成分と混合できない場合を除いて、その治療用組成物への使用が期待される。
【００８０】
第２の観点では、本発明はそれを必要とする対象者における病的障害の治療方法に関する。この方法は、ウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片、あるいはカプシドタンパク質の少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片を含むＶＬＰｓ、あるいはそれらを含む組成物の、治療的有効量を、対象者の治療のために投与する工程を含む。
【００８１】
本発明の方法は病的障害、例えば神経変性障害又は自己免疫関連障害に罹っている対象者の治療に適用できることもある。本明細書で使用されているように、用語「障害」は正常な機能に乱れのある異常状態を指す。「疾患」は、罹った人又はその人と接触した人々に、不快、機能障害、又は苦痛を引き起こす体又は心の任意の異常な状態である。時々この用語は、傷、無能力、症候群、症状、異常行動、及び構造及び機能の種々な変形を含んで広く使用され、一方、他の状況ではこれらは異なる分類に属すると考えられることもある。用語「疾患」、「障害」、「状態」及び「病気」は本明細書では同等に使用されていることは留意されることが好ましい。
【００８２】
本明細書及び本請求項で使用されている用語「治療する、治療すること、治療」は、病的障害のある患者における疾患の活動の臨床的兆候の一つ以上が改善されることを意味する。
【００８３】
「治療」は療法的治療を指す。治療を必要とするものとは、任意の病的障害又は自己免疫関連障害に罹っている哺乳動物の対象者である。「患者」又は「必要とする対象者」とは、前記の苦痛の阻止、克服又は緩和のために、ウイルスのカプシドタンパク質又は任意の本発明の医薬組成物の投与が求められている、いずれかの哺乳動物を意味する。
【００８４】
「予防的治療（preventive treatment）」又は「予防的治療（prophylactic treatment）」を提供するとは、あるもの、特に、状態又は疾患からの防衛又はその阻止のための、保護的活動である。
【００８５】
或る実施態様によれば、ウイルスのカプシドタンパク質は、パピローマウイルス、又はポリオーマウイルスのカプシドタンパク質のいずれか一つ、又は任意のその断片、ペプチド、変異体、任意の混合物又は組合せであることもある。好ましくは、ウイルスのカプシドタンパク質はＳＶ４０のＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３の少なくとも一つ、及び任意のそのペプチド、断片、変異体、混合物及び組合せであることもある。最も好ましくは、ウイルスのカプシドタンパク質はＳＶ４０のＶＰ１、任意のそのペプチド、変異体若しくは断片、あるいは、ＳＶ４０のＶＰ１、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片を含むＶＬＰｓであることもある。具体的な実施態様は、配列番号：１に示されるアミノ酸配列を含むＳＶ４０のＶＰ１タンパク質に関する。
【００８６】
他の特定の実施態様では、変異ＳＶ４０のＶＰ１分子はＶＰ１ΔＣ変異体であることもある。このような変異分子は、好ましくは配列番号：４に実質的に示されるアミノ酸配列を含むこともある。
【００８７】
好ましくは、本発明の方法により治療を受ける病的障害は、品質管理工程又は炎症工程に関与する細胞タンパク質の不活化により引き起こされる異常状態であり、従って、そのような細胞タンパク質の活性化により改善されることもある。
【００８８】
或る特定の好ましい実施態様では、品質管理工程に関与するタンパク質はシャペロンであることもある。本発明で明確にしたように、ＶＰ１又はＶＰ１ΔＣ変異分子より構成されるＶＰ１の５量体を含むＶＬＰｓの投与により、シャペロン、特にシャペロンＨＳＰ／ｃ７０の、レベルの上昇がもたらされた。この上昇は、ＡＲＦ状態、例えばＡＫＩ、に対するＳＶ４０のＶＰ１の有益な効果に関連し、それは処置された動物の生存、血液尿素及びクレアチニンレベルの減少により明らかにされた。
【００８９】
他の実施態様では、本発明の方法は病的障害、例えば神経変性障害又は免疫関連障害、の治療を意図している。
【００９０】
或る特定の実施態様では、本発明の方法は、免疫関連障害、例えば自己免疫疾患、悪性及び非悪性の増殖性障害、移植拒絶病変及び移植片対宿主病、及び病原因子により引き起こされる障害の治療に適している。
【００９１】
更に他の特定の好ましい実施態様では、本発明の方法は特に病原因子により引き起こされる病的障害の治療に適している。このような障害は、ＡＲＦ（急性腎不全）、ＡＲＤＳ（急性呼吸窮迫症候群）及び多系統臓器不全のいずれか一つをもたらすことのある敗血症に至ることがある。
【００９２】
従って、或る特定の好ましい実施態様では、前記ＡＲＦ疾患はＡＫＩであることがある。
【００９３】
