(57)【要約】  構造式Ｉの化合物は、アンドロゲン受容体（ＡＲ）の組織選択的モジュレーターである。これらの化合物は、低下した筋緊張の強化に、また、骨粗鬆症、骨減少症、グルココルチコイド誘導骨粗鬆症、歯周病、骨折、骨再建術後の骨損傷、筋減少症、脆化、加齢肌、男性性腺機能低下症、女性の閉経後症状、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高脂血症、肥満症、再生不能性貧血およびその他の造血障害、炎症性関節炎および関節修復、ＨＩＶ衰弱、前立腺癌、良性前立腺過形成（ＢＰＨ）、腹部脂肪過多症、代謝症候群、ＩＩ型糖尿病、癌カテキシー、アルツハイマー病、筋ジストロフィー、認知低下、性機能障害、睡眠時無呼吸、鬱病、早発卵巣不全症および自己免疫疾患のようなアンドロゲン欠乏に起因するかまたはアンドロゲン投与によって軽減できる状態の治療に、単独でまたは他の活性剤と組合せて有用である。
2009518404.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
結晶質Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミド。
【請求項２】
５．６＋／−０．１、７．６＋／−０．１および９．６＋／−０．１の２−シータ値に回折ピークをもつＸ線粉末回折パターンを有しているＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの無水結晶質形Ａ。
【請求項３】
約３９．７＋／−０．１、１１８．３＋／−０．１、１６９．２＋／−０．１および１２．６＋／−０．１ｐ．ｐ．ｍ．の化学シフト値をもつ炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲスペクトルシグナルを有しているＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの無水結晶質形Ａ。
【請求項４】
約−１２８．９＋／−０．１ｐ．ｐ．ｍ．の化学シフト値をもつフッ素−１９  ＭＡＳ  ＮＭＲスペクトルシグナルを有しているＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの無水結晶質形Ａ。
【請求項５】
約２８１．２℃に融点を有している請求項２に記載の無水結晶質形Ａ。
【請求項６】
約７．８＋／−０．１、８．５＋／−０．１および１０．２＋／−０．１の２−シータ値に回折ピークをもつＸＲＰＤパターンを有しているＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの吸湿性結晶質形Ｂ。
【請求項７】
約１６４．０℃に融点を有している請求項６に記載の吸湿性結集質形Ｂ。
【請求項８】
約１０．１＋／−０．１、１１．０＋／−０．１および１２．４＋／−０．１の２−シータ値に回折ピークをもつＸＲＰＤパターンを有しているＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの結晶質水和物形Ｃ。
【請求項９】
さらに約２６８．０℃に融解／分解吸熱点を有している請求項８に記載の結晶質水和物形Ｃ。
【請求項１０】
約８．９＋／−０．１、９．９＋／−０．１および１２．５＋／−０．１の２−シータ値に回折ピークをもつＸＲＰＤパターンを有しているＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの無水結晶質形Ｄ。
【請求項１１】
約１７４．２＋／−０．１、１２．２＋／−０．１、５６．０＋／−０．１および２３．９＋／−０．１ｐ．ｐ．ｍ．の化学シフト値をもつ炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲスペクトルシグナルを有しているＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの無水結晶質形Ｄ。
【請求項１２】
約２６３．６℃に融解吸熱点を有している請求項１０に記載の結晶質水和物形Ｄ。
【請求項１３】
約６．１＋／−０．１、１２．８＋／−０．１および１３．１＋／−０．１の２−シータ値に回折ピークをもつＸＲＰＤパターンを有しているＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの結晶質四水和物形Ｅ。
【請求項１４】
約１３．１＋／−０．１、２８．９＋／−０．１、３９．３．０＋／−０．１および１５４．２＋／−０．１ｐ．ｐ．ｍ．の化学シフト値をもつ炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲスペクトルシグナルを有しているＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの結晶質四水和物形Ｅ。
【請求項１５】
約−１２６．５＋／−０．１、−１２８．０＋／−０．１および−１２９．３＋／−０．１ｐ．ｐ．ｍ．の化学シフト値をもつフッ素−１９  ＭＡＳ  ＮＭＲスペクトルシグナルを有しているＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの結晶質四水和物形Ｅ。
【請求項１６】
約６．３＋／−０．１、７．６＋／−０．１および１２．５＋／−０．１の２−シータ値に回折ピークをもつＸＲＰＤパターンを有しているＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの結晶質セスキ水和物形Ｆ。
【請求項１７】
約８．２＋／−０．１、１０．０＋０．１および１３．４＋／−０．１の２−シータ値に回折ピークをもつＸＲＰＤパターンを有しているＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの結晶質エタノラート形Ｇ。
【請求項１８】
さらに約１６５．９℃に融解吸熱点を有している請求項１７に記載の結晶質エタノラート形Ｇ。
【請求項１９】
ａ）少なくとも１種類の溶媒に化合物を溶解して混合物を形成する段階と、
ｂ）結晶化が完了し固体が形成されるまで混合物を還流させる段階と、
ｃ）固体を単離する段階と、
ｄ）固体を乾燥する段階と
を含む、化合物Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの無水結晶質形Ａの製造方法。
【請求項２０】
少なくとも１種類の溶媒が、１，２−ジメトキシエタン、イソプロピルアルコール、イソプロピルアセテートおよびアセトンから選択される請求項１９に記載の方法。
【請求項２１】
固体を単離する段階がさらに、固体を真空フィルターで濾過し、１，２−ジメトキシエタン、イソプロピルアルコール、イソプロピルアセテートおよびアセトンから選択された少なくとも１種類の洗浄用溶媒で固体を洗浄する段階を含む請求項２０に記載の方法。
【請求項２２】
無水結晶質遊離塩基形ＡをｐＨ約２以下の水溶液に添加して溶液を形成する段階と、溶液を熟成して固体を沈殿させる段階と、固体を単離する段階と、固体を乾燥する段階とを含む、Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの四水和物形Ｅの製造方法。
【請求項２３】
無水結晶質遊離塩基形Ａの添加を室温で行う請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
四水和物形Ｅを少なくとも１種類の溶媒に溶解して溶液を形成する段階と、少なくとも１種類のアンチ溶媒を溶液が過飽和になるまで溶液に充填する段階と、過飽和溶液を熟成して固体を形成させる段階と、固体を単離する段階と、固体を乾燥する段階とを含む、Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの結晶質無水形Ｄの形成方法。
【請求項２５】
少なくとも１種類の溶媒が、ジメチルアセトアミド、メタノール、ジメチルスルホキシド、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド、および、Ｎ−メチル−２−ピロリドンから選択される請求項２４に記載の方法。
【請求項２６】
少なくとも１種類のアンチ溶媒が、ヘプタン、トルエン、シクロヘキサン、水、アセトニトリル、イソプロピルアセテート、イソブチルアセテートおよびメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテルから選択される請求項２５に記載の方法。
【請求項２７】
少なくとも１種類の溶媒がメタノール、ジメチルスルホキシドおよびＮ−メチル−２−ピロリドンから選択され、少なくとも１種類のアンチ溶媒が水およびアセトニトリルから選択される請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
熟成段階が場合によっては、固体が形成されるまで追加量のアンチ溶媒を添加するかまたはバッチを冷却する段階を含む請求項２７に記載の方法。
【請求項２９】
四水和物形Ｅを４０℃で少なくとも１０時間真空乾燥する段階を含む、Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの結晶質セスキ水和物形Ｆの形成方法。
【請求項３０】
非晶質のＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−α−アンドロスト−１−エン−１７−β−カルボキサミドをエタノールに溶解して溶液を形成する段階と、溶液を約６０℃に加熱する段階と、溶液を室温に冷却することによって溶液を熟成して固体を沈殿させる段階と、溶液から固体を単離する段階と、固体を乾燥する段階とを含む、Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの結晶質エタノラート形Ｇの形成方法。
【請求項３１】
非晶質形のＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−α−アンドロスト−１−エン−１７−β−カルボキサミドをエタノールに溶解して非晶質形対エタノールの比が質量基準で約３：４の溶液を形成する段階と、溶液を約６０℃に加熱する段階と、溶液を室温に冷却することによって溶液を熟成して固体を沈殿させる段階と、溶液から固体を単離する段階と、固体を乾燥する段階とを含む、Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの吸湿性結晶質形Ｂの形成方法。
【請求項３２】
結晶質エタノラート形ＧのＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−α−アンドロスト−１−エン−１７−β−カルボキサミドを撹拌容器中で水に溶解して結晶質エタノラート形Ｇ対水の比が質量基準で約１：１００の溶液を形成する段階と、溶液を熟成して固体を沈殿させる段階と、溶液から固体を単離する段階と、固体を乾燥する段階とを含む、Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの結晶質水和物形Ｃの形成方法。
【請求項３３】
治療有効量の少なくとも１つの結晶質形のＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドと少なくとも１種類の医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物。
【請求項３４】
少なくとも１つの結晶質形が、無水結晶質形Ａ、吸湿性結晶質形Ｂ、水和結晶質形Ｃ、無水結晶質形Ｄ、四水和結晶質形Ｅ、セスキ水和結晶質形Ｆおよびエタノラート形Ｇから選択される請求項３３に記載の医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、組織選択的アンドロゲン受容体モジュレーター（ＳＡＲＭ）であるＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの結晶質形、非晶質形および溶媒和物に関する。このようなＳＡＲＭは、骨粗鬆症、歯周病、骨折、脆化および筋減少症のようなアンドロゲン不足によって発症するかまたはアンドロゲン投与によって軽減できる状態の治療に有用である。さらに、本発明のＳＡＲＭは、抑鬱、性的機能不全および認識減退のような低テストステロンに付随する精神障害を治療するために使用できる。ＳＡＲＭはまた特定組織中でアンタゴニストになるので、高アンドロゲン状態または高アンドロゲン活性が症状を引き起こす良性前立腺過形成および睡眠時無呼吸のような状態に有用である。
【背景技術】
【０００２】
アンドロゲン受容体（ＡＲ）は、ステロイド／上皮小体ホルモン核受容体のスーパーファミリーに所属し、該ファミリーのその他の構成員はエストロゲン受容体、プロゲステロン受容体、グルココルチコイド受容体およびミネラロコルチコイド受容体を含む。ＡＲは体内の多くの組織で発現され、テストステロン（Ｔ）およびジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）のようなアンドロゲンの生理的および病理生理的作用を媒介する受容体である。構造的にはＡＲは、３つの機能ドメイン、すなわち、リガンド結合性ドメイン（ＬＢＤ）、ＤＮＡ結合性ドメインおよびアミノ末端ドメインから構成されている。ＡＲに結合し、内因性ＡＲリガンドの作用を模倣する化合物をＡＲアゴニストと呼び、内因性ＡＲリガンドの作用を阻害する化合物をＡＲアンタゴニストと呼ぶ。
【０００３】
ＡＲにアンドロゲンリガンドが結合すると、リガンド／受容体複合体が誘導され、該複合体は細胞の核に転移した後、核に存在するターゲット遺伝子のプロモーター領域またはエンハンサー領域内部の調節ＤＮＡ配列（アンドロゲン応答要素と呼ぶ）に結合する。次に補因子と呼ばれる他のタンパク質が召集され、これらのタンパク質は受容体に結合して遺伝子転写に導く。
【０００４】
アンドロゲン療法は、生殖障害、および、男性の一次性または二次性の性腺機能低下症のような様々な障害を治療してきた。さらに、天然または合成のいくつかのＡＲアゴニストが、骨疾患のような筋骨格障害、造血障害、神経筋疾患、リウマチ病的疾患、衰弱性疾患を治療するため、および、女性のアンドロゲン不足のようなホルモン置換療法（ＨＲＴ）のために開発されてきた。さらに、フルタミドおよびビカルタミドのようなＡＲアンタゴニストは前立腺癌の治療に使用されている。従って、ＡＲの機能を組織選択的に活性化（“作動”）し、男性化および高密度リポタンパク質コレステロール（ＨＤＬ）抑制のような好ましくない男性性徴的特性を伴うことなくアンドロゲンの望ましい骨−および筋同化作用を生じるような化合物を得ることは有用であろう。
【０００５】
閉経後骨粗鬆症の骨に対してアンドロゲンが有益な効果を有することはテストステロンおよびエストロゲンを併用投与した最近の試験で報告された［Ｈｏｆｂａｕｅｒら，Ｅｕｒ．Ｊ．Ｅｄｏｃｒｉｎｏｌ．１４０：２７１−２８６（１９９９）］。２年をかけた大規模なダブルブラインド比較試験では、複合エストロゲンによる単独療法が骨減量を防止するのに比べて複合エストロゲン（ＣＥＥ）とメチルテストステロンとの併用経口投与は脊椎および腰椎の骨質量の増加促進に効果があることが証明された［Ｊ．Ｒｅｐｒｏｄ．Ｍｅｄ．，４４：１０１２−１０２０（１９９９）］。
【０００６】
さらに、ＣＥＥとメチルテストステロンとによって治療した女性ではホットフラッシュが減少することも証明されている。しかしながら、治療した女性の３０％がかなりのニキビ増加および顔面の増毛に悩んでおり、これらは現用のすべてのアンドロゲン薬理療法に生じる合併症である［Ｗａｔｔｓら，Ｏｂｓｔｅｔ．Ｇｙｎｅｃｏｌ．，８５：５２９−５３７（１９９５）］。また別の試験で観察されたように、ＣＥＥにメチルテストステロンを加えるとＨＤＬレベルが低下することも知見された。このような現用のアンドロゲン療法に伴う男性化の可能性および脂質プロフィルに対する影響が組織選択的アンドロゲン受容体アゴニストの開発を促す理論的根拠を与える。
【０００７】
アンドロゲンはヒトの骨代謝に重要な役割を果たす［Ａｎｄｅｒｓｏｎら，“Ａｎｄｒｏｇｅｎ  ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔａｔｉｏｎ  ｉｎ  ｅｕｇｏｎａｄａｌ  ｍｅｎ  ｗｉｔｈ  ｏｓｔｅｏｐｏｒｏｓｉｓ−ｅｆｆｅｃｔｓ  ｏｆ  ｓｉｘ  ｍｏｎｔｈｓ  ｏｆ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｎ  ｂｏｎｅ  ｍｉｎｅｒａｌ  ｄｅｎｓｉｔｙ  ａｎｄ  ｃａｒｄｉｏｖａｓｃｕｌａｒ  ｒｉｓｋ  ｆａｃｔｏｒｓ，”Ｂｏｎｅ，１８：１７１−１７７（１９９６）］。性機能正常（ｅｕｇｏｎａｄａｌ）であっても骨粗鬆症のある男性のテストステロン治療に対する治療応答は、アンドロゲンが多大な骨代謝効果を発揮することを示す。２５０ｍｇのテストステロンエステルの筋肉内投与に応答して腰椎の平均ＢＭＤは５または６カ月で０．７９９ｇｍ／ｃｍ２から０．８３９ｇ／ｃｍ２に増加した。従ってＳＡＲＭは男性の骨粗鬆症の治療に使用できる。
【０００８】
アンドロゲン不足は、アンドロゲン遮断療法（ＡＤＴ）を受けているステージＤの前立腺癌（転移性）の男性に生じる。内分泌性の精巣摘出術は長期作用性ＧｎＲＨアゴニストによって行われ、アンドロゲン受容体遮断はＡＲアンタゴニストによって行われる。ホルモン遮断に応答してこれらの男性はホットフラッシュ、有意な骨減量、衰弱および疲労に悩まされる。ステージＤの前立腺癌男性のパイロット試験では、１年以上ＡＤＴを受けた男性患者はＡＤＴを受けなかった患者を上回る骨減少症（５０％対３８％）および骨粗鬆症（３８％対２５％）を示した［Ｗｅｉら，Ｕｒｏｌｏｇｙ，５４：６０７−６１１（１９９９）］。ＡＤＴを受けた男性では腰椎ＢＭＤが有意に減少していた。従って、骨および筋肉中でアンタゴニスト作用を生じない前立腺組織選択的ＡＲアンタゴニストは、単独でまたは伝統的ＡＤＴの補助薬として、有用な前立腺癌治療薬になり得る［参照：Ａ．Ｓｔｏｃｈら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．Ｍｅｔａｂ．，８６：２７８７−２７９１（２００１）］。
【０００９】
組織選択的ＡＲアンタゴニストはまた、閉経女性の多房性卵巣症候群も治療できる。参照：Ｃ．Ａ．Ｅａｇｌｅｓｏｎら，“Ｐｏｌｙｃｙｓｔｉｃ  ｏｖａｒｉａｎ  ｓｙｎｄｒｏｍｅ：ｅｖｉｄｅｎｃｅ  ｔｈａｔ  ｆｌｕｔａｍｉｄｅ  ｒｅｓｔｏｒｅｓ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  ｇｏｎａｄｏｔｒｏｐｉｎ−ｒｅｌｅａｓｉｎｇ  ｈｏｒｍｏｎｅ  ｐｕｌｓｅ  ｇｅｎｅｒａｔｏｒ  ｔｏ  ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ  ｂｙ  ｅｓｔｒａｄｉｏｌ  ａｎｄ  ｐｒｏｇｅｓｔｅｒｏｎｅ，”Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，８５：４０４７−４０５２（２０００）。
【００１０】
