(57)【要約】  本発明は、カプセル化したオキサリプラチンを含むリポソーム、及び、カプセル化したオキサリプラチンを製造する方法に関する。本発明は、オキサリプラチンおよび別の抗癌剤を含む  リポソームに関する。本発明のリポソームは、癌の治療に有用である。【選択図】なし【特許請求の範囲】
【請求項１】
オキサリプラチンを含むミセルを形成する方法であって、オキサリプラチンの有効量及び負に荷電したホスファチジールグリセロールを溶媒に混合させることを含む方法。
【請求項２】
前記溶媒がエタノールであり、２０〜４０％である請求項１記載の方法。
【請求項３】
負に荷電したホスファチジールグリセロールリピッドが、ジパルミトイルホスファチジールグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジミリストールホスファチジールグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジアプロイルホスファチジールグリセロール（ＤＣＰＧ）、ジスステアロイルホスファチジールグリセロール（ＤＳＰＧ）又は、ジオレイルホスファチジールグリセロール（ＤＯＰＧ）である請求項１又は２に記載の方法。
【請求項４】
負に荷電したホスファチジールグリセロールが、ＤＰＧＧである請求項３に記載の方法。
【請求項５】
オキサリプラチンと負に荷電したホスファチジールグリセロールリピッドに対するモル比が１：１から２：１である請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
【請求項６】
請求項１〜５のいずれかに定義されたオキサリプラチンミセルを前もってつくられたリポソーム又はリピッドと混合することを含むオキサリプラチンをリポソームへカプセル化する方法。
【請求項７】
前もってつくられたリポソーム又はリピッドが、負及び／又は正に荷電したリピッドを含む請求項６に記載の方法。
【請求項８】
リピッドがホスフォリピッド又はその誘導体である請求項７に記載の方法。
【請求項９】
前記リピッドが、ＤＤＡＢ（ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロマイド）；ＤＭＲＩＥ［Ｎ−１−（２，３−ジミリスチルオキシ）プロピル−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−ハイドロキシエチル）アンモニウムブロマイド］；ＤＭＴＡＰ（１，２−ジミリストイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン）；ＤＯＧＳ（ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン）；ＤＯＴＡＰ［Ｎ−（１−（２，３−  ジオレオイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド］；ＤＯＴＭＡ｛Ｎ−［１−（２，３−ジオレイルオキシ）プロピル］−ｎ，ｎ，ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド｝；  ＤＰＴＡＰ（１，２−ジパルミトイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン）、又は、ＤＳＴＡＰ（１，２−ジステロイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン）、である請求項８に記載の方法。
【請求項１０】
前記リポソームが、１又はそれ以上のコレステロール、ホスファチジールコリン、ホスファチジールエタノールアミン、水素化した大豆ホスファチジールコリン又はセラミドを含む請求項７に記載の方法。
【請求項１１】
前もってつくられたリポソームが、さらに、アンモニウム塩を含む請求項１０に記載の方法。
【請求項１２】
オキシリプラチンをリポソーム中にカプセル化する方法であって、次の工程：
（ｅ）オキサリプラチンの有効量と負に荷電したホスファチジールグリセロールを溶媒と混ぜ合せることによる、オキサリプラチンを含むミセルを形成する工程、および、
（ｆ）前もってつくられたリポソーム又はリピッドにオキサリプラチンミセルを混ぜ合わせる工程、
を含む方法。
【請求項１３】
前記溶媒が、エタノールであり、２０〜４０％である請求項１２に記載の方法。
【請求項１４】
負に荷電したホスファチジールグリセロールが、ＤＰＰＧ、ＤＭＰＧ、ＤＣＰＧ又はＤＯＰＧである請求項１２又は１３に記載の方法。
【請求項１５】
負に荷電したホスファチジールグリセロールが、ＤＰＰＧである請求項１４に記載の方法。
【請求項１６】
オキサリプラチンの負に荷電したホスファチジールグリセロールリピッドのモル比が、１：１〜１：２である請求項１２〜１５のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１７】
リポソーム膜の表面をポリマーで被覆することをさらに含む請求項６〜１６のいずれか１項に記載の方法。
【請求項１８】
リガンドが、ポリマに結合した請求項１７に記載の方法。
【請求項１９】
前記リガンドが、前記リガンドにより認識される表面受容体をもつ特定の細胞のタイプに対してリポソームを指向（導いている）することができる請求項１８に記載の方法。
【請求項２０】
前記リガンドが、ペプチドである請求項１８又は１９に記載の方法。
【請求項２１】
前記リガンドが、上皮細胞成長因子、または、そのエピトープ、エンドスタチン、アンチトロンビン、アナステリン、アンギオスタチン、ＰＥＸ、又は、色素上皮由来因子から選択される請求項１９に記載の方法。
【請求項２２】
ミセル又はリポソーム中で別の抗癌剤を含有することをさらに含む請求項１〜２１に記載の方法。
【請求項２３】
前記抗癌剤が、シスプラチン、パクリタキセル、ＳＮ３８、ドセタキセル、イリノテカン、５−フルオロデオキシウリジン又はドキソルビシンから選択される請求項２２に記載の方法。
【請求項２４】
請求項１〜５の方法により得られたミセル。
【請求項２５】
オキサリプラチンの有効量と負に荷電したホスファチジールグリセロールリピッドを含むミセル。
【請求項２６】
前記ホスファチジールグリセロールリピッドが、ＤＰＰＧである請求項２５に記載のミセル。
【請求項２７】
別の抗癌剤をさらに含む請求項２５〜２６のいずれか１項に記載のミセル。
【請求項２８】
抗癌剤が、シスプラチン、パクリタキセル、ＳＮ３８、ドセタキセル、イリノテカン、５−フルオロデオキシウリジン又はドキソルビシンから選択される請求項２７に記載のミセル。
【請求項２９】
請求項６〜２３に記載のいずれかの方法により得られたオキサリプラチンを含むリポソーム。
【請求項３０】
オキサリプラチンの有効量を含むリポソームであって、前記リポソームの内層と外層が異なるリピッドを含むリポソーム。
【請求項３１】
負に荷電したホスファチジールグリセロールリピッドを含む請求項３０に記載のリポソーム。
【請求項３２】
前記ホスファチジールグリセロールリピッドが、ＤＰＰＧである請求項３１に記載のミセル。
【請求項３３】
コレステロール、ホスファチジールコリン、ホスファチジールエタノールアミン、水素化したホスファチジールコリン、および、セラミドの１以上をさらに含む請求項３２に記載のリポソーム。
【請求項３４】
前記リポソームの表面が、免疫監視を逃れ得るコーティング物により被覆された請求項３０〜３３のいずれか１項に記載のリポソーム。
【請求項３５】
前記コーティング物がポリマである請求項３４に記載のリポソーム。
【請求項３６】
前記ポリマがＰＥＧである請求項３５に記載のリポソーム。
【請求項３７】
リガンドが、前記ポリマに共有結合している請求項３５又は３６に記載のリポソーム。
【請求項３８】
前記リガンドが、前記リガンドにより認識される表面受容体をもつ特定のタイプの細胞に対し、リポソームを指向することができる請求項３７に記載のリポソーム。
【請求項３９】
リガンドが、ペプチドである、請求項３７又は３８に記載のリポソーム。
【請求項４０】
前記リガンドが、上皮細胞成長因子又はそのエピトープ、エンドスタチン、アンチトロンビン、アナステリン、アンギオスタチン、ＰＥＸ、又は、色素上皮由来因子から選択される請求項３７に記載のリポソーム。
【請求項４１】
前記リポソームが、粒子径８０〜１２０ｎｍである請求項２８〜４０のいずれか１項に記載のリポソーム。
【請求項４２】
前記オキサリプラチンと他の薬剤が同一リポソーム中にカプセル化されることを特徴とする別の抗癌剤の有効量をさらに含む請求項２８〜３８のいずれか１項に記載のリポソーム。
【請求項４３】
前記抗癌剤が、シスプラチン、ドセタキセル、パクリタキセル、ゲムシタビン、ナベルビン、ドキソルビシン、イリノテカン、ＳＮ３８、又は、５−フルオロデオキシウリジンから選択される請求項３９に記載のリポソーム。
【請求項４４】
オキサリプラチンと他の薬剤が同一リポソーム中にカプセル化されることを特徴とする抗癌遺伝子の有効量をさらに含む請求項２８〜３８に記載のリポソーム。
【請求項４５】
抗癌遺伝子が、ｐ５３、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、アンギオスタチン、及び、オンコスタチンである請求項４４に記載のリポソーム。
【請求項４６】
癌治療薬としての使用のための請求項２７〜４５のいずれか１項に記載のリポソーム。
【請求項４７】
癌治療用薬剤の製造における請求項２７〜４５のいずれか１項に記載のリポソームの使用。
【請求項４８】
請求項２７〜４５のいずれか１項に定義されたリポソームを投与することを含む癌治療方法。
【請求項４９】
前記リポソームが、点滴静注で３時間による毎週投与、又は隔週投与され、オキサリプラチンが１００〜３５０ｍｇ／ｍ２の用量である請求項４６に記載の使用又は、請求項４７に記載の方法。
【請求項５０】
前記用量が、１００、１５０、２００、２５０又は３００ｍｇ／ｍ２である請求項４８に記載の使用又は方法。
【請求項５１】
前記用量が、３００ｍｇ／ｍ２である請求項４９に記載の使用又は方法。
【請求項５２】
点滴が、毎週一度の３時間点滴である請求項４８〜５０のいずれか１項に記載の使用又は方法。
【請求項５３】
投与が、２〜４サイクルであり、各サイクルが約８週間続き、サイクルの間に１週間の休みが続く、請求項４８〜５１のいずれか１項に記載の使用又は方法。
【請求項５４】
前記癌が、直腸結腸癌、胃癌、膵臓癌、膀胱癌、乳癌、食道癌、尿路上皮癌、非小細胞肺癌、前立腺癌、頭首部癌、メラノーマ、卵巣癌から選択される請求項４８〜５１のいずれか１項に記載の使用又は方法。
【請求項５５】
前記癌が、直腸結腸癌、胃癌、又は、膵臓癌である請求項５３に記載の使用又は方法。
【請求項５６】
オキサリプラチンの有効量、別の抗癌剤、又は抗癌遺伝子及び負に荷電したホスファチジールグリセロールリピッドを含むリポソーム。
【請求項５７】
オキサリプラチンの有効量をカプセル化しており、また、別の抗癌剤又は抗癌遺伝子をカプセル化しているリポソームを投与することを含む併用治療。
【請求項５８】
前記抗癌剤が、シスプラチン、パクリタキセル、ＳＮ３８、イリノテカン、５−フルオロデオキシウリジン、又は、ドキソルビシンから選択される請求項５５又は５６に記載のリポソーム。
【請求項５９】
シスプラチンの有効量をカプセル化しているリポソームとゲムシタビンの有効量の投与を含む併用治療。
【請求項６０】
ゲムシタビンが、シスプラチンのリポソームの一部を形成していない請求項５８に記載の併用治療。
【請求項６１】
ゲムシタビンが、シスプラチンのリポソームと同時に投与される請求項５８又は６０に記載の併用治療。
【請求項６２】
ゲムシタビンが、シスプラチンのリポソームとは異なる時に投与される請求項５８又は６０に記載の併用治療。
【請求項６３】
前記癌が、膵臓癌、直腸結腸癌、胃癌、乳癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、頭首部癌、前立腺癌、精巣癌、腸癌、膀胱癌、食道癌、又は、尿路上皮癌である請求項５８〜６２のいずれか１項に記載の併用治療。
【請求項６４】
ゲムシタビンが、８００〜１０００ｍｇ／ｍ２の用量で投与される請求項５８〜６３のいずれか１項に記載の併用治療。
【請求項６５】
ゲムシタビンが、点滴静脈内投与により１０００ｍｇ／ｍ２の用量で投与される請求項６４に記載の併用治療。
【請求項６６】
ゲムシタビンが、隔週６０分の点滴静脈内投与される請求項６４又は６５に記載の併用治療。
【請求項６７】
前記シスプラチンリポソームが、１００〜１２５ｍｇ／ｍ２の用量で点滴静脈内投与される請求項５８〜６６のいずれか１項に記載の併用治療。
【請求項６８】
前記シスプラチンリポソームが、隔週で８時間のＩＶ点滴静脈内投与される請求項６７に記載の併用治療。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、カプセル化されたオキサリプラチン及びカプセル化されたオキサリプラチンを製造する方法に関する。オキサリプラチンリポソームは、ヒト及び動物の様々な腫瘍において殺癌細胞のために使用することができる。本発明は、また、オキサリプラチン及び別の抗癌剤を含むリポソームに関する。
【背景技術】
【０００２】
免疫療法、ワクチン、血管新生阻害剤、テロメレース阻害剤、アポトシス誘導剤、シグナルトランスダクション療法、遺伝子治療及び癌に対する多くのターゲット療法は、癌との戦いにおいて期待できる武器であるが、臨床応用でそれらの効果が示されているわけではない。癌研究は、大規模な投資の下に行われているが、未だ、４種の主要な腫瘍（乳癌、肺癌、直腸結腸癌、及び、前立腺癌）で、５年相対生存率は、過去２５年間で大きく変わっていない。同一個体間での腫瘍の不均一性は、ターゲット療法の失敗の原因の一部である（Ｍｉｋｌｏｓ、２００５）。それゆえ、古典的な化学療法とホルモン療法（乳癌及び前立腺癌）が、放射線、外科的介入と共に、依然として非常に多くの癌患者の主な治療となっている。
【０００３】
しかしながら、以前から存在する化学療法剤のデリバリとターゲッティングのナノテクノロジを用いた改良は、改善された治療を提供する。オキサリプラチンは、分子式Ｃ８Ｈ１４Ｎ２Ｏ４Ｐｔであって、化学名が、シス−［（１Ｒ，２Ｒ）−１，２−シクロヘキサンジアミン−Ｎ，Ｎ］［オキサレイト（２−）−Ｏ１Ｏ］白金である。その化学構造は、下記に示す。
【化１】
2009528340.tif 000002
【０００４】
癌治療におけるオキサリプラチンは、特定の直腸結腸癌における癌の管理に進歩をもたらした。オキサリプラチンの成功は、DNA損傷を誘導する能力にあって、その結果、大きな生成物における鎖間架橋と同様、鎖内架橋をもたらす（Takahara等）のみならず、アポトーシスをも引き起こし得る（Ｂｏｕｌｉｋａｓ及びＶｏｕｇｉｏｕｋａ、２００３）。オキサリプラチンの白金原子は、２つの隣接するグアノシン残基の間を１，２−鎖間架橋を形成し、二重らせん構造を主溝の方向へ約３０度曲げる。オキサリプラチンは、本薬剤の最終的に細胞毒性をもつ代謝物に維持されている非加水分解性のジアミノシクロヘキサン（DACH）キャリアリガンドを有している。DNAおよび他の大分子とのその反応は、DACH白金モノ付加物を放つオキサレート（蓚酸エステル）の１つ又は両方のカルボキシエステル基の加水分解により進行するか、又は、二官能性のＤＡＣＨ−白金付加物架橋により進行する。ＤＡＣＨ−白金付加物の固有の化学的及び立体的な特性は、シスプラチンとの交叉耐性がないことに起因するようである（Ｆｒａｎｃｅｓｃｏ等、２００２）。オキサリプラチンのアルカリ加水分解は、オキサレート単座の錯体を形成し（pKa7.23）また、２つの連続した工程により２水和物オキサリプラチン錯体を形成する。単座中間体は内因性化合物と急速に反応するようである（Ｊｅｒｒｅｍａｌｍ等、２００３）。５’−ｄ（ＣＣＴＣＴＧＧＴＣＴＣＣ）の配列をもつＤＮＡ１２量体二本鎖に結合したオキサリプラチンの結晶構造が報告されている；つまり、白金原子が、２つの隣接するグアノシン残基間で１，２−細胞間架橋を形成し、主溝の方向に約３０度の二重らせん構造の曲げをもたらしている。結晶学は、オキサリプラチンと二重らせんDNA構造間の相互作用を介するキラリティの重要性のための構造上の証拠を提供した（Sｐｒｉｎｇｅｒ等，２００１）。
【０００５】
しかしながら、その利点にもかかわらず、オキサリプラチンの使用は、神経毒性、血液毒性、及び、胃腸管毒性を含む副作用のユニークなパターンを伴っている。患者には、グレード３／４の好中球減少の重篤なリスクがある。悪心と嘔吐は、通常、穏やか〜中程度である。腎毒性は、軽く、水和無しにオキサリプラチンの投与が許される。ときには、腎尿細管壊死のような重篤な副作用がみられる。
【０００６】
さらに、オキサリプラチンに対する細胞の抵抗性が観られる、これは、遊離オキサリプラチンの潜在的な効力を妨げるものである。抵抗性は優位性をもつ１つの腫瘍細胞が、クローン的に拡大増殖して、オキサリプラチン存在下でも増殖することができる腫瘍細胞に発展する。患者の腫瘍中でオキサリプラチンに対する抵抗性の発展を説明する幾つかのメカニズムが提案されている：