本明細書で前述したように、急性腎損傷（ＡＫＩ）は病理学的には種々の程度の尿細管細胞の損傷を特徴とする。腎細胞死は長期の腎虚血、腎毒素又は敗血症の結果であることがある。ＡＫＩは臨床的には急速（数時間から数日）な糸球体の濾過率（ＧＦＲ）及び尿細管機能の衰退をもたらし、それは持続的な尿毒素、酸塩基の乱れ、体液の不均衡及び他のほとんど全てのシステムの機能不全へとつながる。
【００９４】
本発明の方法で使用される用語「有効量」又は「十分量」は、選択された結果を達成するのに十分な量を意味する。「治療的有効量」は、疾患の重篤の度合と予防又は治療目的、投与経路及び患者の一般的な状態（年齢、性別、体重、及び関与する医師の他の公知の考慮）との関連で決定される。
【００９５】
治療用製剤は、任意の通常用量処方で投与されることもある。或る具体的、及び特定の実施態様では、本発明は、ＡＫＩモデルで示したように、ＡＲＦの治療のためにウイルスのカプシドタンパク質を使用する。実施例で示すように、ＳＶ４０のＶＰ１タンパク質はＶＬＰｓとして使用され、これは疾患動物に注射された。適切な用量は、０．０１〜１００ｍｇ／ｋｇ体重の範囲であることがあり、好ましくは、約０．１〜５０ｍｇ／ｋｇ、最も好ましくは０．１〜２０ｍｇ／ｋｇであることがある。前記で示したように、製剤は、通常有効成分の少なくとも一つを、その許容可能な担体の一つ以上と共に、含む。
【００９６】
実施例に示すように、また、変異ＳＶ４０のＶＰ１分子であるＶＰ１ΔＣは、本発明の組成物及び方法として使用されることがあるが、この場合治療される細胞に有益な効果をもたらすためにはより高い用量が必要とされることがある。
【００９７】
本発明の組成物及び方法で使用される製剤は、経口、直腸、鼻、非経口(皮下、筋肉内、静脈内及び皮内を含む)投与に適する製剤を含むことは、留意されるべきである。製剤は単位剤形として適宜提供され、薬学の技術分野で周知の任意の方法で調剤されることがある。求められる効果を対象者に発揮するために必要な有効量を含む、このような化合物の全ての性状、利用及び由来、及び投与は当技術分野では周知であり、本明細書に更に記載する必要はない。
【００９８】
更に他の実施態様では、本発明の方法での投与工程は、経口、静脈内、筋肉内、皮下、腹腔内、非経口、経皮、膣内、鼻中、粘膜、舌下、局所、直腸、又は皮下投与、又は任意のその組み合わせを含む。
【００９９】
前記のように、本発明による使用のための医薬組成物は、賦形剤及び補助剤を含む生理学的に許容可能な担体の一つ以上を通常の方法で処方することもあり、この担体は有効成分を薬学的に使用できる調製物に加工するのを容易にする。適切な処方は選択された投与経路に依存する。
【０１００】
注射のためには、本発明の有効成分は水溶液で処方されることもあり、好ましくは生理的に適合した緩衝液、例えばハンクス（Ｈａｎｋ’ｓ）溶液、リンゲル（Ｒｉｎｇｅｒ’ｓ）溶液、又は生理食塩緩衝液である。経粘膜投与のためには、処方において浸透させる障壁に対して適切な浸透剤が使用される。このような浸透剤は一般に当技術分野では周知である。
【０１０１】
局所投与のための医薬組成物は、経皮貼布、軟膏、化粧水（ローション）、クリーム、ゲル、滴剤、座薬、噴霧剤、液剤及び粉末剤を含むことがある。通常の医薬担体、液性、粉末又は油性の基剤、増粘剤などが必要であるか又は望ましいことがある。
【０１０２】
経口投与のためには、化合物は活性化合物と当技術分野で周知の薬学的に許容可能な担体を組み合わせることで容易に処方できる。そのような担体は、本発明の化合物を患者による経口摂取のために、錠剤、丸剤、糖衣錠、カプセル、液剤、ゲル剤、シロップ、スラリー、懸濁剤などに処方することを可能にする。
【０１０３】
経口使用のための医薬調製物（pharmacological preparations）は、錠剤又は糖衣錠の核を得るために、固形賦形剤を使用し、場合によって結果として得られた混合物を粉砕しそして顆粒の混合物を処理し、必要に応じて適切な補助剤を添加することで、作製することができる。適切な賦形剤は、特に、糖のような充填剤、例えば乳糖、蔗糖、マンニトール、又はソルビトール、セルロース調製物、例えばトウモロコシ澱粉、小麦澱粉、米澱粉、ジャガイモ澱粉、ゼラチン、トラガカント・ゴム、メチルセルロース、ヒドロキシプロピルメチル・セルロース、カルボメチル・セルロース・ナトリウム；及び／又は生理学的に許容可能なポリマー、例えばポリビニルピロリドン（ＰＶＰ）である。増粘剤、香料添加剤、希釈剤、乳化剤、分散補助剤、又は結合剤は望ましいこともある。
【０１０４】
鼻孔吸入による投与のためには、本発明に使用する有効成分は、ウイルスのカプシドタンパク質、又は好ましくは、ＳＶ４０のＶＰ１を含むＶＬＰｓ、又は変異ＶＰ１分子であるが、これは加圧パックのエアゾール・スプレーの形態、又は適当な推進剤の形態、例えばジクロロジフルオロメタン、トリクロロフルオロメタン、ジクロロ・テトラフルオロエタン、又は二酸化炭素を使用した噴霧器により送達されることもある。加圧エアゾールの場合は、用量単位は定量送達バブルでの提供で決定されることもある。例えば、ディスペンサー（調剤）に使用するためのゼラチンのカプセル及びカートリッジは、化合物及び適切な粉末基剤、例えば乳糖又は澱粉、の粉末混合物を含むように処方されることもある。
