(57)【要約】  本出願は、ヒトインターロイキン−２２（ＩＬ−２２）に特異的に結合するヒト抗体およびその抗原結合断片、ならびにこうした抗体を、例えば、炎症性障害、自己免疫疾患、アレルギー、敗血症性ショック、感染性障害、移植片拒絶、癌およびその他の免疫系障害を診断、治療または予防する場合に使用する方法を提供する。
2009528288.tif 000002
【特許請求の範囲】
【請求項１】
ヒトＩＬ−２２と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを、対象における免疫細胞活性を阻害または軽減するのに十分な量にて該対象に投与し、それによってＩＬ−２２関連障害を治療または予防する方法であって、ここで該抗体またはその抗原結合フラグメントが、少なくとも１つの重鎖可変領域を含むＶＨドメインと、ならびに配列番号：１１、１２、１３、２９、３０、３１、４７、４８、４９、６５、６６、６７、８３、８４、８５、１０１、１０２、１０３、１１９、１２０、１２１、１３７、１３８、１３９、１５５、１５６、１５７、１７３、１７４、１７５、１９１、１９２、１９３、２０９、２１０、２１１、２２７、２２８、２２９、２４５、２４６、２４７、２６３、２６４、２６５、２８１、２８２、２８３、２９９、３００、３０１、３１７、３１８、３１９、３３５、３３６、３３７、３７１、３７２、３７３、３８９、３９０、３９１、４０７、４０８、４０９、４２５、４２６、４２７、４４３、４４４、４４５、４６１、４６２、４６３、４７９、４８０、４８１、４９７、４９８、４９９、５１５、５１６、５１７、５３３、５３４、５３５、５５１、５５２、５５３、５６９、５７０、５７１、５８７、５８８、５８９、６０５、６０６、６０７、６２３、６２４または６２５のいずれか１つの少なくとも１つの軽鎖可変領域を含むＶＬドメインとを含むところの、方法。
【請求項２】
ヒトＩＬ−２２と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを、対象における免疫細胞活性を阻害または軽減するのに十分な量にて該対象に投与し、それによってＩＬ−２２関連障害を治療または予防する方法であって、ここで該抗体またはその抗原結合フラグメントが、少なくとも１つの軽鎖可変領域を含むＶＬドメインと、ならびに配列番号：８、９、１０、２６、２７、２８、４４、４５、４６、６２、６３、６４、８０、８１、８２、９８、９９、１００、１１６、１１７、１１８、１３４、１３５、１３６、１５２、１５３、１５４、１７０、１７１、１７２、１８８、１８９、１９０、２０６、２０７、２０８、２２４、２２５、２２６、２４２、２４３、２４４、２６０、２６１、２６２、２７８、２７９、２８０、２９６、２９７、２９８、３１４、３１５、３１６、３３２、３３３、３３４、３５０、３５１、３５２、３６８、３６９、３７０、３８６、３８７、３８８、４０４、４０５、４０６、４２２、４２３、４２４、４４０、４４１、４４２、４５８、４５９、４６０、４７６、４７７、４７８、４９４、４９５、４９６、５１２、５１３、５１４、５３０、５３１、５３２、５４８、５４９、５５０、５６６、５６７、５６８、５８４、５８５、５８６、６０２、６０３、６０４、６２０、６２１または６２２のいずれか１つの少なくとも１つの重鎖可変領域を含むＶＨドメインとを含むところの、方法。
【請求項３】
少なくとも１つの重鎖可変領域が配列番号：８、９、１０、２６、２７、２８、４４、４５、４６、６２、６３、６４、８０、８１、８２、９８、９９、１００、１１６、１１７、１１８、１３４、１３５、１３６、１５２、１５３、１５４、１７０、１７１、１７２、１８８、１８９、１９０、２０６、２０７、２０８、２２４、２２５、２２６、２４２、２４３、２４４、２６０、２６１、２６２、２７８、２７９、２８０、２９６、２９７、２９８、３１４、３１５、３１６、３３２、３３３、３３４、３５０、３５１、３５２、３６８、３６９、３７０、３８６、３８７、３８８、４０４、４０５、４０６、４２２、４２３、４２４、４４０、４４１、４４２、４５８、４５９、４６０、４７６、４７７、４７８、４９４、４９５、４９６、５１２、５１３、５１４、５３０、５３１、５３２、５４８、５４９、５５０、５６６、５６７、５６８、５８４、５８５、５８６、６０２、６０３、６０４、６２０、６２１または６２２のいずれか１つを含む、請求項１記載の方法。
【請求項４】
ＶＬドメインが配列番号：６、２４、４２、６０、７８、９６、１１４、１３２、１５０、１６８、１８６、２０４、２２２、２４０、２５８、２７６、２９４、３１２、３３０、３４８、３６６、３８４、４０２、４２０、４３８、４５６、４７４、４９２、５１０、５２８、５４６、５６４、５８２、６００または６１８のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項１−３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項５】
抗体またはその抗原結合フラグメントが配列番号：５、２３、４１、５９、７７、９５、１１３、１３１、１４９、１６７、８５、２０３、２２１、２３９、２５７、２７５、２９３、３３１、３２９、３４７、３６５、３８３、４０１、４１９、４３７、４５５、４７３、４９１、５０９、５２７、５４５、５６３、５８１、５９９または６１７のいずれか１つのアミノ酸配列を有するＶＨドメインを含む、請求項１−４のいずれか一項に記載の方法。
【請求項６】
ＶＨドメインが配列番号：５、２３、４１、５９、７７、９５、１１３、１３１、１４９、１８５、２２１、２３９、２５７、２７５、３３１、３２９、３６５、３８３、４０１、４１９、４３７、４５５、４７３、５０９、５２７、５６３または５８１のいずれか１つのアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号：６、２４、４２、６０、７８、９６、１１４、１３２、１５０、１８６、２２２、２４０、２５８、２７６、３１２、３３０、３６６、３８４、４０２、４２０、４３８、４５６、４７４、５１０、５２８、５６４または５８２のいずれか１つのアミノ酸配列を含む、請求項３記載の方法。
【請求項７】
ＶＨドメインが配列番号：１６７または４９１のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号：１６８または４９２の配列を含む、請求項６記載の方法。
【請求項８】
ＶＨドメインが配列番号：２９３または５４５のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号：２９４または５４６の配列を含む、請求項６記載の方法。
【請求項９】
ＶＨドメインが配列番号：２０３または６１７のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号：２０４または６１８の配列を含む、請求項６記載の方法。
【請求項１０】
ＶＨドメインが配列番号：３４７または５９９のアミノ酸配列を含み、ＶＬドメインが配列番号：３４８または６００の配列を含む、請求項６記載の方法。
【請求項１１】
ヒトＩＬ−２２と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを、対象における免疫細胞活性を阻害または軽減するのに十分な量にて該対象に投与し、それによってＩＬ−２２関連障害を治療または予防する方法であって、ヒトＩＬ−２２と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントがヒトＩＬ−２２に対して少なくとも１０１０Ｍ−１の会合定数を有するところの、方法。
【請求項１２】
ヒトＩＬ−２２に対する会合定数が少なくとも１０１１Ｍ−１である、請求項１１記載の方法。
【請求項１３】
ヒトＩＬ−２２と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを、対象における免疫細胞活性を阻害または軽減するのに十分な量にて該対象に投与し、それによってＩＬ−２２関連障害を治療または予防する方法であって、ヒトＩＬ−２２と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントがＩＬ−２２により媒介されるＢＡＦ３細胞の増殖を１５０ｐＭ以下のＩＣ５０で遮断し、該ＢＡＦ３細胞がヒトＩＬ−２２受容体を含むところの、方法。
【請求項１４】
抗体またはその抗原結合フラグメントがＩＬ−２２により媒介されるＢＡＦ３細胞の増殖を１００ｐＭ以下のＩＣ５０で遮断する、請求項１３記載の方法。
【請求項１５】
ヒトＩＬ−２２と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを、対象における免疫細胞活性を阻害または軽減するのに十分な量にて該対象に投与し、それによってＩＬ−２２関連障害を治療または予防する方法であって、該抗体またはその抗原結合フラグメントがＩＬ−２２により媒介されるＨＴ２９細胞からのＧＲＯａ分泌を１ｎＭ以下のＩＣ５０で遮断するところの、方法。
【請求項１６】
抗体またはその抗原結合フラグメントがＩＬ−２２により媒介されるＨＴ２９細胞からのＧＲＯａ分泌を１５０ｐＭ以下のＩＣ５０で遮断する、請求項１５記載の方法。
【請求項１７】
ＩＬ−２２関連障害が、炎症性腸疾患、膵炎、多発性硬化症、関節リウマチ、全身性エリテマトーデス、ＨＩＶ、シェーグレン症候群、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、強直性脊椎炎、乾癬、移植片拒絶およびクローン病から選択される、請求項１−１６のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１８】
サイトカイン阻害剤、増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、細胞傷害剤または細胞増殖抑制剤から選択されるもう一つ別の治療剤を対象に投与することをさらに含む、請求項１−１７のいずれか一項に記載の方法。
【請求項１９】
治療剤が、ＴＮＦアンタゴニスト、ＩＬ−１２アンタゴニスト、ＩＬ−１５アンタゴニスト、ＩＬ−１７アンタゴニスト、ＩＬ−１８アンタゴニスト、ＩＬ−１９アンタゴニスト、ＩＬ−２０アンタゴニスト、ＩＬ−２１アンタゴニストおよびＩＬ−２３アンタゴニスト、Ｔ細胞枯渇剤、Ｂ細胞の枯渇剤、メトトレキサレート、レフルノミド、シロリムス（ラパマイシン）またはその類似体、Ｃｏｘ−２阻害剤、ｃＰＬＡ２の阻害剤、ＮＳＡＩＤまたはｐ３８阻害剤から選択される、請求項１８記載の方法。
【請求項２０】
対象が哺乳動物である、請求項１−１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２１】
対象がヒトである、請求項１−１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２２】
抗体が１μｇ／ｋｇないし２０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇないし１０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇないし１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇないし１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇないし１００μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇないし１ｍｇ／ｋｇ、２５０μｇ／ｋｇないし２ｍｇ／ｋｇ、２５０μｇ／ｋｇないし１ｍｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇないし２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇないし５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇないし１０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇないし２０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇないし２５ｍｇ／ｋｇ、または２０ｍｇ／ｋｇないし３０ｍｇ／ｋｇから選択される範囲にて投与される、請求項１−１９のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２３】
ＩＬ−２２関連障害が関節炎、炎症性腸疾患または乾癬である、請求項１−２２のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２４】
ＩＬ−２２関連障害が関節リウマチである、請求項２３のいずれか一項に記載の方法。
【請求項２５】
ＩＬ−２２関連障害が乾癬である、請求項２３記載の方法。
【請求項２６】
ヒトＩＬ−２２と特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを、対象におけるＩＬ−２２および／またはＩＬ−２２Ｒおよび／またはＩＬ−１０Ｒ２−応答性細胞の過剰増殖を阻害または軽減するのに十分な量にて該対象に投与し、該抗体で過剰増殖障害を治療または予防する方法であって、該抗体またはその抗原結合フラグメントが配列番号：８、９、１０、２６、２７、２８、４４、４５、４６、６２、６３、６４、８０、８１、８２、９８、９９、１００、１１６、１１７、１１８、１３４、１３５、１３６、１５２、１５３、１５４、１７０、１７１、１７２、１８８、１８９、１９０、２０６、２０７、２０８、２２４、２２５、２２６、２４２、２４３、２４４、２６０、２６１、２６２、２７８、２７９、２８０、２９６、２９７、２９８、３１４、３１５、３１６、３３２、３３３、３３４、３５０、３５１、３５２、３６８、３６９、３７０、３８６、３８７、３８８、４０４、４０５、４０６、４２２、４２３、４２４、４４０、４４１、４４２、４５８、４５９、４６０、４７６、４７７、４７８、４９４、４９５、４９６、５１２、５１３、５１４、５３０、５３１、５３２、５４８、５４９、５５０、５６６、５６７、５６８、５８４、５８５、５８６、６０２、６０３、６０４、６２０、６２１または６２２のいずれか１つの少なくとも１つの重鎖可変領域を含む、方法。
【請求項２７】
ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４または３５６Ａ１１により認識されるＩＬ−２２エピトープに特異的に結合する抗体またはその抗原結合フラグメントを、該抗体がＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、または３５６Ａ１１のヒトＩＬ−２２との結合を競合的に阻害するように、対象における免疫細胞活性を阻害または軽減するのに十分な量にて投与し、それによりＩＬ−２２関連障害を治療または予防することを含む、該障害の治療または予防方法。
【請求項２８】
抗体が０８Ｂ０３により認識されるＩＬ−２２エピトープと特異的に結合し、それで該抗体が０８Ｂ０３のヒトＩＬ−２２との結合を競合的に阻害する、請求項２７記載の方法。
【請求項２９】
抗体が３５４Ａ０８により認識されるＩＬ−２２エピトープと特異的に結合し、それで該抗体が３５４Ａ０８のヒトＩＬ−２２との結合を競合的に阻害する、請求項２７記載の方法。
【請求項３０】
抗体が３６８Ｄ０４により認識されるＩＬ−２２エピトープと特異的に結合し、それで該抗体が３６８Ｄ０４のヒトＩＬ−２２との結合を競合的に阻害する、請求項２７記載の方法。
【請求項３１】
抗体が３５６Ａ１１により認識されるＩＬ−２２エピトープと特異的に結合し、それで該抗体が３５６Ａ１１のヒトＩＬ−２２との結合を競合的に阻害する、請求項２７記載の方法。
【発明の詳細な説明】
【技術分野】
【０００１】
本発明は、インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）、特にヒトＩＬ−２２に結合する抗体、例えばヒト抗体、およびその抗原結合断片、ならびにＩＬ−２２関連活性の調節における、その使用に関する。本明細書に開示する抗体は、ＩＬ−２２関連障害、例えば、関節炎を含めた自己免疫障害の診断、予防および／または治療に有用である。
【背景技術】
【０００２】
抗原が、免疫応答を開始し、リンパ球のうちの２種の最も大きな集団、すなわち、Ｔ細胞およびＢ細胞を活性化する。抗原に遭遇すると、Ｔ細胞は、増殖し、エフェクター細胞に分化し、一方、Ｂ細胞は、増殖し、抗体分泌形質細胞に分化する。これらのエフェクター細胞は、サイトカインを分泌する、かつ／またはサイトカインに応答する。サイトカインは、リンパ球およびその他の細胞型が分泌する小型のタンパク質（＜約３０ｋＤａ）である。
【０００３】
インターロイキン−２２（ＩＬ−２２）は、ＩＬ−１０と相同な配列を示す、クラスＩＩサイトカインである。ＩＬ−２２の発現は、Ｔ細胞中で、ＩＬ−９またはＣｏｎＡによって、上方制御される（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ら（２０００）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９７（１８）：１０１４４−９）。さらなる研究は、ＩＬ−２２  ｍＲＮＡの発現が、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてＬＰＳの投与に応答して誘導されること、およびＩＬ−２２が、急性期応答の指標となるパラメータを調節することを示している（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒら（２０００）；Ｐｉｔｔｍａｎ  Ｄら（２００１）Ｇｅｎｅｓ  ａｎｄ  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２：１７２）。その上、β−デフェンシン、Ｓ１００Ａ７、Ｓ１００Ａ８およびＳ１００Ａを含めた、宿主防御に関連する抗菌ペプチドの発現を増強する。Ｗｏｌｋら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ、２１：２４１−５４（２００４）；Ｂｏｎｉｆａｃｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１７４：３６９５−３７０２（２００５）；Ｌｉａｎｇら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．、２０３（１０）：２２７１−７９（２００６）。総合すれば、これらの観察は、ＩＬ−２２が、炎症においてある役割を果たすことを示している（Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．（２００２）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３（３）：２２３−４０）。
【０００４】
ＩＬ−２２は、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２からなる受容体複合体に結合すると考えられている。ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２は、ＩＩ型サイトカイン受容体ファミリー（ＣＲＦ２）の２つのメンバーである（Ｘｉｅ  Ｍ．Ｈ．ら（２０００）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７５（４０）：３１３３５−９；Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．ら（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（４）：２７２５−３２）。ＩＬ−２２受容体の両方の鎖が、いくつかの臓器で恒常的に発現される。これらの臓器に由来する上皮細胞系が、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、ＩＬ−２２に応答性である（Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．（２００２）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３（３）：２２３−４０）。ＩＬ−２２は、ＪＡＫ／ＳＴＡＴ３およびＥＲＫの経路の活性化を、ならびにその他のＭＡＰＫ経路の中間体を誘導する（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ら（２０００）上記；Ｘｉｅ  Ｍ．Ｈ．ら（２０００）上記；Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ  Ｌ．ら（２０００）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６４（４）：１８１４−９；Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．ら（２００１）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７６（４）：２７２５−３２；Ｌｅｊｅｕｎｅ，Ｄ．ら（２００２）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７（３７）：３３６７６−８２）。
【０００５】
ＣＲＦ２メンバーは、ＩＦＮα／β、ＩＦＮγ、凝固因子ＶＩＩａ、ＩＬ−１０、およびＩＬ−１０関連タンパク質である、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２２、ＩＬ−２４、ＩＬ−２６、ならびに最近になって同定されたＩＦＮ様サイトカインである、ＩＬ−２８およびＩＬ−２９に対する受容体である（Ｋｏｔｅｎｋｏ  Ｓ．Ｖ．（２００２）Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  ＆  Ｇｒｏｗｔｈ  Ｆａｃｔｏｒ  Ｒｅｖｉｅｗｓ  １３（３）：２２３−４０；Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ら（２０００）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９（２１）：２５５７−６５；Ｓｈｅｐｐａｒｄ，Ｐ．ら（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４（１）：６３−８；Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ら（２００３）Ｎａｔｕｒｅ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  ４（１）：６９−７７）。これらの膜受容体に加えて、また、ＣＲＦ２ファミリーは、可溶性タンパク質である、ＩＬ−２２結合タンパク質（ＩＬ−２２ＢＰ）も含み、これは、ＩＬ−２２に対して特異的であり、ＩＬ−２２の活性を遮断する（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ，Ｌ．ら（２００１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６６（１２）：７０９０−５；Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ら（２００１）Ｊ  Ｉｍｍｕｎｏｌ  １６６（１２）：７０９６−１０３；Ｘｕ，Ｗ．ら（２００１）Ｐｒｏｃ  Ｎａｔｌ  Ａｃａｄ  Ｓｃｉ  ＵＳＡ  ９８（１７）：９５１１−６；Ｇｒｕｅｎｂｅｒｇ，Ｂ．Ｈ．ら（２００１）Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２（６）：３２９−３４；Ｗｅｉ  Ｃ−Ｃら（２００３）Ｇｅｎｅｓ  ＆  Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ４：２０４−２１１）。ＩＬ−２２受容体複合体が、ＩＬ−２２に対して独特である一方で、鎖（すなわち、ＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２）のそれぞれは、その他のＣＲＦ２メンバーが共有して、ＩＬ−２０、ＩＬ−２４（ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−２０Ｒ２）、ＩＬ−２８、ＩＬ−２９（ＩＮＦ−λＲ１／ＩＬ−１０Ｒ２）、およびＩＬ−１０（ＩＬ−１０Ｒ１／ＩＬ−１０Ｒ２）を含めた、その他のサイトカインに対する機能性受容体を規定する（Ｄｕｍｏｕｔｉｅｒ，Ｌ．ら（２００１）Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１６７（７）：３５４５−９；Ｗａｎｇ，Ｍ．ら（２００２）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７（９）：７３４１−７；Ｐａｒｒｉｓｈ−Ｎｏｖａｋ，Ｊ．ら（２００２）Ｊ  Ｂｉｏｌ  Ｃｈｅｍ  ２７７（４９）：４７５１７−２３；Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ら（１９９７）ＥＭＢＯ  Ｊ．１６（１９）：５８９４−９０３；Ｓｐｅｎｃｅｒ，Ｓ．Ｄ．ら（１９９８）Ｊ  Ｅｘｐ  Ｍｅｄ  １８７（４）：５７１−８）。
【０００６】
ＣＲＦ２複合受容体の両方の鎖が、シグナル伝達には必要である。この複合受容体の一方の鎖が、サイトカインに対する高い親和性に基づいて、リガンド結合鎖（例えば、ＩＦＮγＲ１）として歴史的に定義されている。他方の鎖は（例えば、ＩＦＮγＲ２）は、ヘルパー鎖またはアクセサリー鎖として特徴付けられており、サイトカイン単独に対しては最小の親和性を示す（Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ら（２０００）Ｏｎｃｏｇｅｎｅ  １９（２１）：２５５７−６５）。ＩＬ−２２に対しては、ＩＬ−２２Ｒが、高親和性受容体サブユニットであり、続いて、ＩＬ−１０Ｒ２が、ＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ複合体に結合する（Ｌｉ，Ｊ．ら（２００４）Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．４（５）：６７３−７０８；Ｌｏｇｓｄｏｎ，Ｎ．Ｊ．ら（２００２）Ｊ．Ｉｎｔｅｒｆｅｒｏｎ  Ｃｙｔｏｋｉｎｅ  Ｒｅｓ  ２２（１１）：１０９９−１１１２）。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【０００７】
本出願は、少なくとも一部、インターロイキン−２２（「ＩＬ−２２」）、特にヒトＩＬ−２２に高い親和性および特異性で結合する抗体およびその抗原結合断片等、ＩＬ−２２結合剤を提供する。また、本発明の抗体およびその抗原結合断片は、本明細書において、それぞれ「抗ＩＬ−２２抗体」および「その断片」とも呼ぶ。
【課題を解決するための手段】
【０００８】
一実施形態では、当該抗体およびその抗原結合断片は、ＩＬ−２２活性を減少させる、ＩＬ−２２活性を阻害する、またはＩＬ−２２活性に拮抗する。そのような抗体を使用して、免疫応答またはＩＬ−２２関連障害を、ＩＬ−２２活性に拮抗することによって調節することができる。その他の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体を、診断上、または治療剤もしくは細胞傷害剤をＩＬ−２２発現細胞にデリバリーするためのターゲティング抗体として使用することができる。したがって、本発明の抗ＩＬ−２２抗体は、ＩＬ−２２関連障害、例えば、自己免疫障害、例として、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、ループス性関節炎または強直性脊椎炎を含む）、強皮症、全身性エリテマトーデス、ＨＩＶ、シェーグレン症候群、血管炎、多発性硬化症、自己免疫性甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎を含む）、重症筋無力症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、大腸炎、糖尿病（Ｉ型）；炎症性状態、例として、皮膚（例えば、乾癬）、心血管系（例えば、アテローム性動脈硬化症）、神経系（例えば、アルツハイマー病）、肝臓（例えば、肝炎）、腎臓（例えば、腎炎）および膵臓（例えば、膵臓炎）；心血管障害、例として、コレステロール代謝障害、酸素フリーラジカルによる損傷、虚血；創傷治癒関連障害；呼吸障害、例として、喘息およびＣＯＰＤ（例えば、嚢胞性線維症）；急性炎症性状態（例えば、内毒血症、セプシスおよび敗血症、毒素ショック症候群および感染症）；移植片拒絶およびアレルギーの診断、治療および／または予防に有用である。一実施形態では、ＩＬ−２２関連障害は、関節炎障害、例えば、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎または強直性脊椎炎のうちの１つまたは複数から選択された障害；呼吸障害（例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））；または炎症性状態、例えば、皮膚（例えば、乾癬）、心血管系（例えば、アテローム性動脈硬化症）、神経系（例えば、アルツハイマー病）、肝臓（例えば、肝炎）、腎臓（例えば、腎炎）、膵臓（例えば、膵臓炎）、ならびに胃腸管系臓器、例えば、大腸炎、クローン病およびＩＢＤである。
【０００９】
したがって、一態様では、本発明は、ＩＬ−２２、特にヒトＩＬ−２２に結合する単離抗体に注目する。特定の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体は、以下の特徴のうちの少なくとも１つを有することができる：（１）モノクローナル抗体または単一特異性抗体である；（２）ヒト抗体である；（３）ｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生した抗体である；（４）ｉｎ  ｖｉｖｏで産生した抗体である（例えば、遺伝子導入系）；（５）ＩＬ−２２に少なくとも１０１２Ｍ−１の結合定数で結合する；（６）ＩＬ−２２に少なくとも１０１１Ｍ−１の結合定数で結合する；（７）ＩＬ−２２に少なくとも１０１０Ｍ−１の結合定数で結合する；（８）ＩＬ−２２に少なくとも１０９Ｍ−１の結合定数で結合する；（９）ＩＬ−２２に少なくとも１０６Ｍ−１の結合定数で結合する；（１０）ＩＬ−２２に５００ｎＭ以下の解離定数で結合する；（１１）ＩＬ−２２に１０ｎＭ以下の解離定数で結合する；（１２）ＩＬ−２２に１５０ｐＭ以下の解離定数で結合する；（１３）ＩＬ−２２に６０ｐＭ以下の解離定数で結合する；（１４）ＩＬ−２２ＲまたはＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２の受容体複合体に対するＩＬ−２２の結合を１０ｎＭ以下のＩＣ５０で阻害する；（１５）ＩＬ−２２受容体を操作したＢａＦ３細胞のＩＬ−２２が仲介する増殖を、一実施形態では１ｎＭ以下のＩＣ５０で、別の実施形態では１５０ｐＭ以下のＩＣ５０で、別の実施形態では１００ｐＭ以下のＩＣ５０で、および別の実施形態では１０ｐＭ以下のＩＣ５０で遮断する；（１６）ＨＴ２９細胞からのＩＬ−２２が仲介するＧＲＯａの分泌を、一実施形態では１ｎＭ以下のＩＣ５０で、別の実施形態では１５０ｐＭ以下のＩＣ５０で、および別の実施形態では１０ｐＭ以下のＩＣ５０で遮断する。ＩＬ−２２が仲介するＢａＦ３細胞の増殖、およびＨＴ２９細胞からのＩＬ−２２が仲介するＧＲＯの分泌は、実施例の記載に従って測定することができる。
【００１０】
本発明の抗体の非限定的な例示的実施形態は、本明細書においては、「ＧＩＬ０１」、「ＧＩＬ１６」、「ＧＩＬ４５」、「ＧＩＬ６０」、「ＧＩＬ６８」、「ＧＩＬ９２」、「０９７Ｄ０９」、「０６２Ａ０９」、「０６２Ｇ０５」、「０８７Ｂ０３」、「３６７Ｄ０４」、「３６８Ｄ０４」、「１６６Ｂ０６」、「１６６Ｇ０５」、「３７５Ｇ０６」、「３７６Ｂ１０」、「３５４Ａ０８」、「３５５Ｂ０６」、「３５５Ｅ０４」、および「３５６Ａ１１」と呼ぶ。これらの抗体は、生殖系列化であってもよいし、非生殖系列化であってもよい。別の実施形態では、抗体は、３５６Ａ１１、３５４Ａ０８、０８７Ｂ０３および３６８Ｄ０４から選択される。本発明の抗体は、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、または３５６Ａ１１が結合するのと同一のＩＬ−２２のエピトープ、またはそれらが結合するのに類似するエピトープ（例えば、重複エピトープ）に特異的に結合することができる。その他の実施形態では、抗体は、ＩＬ−２２の断片、例えば、配列番号１に記載するアミノ酸配列に隣接する、または配列番号１に記載するアミノ酸配列と少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％以上同一である配列に隣接する、少なくとも１０、２０、５０、７５、１００、１５０または２００個のアミノ酸の断片に特異的に結合する。その他の実施形態では、抗体は、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、または３５６Ａ１１のうちの少なくとも１つの、その標的エピトープに対する結合を競合的に阻害する。
【００１１】
一実施形態では、本発明の抗体は、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、または３５６Ａ１１のＦＶ断片のＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはその組合せを含む。例えば、抗体は、表１および７に記載するアミノ酸配列（ＶＨに対しては配列番号５、２３、４１、５９、７７、９５、１１３、１３１、１４９、１６７、１８５、２０３、２２１、２３９、２５７、２７５、２９３、３１１、３２９、３４７、３６５、３８３、４０１、４１９、４３７、４５５、４７３、４９１、５０９、５２７、５４５、５６３、５８１、５９９、または６１７およびＶＬに対しては配列番号６、２４、４２、６０、７８、９６、１１４、１３２、１５０、１６８、１８６、２０４、２２２、２４０、２５８、２７６、２９４、３１２、３３０、３４８、３６６、３８４、４０２、４２０、４３８、４５６、４７４、４９２、５１０、５２８、５４６、５６４、５８２、６００、または６１８）、または表１および７に記載するアミノ酸配列と実質的に同一の配列（例えば、表１および７に記載するアミノ酸配列と少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％以上同一である配列、または配列番号５、６、２３、２４、４１、４２、５９、６０、７７、７８、９５、９６、１１３、１１４、１３１、１３２、１４９、１５０、１６７、１６８、１８５、１８６、２０３、２０４、２２１、２２２、２３９、２４０、２５７、２５８、２７５、２７６、２９３、２９４、３１１、３１２、３２９、３３０、３４７、３４８、３６５、３６６、３８３、３８４、４０１、４０２、４１９、４２０、４３７、４３８、４５５、４５６、４７３、４７４、４９１、４９２、５０９、５１０、５２７、５２８、５４５、５４６、５６３、５６４、５８１、５８２、５９９、６００、６１７、または６１８とはアミノ酸残基が１、２、５、１０もしくは１５個以下分、異なる配列）を有するＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインを含む。
【００１２】
別の実施形態では、３５６Ａ１１、３５４Ａ０８、０８７Ｂ０３および３６８Ｄ０４から選択されたＦＶ断片のＶＨドメイン、ＶＬドメイン、またはその組合せを含む。この実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、以下を含む：
配列番号１６７もしくは配列番号４９１に記載するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、および／または配列番号１６８もしくは配列番号４９２に記載するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン（０８７Ｂ０３）；
配列番号２９３もしくは配列番号５４５に記載するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、および／または配列番号２９４もしくは配列番号５４６に記載するアミノ酸配列を有するＶＬドメイン（３５４Ａ０８）；
配列番号２０３もしくは配列番号６１７に記載するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、および／または配列番号２０４もしくは配列番号６１８に記載するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン（３６８Ｄ０４）；または
配列番号３４７もしくは配列番号５９９に記載するアミノ酸配列を含むＶＨドメイン、および／または配列番号３４８もしくは配列番号６００に記載するアミノ酸配列を含むＶＬドメイン（３５６Ａ１１）。
【００１３】
別の実施形態では、抗体は、表１および７に記載するヌクレオチド配列（ＶＨに対しては配列番号１４、３２、５０、６８、８６、１０４、１２２、１４０、１５８、１７６、１９４、２１２、２３０、２４８、２６６、２８４、３０２、３２０、３３８、３５６、３７４、３９２、４１０、４２８、４４６、４６４、４８２、５００、５１８、５３６、５５４、５７２、５９０、６０８、または６２６およびＶＬに対しては配列番号１５、３３、５１、６９、８７、１０５、１２３、１４１、１５９、１７７、１９５、２１３、２３１、２４９、２６７、２８５、３０３、３２１、３３９、３５７、３７５、３９３、４１１、４２９、４４７、４６５、４８３、５０１、５１９、５３７、５５５、５７３、５９１、６０９、または６２７）、または表１および７に記載するヌクレオチド配列と実質的に同一の配列（例えば、表１および７に記載するヌクレオチド配列と少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％以上同一である配列、または配列番号１４、１５、３２、３３、５０、５１、６８、６９、８６、８７、１０４、１０５、１２２、１２３、１４０、１４１、１５８、１５９、１７６、１７７、１９４、１９５、２１２、２１３、２３０、２３１、２４８、２４９、２６６、２６７、２８４、２８５、３０２、３０３、３２０、３２１、３３８、３３９、３５６、３５７、３７４、３７５、３９２、３９３、４１０、４１１、４２８、４２９、４４６、４４７、４６４、４６５、４８２、４８３、５００、５０１、５１８、５１９、５３６、５３７、５５４、５５５、５７２、５７３、５９０、５９１、６０８、６０９、６２６、または６２７とはヌクレオチドが１、２、３、６、１５、３０もしくは４５個以下分、異なる配列）を有する核酸がコードするＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインを含む。
