(57)【要約】本発明は、肥満哺乳動物において体重減少を誘発するための化合物１４３６の使用を対象とする。本発明の別の態様は、外因性肥満を伴う合併症を、化合物１４３６の投与により治療する方法である。この合併症としては、ＩＩ型糖尿病、高血清コレステロール、心臓発作および脳卒中の発生、（特に、ピックウィック症候群における）睡眠時無呼吸、先天性肥満症候群（先天性レプチン、ＰＯＭＣ、およびＭＣ４Ｒ欠損症を含む）、非アルコール性脂肪性肝炎、および肥満による手術における合併症が挙がられるが、これらに限定されない。【特許請求の範囲】
【請求項１】
肥満哺乳動物において体重減少を誘発する方法であって、医薬として許容できる担体または賦形剤、および次式のアミノステロール化合物：
【化１】
2009534391.tif 000005
またはその医薬として許容できる塩を含む有効量の組成物を投与することを含む方法。
【請求項２】
前記哺乳動物が、ＩＩ型糖尿病、高血清コレステロール、睡眠時無呼吸、ピックウィック症候群、および非アルコール性脂肪性肝炎からなる群から選択される病態も患っている、請求項１に記載の方法。
【請求項３】
前記哺乳動物が外因性肥満である、請求項１に記載の方法。
【請求項４】
前記病態がＩＩ型糖尿病である、請求項２に記載の方法。
【請求項５】
前記病態が高血清コレステロールである、請求項２に記載の方法。
【請求項６】
前記病態が睡眠時無呼吸である、請求項２に記載の方法。
【請求項７】
前記病態がピックウィック症候群である、請求項２に記載の方法。
【請求項８】
前記病態が非アルコール性脂肪性肝炎である、請求項２に記載の方法。
【請求項９】
前記肥満哺乳動物が外科的処置を必要とする、請求項１に記載の方法。
【請求項１０】
外因性肥満哺乳動物において急速な体脂肪減少を誘発する方法であって、医薬として許容できる担体または賦形剤、および次式のアミノステロール化合物またはその医薬として許容できる塩：
【化２】
2009534391.tif 000006
を含む有効量の組成物を投与するステップを含む方法。
【請求項１１】
哺乳動物においてインスリンを感作させる方法であって、有効量の次式のアミノステロール化合物：
【化３】
2009534391.tif 000007
またはその医薬として許容できる塩を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項１２】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１１に記載の方法。
【請求項１３】
前記インスリン感作がＩ型またはＩＩ型糖尿病の治療を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１４】
前記インスリン感作が肥満の治療を含む、請求項１１に記載の方法。
【請求項１５】
哺乳動物において酵素ＴＣＰＴＰに優先して酵素ＰＴＰ１Ｂを選択的阻害する方法であって、有効量の次式のアミノステロール化合物：
【化４】
2009534391.tif 000008
またはその医薬として許容できる塩を、それを必要とする哺乳動物に投与する方法。
【請求項１６】
前記酵素ＰＴＰ１ＢおよびＴＣＰＴＰがヒト型である、請求項１５に記載の方法。
【請求項１７】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１５に記載の方法。
【請求項１８】
前記酵素ＴＣＰＴＰに優先する酵素ＰＴＰ１Ｂの選択的阻害がＩ型またはＩＩ型糖尿病治療の改善を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項１９】
前記酵素ＴＣＰＴＰに優先する酵素ＰＴＰ１Ｂの選択的阻害が肥満治療の改善を含む、請求項１５に記載の方法。
【請求項２０】
前記化合物が、さらに医薬として許容できる担体または賦形剤を含む、請求項１１または請求項１５に記載の方法。
【請求項２１】
前記化合物を皮下注射投与する、請求項１１または請求項１５に記載の方法。
【請求項２２】
前記化合物を吸入投与する、請求項１１または請求項１５に記載の方法。
【請求項２３】
哺乳動物においてインスリンを感作するための医薬組成物であって、次式の化合物：
【化５】
2009534391.tif 000009
を含む医薬組成物。
【請求項２４】
カロリー摂取を低減した哺乳動物において基礎代謝率を維持する方法であって、医薬として許容できる担体または賦形剤、および次式のアミノステロール化合物：
【化６】
2009534391.tif 000010
を含む組成物のある量を哺乳動物に投与することを含み、ここで、前記哺乳動物の代謝率を維持するのに有効な量のアミノステロール化合物が投与される方法。
【請求項２５】
前記哺乳動物がヒトである、請求項１１から２４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２６】
哺乳動物においてドーパミン取込みを阻害する方法であって、有効量の次式のアミノステロール化合物：
【化７】
2009534391.tif 000011
またはその医薬として許容できる塩を、それを必要とする哺乳動物に投与すること含む方法。
【請求項２７】
前記哺乳動物がヒトである、請求項２６に記載の方法。
【請求項２８】
前記ドーパミン取込み阻害がＩ型またはＩＩ型糖尿病治療の改善を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項２９】
前記ドーパミン取込み阻害が肥満治療の改善を含む、請求項２６に記載の方法。
【請求項３０】
哺乳動物においてノルエピネフリン取込みを阻害する方法であって、有効量の次式のアミノステロール化合物：
