(57)【要約】本発明は概して予期しない所望の薬理学的特性の組み合わせを有するケモカイン受容体活性のモジュレーターに関するものであり、そして、炎症、アレルギー性、自己免疫、代謝性、癌および／または循環器疾患、特に糖尿病、クローン病、アテローム性動脈硬化症、および多発性硬化症の治療および予防のための薬剤として、それらを含む医薬組成物、およびそれらを使用する方法、ならびに化合物を調製する方法およびそのための中間体を提供する。活性化合物の代謝物もまた本発明において提供され、医薬組成物およびその使用もまた提供される。【特許請求の範囲】
【請求項１】
(i)  N-((1R,2S,5R)-2-((3S)-3-((6-tert-ブチルピリミド[5,4-d]ピリミジン-4-イル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)アセトアミド;
N-((1R,2S,5R)-5-(メチルアミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド;
N-((1R,2S,5R)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)ホルムアミド;
N-((1R,2S,5R)-5-(ジメチルアミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド;
N-((3S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)-2-オキソ-3-ピロリジニル)-6-tert-ブチル-2-ピリジンカルボキサミド;
N-((1R,2S,5R)-5-アミノ-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)プロパンアミド;
2-tert-ブチル-N-((3S)-1-((1S,2R,4R)-4-(tert-ブチルアミノ)-2-(メタンスルホニルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソ-3-ピロリジニル)-4-ピリミジンカルボキサミド;
2-tert-ブチル-N-((3S)-1-((1S,2R,4R)-4-(tert-ブチルアミノ)-2-(プロピオニルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソ-3-ピロリジニル)-4-ピリミジンカルボキサミド;
N-((1R,2S,5R)-5-(tert-ブチルアミノ)-2-((3S)-3-((6-tert-ブチルピリミド[5,4-d]ピリミジン-4-イル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)メタンスルホンアミド; および
N-(((1S,2S,5R)-5-メトキシ-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)メチル)アセトアミド; または
(ii)  それら(i)の医薬的に許容される塩；
から選択される化合物。
【請求項２】
N-((1R,2S,5R)-2-((3S)-3-((6-tert-ブチルピリミド[5,4-d]ピリミジン-4-イル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)アセトアミドまたはその医薬的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
N-((1R,2S,5R)-5-(メチルアミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミドまたはその医薬的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
N-((1R,2S,5R)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)ホルムアミドまたはその医薬的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
N-((1R,2S,5R)-5-(ジメチルアミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミドまたはその医薬的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
N-((3S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)-2-オキソ-3-ピロリジニル)-6-tert-ブチル-2-ピリジンカルボキサミドまたはその医薬的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
N-((1R,2S,5R)-5-アミノ-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)プロパンアミドまたはその医薬的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
2-tert-ブチル-N-((3S)-1-((1S,2R,4R)-4-(tert-ブチルアミノ)-2-(メタンスルホニルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソ-3-ピロリジニル)-4-ピリミジンカルボキサミドまたはその医薬的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
2-tert-ブチル-N-((3S)-1-((1S,2R,4R)-4-(tert-ブチルアミノ)-2-(プロピオニルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソ-3-ピロリジニル)-4-ピリミジンカルボキサミドまたはその医薬的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
N-((1R,2S,5R)-5-(tert-ブチルアミノ)-2-((3S)-3-((6-tert-ブチルピリミド[5,4-d]ピリミジン-4-イル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)メタンスルホンアミドまたはその医薬的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
N-(((1S,2S,5R)-5-メトキシ-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)メチル)アセトアミドまたはその医薬的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項１２】
(i)  N-((1R,2S,5R)-5-(イソプロピルアミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド;
N-((1R,2S,5R)-5-アミノ-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド;
N-((1R,2S,5R)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)-2-((3S)-3-((1-オキシド-6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド;
N-((1R,2S,5R)-5-(イソプロピルアミノ)-2-((3S)-3-((1-オキシド-6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド; および
N-((1R,2S,5R)-5-(tert-ブチルアミノ)-2-((3S)-3-((1-オキシド-6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド; または
(ii)  それら(i)の医薬的に許容される塩；
から選択される化合物。
【請求項１３】
請求項１〜１２に記載の化合物、および医薬的に許容される担体または希釈剤を含む、医薬組成物。
【請求項１４】
請求項１〜１２に記載の化合物の治療上有効量を哺乳類に投与することを特徴とする、哺乳類の疾病を治療する方法であって、該疾病は糖尿病、肥満症、メタボリックシンドローム、脳卒中、神経因性痛、虚血性心筋症、乾癬、高血圧症、強皮症、骨関節炎、動脈瘤、発熱、循環器疾患、クローン病、うっ血性心不全、自己免疫疾患、HIV-感染、HIV関連認知症、乾癬、特発性肺線維症、移植動脈硬化症、物理的にまたは化学的に誘発された脳損傷、炎症性腸疾患、肺胞炎、大腸炎、全身性エリテマトーデス、腎毒性血清腎炎、糸球体腎炎、喘息、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、血管炎、不安定プラーク、関節リウマチ、再狭窄、静脈新生内膜肥厚化、透析移植新生内膜肥厚化、動脈-静脈シャント内膜肥厚化、臓器移植、慢性同種移植腎障害、および癌から選択される該方法。
【請求項１５】
該疾病が糖尿病、肥満症、クローン病、全身性エリテマトーデス、糸球体腎炎、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、および臓器移植から選択される、請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
該疾病が多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、クローン病、および糖尿病から選択される、請求項１４〜１５に記載の方法。
【請求項１７】
該疾病が糖尿病である請求項１４〜１６に記載の方法。
【請求項１８】
該疾病がアテローム性動脈硬化症である請求項１４〜１６に記載の方法。
【請求項１９】
該疾病がクローン病である請求項１４〜１６に記載の方法。
【請求項２０】
該疾病が多発性硬化症である請求項１４〜１６に記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本出願は米国仮出願第60／834,235号、および第60／896,026号（それぞれ2006年7月28日および2007年3月21日出願）の優先権を主張し、両者の開示内容は参照することにより、本明細書に組み込まれる。
【０００２】
本発明の分野
本発明は概して予期しない所望の薬理学的特性の組み合わせを有するケモカイン受容体活性のモジュレーターに関するものであり、そして、炎症、アレルギー性、自己免疫、代謝性、癌および／または循環器疾患、特に糖尿病、アテローム性動脈硬化症、クローン病、および多発性硬化症の治療および予防のための薬剤として、それらを含む医薬組成物、およびそれらを使用する方法、化合物を調製する方法およびそのための中間体を提供する。活性化合物の代謝物、医薬組成物、およびその使用もまた提供される。
【背景技術】
【０００３】
ケモカインとは、様々な細胞によって放出され、数ある細胞種の中でとりわけ、マクロファージ、ＴおよびＢリンパ球、好酸球、好塩基球ならびに好中球を誘引および活性化する、分子量6〜15kDaの化学走性サイトカインである（CharoおよびRasonhoff、New Eng. J. Med.、2006、354、610〜621；Luster、New Eng. J. Med.、1998、338、436〜445；ならびにRollins、Blood、1997、90、909〜928に総説）。アミノ酸配列中の最初の２つのシステインが単一のアミノ酸によって分離されているか（CXC）、または隣接しているか（CC）に応じて、２つの主要なケモカインのクラス、すなわちCXCおよびCCが存在する。インターロイキン-8（IL-8）、好中球活性化タンパク質-2（NAP-2）および黒色腫成長刺激活性タンパク質（MGSA）などのCXCケモカインは、主に好中球およびＴリンパ球に対して化学走性であり、一方、RANTES、MIP-1α、MIP-1β、単球走化性タンパク質（MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4、およびMCP-5）ならびにエオタキシン（-1および-2）などのCCケモカインは、数ある細胞種の中でとりわけ、マクロファージ、Ｔリンパ球、好酸球、樹状細胞、および好塩基球に対して化学走性である。また、主要なケモカインサブファミリーのどちらにも属さないケモカインのリンフォタクチン-1、リンフォタクチン-2（どちらもCケモカイン）、およびフラクタルカイン（CX3Cケモカイン）も存在する。
【０００４】
ケモカインは、「ケモカイン受容体」と呼ばれる、Ｇタンパク質結合７回膜貫通ドメインタンパク質のファミリーに属する特異的な細胞表面受容体と結合する（Horuk、Trends Pharm. Sci.、1994、15、159〜165に総説）。その同族リガンドと結合する際、ケモカイン受容体は会合した三量体Ｇタンパク質を介して細胞内シグナルを伝達し、数ある他の応答でとりわけ、細胞内カルシウム濃度の急速な増加、細胞形状の変化、細胞接着分子の発現の増加、脱顆粒、および細胞遊走の促進をもたらす。以下の特徴パターンでCCケモカインと結合するまたはそれに応答するヒトケモカイン受容体が少なくとも10種存在する（ZlotnikおよびOshie、Immunity、2000、12、121に総説）：CCR-1（または「CKR-1」もしくは「CC-CKR-1」）［MIP-1α、MCP-3、MCP-4、RANTES］（Ben-Barruch, et al.、Cell、1993、72、415〜425、およびLuster、New Eng. J. Med.、1998、338、436〜445）；CCR-2AおよびCCR-2B（または「CKR-2A」／「CKR-2B」もしくは「CC-CKR-2A」／「CC-CKR-2B」）［MCP-1、MCP-2、MCP-3、MCP-4、MCP-5］（Charo, et al.、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、1994、91、2752〜2756、およびLuster、New Eng. J. Med.、1998、338、436〜445）；CCR-3（または「CKR-3」もしくは「CC-CKR-3」）［エオタキシン-1、エオタキシン-2、RANTES、MCP-3、MCP-4］（Combadiere, et al.、J. Biol. Chem.、1995、270、16491〜16494、およびLuster、New Eng. J. Med.、1998、338、436〜445）；CCR-4（または「CKR-4」もしくは「CC-CKR-4」）［TARC、MDC］（Power, et al.、J. Biol. Chem.、1995、270、19495〜19500、およびLuster、New Eng. J. Med.、1998、338、436〜445）；CCR-5（または「CKR-5」もしくは「CC-CKR-5」）［MIP-1α、RANTES、MIP-1β］（Sanson, et al.、Biochemistry、1996、35、3362〜3367）；CCR-6（または「CKR-6」もしくは「CC-CKR-6」）［LARC］（Baba, et al.、J. Biol. Chem.、1997、272、14893〜14898）；CCR-7（または「CKR-7」もしくは「CC-CKR-7」）［ELC］（Yoshie et al.、J. Leukoc. Biol.、1997、62、634〜644）；CCR-8（または「CKR-8」もしくは「CC-CKR-8」）［I-309］（Napolitano et al.、J. Immunol.、1996、157、2759〜2763）；CCR-10（または「CKR-10」もしくは「CC-CKR-10」）［MCP-1、MCP-3］（Bonini, et al.、DNA and Cell Biol.、1997、16、1249〜1256）；ならびにCCR-11［MCP-1、MCP-2、およびMCP-4］（Schweickert, et al.、J. Biol. Chem.、2000、275、90550）。
【０００５】
哺乳動物ケモカイン受容体に加えて、哺乳動物サイトメガロウイルス、ヘルペスウイルスおよびポックスウイルスが、感染細胞において、ケモカイン受容体の結合特性を有するタンパク質を発現することが示されている（WellsおよびSchwartz、Curr. Opin. Biotech.、1997、8、741〜748に総説）。RANTESおよびMCP-3などのヒトCCケモカインは、これらのウイルスによってコードされた受容体を介して急速なカルシウムの動員を引き起こすことができる。受容体の発現は、正常な免疫系監視および感染に対する応答の破壊を可能にすることによって、感染症に許容状態となり得る。さらに、CXCR4、CCR2、CCR3、CCR5およびCCR8などのヒトケモカイン受容体は、たとえばヒト免疫不全ウイルス（HIV）の場合のように、微生物による哺乳動物細胞の感染の補助受容体として作用することができる。
【０００６】
ケモカインおよびその同族受容体は、喘息およびアレルギー性疾患を含めた炎症性、感染性、および免疫調節性の障害および疾患；関節リウマチおよび多発性硬化症などの自己免疫病；ならびにアテローム性動脈硬化症および糖尿病などの代謝性疾患の重要な媒介物質であることが示唆されている（CharoおよびRasonhoff、New Eng. J. Med.、2006、354、610〜621；Z. GaoおよびW. A. Metz、Chem. Rev.、2003、103、3733；P. H. Carter、Current Opinion in Chemical Biology、2002、6、510；Trivedi, et al.、Ann. Reports Med. Chem.、2000、35、191；SaundersおよびTarby、Drug Disc. Today、1999、4、80；PremackおよびSchall、Nature Medicine、1996、2、1174に総説）。たとえば、ケモカイン単球化学誘引物質-1（MCP-1）およびその受容体であるCCケモカイン受容体2（CCR-2）は、白血球を炎症部位へと勇進すること、および続いてこれらの細胞を活性化することにおいて、中心的役割を果たす。ケモカインMCP-1がCCR-2と結合した際、これは、細胞内カルシウム濃度の急速な増加、細胞接着分子の発現の増加、および白血球遊走の促進を誘導する。MCP-1／CCR-2相互作用の重要性の実証は、遺伝子改変したマウスを用いた実験によって提供されている。MCP-1-／-マウスは、いくつかの異なる種類の免疫誘発後に単球を炎症部位内へと動員することができなかった（Bao Lu, et al.、J. Exp. Med.、1998、187、601）。同様に、CCR-2-／-マウスは、様々な外因性因子で誘発した場合に単球を動員することもインターフェロン-γを産生することもできなかった；さらに、CCR-2ヌルマウスの白血球はMCP-1に応答して遊走せず（Landin Boring, et al.、J. Clin. Invest.、1997、100、2552）、したがって、MCP-1／CCR-2相互作用の特異性が実証された。２つの他のグループが、異なるCCR-2-／-マウスの株を用いた同等の結果を独立して報告している（William A. Kuziel, et al.、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、1997、94、12053、およびTakao Kurihara, et al.、J. Exp. Med.、1997、186、1757）。MCP-1-／-およびCCR-2-／-の動物の生存度および一般に正常な健康は、MCP-1／CCR-2相互作用の破壊が生理的発作を引き起こさないという観点から注目すべきである。総合すると、これらのデータにより、MCP-1／CCR2の作用を遮断する分子がいくつかの炎症性および自己免疫障害の治療に有用であるという結論がもたらされる（M. FeriaおよびF. Diaz-Gonzalez、Exp. Opin. Ther. Patents、2006、16、49；ならびにJ. Dawson、W. Miltz、およびC. Wiessner、C. Exp. Opin. Ther. Targets、2003、7、35に総説）。この仮説は、下に記載するように、現在いくつかの異なる動物疾患モデルにおいて妥当性が確認されている。
【０００７】
MCP-1は関節リウマチに罹患している患者においてアップレギュレーションされていることが、知られている（Alisa Koch, et al.、J. Clin. Invest.、1992、90、772〜779）。さらに、いくつかの前臨床研究により、関節リウマチの治療においてMCP-1／CCR2相互作用を拮抗することの潜在的な治療的価値が実証されている。最近、MCP-1をコードしているＤＮＡワクチンがラットにおいて慢性のポリアジュバント誘発関節炎を寛解させることが示された（Sawsan Youssef, et al.、J. Clin. Invest.、2000、106、361）。同様に、疾患症状は、MCP-1に対する抗体を、コラーゲン誘発関節炎（Hiroomi Ogata, et al.、J. Pathol.、1997、182、106）、またはストレプトコッカス細胞壁誘発関節炎（Ralph C. Schimmer, et al.、J. Immunol.、1998、160、1466）に罹患しているラットに直接投与することによって制御することができる。恐らくは最も顕著なことに、MCP-1のペプチド拮抗剤、MCP-1（9-76）は、関節炎のMRL-lprマウスモデルにおいて、疾患の発症の予防および疾患症状の軽減（投与時間に応じる）をどちらも行うことが示された（Jiang-Hong Gong, et al.、J. Exp. Med.、1997、186、131）。さらに、小分子CCR2拮抗剤を投与することにより、関節炎のげっ歯類モデルにおいて臨床スコアが低下したことが実証されている（C. M. Brodmerkel, et al.、J. Immunol.、2005、175、5370; およびＭ．Ｘｉａ他、米国特許出願第0069123号、2006）。抗CCR2抗体の投与は、ネズミCIAに対して、投与時間に応じて様々な効果を有していた（H. Bruhl, et al.、J. Immunol.、2004、172、890）。CCR2-／-マウスを用いた最近の研究は、CCR2の欠失が特定の実験状況においてげっ歯類の関節炎モデルを悪化させる可能性があることを示唆している（M. P. Quinones, et al.、J. Clin. Invest.、2004、113、856；M. P. Quinones, et al.、J. Mol. Med.、2006、84、503）。
【０００８】
MCP-1がアテローム性動脈硬化性病変においてアップレギュレーションされていることは知られており、MCP-1の循環レベルが治療剤を用いた治療によって低下することが示されている（Abdolreza Rezaie-Majd, et al.、Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol.、2002、22、1194〜1199）。いくつかの重要な研究により、アテローム性動脈硬化症の治療においてMCP-1／CCR2相互作用を拮抗することの潜在的な治療的価値が実証されている。たとえば、MCP-1-／-マウスをLDL受容体欠損マウスと交差させた場合に、大動脈脂質沈着の83％の低下が観察された（Long Gu, et al.、Mol. Cell、1998、2、275）。同様に、ヒトアポリポタンパク質Ｂを既に過剰発現していたマウスからMCP-1を遺伝子除去した場合に、生じたマウスは、MCP-1+／+apoB対照マウスと比較してアテローム性動脈硬化性病変の形成から保護されていた（Jennifa Gosling, et al.、J. Clin. Invest.、1999、103、773）。同様に、CCR-2-／-マウスをアポリポタンパク質E-／-マウスと交差させた場合に、アテローム性動脈硬化性病変の発生率の有意な低下が観察された（Landin Boring, et al.、Nature、1998、394、894；T. C. Dawson, et al.、Atherosclerosis、1999、143、205）。最後に、アポリポタンパク質Ｅ-／-マウスにCCR2のペプチド拮抗剤をコードしている遺伝子を投与した場合、病変の大きさが減少し、溶菌斑の安定性が増加した（W. Ni, et al.、Circulation、2001、103、2096〜2101）。CCR2-／-マウスからの骨髄をApoE3-Leidenマウス内へと移植することで初期アテローム発生が阻害されたが（J. Guo, et al.、Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol.、2003、23、447）、進行した病変には最小限の効果しか有さなかった（J. Guo, et al.、Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol.、2005、25、1014）。
【０００９】
２型真性糖尿病に罹患している患者は、典型的には、疾患の顕著な特長の１つとしてインスリン抵抗性を示す。インスリン抵抗性はまた、肥満症、アテローム性動脈硬化症、高血圧、および異常脂質血症が含まれる、「代謝症候群」または「症候群Ｘ」として知られる異常の分類とも関連している（Eckel, et al.、Lancet、2005、365、1415に総説）。炎症が２型糖尿病および「症候群Ｘ」の病理における疾患プロセスの悪化に役割を果たすことは、十分に認識されている（Chen、Pharmacological Research、2006、53、469；NeelsおよびOlefsky、J. Clin. Invest.、2006、116、33；DanadonaおよびAljada、Am J Cardiol.、2002、90、27G〜33G；PickupおよびCrook、Diabetologia、1998、41、1241に総説）。MCP-1は、肥満症誘発インスリン抵抗性において役割を果たすことが認識されている。培養物中では、ヒト前脂肪細胞がMCP-1を構成的に発現した（Gerhardt、Mol. Cell. Endocrinology、2001、175、81）。CCR2は脂肪細胞上で発現される；インビトロで分化した脂肪細胞にMCP-1を加えることで、インスリン刺激性のグルコースの取り込みならびにいくつかの脂肪生成遺伝子（LpL、アジプシン、GLU-4）、aP2、β3-アドレナリン作動性受容体、およびPPARγ）の発現が低下する（P. SartipyおよびD. Loskutoff、Proc. Natl. Acad. Sci USA、1999、96、6902）。２型糖尿病に罹患している患者は、非糖尿病対照よりも高い循環MCP-1レベルを有しており（S. Nomura, et al.、Clin. Exp. Immunol.、2000、121、437）、脂肪組織からのMCP-1の放出は、メトホルミンまたはチアゾリジンジオンなどの抗糖尿病治療剤を用いた治療によって減少させることができる（J. M. Bruun, et al.、J. Clin. Endocrinol. Metab.、2005、90、2282）。同様に、MCP-1は、肥満症のネズミ実験モデルにおいても過剰発現されており、主に脂肪組織によって産生されていた（SartipyおよびLoskutoff、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、2003、100、7265）。肥満マウスでは、MCP-1の発現は、インスリン抵抗性の発症に先行しておよびそれと同時に起こっていた（H. Xu, et al.、J. Clin. Invest.、2003、112、1821）。別の研究により、MCP-1の発現は、マウスの性腺周囲脂肪組織において体重と正に相関したことが示された（Weisberg, et al.、J. Clin. Invest.、2003、112、1796）。これらのデータと一致して、ｄｂ／ｄｂマウスにおけるインスリン抵抗性の発生は、MCP-1の遺伝子欠失または遺伝子誘発性のドミナントネガティブペプチドの発現のどちらかによって寛解された（H. Kanda, et al.、J. Clin. Invest.、2006、116、1494）。論理的な逆関係は実証することができ、脂肪組織におけるMCP-1の過剰発現はインスリン抵抗性を促進した（N. Kamei, et al.、J. Biol. Chem.、2006、281、26602）。MCP-1の遺伝子欠失がdb／dbマウスにおいてインスリン抵抗性に影響を与えないことを示す、１つの矛盾する結果も示された（F. Y. Chow, et al.、Diabetologia、2007、50、471）。MCP-1のデータと一致して、CCR2（MCP-1受容体）を用いた直接研究により、これが、肥満症および肥満症誘発インスリン抵抗性の形成において役割を果たすことが示された。高脂肪の食餌を維持することで、野生型（C. L. Tsou, et al.、J. Clin. Invest.、2007、117、902）およびApoE-／-マウス（F. Tacke, et al.、J. Clin. Invest.、2007、117、185）のどちらにおいても循環CCR2＋炎症性単球の数が増加した。CCR2の遺伝子欠失により、ネズミ脂肪組織における活性マクロファージが減少したが（C. N. Lumeng, et al.、Diabetes、2007、56、16）、「痩せた」状態を維持すると考えられていたＭ２脂肪マクロファージの集団には影響を与えなかった（C. N. Lumeng, et al.、J. Clin. Invest.、2007、117、175）。CCR2の遺伝子欠失により、実験条件に応じて（A. Chen, et al.、Obes. Res.、2005、13、1311）食餌誘発性の肥満症が減少し、食餌誘発性の肥満症モデルにおけるインスリン感度が改善された（S. P. Weisberg, et al.、J. Clin. Invest.、2006、116、115；P Cornelius、RP Gladue、RS Sebastian、国際公開公報WO2006／013427 A2号）、2006年）。小分子CCR2拮抗剤の投与によっても、この同じモデルにおけるインスリン感度が改善された（S. P. Weisberg, et al.、J. Clin. Invest.、2006、116、115）。
【００１０】
２つの研究が、高血圧誘発性の血管の炎症、再構築、および肥厚におけるCCR2の重要な役割を記載している（E Bush et al.、Hypertension、2000、36、360；M Ishibashi, et al.、Circ. Res.、2004、94、1203）。
【００１１】
MCP-1がヒト多発性硬化症においてアップレギュレーションされていることは知られており、また、インターフェロンβ-1ｂを用いた有効な治療が末梢血単核細胞においてMCP-1の発現を減少させることが示されており、これは、MCP-1が疾患の進行において役割を果たすことを示唆している（Carla Iarlori, et al.、J. Neuroimmunol.、2002、123、170〜179）。他の研究により、多発性硬化症の治療においてMCP-1／CCR-2相互作用を拮抗することの潜在的な治療的価値が実証されている；これらの研究はすべて、多発性硬化症の慣用の動物モデルである実験的自己免疫脳脊髄炎（EAE）で実証されている。ＥＡＥに罹患している動物に、MCP-1に対する抗体を投与することにより、疾患の再発が有意に減少した（K. J. Kennedy, et al.、J. Neuroimmunol.、1998、92、98）。さらに、２つの報告から、CCR-2-／-マウスがEAEに対して耐性を有することが示されている（B. T. Fife, et al.、J. Exp. Med.、2000、192、899；L. Izikson, et al.、J. Exp. Med.、2000、192、1075）。続く報告が、様々な株由来のマウスにおけるCCR2欠失の効果を検査することによってこれらの最初の観察を拡張した（S. Gaupp, et al.、Am. J. Pathol.、2003、162、139）。注目すべきことに、小分子CCR2拮抗剤の投与は、C57BL／6マウスにおける疾患の進行も鈍らせた（C. M. Brodmerkel, et al.、J. Immunol.、2005、175、5370）。
【００１２】
MCP-1は、肺移植後に閉塞性細気管支炎症候群を発生する患者においてアップレギュレーションされていることが知られている（Martine Reynaud-Gaubert, et al.、J. of Heart and Lung Transplant.、2002、21、721〜730；John Belperio, et al.、J. Clin. Invest.、2001、108、547〜556）。閉塞性細気管支炎症候群のネズミモデルでは、MCP-1に対する抗体を投与することにより気道閉塞の弱毒化がもたらされた；同様に、CCR2-／-マウスは、この同じモデルで気道閉塞に対して体制を有していた（John Belperio, et al.、J. Clin. Invest.、2001、108、547〜556）。これらのデータは、MCP-1／CCR2の拮抗が移植後の器官拒絶の治療に有用であり得ることを示唆している。さらに、研究により、MCP-1／CCR2軸の破壊が島移植の生存を延長できることが示されている（I Lee et al.、J Immunol、2003、171、6929；R Abdi et al.、J Immunol、2004、172、767）。ラット移植モデルでは、CCR2およびMCP-1が、移植片脈管障害を発生する移植片においてアップレギュレーションされていることが示されている（K Horiguchi et al.、J Heart Lung Transplant.、2002、21、1090）。別の研究では、抗MCP-1遺伝子治療により移植片脈管障害が弱毒化された（A Saiura et al.、Artherioscler Thromb Vasc Biol、2004、24、1886）。１つの研究は、MCP-1の遮断による実験的静脈移植片新生内膜形成の阻害を記載している（H Tatewaki et al.、J Vasc Surg.、2007、45、1236）。
【００１３】
他の研究により、喘息の治療においてMCP-1／CCR2相互作用を拮抗することの潜在的な治療的価値が実証されている。卵白アルブミンで誘発したマウスにおける中和抗体を用いたMCP-1の隔離により、気管支応答性の亢進および炎症の顕著な低下がもたらされた（Jose-Angel Gonzalo, et al.、J. Exp. Med.、1998、188、157）。MCP-1に対する抗体を投与することによって、マンソン住血吸虫の卵で誘発したマウスにおいてアレルギー性気道炎症の低下が可能であることが証明された（Nicholas W. Lukacs, et al.、J. Immunol.、1997、158、4398）。これと一致して、MCP-1-／-マウスでは、マンソン住血吸虫の卵を用いた誘発に対する応答の低下が示された（Bao Lu, et al.、J. Exp. Med.、1998、187、601）。