【００１４】
その他の実施形態では、抗体は、表１および７に記載するアミノ酸配列（配列番号７、２５、４３、６１、７９、９７、１１５、１３３、１５１、１６９、１８７、２０５、２２３、２４１、２５９、２７７、２９５、３１３、３３１、３４９、３６７、３８５、４０３、４２１、４３９、４５７、４７５、４９３、５１１、５２９、５４７、５６５、５８３、６０１、または６１９）、または表１および７に記載するアミノ酸配列と実質的に同一の配列（例えば、表１および７に記載するアミノ酸配列と少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％以上同一である配列、または配列番号７、２５、４３、６１、７９、９７、１１５、１３３、１５１、１６９、１８７、２０５、２２３、２４１、２５９、２７７、２９５、３１３、３３１、３４９、３６７、３８５、４０３、４２１、４３９、４５７、４７５、４９３、５１１、５２９、５４７、５６５、５８３、６０１、または６１９とはアミノ酸残基が１、２、５、１０、１５、２０、３０もしくは３５個以下分、異なる配列）を有するＦＶドメインを含む。別の実施形態では、本発明の抗体は、３５６Ａ１１（配列番号３４９または６０１）、３５４Ａ０８（配列番号２９５または５４７）、０８７Ｂ０３（配列番号１６９または４９３）、および３６８Ｄ０４（配列番号２０５または６１９）から選択された抗体のＦＶドメインを含む。別の実施形態では、抗体は、表１および７に記載するヌクレオチド配列（配列番号１６、３４、５２、７０、８８、１０６、１２４、１４２、１６０、１７８、１９６、２１４、２３２、２５０、２６８、２８６、３０４、３２２、３４０、３５８、３７６、３９４、４１２、４３０、４４８、４６６、４８４、５０２、５２０、５３８、５５６、５７４、５９２、６１０、または６２８）、または表１および７に記載するヌクレオチド配列と実質的に同一の配列（例えば、表１および７に記載するヌクレオチド配列と少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％以上同一である配列、または配列番号１６、３４、５２、７０、８８、１０６、１２４、１４２、１６０、１７８、１９６、２１４、２３２、２５０、２６８、２８６、３０４、３２２、３４０、３５８、３７６、３９４、４１２、４３０、４４８、４６６、４８４、５０２、５２０、５３８、５５６、５７４、５９２、６１０、または６２８とはヌクレオチドが１、２、３、６、１５、３０、４５、６０、９０もしくは１０５個以下分、異なる配列）を有する核酸がコードするＦＶドメインを含む。さらにその他の実施形態では、抗体は、これらのＶＨドメインおよびＶＬドメインの少なくとも１つの相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。例えば、抗体は、表１および７に記載するアミノ酸配列（配列番号５、７、８、９、１０、２３、２５、２６、２７、２８、４１、４３、４４、４５、４６、５９、６１、６２、６３、６４、７７、７９、８０、８１、８２、９５、９７、９８、９９、１００、１１３、１１５、１１６、１１７、１１８、１３１、１３３、１３４、１３５、１３６、１４９、１５１、１５２、１５３、１５４、１６７、１６９、１７０、１７１、１７２、１８５、１８７、１８８、１８９、１９０、２０３、２０５、２０６、２０７、２０８、２２１、２２３、２２４、２２５、２２６、２３９、２４１、２４２、２４３、２４４、２５７、２５９、２６０、２６１、２６２、２７５、２７７、２７８、２７９、２８０、２９３、２９５、２９６、２９７、２９８、３１１、３１３、３１４、３１５、３１６、３２９、３３１、３３２、３３３、３３４、３４７、３４９、３５０、３５１、３５２、３６５、３６７、３６８、３６９、３７０、３８３、３８５、３８６、３８７、３８８、４０１、４０３、４０４、４０５、４０６、４１９、４２１、４２２、４２３、４２４、４３７、４３９、４４０、４４１、４４２、４５５、４５７、４５８、４５９、４６０、４７３、４７５、４７６、４７７、４７８、４９１、４９３、４９４、４９５、４９６、５０９、５１１、５１２、５１３、５１４、５２７、５２９、５３０、５３１、５３２、５４５、５４７、５４８、５４９、５５０、５６３、５６５、５６６、５６７、５６８、５８１、５８３、５８４、５８５、５８６、５９９、６０１、６０２、６０３、６０４、６１７、６１９、６２０、６２１、または６２２）、または表１および７中の配列内に含まれているアミノ酸配列、あるいは表１および７に記載するアミノ酸配列、または表１および７中の配列内に含まれているアミノ酸配列と実質的に相同な配列（例えば、表１および７に記載するアミノ酸配列、または表１および７中の配列内に含まれているアミノ酸配列と少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％以上同一である配列）を有するＶＨドメインのＣＤＲの１つ、２つまたは３つを含むことができる。別の実施形態では、本発明の抗体は、３５６Ａ１１、３５４Ａ０８、０８７Ｂ０３および３６８Ｄ０４から選択された抗体のＶＨドメインのＣＤＲの１つ、２つまたは３つを含む。この実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号１７０または４９４；ｂ）配列番号１７１または４９５；および／またはｃ）配列番号１７２または４９６（０８７Ｂ０３）；
ａ）配列番号２９６または５４８；ｂ）配列番号２９７または５４９；および／またはｃ）配列番号２９８または５５０（３５４Ａ０８）；
ａ）配列番号２０６または６２０；ｂ）配列番号２０７または６２１；および／またはｃ）配列番号２０８または６２２（３６８Ｄ０４）；または
ａ）配列番号３５０または６０２；ｂ）配列番号３５１または６０３；および／またはｃ）配列番号３５２または６０４（３５６Ａ１１）
を含む、重鎖可変領域を含む。
【００１５】
別の実施形態では、抗体は、表１および７に記載するアミノ酸配列（配列番号６、７、１１、１２、１３、２４、２５、２９、３０、３１、４２、４３、４７、４８、４９、６０、６１、６５、６６、６７、７８、７９、８３、８４、８５、９６、９７、１０１、１０２、１０３、１１４、１１５、１１９、１２０、１２１、１３２、１３３、１３７、１３８、１３９、１５０、１５１、１５５、１５６、１５７、１６８、１６９、１７３、１７４、１７５、１８６、１８７、１９１、１９２、１９３、２０４、２０５、２０９、２１０、２１１、２２２、２２３、２２７、２２８、２２９、２４０、２４１、２４５、２４６、２４７、２５８、２５９、２６３、２６４、２６５、２７６、２７７、２８１、２８２、２８３、２９４、２９５、２９９、３００、３０１、３１２、３１３、３１７、３１８、３１９、３３０、３３１、３３５、３３６、３３７、３４８、３４９、３５３、３５４、３５５、３６６、３６７、３７１、３７２、３７３、３８４、３８５、３８９、３９０、３９１、４０２、４０３、４０７、４０８、４０９、４２０、４２１、４２５、４２６、４２７、４３８、４３９、４４３、４４４、４４５、４５６、４５７、４６１、４６２、４６３、４７４、４７５、４７９、４８０、４８１、４９２、４９３、４９７、４９８、４９９、５１０、５１１、５１５、５１６、５１７、５２８、５２９、５３３、５３４、５３５、５４６、５４７、５５１、５５２、５５３、５６４、５６５、５６９、５７０、５７１、５８２、５８３、５８７、５８８、５８９、６００、６０１、６０５、６０６、６０７、６１８、６１９、６２３、６２４、または６２５）、または表１および７中の配列内に含まれているアミノ酸配列、あるいは表１および７に記載するアミノ酸配列、または表１および７中の配列内に含まれているアミノ酸配列と実質的に同一の配列（例えば、表１および７に記載するアミノ酸配列、または表１および７中の配列内に含まれているアミノ酸配列と少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％以上同一である配列）を有するＶＬドメインのＣＤＲの１つ、２つまたは３つを含むことができる。別の実施形態では、本発明の抗体は、３５６Ａ１１、３５４Ａ０８、０８７Ｂ０３および３６８Ｄ０４から選択された抗体のＶＬドメインのＣＤＲの１つ、２つまたは３つを含む。この実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、
ａ）配列番号１７３または４９７；ｂ）配列番号１７４または４９８；および／またはｃ）配列番号１７５または４９９（０８７Ｂ０３）；
ａ）配列番号２９９または５５１；ｂ）配列番号３００または５５２；および／またはｃ）配列番号３０１または５５３（３５４Ａ０８）；
ａ）配列番号２０９または６２３；ｂ）配列番号２１０または６２４；および／またはｃ）配列番号２１１または６２５（３６８Ｄ０４）；または
ａ）配列番号３５３または６０５；ｂ）配列番号３５４または６０６；および／またはｃ）配列番号３５５または６０７（３５６Ａ１１）
を含む、軽鎖可変領域を含む。
【００１６】
その上さらなる実施形態では、抗体は、例えばＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、または３５６Ａ１１のＶＨドメインのＨ３フラグメントを含み、Ｈ３フラグメントは、表１および７に記載するアミノ酸配列（配列番号１０、２８、４６、６４、８２、１００、１１８、１３６、１５４、１７２、１９０、２０８、２２６、２４４、２６２、２８０、２９８、３１６、３３４、３５２、３７０、３８８、４０６、４２４、４４２、４６０、４７８、４９６、５１４、５３２、５５０、５６８、５８６、６０４、または６２２）、または表１および７に記載するアミノ酸配列と実質的に同一の配列（例えば、表１および７に記載するアミノ酸配列と少なくとも約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％以上同一である配列）を有する。
【００１７】
本発明の抗体は、完全長（例えば、少なくとも１本の完全な重鎖と、少なくとも１本の完全な軽鎖とを含む）である場合もあれば、抗原結合断片（例えば、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、単鎖Ｆｖ断片、Ｆｄ断片またはｄＡｂ断片）のみを含む場合もある。抗体は、カッパ、ラムダ、アルファ、ガンマ、デルタ、イプシロンおよびミューの定常領域遺伝子のうちのいずれかから選択された定常領域またはその一部を含むことができる。例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥを含めた、種々のアイソタイプの重鎖定常領域を使用することができる。軽鎖定常領域は、カッパまたはラムダから選択することができる。抗体は、ＩｇＧであってもよく、ＩｇＧ１κまたはＩｇＧ１γであってもよい。
【００１８】
本明細書に記載する抗ＩＬ−２２抗体は、誘導体化することもできれば、別の機能性分子（別のペプチドまたはタンパク質等（例えば、Ｆａｂ断片））に連結することもできる。例えば、本発明の抗体は、数ある中でも、別の抗体（例えば、二重特異性抗体または多重特異性抗体）、毒素、放射性同位体、細胞傷害剤または細胞分裂阻害剤等、少なくとも１つのその他の分子的実体に、（例えば、化学的結合、遺伝子融合、非共有結合性の会合または別法によって）機能性に連結することができる。
【００１９】
別の態様では、本発明は、少なくとも１種の抗ＩＬ−２２抗体と薬学的に許容される担体とを含有する医薬組成物に注目する。医薬組成物は、少なくとも１種の抗ＩＬ−２２抗体と少なくとも１種の治療剤（例えば、本明細書に、より詳細に記載する、サイトカインおよび増殖因子の阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、細胞傷害剤、細胞増殖抑制剤またはその組合せ）との併用をさらに含むことができる。抗ＩＬ−２２抗体と治療剤との併用もまた、本発明の範囲のうちに入る。本発明の組成物および併用を使用して、例えば、活性化されている可能性が高い、組織局在性の免疫細胞に加えて、これらに限定されないが、膵臓、皮膚、肺、腸、肝臓、腎臓、唾液腺を含めた、多様な組織の上皮細胞および血管内皮の上に位置する受容体を介するＩＬ−２２シグナル伝達を調節することによって、ＩＬ−２２関連炎症性障害を調節することができる。
【００２０】
別の態様では、本発明は、ＩＬ−２２関連障害を有する対象を治療する方法に注目する。この方法は、抗ＩＬ−２２抗体を、免疫細胞の少なくとも１種のＩＬ−２２活性を阻害するのに十分な量で、対象に投与するステップを含み、それによって、ＩＬ−２２関連障害を治療する。
【００２１】
抗ＩＬ−２２抗体は、単独で、または本明細書に記載するその他の治療剤と組み合わせて、対象に投与することができる。対象は、哺乳動物、例えば、ヒトであることができる。例えば、この方法を使用して、自己免疫障害、例として、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、ループス性関節炎または強直性脊椎炎を含む）、強皮症、全身性エリテマトーデス、ＨＩＶ、シェーグレン症候群、血管炎、多発性硬化症、自己免疫性甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎を含む）、重症筋無力症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、大腸炎、糖尿病（Ｉ型）；炎症性状態、例として、皮膚（例えば、乾癬）、心血管系（例えば、アテローム性動脈硬化症）、神経系（例えば、アルツハイマー病）、肝臓（例えば、肝炎）、腎臓（例えば、腎炎）および膵臓（例えば、膵臓炎）；心血管障害、例として、コレステロール代謝障害、酸素フリーラジカルによる損傷、虚血；創傷治癒関連障害；呼吸障害、例として、喘息およびＣＯＰＤ（例えば、嚢胞性線維症）；急性炎症性状態（例えば、内毒血症、セプシスおよび敗血症、毒素ショック症候群および感染症）；移植片拒絶およびアレルギー等、ＩＬ−２２関連障害を有する対象を治療することができる。一実施形態では、ＩＬ−２２関連障害は、関節炎障害、例えば、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎または強直性脊椎炎のうちの１つまたは複数から選択された障害；呼吸障害（例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））；または炎症性状態、例えば、皮膚（例えば、乾癬）、心血管系（例えば、アテローム性動脈硬化症）、神経系（例えば、アルツハイマー病）、肝臓（例えば、肝炎）、腎臓（例えば、腎炎）、膵臓（例えば、膵臓炎）、ならびに胃腸管系臓器、例えば、大腸炎、クローン病およびＩＢＤである。
【００２２】
別の態様では、本発明は、対象の急性期応答を減少させる、阻害する、または低下させる方法に注目する。この方法は、ＩＬ−２２結合剤、例えば、ＩＬ−２２アンタゴニスト（例えば、本明細書に記載する抗ＩＬ−２２抗体またはその断片）を、対象の急性期応答を減少させる、阻害する、または低下させるのに十分な量で、対象に投与するステップを含む。一実施形態では、対象は、哺乳動物、例えば、ＩＬ−２２関連障害を患うヒトであり、ＩＬ−２２関連障害として、例えば、呼吸障害、炎症性障害および自己免疫障害が挙げられる。一実施形態では、ＩＬ−２２結合剤は、局部的に、例えば、外用、皮下、または全身循環性ではないその他の投与方法によって投与する。
【００２３】
別の態様では、ＩＬ−２２結合剤を使用して、免疫応答の型を変えること、および／または対象を免疫化するために使用するワクチン製剤の効力を増加させることができる。例えば、本発明の抗ＩＬ−２２抗体は、免疫化の前、間および／または後に投与して、ワクチンの効力を増加させることができる。一実施形態では、ワクチン製剤は、１種または複数のＩＬ−２２アンタゴニストと、抗原、すなわち、例えば、ウイルス抗原、細菌抗原または腫瘍抗原を含めた免疫原とを含有する。別の実施形態では、ＩＬ−２２アンタゴニストおよび免疫原は、別々に、例えば、それぞれを１時間、３時間、１日または２日以内に投与する。
【００２４】
別の実施形態では、本発明は、試料中のＩＬ−２２の存在をｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて検出するための方法を提供する。試料は、血清、血漿、組織および生検等の生体組織を含むことができる。主題の方法を使用して、本明細書に記載するＩＬ−２２関連障害等の障害を診断することができる。この方法は、（１）試料または対照試料を抗ＩＬ−２２抗体に接触させるステップと、（２）抗ＩＬ−２２抗体と試料または対照試料との間の複合体の形成を検出するステップとを含み、試料中に、対照試料と比較して、複合体の形成において統計的に有意な変化があれば、試料中にＩＬ−２２が存在することが示される。
【００２５】
別の態様では、本発明は、ＩＬ−２２の存在をｉｎ  ｖｉｖｏにおいて検出するための方法（例えば、対象のｉｎ  ｖｉｖｏイメージング）を提供する。この方法を使用して、障害、例えば、本明細書に記載するＩＬ−２２関連障害を診断することができる。この方法は、（１）抗ＩＬ−２２抗体を、当該抗体のＩＬ−２２に対する結合を可能にする条件下で、対象または対照の対象に投与するステップと、（２）当該抗体とＩＬ−２２との間の複合体の形成を検出するステップとを含み、対象において、対照、例えば、対照の対象と比較して、複合体の形成において統計的に有意な変化があれば、ＩＬ−２２が存在することが示される。
【００２６】
当該抗体は、検出可能な物質で直接的または間接的に標識して、結合抗体または未結合抗体の検出を促進することができる。適切な検出可能な物質として、種々の酵素、補欠分子族、蛍光材料、発光材料および放射性材料が挙げられる。
【００２７】
別の態様では、本発明は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、薬剤、例えば、治療剤または細胞傷害剤をＩＬ−２２発現細胞にデリバリーまたはターゲティングするための方法を提供する。この方法は、抗ＩＬ−２２抗体を、当該抗体のＩＬ−２２に対する結合を可能にする条件下で、対象に投与するステップを含む。当該抗体は、毒素等の第２の治療部分と結合することができる。
【００２８】
本開示は、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、および３５６Ａ１１のＶＨドメインおよびＶＬドメインからの核酸配列を提供する。また、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、および３５６Ａ１１からの少なくとも１つのＣＤＲを含む核酸配列も提供する。また、本開示は、そのような核酸を含むベクターおよび宿主細胞も提供する。
【００２９】
本開示は、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、または３５６Ａ１１のＶＨドメインまたはＶＬドメインに由来する、新しいＶＨドメインおよびＶＬドメイン、ならびにそのようなドメインの全部または一部を含む機能性抗体を産生する方法をさらに提供する。
【００３０】
本開示の追加の態様を、一部は、説明に記載するが、一部は、その説明から明らかになるか、本発明を実施することによって理解することができるであろう。本発明を、特許請求の範囲において、説明し、特に指摘するが、本開示を、特許請求の範囲を制限するものであると解釈してはならない。以下の詳細な説明は、本発明の種々の実施形態の典型的な描写を含むが、これは、請求する発明を制限するものではない。付随する図は、本明細書の一部をなし、説明と一緒になって、実施形態を例示するためのみのものであり、本発明を制限するものではない。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３１】
Ｉ．定義
本発明をより容易に理解するために、最初に、特定の用語を定義する。追加の定義は、詳細な説明を通して記載する。
【００３２】
「抗体」という用語は、免疫グロブリンまたはその断片を指し、抗原結合断片または抗原結合ドメインを含むいずれのポリペプチドも包含する。この用語は、これらに限定されないが、ポリクローナル抗体、モノクローナル抗体、単一特異性抗体、多特異性抗体、非特異性抗体、ヒト化抗体、ヒト抗体、単鎖抗体、キメラ抗体、合成抗体、組換え抗体、ハイブリッド抗体、変異抗体、グラフト化抗体およびｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生した抗体を含む。「未変化」のという語が先行しない限り、「抗体」という用語は、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ’）２、Ｆｖ、ｓｃＦｖ、Ｆｄ、ｄＡｂ、および抗原結合機能を保持する、その他の抗体断片を含む。典型的には、そのような断片は、抗原結合ドメインを含むであろう。
【００３３】
「抗原結合ドメイン」および「抗原結合断片」という用語は、抗体と抗原との間の特異的結合に関与するアミノ酸を含む、抗体分子の部分を指し、抗体が、特異的に認識して、結合する抗原の部分は、「エピトープ」と呼ばれる。抗原結合ドメインは、抗体軽鎖可変領域（ＶＬ）および抗体重鎖可変領域（ＶＨ）を含むことができるが、必ずしも両方を含む必要はない。Ｆｄ断片は、例えば、２つのＶＨ領域を有し、しばしば、未変化の抗原結合ドメインの何らかの抗原結合機能を保持する。抗体の抗原結合断片の例として、（１）Ｆａｂ断片、すなわち、ＶＬドメイン、ＶＨドメイン、ＣＬドメインおよびＣＨ１ドメインを有する一価の断片；（２）Ｆ（ａｂ’）２断片、すなわち、ヒンジ領域でジスルフィドの橋によって連結している２つのＦａｂ断片を有する二価の断片；（３）２つのＶＨドメインおよび２つのＣＨ１ドメインを有するＦｄ断片；（４）抗体の単腕のＶＬドメインおよびＶＨドメインを有するＦｖ断片；（５）ｄＡｂ断片（Ｗａｒｄら（１９８９）Ｎａｔｕｒｅ  ３４１：５４４−５４６）、これは、ＶＨドメインを有する；（６）単離された相補性決定領域（ＣＤＲ）；および（７）単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）が挙げられる。Ｆｖ領域の２つのドメインであるＶＬおよびＶＨは、別々の遺伝子がコードするが、これらは、組換え法を使用して、合成リンカーによって結合させることができる。この合成リンカーによって、これらを単一のタンパク質鎖として作製することが可能になり、このタンパク質鎖中では、ＶＬ領域とＶＨ領域とが対になって、一価の分子を形成する（単鎖Ｆｖ（ｓｃＦｖ）として知られる；例えば、Ｂｉｒｄら（１９８８）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２４２：４２３−４２６；およびＨｕｓｔｏｎら（１９８８）Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ  ８５：５８７９−５８８３を参照）。これらの抗体断片は、当業者に既知の従来技術を使用して得られ、これらの断片は、未変化の抗体と同一の様式で、機能について評価される。
【００３４】
「有効量」という用語は、ＩＬ−２２の活性を調節して、臨床症状を改善する、あるいは所望の生物学的結果、例えば、Ｔ細胞および／またはＢ細胞の活性の減少、自己免疫の抑制、移植片拒絶の抑制等を達成するのに十分である投与量または量を指す。
【００３５】
「ヒト抗体」という用語は、例えば、Ｋａｂａｔらによって記載されている配列（Ｋａｂａｔら（１９９１）Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｆｉｆｔｈ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｕ．Ｓ．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ、ＮＩＨ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎ  Ｎｏ．９１−３２４２を参照）を含めた、当技術分野で既知のヒト生殖系列免疫グロブリン配列に実質的に対応する可変領域および定常領域を有する抗体を含む。本発明のヒト抗体は、例えば、ＣＤＲ、特にＣＤＲ３中に、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列がコードしないアミノ酸残基（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおけるランダムまたは部位特異的な変異誘発によって、あるいはｉｎ  ｖｉｖｏにおける体細胞変異によって導入した変異）を含むことができる。当該ヒト抗体は、ヒト生殖系列免疫グロブリン配列がコードしないアミノ酸残基で置換された、少なくとも１、２、３、４または５個の位置を有することができる。
【００３６】
ＩＬ−２２活性およびそれに類するものを「阻害する」またはそれらに「拮抗する」という句は、抗ＩＬ−２２抗体を結合させることによって、ＩＬ−２２の少なくとも１種の活性を低下させること、阻害すること、またはそうでなければ減少させることを指し、低下は、同一の抗体の非存在下でのＩＬ−２２の活性と比較する。活性は、例えば、実施例７および９に記載する技法を含めた、当技術分野で既知のいずれかの技法を使用して測定することができる。阻害またはアンタゴニズムは、ＩＬ−２２ポリペプチドの生物学的活性の完全な排除を必ずしも指し示すとは限らない。活性の低下は、約１０％、２０％、３０％、４０％、５０％、６０％、７０％、８０％または９０％以上であることができる。
【００３７】
「インターロイキン−２２」または「ＩＬ−２２」という用語は、ＩＬ−２２Ｒならびに／またはＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２の受容体複合体に結合することができる、クラスＩＩサイトカイン（これは、哺乳動物性であることができる）を指し、以下の特徴のうちの少なくとも１つを有する：（１）自然に存在する哺乳動物のＩＬ−２２ポリペプチド（完全長または成熟型）またはその断片のアミノ酸配列、例えば、配列番号１（ヒト）もしくは配列番号３（マウス）またはその断片として示すアミノ酸配列；（２）配列番号１もしくはそのアミノ酸３４〜１７９（ヒト）もしくは配列番号３（マウス）またはその断片として示すアミノ酸配列と実質的に同一である、例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるアミノ酸配列；（３）自然に存在する哺乳動物のＩＬ−２２ヌクレオチド配列またはその断片（例えば、配列番号２もしくはヌクレオチド７１から６１０（ヒト）もしくは配列番号４（マウス）またはその断片）がコードするアミノ酸配列；（４）配列番号２もしくはそのヌクレオチド７１から６１０（ヒト）もしくは配列番号４（マウス）またはその断片として示すヌクレオチド配列と実質的に同一である、例えば、少なくとも８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％同一であるヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列；（５）自然に存在するＩＬ−２２ヌクレオチド配列またはその断片、例えば、配列番号２（ヒト）もしくは配列番号４（マウス）またはその断片に縮重するヌクレオチド配列がコードするアミノ酸配列；あるいは（６）上記のヌクレオチド配列のうちの１つと、厳密な条件、例えば、高度に厳密な条件の下で、ハイブリダイズするヌクレオチド配列。ＩＬ−２２は、哺乳動物起源、例えば、ヒトまたはマウスのＩＬ−２２Ｒならびに／またはＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２の受容体複合体に結合することができる。
【００３８】
ヒトＩＬ−２２のヌクレオチド配列および予測されるアミノ酸配列を、配列番号２および配列番号１にそれぞれ示す。成熟ヒトＩＬ−２２のアミノ酸配列は、配列番号１のアミノ酸３４〜１７９に対応する。組換えヒトＩＬ−２２の分析によって、多くの構造ドメインが明らかになる。（Ｎａｇｅｍら（２００２）Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ、１０：１０５１−６２；米国特許出願第２００２／０１８７５１２Ａ１号）。
【００３９】
「ＩＬ−２２活性」という用語は、ＩＬ−２２が細胞上のＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２からなる受容体複合体に結合した結果として、開始または中断する、少なくとも１種の細胞過程を指す。ＩＬ−２２活性は、これらに限定されないが、（１）ＩＬ−２２ＲまたはＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２の受容体複合体（例えば、ヒトＩＬ−１０Ｒ２と一緒のヒトＩＬ−２２ＲまたはヒトＩＬ−１０Ｒ２と一緒でないヒトＩＬ−２２Ｒ）に結合する活性；（２）シグナル伝達分子（例えば、ＪＡＫ−１）と会合する活性；（３）ＳＴＡＴタンパク質（例えば、ＳＴＡＴ５、ＳＴＡＴ３またはその組合せ）のリン酸化を刺激する活性；（４）ＳＴＡＴタンパク質を活性化する活性；ならびに（５）上皮細胞、線維芽細胞または免疫細胞の増殖、分化、エフェクター細胞機能、細胞溶解活性、サイトカイン分泌、生存、またはその組合せを調節する（例えば、増加または減少させる）活性のうちの少なくとも１種を含む。上皮細胞として、これらに限定されないが、皮膚、腸、肝臓および腎臓の細胞が挙げられ、内皮細胞も挙げられる。線維芽細胞として、これに限定されないが、滑膜線維芽細胞が挙げられる。免疫細胞として、ＣＤ８＋Ｔ細胞およびＣＤ４＋Ｔ細胞、ＮＫ細胞、Ｂ細胞、マクロファージ、ならびに巨核球を挙げることができる。ＩＬ−２２活性は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおいて、例えば、実施例２および６に記載するＩＬ−２２受容体阻害アッセイ、実施例９のＧＲＯａ分泌アッセイ、または実施例７のＢＡＦ３増殖アッセイを使用して決定することができる。また、ＩＬ−２２活性は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、例えば、実施例１３に記載する免疫応答または障害の進行をスコア化することによって決定することもできる。
【００４０】
本明細書で使用する場合、「ｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生した抗体」は、可変領域の全部または一部（例えば、少なくとも１つのＣＤＲ）を一連の非免疫細胞（例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏファージディスプレイ、タンパク質チップまたは候補配列を抗原に結合する能力について試験することができる、いずれかのその他の方法）中で産生した抗体を指す。この用語には、免疫細胞中での遺伝子の再構成によって生じる配列は含まれない。
【００４１】
「単離の」という用語は、その自然環境を実質的に有しない分子を指す。例えば、単離タンパク質は、細胞物質および当該単離タンパク質が由来する細胞または組織の源からのその他のタンパク質を実質的に有しない。また、この用語は、単離タンパク質が医薬組成物のために、十分に純粋である；あるいは少なくとも７０〜８０％（ｗ／ｗ）純粋である；または少なくとも８０〜９０％（ｗ／ｗ）純粋である；または少なくとも９０〜９５％（ｗ／ｗ）純粋である；または少なくとも９５％、９６％、９７％、９８％、９９％もしくは１００％（ｗ／ｗ）純粋である調製物も指す。
【００４２】
「パーセント同一な」または「パーセント同一性」という句は、少なくとも２つの異なる配列の間の類似性を指す。このパーセント同一性は、標準的な整列アルゴリズム、例えば、Ａｌｔｓｈｕｌらによって記載されているｔｈｅ  Ｂａｓｉｃ  Ｌｏｃａｌ  Ａｌｉｇｎｍｅｎｔ  Ｔｏｏｌ（ＢＬＡＳＴ）（（１９９０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２１５：４０３−４１０）；Ｎｅｅｄｌｅｍａｎらのアルゴリズム（（１９７０）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、４８：４４４−４５３）；またはＭｅｙｅｒらのアルゴリズム（（１９８８）Ｃｏｍｐｕｔ．Ａｐｐｌ．Ｂｉｏｓｃｉ．、４：１１−１７）によって決定することができる。パラメータのセットは、ギャップペナルティ１２、ギャップ伸長ペナルティ４、およびフレームシフトギャップペナルティ５を用いる、Ｂｌｏｓｕｍ  ６２スコア行列であることができる。また、２つのアミノ酸配列またはヌクレオチド配列の間のパーセント同一性は、Ｅ．ＭｅｙｅｒｓおよびＷ．Ｍｉｌｌｅｒのアルゴリズム（（１９８９）ＣＡＢＩＯＳ、４：１１−１７）を使用して決定することもできる。これは、ＰＡＭ１２０加重残基表、ギャップ長ペナルティ１２、およびギャップペナルティ４を使用するＡＬＩＧＮプログラム（バージョン２．０）に組み入れられている。パーセント同一性は、普通、長さが類似する配列を比較することによって計算する。
【００４３】
「レパートリー」という用語は、少なくとも１種の免疫グロブリンをコードする少なくとも１つの配列から、全部または一部を誘導した少なくとも１つのヌクレオチド配列を指す。この配列（複数の配列）は、重鎖のＶセグメント、ＤセグメントおよびＪセグメント、ならびに軽鎖のＶセグメントおよびＪセグメントのｉｎ  ｖｉｖｏでの再構成によって生じる場合がある。あるいは、この配列（複数の配列）は、再構成が生じる、例えば、ｉｎ  ｖｉｔｒｏでの刺激に応答した細胞から生じる場合もある。あるいは、この配列（複数の配列）の全部または一部を、ＤＮＡスプライシング、ヌクレオチド合成、変異誘発およびその他の方法によって得ることもできる。例えば、米国特許第５５６５３３２号を参照されたい。レパートリーは、１つの配列のみを含む場合もあれば、遺伝子的に多様性のあるコレクション中の配列を含めた、複数の配列を含む場合もある。
【００４４】
「特異的結合」または「特異的に結合する」という用語は、生理的条件下で比較的安定である複合体を形成する２つの分子を指す。特異的結合は、高い親和性、および低いから中等度の容量によって特徴付けられる。これによって、普通、低い親和性を有し、中等度から高い容量を有する非特異的結合とは区別される。典型的には、結合は、結合定数ＫＡが１０６Ｍ−１より高い場合に特異的であるとみなされる。必要であれば、結合条件を変化させることによって、特異的結合に影響を実質的に及ぼすことなく、非特異的結合を低下させることができる。抗体濃度、溶液のイオン強度、温度、結合させる時間、ブロック剤（例えば、血清アルブミン、牛乳カゼイン）の濃度等の適切な結合条件を、当業者であれば、日常の技法を使用して最適化することができる。例示的な条件を、実施例３に記載するが、当業者に既知のその他の条件も、本発明の範囲のうちに入る。
【００４５】
本明細書で使用する場合、「厳密な」という用語は、ハイブリダイゼーションおよび洗浄のための条件を説明する。厳密な条件は、当業者には既知であり、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、Ｎ．Ｙ．（１９８９）、６．３．１−６．３．６中に見い出すことができる。この参照文献には、水性および非水性の方法が記載されており、いずれも使用することができる。厳密なハイブリダイゼーション条件の１つの例は、６×塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム（ＳＳＣ）中、約４５℃でのハイブリダイゼーション後、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、５０℃での少なくとも１回の洗浄である。厳密なハイブリダイゼーション条件の第２の例は、６×ＳＳＣ中、約４５℃でのハイブリダイゼーション後、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、５５℃での少なくとも１回の洗浄である。厳密なハイブリダイゼーション条件の別の例は、６×ＳＳＣ中、約４５℃でのハイブリダイゼーション後、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、６０℃での少なくとも１回の洗浄である。厳密なハイブリダイゼーション条件のさらなる例は、６×ＳＳＣ中、約４５℃でのハイブリダイゼーション後、０．２×ＳＳＣ、０．１％ＳＤＳ中、６５℃での少なくとも１回の洗浄である。高度に厳密な条件は、０．５Ｍリン酸ナトリウム、７％ＳＤＳ中、６５℃でのハイブリダイゼーション後、０．２×ＳＳＣ、１％ＳＤＳ中、６５℃での少なくとも１回の洗浄を含む。
【００４６】
「実質的に記載する」、「実質的に同一の」または「実質的に相同な」という句は、関連のアミノ酸配列またはヌクレオチド配列（例えば、ＣＤＲ（複数のＣＤＲ）、ＶＨドメインまたはＶＬドメイン）が、記載する配列と同一であること、または記載する配列と比較して（アミノ酸の保存的置換によって）ごくわずかな差しか有しないことを意味する。ごくわずかな差として、特定の領域の５個のアミノ酸配列中の１個または２個の置換等、軽微なアミノ酸の変化が挙げられる。抗体の場合、第２の抗体は、第１の抗体とは、同一の特異性を有し、少なくとも５０％の親和性を有する。
【００４７】
また、本明細書に開示する配列と、実質的に同一のまたは相同な配列（例えば、少なくとも約８５％の配列同一性）も、本出願の一部である。いくつかの実施形態では、配列同一性は、約８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％または９９％以上であることができる。あるいは、核酸セグメントが選択的ハイブリダイゼーション条件（例えば、高度に厳密なハイブリダイゼーション条件）下で、相補鎖とハイブリダイズする場合には、実質的な同一性または相同性が存在する。核酸は、全細胞中に、細胞の可溶化液中に、または部分的に精製したもしくは実質的に純粋な形態で存在することができる。