また、アンドロゲンが腎肥大およびエリスロポエチン（ＥＰＯ）産生を刺激するので、ＳＡＲＭはある種の造血障害も治療できる。組換えヒトＥＰＯが導入される以前には、慢性腎不全に起因する貧血を治療するためにアンドロゲンが使用されていた。さらに、アンドロゲンは、重篤でない再生不能性貧血および骨髄形成異常症候群のような貧血患者の血清ＥＰＯレベルを上昇させる。貧血治療にはＳＡＲＭが与えるような選択的作用が必要であろう。
【００１１】
ＳＡＲＭはまた、肥満症治療の補助薬として臨床的価値を有し得る。この体脂肪減少方法は、アンドロゲン投与が肥満患者の皮下脂肪および内臓脂肪を減少させたという所見の報告によって支持されている［Ｊ．Ｃ．Ｌｏｖｅｊｏｙら，“Ｏｒａｌ  ａｎａｂｏｌｉｃ  ｓｔｅｒｏｉｄ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｐａｒｅｎｔｅｒａｌ  ａｎｄｒｏｇｅｎ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ，ｄｅｃｒｅａｓｅｓ  ａｂｄｏｍｉｎａｌ  ｆａｔ  ｉｎ  ｏｂｅｓｅ，ｏｌｄｅｒ  ｍｅｎ，”Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｂｅｓｉｔｙ，１９：６１４−６２４（１９９５）］，［Ｊ．Ｃ．Ｌｏｖｅｊｏｙら，“Ｅｘｏｇｅｎｏｕｓ  Ａｎｄｒｏｇｅｎｓ  Ｉｎｆｌｕｅｎｃｅ  Ｂｏｄｙ  Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ  ａｎｄ  Ｒｅｇｉｏｎａｌ  Ｂｏｄｙ  Ｆａｔ  Ｄｉｓｔｒｉｂｕｔｉｏｎ  ｉｎ  Ｏｂｅｓｅ  Ｐｏｓｔｍｅｎｏｐａｕｓａｌ  Ｗｏｍｅｎ−Ａ  Ｃｌｉｎｉｃａｌ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｃｅｎｔｅｒ  Ｓｔｕｄｙ，”Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，８１：２１９８−２２０３（１９９６）］。従って、不要なアンドロゲン作用のないＳＡＲＭは肥満症の治療に有益であり得る。
【００１２】
アンドロゲン受容体アゴニストはまた、特に男性の代謝症候群（インスリン抵抗性症候群、Ｘ症候群）に対して治療有効性を有し得る。男性の２型糖尿病、内臓肥満症、インスリン抵抗性（高インスリン血症、異常脂血症）および代謝症候群には総テストステロンおよび遊離テストステロンならびに性ホルモン結合性グロブリン（ＳＨＢＧ）のレベル低下が付随していた。参照：Ｄ．Ｌａａｋｓｏｎｅｎら，Ｄｉａｂｅｔｅｓ  Ｃａｒｅ，２７（５）：１０３６−１０４１（２００４）；Ｄ．Ｌａａｋｓｏｎｅｎら，Ｅｕｒｏ．Ｊ  Ｅｎｄｏｃｒｉｎ，１４９：６０１−６０８（２００３）；Ｐ．Ｍａｒｉｎら，Ｉｎｔ．Ｊ．Ｏｂｅｓｉｔｙ．１６：９９１−９９７（１９９２）およびＰ．Ｍａｒｉｎら，Ｏｂｅｓｉｔｙ  Ｒｅｓ．，１（４）：２４５−２５１（１９９３）。
【００１３】
アンドロゲン受容体アゴニストはまた、アルツハイマー病（ＡＤ）のような神経変性疾患に治療有効性を有し得る。アンドロゲン受容体を介して神経保護を誘導するアンドロゲンの能力は、Ｊ．Ｈａｍｍｏｎｄら，“Ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ−ｍｅｄｉａｔｅｄ  ｎｅｕｒｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ｔｈｒｏｕｇｈ  ｔｈｅ  ａｎｄｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｐｒｉｍａｒｙ  ｎｅｕｒｏｎｓ，”Ｊ．Ｎｅｕｒｏｃｈｅｍ．，７７：１３１９−１３２６（２００１）によって報告された。Ｇｏｕｒａｓらは、テストステロンがアルツハイマー病のβ−アミロイドペプチドの分泌を減少させること、従ってＡＤの治療に使用できることを報告した。［（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９７：１２０２−１２０５（２０００）］。ＡＤの進行に関与するタンパク質の超リン酸化の阻害メカニズムも記載されている［Ｓ．Ｐａｐａｓｏｚｏｍｅｎｏｓ，“Ｔｅｓｔｏｓｔｅｒｏｎｅ  ｐｒｅｖｅｎｔｓ  ｔｈｅ  ｈｅａｔ  ｓｈｏｃｋ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｏｖｅｒ  ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｇｌｙｃｏｇｅｎ  ｓｙｎｔｈａｓｅ  ｋｉｎａｓｅ−３β  ｂｕｔ  ｎｏｔ  ｏｆ  ｃｙｃｌｉｎ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ  ｋｉｎａｓｅ  ５  ａｎｄ  ｃ−Ｊｕｎ  ＮＨ２−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｋｉｎａｓｅ  ａｎｄ  ｃｏｎｃｏｍｉｔａｎｔｌｙ  ａｂｏｌｉｓｈｅｓ  ｈｙｐｅｒｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  τ：Ｉｍｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ  ｆｏｒ  Ａｌｚｈｅｉｍｅｒ’ｓ  ｄｉｓｅａｓｅ，”Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．，９９：１４０−１１４５（２００２）］。
【００１４】
アンドロゲン受容体アゴニストはまた、筋の緊張および強度に有益な効果を有し得る。最近の研究は、“健康な性機能低下男性の生理的アンドロゲン置換が無脂肪体重、筋肉の大きさおよび最高随意強度の有意な向上に関連している”ことを証明した［Ｓ．Ｂｈａｓｉｎら，Ｊ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎ．，１７０：２７−３８（２００１）］。
【００１５】
アンドロゲン受容体モジュレーターは、男性および女性のリビドー低下を治療するために有用である。男性のアンドロゲン不足はリビドーの低下につながる。Ｓ．Ｈｏｗｅｌｌら，Ｂｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，８２：１５８−１６１。生殖可能年齢後期の多くの女性の低いアンドロゲンレベルは性的関心の減退の一因である。Ｓ．Ｄａｖｉｓ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，８４：１８８６−１８９１（１９９９）。１つの研究によれば、循環する遊離テストステロンが性的欲望にプラスの相関関係を有していた。同上。別の研究では、一次性または二次性のアドレナリン不足の女性に生理的ＤＨＥＡ置換（５０ｍｇ／日）を行った。ＤＨＥＡを投与した女性ではプラセーボを接種した女性に比べて、性的な期待、関心および満足の頻度が増加していた。Ｗ．Ａｒｌｔら，Ｎ  Ｅｎｇｌ．Ｊ．Ｍｅｄ．３４１：１０１３−１０２０（１９９９）。他の参考文献：Ｋ．Ｍｉｌｌｅｒ，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌ．Ｍｅｔａｂ．，８６：２３９５−２４０１（２００１）。
【００１６】
さらに、アンドロゲン受容体モジュレーターはまた、認識損傷の治療に有用であろう。最近の研究では、高用量の経口エストロゲンを単独でまたは高用量の経口メチルテストステロンと併用で閉経女性に４カ月間投与した。４ヶ月間のホルモン治療の前後に認識試験を行った。この調査では、エストロゲン（１．２５ｍｇ）とメチルテストステロン（２．５０ｍｇ）とを併用で服用した女性は記憶蓄積作業で一定レベルの成果を維持したが、エストロゲン（１．２５ｍｇ）だけを服用した女性は低い成果を示したことが知見された。Ａ．Ｗｉｓｎｉｅｗｓｋｉ，Ｈｏｒｍ．Ｒｅｓ．５８：１５０−１５５（２００２）。
【発明の開示】
【００１７】
Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドは以下の構造式を有している：
【００１８】
【化１】
2009518404.tif 000003
【００１９】
この化合物は、２００３年９月２５日公開の国際出願ＷＯ０３／０７７９１９にすでに開示されている。
【００２０】
（発明の概要）
本発明は、Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの結晶質多形、擬似多形および非晶質固体形、それらの使用および医薬組成物に関する。本発明はさらに、Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの非晶質および結晶質固体形の製造方法を提供する。
【００２１】
有効材料の様々な物理化学的特性を知ることは、例えばその製造および医薬加工、および／または、その保存、運送および治療用途を含む化合物のライフサイクルのすべての面で最適に該材料を使用するために重要である。薬理学的に有効な化合物が、例えば不十分な粉砕特性または不十分な溶解特性のような好ましくない物理的特性を有するが故に適切な医薬組成物に作製できないこともある。
【００２２】
本発明の１つの目的は、Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの結晶質多形性および擬似多形性および非晶質の固体形を提供することである。本発明の非晶質および結晶質の固体形は、優れた物理化学的特性、すなわち、望ましい安定性、望ましい医薬特性および優れた加工特性を有している。本発明の結晶質および非晶質の固体形は特に医薬用途に適応するように様々な配合ビヒクルに組込むことができる。
【００２３】
固体形の式Ｉの化合物はアンドロゲン受容体アゴニストとして有効であり、特にＳＡＲＭとして有効である。従って、本発明の多形性、擬似多形性および非晶質の固体形は、アンドロゲン不足によって発症するかまたはアンドロゲン投与によって軽減できる状態の治療に有用である。
【００２４】
（発明の詳細な説明）
本発明は、構造式：
【００２５】
【化２】
2009518404.tif 000004
を有しているＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの結晶質溶媒和物、水和物および無水物を含む多形および擬似多形ならびに非晶質固体形を提供する。本発明はまた固体形の本発明の化合物と医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物に関する。
【００２６】
多形は、結晶格子中に異なる配列および／または立体配座の分子を有している同じ化合物の２つ以上の結晶相である。１つの有効医薬化合物の異なる多形は異なる物理的および化学的特性を示し得る。所与の有効医薬化合物の異なる物理的および化学的特性はまた水分／溶媒含量に左右される。擬似多形は、１つの化合物の水和物および溶媒和物を含む。擬似多形は１種類以上の溶媒または水を化合物の結晶格子に取込んでいる。
【００２７】
１つの化合物の固態物性は、固体形の化合物を得るときの条件をコントロールすることによって操作できる。１つの化合物の異なる結晶構造は、色、安定性、加工性、溶解性および生体内利用率のような物理的および化学的特性の違いを示す。例えば、粒子が互いにどのように行き交うかを左右する流動性はこのような固態物性の１つであり、これは化合物がどのように粉砕されるかを左右する。不十分な流動性を補償して粉砕し易い医薬錠剤を得るために、医薬の配合業者はしばしば潤滑剤または滑沢剤として作用するタルクまたはデンプンのような他の補助成分を医薬組成物に添加しなければならない。好適な流動性および粉砕性を示す固体形の有効成分を選択することによってこのような補助成分の使用量を最小にするのが有利であろう。
【００２８】
化合物の別の固態物性は流体中例えば水中の溶解速度である。有効成分の溶解性は医薬製品の貯蔵安定性を左右する。さらに、有効成分の溶解速度は、経口投与された有効成分が患者の血流に到達できる速度を左右する。適当な固体形の選択によって有効成分の貯蔵安定性および／または溶解速度を最大にできる。
【００２９】
さらに、製薬産業では特定の固体形態の同定、製造および管理が臨床試験においてもまたは他の研究試験においても重要である。１つの薬物の所与の多形が臨床試験中に定常的に維持されないとき、コントロールできないエラー源が試験に導入されるので、試験中の正確な剤形を各ロット間で比較できない。
【００３０】
一般に、所与の化合物が様々な結晶質固体形を形成するか否かを予測することは困難である。これらの異なる結晶質固体形の構造的立体配置および物理的特性を予測することはいっそう困難である。
【００３１】
医薬的に有効な化合物の様々な多形、擬似多形および非晶質形を同定し利用して異なる物理的特性をもつ固体形の一覧表を作成するのが有利であろう。そうすることによって、例えば特定の溶解速度、粉砕特性、熱安定性または保存寿命のような特定の望ましい特性をもつ医薬剤形を設計できる。
【００３２】
本発明の１つの実施態様は、５．６＋／−０．１、７．６＋／−０．１および９．６＋／−０．１の２−シータ値に対応する特性回折ピークをもつＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを有しているＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの結晶質固体形Ａの遊離塩基である。無水結晶質形Ａはさらに、１１．２＋／−０．１、１３．４＋／−０．１および１５．２＋／−０．１の２−シータ値に存在する追加の回折ピークを特徴とする。無水結晶質形Ａはさらにまた、１６．３＋／−０．１および１７．３＋／−０．１の２−シータ値に存在する回折ピークを特徴とする
【００３３】
式Ｉの化合物の無水結晶質固体形Ａの遊離塩基は、３９．７、１１８．３、１６９．２および１２．６＋／−０．１ｐ．ｐ．ｍ．の化学シフト値をもつ特性シグナルを有している固体炭素−１３交差分極マジックアングルスピニング（ＣＰＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル（炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲ）を示す。結晶質固体形Ａはさらに、４４．０、１２１．４、１５８．２および１３．７＋／−０．１ｐ．ｐ．ｍ．の化学シフト値をもつシグナルを特徴とする。化合物Ｉの無水結晶質形Ａはさらにまた、４９．５、１４５．４、１２６．５および２５．０＋／−０．１ｐ．ｐ．ｍ．の化学シフト値をもつシグナルを特徴とする。図２は式Ｉの化合物の無水結晶質形Ａの固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【００３４】
また別の実施態様では、化合物Ｉの無水結晶質形Ａの固体フッ素−１９交差分極マジックアングルスピニング（ＣＰＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルを図３に示す。無水結晶質固体形は−１２８．９＋／−０．１ｐ．ｐ．ｍ．の化学シフト値をもつ特性シグナルを示す。
【００３５】
本発明の１つの実施態様では、化合物Ｉの無水結晶質形Ａが図４に示すＤＳＣ曲線を有している。融解吸熱線は約２８１．２℃にピークを示す。
【００３６】
本発明の１つの実施態様は、ａ）少なくとも１種類の溶媒に化合物を溶解して混合物を形成する段階と、ｂ）結晶化が完了して固体が形成されるまで混合物を還流させる段階と、ｃ）固体を単離する段階と、ｄ）固体を乾燥する段階とを含む式Ｉの化合物の無水結晶質形Ａの製造方法に関する。
【００３７】
本発明の１つの実施態様では、少なくとも１種類の溶媒が、１，２−ジメトキシエタン、イソプロピルアルコール、イソプロピルアセテートおよびアセトンから選択される。
【００３８】
本発明の１つの実施態様では、固体を単離する段階がさらに、固体を真空フィルターで濾過し、１，２−ジメトキシエタン、イソプロピルアルコール、イソプロピルアセテートおよびアセトンから選択された少なくとも１種類の洗浄用溶媒で固体を洗浄する段階を含む。
【００３９】
本発明の別の実施態様では、溶媒が１，２−ジメトキシエタンである。
【００４０】
本発明の１つの実施態様は、７．８＋／−０．１、８．５＋／−０．１および１０．２＋／−０．１の２−シータ値に対応する特性回折ピークをもつＸＲＰＤパターンを有しているＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの吸湿性結晶質形Ｂである。吸湿性結晶質形Ｂはさらに、１２．２＋／−０．１、１２．６＋／−０．１および１３．５＋／−０．１の２−シータ値に存在する追加の回折ピークを特徴とする。吸湿性結晶質形Ｂはさらにまた、１３．９＋／−０．１および１６．８＋／−０．１の２−シータ値に存在する回折ピークを特徴とする。吸湿性結晶質形ＢのＸＲＰＤを図５に示す。
【００４１】
本発明の１つの実施態様では、化合物Ｉの吸湿性結晶質形Ｂが図６に示すＤＳＣ曲線を有している。ＤＳＣ温度記録図は、ＴＧＡの初期重量減に対応する約６６．０℃中心の広範囲の吸熱線と、これに続く約１６４．０℃の融解吸熱点を有している。
【００４２】
本発明の別の実施態様は、非晶質Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドを溶媒に溶解し、非晶質形を確実に溶解するために混合物を加温し、混合物を冷却し、混合物に針（結晶）を形成させ、形成された固体を洗浄用溶媒で洗浄し、固体を乾燥することによって行う化合物Ｉの吸湿性結晶質形Ｂの形成を含む。１つの実施態様で、溶媒はエタノールであり、洗浄用溶媒はエタノールである。本発明の別の実施態様で、非晶質形対溶媒の比は質量基準で３：４、例えば３グラムの非晶質形化合物に対して４（約５ｍｌ）のエタノールである。また別の実施態様では溶液を約６０℃に加熱する。
【００４３】
動的吸湿性試験では、吸湿性結晶質形Ｂが２５℃、相対湿度約２５％から約９５％までの範囲で約７％の水分を次第に吸収する。重量増加は２５％ＲＨの初期サンプル全重量を基準とする。さらに、吸湿性結晶質形Ｂは２５℃で相対湿度が９５％から５％ＲＨに減少したときにその全重量の約８％を失う。結晶質形Ｂの結晶化度は水分の吸収−脱着後にゆっくりと低下する。
【００４４】
本発明の別の実施態様は、１０．１＋／−０．１、１１．０＋／−０．１および１２．４＋／−０．１の２−シータ値に対応する特性回折ピークをもつＸＲＰＤパターンを有している式Ｉの化合物の結晶質水和物固体形Ｃである。結晶質水和物形Ｃはさらに、１３．２＋／−０．１、１４．１＋／−０．１および１８．９＋／−０．１に２−シータ値に存在する追加の回折ピークを特徴とする。結晶質水和物形Ｃはさらにまた、２０．３＋／−０．１および２２．７＋／−０．１の２−シータ値に存在する回折ピークを特徴とする。結晶質水和物形ＣのＸＲＰＤを図７に示す。
【００４５】
本発明の別の実施態様は、図８に示す化合物Ｉの結晶質水和物形ＣのＤＳＣ曲線である。約１２７．７℃中心の広範囲の脱水吸熱線、約２００．９℃の結晶化発熱活性、約２６８．０℃の融解／分解吸熱点が順次に存在する。約２５℃から約１５０℃までの約４．５％の形Ｃの初期重量減の原因は脱水（一水和物の理論値３．６％）であり、次いで２５０℃以上で熱分解する。
