(57)【要約】【課題】【解決手段】本発明は、インド産薬用植物ソリザヤノキから単離されたαグルコシダーゼ阻害剤を提供する。特に、本発明は、ソリザヤノキのヘキサンおよびアセトン画分を提供し、ヘキサン画分は、オロキシリンＡ、クリシンおよびバイカレインというαグルコシダーゼ活性化合物を含み、アセトン画分は、オロキシリンＡ、クリシン、バイカレイン、メトキシクリシンおよびオロキシロシドメチルエステルという化合物を含む。本発明はまた、ソリザヤノキの前記へキサンおよびアセトン画分から、αグルコシダーゼ阻害活性化合物を単離する方法にも関する。本発明はまた、強力な腸管αグルコシダーゼ阻害剤の、食後高血糖、糖尿病における高血糖および関連疾患、肥満、ならびに、高血糖抑制およびαグルコシダーゼ活性の阻害を必要とする病状の予防および治療のための抗高血糖剤として、医薬品、食品、健康食品および特定保健用食品に使用することのできる有効成分としての、強力な腸管αグルコシダーゼ阻害剤の使用も提供する。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
植物ソリザヤノキから得られるαグルコシダーゼ阻害活性画分。
【請求項２】
植物ソリザヤノキのヘキサンおよびアセトン抽出物から選択される、請求項１に記載のαグルコシダーゼ阻害活性画分。
【請求項３】
植物ソリザヤノキの前記ヘキサン抽出物が、活性化合物であるオロキシリンＡ、クリシンおよびバイカレインならびに未同定化合物を、約６０：１０：２５：５．０（重量％）の割合で含む、請求項１および２に記載のαグルコシダーゼ阻害活性画分。
【請求項４】
前記アセトン抽出物が、活性化合物であるオロキシリンＡ、クリシン、バイカレイン、メトキシクリシン、オロキシロシドメチルエステルおよび未同定化合物を約６．７：８．３：５０：１６．７：１３．３：５．０（重量％）の割合で含む、請求項１および２に記載のαグルコシダーゼ阻害活性画分。
【請求項５】
ソリザヤノキの前記ヘキサン／アセトン抽出物のインビトロαグルコシダーゼ阻害活性ＩＣ50が、８４〜１２５μｇ／ｍＬの範囲にある、請求項１に記載の生理活性画分。
【請求項６】
植物ソリザヤノキの前記ヘキサン画分が、約８５μｇ／ｍＬのインビトロαグルコシダーゼ阻害活性ＩＣ50を示す、請求項１に記載の生理活性画分。
【請求項７】
植物ソリザヤノキの前記アセトン抽出物が、約１２４μｇ／ｍＬのインビトロαグルコシダーゼ阻害活性ＩＣ50を示す、請求項１に記載の生理活性画分。
【請求項８】
植物ソリザヤノキのヘキサンおよび／またはアセトン抽出物からαグルコシダーゼ阻害活性化合物を単離する方法であって、ソリザヤノキの乾燥茎皮をガソリンで脱脂後、ヘキサンおよび／またはアセトンで抽出し、得られたヘキサンまたはアセトン抽出物をろ過してその残渣を得、続いてこの得られた残渣をクロマトグラフィーカラムにおいてクロロホルム中１〜５％メタノールで溶出し、オロキシリンＡ、クリシン、バイカレイン、メトキシクリシンおよびオロキシロシドメチルエステルという所望のαグルコシダーゼ阻害活性化合物を得ることを含む方法。
【請求項９】
植物ソリザヤノキのヘキサン抽出物からのαグルコシダーゼ阻害活性化合物の単離が、
ａ）ソリザヤノキの乾燥茎皮をガソリンで脱脂後、ヘキサンで抽出し、得られたヘキサン抽出物の濃縮およびろ過により、残渣を得る工程
ｂ）工程（ａ）で得た残渣を、クロマトグラフィーカラムにおいてクロロホルム中約１％メタノールで溶出し、オロキシラムＡおよび残渣を得る工程
ｃ）工程（ｂ）で得た残渣を、クロロホルム中２％メタノールで溶出し、クリシンを得る工程、ならびに
ｄ）この残留残渣を、さらにクロロホルム中３％メタノールで溶出し、バイカレインを得る工程
を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
植物ソリザヤノキのアセトン抽出物からのαグルコシダーゼ阻害活性化合物の単離が、
ａ）ソリザヤノキの乾燥茎皮をガソリンで脱脂後、ヘキサンおよびアセトンでそれぞれ連続して抽出し、得られたアセトン抽出物を蒸発させて、暗褐色残渣を得る工程
ｂ）工程（ａ）で得た残渣を、クロマトグラフィーカラムにおいてクロロホルム中約１％メタノールで溶出し、オロキシラムＡおよび残渣を得る工程
ｃ）工程（ｂ）で得た残渣を、クロロホルム中２％メタノールで溶出し、クリシンおよび残渣を得る工程
ｄ）工程（ｃ）で得た残渣を、クロロホルム中３％メタノールで溶出し、バイカレインを得る工程
ｅ）工程（ｄ）で得た残渣を、クロロホルム中４％メタノールで溶出し、メトキシクリシンを得る工程、ならびに
ｆ）前記残留残渣を、クロロホルム中５％メタノールで溶出し、オロキシロシドメチルエステルを得る工程
を含む、請求項８に記載の方法。
【請求項１１】
得られたオロキシリンＡの収率が、ヘキサン抽出物の場合、乾燥茎皮に対して約６０％である、請求項８に記載の方法。
【請求項１２】
得られたクリシンの収率が、ヘキサン抽出物の場合、乾燥茎皮に対して約１０％である、請求項８に記載の方法。
【請求項１３】
得られたメトキシクリシンの収率が、ヘキサン抽出物の場合、乾燥茎皮に対して約１３．３％である、請求項８に記載の方法。
【請求項１４】
得られたオロキシロシドメチルエステルの収率が、ヘキサン抽出物の場合、乾燥茎皮に対して約１６．７％である、請求項８に記載の方法。
【請求項１５】
得られたαグルコシダーゼ阻害活性化合物の純度が、約９５％である、請求項８に記載の方法。