【００４８】
「治療剤」という用語は、医学的障害を治療する、または医学的障害の治療の助けとなる物質である。治療剤として、これらに限定されないが、免疫細胞または免疫応答を、抗ＩＬ−２２抗体のＩＬ−２２活性を補完する様式で調節する物質が挙げられる。治療剤の非限定的な例および使用を、本明細書に記載する。
【００４９】
本明細書で使用する場合、抗ＩＬ−２２抗体の「治療有効量」は、対象（ヒト患者等）への単回または多回の投与時に、障害または再発障害の少なくとも１つの症状を治療する、予防する、治癒する、遅延させる、重症度を低減する、および／または改善する、あるいはそのような治療を施さない場合に予想される生存を超えて対象の生存を延長させるのに効果を示す抗体の量を指す。
【００５０】
「治療」という用語は、治療的または予防的な手段を指す。治療は、障害または再発障害の１つまたは複数の症状を予防する、治癒する、遅延させる、重症度を低減する、および／または改善するために、あるいはそのような治療を施さない場合に予想される生存を超えて対象の生存を延長させるために、医学的障害を有する、またはそのような障害を最終的に患う恐れのある対象に投与することができる。
【００５１】
ＩＩ．抗ＩＬ−２２抗体
本開示は、新規な抗原結合断片を含む、新規な抗ＩＬ−２２抗体を提供する。
【００５２】
抗体またはその抗原結合断片を得るために、当業者に既知の多数の方法が利用可能である。例えば、抗体を、組換えＤＮＡ法（米国特許第４８１６５６７号）を使用して産生することができる。また、モノクローナル抗体を、既知の方法に従って、ハイブリドーマの生成（例えば、ＫｏｈｌｅｒおよびＭｉｌｓｔｅｉｎ（１９７５）Ｎａｔｕｒｅ、２５６：４９５−４９９を参照）によって産生することもできる。この様式で形成したハイブリドーマを、次いで、酵素結合免疫吸着測定法（ＥＬＩＳＡ）および表面プラズモン共鳴（ＢＩＡＣＯＲＥ（商標））解析等の標準的な方法を使用してスクリーニングし、特定の抗原に特異的に結合する抗体を産生する１種または複数のハイブリドーマを同定する。免疫原として、特定の抗原のいずれかの形態、例えば、組換え抗原、自然に存在する形態、そのいずれかの変異体または断片、およびその抗原性ペプチドを使用することができる。
【００５３】
抗体を作製する１つの例示的な方法として、タンパク質発現ライブラリー、例えば、ファージまたはリボゾームのディスプレイライブラリーのスクリーニングが挙げられる。ファージディスプレイは、例えば、Ｌａｄｎｅｒら、米国特許第５２２３４０９号；Ｓｍｉｔｈ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２８：１３１５−１３１７；Ｃｌａｃｋｓｏｎら（１９９１）Ｎａｔｕｒｅ、３５２：６２４−６２８；Ｍａｒｋｓら（１９９１）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．、２２２：５８１−５９７；ＷＯ９２／１８６１９；ＷＯ９１／１７２７１；ＷＯ９２／２０７９１；ＷＯ９２／１５６７９；ＷＯ９３／０１２８８；ＷＯ９２／０１０４７；ＷＯ９２／０９６９０；およびＷＯ９０／０２８０９に記載されている。
【００５４】
ディスプレイライブラリーの使用に加えて、特定の抗原を使用して、非ヒト動物、例えば、げっ歯類、例として、マウス、ハムスターまたはラットを免疫化することができる。一実施形態では、非ヒト動物は、ヒト免疫グロブリン遺伝子の少なくとも一部を含む。例えば、マウス抗体の産生を欠損したマウスの系統を、ヒトＩｇ遺伝子座の大きな断片を用いて操作することが可能である。ハイブリドーマ技術を使用して、所望の特異性を有する遺伝子から誘導した抗原特異的モノクローナル抗体を産生かつ選択することができる。例えば、ＸＥＮＯＭＯＵＳＥ（商標）、Ｇｒｅｅｎら（１９９４）Ｎａｔｕｒｅ  Ｇｅｎｅｔｉｃｓ  ７：１３−２１、ＵＳ２００３−００７０１８５、ＷＯ９６／３４０９６、１９９６年１０月３１日公開、およびＰＣＴ出願ＰＣＴ／ＵＳ９６／０５９２８、１９９６年４月２９出願を参照されたい。
【００５５】
別の実施形態では、モノクローナル抗体を、非ヒト動物から得、次いで、修飾抗体、例えば、ヒト化抗体、脱免疫化抗体、キメラ抗体を、当技術分野で既知の組換えＤＮＡ技術を使用して産生することができる。キメラ抗体を作製するための多様なアプローチが、記載されている。例えば、Ｍｏｒｒｉｓｏｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．８１：６８５１、１９８５；Ｔａｋｅｄａら、Ｎａｔｕｒｅ  ３１４：４５２、１９８５年、Ｃａｂｉｌｌｙら、米国特許第４８１６５６７号；Ｂｏｓｓら、米国特許第４８１６３９７号；Ｔａｎａｇｕｃｈｉら、欧州特許公開第１７１４９６号；欧州特許公開第０１７３４９４号、英国特許第２１７７０９６Ｂ号を参照されたい。また、例えば、ヒトの重鎖および軽鎖の遺伝子を発現するが、内因性のマウス免疫グロブリンの重鎖および軽鎖の遺伝子を発現することができない遺伝子導入マウスを使用して、ヒト化抗体を産生することも可能である。Ｗｉｎｔｅｒは、典型的なＣＤＲグラフト化方法を記載しており、これを使用して、本明細書に記載するヒト化抗体を調製することができる（米国特許第５２２５５３９号）。特定のヒト抗体のＣＤＲの全部を、非ヒトＣＤＲの少なくとも一部で置換することもできるし、ＣＤＲの一部のみを非ヒトＣＤＲで置換することもできる。ヒト化抗体が所定の抗原に結合するのに要求される数のＣＤＲを置換することだけが必要である。
【００５６】
ヒト化抗体またはその断片は、抗原結合に直接的には関与しないＦｖ可変ドメインの配列を、ヒトＦｖ可変ドメインからの同等な配列で置換することによって産生することができる。ヒト化抗体またはその断片を産生するための典型的な方法が、Ｍｏｒｒｉｓｏｎ（１９８５）Ｓｃｉｅｎｃｅ  ２２９：１２０２−１２０７；Ｏｉら（１９８６）ＢｉｏＴｅｃｈｎｉｑｕｅｓ  ４：２１４；ならびにＵＳ５，５８５，０８９；ＵＳ５，６９３，７６１；ＵＳ５，６９３，７６２；ＵＳ５，８５９，２０５；およびＵＳ６，４０７，２１３によって提供されている。これらの方法は、重鎖または軽鎖のうちの少なくとも１つからの免疫グロブリンＦｖ可変ドメインの全部または一部をコードする核酸配列を、単離するステップと、操作するステップと、発現させるステップとを含む。そのような核酸は、上記に記載したように、所定の標的に対する抗体を産生するハイブリドーマから、およびその他の源から得ることができる。次いで、ヒト化抗体分子をコードする組換えＤＮＡを、適切な発現ベクターにクローン化することができる。
【００５７】
特定の実施形態では、ヒト化抗体は、保存的置換、コンセンサス配列置換、生殖系列置換および／または逆突然変異の導入によって最適化される。そのような変化させた免疫グロブリン分子は、当技術分野で既知のいくつかの技法のうちのいずれかによって作製することもできるし（例えば、Ｔｅｎｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．、８０：７３０８−７３１２、１９８３；Ｋｏｚｂｏｒら、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ  Ｔｏｄａｙ、４：７２７９、１９８３；Ｏｌｓｓｏｎら、Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．、９２：３−１６、１９８２）、ＰＣＴ公開ＷＯ９２／０６１９３またはＥＰ０２３９４００の教示に従って作製することもできる。
【００５８】
また、抗体またはその断片は、ヒトＴ細胞エピトープの特異的な欠失によって修飾することもできるし、ＷＯ９８／５２９７６およびＷＯ００／３４３１７に開示されている方法によって「脱免疫化」することもできる。手短にいうと、抗体の重鎖可変ドメインおよび軽鎖可変ドメインを、ＭＨＣクラスＩＩに結合するペプチドについて分析することができる。これらのペプチドは、（ＷＯ９８／５２９７６およびＷＯ００／３４３１７で定義される）可能なＴ細胞エピトープである。可能なＴ細胞エピトープの検出のためには、「ペプチドスレディング」と呼ばれるコンピュータモデリングのアプローチを適用することができ、さらに、ＷＯ９８／５２９７６およびＷＯ００／３４３１７に記載されるように、ヒトＭＨＣクラスＩＩ結合ペプチドのデータベースを、ＶＨ配列およびＶＬ配列中に存在するモチーフについて検索することができる。これらのモチーフは、１８種の主要ＭＨＣクラスＩＩ  ＤＲアロタイプのうちのいずれかに結合し、したがって、可能なＴ細胞エピトープを構成する。可変ドメイン中の少数のアミノ酸残基を置換することによって、好ましくは、単一アミノ酸置換によって、検出した可能なＴ細胞エピトープを除去することができる。典型的には、保存的置換を作製する。常ではないが、しばしば、ヒト生殖系列抗体配列中の所与の位置に共通するアミノ酸を使用することができる。ヒト生殖系列配列は、例えば、Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７７６−７９８；Ｃｏｏｋ，Ｇ．Ｐ．ら（１９９５）Ｉｍｍｕｎｏｌ．Ｔｏｄａｙ  Ｖｏｌ．１６（５）：２３７−２４２；Ｃｈｏｔｈｉａ，Ｄ．ら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９−８１７；およびＴｏｍｌｉｎｓｏｎら（１９９５）ＥＭＢＯ  Ｊ．１４：４６２８−４６３８に開示されている。（Ｔｏｍｌｉｎｓｏｎ，Ｉ．Ａ．ら、ＭＲＣ  Ｃｅｎｔｒｅ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、Ｃａｍｂｒｉｄｇｅ、英国が編集した）Ｖ  ＢＡＳＥ登録簿が、ヒト免疫グロブリン可変領域配列の包括的な登録簿を提供している。これらの配列を、例えば、フレームワーク領域およびＣＤＲについてのヒト配列の源として使用することができる。また、例えば、米国特許第６３０００６４号に記載されているように、ヒトのコンセンサスフレームワーク領域も使用することができる。
【００５９】
特定の実施形態では、抗体は、変化させた免疫グロブリンの定常領域またはＦｃ領域を含有することができる。例えば、本明細書の教示に従って産生した抗体は、補体および／またはＦｃ受容体等のエフェクター分子に、より強力に、またはより特異的に結合することができる。これらのエフェクター分子は、エフェクター細胞活性、細胞溶解、補体仲介活性、抗体クリアランス、および抗体半減期等、抗体のいくつかの免疫機能を制御することができる。抗体（例えば、ＩｇＧ抗体）のＦｃ領域に結合する、典型的なＦｃ受容体として、これらに限定されないが、ＦｃγＲＩ、ＦｃγＲＩＩおよびＦｃγＲＩＩＩ、ならびにＦｃＲｎサブクラスの受容体が挙げられ、これらの受容体の対立遺伝子の変異体および選択的にスプライシングされた形態も含まれる。Ｆｃ受容体は、ＲａｖｅｔｃｈおよびＫｉｎｅｔ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ  ９：４５７−９２、１９９１；Ｃａｐｅｌら、Ｉｍｍｕｎｏｍｅｔｈｏｄｓ  ４：２５−３４，１９９４；ならびにｄｅ  Ｈａａｓら、Ｊ．Ｌａｂ．Ｃｌｉｎ．Ｍｅｄ．１２６：３３０−４１、１９９５に概説されている。
【００６０】
抗体産生の追加の技法については、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｈａｒｌｏｗら編、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、１９８８を参照されたい。本発明は、抗体のいずれかの特定の源、産生方法、およびその他の特有の特徴に必ずしも限定されるとは限らない。
【００６１】
抗体は、また、免疫グロブリンとしても知られ、典型的には、それぞれが約２５ｋＤａの２つの軽（Ｌ）鎖、およびそれぞれが約５０ｋＤａの２つの重（Ｈ）鎖からなる、四量体のグリコシル化タンパク質である。ラムダおよびカッパと呼ばれる、２種類の軽鎖を、抗体中に見い出すことができる。重鎖の定常ドメインのアミノ酸配列によって、免疫グロブリンは、Ａ、Ｄ、Ｅ、ＧおよびＭの５種の主要なクラスに割り当てることができ、これらのうちのいくつかは、サブクラス（アイソタイプ）、例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４、ＩｇＡ１およびＩｇＡ２にさらに分類することもできる。各軽鎖は、Ｎ末端可変（Ｖ）ドメイン（ＶＬ）、および定常（Ｃ）ドメイン（ＣＬ）を含む。各重鎖は、Ｎ末端Ｖドメイン（ＶＨ）、３つまたは４つのＣドメイン（ＣＨ）、およびヒンジ領域を含む。ＶＨに最も近位にあるＣＨドメインは、ＣＨ１と呼ばれる。ＶＨドメインおよびＶＬドメインは、フレームワーク領域と呼ばれる比較的保存された配列の４つの領域（ＦＲ１、ＦＲ２、ＦＲ３およびＦＲ４）からなり、これらが、超可変配列の３つの領域（相補性決定領域、ＣＤＲ）のための骨格を形成する。ＣＤＲは、抗体の抗原との特異的な相互作用に関与する残基の大部分を含有する。ＣＤＲは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２およびＣＤＲ３と呼ばれる。したがって、重鎖上のＣＤＲ成分は、Ｈ１、Ｈ２およびＨ３と呼ばれ、一方、軽鎖上のＣＤＲ成分は、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３と呼ばれる。
【００６２】
ＣＤＲ３が、典型的には、抗体結合部位内の分子多様性の最大の源である。Ｈ３は、例えば、２個のアミノ酸残基と短い場合もあれば、２６個超のアミノ酸である場合もある。免疫グロブリンの異なるクラスのサブユニットの構造および三次元立体配置は、当技術分野では周知である。抗体の構造の概説については、Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｈａｒｌｏｗら編、１９８８を参照されたい。各サブユニットの構造、例えば、ＣＨ、ＶＨ、ＣＬ、ＶＬ、ＣＤＲ、ＦＲの構造が、活性のある断片、例えば、抗原に結合するＶＨ、ＶＬまたはＣＤＲのサブユニットの部分、すなわち、抗原結合断片、あるいは、例えば、Ｆｃ受容体および／もしくは補体に結合する、ならびに／またはＦｃ受容体および／もしくは補体を活性化するＣＨサブユニットの部分を含むことを、当業者であれば認識するであろう。ＣＤＲは、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、ＵＳ  Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  ａｎｄ  Ｈｕｍａｎ  Ｓｅｒｖｉｃｅｓ（１９９１）、Ｋａｂａｔら編に記載されているように、典型的には、ＫａｂａｔのＣＤＲと呼ばれる。抗原結合部位を特徴付けるための別の標準は、Ｃｈｏｔｈｉａによって記載されている超可変ループを参照するものである。例えば、Ｃｈｏｔｈｉａ、Ｄ．ら（１９９２）Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．２２７：７９９−８１７；およびＴｏｍｌｉｎｓｏｎら（１９９５）ＥＭＢＯ  Ｊ．１４：４６２８−４６３８を参照されたい。さらに別の標準は、Ｏｘｆｏｒｄ  ＭｏｌｅｃｕｌａｒのＡｂＭ抗体モデリングソフトウェアが使用するＡｂＭの定義である。一般的には、例えば、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｓｅｑｕｅｎｃｅ  ａｎｄ  Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ  Ａｎａｌｙｓｉｓ  ｏｆ  Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｖａｒｉａｂｌｅ  Ｄｏｍａｉｎｓ．Ｉｎ：Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ  Ｌａｂ  Ｍａｎｕａｌ（Ｄｕｅｂｅｌ，Ｓ．およびＫｏｎｔｅｒｍａｎｎ，Ｒ．編、Ｓｐｒｉｎｇｅｒ−Ｖｅｒｌａｇ、Ｈｅｉｄｅｌｂｅｒｇ）を参照されたい。ＫａｂａｔのＣＤＲに関して記載した実施形態は、Ｃｈｏｔｈｉａの超可変ループまたはＡｂＭ定義ループに関して記載された同様の関係を使用して、別途、実行することができる。
【００６３】
Ｆａｂ断片（Ｆｒａｇｍｅｎｔ  ａｎｔｉｇｅｎ−ｂｉｎｄｉｎｇ）は、定常領域の間のジスルフィド結合によって共有結合性に連結している、ＶＨ〜ＣＨ１のドメインとＶＬ〜ＣＬのドメインとからなる。ＦＶ断片は、より小型で、非共有結合性に連結しているＶＨドメインとＶＬドメインとからなる。非共有結合性に連結しているドメインが解離する傾向を克服するために、単鎖ＦＶ断片（ｓｃＦＶ）を構築することができる。ｓｃＦＶは、（１）ＶＨのＣ末端をＶＬのＮ末端に連結する、または（２）ＶＬのＣ末端をＶＨのＮ末端に連結する柔軟性のあるペプチドを含有する。１５アミノ酸長の（Ｇｌｙ４Ｓｅｒ）３のペプチドをリンカーとして使用することができるが、その他のリンカーも当技術分野で既知である。
【００６４】
組立ておよび体細胞変異の後では、抗体遺伝子の配列は、高度に変化に富み、これらの変化に富む遺伝子は、１０１０種の異なる抗体分子をコードすると推定される（Ｉｍｍｕｎｏｇｌｏｂｕｌｉｎ  Ｇｅｎｅｓ、２ｎｄ  ｅｄ．、Ｊｏｎｉｏら編、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ、Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、ＣＡ、１９９５）。
【００６５】
「二重特異性」または「二機能性抗体」は、２つの異なる重鎖／軽鎖の対および２つの異なる結合部位を有する、人工的なハイブリッド抗体である。二重特異性抗体は、ハイブリドーマの融合またはＦａｂ’断片の連結を含めた、多様な方法によって産生することができる。例えば、Ｓｏｎｇｓｉｖｉｌａｉ  ＆  Ｌａｃｈｍａｎｎ、Ｃｌｉｎ．Ｅｘｐ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．７９：３１５−３２１（１９９０）；Ｋｏｓｔｅｌｎｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１４８、１５４７−１５５３（１９９２）を参照されたい。一実施形態では、二重特異性抗体は、Ｆａｂ’断片等、第１の結合ドメインポリペプチドと、これに免疫グロブリン定常領域を介して連結している第２の結合ドメインポリペプチドとを含む。
【００６６】
Ｓｍａｌｌ  Ｍｏｄｕｌａｒ  ＩｍｍｕｎｏＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ（ＳＭＩＰ（商標））は、結合ドメインポリペプチドを含む変異分子の例を提供する。ＳＭＩＰならびにその使用および適用が、例えば、米国公開特許出願第２００３／０１１８５９２号、第２００３／０１３３９３９号、第２００４／００５８４４５号、第２００５／０１３６０４９号、第２００５／０１７５６１４号、第２００５／０１８０９７０号、第２００５／０１８６２１６号、第２００５／０２０２０１２号、第２００５／０２０２０２３号、第２００５／０２０２０２８号、第２００５／０２０２５３４号、および第２００５／０２３８６４６号、ならびにそれらに関連する特許のファミリーメンバーに開示されている。これらのすべての全内容が、参照によって本明細書に組み入れられている。
【００６７】
ＳＭＩＰ（商標）は、典型的には、結合ドメイン−免疫グロブリンの融合タンパク質を指す。これは、結合ドメインポリペプチドを含み、これには、免疫グロブリンのヒンジ領域またはヒンジ作用領域のポリペプチドが融合または別法により接続しており、次に、これには、免疫グロブリン重鎖からの生来のまたは操作した、ＣＨ１以外の、１つまたは複数の定常領域、例えば、ＩｇＧおよびＩｇＡのＣＨ２領域およびＣＨ３領域、またはＩｇＥのＣＨ３領域およびＣＨ４領域を含む領域が融合または別法により接続している（より完全な説明については、例えば、参照によって組み入れられている、Ｌｅｄｂｅｔｔｅｒ，Ｊ．らによるＵ．Ｓ．２００５／０１３６０４９を参照）。結合ドメイン−免疫グロブリンの融合タンパク質は、生来のまたは操作した免疫グロブリン重鎖のＣＨ２定常領域ポリペプチド（またはＩｇＥからの全部もしくは一部に由来する構築物の場合にはＣＨ３）を含む領域をさらに含むことができる。これには、ヒンジ領域ポリペプチドおよび生来のまたは操作した免疫グロブリン重鎖のＣＨ３定常領域ポリペプチド（またはＩｇＥからの全部もしくは一部に由来する構築物の場合にはＣＨ４）が融合または別法により接続しており、これには、ＣＨ２定常領域ポリペプチド（またはＩｇＥからの全部もしくは一部に由来する構築物の場合にはＣＨ３）が融合または別法により接続している。典型的には、そのような結合ドメイン−免疫グロブリンの融合タンパク質は、抗体依存性細胞媒介性細胞傷害、補体結合および／または標的、例えば、ヒトＩＬ−２２等の標的抗原に対する結合からなる群から選択された少なくとも１種の免疫学的活性の能力がある。
【００６８】
治療的タンパク質、すなわち、それが作用する体内の領域上に、またはそれが仲介物を介して間接的に作用する体の領域上に生物学的効果をもたらすタンパク質またはペプチドもまた、本発明を実施するのに有用である。治療的タンパク質は、ペプチド模倣薬を含むことができる。模倣薬は、タンパク質の二次構造の要素を模倣するペプチド含有分子である。例えば、参照によって本明細書に組み入れられている、Ｊｏｈｎｓｏｎら、「Ｐｅｐｔｉｄｅ  Ｔｕｒｎ  Ｍｉｍｅｔｉｃｓ」ｉｎ  ＢＩＯＴＥＣＨＮＯＬＯＧＹ  ＡＮＤ  ＰＨＡＲＭＡＣＹ、Ｐｅｚｚｕｔｏら編、Ｃｈａｐｍａｎ  ａｎｄ  Ｈａｌｌ、Ｎｅｗ  Ｙｏｒｋ（１９９３）を参照されたい。ペプチド模倣薬の使用の裏にある論拠は、タンパク質のペプチド骨格が、主として、抗体と抗原との相互作用等、分子相互作用を促進するようにアミノ酸の側鎖を方向付けるために存在するという点に基づく。ペプチド模倣薬が、天然の分子に類似する分子相互作用を可能にすることが予想される。これらの原理を使用して、変化し、かつおそらく改善されている特徴と共に、本明細書に開示するターゲティングペプチドの天然の特性のうちの多くを有する第二世代の分子を操作することができる。
【００６９】
治療的タンパク質のその他の実施形態は、融合タンパク質を含む。これらの分子は、一般的に、ターゲティングペプチド、例えば、ＩＬ−２２または抗ＩＬ−２２抗体の全部またはかなりの部分と、これにＮ末端またはＣ末端で連結している、第２のポリペプチドまたはタンパク質の全部または一部とを有する。例えば、融合は、異種の宿主におけるタンパク質の組換え発現を可能にする、その他の種からのリーダー配列を利用することができる。別の有用な融合は、抗体エピトープ等、免疫学的に活性のあるドメインを添加して、融合タンパク質の精製を促進することを含む。切断部位を融合の接点に、またはその付近に含めると、精製後の外因性のポリペプチドの除去が促進されるであろう。その他の有用な融合は、酵素からの活性部位等の機能性ドメイン、グリコシル化ドメイン、細胞ターゲティングシグナル、または膜貫通領域を含む。融合タンパク質に組み入れることができるタンパク質またはペプチドの例として、細胞分裂阻害タンパク質、細胞破壊タンパク質、アポトーシス促進剤、抗血管新生剤、ホルモン、サイトカイン、増殖因子、ペプチド薬、抗体、抗体のＦａｂ断片、抗原、受容体タンパク質、酵素、レクチン、ＭＨＣタンパク質、細胞接着タンパク質および細胞結合タンパク質が挙げられる。融合タンパク質を産生する方法は、当業者には周知である。そのようなタンパク質は、例えば、二機能性の架橋結合試薬を使用して化学的に結合させることによって、完全な融合タンパク質を新規に合成することによって、またはターゲティングペプチドをコードするＤＮＡ配列を、第２のペプチドまたはタンパク質をコードするＤＮＡ配列に結合させ、次いで、未変化の融合タンパク質を発現せることによって産生することができる。
【００７０】
一実施形態では、ターゲティングペプチド、例えば、ＩＬ−２２または抗ＩＬ−２２抗体を、Ｆｃ断片等、２つの定常領域ドメインおよびヒンジ領域を含有するが、可変領域は欠く、免疫グロブリン重鎖定常領域と融合させる（参照によって本明細書に組み入れられている、米国特許第６０１８０２６号および第５７５０３７５号を参照）。Ｆｃ領域は、自然に存在するＦｃ領域であってもよいし、変化させて、治療の質、循環時間、低下した凝集等の特定の質を改善させてもよい。Ｆｃ領域に融合させたペプチドおよびタンパク質は、典型的には、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいて、未融合の対応物よりも長い半減期を示す。また、Ｆｃ領域への融合は、融合ポリペプチドの二量体化／多量体化を可能にする。
【００７１】
当業者には既知のＶＨＨ分子（またはナノボディ）は、参照によって本明細書に組み入れられているＷＯ９４０４６７８に記載されているラクダ科に由来するもの等、軽鎖を自然に欠く免疫グロブリンに由来する重鎖可変ドメインである。そのようなＶＨＨ分子は、ラクダ科の種、例えば、ラクダ、ラマ、ヒトコブラクダ、アルパカおよびグアナコ中で産生させた抗体から誘導することができ、時には、ラクダ科可変ドメインまたはラクダ化可変ドメインと呼ばれる。例えば、参照によって本明細書に組み入れられている、Ｍｕｙｌｄｅｒｍａｎｓ．、Ｊ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（２００１）７４（４）：２７７−３０２を参照されたい。ラクダ科以外のその他の種も、軽鎖を自然に欠く重鎖抗体を産生する場合がある。ＶＨＨ分子は、ＩｇＧ分子の約１０分の１の大きさである。これらは、単一のポリペプチドであり、非常に安定で、極端なｐＨおよび温度の条件に抵抗する。さらに、これらは、従来の抗体とは異なり、プロテアーゼの作用にも抵抗性である。さらに、ＶＨＨのｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける発現は、高収率で、適切に折り畳まれた機能性のＶＨＨを産生する。その上、ラクダ科中で産生された抗体は、ｉｎ  ｖｉｔｒｏにおける抗体ライブラリーの使用によって、またはラクダ科以外の哺乳動物の免疫化を介して産生された抗体が認識するエピトープ以外のエピトープを認識するであろう（参照によって本明細書に組み入れられている、ＷＯ９７４９８０５を参照）。
【００７２】
本発明の一態様は、ＩＬ−２２に結合する抗体および抗原結合断片を含む。本開示は、ヒト免疫グロブリン遺伝子ライブラリーに由来する、新規なＣＤＲを提供する。ＣＤＲを運ぶための構造は、一般的に、抗体の重鎖または軽鎖あるいはその断片であり、そこでは、ＣＤＲは、自然のＣＤＲ領域に位置する。可変ドメインの構造および位置は、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｎｏ．９１−３２４２、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１）の記載に従って決定することができる。
【００７３】
本発明の抗ＩＬ−２２抗体の例示的な実施形態のＤＮＡ配列およびアミノ酸（ＡＡ）配列は、そのｓｃＦＶ断片、ＶＨドメインおよびＶＬドメインならびにＣＤＲを含めて、図７〜１０に記載し、表１〜７に列挙する。非生殖系列化抗体の２０個の特異的な実施形態が、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、および３５６Ａ１１として同定される。非生殖系列化抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメイン中のＣＤＲの位置を、表２に列挙する。生殖系列化抗体の１５個の特異的な実施形態が、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０６２Ａ０９、０８７Ｂ０３、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、３５６Ａ１１、および３６８Ｄ０４として同定される。
【００７４】
表１Ａ：非生殖系列化抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメイン、Ｆｖ、ならびにＣＤＲのアミノ酸配列およびヌクレオチド配列
【表１】
2009528288.tif 000003
【００７５】
表１Ｂ：非生殖系列化抗体のＶＨドメインおよびＶＬドメイン、Ｆｖ、ならびにＣＤＲのアミノ酸配列およびヌクレオチド配列
【表２】
2009528288.tif 000004
【００７６】
表２：ＶＨドメインおよびＶＬドメインの非生殖系列化抗体アミノ酸配列内のＣＤＲの位置
【表３】
2009528288.tif 000005
【００７７】
本発明の抗ＩＬ−２２抗体は、所望により、抗体の定常領域またはその部分を含むことができる。例えば、ＶＬドメインは、そのＣ末端側終端で、ＣκまたはＣλのような軽鎖定常ドメインに結合することができる。同様に、ＶＨドメインまたはその一部は、ＩｇＡ、ＩｇＤ、ＩｇＥ、ＩｇＧおよびＩｇＭならびにいずれかのアイソタイプサブクラスのような重鎖の全部または一部に結合することができる。定常領域は、当技術分野では既知である（例えば、Ｋａｂａｔら、Ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ  ｏｆ  Ｐｒｏｔｅｉｎｓ  ｏｆ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｉｃａｌ  Ｉｎｔｅｒｅｓｔ、Ｎｏ．９１−３２４２、Ｎａｔｉｏｎａｌ  Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅｓ  ｏｆ  Ｈｅａｌｔｈ  Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ、Ｂｅｔｈｅｓｄａ、ＭＤ（１９９１）を参照）。したがって、本発明の範囲のうちの抗体は、当技術分野で既知の定常領域と組み合わせた、ＶＨドメインおよびＶＬドメインまたはその部分を含む。
【００７８】
特定の実施形態は、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、または３５６Ａ１１からのＦＶ断片のＶＨドメイン、ＶＬドメインまたはその組合せを含む。別の実施形態は、３５６Ａ１１、３５４Ａ０８、０８７Ｂ０３および３６８Ｄ０４から選択された抗体からのＦＶ断片のＶＨドメイン、ＶＬドメインまたはその組合せを含む。さらなる実施形態は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインからの１つ、２つ、３つ、４つ、５つまたは６つ相補性決定領域（ＣＤＲ）を含む。ＣＤＲ配列が配列番号５−１３、２３−３１、４１−４９、５９−６７、７７−８５、９５−１０３、１１３−１２１、１３１−１３９、１４９−１５７、１６７−１７５、１８５−１９３、２０３−２１１、２２１−２２９、２３９−２４７、２５７−２６５、２７５−２８３、２９３−３０１、３１１−３１９、３２９−３３７、３４７−３５５、３６５−３７３、３８３−３９１、４０１−４０９、４１９−４２７、４３７−４４５、４５５−４６３、４７３−４８１、４９１−４９９、５０９−５１７、５２７−５３５、５４５−５５３、５６３−５７１、５８１−５８９、５９９−６０７または６１７−６２５のうちに含まれる抗体は、本発明の範囲のうちに包含される。例えば、一実施形態では、抗体は、生殖系列化したまたは生殖系列化していないＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、または３５６Ａ１１の、あるいは３５６Ａ１１、３５４Ａ０８、０８７Ｂ０３および３６８Ｄ０４から選択された抗体からのＶＨドメインのＨ３断片を含む。
【００７９】
特定の実施形態では、ＶＨドメインおよび／またはＶＬドメインは、生殖系列化することができる、すなわち、これらのドメインのフレームワーク領域（ＦＲ）を、従来の分子生物学の技法を使用して変異させて、生殖系列細胞が産生するものに一致させる。その他の実施形態では、ＦＲ配列は、生殖系列コンセンサス配列からはずれた状態を維持する。本発明の一実施形態では、生殖系列化抗体を、表７に示す。
【００８０】
一実施形態では、本発明は、生殖系列化したＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、または３５６Ａ１１についてのアミノ酸配列および核酸配列を提供する。生殖系列化したＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０６２Ａ０９、０８７Ｂ０３、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４のＶＨドメインについてのアミノ酸配列およびヌクレオチド配列を、表７および図８に示す。また、生殖系列化したＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０６２Ａ０９、０８７Ｂ０３、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４のＶＬドメインについてのアミノ酸配列およびヌクレオチド配列も、表７および図８に示す。
【００８１】
一実施形態では、変異誘発を使用して、１つまたは複数の生殖系列配列により類似する抗体を作製する。これは、体細胞変異誘発またはエラープローンＰＣＲによって、抗体のフレームワーク領域内に変異を導入する場合に、望ましいことがある。ＶＨドメインおよびＶＬドメインについての生殖系列配列は、ＶＢＡＳＥデータベース（ＭＲＣ  Ｃｅｎｔｅｒ  ｆｏｒ  Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、英国）に対してアミノ酸配列および核酸配列の整列化を行うことによって同定することができる。ＶＢＡＳＥは、千を超える公開されている配列から編集したすべてのヒト生殖系列可変領域配列の包括的な登録簿であり、これには、ＧｅｎｂａｎｋおよびＥＭＢＬのデータベースライブラリーの最近になって発表されている配列中のものも含まれる。いくつかの実施形態では、ｓｃＦｖのＦＲ領域は、ＶＢＡＳＥデータベース中の最も近い配列に一致するように変異させ、ＣＤＲ領域は、未変化の状態に保つ。
【００８２】
特定の実施形態では、本発明の抗体は、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、または３５６Ａ１１が認識するエピトープと同一であるエピトープと特異的に反応し、それによって、それらは、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、または３５６Ａ１１のヒトＩＬ−２２に対する結合を競合的に阻害する。そのような抗体は、競合結合アッセイ中で決定することができる。一実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、３６８Ｄ０４が認識するＩＬ−２２のエピトープに結合し、それによって、当該抗体は、３６８Ｄ０４のヒトＩＬ−２２に対する結合を競合的に阻害する。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、３５６Ａ１１が認識するＩＬ−２２のエピトープに結合し、それによって、当該抗体は、３５６Ａ１１のヒトＩＬ−２２に対する結合を競合的に阻害する。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、３５４Ａ０８が認識するＩＬ−２２のエピトープに結合し、それによって、当該抗体は、３５４Ａ０８のヒトＩＬ−２２に対する結合を競合的に阻害する。別の実施形態では、抗体またはその抗原結合断片は、０８７Ｂ０３が認識するＩＬ−２２のエピトープに結合し、それによって、当該抗体は、０８７Ｂ０３のヒトＩＬ−２２に対する結合を競合的に阻害する。一実施形態では、これらの抗体のヒトＩＬ−２２に対する結合定数（ＫＡ）は、少なくとも１０６Ｍ−１である。別の実施形態では、これらの抗体のヒトＩＬ−２２に対する結合定数は、少なくとも１０９Ｍ−１である。その他の実施形態では、これらの抗体のヒトＩＬ−２２に対する結合定数は、少なくとも１０１０Ｍ−１、少なくとも１０１１Ｍ−１または少なくとも１０１２Ｍ−１である。結合親和性は、ＥＬＩＳＡ、生体分子特異的相互作用の解析等のバイオセンサー技術、または本出願に記載するものを含めた、その他の技法等、当技術分野で既知の技法を使用して決定することができる。
【００８３】
本発明の抗体は、例えば、ＩＬ−２２の全部または一部を含む、組換えタンパク質等のその他のタンパク質にも結合することができることが意図されている。
【００８４】
開示する抗体を使用して、ＩＬ−２２とは若干異なるタンパク質を検出、測定および／または阻害することができることを、当業者であれば認識するであろう。例えば、これらのタンパク質は、ＩＬ−２２の相同体であることができる。抗ＩＬ−２２抗体は、配列番号１に記載する配列中の少なくとも１００、８０、６０、４０または２０個の隣接するアミノ酸のいずれかの配列と少なくとも約６０％、７０％、８０％、９０％または９５％以上同一である配列を含むタンパク質に結合することが予想される。
【００８５】
配列相同性解析に加えて、エピトープのマッピング（例えば、Ｅｐｉｔｏｐｅ  Ｍａｐｐｉｎｇ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ、Ｍｏｒｒｉｓ編、Ｈｕｍａｎａ  Ｐｒｅｓｓ、１９９６を参照）、ならびに二次および三次の構造解析を行って、本開示の抗体およびその抗原との複合体がとる、特異的な３Ｄ構造を同定することができる。そのような方法として、これらに限定されないが、Ｘ線結晶解析（Ｅｎｇｓｔｏｍ（１９７４）Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｅｘｐ．Ｂｉｏｌ．、１１：７−１３）、および本発明の抗体の仮想表現のコンピュータモデリング（Ｆｌｅｔｔｅｒｉｃｋら（１９８６）Ｃｏｍｐｕｔｅｒ  Ｇｒａｐｈｉｃｓ  ａｎｄ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｍｏｄｅｌｉｎｇ、ｉｎ  Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｃｏｍｍｕｎｉｃａｔｉｏｎｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ、ＮＹ）が挙げられる。
【００８６】