【００１４】
他の研究により、腎臓病の治療においてMCP-1／CCR2相互作用を拮抗することの潜在的な治療的価値が実証されている。糸球体腎炎のネズミモデルに、MCP-1に対する抗体を投与することにより、糸球体半月の形成およびＩ型コラーゲンの沈着の顕著な低下がもたらされた（Clare M. Lloyd, et al.、J. Exp. Med.、1997、185、1371）。さらに、誘発させた腎毒性血清腎炎に罹患しているMCP-1-／-マウスは、そのMCP-1＋／＋の対応物よりも有意に少ない尿細管障害を示した（Gregory H. Tesch, et al.、J. Clin. Invest.、1999、103、73）。
【００１５】
いくつかの研究により、全身性エリテマトーデスの治療においてMCP-1／CCR2相互作用を拮抗することの潜在的な治療的価値が実証されている。CCR2-／-マウスは、全身性エリテマトーデスのネズミモデルにおいて、その野生型対応物と比較して延長された生存および低下した腎臓病を示した（G. Perez de Lema, et al.、J. Am. Soc. Neph.、2005、16、3592）。これらのデータは、ループスのげっ歯類モデルにおけるMCP-1の遺伝子欠失（S. Shimizu, et al.、Rheumatology (Oxford)、2004、43、1121；Gregory H. Tesch, et al.、J. Exp. Med.、1999、190、1813）またはCCR2のペプチド拮抗剤の投与（H. Hasegawa, et al.、Arthritis ＆ Rheumatism、2003、48、2555）の最近の研究で見い出された疾患変更活性と一致している。
【００１６】
CCR2＋固有層リンパ球中の顕著な３０倍の増加が、非患部の回腸と比較して、クローン病患者からの小腸で観察された（S. J. Connor, et al.、Gut、2004、53、1287）。また、注記すべきは、対照と比較して活性なクローン病に罹患している患者では、循環CCR2＋／CD14＋／CD56＋単球の部分組の拡大が存在していたことである。いくつかのげっ歯類の研究により、クローン病／大腸炎の治療においてMCP-1／CCR2相互作用を拮抗することの潜在的な治療的価値が実証されている。CCR-2-／-マウスは、デキストラン硫酸ナトリウム誘発大腸炎の効果から保護されていた（Pietro G. Andres, et al.、J. Immunol.、2000、164、6303）。CCR2、CCR5、およびCXCR3（ネズミ結合親和性＝それぞれ24、236、および369nM）の小分子拮抗剤を投与することによっても、デキストラン硫酸ナトリウム誘発大腸炎に対して保護された（H. Tokuyama, et al.、Int. Immunol.、2005、17、1023）。最後に、MCP-1-／-マウスは、大腸炎のハプテン誘発モデルにおいて、実質的に低下した結腸損傷を示した（巨視的および組織学的）（W. I. Khan, et al.、Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol.、2006、291、G803）。
【００１７】
２つの報告が、炎症性腸疾患に罹患している患者の腸管上皮細胞および腸粘膜におけるMCP-1の過剰発現を記載している（H. C. Reinecker, et al.、Gastroenterology、1995、108、40、およびMichael C. Grimm, et al.、J. Leukoc. Biol.、1996、59、804）。
【００１８】
１つの研究は、MCP-1遺伝子中のプロモーター多型性と強皮症（全身性硬化症）との関連を記載している（S Karrer et al.、J Invest Dermatol.、2005、124、92）。組織線維症の関連モデルでは、CCR2／MCP-1軸の阻害により、皮膚（T YamamotoおよびK Nishioka、J Invest Dermatol、2003、121、510；AM Ferreira et al.、J Invest Dermatol.、2006、126、1900）、肺（T Okuma et al.、J Pathol.、2004、204、594；M Gharaee-Kermani et al.、Cytokine、2003、24、266）、腎臓（K Kitagawa et al.、Am J Pathol.、2004、165、237；T Wada et al.、J Am Soc Nephrol、2004、15、940）、心臓（S Hayashidani et al.、Circulation、2003、108、2134）、および肝臓（S Tsuruta et al.、Int J Mol Med.、2004,14、837）における線維症が低下した。
【００１９】
１つの研究により、肺胞炎の治療においてMCP-1／CCR2相互作用を拮抗することの潜在的な治療的価値が実証されている。IgA免疫複合体肺傷害に罹患しているラットを、ラットMCP-1（JE）に対して産生させた抗体を用いて静脈内治療した場合、肺胞炎の症状が部分的に緩和された（Michael L. Jones, et al.、J. Immunol.、1992、149、2147）。
【００２０】
いくつかの研究により、癌の治療においてMCP-1／CCR2相互作用を拮抗することの潜在的な治療的価値が示されている（M. J. CraigおよびR. D. Loberg、Cancer Metastasis Rev.、2006、25、611；I. ContiおよびB. Rollins、Seminars in Cancer Biology、2004、14、149；R. GilesおよびR. D. Loberg、Curr. Cancer Drug Targets、2006、6、659に総説）。ヒト乳癌細胞を保有している免疫不全マウスを抗MCP-1抗体で治療した場合、肺の微小転移の阻害および生存の増加が観察された（Rosalba Salcedo, et al.、Blood、2000、96、34〜40）。ヒト臨床腫瘍検体を用いて、CCR2の発現は、前立腺（prostrate）癌の進行と関連づけられている（Y. Lu, et al.、J. Cell. Biochem.、2007、101、676）。インビトロで、MCP-1の発現は前立腺癌細胞の成長および侵襲を媒介することが示されている（Y. Lu, et al.、Prostate、2006、66、1311）；さらに、前立腺癌細胞によって発現されたMCP-1は骨吸収のヒト骨髄前駆体を誘発した（Y. Lu, et al.、Cancer Res.、2007、67、3646）。
【００２１】
複数の研究により、再狭窄の治療においてMCP-1／CCR2相互作用を拮抗することの潜在的な治療的価値が記載されている。ヒトでは、MCP-1レベルが再狭窄の危険性と直接相関している（F. Cipollone, et al.、Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol.、2001、21、327）。CCR2またはMCP-1を欠くマウスは、動脈傷害後に内膜面積および内膜／培地比の低下を示した（野生型の同腹仔と比較して）（Merce Roque, et al.、Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol.、2002、22、554；A. Schober, et al.、Circ. Res.、2004、95、1125；W. J. Kim, et al.、Biochem Biophys Res Commun.、2003、310、936）。マウスでは、骨格筋におけるMCP-1のドミナントネガティブ阻害剤の形質移入も（K. Egashira, et al.、Circ. Res.、2002、90、1167）、動脈傷害後の内膜過形成を低下させた。中和抗体を用いたCCR2の遮断は、霊長類におけるステント術後の新生内膜過形成を低下させた（C. Horvath, et al.、Circ. Res.、2002、90、488）。
【００２２】
２つの報告が、誘発させた脳外傷を有するラットにおけるMCP-1の過剰発現を記載している（J. S. King, et al.、J. Neuroimmunol.、1994、56、127、およびJoan W. Berman, et al.、J. Immunol.、1996、156、3017）。さらに、CCR2-／-（O. B. Dimitrijevic, et al.、Stroke、2007、38、1345）およびMCP-1-／-マウス（P. M. Hughes, et al.、J. Cereb. Blood Flow Metab.、2002、22、308）がどちらも虚血／再灌流傷害から部分的に保護されていることが、研究によって示されている。
【００２３】
単球／マクロファージが神経因性疼痛の発生に重要な役割を果たしていることが知られている（Liu T、van Rooijen N、Tracey DJ、Pain、2000、86、25）。この考えと一致して、炎症性および神経因性の疼痛のどちらの治療にもおけるCCR2の潜在的な役割が、最近記載された。CCR2-／-マウスは、その野生型対応物と比較して、足底内ホルマリン注射後の疼痛行動の減少および足底内CFA注射後の機械的アロディニアのわずかな減少を含めた、炎症性疼痛に対する応答の変化を示している（C. Abbadie, et al.、Proc. Natl. Acad. Sci., USA、2003、100、7947）。さらに、CCR2-／-マウスは、坐骨神経傷害後に顕著な機械的アロディニアを示さなかった。同様に、小分子CCR2拮抗剤は、経口投与後に機械的アロディニアを傷害前のレベルの約80％まで低下させた（C. Abbadie、J. A. Lindia、およびH. Wang、国際公開公報WO PCT110376号、2004年）。
【００２４】
１つの研究が、虚血性心筋症におけるMCP-1の重要な役割を記載している（N. G. Frangogiannis, et al.、Circulation、2007、115、584）。別の研究は、MCP-1の阻害後の実験的心不全の弱毒化を記載している（S Hayashidani et al.、Circulation、2003、108、2134）。
【００２５】
他の研究が、MCP-1が上に言及していない様々な病状で過剰発現されているという証拠を提供している。これらの報告は、MCP-1拮抗剤がそのような疾患の有用な治療剤である可能性を有するという相関証拠を提供している。別の研究は、げっ歯類の心臓同種移植におけるMCP-1の過剰発現を実証しており、これは、移植動脈硬化症の病因におけるMCP-1の役割を示唆している（Mary E. Russell, et al.、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、1993、90、6086）。MCP-1の過剰発現は、特発性肺線維症に罹患している患者の肺内皮細胞で指摘されている（Harry N. Antoniades, et al.、Proc. Natl. Acad. Sci. USA、1992、89、5371）。同様に、MCP-1の過剰発現は乾癬に罹患している患者の皮膚で指摘されている（M. Deleuran, et al.、J. Dermatol. Sci.、1996、13、228、およびR. Gillitzer, et al.、J. Invest. Dermatol.、1993、101、127）；CCR2＋細胞の優勢の相関発見も報告されている（C. Vestergaard, et al.、Acta Derm. Venerol.、2004、84、353）。最後に、最近の報告により、MCP-1がHIV-1関連の認知症に罹患している患者の脳および脳脊髄液中で過剰発現されていることが示されている（Alfredo Garzino-Demo、国際公開公報WO99／46991号）。
【００２６】
さらに、CCR2多型性が、患者の少なくとも１つの部分群において、サルコイドーシスと関連していることが示されている（P. Spagnolo, et al.、Am J Respir Crit Care Med.、2003、168、1162）。
【００２７】
また、CCR-2がHIVの一部の株の補助受容体として示唆されているも注記すべきである（B. J. Doranz, et al.、Cell、1996、85、1149）。また、CCR-2のHIV補助受容体としての使用を疾患の進行と相関できることも、決定されている（Ruth I. Connor, et al.、J. Exp. Med.、1997、185、621）。この発見は、CCR-2突然変異体、CCR2-64Iの存在が、ヒト集団におけるHIVの遅延発症と正に相関しているという最近の発見と一致している（Michael W. Smith, et al.、Science、1997、277、959）。MCP-1はこれらのプロセスと関連づけられていないが、CCR-2と結合することで作用するMCP-1拮抗剤が、HIVに感染した患者におけるAIDSの疾患進行を遅延させることに有益な治療効果を有し得る可能性がある。
【００２８】
CCR2は、ヒトケモカインMCP-2、MCP-3、およびMCP-4の受容体でもあることに注記されたい（Luster、New Eng. J. Med.、1998、338、436〜445）。本明細書中に記載の式（Ｉ）の新しい化合物はCCR-2受容体と結合することによってMCP-1を拮抗するので、式（Ｉ）のこれらの化合物も、CCR-2によって媒介されるMCP-2、MCP-3、およびMCP-4の作用の有効な拮抗剤である可能性がある。したがって、本明細書中で「MCP-1の拮抗」に言及する場合、「CCR-2のケモカイン刺激の拮抗」に等価であるとみなされるべきである。
【００２９】
したがって、ケモカイン活性を変調する化合物により、炎症性、アレルギー性、自己免疫、代謝、癌および／または心血管の疾患の治療において広範囲の利用性を実証することができる。特許出願公開の国際公開公報WO2005021500（本明細書中に参考として組み込まれており、本出願人に与えられている）は、CCR2によってMCP-1、MCP-2、MCP-3およびMCP-4の活性を変調する化合物を開示している。この参考文献は、保護基の導入および続く除去が含まれる複数工程の合成を含めた、これらの化合物を調製する様々な方法も開示している。
【００３０】
既知のケモカインモジュレーターと比較して改善された薬理学的特徴を有する新しい化合物を発見することが望ましい。たとえば、他のＧタンパク質共役型受容体（すなわち5HT2A受容体）と比べて、CCR-2に対する改善されたCCR-2阻害活性および選択性を有する新しい化合物を発見することが好ましい。また、以下の分類の１つまたは複数において有利かつ改善された特徴を有する化合物を発見することも望ましい：
（ａ）医薬特性（すなわち、溶解度、透過性、持続放出配合に対する従順性）；
（ｂ）用量要件（たとえば、より低い用量および／または１日１回の投薬）；
（ｃ）血液濃度ピーク−最小値特性を低下させる要素（すなわち、クリアランスおよび／または分布容量）；
（ｄ）受容体における活性薬物の濃度を増加させる要素（すなわち、タンパク質結合、分布容量）；
（ｅ）臨床的薬物間相互作用が起こりやすい傾向を低下させる要素（CYP 2D6阻害などのチトクロームP450酵素の阻害または誘導、本明細書中に参考として取り込まれているG. K. Dresser、J. D. Spence、D. G. Bailey、Clin. Pharmacokinet.、2000、38、41〜57を参照）；
（ｆ）有害な副作用の潜在性を低下させる要素（たとえば、Ｇタンパク質共役型受容体を超える薬理学的選択性、潜在的な化学的もしくは代謝的反応性、限定されたCNSへの浸透、イオンチャネル選択性）。前述の薬理学的特徴の望ましい組合せを有する化合物を発見することが特に望ましい。
【発明の概要】
【発明が解決しようとする課題】
【００３１】
また、そのような化合物を調製するための新しいおよび／または改善された方法を提供することも、当分野で望ましい。これらの方法は、それだけには限定されないが、ａ）試験的な工場または製造スケールなどの、より大スケールの産生への容易な適応；ｂ）純度（キラル純度を含む）、安定性ならびに／または中間体および／もしくは最終化合物の取扱いの容易性の改善を可能にする、プロセス工程および／または技術；ならびに／あるいはｃ）より少ないプロセス工程を特徴とし得る。
【課題を解決するための手段】
【００３２】
本発明の概要
従って、本明細書において、予期しない所望の薬理学的特徴の組み合わせを有する新規なケモカイン活性のモジュレーター、またはその医薬的に許容される塩もしくはプロドラッグが開示される。
【００３３】
本開示は、医薬的に許容される担体、および少なくとも１個の本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩もしくはプロドラッグ体の治療上有効量を含む、医薬組成物を提供する。
【００３４】
本開示はまた、その治療の必要がある対象に、少なくとも１個の本発明の化合物またはその医薬的に許容される塩もしくはプロドラッグ体の治療上有効量を投与することを特徴とする、炎症、アレルギー性、自己免疫、代謝性、癌および／または循環器疾患、特に糖尿病、多発性硬化症、クローン病および／またはアテローム性動脈硬化症を治療するための方法を提供する。
【００３５】
本開示は、本明細書に開示された化合物の調製方法およびそのための中間体を提供する。
【００３６】
本開示はまた、活性化合物の代謝物、またはその医薬的に許容される塩もしくはプロドラッグ、その医薬組成物、ならびに炎症、アレルギー性、自己免疫、代謝性、癌および／または循環器疾患、特に糖尿病、多発性硬化症、クローン病および／またはアテローム性動脈硬化症の治療において該代謝物を使用する方法を提供する。
【００３７】
本開示は療法における使用のための新規な環状誘導体を提供する。
【００３８】
本開示は、炎症、アレルギー性、自己免疫、代謝性、癌および／または循環器疾患の治療のための医薬の製造のための、新規な環状誘導体の使用を提供する。
【図面の簡単な説明】
【００３９】
【図１】図1は、tert-ブチル (1R,3R,4S)-3-アセトアミド-4-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-2-オキソピロリジン-1-イル)シクロヘキシルカルバマートのX-線結晶構造を開示する。
【００４０】
詳細な説明
本開示は概して、予期しない所望の薬理学的特性の組み合わせを有するケモカイン受容体活性のモジュレーターに関するものであり、そして、炎症、アレルギー性、自己免疫、代謝性、癌および／または循環器疾患、特に糖尿病、アテローム性動脈硬化症、クローン病および多発性硬化症の治療および予防ための薬剤として、それらを含む医薬組成物、およびそれらを使用する方法、化合物を調製する方法およびそのための中間体を提供する。
【００４１】
本発明の化合物は、所望の薬理学的特徴の組み合わせ（例えば、驚くほど高度な経口バイオアベイラビリティーが、該化合物は極めて有効でありかつ優れた安全基準を有するとの指示と相まって示される）を予想外に示す。
【００４２】
適当な程度の膜透過性(経口バイオアベイラビリティーの重大な因子)を示す、CCR2受容体の既知のモジュレーター、例えば2005年3月10日発行の国際公開公報WO2005021500(米国特許第7,163,937号、2007年1月16日に発行され、現出願人に譲渡された)に開示されているものは、それらのCCR2-結合能によって測定されたとおり十分に有効でなく、および／または、それらは、hERGおよびCaイオンチャネル研究によって測定したイオンチャネル選択性によって示されるように、適当な安全性のクライテリアを欠いている。
【００４３】
対照的に、本明細書中、下記の「比較薬理学的特徴」を題する項目に示される該データによって示されるとおり、相対的に極性な本発明の分子は驚くほど高い膜透過性を示し、さらに強力なCCR2結合能を優れたイオンチャネル選択性と共に維持する。
【００４４】
従って、本発明は炎症、アレルギー性、自己免疫、代謝性、癌および／または循環器疾患の治療に有用であると思われる改良された薬理学的特徴を持つ新規なケモカインモジュレーターを提供する。
【００４５】
本明細書においてまた、活性化合物の代謝物、医薬組成物、および炎症、アレルギー性、自己免疫、代謝性、癌および／または循環器疾患、特に糖尿病、アテローム性動脈硬化症、クローン病および多発性硬化症の治療および予防のためにそれらを使用する方法が、化合物を調製する方法およびそのための中間体と共に提供される。該活性化合物は、N-((1R,2S,5R)-5-(tert-ブチルアミノ)-2-((S)-2-オキソ-3-(6-(トリフルオロメチル)キナゾリン-4-イルアミノ)ピロリジン-1-イル)シクロヘキシル)アセトアミド(共係属中の特許出願、代理人整理番号11079に記載される)およびN-((1R,2S,5R)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)-2-((S)-2-オキソ-3-(6-(トリフルオロメチル)キナゾリン-4-イルアミノ)ピロリジン-1-イル)シクロヘキシル)アセトアミド(共係属中の特許出願、代理人整理番号10720に記載される)である。これらの代謝物の活性は、本明細書中下記の「比較薬理学的特徴」を題する項目に示される。
【発明を実施するための形態】
【００４６】
実施形態
１つの実施形態において、本開示は、
(i)  N-((1R,2S,5R)-2-((3S)-3-((6-tert-ブチルピリミド[5,4-d]ピリミジン-4-イル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)アセトアミド;
N-((1R,2S,5R)-5-(メチルアミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド;
N-((1R,2S,5R)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)ホルムアミド;
N-((1R,2S,5R)-5-(ジメチルアミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド;
N-((3S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)-2-オキソ-3-ピロリジニル)-6-tert-ブチル-2-ピリジンカルボキサミド;
N-((1R,2S,5R)-5-アミノ-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)プロパンアミド;
2-tert-ブチル-N-((3S)-1-((1S,2R,4R)-4-(tert-ブチルアミノ)-2-(メタンスルホニルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソ-3-ピロリジニル)-4-ピリミジンカルボキサミド;
2-tert-ブチル-N-((3S)-1-((1S,2R,4R)-4-(tert-ブチルアミノ)-2-(プロピオニルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソ-3-ピロリジニル)-4-ピリミジンカルボキサミド;
N-((1R,2S,5R)-5-(tert-ブチルアミノ)-2-((3S)-3-((6-tert-ブチルピリミド[5,4-d]ピリミジン-4-イル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)メタンスルホンアミド; および
N-(((1S,2S,5R)-5-メトキシ-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)メチル)アセトアミド; から選択される化合物、または、
(ii)  それら(i)の医薬的に許容される塩に関する。
【００４７】
別の実施形態において、本開示はN-((1R,2S,5R)-2-((3S)-3-((6-tert-ブチルピリミド[5,4-d]ピリミジン-4-イル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)アセトアミドである化合物、またはその医薬的に許容される塩に関する。
【００４８】
１つの実施形態において、本開示はN-((1R,2S,5R)-5-(メチルアミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミドである化合物、またはその医薬的に許容される塩に関する。
【００４９】
別の実施形態において、本開示はN-((1R,2S,5R)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)ホルムアミドである化合物、またはその医薬的に許容される塩に関する。
【００５０】
別の実施形態において、本開示はN-((1R,2S,5R)-5-(ジメチルアミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミドである化合物、またはその医薬的に許容される塩に関する。
【００５１】
別の実施形態において、本開示はN-((3S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)-2-オキソ-3-ピロリジニル)-6-tert-ブチル-2-ピリジンカルボキサミドである化合物、またはその医薬的に許容される塩に関する。
【００５２】
別の実施形態において、本開示はN-((1R,2S,5R)-5-アミノ-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)プロパンアミドである化合物、またはその医薬的に許容される塩に関する。
【００５３】
別の実施形態において、本開示は2-tert-ブチル-N-((3S)-1-((1S,2R,4R)-4-(tert-ブチルアミノ)-2-(メタンスルホニルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソ-3-ピロリジニル)-4-ピリミジンカルボキサミドである化合物、またはその医薬的に許容される塩に関する。
【００５４】
別の実施形態において、本開示は2-tert-ブチル-N-((3S)-1-((1S,2R,4R)-4-(tert-ブチルアミノ)-2-(プロピオニルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソ-3-ピロリジニル)-4-ピリミジンカルボキサミドである化合物、またはその医薬的に許容される塩に関する。
【００５５】
別の実施形態において、本開示はN-((1R,2S,5R)-5-(tert-ブチルアミノ)-2-((3S)-3-((6-tert-ブチルピリミド[5,4-d]ピリミジン-4-イル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)メタンスルホンアミドである化合物、またはその医薬的に許容される塩に関する。
【００５６】
別の実施形態において、本開示はN-(((1S,2S,5R)-5-メトキシ-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)メチル)アセトアミドである化合物、またはその医薬的に許容される塩に関する。
【００５７】
別の実施形態は、医薬的に許容される担体および該実施例の化合物を含む医薬組成物である。
【００５８】
別の実施形態は、実施例の化合物の治療上有効量をその必要がある患者に投与することを特徴とする、ケモカイン、またはケモカイン受容体活性を調節する方法である。
【００５９】
別の実施形態は、実施例の化合物の治療上有効量をその必要がある患者に投与することを特徴とする、CCR-2受容体活性を調節する方法である。
【００６０】
別の実施形態は、実施例の化合物の治療上有効量をその必要がある患者に投与することを特徴とする、該CCR2受容体によって媒介されるMCP-1、MCP-2、MCP-3およびMCP-4、およびMCP-5活性を調節する方法である。
【００６１】
別の実施形態は、実施例の化合物の治療上有効量をその必要がある患者に投与することを特徴とする、MCP-1活性を調節する方法である。
【００６２】
別の実施形態は、実施例の化合物の治療上有効量をその必要がある患者に投与することを特徴とする、CCR2およびCCR5活性を阻害する方法である。
【００６３】
別の実施形態は、実施例の化合物の治療上有効量をその必要がある患者に投与することを特徴とする、炎症、アレルギー性、自己免疫、代謝性、癌および／または循環器疾患を治療するための方法である。
【００６４】
別の実施形態は、実施例の化合物の治療上有効量をその必要がある患者に投与することを特徴とする、疾患を治療するための方法であり、該疾患は、糖尿病、肥満症、メタボリックシンドローム、脳卒中、神経因性痛、虚血性心筋症、乾癬、高血圧症、強皮症、骨関節炎、動脈瘤、発熱、循環器疾患、クローン病、うっ血性心不全、自己免疫疾患、HIV-感染、HIV関連認知症、乾癬、特発性肺線維症、移植動脈硬化症、物理的にまたは化学的に誘発された脳損傷、炎症性腸疾患、肺胞炎、大腸炎、全身性エリテマトーデス、腎毒性血清腎炎、糸球体腎炎、喘息、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、血管炎、不安定プラーク、関節リウマチ、再狭窄、静脈新生内膜肥厚化、透析移植新生内膜肥厚化、動脈-静脈シャント内膜肥厚化、臓器移植、慢性同種移植腎障害、および癌から選択される。
【００６５】
別の実施形態は、実施例の化合物の治療上有効量をその必要がある患者に投与することを特徴とする、疾患を治療するための方法であり、該疾患は、糖尿病、肥満症、クローン病、乾癬、特発性肺線維症、移植動脈硬化症、物理的にまたは化学的に誘発された脳損傷、炎症性腸疾患、肺胞炎、大腸炎、全身性エリテマトーデス、腎毒性血清腎炎、糸球体腎炎、喘息、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、および関節リウマチ、再狭窄、臓器移植、および癌から選択される。
【００６６】
別の実施形態は、実施例の化合物の治療上有効量をその必要がある患者に投与することを特徴とする、疾患を治療するための方法であり、該疾患は、糖尿病、肥満症、クローン病、全身性エリテマトーデス、糸球体腎炎、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、および臓器移植から選択される。
【００６７】
別の実施形態は、実施例の化合物の治療上有効量をその必要がある患者に投与することを特徴とする、疾患を治療するための方法であり、該疾患は、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、クローン病、および糖尿病から選択される。
【００６８】
別の実施形態は、実施例の化合物の治療上有効量をその必要がある患者に投与することを特徴とする、疾患を治療するための方法であり、該疾患は、再狭窄、臓器移植、および癌から選択される。
【００６９】
別の実施形態は、実施例の化合物の治療上有効量をその必要がある患者に投与することを特徴とする、糖尿病を治療するための方法である。
【００７０】
別の実施形態は、実施例の化合物の治療上有効量をその必要がある患者に投与することを特徴とする、多発性硬化症を治療するための方法である。
【００７１】
別の実施形態は、実施例の化合物の治療上有効量をその必要がある患者に投与することを特徴とする、アテローム性動脈硬化症を治療するための方法である。
【００７２】
別の実施形態は、実施例の化合物の治療上有効量をその必要がある患者に投与することを特徴とする、再狭窄を治療するための方法である。
【００７３】
別の実施形態は、実施例の化合物の治療上有効量をその必要がある患者に投与することを特徴とする、臓器移植を治療するための方法である。
【００７４】
別の実施形態は、実施例の化合物の治療上有効量をその必要がある患者に投与することを特徴とする、癌を治療するための方法である。
【００７５】
別の実施形態は、癌を治療するための方法であって、該癌は乳癌、肝臓癌、前立腺癌およびメラノーマから選択される。
【００７６】
別の実施形態は、実施例の化合物の治療上有効量をその必要がある患者に投与することを特徴とする、CCR-2によって少なくとも部分的に媒介される、炎症、アレルギー性、自己免疫、代謝性、癌および／または循環器疾患を治療するための方法である。
【００７７】
別の実施形態は、実施例の化合物の治療上有効量をその必要がある患者に投与することを特徴とする、CCR2活性を調節する方法である。
【００７８】
別の実施形態は、実施例の化合物の治療上有効量をその必要がある患者に投与することを特徴とする、MIP-1βおよび該CCR5受容体によって媒介されるRANTES活性を調節する方法である。
【００７９】
別の実施形態は、糖尿病、肥満症、メタボリックシンドローム、脳卒中、神経因性痛、虚血性心筋症、乾癬、高血圧症、強皮症、骨関節炎、動脈瘤、発熱、循環器疾患、クローン病、うっ血性心不全、自己免疫疾患、HIV-感染、HIV関連認知症、乾癬、特発性肺線維症、移植動脈硬化症、物理的にまたは化学的に誘発された脳損傷、炎症性腸疾患、肺胞炎、大腸炎、全身性エリテマトーデス、腎毒性血清腎炎、糸球体腎炎、喘息、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、血管炎、不安定プラーク、関節リウマチ、再狭窄、静脈新生内膜肥厚化、透析移植新生内膜肥厚化、動脈-静脈シャント内膜肥厚化、臓器移植、慢性同種移植腎障害、および癌を治療するための医薬の調製における実施例の化合物である。
【００８０】
別の実施形態は、治療における使用のための実施例の化合物である。
【００８１】
別の実施形態は、実施例の化合物を調製する方法である。
【００８２】
別の実施形態は: 
(i)  N-((1R,2S,5R)-5-(イソプロピルアミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド;
N-((1R,2S,5R)-5-アミノ-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド;
N-((1R,2S,5R)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)-2-((3S)-3-((1-オキシド-6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド;
N-((1R,2S,5R)-5-(イソプロピルアミノ)-2-((3S)-3-((1-オキシド-6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド; および