【請求項１６】
オロキシリンＡのインビトロαグルコシダーゼ阻害活性ＩＣ50が、２５．９０μｇ／ｍＬである、請求項８に記載の方法。
【請求項１７】
クリシンのインビトロαグルコシダーゼ阻害活性ＩＣ50が、５７．５９μｇ／ｍＬである、請求項８に記載の方法。
【請求項１８】
バイカレインのインビトロαグルコシダーゼ阻害活性ＩＣ50が、３８．７１μｇ／ｍＬである、請求項８に記載の方法。
【請求項１９】
メトキシクリシンのインビトロαグルコシダーゼ阻害活性ＩＣ50が、９５．３９．７１μｇ／ｍＬである、請求項８に記載の方法。
【請求項２０】
オロキシロシドメチルエステルのインビトロαグルコシダーゼ阻害活性ＩＣ50が、９７．３１μｇ／ｍＬである、請求項８に記載の方法。
【請求項２１】
ソリザヤノキのヘキサンおよび／もしくはアセトン画分またはオロキシリンＡ、クリシン、バイカレイン、メトキシクリシン、オロキシロシドメチルエステルおよびそれらの混合物から選択されるαグルコシダーゼ阻害活性化合物を、任意に、薬学的に許容できる担体、アジュバントおよび／または希釈剤とともに含む薬学的組成物。
【請求項２２】
ソリザヤノキのヘキサンおよび／もしくはアセトン抽出物をそのまま、または、オロキシリンＡ、クリシン、バイカレイン、メトキシクリシンおよびオロキシロシドメチルエステルから選択される前記抽出物から単離された活性化合物を、任意に、薬学的に許容できる担体、アジュバントおよび／または希釈剤とともに、食後高血糖、高血糖、糖尿病、肥満および高血糖抑制を必要とする病状の治療のために投与することを含む、対象者におけるアルファグルコシダーゼ阻害化合物の使用。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インド産薬用植物ソリザヤノキ（Ｏｒｏｘｙｌｕｍ  ｉｎｄｉｃｕｍ）（モクコチョウ）から単離されたαグルコシダーゼ阻害剤に関するものである。特に、本発明は、ソリザヤノキのヘキサンおよびアセトン画分に関するものであり、ヘキサン画分はオロキシリンＡ、クリシンおよびバイカレインというαグルコシダーゼ活性化合物を含み、アセトン画分はオロキシリンＡ、クリシン、バイカレイン、メトキシクリシンおよびオロキシロシドメチルエステルという化合物を含む。本発明はまた、ソリザヤノキの前記へキサンおよびアセトン画分から、αグルコシダーゼ阻害活性化合物を単離する方法にも関するものである。
【０００２】
本発明はまた、これらの強力な腸管αグルコシダーゼ阻害剤の、食後高血糖、糖尿病における高血糖および関連疾患、肥満、ならびに、高血糖抑制およびαグルコシダーゼ活性の阻害を必要とする病状の予防および治療のための抗高血糖剤として、医薬品、食品、健康食品および特定保健用食品に使用することのできる有効成分としての使用にも関するものである。
【背景技術】
【０００３】
世界的に人口あたりの糖尿病、肥満および高脂血症の発生率は高く、増加し続けている。西洋の習慣や生活様式の取り入れと共に世界経済の繁栄が、これらの疾患を世界的まん延に向かわせている。糖尿病は、高齢化および肥満人口の増加と共に拡大している最も重篤な慢性疾患の一つである。糖尿病症候群の治療用に開発された薬剤はあるが、今日でも糖尿病患者への対応において最も難しい目標は、血中グルコース濃度をできるかぎり正常に近づけることである。さらに、食後高血糖または高インスリン血症は、糖尿病の大血管性合併症発生の独立危険因子である。この炭水化物代謝依存性疾患、特に、食後高血糖を抑制するための合理的な方法は、炭水化物の消化を緩慢にすることにより、炭水化物の消化によって放出されるグルコースの吸収を遅らせることである。この課題を達成するための最も実行可能かつ合理的な方法は、炭水化物加水分解酵素、より具体的には、腸管αグルコシダーゼの活性を制限することである。腸管αグルコシダーゼは、炭水化物の消化、従ってグルコースの吸収に重要な役割を果たしている。そのため、腸管αグルコシダーゼを阻害することで、食後高血糖負荷を抑制する、潜在的且つ有効な機会が提供される。アカルボース、ミグリトールおよびボグリボースのような薬剤は、主に炭水化物消化酵素αグルコシダーゼを阻害することによってグルコースの吸収を遅らせることにより食後高血糖を低下させることが知られており（ムーラルディアンＡＤ（Moorardian AD）およびサーマンＪＥ（Thurman JE）、Drugs 57、1999、p.19-29（非特許文献１））、現在、糖尿病および肥満患者のための医薬品として臨床的に使用されている。さらに、腸管αグルコシダーゼ阻害剤は、体重管理、体重増加の予防、減量、ならびに、肥満および関連疾患の治療および予防にも推奨されている（ロスナー・ハーベイ（Rosner Harvey）、米国特許第２００４１２２０５４号（特許文献１））。
【０００４】
前記αグルコシダーゼ阻害剤は診療に使用されているが、腹痛、鼓腸、下痢などの結腸における副作用があるため、その用途には限界がある（Ｒウチダ（Uchida, R）、Ａナス（Nasu, A）ら、Chem..Pharm.Bull 47、1999、p.187-193（非特許文献２））。
【特許文献１】米国特許第２００４１２２０５４号明細書
【非特許文献１】ムーラルディアンＡＤおよびサーマンＪＥ、Drugs 57、1999、p.19-29.
【非特許文献２】Ｒウチダ、Ａナスら、Chem..Pharm.Bull 47、1999、p.187-193.