１．抵抗性細胞は、細胞膜を通って、オキサリプラチンの輸送を制限する機構が発達しており、したがって、薬剤の細胞内レベルが制限される。これは、腫瘍細胞によるオキサリプラチンへの抵抗性を獲得する最も重要な機構である。本明細書に記載したオキサリプラチンのリポソームのカプセル化は、オキサリプラチンへの抵抗性のこの機構を回避する。それは、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチン製剤における融合脂質ＤＰＰＧのためであり、また、正常細胞より腫瘍細胞をよりむさぼって貪食するナノ粒子サイズの薬剤（平均１００ｎｍ）のためである。
２．抵抗性細胞は、オキサリプラチンを無毒化するグルタチオン、メタロチオネイン、又は、他の物質が高濃度である。
３．抵抗性細胞は、オキサリプラチンによる障害後のＤＮＡ損傷に対し、より速い修復が発達している。
４．抵抗性に関する他の機構が提案されている、その機構は、ミトコンドリアのシグナル伝達に関連するか、或いは、損傷を受けた細胞がアポトーシス（細胞死）を受けるか、又は、損傷の修復を受けるかを決定する役割をもつ核内のアポトーシス経路に関連する機構である：すなわち、腫瘍クローン（染色体の転移及び他の染色体異常をもたらす染色体の切断部位）の表現型をさらに変化させ得るDNAレベルでの突然変異が蓄積された結果をもたらすであろう損傷を修復する決定である。
【０００７】
遊離薬剤オキサリプラチンの投与にとってより毒性が少なく、かつ、有効性の改善されたものの開発が、主要な課題である。このような改善は、癌治療の問題の幾つかを解決することができよう。
【０００８】
リポソームは、活性薬剤をカプセル化することのできるリン脂質2重層で構成された顕微鏡的なヴィークルである。リポソームでカプセル化されたシスプラチン［レグロン社（Ｒｅｇｕｌｏｎ  Ｉｎｃ．，）、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ、米国６，５１１，６７６］により販売されているリポレプチン（ＬｉｐｏｐｌａｔｉｎR（商標））は、患者への全身分布後、主要ターゲティングの期間中、シスプラチンの腎尿細管毒性及び神経毒性を減少させた。
【０００９】
オキサリプラチンは、シスプラチンとは、異なった、活性スペクトル、作用機作用、抵抗性をもつ薬剤である。オキサリプラチン付加部位は、ヌクレオチド切除修復システムにより修復される。オキサリプラチンは、グルタチオン（GSH）−関連酵素により解毒化される。ERCC1及びXＰＡの発現が、インビトロで６つの直腸結腸癌ライン化細胞でオキサリプラチンの感受性を予測した（Ａｍｏｕｌd等、２００３）。オキサリプラチンは、直腸結腸癌でシスプラチンより良い有効性が報告されている。
【００１０】
シスプラチンとオキサリプラチンは、化学療法の期間中に異なる副作用をもたらす実質的に構造上の相違を有する。
【化２】
2009528340.tif 000003
【００１１】
例えば、シスプラチンの副作用は、腎毒性、末梢神経障害、聴神経障害、及び重篤な胃腸管障害である（非特許文献１，非特許文献２）。
【特許文献１】米国特許第６，５１１，６７６号
【非特許文献１】ＭｃＫｅａｇｅ  ＭＪ：  Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ  ａｄｖｅｒｓｅ  ｅｆｆｅｃｔ  ｐｒｏｆｉｌｅｓ  ｏｆ  ｐｌａｔｉｎｕｍ  ｄｒｕｇｓ．  Ｄｒｕｇ  Ｓａｆ  １３：２２８−４４、１９９５、Ｈａｎｉｇａｎ  ＭＨ
【非特許文献２】Ｄｅｖａｒａｊａｎ  Ｐ：  Ｃｉｓｐｌａｔｉｎ  ｎｅｐｈｒｏｔｏｘｉｃｉｔｙ：  ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  ｍｅｃｈａｎｉｓｍｓ．Ｃａｎｃｅｒ  Ｔｈｅｒ  １、４７−６１、２００３
【非特許文献３】Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．  ２００５  Ｍａｙ  １；６５（９）：３６５  ６−６３．Ｌｉ  Ｃ、Ｈａｒｒｉｓ  ＭＢ、Ｖｅｎｅｍａ  ＶＪ、ＶｅｎｅｍａＲＣ．Ｅｎｄｏｓｔａｔｉｎ  ｉｎｄｕｃｅｓ  ａｃｕｔｅ  ｅｎｄｏｔｈｅｌｉａｌ  ｎｉｔｒｉｃ  ｏｘｉｄｅ  ａｎｄ  ｐｒｏｓｔａｃｙｃｌｉｎ  ｒｅｌｅａｓｅ．
【非特許文献４】Ｂｉｏｃｈｅｍ  Ｂｉｏｐｈｙｓ  Ｒｅｓ  Ｃｏｍｍｕｎ．２００５  Ａｐｒ１５；３２９（３）：８７３−８．
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００１２】
治療に用いる場合、また、腫瘍ターゲティングの治療、化学療法に抵抗性腫瘍をもつ患者の有効な治療をする場合には、遊離オキサリプラチンの高毒性を減少させるためオキサリプラチンの投与において困難性を緩和する必要性がある。
【００１３】
さらに、異なる複数の薬剤は、腫瘍の位置付け、ステージ及び腫瘍の組織構造の観点からみると、異なる癌細胞との戦いにおいてより良い効果をもつと思われるので、１つの薬剤又は遺伝子よりも、同時投与する併用治療により行う必要性がある。
【課題を解決するための手段】
【００１４】
本発明は、オキサリプラチンをカプセル化することにより、また、別の態様では、オキサリプラチンと別の抗癌剤をリポソームに入れることにより、このような問題を解決するか、または、少なくとも緩和することを目的としている。これは、薬剤の有効性を増強させる。
【００１５】
本発明は、カプセル化されたオキサリプラチンを含むリポソームであって、そのリポソームの外膜と内膜が異なる組成の脂質からなるものであり、また、このようなリポソームの製造方法を提供する。そのリポソームは、負に荷電した（陰イオン性）頭部基をもつ脂質分子を含む。本発明は、また、オキサリプラチン及び別の薬剤をカプセル化したリポソームを提供し、また、このようなリポソームの製造方法を提供する。さらに、癌治療におけるこのようなリポソームの使用を提供する。
【００１６】
第１の態様では、本発明は、オキサリプラチンを含むミセルを形成する方法であって、その方法が、オキサリプラチンの有効量と負に荷電したホスファチジールグリセロール  リピッドと溶媒を組み合わせたものを含む。
【００１７】
第２の態様では、本発明は、前もって製造されたリポソームまたはリピッドに本発明のオキサリプラチンミセルを併せてリポソーム中へオキサリプラチンをカプセル化する方法に関する。
【００１８】
第３の態様では、本発明は、次の工程：
ａ）オキサリプラチンの有効量と負に荷電したホスファチジールグリセロールリピッドと溶媒を混合することにより、オキサリプラチンを含むミセルを形成する工程；および、
ｂ）オキサリプラチンミセルを前もってつくったリポソームまたはリピッドに混合する工程；
を含むオキサリプラチンをリポソームにカプセル化する方法に関する。
【００１９】
第４の態様では、本発明は、オキサリプラチンの有効量と負に荷電したホスファチジールグリセロールリピッドを含むミセルに関する。
【００２０】
第５の態様は、本発明は、オキサリプラチンの有効量を含むリポソームに関するものであって、前記リポソームの内膜と外膜が異なるリピッドを含むものであることを特徴とする。本発明の他の態様は、癌治療における前記リポソームの使用に関し、また、前記リポソームの投与により癌を治療する方法に関する。
【００２１】
別の態様においては、本発明は、オキサリプラチン及び別の抗癌剤の有効量を含むリポソームに関する。
【００２２】
さらなる態様においては、本発明は、また、薬学的製剤、すなわち、本発明のリポソームに関する投与スケジュール、を提供する。
【００２３】
関連するさらなる態様においては、シスプラチンの有効量をカプセル化しているリポソーム及びゲムシタビンの有効量との投与することを含む併用治療に関する。また、癌に侵されたヒト患者の治療用の医薬の製造におけるカプセル化したシスプラチンを含むリポソームの使用を提供し、また、前記リポソームとゲムシタビンの投与に関する併用治療により癌を治療する方法。
【発明を実施するための最良の形態】
【００２４】
本発明をさらに、説明する。以下の節においては、本発明の異なる態様が、より詳細に定義されている。そこで定義された各々の態様は、それと反することが明らかに示されていない限り、如何なる他の１の態様又は複数の態様と併用することができる。特に、好ましい又は利点のあるものとして示された他の（１つ又は複数の）特徴と組み合わせることができる。
【００２５】
本発明は、外膜二重層中よりも内側にあって異なる脂質組成をもつリポソームへオキサリプラチンをカプセル化する方法に関する。
【００２６】
第１の態様は、本発明は、オキサリプラチンを含むミセルの形成する方法に関し、その方法は、オキサリプラチンの有効量と負に帯電したリピッドを溶媒溶液と混合することを含んでいる。そのリピッドは、負に帯電した（陰イオン性の）頭部基を含むことを特徴としている。好ましくは、そのリピッドは、ホスファチジールグリセロールリピッドである。
【００２７】
好ましくは、その溶媒はエタノールである。しかしながら、当業者に公知である、炭化水素溶媒は、同様に使用することができる。メタノールは、別の適当な溶媒である。
【００２８】
本明細書で用いたオキサリプラチンの語は、オキサリプラチン及びあらゆるオキサリプラチンのアナログ、又は、誘導体を指す。リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンは、また、本明細書では、そのブランド名である「リポキサール（商標）」を指す。
【００２９】
本発明における負に荷電したホスファチジールグリセロールリピッドの用語は、負に荷電したホスファチジールグリセロールリピッド又はその誘導体を指す。これらのリピッドは、そのリピッドが、負に荷電した（陰イオン性の）頭部基を含むことを特徴としている。このように、その用語は、ミセルを形成し、負に荷電した頭部基をもつあらゆるリピッドを記載するために用いられる。本発明の異なる態様の負に荷電したホスファチジールグリセロールリピッドは、ジパルミトイルホスファチジールグリセロール（ＤＰＰＧ）、ジミリストールホスファチジールグリセロール（ＤＭＰＧ）、ジアプロイルホスファチジールグリセロール（ＤＣＰＧ）、ジスステアロイルホスファチジールグリセロール（ＤＳＰＧ）又は、ジオレイルホスファチジールグリセロール（ＤＯＰＧ）から選択されることができる。好ましい態様では、負に荷電したホスファチジールグリセロールリピッドは、ＤＰＰＧである。
【００３０】
本発明のエタノール溶液は、好ましくは、２０〜４０％であり、より好ましくは、約３０％である。負に荷電したホスファチジールグリセロールリピッドに対するオキサリプラチンのモル比は、１：１〜１：２の範囲である。好ましくは、その比率は、１：１である。
【００３１】
本発明の第１の態様の１つの実施形態は、オキサリプラチンは、最終オキサリプラチン濃度約５ｍｇ／ｍｌにするために、１：１〜１：２のモル比で２０〜４０％のエタノール中で、ｐH６．５〜８．０で硫酸アンモニウム緩衝液、トリス緩衝液（１０〜１００ｍM）、又は、リン酸ナトリウム緩衝液（１０〜２００ｍM）中で、DPPGと混合した。混合した液は、摂氏３０〜６０度で、２０分〜２時間加熱した。このような条件下では、オキサリプラチン分子の正に荷電したイミノ基が、DPPG分子の負に荷電した基と相互反応して、エタノール溶液中で、逆ミセルを形成する。
【００３２】
第２の態様では、本発明は、本発明のオキサリプラチンミセルを前もってつくられたリポソーム又はリピッドに混合させることを含むオキサリプラチンをリポソーム中へカプセル化する方法に関する。
【００３３】
第３の態様では、本発明は、次の工程：
ｃ）オキサリプラチンの有効量と負に荷電したホスファチジールグリセロールリピッドを溶媒に混合することによるオキサリプラチンを含むミセルを形成する工程；及び、
ｄ）前記オキサリプラチンミセルを前もってつくっておいたリポソーム又はリピッドと混合する工程、
を含むオキサリプラチンをリポソーム中にカプセル化する方法に関する。
本方法の１実施形態は、前記ミセルが予め作製されたリポソームに混合される。
【００３４】
前もってつくられたリポソーム又はリピッドは、本発明の方法に用いられており、したがって、本発明のリポソームは、負に及び／又は正に、荷電したリピッド、例えばホスホリピッド等、を含むことができる。多くのホスホリピッドが本発明で用いることができる。例えば、ホスファチジールコリン、ホスファチジールエタノールアミン、ジステアロイルホスファチジル−エタノールアミン、ホスファチジールセリン、ホスファチジールイノシトール、リソホスファチジールコリン、ホスファチジールグリセロール、スフィンゴミエリン又はホスファチジン酸等のすべてが、本発明において用いることができることがわかった。サラミドや他のリピッド誘導体は、同様に用いることができる。リピッド膜の安定性の改善や透過性の改善のために、付加物脂溶性成分が、追加することができる、例えば、コレステロール、又は、別のステロイド、ステアリルアミン、ホスファチジン酸、ジセチルホスフェイト、トコフェロール、又はラノリン抽出物等である。
【００３５】
前記リピッドは、これらの限定されるものではないが、以下の、ＤＤＡＢ、ジメチルジオクタデシルアンモニウムブロマイド；ＤＭＲＩＥ：Ｎ−［１−（２，３−ジミリスチルオキシ）プロピル］−Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−（２−  ハイドロキシエチル）アンモニウムブロマイド；ＤＭＴＡＰ：１，２−ジミリストイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン；ＤＯＧＳ：  ジオクタデシルアミドグリシルスペルミン；ＤＯＴＡＰ：Ｎ−（１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル）−Ｎ，Ｎ，Ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド；ＤＯＴＭＡ：Ｎ−［１−（２，３−ジオレオイルオキシ）プロピル］−ｎ，ｎ，ｎ−トリメチルアンモニウムクロライド；ＤＰＴＡＰ：１，２−ジパルミトイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン；  ＤＳＴＡＰ：１，２−ジステロイル−３−トリメチルアンモニウムプロパン等から選択される。
【００３６】
本発明の１つの実施形態では、オキサリプラチンリポソームは、DPPG、コレステロール、及び、HSPC（水素化された大豆ホスファチジールコリン）を含む。前記カプセル化は、有効性を減少させずに、細胞毒性を有する薬剤の副作用を減少させることを意図している。
【００３７】
本発明のリポソーム製剤は、塩化アンモニウム、硫酸アンモニウム、又は他のあらゆるアンモニウム塩等のアンモニウム塩を含んでいる。
【００３８】
本発明の負に荷電したホスファチジールグリセロールリピッドは、ミセルを形成するためにもちいられ、また、リポソーム膜の一部であって、細胞質ゾルへの薬剤の分配のための細胞膜の透過性を増強する利点を提供する。リポソームは、細胞の膜と融合することができ、そして、その内容物を細胞内へ放つ。このような性質は、融合性と称する。したがって、このような融合性の特質と貪食機構のために、本発明のオキサリプラチンの製剤は、腫瘍細胞の細胞膜を通過することができ、また、オキサリプラチン耐性又は薬剤耐性腫瘍の治療において利用され得る。
【００３９】
別の実施形態によれば、負に荷電したホスファチジールグリセロールリピッドにオキサリプラチンの同様なリポソーム中への錯体は、大変高いカプセル化効率（５０〜１００％）をもたらし、生産物の製造中における薬剤の喪失を最小限にする。
【００４０】
本発明のカプセル化の方法は、本明細書に記載したように、オキサリプラチンと負に荷電したリピッド分子間の逆ミセルの形成に基づいている。逆ミセルは、オキサリプラチンの正に荷電したアミノ基とホスファチジールグリセロールリピッドの負に荷電したリン酸基の間の静電気的相互作用により維持されている。例えば、DPPGは、ホスファチジールグリセロールリピッドの疎水性鎖をエタノール溶媒の方向へ指向しており、これによりオキサリプラチンを取り込もうとしている。前記オキサリプラチン、ホスファチジールグリセロールリピッド逆ミセルは、前もってつくられたリポソーム又はリピッドとそれらを混合することにより、リポソーム中に転換され、これは、透析され、エタノールを膜と通して除かれ、さもなければ、水で希釈され、加圧濾過での濃縮されることも、されないこともあるが、濾過により押し出される。これは、大変高い効率でオキサリプラチンを封入し、カプセル化をもたらした。製造の間にリポソームの脂質組成は、ナノ粒子の外面の脂質組成をほとんど決定される。
【００４１】