【化８】
2009534391.tif 000012
またはその医薬として許容できる塩を、それを必要とする哺乳動物に投与することを含む方法。
【請求項３１】
前記哺乳動物がヒトである、請求項３０に記載の方法。
【請求項３２】
前記ノルエピネフリン取込み阻害がＩ型またはＩＩ型糖尿病治療の改善を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３３】
前記ノルエピネフリン取込み阻害が肥満治療の改善を含む、請求項３０に記載の方法。
【請求項３４】
前記化合物が、さらに医薬として許容できる担体または賦形剤を含む、請求項２６または請求項３０に記載の方法。
【請求項３５】
前記化合物を皮下注射投与する、請求項２６または請求項３０に記載の方法。
【請求項３６】
前記化合物を吸入投与する、請求項２６または請求項３０に記載の方法。
【請求項３７】
哺乳動物においてインスリンを感作するための医薬組成物であって、次式の化合物：
【化９】
2009534391.tif 000013
またはその医薬として許容できる塩を含む医薬組成物。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
（発明の分野）
本願は、肥満哺乳動物において体重減少を誘発するための化合物１４３６の使用を対象とする。
【背景技術】
【０００２】
（発明の背景）
いくつかのアミノステロール化合物が、ツノザメのＳｑｕａｌｕｓ  ａｃａｎｔｈｉａｓの肝臓から単離されている。これらの化合物の１つは、１４３６と呼ばれる。その構造を図１に示す。化合物１４３６は、例えば米国特許第５，７６３，４３０号；第５，７９５，８８５号；第５，８４７，１７２号；第５，８４０，９３６号、および第６，１４３，７３８号に以前に記載され（それぞれ、その全体が組み込まれる）、体重増加を防止し、食欲を抑制することがわかっており、これによって動物モデルにおいて体重減少が起こる。
【０００３】
肥満は、米国では重大な医学的問題であり、残りの先進世界でもだんだんそのようになっている。原因は、主に座りがちな生活様式および高脂肪食の結果である。肥満個体は、肥満に直接関係する医学的問題、具体的にはＩＩ型糖尿病、インスリン抵抗性、血清コレステロールの上昇、血圧上昇、先天性肥満症候群（先天性レプチン、プロオピオメラノコルチン（ＰＯＭＣ）、およびメラノコルチン４型受容体（ＭＣ４Ｒ）欠損症を含む）、および睡眠時無呼吸、特にピックウィック症候群における睡眠時無呼吸に影響されやすい。さらに、肝臓における脂肪蓄積は、非アルコール性脂肪性肝炎および肝硬変に進行する恐れがある。肥満個体の別の問題は、非常に血管新生し、したがって出血を起こしやすい厚い脂肪組織層を切開しなければならない手術ではいずれの場合もリスクが増大することである。必要な手術は、その肥満患者が体重を減少して、手術のリスクを許容できるものにするまで、頻繁に延期される。
【０００４】
インスリンは、様々な代謝過程の重要な制御因子であり、血糖制御で重要な役割を果たす。インスリン合成およびシグナル伝達に関係する欠陥は、糖尿病を招く。インスリンがインスリン受容体（ＩＲ）に結合すると、β−サブユニットの細胞内部分においていくつかのチロシン残基が急速に自己リン酸化する。インスリン受容体基質１（ＩＲＳ−１）およびインスリン受容体基質２（ＩＲＳ−２）を含めて、他の細胞基質のチロシンリン酸化によりさらなるシグナルを伝達するインスリン受容体チロシンキナーゼ（ＩＲＴＫ）活性を最大限に発現するには、密接に位置する３つのチロシン残基（１１５０位のチロシンドメイン）がリン酸化されなければならない。
【０００５】
タンパク質リン酸化は、細胞機能の異なる段階で、シグナルを変換および調節することでよく知られる細胞機構である（例えば、Ｈｕｎｔｅｒ，Ｐｈｉｌ，Ｔｒａｎｓ．  Ｒ．  Ｓｏｃ．  Ｌｏｎｄ．  Ｂ．  ３５３：５８３−６０５（１９９８）；Ｃｈａｎら，Ａｎｎｕ．  Ｒｅｖ．  Ｉｍｍｕｎｏｌ．  １２：５５５−５９２（１９９４）；Ｚｈａｎｇ，Ｃｕｒｒ．  Ｔｏｐ．  Ｃｅｌｌ．  Ｒｅｇ．  ３５：２１−６８（１９９７）；ＭａｔｏｚａｋｉおよびＫａｓｕｇａ，Ｃｅｌｌ．  Ｓｉｇｎａｌ．  ８：１１３−１  １９（１９９６）を参照のこと）。ホスファターゼ類は、少なくとも２つの認識されたクラス：（１）ホスファート基（単数または複数）をセリンまたはトレオニン部分に含むタンパク質を脱リン酸化するホスファターゼ類（Ｓｅｒ／Ｔｈｒホスファターゼ類、または二重特異性ホスファターゼ類、またはＤＳＰ類と称する）、および（２）ホスファート基（単数または複数）をアミノ酸であるチロシンから除去するホスファターゼ類（タンパク質チロシンホスファターゼ類、またはＰＴＰａｓｅ類、またはＰＴＰ類と称する）に大別される。
【０００６】
いくつかの研究は、インビトロでの脱リン酸化により、自己リン酸化したＩＲＴＫの活性を逆転することができ、三リン酸化された１１５０位のチロシンドメインは、ＰＴＰａｓｅ類にとって最も感受性の高い標的であることが明確に示している（Ｇｏｌｄｓｔｅｉｎ，Ｒｅｃｅｐｔｏｒ  ３：１−１５（１９９３）に概説されている）。この三リン酸化された１１５０位のチロシンドメインは、ＩＲＴＫ活性の制御スイッチとして機能すると思われ、ＩＲＴＫは、ＰＴＰによって媒介されるインビボ脱リン酸化により厳密に調節されると思われる（Ｆａｕｒｅら，Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６７：１  １２１５−１１２２１（１９９２））。
【０００７】