本開示は、抗ＩＬ−２２抗体を得るための方法を提供し、これは、表１のＶＨ配列および／またはＶＬ配列を変化させて用いて抗体を生み出すステップを含む。そのような抗体は、当業者であれば当技術分野で既知の技法を使用して誘導することができる。例えば、アミノ酸の置換、欠失または付加を、ＦＲ領域および／またはＣＤＲ領域中に導入することができる。ＦＲの変化は、普通、抗体の安定性および免疫原性を改善するように設計され、一方、ＣＤＲの変化は、典型的には、抗体の抗原に対する親和性を増加させるように設計される。親和性を増加させる変化は、ＣＤＲ配列を変化させた後に、抗体の標的に対する親和性を測定することによって試験することができる（Ａｎｔｉｂｏｄｙ  Ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ、２ｎｄ  ｅｄ．、Ｏｘｆｏｒｄ  Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ  Ｐｒｅｓｓ、Ｂｏｒｒｅｂａｅｃｋ編、１９９５を参照）。
【００８７】
ＣＤＲ配列が、配列番号５−１３、２３−３１、４１−４９、５９−６７、７７−８５、９５−１０３、１１３−１２１、１３１−１３９、１４９−１５７、１６７−１７５、１８５−１９３、２０３−２１１、２２１−２２９、２３９−２４７、２５７−２６５、２７５−２８３、２９３−３０１、３１１−３１９、３２９−３３７、３４７−３５５、３６５−３７３、３８３−３９１、４０１−４０９、４１９−４２７、４３７−４４５、４５５−４６３、４７３−４８１、４９１−４９９、５０９−５１７、５２７−５３５、５４５−５５３、５６３−５７１、５８１−５８９、５９９−６０７中に含まれる、または６１７−６２５中の配列内に含まれる配列とは、ごくわずかしか異ならない抗体も、本発明の範囲のうちに包含される。典型的には、これは、アミノ酸を、類似の電荷、疎水性または立体化学の特徴を有するアミノ酸で置換することになる。また、ＣＤＲ領域とは対照的な、ＦＲ領域中のより激しい置換も、抗体の結合特性に不利に影響する（例えば、親和性を、未置換の抗体と比較して５０％超低下させる）ことがない限り、作製することができる。また、置換を作製して、抗体を生殖系列化する、または抗原結合部位を安定化させることもできる。
【００８８】
保存的な修飾は、そのような修飾を作製する元々の分子の機能性の特徴および化学的な特徴に類似する特徴を有する分子を産生するであろう。それとは対照的に、分子の機能性の特徴および／または化学的な特徴の大幅な修飾は、（１）置換した領域中の分子骨格の構造、例えば、シート状またはヘリックス状の立体構造、（２）標的部位における分子の電荷または疎水性、あるいは（３）分子の大きさを維持することに対する効果が顕著に異なるように、アミノ酸配列中の置換を選択することによって達成することができる。
【００８９】
例えば、「保存的アミノ酸置換」は、生来のアミノ酸残基を、その位置のアミノ酸残基の極性および電荷に対して効果がほとんどまたはまったくないように、外来の残基で置換することになるであろう（例えば、ＭａｃＬｅｎｎａｎら、１９９８、Ａｃｔａ  Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｓｃａｎｄ．Ｓｕｐｐｌ．６４３：５５−６７；Ｓａｓａｋｉら、１９９８、Ａｄｖ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．３５：１−２４を参照）。
【００９０】
所望のアミノ酸の置換は（保存的または非保存的のいずれにしても）、そのような置換が望まれる時点で、当業者であれば決定することができる。例えば、アミノ酸置換を使用して、分子配列の重要な残基を決定すること、あるいは本明細書に記載する分子の親和性を増加または減少させることができる。典型的なアミノ酸置換として、これら限定されないが、表３に記載するものが挙げられる。
【００９１】
表３：アミノ酸置換
【表４】
2009528288.tif 000006
【００９２】
特定の実施形態では、また、保存的アミノ酸置換は、自然に存在しないアミノ酸残基も包含し、これらは、典型的には、生物学的な系中での合成によってではなくむしろ化学的なペプチド合成によって組み入れられる。
【００９３】
一実施形態では、変異型ＶＨドメインを作製するための方法は、開示するＶＨドメインにおいて、少なくとも１個のアミノ酸を付加、欠失または置換するステップ、あるいは開示するＶＨドメインを、少なくとも１つのＶＬドメインと組み合わせるステップと、当該変異型ＶＨドメインを、ＩＬ−２２結合またはＩＬ−２２活性の調節について試験するステップとを含む。
【００９４】
変異型ＶＬドメインを作製するための類似の方法は、開示するＶＬドメインにおいて、少なくとも１個のアミノ酸を付加、欠失または置換するステップ、あるいは開示するＶＬドメインを、少なくとも１つのＶＨドメインと組み合わせるステップと、当該変異型ＶＬドメインを、ＩＬ−２２結合またはＩＬ−２２活性の調節について試験するステップとを含む。
【００９５】
本開示のさらなる態様は、ＩＬ−２２に特異的に結合する抗体または抗原結合断片を調製するための方法を提供する。この方法は、
（ａ）少なくとも１つのＣＤＲを欠く、または置換しようとする少なくとも１つのＣＤＲを含有するＶＨドメインをコードする核酸の出発レパートリーを提供するステップと；
（ｂ）出発レパートリーのＣＤＲ領域に、ＶＨのＣＤＲについて本明細書に実質的に記載するアミノ酸配列をコードする少なくとも１個のドナー核酸を挿入する、または出発レパートリーのＣＤＲ領域を、ＶＨのＣＤＲについて本明細書に実質的に記載するアミノ酸配列をコードする少なくとも１個のドナー核酸で置換して、生成レパートリーを得るステップと；
（ｃ）生成レパートリーの核酸を発現させるステップと；
（ｄ）ＩＬ−２２に結合する特異的な抗原結合断片を選択するステップと；
（ｅ）当該の特異的な抗原結合断片またはそれをコードする核酸を回収するステップと
を含む。
【００９６】
類似の方法では、本発明の少なくとも１つのＶＬのＣＤＲを、少なくとも１つのＣＤＲを欠く、または置換しようとする少なくとも１つのＣＤＲを含有するＶＬドメインをコードする核酸のレパートリーと組み合わせる。当該の少なくとも１つのＶＨのＣＤＲまたはＶＬのＣＤＲは、ＣＤＲ１、ＣＤＲ２、ＣＤＲ３またはその組合せであることができ、配列番号８、９、１０、１１、１２、１３、２６、２７、２８、２９、３０、３１、４４、４５、４６、４７、４８、４９、６２、６３、６４、６５、６６、６７、８０、８１、８２、８３、８４、８５、９８、９９、１００、１０１、１０２、１０３、１１６、１１７、１１８、１１９、１２０、１２１、１３４、１３５、１３６、１３７、１３８、１３９、１５２、１５３、１５４、１５５、１５６、１５７、１７０、１７１、１７２、１７３、１７４、１７５、１８８、１８９、１９０、１９１、１９２、１９３、２０６、２０７、２０８、２０９、２１０、２１１、２２４、２２５、２２６、２２７、２２８、２２９、２４２、２４３、２４４、２４５、２４６、２４７、２６０、２６１、２６２、２６３、２６４、２６５、２７８、２７９、２８０、２８１、２８２、２８３、２９６、２９７、２９８、２９９、３００、３０１、３１４、３１５、３１６、３１７、３１８、３１９、３３２、３３３、３３４、３３５、３３６、３３７、３５０、３５１、３５２、３５３、３５４、３５５、３６８、３６９、３７０、３７１、３７２、３７３、３８６、３８７、３８８、３８９、３９０、３９１、４０４、４０５、４０６、４０７、４０８、４０９、４２２、４２３、４２４、４２５、４２６、４２７、４４０、４４１、４４２、４４３、４４４、４４５、４５８、４５９、４６０、４６１、４６２、４６３、４７６、４７７、４７８、４７９、４８０、４８１、４９４、４９５、４９６、４９７、４９８、４９９、５１２、５１３、５１４、５１５、５１６、５１７、５３０、５３１、５３２、５３３、５３４、５３５、５４８、５４９、５５０、５５１、５５２、５５３、５６６、５６７、５６８、５６９、５７０、５７１、５８４、５８５、５８６、５８７、５８８、５８９、６０２、６０３、６０４、６０５、６０６、６０７、６２０、６２１、６２２、６２３、６２４、または６２５に記載するものを含めた、表１または７に記載されるもの等のＶＨのＣＤＲとＶＬのＣＤＲとの組合せが含まれる。
【００９７】
一実施形態では、可変ドメインが、置換しようとするＣＤＲ３を含むかＣＤＲ３コード領域を欠き、少なくとも１個のドナー核酸が、配列番号１０、１３、２８、３１、４６、４９、６４、６７、８２、８５、１００、１０３、１１８、１２１、１３６、１３９、１５４、１５７、１７２、１７５、１９０、１９３、２０８、２１１、２２６、２２９、２４４、２４７、２６２、２６５、２８０、２８３、２９８、３０１、３１６、３１９、３３４、３３７、３５２、３５５、３７０、３７３、３８８、３９１、４０６、４０９、４２４、４２７、４４２、４４５、４６０、４６３、４７８、４８１、４９６、４９９、５１４、５１７、５３２、５３５、５５０、５５３、５６８、５７１、５８６、５８９、６０４、６０７、６２２、または６２５に実質的に記載するアミノ酸をコードする。
【００９８】
別の実施形態では、可変ドメインが、置換しようとするＣＤＲ１を含むかＣＤＲ１コード領域を欠き、少なくとも１個のドナー核酸が、配列番号８、１１、２６、２９、４４、４７、６２、６５、８０、８３、９８、１０１、１１６、１１９、１３４、１３７、１５２、１５５、１７０、１７３、１８８、１９１、２０６、２０９、２２４、２２７、２４２、２４５、２６０、２６３、２７８、２８１、２９６、２９９、３１４、３１７、３３２、３３５、３５０、３５３、３６８、３７１、３８６、３８９、４０４、４０７、４２２、４２５、４４０、４４３、４５８、４６１、４７６、４７９、４９４、４９７、５１２、５１５、５３０、５３３、５４８、５５１、５６６、５６９、５８４、５８７、６０２、６０５、６２０、または６２３に実質的に記載するアミノ酸配列をコードする。
【００９９】
別の実施形態では、可変ドメインが、置換しようとするＣＤＲ２を含むかＣＤＲ２コード領域を欠き、少なくとも１個のドナー核酸が、配列番号９、１２、２７、３０、４５、４８、６３、６６、８１、８４、９９、１０２、１１７、１２０、１３５、１３８、１５３、１５６、１７１、１７４、１８９、１９２、２０７、２１０、２２５、２２８、２４３、２４６、２６１、２６４、２７９、２８２、２９７、３００、３１５、３１８、３３３、３３６、３５１、３５４、３６９、３７２、３８７、３９０、４０５、４０８、４２３、４２６、４４１、４４４、４５９、４６２、４７７、４８０、４９５、４９８、５１３、５１６、５３１、５３４、５４９、５５２、５６７、５７０、５８５、５８８、６０３、６０６、６２１、または６２４に実質的に記載するアミノ酸配列をコードする。
【０１００】
別の実施形態では、可変ドメインが、置換しようとするＣＤＲ３を含むかＣＤＲ３コード領域を欠き、さらに、置換しようとするＣＤＲ１を含むかＣＤＲ１コード領域を欠き、少なくとも１個のドナー核酸が、表１または７に実質的に記載するアミノ酸配列をコードする。
【０１０１】
別の実施形態では、可変ドメインが、置換しようとするＣＤＲ３を含むかＣＤＲ３コード領域を欠き、さらに、置換しようとするＣＤＲ２を含むかＣＤＲ２コード領域を欠き、少なくとも１個のドナー核酸が、表１または７に実質的に記載するアミノ酸配列をコードする。
【０１０２】
別の実施形態では、可変ドメインが、置換しようとするＣＤＲ３を含むかＣＤＲ３コード領域を欠き、さらに、置換しようとするＣＤＲ１およびＣＤＲ２を含むかＣＤＲ１およびＣＤＲ２のコード領域を欠き、少なくとも１個のドナー核酸が、表１または７に実質的に記載するアミノ酸配列をコードする。
【０１０３】
組換えＤＮＡ法を使用して、開示するＣＤＲ配列は、それぞれのＣＤＲを欠く、ＶＨドメインまたはＶＬドメインのレパートリー内に導入することができる（Ｍａｒｋｓら（ＢｉｏＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９９２）１０：７７９−７８３）。例えば、可変ドメインの５’末端に隣接するプライマーおよび第３のＦＲに隣接するプライマーを使用して、ＣＤＲ３を欠く可変ドメイン配列のレパートリーを生成することができる。このレパートリーは、開示する抗体のＣＤＲ３と組み合わせることができる。類似の技法を使用して、開示するＣＤＲ配列の部分を、その他の抗体からのＣＤＲ配列の部分で入れ換えて、ＩＬ−２２に結合する抗原結合断片のレパートリーを提供することができる。いずれのレパートリーも、（ＷＯ９２／０１０４７およびそれに対応する米国特許第５９６９１０８号に記載されている）ファージディスプレイ等の宿主系中で発現させることができ、それによって、ＩＬ−２２に結合する、適切な抗原結合断片を選択することができる。
【０１０４】
さらなる代替案は、開示するＶＨ配列またはＶＬ配列のランダム変異誘発を使用して、ＩＬ−２２に結合することが依然として可能な変異型のＶＨドメインまたはＶＬドメインを生成する。エラープローンＰＣＲを使用する技法は、Ｇｒａｍらによって記載されている（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９９２）８９：３５７６−３５８０）。
【０１０５】
別の方法は、開示するＶＨ配列またはＶＬ配列の直接的な変異誘発を使用する。そのような技法は、Ｂａｒｂａｓら（Ｐｒｏｃ．Ｎａｔ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．Ｕ．Ｓ．Ａ．（１９９４）９１：３８０９−３８１３）、およびＳｃｈｉｅｒら（Ｊ．Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ．（１９９６）２６３：５５１−５６７）によって開示されている。
【０１０６】
可変ドメインの一部は、本明細書に実質的に記載する少なくとも１つのＣＤＲ領域、および所望により、本明細書に記載するＶＨドメインまたはＶＬドメインからの介在するフレームワーク領域を含むであろう。この部分は、ＦＲ１のＣ末端側の半分および／またはＦＲ４のＮ末端側の半分を含むことができる。可変ドメインのＮ末端またはＣ末端の終端における追加の残基は、自然に存在する抗体中に見い出される残基と同一である必要はない。例えば、組換えＤＮＡ技術による抗体の構築は、しばしば、リンカーの使用からのＮ末端またはＣ末端の残基を導入する。一部のリンカーを使用して、可変ドメインを、その他の可変ドメイン（例えば、二重特異性抗体）、定常ドメインまたはタンパク質性の標識に結合させることができる。
【０１０７】
実施例に例示する実施形態は、ＶＨドメインおよびＶＬドメインの「そろいの」対を含むが、当業者であれば、代替の実施形態は、ＶＨドメインまたはＶＬドメインのいずれかからの単一のＣＤＲのみを含有する抗原結合断片を含むことができることを認識するであろう。単鎖の特異的抗原結ドメインのうちのいずれか一方を使用して、例えば、ＩＬ−２２に結合する能力がある、２つのドメインによる特異的抗原結合断片を形成することが可能な相補的なドメインについてスクリーニングすることができる。スクリーニングは、ＷＯ９２／０１０４７に開示されているいわゆる階層的二重コンビナトリアルなアプローチを使用するファージディスプレイスクリーニング法によって達成することができる。このアプローチでは、Ｈ鎖またはＬ鎖のクローンの一方を含有する個々のコロニーを使用して、他方の（ＬまたはＨの）鎖をコードするクローンの完全なライブラリーを感染させ、得られた二本鎖の特異的抗原結合ドメインを、記載されているファージディスプレイ技法に従って選択する。
【０１０８】
いくつかの代替の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体は、タンパク質（例えば、アルブミン）に、化学的な架橋結合または組換え法によって連結させることができる。また、開示する抗体は、多様な非タンパク質性のポリマー（例えば、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコールまたはポリオキシアルキレン）に、米国特許第４６４０８３５号；第４４９６６８９号；第４３０１１４４号；第４６７０４１７号；第４７９１１９２号；または第４１７９３３７号に記載されている様式で連結させることもできる。抗体は、ポリマーに共役結合させることによって化学的に修飾して、例えば、血液循環中での半減期を増加させることができる。典型的なポリマーおよび結合方法は、米国特許第４７６６１０６号；第４１７９３３７号；第４４９５２８５号；および第４６０９５４６号に示されている。
【０１０９】
開示する抗体は、修飾して、そのグリコシル化を変化させることができる。すなわち、少なくとも１つの炭水化物部分を、欠失させる、または抗体に付加することができる。グリコシル化部位の欠失または付加は、アミノ酸配列を変化させて、グリコシル化コンセンサス部位を欠失させるまたは生み出すことによって達成することができる。グリコシル化コンセンサス部位は、当技術分野で周知である。炭水化物部分を付加する別の手段では、グリコシドを抗体のアミノ酸残基に化学的または酵素的に結合させる（ＷＯ８７／０５３３０およびＡｐｌｉｎら（１９８１）ＣＲＣ  Ｃｒｉｔ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、２２：２５９−３０６を参照）。また、炭水化物部分の除去も、化学的または酵素的に達成することができる（Ｈａｋｉｍｕｄｄｉｎら（１９８７）Ａｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．、２５９：５２；Ｅｄｇｅら（１９８１）Ａｎａｌ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．、１１８：１３１；Ｔｈｏｔａｋｕｒａら（１９８７）Ｍｅｔｈ．Ｅｎｚｙｍｏｌ．、１３８：３５０を参照）。
【０１１０】
抗体の定常領域を変化させるための方法は、当技術分野で既知である。変化した機能（例えば、細胞上のＦｃＲまたは補体のＣ１成分等のエフェクターリガンドに対する変化した親和性）を有する抗体は、抗体の定常部分中の少なくとも１個のアミノ酸残基を、異なる残基で置換することによって産生することができる（例えば、ＥＰ３８８，１５１Ａ１、ＵＳ５，６２４，８２１およびＵＳ５，６４８，２６０を参照）。類似の型の変化をマウスまたはその他の種に適用した場合に、抗体が同様の機能を低下させるまたは失くすのであれば、それらも記載することができるであろう。
【０１１１】
例えば、抗体（例えば、ヒトＩｇＧ等のＩｇＧ）のＦｃ領域のＦｃＲ（例えば、ＦｃガンマＲ１）またはＣ１ｑに対する親和性を変化させることが可能である。親和性は、少なくとも１個の特定の残基を、側鎖上に適切な官能性を有する少なくとも１個の残基で置換することによって、あるいはグルタミン酸もしくはアスパラギン酸等、荷電した官能基、またはおそらく、フェニルアラニン、チロシン、トリプトファンもしくはアラニン等、芳香族非極性残基を導入することによって変化させることができる（例えば、ＵＳ５，６２４，８２１を参照）。
【０１１２】
例えば、ＩｇＧ定常領域中の残基２９７（アスパラギン）をアラニンで置換すると、エフェクター細胞の動員が顕著に阻害されるが、Ｃｌｑに対する親和性はわずかに低下する（約３分の１に弱まる）にすぎない（例えば、ＵＳ５，６２４，８２１を参照）。重鎖中の残基の番号付けは、ＥＵインデックスの番号付けである（Ｋａｂａｔら、１９９１、上記を参照）。この変化は、グリコシル化部位を破壊するので、炭水化物の存在が、Ｆｃ受容体に結合するために必要であると考えられている。グリコシル化部位を破壊する、この部位におけるいずれかのその他の置換は、細胞溶解活性の同様の減少を起こすと考えられている。その他のアミノ酸置換は、例えば、残基３１８（Ｇｌｕ）、３２０（Ｌｙｓ）および３２２（Ｌｙｓ）のうちのいずれか１個を、Ａｌａに変化させると、ＣｌｑのＩｇＧ抗体のＦｃ領域に対する結合を失くすこともまた知られている（例えば、ＵＳ５，６２４，８２１を参照）。
【０１１３】
Ｆｃ受容体との低下した相互作用を有する修飾抗体を産生することができる。例えば、ヒトＦｃガンマＲ１受容体に結合するヒトＩｇＧ３において、Ｌｅｕ２３５をＧｌｕに変化させると、当該受容体との相互作用が破壊されることが示されている。また、抗体のヒンジ連結領域に隣接するまたは近い部位上の変異（例えば、残基２３４、２３６または２３７をＡｌａで置換すること）を使用して、ＦｃガンマＲ１受容体に対する抗体の親和性に影響を及ぼすこともできる。重鎖中の残基の番号付けは、ＥＵインデックスの番号付けに基づく（Ｋａｂａｔら、１９９１、上記を参照）。
【０１１４】
例えば、ＣＨ２ドメインのＮ末端領域中の少なくとも１個のアミノ酸を変化させることによって、抗体の細胞溶解活性を変化させるための追加の方法は、ＭｏｒｇａｎらによるＷＯ９４／２９３５１およびＵＳ５，６２４，８２１に記載されている。
【０１１５】
本発明の抗体は、検出可能な標識または機能性の標識でタグを付けることができる。これらの標識として、放射標識（例えば、１３１Ｉまたは９９Ｔｃ）、酵素標識（例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼまたはアルカリホスファターゼ）、およびその他の化学的な部分（例えば、ビオチン）が挙げられる。
【０１１６】
また、本発明は、ＩＬ−２２、特に、ヒトＩＬ−２２に結合する、単離抗体にも注目する。特定の実施形態では、当該抗ＩＬ−２２抗体は、以下の特徴のうちの少なくとも１つを有することができる：（１）モノクローナル抗体または単一特異性抗体である；（２）ヒト抗体である；（３）ｉｎ  ｖｉｔｒｏで産生した抗体である；（４）ｉｎ  ｖｉｖｏで産生した抗体である（例えば、遺伝子導入マウス系）；（５）ＩＬ−２２に、少なくとも１０１２Ｍ−１の結合定数で結合する；（６）ＩＬ−２２に、少なくとも１０１１Ｍ−１の結合定数で結合する；（７）ＩＬ−２２に、少なくとも１０１０Ｍ−１の結合定数で結合する；（８）ＩＬ−２２に、少なくとも１０９Ｍ−１の結合定数で結合する；（９）ＩＬ−２２に、少なくとも１０６Ｍ−１の結合定数で結合する；（１０）ＩＬ−２２に、５００ｎＭ以下の解離定数で結合する；（１１）ＩＬ−２２に、１０ｎＭ以下の解離定数で結合する；（１２）ＩＬ−２２に、１５０ｐＭ以下の解離定数で結合する；（１３）ＩＬ−２２に、６０ｐＭ以下の解離定数で結合する；（１４）ＩＬ−２２ＲまたはＩＬ−２２ＲおよびＩＬ−１０Ｒ２の受容体複合体に対する、ＩＬ−２２の結合を、１０ｎＭ以下のＩＣ５０で阻害する；（１５）ＩＬ−２２受容体を操作したＢａＦ３細胞の、ＩＬ−２２が仲介する増殖を、一実施形態では、１ｎＭ以下のＩＣ５０で、別の実施形態では、１５０ｐＭ以下のＩＣ５０で、別の実施形態では、１００ｐＭ以下のＩＣ５０で、および別の実施形態では、１０ｐＭ以下のＩＣ５０で遮断する；かつ（１６）ＨＴ２９細胞からのＩＬ−２２が仲介するＧＲＯａの分泌を、一実施形態では、１ｎＭ以下のＩＣ５０で、別の実施形態では、１５０ｐＭ以下のＩＣ５０で、および別の実施形態では、１０ｐＭ以下のＩＣ５０で遮断する。
【０１１７】
上記に記載した修飾は、完全網羅的ではないこと、および多くのその他の修飾が、本開示の教示に照らして、当業者には明らかであることを、当業者であれば理解するであろう。
【０１１８】
ＩＩＩ．核酸、クローン化および発現系
本開示は、開示する抗体をコードする単離核酸を提供する。核酸は、ＤＮＡまたはＲＮＡを含んでもよいし、（全部または一部）合成または（全部または一部）組換えによるものであってもよい。本明細書に記載するヌクレオチド配列への参照は、特定の配列を有するＤＮＡ分子を包含し、ＵがＴで置換されている特定の配列を有するＲＮＡ分子も包含する。
【０１１９】
また、本明細書に開示する、ＣＤＲの１つ、２つもしくは３つ、ＶＨドメイン、ＶＬドメインまたはその組合せ、あるいはそれらと実質的に同一な配列（例えば、それらと少なくとも、８５％、９０％、９５％、９６％、９７％、９８％もしくは９９％以上同一な配列、または開示する配列と厳密な条件下でハイブリダイズすることができる配列）をコードする配列を含む核酸も提供する。
【０１２０】
一実施形態では、単離核酸は、配列番号８−１３、２６−３１、４４−４９、６２−６７、８０−８５、９８−１０３、１１６−１２１、１３４−１３９、１５２−１５７、１７０−１７５、１８８−１９３、２０６−２１１、２２４−２２９、２４２−２４７、２６０−２６５、２７８−２８３、２９６−３０１、３１４−３１９、３３２−３３７、３５０−３５５、３６８−３７３、３８６−３９１、４０４−４０９、４２２−４２７、４４０−４４５、４５８−４６３、４７６−４８１、４９４−４９９、５１２−５１７、５３０−５３５、５４８−５５３、５６６−５７１、５８４−５８９、６０２−６０７、または６２０−６２５のアミノ酸配列から選択された少なくとも１つのＣＤＲ、または本明細書に記載する配列とはアミノ酸が１個もしくは２個分、異なるＣＤＲをコードする配列を有する抗ＩＬ−２２抗体の重鎖可変領域および軽鎖可変領域をコードするヌクレオチド配列を有する。
【０１２１】
核酸は、軽鎖可変領域または重鎖可変領域のみをコードしてもよいし、対応する可変領域に動作可能に連結している抗体の軽鎖定常領域または重鎖定常領域もまたコードしてもよい。一実施形態では、軽鎖可変領域は、カッパ定常領域およびラムダ定常領域から選択された定常領域に連結している。また、軽鎖可変領域は、ヒトのカッパまたはラムダの型であることもできる。別の実施形態では、重鎖可変領域は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１、ＩｇＧ２、ＩｇＧ３、ＩｇＧ４）、ＩｇＭ、ＩｇＡ１、ＩｇＡ２、ＩｇＤおよびＩｇＥから選択された抗体アイソタイプの重鎖定常領域に連結している。重鎖可変領域は、ＩｇＧ（例えば、ＩｇＧ１）アイソタイプであることができる。
【０１２２】
本発明の核酸組成物は、修飾された制限部位等以外は、（ｃＤＮＡもしくはゲノムＤＮＡまたはその混合物の）生来の配列であることが多いが、標準的な技法に従って変異させて、遺伝子配列を提供することができる。コード配列の場合、これらの変異によって、所望するようにアミノ酸配列に影響を与えることができる。特に、生来のＶ配列、Ｄ配列、Ｊ配列，定常配列、スイッチ配列およびその他の本明細書に記載するような配列と実質的に同一、またはそれらに由来するヌクレオチド配列が意図されている（ただし、「由来する」とは、配列が、別の配列と同一またはそれから修飾されていることを示す）。
【０１２３】
一実施形態では、核酸は、提供する配列の核酸とは（例えば、以下のごとくである：ヌクレオチドが少なくとも１個、しかし１０、２０、３０または４０個未満分；ヌクレオチドが少なくとも１個、しかし対象の核酸中の１％、５％、１０％または２０％未満分）異なる（例えば、置換、挿入または欠失によって異なる）。この解析のために必要であれば、配列を、相同性が最大になるように整列させる必要がある。欠失または挿入から「ループ」アウトした配列、またはミスマッチは、違うものとみなす。違いは、非必須残基（複数の残基）をコードする核酸（複数の核酸）においてであってもよいし、保存的置換（複数の置換）であってもよい。
【０１２４】
また、本開示は、プラスミド、ベクター、転写カセットまたは発現カセットの形態の核酸構築物も提供し、これらは、本明細書に記載する少なくとも１個の核酸を含む。
【０１２５】
本開示は、本明細書に記載する少なくとも１種の核酸構築物を含む宿主細胞もさらに提供する。
【０１２６】
また、本明細書に記載する配列を含む核酸（複数の核酸）からコードされたタンパク質（複数のタンパク質）を作製する方法も提供する。この方法は、宿主細胞を適切な条件下で培養するステップを含み、それによって、当該宿主細胞が核酸からのタンパク質を発現する。発現および産生の後に、ＶＨドメインもしくはＶＬドメイン、または特異的な結合メンバーを、いずれかの適切な技法を使用して単離および／または精製することができ、次いで、適宜使用する。また、この方法は、ｓｃＦｖをコードする核酸を、抗体のＦｃ部分をコードする核酸と融合させるステップと、融合させた核酸を細胞中で発現させるステップとを含むこともできる。また、この方法は、生殖系列化するステップを含むこともできる。
【０１２７】
抗原結合断片、ＶＨドメインおよび／またはＶＬドメイン、ならびにコード核酸分子およびベクターは、その自然環境から、実質的に純粋もしくは均質な形態で、または核酸の場合には、要求される機能を有するポリペプチドをコードする配列の他には、源の核酸もしくは遺伝子が存在しないまたは実質的に存在しない状態で、単離および／または精製することができる。
【０１２８】
ポリペプチドを多様な宿主細胞中でクローン化するおよび発現させる系は、当技術分野では既知である。抗体を産生するのに適した細胞は、例えば、Ｆｅｒｎａｎｄｅｚら（１９９９）Ｇｅｎｅ  Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ  Ｓｙｓｔｅｍｓ、Ａｃａｄｅｍｉｃ  Ｐｒｅｓｓ編に記載されている。手短にいうと、適切な宿主細胞として、哺乳動物細胞、昆虫細胞、植物細胞、酵母細胞、または原核細胞、例えば、イー・コリが挙げられる。異種ポリペプチドの発現のための技術において利用可能な哺乳動物細胞として、リンパ球細胞系（例えば、ＮＳＯ）、ＨＥＫ２９３細胞、チャイニーズハムスター卵巣（ＣＨＯ）細胞、ＣＯＳ細胞、ＨｅＬａ細胞、ベビーハムスター腎臓細胞、卵母細胞、および遺伝子導入動物からの細胞、例えば、哺乳動物上皮細胞が挙げられる。一実施形態では、ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、および３５６Ａ１１の抗体を、ＨＥＫ２９３細胞またはＣＨＯ細胞中で発現させる。別の実施形態では、３６５Ａ１１、３５４Ａ０８、０８７Ｂ０３および３６８Ｄ０４から選択された一連の抗体を、ＨＥＫ２９３細胞またはＣＨＯ細胞中で発現させる。その他の実施形態では、本発明の抗体をコードする核酸を、組織特異的なプロモーター（例えば、哺乳動物特異的プロモーター）の下に置いて、抗体を遺伝子導入動物中で産生する。例えば、抗体は、遺伝子を導入したウシ、ブタ、ウマ、ヒツジ、ヤギまたはげっ歯類等の遺伝子導入動物の乳汁中に分泌させる。
【０１２９】
プロモーター配列、転写終結配列、ポリアデニル化配列、エンハンサー配列、マーカー遺伝子およびその他の配列を含めた、適切な調節配列を含有するように、適切なベクターを選択または構築することができる。また、ベクターは、プラスミドまたはウイルス性の骨格を含むこともできる。詳細は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｍａｎｕａｌ、２ｎｄ  ｅｄ．、Ｃｏｌｄ  Ｓｐｒｉｎｇ  Ｈａｒｂｏｒ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ  Ｐｒｅｓｓ（１９８９）を参照されたい。ＤＮＡの操作、調製、変異誘発、配列決定および形質移入を含めた、ベクターを使用する多くの確立された技法が、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｂｉｏｌｏｇｙ、Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ａｕｓｕｂｅｌら編、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ（１９９２）に記載されている。
【０１３０】
本開示のさらなる態様は、当該核酸を宿主細胞中に導入する方法を提供する。真核細胞の場合には、適切な形質移入の技法として、リン酸カルシウム法、ＤＥＡＥ−デキストラン法、エレクトローポレーション、リポソーム仲介形質移入、およびレトロウイルスまたはその他のウイルス、例えば、ワクシニアまたはバキュロウイルスを使用する形質導入を挙げることができる。細菌細胞の場合には、適切な技法として、リン酸カルシウムによる形質転換、エレクトローポレーション、バクテリオファージを使用する形質移入が挙げられる。ＤＮＡの導入後に、選択方法（例えば、薬物耐性）を実施して、当該核酸を含有する細胞を選択することができる。
【０１３１】
ＩＶ．抗ＩＬ−２２抗体の使用
ＩＬ−２２に対するアンタゴニストとして作用する抗ＩＬ−２２抗体を使用して、少なくとも１種のＩＬ−２２が仲介する免疫応答を調節することができ、例として、実質組織中の上皮に作用したり、例えば、ＴＨ１７Ｔ細胞を含めた、Ｔ細胞のサブセットの増殖を遮断する等、下流の免疫応答を間接的に調節したりする。一実施形態では、本発明の抗体を、免疫応答を調節するための方法において使用し、この方法は、ＩＬ−２２を本発明の抗体に接触させるステップを含み、それによって、免疫応答を調節する。一実施形態では、免疫応答は、細胞の増殖、細胞溶解活性、サイトカイン分泌、またはケモカイン分泌を含む。
【０１３２】
したがって、本発明の抗体は、免疫細胞または造血細胞（例えば、骨髄系、リンパ系もしくは赤血球系の細胞またはその前駆細胞）の活性（例えば、増殖、分化および／または生存）を直接的または間接的に阻害するために使用することができ、したがって、多様な免疫障害および過剰増殖障害を治療するために使用することができる。治療することができる免疫障害の非限定的な例として、これらに限定されないが、自己免疫障害、例として、関節炎（関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎、ループス性関節炎または強直性脊椎炎を含む）、強皮症、全身性エリテマトーデス、ＨＩＶ、シェーグレン症候群、血管炎、多発性硬化症、自己免疫性甲状腺炎、皮膚炎（アトピー性皮膚炎および湿疹性皮膚炎を含む）、重症筋無力症、炎症性腸疾患（ＩＢＤ）、クローン病、大腸炎、糖尿病（Ｉ型）；炎症性状態、例として、皮膚（例えば、乾癬）、心血管系（例えば、アテローム性動脈硬化症）、神経系（例えば、アルツハイマー病）、肝臓（例えば、肝炎）、腎臓（例えば、腎炎）および膵臓（例えば、膵臓炎）；心血管障害、例として、コレステロール代謝障害、酸素フリーラジカルによる損傷、虚血；創傷治癒関連障害；呼吸障害、例として、喘息およびＣＯＰＤ（例えば、嚢胞性線維症）；急性炎症性状態（例えば、内毒血症、セプシスおよび敗血症、毒素ショック症候群および感染症）；移植片拒絶およびアレルギーが挙げられる。一実施形態では、ＩＬ−２２関連障害は、関節炎障害、例えば、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎、乾癬性関節炎または強直性脊椎炎のうちの１つまたは複数から選択された障害；呼吸障害（例えば、喘息、慢性閉塞性肺疾患（ＣＯＰＤ））；または炎症性状態、例えば、皮膚（例えば、乾癬）、心血管系（例えば、アテローム性動脈硬化症）、神経系（例えば、アルツハイマー病）、肝臓（例えば、肝炎）、腎臓（例えば、腎炎）、膵臓（例えば、膵臓炎）、ならびに胃腸管系臓器、例えば、大腸炎、クローン病およびＩＢＤ；急性炎症性状態、例えば、内毒血症、セプシスおよび敗血症、毒素ショック症候群および感染症；多臓器不全；呼吸器疾患（ＡＲＤ）；アミロイド症；糸球体硬化症、膜性腎症、腎アテローム硬化症、糸球体腎炎、腎臓の線維増殖性疾患等の腎障害、ならびにその他の腎臓機能不全および腎臓腫瘍である。ＩＬ−２２の上皮に対する作用によって、抗ＩＬ−２２抗体は、上皮癌、例えば、癌腫、メラノーマおよびその他を治療するために使用することができる。これらのおよびその他の疾患状態におけるＩＬ−２２阻害に関する論拠の記載については、ＷＯ０３／０８３０６２（５８〜７５頁）を参照されたい。
【０１３３】
多発性硬化症は、中枢神経系の疾患であり、これは、神経を保護し、適切な神経機能のために必要である脂肪性の物質である、ミエリン鞘の炎症および損失によって特徴付けられる。ＩＬ−２２に依存性である免疫応答の結果として生じる炎症は、本発明の抗体および組成物を用いて治療することができる。多発性硬化症についての実験的自己免疫性脳炎（ＥＡＥ）マウスモデル（Ｔｕｏｈｙら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８８）１４１：１１２６−１１３０）、Ｓｏｂｅｌら（Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８４）１３２：２３９３−２４０１）、およびＴｒａｕｇｏｔｔ（Ｃｅｌｌ  Ｉｍｍｕｎｏｌ．（１９８９）１１９：１１４−１２９））においては、ＥＡＥの誘導の前に（かつ連続的に）ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、または３５６Ａ１１の注射を用いてマウスを治療すると、疾患の発症を大いに遅延させることができる。これは、本発明の抗体の使用を確認するためのモデルとして役に立つことができる。本発明の抗体は、ヒトにおいても、多発性硬化症を治療するために同様に使用することができる。
【０１３４】
関節炎は、関節の炎症によって特徴付けられる疾患である。関節リウマチ（ＲＡ）は、関節炎の最も頻繁な形態であり、結合組織および関節に沿って並ぶ膜である滑膜の炎症が関与する。炎症を起こした滑膜は、しばしば、関節に浸潤し、関節の軟骨および骨を損傷する。ＩＬ−２２およびＩＬ−２２Ｒタンパク質ならびに／または転写物は、両方のヒトの疾患に伴う。ＲＡの滑膜の生検においては、ＩＬ−２２タンパク質は、ビメンチン＋滑膜線維芽細胞および一部のＣＤ６８＋マクロファージ中に検出され、一方、ＩＬ−２２Ｒは、滑膜線維芽細胞中に検出される。滑膜線維芽細胞を、ＩＬ−２２を用いて処理すると、単球走化性タンパク質−１、すなわちＭＣＰ−１の産生が誘導され、かつ一般的な代謝活性も誘導される（Ｉｋｅｕｃｈｉ，Ｈ．ら（２００５）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．５２：１０３７−４６）。ＩＬ−２２を阻害すると、関節リウマチの症状が改善する（ＷＯ２００５／０００８９７Ａ２；米国特許第６９３９５４５号）。炎症性のサイトカインおよびケモカインの分泌の増加、ならびにより重要なことには、ＩＬ−２２依存性である免疫応答の結果生じる疾患の悪化は、本発明の抗体を用いて治療することができる。同様に、本発明の抗体および組成物を、ヒトにおいて、ＲＡまたはその他の関節炎疾患を治療するためにも使用することができる。
【０１３５】