本発明のリポソームを免疫監視（サーベイランス）から回避させ得るコーティング（被覆）を加えることができる。好ましくは、コーティングは、ポリマである。コーティングは、リポソームの段階または、後で、挿入的に形成されたナノヴィークルに追加される。このように本発明のリポソームは、このようなコーティングを含むことができる。本発明で用いることのできるポリマは、ポリエチレングリコール（ＰＥＧ），ポリメチルエチレングリコール、ポリヒドロキシプロピレングリコール、ポリ「プロピレングリコール、ポリメチルプロピレングリコール、ポリヒドロキシプロピレンオキサイド、ポリオキシアルキレン、ポリエーテルアミンをあげることができる。追加されるポリマは、ポリビニルピロロドン、ポリビニルメチルエーテル、ポリメチルオキサゾリン、ポリエチルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルオキサゾリン、ポリヒドロキシプロピルメタアクリルアミド、ポリマタアクリルアミド、ポリジメチルアクリルアミド、ポリヒドロキシメタアクリルアミド、ポリヒドロキシプロピルメタアクリレイト、ポリヒドロキシアチルアクリレイト、ヒドロキシメチルセルロース、ヒドロキシエチルセルロース、ポリエチレングリコール、ポリアスパルトアミド、または、ヒアルロン酸を含んでいる。好ましいポリマは、ＰＥＧである。例えば、ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン、（ＰＥＧ−ＤＳＰＥ）は、ＰＥＧを誘導体化して、ＰＥＧ−誘導体ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン（ＰＥＧ−ＤＳＰＥ）に導いた。そのポリマは、ホモポリマとして又はその阻止として、又はランダムコポリマとして用いられることができる。
【００４２】
本発明で開示したリポソーム性のオキサリプラチンナのヴィークルは、ポリマコーティングのため、免疫監視を逃れることができ、長期間体液中を循環することができ、プールされた組織から腫瘍へ再分配することができ、血管新生を通じて内皮系が不完全である障害を受けた血管系と通して管外遊出によりヒト及び動物への静脈内注射後、固形腫瘍又は転移部位へ好ましくは濃縮されることができる。
【００４３】
本発明で記載したカプセル化する方法の利点は、リポソームナノヴィークル中の薬剤は、漏れやすい腫瘍の血管系を通して好ましくは血管外遊外により、第一義的な腫瘍又は転移部位に到達するであろうし、このようにして抗腫瘍効果を増強する。融合性のリピッドＤＰＰＧは、腫瘍細胞膜とナノ粒子の融合を増強し、リポソームオキサリプラチンの高い取り込みは、腫瘍細胞の貪食の程度を、また増強する。
【００４４】
さらに、リガンドが、本発明のリポソームのポリマコーティングに共有結合することができる。
【００４５】
例えば、リガンドは、ペプチド、例えば抗体、であることができる。ペプチドは、後に挿入で挿入することができる、例えば、ペプチド−ＰＥＧ−ＤＳＰＥ結合体のようにである。本発明のペプチドは、これらの限定されるものではないが、エンドスタチン、抗トロンビン、アナステリン、アンギオスタチン、ＰＥＸ、色素上皮由来因子、トロンボスポンジン（ＴＳＰ）−１及び−２の一次構造に由来するペプチドであり、及び、二重に抗腫瘍活性を発揮し得るもの：すなわち、それを介して腫瘍血管新生を制限するもの、例えば、例えば、ＰＥＧ−ＤＳＰＥ（図１７）に接するエンドスタチンの−ＮＨ２末端に対応する２７アミノ酸ペプチド、は、また、同一の抗血管新生ペプチド−キャリングリポソーム中にカプセル化されたオキサリプラチン分子の抗腫瘍活性を発揮させる。
【００４６】
好ましいペプチドは、エンドスタチンである。エンドスタチン、基底膜コラーゲンペプチド第１８の非コラーゲン性ドメイン１（ＮＣ１）の２０−ｋＤａのＣ−末蛋白分解性フラグメントは、細胞増殖と転移を阻害し、腫瘍血管新生と腫瘍増殖の内因性阻害物質である。エンドスタチンのインビトロ効果について報告されている多くのものを調整することについて主要な問題は、受容体の退会親和性を欠くことである。エンドスタチンに長期間接触させると、内皮細胞分裂と移動を阻害し、血管新生阻害による内皮細胞アポトシスを誘導する；エンドスタチンは、ｅＮＯＳの活性化している培養ウシ動脈内皮細胞において、Ｓｅｒ１１６、Ｓｅｒ６１７、Ｓｅｒ６３５、Ｓｅｒ１１７９及びＴｈｒ４９７での脱リン酸化において内皮細胞性の一酸化窒素合成酵素（ｅＮＯＳ）リン酸化を刺激した。事実、一酸化窒素（ＮＯ）は、血管新生を促進している。エンドスタチンへの内皮細胞の短期間接触は、抗血管新生をもつ長期間接触のようではなく、プロアンギオジェニック（前血管新生）である（Ｌｉ等、２００５）。エンドスタチンのＮＨ２末端ドメインに対応する２７アミノ酸ペプチドは、すべての抗血管新生抑制活性を引き出し、強い抗腫瘍効果をもっていた；亜鉛結合部位である３つのヒスチジンは、そのペプチドの抗癌特性に必須であった（Ｔｊｉｎ  Ｔｈａｍ  Ｓｊｉｎ等，２００５、Ｔｊｉｎ  Ｔｈａｍ  Ｓｊｉｎ  ＲＭ、  Ｓａｔｃｈｉ−Ｆａｉｎａｒｏ  Ｒ、Ｂｉｒｓｎｅｒ  ＡＥ、Ｒａｍａｎｕｊａｍ  ＶＭ、  Ｆｏｌｋｍａｎ  Ｊ、Ｊａｖａｈｅｒｉａｎ  Ｋ）。エンドスタチンのＮＨ２末端亜鉛結合部位に対応する２７アミノ酸合成ペプチドは、抗腫瘍活性に関与している（非特許文献３，４）。
【００４７】
ペプチドリガンドは、腫瘍細胞の表面に過剰発現した腫瘍特異抗原に由来するペプチドエピトープと特異的に相互作用し得るリガンドのペプチドライブラリの容易な選択により当業者により由来することができる。図１７に示した化学ＰＥＧ末端でのこれらのペプチドの結合は、オキサリプラチンのカプセル化リポソームに特異的腫瘍に指向し得ることを与えている。表１は、細胞外表面にさらされているペプチドが由来し、合成され、また、ランダムペプチドライブラリから腫瘍抗原との高親和性をもつペプチドリガンドを引き出すために利用されている腫瘍抗原を図示している。このようなペプチドリガンドは、リピッドのポリマ分子と共有結合しており、例えば、ＰＥＧ−ＤＳＰＥであるが、これは、リポソーム粒子で挿入されている。
【００４８】
ガラクトース、マンノースのような糖鎖、モノクローナル抗体、ピリドキサールリン酸塩、ビタミンＢ１２，シアリルルイスＸ，上皮細胞成長因子、塩基性線維芽細胞成長因子、血管内皮細胞増殖因子、（ＶＣＡＭ−１）、細胞間接着因子（ＩＣＡＭ―１）、血小板内皮細胞増殖因子（ＰＥＣＡＭ−１）、Ａｒｇ−ＧＬｙ−Ａｓｐ（ＲＧＤ）ペプチド、又は、Ａｓｐ−ＧＬｙ−Ａｒｇ（ＮＧＲ）ペプチド、及び、モノクローナル抗体のＦａｂ’画分からなる群から選択することができる。
【００４９】
１つの実施形態において、リポソームオキサリプラチン粒子は、その粒子を葉酸受容体を過剰発現している腫瘍に指向させるためにリポソーム粒子の形成後挿入されたＰＥＧ−ＤＳＰＥ−葉酸結合体でその表面が改良される。
【表１】
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腫瘍抗原に対するペプチドは、ポリマの末端に付け加えることができる、例えば、表面特異抗原を過剰発現する標的特異腫瘍に対する特徴をナノ粒子に付与している多機能化のためのＰＥＧ−ポリマである。
【００５０】
１つの実施形態では、リポソームオキサリプラチン粒子は、葉酸受容体を過剰発現している卵巣（及び他の）癌細胞に対し、オキサリプラチンのリポ−ナノ−粒子を指向する葉酸で改良される。
【００５１】
別の実施形態では、リポソームオキサリプラチン粒子は、また、オキサリプラチンナノ粒子をＨｅｒ２／ｎｅｕ過剰発現している乳癌細胞に指向するＨｅｒ２／ｎｅｕリガンドで改良した。
【００５２】
本発明のオキサリプラチンのリポソーム製剤は、耐性腫瘍における薬剤の減少した取り込みによって引き起こされる遊離オキサリプラチンに対する耐性の問題を回避している。このように、製剤は、オキサリプラチン耐性腫瘍の治療に適用される。本発明のオキサリプラチンリポソーム製剤は、また、様々な腫瘍に対してヒト臨床試験において遊離薬剤オキサリプラチン（遊離オキサリプラチン）よりも低毒性の側面を示す。さらに、オキサリプラチンのこのようなリポソーム製剤の副作用スペクトルが遊離キサリプラチンのそれとは異なるため、本発明のキサリプラチンのリポソーム製剤は、非小細胞肺癌、乳がん、卵巣癌、頭頸部癌、転移前立腺癌及び数種の他の固形腫瘍、付け加えて直腸結腸癌及び胃癌において臨床適用上利点がある。
【００５３】
１つの実施形態では、本発明のリポソームカプセル化したオキサリプラチンは、治療患者においては、ビリルビンレベル（図２）と骨転移（図３）を低くすることができる。
【００５４】
別の実施形態では、本明細書に記載したリポソーム製剤は、点滴静脈内注射後のオキサリプラチンの副作用、特に胃腸管毒性を低くするために用いることができ、そして、同時にカプセル化された他の薬剤の副作用低下にとっても同様に用いることができる。
【００５５】
本発明のリポソーム製剤は、好ましくは、ヒト腫瘍及びそれらの転移を目的とすることができる。
【００５６】
このように、さらなる態様においては、本発明は、本明細書に記載したように、医薬としての使用のオキサリプラチンを含むリポソームに関する。
【００５７】
本発明の別の態様においては、癌治療薬の製造におけるカプセル化されたオキサリプラチンを含むリポソームの使用に関する。
【００５８】
本発明は、また、患者に対して本発明のカプセル化したキサリプラチンを含むリポソームを投与することを含む癌治療の方法に関する。
【００５９】
直腸結腸癌、胃癌、膵臓癌、乳癌、非小細胞肺癌、卵巣癌、頭頸部癌、前立腺癌、睾丸腫瘍、腸癌、食道癌、又は、尿路癌を含む異なるタイプの癌が治療することができる。
【００６０】
リポソームは、１００〜３５０ｍｇ／ｍ２の用量で点滴静脈内投与により毎週投与される。好ましくは、投与は、３００ｍｇ／ｍ２の用量であり、しかし、他のあり得る用量は、１００ｍｇ／ｍ２、１５０ｍｇ／ｍ２、２００ｍｇ／ｍ２、又は、２５０ｍｇ／ｍ２の用量である。１つの実施形態では、投与は、２〜５サイクルである。各サイクルは、８〜１２週であり、１又は２週間の休みが続く、好ましくは、静脈内毎週注入は、３時間である。
【００６１】
別の実施形態では、投与は２週間に１度（隔週）である。
【００６２】
このような上述した投与スケジュールは、本明細書に記載した併用治療として投与されたときは、同様に使用することができる。
【００６３】
別の形態では、本発明は、２つの抗癌剤、キサリプラチン及び別の薬剤を含むミセル及び／又はリポソームを製造する方法に関する。その方法は、オキサリプラチンリポソームを製造に関する本明細書に記載の方法であり、ミセル又はリポソーム中に別の抗癌剤を含む工程を含んでいる。
【００６４】
したがって、さらなる別の態様においては、本発明は、カプセル化されたオキサリプラチン及び抗癌剤を含むリポソームに関する。その薬剤は、したがって、同一のリポソーム内にカプセル化されている。このことは、それらが、標的へ一緒に分配され得るという利点がある。そのリポソームに１つ以上の他の抗癌剤を含むことがあり得るし、また、本発明の範囲内である。
【００６５】
１つの実施形態によれば、異なる作用機作をもつ少なくとも２つの抗癌剤が、本発明の同一のリポソーム中に含まれている。それゆえ、２つの独立した機構により標的とされて、より優れた臨床成功に導いている。
【００６６】
その他の抗癌剤は、白金化合物類（シスプラチン、カルボプラチン等）、代謝拮抗剤類（５−フルオロウラシル、シタラビン、ゲムシタビン、ペントスタチン及びメトトレキセート等）、ＤＮＡを標的としているアントラサイクリン（ドキソルビシン、エピルビシン等）、又は、ＤＮＡを標的とするか若しくはトポイソメラーゼを標的とする薬剤、又は、他の化学療法剤からなる化合物から選択されることができる。
【００６７】
好ましい実施形態では、その他の薬剤は、シスプラチン、ドセタキセル、パクリタキセル、ゲムシタビン、ナベルビン、ドキソルビシン、イリノテカン、ＳＮ−３８，ゲムシタビン、又は５−フルオロデオキシウリジンである。
【００６８】
同一のリポソーム中に２つの薬剤を含むことにより、各薬剤が単独で用いられる時よりも各薬剤の低い用量で用いることができる。その２つの薬剤は相乗的に作用することができ、したがって、低い副作用で腫瘍細胞に対してより大きい損傷を与えて治癒する。
【００６９】
別の好ましい実施形態では、シスプラチンとオキサリプラチンは、同一のリポソームナノカプセル中に共にカプセル化される。このように、このように、このように、同じ腫瘍細胞は、同時に両者、シスプラチンとオキサリプラチンと接触され得ることになる。シスプラチンの副作用（腎毒性、神経毒性、悪心／嘔吐）は、リポソームシスプラチンの副作用（血液毒性）とは異なっている。オキサリプラチンの副作用は、リポソームオキサリプラチンの副作用（神経障害）とは異なっている。このように同一の腫瘍細胞は、少なくとも２つ以上の独立した機構により標的とされ得る、一方、そうでなければ、（仮に、同一のリポソーム中にカプセル化されていなければ）２つの薬剤（オキサリプラチンとシスプラチン）は、ほぼ確実に異なる細胞を各々標的とするであろう）。一方、同一リポソーム中にカプセル化された異なる薬剤の併用投与は、効果を達成するより低い用量を用いることができ、その結果、各薬剤のもつ毒性を避けるか又は減少させることができる。特に、オキサリプラチンの用量を下げることにより、本発明者等は、神経毒性を抑えることができ、一方、シスプラチンの用量を下げることにより、骨髄毒性を低下させることができる。リポソームオキサリプラチンとリポソームシスプラチンを投与された神経毒性及び骨髄毒性の側面は改善され、一方、相乗的な投与後の腫瘍に対して同一か又はそれ以上の大きい損傷を被ると考えられる。このように、同一リポソーム中でのシスプラチンとオキサリプラチンの併用は、リポソーム（複数の）薬剤の副作用をより少ない条件下で、前記薬剤の低用量での投与を可能にした。
【００７０】
別の実施形態では、本発明のリポソームにカプセル化されたオキサリプラチンは、本発明の方法において記載したようにオキサリプラチンとして同一リポソームオキサリプラチン粒子にカプセル化された薬剤ドキソルビシン（ＤＯＸ）と組み合わせることができる。驚くべきことに、これが、オキサリプラチンの用量を低下させ、投与されたオキサリプラチンの神経毒性を低下させ、一方、ＤＯＸの用量を、また低下させる。これは、ＤＯＸの心臓毒性と他の副作用を減少させ、一方、腫瘍に対して同等又はそれ以上の大きい損傷を追わせる。
【００７１】
別の実施形態では、リポソームは、オキサリプラチンと５−フルオロウラシルを含んでいる。５−フルオロウラシルとの併用におけるオキサリプラチンは、転移性の直腸結腸癌の治療で最近、是認された。しかしながら、このような薬剤の投与には、主に、各薬剤の重要な副作用に起因するものであり、それらは、本発明において記載したようにリポソームカプセル化により最少にされる。さｒに、本明細書で記載したように、これらの薬剤を併用することにより、治療の効果は増強された。
【００７２】
本発明は、同一リポソーム中にオキサリプラチンと抗癌遺伝子とのカプセル化に関する。このように、本発明のリポソームは、オキサリプラチンと癌遺伝子を含むことができる。その用いられる癌遺伝子は、これらの限定されるものではないが、ｐ５３、ＩＬ−２、ＩＬ−１２、アンギオスタチン及びオンコスタチンを含む。
【００７３】
別の態様では、本発明は、オキサリプラチンが、両薬剤が同一のリポソーム中にカプセル化されるという本明細書で特定されたように、別の薬剤又は遺伝子と一緒に投与される併用治療に関する。オキサリプラチン及び別の抗癌剤又は遺伝子を含むリポソームが、癌治療薬の製造において、又は、癌治療の方法において、使用することができる。さらに、本発明は、併用リポソームの第一（最初）の医薬上の使用に関する。
【００７４】
当業者は、成分の投与スケジュール及び用量は、との他の薬剤の存在にしたがって変動するものであると理解するであろう。オキサリプラチンに関しては、本明細書に記載した用量と用量の範囲が用いることができる。さらに、リポソーム併用の投与スケジュールは、オキサリプラチン用に本明細書に記載したものである。
【００７５】
１つの実施形態において、本発明のリポソームカプセル化されたオキサリプラチンは、癌患者に１５０〜３００ｍｇ／ｍ２毎週（第１、８，１５日に）１２週間単独チ用又は１ｇ／ｍ２のゲムシタビンの第１日、８日に、２１日サイクルの併用において、又は、ドセタキセル、パクリタキセル、イリノテカンとの併用において投与される。
【００７６】
関連した態様において、本発明は、シスプラチンが、本明細書で記載したような別の抗癌剤との兵ようにおいてカプセル化されたリポソームカプセル化シスプラチンを目的とする。シスプラチンは、パクリタキセル、ドセタキセル、イリノテカン、ＳＮ−３８、ゲムシタビン、５−フルオロデオキシウラシルのいずれか１つと同一リポソーム中に併用されることができる。利点は、同一の腫瘍細胞は、シスプラチンと他の１つの薬剤との同時に攻撃を受け、したがって、２つの独立した分子機構が関与するためより有効な殺細胞効果を達成する。例えば、シスプラチンは、ＤＮＡ複製の停止と同様、ミトコンドリア及び核のアポトーシスへのシグナルを引き起こすであろう、一方、ドセタキセルは、チュブリン重合に働くであろう。
【００７７】
有利なことに、リポソームカプセル化シスプラチンは、本明細書に記載の方法を用いて同一リポソーム中にゲムシタビンと併用してカプセル化される。
【００７８】
別の態様では、本発明のリポソームを含むオキサリプラチンは、別の抗癌剤と一緒に投与することができる、しかし、他の薬剤は同一リポソーム中の一部を形成していない。その他の薬剤は、本明細書で記載されたようなものであり、好ましくは、シスプラチン、ドセタキセル、パクリタキセル、ゲムシタビン、ナベルビン、ドキソルビシン、イリノテカン、ＳＮ−３８、又は、５−フルオロデオキシウラシルカラ選択される。
【００７９】