【００４６】
結晶質水和物形Ｃは、撹拌容器で結晶質エタノラート形Ｇを水に懸濁させ、混合物を暫時熟成することによって製造できる。本発明の１つの実施態様で、結晶質エタノラート形Ｇ対水の比は質量基準で約１：１００である。
【００４７】
本発明の１つの実施態様は、８．８＋／−０．１、９．９＋／−０．１および１２．５＋／−０．１の２−シータ値に対応する特性回折ピークをもつＸＲＰＤパターンを有している式Ｉの化合物の無水結晶質形Ｄである。無水結晶質形Ｄはさらに、１４．８＋／−０．１、１６．３＋／−０．１および１７．９＋／−０．１の２−シータ値に存在する追加の回折ピークを特徴とする。無水結晶質形Ｄはさらにまた、１４．３＋／−０．１、１５．２＋／−０．１および１６．８＋／−０．１の２−シータ値に存在する回折ピークを特徴とする。無水結晶質形ＤのＸＲＰＤを図９に示す。
【００４８】
式Ｉの化合物の無水結晶質固体形Ｄの遊離塩基は、２３．８、３７．９および１７４．１＋／−０．１ｐ．ｐ．ｍ．の化学シフト値をもつ特性シグナルを有している固体炭素−１３交差分極マジックアングルスピニング（ＣＰＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル（炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲ）を有している。結晶質固体形Ｄはさらに、１３．８、４８．８および１５６．９＋／−０．１の化学シフト値をもつシグナルを特徴とする。化合物Ｉの無水結晶質形Ｄはさらにまた、２０．９、３３．６および１２１．２＋／−０．１ｐ．ｐ．ｍ．の化学シフト値をもつシグナルを示すことを特徴とする。図１０は式Ｉの化合物の無水結晶質形Ｄの固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【００４９】
また別の実施態様では、化合物Ｉの無水結晶質形Ｄの固体フッ素−１９  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲスペクトルを図１１に示す。無水結晶質固体形は−１２７．７および−１２８．９＋／−０．１ｐ．ｐ．ｍ．の化学シフト値をもつ特性シグナルを示す。
【００５０】
本発明の別の実施態様は、図１２に示す化合物Ｉの形ＤのＤＳＣ曲線である。このＤＳＣ曲線は約２７３℃にピークをもつ融解吸熱線を示す。
【００５１】
無水結晶質形Ｄは、四水和物形Ｅを少なくとも１種類の溶媒に溶解して溶液を形成し、少なくとも１種類のアンチ溶媒を溶液が過飽和になるまで溶液に充填し、バッチを熟成し、場合によっては固体が形成されるまで追加量のアンチ溶媒を添加するかまたはバッチを冷却することによって製造される。溶液に形Ｄのシードを播種することによって過飽和溶液からの固体形成を促進し得る。
【００５２】
少なくとも１種類の溶媒の非限定例は、ジメチルアセトアミド（ＤＭＡｃ）、メタノール、ジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）、Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）およびＮ――メチル−２−ピロリドン（ＮＭＰ）から選択される。少なくとも１種類のアンチ溶媒の非限定例は、ヘプタン、トルエン、シクロヘキサン、水、アセトニトリル、イソプロピルアセテート、イソブチルアセテートおよびメチルｔｅｒｔ−ブチルエーテル（ＭＴＢＥ）から選択される。溶媒／アンチ溶媒系の非限定例は、メタノール／水、ＤＭＳＯ／水、および、ＮＭＰ／水を含む。
【００５３】
図１３は、本発明の別の実施態様、結晶質四水和物形ＥのＸ線回折パターンを示す。四水和物形Ｅは６．１＋／−０．１、１２．８＋／−０．１および１３．１＋／−０．１の２−シータ値に対応する特性回折ピークを有している。四水和物形Ｅはさらに、１３．９＋／−０．１、１７．６＋／−０．１および１９．０＋／−０．１の２−シータ値に存在する追加の回折ピークを特徴とする。四水和物形Ｅはさらにまた、１９．８＋／−０．１および２２．６＋／−０．１の２−シータ値に存在する回折ピークを特徴とする。
【００５４】
式Ｉの化合物の四水和物形Ｅの遊離塩基は、１３．１、２８．９、３９．３．および１５４．２＋／−０．１ｐ．ｐ．ｍ．の化学シフト値をもつ特性シグナルを有している固体炭素−１３交差分極マジックアングルスピニング（ＣＰＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル（炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲ）を示す。四水和物形Ｅはさらに、１４．６、４９．９、１７３．２および１２０．６＋／−０．１ｐ．ｐ．ｍ．の化学シフト値をもつシグナルを特徴とする。化合物Ｉの四水和物形Ｆはさらにまた、２３．４、３５．１、６３．６および１６１．１＋／−０．１ｐ．ｐ．ｍ．の化学シフト値をもつシグナルを示すことを特徴とする。図１４は、式Ｉの化合物の四水和物形Ｆの固体炭素−１３  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲスペクトルを示す。
【００５５】
また別の実施態様では、化合物Ｉの四水和物形Ｅの固体フッ素−１９  ＣＰＭＡＳ  ＮＭＲスペクトルを図１５に示す。四水和物形Ｅは−１２６．５、−１２８．０および−１２９．３＋／−０．１ｐ．ｐ．ｍ．の化学シフト値をもつ特性シグナルを示す。
【００５６】
図１６は、化合物Ｉの結晶質四水和物形ＥのＤＳＣ曲線である。約９０℃を中心とする広い吸熱線はサンプルから水が失われ、次いで新しい形に再結晶化し、その後約１７７℃にこの形の融解吸熱線が存在することを示す。
【００５７】
四水和物形Ｅは、無水結晶質遊離塩基形ＡをｐＨ約２以下の溶液に入れ、室温および周囲条件下に維持することによって製造できる。
【００５８】
本発明の別の実施態様は、６．３＋／−０．１、７．６＋／−０．１および１２．５＋／−０．１の２−シータ値に対応する特性回折ピークをもつＸＲＰＤパターンを有している化合物Ｉのセスキ水和物形Ｆである。セスキ水和物形Ｆはさらに、１３．５＋／−０．１、１５．５＋／−０．１および１８．３＋／−０．１の２−シータ値に存在する追加の回折ピークを特徴とする。セスキ水和物形Ｆはさらにまた、１９．７＋／−０．１および２１．０＋／−０．１の２−シータ値に存在する回折ピークを特徴とする。セスキ水和物形ＦのＸＲＰＤを図１７に示す。
【００５９】
図１８は、化合物Ｉのセスキ水和物形ＦのＤＳＣ曲線である。ＤＳＣトレースは、脱水によって吸熱線のかなりの低下が観察された四水和物形ＥのＤＳＣトレースと同様の性質を示す。ＤＳＣトレースは閉鎖蒸発皿で２５℃から３５０℃まで１０℃／分の加熱速度を用いて作成した。サンプルの初期重量を基準として約５．１％の全重量減が観察された。セスキ水和物の理論的重量減は５．３％と算出された。
【００６０】
セスキ水和物形Ｆは、四水和物形Ｅを４０℃で少なくとも１０時間真空乾燥することによって製造できる。
【００６１】
本発明の１つの実施態様は、８．２＋／−０．１、１０．０＋０．１および１３．４＋／−０．１の２−シータ値に対応する特性回折ピークをもつＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンを有している化合物Ｉの結晶質エタノラート形Ｇである。結晶質エタノラート形Ｇはさらに、１４．６＋／−０．１、１５．３＋／−０．１および１６．４＋／−０．１の２−シータ値に存在する追加の回折ピークを特徴とする。無水結晶質エタノラート形Ｇはさらにまた、１８．１＋／−０．１および１９．８＋／−０．１の２−シータ値に存在する回折ピークを特徴とする。図１９は結晶質エタノラート形ＧのＸ線回折パターンを示す。
【００６２】
図２０は、化合物Ｉの結晶質エタノラート形Ｇの代表的ＤＳＣ曲線を示す。結晶質エタノラート形ＧのＤＳＣトレースは、約９７．１℃および１２１．６℃を中心とする２つの広い脱溶媒和吸熱線および約１６５．９℃の融解吸熱点を順次に示す。
【００６３】
２５℃から１００℃の間の約５．０％の全重量減は結晶質エタノラート形Ｇに典型的である。熱分解は約２５０℃以上で生じる。初期重量減から発生するガスは、ＴＧＡ炉排気に接続した質量分析計を使用してエタノールであることが確認された。
【００６４】
結晶質エタノラート形Ｇは、非晶質Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスト−１−エン−１７β−カルボキサミドをエタノールに溶解し、溶液を約６０℃に加熱し、次いで固体が得られるまで混合物を室温に冷却することによって形成できる。
【００６５】
１つの実施態様すなわち本発明の１つの多形／擬似多形は、“実質的に純粋”であり、少なくとも約８５％の多形性／擬似多形性純度を有している。すなわち、特定の結晶質形に関して考察すると、該結晶質形は、他の多形性、非晶質性および／または擬似多形性の形を含む不純物を約１５重量％未満含有する。この実施態様の１つの変形では、多形性／擬似多形性純度が少なくとも９５％である。
【００６６】
別の実施態様で、式Ｉの化合物の非晶質形は“実質的に純粋”であり、少なくとも約８５％の純度を有している。すなわち、式Ｉの化合物の固体形に関して考察すると、該非晶質形は、他の多形性および／または擬似多形性の形を含む不純物を約１５重量％未満含有する。この実施態様の１つの変形では、非晶質純度が少なくとも９５％である。典型的な非晶質材料のＸＲＰＤパターンを図２１に示す。
【００６７】
Ｘ線粉末回折試験は、分子構造、結晶化度および多形性を特性決定するために広く使用されている。式Ｉの化合物の結晶質形のＸ線粉末回折（ＸＲＰＤ）パターンは、ＰＷ３０４０／６０コンソールを備えたＰｈｉｌｉｐｓ  Ａｎａｌｙｔｉｃａｌ  Ｘ’Ｐｅｒｔ  ＰＲＯＸ線回折システムで作成した。ＰＷ３３７３／００セラミックＣｕ  ＬＥＦ  Ｘ線管のＫα線をソースとして使用した。
【００６８】
上述のＸ線粉末回折パターンに加えて、化合物Ｉの結晶質形をさらに、固体炭素−１３およびフッ素−１９核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルによって特性決定した。固体炭素−１３ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＳＸ  ４００ＷＢ  ＮＭＲシステムにＢｒｕｋｅｒ  ４ｍｍ二重共鳴ＣＰＭＡＳプローブを使用して得られた。炭素−１３  ＮＭＲスペクトルは、プロトン／炭素−１３交差分極マジックアングルスピニングを可変振幅交差分極および全サイドバンド削除で使用した。サンプルを１０．０ｋＨｚでスピンさせ、合計１０２４のスキャンをリサイクル遅延１０秒で集めた。ＦＴを行う前にスペクトルに１０Ｈｚのラインブロードニングを加えた。化学シフトは、グリシンのカルボニル炭素（１７６．０３ｐ．ｐ．ｍ．）を第二基準として使用しＴＭＳスケールで報告する。
【００６９】
固体フッ素−１９ＮＭＲスペクトルは、Ｂｒｕｋｅｒ  ＤＳＸ  ５００ＷＢ  ＮＭＲシステムにＢｒｕｋｅｒ  ４ｍｍ  Ｈ／Ｆ／Ｘプローブを使用して得られた。該ＮＭＲスペクトルは、プロトン／フッ素−１９交差分極マジックアングルスピニングを可変振幅交差分極および６２．５ＨｚのＴＰＰＭデカップリングで使用した。サンプルを１５．０ｋＨｚでスピンさせ、合計１５０のスキャンをリサイクル遅延５秒で集めた。ＦＴを行う前にスペクトルに１０Ｈｚのラインブロードニングを加えた。化学シフトは、外部第二基準として化学シフト−１２２ｐｐｍのポリ（テトラフルオロエチレン）（テフロン（登録商標））を使用して報告する。
【００７０】
示差走査熱量計（ＤＳＣ）データは、ＴＡ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ  ＤＳＣ  ２９１０または同等の計器を使用して取得した。１から６ｍｇのサンプルを蓋のない蒸発皿で計量する。次にこの蒸発皿を縁曲げし、熱量計セルのサンプル位置に配置する。空の蒸発皿を参照位置に配置する。熱量計セルを閉じ、窒素流をセルに通す。加熱プログラムはサンプルを１０℃／分の加熱速度で約３００℃の温度まで加熱するように設定する。加熱プログラムを開始させる。ランが完了すると、システムソフトウェアに内蔵されたＤＳＣ解析プログラムを使用してデータを解析する。吸熱線が観察される温度範囲より上または下にあるベースライン温度点間の融解吸熱線を積分する。報告したデータは開始温度、ピーク温度およびエンタルピーである。
【００７１】
本発明の１つの実施態様はＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドの非晶質固体形である。図２１は化合物Ｉの非晶質形の典型的なＸＲＰＤパターンを示す。
【００７２】
本発明の固体形は、２つ以上の形の混合物を含み得る。本発明の固体形の混合物は、混合物中に存在する種々の多形のおのおのの特性Ｘ線回折ピークを有するであろう。
【００７３】
ＳＡＲＭとして同定された本発明化合物の固体形は、アンドロゲン不足によって発症しアンドロゲン投与によって軽減できる疾患または状態を治療するために有用である。このような非晶質形、溶媒和物形および結晶質形は、単独療法で、または、ビスホスホネート、エストロゲン、ＳＥＲＭ類、カテプシンＫインヒビター、αｖβ３インテグリン受容体アンタゴニスト、カルシトニンおよびプロトンポンプインヒビターのような骨吸収インヒビターと併用して女性および男性の骨粗鬆症の治療に理想的である。それらはまた、上皮小体ホルモンまたはその類似体のような骨形成を刺激する薬剤と共に使用できる。本発明のＳＡＲＭ化合物の様々な固体形はまた、前立腺癌および良性前立腺過形成（ＢＰＨ）のような前立腺疾患治療のために単独でまたは他の薬剤と組合せて使用できる。さらに、固体形の本発明の化合物は、皮膚に対する作用（ニキビおよび顔面の体毛増殖）が極めて少なく、多毛症の治療にも有用である。さらに、構造式Ｉの化合物は筋成長を刺激でき、筋減少症および脆化の治療に有用である。それらは肥満症の治療で内臓脂肪を減少させるために使用できる。さらに本発明の化合物は、中枢神経系でアンドロゲンアゴニズムを示し、血管運動症状（ホットフラッシュ）を治療するため、ならびに、エネルギーおよびリビドーを増加するために有用である。それらは、アルツハイマー病の治療に使用できる。
【００７４】
固体形の式Ｉの化合物はまた、骨修復能力を有するので前立腺癌の治療に単独でまたはＧｎＲＨアゴニスト／アンタゴニスト療法の補助薬として使用でき、または、前立腺のアンドロゲンに拮抗し骨減量を極めて少なくする能力を有するので抗アンドロゲン療法に代替使用できる。さらに、本発明の化合物は、骨修復能力を有するので膵臓癌の治療に抗アンドロゲン治療の補助薬として使用でき、または抗アンドロゲン特性を利用して単独療法に使用でき、伝統的な抗アンドロゲンに比べて骨節約性であるという利点を提供する。さらに本発明の化合物は、赤血球および血小板のような血液細胞の数を増加させ、再生不能性貧血のような造血障害の治療に有用である。上述したような組織選択的アンドロゲン受容体アゴニズムを考察すると、結晶質および非晶質形の式Ｉの化合物は性機能低下（アンドロゲン不足）男性のホルモン置換療法に理想的である。
【００７５】
本発明はまた、腹部脂肪過多、代謝症候群（“インスリン抵抗性症候群”および“Ｘ症候群”としても知られる）およびＩＩ型糖尿病の男性患者を安全にかつ特異的に治療する方法に関する。
【００７６】
式Ｉの化合物はアンドロゲン受容体の組織選択的モジュレーター（ＳＡＲＭ）であることが知見された。１つの特徴によれば、固体形の本発明の化合物は、哺乳動物のアンドロゲン受容体の機能を活性化するため、特に骨および／または筋組織のアンドロゲン受容体の機能を活性化し男性個体の前立腺または女性個体の子宮のアンドロゲン受容体の機能を阻止または阻害（“拮抗”）するために有用である。
【００７７】
本発明の別の目的は、皮膚の増毛や声帯に影響を与えることなく男性個体の前立腺または女性個体の子宮でＡＲアゴニストによって誘導されるアンドロゲン受容体の機能を弱化または遮断するため、ならびに、血液脂質レベルをコントロールする器官（例えば肝）の機能を活性化しないが骨および／または筋組織のアンドロゲン受容体の機能を活性化するための非晶質形または結晶質形の式Ｉの化合物の使用である。
【００７８】
構造式Ｉの化合物は典型的にはサブマイクロモルでアンドロゲン受容体に結合親和性を示す。従って本発明の化合物は、アンドロゲン受容体機能に関連した障害に悩む哺乳動物の治療に有用である。（１つ以上の）多形、（１つ以上の）擬似多形および非晶質形ならびにそれらの混合物を含む化合物を治療有効量で哺乳動物に投与して、アンドロゲン不足のようなアンドロゲン受容体機能に関連する障害、アンドロゲン置換によって軽減できるかまたはアンドロゲン置換によって改善できる障害を治療する。これらの例は、低下した筋緊張の強化、骨粗鬆症、骨減少症、グルココルチコイド誘導骨粗鬆症、歯周病、骨折（例えば脊椎骨および非脊椎骨の骨折）、骨再建術後の骨損傷、筋減少症、脆化、加齢肌、男性性腺機能低下症、女性の閉経後症状、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高脂血症、肥満症、再生不能性貧血、他の造血障害、膵臓癌、炎症性関節炎および関節修復、ＨＩＶ衰弱、前立腺癌、良性前立腺過形成（ＢＰＨ）、癌カテキシー、アルツハイマー病、筋ジストロフィー、認識減退、性的機能不全、睡眠時無呼吸、抑鬱、未熟卵巣不全および自己免疫疾患を含む。治療は、このような治療を要する哺乳動物に治療有効量の構造式Ｉの化合物を投与することによって行う。さらに、固体形の式Ｉの化合物は単独でまたは他の有効薬剤と組合せて医薬組成物の成分として有用である。
【００７９】
１つの実施態様では、非晶質および結晶質固体形の本発明の化合物が骨粗鬆症、骨減少症、グルココルチコイド誘導骨粗鬆症、歯周病、ＨＩＶ衰弱、前立腺癌、癌カテキシー、肥満症、関節炎状態、再生不能性貧血のような貧血、筋ジストロフィー、アルツハイマー病、認識減退、性的機能不全、睡眠時無呼吸、抑鬱、良性前立腺過形成（ＢＰＨ）、腹部脂肪過多、代謝症候群、ＩＩ型糖尿病およびアテローム性動脈硬化症を非限定例とするアンドロゲン不足によって発症するかまたはアンドロゲン置換によって軽減できる男性個体の状態を治療するために単独でまたは他の有効薬剤と組合せて使用できる。治療は、このような治療を要する男性個体に治療有効量の構造式Ｉの化合物を投与することによって行う。
【００８０】