移植片拒絶は、免疫学的な現象であり、ドナーからの組織が、宿主の免疫細胞によって特異的に「攻撃」される。主要な「攻撃」細胞は、Ｔ細胞であり、そのＴ細胞受容体が、ドナーＭＨＣ分子を「異物」として認識する。この認識がＴ細胞を活性化し、それによって多様なサイトカインおよび細胞溶解性タンパク質が増殖および分泌し、これらが最終的には移植片を破壊する。ＭＬＲおよび移植のモデルは、Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｐｒｏｔｏｃｏｌｓ  ｉｎ  Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、Ｓｅｃｏｎｄ  Ｅｄｉｔｉｏｎ、Ｃｏｌｉｇａｎら編、Ｊｏｈｎ  Ｗｉｌｅｙ  ＆  Ｓｏｎｓ、１９９４；Ｋａｓａｉａｎら（Ｉｍｍｕｎｉｔｙ（２００２）１６：５５９−５６９）；Ｆｕｌｍｅｒら（Ａｍ．Ｊ．Ａｎａｔ．（１９６３）１１３：２７３−２８５）、およびＬｅｎｓｃｈｏｗら（Ｓｃｉｅｎｃｅ（１９９２）２５７：７８９−７９２）によって記載されている。本発明の抗体および組成物を、ＭＬＲを低下させるため、ならびに移植片拒絶およびＩＬ−２２依存性であるヒトにおける関連の疾患（例えば、移植片対宿主病）を治療するために使用することができる。
【０１３６】
また、本発明の抗体は、ＩＬ−２２応答性細胞およびＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２応答性細胞の異常な活性を伴う過剰増殖障害を治療するためにも使用することができ、これは、当該抗体を、対象中のＩＬ−２２および／またはＩＬ−２２Ｒおよび／またはＩＬ−１０Ｒ２に応答性の細胞の過剰増殖を阻害または低減するのに十分な量で投与して、当該抗体が障害を治療または予防することを可能にすることによって治療する。ＩＬ−２２およびＩＬ−２２Ｒの発現は、これらに限定されないが、膵臓、肺、皮膚、腸、肝臓、腎臓を含めた、いくつかの組織中の上皮細胞上で恒常的である（Ｋｏｔｅｎｋｏ，Ｓ．Ｖ．ら（２００１）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７６：２７２５−３２；Ｘｉｅ，Ｍ．Ｈ．ら（２０００）Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．２７５：３１３３５−９；Ｗｏｌｋ，Ｋ．ら（２００４）Ｉｍｍｕｎｉｔｙ  ２１：２４１−５４）。さらに、ＩＬ−２２受容体複合体は、病的な関節および正常な腸からの線維芽細胞の表面上でもまた発現される（Ｉｋｅｕｃｈｉ，Ｈ．ら（２００５）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．５２：１０３７−４６；Ａｎｄｏｈ，Ａら（２００５）Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ  １２９：９６９−８４）。これらの細胞型の新生物の派生物は、これらの細胞が生物体中で生存する能力を調節するＩＬ−２２に対して過剰に応答性である場合がある。したがって、ＩＬ−２２に対する抗体を使用して、そのような新生物の進行を阻害することができる。新生物としては、例えば、扁平上皮癌、基底細胞癌、移行上皮性乳頭腫および移行上皮癌、腺腫、腺癌、形成性胃炎、インスリノーマ、グルカゴーマ、ガストリノーマ、ビポーマ、胆管癌、肝細胞癌、腺様嚢胞癌、虫垂のカルチノイド腫瘍、プロラクチノーマ、オンコサイトーマ、好酸性細胞腺腫、腎臓細胞癌腫、グラヴィッツ腫瘍、多発性内分泌腺腫症、類内膜腺腫、皮膚付属器新生物、粘膜表皮新生物、嚢胞性、粘液性および漿液性の新生物、嚢胞腺腫、腹膜偽粘液腫、乳管、小葉および髄質の新生物、腺房細胞新生物、複合性上皮新生物、ワルサン腫瘍、胸腺腫、分化性腺新生物、性索間質腫瘍、莢膜腫瘍、顆粒膜細胞腫、男化腫瘍、セルトリ・ライディッヒ細胞腫、傍神経節腫、褐色細胞腫、グロムス腫瘍、色素性母斑、悪性黒色腫、黒色腫、結節性黒色腫、異形成母斑、悪性黒子、表在拡大型黒色腫、または末端性黒子性黒色腫が挙げられる。ＩＬ−２２受容体は、ｅｘ  ｖｉｖｏのナイーブな免疫細胞および活性化された免疫細胞の上では検出されないが、この受容体が調節不全になると、ＩＬ−２２応答性のそのような派生した新生物細胞が作製され、したがって、ＩＬ−２２に対する抗体によって阻害される可能性がある。
【０１３７】
別の態様では、本発明は、対象の急性応答期を減少、阻害または低下させる方法に注目する。この方法は、本明細書に記載する抗ＩＬ−２２抗体またはその断片を、対象の急性応答期を減少、阻害または低下させるのに十分な量で、対象に投与するステップを含む。一実施形態では、対象は、哺乳動物、例えば、本明細書に記載するＩＬ−２２関連障害を患うヒトであり、本明細書に記載するＩＬ−２２関連障害として、例えば、呼吸障害、炎症性障害および自己免疫障害が挙げられる。一実施形態では、ＩＬ−２２結合剤は、局部的に、例えば、局所的に、皮下に、または全身循環性ではないその他の投与方法によって投与する。
【０１３８】
ＩＬ−２２は、直接的な全身性の作用ではなく、例えば、組織の炎症のモジュラーまたは調節剤として作用する（例えば、直接的に作用する）ことによって、その抗炎症性作用を局部的に発揮すると考えられている。したがって、ＩＬ−２２活性を、例えば、本発明の抗ＩＬ−２２抗体を使用して阻害すると、全身性の抗炎症療法よりも、より効果的な（例えば、毒性の低下した）組織特異的な抗炎症剤を提供することができる。さらに、例えば、本発明の抗ＩＬ−２２抗体またはその断片を使用する局部的なＩＬ−２２の阻害は、全身性の抗炎症の様式と併用するための有用な候補を提供することができる。
【０１３９】
Ｖ．併用療法
一実施形態では、少なくとも１種の抗ＩＬ−２２抗体と、少なくとも１種の治療剤とを含む医薬組成物を、併用療法において投与する。この療法は、免疫障害および炎症性障害等の病的な状態または障害を治療するために有用である。この場合の「併用して」という用語は、抗体組成物と治療剤とを、同時または順次のいずれかで、実質的に同時期に投与することを意味する。一実施形態では、順次に投与する場合には、第２の化合物の投与時に、２種の化合物のうちの第１の化合物が、治療部位において、有効濃度で依然として検出可能である。別の実施形態では、順次に投与する場合には、第２の化合物の投与時に、２種の化合物のうちの第１の化合物が、治療部位において、有効濃度では検出できない。
【０１４０】
例えば、併用療法は、少なくとも１種の追加の治療剤と共製剤化する、かつ／または少なくとも１種の追加の治療剤と同時投与する、少なくとも１種の抗ＩＬ−２２抗体を含むことができる。追加の薬剤は、より詳細に以下に記載する、少なくとも１種のサイトカイン阻害剤、増殖因子阻害剤、免疫抑制剤、抗炎症剤、代謝阻害剤、酵素阻害剤、細胞傷害剤および細胞分裂阻害剤を含むことができる。一実施形態では、追加の薬剤は、関節炎のための標準的な治療であり、これらに限定されないが、非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）；プレドニゾロン、プレドニゾン、コルチゾンおよびトリアムシノロンを含めた、副腎皮質ステロイド；および疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）が挙げられる。疾患修飾性抗リウマチ薬（ＤＭＡＲＤ）は、例として、メトトレキサート、ヒドロキシクロロキン（Ｐｌａｑｕｅｎｉｌ）およびスルファサラジン、レフルノミド（Ａｒａｖａ）；エタネルセプト（Ｅｎｂｒｅｌ）、（メトトレキサートと一緒のまたは一緒でない）インフリキシマブ（Ｒｅｍｉｃａｄｅ）およびアダリムマブ（Ｈｕｍｉｒａ）を含めた腫瘍壊死因子；抗ＣＤ２０抗体（例えば、Ｒｉｔｕｘａｎ）；アナキンラ（Ｋｉｎｅｒｅｔ）等の可溶性インターロイキン−１受容体；金、ミノサイクリン（Ｍｉｎｏｃｉｎ）、ペニシラミン；ならびにアザチオプリン、シクロホスファミドおよびシクロスポリンを含めた細胞傷害剤が挙げられる。そのような併用療法は、投与する治療剤のより低い投与量を有利に利用し、したがって、種々の単独療法に伴って生じうる毒性または合併症を避けることができる。さらに、本明細書に開示する追加の治療剤は、ＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２の経路に加えて、またはそれとは異なる経路に作用し、したがって、抗ＩＬ−２２抗体の作用を増強する、かつ／または抗ＩＬ−２２抗体の作用と協同することが予想される。
【０１４１】
抗ＩＬ−２２抗体と併用する治療剤は、自己免疫応答およびそれに続く炎症応答の異なる段階で妨害する薬剤であることができる。一実施形態では、本明細書に記載する少なくとも１種の抗ＩＬ−２２抗体を、少なくとも１種のサイトカインアンタゴニストおよび／または増殖因子アンタゴニストと共製剤化して、かつ／または少なくとも１種のサイトカインアンタゴニストおよび／または増殖因子アンタゴニストと同時投与することができる。アンタゴニストとして、可溶性受容体、ペプチド阻害剤、小型分子、リガンド融合体、（サイトカインもしくは増殖因子またはその受容体あるいはその他の細胞表面分子に結合する）抗体およびその結合断片、ならびに「抗炎症性サイトカイン」およびそのアゴニストを挙げることができる。
【０１４２】
本明細書に記載する抗ＩＬ−２２抗体と併用することができる薬剤の非限定的な例として、これらに限定されないが、少なくとも１種のインターロイキン（例えば、ＩＬ−１、ＩＬ−２、ＩＬ−６、ＩＬ−７、ＩＬ−８、ＩＬ−１２（またはそのサブユニットｐ３５もしくはｐ４０のうちの１種）、ＩＬ−１３、ＩＬ−１５、ＩＬ−１６、ＩＬ−１７Ａ−Ｆ（そのヘテロ二量体、例えば、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆの二量体を含む）、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１およびＩＬ−２３（またはそのサブユニットｐ１９もしくはｐ４０のうちの１種））；サイトカイン（例えば、ＴＮＦα、ＬＴ、ＥＭＡＰ−ＩＩおよびＧＭ−ＣＳＦ）；ならびに増殖因子（例えば、ＦＧＦおよびＰＤＧＦ）のアンタゴニストが挙げられる。また、薬剤として、これらに限定されないが、インターロイキン、サイトカインおよび増殖因子に対する少なくとも１種の受容体のアンタゴニストも挙げることができる。また、抗ＩＬ−２２抗体は、ＣＤ２、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ２０（例えば、Ｒｉｔｕｘａｎ）、ＣＤ２５、ＣＤ２８、ＣＤ３０、ＣＤ４０、ＣＤ４５、ＣＤ６９、ＣＤ８０（Ｂ７．１）、ＣＤ８６（Ｂ７．２）、ＣＤ９０等の細胞表面分子またはそのリガンド（例えば、ＣＤ１５４（ｇｐ３９、ＣＤ４０Ｌ））あるいはＬＦＡ−１／ＩＣＡＭ−１およびＶＬＡ−４／ＶＣＡＭ−１に対する阻害剤（例えば、抗体またはその結合断片）と併用することもできる（Ｙｕｓｕｆ−Ｍａｋａｇｉａｎｓａｒら（２００２）Ｍｅｄ  Ｒｅｓ  Ｒｅｖ  ２２（２）：１４６−６７））。特定の実施形態では、本明細書に記載する抗ＩＬ−２２抗体と併用することができるアンタゴニストとしては、ＩＬ−１、ＩＬ−１２（またはそのサブユニットｐ３５もしくはｐ４０のうちの１種）、ＴＮＦα、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７Ａ−Ｆ（そのヘテロ二量体、例えば、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆの二量体を含む）、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１およびＩＬ−２３（またはそのサブユニットｐ１９もしくはｐ４０のうちの１種）ならびにその受容体のアンタゴニストを挙げることができる。
【０１４３】
これらの薬剤の例として、ＩＬ−１２アンタゴニスト（ＩＬ−１２（例えば、ＷＯ００／５６７７２を参照）またはそのサブユニットｐ３５もしくはｐ４０のうちの１種に結合する抗体等）；ＩＬ−１２受容体阻害剤（ＩＬ−１２受容体に対する抗体等）；ならびに可溶性ＩＬ−１２受容体およびその断片が挙げられる。ＩＬ−１５のアンタゴニストの例として、ＩＬ−１５またはその受容体に対する抗体、ＩＬ−１５受容体の可溶性断片、およびＩＬ−１５結合タンパク質が挙げられる。ＩＬ−１８のアンタゴニストの例として、ＩＬ−１８に対する抗体、ＩＬ−１８受容体の可溶性断片、およびＩＬ−１８結合タンパク質（ＩＬ−１８ＢＰ、Ｍａｌｌｅｔら（２００１）Ｃｉｒｃ．Ｒｅｓ．２８）が挙げられる。ＩＬ−１アンタゴニストの例として、インターロイキン−１変換酵素（ＩＣＥ）阻害剤（Ｖｘ７４０等）、ＩＬ−１アンタゴニスト（例えば、ＩＬ−１ＲＡ（ＡＮＫＩＮＲＡ（またはＫｉｎｅｒｅｔ）、ＡＭＧＥＮ製））、ｓＩＬ−１ＲＩＩ（Ｉｍｍｕｎｅｘ製）、および抗ＩＬ−１受容体抗体が挙げられる。
【０１４４】
一実施形態では、併用療法は、アンタゴニストと共製剤化する、かつ／またはアンタゴニストと同時投与する、少なくとも１種の抗ＩＬ−２２抗体を含む。このアンタゴニストは、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆのヘテロ二量体またはＩＬ−２３（またはそのサブユニットｐ１９もしくはｐ４０のうちの１種）のうちの少なくとも１種の抗体またはその抗原結合断片あるいは可溶性受容体等である。
【０１４５】
ＴＮＦアンタゴニストの例として、ＴＮＦ（例えば、ヒトＴＮＦα）に対する抗体、具体的には、Ｄ２Ｅ７（ヒト抗ＴＮＦα抗体、米国特許第６２５８５６２号、Ｈｕｍｉｒａ（商標）、ＢＡＳＦ製）；ＣＤＰ−５７１／ＣＤＰ−８７０／ＢＡＹ−１０−３３５６（ヒト化抗ＴＮＦα抗体、Ｃｅｌｌｔｅｃｈ／Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）；ｃＡ２（キメラ抗ＴＮＦα抗体、Ｒｅｍｉｃａｄｅ（商標）、Ｃｅｎｔｏｃｏｒ製）；および抗ＴＮＦ抗体断片（例えば、ＣＰＤ８７０）が挙げられる。その他の例として、可溶性ＴＮＦ受容体（例えば、ヒトのｐ５５またはｐ７５）断片および誘導体、具体的には、ｐ５５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤのＴＮＦ受容体−ＩｇＧの融合タンパク質、Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ（商標））、および７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤのＴＮＦ受容体−ＩｇＧの融合タンパク質、Ｅｎｂｒｅｌ（商標）、Ｉｍｍｕｎｅｘ製、例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９４）Ｖｏｌ．３７、Ｓ２９５；Ｊ．Ｉｎｖｅｓｔ．Ｍｅｄ．（１９９６）Ｖｏｌ．４４、２３５Ａを参照）が挙げられる。さらなる例として、酵素アンタゴニスト（例えば、ＴＮＦα変換酵素阻害剤（ＴＡＣＥ）、具体的には、アルファ−スルホニルヒドロキサム酸誘導体（ＷＯ０１／５５１１２）、またはＮ−ヒドロキシホルムアミド阻害剤（ＧＷ３３３３、−００５、または−０２２））、ならびにＴＮＦ−ｂｐ／ｓ−ＴＮＦＲ（可溶性ＴＮＦ結合タンパク質、例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９、Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、Ｓ２８４；およびＡｍ．Ｊ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｈｅａｒｔ  Ｃｉｒｃ．Ｐｈｙｓｉｏｌ．（１９９５）Ｖｏｌ．２６８、ｐｐ．３７−４２を参照）が挙げられる。ＴＮＦアンタゴニストは、可溶性ＴＮＦ受容体（例えば、ヒトのｐ５５またはｐ７５）断片および誘導体、例として、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ；およびＴＮＦα変換酵素（ＴＡＣＥ）阻害剤であることができる。
【０１４６】
その他の実施形態では、本明細書に記載する抗ＩＬ−２２抗体は、以下のうちの少なくとも１種と併用して投与することができる：ＩＬ−１３アンタゴニスト、例として、可溶性ＩＬ−１３受容体および／または抗ＩＬ−１３抗体；ならびにＩＬ−１２アンタゴニスト、例として、ＩＬ−２融合タンパク質（例えば、ＤＡＢ４８６−ＩＬ−２および／またはＤＡＢ３８９−ＩＬ−２、Ｓｅｒａｇｅｎ製、例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９３）Ｖｏｌ．３６、１２２３を参照）、および抗ＩＬ−２Ｒ抗体（例えば、抗Ｔａｃ（ヒト化抗体、Ｐｒｏｔｅｉｎ  Ｄｅｓｉｇｎ  Ｌａｂｓ製、Ｃａｎｃｅｒ  Ｒｅｓ．１９９０  Ｍａｒ  １；５０（５）：１４９５−５０２）を参照）。別の併用として、非枯渇性の抗ＣＤ４阻害剤、例として、ＩＤＥＣ−ＣＥ９．１／ＳＢ２１０３９６（抗ＣＤ４抗体、ＩＤＥＣ／ＳｍｉｔｈＫｌｉｎｅ製）と組み合わせる抗ＩＬ−２２抗体が挙げられる。さらにその他の併用として、ＣＤ８０（Ｂ７．１）およびＣＤ８６（Ｂ７．２）等の共刺激分子のアンタゴニスト（抗体、可溶性受容体またはアンタゴニスト性リガンド等）；ＩＣＯＳＬ、ＩＣＯＳ、ＣＤ２８およびＣＴＬＡ４（例えば、ＣＴＬＡ４−Ｉｇ（アバタセプト））；Ｐ−セレクチン糖タンパク質リガンド（ＰＳＧＬ）；ならびに抗炎症性サイトカインおよびそのアゴニスト（例えば、抗体）と併用する抗ＩＬ−２２抗体が挙げられる。抗炎症性サイトカインとして、ＩＬ−４（ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ製）；ＩＬ−１０（ＳＣＨ５２００、組換えＩＬ−１０、ＤＮＡＸ／Ｓｃｈｅｒｉｎｇ製）；ＩＬ−１３；およびＴＧＦを挙げることができる。
【０１４７】
その他の実施形態では、少なくとも１種の抗ＩＬ−２２抗体は、少なくとも１種の抗炎症剤、免疫抑制剤、代謝阻害剤および酵素阻害剤と共製剤化すること、ならびに／または少なくとも１種の抗炎症剤、免疫抑制剤、代謝阻害剤および酵素阻害剤と同時投与することができる。本明細書に記載するＩＬ−２２アンタゴニストと併用することができる薬剤または阻害剤の非限定的な例として、これらに限定されないが、以下のうちの少なくとも１種が挙げられる：非ステロイド性抗炎症剤（ＮＳＡＩＤ）（具体的には、イブプロフェン、テニダップ（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９、Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、Ｓ２８０を参照））、ナプロキセン（例えば、Ｎｅｕｒｏ  Ｒｅｐｏｒｔ（１９９６）Ｖｏｌ．７、ｐｐ．１２０９−１２１３を参照）、メロキシカム、ピロキシカム、ジクロフェナクおよびインドメタシン）；スルファサラジン（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９、Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、Ｓ２８１を参照）；副腎皮質ステロイド（具体的には、プレドニゾロン）；サイトカイン抑制性抗炎症剤（ＣＳＡＩＤ）；ならびにヌクレオチド生合成の阻害剤（具体的には、プリン生合成の阻害剤（例えば、メトトレキサート等の葉酸アンタゴニスト）、およびピリミジン生合成の阻害剤（例えば、レフルノミド等のジヒドロオロト酸脱水素酵素（ＤＨＯＤＨ）阻害剤（例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９、Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、Ｓ１３１；Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ  Ｒｅｓｅａｒｃｈ（１９９６）Ｖｏｌ．４５、ｐｐ．１０３−１０７）を参照））。ＩＬ−２２／ＩＬ−２２ＲアンタゴニストまたはＩＬ−２２／ＩＬ−１０Ｒ２アンタゴニストとの併用のための治療剤として、ＮＳＡＩＤ、ＣＳＡＩＤ、ＤＨＯＤＨ阻害剤（例として、レフルノミド）、および葉酸アンタゴニスト（例として、メトトレキサート）を挙げることができる。
【０１４８】
追加の阻害剤の例として、以下のうちの少なくとも１種が挙げられる：副腎皮質ステロイド（経口、吸入および局所注射）；免疫抑制剤（具体的には、シクロスポリンおよびタクロリムス（ＦＫ−５０６））；ｍＴＯＲ阻害剤（具体的には、シロリムス（ラパマイシン）、またはラパマイシン誘導体（例えば、ＣＣＩ−７７９等のエステルラパマイシン誘導体（Ｅｌｉｔ．Ｌ．（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ３（８）：１２４９−５３；Ｈｕａｎｇ，Ｓ．ら（２００２）Ｃｕｒｒｅｎｔ  Ｏｐｉｎｉｏｎ  Ｉｎｖｅｓｔｉｇ．Ｄｒｕｇｓ３（２）：２９５−３０４）））；ＴＮＦαおよびＩＬ−１等の炎症誘発性サイトカインのシグナル伝達を妨害する薬剤（例えば、ＩＲＡＫ、ＮＩＫ、ＩＫＫ、ｐ３８、またはＭＡＰキナーゼ阻害剤）；ＣＯＸ２阻害剤（例えば、セレコキシブおよびその変異体（ＭＫ−９６６）、例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９、Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、Ｓ８１を参照）；ホスホジエステラーゼ阻害剤（具体的には、Ｒ９７３４０１、例えば、Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  ＆  Ｒｈｅｕｍａｔｉｓｍ（１９９６）Ｖｏｌ．３９、Ｎｏ．９（ｓｕｐｐｌｅｍｅｎｔ）、Ｓ２８２を参照）；ホスホリパーゼ阻害剤（例えば、細胞質ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）の阻害剤、具体的には、トリフルオロメチルケトン類似体（Ｕ．Ｓ．６，３５０，８９２））；血管内皮細胞増殖因子（ＶＥＧＦ）の阻害剤；ＶＥＧＦ受容体の阻害剤；ならびに血管新生の阻害剤。抗ＩＬ−２２抗体との併用のための治療剤として、免疫抑制剤（例として、シクロスポリンおよびタクロリムス（ＦＫ−５０６））；ならびにｍＴＯＲ阻害剤（例として、シロリムス（ラパマイシン）、またはラパマイシン誘導体（例えば、エステルラパマイシン誘導体、例として、ＣＣＩ−７７９））；ＣＯＸ２阻害剤（例として、セレコキシブおよびその変異体）；ならびにホスホリパーゼ阻害剤（例として、細胞質ホスホリパーゼ２（ｃＰＬＡ２）の阻害剤（例えば、トリフルオロメチルケトン類似体））を挙げることができる。
【０１４９】
少なくとも１種の抗ＩＬ−２２抗体と同時投与することおよび／または共製剤化することができる治療剤の例として、これらに限定されないが、以下のうちの少なくとも１種が挙げられる：ＴＮＦアンタゴニスト（具体的には、抗ＴＮＦ抗体）；ＴＮＦ受容体の可溶性断片（例えば、ヒトのｐ５５およびｐ７５）、およびその誘導体（具体的には、ｐ５５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤのＴＮＦ受容体−ＩｇＧの融合タンパク質、Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ（商標））、および７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤのＴＮＦ受容体−ＩｇＧの融合タンパク質、Ｅｎｂｒｅｌ（商標）））；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト（具体的には、ＴＡＣＥ阻害剤）；ＩＬ−１２（またはそのサブユニットｐ３５もしくはｐ４０のうちの１種）、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７Ａ−Ｆ（そのヘテロ二量体、例えば、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆのヘテロ二量体を含む）、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２２およびＩＬ−２３（またはそのサブユニットｐ１９もしくはｐ４０のうちの１種）のアンタゴニスト；Ｔ細胞およびＢ細胞の枯渇剤（具体的には、抗ＣＤ４抗体または抗ＣＤ２２抗体）；小型分子阻害剤（具体的には、メトトレキサレートおよびレフルノミド）；シロリムス（ラパマイシン）およびその類似体（具体的には、ＣＣＩ−７７９）；Ｃｏｘ−２およびｃＰＬＡ２の阻害剤；ｐ３８、ＴＰＬ−２、Ｍｋ−２およびＮＦκＢの阻害剤；ＲＡＧＥおよび可溶性ＲＡＧＥ；Ｐ−セレクチンおよびＰＳＧＬ−１の阻害剤（具体的には、それに対する抗体および小型分子阻害剤）；ならびにエストロゲン受容体ベータ（ＥＲＢ）アゴニストおよびＥＲＢ−ＮＦκｂアンタゴニスト。少なくとも１種の抗ＩＬ−２２抗体と同時投与することおよび／または共製剤化することができる治療剤として、以下のうちの少なくとも１種を挙げることができる：ＴＮＦ受容体の可溶性断片（例えば、ヒトのｐ５５およびｐ７５）、例として、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤのＴＮＦ受容体−ＩｇＧの融合タンパク質、Ｅｎｂｒｅｌ（商標））；メトトレキサート；レフルノミド；ならびにシロリムス（ラパマイシン）およびその類似体（例として、ＣＣＩ−７７９）。
【０１５０】
本明細書に開示する抗ＩＬ−２２抗体は、さらに詳細に下記で議論する特異的な免疫障害を治療するために、その他の治療剤と併用することができる。
【０１５１】
関節炎障害（例えば、関節リウマチ、炎症性関節炎、関節リウマチ、若年性関節リウマチ、骨関節炎および乾癬性関節炎）を治療するために、抗ＩＬ−２２抗体と併用することができる薬剤の非限定的な例として、以下のうちの少なくとも１種が挙げられる：ＴＮＦアンタゴニスト（具体的には、抗ＴＮＦ抗体）；ＴＮＦ受容体の可溶性断片（例えば、ヒトのｐ５５およびｐ７５）、およびその誘導体（具体的には、ｐ５５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（５５ｋＤのＴＮＦ受容体−ＩｇＧの融合タンパク質、Ｌｅｎｅｒｃｅｐｔ（商標））、および７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤのＴＮＦ受容体−ＩｇＧの融合タンパク質、Ｅｎｂｒｅｌ（商標）））；ＴＮＦ酵素アンタゴニスト（具体的には、ＴＡＣＥ阻害剤等）；ＩＬ−１２（またはそのサブユニットｐ３５もしくはｐ４０のうちの１種）、ＩＬ−１５、ＩＬ−１７Ａ−Ｆ（そのヘテロ二量体、例えば、ＩＬ−１７Ａ／ＩＬ−１７Ｆのヘテロ二量体を含む）、ＩＬ−１８、ＩＬ−１９、ＩＬ−２０、ＩＬ−２１、ＩＬ−２３（またはそのサブユニットｐ１９もしくはｐ４０のうちの１種）、およびＩＬ−２４のアンタゴニスト；Ｔ細胞およびＢ細胞の枯渇剤（具体的には、抗ＣＤ４抗体、抗ＣＤ２０抗体または抗ＣＤ２２抗体）；小型分子阻害剤（具体的には、メトトレキサレートおよびレフルノミド）；シロリムス（ラパマイシン）およびその類似体（例えば、ＣＣＩ−７７９）；Ｃｏｘ−２およびｃＰＬＡ２の阻害剤；ＮＳＡＩＤ；ｐ３８、ＴＰＬ−２、Ｍｋ−２およびＮＦκＢの阻害剤；ＲＡＧＥおよび可溶性ＲＡＧＥ；Ｐ−セレクチンまたはＰＳＧＬ−１の阻害剤（具体的には、小型分子阻害剤およびそれに対する抗体）；エストロゲン受容体ベータ（ＥＲＢ）アゴニストおよびＥＲＢ−ＮＦκｂアンタゴニスト。少なくとも１種のＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２アンタゴニストと同時投与することおよび／または共製剤化することができる治療剤として、以下のうちの少なくとも１種を挙げることができる：ＴＮＦ受容体の可溶性断片（例えば、ヒトのｐ５５およびｐ７５）、例として、７５ｋｄＴＮＦＲ−ＩｇＧ（７５ｋＤのＴＮＦ受容体−ＩｇＧの融合タンパク質、Ｅｎｂｒｅｌ（商標））；メトトレキサート；レフルノミド；ならびにシロリムス（ラパマイシン）またはその類似体（例えば、ＣＣＩ−７７９）。
【０１５２】
多発性硬化症を治療するために、抗ＩＬ−２２抗体と併用することができる非限定的な例として、インターフェロン−β（例えば、ＩＦＮβ−１ａおよびＩＦＮβ−１ｂ）、コパキソン、副腎皮質ステロイド、ＩＬ−１阻害剤、ＴＮＦ阻害剤、ＣＤ４０リガンドに対する抗体、ＣＤ８０に対する抗体、ならびにＩＬ−１２（またはそのサブユニットｐ３５もしくはｐ４０のうちの１種）に結合する抗体を含めたＩＬ−１２アンタゴニストが挙げられる。
【０１５３】
炎症性腸疾患またはクローン病を治療するために、抗ＩＬ−２２抗体と併用することができる非限定的な例として、ブデノシド；上皮増殖因子；副腎皮質ステロイド；シクロスポリン；スルファサラジン；アミノサリチル酸；６−メルカプトプリン；アザチオプリン；メトロニダゾール；リポキシゲナーゼ阻害剤；メサラミン；オルサラジン；バルサラジン；抗酸化剤；トロンボキサン阻害剤；ＩＬ−１受容体アンタゴニスト；抗ＩＬ−１モノクローナル抗体；抗ＩＬ−６モノクローナル抗体；増殖因子；エラスターゼ阻害剤；ピリジニル−イミダゾール化合物；本明細書に記載するＴＮＦアンタゴニスト；ＩＬ−４、ＩＬ−１０、ＩＬ−１３および／またはＴＧＦβあるいはそのアゴニスト（例えば、アゴニスト抗体）；ＩＬ−１１；プレドニゾロン、デキサメタゾンまたはブデノシドのグルクロニドまたはデキストラン結合プロドラッグ；ＩＣＡＭ−１アンチセンスホスホロチオエートオリゴデオキシヌクレオチド（ＩＳＩＳ２３０２；Ｉｓｉｓ  Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌｓ，Ｉｎｃ．製）；可溶性補体受容体１（ＴＰ１０；Ｔ  Ｃｅｌｌ  Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｃ．製）；徐放性メサラジン；メトトレキサート；血小板活性化因子（ＰＡＦ）のアンタゴニスト；シプロフロキサシン；ならびにリグノカインが挙げられる。
【０１５４】
その他の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体は、免疫応答の調節、例えば、移植片拒絶または移植片対宿主病に関与するその他の標的に対して作られた少なくとも１種の抗体と併用することができる。免疫応答を治療するために、本発明のＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ１０Ｒ２アンタゴニストと併用することができる非限定的な薬剤の例として、以下が挙げられる：これらに限定されないが、ＣＤ２５（ＩＬ−２受容体α）、ＣＤ１１ａ（ＬＦＡ−１）、ＣＤ５４（ＩＣＡＭ−１）、ＣＤ４、ＣＤ４５、ＣＤ２８／ＣＴＬＡ４、ＣＤ８０（Ｂ７−１）、ＣＤ８６（Ｂ７−２）を含めた細胞表面分子に対する抗体、またはその組合せ。別の実施形態では、抗ＩＬ−２２抗体は、シクロスポリンＡまたはＦＫ５０６等、少なくとも１種の一般的な免疫抑制剤と併用する。
【０１５５】
したがって、本明細書の別の態様は、抗ＩＬ−２２抗体をその他の治療剤と併用して投与するためのキットに関する。一実施形態では、キットは、薬学的担体中に配合された少なくとも１種の抗ＩＬ−２２抗体と、少なくとも１種の治療剤とを含み、これらは、適宜、１つまたは複数の別々の医薬製剤中に配合される。
【０１５６】
ＶＩ．診断での使用
また、抗体は、生体試料中のＩＬ−２２の存在を検出するために使用することができる。これらのタンパク質の存在またはレベルを所与の医学的状態と相関させることによって、当業者であれば、関連する医学的状態を診断することができる。例えば、ＩＬ−２２は、炎症性サイトカイン（ＩＬ−１およびＴＮＦα等）が原因である医学的状態に関連する変化を引き起こすので、ＩＬ−２２の阻害剤は、関節リウマチの症状を改善する（ＷＯ２００５／０００８９７Ａ２）。本発明の抗体によって診断することができる例示的な医学的状態として、多発性硬化症、関節リウマチ、乾癬、炎症性腸疾患、膵臓炎および移植片拒絶が挙げられる。
【０１５７】
抗体に基づく検出方法は、当技術分野では周知であり、ＥＬＩＳＡ、ラジオイムノアッセイ、免疫ブロット、ウエスタンブロット、フローサイトメトリー、免疫蛍光法、免疫沈降法、およびその他の関連の技法が挙げられる。抗体は、ＩＬ−２２を検出するためのこれらの手順のうちの少なくとも１つを組み入れた診断用キット中に提供することができる。キットは、その他の成分、包装、指示、タンパク質の検出およびキットの使用の助けとなるその他の材料を含有することができる。
【０１５８】
抗体は、リガンド基（例えば、ビオチン）、フルオロフォアおよび発色団、放射性同位体、高密度電子試薬、または酵素を含めた、検出可能なマーカーで修飾することができる。酵素は、活性によって検出される。例えば、西洋ワサビペルオキシダーゼは、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を、分光光度計を用いて定量化できる青色の色素に変換する能力によって検出される。その他の適切な結合相手として、ビオチンとアビジン、ＩｇＧとプロテインＡ、ならびに当技術分野で既知のその他の受容体−リガンドの対が挙げられる。
【０１５９】
また、抗体は、数ある中でも、別の抗体（例えば、二重特異性抗体または多重特異性抗体）、毒素、放射性同位体、細胞傷害剤または細胞分裂阻害剤等、少なくとも１つのその他の分子的実体に、（例えば、化学的結合、遺伝子融合、非共有結合性の会合または別法によって）機能的に連結することもできる。その他の置換および可能性は、当業者には明らかであり、それらは、本発明の範囲のうちの等価物とみなされる。
【０１６０】
ＶＩＩ．医薬組成物および投与方法
本発明の特定の実施形態は、開示する抗体を含む組成物を含む。組成物は、医薬品としての使用および患者への投与に適することができる。組成物は、本発明の抗体と薬学的賦形剤とを含む。本明細書で使用する場合、「薬学的賦形剤」は、医薬品としての投与に適合する、溶媒、分散媒体、被膜剤、抗菌剤および抗真菌剤、等張化剤、ならびに吸収遅延剤等を含む。薬学的に活性な物質のためのこれらの物質の使用は、等技術分野では周知である。また、組成物は、補助的な、追加のまたは増強された治療上の機能を提供する、その他の活性化合物を含有してもよい。また、医薬組成物は、投与のための指示と共に、容器、パック、ディスペンサー中に含むこともできる。
【０１６１】
本発明の医薬組成物は、意図する投与経路に適合するように製剤化する。投与を行うための方法は、当業者には既知である。医薬組成物は、局所または経口で投与することができ、粘膜を超えての透過が可能である。医薬組成物の投与の例として、経口摂取または吸入が挙げられる。また、投与は、静脈内投与、腹腔内投与、筋肉内投与、腔内投与、皮下投与、皮膚投与、または経皮投与であってもよい。
【０１６２】
皮内または皮下への適用のために使用する溶液または懸濁液は、典型的には、以下の成分のうちの少なくとも１種を含む：無菌の希釈液、例として、水、生理食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコールまたはその他の合成溶媒；抗菌剤、例として、ベンジルアルコールまたはメチルパラベン；抗酸化剤、例として、アスコルビン酸または亜硫酸水素ナトリウム；キレート化剤、例として、エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）；緩衝液、例として、酢酸、クエン酸またはリン酸；および等張化剤、例として、塩化ナトリウムまたはデキストロース。ｐＨを、酸または塩基で調整することができる。そのような製剤を、アンプル、使い捨てシリンジまたは多用量バイアル中に充填することができる。
【０１６３】
静脈内投与のために使用する溶液または懸濁液として、担体、例として、生理食塩水、静菌性の水、Ｃｒｅｍｏｐｈｏｒ  ＥＬ（商標）（ＢＡＳＦ、Ｐａｒｓｉｐｐａｎ、ニュージャージ州）、エタノールまたはポリオールを含む。いずれの場合も、組成物は、無菌で、シリンジへの注入が容易な流動性を有することが必要である。適切な流動性は、しばしば、レシチンまたは界面活性物質を使用することによって得ることができる。また、組成物は、製造および保管の条件下で安定である必要もある。微生物の阻止は、抗細菌剤または抗真菌剤、例えば、パラベン、クロロブタノール、フェノール、アスコルビン酸、チメロサール等を用いて達成することができる。多くの場合、等張化剤（糖）、ポリアルコール（マンニトールおよびソルビトール）、または塩化ナトリウムを、組成物中に含むことができる。組成物の吸収を、吸収を遅延させる物質、例えば、モノステアリン酸アルミニウムおよびゼラチンを添加することによって延長させることができる。
【０１６４】
経口組成物は、不活性の希釈剤または食用に適した担体を含む。組成物は、ゼラチン中に充填する、または錠剤に圧縮することができる。経口投与の目的では、抗体は、賦形剤と合わせて、錠剤、トローチ剤またはカプセル剤の中に含ませることができる。薬学的に適合する結合剤またはアジュバント物質を、組成物中に含めることができる。錠剤、トローチ剤およびカプセル剤は、（１）結合剤、例として、微結晶セルロース、トラガントゴムまたはゼラチン；（２）賦形剤、例として、デンプンまたはラクトース、（３）崩壊剤、例として、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌまたはコーンスターチ；（４）滑剤、例として、ステアリン酸マグネシウム；（５）流動促進剤、例として、コロイド二酸化ケイ素；あるいは（６）甘味剤または矯味剤を含有することができる。
【０１６５】
また、組成物は、粘膜または皮膚を介する経路によって投与することもできる。例えば、Ｆｃ部分を含む抗体は、腸、口または肺の粘膜を（Ｆｃ受容体を介して）通過することができるであろう。経粘膜投与は、ドロップ剤、鼻腔用スプレー、吸入器または坐剤の使用によって行うことができる。また、経皮投与も、当技術分野で既知の軟膏、膏薬、ジェルまたはクリームを含有する組成物を使用することよって行うことができる。経粘膜投与または経皮投与のためには、関門に浸透する適切な浸透剤を使用する。吸入による投与のためには、抗体は、噴霧剤（例えば、液体または気体）を含有する、加圧された容器またはディスペンサーからのエアロゾルスプレー中、あるいは噴霧器中でデリバリーする。
【０１６６】
特定の実施形態では、本発明の抗体は、担体と一緒にして調製して、抗体を体内から急速に排出されないように保護する。生分解性ポリマー（例えば、エチレンビニルアセテート、ポリ酸無水物、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルソエステル、ポリ乳酸）が、しばしば、使用される。そのような製剤を調製するための方法は、当業者には既知である。リポソームの懸濁液も、薬学的に許容される担体として使用することができる。リポソームは、当技術分野で既知の確立された方法に従って調製することができる（米国特許第４５２２８１１号）。
【０１６７】