ＰＴＰ１Ｂは、インビトロで実施された研究（Ｓｅｅｌｙら、Ｄｉａｂｅｔｅｓ  ４５：１３７９−１３８５（１９９６））と、ＰＴＰ１Ｂ中和抗体を使用したインビボで実施された研究（Ａｈｍａｄら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２７０：２０５０３−２０５０８（１９９５））とによって、ＩＲＴＫ制御に関与する主要なホスファターゼ類の少なくとも１つとして同定された。独立した２つの研究は、ＰＴＰ１Ｂノックアウトマウスが、高脂肪食餌で耐糖能の増大、インスリン感受性の増大、および体重増加の低下を起こすことを示している（Ｅｌｃｈｅｂｌｙら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２８３：１５４４−１５４８（１９９９）、およびＫｌａｍａｎら、Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．  ２０：５４７９−５４８９（２０００））。チロシンホスファターゼＰＴＰ１Ｂの過剰発現または活性の変化は、インスリン抵抗性および糖尿病を含めて、様々な障害の進行の一因となり得る（Ａｎｎ．  Ｒｅｖ．  Ｂｉｏｃｈｅｍ．  ５４：８９７−９３０（１９８５））。さらに、タンパク質チロシンホスファターゼＰＴＰ１Ｂの阻害が、障害、具体的にはＩ型およびＩＩ糖尿病、肥満、自己免疫障害、急性および慢性炎症、骨粗鬆症、ならびに様々な形の癌の治療にとって、治療上有益であることを示唆する証拠がある（Ｚｈａｎｇ  ＺＹら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．  Ｄｒｕｇｓ  ２：２２３−３３（２００３）；Ｔａｙｌｏｒ  ＳＤら、Ｅｘｐｅｒｔ  Ｏｐｉｎ．  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．  Ｄｒｕｇｓ  ３：１９９−２１４（２００４）；Ｊ．  Ｎａｔｌ．  Ｃａｎｃｅｒ  Ｉｎｓｔ．  ８６：３７２−３７８（１９９４）；Ｍｏｌ．  Ｃｅｌｌ．  Ｂｉｏｌ．  １４：６６７４−６６８２（１９９４）；Ｔｈｅ  ＥＭＢＯ  Ｊ．  １２：１９３７−１９４６（１９９３）；Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６９：３０６５９−３０６６７（１９９４）；およびＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ  Ｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  ５４：７０３−７１１（１９９７））。
【０００８】
酵素のＰＴＰａｓｅファミリーは、（１）細胞内型または非膜貫通型ＰＴＰａｓｅ類と（２）受容体型または膜貫通型ＰＴＰａｓｅ類の２つのサブグループに分類することができる。最も知られている細胞内型ＰＴＰａｓｅ類は、２２０〜２４０個のアミノ酸残基からなる単一保存触媒ホスファターゼドメインを含む。ＰＴＰａｓｅドメイン外の領域は、細胞内型ＰＴＰａｓｅ類を細胞内で局在化する際に重要な役割を果たすと考えられている（Ｍａｕｒｏ，Ｌ．Ｊ．およびＤｉｘｏｎ  Ｊ．Ｅ．，ＴＩＢＳ  １９：１５１−１５５（１９９４））。精製され、特徴付けられた最初の細胞内型ＰＴＰａｓｅ類はＰＴＰ１Ｂであった（Ｔｏｎｋｓら、Ｊ．  Ｂｉｏｌ．  Ｃｈｅｍ．  ２６３：６７２２−６７３０（１９８８））。細胞内型ＰＴＰａｓｅ類の他の例としては、（１）Ｔ細胞ＰＴＰａｓｅ（ＴＣＰＴＰ）（Ｃｏｏｌら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８６：５２５７−５２６１（１９８９））、（２）神経型ホスファターゼＳＴＥＰ（Ｌｏｍｂｒｏｓｏら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８８：７２４２−７２４６（１９９１））、（３）ＰＴＰ１Ｃ／ＳＨ−ＰＴＰ１／ＳＨＰ−１（Ｐｌｕｔｚｋｙら、Ｐｒｏｃ．  Ｎａｔｌ．  Ａｃａｄ．  Ｓｃｉ．  ＵＳＡ  ８９：１１２３−１１２７（１９９２））、（４）ＰＴＰ１Ｄ／Ｓｙｐ／ＳＨ−ＰＰＴ２／ＳＨＰ−２（Ｖｏｇｅｌら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５９：１６１１−１６１４（１９９３）；Ｆｅｎｇら、Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２５９：１６０７−１６１１（１９９３））が挙げられる。
【０００９】
受容体型ＰＴＰａｓｅ類は、（ａ）推定リガンド結合細胞外ドメイン、（ｂ）膜貫通領域、および（ｃ）細胞内触媒領域からなる。受容体型ＰＴＰａｓｅ類の推定リガンド結合細胞外ドメインの構造およびサイズは、かなり多岐にわたる。一方、受容体型ＰＴＰａｓｅ類の細胞内触媒領域は、互いに相同であり、また細胞内型ＰＴＰａｓｅ類と相同である。大部分の受容体型ＰＴＰａｓｅ類は、２つの縦列型複製触媒ＰＴＰａｓｅドメインを有する。同定された第１のＰＴＰａｓｅ受容体サブタイプは、（１）  ＣＤ４５（Ｒａｌｐｈ，Ｓ．Ｊ．，ＥＭＢＯ  Ｊ．  ６：１２５１−１２５７（１９８７））および（２）  ＬＡＲ（Ｓｔｒｅｕｌｉら、Ｊ．  Ｅｘｐ．  Ｍｅｄ．  １６８：１５２３−１５３０（１９８８））であった。それ以降、例えばＰＴＰα、ＰＴＰβ、ＰＴＰδ、ＰＴＰε、およびＰＴＰξを含めて、はるかに多くの受容体サブタイプが単離され、特徴づけられてきた（Ｋｒｕｅｇｅｒら、ＥＭＢＯ  Ｊ．  ９：３２４１−３２５２（１９９０））。
【００１０】