“関節炎状態”または“関節炎状態群”という用語は、炎症性病巣が関節に限定されている疾患または関節の何らかの炎症状態を表し、もっとも顕著な例は骨関節炎およびリウマトイド関節炎である（Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ  Ｄｉｃｔｉｏｎａｒｙ  ｏｆ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ；Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；１ｓｔ  ｅｄｉｔｉｏｎ，Ｊａｎｕａｒｙ  １５，１９９２）。本発明の式Ｉの化合物はまた単独でまたは組合せて、ベーチェット病；滑液嚢炎および腱炎；ＣＰＰＤ沈着疾患；手根管症候群；エーラース・ダンロス症候群；線維筋痛症；痛風；感染性関節炎；炎症性腸疾患；若年性関節炎；ループス・エリテマトーデス；ライム病；マルファン症候群；筋炎；骨関節炎；骨形成不全症；骨壊死；多発性関節炎；多発性リウマチ性筋痛症；乾癬性関節炎；レイノー現象；反射性交感神経異栄養症候群；ライター症候群；リウマトイド関節炎；強皮症；シェーグレン症候群のような関節炎状態の治療または予防に使用できる。本発明の１つの実施態様は、非晶質および結晶質形の式Ｉの化合物を単独でまたは混合物として治療有効量で投与する段階を含む関節炎状態の治療または予防を包含する。より下位概念的な実施態様は、治療有効量の式Ｉの化合物を投与する段階を含む骨関節炎の治療または予防である。参照：Ｃｕｔｏｌｏ  Ｍ，Ｓｅｒｉｏｌｏ  Ｂ，Ｖｉｌｌａｇｇｉｏ  Ｂ，Ｐｉｚｚｏｒｎｉ  Ｃ，Ｃｒａｖｉｏｔｔｏ  Ｃ，Ｓｕｌｌｉ  Ａ，Ａｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．２００２  Ｊｕｎ；９６６：１３１−４２；Ｃｕｔｏｌｏ，Ｍ．Ｒｈｅｕｍ  Ｐｉｓ  Ｃｌｉｎ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍ  ２０００  Ｎｏｖ；２６（４）：８８１−９５；Ｂｉｊｌｓｍａ  ＪＷ、Ｖａｎ  ｄｅｎ  Ｂｒｉｎｋ  ＨＲ．Ａｍ  Ｊ  Ｒｅｐｒｏｄ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １９９２  Ｏｃｔ−Ｄｅｃ；２８（３−４）：２３１−４；Ｊａｎｓｓｏｎ  Ｌ．Ｈｏｌｍｄａｈｌ  Ｒ．；Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ  ２００１  Ｓｅｐ；４４（９）：２１６８−７５；Ｐｕｒｄｉｅ  ＤＷ．Ｂｒ  Ｍｅｄ  Ｂｕｌｌ  ２０００；５６（３）：８０９−２３。同じく参照：Ｍｅｒｃｋ  Ｍａｎｕａｌ，１７ｔｈ  ｅｄｉｔｉｏｎ，ｐｐ．４４９−４５１。
【００８１】
関節炎状態を治療するために組合せ使用されるとき、式Ｉの化合物は、併用療法に有用な本文中に記載の薬物のいずれかと共に使用できるか、または、コルチコステロイド、細胞障害薬（または他の疾患調節薬または寛解誘導薬）、金治療、メトトレキセート、ＮＳＡＩＤおよびＣＯＸ−２インヒビターのような関節炎状態を治療または予防する公知の薬物と共に使用できる。
【００８２】
別の実施態様では本発明の化合物は、骨粗鬆症、骨減少症、加齢肌、グルココルチコイド誘導骨粗鬆症、閉経後症状、歯周病、ＨＩＶ衰弱、癌カテキシー、肥満症、再生不能性貧血のような貧血、筋ジストロフィー、アルツハイマー病、未熟卵巣不全、認識減退、性的機能不全、抑鬱、炎症性関節炎および関節修復、アテローム性動脈硬化症および自己免疫疾患を非限定例とする、アンドロゲン不足によって発症するかまたはアンドロゲン置換によって軽減できる女性個体の状態を治療するために単独でまたは他の有効薬剤と組合せて使用できる。治療は、このような治療を要する女性個体に治療有効量の構造式Ｉの化合物を投与することによって行う。
【００８３】
式Ｉの化合物はまた、例えばヒトのような哺乳動物の筋緊張の強化に有用である。非晶質および結晶質形の構造式Ｉの化合物はまた、前立腺癌の治療において伝統的アンドロゲン遮断療法の補助薬として、骨を修復し、骨減量を最小にし、骨ミネラル密度を維持するために使用できる。すなわち、これらは、Ｐ．Ｌｉｍｏｎｔａら，Ｅｘｐ．Ｏｐｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｄｒｕｇｓ，１０：７０９−７２０（２００１）；ＨＪ．Ｓｔｒｉｅｋｅｒ，Ｕｒｏｌｏｇｙ，５８（Ｓｕｐｐｌ．２Ａ）：２４−２７（２００１）；Ｒ．Ｐ．Ｍｉｌｌａｒら，Ｂｒｉｔｉｓｈ  Ｍｅｄｉｃａｌ  Ｂｕｌｌｅｔｉｎ．５６：７６１−７７２（２０００）；Ａ．Ｖ．Ｓｃｈａｌｌｙら，Ａｄｖａｎｃｅｄ  Ｄｒｕｇ  Ｄｅｌｉｖｅｒｙ  Ｒｅｖｉｅｗｓ，２８：１５７−１６９（１９９７）に開示されているようなＧｎＲＨアゴニスト／アンタゴニストを含む伝統的なアンドロゲン遮断療法と共に使用できる。固体形の式Ｉの化合物は、フルタミド、２−ヒドロキシフルタミド（フルタミドの活性代謝産物）、ニルタミドおよびビカルタミド（ＣａｓｏｄｅｘＴＭ）のような抗アンドロゲン剤と組合せて前立腺癌の治療に使用できる。
【００８４】
さらに、本発明はまた、それらのアンドロゲンアンタゴニスト特性を利用してまたはフルタミド、２−ヒドロキシフルタミド（フルタミドの活性代謝産物）、ニルタミドおよびビカルタミド（ＣａｓｏｄｅｘＴＭ）のような抗アンドロゲン剤の補助薬として膵臓癌の治療に使用できる。
【００８５】
“癌を治療する”または“癌の治療”という用語は、癌状態に罹った哺乳動物への投与を表し、また、癌細胞を殺すことによって癌状態を軽減する効果ならびに癌の増殖および／または転移を阻害する効果を表す。
【００８６】
構造式Ｉの化合物は、脂質代謝に対する副作用を最小にできる。従って、それらの組織選択的アンドロゲンアゴニスト特性を考察すると、本発明の化合物は、性機能低下（アンドロゲン不足）の男性個体のホルモン置換療法として既存の方法を凌駕する利点を示す。
【００８７】
さらに、構造式Ｉの化合物は、赤血球および血小板のような血液細胞の数を増加し、再生不能性貧血のような造血障害の治療に使用できる。
【００８８】
本発明の１つの実施態様では、低下した筋緊張の強化、骨粗鬆症、骨減少症、グルココルチコイド誘導骨粗鬆症、歯周病、骨折、骨再建術後の骨損傷、筋減少症、脆化、加齢肌、男性性腺機能低下症、女性の閉経後症状、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高脂血症、肥満症、再生不能性貧血およびその他の造血障害、膵臓癌、炎症性関節炎および関節修復、ＨＩＶ衰弱、前立腺癌、良性前立腺過形成（ＢＰＨ）、癌カテキシー、アルツハイマー病、筋ジストロフィー、認識減退、性的機能不全、睡眠時無呼吸、抑鬱、未熟卵巣不全および自己免疫疾患から選択された障害を治療または改善するために治療有効量の非晶質、多形性および擬似多形性の形の式Ｉの化合物を哺乳動物に投与する。
【００８９】
別の実施態様では、低下した筋緊張、骨粗鬆症、骨減少症、グルココルチコイド誘導骨粗鬆症、歯周病、骨折、骨再建術後の骨損傷、筋減少症、アルツハイマー病および脆化から選択された障害を治療または改善するために治療有効量の非晶質または結晶質形の式Ｉの化合物を単独でまたは組合せて使用できる。
【００９０】
別の実施態様では、男性性腺機能低下症、女性の閉経後症状、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高脂血症、肥満症、再生不能性貧血およびその他の造血障害、膵臓癌、炎症性関節炎および関節修復、ＨＩＶ衰弱、前立腺癌、良性前立腺過形成（ＢＰＨ）、癌カテキシー、筋ジストロフィー、認識減退、性的機能不全、睡眠時無呼吸、抑鬱、未熟卵巣不全および自己免疫疾患のような障害を治療または改善するために非晶質および結晶質形の本発明の化合物を使用できる。
【００９１】
本発明の化合物の固体形は、鏡像異性体的に純粋な形態で投与できる。ラセミ混合物は多数の慣用方法のいずれかによって個別の鏡像異性体に分割できる。これらの方法としては、キラルクロマトグラフィー、キラル副剤で誘導体化し次いでクロマトグラフィーもしくは結晶化によって分離する方法、ジアステレオマー塩の分別結晶化、などがある。
【００９２】
本発明でアンドロゲン受容体の“アゴニスト”として機能するために使用された本発明の式Ｉの化合物は、アンドロゲン受容体に結合し該受容体に特有の生理的または薬理的応答を開始させる。“組織選択的アンドロゲン受容体モジュレーター”という用語は、いくつかの組織では天然リガンドの作用を模倣するが他の組織ではそうでないアンドロゲン受容体リガンドを表す。“部分アゴニスト”は、化合物の使用量にかかわりなく受容体集団の最大活性化を誘導できないアゴニストである。“完全アゴニスト”は、所与の濃度でアンドロゲン受容体集団の完全活性化を誘導する。アンドロゲン受容体の“アンタゴニスト”として機能する式Ｉの化合物は、アンドロゲン受容体に結合し、天然のアンドロゲン受容体リガンドによって正常に誘導されるアンドロゲン関連応答を遮断または阻害できる。
【００９３】
“治療有効量”という用語は、組織、系、動物またはヒトの体内で研究者、獣医、内科医または他の臨床医が求めるような生物学的または医学的応答を誘発する構造式Ｉの化合物の量を意味する。
【００９４】
本文中に使用した“組成物”という用語は、特定した成分を特定した量で含む生成物、および、特定した量の特定した成分の組合せから直接または間接に得られた生成物を含意する。
【００９５】
“医薬的に許容される”という用語は、担体、希釈剤または賦形剤が配合物の他の成分と適合性でなければならないこと、および、そのレシピエントに有害であってはならないことを意味する。
【００９６】
“化合物の投与”および“化合物を投与する”という用語は、本発明の化合物または本発明の化合物のプロドラッグを要治療個体に与えることを意味すると理解されたい。
【００９７】
“アンドロゲン受容体によって媒介される機能を組織選択的に変調する”という用語は、アンドロゲン受容体によって媒介される機能が、同化（骨および／または筋肉）組織で選択的に（または差別的に）変調され、前立腺、精巣、精嚢、卵巣、子宮のような男性性徴（生殖）組織およびその他の性別副存組織ではこのような変調が存在しないことを意味する。１つの実施態様では、同化組織中でアンドロゲン受容体の機能が活性化され、男性性徴組織中でアンドロゲン受容体の機能が遮断または抑制される。別の実施態様では、同化組織のアンドロゲン受容体の機能が遮断または抑制され、アンドロゲン性組織のアンドロゲン受容体の機能が活性化される。
【００９８】
本発明の治療方法を実施するための非晶質または結晶質形の構造式Ｉの化合物の投与は、有効量の構造式Ｉの化合物をこのような治療または予防を必要とする患者に投与することによって行う。本発明方法による予防的投与の必要性は公知の危険要因に基づいて判断する。該当症例の担当医が最終分析で個々の化合物の有効量を決定するが、有効量は、治療すべき正確な疾患、疾患の重篤度、患者が罹患している他の疾患または状態、選択された投与経路、患者に同時に必要な他の薬物および治療とその他の医師の判断要因に従属する。
【００９９】
固定用量薬として配合されるとき、このような合一型製品には、下記の薬用量範囲内の非晶質および結晶質形の式Ｉの化合物と、それぞれの認可薬用量範囲内の（１種以上の）他の医薬有効物質とが使用される。あるいは、合一型配合物が適当でないときは、非晶質および結晶質形の化合物を医薬的に許容される（１種以上の）既知の薬剤と順次に使用できる。
【０１００】
一般に、非晶質または結晶質形の構造式Ｉの化合物の１日投薬量は、１日に成人で約０．０１から約１０００ｍｇの広い範囲で変更できる。例えば、投薬量の範囲は約０．１から約２００ｍｇ／日である。経口投与するための組成物は、治療される哺乳動物への投薬量を症状に応じて調節できるように、約０．０１から約１０００ｍｇ、例えば、０．０１、０．０５、０．１、０．５、１．０、２．５、３．０、５．０、６．０、１０．０、１５．０、２５．０、５０．０、７５、１００、１２５、１５０、１７５、１８０、２００、２２５および５００ミリグラムの有効成分を含有する錠剤の形態で提供される。
【０１０１】
投与は１日に一回の投与でもよく、または、１日の合計投薬量を２、３または４回に分割した用量で投与してもよい。さらに、投与に選択された個々の化合物の特性に基づいて、投与頻度をもっと少なく、例えば、週一回、週２回、月一回、などにしてもよい。もちろん、投与頻度が少なくなれば、これに対応して一回の投薬量は増加するであろう。
【０１０２】
鼻腔内経路、経皮経路、直腸もしくは膣内座薬または静注溶液として投与されるときはもちろん、投薬計画全体を通じて投薬が間欠的でなく連続的であろう。
【０１０３】
本発明の範例は、単独または組合せた非晶質および結晶質形の上述の化合物のいずれかと医薬的に許容される担体とを含む医薬組成物である。本発明の用例は１種以上の非晶質または結晶質形の式Ｉの化合物と医薬的に許容される担体とを組合せる段階を含む医薬組成物の製造方法である。
【０１０４】
医薬用途で本発明方法に使用される組織選択的アンドロゲン受容体の配合物は、非晶質または結晶質形の式Ｉの化合物を医薬的に許容されるその担体および場合により他の治療有効成分と共に含む。担体は医薬的に許容される担体でなければならないが、これは、配合物の他の成分と適合性であり配合物のレシピエント対象に有害でないという意味である。
【０１０５】
従って本発明はさらに、非晶質または結晶質形の構造式Ｉの化合物を医薬的に許容されるその担体と共に含む医薬配合物を提供する。配合物は、経口、直腸、膣内、鼻腔内、外用および非経口（皮下、筋肉内、静脈内投与を含む）に適した配合物を含む。１つの実施態様で配合物は経口投与に適した配合物である。
【０１０６】
式Ｉの化合物の適当な外用配合物は、経皮デバイス、エアロゾル、クリーム、溶液、軟膏、ジェル、ローション、散布粉末などを含む。本発明の化合物を含有する外用医薬組成物は通常は、約０．００５重量％から約５重量％の有効化合物を医薬的に許容されるビヒクルと混合して含む。本発明の化合物の投与に有用な経皮的皮膚貼付薬は平均的な技量の当業者に公知のものを含む。
【０１０７】
配合物は、単位剤形で提供され、製薬業界で公知の方法のいずれかによって調製できる。すべての方法が、有効化合物と１種以上の成分を構成する担体とを会合させる段階を含む。一般には、有効化合物を液体担体、ワックス状固体担体または微細分割固体担体と共に均一および均質に会合させ、次いで必要ならば生成物を所望の剤形に造形する段階を含む。
【０１０８】
経口投与に適した本発明の配合物は、カプセル、カシェ剤、錠剤もしくは甘味入り錠剤のようなおのおのが所定量の有効化合物を含有する個別単位、粉末もしくは顆粒、または、水性液体もしく非水性液体中の懸濁液もしくは溶液、例えば、シロップ、エリキシル剤、または、エマルションとして提供できる。
【０１０９】
錠剤は、場合により１種以上の副成分と共に圧縮または成形することによって製造できる。圧縮錠剤は、自由流動形態例えば粉末または顆粒形態の有効化合物を場合により副成分、例えば、結合剤、滑沢剤、不活性希釈剤、崩壊剤または着色剤と混合して適当な機械で圧縮することによって製造できる。成形錠剤は、好ましくは粉末形態の有効化合物と適当な担体との混合物を適当な機械で成形することによって製造できる。適当な結合剤の非限定例は、デンプン、ゼラチン、ブドウ糖またはベータ−ラクトースのような天然の糖、トウモロコシ甘味料、アラビアガム、トラガカントガムまたはアルギン酸ナトリウムのような天然または合成のガム、カルボキシメチル−セルロース、ポリエチレングリコール、ワックスなどを含む。これらの剤形に使用される滑沢剤の非限定代表例は、オレイン酸ナトリウム、ステアリン酸ナトリウム、ステアリン酸マグネシウム、安息香酸ナトリウム、酢酸ナトリウム、塩化ナトリウムなどを含む。崩壊剤は非限定的に、デンプン、メチルセルロース、寒天、ベントナイト、キサンタンガムなどを含む。
【０１１０】
合成および天然のガム、例えば、トラガカントガム、アラビアガム、メチルセルロースなどのような適宜着香した懸濁化剤または分散剤中のシロップまたは懸濁液のような経口液体形態は、溶液または懸濁液に有効化合物を添加することによって製造できる。使用できるその他の分散剤はグリセリンなどを含む。
【０１１１】
膣内または直腸内投与する配合物は、慣用の担体、すなわち、構造式Ｉの化合物に適合性であり、貯蔵安定性であり、非晶質または結晶質形の式Ｉの化合物に結合したりその放出を妨害したりしない粘膜非刺激性の無毒性基剤を用いて坐剤として提供できる。適当な基剤は、カカオ脂（テオブロマ油）、ポリエチレングリコール（例えば、カーボワックスおよびポリグリコール）、グリコール−界面活性剤の組合せ、ポリオキシル４０ステアレート、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステル（例えば、Ｔｗｅｅｎ、ＭｙｒｊおよびＡｒｌａｃｅｌ）、グリセリン化ゼラチン、水添植物油を含む。グリセリン化ゼラチン坐剤を使用するときは、メチルパラベンまたはプロピルパラベンのような保存剤を使用できる。
【０１１２】
有効薬物成分を含有している外用製剤は、例えばアルコール、アロエベラゲル、アラントイン、グリセリン、ビタミンＡおよびＥ油、鉱油、ＰＰＧ２ミリスチルプロピオネートなどのような当業界で公知の様々な担体材料と混合して、例えば、アルコール溶液、外用クレンザー、クレンジングクリーム、スキンジェル、スキンローションおよびクリームもしくはゲル配合物の形態のシャンプーを形成できる。
【０１１３】
非晶質および結晶質形の本発明のＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドはまた、小さい単層小胞、大きい単層小胞および多層小胞のようなリポソームデリバーリシステムの形態で投与できる。リポソームは、コレステロール、ステアリルアミンまたはホスファチジルコリンのような様々なリン脂質から形成できる。
【０１１４】
本発明のＳＡＲＭはまた、化合物分子を結合させる独立担体としてモノクローナル抗体を使用することによって送達できる。本発明の化合物はまた、標的指向性薬物担体のような可溶性ポリマーに結合できる。このようなポリマーは、ポリビニル−ピロリドン、ピランコポリマー、ポリヒドロキシプロピルメタクリルアミド−フェノール、ポリヒドロキシ−エチルアスパルタミドフェノール、または、パルミトイル残基で置換されたポリエチレン−オキシドポリリシンなどである。さらに、本発明の化合物は、薬物の調節放出を行うために有用な生分解性ポリマーのクラス、例えば、ポリ乳酸、ポリイプシロンカプロラクトン、ポリヒドロキシ酪酸、ポリオルトエステル、ポリアセタール、ポリジヒドロピラン、ポリシアノアクリレートおよび架橋したもしくは両親媒性のヒドロゲルブロックコポリマーに結合できる。
【０１１５】
非経口投与に適した配合物は、レシピエントの血液と等張性の有効化合物の無菌水性製剤を含む。このような配合物は好適には、レシピエント対象の血液と等張性の化合物の溶液または懸濁液を含む。このような配合物は、蒸留水と、蒸留水または生理食塩水中の５％デキストロースと有効化合物とを含有できる。使用溶媒に適した溶解度を有している医薬的および薬理学的に許容される有効化合物の酸付加塩がしばしば有用である。有用な配合物はまた、適当な溶媒で希釈したときに非経口投与に適した溶液を与える固体形の式Ｉの化合物の濃縮溶液または固体を含む。
【０１１６】
本発明の医薬組成物および方法はさらに、上述の骨粗鬆症、歯周病、骨折、骨再建術後の骨損傷、筋減少症、脆化、加齢肌、男性性腺機能低下症、女性の閉経後症状、アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症、高脂血症、再生不能性貧血のような造血障害、膵臓癌、アルツハイマー病、炎症性関節炎および関節修復のような状態の治療に常用の他の治療有効化合物を含み得る。