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００５】
よって、このような限界があるため、天然源、特に、薬用植物から得られる植物化学物質による療法を模索したり、増え続ける患者たちが将来現行の治療法に耐性を生じる可能性があるためそれらの備蓄を増加したりする緊急の必要性があると思われる。
【課題を解決するための手段】
【０００６】
天然源を篩い分けることにより、人類は、前記疾患の治療のみならず予防においても大きな役割を果たす多くの臨床的に有用な薬剤を発見してきた。したがって、糖尿病、肥満および関連心血管系障害の蔓延ならびに薬物耐性の臨床的重要性が増すことにより、学界にさらなる責務が課されることによって、相当な量の活性化合物を含有する新規の天然資源を同定し、それらを薬剤として開発することが緊急の課題となっている。前記の点を踏まえ、食後高血糖および糖尿病における高血糖状態の抑制ならびに体重増加の予防、減量の促進、肥満および関連疾患の予防および治療における体重の抑制のための腸管αグルコシダーゼ阻害剤を探し求めた結果、強力な哺乳類腸管αグルコシダーゼ阻害剤を相当な収量で含むソリザヤノキを初めて同定するに至った。
【発明を実施するための最良の形態】
【０００７】
ソリザヤノキ（Ｏｒｏｘｙｌｕｍ  ｉｎｄｉｃｕｍ  Ｖｅｎｔ）は、インドの伝統的な医療において、数種類の疾患に対して推奨されてきた。インドの民間伝承医学では、その粉末茎皮が、赤痢、下痢、咽喉炎、咳、骨折の治療に使用される（カウシクＰ（Kausik,P）およびダーマンＡ．Ｋ．(Dhaman A.K.)著、「インドの薬用植物および生薬（The medicinal plants and crude drugs of India）」、2000、p.398）。
【０００８】
本発明は、強力な腸管αグルコシダーゼ阻害剤を含む混合物の同定およびソリザヤノキの活性抽出物からの強力な腸管αグルコシダーゼ阻害剤分子の単離に関するものであり、これらは、食後高血糖や糖尿病症候群における高血糖状態の抑制、肥満におけるその他の合併症と共に体重管理および減量のための予防および治療に応用され、さらにまた、αグルコシダーゼ阻害が本明細書に記載されていない疾患の予防および治療に重要な役割を果たす障害において使用してもよい。
【０００９】
本発明において、我々は、強力な腸管αグルコシダーゼ阻害剤を有するインド産薬用植物ソリザヤノキを同定する。ソリザヤノキの乾燥茎皮のヘキサン抽出物は、オロキシリンＡ、クリシン、バイカレインと同定された三大有効成分の９５％を構成し、アセトン抽出物は、五大有効成分を含有し、これはオロキシリンＡ、クリシン、バイカレインのほかに、相当な収量で、さらに二つの化合物、すなわち新腸管αグルコシダーゼ阻害剤であるオロキシロシドメチルエステルおよびメトキシクリシンを含有する。これらの混合物および分子は、食後高血糖、糖尿病における高血糖状態および肥満、ならびにαグルコシダーゼ酵素の阻害を必要とする障害および疾患を抑制する際に、予防および治療に応用される。
【００１０】
［適用、投与、処方：−］
これらの腸管αグルコシダーゼ阻害剤は、食後高血糖の抑制、糖尿病における高血糖状態の治療、肥満および本発明に記載されていない疾患の予防および治療のためにαグルコシダーゼの阻害を必要とする病状における体重およびその他の危険因子の抑制および低減のための薬務において一般的な任意の適切な従来法によって適用または投与し得る。
【００１１】
ヒト、動物および／または獣医学的に適用するには、場合によって、腸管αグルコシダーゼ阻害性混合物または分子は、αグルコシダーゼ酵素のその基質である炭水化物に対する作用を阻害し、作用機序を増強し、それによってより優れた治療効果を得るために、各食事または軽食に先立ってまたは約半時間前に経口摂取するのが好ましい。
【００１２】
本発明の腸管αグルコシダーゼ阻害性混合物または混合物中に存在する化合物は、ヒトへの適用に適した、薬学的に許容できる適切な添加剤、担体、賦形剤、食品製剤などのいずれと共に処方してもよい。これらの材料は、前記混合物または化合物の効能および特性を妨げないように選択すべきであるが、その活性を増強または改善することのできる材料が好ましく、従来技術および処方集において入手できる技量により決定してもよい。
【００１３】
［有効量：−］
有効量レベルおよび投薬期間は、対象疾患の治療パラメータを管理下におくために、当業者が決定してもよい。実際の適用速度、適用量および投与時間は、病状および重症度によって変えてもよく、本発明の実施例において説明されるように濃度および期間と無関係であってもよい。
【００１４】
［本発明の目的］
本発明の主要目的は、強力な腸管αグルコシダーゼ阻害特性を有する活性抽出物を提供することである。
【００１５】
本発明の別の目的は、有望な抽出物、すなわちヘキサン抽出物およびアセトン抽出物から得られる有効成分を腸管αグルコシダーゼ阻害剤として提供することである。
【００１６】
本発明のさらに別の目的は、ソリザヤノキの活性ヘキサン／アセトン抽出物から、腸管αグルコシダーゼ阻害剤として有効成分を、オロキシリンＡ、バイカレイン、クリシン、メトキシクリシンおよびオロキシロシドメチルエステルとして単離する方法を提供することである。
【００１７】
本発明のさらに別の目的は、腸管αグルコシダーゼ阻害剤としての新規活性を、植物ソリザヤノキのアセトン抽出物またはヘキサン抽出物から単離した化合物であるオロキシリンＡ、クリシン、メトキシクリシンおよびオロキシロシドメチルエステルに帰属させることである。