【０１０５】
本明細書に記載の製造物は非経口投与、例えば急速静注又は持続静注のために処方されることもある。注射のための処方は、単位用量形態、例えば、アンプル又は場合により保存剤を添加した繰り返し投与用容器の形で提供される。組成物は、油性又は水性の賦形剤の中の懸濁液、溶液又は乳化液であることがあり、そして調合剤、例えば懸濁剤、安定剤及び／又は分散剤を含むこともある。
【０１０６】
非経口投与のための医薬組成物は、水溶性の形態の活性製造物の水溶液を含む。加えて、有効成分の懸濁液は適切な油性又は水性の基剤の注射用懸濁液として製造されることもある。適切な親油性溶媒又は賦形剤は、脂肪油、例えばゴマ油、又は合成脂肪油エステル、例えばオレイン酸エチル、トリグリセリド又はリポソームを含む。水溶性注射用懸濁液は懸濁液の粘性を高める物質、例えばカルボキシルメチル・セルロース・ナトリウム、ソルビトール又はデキストランを含むこともある。また、場合により、懸濁液は、有効成分の溶解性を高めて高い濃縮度の溶液の製造を可能にするための、適切な安定剤又は試薬を含むことがある。
【０１０７】
代替として、有効成分は適切な賦形剤、例えば無菌でパイロジェンを含まない水をベースとした溶液との構成のために、使用前は粉末体であることがある。
【０１０８】
また、本発明の医薬組成物は、例えばココアバター又は他のグリセリドのような通常の座薬基剤を使用した座薬又は保持浣腸剤のような肛門用組成物、として処方されることもある。
【０１０９】
従って、本発明の医薬組成物は、これに限るわけではないが、溶液、乳化液及びリポソーム含有製剤を含む。これら組成物は、これに限らないが、予め調製された液体、自己乳化固形物、及び自己準乳化固形物を含む種々の成分から生成してもよい。
本発明の関連の使用のために適切な医薬組成物は、意図する目的を達成するために活性成分の有効量が含有されている組成物を含む。より詳細には、治療的有効量とは、疾患の症状を阻止、緩和又は改善するのに、又は治療を受ける対象者の生存を伸ばすのに有効な量の、活性成分の量を意味する。
【０１１０】
前記のように、治療的有効量の決定は当業者の能力の範囲内で、よくなしえることである。本発明の治療方法により使用される任意の医薬組成物にとって、治療的有効量又は用量は、最初にｉｎ  ｖｉｔｒｏの分析により見積もることができる。例えば、用量は動物モデルで処方でき、この情報はヒトにおける有用な用量をより正確に決定するために使用することができる。
【０１１１】
本明細書に記載される有効成分の毒性及び治療有効性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ、細胞培養、動物試験における標準の薬学的手順により決定することができる。ｉｎ  ｖｉｔｒｏ細胞培養分析及び動物試験により得られたデータは、ヒトにおける使用の用量範囲を処方するのに使用することができる。用量は、採用された用量形態及び使用された投与経路に依存して変化することもある。正確な処方、投与経路及び用量は患者の状態を考慮して個々の医師により選択されることができる。
【０１１２】
治療する状態の重症度及び反応性に依存して、投薬は、単独又は繰り返し投与が可能で、治療過程は数日から数週間又は治療が有効になるまでか、又は疾患状態又は症状の軽減が達成されるまでかを選択することができる。
【０１１３】
投与される医薬組成物の量は、治療を受ける対象者、苦痛の重症度、投与の仕方、処方する医師の判断などに依存するのは当然であろう。
【０１１４】
本発明の方法は、特にヒトにおける病的障害の治療を意図しているが、他の哺乳動物も含まれる。制限されない例として、哺乳動物の対象者はサル、ウマ、ウシ、イヌ、ネコ、マウス、ラット及びブタを含む。
【０１１５】
第３の観点では、本発明は、病的障害において品質管理工程に関与する細胞タンパク質の改善効果の促進方法に関する。この方法は、病的障害に罹った対象者から得られた細胞をｅｘ  ｖｉｖｏ又はｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、ウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド又は断片の有効量と接触させる工程を含む。
【０１１６】
更に、本発明は、それを必要とする対象者での病的障害において品質管理工程に関与する細胞タンパク質の改善効果の促進方法に関する。この方法は、前記対象者に対して、ウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド又は断片、あるいはそれらを含むＶＬＰs、あるいはそれらを含む組成物の治療的有効量を投与する工程を含む。
【０１１７】