さらに、別の態様では、本発明は、リポプラチン（商標）とゲムシタビンの併用投与に関する。このように、リポプラチン（商標）とゲムシタビンの併用は、本発明の目的である。同様に、癌を患うヒト患者の治療用医薬の製造におけるリポプラチン（商標）の使用であり、同一リポソーム中にカプセル化されていないリポプラチン（商標）と別の薬剤の投与に関する併用治療によるリポプラチン（商標）の使用を提供する。
【００８０】
他の薬剤は、リポプラチン（商標）と同時に又はことなる時期に投与することができる。
【００８１】
好ましくは、他の薬剤は、ゲムシタビンであり、その投与は、臨床上の改善を導く。好ましくは、治療される癌は、膵臓晩であり、しかし、直腸結腸癌、胃癌、乳癌、非小細胞性肺癌、卵巣癌、頭頸部癌、前立腺癌、睾丸癌、腸癌、膀胱癌、食道癌、又は、尿路上皮癌、のような他の癌は、治療され得る。ゲムシタビンを使用する用量は、８００〜１０００ｍｇ／ｍ２であり、好ましくは、１０００ｍｇ／ｍ２である。リポプラチン（商標）の用量は、１００〜１２５ｍｇ／ｍ２であり、好ましくは１００ｍｇ／ｍ２である。
【００８２】
リポプラチン（商標）とゲムシタビンの投与は、静脈内投与である。リポプラチン（商標）は、好ましくは、隔週に１回８時間の点滴（ＩＶ））第１日、第１５日）で投与される。ゲムシタビンは、好ましくは、２週間に１回、６０分間、投与される。その化合物の投与は、４週間のサイクルで行うことができる。
【００８３】
本発明は、以下の図面及び実施例を参照して説明がなされている。実施例は、オキサリプラチンリポソームの投与が、臨床上の改善に導くことを示しエチル；すなわち、癌治療において臨床効果を示すことである。実施例２は、リポプラチン（商標）とゲムシタビンの投与が、臨床上有利な点をもつことを示している、したがって、臨床改善に導いている。
実施例
【実施例１】
【００８４】
リポソームの製造
オキサリプラチンは、ＤＰＰＧ（ジパルミトイルホスファチジールグリセロール）又は他の負に荷電したリピッド分子とモル比１：２で、３０％エタノール中で、０．１Ｍトリス塩酸緩衝液、ｐＨ７．５、５ｍｇ／ｍｌのオキサリプラチンの最終濃度で、２０〜４０％エタノール中で、３０〜６０度摂氏で、硫酸アンモニウム（１０〜２００ｍＭ）存在下で、又は、トリス緩衝液（１０〜１００ｍＭ）、又はリン酸ナトリウム緩衝液（１０〜２００ｍＭ）ｐＨ６．６〜８．０で、混合し、２０分から3時間インキュウベーションした。このような条件下で、オキサリプラチン分子の正に荷電したイミノ基がＤＰＰＧ上の負に荷電した基と相互作用してエタノール溶液中で逆ミセルを形成する（参照、特許文献１）。得られたオキサリプラチンの−ＤＰＰＧの逆ミセルは、次いで、コレステロール、ホスファチジールコリン、ｍＰＥＧ−（ポリエチレングリコール−ジステアロイルホスファチジルエタノールアミン、）により組成されたリポソーム中に転換され、次いで、生理食潜水に対して透析し、８０〜１２０ｎｍの径をもつ粒子にダウンサイズするために膜を通して押し出す。それが、最終オキサリプラチン製剤の外表面を組成を決める追加されたリポソームのリピッド組成である（図１）。
【実施例２】
【００８５】
Ａ．リポソームカプセル化したオキサリプラチンを用いた前臨床試験
Ｉ．Ａ．  動物試験
動物試験は、２００３年５月から２００４年１２月まで米国で行った、フランス、スイス、へラス（アテネ、パスツール研究所）で独立の研究機関で、マウス異種移植に対して行われ、単なるオキサリプラチンに対して、リポソームカプセル化したオキサリプラチンは、良好な治療を示し、遊離オキサリプラチンに比較してマウス及びラットで低い毒性特性を示し、良い耐性を示した。さらに、リポソームカプセル化オキサリプラチンは、６〜８回の静脈内投与後より、マウスにおける様々なヒト腫瘍に対し完全な消失や縮小を効果的に誘導し、オキサリプラチンよりも少ない毒性をもたらした。
【００８６】
リポソームカプセル化オキサリプラチンは、１６ｍｇ／ｋｇの投与で４日間間隔で６回静脈内注射後マウスにおいてヒト乳癌を完全に消失させた。他方、遊離オキサリプラチンは、ＭＴＤ（最大耐量）は、縮小をもたらしたのみで、腫瘍の完全消失はできなかった。
【００８７】
遊離オキサリプラチン５ｍｇ／ｋｇ注射したマウスは、毒性のため死亡した、そこで、投与用量は、４ｍｇ／ｋｇに下げた。リポソームによりカプセル化したオキサリプラチンの用量は、１６ｍｇ／ｋｇ、ｉ．ｖ．であり、遊離オキサリプラチンの毒性より低いものであった。４ｍｇ／ｋｇの遊離オキサリプラチンの抗腫瘍効果は、ヒト腫瘍の担癌動物に対して１６ｍｇ／ｋｇのリポソームによるカプセル化したオキサリプラチンの効果よりも低かった。
【００８８】
前記試験動物において、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンの動物試験が、報告された。リポソームでカプセル化されたオキサリプラチン、対照として遊離オキサリプラチンのラットへの腹腔内注射（ｉ．ｐ．）は、注射後１０分から７日までの組織の生体内分布の検討のために用いた。遊離オキサリプラチン投与後、７．５ｍｇ／ｍｌ血漿に比べて、１５ｍｇ／ｋｇの用量投与で血漿中の全白金（Ｐｔ）量の最大値は、リポソームでカプセル化されたオキサリプラチンの投与後１４ｍｇ／ｍｌ血漿であった。このような値は、注射後１０〜１５分で達成された。血漿薬物動態の挙動と同様なことが、腎組織で観察された；血清と腎臓は、注射から最初の２０分間、試験した全ての組織中で最も高い白金濃度であった。脾臓組織は、同用量で、注射後のさらに長期の４０〜１９０時間の間、リポソームでカプセル化されたオキサリプラチンに比べて遊離オキサリプラチン投与後の白金濃度の最高値は2倍を超える値を示した。引き続きリポソームでカプセル化されたオキサリプラチンのラットへの１１回の繰り返し投与をしたところ、驚くべきことに、脾臓は、検査した全ての組織で全白金量の最高値に達した（８０ｍｇ／ｇ組織）。肝臓は、遊離オキサリプラチンに対し、リポソームでカプセル化されたオキサリプラチン投与後時間関数として白金蓄積の同様な薬物動態を示した。対照としてのリポプラチン（商標）は、投与１０分から７日間のラット腎臓において、リポソームでカプセル化されたオキサリプラチンと同様の薬物動態挙動を示した。しかし、肝臓の薬物動態は、4時間までは２つの薬物は同様であったが、７日間を超えるとリポプラチン（商標）に比べて、リポソームでカプセル化されたオキサリプラチンは、高い蓄積があった。ラットでの全ての生化学的な検査及び血球数計測は、遊離オキサリプラチンに比べて低い骨随毒性を示した。ラットにリポソームでカプセル化されたオキサリプラチン投与においては、ＳＧＯＴトランスアミナーゼ、アルカリホスファターゼ、ビリルビン、クレアチニン、血中尿素、血中尿酸レベルは、正常で肝毒性又は腎毒性が無いものと一致した。データは、リポソームでカプセル化されたオキサリプラチンのより延長された持続性を示す。それは、リポソームでカプセル化されたＰＥＧ化製剤と一致し、低い毒性特性を示す。
【００８９】
薬物動態研究のためのラットへのリポソームでカプセル化されたオキサリプラチン注射：
薬物動態研究のために、２〜３月齢のウイスタラット雌２０匹を、平均体重１５０ｇを用いた。ラットは、腹腔内に３ｍｇ／ｍｌのリポソームでカプセル化されたオキサリプラチンを最終用量１５ｍｇ／ｋｇで注射した。２匹の動物を各時点で用いた。ラットは、注射後、7分以内、20分、１．５時間、３．７５時間、２４時間、40時間、９０時間、及び１７０〜１８０時間後に犠牲死させた。血液は、ヘパリン処理したエッペンドルチューブで集め、遠心した。血漿中の全白金レベルは、フルナス（ｆｕｒｎａｃｅ）自動吸収機（ＡＡ７００、Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ）を用いて測定した。
【００９０】
組織学的研究のためのリポソームでカプセル化されたオキサリプラチンで繰り返し注射されたラット：
本発明者らは、リポソームでカプセル化されたオキサリプラチンの最大耐量のラットでの繰り返し注射後種々の組織での損傷を検討することに興味があった。
【００９１】
リポソームでカプセル化されたオキサリプラチンの毒性研究のためのラットでの生化学的及び血液学的分析：
ラットは、リポソームでカプセル化されたオキサリプラチンの３ｍｇ／ｍｌ懸濁液を最終用量１５又は３０ｍｇ／ｋｇ腹腔内に注射された。血漿薬物動態研究用ラット血液は、骨髄、腎臓、肝臓、及び、胃腸機能と同様に、独立した顕微鏡研究所により分析された。試験されたパラメータは、ヘモグロビン、ヘマトクリット、白血球、顆粒球、血漿板、ＳＧＯＴトランスアミナーゼ、ＳＧＰＴトランスアミナーゼ、アルカリ干すファターゼ、全ビリルビン量、尿素、尿酸、及びクレアチニンである。
【００９２】
結果
ラットにおけるリポソームでカプセル化されたオキサリプラチンの毒性：
ラットは、遊離オキサリプラチン又はリポソームでカプセル化されたオキサリプラチンを最終用量１５又は３ｍｇ／ｋｇで注射された。３０ｍｇ／ｋｇオキサリプラチン投与群は、重症の食欲不振と重篤な体重喪失を示し；投与７日後で３０ｍｇ／ｋｇオキサリプラチン投与群で３３％の体重喪失であり；7日後の全動物の平均体重は、１５０ｇから平均体重１００ｇに低下した。一方、リポソームでカプセル化されたオキサリプラチンの同用量である３０ｍｇ／ｋｇ注射動物は、わずか１０％の体重減少をしめした（１５０ｇから7日後で平均体重１３５ｇ）。
【００９３】
注射後第７日で、血液が採取されて、１５ｍｇ／ｋｇ処置動物からヘパリン処理又は未処理チューブに入れて、生化学的全項目と血液学的分析用に独立の臨床研究所に送った。各群で２匹の動物を用いた。表１は、２つの測定値の平均を示す。１５ｍｇ／ｋｇのオキサリプラチン群は、８００，０００／ｍｍ３に白血球数が低下を示した（ＷＨＯによる毒性４グレードの毒性）、これに対し、リポソームでカプセル化したオキサリプラチンの処置群では、３，４００，０００／ｍｍ３（グレード１の毒性）であった。それゆえ、リポソームでカプセル化されたオキサリプラチンは、遊離オキサリプラチンに比較して白血球数の大幅な低下は引き起こされなかった。血漿板は、同様に、リポソームでカプセル化したオキサリプラチンに比較してオキサリプラチンでは、より高い程度の減少であった。ヘモグロビンレベルは、両方の処理において、正常値に近かった。それゆえ、いずれの薬剤の骨髄毒性は、赤血球生成過程よりもむしろ白血球及び血小板に向けられているようであった。
ラット、ｉ．ｐ．投与で遊離オキサリプラチン又はリポソームでカプセル化されたオキサリプラチンのいずれかの投与した場合、ＳＧＯＴトランスアミナーゼは、いずれの薬剤でもグレード２肝毒性と一致する上昇であったが、しかし、ＳＧＰＴトランスアミナーゼとアルカリホスファターゼは、影響を受けず、ビリルビン、血中尿素、クレアチニンレベルは、影響を受けず（血中尿酸レベルは値がとれなかったにもかかわらず）腎毒性の無い場合と一致した。
【表２】
2009528340.tif 000005
【００９４】
ラットでの薬物動態
ラットは、５％デキストロースで３ｍｇ／ｍｌのリポソームにカプセル化されたオキサリプラチン又は３ｍｇ／ｍｌの遊離オキサリプラチン保存溶液から、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチン又は遊離オキサリプラチンの最終濃度１５ｍｇ／ｋｇで、腹腔内に直接注射された。注射後種々の時点で、血液を採取し、血漿が分離され、全白金レベルが、薬物動態研究のために測定された。図５Ａは、遊離オキサリプラチン投与後の全白金レベルの最大値が８ｍｇ全白金／ｍｌ血漿以下に対して、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチン投与後の全白金レベルの最大値が１４ｍｇ全白金／ｍｌ血漿以下であり、その最大値は、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチン投与後２０分で達したのに対し、遊離オキサリプラチン投与後では１０分で達した。投与４〜５時間後では、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンでは、１ｍｇ全白金／ｍｌ血漿以下であるのに対し、遊離オキサリプラチンでは、２ｍｇ全白金／ｍｌ血漿であった。４０時間後では、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンは、ゼロに消失したが、遊離オキサリプラチンでは１ｍｇ以下であり、注射後100後にゼロに消失した（図５Ｂ）。
【表３】
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表３
【００９５】
リポソームにカプセル化されたオキサリプラチン（Ｌｉｐｏｘａｌ（商標））又は遊離オキサリプラチンの１５ｍｇ／ｋｇ用量として計算した平均薬物動態パラメータを表２に示す。
【００９６】
ＡＵＣ、無限時間を外挿入する直線台形法（Ｇｉｂａｌｄｉ等、１９８２  Ｇｉｂａｌｄｉ  Ｍ１  Ｐｅｒｒｉｅｒ  Ｄ：  Ｎｏｎｃｏｍｐａｒｔｍｅｎｔａｌ  ａｎａｌｙｓｉｓ  ｂａｓｅｄ  ｏｎ  ｔｈｅ  ｓｔａｔｉｓｔｉｃａｌ  ｍｏｍｅｎｔ  ｔｈｅｏｒｙ．  Ｉｎ  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ、Ｇｉｂａｌｄｉ  Ｍ，  Ｐｅｒｒｉｅｒ  Ｄ  （版）、ｐｐ  ４０９−４１７，  ２ｎｄ版  Ｍａｒｃｅｌ  Ｄｅｋｋｅｒ：  Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ、１９８２）を用いて測定されたＡＵＣは、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンでは、５３．７ｍｇ．ｈ．／ｍｌであり、オキサリプラチンでは、７４．４ｍｇ．ｈ．／ｍｌであった。
【００９７】
血漿中の全白金最大濃度（Ｃｍａｘ）は、遊離オキサリプラチンでは７．６ｍｇ／ｍｌに対して、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンでは、１４．０ｍｇ／ｍｌであった。全身クリアランス（Ｃｌ）は、遊離オキサリプラチンでは、０．２０ｍｌ／ｇ．ｈであるのに対し、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンでは、０．２８ｍｌ／ｇ．ｈであった。これは、Ｃｌ＝Ｄｉ．ｖ．／ＡＵＣから計算し、Ｄｉ．ｖ．は、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチン又は遊離オキサリプラチンのｉ．ｐ．用量であり、ＡＵＣは、特定の用量における曲線より下の相対面積である。
【００９８】
排泄速度定数は（Ｋｅｌ）は、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンは、０．０７／時間であった。これは、下記式：
ｆｏｒｍｕｌａ  ＫｅＩ  ＝  ［Ｌｎ（Ｃｐ１）−Ｌｎ（Ｃｐ２）］／（ｔ２−ｔ１）
（ここで、ｔ１及びｔ２は、測定の最初と最後の時点であり、Ｃｐ１及びＣｐ２は、各々、ｔ１及びｔ２時点における、血漿中の全白金濃度である。）
血漿中濃度−時間曲線の線形回帰分析により計算された。
【００９９】
半減期（ｔ１／２）は、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンでは、１０．２時間であった。これは、前記式により計算された：ｔ１／２＝０．６９３（１／Ｋｅｌ）。１／Ｋｅｌは、平均抵抗時間（ＭＲＴ）であり、半減期（ｔ１／２）に対する、統計的なモーメントアナロジである（Ｇｉｂａｌｄｉ等、１９８２）。
【０１００】
ラット血漿中の全白金レベルは、リポプラチン（商標）、異なるリポソーム白金薬剤で最近、第ＩＩＩ相評価にある（Ｓｔａｔｈｏｐｏｕｌｏｓ等、２００５）で処理した動物で測定された。シスプラチンのリポソーム体であるリポプラチン（商標）が、３０ｍｇ／Ｋｇの腹腔内投与された。３０ｍｇ／Ｋｇのリポプラチンを投与後、最大値は、血漿中で全白金１７ｍｇ以下であり、これらは、注射後20分で到達し、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンの時間枠（タイムフレーム）と近似するものであった（図６Ａ）。対照としてシスプラチン最大耐量である５ｍｇ／Ｋｇがｉ．ｐ．投与され、シスプラチン投与後の最高値は、〜７．５ｍｇ全白金／ｍｌ血漿であった、そして、これは、オキサリプラチンの時間枠に近似し注射後１０分で達した。全ての4種の薬物は、１．５時間までは平行した薬物動態挙動を示した；しかし、リポプラチン（商標）注射5時間後で全白金２．５以下ｍｇ／ｍｌ血漿を示し、次いでオキサリプラチンによる〜２．０ｍｇ全白金／ｍｌ血漿が続き、シスプラチン１．５ｍｇ以下全白金／血漿、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンの１．０以下ｍｇ全白金／血漿であった。
【０１０１】
リポソームにカプセル化されたオキサリプラチン又は遊離オキサリプラチンのラットｉ．ｐ．点滴投与後のラット全身組織ンかの全白金の生体内分布：
【０１０２】
結果の正確性と、原子吸収による白金測定が相対的に容易であるため、マウス及びラットでの白金薬剤の分布を検討するのに有用である。