ＰＴＰ１Ｂ阻害剤として使用するための作用剤、具体的には特許文献１、特許文献２、および特許文献３に記載されるヘテロアリールおよびアリールアミノ酢酸類が同定されているが、これらの作用剤では、ＰＴＰ１ＢとＴＣＰＴＰの阻害活性が分離されない。さらに、ＴＣＰＴＰを阻害することによって潜在的免疫抑制効果が生ずるため、ＴＣＰＴＰに優先するＰＴＰ１Ｂの選択的阻害は、このような作用剤を創薬により適したものとするはずであろう。というのは、作用剤が、このような非選択性によって生ずる望まれない副作用を低減またはなくすことができるからである。
【００１１】
ドーパミントランスポーター（ＤＡＴ）およびノルエピネフリントランスポーター（ＮＥＴ）は、視床下部のシナプス前ニューロンに位置し、シナプスに放出された後のシナプスドーパミンまたはノルエピネフリンのレベルを低下させるように働く。ＤＡＴまたはＮＥＴが阻害されると、シナプス内のそれらのレベルは上昇し、それらの受容体を活性化する。
【００１２】
非特許文献１、非特許文献２、ならびに非特許文献３による研究は、ＤＡＴおよび／もしくはＮＥＴの阻害剤、またはそれらの受容体のアゴニストは、有効な体重減少剤として作用できることを実証している。したがって、化合物１４３６を含む本発明においてインビトロで観察されたＤＡＴおよびＮＥＴの阻害は、体重減少を担う機序の一部としてこのことを裏付ける。
【特許文献１】国際公開第０１／１９８３０号パンフレット
【特許文献２】国際公開第０１／１９８３１号パンフレット
【特許文献３】国際公開第０１／１７５１６号パンフレット
【非特許文献１】ＢｉｌｌｅｓおよびＣｏｗｌｅｙ，Ｎｅｕｒｏｐｓｙｃｈｏｐｈａｒｍａｃｏｌｏｇｙ  １：１−１３（２００６）
【非特許文献２】ＧａｄｄｅおよびＸｉｏｎｇ，Ｅｘｐｅｒｔ  Ｒｅｖ．  Ｎｅｕｒｏｔｈｅｒ．，７：１７−２４（２００７）
【非特許文献３】Ｇｅｈｌｅｒｔら，Ｊ．  Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．  Ｅｘｐ．  Ｔｈｅｒ．，２８７：１２２−７（１９９８）
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１３】
したがって、食餌誘発性肥満の個体において急速な体重減少を安全に誘発することができる薬物が必要とされている。このタイプの薬物は、肥満による合併症、ＩＩ型糖尿病における肥満、高血清コレステロール、（特に、ピックウィック症候群における）睡眠時無呼吸、非アルコール性脂肪性肝炎、および肥満患者の手術の治療にも有用である。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
（発明の要旨）
本発明の一態様は、外因性肥満対象において、化合物１４３６の投与により体重減少を急速に誘発する方法である。
【００１５】
本発明の別の態様は、外因性肥満を伴う合併症を、化合物１４３６の投与により治療する方法である。この合併症としては、ＩＩ型糖尿病、高血清コレステロール、心臓発作および脳卒中の発生、（特に、ピックウィック症候群における）睡眠時無呼吸、先天性肥満症候群（先天性レプチン、ＰＯＭＣ、およびＭＣ４Ｒ欠損症を含む）、非アルコール性脂肪性肝炎、および肥満による手術における合併症が挙がられるが、これらに限定されない。
【００１６】
さらなる態様は、体脂肪（％）の大幅な低下をもたらすための化合物１４３６を用いた外因性肥満哺乳動物の治療である。
【００１７】
本発明の別の態様では、他のホスファターゼに優先して、ＰＴＰ１Ｂに対する選択的阻害活性を実証する化合物１４３６の形のＰＴＰ１Ｂ阻害剤が提供される。
【００１８】
例示的実施形態では、本発明は、図１の化合物（すなわち、化合物１４３６）、またはその治療上許容できる塩もしくはプロドラッグを対象とする。
【００１９】
本発明の別の態様は、治療上有効量の化合物１４３６式を医薬として許容できる担体と組み合わせて含む医薬組成物である。
【００２０】
本発明の別の態様は、Ｔ細胞タンパク質チロシンホスファターゼに優先してタンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂを選択的に阻害する方法であって、治療上有効量の化合物１４３６を投与することを含む方法に関する。
【００２１】
本発明の別の態様は、タンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂの過剰発現またはタンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂの活性亢進によって引き起こされた障害を治療する方法であって、治療上有効量の化合物１４３６をそれを必要とするレシピエントに投与することを含む方法に関する。
【００２２】
本発明の別の態様は、Ｉ型およびＩＩ型糖尿病を治療する方法であって、治療上有効量の化合物１４３６をこれらの疾患のどちらかに悩まされているレシピエントに投与することを含む方法に関する。
【００２３】
本発明の別の態様は、肥満を治療する方法であって、治療上有効量の化合物１４３６を肥満を患っているレシピエントに投与することを含む方法に関する。
【００２４】
本発明の別の態様は、ドーパミンまたはノルエピネフリンをその再取込みトランスポーターの近くで増量させることによる障害を治療する方法であって、治療上有効量の化合物１４３６をそれを必要とするレシピエントに投与することを含む方法に関する。
【００２５】
下記の図１〜１２は、本発明の範囲の実施態様の例示にすぎず、本発明の範囲を特段に限定するものではない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２６】
定義