或る特に好ましい実施態様によれば、品質管理工程に関与する細胞タンパク質はシャペロン、特に、ＨＳＰ／ｃ７０であることもある。
【０１１８】
更に、本発明は細胞を酸化的ストレス又はアポトーシスから救う方法を提供し、それは、酸化的ストレス又はアポトーシスが進行中の細胞をウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片、あるいは前記ウイルスのカプシドタンパク質又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片を含むＶＬＰｓの、あるいはそれらを含む組成物の、有効量と接触させる工程を含む。
【０１１９】
或る具体的な実施態様によれば、これら細胞はアポトーシスの過程又は酸化的ストレスを含む病的障害に罹っている対象者の細胞である。
【０１２０】
更に、本発明は細胞生存経路、好ましくは、ＰＩ３Ｋ−ＰＫＢ／Ａｋｔ生存経路の促進方法を提供する。本発明の方法は細胞を、ウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片、あるいはそれらを含むＶＬＰｓの、有効量と接触させる工程を含む。或る具体的な実施態様では、本発明の方法及び組成物による細胞生存経路の誘導はそれを必要とする対象者において、ｉｎ  ｖｉｔｒｏ又はｉｎ  ｖｉｖｏの細胞培養、又は代替としてｉｎ  ｖｉｖｏで実施されることもある。
【０１２１】
或る実施態様によれば、本発明の任意の方法により提供されるウイルスのカプシドタンパク質は、パピローマウイルス、又はポリオーマウイルスの任意のカプシドタンパク質、又は任意のその断片、ペプチド及び混合物及び組合せであることがある。好ましくは、ウイルスのカプシドタンパク質はＳＶ４０のＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３の少なくとも一つ、及び任意のそのペプチド、断片、変異体、任意の混合物及び組合せであることがある。最も好ましくは、ウイルスのカプシドタンパク質はＳＶ４０のＶＰ１又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片、あるいはＳＶ４０のＶＰ１を含むＶＬＰｓであることもある。詳細には、ＳＶ４０のＶＰ１タンパク質は配列番号：１で示されるようなアミノ酸配列を含むこともある。
【０１２２】
更に他の実施態様では、本発明の方法により使用される変異ＶＰ１分子は、ＶＰ１ΔＣ変異体であることもあり、それは好ましくは配列番号：４で示されるアミノ酸配列を含む。
【０１２３】
好ましくは、本発明の方法は品質管理工程に関与する細胞タンパク質の改善効果を促進し、従ってその様なタンパク質、好ましくはシャペロン、の不活化により引き起こされる病的障害において、特に使用されることもある。
【０１２４】
他の実施態様では、本発明の方法は、病的障害、例えば神経変性障害又は免疫関連障害、において細胞タンパク質、好ましくはシャペロンの改善効果を促進する。
【０１２５】
或る特定の実施態様では、免疫関連障害は自己免疫疾患、悪性及び非悪性の増殖性障害、移植拒絶病変及び移植片対宿主病、及び病原因子により引き起こされる障害であることもある。
【０１２６】
更に他の特に好ましい実施態様では、病原因子により引き起こされる病的障害は、ＡＲＦ疾患、ＡＲＤＳ（急性呼吸窮迫症候群）及び多系統臓器不全のいずれか一つがもたらされる敗血症につながることもある。
【０１２７】
従って、或る特に好ましい実施態様では、そのようなＡＲＦ障害はＡＫＩであることがある。
【０１２８】
第４の観点では、本発明は、病的障害の治療用医薬組成物の製造における、ウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片使用に関する。
【０１２９】
或る実施態様では、本発明により使用されるカプシドタンパク質は、パピローマウイルス、又はポリオーマウイルスの任意のカプシドタンパク質、又は任意のその断片、変異体、ペプチド、混合物及び組合せであることもある。好ましくは、ウイルスのカプシドタンパク質はＳＶ４０のＶＰ１、ＶＰ２、ＶＰ３の少なくとも一つ、及び任意のそのペプチド、断片、変異体、任意の混合物及び組合せであることもある。最も好ましくは、ウイルスのカプシドタンパク質はＳＶ４０のＶＰ１又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片であることもある。
【０１３０】
好ましくは、本発明による使用は、品質管理工程に関与する細胞タンパク質の改善効果を促進させる組成物の製造のためであり、従ってそのようなタンパク質、好ましくはシャペロンの不活化により引き起こされる病的障害の治療のために、特に使用されることがある。
【０１３１】
他の実施態様では、本発明によるウイルスのカプシドタンパク質の使用は、病的障害、例えば神経変性障害又は免疫関連障害の治療用組成物の製造のためである。