腎臓における白金レベル：  腎臓における全白金最高値は、１５ｍｇ／ｋｇＫｇオキサリプラチン投与後では〜１０．５ｍｇ／ｇ組織であるに対し、１５ｍｇ／ｋｇのリポソームにカプセル化されたオキサリプラチンでは、〜１３．７ｍｇ／ｇ組織であり、注射後７〜２０分で達した（図７Ａ）。オキサリプラチン投与後、腎臓では、約4時間で白金レベルは最小値である４．８ｍｇ／ｇ組織に達した、そして、注射後１６７時間には６．９ｍｇ／ｇ組織になり僅かに上昇した。リポソームにカプセル化されたオキサリプラチン投与後においても、また、投与後２０時間で腎臓内では最少の〜１ｍｇ／ｇ組織になり、投与後１８８時間では、僅かに上昇し２．５ｍｇになった。このように、投与7日までは、オキサリプラチン投与による腎臓内での白金レベルは、同量のリポソームにカプセル化されたオキサリプラチン投与に比較して、約3倍高いレベルを示した（図７Ｂ）。
【０１０３】
比較のために、リポプラチン（商標）３０ｍｇ／ｋｇ投与は腎臓に３４ｍｇ／ｇ組織であり、シスプラチンのｇｍｇ／ｋｇ投与後では１０ｍｇ／ｇ組織であった。
【０１０４】
腎臓での薬物動態は、リポプラチン（商標）とリポソームにカプセル化されたオキサリプラチンの間では、近似した挙動を示した。３０ｍｇ／ｋｇのリポプラチン（商標）投与と１５ｍｇ／ｋｇのリポソームにカプセル化されたオキサリプラチン投与は、各々、最高値が、３４及び１４ｍｇ／ｇ組織である。これは、共通の殻を分け合うが、しかし、異なる薬剤であるので、内部及び標的である腫瘍内では、制限し合っているという、2薬剤の腎臓での生体内分布において近似していることが支持される。腎臓での１２０時間後の全白金レベルは、１５ｍｇ／ｋｇのリポソームにカプセル化されたオキサリプラチン投与後に〜２．５ｍｇ／ｇ組織であるのに対し、３０ｍｇ／ｋｇリポプラチン（商標）投与では５ｍｇ／ｋｇであった（図３Ｂ）。投与１４０時間後、５ｍｇ／ｋｇのシスプラチン投与後では〜４ｍｇ／ｇ組織であるのに対し、１５ｍｇ／ｋｇの遊離オキサリプラチン投与は、〜７ｍｇ／ｇ組織であった（図３Ｂ）。
【０１０５】
結論：
腎臓中の白金レベルは、全ラット組織において、７日後が最高値であり、肝臓及び脾臓がそれに続いた。
【０１０６】
肝臓中での白金濃度：
肝臓中の全白金レベルは、１５ｍｇ／ｋｇのリポソームにカプセル化したオキサリプラチン投与では、３．５ｍｇ／ｇ組織であり、２．５分から２０分にかけて投与した急速に滴下したｉ．ｐ．点滴投与から７〜１０分で達し、その後、5時間持続した（図８Ａ）。反対に、同様量の遊離オキサリプラチンのラット腹腔内点滴投与は、肝臓中で近似した全白金レベル（３．０〜３．５ｍｇ／ｇ組織）をもたらし、それは、点滴投与から約30分で達し、2時間持続し、5時間後には１．５ｍｇ／ｇ組織に次第に減少した（図４Ａ）。40時間後で白金レベルがゼロになる血漿はなく、リポソームにカプセル化したオキサリプラチン及び遊離オキサリプラチンの両方において１７０〜１９０時間後から２ｍｇ／ｇ組織の白金レベルの肝臓内蓄積があった（図８Ｂ）。
【０１０７】
比較のために、３０ｍｇ／ｋｇのリポプラチン（商標）投与後の肝臓中全白金は、５時間以内で７ｍｇ／ｇ組織を維持し、１２時間後で４．５ｍｇ／ｇ組織に低下し、２４時間後に６．５ｍｇ／ｇ組織に上昇し、漸次１２０時間後では３．５ｍｇ／ｇ組織に減少した（図４Ｂ）。シスプラチンは、最高値が２０分後で２．５ｍｇ／ｋｇであり、５時間持続し（図４Ａ）、２４時間から１５０時間まで漸次１ｍｇ／ｋｇに低下した（図８Ｂ）、以上のように、リポプラチン（商標）のパターンに近似した。
【０１０８】
脾臓中の全白金：
脾臓中の最高白金濃度は、１５ｍｇ／ｋｇのオキサリプラチン投与後〜５．２ｍｇ／ｇ組織であるのに対し、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチン１５ｍｇ／ｋｇ投与後では３．２ｍｇ／ｇ組織であり、最高値は、注射後１５から２０分で達した（図９Ａ）。リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンに対し、オキサリプラチンは、各々、注射後５時間までは、わずかな減少が見られ、〜２及び〜４ｍｇ／ｇ組織であった。その後、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチン投与後45時間まで脾臓中の全白金濃度は４．５ｍｇ／ｇ組織に上昇し、190時間後の〜２ｍｇ／ｇ組織にまでの減少へと続いた。反対に、遊離オキサリプラチン投与に続いて、脾臓中では全白金の継続的な蓄積があり、168時間後で１８．５ｍｇ／ｇ組織に達した（図９B）。これは、7日後で脾臓重量の途方もない喪失を伴い、おそらく、遊離オキサリプラチンにより毒性から脾臓細胞のアポトーシス的な死という結果をもたらした。事実、試験前の平均体重１５０ｇのマウスに対して、7日後の最終体重は１０９ｇであり、脾臓重量は０．１８８ｇであった。
【０１０９】
リポソームにカプセル化したオキサリプラチンで処理した動物の脾臓中には、うっ血（血液の蓄積）があった。
【０１１０】
しかしながら、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチン処理よりも遊離オキサリプラチン処理からの約１時間後の腎臓内白金ンレベルは高いものであった；１２から２４時間で最小になり（オキサリプラチン投与後では５ｍｇ／ｇ組織であり、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンでは１ｍｇ／ｇ組織である）、そして再度上昇をはじまる；処理170時間後腎臓組織は、オキサリプラチン処理で７ｍｇPt／ｇ組織であり、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチン処理で２．５ｍｇPt／ｇ組織を示した（図５Ｂ）。
【０１１１】
リポソームにカプセル化されたオキサリプラチン又は遊離オキサリプラチン投与後の全ラット組織での全白金の比較測定が図１１に要約されている。オキサリプラチン１５ｍｇ／ｋｇ投与後血漿内レベルは、全組織の中で全白金の最高値（１４．２ｍｇ／ｍｌ）に投与後２０分で達した；リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンのｉ．ｐ．投与後１０分内で腎臓組織は、比較し得る程高いレベルに達した（１３．８ｍｇ／ｍｌ）（図１０Ａ）。次に高いレベルは、オキサリプラチン投与後の腎臓内濃度と血漿内濃度である。脾臓は、その次に高いレベル（１５ｍｇ／ｋｇのオキサリプラチン投与後５ｍｇ／ｇ組織）であり、これは、継続的に上昇し、２４時間で最高に達し、１７０時間後でさらに高くなった（１８．５ｍｇ／ｇ組織）。それゆえに、オキサリプラチン投与後は、最終的に卵巣、脾臓は、白金レベルを最も高いレベルで蓄積する。この点において、オキサリプラチン投与とリポソームにカプセル化されたオキサリプラチン投与後の脾臓における蓄積の間で相違が明白である（図１０Ｂ）。
【０１１２】
４ｍｇ薬剤をｉ．ｐ．投与後のラット組織（７から２０分で達成）中で白金レベルの最高値（ｍｇ／ｍｌ血漿又はｍｇ／ｇ組織）：（NDは、試験をしていない）
【表４】
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表４．リポソームでカプセル化したオキサリプラチン、遊離オキサリプラチン、リポソームシスプラチン、及び、遊離シスプラチン注射、７〜20分後、5時間後、及び、5から7日後におけるラットの種々の組織での全白金レベルの比較
【０１１３】
腎臓、脾臓、及び肝臓は、リポソームでカプセル化されたオキサリプラチンで投与、５〜7日後に有意な白金レベルを示した。
脾臓、腎臓、肺及び肝臓は、遊離オキサリプラチン投与５〜7日後に、有意な白金レベルを示した。
腎臓、脾臓、及び肝臓は、リポプラチン（商標）投与、５〜７日後で有意な白金レベルを示した。
腎臓、脾臓、及び肝臓は、シスプラチン投与と、５〜7日後に、有意な白金レベルを示した。
【０１１４】
遊離オキサリプラチン１５ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．投与とリポソーム化にカプセル化したオキサリプラチン１５ｍｇ／ｋｇｋｇのｉ．ｐ．投与後のデータを示す。
【０１１５】
１．全白金の血漿レベルは、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチン投与後１４ｍｇ／ｍｌ血漿であり、オキサリプラチン投与後の血漿中の全白金レベルは、７．６ｍｇ／ｍｌ血漿であった。このことは、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンは、オキサリプラチンに比べてより長い循環であることを示している。
【０１１６】
２．注射後１５分から１．５時間は、遊離オキサリプラチン投与に比べて（１１ｍｇ／ｇ組織）、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチン投与では、腎臓中に高いレベルであった（１４ｍｇ／ｇ組織）、しかし、１．５時間後とその後は、腎臓中のレベルは、リポソーム化されたオキサリプラチン投与に比べて（２．３ｍｇ／ｇ組織、１．5時間後）、遊離オキサリプラチン投与が高くなった（６．７ｍｇ／ｇ組織）。
【０１１７】
３．脾臓におけるレベルは、注射１．５時間後において、リポソームでカプセル化されたオキサリプラチン投与（１．８ｍｇ／ｇ組織）に比べて、遊離オキサリプラチン投与が高かった（３．８ｍｇ／ｇ組織）。
【０１１８】
４．心臓におけるレベルは、2薬剤は、同程度であり、ともに低いものであった。
【０１１９】
血漿中の白金レベル：
血漿中の全白金の最高値は、オキサリプラチン１５ｍｇ／ｋｇｉ．ｐ．投与後は、〜７．５ｍｇ／ｍｌに対して、リポソームでカプセル化したオキサリプラチン１５ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．投与後は、１４ｍｇ／ｍｌであり、また、注射後７〜２０分でその値に達した（図１０Ａ）。しかしながら、血漿中白金レベルは約1時間後で、リポソームでカプセル化されたオキサリプラチンよりも、遊離オキサリプラチンからの方がより高かった。これは、リポソームでカプセル化されたオキサリプラチンのレベルがゼロになる５０時間後まで、及び遊離オキサリプラチンレベルがゼロになる100時間後までの残りのカーブを通して維持された。
【０１２０】
腎臓中の白金レベル：
腎臓中の全白金の最高値は、オキサリプラチン１５ｍｇ／ｋｇｉ．ｐ．投与後は、〜１０．５ｍｇ／ｍｇ組織に対して、ルポキサール１５ｍｇ／ｋｇのｉ．ｐ．投与後は、１３．５ｍｇ／ｇ組織であり、また、注射後１５〜２０分でその値に達した（図１０Ａ）。しかしながら、遊離オキサリプラチン投与4時間で腎臓中では、４。８ｍｇ／ｇ組織という最小値になり、投与後167時間後では僅かに上昇し６．９ｍｇ／ｇ組織となった。リポソームでカプセル化されたオキサリプラチン投与後においては、腎臓中で投与〜２０時間後で〜１ｍｇ／ｇ組織である最少値になり、188時間後では僅かな上昇があり、２．５ｍｇ／ｇ組織に増加した。このように、腎臓中では、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチン投与〜7日での同量投与に比較して、遊離オキサリプラチン投与での白金レベルは約3倍を示した。7日後におけるラット全組織の中で、腎臓中の白金レベルは、最高値であり、肝臓、脾臓がそれに続いた。
【０１２１】
脾臓中の白金レベル：
脾臓中の全白金レベルは、１５ｍｇ／ｋｇの遊離オキサリプラチン投与で〜７ｍｇ／ｇ組織に比べて、リポソームでカプセル化したオキサリプラチン１５ｍｇ／ｋｇ投与後は、１４ｍｇ／ｇ組織であり、注射後１５〜２０分でその値に達した（図１０Ａ）。しかしながら、腎臓中での投与1時間後の白金レベルでは、リポソームでカプセル化したオキサリプラチンよりも、遊離オキサリプラチンからの値が高い。これはらは、オキサリプラチン投与後の最小値が約１２〜２４時間であり（５ｍｇ／ｇ組織であり、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチン投与後は１ｍｇ／ｇ組織）、再度上昇を始める；遊離オキサリプラチン投与170時間後で、腎臓中のレベルは、７ｍｇ白金／ｇ組織を示し、リポソームでカプセル化されたオキサリプラチンは、２．５ｍｇ白金／ｇ組織を示した（図１０Ａ）。
【０１２２】
薬剤投与がもたらす臓器サイズの減少と重量差：
【０１２３】
リポソームにカプセル化されたオキサリプラチン（１５ｍｇ／ｋｇ）及び遊離オキサリプラチン（１５ｍｇ／ｋｇ）が投与され、薬剤のｉ．ｐ投与７．８及び7日後に、犠牲死させた動物は、両者の間で、体重減少、個々の臓器重量にある大きな相違を示した。
【表５】
2009528340.tif 000008
表５．オキサリプラチン処理後、悪液質の結果としての体重減少：
リポソームオキサリプラチンの相当量を投与された動物は、全体的な重量及び臓器じゅうりょうの減少は少ないものであった。脾臓は、遊離オキサリプラチンにより最も影響を受けやすい組織のようである。
【０１２４】
遊離オキサリプラチン投与動物は、薬剤投与７日間で大きく体重減少を示し、体重減少は、処置時のおいて全体重の４０ｇを超えるものと推定される。さらに、脾臓サイズの有意な減少があり、それは、白金濃度（１８．５ｍｇＰｔ／ｇ組織）の高い値を極端に反映している。
【０１２５】
遊離オキサリプラチン投与後の食欲の喪失と薬剤特性は、体重減少と脾臓サイズの減少をもたらした；このような現象は、薬剤投与７日後に犠牲死させた動物において観察され、それゆえ、ｉ．ｐ投与に続く、７日後では、遊離オキサリプラチンの組織チャートでは高い白金濃度値を示した。
【０１２６】
同様の影響が、全ての遊離オキサリプラチン組織チャートにおいて白金濃度に関する限り考えられ、7日後の時点は、濃度の増加を示している。
【０１２７】
５ｍｇ／ｋｇのオキサリプラチン注射したマウスは毒性死した、このため用量は４ｍｇ／ｋｇに下げた。リポキサール（商標）の用量は、ｉ．ｖ．で１６ｍｇ／ｋｇであり、毒性は、オキサリプラチンの４ｍｇ／ｋｇより低かった。４ｍｇ／ｋｇオキサリプラチンの抗癌効果は、ヒト腫瘍の担癌動物に１６ｍｇ／ｋｇの効果より低かった。
実施例２Ｂ
【０１２８】
第１相臨床試験：
研究の目的は、ａ）副作用を予測することであり、また、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンの最大耐量（ＭＴＤ）と同様に用量規定毒性（ＤＬＴ）を検出することである。患者及び材料：  進行疾病をもつ全２７名の患者が本研究に含まれる。全ての患者は、確立されたガイドラインに従った標準的な治療を以前に受けている。本トライアルでのエントリでは、全ての患者は、再発又は進行性の疾病である。全ての患者はステージ４（直腸結腸癌、胃癌、及び膵臓癌）の胃腸管（消化器）系癌である。本発明者らは、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンの６の異なる用量レベルを設定し、各レベルでは少なくとも３患者が含まれていた。その用量レベルは、１）１００ｍｇ／ｍ２、２）１５０ｍｇ／ｍ２、３）２００ｍｇ／ｍ２、４）２５０ｍｇ／ｍ２、５）３００ｍｇ／ｍ２、６）３５０ｍｇ／ｍ２、である。８人の追加の患者が、ＭＴＤとしての３００ｍｇ／ｍ２で処置された。処置は、4週間毎に、週に1度を連続した3週間で与えられた。結果：重篤な副作用は、最初の４用量（１００〜２５０ｍｇ／ｍ２）では観られなかった。５と６のレベルでは、軽度の骨髄毒性と悪心が観られた。最も共通して観られる副作用は、グレード２の末梢神経障害であり３５０ｍｇ／ｍ２処置の4人全てに観察された。本発明者らは、３５０ｍｇ／ｍ２をＤＬＴと、３００ｍｇ／ｍ２をＭＴＤレベルと考えた。２７患者の名かで３人は、部分寛解を示し、１８人が４ヶ月間、安定した疾患状態であり、平均範囲が（２〜９）であった。結論：本第1相試験では、最も共通する毒性が、３００ｍｇ／ｍ２及び３５０ｍｇ／ｍ２の用量レベルで観られる末梢神経障害である。リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンは、よく耐えており、遊離オキサリプラチンが特別に観られている骨髄毒性と胃腸管特性等の全ての他の副作用を有意に減少している。これらの初期の結果は、治療歴のある患者でも十分な有効性を示した。
【０１２９】
前記の研究は、次のような第一目的をもつ、リポソームでカプセル化されたオキサリプラチン（リポキサール（商標））による臨床試験である：すなわち、ａ）毎週のリポキサール（商標）の漸増する投与量で、用量規定毒性（ＤＬＴ）と最大耐量（ＭＴＤ）を定義すること、ｂ）治療歴のある進行した胃腸管系癌患者にリポキサール（商標）単独治療の毒性特定と薬物動態を調べることである。第二の目的は、治療効果と生存率である。
【０１３０】
患者及び方法：
この研究は、第１相コホート（一群）であり、リポソームにカプセル化したオキサリプラチンの用量増加試験である。本研究プロトコールは、本発明者らの所属する研究機関の審査委員会により、審査されて、承認された。制度が要求する全ての満たすインフォームドコンセントの書類が患者により読み上げられ、それらが登録状態にあるものとして署名された。
【０１３１】
適格基準：
全ての患者は、次の基準を満たすことが要求される。組織学的又は細胞学的に癌であることの確かな診断、二次元的に測定し得るか又は評価し得る疾病である、ＷＨＯの指定する一般状態０〜２、平均余命３ヶ月以上、標準又は初回化学療法による治療歴であること、エントリ時に、何らかの以前の細胞毒性治療に無効であったこと、の少なくとも１つであること。患者は、２又は3つの以前の（治療）コースを受けていた場合は、少なくとも3週間の治療休止期間があることの適格者であった。