本明細書では、「化合物１４３６」または「ＭＳＩ−１４３６」または単に「１４３６」は、図１に構造を示すアミノステロールを意味する。化合物１４３６は、遊離塩基化合物の医薬として許容できる塩も包含するよう意図されている。
【００２７】
本明細書では、ヒトに関連する場合の用語「肥満」としては、肥満度指数スコアが少なくとも約３０より高いヒトが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２８】
本明細書では、マウスに関連する場合の用語「肥満」としては、全体脂肪（％）が少なくとも約２５％より高いマウスが挙げられるが、これらに限定されない。
【００２９】
本明細書では、用語「外因性肥満」は、過食による肥満を意味する。
【００３０】
本明細書では、用語「ピックウィック症候群」は、肥満、傾眠、低換気、および赤血球増加の複合を意味する。
【００３１】
本明細書では、用語「非アルコール性脂肪性肝炎」は、ＩＩ型糖尿病の肥満女性で最も頻繁に認められる肝臓の炎症性疾患を意味する。
【００３２】
本明細書では、用語「変形性関節症」は、肥満によって増悪する非炎症性変性関節疾患を意味する。
【００３３】
本明細書では、用語「基礎代謝率」またはＢＭＲは、ヒトを含めて哺乳動物が安静中に正常な身体機能を維持するために燃焼させるカロリー数を意味する。
【００３４】
本明細書では、用語「カロリー摂取量の低減」は、ヒトが挙げられるが、これらに限定されない哺乳動物によって消費されるカロリー量の低下を意味する。
【００３５】
本明細書では、語句「Ｔ細胞タンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂ（ＴＣＰＴＰ）に優先するタンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂ（ＰＴＰ１Ｂ）の選択的阻害」は、Ｔ細胞タンパク質チロシンホスファターゼ１ＢのＩＣ５０値の少なくとも約４０倍未満であるＩＣ５０値をもつタンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂの阻害を意味する。特定の実施形態では、ＰＴＰ１Ｂの阻害に関するＩＣ５０値は、ＴＣＰＴＰの阻害に関するＩＣ５０値の少なくとも約５０倍未満、または少なくとも約６０倍未満、または少なくとも約７０倍未満、または少なくとも約８０倍未満、または少なくとも約９０倍未満、または少なくとも約１００倍未満、または少なくとも約２００倍未満である。
【００３６】
本明細書では、用語「阻害剤」は、ＰＴＰ１Ｂのその内因性基質への結合を阻止し、かつ／またはその内因性基質上のＰＴＰ１Ｂによって媒介される脱リン酸化を阻止する化合物を意味する。この化合物としては、インスリン受容体チロシンキナーゼ（ＩＲＴＫ）およびＩＲＴＫの断片、ならびに非天然基質、具体的には例えばリン酸ｐ‐ニトロフェニルが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３７】
本明細書では、用語「選択的」は、他の酵素のＩＣ５０値に比べて、ＰＴＰ１Ｂ酵素に対する阻害がＩＣ５０値で表して少なくとも約３倍高い化合物を意味する。この化合物としては、ＴＣ−ＰＴＰ、ＳＨＰ−２、ＬＡＲ、ＣＤ４５、ＰＰ２Ｂ、およびＣｄｃ２５ｃが挙げられるが、これらに限定されない。
【００３８】
本明細書では、「有効量」は、有益なまたは所望の結果をもたらすのに十分な量である。例えば、治療量は、所望の治療効果を実現する量である。この量は、疾患または疾患症状の発症を予防するのに必要な量である予防上有効量と同じでも異なってもよい。有効量は、１回または複数回の投与、塗布、または投与量で投与することができる。一実施形態では、有効量は、肥満個体において体重減少を誘発する化合物１４３６の量である。
処置方法
本発明で、アミノステロール化合物１４３６は、食餌誘発性肥満マウスにおいて急速な体重減少を誘発することが示されている。さらに、最大の体重減少は最も肥満のマウスにおいて観察されるが、これは主に脂肪の減少によるものであり、タンパク質の減少はあるとしてもわずかでしかない。また、最も肥満した１４３６処置マウスは、そのペアフィードマウスより体重が大幅に減少したことが観察され、体重減少の誘発が食欲抑制より多くのものによって引き起こされることが示唆された。驚くべきことに、処置期間の後、具体的には例えば約７日〜約１０日間処置した後、ペアフィードマウスにおいて体重減少の速度が低下したようであるが、１４３６処置マウスにおいてその速度の低下はより小さいことが観察された。１４３６処置群とペアフィード群の最終体重の差は、１４３６処置群による脂肪の減少が相対的に大きいということが少なくとも一因であるようである。
【００３９】
外因性肥満を治療する最も多用されている方法は、食事制限である。この方法には、３つの重大な問題：（１）個体の遵守；（２）筋塊および脂肪の量を大幅に低減する傾向；および（３）個体の代謝のより低いレベルへの再設定がある。
【００４０】
化合物１４３６での処置によって、これらの問題はすべて克服される。医師によって薬物処置が調節されると、個体の遵守が大いに改善されるであろう。図６〜９および１３に示すように、化合物１４３６で処置した後、脂肪が大幅に減少しているものの、タンパク質は同時にはほとんど減少していない。図３〜５に示すように、食餌処置動物の体重減少が横ばいになったときでさえ、１４３６処置動物は体重が減少し続けるので、代謝を再設定しないようである。
【００４１】