N-((1R,2S,5R)-5-(tert-ブチルアミノ)-2-((3S)-3-((1-オキシド-6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド; から選択される化合物、または
(ii)  (i)の医薬的に許容される塩、またはプロドラッグ;
から選ばれる化合物であり、該化合物は医薬的に活性な化合物のヒト代謝物として有用である。
【００８３】
本発明は、その精神または本質的な特性から離れることなく、他の具体的な形態で具現化されることができる。本発明はまた、本明細書に記載された本発明の別の態様および実施形態の組み合わせの全てを包含する。あらゆる実施形態は他の実施形態と組み合わされて、さらなる本発明の実施形態を説明しうることと理解される。さらに、実施形態の要素(好ましい態様を含む)は、いずれかの実施形態のあらゆる他の要素と組み合わせられて、さらなる実施形態を説明することを意図する。
【００８４】
定義
本明細書中に記載した化合物は不斉中心を有し得る。非対称的に置換された原子を含む本発明の化合物は、光学活性を有する型またはラセミ体で単離し得る。ラセミ体の分割によってまたは光学活性を有する出発物質からの合成によってなど、どのように光学活性型を調製するかは当分野で周知である。オレフィン、Ｃ＝Ｎ二重結合などの多くの幾何異性体も本明細書中に記載した化合物中に存在することができ、そのような安定な異性体すべてが本発明で企図される。本発明の化合物のシスおよびトランス幾何異性体を記載し、これは異性体の混合物または分離した異性体として単離し得る。具体的な立体化学または異性体を具体的に示さない限りは、すべてのキラル体、ジアステレオマー体、ラセミ体および構造の幾何異性体が意図される。
【００８５】
本明細書中に開示する化合物の一方の鏡像異性体が、他方と比較して優れた活性を示し得る。したがって、すべての立体化学が本発明の一部であるとみなされる。必要な場合は、ラセミ物質の分離は、Steven D. Young, et al.、Antimicrobial Agents and Chemotherapy、1995、2602〜2605に記載のように、キラルカラムを用いたＨＰＬＣによってまたはショウノウクロライドなどの分割剤を用いた分割によって達成することができる。
【００８６】
本明細書中で用いる語句「医薬的に許容される」とは、健全な医学的判断の範囲内で、過剰な毒性、刺激、アレルギー性応答、または他の問題もしくは合併症なしに人間および動物の組織と接触させて使用することに適しており、適切な利益／危険性の比が釣り合っている、化合物、物質、組成物、および／または剤形をいう。
【００８７】
本明細書中で使用する「医薬的に許容される塩」とは、親化合物を、その酸または塩基の塩を作製することによって改変する、開示する化合物の誘導体をいう。医薬的に許容される塩の例には、それだけには限定されないが、アミンなどの塩基性残基の鉱酸または有機酸の塩；カルボン酸などの酸性残基のアルカリまたは有機の塩等が含まれる。医薬的に許容される塩には、たとえば、無毒性の無機または有機酸から形成した、親化合物の慣用の無毒性塩または第四級アンモニウム塩が含まれる。たとえば、そのような慣用の無毒性の塩には、塩酸、臭化水素酸、硫酸、スルファミン酸、リン酸、硝酸などの無機酸に由来するもの；酢酸、プロピオン酸、コハク酸、グリコール酸、ステアリン酸、乳酸、リンゴ酸、酒石酸、クエン酸、アスコルビン酸、パモン酸、マレイン酸、ヒドロキシマレイン酸、フェニル酢酸、グルタミン酸、安息香酸、サリチル酸、スルファニル酸、２-アセトキシ安息香酸、フマル酸、トルエンスルホン酸、メタンスルホン酸、エタンジスルホン酸、シュウ酸、イセチオン酸などの有機酸から調製した塩が含まれる。
【００８８】
本発明の医薬的に許容される塩は、塩基性または酸性部分を含む親化合物から、慣用の化学的方法によって合成することができる。一般に、そのような塩は、これらの化合物の遊離酸または塩基の形態を、水もしくは有機溶媒、または２つの混合物中の、理論量の適切な塩基または酸と反応させることによって調製することができる；一般に、エーテル、酢酸エチル、エタノール、イソプロパノール、またはアセトニトリルなどの非水性媒体が好ましい。適切な塩の記載は、どのκ指示が本明細書中に参考として取り込まれている、レミントンの医薬科学(Remington’s Pharmaceutical Sciences)、第17版、Mack Publishing Company、ペンシルバニア州Easton、1985、1418ページに見つかる。
【００８９】
プロドラッグは、医薬品の数々の望ましい性質（たとえば、溶解度、生体利用度、製造など）を増強することが知られているので、本発明の化合物をプロドラッグ形態で送達し得る。したがって、本発明は、本発明で特許請求する化合物のプロドラッグ、上記を送達する方法および上記を含む組成物にわたる。「プロドラッグ」には、そのようなプロドラッグを哺乳動物対象に投与した際に、本発明の活性親薬物をインビボで放出する、任意の共有結合した担体が含まれることを意図する。本発明のプロドラッグは、化合物中に存在する官能基を修飾することによって調製し、これは、修飾物がルーチン操作またはインビボのどちらかで切断されて親化合物となるように行う。プロドラッグには、ヒドロキシ、アミノ、またはスルフヒドリル基が任意の基と結合しており、本発明のプロドラッグを哺乳動物対象に投与した際、切断されてそれぞれ遊離ヒドロキシル、遊離アミノ、または遊離スルフヒドリル基が形成される、本発明の化合物が含まれる。プロドラッグの例には、それだけには限定されないが、本発明の化合物のアルコールおよびアミン官能基の酢酸、ギ酸および安息香酸誘導体が含まれる。
【００９０】
「安定な化合物」および「安定な構造」とは、反応混合物から有用な度合の純度まで単離して、有効な治療剤へと配合する間残存するように十分に頑強な化合物を示すことを意味する。本発明は、安定な化合物を具体化することを意図する。
【００９１】
「治療上有効な量」には、MCP-1を阻害するために有効または障害を治療もしくは予防するために有効な、本発明の化合物の単独での量または特許請求した化合物の組合せの量または他の活性成分と組み合わせた本発明の化合物の量が含まれることを意図する。
【００９２】
本明細書中で使用する「治療すること」または「治療」とは、哺乳動物、特にヒトにおける疾患状態の治療に及び、（ａ）疾患状態が哺乳動物で生じることを予防すること（特にそのような哺乳動物が疾患状態を患いやすくなっているが、未だそれに罹患していると診断されていない場合）；（ｂ）疾患状態を阻害すること、すなわち、その発生を停止させること; および／または（ｃ）疾患状態を緩和させること、すなわち、病状の回帰を引き起こすことが含まれる。
【実施例】
【００９３】
下記実施例は、本発明の化合物および出発物質の実施形態を説明するものであり、請求の範囲を制限することを意図しない。
【００９４】
必要に応じて、乾燥窒素 (またはアルゴン) 雰囲気下で反応を行った。無水反応物のために、EMからのDri-Solv溶媒を用いた。他の反応物のために、試薬グレードまたはHPLCグレードの溶媒を使用した。特に断りのない限り、市販の試薬は全て、入手したままで使用した。
【００９５】
LC／MS測定は、島津HPLC／Waters ZQ シングル・クワドルポール質量分析計ハイブリッドシステムを用いて取得した。関係するピークに関するデータは、ポジティブ-モードエレクトロスプレーイオン化から報告される。NMR(核磁気共鳴)スペクトルは、概してBrukerまたはJEOL 400MHzおよび500MHz装置で、指示された溶媒中で取得した。全ての化学シフトは内部標準としてテトラメチルシランの該溶媒共鳴から、ppmで、報告される。1H-NMRスペクトルのデータは概して下記のように報告される: 化学シフト、多重度(s＝一重線、br s＝ブロード 一重線、d＝二重線、dd＝二重線の二重線、t＝三重線、q＝四重線、sep＝七重線、m＝多重線、app＝見かけ上)、結合定数(Hz)、および積分。
【００９６】
当該技術分野の当業者は本明細書で使用される該標準的な略語を認識する。容易な参照のために、該略語には、sat.＝飽和、HPLC＝高速液体クロマトグラフィー、AP＝面積パーセント、KF＝カールフィッシャー、RT＝室温、mmol＝ミリモル、HRMS＝高分解能質量分析、TBTU＝O-ベンゾトリアゾール-2-イル-N,N,N',N'-テトラメチルウロニウムテトラフルオロボラート、MTBE＝TBME＝tert-ブチルメチルエーテル、EDAC＝N-(3-ジメチルアミノプロピル)-N'-エチルカルボジイミド塩酸塩、EDC＝N-(3-ジメチルアミノプロピル)-N'-エチルカルボジイミド、TEA＝トリエチルアミン、DPPA＝ジフェニルホスホリルアジド、IPA＝イソプロピルアルコール、TFA＝トリフルオロ酢酸、DCM＝ジクロロメタン、THF＝テトラヒドロフラン、DMF＝N,N-ジメチルホルムアミド、BOP＝(ベンゾトリアゾール-1-イルオキシ)トリス(ジメチルアミノ)ホスホニウムヘキサフルオロホスファート、EtOAc＝酢酸エチル、DMSO＝ジメチルスルホキシド、℃＝セルシウス度、eq＝当量、または当量、g＝グラムまたはグラム、mg＝ミリグラム、またはミリグラム、mL(またはml)＝ミリリットル、またはミリリットル、h＝時間または時間、M＝モル濃度、N＝規定濃度、min＝分、または分、MHz＝メガヘルツ、tlc＝薄層クロマトグラフィー、v／v＝体積対体積の割合:が含まれるが、必ずしも限定されない。
【００９７】
「α」、「β」、「R」および「S」は、当該技術分野の当業者によく知られている立体化学的な表示である。
実施例1
N-((1R,2S,5R)-2-((3S)-3-((6-tert-ブチルピリミド[5,4-d]ピリミジン-4-イル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)アセトアミド
【化１】
2009544757.tif 000002
【００９８】
実施例1、工程1: (1R,2S,5R)-tert-ブチル 2-ベンジルオキシカルボニルアミノ-7-オキソ-6-アザ-ビシクロ[3.2.1]オクタン-6-カルボキシラート(89.6g、0.24mol、: P. H. Carter、et al. PCT出願 WO 2005／021500を参照)を酢酸エチル(1.5L)に溶解し、生じた溶液を飽和NaHCO3(2×0.45L)および飽和NaCl(1×0.45L)で洗浄した。該溶液を乾燥し(Na2SO4)、ついで3-首3Lの丸底フラスコに直接濾過した。該溶液を直接の窒素注入でパージし、その後10％Pd／C(13.65g)を窒素雰囲気下で入れた。該フラスコを真空にし、水素で充填した; これをさらに２回繰り返した。水素を該溶液に通して30分間バブリングし、ついで該反応物を1atmのH2下で18時間攪拌した。該フラスコを真空にし、窒素を充填し、新たな触媒(6gの10％Pd／C)を入れた。水素を該溶液に通して30分間バブリングし、ついで該反応物を1atmのH2下で18時間攪拌した。該フラスコを真空にし、窒素を充填した。該混合物をセライトを通して濾過し; ついで該フィルターパッドを酢酸エチルで洗浄した。該濾液(〜1.6L EtOAc 体積)をアセトニトリル (0.3L)で希釈し、L-N-Cbz-メチオニン(68g、0.24mol）、TBTU(77g、0.24mol）、およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(42mL、0.24mol）を連続的に入れた。該反応物を室温で4時間攪拌し、その間に、それは懸濁液から澄明な溶液に変化した。該反応物を飽和NH4Cl(0.75L)および水(0.15L)を添加してクエンチし; さらに該混合物をEtOAc(0.75L)で希釈した。該相を混合し、分離し、該有機相を飽和Na2CO3(2×0.9L)および飽和NaCl(1×0.75L)で洗浄した。該溶液を乾燥し(Na2SO4)、濾過し、真空で濃縮し、(1R,2S,5R)-tert-ブチル 2-((S)-2-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-4-(メチルチオ)ブタンアミド)-7-オキソ-6-アザ-ビシクロ[3.2.1]オクタン-6-カルボキシラートが油状物として得られ、これをさらに精製することなく次工程に用いた。主要ピークのLC／MS: [M-Boc＋H]＋＝406.3; [M＋Na]＋＝528.3. 1H-NMR(400MHz, d4-MeOH): δ 7.36(m, 5H), 5.11(s, 2H), 4.32(m, 1H), 4.2(m, 1H), 4.0(m, 1H), 2.5-2.7(m, 3H), 2.25(m, 1H), 2.11(s, 3H), 2.05(m, 4H), 1.9(m, 1H), 1.7(m, 2H), 1.54(s, 9H)。EtOAc[1.26(t), 2.03(s), 4.12(q)]およびN,N,N,N-テトラメチルウレア [2.83(s)]もまた存在する。
【００９９】
実施例1、工程2: (1R,2S,5R)-tert-ブチル 2-((S)-2-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-4-(メチルチオ)ブタンアミド)-7-オキソ-6-アザ-ビシクロ[3.2.1]オクタン-6-カルボキシラート(0.24mol、想定;上記方法を参照)の試料をヨードメタン(1,250g)に溶解し、室温で48時間攪拌した。該反応物を真空で濃縮した。残渣をジクロロメタンに溶解し、真空で濃縮した。これをさらに２回繰り返した。生じたスラッジをジクロロメタン(0.4L)に溶解し、急速に攪拌するMTBE(4.0L)の溶液に注いだ。生じた黄色固体を吸引濾過によって集め、高真空下で乾燥し、該スルホニウム塩(179g)を得た。この物質をさらに精製することなく次工程に用いた。主要ピークのLC／MS: [M-Me2S＋H]＋＝458.4; [M]＋＝520.4. 1H-NMR(400MHz, d4-MeOH): δ 7.35(m, 5H), 5.09(s, 2H), 4.33(m, 1H), 4.28(m, 1H), 3.98(m, 1H), 3.3-3.45(m, 2H), 2.97(s, 3H), 2.94(s, 3H), 2.78(m, 1H), 2.0-2.3(m, 4H), 1.7(m, 2H), 1.52(s, 9H)。MTBE [1.18(s), 3.2(s)]およびN,N,N,N-テトラメチルウレア [2.81(s)]の痕跡もまた存在する。
【０１００】
実施例1、工程3: 先の工程からの該スルホニウム塩の全て(0.24mol、想定)をDMSO(2.0L)に溶解した。生じた溶液を窒素下、室温で攪拌し、炭酸セシウム(216g)を少しずつ入れた。該懸濁液を室温で3時間攪拌し、ついで濾過して、固体を除去した。該溶液を〜0.22L量に分け、そして次のように処理した: 該反応混合物(〜0.22L)を酢酸エチル (1.5L)で希釈し、水(3×0.5L)および食塩水(1×0.3L)で連続的に洗浄した。該有機相を乾燥し(Na2SO4)、濾過し、真空で濃縮した。該所望の(1R,2S,5R)-tert-ブチル 2-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-2-オキソピロリジン-1-イル)-7-オキソ-6-アザビシクロ[3.2.1]オクタン-6-カルボキシラート(90.8g、83％)が微晶質泡状物として、テトラメチルウレア不純物を含まず得られた。主要ピークのLC／MS: [M-Boc＋H]＋＝358.4; [M＋Na]＋＝480.4。1H-NMR(400MHz, d4-MeOH): δ 7.35(m, 5H), 5.12(s, 2H), 4.35(m, 2H), 4.2(m, 1H), 3.6(m, 1H), 3.3(m, 1H), 2.64(m, 1H), 2.28-2.42(m, 2H), 2.15(m, 1H), 1.7-2.0(m, 5H), 1.55(s, 9H)。必要ならば、この物質を、MTBE(1体積)に溶解し、ヘプタン(3.3体積)を加え、そして生じた沈殿物を集めることによって、固体として単離できる。
【０１０１】
実施例1、工程4: 攪拌する(1R,2S,5R)-tert-ブチル 2-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-2-オキソピロリジン-1-イル)-7-オキソ-6-アザビシクロ[3.2.1]オクタン-6-カルボキシラート(108g、0.236mol）のTHF(1L)中溶液に、水酸化リチウム一水和物(21.74g、0.519mol）を入れた。該温度が20℃を超えないように水(0.3L)をゆっくり加えた。該反応物を室温で終夜攪拌し、該揮発物を真空で除去した。1N HCl(450mL)およびNaH2PO4を添加することによって、該pHを〜4に調節した。生じた白色沈殿物を濾過して集め、水(2×1L)で洗浄した。該固体をジクロロメタン(1.5L)および水(〜1L)に溶解した。有機層を乾燥し(Na2SO4)、濾過し、真空で濃縮した。残渣をEtOAc(0.7L)に溶解し、生じた溶液を1時間加熱還流した。室温に冷却した後に分離した固体を濾過して集めた。これらの固体をイソプロパノール中での再結晶化によって精製し、該所望の(1R,2S,5R)-2-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)シクロヘキサンカルボン酸を白色の固体として得た(104.5g、収率93％)。主要ピークのLC／MS: [M-tBu＋H]＋＝420.2; [M-Boc＋H]＋＝376.2; [M＋H]＋＝476.2. 1H-NMR(400MHz, d4-MeOH): δ 7.35(m, 5H), 5.11(s, 2H), 4.35(m, 2H), 3.71(m, 1H), 3.45-3.6(m, 2H), 2.99(m, 1H), 2.41(m, 1H), 2.15(m, 1H), 2.0(m, 2H), 1.6-1.9(m, 4H), 1.46(s, 9H).
【０１０２】
実施例1、工程5: 3Lの丸底フラスコに(1R,2S,5R)-2-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)シクロヘキサンカルボン酸(75.5g、0.158mol）、EDC・HCl(33.5g、0.175mol）、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール(23.6g、0.175mol）、およびジクロロメタン(1L)を入れた。該反応物を室温で2時間攪拌し、その間に、それは白色懸濁液から澄明溶液に変化した。アンモニア(気体)を該溶液中に、該pHが強塩基性(紙)となるまでバブリングし、該反応物を10分間攪拌し; このアンモニア添加を繰り返し、該反応物をさらに10分間攪拌した。水を加えた。該有機相を飽和NaHCO3、NaH2PO4、および食塩水で洗浄し、その後真空で濃縮した。該残渣をアセトニトリル(0.5L)でスラリー化し、ついで濃縮し、(1R,2S,5R)-2-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)シクロヘキサンカルボキサミドが白色の固体として得られ(75.9g、〜100％)、これを次工程でさらに精製することなく使用した。主要ピークのLC／MS: [M-Boc＋H]＋＝375.3; [M＋H]＋＝475.4; [M-tBu＋H]＋＝419.3。1H-NMR(400MHz, d4-MeOH): δ 7.35(m, 5H), 5.11(s, 2H), 4.25(m, 2H), 3.70(m, 1H), 3.6(m, 1H), 3.45(m, 1H), 2.91(m, 1H), 2.38(m, 1H), 2.12(m, 1H), 1.9-2.05(m, 2H), 1.65-1.9(m, 4H), 1.46(s, 9H).
【０１０３】
実施例1、工程6: 該反応を３等分して行い、合わせて水性処理した。5Lの3-首丸底フラスコに(1R,2S,5R)-2-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)シクロヘキサンカルボキサミド(25.3g、53mmol）、アセトニトリル (1.9L)、および2.6Lの水／氷を入れた。該混合物を攪拌し、0℃に冷却した。ヨードベンゼンジアセタート(25.77g、80mmol）を加え、該反応物を2時間攪拌し; さらに0.5当量のヨードベンゼンジアセタートを加えた。該反応物を9時間攪拌した(反応物温度＜10℃)。該混合物に8当量のN,N-ジイソプロピルエチルアミンおよび2当量の無水酢酸を入れた。次の30分後、4当量のN,N-ジイソプロピルエチルアミンおよび2当量の無水酢酸を10分間毎に該反応が完了(HPLC)するまで加えた。該アセトニトリルを真空で除去し; いくつかの固体が該残渣から分離し、これを濾過して集めた。該残っている残渣をジクロロメタン(3L、ついで1L)で抽出した。該有機相を水、飽和NaHCO3、および食塩水で連続的に洗浄した。該集めた固体を活性炭 (15g)と共に該有機相に加えた。該混合物を40℃で30分間攪拌し、その後濾過し、真空で濃縮した。残渣をEtOAc(1L)に溶解し、生じた溶液を75℃で1時間攪拌し、その後室温に冷却した。固体が分離し、濾過して集めた。さらにこの固体を再結晶化によって精製した: それを最初に0.5LのCH2Cl2に溶解し、ついで真空で濃縮し、ついで1LのEtOAcから再結晶化した; これを３回繰り返した。上記の母液から得られた該固体を同一の方法を用いて３回再結晶化した。合わせた固体をアセトニトリル (0.7L)からさらに２回再結晶化し、66g(84％)のtert-ブチル (1R,3R,4S)-3-アセトアミド-4-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-2-オキソピロリジン-1-イル)シクロヘキシルカルバマートを得た(純度＞99.5％ HPLCによる)。主要ピークのLC／MS: [M＋H]＋＝489.4; [M-tBu＋H]＋＝433.3。1H-NMR(400MHz, d4-MeOH): δ 7.3-7.4(m, 5H), 5.11(s, 2H), 4.35(m, 1H), 4.15(m, 1H), 4.04(m, 1H), 3.8(m, 1H), 3.6(m, 2H), 2.44(m, 1H), 2.12(m, 1H), 1.87-2.05(m, 4H), 1.87(s, 3H), 1.55-1.7(m, 2H), 1.46(s, 9H)。該ホフマン転位の立体化学的フィデリティーをこの化合物のX-線結晶構造分析によって確認した（図１に示される）。
【０１０４】
実施例1、工程7: 攪拌するtert-ブチル (1R,3R,4S)-3-アセトアミド-4-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-2-オキソピロリジン-1-イル)シクロヘキシルカルバマート(66g、0.135mol）のジクロロメタン (216mL)中溶液にトリフルオロ酢酸(216mL)を入れた。該反応物を室温で2時間攪拌し、真空で濃縮した。該残渣をメタノールに溶解し、生じた溶液を真空で濃縮した; これを１回繰り返した。ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-アミノシクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマートが油状物として得られ、下記工程8に直接使用した。LC／MS実測値[M＋H]＋＝389.4. 1H-NMR(400MHz, d4-MeOH): δ 7.3-7.4(m, 5H), 5.12(s, 2H), 4.41(br. s, 1H), 4.15(m, 1H), 4.00(t, J＝9.3 Hz, 1H), 3.81(t, J＝9.1 Hz, 1H), 3.65(q, J＝8.4 Hz, 1H), 3.3-3.4(m, 1H), 2.45(m, 1H), 1.95-2.24(m, 5H), 2.00(s, 3H), 1.6-1.8(m, 2H).
【０１０５】
実施例1、工程8: 攪拌するベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-アミノシクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(〜0.135mol）のメタノール(675mL)中溶液に、アセトン(37.8g、4当量)、酢酸ナトリウム(33.2g、3当量)、およびシアノ水素化ほう素ナトリウム(16.9g、2当量)を連続的に入れた。該混合物を室温で6時間攪拌し、濾過した。濾液をジクロロメタン(1L)に溶解し; この溶液を1N NaOH(1L)で洗浄した。該濾過で集められた該固体を0℃で1N NaOH(1L)に溶解し、ついでジクロロメタン(1L)で抽出した。有機抽出液を合わせ、HCl水溶液(200mL 1N HCl＋800mL 水)で抽出した。水相を飽和NaHCO3(500mL)、ついで1N NaOH(100mL)で、pH 11まで塩基性化した。水相をジクロロメタン(2L)で抽出した。有機抽出液を合わせ、乾燥し(Na2SO4)、濾過し、真空で濃縮し、ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(イソプロピルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマートを油状物として得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝431.45. 1H-NMR(400MHz, d4-MeOH): δ 7.3-7.4(m, 5H), 5.12(s, 2H), 4.31(m, 1H), 4.24(t, J＝9.4 Hz, 1H), 4.11(m, 1H), 3.61(t, J＝9.1 Hz, 1H), 3.52(q, J＝8.6 Hz, 1H), 3.04(br. s, 1H), 2.96(sep, J＝6.3 Hz, 1H), 2.40(m, 1H), 2.15(m, 1H), 1.92(s, 3H), 1.7-1.9(m, 5H), 1.65(m, 1H), 1.12(app. dd, J＝6.3, 1.1 Hz, 6H).
【０１０６】
実施例1、工程9(下記工程9別法参照): 攪拌するベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(イソプロピルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(〜115mmol）のジクロロメタン (600mL)中溶液を0℃に冷却し、ホルムアルデヒド(18.6g、37 wt％溶液)、トリエチルアミン(23mL)、および三アセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(28.7g)を連続的に入れた。該混合物を室温で30分間攪拌し、ジクロロメタン(1.2L以下)で希釈した。この溶液を500mLの飽和NaHCO3＋NaOH(飽和NaHCO3、1N NaOHにてpH11に)で３回洗浄した。有機層をHCl水溶液(200mL 1N HCl＋600mL 水)で抽出した。水相を飽和NaHCO3(500mL)、ついで1N NaOH(100mL)で、pH 11まで塩基性化した。水相をジクロロメタン(1.2L)で抽出した。有機抽出液を合わせ、乾燥し(Na2SO4)、濾過し、真空で濃縮し、ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマートが油状物として得られ、それを下記工程10に直接使用した。LC／MS実測値[M＋H]＋＝445.4. 1H-NMR(400MHz, d4-MeOH): δ 7.3-7.4(m, 5H), 5.12(s, 2H), 4.33(br s, 1H), 4.25(t, J＝9.2 Hz, 1H), 4.11(br s, 1H), 3.5-3.6(m, 2H), 2.77(v br s, 2 H), 2.41(m, 1H), 2.26(s, 3H), 2.0-2.1(m, 2H), 1.92(s, 3H), 1.7-1.9(m, 5H), 1.10(app. dd, J＝17, 6.4 Hz, 6H)。
【０１０７】
実施例1、工程10: ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(イソプロピル(メチル)アミノ)-シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(〜0.115mol）のメタノール (600mL)中溶液に10％Pd／C(6gの50％ウェット触媒)を加えた。該フラスコを真空にし、水素を充填した。該混合物を1atmのH2下で2時間攪拌し、該触媒をセライトを通して濾過して除去した。濾液を真空で濃縮して、N-((1R,2S,5R)-2-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)アセトアミドが油状物として得られ、それをさらに精製することなく次工程で用いた。LC／MS実測値[M＋H]＋＝311.47. 1H-NMR(400MHz, d4-MeOH): δ 4.39(br s, 1H), 4.00(m, 1H), 3.3-3.5(m, 4H), 2.73(m, 1H), 2.38(m, 1H), 2.25(s, 3H), 2.0-2.2(m, 3H), 1.94(s, 3H), 1.6-1.75(m, 4H), 1.07(app. dd, J＝21, 6.4 Hz, 6H).
【０１０８】
実施例1、工程11: N-((1R,2S,5R)-2-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)アセトアミド(62mg、0.2mmol）のイソプロパノール (3mL)中溶液に、2-tert-ブチル-8-クロロ-ピリミド[5,4-d]ピリミジン(49mg、1.1当量、P.H. Carter et al., PCT出願WO 2005／021500を参照)およびトリエチルアミン(40.4mg、2当量)を加えた。該混合物を室温で1時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去した。該残渣をプレパラティブHPLCで精製し、標記の化合物をそのTFA塩として得た(125mg、86.3％)。LC／MS実測値[M＋H]＋＝497。1H-NMR(400MHz, CD3OD), δ ppm: 9.31(1 H, s), 8.67(1 H, s), 5.07(1 H, t, J＝9.92 Hz), 4.14-4.31(2 H, m), 3.57-3.89(4 H, m), 2.78(3 H, s), 2.58-2.67(1 H, m), 2.38-2.50(1 H, m), 1.94-2.29(6 H, m), 1.92(3 H, s), 1.51(9 H, s), 1.41(3 H, d, J＝6.61 Hz), 1.34(3 H, dd, J＝6.36, 3.81 Hz)。
実施例2
N-((1R,2S,5R)-5-(イソプロピルアミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド
【化２】
2009544757.tif 000003
【０１０９】
実施例2、工程1: ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(イソプロピルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(30mg、0.07mmol; 実施例1、工程8を参照)のメタノール (3mL)中溶液に10％Pd／C(30mgの50％ウェット触媒)を加えた。該フラスコを真空にし、水素バルーンからの水素を充填した。該混合物を室温、1atmの水素下で1.5時間攪拌し、ついで該触媒を濾過して除去した。濾液を真空で濃縮した。残渣をイソプロパノール (3mL)に溶解し、4-クロロ-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン(19.4mg、1.2当量)およびジイソプロピルエチルアミン(18mg、2当量)を連続的に入れた。該混合物を室温で1時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去した。残渣をプレパラティブ逆相HPLCによって精製し、標記の化合物をそのTFA塩として得た(47mg、93％)。LC／MS実測値[M＋H]＋＝493。1H-NMR(400MHz, CD3OD), δ ppm: 8.90(1 H, s), 8.81(1 H, s), 8.25-8.29(1 H, m), 7.96(1 H, d, J＝8.65 Hz), 5.44(1 H, t, J＝9.92 Hz), 4.42(1 H, d, J＝2.54 Hz), 4.15-4.24(1 H, m), 3.90(1 H, t, J＝8.65 Hz), 3.70-3.79(1 H, m), 3.46-3.62(2 H, m), 2.56-2.67(1 H, m), 2.33-2.47(1 H, m), 1.70-2.23(9 H, m), 1.35(6 H, d, J＝6.10 Hz).
実施例3
N-((1R,2S,5R)-5-(メチルアミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド
【化３】
2009544757.tif 000004
【０１１０】
実施例3、工程1: tert-ブチル (1R,3R,4S)-3-アセトアミド-4-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-2-オキソピロリジン-1-イル)シクロヘキシルカルバマート(43.2g、88mmol;実施例1、工程6を参照)の試料をジクロロメタン(200mL)に溶解した。該溶液にTFA(100mL)を入れ、2.5時間攪拌し、および真空で濃縮した。該残渣をジクロロメタン(200mL)に再溶解し、生じた溶液を攪拌する純粋なジエチルエーテルの溶液(2.0L)に滴下した。白色の固体をエーテル洗浄しながら集め、ついで塩基性の塩類水溶液(2.0M／NaClおよび1.0M／K2CO3、全量350mL)に溶解した。ジクロロメタン(1.2L)を加え、該２相を激しく混合し、その後分離した。水相をジクロロメタン(3×450mL)で抽出した。有機抽出液を合わせ、乾燥し(MgSO4)、濾過し、真空で濃縮して、高真空でベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-アミノシクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(34.8g、定量的)を、微晶質固体として得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝389.5.