【００１８】
本発明のさらに別の目的は、食後高血糖および糖尿病におけるグルコース濃度上昇の抑制ならびに肥満における体重管理のための腸管αグルコシダーゼ阻害剤としての、ソリザヤノキのヘキサンおよび／またはアセトン抽出物ならびにこれらの抽出物から単離された化合物の治療用途を提供することである。
【００１９】
本発明のさらに別の目的は、αグルコシダーゼ酵素の阻害を伴う疾患の予防および治療のためのαグルコシダーゼ阻害剤として、ソリザヤノキからの活性抽出物および分子を治療上の使用に供することである。
【００２０】
［本発明の要旨］
したがって、本発明は、植物ソリザヤノキから得られるαグルコシダーゼ阻害活性画分を提供する。
【００２１】
本発明の一実施形態において、前記αグルコシダーゼ阻害活性画分は、植物ソリザヤノキのヘキサンおよびアセトン抽出物から選択される。
【００２２】
さらに別の実施形態において、植物ソリザヤノキのヘキサン抽出物は、活性化合物であるオロキシリンＡ、クリシンおよびバイカレインならびに未同定化合物を、約６０：１０：２５：５．０（重量％）の割合で含む。
【００２３】
さらに別の実施形態において、アセトン抽出物は、活性化合物であるオロキシリンＡ、クリシン、バイカレイン、メトキシクリシン、オロキシロシドメチルエステルならびに未同定化合物を約６．７：８．３：５０：１６．７：１３．３：５．０（重量％）の割合で含む。
【００２４】
さらに別の実施形態において、ソリザヤノキのヘキサン／アセトン抽出物のインビトロαグルコシダーゼ阻害活性ＩＣ50は、８４〜１２５μｇ／ｍＬの範囲にある。
【００２５】
さらに別の実施形態において、植物ソリザヤノキのヘキサン画分は、約８５μｇ／ｍＬのインビトロαグルコシダーゼ阻害活性ＩＣ50を示す。
【００２６】
さらに別の実施形態において、植物ソリザヤノキのアセトン抽出物は、約１２４μｇ／ｍＬのインビトロαグルコシダーゼ阻害活性ＩＣ50を示す。
【００２７】
本発明はさらに、植物ソリザヤノキのヘキサンおよび／またはアセトン抽出物からαグルコシダーゼ阻害活性化合物を単離する方法を提供するものであって、この方法は、ソリザヤノキの乾燥茎皮をガソリンで脱脂後、ヘキサンおよび／またはアセトンで抽出し、得られたヘキサンまたはアセトン抽出物をろ過してその残渣を得、続いてこの得られた残渣をクロマトグラフィーカラムにおいてクロロホルム中１〜５％メタノールで溶出し、オロキシリンＡ、クリシン、バイカレイン、メトキシクリシンおよびオロキシロシドメチルエステルという所望のαグルコシダーゼ阻害活性化合物を得ることを含む。
【００２８】
本発明の一実施形態において、植物ソリザヤノキのヘキサン抽出物からのαグルコシダーゼ阻害活性化合物の単離は、次の工程を含む。
ａ）ソリザヤノキの乾燥茎皮をガソリンで脱脂後、ヘキサンで抽出し、得られたヘキサン抽出物の濃縮およびろ過により、残渣を得る工程
ｂ）工程（ａ）で得た残渣を、クロマトグラフィーカラムにおいてクロロホルム中約１％メタノールで溶出し、オロキシラムＡおよび残渣を得る工程
ｃ）工程（ｂ）で得た残渣を、クロロホルム中２％メタノールで溶出し、クリシンを得る工程、ならびに
ｄ）この残留残渣を、さらにクロロホルム中３％メタノールで溶出し、バイカレインを得る工程。
【００２９】
さらに別の実施形態において、植物ソリザヤノキのアセトン抽出物からのαグルコシダーゼ阻害活性化合物の単離は、次の工程を含む。
ａ）ソリザヤノキの乾燥茎皮をガソリンで脱脂後、ヘキサンおよびアセトンでそれぞれ連続して抽出し、得られたアセトン抽出物を蒸発させて、暗褐色残渣を得る工程
ｂ）工程（ａ）で得た残渣を、クロマトグラフィーカラムにおいてクロロホルム中約１％メタノールで溶出し、オロキシラムＡおよび残渣を得る工程
ｃ）工程（ｂ）で得た残渣を、クロロホルム中２％メタノールで溶出し、クリシンおよび残渣を得る工程
ｄ）工程（ｃ）で得た残渣を、クロロホルム中３％メタノールで溶出し、バイカレインを得る工程
ｅ）工程（ｄ）で得た残渣を、クロロホルム中４％メタノールで溶出し、メトキシクリシンを得る工程、ならびに
ｆ）この残留残渣を、クロロホルム中５％メタノールで溶出し、オロキシロシドメチルエステルを得る工程。
【００３０】
さらに別の実施形態において、得られたオロキシリンＡの収率は、ヘキサン抽出物の場合、乾燥茎皮に対して約６０％である。
【００３１】
さらに別の実施形態において、得られたクリシンの収率は、ヘキサン抽出物の場合、乾燥茎皮に対して約１０％である。
【００３２】
さらに別の実施形態において、得られたメトキシクリシンの収率は、ヘキサン抽出物の場合、乾燥茎皮に対して約１３．３％である。
【００３３】
さらに別の実施形態において、得られたオロキシロシドメチルエステルの収率は、ヘキサン抽出物の場合、乾燥茎皮に対して約１６．７％である。
【００３４】
さらに別の実施形態において、得られたαグルコシダーゼ阻害活性化合物の純度は、約９５％である。
【００３５】
さらに別の実施形態において、オロキシリンＡのインビトロαグルコシダーゼ阻害活性ＩＣ50は、２５．９０μｇ／ｍＬである。
【００３６】
さらに別の実施形態において、クリシンのインビトロαグルコシダーゼ阻害活性ＩＣ50は、５７．５９μｇ／ｍＬである。
【００３７】
さらに別の実施形態において、バイカレインのインビトロαグルコシダーゼ阻害活性ＩＣ50は、３８．７１μｇ／ｍＬである。
【００３８】
さらに別の実施形態において、メトキシクリシンのインビトロαグルコシダーゼ阻害活性ＩＣ50は、９５．３９．７１μｇ／ｍＬである。