本発明の抗体または抗体の組成物は、記載する治療有効量で投与する。治療有効量は、対象の年齢、状態、性別および医学的状態の重症度によって変化させることができる。適切な投与量は、医師が、臨床的な徴候に基づいて決定することができる。抗体または組成物は、急速投与として投与して、抗体の循環レベルを最も長時間にわたり最大化することができる。また、連続的な注入も、急速投与後に使用することができる。
【０１６８】
本明細書に記載する場合、「対象」という用語は、ヒトおよび非ヒトの動物を含むことを意図する。対象として、ＩＬ−２２を発現する細胞、例えば、癌細胞または免疫細胞によって特徴付けられる障害を有するヒト患者を挙げることができる。本発明の「非ヒト動物」という用語は、すべての脊椎動物、例として、非ヒト霊長類、ヒツジ、イヌ、ウシ、ニワトリ、両生類、爬虫類等を含む。
【０１６９】
対象に投与することができる投与量の範囲の例を、１μｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ、１μｇ／ｋｇから１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇから１ｍｇ／ｋｇ、１０μｇ／ｋｇから１００μｇ／ｋｇ、１００μｇ／ｋｇから１ｍｇ／ｋｇ、２５０μｇ／ｋｇから２ｍｇ／ｋｇ、２５０μｇ／ｋｇから１ｍｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇから２ｍｇ／ｋｇ、５００μｇ／ｋｇから１ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇから２ｍｇ／ｋｇ、１ｍｇ／ｋｇから５ｍｇ／ｋｇ、５ｍｇ／ｋｇから１０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇから２０ｍｇ／ｋｇ、１０ｍｇ／ｋｇから２５ｍｇ／ｋｇ、１５ｍｇ／ｋｇから２５ｍｇ／ｋｇ、２０ｍｇ／ｋｇから２５ｍｇ／ｋｇ、および２０ｍｇ／ｋｇから３０ｍｇ／ｋｇ（または３０ｍｇ／ｋｇ超）から選択することができる。これらの投与量は、１回投与量、投与方法、治療する障害または症状（複数の症状）、および個々の対象の特徴によって、毎日、１週毎、２週毎、１カ月毎、またはより低頻度で、例えば、年２回投与することができる。また、投与量は、（ポンプによって等の）連続的な注入によって投与することもできる。また、投与する量は、投与経路によっても異なる場合がある。例えば、皮下投与は、静脈内投与よりも多い投与量を必要とするであろう。
【０１７０】
特定の状況では、投与の簡便化および投与量の均一化のために、組成物を単位剤型に製剤化するのが有利な場合がある。本明細書で使用する場合、単位剤型は、患者に適した物理的に個別の単位を指す。各用量単位は、担体と共同して治療効果をもたらすように計算された、あらかじめ決定された量の抗体を含有する。用量単位は、抗体の特徴および達成しようとする特定の治療効果によって異なる。
【０１７１】
組成物の毒性および治療の効力は、細胞培養または実験動物において、標準的な薬学的手順によって決定する、例えば、ＬＤ５０（集団の５０％に対して致死的な用量）およびＥＤ５０（集団の５０％において治療に有効な用量）を決定することができる。毒性効果と治療効果との間の用量の比が、治療指数であり、これは、ＬＤ５０／ＥＤ５０の比として表すことができる。大きな治療指数を示す抗体は、より低い毒性および／またはより高い治療効果を示すことができる。
【０１７２】
細胞培養アッセイおよび動物研究から得たデータを使用して、ヒトにおける投与量の範囲を求めることができる。これらの化合物の投与量は、ＥＤ５０を含むが、毒性はほとんどまたはまったくない、血液中の抗体の循環濃度の範囲に入ることができる。投与量は、利用する組成物の投与剤型および投与経路によって、この範囲内で変化させることができる。本発明に使用するいずれの抗体についても、治療有効量は、最初は、細胞培養アッセイを使用して推定することができる。所与の用量は、動物モデルにおいて、ＩＣ５０（すなわち、最大半量の症状の抑制を達成する抗体の濃度）を含む、血漿中の循環濃度の範囲を達成するように求めることができる。いずれの特定の投与量の効果も、適切なバイオアッセイによってモニターすることができる。適切なバイオアッセイの例として、ＤＮＡ複製アッセイ、転写に基づくアッセイ、ＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ結合アッセイ、ＩＬ−２２／ＩＬ−１０Ｒ２結合アッセイ、ＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ／ＩＬ−１０Ｒ２およびその他の免疫学的アッセイが挙げられる。
（実施例）
【実施例１】
【０１７３】
抗ＩＬ−２２ｓｃＦｖの選択
親であるＧＩＬ０１およびＧＩＬ６８の選択
ＧＩＬ０１およびＧＩＬ６８は、ｓｃＦｖライブラリーから、ＩＬ−２２上での可溶性選択によって単離した。可溶性選択は、Ｎ末端Ｈｉｓ／ＦＬＡＧタグ付けタンパク質を有する、ビオチン化ＩＬ−２２（ｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆ）を使用して行った。ｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆは、最初は、１００ｎＭの濃度で使用した。記載されている１．３８×１０１０ライブラリー（Ｖａｕｇｈａｎら、１９９６）の拡大版である、ｓｃＦｖファージミドライブラリーを使用して、ＩＬ−２２に対して特異的な抗体を選択した。精製したｓｃＦｖファージ（１０１２形質導入単位（ｔｕ））を、１００μｌの３％ＭＰＢＳ（ＰＢＳ中の３％粉乳）中で、３０分間ブロックし、次いで、ｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆを添加して、室温で１時間インキュベートした。１ｍｌの３％ＭＰＢＳ中で、３７℃で１時間ブロックした、５０μｌのＤｙｎａｌ  Ｍ２８０ストレプトアビジン磁気ビーズに、ファージ／抗体を添加し、次いで、室温でさらに１５分間インキュベートした。ビーズを、磁気ラックを使用して捕捉し、１ｍｌの３％ＭＰＢＳ／０．１％（ｖ／ｖ）Ｔｗｅｅｎ２０中で４回洗浄し、その後、ＰＢＳ中で３回洗浄した。最後の洗浄の後、ビーズを、１００μｌのＰＢＳ中に再懸濁して、５ｍｌの指数関数的に増殖しているイー・コリＴＧ−１細胞に感染させるのに使用した。ビーズ上の細胞およびファージを、３７℃で１時間インキュベートし（３０分間は静置し、３０分間は２５０ｒｐｍで振とうした）、次いで、２ＴＹＡＧプレート上に広げた。プレートを、３０℃で一晩インキュベートして、翌日、コロニーを可視化した。コロニーを、プレートから１０ｍｌの２ＴＹブロス中にこすり落とし、１５％グリセロールを添加して、−７０℃での保管に供した。
【０１７４】
第１ラウンドの選出からのグリセロール保存培養物に、ハルパーファージを重感染させて、レスキューして、第２ラウンドの選択のために、ｓｃＦｖ抗体発現ファージ粒子を得た。可溶性選択の第２ラウンドおよび第３ラウンドを、ｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆの濃度を５０ｎＭに下げて、上記の記載に従って行った。
【０１７５】
親であるＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０およびＧＩＬ９２の単離
ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０およびＧＩＬ９２を、ｓｃＦｖライブラリーから、ＩＬ−２２融合タンパク質上での選出とｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆ上での可溶性選択との組合せによって単離した。マイクロタイタープレートのウェルを、１０μｇ／ｍｌ（ダルベッコＰＢＳ、ｐＨ７．４）ヒトＩＬ−２２融合タンパク質を用いてコートし、４℃で一晩インキュベートした。ウェルを、ＰＢＳ中で洗浄した後、３％ＭＰＢＳ中で、３７℃で２時間ブロックした。１００μｌの３％ＭＰＢＳ中の精製したファージ（１０１２ｔｕ）を、ブロックしたウェルに添加して、室温で１時間インキュベートした。ウェルを、ＰＢＳＴ（０．１％ｖ／ｖ  Ｔｗｅｅｎ２０を含有するＰＢＳ）で１０回洗浄し、次いでＰＢＳで１０回洗浄した。結合したファージ粒子を、１００μｌのトリプシン溶液（５０ｍＭトリス、ｐＨ８、１ｍＭ  ＣａＣｌ２中の０．５μｇ／ｍｌのトリプシン）を用いて、３７℃で３０分間溶出した。溶出したファージを、１０ｍｌの指数関数的に増殖しているイー・コリＴＧ−１に感染させるのに使用した。感染細胞を、上記に従って、２ＴＹブロス中で、３７℃で１時間増殖させ、次いで、２ＴＹＡＧプレート上に画線した後、３０℃で一晩インキュベートした。産生したコロニーを、プレートからこすり落として、ファージを、上記の記載に従ってレスキューした。第２ラウンドの可溶性選択を、１００ｎＭ  ｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆを使用して、上記に従って行った。
【実施例２】
【０１７６】
ｓｃＦｖがＩＬ−２２のＩＬ−２２Ｒに対する結合を遮断する
阻害アッセイを、親抗体であるＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８およびＧＩＬ９２の上で行って、ＩＬ−２２のＩＬ−２２Ｒおよび／またはＩＬ−２２受容体複合体に対する結合を、遮断するまたは変化させる抗体を同定した。ｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／ＦがヒトＩＬ−２２受容体タンパク質（ｈＩＬ−２２Ｒ）に結合するのを阻害する能力について、周辺質抽出物を含有する粗ｓｃＦｖをスクリーニングした。選択から得られたコロニーを、１００μｌの２ＴＹＡＧを含有する９６ウェルプレート中に拾った。１ｍＭ  ＩＰＴＧを指数関数的に増殖している培養物に添加することによって、ｓｃＦｖの産生を誘導し、３０℃で一晩インキュベートした。周辺質抽出物は、５０ｍＭ  ＭＯＰＳ、ｐＨ７．４／０．５ｍＭ  ＥＤＴＡ／０．５Ｍソルビトール中で調製した（Ｇｒｉｆｆｉｔｈｓら、１９９３）。
【０１７７】
マイクロタイタープレートを、１．２５μｇ／ｍｌのＩＬ−２２受容体タンパク質抗体（ＰＢＳ中）を用いて、室温で１．５時間コートした。次いで、プレートを、ＰＢＳ中で３回洗浄した後、２％粉乳を含有するＰＢＳ（２％ＭＰＢＳ）を用いて、室温で１時間ブロックした。さらに３回洗浄した後、ＩＬ−２２受容体タンパク質を含有する５０μｌの２５％細胞条件培地を、各ウェルに添加して、４℃で一晩インキュベートした。翌日、２５μｌの試料および２５μｌのｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆ（ＰＢＳ／０．０５％ＢＳＡ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ中の５４ｎｇ／ｍｌ）を、洗浄したプレートに添加して、室温で１．５時間インキュベートした。ＰＢＳＴ中で３回洗浄した後、ｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆの結合を、ユーロピウム−ストロプトアビジンを用いて検出し、ＴＲＦを、ＤＥＬＦＩＡ（登録商標）試薬キットおよびＶｉｃｔｏｒ２（商標）Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ製）を用いて検出した。
【０１７８】
ＩＬ−２２結合の阻害を示したクローンは、精製ｓｃＦｖとして、再試験した。ＩＬ−２２／ＩＬ−２２Ｒ結合アッセイ（上記に記載）およびＩＬ−２２／ＩＬ−２２受容体複合体アッセイ（以下に記載）の両方を使用した。クローンの効力をアッセイのＩＣ５０値として測定するために、ｓｃＦｖ濃度を滴定した。これらは、ＧｒａｐｈＰａｄ  Ｐｒｉｓｍソフトウェアおよび４パラメータロジスティク式の曲線に適合させることを使用して決定した。ＩＬ−２２受容体複合体アッセイからの試料の結果を、図１に示す。
【実施例３】
【０１７９】
ＩＬ−２２結合のファージＥＬＩＳＡによる検証
ｓｃＦｖのＩＬ−２２に対する特異性を確立するために、ＩＬ−２２融合タンパク質、ＩＬ−２２Ｈ／Ｆおよび無関係のタンパク質を使用して、ファージＥＬＩＳＡを行った。ファージミドを含有する個々のイー・コリのコロニーを、ウェルあたり１００μｌの２ＴＹＡＧ培地を含有する９６ウェルプレート中に播種した。指数関数的に増殖している培養物に、Ｍ１３Ｋ０７ヘルパーファージを  感染効率（ｍｏｉ）１０まで添加して、プレートを、３７℃でさらに１時間インキュベートした。プレートを、卓上遠心分離機中で、２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した。上清を除去し、細胞ペレットを、１００μｌの２ＴＹＡＫ中に再懸濁させた後、３０℃で振とうしながら一晩インキュベートした。翌日、プレートを、２０００ｒｐｍで１０分間遠心分離した後、各ウェルから１００μｌのファージ含有上清を、新しい９６ウェルプレートに移した。ファージ試料を、最終濃度３％のＭＰＢＳ中で、室温で１時間ブロックした。
【０１８０】
マイクロタイタープレートを、１μｇ／ｍｌのＩＬ−２２融合タンパク質、ＩＬ−２２Ｈ／Ｆまたは無関係のタンパク質を用いてコートし、４℃で一晩インキュベートした。コート後、溶液をウェルから除去し、プレートを、３％ＭＰＢＳ中で、室温で１時間ブロックした。プレートを、ＰＢＳで濯ぎ、次いで、５０μｌのあらかじめブロックしたファージを、各ウェルに添加した。プレートを、室温で１時間インキュベートし、次いで、ＰＢＳＴを３回交換して、その後、ＰＢＳを３回交換して洗浄した。各ウェルに、５０μｌの１：５０００希釈の抗Ｍ１３−ＨＲＰコンジュゲート（Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）を添加した後、プレートを、室温で１時間インキュベートした。プレートをＰＢＳＴで３回、次いで、ＰＢＳで３回洗浄した。５０μｌのＴＭＳ基質を、各ウェルに添加して、発色するまでインキュベートした。反応を、２５μｌの０．５Ｍ  Ｈ２ＰＯ４を添加することによって停止し、４５０ｎｍにおける吸光度を測定した。これらの実験によって、ｓｃＦｖクローンのＩＬ−２２に対する特異的な結合が確認された。
【実施例４】
【０１８１】
ｓｃＦＶのＩｇＧへの変換
ｓｃＦｖクローンからの重鎖および軽鎖のＶ領域を、クローンに特異的なプライマーを用いて増幅した。ＰＣＲ産物を、適切な制限酵素で消化した後、ヒトＩｇＧ４重鎖定常ドメイン（ＶＨドメイン）を含有するベクター、または適宜、ヒトのラムダまたはカッパの軽鎖定常ドメイン（ＶＬドメイン）を含有するベクター内にサブクローン化した。ＶＨセグメントおよびＶＬセグメントのうちの最も近いヒト生殖系列を決定して、この情報を使用して、カッパまたはラムダの軽鎖定常ドメインのどちらを使用するか示した（表４）。Ｖ領域ドメインがプラスミド内に正確に挿入されたことは、個々のイー・コリのコロニーからのプラスミドＤＮＡの配列決定によって検証した。プラスミドは、イー・コリの培養物から、標準的な技法によって調製し、重鎖構築物と軽鎖構築物とを、ＨＥＫ２９３ＥＢＮＡ細胞内に、標準的な技法を使用して同時形質移入した。分泌されたＩｇＧを、プロテインＡセファロース（Ｐｈａｒｍａｃｉａ製）を使用して精製し、緩衝液は、ＰＢＳに交換した。
【０１８２】
表４：ＩＬ−２２中和クローンのＶＨおよびＶＬの生殖系列
【表５】
2009528288.tif 000007
【０１８３】
精製したＩｇＧの効力を、以下に記載する生化学的ＩＬ−２２受容体複合体阻害アッセイにおいて検証した。効力の値を得るために、ＩｇＧ濃度を滴定した。試料の効力のデータを、表５に示す。
【０１８４】
表５：ＩＬ−２２受容体複合体阻害アッセイにおけるＩＬ−２２ｓｃＦｖおよびＩｇＧの効力
【表６】
2009528288.tif 000008
【実施例５】
【０１８５】
ＩＬ−２２抗体の最適化
大型のリボゾームディスプレイライブラリーを生み出し、特に、Ｈａｎｅｓら（２０００）に記載されている、組換えヒトＩＬ−２２を特異的に認識するｓｃＦｖについてスクリーニングした。最初は、５種の親クローン（ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８およびＧＩＬ９２）を、リボゾームディスプレイのフォーマットに変換し、続いて、この鋳型を、ライブラリーを生み出すために使用した。ＤＮＡレベルでは、ｍＲＮＡへの効率的な転写のために、Ｔ７プロモーターを５’末端で添加した。ｍＲＮＡレベルでは、ｍＲＮＡの安定性のために、構築物は、原核生物のリボゾーム結合部位（シャイン−ダルガノ配列）および５’＆３’ステムループを含有した。単鎖の３’末端においては、停止コドンを除去し、ｇＩＩＩの一部を添加して、スペーサーとして作用させて、ｓｃＦｖがリボゾームトンネルから離れて折り畳まれるのを可能にした（Ｈａｎｅｓら、２０００年）。
【０１８６】
リードクローンから誘導したリボゾームディスプレイライブラリーを、非プルーフリーディングＴａｑ  ＤＮＡポリメラーゼを用いるＰＣＲを使用して、単鎖の相補性決定領域（ＣＤＲ）の変異誘発によって生み出した。ライブラリーをｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆとインキュベートし、その後、ストレプトアビジンでコートした磁気ビーズ（Ｄｙｎａｌ  ２８０）を加えてインキュベートして、親和性に基づく選択を行った。三次の複合体（ｍＲＮＡ−リボゾーム−ｓｃＦｖ）を、磁性による分離によって回収し、一方、未結合の複合体は洗い流した。次いで、結合したｓｃＦｖをコードするｍＲＮＡを、記載に従って、ＲＴ−ＰＣＲによってレスキューし（Ｈａｎｅｓら（２０００））、選択の過程を、ｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆの濃度を減少させて（５回にわたり、１００ｎＭ〜１０ｐＭ）繰り返した。
【０１８７】
エラープローンＰＣＲを導入して、ライブラリーの大きさをさらに増加させた。利用したエラー率では、ＣａｄｗｅｌｌおよびＪｏｙｃｅ（１９９２年）の方法に基づいて、標準的なＰＣＲ反応後に、平均で１，０００ｐｂあたり７．２個の変異を生み出した。最初のエラープローンＰＣＲ反応は、選択の第１ラウンドと第２ラウンドとの間に発生した。
【０１８８】
各親クローンについて、ＶＨ／ＶＬ組換えライブラリーを、選択の第２ラウンドまたは第４ラウンドのうちのいずれかの後に、ＶＨおよびＶＬのＣＤＲリボゾームディスプレイの産物から調製した。特定の系列についてのＶＨＣＤＲの選択産物のＶＨ部分を、クローンに特異的なプライマーを使用して、ＰＣＲで特異的に増幅した。同一の系列についてのＶＬＣＤＲの選択産物のＶＬ部分を、別途、増幅した。これら２つのＰＣＲ産物を、オーバーラップＰＣＲ反応によって組み換えた。これは、リボゾームディスプレイの選択のその後のラウンドで必要となるすべての成分を含有するｓｃＦｖ産物の完全なライブラリーを生み出した。
【０１８９】
いくつかのクローンについては、ファージディスプレイライブラリーもまた利用した。ファージライブラリーは、適切なプライマーを用いるＰＣＲ反応を使用して、単鎖のＣＤＲの変異誘発によって生み出した後、上記の記載に従って、選択した。これらの産物もまた、リボゾームディスプレイの選択産物と組み合わせて、ＶＨ／ＶＬ組換えライブラリーを生み出した。リボゾームディスプレイの第４ラウンドからのＶＨの選択産物は、ファージディスプレイの第３ラウンドからの産物と一緒にして、同一の系列からのＶＬの産物と組み換えた。これは、クローンに特異的なプライマーおよびオーバーラップＰＣＲを使用して達成して、ＶＨ／ＶＬ組換えライブラリーを産生した。可溶性ｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆを用いる選択を、上記の記載に従って、リボゾームディスプレイのフォーマット中で続けた。生化学的高スループットスクリーニングのためにｓｃＦｖを産出する目的で、選択産物のｓｃＦｖ領域を、ｐＣＡＮＴＡＢ６中に一方向性にクローン化した。
【実施例６】
【０１９０】
最適化クローンの同定
選択産物の高スループットスクリーニングのために、２種のアッセイを使用した。クローンＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６およびＧＩＬ６８から誘導した産物は、ホモジニアス時間分解蛍光アッセイ（ＨＴＲＦ（登録商標）、Ｃｉｓ  Ｂｉｏｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ製）でスクリーニングし、一方、ＧＩＬ６０およびＧＩＬ９２の産物は、ＤＥＬＦＩＡ（登録商標）（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ製）アッセイでスクリーニングした。
【０１９１】
ＨＴＲＦ（登録商標）エピトープ競合アッセイ
ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６およびＧＩＬ６８から得られたクローンからの培養物の上清を含有する粗ｓｃＦｖを、上記の記載に従って調製し、ＨＴＲＦアッセイにおいて、ｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆ結合ＧＩＬ６８の阻害についてスクリーニングした。
【０１９２】
クリプテートで標識したＧＩＬ６８  ＩｇＧ（標識化キットは、Ｃｉｓ  Ｂｉｏｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ製）を、アッセイ用緩衝液（ＰＢＳ／０．４Ｍ  ＫＦ／０．０５％ＢＳＡ／０．０５％Ｔｗｅｅｎ）中で４００倍に希釈し、その後、７．５ｎＭストレプトアビジンＸＬ６６５（Ｘｌｅｎｔ、Ｃｉｓ  Ｂｉｏｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ製）を添加した。この溶液を、Ｐａｃｋａｒｄ黒色３８４ウェルＯｐｔｉｐｌａｔｅ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ製）中で、粗ｓｃＦｖ試料（１２５×に希釈）およびｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆと混合した。プレートを、室温で１時間インキュベートし、次いで、Ｖｉｃｔｏｒ２（商標）Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ製）を使用して読み取った。６６５ｎＭ／６２０ｎＭの発光比を使用して、各ウェルにおける特異的な結合の割合を計算した。
【０１９３】
ＤＥＬＦＩＡ（登録商標）時間分解蛍光アッセイ
ＧＩＬ６０およびＧＩＬ９２から得られたクローンを、ｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／ＦのＩＬ−２２受容体複合体に対する結合の阻害についてスクリーニングした。
【０１９４】
マイクロタイタープレートを、ＩＬ−２２受容体複合体抗体（ＰＢＳ中の１μｇ／ｍｌ）を用いてコートし、室温で１．５時間インキュベートした。プレートを、ＰＢＳＴ中で３回洗浄した後、２％ＭＰＢＳを用いて、室温で１時間ブロックした。さらに３回洗浄した後、ＩＬ−２２受容体複合体を含有する希釈した細胞条件培地を添加して、４℃で一晩インキュベートした。粗ｓｃＦｖの上清は、上記の記載に従って調製した。翌日、２５μｌの希釈したｓｃＦｖ試料および２５μｌのｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／Ｆ（６ｎｇ／ｍｌ）を、洗浄したプレートに添加して、室温で１．５時間インキュベートした。プレートを、ＰＢＳＴ中で３回洗浄し、次いで、ｂｉｏ．ＩＬ−２２Ｈ／ＦのＩＬ−２２受容体複合体に対する結合を、ユーロピウム−ストロプトアビジンおよびＤＥＬＦＩＡ（登録商標）試薬キット（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ製）を用いて検出した。時間分解蛍光を、Ｖｉｃｔｏｒ２（商標）Ｐｌａｔｅ  Ｒｅａｄｅｒ（Ｐｅｒｋｉｎ  Ｅｌｍｅｒ製）を使用して測定した。
【０１９５】
スクリーニングから同定した陽性クローンから精製したｓｃＦｖを、上記に従って、ＤＥＬＦＩＡ（登録商標）ＩＬ−２２受容体複合体競合アッセイにおいて試験した。アッセイにおけるＩＣ５０値によって測定したクローンの効力を確立するために、ｓｃＦｖ濃度の滴定を使用した。試料の結果を、図２に示す。１４個の最適化クローンを、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４および３５６Ａ１１と呼んだ。
【実施例７】
【０１９６】
ＢＡＦ３−ＩＬ−２２増殖アッセイにおける最適化クローンのランク付け
増殖アッセイを行って、ＩＬ−２２が仲介するＢａＦ３細胞の増殖を遮断する抗体の能力を評価した。ｈＩＬ２２Ｒ／ｈＩＬ１０Ｒ２を発現するＢａＦ３細胞を、ＢａＦ３細胞にｈＩＬ２２Ｒ−ＧＦＰとｈＩＬ１０Ｒ２−ＹＦＰとを同時形質移入することによって産生した。ｈＩＬ２２ＲおよびｈＩＬ１０Ｒ２の両方を発現するＢａＦ３細胞（ＢａＦ３−ＩＬ−２２受容体細胞）を、ＦＡＣＳによって選別および収集した。
【０１９７】
ＢａＦ３−ＩＬ−２２受容体細胞は、１０％ＦＢＳおよび１ｎｇ／ｍＬマウスＩＬ−３を有するＲＰＭＩ１６４０中で慣例に従って維持した。アッセイの準備の直前に、細胞を、アッセイ培地（１０％ＦＢＳ、１０００Ｕ／ｍｌペニシリンおよび１００μｇ／ｍｌストレプトマイシンを有するＲＰＭＩ１６４０）中で４回洗浄した後、アッセイ培地中に再懸濁して、３７℃、５％ＣＯ２で６〜８時間インキュベートした。アッセイ用プレートを調製するために、１００μｌの細胞（アッセイ培地中の１×１０５個／ｍｌ）を、９６ウェル平底組織培養プレート（Ｃｏｓｔａｒ製）の中央の６０ウェルに添加した。ｓｃＦｖ試料またはＩｇＧ試料を、保存試料をアッセイ培地中で希釈し、その後、０．２２μＭのフィルターを通してろ過することによって調製した。試料の５倍段階希釈物を、別の希釈用プレートに調製した。細胞を含有するウェルは、５０μｌの試料、その後、５０μｌのヒトＩＬ−２２（アッセイ培地中の４０ｎｇ／ｍｌ）を用いて処理し、次いで、３７℃、５％ＣＯ２中で４０時間インキュベートした。対照ウェルは、培地のみを含み、細胞は、細胞のみまたは１０ｎｇ／ｍＬヒトＩＬ−２２の存在下の細胞のいずれかを含んだ。
【０１９８】
細胞の増殖を、２０μｌのＡｌａｍａｒ  Ｂｌｕｅ（Ｓｅｒｏｔｅｃ製）をウェルに添加し、その後、３７℃、５％ＣＯ２中で５時間±３０分の間インキュベートすることによって検出した。蛍光を測定する前に、ウェル全体から均一なシグナルを確実に得られるように、プレートを穏やかに軽くたたくことによって混合した（励起＝５６０ｎＭ、発光＝５９０ｎＭ）。ＥＣ５０値およびＩＣ５０値を、４パラメータロジスティク曲線に適合させることによって推定し（Ｇｒａｐｈｐａｄ  Ｐｒｉｓｍ  ２ソフトウェア）、それらを使用して、抗体をランク付けた。最適化ｓｃＦｖおよびＩｇＧについての試料の効力のデータを、表６に示す。
【０１９９】
表６．ＢａＦ３−ＩＬ−２２増殖アッセイにおけるｓｃＦｖクローンおよびＩｇＧクローンのＩＣ５０値
【表７】
2009528288.tif 000009
＊ＧＩＬ９２から誘導したクローンは、生殖系列化ＩｇＧとして試験した。
【実施例８】
【０２００】
生殖系列化
６種の親クローンについての配列データを使用して、各クローンの重鎖および軽鎖について最も近い生殖系列配列を同定した。適切な変異を、適切な変異誘発プライマーを用いる標準的な部位特異的変異誘発の技法を使用して作製した。配列の変異は、配列解析によって確認した。生殖系列化したクローンならびにそのｓｃＦｖならびにＶＨドメインおよびＶＬドメインについての配列を、表７に示す。アッセイにおけるＩＣ５０値によって測定したクローンの効力を確立するために、生殖系列化した親クローンから精製したｓｃＦｖを、前に記載したビオチン化ＩＬ−２２結合ＩＬ−２２受容体複合体競合アッセイにおいて試験した。結果の概要を、表８に示す。
【０２０１】
表７Ａ：生殖系列化した抗体（ＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０６２Ａ０９および０８７Ｂ０３）のＶＨドメインおよびＶＬドメイン、Ｆｖ、ならびにＣＤＲのアミノ酸配列およびヌクレオチド配列
【表８】
2009528288.tif 000010
【０２０２】
表７Ｂ：生殖系列化した抗体（１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４）のＶＨドメインおよびＶＬドメイン、Ｆｖ、ならびにＣＤＲのアミノ酸配列およびヌクレオチド配列
【表９】
2009528288.tif 000011
【０２０３】
表８：ＩＬ−２２受容体競合アッセイにおける非生殖系列化親クローンまたは生殖系列化親クローンのｓｃＦｖの効力
【表１０】
2009528288.tif 000012
【０２０４】
最適化した抗体のうちの９種を、上記の記載に従って、生殖系列化した。８種の生殖系列化したＩｇＧを、上記の記載に従って、ＢａＦ３−ＩＬ−２２増殖アッセイにおいて試験した。代表的な実験からの抗体のＩＣ５０値を、表９に示す。
【０２０５】
次いで、抗体の配列を、ＧＥＮＥＡＲＴ  Ｎｏｒｔｈ  Ａｍｅｒｉｃａ（２８  Ｋｉｒｋ  Ｂｒａｄｄｅｎ  Ｒｄ．Ｅａｓｔ、Ｔｏｒｏｎｔｏ、ＯＮ、カナダ  Ｍ８Ｙ２Ｅ６）に送り、そこで、その配列は、ＣＨＯ細胞中での最適化された発現のために、ＧＥＮＥＡＲＴの特許で守られた最適化アルゴリズムを使用して合成された。
【０２０６】
表９：ＢａＦ３−ＩＬ−２２Ｒ増殖アッセイにおける生殖系列化した最適化クローンのＩｇＧの効力
【表１１】
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【実施例９】
【０２０７】
抗体は、ＨＴ２９細胞からのＩＬ−２２が誘導するＧＲＯａの分泌を阻害する
ＧＲＯアッセイを行って、ＨＴ２９細胞からのＩＬ−２２が誘導するＧＲＯａの分泌を遮断する抗体の能力を評価した。ＨＴ２９細胞を、ＤＭＥＭ培地（ＤＭＥＭ＋１０％ＦＢＳ＋１００単位／ｍｌのペニシリンおよびストレプトマイシン＋２ｍＭグルタミン）中で、５×１０４個／ウェルで、９６ウェル平底組織培養プレート（Ｃｏｒｎｉｎｇ  Ｉｎｃ．製、カタログ番号：３５９５）中に播種した。１０ｎｇ／ｍｌのＩＬ−２２を、ＤＭＥＭ培地中で段階希釈した抗体と混合し、３７℃で３０分間インキュベートした。播種２４時間後、培地を、ＨＴ２９細胞から除去し、あらかじめ混合したＩＬ−２２および抗体を、９６ウェルプレート中の細胞に添加した。
【０２０８】
３７℃、５％ＣＯ２で４８時間インキュベートした後、培地を収集し、分泌されたＧＲＯａを、ヒトＧＲＯａイムノアッセイキット（Ｒ＆Ｄ  Ｓｙｓｔｅｍｓ製、カタログ番号：ＤＧＲ００）を使用して、メーカーの指示に従って試験した。結果を、図３に示す。
【実施例１０】
【０２０９】
抗体は、異なる種のＩＬ−２２に結合し、異なる種のＩＬ−２２を阻害する
生殖系列化した最適化抗体および生殖系列化していない最適化抗体の異種間の反応性を、以下に従って決定した：ＥＬＩＳＡプレート（Ｃｏｓｔａｒ製、カタログ番号：３５９０）を、ＰＢＳ緩衝液中の１μｇ／ｍｌのラット、マウスもしくはヒトのＩＬ−２２、あるいはヒトＩＬ−２６を用いて、一晩コートした。プレートを、ＰＢＳＴ緩衝液（ＰＢＳ中の０．０５％Ｔｗｅｅｎ２０）で３回洗浄し、次いで、１％ＢＳＡ（Ｓｉｇｍａ製、Ａ８９１８）／ＰＢＳＴを用いて、ＲＴで１時間ブロックした。抗体を、１μｇ／ｍｌで添加して、２５℃で１時間インキュベートした。プレートを洗浄し、次いで、ＨＲＰ−標識ヤギ抗ヒトＩｇＧ抗体（Ｓｏｕｔｈｅｒｎ  Ｂｉｏｔｅｃｈ  Ａｓｓｏｃｉａｔｉｏｎ製、カタログ番号：２０４０−０５）を添加した。プレートを、２５℃で１時間インキュベートし、次いで、ＰＢＳＴで洗浄した後、ＴＭＢ（ＫＰＬ製、カタログ番号：５０−７６−０４）を用いて発色させた。反応を、０．１８Ｍ  Ｈ２ＳＯ４を用いて停止した。プレートを、４５０ｎｍのＯＤで読み取った。結果を、図４に示す。
【０２１０】
また、これらの抗体を、ＧＲＯａの細胞アッセイおよびＢａＦ３−ＩＬ−２２増殖アッセイの両方においても評価した。表１０（ａ）および１０（ｂ）に示すように、抗体は、ヒトＩＬ−２２受容体を介する、ヒト、サル、ラットおよびマウスのＩＬ−２２シグナル伝達の活性を遮断した。また、３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４は、実施例１１でさらに議論する、リアルタイム生体分子特異的相互反応解析（ＢＩＡ）を使用すると、マウス、ラットおよびサルのＩＬ−２２に対する異種間の反応性も実証した。
【０２１１】
表１０（ａ）．ＧＲＯａの細胞に基づくアッセイ系において示すように、ＩＬ−２２抗体は、その他の種のＩＬ−２２を遮断することに関して、非常に強力である。表示する値は、ｐＭでのＩＣ５０値を示す。
【表１２】
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【０２１２】
表１０（ｂ）．ＢａＦ３細胞に基づくアッセイ系において示すように、ＩＬ−２２抗体は、その他の種のＩＬ−２２を遮断することに関して、非常に強力である。表示する値は、ｐＭでのＩＣ５０値を示す。
【表１３】
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【実施例１１】
【０２１３】
ラット抗ＩＬ−２２モノクローナル抗体とヒト抗ＩＬ−２２モノクローナル抗体との間の結合動態の比較
ヒトＩＬ−２２に対する、ヒトモノクローナル抗ＩＬ−２２抗体（３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４）、ならびにラットモノクローナル抗ＩＬ−２２抗体（ＷＯ２００５／０００８９７およびＷＯ０２／０６８４７６からのＰ３／３（Ａｂ−０２）およびＰ３／２（Ａｂ−０４））を、表面プラズモン共鳴技術を使用するリアルタイム生体分子特異的相互反応解析（ＢＩＡ）によって、評価した。
【０２１４】
ラットモノクローナル抗体のためのバイオセンサー表面を調製するために、ＰｒｏｔｅｉｎＡ／Ｇ（Ｐｉｅｒｅｃｅ製、＃２１１８６、Ｒｏｃｋｆｏｒｄ、イリノイ州）を、研究用グレードのカルボキシメチルデキストラン製のチップ（ＣＭ５）上に、アミンのカップリングを使用して固定化した。表面を、ＥＤＣ／ＮＨＳを用いて活性化した。プロテインＡ／Ｇを、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ４．０）中で５０μｇ／ｍｌの濃度で注入した。固定化は、ウィザードツールを使用して、プロテインＡ／Ｇの場合は３０００（ＲＵ）を目指して行った。残存する活性化された基を、１．０Ｍエタノールアミン（ｐＨ８．０）を用いてブロックした。第１のフローセルは、バルク屈折率、マトリックス効果および非特異的結合について補正するための参照表面として使用した。第２、第３および第４のフローセルは、捕捉分子を用いてコートした。ラットモノクローナル抗体であるＡｂ−０２およびＡｂ−０４は、プロテインＡ／Ｇに結合するので、３０μｌの１μｇ／ｍｌ溶液を注入することによって、プロテインＡ／Ｇ表面上に捕捉された。ベースラインとＡｂ−０２またはＡｂ−０４の注入完了約９０秒後の点との正味の差を使用して、結合したリガンドの量とした。
【０２１５】
ヒトモノクローナル抗体のためのバイオセンサー表面を調製するために、ヒトモノクローナル抗体（３５６Ａ１１または３６８Ｄ０４）あるいは対照抗体のいずれかを、研究用グレードのカルボキシメチルデキストラン製のチップ（ＣＭ５）上に、標準的なアミンのカップリングを使用して固定化した。表面を、ＥＤＣ／ＮＨＳを用いて活性化した。捕捉抗体を、酢酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ５．５）中で１μｇ／ｍｌの濃度で注入した。残存する活性化された基を、１．０Ｍエタノールアミン（ｐＨ８．０）を用いてブロックした。第１のフローセルは、バルク屈折率、マトリックス効果および非特異的結合について補正するための参照表面として使用した。第２、第３および第４のフローセルは、捕捉分子を用いてコートした。
【０２１６】
Ａｂ−０２およびＡｂ−０４の場合は、ヒトＩＬ−２２の溶液を、３００、１００、５０、２５、１２．５、６．４、３．２、１．６および０ｎＭの濃度で、三つ組みで、１分あたり３０μｌの流速で、３分間注入し、結合した物質の量を時間の関数として、センサーグラムとして記録した。解離の相は、ＨＢＳ／ＥＰ緩衝液中で、同一の流速で、１０分間モニターし、その後、５μｌの０．１％ＴＦＡを注入した後、５μｌのグリセリン、ｐＨ１．５を注入して、完全に活性な捕捉表面を再生した。
【０２１７】
３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４の場合は、ヒトＩＬ−２２の溶液を、４００、２００、１００、５０、２５、１２．５、６．２５および０ｎＭの濃度で、三つ組みで、１分あたり１００μｌの流速（非特異的結合を回避するために速い流れ）で、３分間注入し、結合した物質の量を時間の関数として、センサーグラムとして記録した。解離の相は、ＨＢＳ／ＥＰ緩衝液中で、同一の流速で、６０分間モニターし、その後、５μｌのグリセリン、ｐＨ１．５を２回注入して、完全に活性な捕捉表面を再生した。
【０２１８】
すべての動態実験は、ＨＢＳ／ＥＰ緩衝液中、２２．５℃で行った。ブランクおよび緩衝液の効果は、二重参照を使用して、各センサーグラムから差し引いた。対照実験では、最初の注入は、緩衝液を含有した。
【０２１９】
動態のデータを、１：１モデルに適用したＢＩＡｅｖａｌｕａｔｉｏｎソフトウェア３．０．２を使用して解析した。見かけの解離（Ｋｄ）および結合（Ｋａ）の速度定数を、網羅的解析を使用して、センサーグラムの適切な領域から計算した。抗体と分析物との間の相互作用の親和性の定数を、動態学的な速度定数から、以下の式に従って計算した：ＫＤ＝Ｋｄ／Ｋａ、ただし、ＫＤは、解離定数であり、ＫＡ＝Ｋａ／Ｋｄ、ただし、ＫＡは、結合定数である。Ａｂ−０２およびＡＢ−０４の結合データの概要を、表１１Ａおよび１１Ｂに示す。３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４の結合データの概要を、表１２に示す。
【０２２０】
表１１Ａ．ヒトＩＬ−２２および抗ＩＬ−２２抗体であるＡｂ−０２およびＡｂ−０４との間の相互作用についての動態学的パラメータ
【表１４】
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【０２２１】