【０１１１】
実施例3、工程2: ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-アミノシクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(34.8g、約90mmol）の試料をメタノール (400mL)に溶解した。該フラスコを窒素でパージし、トリエチルアミン(15.61mL、112mmol）、続いて4-メトキシベンズアルデヒド(13.62mL、112mmol）を入れた。該反応物を室温にて14時間攪拌し、その時点で反応物のLC／MSは、完全な１級アミンの消費および所望のイミンの形成を示した(LC／MS実測値[M＋H]＋＝507.4)。該反応物を0℃に冷却し、水素化ホウ素ナトリウム(5.08g、134mmol）を1分間かけて少しずつ入れた。30分後に氷浴を外し、該溶液をさらに3.5時間攪拌した。該反応物を真空で濃縮して、白色の固体／ゴム質が得られ、それを400mLの飽和NaHCO3および1200mLのEtOAcに溶解した。該相を激しく混合し、ついで分離した。有機相を2×800mLの0.5N HClで洗浄した (注意: 少量の第３の油性相が最初の抽出の底にあった; 該酸相と一緒に取った)。該酸洗浄液を合わせ、固体NaOHでpH 13に塩基性化し、室温に冷却し、ついでEtOAc(1×1000mL ; 2×600mL)で抽出した。有機抽出液を合わせ、食塩水で洗浄し(1×120mL)、乾燥し(MgSO4)、濾過し、真空で濃縮した。残渣をジクロロメタンに溶解し、濃縮し; この方法を繰り返し、高真空でベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(4-メトキシベンジルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(43.68g、86mmol、収率96％)を、流動性微晶質固体として得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝509.6。
【０１１２】
実施例3、工程3:ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(4-メトキシベンジルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(54.45g、107mmol）の試料をジクロロメタン(400mL)に溶解した。生じた溶液をN2流下0℃に冷却し、ついでトリエチルアミン(29.8mL、214mmol）、ホルムアルデヒド水溶液(11.96mLの37％溶液、161mmol）、および三アセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(34.0g、161mmol）を連続的に入れた。該氷浴を外し、該反応物を室温にて2時間攪拌し、その後、750mLのEtOAcで希釈し、飽和NaHCO3(2×250mL)で洗浄した。該有機相を真空で濃縮し、生じた残渣をEtOAc(750mL)に溶解した。該有機相を酸[2×(200mL 1N HCl／300mL H2O)]で洗浄した。該酸性洗浄液を合わせ、ついで6N NaOH(80mL)および飽和NaHCO3(70mL)で塩基性化した。該混合物をEtOAc(3×500mL)で抽出した。有機抽出液を合わせ、食塩水で洗浄し(1×100mL)、乾燥し(MgSO4)、濾過し、真空で濃縮した。残渣を塩化メチレンに溶解し、濃縮した; これを２回繰り返し、高真空でベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-((4-メトキシベンジル)(メチル)アミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(54.14g、104mmol、収率97％)を、硬白色微晶質泡状物として得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝523.6.
【０１１３】
実施例3、工程4: ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-((4-メトキシベンジル)(メチル)アミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(25.0g、47.8mmol）の試料をMeOHに溶解した。該フラスコにジヒドロキシパラジウム(6g、8.54mmol）を入れ、真空にし、および水素バルーンからの水素を充填した。該混合物を室温にて終夜攪拌し、ついで濾過した(3×80mL イソプロパノール洗浄)。該残渣を高真空下で濃縮乾固した。該残渣を減圧下、イソプロパノール (4×150mL)で共沸して乾燥し、N-((1R,2S,5R)-2-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(メチルアミノ)シクロヘキシル)アセトアミドを得た(12.5g、46.6mmol、収率97％)。LC／MS実測値[M＋H]＋＝269.
【０１１４】
実施例3、工程5: N-((1R,2S,5R)-2-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(メチルアミノ)シクロヘキシル)アセトアミド(12.5g、46.6mmol）のジクロロメタン中溶液に、トリエチルアミン(12.98mL、93mmol）および4-クロロ-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン(10.83g、46.6mmol）を加えた。該混合物を室温で終夜攪拌し、ついで減圧下で濃縮乾固した。残渣をジクロロメタン(350mL)に溶解し、酢酸水溶液(1×200mL、1×100mL ; 300mLのH2Oおよび16mLの酢酸から作られる）で抽出した。該酸性水層(pH 4-5)をジクロロメタン(2×300mL)で抽出し、Na2CO3でpH 10-11に塩基性化し、ついでジクロロメタン(2×350mL ; 必要に応じてNa2CO3で水層のpHを10-11に維持した)で抽出した。該有機相を飽和NaCl溶液(1×200mL)で洗浄し; 該NaCl層をジクロロメタン(1×100mL)でさらに抽出した。有機抽出液を合わせ、乾燥し(Na2SO4)、濾過し、真空で濃縮し、標記の化合物(19.4g、90％)を得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝465. HPLCにより、該純度は99.4％と示され、最大単一の不純物は0.5％であった。1H-NMR(500MHz, CD3OD), δ ppm: 8.77(1 H, s), 8.56(1 H, s), 8.02(1 H, dd, J＝8.80, 1.37 Hz), 7.87(1 H, d, J＝8.52 Hz), 5.25(1 H, t, J＝8.52 Hz), 4.53(1 H, q, J＝3.94 Hz), 4.01(1 H, dt, J＝11.96, 3.85, 3.71 Hz), 3.46-3.64(2 H, m), 2.77-2.86(1 H, m), 2.47-2.57(1 H, m), 2.41(3 H, s), 2.22(1 H, dq, J＝12.51, 12.44, 3.57 Hz), 1.98(3 H, s), 1.95-1.98(1 H, m), 1.92-1.98(1 H, m), 1.84-1.91(1 H, m), 1.78(1 H, t, J＝3.44 Hz), 1.71-1.76(1 H, m), 1.62-1.69(1 H, m).
【０１１５】
実施例3、再結晶化: 工程5の標記の化合物の試料(19.4g)を300mLの無水エタノールに加えた。該混合物を窒素雰囲気下で還流し、固体は完全に溶解し、ついで〜60℃に攪拌しながらゆっくり冷却した(固体のいくらかは濃縮前に形成した)。該混合物を減圧下で攪拌しながら(〜64℃に維持した油浴)、生成物およびエタノールの総重量が〜62gとなるまでゆっくり濃縮した。相当量の固体が濃縮の間に沈殿した。該混合物を室温にゆっくり冷却し、ついで氷浴で1時間冷却した。該冷混合物を濾過し、該固体を冷エタノール(〜15mL)で洗浄した。該固体を減圧下55-60℃で終夜乾燥し、標記の化合物の遊離塩基(17.4g; 回収率90％)を得た。HPLCにより該純度99.9％と示された。
実施例4
N-((1R,2S,5R)-5-アミノ-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド
【化４】
2009544757.tif 000005
【０１１６】
実施例4、工程1: tert-ブチル (1R,3R,4S)-3-アセトアミド-4-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-2-オキソピロリジン-1-イル)シクロヘキシルカルバマート(1.7g、3.48mmol;実施例1、工程6を参照)のメタノール (10mL)中溶液に、10％Pd／C(0.6gの50％ウェット触媒)を加えた。該フラスコを真空にし、水素バルーンからの水素を充填した。該混合物を室温、1atmの水素下で14時間攪拌し、該触媒を濾過して除去した。濾液を真空で濃縮して、tert-ブチル (1R,3R,4S)-3-アセトアミド-4-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)シクロヘキシルカルバマートが得られ、それをさらに精製することなく次工程で用いた。LC／MS実測値[M＋H]＋＝355.
【０１１７】
実施例4、工程2: tert-ブチル (1R,3R,4S)-3-アセトアミド-4-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)シクロヘキシルカルバマート(〜3.4mmol）のイソプロパノール(10mL)中溶液に4-クロロ-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン(0.97g、1.2当量)およびジイソプロピルエチルアミン(0.88g、2当量)を加えた。該混合物を室温で2.5時間攪拌した。溶媒を減圧下で除去した。該残渣を1％および5％MeOH／ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、tert-ブチル (1R,3R,4S)-3-アセトアミド-4-((S)-2-オキソ-3-(6-(トリフルオロメチル)キナゾリン-4-イルアミノ)ピロリジン-1-イル)シクロヘキシルカルバマート(2.0g、〜100％)を得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝551.
【０１１８】
実施例4、工程3: 攪拌するtert-ブチル (1R,3R,4S)-3-アセトアミド-4-((S)-2-オキソ-3-(6-(トリフルオロメチル)キナゾリン-4-イルアミノ)ピロリジン-1-イル)シクロヘキシルカルバマート(1.65g、3mmol）のジクロロメタン(8mL)中溶液にトリフルオロ酢酸(4mL)を入れた。該反応物を室温で1時間攪拌し、真空で濃縮した。残渣を1mLのメタノールおよび5mLのジクロロメタンの混合液に溶解した。生じた溶液を80mLのt-ブチルメチルエーテルに攪拌しながら滴下した。形成した固体を濾過して集め、乾燥し、標記の化合物をそのTFA塩 (1.75g、86％) として得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝451。1H-NMR(400MHz, CD3OD), δ ppm: 8.82(1 H, s), 8.77(1 H, s), 8.20-8.27(1 H, m), 7.95(1 H, d, J＝8.65 Hz), 5.32(1 H, t, J＝9.92 Hz), 4.36(1 H, t, J＝4.07 Hz), 4.16-4.23(1 H, m), 3.87(1 H, t, J＝9.16 Hz), 3.70-3.79(1 H, m), 3.39(1 H, s), 2.54-2.67(1 H, m), 2.32-2.45(1 H, m), 2.08-2.23(2 H, m), 1.88-2.04(6 H, m), 1.73-1.87(1 H, m).
実施例5
N-((1R,2S,5R)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)-2-((3S)-3-((1-オキシド-6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド
【化５】
2009544757.tif 000006
【０１１９】
実施例5、工程1: tert-ブチル (1R,3R,4S)-3-アセトアミド-4-((S)-2-オキソ-3-(6-(トリフルオロメチル)キナゾリン-4-イルアミノ)ピロリジン-1-イル)シクロヘキシルカルバマート(参照実施例4、工程2)の試料を逆相HPLCによって精製した。生じたTFA塩をEtOAcに溶解し、1N NaOHおよび飽和NaClで連続的に洗浄した。有機抽出液を乾燥し(Na2SO4)、濾過し、真空で濃縮した。生じた遊離塩基(117mg、0.21mmol）を塩化メチレン(4mL)に溶解し、生じた溶液にメタ-クロロペルオキシ安息香酸(105mgの純度77％市販の試薬)を入れた。該溶液は5分以内に黄色に変わった。該反応物を3時間攪拌し、その後Na2S2O3水溶液を添加してクエンチした。該混合物をEtOAで希釈し、該層を分離した。有機相を飽和NaHCO3および食塩水で連続的に洗浄し、その後乾燥し(Na2SO4)、濾過し、真空で濃縮して、4-((S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルアミノ)-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン 1-オキシドを黄色固体として得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝567。この物質の全てを塩化メチレン(6mL)に溶解し、トリフルオロ酢酸(2.5mL)で処理した。生じた溶液を3時間を放置し、その後真空で濃縮した。該残渣を塩化メチレン(6mL)に再溶解し、トリフルオロ酢酸(2.5mL)で処理した。生じた溶液を0.5時間放置し、その後真空で濃縮した。該残渣を逆相HPLCによって精製し、4-((S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-アミノシクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルアミノ)-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン 1-オキシドのTFA塩を凍結乾燥の後、黄色粉体(13.6mg)として得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝467.3. 
【０１２０】
実施例5、工程2: 4-((S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-アミノシクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルアミノ)-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン 1-オキシド(TFA塩、13.6mg)の試料を2mLの1:1 アセトン／メタノールに溶解し、生じた溶液にシアノ水素化ほう素ナトリウム(0.3mLの0.1Mメタノール中溶液)を入れた。1.5時間後のLC／MS分析により、出発物質の消費、および4-((S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(イソプロピルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルアミノ)-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン 1-オキシド、MS実測値[M＋H]＋＝509.3への変換が示された。この物質は単離せず、さらに反応させた: 該溶液に37％ホルムアルデヒド水溶液(0.06mL)を入れ、30分間攪拌し、その時点のLC／MS分析により、所望の4-((S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルアミノ)-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン 1-オキシドの生成、[M＋H]＋＝523.3が示された。該体積を窒素流によって減らし、生じた残渣を逆相HPLCによって精製し、標記の化合物のTFA塩を黄色粉体として(1.7mg)得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝523.3.
実施例5の調製の別法
【０１２１】
実施例5、調製の別法、工程1: 4-クロロ-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン(3.25g、13.97mmol）の試料をアセトニトリル (60mL)にN2雰囲気下で溶解した。生じた濁った溶液にCs2CO3(6.83g、20.96mmol）およびフェノール (1.578g、16.77mmol）を入れ、室温で攪拌した。〜65時間後、該反応物を濾過して、固体を除去した。該有機相を真空で濃縮して、オレンジ色固体を得た。該物質を溶離液として1:3 EtOAc／ヘキサンを用いる自動化フラッシュクロマトグラフィー(80g シリカゲル)によって精製し、所望の4-フェノキシ-6-(トリフルオロメチル)キナゾリンを結晶質固体として得た。LC／MS 実測値(M＋H)＋＝291.1.
【０１２２】
実施例5、調製の別法、工程2: 4-フェノキシ-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン(1.61g、5.55mmol）の無水CH2Cl2(20mL)中溶液に3-クロロベンゾペルオキソ酸(1.243g、5.55mmol）を加え、該混合物を室温にて5時間攪拌した。この時点で、白色の固体が沈殿を始めた。該反応を数滴のMe2Sでクエンチした。該混合物に40mLのヘキサンを加え、所望でない2-ヒドロキシ-4-フェノキシ-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン 1-オキシド(0.43g)が沈殿し、それを濾過して集めた。濾液を濃縮し、所望の4-フェノキシ-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン 1-オキシド(0.93g)が沈殿した（安息香酸副生成物および約15％の2-ヒドロキシ-4-フェノキシ-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン 1-オキシドが混入している）。この物質をさらに精製することなく次の化学反応に使用した。LC／MS 実測値(M＋H)＋＝307.06。
【０１２３】
実施例5、調製の別法、工程3: N-((1R,2S,5R)-2-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)アセトアミド(50mg、0.161mmol;実施例1、工程10を参照)および4-フェノキシ-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン 1-オキシド(99mg、0.161mmol）のi-PrOH(2mL)中溶液にN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.056mL、0.322mmol）を加えた。該容器をアルゴン下で密閉し、マイクロ波中で120℃にて1時間加熱した。LC／MS実測値:(M＋H)＋＝523.3（該主要生成物ピークとして）。該混合物を濃縮し、自動化フラッシュクロマトグラフィー(40g シリカゲル、8:92 10％cNH4OH／MeOHで溶出する)によって精製した。所望の生成物を含有する画分をプールし、真空で濃縮した。該残渣をCH2Cl2およびヘキサンから結晶化した。該２つの得られた物質を合わせ、真空下で乾燥し、標記の化合物、4-((S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルアミノ)-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン 1-オキシド(93mg)を得た。1H-NMRによる分析により、この物質は〜0.75モル濃度相当のCH2Cl2を含むことが示された。1H-NMR(400MHz, d4-MeOH): δ 8.99(s, 1H), 8.81(s, 1H), 8.62(d, J＝8.9 Hz, 1H), 8.32(dd, J＝9.0, 1.5 Hz, 1H), 5.28(t, J＝8.4 Hz, 1H), 4.59(br s, 1H), 4.05(m, 1H), 3.55-3.65(m, 2H), 3.43(m, 1H), 2.75(br s, 1H), 2.55(m, 1H), 2.27(s, 3H), 2.1-2.3(m, 3H), 2.02(s, 3H), 2.0(m, 1H), 1.65-1.7(m, 3H), 1.12(d, J＝6.0 Hz, 3H), 1.06(d, J＝6.0 Hz, 3H)。LC／MS実測値: [M＋H]＋＝523.33.
実施例6
N-((1R,2S,5R)-5-(イソプロピルアミノ)-2-((3S)-3-((1-オキシド-6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド
【化６】
2009544757.tif 000007
【０１２４】
実施例6、工程1: 標記生成物を、実施例5の最初に記載の合成法(２つの工程）の通りに合成する。所望により、実施例5のようにさらに反応させるよりも、この方法で標記の化合物を精製することができる。
実施例6の調製の別法
【０１２５】
実施例6、調製の別法、工程1: ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(イソプロピルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(0.090g、0.209mmol;実施例1、工程8を参照)のMeOH(10mL)中溶液に、〜100mgの10％Pd／C(50％、ウェット)を加えた。該混合物をH2(50psi)下で14時間攪拌した。該触媒を濾過し、溶媒を蒸発させて、N-((1R,2S,5R)-2-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(イソプロピルアミノ)シクロヘキシル)アセトアミドを泡状固体残渣(50mg、0.169mmol）として得た。この物質をi-PrOH(2mL)に溶解し、生じた溶液に4-フェノキシ-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン 1-オキシド(103mg、0.169mmol;実施例5、調製の別法、工程2を参照)およびN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.059mL、0.337mmol）を入れた。該容器をアルゴン雰囲気下で密閉し、マイクロ波中で120℃にて1時間加熱した。該反応物を濃縮し、油状残渣が得られ、それを自動化フラッシュクロマトグラフィーによって精製し、黄色固体を得た。これをCH2Cl2-ヘキサンから再結晶化し、所望の4-((S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(イソプロピルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルアミノ)-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン 1-オキシド(第１収量、43.5mgおよび第２収量、3.1mg)を得た。LC／MS実測値:(M＋H)＋＝509.32。1H-NMR(400MHz, CD3OD), δ ppm: 8.99(s, 1H), 8.81(s, 1H), 8.62(d, J ＝9.0 Hz, 1H), 8.33(dd, J ＝9.0, 1.6 Hz, 1H), 5.28(t, J＝8.3 Hz, 1H), 4.56(brs, 1H), 4.02(brd, 1H), 3.63(m, 2H), 3.18(brs, 1H), 2.55(m, 1H), 2.27(m, 1H), 2.03(s, 3H), 1.97-1.67(m, 7H), 1.16(d, J ＝5.5Hz, 3H), 1.15(d, J ＝5.5Hz, 3H).
実施例7
N-((1R,2S,5R)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)-2-((S)-2-オキソ-3-(6-(トリフルオロメチル)キナゾリン-4-イルアミノ)ピロリジン-1-イル)シクロヘキシル)ホルムアミド
【化７】
2009544757.tif 000008
【０１２６】
実施例7、工程1: 攪拌する(1R,2S,5R)-2-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)シクロヘキサンカルボン酸(38g、0.0799mol;実施例1、工程4を参照)のジクロロメタン(400mL)中溶液にトリフルオロ酢酸(100mL)を0℃で入れた。該反応物を室温で2時間攪拌し、真空で濃縮した。残渣をジクロロメタン(100mL)に溶解し、生じた溶液をジエチルエーテル(1500mL)に攪拌しながら滴下した。形成した固体を濾過して集め、ジエチルエーテル(3×50mL)で洗浄した。白色の固体を真空で乾燥し、(1R,2S,5R)-5-アミノ-2-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-2-オキソピロリジン-1-イル)シクロヘキサンカルボン酸をそのTFA塩(35.5g、86％)として得た。該化合物を次工程にさらに精製することなく使用した。LC／MS実測値[M＋H]＋＝376.
【０１２７】
実施例7、工程2: 攪拌する(1R,2S,5R)-5-アミノ-2-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-2-オキソピロリジン-1-イル)シクロヘキサンカルボン酸(TFA塩、35.5g、0.0725mol）のジクロロエタン(350mL)中溶液にN-メチルモルホリン(29.3g、4.0当量)およびアセトン(42.05g、10当量)を連続的に入れた。該混合物を室温で10分間攪拌し、三アセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(30.7g、2当量)を0℃にて加えた。該混合物を室温で14時間攪拌し、ついでホルムアルデヒド(37 wt％溶液、28.4g、5当量)および三アセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(18.4g、1.2当量)を加えた。該混合物を室温で2時間攪拌し、水(70mL)を加え、攪拌を10分間続けた。該混合物を減圧下で濃縮し、有機溶媒を除去した。生じた混合物を飽和NaHCO3溶液でpH 7-8に、ついで1N HClでpH〜6に調節した。該混合物をジクロロメタン(5×250mL)で抽出した。該抽出液を合わせ、無水Na2SO4で乾燥し、減圧下で濃縮した。残渣をジクロロメタン(100mL)に溶解し、生じた溶液をジエチルエーテル(1500mL)に攪拌しながら滴下した。形成した固体を濾過して集め、ジエチルエーテル(3×50mL）で洗浄した。白色の固体を真空で乾燥し、(1R,2S,5R)-2-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキサンカルボン酸(31g、99％)を得た。該化合物を次工程でさらに精製することなく使用した。LC／MS実測値[M＋H]＋＝432.
【０１２８】
実施例7、工程3: 攪拌する(1R,2S,5R)-2-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキサンカルボン酸(15.0g、0.0348mol）の1,4-ジオキサン(200mL)中溶液にN-メチルモルホリン(5.26g、1.5当量)およびDPPA(14.3g、1.5当量)を0℃にて入れた。該混合物を室温で2時間攪拌した。該混合物に2-(トリメチルシリル)エタノール(6.16g、1.5当量)を入れ、ついで85℃にて窒素の保護下で2.5時間攪拌した。該反応物を室温に冷却し、溶媒を減圧下で除去した。生じた残渣を酢酸エチル (250mL)に溶解し、飽和NaHCO3(3×80mL)および食塩水(3×80mL)で洗浄した。該溶液を無水Na2SO4で乾燥し、濾過し、真空で濃縮した。得られた残渣を1％および2.5％のメタノール／ジクロロメタンで溶出するシリカゲルカラムクロマトグラフィーで精製し、2-(トリメチルシリル)エチル (1R,2S,5R)-2-((S)-3-ベンジルオキシカルボニルアミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシルカルバマート(9.3g、49％)を得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝547.
【０１２９】
実施例7、工程4: 攪拌する2-(トリメチルシリル)エチル (1R,2S,5R)-2-((S)-3-ベンジルオキシカルボニルアミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシルカルバマート(272mg、0.5mmol）のジクロロメタン(3mL)中溶液にトリフルオロ酢酸(2mL)を入れた。該反応物を室温で2時間攪拌し、真空で濃縮した。残渣をジクロロメタン(50mL)に溶解し、飽和NaHCO3(15mL)で洗浄した。該水層をジクロロメタン(4×30mL)で抽出した。全てのジクロロメタン層を合わせ、無水Na2SO4で乾燥し、濾過し、真空で濃縮し、ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アミノ-4-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(190mg、94.5％)を得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝403.
【０１３０】
実施例7、工程5: 460mg(10mmol）のギ酸に、無水酢酸(204mg、2mmol）を加えた。該混合物を室温で2時間攪拌した。ついで上記溶液の5分の1を、ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アミノ-4-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(60mg、0.149mmol）のジクロロメタン (3mL)およびトリエチルアミン(62.3 μl、3当量) 中混合物に0℃にて攪拌しながら加えた。該反応物を室温で1時間攪拌し、1mLの水を加えて該反応をクエンチした。該混合物をジクロロメタン(60mL)で希釈し、飽和NaHCO3(20mL)で洗浄した。該溶液を無水Na2SO4で乾燥し、濾過し、真空で濃縮し、ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-ホルムアミド-4-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(50mg、78％)を得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝431. 
【０１３１】
実施例7、工程6: ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-ホルムアミド-4-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(50mg、0.116mmol）のメタノール(3mL)中溶液に、10％Pd／C(40mgの50％ウェット触媒)を加えた。該フラスコを真空にし、水素バルーンからの水素を充填した。該混合物を室温で1時間攪拌し、該触媒を濾過して除去した。濾液を真空で濃縮して、N-((1R,2S,5R)-2-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)ホルムアミド(35mg、100％)が得られ、それをさらに精製することなく次工程で用いた。LC／MS実測値[M＋H]＋＝297.
【０１３２】
実施例7、工程7: N-((1R,2S,5R)-2-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)ホルムアミド(34mg、0.115mmol）のイソプロパノール中 (3mL)溶液に4-クロロ-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン(32mg、1.2当量、参照: P. H. Carterら、PCT出願 WO 2005／021500)、およびトリエチルアミン(29.1mg、2.5当量)を加えた。該混合物を室温で終夜攪拌した。溶媒を減圧下で除去した。該残渣をプレパラティブHPLCで精製し、標記の化合物をそのTFA塩として得た(76mg、91.7％)。LC／MS実測値[M＋H]＋＝493. 1H-NMR(400MHz, CD3OD), δ ppm: 8.73-8.90(2 H, m), 8.26(1 H, d, J＝8.65 Hz), 8.09(1 H, s), 7.96(1 H, d, J＝9.16 Hz), 5.35(1 H, t, J＝9.66 Hz), 4.30(2 H, s), 3.57-3.92(4 H, m), 2.77-2.83(3 H, m), 2.56-2.68(1 H, m), 1.91-2.46(6 H, m), 1.29-1.48(6 H, m).
実施例8
N-((1R,2S,5R)-5-(ジメチルアミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド
【化８】
2009544757.tif 000009
【０１３３】
実施例8、工程1: 攪拌するtert-ブチル (1R,3R,4S)-3-アセトアミド-4-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-2-オキソピロリジン-1-イル)シクロヘキシルカルバマート(66g、0.135mol;実施例1、工程6を参照)のジクロロメタン(216mL)中溶液にトリフルオロ酢酸(216mL)を入れた。該反応物を室温で2時間攪拌し、真空で濃縮した。該残渣をメタノールに溶解し、生じた溶液を真空で濃縮した; これを１回繰り返した。ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-アミノシクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマートを油状物として得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝389.4。1H-NMR(400MHz, d4-MeOH): δ 7.3-7.4(m, 5H), 5.12(s, 2H), 4.41(br. s, 1H), 4.15(m, 1H), 4.00(t, J＝9.3 Hz, 1H), 3.81(t, J＝9.1 Hz, 1H), 3.65(q, J＝8.4 Hz, 1H), 3.3-3.4(m, 1H), 2.45(m, 1H), 1.95-2.24(m, 5H), 2.00(s, 3H), 1.6-1.8(m, 2H).
【０１３４】
実施例8、工程2: ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-アミノシクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート, TFA塩(500mg、0.99mmol）のCH2Cl2(20mL)中溶液にホルムアルデヒド(5mL、37 wt％溶液)、トリエチルアミン(0.35mL、2.4mmol）、および三アセトキシ水素化ホウ素ナトリウム(315mg、1.5mmol）を連続的に加えた。16時間後、該溶液をCH2Cl2で希釈し、飽和NaHCO3で洗浄した。有機層を集め、HCl水溶液(5mLの1N HClおよび20mLの水)で抽出した。水相を集め、NaOH水溶液(〜10mLの1N NaOHおよび20mLの水)で塩基性化し、ついでジクロロメタン(2×50mL)で抽出した。有機抽出液を合わせ、乾燥し(Na2SO4)、濾過し、真空で濃縮し、ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(ジメチルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマートを油状物として(280mg、収率68％)得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝417.
【０１３５】
実施例8、工程3:ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(ジメチルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(70mg)および10％Pd／C(30mgの50％ウェット触媒)の混合物にEtOAc(50mL)を加え、ついで該フラスコを真空にし、水素を充填した。該混合物を1atmのH2下で16時間攪拌し、該触媒を、セライトを通して濾過して除去した。濾液を真空で濃縮し、N-((1R,2S,5R)-2-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(ジメチルアミノ)シクロヘキシル)アセトアミドが白色の固体として得られ(40mg、収率85％)、それをさらに精製することなく次工程で用いた。LC／MS実測値[M＋H]＋＝283.
【０１３６】
実施例8、工程4: N-((1R,2S,5R)-2-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(ジメチルアミノ)シクロヘキシル)アセトアミド (40mg、0.14mmol）のイソプロパノール(6mL)中溶液に、4-クロロ-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン(39mg、0.17mmol）およびトリエチルアミン(0.02mL、0.14mmol）を加えた。該混合物を室温にて16時間攪拌し、真空で粗油状物まで濃縮し、それをセミ-プレパラティブ逆相HPLC(グラジエント溶出、水／メタノール／TFA)によって精製し、標記の化合物(70mg、収率71％)を得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝479。1H-NMR(400MHz, CD3OD), δ ppm: 8.87(s, 1H), 8.72(s, 1H), 8.22(m, 1H), 7.87(m, 1H), 5.49(m, 1H), 4.23(m, 1H), 4.2(m, 1H), 4.12(m, 1H), 3.75(m, 1H), 3.65(m, 1H), 3.38(m, 1H), 2.82(s, 6H), 2.51(m, 1H), 2.35(m, 1H), 2.15(m, 1H), 2.14-1.86(m, 5H), 1.84(s, 3H).
実施例9
N-((3S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)-2-オキソ-3-ピロリジニル)-6-tert-ブチル-2-ピリジンカルボキサミド
【化９】
2009544757.tif 000010
【０１３７】
実施例9、工程1: 6-tert-ブチルピコリノニトリル (662mg、4.1mmol; 参照: P. H. Carterら、PCT出願 WO 2005／021500)を氷酢酸(6.8mL)に溶解し、その後濃HCl(1.6mL)を添加した。この混合物を油浴(95℃)中で終夜加熱した。冷却後、該溶液を濃縮した。生じた粗固体を50／50 Et2O／ヘキサン中でブフナー漏斗に移した。この固体をさらなる50／50 Et2O／ヘキサンで洗浄し、6-tert-ブチルピコリン酸, HCl塩(880mg)を得た。LC／MS 実測値(M＋H)＋＝180.0.