【０１１７】
骨粗鬆症の治療および予防には、固体形の本発明のＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミドを、抗吸収剤、骨同化促進剤、ならびに、カルシウムサプリメント、フラボノイド、ビタミンＤ類似体のような明確には解明されていないメカニズムによって骨格に有益に作用する他の薬剤などから選択された少なくとも１種類の骨強化剤と組合せて投与できる。これらの併用治療は歯周病、骨折および骨再建術後の骨損傷状態にも有効である。例えば、非晶質および結晶質形の本発明の化合物は、エストロゲン、ビスホスホネート、ＳＥＲＭ類、カテプシンＫインヒビター、αｖβ３インテグリン受容体アンタゴニスト、空胞性ＡＴＰアーゼインヒビター、ポリペプチドオステオプロテゲリン、ＶＥＧＦアンタゴニスト、チアゾリジンジオン、カルシトニン、プロテインキナーゼインヒビター、上皮小体ホルモン（ＰＴＨ）および類似体、カルシウム受容体アンタゴニスト、成長ホルモン分泌促進物質、成長ホルモン放出ホルモン、インスリン様増殖因子、骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）、ＢＭＰアンタゴニズムインヒビター、プロスタグランジン誘導体、線維芽細胞増殖因子、ビタミンＤおよびその誘導体、ビタミンＫおよびその誘導体、大豆イソフラボン、カルシウム塩およびフッ化物塩のような有効量の他の薬剤と効果的に併用投与できる。これらの併用治療は歯周病、骨折および骨再建術後の骨損傷状態にも有効である。
【０１１８】
本発明の１つの実施態様では、非晶質および結晶質形の本発明の化合物が、単独のまたはプロゲスチンもしくはプロゲスチン誘導体と組合せたエストロゲンおよびエストロゲン誘導体；ビスホスホネート；抗エストロゲンまたは選択的エストロゲン受容体モジュレーター；αｖβ３インテグリン受容体アンタゴニスト；カテプシンＫインヒビター；破骨細胞空胞性ＡＴＰアーゼインヒビター；カルシトニン；オステオプロテゲリンから選択された少なくとも１種類の治療有効量の骨強化剤と効果的に併用投与できる。
【０１１９】
骨粗鬆症の治療における本発明の化合物の様々な固体形の活性は、抗吸収剤；エストロゲン、ビスホスホネート、ＳＥＲＭ類、カルシトニン、カテプシンＫインヒビター、空胞性ＡＴＰアーゼインヒビター、ＲＮＡＫ／ＲＡＮＫＬ／オステオプロテゲリン経路の妨害剤、ｐ３８インヒビターまたはその他の破骨細胞生成もしくは破骨細胞活性化のインヒビターの活性とは明らかに違っている。本発明のＳＡＲＭは、骨吸収を阻害するのではなく、例えば骨強度のかなりの部分を担う骨皮質に作用して骨形成の刺激を支援する。骨皮質の増粘は骨折の危険性、特に腰椎骨折の危険性の低下に実質的に貢献する。構造式Ｉの組織−ＳＡＲＭと、例えば、エストロゲンまたはエストロゲン誘導体、ビスホスホネート、抗エストロゲン、ＳＥＲＭ類、カルシトニン、αｖβ３インテグリン受容体アンタゴニスト、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビター、空胞性ＡＴＰアーゼインヒビターおよびカテプシンＫインヒビターのような抗吸収剤との組合せは、骨同化作用および抗吸収作用の相補効果があるので特に有効である。
【０１２０】
エストロゲンおよびエストロゲン誘導体の非限定的代表例は、例えば、１７β−エストラジオール、エストロン、複合エストロゲン（ＰＲＥＭＡＲＩＮ（Ｒ））、ウマエストロゲン、１７β−エチニルエストラジオールなどのようなエストロゲン活性を有するステロイド系化合物を含む。エストロゲンまたはエストロゲン誘導体は単独使用でもよくまたはプロゲスチンもしくはプロゲスチン誘導体との併用でもよい。プロゲスチン誘導体の非限定例はノルエチンドロンおよび酢酸メドロキシプロゲステロンである。
【０１２１】
同じく本発明の化合物と併用できるビスホスホネート化合物の非限定例を以下に挙げる：
（ａ）アレンドロネート（アレンドロン酸としても知られる）、４−アミノ−１−ヒドロキシブチリデン−１，１−ビスホスホン酸、アレンドロネートナトリウム、アレンドロネートモノナトリウム三水和物、または、４−アミノ−１−ヒドロキシブチリデン−１，１−ビスホスホン酸モノナトリウム三水和物。アレンドロネートは、米国特許：１９９０年５月１日付けの４，９２２，００７、Ｋｉｅｃｚｙｋｏｗｓｋｉら；１９９１年５月２８日付けの５，０１９，６５１、Ｋｉｅｃｚｙｋｏｗｓｋｉ；１９９６年４月２３日付けの５，５１０，５１７、Ｄａｕｅｒら；１９９７年７月１５日付けの５，６４８，４９１、Ｄａｕｅｒら、に記載されている；
（ｂ）［（シクロヘプチルアミノ）−メチレン］−ビス−ホスホネート（インカドロネート）。これは、１９９０年１１月１３日付けの米国特許４，９７０，３３５、Ｉｓｏｍｕｒａら、に記載されている；
（ｃ）（ジクロロメチレン）−ビス−ホスホン酸（クロドロン酸）および二ナトリウム塩（クロドロネート）。これらはベルギー特許６７２，２０５（１９６６）およびＪ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ  ３２、４１１１（１９６７）に記載されている；
（ｄ）［１−ヒドロキシ−３−（１−ピロリジニル）−プロピリデン］−ビス−ホスホネート（ＥＢ−１０５３）；
（ｅ）（１−ヒドロキシエチリデン）−ビス−ホスホネート（エチドロネート）；
（ｆ）［１−ヒドロキシ−３−（メチルペンチルアミノ）プロピリデン］−ビス−ホスホネート（イバンドロネート）。これは１９９０年５月２２日付けの米国特許Ｎｏ．４，９２７，８１４、に記載されている；
（ｇ）（６−アミノ−１−ヒドロキシヘキシリデン）−ビス−ホスホネート（ネリドロネート）；
（ｈ）［３−（ジメチルアミノ）−１−ヒドロキシプロピリデン］−ビス−ホスホネート（オルパドロネート）；
（ｉ）（３−アミノ−１−ヒドロキシプロピリデン）−ビス−ホスホネート（パミドロネート）；
（ｊ）［２−（２−ピリジニル）エチリデン］−ビス−ホスホネート（ピリドロネート）。これは米国特許Ｎｏ．４，７６１，４０６に記載されている；
（ｋ）［１−ヒドロキシ−２−（３−ピリジニル）−エチリデン］−ビス−ホスホネート（リセドロネート）；
（ｌ）｛［（４−クロロフェニル）チオ］メチレン｝−ビス−ホスホネート（チルドロネート）。これは１９８９年１０月２４日付けの米国特許４，８７６，２４８、Ｂｒｅｌｉｅｒｅら、に記載されている；
（ｍ）［１−ヒドロキシ−２−（１Ｈ−イミダゾール−１−イル）エチリデン］−ビス−ホスホネート（ゾレドロネート）；および、
（ｎ）［１−ヒドロキシ−２−イミダゾピリジン−（１，２−ａ）−３−イルエチリデン］−ビス−ホスホネート（ミノドロネート）。
【０１２２】
本発明の方法および組成物の１つの実施態様では、ビスホスホネートが、アレンドロネート、クロドロネート、エチドロネート、イバンドロネート、インカドロネート、ミノドロネート、ネリドロネート、オルパドロネート、パミドロネート、ピリドロネート、リセドロネート、チルドロネート、ゾレドロネート、これらのビスホスホネート類の医薬的に許容される塩およびそれらの混合物から選択される。１つの変形例では、ビスホスホネートが、アレンドロネート、リセドロネート、ゾレドロネート、イバンドロネート、チルドロネートおよびクロドロネートから選択される。このクラスの１つのサブクラスでは、ビスホスホネートが、アレンドロネート、医薬的に許容されるその塩およびその水和物、それらの混合物である。医薬的に許容されるアレンドロネートの塩の具体例は、アレンドロネートモノナトリウムである。アレンドロネートモノナトリウムの医薬的に許容される水和物は、一水和物および三水和物を含む。医薬的に許容されるリセドロネート塩の具体例は、リセドロネートモノナトリウムである。リセドロネートモノナトリウムの医薬的に許容される水和物はヘミ−五水和物を含む。
【０１２３】
さらにまた、ラロキシフェン（参照：例えば米国特許Ｎｏ．５，３９３，７６３）、クロミフェン、ズクロミフェン、エンクロミフェン、ナフォキシデン、ＣＩ−６８０、ＣＩ−６２８、ＣＮ−５５，９４５−２７、Ｍｅｒ−２５、Ｕ−１１，５５５Ａ、Ｕ−１００Ａおよびそれらの塩など（参照：例えば米国特許Ｎｏｓ．４，７２９，９９９および４，８９４，３７３）のような抗エストロゲン化合物を本発明の方法および組成物において構造式Ｉの化合物と併用できる。これらの薬剤はまた、ＳＥＲＭまたは選択的エストロゲン受容体モジュレーターとして知られており、エストロゲン経路と同様であると考えられている経路による骨吸収の阻害によって骨減量を予防する当業界で公知の薬剤である。
【０１２４】
ＳＥＲＭの非限定的代表例は例えば、タモキシフェン、ラロキシフェン、ラソフォキシフェン、トレミフェン、アゾルキシフェン、ＥＭ−８００、ＥＭ−６５２、ＴＳＥ４２４、クロミフェン、ドロロキシフェン、イドキシフェンおよびレボルメロキシフェンを含む［Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎら，“Ａ  ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｒｅｖｉｅｗ  ｏｆ  ｓｅｌｅｃｔｉｖｅ  ｅｓｔｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｍｏｄｕｌａｔｏｒｓ，”Ｈｕｍａｎ  Ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ  Ｕｐｄａｔｅ，６：２１２−２２４（２０００）；Ｌｕｆｋｉｎら，Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｌｉｎｉｃｓ  ｏｆ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ，２７：１６３−１８５（２００１）、および、“Ｔａｒｇｅｔｉｎｇ  ｔｈｅ  Ｅｓｔｒｏｇｅｎ  Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｗｉｔｈ  ＳＥＲＭｓ，”Ａｎｎ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．３６：１４９−１５８（２００１）］。
【０１２５】
αｖβ３インテグリン受容体アンタゴニストは骨吸収を抑制し、骨粗鬆症のような骨疾患を治療するために構造式ＩのＳＡＲＭと併用できる。例えば、Ｗ．Ｊ．Ｈｏｅｋｓｔｒａ  ａｎｄ  Ｂ．Ｌ．Ｐｏｕｌｔｅｒ，Ｃｕｒｒ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．５：１９５−２０４（１９９８）およびそこに引用された参考文献を参照するとよい。別のαｖβ３アンタゴニストは、Ｒ．Ｍ．Ｋｅｅｎａｎら，Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４０：２２８９−２２９２（１９９７）；Ｒ．Ｍ．Ｋｅｅｎａｎら，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．８：３１６５−３１７０（１９９８）；Ｒ．Ｍ．Ｋｅｅｎａｎら，Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．８：３１７１−３１７６（１９９８）に記載されている。
【０１２６】
以前はカテプシンＯ２として知られていたカテプシンＫはシステインプロテアーゼであり、ＰＣＴ国際出願公開Ｎｏ．ＷＯ  ９６／１３５２３；米国特許Ｎｏｓ．５，５０１，９６９および５，７３６，３５７に記載されている。システインプロテアーゼ、具体的にはカテプシン類は、腫瘍転移、炎症、関節炎および骨再建のような多くの疾患状態に関係がある。酸性ｐＨでカテプシンはＩ型コラーゲンを分解できる。カテプシンプロテアーゼインヒビターは、コラーゲン線維の分解を阻害することによって骨破壊性骨吸収を阻害でき、従って、骨粗鬆症のような骨吸収疾患の治療に有用である。カテプシンＫインヒビターの非限定例は、ＰＣＴ国際公開ＷＯ  ０１／４９２８８およびＷＯ  ０１／７７０７３に見出される。
【０１２７】
“スタチン”として知られたＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのクラスの構成員は、新しい骨の成長を開始させ、骨粗鬆症によって失われた骨を回復させることが知見された（参照：Ｔｈｅ  Ｗａｌｌ  Ｓｔｒｅｅｔ  Ｊｏｕｒｎａｌ，Ｆｒｉｄａｙ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ  ３，１９９９，ｐａｇｅ  Ｂｌ）。従って、スタチンは骨吸収の治療に有望である。ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの例は、ラクトン化形態またはジヒドロキシ開酸形態のスタチンならびに医薬的に許容されるそれらの塩およびエステルを含む。非限定例は、ロバスタチン（参照：米国特許Ｎｏ．４，３４２，７６７）；シンバスタチン（参照：米国特許Ｎｏ．４，４４４，７８４）；ジヒドロキシ開酸シンバスタチン、特にそのアンモニウムまたはカルシウム塩；プラバスタチン、特にそのナトリウム塩（参照：米国特許Ｎｏ．４，３４６，２２７）；フルバスタチン、特にそのナトリウム塩（参照：米国特許Ｎｏ．５，３５４，７７２）；アトロバスタチン、特にそのカルシウム塩（参照：米国特許Ｎｏ．５，２７３，９９５）；セリバスタチン、特にそのナトリウム塩（参照：米国特許Ｎｏ．５，１７７，０８０）、ＺＤ−４５２２としても知られたロスバスタチン（参照：米国特許Ｎｏ．５，２６０，４４０）、および、ＮＫ−１０４、イタバスタチンまたはニスバスタチンとしても知られたピタバスタチン（参照：ＰＣＴ国際出願公開ＷＯ  ９７／２３２００）である。
【０１２８】
プロトンポンプインヒビターとも呼ばれる破骨細胞空胞性ＡＴＰアーゼインヒビターは固体形の本発明の構造式ＩのＳＡＲＭと共に使用できる。破骨細胞の先端膜に見出されるプロトンＡＴＰアーゼは、骨吸収プロセスで重要な役割を果たすと報告されている。従って、このプロトンポンプは、骨粗鬆症および類縁の代謝疾患の治療および予防に有効であり得る骨吸収インヒビターを設計する際に絶好の標的となる［参照：Ｃ．Ｆａｒｉｎａら，ＤＤＴ，４：１６３−１７２（１９９９）］。
【０１２９】
血管形成誘導因子ＶＥＧＦは、その受容体が破骨細胞に結合することによって骨吸収活性を刺激することが成熟ウサギの単離破骨細胞で証明された［参照：Ｍ．Ｎａｋａｇａｗａら，ＦＥＢＳ  Ｌｅｔｔｅｒｓ，４７３：１６１−１６４（２０００）］。従って、ＫＤＲ／Ｆｌｋ−１およびＦｌｔ−１のような破骨細胞受容体に結合するＶＥＧＦのアンタゴニストの開発は骨吸収の治療または予防につながるまた別の方法を提供できる。
【０１３０】
チアゾリジンジオン（ＴＺＤ）のようなペルオキシソーム増殖因子活性化受容体−γ（ＰＰＡＲγ）のアクチベーターは、破骨細胞様細胞形成および骨吸収をインビトロで阻害する。Ｒ．ＯｋａｚａｋｉらによってＥｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ，１４０：５０６０−５０６５（１９９９）に報告された結果は、骨髄細胞に対する局部的メカニズムおよびグルコース代謝に対する全身的メカニズムを示している。ＰＰＡＲγアクチベーターの非限定例は、トログリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾンのようなグリタゾンおよびＢＲＬ  ４９６５３を含む。
【０１３１】
カルシトニンもまた、構造式ＩのＳＡＲＭと共に使用できる。カルシトニンは好ましくはサーモン鼻腔スプレー（ｓａｌｍｏｎ  ｎａｓａｌ  ｓｐｒａｙ）として使用される（Ａｚｒａら，Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ．１９９６．Ｉｎ：Ｊ．Ｐ．Ｂｉｌｅｚｉｋｉａｎら，Ｅｄ．，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｂｏｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；およびＳｉｌｖｅｒｍａｎ，“Ｃａｌｃｉｔｏｎｉｎ．”Ｒｈｅｕｍａｔｉｃ  Ｄｉｓｅａｓｅ  Ｃｌｉｎｉｃｓ  ｏｆ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ，２７：１８７−１９６、２００１）。
【０１３２】
プロテインキナーゼインヒビターもまた構造式ＩのＳＡＲＭと共に使用できる。キナーゼインヒビターは、ＷＯ  ０１／１７５６２に開示されたものを含み、また、１つの実施態様では、ｐ３８のインヒビターから選択される。本発明に有用なｐ３８インヒビターの非限定例は、ＳＢ  ２０３５８０を含む［Ｂａｄｇｅｒら，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．Ｅｘｐ．Ｔｈｅｒ．，２７９：１４５３−１４６１（１９９６）］。
【０１３３】
骨同化剤は、骨タンパク質マトリックスの産生量を増加することによって骨を造成することが判っている薬剤である。このような骨同化剤は例えば、上皮小体ホルモン（ＰＴＨ）およびそのフラグメント、例えば、天然産生ＰＴＨ（１−８４）、ＰＴＨ（１−３４）、それらの天然型および置換型類似体、特に上皮小体ホルモン皮下注射剤である。ＰＴＨは、骨を形成する細胞である骨芽細胞の活性を増加しこれによって新しい骨の合成を促進することが知見されている（Ｍｏｄｅｒｎ  Ｄｒｕｇ  Ｄｉｓｃｏｖｅｒｙ，Ｖｏｌ．３，Ｎｏ．８，２０００）。ヒトＰＴＨの注射可能な組換え体Ｆｏｒｔｅｏ（テリパラチド）は米国で骨粗鬆症治療薬として正規に認可されている。
【０１３４】
また、Ｇｏｗｅｎら，Ｊ．Ｃｌｉｎ．Ｉｎｖｅｓｔ．１０５：１５９５−６０４（２０００）に記載されているように、ＰＴＨの分泌を誘導するカルシウム受容体アンタゴニストも本発明のＳＡＲＭと組合せて使用できる。
【０１３５】
骨粗鬆症の治療に構造式Ｉの化合物と併用できるその他の骨同化剤には、成長ホルモン分泌促進物質、成長ホルモン、成長ホルモン放出ホルモンなどがある。代表的な成長ホルモン分泌促進物質の非限定例は、米国特許Ｎｏｓ．３，２３９，３４５、４，０３６，９７９、４，４１１，８９０、５，２０６，２３５、５，２８３，２４１、５，２８４，８４１、５，３１０，７３７、５，３１７，０１７、５，３７４，７２１、５，４３０，１４４、５，４３４，２６１、５，４３８，１３６、５，４９４，９１９、５，４９４，９２０、５，４９２，９１６および５，５３６，７１６；欧州特許公開Ｎｏｓ．０，１４４，２３０および０，５１３，９７４；論文；Ｓｃｉｅｎｃｅ，２６０，１６４０−１６４３（Ｊｕｎｅ  １１、１９９３）；Ａｍ．Ｒｅｐ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．，２８：１７７−１８６（１９９３）；Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔｔ．，４：２７０９−２７１４（１９９４）；およびＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，９２：７００１−７００５（１９９５）に開示されている。