【０１３２】
或る特定の実施態様では、免疫関連障害は自己免疫疾患、悪性及び非悪性の増殖性障害、移植拒絶病変及び移植片対宿主病、及び病原因子により引き起こされる障害であることもある。
【０１３３】
病原因子により引き起こされる病的障害は敗血症を導くこともあり、その結果、ＡＲＦ疾患、ＡＲＤＳ（急性呼吸窮迫症候群）及び多系統臓器不全のいずれか一つがもたらされることもある。
【０１３４】
或る特に好ましい実施態様では、そのようなＡＲＦ障害はＡＫＩであることもある。
【０１３５】
更に、本発明は細胞を酸化的ストレス又はアポトーシスから細胞を救うための医薬組成物の製造における、ウイルスのカプシドタンパク質少なくとも一つ、又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片、あるいは前記ウイルスのカプシドタンパク質又は任意のそのペプチド、変異体若しくは断片を含むＶＬＰｓの使用を提供する。
【０１３６】
或る特定の実施態様では、変異ＶＰ１ΔＣ分子は本発明で使用されることもある。
【０１３７】
開示され、そして記載されてはいるように、本発明は本明細書に公開されている特別な実施例、方法、工程及び組成物に限定されるものではなく、その理由はそのような方法、工程及び組成物はある程度は変化することもあることが理解される。また、本明細書で使用されている用語は具体的な実施態様を記載する目的でのみ使用されており、限定を意図しているのではなく、その理由は本発明の範囲は添付請求項及びその同等物によってのみ限定されることになるからであることも当然のことである。
【０１３８】
本明細書及び添付請求項で使用されているように、単数形の「ａ（一つの）」、「ａｎ（一つの）」及び「ｔｈｅ（その）」は、特に記載内容が断らない限り、指示物の複数形も含むことは、留意されなければならない。
【０１３９】
本明細書及びそれに続く実施例及び請求項を通して、文脈上で特に要求していない限り、用語「ｃｏｍｐｒｉｓｅ（含む）」及びその変形、たとえば「ｃｏｍｐｒｉｓｅｓ」、「ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ（含んでいる）」は記載されている完全体、又は工程又は完成体の又は工程のグループの包含を意味するが、しかし他の任意の完全体又は工程又は完全体又は工程のグループを排除しないことは、当然のことながら理解されよう。
【０１４０】
次に続く実施例は、本発明者により本発明の観点の実施において採用された技術を代表するものである。これらの技術は本発明の実施にとり好ましい実施態様の模範例である一方で、当業者であれば本公開に照らして、本発明の精神及び意図する範囲から逸脱しないで多くの修飾を行うことができることは、当然認めるであろうことは、理解されるのが好ましい。
【実施例】
【０１４１】
実験方法
ＡＫＩ（急性腎損傷）モデル動物：
ＡＫＩ（又は正式にはＡＴＮ（急性尿細管壊死）と呼ばれる）は、腎毒素であるＨｇＣｌ２の用量６．５ｍｇ／ｋｇで引き起こされる。投与されたマウスは、その全体的な様子及び血中の尿素レベルに見られるようにＡＫＩを発現した。正常で健康的な動物における血液尿素レベルは通常約＜５０ｍｇ／ｄＬの範囲である。血液尿素はＡＫＩ動物では最初の３〜４日中にかなり上昇する。このＨｇＣｌ２の用量を投与された動物の大部分は４日以内に死亡する。生き残った動物は５日以降血液尿素の低下を示し始め、そして回復するようである。
【０１４２】
ＶＬＰｓの産生
ポリヘドリンプロモータでＶＰ１を発現する組換えバキュロウイルス［Sandalon (1997) ibid.; Sandalon, Z. and Oppenheim, A. In SV40 protocols, L. Raptis, ed. (Totowa, NJ, Humana Press Inc.) (2001)］はＳｆ９細胞で増やした。簡単には、高い力価のウイルス・ストック（＞１０９  ｐｆｕ／ｍｌ）がＶＰ１産生のために、１０モイ（ｍｏｉ、感染の多重度）で対数増殖期の培養のＳｆ９細胞に感染させるために使用された。感染７２時間後に、細胞は遠心分離により回収し、核抽出物はＳｃｈｒｅｉｂｅｒらが採用した方法により調製するか［Schreiber et al., Nucleic Acids Research 17: 6419 (1989)］、又は代わりに培地より５〜６日後に回収し、次いで感染Ｓｆ９細胞を融解させた。核抽出物は一定分量に分けて-８０℃で貯蔵した。そのような核抽出物は自然に会合したＳＶ４０ウイルス様粒子（ＶＬＰｓ）を含む。大部分はＲＮＡである、ＶＬＰｓ内に捕捉されていることもある巨大分子を除去するために、これらは分解し、次のような３工程を踏んで再会合させた：工程Ａ、最終容積１０μｌ中で、５μｌのＳｆ９核抽出物は、１μｌ、１５０ｍＭのＤＴＴ及び１０μｇのＲＮａｓｅで３７℃で２０分間処理された。工程Ｂでは、再会合混合物（最終容積１０μｌ中に１０ｍＭのＡＴＰ、ｐＨ７．９の２０ｍＭのＨｅｐｅｓ−ＫＯＨ緩衝液、８０ｍＭのＫＣｌ、４０ｍＭのＮＨ４Ｃｌ、１０ｍＭのＭｇＣｌ２、１６％グリセロール及び０．０８％ＮＰ−４０、を含む）を処理された核抽出物（工程Ａ）に添加し、そして再会合反応は３７℃、１時間のインキュベーションで行った。工程Ｃにおいて、凝集（パッケージング）反応は、１０μｌの安定化緩衝液（ｐＨ５．２、１５０ｍＭの酢酸ナトリウム緩衝液、３ｍＭのＣａＣｌ２、１２０ｍＭのＫＣｌ及び４０ｍＭのＮＨ４Ｃｌ、塩濃度は１６０ｍＭに維持）を添加し、総容積を３０μｌにしてから、氷上に一晩置くことで行った。