【０１３８】
実施例9、工程2: N-((1R,2S,5R)-2-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)アセトアミド(70mg、0.22mmol;実施例1、工程10を参照)をDMF(2mL)に溶解し、その後、4-メチルモルホリン(0.1mL、0.91mmol）およびtert-ブチルピコリン酸 HCl塩(90mg、0.50mmol）を添加した。0℃に冷却後、BOP(175mg、0.39mmol）を加えた。該溶液を室温に加温し、終夜攪拌した。ついで該溶液を濾過し、濃縮した。生じた残渣を逆相HPLC(グラジエント溶出、水／メタノール／TFA)によって精製し、標記の化合物をそのTFA塩として(85.1mg)得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝487.45。1H-NMR(400MHz, CD3OD), δ ppm: 7.9(m, 2H), 7.67(m, 1H), 4.47(m, 1H), 4.38(t, 1H), 4.24(m, 1H), 3.97-3.74(m, 3H), 3.64(m, 1H), 2.82(s, 3H), 2.6(m, 1H), 2.34(m, 2H), 2.25-2.05(m, 2H), 2.01(s, 3H), 1.95-1.8(m, 2H), 1.45(s, 9H), 1.37(m, 3H).
実施例10
N-((1R,2S,5R)-5-アミノ-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)プロパンアミド
【化１０】
2009544757.tif 000011
【０１３９】
実施例10、工程1: (1R,2S,5R)-2-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)シクロヘキサンカルボキサミド(2.0g 4.21mmol;実施例1、工程5を参照)のMeCN (150mL)およびH2O(205mL)中溶液に、ヨードベンゼン ジアセタート(1.357g、4.21mmol）を加えた。該混合物を0℃で1時間攪拌し、ついで溶けたアイスバス中で14時間かけて室温に加温した。該混合物を酢酸を添加してpH 4に酸性化し、ついでジエチルエーテル(2×60mL）で抽出した。水層を減圧下で濃縮してアセトニトリルを除去した。飽和NaHCO3を用いてpH9-10に調整した後、残留する溶液を塩化メチレン(2×80mL）で抽出した。塩化メチレン層を乾燥し(Na2SO4)、真空で濃縮し、所望のtert-ブチル (1R,3R,4S)-3-アミノ-4-((S)-3-ベンジルオキシカルボニルアミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)シクロヘキシルカルバマート(1.8g、4.03mmol、収率96％)を得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝447.
【０１４０】
実施例10、工程2: tert-ブチル (1R,3R,4S)-3-アミノ-4-((S)-3-ベンジルオキシカルボニルアミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)シクロヘキシルカルバマート(1.8g 4.03mmol）の3mLのDMF中溶液にプロピオン酸(0.285g、3.85mmol）、BOP(1.704g、3.85mmol）およびトリエチルアミン(0.059mL、0.423mmol）を加えた。該混合物を室温で1.5時間攪拌し、ついで水(75mL)に注いだ。生じた混合物をEtOAc(2×60mL)で抽出した。該有機相を合わせ、飽和NaHCO3(2×40mL）および食塩水(50mL)で洗浄した。ついで有機相を乾燥し(MgSO4)、濾過し、真空で濃縮した。該残渣をジエチルエーテルに分散した。沈殿した固体を濾過して集め、ジエチルエーテル(2×40mL)で洗浄し、真空で乾燥し、該tert-ブチル (1R,3R,4S)-4-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-3-プロピオンアミド-2-オキソピロリジン-1-イル)シクロヘキシルカルバマート(1.6g、3.18mmol、収率79％)を得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝503.
【０１４１】
実施例10、工程3: tert-ブチル (1R,3R,4S)-4-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-3-プロピオンアミド-2-オキソピロリジン-1-イル)シクロヘキシルカルバマート(900mg、1.79mmol）の10mLのMeOH中溶液に水酸化パラジウム炭素, 20％(340mg、2.42mmol）を加えた。該混合物を真空にし、水素バルーンからの水素を充填した。該混合物を1atmのH2下、室温で1.5時間攪拌した。濾過し、続いて減圧下で濃縮して、tert-ブチル (1R,3R,4S)-4-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-3-プロピオンアミドシクロヘキシルカルバマート(650mg、1.764mmol、収率99％)が得られ、それをさらに精製することなく次工程で使用した。LC／MS実測値[M＋H]＋＝369.
【０１４２】
実施例10、工程4: tert-ブチル (1R,3R,4S)-4-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-3-プロピオンアミドシクロヘキシルカルバマート(650mg、1.764mmol）の5mLのイソプロパノール中溶液に、4-クロロ-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン(492mg、2.117mmol）およびトリエチルアミン(0.492mL、3.53mmol）を加えた。該混合物を50℃で4時間攪拌した。該溶媒を減圧下で除去し、該残渣を30mLの20％AcOH／水で希釈し、その後ジエチルエーテル(2×20mL）で抽出した。エーテル層を20％AcOH水溶液(3×30mL)で抽出した。水層を合わせ、Na2CO3で塩基性化し、塩化メチレン(3×50mL)で抽出した。有機抽出液を合わせ、食塩水で洗浄し(40mL)、無水Na2SO4で乾燥し、減圧下で濃縮し、tert-ブチル (1R,3R,4S)-4-((S)-2-オキソ-3-(6-(トリフルオロメチル)キナゾリン-4-イルアミノ)ピロリジン-1-イル)-3-プロピオンアミドシクロヘキシルカルバマートを得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝565。この粗生成物全てを5mLの塩化メチレンに溶解した。生じた溶液にTFA(3mL)を入れ、室温で30分間攪拌し、ついで真空で濃縮した。該残渣をプレパラティブ逆相HPLCで精製し、標記の化合物をメタノール水溶液中、そのTFA塩として得た。この溶液を真空で濃縮して、メタノールを除去し、該残留溶液を飽和NaHCO3で塩基性化して塩化メチレン(3×50mL)で抽出し、乾燥し(Na2SO4)、真空で濃縮し、標記の化合物をその遊離塩基として(550mg、1.184mmol、収率67％)得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝465。1H-NMR(400MHz, CD3OD), δ ppm: 8.77(1 H, s), 8.57(1 H, s), 8.03(1 H, dd, J＝9.16, 2.03 Hz), 7.88(1 H, d, J＝8.65 Hz), 5.24(1 H, t, J＝8.65 Hz), 4.55(1 H, d, J＝3.56 Hz), 3.97-4.05(1 H, m), 3.52-3.67(2 H, m), 3.35-3.41(1 H, m), 2.47-2.58(1 H, m), 2.20-2.34(3 H, m), 1.62-2.04(6 H, m), 1.14(3 H, t, J＝7.63 Hz).
実施例11
2-tert-ブチル-N-((S)-1-((1S,2R,4R)-4-(tert-ブチルアミノ)-2-(メチルスルホンアミド)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イル)ピリミジン-4-カルボキサミド
【化１１】
2009544757.tif 000012
【０１４３】
実施例11、工程1: オーブン乾燥した3首丸底フラスコに乾燥した撹拌子、乾燥した還流冷却器、および２つのセプタを備えた。N2下で冷却した後、該フラスコに (1R,2S,5R)-2-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(tert-ブトキシカルボニルアミノ)シクロヘキサンカルボン酸(60g、126mmol;実施例1、工程4を参照)、アセトニトリル (800mL)、N-メチルモルホリン(27.7mL、252mmol）、およびジフェニルホスホリルアジド(29.9mL、139mmol）を連続的に入れた。該反応物を室温にて1時間40分攪拌し、その後2-トリメチルシリルエタノール (90mL、631mmol）を加えた。該反応物を加熱し始め、30分後に還流に達した。それを1時間還流し、その時点で、それを50℃にだんだんと冷却し、ついで外部冷却により15℃に冷却した。該反応物を酢酸(1.734mL、30.3mmol）を添加してクエンチした。該反応物を真空で濃縮し、ついでEtOAc(1.2L)に溶解した。それを水(1×0.3L)、飽和NaHCO3(2×0.3L)、1N HCl(1×0.3L)、および食塩水(2×0.3L)で連続的に洗浄した。該有機相を乾燥し(Na2SO4)、濾過し、真空で濃縮した。該濃縮操作の非常に初期に、固体が出現した。揮発物を除去した後、800mLの10％EtOAc／ヘキサンを加え、該混合物を終夜攪拌した。該固体を集め、乾燥し、tert-ブチル (1R,3R,4S)-4-((S)-3-ベンジルオキシカルボニルアミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-3-((2-トリメチルシリル)エトキシカルボニルアミノ)シクロヘキシルカルバマート (60.5g、102mmol、収率81％)を得た。HPLCにより該物質は72％純粋であり、２つの12％不純物を伴うことが示された。この物質を精製することなく次工程に使用した。ついで濾液を濃縮し、さらに4.38gの生成物を得た。全収率＝64.9g(87％).
【０１４４】
実施例11、工程2: 乾燥した500mL 丸底フラスコに撹拌子を備え、tert-ブチル (1R,3R,4S)-4-((S)-3-ベンジルオキシカルボニルアミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-3-((2-トリメチルシリル)エトキシカルボニルアミノ)シクロヘキシルカルバマート(60.5g)、CH2Cl2(180mL)、およびパラ-トルエンスルホン酸一水和物(19.48g、102mmol）のCH2Cl2 (120mL)およびメタノール(30mL)中溶液を連続的に入れた。該混合物をロータリーエバポレーターに設置し、該CH2Cl2の大部分を除去した(バス温度 約20℃)。該混合物が泡立ち始めたとき、真空を解除し、そしてバス温度は46℃に上昇した(該温度は44と51℃の間で変化した; それを外部から氷を加えて調節した)。該混合物を正確に１時間この温度で回転させ(ガス発生が終始目視できた)、ついでEtOAc(1L)で希釈した。該有機相を0.5N NH4OH(2×250mL)で洗浄した。該水性洗浄液を合わせ、取っておいた。該有機相を飽和NH4Cl(1×250mL)および飽和NaCl(1×250mL)で洗浄した; これらの水性洗浄液を捨てた。初めの合わせたNH4OH洗浄液をEtOAc(1×250mL)でさらに抽出し、その有機抽出液を飽和NH4Cl(1×60mL)および飽和NaCl(1×60mL)で洗浄した。全ての有機抽出液を合わせ、乾燥し(Na2SO4)、濾過し、濃縮した。該残渣をSiO2栓(13cm 幅×7.5cm高さ)を通して溶出することによって精製した。第１の溶離液は純粋なEtOAc(約4L)であった。第２の溶離液は1:9(10％NH4OH／MeOH)／CH2Cl2(約5L)であった。所望の生成物を含有する画分を一緒にプールし、濃縮し、所望の2-(トリメチルシリル)エチル (1R,2S,5R)-5-アミノ-2-((S)-3-ベンジルオキシカルボニルアミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)シクロヘキシルカルバマート(31.6g、64.4mmol、収率63％)を得た。
【０１４５】
実施例11、工程3: 2-(トリメチルシリル)エチル (1R,2S,5R)-5-アミノ-2-((S)-3-ベンジルオキシカルボニルアミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)シクロヘキシルカルバマート(1.03g、2.099mmol）のメタノール(10mL)中溶液に、3,5-ジ-tert-ブチル-1,2-ベンゾキノン(0.555g、2.52mmol）を加えた。この混合物を2時間攪拌し、その後、THF(6mL)および水(2mL)、ならびにシュウ酸をpH 4まで加えた。この混合物を濃縮した。生じた残渣を酢酸エチルに溶解し、食塩水で洗浄した。有機層を乾燥し(MgSO4)、濾過し、濃縮した。これをフラッシュクロマトグラフィーによって精製し、2-(トリメチルシリル)エチル (1R,2S)-2-((S)-3-ベンジルオキシカルボニルアミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-オキソシクロヘキシルカルバマート(0.550g、1.123mmol、収率53.5％)を得た。 LC／MS実測値[M＋H]＋＝491.3.
【０１４６】
実施例11、工程4: 2-(トリメチルシリル)エチル (1R,2S)-2-((S)-3-ベンジルオキシカルボニルアミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-オキソシクロヘキシルカルバマート(0.550g、1.123mmol）の塩化メチレン(0.4mL)中溶液に、t-ブチルアミン(1.180mL、11.23mmol）およびチタン(IV)イソプロポキシド(6.63mL、22.47mmol）を加えた。この混合物を2時間攪拌し、その後シアノ水素化ほう素ナトリウム(127mg、2.022mmol）およびMeOH(1mL)を加えた。2時間後、塩化メチレン(50mL)、続いて1N NaOHを加えた。該混合物をセライトを通して濾過し、該チタン塩を除去した。濾液を乾燥し、真空で濃縮し、2-(トリメチルシリル)エチル (1R,2S,5R)-2-((S)-3-ベンジルオキシカルボニルアミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(tert-ブチルアミノ)シクロヘキシルカルバマートおよびその5Sジアステレオマーを混合物として得た(510mg、0.933mmol、収率83％)。LC／MS実測値[M＋H]＋＝547.31.
【０１４７】
実施例11、工程5: 工程4の生成物(510mg、0.933mmol）をCH2Cl2(2mL)およびトリフルオロ酢酸(2.87mL、37.3mmol）に溶解した。30分後、該溶液を濃縮し、ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アミノ-4-(tert-ブチルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマートのビス-TFA塩をその4Sジアステレオマーとの混合物として得た(520mg、0.825mmol、収率88％)。LC／MS実測値[M＋H]＋＝403.25.
【０１４８】
実施例11、工程6: 工程5の該アミンの一部(362mg、0.57mmol）を塩化メチレン(3mL)に溶解した。生じた溶液にトリエチルアミン(0.125mL、0.900mmol）および塩化メタンスルホニル(0.070mL、0.900mmol）を連続的に入れた。該混合物を室温にて2時間攪拌し、および飽和NaHCO3溶液で洗浄し、乾燥し(Na2SO4)、濾過し、真空で濃縮した。残渣をメタノール(3mL)に溶解した。該容器にPd／C(150mg、1.410mmol）を入れ、水素バルーンを備えた。1時間後、該溶液を濾過し、真空で濃縮した。該残渣をメタノール(3mL)に再溶解し、該容器に再びPd／C(150mg、1.410mmol）を入れ、水素バルーンを備えた。1時間後、該溶液を濾過し、真空で濃縮し、N-((1R,2S,5R)-2-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(tert-ブチルアミノ)シクロヘキシル)メタンスルホンアミドをその5Sジアステレオマーとの混合物として得た(190mg、0.548mmol、収率75％)。LC／MS実測値[M＋H]＋＝347.3.
【０１４９】
実施例11、工程7:工程7の生成物アミン(190mg、0.548mmol）を塩化メチレン(3mL)に溶解した。該2-tert-ブチルピリミジン-4-カルボン酸(196mg、1.09mmol; P.H. Carterら、PCT出願 WO 2005／021500を参照)、EDC(210mg、1.097mmol）、およびN-メチルモルホリン(0.247mL、2.193mmol）を加え、その後、HOBt(364mg、2.7mmol）を添加した。この混合物を終夜攪拌した。該溶液を濃縮し、濾過し、プレパラティブ逆相HPLCによって精製し、該TFA塩の標記の化合物をジアステレオマー的に純粋な形態で得た(123mg、0.198mmol、36％)。LC／MS実測値[M＋H]＋＝509.35。1H-NMR(400MHz, CD3OD), δ ppm: 9.36(br d, 1H), 8.97(d, 1H), 7.88(d, 1H), 4.49(m, 2H), 3.94-3.75(m, 3H), 3.64(m, 1H), 3.04(s, 3H), 2.58(m, 1H), 2.33(m, 2H), 2.2-1.96(m, 4H), 1.88(m, 1H), 1.48(s, 9H), 1.44(s, 9H).
実施例12
2-tert-ブチル-N-((3S)-1-((1S,2R,4R)-4-(tert-ブチルアミノ)-2-(プロピオニルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソ-3-ピロリジニル)-4-ピリミジンカルボキサミド
【化１２】
2009544757.tif 000013
【０１５０】
実施例12、工程1: 2-(トリメチルシリル)エチル (1R,2S,5R)-2-((S)-3-ベンジルオキシカルボニルアミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(tert-ブチルアミノ)シクロヘキシルカルバマートおよびその5Sジアステレオマーの試料(68mg、0.141mmol;実施例11、工程4を参照)をMeOH(3mL)に溶解し、その後、10％Pd／C(100mg、0.940mmol）および水素バルーンを付加した。1時間後、該溶液を濾過し、真空で濃縮した。ついで該反応物を新たな試薬で再び処理した。1時間後、該溶液を濾過し、濃縮し、2-(トリメチルシリル)エチル (1R,2S,5R)-2-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(tert-ブチルアミノ)シクロヘキシルカルバマートを その5Sジアステレオマーとの混合物として(139.4mg、0.338mmol、収率99％)得た: LC／MS実測値[M＋H]＋＝413.4.
【０１５１】
実施例12、工程2: 上記工程1の生成物(139.4mg、0.338mmol）をCH2Cl2(3mL)に溶解した。該溶液に、2-tert-ブチルピリミジン-4-カルボン酸(122mg、0.676mmol）、1H-ベンゾ[d][1,2,3]トリアゾール-1-オール(91mg、0.676mmol）、および4-メチルモルホリン(0.149mL、1.351mmol）を連続的に入れた。ついで該溶液に1-(3-ジメチルアミノ)プロピル)-3-エチル-カルボジイミドヒドロクロリド(130mg、0.676mmol）を入れた。この混合物を終夜攪拌した。該溶液を濃縮し、濾過し、プレパラティブ逆相HPLC(Phenomenex 21×250mm、0％〜100％メタノール-水（0.1％トリフルオロ酢酸含有）30分かけて、15mL／分、220nM、生成物保持時間＝29.9分)によって精製し、2-(トリメチルシリル)エチル (1R,2S,5R)-5-(tert-ブチルアミノ)-2-((S)-3-(2-tert-ブチルピリミジン-4-カルボキサミド)-2-オキソピロリジン-1-イル)シクロヘキシルカルバマートのTFA塩(92mg、0.134mmol、収率39.5％)を得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝575.5.
【０１５２】
実施例12、工程3: 工程2の生成物 (92mg、0.134mmol）をCH2Cl2(2mL)に溶解し、その後、トリフルオロ酢酸(3.09mL、40.1mmol）を添加した。30分後、該溶液を濃縮し、N-((S)-1-((1S,2R,4R)-2-アミノ-4-(tert-ブチルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イル)-2-tert-ブチルピリミジン-4-カルボキサミドのTFA塩(87mg、0.132mmol、収率99％)を得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝431.37.
【０１５３】
実施例12、工程4: N-((S)-1-((1S,2R,4R)-2-アミノ-4-(tert-ブチルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イル)-2-tert-ブチルピリミジン-4-カルボキサミド(87mg、0.132mmol）のTFA塩をCH2Cl2(3mL)に溶解し、その後、トリエチルアミン(0.092mL、0.660mmol）を添加した。該溶液を0℃に冷却し、プロピオン酸無水物を入れた(0.051mL、0.396mmol）。30分後、該溶液を濃縮し、濾過し、プレパラティブ逆相HPLC(Phenomenex 21×100mm、0％〜100％メタノール-水（0.1％トリフルオロ酢酸含有）10分かけて、20mL／分、220nM、生成物保持時間＝8.2分)によって精製し、標記の化合物をそのTFA塩として得た。この物質を塩化メチレンに溶解した。生じた溶液を飽和Na2CO3で洗浄し、ついで乾燥し、真空で濃縮し、標記の化合物(46mg、0.095mmol、収率72％)を得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝487.45。1H-NMR(400MHz, CD3OD), δ ppm: 8.84(d, 1H), 7.73(d, 1H), 4.57(t, 1H), 4.29(m, 1H), 3.95(m, 1H), 3.51(m, 2H), 2.97(m, 1H), 2.42(m, 1H), 2.12(q, 2H), 2.06(m, 1H), 1.9(m, 1H), 1.75-1.55(m, 5H), 1.36(s, 9H), 1.36-1.02(m, 12H).
実施例13
N-((1R,2S,5R)-5-(tert-ブチルアミノ)-2-((3S)-3-((6-tert-ブチルピリミド[5,4-d]ピリミジン-4-イル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)メタンスルホンアミド
【化１３】
2009544757.tif 000014
【０１５４】
実施例13、工程1: 2-(トリメチルシリル)エチル (1R,2S,5R)-2-((S)-3-ベンジルオキシカルボニルアミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(tert-ブチルアミノ)シクロヘキシルカルバマートおよびその5Sジアステレオマー(100mg、0.183mmol;実施例11、工程4を参照)の試料をジクロロメタン(2mL)に溶解し、その後、トリフルオロ酢酸(2.54mL、32.9mmol）を添加した。30分後、該溶液を真空で濃縮した。残渣をジクロロメタン(3mL)に溶解し、その後、トリエチルアミン(0.100mL、0.720mmol）および塩化メタンスルホニル(0.018mL、0.234mmol）を添加した。2時間後、これを飽和NaHCO3溶液で洗浄し、有機層を乾燥し(Na2SO4)、濾過し、濃縮し、ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-4-(tert-ブチルアミノ)-2-(メチルスルホンアミド)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマートをその4Sジアステレオマーとの混合物として得た(66mg、0.137mmol、収率76％)。LC／MS実測値[M＋H]＋＝481.22.
【０１５５】
実施例13、工程2:上記工程1の生成物(0.066g、0.137mmol）をMeOH(4mL)に溶解し、その後、10％Pd／C(150mg、1.410mmol）および水素バルーンを付加した。1時間後、該溶液を濾過し、真空で濃縮した。ついで該反応物を新たな試薬で再び処理した。1時間後、該溶液を濾過し、濃縮し、N-((1R,2S,5R)-2-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(tert-ブチルアミノ)シクロヘキシル)メタンスルホンアミドをその5Sジアステレオマーとの混合物として得た(47.5mg、0.137mmol、収率100％)。LC／MS実測値[M＋H]＋＝347.3.
【０１５６】
実施例13、工程3: 工程2の生成物 (47.5mg、0.137mmol）を2-プロパノール (2mL)に溶解した。生じた溶液にトリエチルアミン(0.057mL、0.411mmol）および2-tert-ブチル-8-クロロピリミド[5,4-d]ピリミジン(45.8mg、0.206mmol; P.H. Carterら、PCT出願 WO 2005／021500を参照)を連続的に入れた。攪拌2時間後、該溶液を濃縮した。該残渣をプレパラティブ逆相HPLC(Phenomenex Luna 5u C18 21.2×100mm、％メタノール-水（0.1％トリフルオロ酢酸含有）、12分かけるグラジエント、20mL／分、220nM、生成物保持時間＝8.2分)によって精製し、該生成物をTFA塩として得た。これをジクロロメタンに溶解し、20％Na2CO3溶液で洗浄した。有機層を濃縮し、標記の化合物を得た(18mg、0.034mmol、収率24.66％)。LC／MS実測値[M＋H]＋＝533.3。1H-NMR(400MHz, CD3OD), δ ppm: 9.15(s, 1H), 8.47(s, 1H), 5.16(m, 1H), 3.91(m, 2H), 3.83(m, 1H), 3.55(m, 1H), 3.14(m, 1H), 2.91(s, 3H), 2.53(m, 1H), 2.1(m, 2H), 1.9(m, 1H), 1.77-1.55(m, 4H), 1.40(s, 9H), 1.07(s, 9H).
実施例14
N-((1R,2S,5R)-5-(tert-ブチルアミノ)-2-((3S)-3-((1-オキシド-6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド
【化１４】
2009544757.tif 000015
【０１５７】
実施例14、工程1: tert-ブチル (1R,3R,4S)-3-アセトアミド-4-((S)-3-(ベンジルオキシカルボニルアミノ)-2-オキソピロリジン-1-イル)シクロヘキシルカルバマート(100g、0.205mol;実施例1、工程6を参照)のジクロロメタン(400mL)中溶液にTFA(400mL)を-20℃にて加えた。該反応物溶液を室温で2時間攪拌した。該溶媒およびTFAのほとんどを減圧下で除去し、該残渣をジクロロメタン(2L)およびK2CO3水溶液(2L)で希釈した。1N HClでpHを10に調節した。該水層をジクロロメタン(3×1L)で抽出した。有機層を合わせて、Na2SO4で乾燥し、濃縮し、ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-アミノシクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマートを油状物として得た(81g、収率100％)。このアミンを次工程でさらに精製することなく直接使用した。
【０１５８】
実施例14、工程2: ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-アミノシクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(13.3g、34mmol）および3,5-ジ-tert-ブチルシクロヘキサ-3,5-ジエン-1,2-ジオン(7.54g、34mmol）のメタノール (160mL)中溶液を室温で2時間攪拌した。該溶液を濃縮し、アセトン(132mL)および水(33mL)で希釈し、続いてDowex-50WX8-200(33g)を添加した。該反応物を室温で2時間攪拌した。Dowex-50WX8-200を濾過して除去し、ジクロロメタン(300mL)で洗浄した。濾液を減圧濃縮し、アセトンのほとんどを除去した。該残渣をジクロロメタン(200mL)で希釈し、NaHCO3水溶液(200mL)および食塩水(200mL)で洗浄した。合わせた水層をジクロロメタン(2×100mL)で抽出した。有機抽出液を合わせて、Na2SO4で乾燥し、濃縮した。該生成物ベンジル (S)-1-((1S,2R)-2-アセトアミド-4-オキソシクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマートを、EtOAc(100mL)およびヘキサン(200mL)中での結晶化により、固体として得た(12g、収率90％)。1H-NMR(500MHz, DMSO-d6)δppm 7.99(d, J＝9.35 Hz, 1 H), 7.44(d, J＝8.80 Hz, 1 H), 7.28 -7.39(m, 5 H), 5.03(s, 2 H), 4.50(s, 1 H), 4.31(d, J＝12.10 Hz, 1 H), 4.18(q, J＝8.98 Hz, 1 H), 3.27(m, 2 H), 2.82(dd, J＝15.12, 5.22 Hz, 1 H), 2.52-2.65(m, 1 H),  2.40(dd, J＝12.92, 4.67 Hz, 1 H), 2.15-2.31(m, 2 H), 2.09(d, J＝15.40 Hz, 1 H), 1.90(m, 1 H), 1.81(s, 3 H), 1.68(m, 1 H)。m／z: 388.46 [M＋H].
【０１５９】
実施例14、工程3: TiCl4(1M ジクロロメタン中、36mL、36mmol）のジクロロメタン(30mL)中溶液に、0℃でTi(OiPr)4(10.8mL、36mmol）を加えた。ついで該混合物を室温で10分間攪拌した。ベンジル (S)-1-((1S,2R)-2-アセトアミド-4-オキソシクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(23.25g、60mmol）のジクロロメタン(600mL)中溶液に、tert-ブチルアミン(30mL、300mmol）を室温で加え、続いて-50℃で該TiCl4／Ti(OiPr)4 溶液を添加した。該反応物を室温にゆっくり加温した。該反応物を2時間後に終えた(HPLC試料をNaBH4／メタノールでクエンチして、該反応をHPLCでモニターした)。該溶液を10℃に冷却し、BH3・SMe2(1M ジクロロメタン中、66mL、66mmol）を加えた。該混合物を室温で5時間攪拌し、ついでNa2CO3水溶液(300mL)でクエンチした。該沈殿物を濾過した。２層を分離し、水層をジクロロメタン(600mL)で抽出した。合わせたジクロロメタン層を1N HClで２回抽出した (150mLおよび15mL)(生成物および該所望でないトランス異性体は共に該酸性水相中にあった)。合わせた酸性水層を12M NH4OH水溶液(12mL)でpH〜8に中和し、ジクロロメタンで２回(600mL、450mL)抽出した。(該生成物は有機相中にあり、一方該トランス異性体はなお水層中にあった)。有機層に残るトランス異性体が無くなるまで、合わせた有機層をNH4Cl水溶液で3回(3×200mL)洗浄した。有機層をNa2SO4で乾燥し濃縮した。該残渣をEtOAc／ヘキサン(200mL／800mL)中での結晶化によって精製し、所望のベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(tert-ブチルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(20.80g、収率78％)を白色の固体（99.5％純度）として得た。1H-NMR(500MHz, DMSO-d6)δppm 8.76(s, 1H), 7.27-7.46(m, 6 H), 5.03(m, 2 H), 4.14(m, 1 H), 4.07(q, J＝8.80 Hz, 1 H), 3.83(m, 1H), 3.36(m, 2H), 2.91(s, 1H), 2.18(m, 1H), 2.04(m, 1H), 1.78(s, 3H), 1.41-1.74(m, 7H), 1.04(s, 9H)。m／z: 445.54 [M＋H].