【０１３６】
インスリン様成長因子（ＩＧＦ）も構造式ＩのＳＡＲＭと共に使用できる。インスリン様成長因子は、単独のまたはＩＧＦ結合性タンパク質３と組合せたインスリン様成長因子ＩおよびＩＧＦ  ＩＩから選択される［参照：Ｊｏｈａｎｎｓｏｎ  ａｎｄ  Ｒｏｓｅｎ，“Ｔｈｅ  ＩＧＦｓ  ａｓ  ｐｏｔｅｎｔｉａｌ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｍｅｔａｂｏｌｉｃ  ｂｏｎｅ  ｄｉｓｅａｓｅｓ，”１９９６，Ｉｎ：Ｂｉｌｅｚｉｋｉａｎら，Ｅｄ．，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｂｏｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；およびＧｈｉｒｏｎら，Ｊ．Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．１０：１８４４−１８５２（１９９５）］。
【０１３７】
骨形態形成タンパク質（ＢＭＰ）も構造式ＩのＳＡＲＭと共に使用できる。骨形態形成タンパク質は、ＢＭＰ２、３、５、６、７、ならびに、近縁分子ＴＧＦベータおよびＧＤＦ５を含む［Ｒｏｓｅｎら，“Ｂｏｎｅ  ｍｏｒｐｈｏｇｅｎｅｔｉｃ  ｐｒｏｔｅｉｎｓ，”１９９６．Ｉｎ：Ｊ．Ｐ．Ｂｉｌｅｚｉｋｉａｎら，Ｅｄ．，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｂｏｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；およびＷａｎｇ  ＥＡ，Ｔｒｅｎｄｓ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．，１１：３７９−３８３（１９９３）］。
【０１３８】
ＢＭＰアンタゴニズムのインヒビターも構造式ＩのＳＡＲＭと共に使用できる。１つの実施態様で、ＢＭＰアンタゴニストインヒビターは、ＢＭＰアンタゴニストＳＯＳＴ、ノギン、コルジン、グレムリンおよびダンのインヒビターから選択される［参照：Ｍａｓｓａｇｕｅ  ａｎｄ  Ｃｈｅｎ，“Ｃｏｎｔｒｏｌｌｉｎｇ  ＴＧＦ−ｂｅｔａ  ｓｉｇｎａｌｉｎｇ，”Ｇｅｎｅｓ  Ｄｅｖ．，１４：６２７−６４４、２０００；Ａｓｐｅｎｂｅｒｇら，Ｊ．Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．１６：４９７−５００、２００１；およびＢｒｕｎｋｏｗら，Ａｍ．Ｊ．Ｈｕｍ．Ｇｅｎｅｔ．６８：５７７−８９（２００１）］。
【０１３９】
本発明の組織選択的アンドロゲン受容体モジュレーターはまた、骨粗鬆症のような骨減量に付随する状態を治療するためにポリペプチドオステオプロテゲリンと併用できる。オステオプロテゲリンは哺乳動物オステオプロテゲリンおよびヒトオステオプロテゲリンから選択できる。ポリペプチドオステオプロテゲリンは腫瘍壊死因子受容体スーパーファミリーの構成員であり、骨粗鬆症のような骨減量の亢進を特徴とする骨疾患の治療に有用である。米国特許Ｎｏ．６，２８８，０３２を参照するとよい。
【０１４０】
プロスタグランジン誘導体もまた構造式ＩのＳＡＲＭと共に使用できる。プロスタグランジン誘導体の非限定代表例は、プロスタグランジン受容体ＥＰ１、ＥＰ２、ＥＰ４、ＦＰ、ＩＰおよびそれらの誘導体のアゴニストから選択される［Ｐｉｌｂｅａｍら，“Ｐｒｏｓｔａｇｌａｎｄｉｎｓ  ａｎｄ  ｂｏｎｅ  ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ，”１９９６，Ｉｎ：Ｂｉｌｅｚｉｋｉａｎら，Ｅｄ．Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｂｏｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ；Ｗｅｉｎｒｅｂら，Ｂｏｎｅ，２８：２７５−２８１（２００１）］。
【０１４１】
線維芽細胞増殖因子もまた構造式ＩのＳＡＲＭと共に使用できる。線維芽細胞増殖因子は、ａＦＧＦ、ｂＦＧＦおよびＦＧＦ活性を有している近縁ペプチドを含む［Ｈｕｒｌｅｙ  Ｆｌｏｒｋｉｅｗｉｃｚ，“Ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ａｎｄ  ｖａｓｃｕｌａｒ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｇｒｏｗｔｈ  ｆａｃｔｏｒ  ｆａｍｉｌｉｅｓ，”１９９６，Ｉｎ：Ｊ．Ｐ．Ｂｉｌｅｚｉｋｉａｎら，Ｅｄ．Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｂｏｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ］。
【０１４２】
骨吸収インヒビターおよび骨同化剤以外にも、明確には解明されていないメカニズムによって骨格に有益に作用することが判っている他の薬剤が存在する。これらの薬剤も構造式ＩのＳＡＲＭと共に有利に使用できる。
【０１４３】
ビタミンＤ、ビタミンＤの誘導体および類似体も構造式ＩのＳＡＲＭと共に使用できる。ビタミンＤおよびビタミンＤ誘導体は、例えば、Ｄ３（コレカルシフェロール）、Ｄ２（エルゴカルシフェロール）、２５−ＯＨ−ビタミンＤ３、１α，２５（ＯＨ）２ビタミンＤ３、１α−ＯＨ−ビタミンＤ３、１α−ＯＨ−ビタミンＤ２、ジヒドロタキステロール、２６，２７−Ｆ６−１α，２５（ＯＨ）２ビタミンＤ３、１９−ノル−１α，２５（ＯＨ）２ビタミンＤ３、２２−オキサカルシトリオール、カルシポトリオール、１α，２５（ＯＨ）２−１６−エン−２３−イン−ビタミンＤ３（Ｒｏ  ２３−７５５３）、ＥＢ１０８９、２０−エピ−１α，２５（ＯＨ）２ビタミンＤ３、ＫＨ１０６０、ＥＤ７１、１α，２４（Ｓ）−（ＯＨ）２ビタミンＤ３、１α，２４（Ｒ）−（ＯＨ）２ビタミンＤ３を含む［参照：Ｊｏｎｅｓ  Ｇ．，“Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｉｃａｌ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ  ｏｆ  ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ：ｖｉｔａｍｉｎ  Ｄ  ａｎｄ  ａｎａｌｏｇｓ，”１９９６，Ｉｎ：Ｊ．Ｐ．Ｂｉｌｅｚｉｋｉａｎら，Ｅｄ．Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｂｏｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ］。
【０１４４】
ビタミンＫおよびビタミンＫ誘導体も本発明のＳＡＲＭの様々な固体形と共に使用できる。ビタミンＫおよびビタミンＫ誘導体は、メナテトレノン（ビタミンＫ２）を含む［参照：Ｓｈｉｒａｋｉら，Ｊ．Ｂｏｎｅ  Ｍｉｎｅｒ．Ｒｅｓ．，１５：５１５−５２１（２０００）］。
【０１４５】
イプリフラボンのような大豆イソフラボンは本発明のＳＡＲＭと共に使用できる。
【０１４６】
フッ化ナトリウム（ＮａＦ）およびフルオロリン酸モノナトリウム（ＭＦＰ）のようなフッ化物塩は構造式ＩのＳＡＲＭと共に使用できる。経口カルシウムサプリメントも構造式ＩのＳＡＲＭと共に使用できる。経口カルシウムサプリメントは、炭酸カルシウム、クエン酸カルシウムおよび天然カルシウム塩を含む（Ｈｅａｎｅｙ．Ｃａｌｃｉｕｍ．１９９６．Ｉｎ：Ｊ．Ｐ．Ｂｉｌｅｚｉｋｉａｎら，Ｅｄ．，Ｐｒｉｎｃｉｐｌｅｓ  ｏｆ  Ｂｏｎｅ  Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ：Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ）。
【０１４７】
骨吸収インヒビター、骨同化剤、および、構造式Ｉの化合物と併用されたときに骨格に有益に作用する別の薬剤の１日の用量範囲は当業界で公知の範囲である。このような組合せの場合、一般に、構造式ＩのＳＡＲＭの１日の用量範囲は、成人では１日に約０．０１から約１０００ｍｇ、例えば約０．１から約２００ｍｇ／日の範囲である。しかしながら、併用薬剤の場合には薬効が向上するので個々の薬剤の用量を減らすという調節が可能である。
【０１４８】
特にビスホスホネートを使用する場合、投薬量は、治療用には約２．５から約１００ｍｇ／日（遊離ビスホスホン酸として測定）、例えば５から２０ｍｇ／日または約１０ｍｇ／日の範囲が適当であろう。予防用には、約２．５から約１０ｍｇ／日、特に約５ｍｇ／日を使用すべきである。副作用を少なくするために、構造式Ｉの化合物とビスホスホネートとの組合せは週一回の投与が望ましい。週一回の投与の場合、毎週約１５ｍｇから約７００ｍｇのビスホスホネートおよび約０．０７から約７０００ｍｇの構造式Ｉの化合物という投薬量を個別にまたは合一剤形で使用できる。特に週一回の投与の場合、構造式Ｉの化合物は調節放出デリバリーデバイスで有利に投与できる。
【０１４９】
アテローム性動脈硬化症、高コレステロール血症および高脂血症の治療には構造式Ｉの化合物と１種以上の追加の有効薬剤との併用投与が効果的である。１種以上の追加の有効薬剤は、ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターのような脂質変性化合物、他の医薬活性を有している薬剤、および、脂質変性効果と他の医薬活性との双方を有している薬剤から選択される。ＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの非限定例は、ラクトン化形態またはジヒドロキシ開酸形態のスタチン類および医薬的に許容されるそれらの塩およびエステルを含む。非限定例は、ロバスタチン（参照：米国特許Ｎｏ．４，３４２，７６７）；シンバスタチン（参照：米国特許Ｎｏ．４，４４４，７８４）；ジヒドロキシ開酸シンバスタチン、特にそのアンモニウムまたはカルシウム塩；プラバスタチン、特にそのナトリウム塩（参照：米国特許Ｎｏ．４，３４６，２２７）；フルバスタチン、特にそのナトリウム塩（参照：米国特許Ｎｏ．５，３５４，７７２）；アトルバスタチン、特にそのカルシウム塩（参照：米国特許Ｎｏ．５，２７３，９９５）；セリバスタチン、特にそのナトリウム塩（参照：米国特許Ｎｏ．５，１７７，０８０）、および、ＮＫ−１０４とも呼ばれるニスバスタチン（参照：ＰＣＴ国際出願公開ＷＯ  ９７／２３２００）などである。
【０１５０】
構造式Ｉの化合物と併用できる追加の有効薬剤の非限定例は、ＨＭＧ−ＣｏＡシンターゼインヒビター；スクアレンエポキシダーゼインヒビター；スクアレンシンテターゼインヒビター（スクアレンシンターゼインヒビターとしても知られる）、アシル−コエンザイムＡ：コレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）インヒビター、これはＡＣＡＴ−１またはＡＣＡＴ−２の選択インヒビターとＡＣＡＴ−１および−２のデュアルインヒビターを含む；ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質（ＭＴＰ）インヒビター；プロブコール；ナイアシン；コレステロール吸収インヒビター、例えばエゼチミベとしても知られたＳＣＨ−５８２３５、および、米国特許Ｎｏｓ．５，７６７，１１５および５，８４６，９６６に記載の１−（４−フルオロフェニル）−３（Ｒ）−［３（Ｓ）−（４−フルオロフェニル）−３−ヒドロキシプロピル）］−４（Ｓ）−（４−ヒドロキシフェニル）−２−アゼチジノン；胆汁酸封鎖剤；ＬＤＬ（低密度リポタンパク質）受容体誘導物質；血小板凝集インヒビター、例えば、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩＩａフィブリノーゲン受容体アンタゴニストおよびアスピリン；ヒトペルオキシソーム増殖因子活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）アゴニスト、例えば、トログリタゾン、ピオグリタゾン、ロシグリタゾンのようなグリタゾンという通称の化合物およびチアゾリジンジオンとして知られた構造クラスに含まれる化合物、ならびに、チアゾリジンジオン構造クラス以外のＰＰＡＲγアゴニスト；クロフィブラート、微粒子化フェノフィブラートを含むフェノフィブラートおよびジェンフィブロジルのようなＰＰＡＲαアゴニスト；ＰＰＡＲα／γデュアルアゴニスト；ビタミンＢ６（ピリドキシンとしても知られる）および塩酸塩のような医薬的に許容されるそれらの塩；ビタミンＢ１２（シアノコバラミンとしても知られる）；葉酸または医薬的に許容されるその塩もしくはエステル、例えば、ナトリウム塩およびメチルグルカミン塩；抗酸化性ビタミン、例えばビタミンＣおよびＥならびにベータカロテン；ベータ−ブロッカー；アンギオテンシンＩＩアンタゴニスト例えばロサルタン；アンギオテンシン変換酵素インヒビター例えばエナラプリルおよびカプトプリル；カルシウムチャンネルブロッカー例えばニフェジピンおよびジルチアゼム；エンドテリンアンタゴニスト；ＬＸＲリガンドのようなＡＢＣ１遺伝子発現を増進する薬剤；アレンドロネートナトリウムのようなビスホスホネート化合物；シクロオキシゲナーゼ−２インヒビター例えばロフェコキシブおよびセレコキシブ、ならびに、これらの状態の治療に有用な既知の他の薬剤。
【０１５１】
構造式Ｉの化合物に併用するときのＨＭＧ−ＣｏＡレダクターゼインヒビターの１日の投薬量範囲は当業者に公知の量に一致する。同様に、ＨＭＧ−ＣｏＡインターゼインヒビター；スクアレンエポキシダーゼインヒビター；スクアレンシンテターゼインヒビター（スクアレンシンターゼインヒビターとしても知られる）、アシルコエンザイムＡ：ＡＣＡＴ−１またはＡＣＡＴ−２選択インヒビターならびにＡＣＡＴ−１および−２のデュアルインヒビターを含むコレステロールアシルトランスフェラーゼ（ＡＣＡＴ）インヒビター；ミクロソームトリグリセリド輸送タンパク質（ＭＴＰ）インヒビター；プロブコール；ナイアシン；エゼチミベのようなコレステロール吸収インヒビター；胆汁酸封鎖剤；ＬＤＬ（低密度リポタンパク質）受容体誘導物質；血小板凝集インヒビター、例えば、糖タンパク質ＩＩｂ／ＩＩ１ａフィブリノーゲン受容体アンタゴニストおよびアスピリン；ヒトペルオキシソーム増殖物質活性化受容体ガンマ（ＰＰＡＲγ）アゴニスト；ＰＰＡＲαアゴニスト；ＰＰＡＲα／γデュアルアゴニスト；ビタミンＢ６；ビタミンＢ１２；葉酸；抗酸化性ビタミン；ベータ−ブロッカー；アンギオテンシンＩＩアンタゴニスト；アンギオテンシン変換酵素インヒビター；カルシウムチャンネルブロッカー；エンドテリンアンタゴニスト；ＡＢＣ１遺伝子発現を増進するＬＸＲリガンドのような薬剤；ビスホスホネート化合物；および、シクロオキシゲナーゼ−２インヒビターの１日の投薬量範囲も当業界で公知の量に一致するが、併用投与の場合には構造式Ｉの化合物との協力作用があるので投薬量をある程度減らすことができる。
【０１５２】
本発明の１つの実施態様は、治療有効量の式Ｉの化合物を投与する段階を含む骨交替マーカー操作方法である。骨交替マーカーの非限定例は、尿中のＩ型コラーゲンのＣ−テロペプチド分解産物（ＣＴＸ）、尿中のＩ型コラーゲンのＮ−テロペプチド架橋（ＮＴＸ）、オステオカルシン（骨Ｇ１ａタンパク質）、デュアルエネルギーｘ線吸収測定法（ＤＸＡ）、骨特異的アルカリホスファターゼ（ＢＳＡＰ）、定量的超音波（ＱＵＳ）、および、デオキシピリジノリン（ＤＰＤ）架橋を含む。
【０１５３】
本発明の方法によれば、併用する個々の成分を治療クール中の異なる時点で個別に投与してもよく、または、個別形態もしくは合一形態で同時に投与してもよい。従って本発明がこのような同時または交互の治療計画をすべて包含すると理解されるべきであり、“投与する”という用語はこれに応じて解釈されるべきである。本発明の化合物と他の薬剤との組合せの範囲は、アンドロゲン不足によって発症するかまたはアンドロゲン補給によって改善できる疾患の治療に有効な範囲であることが理解されよう。
【０１５４】
本発明の化合物の製造に関する記載に使用した略号：
ＡｃＯＨ  酢酸
ＣＢＺ−グリシン  保護形グリシン（Ｃ１０Ｈ１１ＮＯ４）
ＤＨＴ  ジヒドロテストステロン
ＤＭＥＭ  ダルベッコ改質イーグル培地
ＤＭＳＯ  ジメチルスルホキシド
ＤＭＦ  Ｎ，Ｎ−ジメチルホルムアミド
ＥＤＣ  １−（３−ジメチルアミノプロピル）３−エチルカルボジイミドＨＣｌ
ＥＤＴＡ  エチレンジアミン四酢酸
ＥｔＯＡｃ  酢酸エチル
ＥｔＯＨ  エタノール
ＦＢＳ  ウシ胎仔血清
ＦＣＳ  若ウシ胎仔血清
ＨＡＰ  ヒドロキシアパタイト
ＨＥＰＥＳ  （２−ヒドロキシエチル）−１−ピペラジンエタンスルホン酸
ＨＯＡｔ  １−ヒドロキシ−７−アザベンゾトリアゾール
ＨＯＢｔ  Ｎ−ヒドロキシベンゾトリアゾール
ＨＰＬＣ  高性能液体クロマトグラフィー
ＬＣＭＳ  液体クロマトグラフィー／質量スペクトロスコピー
ＬＤＡ  リチエムジイソプロピルアミド
ＭｅＯＨ  メタノール
ＮＭＭ  Ｎ−メチルモルホリン
ｎ−Ｂｕ４ＮＩ  テトラ−ｎ−ブチルアンモニウムヨージド
Ｐｄ／Ｃ  パラジウム／炭素
Ｒｔまたはｒｔ  室温
ＴＥＧＭ  結合用バッファ
ＴＨＦ  テトラヒドロフラン。
【０１５５】
本発明の化合物は、文献に公知であるかまたは実験手順に例示した他の標準操作に加えて以下のスキームに示すような反応を使用することによって製造できる。
【実施例１】
【０１５６】
【化３】
2009518404.tif 000005
【０１５７】
Ｉ．２−（アンモニオメチル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−４−イウム二塩酸塩（２−５）の形成
【０１５８】
【化４】
2009518404.tif 000006
【０１５９】
段階Ｉ．Ａ：Ｎ−（２−アミノピリジン−３−イル）−Ｎ’−カルボキシベンジルグリシンアミド（２−３）
ＤＭＦ（３００ｍＬ）中の２，３−ジアミノピリジン（２−１，２０．８６６ｇ，１９１．２ｍｍｏｌ）、Ｃｂｚ−グリシン（２−２，４０ｇ，１９１．２ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（４３．９３ｇ，２２９．４４ｍｍｏｌ）、ＨＯＡＴ（２６．０２ｇ，１９１．２ｍｍｏｌ）およびＮＭＭ（８２．１２ｍＬ，７６４．８１ｍｍｏｌ）の混合物を２０時間撹拌した。混合物をＨ２Ｏ（５００ｍＬ）で希釈し、ＥｔＯＡｃで抽出した（３×５００ｍＬ）。集めた有機部分を、飽和ＮａＨＣＯ３、ブラインで洗浄し、ＭｇＳＯ４で乾燥し、次いで濃縮すると、生成物２−３が褐色固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）７．８２（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝５Ｈｚ），７．４９（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），７．３１（ｍ，５Ｈ），６．６５（ｍ，１Ｈ），５．１２（ｓ，２Ｈ）。ＨＲＭＳ（ＥＳ，Ｍ＋１）計算値３０１．１２９５、測定値３０１．１２９６。