【０１４３】
反応混合物はクロロホルム（５μｌ）で処理し、混合物はボルテックスし、遠心分離機で分離し、部分的に精製したＶＬＰｓは水層に回収された。ＶＬＰｓは更に精製し、アルゴン下で、ＸＭ３００膜（ミリポア）を使用し、攪拌限外濾過により〜３００倍に濃縮した（最終濃度５〜１０ｍｇ／ｍｌ）。濃縮物は０．５ＭのＮａＣｌ生理食塩水（最初の半分の容積）に再懸濁し、３回再濾過した。精製ＶＬＰｓは一定量ずつ分け、使用するまで−２０℃で貯蔵する。使用直前にＶＬＰｓはＨ２Ｏで３倍に希釈し（最終ＮａＣｌ濃度を１６６ｍＭに）、更に生理食塩水で求められるＶＰ１濃度に希釈される。
【０１４４】
精製ＶＬＰｓのＥＭ
ＶＬＰｓの透過型電子顕微鏡像の作製は、次のようにして行われた：試料はフォルムバール（ｆｏｒｍｖａｒ）炭素で被覆した銅格子に吸着させ、ｐＨ７．０の１％タングストリン酸ナトリウムで染色した。試料はフィリップス（Ｐｈｉｌｉｐｓ）ＣＭ−１２電子顕微鏡で１００ｋＶを使用して観察し、６６，０００Ｘの倍率で写真撮影を行った。
精製ＶＬＰｓは図１に示される。図に示すように、両方の回収方法において（核又は培地）ＶＬＰｓは、野生型ＳＶ４０（図１Ｂ）と類似する均一な形状及びサイズの単離ナノ粒子のように見える（図１Ａ）。ゲル電気泳動は、これらは〜９５％ＶＰ１（図１Ｃ）を含むことを示した。粒子中にはＤＮＡは検出されなかった。
【０１４５】
《実施例１》
＜ＳＶ４０のＬＶＰｓによるシャペロン（Ｈｓｐ／ｃ７０）の誘導／活性化＞
発明の背景で示したように、シャペロンは臨床状態の改善時、例えば急性尿細管壊死（ＡＴＮ）又は現在の定義ではＡＫＩに出現し、ＳＶ４０はシャペロンＨｓｐ７０の発現を活性化することが示されている。本発明者は、従って、ＳＶ４０カプシドタンパク質が何らの遺伝物質もなしに、シャペロン・タンパク質、例えばＨｓｐ７０のレベルに影響を与え、又はそれを修飾することもあるかについて調べた。従って、次にＳＶ４０のカプシドタンパク質によるシャペロンの生合成の誘導が評価された。ウイルス様粒子として（ＶＬＰｓ）ＶＰ１のみを含み、そしてＶＰ１の５量体として解離したＳＶ４０カプシドタンパク質は、アフリカミドリザル腎臓（１０６細胞当たり５０ｎｇ及び５００ｎｇのＳＶ４０のＶＬＰｓ）由来であるＣＶ１細胞に添加した。カプシドタンパク質の添加後のいくつかの時点で、総細胞タンパク質は回収され、等量がポリアクリルアミドゲル電気泳動、及び哺乳動物ＨＳＰ／ｃ７０シャペロンの特異的な抗体を用いたウェスタンブロットにより分析された。無処理マウスは対照（コントロール）として用いられた。図２ＡはＨｓｐ／ｃ７０タンパク質レベルを示すウェスタンブロットを示す。更に、ＳＶ４０のＶＬＰｓによるＨＳＰ／ｃ７０発現の促進が解析された。図２Ｂに示すように、ＣＶ１細胞は５０ｎｇのＶＬＰｓで処理し、抗Ｈｓｐ／ｃ７０抗体で免疫染色しそして共焦点顕微鏡下で観察した。図で明確に明らかにされているように、サルＣＶ−１細胞はＶＬＰｓ感染に対してＨｓｐ／ｃ７０の上方制御による反応を示した。ウェスタンブロット分析は、ＶＰ１（５０及び５００ｎｇ）の両方の濃度で、ＰＩ（感染後）の９時間のタンパク質レベルのかなりの増加を示した。共焦点顕微鏡（図２Ｂ）は、６時間でＨｓｐ／ｃ７０レベルの僅かの増加を示した。Ｈｓｐ／ｃ７０は細胞における蓄積を継続し、ＰＩの９時間までに核へ移動した。４８時間ではＨｓｐ／ｃ７０はもはや見えなくなった。同様の結果は変異ＶＰ１ΔＣ分子（データは示さず）を使用しても得られた。従って、本発明者はＰＩの６〜９時間からＨｓｐ／ｃ７０における増加が起きると結論する。
【０１４６】
《実施例２》
＜ＳＶ４０のＶＬＰｓは培養腎臓細胞をアポトーシスから保護する＞
蓄積する証拠はシャペロンが腎不全を保護することを示唆している［Lu, C.Y. et al. Curr. OP. in Nephrol. Hypertens. 16:83-89 (2007); Riordan, M. et al. Nat. Clin. Pract. Nephrol. 2:149-156 (2006); Kelly, K.J. Contrib. Nephrol. 148:86-106 (2005)］。従って、本発明者は次にＳＶ４０のＶＬＰｓによるｈｓｐ／ｃ７０の誘導がアポトーシスから細胞を保護することもあるかどうか調べた。アポトーシスはヒト腎臓ＨＥＫ細胞でエトポシドにより誘導された。図３に見られるように、１０６細胞当たり５０ｎｇＶＬＰｓの添加はアポトーシス効果をかなり改善し、細胞は無処理対照と同じように見える。同様の効果はＣＶ−１細胞でも得られた。