【０１３２】
評価：
年齢が１８歳以上の適格を有する患者は、ＷＢＣ数３．５ｘ１０９／ｌ、好中球の絶対数１．５ｘ１０９／ｌ、血小板数１００ｘ１０９／ｌ、ヘモグロビン値９ｇ／ｄｌ、総ビリルビンレベル１．５ｇ／ｄｌ、ＡＬＴ及びＡＳＴは、肝転移が無い状態で上限２倍、確認された転移がある場合は、上限5倍、及び、クレアチニンレベルが１．５ｍｇ／ｄｌであることにより測定される、十分な血液学的機能、腎機能、肝機能が要求される。病歴、身体的検査、生命兆候の評価、心電図、コンピュータ断層撮影（ＣＴ）（又は超音波）、が治療前に行われた。治療期間中（各コースの1日前に）血球数、血中尿素、血糖値、血清クレアチニン、尿酸試験、及び、ＥＣＧが行われた。ＣＴスキャン評価は、少なくとも８週薬剤点滴後に行うか、又は、初期の進行中の疾病時に行った。
治療
【０１３３】
薬剤の特徴：
３ｍｇ／ｍｌで、５０ｍｌ毎のガラスバイアル（小瓶）で、ガラスバイアルにつき１５０ｍｇのオキサリプラチンで提供された。リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンは、摂氏４度で、不透明な外観で保存しなければならない。リポソーム性薬剤の特性：リポソームにカプセル化されるオキサリプラチンは、１〜５％デキストラロースで希釈され、連続する8週間週に１度点滴静脈内投与を３時間で行う。副作用がある場合及び特別に骨髄又は神経毒性があるばあいは、治療投与は１週間遅らせる。前又は後の水分補給は必要ではない。抗悪心剤又は抗アレルギー剤のような他の薬剤がないように予防的な計画がされる。悪心又は嘔吐の場合には、制吐剤（オンダンセトロン）又は抗アレルギー剤（デキサメサゾン）が投与される。
【０１３４】
先行する動物試験では、４００ｍｇ／ｍ２から６００ｍｇ／ｍ２が、ＭＴＤとして定義された。ヒトにおいては、レベル１に対して１００ｍｇ／ｍ２の用量から出発することにした。用量の増加は、１レベルにつき、５０ｍｇ／ｍ２とすることにした。表１には、患者群毎のリポソームにカプセル化されたオキサリプラチンの用量増加が提示されている。
【０１３５】
薬剤に関連する毒性が治療の各サイクルにおいて評価されＷＨＯ基準にしたがって、等級分がされた。ＤＬＴは、患者の５０％が７２時間以上続く発熱を伴う好中球数＜５００ｍｍ２を伴うものをグレード３又は４と定義した。グレード３の他の毒性及び特定の神経障害については、患者の５０％以上であれば、グレード３と、またみなした。ＤＬＴよりも低いレベルである用量がＭＴＤとして定義された。一群最小３人の患者が各用量レベルでエントリに組み込まれた。すべての３人の患者が前の用量での最初のサイクルの治療を受けた後に、次のより高いレベルへ用量増加が進めた。そして、各患者は、ＤＬＴの兆候のないことを３週間観察された。もしも、そのレベルの最初の患者が治療の３週間の期間でＤＬＴを経験した場合は、追加の２人の患者は、所与の用量で参加した。治療は、ＤＬＴの発生により終了し、その患者は一つ低いレベルで継続した。
【０１３６】
薬物動態：
薬物動態研究のために、患者は、次の時間で採決された；すなわち、０（薬剤点滴前）及び点滴後２、４、８、２４、４８、７２、１２０（５日）、及び、１６８時間（７日）後である。３ｍｌの血液がＥＤＴＡ又はヘパリン処理チューブに引き抜かれ、次いで遠心され、２℃の冷蔵し、最終的に、前白金レベルを分析する研究機関に送られた。５患者のサンプルが用いられた。白金レベルは（全量及び血清限外濾液中）が原子吸光度により測定された（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ  ＡＡ  ７００  Ｇｒａｐｈｉｔｅ  Ｆｕｒｎａｃｅ  Ａｔｏｍｉｃ  Ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ  Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ  ａｔ  Ｒｅｇｕｌｏｎ  Ａ．Ｅ．）。それは、用量レベル（例えば、２００ｍｇ及び３００ｍｇｍ２）：血漿中濃度曲線から下の面積（ＡＵＣ）、及びＣｍａｘ（血清中の白金量の最高値）である。全身クリアランスは、ＣＬ＝Ｄｉｖ／ＡＵＣから計算されたが、ここで、Ｄｉｖは、リポプラチン（商標）の静脈内投与であり、ＡＵＣは、特定用量での曲線より下の面積である。Ｋｅｌ（排泄速度定数）は、式：
ＫｅＩ＝［Ｌｎ（Ｃｐ１）−Ｌｎ（Ｃｐ２）］／（ｔ２−ｔ１）
からの血漿中濃度−時間曲線の対数の線形回帰分析により計算したが、ここで、ｔ１及びｔ２は、測定の最初と最後の時点であり、Ｃｐ１及びＣｐ２は、各々、ｔ１及びｔ２時点における、血清中の全白金濃度である。
【０１３７】
そのｔ１／２（排泄の半減期）は式ｔ１／２＝０．６９３（１／Ｋｅｌ）から計算した。１／Ｋｅｌは、ＭＲＴ（平均滞留時間：ｍｅａｎ  ｒｅｓｉｄｅｎｃｅ  ｔｉｍｅ）であり、半減期の統計的類似性である（Ｇｉｂａｌｄｉ等、１９８２）。事実上、ＭＲＴは、投与された量の６３．２％が排泄される時間を現す。
【０１３８】
結果：
患者：
患者の特徴は表５に示している。合計２７名の患者が登録された。年齢は３２歳〜７８歳であり、平均６２歳であり、男性１８名、女性９名である。Ｐ．Ｓ．は、０〜２である。すべての患者は、化学療法の治療歴がある。（腫瘍毎の前治療が行われていた。）
【０１３９】
リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンによるＧ．Ｉ毒性は、無視できた。抗  嘔吐剤（オンダンセトロン）無しで、悪心又は軽度の嘔吐がみられた。しかし、オンダンセトロンを使った場合は、悪心・嘔吐はみられなかった。下痢もみられなかった。グレードＩの軽度の骨髄毒性（好中球減少）が患者の２（％）にのみ高用量（３５０ｍｇ／ｍ２）で認められた。肝毒性、腎毒性、心毒性、脱毛は、みられなかった。
【０１４０】
主たる副作用は、神経毒性であり、薬剤の少なくとも３回の点滴後に認められ、第３レベルと第４レベルでグレード１が、第５レベルでグレード２が、第６レベルで１００％の患者にグレード２が認められた。
【０１４１】
このような結果に基づくと、グレード３の神経毒性は、３５０ｍｇ／ｍ２投与の１００％の患者にみられ、用量規定毒性と考えられる。３００ｍｇ／２以下の用量の１つは、最大耐量（ＭＴＤ）と定義された。表５は、リポソームにカプセル化されたオキサリプラチンの増量と各６レベルで投与された患者数が表されている。
【０１４２】
薬物動態：
その結果は、表７、図１５及び１６に示した。血漿中のオキサリプラチの半減期は２４時間であり、尿中排泄は、７日間でまとめた。
【０１４３】
治療への承諾：
合計１０４の点滴（サイクル）が１患者あたり平均４サイクル（２〜１５の範囲）で投与された。サイクル間の平均感覚は７日であった。用量の段階は、１００％計画に基づいていた。グレード３又は４の血液毒性は認められなかったので、治療が遅延した患者はなかった。第４点滴サイクル又は第５点滴サイクル後に、３５０ｍ２を投与された患者にのみ３００ｍｇｍ２という低用量に分類される前に、２週間の間隔をもたせた。ある患者は、４〜６サイクル後に疾病の進行のために治療を中止した。これは、１７人の患者に（６２．９％）の患者に適用された。１２人の患者は、本研究の終了時にまだ、生存していた（４４．４％）。死因は疾病の進行であった。
【０１４４】
治療に対する寛解：
寛解は、強度（intension）−治療ベースで分析した。完全寛解例はなかった。２７人中３人（１１．１％）に部分治癒が認められた。これらの患者は、胃癌が２人で、その１人には胸膜滲出があり、他には骨髄転移があった；第３の患者は、直腸癌から肝転移をもつ患者であった。部分寛解の確認は、最初の患者は、CTスキャンに基づき、第２番目の患者は骨スキャンに基づき、第３番の患者は、CTスキャンと血清ビリルビン値に基づいた。２つの図を提示した：すなわち、第２番の患者における治療前と治療後における骨スキャン（図１）と、第３番の患者における血清ビリルビンレベル曲線である。例外的に、第３番の患者は血清ビリルビンレベルが５１ｍｇ／ｄｌのときに治療され、２コースの終了後レベルは８ｍｇ／ｄｌに低下した。５週間持続した。
【０１４５】
寛解の期間は、各患者毎に、各々、４、７、２ヶ月間であった。１８人の患者が、安定な疾病を平均４ヶ月間は示した（２〜９月の範囲で）。５人の患者は、軽度の効果のため有効ではないと分類され、６人の患者は疾病の進行を示した。３人の寛解例のすべてにおいて、マーカCA−１９−９の５０％かそれ以上の減少があった。同様に、一般状態のレベルは、寛解例３人中の２人から１人に改善がみられた。
【０１４６】
結論：
リポソームでカプセル化されたオキサリプラチンが、本試験において単独治療で（１薬剤での治療）で胃腸管系の進行性癌をもつ患者において試験された。全ての患者は、標準的な治療歴があり、直腸結腸癌をもつ全ての患者は、遊離オキサリプラチンによる治療歴があった。このリポソームでカプセル化されたオキサリプラチンによる治療は、前臨床研究の前にのみ試験された。他の臨床試験は、これ以前には行われなかった。本臨床試験は、前臨床試験のデータに基づいて行われ、そして、リポソーム化されていないオキサリプラチン（遊離）の経験とデータに基づいて行われた。最後のものは、裸の（遊離の）オキサリプラチンに対してリポソームにカプセル化されたオキサリプラチンの類似性と相違を推測させることにおいて、本試験に焦点をあてることに主に助けとなった。G.I.と血液毒性の低下は、大きく減少した。ほとんど変わらず、維持された副作用は、神経毒性のみであった。それはしばしば見られ、薬剤用量を増加させるにつれて、多少なりとも、同じように、増加し、用量規定毒性を定義する唯一のかつ主たる基準として働いた。定義された用量のMLDは、週1回の３００mg／ｍ２投与であった。リポソームでないオキサリプラチンで起こったと同様の付加的な神経毒性がまたみられた（参考文献）。有効性においては、治療歴のある難治性であることが確定した腫瘍に対して１１％の寛解率が見られた。この地検のために選択されたタイプの癌は、化学療法剤に最も感受性のある癌ではない点は重要な点である。
【０１４７】
この研究は、MTDを設定した、また、さらなる研究は、他の薬剤との併用が特に必要である。
【０１４８】
結果として、この実施例は、リポソームのオキサリプラチンは、優れた認容できる薬剤であるであることを示している。３００ｍｇ／ｍ２の用量がMTDと定義された。このG.I.−管（消化管）と骨髄毒性は、オキサリプラチンの裸のタイプに比べて大変減少した。残っている唯一の副作用は、神経毒性であり、DLTを定義する１つである。
【表６】
2009528340.tif 000009
表６．リポソームにカプセル化されたオキサリプラチン（リポキサール（商標））の用量増加。
【表７】
2009528340.tif 000010
表７．患者の基本特性  
【０１４９】
【表８】
2009528340.tif 000011
表８．血漿薬物動態はパラメータは、患者におけるリポキサールを評価する。
（明細書中のパラメータの定義を参照）
【表９】
2009528340.tif 000012
【表１０】
2009528340.tif 000013
【０１５０】
参考文献
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１１．Ｊｅｒｒｅｍａｌｍ  Ｅ，  Ｅｋｓｂｏｒｇ  Ｓ，Ｅｈｒｓｓｏｎ  Ｈ：  Ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ−ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｔｈｅ  ａｃｉｄ  ｄｉｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ  ｃｏｎｓｔａｎｔ  ｆｏｒ  ｔｈｅ  ｏｘａｌａｔｏ  ｍｏｎｏｄｅｎｔａｔｅ  ｃｏｍｐｌｅｘ．  Ｊ  Ｐｈａｒｍ  Ｓｃｉ  ９２：  ４３６−８，  ２００３．
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１３．Ａｒｎｏｕｌｄ  Ｓ，  Ｈｅｎｎｅｂｅｌｌｅ  Ｉ，  Ｃａｎａｌ  Ｐ，  Ｂｕｇａｔ  Ｒ，  Ｇｕｉｃｈａｒｄ  Ｓ：  Ｃｅｌｌｕｌａｒ  ｄｅｔｅｒｍｉｎａｎｔｓ  ｏｆ  ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ  ｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙ  ｉｎ  ｃｏｌｏｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ．  Ｅｕｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ３９：  １１２−９，  ２００３．
１４．Ｄｅ  Ｖｉｔａ  Ｆ，  Ｏｒｄｉｔｕｒａ  Ｍ，  Ｍａｔａｎｏ  Ｅ，  Ｂｉａｎｃｏ  Ｒ，  Ｃａｒｌｏｍａｇｎｏ  Ｃ，  ｌｎｆｕｓｉｎｏ  Ｓ，  Ｄａｍｉａｎｏ  Ｖ，  Ｓｉｍｅｏｎｅ  Ｅ，  Ｄｉａｄｅｍａ  ＭＲ，  Ｌｉｅｔｏ  Ｅ１  Ｃａｓｔｅｌｌａｎｏ，  Ｐ，  Ｐｅｐｅ  Ｓ，  Ｄｅ  Ｐｌａｃｉｄｏ  Ｓ，  Ｇａｌｉｚｉａ  Ｇ，  Ｄｉ  Ｍａｒｔｉｎｏ  Ｎ，  Ｃｉａｒｄｉｅｌｌｏ  Ｆ，  Ｃａｔａｌａｎｏ  Ｇ，  Ｂｉａｎｃｏ  ＡＲ．  Ａ  ｐｈａｓｅ  Ｉｌ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｂｉｗｅｅｋｌｙ  ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ  ｐｌｕｓ  ｉｎｆｕｓｉｏｎａｌ  ５−ｆｌｕｏｒｏｕｒａｃｉｌ  ａｎｄ  ｆｏｌｉｎｉｃ  ａｃｉｄ  （ＦＯＬＦＯＸ−４）  ａｓ  ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｇａｓｔｒｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ．  Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｍａｙ  ９，９２  （９）：  １６４４−１６４９，  ２００５．
１５．Ｌｅｒｓｃｈ  Ｃ，Ｓｃｈｍｅｌｚ  Ｒ，Ｅｃｋｅｌ  Ｆ，Ｅｒｄｍａｎｎ  Ｊ，  Ｍａｙｒ  Ｍ  Ｓｃｈｕｌｔｅ−Ｆｒｏｈｌｉｎｄｅ  Ｅ，Ｑｕａｓｔｈｏｆｆ  Ｓ，  Ｇｒｏｓｓｋｒｅｕｔｚ  Ｊ，  Ａｄｅｌｓｂｅｒｇｅｒ  Ｈ：  Ｐｒｅｖｅｎｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｘａｌｉｐｌａｔｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｐｅｒｉｐｈｅｒａｌ  ｓｅｎｓｏｒｙ  ｎｅｕｒｏｐａｔｈｙ  ｂｙ  ｃａｒｂａｍａｚｅｐｉｎｅ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｃｌｉｎ  Ｃｏｌｏｒｅｃｔａｌ  Ｃａｎｃｅｒ  ２：５４−８，２００２．  
【０１５１】
【表１１】
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表１１
【０１５２】
実施例３
【０１５３】
治療歴のある進行した膵臓癌患者におけるリポソームにしたシスプラチンとゲムシタビンの併用：第１〜２相試験
目的：
本明細書に記載した試験は、新しいリポソームにカプセル化したシスプラチン（リポプラチン（商標）というブランド名で生産、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ, CAで製造）に基づく、第１〜２相試験である。従前の前臨床試験及び臨床試験のデータ（第１相薬物動態）は、リポプラチン（商標）とゲムシタビンの関与する併用治療法の研究へ導いた。
【０１５４】
患者及び方法：
ゲムシタビンの用量は、標準の１０００ｍｇ／ｍ２に維持し、リポプラチン（商標）は、２５ｍｇ／ｍ２〜１２５ｍｇ／ｍ２に増量した。治療は、ゲムシタビンを含む以前の化学療法に無効であった進行性の治療歴のある膵臓癌患者に行われた。
【０１５５】
１２５ｍｇ／ｍ２でのリポプラチン（商標）は、用量規定毒性（ＤＬＴ）と、１００ｍｇ／ｍ２が、最大耐量（ＭＴＤ）と、１０００ｍｇ／ｍ２のゲムシタビンとの併用において、定義された。初期の目的である寛解率のデータは、２／２４が部分寛解（８．３％）、平均３ヶ月の期間（範囲２〜７ヶ月）の疾病安定は１４患者（５８．３％）；８患者に臨床上の何らかの改善（３３．３％）を示した。
【０１５６】
結論：
リポソームにカプセル化されたシスプラチンは、裸のシスプラチンに対して無毒の代替剤である。ゲムシタビンとの併用において、１００ｍｇ／ｍ２のＭＴＤをもつこと、それに、難治性膵臓癌に期待できる効果を示した。
【０１５７】