表１１Ｂ．ラットモノクローナル抗体のヒトＩＬ−２２に対する動態学的データ
【表１５】
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【０２２２】
表１２．ヒトモノクローナル抗体のヒトＩＬ−２２に対する動態学的データ
【表１６】
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【０２２３】
これらの結果は、本発明のヒトモノクローナル抗ＩＬ−２２抗体が、ＷＯ２００５／０００８９７およびＷＯ０２／０６８４７６に、ヒトＩＬ−２２を中和する能力を有するとして記載されている、ラットモノクローナル抗ＩＬ−２２抗体であるＡｂ−０２およびＡｂ−０４よりも有意に向上した、ヒトＩＬ−２２に対する親和性を有することを示している。具体的にいうと、ヒトＩＬ−２２に対して、３５６Ａ１１の解離定数（ＫＤ＝５．４０×１０−１１Ｍまたは０．０５４ｎＭ）は、Ａｂ−０２の解離定数（ＫＤ＝５．２２×１０−８Ｍまたは５２ｎＭ）およびＡｂ−０４の解離定数（ＫＤ＝２．３８×１０−９Ｍまたは２．３８ｎＭ）と比較して、それぞれ、約１０００倍および４０倍超である。同様に、ヒトＩＬ−２２に対して、３６８Ｄ０４（ＫＤ＝１．３２×１０−１０Ｍまたは０．１３２ｎＭ）は、Ａｂ−０２およびＡｂ−０４と比較して、それぞれ、約４００倍および１８倍強力な親和性を有する。サル、マウスおよびラットのＩＬ−２２に対する３５６Ａ１１および３６８０４の結合プロフィールも、ヒトＩＬ−２２の結合プロフィールに類似した（データ示さず）。
【０２２４】
また、３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４の結合特異性も、ＢＩＡを使用して評価した。いずれの抗体も、ヒトＩＬ−１０、ヒトＩＬ−１９、ヒトＩＬ−２０、ヒトＩＬ−２４、ヒトＩＬ−２８Ａ、ヒトＩＬ−２９、ヒトＩＦＮ−α２ｃおよびヒトＩＦＮ−ωとの交差反応性を示さなかった（データ示さず）。
【実施例１２】
【０２２５】
抗ヒトＩＬ−２２抗体のｉｎ  ｖｉｖｏでの半減期
本発明の抗ヒトＩＬ−２２抗体は、長期のｉｎ  ｖｉｖｏでの半減期を有する。例えば、３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４の両方のＤＢＡ／１マウス中でのｉｎ  ｖｉｖｏでの半減期は８日である。具体的にいうと、３５６Ａ１１または３６８Ｄ０４のいずれか（１６ｍｇ／ｋｇ）を、ＤＢＡ／１マウスに、腹腔内に、単回投与した。３５６Ａ１１抗体および３６８Ｄ０４抗体を、ヒトＩｇＧ１  ＥＬＩＳＡを使用して、マウスからの血清中に検出した。３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４の血清濃度の時間経過を、図１１ＡおよびＢに示す。３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４のＰＫパラメータの概要を、以下の表１３に示す。
【０２２６】
表１３．３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４のＰＫパラメータ
【表１７】
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【実施例１３】
【０２２７】
実施例１３：関節炎の治療
関節炎は、関節の炎症によって特徴付けられる疾患である。関節リウマチ（ＲＡ）は、関節炎の最も頻繁な形態であり、結合組織および関節に沿って並ぶ膜である滑膜の炎症が関与する。炎症を起こした滑膜は、しばしば、関節に浸潤し、関節の軟骨および骨を損傷する。ＩＬ−２２およびＩＬ−２２Ｒタンパク質の両方ならびに／または転写物が、ヒトの疾患に伴う。ＲＡの滑膜の生検においては、ＩＬ−２２タンパク質は、ビメンチン＋滑膜線維芽細胞および一部のＣＤ６８＋マクロファージ中に検出され、一方、ＩＬ−２２Ｒは、滑膜線維芽細胞中に検出される。滑膜線維芽細胞を、ＩＬ−２２を用いて処理すると、単球走化性タンパク質−１、すなわちＭＣＰ−１の産生が誘導され、かつ一般的な代謝活性も誘導される（Ｉｋｅｕｃｈｉ，Ｈ．ら（２００５）Ａｒｔｈｒｉｔｉｓ  Ｒｈｅｕｍ．５２：１０３７−４６）。
【０２２８】
ＩＬ−２２を使用して、関節に沿って並ぶ膜である滑膜からの細胞に及ぼすＩＬ−２２の効果を研究する。ヒト線維芽細胞様滑膜細胞（ＨＦＬＳ）（Ｃｅｌｌ  Ａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓ（Ｓａｎ  Ｄｉｅｇｏ、カリフォルニア州）製）を、関節手術を受ける関節リウマチ患者の滑膜組織から単離する。ＨＦＬＳを、ヒトＩＬ−２２と共に４８時間培養し、上清を取り出して、ケモカインおよびサイトカインについて、ＥＬＩＳＡによって試験する。ＩＬ−２２は、ケモカインである、ＭＣＰ−１、エオタキシンおよびＩＰ−１０、ならびにサイトカインであるＴＮＦα、ＩＬ−６およびＩＬ−８のＨＦＬＳからの分泌を増加させるであろう。当技術分野では、これらのケモカインおよびサイトカインは、いくつかの活性を介して炎症を促進することが既知であり、ＩＬ−２２が原因で関節内の濃度が増加すると、炎症およびＲＡが悪化する。
【０２２９】
ヒト抗ＩＬ−２２抗体がコラーゲン誘発関節炎（ＣＩＡ）の症状を改善する能力を、３５６Ａ１１抗体および３６８Ｄ０４抗体を使用して調べた。ＣＩＡは、関節リウマチを研究するための標準的なマウスおよびラットのモデルである。例えば、Ｈｏｌｍｄａｈｌら（２００２）Ａｇｅｉｎｇ  Ｒｅｓ．Ｒｅｖ．、１：１３５を参照されたい。第０日に、ＤＢＡ／１マウス、雄（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ製、Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、メイン州）に、フロイント完全アジュバント中の１００μｇのウシのＣｏｌｌａｇｅｎ  Ｔｙｐｅ  ＩＩ（Ｃｈｏｎｄｒｅｘ製、Ｒｅｄｍｏｎｄ、ワシントン州）を、尾の底部において、皮下に注射し、第２１日には、フロイント完全アジュバント中の１００μｇのウシのＣｏｌｌａｇｅｎ  Ｔｕｐｅ  ＩＩで、マウスを追加免疫した。
【０２３０】
マウスを、疾患の進行について、少なくとも週に２回モニターした。疾患の重症度を、肉眼的な足の評価を使用して、以下のようにスコア化した：０＝腫れを認めない、１＝１から２本の指が腫れるか、足首が腫れる、２＝３本以上の指が腫れるか、足が中等度に腫れる、３＝足が広範に腫れる、および４＝足の強直。コラーゲン注射後にアイソタイプの対照抗体を注射したマウスは、疾患を進行性に発症した。３５６Ａ１１または３６８Ｄ０４のいずれいかを用いて治療すると、疾患の進行が、有意に低減された。これらは、盲検試験であり、したがって、研究が終了するまで、研究者は、どの動物群がどの抗体を投与されたかを知らなかった。
【０２３１】
種々の用量の３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４を評価した。治療群のマウスのうちの１０％が、少なくとも１の疾患重症度スコアを有する場合に、３５６Ａ１１または３６８Ｄ０４（あるいはヒトＩｇＧ１λアイソタイプの対照抗体）の治療を開始した。抗体を、種々の頻度：２日に１回、週に１回または２週に１回で投与し、マウスを、疾患の進行についてモニターした。図１２Ａ〜Ｂ、図１３および図４０〜４１に示すように、３５６Ａ１１を、８ｍｇ／ｋｇまたは１６ｍｇ／ｋｇのずれかで２日に１回投与すると、複数の研究において、ＣＩＡの進行が有意に阻止された。３５６Ａ１１を８ｍｇ／ｋｇで２日に１回投与して試験した、４つの別々の研究（図１３Ａ〜Ｄ）は、３５６Ａ１１抗体が、マウスＣＩＡモデルにおいて疾患の進行を一貫して阻止したことを示している。驚くべきことに、また、図１４〜１５、図４１および図４４Ａ〜Ｂに示すように、３５６Ａ１１の８ｍｇ／ｋｇでの投与を週に２回、さらには週に１回でさえも、複数の研究において、疾患の進行を有意に阻止するのに十分であった。
【０２３２】
３６８Ｄ０４を用いた（１６ｍｇ／ｋｇで２日に１回投与した）最初のＣＩＡ研究においては、ほとんどまたはまったく効力を認めなかった。しかし、図４６Ａ〜Ｃに示すように、複数の研究において、３６８Ｄ０４２を８ｍｇ／ｋｇで週に１回投与すると、疾患の進行が有意に阻止された。
【０２３３】
ヒト抗ＩＬ−２２抗体を、ＣＩＡモデルにおいて週に１回投与すると、ヒト抗ＩＬ−２２抗体が、疾患の進行を有意に阻止することができることは、この抗体を、ヒトに投与する場合、類似の投与頻度、または２週に１回等、よりさらに間隔を設けた投与頻度で投与できるであろうことを示している。
【０２３４】
また、抗ＩＬ−２２抗体の治療効果を、足の組織学的解析によっても評価した。研究の終了時に、動物を堵殺して、組織学的検査のために、足を収集し、１０％ホルマリンで固定して、脱灰した後、パラフィンに包埋して、切片化および標準的なＨ＆Ｅ染色に供した。関節炎の強度および範囲を特徴付ける５等級のスコア化法（０〜４）上で、足をスコア化した。パンヌス形成、滑膜の線維状化、関節軟骨の侵食、および／または肋軟骨化の骨の破壊等、炎症性の浸潤を、炎症に関連するその他の変化に加えて、スコア化のために使用した。組織学的な等級を、個々の足の観察結果を使用して決定した：ＮＡＤ＝０または異常がまったく認められない；１＝軽微から中等度；２＝軽度から中等度；３＝顕著；４＝広範囲。抗ＩＬ−２２抗体の治療的投与の組織学的効果を、図１６Ａ〜Ｆ、図４２Ａ〜Ｃ、図４３および図４５Ａ〜Ｂに示す。図１６Ａ〜Ｆ、図４２Ａ〜Ｃ、図４３および図４５Ａ〜Ｂに示すように、複数の研究において、３５６Ａ１１の投与は、マウスのコラーゲン誘発関節炎の症状を改善した。同様に、複数の研究において、３６８Ｄ０４も８ｍｇ／ｋｇで２日に１回投与すると、マウスのコラーゲン誘発関節炎の症状が改善された。図４７Ａ〜Ｃ。
【０２３５】
組織学的評価に加えて、また、治療したマウスの骨の破壊も調べた。研究終了時に、足を、側臥位で固定して、Ｘ線写真を、Ｆａｘｉｔｒｏｎ製の装置で撮影した。このＦａｘｉｔｒｏｎは、高解像度のＸ線写真を提供し、高倍率能によって、画像性能が増強される。ＦａｘｉｔｒｏｎのＸ線写真は、目視による肉眼的な足の評価スコアと相関し、抗ＩＬ−２２抗体を用いた治療が、アイソタイプの対照抗体を用いた治療と比較して、骨の破壊を阻止することを示した（データ示さず）。
【実施例１４】
【０２３６】
血清ＩＬ−２２のＥＬＩＳＡによる検出、および３５６Ａ１１治療に伴うｉｎ  ｖｉｖｏにおける血清ＩＬ−２２検出の増強
今日まで、ＩＬ−２２遺伝子の発現の検出は、ＲＮＡレベルにおいて報告されているのみである。以下に記載するＥＬＩＳＡを用いても、ＩＬ−２２は、正常マウスでは検出されない。しかし、我々は、このＥＬＩＳＡが、関節炎マウスの循環中のＩＬ−２２の検出を可能にすることを発見するに至った。さらに、３５６Ａ１１抗体の投与によって、ＩＬ−２２の検出が１０倍高いレベルで可能になる。３５６Ａ１１抗体は、投与した用量で、このサイトカインを捕捉し、したがって、先の実施例で示したようにその活性を中和する。血流内にこの抗体が循環すると、この抗体が捕捉したＩＬ−２２は、この場合には、ＥＬＩＳＡを用いると、高いレベルで検出される。これは、このｍＩＬ−２２ＥＬＩＳＡを構成する捕捉用抗体および検出用抗体の独特のかつ特殊なエピトープによる。このＥＬＩＳＡは、ＩＬ−２２／３５６Ａ１１、ＩＬ−２２ＢＰ／ＩＬ−２２、ＩＬ−２２ＢＰ／３５６Ａ１１／ＩＬ−２２および裸のＩＬ−２２を同等に検出する。
【０２３７】
以前に議論したＣＩＡ研究（実施例１３）の場合、関節炎マウスを、１６ｍｇ／ｋｇの３６５Ａ１１抗体を用いて２日に１回治療した。コラーゲン追加免疫後第３０日に、血清を、堵殺マウスから収集した。次いで、血清試料中のＩＬ−２２のレベルを、ＥＬＩＳＡによって測定した。
【０２３８】
このＥＬＩＳＡフォーマットのために、１ｍＧＩＬ１９Ｐ３／１、すなわち、ラットＩｇＧ１ｋモノクローナル抗マウスＩＬ−２２抗体を、９６ウェルマイクロタイターＥＬＩＳＡ用プレート上にコートして、捕捉用抗体として使用した。関節炎マウスから得た血清試料を、段階希釈し、次いで、コートしたマイクロタイタープレートに添加した。試料をマイクロタイタープレート中で１ｍＧＩＬ１９Ｐ３／１と共にインキュベートした後、プレートを洗浄し、２ｈｍＧＩＬ１９Ｐ３／５−ｂｉｏ、すなわち、ビオチン標識したラットＩｇＧ２ａｋモノクローナル抗ＩＬ−２２抗体を、検出用抗体としてプレートに添加した。さらなるインキュベートおよび洗浄の工程の後、テトラメチルベンジジン（ＴＭＢ）を青色の色素に変換し、分光光度計を用いる定量化を可能にする西洋ワサビペルオキシダーゼ（ＨＲＰ）標識ストレプトアビジンを添加して、インキュベートした後、プレートを洗浄した。最後のＴＭＢとのインキュベーションの後、希Ｈ２ＳＯ４を添加して、酵素反応を停止し、吸光度を、分光光度計を使用して４５０ｎｍで測定した。別法として、かつ検出用抗体のアイソタイプであるラットＩｇＧ２ａｋは、コート用抗体のアイソタイプとは異なることから、ラットＩｇＧ２ａ抗体に結合するＨＲＰ標識第２抗体を使用してもよい。このサンドイッチＥＬＩＳＡを使用して、我々は、ｍＩＬ−２２ＢＰおよび／または３５６Ａ１１のいずれかの量を増加させて添加しても、一定濃度のマウスＩＬ−２２を検出する能力が影響を受けないことを実証した。ＬＰＳのｉ．ｐ．注射後のマウスの血清中のＩＬ−２２を検出するために、このＥＬＩＳＡが使用されている。
【０２３９】
上記で示したように、３５６Ａ１１抗体をＣＩＡマウスに投与すると、ＩＬ−２２が、血清中で、約１ｎｇ／ｍＬから約９ｎｇ／ｍＬの範囲のレベルで検出された。図１７を参照されたい。対照的に、ヒトＩｇＧ１λアイソタイプの対照抗体を投与した、対照治療群の関節炎マウスは、有意に低下したｉｎ  ｖｉｖｏのＩＬ−２２レベル（１ｎｇ／ｍＬ未満）を記録した。図１７および図１８を参照されたい。したがって、３５６Ａ１１抗体は、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてＩＬ−２２を捕捉して、循環する安定化された抗体／サイトカインの複合体を生成する。図１６に示すように、これは、続いて、増加した感度を有する、ｉｎ  ｖｉｖｏのＩＬ−２２の検出を可能にする。上記の研究において使用した大量の抗体とは対照的に、３５６Ａ１１は、相当に低下したレベルで投与してもまた、同一の効果を有することができるであろうと提案されている。
【実施例１５】
【０２４０】
乾癬の治療
ＩＬ−２２およびＩＬ−２２Ｒ  ＲＮＡのレベルを、ヒト乾癬患者からの対にした組織試料（病変部体非病変部）中で、定量的ＰＣＲを使用して測定した。この研究は、ＩＬ−２２およびＩＬ−２２Ｒのレベルが、乾癬病変においては、上方制御されることを実証した。図１９。その他の証拠は、ＩＬ−２２が、乾癬の発症に関与することを示している。例えば、ＩＬ−２２を恒常的に発現する遺伝子導入マウスは、肥厚した皮膚、単核免疫細胞の浸潤、乾癬病変の特徴を示し、誕生後ほどなくして死亡する。ＷＯ０３／０８３０６２。同様に、ＩＬ−２２をマウスに投与すると、皮膚の肥厚化および単核免疫細胞の浸潤を引き起こす。ＷＯ０３／０８３０６２。また、ＩＬ−２２は、ヒトのケラチノサイト過形成も誘導し、これは、皮膚の炎症過程における重要な役割を示唆している。Ｂｏｎｉｆａｃｅら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、２００５  １７４：３６９５−３７０２。
【０２４１】
ＳＣＩＤマウスにおける異種移植は、乾癬を研究するためのモデルとして認識されている。例えば、Ｂｏｅｈｎｃｋｅら、Ｂｒ．Ｊ．Ｄｅｒｍａｔｏｌ．２００５、１５３（４）：７５８−６６を参照されたい。局所麻酔下で、慢性のプラーク段階の乾癬を有する患者から、損傷皮膚の分割切片（厚さ約０．５ｍｍ）を切除する。ヒトの分割移植片を、６〜８週齢のＳＣＩＤマウスの背部上に移植する。マウスが移植片を受容し、治癒するのに、３週間かける。移植後第２２日に、マウスに、８ｍｇ／ｋｇのヒト抗Ｉｌ−２２抗体、例として、生殖系列化した０８７Ｂ０３、３６８Ｄ０４、３５４Ａ０８または３５６Ａ１１を、２日に１回、腹腔内に注射する。負の対照として、マウスに、２００μＬのＰＢＳを、毎日、胃内に適用する。陽性の対照として、マウスに、２００μＬのＰＢＳ中で２ｍｇ／ｋｇのデキサメタゾンを、毎日、胃内に適用する。負の対照は、表皮肥厚、乳頭腫、不全角化および高密度の単核の浸潤を含めた、乾癬の証明となるものを発症する。マウスを、移植後第５０日で堵殺し、周囲の組織と共に移植片を切除する。移植片の半分をホルマリン中に固定し、残りの半分を液体窒素中で凍結する。ヘマトキシリンおよびエオシンによる日常的な染色を行い、移植片の病理学的な変化を、定性的（上皮分化）および定量的（上皮の厚さ、炎症性の浸潤）の両面で解析する。上皮の厚さの平均は、乳頭間隆起の先端部から生存している上皮の境界まで、接眼ミクロメーターを使用して測定することができる。炎症性の浸潤の密度は、細胞の数を、３つの隣接する倍率視野で数えることによって決定することができる。疾患の進行は、表皮肥厚、乳頭腫、不全角化、炎症性の浸潤、ならびに角膜層および顆粒層の外観等の乾癬の証明となるものを測定する組織学的解析を使用して、評価することができる。
【０２４２】
移植片の移植後、２００μＬのＰＢＳまたはアイソタイプ適応対照抗体を注射した、負の対照のマウスは、乾癬を進行性に発症する。乾癬病変は、より高いレベルのＩＬ−２２を発現することから、抗ＩＬ−２２抗体、例えば、生殖系列化した０８７Ｂ０３、３６８Ｄ０４、３５４Ａ０８または３５６Ａ１１を用いた治療は、乾癬を抑制するまたは遅延させることが予想され、これは、以下に報告する養子移植研究で確認される。
【０２４３】
ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄマウスにおけるＣＤ４＋ＣＤ４５ｒｂｈｉｇｈＴ細胞の養子移植は、マウスにおいて乾癬を研究するための別のモデルとして認識されている。Ｈｏｎｇら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１６２（１）：７４８０−９１（１９９９）。このモデルでは、ＣＤ４＋ＣＤ４５ｒｂｈｉｇｈＴ細胞の養子移植後第１日に、ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄマウス内に、ＬＰＳとＩＬ−１２またはブドウ球菌エンテロトキシンＢとを同時投与すると、ヒトの乾癬に認められる証明となるものを示す皮膚病変を誘導する。
【０２４４】
このモデルを若干修飾したものを使用して、ＣＤ４＋ＣＤ４５ｒｂｈｉｇｈＤＣ２５−Ｔ細胞を、ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄマウスに移植し、養子移植後第１日に、ＬＰＳとＩＬ−１２とを同時投与する場合とそうでない場合とを設けた。ＣＤ４＋ＣＤ４５ｒｂｈｉｇｈＤＣ２５−Ｔ細胞は、ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄマウス内に移植すると、ＬＰＳもＩＬ−１２も一緒に投与しない場合であっても、乾癬病変を誘導することが可能であった。したがって、このモデルにおいては、養子移植後のＩＬ−１２およびＬＰＳの投与は、抗ＩＬ−２２抗体の効力を変化させるようには見えなかった。
【０２４５】
養子移植のための細胞を、前の記載に従って、若干の修飾を加えて調製した。脾臓を、６〜８週齢のＢＡＬＢ／ｃＢｙドナーマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ製、Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、メイン州）から収集し、脾細胞を、全脾臓の機械的な均質化によって単離した。ＣＤ４＋Ｔ細胞を、マウスＣＤ４濃縮キット（Ｒ＆Ｄ製）を使用して、メーカーの指示に従って選択した。ＣＤ４濃縮Ｔ細胞を、抗ＤＣ４−ＰＥ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製）、抗ＣＤ４５ＲＢ−ＦＩＴＣおよび抗ＣＤ２５−ＡＰＣ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製）で標識した。細胞を、Ｍｏｆｌｏ（Ｂｅｃｔｏｎ  Ｄｉｃｋｉｎｓｏｎ製、Ｓａｎ  Ｊｏｓｅ、カリフォルニア州）セルソーターを使用して選別した。ＣＤ４＋ＣＤ４５ＲｂｈｉｇｈＤＣ２５−細胞を収集すると、＞９５％純粋であった。細胞を、食塩水中に、２×１０６細胞／ｍｌで再懸濁し、４×１０５細胞を、Ｃ．Ｂ−１７／Ｐｒｋｄｃ  ｓｃｉｄ／ｓｃｉｄマウス（Ｊａｃｋｓｏｎ  Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ製、Ｂａｒ  Ｈａｒｂｏｒ、メイン州）にｉ．ｐ．注射した。一部、１０ｎｇのＩＬ−１２および２０μｇのＬＰＳを、レシピエントのマウスにｉ．ｐ．注射した。これらのマウスには、第１日には、ＣＤ４＋ＣＤ４５Ｒｂｈｉｇｈ細胞を投与し、第３日には、ＩＬ−１２の追加の用量を投与した。マウスに、１６ｍｇ／ｋｇのアイソタイプの対照抗体または抗ＩＬ−２２抗体（３５６Ａ１１もしくは３６８Ｄ０４）のいずれかを、養子移植の第１日、およびその後は週に１回、１０週間投与した。マウスを、皮膚病変の臨床症状について、週に２回モニターした。研究終了時に、マウスの耳、皮膚、リンパ節および脾臓を収集して、その後のｅｘ−ｖｉｖｏ研究に供した。
【０２４６】
臨床評価
マウスは、盲検の研究者が、養子移植後第１０日から、週に２回評価した。疾患の進行を記録するために、身体の外観に基づいて、０から６までの半定量的な臨床スコアを得た：０＝皮膚および耳に症状がない；０．５＝耳または眼瞼に軽微の浮腫がある、１＝耳または眼瞼に軽度、中等度の浮腫があり、耳（体表面の＜２％）に軽度の肥厚化を伴う；２＝体表面の２〜１０％に中等度から重度の浮腫があり、中等度の落屑がある；３＝体表面の１０％〜２０％に重度の浮腫および落屑がある；４＝体表面の２０％〜４０％に非常に重度で、広範な浮腫および落屑がある。５＝体表面の４０％〜６０％に非常に重度で、広範な浮腫および落屑がある。６＝体表面の６０％超に非常に重度で、広範な浮腫および落屑がある。獣毛の状態、耳の徴候、眼瞼の外観、ならびに肢および尾の炎症の存在に基づいて、特異的な所見を書き留めた。
【０２４７】
ＬＰＳおよびＩＬ−１２を同時投与しなかった研究においては、抗体である３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４は、対照抗体を用いて治療したマウスと比較して、３５６Ａ１１の場合には、早くも第２１日から、および３６８Ｄ０４の場合には、第３５日から皮膚の炎症を有意に抑制した（図２０Ａ〜Ｂ）。同様の結果を、養子移植後第１日にＬＰＳおよびＩＬ−１２を同時投与した研究でも認め、３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４は、対照抗体と比較して、養子移植後早くも第２８日から、皮膚病変を有意に抑制した。（図２７ＡおよびＢ）。別の研究では、３５６Ａ１１は、養子移植後第１日にＬＰＳおよびＩＬ−１２を、同時投与しなかった場合（図３４Ａ〜Ｂ）でも、同時投与した場合（図３７Ａ〜Ｂ）でも、対照抗体を用いて治療したマウスと比較して、早くも第２１日から、皮膚の炎症を有意に抑制した。
【０２４８】
サイトカインの検出
細胞培養からのマウスの血清または上清を、ＩＬ−６、ＩＦＮγおよびＴＮＦαについて、ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍ製）を使用して定量化した。ＩＬ−２２、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７ＦおよびＩＬ−１７Ａ／Ｆへテロ二量体のＥＬＩＳＡでは、９６ウェルの平底プレート（Ｃｏｓｔａｒ製）を、ＰＢＳ中の抗ＩＬ−２２（Ａｂ−０１）抗体、抗ＩＬ−１７Ａ（Ｒ＆Ｄ製）抗体または抗ＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１５−０１）抗体の２μｇ／ｍｌ溶液の１００μｌを用いて、４℃で一晩コートすることになった。次いで、プレートを、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎ（ＰＢＳ中の０．０５％Ｔｗｅｅｎ−２０）で洗浄し、１％ＢＳＡを有する２００μｌのＰＢＳを用いて、ＲＴで１時間ブロックした。マウスＩＬ−２２（Ａｂ−０１、Ａｂ−０２およびＡｂ−０３）、ならびにマウスＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１５−０１）に対する抗体を、Ｌｉら、Ｉｎｔ．Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ．４：６９３−７０８（２００４）に記載されている方法によって産生した。以下の工程はいずれも工程の間で、プレートを、ＰＢＳ／Ｔｗｅｅｎで洗浄した。次いで、ＩＬ−２２（Ｒ＆Ｄ製）、ＩＬ−１７Ａ（Ｒ＆Ｄ製）、ＩＬ−１７およびＩＬ−１７Ａ／Ｆの標準物質、試料の上清および血清試料（ＰＢＳで１：５に希釈）を添加した。抗ＩＬ−２２（Ａｂ−０３）、抗ＩＬ−１７Ａ（Ｒ＆Ｄ製）および抗ＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１５−０１）に対するビオチン化した二次抗体を、それぞれのプレートに、１％ＢＳＡ／ＰＢＳ溶液中の０．５μｇ／ｍｌで添加し、３７℃で１時間インキュベートした。ポリＨＲＰ標識ストレプトアビジン（Ｐｉｅｒｃｅ製）を、メーカーの指示に従って、１５分間添加した。プレートを、ＴＭＢ基質を添加することによって、１５〜３０分間発色させた。次いで、アッセイを、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｄｅｖｉｃｅｓ（Ｓｕｎｎｙｖａｌｅ、カリフォルニア州）製のプレートリーダー上で読み取り、データを、ＳＯＦＴｍａｘソフトウェアを使用して解析した。
【０２４９】
ＬＰＳおよびＩＬ−１２を同時投与しなかった研究の場合、３５６Ａ１１を用いて治療したマウスでは、対照抗体を用いて治療したマウスよりも高いレベルの血清ＩＬ−２２を検出し、これは、実施例１４で議論したように、３５６Ａ１１が、ｉｎ  ｖｉｖｏにおいてＩＬ−２２を捕捉して、安定化させることを示している（図２１）。また、同様の結果を、養子移植後第１日にＬＰＳおよびＩＬ−１２を同時投与した場合の３５６Ａ１１を用いて治療したマウスにおいても認めた（図２８）。これらの結果は、３５６Ａ１１を用いた別の研究において、養子移植後第１日にＬＰＳおよびＩＬ−１２を、同時投与しなかった場合（図３５）でも、同時投与した場合（図３８）でも再現された。血清ＩＬ−２２は、３６８Ｄ０４を用いて治療したマウスでは検出されなかった（図２１）。
【０２５０】
ＬＰＳおよびＩＬ−１２を、同時投与しなかった研究の場合、３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４を用いて治療したマウスでは、有意に低下した血清レベルのＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ａ／Ｆを検出した（図２２Ａ〜Ｃ）。また、３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４を用いて治療したマウスでは、ＩＬ−６の血清レベルが低下する傾向も認めた（図２２Ｄ）。ＩＮＦγおよびＴＮＦαは、対照抗体、３５６Ａ１１抗体または３６８Ｄ０４抗体を用いて治療したマウスからの血清においては、検出限界を下回った。また、同様の結果を、養子移植後第１日にＬＰＳおよびＩＬ−１２を同時投与した場合の３５６Ａ１１を用いて治療したマウスにおいても認めた（図２９Ａ〜Ｄ）。また、別の研究においては、３５６Ａ１１を用いて治療したマウスでは、養子移植後第１日にＬＰＳおよびＩＬ−１２を、同時投与しなかった場合（図３９Ａ〜Ｂ）でも、同時投与した場合（図３９Ｃ〜Ｄ）でも、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１６の顕著に低下した血清レベルを認めた。
【０２５１】
リンパ節細胞の単離および刺激
このモデルにおける乾癬病変は、普通、耳、眼、顔および首から、身体の残りの部分へ進行する。治療剤を用いて治療したマウスは、普通、眼および耳の周囲のみに軽度の皮膚病変を発症する。したがって、最も多数の活性化細胞を得るために、顔から流入する頚部リンパ節を、各マウスから単離した。リンパ節（ＬＮ）細胞を、機械的な均質化によって回収した。ＬＮ細胞を、１群あたり約９から１０匹のマウスからプールし、１０％ＦＢＳ（ＨｙＣｌｏｎｅ製）、５×１０−５Ｍ  ２−ＭＥ（Ｓｉｇｍａ製）、２ｍＭグルタミン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製、Ｇａｉｔｈｅｒｓｂｕｒｇ、メリーランド州）、１０Ｕ／ｍｌペニシリン、１００μｇストレプトマイシン（Ｌｉｆｅ  Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製）、および１５ｍＭ  ＨＥＰＥＳを補充した完全ＲＰＭＩ１６４０培地中に、１×１０６個／ｍｌで再懸濁した。次いで、総量として、２００μｇ／ウェルのこの懸濁液を、９６ウェルプレート中に充填し、抗ＣＤ３および抗ＣＤ２８（各１μｇ／ｍｌ）を用いて、４８時間刺激した。
【０２５２】
細胞内サイトカイン染色
ＩＬ−２２の中和がエフェクターＴ細胞集団に及ぼす効果を調べるために、細胞内サイトカイン染色を、頚部リンパ節細胞上で行った。細胞を、５０ｎｇ／ｍｌ  ＰＭＡ（Ｓｉｇｍａ製）、１μｇ／ｍｌイオノマイシン（Ｓｉｇｍａ製）、およびＧｏｌｇｉＰｌｕｇ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製）を用いて、１２時間刺激した。細胞を、最初は、表面抗原（ＣＤ４）に対して染色し、次いで、Ｃｙｔｏｆｉｘ／Ｃｙｔｏｐｅｒｍ（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ製）を用いて、メーカーの指示に従って処理した。細胞内サイトカインの染色を、ＩＦＮγ、ＩＬ−２２、ＩＬ−１７Ａ、ＩＬ−１７Ｆ、ＴＮＦαおよび関連するＩｇＧアイソタイプの対照に対する抗体を使用して行った。メーカーの指示に従って、抗ＩＬ−２２（Ａｂ−０２）を、Ａｌｅｘａ６４７（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ  Ｐｒｏｂｅｓ製）で標識し、抗ＩＬ−１７Ｆ（ＲＫ０１５−０１）を、ＦＩＴＣ（Ｐｉｅｒｃｅ  Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ製）で標識した。
【０２５３】
細胞を、ＣＤ４＋のゲートされた集団上で解析した。ＦＡＣＳ解析の結果は、３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４を用いて（ＬＰＳおよびＩＬ−１２は同時投与せずに）治療したマウスにおいては、アイソタイプの対照を用いて治療したマウスと比較して、ＩＬ−２２、ＩＬ−１７Ａ、ならびにＩＬ−２２およびＩＬ−１７Ｆの両方を産生するＤＣ４＋Ｔ細胞の割合が減少したが、ＩＦＮγを産生するＤＣ４＋Ｔ細胞の割合が増加したことを示している（図２３）。また、同様の結果を、養子移植後第１日にＬＰＳおよびＩＬ−１２を同時投与した、３５６Ａ１１治療マウスにおいても認めた。（図３１）。
【０２５４】
サイトカイン転写物の定量化
ＲＮＡを、マウスの耳または（刺激後の）ＬＮ細胞から、Ｑｉａｇｅｎ  Ｒｎｅａｓｙキット（Ｑｉａｇｅｎ製）を使用して単離した。サイトカイン転写物の定量的ＰＣＲを、あらかじめ認定されているプライマーおよびプローブ（Ａｐｐｌｉｅｄ  Ｂｉｏｓｙｓｔｅｍｓ製）を使用して行った。ΔΔＣｔ法を使用して、転写物をＧＡＰＤＨに対して規準化し、対照マウスと比較した誘導倍率を計算した。
【０２５５】
マウスの耳からのＲＮＡを使用した、定量的ＰＣＲの結果は、３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４を用いて治療したマウスは、対照抗体を用いて治療したマウスと比較して、ＩＬ−２２、ＩＬ−１７Ｆ、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−６の遺伝子発現が低下したが、ＩＦＮγの発現は増強したことを示している（図２４Ａ〜Ｅ）。また、同様の結果を、養子移植後第１日にＬＰＳおよびＩＬ−１２を同時投与した、３５６Ａ１１治療マウスにおいても認めた。（図３０Ａ〜Ｅ）。これらの結果は、（ＬＰＳおよびＩＬ−１２は同時投与せずに）３５６Ａ１１を用いた別の研究においても再現され、３６５Ａ１１を用いて治療したマウスは、対照抗体を用いて治療したマウスと比較して、ＩＬ−１ファミリー６タンパク質（ＩＬ−１Ｆ６）の遺伝子発現が低下し、ＩＬ−２２結合タンパク質およびＩＬ−２２受容体サブユニット（ＩＬ−２２Ｒ１）の遺伝子発現は未変化であることを認めた。（図３６Ａ〜Ｈ）。
【０２５６】
上記に記載した抗ＣＤ３および抗ＤＣ２８を用いて４８時間刺激したリンパ節細胞からのＲＮＡを使用した定量的ＰＣＲの結果は、３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４は、ＩＬ−２２、ＩＬ−６、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの遺伝子発現をｅｘ  ｖｉｖｏにおいて抑制したが、ＩＦＮγの遺伝子発現には有意な変化をもたらさなかったことを示している。（図２６Ａ〜Ｅ）。同様の結果を、養子移植後第１日にＬＰＳおよびＩＬ−１２を同時投与した、３５６Ａ１１治療マウスにおいても認めた。（図３３Ａ〜Ｅ）。
【０２５７】
上記に記載した抗ＣＤ３および抗ＤＣ２８を用いて刺激したリンパ節細胞からの上清を、収集して、以前に記載した、ＥＬＩＳＡキット（Ｒ＆Ｄ  ｓｙｓｔｅｍ）を使用するサイトカイン解析に供した。サイトカインＥＬＩＳＡの結果は、ＬＮの遺伝子発現データを反映し、３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４は、刺激した細胞から、ＩＬ−２２、ＩＬ−６、ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆの分泌をｅｘ  ｖｉｖｏにおいて抑制するが、ＩＦＮγの分泌には有意な変化をもたらさないことを示した。（図２５Ａ〜Ｆ）。同様の結果を、養子移植後第１日にＬＰＳおよびＩＬ−１２を同時投与した、３５６Ａ１１治療マウスにおいても認めた。（図３２Ａ〜Ｅ）。
【０２５８】
病理組織学的解析
培検を、ｉｎ  ｖｉｖｏにおける研究終了時にマウス組織について行った。耳、体幹の皮膚からの組織試料を収集し、１０％ホルマリン溶液中に固定して、切片の調製および解析に供した。疾患の重症度を記録するために、０から５までの半定量的な組織学的スコアを、炎症の重症度に基づいて割り当てた。組織学的な評価は、盲検の様式で、有資格者の病理学者が行った。０＝正常範囲内；１＝最小；２＝軽度；３＝中等度；４＝顕著、および５＝重度。
【０２５９】
免疫組織化学的解析
組織試料を、収集し、Ｔｉｓｓｕｅ  Ｔｅｋ  ＯＣＴ  Ｃｏｍｐｏｕｎｄ（Ｍｉｌｅｓ製、Ｅｌｋｈｕｒｔ、インディアナ州）中に包埋し、ドライアイスで凍結して、クリオスタット切断による切片化に供した。組織切片（５μｍ）を、１００％アセトン中で固定し、抗ＣＤ４、抗ＤＣ１１ｂおよび抗好中球抗体（ＰｈａｒＭｉｎｇｅｎ製）を用いて染色した。組織を、目視による蛍光顕微鏡検出に基づいて、陰性＝０、軽度＝１、中等度＝２、および重度＝３として評価した。
【０２６０】
組織学的所見は、３５６Ａ１１および３６８Ｄ０４を用いて治療したマウスは、アイソタイプの対照抗体を用いた治療と比較して、より少ないケラチノサイトの増殖、乳頭間隆起および細胞の皮膚内への炎症性の浸潤を経験したことを実証している。その上、免疫組織化学的検査の結果は、３５６Ａ１１が、上皮層、真皮層および皮下組織層のＣＤ４＋、ＣＤ１１Ｂ＋（マクロファージ）および好中球の数を減少させることも示した。組織学的な結果は、臨床所見の結果を反映し、本発明の抗体等のＩＬ−２２アンタゴニストの、乾癬およびその他の乾癬様皮膚疾患を治療するための治療剤としての使用を支持する。
【０２６１】
全体的な結果は、０８７Ｂ０３、３６８Ｄ０４、３５４Ａ０８または３５６Ａ１１等、本発明の抗体は、乾癬のこのマウスモデルにおいて有効であり、０８７Ｂ０３、３６８Ｄ０４、３５４Ａ０８または３５６Ａ１１を含めた、抗ＩＬ−２２抗体を用いる治療は、ヒトの乾癬の治療介入のために、有効な戦略を提供することを示している。
【実施例１６】
【０２６２】
患者の治療
自己免疫障害、呼吸障害、皮膚、心血管系、神経系、腎臓、肝臓および膵臓の炎症性状態を有する患者、または移植患者が、本発明の抗体を用いて治療することができる患者に属する。典型的な治療計画および予想される結果を、以下に示す。表１４中のもの以外の投与量および投与頻度もまた、使用することができる。当業者であれば、必要に応じて、投与経路、または治療する患者の年齢、体重、状態、性別、医学的状態の重症度等のその他の既知の変数に基づいて、治療計画を調整することができる。
【０２６３】
表１４．治療計画
【表１８】
2009528288.tif 000020
【０２６４】
本明細書は、本明細書内に引用した参照文献の教示に照らすことによって、最も完全に理解される。本明細書内の実施形態は、本発明の実施形態を説明するものであって、本発明の範囲を制限するためのものであると解釈してはならない。多くのその他の実施形態が、本発明によって包含されることを、当業者であれば容易に認識する。本開示中に引用したすべての刊行物および特許は、参照によって、その全体が組み入れられている。参照によって組み入れられている材料が、本明細書と矛盾するまたは一貫性がない範囲においては、本明細書が、そのような材料に取って代わるものとする。本明細書におけるいずれの参照文献の引用も、そのような参照文献が本発明の先行技術であることを是認するわけではない。
【０２６５】
別段の記載がない限り、特許請求の範囲を含めて、明細書中に使用する成分、反応条件およびその他の量を表すすべての数字は、いずれの場合も、「約」という用語によって加減されていると理解されたい。したがって、そうでない旨が記載されていない限り、数値的なパラメータは、近似値であり、本発明によって得ようとする所望の特性によって、変化させることができる。最低でも、かつ均等論を特許請求の範囲を超えて適用することによって、各数値的なパラメータは、有効数字の数および通常の四捨五入法に照らして解釈されたい。