化合物１４３６の医薬として許容できる塩としては、無機または有機の酸または塩基から生成される通常の無毒性塩または第四級アンモニウム塩が挙げられる。このような酸付加塩としては、例えば酢酸塩、アジピン酸塩、安息香酸塩、ベンゼンスルホン酸塩、クエン酸塩、ショウノウ酸塩、ドデシル硫酸塩、塩酸塩、臭化水素酸塩、乳酸塩、マレイン酸塩、メタンスルホン酸塩、硝酸塩、シュウ酸塩、ピバル酸塩、プロピオン酸塩、コハク酸塩、硫酸塩、および酒石酸塩が挙げられる。塩基塩としては、アンモニウム塩、アルカリ金属塩、具体的にはナトリウム塩およびカリウム塩、アルカリ土類金属塩、具体的にはカルシウム塩およびマグネシウム塩、有機塩基との塩、具体的にはジシクロヘキシルアミン塩、ならびにアミノ酸、具体的にはアルギニンとの塩が挙げられる。また、塩基性窒素含有基を、例えばハロゲン化アルキルで四級化することができる。
【００４２】
本発明の医薬組成物は、担体に加えて、安定剤および保存剤も含むことができる。当業者に周知の典型的な担体、安定剤、およびアジュバントの例については、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ：Ｔｈｅ  Ｓｃｉｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｐｒａｃｔｉｃｅ  ｏｆ  Ｐｈａｒｍａｃｙ，２１ｓｔ  ｅｄ．（Ｌｉｐｐｉｎｃｏｔｔ，Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＆  Ｗｉｌｋｉｎｓ，ＰＡ（２００５））を参照のこと。
【００４３】
化合物１４３６は単独で、または好ましくは１４３６を少なくとも１つの医薬として許容できる担体と共に含む医薬製剤として投与することができる。場合によっては、１４３６の投与と当業者に周知の他の治療法を組み合わせてもよい。
【００４４】
化合物１４３６のインビボ投与は、処置の過程全体を通して１回投与、複数回投与で、連続的または断続的に行うことができる。用量は、１日単回投与または分割投与で約０．０５ｍｇ／ｋｇ〜約５ｍｇ／ｋｇ、具体的には約０．０７ｍｇ／ｋｇ〜約３ｍｇ／ｋｇ、具体的には約０．１ｍｇ／ｋｇ〜約２ｍｇ／ｋｇ、具体的には約０．３ｍｇ／ｋｇ〜約１．５ｍｇ／ｋｇ、具体的には約０．５ｍｇ／ｋｇ〜約１ｍｇ／ｋｇである。投与の最も有効な手段および投与量を決定する方法は、当業者によく知られており、治療に使用する組成物、治療目的、治療する標的細胞、および治療する対象によって変わる。単回または複数回投与は、治療を行う医師が用量レベルおよびパターンを選択して実施することができる。化合物１４３６の延長放出性、時限放出性、および／または徐放性製剤を投与することもできる。
【００４５】
化合物１４３６含有医薬組成物は、経口、直腸、鼻腔内、局所（経皮、エアゾール、口腔内、および舌下を含む）、非経口（皮下、筋肉内、静脈内を含む）、腹腔内、および経肺投与を含めて、任意の適切な経路で投与することができる。好ましい経路は、レシピエントの病態および年齢、ならびに治療する疾患によって変わることを理解されたい。
【実施例】
【００４６】
実施例１−食餌誘発性肥満マウスにおける体重減少の誘発
マウスおよび試験デザイン
離乳期に、Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ（Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ，Ｍａｉｎｅ，ＵＳＡ）の雄ＡＫＲ／Ｊマウスに、１０％、４５％、または６０ｋｃａｌ％の脂肪飼料（Ｒｅｓｅａｒｃｈ  Ｄｉｅｔｓ，Ｉｎｃ．，Ｎｅｗ  Ｂｒｕｎｓｗｉｃｋ，ＮＪ，ＵＳＡ）を与えた。マウスを毎週計量し、異なる脂肪飼料を１３〜１４週間利用した後、処置を開始した。処置を開始する直前に、３種類の飼料すべてのマウスを、同じ脂肪組成飼料内で体重によって公平に分配して、さらに無作為に３群に細分した。すべてのマウスに、７日毎に４回のスケジュールで投与し（腹腔内経路）、１４３６の最初の用量は１０ｍｇ／ｋｇであり、残りの用量はすべて、５ｍｇ／ｋｇであった。生理食塩水処置マウスは１０ｍＬ／ｋｇで投与した。ペアフィードマウスに、他の群から１日の時間差をもって、同じ７日毎に４回のスケジュールで生理食塩水（１０ｍＬ／ｋｇ）を投与した。摂食量の尺度として、残った食物を毎日計量した。ペアフィード群に、２４時間前に１４３６処置群によって消費された食物の正確な量を配分した。マウスが関与する手順はすべて、Ｉｎｓｔｉｔｕｔｉｏｎａｌ  Ａｎｉｍａｌ  Ｃａｒｅ  ａｎｄ  Ｕｓｅ  Ｃｏｍｍｉｔｔｅｅによって承認されたプロトコルに従って行った。
【００４７】
図２でわかるように、４５％および６０％の脂肪飼料のマウスは肥満になったが、１０％脂肪飼料（通常のマウス飼料）のマウスは正常に体重が増加した。６０％脂肪食餌マウスは４５％脂肪食餌マウスより大幅に重く、両マウスとも１０％脂肪食餌マウスより大幅に重かった。３群を１４３６で処置した（図２において、０日に開始した）とき、３群はすべて体重が減少したが、３週間の終わりに、３群はすべてほぼ同じ体重に到達したので、マウスが肥満であるほど、体重減少は急速であり、大幅であった（図２）。
【００４８】
図３〜５は、１４３６の体重減少に及ぼす効果が、食餌単独の効果より大きい（例えば、１４３６処置群の体重減少とペアフィード群の体重減少の比較に基づく）ことを示す。この効果は６０％脂肪食餌群で最大であった。この場合、ｐ値は０．０１３であった。この観察は、化合物１４３６が、食餌誘発性体重減少で通常見られる基礎代謝率の再設定を防ぐことによっても、体重減少を誘発するという結論を裏付ける。
【００４９】
体組成