シスプラチン、ｃｉｓ−ＰｔＣｌ２（ＮＨ３）２）は、膀胱癌、頭部癌、頸部癌、肺癌、胃腸管癌、及び多くの他の腫瘍と同様に、睾丸腫瘍および卵巣癌の治療に世界中で使われている（文献１〜７）。これらの腫瘍に対して、大変有効であるにもかかわらず、シスプラチンは、腎毒性（文献８）、聴覚神経、神経障害、及び、悪心・嘔吐（文献７〜９）を含む重篤な副作用を伴うことがわかっている。また、シスプラチンのアナログであるカルボプラチンは、シスプラチンよりも、腎臓と神経系の毒性が著しく低い、また、悪心、嘔吐も少ない。一方、一般的には（そして、卵巣癌と非細胞肺癌に対しては確かに）、抗腫瘍効果は維持されている。しかしながら、血液学的な副作用は、シスプラチンにおけるよりも、カルボプラチンにおけう方がより頻繁である（文献１０、１１）。
【０１５８】
ヌクレオシドアナログである、ゲムシタビン（ゲムザール（商標）のブランド名で、ＥＬｉ  Ｌｉｌｙ社、インデアナポリス、米国）が、シスプラチンと併用により投与された、手術不可能、局所的に進行性の（非小細胞肺癌、ステージ３）又は転移（ステージ３Ｂ、４）膵臓のアデノカルシノーマをもつ患者に、第一線の治療として投与された（１２〜１４）。主な副作用は、骨髄毒性であった。ゲムシタビンと白金を併用を用いる利点は、白金−ＤＮＡ付加体の修復に関与するＤＮＡ合成を阻害することに寄与していることである。ゲムシタビンとシスプラチンは、相乗的に働き、白金−ＤＮＡ付加体の形成を増加させ、卵巣癌のライン化細胞において、リボヌクレオチド及びデオキシリボヌクレオチドプールにおける濃度および併用−依存性の変化をもたらす（１５）。
【０１５９】
リポプラチン（商標）（レグロン社、Ｍｏｕｎｔａｉｎ  Ｖｉｅｗ、ＣＡ、米国）に関する以前の研究は、次のことを示している：すなわち、低毒性である特徴、腫瘍内で濃縮される能力、免疫細胞、マクロファージから逃れること、腎臓からの遅いクリアランス、体液中からの長い循環特性、血中での半減期が３６時間であること、治療上の有効性が期待されることである（１６）。本第１〜２相研究において、本発明者等は、治療歴のある進行性の癌患者に対して１４日毎の投与で、リポプラチン（商標）とゲムシタビンの併用の治療上の有効性と毒性特性を研究することを試みた。本研究の第一の目的は、毒性、つまり、最大耐量（ＭＴＤ）を決定することであり、及び第二の目的は、寛解率と臨床上の利点を決定することである。
【０１６０】
患者及び方法：
１８歳以上の患者であって、組織学的に又は細胞学的に膵臓のアデノカルシノーマであって、二次元的に測定可能な疾病であり、化学療法の治療歴があり、再発性であるか、又は、非寛解性の疾病であるものが、本研究で登録された。他の適格基準は、世界保健機構（ＷＨＯ）の一般状態（ＰＳ）が０〜２、平均余命が少なくとも３月、骨髄予備能（顆粒球１，５００／ｄｌ以上、血小板１２０，０００／ｄｌ以上）、正常な腎（血清クレアチニン濃度、１．２ｍｇ／ｄｌ以下）、及び肝機能試験（総血清ビリルビン濃度、３ｍｇ／ｄｌ以下、血清トランスアミナーゼ及び血清中蛋白は正常）、臨床的に不安定な狭心症、又は、心筋梗塞、鬱血性心不全が、６ヶ月以前にない、中枢神経系の関与、の履歴をもたないことであること等を含んでいる。従前の外科手術は、３週間以前のものは許される。感染症、栄養失調、二次原発腫瘍（非メラノーマ、皮膚エピテリオーマ、又は、ｉｎ  ｓｉｔｕ頸癌は除外された。）は、本研究から除外した。すべての患者は、本研究に参加するための書面によるインフォームドコンセントが与えられた。
【０１６１】
治療計画：
計画は、リポプラチン（商標）をゲムシタビンと併用することであった。リポプラチン（商標）は、レグロン社（Ｒｅｇｕｌｏｎ  Ｉｎｃ．）により供給され、第１日と第１５日にｉ．ｖ．点滴により投与した。第１相試験で本発明者らの経験に基づいて副作用を抑制するために８時間を選んだ。ゲムシタビンは、１０００ｍｇ／ｍ２の用量で第１日と第１５日に５００ｍｌの正常な生理食塩水で６０分、ｉ．ｖ．点滴により与えられ、サイクルは、４週間毎に繰り返えされた（２８日間）。第１日と第１５日の点滴を１サイクルとみなした。薬剤に関連した副作用から十分に回復した場合には、患者は、標準的なオンダンセトロン抗悪心剤ガすべての患者に投与された。組み替えヒト顆粒球コロニ刺激因子（ｒｈＧ−ＣＳＦ）の予防的な投与は認めなかった。グレード３の好中球減少の場合、ペグフィルグラスチム６ｍｇの引き続いて点滴投与が第６日又は第７日にされ、治療が１週間延期された。治療は、少なくとも３サイクル、又は、疾病進行があるまで継続された。研究は、第１相／第２相、リポプラチン（商標）とゲムシタビンの用量増加試験である。その目的は、併用の用量規定毒性（ＤＬＴ）を定めること及び最大耐量（ＭＴＤ）を第２相試験に推薦する用量を定義することであり、また、膵臓癌をもつ治療歴のある患者に薬剤の有効性に関する初期データを集めることである。単独薬剤としてリポプラチン（商標）による骨髄毒性は、以前の第１相試験では、軽度とみなされた（１６）。本発明者等は、リポプラチン（商標）の低用量でスタートし、骨髄毒性剤であるゲムシタビンと併用し、主に、骨髄副作用の拡大を調べるためである。リポプラチン（商標）のスタート用量は、２５ｍｇ／ｍ２レベルであった（表１）。プロトコールは、病院の倫理及び科学委員会により承認された。
【０１６２】
用量決定基準は、血液学的パラメータに基づいた。グレード3及び４の場合は、発熱性の好中球減少の場合は、ペリフィルグラスティムの予防的投与が、記載したように、引き続き周期的に繰り返された。グレード３又は4の好中球減少の場合は、ｒｈＧ−ＣＳＦの投与にもかかわらず、ゲムシタビンとリポプラチン（商標）の投与量は、引き続く点滴投与においては、２５％減少させた。5日間以上続くグレード３又は４の血小板減少症の場合は、両薬剤の用量は、また、２５％減少させた。毒性は、ＷＨＯガイドラインに基づきグレード分けした。
【０１６３】
患者評価：
治療前評価には、白血球分画、血漿板数を含む全血球数、身体的検査、標準的な生化学的検査項目（必要な場合はクレアチニン  クリアランス）、血清中の癌胎児性抗原（ＣＥＡ）、及び、ＣＡ１９−９の決定、心電図、胸部Ｘ腺、上腹部の超音波、及び、胸部、上腹部、下腹部のコンピュータトモグラフィ（ＣＴ）スキャンを含むものである。追加的な画像検討が臨床上の指示に従って行われた。全白血球分画が、毎週行われた；グレード３又は４の好中球減少、グレード４の血漿板減少の場合は、顆粒球の絶対数１０００以上、血漿板数７５０００／ｄｌ以上になるまで毎日調べた。詳細な医学的身体的検査は、処置の各コースの前に疾病の症候と治療毒性を記録するために完了させた。生化学的試験、ＥＣＧ，血清ＣＥＡ，及びＣＡ１９−９決定、胸部Ｘ腺は、6週間毎に行い、神経系の評価は、臨床検査により行った。病巣部位は、身体的に又は胸部Ｘ腺により評価可能であれば、各サイクル後に測定した。超音波又はＣＴスキャンによる評価し得る病巣は３治療サイクル後に評価した。
【０１６４】
完全寛解（ＣＲ）は、全ての測定し得る又は評価し得る疾病、兆候、症候、腫瘍に関連する生化学的変化の少なくとも4週間の消失を意味し、その期間は、新しい病巣が現れないものをいう。部分寛解（ＰＲ）は、処置前の測定値に比べて、全ての測定し得る病巣の垂直径の積の総和が５０％以上の減少であり、少なくとも4週間続き、新しい病巣が現れず、既存の病巣が増大していないものと定義された。肝臓の病巣にとっては、鎖骨中線での肋骨線から肝縁部までと、剣状突起での肋骨線から肝縁部までの測定距離の和が３０％以上減少していることが必要とした。安定疾病（ＳＤ）は、５０％以下の減少と、全ての測定した病巣の２つの垂直径の積の和における増加が２５％以下であること、また、8週間新しい病巣が現れないことと定義された。進行性疾病（ＰＤ）は、あらゆる測定し得る病巣の２つの垂直径の積が本研究のエントリ時に存していたサイズより２５％以上であるか、又は、寛解した患者でも最大退縮のサイズの時、新しい腫瘍疾病の部位の出現したもの、と定義された。内視鏡的逆行性胆道膵管造影(ERCP)、又は、ステントセット後の回復しないビリルビン上昇は、疾病の進行とみなされた。一般状態において２つの不利なステップ、治療前より１０％以上の体重減少、又は症候の増加は、それ自体では疾病の進行を構成しないが、これらの病状の出現は、疾病拡大の新しい評価につながった。全ての寛解は、少なくとも4週間維持しなければならず、放射線専門家により独立し平行して確認された。
【０１６５】
結果：
患者の統計：
２００３年１月から２００４年12月まで、２４患者（男性１１名、女性１３名、平均年齢６６歳、範囲４７〜８０歳）が、本研究に登録された。患者の特徴は、表２に示している。ＷＨＯ一般状態は、患者の４．２％が０であり、４５．８％が１であり、５０％がでであった。患者の殆どが、ステージ４（７９．２％）であった。全ての患者は、治療歴をもっていた：１１名の患者がゲムシタビンによる単剤治療をうけており、１３名がゲムシタビンにイリノテカンの併用をうけていた。
【０１６６】
用量程度：
患者は、３６コース（2週間毎に１０８の点滴）を受けており、コースの平均数は、２（１〜５の範囲）であった。24人の患者中、10人は３コースを終了した。いずれの薬剤についても減量はなく、計画した用量強度の第４用量レベルまでの（９３〜１００％の範囲）を受入れた。
【０１６７】
毒性：
神経毒性又は腎毒性は観察されなかった。２から４分間続き、自ら改善した一時的な腹痛は、リポプラチン（商標）の点滴の始めにおいて１０／２４患者にみられた。グレー路３の骨髄毒性が、第５レベル用量における４名の患者中の２名に認められた。発熱を伴う好中球減少は観られなかった。毒性は表３と表４に示している。レベル５の用量（リポプラチン１２５ｍｇ／ｍ２とゲムシタビン１０００ｍｇ／ｍ２）、ＤＬＴであり、レベル４の用量は、ＭＴＤとみなされた。４人の追加された患者は、第４レベルの用量で治療された。
【０１６８】
治療に対する寛解：
コンピュータ断層撮影による測定し得る寛解の判断は、２人の独立した放射線専門家により、また、２人の経験ある癌専門医により行われた。完全寛解は認められなかった。ＰＲは、６及び５ヶ月の期間内で２人の患者（８．３％）で達成された。安定疾病は、平均３ヶ月（２〜７ヶ月の範囲）で１４患者（５８．３％）に認められた。疼痛減少を主な理由とする臨床上の利点は、８人の患者（３３．３％）に認められた。試験の終了時に、７名の患者が生存していた（２９．２％）。第２線治療の開始からの平均生存期間は、４ヶ月（２〜８＋月）の範囲であった。
【０１６９】
結論：
この新規なリポソームにカプセル化されたシスプラチン、（リポプラチン（商標））は、腎毒性を回避していることを主な特徴とするが、腎毒性は、有効性がもたらされると同時に、シスプラチンの投与でしばしばみられるものである。リポプラチン（商標）の薬物動態は、患者での臨床においても動物試験と同様に示されているように、シスプラチンとは、異なっている（１６）。毒性のないことは、大きな利点であり、それは、シスプラチンが、単剤で投与されたときに示されている。本第１相及び第２相試験においては、毒性と有効性が、シスプラチンをゲムシタビンと併用投与によって検討された。ゲムシタビンの毒性は、十分に定義されており、多剤との併用した時においても一部は定義されている（５）。シスプラチンとゲムシタビンの併用が、同様に、非小細胞肺癌、尿路上皮癌、膵臓癌の治療で用いられた（５、７、１２）。本研究のデータは、大変低い毒性の利点を示しているように思われる。併用による２週間毎の投与は、ゲムシタビンが１０００ｍｇ／ｍ２という標準の用量を維持している場合には、リポプラチン（商標）１００ｍｇ／ｍ２までは大変よく耐えている。リポプラチン１２５ｍｇ／ｍ２の投与では、骨髄毒性がグレード３及び４に達した、それゆえ、この用量がＤＬＴであるとみなされた。１００ｍｇ／ｍ２のリポプラチン（商標）と１ｇ／ｍ２のゲムシタビンが、ＭＴＤであるとみなされた。併用は、患者の目的の寛解の８．３３％を、疾病の安定は、５８．３％を、疼痛の緩和は３３．３％を達成した。患者の全てが難治性であるか又はゲムシタビンを含む治療歴をもつ進行性であることを考慮すると、本試験でもたらされた寛解率は、リポプラチンの追加の結果であるとされるべきである。
【０１７０】
ゲムシタビンと併用されたリポソームにカプセル化されたシスプラチンは、２週間毎に進行性膵臓癌患者に投与され、１００ｍｇ／ｍ２と１０００ｍｇ／ｍ２のＭＴＤを各々である。知慮うによく耐え、有効性は、前途有望な兆しである。
【０１７１】
参考文献：
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３．Ｅｉｎｈｏｒｎ  ＬＨ，  Ｗｉｌｌｉａｍｓ  ＳＤ，  Ｌｏｅｈｒｅｒ  ＰＪ，等：Ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｏｐｔｉｍａｌ  ｄｕｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｆａｖｏｒａｂｌｅ  ｐｒｏｇｎｏｓｉｓ  ｄｉｓｓｅｍｉｎａｔｅｄ  ｇｅｒｍ  ｃｅｌｌ  ｔｕｍｏｒｓ：  ａ  Ｓｏｕｔｈｅａｓｔｅｒｎ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｓｔｕｄｙ  ｇｒｏｕｐ  ｐｒｏｔｏｃｏｌ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  ７（３）：  ３８７−９１  ，１９８９．
４．Ａａｂｏ  Ｋ，  Ａｄａｍｓ  Ｍ，  Ａｄｎｉｔｔ  Ｐ，等：  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ：  ｆｏｕｒ  ｓｙｓｔｅｍａｔｉｃ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ  ｐａｔｉｅｎｔ  ｄａｔａ  ｆｒｏｍ  ３７  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌｓ．  Ｂｒ  Ｊ  Ｃａｎｃｅｒ  ７８：１４７９−８７，１９９８．
５．Ｋａｕｆｍａｎ  Ｄ，  Ｒａｇｈａｖａｎ  Ｄ，  Ｃａｒｄｕｃｃｉ  Ｍ，等：  Ｐｈａｓｅ  Ｉｌ  ｔｒｉａｌ  ｏｆ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ｐｌｕｓ  ｃｉｓｐｌａｔｉｎ  ｉｎ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｕｒｏｔｈｅｌｉａｌ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １８（９）：  １９２１−７，  ２０００．
６．Ｐｉｇｎｏｎ  ＪＰ，  Ｂｏｕｒｈｉｓ  Ｊ，  Ｄｏｍｅｎｇｅ  Ｃ，等：  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ａｄｄｅｄ  ｔｏ  ｌｏｃｏｒｅｇｉｏｎａｌ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｆｏｒ  ｈｅａｄ  ａｎｄ  ｎｅｃｋ  ｓｑｕａｍｏｕｓ−ｃｅｌｌ  ｃａｒｃｉｎｏｍａ：  ｔｈｒｅｅ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｅｓ  ｏｆ  ｕｐｄａｔｅｄ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ  ｄａｔａ．  Ｌａｎｃｅｔ  ３５５：  ９４９−９５５，  ２０００。
７．Ｎｏｎ−Ｓｍａｌｌ−Ｃｅｌｌ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｃｏｌｌａｂｏｒａｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐ：  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒａｐｙ  ｉｎ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ−ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ，  ａ  ｍｅｔａ−ａｎａｌｙｓｉｓ  ｕｓｉｎｇ  ｕｐｄａｔｅｄ  ｄａｔａ  ｏｎ  ｉｎｄｉｖｉｄｕａｌ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｆｒｏｍ  ５２  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｔｒｉａｌｓ．  Ｂｒ  Ｍｅｄ  Ｊ  ３１１  ：８９９−９０９，１９９５。
８．Ｈａｙｅｓ  Ｄ，  Ｃｖｉｔｋｏｖｉｃ  Ｅ，  Ｇｏｌｆｅｙ  Ｒ，等：  Ｈｉｇｈ  ｄｏｓｅ  ｃｉｓ−ｐｌａｔｉｎｕｍ  ｄｉａｍｉｎｅｄｉｃｈｌｏｒｉｄｅ：  ａｍｅｌｉｏｒａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｒｅｎａｌ  ｔｏｘｉｃｉｔｙ  ｂｙ  ｍａｎｎｉｔｏｌ  ｄｉｕｒｅｓｉｓ．  Ｃａｎｃｅｒ  ３９（４）：  １３７２−８，  １９７７