【００３９】
さらに別の実施形態において、オロキシロシドメチルエステルのインビトロαグルコシダーゼ阻害活性ＩＣ50は、９７．３１μｇ／ｍＬである。
【００４０】
本発明はさらに、ソリザヤノキのヘキサンおよび／もしくはアセトン画分またはオロキシリンＡ、クリシン、バイカレイン、メトキシクリシン、オロキシロシドメチルエステルおよびそれらの混合物から選択されるαグルコシダーゼ阻害活性化合物を、任意に、薬学的に許容できる担体、アジュバントおよび／または希釈剤とともに含む薬学的組成物を提供する。
【００４１】
ソリザヤノキのヘキサンおよび／もしくはアセトン抽出物をそのまま、または、オロキシリンＡ、クリシン、バイカレイン、メトキシクリシンおよびオロキシロシドメチルエステルから選択される前記抽出物から単離された活性化合物を、任意に、薬学的に許容できる担体、アジュバントおよび／または希釈剤とともに、食後高血糖、高血糖、糖尿病、肥満および高血糖抑制を必要とする病状の治療のために投与することを含む、対象者におけるアルファグルコシダーゼ阻害化合物の使用。
【００４２】
本発明はさらに、ソリザヤノキのヘキサンおよび／もしくはアセトン抽出物をそのまま、またはオロキシリンＡ、クリシン、バイカレイン、メトキシクリシンおよびオロキシロシドメチルエステルから選択される前記抽出物から単離された活性化合物を、任意に、薬学的に許容できる担体、アジュバントおよび／または希釈剤とともに、食後高血糖、高血糖、糖尿病、肥満および高血糖抑制を必要とする病状の治療のために投与することを含む、対象者におけるアルファグルコシダーゼ阻害化合物の使用を提供する。
【００４３】
本発明は、アセトン抽出物もしくはヘキサン抽出物から選択される腸管αグルコシダーゼ阻害剤を取り入れた薬学的組成物か、またはそれらの抽出物をそのまま投与することによって、対象者に腸管αグルコシダーゼ阻害を提供する方法を提供する。本発明は、腸管αグルコシダーゼ阻害剤として初めてソリザヤノキから単離されたオロキシリンＡおよびクリシンについての新たな活性に関するものである。
【００４４】
［図面の簡単な説明］
本発明を添付図面によって説明する。図中、
図１は、オロキシリンＡ［５，７−ジヒドロキシ−６−メトキシ−２−フェニル−クロメン−４−オン］の式を示す。
図２は、クリシン［５，７−ジヒドロキシ−２−フェニル−クロメン−４−オン］の式を示す。
図３は、バイカレイン［５，６，７−トリヒドロキシ−２−フェニル−クロメン−４−オン］の式を示す。
図４は、メトキシクリシン［５−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−フェニル−クロメン−４−オン］の式を示す。
図５は、オロキシロシドメチルエステル［３，４，５−トリヒドロキシ−６−（６−メトキシ−４−オキソ−２−フェニル−４−Ｈ−クロメン−７−イオロキシ）テトラヒドロピラン−２−カルボン酸メチルエステル］の式を示す。
【００４５】
［本発明の詳細な説明］
本発明の目的に従い、本発明は、新たな供給源、すなわち、相当な量の腸管αグルコシダーゼ阻害活性成分を有するソリザヤノキ乾燥茎皮を同定した。
【００４６】
発明はさらに、腸管αグルコシダーゼ阻害剤を豊富に含有するソリザヤノキの茎のアセトン抽出物およびへキサン抽出物を同定する。
【００４７】
発明はさらに、食後高血糖、糖尿病における高血糖および関連病状の抑制のために適用および／または投与することのできる腸管αグルコシダーゼ阻害剤としての前記抽出物の使用を特定する。
【００４８】
本発明はさらに、肥満における体重の増加を抑制し低下を促進するための前記腸管αグルコシダーゼ阻害剤の使用を特定する。本発明は、ソリザヤノキのヘキサン抽出物から相当の収率（１．０％）で得られる混合物を同定し、この強力な腸管αグルコシダーゼ阻害性混合物が、オロキシリンＡ（収率６０％）、クリシン（収率１０％）およびバイカレイン（収率２５％）として単離された有効成分の約９５％を構成することを特定する。さらに本発明は、別の抽出物、すなわち、オロキシリンＡ（収率６．７％）、クリシン（収率８．３％）、バイカレイン（収率５０％）とともに、ソリザヤノキから初めて単離された、オロキシロシドメチルエステル（収率１３．３％）という新たな天然腸管αグルコシダーゼ阻害剤および収率１６．７％の７−メトキシクリシンと同定された別の腸管αグルコシダーゼ阻害剤を含有する強力な腸管αグルコシダーゼ阻害剤を有するアセトン抽出物（収率１．５％）も同定する。さらに。
【００４９】
本発明は、これらのαグルコシダーゼ阻害剤の、本発明に記載された病状に限定されない疾患過程の予防および治療に、この酵素の阻害が重要な役割を果たす病状における使用を特定する。さらにまた、本発明の目的に従い、本発明は、腸管αグルコシダーゼ阻害性を有するヘキサン抽出物における主要活性分子としてオロキシリンＡ、クリシンおよびバイカレインを同定した。
【００５０】
発明はさらに、オロキシリンＡを、腸管αグルコシダーゼ阻害剤としてのヘキサン抽出物中の主要有効成分であるバイカレイン、クリシン、オロキシリンＡよりも優れた腸管αグルコシダーゼ阻害剤として同定する。
【００５１】
本発明の目的に従い、本発明はさらに、腸管αグルコシダーゼ阻害活性として存在するソリザヤノキ乾燥茎皮のアセトン抽出物も同定する。
【００５２】
本発明は、アセトン抽出物において腸管αグルコシダーゼ阻害性を示す主要活性分子としてオロキシリンＡ、バイカレイン、クリシン、メトキシクリシンおよびオロキシロシドメチルエステルの存在を特定する。