体組成（水分、脂肪、タンパク質、および灰分（％））を、修正付きで記載されている方法に従って確定した（Ｏｆｆｉｃｉａｌ  Ｍｅｔｈｏｄｓ  ｏｆ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ＡＯＡＣ  ＩＮＴＥＲＮＡＴＩＯＮＡＬ．  ２０００）。簡潔に言えば、試料を１２５℃で４時間乾燥して、水分を確定した。乾燥した後、ペンタンを５時間試料に通して滴下させて、脂肪組成を確定した。タンパク質は、窒素検出用の燃焼方法によって確定し、６．２５倍して、窒素（％）をタンパク質（％）に変換した。灰分を確定するために、試料を５５０℃で５時間強熱し、重量を定量した。
【００５０】
図６〜８は、１０％、４５％、および６０％の脂肪食餌群について試験の終わりの全体組成を示す。前処置食餌の効果は、体脂肪（％）が高脂肪食餌では３０％より高いが、通常の食餌では２０％より低いことを示す。１４３６処置群およびペアフィード群は共に、すべての食餌で体脂肪（％）が大幅に減少する。１４３６処置群の体脂肪の減少は、ペアフィード群に比べて大きいという傾向がある。
【００５１】
組織診断
肩甲骨内褐色脂肪組織を１０％亜鉛ホルマリン（Ｆｉｓｈｅｒ  Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ，Ｋａｌａｍａｚｏｏ，ＭＩ，ＵＳＡ）中で４８時間固定し、７０％  ＥｔＯＨに移した。組織をパラフィンに包埋し、５μＭの切片を顕微鏡用スライドグラスに貼り付けた。切片をヘマトキシリン／エオシンで染色し、Ｏｌｙｍｐｕｓ  ＡＸ７０顕微鏡（Ｍｅｌｖｉｌｌｅ，ＮＹ，ＵＳＡ）を用いてＩｎｓｉｇｈｔ  １８．２  Ｃｏｌｏｒ  Ｍｏｓａｉｃ  Ｃａｍｅｒａ（Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃ  Ｉｎｓｔｒｕｍｅｎｔｓ，Ｓｔｅｒｌｉｎｇ  Ｈｅｉｇｈｔｓ，ＭＩ，ＵＳＡ）で像を得た。
【００５２】
図９は、正常マウス（１０％脂肪食餌、生理食塩水で処置、パネルＡ）、生理食塩水で処置した６０％脂肪食餌マウス（パネルＢ）、１４３６で処置した６０％脂肪食餌マウス（パネルＣ）、および６０％脂肪食餌ペアフィードマウスにおいて、褐色脂肪組織（ＢＡＴ）中の脂肪（白色小球）の量を示す。１４３６処置マウスは、６０％脂肪食餌によって増加した脂肪がすべて減少し、食餌制限単独のマウス（ペアフィード）より減少した。
【００５３】
図１３は、正常マウス（１０％脂肪食餌、生理食塩水で処置、パネルＡ）、生理食塩水で処置した６０％脂肪食餌マウス（パネルＢ）、化合物１４３６で処置した６０％脂肪食餌マウス（パネルＣ）、および６０％脂肪食餌ペアフィードマウスにおいて、白色脂肪組織（ＷＡＴ）中の脂肪（白色小球）の量を示す。１４３６処置マウスは、６０％脂肪食餌によって増加した脂肪がすべて減少し、食餌制限単独のマウス（ペアフィード）より減少した。
【００５４】
実施例２−選択的チロシンホスファターゼ酵素阻害
化合物１４３６によるＰＴＰ１ＢおよびＴＣＰＴＰの阻害を、契約の下、ＭＤＳ  Ｐｈａｒｍａによって、大腸菌（Ｅ．  ｃｏｌｉ）内で発現した組換えヒトタンパク質、および基質としてそれぞれチロシンホスホペプチド（２０μｇ／ｍＬ）またはＤｉＦＭＵＰ（１０μＭ）を使用する酵素アッセイで確定した。ＰＴＰ１Ｂアッセイでは、様々な濃度（０．０５μＭ〜５００μＭ）の１４３６と共に室温で３０分間インキュベートした後の残留チロシンホスホペプチドをＥＬＩＳＡ分析することによって、ホスファターゼ活性を定量化した。Ｄａｔａ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  Ｔｏｏｌｂｏｘ（商標）（ＭＤＬ  Ｉｎｆｏｒｍａｔｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ）を用いて、非線形最小二乗回帰分析で、ＩＣ５０値（１．１４μＭ）を確定した（表１を参照のこと）。ＴＣＰＴＰアッセイでは、酵素および基質を３７℃で１５分間プレインキュベートし、続いて様々な濃度（０．５μＭ〜５０μＭ）の１４３６と共に３７℃で６０分間インキュベートする必要があった。ＤｉＦＭＵの分光蛍光定量により、ＴＣＰＴＰ活性を評価した。１４３６はいずれの試験濃度でも、阻害を示さなかったので、ＩＣ５０は＞５０μＭであると推定した（表１）。
【００５５】
【表１】
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実施例３−ドーパミントランスポーター（ＤＡＴ）およびノルエピネフリントランスポーター（ＮＥＴ）への結合阻害
ＭＳＩ−１４３６によるドーパミントランスポーター（ＤＡＴ）およびノルエピネフリントランスポーター（ＮＥＴ）への結合阻害を、それぞれＣＨＯ−Ｋ１細胞またはＭＤＣＫ細胞内で発現した組換えヒトタンパク質を使用した放射性リガンド放射性リガンド結合アッセイで確定した。膜調製物を、１４３６（０．００５μＭ〜５０μＭ）の存在下に、［１２５Ｉ］ＲＴＩ−５５（ＤＡＴの場合０．１５ｎＭ、ＮＥＴの場合０．２０ｎＭ）と共に４℃で３時間インキュベートした。ＰＴＰ１Ｂアッセイと同様にしてＩＣ５０値を確定した（表２を参照のこと）。
【００５６】
【表２】
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実施例４−ＭＳＩ−１４３６によるドーパミンおよびノルエピネフリンの細胞内取込みの阻害