９．Ｇａｎｄａｒａ  ＤＲ，  Ｎａｈｈａｓ  ＮＡ，  Ａｄｅｌｓｏｎ  ＭＤ，等：  Ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｐｌａｃｅｂｏ−ｃｏｎｔｒｏｌｌｅｄ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  ｅｖａｌｕａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｄｉｅｔｈｙｌｄｉｔｈｉｏｃａｒｂａｍａｔｅ  ｆｏｒ  ｃｈｅｍｏｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ  ａｇａｉｎｓｔ  ｃｉｓｐｌａｔｉｎ−ｉｎｄｕｃｅｄ  ｔｏｘｉｃｉｔｉｅｓ．Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １３：４９０−４９５，１９９５．
１０．Ｓｏｕｌｉｅｒ  ＪＰ，  Ｌａｆｉｔｔｅ  ＪＪ，  Ｌｅｃｏｍｔｅ  Ｊ，等：  Ｅｕｒｏｐｅａｎ  Ｌｕｎｇ  Ｃａｎｃｅｒ  Ｗｏｒｋｉｎｇ  Ｐａｒｔｙ：  Ａ  ｔｈｒｅｅ−ａｒｍ  ｐｈａｓｅ  ＩＩＩ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ  ｃｏｍｐａｒｉｎｇ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ｐｌａｔｉｎｕｍ  ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ  ｉｆｏｓｆａｍｉｄｅ  ａｎｄ／ｏｒ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ｉｎ  ｓｔａｇｅ  ＩＶ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ−ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ．  Ａｎｎ  Ｏｎｃｏｌ  １３：８７４−  ８８２，  ２００２．
１１．Ｔｏｇｎｏｎｉ  Ａ，  Ｐｅｎｓａ  Ｆ，  Ｖａｉｒａ  Ｆ，等：Ａ  ｄｏｓｅ  ｆｉｎｄｉｎｇ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｃａｒｂｏｐｌａｔｉｎ  ａｎｄ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ｉｎ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｎｏｎ−ｓｍａｌｌ−ｃｅｌｌ  ｌｕｎｇ  ｃａｎｃｅｒ．  Ｊ  Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ  １４：２９６−３００，２００２．
１２．Ｂｕｒｒｉｓ  ＨＡ  ３ｒｄ，  Ｍｏｏｒｅ  ＭＪ，  Ａｎｄｅｒｓｏｎ  Ｊ，  等：  Ｉｍｐｒｏｖｅｍｅｎｔｓ  ｉｎ  ｓｕｒｖｉｖａｌ  ａｎｄ  ｃｌｉｎｉｃａｌ  ｂｅｎｅｆｉｔ  ｗｉｔｈ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ａｓ  ｆｉｒｓｔ−ｌｉｎｅ  ｔｈｅｒａｐｙ  ｆｏｒ  ｐａｔｉｅｎｔｓ  ｗｉｔｈ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ｐａｎｃｒｅａｓ  ｃａｎｃｅｒ．  Ａ  ｒａｎｄｏｍｉｚｅｄ  ｔｒｉａｌ．  Ｊ  Ｃｌｉｎ  Ｏｎｃｏｌ  １５：２４０３−２４１３，１９９７．
１３．Ｈｅｉｎｅｍａｎｎ  Ｖ，  Ｗｉｌｋｅ  Ｈ，  Ｍｅｒｇｅｎｔｈａｌｅｒ  ＨＧ，  ｅｔ  ａｌ：  Ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ａｎｄ  ｃｉｓｐｌａｔｉｎ  ｉｎ  ｔｈｅ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ａｄｖａｎｃｅｄ  ａｎｄ  ｍｅｔａｓｔａｔｉｃ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ．  Ａｎｎ  Ｏｎｃｏｌ  １１：１３９９−１４０３，  ２０００．
１４．Ｓｔａｔｈｏｐｏｕｌｏｓ  ＧＰ，  Ｒｉｇａｔｏｓ  ＳＫ，  Ｄｉｍｏｐｏｕｌｏｓ  ＭＡ  等：  Ｔｒｅａｔｍｅｎｔ  ｏｆ  ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  ｃａｎｃｅｒ  ｗｉｔｈ  ａ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎ  ｏｆ  ｉｒｉｎｏｔｅｃａｎ  （ＣＰＴ−１１）  ａｎｄ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ：  Ａ  ｍｕｌｔｉｃｅｎｔｅｒ  ｐｈａｓｅ  Ｉｌ  ｓｔｕｄｙ  ｏｆ  ｔｈｅ  Ｇｒｅｅｋ  Ｃｏｏｐｅｒａｔｉｖｅ  Ｇｒｏｕｐ  ｆｏｒ  Ｐａｎｃｒｅａｔｉｃ  Ｃａｎｃｅｒ．  Ａｎｎ  Ｏｎｃｏｌ  １４：３８８−３９４，  ２００３．
１５．Ｖａｎ  Ｍｏｏｒｓｅｌ  ＣＪ，  Ｓｍｉｄ  Ｋ，  Ｖｏｏｒｎ  ＤＡ，等：  Ｅｆｆｅｃｔ  ｏｆ  ｇｅｍｃｉｔａｂｉｎｅ  ａｎｄ  ｃｉｓ−ｐｌａｔｉｎｕｍ  ｃｏｍｂｉｎａｔｉｏｎｓ  ｏｎ  ｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ａｎｄ  ｄｅｏｘｙｒｉｂｏｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅ  ｐｏｏｌｓ  ｉｎ  ｏｖａｒｉａｎ  ｃａｎｃｅｒ  ｃｅｌｌ  ｌｉｎｅｓ，  ｌｎｔ  Ｊ  Ｏｎｃｏｌ  ２２：２０１−２０７，  ２００３．
１６．Ｓｔａｔｈｏｐｏｕｌｏｓ  ＧＰ，  Ｂｏｕｌｉｋａｓ  Ｔ，  Ｖｏｕｇｉｏｕｋａ  Ｍ，等：  Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔｉｃｓ  ａｎｄ  ａｄｖｅｒｓｅ  ｒｅａｃｔｉｏｎｓ  ｏｆ  ａ  ｎｅｗ  ｌｉｐｏｓｏｍａｌ  ｃｉｓｐｌａｔｉｎ  （Ｌｉｐｏｐｌａｔｉｎ）：  Ｐｈａｓｅ  Ｉ  ｓｔｕｄｙ．  Ｏｎｃｏｌｏｇｙ  Ｒｅｐｏｒｔｓ  １３：  ５８９−５９５，  ２００５．
１７．Ｍｉｌｌｅｒ  ＡＢ，  Ｈｏｏｇｓｔｒａｔｅｎ  Ｂ，  Ｓｔａｑｕｅｔ  Ｍ，  Ｗｉｎｋｌｅｒ  Ａ：  （ＷＨＯ）  Ｒｅｐｏｒｔｉｎｇ  ｒｅｓｕｌｔｓ  ｏｆ  ｃａｎｃｅｒ  ｔｒｅａｔｍｅｎｔ．  Ｃａｎｃｅｒ，  ４７（１）：  ２０７−２１４，  １９８１．
【０１７２】
【表１】
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表１．リポプラチン（商標）とゲムシタビンの用量増加。
表は、用量レベル、患者数、リポプラチン（商標）（ｍｇ／ｍ２、毎週）及びゲムシタビンの投与量（ｍｇ／ｍ２、毎週）を示す。第１：４、２５、１０００であり、第２：４、５０、１０００であり、第３：４、７５、１０００であり、第４：４＋４、１００、１０００であり、第５：４、１２５、１０００である。
【０１７３】
【表２】
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表２．基本状態（数、％）における患者の特徴
患者数％、２４、１００であり、年齢（ｙｒ）は、平均６６（４７〜８０の範囲）であり、性別（男性１１名４５．８％；女性１３名、５４．２％）、一般状態（ＷＨＯ）は、０が、１４．２％、１が１１，４５．８％、２が１２名、５０．０％である。疾病状態は、IIIが、５名、２０．８％であり、ＩＶが19名、７９．２％である。組織は、十分な分化が３名、１２．５％であり、中程度の分化が、１２名５０．０％であり、低分化が９名、３７．５％である。治療歴は、ゲムシタビン１ｇ／ｍ２で第１、８、１５日４週間毎が１１名４５．８％、ゲムシタビン９００ｍｇ／ｍ２、第１、８日／３週間毎、プラス１３名５４．２％、イリノテカン３００ｍｇ／ｍ２、第８日／３週間毎。
【０１７４】
【表３】
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表３．血液学的毒性
用量レベルによる毒性リポプラチン（商標）、ゲムシタビンの毒性；最大毒性（ｍｇ／ｍ２；ｍｇ／ｍ２）、患者数、毒性タイプ。第１レベルは、２５，１０００であり、第２レベルは、５０，１０００であり、第３レベルは、７５，１０００であり、第４レベルは、１００，１０００、２／４，＊２〜３，好中球、第５レベルは、１２５，１０００、２／４、３〜４の好中球＊、当初４患者。
【０１７５】
【表４】
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表４．非血液学的毒性
用量グレード１、グレード２，グレード３，グレード４，レベルｎ（％）、ｎ（％）、ｎ（％）、ｎ（％）、悪心５名（２０．８％）、−嘔吐２名（８．３％）、脱毛１４名（５８．３％）、疲労８名（３３．３％）、下痢２名（８．３％）、心毒性、なし；神経毒性３名、（１２．５％）、血栓症の出現、４名（１６．７％）。
【図面の簡単な説明】
【０１７６】
【図１】図１は、リポソームオキサリプラチン（黄色長方形）のスキームによる説明を示す図である。リピッド分子は、球形の親水性の頭部をもって描かれている。粒子表面上の赤色のランダム鎖は、肝臓中マクロファージによる破壊、血液中でのオプソニン化（血清蛋白及び他の高分子との相互作用）全身への分布後（１００ｎｍの小サイズ）固形腫瘍及び転移部位への侵出から逃れる能力を粒子に与えるＰＥＧ分子を表している。
【図２】図２は、直腸癌と肝転移を有する患者（ＴＫ）でのビリルビンレベルの減少である。その患者は、肝臓に由来する高い血中ビリルビンレベル（５０ｍｇ／１００ｍｌ）が進行している。２００ｍｇ／ｍ２の用量でのリポソームオキサリプラチンの第１日、第8日、第15日、第２２日の注射は、５０〜１２ｍｇ／ｍ２へのビリルビンの漸進的な減少をもたらした。おそらく、胆管を詰まられた肝転移における減少によるものであった。第３１日と第３７日の更なる治療は、ビリルビンレベルから推測される疾病の進行を阻止しなかった。
【図３】図３は、リポソームオキサリプラチン単独治療後の骨転移の減少。胃癌を患い骨転移のある患者（ＥＫ）が、7日毎に、１５０ｍｇ／ｍ２で治療した。生活の質（クオリティオブライフ）の有意な改善があり、痛みが多くなく、鎮痛剤の使用の減少、及び患者が毎日の自分の仕事をすることができた。
【図４】図４は、シスプラチンとオキサリプラチンを同一リポソーム粒子中へ共カプセル化、及び、ペプチド又はリスガンドにより認識される表面受容体と特定の細胞タイプに対しこれらを指向させるための挿入後の粒子のペプチド−ＰＥＧ−リピッド結合体の改善。スキームは、リポソーム粒子の多機能化のため、及び、特異的な優先的指向性をもたせるためＰＥＧ分子末端に付けられたペプチド鎖（赤色）を図示する。この場合、腫瘍特異抗原は、リポソーム表面のペプチド分子により認識される。例えば、表面の外側に曝されている上皮細胞成長因子（ＥＧＦＲの部分に結合し得るペプチドエピトープ）は、ＥＧＦＲ過剰発現腫瘍に前記リポソームを指向させる。
【図５Ａ】図５Ａは、オキサリプラチン投与後の全白金レベル（８ｍｇ以下の白金／ｍｌ）の最高値と比較した、リポソームカプセル化オキサリプラチン投与後の全白金レベル（１４ｍｇ／１ｍｌ以下）の最高値を示す。これら最高値は、リポソームカプセル化オキサリプラチンでは、２０分で達したのに対し、オキサリプラチンでは１０分後に達した。
【図５Ｂ】図５Ｂは、遊離オキサリプラチン投与後１００時間内までゼロ（無）に達するラット血漿中全白金レベルを示す図である。
【図６】図６は、リポプラチン（商標）で処理したの動物のラット血漿中の全白金レベルを示す図である。
【図７Ａ】図７Ａは、処理５時間までの動物の腎臓組織における全白金レベルを示す図である。
【図７Ｂ】図７Ｂは、処理１９０時間までの動物の腎臓組織における全白金レベルを示す図である。
【図８Ａ】図８Ａは、処理5時間までの動物における肝臓組織中の全白金レベルを示す図である。
【図８Ｂ】図８Ｂは、処理１９０時間までの動物における肝臓組織中の全白金レベルを示す図である。
【図９Ａ】図９Ａは、処理１９０時間までの動物における脾臓中の白金レベルを示す図である。
【図９Ｂ】図９Ｂは、処理１９０時間までの動物における脾臓中の白金レベルを示す図である。
【図１０Ａ】図１０Ａは、キサリプラチンとリポソームカプセル化キサリプラチン処理５時間後の動物における全白金分布を示す図である。
【図１０Ｂ】図１０Ｂは、オキサリプラチンとリポソームカプセル化キサリプラチン処理5時間後の動物における全白金分布を示す図である。
【図１１Ａ】図１１Ａは、リポソームオキサリプラチンで繰り返し投与したラット（11回）のチャートである。
【図１１Ｂ】図１１Ｂは、リポソームオキサリプラチンで繰り返し投与したラット（11回）のチャートである。
【図１２】図１２は、リポソームカプセル化したキサリプラチンの繰り返し投与（６回）したラットのチャートを示す図である。
【図１３】図１３は、リポプラチン（商標）は、１６ｍｇ／Ｋｇの用量を4日間隔で6回静脈内注射後のマウスにおけるヒト乳癌の完全消失を示すことができたことを示す図である。ＭＴＤ（最大耐量）の投与は、マウスにおけるヒト乳癌に対して縮小のみをもたらしたが、消失には至らなかった。
【図１４】図１４は、１６ｍｇ／ｋｇのリポソームオキサリプラチン（リポキサール（商標））は、マウス木瀬のグラフトに対し、乳癌を根絶治療し最も良い効果である。４ｍｇ／ｋｇの最大耐量のオキサリプラチンは、５ｍｇ／ｋｇのリポキサール（商標）投与後このモデルマウスにおける低い抗腫瘍効果を示した。
【図１５】図１５は、リポソームカプセル化オキサリプラチンの臨床試験の結果を示す図である。
【図１６】図１６は、リポソームカプセル化オキサリプラチンの臨床試験の結果を示す図である。
【図１７】図１７は、ＰＥＧ−ＤＳＰＥへペプチドをカップリングする化学的方法を示す図である。
【図１】
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【図２】
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【図３】
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【図４】
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【図５Ａ】
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【図５Ｂ】
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【図６】
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【図７Ａ】
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【図７Ｂ】
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【図８Ａ】
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【図８Ｂ】
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【図９Ａ】
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【図９Ｂ】
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【図１０Ａ】
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【図１０Ｂ】
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【図１１Ａ】
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【図１１Ｂ】
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【図１２】
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【図１３】
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【図１４】
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【図１５】
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【図１６】
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【図１７】
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【国際調査報告】
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