【０１６０】
段階Ｉ．Ｂ：ベンジル３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチルカーバメート（２−４）
アミノピリジン２−３（４６ｇ，１５３ｍｍｏｌ）を３００ｍＬのＡｃＯＨに溶解し、１２０℃で２０時間加熱した。反応混合物を室温に冷却し、濃縮すると、所望生成物２−４が酢酸塩として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）８．３２（ｍ，１Ｈ），７．９５（ｍ，１Ｈ），７．３４（ｍ，６Ｈ），７．０８（ｍ，１Ｈ），５．１４（ｓ，２Ｈ），４．８７（ｓ，２Ｈ）。ＨＲＭＳ（ＥＳ，Ｍ＋１）計算値２８３．１１９０、測定値２８３．１１９２。
【０１６１】
段階Ｉ．Ｃ：２−（アンモニオメチル）−３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−４−イウム二塩酸塩（２−５）
１０００ｍＬの１：１  ＡｃＯＨ／ＭｅＯＨ中の２−４（５２ｇ，１５１．８８ｍｍｏｌ）の混合物に２０ｇの１０％Ｐｄ／Ｃを添加した。反応混合物を１気圧のＨ２下で２０時間撹拌した。混合物をセライトパッドで濾過し、濃縮し、次いでジオキサンと共沸させると、淡褐色の油が得られた。半固体または粘性の油を２００ｍＬのジオキサンに懸濁させ、２００ｍＬの４．０ＭのＨＣｌ／ジオキサンを添加して淡褐色の懸濁液を調製した。固体を収集し、ジオキサン（２００ｍＬ）で洗浄し、真空下で乾燥すると、２−５が淡褐色固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）８．７５（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），８３６７（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝６Ｈｚ），７．８５（ｍ，１Ｈ），４．８８（ｓ，２Ｈ）。ＨＲＭＳ（ＥＳ，Ｍ＋１）計算値１４９．０８２２、測定値１４９．０８１２。
【０１６２】
ＩＩ．Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−Ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５−アルファ−アンドロスト−１−エン−１７−ベータ−カルボキサミド（１−７）の非晶質形
【０１６３】
段階ＩＩ．Ａ：４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスト−１−エン−１７β−カルボン酸メチルエステル（１−２）
１−１（Ｊ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．２９  ２２９８−２３１５（１９８６））（１２０ｇ，３６２．０４ｍｍｏｌ）、６０％ＮａＨ（１８．７ｇ，ｍｍｏｌ）、ジメチルスルフェート（６８．５０ｇ，５４３．０５ｍｍｏｌ）およびＴＨＦ（１２００ｍＬ）の混合物を周囲温度で１４時間撹拌した。６０℃で２時間加温し、次いで、ヘッドスペースを窒素で掃気しながら４０ｍＬの濃ＨＣｌをゆっくりと添加して反応停止させた。１／５容量まで蒸発させ、次いで１５００ｍＬの水で希釈した。固体を収集し、水およびヘキサンで洗浄し、真空下で乾燥すると、１−２が淡黄色固体として得られた。
【０１６４】
段階ＩＩ．Ｂ：４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスタン−１７β−カルボン酸メチルエステル（１−３）
１−２（２０ｇ，５７．９ｍｍｏｌ）のＥｔＯＨ（１００ｍＬ）溶液に１０％Ｐｄ／Ｃ（５．０ｇ）を添加し、混合物を１気圧のＨ２下で１４時間撹拌した。混合物をセライトパッドで濾過し、濃縮し、次いで真空下で乾燥すると、１−３が白色固体として得られた。
【０１６５】
段階ＩＩ．Ｃ：２α−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスタン−１７β−カルボン酸メチルエステル（１−４）
ＴＨＦ（１００ｍＬ）中の１−３（１２ｇ，３４．５３ｍｍｏｌ）の−７８℃溶液に、１．５ＭのＬＤＡを含有するＴＨＦ溶液（２７．６ｍＬ，４１．４４ｍｍｏｌ）を２０分間で滴下し、次いで１時間撹拌した。次にＴＨＦ（４０ｍＬ）中のＦＮ（ＳＯ２Ｐｈ）２（１３．０７ｇ，４１．４４ｍｍｏｌ）の溶液を２０分間で添加した。３０分後、冷却浴を除去し、反応混合物を１４時間撹拌した。Ｅｔ２Ｏを添加し、混合物を水、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液、ブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、次いで濃縮した。シリカゲルクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン対ＥｔＯＡｃ）にかけると、１−４が無色固体として得られた。ＭＳ  Ｍ＋Ｈ計算値：３６６，測定値３６６．１。
【０１６６】
段階ＩＩ．Ｄ：２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスト−１−エン−１７β−カルボン酸メチルエステル（１−５）
ＴＨＦ（４００ｍＬ）中の１−４（３０ｇ，８２．１ｍｍｏｌ）の−７８℃溶液に、１．５ＭのＬＤＡを含有するＴＨＦ溶液（７１．１ｍＬ，１０７ｍｍｏｌ）を３０分間で滴下し、次いで１時間撹拌した。つぎにメチルベンゼンスルフィネート（１９．２３ｇ，１２３ｍｍｏｌ）を１５分間で添加した。３０分後、冷却浴を除去し、反応混合物を１時間撹拌した。Ｅｔ２Ｏを添加し、混合物を水、炭酸水素ナトリウム飽和水溶液、ブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、次いで濃縮した。残渣をトルエン（２００ｍＬ）に溶解し、還流温度で２時間加熱した。溶媒を蒸発させ、残渣をシリカゲルクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン対５０％ＥｔＯＡｃ／ヘキサン）にかけると、１−５が淡黄色固体として得られた。ＭＳ  Ｍ＋Ｈ計算値：３６４，測定値３６４．１。
【０１６７】
段階ＩＩ．Ｅ：２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスト−１−エン−１７β−カルボン酸（１−６）
１，４−ジオキサン（５０ｍＬ）中の１−５（６．２ｇ，１７．１ｍｍｏｌ）の溶液に水酸化リチウム（１．０７ｇ，２５．６ｍｍｏｌ）の水（３０ｍＬ）溶液を添加し、混合物を１００℃で３時間加熱した。冷却後、混合物を酢酸エチルで希釈し、分離し、有機相を１ＮのＨＣｌ、ブラインで洗浄し、乾燥し（ＭｇＳＯ４）、次いで濃縮すると、１−６が淡黄色固体として得られた。ＭＳ  Ｍ＋Ｈ計算値：３５０，測定値３５０。
【０１６８】
段階ＩＩ．Ｆ：Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスト−１−エン−１７β−カルボキサミド（１−７）
ＤＭＦ（２００ｍＬ）中の１−６（１５ｇ，４２．９ｍｍｏｌ）、ＥＤＣ（９．８８ｇ，５１．５ｍｍｏｌ）、ＨＯＢｔ（６．９６ｇ，５１．５１０ｍｍｏｌ）、ＮＭＭ（１８．９ｍＬ，１７１．７０ｍｍｏｌ）および２−５（１０．４３ｇ，４７．２１７ｍｍｏｌ）の混合物を４０℃で４．０時間加熱し、次いで周囲温度で１４時間撹拌した。混合物を水で希釈し、濾過し、固体を水洗し、次いで真空下で乾燥した。シリカゲルクロマトグラフィー（溶出剤としてヘキサン対７０：２５：５のＣＨＣｌ３／ＥｔＯＡｃ／ＭｅＯＨ）にかけると、１−７が無色非晶質固体として得られた。１Ｈ  ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，ＣＤ３ＯＤ）８．４５（ｍ，１Ｈ），７．９５（ｍ，１Ｈ），７．２３（ｍ，１Ｈ），６．１４（ｄ，１Ｈ，Ｊ＝８Ｈｚ），４．７２（ｍ，２Ｈ），３．４０（ｄｄ，１Ｈ，Ｊ＝４Ｈｚ，１３Ｈｚ），２．９４（ｓ，３Ｈ），２．２３（ｍ，２Ｈ），１．９６（ｍ，２Ｈ），１．５３−１．８６（ｍ，７Ｈ），１．２５−１．３９（ｍ，３Ｈ），１．１２（ｍ，１Ｈ），１．０４（ｍ，２Ｈ），０．９５（ｓ，３Ｈ），０．６８（ｓ，３Ｈ）。ＭＳ  Ｍ＋Ｈ計算値：４８０．２７７０  測定値４８０．２７４０。
【実施例２】
【０１６９】
Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスト−１−エン−１７β−カルボキサミドの無水結晶質形Ａ
非晶質のＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスト−１−エン−１７β−カルボキサミド（１−７）を１，２−ジメトキシエタンに溶解した。溶液を還流温度に加熱した。約２分後、結晶化が生じた。スラリーを２時間還流させ、室温に冷却し、濾過した。固体を１，２−ジメトキシエタンで洗浄し、乾燥すると、Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスト−１−エン−１７β−カルボキサミドの無水結晶質形Ａが得られた。
【実施例３】
【０１７０】
Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスト−１−エン−１７β−カルボキサミドの吸湿性結晶質形Ｂ
非晶質のＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスト−１−エン−１７β−カルボキサミド（３．０ｇｍｓ）（１−７）を加温しながら５ｍＬのエタノールに溶解した。混合物を室温に放冷した。６時間後、針が形成され始めた。混合物を一夜静置した。沈殿した固体を収集し、エタノールで洗浄した。洗浄した固体を２４時間乾燥させた。
【実施例４】
【０１７１】
Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスト−１−エン−１７β−カルボキサミドの結晶質水和物形Ｃ
結晶質エタノラート形Ｇ（約１０ｍｇ）を撹拌容器中で１ｍＬの水に懸濁させた。懸濁液を３時間撹拌した。固体を沈降させた。乾燥した固体のＸＲＰＤ分析は、結晶質水和物形Ｃを示した。
【実施例５】
【０１７２】
Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスト−１−エン−１７β−カルボキサミドの結晶質無水形Ｄ
結晶質四水和物形Ｅ（１．５ｇｍ）およびメタノール（１５ｇｍ，１９ｍＬ）を舟形撹拌羽根を備えた１２５ｍＬ容のジャケット付きフラスコに充填した。ジャケット温度は２０℃に設定した。混合物に形Ａ（３０ｍｇ）を播種し、１時間熟成した。ジャケット付きフラスコに脱イオン水（ＤＩＷ）（１９ｍＬ）を８時間以上の期間で充填した。約１ｍＬのＤＩＷの充填後、形Ａシードが溶解した。約９ｍＬのＤＩＷの充填後、バッチに約５ｍｇの形Ａシードを再度播種した。最初の水充填後、バッチを一夜熟成した。ジャケット付きフラスコ内の混合物の約１／３量（１３ｍＬ）を取り出して、カバー付きメスシリンダーに導入した。固体が沈降した。メスシリンダー内のサンプルの液体部分をピペットで取り出し、ＷｈａｔｍａｎＴＭフィルターで濾過した。メスシリンダー内の残留サンプル部分は真空を備えたフィルターポットで濾過した。次にサンプルをＤＩＷで３回洗浄した。濾過した湿性ケーキを３５℃の真空オーブンで乾燥した。乾燥した固体のＸＲＰＤ分析は結晶質形Ａを示した。
【０１７３】
４．８１ｍＬのＤＩＷをジャケット付きフラスコ内の残留混合物に４時間を要して添加した。次いで、バッチを一夜熟成させた。その後、ジャケット付きフラスコ内の残留混合物のほぼ半量（１５．４ｍＬ）をカバー付きメスシリンダーに導入した。固体を沈降させた。メスシリンダー内のサンプルの液体部分をピペットで取り出し、ＷｈａｔｍａｎＴＭフィルターで濾過した。サンプルの湿性固体部分を、真空を備えたフィルターポットで濾過した。次にサンプルをＤＩＷで３回洗浄した。濾過した湿性ケーキを３５℃の真空オーブンで乾燥した。乾燥した固体のＸＲＰＤ分析は結晶質形Ａを示した。
【０１７４】
その後、３．９５ｍＬのＤＩＷをジャケット付きフラスコ内の残留混合物に４時間を要して添加した。バッチを４時間熟成した。撹拌を中止して固体を沈降させた。メスシリンダー内のサンプルの液体部分をピペットで取り出し、ＷｈａｔｍａｎＴＭフィルターで濾過した。湿性固体を、真空を備えたフィルターポットで濾過した。次にサンプルをＤＩＷで３回洗浄した。濾過した湿性ケーキを３５℃の真空オーブンで乾燥した。乾燥した固体のＸＲＰＤ分析は結晶質無水形Ｄを示した。
【実施例６】
【０１７５】
Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスト−１−エン−１７β−カルボキサミドの結晶質四水和物形Ｅ
無水結晶質形ＡのＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスト−１−エン−１７β−カルボキサミド  ５２．４６ｍｇ）を計量し、５０ｍＬの０．１Ｎの塩酸に撹拌しながら添加して透明溶液を形成した。２４時間後、沈殿を促進するために数滴の５０％ＮａＯＨでサンプルをｐＨ１．５に調整した。溶液はまだ沈殿しなかった。そこで追加量の１００．２５ｍｇの無水結晶質形Ａを溶液に添加して沈殿を促進した。溶液はほぼ透明になり、次いで固体が沈殿し始めた。サンプルをさらに４日間平衡させた後、固体を遠心し、濾過し、冷水ですすいだ。乾燥したサンプルのＸＲＰＤ分析は結晶質四水和物形Ｅを示した。
【実施例７】
【０１７６】
Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスト−１−エン−１７β−カルボキサミドの結晶質セスキ水和物形Ｆ
実施例２に記載した無水結晶質形ＡのＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスト−１−エン−１７β−カルボキサミドの一部分を４０℃のオーブンで２時間真空乾燥し、分析用に１つのアリコートを取り出し、サンプルの残りは乾燥を一夜継続した。次にサンプルを取り出して同様に分析した。２時間サンプルおよび一夜真空乾燥サンプルの双方をＸＲＰＤによって特性決定し、同じ結晶質セスキ水和物形Ｆであることを確認した。
【実施例８】
【０１７７】
Ｎ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスト−１−エン−１７β−カルボキサミドのエタノラート形Ｇ
非晶質のＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスト−１−エン−１７β−カルボキサミド（９．５ｇｍｓ）（１−７）を７５ｍＬのエタノールに６０℃で溶解した。混合物を室温に放冷した。２時間後、固体を収集し、２５ｍＬのエタノールで洗浄した。洗浄した固体を２４時間風乾すると無色固体が得られた。乾燥した固体をＸＲＰＤによって分析し、非晶質形であることを確認した。
【実施例９】
【０１７８】
医薬組成物
本発明の特定実施態様として、１００ｍｇの無水結晶質形ＤのＮ−（３Ｈ−イミダゾ［４，５−ｂ］ピリジン−２−イルメチル）−２−フルオロ−４−メチル−３−オキソ−４−アザ−５α−アンドロスト−１−エン−１７β−カルボキサミドを、微細分割した十分な量のラクトースと配合し、全量をサイズ０の硬質ゼラチンカプセルに充填するための５８０から５９０ｍｇとする。
【０１７９】
上記明細書は本発明の原理を教示しており、実施例は例示目的で与えられており、本発明の実施が慣用的な変更、応用または修正のすべてを特許請求の範囲およびそれらの等価の概念の範囲内に包含することは理解されよう。
【０１８０】
アッセイ
化合物のＳＡＲＭ活性を同定するためのインビトロおよびインビボアッセイ
本出願に例示した化合物は以下のアッセイの１つ以上で活性を示した。
【０１８１】
内在的に発現されたＡＲに対する化合物親和性を検定するヒドロキシアパタイト基剤のラジオリガンド置換アッセイ
材料：
結合用バッファ：ＴＥＧＭ（１０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１０％グリセロール、１ｍＭのベータ−メルカプトエタノール、１０ｍＭのモリブデン酸ナトリウム，ｐＨ７．２）
５０％ＨＡＰスラリー：Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ  Ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ，Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ、１０ｍＭのトリス，ｐＨ８．０および１ｍＭのＥＤＴＡ
洗浄用バッファ：４０ｍＭのトリス，ｐＨ７．５、１００ｍＭのＫＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡおよび１ｍＭのＥＧＴＡ
９５％ＥｔＯＨ
メチルトリエノロン，［１７α−メチル−３Ｈ］，（Ｒ１８８１＊）；ＮＥＮ  ＮＥＴ５９０
メチルトリエノロン（Ｒ１８８１），ＮＥＮ  ＮＬＰ００５（９５％ＥｔＯＨに溶解）
ジヒドロテストステロン（ＤＨＴ）［１，２，４，５，６，７−３Ｈ（Ｎ）］  ＮＥＮ  ＮＥＴ４５３
Ｈｙｄｒｏｘｙａｐａｔｉｔｅ  Ｆａｓｔ  Ｆｌｏｗ；Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ  Ｃａｔ＃３９１９４７
モリブデート＝モリブデン酸（Ｓｉｇｍａ、Ｍ１６５１）
ＭＰＡ−ＭＢ−４５３細胞培養培地：
ＲＰＭＩ  １６４０（Ｇｉｂｃｏ  １１８３５−０５５）ｗ／２３．８ｍＭのＮａＨＣＨ３、２ｍＭのＬ−グルタミン
５００ｍＬの完全培地中                        最終濃度
１０ｍＬ（１Ｍ  Ｈｅｐｅｓ）                  ２０ｍＭ
５ｍＬ（２００ｍＭのＬ−ｇＩｕ）                ４ｍＭ
０．５ｍＬ（１０ｍｇ／ｍＬのヒトインスリン）  １０μｇ／ｍＬ
０．０１ＮのＨＣｌ中
Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ＃４０７６９４−Ｓ）
５０ｍＬのＦＢＳ（Ｓｉｇｍａ  Ｆ２４４２）      １０％
１ｍＬ（１０ｍｇ／ｍＬのゲンタマイシン          ２０μｇ／ｍＬ
Ｇｉｂｃｏ＃１５７１０−０７２）
細胞継代
細胞（Ｈａｌｌ  Ｒ．Ｅ．ら，Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｊｏｕｒｎａｌ  ｏｆ  Ｃａｎｃｅｒ，３０Ａ：４８４−４９０（１９９４））をＰＢＳで２回すすぎ、フェノールレッド非含有トリプシン−ＥＤＴＡを同じＰＢＳで１：１０に希釈する。細胞層を１×トリプシンですすぎ、余剰のトリプシンを除去し、細胞層を３７℃で〜２分間インキュベートする。フラスコを叩いて、細胞剥離の徴候を点検する。細胞がフラスコから剥れて滑り始めると、完全培地を添加してトリプシンの作用を止める。この時点で細胞をカウントし、次いで適正濃度に希釈し、フラスコまたは培養皿に分け入れてさらに培養する（通常は１：３から１：６に希釈）。