【０１４７】
＜ＳＶ４０は腎臓を標的とする＞
ＳＶ４０の自然環境は霊長類の腎臓である。従ってこのウイルがマウスの腎臓を標的にするのは驚くことではない。図４Ａ及び４Ｂで示すように、ＳＶ４０のＶＬＰｓの尾静脈への単回注射後４８時間のマウスの尿細管において、抗ＶＰ１抗体により強い染色が観察できる。これにより、ＳＶ４０のＶＬＰｓ又はカプシドタンパク質を使用したＡＲＦ障害治療の適用性と実現可能性が強調される。
【０１４８】
《実施例３》
＜急性腎損傷（ＡＫＩ）のためのマウスモデル使用の樹立＞
観察されたＳＶ４０のＶＬＰｓ及びカプシドタンパク質によるシャペロンレベルの促進に対する効果及び腎臓細胞におけるアポトーシスに対する保護効果は、本発明者が腎臓に特に関連した病的障害に対するＳＶ４０のＶＬＰｓ及びカプシドタンパク質の有益な効果の可能性についてさらに研究することを励ました。その高い再現性により、水銀腎臓毒性マウスモデルが最初の研究に選択された。マウスモデルの樹立のために、ＢＡＬＢ／Ｃ雌マウス、１９〜２１グラム（６〜９週令）が使用された。指定された濃度のＨｇＣｌ２がマウスにＩＰ（腹腔内）投与された。血液を尾静脈より決められた日に採取し、尿素はレフロトロン（Ｒｅｆｌｏｔｒｏｎ）尿試験（ロシュ）を使用して測定された。図５に示すように、種々のＨｇＣｌ２濃度における血液尿素レベルの標準偏差は小さい。この実験を基盤にして、６．５ｍｇ／ｋｇＨｇＣｌ２の用量が本研究のために選択された。この用量での繰り返し実験での死亡率は常に約９０％であった。
【０１４９】
＜培養マウス尿細管細胞のＨｇＣｌ２−誘導アポトーシスからの保護＞
腎臓毒性に対するＶＬＰｓ効果を調べるために、マウス尿細管細胞［Haverty, T.P. et al. J. Cell Biol. 107:1359-1368 (1988)］がｉｎ  ｖｉｖｏの急性腎不全に罹っている尿細管上皮細胞を代表するために使用された。図６Ａ及び６Ｂに明確に示されるように、１５μＭのＨｇＣｌ２による細胞の処理は強いアポトーシスをもたらし、一方５０ｎｇＶＬＰｓ／１０６細胞による感染は効果的な保護を提供する。同様な結果はＨＥＫ及びＣＶ−１細胞についても得られた（データは示さず）。
【０１５０】
《実施例４》
＜ＶＬＰｓによるマウスの治療により広い用量範囲で生存率を上昇させる＞
前記で明らかにしたように、ＡＫＩ動物モデルを使用すると、６．５ｍｇ／ｋｇのＨｇＣｌ２を注射されたほとんどの動物は３〜４日以内に死亡する。これらの結果は図７Ａで確認され、２／２０（１０％）のＡＫＩ動物のみが生存した。対照的に、ＶＬＰｓを投与された動物の生存率は非常に高い。図７Ａは、ＶＬＰｓを６０〜６００マイクログラム／マウスの用量で３回の注射により投与された１１匹の動物のデータを示す。このグループの生存率は５／１１（４５％）であった。これらの実験は、ＶＬＰｓがＡＫＩに対して治療効果を有することを明確に明らかにしている。
【０１５１】
これら励みとなる予備的データを更に研究するために、次の３つの実験グループはＶＬＰｓの生存率に対する効果を分析するために調べられた：一番目のグループ（シャム：偽処置）はＶＬＰｓの代わりに生理食塩水及びＨｇＣｌ２の代わりにＰＢＳを投与され、二番目のグループはＨｇＣｌ２及びＶＬＰｓで処理され（ＡＫＩ＋ＶＬＰｓ）、そして三番目のグループはＶＬＰｓの代わりに生理食塩水及びＨｇＣｌ２で処理された。ＶＬＰｓ（生理食塩水中０．３ｍｇ／ｋｇ）がマウスに尾静脈より３回毎日連続した注射により投与された（０．１ｍｇ／ｋｇ、毎日、各−３、−２、−１日）。ＶＬＰｓを投与されなかったマウスは並行して食塩水を注射された。ＰＢＳ中のＨｇＣｌ２を４日目にＩＰ注射され、この時点は下記に示す実験で０日と数える。シャム動物は並行してＰＢＳを投与された。マウスは更に１４日間生存率が観察された。図７Ｃに示すように、治療により生存率が１２％（６／４９）から６３％（１９／３０）へ上昇した。カプラン・マイヤー（Ｋａｐｌａｎ−Ｍｅｉｅｒ）／マンテル・コックス（Ｍａｎｔｅｌ−Ｃｏｘ）ログ・ランク試験を使用した統計分析は、Ｐ＝０．０００００２の有意性を示した。図７Ｂに示すように、緩和効果は３μｇ／ｋｇから３ｍｇ／ｋｇまでの広い範囲の用量で見られた。
【０１５２】
《実施例５》
＜ＶＰ１の５量体はＡＫＩ緩和活性を有する＞