【００５３】
本発明はまた、ソリザヤノキのアセトン抽出物から得られる新しい天然化合物としてオロキシロシドメチルエステルを初めて同定する。
【００５４】
本発明の一特徴において、化合物メトキシクリシンは、ソリザヤノキのアセトン抽出物から初めて単離される。
【００５５】
本発明の別の特徴において、オロキシロシドメチルエステルは、腸管αグルコシダーゼ阻害力を有する。
【００５６】
本発明のさらに別の特徴において、化合物メトキシクリシンは、腸管αグルコシダーゼ阻害性を有する。
【００５７】
本発明のさらに別の特徴において、オロキシリンＡ、クリシンおよびバイカレインも腸管αグルコシダーゼ阻害性を有する。
【００５８】
本発明は、ソリザヤノキから得られる腸管αグルコシダーゼ阻害剤としてオロキシリンＡ、クリシン、バイカレイン、メトキシクリシンおよびオロキシロシドメチルエステルを単離する方法を提供し、この方法は次の工程（１）を含む。
ａ）ソリザヤノキの乾燥茎皮のヘキサンによる抽出
ｂ）抽出物をろ過し、固体を分離させた。
ｃ）この残渣のクロロホルム中１％メタノールによる第一の溶出によりオロキシラムＡを得ること
ｄ）この残渣（工程ｃ）のクロロホルム中２％メタノールによる第二の溶出によりクリシンを得ること
ｅ）この残渣（工程ｄ）のクロロホルム中３％メタノールによる第三の溶出によりバイカレインを得ること。
【００５９】
本発明のさらなる目的は、これらの三つの化合物、すなわち、オロキシリンＡ、クリシンおよびバイカレインをソリザヤノキのヘキサン抽出物から単離することに関する。
【００６０】
さらにまた、ソリザヤノキから単離したこれらの化合物すべてが、腸管αグルコシダーゼ阻害を初めて示す。
【００６１】
さらにまた、ソリザヤノキの乾燥茎皮のアセトンによる抽出、ならびに、オロキシンＡ、クリシンおよびバイカレインとともに化合物メトキシクリシンおよびオロキシロシドメチルエステルを単離する方法であり、この方法は次の工程を比較する。
ａ）前記抽出物から残渣を得る工程
ｂ）この残渣のクロロホルム中１％メタノールによる第一の溶出によりオロキシラムＡを得る工程
ｃ）この残渣（工程ｂ）のクロロホルム中２％メタノールによる第二の溶出によりクリシンを得る工程
ｄ）この残渣（工程ｃ）のクロロホルム中３％メタノールによる第三の溶出によりバイカレインを得る工程
ｅ）この残渣（工程ｄ）のクロロホルム中４％メタノールによる第四の溶出によりメトキシクリシンを得る工程
ｆ）この残渣（工程ｅ）のクロロホルム中５％メタノールによる第五の溶出によりオロキシロシドメチルエステルを得る工程。
【００６２】
本発明のさらなる目的は、これら五つの化合物、すなわち、オロキシリンＡ、クリシン、バイカレイン、メトキシクリシンおよびオロキシロシドメチルエステルの、腸管αグルコシダーゼ阻害を示すアセトン抽出物からの初めての単離に関する。さらに発明は、化合物メトキシクリシンおよびオロキシロシドメチルエステルの、全く新規な供給源であるソリザヤノキからの単離に関する。
【００６３】
本発明のさらに別の目的は、第五の化合物、すなわち、７−Ｏ−β−Ｄ−グルクロノピラノシド誘導体であるオロキシロシドメチルエステルの、全く新規な化合物としてのソリザヤノキからの単離に関する。
【００６４】
さらにまた、ソリザヤノキから得られるこれらすべての化合物は、初めて腸管αグルコシダーゼ阻害を示す。
【００６５】
本発明はまた、αグルコシダーゼ阻害の治療活性に関連した、食後高血糖および糖尿病における高血糖状態の抑制、ならびに、糖尿病および肥満の原因および経過の予防および治療に使用する前記抽出物および化合物に帰属する新しい活性も提供する。
【００６６】
本発明はさらに、αグルコシダーゼ酵素の阻害が、αグルコシダーゼ酵素の阻害を伴う疾患予防および治療に有益な効果を与える病状における、前記αグルコシダーゼ阻害剤としての使用に道を開く。
【００６７】
本発明はまた、初めて、新規な供給源、すなわち、ソリザヤノキからの、バイカレイン、メトキシクリシンおよびオロキシロシドメチルエステルの相当な収率での単離も提供する。
【００６８】
本発明の別の特徴において、ソリザヤノキから得られたオロキシラムＡは、以下の分光化学的および物理的性質を有する。
ＭＰ：２３1〜２３２℃。ＩＲ（ＫＢｒ）ｖmax３４３５、２８２５、１６２２、１０１６ｃｍ-1。1Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3＋ＭｅＯＨ−ｄ4）（δ）７．８２−７．８６（２Ｈ、ｍ、Ｈ−２’、６’）、７．４２−７．５６（３Ｈ、ｍ、Ｈ−３’、４’、５’）、６．６２（１Ｈ、ｓ、Ｈ−８）、６．５８（１Ｈ、ｓ、Ｈ−３）、３．９６（３Ｈ、ｓ、Ａｒ−ＯＭｅ）。13Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯｄ6）δ１６３．３７（Ｃ−２）、１０４．４６（Ｃ−３）、１８２．３１（Ｃ−４）、１５２．６４（Ｃ−５）、１３０．８０（Ｃ−６）、１５７．６２（Ｃ−７）、９４．４９（Ｃ−８）、１５２．７９（Ｃ−９）、１０４．７１（Ｃ−１０）、１３１．６０（Ｃ−１’）、１２６．４２（Ｃ−２’）、１２９．２０（Ｃ−３’）、１３２．０６（Ｃ−４’）、６０．０６（ＯＭｅ）。ＥＩＭＳ：２８４（Ｍ+、１００）。
【００６９】
本発明の別の実施形態において、ソリザヤノキから得られたクリシンは、以下の分光化学的および物理的性質を有する。