【０１８２】
ＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞溶解液の調製
ＭＤＡ細胞が７０から８５％の単層集密状態になると、これらの細胞を上述のように剥離し、４℃、１０００ｇで１０分間遠心することによって収集する。次に細胞ペレットをＴＥＧＭ（１０ｍＭのトリス−ＨＣｌ、１ｍＭのＥＤＴＡ、１０％グリセロール、１ｍＭのベータ−メルカプトエタノール、１０ｍＭのモリブデン酸ナトリウム，ｐＨ７．２）で２回洗浄する。最終洗浄の後、細胞を１０７細胞／ｍＬの濃度でＴＥＧＭに再浮遊させる。細胞浮遊液を液体窒素またはエタノール／ドライアイス浴で瞬間冷凍し、ドライアイスに載せた−８０℃のフリーザーに移す。結合アッセイを開始する前に、凍結サンプルを氷水にのせて適宜解凍する（〜１時間）。次にサンプルを４℃、１２，５００ｇから２０，０００ｇで３０分間遠心する。上清を使用して直ちにアッセイを開始する。５０μＬの上清を使用する場合、被験化合物は５０μＬのＴＥＧＭバッファ中で調製できる。
【０１８３】
多化合物スクリーニング手順
１×ＴＥＧＭバッファを調製し、同位体含有アッセイ混合物を以下の処方で調製する：ＥｔＯＨ（反応中の最終濃度２％）、３Ｈ−Ｒ１８８１または３Ｈ−ＤＨＴ（反応中の最終濃度０．５ｎＭ）および１×ＴＥＧＭ。［例えば、１００サンプルの場合、２００μＬ（１００×２）のＥｔＯＨ＋４．２５μＬの１：１０の３Ｈ−Ｒ１８８１予製液＋２３００μＬ（１００×２３）の１×ＴＥＧＭ］。化合物を系列希釈する、例えば、出発最終濃度が１μＭ、化合物が２５μＬ溶液で、重複サンプル用に７５μＬの４×１μＭ溶液を調製する場合、３μＬの１００μＭ溶液を７２μＬのバッファに添加し、１：５に系列希釈する。
【０１８４】
２５μＬの３Ｈ−Ｒ１８８１トレースおよび２５μＬの化合物溶液を最初に混ぜ合わせる。次いで、５０μＬの受容体溶液を添加する。反応混合物をゆるやかに混ぜ合わせ、約２００ｒｐｍで短時間回転させ、４℃で一夜インキュベートする。１００μＬの５０％ＨＡＰスラリーを調製し、インキュベートした反応混合物に加えて渦流させ、氷上で５から１０分間インキュベートする。反応混合物のインキュベート中に反応混合物をさらに２回渦流させ、ＨＡＰを再懸濁させる。次にＦｉｌｔｅｒＭａｔｅＴＭ  Ｕｎｉｖｅｒｓａｌ  Ｈａｒｖｅｓｔｅｒプレート洗浄機（Ｐａｃｋａｒｄ）を使用し、９６−ウェルフォーマットのサンプルを洗浄用バッファで洗浄する。洗浄プロセスで、発現したリガント結合受容体を含有しているＨＡＰはＵｎｉｆｉｌｔｅｒ−９６  ＧＦ／Ｂフィルタープレート（Ｐａｃｋａｒｄ）に移る。フィルタープレート上のＨＡＰペレットを５０μＬのＭＩＣＲＯＳＣＩＮＴ（Ｐａｃｋａｒｄ）シンチラントと共に３０分間インキュベートした後、ＴｏｐＣｏｕｎｔマイクロシンチレーションカウンター（Ｐａｃｋａｒｄ）でカウントする。Ｒ１８８１を標準としてＩＣ５０を計算する。
【０１８５】
式Ｉの化合物を上記アッセイで試験すると、１マイクロモル以下のＩＣ５０値を有することが知見された。
【０１８６】
アンドロゲン受容体のＮ末端ドメインおよびＣ末端ドメインのリガンド誘導相互作用を検定する哺乳類ツーハイブリッドアッセイ（アゴニストモード：ＶＩＲＣＯＮ）
このアッセイは、ｒｈＡＲのＮ末端ドメイン（ＮＴＤ）とＣ末端ドメイン（ＣＴＤ）との間の相互作用を誘導するＡＲアゴニストの能力を評価する。この相互作用は活性化アンドロゲン受容体によって媒介されるインビボの男性化傾向に影響を及ぼす。ｒｈＡＲのＮＴＤとＣＴＤとの相互作用は、哺乳類ツーハイブリッドアッセイでＣＶ−１サル腎細胞中のＧａｌ４ＤＢＤ−ｒｈＡＲＣＴＤ融合タンパク質とＶＰ１６−ｒｈＡＲＮＴＤ融合タンパク質との間のリガンド誘導会合として定量される。
【０１８７】
トランスフェクション前日、ＣＶ−１細胞をトリプシン処理してカウントし、次いでＤＭＥＭ＋１０％ＦＣＳ中で９６ウェルまたはもっと大きいプレートに２０，０００細胞／ウェル（プレートの大きさに応じて増量）で平板培養する。翌朝、ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ  ＰＬＵＳ試薬（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ）を販売者の推奨する手順に従って使用し、ＣＶ−１細胞にｐＣＢＢ１（ＳＶ４０初期プロモーター下で発現したＧａｌ４ＤＢＤ−ｒｈＡＲＬＢＤ融合構築物）、ｐＣＢＢ２（ＳＶ４０初期プロモーター下で発現したＶＰ１６−ｒｈＡＲ  ＮＴＤ融合構築物）およびｐＦＲ（Ｇａｌ４応答性ルシフェラーゼリポーター、Ｐｒｏｍｅｇａ）をコトランスフェクトする。簡単に説明すると、０．０５μｇのｐＣＢＢ１、０．０５μｇのｐＣＢＢ２および０．１μｇのｐＦＲのＤＮＡ混合物を、“ＰＬＵＳ  Ｒｅａｇｅｎｔ”（１．６μＬ、ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ）に混合した３．４μＬのＯＰＴＩ−ＭＥＭ（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ）に混合し、室温（ＲＴ）で１５分間インキュベートしてプレ複合体化ＤＮＡを形成する。
【０１８８】
各ウェル用に、０．４μＬのＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ試薬（ＧＩＢＣＯ−ＢＲＬ）を第二管で４．６μＬのＯＰＴＩ−ＭＥＭに希釈して混ぜ合せ、希釈ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ試薬を調製する。プレ複合体化ＤＮＡ（上記）と希釈ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ試薬（上記）とを一緒にして混ぜ合せ、室温で１５分間インキュベートする。細胞上の培地を、４０μＬ／ウェルのＯＰＴＩ−ＭＥＭで交換し、１０μＬのＤＮＡ−脂質複合体を各ウェルに加える。複合体を静かに培地に混ぜ、３７℃、５％ＣＯ２で５時間インキュベートする。インキュベーション後、２００μＬ／ウェルのＤＭＥＭおよび１３％の活性炭脱着ＦＣＳを添加し、次いで３７℃、５％ＣＯ２でインキュベートする。２４時間後、被験化合物を所望濃度（１ｎＭ−１０μＭ）で添加する。４８時間後、ＬＵＣ−スクリーンシステム（ＴＲＯＰＩＸ）を製造業者のプロトコル通りに使用してルシフェラーゼ活性を測定する。アッセイは、各５０μＬのアッセイ溶液１次いでアッセイ溶液２を順次にウェルに添加することによって直接的に行う。室温で４０分間のインキュベーション後、２−５秒の積分で蛍光を直接測定する。
【０１８９】
被験化合物の活性は、３ｎＭのＲ１８８１によって得られた活性に対するＥｍａｘとして計算する。本発明の典型的な組織選択的アンドロゲン受容体モジュレーターはこのアッセイで弱いアゴニスト活性を示すかまたはアゴニスト活性を全く示さず、１０マイクロモルでアゴニスト活性５０％未満である。
【０１９０】
参照：Ｈｅ  Ｂ，Ｋｅｍｐｐａｉｎｅｎ  ＪＡ，Ｖｏｅｇｅｌ  ＪＪ，Ｇｒｏｎｅｍｅｙｅｒ  Ｈ，Ｗｉｌｓｏｎ  ＥＭ，“Ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ  ｆｕｎｃｔｉｏｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｈｕｍａｎ  ａｎｄｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｌｉｇａｎｄ  ｂｉｎｄｉｎｇ  ｄｏｍａｉｎ  ｍｅｄｉａｔｅｓ  ｉｎｔｅｒ−ｄｏｍａｉｎ  ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎ  ｗｉｔｈ  ｔｈｅ  ＮＨ（２）−ｔｅｒｍｉｎａｌ  ｄｏｍａｉｎ，”Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７４：３７２１９−３７２２５（１９９９）。
【０１９１】
アンドロゲン受容体のトランス活性化変調（ＴＡＭＡＲ）
このアッセイは、ヒトＡＲを天然に発現するヒト乳癌細胞系ＭＤＡ−ＭＢ−４５３細胞中のＭＭＴＶ−ＬＵＣリポーター遺伝子からの転写をコントロールする被験化合物の能力を評価する。このアッセイはＬＵＣリポーター遺伝子に結合した修飾ＭＭＴＶ  ＬＴＲ／プロモーターの誘導を測定する。
【０１９２】
１０％ＦＢＳ、４ｍＭのＬ−グルタミン、２０ｍＭのＨＥＰＥＳ、１０ｕｇ／ｍＬのヒトインスリンおよび２０ｕｇ／ｍＬのゲンタマイシンを含有しているフェノールレッド非含有ＲＰＭＩ  １６４０から成る“対数増殖培地”中で、透明底部をもつ白色の９６ウェルプレートに２０，０００から３０，０００細胞／ウェルを平板培養する。インキュベーター条件は、３７℃および５％ＣＯ２である。トランスフェクションはバッチモードで行う。細胞をトリプシン処理し、適正量の新しい培地中で好都合な細胞数までカウントし、Ｆｕｇｅｎｅ／ＤＮＡカクテルミックスとゆるやかに混ぜ合わせて、９６ウェルプレートに平板培養する。全部のウェルに２００Ｔｌの培地＋脂質／ＤＮＡ複合体を入れ、次いで３７℃で一夜インキュベートする。トランスフェクションカクテルは、無血清Ｏｐｔｉｍｅｍ、Ｆｕｇｅｎｅ６試薬およびＤＮＡから成る。製造業者（Ｒｏｃｈｅ  Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ）のカクテル調製プロトコルに従う。脂質（Ｔｌ）対ＤＮＡ（Ｔｇ）比は約３：２であり、インキュベーション時間は室温で２０分間である。トランスフェクションの１６から２４時間後、ＤＭＳＯ（ビヒクル）中の最終濃度＜３％とした被験化合物で細胞を処理する。細胞を被験化合物に４８時間接触させる。４８時間後、細胞をＰｒｏｍｅｇａ細胞培養物溶解バッファで３０から６０分間溶解し、次いで９６ウェルフォーマット光量計で抽出物中のルシフェラーゼ活性を測定する。
【０１９３】
被験化合物の活性は、１００ｎＭのＲ１８８１で得られた活性に対するＥｍａｘとして計算する。
参照：Ｒ．Ｅ．Ｈａｌｌら，“ＭＤＡ−ＭＢ−４５３，ａｎ  ａｎｄｒｏｇｅｎ−ｒｅｓｐｏｎｓｉｖｅ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅ  ｗｉｔｈ  ｈｉｇｈ  ａｎｄｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ，”Ｅｕｒ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，３０Ａ：４８４−４９０（１９９４）およびＲ．Ｅ．Ｈａｌｌら，“Ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ  ｏｆ  ａｎｄｒｏｇｅｎ  ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ｇｅｎｅ  ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  ｂｙ  ｓｔｅｒｏｉｄｓ  ａｎｄ  ｒｅｔｉｎｏｉｃ  ａｃｉｄ  ｉｎ  ｈｕｍａｎ  ｂｒｅａｓｔ−ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌｓ，”Ｉｎｔ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ，５２：７７８−７８４（１９９２）。
被験化合物の活性は、Ｒ１８８１で得られた活性に対するＥｍａｘとして計算する。例示した本発明の組織選択的アンドロゲン受容体モジュレーターはこのアッセイで１０％を上回る部分アゴニスト活性を示す。
【０１９４】
インビボ前立腺アッセイ
最初期の性的成熟年齢に達した９−１０週齢の雄のスプレーグ−ドーリーラットを予防モードで使用する。目標は、精巣除去（精巣摘出術［ＯＲＸ］）後の７日間に生じる腹側前立腺および精嚢の急激な性能低下（〜８５％）をアンドロゲン様化合物がどの程度遅延させるかを測定することである。
【０１９５】
ラットに精巣摘出術（ＯＲＸ）を施す。各ラットを計量し、次いでイソフルランガスで麻酔し、目的を果たすまで維持する。陰嚢を１．５ｃｍ長さで腹背切開する。右精巣を体外に出す。精巣動脈および輸精管を精巣から０．５ｃｍ近位で４．０シルクによって結紮する。結紮部位の遠位を小型手術鋏で切断して精巣を切り離す。組織断端は陰嚢に戻す。左精巣についても同じ操作を繰返す。両方の断端を陰嚢に戻した後、陰嚢とその上の皮膚を４．０シルクで縫合する。擬ＯＲＸ（Ｓｈａｍ−ＯＲＸ）の場合、結紮および鋏切断を除く全部の手順が完了している。ラットは１０から１５分以内に意識および十分な運動能力を完全に回復する。
【０１９６】
切開創の縫合後、直ちに所定用量の被験化合物をラットに皮下または経口投与する。さらに６日間連続して治療を継続する。
【０１９７】
剖検およびエンドポイント
ラットを先ず計量し、次いでＣＯ２室で仮死状態まで麻酔する。心臓穿刺によって約５ｍＬの全血を採取する。次いでラットの死亡徴候およびＯＲＸの完了を調べる。次に、前立腺の腹側部分を探し出し、型通りのやり方で鈍的剥離する。腹側前立腺を３から５秒間ドライブロットし、次いで計量する（ＶＰＷ）。最後に、精嚢を探し出し、切り離す。腹側精嚢を３から５秒間ドライブロットし、次いで計量する（ＳＶＷＴ）。
【０１９８】
このアッセイの一次データは、腹側前立腺および精嚢の重量である。二次データは、血清ＬＨ（黄体形成ホルモン）およびＦＳＨ（卵胞刺激ホルモン）、また、できれば骨形成および男性化の血清マーカーを含む。群間差を確認するためにフィッシャーＰＬＳＤポストホック検定を加えたＡＮＯＶＡによってデータを解析する。被験化合物がＯＲＸ誘導ＶＰＷおよびＳＶＷＴの減少を阻害する程度を評価する。
【０１９９】
インビボ骨形成アッセイ：
成人女性をシミュレートするために７から１０ヶ月齢の雌のスプレーグ−ドーリーラットを治療モードで使用する。骨減量を生じさせエストロゲン不足の骨減少症の成人女性をシミュレートするために７５から１８０日前にラットに卵巣摘出術（ＯＶＸ）を施しておく。低用量の強力な抗吸収剤アレンドロネート（０．００２８ｍｐｋ  ＳＣ，２×／週）による前処置をＤａｙ０に開始する。被験化合物による治療をＤａｙ１５に開始する。Ｄａｙｓ１５−３１まで被験化合物で治療し、Ｄａｙ３２に剖検を行う。目標は、骨膜表面の蛍光色素ラベリングの増加によって示される骨形成量がアンドロゲン様化合物によってどの程度増加するかを測定することである。
【０２００】
典型的アッセイでは、各７匹のラットから成る９グループを試験する。Ｄａｙｓ１９および２９（治療５および１５日目）に、各ラットにカルセイン（８ｍｇ／ｋｇ）の皮下注射を一回行う。
【０２０１】
剖検およびエンドポイント
ラットを先ず計量し、次いでＣＯ２室で仮死状態まで麻酔する。心臓穿刺によって約５ｍＬの全血を採取する。次いでラットの死亡徴候およびＯＲＶの完了を調べる。最初に、子宮を探し出し、型通りのやり方で鈍的剥離し、３から５秒間ドライブロットし、次いで計量する（ＵＷ）。子宮を１０％中性緩衝ホルマリンに入れる。次に、右肢を股関節から外す。大腿骨と頚骨とを膝で分離し、筋肉を実質的に除去し、次いで７０％エタノールに入れる。
【０２０２】
大腿骨の近位−遠位中点を中心にした右大腿骨中央の１ｃｍセグメントをシンチレーションバイアルに入れ、工業用アルコールおよびアセトンで脱水および脱脂し、次いで漸増濃度のメチルメタクリレート溶液に導入する。これを９０％メチルメタクリレート：１０％ジブチルフタレートの混合物に埋封し、４８から７２時間重合させる。ボトルを割り、プラスチックブロックをＬｅｉｃａ  １６００  Ｓａｗ  Ｍｉｃｒｏｔｏｍｅの万力型標本ホルダーに適合する形状に裁断し、骨の長軸の横断切片作製を準備する。８５μｍ厚みの３つの横断切片を作製し、ガラススライドに封入する。骨の中点にほぼ対応する１つの切片を各ラットから選択し、ブラインドコードする。各切片の骨膜表面の全骨膜表面積、シングル蛍光色素ラベル、ダブル蛍光色素ラベルおよびラベル間距離を評価する。
【０２０３】
このアッセイの一次データは、骨形成の半独立マーカーであるダブルラベル含有骨膜表面のパーセンテージおよびミネラル付着率（ラベル間距離（μｍ）／１０ｄ）である。二次データは、子宮重量および組織学的特徴を含む。三次エンドポイントは、骨形成および男性化の血清マーカーを含み得る。群間差を確認するためにフィッシャーＰＬＳＤポストホック検定を加えたＡＮＯＶＡによってデータを解析する。被験化合物が骨形成エンドポイントを増加させた程度を評価する。
【図面の簡単な説明】
【０２０４】
【図１】化合物Ｉの無水結晶質形Ａの特性Ｘ線回折パターンである。
【図２】化合物Ｉの無水結晶質形Ａの炭素−１３交差分極マジックアングルスピニング（ＣＰＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルである。
【図３】化合物Ｉの無水結晶質形Ａのフッ素−１９交差分極マジックアングルスピニング（ＣＰＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルである。
【図４】化合物Ｉの無水結晶質形Ａの典型的ＤＳＣ曲線である。
【図５】化合物Ｉの結晶質形ＢのＸ線回折パターンである。
【図６】化合物Ｉの結晶質形Ｂの典型的ＤＳＣ曲線である。
【図７】化合物Ｉの結晶質水和物形ＣのＸ線回折パターンである。
【図８】化合物Ｉの結晶質水和物形ＣのＤＳＣ曲線である。
【図９】化合物Ｉの無水結晶質形ＤのＸ線回折パターンである。
【図１０】化合物Ｉの無水結晶質形Ｄの炭素−１３交差分極マジックアングルスピニング（ＣＰＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルである
【図１１】化合物Ｉの無水結晶質形Ｄのフッ素−１９交差分極マジックアングルスピニング（ＣＰＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトル
【図１２】化合物Ｉの無水結晶質形Ｄの典型的ＤＳＣ曲線である。
【図１３】化合物Ｉの結晶質四水和物形ＥのＸＲＰＤである。
【図１４】化合物Ｉの結晶質四水和物形Ｅの炭素−１３交差分極マジックアングルスピニング（ＣＰＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルである。
【図１５】化合物Ｉの結晶質四水和物形Ｅのフッ素−１９交差分極マジックアングルスピニング（ＣＰＭＡＳ）核磁気共鳴（ＮＭＲ）スペクトルである。
【図１６】化合物Ｉの結晶質四水和物形ＥのＤＳＣ曲線である。
【図１７】化合物Ｉのセスキ水和物形ＦのＸ線回折パターンである。
【図１８】化合物Ｉのセスキ水和物形ＦのＴＧＡ曲線である。
【図１９】化合物Ｉの結晶質エタノラート形ＧのＸ線回折パターンである。
【図２０】化合物Ｉの結晶質エタノラート形Ｇの典型的ＤＳＣ曲線である。
【図２１】化合物Ｉの非晶質形のＸＲＰＤである。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【国際調査報告】
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