ドーパミントランスポーターを発現するＣＨＯ−Ｋ１細胞およびノルエピネフリントランスポーターを発現するＭＤＣＫ細胞を使用して、ドーパミンおよびノルエピネフリン取込みを化合物１４３６（０．０５μＭ〜５μＭ）の存在下で調査した。放射性リガンドを有する細胞を化合物の存在下に室温で１０分間インキュベートした後、［３Ｈ］ドーパミンまたは［３Ｈ］ノルエピネフリンを定量化すると、１４３６の拮抗作用が明らかになった。ノミフェンシン（ＤＡＴ）またはデシプラミン（ＮＥＴ）の応答の誘発に比べて取込み阻害が≧５０％である場合に、拮抗作用の有意水準に合った。表３に、求めた拮抗作用を詳述し、図１０に、用量応答曲線を示す。ＩＣ５０値は、ドーパミン取込み阻害の場合４２２ｎＭであり、ノルエピネフリン取込み阻害の場合７１８ｎＭであると算出された。
【００５７】
【表３】
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実施例５−インビトロおよびインビボでのタンパク質チロシンホスファターゼ１Ｂ阻害
ＨｅｐＧ２細胞（不死化肝細胞）を、３０分間または３時間インビトロで１０ｎＭ  インスリン、１０μＭ  ＭＳＩ−１４３６のどちらとも処置せず、またはその両方で処置した。図１１は、細胞可溶化物のウエスタンブロット解析を示す。インスリン受容体β（ＩＲβ）の量には差は見られなかった（パネルＡ）。インスリン受容体βの免疫沈降と、その後に続くリン酸化チロシンウエスタンブロット解析によって、インスリンは単独でＩＲβのリン酸化を誘導し、ＭＳＩ−１４３６はリン酸化を誘発しない（パネルＢ）ことが明らかになった。インスリンとＭＳＩ−１４３６の両方で３０分間処置した細胞は、インスリン誘導性リン酸化に比べてＩＲβリン酸化を増大させることを実証した（パネルＢ）。この効果は、３時間後にわずかに減少した。
【００５８】
ＭＳＩ−１４３６のＰＴＰ１Ｂに及ぼす効果を生体外で検討するために、ｏｂ／ｏｂマウスを、ビヒクル、ＭＳＩ−１４３６（単回投与、１０ｍｇ／ｋｇ、腹腔内）、またはペアフィード対照マウスで処置した（ｎ＝４／群）。単回処置して２４時間後、マウスを麻酔にかけ、切開により門脈を露出した。インスリンまたはリン酸緩衝生理食塩水（ＰＢＳ）を門脈に注射し、肝臓を、注射して２分後回収した。肝臓を溶解し、溶解産物を抗インスリン受容体基質１（ＩＲＳ−１）と共に免疫沈降させ、次いでホスホチロシンについてブロットする。得られたブロットは、リン酸化インスリン受容体基質１（Ｐ−ＩＲＳ−１）を表す。画像処理ソフトウェアを用いて、ブロットを解析した。図１２は、ＭＳＩ−１４３６が、インビボでインスリン誘導性ＩＲＳ−１リン酸化を増大させ、その程度はペアフィードがインスリン誘導性に及ぼす効果より大きい（図１２）ことを明らかにした。
【００５９】
別段の定義のない限り、本明細書の科学技術用語はすべて、本発明が属する技術分野の当業者によって一般的に理解される意味と同じ意味を有する。本明細書に記載する方法および材料に類似または匹敵する方法および材料を、本発明の実施または試験で使用することができるが、好ましい方法および材料を本明細書に記載する。本明細書に引用する特許および刊行物はすべて、参照によりそれらの全体が本明細書に組み込まれる。
【図面の簡単な説明】
【００６０】
【図１】化合物１４３６の構造を示す図である。
【図２】高脂肪食餌のマウスの体重に及ぼす効果および化合物１４３６での処置による回復を示す図である。
【図３】様々な処置を受けた６０％脂肪食餌マウスの体重の変化（％）を示す図である。
【図４】様々な処置を受けた４５％脂肪食餌マウスの体重の変化（％）を示す図である。
【図５】様々な処置を受けた１０％脂肪食餌マウスの体重の変化（％）を示す図である。
【図６】様々な処置を受けた６０％脂肪食餌マウスの体組成を示す図である。
【図７】様々な処置を受けた４５％脂肪食餌マウスの体組成を示す図である。
【図８】様々な処置を受けた１０％脂肪食餌マウスの体組成を示す図である。
【図９】正常マウスおよび様々な処置を受けた６０％脂肪食餌マウスにおける褐色脂肪組織の組織像を示す図である。
【図１０】ＭＳＩ−１４３６によるドーパミンおよびノルエピネフリンの細胞取込みの阻害の用量応答曲線を示す図である。
【図１１】インスリン受容体βのリン酸化度に及ぼすＭＳＩ−１４３６の効果のウエスタンブロット解析を示す図である。
【図１２】インスリン受容体基質１のリン酸化度に及ぼすＭＳＩ−１４３６の効果のウエスタンブロット解析を示す図である。
【図１３】正常マウスおよび様々な処置を受けた６０％脂肪食餌マウスにおける白色脂肪組織の組織像を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５】
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【図６】
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【図７】
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【図８】
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【図９】
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【図１０】
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【図１１】
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【図１２】
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【図１３】
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【国際調査報告】
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