【０１６０】
実施例14、工程4: ベンジル (S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(tert-ブチルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(43.3g、98mmol）のメタノール(400mL)中溶液に、10％ウェットPd／C(4.34g)を加えた。該混合物を真空にし、水素バルーンの水素を充填した。該混合物を室温で5時間攪拌した。該混合物を濾過し、メタノール (500mL)で洗浄し、減圧下で濃縮乾固した。得られた粗生成物を、IPA(2×100mL)で減圧下に蒸留し、生成物N-((1R,2S,5R)-2-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(tert-ブチルアミノ)シクロヘキシル)アセトアミドを油状物として得た(30g、収率98％)。このアミンを次工程でさらに精製することなく使用した。
【０１６１】
実施例14、工程5: N-((1R,2S,5R)-2-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-(tert-ブチルアミノ)シクロヘキシル)アセトアミド(50mg、0.161mmol、上記の通りに調製した)および4-フェノキシ-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン 1-オキシド(99mg、0.161mmol;実施例5、調製の別法、工程2を参照)のi-PrOH(2mL)中溶液にN,N-ジイソプロピルエチルアミン(0.056mL、0.322mmol）を加えた。該容器をアルゴン雰囲気下で密閉し、マイクロ波中で120℃にて1時間加熱した。LC／MS実測値:(M＋H)＋＝523.3（主要生成物ピークとして）。該反応を別の容器中で同一スケールにて繰り返した。該２つの反応物を合わせ、濃縮し、油状残渣を得、それを8:92(10％cNH4OH／MeOH)で溶出する自動化フラッシュクロマトグラフィー(40gシリカゲル)によって精製した。所望の生成物を含有する画分をプールし、真空で濃縮した。該残渣をCH2Cl2およびヘキサンから結晶化した。該２つの生成物を合わせ、真空下で乾燥し、4-((S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(tert-ブチルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルアミノ)-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン 1-オキシド(101mg)を得た。1H-NMRによる分析は、この物質が〜0.6モル濃度相当のCH2Cl2を含むことを示した。LC／MS実測値: [M＋H]＋＝523.30。1H-NMR(400MHz, CD3OD), δ ppm: 9.00(s, 1H), 8.80(s, 1H), 8.61(d, J ＝9.0 Hz, 1H), 8.32(dd, J ＝9.0, 1.6 Hz, 1H), 5.28(t, J＝8.3 Hz, 1H), 4.57(brs, 1H), 4.02(brd, 1H), 3.65-3.51(m, 2H), 3.24(brs, 1H), 2.59-2.51(m, 1H), 2.34-2.20(m, 1H), 2.04(s, 3H), 2.04(m, 1H), 1.89(brs, 3H), 1.74(brs, 2H), 1.20(s, 9H).
実施例15
N-(((1S,2S,5R)-5-メトキシ-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)メチル)アセトアミド
【化１５】
2009544757.tif 000016
【０１６２】
実施例15、工程1:ベンジル (1R,2S,5R)-7-オキソ-6-オキサビシクロ[3.2.1]オクタン-2-イルカルバマート(9g、32.7mmol; P. H. Carterら、PCT出願 WO 2005／021500を参照)の試料をTHF(50mL)および水(16.67mL)に室温で溶解し、その後、水素化ホウ素ナトリウム(1.237g、32.7mmol）を添加した。該反応混合物を22時間攪拌した。それを飽和NaHCO3溶液でクエンチした。該反応混合物を1:9 MeOH-CH2Cl2 混合物(5×)で抽出した。有機層を合わせ、ついで食塩水で洗浄し、無水MgSO4で乾燥した。所望の生成物、ベンジル (1S,2R,4R)-4-ヒドロキシ-2-(ヒドロキシメチル)シクロヘキシル カルバマート(8.75g、31.3mmol、収率96％)を白色泡状固体として得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝280.30.
【０１６３】
実施例15、工程2:ベンジル (1S,2R,4R)-4-ヒドロキシ-2-(ヒドロキシメチル)シクロヘキシルカルバマート(20.5g、73.4mmol）の試料を、無水ピリジン(140mL)に室温で溶解し、その後、塩化トリチル(20.46g、73.4mmol）を少しずつ添加した。該反応混合物を２日間攪拌した。ピリジンを蒸発させ、残渣をEtOAcに溶解した。該溶液を水(2×)、続いて食塩水で洗浄した。合わせた水層をEtOAcで再抽出した。この有機層を食塩水で洗浄した。ついで有機層を合わせて、無水Na2SO4で乾燥し、濃縮して油状残渣が得られ、それを処理して、EtOAcおよびヘキサンから結晶化させて白色結晶質生成物を得た。該母液をクロマトグラフ処理(400gシリカゲル20％EtOAc／ヘキサン、続いて40％および最後に70％で溶出した)した。所望の位置異性体、ベンジル (1S,2R,4R)-4-ヒドロキシ-2-(トリチルオキシメチル)シクロヘキシルカルバマート(33.08g、63.4mmol、収率86％)を白色の固体として得た。MS実測値[M-H]-＝520.2(AP／CI)。1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ, ppm 7.4(d, J＝7.12 Hz, 6H), 7.19-7.34(m, 15H), 5.25-5.31(m, 1H), 4.98-5.09(m, 2H), 3.92(s, 1H), 3.66(bs, 1H), 3.14-3.24(m, 1H), 2.97(dd, J＝9.41, 4.83 Hz, 1H), 1.98-2.08(m, 1H), 1.91(d, J＝11.9 Hz, 2 H), 1.76-1.84(m, 1H), 1.36-1.49(m, 2H), 1.39-1.43(m, 1H), 1.19-1.30(m, 1H)。少量の所望でない異性体、ベンジル (1S,2R,4R)-2-(ヒドロキシメチル)-4-(トリチルオキシ)シクロヘキシル カルバマート(1.17g、2.243mmol、収率3.06％)もまた得た。MS実測値[M-H]-＝520.2(AP／CI). 1H-NMR(400MHz, CDCl3)δ, ppm 7.48(d, J＝7.12 Hz, 6H), 7.32-7.40(m, 5H), 7.21-7.32(m, 10H), 5.05-5.14(m, 2H), 4.96(d, J＝8.65 Hz, 1H), 3.89(dd, J＝8.39, 2.8 Hz, 1H), 3.84(dd, J＝10.7, 4.58 Hz, 1H), 3.46(ddd, J＝14.5, 9.92, 4.07 Hz, 1H), 3.07(ddd, J＝15.26, 10.43, 4.3 Hz, 1H), 1.66(dd, J＝14.24, 3.05 Hz), 1.43-1.51(m, 1H), 1.30-1.40(m, 2H), 1.14-1.23(m, 1H), 0.79-0.91(m, 1H), 0.72-0.79(m, 1H)。
【０１６４】
実施例15、工程3: ベンジル (1S,2R,4R)-4-ヒドロキシ-2-(トリチルオキシメチル)シクロヘキシルカルバマート(11.5g、21.47mmol）の試料をCH2Cl2(100mL)にN2下、室温で溶解し、その後、1,8-ビス(ジメチルアミノ)ナフタレン(11.50g、53.7mmol）、モレキュラーシーブ(粉末化4Å、5g)およびトリメチルオキソニウム テトラフルオロボラート(6.35g、42.9mmol、３回にわけて)を順に添加した。反応混合物を48時間攪拌した。出発物質はなお残った。追加量のトリメチルオキソニウム テトラフルオロボラート(1.5g)およびモレキュラーシーブ(1g)を加え、該反応混合物をさらに5時間攪拌した。それを200mLのCH2Cl2で希釈し、セライトを通して濾過した。ろ液を0.5N HCl(3×50mL)、続いて飽和Na2CO3で洗浄し、無水MgSO4で乾燥した。ついで該溶液を濃縮し、真空で乾燥して、淡黄色泡状物を得た。該黄色泡状物を100mLのAcOH:水(7:3)に入れ、60℃で3時間攪拌した。生じたピンク色溶液を濃縮し、1N NaOHで塩基性にした。該混合物をEtOAc(5×、各150mL)で抽出した。有機層を合わせて、食塩水で洗浄し、無水MgSO4で乾燥し、濃縮し、クロマトグラフ処理 (300gシリカゲル; 7:3 EtOAc:ヘキサン、続いてEtOAcで溶出した) した。所望のベンジル (1S,2R,4R)-2-(ヒドロキシメチル)-4-メトキシシクロヘキシル カルバマート(6.1g、20.79mmol、97％)を油状物として得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝294.41.
【０１６５】
実施例15、工程4:トリフェニルホスフィン(7.39g、28.2mmol）の試料を0℃でTHF(60mL)に溶解し、その後、該ジエチルアゾジカルボキシラート(4.46mL、28.2mmol）を滴下した。攪拌を0℃で30分間続け、該ベンジル (1S,2R,4R)-2-(ヒドロキシメチル)-4-メトキシシクロヘキシル カルバマート(4.13g、14.08mmol）のTHF(40mL)中溶液を該反応混合物にゆっくり加えた。該反応混合物を0℃で30分間攪拌し、アジ化水素(14.08mL、28.2mmol）(2M ベンゼン溶液として)の溶液をゆっくり加えた。該反応混合物を0℃で90分間攪拌した。それをMeOHでクエンチし、終夜室温で攪拌した。該赤色調黄色溶液を濃縮し、クロマトグラフ処理した。ベンジル (1S,2S,4R)-2-(アジドメチル)-4-メトキシシクロヘキシルカルバマート(4.19g、13.16mmol、収率93％)を非常に粘稠な油状物として得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝319.5.
【０１６６】
実施例15、工程5: ベンジル (1S,2S,4R)-2-(アジドメチル)-4-メトキシシクロヘキシルカルバマート(4.7g、14.76mmol）の試料をTHFに室温で溶解し、その後、水(0.293mL、16.24mmol）およびトリフェニルホスフィン(4.26g、16.24mmol）を添加した。該反応物を60℃で4時間攪拌した。ついでそれを冷却し、飽和Na2CO3水溶液(3.13g、29.5mmol）、続いてジ-t-ブチルジカルボナート(3.77mL、16.24mmol）で処理した。該反応混合物を室温で終夜攪拌した。それをEtOAcおよび水間に分配した。有機層を食塩水で洗浄し、無水MgSO4で乾燥した。該溶液を濃縮し、クロマトグラフ処理した(500mLシリカゲル30％EtOAc／ヘキサンで溶出した)。所望のtert-ブチル ((1S,2S,5R)-2-ベンジルオキシカルボニルアミノ-5-メトキシシクロヘキシル)メチルカルバマートを粘稠油状物として得た。LC／MS実測値[M-Boc＋H]＋＝293.25.
【０１６７】
実施例15、工程6:工程5の生成物の試料をMeOH(100mL)に溶解した。パラジウム炭素(0.185g、1.743mmol）を該溶液に加え、および該反応混合物を50psiの水素下で2時間攪拌した。該反応混合物を、セライトを通してEtOAcで濾過した。生じた溶液を真空で濃縮して、tert-ブチル ((1S,2S,5R)-2-アミノ-5-メトキシシクロヘキシル)メチルカルバマートを澄明油状物として得、それをさらに精製することなく使用した。定量的収率が見込まれた。LC／MS実測値[M＋H]＋＝259.41.
【０１６８】
実施例15、工程7: tert-ブチル ((1S,2S,5R)-2-アミノ-5-メトキシシクロヘキシル)メチルカルバマート(2.53g、9.79mmol）の試料をCH2Cl2(50mL)に室温で溶解した。該溶液に、1-ヒドロキシベンゾトリアゾール (1.456g、10.77mmol）、N-カルボベンジルオキシ-L-メチオニン(4.16g、14.69mmol）および1-(3-ジメチルアミノプロピル)-3-エチルカルボジイミド塩酸塩(2.440g、12.73mmol）を連続的に入れた。該反応混合物を終夜攪拌した。それをEtOAcで希釈し、飽和Na2CO3、続いて食塩水で洗浄した。該溶液を乾燥し(MgSO4)、濾過し、真空で濃縮して、tert-ブチル ((1S,2S,5R)-2-((S)-2-ベンジルオキシカルボニルアミノ-4-(メチルチオ)ブタンアミド)-5-メトキシシクロヘキシル)メチルカルバマートを無色粘着性固体として得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝524.31.
【０１６９】
実施例15、工程8:工程7の生成物の試料をヨードメタン(30mL)に溶解し、室温で２日間攪拌した。該反応混合物を濃縮し、真空で乾燥した。残渣をCH2Cl2に溶解し、および濃縮した。該処理をさらに４回繰り返した。生じた残渣を真空で乾燥し、黄色泡状固体を得、ついでそれをDMF(20mL)に入れ、Cs2CO3(6.36g、19.52mmol）で処理した。該反応混合物を室温で終夜攪拌した。それをEtOAcで希釈し、水(2×)で洗浄した。合わせた水層をEtOAc(2×)で抽出した。ついで有機層を合わせて、食塩水で洗浄し、無水MgSO4で乾燥した。ついで該溶液を濃縮し、クロマトグラフ処理し、tert-ブチル ((1S,2S,5R)-2-((S)-3-ベンジルオキシカルボニルアミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-メトキシシクロヘキシル)メチルカルバマートを白色泡状固体として得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝476.4
【０１７０】
実施例15、工程9: tert-ブチル ((1S,2S,5R)-2-((S)-3-ベンジルオキシカルボニルアミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-メトキシシクロヘキシル)メチルカルバマート(0.75g、1.577mmol）の試料をCH2Cl2(15mL)に室温で溶解した。該溶液にトリフルオロ酢酸(1.215mL、15.77mmol）を入れ、6時間攪拌した。ついでそれを濃縮し、真空で乾燥した。残渣をEtOAcに溶解し、飽和Na2CO3、続いて食塩水で洗浄した。有機層をついで無水Na2SO4で乾燥し、濃縮し、真空で乾燥して、淡黄色泡状物を得た。この物質をCH2Cl2(10mL)に室温で溶解した。該溶液にトリエチルアミン(0.659mL、4.73mmol）、ジメチルアミノピリジン(0.019g、0.158mmol）、および無水酢酸(0.164mL、1.734mmol）を連続的に入れた。該反応混合物を90分間攪拌し、ついで飽和NaHCO3でクエンチした。ついで該反応混合物をCH2Cl2(3×)で抽出した。有機層を合わせ、無水MgSO4で乾燥し、濃縮し、クロマトグラフ処理した。所望の生成物、ベンジル (S)-1-((1S,2S,4R)-2-(アセトアミドメチル)-4-メトキシシクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマートを白色の固体として得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝418.4.
【０１７１】
実施例15、工程10:該ベンジル (S)-1-((1S,2S,4R)-2-(アセトアミドメチル)-4-メトキシシクロヘキシル)-2-オキソピロリジン-3-イルカルバマート(614mg、1.471mmol）の試料およびPd／C(62.6mg、0.294mmol）をMeOH(30mL)中で、室温、50psiの水素雰囲気下にて2時間攪拌した。該懸濁液を、セライトを通してEtOAcで濾過し、濃縮し、真空で乾燥して、N-(((1S,2S,5R)-2-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-メトキシシクロヘキシル)メチル)アセトアミド(410mg、1.447mmol、収率98％)を白色の固体として得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝284.24.
【０１７２】
実施例15、工程11: 該N-(((1S,2S,5R)-2-((S)-3-アミノ-2-オキソピロリジン-1-イル)-5-メトキシシクロヘキシル)メチル)アセトアミド(220mg、0.776mmol）の試料を2-プロパノール (10mL)に室温で溶解した。この溶液に、トリエチルアミン(0.433mL、3.11mmol）、続いて4-クロロ-6-(トリフルオロメチル)キナゾリン(235mg、1.009mmol）を加えた。該反応混合物を終夜攪拌した。それを濃縮し、クロマトグラフ処理し(120gシリカゲル、5％、続いて10％MeOH／CH2Cl2で溶出する)、標記の化合物(300mg、0.626mmol、収率81％)を白色の固体として得た。LC／MS実測値[M＋H]＋＝480.4。1H-NMR(400MHz, CDCl3), δ ppm: 8.6(s, 1H), 8.51(s, 1H), 7.92(br s, 1H), 7.87-7.82(m, 2H), 6.28(br s, 1H), 5.00(dd, J＝16.02, 8.65 Hz, 1H), 4.36-4.35(m, 1H), 3.72-3.68(m, 1H), 3.63-3.56(m, 1H), 3.37-3.23(m, 2H), 3.31(s, 3H), 3.18-3.13(m, 1H), 2.69-2.66(m, 1H), 2.12-2.07(m, 1H), 2.06-1.89(m, 4H), 1.96(s, 3H), 1.74-1.67(m, 1H), 1.57-1.51(m, 1H), 1.30-1.28(m, 1H)。
【０１７３】
比較薬理学的特徴
本出願の化合物および国際公開公報WO2005021500号（米国特許第7,163,937号に対応、現出願人に譲渡された）中に見つかる化合物の薬理学的特徴を比較するアッセイおよびデータを以下に表す。
【０１７４】
ヒト末梢血単核細胞結合（「CCR2結合」）
Yoshimura, et al.、J. Immunol.、1990、145、292をも参照されたい。ヒトCCR2結合アッセイを、125I-ヒトMCP-1をトレーサーリガンドとして用いて、ヒト末梢血単核細胞（hPBMC）を用いて確立させた。hPBMCを、ヒトleukopak（Biological Specialty Inc.）から、フィコール-Hypaque（Mediatech Cellgro）を用いて、標準のプロトコルを使用して単離した。単離したhPBMCを洗浄し、結合バッファー（RPMI-1640、0.1％BSA、20mMのHepes、pH7.4）中で1×107個／mlまで希釈した。125I-MCP-1（NEN／Perk Elmer）を結合バッファー中で0.45nMまで希釈した。化合物を結合バッファー中で、結合アッセイで使用する最終濃度の３倍で希釈した。結合アッセイは、96ウェルフィルタープレート（Millipore）を用いて行った。全125I-MCP-1結合は以下のように評価した：150μlの全容量のそれぞれの反応に、5×105個の細胞、0.15nMの125I-MCP-1、および最終濃度の範囲が0〜100nMとなる化合物を加えた。プレートを室温で30分間インキュベーションし、次いで、真空多岐管濾過（Millipore）を用いてRPMI-1640、0.1％のBSA、0.4MのNaCl、20mMのHepes、pH7.4で３回洗浄した。洗浄後、プレートを60分間室温で空気乾燥させた。次いで、25μlのMicroscint 20をそれぞれのウェルに加えた。プレートを密閉し、Triluxで１分間計数した。非特異的結合は、300nMの冷MCP-1（PeproTech Inc.）の存在下で決定した。特異的125I-MCP-1は、全結合と非特異的結合との差として計算した。すべての条件を２つ組で試験した。IC50とは、特異的結合を50％低下させるために必要な競合化合物の濃度と定義される。
【０１７５】
hERG流束
hERGチャネルを安定して発現しているHEK293細胞を、10％のSigmaウシ胎児血清、非必須アミノ酸、2mMのＬ-グルタミンおよび500μg／mlのG418を添加したダルベッコ変法イーグル培地中、インキュベーターで増殖させた（37℃、5％のCO2）。細胞解離バッファーを用いて細胞をフラスコから抽出し、その後、これを、384ウェルのCorningポリ-D-リシンでコーティングした黒色／透明プレートに、10％の血清培地中に2×104個の細胞／ウェルの密度（20μl）で播種し、15〜24時間、37℃、5％のCO2インキュベーター内で、コンフルエントな細胞の単層が得られるまでインキュベーションした。
【０１７６】
BTC-AM色素（Molecular Probes、オレゴン州Eugene）の2mMのストックを100％のDMSO中で調製し、アッセイの日に、10％（w／v）のプルロニック酸／DMSOに1：1で加えた。その後、色素をhERG外部EPバッファー（140mMのNaCl、4.0mMのKCl、1.8mMのCaCl2、1.0mMのMgCl2、10mMのHEPES、pH7.3および10mMのグルコース；すべてのバッファー構成成分はSigma Chemicalから入手した）中で希釈した。このBTC色素混合物（30μl）を細胞に加え、2.5μMの最終添加濃度が生じた。細胞を21℃で45分間インキュベーションする。
【０１７７】
試験化合物を10mM DMSO 60μlに希釈した。その後、これらの化合物を、DMSO中に1：2の比で、384ウェルプレートのカラム1〜10および11〜20内で段階希釈した。アッセイ用プレートを、DMSOで段階希釈したプレートから2.5μlを刻印して作製し、これは、Velocity 11 BioCel上で調製した。48μlのEPバッファーを加えることによって水性プレートを作製し、その後、アッセイをFLIPRで読み取る30〜45分間前に希釈した。色素を載せた後、水性希釈した化合物を３つ組プレートの細胞に加え（10μl）、80μM〜0.156nMの十点濃度範囲が得られた。アッセイ中の最終DMSO濃度は1％である。アッセイの準備ができた水性プレートを調製し、Cybio液体ハンドラーで希釈した。
【０１７８】
色素を載せた細胞を、アルゴンレーザーの488nm系を用いて色素を励起させるFLIPR384（Molecular Devices、カリフォルニア州Sunnyvale）で読み取った。発光は、540±30nmの帯域通過フィルターを用いてフィルタリングした。66mMのK2SO4および1.3mMのTl2SO4（Sigma／Aldrich）を含む20μl／ウェルのEPバッファーを加えることによって、hERGチャネルが開くように刺激した。それぞれのプレートについて、データを12秒間の間、毎秒収集し、この時点でTl+含有刺激バッファーを加えた。データ収集を48秒間の間、毎秒継続し、その後、さらに2分間、3秒毎に続けた。
【０１７９】
アッセイの動作範囲をブランクおよび全ウェルから決定した。全ウェル（カラム21および22）は、プレートの最大hERG活性化を定義し（試験化合物が存在しない）、ブランクのウェル（カラム23および24）は100％のhERG阻害を定義する。ブランクのウェルは、400nMの標準のhERG阻害剤ドフェチリド（Ficker, et al.、1998）またはE-4031のどちらかを含む。オンラインFLIPRソフトウェアを用いて、それぞれの試料ウェルの生データ点を、最初に細胞／シグナルのばらつき、陰性対照（ブランク）バックグラウンドについて補正し、陽性対照（全ウェル）に対して正規化した。その後、Excel Fit（ID Business Solutions Limited、英国Surrey）を使用して、単点ロジスティック方程式、Ｙ＝Ａ＋((Ｂ−Ａ)／１＋((Ｃ／Ｘ)＾Ｄ)))［式中、Ａ＝最大阻害］を用いて、hERG Tl＋流束データの試験化合物の濃度応答曲線を当てはめた。データは、試験化合物の所定の条件についてTl＋流束の蛍光の変化の最大振幅を当てはめることによって、分析した。化合物の効力（IC50値）は、３つ組ウェルの平均から計算した。
【０１８０】
ナトリウムチャネル、部位２結合アッセイ
W. A. Catterall, et al.、J. Biol. Chem.、1981、256、8922も参照されたい。標準の結合バッファーは、50mMのHEPES、50mMのトリス-HCl、pH7.4、130mMの塩化コリン、5.4mMのKCl、0.8mMのMgCl2、5.5mMのグルコース、40μg/mLのLqTを含んでいた。結合反応は、シナプトソーム（ウィスターラットの脳から調製）を、標準の結合バッファー中の5nMの［3H］-バトラコトキシンおよび望ましい濃度の試験する化合物を含む反応混合物に加えることによって、開始させた。その後、試料を混合し、37℃で60分間インキュベーションした。50mMのHEPES、50mMのトリス-HCl、pH7.4、1.8mMのCaCl2、0.8mMのMgCl2および１mg／mLのウシ血清アルブミンを含む氷冷洗浄バッファーを加えることによって反応を停止させた。シナプトソームをすぐにガラスファイバーフィルター上に回収し、洗浄バッファーで３回洗浄した。液体シンチレーション分光計を用いて、フィルター上に残った［3H］-バトラコトキシンの放射活性を計数した。
【０１８１】
平行人工膜透過性アッセイ（PAMPA）
平行人工膜透過性アッセイ（PAMPA）は、胃腸管（GIT）脂質と呼ばれる特別に配合したレシチン系の脂質の組合せからなる。GIT脂質を用いて、Caco-2アッセイで用いるものに類似のサンドイッチプレートアセンブリに膜を形成する。GIT脂質は、ヒトにおいて受動的に吸収されることが知られている標準の化合物によって測定すると、インビボの膜の組成および性能に非常に似ている。PAMPAは、発見化合物の透過性スクリーニングのインビトロモデルとして幅広く使用されている。PAMPA膜を通る化合物の通過速度を用いて、化合物のインビボの受動的透過性と関連させることができる透過性係数（Pc）を決定する。
【０１８２】
特定の化合物の透過性係数（Pc）はpH依存性の設定で試験し、頂点および側底のpHは7.4である。すべての実験は３つ組の決定で実施する。
【０１８３】
化合物（100％のDMSO中に10mMのストック）を、pH7.4のドナーウェルバッファー（pIONカタログ番号110151）中で1：100に希釈し、1％のDMSO中の100μMのアッセイ溶液を得た。ドナーウェルバッファー中で希釈した化合物をWhatman Unifilterプレートに移し、濾過した後、200μlをアッセイプレート（pIONカタログ番号110163）のドナーウェルに分注した。PAMPA膜は、4μlの脂質溶液（pIONカタログ番号110169）をフィルタープレート（VWR カタログ番号13503)上にピペットで操作することによって形成した。その後、膜を200μlのアクセプターウェルバッファー、pH7.4（pIONカタログ番号110139）で覆った。PAMPAアッセイプレート（ドナー側およびアクセプター側）を合わせ、室温で４時間インキュベーションさせた。その後、プレートを分解し、分光光度計プレート（VWR カタログ番号655801）を満たした（150μl／ウェル）。ドナー、アクセプター、参照、およびブランクのプレートを、SpectraMax UVプレートリーダーで読み取った。データは、スペクトルおよび生じたPc値を解析するpIONソフトウェアで収集した。
【０１８４】
CCR2の化学走性
ヒトCCR2の化学走性アッセイは、ヒト単球細胞系THP-1で実施した。最初に、THP-1細胞を、フェノールレッドを含まないBSAを含まないRPMI-1640（pH7.4）中の蛍光色素カルセイン-AMで、37℃で30分間、15分毎に穏やかに混合しながら標識した。その後、標識した細胞を洗浄し、化学走性バッファー（フェノールレッドを含まないRPMI-1640、0.1％のBSA、pH7.4）中に1×105個／mlで再懸濁させた。最終アッセイ濃度の範囲が0.01nM〜1μMとなるように、試験化合物を化学走性バッファー中で希釈した。リガンドMCP-1（PeproTech Inc.）を化学走性バッファーで20nMまで希釈した。アッセイを行うために、等容量の試験化合物希釈液を等容量の標識したTHP-1細胞と混合し（混合物１）、等容量の試験化合物希釈液を等容量の希釈したMCP-1リガンドと混合した（混合物２）。どちらの混合物も、37℃で10分間、独立してインキュベーションし、次いで穏やかに混合した。その後、50μlの混合物１を上部チャンバに入れ、225μlの混合物２を下部チャンバに入れることによって、MCP-1誘導性化学走性を化学走性プレート（Becton Dickinson）中で測定した。プレートに蓋をし、37℃で30分間インキュベーションした。30分後、プレートをCytofluorで読み取った。すべての条件は２つ組で試験した。シグナル対ノイズの決定には、50μlの標識したTHP-1細胞を単独で上部チャンバに入れ（5×104個／ウェル）、225μlのリガンドMCP-1を単独で下部チャンバに入れた（最終濃度10nM）。段階的な濃度の試験化合物によって達成される阻害を、化合物を含まないMCP-1対照の割合として計算した。IC50とは、細胞の化学走性の50％の阻害に達するために必要な試験化合物の濃度と定義される。
【０１８５】
hERGパッチクランプ
全細胞パッチクランプを用いて、クローニングしたhERGカリウムチャネルαサブユニットを安定して発現しているHEK-293細胞におけるhERG電流を直接測定した。化合物は、pH7.4の水性バッファー中、室温で試験した。反復試験パルス（0.05Hz）を-80mV〜＋20mVの保持電位で２秒間適用し、電位を-65mVまでステップさせることによって、試験パルス後にテール電流を誘発した。化合物からの効果は、ピークテール電流の阻害を測定することによって計算した。
【０１８６】