ＭＰ：２８５〜２８６℃。ＩＲ（ＫＢｒ）ｖmax３４５０、２９２５、１６２６、１０２４ｃｍ-1。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3＋ＭｅＯＨ−ｄ4）（δ）７．８２−７．９２（２Ｈ、ｍ、Ｈ−２’、６’）、７．４４−７．５８（３Ｈ、ｍ、Ｈ−３’、４’、５’）、６．６４（１Ｈ、ｓ、Ｈ−８）、６．４４（１Ｈ、ｓ、Ｈ−３）、６．２４（１Ｈ、ｓ、Ｈ−６）。13Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯｄ6）δ１６３．０（Ｃ−２）、１０５．０（Ｃ−３）、１８１．６（Ｃ−４）、１６１．５（Ｃ−５）、９９．０（Ｃ−６）、１６４．３（Ｃ−７）、９４．０（Ｃ−８）、１５７．３（Ｃ−９）、１０４．０（Ｃ−１０）、１３８．７（Ｃ−１’）、１２６．１（Ｃ−２’）、１２８．８（Ｃ−３’）、１３１．６（Ｃ−４’）、１２８．８（Ｃ−５’）、１２６．１（Ｃ−６’）。ＥＩＭＳ：Ｍ+２５４。
【００７０】
本発明の別の実施形態において、ソリザヤノキから得られたバイカレインは、以下の分光化学的および物理的性質を有する。
ＭＰ：２２３〜２２６℃。ＩＲ（ＫＢｒ）ｖmax３４５０、２９２０、１６２２、１０２４ｃｍ-1。1Ｈ  ＮＭＲ（４００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3＋ＣＤＣｌ3）（δ）７．８２−７．９８（２Ｈ、ｍ、Ｈ−２’、６’）、７．４４−７．６０（３Ｈ、ｍ、Ｈ−３’、４’、５’）、６．６２（１Ｈ、ｓ、Ｈ−８）、６．５８（１Ｈ、ｓ、Ｈ−３）。13Ｃ  ＮＭＲ（５０ＭＨｚ、ＤＭＳＯｄ6）δ１６２．９（Ｃ−２）、１０４．５（Ｃ−３）、１８２．１（Ｃ−４）、１４７．０（Ｃ−５）、１２９．３（Ｃ−６）、１５３．７（Ｃ−７）、９４．０（Ｃ−８）、１４９．９（Ｃ−９）、１０４．３（Ｃ−１０）、１３１．０（Ｃ−１’）、１２６．２（Ｃ−２’）、１２９．０（Ｃ−３’）、１３１．７（Ｃ−４’）、１２９．０（Ｃ−５’）、１２６．２（Ｃ−６）。ＥＩＭＳ：２７０（Ｍ+、１００）。
【００７１】
本発明の別の実施形態において、ソリザヤノキから得られたメトキシクリシンは、以下の分光化学的および物理的性質を有する。
ＭＰ：１６４℃。（ＫＢｒ）ｖmax３４５０、２９２５、１６５４、１６２１、１０１６ｃｍ-1。1Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）（δ）１３．０（１Ｈ、ｓ、ＯＨ−５）、７．８２−７．９６（２Ｈ、ｍ、Ｈ−２’、６’）、７．４４−７．６０（３Ｈ、ｍ、Ｈ−３’、４’、５’）、６．６２（１Ｈ、ｓ、Ｈ−８）、６．６０（１Ｈ、ｓ、Ｈ−３）、６．５８（１Ｈ、ｓ、Ｈ−６）、３．９６（３Ｈ、ｓ、ＯＭｅ）。13Ｃ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＣＤＣｌ3）（δ）１６４．０８（Ｃ−２）、１０５．０４（Ｃ−３）、１８２．８８（Ｃ−４）、１６４．０８（Ｃ−５）、９３．９７（Ｃ−６）、１５３．３１（Ｃ−７）、９３．９７（Ｃ−８）、１５３．３１（Ｃ−９）、１０５．５０（Ｃ−１０）、１３０．９６（Ｃ−１’）、１２６．２４（Ｃ−２’）、１２８．８８（Ｃ−３’）、１３１．２６（Ｃ−４’）、１２８．８８（Ｃ−５’）、１２６．２４（Ｃ−６’）、６０．６３（Ａｒ−ＯＭｅ）。ＥＩＭＳ：１９２（Ｍ+、１００）。
【００７２】
本発明の別の実施形態において、ソリザヤノキから得られたオロキシロシドメチルエステルは、以下の分光化学的および物理的性質を有する。
ＭＰ：２０１℃。ＵＶλmax（ＭｅＯＨ）３４５、２８５ｎｍ。ＩＲ（ＫＢｒ）ｖmax３３９５、２９２４、１７３５（エステル−Ｃ＝Ｏ）、１６１８（−Ｃ＝Ｏ）、１４６１、１３５９、１２２４、１０７６ｃｍ-1。1Ｈ  ＮＭＲ（２００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）（δ）
１２．７８（１Ｈ、ｓ、ＯＨ−５）、７．９０−８．０（２Ｈ、ｍ、Ｈ−２’、６’）、７．４８−７．６０（３Ｈ、ｍ、Ｈ−３’、４’、５’）、６．８４（１Ｈ、ｓ、Ｈ−８）、６．８０（１Ｈ、ｓ、Ｈ−３）、３．４−５．５０（ｍ、糖プロトン）、３．７８（３Ｈ、ｓ、ＯＭｅ）、３．８２（３Ｈ、ｓ、Ａｒ−ＯＭｅ）。13Ｃ  ＮＭＲ（３００ＭＨｚ、ＤＭＳＯ−ｄ6）（δ）１６３．７２（Ｃ−２）、１０４．９５（Ｃ−３）、１８２．３７（Ｃ−４）、１５２．５２（Ｃ−５）、１３２．０４（Ｃ−６）、１５６．０８（Ｃ−７）、９４．０７（Ｃ−８）、１５２．１７（Ｃ−９）、１０６．１２（Ｃ−１０）、１３０．５９（Ｃ−１’）、１２６．３５（Ｃ−２’、６’）、１２９．０３（Ｃ−３’、５’）、１３２．０６（Ｃ−４’）、９９．４９（Ｃ−１’’）、７５．６０（Ｃ−２’’）、７５．２５（Ｃ−３’’）、７２．７７（Ｃ−４’’）、７１．１８（Ｃ−５’’）、１６８．９６（Ｃ−６’’）、６０．２１（Ａｒ−ＯＭｅ）、５１．８１（ＯＭｅ）。ＥＩＭＳ：４７５（Ｍ+＋１、１００）。
【００７３】
以下の実施例は、例として提示されるものであり、したがって本発明の範囲を限定するものと解釈すべきではない。
【実施例１】
【００７４】
［実験プロトコール：オロキシリンＡ、クリシンおよびバイカレインの単離方法］
乾燥粉末茎皮（２００ｇ）を、まずガソリンを用いてソックスレー装置で脱脂した。そのヘキサン抽出物をろ過したところ、淡黄色の粉末固体が得られた。この固体（２ｇ）を、シリカゲル（６０〜１２０メッシュ）を６０ｃｍの高さまで充填した直径３．５ｃｍのカラム上クロマトグラフィにかけた。