次に本発明者は、全体のカプシドが観察された有益な効果に必要なのか、又はアポトーシスから保護するための十分量の情報がＶＰ１の５量体に存在することもあるのか、ということを調べた。ＳＶ４０のＶＬＰｓは主要カプシドタンパク質ＶＰ１の５量体７２個（３６０個の単量体）より構成されている。この単量体の構造は、伸長するアミノ酸及びカルボキシ末端腕を有するβ−バレル（ｂａｒｒｅｌ）核である。５量体は３６０個のカルボキシ末端腕を介して一緒に支えられている。カルボキシ末端腕を欠損する変異ＶＰ１カプシドタンパク質であるＶＰ１ΔＣ、は核構造を維持しているが、一方でＶＬＰｓに会合することができない。欠損変異体ＶＰ１ΔＣ６５−Ｈｉｓ［Roitman-Shemer, V. et al. Biochem Biophys. Res. Commun. 353:424-430 (2007)］はＳｆ９細胞で産生され、Ｈｉｓ−タグを介してＮｉ−ＮＴＡレジン（キアゲン）上で精製された。クマシー染色されたＳＤＳ−ＰＡＧＥ（図８Ａ）は、１ｍｇタンパク質を載せたレーンにおいて、そのタンパク質が約９５％純粋であることを示す。
【０１５３】
生存実験は前記のようにＶＬＰｓについてマウスの少数のグループで行われた（各グループで４匹の動物）。図８Ｂに示すように、ＶＰ１治療は０．７５０ｍｇ／ｋｇを注射されたマウスで７５％（３／４）の生存率をもたらした。これらの結果は、ＶＬＰｓに比較すると高い用量においてではあるが、ＶＰ１ΔＣもまた水銀損傷に対する保護で有効であることを示した。
【０１５４】
《実施例６》
＜異なる疾患パラメーターに対するＳＶ４０のＶＬＰｓ及びカプシドタンパク質の効果＞
本発明者は、更に追加の腎不全パラメーターについてＳＶ４０のＶＬＰｓを用いた病的障害、好ましくはＡＲＦの治療の適用性及び実現可能性を研究した。調べたパラメーターの一つは腎臓の構造及び形態であった。水銀損傷後３日目に採取されたマウスの３グループの代表的な腎臓が下記に示される。ＡＫＩの腎臓がより小さく血の気が無いのに対して、ＶＬＰ処理マウス由来の腎臓はシャム腎臓と類似しているように見えた（図９Ａ）。また、ＶＬＰｓの有益な効果は追加のパラメーターを調べた時にも観察された。図９Ｂに示すように、感染後４日目には、腎不全の２つの特徴である血清尿素及びクレアチニンの両方のレベル上昇は、ＶＬＰ処理ＡＫＩマウスでは非処理ＡＫＩマウスに比較して有意に緩和された。留意すべきことに、ＡＫＩマウスにおける血清尿素は４日間の実験の間中上昇を続けた。対照的に、図９Ｃで示すように、ＶＬＰ処理ＡＫＩ動物における血清尿素は３日目にピークに達し、それ以降低下した。このパターンはＶＬＰ処理動物の腎機能の回復と適合しそして高い生存率と関連する。
【０１５５】
《実施例7》
＜保護のメカニズム＞
ＳＶ４０のＶＬＰｓ及びＶＰ１カプシドタンパク質によるＡＫＩ動物の保護メカニズムの可能性について分析する試みで、次にストレスシグナルの関与を調べた。脂質の過酸化レベルをチオバルビツール酸反応基質（ＴＢＡＲＳ）測定法で測定した［Esterbauer, H. and Cheeseman, K.H. 方法s Enzymol. 186:407-421 (1990)］。このレベルはＶＬＰ処理マウスで低下しており（図１０）、このことは、ＶＬＰｓによる酸化的ストレスの緩和が、少なくとも部分的には、水銀誘導腎毒性からの腎機能保護を仲介していることを示唆する。
【０１５６】
並行する研究では（未発表データ、示さず）、本発明者はＶＰ１のＶＬＰｓを使用した細胞の治療はＰＬＣ−γ及びそのシグナル経路の非常に急速な活性化をもたらすことを示した。特に、急速な（１時間）ＰＡＲＰ−１及びカスパーゼ３及び１０の活性化はアポトーシス経路の開始を示唆する。しかしながら、細胞はアポトーシスへと進行はせず、その経過は６時間におけるシャペロン（Ｈｓｐ／ｃ７０）及びＰＩ３Ｋ−ＰＫＢ／Ａｋｔ生存経路の活性化により阻止され、それはＰＩ３Ｋ−ＰＫＢ／Ａｋｔ及びＢａｄタンパク質のリン酸化を含む。従って、いずれかの仮説に結びつくことなく、本発明者はＳＶ４０のＶＰ１カプシドタンパク質（又は任意のその変異体又はＶＬＰ）がＰＩ３Ｋ−ＰＫＢ／Ａｋｔ生存経路を誘導するという仮説を立てた。
【図５】
2009541218.tif 000002
【図７Ｂ】
2009541218.tif 000003
【図７Ｃ】
2009541218.tif 000004
【図８Ｂ】
2009541218.tif 000005
【図９Ｂ】
2009541218.tif 000006
【図９Ｃ】
2009541218.tif 000007
【図１０】
2009541218.tif 000008
【図１】
2009541218.tif 000009
【図２Ａ】
2009541218.tif 000010
【図２Ｂ】
2009541218.tif 000011
【図３】
2009541218.tif 000012
【図４】
2009541218.tif 000013
【図６】
2009541218.tif 000014
【図７Ａ】
2009541218.tif 000015
【図８Ａ】
2009541218.tif 000016
【図９Ａ】
2009541218.tif 000017
【配列表】
2009541218000001.app
【国際調査報告】
2009541218.tif 000018
2009541218.tif 000019
2009541218.tif 000020
2009541218.tif 000021
2009541218.tif 000022