ナトリウムチャネルパッチクランプ
全細胞パッチクランプを用いて、ヒト心臓ナトリウムチャネルSCN5Aを発現しているHEK-293細胞における内向ナトリウム電流を直接測定した。化合物は、タンパク質を含まない水性バッファーで試験した。定常状態阻害を決定するために、以下の電位プロトコルを用いてナトリウム電流を５秒毎に誘発した：細胞を-90mVの電位に保持し、-20mVまで60msステップさせた。効果は、-20mVまでの試験パルス中のピーク電流の阻害を測定することによって計算した。速度依存性の阻害は、1Hzおよび4Hzの周波数での刺激によって評価した。
【０１８７】
ラットにおける単一用量薬物動態学
オスのスプラーグ-ドーリーラット（250〜300g）を薬物動態学研究に用いた。PO投薬前にラットを終夜絶食させ、投薬の４時間後に給餌した。血液試料（約0.3mLまで）を頸静脈からK2EDTA含有チューブ内に採取し、その後、4℃で遠心分離して（1500〜2000×g）血漿が得られた。経口生体利用度の研究では、2群の動物（N＝2〜3／群）に、頸静脈からの静脈内（IV）インフュージョン（10分間にわたる）として、または経口胃管栄養法によって試験化合物を与えた。一連の血液試料が、投薬の0.17（IVのみ）、0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、および24時間後に得られた。4℃での遠心分離（1500〜2000×g）によって得られた血漿試料は、LC／MS／MSによって分析するまで-20℃で保管した。
【０１８８】
サルにおける単一用量薬物動態学
様々な試験化合物の薬物動態学を、オスのカニクイザルにおいてクロスオーバーの設計で評価した。PO投薬前にサルを終夜絶食させ、投薬の４時間後に給餌した。１〜３匹の動物（3〜5kg）の群に、大腿静脈からのIVインフュージョン（10分間にわたる）によって、および経口胃管栄養法によって化合物を与え、処置間に１週間の洗い流しを用いた。一連の血液試料（〜0.3mL）を、大腿動脈から、投薬の0.17（IVのみ）、0.25、0.5、0.75、1、2、4、6、8、および24時間後に採取し、4℃で遠心分離して（1500〜2000×g）血漿が得られた。試料は、LC／MS／MSによって分析するまで-20℃で保管した。
【０１８９】
薬物動態学アッセイ用のデータ分析
薬物動態学パラメータは、血漿濃度対時間データの非区画分析によって得た（KINETICA（商標）ソフトウェア、バージョン4.2、InnaPhase Corporation、ペンシルバニア州Philadelphia）。ピーク濃度（Cmax）およびCmaxの時間は、実験観察から直接記録した。時間0から最後のサンプリング時間までの曲線下面積（AUC（0〜T））は、直線およびログ台形総和の組合せを用いて計算した。全血漿クリアランス（CLTp）、定常状態分布容量（Vss）、見かけ上の排出半減期（T1／2）および平均滞留時間（MRT）を、IV投与後に推定した。T1／2の推定は、定量可能な濃度を有する最低３つの時点を用いて行った。絶対経口生体利用度（F）は、経口およびIV投薬後の、用量で正規化したAUC値の比として推定した。
【０１９０】
THP-1結合
該ヒトCCR2結合アッセイをまた、125I-ヒトMCP-1を該トレーサーリガンドとして用いて、該THP-1ヒト単球性白血病細胞種（これは内在性CCR2を発現する）を用いて確立させた。CCR2受容体に対する試験化合物の結合親和性を評価するために、放射性リガンド競合結合アッセイを用いた。放射性リガンド競合試験のために、2.5×105個のTHP-1細胞／ウェル(50mM HEPES、pH7.4、5mM MgCl2、1mM CaCl2および0.5％BSAを含有するアッセイバッファー中)を含む100μlを3-倍連続希釈した試験化合物（最終濃度が5μM〜100pMの範囲）が入った96-ウェルアッセイプレートに加えた。その後に、50μlの125I-MCP-1放射性リガンドを、最終濃度0.2nMにて、アッセイバッファー中で、該反応物に加えた。室温での90分間のインキュベーション時間の後、該結合反応をGF／Bフィルタープレート(PerkinElmer カタログ番号6005177)で収集することによって終了し、続いて氷冷洗浄バッファー(50mM HEPES, pH7.4, 0.1％BSA, 0.5M NaCl)で洗浄し、非結合リガンドを除去した。洗浄後、該プレートを60℃にて45分間乾燥し、続いて40μlのMicroScint 20シンチレーション液を添加し、密閉し、該Packard TopCountリーダーで分析した。非特異的結合を手持のCCR2小分子アンタゴニスト(実施例2k, WO2005021500; CCR2 IC50＝2nM) 10μM(5000倍を上回るモル濃度)の存在下で決定した。125I-MCP-1の特異的結合を全結合および非特異的結合の間の差として算出した。該競合データを試験化合物(全シグナルのパーセント)が無い場合に放射性リガンド特異的結合の阻害パーセンテージとしてプロットした。非特異的結合について修正した後、IC50値を決定した。IC50は、125I-MCP-1特異的結合を50％低下するのに必要とされる試験化合物の濃度と定義され、該４パラメーターロジスティック方程式を用いて計算し、該正規化データに適合させた。
【０１９１】
以下に、上述したアッセイで測定されたそれぞれの化合物のデータが示される。
【表１】
2009544757.tif 000017
【表２】
2009544757.tif 000018
【表３】
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【表４】
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【表５】
2009544757.tif 000021
【０１９２】
有用性
実施例の代表的な化合物は、当業者によって知られているアッセイを用いて、ケモカイン受容体活性のモジュレーターであることが示されている。本セクションでは、そのようなアッセイを記載し、その参考文献を与える。さらなるアッセイは、本明細書中に、上記の題名「比較薬理学的特徴」のセクションに記載されている。MCP-1拮抗のこれらのアッセイにおいて活性を示すことによって、実施例の化合物は、ケモカインおよびその同族受容体に関連するヒトの疾患の治療に有用であることが期待される。これらのアッセイにおける活性の定義とは、特定のアッセイで測定した場合に30μM以下の濃度のIC50を実証する化合物である。
【０１９３】
ヒトPBMCに対するMCP-1の結合の拮抗
（Yoshimura et al.、J. Immunol.、1990、145、292）
実施例中に記載する少なくとも１つの化合物が、本明細書中に記載するヒトPBMC（ヒト末梢血単核細胞）に対するMCP-1の結合の拮抗において活性を有する。
【０１９４】
Milliporeフィルタープレート（＃MABVN1250）を、100μlの結合バッファー（RPMI1640培地中に0.5％のウシ血清アルブミン、20mMのHEPESバッファーおよび５mMの塩化マグネシウム）で、30分間、室温で処理する。結合を測定するために、既知の濃度の化合物を含むまたは含まない50μlの結合バッファーを、50μlの125-Iで標識したヒトMCP-1（150ｐＭの放射性リガンドの最終濃度を得るため）および5×105個の細胞を含む50μlの結合バッファーと合わせる。そのような結合アッセイに用いる細胞には、フィコール-Hypaque勾配遠心分離によって単離したヒト末梢血単核細胞、ヒト単球（Weiner et al.、J. Immunol. Methods.、1980、36、89）、または内在性受容体を発現するＴＨＰ-1細胞系が含まれることができる。化合物、細胞および放射性リガンドの混合物を、室温で30分間インキュベーションする。プレートを真空の多岐管上に置き、真空を適用し、プレートを、0.5MのNaClを含む結合バッファーで３回洗浄する。プラスチックスカートをプレートから取り外し、プレートを空気乾燥させ、ウェルを打ち抜いて計数する。任意の競合化合物が存在しない場合に得られる合計数および試験化合物の代わりに100nMのMCP-1を加えることによって決定されるバックグラウンド結合を用いて、結合の％阻害を計算する。
【０１９５】
MCP-1誘導性のカルシウム流入の拮抗
(Sullivan, et al.、Methods Mol. Biol. 1999、114、125〜133)
実施例中に記載する少なくとも１つの化合物が、本明細書中に記載するMCP-1誘導性のカルシウム流入アッセイの拮抗において活性を有する。
【０１９６】
カルシウム動員は、蛍光Ca2＋指示薬色素Fluo-3を用いて測定する。細胞を、8×105個の細胞／mlで、0.1％のウシ血清アルブミン、20mMのHEPESバッファー、5mMのグルコース、1％のウシ胎児血清、4μMのFluo-3AMおよび2.5mMのプロベネシドを含むリン酸緩衝生理食塩水中、60分間37℃でインキュベーションする。そのようなカルシウムアッセイで使用する細胞には、Weiner et al.、J. Immunol. Methods 1990、36、89〜97によって記載されているように単離したヒト単球、またはTHP-1およびMonoMac-6などの内在性CCR2受容体を発現する細胞系が含まれることができる。その後、細胞を、0.1％のウシ血清アルブミン、20mMのHEPES、5mMのグルコースおよび2.5mMのプロベネシドを含むリン酸緩衝生理食塩水で３回洗浄する。細胞を、0.5％のウシ血清アルブミン、20mMのHEPESおよび2.5mMのプロベネシドを含むリン酸緩衝生理食塩水に、2〜4×106個の細胞／mlの最終濃度で再懸濁させる。細胞を96ウェルの黒色壁のマイクロプレートに播種し（100μl／ウェル）、プレートを200×gで5分間遠心分離する。様々な濃度の化合物をウェルに加え（50μl／ウェル）、5分後、50μl／ウェルのMCP-1を加えて10nMの最終濃度が得られる。カルシウム動員は、蛍光イメージングプレートリーダーを用いることによって検出する。細胞単層をアルゴンレーザー（488nM）で励起させ、細胞に関連する蛍光を3分間測定する（最初の90秒間は毎秒、次の90秒間は10秒毎）。データは任意の蛍光単位として生じ、それぞれのウェルの蛍光の変化を最大-最小の差異として決定する。化合物依存性の阻害は、MCP-1単独での応答と比較して計算する。
【０１９７】
MCP-1誘導性のヒトPBMC化学走性の拮抗
（Bacon et al.、Brit. J. Pharmacol.、1988、95、966）
実施例中に記載する少なくとも１つの化合物が、本明細書中に記載のMCP-1誘導性のヒトPBMC化学走性アッセイの拮抗において活性を有する。
【０１９８】
神経プローブMBA96の96ウェル化学走性チャンバ、Polyfiltronics  MPC  96ウェルプレート、および神経プローブポリビニルピロリドンを含まないポリカーボネートPFD5の8ミクロンフィルターを、37℃のインキュベーター内で温める。標準のフィコール密度分離方法によって新鮮なものを単離したヒト末梢血単核細胞（PBMC）（Boyum et al.、Scand. J. Clin. Lab Invest. Suppl.、1968、97、31）を、DMEM中に1×107個の細胞／mlで懸濁させ、37℃で温める。ヒトMCP-1の60nMの溶液も37℃で暖める。試験化合物の希釈液を、DMEM中に必要な濃度の2×で作製する。PBMC懸濁液および60nmのMCP-1溶液を、予熱したDMEMを含むポリプロピレンチューブ内で、試験化合物を希釈してまたは希釈せずに、1：1で混合する。これらの混合物は、37℃チューブ加温器内で温める。アッセイを開始するためには、MCP-1／化合物の混合物を、神経プローブ化学走性チャンバの下部分内に入れたPolyfiltronics  MPC  96ウェルプレートのウェルに加える。概ねの容量はそれぞれのウェルに400μlであり、分注後に正メニスカスがあるはずである。8ミクロンのフィルターを96ウェルプレートの上に穏やかに置き、ゴムのガスケットを上部チャンバの底部に装着し、チャンバを組み立てる。細胞懸濁液／化合物の混合物の200μl容量を上部チャンバの適切なウェルに加える。上部チャンバをプレートシーラーで覆い、組み立てたユニットを37℃のインキュベーター内に45分間置く。インキュベーション後、プレートシーラーを取り外し、残った細胞懸濁液をすべて吸引して除去する。チャンバを分解し、フィルターを穏やかに取り外す。フィルターを90°の角度に保ちながら、穏やかな流れのリン酸緩衝生理食塩水を用いて遊走しなかった細胞を洗浄して除去し、フィルターの上部をゴムスキージの先端で拭う。この洗浄をさらに２回繰り返す。フィルターを空気乾燥させ、その後、Wright  Geimsa染色に45秒間、完全に浸す。その後、蒸留水に7分間浸し、その後、15秒間新鮮な蒸留水でさらに洗浄することによって、フィルターを洗浄する。フィルターを再度空気乾燥させる。フィルター上の遊走した細胞を視覚的顕微鏡観察によって定量する。
【０１９９】
哺乳動物ケモカイン受容体は、ヒトなどの哺乳動物において免疫細胞機能に干渉するまたはそれを促進するための標的を提供する。ケモカイン受容体の機能を阻害または促進する化合物が、治療目的のための免疫細胞機能の変調に特に有用である。したがって、本発明は、喘息およびアレルギー性疾患、病原性微生物（定義によりウイルスが含まれる）による感染症、ならびに関節リウマチおよびアテローム性動脈硬化症などの自己免疫病理を含めた、様々な炎症性、感染性、および免疫調節性の障害および疾患の予防および／または治療に有用な化合物に向けられている。
【０２００】
たとえば、哺乳動物ケモカイン受容体（たとえばヒトケモカイン受容体）の１つまたは複数の機能を阻害する本発明の化合物を、炎症または感染症を阻害（すなわち、軽減または予防）するために投与し得る。その結果、白血球の遊出、接着、化学走性、開口分泌（たとえば酵素ヒスタミンの）または炎症伝達物質の放出などの、１つまたは複数の炎症プロセスが阻害される。
【０２０１】
同様に、哺乳動物ケモカイン受容体（たとえばヒトケモカイン）の１つまたは複数の機能を促進する本発明の化合物は、白血球の遊出、接着、化学走性、開口分泌（たとえば酵素ヒスタミンの）または炎症伝達物質の放出などの免疫または炎症反応を刺激（誘発または増強）させるために投与し、これは、炎症プロセスの有益な刺激をもたらす。たとえば、寄生生物感染症と戦うために好酸球を動員することができる。さらに、前述の炎症性、アレルギー性および自己免疫性の疾患の治療も、ケモカイン受容体の内部移行の誘導によって細胞上の受容体発現の損失を引く起こすために十分な化合物のデリバリー、または細胞遊走の誤った指示をもたらす様式の化合物デリバリーを企図する場合は、哺乳動物ケモカイン受容体の１つまたは複数の機能を促進する本発明の化合物について企図することができる。
【０２０２】
ヒトなどの霊長類に加えて、様々な他の哺乳動物を、本発明の方法に従って治療することができる。たとえば、それだけには限定されないが、ウシ、ヒツジ、ヤギ、ウマ、イヌ、ネコ、モルモット、ラットまたは他のウシ科動物、ヒツジ科動物、ウマ科動物、イヌ科動物、ネコ科動物、げっ歯類もしくはネズミ種を含めた哺乳動物を治療することができる。しかし、本方法は、トリ種などの他の種でも実施することができる。上記方法で治療した対象は、ケモカイン受容体活性の変調が所望される、オスまたはメスの哺乳動物である。本明細書中で使用する「変調」とは、拮抗、アゴニズム、部分的拮抗および／または部分的アゴニズムを包含することを意図する。
【０２０３】
CCR5結合および機能的アッセイ
細胞誘導体化および細胞培養
内在性CCケモカイン受容体5（CCR5）を安定して発現しているHT1080細胞のプールを、Harrington、Sherf、およびRundlettによって概要が示された方法を用いて開発した（米国特許ＵＳ6,361,972号およびUS6,410,266号を参照）。最も高発現のクローンを、反復フローサイトメトリー、次いでサブクローニングを用いて単離した。その後、これらの細胞を、6ウェルの皿中、3×105個の細胞／ウェルで培養し、キメラのＨＡタグ付けしたＧタンパク質Gqi5を含むDNAベクターで形質移入した（Molecular Devices；15マイクロLのFermentesのEx-Gen中に５マイクログラムの直鎖状にしたベクターDNAを形質移入に用いた）。形質移入の２日後、ウェルを合わせ、P100プレートに播種した。播種の７日後、コロニーを拾い、拡大させ、ウエスタンブロットによってGqi5含有量について分析した。高発現のGqi5（形質移入から）およびCCR5（内在性）を有するクローン（3559.1.6と呼ぶ）を選択し、以下に記載の実験で用いた。HT1080細胞（クローン3559.1.6）を、10％の透析ウシ胎児血清、2％のペニシリン／ストレプトマイシン／グルタミン、および500マイクログラム／mLのハイグロマイシンB（最終濃度）を添加したα-MEMを用いて、37℃、5％のCO2で、加湿雰囲気中で培養した。
【０２０４】
膜の調製
1×108個のHT1080細胞（クローン3559.1.6）含む細胞ペレットを、5mLの氷冷膜調製バッファー（50mMのHEPES、５mMのMgCl2、1mMのCaCl2）に再懸濁させ、Polytronホモジナイザーで、高速で20秒間、氷上でホモジナイズした。ホモジネートをさらに25mLの膜調製バッファーで希釈し、12分間遠心分離した（48,000×g、4℃）。細胞ペレットを5mLの膜調製バッファーに再懸濁させた後、既に記載したように再度ホモジナイズした。ホモジネートを5mLの膜調製バッファーで希釈し、CCR5タンパク質濃度についてアッセイした。
【０２０５】
結合アッセイ
上述の膜の調製からの新しく調製したホモジネートを、結合バッファー（50mMのHEPES、5mMのMgCl2、１mMのCaCl2、0.1％のBSA；アッセイ前に１個の完全なプロテアーゼ阻害剤錠剤を加えた）中で希釈して、10マイクログラム／ウェル（Corning，Inc.の無地の白色96ウェルプレート）の最終タンパク質濃度を達成した。この膜調製物をWGA-SPAビーズ（Amerhsam；結合バッファーに事前に浸した）と混合して、200マイクログラム／ウェルの濃度が得られた。その後、膜／SPAビーズ混合物（100マイクロリットル／ウェル）を、様々な濃度の被験物質を含む2マイクロリットルのDMSO（陰性対照には純粋なDMSO；被験物質には様々な濃度の本発明の実施例；陽性対照として500nMのMIP-1β）で事前にドットしたプレートに加えた。結合アッセイは、50マイクロリットルの［125I］-MIP-1β（Perkin Elmer；物質は、50マイクロリットル／ウェルを加えることによって0.1nMの最終濃度の［125I］-MIP-1βが得られるように結合バッファー中で希釈した）を加えることで開始した。プレートを密閉し、室温で4〜6時間静置した後、Packard TopCountで計数した。それぞれの実験のウィンドウを定義するために陰性および陽性対照を使用して、被験物質の％結合を計算した。
【０２０６】
蛍光イメージングプレートリーダー（FLIPR）に基づいた機能的アッセイ
HT1080細胞（クローン3559.1.6）を、10,000個の細胞／ウェル（30マイクロリットル）で、384ウェルプレート（黒色／透明の底部のBiocoat PDL、Beckton Dickinson）に播種し、30マイクロリットル／ウェルのFluro-4AM蛍光色素（1mgのFluro-4AMを440マイクロリットルのDMSOに溶かし、100マイクロリットルのプルロニック溶液で希釈した後、10mLのハンクスバッファーでさらに希釈することによって調製）を入れた。細胞を、37℃、5％のCO2で30分間インキュベーションした後、3回洗浄し、アッセイバッファー（20mMのHEPES、1.2mMのCaCl2、5mMのMgCl2、2.5mMのプロベネシド、0.5％のＢＳA、1×ハンクス）に懸濁させた。被験物質をDMSO中で段階希釈し、その後、アッセイバッファーで1：10に希釈した後、細胞に加えた（10マイクロリットル／ウェル）。FLIPRを用いて、流束（すなわち作用活性）の導入についてプレートを読み取った（10〜70秒間）。その後、細胞に作用剤溶液をさらに入れ（30マイクロリットル／ウェル；30マイクロリットルの100マイクロモーラーのMIP-1βを100mLのアッセイバッファーで希釈することによって調製；このプロトコルにより、アッセイにおいて５nMのMIP-1βの最終濃度がデリバリーされる）、FLIPRを用いてプレートを１分間読み取った。被験物質の拮抗活性は、0.4％のDMSO／バッファーの陰性対照と比較して決定した。
【０２０７】
本開示の少なくとも１つの化合物は、CCR2およびCCR5の両方の阻害剤であり、どちらのケモカインと関連している疾患を治療するためにも用い得る。本発明のこれらの化合物は二重拮抗剤とみなされる。
【０２０８】
ケモカイン受容体の機能の阻害剤で治療することができるヒトまたは他の種の疾患または状態には、それだけには限定されないが、喘息、アレルギー性鼻炎、過敏症肺疾患、過敏性肺炎、好酸球性蜂窩織炎（たとえばウェルズ症候群）、好酸球性肺炎（たとえば、レフラー症候群、慢性好酸球性肺炎）、好酸球性筋膜炎（たとえばシュルマン症候群）、遅延型過敏症、間質性肺疾患（ILD）（たとえば、特発性肺線維症、または関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、強直性脊椎炎、全身性硬化症、シェーグレン症候群、多発性筋炎もしくは皮膚筋炎に関連するILD）などの呼吸アレルギー性疾患；全身性アナフィラキシーまたは過敏症応答、薬物アレルギー（たとえば、ペニシリン、セファロスポリンに対する）、汚染トリプトファンの摂取による好酸球増加症-筋痛症候群、昆虫刺傷アレルギー；関節リウマチ、乾癬性関節炎、多発性硬化症、全身性エリテマトーデス、重症筋無力症、若年発症糖尿病などの自己免疫疾患；糸球体腎炎、自己免疫甲状腺炎、ベーチェット病；同種移植片拒絶または移植片対宿主病を含めた移植片拒絶（たとえば移植における）；クローン病および潰瘍性大腸炎などの炎症性腸疾患；脊髄関節症；強皮症；乾癬（Ｔ細胞媒介性乾癬を含む）および皮膚炎、湿疹、アトピー性皮膚炎、アレルギー性接触皮膚炎、蕁麻疹などの炎症性皮膚疾患；血管炎（たとえば、壊死性、皮膚、および過敏症の血管炎）；好酸球性筋炎、好酸球性筋膜炎；皮膚または器官の白血球浸潤を伴う癌を含めた、炎症性またはアレルギー性の疾患および状態が含まれる。それだけには限定されないが、再灌流傷害、アテローム性動脈硬化症、特定の血液悪性疾患、サイトカイン誘発毒性（たとえば、敗血症性ショック、内毒素ショック）、多発性筋炎、皮膚筋炎を含めた、望ましくない炎症反応を阻害すべき他の疾患または状態を治療することができる。ケモカイン受容体の機能の阻害剤で治療することができるヒトまたは他の種の感染症または状態には、それだけには限定されないが、HIVが含まれる。
【０２０９】
ケモカイン受容体の機能のプロモーターで治療することができるヒトまたは他の種の疾患または状態には、それだけには限定されないが：AIDSまたは他のウイルス感染症などに罹患している個体、免疫抑制を引き起こす、放射線療法、化学療法、自己免疫疾患の治療または薬物療法（たとえばコルチコステロイド治療）を受けている個体などにおける免疫抑制；受容体の機能の先天性欠損または他の原因による免疫抑制; および、それだけには限定されないが、線形動物（線虫）；（鞭虫、蟯虫、回虫、鈎虫、糞線虫、旋毛虫、糸状虫）；吸虫（trematode）（吸虫（fluke））（住血吸虫症、肝吸虫症）、条虫（cestode）（条虫（tape worm））（エキノコックス、無鉤条虫、嚢虫）；内臓虫（visceral worm）、臓器幼虫移行症（たとえばトキソカラ）、好酸球性胃腸炎（たとえば、アニサキsp.、フォカネマ（Phocanema）sp.）、皮膚幼虫偏頭痛（ブラジル鉤虫、イヌ鉤虫）などの蠕虫感染症を含めた寄生虫疾患等の感染症疾患が含まれる。したがって、本発明の化合物は、様々な炎症性、感染性および免疫調節性の障害および疾患の、予防および治療に有用である。
【０２１０】
さらに、前述の炎症性、アレルギー性および自己免疫性の疾患の治療も、ケモカイン受容体の内部移行の誘導によって細胞上の受容体発現の損失を引き起こすために十分な化合物のデリバリー、または細胞遊走の誤った指示をもたらす様式の化合物デリバリーを企図する場合は、ケモカイン受容体の機能のプロモーターについて企図することができる。
【０２１１】
別の態様では、本発明を用いて、Ｇタンパク質共役型受容体の推定上の特異的作用剤または拮抗剤を評価し得る。本発明は、ケモカイン受容体の活性を変調する化合物のスクリーニングアッセイの調製および実行における、これらの化合物の使用に向けられている。さらに、本発明の化合物は、他の化合物とケモカイン受容体との結合部位を、たとえば競合的阻害によって確立もしくは決定するため、または、その既知の活性を、未知の活性を有する化合物と比較するアッセイにおける参照として、有用である。新しいアッセイまたはプロトコルを開発する際、本発明による化合物を用いて、その有効性を試験することができる。具体的には、そのような化合物を、市販のキット、たとえば、前述の疾患に関連する医薬研究で使用するためのキット中に提供し得る。また、本発明の化合物は、ケモカイン受容体の推定上の特異的モジュレーターの評価にも有用である。さらに、本発明の化合物は、結合しない化合物の例として、または、相互作用の特異的部位の定義に役立ち得る、これらの受容体に対して活性を有する化合物の構造的変異体として役割を果たすことによって、ケモカイン受容体でないと考えられているＧタンパク質共役型受容体の特異性を検査するために利用することができる。
【０２１２】
本明細書中に開示する化合物は、関節リウマチ、骨関節炎、敗血症性ショック、アテローム性動脈硬化症、動脈瘤、発熱、心血管作用、血行動態ショック、敗血症症候群、虚血後再灌流障害、マラリア、クローン病、炎症性腸疾患、マイコバクテリア感染症、髄膜炎、乾癬、鬱血性心不全、線維性疾患、悪液質、移植片拒絶、自己免疫疾患、皮膚炎症性疾患、多発性硬化症、放射線損傷、過酸素症肺胞傷害、HIV、HIV認知症、インスリン非依存性真性糖尿病、喘息、アレルギー性鼻炎、アトピー性皮膚炎、特発性肺線維症、水疱性類天疱瘡、寄生蠕虫感染症、アレルギー性大腸炎、湿疹、結膜炎、移植、家族性好酸球増加症、好酸球性蜂窩織炎、好酸球性肺炎、好酸球性筋膜炎、好酸球性胃腸炎、薬物誘導好酸球増加症、嚢胞性線維症、チャーグ-ストラウス症候群、リンパ腫、ホジキン病、結腸癌、フェルティ症候群、サルコイドーシス、ブドウ膜炎、アルツハイマー、糸球体腎炎、および全身性エリテマトーデス、食道扁平細胞癌、神経因性疼痛、ならびに肥満症から選択される障害の治療または予防に有用である。
【０２１３】
別の態様では、化合物は、関節リウマチ、骨関節炎、アテローム性動脈硬化症、動脈瘤、発熱、心血管作用、クローン病、炎症性腸疾患、乾癬、鬱血性心不全、多発性硬化症、自己免疫疾患、皮膚炎症性疾患から選択される炎症性障害の治療または予防に有用である。
【０２１４】
別の態様では、化合物は、関節リウマチ、骨関節炎、アテローム性動脈硬化症、クローン病、炎症性腸疾患、および多発性硬化症から選択される炎症性障害の治療または予防に使用する。
【０２１５】
別の態様では、本明細書中に開示する実施例は、それだけには限定されないが、以下を含めた様々な癌の治療に有用であり得る：
膀胱（加速および転移性膀胱癌を含む）、乳房、結腸（結腸直腸癌を含む）、腎臓、肝臓、肺（小細胞や非小細胞肺癌、および肺腺癌を含む）、卵巣、前立腺、精巣、尿生殖路、リンパ系、直腸、喉頭、膵臓（外分泌膵癌を含む）、食道、胃、胆嚢、子宮頸部、甲状腺、ならびに皮膚（扁平細胞癌を含む）を含めた癌；
白血病、急性リンパ性白血病、急性リンパ芽球性白血病、Ｂ細胞リンパ腫、Ｔ細胞リンパ腫、ホジキンリンパ腫、非ホジキンリンパ腫、有毛細胞リンパ腫、組織球性リンパ腫、およびバーケットリンパ腫を含めたリンパ系統の造血腫瘍；
急性および慢性の骨髄性白血病、脊髄形成異常症候群、骨髄性白血病、ならびに前骨髄急性白血病を含めた骨髄系統の造血腫瘍；
星細胞腫、神経芽細胞腫、神経膠腫、およびシュワン腫を含めた中枢および末梢神経系の腫瘍；
線維肉腫、横紋筋肉腫、および骨肉腫を含めた間葉起源の腫瘍；
黒色腫、色素性乾皮症、ケラトアクタントーマ、精上皮腫、甲状腺濾胞性癌、および奇形癌を含めた他の腫瘍。
【０２１６】
別の態様では、本発明は、乳癌、肝臓癌、前立腺癌、および黒色腫から選択される癌を治療する方法を開示する。さらに、本明細書中に開示する化合物は、卵巣癌および多発性骨髄腫の治療に有用であり得る。
【０２１７】
本発明は、様々な非癌性増殖性疾患を治療する方法を提供する。
【０２１８】
喘息およびアレルギー性疾患、ならびに関節リウマチやアテローム性動脈硬化症などの自己免疫病理および上述の病理を含めた、炎症性、感染性および免疫調節性の障害および疾患を予防および治療するための組合せ治療は、本発明の化合物と、そのような利用が知られている他の化合物との組合せによって例示される。たとえば、炎症の治療または予防では、本発明の化合物は、オピエート作用剤、リポキシゲナーゼ阻害剤、シクロオキシゲナーゼ-2阻害剤、インターロイキン-1阻害剤などのインターロイキン阻害剤、腫瘍壊死因子阻害剤、ＮＭＤＡ拮抗剤、一酸化窒素阻害剤または一酸化窒素の合成阻害剤、非ステロイド性抗炎症剤、ホスホジエステラーゼ阻害剤、あるいはサイトカイン抑制抗炎症剤などの抗炎症剤または鎮痛剤と併せて、たとえばアセトアミノフェン、アスピリン、コデイン、フェンタインル、イブプロフェン、インドメタシン、ケトロラック、モルヒネ、ナプロキセン、フェナセチン、ピロキシカム、ステロイド鎮痛剤、スフェンタニル、サンリンダック、インターフェロンαなどの化合物と併せて、使用し得る。同様に、本発明の化合物は、疼痛緩和剤；カフェイン、H2-拮抗剤、シメチコン、水酸化アルミニウムまたはマグネシウムなどの増強剤；フェニレフリン、フェニルプロパノールアミン、プソイドフェドリン、オキシメタゾリン、エフィネフリン、ナファゾリン、キシロメタゾリン、プロピルヘキセドリン、またはレボデスオキシ-エフェドリンなどの鬱血除去剤; およびコデイン、ヒドロコドン、カラミフェン、カルベタペンタン、またはデキストラメトルファンなどの鎮咳剤；利尿剤；ならびに鎮静性または非鎮静性抗ヒスタミン剤と共に投与し得る。同様に、本明細書中に開示する化合物は、本発明の化合物が有用な疾患または状態の治療／予防／抑制または寛解に用いられている他の薬物と組み合わせて使用し得る。そのような他の薬物は、それについて一般的に使用されている経路および量で、本発明の化合物と同時にまたは逐次的に投与し得る。化合物を１つまたは複数の他の薬物と同時に使用する場合、本発明の化合物に加えてそのような他の薬物を含む医薬組成物を使用し得る。したがって、医薬組成物には、本開示の化合物に加えて１つまたは複数の他の活性成分も含むものが含まれる。