【００７５】
続いてこのカラムを、クロロホルム中１％メタノールで溶出し、オロキシリンＡを得た。
【００７６】
オロキシリンＡの収量は、約１．２ｇである。
【００７７】
前記カラムをクロロホルム中２％メタノールでさらに溶出し、クリシンを得た。
【００７８】
クリシンの収量は、約０．２ｇである。
【００７９】
前記カラムを、クロロホルム中３％メタノールでさらに溶出し、バイカレインを得た。
【００８０】
バイカレインの収量は、約０．５ｇである。
【００８１】
ヘキサン画分中の未同定化合物と共に三つの活性化合物について、オロキシリンＡ、クリシン、バイカレインおよび未同定化合物などの割合は、６０：１０：２５：５．０である。
【００８２】
［メトキシクリシンおよびオロキシロシドメチルエステルの単離方法：］
前記乾燥粉末茎皮（２００ｇ）を、ヘキサンおよびアセトンで連続して抽出した。アセトン抽出物を蒸発させることにより、暗褐色残渣（３ｇ）を得た。この残渣を、シリカゲル（６０〜１２０メッシュ）を６０ｃｍの高さまで充填した直径３．５ｃｍのカラム上クロマトグラフィにかけた。オロキシリンＡ、クリシンおよびバイカレインのほかに、さらに二つの化合物、すなわち、メトキシクリシンおよびオロキシロシドメチルエステルが、以下のように単離された。
【００８３】
続いて、前記カラムを、クロロホルム中１％メタノールで溶出し、オロキシリンＡを得た。
【００８４】
オロキシリンＡの収量は、約０．２ｇである。
【００８５】
前記カラムをクロロホルム中２％メタノールでさらに溶出し、クリシンを得た。
【００８６】
クリシンの収量は、約０．２５ｇである。
【００８７】
前記カラムをクロロホルム中３％メタノールでさらに溶出し得た。
【００８８】
バイカレインの収量は、約１．５ｇである。
【００８９】
前記溶出を引き続いてクロロホルム中４％メタノールでさらに溶出し、メトキシクリシンを得る。
【００９０】
メトキシクリシンの収量は、約０．５ｇである。
【００９１】
カラムをクロロホルム中５％メタノールでさらに溶出し、オロキシロシドメチルエステルを得る。オロキシロシドメチルエステルの収量は、約０．４ｇである。
【００９２】
前記化合物はすべて、純度９５％で単離された。
【００９３】
アセトン画分中の未同定化合物と共に五つの活性化合物について、オロキシリンＡ、クリシン、バイカレイン、メトキシクリシン、オロキシロシドメチルエステルおよび未同定化合物の割合は、６．７：８．３：５０：１６．７：１３．３：５．０．ｆである。
【００９４】
前記化合物すべての石油化学的および物理的性質は、前述している。
【実施例２】
【００９５】
［腸管αグルコシダーゼ阻害の測定法：］
生理食塩水中、１００：１（ｗ／ｖ）の割合のラット腸管アセトン粉末（シグマケミカルズ（ｓｉｇｍａ  ｃｈｅｍｉｃａｌｓ）、米国）を適切に超音波処理した。２５℃で３０００ｒｐｍ×３０分の遠心分離後得られた上清を、哺乳動物腸管αグルコシダーゼの原材料とした。抽出物または分子（ＤＭＳＯ中５ｍｇ／ｍｌ）から調製した１０μＬのテストサンプルを、１００μＬの１００ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ６．８）中、５０μＬの粗酵素とともに５分間インキュベートした。その後、５０μＬの基質（５ｍＭ、前記緩衝液中調製したｐ−ニトロフェニルα−Ｄ−グルコピラノシド）を添加した。５分間のインキュベーション後、放出されたｐ−ニトロフェノールを４０５ｎｍで分光光度法により判定した。コントロールおよびブランクの判定を行うために、テストサンプルの代わりに１０μＬのＤＭＳＯ、基質の代わりに５０μＬの緩衝液を添加した。着色化合物による干渉を補償するために、それらの個別のブランクを調製し、それによって分光光度による判定を評価した。阻害率を次式で算出し、
｛１−（テストサンプルの吸光度／コントロールサンプルの吸光度）｝×１００
テストサンプルの５０％阻害濃度（ＩＣ50）を、テストサンプル濃度の段階希釈液によって得られたデータから適切な回帰分析を適用することによって算出した。各テストサンプルおよび他のコントロールサンプルは、１サンプル３点方式で行った。
【００９６】
【表１】
2009527541.tif 000002
【図面の簡単な説明】
【００９７】
【図１】図１は、オロキシリンＡ［５，７−ジヒドロキシ−６−メトキシ−２−フェニル−クロメン−４−オン］の式を示す。
【図２】図２は、クリシン［５，７−ジヒドロキシ−２−フェニル−クロメン−４−オン］の式を示す。
【図３】図３は、バイカレイン［５，６，７−トリヒドロキシ−２−フェニル−クロメン−４−オン］の式を示す。
【図４】図４は、メトキシクリシン［５−ヒドロキシ−７−メトキシ−２−フェニル−クロメン−４−オン］の式を示す。
【図５】図５は、オロキシロシドメチルエステル［３，４，５−トリヒドロキシ−６−（６−メトキシ−４−オキソ−２−フェニル−４−Ｈ−クロメン−７−イオロキシ）テトラヒドロピラン−２−カルボン酸メチルエステル］の式を示す。
【図１】
2009527541.tif 000003
【図２】
2009527541.tif 000004
【図３】
2009527541.tif 000005
【図４】
2009527541.tif 000006
【図５】
2009527541.tif 000007
【国際調査報告】
2009527541.tif 000008
2009527541.tif 000009
2009527541.tif 000010
2009527541.tif 000011