【０２６６】
別段の記載がない限り、一連の要素に先行する「少なくとも」という用語は、その一連の要素のいずれにも関係することを理解されたい。当業者であれば、本明細書に記載する発明の特定の実施形態の多くの等価物を認識するであろうし、日常的な実験のみを使用して、解明することができるであろう。そのような等価物は、以下の特許請求の範囲によって包含されるものとする。
【図面の簡単な説明】
【０２６７】
【図１】ＩＬ−２２受容体複合体アッセイ：ｂｉｏ．ＩＬ−２２結合ＩＬ−２２受容体複合体ＤＥＬＦＩＡ競合アッセイにおける親抗ＩＬ−２２のｓｃＦｖクローンの効力を示すグラフである。
【図２】ＩＬ−２２受容体複合体アッセイ：ｂｉｏ．ＩＬ結合ＩＬ−２２受容体複合体ＤＥＬＦＩＡ競合アッセイにおけるリードｓｃＦｖクローンのプロファイリングを示すグラフである。（Ａ）ＧＩＬ１由来。（Ｂ）ＧＩＬ１６由来。（Ｃ）ＧＩＬ１６、ＧＩＬ６０およびＧＩＬ６８由来。（Ｄ）ＧＩＬ６０由来。（Ｅ）ＧＩＬ６８由来。（Ｆ）ＧＩＬ６８由来。（Ｇ）ＧＩＬ９２由来。
【図３】ＧＲＯａの細胞に基づくアッセイにおけるＩｇＧの効力を示すグラフである。ｈｕＩＬ−２２ＧＲＯａアッセイにおける最適化ＧＩＬ−ＩｇＧ。（Ａ）生殖系列化ＩｇＧ。（Ｂ）非生殖系列化ＩｇＧ。
【図４】ＩＬ−２２抗体のＥＬＩＳＡによる異種間の反応性を示すグラフである。最適化したＧＩＬ−ＩｇＧは、ＩＬ−２２に特異的に結合する。（Ａ）生殖系列化ＩｇＧ。（Ｂ）非生殖系列化ＩｇＧ。
【図５】ヒトＩＬ−２２のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列を示す図である。ヒトＩＬ−２２のヌクレオチド配列は、配列番号２であり、ポリ（Ａ）尾部を含む。開示するヌクレオチド配列は、オープンリーディングフレームを含み、上記のヌクレオチド配列に対応する完全長ＩＬ−２２タンパク質のアミノ酸配列を、配列番号１に報告する。成熟型ＩＬ−２２のアミノ酸配列は、配列番号１のアミノ酸の３４〜１７９にほぼ対応する。
【図６】マウスＩＬ−２２のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列を示す図である。
【図７】ＶＨドメインおよびＶＬドメイン、ならびにＣＤＲ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３）を含む、生殖系列化していないＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、および３５６Ａ１１のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列を示す図である。
【図８】ＶＨドメインおよびＶＬドメイン、ならびにＣＤＲ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３）を含む、生殖系列化したＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０６２Ａ０９、０８７Ｂ０３、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、３５６Ａ１１、および３６８Ｄ０４のアミノ酸配列およびヌクレオチド配列を示す図である。
【図９】生殖系列化していないＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０９７Ｄ０９、０６２Ａ０９、０６２Ｇ０５、０８７Ｂ０３、３６７Ｄ０４、３６８Ｄ０４、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３７５Ｇ０６、３７６Ｂ１０、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、および３５６Ａ１１のｓｃＦｖのアミノ酸配列およびヌクレオチド配列を示す図であり、下線部がＣＤＲ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３）である。
【図１０】生殖系列化したＧＩＬ０１、ＧＩＬ１６、ＧＩＬ４５、ＧＩＬ６０、ＧＩＬ６８、ＧＩＬ９２、０６２Ａ０９、０８７Ｂ０３、１６６Ｂ０６、１６６Ｇ０５、３５４Ａ０８、３５５Ｂ０６、３５５Ｅ０４、３５６Ａ１１、および３６８Ｄ０４のｓｃＦｖのアミノ酸配列およびヌクレオチド配列を示す図であり、下線部がＣＤＲ（Ｈ１、Ｈ２、Ｈ３、Ｌ１、Ｌ２およびＬ３）である。
【図１１】（Ａ）３５６Ａ１１および（Ｂ）３６８Ｄ０４のｉｎ  ｖｉｖｏでの半減期を示すグラフである。
【図１２】マウスＣＩＡモデルにおいて、種々の用量の３５６Ａ１１を２日に１回投与した場合の平均疾患重症度スコア（Ａ）、または疾患重症度スコア（Ｂ）を示すグラフである。
【図１３】複数の研究で、マウスＣＩＡモデルにおいて、８ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１を、２日に１回投与した場合の平均疾患重症度スコアを示すグラフである。
【図１４】マウスＣＩＡモデルにおいて、８ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１を、週に１回または週に２回投与した場合の平均疾患重症度スコアを示すグラフである。
【図１５】マウスＣＩＡモデルにおいて、８ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１を、２日に１回、週に２回または週に１回投与した２つの別々の研究からの疾患重症度スコアを示すグラフである。
【図１６】マウスを使用した複数の研究における疾患の進行の組織学的評価（足）を示すグラフである。治療は、マウスＣＩＡモデルにおいて、（Ａ）８ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１を、２日に１回、あるいは（Ｂ）１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１を、２日に１回、（Ｃ）８ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１を、２日に１回、週に１回、または週に２回、（Ｄ）８ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１を、週に１回、（Ｅ）８ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１を、週に２回、あるいは（Ｆ）８ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１を、２日に１回行った。
【図１７】３５６Ａ１１を用いて治療した関節炎マウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏのＩＬ−２２（ｎｇ／ｍＬ）の検出および安定化を示すグラフである。
【図１８】アイソタイプの対照抗体を投与した関節炎マウスにおけるｉｎ  ｖｉｖｏのＩＬ−２２（ｎｇ／ｍＬ）の検出を示すグラフである。
【図１９】ヒト乾癬病変におけるＩＬ−２２およびＩＬ−２２Ｒタンパク質の上方制御を示すグラフである。
【図２０】乾癬のマウスモデルにおいて、１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１、３６８Ｄ０４または対照抗体を用いて治療したマウスの疾患の評価を示すグラフである。（Ａ）１０週にわたる疾患の臨床的な進行。（Ｂ）第１０週における臨床スコア。
【図２１】１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１、３６８Ｄ０４または対照抗体を用いて治療した乾癬マウスにおけるＩＬ−２２のｉｎ  ｖｉｖｏの血清レベル（ｐｇ／ｍＬ）の検出を示すグラフである。
【図２２】１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１、３６８Ｄ０４または対照抗体を用いて治療した乾癬マウスにおける（Ａ）ＩＬ−１７Ａ、（Ｂ）ＩＬ−１７Ｆ、（Ｃ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆ；および（Ｄ）ＩＬ−６のｉｎ  ｖｉｖｏの血清レベルの検出を示すグラフである。
【図２３】フローサイトメトリーによる解析を示す図である。１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１、３６８Ｄ０４または対照抗体を用いて治療した乾癬マウスから単離後、プールしたＤＣ４＋リンパ節細胞を、ＰＭＡおよびイオノマイシンで処理し、ＩＬ−２２およびＩＬ−１７Ａ；ＩＬ−２２およびＩＬ−１７Ｆ；ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ；ＩＬ−２２およびＴＮＦα；ＩＬ−２２およびＩＦＮγ；またはＴＮＦαおよびＩＦＮγに対して染色した。
【図２４】１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１、３６８Ｄ０４または対照抗体を用いて治療した乾癬マウスの耳における、サイトカイン遺伝子の発現を示すグラフである。（Ａ）ＩＬ−２２。（Ｂ）ＩＬ−１７。（Ｃ）ＩＦＮγ。（Ｄ）ＩＬ−１７Ｆ。（Ｅ）ＩＬ−６。
【図２５】１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１、３６８Ｄ０４または対照抗体を用いて治療した乾癬マウスから単離し、プールしたリンパ節細胞の上清を、プレートに結合させた抗ＣＤ３抗体を用いて、およびプレートに結合させた抗ＣＤ３抗体なしで、ｅｘ  ｖｉｖｏで刺激した場合のサイトカインの検出を示すグラフである。（Ａ）ＩＬ−２２。（Ｂ）ＩＬ−６。（Ｃ）ＩＦＮγ。（Ｄ）ＩＬ−１７Ｆ。（Ｅ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆ。（Ｆ）ＩＬ−１７Ａ。
【図２６】１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１、３６８Ｄ０４または対照抗体を用いて治療した乾癬マウスから単離し、プールしたリンパ節細胞を、プレートに結合させた抗ＣＤ３抗体を用いてｅｘ  ｖｉｖｏで刺激した場合のサイトカイン遺伝子の発現を示すグラフである。（Ａ）ＩＬ−２２。（Ｂ）ＩＬ−６。（Ｃ）ＩＦＮγ。（Ｄ）ＩＬ−１７Ｆ。（Ｅ）ＩＬ−１７Ａ。
【図２７】乾癬のマウスモデルにおいて、１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１または対照抗体を用いて治療したマウスの疾患の評価を示すグラフである。マウスは、Ｔ細胞養子移植後第１日にＩＬ−１２およびＬＰＳを用いて処置した。（Ａ）１０週にわたる疾患の臨床的な進行。（Ｂ）第１０週における臨床スコア。
【図２８】１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１または対照抗体を用いて治療した乾癬マウスにおけるＩＬ−２２のｉｎ  ｖｉｖｏの血清レベル（ｎｇ／ｍＬ）の検出を示すグラフである。マウスは、Ｔ細胞養子移植後第１日にＩＬ−１２およびＬＰＳを用いて処置した。
【図２９】１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１または対照抗体を用いて治療した乾癬マウスにおける（Ａ）ＩＬ−１７Ａ、（Ｂ）ＩＬ−１７Ｆ、（Ｃ）ＩＬ−１７Ａ／Ｆ；および（Ｄ）ＩＬ−６のｉｎ  ｖｉｖｏの血清レベルの検出を示すグラフである。マウスは、Ｔ細胞養子移植後第１日にＩＬ−１２およびＬＰＳを用いて処置した。
【図３０】１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１または対照抗体を用いて治療した乾癬マウスの耳におけるサイトカイン遺伝子の発現を示すグラフである。（Ａ）ＩＬ−１７。（Ｂ）ＩＬ−２２。（Ｃ）ＩＬ−１７Ｆ。（Ｄ）ＩＦＮγ。（Ｅ）ＩＬ−６。マウスは、Ｔ細胞養子移植後第１日にＩＬ−１２およびＬＰＳを用いて処置した。
【図３１】フローサイトメトリーによる解析を示す図である。１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１または対照抗体を用いて治療した乾癬マウスから単離後、プールしたＤＣ４＋リンパ節細胞を、ＰＭＡおよびイオノマイシンで処理し、ＩＬ−２２およびＩＬ−１７Ａ；ＩＬ−２２およびＩＬ−１７Ｆ；ＩＬ−１７ＡおよびＩＬ−１７Ｆ；ＩＬ−２２およびＴＮＦα；ＩＬ−２２およびＩＦＮγ；またはＴＮＦαおよびＩＦＮγに対して染色した。マウスは、Ｔ細胞養子移植後第１日にＩＬ−１２およびＬＰＳを用いて処置した。
【図３２】１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１または対照抗体を用いて治療した乾癬マウスから単離し、プールしたリンパ節細胞の上清を、プレートに結合させた抗ＣＤ３抗体を用いて、またはプレートに結合させた抗ＣＤ３抗体なしで、ｅｘ  ｖｉｖｏで刺激した場合のサイトカインの検出を示すグラフである。（Ａ）ＩＬ−２２。（Ｂ）ＩＬ−６。（Ｃ）ＩＦＮγ。（Ｄ）ＩＬ−１７Ａ。（Ｅ）ＩＬ−１７Ｆ。マウスは、Ｔ細胞養子移植後第１日にＩＬ−１２およびＬＰＳを用いて処置した。
【図３３】１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１または対照抗体を用いて治療した乾癬マウスから単離し、プールしたリンパ節細胞を、プレートに結合させた抗ＣＤ３抗体を用いてｅｘ  ｖｉｖｏで刺激した場合のサイトカイン遺伝子の発現を示すグラフである。（Ａ）ＩＬ−２２。（Ｂ）ＩＬ−６。（Ｃ）ＩＦＮγ。（Ｄ）ＩＬ−１７Ａ。（Ｅ）ＩＬ−１７Ｆ。マウスは、Ｔ細胞養子移植後第１日にＩＬ−１２およびＬＰＳを用いて処置した。
【図３４】乾癬のマウスモデルにおいて、１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１または対照抗体を用いて治療したマウスの疾患の評価を示すグラフである。（Ａ）１０週にわたる疾患の臨床的な進行。（Ｂ）第１０週における臨床スコア。
【図３５】１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１または対照抗体を用いて治療した乾癬マウスにおけるＩＬ−２２のｉｎ  ｖｉｖｏの血清レベル（ｎｇ／ｍＬ）の検出を示すグラフである。
【図３６】１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１または対照抗体を用いて治療した乾癬マウスの耳におけるサイトカイン遺伝子の発現を示すグラフである。（Ａ）ＩＬ−２２、（Ｂ）ＩＬ−１７、（Ｃ）ＩＬ−１７Ｆ、（Ｄ）ＩＬ−１Ｆ６（ＩＬ−１ファミリーメンバー６）、（Ｅ）ＩＬ−６、（Ｆ）ＩＦＮγ、（Ｇ）ＩＬ−２２ＢＰ（ＩＬ−２２結合タンパク質）、または（Ｈ）ＩＬ−２２Ｒ１（ＩＬ−２２受容体サブユニット）。
【図３７】乾癬のマウスモデルにおいて、１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１または対照抗体を用いて治療したマウスの疾患の評価を示すグラフである。（Ａ）１０週にわたる疾患の臨床的な進行。（Ｂ）第１０週における臨床スコア。マウスは、Ｔ細胞養子移植後第１日にＩＬ−１２およびＬＰＳを用いて処置した。
【図３８】１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１または対照抗体を用いて治療した乾癬マウスにおけるＩＬ−２２のｉｎ  ｖｉｖｏの血清レベル（ｎｇ／ｍＬ）の検出を示すグラフである。マウスは、Ｔ細胞養子移植後第１日にＩＬ−１２およびＬＰＳを用いて処置した。
【図３９】１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１または対照抗体を用いて（ＩＬ−１２およびＬＰＳは同時投与せずに）治療した乾癬マウスにおける（Ａ）ＩＬ−１７Ａおよび（Ｂ）ＩＬ−６、ならびに、１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１または対照抗体を用いて（Ｔ細胞養子移植後第１日にＩＬ−１２およびＬＰＳを同時投与して）治療した乾癬マウスにおける（Ｃ）ＩＬ−１７Ａおよび（Ｄ）ＩＬ−６のｉｎ  ｖｉｖｏの血清レベルの検出を示すグラフである。
【図４０】マウスＣＩＡモデルにおいて、１６ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１を、２日に１回投与した場合の第３０日での（Ａ）平均疾患重症度スコア、または（Ｂ）疾患重症度スコアを示すグラフである。
【図４１】マウスＣＩＡモデルにおいて、８ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１を、２日に１回、週に１回、または週に２回投与した場合の平均疾患重症度スコアを示すグラフである。
【図４２】（Ａ）８ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１を、週に１回、（Ｂ）８ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１を、週に２回、または（Ｃ）８ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１を、２日に１回用いて治療したマウスにおける疾患の進行の組織学的評価（足）を示すグラフである。
【図４３】８ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１を、週に１回、週に２回、または２日に１回用いて治療したマウスにおける疾患の進行の組織学的評価（平均足重症度スコア）を示すグラフである。
【図４４】マウスＣＩＡモデルにおいて、８ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１を、週に１回投与した２つの別々の研究からの平均疾患重症度スコアを示すグラフである。
【図４５】マウスＣＩＡモデルにおいて、８ｍｇ／ｋｇの３５６Ａ１１を、週に１回用いて治療したマウスでの２つの別々の研究からの疾患の進行の組織学的評価（足）を示すグラフである。
【図４６】マウスＣＩＡモデルにおいて、８ｍｇ／ｋｇの３６８Ａ０４を、週に１回投与した３つの別々の研究からの平均疾患重症度スコアを示すグラフである。
【図４７】マウスＣＩＡモデルにおいて、８ｍｇ／ｋｇの３６８Ａ０４を、週に１回用いて治療したマウスでの３つの別々の研究からの疾患の進行の組織学的評価（足）を示すグラフである。
【図４８】マウスＣＩＡモデルにおいて、３５６Ａ１１を用いて治療した（８ｍｐｋ、週に１回）マウスからの（Ａ）ＩＬ−６（ｐｇ／ｍｌ）、および（Ｂ）ＣＸＣＬ１（ｎｇ／ｍｌ）の血清レベルを示すグラフである。
【図１】
2009528288.tif 000021
【図２Ａ】
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【図２Ｂ】
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【図２Ｃ】
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【図２Ｄ】
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【図２Ｅ】
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【図２Ｆ】
2009528288.tif 000027
【図２Ｇ】
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【図３Ａ】
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【図３Ｂ】
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【図４Ａ】
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【図４Ｂ】
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【図５】
2009528288.tif 000033
【図６】
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【図７−１】
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【図７−２】
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【図７−３】
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【図７−４】
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【図７−５】
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【図７−６】
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【図７−７】
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【図７−８】
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【図７−９】
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【図７−１０】
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【図７−１１】
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【図７−１２】
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【図７−１３】
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【図７−１４】
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【図７−１５】
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【図７−１６】
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【図７−１７】
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【図７−１８】
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【図７−１９】
2009528288.tif 000053
【図７−２０】
2009528288.tif 000054
【図８−１】
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【図８−２】
2009528288.tif 000056
【図８−３】
2009528288.tif 000057
【図８−４】
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【図８−５】
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【図８−６】
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【図８−７】
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【図８−８】
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【図８−９】
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【図８−１０】
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【図８−１１】
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【図８−１２】
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【図８−１３】
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【図８−１４】
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【図８−１５】
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【図９−１】
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【図９−２】
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【図９−３】
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【図９−４】
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【図９−５】
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【図９−６】
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【図９−７】
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【図９−８】
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【図９−９】
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【図９−１０】
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【図９−１１】
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【図９−１２】
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【図９−１３】
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【図９−１４】
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【図９−１５】
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【図９−１６】
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【図９−１７】
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【図９−１８】
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【図９−１９】
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【図９−２０】
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【図１０−１】
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【図１０−２】
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【図１０−３】
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【図１０−４】
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【図１０−５】
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【図１０−６】
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【図１０−７】
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【図１０−８】
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【図１０−９】
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【図１０−１０】
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【図１０−１１】
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【図１０−１２】
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【図１０−１３】
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【図１０−１４】
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【図１０−１５】
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【図１１】
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【図１２Ａ】
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【図１２Ｂ】
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【図１３Ａ】
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【図１３Ｂ】
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【図１３Ｃ】
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【図１３Ｄ】
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【図１４Ａ】
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【図１４Ｂ】
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【図１５Ａ】
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【図１５Ｂ】
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【図１６Ａ】
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【図１６Ｂ】
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【図１６Ｃ】
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【図１６Ｄ】
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【図１６Ｅ】
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【図１６Ｆ】
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【図１７】
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【図１８】
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【図１９】
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【図２０】
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【図２１】
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【図２２】
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【図２３】
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【図２４−１】
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【図２４−２】
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【図２５】
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【図２６】
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【図２７】
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【図２８】
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【図２９】
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【図３０−１】
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【図３０−２】
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【図３１】
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【図３２】
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【図３３】
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【図３４】
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【図３５】
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【図３６−１】
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【図３６−２】
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【図３７】
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【図３８】
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【図３９】
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【図４０Ａ】
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【図４０Ｂ】
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【図４１】
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【図４２Ａ】
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【図４２Ｂ】
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【図４２Ｃ】
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【図４３】
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【図４４Ａ】
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【図４４Ｂ】
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【図４５Ａ】
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【図４５Ｂ】
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【図４６Ａ】
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【図４６Ｂ】
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【図４６Ｃ】
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【図４７Ａ】
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【図４７Ｂ】
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【図４７Ｃ】
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【図４８】
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【手続補正書】
【提出日】平成20年12月1日(2008.12.1)
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】配列表
【補正方法】変更
【補正の内容】
【配列表】
2009528288000001.app
【国際調査報告】
2009528288.tif 000166
2009528288.tif 000167
2009528288.tif 000168
2009528288.tif 000169
2009528288.tif 000170