【０２１９】
本発明の化合物と組み合わせ得る、別々にまたは同じ医薬組成物中で投与する他の活性成分の例には、それだけには限定されないが：（ａ）セレクチン、ICAMおよびVLA-4に対するものなどのインテグリン拮抗剤；（ｂ）ベクロメタゾン、メチルプレドニゾロン、ベータメタゾン、プレドニゾン、デキサメタゾン、およびヒドロコルチゾンなどのステロイド；（ｃ）シクロスポリン、タクロリムス、ラパマイシンおよび他のＦＫ-5０６型免疫抑制剤などの免疫抑制剤；（ｄ）ブロモフェニラミン、クロルフェニルアミン、デキスクロルフェニルアミン、トリプロリジン、クレマスチン、ジフェンヒドラミン、ジフェニルピラリン、トリペレナミン、ヒドロキシジン、メトジラジン、プロメタジン、トリメプラジン、アザタジン、シプロヘプタジン、アンタゾリン、フェニラミンピリラミン、アステミゾール、テルフェナジン、ロラタジン、セチリジン、フェキソフェナジン、デスカルボエトキシロラタジンなどの抗ヒスタミン剤（Ｈ１-ヒスタミン拮抗剤）；（ｅ）ｂ２-作用剤（テルブタリン、メタプロテレノール、フェノテロール、イソエタリン、アルブテラール、ビトルテロール、およびピルブテロール）、テオフィリン、クロモリンナトリウム、アトロピン、臭化イプラトロピウム、ロイコトリエン拮抗剤（ザフィルルカスト、モンテルカスト、プランルカスト、イラルカスト、ポビルカスト、SKB-102,203）、ロイコトリエン生合成阻害剤（ジロートン、BAY-1005）などの非ステロイド性抗喘息剤；（ｆ）プロピオン酸誘導体（アルミノプロフェン、ベンキサプロフェン、ブクロキシン酸、カルプロフェン、フェンブフェン、フェノプロフェン、フルプロフェン、フルルビプロフェン、イブプロフェン、インドプロフェン、ケトプロフェン、ミロプロフェン、ナプロキセン、オキサプロジン、ピルプロフェン、プラノプロフェン、スプロフェン、チアプロフェン酸、およびチオキサプロフェン）、酢酸誘導体（インドメタシン、アセメタシン、アルクロフェナク、クリダナク、ジクロフェナク、フェンクロフェナク、フェンクロジン酸、フェンチアザク、フロフェナク、イブフェナック、イソキセパク、オクスピナク、スリンダク、チオピナク、トルメチン、ジドメタシン、およびゾメピラック）、フェナム酸誘導体（フルフェナム酸、メクロフェナム酸、メフェナム酸、ニフルム酸およびトルフェナム酸）、ビフェニルカルボン酸誘導体（ジフルニサルおよびフルフェニサル）、オキシカム（イソキシカム、ピロキシカム、スドキシカムおよびテノキシカン）、サリチレート（アセチルサリチル酸、スルファサラジン）ならびにピラゾロン（アパゾン、ベズピペリロン、フェプラゾン、モフェブタゾン、オキシフェンブタゾン、フェニルブタゾン）などの非ステロイド性抗炎症剤（NSAID）；（ｇ）シクロオキシゲナーゼ-2（COX-2）阻害剤；（ｈ）IV型ホスホジエステラーゼ（PDE-IV）の阻害剤；（ｉ）ケモカイン受容体の他の拮抗剤；（ｊ）HMG-COAレダクターゼ阻害剤（ロバスタチン、シンバスタチンやプラバスタチン、フルバスタチン、アトルブサタチン、および他のスタチン）、金属イオン封鎖剤（コレスチラミンおよびコレスチポール）、ニコトン酸、フェノフィブリン酸誘導体（ゲムフィブロジル、クロフィブラート、フェノフィブラ���トおよびベンザフィブラート）、ならびにプロブコールなどのコレステロール低下剤；（ｋ）インスリン、スルホニル尿素、ビグアニド（メトホルミン）、ａ-グルコシダーゼ阻害剤（アカルボース）およびグリタゾン（トログリタゾンおよびピオグリタゾン）などの抗糖尿病剤；（ｌ）インターフェロン調製物（インターフェロンα-2a、インターフェロン-2B、インターフェロンα-N3、インターフェロンβ-1ａ、インターフェロンβ-1ｂ、インターフェロンγ-1ｂ）；（ｍ）エファビレンツ、ネビラピン、インジナビル、ガンシクロビル、ラミブジン、ファムシクロビル、およびザルシタビンなどの抗ウイルス化合物；（ｏ）5-アミノサリチル酸およびそのプロドラッグなどの他の化合物、アザチオプリンおよび6-メルカプトプリンなどの代謝拮抗剤、ならびに細胞毒性がある癌化学療法剤が含まれる。本発明の化合物と第２の活性成分との重量比は変化してもよく、それぞれの成分の有効用量に依存する。
【０２２０】
一般に、それぞれの有効用量を使用する。したがって、たとえば、化合物をNSAIDと組み合わせる場合、本発明の化合物対NSAIDの重量比は、一般に約1000：1〜約1：1000の範囲、または約200：1〜約1：200の範囲である。本発明の化合物と他の活性成分との組合せも、一般に前述の範囲内にあるが、それぞれの場合について、有効用量のそれぞれの活性成分を使用すべきである。
【０２２１】
癌の治療では、化学療法剤および／または他の治療（たとえば放射線療法）の組合せが多くの場合有利である。第２の（または第３の）薬剤は、第１の治療剤と同じまたはそれと異なる作用機構を有し得る。投与する２つ以上の薬物が異なる様式で、もしくは細胞周期の異なる段階で作用する、および／または２つ以上の薬物が重複する毒性もしくは副作用を有する、および／または患者が現す特定の病状の治療において組み合わせる薬物の有効性がそれぞれ実証されている、細胞毒性がある薬物の組合せを用いることが特に有用であり得る。
【０２２２】
したがって、本明細書中に開示する化合物（または本明細書中に開示する他の式）を、他の抗癌および細胞毒性剤ならびに癌または他の増殖性疾患の治療に有用な治療と組み合わせて投与し得る。本明細書中の本発明は、癌を治療する医薬品の調製における本明細書中の化合物（または本明細書中に開示する他の式）の使用をさらに含む、かつ／または、本明細書中の化合物と化合物を他の抗癌もしくは細胞毒性剤および癌を治療するための治療と組み合わせて使用するという指示書とのパッケージを含む。本発明はさらに、化合物と１つまたは複数の追加の薬剤との組合せをキット形態で含み、たとえば、一緒に梱包されているか、またはキットとして一緒に販売する別々のパッケージに入れられている、または一緒に配合するように梱包されている。
【０２２３】
第２の（またはそれ以上の）抗癌剤は、以下のうちの任意の１つまたは複数から選択し得る：
アルキル化剤（窒素マスタード、アルキルスルホネート、ニトロソ尿素、エチレンイミン誘導体、およびトリアゼンを含む）；抗血管形成（マトリックスメタロプロテイナーゼ阻害剤を含む）；代謝拮抗剤（アデノシンデアミナーゼ阻害剤、葉酸拮抗剤、プリン類似体、およびピリミジン類似体を含む）；抗生物質または抗体（モノクローナル抗体、CTLA-4抗体、アントラサイクリンを含む）；アロマターゼ阻害剤；
細胞周期応答調節剤；酵素；ファルネシル-タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；
ホルモン剤および抗ホルモン剤ならびにステロイド（合成類似体、糖質コルチコイド、エストロゲン／抗エストロゲン［たとえばSERM］、アンドロゲン／抗アンドロゲン、プロゲスチン、プロゲステロン受容体作用剤、および黄体形成ホルモン放出［LHRH］作用剤および拮抗剤を含む）；インスリン様成長因子（IGF）／インスリン様成長因子受容体（IGFR）系モジュレーター（IGFR1阻害剤を含む）；インテグリン-シグナル伝達阻害剤；キナーゼ阻害剤（SrcキナーゼもしくはSrc／ablの複数キナーゼ阻害剤および／もしくは阻害剤、サイクリン依存性キナーゼ［CDK］阻害剤を含む、panHer、Her-1およびHer-2抗体、抗VEGF抗体を含めたVEGF阻害剤、EGFR阻害剤、マイトジェン活性化タンパク質[MAP］阻害剤、MEK阻害剤、オーロラキナーゼ阻害剤、PDGF阻害剤、ならびに他のチロシンキナーゼ阻害剤またはセリン／スレオニンキナーゼ阻害剤；
エクチナサイジンまたはその類似体および誘導体などの微小管撹乱剤；タキサン、天然に存在するエポチロンならびにその合成および半合成類似体などの微小管安定化剤；
微小管結合の不安定化剤（ビンカアルカロイドを含む）；
トポイソメラーゼ阻害剤；プレニル-タンパク質トランスフェラーゼ阻害剤；白金配位複合体；シグナル伝達阻害剤；ならびに生物学的応答調節剤、成長因子、および免疫変調剤などの抗癌剤および細胞毒性剤として使用される他の薬剤。
【０２２４】
さらに、本発明の化合物は、前述の状態に関連する副作用に対処することにおける、その特定の有用性について選択される他の治療剤と共に配合するか、または同時投与することができる。たとえば、本発明の化合物は、制吐剤などの嘔気、過敏症および胃の不快感を予防する薬剤、ならびにH1およびH2抗ヒスタミン剤と共に配合し得る。
上記の他の治療剤は、本発明の化合物と組み合わせて用いる場合、たとえば、医師用卓上参考書(Physicians’ Desk Reference、PDR)に示された量または他の方法で当業者によって決定される量で用いることができる。
【０２２５】
化合物は、治療上有効な量で哺乳動物に投与する。「治療上有効な量」とは、単独でまたは追加の治療剤と組み合わせて哺乳動物に投与した場合に、病状または疾患の進行の予防または寛解に有効である、本開示の化合物の量を意味する。
【０２２６】
用量および配合物
本開示の化合物は、錠剤、カプセル（これらのそれぞれに持続放出または徐放性配合物が含まれる）、丸薬、散剤、顆粒、エリキシル、チンキ剤、懸濁液、シロップ、および乳剤などの経口剤形で投与することができる。また、これらを静脈内（ボーラスもしくはインフュージョン）、腹腔内、皮下、または筋肉内の形態で投与してもよく、これにはすべて医薬分野の技術者に周知の剤形を用いる。これらは単独で投与することができるが、一般に、選択した投与経路および標準の医薬の実施に基づいて選択される医薬担体と共に投与する。
【０２２７】
本発明の化合物の投薬レジメンは、もちろん、特定の薬剤の薬力学的特徴およびその投与の機構や経路；レシピエントの種、年齢、性別、健康、病状、および重量；症状の性質および程度；併用治療の種類；治療頻度；投与経路、患者の腎臓および肝臓機能、ならびに所望する効果などの、既知の要素に応じて変動する。医師または獣医師は、障害の進行を予防、対抗、または停止させるために必要な有効量の薬物を決定および処方することができる。
【０２２８】
一般的な指針として、それぞれの活性成分の１日経口用量は、示した効果のために使用した場合、約0.001〜1000ｍｇ／体重1kg、または約0.01〜100mg／体重１kg／日、あるいは、約1.0〜20mg／kg／日の範囲である。静脈内では、用量は、一定測度のインフュージョン中約1〜約10mg／kg／分の範囲である。本発明の化合物は、単一の１日用量で投与するか、または合計１日用量を１日２、３、もしくは４回の分割用量で投与し得る。一実施形態では、活性成分の１日経口用量は、１日１回投与するか、または分割用量で１日２回投与する、3〜600mgである。あるいは、活性成分は、１日２回投与する10〜20mgまたは１日１回投与する40〜100mgの用量で投与し得る。あるいは、活性成分は、１日２回の12.5mgまたは１日１回の75mgの用量で投与し得る。あるいは、活性成分は、１日１回または２回投与する3、10、30、100、300、および600mgの用量で投与し得る。
【０２２９】
本発明の化合物は、適切な鼻腔内ビヒクルの局所的使用によって鼻腔内で、または経皮皮膚パッチを用いた経皮経路によって投与することができる。経皮デリバリー系の形態で投与した場合、投薬は、もちろん、投薬レジメン全体にわたって間欠的ではなく連続的である。
【０２３０】
化合物は、典型的には、意図する投与形態、すなわち、経口錠剤、カプセル、エリキシル、シロップなどに関して適切であるように選択し、かつ慣用の医薬の実施に矛盾しない、適切な医薬的希釈剤、賦形剤、または担体（本明細書中で医薬担体と総称する）と混合して投与する。
【０２３１】
たとえば、錠剤またはカプセルの形態での経口投与では、活性薬物構成成分を、ラクトース、デンプン、スクロース、グルコース、メチルセルロース、ステアリン酸マグネシウム、リン酸二カルシウム、硫酸カルシウム、マンニトール、ソルビトールなどの、経口の無毒性の医薬的に許容される不活性担体と組み合わせることができ；液体形態での経口投与では、経口薬構成成分を、エタノール、グリセロール、水などの、任意の経口の無毒性の医薬的に許容される不活性担体と組み合わせることができる。さらに、所望する場合または必要な場合は、適切な結合剤、潤滑剤、崩壊剤、および着色料も混合物内に取り込むことができる。適切な結合剤には、デンプン、ゼラチン、グルコースまたはβ-ラクトースなどの天然の糖、トウモロコシ甘味料、アカシア、トラガカント、またはアルギン酸ナトリウムなどの天然および合成のゴム、カルボキシメチルセルロース、ポリエチレングリコール、ワックス等が含まれる。これらの剤形で使用する潤滑剤には、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどが含まれる。崩壊剤には、それだけには限定されないが、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどが含まれる。
【０２３２】
また、本発明の化合物は、小単層ベシクル、大単層ベシクル、および多重膜小胞などのリポソームデリバリー系の形態で投与することもできる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミン、またはホスファチジルコリンなどの様々なリン脂質から形成することができる。
【０２３３】
また、本発明の化合物は、標的化可能な薬物担体などの可溶性ポリマーとカップリングさせてもよい。そのようなポリマーには、ポリビニルピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド-フェノール、ポリヒドロキシエチルアスパルトアミドフェノール、またはパルミトイル残基で置換したポリエチレンオキシド-ポリリシンが含まれることができる。さらに、本発明の化合物は、薬物の徐放性を達成するために有用な生分解性ポリマーのクラス、たとえば、ポリ乳酸、ポリグリコール酸、ポリ乳酸とポリグリコール酸のコポリマー、ポリεカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアシレート、およびヒドロゲルの架橋結合または両親媒性ブロックコポリマーとカップリングさせてもよい。
【０２３４】
投与に適した剤形（医薬組成物）は、単位用量あたり約1ミリグラム〜約100ミリグラムの活性成分を含み得る。これらの医薬組成物中では、活性成分は通常、組成物の全重量に基づいて約0.5〜95重量％の量で存在する。
【０２３５】
ゼラチンカプセルは、活性成分およびラクトース、デンプン、セルロース誘導体、ステアリン酸マグネシウム、ステアリン酸などの粉末担体を含み得る。同様の希釈剤を用いて圧縮錠剤を作製することができる。錠剤およびカプセルはどちらも、一定期間にわたって医薬品の連続的放出を提供するために、持続放出生成物として製造することができる。圧縮錠剤は、任意の不快な味を覆い隠し、錠剤を大気から保護するために糖もしくはフィルムでコーティングするか、または胃腸管内での選択的分解のために腸溶コーティングすることができる。
【０２３６】
経口投与のための液体剤形は、患者の許容性を高めるために、着色料および香料を含むことができる。
【０２３７】
一般に、水、適切な油、生理食塩水、デキストロース水溶液（グルコース）、ならびに関連する糖溶液およびプロピレングリコールまたはポリエチレングリコールなどのグリコールが、非経口液剤の適切な担体である。非経口投与のための液剤は、活性成分の水溶性の塩、適切な安定化剤、および必要な場合は干渉物質を含み得る。単独または組み合わせた、亜硫酸水素ナトリウム、亜硫酸ナトリウム、またはアスコルビン酸などの抗酸化剤が、適切な安定化剤である。また、クエン酸およびその塩ならびにナトリウムEDTAも使用される。さらに、非経口液剤は、塩化ベンザルコニウム、メチル-またはプロピル-パラベン、およびクロロブタノールなどの保存料を含むことができる。
【０２３８】
適切な医薬担体は、当分野の標準の参考テキストである、レミントンの医薬科学(Remington’s Pharmaceutical Sciences)、Mack Publishing Companyに記載されている。
【０２３９】
本発明の化合物を投与するための代表的な有用な医薬用量形態は、以下のように例示することができる。
【０２４０】
カプセル
標準のツーピース硬ゼラチンカプセルに、それぞれ100ミリグラムの粉末活性成分、150ミリグラムのラクトース、50ミリグラムのセルロース、および6ミリグラムのステアリン酸マグネシウムを満たすことによって、多数の単位カプセルを調製することができる。
【０２４１】
軟ゼラチンカプセル
ダイズ油、綿実油またはオリーブ油などの消化可能な油中の活性成分の混合物を調製し、容積式ポンプによってゼラチン内に注入して、100ミリグラムの活性成分を含む軟ゼラチンカプセルを形成し得る。カプセルを洗浄し、乾燥させるべきである。
【０２４２】
錠剤
錠剤は、単位用量が100ミリグラムの活性成分、0.2ミリグラムのコロイド状二酸化ケイ素、5ミリグラムのステアリン酸マグネシウム、275ミリグラムの結晶セルロース、11ミリグラムのデンプンおよび98.8ミリグラムのラクトースであるように、慣用の手順によって調製し得る。嗜好性を増加させるまたは吸収を遅延させるために、適切なコーティングを塗布し得る。
【０２４３】
注射液
1.5重量％の活性成分を10容量％のプロピレングリコールおよび水中で撹拌することによって、注射による投与に適した非経口組成物を調製し得る。液剤は、塩化ナトリウムで等張にし、滅菌するべきである。
【０２４４】
懸濁液
それぞれの5mLが100mgの微粉活性成分、200mgのカルボキシメチルセルロースナトリウム、5mgの安息香酸ナトリウム、1.0gのソルビトール溶液、U.S.P.、および0.025mLのバニリンを含むように、経口投与のための水性懸濁液を調製することができる。
【０２４５】
本発明の化合物を他の抗凝血剤と組み合わせる場合、たとえば、１日用量は、患者の体重１キログラムあたり約0.1〜100ミリグラムの式Ｉの化合物および約1〜7.5ミリグラムの第２の抗凝血剤であり得る。錠剤剤形には、本発明の化合物は、一般に単位用量あたり約5〜10ミリグラムの量、第２の抗凝血剤は単位用量あたり約1〜5ミリグラムの量で存在し得る。
【０２４６】
前述の第２の治療剤のうちの２つ以上を実施例の化合物と共に投与する場合、一般に、典型的な１日用量および典型的な剤形中のそれぞれの構成成分の量は、組み合わせて投与した場合の治療剤の相加効果または相乗効果を考慮して、単独で投与した場合の薬剤の通常の用量と比較して減少させ得る。
【０２４７】
特に、単一の単位用量として提供する場合、組み合わせた活性成分の間に化学的相互作用の潜在性が存在する。そのため、実施例の化合物と第２の治療剤とを単一の単位用量中で組み合わせた場合、これらは、活性成分を単一の単位用量で組み合わせているが、活性成分間の物理的接触が最小限となる（すなわち減少される）ように配合する。たとえば、１つの活性成分を腸溶コーティングし得る。活性成分の１つを腸溶コーティングすることによって、組み合わせた活性成分間の接触を最小限にすることが可能になるだけでなく、これらの構成成分の１つが胃内ではなく腸管内で放出されるように、胃腸管におけるこれらの構成成分の１つの放出を制御することも可能となる。また、活性成分の１つを、胃腸管全体にわたる持続放出をもたらし、かつ組み合わせた活性成分間の物理的接触を最小限にする役割を果たす物質でコーティングし得る。さらに、持続放出される構成成分を、この構成成分の放出が腸管内のみで起こるように、さらに腸溶コーティングすることができる。さらに別の手法は、活性構成成分をさらに分離するために、１つの構成成分を持続放出および／または腸内放出ポリマーでコーティングし、他方の構成成分も低粘度グレードのヒドロキシプロピルメチルセルロース（HPMC）などのポリマーまたは当分野で知られている他の適切な物質でコーティングする、組合せ生成物の配合を含む。ポリマーコーティングは、他の構成成分との相互作用に対するさらなる障壁を形成する役割を果たす。
【０２４８】
本発明の組合せ生成物の構成成分間の接触を最小限にするこれらおよび他の方法は、単一の剤形で投与するか、または別々の形態であるが同じ様式で同時に投与するかにかかわらず、本開示で備えれば、当業者には容易に明らかであろう。
【０２４９】
さらに、本明細書中に開示する特定の化合物は、他の化合物の代謝物として有用であり得る。したがって、一実施形態では、化合物は、後に医薬組成物内に取り込んでもよい実質的に純粋な化合物として有用であるか、またはその化合物のプロドラッグの投与後に生じる代謝物として有用であり得る。一実施形態では、化合物は、本明細書中に記載の障害の治療に有用であることによって、代謝物として有用であり得る。
【０２５０】
本明細書中で使用する「実質的に純粋」には、約90、91、92、93、94、95、96、97、98、99、および100％を含めた、約90重量％を超える純度を有する化合物が含まれることを意図する。
【０２５１】
一例として、本明細書中に開示する化合物は、約90（重量）％を超える純度を有することで実質的に純粋であり得、物質の残りの約10％未満は、化合物の他の代謝物、化合物のプロドラッグ、および／またはその調製から生じる反応および／またはプロセス不純物を含む。
【０２５２】
明らかに、上記教示に鑑みて、本発明の数々の変更および変形が可能である。したがって、添付の特許請求の範囲内で、本明細書中に具体的に記載した方法以外で本発明を実施し得ることが理解されよう。
【図１】
2009544757.tif 000022
【手続補正書】
【提出日】平成21年4月1日(2009.4.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】特許請求の範囲
【補正対象項目名】全文
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
【請求項１】
(i)  N-((1R,2S,5R)-2-((3S)-3-((6-tert-ブチルピリミド[5,4-d]ピリミジン-4-イル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)アセトアミド;
N-((1R,2S,5R)-5-(メチルアミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド;
N-((1R,2S,5R)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)ホルムアミド;
N-((1R,2S,5R)-5-(ジメチルアミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド;
N-((3S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)-2-オキソ-3-ピロリジニル)-6-tert-ブチル-2-ピリジンカルボキサミド;
N-((1R,2S,5R)-5-アミノ-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)プロパンアミド;
2-tert-ブチル-N-((3S)-1-((1S,2R,4R)-4-(tert-ブチルアミノ)-2-(メタンスルホニルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソ-3-ピロリジニル)-4-ピリミジンカルボキサミド;
2-tert-ブチル-N-((3S)-1-((1S,2R,4R)-4-(tert-ブチルアミノ)-2-(プロピオニルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソ-3-ピロリジニル)-4-ピリミジンカルボキサミド;
N-((1R,2S,5R)-5-(tert-ブチルアミノ)-2-((3S)-3-((6-tert-ブチルピリミド[5,4-d]ピリミジン-4-イル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)メタンスルホンアミド; および
N-(((1S,2S,5R)-5-メトキシ-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)メチル)アセトアミド; または
(ii)  それら(i)の医薬的に許容される塩;
から選択される化合物。
【請求項２】
N-((1R,2S,5R)-2-((3S)-3-((6-tert-ブチルピリミド[5,4-d]ピリミジン-4-イル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)アセトアミドまたはその医薬的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項３】
N-((1R,2S,5R)-5-(メチルアミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミドまたはその医薬的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項４】
N-((1R,2S,5R)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)ホルムアミドまたはその医薬的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項５】
N-((1R,2S,5R)-5-(ジメチルアミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミドまたはその医薬的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項６】
N-((3S)-1-((1S,2R,4R)-2-アセトアミド-4-(イソプロピル(メチル)アミノ)シクロヘキシル)-2-オキソ-3-ピロリジニル)-6-tert-ブチル-2-ピリジンカルボキサミドまたはその医薬的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項７】
N-((1R,2S,5R)-5-アミノ-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)プロパンアミドまたはその医薬的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項８】
2-tert-ブチル-N-((3S)-1-((1S,2R,4R)-4-(tert-ブチルアミノ)-2-(メタンスルホニルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソ-3-ピロリジニル)-4-ピリミジンカルボキサミドまたはその医薬的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項９】
2-tert-ブチル-N-((3S)-1-((1S,2R,4R)-4-(tert-ブチルアミノ)-2-(プロピオニルアミノ)シクロヘキシル)-2-オキソ-3-ピロリジニル)-4-ピリミジンカルボキサミドまたはその医薬的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項１０】
N-((1R,2S,5R)-5-(tert-ブチルアミノ)-2-((3S)-3-((6-tert-ブチルピリミド[5,4-d]ピリミジン-4-イル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)メタンスルホンアミドまたはN-(((1S,2S,5R)-5-メトキシ-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)メチル)アセトアミドもしくはその医薬的に許容される塩である請求項１に記載の化合物。
【請求項１１】
(i)  N-((1R,2S,5R)-5-(イソプロピルアミノ)-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド;
N-((1R,2S,5R)-5-アミノ-2-((3S)-2-オキソ-3-((6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド;
N-((1R,2S,5R)-5-(イソプロピル(メチル)アミノ)-2-((3S)-3-((1-オキシド-6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド;
N-((1R,2S,5R)-5-(イソプロピルアミノ)-2-((3S)-3-((1-オキシド-6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド; および
N-((1R,2S,5R)-5-(tert-ブチルアミノ)-2-((3S)-3-((1-オキシド-6-(トリフルオロメチル)-4-キナゾリニル)アミノ)-2-オキソ-1-ピロリジニル)シクロヘキシル)アセトアミド; または
(ii)  それら(i)の医薬的に許容される塩；
から選択される化合物。
【請求項１２】
請求項１〜１１に記載の化合物、および医薬的に許容される担体または希釈剤を含む、医薬組成物。
【請求項１３】
請求項１〜１１に記載の化合物の治療上有効量を哺乳類に投与することを特徴とする該哺乳類の疾病を治療する方法であって、該疾病は糖尿病、肥満症、メタボリックシンドローム、脳卒中、神経因性痛、虚血性心筋症、乾癬、高血圧症、強皮症、骨関節炎、動脈瘤、発熱、循環器疾患、クローン病、うっ血性心不全、自己免疫疾患、HIV-感染、HIV関連認知症、乾癬、特発性肺線維症、移植動脈硬化症、物理的にまたは化学的に誘発された脳損傷、炎症性腸疾患、肺胞炎、大腸炎、全身性エリテマトーデス、腎毒性血清腎炎、糸球体腎炎、喘息、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、血管炎、不安定プラーク、関節リウマチ、再狭窄、静脈新生内膜肥厚化、透析移植新生内膜肥厚化、動脈-静脈シャント内膜肥厚化、臓器移植、慢性同種移植腎障害、および癌から選択される、該方法。
【請求項１４】
該疾病が糖尿病、肥満症、クローン病、全身性エリテマトーデス、糸球体腎炎、多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、再狭窄、および臓器移植から選択される請求項１３に記載の方法。
【請求項１５】
該疾病が多発性硬化症、アテローム性動脈硬化症、クローン病、および糖尿病から選択される、請求項１３または１４に記載の方法。
【国際調査報告】
2009544757.tif 000023
2009544757.tif 000024
2009544757.tif 000025